JP2885689B2 - ヒト内在性レトロウイルス遺伝子由来のポリペプチドまたは該ポリペプチドに対する抗体からなる癌検出剤 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、癌等の疾患に伴っ
て発現されるヒト内在性レトロウイルス抗原であるポリ
ペプチド、該ポリペプチドに対する特異抗体からなる、
癌検出剤に関する。本発明の癌検出剤を使用して、単離
されたヒトの血清などの体液もしくは組織中から癌を早
期に検出できる。

【０００２】

【従来の技術】現在、癌は本邦において主要死亡原因の
一つである疾患である。発癌のメカニズムは完全には解
明されておらず、現時点での癌の予防を行うことは難し
い。

【０００３】一般に細胞が癌化すると正常細胞とは異な
る遺伝子発現が起こることが知られ、これら異常遺伝子
発現による生成物が腫瘍マーカーとして利用されてき
た。現在の癌の診断法のほとんどは、癌細胞特異的に生
産されるいわゆる腫瘍マーカーを組織学的に、あるいは
生化学的に検出することによって行われている。

【０００４】たとえば、乳癌において、下記文献に示さ
れた現在汎用されている各腫瘍マーカーのステージ別の
陽性率は次の通りである。

【０００５】１）Ｍｙｅｒｓ，Ｒ．Ｅ．ら Ｃａｎｃ
ｅｒ （１９７８）４２，１５２０−１５２６ CEA（癌胎児性抗原）における乳癌患者陽性率は、 ステージI、（１４．８％／８１例） ステージII、（２３．７％／１１４例） ステージIII、（４０．５％／４２例） ステージIV、（７３．１％／２６０例）であった。

【０００６】２）杉山和義 ら 日本臨床外科医学会雑
誌 （１９９０）５１（７），１３８０−１３８８． 表３（引用） 各癌マーカーの陽性率の比較 ＢＣＡ２２５ ＣＡ１５−３ ＣＥＡ 疾患名 例数 陽性数（％） 陽性数（％） 陽性数（％） 原発性乳癌 ５８ ５（８．６） ２（３．４） ７（１２．１） ステージI １９ １（５．３） ０（０．０） ２（１０．５） ステージII ３０ ２（６．７） １（３．３） ３（１０．０） ステージ III＋IV ９ ２（２２．２） １（１１．１） ２（２２．２） 乳癌再発 ２０ 1４（７０） １１（５５） １１（５５） 乳癌計 ７８ ９（２４．４) １３(１６．７) １８(２３．１) 上記２つの文献からも明らかなように、従来は、ステー
ジIIIまたはIV段階あるいは再発段階の乳癌細胞など癌
細胞がある程度増殖した段階で初めてはっきりと検出さ
れるにすぎず、早期発見は非常に困難であった。

【０００７】

【発明が解決しようとする課題】近年外科手術の手技が
向上し、早期に癌を発見できた場合の治癒率は飛躍的に
上昇してきている。従って、癌を初期の段階で確実に診
断できる方法があれば癌患者の治療のために非常に有用
である。

【０００８】しかし、従来の腫瘍マーカーの多くは癌細
胞がある程度増殖した段階で初めて検出されるものがほ
とんどで、早期発見は事実上困難を極めている。従っ
て、新たな癌発生の検出方法の開発が待たれている現状
である。

【０００９】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、鋭意研究
の結果、これまでヒト体内で癌の発生と発現の関係が明
確に証明されていなかったヒト内在性レトロウイルス由
来のポリペプチドまたはそれに対する特異抗体を検出す
ることにより、早期に癌の発生を検知する方法を発明し
た。すなわち、本発明は、 １）ヒト細胞内で発現する内在性レトロウイルス遺伝子
にコードされるタンパク質もしくはその部分配列からな
る、抗原決定基を少なくとも一個含有していることを特
徴とするポリペプチドからなる癌検出剤；および ２）上記ポリペプチドに対する抗体からなる癌検出剤。

【００１０】に関するものである。

【００１１】本発明の好適具体例は、上記ポリペプチド
が、ヒト内在性レトロウイルス遺伝子ＨＥＲＶ−Ｅファ
ミリーに属するｐｏｌ遺伝子領域にコードされたポリペ
プチドからなる癌検出剤および該ポリペプチドに対する
抗体からなる癌検出剤である。

【００１２】外来性（感染性）レトロウイルスである H
IV-I や HTLV-I などは RNAウイルスであり、逆転写酵
素によってRNA から DNA を逆転写することができる。
ウイルス遺伝子は感染後宿主のゲノムDNA上に組み込ま
れたプロウイルスの形で存在することが知られている。
プロウイルスは gag （ウイルス構造蛋白）、pol （逆
転写酵素）、env （外被蛋白）遺伝子の両端に LTR （l
ong terminal repeat）と呼ばれる繰り返し配列が存在
する特徴的な構造を示す。こうした外来性レトロウイル
ス類似の遺伝子構造は、正常なヒトのゲノム DNA 上に
多数存在しており、ヒト DNA の0.1〜0.6％を占めると
されている。

【００１３】こうしたプロウイルスは内在性レトロウイ
ルスと総称されており、外来性レトロウイルスとは異な
り生殖細胞の染色体中にも組み込まれているため、メン
デルの法則に従って安定的に子孫に継代される。しか
し、多くの場合、外来性レトロウイルス類似の遺伝子構
造は保たれているものの、遺伝子配列中に多数の終止コ
ドンが存在するため、通常はウイルス粒子を形成するこ
とはないと考えられている。

【００１４】内在性レトロウイルスに関して、その遺伝
子発現および関連蛋白の発現、さらにウイルス粒子の形
成についての研究は未だ十分に進んでいるとは言えず、
自己免疫機序の発現や発癌との関連性が推測されてはい
るが、確かな実証はなされていない。実際、胎盤やある
種癌細胞等で内在性レトロウイルス遺伝子の発現やレト
ロウイルス様粒子の形成が認められているが、遺伝子配
列上は何れも不完全と考えられ、特定の内在性レトロウ
イルス遺伝子の発現による関連蛋白の発現を示唆させる
ものは、類似の遺伝子を持つヒト以外の動物のレトロウ
イルス由来の抗原に対する抗体を用いた交差反応性によ
る間接的な成績ばかりであり、直接的な成績は得られて
いない。

【００１５】ヒト本来の遺伝子産物に対して免疫機構が
働き抗体が産生されることは、自己免疫疾患等を除き通
常は生じない現象である。しかしながら、レトロウイル
ス遺伝子産物のような本来非自己の遺伝子産物には、該
遺伝子が癌化に伴って発現されるならば、ヒトの免疫機
構が働き特異抗体を産生する可能性がある。このような
癌化により生成する内在性レトロウイルス抗原に対する
抗体は、癌特異抗原を直接検出するよりもより早期に検
出できる可能性があり、従来の腫瘍マーカーとは異なる
新たな癌等の検出が可能となる。従って、癌の発生に伴
い発現される内在性レトロウイルス遺伝子産物の同定
と、上記機構による抗体の存在を解明することは、新た
な癌等の発生の検出方法を提供できると共に、新たな癌
治療法やワクチン開発への可能性を与えるものである。

【００１６】本発明以前には、内在性レトロウイルス遺
伝子は不完全であると考えられ、関連蛋白の生成を示す
直接証拠は無かった。これまでに発見されている内在性
レトロウイルス遺伝子は、ヒト染色体当り２〜１００コ
ピー存在する各ファミリー中の数種であり、各ファミリ
ー内での遺伝子配列およびアミノ酸配列の相同性は極め
て高い。本発明者らは、上記ファミリーの中で蛋白の発
現が可能な変異種が存在する可能性があることに基づ
き、不完全内在性レトロウイルス遺伝子からポリペプチ
ドをコードする遺伝子を選択し、遺伝情報に相当するポ
リペプチドを作製した。さらに、作製したポリペプチド
に対する抗体を調製し、癌化細胞中での作製ポリペプチ
ドと相同な内在性レトロウイルス遺伝子由来の抗原の存
在を示すとともに、その様な癌を有する患者の血中に、
そのポリペプチドと反応する抗体の存在を確認すること
によって、本発明を完成した。

【００１７】本発明において、ヒト細胞内で発現する内
在性レトロウイルス遺伝子とは、癌細胞などにおいて転
写されるものであればよい。この様な遺伝子は、既にク
ローニングされた内在性レトロウイルス遺伝子配列に相
補する特異ＤＮＡプローブによるハイブリダイゼーショ
ン法や、特異ポリメラーゼチェインリアクション（ＰＣ
Ｒ）プライマーによるＲＴ−ＰＣＲ法など、一般に用い
られる手法により、遺伝子発現の有無を確認して選択す
ることができる。

【００１８】本発明のポリペプチドとは、上記のように
して選択されたヒト細胞内で発現する内在性レトロウイ
ルス遺伝子にコードされるタンパク質に由来するポリペ
プチドであり、このタンパク質全体でも、これから相補
的な抗体と特異的に結合し得る抗原決定基が少なくとも
一個含むような領域を選択して用いてもよい。

【００１９】本発明のポリペプチドは、上記遺伝子内の
遺伝情報を基に、遺伝子工学的手法または化学的にペプ
チドを合成する方法等、いずれの方法により生産された
ものも用いることができる。具体的には、種々の周知の
方法によりクローニングした内在性レトロウイルス遺伝
子、または化学合成により作製された該遺伝子を、適当
な発現ベクターに組み込み、大腸菌や酵母等の微生物、
または高等動植物細胞を宿主として目的ポリペプチドを
生成、単離することができる。発現に当たっては、目的
ポリペプチド単独でも、他の適当な蛋白との融合蛋白質
として発現させた後、目的ポリペプチドを単離精製する
ことも可能である。

【００２０】ヒト細胞内で発現する内在性レトロウイル
ス遺伝子にコードされるタンパク質もしくはその部分配
列からなる、抗原決定基を少なくとも一個含有している
ことを特徴とするポリペプチドを用いた癌検出剤は、単
離された血清等の検体中における、ヒト内在性レトロウ
イルス由来のポリペプチドに対する特異抗体を検出する
ものであり、以下のようにして行うことができる。検体
としては、ヒト由来の種々の体液を挙げることができ、
例えば、血清及び尿等を挙げることができる。

【００２１】まず、人為的に調製したポリペプチドを例
えばマイクロタイタープレートのウエルの内壁のような
固相に結合し、非特異吸着部位をウシ血清アルブミン
（ＢＳＡ）等でブロッキングした後、検体を反応させ
る。洗浄後、固相に結合しているヒト抗体に対する第２
抗体を反応させる。洗浄後、固相に結合した第２抗体の
量を測定することにより、検体中ポリペプチドに対して
結合したヒト抗体を検出することができる。

【００２２】第２抗体の量の測定は、従来より免疫分析
分野において周知の種々の方法により行うことができ
る。例えば、第２抗体を酵素で標識しておき、発色性の
基質あるいは化学発光性の基質を用いて行うことができ
る。あるいは第２抗体にビオチンを結合しておき、この
ビオチンを標識化アビジンと反応させて該標識を測定す
ることによっても行うことができる。更には第２抗体に
特異的に反応する標識化抗体をさらに反応させ、該標識
を測定することによっても行うことができる。第２抗体
の標識には、酵素の代わりに蛍光色素や放射性物質を用
いてもよい。

【００２３】また、本発明のヒト内在性レトロウイルス
由来のポリペプチドをラテックスや動物の赤血球のよう
な粒子に結合させ、これと検体を反応させて、粒子の凝
集を吸光度測定等により測定することにより、検体中の
ヒト内在性レトロウイルス由来のポリペプチドに対する
特異抗体を検出または測定することができる。

【００２４】なお、ここで用いることのできるポリペプ
チドにはその配列に相補的な抗体と特異的に結合し得る
抗原決定基が少なくとも一個含むものであればよいし、
そのようなポリペプチドを数種類組み合わせて用いるこ
とも可能である。

【００２５】更に本発明のポリペプチドに親和性を有す
ることを特徴とするモノクローナル抗体又はポリクロー
ナル抗体を用いた免疫化学的方法あるいは組織化学的方
法による癌細胞等におけるヒト内在性レトロウイルス由
来のポリペプチドの検出は以下のようにして行えばよ
い。

【００２６】まず、本発明のポリペプチドに親和性を有
することを特徴とするモノクローナル抗体は、常法に基
づき、上記のような方法により調製したヒト内在性レト
ロウイルス由来のポリペプチドを動物に免疫し、その抗
体産生細胞とミエローマ細胞とを融合させ、得られるハ
イブリドーマから抗ヒト内在性レトロウイルス由来ポリ
ペプチド抗体を産生するハイブリドーマを選択し、これ
を培養して生産されたモノクローナル抗体を回収するこ
とにより得ることができる。また、同ポリクローナル抗
体は、常法に基づき、上記のような方法により調製した
ヒト内在性レトロウイルス由来のポリペプチドを動物に
免疫し、その血清から回収することにより得ることがで
きる。

【００２７】ヒト細胞内で発現する内在性レトロウイル
ス遺伝子にコードされるタンパク質もしくはその部分配
列からなる、抗原決定基を少なくとも一個含有している
ことを特徴とするポリペプチドに対する抗体を用いた癌
検出剤は、一つは単離された血清等の検体中における、
ヒト内在性レトロウイルス由来のポリペプチドを含む免
疫複合体を検出するものであり、以下のようにして行う
ことができる。検体としては、ヒト由来の種々の体液を
挙げることができ、例えば、血清及び尿等を挙げること
ができる。

【００２８】まず、本発明のポリペプチドに親和性を有
することを特徴とするモノクローナル抗体又はポリクロ
ーナル抗体を例えばマイクロタイタープレートのウエル
の内壁のような固相に結合し、非特異吸着部位をウシ血
清アルブミン（ＢＳＡ）等でブロッキングした後、検体
を反応させる。洗浄後、固相に結合している免疫複合体
のヒト抗体に対する第２抗体を反応させる。洗浄後、固
相に結合した第２抗体の量を測定することにより、検体
中のポリペプチドを含む免疫複合体を検出することがで
きる。

【００２９】第２抗体の量の測定は、従来より免疫分析
分野において周知の種々の方法により行うことができ
る。例えば、第２抗体を酵素で標識しておき、発色性の
基質あるいは化学発光性の基質を用いて行うことができ
る。あるいは第２抗体にビオチンを結合しておき、この
ビオチンを標識化アビジンと反応させて該標識を測定す
ることによっても行うことができる。更には第２抗体に
特異的に反応する標識化抗体をさらに反応させ、該標識
を測定することによっても行うことができる。第２抗体
の標識には、酵素の代わりに蛍光色素や放射性物質を用
いてもよい。

【００３０】また、もう一つの癌検出剤としては、ヒト
内在性レトロウイルス由来のポリペプチドを発現してい
る特定の癌細胞等を、上記の方法により得られるヒト内
在性レトロウイルス由来のポリペプチドに親和性を有す
ることを特徴とするモノクローナル抗体又はポリクロー
ナル抗体によって免疫組織染色することで特定の癌等を
組織レベルまたは細胞レベルで検出するものである。

【００３１】なお、上記において用いることができる抗
体は、本モノクローナル抗体そのものでもよいが、酵素
により切断したＦ(ａｂ')２フラグメントやＦａｂフラ
グメント、あるいは遺伝子操作によりＣＨ鎖ＣＬ鎖領域
をヒト型に変換した抗体や一本鎖ＦＶ抗体のような抗体
遺伝子の直接クローニングによる組換え抗体などを用い
ても構わない。

【００３２】

【発明の実施の形態】本発明の癌検出剤は、マルチコピ
ーＣ型内在性レトロウイルスＨＥＲＶ−Ｅファミリーの
逆転写酵素（ｐｏｌ）をコードする領域より作製した、
分子量約１５０００のポリペプチドである組換えＨＥＲ
Ｖ−Ｅ−ＰＯＬからなり、単離された血清等ヒト体液中
における特異抗体の検出を行うことによって癌の早期検
出を行うものである。本発明のもう一方の癌検出剤は上
記ポリペプチドに対する抗体からなり、該抗体を用いた
免疫組織染色により癌、特に乳癌の早期検出を行うこと
ができるものである。

【００３３】本発明の癌検出剤の成分であるポリペプチ
ドは、癌等の疾患に対するワクチンとしても利用し得る
有用な物質であり、かつ、そのポリペプチドに親和性を
有することを特徴とする抗体、例えばモノクローナル抗
体、は癌等の疾患治療薬としても利用し得る有用な物質
である。

【００３４】

【実施例】以下、本発明を、マルチコピーＣ型内在性レ
トロウイルスＨＥＲＶ−Ｅファミリーの逆転写酵素（ｐ
ｏｌ）をコードする領域より作製した、分子量約１５０
００のポリペプチドを例としてさらに詳細に説明する。
尚、本発明は、内在性レトロウイルス遺伝子を特異的に
発現する他の種々の疾患に対しても有効な手段となるこ
とは明らかであり、下記実施例に限定されるものではな
い。

【００３５】実施例１ １．ヒト乳癌細胞ＭＣＦ−７で発現されるヒト内在性レ
トロウイルス遺伝子のクローニング ＭＣＦ−７細胞は１０％牛胎児血清（FCS）添加ＲＰＭ
Ｉ１６４０培地にて１０％飽和から培養を開始し、５〜
６日間培養後培地を３０μg／mlの５−ブロモデオキシ
ウリジンを含む１０％牛胎児血清（FCS）添加ＲＰＭＩ
１６４０培地にて１日培養した。培地を１０％牛胎児血
清（FCS）添加ＲＰＭＩ１６４０培地に交換後、さらに
５日間培養し、５−ブロモデオキシウリジン活性化ＭＣ
Ｆ−７細胞を調製した。５−ブロモデオキシウリジン活
性化ＭＣＦ−７細胞からポリ(Ａ)＋ＲＮＡを抽出し、オ
リゴｄ(Ｔ)１８プライマー（ファルマシア社製）及びＡ
ＭＶ逆転写酵素（宝酒造社製）によりｃＤＮＡを合成し
た。マルチコピーＣ型内在性レトロウイルス ＨＥＲＶ
−Ｅファミリーのクローン４−１（Ｒｅｐａｓｋｅ，
Ｒ．ら、Ｊ．ｏｆ Ｖｉｒｏｌ．（１９８５）５４
（３），７６４−７７２）の遺伝子配列を基にその遺伝
子の配列番号１７５０〜３６０７までのｇａｇ−ｐｏｌ
領域を増幅するようなＰＣＲプライマーを合成した。セ
ンス鎖用ＰＣＲプライマーとしてＧＰ３０Ｆ（５’−Ｃ
ＡＧＧＧＣＣＣＧＧＡＡＣＴＧＧＡＡＡＡＡＣＡＡＴ−
３’制限酵素ＡｐａＩ部位を付加）、アンチセンス鎖用
ＰＣＲプライマーとしてＰＯＬ−ＸｈｏＩ−Ｒ（５’−
ＣＧＣＴＣＧＡＧＧＴＧＧＧＧＧＡＧＴＴＣＴＴＧＡＡ
−３’制限酵素ＸｈｏＩ部位を付加）。ｃＤＮＡを鋳型
として上記のＰＣＲプライマーを用いてＧｅｎｅＡｍｐ
ＰＣＲ Ｒｅａｇｅｎｔ Ｋｉｔ（パーキンエルマー
／シータス社製）により、増幅を行った。結果、約１８
００ｂｐ．の産物（ＧＰ１８００）の増幅が得られ（図
１および２）、これをＴＡクローニングベクターｐＣＲ
II（インビトロジェン社製）に組み込みダイデオキシヌ
クレオチド チェイン ターミネーション法にて塩基配
列の確認を行った。結果、クローン４−１と塩基配列の
相同性で約９０％の一致が見られ、ＨＥＲＶ−Ｅファミ
リーの１クローンと確認された（図３及び図４）。従っ
て、ＭＣＦ−７細胞におけるＨＥＲＶ−Ｅ遺伝子の発現
が確認された。

【００３６】以下、図面にしたがって説明する。

【００３７】図１は、ＭＣＦ−７細胞で発現されたＨＥ
ＲＶ遺伝子のＰＣＲクローニングの結果を示し、鋳型と
してＭＣＦ−７のｍＲＮＡより調製したｃＤＮＡを用
い、ＧＰ３０Ｆ及びＰＯＬ−ＸｈｏＩ−ＲをＰＣＲプラ
イマーとして９５℃で３０秒、４０℃で２分、６０℃で
３分のＰＣＲサイクルを３５回行った時の増幅産物の２
％アガロースゲル電気泳動パターンである。レーン１は
サイズマーカーλ／ＨｉｎｄIII、レーン２はＰＣＲ産
物で、矢印の位置に約１８００ｂｐのフラグメント（Ｇ
Ｐ１８００）の増幅が見られた。

【００３８】図２は、ＧＰ１８００フラグメントを組み
込んだクローニングベクターｐＣＲII（ｐＣＲIIーＧＰ
１８００）の制限酵素分析の結果を示し、レーン１はサ
イズマーカーλ／ＨｉｎｄIII＋φχ１７４／ＨａｅII
I、レーン２はｐＣＲIIーＧＰ１８００／ＥｃｏＲＩ消
化、レーン３はｐＣＲIIーＧＰ１８００／ＡｐａＩ消
化、レーン４はｐＣＲIIーＧＰ１８００／ＸｈｏＩ消化
の２％アガロースゲル電気泳動パターンである。矢印の
位置に約１８００ｂｐのフラグメントの挿入が見られ
た。また、ＡｐａＩ消化の結果からフラグメント内部に
ＡｐａＩ部位が認められた。

【００３９】図３は、クローニングされたＭＣＦ−７Ｈ
ＥＲＶ遺伝子の塩基配列１、すなわち、ダイデオキシヌ
クレオチド チェイン ターミネーション法にて決定し
たＧＰ１８００フラグメントの５’側の部分ｇａｇ遺伝
子配列を示す。ＭＣＦ−７ＨＥＲＶとして今回決定した
遺伝子配列を、また、比較としてその下にＨＥＲＶ−Ｅ
（４−１）の配列（１９４３−２２５０）を並記し、そ
れとの相同性を比較した。相違部分を＊印を記した。両
者には８９．３％のホモロジーが見られた。また、部分
ｇａｇ遺伝子には四角枠で示した終始コドンが存在し、
遺伝子としては不活性であった。

【００４０】図４は、クローニングされたＭＣＦ−７Ｈ
ＥＲＶ遺伝子の塩基配列２、すなわちダイデオキシヌク
レオチド チェイン ターミネーション法にて決定した
ＧＰ１８００フラグメントの３’側の部分ｐｏｌ遺伝子
配列を示す。ＭＣＦ−７ ＨＥＲＶとして今回決定した
遺伝子配列を、また、比較としてその下にＨＥＲＶ−Ｅ
（４−１）の配列（３２６１−３６０７）を並記し、そ
れとの相同性を比較した。相違部分を＊印を記した。両
者には９１．６％のホモロジーが見られた。

【００４１】２.組換えＨＥＲＶ−Ｅ−ＰＯＬの調製 得られたＨＥＲＶ−Ｅ遺伝子から図５に示す部分的なｐ
ｏｌ領域を発現、翻訳させるために、まずＨＥＲＶ−Ｅ
−ＰＯＬ発現用のカセット遺伝子調製のためＨＥＲＶ−
Ｅ−ＰＯＬ遺伝子の５’側センス鎖用ＰＣＲプライマー
としてＰＯＬ−Ｍｅｔ−Ｆ（５’−ＣＡＴＧＧＧＡＡＴ
ＴＡＴＴＧＴＴＣＣＴＴＧＴＣＡＧ−３’Ｎ端メチオニ
ンコドン付加）を合成し、アンチセンス鎖用ＰＣＲプラ
イマーとしてＰＯＬ−ＸｈｏＩ−Ｒを用いてＰＣＲによ
ってＨＥＲＶ−Ｅ−ＰＯＬ発現用のカセット遺伝子を調
製した。カセット遺伝子はＴＡクローニングベクターｐ
ＣＲIIにサブクローニングした後、図６に示す様にＥｃ
ｏＲＩ／ＸｈｏＩ断片として切り出し、グルタチオン−
Ｓ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）との融合蛋白質とし
て発現させる発現ベクターｐＧＥＸ−４Ｔ−１（ファル
マシア社製）に組み込んだ。このプラスミドにより大腸
菌をトランスフォームし、菌体内にＧＳＴ−組換えＨＥ
ＲＶ−Ｅ−ＰＯＬ融合蛋白質を発現させた。この大腸菌
培養液より菌体を集め、破砕後遠心し、不溶性沈殿にＧ
ＳＴ−組換えＨＥＲＶ−Ｅ−ＰＯＬ融合蛋白質を回収し
た。不溶性のＧＳＴ−組換えＨＥＲＶ−Ｅ−ＰＯＬ融合
蛋白質は７Ｍ尿素を含む緩衝液から再生可溶化し、トロ
ンビンによってＧＳＴ蛋白を切り離し、硫安分画によっ
て組換えＨＥＲＶ−Ｅ−ＰＯＬを精製した。

【００４２】以下、図面を参照して説明する。

【００４３】図５はタンパク発現用に発現ベクターｐＧ
ＥＸ−４Ｔ−１に組み込んだ部分ｐｏｌ遺伝子のアミノ
酸配列とその相同遺伝子間でのアミノ酸配列における相
同性の比較の結果を示す。本発現遺伝子のアミノ酸配列
をＭＣＦ−７として示し、比較としてクローン４ー１及
びＭｏ−ＭｕＬＶ（モロニー・マウス白血病ウイルスの
ｐｏｌ）のアミノ酸配列を並記し、その相同領域を枠で
囲んで示した。ＭＣＦ−７とクローン４ー１とのホモロ
ジーは９１．２％、Ｍｏ−ＭｕＬＶとのホモロジーは６
４．０％であった。

【００４４】図６は、組換えＨＥＲＶ−Ｅ−ＰＯＬ発現
ベクターｐＧＳＴ−ＰＯＬの構築を示す。ＰＣＲクロー
ン化ＧＰ１８００遺伝子はＴＡクローニングベクターｐ
ＣＲIIに挿入後、ＰＣＲによってサブクローン化ＰＯＬ
遺伝子を取り出し、ｐＣＲIIにサブクローニングした。
発現用のＰＯＬ遺伝子はＥｃｏＲＩ及びＸｈｏＩ断片と
して切り出し、発現ベクターｐＧＥＸ−４Ｔ−１に挿入
した。枠組内には挿入部位近傍の配列構造並びに融合タ
ンパクを切り離す際のトロンビン切断部位を示した。

【００４５】３.ヒト抗ＨＥＲＶ−Ｅ−ＰＯＬ抗体価
ＥＬＩＳＡ法（Ａｎｔｉ−ＨＥＲＶ−Ｅ−ＰＯＬ ＥＬ
ＩＳＡ） 組換えＨＥＲＶ−Ｅ−ＰＯＬ１０μｇ／ｍｌをＰＢＳに
て調製し、マイクロプレートに１００μｌ／ウエルで分
注、室温１２時間放置して吸着させた。ウエルを純水で
洗浄後、１％ＢＳＡを含むＰＢＳを３００μｌ／ウエル
で分注して未吸着部位をブロッキング後、使用時まで４
℃で保存した。測定は、予め１００倍に希釈したヒト血
清検体を１００μlづつ分注後、室温で１時間反応させ
た。０.１％Ｔｗｅｅｎ２０−ＰＢＳで４回洗浄後、パ
ーオキシダーゼ標識抗ヒトイムノグロブリンG（ダコ社
製）を２０００倍希釈して分注し、室温で３０分反応さ
せた。０.１％Ｔｗｅｅｎ２０−ＰＢＳで４回洗浄後、
発色基質５ｍＭオルトフェニレンジアミン−０.０２５
％過酸化水素−リン酸クエン酸緩衝液（pH５.０）を１
００μｌづつ分注して室温で１５分反応させた。３N硫
酸を１００μlづつ加えて反応を停止させた後、波長４
９２ｎｍの吸光度を測定した。測定間のバラツキを平均
化するため、結果は陰性コントロール血清の吸光度を基
準としてその比を比較するべくＡｎｔｉ−ＨＥＲＶ−Ｅ
−ＰＯＬ（ＩｇＧ）インデックス（検体の吸光度／陰性
コントロールの吸光度）で表示した。

【００４６】４.乳癌患者及び正常者におけるヒト抗Ｈ
ＥＲＶ−Ｅ−ＰＯＬ抗体価の比較 上記方法によって乳癌患者（６６名）及び正常者（５０
名）におけるヒト抗ＨＥＲＶ−Ｅ−ＰＯＬ抗体価を測定
した結果、図７に示すように、乳癌患者群における抗体
価が有意に高く（ｐ＜０．０５、マン・ホイットニー検
定）、陰性コントロールの２倍以上の抗体価を示すもの
を陽性としたときの各陽性率は、乳癌患者群全体で４０
％、乳癌のステージ別ではI期II期の初期において５１
％であった。一方、正常者群で１５％であった。これら
の結果より、乳癌患者の血中に抗ＨＥＲＶ−Ｅ−ＰＯＬ
抗体が存在することが示された。

【００４７】５. 抗ＨＥＲＶ−Ｅ−ＰＯＬモノクロー
ナル抗体の作製 抗ＨＥＲＶ−Ｅ−ＰＯＬモノクローナル抗体は、組換え
ＨＥＲＶ−Ｅ−ＰＯＬを抗原としてＢＡＬＢ／ｃマウス
を免疫して作製した。組換えＨＥＲＶ−Ｅ−ＰＯＬ１０
０μgをフロインド・コンプリートアジュバントを用い
てエマルジョンにし、６週令マウス（雌）の皮下に２週
間間隔で２回投与した。最終免疫は、組換えＨＥＲＶ−
Ｅ−ＰＯＬ１００μgのＰＢＳ溶液を腹腔内に投与し、
３日後に脾細胞を調製した。単離した脾細胞とマウスミ
エローマ細胞Ｘ６３−Ａｇ８−６，５，３とを５：１の
細胞数で混合し、５０％ポリエチレングリコール４００
０を用いて細胞融合を行った。ＨＡＴ（ヒポキサンチ
ン、アミノプテリン、チミジン）選択培地でハイブリド
ーマを選択し、培養上清の特異抗体価をヒト抗ＨＥＲＶ
−Ｅ−ＰＯＬ抗体価 ＥＬＩＳＡ法の項で用いた組換え
ＨＥＲＶ−Ｅ−ＰＯＬ固相化マイクロプレート及びパー
オキシダーゼ標識抗マウスイムノグロブリン抗体（ダコ
社製）を用いて調べ、抗体陽性のハイブリドーマを選択
した。得られたハイブリドーマは限界希釈法にてクロー
ニングし、単一コロニーを含むウエルのハイブリドーマ
を１クローンとした。各モノクローナル抗体のサブクラ
スの決定は、サブクラス同定用キット（ザイメッド社
製）を用いて行った。得られたハイブリドーマクローン
は以下の通りであった： ハイブリドーマ＃１６０５（ＩｇＭ，κ）、＃４１０３
（ＩｇＭ，κ）、＃４１１７（ＩｇＭ，κ）、＃６０１
（ＩｇＧ１，κ）、＃７０６（ＩｇＧ２a，κ）、＃２
２０１（ＩｇＧ２b，κ）、＃４３１４（ＩｇＧ２a，
κ）、＃４７０６（ＩｇＧ１，κ）、＃５７０１（Ｉｇ
Ｇ２a，κ） 抗体の大量調製には、プリスタン０.５mlを投与して１
週間後のＢＡＬＢ／ｃマウスの腹腔にハイブリドーマ細
胞を１０７個接種し、約１０日後に貯留してきた腹水を
採取することによって、抗体を高濃度で含む腹水から回
収した。

【００４８】６. ＨＥＲＶ−Ｅ−ＰＯＬを含む免疫複
合体の検出 抗ＨＥＲＶ−Ｅ−ＰＯＬモノクローナル抗体（＃１６０
５）２０μｇ／ｍｌをＰＢＳにて調製し、マイクロプレ
ートに１００μl／ウエルで分注、室温１２時間放置し
て吸着させた。ウエルを純水で洗浄後、０.１％ＢＳＡ
を含むＰＢＳを３００μl／ウエルで分注して未吸着部
位をブロッキング後、使用時まで４℃で保存した。測定
は、予め１００倍に希釈したヒト血清検体を１００μl
づつ分注後、室温で１時間反応させた。０.１％Ｔｗｅ
ｅｎ２０−ＰＢＳで４回洗浄後、パーオキシダーゼ標識
抗ヒトイムノグロブリンG（ダコ社製）を２０００倍希
釈して分注し、室温で３０分反応させた。０.１％Ｔｗ
ｅｅｎ２０−ＰＢＳで４回洗浄後、発色基質５ｍＭオル
トフェニレンジアミン−０.０２５％過酸化水素−リン
酸クエン酸緩衝液（pH５.０）を１００μlづつ分注して
室温で１５分反応させた。３N硫酸を１００μlづつ加え
て反応を停止させた後、波長４９２ｎｍの吸光度を測定
した。測定間のバラツキを平均化するため、結果は陰性
コントロール血清の吸光度を基準としてその比を比較す
るべくＨＥＲＶ−Ｅ−ＰＯＬ免疫複合体インデックス
（検体の吸光度／陰性コントロールの吸光度）で表示し
た。

【００４９】７. 乳癌患者及び正常者におけるＨＥＲ
Ｖ−Ｅ−ＰＯＬを含む免疫複合体インデックスの比較 上記方法によって乳癌患者（６６名）及び正常者（５０
名）におけるＨＥＲＶ−Ｅ−ＰＯＬを含む免疫複合体イ
ンデックスを測定した結果、図７に示すように、乳癌患
者群における免疫複合体インデックスが有意に高く（ｐ
＜０．０５、マン・ホイットニー検定）、陰性コントロ
ールの２倍以上の抗体価を示すものを陽性としたときの
各陽性率は、乳癌患者群全体で３２％、乳癌のステージ
別ではI期II期の初期において５２％であった。一方、
正常者群で１０％であった。これらの結果より、乳癌患
者の血中にＨＥＲＶ−Ｅ−ＰＯＬを含む免疫複合体が存
在することが示された。また、ヒト抗ＨＥＲＶ−Ｅ−Ｐ
ＯＬ抗体価もしくは免疫複合体インデックスの何れか一
方でも陽性となる率では、正常者群で１８％に対して乳
癌患者群特にI期II期の初期群において７０％の著しい
陽性率を示した。

【００５０】８. イムノブロッティングによる特異性
の確認 組換えＨＥＲＶ−Ｅ−ＰＯＬ試料及びＭｏ−ＭｕＬＶ逆
転写酵素蛋白試料（ギブコ／ＢＲＬ社製）を、等量のＳ
ＤＳ／ＰＡＧＥ緩衝液と混合し、沸騰水中で加熱した
後、８〜２０％グラジエントゲルによるＳＤＳ−ＰＡＧ
Ｅを行い、これをニトロセルロース膜に転写した。転写
膜を３％ＢＳＡ−ＰＢＳでブロッキングした後、各モノ
クローナル抗体を反応させた。Ｔｗｅｅｎ２０−ＰＢＳ
にて洗浄後、パーオキシダーゼ標識抗マウスイムノグロ
ブリン抗体（ダコ社製）を反応させた。Ｔｗｅｅｎ２０
−ＰＢＳにて洗浄後、発色液ＴＭＢｌｕｅ（インタージ
ェン−ＣＤＰ社製）を加えて発色させた。結果、いずれ
も組換えＨＥＲＶ−Ｅ−ＰＯＬの分子量１５Ｋｄの位置
にバンドを生じ、特異性を確認した。また、組換えＨＥ
ＲＶ−Ｅ−ＰＯＬと６４％の相同性を持つＭｏ−ＭｕＬ
Ｖ逆転写酵素とは、＃１６０５及び＃４１０３に関して
は交差反応性を認めた。

【００５１】９. 抗ＨＥＲＶ−Ｅ−ＰＯＬモノクロー
ナル抗体によるヒト乳癌及び各種ヒト組織の免疫組織染
色 各種ヒト病理検体組織の未染色ホルマリン固定パラフィ
ン包埋切片を用いて常法に従って免疫組織染色を行っ
て、組織中の発現ＨＥＲＶ−Ｅ内在性レトロウイルス遺
伝子産物（ＨＥＲＶ−Ｅ−ＰＯＬ）の存在を確認し、組
織別の結果を比較することによって、その発現特異性を
検討した。用いた抗体は＃１６０５及び＃４１０３を主
として用い、陽性コントロールに抗ヒトＢ細胞モノクロ
ーナル抗体さらに正常マウス血清を陰性コントロールと
して使用した。結果は、表１に示したように、乳癌にお
いて強い染色結果が得られ、他の癌や正常組織では染色
されなかった。

【００５２】

【表１】

【００５３】図８に一次抗体としてモノクローナル抗体
＃１６０５を用い、二次抗体としてペルオキシダーゼ標
識抗マウス免疫グロブリン抗体を用いたヒト乳癌におけ
る免疫組織染色の結果（染色像）を写真で示した。免疫
組織染色に用いたヒト乳癌は、乳頭腺管癌、ステージII
期である。癌部を→、非癌部を⇒の矢印で示す。腺癌組
織の細胞質とモノクローナル抗体♯１６０５は反応して
いる。一方、非癌部組織との反応性は±と判定される。

【００５４】以上より、乳癌におけるＨＥＲＶ−Ｅ内在
性レトロウイルス遺伝子産物の存在が示された。

【００５５】１０. イムノブロッティングによるＭＣ
Ｆ−７細胞ライセート中の反応抗原の確認 抗ＨＥＲＶ−Ｅ−ＰＯＬモノクローナル抗体及びヒト抗
ＨＥＲＶ−Ｅ−ＰＯＬ抗体陽性乳癌患者血清が反応する
ＭＣＦ−７細胞ライセート中の抗原を比較分析するため
以下の検討を行った。ＭＣＦ−７細胞は１０％牛胎児血
清（FCS）添加ＲＰＭＩ１６４０培地にて飽和状態まで
培養した後、回収し、集めた細胞は７Ｍ尿素を含む緩衝
液中で溶解させ、その遠心上清をＭＣＦ−７細胞ライセ
ート試料とした。ＭＣＦ−７細胞ライセート試料を等量
のＳＤＳ／ＰＡＧＥ緩衝液と混合し、沸騰水中で加熱し
た後、８〜２０％グラジエントゲルによるＳＤＳ−ＰＡ
ＧＥを行い、これをニトロセルロース膜に転写した。転
写膜を３％ＢＳＡ−ＰＢＳでブロッキングした後、抗Ｈ
ＥＲＶ−Ｅ−ＰＯＬモノクローナル抗体＃１６０５及び
ヒト抗ＨＥＲＶ−Ｅ−ＰＯＬ抗体陽性乳癌患者血清（１
００倍希釈）をそれぞれ反応させた。Ｔｗｅｅｎ２０−
ＰＢＳにて洗浄後、モノクローナル抗体＃１６０５につ
いてはパーオキシダーゼ標識抗マウスイムノグロブリン
抗体（ダコ社製）また乳癌患者血清についてはパーオキ
シダーゼ標識抗ヒトイムノグロブリンG（ダコ社製）を
反応させた。Ｔｗｅｅｎ２０−ＰＢＳにて洗浄後、発色
液ＴＭＢｌｕｅ（インタージェン−ＣＤＰ社製）を加え
て発色させた。結果は図９に示したように、抗ＨＥＲＶ
−Ｅ−ＰＯＬモノクローナル抗体及びヒト抗ＨＥＲＶ−
Ｅ−ＰＯＬ抗体陽性乳癌患者血清はいずれも分子量約４
７Ｋｄの同じ位置のバンドを認識した。一方、正常者血
清にはバンドは確認できなかった。この共通抗原の結果
からも乳癌患者におけるＨＥＲＶ−Ｅ内在性レトロウイ
ルス遺伝子産物の特異的発現が強く支持された。

【００５６】図９は上述のように、抗ＨＥＲＶ−Ｅ−Ｐ
ＯＬモノクローナル抗体及びヒト抗ＨＥＲＶ−Ｅ−ＰＯ
Ｌ抗体陽性乳癌患者血清によるＭＣＦ−７細胞ライセー
トのイムノブロッティングの結果を示す。図中、Ａは、
ＳＤＳ−ＰＡＧＥ分離像のクマシーブリリアントブルー
染色を示し；Ｍｒは分子量マーカー；ｍＡｂは、モノク
ローナル抗体＃１６０５；Ｓｅｒｕｍ１は、乳癌患者血
清；Ｓｅｒｕｍ２は乳管内乳頭腫患者血清；そしてＳｅ
ｒｕｍ３は正常血清；におけるイムノブロッティング結
果を示す。それぞれ、レーン１は５ーブロモデオキシウ
リジン未処理ＭＣＦ−７細胞ライセート、レーン２は５
ーブロモデオキシウリジン処理ＭＣＦ−７細胞ライセー
ト、レーン３はモロニー・マウス白血病ウイルス逆転写
酵素を泳動している。＊＊は、モノクローナル抗体＃１
６０５及び乳癌患者血清、乳管内乳頭腫患者血清が共通
に認識した４７Ｋｄの抗原バンドを示す。また、＊はＨ
ＥＲＶと共通抗原性があるモロニー・マウス白血病ウイ
ルス逆転写酵素とも反応性があることを示す。

【００５７】

【発明の効果】上述の様に、本発明は、これまで遺伝子
からの蛋白発現が明確に証明されていなかった内在性レ
トロウイルス遺伝子から、ヒト細胞内において発現して
いる遺伝子を選択し、この遺伝子にコードされるポリペ
プチドの検出、またはこのポリペプチドに対する特異抗
体によるの検出、を行うことで、内在性レトロウイルス
に関連する疾病発病の早期検出を可能とするものであ
る。

【００５８】

【配列表】

【００５９】配列番号 ：１ 配列の長さ：３０７ 配列の型 ：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ 配列 ATTATCAAAA CCCCCAAGAG CATGGAAGGA CCCAGTTGCC AGGAACAGAC CCCCATTTGG ACCCACATGA AAGAGAGGAT ATGCAAAGGC TAAATGAGAC AGGGAAGCTC TCTTGGAAGG ATTAATGAGG GGAGCTCAGA AGGCCACGAA CGTTAACAAG CTCTCTGAGG TCATTCAGGG AAAAGAAGAA AGTCCGGCAC AATTCTACGA GAGACTGTGT GAGGCCTATC GTATGTATAC TCCCTTTGAT CCCGATAGCC CTGAAAATCA GCGTATGATT CACATGGCTT TAGTCCGTCA AAGCCCA

【００６０】配列番号 ：２ 配列の長さ：３４７ 配列の型 ：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ 配列： TGGAATTATT GTTCCTTGTC AGTGTCCATG GAACACTCCC CTCCTGCCTG TTCCCAAGCC ACAGACCAAG GACTGCCGGC CGGTACAGGA TTTGCGGTTG CTTCATCAAG CTACACTGAC TTTACATCCA ACAGTACCTA ACCCGTCCAC ATTCTTGGGG TTGCTGCCAG CTGAGGACAG CTGGTTCACC TGCTTTGACC TGAAAGATGC TTTCTTTCCT ATCAGATTAG CCCCCGAGAG GCAGAAGCTG TTTGCCTTTC AGTGGGAAGA TCCGGAGTCA GGTGTCACTA CTCAGTACAC TTGGACCCGG CTTCCCCTTG GGTTCAAGAA CTCCCCCACC TCGAGCG

【００６１】配列番号 ：３ 配列の長さ：１１４ 配列の型 ：アミノ酸 配列： GIIVPCQCPW NTPLLPVPKP QTKDCRPVQD LPLLHQATLT LHPTVPNPST LLGLLPAEDS WFTCFDLKDA FFPIRLAPER QKLFAFQWED PESGVTTQYT WTRLPLGFKN SPTS

【図面の簡単な説明】

【図１】ＭＣＦ−７細胞で発現されたＨＥＲＶ遺伝子の
ＰＣＲクローニングを行った時の増幅産物の２％アガロ
ースゲル電気泳動パターンを示す写真である。

【図２】ＧＰ１８００フラグメントを組み込んだクロー
ニングベクターｐＣＲII（ｐＣＲIIーＧＰ１８００）の
制限酵素分析の結果得られた、２％アガロースゲル電気
泳動パターンを示す写真である。

【図３】本発明のクローニングされたＭＣＦ−７ＨＥＲ
Ｖ遺伝子の塩基配列１、すなわちダイデオキシヌクレオ
チド チェイン ターミネーション法にて決定したＧＰ
１８００フラグメントの５’側の部分ｇａｇ遺伝子配列
を示し、該配列をその下の従来技術によるＨＥＲＶ−Ｅ
（４−１）の配列（１９４３−２２５０）と相同性につ
いて比較した比較図である。

【図４】クローニングされたＭＣＦ−７ＨＥＲＶ遺伝子
の塩基配列２，すなわち、ダイデオキシヌクレオチド
チェイン ターミネーション法にて決定したＧＰ１８０
０フラグメントの３’側の部分ｐｏｌ遺伝子配列を示
し、該遺伝子配列をその下のＨＥＲＶ−Ｅ（４−１）の
配列（３２６１−３６０７）との相同性について比較し
た比較図である。

【図５】発現ベクターｐＧＥＸ−４Ｔ−１に組み込んだ
部分ｐｏｌ遺伝子のアミノ酸配列（ＭＣＦ−７）とクロ
ーン４ー１及びＭｏ−ＭｕＬＶ（モロニー・マウス白血
病ウイルスのｐｏｌ）のアミノ酸配列との相同性比較図
である。

【図６】組換えＨＥＲＶ−Ｅ−ＰＯＬ発現ベクターｐＧ
ＳＴ−ＰＯＬの構築を示す工程図である。

【図７】ヒト抗ＨＥＲＶ−Ｅ−ＰＯＬ抗体価（黒丸）及
び免疫複合体インデックス（白丸）の正常者群及び乳癌
患者群における分布を示すグラフである。

【図８】一次抗体としてモノクローナル抗体＃１６０５
を用い、二次抗体としてペルオキシダーゼ標識抗マウス
免疫グロブリン抗体を用いて染色した、ヒト乳頭腺管癌
のステージII期の免疫組織染色像を示す写真である。

【図９】抗ＨＥＲＶ−Ｅ−ＰＯＬモノクローナル抗体及
びヒト抗ＨＥＲＶ−Ｅ−ＰＯＬ抗体陽性乳癌患者血清に
よるＭＣＦ−７細胞ライセートのイムノブロッティング
の結果を示す電気泳動の写真である。

【符号の説明】

図１の符号：１はサイズマーカーλ／ＨｉｎｄIIIのレ
ーン、２はＰＣＲ産物のレーン、矢印の位置は約１８０
０ｂｐのフラグメント（ＧＰ１８００）の増幅を示す。 図２の符号：１はサイズマーカーλ／ＨｉｎｄIII＋φ
χ１７４／ＨａｅIIIのレーン、２はｐＣＲIIーＧＰ１
８００／ＥｃｏＲＩ消化のレーン、３はｐＣＲIIーＧＰ
１８００／ＡｐａＩ消化のレーン、４はｐＣＲIIーＧＰ
１８００／ＸｈｏＩ消化のレーン、矢印はその位置にお
ける約１８００ｂｐのフラグメントの挿入およびフラグ
メント内部のＡｐａＩ部位を示す。 図３の符号：＊印はＭＣＦ−７ ＨＥＲＶ遺伝子配列と
ＨＥＲＶ−Ｅ（４−１）の配列（１９４３−２２５０）
との相違部分；四角枠は終始コドンを示す。 図４の符号：＊印はＭＣＦ−７ ＨＥＲＶ遺伝子配列と
ＨＥＲＶ−Ｅ（４−１）の配列（３２６１−３６０７）
との相違部分を示す。 図５の符号：枠はアミノ酸配列の相同部分を示す。 図７の符号：黒丸はヒト抗ＨＥＲＶ−Ｅ−ＰＯＬ抗体
価；白丸は免疫複合体インデックス値；＊は、カットオ
フ・インデックスを２．０（横方向破線で示す）とした
場合のそれぞれヒト抗ＨＥＲＶ−Ｅ−ＰＯＬ抗体価測定
もしくは免疫複合体インデックス測定における陽性率
（％）；＊＊は、ヒト抗ＨＥＲＶ−Ｅ−ＰＯＬ抗体価測
定もしくは免疫複合体インデックス測定のいずれかが陽
性の場合の陽性率（％）を表示している。 図８の符号：→は癌部；⇒は非癌部を示す。 図９の符号：Ａは、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ分離像のクマシー
ブリリアントブルー染色を示し；Ｍｒは分子量マーカ
ー；ｍＡｂは、モノクローナル抗体＃１６０５；Ｓｅｒ
ｕｍ１は、乳癌患者血清；Ｓｅｒｕｍ２は乳管内乳頭腫
患者血清；そしてＳｅｒｕｍ３は正常血清；におけるイ
ムノブロッティング結果を示す。１は５ーブロモデオキ
シウリジン未処理ＭＣＦ−７細胞ライセート；２は５ー
ブロモデオキシウリジン処理ＭＣＦ−７細胞ライセー
ト；３はモロニー・マウス白血病ウイルス逆転写酵素；
の泳動を行ったレーンを示す。＊＊は、モノクローナル
抗体＃１６０５及び乳癌患者血清、乳管内乳頭腫患者血
清が共通に認識した４７Ｋｄの抗原バンドを示す。＊は
ＨＥＲＶと共通抗原性があるモロニー・マウス白血病ウ
イルス逆転写酵素とも反応性があることを示す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 ＦＩ Ｇ０１Ｎ 33/53 Ｇ０１Ｎ 33/53 Ｄ 33/574 33/574 Ａ 33/577 33/577 Ｂ // Ｃ０７Ｋ 14/15 Ｃ０７Ｋ 14/15 16/10 16/10 (Ｃ１２Ｎ 15/09 ＺＮＡ Ｃ１２Ｒ 1:92） (Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｒ 1:91） (Ｃ１２Ｐ 21/08 Ｃ１２Ｒ 1:91） (56)参考文献 Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．，54（３) （1985），ｐ．764−772 Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃ ｉ．，80（1983），ｐ．678−682 Ｊｐｎ．Ｊ．Ｇｅｎｅｔ．，62 （1987），ｐ．127−137 (58)調査した分野(Int.Cl.⁶，ＤＢ名) C12N 15/00 - 15/90 ＢＩＯＳＩＳ（ＤＩＡＬＯＧ) ＷＰＩ（ＤＩＡＬＯＧ) Ｇｅｎｓｅｑ

Claims (3)

(57)【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 ヒト内在性レトロウイルス遺伝子ＨＥＲ
   Ｖ−Ｅファミリーに属するｐｏｌ遺伝子領域にコードさ
   れたポリペプチドからなる癌検出剤。
2. 【請求項２】 ポリペプチドが、ヒト内在性レトロウイ
   ルス遺伝子ＨＥＲＶーＥファミリーに属するｐｏｌ遺伝
   子領域にコードされた図５の下記アミノ酸配列 【式１】 を有するポリペプチドであり、検出される癌が乳癌であ
   る請求項１に記載の癌検出剤。
3. 【請求項３】 ヒト内在性レトロウイルス遺伝子ＨＥＲ
   Ｖ−Ｅファミリーに属するｐｏｌ遺伝子領域にコードさ
   れたポリペプチドに対する抗体からなる癌検出剤。