JP3183994B2 - 新規な凝乳酵素及びその製造法 - Google Patents
新規な凝乳酵素及びその製造法Info
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Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、アスペルギルス・ウス
タスが生産する新規な凝乳酵素に関する。また、本発明
は、この新規な凝乳酵素生産能を有するアスペルギルス
・ウスタスを培養し、その培養物から凝乳酵素を製造す
る方法に関する。さらに、本発明は、アスペルギルス・
ウスタスに属し、この新規な凝乳酵素生産能を有する菌
株に関する。
タスが生産する新規な凝乳酵素に関する。また、本発明
は、この新規な凝乳酵素生産能を有するアスペルギルス
・ウスタスを培養し、その培養物から凝乳酵素を製造す
る方法に関する。さらに、本発明は、アスペルギルス・
ウスタスに属し、この新規な凝乳酵素生産能を有する菌
株に関する。
【０００２】
【従来の技術】従来より、チーズを製造するに際して
は、原料乳を凝固させるために凝乳酵素が必要とされ、
離乳前の子牛第４胃から抽出、調製されるキモシンが凝
乳酵素として伝統的に用いられている。しかし、このキ
モシンの原料となる子牛の慢性的な供給不足から、１９
７０年代の初め頃より、多くの研究者が精力的にキモシ
ンに代わる凝乳酵素の研究、開発を行ってきた。そし
て、これまでに、動物、植物及び微生物起源のキモシン
に代わる多数の凝乳酵素が見出され、チーズ製造への利
用の試みがなされているが、キモシンに代わる凝乳酵素
として実用化されているものは、動物起源のペプシンや
エンドシア・パラシチカ（Ｅｎｄｏｔｈｉａｐａｒａｓ
ｉｔｉｃａ）、ムコール・プシルス（Ｍｕｃｏｒ ｐｕ
ｓｉｌｌｕｓ）及びムコール・ミイヘイ（Ｍｕｃｏｒ
ｍｉｅｈｅｉ）の糸状菌３種が生産する微生物起源の微
生物レンネットのみである。
は、原料乳を凝固させるために凝乳酵素が必要とされ、
離乳前の子牛第４胃から抽出、調製されるキモシンが凝
乳酵素として伝統的に用いられている。しかし、このキ
モシンの原料となる子牛の慢性的な供給不足から、１９
７０年代の初め頃より、多くの研究者が精力的にキモシ
ンに代わる凝乳酵素の研究、開発を行ってきた。そし
て、これまでに、動物、植物及び微生物起源のキモシン
に代わる多数の凝乳酵素が見出され、チーズ製造への利
用の試みがなされているが、キモシンに代わる凝乳酵素
として実用化されているものは、動物起源のペプシンや
エンドシア・パラシチカ（Ｅｎｄｏｔｈｉａｐａｒａｓ
ｉｔｉｃａ）、ムコール・プシルス（Ｍｕｃｏｒ ｐｕ
ｓｉｌｌｕｓ）及びムコール・ミイヘイ（Ｍｕｃｏｒ
ｍｉｅｈｅｉ）の糸状菌３種が生産する微生物起源の微
生物レンネットのみである。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】本発明者らは, 新たな
微生物起源の凝乳酵素を見出すべく、鋭意検討を行った
ところ、土壌から分離した糸状菌のフスマ培養抽出物が
強い凝乳活性を有することを見出し、本発明を成すに至
った。したがって、本発明は、新規な凝乳酵素を提供す
ることを課題とする。また、本発明は、この新規な凝乳
酵素を製造する方法を提供することを課題とする。さら
に、本発明は、この新規な凝乳酵素の産生能を有する菌
株を提供することを課題とする。
微生物起源の凝乳酵素を見出すべく、鋭意検討を行った
ところ、土壌から分離した糸状菌のフスマ培養抽出物が
強い凝乳活性を有することを見出し、本発明を成すに至
った。したがって、本発明は、新規な凝乳酵素を提供す
ることを課題とする。また、本発明は、この新規な凝乳
酵素を製造する方法を提供することを課題とする。さら
に、本発明は、この新規な凝乳酵素の産生能を有する菌
株を提供することを課題とする。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明では、新規な凝乳
酵素の産生能を有する微生物を培養し、得られる培養物
から、本発明の凝乳酵素を採取する。ここで、本発明に
おいて用いる凝乳酵素を生産する菌株の菌学的性質につ
いて次の通り示す。 (ａ）形態 分生子柄は、空中菌糸及び基中菌糸から生じ、脚細胞を
持っており、厚壁、滑面で、長さ１００〜３００μｍ、
直径５〜７μｍ。隔壁は殆どなく、暗褐色を呈する。頂
嚢は、ほぼ球形で直径１０〜２０μｍ、ほぼ全面で、又
は頂嚢下部を除いて、梗子はふたつに分かれている。基
梗は、臼歯型２〜３μｍ×５〜７μｍ、端梗は、短い瓶
型２×７μｍである。分生子は、球形で直径３〜３．５
μｍ、表面にかなり長い刺状突起を全面に付け、淡緑色
から淡褐色を呈する。端梗子先端から分生子の連鎖を生
じるが、長鎖とはならず、全体としてほぼ球形の分生子
頭を形成する。
酵素の産生能を有する微生物を培養し、得られる培養物
から、本発明の凝乳酵素を採取する。ここで、本発明に
おいて用いる凝乳酵素を生産する菌株の菌学的性質につ
いて次の通り示す。 (ａ）形態 分生子柄は、空中菌糸及び基中菌糸から生じ、脚細胞を
持っており、厚壁、滑面で、長さ１００〜３００μｍ、
直径５〜７μｍ。隔壁は殆どなく、暗褐色を呈する。頂
嚢は、ほぼ球形で直径１０〜２０μｍ、ほぼ全面で、又
は頂嚢下部を除いて、梗子はふたつに分かれている。基
梗は、臼歯型２〜３μｍ×５〜７μｍ、端梗は、短い瓶
型２×７μｍである。分生子は、球形で直径３〜３．５
μｍ、表面にかなり長い刺状突起を全面に付け、淡緑色
から淡褐色を呈する。端梗子先端から分生子の連鎖を生
じるが、長鎖とはならず、全体としてほぼ球形の分生子
頭を形成する。
【０００５】(ｂ）生育 ポテトデキストロース寒天培地で培養した場合は、分生
子を良く生成し、暗オリーブ色を呈する。ツアッペック
液寒天培地で培養した場合は、２７℃、７日間で直径約
４ｃｍの菌叢に生育する。表面は、淡褐色で緻密なフェ
ルト状を呈し、分生の成熟に伴ってオリーブ灰色とな
る。裏面は、黄色乃至褐色を呈する。生育ｐＨ範囲は
３．５〜９．０で最適ｐＨは４．０付近、生育温度範囲
は１５〜３５℃最適生育温度は２５〜２８℃である。
子を良く生成し、暗オリーブ色を呈する。ツアッペック
液寒天培地で培養した場合は、２７℃、７日間で直径約
４ｃｍの菌叢に生育する。表面は、淡褐色で緻密なフェ
ルト状を呈し、分生の成熟に伴ってオリーブ灰色とな
る。裏面は、黄色乃至褐色を呈する。生育ｐＨ範囲は
３．５〜９．０で最適ｐＨは４．０付近、生育温度範囲
は１５〜３５℃最適生育温度は２５〜２８℃である。
【０００６】上記の菌学的性質に基づき、文献〔Ｋ．
Ｂ．Ｒａｐｅｒ ｅｔ ａｌ．、Ｔｈｅ Ｇｅｎｕｓ
Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ、５４３頁、１９７３年〕を参
照して分類したところ、この菌株は、アスペルギルス・
ウスタス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｕｓｔｕｓ）と同
定された。なお、この菌株は、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ
ｕｓｔｕｓ ＳＢＴ ７５６７株として、工業技術院微
生物工業技術研究所に微工研菌寄第１３１５７号（ＦＥ
ＲＭ Ｐ−１３１５７）の番号で寄託されている。
Ｂ．Ｒａｐｅｒ ｅｔ ａｌ．、Ｔｈｅ Ｇｅｎｕｓ
Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ、５４３頁、１９７３年〕を参
照して分類したところ、この菌株は、アスペルギルス・
ウスタス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｕｓｔｕｓ）と同
定された。なお、この菌株は、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ
ｕｓｔｕｓ ＳＢＴ ７５６７株として、工業技術院微
生物工業技術研究所に微工研菌寄第１３１５７号（ＦＥ
ＲＭ Ｐ−１３１５７）の番号で寄託されている。
【０００７】このアスペルギルス・ウスタスの培養に
は、小麦ふすまに水または緩衝液を加えて調製した固体
培地が適している。すなわち、小麦ふすま量の半分量か
ら倍量程度、好ましくは等量を加水した固体培地を用い
る。また、この培地に大豆粉、カゼインあるいはホエー
粉などを５％以内で添加しても良い。そして、この培地
にアスペルギルス・ウスタスを接種した後、温度２０〜
３０℃、好ましくは２５〜２８℃で、３〜７日間、好ま
しくは４〜６日間培養を行う。なお、１２メッシュ以上
の微細小麦ふすまを２〜１０％、好ましくは５〜８％濃
度に調製した液体培地を用い、２〜５日間振とう培養を
行って構わない。
は、小麦ふすまに水または緩衝液を加えて調製した固体
培地が適している。すなわち、小麦ふすま量の半分量か
ら倍量程度、好ましくは等量を加水した固体培地を用い
る。また、この培地に大豆粉、カゼインあるいはホエー
粉などを５％以内で添加しても良い。そして、この培地
にアスペルギルス・ウスタスを接種した後、温度２０〜
３０℃、好ましくは２５〜２８℃で、３〜７日間、好ま
しくは４〜６日間培養を行う。なお、１２メッシュ以上
の微細小麦ふすまを２〜１０％、好ましくは５〜８％濃
度に調製した液体培地を用い、２〜５日間振とう培養を
行って構わない。
【０００８】アスペルギルス・ウスタスの培養物からの
凝乳酵素の取得方法としては、固体培養を行った場合、
培養物と等量の水あるいは緩衝液を加えて菌体を抽出
し、凝乳酵素の粗酵素液を得、適宜、その粗酵素液を濃
縮、乾燥して凝乳酵素の粗酵素粉末を得ることができ
る。また、液体培養を行った場合、遠心分離を行って菌
体を除去し、その培養上清液に、硫安や硫酸ナトリウム
などを加えるか、あるいはアセトンやアルコールなどの
有機溶媒を加えて、凝乳酵素を沈澱させ、その沈殿を分
離、回収し、乾燥して凝乳酵素の粗酵素粉末を得ること
ができる。
凝乳酵素の取得方法としては、固体培養を行った場合、
培養物と等量の水あるいは緩衝液を加えて菌体を抽出
し、凝乳酵素の粗酵素液を得、適宜、その粗酵素液を濃
縮、乾燥して凝乳酵素の粗酵素粉末を得ることができ
る。また、液体培養を行った場合、遠心分離を行って菌
体を除去し、その培養上清液に、硫安や硫酸ナトリウム
などを加えるか、あるいはアセトンやアルコールなどの
有機溶媒を加えて、凝乳酵素を沈澱させ、その沈殿を分
離、回収し、乾燥して凝乳酵素の粗酵素粉末を得ること
ができる。
【０００９】本発明の凝乳酵素の精製方法としは、通常
行われる酵素の精製方法を用いることができ、例えば、
アスペルギルス・ウスタスの小麦ふすま培養物から得ら
れた粗酵素をアンバーライトＣＧ−５０カラムクロマト
グラフィー及びセファクリルＳ−２００カラムクロマト
グラフィーで精製して得ることができる。次に、本発明
の凝乳酵素の酵素学的性質を示す。
行われる酵素の精製方法を用いることができ、例えば、
アスペルギルス・ウスタスの小麦ふすま培養物から得ら
れた粗酵素をアンバーライトＣＧ−５０カラムクロマト
グラフィー及びセファクリルＳ−２００カラムクロマト
グラフィーで精製して得ることができる。次に、本発明
の凝乳酵素の酵素学的性質を示す。
【００１０】（１）凝乳活性及び蛋白質分解活性 凝乳活性（ＭＣＡ）は、酵素蛋白質１ｍｇ当たり９１．
８単位であり、また、蛋白質分解活性（ＰＡ）は、酵素
蛋白質１ｍｇ当たり０．９単位であった。したがって、
ＭＣＡ／ＰＡ＝１０２である。
８単位であり、また、蛋白質分解活性（ＰＡ）は、酵素
蛋白質１ｍｇ当たり０．９単位であった。したがって、
ＭＣＡ／ＰＡ＝１０２である。
【００１１】（２）各カゼイン画分に対する作用性 αS1−カゼインに対する分解性は、キモシンに比べて極
めて低く、β−カゼインに対する分解性は、キモシンに
比べて高かった。また、κ−カゼインに対する分解性
は、キモシンと同等であった。
めて低く、β−カゼインに対する分解性は、キモシンに
比べて高かった。また、κ−カゼインに対する分解性
は、キモシンと同等であった。
【００１２】（３）最適作用ｐＨ及び安定ｐＨ ＭＣＡは、ｐＨが低下するにつれて増大するが、ｐＨ
６．７５以上では活性が認められなかった。なお、ｐＨ
とＭＣＡとの関係について図１に示す。また、ＰＡは、
ｐＨが６．０付近で最高の値を示した。なお、ＭＣＡ及
びＰＡは共にｐＨ３．０〜６．０で安定であった。ＭＣ
ＡあるいはＰＡとｐＨとの関係について図２に示す。
６．７５以上では活性が認められなかった。なお、ｐＨ
とＭＣＡとの関係について図１に示す。また、ＰＡは、
ｐＨが６．０付近で最高の値を示した。なお、ＭＣＡ及
びＰＡは共にｐＨ３．０〜６．０で安定であった。ＭＣ
ＡあるいはＰＡとｐＨとの関係について図２に示す。
【００１３】（４）最適作用温度及び熱安定性 最適作用温度は、それぞれＭＣＡが６３℃付近、ＰＡが
５０℃付近に認められた。また、ＭＣＡ及びＰＡは共に
４０〜４５℃付近で失活が始まり、５５℃で殆ど失活し
た。
５０℃付近に認められた。また、ＭＣＡ及びＰＡは共に
４０〜４５℃付近で失活が始まり、５５℃で殆ど失活し
た。
【００１４】（５）阻害剤 本発明の凝乳酵素は、ｎ−エチルマレイミド及びソディ
ウムドデシルサルフェートによって顕著に阻害された。
ウムドデシルサルフェートによって顕著に阻害された。
【００１５】（６）精製法 本発明の凝乳酵素は、小麦ふすま培養物から粗酵素を抽
出し、この粗酵素液を硫安塩析した後、アンバーライト
ＣＧ−５０カラムクロマトグラフィー及びセファクリル
Ｓ−２００カラムクロマトグラフィーで精製して精製酵
素標品を得ることができる。
出し、この粗酵素液を硫安塩析した後、アンバーライト
ＣＧ−５０カラムクロマトグラフィー及びセファクリル
Ｓ−２００カラムクロマトグラフィーで精製して精製酵
素標品を得ることができる。
【００１６】（７）分子量 ＳＤＳ−ＰＡＧＥにより測定した分子量は、約８６，０
００である。
００である。
【００１７】(8) 活性測定法 MCA は、Berridge法に準じて測定した (国際酪農連盟
編; IDF Standard 110 p１〜７(1982)) すなわち、0.01
M 塩化カルシウムに溶解した10％還元脱脂乳(pH6.0) を
基質として用い、この基質10mlに対して 5〜10分間でカ
ードフラグメントが生成するような濃度に調製した酵素
液 1mlを加え、30℃に保持した。時々、試験管を静かに
回転させ、基質／酵素混合液を撹拌してカードフラグメ
ントの生成を観察した。そして、カードフラグメントが
生成するまでの時間を測定し、単位量の酵素が単位時間
(100秒間) に何倍量の基質を凝固させ得るかを計算し、
活性をBerridge Unit として表した。
編; IDF Standard 110 p１〜７(1982)) すなわち、0.01
M 塩化カルシウムに溶解した10％還元脱脂乳(pH6.0) を
基質として用い、この基質10mlに対して 5〜10分間でカ
ードフラグメントが生成するような濃度に調製した酵素
液 1mlを加え、30℃に保持した。時々、試験管を静かに
回転させ、基質／酵素混合液を撹拌してカードフラグメ
ントの生成を観察した。そして、カードフラグメントが
生成するまでの時間を測定し、単位量の酵素が単位時間
(100秒間) に何倍量の基質を凝固させ得るかを計算し、
活性をBerridge Unit として表した。
【００１８】
【００１９】ＰＡは、Ｆｏｌｉｎ法に従って測定した。
すなわち、０．０５Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ６．０）にハ
マーステンカゼイン０．６％を溶解して基質とし、この
基質溶液５ｍｌに酵素液１ｍｌを加え、３０℃、３０分
間反応後、０．４４Ｍトリクロル酢酸（ＴＣＡ）を５ｍ
ｌ加えて反応を停止させた。さらに、この溶液を４０
℃、２０分間保持した後、東洋濾紙Ｎｏ．６で濾過し、
濾液２ｍｌに０．５５Ｍ炭酸ナトリウム５ｍｌ及びＦｏ
ｌｉｎ−Ｃｉｏｃａｌｔｅｕ試薬３倍希釈液１ｍｌを加
え、４０℃で２０分間発色させた後、６６０ｎｍで吸光
度を測定した値をＰＡとした。次に本発明の実施例を挙
げて具体的に説明する。
すなわち、０．０５Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ６．０）にハ
マーステンカゼイン０．６％を溶解して基質とし、この
基質溶液５ｍｌに酵素液１ｍｌを加え、３０℃、３０分
間反応後、０．４４Ｍトリクロル酢酸（ＴＣＡ）を５ｍ
ｌ加えて反応を停止させた。さらに、この溶液を４０
℃、２０分間保持した後、東洋濾紙Ｎｏ．６で濾過し、
濾液２ｍｌに０．５５Ｍ炭酸ナトリウム５ｍｌ及びＦｏ
ｌｉｎ−Ｃｉｏｃａｌｔｅｕ試薬３倍希釈液１ｍｌを加
え、４０℃で２０分間発色させた後、６６０ｎｍで吸光
度を測定した値をＰＡとした。次に本発明の実施例を挙
げて具体的に説明する。
【００２０】
【実施例１】Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｕｓｔｕｓ Ｓ
ＢＴ ７５６７株（微工研菌寄第１３１５７号）をポテ
トデキストロース寒天培地で２５℃、５日間培養した
後、滅菌水を加えて胞子懸濁液を調製した。そして、１
リットル容の三角フラスコに小麦ふすま３５ｇと蒸留水
３５ｍｌを加えた培地に、この胞子懸濁液１ｍｌを接種
し、２５℃、５日間培養した。培養後、この培養物に１
０倍量の蒸留水を加え、ホモジナイザーで磨砕し、４℃
で遠心分離（５，０００×ｇ、１０分間) して上清液を
抽出粗酵素液とした。この粗酵素液に硫安を加え、０．
３硫安飽和度以上で生成する沈澱を遠心分離（１０，０
００×ｇ、１５分間) で集め、０．０１Ｍリン酸緩衝液
（ｐＨ６．０）に対して一夜透析した後、凍結乾燥して
０．２ｇの酵素標品を得た。この酵素標品の凝乳活性は
６，０００単位であり、蛋白質１ｍｇ当たりの活性は５
単位であった。
ＢＴ ７５６７株（微工研菌寄第１３１５７号）をポテ
トデキストロース寒天培地で２５℃、５日間培養した
後、滅菌水を加えて胞子懸濁液を調製した。そして、１
リットル容の三角フラスコに小麦ふすま３５ｇと蒸留水
３５ｍｌを加えた培地に、この胞子懸濁液１ｍｌを接種
し、２５℃、５日間培養した。培養後、この培養物に１
０倍量の蒸留水を加え、ホモジナイザーで磨砕し、４℃
で遠心分離（５，０００×ｇ、１０分間) して上清液を
抽出粗酵素液とした。この粗酵素液に硫安を加え、０．
３硫安飽和度以上で生成する沈澱を遠心分離（１０，０
００×ｇ、１５分間) で集め、０．０１Ｍリン酸緩衝液
（ｐＨ６．０）に対して一夜透析した後、凍結乾燥して
０．２ｇの酵素標品を得た。この酵素標品の凝乳活性は
６，０００単位であり、蛋白質１ｍｇ当たりの活性は５
単位であった。
【００２１】
【実施例２】５００ｍｌ容の三角フラスコに小麦ふすま
５ｇと蒸留水１００ｍｌを加えた培地に、実施例１と同
様にして調製した胞子懸濁液３ｍｌを接種し、２５℃、
３日間振とう（１４０ｒｐｍ）培養した。培養後、この
培養物を４℃で遠心分離（５，０００×ｇ、１０分間)
して上清液を粗酵素液とした。この粗酵素液に硫安を加
え、０．３硫安飽和度以上で生成する沈澱を遠心分離
（１０，０００×ｇ、１５分間) で集め、０．０１Ｍリ
ン酸緩衝液（ｐＨ６．０）に対して一夜透析した後、凍
結乾燥して９０ｍｇの酵素標品を得た。この酵素標品の
凝乳活性は３５０単位であった。
５ｇと蒸留水１００ｍｌを加えた培地に、実施例１と同
様にして調製した胞子懸濁液３ｍｌを接種し、２５℃、
３日間振とう（１４０ｒｐｍ）培養した。培養後、この
培養物を４℃で遠心分離（５，０００×ｇ、１０分間)
して上清液を粗酵素液とした。この粗酵素液に硫安を加
え、０．３硫安飽和度以上で生成する沈澱を遠心分離
（１０，０００×ｇ、１５分間) で集め、０．０１Ｍリ
ン酸緩衝液（ｐＨ６．０）に対して一夜透析した後、凍
結乾燥して９０ｍｇの酵素標品を得た。この酵素標品の
凝乳活性は３５０単位であった。
【００２２】
【実施例３】実施例１で得た酵素標品０．２ｇを１０ｍ
Ｍ酢酸緩衝液（ｐＨ４．５）に溶解した後、この酵素溶
液を１０ｍＭ酢酸緩衝液（ｐＨ４．５）で平衡化したア
ンバーライトＣＧ−５０を充填したカラム（直径２．６
ｃｍ×高さ４０ｃｍ）に負荷し、０．５〜１．０Ｍ食塩
を含む１０ｍＭ酢酸緩衝液（ｐＨ４．５）でリニヤーグ
ラジエント溶出を行って活性画分を回収した。そして、
この活性画分を限外濾過で濃縮した後、セファクリルＳ
−２００を用いたカラムクロマトグラフィーを行って活
性画分を回収し、凍結乾燥を行って精製酵素５ｍｇを得
た。本酵素は、この二段階のカラムクロマトグラフィー
によって１８．７倍まで精製され、収率は２．３％であ
った。また、この精製酵素は、ポリアクリルアミドディ
スク電気泳動で単一バンドであることが確認された。
Ｍ酢酸緩衝液（ｐＨ４．５）に溶解した後、この酵素溶
液を１０ｍＭ酢酸緩衝液（ｐＨ４．５）で平衡化したア
ンバーライトＣＧ−５０を充填したカラム（直径２．６
ｃｍ×高さ４０ｃｍ）に負荷し、０．５〜１．０Ｍ食塩
を含む１０ｍＭ酢酸緩衝液（ｐＨ４．５）でリニヤーグ
ラジエント溶出を行って活性画分を回収した。そして、
この活性画分を限外濾過で濃縮した後、セファクリルＳ
−２００を用いたカラムクロマトグラフィーを行って活
性画分を回収し、凍結乾燥を行って精製酵素５ｍｇを得
た。本酵素は、この二段階のカラムクロマトグラフィー
によって１８．７倍まで精製され、収率は２．３％であ
った。また、この精製酵素は、ポリアクリルアミドディ
スク電気泳動で単一バンドであることが確認された。
【００２３】
【発明の効果】本発明の凝乳酵素は、キモシン代替酵素
としてチーズの製造に用いることができる。また、本発
明の方法により、キモシン代替酵素としてチーズの製造
に用いることのできる凝乳酵素を効率良く得ることがで
きる。
としてチーズの製造に用いることができる。また、本発
明の方法により、キモシン代替酵素としてチーズの製造
に用いることのできる凝乳酵素を効率良く得ることがで
きる。
【図１】本発明の凝乳酵素とキモシンの凝乳活性を示
す。
す。
【図２】本発明の凝乳酵素の凝乳活性と蛋白質分解活性
を示す。
を示す。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) C12N 9/48 - 9/86 C12N 1/14 ＢＩＯＳＩＳ（ＤＩＡＬＯＧ) ＣＡ（ＳＴＮ) ＥＰＡＴ（ＱＵＥＳＴＥＬ) ＪＩＣＳＴファイル（ＪＯＩＳ) ＭＥＤＬＩＮＥ（ＳＴＮ) ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ) ＷＰＩ（ＤＩＡＬＯＧ)
Claims (4)
- 【請求項１】 アスペルギルス・ウスタス(Aspergillus
ustus)の産生する次の理化学的特性を有する凝乳酵
素。 (1) 基質特異性 凝乳活性が高く、蛋白質分解活性は、凝乳活性にくらべ
ていちじるしく低い。 (2) 至適pH及び安定pH 凝乳活性は、pH6.0 付近で至適であり、pH 3.0〜6.0 で
安定である。 (3) 最適作用温度及び熱安定性 最適作用温度 63 ℃ 熱安定性 40 ℃で失活が始まり、55℃でほとん
ど失活する。 (4) 阻害剤 n-エチルマレイミド及びソディウムドデシルサルフェー
トにより活性が阻害される。 (5) 分子量 約 86,000(SDS-PAGE法による) - 【請求項２】 凝乳酵素産生能を有するアスペルギルス
・ウスタス(Aspergillus ustus)の小麦ふすま培養物か
ら凝乳酵素の粗酵素を得て、これをクロマトグラフィー
により精製することを特徴とする請求項１記載の凝乳酵
素の製造法。 - 【請求項３】 アスペルギルス・ウスタス(Aspergillus
ustus)が、アスペルギルス・ウスタス(Aspergillus
ustus) SBT 7567 株 (受託番号 微工研菌寄第 13157
号) である請求項２に記載の凝乳酵素の製造法。 - 【請求項４】 凝乳酵素産生能を有するアスペルギルス
・ウスタス(Aspergillus ustus) SBT 7567 株（受託番
号 微工研菌寄第 13157号) 。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP07759693A JP3183994B2 (ja) | 1993-03-11 | 1993-03-11 | 新規な凝乳酵素及びその製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP07759693A JP3183994B2 (ja) | 1993-03-11 | 1993-03-11 | 新規な凝乳酵素及びその製造法 |
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| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH06261753A JPH06261753A (ja) | 1994-09-20 |
| JP3183994B2 true JP3183994B2 (ja) | 2001-07-09 |
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ID=13638341
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP07759693A Expired - Fee Related JP3183994B2 (ja) | 1993-03-11 | 1993-03-11 | 新規な凝乳酵素及びその製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
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| JP (1) | JP3183994B2 (ja) |
-
1993
- 1993-03-11 JP JP07759693A patent/JP3183994B2/ja not_active Expired - Fee Related
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| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH06261753A (ja) | 1994-09-20 |
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