JP2995297B1 - 冬コムギ耐凍性関連性タンパク質ｃｗｐｍ２３のペプチド断片 - Google Patents
冬コムギ耐凍性関連性タンパク質ｃｗｐｍ２３のペプチド断片Info
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/415—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from plants
Abstract
【要約】
【課題】 凍結耐性の高められた植物、動物および微生
物を遺伝子工学的に作製するために、植物の凍結耐性発
現に寄与する細胞膜タンパク質を同定する。 【解決手段】 冬コムギの凍結耐性に関与するＣＷＰＭ
２３タンパク質を精製し、部分アミノ酸配列を決定す
る。
物を遺伝子工学的に作製するために、植物の凍結耐性発
現に寄与する細胞膜タンパク質を同定する。 【解決手段】 冬コムギの凍結耐性に関与するＣＷＰＭ
２３タンパク質を精製し、部分アミノ酸配列を決定す
る。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、冬コムギの凍結耐
性に寄与する細胞膜タンパク質ＣＷＰＭ２３の精製、部
分配列決定およびその利用に関する。
性に寄与する細胞膜タンパク質ＣＷＰＭ２３の精製、部
分配列決定およびその利用に関する。
【０００２】
【従来の技術】植物の凍結傷害は細胞膜外氷晶の形成に
より、細胞が脱水収縮されるときに起こる細胞膜の不可
逆的損傷が主な原因である考えられている。秋から冬に
かけての耐凍性獲得の過程においては新たに誘導された
特異的なタンパク質の作用により、細胞膜が安定化さ
れ、凍結傷害が回避されていると考えられる。このよう
な凍結傷害に耐性を持つ生物の分子育種を行うために、
植物の低温誘導性のタンパク質を遺伝子工学的に導入、
発現させる試みが行われてきた。
より、細胞が脱水収縮されるときに起こる細胞膜の不可
逆的損傷が主な原因である考えられている。秋から冬に
かけての耐凍性獲得の過程においては新たに誘導された
特異的なタンパク質の作用により、細胞膜が安定化さ
れ、凍結傷害が回避されていると考えられる。このよう
な凍結傷害に耐性を持つ生物の分子育種を行うために、
植物の低温誘導性のタンパク質を遺伝子工学的に導入、
発現させる試みが行われてきた。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】しかし、これらの低温
誘導性タンパク質はほとんどが親水性のものであり、実
際に凍結傷害の起こる細胞膜とは別の場所に存在するも
のであった。そして凍結耐性の付与にはこれら親水性タ
ンパク質の遺伝子導入の効果は十分でないことが指摘さ
れてきたが、疎水性の高い細胞膜タンパク質の精製は容
易ではなく、その機能解析および利用はなされておら
ず、細胞膜の低温誘導性タンパク質同定および精製が必
要とされる。
誘導性タンパク質はほとんどが親水性のものであり、実
際に凍結傷害の起こる細胞膜とは別の場所に存在するも
のであった。そして凍結耐性の付与にはこれら親水性タ
ンパク質の遺伝子導入の効果は十分でないことが指摘さ
れてきたが、疎水性の高い細胞膜タンパク質の精製は容
易ではなく、その機能解析および利用はなされておら
ず、細胞膜の低温誘導性タンパク質同定および精製が必
要とされる。
【０００４】ＣＷＰＭ２３タンパク質は冬コムギの低温
馴化過程において特異的に誘導される細胞膜タンパク質
であり、冬コムギの実生において耐凍性の増加と並行し
て細胞膜に蓄積する。ＣＷＰＭ２３タンパク質の誘導は
冬コムギでは顕著であるが、耐凍性の低い春コムギには
見られないことから、冬コムギの持つ高い耐凍性との関
わりが示唆される。そのようなＣＷＰＭ２３遺伝子を他
の植物に導入することができれば、すぐれた耐凍性、耐
乾燥性を持つ作物をつくり出すことが可能となる。そこ
で、冬コムギより細胞膜画分を調製してＣＷＰＭ２３タ
ンパク質を精製し、酵素処理によりペプチド断片を得
た。さらにそのアミノ酸分析を行い、アミノ酸配列を決
定した。
馴化過程において特異的に誘導される細胞膜タンパク質
であり、冬コムギの実生において耐凍性の増加と並行し
て細胞膜に蓄積する。ＣＷＰＭ２３タンパク質の誘導は
冬コムギでは顕著であるが、耐凍性の低い春コムギには
見られないことから、冬コムギの持つ高い耐凍性との関
わりが示唆される。そのようなＣＷＰＭ２３遺伝子を他
の植物に導入することができれば、すぐれた耐凍性、耐
乾燥性を持つ作物をつくり出すことが可能となる。そこ
で、冬コムギより細胞膜画分を調製してＣＷＰＭ２３タ
ンパク質を精製し、酵素処理によりペプチド断片を得
た。さらにそのアミノ酸分析を行い、アミノ酸配列を決
定した。
【０００５】このようにして決定された部分アミノ酸配
列に基づいて作成したオリゴヌクレオチドプライマーを
用いてＰＣＲを行えば、ＣＷＰＭ２３タンパク質をコー
ドする遺伝子を単離することが可能である。単離したＣ
ＷＰＭ２３遺伝子は作物の育種において重要な利用価値
を有することが期待され、遺伝子工学的にＣＷＰＭ２３
遺伝子を他の植物に導入することにより、すぐれた耐凍
性、耐乾燥性を持つ作物をつくり出すことが可能であ
る。また、植物の育種のみならず、当該遺伝子を発現さ
せた形質転換体微生物および動物を作成することによ
り、その凍結時における細胞の生存率が向上することが
期待される。動物に導入する例では肉、魚など凍結保存
された食品の鮮度の向上、微生物ではパン生地など中間
発酵産物の凍結保存にも利用可能である。また、ＣＷＰ
Ｍ２３が耐凍性の高いチホクコムギ、ノースターといっ
た冬コムギ品種に顕著に誘導されることから、ムギ類の
育種においてＣＷＰＭ２３遺伝子が耐凍性の高い作物の
分子育種マーカーとして有用であるとも考えられる。
列に基づいて作成したオリゴヌクレオチドプライマーを
用いてＰＣＲを行えば、ＣＷＰＭ２３タンパク質をコー
ドする遺伝子を単離することが可能である。単離したＣ
ＷＰＭ２３遺伝子は作物の育種において重要な利用価値
を有することが期待され、遺伝子工学的にＣＷＰＭ２３
遺伝子を他の植物に導入することにより、すぐれた耐凍
性、耐乾燥性を持つ作物をつくり出すことが可能であ
る。また、植物の育種のみならず、当該遺伝子を発現さ
せた形質転換体微生物および動物を作成することによ
り、その凍結時における細胞の生存率が向上することが
期待される。動物に導入する例では肉、魚など凍結保存
された食品の鮮度の向上、微生物ではパン生地など中間
発酵産物の凍結保存にも利用可能である。また、ＣＷＰ
Ｍ２３が耐凍性の高いチホクコムギ、ノースターといっ
た冬コムギ品種に顕著に誘導されることから、ムギ類の
育種においてＣＷＰＭ２３遺伝子が耐凍性の高い作物の
分子育種マーカーとして有用であるとも考えられる。
【０００６】
【実施例】（粗ミクロソーム画分の調製）冬コムギから
の粗ミクロソーム画分ならびに細胞膜画分の調製は基本
的にZhouら（Zhou et al.(1994)Plant Cell Physiol.3
5:175-182）の方法に従っておこなった。低温馴化させ
た冬コムギ（TriticumaestivumL.cv.Chihokukomigi）の
地上部（苗条）を約３ｍｍ幅に刻んだ後、３０ｇの新鮮
重量の冬コムギに対して１００ｍｌの氷冷した抽出バッ
ファー［５０ｍＭ ＭＯＰＳ−ＫＯＨ（ｐＨ７．６）、
３３０ｍＭ ｓｕｃｒｏｓｅ、５ｍＭ ＥＧＴＡ、３ｍ
Ｍ ＥＤＴＡ、３０ｍＭ ＮａＣｌ、１０ｍＭ Ｎａ
Ｆ、０．２％（ｗ／ｖ）ｃａｓｅｉｎ ｈｙｄｒｏｌｙ
ｚａｔｅ、２．５ｍＭ Ｋ2 Ｐ2 Ｏ5 、１％（ｗ／
ｖ））ＰＶＰＰ、２ｍＭ ＰＭＳＦ、１０μｇ／ｍｌ
ＢＨＴ］に浸し、直ちにＰｏｌｙｔｒｏｎ ＰＴ１０−
３５にて破砕した。破砕液を４重のガーゼにて濾過した
後、濾液を１０，０００ｇで２０分間遠心分離して上清
を得た。この上清を３５，０００ｇで４０分間遠心分離
して得られた沈殿を適量（３０−５０ｍｌ程度）のＳＫ
Ｐバッファー［１０ｍＭ Ｋ−ｐｈｏｓｐｈａｔｅ（ｐ
Ｈ７．６）、３３０ｍＭ ｓｕｃｒｏｓｅ、１ｍＭ Ｅ
ＧＴＡ、１ｍＭ ＤＴＴ］に懸濁し、再度１０，０００
ｇで２０分間遠心分離して上清を回収した。これを、２
００，０００ｇで２０分間遠心分離して得られた沈殿を
少量のＳＫＰバッファーに懸濁し、これを粗ミクロソー
ム画分とした。
の粗ミクロソーム画分ならびに細胞膜画分の調製は基本
的にZhouら（Zhou et al.(1994)Plant Cell Physiol.3
5:175-182）の方法に従っておこなった。低温馴化させ
た冬コムギ（TriticumaestivumL.cv.Chihokukomigi）の
地上部（苗条）を約３ｍｍ幅に刻んだ後、３０ｇの新鮮
重量の冬コムギに対して１００ｍｌの氷冷した抽出バッ
ファー［５０ｍＭ ＭＯＰＳ−ＫＯＨ（ｐＨ７．６）、
３３０ｍＭ ｓｕｃｒｏｓｅ、５ｍＭ ＥＧＴＡ、３ｍ
Ｍ ＥＤＴＡ、３０ｍＭ ＮａＣｌ、１０ｍＭ Ｎａ
Ｆ、０．２％（ｗ／ｖ）ｃａｓｅｉｎ ｈｙｄｒｏｌｙ
ｚａｔｅ、２．５ｍＭ Ｋ2 Ｐ2 Ｏ5 、１％（ｗ／
ｖ））ＰＶＰＰ、２ｍＭ ＰＭＳＦ、１０μｇ／ｍｌ
ＢＨＴ］に浸し、直ちにＰｏｌｙｔｒｏｎ ＰＴ１０−
３５にて破砕した。破砕液を４重のガーゼにて濾過した
後、濾液を１０，０００ｇで２０分間遠心分離して上清
を得た。この上清を３５，０００ｇで４０分間遠心分離
して得られた沈殿を適量（３０−５０ｍｌ程度）のＳＫ
Ｐバッファー［１０ｍＭ Ｋ−ｐｈｏｓｐｈａｔｅ（ｐ
Ｈ７．６）、３３０ｍＭ ｓｕｃｒｏｓｅ、１ｍＭ Ｅ
ＧＴＡ、１ｍＭ ＤＴＴ］に懸濁し、再度１０，０００
ｇで２０分間遠心分離して上清を回収した。これを、２
００，０００ｇで２０分間遠心分離して得られた沈殿を
少量のＳＫＰバッファーに懸濁し、これを粗ミクロソー
ム画分とした。
【０００７】（細胞膜画分の調製）上記の方法によって
調製した粗ミクロソーム画分を、供試材料３０ｇに対し
ておよそ１０ｇの氷冷した水性二層分配用のポリマー溶
液［最終濃度６％（ｗ／ｗ）Ｄｅｘｔｒａｎ Ｔ−５
０、６％（ｗ／ｗ）ポリエチレングリコール３３５０、
３０ｍＭ ＮａＣｌ、ＳＫＰバッファー］に添加し、こ
れを激しく混和した後、１，０００ｇで５分間遠心分離
した。相分離したポリマー溶液の上層（細胞膜画分が凝
縮されたポリエチレングリコール層）を回収したのち、
これと並行して粗ミクロソーム画分の代わりにＳＫＰバ
ッファーのみをポリマー溶液に添加して同様に水性二層
分配を行って得られた下層（デキストラン層）にこの細
胞膜画分を含むポリエチレングリコール層を添加して、
再度同様の方法によって二層分配をおこなった。得られ
たポリエチレングリコール層はＳＫＰバッファーで二倍
容以上に希釈したのち、２００，０００ｇで遠心分離し
て細胞膜に富む膜画分の沈殿を得た。これをＳＫＰバッ
ファーで懸濁して、再度遠心分離したのち、沈殿をＳＫ
Ｐバッファーで再懸濁し、これを細胞膜画分とした。
調製した粗ミクロソーム画分を、供試材料３０ｇに対し
ておよそ１０ｇの氷冷した水性二層分配用のポリマー溶
液［最終濃度６％（ｗ／ｗ）Ｄｅｘｔｒａｎ Ｔ−５
０、６％（ｗ／ｗ）ポリエチレングリコール３３５０、
３０ｍＭ ＮａＣｌ、ＳＫＰバッファー］に添加し、こ
れを激しく混和した後、１，０００ｇで５分間遠心分離
した。相分離したポリマー溶液の上層（細胞膜画分が凝
縮されたポリエチレングリコール層）を回収したのち、
これと並行して粗ミクロソーム画分の代わりにＳＫＰバ
ッファーのみをポリマー溶液に添加して同様に水性二層
分配を行って得られた下層（デキストラン層）にこの細
胞膜画分を含むポリエチレングリコール層を添加して、
再度同様の方法によって二層分配をおこなった。得られ
たポリエチレングリコール層はＳＫＰバッファーで二倍
容以上に希釈したのち、２００，０００ｇで遠心分離し
て細胞膜に富む膜画分の沈殿を得た。これをＳＫＰバッ
ファーで懸濁して、再度遠心分離したのち、沈殿をＳＫ
Ｐバッファーで再懸濁し、これを細胞膜画分とした。
【０００８】（ＣＷＰＭ２３タンパク質の可溶化）調製
した細胞膜画分（１ｍｇタンパク質相当）を２６０，０
００ｇで遠心分離して沈殿を得たのち、これを３００μ
ｌのＴｒｉｓ−ＮａＣｌ溶液［１０ｍＭＴｒｉｓ−ＨＣ
ｌ（ｐＨ７．４）、１５０ｍＭ ＮａＣｌ］で懸濁し
た。これに３００μｌの２％（ｗ／ｗ）ＴｒｉｔｏｎＸ
−１１４を含むＴｒｉｓ−ＮａＣｌ溶液を添加して十分
に混ぜたのち３０分間氷冷することによってＣＷＰＭ２
３の可溶化をおこなった。次に、これを２６０，０００
ｇで遠心分離して上清（Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１１４可溶
性画分）を得た後、これを３０℃の恒温槽内に５分間静
置してＴｒｉｔｏｎ Ｘ−１１４の相分離を行った。な
お、Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１１４の相分離については基本
的にBruscaとRadolf（Brusca and Radolf (1994) Metho
ds Enzymol.228:182-193）の方法に従った。これを６，
４００ｇで１０分間遠心分離して得られた上層（水相）
を回収した。これと並行して１％（ｗ／ｗ）Ｔｒｉｔｏ
ｎ Ｘ−１１４を含むＴｒｉｓ−ＮａＣｌ溶液を用いて
同様に相分離を行って回収した下層（界面活性剤相）に
対し、ＣＷＰＭ２３が濃縮された水相を添加して十分に
氷冷した後、十分に混和して再度同様の方法によって相
分離をおこなった。これによって得られた水相に４倍容
のアセトンを添加してよく混和したのち、−８０℃に２
時間静置した。これを６，４００ｇで１０分間遠心分離
して得られた沈殿にＳＤＳサンプルバッファーを添加し
て、タンパク質を可溶化させた。
した細胞膜画分（１ｍｇタンパク質相当）を２６０，０
００ｇで遠心分離して沈殿を得たのち、これを３００μ
ｌのＴｒｉｓ−ＮａＣｌ溶液［１０ｍＭＴｒｉｓ−ＨＣ
ｌ（ｐＨ７．４）、１５０ｍＭ ＮａＣｌ］で懸濁し
た。これに３００μｌの２％（ｗ／ｗ）ＴｒｉｔｏｎＸ
−１１４を含むＴｒｉｓ−ＮａＣｌ溶液を添加して十分
に混ぜたのち３０分間氷冷することによってＣＷＰＭ２
３の可溶化をおこなった。次に、これを２６０，０００
ｇで遠心分離して上清（Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１１４可溶
性画分）を得た後、これを３０℃の恒温槽内に５分間静
置してＴｒｉｔｏｎ Ｘ−１１４の相分離を行った。な
お、Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１１４の相分離については基本
的にBruscaとRadolf（Brusca and Radolf (1994) Metho
ds Enzymol.228:182-193）の方法に従った。これを６，
４００ｇで１０分間遠心分離して得られた上層（水相）
を回収した。これと並行して１％（ｗ／ｗ）Ｔｒｉｔｏ
ｎ Ｘ−１１４を含むＴｒｉｓ−ＮａＣｌ溶液を用いて
同様に相分離を行って回収した下層（界面活性剤相）に
対し、ＣＷＰＭ２３が濃縮された水相を添加して十分に
氷冷した後、十分に混和して再度同様の方法によって相
分離をおこなった。これによって得られた水相に４倍容
のアセトンを添加してよく混和したのち、−８０℃に２
時間静置した。これを６，４００ｇで１０分間遠心分離
して得られた沈殿にＳＤＳサンプルバッファーを添加し
て、タンパク質を可溶化させた。
【０００９】（ＣＷＰＭ２３タンパク質のＳＤＳポリア
クリルアミド電気泳動）上記の方法により得られた可溶
化タンパク質約２．５μｇをサンプルに用いて１３％
Ｔ、２．６％Ｃのアクリルアミド濃度のＳＤＳポリアク
リルアミド電気泳動法（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）に供試し
て、目的タンパク質の分離をおこなった（Laemmli (197
0) Nature 227:680-685 ）。泳動後のゲルをクマシーブ
リリアントブルー（ＣＢＢ）染色液に浸してタンパク質
を染色した後、ＣＷＰＭ２３タンパク質のバンドを剃刀
で切り取り、これを十分量の泳動バッファーに浸した
後、目的タンパク質をエレクトロエリューター（Ｂｉｏ
−Ｒａｄ社：Ｍｏｄｅｌ４２２）を用いて電気溶出し
た。回収したＣＷＰＭ２３画分は、１６．２％Ｔ、３％
Ｃのアクリルアミド濃度のＴｒｉｃｉｎｅ−ＳＤＳポリ
アクリルアミドゲル電気泳動法（Ｔｒｉｃｉｎｅ−ＳＤ
Ｓ−ＰＡＧＥ）に供試して、目的タンパク質の分離をお
こなった（Schagger and Von Jagow (1987) Anal.Bioch
em.166:368-379）。泳動後のゲルから前述の方法と同様
にして目的タンパク質を電気溶出して得られたＣＷＰＭ
２３画分の一部を用いて、ＣＷＰＭ２３の純度をＳＤＳ
−ＰＡＧＥによって確認した（図１）。
クリルアミド電気泳動）上記の方法により得られた可溶
化タンパク質約２．５μｇをサンプルに用いて１３％
Ｔ、２．６％Ｃのアクリルアミド濃度のＳＤＳポリアク
リルアミド電気泳動法（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）に供試し
て、目的タンパク質の分離をおこなった（Laemmli (197
0) Nature 227:680-685 ）。泳動後のゲルをクマシーブ
リリアントブルー（ＣＢＢ）染色液に浸してタンパク質
を染色した後、ＣＷＰＭ２３タンパク質のバンドを剃刀
で切り取り、これを十分量の泳動バッファーに浸した
後、目的タンパク質をエレクトロエリューター（Ｂｉｏ
−Ｒａｄ社：Ｍｏｄｅｌ４２２）を用いて電気溶出し
た。回収したＣＷＰＭ２３画分は、１６．２％Ｔ、３％
Ｃのアクリルアミド濃度のＴｒｉｃｉｎｅ−ＳＤＳポリ
アクリルアミドゲル電気泳動法（Ｔｒｉｃｉｎｅ−ＳＤ
Ｓ−ＰＡＧＥ）に供試して、目的タンパク質の分離をお
こなった（Schagger and Von Jagow (1987) Anal.Bioch
em.166:368-379）。泳動後のゲルから前述の方法と同様
にして目的タンパク質を電気溶出して得られたＣＷＰＭ
２３画分の一部を用いて、ＣＷＰＭ２３の純度をＳＤＳ
−ＰＡＧＥによって確認した（図１）。
【００１０】（ＣＷＰＭ２３の部分アミノ酸配列決定）
ＣＷＰＭ２３をリシルエンドペプチダーゼ（和光純薬）
による酵素処理をすることにより得られたペプチド断片
をＴｒｉｃｉｎｅ−ＳＤＳ−ＰＡＧＥによって分離し
た。その後、これをポリビニリデンジフルオリド（ＰＶ
ＤＦ）膜に電気転写し、ＣＢＢ染色することによって検
出し、これらを切り出して３つのペプチド（ＣＰ２３Ｆ
１、２、３）について気相シークエンサー（島津社：Ｐ
ＰＳＱ−１０）によるアミノ酸分析に供試した。ＣＷＰ
Ｍ２３由来の３つのペプチドにつき、部分アミノ酸配列
を決定した。 ＣＰ２３Ｆ１：ＩＧＶＡＡＥ ＣＰ２３Ｆ２：ＩＬＬＬＫＬ ＣＰ２３Ｆ３：ＬＫＶＫＦＹＶＰＰＦＬＰＩＩＰＶＶＧ
ＣＷＰＭ２３をリシルエンドペプチダーゼ（和光純薬）
による酵素処理をすることにより得られたペプチド断片
をＴｒｉｃｉｎｅ−ＳＤＳ−ＰＡＧＥによって分離し
た。その後、これをポリビニリデンジフルオリド（ＰＶ
ＤＦ）膜に電気転写し、ＣＢＢ染色することによって検
出し、これらを切り出して３つのペプチド（ＣＰ２３Ｆ
１、２、３）について気相シークエンサー（島津社：Ｐ
ＰＳＱ−１０）によるアミノ酸分析に供試した。ＣＷＰ
Ｍ２３由来の３つのペプチドにつき、部分アミノ酸配列
を決定した。 ＣＰ２３Ｆ１：ＩＧＶＡＡＥ ＣＰ２３Ｆ２：ＩＬＬＬＫＬ ＣＰ２３Ｆ３：ＬＫＶＫＦＹＶＰＰＦＬＰＩＩＰＶＶＧ
【００１１】
【発明の効果】冬コムギの凍結耐性に関与するＣＷＰＭ
２３タンパク質が精製され、部分アミノ酸配列が決定さ
れた。このアミノ酸配列に基づいて作製したオリゴヌク
レオチドプライマーを用いてＰＣＲを行うことにより、
ＣＷＰＭ２３タンパク質をコードする遺伝子を単離する
ことが可能であり、この遺伝子を導入することにより、
動物、植物および微生物に凍結耐性を付与できる可能性
がある。
２３タンパク質が精製され、部分アミノ酸配列が決定さ
れた。このアミノ酸配列に基づいて作製したオリゴヌク
レオチドプライマーを用いてＰＣＲを行うことにより、
ＣＷＰＭ２３タンパク質をコードする遺伝子を単離する
ことが可能であり、この遺伝子を導入することにより、
動物、植物および微生物に凍結耐性を付与できる可能性
がある。
【００１２】配列表 出願人氏名：九州大学長 発明の名称：冬コムギ耐凍性関連性タンパク質ＣＷＰＭ
２３のペプチド断片 配列の数：３ 配列番号：１ 配列の長さ：６ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 起源：冬コムギ由来のＣＷＰＭ２３タンパク質 配列 Ile Gly Val Ala Ala Glu １ ５ 配列番号：２ 配列の長さ：６ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 起源：冬コムギ由来のＣＷＰＭ２３タンパク質 配列 Ile Leu Leu Leu Lys Leu １ ５ 配列番号：３ 配列の長さ：１８ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 起源：冬コムギ由来のＣＷＰＭ２３タンパク質 配列 Leu Lys Val Lys Phe Tyr Val Pro Pro Phe Leu Pro Ile Ile Pro Val Val Gly １ ５ １０ １５
２３のペプチド断片 配列の数：３ 配列番号：１ 配列の長さ：６ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 起源：冬コムギ由来のＣＷＰＭ２３タンパク質 配列 Ile Gly Val Ala Ala Glu １ ５ 配列番号：２ 配列の長さ：６ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 起源：冬コムギ由来のＣＷＰＭ２３タンパク質 配列 Ile Leu Leu Leu Lys Leu １ ５ 配列番号：３ 配列の長さ：１８ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 起源：冬コムギ由来のＣＷＰＭ２３タンパク質 配列 Leu Lys Val Lys Phe Tyr Val Pro Pro Phe Leu Pro Ile Ile Pro Val Val Gly １ ５ １０ １５
【図面の簡単な説明】
【図１】単離したＣＷＰＭ２３の電気泳動像である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (58)調査した分野(Int.Cl.6，ＤＢ名) C07K 7/06 C07K 7/08 C12N 15/00 - 15/90 ＣＡ（ＳＴＮ) ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ)
Claims (6)
- 【請求項１】 Ile-Gly-Val-Ala-Ala-Glu からなる、ペ
プチド断片。 - 【請求項２】 Ile-Leu-Leu-Leu-Lys-Leu からなる、ペ
プチド断片。 - 【請求項３】 Leu-Lys-Val-Lys-Phe-Tyr-Val-Pro-Pro-
Phe-Leu-Pro-Ile-Ile-Pro-Val-Val-Gly からなる、ペプ
チド断片。 - 【請求項４】 冬コムギの耐凍性に関連する細胞膜タン
パク質ＣＷＰＭ２３に由来するところの、請求項１から
３いずれか１項記載のペプチド断片。 - 【請求項５】 請求項１から３いずれか１項記載のペプ
チド断片をコード化するところの、ＤＮＡ断片。 - 【請求項６】 請求項１から３いずれか１項記載のペプ
チド断片である、耐凍性タンパク質のマーカー。
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP10349459A JP2995297B1 (ja) | 1998-12-09 | 1998-12-09 | 冬コムギ耐凍性関連性タンパク質ｃｗｐｍ２３のペプチド断片 |
| AU48842/99A AU722880B1 (en) | 1998-12-09 | 1999-09-21 | Peptide fragments derived from CWPM23, a protein involved in freezing resistance of winter wheat |
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