JP2961107B1 - 空気動力圧力差式淹浸バイオリアクター - Google Patents
空気動力圧力差式淹浸バイオリアクターInfo
- Publication number
- JP2961107B1 JP2961107B1 JP20555098A JP20555098A JP2961107B1 JP 2961107 B1 JP2961107 B1 JP 2961107B1 JP 20555098 A JP20555098 A JP 20555098A JP 20555098 A JP20555098 A JP 20555098A JP 2961107 B1 JP2961107 B1 JP 2961107B1
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- air
- pressure
- brewing
- bioreactor
- culture
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M21/00—Bioreactors or fermenters specially adapted for specific uses
- C12M21/08—Bioreactors or fermenters specially adapted for specific uses for producing artificial tissue or for ex-vivo cultivation of tissue
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M23/00—Constructional details, e.g. recesses, hinges
- C12M23/20—Material Coatings
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M23/00—Constructional details, e.g. recesses, hinges
- C12M23/34—Internal compartments or partitions
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M23/00—Constructional details, e.g. recesses, hinges
- C12M23/38—Caps; Covers; Plugs; Pouring means
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M25/00—Means for supporting, enclosing or fixing the microorganisms, e.g. immunocoatings
- C12M25/02—Membranes; Filters
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M41/00—Means for regulation, monitoring, measurement or control, e.g. flow regulation
- C12M41/30—Means for regulation, monitoring, measurement or control, e.g. flow regulation of concentration
- C12M41/34—Means for regulation, monitoring, measurement or control, e.g. flow regulation of concentration of gas
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M41/00—Means for regulation, monitoring, measurement or control, e.g. flow regulation
- C12M41/40—Means for regulation, monitoring, measurement or control, e.g. flow regulation of pressure
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Sustainable Development (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Clinical Laboratory Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
Abstract
【要約】
【課題】 液体培地における植物の組織培養に適用さ
れ、植物の成長・分化に必要な養分を提供でき、無菌状
態を維持できるほか、光度、安定した気圧、通気性、成
長空間、温度、湿度などの適切な物理環境を提供できる
ようなバイオリアクターを提供することを課題とする。 【解決手段】 空気圧力調整器を気体源として使用し、
加圧時には、貯蔵糟内の培地を培養糟内に押し込み、培
養糟内の植物組織をその中に淹浸させ、同時にセルフタ
イマーを使用して電源・圧力供給の制御、淹浸時間・頻
度の調整を行い、一方加圧停止時には、培養糟内の培地
の位置エネルギーが高いことを動力として利用し、液体
培地を自身の重力によって平衡状態に達させ、また、気
体源と貯蔵糟の間には気体加湿設計がなされ、バイオリ
アクター内の湿った空気が放出して液体培地の総量に変
化が生じるのを抑えられるような、空気動力圧力差式淹
浸バイオリアクターを作成した。
れ、植物の成長・分化に必要な養分を提供でき、無菌状
態を維持できるほか、光度、安定した気圧、通気性、成
長空間、温度、湿度などの適切な物理環境を提供できる
ようなバイオリアクターを提供することを課題とする。 【解決手段】 空気圧力調整器を気体源として使用し、
加圧時には、貯蔵糟内の培地を培養糟内に押し込み、培
養糟内の植物組織をその中に淹浸させ、同時にセルフタ
イマーを使用して電源・圧力供給の制御、淹浸時間・頻
度の調整を行い、一方加圧停止時には、培養糟内の培地
の位置エネルギーが高いことを動力として利用し、液体
培地を自身の重力によって平衡状態に達させ、また、気
体源と貯蔵糟の間には気体加湿設計がなされ、バイオリ
アクター内の湿った空気が放出して液体培地の総量に変
化が生じるのを抑えられるような、空気動力圧力差式淹
浸バイオリアクターを作成した。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、空気動力圧力差式
淹浸バイオリアクターに関するもので、特に液体培地を
使用して植物組織を大量に培養するためのバイオリアク
ター、すなわち植物の成長・分化に必要な養分を提供
し、無菌状態を維持できるほか、光度、安定した気圧、
通気性、成長空間、温度、湿度などの適切な物理環境を
提供できるようなバイオリアクターに関するものであ
る。
淹浸バイオリアクターに関するもので、特に液体培地を
使用して植物組織を大量に培養するためのバイオリアク
ター、すなわち植物の成長・分化に必要な養分を提供
し、無菌状態を維持できるほか、光度、安定した気圧、
通気性、成長空間、温度、湿度などの適切な物理環境を
提供できるようなバイオリアクターに関するものであ
る。
【０００２】
【従来の技術】植物組織の培養過程は、そのほとんどが
大量生産、低い汚染リスク、低い人工操作コストを考慮
するが、現在使用されている培養技術ではこれらの要求
を完全に満たすことはできない。例えば、植物組織培養
の公知技術である、固型培地を使用した静置培養法で
は、単一容器内で培養できる植物培養物の数量は非常に
限られ、また、各培養物ごとに固型培地に植え込む操作
を行う必要があり、操作過程で汚染されるリスクが高
い。そして、液体培地を使用した平面往復式又は回転式
の振盪培養法では、植物培養物を長時間液体培地に浸す
ため植物体が痛み易く、そのうえ振盪過程でも植物体ど
うしのぶつかり合いによって傷がついてしまう。このほ
か、液体培地の回転ドラム式バイオリアクターを使用し
た回転培養法では、植物体に充分な気体を供給できるも
のの、回転の過程で植物体が大きく移動するため、植物
体どうしあるいは植物体とリアクターの筒壁がぶつかる
確率はさらに高くなり、植物体を傷つけてしまう。
大量生産、低い汚染リスク、低い人工操作コストを考慮
するが、現在使用されている培養技術ではこれらの要求
を完全に満たすことはできない。例えば、植物組織培養
の公知技術である、固型培地を使用した静置培養法で
は、単一容器内で培養できる植物培養物の数量は非常に
限られ、また、各培養物ごとに固型培地に植え込む操作
を行う必要があり、操作過程で汚染されるリスクが高
い。そして、液体培地を使用した平面往復式又は回転式
の振盪培養法では、植物培養物を長時間液体培地に浸す
ため植物体が痛み易く、そのうえ振盪過程でも植物体ど
うしのぶつかり合いによって傷がついてしまう。このほ
か、液体培地の回転ドラム式バイオリアクターを使用し
た回転培養法では、植物体に充分な気体を供給できるも
のの、回転の過程で植物体が大きく移動するため、植物
体どうしあるいは植物体とリアクターの筒壁がぶつかる
確率はさらに高くなり、植物体を傷つけてしまう。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】したがって、上述した
問題を解決するため、本発明は空気動力圧力差式淹浸バ
イオリアクターを提供することを目的とするものであ
る。
問題を解決するため、本発明は空気動力圧力差式淹浸バ
イオリアクターを提供することを目的とするものであ
る。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明は、空気動力圧力
差式淹浸バイオリアクターに関するもので、動力として
気体を使用し、その動力によって生じた圧力差と淹浸の
原理を利用して、大量の植物組織を液体培地に淹浸し培
養を行うことを特徴とするものである。本発明の主要設
計原理は次の通りである。すなわち、空気圧力調整器を
気体源として使用し、加圧時には、貯蔵糟内の培地が培
養糟内に押し込まれ、培養糟内の植物組織をその中に淹
浸させる。また電源・圧力供給の制御、淹浸時間・頻度
の調整にはセルフタイマーを使用する。一方加圧停止時
には、培養糟内の培地の位置エネルギーが高いことを動
力として利用し、液体培地を自身の重力によって平衡状
態に達させる。また、気体源と貯蔵糟の間には気体加湿
設計がなされ、バイオリアクター内の湿った空気が放出
して液体培地の総量に変化が生じるのを抑えている。
差式淹浸バイオリアクターに関するもので、動力として
気体を使用し、その動力によって生じた圧力差と淹浸の
原理を利用して、大量の植物組織を液体培地に淹浸し培
養を行うことを特徴とするものである。本発明の主要設
計原理は次の通りである。すなわち、空気圧力調整器を
気体源として使用し、加圧時には、貯蔵糟内の培地が培
養糟内に押し込まれ、培養糟内の植物組織をその中に淹
浸させる。また電源・圧力供給の制御、淹浸時間・頻度
の調整にはセルフタイマーを使用する。一方加圧停止時
には、培養糟内の培地の位置エネルギーが高いことを動
力として利用し、液体培地を自身の重力によって平衡状
態に達させる。また、気体源と貯蔵糟の間には気体加湿
設計がなされ、バイオリアクター内の湿った空気が放出
して液体培地の総量に変化が生じるのを抑えている。
【０００５】該バイオリアクターは主に、培養糟、貯蔵
糟、連結管、空気増湿器、空気圧力調整器、及び電源セ
ルフタイマーとからなる。図１は、本発明によるバイオ
リアクターを図示したものである。本発明によるバイオ
リアクターは、液体培地における植物の組織培養に適用
される。先ず、固型培地で成長した植物の組織を無菌環
境下で本発明によるバイオリアクターの培養糟に移し、
培養糟の上蓋と密封パッドを閉じる。培養糟内には網棚
と支持棒があり、これは、培養糟内の液体培地が貯蔵糟
内の液体培地と同じ高さまで下がった時、培養糟内の植
物組織を支持棒と網棚で支えて液体培地に浸からないよ
うにし、植物体が培地に長時間浸かって痛んでしまうの
を防止する目的で設けられたものである。続いて、適度
な比率の液体培地（例えば、ユリの鱗茎を培養する場
合、２〜３ｍｌ／鱗茎）をバイオリアクターの貯蔵糟内
に入れ、培養糟と同様に上蓋と密封パッドを閉じる。以
上の操作は全て無菌環境下で行われなければならない。
糟、連結管、空気増湿器、空気圧力調整器、及び電源セ
ルフタイマーとからなる。図１は、本発明によるバイオ
リアクターを図示したものである。本発明によるバイオ
リアクターは、液体培地における植物の組織培養に適用
される。先ず、固型培地で成長した植物の組織を無菌環
境下で本発明によるバイオリアクターの培養糟に移し、
培養糟の上蓋と密封パッドを閉じる。培養糟内には網棚
と支持棒があり、これは、培養糟内の液体培地が貯蔵糟
内の液体培地と同じ高さまで下がった時、培養糟内の植
物組織を支持棒と網棚で支えて液体培地に浸からないよ
うにし、植物体が培地に長時間浸かって痛んでしまうの
を防止する目的で設けられたものである。続いて、適度
な比率の液体培地（例えば、ユリの鱗茎を培養する場
合、２〜３ｍｌ／鱗茎）をバイオリアクターの貯蔵糟内
に入れ、培養糟と同様に上蓋と密封パッドを閉じる。以
上の操作は全て無菌環境下で行われなければならない。
【０００６】上述した貯蔵糟及び培養糟は、並列に並べ
てもよいし、培養糟を貯蔵糟の上に垂直に積み重ねても
よい。
てもよいし、培養糟を貯蔵糟の上に垂直に積み重ねても
よい。
【０００７】上述した培養糟には第１の圧力平衡口が設
けられ、該糟内の圧力を平衡に保つために使用される。
また、貯蔵糟内にも同様に第２の圧力平衡口が設けら
れ、貯蔵糟内の圧力を平衡に保つために使用される。且
つ、上述した第１の圧力平衡口と第２の圧力平衡口は、
それぞれ空気用濾過除菌装置に連結し、バイオリアクタ
ーに出入りする気体を無菌状態に保っている。
けられ、該糟内の圧力を平衡に保つために使用される。
また、貯蔵糟内にも同様に第２の圧力平衡口が設けら
れ、貯蔵糟内の圧力を平衡に保つために使用される。且
つ、上述した第１の圧力平衡口と第２の圧力平衡口は、
それぞれ空気用濾過除菌装置に連結し、バイオリアクタ
ーに出入りする気体を無菌状態に保っている。
【０００８】上述した空気用濾過除菌装置としては、ニ
トロセルロース膜又は綿花製濾過除菌装置が使用できる
が、コスト面から言えば、空気用綿花製濾過除菌装置を
使用するほうが経済的である。該空気用綿花製濾過除菌
装置は、綿花若干量と、耐熱１２５℃の１．５ｍｌ微量
用エペンドルフ（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ）で、上蓋及び底
部に穴を開け、上蓋と本体の繋ぎを取り除いた後アルコ
ールランプ或はその他の熱源で上蓋を溶かして落ちない
ように本体に粘着させ培養糟の上に固定したエペンドル
フからなる。
トロセルロース膜又は綿花製濾過除菌装置が使用できる
が、コスト面から言えば、空気用綿花製濾過除菌装置を
使用するほうが経済的である。該空気用綿花製濾過除菌
装置は、綿花若干量と、耐熱１２５℃の１．５ｍｌ微量
用エペンドルフ（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ）で、上蓋及び底
部に穴を開け、上蓋と本体の繋ぎを取り除いた後アルコ
ールランプ或はその他の熱源で上蓋を溶かして落ちない
ように本体に粘着させ培養糟の上に固定したエペンドル
フからなる。
【０００９】上述した貯蔵糟と培養糟は繋がっており、
且つ貯蔵糟は第１の連結管を経て空気増湿器に連結して
いる。この空気増湿器内にはプラスチック片が浮かんで
おり、このプラスチック片は、水分の蒸発を減らし、そ
の流失速度を小さくすることができる。上述した空気増
湿器はさらに、バイオリアクターに加える圧力を制御す
るために空気圧力調整器に連結し、この空気圧力調整器
はさらに電源セルフタイマーに連結している。
且つ貯蔵糟は第１の連結管を経て空気増湿器に連結して
いる。この空気増湿器内にはプラスチック片が浮かんで
おり、このプラスチック片は、水分の蒸発を減らし、そ
の流失速度を小さくすることができる。上述した空気増
湿器はさらに、バイオリアクターに加える圧力を制御す
るために空気圧力調整器に連結し、この空気圧力調整器
はさらに電源セルフタイマーに連結している。
【００１０】電源セルフタイマーを第１時間に設定する
と電源が入り、空気圧力調整器から空気用濾過除菌膜装
置および第１の連結管を経て貯蔵糟に加圧される。この
時、貯蔵糟内の圧力は培養糟内の圧力よりも大きいた
め、貯蔵糟内の液体培地を培養糟内に押し込み、植物組
織を液体培地に淹浸させることができる。この時、培養
糟内には安定した気泡が発生する。第２時間、すなわち
電源が停止し加圧も停止すると、培養糟内の培地の位置
エネルギーが高いことを動力として利用し、該液体培地
を自身にかかる重力によって自動的に平衡に達させ、一
定時間経過後には培養糟内の液体培地がゆっくりと貯蔵
糟内に戻っていくようにする。
と電源が入り、空気圧力調整器から空気用濾過除菌膜装
置および第１の連結管を経て貯蔵糟に加圧される。この
時、貯蔵糟内の圧力は培養糟内の圧力よりも大きいた
め、貯蔵糟内の液体培地を培養糟内に押し込み、植物組
織を液体培地に淹浸させることができる。この時、培養
糟内には安定した気泡が発生する。第２時間、すなわち
電源が停止し加圧も停止すると、培養糟内の培地の位置
エネルギーが高いことを動力として利用し、該液体培地
を自身にかかる重力によって自動的に平衡に達させ、一
定時間経過後には培養糟内の液体培地がゆっくりと貯蔵
糟内に戻っていくようにする。
【００１１】肥大過程にあるカサブランカの鱗茎を本発
明の空気動力圧力差式淹浸バイオリアクターで培養する
場合、好ましい淹浸時間は一日平均８〜１２時間で、平
均４回に分けて実施する。
明の空気動力圧力差式淹浸バイオリアクターで培養する
場合、好ましい淹浸時間は一日平均８〜１２時間で、平
均４回に分けて実施する。
【００１２】上述したバイオリアクターの貯蔵糟は、培
養糟としても使用できる。
養糟としても使用できる。
【００１３】さらに、図２に示されているように、本発
明によるもう１つの空気動力圧力差式淹浸バイオリアク
ターは、植物組織を含有する培養糟と、培養糟の真下に
設置され液体培地を含有する貯蔵糟とからなり、この培
養糟と貯蔵糟は繋がっており、培養糟内には該糟内の圧
力を平衡に保つための第１の圧力平衡口が設けられてい
る。貯蔵糟からは第１の連結管が伸び、第２の圧力平衡
口を経て空気増湿器に連結している。第１の連結管及び
第２の圧力平衡口に連結している空気用濾過除菌膜装置
は、気体源の主要な入り口であるため、空気用綿花製濾
過除菌装置で代えることはできない。電源セルフタイマ
ーの第１時間の加圧時には、加えられた圧力は空気用濾
過除菌膜装置及び第１の連結管を経て貯蔵糟に達する。
この時、貯蔵糟内の圧力は培養糟内の圧力よりも大きい
ため、貯蔵糟内の液体培地は培養糟内に押し込まれ、培
養される植物組織を液体培地に浸すことができる。電源
セルフタイマーの第２時間の加圧停止時には、培養糟内
の培地の位置エネルギーが高いことを動力として利用
し、該液体培地を自身の重さによって自動的に平衡に達
させる。すなわち、一定時間経過後、培養糟内の液体培
地がゆっくりと貯蔵糟内に戻っていくようにする。
明によるもう１つの空気動力圧力差式淹浸バイオリアク
ターは、植物組織を含有する培養糟と、培養糟の真下に
設置され液体培地を含有する貯蔵糟とからなり、この培
養糟と貯蔵糟は繋がっており、培養糟内には該糟内の圧
力を平衡に保つための第１の圧力平衡口が設けられてい
る。貯蔵糟からは第１の連結管が伸び、第２の圧力平衡
口を経て空気増湿器に連結している。第１の連結管及び
第２の圧力平衡口に連結している空気用濾過除菌膜装置
は、気体源の主要な入り口であるため、空気用綿花製濾
過除菌装置で代えることはできない。電源セルフタイマ
ーの第１時間の加圧時には、加えられた圧力は空気用濾
過除菌膜装置及び第１の連結管を経て貯蔵糟に達する。
この時、貯蔵糟内の圧力は培養糟内の圧力よりも大きい
ため、貯蔵糟内の液体培地は培養糟内に押し込まれ、培
養される植物組織を液体培地に浸すことができる。電源
セルフタイマーの第２時間の加圧停止時には、培養糟内
の培地の位置エネルギーが高いことを動力として利用
し、該液体培地を自身の重さによって自動的に平衡に達
させる。すなわち、一定時間経過後、培養糟内の液体培
地がゆっくりと貯蔵糟内に戻っていくようにする。
【００１４】貯蔵糟と培養糟を上下に垂直に設置する場
合は、これら２つの糟を鉄枠で固定してもしなくてもよ
く、また、第２時間の若干時間内に、培養糟内の液体培
地は全て貯蔵糟内に戻るため、植物組織を支えるための
網棚と支柱を設ける必要はない。これらの貯蔵糟と培養
糟は、いずれも上蓋と密封パッドを有する。
合は、これら２つの糟を鉄枠で固定してもしなくてもよ
く、また、第２時間の若干時間内に、培養糟内の液体培
地は全て貯蔵糟内に戻るため、植物組織を支えるための
網棚と支柱を設ける必要はない。これらの貯蔵糟と培養
糟は、いずれも上蓋と密封パッドを有する。
【００１５】上述した空気動力圧力差式淹浸バイオリア
クターは、第１時間の加圧時、貯蔵糟内の圧力が培養糟
内の圧力よりも大きいため、貯蔵糟内の培地を培養糟内
に押し込むことができ、且つ、第１時間から第２時間ま
での間、貯蔵糟内と培養糟内の圧力が、第１の圧力平衡
口と第２の圧力平衡口によって調節されるようなバイオ
リアクターである。
クターは、第１時間の加圧時、貯蔵糟内の圧力が培養糟
内の圧力よりも大きいため、貯蔵糟内の培地を培養糟内
に押し込むことができ、且つ、第１時間から第２時間ま
での間、貯蔵糟内と培養糟内の圧力が、第１の圧力平衡
口と第２の圧力平衡口によって調節されるようなバイオ
リアクターである。
【００１６】上述した空気動力圧力差式淹浸バイオリア
クターは、第１の連結管と連通管がシリコンチューブで
あるようなバイオリアクターである。
クターは、第１の連結管と連通管がシリコンチューブで
あるようなバイオリアクターである。
【００１７】上述した空気動力圧力差式淹浸バイオリア
クターは、第１の圧力平衡口と第２の圧力平衡口が綿花
製濾過除菌装置で、この綿花製濾過除菌装置が、綿花若
干量と、耐熱１２５℃の１．５ｍｌ微量用エペンドルフ
（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ）で、上蓋及び底部に穴を開け、
上蓋と本体の繋ぎを取り除いてアルコールランプ或はそ
の他の熱源で上蓋を溶かして落ちないように本体に粘着
させた後、短いシリコンチューブで培養糟の上に固定し
たようなエペンドルフからなるような、バイオリアクタ
ーである。
クターは、第１の圧力平衡口と第２の圧力平衡口が綿花
製濾過除菌装置で、この綿花製濾過除菌装置が、綿花若
干量と、耐熱１２５℃の１．５ｍｌ微量用エペンドルフ
（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ）で、上蓋及び底部に穴を開け、
上蓋と本体の繋ぎを取り除いてアルコールランプ或はそ
の他の熱源で上蓋を溶かして落ちないように本体に粘着
させた後、短いシリコンチューブで培養糟の上に固定し
たようなエペンドルフからなるような、バイオリアクタ
ーである。
【００１８】上述した空気動力圧力差式淹浸バイオリア
クターは、第１の連結管と空気用濾過除菌膜装置に連結
され、貯蔵糟内の湿度制御のためにさらに空気増湿器に
連結し、該空気増湿器の液体中に水分の大量散失を防ぐ
ためのプラスチック片が複数片入っているような、バイ
オリアクターである。
クターは、第１の連結管と空気用濾過除菌膜装置に連結
され、貯蔵糟内の湿度制御のためにさらに空気増湿器に
連結し、該空気増湿器の液体中に水分の大量散失を防ぐ
ためのプラスチック片が複数片入っているような、バイ
オリアクターである。
【００１９】上述した空気動力圧力差式淹浸バイオリア
クターは、空気増湿器が、気体源制御のために空気圧力
調整器に連結し、加えられた圧力によって湿った空気を
空気用濾過除菌膜を経て貯蔵糟内に送り込むような、バ
イオリアクターである。
クターは、空気増湿器が、気体源制御のために空気圧力
調整器に連結し、加えられた圧力によって湿った空気を
空気用濾過除菌膜を経て貯蔵糟内に送り込むような、バ
イオリアクターである。
【００２０】上述した空気動力圧力差式淹浸バイオリア
クターは、空気圧力調整器が、電動エアーポンプ、又は
中央システム空気圧縮機を電子バルブと組み合わせたも
のであるような、バイオリアクターである。
クターは、空気圧力調整器が、電動エアーポンプ、又は
中央システム空気圧縮機を電子バルブと組み合わせたも
のであるような、バイオリアクターである。
【００２１】上述した空気動力圧力差式淹浸バイオリア
クターは、空気圧力調整器が、電源セルフタイマーに連
結し、第１時間と第２時間を設定するような、バイオリ
アクターである。
クターは、空気圧力調整器が、電源セルフタイマーに連
結し、第１時間と第２時間を設定するような、バイオリ
アクターである。
【００２２】上述した空気動力圧力差式淹浸バイオリア
クターは、植物培養物が、カサブランカの鱗茎若しくは
繻子蓮の茎部分の促芽繁殖、又は蘭のＰＬＢの増殖及び
促芽になりうるような、バイオリアクターである。カサ
ブランカの鱗茎の、液体培地における肥大過程の淹浸時
間は、一日８〜１２時間、平均４回に分けて行うのが好
ましい。
クターは、植物培養物が、カサブランカの鱗茎若しくは
繻子蓮の茎部分の促芽繁殖、又は蘭のＰＬＢの増殖及び
促芽になりうるような、バイオリアクターである。カサ
ブランカの鱗茎の、液体培地における肥大過程の淹浸時
間は、一日８〜１２時間、平均４回に分けて行うのが好
ましい。
【００２３】上述した空気動力圧力差式淹浸バイオリア
クターは、各機器及び装置が耐１２５℃高温材料で構成
されているような、バイオリアクターである。
クターは、各機器及び装置が耐１２５℃高温材料で構成
されているような、バイオリアクターである。
【００２４】以上より、本発明によるバイオリアクター
が、空気増湿器、空気用濾過除菌膜装置、空気用綿花製
濾過除菌装置を組み合わせることによって、中に入る空
気の湿度及びシステムの通気性を適度な範囲内に制御
し、無菌状態を達成できるようなバイオリアクターであ
ることがわかる。
が、空気増湿器、空気用濾過除菌膜装置、空気用綿花製
濾過除菌装置を組み合わせることによって、中に入る空
気の湿度及びシステムの通気性を適度な範囲内に制御
し、無菌状態を達成できるようなバイオリアクターであ
ることがわかる。
【００２５】本発明の空気動力圧力差式淹浸バイオリア
クターを、カサブランカの鱗茎の肥大過程に適用する場
合の培養手順は以下の通りである。 （１）先ず、固型培地ＭＳ３０（すなわちＭＳ培地：全
量のＭＳ ＳａｌｔとＭＳ Ｖｉｔを含有するが、しょ糖
の濃度は３０ｇ／Ｌ＋ＮＡＡ ０．１ｐｐｍ＋ＢＡ０．
１ｐｐｍ）で成長しているカサブランカの鱗茎（直径約
３ｍｍ）を取り出し、鱗茎１つ当たり約２ｍｌ〜３ｍｌ
ＭＳ６０（ＭＳ培地、しょ糖６０ｇ／Ｌ、成長ホルモ
ンは無添加）の割合で、本発明による空気動力圧力差式
淹浸バイオリアクターに培地入れる。一度に処理できる
鱗茎総数は約２５０〜６００個（双子型と筒型に区別さ
れる）で、セルフタイマーで淹浸時間を一日４回、一回
２．５時間に制御する。培養温度は２５℃で、暗所で３
週間処理した後、陽所で３週間処理する。こうして得ら
れた直径１０ｍｍを超える鱗茎をＡ球、７〜１０ｍｍを
Ｂ球、５〜７ｍｍをＣ球、３〜５ｍｍをＤ球と呼ぶ。本
発明による空気動力圧力差式淹浸バイオリアクターを使
用して得られたＡ＋Ｂ球の総数は通常、鱗茎総数の８５
％以上を占める。
クターを、カサブランカの鱗茎の肥大過程に適用する場
合の培養手順は以下の通りである。 （１）先ず、固型培地ＭＳ３０（すなわちＭＳ培地：全
量のＭＳ ＳａｌｔとＭＳ Ｖｉｔを含有するが、しょ糖
の濃度は３０ｇ／Ｌ＋ＮＡＡ ０．１ｐｐｍ＋ＢＡ０．
１ｐｐｍ）で成長しているカサブランカの鱗茎（直径約
３ｍｍ）を取り出し、鱗茎１つ当たり約２ｍｌ〜３ｍｌ
ＭＳ６０（ＭＳ培地、しょ糖６０ｇ／Ｌ、成長ホルモ
ンは無添加）の割合で、本発明による空気動力圧力差式
淹浸バイオリアクターに培地入れる。一度に処理できる
鱗茎総数は約２５０〜６００個（双子型と筒型に区別さ
れる）で、セルフタイマーで淹浸時間を一日４回、一回
２．５時間に制御する。培養温度は２５℃で、暗所で３
週間処理した後、陽所で３週間処理する。こうして得ら
れた直径１０ｍｍを超える鱗茎をＡ球、７〜１０ｍｍを
Ｂ球、５〜７ｍｍをＣ球、３〜５ｍｍをＤ球と呼ぶ。本
発明による空気動力圧力差式淹浸バイオリアクターを使
用して得られたＡ＋Ｂ球の総数は通常、鱗茎総数の８５
％以上を占める。
【００２６】
【発明の実施の形態】以下に、本発明による空気動力圧
力差式淹浸バイオリアクターの実施例の説明をする。
力差式淹浸バイオリアクターの実施例の説明をする。
【００２７】
【実施例】実施例１ 図１は、本発明によるバイオリアクターを図示したもの
である。本発明によるバイオリアクターは、液体培地に
おける植物の組織培養に適用される。先ず、固型培地で
育った植物の組織を、高温で除菌された本発明によるバ
イオリアクターの培養糟２０に無菌的に移し替え、続い
て培養糟の上蓋２２と密封パッドを閉じる。ここで、培
養糟２０内には、植物の組織を支え、植物組織が液体培
地に長時間浸かって痛むのを防ぐ目的で、網棚８と支柱
２８が設けられている。また、適当な割合の液体培地を
バイオリアクターの貯蔵糟１０に入れ、培養糟と同様に
上蓋１２と密封パッドを閉じる。以上の操作は全て無菌
環境下で行われなければならない。
である。本発明によるバイオリアクターは、液体培地に
おける植物の組織培養に適用される。先ず、固型培地で
育った植物の組織を、高温で除菌された本発明によるバ
イオリアクターの培養糟２０に無菌的に移し替え、続い
て培養糟の上蓋２２と密封パッドを閉じる。ここで、培
養糟２０内には、植物の組織を支え、植物組織が液体培
地に長時間浸かって痛むのを防ぐ目的で、網棚８と支柱
２８が設けられている。また、適当な割合の液体培地を
バイオリアクターの貯蔵糟１０に入れ、培養糟と同様に
上蓋１２と密封パッドを閉じる。以上の操作は全て無菌
環境下で行われなければならない。
【００２８】上述した貯蔵糟１０と培養糟２０は、平行
に並べても、培養糟が上、貯蔵糟が下になるように垂直
に積み重ねてもよい。
に並べても、培養糟が上、貯蔵糟が下になるように垂直
に積み重ねてもよい。
【００２９】上述した培養糟２０には、該糟内の圧力を
平衡に保つための第１の圧力平衡口３０が設けられ、ま
た貯蔵糟１０にも、該糟内の圧力を平衡に保つための同
様な第２の圧力平衡口４０が設けられており、且つこれ
らの第１の圧力平衡口３０と第２の圧力平衡口４０はい
ずれも空気用濾過除菌膜装置１６に連結され、本発明に
よるバイオリアクターに出入りする空気が全て無菌状態
であるようにしている。
平衡に保つための第１の圧力平衡口３０が設けられ、ま
た貯蔵糟１０にも、該糟内の圧力を平衡に保つための同
様な第２の圧力平衡口４０が設けられており、且つこれ
らの第１の圧力平衡口３０と第２の圧力平衡口４０はい
ずれも空気用濾過除菌膜装置１６に連結され、本発明に
よるバイオリアクターに出入りする空気が全て無菌状態
であるようにしている。
【００３０】コスト面から見ると、上述した２つの圧力
平衡口３０、４０に連結された空気用濾過除菌膜装置の
価格は経済的でないため、本発明では空気用綿花製濾過
除菌装置２４を使用することもできる。該空気用綿花製
濾過除菌装置は、綿花若干量と、耐熱１２５℃の１．５
ｍｌ微量用エペンドルフ（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ）で、上
蓋及び底部に穴を開け、上蓋と本体の繋ぎを取り除いた
後アルコールランプ或はその他の熱源で上蓋を溶かして
落ちないように本体に粘着させた後、短いシリコンチュ
ーブで培養糟２０の第１の圧力平衡口３０及び貯蔵糟１
０の第２の圧力平衡口４０上に固定したようなエペンド
ルフからなる。
平衡口３０、４０に連結された空気用濾過除菌膜装置の
価格は経済的でないため、本発明では空気用綿花製濾過
除菌装置２４を使用することもできる。該空気用綿花製
濾過除菌装置は、綿花若干量と、耐熱１２５℃の１．５
ｍｌ微量用エペンドルフ（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ）で、上
蓋及び底部に穴を開け、上蓋と本体の繋ぎを取り除いた
後アルコールランプ或はその他の熱源で上蓋を溶かして
落ちないように本体に粘着させた後、短いシリコンチュ
ーブで培養糟２０の第１の圧力平衡口３０及び貯蔵糟１
０の第２の圧力平衡口４０上に固定したようなエペンド
ルフからなる。
【００３１】上述した貯蔵糟１０と培養糟２０は繋がっ
ており、且つ貯蔵糟１０は第１の連結管３２を通して空
気増湿器６に連結されている。この空気増湿器６内には
プラスチック片４６が浮かんでおり、このプラスチック
片は、水分の蒸発及びその流失速度を小さくすることが
できる。この空気増湿器６は、加圧制御のためさらに空
気圧力調整器４に連結し、この空気圧力調整器４はさら
に電源セルフタイマー２に連結している。
ており、且つ貯蔵糟１０は第１の連結管３２を通して空
気増湿器６に連結されている。この空気増湿器６内には
プラスチック片４６が浮かんでおり、このプラスチック
片は、水分の蒸発及びその流失速度を小さくすることが
できる。この空気増湿器６は、加圧制御のためさらに空
気圧力調整器４に連結し、この空気圧力調整器４はさら
に電源セルフタイマー２に連結している。
【００３２】設定を経た電源セルフタイマー２は、第１
時間時に電源をオンにし、空気圧力調整器によって加圧
する。加えられた圧力は、空気用濾過除菌膜装置１６及
び第１の連結管３２を通って貯蔵糟１０内に達する。こ
の時、貯蔵糟１０内の圧力は培養糟２０内の圧力よりも
大きいため、貯蔵糟１０内の液体培地は培養糟２０内に
押し込まれ、植物組織を液体培地に浸からせることがで
きる。第２時間時に加圧が停止されると、培養糟２０内
の培地の位置エネルギーが高いことを動力として利用
し、液体培地を自身にかかる重力によって自動的に平衡
に達させる。すなわち、一定時間経過後、培養糟２０内
の液体培地は貯蔵糟１０内にゆっくりと戻り、且つ両者
の液面の高さは平衡に達する。
時間時に電源をオンにし、空気圧力調整器によって加圧
する。加えられた圧力は、空気用濾過除菌膜装置１６及
び第１の連結管３２を通って貯蔵糟１０内に達する。こ
の時、貯蔵糟１０内の圧力は培養糟２０内の圧力よりも
大きいため、貯蔵糟１０内の液体培地は培養糟２０内に
押し込まれ、植物組織を液体培地に浸からせることがで
きる。第２時間時に加圧が停止されると、培養糟２０内
の培地の位置エネルギーが高いことを動力として利用
し、液体培地を自身にかかる重力によって自動的に平衡
に達させる。すなわち、一定時間経過後、培養糟２０内
の液体培地は貯蔵糟１０内にゆっくりと戻り、且つ両者
の液面の高さは平衡に達する。
【００３３】実施例２ 図２に図示されているように、本発明によるもう１つの
空気動力圧力差式淹浸バイオリアクターは、植物組織を
含有する培養糟２０と、培養糟２０の真下に設置され、
液体培地を含有する貯蔵糟１０とからなり、この培養糟
２０と貯蔵糟１０は繋がっており、培養糟２０内には該
糟内の圧力を平衡に保つための第１の圧力平衡口３０が
設けられている。貯蔵糟１０からは第１の連結管３２が
伸び、第２の圧力平衡口４０を経て空気増湿器６に連結
している。第１の連結管３２及び第２の圧力平衡口４０
に連結している空気用濾過除菌膜装置１６は、気体源の
主要な入り口である。第１時間の加圧時には、加えられ
た圧力は、空気増湿器６及び空気用濾過除菌膜装置１
６、さらに第１の連結管３２を経て貯蔵糟１０に達す
る。この時、貯蔵糟１０内の圧力は培養糟２０内の圧力
よりも大きいため、貯蔵糟１０内の液体培地は培養糟２
０内に押し込まれ、培養される植物組織を液体培地に浸
すことができる。第２時間の加圧停止時には、培養糟２
０内の培地の位置エネルギーが高いことを動力として利
用し、該液体培地を自身の重さによって自動的に平衡に
達させる。すなわち、一定時間経過後、培養糟２０内の
液体培地がゆっくりと貯蔵糟１０内に戻っていくように
する。
空気動力圧力差式淹浸バイオリアクターは、植物組織を
含有する培養糟２０と、培養糟２０の真下に設置され、
液体培地を含有する貯蔵糟１０とからなり、この培養糟
２０と貯蔵糟１０は繋がっており、培養糟２０内には該
糟内の圧力を平衡に保つための第１の圧力平衡口３０が
設けられている。貯蔵糟１０からは第１の連結管３２が
伸び、第２の圧力平衡口４０を経て空気増湿器６に連結
している。第１の連結管３２及び第２の圧力平衡口４０
に連結している空気用濾過除菌膜装置１６は、気体源の
主要な入り口である。第１時間の加圧時には、加えられ
た圧力は、空気増湿器６及び空気用濾過除菌膜装置１
６、さらに第１の連結管３２を経て貯蔵糟１０に達す
る。この時、貯蔵糟１０内の圧力は培養糟２０内の圧力
よりも大きいため、貯蔵糟１０内の液体培地は培養糟２
０内に押し込まれ、培養される植物組織を液体培地に浸
すことができる。第２時間の加圧停止時には、培養糟２
０内の培地の位置エネルギーが高いことを動力として利
用し、該液体培地を自身の重さによって自動的に平衡に
達させる。すなわち、一定時間経過後、培養糟２０内の
液体培地がゆっくりと貯蔵糟１０内に戻っていくように
する。
【００３４】貯蔵糟１０と培養糟２０を上下に垂直に設
置する場合は、これら２つの糟を鉄枠で固定してもしな
くてもよく、第２時間の若干時間内に、培養糟２０内の
液体培地は全て貯蔵糟１０内に戻るため、植物組織を支
えるための網棚と支柱を設ける必要はない。
置する場合は、これら２つの糟を鉄枠で固定してもしな
くてもよく、第２時間の若干時間内に、培養糟２０内の
液体培地は全て貯蔵糟１０内に戻るため、植物組織を支
えるための網棚と支柱を設ける必要はない。
【００３５】これらの貯蔵糟１０と培養糟２０は、いず
れも上蓋と密封パッドを有する。第１時間の加圧時に
は、貯蔵糟１０内の圧力は培養糟２０内の圧力よりも大
きいため、貯蔵糟１０内の培地を培養糟２０内に押し込
むことができる。また、第１時間から第２時間までの
間、貯蔵糟１０と培養糟２０内の圧力は、第１の圧力平
衡口３０と第２の圧力平衡口４０によって調節される。
れも上蓋と密封パッドを有する。第１時間の加圧時に
は、貯蔵糟１０内の圧力は培養糟２０内の圧力よりも大
きいため、貯蔵糟１０内の培地を培養糟２０内に押し込
むことができる。また、第１時間から第２時間までの
間、貯蔵糟１０と培養糟２０内の圧力は、第１の圧力平
衡口３０と第２の圧力平衡口４０によって調節される。
【００３６】上述した空気動力圧力差式淹浸バイオリア
クターは、第１の連結管３２と連通管がシリコンチュー
ブであるようなバイオリアクターである。
クターは、第１の連結管３２と連通管がシリコンチュー
ブであるようなバイオリアクターである。
【００３７】上述した空気動力圧力差式淹浸バイオリア
クターは、第１の圧力平衡口３０と第２の圧力平衡口４
０がそれぞれ綿花製濾過除菌装置に連結され、この綿花
製濾過除菌装置が、綿花若干量と、耐熱１２５℃の１．
５ｍｌ微量用エペンドルフ（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ）で、
上蓋及び底部に穴を開け、上蓋と本体の繋ぎを取り除い
てアルコールランプ或はその他の熱源で上蓋を溶かして
落ちないように本体に粘着させた後、短いシリコンチュ
ーブで培養糟２０の上に固定したようなエペンドルフか
らなるような、バイオリアクターである。
クターは、第１の圧力平衡口３０と第２の圧力平衡口４
０がそれぞれ綿花製濾過除菌装置に連結され、この綿花
製濾過除菌装置が、綿花若干量と、耐熱１２５℃の１．
５ｍｌ微量用エペンドルフ（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ）で、
上蓋及び底部に穴を開け、上蓋と本体の繋ぎを取り除い
てアルコールランプ或はその他の熱源で上蓋を溶かして
落ちないように本体に粘着させた後、短いシリコンチュ
ーブで培養糟２０の上に固定したようなエペンドルフか
らなるような、バイオリアクターである。
【００３８】上述した空気動力圧力差式淹浸バイオリア
クターは、第１の連結管３２が、綿花製濾過除菌装置２
４に連結され、さらに貯蔵糟１０内の湿度制御のために
空気増湿器６に連結され、該空気増湿器６の液体に水分
の大量散失を防ぐためのプラスチック片４６が複数片入
っているような、バイオリアクターである。
クターは、第１の連結管３２が、綿花製濾過除菌装置２
４に連結され、さらに貯蔵糟１０内の湿度制御のために
空気増湿器６に連結され、該空気増湿器６の液体に水分
の大量散失を防ぐためのプラスチック片４６が複数片入
っているような、バイオリアクターである。
【００３９】空気増湿器６は、空気源制御のために空気
圧力調整器４に連結し、加えられた圧力によって湿った
空気を貯蔵糟１０内に送り込む。
圧力調整器４に連結し、加えられた圧力によって湿った
空気を貯蔵糟１０内に送り込む。
【００４０】空気圧力調整器４は、電動エアーポンプ、
又は中央システム空気圧縮機を電子バルブと組み合わせ
たものである。
又は中央システム空気圧縮機を電子バルブと組み合わせ
たものである。
【００４１】空気圧力調整器４は、電源セルフタイマー
２に連結され、第１時間と第２時間を設定する。
２に連結され、第１時間と第２時間を設定する。
【００４２】培養糟２０内の植物培養物は、カサブラン
カの鱗茎若しくは繻子蓮の茎部分の促芽繁殖、又は蘭の
ＰＬＢの増殖及び促芽になりうる。
カの鱗茎若しくは繻子蓮の茎部分の促芽繁殖、又は蘭の
ＰＬＢの増殖及び促芽になりうる。
【００４３】上述した空気動力圧力差式淹浸バイオリア
クターは、カサブランカの鱗茎の液体培地における肥大
過程の淹浸時間が好ましくは一日８〜１２時間であるよ
うな、バイオリアクターである。
クターは、カサブランカの鱗茎の液体培地における肥大
過程の淹浸時間が好ましくは一日８〜１２時間であるよ
うな、バイオリアクターである。
【００４４】上述した空気動力圧力差式淹浸バイオリア
クターは、各機器及び装置が耐１２５℃高温材料で構成
されているような、バイオリアクターである。
クターは、各機器及び装置が耐１２５℃高温材料で構成
されているような、バイオリアクターである。
【００４５】実施例３：異なる淹浸時間がカサブランカ
の鱗茎の肥大に与える影響 実施例１で取り上げたのと同様な装置を使用し、固型培
地ＭＳ３０（すなわちＭＳ培地：全量のＭＳ Ｓａｌｔ
とＭＳ Ｖｉｔを含有するが、しょ糖濃度は３０ｇ／Ｌ
＋ＮＡＡ ０．１ｐｐｍ＋ＢＡ ０．１ｐｐｍ）で育った
ユリの鱗茎（直径約３ｍｍ）を培養した。１鱗茎当たり
約２．５ｍｌ〜３ｍｌの割合で、本発明によるバイオリ
アクターの貯蔵糟１０内に液体培地ＭＳ６０（ＭＳ培
地、しょ糖濃度６０ｇ／Ｌ、成長ホルモンは未添加）を
入れた。一度に処理する総数約３００個の鱗茎を培養糟
２０内に入れ、セルフタイマー２で毎日の淹浸時間を制
御した。培養温度は２５℃で、暗所で２週間処理した
後、陽所で２週間処理し、計４週間肥大させた。こうし
て得られた直径１０ｍｍを超える鱗茎をＡ球、７〜１０
ｍｍをＢ球、５〜７ｍｍをＣ球、３〜５ｍｍをＤ球とす
る。
の鱗茎の肥大に与える影響 実施例１で取り上げたのと同様な装置を使用し、固型培
地ＭＳ３０（すなわちＭＳ培地：全量のＭＳ Ｓａｌｔ
とＭＳ Ｖｉｔを含有するが、しょ糖濃度は３０ｇ／Ｌ
＋ＮＡＡ ０．１ｐｐｍ＋ＢＡ ０．１ｐｐｍ）で育った
ユリの鱗茎（直径約３ｍｍ）を培養した。１鱗茎当たり
約２．５ｍｌ〜３ｍｌの割合で、本発明によるバイオリ
アクターの貯蔵糟１０内に液体培地ＭＳ６０（ＭＳ培
地、しょ糖濃度６０ｇ／Ｌ、成長ホルモンは未添加）を
入れた。一度に処理する総数約３００個の鱗茎を培養糟
２０内に入れ、セルフタイマー２で毎日の淹浸時間を制
御した。培養温度は２５℃で、暗所で２週間処理した
後、陽所で２週間処理し、計４週間肥大させた。こうし
て得られた直径１０ｍｍを超える鱗茎をＡ球、７〜１０
ｍｍをＢ球、５〜７ｍｍをＣ球、３〜５ｍｍをＤ球とす
る。
【００４６】淹浸時間をそれぞれ一日４時間、８時間、
１２時間の３組に分け、淹浸後の成長結果を比較した。
１２時間の３組に分け、淹浸後の成長結果を比較した。
【００４７】表１より、淹浸時間が一日８時間の場合、
Ｂ球以上の鱗茎が７４．３１％得られた。一日１２時間
の場合、Ｂ球以上の鱗茎が７３．５８％得られたが、培
地に長時間淹浸されたため鱗茎が痛んで開きかけてしま
った。
Ｂ球以上の鱗茎が７４．３１％得られた。一日１２時間
の場合、Ｂ球以上の鱗茎が７３．５８％得られたが、培
地に長時間淹浸されたため鱗茎が痛んで開きかけてしま
った。
【００４８】
【表１】
【００４９】実施例４ 実施例３と同様の方法で、暗所で３週間処理した後、陽
所で３週間処理し、計６週間肥大させた。淹浸時間は一
日８時間で、平均４回に分けて行った。得られた結果は
表２の通りで、６週間培養したユリの鱗茎のＡ球＋Ｂ球
が占める割合は８５％に達しており、非常に良い結果が
得られたことがわかる。
所で３週間処理し、計６週間肥大させた。淹浸時間は一
日８時間で、平均４回に分けて行った。得られた結果は
表２の通りで、６週間培養したユリの鱗茎のＡ球＋Ｂ球
が占める割合は８５％に達しており、非常に良い結果が
得られたことがわかる。
【００５０】
【表２】
【００５１】実施例５：培地の添加物がカサブランカの
鱗茎の肥大に与える影響 実施例１で取り上げたのと同様な装置を使用し、固型培
地ＭＳ３０（しょ糖濃度は３０ｇ／Ｌ＋ＮＡＡ ０．１
ｐｐｍ＋ＢＡ ０．１ｐｐｍ）で育ったカサブランカの
鱗茎（直径約３ｍｍ）を培養した。１鱗茎当たり約２ｍ
ｌ〜３ｍｌの割合で、本発明によるバイオリアクターの
貯蔵糟１０内に液体培地ＭＳ６０を入れた。一度に処理
する総数約３００個の鱗茎を培養糟２０内に入れ、セル
フタイマー２で毎日の淹浸時間を一日１０時間に制御し
た。培養温度は２５℃で、暗所で２週間、陽所で２週間
の計４週間肥大させた後、本発明による空気動力圧力差
式淹浸バイオリアクターに少々手を加え、人工的な方式
でＭＳ６０（しょ糖の含量６０ｇ／Ｌ）、ＭＳ９０（し
ょ糖の含量９０ｇ／Ｌ）、無菌水の三種を添加できるよ
うにした。これら三種類の液体４００ｍｌをそれぞれ添
加瓶に取り、バイオリアクター内の培地が減少するたび
に添加を続け、総体積６００ｍｌを維持した。
鱗茎の肥大に与える影響 実施例１で取り上げたのと同様な装置を使用し、固型培
地ＭＳ３０（しょ糖濃度は３０ｇ／Ｌ＋ＮＡＡ ０．１
ｐｐｍ＋ＢＡ ０．１ｐｐｍ）で育ったカサブランカの
鱗茎（直径約３ｍｍ）を培養した。１鱗茎当たり約２ｍ
ｌ〜３ｍｌの割合で、本発明によるバイオリアクターの
貯蔵糟１０内に液体培地ＭＳ６０を入れた。一度に処理
する総数約３００個の鱗茎を培養糟２０内に入れ、セル
フタイマー２で毎日の淹浸時間を一日１０時間に制御し
た。培養温度は２５℃で、暗所で２週間、陽所で２週間
の計４週間肥大させた後、本発明による空気動力圧力差
式淹浸バイオリアクターに少々手を加え、人工的な方式
でＭＳ６０（しょ糖の含量６０ｇ／Ｌ）、ＭＳ９０（し
ょ糖の含量９０ｇ／Ｌ）、無菌水の三種を添加できるよ
うにした。これら三種類の液体４００ｍｌをそれぞれ添
加瓶に取り、バイオリアクター内の培地が減少するたび
に添加を続け、総体積６００ｍｌを維持した。
【００５２】表３から、ＭＳ６０、ＭＳ１２０を添加す
ると、いずれも鱗茎の肥大に不利な影響を及ぼし、それ
ぞれ５５．１２％、４２．９５％しかＢ球以上の鱗茎を
得られなかったことがわかる。ＭＳ６０、ＭＳ１２０を
添加すると、無機塩類の濃度増加を招いて肥大効果に悪
影響を及ぼし、一方Ｈ２Ｏを添加した場合は７２．２％
のＢ球以上の鱗茎が得られる。したがって、培養過程に
おける培地の損失体積は、無菌水で以って補うしかない
ことがわかる。
ると、いずれも鱗茎の肥大に不利な影響を及ぼし、それ
ぞれ５５．１２％、４２．９５％しかＢ球以上の鱗茎を
得られなかったことがわかる。ＭＳ６０、ＭＳ１２０を
添加すると、無機塩類の濃度増加を招いて肥大効果に悪
影響を及ぼし、一方Ｈ２Ｏを添加した場合は７２．２％
のＢ球以上の鱗茎が得られる。したがって、培養過程に
おける培地の損失体積は、無菌水で以って補うしかない
ことがわかる。
【００５３】
【表３】
【００５４】実施例６：カサブランカの鱗茎の肥大過程
におけるｐＨ値及びＤＯ値の測定 実施例１の方法で、本発明による空気動力圧力差式淹浸
バイオリアクターにｐＨ値・ＤＯ値測定槽を追加し、ｐ
Ｈ値測定器及びＤＯ値測定器と、ｐＨ値・ＤＯ値制御器
を連結し、測定時には人工的方法で淹浸後の培地を測定
槽に導入し、淹浸後のｐＨ値及びＤＯ値を測定し、結果
を記録した。
におけるｐＨ値及びＤＯ値の測定 実施例１の方法で、本発明による空気動力圧力差式淹浸
バイオリアクターにｐＨ値・ＤＯ値測定槽を追加し、ｐ
Ｈ値測定器及びＤＯ値測定器と、ｐＨ値・ＤＯ値制御器
を連結し、測定時には人工的方法で淹浸後の培地を測定
槽に導入し、淹浸後のｐＨ値及びＤＯ値を測定し、結果
を記録した。
【００５５】この実験の淹浸時間は一日４回、一回２．
５時間で、接種した鱗茎総数は３００個、全過程を陽所
で４週間肥大させた。
５時間で、接種した鱗茎総数は３００個、全過程を陽所
で４週間肥大させた。
【００５６】図３からわかるように、ｐＨ値は反応の初
日に４．８から４．１に下がり、２日目には３．８まで
下がり、そのままの値を３週間維持して最後の週に再び
４．１に戻っている。一方ＤＯ値は、全過程をかけて
７．６から６．６まで下がっている。
日に４．８から４．１に下がり、２日目には３．８まで
下がり、そのままの値を３週間維持して最後の週に再び
４．１に戻っている。一方ＤＯ値は、全過程をかけて
７．６から６．６まで下がっている。
【００５７】比較実施例：回転ドラム式バイオリアクタ
ーがカサブランカの鱗茎の肥大に与える影響 病原菌のないカサブランカの鱗茎を材料とし、先ず８０
０ｍｌのＭＳ６０を７Ｌの回転ドラム式リアクター（Ｈ
ＡＲＩＯ ｃｅｌｌｒｏｔｏｒ）に入れて一度に除菌
し、冷却するのを待ってから接種した。接種後、酸素源
としてエアーポンプを繋ぎ、培養温度２５℃で、暗所で
２週間、陽所で２週間、計４週間培養して肥大させ、培
養期間中はｐＨ記録器でｐＨ値の変化を記録した。この
ほか、スクリーンメンブレン（Ｓｃｒｅｅｎ Ｍｅｍｂ
ｒａｎｅ）の培養法を対照組とした。図４から、回転ド
ラム式バイオリアクターで肥大させた鱗茎を対照組の鱗
茎と比較すると、前者の肥大効果のほうが劣ることがわ
かる。培養期間におけるｐＨ値は図５に示されるよう
に、５．４から３．９に下がっており、培地を追加した
か陽光に当てた後にようやく再び上昇している。回転ド
ラム式バイオリアクターであろうと、スクリーンメンブ
レン（Ｓｃｒｅｅｎ Ｍｅｍｂｒａｎｅ）による培養法
であろうと、４週間の培養後、Ａ＋Ｂ球（７ｍｍ以上）
の割合はいずれも３０％以下であり、本発明による空気
動力圧力差式淹浸バイオリアクターで４週間培養した後
の７０％や６週間培養した後の８５％よりも明らかに低
い。
ーがカサブランカの鱗茎の肥大に与える影響 病原菌のないカサブランカの鱗茎を材料とし、先ず８０
０ｍｌのＭＳ６０を７Ｌの回転ドラム式リアクター（Ｈ
ＡＲＩＯ ｃｅｌｌｒｏｔｏｒ）に入れて一度に除菌
し、冷却するのを待ってから接種した。接種後、酸素源
としてエアーポンプを繋ぎ、培養温度２５℃で、暗所で
２週間、陽所で２週間、計４週間培養して肥大させ、培
養期間中はｐＨ記録器でｐＨ値の変化を記録した。この
ほか、スクリーンメンブレン（Ｓｃｒｅｅｎ Ｍｅｍｂ
ｒａｎｅ）の培養法を対照組とした。図４から、回転ド
ラム式バイオリアクターで肥大させた鱗茎を対照組の鱗
茎と比較すると、前者の肥大効果のほうが劣ることがわ
かる。培養期間におけるｐＨ値は図５に示されるよう
に、５．４から３．９に下がっており、培地を追加した
か陽光に当てた後にようやく再び上昇している。回転ド
ラム式バイオリアクターであろうと、スクリーンメンブ
レン（Ｓｃｒｅｅｎ Ｍｅｍｂｒａｎｅ）による培養法
であろうと、４週間の培養後、Ａ＋Ｂ球（７ｍｍ以上）
の割合はいずれも３０％以下であり、本発明による空気
動力圧力差式淹浸バイオリアクターで４週間培養した後
の７０％や６週間培養した後の８５％よりも明らかに低
い。
【００５８】
【発明の効果】本発明のバイオリアクターを利用するこ
とにより、液体培地における植物の組織培養において、
植物の成長・分化に必要な養分を提供でき、無菌状態を
維持できるほか、光度、安定した気圧、通気性、成長空
間、温度、湿度などの適切な物理環境を提供できるよう
になった。
とにより、液体培地における植物の組織培養において、
植物の成長・分化に必要な養分を提供でき、無菌状態を
維持できるほか、光度、安定した気圧、通気性、成長空
間、温度、湿度などの適切な物理環境を提供できるよう
になった。
【図１】本発明による空気動力圧力差式淹浸バイオリア
クターの配置図である。
クターの配置図である。
【図２】本発明による空気動力圧力差式淹浸バイオリア
クターのもう一つの配置図である。
クターのもう一つの配置図である。
【図３】本発明による空気動力圧力差式淹浸バイオリア
クターでカサブランカの鱗茎を肥大させた時の、ｐＨ値
とＤＯ値を示したグラフである。
クターでカサブランカの鱗茎を肥大させた時の、ｐＨ値
とＤＯ値を示したグラフである。
【図４】回転ドラム式バイオリアクターでカサブランカ
の鱗茎を肥大させた時の、鱗茎の肥大に与える影響を示
したグラフである。
の鱗茎を肥大させた時の、鱗茎の肥大に与える影響を示
したグラフである。
【図５】回転ドラム式バイオリアクターでカサブランカ
の鱗茎を肥大させた時の、ｐＨ値の変化状況を示したグ
ラフである。
の鱗茎を肥大させた時の、ｐＨ値の変化状況を示したグ
ラフである。
２ 電源セルフタイマー ４ 空気圧力調整器 ６ 空気増湿器 ８ 培養糟の網棚 １０ 貯蔵糟 １２ 貯蔵糟の上蓋 １６ 空気用濾過除菌膜装置 １８ 液体培地 ２０ 培養糟 ２２ 培養糟の上蓋 ２４ 空気用綿花製濾過除菌装置 ２６ 連通管 ２８ 支柱 ３０ 第１の圧力平衡口 ３２ 第１の連結管 ４０ 第２の圧力平衡口 ４６ プラスチック片
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 曾 櫻真 台湾台北県永和市民有街23巷45号４樓 (72)発明者 葉 美娟 台湾台北市永吉路120巷81弄９号５樓 (56)参考文献 特開 昭63−169983（ＪＰ，Ａ) 特開 平８−169983（ＪＰ，Ａ) (58)調査した分野(Int.Cl.6，ＤＢ名) C12M 1/00 - 3/10
Claims (11)
- 【請求項１】 液体培地における植物の組織培養に適用
される空気動力圧力差式淹浸バイオリアクターで、植物
組織を入れるために使用され、内部の圧力を平衡に保つ
ための第１の圧力平衡口が設けられているような培養槽
と、液体培地を入れるために使用され、且つ該培養槽と
繋がっており、且つ内部の圧力を平衡に保つための第２
の圧力平衡口が設けられているような貯蔵槽と、該貯蔵
槽内の湿度を平衡状態に制御するためのもので、且つ内
部の液体には水分の大量散失を防止するためのプラスチ
ック片が複数片入っているような空気増湿器と、該貯蔵
槽上に設けられ、該貯蔵槽と該空気増湿器を連結するた
めの第１の連結管と、該第１の連結管上に設けられ、且
つ第１時間の加圧時には、加えられた圧力が該空気用濾
過除菌装置及び該第１の連結管を経て該貯蔵槽内に達
し、この時該貯蔵槽内の圧力は該培養槽内の圧力よりも
大きいため、該貯蔵槽内の液体培地を該培養槽内に押し
込み、被培養植物組織を液体培地に淹浸させることがで
き、第２時間の加圧停止時には、該培養槽内の培地の位
置エネルギーが高いことを動力として利用し、該液体培
地を自身にかかる重力によって自動的に平衡に達させ、
一定時間経過後には、該培養槽内の液体培地が該貯蔵槽
内にゆっくりと戻っていくような空気用濾過除菌装置
と、からなり、空気を動力として使用し、空気の動力に
よって生じた圧力差及び淹浸の原理によって、大量の植
物組織を液体培地に淹浸させて培養を行うことを特徴と
する空気動力圧力差式淹浸バイオリアクター。 - 【請求項２】 液体培地における植物の組織培養に適用
される空気動力圧力差式淹浸バイオリアクターで、植物
組織を入れるために使用され、内部の圧力を平衡に保つ
ための第１の圧力平衡口が設けられているような培養槽
と、液体培地を入れるために使用され、該培養槽がその
真上に垂直に積み重ねられ、且つ該培養槽と繋がってい
るような貯蔵槽と、該貯蔵槽内の湿度を平衡状態に制御
するためのもので、且つ内部の液体には水分の大量散失
を防止するためのプラスチック片が複数片入っているよ
うな空気増湿器と、該貯蔵槽上に設けられ、該貯蔵槽と
該空気増湿器を連結するための第１の連結管と、該第１
の連結管上に設けられ、且つ第１時間の加圧時には、加
えられた圧力が該空気用濾過除菌装置及び該第１の連結
管を通って該貯蔵槽内に達し、この時該貯蔵槽内の圧力
は該培養槽内の圧力よりも大きいため、該貯蔵槽内の液
体培地を該培養槽内に押し込み、被培養植物組織を液体
培地に淹浸させることができ、第２時間の加圧停止時に
は、該培養槽内の培地の位置エネルギーが高いことを動
力として利用し、該液体培地を自身にかかる重力によっ
て自動的に平衡に達させ、一定時間経過後には、該培養
槽内の液体培地が該貯蔵槽内にゆっくりと戻っていくよ
うな空気用濾過除菌装置と、からなり、空気を動力とし
て使用し、空気の動力によって生じた圧力差及び淹浸の
原理によって、大量の植物組織を液体培地に淹浸させて
培養を行うことを特徴とする空気動力圧力差式淹浸バイ
オリアクター。 - 【請求項３】 該培養槽と貯蔵槽が平行に並んでいるこ
とを特徴とする請求項１に記載の空気動力圧力差式淹浸
バイオリアクター。 - 【請求項４】 該第１の圧力平衡口、該第２の圧力平衡
口、及び該空気用濾過除菌膜装置が、空気用ニトロセル
ロース製濾過除菌装置、または綿花を材料とする濾過除
菌装置であることを特徴とする請求項１から３のいずれ
かに記載の空気動力圧力差式淹浸バイオリアクター。 - 【請求項５】 該貯蔵槽と該培養槽がともに上蓋と密封
パッドを有することを特徴とする請求項１から３のいず
れかに記載の空気動力圧力差式淹浸バイオリアクター。 - 【請求項６】 該第１の連結管がシリコンチューブであ
ることを特徴とする請求項１から３のいずれかに記載の
空気動力圧力差式淹浸バイオリアクター。 - 【請求項７】 該培養槽内に網棚と支柱が設けられてい
ることを特徴とする請求項１又は請求項３に記載の空気
動力圧力差式淹浸バイオリアクター。 - 【請求項８】 該空気増湿器が、空気源制御のために空
気圧力調整器に連結し、加えられた圧力によって空気を
該貯蔵槽内に導入することを特徴とする請求項１から３
のいずれかに記載の空気動力圧力差式淹浸バイオリアク
ター。 - 【請求項９】 該空気圧力調整器が、電動エアーポンプ
か、又は中央システム空気圧縮機を電子バルブと組み合
わせたものであることを特徴とする請求項１から３のい
ずれかに記載の空気動力圧力差式淹浸バイオリアクタ
ー。 - 【請求項１０】 該空気圧力調整器が電源セルフタイマ
ーに連結し、上述した第１時間と第２時間を設定してい
ることを特徴とする請求項９に記載の空気動力圧力差式
淹浸バイオリアクター。 - 【請求項１１】 該貯蔵槽が培養槽としても使用できる
ことを特徴とする請求項１から３のいずれかに記載の空
気動力圧力差式淹浸バイオリアクター。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP20555098A JP2961107B1 (ja) | 1998-07-21 | 1998-07-21 | 空気動力圧力差式淹浸バイオリアクター |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP20555098A JP2961107B1 (ja) | 1998-07-21 | 1998-07-21 | 空気動力圧力差式淹浸バイオリアクター |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2961107B1 true JP2961107B1 (ja) | 1999-10-12 |
| JP2000041660A JP2000041660A (ja) | 2000-02-15 |
Family
ID=16508758
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP20555098A Expired - Lifetime JP2961107B1 (ja) | 1998-07-21 | 1998-07-21 | 空気動力圧力差式淹浸バイオリアクター |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2961107B1 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN111528103A (zh) * | 2020-07-01 | 2020-08-14 | 广州齐志生物工程设备有限公司 | 一种植物组织培养反应器及其放大培养方法 |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP3865354B2 (ja) * | 2000-03-02 | 2007-01-10 | 高木産業株式会社 | 細胞又は組織の培養方法 |
| JP4607432B2 (ja) * | 2003-05-12 | 2011-01-05 | 高木産業株式会社 | 細胞又は組織の培養装置 |
| JP2010000007A (ja) * | 2008-06-18 | 2010-01-07 | Asahikawa Poultry Kk | 処理環境を変更可能な培養装置および培養方法 |
-
1998
- 1998-07-21 JP JP20555098A patent/JP2961107B1/ja not_active Expired - Lifetime
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN111528103A (zh) * | 2020-07-01 | 2020-08-14 | 广州齐志生物工程设备有限公司 | 一种植物组织培养反应器及其放大培养方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP2000041660A (ja) | 2000-02-15 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN203048953U (zh) | 一种可拆卸的植物组织液体培养装置 | |
| JP2002513557A5 (ja) | ||
| CN109097319B (zh) | 一种番石榴叶悬浮细胞的培养方法及番石榴叶悬浮细胞的应用 | |
| CN102835310A (zh) | 一种双盘组合式植物组织培养容器 | |
| JP2961107B1 (ja) | 空気動力圧力差式淹浸バイオリアクター | |
| CN112136689A (zh) | 一种检测根际微生物对植物生长及根系发育影响的实验体系及其应用 | |
| CN105210866B (zh) | 一种间歇浸没式兰科植物类原球茎增殖快繁方法 | |
| JP5981653B2 (ja) | 無菌条件下の植物の大規模成長のためのバイオリアクタ容器 | |
| CN204939495U (zh) | 一种高通量植物固液培养装置 | |
| CN205408770U (zh) | 一种温室植物栽培装置 | |
| CN105191798B (zh) | 一种间歇浸没式百合鳞片增殖快繁方法 | |
| CN105340733B (zh) | 一种间歇浸没式苦苣苔叶片不定芽诱导方法 | |
| CN207201633U (zh) | 一种喷溅式植物培养装置 | |
| CN101953296B (zh) | 压力脉动超声雾化培养装置及其培养方法 | |
| CN2301847Y (zh) | 植物器官生物培养反应器 | |
| CN204741992U (zh) | 用于白芨的组培炼苗盒 | |
| CN215346350U (zh) | 一种微生物和植物共生装置 | |
| WO2000005942A1 (fr) | Recipient de culture et procede d'utilisation et de production de microtubercules de pommes de terre | |
| KR100239220B1 (ko) | 식물의 조직 및 기관 배양용 배지 자동순환식 생물반응기 | |
| KR200245301Y1 (ko) | 인삼배양근 배양기 | |
| CN204529876U (zh) | 液体细胞培养专用接种架 | |
| KR200357747Y1 (ko) | 2리터 플라스틱 생물반응기 | |
| CN105210867B (zh) | 一种间歇浸没式蕨类植物绿色球状体的增殖快繁方法 | |
| Balogun et al. | Novelty, rapidity and quality in seed yam production: the case of Temporary Immersion Bioreactors | |
| CN218897846U (zh) | 生物反应器 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20070730 Year of fee payment: 8 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20080730 Year of fee payment: 9 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20090730 Year of fee payment: 10 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20090730 Year of fee payment: 10 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20100730 Year of fee payment: 11 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20100730 Year of fee payment: 11 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20110730 Year of fee payment: 12 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20120730 Year of fee payment: 13 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20120730 Year of fee payment: 13 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20130730 Year of fee payment: 14 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| EXPY | Cancellation because of completion of term |