JP2901207B2 - 新規酸性カルボキシペプチダーゼ及びその製法 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は，例えば，タン白質加水
分解物の苦味ペプチドの除去の如き飲食品類分野、タン
白質のアミノ酸配列の決定の如きタン白質研究分野、消
化剤としての利用の如き医薬品分野、その他、広いプロ
テアーゼ利用分野において有用な酸性カルボキシペプチ
ダーゼ（以下、ＡＣＰａｓｅと称することがある）及び
その製法に関し、更に詳しくは，イカ類肝臓由来の新規
な酸性カルボキシペプチダーゼ及びその製法に関する。

【０００２】

【従来の技術】従来、酸性カルボキシペプチダーゼとし
て、例えば植物起源のカルボキシペプチダーゼとして
は、柑橘類の果皮［Nature(LONDON)201,613(1964)］、
柑橘類の葉［Hoppe-Seylers Z.Physiol.Chem. 352,1524
(1971)]、インゲンマメの葉の酵素［J.Biol.Chem. 247,
5573(1972)]、発芽大麦の酵素［Eu.J.Biochem.7,193(19
69)]、発芽小麦の酵素［Plant Physiol. 58,516(197
6)]、発芽綿実の酵素［J.Biol.Chem.247,5034,5041(197
2)]、トマトの酵素［Agric.Biol.Chem.38,1901(197
4)]、スイカの酵素［同 38,1891,(1974)]、小麦及び／
又は小麦ふすまから得られるカルボキシペプチダーゼ
（特公昭57-53073号公報)及びブロメライン粉末中の酵
素［J. Biochem.75,881(1974)]等が知られており、その
作用至適ｐＨは５乃至６の弱酸性にある。

【０００３】また微生物起源のカルボキシペプチダーゼ
としては、例えば、アスペルギルス・サイトイ(Aspergi
llus saitoi)の酵素［Biochim. Biophs. Acta 258,274
(1972)］、アスペルギルス・オリゼー（Aspergillusory
zae)の酵素［ Agric. Biol. Chem.36,1343,1474,1481(1
872)、同 37,1237,(1973)、特開昭47-29577号公報］、
アスペルギルス属(Aspergillus)の酵素（特開昭47-2538
2号公報、特開昭51-95182号公報、特開昭48-82068号公
報）、ペニシリウム属（Penicillium)の酵素（特開昭48
-35084号公報、特公昭 49-13987号公報）、モナスカス
属(Monascus)の酸性カルボキシペプチダーゼ（特開昭 6
2-158482号公報）等の既知の酵素を挙げることができ、
これらの作用至適ｐＨは３〜５の酸性側にある。

【０００４】更に、動物起源の酸性カルボキシペプチダ
ーゼとしては、牛膵臓[Method in Enzymology19,475(19
37)]、豚膵臓［同19,504(1970)]などから得られる酵素
が知られている。

【０００５】本発明者らは先に、イカ肝臓より得られた
プロテアーゼによるタン白質材料の加水分解物が、高食
塩含有飲食品及び／又は高酸類含有飲食品のストレート
なもしくは丸みに乏しい鹹味及び／又は酸味を和らげ、
丸みに富んだマイルドでかつコク味のある好ましい呈味
感に改善する作用があることを見いだし、飲食品の風味
改善方法として提案した（特開昭62-11060号公報）。

【０００６】イカ肝臓に存在するタン白質分解酵素は、
従来カテプシン系の酵素群であるといわれており、例え
ば、Comp.Ｂiochem.Ｐhysiol.Ｂ.,70，791,(1981);Ａgr
ic.Ｂiol.Ｃhem.40(6)1159-1165(1976);日本水産学会誌
26,500,504(1960);及び同27,85,(1961)等に詳細に記載
されている。しかしながらイカ肝臓酵素にエキソ型プロ
テアーゼであるカルボキシペプチダーゼ活性があること
は知られていない。従って、本発明の目的は従来未知の
イカ類肝臓由来の新規酸性カルボキシペプチダーゼを提
供するにある。本発明の他の目的は、該酸性カルボキシ
ペプチダーゼの製法を提供するにある。以下、本発明の
具体的な態様について更に詳しく説明する。

【０００７】本発明により提供される酸性カルボキシペ
プチダーゼを採取することのできるイカ類としては、例
えば、アカイカ、スルメイカ、マイカ、アオリイカ、ヤ
リイカ、ケンサキイカ、コウイカ、ヒナイカ、ミミイ
カ、ホタルイカ、ドスイカ、ダイオウイカ、ソデイカ等
の各種のイカ類を挙げることができるが、殊に、肝臓重
量が大きく、また水揚げ量の多いスルメイカ、アカイカ
及びマイカが好適である。これらイカ類の肝臓は、生鮮
品、冷凍品及び塩蔵品のいずれも利用することができ
る。

【０００８】これらイカ類の肝臓から酸性カルボキシペ
プチダーゼを分離採取する方法としては、例えば、生鮮
イカまたは冷凍イカの肝臓を分別し、これを磨砕処理し
た後、磨砕物１重量部に対して通常約１〜約１０重量
部、好ましくは約３〜約８重量部の水もしくはｐＨ約２
〜６の緩衝液をを加えて撹拌抽出し、好ましくは抽出液
を再度ｐＨ約２〜６、好ましくはｐＨ約２〜５に調整
し、得られる抽出水層部を遠心分離し、脂肪を分離除去
し、更にこの水層部をケイソウ土、セルロースなどの濾
過助剤を用いて濾過し、清澄な粗酵素液を得る方法を例
示することができる。得られる粗酵素液は、凍結濃縮、
減圧濃縮、限外濾過などの適宜な濃縮手段を用いて、該
酵素の活性低下をきたさない温度、例えば、約５０℃以
下の温度で濃縮することにより粗酵素濃縮物を得ること
ができる。

【０００９】この濃縮物はそのまま粗酵素として利用す
ることができるが、更に望ましくは該濃縮物を直接ある
いはデキストリン類などの適当なバインダーを添加した
後、真空乾燥、凍結乾燥等によって乾燥粉末化すること
が保存上有利である。また、上記濃縮物を常法により、
例えばアセトン沈殿法、アルコール沈殿法または塩析法
によって粗酵素を分離した後乾燥を行ってもよい。一
方、前記イカ肝臓を水抽出して得られる抽出水層部は、
例えばイオン交換樹脂、スチレン−ジビニルベンゼンを
重合して得られる多孔性重合樹脂等と接触させて捕集す
ることができる。さらに好ましくは阻害剤を用いるアフ
ィニティークロマトグラフィーを用いて捕集し、含水メ
タノール、含水エタノール又は含水アセトン等で溶出し
た後、上記のごとき処理によって粉末化することができ
る。

【００１０】更に上記の水抽出法に代る方法として、イ
カの肝臓を磨砕処理した後、遠心分離などによって脂肪
を分離するか又はせずして、例えばイカ肝臓の２〜５倍
重量のアセトンなどを用いて１〜５回程度繰り返し抽出
脱脂した後、前記の如き乾燥手段によって粗酵素粉末を
得てもよい。

【００１１】本発明のイカ肝臓由来の新規酸性カルボキ
シペプチダーゼは、ペプチドのカルボキシ末端からアミ
ノ酸を逐次遊離するエキソペプチダーゼであり、これま
で知られていたイカ肝臓由来のタン白質分解酵素がカテ
プシン系のプロテアーゼであるのとは全く異なり、本発
明者らによって初めて見出されたものである。以下、本
発明の酸性カルボキシペプチダーゼの諸性質及び既知の
酸性カルボキシペプチダーゼとの相違点を具体的に説明
する。

【００１２】本発明のイカ肝臓由来の酸性カルボキシペ
プチダーゼと従来既知のイカ肝臓由来のカテプシン系プ
ロテアーゼとの主な特性を対比して下記の表１に示す。

【００１３】

【表１】 ＊ 至適ｐＨ及び安定ｐＨはカルボベンゾキシ−グルタ
ミル−チロシンに作用させた場合のものである。 ＊＊分子量はアンドリュウスの方法に準じ、Ｓｕｐｅｒ
ｏｓｅ１２のゲル濾過法により測定した場合の値であ
る。

【００１４】以下、本発明の酸性カルボキシペプチダー
ゼの酵素学的性質について説明する。 (１) 酵素作用：本酵素はｐＨ２乃至６の酸性下でタン
白質及びペプチドのカルボキシ末端のペプチド結合を加
水分解し、中性、酸性又は塩基性アミノ酸ならびにプロ
リンからなるアミノ酸のいずれをも逐次遊離することが
できる酸性カルボキシペプチダーゼ（エキソペプチダー
ゼ）である。下記表２にカルボベンゾキシ−グリシル−
プロリル−ロイシル−グリシン（以下、Ｚ−Ｇly−Ｐro
−Ｌeu−Ｇlyと表記することがある）を基質とし本発明
の酵素を用いて行った場合の反応の経時的変化を示す。

【００１５】

【表２】

【００１６】（２）基質特異性 本発明の酸性カルボキシペプチダーゼの低分子基質に対
する基質特異性を下記表３に示す。

【００１７】

【表３】 ＊ｐＨ３.１；３０℃ 基質Ｚ-Ｇlu-Ｔyrに対する活性を100％とした場合の相
対活性（％）。なお、Ｚはベンジルオキシカルボニル基
を表し、Ｂｚはベンゾイル基を表す。

【００１８】表３の結果から明らかな如く、本発明の酵
素はカルボベンゾキシ・グリシル・ロイシルアミド（Ｚ
-Ｇly-Ｌeu-ＮＨ₂）に対して活性が認められないことか
ら、アミダーゼ活性をもたず、また、アミノ酸分析機に
よる測定結果から基質をＺ-Ｐhe-Ｔyr-Ｌeuとした場合
にＣ末端より順次遊離アミノ酸が分離してくることが認
められる。従って本発明の酵素はカルボキシペプチダー
ゼ作用を示すことが確認された。

【００１９】(３) 作用至適ｐＨ及び安定ｐＨ範囲：本
発明の酸性カルボキシペプチダーゼの至適ｐＨを図１に
示す。カルボベンゾキシ-グルタミル-チロシン（Ｚ−Ｇ
lu−Ｔyr）に作用させた場合の至適ｐＨは３〜６である
と認められた。また、安定ｐＨ範囲は図２に示すように
ｐＨ約２〜ｐＨ約６の範囲である。

【００２０】(４）力価測定法及び力価表示 力価の測定は、ペプチドの加水分解により生ずる遊離ア
ミノ酸を比色法で定量することによって行った。すなわ
ち、０.０５Ｍ酢酸緩衝液（ｐＨ３.１）に溶解した酵素
液２ｍｌを３０℃、１０分間予熱の後、これに０．０５
Ｍ酢酸緩衝液（ｐＨ３．１）に１０^-3Ｍのカルボベンゾ
キシ-グルタミル-チロシン（Ｚ−Ｇlu−Ｔyr）を溶解し
た基質２mlを一定時間反応させ、次いで、０.３ＭＮaＯ
Ｈ２ｍｌを添加混合して、反応を停止させる。更に３０
℃、３０分間放置した後、２.５％酢酸溶液２mlを加え
ｐＨを調整後、必要により濾紙濾過を行う。この濾液２
mlをとり、０.５Ｍクエン酸緩衝液(ｐＨ５.０）とニン
ヒドリン試薬１mlを加え、１００℃、１５分間加熱後、
急冷し、Ｕ−２０００型分光光度計（日立製）を用い、
５７０ｎｍ又は５８０ｎｍの吸光度を測定する。酵素単
位は、上記の条件で１秒間に１モルのアミノ酸を生成す
ることのできる酵素を１酵素単位：１カタール（１ｋａ
ｔ）として算定し、ＡＣＰase 活性（kat／mｌ）として
表わす。

【００２１】 （５） 作用適温（至適温度） 本酵素の温度一活性曲線は図３に示すとおりであり、作
用適温（至適温度）は約３０〜約５０℃である。

【００２２】(６) 温度による失活の条件 本酵素を各温度で１０分間処理後、直ちに氷水中で冷却
し、次いで前記(４)項で述べた条件でカルボベンゾキシ
−グルタミル−チロシン（Ｚ−Ｇlu−Ｔyr）に作用させ
た結果を図４に示す。図４から明らかな如く、本酵素は
４０℃以下では安定であるが６０℃，３０分間の加熱で
ほぼ失活する。

【００２３】(７) 阻害剤及び活性化 各種阻害剤および金属塩の酵素作用に及ぼす影響を、
０.０５Ｍ酢酸緩衝液（ｐＨ３.１）に溶解した１０^-3Ｍ
のカルボベンゾキシ−グルタミル−チロシン（Ｚ−Ｇlu
−Ｔyr）を基質として検討した。酵素液に各種阻害剤又
はキレート剤を添加し、これに基質を加えて前記(４)項
に記載した条件で作用させたときの残存活性の変化を調
べた。その結果を下記表４に示す。

【００２４】

【表４】

【００２５】表４の結果から明らかなとおり、本発明の
イカ肝臓由来の酸性カルボキシペプチダーゼはキレート
剤、例えばＥＤＴＡにより阻害を受けないので金属酵素
でないと認められる。更に、ＰＭＳＦで阻害を受けない
のでセリン型の酵素ではないと認められる。またＥ−６
４でも阻害を受けないことから−ＳＨが活性中心ではな
いが、パラクロロマーキュリー安息香酸、モノヨード酢
酸、ＨｇＣl₂で阻害を受けることから−ＳＨが活性に関
与している可能性もある。これに対して、ＴＰＣＫ、Ｚ
−ＰＣＫ、キモスタチンで阻害を受けることから活性中
心に−Ｈｉｓが関与してしていると推測される。また、
本酵素はＣys−Ｃysの１×１０^-4Ｍ〜１×１０^-2Ｍの濃
度範囲で活性化される。

【００２６】(８) 精製方法 本発明の酸性カルボキシペプチダーゼは、前記した如く
イカ肝臓を脱脂後、水または緩衝液を用いて抽出された
粗酵素液を限外濾過等により濃縮するか、又はそのまま
硫安塩析、有機溶媒を用いた分別沈殿などの操作を行っ
た後、Ｓｅｐｈａｄｅｘ等によるゲル瀘過もしくは各種
の吸着樹脂またはこれらの組合わせにより精製すること
ができる。殊に強陽イオン交換樹脂による精製が好適で
ある。粗酵素濃縮物を強陽イオン交換樹脂ＭｏｎｏＳ
ＨＲ５/５（ＰｈａｒｍａｃｉａＬＫＢ）を用いて分画
精製した結果を後記図５に示す。フラクションＮ０．２
３に単一のカルボキシペプチダーゼ活性が認められた。
また該強陽イオン交換樹脂分画により得られたカルボキ
シペプチダーゼ画分をＳｕｐｅｒｏｓｅ１２ＨＲ１０／
３０（Ｐｈａｒｍａｃｉａ ＬＫＢ）を用いてゲル瀘過
した結果を後記図６に示す。フラクションＮｏ．２６に
単一のカルボキシペプチダーゼ活性が認められた。精製
方法の具体例は後記実施例１〜６に示すとおりである。

【００２７】（９）分子量 本酵素の分子量は、アンドリウスの方法に準じ、Ｓｕｐ
ｅｒｏｓｅ１２のゲル瀘過法によって求めたところ、後
記図７に示した如く約４２０００であった。また本酵素
をＰｈａｓｔ Ｓｙｓｔｅｍ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ ＬＫ
Ｂ）を用いてデイスク電気泳動を行い、次いで酵素タン
白質を銀染色した結果も後記図８に示す如く分子量約４
２０００に単一のバンドを示した。かかる分子量を有す
るカルボキシペプチダーゼは、従来公知の動植物起源の
ものとは顕著に異なり、また、モナスカス属、ペニシリ
ウム属及びアスペルギルス属等の微生物が産生するもの
とも相違する。

【００２８】（１０）結晶構造 本酵素は高度に精製することによって、極端な活性低下
が認められるため、結晶化するには至っていない。

【００２９】以上の如く、本発明酵素は，作用至適ｐＨ
が３〜６の酸性側にあり、前記した如くＺ−Ｇly−Ｐro
−Ｌeu−Ｇlyの加水分解で見られたようにカルボキシ末
端から逐次アミノ酸を遊離し，更にＺ−Ｐｈｅ−Ｐｒｏ
のカルボキシ末端のプロリンを加水分解する作用を有し
ており、かかる作用を示さない従来から知られている動
物すい臓からのカルボキシペプチダーゼＡ又はＢとは全
く異なるカルボキシペプチダーゼであると考えられる。

【００３０】これらの挙動及び至適ｐＨからみると本酵
素は小麦などから得られるカルボキシペプチダーゼとは
基質特異性、分子量が全く異なり、阻害剤による阻害に
も差が認められることから、これらのカルボキシペプチ
ダーゼとも別種のものであると推定される。また、本出
願人の出願に係わるモナスカス属に属する菌の産生する
カルボキシペプチダーゼ（特開昭６２−１５８４８２号
公報）とも至適ｐＨ、至適温度、阻害剤の影響及び基質
特異性の点で異なり、このカルボキシペプチダーゼとも
別種のものであると認められる。以上の理由により、本
発明の酵素は従来既知のカルボキシペプチダーゼとは別
異の新規な酸性カルボキシペプチダーゼであると考えら
れる。以下、実施例により本発明の数態様を更に具体的
に説明する。

【００３１】

【実施例】

【実施例１】４０℃の軟水１Ｋｇに生のスルメイカ肝臓
（岩手県産）２００ｇを添加し、ｐＨ５に調整して充分
にかき混ぜた後、２０℃で１５時間静置した。次にデカ
ント分離により水層部を得た。この水層部をケイソウ土
濾過し、抽出液７００ｇを得た。この抽出液のｐＨ４．
０におけるカルボベンゾキシ−フェニルアラニル−チロ
シル−ロイシン（Ｚ−Ｐｈｅ−Ｔｈｙ−Ｌｅｕ）を基質
とする酵素活性を測定した結果、１２．４（ｎｋａｔ／
ｍｌ）であった（以下、この抽出液を「イカカルボキシ
ペプチダーゼ１」と称する）。

【００３２】

【実施例２】４０℃の軟水１４Ｋｇに冷凍アカイカ肝臓
（ニュージーランド沖産）２Ｋｇを添加し充分にかき混
ぜた後、１Ｎ−ＨＣｌにてｐＨ４．０に調整し、３０℃
で２時間静置した。次いでデカント分離により水層部を
採取し、珪藻土濾過して濾液１０Ｋｇを得た。この濾液
を減圧下に濃縮し濃縮液１Ｋｇを得た。この濃縮液の酵
素活性は１７．０（ｎｋａｔ／ｍｌ）であった。これを
２８０ｎｍにおけるタン白吸収当たりの比活性で表すと
１２．８（ｎｋａｔ／Ａ２８０ｎｍ）であった（以下、
この濃縮液を「イカカルボキシペプチダーゼ２」と称す
る）。

【００３３】

【実施例３】実施例２で得られたイカカルボキシペプチ
ダーゼ２の１Ｋｇに硫酸アンモニウム３５．３ｇを加
え、かき混ぜて溶解させた後４℃で１５時間静置した。
次いで、遠心分離により不溶物を除き分離液１０３１．
６ｇを得た。この分離液に硫酸アンモニウム３１８ｇを
加えて溶解し、４０℃で１５時間静置して塩析処理を行
い析出物２１ｇを得た。この析出物をｐＨ４．０の０．
０１Ｍ酒石酸緩衝液４０ｇに溶解し、得られた溶液を透
析チューブ（Ｕｎｉｏｎ Ｃａｒｂｉｄｅ ｃｏｒ
ｐ．）を用いて同じ緩衝液で透析処理して脱塩した。そ
の結果、酵素液１１０ｇを得た。この酵素液のＡＣＰａ
ｓｅ活性は１４１．９（ｎｋａｔ／ｍｌ）；３０．３
（ｎｋａｔ／Ａ２８０ｎｍ）であった（以下、この酵素
液を「イカカルボキシペプチダーゼ３」と称する）。

【００３４】

【実施例４】実施例３で得られたイカカルボキシペプチ
ダーゼ３の５ｇをｐＨ５．０の０．０１Ｍ酢酸緩衝液に
て平衡化した直径３．２ｃｍ×２３ｃｍのセルロースカ
ラムに供し、同緩衝液で塩化ナトリウム濃度が０〜０．
６Ｍまでのグラジエントを行い、ＡＣＰａｓｅ活性をも
つ画分１０ｇを得た。この分画物の活性は６８．０（ｎ
ｋａｔ／ｍｌ）；８７．２（ｎｋａｔ／Ａ２８０ｎｍ）
であった。

【００３５】

【実施例５】実施例３で得られたイカカルボキシペプチ
ダーゼ３の５ｇをｐＨ４.０の０.０１Ｍ酢酸緩衝液で平
衡化した直径１．６ｃｍ×１０ｃｍのＭｏｎｏ Ｓ（Ｐ
ｈａｒｍａｃｉａ ＬＫＢ．製）カラムに供し、同緩衝
液で塩化ナトリウム濃度０〜０．５Ｍまでグラジエント
を行い、ＡＣＰａｓｅ活性をもつ画分５ｇを得た。この
分画物の活性は１０８．２（ｎｋａｔ／ｍｌ）；１４
２．４（ｎｋａｔ／Ａ２８０ｎｍ）であった（以下、こ
の分画物を「イカカルボキシペプチダーゼ４」と称す
る）。

【００３６】

【実施例６】実施例５で得られたイカカルボキシペプチ
ダーゼ４の５ｇをｐＨ５．０の０．０１Ｍ酢酸緩衝液
（含０．１５Ｍ塩化ナトリウム）にて平衡化した直径
１．６ｃｍ×６０ｃｍのＳｕｐｅｒｄｅｘ ７５（Ｐｈ
ａｒｍａｃｉａ ＬＫＢ）に供し、同緩衝液で塩化ナト
リウム濃度０〜０．５Ｍまでグラジエントをおこない行
い、ＡＣＰａｓｅ活性をもつ画分５ｇを得た。この分画
物の活性は、１０８．２（ｎｋａｔ／ｍｌ）；１４２．
４（ｎｋａｔ／Ａ２８０ｎｍ）であった。

【００３７】

【発明の効果】イカ類肝臓にカテプシン系のプロテアー
ゼが存在することは従来から知られていた。これらのプ
ロテアーゼはタン白質をランダムに分解するエンドペプ
チダーゼである。イカ類肝臓酵素には上記プロテアーゼ
のほかに酸性カルボキシペプチダーゼが存在することは
従来全く知られておらず、かかる入手が容易で大部分が
廃棄されているイカ類肝臓から新規な酸性カルボキシペ
プチダーゼが得られることは酵素製造上極めて有利であ
る。更に本酵素は、近来蛋白資源の不足から重視されて
いる大豆その他の動植物タン白質酵素分解物製造の際に
問題となっている苦味ペプチド類の除去をはじめとし
て、ペプチド類のカルボキシ末端分析、アミノ酸配列の
決定及び消化剤としての利用など、蛋白研究分野、食品
工業分野及び医薬分野において広く利用可能で産業上極
めて有用な酵素である。

【図面の簡単な説明】

【図１】本発明酵素の至適ｐＨ範囲を示す図である。

【図２】本発明酵素の安定ｐＨ範囲を示す図である。

【図３】本発明酵素の至適温度範囲を示す図である。

【図４】本発明酵素の安定温度範囲を示す図である。

【図５】粗酵素のＭｏｎｏＳを用いたイオン交換クロマ
トグラフィーの溶出パターンを示す図である。

【図６】図５におけるフラクションＮｏ．２３をＳｕｐ
ｅｒｏｓｅ１２を用いてゲル濾過した際の溶出パターン
を示す図である。

【図７】本発明酵素のアンドリウスの方法による分子量
測定を示す図である。

【図８】本発明酵素のディスク電気泳動を示す図であ
る。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 船田 桂子 神奈川県川崎市中原区苅宿335 長谷川 香料株式会社川崎研究所内 (56)参考文献 特開 昭62−11060（ＪＰ，Ａ) (58)調査した分野(Int.Cl.⁶，ＤＢ名) C12N 9/48 ＢＩＯＳＩＳ（ＤＩＡＬＯＧ) ＷＰＩ（ＤＩＡＬＯＧ)

Claims (2)

(57)【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 次の理化学的性質を有することによって
   特徴づけられる酸性カルボキシペプチダーゼ。 （１）酵素作用 酸性下でタン白質及びペプチドのカルボキシ末端のぺプ
   チド結合を加水分解する。 （２）基質特異性 比較的非特異的にカルボキシ末端のペプチド結合を加水
   分解物するエキソ型カルボキシペプチダーゼであるが、
   Ｃ末端より２番目に疎水性アミノ酸がある場合によく作
   用する。 （３）至適ｐＨ： ｐＨ３〜６ （４）安定ｐＨ範囲： ｐＨ２〜６のｐＨ域で安定であ
   る。 （５）作用適温の範囲：３０〜５０℃ （６）ｐＨ、温度などによる失活の条件 ｐＨ１０以上において３０分または６０℃、３０分間で
   ほぼ失活する。 （７）阻害、活性化及び安定化 パラクロロマーキュリー安息香酸、モノヨード酢酸、キ
   モスタンチン、硫酸第二銅、塩化第二水銀及びカルボベ
   ンゾキシ−ＰＣＫにより阻害され、Ｃｙｓ−Ｃｙｓによ
   り活性化される。 （８）分子量： 約４２０００
2. 【請求項２】 イカ肝臓を水又は酸性の緩衝液で抽出
   し、得られる抽出液から脂肪及び不溶性固形分を除去す
   ることを特徴とする請求項１記載の酸性カルボキシペプ
   チダーゼの製法。