JP3135200B2 - タイマイの甲羅由来の５ｋタンパク質をコードする構造遺伝子及び該タンパク質の製造法 - Google Patents
タイマイの甲羅由来の５ｋタンパク質をコードする構造遺伝子及び該タンパク質の製造法Info
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- JP3135200B2 JP3135200B2 JP07097764A JP9776495A JP3135200B2 JP 3135200 B2 JP3135200 B2 JP 3135200B2 JP 07097764 A JP07097764 A JP 07097764A JP 9776495 A JP9776495 A JP 9776495A JP 3135200 B2 JP3135200 B2 JP 3135200B2
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Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、遺伝子工学的手法を用
いることにより、タイマイという海ガメの甲羅などを構
成するタイマイの甲羅由来の５Ｋタンパク質をコードす
る構造遺伝子及び該タンパク質の製造法に関する。
いることにより、タイマイという海ガメの甲羅などを構
成するタイマイの甲羅由来の５Ｋタンパク質をコードす
る構造遺伝子及び該タンパク質の製造法に関する。
【０００２】
【従来の技術】ここ数年来、遺伝子工学的手法により微
生物にペプチドないしタンパク質（以下「タンパク質
等」という）を生産させる技術が一般化されつつある。
そして現在、この技術を駆使してタンパク質等を生産す
るにあたりその生産効率を向上させるべく種々の改良が
なされているところである。ここで遺伝子工学的手法に
よるタンパク質などの生産とは、所望タンパク質等に対
応するＤＮＡ遺伝子をベクターに組み込み組み換えＤＮ
Ａとし、ついでこれを宿主微生物に組み込んで宿主の形
質転換を行って形質転換体を得、これを適当な条件で培
養することによって所望タンパク質を産生させ、ついで
この所望タンパク質等を回収する工程よりなるのがふつ
うである。このような遺伝子工学的手法をもってペプチ
ドの合成を行う場合には、具体的な下記のような方法が
知られている。目的ペプチドの構造遺伝子を翻訳開始
信号下流に直結して発現を行う直接発現法、分泌性蛋
白のシグナルペプチドを利用して目的産物を細胞質外へ
分泌させる分泌法、他の蛋白と融合させることにより
細胞質内での安定性を高め、これによって収量の増大を
計る融合法、以上のように手法は確立されつつあるが、
必ずしも目的タンパク質等が得られるとは限られていな
い。したがって、所望のタンパク質等の得られる製造方
法の確立が望まれるところであった。
生物にペプチドないしタンパク質（以下「タンパク質
等」という）を生産させる技術が一般化されつつある。
そして現在、この技術を駆使してタンパク質等を生産す
るにあたりその生産効率を向上させるべく種々の改良が
なされているところである。ここで遺伝子工学的手法に
よるタンパク質などの生産とは、所望タンパク質等に対
応するＤＮＡ遺伝子をベクターに組み込み組み換えＤＮ
Ａとし、ついでこれを宿主微生物に組み込んで宿主の形
質転換を行って形質転換体を得、これを適当な条件で培
養することによって所望タンパク質を産生させ、ついで
この所望タンパク質等を回収する工程よりなるのがふつ
うである。このような遺伝子工学的手法をもってペプチ
ドの合成を行う場合には、具体的な下記のような方法が
知られている。目的ペプチドの構造遺伝子を翻訳開始
信号下流に直結して発現を行う直接発現法、分泌性蛋
白のシグナルペプチドを利用して目的産物を細胞質外へ
分泌させる分泌法、他の蛋白と融合させることにより
細胞質内での安定性を高め、これによって収量の増大を
計る融合法、以上のように手法は確立されつつあるが、
必ずしも目的タンパク質等が得られるとは限られていな
い。したがって、所望のタンパク質等の得られる製造方
法の確立が望まれるところであった。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】また、海ガメの中でも
タイマイの甲羅は、鼈甲細工などの伝統的工芸に用いら
れてきた。しかしながら、ワシントン条約により平成４
年末をもって輸入禁止となった。そのため、鼈甲細工従
事者および海ガメの研究者にとっては死活問題となって
いた。
タイマイの甲羅は、鼈甲細工などの伝統的工芸に用いら
れてきた。しかしながら、ワシントン条約により平成４
年末をもって輸入禁止となった。そのため、鼈甲細工従
事者および海ガメの研究者にとっては死活問題となって
いた。
【０００４】本発明は、本出願と同時に特許出願した
『タイマイの甲羅からのタンパク質の分離法』によって
タイマイの甲羅を構成するタンパク質の性質を明らかに
することにより、これまで製造されていないタイマイの
甲羅を構成するタイマイの甲羅由来の５Ｋタンパク質及
びその製造法を提供することを目的としている。
『タイマイの甲羅からのタンパク質の分離法』によって
タイマイの甲羅を構成するタンパク質の性質を明らかに
することにより、これまで製造されていないタイマイの
甲羅を構成するタイマイの甲羅由来の５Ｋタンパク質及
びその製造法を提供することを目的としている。
【０００５】
【課題を解決するための手段】上記目的を達成するため
に、請求項１の発明は、下記のアミノ酸配列からなる５
Ｋタンパク質をコードする構造遺伝子からなる。 Tyr Tyr Asn Pro Tyr Cys Tyr Gln Gly Trp Arg Gly Tyr Arg Gly His Tyr Gly Cys Tyr Arg Pro Trp Gly Ser Trp Lys Pro Tyr Arg Tyr Gly Trp Gly His Gln Tyr Gly Gly His Tyr Pro Tyr Arg Trp Gly His Gly Tyr Leu Trp
に、請求項１の発明は、下記のアミノ酸配列からなる５
Ｋタンパク質をコードする構造遺伝子からなる。 Tyr Tyr Asn Pro Tyr Cys Tyr Gln Gly Trp Arg Gly Tyr Arg Gly His Tyr Gly Cys Tyr Arg Pro Trp Gly Ser Trp Lys Pro Tyr Arg Tyr Gly Trp Gly His Gln Tyr Gly Gly His Tyr Pro Tyr Arg Trp Gly His Gly Tyr Leu Trp
【０００７】また、請求項２の発明は、前記５Ｋタンパ
ク質がタイマイの甲羅由来のものである請求項１の構造
遺伝子を組み込んだ組み換えベクターからなる。
ク質がタイマイの甲羅由来のものである請求項１の構造
遺伝子を組み込んだ組み換えベクターからなる。
【００１０】また、請求項３の発明は、請求項２の組み
換えベクターを用いて微生物を形質転換し、微生物を培
養することを特徴とするタイマイの甲羅由来の５Ｋタン
パク質の製造法からなる。
換えベクターを用いて微生物を形質転換し、微生物を培
養することを特徴とするタイマイの甲羅由来の５Ｋタン
パク質の製造法からなる。
【００１２】上記の遺伝子をプロモーターの下流に連結
したベクターを構築する方がタンパク質を生産させるた
めに効果的である。なお、プロモータは、ｔａｃプロモ
ーター、ｔｒｐプロモーター、ｌａｃプロモーターなど
大腸菌中でその作用を示すものをいう。
したベクターを構築する方がタンパク質を生産させるた
めに効果的である。なお、プロモータは、ｔａｃプロモ
ーター、ｔｒｐプロモーター、ｌａｃプロモーターなど
大腸菌中でその作用を示すものをいう。
【００１３】大腸菌などの生物の細胞の中へベクターを
入れ形質転換させると、その形質転換体の中で遺伝子を
含むベクターを半永久的に保持することができる。
入れ形質転換させると、その形質転換体の中で遺伝子を
含むベクターを半永久的に保持することができる。
【００１４】そして、必要に応じ形質転換体よりベクタ
ーの調製も可能である。
ーの調製も可能である。
【００１５】
【作用】タイマイの甲羅由来の分子量５０００（以下５
Ｋ）のタンパク質をコードする遺伝子を含有するベクタ
ーを大腸菌に入れ形質転換させる。次にこの大腸菌を培
養しながら、ベクター上のプロモーターの誘導物質を加
えることにより、５Ｋタンパク質の生産が確認される。
Ｋ）のタンパク質をコードする遺伝子を含有するベクタ
ーを大腸菌に入れ形質転換させる。次にこの大腸菌を培
養しながら、ベクター上のプロモーターの誘導物質を加
えることにより、５Ｋタンパク質の生産が確認される。
【００１６】上記５Ｋタンパク質は、大腸菌を破細した
後、遠心分離を行ったら、沈殿画分として回収される。
後、遠心分離を行ったら、沈殿画分として回収される。
【００２０】
【実施例】本出願と同時に特許出願した『タイマイの甲
羅からのタンパク質の分離法』で明らかにしたタイマイ
の甲羅由来のタンパク質５Ｋをコードする遺伝子、５Ｋ
遺伝子を化学合成した（図１）。
羅からのタンパク質の分離法』で明らかにしたタイマイ
の甲羅由来のタンパク質５Ｋをコードする遺伝子、５Ｋ
遺伝子を化学合成した（図１）。
【００２１】この際、遺伝子の上流５’を制限酵素Ｅｃ
ｏＲＩ、下流３’を制限酵素Ｈｉｎｄ IIIとなるように
している。
ｏＲＩ、下流３’を制限酵素Ｈｉｎｄ IIIとなるように
している。
【００２２】構造遺伝子の前には翻訳開始コドンのＡＴ
Ｇ（メチオニンに対応）を付け、一方、終止コドンとし
てＴＡＡとＴＧＡの２つを付与した。
Ｇ（メチオニンに対応）を付け、一方、終止コドンとし
てＴＡＡとＴＧＡの２つを付与した。
【００２３】遺伝子は、約４０ｍｅｒのＤＮＡオリゴヌ
クレオチドとして合成し、それら３０ｐｍｏｌをＴ４Ｄ
ＮＡキナーゼで５’をリン酸化した。これらをＴ４ＤＮ
Ａリガーゼにより連結し、フェノール、クロロホルム処
理、エタノール沈殿を行った。その後、制限酵素Ｅｃｏ
ＲＩとＨｉｎｄ IIIで消化し、アクリルアミドゲルで電
気泳動を行った。目的のサイズに相当する部分を切り出
し、エレクトロエルーター（ＩＢＩ社）で溶出すること
により、５Ｋ（１６７ｂｐ）の遺伝子を回収した。
クレオチドとして合成し、それら３０ｐｍｏｌをＴ４Ｄ
ＮＡキナーゼで５’をリン酸化した。これらをＴ４ＤＮ
Ａリガーゼにより連結し、フェノール、クロロホルム処
理、エタノール沈殿を行った。その後、制限酵素Ｅｃｏ
ＲＩとＨｉｎｄ IIIで消化し、アクリルアミドゲルで電
気泳動を行った。目的のサイズに相当する部分を切り出
し、エレクトロエルーター（ＩＢＩ社）で溶出すること
により、５Ｋ（１６７ｂｐ）の遺伝子を回収した。
【００２４】上記の遺伝子をｔａｃプロモータをもつベ
クターｐＦＭ００５（文献：Ａ．Ｋitazono 等、Ｊ．Ｂ
actriol 、１７４、7917-7925 、１９９２）のＥｃｏＲ
Ｉ−Ｈｉｎｄ IIIにＴ４ＤＮＡリガーゼを用いて連結
し、大腸菌ＪＭ１０９を形質転換した。形質転換体より
プラスミドを調製し、ＡＢＩ社ＤＮＡシーケンサー３７
３Ａで塩基配列を確認した。そして、ｔａｃプロモータ
ーの下流に５Ｋ遺伝子を含有するものをｐＢＥ５１と命
名した（図２）。
クターｐＦＭ００５（文献：Ａ．Ｋitazono 等、Ｊ．Ｂ
actriol 、１７４、7917-7925 、１９９２）のＥｃｏＲ
Ｉ−Ｈｉｎｄ IIIにＴ４ＤＮＡリガーゼを用いて連結
し、大腸菌ＪＭ１０９を形質転換した。形質転換体より
プラスミドを調製し、ＡＢＩ社ＤＮＡシーケンサー３７
３Ａで塩基配列を確認した。そして、ｔａｃプロモータ
ーの下流に５Ｋ遺伝子を含有するものをｐＢＥ５１と命
名した（図２）。
【００２５】ｔｒｐプロモーターを持つｐＫＭ９２４
は、以下のように構築した。ｔｒｐプロモーターを含有
するｐＴＰＫ１（文献；Ｙ．Ｍurooka等、Ｊournal of
Ｂiotechnology，２，３０３〜３１６，１９８５）を
ＥｃｏＲＩで切断後、Ｔ４ＤＮＡポリメラーゼにより平
滑末端とし、ＨｐａＩでさらに切断して約３５０ｂｐの
断片を得た。この断片と、ｐＦＭ００５をＳａｌＩで切
断しＴ４ＤＮＡポリメラーゼで平滑末端とし、さらにＨ
ｉｎｄ IIIで切断して得た大きい断片と、ｐＵＣ１９の
ＥｃｏＲＩ−Ｈｉｎｄ IIIのポリリンカーと、ＨｐａＩ
−ＥｃｏＲＩリンカー ５’−AACTAGTACGCAAGTTCACGTAAAAAGGTTTG−３’ ３’−TTGATCATGCGTTCAAGTGCATTTTTCCAAACTTAA−５’ の４つのＤＮＡ断片をＴ４ＤＮＡリガーゼを用いて連結
し、大腸菌ＨＢ１０１を形質転換した。その形質転換体
よりプラスミドを調製し、ＤＮＡシーケンサーで塩基配
列を調べてｐＫＭ９２４を得た。このベクターは、クロ
ーニング部はＥｃｏＲＩ−Ｈｉｎｄ IIIでプロモーター
がｔｒｐである。ｐＫＭ９２４のＥｃｏＲＩ−Ｈｉｎｄ
IIIの部位に５Ｋ遺伝子を連結し、大腸菌ＨＢ１０１を
形質転換した。形質転換体よりプラスミドを調製し塩基
配列を調べた。そして、ｔｒｐプロモーターの下流に５
Ｋ遺伝子を含有するものをｐＢＴ５１と命名した（図
２）。
は、以下のように構築した。ｔｒｐプロモーターを含有
するｐＴＰＫ１（文献；Ｙ．Ｍurooka等、Ｊournal of
Ｂiotechnology，２，３０３〜３１６，１９８５）を
ＥｃｏＲＩで切断後、Ｔ４ＤＮＡポリメラーゼにより平
滑末端とし、ＨｐａＩでさらに切断して約３５０ｂｐの
断片を得た。この断片と、ｐＦＭ００５をＳａｌＩで切
断しＴ４ＤＮＡポリメラーゼで平滑末端とし、さらにＨ
ｉｎｄ IIIで切断して得た大きい断片と、ｐＵＣ１９の
ＥｃｏＲＩ−Ｈｉｎｄ IIIのポリリンカーと、ＨｐａＩ
−ＥｃｏＲＩリンカー ５’−AACTAGTACGCAAGTTCACGTAAAAAGGTTTG−３’ ３’−TTGATCATGCGTTCAAGTGCATTTTTCCAAACTTAA−５’ の４つのＤＮＡ断片をＴ４ＤＮＡリガーゼを用いて連結
し、大腸菌ＨＢ１０１を形質転換した。その形質転換体
よりプラスミドを調製し、ＤＮＡシーケンサーで塩基配
列を調べてｐＫＭ９２４を得た。このベクターは、クロ
ーニング部はＥｃｏＲＩ−Ｈｉｎｄ IIIでプロモーター
がｔｒｐである。ｐＫＭ９２４のＥｃｏＲＩ−Ｈｉｎｄ
IIIの部位に５Ｋ遺伝子を連結し、大腸菌ＨＢ１０１を
形質転換した。形質転換体よりプラスミドを調製し塩基
配列を調べた。そして、ｔｒｐプロモーターの下流に５
Ｋ遺伝子を含有するものをｐＢＴ５１と命名した（図
２）。
【００２６】上記ｐＢＥ５１の形質転換体を別々にＬＢ
培地で培養し、ｔａｃプロモーターの誘導物質であるイ
ソプロヒル−β−Ｄ−チオガラクトピラノシド（以下Ｉ
ＰＴＧ）を１ｍＭ添加して培養し、遺伝子発現を行っ
た。その結果、５Ｋ遺伝子を持つｐＢＥ５１ベクターを
含有する大腸菌の中で、５Ｋタンパク質と思われるタン
パク質をＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動（以
下ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）において確認した（図３）。一
方、ｐＢＴ５１を含有する大腸菌をＭ９カザミノ酸培地
で培養し、ｔｒｐプロモーターの誘導物質である３−β
−インドールアクリル酸を２０μｇ／ｍｌになるように
加え遺伝子発現を行ったところ、前述と同様に５Ｋタン
パク質だけが効率良く生産された。
培地で培養し、ｔａｃプロモーターの誘導物質であるイ
ソプロヒル−β−Ｄ−チオガラクトピラノシド（以下Ｉ
ＰＴＧ）を１ｍＭ添加して培養し、遺伝子発現を行っ
た。その結果、５Ｋ遺伝子を持つｐＢＥ５１ベクターを
含有する大腸菌の中で、５Ｋタンパク質と思われるタン
パク質をＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動（以
下ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）において確認した（図３）。一
方、ｐＢＴ５１を含有する大腸菌をＭ９カザミノ酸培地
で培養し、ｔｒｐプロモーターの誘導物質である３−β
−インドールアクリル酸を２０μｇ／ｍｌになるように
加え遺伝子発現を行ったところ、前述と同様に５Ｋタン
パク質だけが効率良く生産された。
【００２７】上記大腸菌で生産された５Ｋタンパク質を
超音波処理により無細胞抽出液とし、１８０００回転遠
心を２０分行ったところ沈殿画分として回収された。こ
の画分を８Ｍグアニジン塩酸、２０ｍＭジチオスレイト
ール（以下ＤＴＴ）、リン酸緩衝液、ｐＨ６に溶解し、
６Ｍグアニジン塩酸塩、５ｍＭＤＴＴを含むリン酸緩衝
液で平衡化したセファディクスＧ５０（ファルマシア
社）のカラムクトマトに供し、５Ｋタンパク質画分を回
収した。このタンパク質を逆相Ｃ18カラム（Ｗaters 、
ＰuresilＣ18、4.6 ×250 ｍｍ）を用いたＨＰＬＣに供
し、最終的に５Ｋタンパク質を単一バンドにまで精製し
た。そのＳＤＳ−ＰＡＧＥパターンは図４に示す。
超音波処理により無細胞抽出液とし、１８０００回転遠
心を２０分行ったところ沈殿画分として回収された。こ
の画分を８Ｍグアニジン塩酸、２０ｍＭジチオスレイト
ール（以下ＤＴＴ）、リン酸緩衝液、ｐＨ６に溶解し、
６Ｍグアニジン塩酸塩、５ｍＭＤＴＴを含むリン酸緩衝
液で平衡化したセファディクスＧ５０（ファルマシア
社）のカラムクトマトに供し、５Ｋタンパク質画分を回
収した。このタンパク質を逆相Ｃ18カラム（Ｗaters 、
ＰuresilＣ18、4.6 ×250 ｍｍ）を用いたＨＰＬＣに供
し、最終的に５Ｋタンパク質を単一バンドにまで精製し
た。そのＳＤＳ−ＰＡＧＥパターンは図４に示す。
【００２８】精製した５Ｋタンパク質のアミノ酸分析か
ら、予想どおり目的の５Ｋタンパク質であることを確認
した。
ら、予想どおり目的の５Ｋタンパク質であることを確認
した。
【００３５】
【発明の効果】本発明は、以上説明したように構成され
ているので、以下に記載されているような効果を奏す
る。
ているので、以下に記載されているような効果を奏す
る。
【００３６】遺伝子工学的手法により、これまで入手出
来なかったタイマイの甲羅の５Ｋタンパク質の製造が安
価に且つ永久的に可能となる。
来なかったタイマイの甲羅の５Ｋタンパク質の製造が安
価に且つ永久的に可能となる。
【００３７】製造された５Ｋタンパク質を用いることに
より、タイマイの甲羅のような素材の開発が期待でき
る。
より、タイマイの甲羅のような素材の開発が期待でき
る。
【００３８】タイマイの甲羅由来の５Ｋタンパク質をコ
ードする遺伝子を合成したベクターを含有する大腸菌を
培養することにより、遺伝子の調製が可能となる。
ードする遺伝子を合成したベクターを含有する大腸菌を
培養することにより、遺伝子の調製が可能となる。
【００３９】ベクターを含有する大腸菌は、グリセリン
存在下、低温することにより半永久的に保存できる。
存在下、低温することにより半永久的に保存できる。
【００４０】さらに、調製したベクターは、低温にする
ことにより永久的に保存できる。
ことにより永久的に保存できる。
【００４１】化学合成ＤＮＡを用いることにより、類似
のタンパク質を作る生物において、ｍＲＮＡの解析、遺
伝子のクローニング、および、ＰＣＲ法による遺伝子増
幅と解析に利用できる。
のタンパク質を作る生物において、ｍＲＮＡの解析、遺
伝子のクローニング、および、ＰＣＲ法による遺伝子増
幅と解析に利用できる。
【００４２】また、製造された５Ｋタンパク質を基に、
モノクローナル抗体、あるいは、ポリクロナール抗体の
作製が容易に可能となる。
モノクローナル抗体、あるいは、ポリクロナール抗体の
作製が容易に可能となる。
【００４３】そのような抗体を用いることにより、角化
メカニズムの解明に利用できる。
メカニズムの解明に利用できる。
【００４４】また、抗体を用いることにより、海ガメの
分類に利用できる。
分類に利用できる。
【図１】タイマイの甲羅由来の５Ｋタンパク質をコード
する遺伝子である。
する遺伝子である。
【図２】ｐＢＥ５１、ｐＢＴ５１ベクターの構築法を示
す図である。
す図である。
【図３】大腸菌の中で生産された５Ｋタンパク質であ
る。
る。
【図４】ＳＤＳ−ＰＡＧＥによる５Ｋタンパク質の分析
である。
である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ Ｃ１２Ｒ 1:19）
Claims (3)
- 【請求項１】 下記のアミノ酸配列からなる５Ｋタンパ
ク質をコードする構造遺伝子。 Tyr Tyr Asn Pro Tyr Cys Tyr Gln Gly Trp Arg Gly Tyr Arg Gly His Tyr Gly Cys Tyr Arg Pro Trp Gly Ser Trp Lys Pro Tyr Arg Tyr Gly Trp Gly His Gln Tyr Gly Gly His Tyr Pro Tyr Arg Trp Gly His Gly Tyr Leu Trp - 【請求項２】 前記５Ｋタンパク質がタイマイの甲羅由
来のものである請求項１の構造遺伝子を組み込んだ組み
換えベクター。 - 【請求項３】 請求項２の組み換えベクターを用いて微
生物を形質転換し、微生物を培養することを特徴とする
タイマイの甲羅由来の５Ｋタンパク質の製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP07097764A JP3135200B2 (ja) | 1995-03-29 | 1995-03-29 | タイマイの甲羅由来の５ｋタンパク質をコードする構造遺伝子及び該タンパク質の製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP07097764A JP3135200B2 (ja) | 1995-03-29 | 1995-03-29 | タイマイの甲羅由来の５ｋタンパク質をコードする構造遺伝子及び該タンパク質の製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH08266285A JPH08266285A (ja) | 1996-10-15 |
| JP3135200B2 true JP3135200B2 (ja) | 2001-02-13 |
Family
ID=14200942
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP07097764A Expired - Fee Related JP3135200B2 (ja) | 1995-03-29 | 1995-03-29 | タイマイの甲羅由来の５ｋタンパク質をコードする構造遺伝子及び該タンパク質の製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3135200B2 (ja) |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103630619B (zh) * | 2013-10-28 | 2014-12-10 | 山东东阿阿胶股份有限公司 | 一种龟甲胶及其制品的检测物及其质谱检测方法 |
-
1995
- 1995-03-29 JP JP07097764A patent/JP3135200B2/ja not_active Expired - Fee Related
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| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH08266285A (ja) | 1996-10-15 |
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