JP3330446B2 - 細胞分離器具および細胞分離方法 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、血液中から所定の血液
成分を採取するための細胞分離器具および細胞分離方法
に関する。

【０００２】

【従来の技術】採血を行う場合、現在では、血液の有効
利用および供血者の負担軽減などの理由から、採血血液
を遠心分離などにより各血液成分に分離し、輸血者に必
要な成分だけを採取し、その他の成分は供血者に返還す
る成分採血が行われている。

【０００３】このような成分採血において、血小板製剤
を得る場合、供血者から採血した血液を血液成分分離回
路に導入し、該血液成分分離回路に設置された遠心ボー
ルと呼ばれる遠心分離器により血漿、バフィーコート
（白血球と血小板とを含む）および赤血球の３成分に分
離し、その内のバフィーコートを容器に回収して血小板
製剤とし、残りの血漿および赤血球は、供血者に返血す
ることが行われる。

【０００４】しかしながら、この方法では、多くの血小
板を得ようとすると、それに混入する白血球の量も増大
するため、他人へ輸血する際の適合性や感染（例えば、
肝炎やＧＶＨＤの発症）等の問題が生じ、好ましくな
い。

【０００５】そこで、得られたバフィーコートを白血球
除去フィルターに通過させ、白血球を分離除去し、この
乏白血球血小板を容器に回収して血小板製剤とすること
が提案されている。

【０００６】しかしながら、この方法でも、白血球除去
フィルターに捕捉された白血球は、供血者に返還されな
いため、供血者においては、一時的に免疫力が低下し、
感染防御に支障を来すおそれがある。

【０００７】

【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、細胞
分離フィルターにて捕捉された細胞を有効に利用するこ
とができ、特に成分採血に際し、目的とする成分以外の
血液成分を可能な限り供血者に返還することができる細
胞分離器具および細胞分離方法を提供することにある。

【０００８】

【課題を解決するための手段】このような目的は、下記
（１）〜（18）の本発明により達成される。

【０００９】（１） 第１の血液成分を供給する第１の
ラインと、該第１のラインから供給された第１の血液成
分中から所定の細胞を分離除去する細胞分離フィルター
と、該細胞分離フィルターを通過した第２の血液成分を
貯留する容器と、前記細胞分離フィルターと前記容器と
を接続する第２のラインと、前記第２のラインの途中に
接続され、前記細胞分離フィルターに洗浄用液体を供給
する第３のラインとを有することを特徴とする細胞分離
器具。

【００１０】（２） 前記第１のラインの途中にポンプ
が設置されている上記（１）に記載の細胞分離器具。

【００１１】（３） 前記第１のラインは、前記第１の
血液成分を貯留する第２の容器と、該第２の容器に連通
するチューブとで構成されている上記（１）または
（２）に記載の細胞分離器具。

【００１２】（４） 前記第１のラインおよび／または
前記第２のラインの流路を遮断し得る流路開閉手段を有
する上記（１）に記載の細胞分離器具。

【００１３】（５） 採血血液より少なくとも前記第１
の血液成分と第３の血液成分とを得る血液成分分離回路
を有し、該血液成分分離回路により得られた前記第１の
血液成分を前記第１のラインへ移送するよう構成されて
いる上記（１）ないし（４）のいずれかに記載の細胞分
離器具。

【００１４】（６） 前記第１のラインの途中に接続さ
れ、前記細胞分離フィルターを通過した後の前記洗浄用
液体を前記血液成分分離回路へ移送する第４のラインを
有する上記（５）に記載の細胞分離器具。

【００１５】（７） 前記洗浄用液体は、電解質液また
は糖液である上記（１）ないし（６）のいずれかに記載
の細胞分離器具。

【００１６】（８） 前記洗浄用液体は、第３の血液成
分である上記（１）ないし（６）のいずれかに記載の細
胞分離器具。

【００１７】（９） 前記血液成分分離回路は、前記第
３の血液成分を貯留する第３の容器を有し、前記第３の
ラインは、前記第３の容器に貯留された第３の血液成分
を洗浄用液体として前記細胞分離フィルターに供給する
ものである上記（５）または（６）に記載の細胞分離器
具。

【００１８】（10） 前記血液成分分離回路は、生体に
対し脱血および／または返血を行う第５のラインを有す
る上記（５）、（６）または（９）に記載の細胞分離器
具。

【００１９】（11） 第１のラインから第１の血液成分
を供給し、細胞分離フィルターを通過させて、所定の細
胞が分離除去された第２の血液成分を得、該第２の血液
成分を第２のラインを介して容器に回収した後、前記第
２のラインの途中に接続された第３のラインから前記細
胞分離フィルターに洗浄用液体を供給し、前記細胞分離
フィルターに捕捉されている細胞を前記洗浄用液体とと
もに前記第１のラインへ逆送することを特徴とする細胞
分離方法。

【００２０】（12） 血液成分分離回路により採血血液
を分離して第１の血液成分を得、該第１の血液成分を第
１のラインから供給し、細胞分離フィルターを通過させ
て、所定の細胞が分離除去された第２の血液成分を得、
該第２の血液成分を第２のラインを介して容器に回収し
た後、前記第２のラインの途中に接続された第３のライ
ンから前記細胞分離フィルターに洗浄用液体を供給し、
前記細胞分離フィルターに捕捉されている細胞を前記洗
浄用液体とともに前記第１のラインへ逆送することを特
徴とする細胞分離方法。

【００２１】（13） 前記第１のラインへ逆送された細
胞を含む洗浄用液体をさらに前記血液成分分離回路へ移
送する上記（12）に記載の細胞分離方法。

【００２２】（14） 前記洗浄用液体は、電解質液また
は糖液である上記（11）ないし（13）のいずれかに記載
の細胞分離方法。

【００２３】（15） 前記洗浄用液体は、第３の血液成
分である上記（11）ないし（13）のいずれかに記載の細
胞分離器具。

【００２４】（16） 血液成分分離回路により採血血液
を分離して第１の血液成分および第３の血液成分を得、
前記第１の血液成分を第１のラインから供給し、細胞分
離フィルターを通過させて、所定の細胞が分離除去され
た第２の血液成分を得、該第２の血液成分を第２のライ
ンを介して容器に回収した後、前記第２のラインの途中
に接続された第３のラインから前記細胞分離フィルター
に前記第３の血液成分を供給し、前記細胞分離フィルタ
ーに捕捉されている細胞を前記第３の血液成分とともに
前記第１のラインへ逆送することを特徴とする細胞分離
方法。

【００２５】（17） 前記第１のラインへ逆送された細
胞を含む第３の血液成分をさらに前記血液成分分離回路
へ移送する上記（16）に記載の細胞分離方法。

【００２６】（18） 血液成分分離回路により採血血液
を分離して第１の血液成分および第３の血液成分を得、
前記第１の血液成分を第１のラインから供給し、細胞分
離フィルターを通過させて、所定の細胞が分離除去され
た第２の血液成分を得、該第２の血液成分を第２のライ
ンを介して容器に回収した後、前記第２のラインの途中
に接続された第３のラインから前記細胞分離フィルター
に前記第３の血液成分を供給し、前記細胞分離フィルタ
ーに捕捉されている細胞を前記第３の血液成分とともに
前記第１のラインへ逆送し、さらに、この細胞を含む第
３の血液成分を前記第１のラインの途中に接続された第
４のラインを介して前記血液成分分離回路へ移送するこ
とを特徴とする細胞分離方法。

【００２７】

【実施例】以下、本発明の細胞分離器具および細胞分離
方法を添付図面に示す好適実施例に基づいて詳細に説明
する。

【００２８】図１は、本発明の細胞分離器具の構成例を
示す平面図である。同図に示すように、細胞分離器具１
Ａは、血液成分分離回路２と、該血液成分分離回路２で
得られたバフィーコート（第１の血液成分）を供給する
第１のライン３と、該第１のライン３より供給されたバ
フィーコート中から白血球（細胞）を分離除去する細胞
分離フィルター４と、該細胞分離フィルター４を通過し
た血小板（第２の血液成分）を貯留する血小板バッグ
（容器）６と、細胞分離フィルター４と血小板バッグ６
とを接続する第２のライン５と、第２のライン５の途中
に接続された第３のライン７とを有している。以下、こ
れらについて順次説明する。

【００２９】第１のライン３は、バフィーコートバッグ
（第２の容器）３１と、該バフィーコートバッグ３１内
に連通するようその一端がバフィーコートバッグ３１に
接続されたチューブ３２とで構成されている。チューブ
３２の他端は、細胞分離フィルター４の流入口４２に接
続されている。

【００３０】チューブ３２の途中には、該チューブ３２
の内部流路を遮断・解放し得る流路開閉手段としてのバ
ルブ８１と、例えばローラポンプよりなる送液用のポン
プ９１とが設置されている。

【００３１】図５に示すように、細胞分離フィルター４
は、両端に流入口４２および流出口４３を有するケーシ
ング４１と、該ケーシング４１内に挿入された濾過部材
４５とで構成されている。ケーシング４１の対向する内
面には、導入された血液成分を濾過部材４５の表面に均
一に分配するための多数の凹部４４が形成されている。
濾過部材４５としては、例えば、ポリプロピレン、ポリ
エステル、ポリウレタン、ポリアミド等の合成樹脂より
なる織布、不織布、メッシュ、発泡体等の多孔質体を１
層または２層以上積層してなるものが挙げられる。

【００３２】第２のライン５は、主に、一端が細胞分離
フィルター４の流出口４３に接続され、他端が血小板バ
ッグ６内に連通するよう血小板バッグ６に接続されたチ
ューブ５１で構成されている。

【００３３】チューブ５１の途中には、該チューブ５１
の内部流路を遮断・解放し得る流路開閉手段としてのバ
ルブ８２が設置されている。また、チューブ５１のバル
ブ８２と血小板バッグ６との間には、Ｔ字状の分岐コネ
クタ５２を介してチューブ５３の基端が接続され、チュ
ーブ５３の先端は、空気貯留バッグ５４に接続されてい
る。血小板バッグ６には、例えば、生理食塩水、ＧＡ
Ｃ、ＰＡＳ、ＰＳＭ−１のような血小板保存液が予め入
れられていてもよい。

【００３４】第３のライン７は、細胞分離フィルター４
に洗浄用液体を供給するためのラインであり、主にチュ
ーブ７１と、該チューブ７１の先端に設置されたキャッ
プ付きの針管７２と、チューブ７１の途中に設置された
チャンバー７３とで構成されている。チューブ７１の基
端は、Ｔ字状の分岐コネクタ７４を介してチューブ５１
の途中（チューブ５１の両端を含む）に接続されてい
る。なお、チャンバー７３は、針管７２側から供給され
る洗浄用液体中から気泡を除去する機能を有するもので
ある。

【００３５】第３のライン７より供給される洗浄用液体
としては、例えば、生理食塩水、ハンクス平衡塩溶液、
ダルベッコ平衡塩溶液のような各種電解質液、またはブ
ドウ糖液、ＡＣＤ−Ａ液、ＣＰＤＡ−１液のような各種
糖液、血液抗凝固剤が好適に使用される。このような洗
浄用液体は、供血者に返還される細胞の機能を維持また
は回復させる機能を有するからである。なお、本実施例
では、生理食塩水が用いられる。

【００３６】血液成分分離回路２は、供血者（ドナー）
に対し脱血および返血を行う第５のライン１０と、遠心
ボール（遠心分離器）１４と、血漿バッグ（第３の容
器）２１と、血漿バッグ用空気貯留バッグ２２と、これ
らを所望に接続するチューブと、２つのポンプ９２、９
３とを有する。

【００３７】第５のライン１０は、主に、チューブ１０
１と、チューブ１０１の先端に接続された穿刺針１０２
と、チューブ１０１の途中に設置された気泡除去用のチ
ャンバー１０３とで構成されている。チューブ１０１の
穿刺針１０２とチャンバー１０３との間には、ト字状の
分岐コネクタ１０４および１０８を介してそれぞれチュ
ーブ１０５および１０９が接続されている。チューブ１
０５の先端には、キャップ付きの針管１０６が設置さ
れ、チューブ１０５の途中には、気泡除去用のチャンバ
ー１０７が設置されている。また、チューブ１０９の先
端には、キャップ付きの針管１１０が設置され、チュー
ブ１０９の途中には、例えばローラポンプよりなる送液
用のポンプ９２と、気泡除去用のチャンバー１１１とが
設置されている。

【００３８】チューブ１０１の基端は、Ｔ字状の分岐コ
ネクタ１２を介してチューブ１３および２０の一端と接
続されている。チューブ２０の分岐コネクタ１２とチャ
ンバー１０３との間には、チューブ１０１内の流路を開
閉するバルブ８３が設置されている。

【００３９】チューブ１３の他端は、遠心ボール１４の
流入口１４３に接続され、チューブ１３の途中には、例
えばローラポンプよりなる送液用のポンプ９３が設置さ
れている。

【００４０】遠心ボール１４は、上端に流入口１４３が
形成された鉛直方向に伸びる管体１４１と、該管体１４
１の回りで回転するローター１４２とで構成されてい
る。ローター１４２には、その底部および周壁内面に沿
って血液の流路が形成され、該流路の上部に連通するよ
う流出口１４４が形成されている。

【００４１】遠心ボール１４の流出口１４４には、チュ
ーブ１５の一端が接続され、チューブ１５の他端は、Ｔ
字状の分岐コネクタ１６を介してチューブ１７および１
８の一端と接続されている。

【００４２】チューブ１７の他端は、バフィーコートバ
ッグ３１に接続され、チューブ１７の途中には、チュー
ブ１７内の流路を開閉するバルブ８５が設置されてい
る。また、チューブ１８の他端は、気泡除去用のチャン
バー１９に接続され、チューブ１８の途中には、チュー
ブ１８内の流路を開閉するバルブ８６が設置されてい
る。チューブ２０の他端は、気泡除去用のチャンバー１
９に接続され、チューブ２０の途中には、チューブ２０
内の流路を開閉するバルブ８４が設置されている。

【００４３】空気貯留バッグ２２は、一連の処理後に血
漿バッグ２１内からエアーを排出し、これを貯留するた
めのバッグであり、そのため、血漿バッグ２１および空
気貯留バッグ２２は、チューブ２３により接続されてそ
の内部同士が連通している。また、血漿バッグ２１に
は、チューブ２４の一端が接続され、チューブ２４の他
端は、気泡除去用のチャンバー１９に接続されている。

【００４４】前記各バッグ３１、６、５４、２１および
２２は、それぞれ、樹脂製の可撓性を有するシート材を
重ね、その周縁部を融着（熱融着、高周波融着等）また
は接着して袋状にしたものである。

【００４５】各バッグ３１、６、５４、２１および２２
を構成するシート材の構成材料としては、例えば、軟質
ポリ塩化ビニルが好適に使用される。この軟質ポリ塩化
ビニルにおける可塑剤としては、例えば、ジ（エチルヘ
キシル）フタレート（ＤＥＨＰ）、ジ−（ｎ−デシル）
フタレート（ＤｎＤＰ）等が使用される。なお、このよ
うな可塑剤の含有量は、ポリ塩化ビニル１００重量部に
対し、３０〜７０重量部程度とするのが好ましい。

【００４６】また、各バッグ３１、６、５４、２１およ
び２２のシート材の他の構成材料としては、ポリオレフ
ィン、すなわちエチレン、プロピレン、ブタジエン、イ
ソプレン等のオレフィンあるいはジオレフィンを重合ま
たは共重合した重合体を用いることができ、例えば、ポ
リエチレン、ポリプロピレン、エチレン−酢酸ビニル共
重合体（ＥＶＡ）、ＥＶＡと各種熱可塑性エラストマー
とのポリマーブレンド等、あるいは、これらを任意に組
み合せたものが挙げられる。さらには、ポリエチレンテ
レフタレート（ＰＥＴ）、ポリブチレンテレフタレート
（ＰＢＴ）、ポリ−１，４−シクロヘキサンジメチルテ
レフタレート（ＰＣＨＴ）のようなポリエステルや、ポ
リ塩化ビニリデンを用いることもできる。

【００４７】なお、血小板バッグ６を構成するシート材
は、血小板保存性を向上するために、ガス透過性に優れ
るものが好ましく、そのために、例えば、シート材とし
て、前記ポリオレフィンやＤｎＤＰ可塑化ポリ塩化ビニ
ル等を用いたり、また、シート材の厚さを比較的薄く
（例えば、０．１〜０．５mm程度、特に、０．１〜０．
３mm程度）するのが好ましい。

【００４８】チューブ３２、５１、５３、７１、１０
１、１０５、１０９、１３、１５、１７、１８、２０、
２３、２４および２５１の構成材料としては、例えば、
ポリ塩化ビニル、ポリエチレン、ポリプロピレン、ＰＥ
ＴやＰＢＴのようなポリエステル、エチレン−酢酸ビニ
ル共重合体、ポリウレタン、ポリエステルエラストマ
ー、スチレン−ブタジエン−スチレン共重合体等の熱可
塑性エラストマー等が挙げられるが、その中でも特に、
ポリ塩化ビニルが好ましい。各チューブがポリ塩化ビニ
ル製であれば、十分な可撓性、柔軟性が得られるので取
り扱いがし易く、また、クレンメ等による閉塞にも適す
るからである。

【００４９】また、分岐コネクタ５２、７４、７５、１
０４、１０８、１２、２５２および２５３の構成材料に
ついても、前記チューブの構成材料と同様のものを用い
ることができる。

【００５０】なお、流路開閉手段は、前述したような各
チューブの途中に装着されたバルブ（コック）に限ら
ず、例えば可撓性チューブを挟持してその内腔を閉塞し
得るクレンメであってもよい。

【００５１】次に、図１に示す細胞分離器具１Ａを用い
た本発明の細胞分離方法について説明する。

【００５２】［Ａ−０］バルブ８３、８５を開、その他
のバルブを閉とした状態で、ポンプ９２、９３を作動
（正転）し、抗凝固剤を、針管１１０、チャンバー１１
１およびチューブ１０９を介して、分岐コネクタ１０
８、チューブ１０１およびチャンバー１０３内に導入
し、また、生理食塩水を、針管１０６、チャンバー１０
７およびチューブ１０５を介して、分岐コネクタ１０４
および穿刺針１０２内に供給し、プライミングしてお
く。

【００５３】［Ａ−１］一旦ポンプ９２、９３を停止
し、チューブ１０５をクレンメ等で閉塞し、供血者の血
管に穿刺針１０２を穿刺し、ポンプ９３を作動（正転）
すると、供血者からの採血血液は、穿刺針１０２、チュ
ーブ１０１、チャンバー１０３およびチューブ１３を介
して移送され、遠心ボール１４の流入口１４３より管体
１４１を経てローター１４２内に導入される。

【００５４】また、この採血と同時に、ポンプ９２を作
動して、針管１１０、チャンバー１１１およびチューブ
１０９を介して、例えば、ＡＣＤ−Ａ液、ＣＰＤ液、Ｃ
ＰＤＡ−１液、ヘパリンナトリウム液等の抗凝固剤を供
給し、この抗凝固剤を採血血液中に混入させる。

【００５５】［Ａ−２］遠心ボール１４内に導入された
血液は、ローター１４２の回転（例えば、４８００rpm
）により、ローター１４２の流路内で内層より血漿
層、バフィーコート層および赤血球層に分離される。

【００５６】［Ａ−３］バルブ８５を閉じ、バルブ８６
を開き、ローター１４２内の血漿（第３の血液成分）を
流出口１４４より流出させ、チューブ１５、１８、チャ
ンバー１９、チューブ２４を介して血漿バッグ２１内に
回収する。このとき、血漿バッグ２１内への血漿の流入
に伴い、血漿バッグ２１内の空気が排出され、この空気
がチューブ２３を介して空気貯留バッグ２２へ移送さ
れ、貯留される。

【００５７】［Ａ−４］ローター１４２内からバフィー
コートが流出する直前に、ローター１４２の駆動を継続
しつつ、ポンプ９２、９３を停止し採血を停止した後、
バルブ８４、８５を開、その他のバルブを閉として再度
ポンプ９３を駆動し、血漿バッグ２１内の血漿を、チュ
ーブ２４、チャンバー１９、チューブ２０、１３および
管体１４１を介してローター１４２内に供給する。これ
により、ローター１４２内のバフィーコートが流出口１
４４より流出し、チューブ１５および１７を介してバフ
ィーコートバッグ３１内に回収される。なお、このと
き、バフィーコートバッグ３１は、チューブ３２の接続
側端部を上方に向けて置かれている。

【００５８】［Ａ−５］バフィーコートバッグ３１への
バフィーコートの回収が終了したら、ポンプ９３および
ローター１４２を停止し、バルブ８３、８５を開、その
他のバルブを閉とし、ポンプ９３を逆回転して、遠心ボ
ール１４内に残った赤血球および血漿を、管体１４１、
チューブ１３、チャンバー１０３、チューブ１０１およ
び穿刺針１０２を介して、供血者に返血する。

【００５９】なお、この後または、その途中で、バルブ
８４、８５を開、その他のバルブを閉とし、ポンプ９３
を回転して、血漿バッグ２１の血漿を、チューブ２４、
チャンバー１９、チューブ２０、１３を介してローター
１４２内に入れ、続いて、バルブ８３、８５を開、その
他のバルブを閉とし、ポンプ９３を逆回転して、血漿バ
ッグ２１から移した遠心ボール１４内の血漿を、管体１
４１、チューブ１３、チャンバー１０３、チューブ１０
１および穿刺針１０２を介して、供血者に返血してもよ
い。

【００６０】［Ａ−６］上記工程［Ａ−５］と前後し
て、バルブ８１を開き、ポンプ９１を逆回転させて針管
７２より生理食塩水（細胞の洗浄用液体）を供給し、第
３のライン７、チューブ５１、細胞分離フィルター４お
よびチューブ３２の流路を生理食塩水でプライミングし
ておく。

【００６１】［Ａ−７］バルブ８１、８２を開、その他
のバルブを閉とし、バフィーコートバッグ３１をチュー
ブ３２の接続側端部が下方となるような姿勢とし、ポン
プ９１を作動（正転）して、バフィーコートバッグ３１
内のバフィーコートを流出させる。これにより、バフィ
ーコートは、チューブ３２を介して流入口４２より細胞
分離フィルター４内に導入され、血小板はそのほとんど
が濾過部材４５を通過するが、白血球（細胞）は濾過部
材４５に捕捉される。このようにして白血球が分離、除
去された血小板（濃厚血小板血漿）は、流出口４３より
流出し、チューブ５１を介して、血小板バッグ６内に回
収される。

【００６２】［Ａ−８］血小板バッグ６への血小板の回
収が終了したら、バルブ８１を開、その他のバルブを閉
とし、ポンプ９１を逆回転させつつ針管７２より生理食
塩水（細胞の洗浄用液体）を供給する。これにより、生
理食塩水は、チャンバー７３、チューブ７１、５１、細
胞分離フィルター４およびチューブ３２を介して、前記
バフィーコートの流れとは逆方向に移送され、バフィー
コートバッグ３１内に回収される。

【００６３】このとき、細胞分離フィルター４において
は、生理食塩水は、流出口４３より流入し、濾過部材４
５を通過して流入口４２より排出されるが、生理食塩水
の濾過部材４５の通過に伴い、濾過部材４５に捕捉され
ていた白血球は、洗い出されて生理食塩水に混入し、生
理食塩水とともにバフィーコートバッグ３１内に回収さ
れる。

【００６４】なお、生理食塩水に代表される洗浄用液体
の供給量は、濾過部材４５に捕捉されていた白血球を洗
い出すのに十分な量とされ、本実施例の場合、１０〜２
００ml程度、特に３０〜８０ml程度とするのが好まし
い。

【００６５】［Ａ−９］バフィーコートバッグ３１への
白血球混入生理食塩水の回収が終了したら、バルブ８
３、８５を開、その他のバルブを閉とし、ポンプ９３を
逆回転して、バフィーコートバッグ３１内の白血球混入
生理食塩水を、チューブ１７、１５、ローター１４２内
の流路、管体１４１、チューブ１３、チャンバー１０
３、チューブ１０１および穿刺針１０２を介して、供血
者に返還する。

【００６６】［Ａ−１０］供血者への白血球の返還が終
了したら、供血者の血管から穿刺針１０２を抜き取る。

【００６７】［Ａ−１１］バルブ８２を閉じた状態で、
血小板バッグ６をチューブ５１の接続側端部が上方とな
るような姿勢とし、血小板バッグ６を圧迫してバッグ内
の空気を排出する。排出された空気は、チューブ５１お
よび５３を介して空気貯留バッグ５４内に移送、回収さ
れる。

【００６８】［Ａ−１２］チューブ５１の分岐コネクタ
５２と血小板バッグ６との間を、例えば融着により封止
し、さらにこの封止部を切断、分離することにより、血
小板製剤入りの血小板バッグ６が得られる。

【００６９】以上のように、本発明では、供血者の採血
血液より分離されたバフィーコートから、細胞分離フィ
ルター４により白血球を分離、除去するため、白血球の
混入率が極めて低い血小板製剤を得ることができる。し
かも、細胞分離フィルター４で分離、除去した白血球
を、洗浄用液体で洗い出して供血者に返還するため、供
血者においては、白血球の欠乏による免疫力の低下を生
じるおそれがなくなる。

【００７０】図２は、本発明の細胞分離器具の他の構成
例を示す平面図である。同図に示す細胞分離器具１Ｂ
は、前記細胞分離器具１Ａの構成に、第４のライン２５
が付加されたものである。以下、細胞分離器具１Ａと異
なる点について説明し、同様の事項についてはその説明
を省略する。

【００７１】第４のライン２５は、細胞分離フィルター
４を通過した後の洗浄用液体を血液成分分離回路２へ移
送するためのラインであり、主にチューブ２５１で構成
されている。

【００７２】このチューブ２５１の一端は、Ｔ字状の分
岐コネクタ２５２を介してチューブ３２の途中（チュー
ブ３２の両端を含む）に接続され、他端は、Ｔ字状の分
岐コネクタ２５３を介して血液成分分離回路２に設置さ
れたチューブ１８の途中に接続されている。また、チュ
ーブ２５１の途中には、該チューブ２５１の内部流路を
遮断・解放し得る流路開閉手段としてのバルブ８７が設
置されている。

【００７３】次に、図２に示す細胞分離器具１Ｂを用い
た本発明の細胞分離方法について説明する。

【００７４】［Ｂ−０］〜［Ｂ−７］それぞれ、前記工
程［Ａ−０］〜［Ａ−７］と同様の工程を実行する。

【００７５】［Ｂ−８］血小板バッグ６への血小板の回
収が終了したら、バルブ８３、８４、８７を開、その他
のバルブを閉とし、ポンプ９１を逆回転させつつ針管７
２より生理食塩水（細胞の洗浄用液体）を供給する。こ
れにより、生理食塩水は、チャンバー７３、チューブ７
１、５１、細胞分離フィルター４、チューブ３２、２５
１、１８、チャンバー１９、チューブ２０、チャンバー
１０３、チューブ１０１および穿刺針１０２を介して移
送される。

【００７６】このとき、細胞分離フィルター４において
は、前述したように、生理食塩水の通過に伴い、濾過部
材４５に捕捉されていた白血球は、洗い出されて生理食
塩水中に混入する。従って、濾過部材４５に捕捉されて
いた白血球は、生理食塩水とともに供血者に返還され
る。

【００７７】［Ｂ−９］〜［Ｂ−１１］それぞれ、前記
工程［Ａ−１０］〜［Ａ−１２］と同様の工程を実行す
る。このような構成の細胞分離器具１Ｂでは、白血球混
入生理食塩水を、ローター１４２内の経路を通らない比
較的短い流路で供血者に返還できるので、返還できる白
血球数のロスを少なくすることができるという利点があ
る。

【００７８】図３は、本発明の細胞分離器具の他の構成
例を示す平面図である。同図に示す細胞分離器具１Ｃ
は、第３のライン７の構成が異なる以外は、前記細胞分
離器具１Ａと同様のものである。以下、細胞分離器具１
Ａと異なる点について説明し、同様の事項についてはそ
の説明を省略する。

【００７９】第３のライン７は、主に前記と同様のチュ
ーブ７１で構成されており、チューブ７１の基端は、Ｔ
字状の分岐コネクタ７４を介してチューブ５１の途中に
接続され、先端は、血液成分分離回路２に設置されたチ
ャンバー１９に接続されている。また、チューブ７１の
途中には、該チューブ７１の内部流路を遮断・解放し得
る流路開閉手段としてのバルブ８８が設置されている。

【００８０】次に、図３に示す細胞分離器具１Ｃを用い
た本発明の細胞分離方法について説明する。

【００８１】［Ｃ−０］〜［Ｃ−５］それぞれ、前記工
程［Ａ−０］〜［Ａ−５］と同様の工程を実行する。

【００８２】［Ｃ−６］上記工程［Ｃ−５］と前後し
て、バルブ８１、８８を開、その他のバルブを閉とし、
ポンプ９１を逆回転させて、血漿バッグ２１内の血漿
（細胞の洗浄用液体）を供給し、チューブ２４、チャン
バー１９、チューブ７１、５１、細胞分離フィルター４
およびチューブ３２の流路を血漿でプライミングしてお
く。

【００８３】［Ｃ−７］前記工程［Ａ−７］と同様の工
程を実行する。

【００８４】［Ｃ−８］血小板バッグ６への血小板の回
収が終了したら、バルブ８１、８８を開、その他のバル
ブを閉とし、ポンプ９１を逆回転させて、血漿バッグ２
１内の血漿（細胞の洗浄用液体）を、チューブ２４、チ
ャンバー１９、チューブ７１、５１、細胞分離フィルタ
ー４およびチューブ３２を介して移し、バフィーコート
バッグ３１内に回収する。

【００８５】このとき、細胞分離フィルター４において
は、血漿は、流出口４３より流入し、濾過部材４５を通
過して流入口４２より排出されるが、血漿の濾過部材４
５の通過に伴い、濾過部材４５に捕捉されていた白血球
は洗い出されて血漿中に混入し、血漿とともにバフィー
コートバッグ３１内に回収される。

【００８６】［Ｃ−９］バフィーコートバッグ３１への
白血球混入血漿の回収が終了したら、バルブ８３、８５
を開、その他のバルブを閉とし、ポンプ９３を作動（正
転）して、バフィーコートバッグ３１内の白血球混入血
漿を、チューブ１７、１５、ローター１４２内の流路、
管体１４１、チューブ１３、チャンバー１０３、チュー
ブ１０１および穿刺針１０２を介して、供血者に返還す
る。

【００８７】［Ｃ−１０］〜［Ｃ−１２］それぞれ、前
記工程［Ａ−１０］〜［Ａ−１２］と同様の工程を実行
する。このような構成の細胞分離器具１Ｃでは、洗浄用
液体として供血者の血漿を用いるため、供血者に返還さ
れる白血球の機能を維持する上で有利であり、また、不
要な液体を供血者に投与しないで済み、血液の希釈も防
止できるという利点がある。

【００８８】図４は、本発明の細胞分離器具の他の構成
例を示す平面図である。同図に示す細胞分離器具１Ｄ
は、第３のライン７の構成が異なる以外は、前記細胞分
離器具１Ｂと同様のものである。以下、細胞分離器具１
Ｂと異なる点について説明し、同様の事項についてはそ
の説明を省略する。

【００８９】第３のライン７は、主に前記と同様のチュ
ーブ７１で構成されており、チューブ７１の基端は、Ｔ
字状の分岐コネクタ７４を介してチューブ５１の途中に
接続され、先端は、Ｔ字状の分岐コネクタ７５を介して
血液成分分離回路２に設置されたチューブ２４の途中に
接続されている。また、チューブ７１の途中には、該チ
ューブ７１の内部流路を遮断・解放し得る流路開閉手段
としてのバルブ８８が設置されている。

【００９０】また、チューブ２４の分岐コネクタ７５と
チャンバー１９の間には、チューブ２４の内部流路を遮
断・解放し得る流路開閉手段としてのバルブ８９が設置
されている。

【００９１】次に、図４に示す細胞分離器具１Ｄを用い
た本発明の細胞分離方法について説明する。

【００９２】［Ｄ−０］〜［Ｄ−５］それぞれ、前記工
程［Ａ−０］〜［Ａ−５］と同様の工程を実行する。

【００９３】［Ｄ−６］上記工程［Ｄ−５］と前後し
て、バルブ８１、８８を開、その他のバルブを閉とし、
ポンプ９１を逆回転させて、血漿バッグ２１内の血漿
（細胞の洗浄用液体）を供給し、チューブ２４、７１、
５１、細胞分離フィルター４およびチューブ３２の流路
を血漿でプライミングしておく。

【００９４】［Ｄ−７］前記工程［Ａ−７］と同様の工
程を実行する。

【００９５】［Ｄ−８］血小板バッグ６への血小板の回
収が終了したら、バルブ８３、８４、８７、８８を開、
その他のバルブを閉とし、ポンプ９１を逆回転させて、
血漿バッグ２１内の血漿（細胞の洗浄用液体）を、チュ
ーブ２４、７１、５１、細胞分離フィルター４、チュー
ブ３２、２５１、１８、チャンバー１９、チューブ２
０、チャンバー１０３、チューブ１０１および穿刺針１
０２を介して移送する。

【００９６】このとき、細胞分離フィルター４において
は、前述したように、血漿の通過に伴い、濾過部材４５
に捕捉されていた白血球は、洗い出されて血漿中に混入
する。従って、濾過部材４５に捕捉されていた白血球
は、血漿とともに供血者に返還される。

【００９７】［Ｄ−９］〜［Ｄ−１１］それぞれ、前記
工程［Ａ−１０］〜［Ａ−１２］と同様の工程を実行す
る。このような構成の細胞分離器具１Ｄは、前述した細
胞分離器具１Ｂと細胞分離器具１Ｃとの利点を兼ね備え
ている。

【００９８】次に、本発明の細胞分離器具および細胞分
離方法の具体的実施例について説明する。

【００９９】（実施例１）図１に示す構成の細胞分離器
具１Ａを用い、前述した細胞分離方法に従い、供血者か
らの採血（複数のドナーから採血した同一血液型の血液
をプール）、遠心分離器による血液成分の分離、バフィ
ーコートからの白血球の分離、除去による血小板の回
収、洗浄用液体による細胞分離フィルターの洗浄および
白血球を含む洗浄用液体の供血者への返還（採血針１０
２に空バッグを接続し、この空バッグ内に白血球を含む
洗浄用液体を採取）の各工程を順次行った。

【０１００】遠心分離器は、ヘモネティクス社製の遠心
ボール（容量：２２５ml）を用いた。また、細胞分離フ
ィルターは、図５に示す構造であって、ポリウレタン製
多孔質体よりなる膜２枚の積層体（厚さ：４mm、有効濾
過面積：２５cm² ）を濾過部材としたものを用いた。

【０１０１】各ポンプは、正転／逆転可能なローラポン
プを用いた。各バルブは、流路の開閉を自動制御し得る
チューブ圧閉式の電磁バルブを用いた。各バッグおよび
各チューブは、いずれもＤｎＤＰ可塑化ポリ塩化ビニル
製のものを用いた。採血量は、約４５００mlであった。
また、洗浄用液体である生理食塩水は、１００ml供給し
た。

【０１０２】（実施例２）図２に示す構成の細胞分離器
具１Ｂを用い、前述した細胞分離方法に従い、供血者か
らの採血（複数のドナーから採血した同一血液型の血液
をプール）、遠心分離器による血液成分の分離、バフィ
ーコートからの白血球の分離、除去による血小板の回
収、洗浄用液体による細胞分離フィルターの洗浄および
白血球を含む洗浄用液体の供血者への返還（採血針１０
２に空バッグを接続し、この空バッグ内に白血球を含む
洗浄用液体を採取）の各工程を順次行った。

【０１０３】遠心分離器、細胞分離フィルター、各ポン
プ、各バルブ、各バッグおよび各チューブは、いずれ
も、前記実施例１と同様のものを用いた。採血量は、約
４５００mlであった。また、洗浄用液体である生理食塩
水は、１００ml供給した。

【０１０４】（実施例３）図３に示す構成の細胞分離器
具１Ｃを用い、前述した細胞分離方法に従い、供血者か
らの採血（複数のドナーから採血した同一血液型の血液
をプール）、遠心分離器による血液成分の分離、バフィ
ーコートからの白血球の分離、除去による血小板の回
収、洗浄用液体による細胞分離フィルターの洗浄および
白血球を含む洗浄用液体の供血者への返還（採血針１０
２に空バッグを接続し、この空バッグ内に白血球を含む
洗浄用液体を採取）の各工程を順次行った。

【０１０５】遠心分離器、細胞分離フィルター、各ポン
プ、各バルブ、各バッグおよび各チューブは、いずれ
も、前記実施例１と同様のものを用いた。採血量は、約
４５００mlであった。また、洗浄用液体である血漿は、
１００ml供給した。

【０１０６】（実施例４）図４に示す構成の細胞分離器
具１Ｄを用い、前述した細胞分離方法に従い、供血者か
らの採血（複数のドナーから採血した同一血液型の血液
をプール）、遠心分離器による血液成分の分離、バフィ
ーコートからの白血球の分離、除去による血小板の回
収、洗浄用液体による細胞分離フィルターの洗浄および
白血球を含む洗浄用液体の供血者への返還（採血針１０
２に空バッグを接続し、この空バッグ内に白血球を含む
洗浄用液体を採取）の各工程を順次行った。

【０１０７】遠心分離器、細胞分離フィルター、各ポン
プ、各バルブ、各バッグおよび各チューブは、いずれ
も、前記実施例１と同様のものを用いた。採血量は、約
４５００mlであった。また、洗浄用液体である血漿は、
１００ml供給した。

【０１０８】＜実験および評価＞上記実施例１〜４につ
いて、バフィーコートバッグ３１に回収されたバフィ
ーコート、血小板バッグ６に回収された濃厚血小板血
漿、および細胞分離フィルター４を通過後の白血球混
入洗浄用液体をそれぞれサンプリングし、これらに含ま
れる白血球数を測定した。また、については、血小板
数も測定した。これらの測定結果を下記表１に示す。

【０１０９】なお、細胞数の測定方法は、についての
白血球数は、希釈、染色後、血球計算板（Nageotte血算
板）を用いて視算し、その他は、自動血球計数装置（東
亜医用電子社製、Sysmex K-2000 型）を用いた。

【０１１０】

【表１】

【０１１１】上記表１の結果から明らかなように、実施
例１〜４については、いずれも、細胞分離フィルターで
分離、除去された白血球の大半を、供血者に返還できる
ことが確認された。

【０１１２】本発明の細胞分離器具において、第１、第
２、第３、第４および第５のラインは、それぞれ、図示
の構成に限定されない。例えば、第１のラインは、バッ
グ３１を有さず、チューブ３２のみで構成されていても
よい。また、第２のラインにおいて、分岐コネクタ５
２、チューブ５３および空気貯留バッグ５４は、省略さ
れていてもよい。また、第２のラインに複数の血小板バ
ッグ６が接続されていてもよい。さらに、図１および図
２に示す構成において、第３のライン７は、チューブ７
１の先端に、洗浄用液体を貯留する可撓性を有するバッ
グ（容器）が接続されていてもよい。

【０１１３】また、ポンプ９１を有さず、落差によって
バフィーコートや洗浄用液体の移送を行う構成としても
よい。なお、本発明において、容器、第２の容器、第３
の容器は、それぞれ、前記可撓性を有するバッグに限ら
ず、例えば、ボトル等の硬質の容器であってもよい。

【０１１４】さらに、血液成分分離回路の構成や血液成
分の分離方法（操作手順）も、前記各実施例のものに限
定されない。本発明の細胞分離器具は、各図に示す実施
例と異なり、血液成分分離回路、特に第５のラインを有
する血液成分分離回路が接続されていないものであって
もよい。この場合、例えば特公昭６１−３０５８２号公
報に記載されたチューブ接続装置および接続方法を用い
て、例えば第１のラインのチューブや第３のラインのチ
ューブと、血液成分分離回路に設置された所定のチュー
ブとを無菌的に接続することができ、これにより、採血
から白血球の返血までの操作を閉鎖系にて無菌的に行う
ことができる。

【０１１５】なお、本発明は、前述したバフィーコート
から白血球を除去して血小板製剤を得るのに適用する場
合に限らず、例えば、血液中から血漿製剤、アルブミン
製剤、赤血球製剤等を製造する場合に適用してもよく、
また、洗浄用液体により回収される細胞も、白血球（リ
ンパ球）に限定されない。

【０１１６】また、本発明は、細胞の培養やそれに関連
した操作に適用することもできる。この場合、洗浄用液
体としては、例えば、ＲＰＭＩ１６４０培地、１９９倍
地、イーグル培地のような各種細胞培養用の液体培地を
用いることができる。

【０１１７】また、洗浄用液体を媒介にして細胞分離フ
ィルターから回収された細胞は、前記各実施例のよう
に、供血者に直ちに返還する場合に限らず、例えば容器
に貯留して後に返還したり、あるいは他の目的で利用す
ることもできる。

【０１１８】

【発明の効果】以上述べたように、本発明の細胞分離器
具および細胞分離方法によれば、細胞分離フィルターに
より、所定の細胞を分離、除去するため、例えば血液製
剤を得るに際し、その血液製剤中の白血球（特にリンパ
球）の除去率が高くなり、肝炎、エイズ、ＧＶＨＤ等の
感染をより高い確率で防止することができる。

【０１１９】また、細胞分離フィルターにて分離、除去
された細胞を、洗浄用液体を媒介として回収するため、
回収された該細胞を有効に利用することができ、特に、
成分採血に際し、細胞分離フィルターにて分離、除去さ
れた白血球を供血者に返還することができるので、白血
球の欠乏による免疫力の一時的な低下を防止することが
できる。

【０１２０】また、洗浄用液体として、電解質液、糖液
または血漿のような血液成分を用いる場合には、回収す
る細胞の機能を良好な状態に維持し得るとともに、生体
に対し悪影響を及ぼさない。

【図面の簡単な説明】

【図１】本発明の細胞分離器具の構成例を示す平面図で
ある。

【図２】本発明の細胞分離器具の構成例を示す平面図で
ある。

【図３】本発明の細胞分離器具の他の構成例を示す平面
図である。

【図４】本発明の細胞分離器具の他の構成例を示す平面
図である。

【図５】本発明の細胞分離器具における細胞分離フィル
ターの構成例を示す断面図である。

【符号の説明】

１Ａ、１Ｂ、１Ｃ、１Ｄ 細胞分離器具 ２ 血液成分分離回路 ３ 第１のライン ３１ バフィーコートバッグ ３２ チューブ ４ 細胞分離フィルター ４１ ケーシング ４２ 流入口 ４３ 流出口 ４４ 凹部 ４５ 濾過部材 ５ 第２のライン ５１ チューブ ５２ 分岐コネクタ ５３ チューブ ５４ 空気貯留バッグ ６ 血小板バッグ ７ 第３のライン ７１ チューブ ７２ 針管 ７３ チャンバー ７４、７５ 分岐コネクタ ８１〜８９ バルブ ９１〜９３ ポンプ １０ 第５のライン １０１ チューブ １０２ 採血針 １０３ チャンバー １０４ 分岐コネクタ １０５ チューブ １０６ 針管 １０７ チャンバー １０８ 分岐コネクタ １０９ チューブ １１０ 針管 １１１ チャンバー １２ 分岐コネクタ １３ チューブ １４ 遠心ボール １４１ 管体 １４２ ローター １４３ 流入口 １４４ 流出口 １５ チューブ １６ 分岐コネクタ １７、１８ チューブ １９ チャンバー ２０ チューブ ２１ 血漿バッグ ２２ 血漿バッグ用空気貯留バッグ ２３、２４ チューブ ２５ 第４のライン ２５１ チューブ ２５２、２５３ 分岐コネクタ

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (56)参考文献 特開 昭55−15448（ＪＰ，Ａ) 特開 平３−73825（ＪＰ，Ａ) 特開 平３−287067（ＪＰ，Ａ) 特表 昭62−502174（ＪＰ，Ａ) 特表 平７−507463（ＪＰ，Ａ) 特表 平７−509153（ＪＰ，Ａ) (58)調査した分野(Int.Cl.⁷，ＤＢ名) A61M 1/02 570 A61M 1/02 520 A61J 3/00 300 A61K 35/14

Claims (7)

(57)【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 第１の血液成分を供給する第１のライン
   と、該第１のラインから供給された第１の血液成分中か
   ら所定の細胞を分離除去する細胞分離フィルターと、該
   細胞分離フィルターを通過した第２の血液成分を貯留す
   る容器と、前記細胞分離フィルターと前記容器とを接続
   する第２のラインと、前記第２のラインの途中に接続さ
   れ、前記細胞分離フィルターに洗浄用液体を供給する第
   ３のラインとを有することを特徴とする細胞分離器具。
2. 【請求項２】 前記第１のラインの途中にポンプが設置
   されている請求項１に記載の細胞分離器具。
3. 【請求項３】 採血血液より少なくとも前記第１の血液
   成分と第３の血液成分とを得る血液成分分離回路を有
   し、該血液成分分離回路により得られた前記第１の血液
   成分を前記第１のラインへ移送するよう構成されている
   請求項１または２に記載の細胞分離器具。
4. 【請求項４】 第１のラインから第１の血液成分を供給
   し、細胞分離フィルターを通過させて、所定の細胞が分
   離除去された第２の血液成分を得、該第２の血液成分を
   第２のラインを介して容器に回収した後、前記第２のラ
   インの途中に接続された第３のラインから前記細胞分離
   フィルターに洗浄用液体を供給し、前記細胞分離フィル
   ターに捕捉されている細胞を前記洗浄用液体とともに前
   記第１のラインへ逆送することを特徴とする細胞分離方
   法。
5. 【請求項５】 血液成分分離回路により採血血液を分離
   して第１の血液成分を得、該第１の血液成分を第１のラ
   インから供給し、細胞分離フィルターを通過させて、所
   定の細胞が分離除去された第２の血液成分を得、該第２
   の血液成分を第２のラインを介して容器に回収した後、
   前記第２のラインの途中に接続された第３のラインから
   前記細胞分離フィルターに洗浄用液体を供給し、前記細
   胞分離フィルターに捕捉されている細胞を前記洗浄用液
   体とともに前記第１のラインへ逆送することを特徴とす
   る細胞分離方法。
6. 【請求項６】 血液成分分離回路により採血血液を分離
   して第１の血液成分および第３の血液成分を得、前記第
   １の血液成分を第１のラインから供給し、細胞分離フィ
   ルターを通過させて、所定の細胞が分離除去された第２
   の血液成分を得、該第２の血液成分を第２のラインを介
   して容器に回収した後、前記第２のラインの途中に接続
   された第３のラインから前記細胞分離フィルターに前記
   第３の血液成分を供給し、前記細胞分離フィルターに捕
   捉されている細胞を前記第３の血液成分とともに前記第
   １のラインへ逆送することを特徴とする細胞分離方法。
7. 【請求項７】 血液成分分離回路により採血血液を分離
   して第１の血液成分および第３の血液成分を得、前記第
   １の血液成分を第１のラインから供給し、細胞分離フィ
   ルターを通過させて、所定の細胞が分離除去された第２
   の血液成分を得、該第２の血液成分を第２のラインを介
   して容器に回収した後、前記第２のラインの途中に接続
   された第３のラインから前記細胞分離フィルターに前記
   第３の血液成分を供給し、前記細胞分離フィルターに捕
   捉されている細胞を前記第３の血液成分とともに前記第
   １のラインへ逆送し、さらに、この細胞を含む第３の血
   液成分を前記第１のラインの途中に接続された第４のラ
   インを介して前記血液成分分離回路へ移送することを特
   徴とする細胞分離方法。