JP3197451B2 - 保存血液中のエンドトキシン検出方法及び検出キット - Google Patents
保存血液中のエンドトキシン検出方法及び検出キットInfo
- Publication number
- JP3197451B2 JP3197451B2 JP03464795A JP3464795A JP3197451B2 JP 3197451 B2 JP3197451 B2 JP 3197451B2 JP 03464795 A JP03464795 A JP 03464795A JP 3464795 A JP3464795 A JP 3464795A JP 3197451 B2 JP3197451 B2 JP 3197451B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- endotoxin
- reaction
- tank
- sample
- blood
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
Landscapes
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、細菌汚染された血液の
輸血を未然に防止するための輸血用保存血液中のエンド
トキシンの検出キット及びその検出方法に関するもので
ある。
輸血を未然に防止するための輸血用保存血液中のエンド
トキシンの検出キット及びその検出方法に関するもので
ある。
【０００２】被検液にエンドスペシー（主剤）、亜硝酸
ナトリウム（反応停止剤）、スルファミン酸アンモニウ
ムならびにＮ−１−ナフチルエチレンジアミン二塩酸塩
（着色剤）を順次添加して、エンドトキシンを測定する
血漿中のエンドトキシン定量用に体外診断用医薬品とし
て、ゲル化法リムルステストによる和光純薬製キット及
び発色合成基質を用いた発色法による生化学工業製キッ
トがある。例えば生化学工業製キットとして体外診断用
医薬品（血漿中エンドトキシン定量試薬「エンドトキシ
ンテスト−Ｄ」）を用いてエンドトキシンの検出を行う
操作手順の一例は以下の通りである。
ナトリウム（反応停止剤）、スルファミン酸アンモニウ
ムならびにＮ−１−ナフチルエチレンジアミン二塩酸塩
（着色剤）を順次添加して、エンドトキシンを測定する
血漿中のエンドトキシン定量用に体外診断用医薬品とし
て、ゲル化法リムルステストによる和光純薬製キット及
び発色合成基質を用いた発色法による生化学工業製キッ
トがある。例えば生化学工業製キットとして体外診断用
医薬品（血漿中エンドトキシン定量試薬「エンドトキシ
ンテスト−Ｄ」）を用いてエンドトキシンの検出を行う
操作手順の一例は以下の通りである。
【０００３】（１） 検体採取と調製 ヘパリン採血の血液１ｍｌをエンドトキシンフリー試験
管にアルミキャップをし、４℃、１５０ｇ×１０ｍｉｎ
遠心しＰＲＰ（多血小板血漿）を得て、氷冷下で保存す
る。 （２）−１ 前処理（除タンパク処理） （１）のＰＲＰ（２００μｌ）を過塩素酸溶液（４００
μｌ）に加え、ミキサーで撹拌後、３７℃、２０ｍｉｎ
加温後１０００ｇ×１５ｍｉｎ遠心する。 （２）−２ 中和 （２）−１の上清１００μｌに水酸化ナトリウム溶液１
００μｌを加え、中和する。 （３） 主反応 主剤（カブトガニ血球抽出成分＋発色合成基質＋緩衝
液）１６０μｌに（２）−２の検体１００μｌを加え、
ミキサーで撹拌する。（３７℃、３０ｍｉｎ加温） （４） 反応停止（エンドトキシンフリーの操作必要） 直ちに氷冷後、亜硝酸Ｎａ、塩酸溶液５００μｌを加
え、よく撹拌する。 （５） ジアゾカップリング反応 （４）にスルファミン酸アンモニウム溶液５００μｌを
加え撹拌し、次いでＮ−（１−ナフチル）エチレンジア
ミン二塩酸塩５００μｌを加え、撹拌する。 （６） 測定 赤色を波長５４５ｎｍで分光光度計により吸光度を測定
する。いずれも操作が繁雑で時間がかかる上、実験者の
習熟の他、エンドトキシンフリーの操作が必要であり、
信頼性のある結果を得るためには、十分な注意が必要で
ある。
管にアルミキャップをし、４℃、１５０ｇ×１０ｍｉｎ
遠心しＰＲＰ（多血小板血漿）を得て、氷冷下で保存す
る。 （２）−１ 前処理（除タンパク処理） （１）のＰＲＰ（２００μｌ）を過塩素酸溶液（４００
μｌ）に加え、ミキサーで撹拌後、３７℃、２０ｍｉｎ
加温後１０００ｇ×１５ｍｉｎ遠心する。 （２）−２ 中和 （２）−１の上清１００μｌに水酸化ナトリウム溶液１
００μｌを加え、中和する。 （３） 主反応 主剤（カブトガニ血球抽出成分＋発色合成基質＋緩衝
液）１６０μｌに（２）−２の検体１００μｌを加え、
ミキサーで撹拌する。（３７℃、３０ｍｉｎ加温） （４） 反応停止（エンドトキシンフリーの操作必要） 直ちに氷冷後、亜硝酸Ｎａ、塩酸溶液５００μｌを加
え、よく撹拌する。 （５） ジアゾカップリング反応 （４）にスルファミン酸アンモニウム溶液５００μｌを
加え撹拌し、次いでＮ−（１−ナフチル）エチレンジア
ミン二塩酸塩５００μｌを加え、撹拌する。 （６） 測定 赤色を波長５４５ｎｍで分光光度計により吸光度を測定
する。いずれも操作が繁雑で時間がかかる上、実験者の
習熟の他、エンドトキシンフリーの操作が必要であり、
信頼性のある結果を得るためには、十分な注意が必要で
ある。
【０００４】一方輸血される血液製剤は、抗凝固剤、赤
血球保存液の開発により、保存期間は長期間可能とな
り、国内でも赤血球保存液（ＭＡＰ液）添加赤血球濃厚
液は最長４２日まで冷蔵保存が可能となった。そのため
長期保存化に伴い、エルシニア菌などの低温増殖菌によ
る汚染問題が起こり、海外では汚染血液の輸血により死
亡した例も報告され、国内においても保存血液中よりエ
ルシニア菌検出の報告もなされている。また赤血球製剤
以外でも２２℃で保存される血小板製剤でもセラチア菌
などの増殖による汚染の報告もある。これまで、輸血用
血液が細菌に汚染されているかどうかは、輸血前の外観
的所見により著しい溶血や変色、凝集塊形成の有無によ
り判断されてきたが、その程度は汚染原因の菌種、血液
製剤の種類などにより異なることが多く外観検査のみで
完全に除外することは難しいと考えられる。そこで本発
明者は、鋭意検討を重ねた結果上記のような輸血用血液
が細菌に汚染されている場合に、血液中のエンドトキシ
ンを簡便、迅速に測定することにより、汚染血液の輸血
を未然に防止するためのエンドトキシンの検出方法及び
検出キットを発明するに至った。
血球保存液の開発により、保存期間は長期間可能とな
り、国内でも赤血球保存液（ＭＡＰ液）添加赤血球濃厚
液は最長４２日まで冷蔵保存が可能となった。そのため
長期保存化に伴い、エルシニア菌などの低温増殖菌によ
る汚染問題が起こり、海外では汚染血液の輸血により死
亡した例も報告され、国内においても保存血液中よりエ
ルシニア菌検出の報告もなされている。また赤血球製剤
以外でも２２℃で保存される血小板製剤でもセラチア菌
などの増殖による汚染の報告もある。これまで、輸血用
血液が細菌に汚染されているかどうかは、輸血前の外観
的所見により著しい溶血や変色、凝集塊形成の有無によ
り判断されてきたが、その程度は汚染原因の菌種、血液
製剤の種類などにより異なることが多く外観検査のみで
完全に除外することは難しいと考えられる。そこで本発
明者は、鋭意検討を重ねた結果上記のような輸血用血液
が細菌に汚染されている場合に、血液中のエンドトキシ
ンを簡便、迅速に測定することにより、汚染血液の輸血
を未然に防止するためのエンドトキシンの検出方法及び
検出キットを発明するに至った。
【０００５】
【課題を解決するための手段】［１］本発明は、次の各
工程（１）から（３）よりなり、各工程（１）から
（３）をクローズドシステムのキット内で行う輸血用保
存血液中のエンドトキシン検出方法を提供する。 （１）反応槽２の中で試料を主剤１２と反応させる工
程、 （２）反応停止槽３の中で前記試料と主剤１２に反応停
止剤１３を接触させる工程、 （３）着色槽４の中で前記試料に着色剤１４を接触させ
る工程、 ［２］本発明は、次の各工程（１）から（４）よりな
り、各工程（１）から（４）をクローズドシステムのキ
ット内で行う輸血用保存血液中のエンドトキシン検出方
法を提供する。 （１）試料を吸着剤２２を通過させて、エンドトキシン
を吸着剤２２に吸着させる工程、 （２）前記エンドトキシンと主剤１２を反応させる工
程、 （３）前記エンドトキシンと主剤１２に反応停止剤１３
を接触させる工程、 （４）前記エンドトキシンに着色剤１４を接触させる工
程、 ［３］本発明は、反応槽２と反応停止槽３を途中に連通
部材８を配置した接続管６を介して接続し、または前記
反応停止槽３と着色槽４を途中に連通部材９を配置した
接続管７を介して接続し、前記反応槽２の上部には栓体
５が装着されるとともに内部には主剤１２が封入され、
前記反応停止槽３の内部には反応停止剤１３が封入さ
れ、前記着色槽４の内部には着色剤１４を封入した輸血
用保存血液中のエンドトキシン検出キット１を提供す
る。 ［４］本発明は、内部にエンドトキシンの特異的吸着剤
２２と、該吸着剤２２の活性を維持するための保存剤２
３が封入され、上部に栓体２５が装着され、下部に廃液
口２９を形成した輸血用保存血液中のエンドトキシン検
出キット２１を提供する。
工程（１）から（３）よりなり、各工程（１）から
（３）をクローズドシステムのキット内で行う輸血用保
存血液中のエンドトキシン検出方法を提供する。 （１）反応槽２の中で試料を主剤１２と反応させる工
程、 （２）反応停止槽３の中で前記試料と主剤１２に反応停
止剤１３を接触させる工程、 （３）着色槽４の中で前記試料に着色剤１４を接触させ
る工程、 ［２］本発明は、次の各工程（１）から（４）よりな
り、各工程（１）から（４）をクローズドシステムのキ
ット内で行う輸血用保存血液中のエンドトキシン検出方
法を提供する。 （１）試料を吸着剤２２を通過させて、エンドトキシン
を吸着剤２２に吸着させる工程、 （２）前記エンドトキシンと主剤１２を反応させる工
程、 （３）前記エンドトキシンと主剤１２に反応停止剤１３
を接触させる工程、 （４）前記エンドトキシンに着色剤１４を接触させる工
程、 ［３］本発明は、反応槽２と反応停止槽３を途中に連通
部材８を配置した接続管６を介して接続し、または前記
反応停止槽３と着色槽４を途中に連通部材９を配置した
接続管７を介して接続し、前記反応槽２の上部には栓体
５が装着されるとともに内部には主剤１２が封入され、
前記反応停止槽３の内部には反応停止剤１３が封入さ
れ、前記着色槽４の内部には着色剤１４を封入した輸血
用保存血液中のエンドトキシン検出キット１を提供す
る。 ［４］本発明は、内部にエンドトキシンの特異的吸着剤
２２と、該吸着剤２２の活性を維持するための保存剤２
３が封入され、上部に栓体２５が装着され、下部に廃液
口２９を形成した輸血用保存血液中のエンドトキシン検
出キット２１を提供する。
【０００６】
【実施例】図１はエンドトキシン検出キット１（以下、
検出キット１）の概略図で、検出キット１は筒状の反応
槽２と反応停止槽３と着色槽４より構成され、反応槽２
と反応停止槽３は途中に連通部材８を配置した接続管６
を介して接続され、反応停止槽３と着色槽４は途中に連
通部材９を配置した接続管７を介して接続されている。
反応槽２の上部には栓体５が装着され、反応槽２の内部
には主剤１２が封入され、反応停止槽３の内部には反応
停止剤１３が封入され、着色槽４の内部には着色剤１４
が封入されている。検出キット１を構成する各反応槽２
と反応停止槽３と着色槽４は閉鎖系に維持されている。
反応槽２等は外部から押圧してポンピングできるように
可とう性のプラスチックチューブ等により形成され、そ
れぞれ前記接続管６等により接続することにより組み立
てられる。また接続管６（７）へ連通部材８（９）を配
置する手段として図１のように接続管６（７）内部に薄
肉部を介して大径と小径の部材よりなる連通部材８を装
填しても良いが接続管６（７）の外周にクランプ等から
なる連通部材を装着しても良い。
検出キット１）の概略図で、検出キット１は筒状の反応
槽２と反応停止槽３と着色槽４より構成され、反応槽２
と反応停止槽３は途中に連通部材８を配置した接続管６
を介して接続され、反応停止槽３と着色槽４は途中に連
通部材９を配置した接続管７を介して接続されている。
反応槽２の上部には栓体５が装着され、反応槽２の内部
には主剤１２が封入され、反応停止槽３の内部には反応
停止剤１３が封入され、着色槽４の内部には着色剤１４
が封入されている。検出キット１を構成する各反応槽２
と反応停止槽３と着色槽４は閉鎖系に維持されている。
反応槽２等は外部から押圧してポンピングできるように
可とう性のプラスチックチューブ等により形成され、そ
れぞれ前記接続管６等により接続することにより組み立
てられる。また接続管６（７）へ連通部材８（９）を配
置する手段として図１のように接続管６（７）内部に薄
肉部を介して大径と小径の部材よりなる連通部材８を装
填しても良いが接続管６（７）の外周にクランプ等から
なる連通部材を装着しても良い。
【０００７】本発明では、前記主剤１２としてカブトガ
ニ血球抽出成分（ライセート）と発色合成基質（Ｂｏｃ
−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−ｐＮＡ；ｔ−ブトキシカル
ボニル−Ｌ−ロイシル−グリシル−Ｌ−アルギニン−ｐ
−ニトロアニリド塩酸塩）と緩衝液（例えば、リン酸緩
衝液、トリス塩酸緩衝液、グッド緩衝液等）からなる組
成物（以下、主剤１２Ａ）等が使用され、前記反応停止
剤１３として亜硝酸ナトリウム−塩酸水溶液（以下、反
応停止剤１３Ａ）等が使用され、前記着色剤１４として
スルファミン酸アンモニウム溶液とＮ−（１−ナフチ
ル）エチレンジアミン二塩酸塩の混合物（以下、着色剤
１４Ａ）等が使用される。
ニ血球抽出成分（ライセート）と発色合成基質（Ｂｏｃ
−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−ｐＮＡ；ｔ−ブトキシカル
ボニル−Ｌ−ロイシル−グリシル−Ｌ−アルギニン−ｐ
−ニトロアニリド塩酸塩）と緩衝液（例えば、リン酸緩
衝液、トリス塩酸緩衝液、グッド緩衝液等）からなる組
成物（以下、主剤１２Ａ）等が使用され、前記反応停止
剤１３として亜硝酸ナトリウム−塩酸水溶液（以下、反
応停止剤１３Ａ）等が使用され、前記着色剤１４として
スルファミン酸アンモニウム溶液とＮ−（１−ナフチ
ル）エチレンジアミン二塩酸塩の混合物（以下、着色剤
１４Ａ）等が使用される。
【０００８】図２はその他のエンドトキシン検出キット
２１（以下、検出キット２１）の概略図で、検出キット
２１は内部にエンドトキシンの特異的吸着剤２２（以
下、吸着剤２２）と該吸着剤２２の活性を維持するため
の保存剤２３が封入され、上部には栓体２５が装着さ
れ、下部には廃液口２９が形成されている。廃液口２９
の下部は、溶着等の手段により密封しておいて、使用時
にハサミ等で切断開口するようにしても良いし栓体を装
着しておいて、使用時に栓体をはずして開口するように
形成しても良い。本発明では前記吸着剤２２としてダイ
セル化学工業株式会社製のパイロセップＡ（アガロース
にヘキサメチレンジアミンをスペーサーとして、ヒスチ
ジンを共有結合させたソフトゲルタイプ、吸着剤２２
Ａ）、パイロセップＣ（セルロースをベースとしたハー
ドゲルタイプ、吸着剤２２Ｃ）等が使用され、保存剤２
３として水（保存剤２３Ａ）、低イオン強度緩衝液（保
存剤２３Ｂ）、塩化ナトリウム水溶液（例えば０．０５
Ｍ）（保存剤２３Ｃ）等が使用される。また、本発明で
は赤血球を含む製剤（全血、赤血球濃厚液）と赤血球を
含まない製剤（血漿、貧血小板血漿、多血小板血漿、血
小板濃厚液）が使用され、赤血球を含む製剤は遠心処理
した後、その上澄が使用され、赤血球を含まない製剤
は、除蛋白処理して遠心処理した後、その上澄が使用さ
れる。また本発明では着色剤を選択することにより着色
の色を自由に設定することができる。
２１（以下、検出キット２１）の概略図で、検出キット
２１は内部にエンドトキシンの特異的吸着剤２２（以
下、吸着剤２２）と該吸着剤２２の活性を維持するため
の保存剤２３が封入され、上部には栓体２５が装着さ
れ、下部には廃液口２９が形成されている。廃液口２９
の下部は、溶着等の手段により密封しておいて、使用時
にハサミ等で切断開口するようにしても良いし栓体を装
着しておいて、使用時に栓体をはずして開口するように
形成しても良い。本発明では前記吸着剤２２としてダイ
セル化学工業株式会社製のパイロセップＡ（アガロース
にヘキサメチレンジアミンをスペーサーとして、ヒスチ
ジンを共有結合させたソフトゲルタイプ、吸着剤２２
Ａ）、パイロセップＣ（セルロースをベースとしたハー
ドゲルタイプ、吸着剤２２Ｃ）等が使用され、保存剤２
３として水（保存剤２３Ａ）、低イオン強度緩衝液（保
存剤２３Ｂ）、塩化ナトリウム水溶液（例えば０．０５
Ｍ）（保存剤２３Ｃ）等が使用される。また、本発明で
は赤血球を含む製剤（全血、赤血球濃厚液）と赤血球を
含まない製剤（血漿、貧血小板血漿、多血小板血漿、血
小板濃厚液）が使用され、赤血球を含む製剤は遠心処理
した後、その上澄が使用され、赤血球を含まない製剤
は、除蛋白処理して遠心処理した後、その上澄が使用さ
れる。また本発明では着色剤を選択することにより着色
の色を自由に設定することができる。
【０００９】次にエンドトキシンの検出例について説明
する。実施例１（検出キット１により検出を行う場合） 除蛋白処理した多血小板血漿を遠心処理し、これらの上
澄を試験管に採取して試料Ａを作成した。試料Ａをシリ
ンジに採取し、これを栓体５に穿刺して反応槽２の中に
注入し、主剤１２Ａ（緩衝液はリン酸緩衝液を使用し
た。）と室温で２０分間反応させた。連通部材８を破断
して前記試料Ａと主剤１２Ａを反応停止槽３の中に導入
して、反応停止剤１３Ａを接触させた。連通部材８を破
断して前記試料Ａ等を着色槽４の中に導入して、着色剤
１４Ａと接触させ、ジアゾカップリング反応を生じさせ
着色槽４中の着色状況を肉眼で観察した。着色槽４内は
かすかに赤色に着色し、これによりエンドトキシンを検
出することができた。本実施例の方法では、試料Ａの前
処理から着色槽４の赤色の着色観察に至るまでの全操作
を５０分（前処理２０分、反応から着色３０分）で行う
ことができた。
する。実施例１（検出キット１により検出を行う場合） 除蛋白処理した多血小板血漿を遠心処理し、これらの上
澄を試験管に採取して試料Ａを作成した。試料Ａをシリ
ンジに採取し、これを栓体５に穿刺して反応槽２の中に
注入し、主剤１２Ａ（緩衝液はリン酸緩衝液を使用し
た。）と室温で２０分間反応させた。連通部材８を破断
して前記試料Ａと主剤１２Ａを反応停止槽３の中に導入
して、反応停止剤１３Ａを接触させた。連通部材８を破
断して前記試料Ａ等を着色槽４の中に導入して、着色剤
１４Ａと接触させ、ジアゾカップリング反応を生じさせ
着色槽４中の着色状況を肉眼で観察した。着色槽４内は
かすかに赤色に着色し、これによりエンドトキシンを検
出することができた。本実施例の方法では、試料Ａの前
処理から着色槽４の赤色の着色観察に至るまでの全操作
を５０分（前処理２０分、反応から着色３０分）で行う
ことができた。
【００１０】実施例２（検出キット２１により検出を行
う場合） 実施例１と同様に作成した試料Ａをシリンジに採取し、
これを栓体２５に穿刺して検出キット２１の中に注入
し、室温で３０分放置した。エンドトキシンが吸着剤２
２Ｃに吸着された後、その他の試料Ａ、保存剤２３Ａは
廃液口２９より廃出した。検出キット２１の中に主剤１
２Ａを加え前記エンドトキシンと２０分間反応させた。
続いてこれらに反応停止剤１３Ａ、着色剤１４Ａを順次
加えてジアゾカップリング反応を生じさせ検出キット２
１中の着色状況を肉眼で観察した。検出キット２１内は
かすかに赤色に着色し、これによりエンドトキシンを検
出することができた。本実施例の方法では、試料Ａの前
処理から検出キット２１の着色観察に至るまでの全操作
を６０分で行うことができた。
う場合） 実施例１と同様に作成した試料Ａをシリンジに採取し、
これを栓体２５に穿刺して検出キット２１の中に注入
し、室温で３０分放置した。エンドトキシンが吸着剤２
２Ｃに吸着された後、その他の試料Ａ、保存剤２３Ａは
廃液口２９より廃出した。検出キット２１の中に主剤１
２Ａを加え前記エンドトキシンと２０分間反応させた。
続いてこれらに反応停止剤１３Ａ、着色剤１４Ａを順次
加えてジアゾカップリング反応を生じさせ検出キット２
１中の着色状況を肉眼で観察した。検出キット２１内は
かすかに赤色に着色し、これによりエンドトキシンを検
出することができた。本実施例の方法では、試料Ａの前
処理から検出キット２１の着色観察に至るまでの全操作
を６０分で行うことができた。
【００１１】実施例３ 前記実施例１及び実施例２において試料Ａと主剤１２Ａ
の反応温度を高温（３７℃）に設定して反応を促進させ
た後、反応停止剤１３Ａを接触させて反応停止槽４（検
出キット２１）内の着色状況を肉眼で観察した。反応停
止槽４（検出キット２１）内はかすかに黄色に着色し、
これによりエンドトキシンを検出することができた。ま
た、試料の量を増やし、主剤１２Ａ等の濃度を高くして
室温で試料Ａと主剤１２Ａを反応させても前記と同様に
エンドトキシンを検出することができた。本実施例では
試料Ａの前処理からエンドトキシンの着色観察に至るま
で全操作を４０分で行うことができた。
の反応温度を高温（３７℃）に設定して反応を促進させ
た後、反応停止剤１３Ａを接触させて反応停止槽４（検
出キット２１）内の着色状況を肉眼で観察した。反応停
止槽４（検出キット２１）内はかすかに黄色に着色し、
これによりエンドトキシンを検出することができた。ま
た、試料の量を増やし、主剤１２Ａ等の濃度を高くして
室温で試料Ａと主剤１２Ａを反応させても前記と同様に
エンドトキシンを検出することができた。本実施例では
試料Ａの前処理からエンドトキシンの着色観察に至るま
で全操作を４０分で行うことができた。
【００１２】また、本発明において実施例３のようにエ
ンドトキシンの検出を行う場合は、図１の検出キット１
において接続管９と着色槽４は省略することができる。
ンドトキシンの検出を行う場合は、図１の検出キット１
において接続管９と着色槽４は省略することができる。
【００１３】本発明においては、試験に使用する試料の
量、反応時間、温度、主剤、着色剤の量を適宜調整する
ことにより、エンドトキシンの検出感度を変えることが
できる。また、血液製剤が汚染した場合、認知すべきエ
ンドトキシン量に見合った赤色の見本を用意しておけ
ば、本キットにより試験を行い、赤色の着色状態を比べ
ることで、汚染血液の判定は容易となる。
量、反応時間、温度、主剤、着色剤の量を適宜調整する
ことにより、エンドトキシンの検出感度を変えることが
できる。また、血液製剤が汚染した場合、認知すべきエ
ンドトキシン量に見合った赤色の見本を用意しておけ
ば、本キットにより試験を行い、赤色の着色状態を比べ
ることで、汚染血液の判定は容易となる。
【００１４】
【発明の作用効果】（１）輸血用血液の細菌汚染の確認
をこれまでの目視による外観（主観的）検査から比色
（客観的）検査に変更することで、輸血事故防止に大き
く貢献できる。 （２）従来のエンドトキシン検出法（体外診断用）に比
べ、器具、試薬の準備に時間がかからずクリーンベンチ
下でなくても、エンドトキシンの検出を短時間ででき
る。（検出操作の全工程は従来法：約１．５〜２時間に
対して、本発明：４０〜６０分） （３）輸血前検査として、本キットを使用することで汚
染血液の輸血を未然に防止できる。 （４）従来法では、検体調整から反応停止段階まで、エ
ンドトキシンフリーの操作が必要であるため、使用する
試験管ピペットを始め検体以外からのエンドトキシンの
汚染を防ぐためクリーンベンチ等清浄な環境下で試験を
行う必要があったが、本発明の方法では、測定する血液
製剤をディスポシリンジ等で無菌的に採取した後は、ク
ローズドシステムのキット内での反応となるため通常の
環境下で行える。 （５）従来の体外診断用医薬品は、赤色を吸光度で読
み、正確な定量が可能であるが、本発明の方法は、第１
目的を輸血用血液が細菌に汚染されていないかどうかを
検出することにおいているため、肉眼により赤色を判断
することで判定できるものである。
をこれまでの目視による外観（主観的）検査から比色
（客観的）検査に変更することで、輸血事故防止に大き
く貢献できる。 （２）従来のエンドトキシン検出法（体外診断用）に比
べ、器具、試薬の準備に時間がかからずクリーンベンチ
下でなくても、エンドトキシンの検出を短時間ででき
る。（検出操作の全工程は従来法：約１．５〜２時間に
対して、本発明：４０〜６０分） （３）輸血前検査として、本キットを使用することで汚
染血液の輸血を未然に防止できる。 （４）従来法では、検体調整から反応停止段階まで、エ
ンドトキシンフリーの操作が必要であるため、使用する
試験管ピペットを始め検体以外からのエンドトキシンの
汚染を防ぐためクリーンベンチ等清浄な環境下で試験を
行う必要があったが、本発明の方法では、測定する血液
製剤をディスポシリンジ等で無菌的に採取した後は、ク
ローズドシステムのキット内での反応となるため通常の
環境下で行える。 （５）従来の体外診断用医薬品は、赤色を吸光度で読
み、正確な定量が可能であるが、本発明の方法は、第１
目的を輸血用血液が細菌に汚染されていないかどうかを
検出することにおいているため、肉眼により赤色を判断
することで判定できるものである。
【図１】エンドトキシン検出キットの概略図
【図２】エンドトキシン検出キットの概略図
１、２１ エンドトキシン検出キット（検出キット） ２ 反応槽 ３ 反応停止槽 ４ 着色槽 ５、２５ 栓体 ６、７ 接続管 ８、９ 連通部材 １２ 主剤 １３ 反応停止剤 １４ 着色剤 ２２ 吸着剤 ２３ 保存剤 ２９ 廃液口
Claims (4)
- 【請求項１】次の各工程（１）から（３）よりなり、各
工程（１）から（３）をクローズドシステムのキット内
で行う、ことを特徴とする輸血用保存血液中のエンドト
キシン検出方法。 （１）反応槽２の中で試料を主剤１２と反応させる工
程、 （２）反応停止槽３の中で前記試料と主剤１２に反応停
止剤１３を接触させる工程、 （３）着色槽４の中で前記試料に着色剤１４を接触させ
る工程、 - 【請求項２】次の各工程（１）から（４）よりなり、各
工程（１）から（４）をクローズドシステムのキット内
で行う、ことを特徴とする輸血用保存血液中のエンドト
キシン検出方法。 （１）試料を吸着剤２２を通過させて、エンドトキシン
を吸着剤２２に吸着させる工程、 （２）前記エンドトキシンと主剤１２を反応させる工
程、 （３）前記エンドトキシンと主剤１２に反応停止剤１３
を接触させる工程、 （４）前記エンドトキシンに着色剤１４を接触させる工
程、 - 【請求項３】反応槽２と反応停止槽３を途中に連通部材
８を配置した接続管６を介して接続し、または前記反応
停止槽３と着色槽４を途中に連通部材９を配置した接続
管７を介して接続し、 前記反応槽２の上部には栓体５が装着されるとともに内
部には主剤１２が封入され、前記反応停止槽３の内部に
は反応停止剤１３が封入され、前記着色槽４の内部には
着色剤１４を封入した、ことを特徴とする輸血用保存血
液中のエンドトキシン検出キット１。 - 【請求項４】内部にエンドトキシンの特異的吸着剤２２
と、該吸着剤２２の活性を維持するための保存剤２３が
封入され、 上部に栓体２５が装着され、下部に廃液口２９を形成し
た、ことを特徴とする輸血用保存血液中のエンドトキシ
ン検出キット２１。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP03464795A JP3197451B2 (ja) | 1995-01-31 | 1995-01-31 | 保存血液中のエンドトキシン検出方法及び検出キット |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP03464795A JP3197451B2 (ja) | 1995-01-31 | 1995-01-31 | 保存血液中のエンドトキシン検出方法及び検出キット |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH08211052A JPH08211052A (ja) | 1996-08-20 |
| JP3197451B2 true JP3197451B2 (ja) | 2001-08-13 |
Family
ID=12420240
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP03464795A Expired - Fee Related JP3197451B2 (ja) | 1995-01-31 | 1995-01-31 | 保存血液中のエンドトキシン検出方法及び検出キット |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3197451B2 (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2013093671A1 (en) * | 2011-12-21 | 2013-06-27 | Grifols, S.A. | Identification of atypical antibodies in human blood and blood products |
-
1995
- 1995-01-31 JP JP03464795A patent/JP3197451B2/ja not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH08211052A (ja) | 1996-08-20 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US3733179A (en) | Method and apparatus for the quantitative determination of blood chemicals in blood derivatives | |
| US6016712A (en) | Device for receiving and processing a sample | |
| US3476515A (en) | Analytical test pack and process for analysis | |
| Roth et al. | Optimization of detection of bacterial endotoxin in plasma with the Limulus test | |
| KR101759995B1 (ko) | 미생물의 분리, 특성규명 및/또는 동정에 사용하기 위한 분리 장치 | |
| KR20110025819A (ko) | 폐쇄된 용기 시료 채취 시스템을 위한 허브에 꽂힌 이중 캐뉼러 기기 | |
| Lippi et al. | Preanalytical variability in laboratory testing: influence of the blood drawing technique | |
| JP2007078665A (ja) | 血液エンドトキシン測定方法 | |
| EP2748609B1 (en) | Detection of endotoxin in aqueous solution | |
| JP2957251B2 (ja) | エンドトキシンの測定法 | |
| EP2299273A1 (en) | Method of assaying physiologically active substance of biological origin, kit for assaying physiologically active substance of biological origin and apparatus for assaying physiologically active substance of biological origin | |
| JP3197451B2 (ja) | 保存血液中のエンドトキシン検出方法及び検出キット | |
| CN107576807A (zh) | 一种血型检测质控品及其制备方法和在血型检测中的应用 | |
| US4105499A (en) | Heart attack screening method, apparatus and kit for same | |
| US10690652B2 (en) | Method for detecting sickle-cell disease and kit for implementing same | |
| Roth et al. | Production of modified crosslinked cell‐free hemoglobin for human use: the role of quantitative determination of endotoxin contamination | |
| US20210116448A1 (en) | Method for measuring fibrinogen concentration in blood sample and nanoparticles for same | |
| EP0522034B1 (en) | Method of testing a potentially infectious substance | |
| CA1236396A (en) | Endotoxin-detecting device | |
| Roth et al. | Binding specificity and affinity of acriflavine for nucleic acids | |
| EP2899542A1 (en) | Quantification method, quantification device, and quantification kit | |
| Bull | Recommendations for reference method for the packed cell volume | |
| Heyns et al. | Unsuitability of evacuated tubes for monitoring heparin therapy by activated partial thromboplastin time. | |
| US4708850A (en) | Self-contained portable apparatus for blood typing | |
| CN106771164A (zh) | 一种检测奶牛乳房炎中金黄色葡萄球菌的胶体金试纸及其制备方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20080608 Year of fee payment: 7 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20090608 Year of fee payment: 8 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20100608 Year of fee payment: 9 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20100608 Year of fee payment: 9 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20110608 Year of fee payment: 10 |
|
| S531 | Written request for registration of change of domicile |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313531 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20110608 Year of fee payment: 10 |
|
| R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20120608 Year of fee payment: 11 |
|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |