JP2949619B2 - 全身性エリテマトーデス病態診断剤 - Google Patents
全身性エリテマトーデス病態診断剤Info
- Publication number
- JP2949619B2 JP2949619B2 JP9284297A JP9284297A JP2949619B2 JP 2949619 B2 JP2949619 B2 JP 2949619B2 JP 9284297 A JP9284297 A JP 9284297A JP 9284297 A JP9284297 A JP 9284297A JP 2949619 B2 JP2949619 B2 JP 2949619B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- antibody
- peptide
- serum
- lupus
- ribosome
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
Landscapes
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、全身性エリテマト
ーデス病態診断剤、さらに詳しくは、酵素抗体法（ＥＬ
ＩＳＡ法）により血清中の抗リボソームＰ蛋白抗体（抗
Ｐ抗体）値を測定するための、全身性エリテマトーデス
の中枢神経系の病態診断剤に関する。
ーデス病態診断剤、さらに詳しくは、酵素抗体法（ＥＬ
ＩＳＡ法）により血清中の抗リボソームＰ蛋白抗体（抗
Ｐ抗体）値を測定するための、全身性エリテマトーデス
の中枢神経系の病態診断剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）は、
多臓器を侵す自己免疫疾患で多種類の自己抗体の出現が
大きな特徴である。中枢神経（ＣＮＳ）の障害は、ＳＬ
Ｅの合併症として比較的よく見られるものであり、脳器
質症候群や非器質性精神病（神経症、うつ病、分裂病な
ど）などの精神機能の異常（いわゆるＣＮＳループス）
がＳＬＥにおけるＣＮＳの障害の１つの特徴である。そ
の頻度は軽症のものも含めると全患者の２５〜６０％に
及ぶと言われている。しかしながら、ＳＬＥにおけるＣ
ＮＳ障害の機序についてはよく判っておらず、従来、本
症の治療を困難にしていた大きな要因として、その診断
・疾患活動性の評価が困難であった点が挙げられる。
多臓器を侵す自己免疫疾患で多種類の自己抗体の出現が
大きな特徴である。中枢神経（ＣＮＳ）の障害は、ＳＬ
Ｅの合併症として比較的よく見られるものであり、脳器
質症候群や非器質性精神病（神経症、うつ病、分裂病な
ど）などの精神機能の異常（いわゆるＣＮＳループス）
がＳＬＥにおけるＣＮＳの障害の１つの特徴である。そ
の頻度は軽症のものも含めると全患者の２５〜６０％に
及ぶと言われている。しかしながら、ＳＬＥにおけるＣ
ＮＳ障害の機序についてはよく判っておらず、従来、本
症の治療を困難にしていた大きな要因として、その診断
・疾患活動性の評価が困難であった点が挙げられる。
【０００３】リボソームＰ蛋白に対する自己抗体（抗Ｐ
抗体）はＳＬＥ患者の１２〜１６％に認められる。抗Ｐ
抗体はループス精神病に対する特異性が非常に高いこと
が報告されているが（例えば、Bonfa E, et al "Associ
ation between lupus psychosis and anti-ribosomal P
protein antibodies." N Eng J Med 317:265-271,1987
など）、報告によってはこの抗体とＳＬＥの精神神経病
変との関係についての不一致が見られ（例えば、Derkse
n RHWM, et al "A prospective study on antiribosoma
l P protein in two cases of familial lupus and rec
urrent psychosis." Ann Rheum Dis 49:779-782, 1990
など）、この抗体のＳＬＥにおける意義については報告
により賛否両論入り混じっていた。
抗体）はＳＬＥ患者の１２〜１６％に認められる。抗Ｐ
抗体はループス精神病に対する特異性が非常に高いこと
が報告されているが（例えば、Bonfa E, et al "Associ
ation between lupus psychosis and anti-ribosomal P
protein antibodies." N Eng J Med 317:265-271,1987
など）、報告によってはこの抗体とＳＬＥの精神神経病
変との関係についての不一致が見られ（例えば、Derkse
n RHWM, et al "A prospective study on antiribosoma
l P protein in two cases of familial lupus and rec
urrent psychosis." Ann Rheum Dis 49:779-782, 1990
など）、この抗体のＳＬＥにおける意義については報告
により賛否両論入り混じっていた。
【０００４】こうした中で、報告者による差異は、測定
法やループス精神病の診断基準や研究の進め方の差異、
あるいは人種による差異に起因するもので測定法の感度
とは関係ないと述べている報告もある（Teh L-S, Isenb
erg DA "Antiribosomal P protein antibodies in syst
emic lupus erythematosus." A reappraisal. Arthriti
s Rheum 37:307-315, 1994)。しかしこの報告では、結
果に重大な影響を及ぼす測定法の特異性については何も
触れていない。
法やループス精神病の診断基準や研究の進め方の差異、
あるいは人種による差異に起因するもので測定法の感度
とは関係ないと述べている報告もある（Teh L-S, Isenb
erg DA "Antiribosomal P protein antibodies in syst
emic lupus erythematosus." A reappraisal. Arthriti
s Rheum 37:307-315, 1994)。しかしこの報告では、結
果に重大な影響を及ぼす測定法の特異性については何も
触れていない。
【０００５】また抗Ｐ抗体は、真核細胞のリボソームの
６０Ｓサブユニットに存在するＰ０、Ｐ１、Ｐ２のリン
酸化蛋白（分子量は各々３８ｋｄ、１９ｋｄ、１７ｋ
ｄ）を認識し、これらリボソームＰ蛋白はＣ末端の２２
アミノ酸より成る共通の抗原決定基を有している（Elko
n KB, et al "Identification and chemical synthesis
of a ribosomal protein antigenic determinant in sy
stemic lupus erythematosus." Proc Natl Acad Sci US
A 83:7419-7423, 1986)。しかしながら、リコンビナン
トリボソームＰ蛋白を抗原とする方法を用いた測定系に
おいても、従来と異なる結果が報告されている（Yoshio
T, et al "Quantitation of antiribosomal P0 protei
n antibodies by ELISA with recombinant P0 fusion p
rotein andtheir association with central nervous s
ystem disease in systemic lupuserythematosus." J R
heumatol 22:1681-1687, 1995)。
６０Ｓサブユニットに存在するＰ０、Ｐ１、Ｐ２のリン
酸化蛋白（分子量は各々３８ｋｄ、１９ｋｄ、１７ｋ
ｄ）を認識し、これらリボソームＰ蛋白はＣ末端の２２
アミノ酸より成る共通の抗原決定基を有している（Elko
n KB, et al "Identification and chemical synthesis
of a ribosomal protein antigenic determinant in sy
stemic lupus erythematosus." Proc Natl Acad Sci US
A 83:7419-7423, 1986)。しかしながら、リコンビナン
トリボソームＰ蛋白を抗原とする方法を用いた測定系に
おいても、従来と異なる結果が報告されている（Yoshio
T, et al "Quantitation of antiribosomal P0 protei
n antibodies by ELISA with recombinant P0 fusion p
rotein andtheir association with central nervous s
ystem disease in systemic lupuserythematosus." J R
heumatol 22:1681-1687, 1995)。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】このように、抗Ｐ抗体
はループス精神病に非常に特異性の高いことが報告され
ているにもかかわらず、報告によってはこの抗体とＳＬ
Ｅの臨床症状との関係について不一致が見られる。
はループス精神病に非常に特異性の高いことが報告され
ているにもかかわらず、報告によってはこの抗体とＳＬ
Ｅの臨床症状との関係について不一致が見られる。
【０００７】本発明は、抗Ｐ抗体とループス精神病との
関係について再評価するとともに、有効な全身性エリテ
マトーデス病態診断剤を提供することを目的とするもの
である。
関係について再評価するとともに、有効な全身性エリテ
マトーデス病態診断剤を提供することを目的とするもの
である。
【０００８】
【課題を解決するための手段】本発明の上記目的は、純
度９９％以上のＣ末端２２個のアミノ酸を含む合成リボ
ソームＰペプチドをヒト血清アルブミンと結合させた合
成リボソームＰペプチドーアルブミン結合物を含有する
ことを特徴とする全身性エリテマトーデス病態診断剤に
より解決されることが見出された。
度９９％以上のＣ末端２２個のアミノ酸を含む合成リボ
ソームＰペプチドをヒト血清アルブミンと結合させた合
成リボソームＰペプチドーアルブミン結合物を含有する
ことを特徴とする全身性エリテマトーデス病態診断剤に
より解決されることが見出された。
【０００９】本発明では、Ｃ末端２２個のアミノ酸を含
む純度の高い合成リボソームＰペプチドをヒト血清アル
ブミンとを結合させ、これを抗原として酵素抗体法（Ｅ
ＬＩＳＡ）により、被験者より得た血清中の坑Ｐ抗体価
を測定することにより、ループス精神病（脳器質症候群
と非器質性精神病の両者を含む）の病態診断を的確に行
うことができるものである。
む純度の高い合成リボソームＰペプチドをヒト血清アル
ブミンとを結合させ、これを抗原として酵素抗体法（Ｅ
ＬＩＳＡ）により、被験者より得た血清中の坑Ｐ抗体価
を測定することにより、ループス精神病（脳器質症候群
と非器質性精神病の両者を含む）の病態診断を的確に行
うことができるものである。
【００１０】従来の殆どの研究がＳＬＥ患者血清中の抗
Ｐ抗体の測定にあたっては２２アミノ酸より成る合成ペ
プチドを抗原として用いている。しかし、その合成ペプ
チドの純度は各研究により相違があるとともに、そのペ
プチドを結合するキャリアー蛋白も一定していない。ま
た、リコンビナトリボソーマルＰ蛋白を抗原とする方法
を用いた測定系では、抗原内に細菌由来の産物が混入し
ている可能性も考えられる。
Ｐ抗体の測定にあたっては２２アミノ酸より成る合成ペ
プチドを抗原として用いている。しかし、その合成ペプ
チドの純度は各研究により相違があるとともに、そのペ
プチドを結合するキャリアー蛋白も一定していない。ま
た、リコンビナトリボソーマルＰ蛋白を抗原とする方法
を用いた測定系では、抗原内に細菌由来の産物が混入し
ている可能性も考えられる。
【００１１】従って、本発明者らは、こうした測定系に
用いる抗原の差異が、抗Ｐ抗体とループス精神病の相関
についての異なった結論を生み出している 可能性が高
いとの想定のもと、本発明においては、純度９９％以上
の２２アミノ酸より成る合成リボソームＰペプチドを用
いた抗Ｐ抗体に特異性の高いＥＬＩＳＡ法を開発した。
用いる抗原の差異が、抗Ｐ抗体とループス精神病の相関
についての異なった結論を生み出している 可能性が高
いとの想定のもと、本発明においては、純度９９％以上
の２２アミノ酸より成る合成リボソームＰペプチドを用
いた抗Ｐ抗体に特異性の高いＥＬＩＳＡ法を開発した。
【００１２】この方法を用いて、ループス精神病と血清
抗Ｐ抗体との関係について再検討を行ったところ、血清
中の抗Ｐ抗体は、脳器質症候群と非器質性精神病を含む
ループス精神病において、ループス精神病以外のＳＬＥ
患者と比較して、有意の上昇を認めることが示され、こ
の両者の相関が裏付けられた。抗Ｐ抗体とループス精神
病との相関についてのこれまでの報告の不一致は、リボ
ソームＰペプチドの純度の差が起因していた可能性が高
いと結論づけられる。
抗Ｐ抗体との関係について再検討を行ったところ、血清
中の抗Ｐ抗体は、脳器質症候群と非器質性精神病を含む
ループス精神病において、ループス精神病以外のＳＬＥ
患者と比較して、有意の上昇を認めることが示され、こ
の両者の相関が裏付けられた。抗Ｐ抗体とループス精神
病との相関についてのこれまでの報告の不一致は、リボ
ソームＰペプチドの純度の差が起因していた可能性が高
いと結論づけられる。
【００１３】事実、過去の報告を見る限り、測定系に用
いられた合成リボソームＰペプチドの純度には見過ごせ
ない差が存在する。例えば、血清坑Ｐ抗体とループス精
神病の有意な相関を報告したＢｏｎｆａやＳｃｈｎｅｅ
ｂａｕｍらは純度の高い精製リボソームＰペプチドを用
いているのに対して、この両者に有意の相関がないと報
告している他の発明者は純度がたった５０％のリボソー
ムＰペプチドを用いていたり、こうした純度を全く報告
していない。
いられた合成リボソームＰペプチドの純度には見過ごせ
ない差が存在する。例えば、血清坑Ｐ抗体とループス精
神病の有意な相関を報告したＢｏｎｆａやＳｃｈｎｅｅ
ｂａｕｍらは純度の高い精製リボソームＰペプチドを用
いているのに対して、この両者に有意の相関がないと報
告している他の発明者は純度がたった５０％のリボソー
ムＰペプチドを用いていたり、こうした純度を全く報告
していない。
【００１４】また、リボソームＰペプチドの結合相手の
アルブミンとしては、ヒト血清アルブミン、ウシ血清ア
ルブミン、卵白アルブミン等を挙げることができる。こ
こで、卵白アルブミン、ウシ血清アルブミンは異種蛋白
であるために、正常人でもこれらに対する抗体を有して
いる場合があり、これは、抗リボソームＰ抗体を測定を
行う際、特に非特異反応を生じる原因となる。これに対
して、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）は元来ヒトの同種
蛋白であるので、こうした非特異的反応を生じにくいた
め、抗リボソームＰ抗体の測定を行う上で優れており、
本発明の病態診断剤に特に有効である。
アルブミンとしては、ヒト血清アルブミン、ウシ血清ア
ルブミン、卵白アルブミン等を挙げることができる。こ
こで、卵白アルブミン、ウシ血清アルブミンは異種蛋白
であるために、正常人でもこれらに対する抗体を有して
いる場合があり、これは、抗リボソームＰ抗体を測定を
行う際、特に非特異反応を生じる原因となる。これに対
して、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）は元来ヒトの同種
蛋白であるので、こうした非特異的反応を生じにくいた
め、抗リボソームＰ抗体の測定を行う上で優れており、
本発明の病態診断剤に特に有効である。
【００１５】尚、本発明では、ループス精神病患者の脳
脊髄液中には抗Ｐ抗体の異常な上昇は認められず、本抗
体が中枢神経内で産生されている可能性は薄いと考えら
れた。
脊髄液中には抗Ｐ抗体の異常な上昇は認められず、本抗
体が中枢神経内で産生されている可能性は薄いと考えら
れた。
【００１６】
【発明の実施の形態】本発明に用いられるＣ末端２２個
のアミノ酸を含む合成リボソームＰペプチドは、市販の
ペプチド合成機を用いて容易に合成することができる。
得られたペプチドを９９％以上の純度に精製する方法と
しては、従来公知の種々の方法を用いることができ、例
えば、高速液体クロマトグラフィー、アフィニティクロ
マトグラフィー、電気泳動法等を挙げることができる。
のアミノ酸を含む合成リボソームＰペプチドは、市販の
ペプチド合成機を用いて容易に合成することができる。
得られたペプチドを９９％以上の純度に精製する方法と
しては、従来公知の種々の方法を用いることができ、例
えば、高速液体クロマトグラフィー、アフィニティクロ
マトグラフィー、電気泳動法等を挙げることができる。
【００１７】精製した合成リボソームＰペプチドは、好
ましくは０．１〜１００mg／mlの濃度、より好ましくは
５〜１０mg／mlの濃度の溶液にすることが好ましい。溶
媒としては０．０５〜０．２５Ｍのリン酸バッファー
（ＰＢＳ）などが挙げられ、ＰＨは５．０〜８．０、特
に７．０〜７．４が好ましい。
ましくは０．１〜１００mg／mlの濃度、より好ましくは
５〜１０mg／mlの濃度の溶液にすることが好ましい。溶
媒としては０．０５〜０．２５Ｍのリン酸バッファー
（ＰＢＳ）などが挙げられ、ＰＨは５．０〜８．０、特
に７．０〜７．４が好ましい。
【００１８】一方、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）、ウ
シ血清アルブミン（ＢＳＡ卵白アルブミン（ＯＶＡ）は
市販のものを用いることができる。また、従来公知の方
法（例えば、セルロース・アセテート電気泳動法、セフ
ァデックスによるゲル濾過など）によって精製すること
が好ましい。精製したアルブミンも上記と同様の溶媒
に、１〜１０００mg／mlの濃度、より好ましくは１０〜
１００mg／mlの濃度で溶解することが好ましい。
シ血清アルブミン（ＢＳＡ卵白アルブミン（ＯＶＡ）は
市販のものを用いることができる。また、従来公知の方
法（例えば、セルロース・アセテート電気泳動法、セフ
ァデックスによるゲル濾過など）によって精製すること
が好ましい。精製したアルブミンも上記と同様の溶媒
に、１〜１０００mg／mlの濃度、より好ましくは１０〜
１００mg／mlの濃度で溶解することが好ましい。
【００１９】合成リボソームＰペプチドとアルブミンと
の結合は、Avrameas S "Coupling of enzymes to prote
ins with glutaraldehyde: use of the conjugates for
thedetection of antigens and antibodies" Immunoch
emistry 6: 43-52,1969に記載される方法に基づき、グ
ルタールアルデヒド法にて行うことができる。具体的に
は、上記合成リボソームＰペプチド溶液とアルブミン溶
液の混合物にグルタールアルデヒド溶液を加えて放置し
たのち、遠心分離機にかけ、その上清を透析することに
より、本発明の合成リボソームＰペプチド−アルブミン
結合物を得ることができる。あるいは、Fujiwara K et
al, "Novel preparation method of immunogen for hyd
rophobic hapten, enzyme immunoassay for daunomycin
and adriamycin" J Immunol Method 45: 195-2-3, 198
1 に記載されるように、γ−マレイミド ｎ−ブチル酸
Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＧＭＢＳ）を
用いる方法によっても同等の結合物を得ることができ
る。
の結合は、Avrameas S "Coupling of enzymes to prote
ins with glutaraldehyde: use of the conjugates for
thedetection of antigens and antibodies" Immunoch
emistry 6: 43-52,1969に記載される方法に基づき、グ
ルタールアルデヒド法にて行うことができる。具体的に
は、上記合成リボソームＰペプチド溶液とアルブミン溶
液の混合物にグルタールアルデヒド溶液を加えて放置し
たのち、遠心分離機にかけ、その上清を透析することに
より、本発明の合成リボソームＰペプチド−アルブミン
結合物を得ることができる。あるいは、Fujiwara K et
al, "Novel preparation method of immunogen for hyd
rophobic hapten, enzyme immunoassay for daunomycin
and adriamycin" J Immunol Method 45: 195-2-3, 198
1 に記載されるように、γ−マレイミド ｎ−ブチル酸
Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＧＭＢＳ）を
用いる方法によっても同等の結合物を得ることができ
る。
【００２０】また本発明では、合成リボソームＰペプチ
ドとアルブミンの重量組成 比が、１０〜３００対１０
０〜５００、特に４０〜６０対２００〜４００であるこ
とが好ましい。この範囲内において特に全身性エリテマ
トーデスの中枢神経系の病態と相関性のある有効な測定
結果を得ることができる。
ドとアルブミンの重量組成 比が、１０〜３００対１０
０〜５００、特に４０〜６０対２００〜４００であるこ
とが好ましい。この範囲内において特に全身性エリテマ
トーデスの中枢神経系の病態と相関性のある有効な測定
結果を得ることができる。
【００２１】また、本発明の合成リボソームＰペプチド
−アルブミン結合物は、好ましくは０．６mg／ml以上の
濃度、より好ましくは１〜１０mg／mlの濃度の溶液とす
ることが好ましく、更に、好ましくは−２０℃以下、よ
り好ましくは−２０〜−７０℃の温度で凍結保存するこ
とにより、１年間以上経時しても、本発明で適用される
べきＥＬＩＳＡによる測定系に用いた場合に同じ安定し
た測定結果を得ることができる。
−アルブミン結合物は、好ましくは０．６mg／ml以上の
濃度、より好ましくは１〜１０mg／mlの濃度の溶液とす
ることが好ましく、更に、好ましくは−２０℃以下、よ
り好ましくは−２０〜−７０℃の温度で凍結保存するこ
とにより、１年間以上経時しても、本発明で適用される
べきＥＬＩＳＡによる測定系に用いた場合に同じ安定し
た測定結果を得ることができる。
【００２２】本発明では、従来公知の酵素抗体法（ＥＬ
ＩＳＡ）を用いて、即ち、合成リボソームＰペプチド−
アルブミン結合物を抗原として固相（通常はプラスチッ
ク製のプレート）に結合させておき、被験者の血清を反
応させた後、ペルオキシダーゼ標識抗ヒトＩｇＧを反応
させ、その後、ｏ −フェニレンジアミン、Ｈ2Ｏ2を含
む基質液にて発色させ、ＯＤ４９２を測定して、プレー
ト中のウェルの酵素活性を測定することにより、血清中
の抗Ｐ抗体値を測定することができる。また、ペルオキ
シダーゼ標識抗ヒトＩｇＧの代わりに、アルカリホスフ
ァターゼ標識抗ヒトＩｇＧ、ビオチン標識抗ヒトＩｇＧ
等を使用しても、同様に測定することができる。
ＩＳＡ）を用いて、即ち、合成リボソームＰペプチド−
アルブミン結合物を抗原として固相（通常はプラスチッ
ク製のプレート）に結合させておき、被験者の血清を反
応させた後、ペルオキシダーゼ標識抗ヒトＩｇＧを反応
させ、その後、ｏ −フェニレンジアミン、Ｈ2Ｏ2を含
む基質液にて発色させ、ＯＤ４９２を測定して、プレー
ト中のウェルの酵素活性を測定することにより、血清中
の抗Ｐ抗体値を測定することができる。また、ペルオキ
シダーゼ標識抗ヒトＩｇＧの代わりに、アルカリホスフ
ァターゼ標識抗ヒトＩｇＧ、ビオチン標識抗ヒトＩｇＧ
等を使用しても、同様に測定することができる。
【００２３】本発明によれば、かかる抗Ｐ抗体と全身性
エリテマトーデスのループス精神病とが相関することを
見出し、合成リボソームＰペプチド−アルブミン結合物
は、有効な全身性エリテマトーデス病態診断剤として機
能することが確認された。
エリテマトーデスのループス精神病とが相関することを
見出し、合成リボソームＰペプチド−アルブミン結合物
は、有効な全身性エリテマトーデス病態診断剤として機
能することが確認された。
【００２４】
【実施例】以下、本発明を実施例により例証するが、本
発明はこれに限定されるものではない。
発明はこれに限定されるものではない。
【００２５】1)患者 本発明では、７５例のＳＬＥ患者を用いた。これらの患
者はすべてアメリカリウマチ協会の１９８２年のＳＬＥ
の分類のための改定基準を満たしていた(14)。表１に示
す通り、７５例のＳＬＥ患者のうち、２６例は中枢神経
症状を欠いており、２８例はループス精神病（指南力・
認知・記憶・その他の知的機能の障害を主徴とする脳器
質症候群９例、神経症・躁病・うつ状態・分裂病などの
非器質生精神病１９例）を示し、２１例は精神病以外の
中枢神経症状を示した（非精神病ＣＮＳ）。なお、ルー
プス精神病及び非精神病ＣＮＳの診断は、CSF Ig Index
（15，16）とCSF IL-6活性(17)のいずれかあるいは両者
の上昇により確認されている。
者はすべてアメリカリウマチ協会の１９８２年のＳＬＥ
の分類のための改定基準を満たしていた(14)。表１に示
す通り、７５例のＳＬＥ患者のうち、２６例は中枢神経
症状を欠いており、２８例はループス精神病（指南力・
認知・記憶・その他の知的機能の障害を主徴とする脳器
質症候群９例、神経症・躁病・うつ状態・分裂病などの
非器質生精神病１９例）を示し、２１例は精神病以外の
中枢神経症状を示した（非精神病ＣＮＳ）。なお、ルー
プス精神病及び非精神病ＣＮＳの診断は、CSF Ig Index
（15，16）とCSF IL-6活性(17)のいずれかあるいは両者
の上昇により確認されている。
【００２６】
【表１】
【００２７】2)検体 ７５例のＳＬＥ患者より、その活動期に血清を採取し
た。さらに、２１例の患者については、血清採取日に同
時に腰椎穿刺によりＣＳＦ（脳脊髄液）を採取した。こ
れらの検体は抗Ｐ抗体測定までの間−２０℃で保存し
た。抗Ｐ抗体の測定は診断・臨床症状について予備知識
を持たぬ者により行われた。
た。さらに、２１例の患者については、血清採取日に同
時に腰椎穿刺によりＣＳＦ（脳脊髄液）を採取した。こ
れらの検体は抗Ｐ抗体測定までの間−２０℃で保存し
た。抗Ｐ抗体の測定は診断・臨床症状について予備知識
を持たぬ者により行われた。
【００２８】3)リボソームＰペプチドの合成 リボソームＰ蛋白のＣ末端の２２個のアミノ酸配列（Ar
temia SalinaのP2蛋白の90〜111残基) に一致したペプ
チドを自動ペプチド合成装置（パーキンエルマー社、千
葉県）を用いた固相法により合成した。このぺプチドは
高速液体クロマトグラフィーにより精製した。この純度
は、高速液体クロマトグラフィー・アミノ酸分析・ミク
ロシークエンス法により９９％以上であることを確認し
ている。精製したリボソームＰペプチドは、５mg／mlの
濃度でリン酸バッファー（ＰＢＳ、ｐＨ７．２、０．１
５Ｍ）に溶解させた。
temia SalinaのP2蛋白の90〜111残基) に一致したペプ
チドを自動ペプチド合成装置（パーキンエルマー社、千
葉県）を用いた固相法により合成した。このぺプチドは
高速液体クロマトグラフィーにより精製した。この純度
は、高速液体クロマトグラフィー・アミノ酸分析・ミク
ロシークエンス法により９９％以上であることを確認し
ている。精製したリボソームＰペプチドは、５mg／mlの
濃度でリン酸バッファー（ＰＢＳ、ｐＨ７．２、０．１
５Ｍ）に溶解させた。
【００２９】4)血清アルブミン結合物の作成 ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ；マイルス社、インディア
ナ州エルクハート）、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ；マ
イルス社）、又は卵白アルブミン（ＯＶＡ；マイルス
社）（それぞれ３００mg／ml）0.１mlに、上記合成リボ
ソームＰペプチド（５mg／ml）０．９mlを加える。これ
に、グルタールアルデヒド（ＰＢＳで１％に希釈したも
の）を０．２ml添加し、ゆっくりと振とう混和しながら
２時間置く。この産物を２×１０4 rpm で２０分間遠心
する。この上清を透析膜中に入れ、０．１５ＭのＰＢＳ
で透析する。これを６００μｇ／ml以上の濃度で−２０
℃で凍結保存する。
ナ州エルクハート）、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ；マ
イルス社）、又は卵白アルブミン（ＯＶＡ；マイルス
社）（それぞれ３００mg／ml）0.１mlに、上記合成リボ
ソームＰペプチド（５mg／ml）０．９mlを加える。これ
に、グルタールアルデヒド（ＰＢＳで１％に希釈したも
の）を０．２ml添加し、ゆっくりと振とう混和しながら
２時間置く。この産物を２×１０4 rpm で２０分間遠心
する。この上清を透析膜中に入れ、０．１５ＭのＰＢＳ
で透析する。これを６００μｇ／ml以上の濃度で−２０
℃で凍結保存する。
【００３０】5)抗Ｐ抗体の測定 ９６穴マイクロタイタープレート（塩化ビニル製）の各
ウェルを、リン酸バッファー（ｐＨ7.２）（ＰＢＳ）に
て１５μｇ／mlに希釈したリボソームＰ−ＨＳＡ化合物
でコートした。それぞれのウェルはＰＢＳにて４倍に希
釈したブロックエース（大日本製薬（株）、大阪）にて
オーバーコートした。この抗原をコートしたウェルに入
れる前に、被検血清は予め１％ＢＳＡを含むＰＢＳで２
００倍に希釈しておく。被検血清をウェルに入れ反応さ
せた後、ウェルに結合した抗Ｐ抗体をペルオキシダーゼ
標識Ｆ（ａｂ′)2ヤギ抗ヒトＩｇＧ（カペル社、ペンシ
ルバニア州コクランビル）に反応させて検出した。１０
０mlの０．０５Ｍクエン酸リン酸バッファー中（ｐＨ
４．８）にｏ−フェニレンジアミン４０ｍｇと３０％Ｈ
2Ｏ2１０μｌを含む基質液を各ウェルに加え、３７℃で
３０分反応させた後、５N Ｈ2ＳＯ2を加えて反応を停止
させ、２波長マイクロプレートリーダー（ＭＴＰ−１２
０、コロナ電機、茨城県）にてＯＤ４９２を測定した。
抗Ｐ抗体標準血清（イムノビジョン社、アリゾナ州スプ
リングデール）を用いて標準曲線を作成し、ＯＤ４９２
の値より抗Ｐ抗体をユニット標示で定量化した。
ウェルを、リン酸バッファー（ｐＨ7.２）（ＰＢＳ）に
て１５μｇ／mlに希釈したリボソームＰ−ＨＳＡ化合物
でコートした。それぞれのウェルはＰＢＳにて４倍に希
釈したブロックエース（大日本製薬（株）、大阪）にて
オーバーコートした。この抗原をコートしたウェルに入
れる前に、被検血清は予め１％ＢＳＡを含むＰＢＳで２
００倍に希釈しておく。被検血清をウェルに入れ反応さ
せた後、ウェルに結合した抗Ｐ抗体をペルオキシダーゼ
標識Ｆ（ａｂ′)2ヤギ抗ヒトＩｇＧ（カペル社、ペンシ
ルバニア州コクランビル）に反応させて検出した。１０
０mlの０．０５Ｍクエン酸リン酸バッファー中（ｐＨ
４．８）にｏ−フェニレンジアミン４０ｍｇと３０％Ｈ
2Ｏ2１０μｌを含む基質液を各ウェルに加え、３７℃で
３０分反応させた後、５N Ｈ2ＳＯ2を加えて反応を停止
させ、２波長マイクロプレートリーダー（ＭＴＰ−１２
０、コロナ電機、茨城県）にてＯＤ４９２を測定した。
抗Ｐ抗体標準血清（イムノビジョン社、アリゾナ州スプ
リングデール）を用いて標準曲線を作成し、ＯＤ４９２
の値より抗Ｐ抗体をユニット標示で定量化した。
【００３１】ＥＬＩＳＡプレートにて最大吸光度の１／
２の吸光度を示すのに必要な抗Ｐ抗体を１Ｕ／mlと便宜
的に設定した。同じ標準曲線を用いて、ＨＳＡのにみ対
する非特異的結合をユニット標示にて定量的に求めた。
特異的な抗Ｐ抗体値は、リボソーム−ＨＳＡに対する反
応によって求められた値から、ＨＳＡのみに対する反応
によって求めた値を差し引くことにより算出した。この
測定法の再現性は、プレート内変動が４.５％（ＣＶ
値）、プレート間変動が１３.７％であった。
２の吸光度を示すのに必要な抗Ｐ抗体を１Ｕ／mlと便宜
的に設定した。同じ標準曲線を用いて、ＨＳＡのにみ対
する非特異的結合をユニット標示にて定量的に求めた。
特異的な抗Ｐ抗体値は、リボソーム−ＨＳＡに対する反
応によって求められた値から、ＨＳＡのみに対する反応
によって求めた値を差し引くことにより算出した。この
測定法の再現性は、プレート内変動が４.５％（ＣＶ
値）、プレート間変動が１３.７％であった。
【００３２】6)ウェスタンブロット法 いくつかのＳＬＥ患者血清は、ＨＥｐ２細胞抽出液を用
いたウェスタンブロット法にて抗Ｐ抗体の存在について
検討されていた。これらの血清のリボソームＰペプチド
に対する特異的結合、ＨＳＡ・ＢＳＡ・ＯＶＡに対する
非特異的結合をウェスタンブロット法により確認した。
リボソームＰペプチド結合あるいは非結合のＨＳＡ・Ｂ
ＳＡ・ＯＶＡをＳＤＳポリアクリルアミド電気泳動の
後、ニトロセルロース膜へ転写し、ＰＢＳにて４倍に希
釈したブロックエース中で室温で二時間オーバーコート
した。その後に、このメンブレンを0.０５％ Tween 20
を含むＰＢＳで２００倍に希釈したＳＬＥ患者血清と４
℃で一昼夜反応させた。その後にペルオキシダーゼ標識
Ｆ（ａｂ′)2ヤギ抗ヒトＩｇＧ（カペル社）と室温で３
時間反応させ、ＥＣＬシステム（アマルシャム社、東
京）を用いて現像した。
いたウェスタンブロット法にて抗Ｐ抗体の存在について
検討されていた。これらの血清のリボソームＰペプチド
に対する特異的結合、ＨＳＡ・ＢＳＡ・ＯＶＡに対する
非特異的結合をウェスタンブロット法により確認した。
リボソームＰペプチド結合あるいは非結合のＨＳＡ・Ｂ
ＳＡ・ＯＶＡをＳＤＳポリアクリルアミド電気泳動の
後、ニトロセルロース膜へ転写し、ＰＢＳにて４倍に希
釈したブロックエース中で室温で二時間オーバーコート
した。その後に、このメンブレンを0.０５％ Tween 20
を含むＰＢＳで２００倍に希釈したＳＬＥ患者血清と４
℃で一昼夜反応させた。その後にペルオキシダーゼ標識
Ｆ（ａｂ′)2ヤギ抗ヒトＩｇＧ（カペル社）と室温で３
時間反応させ、ＥＣＬシステム（アマルシャム社、東
京）を用いて現像した。
【００３３】7)統計的解析 各群における血清抗Ｐ抗体価の差異は、Ｍann-Ｗhitney
Ｕテストを用いて検定した。各群の血清抗Ｐ抗体の陽
性率についてはカイ二乗検定により解析した。治療によ
る血清抗Ｐ抗体価の変動についてはＷilcoxon signed r
ank testにより解析した。
Ｕテストを用いて検定した。各群の血清抗Ｐ抗体の陽
性率についてはカイ二乗検定により解析した。治療によ
る血清抗Ｐ抗体価の変動についてはＷilcoxon signed r
ank testにより解析した。
【００３４】8)抗Ｐ抗体測定ＥＬＩＳＡ法の特異性 抗Ｐ抗体のＥＬＩＳＡ法の特異性を検討するために、１
６例のＳＬＥ患者の血清と、リボソームＰペプチドを結
合した又は結合していない各種のキャリアー蛋白との反
応性を解析した。結果を表２に示す。
６例のＳＬＥ患者の血清と、リボソームＰペプチドを結
合した又は結合していない各種のキャリアー蛋白との反
応性を解析した。結果を表２に示す。
【００３５】
【表２】
【００３６】ＨＥｐ−２細胞の抽出物によるウェスタン
ブロット法にて予め抗Ｐ抗体存在の確認されている血清
８例は、すべてアルブミン−リボソームＰペプチド複合
物と反応したが（図１Ａ）、一部の血清はリボソームＰ
ペプチドを結合しないアルブミンそのものとも反応した
（図１Ｂ）。
ブロット法にて予め抗Ｐ抗体存在の確認されている血清
８例は、すべてアルブミン−リボソームＰペプチド複合
物と反応したが（図１Ａ）、一部の血清はリボソームＰ
ペプチドを結合しないアルブミンそのものとも反応した
（図１Ｂ）。
【００３７】図１では、リボソームＰペプチド結合キャ
リアー蛋白（＋）あるいはキャリアー蛋白のみ（−）を
用いて検討した（ＯＶＡ＝卵白アルブミン、ＢＳＡ＝ウ
シ血清アルブミン、ＨＳＡ＝ヒト血清アルブミン）。
リアー蛋白（＋）あるいはキャリアー蛋白のみ（−）を
用いて検討した（ＯＶＡ＝卵白アルブミン、ＢＳＡ＝ウ
シ血清アルブミン、ＨＳＡ＝ヒト血清アルブミン）。
【００３６】一方、ＨＥｐ−２細胞抽出物を用いたウェ
スタンブロット法で抗Ｐ抗体が陰性であった血清８例の
うちでは、３例のみがリボソームＰペプチド結合及び非
結合のアルブミンと反応を示した。従って、これらの血
清中にはアルブミンに対する抗体は存在するが、抗Ｐ抗
体は存在しないことが判る。
スタンブロット法で抗Ｐ抗体が陰性であった血清８例の
うちでは、３例のみがリボソームＰペプチド結合及び非
結合のアルブミンと反応を示した。従って、これらの血
清中にはアルブミンに対する抗体は存在するが、抗Ｐ抗
体は存在しないことが判る。
【００３８】注目すべき点は、ＨＥｐ−２細胞抽出物を
用いたウェスタンブロット法で抗Ｐ抗体陽性を示した血
清８例はすべてＥＬＩＳＡでも陽性値を示したが（１２
1.６〜１４１３．６Ｕ／ml）、ＨＥｐ−２によるウェス
タンブロット法で抗Ｐ抗体陰性を示した血清８例は抗ア
ルブミン抗体陽性の３例を含むすべてがＥＬＩＳＡで抗
Ｐ抗体陰性値を示した（０〜１７Ｕ／ml）。ＥＬＩＳＡ
の抗原としてリボソームＰ−ＨＳＡ、リボソームＰ−Ｂ
ＳＡ、リボソームＰ−ＯＶＡのいずれを用いた場合も、
抗Ｐ抗体の測定に有意の変動は認められなかった。これ
らの結果はＳＬＥ患者の中には血清中に抗アルブミン抗
体を含むものが存在することを示している。しかし、本
発明により確立されたＥＬＩＳＡ法は、抗Ｐ抗体に特異
的であるととが確認された。
用いたウェスタンブロット法で抗Ｐ抗体陽性を示した血
清８例はすべてＥＬＩＳＡでも陽性値を示したが（１２
1.６〜１４１３．６Ｕ／ml）、ＨＥｐ−２によるウェス
タンブロット法で抗Ｐ抗体陰性を示した血清８例は抗ア
ルブミン抗体陽性の３例を含むすべてがＥＬＩＳＡで抗
Ｐ抗体陰性値を示した（０〜１７Ｕ／ml）。ＥＬＩＳＡ
の抗原としてリボソームＰ−ＨＳＡ、リボソームＰ−Ｂ
ＳＡ、リボソームＰ−ＯＶＡのいずれを用いた場合も、
抗Ｐ抗体の測定に有意の変動は認められなかった。これ
らの結果はＳＬＥ患者の中には血清中に抗アルブミン抗
体を含むものが存在することを示している。しかし、本
発明により確立されたＥＬＩＳＡ法は、抗Ｐ抗体に特異
的であるととが確認された。
【００３９】9)ＥＬＩＳＡによる抗Ｐ抗体の定量 ７５例のＳＬＥ患者血清中の抗Ｐ抗体をＥＬＩＳＡによ
り測定した。
り測定した。
【００４０】図２Ａに示すように、血清抗Ｐ抗体は、ル
ープス精神病（lupus psychosis)の患者において、非Ｃ
ＮＳのＳＬＥ患者あるいは非精神病ＣＮＳを示すＳＬＥ
患者に比し有意に上昇していた。ループス精神病患者の
患者の中には、９例の脳器質症候群を示す患者と１９例
の非器質精神病を示す患者が存在する。しかし、血清抗
Ｐ抗体は非器質性精神症状（non-organic psychosis)と
脳器質症候群(organicbrain syndrome)の間では有意差
がなかった。破線は血清抗Ｐの検出限界（４Ｕ／ml）を
示す。縦棒は平均±標準偏差を示す。統計学的解析はＭ
ann-Ｗitney Ｕテストを用いて行った。
ープス精神病（lupus psychosis)の患者において、非Ｃ
ＮＳのＳＬＥ患者あるいは非精神病ＣＮＳを示すＳＬＥ
患者に比し有意に上昇していた。ループス精神病患者の
患者の中には、９例の脳器質症候群を示す患者と１９例
の非器質精神病を示す患者が存在する。しかし、血清抗
Ｐ抗体は非器質性精神症状（non-organic psychosis)と
脳器質症候群(organicbrain syndrome)の間では有意差
がなかった。破線は血清抗Ｐの検出限界（４Ｕ／ml）を
示す。縦棒は平均±標準偏差を示す。統計学的解析はＭ
ann-Ｗitney Ｕテストを用いて行った。
【００４１】３４名の健常人血清中の抗Ｐ抗体は５．５
２±８．３９Ｕ／ml（平均±標準偏差）であった。表３
に示すように、非ＣＮＳのＳＬＥ患者２６例のうち２例
のみ（１９．２％）が、正常の上限の抗Ｐ抗体値を示し
た（健常人の抗Ｐ抗体平均値に標準偏差の３倍を加えた
値）。ループス精神病の患者では、非ＣＮＳのＳＬＥ患
者あるいは非精神病ＣＮＳを示すＳＬＥに比して、血清
抗Ｐ抗体値の異常を示す割合が有意に上昇していた（ｐ
＝0.００５、χ2＝１２．１９、自由度＝２）。これら
の結果は、リボソームＰ蛋白のＣ末端の部分に対する自
己抗体の上昇がループス精神病と有意に相関するとする
知見を裏付けるものである。さらに、脳器質症候群と非
器質精神病は抗Ｐ抗体の関与する共通の病態を有してい
ることが示唆された。
２±８．３９Ｕ／ml（平均±標準偏差）であった。表３
に示すように、非ＣＮＳのＳＬＥ患者２６例のうち２例
のみ（１９．２％）が、正常の上限の抗Ｐ抗体値を示し
た（健常人の抗Ｐ抗体平均値に標準偏差の３倍を加えた
値）。ループス精神病の患者では、非ＣＮＳのＳＬＥ患
者あるいは非精神病ＣＮＳを示すＳＬＥに比して、血清
抗Ｐ抗体値の異常を示す割合が有意に上昇していた（ｐ
＝0.００５、χ2＝１２．１９、自由度＝２）。これら
の結果は、リボソームＰ蛋白のＣ末端の部分に対する自
己抗体の上昇がループス精神病と有意に相関するとする
知見を裏付けるものである。さらに、脳器質症候群と非
器質精神病は抗Ｐ抗体の関与する共通の病態を有してい
ることが示唆された。
【００４２】
【表３】
【００４３】10) 治療による血清抗Ｐ抗体の変化 ６例のループス精神病を示す患者において、中枢神経症
状の治療による改善と血清抗Ｐ抗体値の推移とを経時的
に検討した（主として治療後１〜３ヵ月の間）。
状の治療による改善と血清抗Ｐ抗体値の推移とを経時的
に検討した（主として治療後１〜３ヵ月の間）。
【００４４】図３に示すように、治療により血清抗Ｐ抗
体値は有意に低下した（統計処理はＷilcoxon signed r
ank testにより行った）。図４は、治療によって改善し
たループス精神病を示すＳＬＥの１症例の臨床経過を示
す。中枢神経症状の改善と平行して抗Ｐ抗体値も低下し
ている。矢印はステロイドパルス療法を示す（１ｇ／日
を３日間連続）。血清抗Ｐ抗体は、患者の症状増悪時に
高値を示し、症状軽快とともに低下している。従って、
血清抗Ｐ抗体値は中枢神経病変の活動性の指標としても
有効であることが判る。
体値は有意に低下した（統計処理はＷilcoxon signed r
ank testにより行った）。図４は、治療によって改善し
たループス精神病を示すＳＬＥの１症例の臨床経過を示
す。中枢神経症状の改善と平行して抗Ｐ抗体値も低下し
ている。矢印はステロイドパルス療法を示す（１ｇ／日
を３日間連続）。血清抗Ｐ抗体は、患者の症状増悪時に
高値を示し、症状軽快とともに低下している。従って、
血清抗Ｐ抗体値は中枢神経病変の活動性の指標としても
有効であることが判る。
【００４５】11) ＣＮＳループス患者髄液中抗Ｐ抗体の
測定 髄液中の抗Ｐ抗体についてもその結果は報告者により一
定しない。我々もＣＮＳループス患者の髄液中抗Ｐ抗体
の測定を試みた。髄液中抗Ｐ抗体はループス精神病１２
例中の１例のみに認められたが、非精神病ＣＮＳを示す
ＳＬＥ９例中には１例も認められなかった。従って、ル
ープス精神病の発症にあたっては、髄液中の抗Ｐ抗体で
はなく、血清中の抗Ｐ抗体が重要な役割を果たすものと
考えられる。
測定 髄液中の抗Ｐ抗体についてもその結果は報告者により一
定しない。我々もＣＮＳループス患者の髄液中抗Ｐ抗体
の測定を試みた。髄液中抗Ｐ抗体はループス精神病１２
例中の１例のみに認められたが、非精神病ＣＮＳを示す
ＳＬＥ９例中には１例も認められなかった。従って、ル
ープス精神病の発症にあたっては、髄液中の抗Ｐ抗体で
はなく、血清中の抗Ｐ抗体が重要な役割を果たすものと
考えられる。
【００４６】12) まとめ 本発明においては、高純度のリボソームＰペプチドを用
いることにより特に抗Ｐ抗体のＥＬＩＳＡの特異性に対
して配慮を行った。リボソームＰペプチドを結合するキ
ャリアー蛋白の差異は結果的には測定結果に対しては影
響を及ぼさなかった。しかし、リボソームＰペプチドの
結合の相手として、元来ヒトの同種蛋白であるヒト血清
アルブミン（ＨＳＡ）とすることにより、非特異的反応
が生じにくく、抗リボソームＰ抗体の測定を行う上で優
れており、本発明の病態診断剤に有効である。
いることにより特に抗Ｐ抗体のＥＬＩＳＡの特異性に対
して配慮を行った。リボソームＰペプチドを結合するキ
ャリアー蛋白の差異は結果的には測定結果に対しては影
響を及ぼさなかった。しかし、リボソームＰペプチドの
結合の相手として、元来ヒトの同種蛋白であるヒト血清
アルブミン（ＨＳＡ）とすることにより、非特異的反応
が生じにくく、抗リボソームＰ抗体の測定を行う上で優
れており、本発明の病態診断剤に有効である。
【００４７】更に、我々の開発したＥＬＩＳＡの結果
は、ＨＥｐ−２細胞抽出物を用いたウェスタンブロット
の結果とよく相関したことから、抗Ｐ抗体に対する特異
性の高いことが確認されている。この特異性の高いＥＬ
ＩＳＡを用いることにより、ループス精神病と抗Ｐ抗体
との有意な相関を裏付けることができた。さらに、我々
の結果は、ループス精神病と抗Ｐ抗体との関係について
のこれまでの賛否両論は測定系に用いたリソームＰペプ
チドの純度の差に起因するという結論を支持するに至っ
た。
は、ＨＥｐ−２細胞抽出物を用いたウェスタンブロット
の結果とよく相関したことから、抗Ｐ抗体に対する特異
性の高いことが確認されている。この特異性の高いＥＬ
ＩＳＡを用いることにより、ループス精神病と抗Ｐ抗体
との有意な相関を裏付けることができた。さらに、我々
の結果は、ループス精神病と抗Ｐ抗体との関係について
のこれまでの賛否両論は測定系に用いたリソームＰペプ
チドの純度の差に起因するという結論を支持するに至っ
た。
【００４８】更に一方では、ＴehやＩsenberg が指摘し
たように、ループス精神病と診断する方法と基準が従来
技術ではまちまちであるという点も無視できない。こう
した違いはＳＬＥにおける多彩な精神神経症状の評価の
困難性を反映しているかもしれない。しかし、精神神経
症状を示すＳＬＥ患者では、CSF Ig IndexやCSF IL-6の
上昇で裏付けられる中枢神経内での免疫異常を有するこ
とを考えておく必要がある。本発明では、ループス精神
病及び非精神病ＣＮＳを示すＳＬＥ患者はCSFIg Index
の上昇やCSF IL-6の上昇を示したことから、これら患者
の中枢神経症状は活動性のＳＬＥに起因することを確認
している。
たように、ループス精神病と診断する方法と基準が従来
技術ではまちまちであるという点も無視できない。こう
した違いはＳＬＥにおける多彩な精神神経症状の評価の
困難性を反映しているかもしれない。しかし、精神神経
症状を示すＳＬＥ患者では、CSF Ig IndexやCSF IL-6の
上昇で裏付けられる中枢神経内での免疫異常を有するこ
とを考えておく必要がある。本発明では、ループス精神
病及び非精神病ＣＮＳを示すＳＬＥ患者はCSFIg Index
の上昇やCSF IL-6の上昇を示したことから、これら患者
の中枢神経症状は活動性のＳＬＥに起因することを確認
している。
【００４９】また、上述の通り、ＳＬＥでは、高次脳機
能の異常に伴って多彩な症状が見られ、これら高次脳機
能の異常に伴う症状は、指南力・認知・記憶・そのたの
知的機能の障害を特徴とする「脳器質症候群」と、神経
症・躁病・うつ状態・分裂病などの症状を主徴とする
「非器質性精神病」の２つに大別される傾向にあるが、
これまでの報告は、脳器質症候群と抗Ｐ抗体との相関に
ついては全く言及されていない。本発明の結果は、脳器
質症候群と非器質性精神病の間では、血清抗Ｐ抗体の値
に有意差のないことをはっきりと証明した。従って、抗
Ｐ抗体は精神症状の症状特異性を決定するものではない
ことが判る。
能の異常に伴って多彩な症状が見られ、これら高次脳機
能の異常に伴う症状は、指南力・認知・記憶・そのたの
知的機能の障害を特徴とする「脳器質症候群」と、神経
症・躁病・うつ状態・分裂病などの症状を主徴とする
「非器質性精神病」の２つに大別される傾向にあるが、
これまでの報告は、脳器質症候群と抗Ｐ抗体との相関に
ついては全く言及されていない。本発明の結果は、脳器
質症候群と非器質性精神病の間では、血清抗Ｐ抗体の値
に有意差のないことをはっきりと証明した。従って、抗
Ｐ抗体は精神症状の症状特異性を決定するものではない
ことが判る。
【００５０】抗Ｐ抗体の出現には、人種差の存在する可
能性が指摘されている。実際、日本からの２つの報告で
は抗Ｐ抗体の陽性率が高い（３０％と４２％）。しか
し、本発明においては、ＳＬＥ患者全体での抗Ｐ抗体の
陽性率は２８％であった。本発明においては、ループス
精神病の患者の割合が意図的に高くなっていることを考
慮に入れると、日本人のＳＬＥ患者全体での血清抗Ｐ抗
体の陽性率が他国に比して高いことは考えにくい。
能性が指摘されている。実際、日本からの２つの報告で
は抗Ｐ抗体の陽性率が高い（３０％と４２％）。しか
し、本発明においては、ＳＬＥ患者全体での抗Ｐ抗体の
陽性率は２８％であった。本発明においては、ループス
精神病の患者の割合が意図的に高くなっていることを考
慮に入れると、日本人のＳＬＥ患者全体での血清抗Ｐ抗
体の陽性率が他国に比して高いことは考えにくい。
【００５１】本発明においては、患者の精神神経症状の
活動性が高いときに血清抗Ｐ抗体の上昇を認め、治療に
より症状が軽快すると、抗Ｐ抗体値は低下した。更に、
一人の患者で経時的に観察したところ、治療によって症
状が改善するのと平行してやはり血清抗Ｐ抗体は低下し
た。これらの結果より、これまでの報告と同様に、血清
中の抗Ｐ抗体は、精神症状を示す患者の中枢神経病変の
活動性のモニターを行う上で有用であることが示され
た。しかし、血清中の抗Ｐ抗体値の上昇の程度が中枢神
経病変の重症度を必ずしも反映していないことも本発明
が示している点に注意すべきである。例えば、活動性の
中枢神経病変を持つ患者が血清抗Ｐ抗体値で１２１．６
Ｕ／mlを示すこともあれば、治療により改善期にある患
者が血清抗Ｐ抗体値で８００．０Ｕ／mlを示すこともあ
る点である。これらの結果は、血清中の抗Ｐ抗体値その
ものは中枢神経病変の程度を知るための有益なマーカー
ではなく、むしろ共通な病態生理を持つＳＬＥの神経障
害の存在を示す１つの独特の指標と考えるべきであろ
う。異なる抗Ｐ抗体価でも同様の中枢神経症状を発症さ
せる個体の要因について今後明らかにしている必要があ
る。
活動性が高いときに血清抗Ｐ抗体の上昇を認め、治療に
より症状が軽快すると、抗Ｐ抗体値は低下した。更に、
一人の患者で経時的に観察したところ、治療によって症
状が改善するのと平行してやはり血清抗Ｐ抗体は低下し
た。これらの結果より、これまでの報告と同様に、血清
中の抗Ｐ抗体は、精神症状を示す患者の中枢神経病変の
活動性のモニターを行う上で有用であることが示され
た。しかし、血清中の抗Ｐ抗体値の上昇の程度が中枢神
経病変の重症度を必ずしも反映していないことも本発明
が示している点に注意すべきである。例えば、活動性の
中枢神経病変を持つ患者が血清抗Ｐ抗体値で１２１．６
Ｕ／mlを示すこともあれば、治療により改善期にある患
者が血清抗Ｐ抗体値で８００．０Ｕ／mlを示すこともあ
る点である。これらの結果は、血清中の抗Ｐ抗体値その
ものは中枢神経病変の程度を知るための有益なマーカー
ではなく、むしろ共通な病態生理を持つＳＬＥの神経障
害の存在を示す１つの独特の指標と考えるべきであろ
う。異なる抗Ｐ抗体価でも同様の中枢神経症状を発症さ
せる個体の要因について今後明らかにしている必要があ
る。
【００５２】本発明においては、ループス精神病の患者
の髄液中の抗Ｐ抗体の上昇を認めることはできなかっ
た。
の髄液中の抗Ｐ抗体の上昇を認めることはできなかっ
た。
【００５３】むしろ、髄液ではなく、血清中の抗Ｐ抗体
がループス精神病の発症に重要な役割を果たしている可
能性が高い。しかし、現在のところそん機序が全く判っ
ておらず、また血清中の抗Ｐ抗体がループス精神病の病
態形成に関与するという実際の証拠もない。事実抗Ｐ抗
体の結合する抗原は細胞質中に存在し、通常ＩｇＧ（抗
体）は細胞質中に入ることができない。しかし、最近の
研究によると、抗Ｐ抗体の認識するエピトープが神経細
胞や種々の非神経細胞の表面に存在するという。
がループス精神病の発症に重要な役割を果たしている可
能性が高い。しかし、現在のところそん機序が全く判っ
ておらず、また血清中の抗Ｐ抗体がループス精神病の病
態形成に関与するという実際の証拠もない。事実抗Ｐ抗
体の結合する抗原は細胞質中に存在し、通常ＩｇＧ（抗
体）は細胞質中に入ることができない。しかし、最近の
研究によると、抗Ｐ抗体の認識するエピトープが神経細
胞や種々の非神経細胞の表面に存在するという。
【００５４】従って、抗Ｐ抗体がそのような細胞と結合
することにより、その機能を障害する可能性が十分考え
られる。この点に関連して、中枢神経系の血管内皮細胞
がリボソームＰ抗原の発現に関して一般の血管内皮細胞
と異なっており、抗Ｐ抗体による障害を受けやすくなっ
ていることも十分推察される。
することにより、その機能を障害する可能性が十分考え
られる。この点に関連して、中枢神経系の血管内皮細胞
がリボソームＰ抗原の発現に関して一般の血管内皮細胞
と異なっており、抗Ｐ抗体による障害を受けやすくなっ
ていることも十分推察される。
【００５５】まとめると、本発明の結果は、リボソーム
Ｐペプチドの純度の差がこれまでの文献上の抗Ｐ抗体と
ループス精神病の相関についての賛否両論の原因になっ
ていたことが判る。特異性の高いＥＬＩＳＡを用いるこ
とにより、我々は血清抗Ｐ抗体とループス精神病（脳器
質症候群と非器質性精神病の両者を含む）の相関を確認
することができた。今後の検討が必要なものの、髄液中
ではく血清中の抗Ｐ抗体がびまん性の中枢神経障害の発
症に関与するものである。なお、ループス精神病の発症
に関与する他の因子や精神神経症状の特異性を決定する
要因についても今後の検討を行ってゆく必要がある。最
後に抗Ｐ抗体がいかなる機序で産生されるかについての
検討も、ループス精神病の発症機序の全貌の解明のため
に重要である。
Ｐペプチドの純度の差がこれまでの文献上の抗Ｐ抗体と
ループス精神病の相関についての賛否両論の原因になっ
ていたことが判る。特異性の高いＥＬＩＳＡを用いるこ
とにより、我々は血清抗Ｐ抗体とループス精神病（脳器
質症候群と非器質性精神病の両者を含む）の相関を確認
することができた。今後の検討が必要なものの、髄液中
ではく血清中の抗Ｐ抗体がびまん性の中枢神経障害の発
症に関与するものである。なお、ループス精神病の発症
に関与する他の因子や精神神経症状の特異性を決定する
要因についても今後の検討を行ってゆく必要がある。最
後に抗Ｐ抗体がいかなる機序で産生されるかについての
検討も、ループス精神病の発症機序の全貌の解明のため
に重要である。
【図１】 ２例の代表的なＳＬＥ患者血清の抗Ｐ抗体
（ＡとＢ）のイムノブロットによる反応を示す図。
（ＡとＢ）のイムノブロットによる反応を示す図。
【図２】 ＣＮＳループスにおける血清中抗リボソーム
Ｐ抗体値を示す図。
Ｐ抗体値を示す図。
【図３】 ループス精神病６例における治療後の血清抗
Ｐ値の変化を示す図。
Ｐ値の変化を示す図。
【図４】 脳器質症候群を示すＳＬＥ患者の臨床経過を
示す図。
示す図。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (56)参考文献 特開 平１−230591（ＪＰ，Ａ) 特開 昭59−116229（ＪＰ，Ａ) 今堀和友他監修「生化学辞典第１版」 株式会社東京化学同人発行（1984）「ペ プチド合成」の項 ＣＬＩＮＩＣＡＬ ＩＭＭＵＮＯＬＯ ＧＹ ＡＮＤ ＩＭＭＵＮＯＰＡＴＨＯ ＬＯＧＹ，45（１）（1987）Ｐ129−138 Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，90（1991）ｐ 54 (58)調査した分野(Int.Cl.6，ＤＢ名) G01N 33/564 G01N 33/53 G01N 33/544 ＣＡ（ＳＴＮ)
Claims (2)
- 【請求項１】純度９９％以上のＣ末端２２個のアミノ酸
を含む合成リボソームＰペプチドをヒト血清アルブミン
と結合させた合成リボソームＰペプチドーアルブミン結
合物を含有することを特徴とする全身性エリテマトーデ
ス病態診断剤。 - 【請求項２】合成リボソームＰペプチドとヒト血清アル
ブミンの重量組成比が１０〜３００対１００〜５００で
あることを特徴とする請求項１記載の全身性エリテマト
ーデス病態診断剤。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP9284297A JP2949619B2 (ja) | 1997-03-28 | 1997-03-28 | 全身性エリテマトーデス病態診断剤 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP9284297A JP2949619B2 (ja) | 1997-03-28 | 1997-03-28 | 全身性エリテマトーデス病態診断剤 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH10274655A JPH10274655A (ja) | 1998-10-13 |
| JP2949619B2 true JP2949619B2 (ja) | 1999-09-20 |
Family
ID=14065698
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP9284297A Expired - Fee Related JP2949619B2 (ja) | 1997-03-28 | 1997-03-28 | 全身性エリテマトーデス病態診断剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2949619B2 (ja) |
-
1997
- 1997-03-28 JP JP9284297A patent/JP2949619B2/ja not_active Expired - Fee Related
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| ＣＬＩＮＩＣＡＬ ＩＭＭＵＮＯＬＯＧＹ ＡＮＤ ＩＭＭＵＮＯＰＡＴＨＯＬＯＧＹ，４５（１）（１９８７）Ｐ１２９−１３８ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，９０（１９９１）ｐ５４ |
| 今堀和友他監修「生化学辞典第１版」株式会社東京化学同人発行（１９８４）「ペプチド合成」の項 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH10274655A (ja) | 1998-10-13 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Isshi et al. | Association of anti–ribosomal P protein antibodies with neuropsychiatric systemic lupus erythematosus | |
| O'Connor et al. | Myelin basic protein-reactive autoantibodies in the serum and cerebrospinal fluid of multiple sclerosis patients are characterized by low-affinity interactions | |
| US5187065A (en) | Method and materials for detecting lyme disease | |
| JP5711449B2 (ja) | 膵島細胞抗原分子及び又はインスリンに反応する自己抗体の検出 | |
| Bertolaccini et al. | The value of IgA antiphospholipid testing for diagnosis of antiphospholipid (Hughes) syndrome in systemic lupus erythematosus. | |
| US10871493B2 (en) | Assay for the diagnosis of peanut allergy | |
| JP3032290B2 (ja) | 脱髄性神経障害特に多発性硬化症の診断手段 | |
| EP1238284B1 (en) | Diagnostic assay for stroke | |
| JP4234207B2 (ja) | アレルギー性気管支肺アスペルギルス症の診断方法 | |
| JPH02503714A (ja) | ＩｇＡ腎臓病の診断のための方法及びキツト | |
| US20040248216A1 (en) | Method of examining cancer by assaying autoantibody against mdm2 and reagent therefor | |
| US8460884B2 (en) | Use of hematopoietic growth factor inducible neurokinin-1 (HGFIN) as a biomarker for renal injury or renal disease | |
| JP2000502793A (ja) | Ｅｌｉｓａ試験システム | |
| JP2949619B2 (ja) | 全身性エリテマトーデス病態診断剤 | |
| JP3989837B2 (ja) | 抗ラミニン−１抗体の測定法およびその応用 | |
| US6352831B1 (en) | Glycolipid complexes and their uses | |
| Pourmand et al. | Ro 52kD autoantibodies are detected in a subset of ANA-negative sera | |
| EP1806582B1 (en) | Method of diagnosing myasthenia gravis | |
| JP3998245B2 (ja) | 酸化アポリポタンパク質ａｉ及びそれを含有する酸化リポタンパク質の測定法及びキット | |
| US20070166775A1 (en) | Diagnosis and treatment for immunoglobulin E (IgE) implicated disorders | |
| JP3510889B2 (ja) | 糖尿病及び前糖尿症状の診断のための方法 | |
| US5576186A (en) | Diagnosis and monitoring of rheumatological diseases by detection of anti-EF1-α antibodies | |
| JP2915530B2 (ja) | ラミニン フラグメント | |
| JP3268494B2 (ja) | 全身性エリテマトーデス病態診断剤 | |
| US20070287166A1 (en) | Diagnostic Method for Alzheimier's Disease |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |