JP3116091B2 - 培養細胞または受精卵に外来遺伝子を導入する方法 - Google Patents
培養細胞または受精卵に外来遺伝子を導入する方法Info
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【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、生物研究分野、医学研
究分野、畜産研究分野、水産研究分野における外来遺伝
子の導入技術に関し、詳しくは、これらの分野において
培養細胞または受精卵に外来遺伝子を導入する方法に関
するものである。
究分野、畜産研究分野、水産研究分野における外来遺伝
子の導入技術に関し、詳しくは、これらの分野において
培養細胞または受精卵に外来遺伝子を導入する方法に関
するものである。
【０００２】
【従来の技術】近年、外来遺伝子の導入技術が発展する
につれて、新たに有用な形質を付加させた生物品種の創
出が可能となり、トランスジェニック生物作成として画
期的な研究成果があがりつつある。
につれて、新たに有用な形質を付加させた生物品種の創
出が可能となり、トランスジェニック生物作成として画
期的な研究成果があがりつつある。
【０００３】なお、外来遺伝子の導入技術としては、リ
ン酸カルシュウム法、エレクトロポレーション法、リポ
フェクション法、顕微注入法、ウイルスベクター法など
により、プラスミドベクターにクローニングされた外来
遺伝子を培養細胞または受精卵に導入する操作が行われ
ている。
ン酸カルシュウム法、エレクトロポレーション法、リポ
フェクション法、顕微注入法、ウイルスベクター法など
により、プラスミドベクターにクローニングされた外来
遺伝子を培養細胞または受精卵に導入する操作が行われ
ている。
【０００４】また、外来遺伝子の導入技術としては、パ
ーティクルガン（空気銃のような装置）を用いた遺伝子
導入法も知られている。従来、パーティクルガンによる
遺伝子導入法は、主として細胞壁を持つ植物細胞に適用
され、外来遺伝子の導入が可能となったことで植物の種
類を飛躍的に増大させてきた。さらに最近では、パーテ
ィクルガンを用いて動物卵に外来遺伝子を導入する方法
も提案されている。
ーティクルガン（空気銃のような装置）を用いた遺伝子
導入法も知られている。従来、パーティクルガンによる
遺伝子導入法は、主として細胞壁を持つ植物細胞に適用
され、外来遺伝子の導入が可能となったことで植物の種
類を飛躍的に増大させてきた。さらに最近では、パーテ
ィクルガンを用いて動物卵に外来遺伝子を導入する方法
も提案されている。
【０００５】パーティクルガンを用いて動物卵に外来遺
伝子を導入する方法は、例えば、ウニ卵に外来遺伝子を
導入するときに利用されており、また他の無脊椎動物卵
に外来遺伝子を導入するときにも利用されている。そし
て、多少の改良により堅い卵殻を持つ魚卵にも遺伝子を
導入することが可能であり、多数の卵を同時に処理でき
る点で魚介類の品種改良への道が開かれると考えられて
いる。
伝子を導入する方法は、例えば、ウニ卵に外来遺伝子を
導入するときに利用されており、また他の無脊椎動物卵
に外来遺伝子を導入するときにも利用されている。そし
て、多少の改良により堅い卵殻を持つ魚卵にも遺伝子を
導入することが可能であり、多数の卵を同時に処理でき
る点で魚介類の品種改良への道が開かれると考えられて
いる。
【０００６】なお、パーティクルガンを用いて動物卵に
外来遺伝子を導入する方法では、具体的には、遺伝子
（ＤＮＡ）を沈着させた金やタングステンなどの微粒子
をガス圧で加速し、培養細胞または受精卵に打ち込むよ
うにしている。このように外来遺伝子を動物卵に導入し
た後、導入後の遺伝子がプリズム胚でも認められてお
り、金属粒子は何らかの機構で胚から取り除くことが可
能となっている。
外来遺伝子を導入する方法では、具体的には、遺伝子
（ＤＮＡ）を沈着させた金やタングステンなどの微粒子
をガス圧で加速し、培養細胞または受精卵に打ち込むよ
うにしている。このように外来遺伝子を動物卵に導入し
た後、導入後の遺伝子がプリズム胚でも認められてお
り、金属粒子は何らかの機構で胚から取り除くことが可
能となっている。
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】ところが、上述した複
数種の遺伝子導入方法を用いた場合には何れも、外来遺
伝子が導入される染色体ＤＮＡ上の位置は、現在の技術
ではコントロールできない。従って、培養細胞または受
精卵内において、導入後の外来遺伝子が周囲（隣接）の
遺伝子の環境にさらされることになり、正常に発現しな
い場合が多い。
数種の遺伝子導入方法を用いた場合には何れも、外来遺
伝子が導入される染色体ＤＮＡ上の位置は、現在の技術
ではコントロールできない。従って、培養細胞または受
精卵内において、導入後の外来遺伝子が周囲（隣接）の
遺伝子の環境にさらされることになり、正常に発現しな
い場合が多い。
【０００８】つまり、図２に示すように、外来遺伝子が
不活性クロマチンＤＮＡ上に導入された場合は、該外来
遺伝子が不活性になってしまう。一方、外来遺伝子が活
性クロマチンＤＮＡ上に導入された場合は、強力なエン
ハンサーの支配を受けるので、外来遺伝子の過剰発現
や、時期特異的、組織特異的な遺伝子の発現がコントロ
ール不能という問題が生じてくる。
不活性クロマチンＤＮＡ上に導入された場合は、該外来
遺伝子が不活性になってしまう。一方、外来遺伝子が活
性クロマチンＤＮＡ上に導入された場合は、強力なエン
ハンサーの支配を受けるので、外来遺伝子の過剰発現
や、時期特異的、組織特異的な遺伝子の発現がコントロ
ール不能という問題が生じてくる。
【０００９】上述したことから、さらに図２に示すよう
に、外来遺伝子が不活性クロマチンＤＮＡ上に導入され
た場合は、トランスジェニック生物の作成効率が著しく
低くなっている。一方、外来遺伝子が活性クロマチンＤ
ＮＡ上に導入された場合は、導入後の遺伝子がコントロ
ール不能の遺伝子として発現してしまう。結局、所要の
目的に合致したトランスジェニック生物を作成すること
が難しくなる。
に、外来遺伝子が不活性クロマチンＤＮＡ上に導入され
た場合は、トランスジェニック生物の作成効率が著しく
低くなっている。一方、外来遺伝子が活性クロマチンＤ
ＮＡ上に導入された場合は、導入後の遺伝子がコントロ
ール不能の遺伝子として発現してしまう。結局、所要の
目的に合致したトランスジェニック生物を作成すること
が難しくなる。
【００１０】要するに、上述した複数種の遺伝子導入方
法では何れも、導入された外来遺伝子が正しく機能する
トランスジェニック生物があまり期待できず、期待でき
るとしても、色々な複雑な操作が必要となってくるの
で、トランスジェニック生物の作成に多大な労力と時間
を必要とする。
法では何れも、導入された外来遺伝子が正しく機能する
トランスジェニック生物があまり期待できず、期待でき
るとしても、色々な複雑な操作が必要となってくるの
で、トランスジェニック生物の作成に多大な労力と時間
を必要とする。
【００１１】本発明は、上述した問題点を解消するため
になされたものであり、導入された外来遺伝子が正しく
機能し目的に合致したトランスジェニック生物を作成す
るための遺伝子導入方法を提供しようとしている。
になされたものであり、導入された外来遺伝子が正しく
機能し目的に合致したトランスジェニック生物を作成す
るための遺伝子導入方法を提供しようとしている。
【００１２】
【課題を解決するための手段】上記の目的を達成するた
めに本発明は、外来遺伝子の導入方法であって、培養細
胞または受精卵に外来遺伝子を導入する際に、導入後の
外来遺伝子が周囲の遺伝子からの干渉を受けないよう
に、導入しようとする外来遺伝子を、インスレーターで
挟み独立した環境を確保した状態で染色体ＤＮＡに導入
し、上記インスレーターとして、ウニ・アリールスルフ
ァターゼ（Ａｒｓ）遺伝子の上流−２６８６ｂｐ〜−２
１１５ｂｐに存在するインスレーター・フラグメントを
用い、該インスレーター・フラグメントとして、アリー
ルスルファターゼ遺伝子のエンハンサーとプロモーター
との間に挿入されるとアリールスルファターゼ遺伝子の
エンハンサーの活性を完全に遮断できるものを用いる外
来遺伝子の導入方法において、上記インスレーター・フ
ラグメントは、導入しようとする外来遺伝子を挟むよう
にプラスミドに配置され、導入される外来遺伝子（ＤＮ
Ａ）とインスレーター・フラグメントとを同じ制限酵素
末端を持つように直鎖化し、混ぜて受精卵に導入し、導
入操作を行う際、受精卵に導入される外来遺伝子（ＤＮ
Ａ）に対し、制限酵素を用いることで制限酵素末端を持
つように直鎖化し、そして、重量比で８倍量の同じ制限
酵素で完全消化したバフンウニ染色体ＤＮＡと、同じ制
限酵素末端を持つように直鎖化したインスレーター・フ
ラグメントと混合させることを特徴とするものである。
めに本発明は、外来遺伝子の導入方法であって、培養細
胞または受精卵に外来遺伝子を導入する際に、導入後の
外来遺伝子が周囲の遺伝子からの干渉を受けないよう
に、導入しようとする外来遺伝子を、インスレーターで
挟み独立した環境を確保した状態で染色体ＤＮＡに導入
し、上記インスレーターとして、ウニ・アリールスルフ
ァターゼ（Ａｒｓ）遺伝子の上流−２６８６ｂｐ〜−２
１１５ｂｐに存在するインスレーター・フラグメントを
用い、該インスレーター・フラグメントとして、アリー
ルスルファターゼ遺伝子のエンハンサーとプロモーター
との間に挿入されるとアリールスルファターゼ遺伝子の
エンハンサーの活性を完全に遮断できるものを用いる外
来遺伝子の導入方法において、上記インスレーター・フ
ラグメントは、導入しようとする外来遺伝子を挟むよう
にプラスミドに配置され、導入される外来遺伝子（ＤＮ
Ａ）とインスレーター・フラグメントとを同じ制限酵素
末端を持つように直鎖化し、混ぜて受精卵に導入し、導
入操作を行う際、受精卵に導入される外来遺伝子（ＤＮ
Ａ）に対し、制限酵素を用いることで制限酵素末端を持
つように直鎖化し、そして、重量比で８倍量の同じ制限
酵素で完全消化したバフンウニ染色体ＤＮＡと、同じ制
限酵素末端を持つように直鎖化したインスレーター・フ
ラグメントと混合させることを特徴とするものである。
【００１３】さらに本発明は、外来遺伝子が不活性クロ
マチンＤＮＡ上に導入された場合は、該外来遺伝子を挟
むように位置している両側のインスレーターにより、不
活性クロマチンＤＮＡからの影響を遮断することで、導
入後の外来遺伝子が不活性になることを回避し、一方、
外来遺伝子が活性クロマチンＤＮＡ上に導入された場合
は、該外来遺伝子を挟むように位置している両側のイン
スレーターにより、強力なエンハンサーの支配を遮断す
ることで、外来遺伝子の過剰発現や、異常な時期特異
的、組織特異的な遺伝子の発現を回避することをもう一
つの特徴とするものである。
マチンＤＮＡ上に導入された場合は、該外来遺伝子を挟
むように位置している両側のインスレーターにより、不
活性クロマチンＤＮＡからの影響を遮断することで、導
入後の外来遺伝子が不活性になることを回避し、一方、
外来遺伝子が活性クロマチンＤＮＡ上に導入された場合
は、該外来遺伝子を挟むように位置している両側のイン
スレーターにより、強力なエンハンサーの支配を遮断す
ることで、外来遺伝子の過剰発現や、異常な時期特異
的、組織特異的な遺伝子の発現を回避することをもう一
つの特徴とするものである。
【００１４】なお、本発明の方法による遺伝子導入時の
操作も、従来のパーティクルガンによる遺伝子導入法を
使用することが可能である。すなわち、外来遺伝子（Ｄ
ＮＡ）を沈着させた金の微粒子をガス圧で加速して培養
細胞または受精卵に打ち込む方法を利用できる。
操作も、従来のパーティクルガンによる遺伝子導入法を
使用することが可能である。すなわち、外来遺伝子（Ｄ
ＮＡ）を沈着させた金の微粒子をガス圧で加速して培養
細胞または受精卵に打ち込む方法を利用できる。
【００１５】
【作用】上記した本発明の方法によれば、図１に示すよ
うに、培養細胞または受精卵に外来遺伝子を導入する際
にして、導入後の外来遺伝子が周囲の遺伝子からの干渉
を受けないように、導入しようとする遺伝子を、インス
レーターで挟み独立した環境を確保した状態で染色体Ｄ
ＮＡに導入することから、導入後の外来遺伝子は、導入
先の培養細胞または受精卵内で隣接遺伝子からの干渉を
受けずに済むようになっている。
うに、培養細胞または受精卵に外来遺伝子を導入する際
にして、導入後の外来遺伝子が周囲の遺伝子からの干渉
を受けないように、導入しようとする遺伝子を、インス
レーターで挟み独立した環境を確保した状態で染色体Ｄ
ＮＡに導入することから、導入後の外来遺伝子は、導入
先の培養細胞または受精卵内で隣接遺伝子からの干渉を
受けずに済むようになっている。
【００１６】すなわち、図１に示すように、外来遺伝子
が不活性クロマチンＤＮＡ上に導入された場合は、該外
来遺伝子を挟むように位置している両側のインスレータ
ーにより、不活性クロマチンＤＮＡからの影響を遮断す
ることができ、導入後の外来遺伝子が不活性になること
が避けられる。一方、外来遺伝子が活性クロマチンＤＮ
Ａ上に導入された場合は、該外来遺伝子を挟むように位
置している両側のインスレーターにより、強力なエンハ
ンサーの支配を遮断することができるので、外来遺伝子
の過剰発現や、異常な時期特異的、組織特異的な遺伝子
の発現が回避できるようになる。
が不活性クロマチンＤＮＡ上に導入された場合は、該外
来遺伝子を挟むように位置している両側のインスレータ
ーにより、不活性クロマチンＤＮＡからの影響を遮断す
ることができ、導入後の外来遺伝子が不活性になること
が避けられる。一方、外来遺伝子が活性クロマチンＤＮ
Ａ上に導入された場合は、該外来遺伝子を挟むように位
置している両側のインスレーターにより、強力なエンハ
ンサーの支配を遮断することができるので、外来遺伝子
の過剰発現や、異常な時期特異的、組織特異的な遺伝子
の発現が回避できるようになる。
【００１７】このように隣接遺伝子からの干渉を遮断す
ることで、導入された遺伝子は染色体上の挿入位置に依
存せず、導入後の外来遺伝子が培養細胞または受精卵内
の染色体ＤＮＡ上で安定的に正常発現することが保証さ
れるようになり、トランスジェニック生物作成の効率化
に寄与できる。
ることで、導入された遺伝子は染色体上の挿入位置に依
存せず、導入後の外来遺伝子が培養細胞または受精卵内
の染色体ＤＮＡ上で安定的に正常発現することが保証さ
れるようになり、トランスジェニック生物作成の効率化
に寄与できる。
【００１８】
【実施例】以下、実施例により本発明をさらに詳しく説
明する。なお、以下の実施例では、バフンウニ・アリー
ルスルファターゼ（Ａｒｓ）遺伝子の上流−２６８６ｂ
ｐ〜−２１１５ｂｐに存在するインスレーター・フラグ
メントを用いる。すなわち、導入される外来遺伝子を挟
むように上記インスレーター・フラグメントをプラスミ
ド上に配置することで、受精卵に導入された外来遺伝子
が周囲の隣接遺伝子からの影響を受けなくて済むという
原理を利用している。なお、実際の遺伝子導入操作で
は、導入される外来遺伝子（ＤＮＡ）とインスレーター
・フラグメントとを同じ制限酵素末端を持つように直鎖
化し、混ぜて受精卵に導入するだけて、インスレーター
の機能が充分に発揮できるようになっている。
明する。なお、以下の実施例では、バフンウニ・アリー
ルスルファターゼ（Ａｒｓ）遺伝子の上流−２６８６ｂ
ｐ〜−２１１５ｂｐに存在するインスレーター・フラグ
メントを用いる。すなわち、導入される外来遺伝子を挟
むように上記インスレーター・フラグメントをプラスミ
ド上に配置することで、受精卵に導入された外来遺伝子
が周囲の隣接遺伝子からの影響を受けなくて済むという
原理を利用している。なお、実際の遺伝子導入操作で
は、導入される外来遺伝子（ＤＮＡ）とインスレーター
・フラグメントとを同じ制限酵素末端を持つように直鎖
化し、混ぜて受精卵に導入するだけて、インスレーター
の機能が充分に発揮できるようになっている。
【００１９】受精卵の作成 日本近海で取れたバフンウニの卵を海水中で受精させ、
そして受精卵を２回にわたって海水で洗った。その後、
受精卵の胚体積０．１５ｍｌを取り、シャーレの中に敷
いた濾紙上に均一になるように散布した。このようにし
て、受精後のウニ卵は、濾紙の繊維に挟まれて固定され
た。
そして受精卵を２回にわたって海水で洗った。その後、
受精卵の胚体積０．１５ｍｌを取り、シャーレの中に敷
いた濾紙上に均一になるように散布した。このようにし
て、受精後のウニ卵は、濾紙の繊維に挟まれて固定され
た。
【００２０】遺伝子（ＤＮＡ）を沈着した金粒子の作成 上記の受精卵に導入される遺伝子（ＤＮＡ）に対し、制
限酵素を用いることで、ある制限酵素末端を持つように
直鎖化し、そして、重量比で８倍量の同じ制限酵素で完
全消化したバフンウニ染色体ＤＮＡと、同じ制限酵素末
端を持つように直鎖化したインスレーター・フラグメン
トと混合させて、１ｍｌあたり０．５ｍｇのＤＮＡを含
む溶液を調製した。そして、２．５ｍｇの乾燥金粒子
（直径約１μｍ、１００％のエタノール中で音波洗浄し
たもの）を上記のＤＮＡ溶液２０μｌに懸濁し、１２μ
ｌのＰＥＧ溶液（ポリエチレングリコールを２０重量％
の濃度になるように２．５ＭＮａＣｌに溶かし、オート
クレーブで滅菌処理したもの）を添加して２０分間氷冷
した。これによって、ＤＮＡが金粒子に沈着した。その
後、軽く遠心分離して上清を取り除いてから、遺伝子
（ＤＮＡ）を沈着させた金粒子を得た。このように遺伝
子（ＤＮＡ）を沈着した金粒子は、ボルテックスミキサ
ーを用いて６２．５μｌの１００％エタノールに懸濁す
ることで更に処理された。
限酵素を用いることで、ある制限酵素末端を持つように
直鎖化し、そして、重量比で８倍量の同じ制限酵素で完
全消化したバフンウニ染色体ＤＮＡと、同じ制限酵素末
端を持つように直鎖化したインスレーター・フラグメン
トと混合させて、１ｍｌあたり０．５ｍｇのＤＮＡを含
む溶液を調製した。そして、２．５ｍｇの乾燥金粒子
（直径約１μｍ、１００％のエタノール中で音波洗浄し
たもの）を上記のＤＮＡ溶液２０μｌに懸濁し、１２μ
ｌのＰＥＧ溶液（ポリエチレングリコールを２０重量％
の濃度になるように２．５ＭＮａＣｌに溶かし、オート
クレーブで滅菌処理したもの）を添加して２０分間氷冷
した。これによって、ＤＮＡが金粒子に沈着した。その
後、軽く遠心分離して上清を取り除いてから、遺伝子
（ＤＮＡ）を沈着させた金粒子を得た。このように遺伝
子（ＤＮＡ）を沈着した金粒子は、ボルテックスミキサ
ーを用いて６２．５μｌの１００％エタノールに懸濁す
ることで更に処理された。
【００２１】受精卵への遺伝子導入 ＤＮＡを沈着した金粒子０．８ｍｇをプロジェクタイル
に載せてパーティクルガンにセットし、０．１気圧程度
の減圧下で初速度３５０ｍ／ｓで発射し、濾紙上に固定
した受精卵に撃ち込んだ。
に載せてパーティクルガンにセットし、０．１気圧程度
の減圧下で初速度３５０ｍ／ｓで発射し、濾紙上に固定
した受精卵に撃ち込んだ。
【００２２】導入後の外来遺伝子の正常発現性に対する
評価 上記インスレーター・フラグメントを用いることによっ
て、受精卵に導入された外来遺伝子が周囲の隣接遺伝子
からの影響を受けなくて済むということが、クロラムフ
ェニコールアセチル基遺伝酵素（chloramphenicolacety
ltransferase,以下CATと称す）および発光生物（例えば
ホタル）由来のルシフェラーゼ（luciferase,以下lucと
称す）という２種類のレポーター遺伝子（reportergen
e）を使用することによって確認されている。
評価 上記インスレーター・フラグメントを用いることによっ
て、受精卵に導入された外来遺伝子が周囲の隣接遺伝子
からの影響を受けなくて済むということが、クロラムフ
ェニコールアセチル基遺伝酵素（chloramphenicolacety
ltransferase,以下CATと称す）および発光生物（例えば
ホタル）由来のルシフェラーゼ（luciferase,以下lucと
称す）という２種類のレポーター遺伝子（reportergen
e）を使用することによって確認されている。
【００２３】ここでCATとlucは、テスト用の遺伝子とし
て用いられており、それぞれウニのヒストンＨ1遺伝
子、アリールスルファターゼ遺伝子のプロモーターの下
流側に連結され、その融合遺伝子の産物の活性を測定す
ることにより、導入された外来遺伝子が正常に発現して
いることを確認できた。
て用いられており、それぞれウニのヒストンＨ1遺伝
子、アリールスルファターゼ遺伝子のプロモーターの下
流側に連結され、その融合遺伝子の産物の活性を測定す
ることにより、導入された外来遺伝子が正常に発現して
いることを確認できた。
【００２４】
【発明の効果】上記した本発明の方法によれば、インス
レーターで挟まれた外来遺伝子は、培養細胞または受精
卵内に導入された後、周囲遺伝子の影響を受けないた
め、導入された遺伝子は染色体上の挿入位置に依存せ
ず、安定的な発現が保証される。従って、本発明の方法
は、トランスジェニック生物作成の効率化に寄与でき
る。
レーターで挟まれた外来遺伝子は、培養細胞または受精
卵内に導入された後、周囲遺伝子の影響を受けないた
め、導入された遺伝子は染色体上の挿入位置に依存せ
ず、安定的な発現が保証される。従って、本発明の方法
は、トランスジェニック生物作成の効率化に寄与でき
る。
【００２５】トランスジェニック生物作成の効率化によ
り、基礎研究では種々の遺伝子の機能解析、細胞分化の
分子的メカニズム、発ガン機構の遺伝子レベルでの研究
が促進されると共に、応用研究では遺伝子治療、遺伝子
導入による品種改良が促進される。
り、基礎研究では種々の遺伝子の機能解析、細胞分化の
分子的メカニズム、発ガン機構の遺伝子レベルでの研究
が促進されると共に、応用研究では遺伝子治療、遺伝子
導入による品種改良が促進される。
【図１】本発明方法におけるメカニズムを説明する原理
図である。
図である。
【図２】従来方法におけるメカニズムを説明する原理図
である。
である。
フロントページの続き (56)参考文献 第69回日本生化学会大会・第19回日本 分子生物学会年会・合同年会講演要旨集 （1996．Ｊｕｌ．25）ｐ．293 (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) C12N 15/85 C12N 5/10 A01K 67/027 ＢＩＯＳＩＳ（ＤＩＡＬＯＧ) ＷＰＩ（ＤＩＡＬＯＧ)
Claims (2)
- 【請求項１】 培養細胞または受精卵に外来遺伝子を導
入する際に、導入後の外来遺伝子が周囲の遺伝子からの
干渉を受けないように、導入しようとする外来遺伝子
を、インスレーターで挟み独立した環境を確保した状態
で染色体ＤＮＡに導入し、上記インスレーターとして、
ウニ・アリールスルファターゼ（Ａｒｓ）遺伝子の上流
−２６８６ｂｐ〜−２１１５ｂｐに存在するインスレー
ター・フラグメントを用い、該インスレーター・フラグ
メントとして、アリールスルファターゼ遺伝子のエンハ
ンサーとプロモーターとの間に挿入されるとアリールス
ルファターゼ遺伝子のエンハンサーの活性を完全に遮断
できるものを用いる外来遺伝子の導入方法において、 上記インスレーター・フラグメントは、導入しようとす
る外来遺伝子を挟むようにプラスミドに配置され、導入
される外来遺伝子（ＤＮＡ）とインスレーター・フラグ
メントとを同じ制限酵素末端を持つように直鎖化し、混
ぜて受精卵に導入し、 導入操作を行う際、受精卵に導入される外来遺伝子（Ｄ
ＮＡ）に対し、制限酵素を用いることで制限酵素末端を
持つように直鎖化し、そして、重量比で８倍量の同じ制
限酵素で完全消化したバフンウニ染色体ＤＮＡと、同じ
制限酵素末端を持つように直鎖化したインスレーター・
フラグメントと混合させることを特徴とする外来遺伝子
の導入方法。 - 【請求項２】 外来遺伝子が不活性クロマチンＤＮＡ上
に導入された場合は、該外来遺伝子を挟むように位置し
ている両側のインスレーターにより、不活性クロマチン
ＤＮＡからの影響を遮断することで、導入後の外来遺伝
子が不活性になることを回避し、一方、外来遺伝子が活
性クロマチンＤＮＡ上に導入された場合は、該外来遺伝
子を挟むように位置している両側のインスレーターによ
り、強力なエンハンサーの支配を遮断することで、外来
遺伝子の過剰発現や、異常な時期特異的、組織特異的な
遺伝子の発現を回避することを特徴とする請求項１記載
の外来遺伝子の導入方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP11316583A JP3116091B2 (ja) | 1999-11-08 | 1999-11-08 | 培養細胞または受精卵に外来遺伝子を導入する方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP11316583A JP3116091B2 (ja) | 1999-11-08 | 1999-11-08 | 培養細胞または受精卵に外来遺伝子を導入する方法 |
Related Parent Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP00655097A Division JP3240370B2 (ja) | 1997-01-17 | 1997-01-17 | 培養細胞または受精卵に外来遺伝子を導入する方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2000116378A JP2000116378A (ja) | 2000-04-25 |
| JP3116091B2 true JP3116091B2 (ja) | 2000-12-11 |
Family
ID=18078711
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP11316583A Expired - Lifetime JP3116091B2 (ja) | 1999-11-08 | 1999-11-08 | 培養細胞または受精卵に外来遺伝子を導入する方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3116091B2 (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7747702B2 (en) | 1998-09-22 | 2010-06-29 | Avocent Huntsville Corporation | System and method for accessing and operating personal computers remotely |
| US7818367B2 (en) | 1995-08-25 | 2010-10-19 | Avocent Redmond Corp. | Computer interconnection system |
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-
1999
- 1999-11-08 JP JP11316583A patent/JP3116091B2/ja not_active Expired - Lifetime
Non-Patent Citations (1)
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| 第６９回日本生化学会大会・第１９回日本分子生物学会年会・合同年会講演要旨集（１９９６．Ｊｕｌ．２５）ｐ．２９３ |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7818367B2 (en) | 1995-08-25 | 2010-10-19 | Avocent Redmond Corp. | Computer interconnection system |
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