JP3003989B2 - 豚流行性下痢ウイルス（ｐｅｄｖ）感受性細胞の作出法 - Google Patents
豚流行性下痢ウイルス（ｐｅｄｖ）感受性細胞の作出法Info
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Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は豚流行性下痢ウイル
ス（以下「ＰＥＤＶ」と略称する）を産生するトリプシ
ン耐性豚細胞の作出方法、ＰＥＤＶの増殖単離方法およ
びその診断法に関する。
ス（以下「ＰＥＤＶ」と略称する）を産生するトリプシ
ン耐性豚細胞の作出方法、ＰＥＤＶの増殖単離方法およ
びその診断法に関する。
【０００２】
【従来の技術および発明が解決しようとする課題】豚流
行性下痢（ＰＥＤ）は、１９７１年に英国で豚の急性下
痢症が発生し、その原因はそれまで知られていた下痢の
起因微生物ではなく、新しく発見されたコロナウイルス
によることが明らかにされ、ＰＥＤＶと名づけられた。
ＰＥＤは今や世界的に発生が見られ、わが国においても
１９８２年に初発生があり、１９９４年以後全国的に発
生を見ている。ＰＥＤＶは全ての年令の豚に感染し、感
染豚は嘔吐、発熱、水様性の下痢（または軟便）、食欲
不信等の症状を呈する。哺乳豚が感染すると１０〜１０
０％の死亡率となり、母豚では泌乳の減少や停止などを
起こし、さらには死流産を起こすこともある。本病によ
る経済的損失は、流産や死産、哺乳豚の死亡、下痢によ
る発育低下、飼料効率の低下、薬剤費や労賃の増加など
により甚大な金額となる。ＰＥＤＶはＶｅｒｏ細胞にト
リプシンを低濃度添加して培養することにより増殖する
ことが報告されているが、下痢便からウイルスを分離す
るには、下痢便を細胞に接種して、数回継代培養するこ
とが必要で短期間に診断することが困難であった。さら
にＰＥＤＶが関与する下痢の内、数少ない症例でＰＥＤ
Ｖが分離ささるに過ぎない。また、ＰＥＤＶの培養には
培養液にトリプシンを添加しなければならない。トリプ
シンの作用により健康な細胞は障害を受けるのでウイル
スを大量に得ることが難しい。このようなことから、本
ウイルスに関する研究ならびに本病の診断、予防法など
の研究のために、本ウイルスに感受性があり、トリプシ
ンに耐性を示す継代細胞の樹立が強く望まれている。
行性下痢（ＰＥＤ）は、１９７１年に英国で豚の急性下
痢症が発生し、その原因はそれまで知られていた下痢の
起因微生物ではなく、新しく発見されたコロナウイルス
によることが明らかにされ、ＰＥＤＶと名づけられた。
ＰＥＤは今や世界的に発生が見られ、わが国においても
１９８２年に初発生があり、１９９４年以後全国的に発
生を見ている。ＰＥＤＶは全ての年令の豚に感染し、感
染豚は嘔吐、発熱、水様性の下痢（または軟便）、食欲
不信等の症状を呈する。哺乳豚が感染すると１０〜１０
０％の死亡率となり、母豚では泌乳の減少や停止などを
起こし、さらには死流産を起こすこともある。本病によ
る経済的損失は、流産や死産、哺乳豚の死亡、下痢によ
る発育低下、飼料効率の低下、薬剤費や労賃の増加など
により甚大な金額となる。ＰＥＤＶはＶｅｒｏ細胞にト
リプシンを低濃度添加して培養することにより増殖する
ことが報告されているが、下痢便からウイルスを分離す
るには、下痢便を細胞に接種して、数回継代培養するこ
とが必要で短期間に診断することが困難であった。さら
にＰＥＤＶが関与する下痢の内、数少ない症例でＰＥＤ
Ｖが分離ささるに過ぎない。また、ＰＥＤＶの培養には
培養液にトリプシンを添加しなければならない。トリプ
シンの作用により健康な細胞は障害を受けるのでウイル
スを大量に得ることが難しい。このようなことから、本
ウイルスに関する研究ならびに本病の診断、予防法など
の研究のために、本ウイルスに感受性があり、トリプシ
ンに耐性を示す継代細胞の樹立が強く望まれている。
【０００３】
【課題を解決するための手段】上記問題点を解決するた
めに、本発明は子豚および豚胎子の多くの臓器から培養
細胞を作出し、それぞれの培養細胞からトリプシンによ
る障害が低い細胞を取り出した。さらに、ＰＥＤＶを接
種、培養し、ウイルスが増殖したかどうかを細胞変性を
指標にウイルス感受性細胞を見出したものである。これ
らの細胞は下記の実施例により詳述する。
めに、本発明は子豚および豚胎子の多くの臓器から培養
細胞を作出し、それぞれの培養細胞からトリプシンによ
る障害が低い細胞を取り出した。さらに、ＰＥＤＶを接
種、培養し、ウイルスが増殖したかどうかを細胞変性を
指標にウイルス感受性細胞を見出したものである。これ
らの細胞は下記の実施例により詳述する。
【０００４】実施例 １トリプシン耐性豚腎（ＴＲ−ＳＫ）細胞の作出 子豚の腎臓を採取し、０．２５％トリプシン溶液と０．
２％ＥＤＴＡ溶液の等量混合液を加え、細胞を単離し、
細胞培養液（イーグルＭＥＭ液に容量百分率で非働化牛
血清１０％、トリプトースホスフェートブロス１０％、
カナマイシン１００μｇ／ｍｌ、およびファンギゾン１
μｇ／ｍｌを混合したもの）で細胞浮遊液を調製した。
この細胞浮遊液を細胞培養マイクロプレートに分注し、
培養した。培養１週間後にマイクロプレートの底面に細
胞の増殖が見られた。ついで、０．２５％トリプシン溶
液と０．２％ＥＤＴＡ溶液の等量混合液を加え、細胞を
単離し、再度細胞培養液で細胞浮遊液を調製した。この
細胞浮遊液を細胞培養マイクロプレートに分注し培養し
た。培養後３日で細胞のシートが形成された。この細胞
シートをトリプシン添加培養液（イーグルＭＥＭ液に容
量百分率でトリプトースホスフェートブロス１０％、カ
ナマイシン１００μｇ／ｍｌ、ファンギゾン１μｇ／ｍ
ｌおよびトリプシン１０μｇ／ｍｌに混合したもの）で
３回洗浄して、同培養液で培養した。培養後２〜４日で
トリプシンに感受性のある細胞はマイクロプレートの底
面から剥離し培養液中に浮遊した。さらに培養を継続し
た結果、３〜５週後に増殖する細胞が散見された。この
ような状態に達したときに、これまでの培養液を棄てて
５％に牛胎子血清を加えたトリプシン添加培養液を加え
てさらに培養を継続した。増殖する細胞がシートを形成
した段階で培養液を除き、細胞を継代した（トリプシン
／ＥＤＴＡ溶液で細胞を単離し、細胞培養液で再度培養
する）。上記操作を３回繰り返し、トリプシン耐性細胞
を作出した。
２％ＥＤＴＡ溶液の等量混合液を加え、細胞を単離し、
細胞培養液（イーグルＭＥＭ液に容量百分率で非働化牛
血清１０％、トリプトースホスフェートブロス１０％、
カナマイシン１００μｇ／ｍｌ、およびファンギゾン１
μｇ／ｍｌを混合したもの）で細胞浮遊液を調製した。
この細胞浮遊液を細胞培養マイクロプレートに分注し、
培養した。培養１週間後にマイクロプレートの底面に細
胞の増殖が見られた。ついで、０．２５％トリプシン溶
液と０．２％ＥＤＴＡ溶液の等量混合液を加え、細胞を
単離し、再度細胞培養液で細胞浮遊液を調製した。この
細胞浮遊液を細胞培養マイクロプレートに分注し培養し
た。培養後３日で細胞のシートが形成された。この細胞
シートをトリプシン添加培養液（イーグルＭＥＭ液に容
量百分率でトリプトースホスフェートブロス１０％、カ
ナマイシン１００μｇ／ｍｌ、ファンギゾン１μｇ／ｍ
ｌおよびトリプシン１０μｇ／ｍｌに混合したもの）で
３回洗浄して、同培養液で培養した。培養後２〜４日で
トリプシンに感受性のある細胞はマイクロプレートの底
面から剥離し培養液中に浮遊した。さらに培養を継続し
た結果、３〜５週後に増殖する細胞が散見された。この
ような状態に達したときに、これまでの培養液を棄てて
５％に牛胎子血清を加えたトリプシン添加培養液を加え
てさらに培養を継続した。増殖する細胞がシートを形成
した段階で培養液を除き、細胞を継代した（トリプシン
／ＥＤＴＡ溶液で細胞を単離し、細胞培養液で再度培養
する）。上記操作を３回繰り返し、トリプシン耐性細胞
を作出した。
【０００５】実施例 ２トリプシン耐性豚小腸上皮（ＴＲ−ＳＳＩ）細胞の作出 豚胎子の小腸を摘出し、小腸粘膜をメスなどの甲で剥離
して、細胞培養液に浮遊させた。ついで、この浮遊液を
マイクロプレートに分注し３７℃で培養した。３〜４週
間経過すると培養細胞の増殖が見られた。この細胞を実
施例１に記載の方法にしたがいトリプシン耐性小腸上皮
（ＴＲ−ＳＳＩ）細胞を作出した。
して、細胞培養液に浮遊させた。ついで、この浮遊液を
マイクロプレートに分注し３７℃で培養した。３〜４週
間経過すると培養細胞の増殖が見られた。この細胞を実
施例１に記載の方法にしたがいトリプシン耐性小腸上皮
（ＴＲ−ＳＳＩ）細胞を作出した。
【０００６】実施例 ３ 上記実施例のように、豚腎、豚小腸上皮以外に、豚膀胱
上皮、豚血管内皮、豚肺胞上皮を使って同様な処理を行
うことにより、トリプシン耐性でＰＥＤウイルスを生産
する細胞を得ることができた。
上皮、豚血管内皮、豚肺胞上皮を使って同様な処理を行
うことにより、トリプシン耐性でＰＥＤウイルスを生産
する細胞を得ることができた。
【０００７】実施例 ４ＰＥＤＶの増殖・単離法 ＴＲ−ＳＫ細胞およびＴＲ−ＳＳＩ細胞においても下記
の方法によりＰＥＤＶを培養増殖することができた。単
層を形成した細胞を前記のトリプシン溶液で細胞をばら
ばらにした。これを細胞培養液中に約１００万個／ｍｌ
に浮遊させ、ついで培養瓶に分注し３７℃で１〜３日間
培養した。単層を形成したところでＰＥＤＶを接種し、
３７℃で６０〜９０分感作し、ウイルスを完全に細胞に
吸着させた。ついで前記ウイルス液を除去し７５μｇ／
ｍｌの割合にトリプシンを添加した培養液で１〜４日間
培養した。このように各細胞はいずれもウイルス接種後
１〜５日で特有の細胞変性効果を示してくるので、この
時期に培養液を採取した。このように採取した培養液に
含まれるウイルス量はいずれも１０7.0 ＴＣＩＤ50／ｍ
ｌ以上であった。
の方法によりＰＥＤＶを培養増殖することができた。単
層を形成した細胞を前記のトリプシン溶液で細胞をばら
ばらにした。これを細胞培養液中に約１００万個／ｍｌ
に浮遊させ、ついで培養瓶に分注し３７℃で１〜３日間
培養した。単層を形成したところでＰＥＤＶを接種し、
３７℃で６０〜９０分感作し、ウイルスを完全に細胞に
吸着させた。ついで前記ウイルス液を除去し７５μｇ／
ｍｌの割合にトリプシンを添加した培養液で１〜４日間
培養した。このように各細胞はいずれもウイルス接種後
１〜５日で特有の細胞変性効果を示してくるので、この
時期に培養液を採取した。このように採取した培養液に
含まれるウイルス量はいずれも１０7.0 ＴＣＩＤ50／ｍ
ｌ以上であった。
【０００８】実施例 ５下痢の原因の診断方法 下痢便や腸管等を試料製作用培養液（ニッスイ製イーグ
ルＭＥＭ液、ｐＨ７．２）で１０％乳剤を作製した。こ
の試料をマイクロプレートでシートを形成させたＴＲ−
ＳＫ細胞あるいはＴＲ−ＳＳＩ細胞に接種し、６０〜９
０分間感作した。接種試料を除き、７５μｇ／ｍｌの割
合にトリプシンおよび１％にゼラチンを添加したＭＥＭ
培養液、およびトリプシンを添加していないＭＥＭ培養
液を加え、平行して培養した。試料中にＰＥＤウイルス
が存在する場合は、トリプシン添加培養液で培養した細
胞では１〜３日で明瞭な特徴のある細胞変化が現れ、マ
イクロプレートの底面から剥離した。一方、トリプシン
を添加していないＭＥＭ培養液で培養した細胞では細胞
変化は観察されなかった。試料中にＰＥＤＶが存在しな
い場合は、両接種細胞で細胞の変化は起きなかった。試
料中にＰＥＤＶ以外のウイルスが存在する場合は、培養
液にトリプシンの添加の有無に関係なく細胞の変化（ウ
イルスの種類により特徴的な細胞変化）が起きた。この
方法により下痢の原因がＰＥＤＶによるものかどうかを
診断することができた。さらに詳しくは、トリプシン添
加培養液で培養した細胞は１〜３日で明瞭な特徴のある
細胞変化が現れたところで細胞を遠心により集め、スラ
イドグラスに塗沫し蛍光抗体法または酵素抗体法の１つ
であるストレプトアビジン−ビオチン法（以下「ＡＢＣ
法」と呼ぶ）によりＰＥＤＶ抗原を同定した。
ルＭＥＭ液、ｐＨ７．２）で１０％乳剤を作製した。こ
の試料をマイクロプレートでシートを形成させたＴＲ−
ＳＫ細胞あるいはＴＲ−ＳＳＩ細胞に接種し、６０〜９
０分間感作した。接種試料を除き、７５μｇ／ｍｌの割
合にトリプシンおよび１％にゼラチンを添加したＭＥＭ
培養液、およびトリプシンを添加していないＭＥＭ培養
液を加え、平行して培養した。試料中にＰＥＤウイルス
が存在する場合は、トリプシン添加培養液で培養した細
胞では１〜３日で明瞭な特徴のある細胞変化が現れ、マ
イクロプレートの底面から剥離した。一方、トリプシン
を添加していないＭＥＭ培養液で培養した細胞では細胞
変化は観察されなかった。試料中にＰＥＤＶが存在しな
い場合は、両接種細胞で細胞の変化は起きなかった。試
料中にＰＥＤＶ以外のウイルスが存在する場合は、培養
液にトリプシンの添加の有無に関係なく細胞の変化（ウ
イルスの種類により特徴的な細胞変化）が起きた。この
方法により下痢の原因がＰＥＤＶによるものかどうかを
診断することができた。さらに詳しくは、トリプシン添
加培養液で培養した細胞は１〜３日で明瞭な特徴のある
細胞変化が現れたところで細胞を遠心により集め、スラ
イドグラスに塗沫し蛍光抗体法または酵素抗体法の１つ
であるストレプトアビジン−ビオチン法（以下「ＡＢＣ
法」と呼ぶ）によりＰＥＤＶ抗原を同定した。
【０００９】実施例 ６ＴＲ−ＳＫ細胞およびＴＲ−ＳＳＩ細胞を用いた中和抗
体測定による診断法 ＰＥＤＶに感染した豚の体内にはウイルスに対する中和
抗体が産生される。この中和抗体を測定することにより
ＰＥＤＶに感染したかどうか診断することができる。本
中和抗体測定にはＴＲ−ＳＫ細胞またはＴＲ−ＳＳＩ細
胞を用いることにより可能になった。まず、２倍段階希
釈した非働化した血清５０μｌと等量の２００ＴＣＩＤ
50／ｍｌにＰＥＤＶ液を混合して、３７℃で６０分間反
応させた。マイクロプレートに培養したＴＲ−ＳＫ細胞
またはＴＲ−ＳＳＩ細胞に上記のウイルスと血液の混合
液５０μｌを接種し、３７℃で６０分間吸着させた。接
種液を取り除き、７５μｇ／ｍｌの割合にトリプシンお
よび１％にゼラチンを添加したＭＥＭ培養液で３回洗浄
した後、同培養液で３７℃で培養した。ＰＥＤＶによる
細胞変化が見られない場合を抗体陽性として、細胞変化
を抑制する血清の最高希釈倍数を中和抗体価とした。こ
のようにして求めた中和抗体価がウイルス感染前よりも
ウイルス感染後の血清で上昇している場合、ＰＥＤＶに
感染していると診断できる。ＰＥＤＶの感染により下痢
症状を呈した豚の、発症中および発症後３週目の血清中
の中和抗体を測定した結果、発症中では抗体は陰性で、
発症後３週目には６４〜２５６倍に中和抗体が上昇して
いた。このことから、この下痢の原因はＰＥＤＶによる
ものと診断することができた。
体測定による診断法 ＰＥＤＶに感染した豚の体内にはウイルスに対する中和
抗体が産生される。この中和抗体を測定することにより
ＰＥＤＶに感染したかどうか診断することができる。本
中和抗体測定にはＴＲ−ＳＫ細胞またはＴＲ−ＳＳＩ細
胞を用いることにより可能になった。まず、２倍段階希
釈した非働化した血清５０μｌと等量の２００ＴＣＩＤ
50／ｍｌにＰＥＤＶ液を混合して、３７℃で６０分間反
応させた。マイクロプレートに培養したＴＲ−ＳＫ細胞
またはＴＲ−ＳＳＩ細胞に上記のウイルスと血液の混合
液５０μｌを接種し、３７℃で６０分間吸着させた。接
種液を取り除き、７５μｇ／ｍｌの割合にトリプシンお
よび１％にゼラチンを添加したＭＥＭ培養液で３回洗浄
した後、同培養液で３７℃で培養した。ＰＥＤＶによる
細胞変化が見られない場合を抗体陽性として、細胞変化
を抑制する血清の最高希釈倍数を中和抗体価とした。こ
のようにして求めた中和抗体価がウイルス感染前よりも
ウイルス感染後の血清で上昇している場合、ＰＥＤＶに
感染していると診断できる。ＰＥＤＶの感染により下痢
症状を呈した豚の、発症中および発症後３週目の血清中
の中和抗体を測定した結果、発症中では抗体は陰性で、
発症後３週目には６４〜２５６倍に中和抗体が上昇して
いた。このことから、この下痢の原因はＰＥＤＶによる
ものと診断することができた。
【００１０】実施例 ７ＰＥＤＶに感染したＴＲ−ＳＫ細胞あるいはＴＲ−ＳＳ
Ｉ細胞を使用したＰＥＤＶ抗体の検出法 実施例３の方法によりＴＲ−ＳＫ細胞あるいはＴＲ−Ｓ
ＳＩ細胞にＰＥＤＶを感染させ、２日間培養した。培養
液中に浮遊する細胞および底面に付着している細胞を
０．２５％トリプシン溶液と０．２％ＥＤＴＡ溶液の等
量混合液を加え、単離し、両者の細胞を１０００回転５
分間の遠心で沈澱に集めた。このウイルス感染細胞を少
量のリン酸緩衝食塩液に浮遊させ、スライドグラス用カ
バースリップの表面に塗沫し乾燥させた。このように作
製したＰＥＤＶ感染細胞を使用し、間接蛍光抗体法によ
り血清中のＰＥＤＶに対する抗体を検出することがで
き、ＰＥＤの診断ができた。
Ｉ細胞を使用したＰＥＤＶ抗体の検出法 実施例３の方法によりＴＲ−ＳＫ細胞あるいはＴＲ−Ｓ
ＳＩ細胞にＰＥＤＶを感染させ、２日間培養した。培養
液中に浮遊する細胞および底面に付着している細胞を
０．２５％トリプシン溶液と０．２％ＥＤＴＡ溶液の等
量混合液を加え、単離し、両者の細胞を１０００回転５
分間の遠心で沈澱に集めた。このウイルス感染細胞を少
量のリン酸緩衝食塩液に浮遊させ、スライドグラス用カ
バースリップの表面に塗沫し乾燥させた。このように作
製したＰＥＤＶ感染細胞を使用し、間接蛍光抗体法によ
り血清中のＰＥＤＶに対する抗体を検出することがで
き、ＰＥＤの診断ができた。
【効果】以上の説明で分かるように、本発明の各細胞に
よる培養法は、ＰＥＤＶを良く増殖せしめ、かつこれら
細胞培養におけるウイルスの継代および定量が可能とな
った。また、ウイルス感染細胞を使用することにより本
ウイルス抗体を測定することができた。さらに、本ウイ
ルスの研究ならびに本病の診断の有力な手段が確立さ
れ、また本発明の培養法により本病を予防するための不
活性化ウイルスワクチンおよび弱毒生ワクチンの製造の
基礎が確立される等本病の対策に貢献することができ
る。
よる培養法は、ＰＥＤＶを良く増殖せしめ、かつこれら
細胞培養におけるウイルスの継代および定量が可能とな
った。また、ウイルス感染細胞を使用することにより本
ウイルス抗体を測定することができた。さらに、本ウイ
ルスの研究ならびに本病の診断の有力な手段が確立さ
れ、また本発明の培養法により本病を予防するための不
活性化ウイルスワクチンおよび弱毒生ワクチンの製造の
基礎が確立される等本病の対策に貢献することができ
る。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (56)参考文献 特開 昭54−95789（ＪＰ，Ａ) 特開 昭48−62989（ＪＰ，Ａ) 特開 昭62−179385（ＪＰ，Ａ) Ｊ．Ｖｅｔ．Ｍｅｄ．Ｓｃｉ. （1992）Ｖｏｌ．54，Ｎｏ．２，ｐ. 313−318 ＳＣＩＥＮＣＥ（1986）Ｖｏｌ．233, Ｎｏ．4760，ｐ．215−219 Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏ ｌｏｇｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ （1983）Ｖｏｉ．56，ｐ．305−317 ＡＩＤＳ ＲＥＳＥＡＲＣＨ ＡＮＤ ＨＵＭＡＮ ＲＥＴＲＯＶＩＲＵＳＥ Ｓ（1991）Ｖｏｌ．７，ｐ．83−88 (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) C12N 5/06 C12N 7/00 ＢＩＯＳＩＳ（ＤＩＡＬＯＧ) ＷＰＩ（ＤＩＡＬＯＧ)
Claims (2)
- 【請求項１】 豚由来の培養細胞を、トリプシン添加細
胞培養液で培養し、トリプシン耐性細胞を採取すること
を特徴とする、豚流行性下痢ウイルス生産細胞の作出方
法。 - 【請求項２】 トリプシン添加培養液はイーグルＭＥＭ
液に容量百分率でトリプトースホスフェートブロス１０
％、カナマイシン１００μｇ／ｍｌ、ファンギゾン１μ
ｇ／ｍｌおよびトリプシン１０μｇ／ｍｌを混合したも
のである、請求項１記載の作出方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8245807A JP3003989B2 (ja) | 1996-09-18 | 1996-09-18 | 豚流行性下痢ウイルス（ｐｅｄｖ）感受性細胞の作出法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8245807A JP3003989B2 (ja) | 1996-09-18 | 1996-09-18 | 豚流行性下痢ウイルス（ｐｅｄｖ）感受性細胞の作出法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH1084951A JPH1084951A (ja) | 1998-04-07 |
| JP3003989B2 true JP3003989B2 (ja) | 2000-01-31 |
Family
ID=17139142
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP8245807A Expired - Fee Related JP3003989B2 (ja) | 1996-09-18 | 1996-09-18 | 豚流行性下痢ウイルス（ｐｅｄｖ）感受性細胞の作出法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3003989B2 (ja) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AU2015241107B2 (en) | 2014-04-03 | 2019-10-03 | Boehringer Ingelheim Animal Health USA Inc. | Porcine epidemic diarrhea virus vaccine |
| CN114958763B (zh) * | 2022-01-14 | 2023-02-14 | 江苏省农业科学院 | 一种构建DBN1基因敲除的Vero细胞株的方法及其应用 |
-
1996
- 1996-09-18 JP JP8245807A patent/JP3003989B2/ja not_active Expired - Fee Related
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| ＡＩＤＳ ＲＥＳＥＡＲＣＨ ＡＮＤ ＨＵＭＡＮ ＲＥＴＲＯＶＩＲＵＳＥＳ（１９９１）Ｖｏｌ．７，ｐ．８３−８８ |
| Ｊ．Ｖｅｔ．Ｍｅｄ．Ｓｃｉ．（１９９２）Ｖｏｌ．５４，Ｎｏ．２，ｐ．３１３−３１８ |
| Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ（１９８３）Ｖｏｉ．５６，ｐ．３０５−３１７ |
| ＳＣＩＥＮＣＥ（１９８６）Ｖｏｌ．２３３，Ｎｏ．４７６０，ｐ．２１５−２１９ |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH1084951A (ja) | 1998-04-07 |
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