JP2024514352A - グルカゴン様ペプチド化合物 - Google Patents

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JP2024514352A JP2023564257A JP2023564257A JP2024514352A JP 2024514352 A JP2024514352 A JP 2024514352A JP 2023564257 A JP2023564257 A JP 2023564257A JP 2023564257 A JP2023564257 A JP 2023564257A JP 2024514352 A JP2024514352 A JP 2024514352A
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ガルヤン，キース
ガオ，ジンハイ
ギンスバーグ‐モラフ，キャロル
ジェイン，パンカジュ
マルチンケビシエン，ジョビタ
マイケル，ウォルター
宗人 茂木
マロ，マーティン
パテル，セジャル
プルマー，スコット
シン，アロック
ウセラ，エイミー
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ノバルティス アーゲー
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Abstract

ＧＬＰ－１化合物及び脂肪酸又は脂肪酸誘導体を含む新規化合物、前記新規化合物の製造並びにその使用が本明細書で提供される。

Description

ＧＬＰ－１化合物及び脂肪酸又は脂肪酸誘導体を含む新規化合物、前記新規化合物の製造並びにその使用が本明細書で提供される。これらの新規化合物は、有利な薬理学的有効性を示す。
グルカゴン様ペプチド（ＧＬＰ）１（ＧＬＰ１）アゴニストは、治療的に有効な化合物の重要なクラスに属する。ＧＬＰ１アゴニストは、一般的に、２型糖尿病の処置で使用される。このようなグルカゴン様ペプチド１（ＧＬＰ１）化合物の構造を修飾して、急速な生体分解を防いでインビボで満足のいく作用持続時間を提供し、忍容性を改善するために、様々なアプローチが使用されてきた。
例えば、国際公開第２００６／０９７５３７号パンフレット（Ｎｏｖｏ Ｎｏｒｄｉｓｋ）は、位置２６のリジン残基に対して、少なくとも２つの酸性基を含む部分でアシル化されている配列ＧＬＰ－１（７－３７）（配列番号１）と比較して、位置７及び／又は８に少なくとも１つの非天然のアミノ酸残基の修飾を有するＧＬＰ１化合物を記載している。
国際公開第２０１５／２０００７８号パンフレット（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）は、リンカーを介して脂肪酸に連結されているＧＤＦ１５などの生体分子を含む複合物を開示している。対応する複合物は、代謝性疾患又は障害の処置又は予防において有用であり得る。
式（ｉ）：
Figure 2024514352000001
（式中、
Ｒ１及びＲ２は、独立して、ＣＨ３、ＯＨ、ＣＯ２Ｈ、ＣＨ＝ＣＨ２及びＣ≡ＣＨから選択され；
ｎ及びｍは、それぞれ５～３０から独立して選択される整数である）
の化合物又は薬学的に許容可能なその塩に任意選択的にリンカーを介して共有結合される、ＧＬＰ－１又はＧＬＰ－１類似体を含む化合物が本明細書で提供され、式（ｉ）の化合物は、そのＣＯ２Ｈ基の１つを通して共有結合される。
本明細書に記載の化合物は、一般的に、グルカゴン様ペプチド１受容体（ＧＬＰ１Ｒ）のアゴニストとして作用し得る。従って、これらの化合物は、代謝性疾患、障害及び状態、例えば肥満、２型糖尿病、インスリン抵抗性、高インスリン血症、耐糖能障害、高血糖、１つ以上の糖尿病合併症（慢性腎臓病を含むが、限定されない）、糖尿病性腎症、脂質異常症、心血管系疾患及びニューロパチーを含むが、限定されない疾患又は障害の処置において有用であり得る。本化合物は、進行性肝疾患及びニューロパチーの処置でも潜在的に有用であり得る。
定義
「ペプチド」という用語は、本明細書で使用される場合、ペプチド結合により連結される少なくとも５つのアミノ酸から構成される化合物を意味する。アミノ酸は、天然アミノ酸及び非天然アミノ酸であり得る。一部のペプチドは、全て天然アミノ酸から構成され得る。一部のペプチドは、全て非天然アミノ酸から構成され得る。一部のペプチドは、天然アミノ酸及び非天然アミノ酸の混合物から構成され得る。
「天然」という用語は、天然で見出され、人間により操作されていない物質を指す。同様に、「非天然の」、「非－天然」などは、本明細書で使用される場合、天然で見出されないか又は人間により構造的に修飾若しくは合成されている物質を指す。
アミノ酸と関連して使用される場合、「天然の」という用語は、通常、２２個の従来のアミノ酸、例えばアラニン（Ａ又はＡｌａ）、システイン（Ｃ又はＣｙｓ）、シスチン（ＣｙＳＳ）、アスパラギン酸（Ｄ又はＡｓｐ）、グルタミン酸（Ｅ又はＧｌｕ）、フェニルアラニン（Ｆ又はＰｈｅ）、グリシン（Ｇ又はＧｌｙ）、ヒスチジン（Ｈ又はＨｉｓ）、イソロイシン（Ｉ又はＩｌｅ）、リジン（Ｋ又はＬｙｓ）、ロイシン（Ｌ又はＬｅｕ）、メチオニン（Ｍ又はＭｅｔ）、アスパラギン（Ｎ又はＡｓｎ）、プロリン（Ｐ又はＰｒｏ）、４－ヒドロキシプロリン（Ｏ又はＨｙｐ）、グルタミン（Ｑ又はＧｌｎ）、アルギニン（Ｒ又はＡｒｇ）、セリン（Ｓ又はＳｅｒ）、スレオニン（Ｔ又はＴｈｒ）、バリン（Ｖ又はＶａｌ）、トリプトファン（Ｗ又はＴｒｐ）及びチロシン（Ｙ又はＴｙｒ））を指す。
「天然に生じないアミノ酸」、「非－天然のアミノ酸」及び「非天然アミノ酸」という用語は、本明細書で使用される場合、交換可能に、同じであれ異なるものであれ、何れかの生物からの非修飾又は修飾遺伝子を使用して何れの生物でも生合成により産生され得ないアミノ酸構造を表すものとする。これらは、上記の２２種類の天然アミノ酸の１つではない修飾されたアミノ酸及び／又はアミノ酸類似体を含むが、限定されない。
非天然のアミノ酸の例は、γ－カルボキシグルタメート、オルニチン、ホスホセリン、Ｄ－アミノ酸、例えばＤ－アラニン及びＤ－グルタミンなどである。合成非天然アミノ酸は、化学合成により製造されたアミノ酸、即ちＤ－アラニン及びＤ－ロイシンなどのアミノ酸のＤ－異性体、Ａｉｂ（α－アミノイソ酪酸）、Ａｂｕ（α－アミノ酪酸）、Ｔｌｅ（ｔｅｒｔ－ブチルグリシン）、３－アミノメチル安息香酸、アントラニル酸、デス－アミノ－ヒスチジン、アミノ酸のベータ類似体、例えばβ－アラニンなど、例えばＤ－ヒスチジン、デスアミノ－ヒスチジン、２－アミノ－ヒスチジン、ベータ－ヒドロキシ－ヒスチジン、ホモヒスチジン、Ｎａ－アセチル－ヒスチジン、α－フルオロメチル－ヒスチジン、α－メチル－ヒスチジン、３－ピリジルアラニン、２－ピリジルアラニン又は４－ピリジルアラニン、（１－アミノシクロプロピル）カルボン酸，（１－アミノシクロブチル）カルボン酸、（１－アミノシクロペンチル）カルボン酸、（１－アミノシクロヘキシル）カルボン酸、（１－アミノシクロヘプチル）カルボン酸又は（１－アミノシクロオクチル）カルボン酸を含む。
光学異性体について言及がないアミノ酸は、全てＬ－異性体を意味すると理解されたい。
ペプチドの「類似体（ａｎａｌｏｇｕｅ）」又は「類似体（ａｎａｌｏｇ）」という用語は、本明細書で使用される場合、ペプチドの１つ以上のアミノ酸残基が別のアミノ酸残基により１回以上置換され、且つ／又は１つ以上のアミノ酸残基がペプチドから欠失され、且つ／又は１つ以上のアミノ酸残基がペプチドに付加されている、修飾されたペプチドを意味する。アミノ酸残基のこのような付加又は欠失は、ペプチド内のあらゆる位置で起こり得る。例えば、アミノ酸残基のこのような付加又は欠失は、ペプチドのＮ末端部分内で及び／又はペプチドのＣ末端部分で起こり得る。
「ＧＬＰ－１」という用語は、本明細書で使用される場合、ＧＬＰ－１（７－３７）（配列番号１）を意味する。
「ＧＬＰ－１類似体」という用語は、本明細書で使用される場合、上記で定義されるようなＧＬＰ－１（７－３７）の類似体を指し、「類似体」という用語は、上記で定義される通りである。例えば、［Ａｒｇ３４］ＧＬＰ－１（７－３７）Ｌｙｓは、ＧＬＰ－１（７－３７）の位置３４の天然のリジンがアルギニンで置換されており、リジンが末端アミノ酸残基、即ちＧｌｙ３７に付加されているＧＬＰ－１（７－３７）類似体を指す。
さらなる実施形態
別の実施形態は、式（Ｉ）：
Figure 2024514352000002
（式中、
Ｒ１及びＲ２は、独立して、ＣＨ３、ＯＨ、ＣＯ２Ｈ、ＣＨ＝ＣＨ２及びＣ≡ＣＨから選択され；
ｎ及びｍは、それぞれ５～３０から独立して選択される整数であり；
Ｌは、任意選択的なリンカーであり、及びＰは、ＧＬＰ－１又はＧＬＰ－１類似体である）
の化合物又は薬学的に許容可能なその塩である、前述の実施形態による式（ｉ）の化合物を提供する。
別の実施形態は、ＧＬＰ－１又はＧＬＰ－１類似体（Ｐ）がＮＨ基を介して任意選択的なリンカー（Ｌ）に結合される、前述の実施形態による式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容可能なその塩を提供する。
別の実施形態は、リンカー（Ｌ）が、
Figure 2024514352000003
Figure 2024514352000004
（式中、
ｙは、１～３６から選択される整数であり；
ｌは、０、１、２、３、４、５又は６であり；
ｋは、１、２又は３であり；
ｓは、０、１、２又は３であり；
ｔは、０、１、２、３又は４であり；
ｐは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２又は２３であり；
＊＊の印を付けられた波線は、式（Ｉ）のＣＯ基への連結を示し、
＊＊＊の印を付けられた波線は、基Ｐへの連結を示す）
から選択される、前述の実施形態による式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容可能なその塩を提供する。
別の実施形態は、
ｙが、１～３６から選択される整数であり；
ｌが２、３、４又は５であり；
ｋが１又は２であり；
ｓが０、１又は２であり；
ｔが０、１、２又は３であり；
ｐが１、２、３、４、７、１１又は２３である、前述の実施形態による式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容可能なその塩を提供する。
別の実施形態は、
ｙが、１～３６から選択される整数であり；
ｌが２、３、４又は５であり；
ｋが１又は２であり；
ｓが０、１又は２であり；
ｔが０又は１であり；及び
ｐが１、２、３、４又は１１である、前述の実施形態による式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容可能なその塩を提供する。
別の実施形態は、リンカー（Ｌ）が、
Figure 2024514352000005
（式中、
ｙは、１～３６から選択される整数であり、
ｓは、１であり、且つｋは、１であり、
＊＊の印を付けられた波線は、式（Ｉ）のＣＯ基への連結を示し、
＊＊＊の印を付けられた波線は、基Ｐへの連結を示す）
から選択される、前述の実施形態による式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容可能なその塩を提供する。
別の実施形態は、Ｌが、
Figure 2024514352000006
（式中、
ｙは、１～３６から選択される整数であり，
ｓは、０、１又は２であり、且つｋは、１、２又は３であり、並びに
＊＊の印を付けられた波線は、式（Ｉ）のＣＯ基への連結を示し、及び
＊＊＊の印を付けられた波線は、基Ｐへの連結を示す）
から選択される、前述の実施形態による式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容可能なその塩を提供する。
別の実施形態は、リンカー（Ｌ）が、
Figure 2024514352000007
（式中、ｙは、１～３６から選択される整数である）
から選択される、前述の実施形態による式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容可能なその塩を提供する。
別の実施形態は、前記リンカーのＣ（Ｏ）基の炭素原子がＧＬＰ－１又はＧＬＰ－１類似体のリジン残基のＮＨ基の窒素原子に連結される、前述の実施形態による式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容可能なその塩を提供する。
別の実施形態は、Ｒ１及びＲ２が独立してＣＨ３、ＯＨ及びＣＯ２Ｈから選択される、前述の実施形態による式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容可能なその塩を提供する。
別の実施形態は、式（ＩＩ）
Figure 2024514352000008
（式中、
ＮＨ－Ｐ’は、ＮＨ部分を介してリンカーＬに連結される基Ｐ（即ちＧＬＰ－１又はＧＬＰ－１類似体）を表し；
Ｒ１及びＲ２は、独立して、ＣＨ３、ＯＨ及びＣＯ２Ｈから選択され；
ｎ及びｍは、それぞれ５～３０から独立して選択される整数であり；及び
ｙは、１～３６から選択される整数である）
の化合物又は薬学的に許容可能なその塩である、前述の実施形態による式（Ｉ）の化合物を提供する。
一実施形態では、基Ｐ（即ちＧＬＰ－１又はＧＬＰ－１類似体）は、Ｐ’－ＮＨ２、即ちアミノ酸側鎖の一部である遊離－ＮＨ２基を有するＰ基に対応し、Ｐは、前記－ＮＨ基を介してリンカーＬに連結される。
別の実施形態は、Ｒ１及びＲ２が独立してＣＯ２Ｈ及びＣＨ３から選択される、本明細書の上記で定義されるような式（ＩＩ）の化合物を提供する。
別の実施形態は、ｎ及びｍが、それぞれ５～２０から独立して選択される整数である、本明細書の上記で定義されるような式（ＩＩ）の化合物を提供する。
別の実施形態は、ｎ及びｍが、それぞれ１０、１１、１３及び１４から独立して選択される整数である、本明細書の上記で定義されるような式（ＩＩ）の化合物を提供する。
別の実施形態は、
Ｒ１がＣＯ２Ｈであり、及びＲ２がＣＨ３であり；ｎが１０であり、及びｍが１０であるか；
Ｒ１がＣＯ２Ｈであり、及びＲ２がＣＯ２Ｈであり；ｎが１０であり、及びｍが１０であるか；
Ｒ１がＣＯ２Ｈであり、及びＲ２がＣＯ２Ｈであり；ｎが１０であり、及びｍが１１であるか；
Ｒ１がＣＯ２Ｈであり、及びＲ２がＣＯ２Ｈであり；ｎが１０であり、及びｍが１３であるか；又は
Ｒ１がＣＯ２Ｈであり、及びＲ２がＣＯ２Ｈであり；ｎが１０であり、及びｍが１４である、本明細書の上記で定義されるような式（ＩＩ）の化合物を提供する。
別の実施形態は、式（ＩＩＩ）
Figure 2024514352000009
（式中、Ｒ１は、ＣＯ２Ｈであり、及びＲ２は、ＣＨ３である）
の化合物又は薬学的に許容可能なその塩である、本明細書で定義されるような式（ＩＩ）の化合物を提供する。
別の実施形態は、式（ＩＩＩａ）の化合物若しくは式（ＩＩＩｂ）の化合物
Figure 2024514352000010
（式中、Ｒ１は、ＣＯ２Ｈであり、及びＲ２は、ＣＨ３である）
又は薬学的に許容可能なその塩である、本明細書で定義されるような式（ＩＩＩ）の化合物を提供する。
別の実施形態は、式（ＩＶ）
Figure 2024514352000011
の化合物又は薬学的に許容可能なその塩であり、この化合物が、ラセミ体として若しくは立体化学的に濃縮された混合物として存在するか、又は＊の印を付けられた炭素原子に関して立体化学的に純粋である、本明細書で定義されるような式（ＩＩ）の化合物を提供する。
別の実施形態は、式（ＩＶａ）の化合物若しくは式（ＩＶｂ）の化合物
Figure 2024514352000012
（式中、ｙは、１～３６から選択される整数である）
又は薬学的に許容可能なその塩である、本明細書で前に定義されるような式（ＩＶ）の化合物を提供する。
別の実施形態は、本明細書で定義されるような式（ＩＶａ）の化合物又は式（ＩＶｂ）の化合物（式中、ｙは、２～２４から選択される整数である）を提供する。
別の実施形態は、本明細書で定義されるような式（ＩＶａ）の化合物又は式（ＩＶｂ）の化合物（式中、ｙは、２、８及び２４から選択される整数である）を提供する。
別の実施形態は、本明細書で定義されるような式（ＩＶａ）の化合物又は式（ＩＶｂ）の化合物（式中、ｙは、２である）を提供する。
別の実施形態は、本明細書で定義されるような式（ＩＶａ）の化合物又は式（ＩＶｂ）の化合物（式中、ｙは、８である）を提供する。
別の実施形態は、本明細書で定義されるような式（ＩＶａ）の化合物又は式（ＩＶｂ）の化合物（式中、ｙは、２４である）を提供する。
別の実施形態は、上記で定義された実施形態の何れかによる化合物又は薬学的に許容可能なその塩を提供し、Ｐは、
ＧＬＰ－１（７－３７）：Ｈｉｓ－Ａｌａ－Ｇｌｕ－Ｇｌｙ－Ｔｈｒ－Ｐｈｅ－Ｔｈｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｐ－Ｖａｌ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ｔｙｒ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ－Ｇｌｙ－Ｇｌｎ－Ａｌａ－Ａｌａ－Ｌｙｓ－Ｇｌｕ－Ｐｈｅ－Ｉｌｅ－Ａｌａ－Ｔｒｐ－Ｌｅｕ－Ｖａｌ－Ｌｙｓ－Ｇｌｙ－Ａｒｇ－Ｇｌｙ（配列番号１）、及び
配列ＧＬＰ－１（７－３７）（配列番号１）と比較して、位置７若しくは位置８又は位置７及び８に非天然のアミノ酸残基を含むＧＬＰ－１類似体
から選択される。
別の実施形態は、Ｐが、
Ｘａａ７－Ｘａａ８－Ｇｌｕ－Ｇｌｙ－Ｔｈｒ－Ｐｈｅ－Ｔｈｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｐ－Ｘａａ１６－Ｓｅｒ－Ｘａａ１８－Ｘａａ１９－Ｘａａ２０－Ｇｌｕ－Ｘａａ２２－Ｘａａ２３－Ａｌａ－Ｘａａ２５－Ａｒｇ－Ｘａａ２７－Ｐｈｅ－ｌｌｅ－Ｘａａ３０－Ｔｒｐ－Ｌｅｕ－Ｘａａ３３－Ｘａａ３４－Ｘａａ３５－Ｘａａ３６－Ｘａａ３７（配列番号２）（以下ではＰ＊）
（式中、
Ｘａａ７は、Ｈｉｓ、イミダゾプロピオニル、α－ヒドロキシ－ヒスチジン、Ｄ－ヒスチジン、デスアミノ－ヒスチジン、２－アミノ－ヒスチジン、β－ヒドロキシ－ヒスチジン、ホモヒスチジン、Ｎα－アセチル－ヒスチジン、Ｎα－ホルミル－ヒスチジン、α－フルオロメチル－ヒスチジン、α－メチル－ヒスチジン、３－ピリジルアラニン、２－ピリジルアラニン又は４－ピリジルアラニンであり；
Ｘａａ８は、Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｔｈｒ、Ｓｅｒ、Ｌｙｓ、Ａｉｂ、（１－アミノシクロプロピル）カルボン酸、（１－アミノシクロブチル）カルボン酸、（１－アミノシクロペンチル）カルボン酸、（１－アミノシクロヘキシル）カルボン酸、（１－アミノシクロヘプチル）カルボン酸又は（１－アミノシクロオクチル）カルボン酸であり；
Ｘａａ１６は、Ｖａｌ又はＬｅｕであり；
Ｘａａ１８は、Ｓｅｒ、Ｌｙｓ又はＡｒｇであり；
Ｘａａ１９は、Ｔｙｒ又はＧｌｎであり；
Ｘａａ２０は、Ｌｅｕ又はＭｅｔであり；
Ｘａａ２２は、Ｇｌｙ、Ｇｌｕ又はＡｉｂであり；
Ｘａａ２３は、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ又はＡｒｇであり；
Ｘａａ２５は、Ａｌａ又はＶａｌであり；
Ｘａａ２７は、Ｇｌｕ又はＬｅｕであり；
Ｘａａ３０は、Ａｌａ、Ｇｌｕ又はＡｒｇであり；
Ｘａａ３３は、Ｖａｌ又はＬｙｓであり；
Ｘａａ３４は、Ｌｙｓ、Ｇｌｕ、Ａｓｎ又はＡｒｇであり；
Ｘａａ３５は、Ｇｌｙ又はＡｉｂであり；
Ｘａａ３６は、Ａｒｇ、Ｇｌｙ若しくはＬｙｓであるか又は存在せず；及び
Ｘａａ３７は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｇｌｕ、Ｐｒｏ、Ｌｙｓであるか又は存在しない）
である、上記で定義された実施形態の何れかによる化合物又は薬学的に許容可能なその塩を提供する。
別の実施形態は、先述の実施形態による化合物を提供し、Ｐ＊において、
Ｘａａ７は、Ｈｉｓ又はデスアミノ－ヒスチジンであり；
Ｘａａ８は、Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｌｙｓ又はＡｉｂであり；
Ｘａａ１６は、Ｖａｌであり；
Ｘａａ１８は、Ｓｅｒであり；
Ｘａａ１９は、Ｔｙｒであり；
Ｘａａ２０は、Ｌｅｕであり；
Ｘａａ２２は、Ｇｌｙ、Ｇｌｕ又はＡｉｂであり；
Ｘａａ２３は、Ｇｌｎ又はＧｌｕであり；
Ｘａａ２５は、Ａｌａであり；
Ｘａａ２７は、Ｇｌｕであり；
Ｘａａ３０は、Ａｌａ又はＧｌｕであり；
Ｘａａ３３は、Ｖａｌであり；
Ｘａａ３４は、Ｌｙｓ又はＡｒｇであり；
Ｘａａ３５は、Ｇｌｙ又はＡｉｂであり；
Ｘａａ３６は、Ａｒｇ若しくはＬｙｓであるか又は存在せず；及び
Ｘａａ３７は、Ｇｌｙであるか又は存在しない。
別の実施形態は、先述の実施形態による化合物を提供し、Ｐ＊において、
Ｘａａ７は、Ｈｉｓであり；
Ｘａａ８は、Ｇｌｙ又はＡｉｂであり；
Ｘａａ１６は、Ｖａｌであり；
Ｘａａ１８は、Ｓｅｒであり；
Ｘａａ１９は、Ｔｙｒであり；
Ｘａａ２０は、Ｌｅｕであり；
Ｘａａ２２は、Ｇｌｕ又はＡｉｂであり；
Ｘａａ２３は、Ｇｌｎ又はＧｌｕであり；
Ｘａａ２５は、Ａｌａであり；
Ｘａａ２７は、Ｇｌｕであり；
Ｘａａ３０は、Ａｌａであり；
Ｘａａ３３は、Ｖａｌであり；
Ｘａａ３４は、Ｌｙｓ又はＡｒｇであり；
Ｘａａ３５は、Ｇｌｙ又はＡｉｂであり；
Ｘａａ３６は、Ａｒｇであり；及び
Ｘａａ３７は、Ｇｌｙである。
別の実施形態は、本明細書で定義されるような式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容可能なその塩を提供し、Ｐは、
［Ａｉｂ８、Ａｒｇ３４］ＧＬＰ－１（７－３７）：Ｈｉｓ－Ａｉｂ－Ｇｌｕ－Ｇｌｙ－Ｔｈｒ－Ｐｈｅ－Ｔｈｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｐ－Ｖａｌ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ｔｙｒ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ－Ｇｌｙ－Ｇｌｎ－Ａｌａ－Ａｌａ－Ｌｙｓ－Ｇｌｕ－Ｐｈｅ－Ｉｌｅ－Ａｌａ－Ｔｒｐ－Ｌｅｕ－Ｖａｌ－Ａｒｇ－Ｇｌｙ－Ａｒｇ－Ｇｌｙ（配列番号３）；及び
［Ａｒｇ３４］ＧＬＰ－１（７－３７）：Ｈｉｓ－Ａｌａ－Ｇｌｕ－Ｇｌｙ－Ｔｈｒ－Ｐｈｅ－Ｔｈｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｐ－Ｖａｌ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ｔｙｒ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ－Ｇｌｙ－Ｇｌｎ－Ａｌａ－Ａｌａ－Ｌｙｓ－Ｇｌｕ－Ｐｈｅ－Ｉｌｅ－Ａｌａ－Ｔｒｐ－Ｌｅｕ－Ｖａｌ－Ａｒｇ－Ｇｌｙ－Ａｒｇ－Ｇｌｙ（配列番号４）
から選択される。
別の実施形態は、Ｐが、［Ａｉｂ８、Ａｒｇ３４］ＧＬＰ－１（７－３７）（配列番号３）；又は代わりに、
Figure 2024514352000013
で示される通りであり、アミノ酸メンバーＬｙｓにおける波線がリンカーへの連結点を示す、本明細書で定義されるような式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容可能なその塩を提供する。
別の実施形態は、
Figure 2024514352000014
（式中、ｙは、１～３６から選択される整数である）
である、本明細書で定義されるような式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容可能なその塩を提供し、この化合物は、ジアステレオマー混合物、立体化学的に濃縮された混合物として存在するか、又は＊の印を付けられた炭素原子に関して立体化学的に純粋である。
別の実施形態は、式（Ｘ）又は式（ＸＩ）：
Figure 2024514352000015
（式中、ｙは、１～３６から選択される整数である）
のものである、本明細書で定義されるような式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容可能なその塩を提供する。
別の実施形態は、本明細書で定義されるような式（Ｘ）又は式（ＸＩ）の化合物（式中、ｙは、２～２４から選択される整数である）を提供する。
別の実施形態は、本明細書で定義されるような式（Ｘ）又は式（ＸＩ）の化合物（式中、ｙは、２、８及び２４から選択される整数である）を提供する。
別の実施形態は、本明細書で定義されるような式（Ｘ）又は式（ＸＩ）の化合物（式中、ｙは、２である）を提供する。
別の実施形態は、本明細書で定義されるような式（Ｘ）又は式（ＸＩ）の化合物（式中、ｙは、８である）を提供する。
別の実施形態は、本明細書で定義されるような式（Ｘ）又は式（ＸＩ）の化合物（式中、ｙは、２４である）を提供する。
別の実施形態は、
Figure 2024514352000016
（化合物１）、
Figure 2024514352000017
（化合物２）、
Figure 2024514352000018
（化合物３）、
Figure 2024514352000019
（化合物４）、
Figure 2024514352000020
（化合物５）、
Figure 2024514352000021
（化合物６）、
Figure 2024514352000022
（化合物７）、
Figure 2024514352000023
（化合物８）、及び
Figure 2024514352000024
（化合物９）
から選択される、本明細書で定義されるような式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容可能なその塩を提供する。
別の実施形態は、
Figure 2024514352000025
（化合物１）
である、本明細書で定義されるような式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容可能なその塩を提供する。
別の実施形態は、
Figure 2024514352000026
（化合物２）
である、本明細書で定義されるような式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容可能なその塩を提供する。
別の実施形態は、
Figure 2024514352000027
（化合物３）
である、本明細書で定義されるような式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容可能なその塩を提供する。
別の実施形態は、本明細書に記載の化合物又は薬学的に許容可能なその塩と、１つ以上の薬学的に許容可能な担体とを含む医薬組成物を提供する。
別の実施形態は、化合物が化合物１、２、３、４、５、６、７、８及び９から選択される、前述の実施形態による医薬組成物を提供する。
別の実施形態は、化合物が化合物１、２及び３から選択される、前述の実施形態による医薬組成物を提供する。
別の実施形態は、治療的有効量の、本明細書に記載の化合物又は薬学的に許容可能なその塩と、１つ以上の治療的に活性がある薬剤とを含む組み合わせを提供する。
別の実施形態は、化合物が化合物１、２、３、４、５、６、７、８及び９から選択される、前述の実施形態による組み合わせを提供する。
別の実施形態は、化合物が化合物１、２及び３から選択される、前述の実施形態による組み合わせを提供する。
別の実施形態は、薬剤としての使用のための、本明細書に記載の化合物又は薬学的に許容可能なその塩を提供する。
別の実施形態は、化合物１、２、３、４、５、６、７、８及び９から選択される、前述の実施形態による使用のための化合物を提供する。
別の実施形態は、化合物１、２及び３から選択される、前述の実施形態による使用のための化合物を提供する。
別の実施形態は、肥満、２型糖尿病、インスリン抵抗性、高インスリン血症、耐糖能障害、高血糖、１つ以上の糖尿病合併症（慢性腎臓病を含むが、限定されない）、糖尿病性腎症、脂質異常症、メタボリックシンドローム、進行性肝疾患、心血管系疾患及びニューロパチーから選択される疾患又は障害の処置での使用のための、本明細書に記載の化合物又は薬学的に許容可能なその塩を提供する。非限定例として、ニューロパチーは、末梢ニューロパチーである（例えば、糖尿病に付随し得る）。
別の実施形態は、高血圧、アテローム性動脈硬化症、末梢動脈疾患、卒中発作、心筋症、心房細動、心不全（例えば、駆出率が低下した心不全（ＨＦｒＥＦ）、駆出率が中間範囲の心不全（ＨＦｍｒＥＦ）及び駆出率が保たれた心不全（ＨＦｐＥＦ）、冠動脈心疾患及び不整脈（例えば、心房性不整脈及び心室性不整脈）から選択される心血管系疾患又は障害の処置での使用のための、本明細書に記載のような化合物又は薬学的に許容可能なその塩を提供する。
別の実施形態は、化合物１、２、３、４、５、６、７、８及び９から選択される、前述の２つの実施形態による使用のための化合物を提供する。
別の実施形態は、化合物１、２及び３から選択される、前述の実施形態による使用のための化合物を提供する。
別の実施形態は、治療的有効量の、本明細書に記載のような化合物又は薬学的に許容可能なその塩を患者に投与することを含む、グルカゴン様ペプチド１受容体（ＧＬＰ１Ｒ）のアゴニストに感受性がある治療を必要とする患者を処置する方法を提供する。
別の実施形態は、化合物が化合物１、２、３、４、５、６、７、８及び９から選択される、前述の実施形態による処置の方法を提供する。
別の実施形態は、化合物が化合物１、２及び３から選択される、前述の実施形態による処置の方法を提供する。
別の実施形態は、患者が、肥満、２型糖尿病、インスリン抵抗性、高インスリン血症、耐糖能障害、高血糖、１つ以上の糖尿病合併症（慢性腎臓病を含むが、限定されない）、糖尿病性腎症、脂質異常症、メタボリックシンドローム、進行性肝疾患、心血管系疾患及びニューロパチーから選択される疾患又は障害に罹患している、前述の実施形態による処置の方法を提供する。非限定例として、ニューロパチーは、末梢ニューロパチーである（例えば、糖尿病に付随し得る）。
別の実施形態は、患者が高血圧、アテローム性動脈硬化症、末梢動脈疾患、卒中発作、心筋症、心房細動、心不全（例えば、駆出率が低下した心不全（ＨＦｒＥＦ）、駆出率が中間範囲の心不全（ＨＦｍｒＥＦ）及び駆出率が保たれた心不全（ＨＦｐＥＦ）、冠動脈心疾患及び不整脈（例えば、心房性不整脈及び心室性不整脈）から選択される心血管系疾患又は障害に罹患している、前述の実施形態による処置の方法を提供する。
さらなる態様
出発物質及び手順の選択に依存して、本化合物は、非対称炭素原子の数に依存して、可能な立体異性体の１つの形態において又はそれらの混合物、例えば純粋な光学異性体若しくは立体異性体の混合物、例えばラセミ体及びジアスレオ異性体の混合物などとして存在し得る。本明細書に記載のような化合物は、限定されず、本化合物は、ラセミ混合物、ジアステレオマー混合物及び光学的に純粋な形態を含め、全てのこのような可能性のある立体異性体を含む。光学活性（Ｒ）－及び（Ｓ）－立体異性体は、キラルシントン又はキラル試薬を使用して調製し、従来技術を使用して分割され得る。本化合物が二重結合を含有する場合、置換基は、Ｅ又はＺ立体配置であり得る。本化合物が二置換シクロアルキルを含有する場合、シクロアルキル置換基は、シス－又はトランス－立体配置を有し得る。全ての互変異性形態も含まれるものとする。
本明細書で使用される場合、１つ又は複数の「塩」という用語は、本開示の化合物の酸付加塩又は塩基付加塩を指す。「塩」は、特に「薬学的に許容可能な塩」を含む。「薬学的に許容可能な塩」という用語は、本開示の化合物の生物学的有効性及び特性を保持する塩を指し、これは、一般的に、生物学的に又は他の面で望ましくないものではない。多くの場合、本開示の化合物は、例えば、アミノ及びピリジン基又はそれと同様の他の基及び／又は酸性プロトンにおいて見出されるように、例えばカルボン酸又は５－オキソ－４，５－ジヒドロ－１，２，４－オキサジアゾール基又はそれと同様の他の基において見出されるように、塩基性窒素原子が存在するため、酸性及び／又は塩基性塩を形成可能である。
薬学的に許容可能な酸付加塩は、無機酸及び有機酸とともに形成され得る。塩が誘導され得る無機酸としては、例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸などが挙げられる。塩が誘導され得る有機酸としては、例えば、酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、シュウ酸、マレイン酸、マロン酸、コハク酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、トルエンスルホン酸、スルホサリチル酸などが挙げられる。
薬学的に許容可能な塩基付加塩は、無機塩基及び有機塩基とともに形成され得る。塩が誘導され得る無機塩基としては、例えば、アンモニウム塩及び周期表の列Ｉ～ＸＩＩの金属が挙げられる。特定の実施形態では、塩は、ナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウム、マグネシウム、鉄、銀、亜鉛及び銅から誘導され；特に適切な塩としては、アンモニウム、カリウム、ナトリウム、カルシウム及びマグネシウム塩が挙げられる。塩が誘導され得る有機塩基としては、例えば、一級、二級及び三級アミン、天然の置換アミンを含む置換アミン、環状アミン、塩基性イオン交換樹脂などが挙げられる。特定の有機アミンとしては、イソプロピルアミン、ベンザチン、コリナート、ジエタノールアミン、ジエチルアミン、リジン、メグルミン、ピペラジン及びトロメタミンが挙げられる。
別の態様では、本開示の化合物は、ナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウム、マグネシウム、鉄、銀、亜鉛、銅、イソプロピルアミン、ベンザチン、コリナート、ジエタノールアミン、ジエチルアミン、リジン、メグルミン、ピペラジン又はトロメタミン塩形態で提供される。
別の態様では、本開示の化合物は、酢酸塩、アスコルビン酸塩、アジピン酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベシル酸塩、臭化物／臭化水素酸塩、炭酸水素塩／炭酸塩、重硫酸塩／硫酸塩、カンファスルホン酸塩、カプリン酸塩、塩化物／塩酸塩、クロルテオフィロナート、クエン酸塩、エタンジスルホン酸塩、フマル酸塩、グルセプト酸塩、グルコン酸塩、グルクロン酸塩、グルタミン酸塩、グルタル酸塩、グリコール酸塩、馬尿酸塩、ヨウ化水素酸塩／ヨウ化物、イセチオン酸塩、乳酸塩、ラクトビオン酸塩、ラウリル硫酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、マンデル酸塩、メシル酸塩、メチル硫酸塩、ムチン酸塩、ナフトエ酸塩、ナプシル酸塩、ニコチン酸塩、硝酸塩、オクタデカン酸塩、オレイン酸塩、シュウ酸塩、パルミチン酸塩、パモ酸塩、リン酸塩／リン酸水素酸塩／リン酸二水素酸塩、ポリガラクツロ酸塩、プロピオン酸塩、セバシン酸塩、ステアリン酸塩、コハク酸塩、スルホサリチル酸塩、硫酸塩、酒石酸塩、トシル酸塩、トリフェニル酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩又はキシナホ酸塩形態で提供される。
本明細書で与えられる何れの式も化合物の非標識形態並びに同位体標識形態を表すものとする。同位体標識される化合物は、１つ以上の原子が、選択された原子量又は原子数を有する原子により置き換えられることを除いて、本明細書で与えられる式により示される構造を有する。本明細書に記載の化合物に組み込まれ得る同位体は、例えば、水素の同位体を含む。
さらに、特定の同位体、特に重水素（即ち２Ｈ又はＤ）の組み込みは、代謝的安定性がより高いことにより、例えばインビボ半減期の延長又は投与要件の減少又は治療指数若しくは忍容性の改善など、特定の治療的な長所を可能にし得る。これに関連して、重水素は、本明細書に記載のような化合物の置換基とみなされることが理解される。重水素の濃度は、同位体濃縮係数により定義され得る。「同位体濃縮係数」という用語は、本明細書で使用される場合、同位体存在度と特定の同位体の天然の存在度との間の比を意味する。本明細書に記載の化合物における置換基が重水素であるものとして表示される場合、このような化合物は、少なくとも３５００（各指定重水素原子での５２．５％重水素組み込み）、少なくとも４０００（６０％重水素組み込み）、少なくとも４５００（６７．５％重水素組み込み）、少なくとも５０００（７５％重水素組み込み）、少なくとも５５００（８２．５％重水素組み込み）、少なくとも６０００（９０％重水素組み込み）、少なくとも６３３３．３（９５％重水素組み込み）、少なくとも６４６６．７（９７％重水素組み込み）、少なくとも６６００（９９％重水素組み込み）又は少なくとも６６３３．３（９９．５％重水素組み込み）の各指定の重水素原子に対する同位体濃縮係数を有する。「同位体濃縮係数」という用語は、重水素に対して記載されるものと同様にあらゆる同位体に適用され得ることを理解すべきである。
本明細書に記載の化合物に組み込まれ得る同位体の他の例としては、水素、炭素、窒素、酸素、フッ素及び硫黄の同位体、例えばそれぞれ３Ｈ、１１Ｃ、１３Ｃ、１４Ｃ、１５Ｎ、１８Ｆ、３５Ｓなどが挙げられる。従って、例えば放射性同位体、例えば３Ｈ及び１４Ｃなど、又は非放射性同位体、例えば２Ｈ及び１３Ｃなどが存在するものを含め、上述の同位体の何れかの１つ以上も組み込む本明細書に記載の化合物の何れもが含まれることが理解されるべきである。このような同位体標識化合物は、代謝試験（１４Ｃによる）、反応速度論研究（例えば、２Ｈ又は３Ｈによる）、検出又はイメージング技術、例えばポジトロン断層撮影（ＰＥＴ）又は薬物若しくは基質組織分布アッセイを含む単一光子放射断層撮影（ＳＰＥＣＴ）又は患者の放射線治療において有用である。特に、１８Ｆ又は標識される化合物は、ＰＥＴ又はＳＰＥＣＴ試験に対して特に所望され得る。本明細書に記載の同位体標識された化合物は、一般的に、以前使用された非標識試薬の代わりに適切な同位体標識された試薬を使用して、当業者に公知の従来技術又は添付の実施例及び調製において記載のものと類似の工程によって調製され得る。
本明細書で使用される場合、「医薬組成物」という用語は、経口又は非経口投与に適切な形態の、少なくとも１つの薬学的に許容可能な担体を一緒に伴う、本明細書に記載の化合物又は薬学的に許容可能なその塩を指す。
本明細書で使用される場合、「薬学的に許容可能な担体」という用語は、医薬組成物の調製又は使用における有用な物質を指し、当業者に公知であろうように、例えば適切な希釈剤、溶媒、分散媒、界面活性剤、抗酸化剤、保存剤、等張化剤、緩衝剤、乳化剤、吸収遅延剤、塩、薬物安定化剤、結合剤、賦形剤、崩壊剤、滑沢剤、湿潤剤、甘味剤、香味剤、色素及びそれらの組み合わせを含む（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，２２ｎｄ Ｅｄ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｓｓ，２０１３，ｐｐ．１０４９－１０７０を参照されたい）。
本明細書に記載の化合物の「治療的有効量」という用語は、対象の生物学的又は医学的応答を誘発する化合物の量を指す。一連の非限定例として、本明細書に記載の化合物のこのような治療的有効量は、例えば、ＧＬＰ１Ｒ活性をアゴナイズし、１つ以上の症状を寛解させ得、１つ以上の状態を緩和し得、疾患、障害若しくは状態の進行を緩徐化し得るか若しくは遅延させ得るか、又は疾患、障害又は状態を予防し得る。
本明細書で使用される場合、「治療的有効量」という用語は、対象に投与されたとき、少なくとも部分的にＧＬＰ１Ｒの活性を上昇させるか又はアゴナイズすることに対して応答する状態又は障害又は疾患を緩和し、予防し、且つ／又は寛解させる、本明細書に記載の化合物の量を指す。別の実施形態では、「治療的有効量」という用語は、対象、細胞若しくは組織；又は非細胞性の生体物質；又は培地に投与された場合、少なくとも部分的にＧＬＰ１Ｒの活性を上昇させるか若しくはアゴナイズするか；又は少なくとも部分的にＧＬＰ１Ｒの発現を上昇させるか若しくはアゴナイズする、本明細書に記載の化合物の量を指す。別の実施形態では、「治療的有効量」という用語は、対象に投与されたとき、例えばグルコースレベル低下（血中グルコースレベルの低下など）、インスリン感受性上昇、グルコースホメオスタシスの改善、トリグリセリド又はコレステロールレベルの低下、体重減少、食物摂取減少及び体脂肪質量減少（末梢脂肪及び／又は内臓脂肪など）から選択される１つ以上の所望の生物学的又は医学的応答の観察可能なレベルを引き起こす、本明細書に記載の化合物の量を指す。
本明細書で使用される場合、「患者」又は「対象」という用語は、交換可能であり、霊長類（例えば、ヒト、雄又は雌；又は非ヒト霊長類）、イヌ、ウサギ、モルモット、ブタ、ラット及びマウスを指す。特定の実施形態では、対象は、霊長類である。また他の実施形態では、対象は、ヒトである。
本明細書で使用される場合、「アゴナイズする」、「アゴニズム」及び「アゴナイズすること」という用語は、例えば、細胞内環状アデノシン一リン酸（ｃＡＭＰ）の増加により測定される場合、ＧＬＰ１Ｒのシグナル伝達を増大させることを指す。
本明細書で使用される場合、何れかの疾患、障害又は状態「を処置する」、「を処置すること」又は「の処置」という用語は、疾患、障害又は状態を緩和するか又は寛解させること（即ち疾患、障害若しくは状態又はその臨床症状の少なくとも１つの発生若しくは進行を緩徐化するか又は抑止すること）；又は患者にとって識別可能ではなくてもよいものを含む、疾患、障害又は状態と関連する少なくとも１つの生理学的パラメータ又はバイオマーカーを緩和するか又は寛解させることを指す。
本明細書で使用される場合、何れかの疾患、障害又は状態「を予防する」、「を予防すること」又は「の予防」という用語は、疾患、障害又は状態の予防的処置；又は疾患、障害又は状態の発症又は進行の遅延を指す。
本明細書で使用される場合、対象は、このような対象が生物学的に、医学的に又はクオリティーオブライフにおいてこのような処置から利益を得る場合、処置を「必要としている」。
本明細書で使用される場合、「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」、「その」という語及び使用される同様の語（特に特許請求の範囲に関連して）は、本明細書で別段示されない限り又は文脈により明白に矛盾しない限り、単数及び複数の両方を包含するものと解釈すべきものである。
本明細書に記載の方法の全ては、本明細書で別段示されない限り又は文脈により明白に矛盾しない限り、あらゆる適切な順序で行われ得る。本明細書で提供されるあらゆる例又は代表的な語（例えば、「など」）の使用は、単に組成物及び方法又は本明細書で提供される使用をより良好に例示するためであり、別途特許請求される範囲における限定を提起するものではない。
本明細書に記載の化合物の何れかの不斉原子（例えば、炭素など）は、ラセミ又はエナンチオマー的に濃縮された、例えば（Ｒ）－、（Ｓ）－又は（Ｒ，Ｓ）－立体配置で存在し得る。特定の実施形態では、各不斉原子は、（Ｒ）－又は（Ｓ）－立体配置における少なくとも５０％のエナンチオマー過剰率、少なくとも６０％のエナンチオマー過剰率、少なくとも７０％のエナンチオマー過剰率、少なくとも８０％のエナンチオマー過剰率、少なくとも９０％のエナンチオマー過剰率、少なくとも９５％のエナンチオマー過剰率又は少なくとも９９％のエナンチオマー過剰率を有する。
従って、本明細書で使用される場合、本明細書に記載のような化合物は、例えば、実質的に純粋なジアステレオマー、光学異性体（アンチポード）、ラセミ体又はそれらの混合物として、可能な立体異性体、回転異性体、アトロプ異性体、互変異生体又はそれらの混合物の１つの形態であり得る。
立体異性体の何れかの得られる混合物は、純粋な又は実質的に純粋な幾何又は光学異性体、ジアステレオマー、ラセミ体に、例えばクロマトグラフィー及び／又は分別再結晶により、構成物の物理化学的な相違に基づいて分離され得る。
本明細書に記載の化合物又は中間体の何れの得られるラセミ体も、公知の方法により、例えば光学活性酸又は塩基を用いて得られるそのジアステレオマー塩の分離及び光学活性のある酸性又は塩基性化合物の遊離により、光学的アンチポードに分割され得る。従って、特に、塩基性部分は、例えば、光学活性のある酸、例えば酒石酸、ジベンゾイル酒石酸、ジアセチル酒石酸、ジ－Ｏ，Ｏ’－ｐ－トルオイル酒石酸、マンデル酸、リンゴ酸又はカンファ－１０－スルホン酸を用いて形成される塩の分別再結晶により、本明細書に記載の化合物をそれらの光学的アンチポードに分割するために使用され得る。本明細書に記載のラセミ化合物又はラセミ中間体は、キラルクロマトグラフィー、例えばキラル吸着剤を用いた高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によっても分割され得る。
本願の化合物は、市販の出発物質、文献中で知られる化合物を使用して又は容易に調製される中間体から、当業者に公知であるか又は本明細書の教示に照らして熟練の化学者に明らかとなるかの何れかの標準的な合成方法及び手順を使用することにより、有機合成の技術分野の当業者により調製され得る。
本明細書に記載の化合物は、以下の合成スキームによって部分的に示されるような有機合成の技術分野で公知の方法によって調製され得る。下記のスキームにおいて、化学の一般的な原理に従い、必要に応じて感受性又は反応性のある基に対して保護基が使用されることがよく理解される。保護基は、例えば、Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，３ｒｄ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ：Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９９９又はＰｒｏｔｅｃｔｉｎｇ Ｇｒｏｕｐｓ，３ｒｄ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｔｈｉｅｍｅ，Ｓｔｕｔｔｇａｒｔ，２００４に記載のような有機合成の標準的な方法に従い操作される。当業者に容易に明らかとなる方法を使用して化合物合成の都合の良い段階で保護基が除去される。
当業者は、本明細書で開示される化合物において立体中心が存在するか否かを認識するであろう。最終産物、中間体又は出発物質の分割は、当技術分野で公知の何れかの適切な方法により影響を受け得る。例えば、Ｅ．Ｌ．Ｅｌｉｅｌ，Ｓ．Ｈ．Ｗｉｌｅｎ及びＬ．Ｎ．Ｍａｎｄｅｒによる”Ｓｔｅｒｅｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ”（Ｗｉｌｅｙ－ｌｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，１９９４）を参照されたい。
本明細書に記載の化合物は、市販の出発物質から作製され得るか又は公知の有機、無機及び／又は酵素的な工程を使用して合成され得る。
化合物の調製
本明細書に記載の化合物は、有機合成の当業者に周知の多くの方法によって調製され得る。例として、本開示の化合物は、合成有機化学の技術分野で公知の合成方法又は当業者により認められるようなそれに対する変法と一緒に、下記の方法を使用して合成され得る。
一般的な合成手順
本明細書に記載の化合物は、実験セクション（化学セクション）で詳細に示されるように製造され得、例えば以下の通りである。
一般的スキーム（Ｉ）：脂肪酸部分、式（ｉ）の化合物の合成：
式（ｉ）の化合物を調製する一般的な方法を一般的スキーム（Ｉ）で概説する。
Figure 2024514352000028
例えば水素化ナトリウム、炭酸カリウム若しくはセシウム、水酸化ナトリウム、ジイソプロピルアミドリチウム、ナトリウムビス（トリメチルシリル）アミドなど、塩基の存在下において且つＤＭＦ、ＴＨＦ又はジメチルアセトアミドなどの溶媒の存在下若しくは非存在下において、ＲＴ前後又はそれより高い若しくは低い温度でマロン酸誘導体（６０）をＲ１－（ＣＨ２）ｍ－Ｘと反応させ得、アルキル化中間体（６１）を得て、次にこれを塩基の存在下でＲ２－（ＣＨ２）ｎ－Ｘと反応させて、ジ－アルキル化中間体（６２）をもたらす。可変要素Ｒ１、Ｒ２、ｎ及びｍは、本明細書で定義されるような意味を有し、Ｘは、ハロゲン（例えば、Ｂｒ、Ｃｌ、Ｉ）、トリフルオロメタンスルホニルオキシなどから選択される脱離基であり、Ｐ１及びＰ２は、例えば、メチル、エチル、ｔｅｒｔ－ブチル、メトキシベンジル、ベンジル、トリメチルシリル、ｔ－ブチルジメチルシリル又は２－アルキル１，３オキサゾリンなどのカルボン酸保護基である。
次に、保護基Ｐ１及びＰ２に依存して、中間体（６２）を塩基、例えばＮａＯＨ、ＫＯＨ若しくはＬｉＯＨ又はＴＦＡ、ＨＣｌ若しくはＢＣｌ３から選択されるが、限定されない酸と反応させるか、又は保護基Ｐ１及びＰ２がベンジル又はメトキシベンジルである場合、中間体（６２）を、一般的には、パラジウム炭素などであるが、限定されない触媒の存在下で水素と反応させて、式（ｉ）の化合物に対応する（即ちＰ１が水素であるとき）化合物（６５）を提供する。
代わりに、ＮａＨ、炭酸カリウム又はセシウム、水酸化ナトリウム、ジイソプロピルアミドリチウムなどの塩基の存在下において且つＤＭＦ、ＴＨＦ又はジメチルアセトアミドなどの溶媒の存在下又は非存在下において、中間体（６１）をＣＨ２＝ＣＨ－（ＣＨ２）ｊ－Ｘ（式中、ｊは、１～１０であり、Ｘは、本明細書で定義される通り、例えば臭化アリルである）と反応させて、不飽和ジ－アルキル化中間体６３を生じさせ得、これをクロマトグラフィーによってそのＲ又はＳエナンチオマーに分離し得る。次に、ＤＣＭ又はＴＨＦなどの溶媒の存在下において、中間体６３を過剰、例えば２当量のアルキル化剤Ｒ２－（ＣＨ２）ｎ’－ＣＨ＝ＣＨ２（式中、ｎ’は、５～２７である）及びオレフィンメタセシス触媒、例えばＧｒｕｂｂｓ ＩＩの存在下で反応させて、中間体６４を得て、これを触媒、例えばＰｄ／Ｃの存在下において、溶媒、例えばＴＨＦ、メタノールなどの存在下で水素と反応させ得、任意選択的に続いて例えば提供されるＰ２がベンジル基でない場合、一般的には中間体６２から中間体６５への反応において開示されるように、脱保護反応を行い；例えばＮａＯＨ、ＫＯＨ又はＬｉＯＨを用いて、メタノール、エタノール又はジオキサン中において又はＴＦＡ、ＨＣｌ又はＢＣｌ３から選択されるが、限定されない酸を用いて行う。側鎖中の二重結合は、スキーム（ＩＩ）で示されるようにリンカーが脂肪酸に連結された後にも水素付加され得る。ＣＨ＝ＣＨ基と一緒にパラメータｊ及びｎ’は、中間体６５においてｎにより決定された鎖長、即ち（ＣＨ２）ｎを提供するように選択される。
一般的スキーム（ＩＩ）：リンカー（Ｌ）を含む脂肪酸部分の合成：
Figure 2024514352000029
中間体６５を使用することにより中間体６６を調製する一般的な方法を一般的スキーム（ＩＩ）で概説する。カップリング試薬、例えばカルボニルジイミダゾール（ＤＣＣ）の存在下において、塩基、例えばＮ，Ｎ－ジイソプロプリルエチルアミン又はＫ２ＣＯ３の存在下又は非存在下において且つ溶媒、例えばＤＭＦの存在下又は非存在下で脂肪酸誘導体６５を式Ｈ２Ｎ－Ｌ－ＣＯＯＰ３のアミノ酸誘導体（式中、Ｐ３は、水素又はカルボン酸保護基（例えば、メチル、エチル、ｔｅｒｔ－ブチル、メトキシベンジル、ベンジル、トリメチルシリル、ｔ－ブチルジメチルシリル又は２－アルキル１，３オキサゾリン）であり、Ｌは、本明細書に記載のようなリンカーであるが、ただし、式Ｈ２Ｎ－Ｌ－ＣＯＯＰ３のアミノ酸誘導体中のリンカーＬは、その末端基、即ちＮＨ２及びＣＯＯＰ３と一緒に示される）と反応され得、誘導体化された脂肪酸誘導体（６６）が得られる。
標準的なペプチドカップリング反応は、例えば、カルボン酸基からその活性化形態への、例えば標準的なＮ－ヒドロスクシンイミド化学を使用するか、又はトリホスゲン、カルボニルジイミダゾール、クロロギ酸４－ニトロフェニル又は炭酸ジスクシンイミジルなどの試薬と炭酸基を反応させることによる、例えば対応するピロリジン－２，５－ジオン基への、塩化チオニル若しくは塩化オキサリルなどの試薬を使用するか、又はＣｌＣ（Ｏ）Ｏ－イソブチル、２，４，６－トリクロロ塩化ベンゾイル若しくはプロピルホスホン酸無水物環状トリマー（Ｔ３Ｐ）などの試薬を使用して炭酸基を対応する混合無水物に変換することによる、対応する炭酸ハロゲン化物への、変換と、それに続く三級アミン（例えば、トリエチルアミン又はＮ，Ｎ－ジイソプロプリルエチルアミン）又は無機塩基、例えばＫ２ＣＯ３などの塩基の存在下若しくは非存在下でのオキサゾリジン－２，５－ジオン、酸ハロゲン化物又は混合無水物の反応を含む。代わりに、ペプチドカップリング反応試薬は、１－ヒドロキシベンゾトリアゾール、１－ヒドロキシ－７－アザベンゾトリアゾール又はジメチルアミノピリジンなどの試薬の存在下若しくは非存在下での、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）、１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ ＨＣｌ）、ベンゾトリアゾール－１－イル－オキシ－トリス－ピロリジノ－ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（ＰｙＢＯＰ）又はベンゾトリアゾール－１－イル－オキシ－トリス－（ジメチルアミノ）－ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（ＢＯＰ）を含む。
一般的スキーム（ＩＩＩ）：式（Ｉ）の化合物の合成：
Figure 2024514352000030
中間体６６を使用することによって式（Ｉ）の化合物を調製する一般的な方法を一般的スキーム（ＩＩＩ）で概説する。提供されるＰ３は保護基（例えば、水素ではない）であり、例えば溶媒、例えばメタノールの存在下又は非存在下において、酸、例えばＨＣｌ又はｐ－トルエンスルホン酸を使用して、式（６６）の脂肪酸誘導体をそのカルボン酸に変換し、次に溶媒、例えばＤＣＭ又はＴＨＦの存在下又は非存在下で例えばＤＣＣ及びＮ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）を使用して、活性化炭酸エステル、例えばＮＨＳ－エステルに変換し、次に例えばピペリジン及び溶媒、例えばＤＭＦ又はＤＭＡの存在下において、それを、遊離－ＮＨ２基を有するＧＬＰ－１又はＧＬＰ－１類似体Ｐ＊と反応させ；可変要素Ｐ＊及びＰは、本明細書で定義されるような意味を有する（一般的スキーム（ＩＩＩ）で示される通り）。
分離の性質に依存して、順相、逆相又はキラルカラムを使用したキラル塩技術、クロマトグラフィーにより、上記の工程から得られるエナンチオマー、ジアステレオマー及びシス／トランス異性体の混合物をそれらの単一の構成要素に分離し得る。
本開示の化合物又は中間体の何れかの得られるラセミ体は、既知の方法により、例えば光学活性な酸又は塩基により得られ、光学活性な酸性又は塩基性化合物を遊離させる、そのジアステレオマー塩の分離によって光学的アンチポードに分割され得る。従って、特に、塩基性部分は、例えば、光学的活性のある酸、例えば酒石酸、ジベンゾイル酒石酸、ジアセチル酒石酸、ジ－Ｏ，Ｏ’－ｐ－トルオイル酒石酸、マンデル酸、リンゴ酸又はカンファ－１０－スルホン酸を用いて形成される塩の分別再結晶によって本開示の化合物をそれらの光学的アンチポードに分割するために使用され得る。本開示のラセミ化合物又はラセミ中間体は、キラルクロマトグラフィー、例えばキラル吸着剤を使用した高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によっても分割され得る。
医薬組成物
本明細書に記載の医薬組成物は、本明細書に記載のような化合物又は薬学的に許容可能なその塩及び薬学的に許容可能な担体を含む。さらなる実施形態では、本組成物は、少なくとも２つの薬学的に許容可能な担体、例えば本明細書に記載のものなどを含む。医薬組成物は、特定の投与経路、例えば経口投与、非経口投与（例えば、注射、点滴、経皮又は局所投与による）及び直腸投与などのために製剤化され得る。局所投与は、吸入又は鼻腔内適用にも適切であり得る。本明細書に記載の医薬組成物は、固体形態（カプセル、錠剤、丸剤、顆粒剤、粉末又は坐薬を含むが、限定されない）で又は液体形態（溶液、懸濁液又はエマルションを含むが、限定されない）で作製され得る。錠剤は、当技術分野で公知の方法に従い、フィルムコーティング又は腸陽性コーティングされ得る。一般的には、本医薬組成物は、以下の１つ以上と一緒に有効成分を含む、錠剤又はゼラチンカプセルである：
ａ）希釈剤、例えばラクトース、デキストロース、スクロース、マンニトール，ソルビトール、セルロース及び／又はグリシン；
ｂ）滑沢剤、例えばシリカ、タルカム、ステアリン酸、そのマグネシウム又はカルシウム塩及び／又はポリエチレングリコール；
錠剤に対して、また、
ｃ）結合剤、例えばケイ酸マグネシウムアルミニウム、デンプン糊、ゼラチン、トラガカント、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム及び／又はポリビニルピロリドン；必要に応じて
ｄ）崩壊剤、例えばデンプン、寒天、アルギン酸若しくはそのナトリウム塩又は発泡性混合物；及び
ｅ）吸収剤、着色剤、香料及び甘味料。
注射による使用に適切な医薬組成物は、一般的には、無菌注射用溶液又は分散液の即時調製のための、無菌水溶液（水溶性である場合）又は分散液及び無菌粉末を含む。
静脈内投与に対して、適切な担体は、生理食塩水、静菌水、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ ＥＬＴＭ（ＢＡＳＦ，Ｐａｒｓｉｐｐａｎｙ，Ｎ．Ｊ．）又はリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）を含む。全ての場合、本組成物は、無菌であるべきであり、容易な通針性が存在する程度に流動性であるべきである。好ましい製剤処方は、製造及び保管の条件下で安定であり、細菌及び真菌などの微生物の混入作用から保護されていなければならない。一般に、適切な担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール及び液体ポリエチレングリコールなど）及び適切なそれらの混合物を含有する溶媒又は分散媒であり得る。例えば、レシチンなどのコーティングの使用、分散の場合には求められる粒径の維持及び界面活性剤の使用により、適正な流動性が維持され得る。微生物の作用の予防は、様々な抗菌及び抗真菌剤、例えばパラベン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸、チメロサールなどによって達成され得る。多くの場合、組成物中において、等張剤、例えば糖、ポリアルコール、例えばマンニトールなど、アミノ酸、ソルビトール、塩化ナトリウムを含むことが好ましい。注射用組成物の持続的吸収は、吸収を遅延させる薬剤、例えばモノステアリン酸アルミニウム及びゼラチンを組成物中に含むことによってなされ得る。いくつかの実施形態では、組み換えアルブミンなどの多機能性賦形剤は、分解又は凝集から本化合物の安定性を促進するために、溶解度、投与における支援、活性構成成分の放出を改善するために、製剤工程に組み込まれ得る（ＢｉｏＰｈａｒｍ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，２０１２，Ｖｏｌ ２３，Ｉｓｓｕｅ ３，ｐｐ４０～４４）。
特定の注射用組成物は、水性等張性溶液又は懸濁液であり、坐薬は、有利に脂肪エマルション又は懸濁液から調製される。前記組成物は、安定化され得、且つ／又は保存剤、安定化剤、湿潤剤又は乳化剤、溶解促進剤、浸透圧を調節するための塩及び／若しくは緩衝剤などのアジュバントを含有する。さらに、これらは、他の治療的に価値のある物質も含有し得る。前記組成物は、それぞれ従来の混合、造粒又はコーティング法に従い調製され、有効成分０．１～７５％を含有するか又は１～５０％を含有する。
無菌注射用溶液は、必要に応じて、上記で列挙される成分の１つ又はその組み合わせとともに適切な溶媒中で必要とされる量で活性化合物を組み込み、続いてろ過滅菌することによって調製され得る。一般に、分散液は、基本の分散媒及び上記で列挙されるものからの求められる他の成分を含有する無菌のビヒクルに活性化合物を組み込むことによって調製される。無菌注射用溶液の調製のための無菌粉末の場合、好ましい調製方法は、前にろ過滅菌したその溶液から有効成分＋何れかのさらなる所望の成分の粉末を得る、真空乾燥及び凍結乾燥である。
本明細書に記載の化合物は、遊離形態であれ又は薬学的に許容可能な塩形態であれ、例えば本明細書で提供されるインビトロ及びインビボ試験で示されるように、例えばＧＬＰ１Ｒのアゴニストとして価値ある薬理学的特性を示し、従って治療のため又は例えばツール化合物として、研究化学物質としての使用が示唆される。
有用性リスト
本明細書に記載の化合物は、例えば、肥満、２型糖尿病、インスリン抵抗性、高インスリン血症、耐糖能障害、高血糖、１つ以上の糖尿病合併症（慢性腎臓病を含むが、限定されない）、糖尿病性腎症、脂質異常症、メタボリックシンドローム、進行性肝疾患、心血管系疾患及びニューロパチーから選択される代謝及び関連疾患、障害及び状態の処置において有用であり得る。非限定例として、ニューロパチーは、末梢ニューロパチー（例えば、糖尿病に付随し得る）である。
進行性肝疾患は、例えば、非アルコール性脂肪肝疾患（ＦＬＤ又はＮＡＦＬＤ）及び例えば非アルコール脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）であり得る。
心血管系疾患は、高血圧、アテローム性動脈硬化症、末梢動脈疾患、卒中発作、心筋症、心房細動、心不全（例えば、駆出率が低下した心不全（ＨＦｒＥＦ）、駆出率が中間範囲の心不全（ＨＦｍｒＥＦ）及び駆出率が保たれた心不全（ＨＦｐＥＦ）、冠動脈心疾患及び不整脈（例えば、心房性不整脈及び心室性不整脈）から選択され得る。
本発明の化合物は、対象において同時に起こっているいくつかの疾患、障害又は状態（併存症と呼ばれる）の処置において有用であり得る。併存症は、例えば、２型糖尿病であり、さらに肥満であり、且つ／又はさらに心不全及び／若しくはＮＡＳＨを示す対象におけるものであり得る。例えば、肥満対象は、２型糖尿病も示し、且つ／又は心血管系疾患（例えば、心不全）も示し得る。このような対象は、進行性肝疾患（例えば、ＮＡＳＨ）も示し得る。例えば、肥満対象は、２型糖尿病も示し、且つ／又は心血管系疾患（例えば、心不全）も示し、且つ／又は進行性肝疾患（例えば、ＮＡＳＨ）も示し得る。対象は、高血圧及び／又は高い血中コレステロールレベルも有し得る。対象は、末梢ニューロパチーにも罹患し得る。
本明細書で使用される場合、上記の有用性セクションで開示される指示は、以下では「上述のリスト」と呼ばれ得る。
一実施形態では、本疾患、障害又は状態は、肥満、２型糖尿病、アテローム性動脈硬化症、心不全（特に駆出率が保存されている心不全）及びＮＡＳＨから選択される。
一実施形態では、本疾患、障害又は状態は、肥満、２型糖尿病、アテローム性動脈硬化症及び心不全（特に駆出率が保存されている心不全）から選択される。
本開示の別の態様は、ＧＬＰ１Ｒの変化が付随する患者における疾患又は障害を、処置する、予防する、阻害する又は排除する方法に関する。本方法は、ＧＬＰ１Ｒの変化が付随する疾患又は障害に対する処置を必要とする患者に有効量の本明細書に記載のような化合物又は薬学的に許容可能なその塩又は本明細書に記載の化合物又は薬学的に許容可能なその塩と１つ以上の薬学的に許容可能な担体とを含む医薬組成物を投与することを含む。
従って、さらなる態様として、治療における本明細書に記載の化合物又は薬学的に許容可能なその塩の使用が本明細書で提供される。さらなる実施形態では、この治療は、ＧＬＰ１Ｒのアゴニズムにより処置され得る疾患、障害又は状態の処置である。別の実施形態では、治療は、上述のリストの何れかから選択される疾患、障害又は状態の処置である。
従って、さらなる態様として、治療での使用のための、本明細書に記載の化合物又は薬学的に許容可能なその塩が本明細書で提供される。さらなる実施形態では、治療は、ＧＬＰ１Ｒのアゴニズムにより処置され得る疾患、障害又は状態の処置である。別の実施形態では、治療は、上述のリストの何れかから選択される疾患、障害又は状態の処置である。
別の態様では、患者における疾患、障害又は状態を処置する方法が本明細書で提供され、これは、ＧＬＰ１Ｒのアゴニズムにより処置可能であり、治療的有効量の本明細書に記載の化合物又は薬学的に許容可能なその塩の投与を含む。
別の実施形態では、疾患、障害又は状態の処置を必要とする対象において疾患、障害又は状態を処置する方法が本明細書で提供され、この方法は、治療的有効量の本明細書に記載の化合物を対象に投与することを含み、疾患、障害又は状態は、上述のリストの何れかから選択される。
さらなる態様では、薬剤の製造のための本明細書に記載の化合物又は薬学的に許容可能なその塩の使用が本明細書で提供される。さらなる実施形態では、薬剤は、ＧＬＰ１Ｒのアゴニズムにより処置され得る疾患の処置のためである。別の実施形態では、疾患は、上述のリストの何れかから選択される。
さらに、本発明は、上述のリストの何れかから選択される疾患、障害又は状態を処置するための、本明細書に記載の何れかの化合物又は薬学的に許容可能なその塩の使用を提供する。
「代謝障害」又は「代謝疾患」という用語は、高トリグリセリド、低い高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）コレステロール及び高い低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）コレステロールを特徴とする、肥満、耐糖能障害、インスリン抵抗性、高インスリン血症、過剰な内臓脂肪症、高血圧、脂質異常症を含むが、限定されない関連する一連の形質を指す。代謝疾患又は障害を有する対象は、２型糖尿病及び例えばアテローム性動脈硬化症の発症リスクがある。
ヒト成人における「肥満」という用語は、３０以上の体格指数（ＢＭＩ）を指す（Ｃｅｎｔｅｒｓ ｆｏｒ Ｄｉｓｅａｓｅ Ｃｏｎｔｒｏｌ ａｎｄ Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ）。このような対象は、肥満とも呼ばれ得る。これは、クラスＩ肥満と呼ばれる。クラスＩＩ肥満は、ＢＭＩが３５～３９．９である個体を含み、クラスＩＩＩ肥満は、ＢＭＩが４０を超える個体を指す。体格指数（ＢＭＩ）は、身長及び体重に基づく体脂肪の目安である。計算のための式は、ＢＭＩ＝体重キログラム／身長メートル２である。一実施形態では、肥満であるヒト対象のＢＭＩは、≧３０若しくは≧３５又はＢＭＩの範囲が≧３５～＜４０若しくは≧３０～＜４０である。量＜４０は、例えば、３９．９であり得る。いくつかの実施形態では、肥満は、重度の肥満又は病的な肥満であり、このときヒト対象のＢＭＩは≧４０である。
「２型糖尿病」という用語は、グルコース利用の異常及び過剰なグルコース産生の組み合わせの結果生じる、空腹及び飽食状態の両方で持続的にグルコースレベルが高いことを特徴とする状態である。これは、膵臓からの不適切なインスリン産生又は末梢インスリン抵抗性の何れかの結果生じ得る。
「インスリン抵抗性」という用語は、本明細書で使用される場合、異常な量のインスリンが予想される生理学的反応を誘導し得ず、下流経路を活性化し得ない状態を指す。多くの例において、内因的に産生されるか又は外因的に投与されるかの何れかの生理的範囲を超えるインスリンは、予想される生理反応を誘導するために完全又は部分的な生体反応を誘導するのに十分である。
「高インスリン血症」という用語は、過剰なインスリンが血中で検出され得る状態を指す。
「耐糖能障害」という用語は、健康な個体と比較して、対象における基底又は食後のグルコースレベルの上昇及び／又はインスリンレベル上昇又は異常なグルコースにより刺激されるインスリン放出又はＨＯＭＡ－ＩＲ（インスリン抵抗性の恒常性モデル評価）と関連する臨床症状又は臨床症状の組み合わせを特徴とするあらゆる障害を包含する。グルコース及び／又はインスリンレベルの上昇は、以下の疾患、障害及び状態：肥満、メタボリックシンドローム、耐糖能障害、ＩＩ型糖尿病、妊娠性糖尿病、Ｉ型糖尿病、インスリン抵抗性、高インスリン血症、リポジストロフィー、脂肪萎縮症及び様々なＭＯＤＹ（若年発症成人型糖尿病）突然変異において現れ得る。本開示のＧＬＰ１Ｒアゴニスト及びその組成物は、例えば、グルコースホメオスタシスを達成及び／又は維持するために、例えば血流中でグルコースレベルを低下させ、且つ／又は健康な対象で見られる範囲までインスリンレベルを低下させるために使用され得る。
「高血糖」という用語は、本明細書で使用される場合、健康な個体と比較して、多量のグルコースが対象の血漿中を循環する状態を指す。高血糖は、本明細書に記載のような空腹時血中グルコースレベルの測定を含む、当技術分野で公知の方法を使用して診断され得る。
「糖尿病合併症」という用語は、腎臓、末梢四肢及び眼（例えば、網膜症）を含む他の器官を損傷させるか又は血管疾患及びニューロパチーを誘導する、持続的な高血糖値により引き起こされる問題である。血管機能異常は、勃起機能不全に寄与し、皮膚感染のリスク上昇につながり得る。糖尿病は、心疾患及び骨及び関節障害に対するリスクも上昇させる。糖尿病の他の長期合併症としては、肝細胞癌、子宮内膜癌、乳癌及び膵臓癌を含む癌の過剰なリスクが挙げられる。
「糖尿病性腎症」という用語は、糖尿病の結果起こる状態であり、腎機能を低下させる腎臓の血管及び他の細胞に対する損傷により引き起こされる。
「脂質異常症」という用語は、リポタンパク質過剰産生又は異常代謝を含むリポタンパク質代謝の複合的な障害を指す。脂質異常症は、血中の、総コレステロール、低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）コレステロール及びトリグリセリド濃度の上昇及び高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）コレステロール濃度の低下により明らかになり得る。
「メタボリックシンドローム」という用語は、冠動脈疾患、駆出率が低下した心不全、駆出率が保存されている心不全、脳血管疾患及び末梢血管疾患を含む心血管系疾患に対するリスクを上昇させる一連のリスク因子を指す。これらのリスク因子は、腹部脂肪、絶食後の高血糖（少なくとも１１０ミリグラム／デシリットル（ｍｇ／ｄｌ））；血流中の高トリグリセリド（少なくとも１５０ｍｇ／ｄＬ）；低ＨＤＬ（４０ｍｇ／ｄｌ未満）；及び１３０／８５ｍｍＨｇ以上の血圧（世界保健機関）を含む。
「進行性肝疾患」という用語は、肝細胞癌に罹患し易い線維症及び肝硬変により明らかにされる脂肪肝の良性状態からの進行を指す。肥満が関連する非アルコール性脂肪肝（ＮＡＦＬ）のＮＡＳＨ、線維症及び肝硬変への進行が十分に裏付けられている。
ＮＡＦＬＤとしても知られる「非アルコール性脂肪肝疾患（ＦＬＤ）」という用語は、過剰な脂質が肝細胞に蓄積する状態であり、これは、肝臓における過剰なデノボ脂質生合成又は脂肪酸の異常なクリアランス及び酸化の何れかから生じ得る。ＮＡＦＬＤは、アルコール性肝疾患及びウイルス性肝疾患を含む肝疾患の他の原因から除外される。ＮＡＦＬＤは、疾患の進行を反映する３つの組織学的実体：脂肪肝、肝脂肪症及び線維症又は肝硬変を含む。ＮＡＦＬＤの最も一般的な原因は肥満であるが、ＮＡＦＬＤは、痩せた個体でも見られ得る。脂肪の蓄積は、脂肪性肝炎と呼ばれるマクロファージの浸潤及び膨張を含む肝細胞組織学の変化を付随する炎症を進行させ得、これは非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）と呼ばれる。ＮＡＳＨは、小葉間の架橋線維症又は肝硬変を伴う線維症に進行し得る。本明細書で使用される場合、ＮＡＳＨという用語は、脂肪性肝炎、風船様肝細胞及び小葉の炎症を包含し得る。
「心血管系疾患」という用語は、心臓又は血管に関連する疾患である。
「アテローム性動脈硬化症」という用語は、大型及び中型の動脈の内膜において不規則に分布した脂質沈着物を特徴とする血管疾患を指し、この脂肪沈着物は、動脈内腔の狭窄を引き起こし、線維症及び石灰化に最終的に進行することがある。病変は、通常、局限的であり、ゆっくりと断続的に進行する。血流の制限は、殆どの臨床症状の主原因であり、病変の分布及び重症度とともに変動する。
「末梢動脈疾患」という用語は、動脈での脂肪沈着物の蓄積が下肢筋肉への血液供給を制限する場合を指す。
「卒中発作」という用語は、脳の一部への血液供給が遮断される場合を指す。
「心筋症」という用語は、心機能又は生理機能及び状態に影響を及ぼし得る心房又は心室の心筋の後天性又は先天性の構造異常として定義される。
「心不全」という用語は、心臓の血液ポンプ機能が低下している場合を指し、駆出率が保たれた心不全（ＨＦｐＥＦ）、駆出率が低下した心不全（ＨＦｒＥＦ）及び駆出率が中間範囲の心不全（ＨＦｍｒＥＦ）を含み得る。
「冠動脈心疾患」という用語は、冠動脈疾患とも呼ばれ、心臓に血液を供給する動脈の狭窄である。
「不整脈」という用語は、異常な心臓リズムを指し、心房性不整脈、心房細動及び心室性不整脈を含み得る。
「ニューロパチー」という用語は、神経が損傷を受けている場合を指す。この用語は、手、肢及び腕などの四肢の神経が損傷を受けるときに発症する末梢ニューロパチーを含む。糖尿病は、末梢ニューロパチーの一般的な原因である。
別の実施形態は、肥満、２型糖尿病、インスリン抵抗性、高インスリン血症、耐糖能障害、高血糖、糖尿病合併症（慢性腎臓病を含むが、限定されない）、糖尿病性腎症、脂質異常症、メタボリックシンドローム、進行性肝疾患、心血管系疾患及びニューロパチー（特に、例えば糖尿病に付随する、末梢ニューロパチーから選択される疾患又は障害の処置での使用のための、
Figure 2024514352000031
（化合物１）
である、本明細書で定義されるような式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容可能なその塩を提供する。
別の実施形態は、肥満、２型糖尿病、インスリン抵抗性、高インスリン血症、耐糖能障害、高血糖、糖尿病合併症（慢性腎臓病を含むが、限定されない）、糖尿病性腎症、脂質異常症、メタボリックシンドローム、進行性肝疾患、心血管系疾患及びニューロパチー（特に、例えば糖尿病に付随する、末梢ニューロパチーから選択される疾患又は障害の処置での使用のための、
Figure 2024514352000032
（化合物２）
である、本明細書で定義されるような式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容可能なその塩を提供する。
別の実施形態は、肥満、２型糖尿病、インスリン抵抗性、高インスリン血症、耐糖能障害、高血糖、糖尿病合併症（慢性腎臓病を含むが、限定されない）、糖尿病性腎症、脂質異常症、メタボリックシンドローム、進行性肝疾患、心血管系疾患及びニューロパチー（特に、例えば糖尿病に付随する、末梢ニューロパチーから選択される疾患又は障害の処置での使用のための、
Figure 2024514352000033
（化合物３）
である、本明細書で定義されるような式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容可能なその塩を提供する。
別の実施形態は、高血圧、アテローム性動脈硬化症、末梢動脈疾患、卒中発作、心筋症、心房細動、心不全（例えば、駆出率が低下した心不全（ＨＦｒＥＦ）、駆出率が中間範囲の心不全（ＨＦｍｒＥＦ））及び駆出率が保たれた心不全（ＨＦｐＥＦ）、冠動脈心疾患及び不整脈（例えば、心房性不整脈及び心室性不整脈）から選択される疾患又は障害の処置での使用のための、
Figure 2024514352000034
（化合物１）
である、本明細書で定義されるような式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容可能なその塩を提供する。
別の実施形態は、高血圧、アテローム性動脈硬化症、末梢動脈疾患、卒中発作、心筋症、心房細動、心不全（例えば、駆出率が低下した心不全（ＨＦｒＥＦ）、駆出率が中間範囲の心不全（ＨＦｍｒＥＦ））及び駆出率が保たれた心不全（ＨＦｐＥＦ）、冠動脈心疾患及び不整脈（例えば、心房性不整脈及び心室性不整脈）から選択される疾患又は障害の処置での使用のための、
Figure 2024514352000035
（化合物２）
である、明細書で定義されるような式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容可能なその塩を提供する。
別の実施形態は、高血圧、アテローム性動脈硬化症、末梢動脈疾患、卒中発作、心筋症、心房細動、心不全（例えば、駆出率が低下した心不全（ＨＦｒＥＦ）、駆出率が中間範囲の心不全（ＨＦｍｒＥＦ））及び駆出率が保たれた心不全（ＨＦｐＥＦ）、冠動脈心疾患及び不整脈（例えば、心房性不整脈及び心室性不整脈）から選択される疾患又は障害の処置での使用のための、
Figure 2024514352000036
（化合物３）
である、本明細書で定義されるような式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容可能なその塩を提供する。
剤型
本明細書に記載のような医薬組成物又は組み合わせは、約５０～７０ｋｇの対象に対して約１～１００ｍｇの有効成分の単位剤型中にあり得る。化合物、医薬組成物又はその組み合わせの治療的有効投与量は、対象の種、体重、年齢及び個々の状態、処置されている障害若しくは疾患又はその重症度に依存する。
組み合わせ態様
本明細書に記載の何れかの化合物は、１つ以上の他の治療剤と同時に又はその前若しくはその後の何れかで投与され得る。本明細書に記載の何れかの化合物は、同じ若しくは異なる投与経路により個別に又は他の薬剤と同じ医薬組成物中で一緒に、投与され得る。治療剤は、例えば、化学的化合物、ペプチド、ペプチド複合物及び融合物、抗体、抗体断片又は核酸であり、これは、治療的に活性があるか又は本明細書に記載の化合物と組み合わせて対象に投与したときに治療活性を促進する。
従って、別の態様では、（例えば、治療的有効量の）本明細書に記載の化合物又は薬学的に許容可能なその塩及び１つ以上の他の治療的に活性がある薬剤を含む、組み合わせ、特に医薬の組み合わせが本明細書で提供される。
一実施形態では、治療における同時、個別又は連続使用のための組み合わせ調製物として、本明細書に記載の化合物及び少なくとも１つの他の治療剤を含む組み合わせが本明細書で提供される。一実施形態では、治療は、上述のリストから選択される疾患、障害又は状態の処置である。
組み合わせ調製物として提供される製品は、同じ医薬組成物中で一緒に本明細書に記載の化合物及び１つ以上のさらなる治療剤を含む組成物又は例えばキットの形態における、本明細書に記載の化合物及び別個の形態の他の治療剤を含む。
一実施形態では、本明細書に記載の化合物及び１つ以上のさらなる治療剤を含む医薬の組み合わせが本明細書で提供される。任意選択的に、医薬の組み合わせは、上記のような薬学的に許容可能な担体を含み得る。
一実施形態では、２つ以上の別個の医薬組成物を含むキットが本明細書で提供され、この少なくとも１つは本明細書に記載の化合物を含有する。一実施形態では、本キットは、前記組成物を別個に保持するための手段、例えば容器、分離されたボトル又は分離されたホイルパケットなどを含む。このようなキットの例は、一般的には錠剤、カプセルなどの包装のために使用されるような、ブリスター包装である。
本キットは、異なる剤型、例えば経口及び非経口を投与するために、異なる投与間隔で別個の組成物を投与するか又は互いに対して別個の組成物を滴定するために使用され得る。コンプライアンスを支援するために、本キットは一般的に、投与のための指示を含む。
本明細書に記載の組み合わせ治療において、本明細書に記載の何れかの化合物及び他の治療剤は、同じ又は異なる製造者により製造及び／又は製剤化され得る。
さらに、本明細書に記載の何れかの化合物及び他の治療剤は、（ｉ）医師への組み合わせ生成物の発売前（例えば、本明細書に記載の化合物及び他の治療剤を含むキットの場合）；（ｉｉ）投与直前、医師自身により（又は医師の指導のもと）；（ｉｉｉ）例えば本明細書に記載の化合物及び他の治療剤の連続投与中に患者自身において、組み合わせ療法に一緒に入れられ得る。
上述のリストの何れかから選択される疾患、障害又は状態を処置する方法での使用のための本明細書に記載のような化合物及び１つ以上のさらなる治療剤を含む組み合わせも本明細書で提供される。
上述のリストの何れかから選択される疾患、障害又は状態を処置するための本明細書に記載のような化合物及び１つ以上のさらなる治療剤を含む組み合わせの使用も本明細書で提供される。
一実施形態では、他の治療剤は、以下のものから選択され得る：
１．抗糖尿病薬、例えばインスリン、インスリン誘導体及び模倣薬；インスリン分泌促進物質、例えばスルホニル尿素（例えば、クロルプロパミド）；又はＤＰＰＩＶ（ジペプチジルペプチダーゼＩＶ）阻害剤、例えばビルダグリプチン；
２．脂質低下薬、例えば３－ヒドロキシ－３－メチル－グルタリル補酵素Ａ（ＨＭＧ－ＣｏＡ）レダクターゼ阻害剤、例えばロバスタチン；スクアレンシンターゼ阻害剤；ＦＸＲ（ファルネソイドＸ受容体）及びＬＸＲ（肝臓Ｘ受容体）リガンド；胆汁酸吸着剤、例えばコレスチラミン及びコレセベラム；フィブラート系薬剤；ニコチン酸又はアスピリン；
３．抗肥満剤、例えばオルリスタット；
４．降圧剤、例えばループ利尿薬、例えばエタクリン酸；アンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤、例えばベナゼプリル；Ｎａ－Ｋ－ＡＴＰａｓｅ膜ポンプの阻害剤、例えばジゴキシン；中性エンドペプチダーゼ（ＮＥＰ）阻害剤；ＡＣＥ／ＮＥＰ阻害剤、例えばオマパトリラト；アンジオテンシンＩＩアンタゴニスト、例えばバルサルタン；アンジオテンシン受容体－ネプリライシン阻害剤（ＡＲＮｉ）、例えばサクビトリル／バルサルタン（ＬＣＺ６９６）；レニン阻害剤、例えばジテキレン；β－アドレナリン受容体ブロッカー、例えばチモロール；変力剤、例えばジゴキシン；カルシウムチャネルブロッカー、例えばアムロジピン；アルドステロン受容体アンタゴニスト；又はアルドステロンシンターゼ阻害剤；
５．ペルオキシソーム増殖因子－活性化因子受容体のアゴニスト、例えばフェノフィブラート；
６．コルチコトロピン放出ホルモン受容体に結合する化合物、例えばウロコルチン２。
本開示は、以下の実施例及び合成スキームによりさらに例示され、これらは、本明細書に記載される具体的な手順に対して範囲又は趣旨において本開示を限定するものとして解釈されるべきものではない。実施例は、特定の実施形態を例示するために提供されること及び本開示の範囲に対する限定がそれにより意図されないことを理解されたい。本開示の趣旨及び／又は添付される特許請求の範囲から逸脱することなく、当業者に対してそれ自体示唆し得る様々な他の実施形態、改変形態及びその均等物を求め得ることをさらに理解されたい。
本開示の化合物は、有機合成の技術分野で公知の方法によって調製され得る。方法の全てにおいて、化学の一般的な原理に従って必要とされる場合、感受性がある基又は反応性がある基に対する保護基が使用され得ることが理解される。保護基は、有機合成の標準的な方法に従い操作される（Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎ及びＰ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ（１９９９）Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，３ｒｄ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ）。これらの基は、当業者に容易に明らかになる方法を使用して、化合物合成の都合の良い段階で除去される。
実験セクション
分析方法、材料及び器具類
別段の記載がない限り、試薬及び溶媒は、市販業者から受け取ったまま使用した。プロトン核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトルは、別段の記載がない限り、Ｂｒｕｋｅｒ Ａｖａｎｃｅ分光計又はＶａｒｉａｎ Ｏｘｆｏｒｄ ４００ＭＨｚ分光計の何れかで得た。スペクトルは、ｐｐｍ（δ）で与えられ、カップリング定数、Ｊは、ヘルツで報告する。内部標準としてテトラメチルシラン（ＴＭＳ）を使用した。化学シフトは、ＮＭＲスペクトルデータにおいて示される場合、ジメチルスルホキシド（δ２．５０）、メタノール（δ３．３１）、クロロホルム（δ７．２６）又は他の溶媒に対するｐｐｍで報告する。少量の乾燥試料（２～５ｍｇ）を適切な重水素化溶媒（１ｍＬ）中で溶解させる。化学名は、ＣａｍｂｒｉｄｇｅＳｏｆｔからのＣｈｅｍＢｉｏＤｒａｗ Ｕｌｔｒａ ｖ１７ｆｒｏｍ を使用して生成させた。
略語：
ＡＣ５０ 最大半量の化合物効果の濃度
ＡＣＮ アセトニトリル
Ａｉｎｆ 高濃度でのＨｉｌｌ曲線のプラトー値
Ａ０ 低濃度でのＨｉｌｌ曲線のプラトー値
Ａｉｂ α－アミノイソ酪酸
ＡＬＳ オートサンプラー
ＡＵＣｉｎｆ 時間０から無限大の血漿濃度－時間曲線下面積
ｂｒ ブロード
ＢＳＡ ウシ血清アルブミン
ＢＷ 体重
ｃＡＭＰ 環状アデノシン一リン酸
ｃａｔ ＃ カタログ番号
ＣＨＯ チャイニーズハムスター卵巣細胞
Ｃｍａｘ 最大血漿濃度
ＣＯ２ 二酸化炭素
ｃｙｎｏＧＬＰ１Ｒ カニクイザルグルカゴン様ペプチド１受容体
ｄ 二重線
ｄｄ 二重線の二重線
ＤＣＣ Ｎ，Ｎ’－ジシクロヘキシルカルボジイミド
ＤＣＭ ジクロロメタン
ＤＣＵ Ｎ，Ｎ’－ジシクロヘキシル尿素
ＤＥＡ Ｎ，Ｎ－ジエチルアニリン
ＤＥＲＥＴ 解離促進共鳴エネルギー転移
ＤＩＥＡ／ＤＩＰＥＡ ジエチルイソプロピルアミン
ＤＩＯ 食餌誘導性肥満
ＤＭＥＭ ダルベッコ改変イーグル培地
ＤＭＦ Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド
ＤＭＳＯ ジメチルスルホキシド
ＤＳＣ Ｎ，Ｎ’－炭酸ジスクシンイミジル
ＤＭＡ ジメチルアセトアミド
ＤＭＡＰ ４－（Ｎ，Ｎ－ジメチルアミノ）ピリジン
ＥＡ 酵素アクセプター
ＥＣ 有効濃度
ＥＣ０ 反応を与えない化合物の有効濃度
ＥＣ５０ 最大半量反応を与える化合物の有効濃度
ＥＣ１００ 最大（１００％）反応を与える化合物の有効濃度
Ｅｍａｘ 有効性：投与される薬剤から達成可能な最大反応
ＥＤＣ又はＥＤＣＩ Ｎ－エチル－Ｎ’－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド
ＥＤＴＡ エチレンジアミンテトラ酢酸
Ｅｘ９－３９ エキセンディン９－３９
ＥＬＳＤ 蒸発光散乱検出器
ｅｑｕｉｖ 当量
ＥＳＩ エレクトロスプレーイオン化
ＥｔＯＡｃ 酢酸エチル
ＦＢＳ ウシ胎児血清
ＦＩ 食物摂取
Ｆｍｏｃ ９－フルオレニルメトキシカルボニル
ＦＲＥＴ 蛍光共鳴エネルギー移動
ｇ グラム
ＧＬＰ１ グルカゴン様ペプチド１
ＧＬＰ１Ｒ グルカゴン様ペプチド１受容体
ＧＰＣＲ Ｇ－タンパク質共役型受容体
Ｇ４１８ ジェネティシン、選択抗生物質
Ｇｒｕｂｂｓ ＩＩ ジクロロ［１，３－ビス（２，４，６－トリメチルフェニル）－２－イミダゾリジニリデン］（ベンジリデン）（トリシクロヘキシルホスフィン）ルテニウム（ＩＩ）
ｈ 時間
ＨＡＴＵ （１－［ビス（ジメチルアミノ）メチレン］－１Ｈ－１，２，３－トリアゾロ［４，５－ｂ］ピリジニウム３－オキシドヘキサフルオロホスフェート
ＨＤＦ 高脂肪食
ＨＥＳＩ 加熱エレクトロスプレーイオン化
ｈＧＬＰ１Ｒ ヒトグルカゴン様ペプチド１受容体
ＨＰＬＣ 高圧液体クロマトグラフィー
ＨＴＲＦ 均一系時間分解蛍光測定
ＩＢＭＸ ３－イソブチル－１－メチルキサンチン
ｋｇ キログラム
Ｌ リットル
ＬＣＭＳ 液体クロマトグラフィー及び質量分析
ＭｅＯＨ メタノール
ＭＳ 質量分析
ＭＴＢＥ メチルｔｅｒｔ－ブチルエーテル
ｍ 多重線
ｍｇ ミリグラム
ｍｉｎ 分
ｍＬ ミリリットル
ｍｍｏｌ ミリモル
ｍＭ ミリモル濃度
ｍ／ｚ 質量電荷比
ｎＭ ナノモル濃度
ｎｍｏｌ ナノモル
ＮＭＰ Ｎ－メチル－２－ピロリジノン
ＮＭＲ 核磁気共鳴
ＮＰＬＣ 順相液体クロマトグラフィー
ｐ 五重線
Ｐｂｆ ２，２，４，６，７－ペンタメチルジヒドロベンゾフラン－５－スルホニル－
ＰＢＳ リン酸緩衝食塩水
Ｐｄ／Ｃ パラジウム炭素
ＰＥＧ ポリエチレングリコール
ＰＫ 薬物動態
ＰＤ 薬力学
ｐｐｍ パーツパーミリオン
ＱＣ 品質管理
ＱＤ １日１回
Ｑ３Ｄ ３日ごとに１回
Ｑ１Ｗ 週１回
ＲＣＦ 相対遠心力
ＲＰＭ 回毎分
Ｒｔ 保持時間
ＲＴ 室温
ｒｏｔｏｖａｐ ロータリーエバポレーター
ｓ 一重線
ｓ．ｃ．又はＳＣ 皮下
ｓｅｃ 秒
ＳＥＭ 平均の標準誤差
ＳＦＣ 超臨界流体クロマトグラフィー
ＳＭ 出発物質
ｔ 三重線
ＴＥＡ トリエチルアミン
ＴＦＡ トリフルオロ酢酸
ＴＨＦ テトラヒドロフラン
Ｔｍａｘ 最大血漿濃度に到達するまでにかかる時間
Ｔ１／２ 半減期
ｖ／ｖ 体積／体積
μｇ マイクログラム
μＬ マイクロリットル
μＭ マイクロモル濃度
生物学的アッセイ及びデータ
細胞内ｃＡＭＰ濃度を測定する以下の細胞アッセイにおいて、本明細書に記載の化合物を試験した。ｃＡＭＰは、ＧＬＰ１Ｒの活性化によって生成される。得られたデータを表１～３で示す。ＥＣ５０は、最大反応の半分になる化合物の濃度として定義される（ベースライン補正後）。Ｅｍａｘは、ＧＬＰ１Ｒに対する内因性リガンド（ＧＬＰ１（７－３６））について観察される最大反応に対して正規化された、試験化合物に対して観察される最大反応として定義される。
ヒトＧＬＰ１Ｒ ｃＡＭＰアゴニストアッセイ
ＧＰＣＲのリガンド活性化後のｃＡＭＰの細胞内濃度の変化を測定する、ＧｌｏＳｅｎｓｏｒ（商標）ｃＡＭＰアッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ Ｃｏｒｐ．）を使用して、化合物のアゴニスト活性を決定した。このアッセイは、ホチヌス・ピラリス（Ｐｈｏｔｉｎｕｓ ｐｙｒａｌｉｓ）ルシフェラーゼの突然変異体形態に融合されたｃＡＭＰ結合ドメインを伴うｐＧｌｏＳｅｎｓｏｒ（商標）－２２Ｆ ｃＡＭＰプラスミド（Ｐｒｏｍｅｇａ、ｃａｔ ＃Ｅ２３０１）によってコードされるバイオセンサーを使用する。ｃＡＭＰへの結合は、光出力の大きい増大を促進する立体構造変化を引き起こし、これは、発光検出器によって測定され得る。ヒトＧＬＰ１受容体（ｈＧＬＰ１Ｒ）及びｐＧｌｏＳｅｎｓｏｒ（商標）－２２Ｆを安定して過剰発現するＨＥＫ２９３－ＳＮＡＰ－ｈＧＬＰ１Ｒ－ＧｌｏＳｅｎｓｏｒｓ細胞をＣＯ２非依存性培地（１．０％ＦＢＳ、２ｍＭ Ｌ－グルタミン、ペニシリン及びストレプトマイシン入りのＧｉｂｃｏ ｃａｔ ＃１８０４５－０８８）中で白色３８４ウェルポリ－Ｄ－リジンコーティングプレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ Ｂｉｏ Ｏｎｅ、ｃａｔ ＃７８１９４５）に播種し、３７℃、５％ＣＯ２で一晩、加湿して温置した。翌朝、ＧｌｏＳｅｎｓｏｒ基質（Ｐｒｏｍｅｇａ、ｃａｔ ＃Ｅ１２９１）の４％ｖ／ｖ希釈液を含有する等体積のＣＯ２－非依存性培地を全ウェルに添加することによってアッセイを開始した。細胞プレートをＲＴにおいて２ｈ暗所で温置した。液体操作段階のためにＢｉｏｍｅｋ ｉ７（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ）機器を使用した。２つ組の用量反応曲線を作成するために、０．１％ＢＳＡ、０．５ｍＭ ＩＢＭＸ及び０．４％ＤＭＳＯを含有するＣＯ２－非依存性培地中１００ｎＭ～０．０３ｐＭの範囲の最終濃度になるように３倍連続希釈された化合物を６０μＬの最終体積まで細胞アッセイプレートに添加した。２ｎＭの最終濃度でＧＬＰ１（７－３６）ペプチド（Ｂａｃｈｅｍ、ｃａｔ ＃Ｈ－６７９５）を含有するＥＣ１００対照ウェル及びペプチド不含のＥＣ０対照ウェルを同時に同じプレート中で試験化合物と同じアッセイ緩衝液を使用して試験した。細胞に化合物を添加した後、このプレートをＲＴで暗所において１２ｍｉｎ、温置した。次に、０．１ｓｅｃ／ウェルで３８４ウェル発光開口部があるＵｌｔｒａ－Ｓｅｎｓｉｔｉｖｅプロトコール設定「３８４－ウェルＵＳ発光検出器」を使用して、「ＴＲＦ Ｌｉｇｈｔ Ｕｎｉｔ、３３７ｎｍ」付きのＥｎｖｉｓｉｏｎ ２１０４マルチラベルリーダー（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）を用いて、発光を測定した。ＧＬＰ１（７－３６）ＥＣ１００対照ウェルのパーセントとしてｃＡＭＰ活性を計算した：［（試料シグナル－平均ＥＣ０シグナル）／（ＧＬＰ１（７－３６）シグナルの平均ＥＣ１００－平均ＥＣ０シグナル）｝＊１００。ソフトウェアパッケージＤＡＶＩＤのＨｅｌｉｏｓモジュールにおいて、ＥＣ５０決定のためのカーブフィッティングを行った。４－パラメータロジスティックモデル、Ｈｉｌｌスロープを使用した：ｙ＝Ａｉｎｆ＋（Ａ０－Ａｉｎｆ）／（１＋（ｘ／ＡＣ５０）Ｈｉｌｌ Ｓｌｏｐｅ）。式中、ｙは、機能的反応であり；ｘは、化合物濃度であり；Ａ０は、最小値（０用量で）；Ａｉｎｆは最大値（無限用量で）であり；ＡＣ５０は、屈曲点に対応する（即ちＡ０とＡｉｎｆとの間のシグモイド状曲線の半分における点）。ＥＣ５０値は、μＭでＨｅｌｉｏｓから計算されたＡＣ５０値により表された。Ｅｍａｘは、フィットさせた曲線から誘導される、濃度範囲内で検出される最大活性である。
ＨＥＫ２９３－ＳＮＡＰ－ｈＧＬＰ１Ｒ細胞株の作製
３２７μＬのＯｐｔｉ－ＭＥＭ培地（Ｇｉｂｃｏ、ｃａｔ ＃３１９８５－０６２）を１２μＬのＦｕＧＥＮＥ（登録商標）ＨＤ（Ｐｒｏｍｅｇａ、ｃａｔ ＃Ｅ２３１１）と混合し、ＲＴで５分間温置した。次に、８．２μＬ（４μｇ、０．４８５μｇ／μＬ溶液）の、ＳＮＡＰタグと融合されたヒトＧＬＰ１Ｒ（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＭ＿００２０６２．３）をコードするｐＳＮＡＰ－ｈＧＬＰ１Ｒプラスミド（Ｃｉｓｂｉｏ、ｃａｔ ＃ＰＳＮＡＰ－ＧＬＰ１）をＦｕｇｅｎｅ ＨＤ／Ｏｐｔｉ－ＭＥＭミックスに添加し、ＲＴで２０分間温置した。ＨＥＫ２９３細胞（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ－１５７３（商標））の懸濁液を８００，０００細胞／ｍＬに調製した。次に、プラスミド／ＦｕＧｅｎｅ ＨＤ混合物を８ｍＬの細胞に添加し、穏やかに混合した。２ｍＬの新しい混合液を６ウェルプレート中の４ウェルに添加し、２ｍＬの非遺伝子移入細胞を２つのウェルに対照として添加した。このプレートを３７℃で１００％コンフルエントまで温置した。２５００細胞／ｍＬの希釈で細胞トリプシン処理後に抗生物質選択［８００μｇ／ｍＬ Ｇ４１８（ジェネティシン、Ｇｉｂｃｏ、ｃａｔ ＃１０１３１－０３５）］を行った。１ｍＬの細胞懸濁液を１０ｃｍ培養皿中の２０ｍＬの選択培地に添加し（全部で２５００個の細胞）、並行して、４ｍＬの希釈細胞懸濁液を１０ｃｍ培養皿中の２０ｍＬの選択培地に添加した（全部で１００００個の細胞）。細胞の残りをＴ１５０フラスコ中で培養した。さらに、陰性対照としてＨＥＫ２９３細胞をＴ７５フラスコにおいて選択培地中で培養した。最後に、単クローンを１０ｃｍ培養皿からピックアップし、遺伝子発現分析及びＨＴＲＦ ｃＡＭＰアッセイのために十分な細胞となるまで培養した。クローン２は、最大ＧＬＰ１Ｒ－依存性ｃＡＭＰ反応を示し、ＧｌｏＳｅｎｓｏｒ安定細胞株の作製のために増殖させた。
ＨＥＫ２９３－ＳＮＡＰ－ｈＧＬＰ１Ｒ－ＧｌｏＳｅｎｓｏｒ安定細胞株の作製
１７ｍＬのＤＭＥＭ完全増殖培地（Ｇｉｂｃｏ、ｃａｔ ＃１１９６５－０９２）＋１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ、Ｇｉｂｃｏ、ｃａｔ ＃１６１４０～０７１）を含有する１０ｃｍ皿中で３百万個の細胞の密度でＳＮＡＰ－ｈＧＬＰ１Ｒを安定に過剰発現するＨＥＫ２９３細胞（上記）を播種した。翌日、細胞に対して以下のように遺伝子移入を行った。１７５８μＬ Ｏｐｔｉ－ＭＥＭ溶液中３７μｇのプラスミドＤＮＡを添加することにより、０．０２０μｇ／μＬ ｐＧｌｏＳｅｎｓｏｒ（商標）－２２Ｆ ｃＡＭＰプラスミド（Ｐｒｏｍｅｇａ、ｃａｔ ＃Ｅ２３０１；ＧｅｎＢａｎｋ（登録商標）受入番号はＧＵ１７４４３４）としてＤＮＡ複合体を調製した。次に、慎重に混合することにより、１１２μＬのＦｕＧＥＮＥ（登録商標）ＨＤ試薬をそれに添加した。ＲＴで５～１０分温置した後、８５０μＬの複合体／ウェルを細胞に添加し、十分に撹拌した。加湿して３７℃、５％ＣＯ２で２４ｈ温置後、培地を除去し、細胞をＰＢＳですすいだ。次に、選択培地［６００μｇ／ｍＬ Ｇ４１８及び６００μｇ／ｍＬハイグロマイシンＢ（Ｇｉｂｃｏ、ｃａｔ ＃１０６８７０１０）］を添加した。死細胞が観察されなくなるまで、培地を週２回交換した。細胞クローンが見られるようになったら、１０μＬの０．０５％トリプシン－ＥＤＴＡ溶液の添加後、ピペットで出し入れすることによって単細胞を単離した。次に、本明細書に記載のＧｌｏＳｅｎｓｏｒ発光アッセイにおいてｃＡＭＰアゴニスト反応について試験するために十分な細胞が利用可能になるまで、これらの単細胞由来のクローンを選択培地（６００μｇ／ｍＬ Ｇ４１８＋６００μｇ／ｍＬハイグロマイシンＢ）が入った６ウェルプレート中で培養した。ヒトＧＬＰ１Ｒ ｃＡＭＰアゴニストアッセイに対して、所望の反応を生じさせたＨＥＫ２９３－ＳＮＡＰ－ｈＧＬＰ１Ｒ安定細胞クローンを使用した。これらのデータは、試験した化合物の相対的な能力の指標である。
Figure 2024514352000037
カニクイザルＧＬＰ１Ｒ ｃＡＭＰアゴニストアッセイ
ＧＰＣＲのリガンド活性化後のｃＡＭＰの細胞内濃度の変化を測定する、ＨＴＲＦ ｃＡＭＰアッセイ（ＣｉｓＢｉｏ、ｃａｔ ＃６２ＡＭ４ＰＥＣ）を使用して、記載された化合物のアゴニスト活性をさらに試験した。このアッセイは、Ｅｕ３＋クリプテート（ドナーフルオロフォア）及びｄ２にカップリングされたｃＡＭＰ（アクセプターフルオロフォア）で標識される特異的な抗ｃＡＭＰモノクローナル抗体を含む競合方式に基づく。これにより、細胞においてＧタンパク質共役型受容体上で作用する化合物の直接的な特徴評価が可能になる。細胞により産生されるネイティブｃＡＭＰは、抗ｃＡＭＰ抗体－Ｅｕ３＋クリプテートへの結合に対してｄ２－標識ｃＡＭＰと競合する。ＤＭＥＰ完全培地（Ｇｉｂｃｏ、ｃａｔ ＃１１９６５－０９２、１０％加熱不活性化ＦＢＳ、０．５ｍｇ／ｍｌジェネティシン；Ｇｉｂｃｏ Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、ｃａｔ ＃１０１３１０２７）中５０００細胞／ウェルで、白色３８４ウェルポリ－Ｄ－リジンコーティングプレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ Ｂｉｏ Ｏｎｅ、ｃａｔ ＃７８１９４５）においてカニクイザルＧＬＰ１受容体（ｃｙｎｏＧＬＰ１Ｒ）を安定して過剰発現するＨＥＫ２９３－ｃｙｎｏＧＬＰ１Ｒ Ｆ６細胞を播種し、加湿して３７℃、５％ＣＯ２で一晩温置した。翌日、アッセイを行った。刺激緩衝液［１Ｘ ＨＢＳＳ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、ｃａｔ ＃１４０６５－０５６）、２０ｍＭ ＨＥＰＥＳ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、ｃａｔ ＃１５６３０）、０．１％ＢＳＡ（Ｓｉｇｍａ、ｃａｔ ＃Ａ０２８１）及び０．５ｍＭ ＩＢＭＸ］中でペプチドを希釈した。３つ組用量反応曲線を作成するために、３倍連続希釈化合物（２倍濃度）をＤＭＳＯ中で希釈した。ＥＬｘ４０５ Ｓｅｌｅｃｔ、ＢｉｏＴｅｋプレート洗浄機で細胞を洗浄し、１０μＬ／ウェルのアッセイ緩衝液［１Ｘ ＨＢＳＳ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、ｃａｔ ＃１４０６５－０５６）、２０ｍＭ ＨＥＰＥＳ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、ｃａｔ ＃１５６３０）］を残した。プレートを短時間遠心分離し、１０μＬの２倍希釈ペプチドをウェルごとに添加した。再びプレートを短時間遠心分離し、ＲＴで３０分間温置した。キットとともに提供された溶解緩衝液中で２０ｘ ｄ２及びＥｕ３＋クリプテートを希釈した。ペプチドとの３０分間の温置後、１０μＬの希釈されたｄ２をウェルごとに添加し、続いて１０μＬの希釈されたＥｕ３＋クリプテートを添加した。黒色の蓋でプレートを被覆し、ＲＴで１ｈ、温置し、続いて短時間遠心分離した。次いで、２つの異なる波長（６６５ｎｍ及び６２０ｎｍ）の蛍光放射セットを用いてＥｎｖｉｓｉｏｎ ２１０４マルチラベルリーダー（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）でＨＴＲＦシグナルを測定した。ソフトウェアパッケージＤＡＶＩＤのＨｅｌｉｏｓモジュールにおいて、ＥＣ５０決定のためのカーブフィッティングを行った。４つの標準パラメータ：ｓｔｄ＿ｃｒｖ＿ａｃ５０（標準曲線 ＡＣ５０）、ｓｔｄ＿ｃｒｖ＿ａ０（標準曲線 Ａ０）、ｓｔｄ＿ｃｒｖ＿ａｉｎｆ（標準曲線 Ａｉｎｆ）、ｓｔｄ＿ｃｒｖ＿ｈｉｌｌ（標準曲線 Ｈｉｌｌスロープ）を得るために、標準曲線化合物が置かれたプレートのセクションにおいて４－パラメータロジスティックカーブフィッティングを行った。次に、これらの４つのパラメータ値を使用して、式：ｙ＝ｓｔｄ＿ｃｒｖ＿ａｃ５０＊［（Ｘ－ｓｔｄ＿ｃｒｖ＿ａ０）／（ｓｔｄ＿ｃｒｖ＿ａｉｎｆ－Ｘ）］＾（１／ｓｔｄ＿ｃｒｖ＿ｈｉｌｌ）を使用して各ウェルに対して標準曲線形質転換を適用した。ｙは、機能的反応であり；ｘは、化合物濃度である。全ての試験化合物に対してμＭで、このアッセイに対するＥＣ５０値に相当するＡＣ５０を得るために、変換されたデータにおいて４－パラメータロジスティックカーブフィッティングを行った。Ｅｍａｘは、ＧＬＰ１（７－３６）ＥＣ１００：［（試料Ａｍａｘ－試料Ａ０）／（ＧＬＰ１（７－３６）Ａｍａｘ－ＧＬＰ１（７－３６）Ａ０）］＊１００のパーセントとして表した。
ＨＥＫ２９３－ｃｙｎｏＧＬＰ１Ｒ安定細胞株の作製
遺伝子移入の前日に、Ｔ２５フラスコにおいて８ｍＬのＤＭＥＭ完全増殖培地＋１０％ＦＢＳ中１×１０６細胞の密度でＨＥＫ２９３細胞を播種した。翌日、細胞に対して以下のように遺伝子移入を行った。４１４μＬのＯｐｔｉＭＥＭ溶液中のｃｙｎｏ ＧＬＰ１Ｒ ｃＤＮＡ［コドン最適化、ＧｅｎｅＡｒｔ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）；ＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ＿００１２７４５９２］をコードする８．８μｇのｐｃＤＮＡ３．１（＋）Ｎｅｏプラスミドを添加することにより、０．０２０μｇ／μＬとしてＤＮＡ複合体を調製した。次に、慎重に混合することにより、２６μＬのＦｕＧＥＮＥ（登録商標）ＨＤ試薬をそれに添加した。ＲＴで５～１０分間温置した後、４００μＬ複合体／ウェルを細胞に添加し、十分に混合した。加湿して３７℃、５％ＣＯ２で４８ｈ温置した後、細胞を０．５ｍｇ／ｍＬジェネティシンの存在下で１５ｃｍ皿に移した。ｃｙｎｏ ＧＬＰ１Ｒ ｃＡＭＰ細胞アゴニストアッセイにおけるさらなる分析のために、機能ｃＡＭＰアッセイ（クローンＦ６）において最大活性を示したＨＥＫ２９３Ｔ－ｃｙｎｏＧＬＰ１Ｒ安定細胞クローンを選択した。
これらのデータは、試験化合物の相対的な効力を示す。
Figure 2024514352000038
マウスＧＬＰ１Ｒ ｃＡＭＰアゴニストアッセイ
マウスＧＬＰ１受容体（ｍＧＬＰ１Ｒ）を安定して過剰発現するＨＥＫ２９３－ｍＧＬＰ１Ｒ ＣＲＥ－Ｌｕｃ（クローンＣ３）細胞を使用したことを除いて（下記の作製）カニクイザルＧＬＰ１Ｒ ｃＡＭＰアッセイ（上記を参照されたい）と同様の手順を使用して、化合物のｃＡＭＰアゴニスト活性を試験した。
ＨＥＫ２９３－ｍＧＬＰ１Ｒ ＣＲＥ－Ｌｕｃ安定細胞株の作製
１０ｃｍ皿において１７ｍＬのＤＭＥＭ完全増殖培地＋１０％ＦＢＳ中３×１０６細胞の密度でＨＥＫ２９３Ｔ ＣＲＥ－Ｌｕｃ細胞を播種した。翌日、細胞に対して以下のように遺伝子移入を行った。１７５８μＬ Ｏｐｔｉ－ＭＥＭ溶液中のマウスＧＬＰ１Ｒ ｃＤＮＡ（ＧｅｎｅＣｏｐｏｅｉａ、ｃａｔ ＃ＥＸ－Ｍｍ２３９０１－Ｍ６７；ＮＣＢＩ参照配列：ＮＭ＿０２１３３２．２）をコードする３７μｇのプラスミドＤＮＡを添加することにより、０．０２０μｇ／μＬとしてＤＮＡ複合体を調製した。次に、慎重に混合することによって１１２μＬのＦｕＧＥＮＥ（登録商標）ＨＤ試薬をそれに添加した。ＲＴで５～１０分間温置した後、８５０μＬのＤＮＡ複合体／ウェルを細胞に添加し、十分に混合した。加湿して３７℃、５％ＣＯ２で２４ｈ温置後、培地を除去し；細胞をＰＢＳですすぎ、分けた。次に、選択培地［２μｇ／ｍＬピューロマイシン（Ｃｏｒｎｉｎｇ、ｃａｔ ＃６１－３８５－ＲＡ）及び１００μｇ／ｍＬハイグロマイシン（Ｇｉｂｃｏ、ｃａｔ ＃１０６８７０１０）］を添加した。死細胞が観察されなくなるまで培地を週３回交換した。細胞クローンが見えるようになったら、単細胞を単離した。マウスＧＬＰ１Ｒ ｃＡＭＰ細胞アゴニストアッセイのために、最大遺伝子発現を示したＨＥＫ２９３Ｔ－ｍＧＬＰ１Ｒ－ＣＲＥ－Ｌｕｃ安定細胞クローン（クローンＣ３）を使用した。
これらのデータは、試験化合物の相対効力を示す。
Figure 2024514352000039
ヒトＧＬＰ１Ｒβ－アレスチン動員アッセイ
ＰａｔｈＨｕｎｔｅｒ（登録商標）β－アレスチンアッセイ（ＤｉｓｃｏｖｅｒＸ）を使用してアゴニストがβ－アレスチンを動員した程度を測定した。このアッセイは、酵素補完アプローチを使用して受容体へのβ－アレスチンの結合を測定する。β－ガラクトシダーゼ酵素（Ｐｒｏｌｉｎｋ及び酵素アクセプター又は「ＥＡ」と呼ばれる）の２つの不活性部分にタグ付加して、ヒトＧＬＰ１Ｒ（ｈＧＬＰ１Ｒ）がＰｒｏｌｉｎｋ部分を含有し、β－アレスチンがＥＡ部分を含有するようにする。β－アレスチンが受容体に動員される場合、酵素は活性になり、化学発光基質（ＰａｔｈＨｕｎｔｅｒ（登録商標）Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ｋｉｔ、ＤｉｓｃｏｖｅｒＸ ｃａｔ ＃９３－０００１）の存在下で発光を生じるようになる。発光は適切な検出器上で測定され得る。プレーティング試薬２（ＤｉｓｃｏｖｅｒＸ，ｃａｔ ＃９３－０５６３Ｒ２Ａ）中で白色３８４ウェルポリ－Ｄ－リジンコーティングプレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ Ｂｉｏ Ｏｎｅ、ｃａｔ ＃７８１９４５）において２０μＬ／ウェルで、Ｐｒｏｌｉｎｋタグを有するｈＧＬＰ１Ｒ及びＥＡタグを有するβ－アレスチンを安定して過剰発現するＣＨＯ－ｈＧＬＰ１Ｒ－β－アレスチン細胞を播種し、加湿して５％ＣＯ２、３７℃で一晩温置した。翌日、アゴニストを最終必要濃度の５倍で調製した。３つ組用量反応曲線を作成するために、アッセイ緩衝液（ＨＢＳＳ、１０ｍＭ Ｈｅｐｅｓ及び０．１％ＢＳＡ）中で化合物を３倍で連続希釈し、次いで化合物に依存して、２５μＬの最終体積及び３μＭ以下で始まる最終最大濃度になるように細胞アッセイプレートに添加した。ＧＬＰ１（７－３６）ペプチド（Ｂａｃｈｅｍ、ｃａｔ ＃Ｈ－６７９５）を１μＭの最終濃度で含有するＥＣ１００対照ウェル及び化合物不含のＥＣ０対照ウェルを同じプレートで、試験化合物と同じアッセイ緩衝液を使用して、同時に試験した。化合物を細胞に添加した後、プレートを３７℃、５％ＣＯ２で加湿して２ｈ温置した。次いで、検出試薬を調製し（製造者の推奨に従い、１９部の細胞アッセイ緩衝液、５部の基質試薬１及び１部の基質試薬２、ＤｉｓｃｏｖｅｒＸ ｃａｔ ＃９３－０００１）、１ウェルあたり１２μＬを細胞アッセイプレートに添加した。ＲＴで暗所においてさらなる時間、プレートを温置した。次に、０．１秒／ウェルで３８４ウェル発光開口部があるＵｌｔｒａ－Ｓｅｎｓｉｔｉｖｅプロトコール設定「３８４－ウェルＵＳ発光検出器」を使用して、「ＴＲＦ Ｌｉｇｈｔ Ｕｎｉｔ、３３７ｎｍ」（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）付きのＥｎｖｉｓｉｏｎ ２１０４マルチラベルリーダーにより、発光を測定した。Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ Ｅｘｃｅｌを使用して、β－アレスチン動員を計算し、ＧＬＰ１（７－３６）ＥＣ１００対照ウェルのパーセントとして表した：［（試料シグナル－平均ＥＣ０シグナル）／（ＧＬＰ１（７－３６）シグナルの平均ＥＣ１００－平均ＥＣ０シグナル）］＊１００。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍを使用して、ＥＣ５０決定のためのカーブフィッティングを行った。４－パラメータロジスティックモデル、Ｈｉｌｌスロープを使用した：Ｙ＝Ｂｏｔｔｏｍ＋（Ｔｏｐ－Ｂｏｔｔｏｍ）／（１＋１０＾（（Ｌｏｇ ＥＣ５０～Ｘ）＊Ｈｉｌｌスロープ））（式中、Ｙは、機能的反応であり；Ｘは、化合物濃度であり；ｂｏｔｔｏｍは、Ａ０又は最小値（０用量で）であり；ｔｏｐは、Ａｉｎｆ又は最大値（無限用量で）であり；ＥＣ５０は、屈曲点である（即ちシグモイド状の曲線におけるＡ０とＡｉｎｆとの間の半分である点）。ＥＣ５０値をμＭで計算した。Ｅｍａｘは、ＧＬＰ１（７－３６）に対するフィッティングされた曲線から導かれる、濃度範囲内で検出される最大活性である。
ＣＨＯ－ｈＧＬＰ１Ｒ－β－アレスチン細胞株の作製
２２ｍＬの完全培地（ＡｓｓａｙＣｏｍｐｌｅｔｅ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ ｋｉｔ１０７、ＤｉｓｃｏｖｅｒＸ、ｃａｔ ＃９２－３１０７Ｇ）中２×１０６細胞／Ｔ７５ｃｍ２フラスコの密度でＰａｔｈＨｕｎｔｅｒ（登録商標）ＣＨＯ－Ｋ１－ＥＡ親細胞（ＤｉｓｃｏｖｅｒＸ、ｃａｔ ＃９３－０１６４）を播種した。翌日、２２ｍＬの抗生物質なしの新鮮培地で培地交換を行い、細胞に対して以下のように遺伝子移入を行った。Ｏｐｔｉ－ＭＥＭ培地（３：１の試薬：ＤＮＡ比）中でプラスミド／Ｆｕｇｅｎｅ（登録商標）ＨＤ Ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ ｍｉｘを調製した。２５μｇ（３４μＬ）のｐＣＭＶ－ＰＫ１－ＧＬＰ１Ｒプラスミド［（ＤｉｓｃｏｖｅｒＸ ｐＣＭＶ ＰＫ ｖｅｃｔｏｒ ｂｕｎｄｌｅ、ｃａｔ ＃９３－０４９１、全長ヒトＧＬＰ１Ｒ－ＮＣＢＩ参照配列：ＮＭ＿００２０６２をコードする挿入された配列があるもの、ＧｅｎｅＡｒｔ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）により合成］を１１２９μＬのＯｐｔｉ－ＭＥＭに添加し、総体積１１６３μＬとした。次に、慎重に混合することによって７４μＬのＦｕＧＥＮＥ（登録商標）ＨＤ試薬を添加した。ＲＴで５～１０分間温置した後、１１２５μＬの複合溶液を細胞に添加し、３７℃で４８ｈ温置した。続いて、培地を除去し、３００μｇ／ｍＬハイグロマイシン（Ｇｉｂｃｏ、ｃａｔ ＃１０６８７０１０）及び５００μｇ／ｍＬジェネティシン（Ｇｉｂｃｏ、ｃａｔ ＃１０１３１０３５）を含有する選択培地を添加した。死細胞が観察されなくなるまで、培地を２～３日ごとに交換した。細胞を剥離し、３０００００細胞／ｍＬで再懸濁し、４０μｍストレイナーで濾した。次に、１００μＬ培地中で黒色の透明底ポリ－Ｄ－リジンコーティング９６ウェルプレートにおいてＡｒｉａ Ｇ機器を使用して細胞をＦＡＣＳで選別して単細胞にした。最大８０μＬを除去することによって２～３日ごとに培地を交換し、選択抗生物質を含有する新鮮培地を添加した。生き残った単クローンを増殖させ、試験した。最適シグナル及び曲線プロファイルに基づき、β－アレスチンアッセイのために単クローン１を選択した。
Figure 2024514352000040
β－アレスチンアッセイにおいて評価されたデータは、本明細書に記載の化合物の胃腸忍容性（吐き気／嘔吐の軽減）と反比例して相関し得、即ちβ－アレスチンアッセイにおいて活性が低い化合物ほど、忍容性が高くなり得る。［例えば、Ｊｏｎｅｓ ｅｔ．ａｌ．Ｎａｔ．Ｃｏｍｍｕｎ．２０１８，９，１６０２］。
ヒトＧＬＰ１Ｒ ＤＥＲＥＴ内部移行及び再利用アッセイ
アゴニストが内部移行するか又はヒトＧＬＰ１Ｒの再利用を可能にする程度は、最適化されたバージョンのＲｅａｌＴｉｍｅ ＦＲＥＴに基づく「ＤＥＲＥＴ」（解離増強共鳴エネルギー移動）アッセイに基づいて決定した。この技術は、ＳＮＡＰ－Ｌｕｍｉ－テルビウム（ドナーフルオロフォア、Ｃｉｓｂｉｏ、ｃａｔ ＃ＳＳＮＰＴＢＤ）でのＳＮＡＰタグ付加ＧＰＣＲの標識化に依存する。過剰なフルオレセイン（アクセプターフルオロフォア）の存在下で関心対象のＧＰＣＲを過剰発現する細胞とともに化合物を温置する。ＧＰＣＲが細胞表面上にあるとき、ドナーシグナルはアクセプターにより不活性化され、ドナー／アクセプター比は低くなる。ＧＰＣＲが内部移行する場合、ドナーシグナルはもはや不活性化されず、アクセプターは、もはや励起されないため、ドナー／アクセプター比は、上昇する。過剰なアンタゴニストの添加により、さらなる受容体内部移行が阻止され、受容体が再循環して膜に戻ることが可能になり、ドナー／アクセプター比のその後の低下につながる。
白色３８４ウェルポリ－Ｄ－リジンコーティングプレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ Ｂｉｏ Ｏｎｅ，ｃａｔ ＃７８１９４５）において、通常のＤＭＥＭ増殖培地（Ｇｉｂｃｏ、ｃａｔ ＃１１９６５－０９２、１０％熱不活性化ＦＢＳ、１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、１ｘペニシリン／ストレプトマイシン、０．５ｍｇ／ｍＬジェネティシン（Ｇｉｂｃｏ、ｃａｔ ＃１０１３１－０３５）及び０．２５ｍｇ／ｍＬハイグロマイシンＢ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、ｃａｔ ＃１０６８７０１０）中でＨＥＫ２９３－ＳＮＡＰ－ｈＧＬＰ１Ｒ－ＧｌｏＳｅｎｓｏｒ細胞（ＳＮＡＰタグ付加ｈＧＬＰ１Ｒを安定して過剰発現）を一晩播種した。アッセイ日に、細胞培地を除去し、Ｏｐｔｉ－ＭＥＭ溶液中で１００ｎＭ ＳＮＡＰ－Ｌｕｍｉ－Ｔｂ試薬を添加した。細胞を３７℃で１ｈ温置した。アッセイ緩衝液［１Ｘ ＨＢＳＳ（１０Ｘ Ｇｉｂｃｏ、ｃａｔ ＃１４０６５－０５６）、２０ｍＭ Ｈｅｐｅｓ（Ｇｉｂｃｏ、ｃａｔ ＃１５６３０－０８０）、１ｍＭ ＣａＣｌ２（Ｆｌｕｋａ、ｃａｔ ＃２１１１４－１Ｌ）、１ｍＭ ＭｇＣｌ２（Ａｍｂｉｏｎ、ｃａｔ ＃ＡＭ９５３０Ｇ）ｐＨ７．４］中でプレート洗浄機を使用して細胞を洗浄し、０．１％ＢＳＡ入りの２０μＬ緩衝液を各ウェルに添加した。３７℃で約１５ｍｉｎ、細胞を静置して平衡化した後、１０μｌのフルオレセイン（ナトリウム塩、Ｓｉｇｍａ、ｃａｔ ＃Ｆ６３７７、緩衝液中で希釈）を２５μＭ最終濃度で添加した。３つ組の用量反応曲線を作成するために、化合物をアッセイ緩衝液中で３倍連続希釈し、次いで４０μＬの最終体積及び３μＭ以下で始まる最終最大濃度（場合による）になるように細胞アッセイプレートに添加した。ＥＣ１００を確立するために、試験化合物と同じプレート及びアッセイ緩衝液中、１μＭの最終最大濃度のＧＬＰ１（７－３６）ペプチド（Ｂａｃｈｅｍ、ｃａｔ ＃Ｈ－６７９５）対照曲線が含まれた。緩衝液のみが入ったＥＣ０ウェルも含まれた。ＬＡＮＣＥ／ＤＥＬＦＩＡ Ｄ４００シングルミラー、励起フィルターＸ３２０及び発光フィルターＭ６１５＿２０３（ドナー発光）及びＭ５１５（アクセプター発光）とともにＰｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ Ｅｎｖｉｓｉｏｎを使用して、プレートＦＲＥＴ蛍光を直ちに測定し、次いで３０分ごとに測定した。ピーク内部移行に１２０分で到達し、アゴニスト結合をさらに阻止するために、その時点で全てのウェルに１０μＭ（最終）エキセンディン９－３９（Ｂａｃｈｅｍ、ｃａｔ ＃Ｈ８７４０、ＧＬＰ１Ｒ アンタゴニスト）を添加した。受容体がどの程度うまく再循環されて膜に戻るかを確立するために、さらに１８０分間にわたり測定を継続した。読み取りと読み取りとの間、プレートを３７℃に維持した。データは、Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ Ｅｘｃｅｌを使用して、ドナー／アクセプター発光の比として表し、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍにおいてプロットした。内部移行に対してＥＣ５０及びＥｍａｘを決定するために、データを計算し、Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ Ｅｘｃｅｌを使用して、ＧＬＰ１（７－３６）ＥＣ１００対照ウェルのパーセントとして表した：［（試料シグナル－平均ＥＣ０シグナル）／（ＧＬＰ１（７－３６）シグナルの平均ＥＣ１００－平均ＥＣ０シグナル）］＊１００。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍを使用して、ＥＣ５０決定のためのカーブフィッティングを行った。４－パラメータロジスティックモデル、Ｈｉｌｌスロープを使用した：
Ｙ＝Ｂｏｔｔｏｍ＋（Ｔｏｐ－Ｂｏｔｔｏｍ）／（１＋１０＾（（Ｌｏｇ ＥＣ５０－Ｘ）＊Ｈｉｌｌスロープ））
（式中、Ｙは、機能的反応であり；Ｘは、化合物濃度であり；ｂｏｔｔｏｍは、Ａ０又は最小値（０用量で）であり；ｔｏｐは、Ａｉｎｆ又は最大値（無限用量で）であり；ＥＣ５０は、屈曲点である（即ちシグモイド状の曲線のＡ０とＡｉｎｆとの間の半分である点）。ＥＣ５０値をμＭで計算した。Ｅｍａｘは、ＧＬＰ１（７－３６）に対するフィッティングされた曲線から導かれる、濃度範囲内で検出された最大活性である。受容体再利用パラメータを決定するために、Ｅｘ９－３９添加後の各時点で相対Ｅｍａｘを計算し、４－パラメータシグモイドフィットを使用して経時的にカーブフィッティングを行った。このモデルを使用して、本発明者らは、受容体が再循環して膜に戻るＴ１／２速度を決定した。本発明者らは、最初に内部移行した量の割合として再循環された受容体の最大パーセンテージも決定した。
Figure 2024514352000041
Figure 2024514352000042
内部移行速度が遅く、受容体再循環速度が速いほど、多くの受容体が膜で保持される。表５は、受容体内部移行データを示し、表６は、受容体再利用データを示す。後者において、Ｔ１／２値がより低いことは、受容体の細胞表面への戻りがより迅速であり、化合物と相互作用するために利用可能な受容体の数が多くなることを示す［例えば、Ｊｏｎｅｓ ｅｔ．ａｌ．Ｎａｔ．Ｃｏｍｍｕｎ．２０１８，９，１６０２を参照されたい］。これは、記載の化合物の忍容性と反比例して相関し得、即ち効力が低いほど、忍容性が高い。
薬物動態実験
マウスＰＫ：
全てのインビボ実験に対して、ＰＢＳ中の保存溶液において本明細書で開示される化合物を調製し、化合物の濃度を１ｍｇ／ｍＬとした。次に、これらの保存溶液を生理食塩水で希釈して、実験において開示される濃度を得た。
全てのインビボ実験のために、１．３４ｍｇ／ｍＬのセマグルチドの保存溶液であるＯＺＥＭＰＩＣと呼ばれる臨床製剤としてセマグルチドを購入した。保存溶液は、不活性物質リン酸二ナトリウム二水和物、１．４２ｍｇ；プロピレングリコール、１４．０ｍｇ；フェノール、５．５０ｍｇ；及び注射用の水を含む。ＯＺＥＭＰＩＣのｐＨはおよそ７．４である。次に、この保存溶液を生理食塩水で希釈して、本明細書で開示される濃度を得た。
全ての化合物について：薬物動態パラメータを得るために、５ｍＬ／ｋｇの投与体積を使用して６週齢から高脂肪餌（６０％のカロリーが脂肪由来）を与えられた３匹のＣ５７ＢＬ／６マウス（２０～３０週齢）に０．２４ｍｇ／ｋｇの生理食塩水中の化合物を皮下投与し（ｓ．ｃ．）、この場合、化合物の濃度は４８μｇ／ｍＬであった。化合物投与後、第０日の投与から０．５、１、３及び６ｈ後並びに次いで投与から２４、４８、７２、９６、１６８、２４０、３３６及び４０８ｈ後（即ち第１、２、３、４、７、１０、１４及び１７日）に、尾部の切れ目から血液試料をＥＤＴＡコーティングチューブ中に回収した。遠心分離（１３，０００ｒｐｍ、４℃、５分間）により血漿部分を得て；マウス血漿の３０μＬアリコートをバイオ分析のために９６ウェルプレートに移した。ブランクマウス血漿（未処置マウスの血漿）中で較正標準物質及びＱＣ試料を調製した。ブランクマウス血漿でＰＫ試料を２倍希釈し（１０μＬ試料＋１０μＬブランクマウス血漿）、内部標準を含有する１５０μＬメタノールの添加を含むタンパク質沈殿手順を使用して抽出した。試料をボルテックス処理し、４０００ｒｐｍで１５分間、４℃において遠心分離した。上清の１２５μＬアリコートを９６ウェルプレートに移し、１００μＬの水を各ウェルに添加し、ボルテックス処理した。試料を分析し、以下で概説する条件を使用してＬＣ－ＭＳ／ＭＳによって定量した。
ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ法
質量分光計：Ｔｈｅｒｍｏ ＱＥｘａｃｔｉｖｅ ＨＦＸ
液体クロマトグラフ：Ｔｈｅｒｍｏ Ｖａｎｑｕｉｓｈ
オートサンプラー（ＡＬＳ）：Ｔｈｅｒｍｏ Ｖａｎｑｕｉｓｈ
ＨＰＬＣ条件
ＬＣカラム：Ｗａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣ Ｐｒｏｔｅｉｎ ＢＥＨ Ｃ ４、５０×２．１ｍｍ、１．７μｍ
溶媒Ａ：１００：０．１（ｖ：ｖ）水：ギ酸
溶媒Ｂ：１００：０．１（ｖ：ｖ）アセトニトリル：ギ酸
注入体積：１０μＬ
カラムオーブン温度：４０℃
ＡＬＳ温度：４℃。
Figure 2024514352000043
ＭＳ条件
イオン源：ＨＥＳＩ
極性：正極
Ａｕｘガスヒーター温度：３８０℃
シースガス流速：６０
Ａｕｘガス流速：１４
スイープガス流速：３
イオンスプレー電圧：３５００Ｖ
キャピラリー温度：３２０℃
Figure 2024514352000044
カニクイザルＰＫ：
薬物動態パラメータを得るために、肥満雄カニクイザルに０．５ｍＬ／ｋｇの投与体積を使用して生理食塩水中３０、６０又は９０μｇ／ｍＬの処方濃度で化合物の単回ｓ．ｃ．用量を与えた。朝、食餌前にサルに投与したが、絶食させなかった。定められた間隔で（投与前、投与後０．２５、０．５、１、３、７、２４、４８、９６、１６８、２４０、３３６及び５０４ｈ）伏在静脈を介して動物から採血した。Ｋ２ＥＤＴＡを含有するバキュテイナーチューブに血液を採取し、遠心分離まで氷上で保管した。４℃において１０００～２０００ＲＣＦ（一般的には１３００ＲＣＦ）で１０分間、遠心分離によって血漿部分を得た。サル血漿の５０μＬアリコートをバイオ分析のために９６ウェルプレートに移した。較正標準及びＱＣ試料をブランク肥満カニクイザル血漿（未処理肥満サルの血漿）中で調製した。ブランク肥満サル血漿でＰＫ試料を２倍希釈し（１０μＬ試料＋１０μＬブランク肥満サル血漿）、内部標準を含有する１５０μＬメタノールの添加を含むタンパク質沈殿手順を使用して抽出した。試料をボルテックス処理し、４℃において４０００ｒｐｍで１５分間遠心分離した。上清の１２５μＬアリコートを９６ウェルプレートに移し、１００μＬの水を各ウェルに添加し、ボルテックス処理した。試料を分析し、概説された条件を使用してＬＣ－ＭＳ／ＭＳにより定量した。
Figure 2024514352000045
表８及び９で評価されたデータは、セマグルチドと比較した場合の本化合物の代謝分解に対する優れたインビボ安定性についての証拠を提供する。
有効性試験：急性的な食餌摂取試験：
食餌誘発肥満（ＤＩＯ）雄マウス（Ｃ５７ＢＬ／６マウスに６週齢から高脂肪餌を与えた（６０％カロリーが脂肪由来））において、処方濃度が生理食塩水中２４、３８又は４８μｇ／ｍＬ（５ｍＬ／ｋｇの投与体積）の各試験化合物（例えば、化合物１）の単回ＳＣ皮下（ｓ．ｃ．）投与後の食餌摂取（ＦＩ）を評価した。この試験では雄２４～３０週齢を使用した。承認済みのＩＡＣＵＣプロトコール下において、通常の光周期（６：００ａｍ～６：００ｐｍに点灯し、他の時間は消灯）の部屋で１ケージあたり１匹ずつ動物を収容した。平均食餌摂取（ＦＩ）（試験開始前に３日間隔で測定した２４ｈ食餌摂取）をベースラインとして使用した。試験開始時、食餌重量を記録し、試験化合物を動物に皮下投与した。試験化合物投与後２４ｈで、食餌摂取重量を測定した。指定された投与量での化合物の単回用量の皮下投与後、肥満マウスにおける２４時間後の食餌摂取（ＦＩ）を評価し；得られたデータを表１０で示す。比較として、セマグルチドの効果を評価した。
Figure 2024514352000046
有効性試験
食餌誘導性肥満（ＤＩＯ）雄マウス（Ｃ５７ＢＬ／６マウスに６週齢から高脂肪餌（６０％カロリーが脂肪由来）を与えた）において、化合物（例えば、化合物１）処置後の有効性（食餌摂取及び体重減少）を評価した。この試験で雄２４～３０週齢を使用した（ｎ＝７／群）。承認済みのＩＡＣＵＣプロトコール下において、通常の光周期の部屋で１ケージあたり１匹ずつ動物を収容した。体重（ＢＷ）及び食餌摂取（ＦＩ）（試験開始前に３日間にわたり測定した２４ｈ食餌摂取）の平均に基づいて、マウスをビヒクル（生理食塩水）又は処置群に割り当てた。試験開始時、体重及び食餌重量を記録し、ビヒクル又は化合物（５ｍｌ／ｋｇの投与体積を使用して、生理食塩水中１２、２４、２９．６、３８又は４８μｇ／ｍｌ）を動物に皮下投与した。化合物又はビヒクルをＱＤで与えるか、又は指示された場合にはＱ３Ｄ（３日ごと）で与えた。セマグルチドをＱＤで投与した。体重及び食餌摂取を毎日測定した。（ｉ）公開データ（セマグルチド）とともに別個の試験及び一続きの試験で評価された最大効果及び（ｉｉ）等モル濃度に基づいて、化合物１及びセマグルチドの用量を選択した。立体異性体（化合物２及び３）の用量は、別個の試験で評価した化合物１の最大有効性に基づいて選択した。
化合物の皮下投与から１８、２４及び３０日後の肥満マウスの体重減少を表１１で示す。投与量に依存して、試験化合物及びビヒクルをＱＤ又はＱ３Ｄで投与し；セマグルチドをＱＤで投与し；化合物は、全て生理食塩水中で溶解させた。
Figure 2024514352000047
カニクイザル有効性試験：
ＢＷ及びＦＩに対するその効果を評価することにより、新規長時間作用型ＧＬＰ１Ｒアゴニスト（化合物１）の薬物動態（ＰＫ）／薬力学（ＰＤ）関係を肥満カニクイザルにおいて試験した。有効性は、ＦＩ及びＢＷの低下として定義した。忍容性は、嘔吐の軽減及び／又は嘔吐がないこととして評価し、報酬としての果実及び野菜及びピーナツの選択で関心を保持させた。
少なくとも１週間にわたりサルを試験用の餌に順化させた（５ＴＵＲ餌、１ｇペレット（ＴｅｓｔＤｉｅｔ Ｃａｔ ＃１８１５６３９－３１０））。順化期間後、ベースライン食餌摂取（ＦＩ）を確立するために、投与の初日前に１週間、食餌摂取を記録した。投与の初日前に、７日間以内に得られた２つの独立した測定の平均としてベースライン体重を計算した。
１０匹の雄肥満カニクイザルにビヒクル（ｎ＝４）又は化合物（ｎ＝６）（０．５ｍＬ／ｋｇの投与体積を使用して０．０３ｍｇ／ｋｇ、ゆえに０．０６ｍｇ／ｍＬ濃度；）の何れかの皮下（ｓ．ｃ．）注射を行った。試験化合物を指定された濃度において生理食塩水中で溶解させた。朝、食餌を与える前にサルに投与したが、絶食させなかった。食餌摂取を試験中毎日測定した。サルに予め秤量した量の餌、２００ｇ／日を与え；それらの割り当ての半分を朝に与え、残りを午後に与えた。毎日のＦＣを決定するために、翌朝、食べ残した餌の重量を測定した。体重（ＢＷ）を週２回測定した。
Figure 2024514352000048
Figure 2024514352000049
化合物１は、肥満サルにおいて食餌摂取を抑制し、体重を減少させる（表１２及び１３を参照されたい）。全てのデータは、ｎ＝７／群で平均±ＳＥＭとして表す。
忍容性評価：
驚くべきことに、本明細書に記載の化合物は、肥満サルに投与されたとき、はるかに忍容性が高かったことが分かった（対照薬としてのセマグルチドに対して評価）。化合物１、２、５又は９の投与後、嘔吐の何らかの徴候を示したサルはいなかった一方、化合物３では１／６のサルが嘔吐を示し、セマグルチドを投与された全てのサルが嘔吐した（表１４を参照されたい）。
Figure 2024514352000050
化学セクション
Ａ：分析セクション
ＬＣＭＳの方法：
Figure 2024514352000051
Figure 2024514352000052
Figure 2024514352000053
Figure 2024514352000054
Figure 2024514352000055
Figure 2024514352000056
Figure 2024514352000057
Figure 2024514352000058
Figure 2024514352000059
Figure 2024514352000060
Figure 2024514352000061
Ｂ：合成セクション
中間体１：ベンジル１１－ブロモウンデカノアート
Figure 2024514352000062
ＤＣＭ（２６．５ｋｇ）中の１１－ブロモウンデカン酸（４．６０ｋｇ、１７．３ｍｏｌ、１．１当量）の混合物に０℃でＤＭＡＰ（９８ｇ、０．８ｍｏｌ、０．０５当量）とともにＥＤＣＩ（３．８ｋｇ、２０．２ｍｏｌ、１．２８当量）を分割して添加した。次に、ベンジルアルコール（１．７０ｋｇ、１５．７ｍｏｌ、１．００当量）を滴下して添加した。２０℃で４ｈ撹拌した後、水（７０．０ｋｇ）を滴下して添加した。次に、反応混合物を真空下で濃縮した。ヘプタン（２３．２ｋｇ）及び１９％ＮａＣｌ溶液（１７ｋｇ）を添加し、相分離させた。有機相を５％Ｎａ２ＣＯ３、２５．０ｋｇ；１９％ＮａＣｌ溶液、２５．０ｋｇ（ｘ２）、５．２％ＨＣｌ水溶液、２５．０ｋｇ；１９％ＮａＣｌ溶液、２５．０ｋｇ、水（５．０ｋｇ）及びブライン（５．０ｋｇ）で洗浄した。次に、有機相を５０℃において真空下で濃縮して、中間体１を得て、これをそのまま次の段階のために使用した。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ）δ ｐｐｍ １．１８－１．３６（ｍ，１０Ｈ）１．３７－１．４７（ｍ，２Ｈ）１．６４（ｑｕｉｎ，Ｊ＝７．３３Ｈｚ，２Ｈ）１．８５（ｄｔ，Ｊ＝１４．５６，７．０６Ｈｚ，２Ｈ）２．３５（ｔ，Ｊ＝７．５８Ｈｚ，２Ｈ）３．４０（ｔ，Ｊ＝６．８８Ｈｚ，２Ｈ）５．１１（ｓ，２Ｈ）７．２８－７．４５（ｍ，５Ｈ）．
中間体２：１，１１－ジベンジル１１－（ｔｅｒｔ－ブチル）ドコサン－１，１１，１１－トリカルボキシラート
Figure 2024514352000063
ＮＭＰ（３０Ｌ）中のベンジルｔｅｒｔ－ブチルマロナート（３．０ｋｇ、１２．０ｍｏｌ、１．０当量）の溶液に２０℃で１－ヨードウンデカン（３．５５ｋｇ、１２．５８ｍｏｌ、１．０５当量）及びＣｓ２ＣＯ３（１１．７６ｋｇ、３６．０９ｍｏｌ、３．０当量）を添加した。得られた混合物を２０℃で６ｈ撹拌し、次に中間体１（５．５３ｋｇ、１５．６ｍｏｌ、１．３当量）を添加した。反応混合物を８５℃に加熱し、１２ｈ撹拌した。次に、混合物を２０℃に冷却し、水（３０ｋｇ）及びヘプタン（１０ｋｇ）の混合物を添加した。３０ｍｉｎ撹拌後、有機相を分離し、ブライン（５ｋｇ）及びＭｅＯＨ（４ｋｇ）の混合物で３回洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、ろ過し、真空濃縮した。カラムクロマトグラフィーによってさらなる精製を行った：ヘプタン／ＥｔＯＡｃ＝１／０～１００／１で溶出して中間体２を得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ）δ ｐｐｍ ０．８４－０．９４（ｍ，３Ｈ）１．１２（ｍ，Ｊ＝６．６０Ｈｚ，４Ｈ）１．１９－１．３３（ｍ，２８Ｈ）１．３５（ｓ，９Ｈ）１．６６（ｑｕｉｎ，Ｊ＝７．４０Ｈｚ，２Ｈ）１．８５（ｔ，Ｊ＝８．４４Ｈｚ，４Ｈ）２．３７（ｔ，Ｊ＝７．５２Ｈｚ，２Ｈ）５．１４（ｓ，２Ｈ）５．１６（ｓ，２Ｈ）７．３０－７．４２（ｍ，１０Ｈ）．
中間体３：１３－（ベンジルオキシ）－２－（（ベンジルオキシ）カルボニル）－１３－オキソ－２－ウンデシルトリデカン酸
Figure 2024514352000064
ヘプタン（２１Ｌ）中の中間体２（６．０ｋｇ、８．８ｍｏｌ、１．０当量）の溶液に２０±５℃でＴＦＡ（１０．０ｋｇ、８８．４ｍｏｌ、１０．０当量）を滴下して添加した。２０±５℃で８ｈ撹拌した後、ＴＦＡの殆どを減圧下で除去し、得られた残渣をヘプタン（４２Ｌ、７Ｖ）中で再溶解し、ブライン（４２Ｌ ｘ ３）で洗浄した。相の分離後、有機相を濃縮して、黄色油状物質として粗製生成物を得た。粗製生成物をカラムクロマトグラフィーによって精製した：ヘプタンからヘプタン：ＥｔＯＡｃ＝１０／１で溶出して、中間体３を得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ）δ ｐｐｍ ０．８７－０．９４（ｍ，３Ｈ）０．９４－１．０５（ｍ，２Ｈ）１．１９（ｂｒ．ｓ．，１４Ｈ）１．２３－１．３７（ｍ，１６Ｈ）１．６５（ｑｕｉｎ，Ｊ＝７．４０Ｈｚ，２Ｈ）１．７８－１．９１（ｍ，２Ｈ）１．９３－２．０５（ｍ，２Ｈ）２．３７（ｔ，Ｊ＝７．５２Ｈｚ，２Ｈ）５．１４（ｓ，２Ｈ）５．２７（ｓ，２Ｈ）７．３１－７．４４（ｍ，１０Ｈ）．
キラルＳＦＣを介してラセミ中間体３の純粋なエナンチオマーを分離し、エナンチオ純粋な中間体３Ａ及び３Ｂを得て、これを使用して、化合物２及び３をそれぞれ調製した。エナンチオ純粋な中間体３Ａ及び３Ｂを得るためのパラメータは、以下の通りであった。
機器：Ｔｈａｒ ３５０ ｐｒｅｐａｒａｔｉｖｅ ＳＦＣ（ＳＦＣ－１８）
カラム：ＣｈｉｒａｌＰａｋ ＡＤ、３００×５０ｍｍ Ｉ．Ｄ．，１０μｍ
移動相：ＣＯ２に対してＡ及びエタノールに対してＢ
勾配：Ｂ４０％
流速：２００ｍＬ／ｍｉｎ
背圧：１００ｂａｒ
カラム温度：３８℃
波長：２１０ｎｍ
サイクル時間：約３．７ｍｉｎ
ピーク１：Ｒエナンチオマー（３Ａ）
ピーク２：Ｓエナンチオマー（３Ｂ）
Figure 2024514352000065
エナンチオマー３Ａの絶対立体配置は、その誘導体（以下に示される）によって決定した。即ち、エナンチオマー３Ａを第１段階においてＤＭＦ中の塩化オキサリルと反応させ、続いて得られた酸塩化物を（Ｓ）－１－（４－ニトロフェニル）－エタン－１－アミンと反応させ、次いでこれをＰｄ／Ｃの存在下において水素で処理し、下で示される構造を得て、これから単Ｘ線結晶を得た。従って、エナンチオマー３Ａの絶対立体配置がＲであるという決定に従い、キラルＳＦＣにより分離されたエナンチオマー混合物のピーク２をＳ－立体配置と結び付け、エナンチオマー３Ｂに割り当てた。
Figure 2024514352000066
（Ｒ）－エナンチオマー３Ａの誘導体－Ｘ線を介して決定された立体構造
（Ｒ）－２－（（（Ｓ）－１－（４－アンモニオフェニル）エチル）カルバモイル）－２－（１０－カルボキシデシル）トリデカノアート
中間体４：１４－（（ベンジルオキシ）カルボニル）－３，１５－ジオキソ－１－フェニル－１４－ウンデシル－２，１９，２２，２５，２８，３１，３４，３７，４０，４３，４６，４９，５２，５５，５８，６１，６４，６７，７０，７３，７６，７９，８２，８５，８８－ペンタコサオキサ－１６－アザヘンノナコンタン－９１－オン酸
Figure 2024514352000067
フラスコに中間体３（６４０ｇ、１．０３ｍｏｌ）、ＤＣＭ（８．３ｋｇ）及びＤＭＦ（３ｇ）を添加した。得られた混合物を２５℃で撹拌し、次に塩化オキサリル（１７０ｇ、１．３４ｍｏｌ）を滴下して添加した。さらに２～３ｈ、撹拌を継続した。反応混合物の濃縮及びヘプタンでの溶媒交換により、粗製混合物が得られ、これに８．５ｋｇのＤＣＭを添加して、溶液を形成させ、これを次の段階において直接使用した。
フラスコに１－アミノ－３，６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３，３６，３９，４２，４５，４８，５１，５４，５７，６０，６３，６６，６９，７２－テトラコサオキサペンタヘプタコンタン－７５－酸（アミン－ＰＥＧ２４－酸、９００ｇ、０．７９ｍｏｌ）、ＤＣＭ（６．０ｋｇ）及びＤＩＰＥＡ（２０３ｇ）を添加し、得られた混合物を２５℃で撹拌した。次に、段階１からの塩化アシル粗製溶液を滴下して添加した。反応混合物をさらに１～２ｈ撹拌した。酸性樹脂（１．３ｋｇ）を添加し、３０ｍｉｎ撹拌を継続した。次に、混合物をろ過した。ＭｇＳＯ４（１．３ｋｇ）を添加し、３０ｍｉｎ撹拌を継続した。混合物をろ過し、濃縮して、粗製残渣を提供した。ＭＴＢＥ、ＤＣＭ、ＭｅＯＨを含む移動相を用いてＡｌ２Ｏ３で粗製残渣を精製した。次に、所望の分画全てを回収し、濃縮して、中間体４を得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ）δ ｐｐｍ ０．８６－０．９３（ｍ，３Ｈ）０．９３－１．０４（ｍ，２Ｈ）１．１９（ｂｒ．ｓ．，１５Ｈ）１．２３－１．３７（ｍ，１５Ｈ）１．６１－１．６８（ｍ，２Ｈ）１．７８（ｔｄ，Ｊ＝１２．４４，４．３４Ｈｚ，２Ｈ）１．９２－２．０５（ｍ，２Ｈ）２．３７（ｔ，Ｊ＝７．５８Ｈｚ，２Ｈ）２．６２（ｔ，Ｊ＝６．０５Ｈｚ，２Ｈ）３．４９（ｄｄ，Ｊ＝６．７２，２．３２Ｈｚ，２Ｈ）３．５２－３．５９（ｍ，２Ｈ）３．５９－３．７３（ｍ，９２Ｈ）３．８０（ｔ，Ｊ＝６．０５Ｈｚ，２Ｈ）５．１３（ｓ，２Ｈ）５．１８（ｓ，２Ｈ）７．３１－７．４２（ｍ，１０Ｈ）８．０９（ｔ，Ｊ＝５．２６Ｈｚ，１Ｈ）．
中間体５：７７，８７－ジベンジル１－（２，５－ジオキソピロリジン－１－イル）７６－オキソ－７７－ウンデシル－３，６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３，３６，３９，４２，４５，４８，５１，５４，５７，６０，６３，６６，６９，７２－テトラコサオキサ－７５－アザヘプタオクタコンタン－１，７７，８７－トリカルボキシラート
Figure 2024514352000068
ＤＣＭ（６．１ｋｇ）中の中間体４（９２０ｇ、０．５３ｍｏｌ）の溶液にＴＥＡ（１１ｇ）を添加し、得られた混合物を撹拌し、透明な溶液を得た。次に、ＤＳＣ（１６１ｇ、０．６３ｍｏｌ）を添加し、２５℃で２ｈ撹拌を継続した。酸性樹脂（１８０ｇ）を添加し、この混合物を３０ｍｉｎ撹拌した。ＭｇＳＯ４（１８０ｇ）を添加し、撹拌を３０ｍｉｎ継続した。次に、混合物をろ過し、透明な淡黄色溶液を得た。真空下での濃縮により粗製中間体５を得て、これを次の段階において直接使用した。ＬＣＭＳ方法Ａ：Ｒｔ＝１．５ｍｉｎ、［Ｍ＋Ｈ３Ｏ＋Ｈ］＋２＝９３３．９。
中間体６：２－（（７５－（（２，５－ジオキソピロリジン－１－イル）オキシ）－７５－オキソ－３，６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３，３６，３９，４２，４５，４８，５１，５４，５７，６０，６３，６６，６９，７２－テトラコサオキサペンタヘプタコンチル）カルバモイル）－２－ウンデシルトリデカンジオン酸
Figure 2024514352000069
水素化反応器に中間体５（９８６ｇ、０．４８ｍｏｌ、９０％純度）、ＴＨＦ（７．６ｋｇ）及び１０％Ｐｄ／Ｃ（１１０ｇ）を添加し、続いてＭｇＳＯ４（１１０ｇ）を添加し、得られた混合物に対してＮ２でパージし、次いでＨ２でパージし、２５℃で３～２４ｈ撹拌した。出発物質の完全消費後、追加のＭｇＳＯ４（２２０ｇ）を添加し、さらに３０ｍｉｎ撹拌を継続した。反応混合物をろ過した。ケーキを１００ｍＬのＴＨＦで洗浄し、ろ液を合わせ、濃縮して、中間体６を得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ）δ ｐｐｍ ０．８４－０．９４（ｍ，３Ｈ）１．１７（ｂｒ．ｓ．，２Ｈ）１．２１－１．３９（ｍ，３０Ｈ）１．５７－１．６８（ｍ，２Ｈ）１．６９－１．８０（ｍ，２Ｈ）１．９７－２．１０（ｍ，２Ｈ）２．３４（ｔ，Ｊ＝７．２１Ｈｚ，２Ｈ）２．８６（ｓ，４Ｈ）２．９２（ｔ，Ｊ＝６．４８Ｈｚ，２Ｈ）３．５１－３．７３（ｍ，９６Ｈ）３．８７（ｔ，Ｊ＝６．４８Ｈｚ，２Ｈ）７．４５（ｔ，Ｊ＝４．４６Ｈｚ，１Ｈ）．
中間体７：１－ベンジル３－（ｔｅｒｔ－ブチル）２－ウンデシルマロナート
Figure 2024514352000070
ベンジルｔｅｒｔ－ブチルマロナート（１１０ｇ、４３９ｍｍｏｌ、１当量）をＤＭＦ（８００ｍＬ）中に入れた。得られた混合物に１－ヨードウンデカン（１３０ｇ、４６１ｍｍｏｌ、１．０５当量）及びＫ２ＣＯ３（１５１ｇ、１．１０ｍｏｌ、２．５当量）を添加した。得られた懸濁液を５０℃で１２ｈ撹拌した。次に、反応混合物を酢酸エチル（５００ｍＬ）で希釈し、次いで氷水に注いだ。合わせた有機相をブライン（１５０ｍＬ）で２回洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過し、減圧下で濃縮し、粗製残渣を得た。粗製残渣をカラムクロマトグラフィーによって精製し（ＳｉＯ２、石油エーテル／酢酸エチル＝１／０～０／１で溶出）、無色油状物質として中間体７を得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ｐｐｍ ７．４６－７．２６（ｍ，５Ｈ），５．２７－４．９８（ｍ，２Ｈ），３．４４－３．２６（ｍ，１Ｈ），１．７２（ｂｒ ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ），１．３３（ｓ，９Ｈ），１．２８－１．１０（ｍ，１８Ｈ），０．９３－０．７５（ｍ，３Ｈ）．
中間体８：１－ベンジル３－（ｔｅｒｔ－ブチル）２－アリル－２－ウンデシルマロナート
Figure 2024514352000071
ＤＭＦ（１２３０ｍＬ）に０℃でＮａＨ（１４．５ｇ、３６４ｍｍｏｌ、６０％、１．２当量）を滴下して添加し、次にＤＭＦ（１２３ｍＬ）中の中間体７（１２３ｇ、３０４ｍｍｏｌ、１当量）をゆっくりと添加した。得られた混合物を０℃で０．５ｈ撹拌し、次に臭化アリル（４０．４ｇ、３３４ｍｍｏｌ、２９ｍＬ、１．１当量）を滴下して添加した。反応混合物を２０℃で９．５ｈ撹拌し、次に酢酸エチル（２５００ｍＬ）で希釈した。混合物を氷冷飽和ＮＨ４Ｃｌ４（１２００ｍＬ）に注いだ。有機相を水相から分離し、水相を酢酸エチルで２回洗浄した。次に、有機相を合わせ、ブライン（５００ｍＬ）で３回洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、ろ過し、減圧下で濃縮して、残渣を得た。この残渣をカラムクロマトグラフィーによって精製し（ＳｉＯ２、石油エーテル／酢酸エチル＝１／０から９８／２で溶出）、黄色油状物質として中間体８を得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ｐｐｍ ７．５０－７．２６（ｍ，５Ｈ），５．７０－５．５０（ｍ，１Ｈ），５．２４－５．０１（ｍ，４Ｈ），４．９９－４．７４（ｍ，１Ｈ），１．７０（ｂｒ ｓ，２Ｈ），１．４５－１．３４（ｍ，３Ｈ），１．２７（ｓ，９Ｈ），１．２５－１．１５（ｍ，１８Ｈ），０．８５（ｂｒ ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ）．
中間体８Ａ及び８Ｂ：１－ベンジル３－（ｔｅｒｔ－ブチル）２－アリル－２－ウンデシルマロナート
Figure 2024514352000072
中間体８（１５９ｇ）をＳＦＣ分離（カラム：Ｃｈｉｒａｌｐａｋ ＩＧ－３ １００＊４．６ｍｍ Ｉ．Ｄ．、３ｕｍ；移動相：Ａ：ＣＯ２ Ｂ：イソプロパノール（０．０５％ＤＥＡ）；勾配：５ｍｉｎでＢを５％から４０％及び４０％で２．５ｍｉｎ保持し、次いでＢを５％で２．５ｍｉｎ保持；流速：２．５ｍＬ／ｍｉｎ；カラム温度：３５℃ ＡＢＰＲ：１５００ｐｓｉ）によって精製して、中間体８Ａ（ピーク１）及び中間体８Ｂ（ピーク２）を得た。ＬＣＭＳ方法Ｂ：Ｒｔ＝１．３３４ｍｉｎ、ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｎａ］＋＝４６７．３。ＳＦＣ：中間体８Ａ（ピーク１）、純粋なエナンチオマー（Ｒ）；ＳＦＣ：中間体８Ｂ（ピーク２）、純粋なエナンチオマー（Ｓ）。
中間体９：ベンジルデク－９－エノアート
Figure 2024514352000073
ＤＣＭ（１４００ｍＬ）中のデク－９－エノン酸（７０．０ｇ、４１１ｍｍｏｌ、７６．０ｍＬ、１当量）の溶液にＢｎＯＨ（６６．６ｇ、６１６ｍｍｏｌ、６４．１ｍＬ、１．５当量）、ＤＭＡＰ（５．０２ｇ、４１．１２ｍｍｏｌ、０．１当量）、ＥＤＣＩ（９４．５ｇ、４９３．３ｍｍｏｌ、１．２当量）及びＤＩＥＡ（６３．７ｇ、４９３ｍｍｏｌ、８５．９ｍＬ、１．２当量）を添加した。得られた混合物を２５℃で１２ｈ撹拌した。次に、反応混合物をＤＣＭ（５００ｍＬ）で希釈した。得られた溶液をブライン（５００ｍＬ）で２回洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、ろ過し、減圧下で濃縮し、粗製残渣を得た。この粗製残渣をカラムクロマトグラフィーによって精製し（ＳｉＯ２、石油エーテル／酢酸エチル＝１／０から０／１で溶出）、無色油状物質として中間体９を得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ｐｐｍ ７．４６－７．２９（ｍ，５Ｈ），５．７８（ｄｄ，Ｊ＝１０．４，１６．８Ｈｚ，１Ｈ），５．１３－５．０５（ｍ，２Ｈ），５．０３－４．７７（ｍ，２Ｈ），２．３８－２．２６（ｍ，２Ｈ），２．１３－１．９２（ｍ，２Ｈ），１．６２－１．４８（ｍ，２Ｈ），１．３８－１．２８（ｍ，２Ｈ），１．２８－１．１５（ｍ，６Ｈ）．
中間体１０Ａ：１，１１－ジベンジル１１－（ｔｅｒｔ－ブチル）（Ｒ）ドコス－８－エン－１，１１，１１－トリカルボキシラート
Figure 2024514352000074
中間体８Ａ（２６．０ｇ、５８．４ｍｍｏｌ、１当量）及び中間体９（３０．４ｇ、１１６ｍｍｏｌ、２当量）をＣＨ２Ｃｌ２（５２０ｍＬ）中で溶解させた。次に、Ｇｒｕｂｂｓ ＩＩ（２．３８ｇ、３．８０ｍｍｏｌ、０．０６５当量）を添加し、得られた混合物を４０℃で１．５ｈ撹拌した。次に、反応混合物を濃縮して、粗製残渣を提供した。この残渣をカラムクロマトグラフィーによって精製し（ＳｉＯ２、石油エーテル／酢酸エチル＝１／０から０／１で溶出）、無色油状物質として中間体１０Ａを得た。ＬＣＭＳ方法Ｂ：Ｒｔ＝１．４５６ｍｉｎ、［Ｍ＋Ｎａ］＋＝６９９．６。
中間体１１Ａ：（Ｓ）－１３－（ベンジルオキシ）－２－（（ベンジルオキシ）カルボニル）－１３－オキソ－２－ウンデシルトリデク－４－エノン酸
Figure 2024514352000075
中間体１０Ａ（５０．０ｇ、７３．８ｍｍｏｌ、１当量）をＴＦＡ（５００ｍＬ）中で溶解させ、得られた混合物を２５℃で３０ｍｉｎ撹拌した。次に、反応混合物を濃縮し、粗製残渣を得て、これを酢酸エチル（５００ｍＬ）中で溶解させ、次いで飽和ＮａＨＣＯ３（５００ｍＬ）で２回洗浄し、ブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、ろ過し、濃縮して、粗製残渣を得た。残渣をカラムクロマトグラフィーによって精製し（ＳｉＯ２、石油エーテル／酢酸エチル＝１／０から０／１で溶出）、無色油状物質として中間体１１Ａを得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ｐｐｍ ７．４４－７．１４（ｍ，１０Ｈ），５．４１（ｂｒ ｓ，１Ｈ），５．２２－４．８６（ｍ，５Ｈ），２．４９－２．４１（ｍ，２Ｈ），２．３７－２．２８（ｍ，２Ｈ），１．９５－１．８３（ｍ，２Ｈ），１．７６－１．６５（ｍ，２Ｈ），１．５８－１．４６（ｍ，２Ｈ），１．３４－０．９８（ｍ，２５Ｈ），０．９０－０．７６（ｍ，３Ｈ）．ＬＣＭＳ方法Ｂ：Ｒｔ＝１．３２３ｍｉｎ，［Ｍ＋Ｈ］＋＝６２２．３。
中間体１２Ａ：１，１１－ジベンジル１１－（２，５－ジオキソピロリジン－１－イル）（Ｒ）－ドコス－８－エン－１，１１，１１－トリカルボキシラート
Figure 2024514352000076
ＣＨ２Ｃｌ２（２６０ｍＬ）及びＴＨＦ（２９ｍＬ）中の中間体１１Ａ（２９．０ｇ、４６．７ｍｍｏｌ、１当量）の溶液にＮＨＳ（５．６４ｇ、４９．０ｍｍｏｌ、１．０５当量）及びＤＣＣ（１１．５ｇ、５６．０ｍｍｏｌ、１１．３ｍＬ、１．２当量）を２５℃で添加し、得られた混合物を２５℃で５ｈ撹拌した。次に、反応混合物をろ過し、ＣＨ２Ｃｌ２（３０ｍＬ）で３回洗浄した。有機相を濃縮して、粗製残渣を得た。粗製残渣をカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、石油エーテル／酢酸エチル＝１／０から８５／１５で溶出）によって精製して、淡黄色油状物質として中間体１２Ａを得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ）δ ｐｐｍ ７．３７－７．２０（ｍ，１０Ｈ），５．５３－５．３４（ｍ，１Ｈ），５．２４－５．１６（ｍ，１Ｈ），５．１５－５．１２（ｍ，２Ｈ），５．１６－５．１２（ｍ，２Ｈ），５．０７－５．００（ｍ，２Ｈ），２．７３（ｂｒ ｓ，４Ｈ），２．６６－２．５３（ｍ，２Ｈ），２．３４－２．１６（ｍ，２Ｈ），１．９７－１．７７（ｍ，４Ｈ），１．７０－１．４７（ｍ，３Ｈ），１．３７－０．９９（ｍ，２６Ｈ），０．８８－０．６５（ｍ，３Ｈ）．ＬＣＭＳ方法Ｂ：Ｒｔ＝１．３４８ｍｉｎ，［Ｍ＋Ｈ］＋＝７１８．６．
中間体１３Ａ：（Ｓ）－１４－（（ベンジルオキシ）カルボニル）－３，１５－ジオキソ－１－フェニル－１４－ウンデシル－２，１９，２２，２５，２８，３１，３４，３７，４０，４３，４６，４９，５２，５５，５８，６１，６４，６７，７０，７３，７６，７９，８２，８５，８８－ペンタコサオキサ－１６－アザヘンノナコント－１１－エン－９１－酸
Figure 2024514352000077
ＤＭＦ（３ｍＬ）中の中間体１２Ａ（５４５ｍｇ、０．７５９ｍｍｏｌ）に１－アミノ－３，６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３，３６，３９，４２，４５，４８，５１，５４，５７，６０，６３，６６，６９，７２－テトラコサオキサペンタヘプタコンタン－７５－酸（アミン－ＰＥＧ２４－酸、１１３１ｍｇ、０．９８７ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（０．１９９ｍＬ、１．１３９ｍｍｏｌ）を添加した。１６ｈ後、反応が完了した。揮発物を除去し、得られた残渣をＲＰＬＣ（ＩＳＣＯ Ｃ１８ Ｇｏｌｄ １５０ｇカラム、１０～１００％ＡＣＮ：水勾配、０．１％ＴＦＡ入りで溶出）上で直接精製した。生成物を含有する分画を合わせ、凍結し、凍結乾燥して、濃厚な油状物質として中間体１３Ａを得た。ＬＣＭＳ方法Ｈ：Ｒｔ＝２．９３ｍｉｎ，［Ｍ＋Ｈ］＋＝１７５０．５。
中間体１４Ａ：７７，８７－ジベンジル１－（２，５－ジオキソピロリジン－１－イル）－（Ｓ）－７６－オキソ－７７－ウンデシル－３，６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３，３６，３９，４２，４５，４８，５１，５４，５７，６０，６３，６６，６９，７２－テトラコサオキサ－７５－アザヘプタオクタコント－７９－エン－１，７７，８７－トリカルボキシラート
Figure 2024514352000078
５ｍＬの無水ＤＣＭ中で溶解された中間体１３Ａ（１８３ｍｇ、０．１０５ｍｍｏｌ）にＤＳＣ（３２．２ｍｇ、０．１２６ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（０．０２７ｍＬ、０．１５７ｍｍｏｌ）を添加し、得られた混合物を１６ｈ撹拌し、その後、反応が完了した。粗製混合物をＤＣＭ平衡化ＩＳＣＯ Ｇｏｌｄ ４０グラムカラム上に直接注入し、ＮＰＬＣ（ＤＣＭ中０～３０％ＭｅＯＨで溶出、シリカ）によって精製した。生成物を含有する分画を合わせ、濃縮し、濃厚な透明な油状物質として中間体１４Ａを得た。ＬＣＭＳ方法Ｈ：Ｒｔ＝２．７９ｍｉｎ，［Ｍ＋Ｈ］＋＝１８４７．５。
中間体１５Ａ：（Ｓ）－２－（（７５－（（２，５－ジオキソピロリジン－１－イル）オキシ）－７５－オキソ－３，６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３，３６，３９，４２，４５，４８，５１，５４，５７，６０，６３，６６，６９，７２－テトラコサオキサペンタヘプタコンチル）カルバモイル）－２－ウンデシルトリデカンジオン酸
Figure 2024514352000079
中間体１４Ａ（１６５ｍｇ、０．０８９ｍｍｏｌ）を２ｍＬの無水ＴＨＦに溶解させ、脱気し、窒素で３回置き換えた。この混合物に１０％パラジウム炭素（９．５１ｍｇ、８．９４μｍｏｌ）を添加し、脱気し、磁気撹拌しながらバルーンからの水素で置き換えた。１６ｈ後、反応が完了した。５ｍＬの無水ＤＣＭでの希釈後、Ｃｅｌｉｔｅ（登録商標）に通して反応混合物をろ過した。パラジウム炭素及びＰａｄを５ｍＬのＤＣＭで２回洗浄し、全ての有機相を合わせ、濃縮して、中間体１５Ａを得た。ＬＣＭＳ方法Ｆ：Ｒｔ＝３．２９ｍｉｎ，［Ｍ＋Ｈ］＋＝１６６９．５。
中間体１０Ｂ：１，１１－ジベンジル１１－（ｔｅｒｔ－ブチル）（Ｓ）－ドコス－８－エン－１，１１，１１－トリカルボキシラート
Figure 2024514352000080
中間体８Ｂ（３６．０ｇ、８０．９ｍｍｏｌ、１当量）及び中間体３（４２．１ｇ、１６１ｍｍｏｌ、２当量）をＣＨ２Ｃｌ２（７２０ｍＬ）中で溶解させ、次にＧｒｕｂｂｓ ＩＩ（３．３０ｇ、５．２６ｍｍｏｌ、０．０６５当量）を添加した。得られた混合物を４０℃で１ｈ撹拌し、次に真空濃縮し、粗製残渣を得た。粗製残渣をカラムクロマトグラフィーによって精製し（ＳｉＯ２、石油エーテル／酢酸エチル＝１／０から０／１で溶出）、無色油状物質として中間体１０Ｂを得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ）δ ｐｐｍ ７．４５－７．２５（ｍ，１０Ｈ），５．５０－５．３０（ｍ，１Ｈ），５．２０－５．０２（ｍ，５Ｈ），２．４８－２．４０（ｍ，１Ｈ），２．３９－２．２３（ｍ，３Ｈ），１．９６－１．８３（ｍ，３Ｈ），１．７９－１．６４（ｍ，１Ｈ），１．６１－１．４５（ｍ，３Ｈ），１．４０－１．１４（ｍ，２２Ｈ），１．１３－０．９４（ｍ，３Ｈ），１．１４－０．９３（ｍ，３Ｈ），０．８７－０．８０（ｍ，１Ｈ）．ＬＣＭＳ方法Ｂ：ＲＴ＝１．４４８ｍｉｎ，［Ｍ－５６＋Ｈ］＋＝６２２．３。
中間体１１Ｂ：（Ｒ）－１３－（ベンジルオキシ）－２－（（ベンジルオキシ）カルボニル）－１３－オキソ－２－ウンデシルトリデク－４－エノン酸
Figure 2024514352000081
中間体１０Ｂ（６２ｇ、９１．５９ｍｍｏｌ、１当量）をＴＦＡ（６２０ｍＬ）中で溶解させ、得られた混合物を２５℃で３０ｍｉｎ撹拌した。次に、反応混合物を真空濃縮し、粗製残渣を得た。粗製残渣を酢酸エチル（８００ｍＬ）中で溶解させ、次にｓａｔ．ＮａＨＣＯ３（２００ｍＬ）により２回及びブライン（１００ｍＬ）により洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４を使用して乾燥させ、ろ過し、濃縮して、粗製残渣を得た。粗製残渣をカラムクロマトグラフィーによって精製し（ＳｉＯ２、石油エーテル／酢酸エチル＝１／０から０／１で溶出）、黄色油状物質として中間体１１Ｂを得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ １３．１５－１２．５５（ｍ，１Ｈ），７．５４－６．９２（ｍ，１０Ｈ），５．５４－５．３３（ｍ，１Ｈ），５．２５－４．９４（ｍ，５Ｈ），２．４７（ｂｒ ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ），２．３３（ｂｒ ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，２Ｈ），１．９７－１．８３（ｍ，２Ｈ），１．７９－１．６３（ｍ，２Ｈ），１．６０－１．４５（ｍ，２Ｈ），１．３８－０．９６（ｍ，２６Ｈ），０．９２－０．７６（ｍ，３Ｈ）．ＬＣＭＳ方法Ｂ：ＲＴ＝１．３２３ｍｉｎ、ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋＝６２１．６。
中間体１２Ｂ：１，１１－ジベンジル１１－（２，５－ジオキソピロリジン－１－イル）（Ｓ）－ドコス－８－エン－１，１１，１１－トリカルボキシラート
Figure 2024514352000082
ＣＨ２Ｃｌ２（２４３ｍＬ）及びＴＨＦ（２７ｍＬ）中の中間体１１Ｂ（２７ｇ、４３．４ｍｍｏｌ、１当量）の溶液にＮＨＳ（５．２６ｇ、４５．６ｍｍｏｌ、１．０５当量）及びＤＣＣ（１０．７ｇ、５２．１ｍｍｏｌ、１０．５ｍＬ、１．２当量）を添加し、得られた混合物を２５℃で６ｈ撹拌した。次に、反応混合物をろ過し、ＣＨ２Ｃｌ２（３０ｍＬ）により３回洗浄して、ろ液を得て、次にそれを濃縮して粗製残渣を得た。粗製残渣をカラムクロマトグラフィーによって精製し（ＳｉＯ２、石油エーテル／酢酸エチル＝１／０から８５／１５で溶出）、淡黄色油状物質として中間体１２Ｂを得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ）δ １３．１５－１２．５５（ｍ，１Ｈ），７．５４－６．９２（ｍ，１０Ｈ），５．５４－５．３３（ｍ，１Ｈ），５．２５－４．９４（ｍ，５Ｈ），２．４７（ｂｒ ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ），２．３３（ｂｒ ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，２Ｈ），１．９７－１．８３（ｍ，２Ｈ），１．７９－１．６３（ｍ，２Ｈ），１．６０－１．４５（ｍ，２Ｈ），１．３８－０．９６（ｍ，２６Ｈ），０．９２－０．７６（ｍ，３Ｈ）．ＬＣＭＳ方法Ｂ：Ｒｔ＝１．３４８ｍｉｎ，［Ｍ＋Ｈ］＋＝７１８．５。
中間体１３Ｂ：（Ｒ）－１４－（（ベンジルオキシ）カルボニル）－３，１５－ジオキソ－１－フェニル－１４－ウンデシル－２，１９，２２，２５，２８，３１，３４，３７，４０，４３，４６，４９，５２，５５，５８，６１，６４，６７，７０，７３，７６，７９，８２，８５，８８－ペンタコサオキサ－１６－アザヘンノナコント－１１－エン－９１－酸
Figure 2024514352000083
中間体１２Ｂ（１．０７ｇ、１．４９ｍｍｏｌ）を１－アミノ－３，６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３，３６，３９，４２，４５，４８，５１，５４，５７，６０，６３，６６，６９，７２－テトラコサオキサペンタヘプタコンタン－７５－酸（Ｂｉｏｐｈａｒｍ、１．８８ｇ、１．６４ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（３９０μＬ、２．２３６ｍｍｏｌ）及びＤＭＡＰ（１８ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ）で処理した。１６ｈ後、反応が完了した。揮発物を除去し、得られた残渣をＲＰＬＣ（ＩＳＣＯ Ｃ１８ Ｇｏｌｄ １５０ｇカラム、０．１％ＴＦＡ入りの１０～１００％ＡＣＮ：水勾配で溶出）により精製した。生成物を含有する分画を合わせ、凍結及び凍結乾燥して、濃厚な油状物質として中間体１３Ｂを得た。ＬＣＭＳ方法Ｃ：Ｒｔ＝４．０４ｍｉｎ，［Ｍ＋２Ｈ］２＋＝８７５．８。
中間体１４Ｂ：７７，８７－ジベンジル１－（２，５－ジオキソピロリジン－１－イル）－（Ｒ）－７６－オキソ－７７－ウンデシル－３，６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３，３６，３９，４２，４５，４８，５１，５４，５７，６０，６３，６６，６９，７２－テトラコサオキサ－７５－アザヘプタオクタコント－７９－エン－１，７７，８７－トリカルボキシラート
Figure 2024514352000084
中間体１３Ｂ（３１２ｍｇ、０．１７８ｍｍｏｌ）を１－ヒドロキシピロリジン－２，５－ジオン（２４．６３ｍｇ、０．２１４ｍｍｏｌ）とともに１．８ｍＬの無水ＤＣＭに溶解させ、次いでＤＣＭ中の１Ｍ ＤＣＣ（Ａｌｄｒｉｃｈ、１９６μＬ）で処理し、ジシクロヘキシル尿素副産物の沈殿が直ちに生じた。１６ｈ後、反応が完了し、次に反応混合物をＤＣＭ平衡化ＩＳＣＯ Ｇｏｌｄ ４０グラムカラム上に直接注入し、ＮＰＬＣ（ＤＣＭ中０～３０％ＭｅＯＨで溶出、シリカ）によって精製した。生成物を含有する分画を合わせ、濃縮して、濃厚な透明油状物質として中間体１４Ｂを得た。ＬＣＭＳ方法Ｆ：Ｒｔ＝４．２１ｍｉｎ，［Ｍ＋Ｈ＋Ｈ２Ｏ］＋＝１８６４．４。
中間体１５Ｂ：（Ｒ）－２－（（７５－（（２，５－ジオキソピロリジン－１－イル）オキシ）－７５－オキソ－３，６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３，３６，３９，４２，４５，４８，５１，５４，５７，６０，６３，６６，６９，７２－テトラコサオキサペンタヘプタコンチル）カルバモイル）－２－ウンデシルトリデカンジオン酸
Figure 2024514352000085
中間体１４Ｂ（１７２ｍｇ、０．０９３ｍｍｏｌ）を１．８ｍＬの無水ＴＨＦに溶解させ、脱気し、窒素で３回置き換えた。この混合物に１０％パラジウム炭素（１０ｍｇ、９．４ｕｍｏｌ）を添加し、脱気し、磁気撹拌しながらバルーンからの水素で置き換えた。１６ｈ後、反応が完了した。５ｍＬの無水ＤＣＭでの希釈後、Ｃｅｌｉｔｅ（登録商標）に通して反応混合物をろ過した。パラジウム炭素及びＣｅｌｉｔｅ－ケーキを５ｍＬのＤＣＭで２回洗浄し、ろ過した。全ての有機物を合わせ、濃縮して、中間体１５Ｂを得た。ＬＣＭＳ方法Ｆ：Ｒｔ＝３．３１ｍｉｎ，［Ｍ＋Ｈ］＋＝１６６９．０。
中間体１６：１，１１－ジベンジル１１－（２，５－ジオキソシクロペンチル）ドコサン－１，１１，１１－トリカルボキシラート
Figure 2024514352000086
１０００ｍＬの３つ口丸底フラスコ（機械式撹拌器及び窒素インレットを取り付け）に中間体３（３７．７ｇ、６０．５ｍｍｏｌ）、ＤＣＭ（３６０ｍＬ、比：９．０）及びＴＨＦ（４０ｍＬ、比：１．０）を添加し、続いてＮ－ヒドロキシスクシンイミド（７．３１ｇ、６３．６ｍｍｏｌ）及びＤＣＣ（１４．９９ｇ、７２．６ｍｍｏｌ）を添加した。添加の５ｍｉｎ後、得られた混合物は白色懸濁液になった。反応混合物をＲＴにおいて全部で６ｈ撹拌し、次いでＣｅｌｉｔｅ（登録商標）のパッド上でろ過した。パッドをＤＣＭ（２ベッド体積）で十分に洗浄した。合わせた有機相を真空濃縮し、粗製残渣を高真空下で乾燥させた。粗製生成物を白色油状物質として単離した。粗製生成物にＤＣＭ（約４００ｍＬ）及びシリカゲル（７５ｇ）を添加した。得られた懸濁液を真空濃縮し、高真空下で３ｈ残渣を乾燥させた。カラムクロマトグラフィー（７５０ｇ ＳｉＯ２ゲル、２％酢酸エチル／ヘプタンから３５％酢酸エチル／ヘプタンで溶出）を介してバッチを精製した。生成物含有分画を合わせ、真空濃縮し、高真空下で一晩乾燥させ、無色油状物質として中間体１６得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ）δ ｐｐｍ ０．８６－０．９３（ｍ，３Ｈ）１．１２－１．２１（ｍ，２Ｈ）１．２１－１．３７（ｍ，３０Ｈ）１．６６（ｑｕｉｎ，Ｊ＝７．４０Ｈｚ，２Ｈ）１．８９－２．０７（ｍ，４Ｈ）２．３７（ｔ，Ｊ＝７．５８Ｈｚ，２Ｈ）２．８４（ｂｒ．ｓ．，４Ｈ）５．１３（ｓ，２Ｈ）５．２５（ｓ，２Ｈ）７．３０－７．４７（ｍ，１０Ｈ）．
中間体１７：１４－（（ベンジルオキシ）カルボニル）－３，１５－ジオキソ－１－フェニル－１４－ウンデシル－２，１９，２２，２５，２８，３１，３４，３７，４０－ノナオキサ－１６－アザトリテトラコンタン－４３－酸
Figure 2024514352000087
２５０ｍＬの丸底フラスコ（磁気撹拌機及び窒素インレットを取り付け）に中間体１６（７．０ｇ、９．７２ｍｍｏｌ）及びＤＣＭ（７０ｍＬ）を添加し、続いて１－アミノ－３，６，９，１２，１５，１８，２１，２４－オクタオキサヘプタコサン－２７－酸（アミノ－ＰＥＧ８－酸）（４．５１ｇ、１０．２１ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（４．２５ｍＬ、２４．３１ｍｍｏｌ）及びＤＭＡＰ（０．１１９ｇ、０．９７２ｍｍｏｌ）を添加した。得られた淡黄色の均一な溶液を周囲温度で一晩撹拌した。次に、反応混合物を真空濃縮して、淡黄色の油状残渣を得た。次に、この残渣を酢酸エチル（１５０ｍＬ）で希釈し、溶液を５００ｍＬの分液漏斗に移した。次に、溶液をブライン（５００ｍＬ）で洗浄した。得られた水相を酢酸エチル（１５０ｍＬ；次に１００ｍＬ）で逆抽出した。合わせた有機相を乾燥させ（硫酸ナトリウムで）、Ｃｅｌｉｔｅ（登録商標）上でろ過し、真空濃縮した。カラムクロマトグラフィー（３３０ｇ ＳｉＯ２ゲル、ＤＣＭから１０％メタノール／ＤＣＭで溶出）を介して粗製生成物を精製した。主な生成物を含有する分画を合わせ、真空濃縮した。残渣を高真空下で一晩乾燥させ、中間体１７を得た。ＬＣＭＳ方法Ｅ：Ｒｔ＝１．４３ｍｉｎ、［Ｍ＋Ｈ］＋＝１０４７．０。
中間体１８：２９，３９－ジベンジル１－（２，５－ジオキソピロリジン－１－イル）２８－オキソ－２９－ウンデシル－３，６，９，１２，１５，１８，２１，２４－オクタオキサ－２７－アザノナトリアコンタン－１，２９，３９－トリカルボキシラート
Figure 2024514352000088
中間体１７（５．５１ｇ、５．２７ｍｍｏｌ）を含有する５０ｍＬの丸底フラスコにＤＣＭ（２７．５ｍＬ、比：１．０）及びＴＨＦ（２７．５ｍＬ、比：１．０）を添加し、続いてＤＣＣ（１．４１２ｇ、６．８５ｍｍｏｌ）及びＮ－ヒドロキシスクシンイミド（０．６９７ｇ、６．０６ｍｍｏｌ）を添加した。およそ１０ｍｉｎ撹拌した後、得られた混合物が濃厚な白色懸濁液になった。次に、反応混合物を周囲温度で３ｈ４５ｍｉｎ撹拌し、真空濃縮して、白色ペーストを得た。混合物にＤＣＭ（３５ｍＬ）を添加し、得られた白色懸濁液を１０ｍｉｎ撹拌した。次に、混合物をＣｅｌｉｔｅ（登録商標）のパッド上でろ過し、パッドを冷ＤＣＭ（１ベッド体積）で洗浄した。合わせたろ液を真空濃縮した。残渣を高真空下で一晩乾燥させ、無色油状物質として中間体１８を得た。ＬＣＭＳ方法Ｅ：Ｒｔ＝１．４５ｍｉｎ，［Ｍ＋Ｈ］＋＝１０４４．０。
中間体１９：２－（（２７－（（２，５－ジオキソピロリジン－１－イル）オキシ）－２７－オキソ－３，６，９，１２，１５，１８，２１，２４－オクタオキサヘプタコシル）カルバモイル）－２－ウンデシルトリデカンジオン酸
Figure 2024514352000089
２５０ｍＬの丸底フラスコ（磁気撹拌機を取り付け）に中間体１８（６．０ｇ、５．２５ｍｍｏｌ）及びＴＨＦ（７０ｍＬ）を添加した。この溶液に１０％Ｐｄ／Ｃ（０．６０３ｇ、０．５６７ｍｍｏｌ）を添加し、反応容器を窒素でパージし、続いて水素でパージした。次に、得られた混合物を３ｈ水素（バルーン圧）に曝露した。反応容器を窒素でパージし、懸濁液をＣｅｌｉｔｅ（登録商標）のパッド上でろ過した。パッドをＴＨＦで十分に洗浄し、合わせたろ液を真空濃縮した。次に、得られた残渣を高真空下で一晩乾燥させ、無色油状物質として中間体１９を得た。ＬＣＭＳ方法Ｅ：Ｒｔ＝０．９１ｍｉｎ，［Ｍ＋Ｈ］＋＝９６３．８。
中間体２０：１４－（（ベンジルオキシ）カルボニル）－３，１５－ジオキソ－１－フェニル－１４－ウンデシル－２，１９，２２－トリオキサ－１６－アザペンタコサン－２５－酸
Figure 2024514352000090
２５０ｍＬの丸底フラスコ（マグネチックスターラーバーとともに）に、中間体１６（５．０ｇ、６．９４ｍｍｏｌ）及びＤＣＭ（体積：１００ｍＬ）を添加し、続いて３－（２－（２－アミノエトキシ）エトキシ）プロパン酸（アミノ－ＰＥＧ２－酸、１．２３１ｇ、６．９４ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（３．０３ｍＬ、１７．３６ｍｍｏｌ）及びＤＭＡＰ（０．０８５ｇ、０．６９４ｍｍｏｌ）を添加した。得られた白色懸濁液を周囲温度で２２ｈ撹拌した。ＬＣＭＳが、顕著なＮＨＳエステル出発物質の残留を示した。次に、反応混合物を４０℃に温め、撹拌を５．５ｈ継続した。混合物を周囲温度に冷却し、次に真空濃縮し、白色ペーストを得た。混合物に酢酸エチル（１５０ｍＬ）を添加した。ブライン（１５０ｍＬ）と一緒に溶液を５００ｍＬの分液漏斗に移した。相を分離し、水相を酢酸エチル（１５０ｍＬ）で２回抽出した。合わせた有機相を（硫酸ナトリウムで）乾燥させ、Ｃｅｌｉｔｅ（登録商標）上でろ過し、真空濃縮した。カラムクロマトグラフィーを介して（１２０ｇシリカゲル、０．５％メタノール／ＤＣＭから６０％メタノール／ＤＣＭで溶出）粗製生成物を精製した。ＴＬＣ（５％メタノール／ＤＣＭ）により主な生成物を含有する分画を合わせ、真空濃縮し、得られた残渣を高真空下で一晩乾燥させ、無色油状物質として中間体２０を得た。ＬＣＭＳ方法Ｅ：Ｒｔ＝１．４５ｍｉｎ，［Ｍ＋Ｈ］＋＝７８２．８。
中間体２１：ジベンジル２－（（２－（２－（３－（（２，５－ジオキソピロリジン－１－イル）オキシ）－３－オキソプロポキシ）エトキシ）エチル）カルバモイル）－２－ウンデシルトリデカンジオアート
Figure 2024514352000091
５００ｍＬの丸底フラスコ（磁気撹拌機及び窒素インレットを取り付け）に、中間体２０（３．７ｇ、４．７３ｍｍｏｌ）、ＤＣＭ（１９ｍＬ、比：１．０）及びＴＨＦ（１９ｍＬ、比：１．０）を添加し、次にＮ－ヒドロキシスクシンイミド（０．６２６ｇ、５．４４ｍｍｏｌ）及びＤＣＣ（１．２６９ｇ、６．１５ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を周囲温度で３ｈ撹拌し、その時点で、これは、白色懸濁液になっていた。次に、Ｃｅｌｉｔｅ（登録商標）上で懸濁液をろ過し、パッドをＤＣＭで洗浄した。合わせたろ液を真空濃縮した。次に、得られた残渣をＤＣＭ（２０ｍＬ）中で懸濁し、混合物を周囲温度で１０ｍｉｎ撹拌し、次にＣｅｌｉｔｅ（登録商標）のパッド上でろ過した。パッドを冷ＤＣＭで洗浄した。合わせたろ液を真空濃縮した。残渣を高真空下で一晩乾燥させ、淡黄色油状物質として中間体２１を得た。ＬＣＭＳ方法Ｅ：Ｒｔ＝１．４７ｍｉｎ，［Ｍ＋Ｈ］＋＝８７９．７。
中間体２２：２－（（２－（２－（３－（（２，５－ジオキソピロリジン－１－イル）オキシ）－３－オキソプロポキシ）エトキシ）エチル）カルバモイル）－２－ウンデシルトリデカンジオン酸
Figure 2024514352000092
中間体２１（４．１６ｇ、４．７３ｍｍｏｌ）を含有する１００ｍＬの丸底フラスコにＴＨＦ（４０ｍＬ）を添加した。この溶液に１０％Ｐｄ／Ｃ（０．４２ｇ、３．９３ｍｍｏｌ）を添加し、容器を窒素でパージした。次に、反応容器を水素でパージし、水素圧（バルーン）に曝露した。得られた黒色の懸濁液を４ｈ撹拌し、次いでＣｅｌｉｔｅ（登録商標）のパッド上でろ過した。パッドをＴＨＦで洗浄した。合わせたろ液を真空濃縮し、次いで高真空下で乾燥させ、無色油状物質として中間体２２を得た。ＬＣＭＳ方法Ｇ：Ｒｔ＝１．７２ｍｉｎ，［Ｍ＋Ｈ］＋＝６９９．４。
中間体２３：ベンジル１１－ブロモウンデカノアート
Figure 2024514352000093
２Ｌ丸型の３つ口丸底フラスコ（機械式撹拌器、温度プローブ及び窒素インレットを取り付け）に１１－ブロモウンデカン酸（５０ｇ、１８９ｍｍｏｌ）及び５００ｍＬのジクロロメタンを添加した。次に、得られた橙色の均一な溶液にベンジルアルコール（２３．５３ｍＬ、２２６ｍｍｏｌ）、ＥＤＣＩ・ＨＣｌ（５４．２ｇ、２８３ｍｍｏｌ）及びＤＭＡＰ（１．１５２ｇ、９．４３ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を一晩撹拌した。ＴＬＣ分析（ヘプタン中３０％酢酸エチル）は、１１－ブロモウンデカン酸の消費を示した。反応混合物を２Ｌ丸底フラスコに移し、真空濃縮した。得られた残渣を１Ｌの水及び８００ｍＬのＭＴＢＥで希釈した。相を分離し、６００ｍＬのＭＴＢＥで水相を２回抽出した。合わせた有機相を７５０ｍＬのブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、Ｃｅｌｉｔｅ（登録商標）上でろ過し、真空濃縮した。物質を高真空下で２ｈ乾燥させて、淡黄色油状物質を得た。粗製生成物を５００ｍＬのＤＣＭ中で溶解させ、１００ｇシリカゲルを添加した。混合物を真空濃縮し、次いで高真空下で一晩乾燥させた。クロマトグラフィー（７５０ｇシリカカラム、１％ＥｔＯＡｃ／ヘプタンから２０％ＥｔＯＡｃ／ヘプタン勾配で溶出）を介して残渣を精製した。ベンジル１１－ブロモウンデカノアートを含有する分画を合わせ、真空濃縮した。残渣を高真空下で５ｈ乾燥させ、無色油状物質として中間体２３を得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ）δ ７．５８－７．３１（ｍ，５Ｈ），５．１４（ｓ，２Ｈ），３．４３（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，２Ｈ），２．３８（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），１．８７（ｐ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，２Ｈ），１．７３－１．６１（ｍ，２Ｈ），１．４９－１．４０（ｍ，２Ｈ），１．３７－１．２６（ｍ，１０Ｈ）．
中間体２４：１，１１，２１－トリベンジル１１－ｔｅｒｔ－ブチルヘンイコサン－１，１１，１１，２１－テトラカルボキシラート
Figure 2024514352000094
機械式撹拌器、温度プローブ及び窒素インレットを取り付けた２５０ｍＬの３つ口丸底フラスコにベンジルｔｅｒｔ－ブチルマロナート（６ｇ、２３．９７ｍｍｏｌ）及び３０ｍＬのＤＭＦを添加し、次いで中間体２３（１８．７４ｇ、５２．７ｍｍｏｌ）及び６０ｍＬのＤＭＦの混合物を添加した。この無色溶液に炭酸セシウム（３１．２ｇ、９６ｍｍｏｌ）を添加し、得られた懸濁液を周囲温度で撹拌した。周囲温度で５．５ｈ撹拌した後、ＬＣＭＳは、ベンジルｔｅｒｔ－ブチルマロナートが存在しなかったことを示した。反応混合物は、モノ－及びジ－アルキル化生成物の混合物であった。従って、混合物を２２ｈ撹拌したが、ＬＣＭＳは、モノアルキル化中間体が依然として残存したことを示した。次に、反応混合物を４０℃に加熱し、３ｈ撹拌した。ＬＣＭＳは依然として、最小の進行を示した。混合物を０～５℃に冷却し、２００ｍＬの脱イオン化（ＤＩ）水を細い線になるように添加した。次に、混合物を周囲温度まで温め、５００ｍＬ分液漏斗に移した。水相を２００ｍＬのＭＴＢＥで２回抽出した。合わせた有機相を２００ｍＬのブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、Ｃｅｌｉｔｅ（登録商標）上でろ過し、真空濃縮した。残渣を高真空下で２ｈ乾燥させて、粗製無色生成物を得て、ＮＰＬＣ（３３０ｇ ＩＳＣＯシリカカラム、０．５％酢酸エチル／ヘプタンから３０％酢酸エチル／ヘプタン勾配で溶出）を介してこれを精製した。生成物含有分画を合わせ、真空濃縮した。残渣を高真空下で一晩乾燥させて、無色油状物質として中間体２４を得た。ＬＣＭＳ方法Ｅ：Ｒｔ＝１．７５ｍｉｎ，［Ｍ＋Ｈ＋Ｈ２Ｏ］＋＝８２１．３。
中間体２５：１３－（ベンジルオキシ）－２－（１１－（ベンジルオキシ）－１１－オキソウンデシル）－２－（（ベンジルオキシ）カルボニル）－１３－オキソトリデカン酸
Figure 2024514352000095
磁気スターラーバー及び窒素インレットを取り付けた１Ｌ丸底フラスコに中間体２４（１７．７８ｇ、２２．２５ｍｍｏｌ）及び１８０ｍＬのＴＦＡを添加し、得られた混合物を４５ｍｉｎ撹拌した。ＬＣＭＳ分析が残存している出発物質がないことを示したら、混合物を真空濃縮し、淡黄色油状物質を得た。得られた油状物質を２５０ｍＬのトルエンで希釈し、次いで真空濃縮し、残存するＴＦＡを除去した。この最終段階を１回反復した。週末にわたり残渣を高真空下で乾燥させ、淡黄色油状物質として中間体２５を得て、これを次の段階でそのまま使用した。ＬＣＭＳ方法Ｅ：Ｒｔ＝１．５５ｍｉｎ，［Ｍ＋Ｈ＋Ｈ２Ｏ］＋＝７６０．４。
中間体２６：１，１１，２１－トリベンジル１１－（２，５－ジオキソピロリジン－１－イル）ヘンイコサン－１，１１，１１，２１－テトラカルボキシラート
Figure 2024514352000096
中間体２５（１６．５３ｇ、２２．２５ｍｍｏｌ）を含有する５００ｍＬの丸底フラスコに１８０ｍＬのＤＣＭ及び２０ｍＬのＴＨＦを添加し、続いてＮ－ヒドロキシスクシンイミド（２．６９ｇ、２３．３６ｍｍｏｌ）及びＤＣＣ（５．５１ｇ、２６．７ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を一晩撹拌し、その後、ＬＣＭＳは、所望の生成物への完全な変換を示した。得られた白色懸濁液をＣｅｌｉｔｅ（登録商標）のパッド上でろ過し、パッドを２つのベッド体積ＤＣＭで洗浄した。合わせたろ液を真空濃縮し、無色油状物質を得て、得られた油状物質を高真空下で１ｈ乾燥させ、２１．３ｇの粗製生成物を得た。粗製生成物を２５０ｍＬのＤＣＭ中で溶解させ、３２ｇのシリカゲルを添加した。混合物を真空濃縮し、次いで高真空下で２ｈ乾燥させた。カートリッジドライローデッドＮＰＬＣ（３３０ｇのシリカゲルカラム、５％酢酸エチル／ヘプタンから４０％酢酸エチル／ヘプタン勾配で溶出）を介して、残渣を精製した。生成物含有分画を合わせ、真空濃縮し、高真空下で一晩乾燥させ、無色油状物質として中間体２６を得た。ＬＣＭＳ方法Ｅ：Ｒｔ＝１．５８ｍｉｎ、［Ｍ＋Ｈ＋Ｈ２Ｏ］＋＝８５７．４。
中間体２７：１４－（１１－（ベンジルオキシ）－１１－オキソウンデシル）－１４－（（ベンジルオキシ）カルボニル）－３，１５－ジオキソ－１－フェニル－２，１９，２２，２５，２８，３１，３４，３７，４０，４３，４６，４９，５２，５５，５８，６１，６４，６７，７０，７３，７６，７９，８２，８５，８８－ペンタコサオキサ－１６－アザヘンノナコンタン－９１－酸
Figure 2024514352000097
中間体２６（４７９ｍｇ、０．５０３ｍｍｏｌ）を５．７ｍＬの無水ＤＣＭ中で溶解させた。次に、この溶液を１－アミノ３，６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３，３６，３９，４２，４５，４８，５１，５４，５７，６０，６３，６６，６９，７２－テトラコサオキサペンタヘプタコンタン－７５－酸（６８６ｍｇ、０．５９９ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（１４９μＬ，０．８５５ｍｍｏｌ）及びＤＭＡＰ（７ｍｇ、０．０５７ｍｍｏｌ）で処理し、室温で１６ｈ撹拌した。１６ｈ後、ＬＣ／ＭＳ分析により反応が完了し、ロータリーエバポレーターにより揮発物を除去した。ＮＰＬＣ（２４グラムＩＳＣＯ Ｇｏｌｄシリカカラム、ＤＣＭ中０～２０％ＭｅＯＨで溶出）によって粗製生成物を精製し、濃厚な油状物質として中間体２７を得た。ＬＣＭＳ方法Ｅ：Ｒｔ＝１．３５ｍｉｎ，［Ｍ＋Ｈ］＋＝１８７１．９。
中間体２８：７７，８７－ジベンジル１－（２，５－ジオキソピロリジン－１－イル）７７－（１１－（ベンジルオキシ）－１１－オキソウンデシル）－７６－オキソ－３，６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３，３６，３９，４２，４５，４８，５１，５４，５７，６０，６３，６６，６９，７２－テトラコサオキサ－７５－アザヘプタオクタコンタン－１，７７，８７－トリカルボキシラート
Figure 2024514352000098
中間体２７（７６４ｍｇ、０．４０８ｍｍｏｌ）を４ｍＬのＤＣＭ中の１－ヒドロキシピロリジン－２，５－ジオン（５６．４ｍｇ、０．４９０ｍｍｏｌ）で処理した。この混合物にＤＣＭ中の１Ｍ ＤＣＣ（Ａｌｄｒｉｃｈ、０．４９９ｍＬ、０．４９９ｍｍｏｌ）の溶液を添加し、反応混合物を窒素下で撹拌した。１６ｈ後、反応が完了した。揮発物を除去し、ＮＰＬＣ（２４グラムＩＳＣＯ Ｇｏｌｄ カラム、ＤＣＭ中０～１５％ＭｅＯＨで溶出）によって残渣を精製した。生成物を含有する分画を合わせ、濃縮し、中間体２８を得た。ＬＣＭＳ方法Ｆ：Ｒｔ＝４．０３ｍｉｎ，［Ｍ＋２Ｈ］２＋＝９８５．１。
中間体２９：１１－（（７５－（（２，５－ジオキソピロリジン－１－イル）オキシ）－７５－オキソ－３，６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３，３６，３９，４２，４５，４８，５１，５４，５７，６０，６３，６６，６９，７２－テトラコサオキサペンタヘプタコンチル）カルバモイル）ヘンイコサン－１，１１，２１－トリカルボン酸
Figure 2024514352000099
撹拌バーを用いて中間体２８（５００ｍｇ、０．２５４ｍｍｏｌ）を２．５ｍＬの無水ＴＨＦに溶解させた。脱気し、窒素で３回置き換えた。次に、１０％パラジウム炭素（Ａｌｄｒｉｃｈ、２７ｍｇ、０．０２５ｍｍｏｌ）を慎重に添加し、フラスコを脱気した。空気をバルーンリザーバーからの水素で置き換えた。反応混合物を一晩、１６ｈにわたり撹拌し、ＬＣ／ＭＳで反応が完了したことが示された。反応混合物を５ｍＬの無水ＤＣＭで希釈し、Ｃｅｌｉｔｅ（登録商標）に通してろ過した。ろ液を濃縮して、濃厚な透明油状物質として中間体２９を得た。ＬＣＭＳ方法Ｆ：Ｒｔ＝２．６０ｍｉｎ，［Ｍ＋２Ｈ］２＋＝８４９．９。
中間体３０：ベンジル１２－ブロモドデカノアート
Figure 2024514352000100
２４ｍＬのＤＣＭ中で１２－ブロモドデカン酸（２ｇ、７．１６ｍｍｏｌ）、ベンジルアルコール（１．１６ｇ、１０．７４ｍｍｏｌ）及びＥＤＣ・ＨＣｌ（２．０６ｇ，１０．７４ｍｍｏｌ）を合わせた。この溶液にＤＭＡＰ（４４ｍｇ、０．３５８ｍｍｏｌ）を一度に添加し、得られた混合物を一晩撹拌した。ＬＣＭＳ分析に基づくと、反応は、約９０％完了であった。ＮＰＬＣによって反応混合物を精製した（ヘプタン中０～１５％ＥｔＯＡｃで溶出、シリカ）。生成物を含有する分画を合わせ、濃縮し、所望の生成物、中間体３０を得た。１Ｈ ＮＭＲ：（４００ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ）δ ７．４７－７．３１（ｍ，５Ｈ），５．１４（ｓ，２Ｈ），３．４３（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，２Ｈ），２．３８（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），１．８８（ｐ，２Ｈ），１．６７（ｐ，２Ｈ），１．５０－１．３９（ｍ，２Ｈ），１．３５－１．２６（ｍ，１２Ｈ）．
中間体３１：１，１２，２３－トリベンジル１２－（ｔｅｒｔ－ブチル）トリコサン－１，１２，１２，２３－テトラカルボキシラート、１，１２－ジベンジル１－（ｔｅｒｔ－ブチル）ドデカン－１，１，１２－トリカルボキシラート
Figure 2024514352000101
１２ｍＬの無水ＤＭＦ中で中間体３０（１ｇ、２．７１ｍｍｏｌ）、ベンジルｔｅｒｔ－ブチルマロナート（２７６．４ｍｇ、１．１０４ｍｍｏｌ）及び油中６０％水素化ナトリウム（９７ｍｇ、２．４３ｍｍｏｌ）を合わせ、オーブン乾燥させた丸底フラスコにおいて、得られた混合物を窒素雰囲気下でＲＴにおいて一晩撹拌した。１６ｈ後、ＬＣＭＳ分析から、所望の生成物への完全な変換が示された。反応混合物を水とＥｔＯＡｃとの間で分配し、ＥｔＯＡｃ（２×２０ｍＬ）で洗浄した。有機相を合わせ、ブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過し、ロータリーエバポレーターにより濃縮した。ＮＰＬＣ（ヘプタン中０～６０％ＥｔＯＡｃで溶出、シリカ、ＥＬＳＤ検出）によって粗製生成物を精製した。過剰なＳＭ臭化物が最初に直ちに溶出され、モノアルキル化生成物が２番目に溶出され、続いて所望の生成物が溶出された。生成物を含有する分画を合わせ、濃縮し、透明な粘性のある油状物質として中間体３１を得た。ＬＣＭＳ方法Ｅ：Ｒｔ＝１．７３ｍｉｎ、［Ｍ＋Ｈ＋Ｈ２Ｏ］＋＝８４５．０。
中間体３２：１４－（ベンジルオキシ）－２－（１２－（ベンジルオキシ）－１２－オキソドデシル）－２－（（ベンジルオキシ）カルボニル）－１４－オキソテトラデカン酸
Figure 2024514352000102
中間体３１（６５０ｍｇ、０．７８６ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（７．２ｍＬ）中で溶解させ、ＴＦＡ（０．６０５ｍＬ、７．８６ｍｍｏｌ）で処理した。１６ｈ後、ＬＣ／ＭＳ ＥＬＳＤシグナルにより示される通り、反応が完了した。揮発物を除去し、ＮＰＬＣ（ＤＣＭ中０～５％ＭｅＯＨで溶出、シリカ）により、得られた残渣を精製した。生成物を含有する分画を合わせ、濃縮し、透明な油状物質として中間体３２を得た。ＬＣＭＳ方法Ｅ：Ｒｔ＝１．５７ｍｉｎ，［Ｍ＋Ｈ］＋＋７７１．９。
中間体３３：１，１２，２３－トリベンジル１２－（２，５－ジオキソピロリジン－１－イル）トリコサン－１，１２，１２，２３－テトラカルボキシラート
Figure 2024514352000103
１－ヒドロキシピロリジン－２，５－ジオン（５０．９ｍｇ、０．４４２ｍｍｏｌ）及びＤＣＭ中１Ｍ ＤＣＣ（Ａｌｄｒｉｃｈ、４２２μＬ、０．４２２ｍｍｏｌ）とともに中間体３２（３１０ｍｇ、０．４０２ｍｍｏｌ）を３．６ｍＬのＤＣＭに溶解させた。１５分後、ＤＣＵ副産物の沈殿が観察された。反応混合物を一晩撹拌し、その後、ＬＣ／ＭＳにより、生成物への完全な変換が示された。揮発物を部分的に除去し、ＮＰＬＣ（ヘプタン中０～３０％ＥｔＯＡｃで溶出、シリカ）によって油状生成物を精製し、中間体３３を得た。ＬＣＭＳ方法Ｅ：Ｒｔ＝１．４９ｍｉｎ、［Ｍ＋Ｈ＋Ｈ２Ｏ］＋＝８８６．５。
中間体３４：１５－（１２－（ベンジルオキシ）－１２－オキソドデシル）－１５－（（ベンジルオキシ）カルボニル）－３，１６－ジオキソ－１－フェニル－２，２０，２３，２６，２９，３２，３５，３８，４１，４４，４７，５０，５３，５６，５９，６２，６５，６８，７１，７４，７７，８０，８３，８６，８９－ペンタコサオキサ－１７－アザドノナコンタン－９２－酸
Figure 2024514352000104
１－アミノ－３，６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３，３６，３９，４２，４５，４８，５１，５４，５７，６０，６３，６６，６９，７２－テトラコサオキサペンタヘプタコンタン－７５－酸（Ｂｉｏｐｈａｒｍ、１６８ｍｇ、０．１４７ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（３８．５μＬ，０．２２０ｍｍｏｌ）及びＤＭＡＰ（１．８ｍｇ、０．００１５ｍｍｏｌ）で中間体３３（１２７．６ｍｇ、０．１４７ｍｍｏｌ）を処理した。１６ｈ後、反応が基本的に完了した。揮発物を除去し、ＮＰＬＣ（ＤＣＭ中０～１５％ＭｅＯＨで溶出、シリカ）によって残渣を精製した。生成物を含有する分画を合わせ、濃縮し、中間体３４を得た。ＬＣＭＳ方法Ｅ：Ｒｔ＝１．４１ｍｉｎ，［Ｍ＋２Ｈ］２＋＝９５１．６。
中間体３５：７７，８８－ジベンジル１－（２，５－ジオキソピロリジン－１－イル）７７－（１２－（ベンジルオキシ）－１２－オキソドデシル）－７６－オキソ－３，６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３，３６，３９，４２，４５，４８，５１，５４，５７，６０，６３，６６，６９，７２－テトラコサオキサ－７５－アザオクタオクタコンタン－１，７７，８８－トリカルボキシラート
Figure 2024514352000105
Figure 2024514352000106
中間体３４（１９４ｍｇ、０．１０２ｍｍｏｌ）を１ｍＬのＤＣＭ中で溶解させ、１－ヒドロキシピロリジン－２，５－ジオン（１１．７５ｍｇ，０．１０２ｍｍｏｌ）及びＤＣＭ中１Ｍ ＤＣＣ（Ａｌｄｒｉｃｈ、０．１０７ｍＬ、０．１０７ｍｍｏｌ）で処理した。１５ｍｉｎ後、ＤＣＵの沈殿が観察された。１６ｈ後、ＬＣ／ＭＳにより示される通り反応が完了した。揮発物を除去し、油状残渣を得た。この物質をＮＰＬＣ（ＤＣＭ中０～１５％ＭｅＯＨで溶出、シリカ、ＥＬＳＤ検出）によって精製した。生成物を含有する分画を合わせ、濃縮し、所望の生成物、中間体３５を得た。ＬＣＭＳ方法Ｅ：Ｒｔ＝１．４０ｍｉｎ、［Ｍ＋２Ｈ＋Ｈ２Ｏ］２＋＝１００８．２。
中間体３６：１２－（（７５－（（２，５－ジオキソピロリジン－１－イル）オキシ）－７５－オキソ－３，６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３，３６，３９，４２，４５，４８，５１，５４，５７，６０，６３，６６，６９，７２－テトラコサオキサペンタヘプタコンチル）カルバモイル）トリコサン－１，１２，２３－トリカルボン酸
Figure 2024514352000107
中間体３５（１３０ｍｇ、０．０６５ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（２ｍＬ）中で溶解させ、得られた混合物を窒素で３回パージした。１０％パラジウム炭素（３６．４ｍｇ、０．０３３ｍｍｏｌ）を慎重に添加し、脱気し、次いでバルーンリザーバーからの水素で置き換えた。ＬＣ／ＭＳ分析（ＥＬＳＤ検出）により示される通り、１６ｈ後に反応が完了した。ＮＰＬＣ（ＤＣＭ中のＭｅＯＨで溶出、シリカ、０～２０％）により精製を遂行し、所望の生成物を含有する分画を合わせ、濃縮し、中間体３６を得た。ＬＣＭＳ方法Ｅ：Ｒｔ＝０．６４ｍｉｎ，［Ｍ＋２Ｈ］２＋＝８６４．０。
中間体３７：ベンジル１４－ブロモテトラデカノアート
Figure 2024514352000108
１４－ブロモテトラデカン酸（１．００ｇｍ、３．２５ｍｍｏｌ）、ベンジルアルコール（６７７μＬ、６．５１ｍｍｏｌ）及びＥＤＣ・ＨＣｌ（９３６ｍｇ、４．８９ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（１１ｍＬ）中で合わせた。この溶液にＤＭＡＰ（１９．９ｍｇ、０．１６３ｍｍｏｌ）を一度に添加し、得られた混合物を一晩撹拌した。この時間後、ＬＣ／ＭＳ分析により示される通り、反応が完了した。揮発物を除去し、得られた残渣をＮＰＬＣ（ヘプタン中０～１５％ＥｔＯＡｃで溶出、シリカ）によって精製した。生成物を含有する分画を合わせ、濃縮し、所望の中間体３７を得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ）δ ７．３３－７．２２（ｍ，５Ｈ），５．０４（ｓ，２Ｈ），３．３４（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，２Ｈ），２．２８（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，２Ｈ），１．７８（ｐ，２Ｈ），１．５８（ｐ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，２Ｈ），１．３９－１．３１（ｍ，２Ｈ），１．２５－１．１６（ｍ，１６Ｈ）．
中間体３８：１，１４，２７－トリベンジル１４－（ｔｅｒｔ－ブチル）ヘプタコサン－１，１４，１４，２７－テトラカルボキシラート、１，１４－ジベンジル１－（ｔｅｒｔ－ブチル）テトラデカン－１，１，１４－トリカルボキシラート
Figure 2024514352000109
中間体３７（７１３ｍｇ、１．７９３ｍｍｏｌ）、ベンジルｔｅｒｔ－ブチルマロナート（１８７ｍｇ、０．７４７ｍｍｏｌ）及び油中６０％水素化ナトリウム（６５．７ｍｇ、１．６４４ｍｍｏｌ）を無水ＤＭＦ（８ｍＬ）中で合わせ、オーブン乾燥させた丸底フラスコ中、窒素雰囲気下で６０℃において一晩撹拌した。２４ｈ後、ＬＣ／ＭＳ分析は、モノ及びビスアルキル化マロナート生成物が存在することを示した。反応混合物をさらなるベンジル１４－ブロモテトラデカノアート（２２９．２ｍｇ、０．５７ｍｍｏｌ）及び油中６０％水素化ナトリウム（４５ｍｇ、１．１３ｍｍｏｌ）で処理した。１６ｈ後、ＬＣ／ＭＳにより示される通り、反応が基本的に完了した。反応混合物を１０ｍＬの水と１０ｍＬのＥｔＯＡｃとの間で慎重に分配した。水相を１０ｍＬのＥｔＯＡｃで洗浄した。有機相を合わせ、ブラインで洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ロータリーエバポレーターにより濃縮した。粗製生成物をＮＰＬＣ（ヘプタン中０～３５％ＥｔＯＡｃで溶出、シリカ、ＥＬＳＤ検出）によって精製した。過剰な出発物質臭化物が最初に直ちに溶出され、モノアルキル化生成物が２番目に溶出され、続いて所望の生成物が溶出された。生成物を含有する分画を合わせ、濃縮し、透明な粘性のある油状物質として中間体３８を得た。ＬＣＭＳ方法Ｅ：Ｒｔ＝１．８７ｍｉｎ，［Ｍ＋Ｎａ］＋＝９０５．７。
中間体３９：１６－（ベンジルオキシ）－２－（１４－（ベンジルオキシ）－１４－オキソテトラデシル）－２－（（ベンジルオキシ）カルボニル）－１６－オキソヘキサデカン酸
Figure 2024514352000110
中間体３８（２９０．４ｍｇ、０．３２９ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（３ｍＬ）に溶解させ、次いでＴＦＡ（０．２５ｍＬ、３．２９ｍｍｏｌ）で処理した。１６ｈ後、ＬＣ／ＭＳ ＥＬＳＤシグナルにより示される通り、反応が完了した。揮発物を除去し、得られた残渣をＮＰＬＣ（ＤＣＭ中の０～５％ＭｅＯＨで溶出、シリカ）によって精製した。生成物を含有する分画を合わせ、濃縮し、透明な油状物質として中間体３９を得た。ＬＣＭＳ方法Ｅ：Ｒｔ＝１．６５ｍｉｎ，［Ｍ＋Ｈ］＋＝８２８．１。
中間体４０：１，１４，２７－トリベンジル１４－（２，５－ジオキソピロリジン－１－イル）ヘプタコサン－１，１４，１４，２７－テトラカルボキシラート
Figure 2024514352000111
１－ヒドロキシピロリジン－２，５－ジオン（３５．６ｍｇ、０．３０９ｍｍｏｌ）及びＤＣＭ中１Ｍ ＤＣＣ（Ａｌｄｒｉｃｈ、２１２μＬ、０．２１２ｍｍｏｌ）とともに中間体３９（１７０．４ｍｇ、０．２０６ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（２ｍＬ）中で溶解させた。１０ｍｉｎ後、ＤＣＵの沈殿が観察された。反応混合物を一晩撹拌し、その時点でＬＣ／ＭＳにより、生成物への完全な変換が示された。揮発物を部分的に除去し、油状生成物をＮＰＬＣ（ヘプタン中０～４０％ＥｔＯＨで溶出、シリカ）によって精製し、中間体４０を得た。ＬＣＭＳ方法Ｅ：Ｒｔ＝１．６９ｍｉｎ，［Ｍ＋Ｈ］＋＝９２４．４。
中間体４１：１７－（１４－（ベンジルオキシ）－１４－オキソテトラデシル）－１７－（（ベンジルオキシ）カルボニル）－３，１８－ジオキソ－１－フェニル－２，２２，２５，２８，３１，３４，３７，４０，４３，４６，４９，５２，５５，５８，６１，６４，６７，７０，７３，７６，７９，８２，８５，８８，９１－ペンタコサオキサ－１９－アザテトラノナコンタン－９４－酸
Figure 2024514352000112
中間体４０（１１９．８ｍｇ、０．１３０ｍｍｏｌ）を１．３ｍＬのＤＣＭの溶液中で１－アミノ－３，６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３，３６，３９，４２，４５，４８，５１，５４，５７，６０，６３，６６，６９，７２－テトラコサオキサペンタヘプタコンタン－７５－酸（１４９ｍｇ、０．１３０ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（３４．０μＬ，０．１９４ｍｍｏｌ）及びＤＭＡＰ（１．５８４ｍｇ、０．００１３ｍｍｏｌ）で処理した。１６ｈ後、反応が基本的に完了した。揮発物を除去し、ＮＰＬＣ（ＤＣＭ中０～６５％ＭｅＯＨで溶出、シリカ）によって残渣を精製した。生成物を含有する分画を合わせ、濃縮し、中間体４１を得た。ＬＣＭＳ方法Ｅ：Ｒｔ＝１．５６ｍｉｎ，［Ｍ＋２Ｈ］２＋＝９７８．９。
中間体４２：７７，９０－ジベンジル１－（２，５－ジオキソピロリジン－１－イル）７７－（１４－（ベンジルオキシ）－１４－オキソテトラデシル）－７６－オキソ－３，６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３，３６，３９，４２，４５，４８，５１，５４，５７，６０，６３，６６，６９，７２－テトラコサオキサ－７５－アザノナコンタン－１，７７，９０－トリカルボキシラート
Figure 2024514352000113
中間体４１（１４４．２ｍｇ、０．０７４ｍｍｏｌ）を７００μＬ ＤＣＭに溶解させ、１－ヒドロキシピロリジン－２，５－ジオン（１２．７３ｍｇ、０．１１１ｍｍｏｌ）及びＤＣＭ中１Ｍ ＤＣＣ（ジシクロヘキシルメタンジイミン）（Ａｌｄｒｉｃｈ、０．０７７ｍＬ、０．０７７ｍｍｏｌ）で処理した。１５ｍｉｎ後、ＤＣＵの沈殿が観察された。１６ｈ後、ＬＣ／ＭＳにより示される通り、反応が完了した。揮発物を除去し、油状残渣を得た。ＥＬＳＤ検出とともにＮＰＬＣ（ＤＣＭ中０～２５％ＭｅＯＨで溶出、シリカ）によってこの物質を精製した。生成物を含有する分画を合わせ、濃縮し、所望の生成物、中間体４２を得た。ＬＣＭＳ方法Ｅ：Ｒｔ＝１．５５ｍｉｎ，［Ｍ＋２Ｈ＋Ｈ２Ｏ］２＋＝１０３６．２／
中間体４３：１４－（（７５－（（２，５－ジオキソピロリジン－１－イル）オキシ）－７５－オキソ－３，６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３，３６，３９，４２，４５，４８，５１，５４，５７，６０，６３，６６，６９，７２－テトラコサオキサペンタヘプタコンチル）カルバモイル）ヘプタコサン－１，１４，２７－トリカルボン酸
Figure 2024514352000114
スターラーバーが入った丸底フラスコ中で中間体４２（１１８．８ｍｇ、０．０５８ｍｍｏｌ）を３．７５ｍＬのＴＨＦに溶解させた。得られた混合物を窒素で３回パージし、次いで３０．８ｍｇ（０．０２９ｍｍｏｌ）１０％Ｐｄ／Ｃを添加した。脱気し、バルーンからの水素で置き換えた。１６ｈで反応が完了した。反応混合物を１０ｍＬのＤＣＭで希釈し、Ｃｅｌｉｔｅ（登録商標）に通してろ過し、ろ液を濃縮乾固した。ＮＰＬＣ（ＤＣＭ中ＭｅＯＨで溶出、シリカ、０～２０％）により精製を行い、生成物を含有する分画を合わせ、濃縮して、中間体４３を得た。ＬＣＭＳ方法Ｅ：Ｒｔ＝０．８６ｍｉｎ、［Ｍ＋２Ｈ］２＋＝８９２．０。
中間体４４：ベンジル１５－ブロモペンタデカノアート
Figure 2024514352000115
１５－ブロモペンタデカン酸（１９４９ｍｇ、６．０７ｍｍｏｌ）、ベンジルアルコール（９８４ｍｇ、９．１０ｍｍｏｌ）及びＥＤＣＩ・ＨＣｌ（１７４４ｍｇ、９．１０ｍｍｏｌ）を２４ｍＬのＤＣＭ中で合わせた。この溶液にＤＭＡＰ（３７．１ｍｇ、０．３０３ｍｍｏｌ）を一度に添加し、得られた混合物を３２ｈ撹拌させた。３２ｈ後、反応が基本的に完了した。反応混合物を水とＤＣＭとの間で分配した。有機相をブラインで洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過した。揮発物を除去し、得られた残渣をＮＰＬＣ（ヘプタン中０～１５％ＥｔＯＡｃで溶出、シリカ、ＥＬＳＤ検出）によって精製した。生成物を含有する分画を合わせ、濃縮し、中間体４４を得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ）δ ７．２９－７．２２（ｍ，５Ｈ），５．０２（ｓ，２Ｈ），３．３１（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，２Ｈ），２．２６（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，２Ｈ），１．７６（ｐ，２Ｈ），１．５４（ｐ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，２Ｈ），１．３６－１．３０（ｍ，２Ｈ），１．２２－１．１６（ｍ，１８Ｈ）．
中間体４５：１，１５，２９－トリベンジル１５－（ｔｅｒｔ－ブチル）ノナコサン－１，１５，１５，２９－テトラカルボキシラート、１，１５－ジベンジル１－（ｔｅｒｔ－ブチル）ペンタデカン－１，１，１５－トリカルボキシラート
Figure 2024514352000116
中間体４４（１０１３ｍｇ、２．４６１ｍｍｏｌ）、ベンジルｔｅｒｔ－ブチルマロナート（２８０ｍｇ、１．１１９ｍｍｏｌ）及び油中６０％水素化ナトリウム（９８ｍｇ、２．４６１ｍｍｏｌ）を無水ＤＭＦ（５．６ｍＬ）中で合わせ、オーブン乾燥させた丸底フラスコ中、窒素雰囲気下でＲＴにおいて一晩撹拌した。次に、反応混合物を１０ｍＬの水に慎重に注ぎ、１０ｍＬのＥｔＯＡｃで３回抽出した。有機相を合わせ、ブライン及び無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過し、濃縮した。ＮＰＬＣ（ヘプタン中０～６０％ＥｔＯＡｃで溶出、シリカ、ＥＬＳＤ検出）によって生成物を精製した。生成物を含有する分画を合わせ、濃縮し、透明な粘性のある油状物質として中間体４５を得た。ＬＣＭＳ方法Ｈ：Ｒｔ＝４．２３ｍｉｎ，［Ｍ＋Ｈ＋Ｈ２Ｏ］＋＝９２８．９。
中間体４６：１７－（ベンジルオキシ）－２－（１５－（ベンジルオキシ）－１５－オキソペンタデシル）－２－（（ベンジルオキシ）カルボニル）－１７－オキソヘプタデカン酸
Figure 2024514352000117
中間体４５（７５０ｍｇ、０．８２３ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（８．２３ｍＬ）に溶解させ、ＴＦＡ（６３４μＬ、８．２３ｍｍｏｌ）で処理した。１６ｈ後、反応が部分的に完了した。反応混合物を１週間撹拌したままにし、この時間後、基本的に完了した。得られた油状残渣をＥＬＳＤ検出とともにＮＰＬＣ（ヘプタン中０～２５％ＥｔＯＡｃで溶出、シリカ）によって精製した。生成物を含有する分画を濃縮し、中間体４６を得た。ＬＣＭＳ方法Ｈ：Ｒｔ＝３．７０ｍｉｎ、［Ｍ＋Ｈ＋Ｈ２Ｏ］＋＝８７３．２。
中間体４７：１，１５，２９－トリベンジル１５－（２，５－ジオキソピロリジン－１－イル）ノナコサン－１，１５，１５，２９－テトラカルボキシラート
Figure 2024514352000118
中間体４６（４３５ｍｇ、０．５０９ｍｍｏｌ）及び１－ヒドロキシピロリジン－２，５－ジオン（６４．４ｍｇ、０．５６０ｍｍｏｌ）を５ｍＬの無水ＤＣＭ（５ｍＬ）に懸濁し、ＤＣＭ中１Ｍ ＤＣＣ（Ａｌｄｒｉｃｈ、５３４μＬ、０．５３４ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物をＲＴで撹拌した。１５ｍｉｎ後、微細な沈殿物（ｐｐｔ）が形成され、これにより、ＤＣＵの形成が示唆された。１６ｈ後、ＬＣ／ＭＳにより示される通り、反応が完了した。蒸発によって揮発物を除去した。油状残渣をＮＰＬＣ（ＤＣＭ中の０～１０％ＭｅＯＨで溶出、シリカ、ＥＬＳＤ検出）によって精製した。生成物を含有する分画を合わせ、濃縮し、中間体４７を得た。ＬＣＭＳ方法Ｉ：Ｒｔ＝３．６２ｍｉｎ、［Ｍ＋Ｈ２Ｏ＋Ｈ］＋＝９７０．１。
中間体４８：１８－（１５－（ベンジルオキシ）－１５－オキソペンタデシル）－１８－（（ベンジルオキシ）カルボニル）－３，１９－ジオキソ－１－フェニル－２，２３，２６，２９，３２，３５，３８，４１，４４，４７，５０，５３，５６，５９，６２，６５，６８，７１，７４，７７，８０，８３，８６、８９，９２－ペンタコサオキサ－２０－アザペンタノナコンタン－９５－酸
Figure 2024514352000119
１－アミノ－３，６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３，３６，３９，４２，４５，４８，５１，５４，５７，６０，６３，６６，６９，７２－テトラコサオキサペンタヘプタコンタン－７５－酸（１９８ｍｇ、０．１７３ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（４８．５μＬ、０．３７５ｍｍｏｌ）及びＤＭＡＰ（２ｍｇ、０．１０９ｍｍｏｌ）とともに２ドラムスクリューキャップバイアル中で中間体４７（１４３ｍｇ、１５０ｍｍｏｌ）を１．５ｍＬのＤＣＭに溶解させた。得られた混合物を一晩撹拌した。次に、揮発物を除去し、ＮＰＬＣ（ＤＣＭ中０～１０％ＭｅＯＨで溶出、シリカ）を介して、得られた残渣を精製した。生成物を含有する分画を合わせ、濃縮し、透明な半固形物として中間体４８を得た。ＬＣＭＳ方法Ｉ：Ｒｔ＝２．５３ｍｉｎ，［Ｍ＋２Ｈ＋２Ｈ２Ｏ］２＋＝１０１０．１。
中間体４９：７７，９１－ジベンジル１－（２，５－ジオキソピロリジン－１－イル）７７－（１５－（ベンジルオキシ）－１５－オキソペンタデシル）－７６－オキソ－３，６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３，３６，３９，４２，４５，４８，５１，５４，５７，６０，６３，６６，６９，７２－テトラコサオキサ－７５－アザヘンノナコンタン－１，７７，９１－トリカルボキシラート
Figure 2024514352000120
オーブン乾燥させた１０ｍＬの丸底フラスコ（ＲＢＦ）中で撹拌しながら、中間体４８（２１０ｍｇ、０．１０６ｍｍｏｌ）及び１－ヒドロキシピロリジン－２，５－ジオン（１３．４ｍｇ、０．１１６ｍｍｏｌ）を１ｍＬの無水ＤＣＭ中に懸濁した。この混合物にＤＣＭ中１Ｍ ＤＣＣ（Ａｌｄｒｉｃｈ、１１６μＬ、０．１１６ｍｍｏｌ）を添加した。１６ｈ後、ＬＣ／ＭＳにより示される通り、反応が完了した。揮発物を除去し、得られた残渣をＮＰＬＣ（ＤＣＭ中０～１５％ＭｅＯＨで溶出、シリカ、ＥＬＳＤ検出）によって精製した。所望の生成物を含有する分画を合わせ、濃縮し、蝋様の固体として中間体４９を得た。ＬＣＭＳ方法Ｈ：Ｒｔ＝３．４８ｍｉｎ、［Ｍ＋Ｈ２Ｏ＋２Ｈ］２＋＝１０４９．９。
中間体５０：１５－（（７５－（（２，５－ジオキソピロリジン－１－イル）オキシ）－７５－オキソ－３，６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３，３６，３９，４２，４５，４８，５１，５４，５７，６０，６３，６６，６９，７２－テトラコサオキサペンタヘプタコンチル）カルバモイル）ノナコサン－１，１５，２９－トリカルボン酸
Figure 2024514352000121
スターラーバーを備えた丸底フラスコにおいて中間体４９（１４０ｍｇ、０．０６７ｍｍｏｌ）を無水ＴＨＦ（１ｍＬ）中で溶解させ、得られた混合物をＮ２で３回パージした。次に、乾燥１０％Ｐｄ炭素（７ｍｇ、６．７３μｍｏｌ）及び２０％水酸化Ｐｄ炭素（Ａｌｄｒｉｃｈ）（５ｍｇ、６．７３ｕｍｏｌ）を添加し、脱気し、バルーンからの水素で置き換えた。反応混合物を１６ｈ撹拌した。次に、脱気し、Ｎ２で置き換えた。反応混合物を５ｍＬの無水ＤＣＭで希釈した。Ｃｅｌｉｔｅ（登録商標）に通してろ過した後、揮発物を除去し、粘性のある油状物質として中間体５０を得た。ＬＣＭＳ方法Ｄ：Ｒｔ＝１．３６ｍｉｎ、［Ｍ＋２Ｈ］２＋＝９０６．２。
ペプチド合成：
標準的な合成技術、例えばＪｏｓｅ Ｐａｌｏｍｏ ＲＳＣ Ａｄｖ．，２０１４，４，３２６５８－３２６７２で言及されるような固体相ペプチド合成技術；Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，２ｎｄ Ｅｄ．，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ（１９８９）及び同様の参考文献に記載されるような組み換えＤＮＡ技術を用いてＧＬＰ１ペプチドを合成し得る。
ＧＬＰ－１類似体合成：［Ｆｍｏｃ－Ｈｉｓ７、Ａｉｂ８、Ａｒｇ３４］ＧＬＰ－１（７－３７）
Figure 2024514352000122
標準的なＦｍｏｃ化学を使用してペプチドを合成した。
１）樹脂調製：１－クロロ－２－［クロロ（ジフェニル）メチル］ベンゼン（１００ｍｍｏｌ、１．００当量）にＤＣＭ（４．００ｍＬ）中のＦｍｏｃ－Ｇｌｙ－ＯＨ（５０ｍｏｌ、０．５０当量）及びＤＩＥＡ（４００ｍｍｏｌ、４．００当量）を添加した。得られた混合物を窒素雰囲気下で２５℃において２ｈ撹拌した。次に、ＭｅＯＨ（１００ｍＬ）を添加し、混合物を窒素雰囲気下でさらに３０ｍｉｎ撹拌した。樹脂をＤＭＦ（５００ｍＬ）で３回洗浄した。次に、ＤＭＦ（５００ｍＬ）中の２０％ピペリジンを添加し、混合物を窒素雰囲気で２５℃において２０ｍｉｎ撹拌した。得られた混合物をろ過し、樹脂を得た。樹脂をＤＭＦ（５００ｍＬ）で５回洗浄し、次いでろ過して樹脂を得た。
２）カップリング：ＤＭＦ（３００ｍＬ）中のＤＩＥＡ（２００ｍｍｏｌ、４．００当量）、Ｆｍｏｃ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－ＯＨ（１００ｍｍｏｌ、２．００当量）及びＨＢＴＵ（９５ｍｍｏｌ、１．９０当量）の溶液を樹脂に添加し、窒素雰囲気下で２５℃において３０ｍｉｎ撹拌した。次に、樹脂をＤＭＦ（５００ｍＬ）で３回洗浄した。
３）脱保護：ＤＭＦ（５００ｍＬ）中の２０％ピペリジンを樹脂に添加し、得られた混合物を窒素雰囲気下で２５℃において２０ｍｉｎ撹拌した。樹脂をＤＭＦ（５００ｍＬ）で５回洗浄し、ろ過して樹脂を得た。
次に、さらなるアミノ酸単位＃３～３１を用いて上記のカップリング段階２及び脱保護段階３を繰り返し、ＧＬＰ－１又はＧＬＰ－１類似体を得た。
Figure 2024514352000123
ニンヒドリン試験によってカップリング反応を監視し、樹脂をＤＭＦで５回洗浄した。
ペプチド切断及び精製：
１）ＲＴで側鎖が保護されたペプチドを含有するフラスコに切断緩衝液（９２．５％ＴＦＡ／２．５％３－メルカプトプロピオン酸／２．５％ＴＩＳ／２．５％Ｈ２Ｏ）を添加し、次いで２ｈ撹拌した。
２）沈殿したペプチドを冷イソプロピルエーテルで洗浄した。
３）沈殿したペプチドをろ過し、ろ過ケーキを回収した。
４）沈殿したペプチドをイソプロピルエーテルでさらに２回洗浄した。
５）次に、粗製ペプチドを真空下で２ｈ乾燥させた。
粗製ペプチドをｐｒｅｐ－ＨＰＬＣ（ＴＦＡ条件；３０℃、Ａ：Ｈ２Ｏ中０．０７５％ＴＦＡ、Ｂ：ＣＨ３ＣＮで溶出）によって精製し、ｐｒｅｐ－ＨＰＬＣ（ＨＯＡｃ条件、Ａ：Ｈ２Ｏ中０．５％ＨＡｃ、Ｂ：ＡＣＮで溶出）によって精製し、白色固体として［Ｆｍｏｃ－Ｈｉｓ７、Ａｉｂ８、Ａｒｇ３４］ＧＬＰ－１－（７－３７）を得た。
（リンカーでの）ペプチドへの脂肪酸誘導体の複合化反応：
Figure 2024514352000124
ペプチド複合化反応に対する一般的手順：
方法Ａ：［Ｆｍｏｃ－Ｈｉｓ７、Ａｉｂ８、Ａｒｇ３４］ＧＬＰ－１－（７－３７）をＤＭＡ中に入れ、所望の「脂肪酸－リンカー複合物」ＮＨＳ－エステルを添加した。この混合物をＲＴで１６～４０ｈ撹拌した。ＬＣＭＳ分析により完全な変換が観察されたら、１０当量のピペリジンを添加し、撹拌を２ｈ継続して、Ｆｍｏｃ基を除去した。
粗製生成物をＨＰＬＣ（カラム：Ｗａｔｅｒｓ ＸＳｅｌｅｃｔ Ｃ１８ ＣＳＨ １９×１５０ｍｍ；５ミクロン）によって精製し、０．１％ＴＦＡ修飾剤入りの水中０～１００％ＡＣＮで溶出（３０ｍＬ／ｍｉｎ）して、白色の綿毛状の固体として所望の化合物のＴＦＡ塩を得た。ＢＴ ＡＧ １－ＸＢ Ｒｅｓｉｎ（ｃａｔ＃１４３－２４４６；ＢＩＯ－ＲＡＤ）と併せて水中に化合物を入れ、得られた混合物を１ｈ撹拌することによって残留ＴＦＡを除去した。次に、混合物をろ過し、樹脂をアセトニトリル及び水で洗浄した。溶液を凍結乾燥して、所望の化合物を得た。
方法Ｂ：［Ｆｍｏｃ－Ｈｉｓ７、Ａｉｂ８、Ａｒｇ３４］ＧＬＰ－１－（７－３７）をＤＭＦ中に入れ、所望の「脂肪酸－リンカー複合物」ＮＨＳ脂肪酸を添加した。この混合物をＲＴで１６～４０ｈ撹拌した。ＬＣＭＳ分析によって完全な変換が観察された後、１０当量のピペリジンを添加し、さらに２ｈ撹拌を継続して、Ｆｍｏｃ基を除去した。粗製生成物を０．１Ｎ炭酸アンモニウム水溶液で希釈し、ＲＰＬＣ（ＩＳＣＯ Ｇｏｌｄ Ｃ１８ １５０グラムカラム、水中１０～１００％ＡＣＮで溶出、０．１％ギ酸修飾剤）によって精製した。所望の生成物を含有する純粋な分画を合わせ、凍結乾燥して、所望の化合物を得た。
化合物１（ジアステレオマー混合物）
Figure 2024514352000125
無水ＤＭＦ（９．８ｍＬ）中の［Ｆｍｏｃ－Ｈｉｓ７、Ａｉｂ８、Ａｒｇ３４］ＧＬＰ－１－（７－３７）（３５６．６ｍｇ、０．０９９ｍｍｏｌ）の溶液に１．５ｍＬの無水ＤＭＦ中の中間体６（１９７ｍｇ、０．１１８ｍｍｏｌ）の溶液を添加した。１６ｈ後、約８５％変換まで反応が進んだため、さらなる０．２当量の中間体６を添加した（０．５ｍＬ無水ＤＭＦ中３２．９ｍｇ）。４８ｈ後、反応が完了した。次に、ピペリジン（９８μＬ、０．９８５ｍｍｏｌ、１０当量）の添加によりＦｍｏｃ除去を開始した。１６ｈ後、Ｆｍｏｃ除去を完了し、減圧下で溶媒を除去した。上記の粗製生成物を２５ｍＬの０．１Ｎ炭酸アンモニウム水溶液に入れ、ＩＳＣＯ ＲｅｄｉＳｅｐ Ｇｏｌｄ Ｃ１８Ａｑ １００ Ｇｒａｍカラム（カタログ番号６９－２２０３－５６２）上に注入（２回）し、０．１％ＴＦＡ修飾剤入りの溶出液としての水中０～１００％ＡＣＮで溶出した。生成物を含有する分画を凍結乾燥し、白色の綿毛状の粉末を得た。残留ＴＦＡを除去するために、７００ｍｇの水酸化物樹脂（ＢｉｏＲａｄ ＡＧ １－Ｘ８）をエッペンドルフチューブに量り取り、５×２ｍＬの１：１ ＡＣＮ：Ｈ２Ｏ、０．１％ギ酸ですすぎ、上清を除去し、各すすぎの間に廃棄した（遠心分離して樹脂を沈殿させる）。すすいだ樹脂を上で調製した生成物の溶液に添加し、１ｈ振盪した。上清をろ過し、次いで０．１％ギ酸入りの１０ｍＬの１：１ ＡＣＮ：Ｈ２Ｏですすいだ。この溶液を凍結乾燥して、白色粉末として化合物１を得た。ＬＣＭＳ方法Ｊ：実測ｍ／ｚ＝２４７４．８４４７（ＭＨ２ ２＋）、Ｒｔ：１．１６ｍｉｎ；計算した質量：４９４７．６７５０。ＬＣＭＳ方法Ｋ：実測ｍ／ｚ＝４９４８．７００２（ＭＨ）＋、Ｒｔ：２．３１ｍｉｎ；計算した質量：４９４７．６７５０。
化合物２：ジアステレオマー１
Figure 2024514352000126
複合化反応に対する一般的手順、方法Ｂ及び出発物質として中間体１５Ａ（Ｓ－エナンチオマー）を使用して、化合物２を合成した。
ＬＣＭＳ方法Ｆ：実測ｍ／ｚ＝１２３８．５（ＭＨ４ ４＋）、Ｒｔ：２．２５ｍｉｎ；計算した質量：４９４７．６７５０。
ＬＣＭＳ方法Ｋ：実測４９４８．７００２（ＭＨ＋）、Ｒｔ：２．３１ｍｉｎ；計算した質量：４９４７．６７５０。
化合物２を合成するための代替的方法：
中間体３から４、次いで５に、最後に中間体６に変換するために記載された反応と同様に、化合物２を合成するための代替的方法は、中間体３Ｂ（Ｓ－エナンチオマー）で始まり、これを４Ｂ（＝中間体４のＳ－エナンチオマー）に、次いで５Ｂ（＝中間体５のＳ－エナンチオマー）に、最終的に中間体６Ｂ（＝中間体６のＳ－エナンチオマー）に変換する。次に、複合化反応に対する一般的手順に従い、中間体６Ｂ及び［Ｆｍｏｃ－Ｈｉｓ７、Ａｉｂ８、Ａｒｇ３４］ＧＬＰ－１－（７－３７）を反応させ、化合物２を得る。
化合物２の合成に対する出発物質として使用されたエナンチオマー的に純粋な中間体３Ｂの誘導体の単Ｘ線結晶学を使用することにより、化合物２に対する脂肪酸部分における絶対的立体配置がＳであることが決定された。
化合物３：ジアステレオマー２
Figure 2024514352000127
複合化反応に対する一般的手順、方法Ｂを使用し、出発物質として中間体１５Ｂ（Ｒ－エナンチオマー）を使用して、化合物３を合成した。
ＬＣＭＳ方法Ｆ：実測ｍ／ｚ＝１２３８．６（ＭＨ４ ４＋）、Ｒｔ：２．２９ｍｉｎ；計算した質量：４９４７．６７５０。
ＬＣＭＳ方法Ｋ：実測４９４８．７００２（ＭＨ＋）、Ｒｔ：２．３１ｍｉｎ；計算した質量：４９４７．６７５０。
化合物３を合成するための代替的方法：
中間体３から４、次に５、最終的に中間体６への変換のために記載した反応と同様に、化合物３に対する代替的方法は、中間体３Ａ（Ｒ－エナンチオマー）で始まり、これを４Ａ（＝中間体４のＲ－エナンチオマー）、次いで５Ａ（＝中間体５のＲ－エナンチオマー）、最終的に中間体６Ａ（＝中間体６のＲ－エナンチオマー）に変換する。次に、化合物３を得るための複合化反応に対する一般的手順に従い、中間体６Ａ及び［Ｆｍｏｃ－Ｈｉｓ７、Ａｉｂ８、Ａｒｇ３４］ＧＬＰ－１－（７－３７）を反応させる。
化合物３に対する脂肪酸部分における絶対的立体配置がＲであることが決定された。これは、エナンチオマー的に純粋な中間体３Ａの誘導体の単Ｘ線結晶学によって決定された。
化合物４：
Figure 2024514352000128
中間体１９を用い、複合化反応のための一般的手順、方法Ａを使用して、化合物４を合成した。
ＬＣＭＳ方法Ｆ：実測ｍ／ｚ＝１０６１．７（ＭＨ４ ４＋），Ｒｔ：２．２６ｍｉｎ；計算した質量：４２４３．２５５６。
化合物５：
Figure 2024514352000129
中間体２２を用い、複合化反応のための一般的手順、方法Ｂを使用して、化合物５を合成した。
ＬＣＭＳ方法Ｆ：実測ｍ／ｚ＝９９６．６（ＭＨ４ ４＋）、Ｒｔ：２．３４ｍｉｎ；計算した質量：３９７９．０９８３。
化合物６：
Figure 2024514352000130
中間体２９を用い、複合化反応のための一般的手順、方法Ｂを使用して、化合物６を合成した。
ＬＣＭＳ方法Ｆ：実測ｍ／ｚ＝２４９０．９（ＭＨ２ ２＋）、Ｒｔ：２．０９ｍｉｎ；計算した質量：４９７７．６４９５。
ＬＣＭＳ方法Ｋ：実測４９７８．６６０２（ＭＨ＋）、Ｒｔ：２．０９ｍｉｎ；計算した質量：４９７７．６４９５。
化合物７：
Figure 2024514352000131
中間体３６を用い、複合化反応のための一般的手順、方法Ｂを使用して、化合物７を合成した。
ＬＣＭＳ方法Ｆ：実測ｍ／ｚ＝１２５３．１（ＭＨ４ ４＋）、Ｒｔ：２．１３ｍｉｎ；計算した質量：５００５．６８０５
ＬＣＭＳ方法Ｋ：実測５００６．７１００（ＭＨ＋）、Ｒｔ：２．１５ｍｉｎ；計算した質量：５００５．６８０５
化合物８：
Figure 2024514352000132
中間体４３を用い、複合化反応のための一般的手順、方法Ｂを使用して、化合物８を合成した。
ＬＣＭＳ方法Ｋ：実測５０６２．７７００（ＭＨ＋）、Ｒｔ：２．３０ｍｉｎ；計算した質量：５０６１．７４３１。
化合物９：
Figure 2024514352000133
中間体５０を用い、複合化反応のための一般的手順、方法Ａを使用して、化合物９を合成した。
ＬＣＭＳ方法Ｊ：実測ｍ／ｚ＝１２７４．０（ＭＨ４ ４＋）、Ｒｔ：１．１８ｍｉｎ；計算した質量：５０８９．７７４４。
当業者は、本明細書に具体的に記載される具体的な実施形態に対する多くの均等物を認識し、過剰ではない通常の実験を用いて確認することが可能である。このような均等物は、以下の特許請求の範囲に包含されるものとする。
付録１（配列リスト）
ＧＬＰ－１（７－３７）：
配列番号１：Ｈｉｓ－Ａｌａ－Ｇｌｕ－Ｇｌｙ－Ｔｈｒ－Ｐｈｅ－Ｔｈｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｐ－Ｖａｌ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ｔｙｒ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ－Ｇｌｙ－Ｇｌｎ－Ａｌａ－Ａｌａ－Ｌｙｓ－Ｇｌｕ－Ｐｈｅ－Ｉｌｅ－Ａｌａ－Ｔｒｐ－Ｌｅｕ－Ｖａｌ－Ｌｙｓ－Ｇｌｙ－Ａｒｇ－Ｇｌｙ
配列番号２：Ｘａａ７－Ｘａａ８－Ｇｌｕ－Ｇｌｙ－Ｔｈｒ－Ｐｈｅ－Ｔｈｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｐ－Ｘａａ１６－Ｓｅｒ－Ｘａａ１８－Ｘａａ１９－Ｘａａ２０－Ｇｌｕ－Ｘａａ２２－Ｘａａ２３－Ａｌａ－Ｘａａ２５－Ａｒｇ－Ｘａａ２７－Ｐｈｅ－ｌｌｅ－Ｘａａ３０－Ｔｒｐ－Ｌｅｕ－Ｘａａ３３－Ｘａａ３４－Ｘａａ３５－Ｘａａ３６－Ｘａａ３７
Ｘａａ１６は、Ｖａｌ又はＬｅｕ；
Ｘａａ１８は、Ｓｅｒ、Ｌｙｓ又はＡｒｇ；
Ｘａａ１９は、Ｔｙｒ又はＧｌｎ
Ｘａａ２０は、Ｌｅｕ又はＭｅｔ；
Ｘａａ２２は、Ｇｌｙ、Ｇｌｕ又はＡｉｂ；
Ｘａａ２３は、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ又はＡｒｇ；
Ｘａａ２５は、Ａｌａ又はＶａｌ；
Ｘａａ２７は、Ｇｌｕ又はＬｅｕ；
Ｘａａ３０は、Ａｌａ、Ｇｌｕ又はＡｒｇ；
Ｘａａ３３は、Ｖａｌ又はＬｙｓ；
Ｘａａ３４は、Ｌｙｓ、Ｇｌｕ、Ａｓｎ又はＡｒｇ；
Ｘａａ３５は、Ｇｌｙ又はＡｉｂ；
Ｘａａ３６は、Ａｒｇ、Ｇｌｙ又はＬｙｓ又は存在しない；及び
Ｘａａ３７は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｇｌｕ、Ｐｒｏ、Ｌｙｓであるか又は存在しない。
［Ａｉｂ８、Ａｒｇ３４］ＧＬＰ－１（７－３７）：
配列番号３：Ｈｉｓ－Ａｉｂ－Ｇｌｕ－Ｇｌｙ－Ｔｈｒ－Ｐｈｅ－Ｔｈｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｐ－Ｖａｌ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ｔｙｒ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ－Ｇｌｙ－Ｇｌｎ－Ａｌａ－Ａｌａ－Ｌｙｓ－Ｇｌｕ－Ｐｈｅ－Ｉｌｅ－Ａｌａ－Ｔｒｐ－Ｌｅｕ－Ｖａｌ－Ａｒｇ－Ｇｌｙ－Ａｒｇ－Ｇｌｙ
［Ａｒｇ３４］ＧＬＰ－１（７－３７）：
配列番号４：Ｈｉｓ－Ａｌａ－Ｇｌｕ－Ｇｌｙ－Ｔｈｒ－Ｐｈｅ－Ｔｈｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｐ－Ｖａｌ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ｔｙｒ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ－Ｇｌｙ－Ｇｌｎ－Ａｌａ－Ａｌａ－Ｌｙｓ－Ｇｌｕ－Ｐｈｅ－Ｉｌｅ－Ａｌａ－Ｔｒｐ－Ｌｅｕ－Ｖａｌ－Ａｒｇ－Ｇｌｙ－Ａｒｇ－Ｇｌｙ
Figure 2024514352000134
Figure 2024514352000135
Figure 2024514352000136
Figure 2024514352000137

Claims (30)

  1. 式（Ｉ）：
    Figure 2024514352000138
    （式中、
    Ｒ１及びＲ２は、独立して、ＣＨ３、ＯＨ、ＣＯ２Ｈ、ＣＨ＝ＣＨ２及びＣ≡ＣＨから選択され；
    ｎ及びｍは、それぞれ５～３０から独立して選択される整数であり；
    Ｌは、任意選択的なリンカーであり；
    Ｐは、ＧＬＰ－１又はＧＬＰ－１類似体である）
    の化合物又は薬学的に許容可能なその塩。
  2. Ｐは、ＮＨ基を介してＬに結合される、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容可能なその塩。
  3. Ｌは、
    Figure 2024514352000139
    （式中、
    ｙは、１～３６から選択される整数であり、
    ｓは、０、１又は２であり、且つｋは、１、２又は３であり、並びに
    ＊＊の印を付けられた波線は、式（Ｉ）のＣＯ基への連結を示し、及び
    ＊＊＊の印を付けられた波線は、基Ｐへの連結を示す）
    から選択される、請求項１又は２に記載の式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容可能なその塩。
  4. Ｌは、
    Figure 2024514352000140
    （式中、ｙは、１～３６から選択される整数である）
    である、請求項３に記載の式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容可能なその塩。
  5. 式（ＩＩ）
    Figure 2024514352000141
    （式中、
    ＮＨ－Ｐ’は、リンカーＬのＣＯ基にＮＨ部分を介して連結される基Ｐを表し；
    Ｒ１及びＲ２は、独立して、ＣＨ３、ＯＨ及びＣＯ２Ｈから選択され；
    ｎ及びｍは、それぞれ５～３０から独立して選択される整数であり；及び
    ｙは、１～３６から選択される整数である）
    の化合物又は薬学的に許容可能なその塩である、請求項１又は４に記載の式（Ｉ）の化合物。
  6. Ｒ１は、ＣＯ２Ｈであり、及びＲ２は、ＣＨ３であり；ｎは、１０であり、及びｍは、１０であるか；
    Ｒ１は、ＣＯ２Ｈであり、及びＲ２は、ＣＯ２Ｈであり；ｎは、１０であり、及びｍは、１０であるか；
    Ｒ１は、ＣＯ２Ｈであり、及びＲ２は、ＣＯ２Ｈであり；ｎは、１０であり、及びｍは、１１であるか；
    Ｒ１は、ＣＯ２Ｈであり、及びＲ２は、ＣＯ２Ｈであり；ｎは、１０であり、及びｍは、１３であるか；又は
    Ｒ１は、ＣＯ２Ｈであり、及びＲ２は、ＣＯ２Ｈであり；ｎは、１０であり、及びｍは、１４である、請求項５に記載の式（ＩＩ）の化合物。
  7. 式（ＩＩＩ）
    Figure 2024514352000142
    （式中、Ｒ１は、ＣＯ２Ｈであり、及びＲ２は、ＣＨ３である）
    の化合物又は薬学的に許容可能なその塩である、請求項５又は６に記載の式（ＩＩ）の化合物。
  8. 式（ＩＶ）
    Figure 2024514352000143
    の化合物又は薬学的に許容可能なその塩であり、前記化合物は、ラセミ体として若しくは立体化学的に濃縮された混合物として存在するか、又は＊の印を付けられた炭素原子に関して立体化学的に純粋である、請求項７に記載の式（ＩＩＩ）の化合物。
  9. 式（ＩＶａ）の化合物若しくは式（ＩＶｂ）の化合物
    Figure 2024514352000144
    （式中、ｙは、１～３６から選択される整数である）
    又は薬学的に許容可能なその塩である、請求項８に記載の式（ＩＶ）の化合物。
  10. ｙは、２～２４から選択される整数である、請求項９に記載の式（ＩＶａ）の化合物又は式（ＩＶｂ）の化合物。
  11. ｙは、２４である、請求項１０に記載の式（ＩＶａ）の化合物又は式（ＩＶｂ）の化合物。
  12. Ｐは、
    ＧＬＰ－１（７－３７）：Ｈｉｓ－Ａｌａ－Ｇｌｕ－Ｇｌｙ－Ｔｈｒ－Ｐｈｅ－Ｔｈｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｐ－Ｖａｌ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ｔｙｒ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ－Ｇｌｙ－Ｇｌｎ－Ａｌａ－Ａｌａ－Ｌｙｓ－Ｇｌｕ－Ｐｈｅ－Ｉｌｅ－Ａｌａ－Ｔｒｐ－Ｌｅｕ－Ｖａｌ－Ｌｙｓ－Ｇｌｙ－Ａｒｇ－Ｇｌｙ（配列番号１）、及び
    前記配列ＧＬＰ－１（７－３７）と比較して、位置７若しくは位置８又は位置７及び８に非天然アミノ酸残基を含むＧＬＰ－１類似体
    から選択される、請求項１～１１の何れか一項に記載の化合物又は薬学的に許容可能なその塩。
  13. Ｐは、
    ［Ａｉｂ８、Ａｒｇ３４］ＧＬＰ－１（７－３７）：Ｈｉｓ－Ａｉｂ－Ｇｌｕ－Ｇｌｙ－Ｔｈｒ－Ｐｈｅ－Ｔｈｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｐ－Ｖａｌ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ｔｙｒ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ－Ｇｌｙ－Ｇｌｎ－Ａｌａ－Ａｌａ－Ｌｙｓ－Ｇｌｕ－Ｐｈｅ－Ｉｌｅ－Ａｌａ－Ｔｒｐ－Ｌｅｕ－Ｖａｌ－Ａｒｇ－Ｇｌｙ－Ａｒｇ－Ｇｌｙ（配列番号３）；及び
    ［Ａｒｇ３４］ＧＬＰ－１（７－３７）：Ｈｉｓ－Ａｌａ－Ｇｌｕ－Ｇｌｙ－Ｔｈｒ－Ｐｈｅ－Ｔｈｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｐ－Ｖａｌ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ｔｙｒ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ－Ｇｌｙ－Ｇｌｎ－Ａｌａ－Ａｌａ－Ｌｙｓ－Ｇｌｕ－Ｐｈｅ－Ｉｌｅ－Ａｌａ－Ｔｒｐ－Ｌｅｕ－Ｖａｌ－Ａｒｇ－Ｇｌｙ－Ａｒｇ－Ｇｌｙ（配列番号４）
    から選択される、請求項１～１１の何れか一項に記載の式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容可能なその塩。
  14. Ｐは、以下：
    Figure 2024514352000145
    で示されるような［Ａｉｂ８、Ａｒｇ３４］ＧＬＰ－１（７－３７）であり、アミノ酸メンバーＬｙｓにおける波線は、Ｌへの連結点を示す、請求項１～１１の何れか一項に記載の式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容可能なその塩。
  15. Figure 2024514352000146
    （式中、ｙは、１～３６から選択される整数である）
    であり、前記化合物は、ジアステレオマー混合物、立体化学的に濃縮された混合物として存在するか、又は＊の印を付けられた炭素原子に関して立体化学的に純粋である、請求項１～１１若しくは１４の何れか一項に記載の式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容可能なその塩。
  16. Figure 2024514352000147
    （化合物１）、
    Figure 2024514352000148
    （化合物２）、
    Figure 2024514352000149
    （化合物３）、
    Figure 2024514352000150
    （化合物４）、
    Figure 2024514352000151
    （化合物５）、
    Figure 2024514352000152
    （化合物６）、
    Figure 2024514352000153
    （化合物７）、
    Figure 2024514352000154
    （化合物８）、及び
    Figure 2024514352000155
    （化合物９）
    から選択される、請求項１～１１若しくは１５の何れか一項に記載の式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容可能なその塩。
  17. Figure 2024514352000156
    である、請求項１６に記載の式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容可能なその塩。
  18. Figure 2024514352000157
    である、請求項１６に記載の式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容可能なその塩。
  19. Figure 2024514352000158
    である、請求項１６に記載の式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容可能なその塩。
  20. 請求項１～１９の何れか一項に記載の化合物又は薬学的に許容可能なその塩と、１つ以上の薬学的に許容可能な担体とを含む医薬組成物。
  21. 治療的有効量の、請求項１～１９の何れか一項に記載の化合物又は薬学的に許容可能なその塩と、１つ以上の治療的に活性がある薬剤とを含む組み合わせ。
  22. 前記化合物は、化合物１、２及び３から選択される、請求項２１に記載の組み合わせ。
  23. 薬剤としての使用のための、請求項１～１９の何れか一項に記載の化合物又は薬学的に許容可能なその塩。
  24. 肥満、２型糖尿病、インスリン抵抗性、高インスリン血症、耐糖能障害、高血糖、慢性腎臓病及び糖尿病性腎症から選択される１つ以上の糖尿病合併症、脂質異常症、メタボリックシンドローム、ＮＡＦＬＤ及びＮＡＳＨから選択される進行性肝疾患、心血管系疾患並びに糖尿病に付随する末梢ニューロパチーから選択される疾患又は障害の処置での使用のための、請求項１～１９の何れか一項に記載の化合物又は薬学的に許容可能なその塩。
  25. 前記心血管系疾患は、高血圧、アテローム性動脈硬化症、末梢動脈疾患、卒中発作、心筋症、心房細動、駆出率が低下した心不全（ＨＦｒＥＦ）、駆出率が中間範囲の心不全（ＨＦｍｒＥＦ）及び駆出率が保たれた心不全（ＨＦｐＥＦ）から選択される心不全、冠動脈心疾患並びに心房性不整脈及び心室性不整脈から選択される不整脈から選択される、請求項２４に記載の使用のための化合物。
  26. 化合物１、２及び３から選択される、請求項２３～２５の何れか一項に記載の使用のための化合物。
  27. グルカゴン様ペプチド１受容体（ＧＬＰ１Ｒ）のアゴニストに感受性である治療を必要とする患者を処置する方法であって、治療的有効量の、請求項１～１９の何れか一項に記載の化合物又は薬学的に許容可能なその塩を前記患者に投与することを含む方法。
  28. 肥満、２型糖尿病、インスリン抵抗性、高インスリン血症、耐糖能障害、高血糖、慢性腎臓病及び糖尿病性腎症から選択される１つ以上の糖尿病合併症、脂質異常症、メタボリックシンドローム、ＮＡＦＬＤ及びＮＡＳＨから選択される進行性肝疾患、心血管系疾患並びに糖尿病に付随する末梢ニューロパチーから選択される疾患又は障害の処置を、それを必要とする患者において行う方法であって、治療的有効量の、請求項１～１９の何れか一項に記載の化合物又は薬学的に許容可能なその塩を前記患者に投与することを含む方法。
  29. 前記心血管系疾患は、高血圧、アテローム性動脈硬化症、末梢動脈疾患、卒中発作、心筋症、心房細動、駆出率が低下した心不全（ＨＦｒＥＦ）、駆出率が中間範囲の心不全（ＨＦｍｒＥＦ）及び駆出率が保たれた心不全（ＨＦｐＥＦ）から選択される心不全、冠動脈心疾患並びに心房性不整脈及び心室性不整脈から選択される不整脈から選択される、請求項２８に記載の方法。
  30. 前記化合物は、化合物１、２及び３から選択される、請求項２８又は２９に記載の方法。
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