JP2552394Y2

JP2552394Y2 - ペプチドフラグメント分取装置

Info

Publication number: JP2552394Y2
Application number: JP1992082497U
Authority: JP
Inventors: 林太郎山本; 清史軒原
Original assignee: Shimadzu Corp
Current assignee: Shimadzu Corp
Priority date: 1992-11-30
Filing date: 1992-11-30
Publication date: 1997-10-29
Anticipated expiration: 2007-10-29
Also published as: JPH0642937U

Description

【考案の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本考案は、ペプチドフラグメント
分取装置、特に、ポリペプチド中のリジン残基とそれに
続くカルボキシル末端側のアミノ酸残基との間のペプチ
ド結合が特異的に切断されたペプチドフラグメント混合
物からカルボキシル末端ペプチドを分取するペプチドフ
ラグメント分取装置に関する。

【０００２】

【従来の技術およびその課題】ペプチドのカルボキシル
末端（Ｃ末端）の分析法として、特開平１−２３５６０
０号公報に開示されたペプチド分取方法がある。このペ
プチド分取方法では、ポリペプチド中のリジン残基とそ
れに続くＣ末端側のアミノ酸残基との間のペプチド結合
を特異的に切断処理する。そして、得られたペプチドフ
ラグメント混合物が、遊離のアミノ基と反応して共有結
合を形成し得る官能基を有する固相支持体と反応させら
れる。次いで、各ペプチドのα位のアミノ基を有する末
端残基とそれに隣接する残基との間のペプチド結合をト
リフルオロ酢酸（ＴＦＡ）により切断し、遊離してくる
タンパク質のＣ末端ペプチドフラグメントを採取する。

【０００３】このペプチド分取方法を実施する装置とし
て、ペプチドフラグメント混合物と固相支持体とを充填
する反応容器と、ペプチドフラグメント混合物の各ペプ
チドと固相支持体とを共有結合で結合させるカップリン
グ手段と、酸（特にＴＦＡが適している）を含む試薬を
試薬ボトルから配管を介して反応容器に供給するための
試薬供給部と、切断されたフラグメントを回収する回収
部とを備えたものを本考案者は考えた。しかし、このよ
うな構成からなるペプチドフラグメント分取装置では、
ＴＦＡ等の試薬を反応容器に供給した後に、試薬を収納
する試薬ボトルと反応容器との間の配管に試薬が残留す
ることになる。このため、以下の問題が生じる。

【０００４】時間の経過に伴いＴＦＡが一部分解変質
し、次回の送液の際に純度の低下したＴＦＡが装置性能
と反応性そのものとに影響を与える。ＴＦＡは配管を透過して装置内に拡散するので、装置
の腐食の原因となる。本考案の目的は、配管内に残留す
る試薬を減少させることにある。

【０００５】

【課題を解決するための手段】本考案に係るペプチドフ
ラグメント分取装置は、ポリペプチド中のリジン残基と
それに続くカルボキシル末端側のアミノ酸残基との間の
ペプチド結合が特異的に切断されたペプチドフラグメン
ト混合物からカルボキシル末端ペプチドフラグメントを
分取する装置である。この装置は反応容器とカップリン
グ手段と試薬供給手段と回収手段と試薬回収手段とを備
えている。

【０００６】反応容器には、固相支持体が充填されてお
り、ペプチドフラグメント混合物が注入される。カップ
リング手段は、反応容器内の温度を調整してペプチドフ
ラグメント混合物を固相支持体に共有結合するものであ
る。試薬供給手段は、試薬を収納する試薬収納部を有
し、試薬収納部から配管を介して試薬を前記反応容器に
供給するためのものである。回収手段は、反応容器から
のペプチドフラグメントと廃液とを選択的に回収するも
のである。試薬回収手段は、配管に残留する試薬を試薬
収納部に回収するものである。

【０００７】

【作用】本考案に係るペプチドフラグメント分取装置で
は、反応容器には固相支持体が充填されており、ここに
ペプチドフラグメント混合物が注入されると、カップリ
ング手段により、反応容器内の温度が調整され、ペプチ
ドフラグメント混合物が固相支持体にカップリングされ
る。そして、試薬供給手段が、試薬を試薬収納部から反
応容器に配管を介して供給する。さらに、反応容器から
のペプチドフラグメントが回収手段により選択的に回収
される。これらの処理が終了すると、配管に残留する試
薬が試薬回収手段により試薬収納部に回収される。

【０００８】ここでは、回収手段により、ガス供給部か
ら反応容器と第２回収部に選択的にガスを供給してガス
圧を高めて第１回収部にペプチドフラグメントを回収
し、またガス供給部から反応容器と第１回収部に選択的
にガスを供給してガス圧を高めて第２回収部に廃液を回
収する。これにより装置の大型化，複雑化を招くことな
く必要なペプチドフラグメントとその他の廃液とを区分
して回収できる。さらに、試薬回収手段により、配管に
残留する試薬が確実に試薬収納部に回収される。このた
め、配管内に残留する試薬が減少する。これにより、装
置の寿命は向上しかつ次回使用時にコンタミネーション
の危険が減少する。

【０００９】

【実施例】図１に示す本考案の一実施例によるペプチド
フラグメント分取装置１は、箱状の本体ケース２と、本
体ケース２の前面上部に配置された操作パネル３とを有
している。本体ケース２の前面には、第１容器配置部４
と第２容器配置部５とが上下に配置されている。

【００１０】第１容器配置部４には、回収されたＣ末端
ペプチドを収納する回収ボトル６を取り付けるための回
収ボトル取付部７と、後述するカラム３２を収納するヒ
ートブロック８とが並んで配置されている。第２容器配
置部５には、廃液ボトル９を取り付けるための廃液ボト
ル取付部１０と、回収液を収納する回収液ボトル１１を
取り付けるための回収液ボトル取付部１２と、切断に用
いるトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）を収納する切断液ボト
ル１３を取り付けるための切断ボトル取付部１４と、洗
浄液を収納する洗浄液ボトル１５を取り付けるための洗
浄ボトル取付部１５とが並設されている。

【００１１】操作パネル３は、図２に示すように、８個
のＬＥＤ１〜ＬＥＤ８を並設配置した工程表示部１９
と、５個のキーＫ１〜Ｋ５を並設配置したキー入力部２
０と、６個のＬＥＤを上下に配置した状態表示部２１と
から構成されている。ＬＥＤ１はカップリング工程時
に、ＬＥＤ２は第１洗浄工程時に、ＬＥＤ３は第２洗浄
工程時に、ＬＥＤ４は乾燥工程時に、ＬＥＤ５は切断工
程時に、ＬＥＤ６は回収工程時に、ＬＥＤ７は濃縮工程
時に、ＬＥＤ８は工程完了時にそれぞれ点灯する。

【００１２】キーＫ１は、配管内の洗浄のみを行うとき
に操作する洗浄キー（ＷＡＳＨ）である。キーＫ２は、
後述するＴＦＡ回収時に操作するＴＦＡ回収キー（ＴＦ
Ａ／ＲＥＴ）である。キーＫ３は、任意の工程から進捗
させるためのカーソルキーである。キーＫ４は、工程を
自動的に進捗させるためのランキー（ＲＵＮ）である。
キーＫ５は、工程を強制的に停止させるためのストップ
キー（ＳＴＯＰ）である。

【００１３】本体ケース１内には、図３に示す１３個の
電磁弁ＳＶ１〜ＳＶ１３を含む配管系統が配置されてい
る。電磁弁ＳＶ１〜ＳＶ７及びＳＶ１１〜ＳＶ１３は、
常閉の２方向弁である。これらの電磁弁は通電時に開
く。また電磁弁ＳＶ８〜ＳＶ１０は３方向弁であり、そ
のうち２つの入側ポートは常開であり、残りの出側ポー
トは常閉である。このため電磁弁ＳＶ８〜ＳＶ１０は通
電時に全てのポートが開き、遮断時に出側ポートのみ閉
じる。

【００１４】電磁弁ＳＶ１の入側ポートには、窒素ガス
ボンベ（図示せず）が接続される。電磁弁ＳＶ１の出側
ポートには、電磁弁ＳＶ２〜ＳＶ７の入側ポートが一括
接続されている。電磁弁ＳＶ２の出側ポートは、電磁弁
ＳＶ８、電磁弁ＳＶ９、計測管３１及び電磁弁ＳＶ１０
を介してヒートブロック８内のカラム３２に接続されて
いる。

【００１５】電磁弁ＳＶ３の出側ポートには、先端が洗
浄ボトル１５に挿入された配管の基端が接続されてい
る。電磁弁ＳＶ４の出側ポートには、先端が回収液ボト
ル１１に挿入された配管の基端が接続されている。電磁
弁ＳＶ５の出側ポートには、先端が切断液ボトル１３に
挿入された配管の基端が接続されている。電磁弁ＳＶ６
には、先端が廃液ボトル９に挿入された配管の基端が接
続されている。電磁弁ＳＶ７の出側ポートには、先端が
回収ボトル６に挿入された配管の基端が接続されてい
る。

【００１６】また電磁弁ＳＶ８の出側ポートには、先端
が洗浄ボトル１５内の底面近くに挿入された配管の基端
が接続されている。電磁弁ＳＶ９の出側ポートには、先
端が回収液ボトル１１の底面近くに挿入された配管の基
端が接続されている。電磁弁ＳＶ１０の出側ポートに
は、先端が切断液ボトル１３の底面近くに挿入された配
管の基端が接続されている。なお、これらの配管は、耐
腐食性等を考慮した透明樹脂性のチューブから構成され
ている。

【００１７】ヒートブロック８内には、酵素処理された
ペプチドと固相支持体とを充填するためのカラム３２が
配置され得る。カラム３２には、分配ブロック３４が配
管を介して接続されている。カラム３２と分配ブロック
３４との間には、配管内を通過する液を検出してカラム
３２に液が満たされたことを検出するための液センサ３
３が配置されている。分配ブロック３４は２方向に分岐
しており、一方には廃液ボトル９に挿通された配管が、
他方には回収ボトル６に挿通された配管がそれぞれ接続
されている。また、切断液ボトル１３、廃液ボトル９及
び回収ボトル６には、配管を介して電磁弁ＳＶ１１，Ｓ
Ｖ１２，ＳＶ１３の入側ポートが接続されている。これ
らの電磁弁ＳＶ１１，ＳＶ１２，ＳＶ１３の出側ポート
は大気に開放されている。

【００１８】ペプチドフラグメント分取装置１は、図４
に示す制御部４０を有している。制御部４０は、ＲＯ
Ｍ，ＲＡＭ等のメモリを含むマイクロコンピュータから
構成されている。制御部４０には、電磁弁ＳＶ１〜ＳＶ
１３が接続されている。また制御部４０には、キーＫ１
〜Ｋ５と、工程及び状態表示部１９，２１と、ヒートブ
ロック８を温度制御するための温調部４１と、各工程に
おける処理時間を規定するためのタイマー４２と、液セ
ンサ３３とが接続されている。なお温調部４１には、温
度設定部（図示せず）が設けられている。

【００１９】次に、上述のように構成されたペプチドフ
ラグメント分取装置１の制御動作を、図５〜図１５に示
すフローチャートにしたがって説明する。具体的な制御
動作を開始させる前に、オペレーターは、各ボトルに試
薬を充填し各取付部に取り付ける。ここで、洗浄ボトル
９には、メタノールあるいはアセトニトリルが充填され
ている。回収液ボトル１１には、０．１％ＴＦＡを含む
５０％アセトニトリル・２−プロバノール混合液が充填
されている。切断液ボトル１３には、ＴＦＡが充填され
ている。

【００２０】また、ヒートブロック８に、官能基を有す
る固相支持体（イソシオチアナート基が導入された多孔
性ガラス）が充填されたカラム３２を装着する。カラム
３２には、酵素（リシルエンドペプチターゼ）で処理さ
れたアミノ酸残基を含むペプチドフラグメント混合物が
予め注入されている。なお、このペプチドフラグメント
混合物には、酵素処理時に用いた尿素が残留している。

【００２１】一方、ペプチドフラグメント分取装置１の
制御部４０では、プログラムがスタートすると、まずス
テップＳ１で初期設定がなされる。ここでは、たとえば
制御部４０内のメモリがクリアされる。ステップＳ２で
は、工程の進捗状況を示す変数ｓを「１」にセットす
る。ステップＳ３では、工程表示部１９のＬＥＤ（最初
はＬＥＤ１）を点灯する。

【００２２】そして、ステップＳ４〜Ｓ７でキー判定処
理を繰り返す。ここで、ステップＳ４では、ランキーＫ
３が操作されたか否かを判断する。ステップＳ５では、
洗浄キーＫ１が操作されたか否かを判断する。ステップ
Ｓ６では、ＴＦＡ回収キーＫ２が操作されたか否かを判
断する。ステップＳ７では、カーソルキーＫ３が操作さ
れたか否かを判断する。

【００２３】ステップＳ４でランキーＫ３が操作された
と判断するとステップＳ８に移行する。ステップＳ８で
は、図７に示す順次処理（ＲＵＮ処理）が実行される。
ステップＳ５で洗浄キーＫ１が操作されたと判断すると
ステップＳ９に移行する。ステップＳ９では、配管内を
洗浄する洗浄処理が実行される。ステップＳ６でＴＦＡ
回収キーＫ２が操作されたと判断するとステップＳ１０
に移行する。ステップＳ１０では、図１６に示すＴＦＡ
回収処理が実行される。ステップＳ７でカーソルキーＫ
３が操作されたと判断するとステップＳ１１に移行す
る。ステップＳ１１では、カーソル処理が実行される。
このカーソル処理では、カーソルキーＫ３の操作の都
度、変数ｓをインクリメントする。なお、変数ｓは
「７」の次が「１」に戻るように変更される。また、変
数ｓが「８」のときも「１」に戻るように変更される。

【００２４】ステップＳ８での順次処理では、まず図７
のステップＳ３１で変数ｓを読み込む。ステップＳ３２
では、読み込んだ変数ｓの値が「１」であるか否かを判
断する。変数ｓが「１」と判断した場合にはステップＳ
３３に移行する。ステップＳ３３では、カラム３２内に
充填された固相支持体とペプチドフラグメント混合物と
のカップリング処理を行う。ステップＳ３５では、未結
合のペプチドのパージ及び回収液による第１洗浄を行
う。これにより、未結合のペプチドフラグメント混合物
を洗い流す。ステップＳ３５では洗浄液による第２洗浄
を行う。これにより、カラム３２及び配管内を洗浄す
る。ステップＳ３７では、Ｎ₂ガスによる乾燥処理を行
う。ステップＳ３８では、ＴＦＡを用いた酸処理による
切断処理を行う。ステップＳ３９では、回収液によるフ
ラグメントの回収処理を行う。ステップＳ４０では、Ｎ
₂ガスにより、回収したフラグメントの濃縮処理を行
う。

【００２５】これらの処理が終了すると、ステップＳ４
１で変数ｓを「８」にし、一連の分取処理が終了したこ
とをＬＥＤ８の点灯によって告知できるようにする。そ
してメインルーチンに戻る。ステップＳ３２で変数ｓが
「１」ではないと判断した場合（処理を途中の工程から
始める場合）には、ステップＳ４３〜ステップＳ４７
で、変数ｓが「２」〜「６」のいずれの値であるかを判
断する。そして、その判断結果に応じて、ステップＳ４
３〜Ｓ４７のいずれかから、ステップＳ３６〜ステップ
Ｓ３９のいずれかに移行する。変数ｓが「７」の場合に
はステップＳ４７から、ステップＳ４０へと移行する。

【００２６】ステップＳ３３のカップリング処理では、
図８のステップＳ５１で、ＲＵＮキーのＬＥＤを点灯す
る。これにより、オペレータは一連の処理が開始された
ことを認識できる。ステップＳ５３では、温調部４１に
よりヒートブロック８を４℃〜８０℃（好ましくは１０
℃〜６０℃）の範囲内で温調する。この温調は、設定時
間Ｔ₂（たとえば５分〜３時間）の間行われる。すなわ
ち、ステップＳ５４で設定時間Ｔ₂の経過を待ち、設定
時間Ｔ₂が経過するとステップＳ５５に移行して温調を
終了する。ステップＳ５６ではＬＥＤ１を消灯する。こ
れによって、固相支持体とペプチドフラグメント混合物
とのカップリング反応を行う。

【００２７】図７のステップＳ３５の第１洗浄工程で
は、図９のステップＳ６０でＬＥＤ２を点灯する。ステ
ップＳ６１では、電磁弁ＳＶ１，７，１２を開く。する
と、回収ボトル６内がＮ₂ガスで加圧され、また廃液ボ
トル９は大気に開放される。そして、電磁弁ＳＶ１，
２，８，９，１０を介してＮ₂ガスがカラム３２に供給
され、これにより、カラム３２内の未カップリングのペ
プチドが廃液ボトル９へとパージされる。ステップＳ６
２では設定時間Ｔ₃の経過を待つ。設定時間が経過した
と判断するとステップＳ６３に移行する。ステップＳ６
３では電磁弁ＳＶ１，２，７，１２を閉じる。図１０の
ステップＳ７２では、電磁弁ＳＶ１，４，９，７，１２
を開く。これにより、Ｎ₂ガスが、回収液ボトル１１に
充填されるとともに、回収ボトル６にも充填される。こ
れにより回収液ボトル１１及び回収ボトル６内の圧力が
大気圧より上昇するため、回収液ボトル１１内に充填さ
れた回収液が電磁弁ＳＶ９，１０を介してカラム３２に
供給される。ステップＳ７３では、カラム３２が回収液
で満たされたことを、液センサ３３が検出するのを待
つ。

【００２８】液センサ３３が回収液の流れを検出し、カ
ラム３２が回収液で満たされるとステップＳ７４に移行
する。ステップＳ７４では、電磁弁ＳＶ１，４，９，
７，１２を閉じる。そしてステップＳ７５では、カラム
３２内及び配管内の回収液を排出するために、電磁弁Ｓ
Ｖ１，２，７，１２を開く。これにより、カラム３２及
び配管内に満たされた回収液は、回収液ボトル６が加圧
され、廃液ボトル９が大気に開放されているので、分配
ブロック３４を介して廃液ボトル９側に排出される。ス
テップＳ７６では設定時間Ｔ₄の経過を待つ。設定時間
Ｔ₄経過するとステップＳ７７に移行する。ステップＳ
７７では電磁弁ＳＶ１，７，１２を閉じる。そして、ス
テップＳ７８でＬＥＤ２を消灯することにより第１洗浄
工程が終了したことを告知した後、図７のステップＳ３
６に移行する。

【００２９】図７のステップＳ３６の第２洗浄工程で
は、図１１のステップＳ８１でＬＥＤ３を点灯する。続
いてステップＳ８２では、電磁弁ＳＶ１，３，８，７，
１２を開く。これにより、洗浄ボトル１１及び回収液ボ
トル６内にＮ₂ガスが充填され、内部が加圧される。ま
た、廃液ボトル９内が大気に開放される。すると、洗浄
ボトル１５内に貯蔵された洗浄液が、電磁弁ＳＶ８，
９，１０を介してカラム３２内に供給される。カラム３
２内に供給された洗浄液は第１洗浄と同様にして廃液ボ
トル９側に流れる。ステップＳ８３では、洗浄液がカラ
ム３２を満たしたことを液センサ３３が検出するのを待
つ。液センサ３３が洗浄液を検出するとステップＳ８４
に移行する。ステップＳ８４では開いた電磁弁１，３，
８，７，１２をそれぞれ閉じる。以降のステップＳ８５
〜ステップＳ８８での動作は、第１洗浄におけるステッ
プＳ７５〜ステップＳ７８での動作と同様であるので説
明を省略する。

【００３０】図７のステップＳ３７の乾燥工程では、図
１２のステップＳ９１でＬＥＤ４を点灯する。ステップ
Ｓ９２では電磁弁ＳＶ１，２，７，１２を開き、カラム
３２内にＮ₂ガスを供給する。ステップＳ９３では所定
時間Ｔ₆の経過を待つ。設定時間Ｔ₆が経過するとステ
ップＳ９４に移行する。設定時間Ｔ₆が経過するとステ
ップＳ９４に移行し、開いた電磁弁ＳＶ１，２，７，１
２を閉じる。そして、ステップＳ９５に移行してＬＥＤ
４を消灯し、図７のステップＳ３８に移行する。なお、
ここでは、真空中で乾燥するのではなくＮ₂ガスで乾燥
するので、乾燥工程が簡略化できる。

【００３１】図７のステップＳ３８の切断工程では、図
１３のステップＳ１０１でＬＥＤ５を点灯する。ステッ
プＳ１０２では、電磁弁ＳＶ１，５，１０，７，１２を
それぞれ開く。これにより、切断液ボトル１３内に貯蔵
されたＴＦＡが電磁弁ＳＶ１０を介してカラム３２内に
供給される。ステップＳ１０３では液センサ３３がＴＦ
Ａ液を検出するのを待つ。カラム３２がＴＦＡで満たさ
れ、液センサ３３がＴＦＡ液を検出したと判断するとス
テップＳ１０４に移行する。ステップＳ１０４では電磁
弁ＳＶ１，５，１０，７，１２を閉じる。

【００３２】ステップＳ１０５では、ヒートブロック８
を温調部４１により温調する。このときの温度は２０℃
〜８０℃（好ましくは３０℃〜６０℃）の範囲である。
ステップＳ１０６では、設定時間Ｔ₇（５分〜１時間）
の経過を待つ。ステップＳ１０６で設定時間Ｔ₇が経過
したと判断するとステップＳ１０７に移行する。ステッ
プＳ１０７では温調を終了する。ステップＳ１０８で
は、電磁弁ＳＶ１，２，６，１３を開く。これにより、
廃液ボトル９内が加圧されるとともに回収ボトル６内が
大気に開放される。そしてＮ₂ガスがカラム３２、分配
ブロック３４を通じて回収ボトル６側に噴き出すこと
で、カラム３２内がパージされる。ステップＳ１０９で
は設定時間Ｔ₈の経過を待つ。設定時間Ｔ₈が経過する
とステップＳ１１０に移行し、電磁弁ＳＶ１，２，６，
１３を閉じる。そして、ステップＳ１１１でＬＥＤ５を
消灯した後、図７のステップＳ３９に移行する。

【００３３】図７のステップＳ３９の回収処理では、図
１４のステップＳ１２１でＬＥＤ６を点灯する。ステッ
プＳ１２２では電磁弁ＳＶ１，４，９，６，１３を開
く。これにより、回収液ボトル１１及び廃液ボトル９内
が加圧され、回収ボトル６内が大気に開放される。これ
にしたがって、回収液ボトル１１内の回収液が電磁弁Ｓ
Ｖ９，計量管３１及び電磁弁ＳＶ１０を介してカラム３
２内に供給される。ステップＳ１２３では、液センサ３
３が回収液を検出するのを待つ。液センサ３３が回収液
を検出するとステップＳ１２４に移行する。ステップＳ
１２４では電磁弁ＳＶ１，４，９，６，１３を閉じる。
続いてステップＳ１２２では、電磁弁ＳＶ１，２，６，
１３を開く。これによりカラム３２内で切断されたＣ末
端ペプチドの回収液は分配ブロック３４を介して回収ボ
トル６に回収される。ステップＳ１２６では設定時間Ｔ
₉の経過を待つ。設定時間Ｔ₉が経過するとステップＳ
１２７に移行し、電磁弁ＳＶ１，２，６，１３を閉じ
る。これにより、カラム３２内に残ったＣ末端ペプチド
が効率良く回収ボトル６内に回収されたことになり、ス
テップＳ１２８でＬＥＤ６を消灯した後、図７のステッ
プＳ４０に移行する。

【００３４】図７のステップＳ４０の濃縮処理ルーチン
では、図１５のステップＳ１３１でＬＥＤ７を点灯す
る。ステップＳ１３２では、電磁弁ＳＶ１，７，１３を
開く。これによりＮ₂ガスが回収ボトル６に流れ、回収
ボトル６内の回収液が蒸発して濃縮される。ステップＳ
１３３では、設定時間Ｔ₁₀の経過を待つ。この設定時間
はたとえば３時間程度である。ステップＳ１３４では電
磁弁ＳＶ１，７，１３を閉じる。そして、ステップＳ１
３５でＬＥＤ７を消灯した後、図７のステップＳ４１に
移行する。

【００３５】ステップＳ４１では、ステップＳ３（図
５）でＬＥＤ８を点灯させるため、変数ｓを「１」にセ
ットする。この一連の順次処理が終了した時点では、切
断液ボトル１３内が加圧されたままであり、電磁弁ＳＶ
１０と切断液ボトル１３とを接続する配管にはＴＦＡが
残留している。この配管内のＴＦＡを除去するために
は、ＴＦＡ回収キーＫ２を操作する。

【００３６】図５のステップＳ１４のＴＦＡ回収処理で
は、図１６のステップＳ１４１でＴＦＡ回収キーＫ２に
設けられたＬＥＤを点灯する。ステップＳ１４２では、
電磁弁ＳＶ１，２，１０，１１を開く。これにより、切
断液ボトル１３内が大気圧に開放されるとともに、電磁
弁ＳＶ１０を介して切断液ボトル１３へとＮ₂ガスが流
れ、配管に残留していたＴＦＡ液が切断液ボトル１３に
回収される。ステップＳ１４３では、設定時間Ｔ₁₁の経
過を待つ。この設定時間Ｔ₁₁は、配管内のＴＦＡ液を回
収するのに充分な時間である。設定時間Ｔ₁₁が経過した
と判断するとステップＳ１４４に移行する。

【００３７】ステップＳ１４４では、電磁弁ＳＶ１，
２，１０を閉じる。ステップＳ１４５では設定時間Ｔ₁₂
の経過を待つ。この設定時間Ｔ₁₂は、切断液ボトル１３
を大気圧にするのに充分な時間である。設定時間Ｔ₁₂が
経過するとステップＳ１４６に移行する。そして、ステ
ップＳ１４６で電磁弁ＳＶ１１を閉じた後、メインルー
チンに戻る。

【００３８】また、前記一連の順次処理の途中で処理を
中断したい場合には、ストップキーＫ５を押す。ストッ
プキーＫ５が操作されると、割り込み処理がかかり、図
６に示すストップ処理が実行される。図６のステップＳ
２１では、順次処理中における動作を一端停止する。ス
テップＳ２２では、ストップキーＫ５が再度操作された
か否かを判断する。ストップキーＫ５が操作されていな
いと判断するとステップＳ２４に移行する。ステップＳ
２４では、ランキーＫ４が操作されたか否かを判断す
る。ランキーＫ４が操作されていない場合にはステップ
Ｓ２１に戻り中断状態を続ける。

【００３９】ここで、ストップキーＫ５が再度操作され
たとすると、プログラムはステップＳ２２からステップ
Ｓ２３に移行する。ステップＳ２３では、処理工程を最
初に戻すため、次の処理が図５のステップＳ２から始ま
るようにプログラムカウンタを変更し、この処理を終了
する。またランキーＫ４が操作された場合には、ステッ
プＳ２５に移行する。ステップＳ２５では中断された動
作を再開する。

【００４０】上述の実施例では、カラム３２に固相支持
体を充填し、ペプチドフラグメント混合物を注入してヒ
ートブロック８に装着し、各ボトルを対応する取付部に
装着するだけの簡単な操作で、ペプチドフラグメント混
合物からＣ末端フラグメントを分取することができる。
このため、ペプチドからＣ末端フラグメントを熟練を要
さず簡単に再現性良く分取できる。

【００４１】また、ＴＦＡ回収処理により、配管内に残
留した試薬を回収できるので、配管からのＴＦＡ蒸気の
拡散を減少でき、腐食等のトラブルを軽減できる。さら
に、廃液ボトル９と回収ボトル６とを選択的に加圧及び
大気圧に開放することによりカラム３２からの液を振り
分けているので、振り分け流路中に電磁弁を設ける必要
がなくなる。このため、反応カラム等の下流側のデッド
ボリュームを小さくできでき、たとえば尿素のように乾
くと析出する試料や試薬を用いても、長期間の使用が可
能となる。

【００４２】〔他の実施例〕（ａ）前記実施例では、ＴＦＡ回収処理を独立して行
うように構成したが、ＴＦＡ液による切断終了の都度、
自動的に行うようにしてもよい。（ｂ）前記実施例では、切断用のＴＦＡだけを回収す
るように構成したが他の試薬を回収するようにしてもよ
い。

【００４３】

【考案の効果】本考案に係るペプチドフラグメント分取
装置では、試薬回収手段により配管に残留する試薬が試
薬収納部に回収されるので、配管内に残留する試薬が少
なくなる。これによりコンタミネーションの危険が大幅
に減少し、また装置の寿命も格段に長くなる。

【図面の簡単な説明】

【図１】本考案の一実施例によるペプチドフラグメント
分取装置の斜視外観図。

【図２】その操作パネルの正面図。

【図３】その配管系の概略図。

【図４】その制御系のブロック図。

【図５】その制御フローチャート。

【図６】その制御フローチャート。

【図７】その制御フローチャート。

【図８】その制御フローチャート。

【図９】その制御フローチャート。

【図１０】その制御フローチャート。

【図１１】その制御フローチャート。

【図１２】その制御フローチャート。

【図１３】その制御フローチャート。

【図１４】その制御フローチャート。

【図１５】その制御フローチャート。

【図１６】その制御フローチャート。

【符号の説明】

１ペプチドフラグメント分取装置６回収ボトル８ヒートブロック１３切断液ボトル３２反応容器４０制御部ＳＶ５，ＳＶ１１電磁弁

Claims

(57)【実用新案登録請求の範囲】

【請求項１】ポリペプチド中のリジン残基とそれに続く
カルボキシル末端基側のアミノ酸残基との間のペプチド
結合が特異的に切断されたペプチドフラグメント混合物
からカルボキシル末端ペプチドフラグメントを分取する
装置であって、前記ペプチドフラグメント混合物と固相支持体とを充填
する反応容器と、前記反応容器内の温度を調整して前記ペプチドフラグメ
ント混合物を固相支持体に共有結合するカップリング手
段と、試薬を収納する試薬収納部を有し、前記試薬収納部から
配管を介して前記試薬を前記反応容器に供給するための
試薬供給手段と、ペプチドフラグメントを収納する第１回収部と廃液を収
納する第２回収部とを有し、前記反応容器から配管を介
して選択的にペプチドフラグメントを第１回収部に回収
し、廃液を第２回収部に回収する回収手段と、前記配管に残留する前記試薬を前記試薬収納部に回収す
る試薬回収手段とを備え、前記回収手段は、ガス供給部と、前記ガス供給部と前記
第１回収部、前記第２回収部及び前記反応容器とをそれ
ぞれ連結し前記ガス供給部からガスを供給するための配
管を有し、前記反応容器及び前記第１回収部にガスを供
給してガス圧を高めて前記第２回収部に廃液を回収し、
前記反応容器及び前記第２回収部にガスを供給してガス
圧を高めてペプチドフラグメントを第１回収部に回収す
る、ペプチドフラグメント分取装置。