JP3230990B2 - 生殖原細胞を用いた子孫個体の作出法 - Google Patents
生殖原細胞を用いた子孫個体の作出法Info
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Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、発生工学分野等に
おいて有用な生殖系列キメラ個体を効率的に作出する方
法に関する。
おいて有用な生殖系列キメラ個体を効率的に作出する方
法に関する。
【０００２】
【従来の技術】発生工学の分野で各種の操作を施して、
その効果を子孫に伝えることが必要な場合や、種の保存
を効率的に行おうとする場合、生殖細胞系列の細胞を利
用するのが効果的である。このため、近年、生殖細胞系
列の細胞の中でも最も未分化な細胞である始原生殖細胞
を他個体の胚へ移植して生殖系列キメラ個体を作出する
技術が鳥類で開発されている（Y.Yasudaら,1992,J.Repr
od.Fert.,96,521-528.）。
その効果を子孫に伝えることが必要な場合や、種の保存
を効率的に行おうとする場合、生殖細胞系列の細胞を利
用するのが効果的である。このため、近年、生殖細胞系
列の細胞の中でも最も未分化な細胞である始原生殖細胞
を他個体の胚へ移植して生殖系列キメラ個体を作出する
技術が鳥類で開発されている（Y.Yasudaら,1992,J.Repr
od.Fert.,96,521-528.）。
【０００３】しかし、一個体から単離可能な始原生殖細
胞数が少なく、その体外培養法が開発されていないた
め、生殖系列キメラ個体を作出するためには、毎回、多
数の初期胚から血液を採取し、始原生殖細胞を単離しな
ければならない。これは、生殖系列の細胞を胚体外に取
り出し、発生工学的な利用を考える場合、極めて不利な
条件である。このため、遺伝子導入等の発生工学的操作
を加えた細胞を移植して、生殖系列キメラ個体を作出す
ることに成功した例は現時点では皆無である。
胞数が少なく、その体外培養法が開発されていないた
め、生殖系列キメラ個体を作出するためには、毎回、多
数の初期胚から血液を採取し、始原生殖細胞を単離しな
ければならない。これは、生殖系列の細胞を胚体外に取
り出し、発生工学的な利用を考える場合、極めて不利な
条件である。このため、遺伝子導入等の発生工学的操作
を加えた細胞を移植して、生殖系列キメラ個体を作出す
ることに成功した例は現時点では皆無である。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】このように、始原生殖
細胞を利用した生殖系列キメラ個体の作出方法には数多
くの問題がある。本発明は、このような問題を解決する
ことをその目的とするものであり、具体的には、始原生
殖細胞以外の生殖細胞系列の細胞を利用した効率的な生
殖系列キメラ個体の作出方法を提供することを目的とす
るものである。
細胞を利用した生殖系列キメラ個体の作出方法には数多
くの問題がある。本発明は、このような問題を解決する
ことをその目的とするものであり、具体的には、始原生
殖細胞以外の生殖細胞系列の細胞を利用した効率的な生
殖系列キメラ個体の作出方法を提供することを目的とす
るものである。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本発明者は、上記課題を
解決するため鋭意検討を重ねた結果、他個体へ移植する
生殖細胞系列の細胞として生殖原細胞を用いることによ
り、生殖系列キメラ個体を効率的に作出できることを見
出し、本発明を完成した。即ち、本発明は、一の個体よ
り取り出した生殖細胞系列の細胞を、他の個体へ移植す
ることにより、生殖系列キメラ個体を作出する方法にお
いて、生殖細胞系列の細胞として、生殖原細胞を用いる
ことを特徴とする生殖系列キメラ個体の作出方法であ
る。
解決するため鋭意検討を重ねた結果、他個体へ移植する
生殖細胞系列の細胞として生殖原細胞を用いることによ
り、生殖系列キメラ個体を効率的に作出できることを見
出し、本発明を完成した。即ち、本発明は、一の個体よ
り取り出した生殖細胞系列の細胞を、他の個体へ移植す
ることにより、生殖系列キメラ個体を作出する方法にお
いて、生殖細胞系列の細胞として、生殖原細胞を用いる
ことを特徴とする生殖系列キメラ個体の作出方法であ
る。
【０００６】以下、本発明を詳細に説明する。本発明
は、一の個体より取り出した生殖細胞系列の細胞を、他
の個体へ移植することにより、生殖系列キメラ個体を作
出する。ここで、「生殖細胞系列の細胞」とは、卵、精
子などの生殖細胞、及び最終的に生殖細胞にまで分化す
ることのできる細胞のことをいう。本発明では、生殖細
胞系列の細胞として、特に生殖原細胞を用いる。ここ
で、「生殖原細胞」とは、将来生殖細胞に分化する細胞
であって、既に分化を開始している細胞をいい、分化を
開始している点で「始原生殖細胞」と区別することがで
き、減数分裂を開始していない点で「生殖細胞」と区別
することができる。
は、一の個体より取り出した生殖細胞系列の細胞を、他
の個体へ移植することにより、生殖系列キメラ個体を作
出する。ここで、「生殖細胞系列の細胞」とは、卵、精
子などの生殖細胞、及び最終的に生殖細胞にまで分化す
ることのできる細胞のことをいう。本発明では、生殖細
胞系列の細胞として、特に生殖原細胞を用いる。ここ
で、「生殖原細胞」とは、将来生殖細胞に分化する細胞
であって、既に分化を開始している細胞をいい、分化を
開始している点で「始原生殖細胞」と区別することがで
き、減数分裂を開始していない点で「生殖細胞」と区別
することができる。
【０００７】生殖原細胞の供給源とする生物は、動物で
あればどのようなものでもよいが、鳥類のように始原生
殖細胞が発生の途中で血液循環するという性質を持った
動物が好ましく、鳥類の中でも特に、ニワトリ、ウズラ
等の家禽として飼育されている鳥類が、材料入手の際の
利便性を考慮した場合には好都合である。生殖原細胞の
移植対象とする生物も、動物であればどのようなもので
よいが、鳥類が好ましく、特にニワトリ、ウズラ、シチ
メンチョウが好ましい。なお、生殖原細胞の供給源とす
る動物と移植対象とする動物は、同一の種である必要は
必ずしもなく、例えば、ニワトリとウズラのように一定
の近縁関係にある種であれば移植可能である。
あればどのようなものでもよいが、鳥類のように始原生
殖細胞が発生の途中で血液循環するという性質を持った
動物が好ましく、鳥類の中でも特に、ニワトリ、ウズラ
等の家禽として飼育されている鳥類が、材料入手の際の
利便性を考慮した場合には好都合である。生殖原細胞の
移植対象とする生物も、動物であればどのようなもので
よいが、鳥類が好ましく、特にニワトリ、ウズラ、シチ
メンチョウが好ましい。なお、生殖原細胞の供給源とす
る動物と移植対象とする動物は、同一の種である必要は
必ずしもなく、例えば、ニワトリとウズラのように一定
の近縁関係にある種であれば移植可能である。
【０００８】生殖原細胞を個体より取り出す方法は、特
に制限はなく、各動物について常用されている方法に従
って行うことができる。ニワトリの場合は、まず、胚か
ら生殖腺原基を取り出し、これを酵素処理することによ
り、生殖原細胞を分離することができる。ここで用いる
胚は、生殖原細胞が形成されるているものであれば、ど
のような時期のものでもよい。具体的には、受精から３
日目以降の胚を使用することができる。生殖腺原基は、
肉眼で明確に認識できるので、ピンセットやメス等を用
いて容易に取り出すことができる。
に制限はなく、各動物について常用されている方法に従
って行うことができる。ニワトリの場合は、まず、胚か
ら生殖腺原基を取り出し、これを酵素処理することによ
り、生殖原細胞を分離することができる。ここで用いる
胚は、生殖原細胞が形成されるているものであれば、ど
のような時期のものでもよい。具体的には、受精から３
日目以降の胚を使用することができる。生殖腺原基は、
肉眼で明確に認識できるので、ピンセットやメス等を用
いて容易に取り出すことができる。
【０００９】生殖原細胞の分離に使用する酵素は、例え
ば、トリプシン、コラーゲナーゼ、プロテアーゼ、キレ
ート剤などを用いることができるが、これらに限定され
るわけではない。なお、ニワトリの場合、一個体から約
８００〜１５００個の生殖原細胞を得ることができる。
ば、トリプシン、コラーゲナーゼ、プロテアーゼ、キレ
ート剤などを用いることができるが、これらに限定され
るわけではない。なお、ニワトリの場合、一個体から約
８００〜１５００個の生殖原細胞を得ることができる。
【００１０】取り出した生殖原細胞は、他の個体へ移植
する。移植の方法は、特に制限はなく、各動物について
常用されている方法に従って行うことができる。ニワト
リの場合、始原生殖細胞を移植する場合と同様にして行
うことができる（実験医学 Vol.12(2)（増刊）,260-26
5, 1994. ）。即ち、受精から一定期間経過した胚の周
縁静脈中に生殖原細胞を注入することにより、生殖原細
胞を移植できる。胚は、受精から２（血液循環の開始直
後）〜３（始原生殖細胞の循環終了の発生段階）日後の
ものが好ましい。生殖原細胞の注入量は、１００〜３０
０個程度が好ましい。生殖原細胞を移植した個体を、孵
卵又は子宮内で生育させることにより、生殖系列キメラ
個体を得ることができる。なお、「生殖系列キメラ個
体」とは、他の個体に由来する生殖細胞を有する個体を
いう。
する。移植の方法は、特に制限はなく、各動物について
常用されている方法に従って行うことができる。ニワト
リの場合、始原生殖細胞を移植する場合と同様にして行
うことができる（実験医学 Vol.12(2)（増刊）,260-26
5, 1994. ）。即ち、受精から一定期間経過した胚の周
縁静脈中に生殖原細胞を注入することにより、生殖原細
胞を移植できる。胚は、受精から２（血液循環の開始直
後）〜３（始原生殖細胞の循環終了の発生段階）日後の
ものが好ましい。生殖原細胞の注入量は、１００〜３０
０個程度が好ましい。生殖原細胞を移植した個体を、孵
卵又は子宮内で生育させることにより、生殖系列キメラ
個体を得ることができる。なお、「生殖系列キメラ個
体」とは、他の個体に由来する生殖細胞を有する個体を
いう。
【００１１】
【００１２】
【実施例】白色レグホン（農林水産省畜産試験場製）の
５日胚から無菌的に生殖腺原基を回収した。回収した生
殖腺原基を細断し、トリプシン（SIGMA 製）で処理した
後、ガラス毛細管でピペティングすることにより１０％
ＦＢＳ（牛胎児血清）を含むＭＥＭ（最小培地）（10
mMＨＥＰＥＳ添加）に生殖原細胞を懸濁した。この細胞
懸濁液に最終濃度が１０％になるようにＤＭＳＯ（和光
純薬製）を添加し、−８０℃まで毎分１℃で冷却した
後、液体窒素中に保存した。
５日胚から無菌的に生殖腺原基を回収した。回収した生
殖腺原基を細断し、トリプシン（SIGMA 製）で処理した
後、ガラス毛細管でピペティングすることにより１０％
ＦＢＳ（牛胎児血清）を含むＭＥＭ（最小培地）（10
mMＨＥＰＥＳ添加）に生殖原細胞を懸濁した。この細胞
懸濁液に最終濃度が１０％になるようにＤＭＳＯ（和光
純薬製）を添加し、−８０℃まで毎分１℃で冷却した
後、液体窒素中に保存した。
【００１３】試料を液体窒素中で１〜３カ月間保存した
後、５℃の水中で融解した。融解後、ガラス毛細管を用
いて、生殖原細胞（１００〜３００個）を横斑プリマス
ロック（農林水産省畜産試験場製）の２日胚の血管内に
注入した。生殖原細胞を注入した卵は、孵卵器（昭和フ
ランキ研究所製）内で孵化させた。孵化したヒナの内、
性成熟に達した雄２羽（個体番号：male♯30、male♯1
7）、雌４羽（個体番号：female♯2 、female♯6 、fem
ale♯10、female♯22）に対して横斑プリマロックを交
配することにより、後代検定を行い、横斑を有しない白
色羽の雛個体の比率を記録した。結果を表１に示す。
後、５℃の水中で融解した。融解後、ガラス毛細管を用
いて、生殖原細胞（１００〜３００個）を横斑プリマス
ロック（農林水産省畜産試験場製）の２日胚の血管内に
注入した。生殖原細胞を注入した卵は、孵卵器（昭和フ
ランキ研究所製）内で孵化させた。孵化したヒナの内、
性成熟に達した雄２羽（個体番号：male♯30、male♯1
7）、雌４羽（個体番号：female♯2 、female♯6 、fem
ale♯10、female♯22）に対して横斑プリマロックを交
配することにより、後代検定を行い、横斑を有しない白
色羽の雛個体の比率を記録した。結果を表１に示す。
【００１４】
【００１５】白色羽の形質は完全優性遺伝をし、黒色羽
の形質は完全劣性遺伝をする。従って、横斑プリマロッ
ク同士を交配しても、本来、白色羽の個体は生まれな
い。表１が示すように、male♯30、male♯17及びfemale
♯22の３個体では、白色羽の個体が生まれている。従っ
て、これら３個体は、生殖細胞に白色レグホン由来の細
胞が導入されており、生殖系列のキメラ個体であると考
えられる。
の形質は完全劣性遺伝をする。従って、横斑プリマロッ
ク同士を交配しても、本来、白色羽の個体は生まれな
い。表１が示すように、male♯30、male♯17及びfemale
♯22の３個体では、白色羽の個体が生まれている。従っ
て、これら３個体は、生殖細胞に白色レグホン由来の細
胞が導入されており、生殖系列のキメラ個体であると考
えられる。
【００１６】
【発明の効果】本発明は、胚中に比較的多量に存在する
生殖原細胞を利用するので、従来の方法に比べ、効率的
に生殖系列キメラ個体を作出することができる。
生殖原細胞を利用するので、従来の方法に比べ、効率的
に生殖系列キメラ個体を作出することができる。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (56)参考文献 Ｈａｓｈｉｍｏｔｏ Ｋ．ｅｔ ａ ｌ．，Ｄｅｖｅｌｏｐ．Ｇｒｏｗｔｈ ＆ Ｄｉｆｆｅｒ．，ｖｏｌ．34 （２），ｐ．233−238（1992) (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) A01K 67/02 ＢＩＯＳＩＳ（ＤＩＡＬＯＧ) ＪＩＣＳＴファイル（ＪＯＩＳ) ＭＥＤＬＩＮＥ（ＳＴＮ) ＷＰＩＤＳ（ＳＴＮ) ＥＭＢＡＳＥ
Claims (1)
- 【請求項１】 一の個体より取り出した生殖原細胞を、
他の個体（ヒトを除く。）の胚であって始原生殖細胞の
移動終了の発生段階までの胚に移植することを特徴とす
る、生殖系列キメラ個体の作出方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP13906996A JP3230990B2 (ja) | 1996-05-31 | 1996-05-31 | 生殖原細胞を用いた子孫個体の作出法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP13906996A JP3230990B2 (ja) | 1996-05-31 | 1996-05-31 | 生殖原細胞を用いた子孫個体の作出法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH09313070A JPH09313070A (ja) | 1997-12-09 |
| JP3230990B2 true JP3230990B2 (ja) | 2001-11-19 |
Family
ID=15236775
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP13906996A Expired - Fee Related JP3230990B2 (ja) | 1996-05-31 | 1996-05-31 | 生殖原細胞を用いた子孫個体の作出法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3230990B2 (ja) |
-
1996
- 1996-05-31 JP JP13906996A patent/JP3230990B2/ja not_active Expired - Fee Related
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Ｈａｓｈｉｍｏｔｏ Ｋ．ｅｔ ａｌ．，Ｄｅｖｅｌｏｐ．Ｇｒｏｗｔｈ ＆ Ｄｉｆｆｅｒ．，ｖｏｌ．３４（２），ｐ．２３３−２３８（１９９２） |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH09313070A (ja) | 1997-12-09 |
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