JP3267980B2 - 神経薬スクリーニング - Google Patents
神経薬スクリーニングInfo
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- JP3267980B2 JP3267980B2 JP51593897A JP51593897A JP3267980B2 JP 3267980 B2 JP3267980 B2 JP 3267980B2 JP 51593897 A JP51593897 A JP 51593897A JP 51593897 A JP51593897 A JP 51593897A JP 3267980 B2 JP3267980 B2 JP 3267980B2
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- mixture
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- C07K14/71—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants for growth factors; for growth regulators
-
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- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/475—Growth factors; Growth regulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
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- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】 この出願においてなされた研究は、国立衛生研究所の
補助金によって一部支援されたものである。合衆国政府
はこの出願についての特許に対して権利を有するもので
ある。
補助金によって一部支援されたものである。合衆国政府
はこの出願についての特許に対して権利を有するもので
ある。
緒言 分野 本発明の技術分野は、哺乳動物のネトリン（netrin）
と哺乳動物ネトリンレセプターを用いた神経薬スクリー
ニングである。
と哺乳動物ネトリンレセプターを用いた神経薬スクリー
ニングである。
背景 ネトリンは、発育する軸索の成長の大きな調節物質で
あり、或る軸索の誘因物質として、また他の軸索の忌避
物質として作用する、一群の蛋白質である。それ自体、
これらの効果の調節は、成人神経系の軸索の再生（例え
ば、傷害や外傷に続くもの）を援助する重要な治療経路
を与える。
あり、或る軸索の誘因物質として、また他の軸索の忌避
物質として作用する、一群の蛋白質である。それ自体、
これらの効果の調節は、成人神経系の軸索の再生（例え
ば、傷害や外傷に続くもの）を援助する重要な治療経路
を与える。
ネトリン活性の調節物質の高処理医薬スクリーンを構
築する能力は、同定できる哺乳動物ネトリンがないため
に制限されていた。ネトリンに対する神経応答を媒介す
る軸索上のレセプターを同定することは、神経系の治療
に関与する先導的な医薬を同定するための重要な標的を
提供することになる。
築する能力は、同定できる哺乳動物ネトリンがないため
に制限されていた。ネトリンに対する神経応答を媒介す
る軸索上のレセプターを同定することは、神経系の治療
に関与する先導的な医薬を同定するための重要な標的を
提供することになる。
関連文献 イシイら（1992）Neuron 9,873−881,は、哺乳動物の
ネトリン遺伝子に類似の配列を有するネマトーダ遺伝
子、unc−６を記載している。Leung−Hagensteinら（19
92）Cell 71,289−299,Hedgecockら（1990）Neuron 2,6
1−85及びHamelinら（1993）Nature 364,327−330は、
脊椎動物遺伝子、「結腸直腸癌に欠落しているもの（DC
C）」“Deleted in Colorectal Carcinoma"（DCC）及び
ネオゲニン（neogenin）に類似した配列を有する、unc
−６と同じ遺伝子経路にある２つの他の遺伝子、unc−
５及びunc−40を記載している（Fearonら（1990）Scien
ce 247,49−56,Hendrickら（1994）及びVielmetterら
（1994）JCB 127,2009−2020）。Choら（1995）Current
Opinion in Genetics and Development 5,72−78は、D
CC機能の最新のレビューを記載している。さらに下記の
文献も参照されたい。Colamarino ＆ Tessie−Lavigne
（1995）Cell 81,621−629;Kennedyら（1994）Cell 78,
425−435;及びSerafiniら（1994）Cell 71,289−299。
ネトリン遺伝子に類似の配列を有するネマトーダ遺伝
子、unc−６を記載している。Leung−Hagensteinら（19
92）Cell 71,289−299,Hedgecockら（1990）Neuron 2,6
1−85及びHamelinら（1993）Nature 364,327−330は、
脊椎動物遺伝子、「結腸直腸癌に欠落しているもの（DC
C）」“Deleted in Colorectal Carcinoma"（DCC）及び
ネオゲニン（neogenin）に類似した配列を有する、unc
−６と同じ遺伝子経路にある２つの他の遺伝子、unc−
５及びunc−40を記載している（Fearonら（1990）Scien
ce 247,49−56,Hendrickら（1994）及びVielmetterら
（1994）JCB 127,2009−2020）。Choら（1995）Current
Opinion in Genetics and Development 5,72−78は、D
CC機能の最新のレビューを記載している。さらに下記の
文献も参照されたい。Colamarino ＆ Tessie−Lavigne
（1995）Cell 81,621−629;Kennedyら（1994）Cell 78,
425−435;及びSerafiniら（1994）Cell 71,289−299。
発明の概要 本発明は、神経疾患又は神経傷害の診断又は治療に有
用な薬剤の候補化合物を同定するための方法及び組成物
を提供するものである。特に、本発明は、単離されたネ
トリンと、このネトリンに特異的に結合し得る、単離さ
れた天然ネトリンレセプターを含む混合物を提供するも
のである。ネトリンレセプターの例としては、DCC及び
ネオゲニンがある。この一般的な方法は、単離されたネ
トリン、単離された天然ネトリンレセプター、及び候補
となる薬剤を含む混合物をインキュベートし、該薬剤の
存在が、レセプターに対するネトリンの結合を調節する
かどうかを決定する工程を含む。特定の薬剤は、神経疾
患又は神経傷害の診断又は治療に有用な薬剤のための候
補化合物を与える。
用な薬剤の候補化合物を同定するための方法及び組成物
を提供するものである。特に、本発明は、単離されたネ
トリンと、このネトリンに特異的に結合し得る、単離さ
れた天然ネトリンレセプターを含む混合物を提供するも
のである。ネトリンレセプターの例としては、DCC及び
ネオゲニンがある。この一般的な方法は、単離されたネ
トリン、単離された天然ネトリンレセプター、及び候補
となる薬剤を含む混合物をインキュベートし、該薬剤の
存在が、レセプターに対するネトリンの結合を調節する
かどうかを決定する工程を含む。特定の薬剤は、神経疾
患又は神経傷害の診断又は治療に有用な薬剤のための候
補化合物を与える。
詳細な説明 本発明は、哺乳動物、特にヒトの、神経疾患又は神経
傷害の診断又は治療に有用な生理活性物質又は薬剤を同
定するための方法及び組成物を提供するものである。こ
の方法は、哺乳動物、特にヒトの、ネトリンと、対応す
るネトリンレセプターの相互作用を、候補薬剤の存在下
及び非存在下でモニターするというものである。レセプ
ター活性化アッセイ、結合アッセイをはじめとする、広
範な種類のアッセイが利用できる。結合アッセイは、細
胞上に発現した全長レセプターの細胞外領域に対するネ
トリンの結合、又はＣ末端を切り詰めたレセプターに対
するネトリンのインビトロ蛋白質−蛋白質結合をモニタ
ーすることができる。一般的には、このようなインビト
ロスクリーニングは、固体基質への結合パートナーの一
方の固定化を含んでいる。
傷害の診断又は治療に有用な生理活性物質又は薬剤を同
定するための方法及び組成物を提供するものである。こ
の方法は、哺乳動物、特にヒトの、ネトリンと、対応す
るネトリンレセプターの相互作用を、候補薬剤の存在下
及び非存在下でモニターするというものである。レセプ
ター活性化アッセイ、結合アッセイをはじめとする、広
範な種類のアッセイが利用できる。結合アッセイは、細
胞上に発現した全長レセプターの細胞外領域に対するネ
トリンの結合、又はＣ末端を切り詰めたレセプターに対
するネトリンのインビトロ蛋白質−蛋白質結合をモニタ
ーすることができる。一般的には、このようなインビト
ロスクリーニングは、固体基質への結合パートナーの一
方の固定化を含んでいる。
このアッセイは、単離されたネトリンと、このネトリ
ンに特異的に結合することができる単離された天然ネト
リンレセプターを含む混合物を使用する。このアッセイ
に使用するネトリンレセプターの例としては、DCC及び
ネオゲニンがある。本発明者は、これらの哺乳動物遺伝
子産物が天然の哺乳動物、特にヒトの、ネトリンレセプ
ターとして機能することを見いだした。本発明の方法
は、神経疾患又は神経障害の診断又は治療に有用な薬剤
のための候補化合物又は生理活性物質を同定する方法に
おいて、 単離された哺乳動物ネトリン、及び単離された天然の
哺乳動物ネトリンレセプターであって、結腸直腸癌に欠
落しているもの（DCC）及びネオゲニンからなる群から
選ばれたもの、を含む第１の混合物を形成し； 該第１の混合物を、所定の条件下でインキュベートし
て、該ネトリンを該ネトリンレセプターに特異的に結合
させ、該ネトリンレセプターに対する該ネトリンの第１
結合親和力を検出し； 単離された哺乳動物ネトリン、単離された天然の哺乳
動物ネトリンレセプターであって、結腸直腸癌に欠落し
ているもの（DCC）及びネオゲニンからなる群から選ば
れたもの、及び候補化合物又は生理活性物質、を含む第
２の混合物を形成し； 該第２の混合物を、所定の条件下でインキュベートし
て、該ネトリンを該ネトリンレセプターに特異的に結合
させ、該ネトリンレセプターに対する該ネトリンの第２
結合親和力を検出し； 該第１結合親和力と該第２結合親和力を比較し； 該第１結合親和力と該第２結合親和力の差が有意であ
る場合に、前記候補化合物又は生理活性物質が、神経疾
患又は神経障害の診断又は治療に有用な薬剤のための候
補化合物又は生理活性物質であると判断することを特徴
とする、上記方法。
ンに特異的に結合することができる単離された天然ネト
リンレセプターを含む混合物を使用する。このアッセイ
に使用するネトリンレセプターの例としては、DCC及び
ネオゲニンがある。本発明者は、これらの哺乳動物遺伝
子産物が天然の哺乳動物、特にヒトの、ネトリンレセプ
ターとして機能することを見いだした。本発明の方法
は、神経疾患又は神経障害の診断又は治療に有用な薬剤
のための候補化合物又は生理活性物質を同定する方法に
おいて、 単離された哺乳動物ネトリン、及び単離された天然の
哺乳動物ネトリンレセプターであって、結腸直腸癌に欠
落しているもの（DCC）及びネオゲニンからなる群から
選ばれたもの、を含む第１の混合物を形成し； 該第１の混合物を、所定の条件下でインキュベートし
て、該ネトリンを該ネトリンレセプターに特異的に結合
させ、該ネトリンレセプターに対する該ネトリンの第１
結合親和力を検出し； 単離された哺乳動物ネトリン、単離された天然の哺乳
動物ネトリンレセプターであって、結腸直腸癌に欠落し
ているもの（DCC）及びネオゲニンからなる群から選ば
れたもの、及び候補化合物又は生理活性物質、を含む第
２の混合物を形成し； 該第２の混合物を、所定の条件下でインキュベートし
て、該ネトリンを該ネトリンレセプターに特異的に結合
させ、該ネトリンレセプターに対する該ネトリンの第２
結合親和力を検出し； 該第１結合親和力と該第２結合親和力を比較し； 該第１結合親和力と該第２結合親和力の差が有意であ
る場合に、前記候補化合物又は生理活性物質が、神経疾
患又は神経障害の診断又は治療に有用な薬剤のための候
補化合物又は生理活性物質であると判断することを特徴
とする、上記方法。
以下の例示的なアッセイは、例示の目的で示すもので
あり、限定的なものではない。トランスフェクトしたCO
S細胞のリガンドスクリーニング。
あり、限定的なものではない。トランスフェクトしたCO
S細胞のリガンドスクリーニング。
Ｉ リガンドの調製 発現構築物：標的ネトリンをコードするcDNAをヒトIg
GのFc部分で標識し、293発現ベクターにサブクローニン
グする（pCEP4:In Vitrogen）。
GのFc部分で標識し、293発現ベクターにサブクローニン
グする（pCEP4:In Vitrogen）。
トランスフェクション:293EBNA細胞を、ネトリン発現
構築物でトランスフェクトする（CaPO4法）。24時間
後、回収し、トランスフェクト細胞を、G418（ゲネティ
シン,250μg/ml,ギブコ）及びハイグロマイシン（200μ
g/ml）で選択する。選択処理が完了したら細胞をダルベ
ッコ改変イーグル培地（DME）/10％FCS中に、選択条件
下に保持する。
構築物でトランスフェクトする（CaPO4法）。24時間
後、回収し、トランスフェクト細胞を、G418（ゲネティ
シン,250μg/ml,ギブコ）及びハイグロマイシン（200μ
g/ml）で選択する。選択処理が完了したら細胞をダルベ
ッコ改変イーグル培地（DME）/10％FCS中に、選択条件
下に保持する。
調整培地の調製：血清含有培地を、グルタマックス−
１（ギブコ）と300ng/mlへパリン（シグマ）を含むオプ
チメン（Optimem）に置き換え、細胞を３日間調整す
る。この培地を集め、3,000xgで10分間遠心する。上清
を濾過し（0.45μｍ）、0.1％アジドを加え、４℃で２
週間以内、保存する。
１（ギブコ）と300ng/mlへパリン（シグマ）を含むオプ
チメン（Optimem）に置き換え、細胞を３日間調整す
る。この培地を集め、3,000xgで10分間遠心する。上清
を濾過し（0.45μｍ）、0.1％アジドを加え、４℃で２
週間以内、保存する。
II 繰り詰めたレセプターの調製（ポジティブコントロ
ール） 発現構築物：細胞外領域を含む対応するネトリンレセ
プター欠落変異体をコードするcDNA（経膜領域のＮ末端
で切り詰めた）を293発現ベクターにサブクローニング
する（pCEP4:In Vitrogen）。
ール） 発現構築物：細胞外領域を含む対応するネトリンレセ
プター欠落変異体をコードするcDNA（経膜領域のＮ末端
で切り詰めた）を293発現ベクターにサブクローニング
する（pCEP4:In Vitrogen）。
トランスフェクション:293EBNA細胞を、レセプター変
異体発現構築物でトランスフェクトする（CaPO4法）。2
4時間後、回収し、トランスフェクト細胞を、G418（ゲ
ネティシン,250μg/ml,ギブコ）及びハイグロマイシン
（200μg/ml）で選択する。選択処理が完了したら細胞
をダルベッコ改変イーグル培地（DME）/10％FCS中に、
選択条件下に保持する。
異体発現構築物でトランスフェクトする（CaPO4法）。2
4時間後、回収し、トランスフェクト細胞を、G418（ゲ
ネティシン,250μg/ml,ギブコ）及びハイグロマイシン
（200μg/ml）で選択する。選択処理が完了したら細胞
をダルベッコ改変イーグル培地（DME）/10％FCS中に、
選択条件下に保持する。
調整培地の調製：血清含有培地を、グルタマックス−
１（ギブコ）と300ng/mlへパリン（シグマ）を含むオプ
チメン（Optimem）に置き換え、細胞を３日間調整す
る。この培地を集め、3,000xgで10分間遠心する。上清
を濾過し（0.45μｍ）、0.1％アジドを加え、４℃で２
週間以内、保存する。
１（ギブコ）と300ng/mlへパリン（シグマ）を含むオプ
チメン（Optimem）に置き換え、細胞を３日間調整す
る。この培地を集め、3,000xgで10分間遠心する。上清
を濾過し（0.45μｍ）、0.1％アジドを加え、４℃で２
週間以内、保存する。
II トランスフェクトCOS細胞 COS細胞（250,000）を35mm皿の2mlDEM/10％FCSに播
く。
く。
18〜24時間後、１μｇのネトリンレセプターをコード
するDNA（pMT21発現ベクターにクローニングしたcDNA）
を血清を含まない培地200μｌに希釈し、６μｌのリポ
フェクタミン（ギブコ）を加える。この溶液を室温で15
〜45分間インキュベートする。
するDNA（pMT21発現ベクターにクローニングしたcDNA）
を血清を含まない培地200μｌに希釈し、６μｌのリポ
フェクタミン（ギブコ）を加える。この溶液を室温で15
〜45分間インキュベートする。
この細胞をPBSで２回洗浄する。脂質−DNA複合体を含
む試験管に血清を含まない培地800μｌを加える。この
溶液を洗浄した細胞の上にのせる。
む試験管に血清を含まない培地800μｌを加える。この
溶液を洗浄した細胞の上にのせる。
６時間インキュベートする。1mlDMA/20％FCSを加えて
反応を停止する。細胞をリフィードする。12時間後アッ
セイを行う。
反応を停止する。細胞をリフィードする。12時間後アッ
セイを行う。
III リガンド結合アッセイ トランスフェクトCOS細胞のプレートを冷PBS（プラス
Ca/Mg）/1％ヤギ血清で１回洗浄する。1mlの調整培地
（ニート）を加え、室温で90分間インキュベートする。
Ca/Mg）/1％ヤギ血清で１回洗浄する。1mlの調整培地
（ニート）を加え、室温で90分間インキュベートする。
プレートをPBS（プラスCa/Mg）で３回洗浄する。４回
目の洗浄の際、1mlPBSに対して1mlの50％メタノールを
加える。次いで、1mlのメタノールを加える。空気を抜
いてから1mlメタノールを加える。
目の洗浄の際、1mlPBSに対して1mlの50％メタノールを
加える。次いで、1mlのメタノールを加える。空気を抜
いてから1mlメタノールを加える。
PBSで１回洗浄する。PBS/1％ヤギ血清で１回洗浄す
る。
る。
PBS/1％ヤギ血清中の第２抗体（アルカリ性ホスファ
ターゼに結合した１対2,000抗ヒトFc（Jackson Lab））
を加える。室温で30〜40分間インキュベートする。
ターゼに結合した１対2,000抗ヒトFc（Jackson Lab））
を加える。室温で30〜40分間インキュベートする。
PBSで３回洗浄する。アルカリ性ホスファターゼバッ
ファー（100mM Tris−Cl,pH9.5,100mM NaCl,5mM MgC
l2）で１回洗浄する。アルカリ性ホスファターゼ試薬を
調整する：アルカリ性ホスファターゼバッファー中に、
4.5μl/ml NBTと3.5μl/ml BCIP（ギブコ）を含む。
ファー（100mM Tris−Cl,pH9.5,100mM NaCl,5mM MgC
l2）で１回洗浄する。アルカリ性ホスファターゼ試薬を
調整する：アルカリ性ホスファターゼバッファー中に、
4.5μl/ml NBTと3.5μl/ml BCIP（ギブコ）を含む。
10〜30分間インキュベートし、20mM EDTAのPBS溶液で
冷却する。
冷却する。
ネトリンに結合した細胞は、暗紫色の反応生成物の存
在によって眼で見える。
在によって眼で見える。
平行してインキュベーションを行い、希釈系列の変異
体レセプター調整培地と結合したネトリンを滴定するこ
とにより、ポジティブコントロールを与える。
体レセプター調整培地と結合したネトリンを滴定するこ
とにより、ポジティブコントロールを与える。
IV 結果：ネトリンレセプターに対するネトリンの結合 哺乳動物ネトリンを発現する細胞はネトリンレセプタ
ーに結合することが示された。第２抗体存在下で、ネト
リン−Fc融合の不存在下では、対照COS細胞又はレセプ
ター発現COS細胞との反応性は観察されなかった。ネト
リンが直接にアルカリ性ホスファターゼに融合し、第２
抗体を必要としない構築物を使用したレセプター発現細
胞に対する結合は観察された。レセプター欠落変位体
は、阻害アッセイのためのポジティブコントロールとし
て作用する、ネトリン−レセプター結合を滴定する。
ーに結合することが示された。第２抗体存在下で、ネト
リン−Fc融合の不存在下では、対照COS細胞又はレセプ
ター発現COS細胞との反応性は観察されなかった。ネト
リンが直接にアルカリ性ホスファターゼに融合し、第２
抗体を必要としない構築物を使用したレセプター発現細
胞に対する結合は観察された。レセプター欠落変位体
は、阻害アッセイのためのポジティブコントロールとし
て作用する、ネトリン−レセプター結合を滴定する。
この明細書に引用したすべての刊行物及び特許出願の
内容は、各刊行物又は特許出願が具体的にかつ個別に参
照されることにより、この明細書に含まれるものとす
る。本発明の理解を容易ならしめるために、本発明を例
示により詳細に説明したが、本発明の開示に照らし、特
許請求の範囲の精神及び範囲を逸脱することなく変更、
改変を行うことができることは当業者に明らかなところ
である。
内容は、各刊行物又は特許出願が具体的にかつ個別に参
照されることにより、この明細書に含まれるものとす
る。本発明の理解を容易ならしめるために、本発明を例
示により詳細に説明したが、本発明の開示に照らし、特
許請求の範囲の精神及び範囲を逸脱することなく変更、
改変を行うことができることは当業者に明らかなところ
である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ // Ｃ１２Ｎ 15/09 Ｃ１２Ｎ 15/00 Ａ (72)発明者 マス カスコ アメリカ合衆国 カリフォルニア州 94143 サンフランシスコ（番地なし) ユーシーエスエフ デパートメント ア ナトミー (72)発明者 マス マサユキ アメリカ合衆国 カリフォルニア州 94143 サンフランシスコ（番地なし) ユーシーエスエフ デパートメント ア ナトミー (72)発明者 レナード ディヴィッド アメリカ合衆国 カリフォルニア州 94143 サンフランシスコ（番地なし) ユーシーエスエフ デパートメント ア ナトミー (72)発明者 テッシエール ラヴィーニュ マルク アメリカ合衆国 カリフォルニア州 94143 サンフランシスコ（番地なし) ユーシーエスエフ デパートメント ア ナトミー (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) C12Q 1/02 G01N 33/53 - 33/566 ＢＩＯＳＩＳ（ＤＩＡＬＯＧ) ＭＥＤＬＩＮＥ（ＳＴＮ) ＷＰＩ（ＤＩＡＬＯＧ)
Claims (8)
- 【請求項１】単離された哺乳動物のネトリンと、該ネト
リンに特異的に結合し得る単離された天然の哺乳動物ネ
トリンレセプターを含み、該レセプターが、結腸直腸癌
に欠落しているもの（DCC）及びネオゲニンからなる群
から選ばれたものである混合物。 - 【請求項２】ネトリンがヒトネトリンである請求項１記
載の混合物。 - 【請求項３】レセプターが結腸直腸癌に欠落している
（DCC）ものである請求項１記載の混合物。 - 【請求項４】レセプターがネオゲニンである請求項１記
載の混合物。 - 【請求項５】神経疾患又は神経障害の診断又は治療に有
用な薬剤のための候補化合物又は生理活性物質を同定す
る方法において、 単離された哺乳動物ネトリン、及び単離された天然の哺
乳動物ネトリンレセプターであって、結腸直腸癌に欠落
しているもの（DCC）及びネオゲニンからなる群から選
ばれたもの、を含む第１の混合物を形成し； 該第１の混合物を、所定の条件下でインキュベートし
て、該ネトリンを該ネトリンレセプターに特異的に結合
させ、該ネトリンレセプターに対する該ネトリンの第１
結合親和力を検出し； 単離された哺乳動物ネトリン、単離された天然の哺乳動
物ネトリンレセプターであって、結腸直腸癌に欠落して
いるもの（DCC）及びネオゲニンからなる群から選ばれ
たもの、及び候補化合物又は生理活性物質、を含む第２
の混合物を形成し； 該第２の混合物を、所定の条件下でインキュベートし
て、該ネトリンを該ネトリンレセプターに特異的に結合
させ、該ネトリンレセプターに対する該ネトリンの第２
結合親和力を検出し； 該第１結合親和力と該第２結合親和力を比較し； 該第１結合親和力と該第２結合親和力の差が有意である
場合に、前記候補化合物又は生理活性物質が、神経疾患
又は神経障害の診断又は治療に有用な薬剤のための候補
化合物又は生理活性物質であると判断することを特徴と
する、上記方法。 - 【請求項６】ネトリンがヒトネトリンである請求項５記
載の方法。 - 【請求項７】レセプターが、結腸直腸癌に欠落している
もの（DCC）である請求項５記載の方法。 - 【請求項８】レセプターが、ネオゲニンである請求項５
記載の方法。
Applications Claiming Priority (3)
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