JP3232619B2 - システイン合成酵素をコードする遺伝子 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、植物のシステイン合成
酵素をコードする遺伝子に関し、詳細には含硫アミノ酸
であり植物の必須アミノ酸であるシステイン合成酵素を
コードする遺伝子に関する。

【０００２】

【従来の技術および発明が解決しようとする課題】シス
テインは含硫α−アミノ酸の一つであり、各種医薬品の
原料、食品添加物、化粧品等に使用されている。植物や
微生物において、システインはＯ−アセチルコリンと硫
化水素からシステイン合成酵素〔ＥＣ ４．２．９９．
８；Ｏ−アセチルセリン スルフヒドリラーゼ，Ｏ−ア
セチルセリン（チオール）−リアーゼ〕の作用により生
合成されることが知られており、酵素レベルではＳａｌ
ｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｙｍｕｒｉｕｍから精製され
たものが（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２４４，２４１
８−２４２７，１９６９；Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，
２４４，２４２８−２４３９，１９６９）、またＳａｌ
ｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｙｍｕｒｉｕｍ およびＥｓ
ｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ由来の遺伝子が単離同定
されている（Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ，１７０，
３１５０−３１５７，１９８８）。またかかるシステイ
ン合成酵素は、神経興奮作用を持った非タンパク性アミ
ノ酸の生合成や（Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２
５，２７５９−２７６３，１９８６）、ある種の農薬の
解毒抱合等に関与していることが明らかにされ（Ｐｈｙ
ｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２９，２５０７−２５０８，
１９９０）、その生理活性にも興味が持たれている。

【０００３】一方、羊毛の品質を向上させるために、牧
草中にシステイン等の含硫アミノ酸の含有量を高めるこ
とが検討されている。即ち、かかるシステイン合成酵素
の遺伝子を植物で発現させ、農産物中のシステイン含有
量を高めることは、栄養価、飼料効率等を高める点にお
いて有望な育種方法と考えられている。そのためには植
物におけるシステイン合成酵素の遺伝子に関わる情報が
必要とされているが、植物由来の遺伝子はまだ単離され
ていないのが現状であった。

【０００４】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、遺伝子工
学的手法により植物由来のシステイン合成酵素のｃＤＮ
Ａをクローニングすることに着目し、かかるクローニン
グに必要なシステイン合成酵素をコードするＤＮＡセグ
メントを初めて得るに至り、本発明に到達した。

【０００５】即ち本発明の要旨は、植物のシステイン合
成酵素をコードする遺伝子に存する。以下、本発明につ
き詳細に説明する。本発明のシステイン合成酵素をコー
ドする遺伝子は、原料となる植物体から対応するｍＲＮ
Ａを取り出し、これを用いて岡山−Ｂｅｒｇのベクター
・プライマー法（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ａｎｄ Ｃｅｌ
ｌｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，２，１６１−１７０，１
９８２）、Ｇｕｂｌｅｒ ＆ Ｈｏｆｆｍａｎの方法
（Ｇｅｎｅ，２５，２６３，１９８３）等によりｃＤＮ
Ａを得る。

【０００６】原料となる植物体は特に制限されないが、
ナス科植物、イネ科植物、マメ科植物、アカザ科植物等
の高等植物を用いるのが好ましい。本発明においては、
アカザ科植物のホウレンソウ（Ｓｐｉｎａｃｉａ ｏｌ
ｅｒａｃｅａ）が特に好適に使用され、具体的には市販
の種子、たとえばパレード（サカタ社製）、ユーパロ
（協和種苗社製）、オスカー（タキイ社製）等を発芽さ
せた幼植物が挙げられる。以下、ホウレンソウを原料と
し、Ｇｕｂｌｅｒ ＆ Ｈｏｆｆｍａｎの方法（Ｇｅｎ
ｅ，２５，２６３，１９８３）により本発明のシステイ
ン合成酵素をコードする遺伝子を得る場合を例にとり、
詳細に説明する。

【０００７】まずホウレンソウの幼植物の緑葉をワーリ
ングブレンダー等で磨砕し、フェノール抽出、エタノー
ル沈澱等によって全ＲＮＡを得る。次いで塩化リチウム
処理によって、ＤＮＡや低分子ＲＮＡを除去する。目的
とするシステイン合成酵素のｍＲＮＡがｐｏｌｙＡ部分
を有する場合は、常法に従い、これをオリゴ（ｄＴ）セ
ルロースカラムにより、ｐｏｌｙ（Ａ⁺ ）ＲＮＡ（ｍＲ
ＮＡ）を得ることができる。

【０００８】このｍＲＮＡを原料として、まず逆転写酵
素により第１鎖ｃＤＮＡを得、次いでＤＮＡポリメラー
ゼにより第２鎖ｃＤＮＡを合成して、２本鎖ｃＤＮＡを
得る。通常、Ｔ４ＤＮＡポリメラーゼで末端を平滑化し
た後、ＥｃｏＲＩ等のリンカーを結合し、たとえばλｇ
ｔ１０，１１等に組み込み、ファージ粒子にパッケージ
ングする。このファージ粒子を大腸菌Ｙ１０８８、ＤＨ
５α、ＮＫ３株等に感染させて培養し、種々の長さのｃ
ＤＮＡを含むｃＤＮＡライブラリーを得る。

【０００９】システイン合成酵素のｃＤＮＡクローン
は、システイン合成酵素を適当なプロテアーゼで消化す
ることによって得られるペプチドフラグメントの部分ア
ミノ酸配列から推定されるＤＮＡプローブを合成し、ｃ
ＤＮＡライブラリーからプラークハイブリダイゼーショ
ン法（Ｍａｎｉａｔｉｓ Ｔ，ｅｔ ａｌ，Ｍｏｌｅｃ
ｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ
Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏ
ｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，１９８２，ｐ３５３−３６
１）等によりスクリーニングすることができる。かかる
ｃＤＮＡクローンは、システイン合成能を欠損したＮＫ
３株等の大腸菌を、該ｃＤＮＡクローンを組み込んだｐ
ＴＶ１１８Ｎ（タカラ社製）等の発現ベクターで形質転
換し、システイン欠失培地での成育の有無を確認するこ
とにより検定することができる。

【００１０】また、ｃＤＮＡライブラリーから、精製さ
れたシステイン合成酵素蛋白質を抗原としてウサギに免
疫して得られる抗ウサギ抗体と反応するクローンを選択
し、該クローンに組み込まれているｃＤＮＡをプローブ
とし、ｃＤＮＡライブラリーとハイブリダイゼーション
させる。そして該プローブとハイブリダイズしたものの
うち、ｃＤＮＡ鎖長の長いものを選択し、ｐＵＣ１９等
のプラスミドに導入し、大腸菌Ｙ１０８８等を形質転換
させる。得られる形質転換体を培養して、組み込まれて
いるｃＤＮＡを得ることもできる。

【００１１】かくして得られるｃＤＮＡを、例えばＳａ
ｎｇｅｒらのデオキシ法（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａ
ｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，７４，５４６３，１９７７）によ
って、塩基配列を決定することができる。本発明のシス
テイン合成酵素をコードする遺伝子のアミノ酸配列およ
び塩基配列の一例を、配列表の配列番号１に示す。

【００１２】

【発明の効果】本発明のシステイン合成酵素をコードす
る遺伝子を植物体で発現させることにより、システイン
含有量を高め、農作物中の栄養価、飼料価値を高めるこ
とが期待される。

【００１３】

【実施例】以下、本発明を実施例により詳細に説明する
が、その要旨を越えない限り以下に限定されるものでは
ない。

【００１４】〔１〕ホウレンソウ緑葉よりのｐｏｌｙ
Ａ⁺ ＲＮＡの調製 ホウレンソウパレード種（ｓｐｉｎａｃｉａ ｏｌｅｒ
ａｃｅａ）の発芽後７０日の緑葉４２ｇを１５０ｍｌの
抽出用緩衝液〔０．１Ｍ ＮａＣｌ，１０ｍＭＥＤＴ
Ａ，１％ ＳＤＳ，０．１Ｍ Ｔｒｉｓ：ＨＣｌ（ｐＨ
９．０）〕、１５０ｍｌのフェノール：クロロホルム：
イソアミルアルコール（２５：２４：１）、３０ｍｌの
β−メルカプトエタノールを加えて４℃でワーリングブ
レンダーで磨砕した。磨砕液を７０００ｒｐｍ、１０分
間遠心し、上層の水層にほぼ等量のフェノール：クロロ
ホルム：イソアミルアルコール（２５：２４：１）を加
え、よく混合した後、遠心によって再度水層を回収し
た。このフェノール抽出をもう一度繰り返し、最終的に
得られた水層に５Ｍ ＮａＣｌを最終濃度が０．２５Ｍ
になるように加え、更に２．５倍量のエタノールを加え
良く混合し、−２０℃に一晩放置した。８０００ｒｐ
ｍ、２０分間の遠心で得られた沈殿を、７０％エタノー
ルに懸濁し、再度遠心によって回収した後、減圧乾燥し
た。

【００１５】得られた乾燥全核酸標品を１５ｍｌ ＥＴ
緩衝液〔１０ｍＭ Ｔｒｉｓ：ＨＣｌ（ｐＨ７．５），
１０ｍＭ ＥＤＴＡ〕に溶かし、５Ｍ ＬｉＣｌを１０
ｍｌ加えて、最終濃度を２Ｍとして、４℃で一晩放置し
た。１２，０００ｒｐｍ、２０分間の遠心分離によっ
て、上清に残るＤＮＡや低分子量ＲＮＡを除いた全ＲＮ
Ａ画分を沈殿として回収した。２Ｍ ＬｉＣｌによる沈
殿を再度繰り返し、７０％エタノールで洗浄した後、減
圧乾燥させ、全ＲＮＡ標品５７ｍｇを得た。

【００１６】乾燥全ＲＮＡ標品１０ｍｇを４．５ｍｌの
１０ｍＭ Ｔｒｉｓ：ＨＣｌ（ｐＨ７．５），１０ｍＭ
ＥＤＴＡ，０．２％ ＳＤＳに溶解し、６８℃３分間
処理した後、氷水中で急冷した。０．５ｍｌの５Ｍ Ｌ
ｉＣｌを加え、遠心によって不溶物を除去した上清を、
予め０．５Ｍ ＬｉＣｌ，１０ｍＭ Ｔｒｉｓ：ＨＣｌ
（ｐＨ７．５），１０ｍＭ ＥＤＴＡ，０．２％ ＳＤ
Ｓで平衡化した約１ｍｌのｏｌｉｇｏ−ｄＴセルロース
カラム（Ａｍｅｒｓｈａｍ社製）にかけた。カラムを約
５倍量の同緩衝液で洗った後、１０ｍＭ Ｔｒｉｓ：Ｈ
Ｃｌ（ｐＨ７．５），１ｍＭ ＥＤＴＡ，０．０５％
ＳＤＳでカラムに吸着したｐｏｌｙ Ａ ⁺ ＲＮＡを溶出
した。ｐｏｌｙ Ａ⁺ ＲＮＡ溶出液に２．５倍容の５Ｍ
ＬｉＣｌ：エタノール（１：２４）を加え、−２０℃
で一晩放置した。３０，０００ｒｐｍ、３０分間の遠心
で得られた沈殿を、７０％エタノールで洗浄後、減圧乾
燥させ、ｐｏｌｙ Ａ⁺ ＲＮＡ ９６μｇを得た。

【００１７】〔２〕ホウレンソウ緑葉ｐｏｌｙ Ａ⁺ Ｒ
ＮＡのｃＤＮＡライブラリーの構築 上記〔１〕で得られたホウレンソウ緑葉より調製したｐ
ｏｌｙ Ａ⁺ ＲＮＡ３μｇを９μｌの５ｍＭ Ｔｒｉ
ｓ：ＨＣｌ（ｐＨ８．３）中で、６５℃，５分間加熱処
理した後に４３℃に降温した。次いで、４μｌの一本鎖
合成反応用バッファー〔５０ｍＭ Ｔｒｉｓ：ＨＣｌ
（ｐＨ８．３），５０ｍＭ ＫＣｌ，１０ｍＭ ＭｇＣ
ｌ₂ ，３ｍＭ ＤＴＴ〕，２μｌの１．２５ｍＭ ｄＮ
ＴＰ，オリゴ（ｄＴ）プライマー１．３５μｇ，９ユニ
ットのヒト胎盤リボヌクレアーゼインヒビター（和光純
薬）を加えて全液量を２０μｌにした。この反応液にＲ
ｅｖｅｒｓｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔａｓｅ（生化学工
業）２６ユニットを加え、４３℃で４５分間反応させ
た。反応終了後、チューブを氷水中に入れ、１本鎖ｃＤ
ＮＡの合成を終了した。

【００１８】次に、１本鎖ｃＤＮＡ合成反応液に、３
７．５μｌの二本鎖合成反応用バッファー〔１００ｍＭ
Ｔｒｉｓ：ＨＣｌ（ｐＨ７．４），２５ｍＭ ＫＣ
ｌ，１０ｍＭ ＭｇＣｌ₂ ，１ｍＭ ＤＴＴ〕、大腸菌
リボヌクレアーゼＨ，大腸菌ＤＮＡポリメラーゼＩ ２
３ユニットを加えて、全液量を１００μｌにした。この
反応液を最初は１２℃，６０分間、次に２２℃，６０分
間、更に７０℃，１０分間反応させ、エッペンドルフ遠
心分離機で数秒間遠心した。再び氷浴中にもどしＴ４
ＤＮＡポリメラーゼ６ユニットを添加し、３７℃，１０
分間反応させ、２本鎖ｃＤＮＡの両末端を平衡化した。
反応の終了のため、１０μｌの０．２５ＭＥＤＴＡ（ｐ
Ｈ８）と１０μｌの１０％ＳＤＳを加えた。反応液は、
フェノール抽出エーテル抽出の後に２５μｌの４Ｍ酢酸
アンモニウムと１００μｌのエタノールを加えて、混合
し、−７０℃で２０分間冷却した後、遠心によってＤＮ
Ａを回収した。この一連の反応によって、約１．４μｇ
の２本鎖ｃＤＮＡを合成する事が出来た。この２本鎖ｃ
ＤＮＡの中、０．５μｇを供試してｃＤＮＡクローニン
グシステムλｇｔ １０キット（Ａｍｅｒｓｈａｍ社）
を用いてｃＤＮＡライブラリーを作製した。

【００１９】〔３〕合成ＤＮＡプローブの作製 ホウレンソウのシステイン合成酵素のＶ８プロテアーゼ
消化によって生じた２個のペプチドフラグメントのアミ
ノ酸配列から予想されるＤＮＡ配列一鎖Ｖ８１２（ａ）
およびＶ８２２（ａ）を合成し、末端を³²Ｐでラベルし
てプローブとした。合成ＤＮＡプローブＶ８１２（ａ）
の塩基配列を配列表の配列番号：２に、Ｖ８２２（ａ）
の塩基配列を配列表の配列番号：３に示す。

【００２０】〔４〕合成ＤＮＡプローブによるｃＤＮＡ
ライブラリーのスクリーニング 上記〔２〕で得られたｃＤＮＡライブラリーのうち、約
２×１０⁵ の独立なファージプラークを上記〔３〕で作
製したプローブによって、プラークハイブリダイゼーシ
ョンを行った。フィルターの最終洗浄は６×ＳＳＣ，
０．１％ＳＤＳ，４７℃で行い、前記のＶ８１２
（ａ），Ｖ８２２（ａ）の両方にポジティブなクローン
１９個をスクリーニングした。約１．３ｋｂのＥｃｏＲ
Ｉインサートを持つ２つのクローンλｃｓ２とλｃｓ４
を選び、同インサートをプラスミドベクターｐＵＣ１９
とＭ１３ｍｐ１８のＥｃｏＲＩサイトにサブクローニン
グした。

【００２１】 〔５〕システイン合成酵素ｃＤＮＡの塩基配列の決定 λｃｓ２とλｃｓ４由来のインサートを含むクローンの
塩基配列をＳａｎｇｅｒらのジデオキシ法によって、正
逆両方向について、決定した。λｃｓ４のインサート部
分１３０３ｂｐの全塩基配列を配列表の配列番号１に示
した。配列番号１の中で、１６３番目のアミノ酸スレオ
ニンから１８２番目のアミノ酸グリシンまで、および７
１番目のセリンから９０番目のアラニンまでは、プロー
ブ作製に用いたアミノ酸配列に相当する部分を示し、そ
れぞれＶ８１２（ａ），Ｖ８２２（ａ）に対応する。

【００２２】 〔６〕システイン合成酵素ｃＤＮＡクローンの検定 今回クローニングしたｃＤＮＡクローンが、確かにシス
テイン合成酵素をコードしているか否かを検定した。シ
ステイン合成能を欠損した大腸菌（ＮＫ３）に、該ｃＤ
ＮＡクローンを組込んだ発現ベクターｐＴＶ１１８Ｎ
（タカラ）を導入し、システイン欠失培地で生育する事
が確認できた事からシステイン合成能が回復している事
が分った。

【００２３】これにより本ｃＤＮＡクローンはシステイ
ン合成酵素をコードしている事が確かめられた。

【００２４】

【配列表】

配列番号：１ 配列の長さ：１３０３ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ ｔｏ ｍＲＮＡ ハイポセティカル：Ｎｏ アンチセンス Ｎｏ 起源 生物名：Ｓｐｉｎａｃｉａ ｏｌｅｒａｃｅａ 株名：パレード種 TCAGTCTCGA TTCTTCTCAG ATTTCTATCT CTTTTAAGTA TATAACCCAA A ATG GTT 57 Met Val 1 GAG GAG AAG GCC TTC ATT GCT AAA GAT GTG ACT GAA TTG ATT GGG AAA 105 Glu Glu Lys Ala Phe Ile Ala Lys Asp Val Thr Glu Leu Ile Gly Lys 5 10 15 ACG CCA TTG GTA TAT CTC AAC ACT GTC GCC GAT GGT TGT GTT GCT CGT 153 Thr Pro Leu Val Tyr Leu Asn Thr Val Ala Asp Gly Cys Val Ala Arg 20 25 30 GTT GCT GCA AAG CTG GAA GGA ATG GAA CCT TGC TCT AGT GTT AAA GAC 201 Val Ala Ala Lys Leu Glu Gly Met Glu Pro Cys Ser Ser Val Lys Asp 35 40 45 50 AGG ATT GGG TTC AGT ATG ATT ACT GAT GCT GAA AAA AGC GGG CTT ATT 249 Arg Ile Gly Phe Ser Met Ile Thr Asp Ala Glu Lys Ser Gly Leu Ile 55 60 65 ACA CCT GGA GAG AGT GTC CTG ATT GAG CCC ACC AGT GGA AAT ACT GGC 297 Thr Pro Gly Glu Ser Val Leu Ile Glu Pro Thr Ser Gly Asn Thr Gly 70 75 80 ATT GGA TTA GCC TTC ATC GCA GCA GCT AAA GGT TAC AAG CTC ATC ATT 345 Ile Gly Leu Ala Phe Ile Ala Ala Ala Lys Gly Tyr Lys Leu Ile Ile 85 90 95 ACG ATG CCA GCA TCA ATG AGT CTT GAG CGG AGG ACT ATT CTC AGG GCC 393 Thr Met Pro Ala Ser Met Ser Leu Glu Arg Arg Thr Ile Leu Arg Ala 100 105 110 TTT GGT GCT GAG CTT ATC CTT ACT GAT CCA GCA AAA GGT ATG AAA GGG 441 Phe Gly Ala Glu Leu Ile Leu Thr Asp Pro Ala Lys Gly Met Lys Gly 115 120 125 130 GCT GTT CAG AAG GCT GAG GAG ATC CGT GAC AAA ACT CCT AAT TCA TAT 489 Ala Val Gln Lys Ala Glu Glu Ile Arg Asp Lys Thr Pro Asn Ser Tyr 135 140 145 ATA CTA CAA CAG TTT GAA AAC CCT GCC AAC CCA AAG GTT CAT TAT GAA 537 Ile Leu Gln Gln Phe Glu Asn Pro Ala Asn Pro Lys Val His Tyr Glu 150 155 160 ACA ACT GGA CCA GAA ATT TGG AAA GGC ACA GGT GGA AAA ATT GAT ATA 585 Thr Thr Gly Pro Glu Ile Trp Lys Gly Thr Gly Gly Lys Ile Asp Ile 165 170 175 TTC GTC TCT GGA ATA GGG ACT GGA GGT ACA ATA ACA GGT GCA GGA AAA 633 Phe Val Ser Gly Ile Gly Thr Gly Gly Thr Ile Thr Gly Ala Gly Lys 180 185 190 TAC CTA AAG GAA CAA AAC CCG GAT GTT AAG CTA ATT GGC CTG GAA CCA 681 Tyr Leu Lys Glu Gln Asn Pro Asp Val Lys Leu Ile Gly Leu Glu Pro 195 200 205 210 GTG GAA AGT GCT GTA TTG TCT GGA GGA AAA CCT GGC CCA CAT AAG ATT 729 Val Glu Ser Ala Val Leu Ser Gly Gly Lys Pro Gly Pro His Lys Ile 215 220 225 CAA GGA CTT GGA GCT GGA TTC ATA CCT GGT GTT CTG GAT GTG AAT ATT 777 Gln Gly Leu Gly Ala Gly Phe Ile Pro Gly Val Leu Asp Val Asn Ile 230 235 240 ATC GAT GAA GTG GTT CAG ATA TCC AGT GAA GAA TCT ATT GAA ATG GCC 825 Ile Asp Glu Val Val Gln Ile Ser Ser Glu Glu Ser Ile Glu Met Ala 245 250 255 AAA TTG CTC GCC CTC AAG GAA GGT CTA CTG GTT GGG ATT TCA TCT GGT 873 Lys Leu Leu Ala Leu Lys Glu Gly Leu Leu Val Gly Ile Ser Ser Gly 260 265 270 GCT GCT GCT GCC GCT GCC ATT AAA GTG GCA AAG AGG CCT GAA AAT GCT 921 Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ile Lys Val Ala Lys Arg Pro Glu Asn Ala 275 280 285 290 GGA AAA CTC ATC GTC GCT GTC TTT CCC AGC TTT GGC GAA CGA TAT TTA 969 Gly Lys Leu Ile Val Ala Val Phe Pro Ser Phe Gly Glu Arg Tyr Leu 295 300 305 TCC TCG GTG TTG TTT GAT TCA GTG AGG AAG GAG GCA GAG AGC ATG GTT 1017 Ser Ser Val Leu Phe Asp Ser Val Arg Lys Glu Ala Glu Ser Met Val 310 315 320 ATT GAG TCC TAAG TTCGAGTTCT CCTTTAATGG TCTTGGATAC TTCACAGGCT 1070 Ile Glu Ser 325 TTGGTCTTTT CATGTGGTCT AAATCCTAGT TTTCTTCTGT TTTCCCTTTC TTTTCTCGTA 1130 GACATGCAAA TCGTGGCCCT TCTGTATTAG AACAATGTCA GTTGTGTCCT TGATGTTTGG 1190 TCATCATGCA CTGGCAACTA TGGTTTGTGA TGTATAAAAT ACTCTTTCAT GTTCTTCCAT 1250 TACATATTGT TGATGAGGGA TTTCATGTGA TAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AAA 1303 配列番号：２ 配列の長さ：５０ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸 合成ＤＮＡ 起源 生物名：Ｓｐｉｎａｃｉａ ｏｌｅｒａｃｅａ 配列 AAIATRTCIATYTTICCICCIGTICCYTTCCAIATYTCIGGICCIGTIGT 50 配列番号：３ 配列の長さ：５６ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸 合成ＤＮＡ 起源 生物名：Ｓｐｉｎａｃｉａ ｏｌｅｒａｃｅａ 配列 GCIGCIATRAAIGCCAGICCAATICCIGTRTTICCGCTGGTCGGYTCIATCAGIAC 56

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (56)参考文献 Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ, （1985），Ｖｏｌ．24，Ｎｏ．９，ｐ ｐ．1907−1911 (58)調査した分野(Int.Cl.⁷，ＤＢ名) C12N 15/00 - 15/90 ＢＩＯＳＩＳ（ＤＩＡＬＯＧ) ＧｅｎＢａｎｋ／ＥＭＢＬ／ＤＤＢＪ／Ｇ ｅｎｅＳｅｑ ＭＥＤＬＩＮＥ（ＳＴＮ) ＷＰＩ（ＤＩＡＬＯＧ)

Claims (2)

(57)【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 配列番号１に記載のアミノ酸配列からな
   るタンパク質、または、配列番号１に記載のアミノ酸配
   列において１または数個のアミノ酸が欠失、置換または
   付加されているアミノ酸配列からなり、システイン合成
   酵素活性を有するタンパク質。
2. 【請求項２】 下記の（Ａ）から（Ｄ）の何れかの塩基
   配列を有する遺伝子。 （Ａ）配列番号１に記載のアミノ酸配列をコードする塩
   基配列； （Ｂ）配列番号１に記載のアミノ酸配列において１また
   は数個のアミノ酸が欠失、付加または置換されているア
   ミノ酸配列からなり、システイン合成酵素活性を有する
   アミノ酸配列をコードする塩基配列； （Ｃ）配列番号１に記載の塩基配列の塩基番号５２〜１
   ０２６で表される塩基配列； （Ｄ）配列番号１に記載の塩基配列の塩基番号５２〜１
   ０２６で表される塩基配列とストリンジェントな条件で
   ハイブリダイズし、システイン合成酵素活性を有するア
   ミノ酸配列をコードする塩基配列。