JP3052487B2 - オリゴヌクレオチドプローブとそれを用いた細菌の検出方法 - Google Patents
オリゴヌクレオチドプローブとそれを用いた細菌の検出方法Info
- Publication number
- JP3052487B2 JP3052487B2 JP26574891A JP26574891A JP3052487B2 JP 3052487 B2 JP3052487 B2 JP 3052487B2 JP 26574891 A JP26574891 A JP 26574891A JP 26574891 A JP26574891 A JP 26574891A JP 3052487 B2 JP3052487 B2 JP 3052487B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- paracoccus
- cocci
- rrna
- sequence
- methods
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明はパラコッカス属に属し、
水酸化テトラメチルアンモニウム分解能を有するパラコ
ッカス・コクリを検出する方法に関するものである。
水酸化テトラメチルアンモニウム分解能を有するパラコ
ッカス・コクリを検出する方法に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】一般に自然界（土壌、河川等）から目的
の微生物を単離するためには特別な培地による選択培養
を行なうことが多い。この方法は簡便であるため広く用
いられているが、微生物の種類によっては培養が不可能
であったり困難な場合がある。このような場合には放射
性同位元素または蛍光色素でラベルした抗体を用いる方
法が知られているが、この方法は抗体を得るのに手間が
かかるという難点があった。
の微生物を単離するためには特別な培地による選択培養
を行なうことが多い。この方法は簡便であるため広く用
いられているが、微生物の種類によっては培養が不可能
であったり困難な場合がある。このような場合には放射
性同位元素または蛍光色素でラベルした抗体を用いる方
法が知られているが、この方法は抗体を得るのに手間が
かかるという難点があった。
【０００３】この方法に代わるものとして、生物種に特
異的な核酸の塩基配列を、それに相補的な配列を持つオ
リゴヌクレオチドをプローブにして検出する方法が発表
されている。特に生物に普遍的に存在するリボゾームの
構成要素である１６ＳｒＲＮＡの塩基配列を検出するプ
ローブは特異性が高く、また高次な分類にも使用可能な
ものとして期待されている。
異的な核酸の塩基配列を、それに相補的な配列を持つオ
リゴヌクレオチドをプローブにして検出する方法が発表
されている。特に生物に普遍的に存在するリボゾームの
構成要素である１６ＳｒＲＮＡの塩基配列を検出するプ
ローブは特異性が高く、また高次な分類にも使用可能な
ものとして期待されている。
【０００４】レーンらによると（プロシーディング・ナ
ショナル・アカデミーオブサイエンス・ユーエスーエー
（Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ａｃａｄ
ｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅ ＵＳＡ）、８２巻、６
９５５−６９５９頁 １９８５年）１６ＳｒＲＮＡには
原核生物全体に保存されている領域と種あるいは属に特
異的な領域とがあり、保存されている領域を使って特異
的な領域の配列を決定することが可能である。
ショナル・アカデミーオブサイエンス・ユーエスーエー
（Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ａｃａｄ
ｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅ ＵＳＡ）、８２巻、６
９５５−６９５９頁 １９８５年）１６ＳｒＲＮＡには
原核生物全体に保存されている領域と種あるいは属に特
異的な領域とがあり、保存されている領域を使って特異
的な領域の配列を決定することが可能である。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】特定の微生物を利用し
て廃水処理を行なう場合、処理条件や生育条件を最適に
するために、その微生物の活性汚泥中での優占度や生育
状況を知る必要がある。そのためには微生物を特異的に
検出し、計数しなければならないが、いままでパラコッ
カス・コクリを検出、計数するためには水酸化テトラメ
チルアンモニウムを唯一の炭素源とする選択培地による
培養を行なわなければならなかった。
て廃水処理を行なう場合、処理条件や生育条件を最適に
するために、その微生物の活性汚泥中での優占度や生育
状況を知る必要がある。そのためには微生物を特異的に
検出し、計数しなければならないが、いままでパラコッ
カス・コクリを検出、計数するためには水酸化テトラメ
チルアンモニウムを唯一の炭素源とする選択培地による
培養を行なわなければならなかった。
【０００６】以下に従来の一例を述べると、パラコッカ
ス・コクリを検出、計数するためには細菌懸濁液をＴＭ
ＡＣｌ培地（１ｇテトラメチルアンモニウム，２０ｍｇ
塩酸チアミン，１ｇ硫酸アンモニウム，２０ミリリット
ルＨｕｔｎｅｒの無機塩溶液，４０ミリリットルＮａ2
ＨＰＯ4 ＋ＫＨ2 ＰＯ4 緩衡液，１５ｇ寒天／１０００
ミリリットル）上で５〜７日間３０℃で培養し、出現し
たコロニーをカウントしなければならなかった。これに
は検出、計数にほぼ一週間を必要とし、活性汚泥中での
挙動をリアルタイムでモニタリングするということはで
きなかった。
ス・コクリを検出、計数するためには細菌懸濁液をＴＭ
ＡＣｌ培地（１ｇテトラメチルアンモニウム，２０ｍｇ
塩酸チアミン，１ｇ硫酸アンモニウム，２０ミリリット
ルＨｕｔｎｅｒの無機塩溶液，４０ミリリットルＮａ2
ＨＰＯ4 ＋ＫＨ2 ＰＯ4 緩衡液，１５ｇ寒天／１０００
ミリリットル）上で５〜７日間３０℃で培養し、出現し
たコロニーをカウントしなければならなかった。これに
は検出、計数にほぼ一週間を必要とし、活性汚泥中での
挙動をリアルタイムでモニタリングするということはで
きなかった。
【０００７】本発明の目的は迅速にかつ特異的にパラコ
ッカス・コクリを検出、計数する方法を提供することに
ある。
ッカス・コクリを検出、計数する方法を提供することに
ある。
【０００８】
【課題を解決するための手段】本発明は、（１）パラコ
ッカス属に属する細菌の１６ＳｒＲＮＡの可変領域に相
補的な配列をもつデオキシリボヌクレオチドまたはリボ
ヌクレオチドにおいて、塩基配列５’ＡＡＣＣＣＴＣＴ
ＧＴＣＡＣＣＡＣＣＡＴ３’を含むオリゴヌクレオチド
プローブと、（２）パラコッカス属に属する細菌の１６
ＳｒＲＮＡの可変領域に相補的な配列をもつデオキシリ
ボヌクレオチドまたはリボヌクレオチドに、蛍光色素を
付加することにより得られたプローブを用いて、パラコ
ッカス属に属する細菌を特異的に検出することを特徴と
する方法とである。
ッカス属に属する細菌の１６ＳｒＲＮＡの可変領域に相
補的な配列をもつデオキシリボヌクレオチドまたはリボ
ヌクレオチドにおいて、塩基配列５’ＡＡＣＣＣＴＣＴ
ＧＴＣＡＣＣＡＣＣＡＴ３’を含むオリゴヌクレオチド
プローブと、（２）パラコッカス属に属する細菌の１６
ＳｒＲＮＡの可変領域に相補的な配列をもつデオキシリ
ボヌクレオチドまたはリボヌクレオチドに、蛍光色素を
付加することにより得られたプローブを用いて、パラコ
ッカス属に属する細菌を特異的に検出することを特徴と
する方法とである。
【０００９】
【作用】本発明はパラコッカス・コクリ１６ＳｒＲＮＡ
の部分塩基配列を１３９２−１４０５（大腸菌１６Ｓｒ
ＲＮＡのナンバーリング）の保存領域をプライマーとし
て逆転写酵素を使ったジデオキシ法によって決定し、他
の細菌の１６ＳｒＲＮＡ配列と比較することで可変領域
を探索することにより得た。図１に決定されたパラコッ
カス・コクリ１６ＳｒＲＮＡの部分塩基配列と本発明の
オリゴヌクレオチドプローブが結合する部分を示す。図
２のＡ、Ｂにそれぞれ本発明に関わるパラコッカス・コ
クリと比較のためエッシェリシア・コリの１６ＳｒＲＮ
Ａの部分塩基配列を示す。図２Ａの塩基の下の＊は、エ
ッシェリシア・コリと同じ塩基であることを示し、図２
Ｂの塩基の下の数字は５’末端からの塩基数を示す。図
２Ａ、Ｂの比較からまた他の細菌との１６ＳｒＲＮＡ配
列の比較からも本発明の結合部分はパラコッカス・コク
リに特異的であることが確かめられた。
の部分塩基配列を１３９２−１４０５（大腸菌１６Ｓｒ
ＲＮＡのナンバーリング）の保存領域をプライマーとし
て逆転写酵素を使ったジデオキシ法によって決定し、他
の細菌の１６ＳｒＲＮＡ配列と比較することで可変領域
を探索することにより得た。図１に決定されたパラコッ
カス・コクリ１６ＳｒＲＮＡの部分塩基配列と本発明の
オリゴヌクレオチドプローブが結合する部分を示す。図
２のＡ、Ｂにそれぞれ本発明に関わるパラコッカス・コ
クリと比較のためエッシェリシア・コリの１６ＳｒＲＮ
Ａの部分塩基配列を示す。図２Ａの塩基の下の＊は、エ
ッシェリシア・コリと同じ塩基であることを示し、図２
Ｂの塩基の下の数字は５’末端からの塩基数を示す。図
２Ａ、Ｂの比較からまた他の細菌との１６ＳｒＲＮＡ配
列の比較からも本発明の結合部分はパラコッカス・コク
リに特異的であることが確かめられた。
【００１０】
【実施例】（実施例１） パラコッカス・コクリ（Ｐａｒａｃｏｃｃｕｓ ｋｏｃ
ｕｒｉｉ）ＪＣＭ７６８４（インターナショナル・ジャ
ーナル・オブ・システマティック・バクテリオロジー
（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ
Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ）
４０巻２９２−２９６頁１９９０年）とエッシェリシア
・コリ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）ＡＴＣＣ
２４９７７を菌数が約１×１０7 個／ミリリットルにな
るようにリン酸緩衝液（１４５ｍＭＮａＣｌ，１００ｍ
Ｍ Ｓｏｄｉｕｍｐｈｏｓｐｈａｔｅ，ｐＨ７．５）で
希釈する。１／１０ボリュームの３７％ホルムアルデヒ
ドを加えて菌体を固定し、０．１％ゼラチン，０．０１
％クロムミョウバンでコートしたスライドグラスに３０
マイクロリットル滴下し風乾する。スライドグラスを９
０％メタノール，３．７ホルムアルデヒドに室温で１０
分間侵して菌体を際固定した後、純水で洗浄する。
ｕｒｉｉ）ＪＣＭ７６８４（インターナショナル・ジャ
ーナル・オブ・システマティック・バクテリオロジー
（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ
Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ）
４０巻２９２−２９６頁１９９０年）とエッシェリシア
・コリ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）ＡＴＣＣ
２４９７７を菌数が約１×１０7 個／ミリリットルにな
るようにリン酸緩衝液（１４５ｍＭＮａＣｌ，１００ｍ
Ｍ Ｓｏｄｉｕｍｐｈｏｓｐｈａｔｅ，ｐＨ７．５）で
希釈する。１／１０ボリュームの３７％ホルムアルデヒ
ドを加えて菌体を固定し、０．１％ゼラチン，０．０１
％クロムミョウバンでコートしたスライドグラスに３０
マイクロリットル滴下し風乾する。スライドグラスを９
０％メタノール，３．７ホルムアルデヒドに室温で１０
分間侵して菌体を際固定した後、純水で洗浄する。
【００１１】次にスライドグラスをトリス緩衝液（１０
０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ，ｐＨ８．０，５０ｍＭ Ｓ
ｏｄｉｕｍ ｂｏｒｏｈｙｄｒｉｄｅ）に室温、遮光し
た状態で３０分間侵す。スライドグラスを純水で洗浄後
風乾する。５’ＡＡＣＣＣＴＣＴＧＴＣＡＣＣＡＣＣＡ
Ｔ３’の配列を持つオリゴヌクレオチドの５’末端から
２番目と３番目の塩基（ＡとＣ）の間のリン酸基にフル
オレセインイソチオシアネート（Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉ
ｎ ｉｓｏｔｈｉｏｃｙａｎａｔｅ）を付加した蛍光標
識プローブを１．７ｎｇ／マイクロリットルになるよう
に、ハイブリダゼイション緩衝液（７５０ｍＭ ＮａＣ
ｌ，１００ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ ｐＨ７．８，５ｍ
Ｍ ＥＤＴＡ，０．２％ ｂｏｖｉｎｅ ｓｅｒｕｍａ
ｌｂｕｍｉｎ，１０％ ｄｅｘｔｒａｎ ｓｕｌｆａｔ
ｅ，０．０１％ ｐｏｌｙａｄｅｎｙｌｉｃ ａｃｉ
ｄ）で希釈し、３０マイクロリットルをスライドグラス
に滴下する。スライドグラスを気密性の容器にいれ、遮
光した状態にして３７℃で５時間以上反応させる。
０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ，ｐＨ８．０，５０ｍＭ Ｓ
ｏｄｉｕｍ ｂｏｒｏｈｙｄｒｉｄｅ）に室温、遮光し
た状態で３０分間侵す。スライドグラスを純水で洗浄後
風乾する。５’ＡＡＣＣＣＴＣＴＧＴＣＡＣＣＡＣＣＡ
Ｔ３’の配列を持つオリゴヌクレオチドの５’末端から
２番目と３番目の塩基（ＡとＣ）の間のリン酸基にフル
オレセインイソチオシアネート（Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉ
ｎ ｉｓｏｔｈｉｏｃｙａｎａｔｅ）を付加した蛍光標
識プローブを１．７ｎｇ／マイクロリットルになるよう
に、ハイブリダゼイション緩衝液（７５０ｍＭ ＮａＣ
ｌ，１００ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ ｐＨ７．８，５ｍ
Ｍ ＥＤＴＡ，０．２％ ｂｏｖｉｎｅ ｓｅｒｕｍａ
ｌｂｕｍｉｎ，１０％ ｄｅｘｔｒａｎ ｓｕｌｆａｔ
ｅ，０．０１％ ｐｏｌｙａｄｅｎｙｌｉｃ ａｃｉ
ｄ）で希釈し、３０マイクロリットルをスライドグラス
に滴下する。スライドグラスを気密性の容器にいれ、遮
光した状態にして３７℃で５時間以上反応させる。
【００１２】反応後、ＳＥＴ緩衝液（３０ｍＭ ＮａＣ
ｌ，４ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ ｐＨ７．８，０．２ｍ
Ｍ ＥＤＴＡ）でスライドグラスを洗浄する。暗所で風
乾後、落射型蛍光顕微鏡で検鏡する。励起光源には水銀
ランプを使用し、フィルター（ＺＥＩＳＳ ４８７９０
９）で励起光を調整する。検鏡の結果パラコッカス・コ
クリは蛍光が認められたが、エッシェリシア・コリでは
認められなかった。またバックグラウンドの蛍光はほと
んど観測されなかった。
ｌ，４ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ ｐＨ７．８，０．２ｍ
Ｍ ＥＤＴＡ）でスライドグラスを洗浄する。暗所で風
乾後、落射型蛍光顕微鏡で検鏡する。励起光源には水銀
ランプを使用し、フィルター（ＺＥＩＳＳ ４８７９０
９）で励起光を調整する。検鏡の結果パラコッカス・コ
クリは蛍光が認められたが、エッシェリシア・コリでは
認められなかった。またバックグラウンドの蛍光はほと
んど観測されなかった。
【００１３】（実施例２）パラコッカス・コクリとバシ
ラス・サブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉ
ｓ）ＩＦＯ１３７１９について上記の実施例と同様の操
作を行なった結果パラコッカス・コクリにのみ蛍光が観
測された。
ラス・サブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉ
ｓ）ＩＦＯ１３７１９について上記の実施例と同様の操
作を行なった結果パラコッカス・コクリにのみ蛍光が観
測された。
【００１４】
【発明の効果】本発明の方法では従来と比較し、短期間
で迅速にかつ特異的にパラコッカス・コクリを検出、計
数することができる。
で迅速にかつ特異的にパラコッカス・コクリを検出、計
数することができる。
【図１】パラコッカス・コクリの１６ＳｒＲＮＡの部分
塩基配列とそれに結合したオリゴヌクレオチドプローブ
を示した図である。
塩基配列とそれに結合したオリゴヌクレオチドプローブ
を示した図である。
【図２】パラコッカス・コクリとエッシェリシア・コリ
との１６ＳｒＲＮＡの部分塩基配列を比較した図であ
る。（Ａ）は本発明に関わるパラコッカス・コクリの１
６ＳｒＲＮＡの部分塩基配列で、（Ｂ）は比較のための
エッシェリシア・コリの１６ＳｒＲＮＡの部分塩基配列
を示す
との１６ＳｒＲＮＡの部分塩基配列を比較した図であ
る。（Ａ）は本発明に関わるパラコッカス・コクリの１
６ＳｒＲＮＡの部分塩基配列で、（Ｂ）は比較のための
エッシェリシア・コリの１６ＳｒＲＮＡの部分塩基配列
を示す
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ Ｃ１２Ｒ 1:01） (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) C12Q 1/68 C12N 15/09 G01N 33/53 G01N 33/566 ＢＩＯＳＩＳ（ＤＩＡＬＯＧ) ＣＡ（ＳＴＮ) ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ) ＷＰＩ（ＤＩＡＬＯＧ)
Claims (2)
- 【請求項１】 パラコッカス属に属する細菌であるパラ
コッカス・コクリの１６ＳｒＲＮＡの可変領域に相補的
な配列をもつデオキシリボヌクレオチドまたはリボヌク
レオチドにおいて、塩基配列５’ＡＡＣＣＣＴＣＴＧＴ
ＣＡＣＣＡＣＣＡＴ３’からなることを特徴とするオリ
ゴヌクレオチドプローブ。 - 【請求項２】 パラコッカス属に属する細菌であるパラ
コッカス・コクリの１６ＳｒＲＮＡの可変領域に相補的
な配列をもつデオキシリボヌクレオチドまたはリボヌク
レオチドの塩基配列５’ＡＡＣＣＣＴＣＴＧＴＣＡＣＣ
ＡＣＣＡＴ３’に、蛍光色素を付加することにより得ら
れたオリゴヌクレオチドプローブを用いて、前記パラコ
ッカス属に属する細菌であるパラコッカス・コクリを特
異的に検出することを特徴とするオリゴヌクレオチドプ
ローブを用いた細菌の検出方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP26574891A JP3052487B2 (ja) | 1991-10-15 | 1991-10-15 | オリゴヌクレオチドプローブとそれを用いた細菌の検出方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP26574891A JP3052487B2 (ja) | 1991-10-15 | 1991-10-15 | オリゴヌクレオチドプローブとそれを用いた細菌の検出方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH05103700A JPH05103700A (ja) | 1993-04-27 |
| JP3052487B2 true JP3052487B2 (ja) | 2000-06-12 |
Family
ID=17421458
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP26574891A Expired - Lifetime JP3052487B2 (ja) | 1991-10-15 | 1991-10-15 | オリゴヌクレオチドプローブとそれを用いた細菌の検出方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3052487B2 (ja) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6326486B1 (en) | 1999-05-03 | 2001-12-04 | Gen-Probe Incorporated | Polynucleotide probes for detection and quantitation of bacteria in the family enterobacteriaceae |
| US6821770B1 (en) | 1999-05-03 | 2004-11-23 | Gen-Probe Incorporated | Polynucleotide matrix-based method of identifying microorganisms |
-
1991
- 1991-10-15 JP JP26574891A patent/JP3052487B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH05103700A (ja) | 1993-04-27 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US5124444A (en) | Lactam-containing compositions and methods useful for the extraction of nucleic acids | |
| Hodson et al. | In situ PCR for visualization of microscale distribution of specific genes and gene products in prokaryotic communities | |
| JP2976406B2 (ja) | 核酸プローブ | |
| AU651077B2 (en) | Process for detection of water-borne microbial pathogens and indicators of human fecal contamination in water samples and kits therefor | |
| US5955262A (en) | Method of detecting and characterizing a nucleic acid or reactant for the application of this method | |
| Maiwald et al. | Characterization of contaminating DNA in Taq polymerase which occurs during amplification with a primer set for Legionella 5S ribosomal RNA | |
| US5376529A (en) | Lactam-containing compositions and methods useful for the hybridization of nucleic acids | |
| US5004682A (en) | Method and kit for detecting live microorganisms in chlorine- or bromine-treated water | |
| CN112111494B (zh) | 识别铜绿假单胞菌的DNAzymes及筛选检测方法与用途 | |
| US5563034A (en) | Negative control probes that are identical in sequence but opposite in polarity to the target, or are complementary in sequence and of the same polarity as the target, for use in nucleic acid hybridization assays | |
| CN101942511A (zh) | 原位荧光环介导恒温核酸扩增技术检测结核分枝杆菌的方法及试剂盒 | |
| US6413747B1 (en) | Enhancement of nucleic acid amplification by the addition of a polyamine | |
| Feray et al. | Assessment of three methods for detection and quantification of nitrite-oxidizing bacteria and Nitrobacter in freshwater sediments (MPN-PCR, MPN-Griess, immunofluorescence) | |
| JP3052487B2 (ja) | オリゴヌクレオチドプローブとそれを用いた細菌の検出方法 | |
| Heidelberg et al. | Enumeration of Vibrio vulnificus on membrane filters with a fluorescently labeled oligonucleotide probe specific for kingdom-level 16S rRNA sequences | |
| Favre et al. | Transfer RNA: From photophysics to photobiology | |
| CA2981193A1 (en) | Pcr amplification methods for detecting and quantifying sulfate-reducing bacteria in oilfield fluids | |
| CA1276864C (en) | Method for the monitoring and control of microbial populations | |
| CN114457083A (zh) | 一组特异识别孔雀石绿的单链dna核酸适配体及其应用 | |
| AU755250B2 (en) | Methods for the rapid detection of viable bacteria | |
| Hoshino et al. | In situ PCR for visualizing distribution of a functional gene “amoA” in a biofilm regardless of activity | |
| JP3450367B2 (ja) | Ｄｎａの抽出方法 | |
| JP3814909B2 (ja) | レジオネラ属に属する細菌検出用オリゴヌクレオチドプローブおよびレジオネラ属に属する細菌の検出方法 | |
| JP2000342261A (ja) | ブルクホルデリア・セパシアの検出法及び検出用キット | |
| JPH0870896A (ja) | 新規核酸断片およびこれらを用いたＣｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｐ． Ｊ１株の検出法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20000307 |