JP2973053B2 - 魚類用餌料性疾患治療・予防剤 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、有機化セレンを有効成
分とする魚類用餌料性疾患治療・予防剤に関する。

【０００２】

【従来の技術】魚類は一般に肉食性の傾向が強く、高蛋
白飼料を要求する。また、魚類は一般的に多不飽和脂肪
酸を必須脂肪酸としている（魚類の栄養と飼料：恒星社
厚生閣１９８０年 １８１項）。従来、蛋白質や多不飽
和脂肪酸等の必須成分、およびエネルギ−を補うため
に、魚類用餌料として生餌、魚粉や、多不飽和脂肪酸を
主成分とする魚油等の添加が一般的に行われてきた。一
般に生餌としては、現在イワシ等を主に利用している
が、それらの魚類は大量に捕獲できる時期に捕獲し、使
用までの長い期間冷凍保存されており、保存期間が長期
に及ぶことと、冷凍費とのかね合から冷蔵温度も比較的
高い状態にあり、多くの場合生餌は変敗度合いが高くな
っている現状にある。また、魚粉の場合も同様であり、
生鮮魚に比べ蛋白質を変性させた魚粉は変敗が進行し易
い。特に、酸化促進作用を有する鉄分を含むヘム色素が
多く含まれている血合肉は、普通肉より変敗し易く、し
たがって、赤身の魚を原料とする沿岸ミ−ルは安価では
あるが、変敗度合いが高くなっている。また、多不飽和
脂肪酸が変敗し易いのは極めてよく知られた事実であ
る。また、コイの飼料であるサナギも変敗し易いと言わ
れている。

【０００３】これらの餌料を給与される魚類において
は、陸上動物には通常認められない種々の餌料性疾病、
即ち、成長停止、斃死率の増加、肝臓の脂肪変性、背こ
け病などを引き起こすことが報告されている（油脂研究
会抄録Ｂシリ−ズ Ｎｏ１４１９８１年）。魚類のこれ
ら餌料性疾病に関し、従来あまり検討されていないが、
わずかにブリの餌料性肝臓障害の改善薬としてグルタチ
オンが承認許可されている。しかしながらグルタチオン
は、その作用機序も良くわかっていないとともに、高価
なものであって利用し難いものであった。

【０００４】

【発明が解決しようとする課題】上記魚類用餌料性疾患
に治療・予防効果のある、安価な治療・予防剤および魚
類用餌料の開発が求められていた。

【０００５】

【課題を解決するための手段】セレンは、原子番号３
４、原子量７９の元素であり、その無機化合物は毒性が
強く、以前は単に生体に有害なものであるとみられてい
たが、哺乳動物においては生理的な役割があることが知
られている。一方、セレンの魚類に対する生理的役割の
研究は全くされておらず、その必要性に関しても殆ど報
告はないが、コイにおいて亜セレン酸ナトリウム、セレ
ン酸ナトリウムや二酸化セレン等の無機のセレンを飼料
に添加すると飼料効率がわずかに改善されたという報告
があるにすぎない（特公昭６１−１４６１５５号）。無
機セレンは日本国内では安全性の面から無機セレンを飼
料、食品等へ添加することは許可されいない状況下にあ
って、この報告は鑑賞用のコイ以外に適用が困難であ
り、特に食肉用の養魚においては無意味である。そもそ
も、魚類は陸上の哺乳動物とは異なり、餌料中の無機質
の外に環境水中に溶存する無機塩類を鰓、皮膚、腸管を
通して直接体内に吸収している。事実、清浄海水中には
亜セレン酸イオンの形態でセレンとして０．２ｐｐｂ含
まれており、また清浄環境で生育した魚類５２種の筋肉
中のセレン含量は湿重量で平均１ｐｐｍ弱であるという
報告（水産学シリ−ズ（４７） 魚類の物質代謝 １１
８〜１１９項 昭和５８年１０月１５日発行 恒星社厚
生閣）もある。このようなことから魚類においてセレン
が仮に必要であるとしても、その摂取不足はあり得ない
ものと考えられており、敢えてセレンの検討をする必要
性もない状況であった。

【０００６】このような状況のもと、本発明者らは、前
述の魚類の餌料性疾患の治療や予防に効果のある、安価
な魚類用餌料の開発を目指し、鋭意研究した結果、有機
化セレン含有菌体をそれら魚類に給与することにより、
餌料性疾患の治療・予防が可能であるという新規な事実
を確認して、本発明を完成するに至った。即ち、本発明
は、有機化セレンを有効成分とする魚類用餌料性疾患治
療・予防剤である。

【０００７】本発明で有機化セレンとは、セレノメチオ
ニン等の有機化セレンが例示されるが、特に好ましくは
後記の高分子化セレンが挙げられる。また水中で魚類に
与える場合に、無機セレンに比べて逸散し難いことか
ら、有機化セレン含有菌体であることが好ましい。有機
化セレン含有菌体含有菌体としては、種々の公知の有機
化セレン含有菌体が使用できる。例えば特公昭５５−３
６３１４号、特開昭５７−１７４０９８号、特開昭６０
−１８０５８２号等が例示されるが、特に好ましくは、
特開平４−４０８８８号に開示された方法、即ち酵母、
細菌、カビ、単細胞緑藻等を用いて菌体をバイオロジカ
ルスペ−ス以上の菌体濃度となるように分散せしめ、高
分子化セレンを蓄積せしめた菌体を得る製造方法により
得られる菌体が例示される。

【０００８】さらに本発明の方法を、特開平４−４０８
８８号の方法を中心として説明すると以下の通りであ
る。高分子化セレン含有菌体となす微生物菌体として
は、菌体内にセレンを透過・吸収して高分子化セレンを
蓄積し、高分子化セレン含有菌体となりうることが可能
な微生物菌体であれば広く対象とすることができるが、
飼料や餌料に添加して魚類に給与することから可食性で
あることが好ましい。

【０００９】上記の微生物に該当するものとしては、酵
母、細菌、カビ、単細胞緑藻等が挙げられる。酵母では
各種の食品製造に用いられ安全性が認められているもの
としてパン酵母、ビ−ル酵母、日本酒用酵母、アルコ−
ル酵母、ワイン酵母等で知られているサッカロマイセス
属に属する酵母が挙げられ、特に好ましくはサッカロマ
イセス・セレビシェ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃ
ｅｒｅｖｉｓｉａｅ）に属する酵母であり、また、みそ
・醤油等に用いられているものとして例えばサッカロマ
イセス・ロキシ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｒｏｕ
ｘｉｉ）やチゴサッカロマイセス・エスピ−（Ｚｙｇｏ
ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｓｐ．）に属する酵母
等、その他にもハンセヌラ（Ｈａｎｓｅｎｕｌａ）属、
キャンディダ（Ｃａｎｄｉｄａ）属、トルラスポラ（Ｔ
ｏｒｕｌａｓｕｐｏｒａ）属、トルロプシス（Ｔｏｒｕ
ｌｏｐｓｉｓ）属、ミコトルラ（Ｍｙｃｏｔｏｒｕｌ
ａ）属に属する幅広い範囲の可食性酵母が本発明に使用
できる。細菌としては、乳酸菌として知られるラクトバ
チルス・カゼイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃａｓ
ｅｉ）ラクトバチルス・アシドフィラス（Ｌａｃｔｏｂ
ａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｐｈｉｌｕｓ）等、また納豆
菌として知られるバチルス・ナット（Ｂａｃｉｌｌｕｓ
ｎａｔｔｏ）等広範囲の可食性の細菌、カビとしては
アスペルギルス・ニガ−（Ａｓｐｅｒｕｇｉｌｌｏｓｅ
ｎｉｇａｒ）やアスペルギルス・アワモリ（Ａｓｐｅ
ｒｕｇｉｌｌｏｓｅ ａｗａｍｏｒｉ）に属するものが
ごく一部として例示され、他にも広範囲の可食性のカビ
が使用できる。また、可食性の単細胞緑藻であるクロレ
ラとしてクロレラ・ブルガリスやスピルリナも本発明に
有効に使用できる。

【００１０】高分子化セレン含有菌体として、サッカロ
マイセス属に属する微生物は本発明の各用途において特
に優れた効果が認められること、その安全性が充分に確
認されていること、その製造方法が簡単であること、製
造費用が安価であること、セレン濃度がより高濃度の乾
燥菌体が簡単に調整できること等において特に好まし
い。

【００１１】また、高分子化セレン含有菌体を調整する
に当たっては、特開昭６０−２２４４５１号に開示され
た方法、即ち、予め無機セレンを添加した培地でバチル
ス・サブチルス等の微生物を培養・増殖させることによ
り得た有機化セレン含有微生物菌体を用いてもよいが、
本発明者らの発明による特開平４−４０８８８号明細書
の方法に従って調整された高分子化セレン含有菌体を用
いると、以下に説明する通りに高濃度の高分子化セレン
を含有する菌体が効率的に得られるメリットおよび効果
も高いことから特に好ましい。本製造法によれば、無機
セレンを添加した培地での菌体増殖の必要はないことか
ら、セレン濃度を菌体増殖阻害を生ずる濃度以上にする
ことが可能であり高濃度の高分子化セレンを含有した菌
体を製造することができる。また実質的にセレンを含有
しない培地で菌体を予め培養・増殖させるため、培養時
のセレンによる生育阻害が無く、セレンを添加した培地
で培養・増殖させる場合に比較し、短時間に大量の高分
子化セレン含有菌体を調整できる。さらに、菌体をバイ
オロジカルスペ−ス濃度以上に濃縮化することから反応
系を小さくでき、したがって反応後の廃液を少量化する
ことができ、また、反応液中にセレン以外の金属を含ま
ないため廃液処理が簡便である。

【００１２】本製造法についてさらに説明すると、上述
の高分子化セレンを蓄積することのできる微生物菌体
は、予め適当な方法に従って調整された培地または媒体
で適宜培養・増殖したものを用いれば良い。培養に当た
っては、上記に例示した対象とする微生物菌体のそれぞ
れを、通常培養する場合に使用されている培養培地組成
例えば炭素源、窒素源、無機塩等または培養媒体組成を
用い、適宜の培養温度にて培養すればよく、必要に応じ
予備培地または媒体で種菌培養した後各培養培地または
媒体で適宜培養・増殖せしめてもよい。菌体増殖曲線に
おける対数増殖期後期から定常期後期までの適宜な時期
に、通常の遠心分離やろ過等の手段により集菌すればよ
い。例えば水溶性無機セレン化合物として亜セレン酸を
用いる場合、好ましくは一般に菌体増殖曲線における亜
セレン酸還元酵素が生成される前段階である対数増殖期
後期から定常期初期の段階まで適宜培養して集菌すれ
ば、増殖菌体数が多く好適であるとともに、該菌体を用
いて実質的に菌体増殖を必要としない条件、好ましくは
バイオロジカルスペ−ス以上の菌体濃度に調整して亜セ
レン酸を含有する反応液と反応せしめた場合、セレンが
菌体に取り込まれても亜セレン酸還元酵素の作用を受け
ないことから実質的に無機セレンの生成を防止でき、良
好な高分子セレン含有菌体を得ることができる。

【００１３】菌体として酵母を用いた場合は、例えばＹ
ＰＧ培地等で種菌培養した後糖密培地で通常２５℃〜３
５℃で１２時間〜２４時間特に好ましくは１８時間〜２
０時間培養・増殖させた後培養菌体を集菌するのが好ま
しい。細菌として乳酸菌を用いた場合、例えばロイコノ
ストック培地等で通常２５℃〜３５℃で１５時間〜３０
時間特に好ましくは２０時間〜２４時間培養・増殖させ
て集菌すればよく、カビを用いた場合には、例えばＹＭ
培地で通常２０℃〜３０℃で３０時間〜５０時間特に好
ましくは３５時間〜４０時間培養・増殖させて集菌すれ
ばよく、単細胞緑藻を用いた場合には、例えば水を媒体
とするかもしくは参考例３に示した培地で通常２５℃〜
３３℃で２４時間〜４８時間特に好ましくは３０時間〜
４０時間培養・増殖させて集菌すればよい。

【００１４】次いで、該集菌した菌体から培養・増殖に
用いた培養培地または媒体を水等で数回洗浄して洗い流
して除去し、さらに、該菌体をセレンの高分子化基質お
よび水溶性セレン化合物を含有する水溶性（以下、反応
液ということがある）に分散せしめてセレンを高分子化
セレンとして菌体内に蓄積せしめるが、この反応をせし
める際、該菌体をバイオロジカルスペ−ス以上の菌体濃
度に調製して菌体増殖によるセレンの高分子化基質の消
費を完全に停止させ、セレンの高分子基質の消費を専ら
高分子化の反応用に向けさせることが必要である。この
バイオロジカルスペ−ス以上の菌体濃度に調整すると
は、菌体懸濁液（反応液）が本質的には該菌体の増殖を
許す成分を含んでいても、懸濁液の一定容積中に菌体が
実質的にそれ以上増殖することのできない状態、即ち菌
体増殖曲線における定常状態の菌体濃度以上の濃度の条
件下に調整することを意味する。例えば、酵母では１０
⁹ 個／ｍｌ以上、乳酸菌では１０⁸ 個／ｍｌ、クロレラ
では１０⁹ 個／ｍｌ以上であるので、反応に際しては酵
母では１〜５×１０⁹ 個／ｍｌ、乳酸菌では１〜５×１
０⁸ 個／ｍｌ、クロレラでは１〜５×１０⁹ 個／ｍｌの
菌体濃度で行えばよく、実用上はこれら微生物の懸濁液
における菌体濃度の測定は分光光度計によるＯ．Ｄ．値
で行うことから、対象菌体の増殖曲線の定常期状態にお
ける菌体濃度時点とする場合のＯ．Ｄ．値の測定誤差を
±１０％とすればよい。また、カビの場合はＯ．Ｄ．値
の測定が不可能であるので培養液量より少ない反応液に
菌体を懸濁して使用すればよい。

【００１５】次いで、該菌体をセレンの高分子化基質と
なり得る有機化合物および水溶性無機セレン化合物を含
有する水溶液に分散せしめて、菌体内に高分子化セレン
を蓄積せしめる。反応液中でのセレンの高分子化基質と
なり得る有機化合物および水溶性無機セレン化合物を含
有する水溶液は、両方を混合した水溶液にて上述のバイ
オロジカルスペ−ス以上の菌体濃度に分散させても、ま
たは逐次にまず該菌体を有機化合物水溶液に分散させて
から水溶性セレン化合物水溶液に分散させても、または
分散する順序を逆としてもいずれの過程を経ていてもか
まわず、上記の反応液に菌体をバイオロジカルスペ−ス
以上の菌体濃度に分散・接触せしめる過程であればいず
れでもかまわない。

【００１６】セレンの高分子化基質となり得る有機化合
物とは、菌体内反応機構である高エネルギ−リン酸化合
物合成機構、例えば解糖系反応機構やＴＣＡ回路反応機
構を作動させるに不可欠な成分であり、即ち菌体にとっ
てエネルギ−基質となり得る有機化合物であればよく、
具体的には糖および／またはアミノ酸が挙げられる。糖
としては、例えば、グルコ−ス、フルクト−ス、ガラク
ト−ス、シュ−クロ−ス、マルト−ス、トレハロ−スが
挙げられ、特に好ましくはグルコ−スである。アミノ酸
としては、例えばロイシン、イソロイシン、セリン等の
グルコゲニックアミノ酸系であればよく、特に好ましく
はロイシンまたはイソロイシンである。反応液である該
有機化合物水溶液には少なくとも上記糖および／または
アミノ酸と、必要に応じ緩衝液としてリン酸塩等を含有
する水溶液であるのが好ましい。さらに、必要に応じ高
ネルギ−リン酸化合物の補給源となりうるものとして、
アデニン、アデノシンを上記系に添加すると、より有効
に高分子化セレンが菌体内に蓄積される。反応に用いる
際の上記有機化合物水溶液のｐＨは、通常ｐＨ４〜７、
特に好ましくはｐＨ５〜６が例示される。リン酸塩等緩
衝液を用いた場合には該緩衝液を好ましいｐＨに調整す
ればよい。有機化合物水溶液の各々の成分の量的関係に
ついては、有機化合物水溶液全量に対し、糖とアミノ酸
は単独かまたは併用してもよく、糖は０．３％〜２％を
含有させるのが好ましく、アミノ酸は０．３％〜２％、
また必要に応じ緩衝液であるリン酸塩は０．０１Ｍ〜
０．３Ｍ用いればよく、また、アデニン、アデノシンを
加える場合には、０．００１％〜０．０２％を用いれば
よい。

【００１７】次いで、本発明に使用できるセレンの供給
源である水溶性無機セレン化合物は、対象菌体の細胞膜
を透過し、菌体内で蛋白質と結合して高分子化セレンと
変換せれうる適当な水溶性のセレン化合物であればよ
く、例えば亜セレン酸（Ｈ₂ ＳｅＯ₃ ）、二酸化セレン
（ＳｅＯ₂ ）、セレン酸（Ｈ₂ ＳｅＯ₄ ）等の無機セレ
ンが挙げられるが、特に亜セレン酸を用いるのが好まし
い。反応に用いる量としては反応液中のセレン濃度が２
ｐｐｍ以上、好ましくは１０〜１００ｐｐｍとなるよう
に水溶性セレン化合物の添加量を調整すればよい。上述
のとおり、反応液へ菌体を同時または逐次に分散し、振
盪させて反応せしめるが、反応における反応温度は２０
℃〜４０℃特に好ましくは２５℃〜３５℃で、反応時間
は４時間以上特に８〜２０時間反応せしめるのが好まし
い。反応後、遠心分離等の手段で集菌し、好ましくはさ
らに回収菌体を水で数回洗浄することにより高分子化さ
れたセレンを含有する微生物菌体が得られる。この菌体
の毒性は無機セレンに比べて極めて低い。得られた高分
子化セレン含有菌体は必要に応じ凍結乾燥、加熱乾燥や
スプレ−ドライ等をして保存すればよく、好ましくは９
０℃以上にて加熱乾燥して用いればよい。

【００１８】このようにして得られた高分子化セレン含
有菌体中の高分子化セレンは、セファデックスＧ５０カ
ラムによる溶出パタ−ンとセレンの分布から、８５％以
上のセレンが蛋白質である高分子分画に存在するもので
あった。また、高分子化セレン含有菌体の菌体内セレン
濃度は５００〜３０００ｐｐｍ／乾燥菌体程度であっ
た。

【００１９】本発明の餌料性疾患とは、例えばマスで
は、成長停止、斃死率増加、高度の貧血、肝臓の脂肪変
性、腎臓の異常組織構造とコレステロ−ルの沈着、コイ
では、背こけ病（筋ジストロフィ）の発生、糖尿病的症
状（例えば血糖量の増加等）、腎糸球体、網膜における
毛細血管の変性、ランゲルハンス氏島のＢ細胞の顆粒消
失、空胞変性、線維組織の増殖、ウナギでは、飼料効率
の低下と血液中の総コレステロ−ル量の増加、ハマチ
（ブリ）では、胆汁うっ血、血球破壊、肝実質細胞の萎
縮と部分壊死、肝臓の貧血と灰白色化、眼球突出、背こ
け病状、マダイでは、成長および肥満度の低下、筋肉中
の脂肪減少、水分増加、血漿中のトリグリセライドおよ
び総コレステロ−ルの減少、チャネルキャットフイッシ
ュでは、成長、飼料効率、生残率の低下、高度の貧血、
眼球突出、腹水、肛門の腫脹、筋肉線維、腎臓および膵
臓組織の変化等が例示され、特にこれらの症状の前後に
生ずるＧＯＴ（グルタミン酸−オキサロ酢酸トランスア
ミナーゼ）、ＧＰＴ（グルタミン酸−ピルビン酸トラン
スアミナーゼ）、ＴＢＡ（２−チオバルビツール酸）値
等の検査値異常や、肝臓の脂肪変性、肝実質細胞の萎縮
と部分壊死、肝臓の貧血と灰白色化、黄疸症等の餌料性
肝臓機能障害も重要な病変である。

【００２０】有機化セレン含有菌体である上記高分子化
セレン含有菌体を魚類に投与したところ、前述の餌料性
疾患、特に餌料性肝臓障害の治療・予防効果が認めら
れ、この効果は従来知られていない全く新規な効果であ
った。この効果は、公知の方法により有機化セレン含有
菌体から抽出した有機化セレンにも認められた。有機化
セレンとしては、セレノメチオニン等の化合物であって
もよいが、特に効果において好ましい高分子化セレンが
例示され、この高分子化セレンとしては、上記の特開平
４−４０８８８号に記載の高分子化セレン含有菌体由来
の高分子化セレンが特に好ましい。また、水中への逸散
がなく、安価であることから、有機化セレンが菌体に含
有された有機化セレン含有菌体が特に効率的であり好ま
しい。本発明の魚類用餌料性疾患治療・予防剤の製造に
当たっては、前記により得られた有機化セレンまたは有
機化セレン含有菌体を、そのまま、あるいは公知の賦形
剤、安定剤等を加えて、さらに必要に応じてビタミン等
の各種養分およびその他の添着剤等を含む魚類用配合剤
となしてもよく、その形状としては、粉体、顆粒、ペレ
ット、懸濁液等の適宜の状態に調整すればよい。この魚
類用餌料性疾患治療・予防剤を投与する場合には、魚類
に対し、単独で投与してもよいが、魚類用餌料に混合し
て給与することが簡便であり好ましい。投与時期は、疾
患の予防剤として常時投与しても、また最も必要とされ
る飼養後半に添加してもよく、治療を目的として疾患時
に投与してもよい。投与量は、魚の種類、大きさ、症
状、使用目的等により異なるが、例えばハマチにおいて
は通常、有機化セレンとして０．００１〜１０ｍｇ／ｋ
ｇ・日、好ましくは０．００２〜２ｍｇ／ｋｇ・日が例
示され、コイでは通常、０．００１〜１ｍｇ／ｋｇ・
日、好ましくは０．００２〜０．５ｍｇ／ｋｇ・日が例
示される。

【００２１】本発明の魚類用餌料性疾患治療・予防剤を
添加して魚類用餌料を調整するに際しては、魚類用餌料
性疾患治療・予防剤である有機化セレン、有機化セレン
含有菌体またはそれらの処理物と、公知の他の魚類用飼
料原料とを添加または混合して魚類用餌料とすればよ
く、例えば、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、硫酸
カルシウム、小麦粉、デンプン、デキストリン、飼料用
酵母等や飼料用原料の穀類、そうこう類、粕類と混合し
て希釈したり、あるいはビタミン、ミネラル等のプレミ
ックスに添加して使用してもよい。通常、生餌あるいは
配合飼料に添加して本発明が対象とする魚類、例えばブ
リ、ハマチ、マダイ、ヒラメ等の海水魚やエビ等の甲殻
類あるいはウナギ、アユ、マス、コイ、ナマズ等の淡水
魚に給与する方法が好ましい。また生餌の場合、アルギ
ン酸ナトリウム、グァ−ガム等の添着剤を同時に使用し
てもよい。通常、魚類用餌料中のセレンの濃度は、有機
化セレンに由来するセレンの濃度として、０．１〜１０
ｐｐｍ程度であることが好ましい。

【００２２】

【実施例】以下に本発明に関し、実施例および参考例を
挙げて具体的に説明するが、本発明はこれによって何等
限定されるものではない。 参考例１ 高分子化セレン含有菌体（サッカロマイセス
・セレビシェ）の調製 ｐＨ５に調製したＹＰＧ培地（グルコ−ス４％、ペプト
ン１％、イ−ストエキス０．５％、リン酸カリウム０．
５％、硫酸マグネシウム０．２％）１００ｍｌを５００
ｍｌ容三角フラスコに分注し１２１℃で１５分殺菌した
後、サッカロマイセス・セレビシェＦＴＹ−３（ＦＥＲ
Ｍ ＢＰ−２３２６）を１白金耳植付け、３０℃で２４
時間振盪培養し、種菌とした。４基の３０ｌ容ジャ−フ
ァ−メンタ−を用い、それぞれｐＨ５に調製し１２０℃
で３０分加熱滅菌した糖蜜培地（糖蜜１０％（蔗糖とし
て４％含有）、尿素０．５％、７５％リン酸０．１％、
硫酸亜鉛０．０００３％）２０ｌに対し、前記の種菌各
々５００ｍｌを植え付け、３２℃、通気量３０ｌ／分、
攪拌速度３００ｒｐｍで１６時間培養した。連続遠心機
を使用して集菌し（１２０ｌ／時間）、約２０ｌの水を
加えて菌体を懸濁し、遠心分離して菌体を洗浄した。こ
の操作を３回繰り返した後、菌体濃度を２．５×１０⁹
個／ｍｌに調製してバイオロジカルスペ−ス以上の菌体
濃度の状態とし、０．５％グルコ−スを含む０．０３Ｍ
リン酸緩衝液（ｐＨ５）５ｌに懸濁し、亜セレン酸０．
４ｇ（セレン濃度として４８ｐｐｍ）を加えて通気量１
０ｌ／分、攪拌速度２００ｒｐｍ、振盪（反応）温度３
０℃で反応せしめた。１８時間後、遠心分離して集菌
し、さらに２０ｌの水で３回洗浄し、湿菌体３．５Ｋｇ
を得た。その後、７ｌの水を加えて攪拌、分散した後、
９０℃で１５分間加熱し、コチワ式スプレ−ドライヤ−
を用い、送風１４０℃、排風６０℃、送液４ｌ／時間の
条件でスプレ−ドライし、乾燥粉末１．１Ｋｇを得た
（水分４．１％、菌体内セレン濃度１９１０ｐｐｍ）。
セレンの測定は、乾燥菌体を硝酸と過塩素酸で酸化分解
し、この分解液を２，３−ジアミノナフタレンによる蛍
光光度法により測定した。

【００２３】参考例２ 高分子化セレン含有菌体中の高
分子化セレン 参考例１で得られた菌体５ｇを５０ｍｌの水に懸濁し、
１Ｎ苛性ソ−ダでｐＨ７に調製した後、ポジトロン破砕
機で菌体を破砕し、さらに９５℃で１０分加熱した後、
１００００ｒｐｍで１５分間遠心分離し、上清３８ｍｌ
を得た（セレン濃度１７４ｐｐｍ）。上清１０ｍｌを凍
結乾燥した後、２ｍｌの水に溶解し、その内１ｍｌを用
いてセファデックスＧ５０の１００ｍｌカラム（２×３
２ｃｍ）による溶出パタ−ンとセレンの分布を調べた。
その結果、８５％以上のセレンが高分子分画に存在し
た。

【００２４】参考例３ 高分子化セレン含有菌体（クロ
レラ・ブルガリス）の調製 クロレラ・ブルガリス（Ｃｈｒｏｒｅｌｌａ ｂｕｒｕ
ｇａｌｌｉｓ）を２％グルコ−ス、０．４％尿素、０．
１％リン酸塩、０．１％硫酸マグネシウム、０．０３％
硫酸第一鉄、０．１％塩化カルシウムを含む培地で３０
℃で３０時間程度通常の条件で培養し、培養液８０ｌか
ら得られた菌体を８０ｌの水で３回洗浄した後、該菌体
を０．５％グルコ−スを含む０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐ
Ｈ６）２０ｌに懸濁して菌体濃度をバイオロジカルスペ
−ス以上の菌体濃度である２×１０ 9個／ｍｌに調製
し、亜セレン酸４ｇ（セレン濃度として１２０ｐｐｍ）
を加えて、３０℃で１８時間振盪して反応せしめ、菌体
濃度を測定して遠心分離にて集菌し、さらに菌体を８０
ｌの水で２回洗浄した後凍結乾燥した。該菌体のセレン
濃度は２０６０ｐｐｍであった。

【００２５】実施例１ マゴイに対する酸化脂質給与に
よるセレン含有物質の効果 体重約５０ｇのマゴイ１０尾を１群として合計６区を用
意した。表１に示す給与飼料に、陰性対照区には新鮮な
油脂（ＰＯＶ１０）を、陽性対照区と残りの４つの区に
は変敗させた油脂（ＰＯＶ１２０）をそれぞれ使用し
た。

【００２６】

【表１】

【００２７】残りの４つの区に各々、亜セレン酸ナトリ
ウム、特開昭６０−２２４４５１号公報の製造例にした
がって調製したセレン含有バチルス・サブチルス（セレ
ン濃度；２１００ｐｐｍ／乾燥菌体）、参考例１のセレ
ン含有サッカロマイセス・セレビシェ（セレン濃度；１
９１０ｐｐｍ／乾燥菌体）および参考例３のセレン含有
クロレラ・ブルガリス（セレン濃度；２０６０ｐｐｍ／
乾燥菌体）をセレン濃度として１ｐｐｍとなるように給
与飼料に添加混合し調製した。調製した各飼料をマゴイ
に対し３２日間給与し、給与終了後に各区の成長率、飼
料効率並びに血漿のＴＢＡ値（ｎｍｏｌＭＡ／ｍｌ）、
ＧＯＴ（ＫＵ）、ＧＰＴ（ＫＵ）を測定した。前述の陰
性および陽性対照区の飼料中セレン含有量は共に０．０
５ｐｐｍであった。なお飼育条件は保温、流水飼育（水
温２６℃〜２７℃）で実施した。その結果、表２に示さ
れる通り陽性対照区に比べ参考例１の投与区および参考
例３の投与区ならびに特開昭６０−２２４４５１の投与
区は、ＴＢＡ値やＧＯＴ、ＧＰＴの有意な低下が認めら
れた。特に参考例１の投与区は陰性対照区の値に最も近
く、顕著な効果が認められた。

【００２８】

【表２】

【００２９】実施例２ マゴイに対するセレン含有酵母
の投与量 体重約５０ｇのマゴイ１０尾を１群として合計５区を用
意した。前記の表１に示す給与飼料に、陰性対照区には
ＰＯＶ１０の油脂を、陽性対照区と残りの３つの区には
ＰＯＶ１２０の油脂を使用した。残りの３つの区に参考
例１のセレン含有サッカロマイセス・セレビシェ（セレ
ン濃度；１９１０ｐｐｍ／乾燥菌体）をセレン濃度とし
て０．１ｐｐｍ、１ｐｐｍ、１０ｐｐｍとなるように給
与飼料に添加混合し調製した。調製した各飼料をマゴイ
に対し３２日間給与し、給与終了後に各区の成長率、飼
料効率ならびに血漿のＴＢＡ値、ＧＯＴ、ＧＰＴを測定
した。なお陰性、陽性対照区の飼料中セレン含有量は共
に０．０５ｐｐｍであった。また飼育条件は実施例１と
同様である。その結果は表３に示される通り、陽性対照
区に比べセレン含有酵母投与区はＴＢＡ値やＧＯＴ、Ｇ
ＰＴの有意な低下が認められ、特にセレン濃度の１ｐｐ
ｍと１０ｐｐｍ区は陰性対照区と同様な値を示した。

【００３０】

【表３】

【００３１】実施例３ 経口投与による急性毒性試験 ウイスタ−系ラット５匹を１群とし、亜セレン酸ナトリ
ウム、特開昭６０−２２４４５１号製造例にしたがって
調製したセレン含有バチルス・サブチルス菌体（セレン
濃度；２１００ｐｐｍ／乾燥菌体）、および参考例１の
セレン含有サッカロマイセス・セレビシェ（セレン濃
度；１９１０ｐｐｍ／乾燥菌体）を経口投与し、その生
存率を調べた。その結果は表４に示される通り、特開昭
６０−２２４４５１の投与群および参考例１の投与群に
おいては、極めて毒性が低いものであった。

【００３２】

【表４】

【００３３】実施例４ マゴイにおける背こけ病ならび
に斃死率の改善 体重約５ｇのマゴイ２００尾を１群として合計３区を用
意した。表５に示す給与飼料に、陰性対照区にはＰＯＶ
７の油脂を、陽性対照区と参考例１のセレン含有サッカ
ロマイセス・セレビシェ（セレン濃度；１９１０ｐｐｍ
／乾燥菌体）をセレン濃度として１ｐｐｍ添加調製した
区には、ＰＯＶ２５０〜２８０の油脂を使用して７月上
旬から１０月上旬までの約９０日間流水（水温２０℃〜
２５℃）で飼育し、成長率、背こけ病発生率ならびに斃
死率に及ぼす効果を調べた。投餌量は１日当り乾物とし
て約４．５％を目安とし、摂餌状態により調節した。な
お陰性、陽性対照区の飼料中セレン含有量はともに０．
４６ｐｐｍであった。

【００３４】

【表５】

【００３５】その結果、表６に示される通り参考例１の
投与区は背こけ病の発生は認められず、陰性対照区に比
べ成長率に優れ、幣死率も少なかった。

【００３６】

【表６】

【００３７】実施例５ ハマチ当才魚に対するセレン含
有酵母ならびにグルタチオンの効果 体重約１００ｇのハマチ１２尾を１群とし合計３区を用
意し、表７に示す給与飼料で飼育した。この飼料に使用
したブラウンフィッシュミ−ルのＴＢＡ値は５．１ｍｇ
ＭＡ／Ｋｇであった。

【００３８】

【表７】

【００３９】セレン含有酵母区は参考例１のセレン含有
サッカロマイセス・セレビシェ（セレン濃度；１９１０
ｐｐｍ／乾燥菌体）をセレン濃度として１ｐｐｍ添加混
合して、グルタチオン区はグルタチオンを５００ｐｐｍ
添加混合して調製し、対照区とともにハマチに対し３０
日間給与し、給与終了後に成長率、飼料効率ならびに血
漿のＴＢＡ値、ＧＯＴ、ＧＰＴを測定した。なお対照区
ならびにグルタチオン区の飼料中セレン含有量はそれぞ
れ０．５４ｐｐｍ、０．５６ｐｐｍであった。また飼育
条件は流水飼育（水温２４℃〜２８℃）で実施した。そ
の結果表８に示される通りセレン含有区は、グルタチオ
ン区に比べＴＢＡ値やＧＯＴ、ＧＰＴを有意に低下せし
め、好ましい効果が認められた。

【００４０】

【表８】

【００４１】実施例６ ハマチ２才魚に対する生餌給与
によるセレン含有酵母の効果 ハマチ２才魚が５０００尾放養されている生簀を２生簀
用意した。試験区には参考例１のセレン含有サッカロマ
イセス・セレビシェ（セレン濃度；１９１０ｐｐｍ／乾
燥菌体）をイワシ生餌に対しセレン濃度として０．２ｐ
ｐｍになるように添着剤あるいはビタミンプレミックス
（三鷹製薬株式会社）とともに混じて給与し、対照区も
同様の条件で参考例１のセレン含有酵母を除いて給与し
た。給与期間は９月上旬から１２月上旬までの約３カ月
間で延べ７３回給餌を行い、血液性状（各区１０尾ずつ
サンプリング）、幣死率ならびに黄疸発生率を調査し
た。その結果、表９に示される通り、試験区は対照区に
比べ血漿中のＴＢＡ値、ＧＯＴ、ＧＰＴが有意に低下
し、コレステロ−ル含量（ｍｇ／ｄｌ）は上昇してお
り、黄疸症の発生もごくわずかで、幣死率も減少した。

【００４２】

【表９】

【００４３】

【発明の効果】本発明によれば、魚類用餌料性疾患の治
療・予防に効果のある、安価な治療・予防剤を提供する
ことができる。

Claims (5)

(57)【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 有機化セレンを有効成分とする魚類用餌
   料性疾患治療・予防剤。
2. 【請求項２】 有機化セレンが、有機化セレン含有菌体
   である請求項１記載の魚類用餌料性疾患治療・予防剤。
3. 【請求項３】 有機化セレンが、高分子化セレンである
   請求項１記載の魚類用餌料性疾患治療・予防剤。
4. 【請求項４】 有機化セレン含有菌体が、高分子化セレ
   ンを菌体内に蓄積することのできる微生物菌体をセレン
   の高分子化基質である有機化合物および水溶性無機セレ
   ン化合物を含有する水溶液に、該菌体がバイオロジカル
   スペース以上の菌体濃度となるように分散せしめ、該菌
   体に高分子セレンを蓄積せしめた高分子化セレン含有菌
   体である請求項２記載の魚類用餌料性疾患治療・予防
   剤。
5. 【請求項５】 有機化セレン含有菌体が可食性酵母であ
   る請求項２記載の魚類用餌料性疾患治療・予防剤。