JP3183717B2 - 腫瘍細胞の存在の有無の判定方法 - Google Patents
腫瘍細胞の存在の有無の判定方法Info
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Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、正常な外分泌腺細胞ま
たは組織中のＬＦＡ−１の存在の有無を判定すること、
または、該細胞または組織から分泌される分泌液中のＬ
ＦＡ−１の存在の有無を判定することを特徴とする腫瘍
細胞の存在の有無の判定方法に関する。さらに、該方法
を含む白血病などの癌の診断方法および該方法に用いる
キットに関する。
たは組織中のＬＦＡ−１の存在の有無を判定すること、
または、該細胞または組織から分泌される分泌液中のＬ
ＦＡ−１の存在の有無を判定することを特徴とする腫瘍
細胞の存在の有無の判定方法に関する。さらに、該方法
を含む白血病などの癌の診断方法および該方法に用いる
キットに関する。
【０００２】
【従来の技術】リンパ球機能関連抗原−１（lymphocyte
function associated antigen-1, LFA-1, 国際抗体分
類CD11a/CD18）は、インテグリン（integrin）β−２
（白血球インテグリン）ファミリ−に属し、末梢血液白
血球、リンパ組織およびいくつかの組織マクロフア−ジ
で見出されたものである（文献１）。LFA-1は、免疫反
応または炎症の際の、リンパ球−リンパ球間、リンパ球
−マクロファ−ジ間、または白血球−血管内皮細胞間の
細胞間相互作用に寄与する最も重要な接着分子のひとつ
である。また、LFA-1はα鎖（CD11a）およびβ鎖（CD1
8）からなるヘテロダイマ−である。
function associated antigen-1, LFA-1, 国際抗体分
類CD11a/CD18）は、インテグリン（integrin）β−２
（白血球インテグリン）ファミリ−に属し、末梢血液白
血球、リンパ組織およびいくつかの組織マクロフア−ジ
で見出されたものである（文献１）。LFA-1は、免疫反
応または炎症の際の、リンパ球−リンパ球間、リンパ球
−マクロファ−ジ間、または白血球−血管内皮細胞間の
細胞間相互作用に寄与する最も重要な接着分子のひとつ
である。また、LFA-1はα鎖（CD11a）およびβ鎖（CD1
8）からなるヘテロダイマ−である。
【０００３】細胞間接着分子−１（intercellular adhe
sion molecule-1、ICAM-1、CD54）、ICAM-2およびICAM-
3は、LFA-1の生体内リガンドとして知られている。LFA-
1が種々の細胞／組織で見出されているのに対して、ICA
M-1のようなLFA-1リガンドは、血管内皮細胞およびサイ
トカイン活性化ケラチノサイトを含む種々の細胞に分布
している（文献５、６）。LFA-1リガンドは造血系細胞
および非造血系細胞のいずれでも発現されているが、非
造血系細胞でのLFA-1の発現は未だ報告されていない。
sion molecule-1、ICAM-1、CD54）、ICAM-2およびICAM-
3は、LFA-1の生体内リガンドとして知られている。LFA-
1が種々の細胞／組織で見出されているのに対して、ICA
M-1のようなLFA-1リガンドは、血管内皮細胞およびサイ
トカイン活性化ケラチノサイトを含む種々の細胞に分布
している（文献５、６）。LFA-1リガンドは造血系細胞
および非造血系細胞のいずれでも発現されているが、非
造血系細胞でのLFA-1の発現は未だ報告されていない。
【０００４】最近、LFA-1が造血系腫瘍細胞株で発現さ
れていることが報告されている（文献２４）。また、細
胞から放出された可溶性ICAM-1（sICAM-1）が、細胞上
のICAM-1と腫瘍細胞上のLFA-1との結合を阻害するの
で、sICAM-1が癌の診断薬となりうることが示唆されて
いる（文献２５）。
れていることが報告されている（文献２４）。また、細
胞から放出された可溶性ICAM-1（sICAM-1）が、細胞上
のICAM-1と腫瘍細胞上のLFA-1との結合を阻害するの
で、sICAM-1が癌の診断薬となりうることが示唆されて
いる（文献２５）。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】担癌患者の血液中の腫
瘍関連抗原（AFP、CEA、CA19-9、CA125他）の検出が広
く行なわれているが、これらは良性疾患にも検出され、
特異性の点で問題がある。よって、さらに特異性の高い
腫瘍関連抗原の発見、およびその抗原の検出に基づく精
度の高い癌の診断方法が望まれている。
瘍関連抗原（AFP、CEA、CA19-9、CA125他）の検出が広
く行なわれているが、これらは良性疾患にも検出され、
特異性の点で問題がある。よって、さらに特異性の高い
腫瘍関連抗原の発見、およびその抗原の検出に基づく精
度の高い癌の診断方法が望まれている。
【０００６】また、これらの検査においては、患者から
採取した血液をサンプルとするので、血液採取など患者
に負担がかかる。よって、より簡便に採取できるサンプ
ルを試料とする癌の診断方法が望まれている。
採取した血液をサンプルとするので、血液採取など患者
に負担がかかる。よって、より簡便に採取できるサンプ
ルを試料とする癌の診断方法が望まれている。
【０００７】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、非造血系
細胞のLFA-1に関する研究を行なううちに、膵臓腺癌患
者の種々の正常な外分泌組織にLFA-1が存在することを
見出した。LFA-1は正常な外分泌腺に局在し、その発現
は組織浸潤白血球またはリンパ球によるものではないこ
とが明らかになった。
細胞のLFA-1に関する研究を行なううちに、膵臓腺癌患
者の種々の正常な外分泌組織にLFA-1が存在することを
見出した。LFA-1は正常な外分泌腺に局在し、その発現
は組織浸潤白血球またはリンパ球によるものではないこ
とが明らかになった。
【０００８】正常な外分泌組織でのLFA-1の発現をさら
に確認するために、LFA-1のα鎖およびβ鎖に対するモ
ノクロ−ナル抗体を用いて、２３例の悪性疾患患者と１
１例の良性疾患患者を調べたところ、悪性疾患患者の全
例で正常な外分泌腺においてLFA-1が発現されており、
良性疾患患者の全例で外分泌腺ではLFA-1が発現されて
いないことが確認された。さらに、LFA-1の発現は、原
発腫瘍または転移腫瘍由来の腫瘍細胞を有する器官に存
在する正常な外分泌腺において認められるだけでなく、
悪性疾患患者由来の腫瘍細胞を有しない器官の正常外分
泌組織においても認められた。例えば、膵臓癌患者であ
れば、腫瘍細胞が存在する膵臓中の正常な外分泌腺にLF
A-1の発現が観察されるだけでなく、腫瘍細胞が存在し
ない胃などの正常外分泌組織においても認められる。
に確認するために、LFA-1のα鎖およびβ鎖に対するモ
ノクロ−ナル抗体を用いて、２３例の悪性疾患患者と１
１例の良性疾患患者を調べたところ、悪性疾患患者の全
例で正常な外分泌腺においてLFA-1が発現されており、
良性疾患患者の全例で外分泌腺ではLFA-1が発現されて
いないことが確認された。さらに、LFA-1の発現は、原
発腫瘍または転移腫瘍由来の腫瘍細胞を有する器官に存
在する正常な外分泌腺において認められるだけでなく、
悪性疾患患者由来の腫瘍細胞を有しない器官の正常外分
泌組織においても認められた。例えば、膵臓癌患者であ
れば、腫瘍細胞が存在する膵臓中の正常な外分泌腺にLF
A-1の発現が観察されるだけでなく、腫瘍細胞が存在し
ない胃などの正常外分泌組織においても認められる。
【０００９】すなわち、本発明により、悪性疾患患者の
外分泌組織中の正常な外分泌腺細胞がLFA-1を特異的に
発現してることが示された。
外分泌組織中の正常な外分泌腺細胞がLFA-1を特異的に
発現してることが示された。
【００１０】免疫組織学的分析により外分泌腺でのLFA-
1の発現が確認されたが、悪性疾患患者の正常な外分泌
腺にみられるLFA-1分子が、分泌や出血により外分泌腺
に移動した白血球産物である可能性が残る。しかし、細
胞表面および細胞質にLFA-1分子を発現する非造血系細
胞株が存在したので、その可能性は極めて低い。
1の発現が確認されたが、悪性疾患患者の正常な外分泌
腺にみられるLFA-1分子が、分泌や出血により外分泌腺
に移動した白血球産物である可能性が残る。しかし、細
胞表面および細胞質にLFA-1分子を発現する非造血系細
胞株が存在したので、その可能性は極めて低い。
【００１１】LFA-1遺伝子の転写制御機構が明らかにな
っていないので、悪性疾患患者の外分泌腺にLFA-1が発
現される理由は不明である。腫瘍細胞または宿主細胞由
来の組織的に循環する因子が、外分泌腺におけるLFA-1
遺伝子の発現を誘発している可能性がある。TNF、IL-
1、またはIFN-γといった炎症性サイトカインが、種々
の細胞で、LFA-1の受容体であるICAM-1を含む表面分子
の発現を制御している（文献６、１１−１３）。従っ
て、これらのサイトカインが、LFA-1インデュ−サ−で
ある可能性がある。しかし、結核やウイルス性肝炎など
の微生物感染の際に血清中に大量の炎症性サイトカイン
が検出されるが（文献１４−１６）、外分泌腺における
LFA-1の発現はそのような感染症ではみられない（表
３）。よって、炎症性サイトカインが外分泌腺のLFA-1
インデュ−サ−であるとは考えられない。形質転換成長
因子-β（transforming growth factor-β、TGF-β）
は、種々の細胞に対して様々な機能を発現する腫瘍由来
因子として知られているが（文献１７、１８）、TGF-β
もまたLFA-1インデュ−サ−である可能性がある。
っていないので、悪性疾患患者の外分泌腺にLFA-1が発
現される理由は不明である。腫瘍細胞または宿主細胞由
来の組織的に循環する因子が、外分泌腺におけるLFA-1
遺伝子の発現を誘発している可能性がある。TNF、IL-
1、またはIFN-γといった炎症性サイトカインが、種々
の細胞で、LFA-1の受容体であるICAM-1を含む表面分子
の発現を制御している（文献６、１１−１３）。従っ
て、これらのサイトカインが、LFA-1インデュ−サ−で
ある可能性がある。しかし、結核やウイルス性肝炎など
の微生物感染の際に血清中に大量の炎症性サイトカイン
が検出されるが（文献１４−１６）、外分泌腺における
LFA-1の発現はそのような感染症ではみられない（表
３）。よって、炎症性サイトカインが外分泌腺のLFA-1
インデュ−サ−であるとは考えられない。形質転換成長
因子-β（transforming growth factor-β、TGF-β）
は、種々の細胞に対して様々な機能を発現する腫瘍由来
因子として知られているが（文献１７、１８）、TGF-β
もまたLFA-1インデュ−サ−である可能性がある。
【００１２】種々の細胞表面分子は、細胞質膜上に存在
するだけでなく、血清中に可溶化して存在している（文
献１９−２１）。可溶化したLFA-1分子が外分泌腺から
分泌されると、それが、呼吸器上皮におけるライノウイ
ルスおよびその細胞表面受容体（ICAM-1）との相互作用
を含むLFA-1またはICAM-1関連現象を制御すると推定さ
れる。
するだけでなく、血清中に可溶化して存在している（文
献１９−２１）。可溶化したLFA-1分子が外分泌腺から
分泌されると、それが、呼吸器上皮におけるライノウイ
ルスおよびその細胞表面受容体（ICAM-1）との相互作用
を含むLFA-1またはICAM-1関連現象を制御すると推定さ
れる。
【００１３】本発明は、生体内の腫瘍細胞の存在によ
り、その生体内の正常な外分泌腺にLFA-1が発現される
という発見に基づく。すなわち、腫瘍細胞がLFA-1を発
現しているという知見とは根本的に異なる発見に基づく
ものである。従って本発明は、正常な外分泌腺細胞また
は組織中のLFA-1の存在の有無を判定すること、また
は、該細胞または組織から分泌される分泌液中のLFA-1
の存在の有無を判定することを特徴とする腫瘍細胞の存
在の有無の判定方法を提供する。
り、その生体内の正常な外分泌腺にLFA-1が発現される
という発見に基づく。すなわち、腫瘍細胞がLFA-1を発
現しているという知見とは根本的に異なる発見に基づく
ものである。従って本発明は、正常な外分泌腺細胞また
は組織中のLFA-1の存在の有無を判定すること、また
は、該細胞または組織から分泌される分泌液中のLFA-1
の存在の有無を判定することを特徴とする腫瘍細胞の存
在の有無の判定方法を提供する。
【００１４】正常な外分泌腺細胞とは、腫瘍化していな
い細胞を意味する。正常な外分泌腺組織とは、主に、腫
瘍細胞を含んでいない外分泌腺組織を意味する。しか
し、腫瘍細胞の転移などにより、正常な外分泌腺組織の
一部に腫瘍細胞が存在することがあるが、外分泌腺組織
中の正常な外分泌腺細胞が腫瘍細胞の存在によりLFA-1
を発現しており、本発明の方法に適用できる限り、腫瘍
細胞を含んでいる外分泌腺組織も、正常な外分泌腺組織
に包含される。腫瘍とは、主に悪性腫瘍を意味するが、
良性腫瘍を排除するものではない。
い細胞を意味する。正常な外分泌腺組織とは、主に、腫
瘍細胞を含んでいない外分泌腺組織を意味する。しか
し、腫瘍細胞の転移などにより、正常な外分泌腺組織の
一部に腫瘍細胞が存在することがあるが、外分泌腺組織
中の正常な外分泌腺細胞が腫瘍細胞の存在によりLFA-1
を発現しており、本発明の方法に適用できる限り、腫瘍
細胞を含んでいる外分泌腺組織も、正常な外分泌腺組織
に包含される。腫瘍とは、主に悪性腫瘍を意味するが、
良性腫瘍を排除するものではない。
【００１５】外分泌腺とは、汗腺、脂腺、唾液腺（耳下
腺、舌下腺、顎下腺）、食道腺、胃腺（噴門腺、幽門
腺）、十二指腸腺、小腸腺、膵腺、気管腺、気管支腺、
肺胞上皮腺、胆管など、全ての消化腺・生殖腺、汗腺・
粘液腺・絹糸腺を意味し、全ての外分泌腺を包含する。
腺、舌下腺、顎下腺）、食道腺、胃腺（噴門腺、幽門
腺）、十二指腸腺、小腸腺、膵腺、気管腺、気管支腺、
肺胞上皮腺、胆管など、全ての消化腺・生殖腺、汗腺・
粘液腺・絹糸腺を意味し、全ての外分泌腺を包含する。
【００１６】LFA-1の存在の有無を判定するための試料
としては、通常、上記外分泌腺細胞または組織が存在す
る組織を用いることができる。すなわち、胃腺、汗腺、
皮脂腺、毛腺などが存在する、胃上皮の生検標本、毛根
など、採取が簡便な組織を用いればよい。さらには、気
管支上皮、肺胞上皮、十二指腸腺、膵臓小胞、総胆管な
どを試料としてもよい。本発明に用いる試料には、腫瘍
を有していると推定される組織に限定されず、任意の外
分泌腺細胞または組織を用いることができ、従来法に比
べ、試料の採取が容易になる。
としては、通常、上記外分泌腺細胞または組織が存在す
る組織を用いることができる。すなわち、胃腺、汗腺、
皮脂腺、毛腺などが存在する、胃上皮の生検標本、毛根
など、採取が簡便な組織を用いればよい。さらには、気
管支上皮、肺胞上皮、十二指腸腺、膵臓小胞、総胆管な
どを試料としてもよい。本発明に用いる試料には、腫瘍
を有していると推定される組織に限定されず、任意の外
分泌腺細胞または組織を用いることができ、従来法に比
べ、試料の採取が容易になる。
【００１７】また、LFA-1は外分泌腺から外分泌液中に
分泌されるので、汗腺から分泌される汗、皮脂腺から分
泌される皮脂、唾液腺から分泌される唾液などを試料と
すれば、LFA-1の存在の有無の判定がさらに容易にな
る。
分泌されるので、汗腺から分泌される汗、皮脂腺から分
泌される皮脂、唾液腺から分泌される唾液などを試料と
すれば、LFA-1の存在の有無の判定がさらに容易にな
る。
【００１８】LFA-1はα鎖およびβ鎖からなるヘテロダ
イマ−であり、このうちβ鎖はMac-1などの分子と共通
のもので、α鎖がLFA-1に特異的なものであるので、LFA
-1の存在の有無の判定は、α鎖に基づくのが好ましい。
また、後記実施例および表１および表２に示されるとお
り、α鎖（CD11a）に対する抗体を用いた方が、LFA-1の
存在の有無の判定において、好結果が得られた。
イマ−であり、このうちβ鎖はMac-1などの分子と共通
のもので、α鎖がLFA-1に特異的なものであるので、LFA
-1の存在の有無の判定は、α鎖に基づくのが好ましい。
また、後記実施例および表１および表２に示されるとお
り、α鎖（CD11a）に対する抗体を用いた方が、LFA-1の
存在の有無の判定において、好結果が得られた。
【００１９】LFA-1の存在の有無の判定は、通常のタン
パク質検出方法に従い、LFA-1を検出することにより行
なうことができる。LFA-1を検出しうるタンパク質検出
方法としては、以下の方法などが挙げられる。
パク質検出方法に従い、LFA-1を検出することにより行
なうことができる。LFA-1を検出しうるタンパク質検出
方法としては、以下の方法などが挙げられる。
【００２０】免疫組織化学染色法 LFA-1の存在の有無の判定には、すべての免疫組織化学
染色法を適用できる。酵素、放射性同位元素、螢光色素
などで標識した抗LFA-1抗体を用いて組織を染色する直
接法、抗LFA-1抗体を反応させた後、該抗体と反応する
標識抗体を用いる間接法のいずれをも適用することがで
きる。好適な方法としては、アビジン−ビオチン（AB
C）法、ストレプトアビジン−ビオチン（SAB）法、ペル
オキシダ−ゼ抗ペルオキシダ−ゼ（PAP）法が挙げられ
る。
染色法を適用できる。酵素、放射性同位元素、螢光色素
などで標識した抗LFA-1抗体を用いて組織を染色する直
接法、抗LFA-1抗体を反応させた後、該抗体と反応する
標識抗体を用いる間接法のいずれをも適用することがで
きる。好適な方法としては、アビジン−ビオチン（AB
C）法、ストレプトアビジン−ビオチン（SAB）法、ペル
オキシダ−ゼ抗ペルオキシダ−ゼ（PAP）法が挙げられ
る。
【００２１】ＥＩＡおよびＲＩＡ 正常な外分泌腺の抽出液や分泌液を試料とすれば、ＥＩ
ＡやＲＩＡにより該試料中のLFA-1の存在の有無を判定
できる。ビ−ズ、ボ−ル、プレ−トなどに固相化した抗
LFA-1抗体と、酵素、放射性同位元素、螢光色素などで
標識した抗LFA-1抗体を用いるサンドイッチ法や、固相
化した抗LFA-1抗体に標識LFA-1と試料中のLFA-1を競合
反応させる競合法などが好適である。
ＡやＲＩＡにより該試料中のLFA-1の存在の有無を判定
できる。ビ−ズ、ボ−ル、プレ−トなどに固相化した抗
LFA-1抗体と、酵素、放射性同位元素、螢光色素などで
標識した抗LFA-1抗体を用いるサンドイッチ法や、固相
化した抗LFA-1抗体に標識LFA-1と試料中のLFA-1を競合
反応させる競合法などが好適である。
【００２２】ウエスタンブロッティング 正常な外分泌腺の抽出液や分泌液を、ナイロン膜やセル
ロ−ス膜にブロットした後、酵素、放射性同位元素、螢
光色素などで標識した抗LFA-1抗体を用いてLFA-1を検出
する（直接法）か、抗LFA-1抗体を反応させた後、該抗
体と反応する標識抗体を用いてLFA-1を検出する（間接
法）ことにより、試料中のLFA-1の存在の有無を判定で
きる。
ロ−ス膜にブロットした後、酵素、放射性同位元素、螢
光色素などで標識した抗LFA-1抗体を用いてLFA-1を検出
する（直接法）か、抗LFA-1抗体を反応させた後、該抗
体と反応する標識抗体を用いてLFA-1を検出する（間接
法）ことにより、試料中のLFA-1の存在の有無を判定で
きる。
【００２３】免疫沈降法 正常な外分泌腺の抽出液や分泌液を、試験管などの容器
中で抗LFA-1抗体と免疫沈降反応させ、レ−ザ−ネフロ
メ−タ−などを用いて沈降度を測定する。ゲル内で免疫
沈降反応させるオクタロニ−法も適用できる。
中で抗LFA-1抗体と免疫沈降反応させ、レ−ザ−ネフロ
メ−タ−などを用いて沈降度を測定する。ゲル内で免疫
沈降反応させるオクタロニ−法も適用できる。
【００２４】LFA-1を検出しうるタンパク質検出方法と
しては、以上のものが好適な例として例示されるが、LF
A-1の存在の有無の判定はこれらタンパク質検出方法に
限定されるものではなく、LFA-1を検出しうる全て検出
方法が包含される。例えば、正常な外分泌腺細胞からmR
NAを抽出し、LFA-1遺伝子（文献２６）とハイブリダイ
ズしうるプライマ−を用いて、RT-PCR法に従い該mRNAか
らLFA-1 cDNAを増幅することにより、LFA-1を検出しう
る。
しては、以上のものが好適な例として例示されるが、LF
A-1の存在の有無の判定はこれらタンパク質検出方法に
限定されるものではなく、LFA-1を検出しうる全て検出
方法が包含される。例えば、正常な外分泌腺細胞からmR
NAを抽出し、LFA-1遺伝子（文献２６）とハイブリダイ
ズしうるプライマ−を用いて、RT-PCR法に従い該mRNAか
らLFA-1 cDNAを増幅することにより、LFA-1を検出しう
る。
【００２５】LFA-1の存在の有無の判定は、LFA-1と特異
的に反応する試薬を用いると、より正確、簡便に行なう
ことができる。該試薬としては、ICAM-1、ICAM-2、ICAM
-3、sICAMなど天然のLFA-1リガンドや、LFA-1に対する
抗体を用いることができるが、入手の容易性などの点か
ら、抗体が好ましい。抗体は、ポリクロ−ナル抗体およ
びモノクロ−ナル抗体のいずれも用いることができる
が、モノクロ−ナル抗体が好ましい。さらに、前記の理
由から、LFA-1のα鎖に対する抗体が好ましい。
的に反応する試薬を用いると、より正確、簡便に行なう
ことができる。該試薬としては、ICAM-1、ICAM-2、ICAM
-3、sICAMなど天然のLFA-1リガンドや、LFA-1に対する
抗体を用いることができるが、入手の容易性などの点か
ら、抗体が好ましい。抗体は、ポリクロ−ナル抗体およ
びモノクロ−ナル抗体のいずれも用いることができる
が、モノクロ−ナル抗体が好ましい。さらに、前記の理
由から、LFA-1のα鎖に対する抗体が好ましい。
【００２６】後記実施例に示されるように、LFA-1は悪
性腫瘍患者の外分泌腺に特異的に検出され、外分泌腺以
外の組織では検出されず（表１および表２）、かつ、良
性疾患患者の外分泌腺および外分泌腺以外の組織のいず
れでも検出されない（表３）。従って、本発明の方法
は、白血病などの癌の診断に有用である。
性腫瘍患者の外分泌腺に特異的に検出され、外分泌腺以
外の組織では検出されず（表１および表２）、かつ、良
性疾患患者の外分泌腺および外分泌腺以外の組織のいず
れでも検出されない（表３）。従って、本発明の方法
は、白血病などの癌の診断に有用である。
【００２７】本発明は、上記方法に用いる、LFA-1と特
異的に反応する試薬を含有するキットを提供する。この
キットは、通常のタンパク質検出キットと同様に提供さ
れうる。すなわち、LFA-1と特異的に反応する試薬の他
に、発色剤などを含む検出用試薬、反応用緩衝液、溶解
液、希釈液、洗浄液、反応停止液など、LFA-1の検出に
必要なものを含みキット化すればよい。LFA-1と特異的
に反応する試薬は、酵素、放射性同位元素、螢光色素な
ど検出可能な標識化合物により標識されているものが好
ましい。また、該試薬は、標識化合物により標識されて
いるもの（抗体など）と特異的に結合しうるものであっ
てもよい。該試薬としては、前記のとおりICAMなど天然
のLFA-1リガンドや、LFA-1に対する抗体を用いることが
できるが、入手の容易性などの点から、抗体が好まし
い。
異的に反応する試薬を含有するキットを提供する。この
キットは、通常のタンパク質検出キットと同様に提供さ
れうる。すなわち、LFA-1と特異的に反応する試薬の他
に、発色剤などを含む検出用試薬、反応用緩衝液、溶解
液、希釈液、洗浄液、反応停止液など、LFA-1の検出に
必要なものを含みキット化すればよい。LFA-1と特異的
に反応する試薬は、酵素、放射性同位元素、螢光色素な
ど検出可能な標識化合物により標識されているものが好
ましい。また、該試薬は、標識化合物により標識されて
いるもの（抗体など）と特異的に結合しうるものであっ
てもよい。該試薬としては、前記のとおりICAMなど天然
のLFA-1リガンドや、LFA-1に対する抗体を用いることが
できるが、入手の容易性などの点から、抗体が好まし
い。
【００２８】本明細書で引用した文献は以下のとおり。
【００２９】文献 1：Kishimoto TK ら、Adv lmmunol 1
989, 46:149-182. 文献 2：Simmons D ら、Nature 1988, 331:624-627 文献 3：Staunton DE ら、Nature 1989, 339:61-64 文献 4：de Fougerrolles AR ら、J Exp Med 1991, 17
4:253-267 文献 5：AR, Springer TA、J Exp Med 1992, 175:185-1
90. 文献 6：Symington FW ら、J Immunol 1991, 146:2169-
2175 文献 7：Dustin ML ら、J Exp Med 1988, 167:1323-134
0 文献 8：Tedder TF ら、Eur J Immunol 1986, 16:1539-
1543 文献 9：Dorken B ら、Oxford Univ Press, Vienna, Au
stria 1989. 文献10：Yamada A ら、Cell lmmunol in press. 文献11：Matsuyama T ら、J Exp Med 1989, 170:1133-1
148 文献12：Pober JS ら、J lmmunol 1986, 137:1893-1896 文献13：Mantovani A ら、Immunol today 1989, 10:370
-375 文献14：Scuderi P ら、Lancet 1986, 2:1364-1365 文献15：Shimamoto K ら、Chest 1991, 99:1103-1107 文献16：Kakumu S ら、Clin Immunopathol 1990, 56:54
-65 文献17：Hilton DJ ら、J Cell Bioche 1991, 46:21-26 文献18：Hooper WC、Leuk Res 1991, 15:179-184 文献19：Seth R ら、Lancet 1991, 338:83-84 文献20：Rubin LA ら、J lmmunol 1985, 136:3172. 文献21：Fujimoto J ら、J Exp Med 1983, 159:752 文献22：Staunton DE ら、Cell 1990, 61:243-54. 文献23：Marlin SD ら、Ｎａｔｕｒｅ １９９０， ３
４４：７０−７２ 文献２４：Strassmann G ら、J Immunol 1986, 136:432
8 文献25：カナダ特許公開第2,008,368号 文献26：Larson, SR ら、J Cell Biol 1989, 108:703-7
12
989, 46:149-182. 文献 2：Simmons D ら、Nature 1988, 331:624-627 文献 3：Staunton DE ら、Nature 1989, 339:61-64 文献 4：de Fougerrolles AR ら、J Exp Med 1991, 17
4:253-267 文献 5：AR, Springer TA、J Exp Med 1992, 175:185-1
90. 文献 6：Symington FW ら、J Immunol 1991, 146:2169-
2175 文献 7：Dustin ML ら、J Exp Med 1988, 167:1323-134
0 文献 8：Tedder TF ら、Eur J Immunol 1986, 16:1539-
1543 文献 9：Dorken B ら、Oxford Univ Press, Vienna, Au
stria 1989. 文献10：Yamada A ら、Cell lmmunol in press. 文献11：Matsuyama T ら、J Exp Med 1989, 170:1133-1
148 文献12：Pober JS ら、J lmmunol 1986, 137:1893-1896 文献13：Mantovani A ら、Immunol today 1989, 10:370
-375 文献14：Scuderi P ら、Lancet 1986, 2:1364-1365 文献15：Shimamoto K ら、Chest 1991, 99:1103-1107 文献16：Kakumu S ら、Clin Immunopathol 1990, 56:54
-65 文献17：Hilton DJ ら、J Cell Bioche 1991, 46:21-26 文献18：Hooper WC、Leuk Res 1991, 15:179-184 文献19：Seth R ら、Lancet 1991, 338:83-84 文献20：Rubin LA ら、J lmmunol 1985, 136:3172. 文献21：Fujimoto J ら、J Exp Med 1983, 159:752 文献22：Staunton DE ら、Cell 1990, 61:243-54. 文献23：Marlin SD ら、Ｎａｔｕｒｅ １９９０， ３
４４：７０−７２ 文献２４：Strassmann G ら、J Immunol 1986, 136:432
8 文献25：カナダ特許公開第2,008,368号 文献26：Larson, SR ら、J Cell Biol 1989, 108:703-7
12
【００３０】
材料と方法抗体 モノクロ−ナル抗体2F12（anti-CD11a, IgG1）（文献
６）、10F12（anti-CD18, IgG1）（文献６）、HVS6B6
（anti-CD11a, IgG1）（文献10）および8F2（anti-CD49
d, IgG1）（文献11）は、S.F.Schlossman博士およびC.M
orimoto博士（Dana-Farber Cancer Institute, Boston,
MA）から提供いただいた。モノクロ−ナル抗体YH-384
（anti-CD11a, IgG3）、JML-H11（anti-CD11b, IgG2a）
（文献９）およびYH-370（anti-CD54, IgG1）は本発明
者らが調製したものである。アフィニティ−精製したウ
サギ抗マウスIgGポリクロ−ナル抗体は、Jackson Immun
o-Research Laboratories（West Grove, PA）から購入
した。FITC標識F(ab’)2山羊抗マウスIgは、Tago（Burl
ingame, CA）から購入した。
６）、10F12（anti-CD18, IgG1）（文献６）、HVS6B6
（anti-CD11a, IgG1）（文献10）および8F2（anti-CD49
d, IgG1）（文献11）は、S.F.Schlossman博士およびC.M
orimoto博士（Dana-Farber Cancer Institute, Boston,
MA）から提供いただいた。モノクロ−ナル抗体YH-384
（anti-CD11a, IgG3）、JML-H11（anti-CD11b, IgG2a）
（文献９）およびYH-370（anti-CD54, IgG1）は本発明
者らが調製したものである。アフィニティ−精製したウ
サギ抗マウスIgGポリクロ−ナル抗体は、Jackson Immun
o-Research Laboratories（West Grove, PA）から購入
した。FITC標識F(ab’)2山羊抗マウスIgは、Tago（Burl
ingame, CA）から購入した。
【００３１】免疫組織学的試験 本発明に用いた解剖標本は、Kojiro博士（Department o
f Pathology, KurumeUniversity）から提供いただい
た。組織学的試験のため、ホルマリン固定し、パラフィ
ンに包埋した。凍結切片の調製には、OCT化合物（Miles
Elkhart, IN）浸漬標本を用いた。クリオスタット切片
を５μmに切断、風乾し、室温で５分間、クロロホルム-
アセトン（１：１）で固定した。全ての切片をラップ
し、使用するまで−８０℃で保存した。
f Pathology, KurumeUniversity）から提供いただい
た。組織学的試験のため、ホルマリン固定し、パラフィ
ンに包埋した。凍結切片の調製には、OCT化合物（Miles
Elkhart, IN）浸漬標本を用いた。クリオスタット切片
を５μmに切断、風乾し、室温で５分間、クロロホルム-
アセトン（１：１）で固定した。全ての切片をラップ
し、使用するまで−８０℃で保存した。
【００３２】間接免疫ペルオキシダ−ゼ染色は、アビジ
ンビオチン複合体（ABC）キット（Vector Laboratorie
s, Burlingame, CA）またはストレプトアビジンビオチ
ン複合体（SAB）キット（Dako, Glostrup, Denmark）を
用いて行なった。染色前に、ホルマリン固定切片を０.
１％ペプシン（Pepsin A, 1:60,000, Sigma, St Louis,
MO）で処理した。
ンビオチン複合体（ABC）キット（Vector Laboratorie
s, Burlingame, CA）またはストレプトアビジンビオチ
ン複合体（SAB）キット（Dako, Glostrup, Denmark）を
用いて行なった。染色前に、ホルマリン固定切片を０.
１％ペプシン（Pepsin A, 1:60,000, Sigma, St Louis,
MO）で処理した。
【００３３】細胞株と細胞培養 膵臓細胞株PANC-IはH.Tsuda博士（Kurume University H
ospital）から提供いただいた。その他の非造血系細胞
株は、Japanese Cancer Research Resources Bank（JCR
B, Tokyo）から分与された。細胞株は、非働化FCSを１
０％含むRPMI1640培地または新生子牛血清を５〜２０％
含むE-MEM中で３７℃で維持した。免疫螢光分析のた
め、細胞を７０％コンフルエンシ−（confluency）まで
培養し、０.２５％トリプシン（1:250、DIFCO、Detroi
t、Mich）-０.５mM EDTA-PBS（pH7.6）を用いて採取
し、染色に用いた。
ospital）から提供いただいた。その他の非造血系細胞
株は、Japanese Cancer Research Resources Bank（JCR
B, Tokyo）から分与された。細胞株は、非働化FCSを１
０％含むRPMI1640培地または新生子牛血清を５〜２０％
含むE-MEM中で３７℃で維持した。免疫螢光分析のた
め、細胞を７０％コンフルエンシ−（confluency）まで
培養し、０.２５％トリプシン（1:250、DIFCO、Detroi
t、Mich）-０.５mM EDTA-PBS（pH7.6）を用いて採取
し、染色に用いた。
【００３４】フロ−サイトメトリ−分析 細胞表面抗原（LFA-1、Mac-1など）の発現を、間接免疫
螢光法により検出した。要約すると、１×１０6個の細
胞を、適切なモノクロ−ナル抗体と、４℃で３０分間培
養した。この細胞を氷冷PBSで洗浄し、FITC標識山羊抗
マウスIg抗体（1:125希釈）で、４℃で２０分間染色し
た。洗浄後、その細胞を１％ホルムアルデヒド-PBSで固
定し、分析まで４℃で保存した。この細胞をフロ−サイ
トメ−タ−CYTRON（Ortho、Westwood、MA）で分析し
た。
螢光法により検出した。要約すると、１×１０6個の細
胞を、適切なモノクロ−ナル抗体と、４℃で３０分間培
養した。この細胞を氷冷PBSで洗浄し、FITC標識山羊抗
マウスIg抗体（1:125希釈）で、４℃で２０分間染色し
た。洗浄後、その細胞を１％ホルムアルデヒド-PBSで固
定し、分析まで４℃で保存した。この細胞をフロ−サイ
トメ−タ−CYTRON（Ortho、Westwood、MA）で分析し
た。
【００３５】細胞質抗原の発現は、以下の方法で検出し
た。細胞スミアをサイトスピン（1500rpm、5分）により
調製し、５分以上風乾した。この細胞を、室温で５分間
メタノ−ル-アセトン（1:1）で固定し、間接免疫螢光法
により染色した。染色したサンプルを螢光顕微鏡で調べ
た。
た。細胞スミアをサイトスピン（1500rpm、5分）により
調製し、５分以上風乾した。この細胞を、室温で５分間
メタノ−ル-アセトン（1:1）で固定し、間接免疫螢光法
により染色した。染色したサンプルを螢光顕微鏡で調べ
た。
【００３６】結果膵臓外分泌腺でのLFA-1分子の発現 LFA-1αとLFA-1βは造血系細胞上に広く分布している。
LFA-1の発現が造血系細胞に限定されるかどうかを明ら
かにするため、膵臓腺癌患者由来の種々の異なる組織標
本を、抗LFA-1α、抗LFA-1β、および抗CD11b（Mac-1）
で染色した。その結果、モノクロ−ナル抗体2F12に認識
されるLFA-1αは、SAB法で茶色粒子として正常な膵臓外
分泌腺で強く発現されていた。同様に、LFA-1αのエピ
ト−プである が2F12認識エピト−プとは異なるHVS6B6
エピト−プは、膵臓小胞の上皮および細胞質で明らかに
発現されていたが、ランゲルハンス島では全く発現され
ていなかった。明確に染色された細胞が浸潤白血球とは
異なることを、ヘマトキシリンを用いる核染色により細
胞形態学的に確認した。
LFA-1の発現が造血系細胞に限定されるかどうかを明ら
かにするため、膵臓腺癌患者由来の種々の異なる組織標
本を、抗LFA-1α、抗LFA-1β、および抗CD11b（Mac-1）
で染色した。その結果、モノクロ−ナル抗体2F12に認識
されるLFA-1αは、SAB法で茶色粒子として正常な膵臓外
分泌腺で強く発現されていた。同様に、LFA-1αのエピ
ト−プである が2F12認識エピト−プとは異なるHVS6B6
エピト−プは、膵臓小胞の上皮および細胞質で明らかに
発現されていたが、ランゲルハンス島では全く発現され
ていなかった。明確に染色された細胞が浸潤白血球とは
異なることを、ヘマトキシリンを用いる核染色により細
胞形態学的に確認した。
【００３７】LFA-1はαβヘテロダイマ−であるが、α
鎖（CD11a）が正常な外分泌腺の上皮および細胞質で検
出された。β鎖（CD18）は比較的弱く検出された。CD11
bを認識するH11抗体は、膵臓の外分泌腺および実質細胞
のいずれをも染色しなかった。抗YH-370（CD54）および
抗8F2（CD49d）（いずれのIgアイソタイプも2F12抗体ま
たはHVS6B6抗体と同じ）は、この組織標本の染色におい
て陰性であった。従って、以下の実験では、2F12抗体お
よびHVS6B6抗体をLFA-1α鎖発現の検出に用いた。
鎖（CD11a）が正常な外分泌腺の上皮および細胞質で検
出された。β鎖（CD18）は比較的弱く検出された。CD11
bを認識するH11抗体は、膵臓の外分泌腺および実質細胞
のいずれをも染色しなかった。抗YH-370（CD54）および
抗8F2（CD49d）（いずれのIgアイソタイプも2F12抗体ま
たはHVS6B6抗体と同じ）は、この組織標本の染色におい
て陰性であった。従って、以下の実験では、2F12抗体お
よびHVS6B6抗体をLFA-1α鎖発現の検出に用いた。
【００３８】悪性疾患患者由来の組織上のLFA-1分布 正常な外分泌組織上のLFA-1の発現が膵臓腺癌患者の膵
臓に限定されるかどうかを明確にするため、１３例の他
の悪性疾患患者由来の組織上のLFA-1の発現を調べた。
表１および表２に示すとおり、正常な外分泌腺上でのLF
A-1の発現は、膵臓に限定 されるものではなく、悪性疾
患患者の胃腺、十二指腸腺、総胆管、気管支上皮および
肺胞上皮でも検出された。これらの結果は、正常な外分
泌腺上のLFA-1の発 現が腫瘍を有している器官に限定さ
れず、転移の有無にかかわらず他の器官でも検出される
ことを示している。膵臓のランゲルハンス島のような内
分泌腺や、細尿管、糸球体、肝実質細胞のような非外分
泌組織は、LFA-1のα鎖とβ鎖のいず れも発現していな
かった。表３に示すとおり、良性疾患患者の外分泌腺で
はLFA-1は発現されていない。
臓に限定されるかどうかを明確にするため、１３例の他
の悪性疾患患者由来の組織上のLFA-1の発現を調べた。
表１および表２に示すとおり、正常な外分泌腺上でのLF
A-1の発現は、膵臓に限定 されるものではなく、悪性疾
患患者の胃腺、十二指腸腺、総胆管、気管支上皮および
肺胞上皮でも検出された。これらの結果は、正常な外分
泌腺上のLFA-1の発 現が腫瘍を有している器官に限定さ
れず、転移の有無にかかわらず他の器官でも検出される
ことを示している。膵臓のランゲルハンス島のような内
分泌腺や、細尿管、糸球体、肝実質細胞のような非外分
泌組織は、LFA-1のα鎖とβ鎖のいず れも発現していな
かった。表３に示すとおり、良性疾患患者の外分泌腺で
はLFA-1は発現されていない。
【００３９】さらに、舌癌患者（舌に原発巣があり、転
移は観察されていない症例）の顎下腺において、腺組織
に染色像が観察された。また、同症例の頚部皮膚組織に
おいて、毛根および汗腺に陽性染色像が認められた。
移は観察されていない症例）の顎下腺において、腺組織
に染色像が観察された。また、同症例の頚部皮膚組織に
おいて、毛根および汗腺に陽性染色像が認められた。
【００４０】外分泌腺上のLFA-1の発現と悪性疾患との関係 悪性疾患患者由来の外分泌腺でのLFA-1の発現が確認さ
れたが、外分泌腺でのLFA-1の発現が悪性疾患と相関す
るかどうかは不明であった。悪性疾患とは対照的に、３
例の異なる良性腫瘍について調べた外分泌組織のすべて
がLFA-1α鎖とβ鎖のいずれも発現していなかった。こ
れらの結果は、外分泌腺上でのLFA-1の発現と病理学的
悪性度との相関を示している。
れたが、外分泌腺でのLFA-1の発現が悪性疾患と相関す
るかどうかは不明であった。悪性疾患とは対照的に、３
例の異なる良性腫瘍について調べた外分泌組織のすべて
がLFA-1α鎖とβ鎖のいずれも発現していなかった。こ
れらの結果は、外分泌腺上でのLFA-1の発現と病理学的
悪性度との相関を示している。
【００４１】胃の内視鏡生検標本が患者から入手可能で
あるので、６例以上の胃の良性疾患および９例の胃の悪
性疾患由来の胃標本を、外分泌腺でのLFA-1の発現が腫
瘍細胞の分化段階と相関するかどうかについて調べた。
α鎖β鎖のいずれも、胃潰瘍のような胃の良性疾患由来
の胃生検標本からは検出されなかった。対照的に、胃の
悪性疾患の９例すべてにおいて、その外分泌腺でLFA-1
が発現されていた。LFA-1の発現と悪性疾患の段階には
関連はないようである。
あるので、６例以上の胃の良性疾患および９例の胃の悪
性疾患由来の胃標本を、外分泌腺でのLFA-1の発現が腫
瘍細胞の分化段階と相関するかどうかについて調べた。
α鎖β鎖のいずれも、胃潰瘍のような胃の良性疾患由来
の胃生検標本からは検出されなかった。対照的に、胃の
悪性疾患の９例すべてにおいて、その外分泌腺でLFA-1
が発現されていた。LFA-1の発現と悪性疾患の段階には
関連はないようである。
【００４２】培養細胞株でのLFA-1の分布 免疫組織学的分析により、悪性疾患患者の正常な外分泌
腺でLFA-1が発現していることが明らかになったが、白
血球由来LFA-1分子が外分泌腺へ移動している可能性が
残る。従って、LFA-1を発現する非造血系細胞株を探索
すべく、LFA-1の発現につき、１９の非造血系細胞株を
調べた。試験に用いた非造血系細胞株のうち、PANC-Iお
よびMKN45以外の株は、その表面または細胞質にLFA-1お
よびCD11bを発現していなかった。PANC-IおよびMKN45
は、その表面上に、LFA-1α鎖の2F12エピト−プおよびH
VS6B6エピト−プを発現しており、細胞質中ではさらに
強く発現している。PANC-Iは膵臓管細胞腫瘍であり、MK
N45は胃起源の腺癌細胞株である。培養上澄中に分泌さ
れる成分の生化学的および免疫化学的定量により、両細
胞株が外分泌機能を維持していることが明らかになっ
た。免疫組織学的分析に加え、これらの結果は、外分泌
腺で発現されるLFA-1分子が外分泌腺細胞自体によって
産生されていることを示している。
腺でLFA-1が発現していることが明らかになったが、白
血球由来LFA-1分子が外分泌腺へ移動している可能性が
残る。従って、LFA-1を発現する非造血系細胞株を探索
すべく、LFA-1の発現につき、１９の非造血系細胞株を
調べた。試験に用いた非造血系細胞株のうち、PANC-Iお
よびMKN45以外の株は、その表面または細胞質にLFA-1お
よびCD11bを発現していなかった。PANC-IおよびMKN45
は、その表面上に、LFA-1α鎖の2F12エピト−プおよびH
VS6B6エピト−プを発現しており、細胞質中ではさらに
強く発現している。PANC-Iは膵臓管細胞腫瘍であり、MK
N45は胃起源の腺癌細胞株である。培養上澄中に分泌さ
れる成分の生化学的および免疫化学的定量により、両細
胞株が外分泌機能を維持していることが明らかになっ
た。免疫組織学的分析に加え、これらの結果は、外分泌
腺で発現されるLFA-1分子が外分泌腺細胞自体によって
産生されていることを示している。
【００４３】
【表１】
【００４４】
【表２】
【００４５】
【表３】
【００４６】
【発明の効果】本発明は白血病などの癌の臨床診断に有
用である。患者が悪性腫瘍を有しているならば、胃のよ
うな外分泌組織の正常な外分泌腺でLFA-1を発現してい
るので、その生検標本をLFA-1につき抗体で染色すれ
ば、癌の診断が可能になる。さらに、LFA-1は外分泌液
中に分泌されるので、汗腺、皮脂腺などから分泌される
汗、皮脂を診断試料とすることができ、簡便な診断が可
能になる。また、毛根部には毛腺、汗腺、皮脂腺などが
存在するので、毛根も診断試料とすることができる。本
発明の用いる試料は、腫瘍細胞を有していると推定され
る組織に限定されないので、従来の方法と比べ、試料の
採取が容易である。
用である。患者が悪性腫瘍を有しているならば、胃のよ
うな外分泌組織の正常な外分泌腺でLFA-1を発現してい
るので、その生検標本をLFA-1につき抗体で染色すれ
ば、癌の診断が可能になる。さらに、LFA-1は外分泌液
中に分泌されるので、汗腺、皮脂腺などから分泌される
汗、皮脂を診断試料とすることができ、簡便な診断が可
能になる。また、毛根部には毛腺、汗腺、皮脂腺などが
存在するので、毛根も診断試料とすることができる。本
発明の用いる試料は、腫瘍細胞を有していると推定され
る組織に限定されないので、従来の方法と比べ、試料の
採取が容易である。
フロントページの続き (72)発明者 横山 三男 福岡県久留米市西町北畑1015−１−601 (56)参考文献 特開 平３−157397（ＪＰ，Ａ) 特表 平４−501365（ＪＰ，Ａ) Ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｎｄ Ｅｘｐｅ ｒｉｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇ ｙ，85，３−８（1991) (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) G01N 33/574 G01N 33/53 ＢＩＯＳＩＳ（ＤＩＡＬＯＧ) ＣＡ（ＳＴＮ)
Claims (9)
- 【請求項１】 正常な外分泌腺細胞または組織中のＬＦ
Ａ−１の存在の有無を判定すること、または、該細胞ま
たは組織から分泌される分泌液中のＬＦＡ−１の存在の
有無を判定することを特徴とする腫瘍細胞の存在の有無
の判定方法。 - 【請求項２】 該外分泌腺組織が腫瘍細胞を含んでいな
いことを特徴とする請求項１に記載の判定方法。 - 【請求項３】 該外分泌腺細胞または組織が存在する組
織中のＬＦＡ−１の存在の有無を判定することを特徴と
する請求項１に記載の判定方法。 - 【請求項４】 該ＬＦＡ−１がＬＦＡ−１のα鎖である
ことを特徴とする請求項１に記載の判定方法。 - 【請求項５】 ＬＦＡ−１と特異的に反応する試薬によ
りＬＦＡ−１の存在の有無を判定することを特徴とする
請求項１に記載の判定方法。 - 【請求項６】 該試薬が抗体である請求項５に記載の判
定方法。 - 【請求項７】 請求項１〜６のいずれかに記載の方法を
含む癌の診断方法。 - 【請求項８】 請求項１〜７のいずれかに記載の方法に
用いる、ＬＦＡ−１と特異的に反応する試薬を含有する
キット。 - 【請求項９】 該試薬が抗体である請求項８に記載のキ
ット。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP20414292A JP3183717B2 (ja) | 1992-07-30 | 1992-07-30 | 腫瘍細胞の存在の有無の判定方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP20414292A JP3183717B2 (ja) | 1992-07-30 | 1992-07-30 | 腫瘍細胞の存在の有無の判定方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0650975A JPH0650975A (ja) | 1994-02-25 |
| JP3183717B2 true JP3183717B2 (ja) | 2001-07-09 |
Family
ID=16485534
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP20414292A Expired - Fee Related JP3183717B2 (ja) | 1992-07-30 | 1992-07-30 | 腫瘍細胞の存在の有無の判定方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3183717B2 (ja) |
-
1992
- 1992-07-30 JP JP20414292A patent/JP3183717B2/ja not_active Expired - Fee Related
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｎｄ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，８５，３−８（１９９１） |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0650975A (ja) | 1994-02-25 |
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