JP2603487B2 - ガンに罹患している疑いのあるヒトをスクリーニングする方法 - Google Patents
ガンに罹患している疑いのあるヒトをスクリーニングする方法Info
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Description
【発明の詳細な説明】 本発明はヒトから分離された体液中の下記構造を有す
るブラジキニン誘導体のレベルを検出することを特徴と
するガンに罹患している疑いのあるヒトをスクリーニン
グする方法に関する。
るブラジキニン誘導体のレベルを検出することを特徴と
するガンに罹患している疑いのあるヒトをスクリーニン
グする方法に関する。
H2N−Arg−Pro−Hyp−Gly−Phe−Ser−Pro−Phe−Arg−
COOH （式中、Argはアルギニン、Proはプロリン、Hypはヒド
ロキシプロリン、Glyはグリシン、Pheはフェニルアラニ
ンおよびSerはセリンの残基をそれぞれ意味する）。
COOH （式中、Argはアルギニン、Proはプロリン、Hypはヒド
ロキシプロリン、Glyはグリシン、Pheはフェニルアラニ
ンおよびSerはセリンの残基をそれぞれ意味する）。
上記ブラジキニン誘導体（以下HYP−BKという）はブ
ラジキニン（以下BKという）のＮ末端から３番目のアミ
ノ酸であるプロリンがヒドロキシプロリンで置換された
ペプチドである。HYP−BKはすでにカエルの皮膚に見い
出されているが、哺乳動物中に存在するという報告はな
い。
ラジキニン（以下BKという）のＮ末端から３番目のアミ
ノ酸であるプロリンがヒドロキシプロリンで置換された
ペプチドである。HYP−BKはすでにカエルの皮膚に見い
出されているが、哺乳動物中に存在するという報告はな
い。
本発明者らは、ヒトの胃ガン患者の腹水中にもHYP−B
Kが蓄積されること、およびヒトから分離された体液、
例えば血液，腹水，尿などにおいて異常上昇するHYP−B
Kを検出することにより、ガンの如き炎症を伴い血管透
過性を亢進する疾患に罹患している疑いのあるヒトをス
クリーニングすることが可能であるとの知見を得、本発
明を完成した。
Kが蓄積されること、およびヒトから分離された体液、
例えば血液，腹水，尿などにおいて異常上昇するHYP−B
Kを検出することにより、ガンの如き炎症を伴い血管透
過性を亢進する疾患に罹患している疑いのあるヒトをス
クリーニングすることが可能であるとの知見を得、本発
明を完成した。
ヒト体液中のHYP−BKの検出は定性的であってもよい
が、定量的である方がより好ましい。HYP−BKの検出は
通常の生体成分の検出方法が適用される。例えば、HYP
−BKの検出は逆相高速液体クロマトグラフィー法やHYP
−BKに対する抗体、好ましくはモノクローナル抗体を利
用する種々の免疫検定法により行える。免疫検定法とし
てはEIA法が特に有利である。EIA法は抗HYP−BK抗体お
よび酵素で標識されたHYP−BK（酵素標識抗原）などを
試薬として用いる方法であり、抗体の特異的抗原結合力
と高い酵素活性とを合理的に組み合せた方法である。
が、定量的である方がより好ましい。HYP−BKの検出は
通常の生体成分の検出方法が適用される。例えば、HYP
−BKの検出は逆相高速液体クロマトグラフィー法やHYP
−BKに対する抗体、好ましくはモノクローナル抗体を利
用する種々の免疫検定法により行える。免疫検定法とし
てはEIA法が特に有利である。EIA法は抗HYP−BK抗体お
よび酵素で標識されたHYP−BK（酵素標識抗原）などを
試薬として用いる方法であり、抗体の特異的抗原結合力
と高い酵素活性とを合理的に組み合せた方法である。
ヒト体液中にHYP−BKが高レベルで検出されるとき、
ガンの如き炎症を伴い血管透過性を亢進する疾患に罹患
している可能性が強いと判断される。
ガンの如き炎症を伴い血管透過性を亢進する疾患に罹患
している可能性が強いと判断される。
以下に参考例と実施例を挙げて本発明を更に詳細に説
明する。
明する。
参考例１ HYP−BKの合成 HYP−BKは、固相ペプチド合成装置モデル990E（ベッ
クマン インストルメント社）を用いてJ.Am.Chem.So
c.,86,304−305（1964）に開示の方法に準じて合成し
た。即ち、手順に従って、ｐ−メチルベンツヒドリルア
ミン樹脂に各Boc−Ｌ−アミノ酸をカップルさせ、まずH
2N−Arg−Pro−Hyp−Gly−Phe−Ser−Pro−Phe−Arg−A
la−Ala−CONH2を合成した。縮合剤としては、Boc−ア
ルギニンの場合はジシクロヘキシル カルボジイミドお
よび１−ヒドロキシベンゾトリアゾールを用い、そのほ
かの場合は前者のみを用いた。得られたペプチドをトリ
プシン処理することによりAla−Ala−CONH2残基を脱離
してHYP−BKを得た。HYP−BKの精製は実施例１に記載の
逆相高速液体クロマトグラフィー法により行った。
クマン インストルメント社）を用いてJ.Am.Chem.So
c.,86,304−305（1964）に開示の方法に準じて合成し
た。即ち、手順に従って、ｐ−メチルベンツヒドリルア
ミン樹脂に各Boc−Ｌ−アミノ酸をカップルさせ、まずH
2N−Arg−Pro−Hyp−Gly−Phe−Ser−Pro−Phe−Arg−A
la−Ala−CONH2を合成した。縮合剤としては、Boc−ア
ルギニンの場合はジシクロヘキシル カルボジイミドお
よび１−ヒドロキシベンゾトリアゾールを用い、そのほ
かの場合は前者のみを用いた。得られたペプチドをトリ
プシン処理することによりAla−Ala−CONH2残基を脱離
してHYP−BKを得た。HYP−BKの精製は実施例１に記載の
逆相高速液体クロマトグラフィー法により行った。
実施例 １ ガン患者（男性65歳）の腹水100mlを腹部穿刺法によ
り集める。キニンの生成ないしは分解を防ぐために、集
めた腹水にパラアミノジフェニルメチルフルオライド
（1mM/）、ヘキサジメスリンブロマイド（50μｇ）、
EDTA（1.5％）、カプトプリル（1mM/）およびDL−２
−メルカプトメチル−３−グアニジノエチル−チオプロ
パン酸（1mM/）を含む水溶液10mlを加える。この混液
に99％エタノールを最終濃度70％となるように加え４℃
で３時間放置する。沈殿物を遠心分離し、上清を10mlま
で濃縮する。10％酢酸処理したセファデックスＧ−25
（微細粒）カラム（2.6×92cm）に前記濃縮物をかけ、
ついで溶出し低分子キニン活性分画を集めて凍結乾燥す
る。なお、キニン活性はラット子宮収縮法［ThrombsisR
es.,28 143（1982）］により測定した（以下同様）。凍
結乾燥物を逆相高速液体クロマトグラフィーに付し第１
図の溶出図を得る。第１図の溶出図においてキニン活性
が認められるピークＩおよびIIの内、ピークＩの分画
（1ml）を集め、凍結乾燥する。160ピコモルHYP−BK相
当量の凍結乾燥物および400ピコモルのBKの混合物を逆
相高速液体クロマトグラフィーに付し第2a図の結果を得
る。また、参考例１で得た合成HYP−BKの200ピコモルお
よび400ピコモルのBKの混合物を同様にして逆相高速液
体クロマトグラフィーに付し第2b図の結果を得る。以上
からヒト胃ガン患者の腹水中のHYP−BKの存在を確認し
た。
り集める。キニンの生成ないしは分解を防ぐために、集
めた腹水にパラアミノジフェニルメチルフルオライド
（1mM/）、ヘキサジメスリンブロマイド（50μｇ）、
EDTA（1.5％）、カプトプリル（1mM/）およびDL−２
−メルカプトメチル−３−グアニジノエチル−チオプロ
パン酸（1mM/）を含む水溶液10mlを加える。この混液
に99％エタノールを最終濃度70％となるように加え４℃
で３時間放置する。沈殿物を遠心分離し、上清を10mlま
で濃縮する。10％酢酸処理したセファデックスＧ−25
（微細粒）カラム（2.6×92cm）に前記濃縮物をかけ、
ついで溶出し低分子キニン活性分画を集めて凍結乾燥す
る。なお、キニン活性はラット子宮収縮法［ThrombsisR
es.,28 143（1982）］により測定した（以下同様）。凍
結乾燥物を逆相高速液体クロマトグラフィーに付し第１
図の溶出図を得る。第１図の溶出図においてキニン活性
が認められるピークＩおよびIIの内、ピークＩの分画
（1ml）を集め、凍結乾燥する。160ピコモルHYP−BK相
当量の凍結乾燥物および400ピコモルのBKの混合物を逆
相高速液体クロマトグラフィーに付し第2a図の結果を得
る。また、参考例１で得た合成HYP−BKの200ピコモルお
よび400ピコモルのBKの混合物を同様にして逆相高速液
体クロマトグラフィーに付し第2b図の結果を得る。以上
からヒト胃ガン患者の腹水中のHYP−BKの存在を確認し
た。
なお前記、逆相高速液体クロマトグラフィーの条件お
よび使用した機器は次のとおりである： カラム;ODS−120A（（株）東ソー）カラム4.6mm×25cm 溶媒； 第１図の場合 ０〜50％アセトニトリル−0.1％トリフルオロ酢酸 第２図の場合 17％アセトニトリル−0.25M硫酸ナトリウム−0.01Mリン
酸２水素カリウム−0.2％リン酸 ランプ；モデルCCPM（（株）東ソー） UV検出器；モデルUV−8000（（株）東ソー）
よび使用した機器は次のとおりである： カラム;ODS−120A（（株）東ソー）カラム4.6mm×25cm 溶媒； 第１図の場合 ０〜50％アセトニトリル−0.1％トリフルオロ酢酸 第２図の場合 17％アセトニトリル−0.25M硫酸ナトリウム−0.01Mリン
酸２水素カリウム−0.2％リン酸 ランプ；モデルCCPM（（株）東ソー） UV検出器；モデルUV−8000（（株）東ソー）
第１図は胃ガン患者の腹水をセファデクッスＧ−25（微
細粒）カラム処理をし、更に逆相高速液体クロマトグラ
フィーにかけたときの溶出図である。 第２図の（ａ）部分は第１図におけるピークＩとBKから
なる混合物の逆相高速液体クロマトグラフィーの溶出図
であり、第２図の（ｂ）部分は合成HYP−BK標品とBKか
らなる混合物の逆相高速液体クロマトグラフィーの溶出
図である。
細粒）カラム処理をし、更に逆相高速液体クロマトグラ
フィーにかけたときの溶出図である。 第２図の（ａ）部分は第１図におけるピークＩとBKから
なる混合物の逆相高速液体クロマトグラフィーの溶出図
であり、第２図の（ｂ）部分は合成HYP−BK標品とBKか
らなる混合物の逆相高速液体クロマトグラフィーの溶出
図である。
Claims (1)
- 【請求項１】ヒトから分離された体液中の下記構造を有
するブラジキニン誘導体のレベルを検出することを特徴
とするガンに罹患している疑いのあるヒトをスクリーニ
ングする方法： H2N−Arg−Pro−Hyp−Gly−Phe−Ser−Pro−Phe−Arg−
COOH （式中、Argはアルギニン、Proはプロリン、Hypはヒド
ロキシプロリン、Glyはグリシン、Pheはフェニルアラニ
ンおよびSerはセリンの残基をそれぞれ意味する）。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP29904987A JP2603487B2 (ja) | 1987-11-26 | 1987-11-26 | ガンに罹患している疑いのあるヒトをスクリーニングする方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP29904987A JP2603487B2 (ja) | 1987-11-26 | 1987-11-26 | ガンに罹患している疑いのあるヒトをスクリーニングする方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH01140065A JPH01140065A (ja) | 1989-06-01 |
| JP2603487B2 true JP2603487B2 (ja) | 1997-04-23 |
Family
ID=17867548
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP29904987A Expired - Lifetime JP2603487B2 (ja) | 1987-11-26 | 1987-11-26 | ガンに罹患している疑いのあるヒトをスクリーニングする方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2603487B2 (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA3008621A1 (en) | 2015-12-15 | 2017-06-22 | Dyax Corp. | Peptide quantitation assay for differentiating full-length high molecular weight kininogen (hmwk) and cleaved hmwk |
-
1987
- 1987-11-26 JP JP29904987A patent/JP2603487B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH01140065A (ja) | 1989-06-01 |
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