JP2024509955A - アシル活性化酵素、ならびにそれを含むトランスジェニック細胞、組織および生物 - Google Patents

アシル活性化酵素、ならびにそれを含むトランスジェニック細胞、組織および生物 Download PDF

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Abstract

本発明は、ヘリクリサム・アンブラクリゲルムに由来し、アシル活性化酵素（ＡＡＥ）ファミリーに属するタンパク質またはその複数をコード化する、ポリヌクレオチド配列を提供する。さらに、該ポリヌクレオチドを含む人工核酸分子、それを含むトランスジェニック細胞、組織、または植物を提供する。さらに、アシルコエンザイムＡ（ＣｏＡ）を合成する方法を提供する。【選択図】図６

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０２１年３月１０日に出願された表題「ＡＣＹＬ ＡＣＴＩＶＡＴＩＮＧ ＥＮＺＹＭＥ ＡＮＤ Ａ ＴＲＡＮＳＧＥＮＩＣ ＣＥＬＬ， ＴＩＳＳＵＥ， ＡＮＤ ＯＲＧＡＮＩＳＭ ＣＯＭＰＲＩＳＩＮＧ ＳＡＭＥ」の米国特許仮出願第６３／１５８，９６７号の優先権の利益を主張しており、該仮特許出願の内容は、全体として参照により本明細書に組み入れられる。
発明の分野
本発明は、アシル活性化酵素（ＡＡＥ）、およびＡＡＥをコード化するポリヌクレオチド、およびアシルコエンザイムＡ（ＣｏＡ）を生成するためなどのＡＡＥを使用する方法に関する。
背景
カンナビノイドは、カンナビス・サティバＬ（Ｃａｎｎａｂｉｓ ｓａｔｉｖａ Ｌ．）（大麻）を代表するものであるが、幾つかの特異的化合物はまた、他の開花植物、コケ類、および真菌においても同定されている。これらの植物の１つが、ヘリクリサム・アンブラクリゲルム・レス（Ｈｅｌｉｃｈｒｙｓｕｍ ｕｍｂｒａｃｕｌｉｇｅｒｕｍ Ｌｅｓｓ）（Ｈ．アンブラクリゲルム）である。この多年草の南アフリカ産植物は、主要なカンナビノイド全ての５炭素アルキル前駆体であるカンナビゲロール酸（ＣＢＧＡ）を生成する、大麻以外で公知の唯一の植物である。
大麻におけるカンナビノイド生合成の最初の酵素的ステップは、ヘキサノイルコエンザイムＡ（ＣｏＡ）と３分子のマロニル－ＣｏＡとの縮合を触媒するポリケチド合成酵素によるオリベトール酸の形成である。Δ９－テトラヒドロカンナビノール酸およびカンナビジオール酸を含む主要なカンナビノイドは、中鎖脂肪アシル－ＣｏＡである前駆体ヘキサノイル－ＣｏＡから形成される。多様な側鎖を有する他のカンナビノイドが、異なる長さの脂肪族－ＣｏＡから形成される（例えば、Δ９－テトラヒドロカンナビバリン酸は、ｎ－ブチリル－ＣｏＡプライマーから形成される）。
植物中のヘキサノイル－ＣｏＡおよび他のアシル－ＣｏＡチオエステルは、ＡＴＰを用いてカルボン酸基質の活性化を触媒するアシル活性化酵素（ＡＡＥ。アシル－ＣｏＡ合成酵素とも呼ばれる）により合成される。これらの酵素は、短鎖、中鎖、長鎖および超長鎖脂肪酸、ジャスモン酸エステル前駆体、フェニルプロパノイド由来の酸（例えば、桂皮酸）ならびにマロン酸塩、酢酸塩、およびクエン酸塩などの他の有機酸を含む種々のカルボン酸に作用する。非常に数少ない中鎖アシルＣｏＡ合成酵素が、過去に自然界で同定されている。植物では、アラビドプシス・サチアナ、ＡＡＥ７、Ａｔ４ｇ０５１６０およびＡｔ５ｇ６３３８０からの３種の酵素が、ヘキサノアートからヘキサノイル－ＣｏＡを形成することが示されている。
カンナビノイドは、貴重な天然産物である。カンナビノイド生合成に関与する酵素をコード化する遺伝子は、カンナビノイドの遺伝子操作および／または代謝的操作において有用となろう。そのような遺伝子はまた、カンナビノイドベースの薬剤の生成のため、または細菌もしくは酵母などの異種生物においてカンナビノイド生合成を再構成するため、または組換えタンパク質を利用して無細胞系でカンナビノイドを生成するために、マーカー選抜育種を介した特定の大麻の変種の作出に有用であり得る。
カンナビノイド生合成の酵素をコード化する遺伝子は、カンナビノイド類似体の合成、およびカンナビノイド前駆体の類似体の合成においても有用であり得る。カンナビノイド類似体は、過去に合成されており、医薬品として有用であり得る。芳香族ポリケチドの合成に関与する酵素、およびそのような酵素をコード化するヌクレオチド配列を同定することが、当該技術分野で依然として必要とされている。
概要
第一の態様によれば、配列番号１～１１に対して少なくとも８９％の相同性を有する核酸配列、またはそれらの任意の組合わせを含む単離ＤＮＡ分子が提供される。
別の態様によれば、配列番号１～１１のいずれか１つに対して少なくとも８９％の相同性を有する核酸配列、またはそれらの任意の組合わせを含む人工核酸分子が提供される。
別の態様によれば、配列番号１～１１のいずれか１つに対して少なくとも８９％の相同性を有する核酸配列、またはそれらの任意の組合わせを含むプラスミドまたはアグロバクテリウムが提供される。
別の態様によれば、（ａ）本発明の単離ＤＮＡ分子；（ｂ）本明細書に開示された人工ベクター；および（ｃ）本明細書に開示されたプラスミドまたはアグロバクテリウム、のうちのいずれか１つによりコード化された単離タンパク質が提供される。
別の態様によれば、（ａ）配列番号１～１１のいずれか１つに対して少なくとも８９％の相同性を有する核酸配列、もしくはそれらの任意の組合わせ；（ｂ）本明細書に開示された人工核酸分子；（ｃ）本明細書に開示されたプラスミドもしくはアグロバクテリウム；（ｄ）本明細書に開示された単離タンパク質；または（ｅ）（ａ）～（ｄ）の任意の組合わせ、を含むトランスジェニック細胞が提供される。
別の態様によれば、本明細書に開示されたトランスジェニック細胞に由来する抽出物、またはそれらの任意の画分が提供される。
別の態様によれば、（ａ）配列番号１～１１のいずれか１つに対して少なくとも８９％の相同性を有する核酸配列、もしくはそれらの任意の組合わせ；（ｂ）本明細書に開示された人工ベクター；（ｃ）本明細書に開示されたプラスミドもしくはアグロバクテリウム；（ｄ）本明細書に開示された単離タンパク質；（ｅ）本明細書に開示されたトランスジェニック細胞；または（ｆ）（ａ）～（ｅ）の任意の組合わせ、を含むトランスジェニック植物、トランスジェニック植物組織または植物部分が提供される。
別の態様によれば、（ａ）本発明の単離ＤＮＡ分子；（ｂ）本明細書に開示された人工ベクター；（ｃ）本明細書に開示されたプラスミドもしくはアグロバクテリウム；（ｃ）本明細書に開示された単離タンパク質；（ｄ）本明細書に開示されたトランスジェニック細胞；（ｅ）本明細書に開示された抽出物；（ｆ）本明細書に開示されたトランスジェニック植物組織もしくは植物部分；または（ｇ）（ａ）～（ｇ）の任意の組合わせと、許容できる担体と、を含む組成物が提供される。
別の態様によれば、（ａ）配列番号１～１１のいずれか１つに対して少なくとも８９％の相同性を有する核酸配列を含む人工ベクターを含む細胞を提供するステップと；（ｂ）ステップ（ａ）の細胞を培養して、人工ベクターによりコード化されたタンパク質が発現され、それによりアシルＣｏＡを合成するステップと、を含む、アシルコエンザイムＡ（ＣｏＡ）を合成する方法が提供される。
別の態様によれば、配列番号１２～２２のいずれか１つに対して少なくとも９３％の相同性を有するアミノ酸配列を含むタンパク質の存在下で、ＣｏＡをアシル基と接触させ、それによりアシルＣｏＡを合成することを含む、アシルＣｏＡを合成する方法が提供される。
別の態様によれば、（ａ）配列番号１～１１のいずれか１つに対して少なくとも８９％の相同性を有する核酸配列を含むトランスジェニック細胞またはトランスフェクト細胞を培地中で培養するステップと、（ｂ）トランスジェニック細胞またはトランスフェクト細胞を抽出し、それによりトランスジェニック細胞またはトランスフェクト細胞から抽出物を得るステップと、を含む、トランスジェニック細胞またはトランスフェクト細胞から抽出物を得る方法が提供される。
別の態様によれば、本明細書に開示された方法に従って得られたトランスジェニック細胞またはトランスフェクト細胞の抽出物が提供される。
別の態様によれば、本明細書に開示された方法に従って得られた培養トランスジェニック細胞または培養トランスフェクト細胞から分離された培地またはその一部が提供される。
別の態様によれば、（ａ）本明細書に開示された抽出物；（ｂ）本明細書に開示された培地もしくはその一部；または（ａ）と（ｂ）との組合せと、許容できる担体と、を含む組成物が提供される。
幾つかの実施形態において、核酸配列は、配列番号１～１１のいずれか１つに対して少なくとも８９％の相同性を有し、１，２００～２，５００ヌクレオチド長である。
幾つかの実施形態において、核酸配列は、アシル活性化酵素活性を特徴とするタンパク質をコード化する。
幾つかの実施形態において、単離タンパク質は、配列番号１２～２２のいずれか１つに対して少なくとも９３％の相同性を有するアミノ酸配列を含む。
幾つかの実施形態において、単離タンパク質は、配列番号１２～２２のいずれか１つのアミノ酸配列からなる。
幾つかの実施形態において、単離タンパク質は、アシル活性化酵素活性を特徴とする。
幾つかの実施形態において、アシルは、Ｃ１～Ｃ８アルキル鎖およびアルファ不飽和フェニルアルキルカルボン酸からなる群から選択される。
幾つかの実施形態において、Ｃ１～Ｃ８アルキル鎖は、ヘキサン酸である。
幾つかの実施形態において、アルファ不飽和フェニルアルキルカルボン酸は、桂皮酸またはその誘導体を含む。
幾つかの実施形態において、桂皮酸誘導体は、桂皮酸のヒドロキシル化誘導体である。
幾つかの実施形態において、桂皮酸のヒドロキシル化誘導体は、クマル酸である。
幾つかの実施形態において、トランスジェニック細胞は、単細胞生物、多細胞生物の細胞、および培養された細胞のいずれか１つである。
幾つかの実施形態において、単細胞生物は、真菌または細菌を含む。
幾つかの実施形態において、真菌は、酵母細胞である。
幾つかの実施形態において、抽出物は、単離ＤＮＡ分子、単離タンパク質、またはその両方を含む。
幾つかの実施形態において、トランスジェニック細胞は、カンナビス・サティバ植物である。
幾つかの実施形態において、タンパク質は、アシル活性化酵素活性を有することを特徴とする。
幾つかの実施形態において、培養することは、細胞に有効量のアシル基を補充することを含む。
幾つかの実施形態において、アシル基は、タンパク質の存在下でアシルＣｏＡを得るためにＣｏＡにコンジュゲートされる。
幾つかの実施形態において、アルファ不飽和フェニルアルキルカルボン酸は、桂皮酸もしくはその誘導体を含む、または桂皮酸もしくはその誘導体である。
幾つかの実施形態において、人工ベクターは、発現ベクターである。
幾つかの実施形態において、細胞は、原核細胞または真核細胞である。
幾つかの実施形態において、細胞は、本発明の単離ＤＮＡ分子もしくは本明細書に開示された人工ベクターを有するトランスジェニック細胞、または本発明の単離ＤＮＡ分子もしくは本明細書に開示された人工ベクターをトランスフェクトした細胞である。
幾つかの実施形態において、アシルＣｏＡは、アセチルＣｏＡ、ブチリルＣｏＡ、ヘキサノイルＣｏＡ、オクタノイルＣｏＡ、シンナモイルＣｏＡ、クマロイルＣｏＡ、およびそれらの任意の組合わせからなる群から選択される。
幾つかの実施形態において、該方法は、細胞に人工ベクターを導入またはトランスフェクトすることを含む、（ａ）に先行するステップをさらに含む。
幾つかの実施形態において、接触させることは、無細胞系においてである。
幾つかの実施形態において、該方法は、培地から培養トランスジェニック細胞または培養トランスフェクト細胞を分離することを含む、ステップ（ｂ）に先行するステップをさらに含む。
他に定義されない限り、本明細書で用いられる全ての技術的および／または科学的用語は、本発明が属する技術分野の当業者により一般的に理解されるものと同じ意味を有する。本明細書に記載されたものと類似または同一の方法および材料が、本発明の実施形態の実践またはテストにおいて用いられ得るが、例示的方法および／または材料を、以下に記載する。矛盾がある場合、定義を含む本発明の明細書が優先する。加えて材料、方法、および実施例は、例示に過ぎず、必ずしも限定を意図するものではない。
本発明のさらなる実施形態および完全な適用可能範囲は、本明細書の以後に与えられた詳細な記載から自明であろう。しかし、本発明の主旨および範囲内の様々な変更および改良が、この詳細な記載から当業者に自明であるため、詳細な説明および具体的実施例は、本発明の好ましい実施形態を示しているが、単なる例証として与えられることが、理解されなければならない。
Ｈ．アンブラクリゲルムのエタノール抽出物中のＣＢＧＡおよびｈｅｌｉＣＢＧＡの同定を示すグラフを含む図である。Ｈ．アンブラクリゲルム試料と比較した（１Ａ）ＣＢＧＡ（３５９．２２２Ｄａ）および（１Ｂ）ｈｅｌｉＣＢＧＡ（３９３．２０６Ｄａ）標準物質の抽出イオン電流（ＸＩＣ）クロマトグラムおよびＭＳ／ＭＳスペクトルマッチング。 Ｈ．アンブラクリゲルムの葉にヘキサン酸Ｄ１１またはフェニルアラニン－Ｄ５およびフェニルアラニン－１３Ｃ９をそれぞれ供給することを介したＣＢＧＡおよびｈｅｌｉＣＢＧＡの同位体標識を示す化学構造の図式およびグラフを含む図である。Ｈ．アンブラクリゲルムの葉に、二重蒸留水（ＤＤＷ、対照）、（２Ａ）非標識／標識ヘキサン酸、または（２Ｄ）非標識／標識フェニルアラニン、のどれかを３日間供給し、その後、カンナビノイドを抽出し、ＵＰＬＣ－ｑＴＯＦを介して分析した。（２Ｂおよび２Ｅ）ＣＢＧＡおよびｈｅｌｉＣＢＧＡの抽出イオン電流（ＸＩＣ）クロマトグラムならびに（２Ｃおよび２Ｆ）ＭＳ／ＭＳスペクトル、およびそれらの対応する標識ピーク。非標識型を標識型と比較するＭＳ／ＭＳスペクトルは、標識と一致する質量シフトを有する類似のフラグメンテーションパターンを示す。標識された代謝産物は、その天然の非標識類似体とほぼ同一の生理化学的特性を有するため、新たに誘導された同じ位相は、ｍ／ｚ値が異なることを除き、共溶出したクロマトグラフィーピーク（非標識型および標識型）として検出された。 Ｈ．アンブラクリゲルムエタノール抽出物中のＣＢＧＡ型アルキル相同体の同定を示す化学構造の図式およびグラフを含む図である。（３Ａ）ｍ／ｚ ３３１．１９１、３４５．２０７、３５９．２２２、３７３．２３８、および３８７．２５４の抽出イオン電流（ＸＩＣ）クロマトグラム。各クロマトグラム内の印をつけたピークは、検出されたＣ１～Ｃ７化合物に対応する。示された通り、アルキル相同体は、親油性が増加した結果として鎖長の順に逆相カラムから溶出する。（３Ｂ）非標識および（３Ｃ）同位体標識化合物の陰極性におけるＭＳ／ＭＳスペクトル。おそらく存在量が少ないために、必ずしも全ての標識化合物が検出されたわけではなかった。（３Ｄ）ＭＳ／ＭＳスペクトルおよび標識によるＣＢＧＡの示唆されたフラグメンテーション構造。青色のフラグメントは、ヘキサン酸－Ｄ１１を標識された化合物中の特定のフラグメントのｍ／ｚに対応する。全てのアルカリ相同体では、アルカリ鎖を含む全ての生成物イオンのＭＳ／ＭＳスペクトルにおいて適切ななｍ／ｚシフトが観察された。（３Ｅ）同定された化合物の構造および同位体標識前駆体の概要。 Ｈ．アンブラクリゲルムエタノール抽出物中の同定されたプレニル化アルキル相同体フロログルシノイドのクロマトグラムおよび概要を含む図である。（４Ａ）ｍ／ｚ３０３．１６０、３１７．１７５、３４５．２０７、３５９．２２２、３７３．２３８、および３８７．２５４の抽出イオン電流（ＸＩＣ）クロマトグラム。各クロマトグラム内の印を付けたピークは、検出されたＰｈ１～Ｐｈ１３化合物に対応する。示された通り、アルキル相同体は、親油性が増加した結果として鎖長の順に逆相カラムから溶出する。（４Ｂ）同定された化合物の構造および同位体標識前駆体の概要。 Ｈ．アンブラクリゲルムからクローニングされたＡＡＥ、ならびにアラビドプシス・サリアナ（Ｓｈｏｋｅｙ ｅｔ ａｌ．， ２００３）および大麻（Ｓｔｏｕｔ ｅｔ ａｌ．， ２０１２）植物からのＡＡＥの系統樹を含む図である。配列を、ＭＵＳＣＬＥを用いて整列させ、ＪＴＴ距離行列法を利用した最尤系統樹を、ＭＥＧＡ１１ソフトウエアを用いて構築した。ブートストラップ値を、各ブランチのノードで示す（１００レプリケート）。ＣｓＡＡＥ１を強調し、これは大麻における最も活性な酵素であり、ＨｕＡＡＥ４（配列番号４）と類似している。本明細書に開示された高活性酵素であるＨｕＡＡＥ６（配列番号６）は、より大きな基質（例えば、１６～３０炭素長鎖脂肪酸）に対して作用することが公知である長鎖アシル－ＣｏＡ合成酵素（ＬＡＣＳ）と類似している。 大腸菌細胞内で生成された精製Ｈ．アンブラクリゲルムアシル活性化酵素（ＨｕＡＡＥ）タンパク質の組換え酵素アッセイを示す垂直棒グラフを含む図である。ピーク面積を示す。様々なアルキル（短鎖および中鎖脂肪酸）および芳香族（桂皮酸およびクマル酸）基質を、酵素アッセイで用いた。
詳細な記載
本発明は、幾つかの実施形態において、ヘリクリサム・アンブラクリゲルムに由来し、アシル活性化酵素（ＡＡＥ）ファミリーに属するタンパク質またはその複数をコード化するポリヌクレオチド配列、およびそれを用いる方法を対象とする。
幾つかの実施形態によれば、配列番号１～１１のいずれか１つを含む核酸配列、またはそれらの任意の組合わせを含むポリヌクレオチド（「本発明のポリヌクレオチド」）が提供される。
幾つかの実施形態において、ポリヌクレオチドは、単離ポリヌクレオチドである。幾つかの実施形態において、ポリヌクレオチドは、ＤＮＡ分子である。幾つかの実施形態において、ポリヌクレオチドは、単離ＤＮＡ分子である。幾つかの実施形態において、ＤＮＡ分子は、単離ＤＮＡ分子である。幾つかの実施形態において、ＤＮＡ分子は、相補性ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）分子である。
本明細書で用いられる用語「単離ポリヌクレオチド」および「単離ＤＮＡ分子」は、天然の核酸に会合する炭水化物、脂質、または他のタンパク質性不純物などの混入細胞成分を本質的に含まない核酸分子を指す。典型的には単離ＤＮＡまたはＲＮＡの調製物は、核酸を高度に精製された形態、例えば少なくとも約８０％純粋、少なくとも約９０％純粋、少なくとも約９５％純粋、９５％を超えて純粋、または９９％を超えて純粋な形態で含有する。幾つかの実施形態において、単離ポリヌクレオチドは、ＤＮＡ、ＲＮＡ、およびｃＤＮＡのいずれか１つである。幾つかの実施形態において、単離ポリヌクレオチドは、合成ポリヌクレオチドである。ポリヌクレオチドの合成は、当該技術分野で周知であり、例えばプライマーリンカーにより複数の核酸分子を共にライゲートすること、または共有結合で連結することにより、実施され得る。
用語「核酸」は、当該技術分野で周知である。本明細書で用いられる「核酸」は一般に、ヌクレオチドを含むＤＮＡ、ＲＮＡまたはそれらの誘導体もしくは類似体の任意の分子（例えば、鎖）を指す。ヌクレオチドは、ヌクレオシドとリン酸基とで構成される。ヌクレオシドの窒素性塩基は、例えばＤＮＡ（例えば、アデニン「Ａ」、グアニン「Ｇ」、チミン「Ｔ」、またはシトシン「Ｃ」）またはＲＮＡ（Ａ、Ｇ、ウラシル「Ｕ」またはＣ）中に見出される天然に存在するプリンまたはピリミジンヌクレオシドを含む。
用語「核酸分子」は、一本鎖ＲＮＡ（ｓｓＲＮＡ）、二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）、一本鎖ＤＮＡ（ｓｓＤＮＡ）、二本鎖ＤＮＡ（ｄｓＤＮＡ）、低分子ＲＮＡ、環状核酸、ゲノムＤＮＡまたはＲＮＡのフラグメント、分解核酸、増幅生成物、修飾核酸、プラスミドまたはオルガネラ核酸、およびオリゴヌクレオチドなどの人工核酸を含むが、それらに限定されない。
幾つかの実施形態において、ポリヌクレオチドは、以下の核酸配列を含む、またはそれからなる：
ＡＴＧＡＣＧＴＣＧＴＣＡＡＡＧＡＡＧＴＴＴＡＣＡＧＴＴＧＡＡＧＴＴＧＡＡＣＣＧＧＣＧＡＴＴＣＣＧＧＣＣＡＡＧＧＡＴＧＧＡＡＡＡＣＣＧＴＣＧＧＣＴＧＧＡＣＣＧＧＴＴＴＡＣＣＧＴＡＧＴＡＴＣＴＴＴＧＣＴＡＡＡＧＡＣＧＧＴＴＴＴＣＣＡＧＣＴＣＡＴＡＴＴＧＡＣＧＧＴＴＴＡＧＡＴＴＣＡＴＧＴＴＧＧＧＡＴＡＴＴＴＴＣＣＧＣＣＴＡＴＣＴＧＴＧＧＡＧＡＡＡＴＡＣＣＣＣＡＡＴＡＡＴＣＧＡＡＴＧＣＴＴＧＧＣＡＣＣＣＧＴＧＡＡＴＴＴＧＴＧＡＡＴＧＧＡＡＡＧＣＡＴＧＧＡＣＣＡＴＡＴＧＴＡＴＧＧＴＣＧＡＣＴＴＡＣＡＡＡＣＡＡＧＴＡＴＡＣＧＡＣＡＡＧＧＴＧＡＴＡＡＡＧＧＴＴＧＧＡＡＡＴＧＣＴＡＴＣＣＧＴＧＣＧＴＧＴＧＧＴＧＴＣＧＡＧＣＣＡＧＧＴＧＧＴＣＧＧＴＧＴＧＧＧＡＴＣＴＡＴＧＧＴＧＣＣＡＡＴＴＧＴＧＣＡＧＡＡＴＧＧＡＴＴＡＴＧＡＧＣＡＴＧＧＡＧＧＣＡＴＧＴＡＡＴＧＣＴＣＡＴＧＧＧＣＴＴＴＡＣＴＧＴＧＴＡＣＣＴＴＴＡＴＡＣＧＡＴＡＣＣＴＴＡＧＧＴＧＣＴＧＧＴＧＣＡＡＴＴＧＡＡＴＴＣＡＴＴＣＴＴＴＧＣＣＡＴＧＣＣＧＡＧＧＴＴＡＣＡＡＴＴＧＣＴＴＴＴＧＴＡＧＡＡＧＡＧＡＡＡＡＡＧＡＴＣＣＣＴＧＡＧＴＴＧＴＴＧＡＡＡＡＣＡＴＴＴＣＣＧＡＡＡＧＣＴＧＧＡＧＡＡＴＴＴＣＴＧＡＡＡＡＣＡＡＴＴＧＴＧＡＧＣＴＴＴＧＧＡＡＡＡＧＴＴＡＣＴＣＣＴＧＡＡＣＡＡＡＧＡＧＡＡＣＡＡＧＣＴＧＡＡＡＡＣＴＴＴＧＧＴＴＴＡＡＡＡＡＴＡＣＡＴＴＣＡＴＧＧＧＡＴＧＡＡＴＴＣＴＴＧＡＣＡＴＴＧＧＧＴＧＡＴＧＡＴＡＡＡＡＡＣＴＴＴＧＡＣＣＴＧＣＣＡＣＴＧＡＡＧＧＡＡＡＡＡＡＣＴＧＡＴＡＴＣＴＧＴＡＣＡＡＴＡＡＴＧＴＡＣＡＣＴＡＧＴＧＧＡＡＣＡＡＣＴＧＧＴＧＡＴＣＣＴＡＡＧＧＧＴＧＴＴＣＴＧＡＴＴＴＣＡＡＡＴＡＡＣＡＧＣＡＴＧＧＣＡＡＣＡＣＴＴＡＴＡＧＣＴＧＧＣＧＴＣＡＡＴＣＧＴＣＴＡＣＴＡＧＡＴＡＧＴＧＣＡＡＡＡＧＡＡＴＣＴＴＴＧＡＡＴＣＡＡＣＡＴＧＡＴＧＴＣＴＡＴＣＴＣＴＣＧＴＴＴＴＴＡＣＣＴＣＴＧＧＣＡＣＡＴＡＴＡＴＴＴＧＡＣＣＧＴＧＴＧＡＴＴＧＡＡＧＡＡＴＧＴＴＴＴＡＴＣＡＡＴＣＡＴＧＧＡＧＣＡＴＣＴＡＴＡＧＧＡＴＴＣＴＧＧＣＧＴＧＧＧＧＡＴＧＴＴＡＡＡＴＴＧＣＴＧＡＴＴＧＡＡＧＡＣＡＴＡＧＧＧＧＡＧＣＴＧＡＡＡＣＣＴＡＣＴＡＴＴＴＴＣＴＧＣＧＣＴＧＴＴＣＣＴＣＧＡＧＴＧＴＴＧＧＡＴＡＧＧＡＴＴＴＡＴＴＣＡＧＧＴＴＴＧＣＡＡＣＡＧＡＡＡＡＴＴＴＣＴＧＣＧＧＧＧＧＧＴＴＴＴＡＴＣＡＡＡＣＧＴＡＡＣＴＴＡＴＴＴＡＡＴＣＴＡＧＣＣＴＡＴＴＣＡＴＡＣＡＡＡＴＴＡＣＧＴＡＡＴＡＴＧＡＡＧＧＧＡＧＧＧＡＡＡＡＣＡＣＡＴＴＣＡＧＡＧＧＣＡＴＣＴＣＣＡＴＴＧＡＧＴＧＡＣＡＡＡＡＴＣＧＴＣＴＴＣＡＧＴＡＡＧＧＴＴＡＡＧＣＡＧＧＧＣＣＴＡＧＧＡＧＧＡＡＡＴＧＴＡＣＧＡＡＴＴＡＴＴＣＴＡＴＣＴＧＧＡＧＣＴＧＣＴＣＣＡＣＴＡＧＣＴＣＣＡＣＡＴＧＴＡＧＡＡＧＣＴＴＡＣＣＴＧＡＡＡＧＴＡＧＴＧＧＣＡＴＧＴＡＧＴＣＡＣＧＴＣＣＴＧＣＡＡＧＧＡＴＡＴＧＧＣＣＴＧＡＣＡＧＡＡＡＣＴＴＧＴＧＣＴＧＧＡＴＣＡＴＴＴＧＴＣＴＣＡＣＴＧＣＣＡＡＡＣＧＡＡＡＴＧＧＡＧＡＴＧＣＴＧＧＧＴＡＣＡＧＴＧＧＧＣＣＣＡＣＣＴＧＴＡＣＣＡＧＴＴＴＴＧＧＡＴＧＣＣＣＧＡＣＴＧＧＡＧＴＣＴＧＴＴＣＣＧＧＡＧＡＴＧＡＡＣＴＡＴＧＡＴＧＣＴＴＧＴＴＣＡＡＧＣＡＡＡＣＣＡＣＡＡＧＧＡＧＡＡＡＴＡＴＧＴＡＴＴＡＧＡＧＧＧＧＡＴＧＴＴＣＴＧＴＴＴＴＣＡＧＧＡＴＡＣＴＡＣＡＡＧＣＧＴＧＡＧＧＡＣＣＴＴＡＣＡＡＡＡＧＡＡＧＴＣＴＴＴＧＴＴＧＡＴＧＧＧＴＧＧＴＴＣＣＡＴＡＣＡＧＧＴＧＡＴＡＴＣＧＧＴＧＡＧＴＧＧＣＡＡＣＣＡＧＡＴＧＧＡＡＧＣＡＴＧＡＡＡＡＴＴＡＴＴＧＡＣＣＧＡＡＡＧＡＡＡＡＡＣＡＴＴＴＴＴＡＡＧＣＴＣＴＣＡＣＡＡＧＧＡＧＡＧＴＡＣＧＴＣＧＣＡＧＴＴＧＡＡＡＡＴＣＴＧＧＡＧＡＡＴＧＴＴＴＡＴＧＧＡＡＡＴＧＴＴＴＣＴＧＡＣＡＴＴＧＡＣＡＣＧＡＴＡＴＧＧＡＴＡＴＡＴＧＧＧＡＡＣＡＧＣＴＴＣＧＡＧＴＴＴＴＧＴＣＴＴＧＴＴＧＣＴＧＴＧＧＴＣＡＡＣＣＣＡＡＡＴＧＡＧＣＣＡＧＣＡＡＴＣＡＡＡＣＧＴＴＡＴＧＣＴＧＡＡＧＣＡＡＡＴＡＡＴＡＴＴＴＣＴＧＧＧＧＡＴＴＴＴＧＡＴＴＣＡＴＴＡＴＧＴＧＡＡＡＡＴＣＣＣＡＡＡＡＴＴＡＡＡＧＡＡＴＡＣＡＴＡＣＴＣＧＧＡＧＡＧＣＴＣＧＣＴＡＧＡＡＴＴＧＧＡＡＡＡＧＡＧＡＡＡＡＡＧＴＴＡＡＡＡＧＧＴＴＴＴＧＡＡＴＴＣＧＴＣＡＡＡＧＣＴＧＴＴＣＡＣＣＴＴＧＡＣＣＣＴＧＴＣＣＣＴＴＴＣＧＡＣＡＴＧＧＡＡＣＧＴＧＡＣＣＴＴＣＴＧＡＣＣＣＣＡＡＣＡＴＴＣＡＡＧＡＡＧＡＡＡＡＧＧＣＣＣＣＡＧＡＴＧＣＴＴＡＡＧＴＡＣＴＡＣＣＡＧＧＡＴＧＴＡＡＴＴＧＡＴＡＡＣＡＴＧＴＡＣＡＡＧＡＣＴＡＴＴＡＡＣＡＡＧＡＡＧＴＧＡ（配列番号１)。
幾つかの実施形態において、ポリヌクレオチドは、配列番号１に対して少なくとも８９％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、もしくは少なくとも９７％、またはそれらの間の任意の値および範囲の相同性もしくは同一性を有する核酸配列を含む。各可能性は、本発明の別の実施形態を表す。幾つかの実施形態において、ポリヌクレオチドは、配列番号１に対して８９％～１００％、９０％～１００％、９５％～１００％、または９７％～１００％の相同性または同一性を有する核酸配列を含む。各可能性は、本発明の別の実施形態を表す。
幾つかの実施形態において、ポリヌクレオチドは、以下の核酸配列を含む、またはそれからなる：
ＡＴＧＧＡＴＧＣＡＴＴＧＡＧＧＡＡＧＣＣＴＡＡＴＴＣＴＧＣＧＡＡＴＴＣＡＡＧＣＣＣＴＴＴＡＡＣＴＣＣＴＡＴＣＧＧＡＴＴＣＣＴＴＧＡＡＡＧＧＧＣＡＧＣＣＧＴＣＧＴＡＴＴＴＧＣＣＡＡＣＴＣＴＣＣＴＴＣＧＡＴＣＧＴＡＴＡＣＡＡＣＡＡＴＣＴＣＡＴＣＴＡＣＡＣＴＴＧＧＡＧＣＧＡＴＡＣＴＴＴＴＣＡＴＣＧＴＴＧＴＣＴＡＣＧＡＴＴＡＧＣＴＴＣＡＴＣＣＡＴＣＴＣＴＣＧＴＣＴＣＧＣＴＡＴＡＣＧＡＡＡＡＧＧＣＧＡＣＧＴＴＧＴＴＴＣＡＧＴＡＣＴＣＧＣＡＣＣＡＡＡＣＡＴＣＣＣＴＧＣＣＡＴＴＴＡＴＧＡＧＣＴＴＣＡＴＴＴＴＧＧＣＡＴＣＡＣＴＡＴＧＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＴＡＡＴＣＡＡＣＡＣＣＡＴＣＡＡＴＡＣＣＣＧＴＴＴＧＧＡＴＧＣＧＣＧＴＡＣＴＡＴＣＴＣＡＡＴＡＣＴＣＣＴＴＴＧＴＣＡＣＡＧＴＧＡＡＴＣＣＡＡＧＣＴＣＧＴＣＴＴＴＧＴＴＧＡＴＴＡＣＣＡＧＴＴＧＡＣＴＣＧＴＣＴＴＡＴＡＣＧＡＧＡＡＧＣＧＧＴＴＴＣＴＴＴＧＡＴＧＣＣＡＧＡＴＧＣＴＴＧＴＧＴＴＣＣＣＣＣＡＣＡＡＣＴＣＧＴＣＣＴＣＡＴＣＧＴＡＧＡＴＧＡＣＧＧＡＣＡＴＡＡＴＣＴＡＴＣＴＴＴＡＣＴＴＴＣＴＧＡＴＣＡＡＴＴＴＡＴＣＡＡＴＡＣＴＴＡＴＧＡＡＧＣＴＡＴＧＧＴＴＧＡＡＡＣＡＧＧＧＧＡＴＣＣＴＧＧＧＴＴＣＡＡＴＴＧＧＧＴＴＣＧＴＣＣＡＧＡＴＡＧＣＧＡＴＴＧＧＧＡＣＣＣＴＣＴＡＡＣＧＴＴＧＡＡＴＴＡＣＡＣＴＴＣＴＧＧＧＡＣＧＡＣＴＴＣＴＴＣＣＣＣＣＡＡＡＧＧＴＧＴＴＧＴＴＡＡＣＡＧＣＣＡＣＣＧＴＧＧＡＴＣＧＴＴＣＡＴＡＧＴＡＧＣＧＴＴＴＧＡＴＴＣＴＴＴＡＣＴＧＧＡＧＴＧＧＣＡＣＧＴＡＣＣＧＡＡＡＣＡＧＣＣＧＡＴＣＡＴＧＣＴＧＴＧＧＡＣＴＣＴＡＣＣＡＡＴＧＴＴＣＣＡＣＧＣＡＡＡＴＧＧＧＴＧＧＡＧＣＴＴＣＧＴＴＴＧＧＧＧＴＡＴＧＧＣＡＧＣＴＧＴＴＧＧＴＧＧＣＡＣＣＡＡＴＧＴＴＴＧＣＣＴＴＣＧＴＡＡＡＴＴＣＧＡＴＧＣＴＡＣＴＡＴＴＡＴＴＴＡＴＧＡＣＡＣＣＡＴＴＣＧＴＡＡＣＣＡＣＣＡＴＧＴＧＡＣＧＣＡＣＡＴＧＴＧＴＧＧＣＧＣＣＣＣＴＧＴＴＧＴＡＣＴＣＡＡＣＡＴＧＴＴＡＴＣＡＧＡＡＧＧＴＡＡＧＣＣＡＣＴＴＧＡＡＣＡＣＡＣＧＧＴＴＣＡＣＡＴＡＡＴＧＡＣＡＧＣＡＧＧＡＧＣＡＣＣＡＣＣＴＣＣＡＧＣＧＧＣＣＧＴＴＴＴＧＴＴＧＣＧＡＡＣＣＧＡＧＴＣＧＣＴＡＧＧＧＴＴＴＧＡＧＧＴＧＡＣＴＣＡＴＧＧＧＴＴＣＧＧＧＡＴＧＡＣＡＧＡＡＡＣＡＧＧＣＧＧＧＴＴＡＧＴＴＧＴＧＴＣＡＴＧＣＴＣＡＴＧＧＡＡＧＡＡＡＧＡＡＴＧＧＡＡＴＣＧＴＣＴＧＣＣＣＧＴＧＡＣＴＧＡＧＡＡＡＧＣＧＡＧＡＴＴＧＡＡＡＧＣＧＡＧＡＣＡＡＧＧＡＧＴＴＡＧＡＡＣＡＣＴＴＧＧＧＡＴＧＡＣＧＧＡＡＧＴＧＧＡＴＡＴＴＧＴＧＧＡＴＣＣＣＧＡＧＴＣＡＧＧＡＧＴＡＡＧＴＧＴＧＡＣＴＣＧＡＧＡＣＧＧＧＴＴＡＡＣＴＣＡＧＧＧＧＧＡＡＴＴＡＧＴＧＴＴＧＣＧＡＧＧＴＧＧＧＴＣＴＡＴＴＡＴＧＴＴＧＧＧＴＴＡＣＴＴＡＡＡＡＧＡＴＣＣＧＧＡＡＡＣＡＡＣＡＡＡＴＡＡＡＴＣＣＧＴＴＡＡＡＡＡＣＧＧＧＴＧＧＴＴＴＴＡＴＡＣＣＧＧＣＧＡＣＧＴＧＧＣＧＧＴＧＡＴＧＣＡＴＣＣＡＧＡＴＧＧＡＴＡＴＣＴＧＧＡＡＡＴＡＡＡＡＧＡＴＡＧＡＴＣＡＡＡＡＧＡＴＧＴＡＡＴＡＡＴＡＡＧＴＧＧＴＧＧＴＧＡＧＡＡＴＡＴＡＡＧＴＡＧＴＧＴＧＧＡＧＧＴＴＧＡＧＴＣＡＡＴＣＴＴＧＴＡＴＣＡＧＣＡＴＣＣＴＧＣＧＡＴＴＡＡＣＧＡＧＧＣＣＧＣＧＧＴＧＧＴＧＧＧＡＣＧＧＣＣＴＧＡＴＧＡＧＴＴＴＴＧＧＧＧＣＧＡＧＴＣＧＣＣＧＴＧＴＧＣＴＴＴＣＧＴＧＡＧＴＴＴＧＡＡＡＧＡＴＧＡＴＡＡＣＧＧＧＡＡＧＧＴＧＧＣＴＧＴＧＣＣＡＡＣＡＧＣＧＧＡＴＧＡＧＡＴＡＡＴＧＡＡＧＴＴＴＴＧＴＡＡＡＧＧＡＡＡＧＴＴＧＣＣＧＧＧＴＴＡＣＡＴＧＧＴＡＣＣＣＡＡＡＴＣＧＧＴＴＧＴＧＴＴＴＡＡＧＡＡＧＧＡＴＣＴＴＣＣＧＡＡＧＡＣＡＴＣＴＡＣＣＧＧＴＡＡＧＡＴＴＣＡＧＡＡＡＴＡＴＧＴＧＣＴＴＡＧＡＡＡＡＣＴＴＧＣＴＡＡＡＧＡＴＴＴＧＧＧＴＴＴＴＧＣＴＧＴＡＡＡＡＡＧＴＣＧＡＡＴＴＴＡＧ（配列番号２）。
幾つかの実施形態において、ポリヌクレオチドは、配列番号２に対して少なくとも７９％、少なくとも８３％、少なくとも８７％、少なくとも８９％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、もしくは少なくとも９９％、またはそれらの間の任意の値および範囲の相同性もしくは同一性を有する核酸配列を含む。各可能性は、本発明の別の実施形態を表す。幾つかの実施形態において、ポリヌクレオチドは、配列番号１に対して７９％～１００％、８０％～１００％、８２％～１００％、または９０％～１００％の相同性または同一性を有する核酸配列を含む。各可能性は、本発明の別の実施形態を表す。
幾つかの実施形態において、ポリヌクレオチドは、以下の核酸配列を含む、またはそれからなる：
ＡＴＧＡＣＣＧＡＡＧＡＧＧＡＡＡＡＡＡＡＴＡＡＡＧＣＡＧＡＧＴＣＣＡＴＧＧＧＧＡＴＡＡＡＡＡＣＧＴＡＴＧＣＡＴＧＧＡＧＣＧＡＣＴＴＣＣＴＴＣＡＴＣＴＧＧＧＧＡＧＴＡＡＡＡＡＴＣＣＴＴＣＡＧＡＡＣＴＧＣＡＡＡＣＧＣＣＴＡＡＡＧＣＡＡＣＴＧＡＴＡＴＡＴＧＴＡＣＡＡＴＣＡＴＧＴＡＣＡＣＴＡＧＴＧＧＣＡＣＴＡＧＴＧＧＡＧＡＣＣＣＡＡＡＡＧＧＴＧＴＴＡＴＡＴＴＧＡＣＡＣＡＴＧＡＡＡＡＴＧＣＴＡＣＡＡＣＡＡＡＣＡＴＡＣＧＡＧＧＧＧＴＴＧＡＴＣＴＴＴＴＣＡＴＧＧＡＡＣＡＡＴＴＣＧＡＧＧＡＣＡＡＧＡＴＧＡＣＣＧＴＧＧＡＴＧＡＣＧＴＴＴＡＴＡＴＡＴＣＴＴＴＣＴＴＧＣＣＴＣＴＴＧＣＴＣＡＣＡＴＴＣＴＴＧＡＴＣＧＴＡＴＧＡＴＴＧＡＡＧＡＡＴＡＣＴＴＴＴＴＣＣＧＴＡＧＴＧＧＴＧＣＣＴＣＴＧＴＣＧＧＣＴＴＣＴＡＴＣＡＴＧＧＧＧＡＴＡＴＣＡＡＴＧＣＧＴＴＧＡＡＧＧＡＧＧＡＴＴＴＧＧＣＡＧＡＧＣＴＡＡＡＧＣＣＴＡＣＴＴＴＴＴＴＧＧＣＴＧＧＡＧＴＡＣＣＴＣＧＡＧＴＴＴＴＧＧＡＡＡＡＧＡＴＴＣＡＣＧＡＡＧＧＴＧＴＧＣＴＴＡＡＡＧＧＡＣＴＡＧＡＡＧＡＡＧＴＴＡＡＴＣＣＡＡＧＧＡＧＡＡＧＧＡＡＡＡＴＡＴＴＴＡＧＣＡＴＴＴＴＡＴＡＣＡＡＴＣＡＣＡＡＡＣＴＡＡＡＡＴＡＣＡＴＧＡＡＡＧＣＡＧＧＴＴＡＣＡＡＧＣＡＴＡＡＡＴＡＴＧＣＡＴＣＡＣＣＡＣＴＴＧＣＡＧＡＴＣＴＧＣＴＴＧＣＴＴＴＴＡＧＡＡＡＧＧＴＴＡＡＧＡＡＣＡＧＧＣＴＴＧＧＴＧＧＧＣＧＡＡＴＴＣＧＴＣＴＴＡＴＧＧＴＡＴＣＴＧＧＡＧＧＡＧＣＴＣＣＧＴＴＡＡＧＣＡＣＴＧＡＧＡＴＴＧＡＡＧＡＧＴＴＣＡＴＧＡＧＧＧＴＴＡＣＴＴＣＡＴＧＴＧＣＴＴＴＴＧＴＧＧＣＧＣＡＡＧＧＡＴＡＴＧＧＴＴＴＧＡＣＧＧＡＡＡＣＡＴＧＴＧＧＴＴＴＧＧＣＴＡＣＴＴＴＡＧＧＡＴＴＴＣＣＡＧＡＴＧＡＧＡＴＧＴＧＣＡＴＧＡＴＴＧＧＡＡＣＡＧＴＴＧＧＴＴＣＧＣＣＣＴＴＣＧＴＧＴＡＴＡＣＡＧＡＡＴＴＡＣＧＣＣＴＣＧＡＡＧＡＡＧＴＴＴＣＡＧＡＴＡＴＧＧＧＣＴＡＴＧＡＣＣＣＧＴＴＧＧＣＣＡＡＴＣＣＡＣＣＡＣＧＴＧＧＴＧＡＡＡＴＡＴＧＴＧＴＴＡＡＧＧＧＡＡＡＡＡＣＧＣＣＴＴＴＣＧＣＡＧＧＴＴＡＣＴＡＣＡＡＧＡＡＴＣＣＡＧＡＡＣＴＣＡＣＴＡＡＴＧＡＧＧＴＣＡＴＧＡＡＡＧＡＴＧＧＧＴＧＧＴＴＴＣＡＴＡＣＡＧＧＴＧＡＣＡＴＡＧＧＡＧＡＧＡＴＧＣＡＡＣＣＡＡＡＣＧＧＧＧＴＡＴＴＧＡＡＡＡＴＣＡＴＣＧＡＣＡＧＡＡＡＧＡＡＡＣＡＴＣＴＧＡＴＡＡＡＡＣＴＡＴＣＴＣＡＡＧＧＧＧＡＧＴＡＴＡＴＣＧＣＧＣＴＴＧＡＡＴＡＴＣＴＡＧＡＧＡＡＡＧＴＴＴＡＣＴＧＣＡＴＣＡＣＴＣＣＣＡＴＴＣＴＴＧＡＡＧＡＣＡＴＣＴＧＧＧＴＡＴＡＴＧＧＧＧＡＴＡＧＣＴＴＣＡＡＧＴＣＡＴＣＡＴＴＧＧＴＣＧＣＧＧＴＡＧＣＴＧＴＡＣＣＡＡＡＣＡＡＡＧＡＡＡＡＣＧＣＡＧＡＡＡＡＧＴＧＧＧＣＣＧＡＴＣＡＡＡＡＧＧＧＣＣＴＴＡＡＡＧＴＴＴＣＴＴＡＣＴＣＴＧＡＧＣＴＣＴＧＣＡＣＡＣＴＡＡＣＡＣＡＧＴＴＣＡＧＡＧＡＴＴＡＴＡＴＣＣＡＡＴＣＴＧＡＡＣＴＧＡＡＡＴＣＴＡＣＣＧＣＧＧＡＧＡＧＡＡＡＣＡＡＧＣＴＡＡＧＡＧＧＴＴＴＴＧＡＧＣＡＴＡＴＡＡＡＧＧＣＴＡＴＡＡＴＴＧＴＧＧＡＧＣＣＡＣＧＧＡＣＧＴＴＴＧＡＡＧＧＡＧＡＣＣＡＧＧＡＡＴＴＧＴＴＧＡＣＴＧＣＡＡＣＡＡＴＧＡＡＧＡＡＡＣＧＴＡＧＡＡＡＴＡＡＡＣＴＧＣＴＴＡＡＣＣＧＴＴＡＣＡＡＧＧＡＧＧＧＧＡＴＣＧＡＣＡＡＣＣＴＴＴＡＣＡＡＧＡＡＣＴＴＧＧＣＴＧＣＡＡＡＣＡＡＡＣＧＣＴＧＡ（配列番号３）。
幾つかの実施形態において、ポリヌクレオチドは、配列番号３に対して少なくとも８６％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、もしくは少なくとも９９％、またはそれらの間の任意の値および範囲の相同性もしくは同一性を有する核酸配列を含む。各可能性は、本発明の別の実施形態を表す。幾つかの実施形態において、ポリヌクレオチドは、配列番号３に対して８６％～１００％、８８％～１００％、９０％～１００％、または９２％～１００％の相同性または同一性を有する核酸配列を含む。各可能性は、本発明の別の実施形態を表す。
幾つかの実施形態において、ポリヌクレオチドは、以下の核酸配列を含む、またはそれからなる：
ＡＴＧＧＴＧＴＡＣＡＡＧＴＣＴＴＴＧＡＡＴＴＣＡＡＴＡＴＣＣＡＴＡＴＣＡＧＡＴＡＴＡＧＴＡＡＡＴＣＴＴＧＧＴＡＴＡＴＣＡＣＣＴＧＡＡＡＣＴＧＣＡＡＣＴＣＡＡＣＴＴＣＡＴＣＡＧＡＡＡＣＴＡＡＣＴＧＡＡＡＴＣＡＴＴＣＡＧＡＴＴＴＡＴＧＧＴＴＴＴＧＡＴＧＣＴＣＣＴＣＡＡＡＣＡＴＧＧＡＣＣＣＡＧＡＴＡＴＣＣＡＣＣＣＧＧＡＴＴＣＴＴＣＡＴＣＣＧＧＡＣＣＴＴＣＣＣＴＴＴＴＧＴＴＴＴＣＡＴＣＡＧＡＴＧＡＴＧＴＡＴＴＡＴＧＧＡＴＧＣＴＡＴＧＴＴＧＡＴＴＴＴＧＧＡＣＣＧＧＡＴＣＣＴＣＣＴＧＣＴＴＧＧＴＣＡＣＣＣＧＡＣＣＣＧＡＡＧＧＡＴＧＣＡＡＡＧＴＴＡＡＣＡＡＡＣＡＴＡＧＧＴＡＧＴＴＴＡＴＴＡＧＡＧＡＧＡＣＧＣＧＧＡＡＡＧＧＡＧＴＴＣＴＴＧＧＧＧＣＣＴＡＧＴＴＡＴＡＡＡＧＡＴＣＣＣＡＴＴＴＣＡＡＧＣＴＡＣＴＣＴＧＣＴＣＴＴＣＡＧＧＡＡＴＴＴＴＣＡＧＣＣＴＴＡＡＡＴＣＴＡＧＡＧＧＴＧＴＴＴＴＧＧＡＡＡＡＣＡＡＴＡＴＴＧＧＡＴＧＡＡＡＴＧＡＡＴＡＴＡＡＣＡＴＴＴＴＣＴＧＴＧＣＣＴＣＣＡＡＡＡＣＧＣＡＴＡＴＴＡＧＴＴＧＡＴＧＡＣＣＴＧＴＣＴＡＡＡＧＡＡＡＧＣＣＡＧＴＴＡＴＴＧＣＡＴＣＣＡＧＧＴＧＧＴＣＧＡＴＧＧＣＴＴＣＣＣＧＧＡＧＣＴＴＡＴＧＴＡＡＡＴＣＣＡＧＣＴＡＧＡＡＡＴＴＧＴＴＴＧＡＧＴＴＴＡＡＧＴＡＧＣＡＡＧＡＧＡＡＧＧＴＴＡＡＧＴＧＡＴＡＴＡＧＣＡＧＴＴＡＴＡＴＧＧＣＧＴＧＡＴＧＡＡＧＧＡＡＡＴＧＡＴＧＡＴＡＴＧＣＣＧＧＴＣＡＡＣＡＡＡＡＴＧＡＣＧＴＴＴＣＡＧＣＡＧＴＴＧＣＧＣＴＣＡＧＡＧＧＴＴＴＧＧＴＴＡＧＴＴＧＣＡＴＡＴＧＣＡＣＴＴＧＡＴＡＣＡＴＴＧＧＧＡＧＴＧＧＡＡＡＡＡＧＧＡＴＣＴＧＣＡＡＴＴＧＣＡＡＴＣＧＡＴＡＴＧＣＣＴＡＴＧＧＡＴＧＴＣＡＡＡＴＣＴＧＴＧＧＴＧＡＴＴＴＡＴＣＴＡＧＣＣＡＴＴＧＴＴＴＴＡＧＣＡＧＧＣＴＡＴＧＴＧＧＴＴＧＴＡＴＣＴＡＴＴＧＣＡＧＡＴＡＧＴＴＴＴＧＣＴＧＣＴＧＧＴＧＡＡＡＴＴＴＣＧＡＣＣＡＧＡＣＴＴＧＴＡＴＴＡＴＣＡＡＡＡＧＣＡＡＡＡＧＣＡＡＴＴＴＴＴＡＣＴＣＡＧＧＡＴＴＴＧＡＴＣＡＴＴＣＧＴＧＧＴＧＡＣＡＧＡＡＧＣＣＡＴＣＣＣＴＴＧＴＡＣＡＧＣＣＧＡＧＴＴＧＴＴＧＡＴＧＣＴＣＡＡＴＣＡＣＣＴＣＴＡＧＣＡＡＴＴＧＴＣＡＴＴＣＣＴＡＣＧＡＧＡＧＧＣＴＣＡＡＧＴＴＴＴＡＧＴＡＴＡＡＡＡＴＴＡＣＧＴＧＡＣＧＧＴＧＡＴＡＴＴＴＣＴＴＧＧＣＡＴＧＡＴＴＴＴＣＴＧＧＡＡＣＧＡＧＣＴＡＡＣＡＣＴＴＡＣＡＧＧＡＡＴＧＴＴＧＡＧＴＴＴＧＴＴＧＣＴＧＴＴＧＡＡＣＧＡＣＣＣＧＴＴＧＡＡＧＣＴＴＴＣＴＣＡＡＡＴＡＴＣＣＴＴＴＴＣＴＣＡＴＣＡＧＧＡＡＣＴＡＣＡＧＧＧＧＡＡＣＣＧＡＡＧＧＣＡＡＴＴＣＣＡＴＧＧＡＣＣＣＴＴＧＣＡＡＣＡＣＣＴＴＴＣＡＡＧＧＣＴＧＧＴＧＣＡＧＡＣＧＣＴＴＧＧＴＧＣＣＡＣＡＴＧＧＡＴＧＴＣＣＡＣＡＡＡＧＧＴＧＡＴＧＴＴＧＴＴＧＣＡＴＧＧＣＣＴＡＣＴＡＡＴＣＴＴＧＧＡＴＧＧＡＴＧＡＴＧＧＧＴＣＣＴＴＧＧＣＴＡＡＴＡＴＡＴＧＣＴＴＣＡＴＴＧＴＴＡＡＡＴＧＧＧＧＧＣＴＣＡＣＴＴＧＣＡＴＴＡＴＡＣＡＡＣＧＧＡＴＣＴＣＣＣＣＴＧＡＣＴＴＣＴＧＧＡＴＴＴＧＣＣＡＡＧＴＴＴＧＴＴＣＡＧＧＡＴＧＣＡＡＡＡＧＴＡＡＣＡＴＴＧＴＴＧＧＧＡＧＴＧＡＴＡＣＣＡＡＧＴＡＴＴＧＴＧＡＧＧＧＣＡＴＧＧＡＧＡＡＣＡＡＡＣＡＡＴＡＧＴＡＣＡＧＣＣＧＧＣＴＴＴＧＡＣＴＧＧＴＣＡＡＣＣＡＴＣＣＧＧＴＧＣＴＴＴＧＧＡＴＣＧＡＣＣＧＧＴＧＡＧＧＣＣＴＣＴＡＡＴＡＣＴＧＡＴＧＡＡＴＧＴＣＴＴＴＧＧＣＴＧＡＴＧＧＧＡＡＧＡＧＣＴＣＡＴＴＡＣＡＡＡＣＣＧＧＴＣＡＴＣＧＡＧＴＡＴＴＧＣＧＧＴＧＧＣＡＣＡＧＡＧＡＴＴＧＧＴＧＧＴＧＧＴＴＴＴＡＴＴＡＣＡＧＧＡＴＣＴＴＴＡＣＴＧＣＡＧＣＣＴＣＡＧＴＧＴＴＴＧＴＣＴＧＣＴＴＴＣＡＧＣＡＣＡＣＣＡＡＧＴＴＴＧＧＧＴＴＧＴＡＡＡＣＴＧＴＴＡＡＴＴＣＴＴＧＧＣＧＡＡＧＡＴＧＧＡＡＴＣＣＣＴＡＴＡＣＣＡＣＡＡＡＡＣＧＣＴＣＣＴＧＧＡＡＴＴＧＧＴＧＡＡＴＴＧＧＣＴＣＴＧＡＡＴＣＣＣＣＴＣＡＴＧＴＴＴＧＧＧＧＣＡＴＣＧＡＧＣＡＣＡＣＴＡＣＴＡＡＡＴＧＣＡＡＡＣＣＡＣＴＡＴＧＡＴＧＴＣＴＡＣＴＴＴＡＡＡＧＧＣＡＴＧＣＣＣＴＣＴＴＧＧＡＡＴＧＧＴＡＡＧＧＴＴＣＴＡＡＧＡＡＧＧＣＡＴＧＧＡＧＡＴＧＴＡＴＴＴＧＡＧＣＧＣＡＣＧＴＣＴＡＡＡＧＧＡＴＡＣＴＡＴＣＧＴＧＣＣＣＡＴＧＧＴＣＧＴＧＣＡＧＡＴＧＡＴＡＣＴＡＴＧＡＡＴＣＴＴＧＧＧＧＧＴＡＴＴＡＡＧＧＴＡＡＧＴＴＣＧＧＴＴＧＡＧＡＴＴＧＡＡＣＧＴＧＴＡＴＧＣＡＡＣＴＣＧＡＴＴＧＡＴＧＡＣＡＧＡＡＴＴＣＴＣＧＡＧＡＣＡＧＣＧＧＣＴＡＴＡＧＧＧＧＴＴＡＣＡＣＣＴＴＣＴＧＧＴＧＧＣＧＧＧＣＣＡＧＡＧＡＧＧＴＴＧＧＴＡＡＴＴＧＴＴＧＴＴＧＣＴＴＴＴＡＡＡＧＡＴＧＧＣＡＧＴＧＧＴＴＣＧＡＡＡＣＣＣＧＡＣＴＴＡＡＴＣＡＡＧＴＴＧＡＡＧＧＴＣＡＣＡＣＴＧＡＡＴＴＣＡＧＣＴＴＴＡＣＡＡＡＡＧＡＡＴＣＴＧＡＡＣＣＣＴＴＴＧＴＴＴＡＡＧＧＴＴＴＣＴＧＡＴＧＴＧＧＴＧＣＣＣＴＴＴＣＣＡＴＣＡＣＴＴＣＣＴＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＣＡＡＡＣＡＡＧＧＴＡＡＴＧＡＧＡＡＧＧＧＴＴＴＴＧＣＧＡＣＡＧＣＡＧＴＴＧＡＣＴＣＡＡＡＴＴＧＧＴＣＡＡＡＡＴＡＧＣＡＡＧＣＴＡＴＡＡ（配列番号４）。
幾つかの実施形態において、ポリヌクレオチドは、配列番号４に対して少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、もしくは少なくとも９９％、またはそれらの間の任意の値および範囲の相同性もしくは同一性を有する核酸配列を含む。各可能性は、本発明の別の実施形態を表す。幾つかの実施形態において、ポリヌクレオチドは、配列番号４に対して８８％～１００％、９０％～１００％、９２～１００％、または９５％～１００％の相同性または同一性を有する核酸配列を含む。各可能性は、本発明の別の実施形態を表す。
幾つかの実施形態において、ポリヌクレオチドは、以下の核酸配列を含む、またはそれからなる：
ＡＴＧＧＧＴＧＡＴＴＣＡＧＡＧＧＧＡＡＧＣＡＧＣＡＴＴＡＧＴＡＣＴＣＣＴＡＣＡＡＣＴＧＡＡＣＡＡＧＴＴＧＧＴＴＴＣＴＴＧＴＣＡＡＡＴＡＴＣＡＴＧＧＡＡＧＡＣＡＡＡＴＣＴＴＡＴＡＧＴＧＣＴＧＣＡＧＴＴＧＣＡＡＴＴＡＴＧＧＴＴＧＣＣＡＴＴＧＣＴＧＴＡＣＣＧＴＴＧＧＴＴＣＴＴＴＣＴＴＣＡＧＴＧＴＴＴＧＣＡＧＣＧＡＡＧＡＡＧＡＡＡＧＴＧＡＡＡＣＡＡＣＧＡＧＧＣＧＴＴＣＣＣＧＴＴＣＡＡＧＴＴＧＧＴＧＧＴＧＡＧＣＣＡＧＧＴＴＴＴＧＣＣＡＴＧＣＧＴＡＡＣＴＣＴＡＧＡＴＣＡＡＡＣＡＡＡＴＴＡＧＴＴＧＡＴＧＴＣＣＣＡＴＧＧＧＡＡＧＧＡＧＣＴＡＧＡＡＣＡＡＴＧＧＣＴＧＣＴＣＴＴＴＴＴＧＡＧＣＡＧＴＣＴＴＧＴＡＡＧＡＡＧＣＡＴＴＣＡＣＡＧＣＴＴＣＧＧＴＴＴＣＴＴＧＧＴＡＣＡＡＧＧＡＡＧＴＴＧＡＴＴＧＡＡＡＧＡＡＧＣＴＴＴＧＴＧＡＧＴＧＧＴＡＧＴＧＡＴＧＧＧＡＧＡＡＡＡＴＴＣＧＡＧＡＡＧＴＴＡＣＡＴＣＴＴＧＧＧＧＡＧＴＡＴＣＡＧＴＧＧＧＡＧＡＣＡＴＡＴＧＧＧＣＡＧＡＴＡＴＴＴＧＡＡＣＧＴＧＴＴＴＧＣＡＡＣＴＴＴＧＣＡＴＣＴＧＧＡＣＴＴＡＴＴＣＡＧＣＴＴＧＧＴＣＡＴＧＡＣＣＣＴＧＡＴＡＣＴＣＧＴＡＴＴＧＣＣＡＴＣＴＴＴＴＣＴＧＡＣＡＣＡＣＧＡＧＣＴＧＡＡＴＧＧＴＴＡＡＴＴＧＣＡＴＴＴＧＡＧＧＧＡＴＧＣＴＴＣＡＧＧＣＡＧＡＡＣＡＴＣＡＣＴＧＴＧＧＴＴＡＣＣＡＴＡＴＡＴＧＣＡＴＣＡＴＴＡＧＧＴＧＡＴＧＡＴＧＣＣＣＴＣＡＴＴＣＡＣＴＣＴＣＴＴＡＡＣＧＡＧＡＣＴＡＡＡＧＴＡＴＣＧＡＣＣＴＴＧＡＴＴＴＧＴＧＡＴＴＣＣＡＡＡＣＴＡＴＴＧＡＡＡＡＡＡＧＴＧＧＣＴＧＣＡＧＴＴＡＧＴＴＣＡＡＧＣＣＴＧＡＡＡＡＣＴＧＴＡＧＡＡＡＡＣＴＴＣＡＴＣＴＡＣＴＴＴＧＡＡＡＧＴＧＡＣＡＡＣＡＣＴＧＡＡＧＣＴＴＴＡＡＡＴＧＡＡＡＴＣＧＧＴＧＡＴＴＧＧＡＡＡＡＴＡＴＣＴＴＣＴＴＴＴＴＣＴＧＡＡＧＴＣＧＡＧＡＧＣＴＴＧＧＧＡＣＡＧＡＡＧＡＧＴＣＣＡＧＴＡＡＧＴＧＣＴＡＧＡＣＴＧＣＣＴＡＴＣＡＡＧＡＡＡＧＡＣＧＴＴＧＣＡＧＴＧＡＴＣＡＴＧＴＡＴＡＣＡＡＧＴＧＧＣＡＧＣＡＣＡＧＧＴＴＴＡＣＣＡＡＡＧＧＧＧＧＴＧＡＴＧＡＴＧＡＣＴＣＡＴＧＧＧＡＡＴＧＴＡＧＴＡＧＣＡＡＣＴＧＣＡＧＣＴＧＣＧＧＴＴＡＴＧＡＣＴＧＴＡＡＴＣＣＣＡＡＡＴＡＴＴＧＧＧＡＣＣＡＡＴＧＡＴＧＴＴＴＡＴＣＴＧＧＣＡＴＡＣＴＴＡＣＣＡＴＴＧＧＣＴＣＡＴＡＴＴＴＴＣＧＡＧＴＴＧＧＣＴＧＣＴＧＡＧＡＣＴＧＴＧＡＴＧＧＴＡＡＣＴＧＣＡＧＧＴＡＴＴＣＣＡＡＴＴＧＧＴＴＡＴＧＧＴＴＣＡＧＣＡＣＴＣＡＣＴＴＴＡＡＣＡＧＡＣＡＣＡＴＣＡＡＡＴＡＡＡＡＴＣＡＡＧＡＡＡＧＧＡＡＣＣＴＴＧＧＧＡＧＡＴＧＣＡＴＣＣＡＴＣＴＴＧＡＡＧＣＣＡＡＣＧＴＴＡＡＴＧＧＣＡＧＣＴＧＴＴＣＣＡＧＣＴＡＴＴＴＴＡＧＡＴＣＧＴＧＴＣＣＧＡＧＡＴＧＧＡＧＴＡＴＴＡＡＡＧＡＡＧＧＴＴＧＡＧＧＡＡＡＡＧＧＧＡＧＧＴＴＴＧＡＣＡＡＣＡＡＡＡＡＴＡＴＴＣＡＡＴＡＴＡＧＣＣＴＡＣＡＡＡＡＧＧＣＧＴＴＴＧＣＴＡＧＣＡＧＴＡＧＡＴＧＧＡＡＧＴＴＧＧＣＴＧＧＧＴＧＣＡＴＧＧＧＧＧＴＴＡＧＡＧＡＡＧＣＴＡＴＴＧＴＧＧＧＡＴＧＣＣＡＴＴＧＴＴＴＴＴＡＡＧＡＡＧＡＴＴＣＧＴＴＣＴＧＴＡＣＴＴＧＧＡＧＧＡＧＡＴＡＴＣＣＧＴＴＴＣＡＴＧＣＴＣＴＧＴＧＧＴＧＧＴＧＣＴＣＣＴＴＴＡＧＣＴＧＣＡＧＡＴＡＣＴＣＡＧＣＧＡＴＴＴＡＴＡＡＡＴＧＴＣＴＧＣＧＴＴＧＧＧＧＣＴＣＣＡＡＴＴＧＧＡＣＡＡＧＧＡＴＡＴＧＧＧＣＴＧＡＣＣＧＡＡＡＣＡＴＧＣＧＣＴＧＧＡＧＣＴＧＣＴＴＴＣＴＣＴＧＡＧＧＣＡＧＡＴＧＡＴＡＡＴＴＣＴＧＴＴＧＧＧＣＧＴＧＴＴＧＧＴＣＣＡＣＣＡＣＴＴＣＣＴＴＧＴＧＴＣＴＡＴＡＴＴＡＡＡＣＴＴＧＴＴＴＣＡＴＧＧＧＡＴＧＡＡＧＧＴＧＧＧＴＡＴＴＴＡＡＣＡＴＣＡＧＡＣＡＡＡＣＣＡＡＴＧＣＣＧＣＧＡＧＧＣＧＡＡＧＴＴＧＴＡＧＴＴＧＧＴＧＧＧＴＡＣＡＧＴＧＴＡＡＣＣＧＣＴＧＧＴＴＡＣＴＴＴＡＡＴＡＡＴＧＡＧＧＡＡＡＡＧＡＣＣＡＡＴＧＡＧＧＴＴＴＡＣＡＡＧＧＴＴＧＡＴＧＡＡＡＧＴＧＧＧＡＴＧＣＧＴＴＧＧＴＴＣＴＡＣＡＣＴＧＧＧＧＡＣＡＴＴＧＧＡＡＧＧＴＴＴＣＡＴＣＣＴＧＡＴＧＧＡＴＧＣＣＴＴＧＡＡＡＴＣＡＴＴＧＡＣＡＧＧＡＡＧＡＡＧＧＡＴＡＴＴＧＴＡＡＡＡＣＴＴＣＡＡＣＡＴＧＧＡＧＡＧＴＡＣＡＴＣＴＣＣＴＴＧＧＧＧＡＡＧＧＴＴＧＡＧＧＣＡＧＣＡＣＴＴＧＣＧＴＣＡＡＧＣＡＡＧＴＡＴＧＴＡＧＡＧＡＡＴＧＴＡＡＴＧＴＴＡＣＡＴＧＣＣＧＡＣＣＣＣＴＴＣＣＡＣＡＣＴＴＡＴＴＧＴＧＴＣＧＣＣＴＴＡＧＴＴＧＴＣＣＣＴＧＣＧＣＧＴＣＡＧＧＴＴＡＴＡＧＡＡＣＡＧＴＧＧＧＣＴＣＡＡＧＡＴＧＣＧＧＧＴＡＴＴＡＧＴＴＡＣＣＡＡＧＡＴＴＴＴＧＣＴＧＡＧＴＴＧＴＧＴＧＡＴＡＡＡＡＡＧＧＡＡＡＣＴＧＴＣＴＣＴＧＡＧＧＴＴＣＡＧＣＡＡＴＣＣＣＴＴＡＣＣＡＡＧＧＴＡＧＣＡＡＡＡＧＡＴＧＣＡＡＡＡＣＴＡＧＡＣＡＡＧＴＴＴＧＡＡＡＣＧＣＣＴＧＣＡＡＡＧＡＴＡＡＡＧＣＴＧＡＴＧＣＣＡＧＡＴＣＣＡＴＧＧＡＣＴＣＣＴＧＡＡＴＣＴＧＧＡＴＴＡＧＴＡＡＣＡＧＣＧＧＣＴＣＴＴＡＡＧＴＴＡＡＡＡＡＧＧＧＡＡＣＡＡＣＴＧＡＡＧＴＣＣＡＡＡＴＴＴＡＡＧＧＡＴＧＡＴＣＴＧＧＡＴＡＡＧＣＴＡＴＡＴＧＧＧＴＧＡ（配列番号５）。
幾つかの実施形態において、ポリヌクレオチドは、配列番号５に対して少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、もしくは少なくとも９９％、またはそれらの間の任意の値および範囲の相同性もしくは同一性を有する核酸配列を含む。各可能性は、本発明の別の実施形態を表す。幾つかの実施形態において、ポリヌクレオチドは、配列番号５に対して８８％～１００％、９０％～１００％、９１～１００％、または９５％～１００％の相同性または同一性を有する核酸配列を含む。各可能性は、本発明の別の実施形態を表す。
幾つかの実施形態において、ポリヌクレオチドは、以下の核酸配列を含む、またはそれからなる：
ＡＴＧＴＣＧＧＴＴＴＡＣＡＣＣＧＴＴＡＡＡＧＴＣＧＡＧＧＡＴＴＣＡＣＧＧＧＣＡＧＣＴＴＣＣＧＧＡＧＡＡＡＣＣＣＣＧＴＣＡＧＣＡＧＧＧＣＣＧＧＴＴＴＡＣＡＧＧＴＧＣＡＴＴＴＡＴＧＣＣＡＡＧＧＡＴＧＣＴＣＴＣＡＴＧＧＡＡＣＴＧＣＣＣＣＣＣＧＧＴＴＡＴＧＡＡＴＣＴＣＣＣＴＧＧＧＡＣＴＴＣＴＴＴＡＧＴＧＡＧＴＣＴＧＴＴＡＡＡＡＧＡＡＡＣＣＣＡＡＡＧＡＡＣＣＣＡＧＣＡＣＴＡＧＧＴＣＧＴＣＧＴＣＡＡＧＴＣＡＴＣＧＡＴＧＧＡＡＡＧＧＣＴＧＧＴＧＧＴＴＡＴＴＣＡＴＧＧＣＴＴＴＣＡＴＡＴＣＡＡＧＡＡＧＣＣＴＡＣＡＡＴＴＣＴＧＣＴＣＴＡＣＧＣＡＴＴＧＣＴＴＣＴＧＣＣＡＴＣＡＧＡＡＧＣＣＧＡＴＣＴＧＴＴＡＡＴＣＣＴＧＧＧＧＡＴＣＧＧＴＧＴＧＧＴＡＴＡＴＡＴＧＧＡＣＣＴＡＡＣＴＧＴＣＣＴＧＡＡＴＧＧＡＴＡＡＴＣＴＣＡＡＴＧＧＡＧＧＣＴＴＧＴＡＡＣＡＧＣＡＡＴＧＧＣＡＴＡＡＣＣＴＡＴＧＴＴＣＣＣＣＴＡＴＡＴＧＡＴＡＣＡＣＴＴＧＧＴＧＣＴＡＡＴＧＣＧＧＴＴＧＡＡＴＡＣＡＴＣＡＴＣＡＡＣＣＡＴＧＣＡＧＡＡＡＴＴＴＣＴＴＴＡＧＴＴＴＴＴＧＴＴＣＡＡＧＡＧＡＡＣＡＡＧＴＴＧＴＣＴＧＣＴＡＴＴＴＴＡＴＣＡＴＧＴＣＴＴＣＣＡＡＡＴＴＧＣＴＣＡＴＣＡＡＡＴＣＴＴＡＡＡＡＣＡＡＴＣＧＴＣＡＧＣＴＴＴＧＧＧＡＡＧＴＴＣＴＣＴＧＡＡＴＣＡＣＡＡＡＡＧＡＡＣＧＡＡＧＣＣＡＴＧＧＡＡＣＡＴＧＧＣＧＴＣＧＡＴＴＧＣＴＴＣＴＣＴＴＧＧＧＡＡＧＡＧＴＴＴＴＣＴＴＣＧＡＴＧＧＧＧＡＡＴＴＴＧＧＡＡＧＡＴＧＡＡＣＴＴＣＣＴＧＣＡＡＡＡＡＡＴＡＡＧＡＣＴＧＡＣＡＴＴＴＧＣＡＣＣＡＴＡＡＴＧＴＡＴＡＣＡＡＧＴＧＧＡＡＣＡＡＣＧＧＧＡＧＡＧＣＣＴＡＡＧＧＧＴＧＴＣＧＴＡＣＴＡＡＧＴＡＡＣＡＧＡＧＣＴＴＴＣＡＴＧＴＣＣＧＡＡＧＴＣＴＴＧＴＣＴＡＴＧＣＡＴＧＡＡＣＴＡＣＴＣＡＴＡＧＡＡＡＣＡＧＡＣＡＡＡＣＣＧＧＧＣＡＣＡＧＡＡＧＡＡＧＡＴＡＣＣＴＡＣＴＴＣＴＣＴＴＴＴＣＴＴＣＣＴＴＴＧＧＣＡＣＡＴＡＴＡＴＴＴＧＡＴＣＡＡＡＴＡＡＴＧＧＡＧＡＣＧＴＡＴＴＴＣＡＴＣＴＡＣＡＧＴＧＧＴＧＣＴＴＣＧＡＴＡＧＧＧＴＴＴＴＧＧＣＡＡＧＧＡＧＡＴＡＴＣＡＧＡＴＡＣＴＴＧＡＴＴＧＡＡＧＡＣＣＴＴＣＴＴＧＴＧＴＴＧＣＡＧＣＣＡＡＣＣＡＴＡＴＴＴＴＧＴＧＧＴＧＴＴＣＣＡＡＧＡＧＴＴＴＡＴＧＡＣＣＧＣＡＴＴＴＡＴＡＣＧＧＧＣＡＴＡＡＴＧＧＣＴＡＡＧＡＴＴＴＣＡＡＣＴＧＧＡＧＧＴＧＣＴＡＴＴＣＧＧＡＡＧＧＣＡＴＴＡＴＴＴＧＡＴＴＴＴＧＣＡＴＡＣＡＡＣＴＡＴＡＡＡＴＴＡＡＧＧＡＡＣＣＴＴＧＡＡＡＡＧＧＧＡＡＴＡＣＡＡＣＡＡＧＡＣＡＡＡＴＣＡＧＣＴＣＣＴＣＴＴＴＴＧＧＡＣＡＡＧＣＴＧＧＴＣＴＴＣＧＡＴＡＡＧＡＴＴＡＡＡＣＡＡＧＧＧＴＴＴＧＧＡＧＧＡＡＧＧＧＴＴＣＧＴＣＴＴＡＴＧＴＴＡＴＣＴＧＧＡＧＣＣＧＣＡＣＣＴＴＴＧＣＣＡＡＡＡＣＡＣＧＴＧＧＡＧＧＡＡＴＴＴＴＴＡＡＧＡＧＴＧＡＣＧＴＧＣＴＧＴＡＣＣＧＴＴＣＴＣＴＣＡＣＡＡＧＧＡＴＡＣＧＧＡＣＴＴＡＣＴＧＡＡＡＧＴＴＧＴＧＧＴＧＧＡＴＧＣＴＴＴＡＣＡＴＣＣＡＴＴＧＣＧＡＡＴＧＴＧＴＡＣＴＣＴＡＴＧＡＴＣＧＧＧＡＣＴＧＴＴＧＧＴＧＴＡＣＣＣＡＴＧＡＣＡＡＣＴＡＴＴＧＡＡＧＣＡＡＧＡＣＴＴＧＡＧＴＣＡＧＴＧＣＣＡＧＡＧＡＴＧＧＧＡＴＡＴＧＡＴＧＣＡＣＴＣＡＧＴＡＧＴＧＴＧＣＣＡＴＧＴＧＧＣＧＡＡＡＴＴＴＧＣＣＴＣＡＧＧＧＧＡＡＡＣＡＣＡＣＴＡＴＴＴＴＣＴＧＧＧＴＡＣＣＡＣＡＡＡＣＧＡＧＡＣＧＡＴＣＴＡＡＣＴＧＡＴＧＣＴＧＴＣＣＴＴＧＴＡＧＡＴＧＧＣＴＧＧＴＴＣＣＡＴＡＣＡＧＧＴＧＡＣＡＴＴＧＧＧＧＡＡＴＧＧＣＡＧＧＣＡＧＡＴＧＧＡＧＣＡＡＴＧＡＡＡＡＴＣＡＴＴＧＡＣＡＧＧＡＡＡＡＡＧＡＡＴＡＴＡＴＴＣＡＡＡＴＴＧＴＣＴＣＡＡＧＧＡＧＡＡＴＡＴＧＴＴＧＣＡＧＴＴＧＡＡＡＧＴＡＴＴＧＡＡＡＧＣＡＣＣＴＡＴＴＣＡＣＧＧＴＧＴＣＣＴＴＴＧＧＴＴＡＣＣＴＣＧＡＴＴＴＧＧＧＴＧＴＡＣＧＧＣＡＡＴＡＧＴＴＴＴＧＡＡＴＣＴＴＴＴＣＴＡＧＴＴＧＣＧＧＴＴＧＴＧＧＴＴＣＣＣＧＡＴＡＧＡＧＴＡＧＣＡＧＴＴＧＡＡＧＡＧＴＴＴＧＣＴＧＣＡＡＡＧＡＡＣＡＡＴＧＡＡＴＣＡＧＧＡＧＡＴＴＡＴＧＣＡＴＣＧＴＴＧＴＧＣＡＡＧＡＡＣＣＣＡＡＡＴＧＴＣＡＧＧＡＡＡＴＡＴＧＴＴＣＴＴＧＡＡＧＡＧＣＴＧＡＡＴＧＣＴＧＡＡＧＣＴＣＡＡＴＧＣＡＡＴＡＡＡＣＴＴＣＧＣＧＧＧＴＴＴＧＡＧＡＴＧＣＴＡＡＡＡＧＣＡＧＴＴＣＡＴＴＴＧＧＡＴＣＣＡＧＴＣＣＣＡＴＴＴＧＡＣＴＴＣＧＡＧＡＧＧＧＡＴＴＴＡＡＴＡＡＣＡＣＣＡＡＣＣＴＴＴＡＡＡＣＴＡＡＡＡＡＧＡＣＡＧＣＡＧＣＴＴＣＴＡＡＡＡＴＡＣＴＡＴＡＡＧＧＡＴＴＧＣＧＴＴＧＡＡＣＡＡＣＴＡＴＡＴＧＣＴＧＡＡＧＣＡＡＡＧＡＣＡＴＣＣＡＡＧＡＡＡＴＧＡ（配列番号６）。
幾つかの実施形態において、ポリヌクレオチドは、配列番号６に対して少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、もしくは少なくとも９９％、またはそれらの間の任意の値および範囲の相同性もしくは同一性を有する核酸配列を含む。各可能性は、本発明の別の実施形態を表す。幾つかの実施形態において、ポリヌクレオチドは、配列番号６に対して８９％～１００％、９０％～１００％、９３～１００％、または９５％～１００％の相同性または同一性を有する核酸配列を含む。各可能性は、本発明の別の実施形態を表す。
幾つかの実施形態において、ポリヌクレオチドは、以下の核酸配列を含む、またはそれからなる：
ＡＴＧＧＡＡＡＣＴＣＡＴＧＧＡＣＣＡＡＧＧＣＴＴＣＴＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＴＡＣＡＡＡＧＡＴＣＣＴＡＴＣＡＣＧＡＧＴＴＡＴＡＡＡＣＡＧＴＴＣＣＡＡＡＡＧＴＴＣＴＣＴＧＴＴＣＡＡＣＡＴＣＴＡＧＡＧＧＴＧＴＡＴＴＧＧＴＣＴＣＴＴＧＴＧＴＴＡＧＡＡＡＡＧＣＴＴＴＣＡＡＴＣＣＡＡＴＴＴＣＡＧＧＡＡＣＧＴＣＣＡＡＡＡＴＧＴＡＴＡＧＴＡＧＡＴＡＣＴＴＣＴＧＡＣＡＡＡＴＣＡＡＡＡＣＡＣＧＧＧＧＧＣＡＣＡＴＧＧＣＴＴＣＣＣＧＧＴＴＣＡＧＴＴＴＴＧＡＡＣＡＴＴＧＣＧＧＡＧＴＧＴＴＧＴＡＴＡＴＴＧＴＣＡＡＣＴＡＣＴＧＡＡＡＣＡＧＡＴＧＡＡＡＡＧＧＴＴＧＣＧＡＴＴＧＴＧＴＧＧＣＧＧＧＡＴＧＡＡＡＧＡＴＧＴＧＡＴＡＡＴＣＴＧＧＡＴＧＴＡＡＡＣＡＡＧＡＴＧＡＣＡＴＴＣＡＡＡＧＡＡＴＴＧＣＧＡＣＡＡＣＡＡＧＴＡＡＴＧＴＴＧＧＴＴＧＣＡＡＡＴＧＣＡＴＴＧＡＡＧＴＴＡＴＴＧＴＴＴＴＣＡＡＡＡＧＧＡＧＡＴＣＣＴＡＴＴＧＣＡＡＴＴＧＡＴＡＴＧＣＣＡＡＴＧＡＣＡＧＴＴＡＣＴＧＣＡＧＴＡＡＴＴＣＴＡＴＡＴＴＴＧＧＣＧＡＴＴＧＴＡＴＡＴＴＣＴＧＧＡＴＴＴＧＴＧＧＴＴＧＴＡＴＣＴＡＴＡＧＣＴＧＡＣＡＧＴＴＴＴＧＣＡＧＣＴＡＡＡＧＡＧＡＴＴＧＣＡＡＣＡＣＧＡＴＴＡＣＧＴＧＴＡＴＣＴＡＡＴＧＣＡＡＡＧＧＣＴＡＴＣＴＴＴＡＣＴＣＡＡＧＡＴＴＡＣＡＴＴＧＴＴＣＧＡＧＧＴＧＧＴＣＧＡＡＧＡＴＴＴＣＣＴＴＴＧＴＡＣＡＧＴＣＧＡＧＴＴＡＴＴＧＡＡＧＣＣＡＣＣＣＡＡＴＧＴＡＧＡＧＣＣＡＴＣＧＴＧＧＴＴＣＣＴＧＣＧＡＴＡＧＧＧＧＡＡＡＡＣＧＴＡＧＡＡＧＴＴＡＴＴＴＴＡＡＧＡＡＡＡＣＡＧＧＡＣＡＴＴＴＣＡＴＧＧＧＧＣＧＡＴＴＴＴＣＴＴＴＣＴＧＧＴＧＣＡＡＡＡＣＡＧＣＴＴＣＣＴＡＧＣＣＣＧＧＡＴＴＡＴＴＧＣＴＣＴＣＣＡＧＴＣＴＡＴＣＡＡＴＣＣＡＴＡＧＡＣＡＣＧＴＴＧＡＣＡＡＡＣＡＴＡＣＴＣＴＴＣＴＣＴＴＣＧＧＧＡＡＣＡＡＣＡＧＧＡＧＡＣＣＣＡＡＡＡＧＣＴＡＴＡＣＣＡＴＧＧＡＣＧＣＡＡＡＴＡＴＣＴＣＣＡＡＴＧＡＧＡＴＧＴＧＣＴＧＣＴＧＡＣＧＧＡＴＧＧＧＣＴＣＡＴＡＴＧＧＡＴＡＴＴＣＡＧＧＣＴＧＧＡＧＡＴＧＴＴＴＡＴＴＧＴＴＧＧＣＣＣＡＣＡＡＡＴＣＴＧＧＧＡＴＧＧＧＴＣＡＴＧＧＧＡＣＣＣＡＴＴＧＴＡＣＴＴＴＡＣＴＣＧＡＧＴＴＴＴＣＴＴＡＣＣＧＧＴＧＣＡＡＣＡＴＴＧＧＣＴＣＴＴＴＡＴＡＡＴＧＧＣＴＣＣＣＣＴＣＴＴＧＧＴＣＡＴＧＧＴＴＴＴＧＧＡＡＡＡＴＴＴＧＴＴＣＡＧＧＡＴＧＣＡＧＧＡＧＴＧＡＣＡＡＴＴＴＴＧＧＧＣＡＣＧＧＴＴＣＣＡＡＧＣＡＴＡＧＴＣＡＡＧＴＣＴＴＧＧＡＡＧＡＧＴＡＣＡＡＧＡＴＧＴＡＴＧＧＡＡＧＧＡＣＴＧＧＡＣＴＧＧＡＣＡＡＡＧＡＴＡＡＡＧＧＣＡＴＴＴＧＧＧＴＣＧＡＣＴＧＧＴＧＡＡＧＣＴＴＣＴＡＡＴＧＴＣＧＡＣＧＡＴＧＡＣＣＴＴＴＧＧＣＴＴＴＣＣＴＣＡＡＡＧＧＣＣＴＡＣＴＡＣＡＡＡＣＣＴＧＴＴＣＴＴＧＡＡＴＧＣＴＧＴＧＧＡＧＧＴＡＣＣＧＡＧＣＴＴＧＣＡＴＣＴＴＣＴＴＡＴＧＴＴＣＡＡＧＧＧＡＡＴＣＴＴＣＴＡＣＡＧＣＣＡＣＡＡＧＣＣＴＴＴＧＧＡＧＣＡＴＴＡＡＧＣＴＣＴＧＣＴＴＣＡＡＴＧＧＧＡＡＣＣＧＧＡＴＴＴＧＴＣＡＴＡＴＴＴＧＡＣＧＡＴＣＡＴＧＧＡＧＴＴＣＣＴＴＡＣＣＣＧＧＡＣＧＡＴＧＡＡＣＣＣＴＧＴＧＴＴＧＧＴＧＡＡＧＴＧＧＧＴＴＴＧＴＴＴＣＣＡＧＴＡＴＡＴＡＴＧＧＧＡＧＣＡＴＣＴＧＡＴＡＧＡＣＴＡＣＴＧＡＡＴＧＣＡＧＡＴＣＡＴＧＡＡＡＡＡＡＴＴＴＡＣＴＴＣＡＡＧＧＧＡＡＴＧＣＣＧＡＧＴＴＡＣＡＡＡＧＧＡＡＴＧＣＡＡＣＴＡＡＧＧＡＧＡＣＡＴＧＧＡＧＡＴＡＴＣＡＴＣＡＡＧＡＧＡＡＣＡＡＴＴＧＧＡＧＧＡＴＡＴＴＴＧＧＴＴＧＴＡＣＡＡＧＧＣＡＧＧＧＣＴＧＡＴＧＡＴＡＣＣＡＴＧＡＡＣＣＴＴＧＧＴＧＧＣＡＴＡＡＡＧＡＣＧＡＧＣＴＣＡＡＴＡＧＡＡＡＴＴＧＡＧＣＧＴＧＴＴＴＧＴＧＡＡＣＡＡＧＣＴＧＡＴＧＧＡＡＧＣＡＴＣＡＴＧＧＡＡＡＣＴＧＣＴＧＣＡＧＴＣＡＧＴＧＴＴＧＣＡＣＣＴＧＣＡＡＣＣＧＧＴＧＧＴＣＣＡＧＡＡＣＴＡＴＴＡＧＣＣＡＴＡＴＴＴＧＴＧＧＴＡＣＴＡＡＡＧＡＡＣＧＧＴＴＧＣＡＡＣＡＣＴＣＡＡＣＣＡＣＡＧＧＡＣＣＴＡＡＡＧＡＴＧＡＴＡＴＴＴＴＣＡＡＡＧＧＣＣＡＴＴＣＡＡＡＡＡＡＡＣＣＴＣＡＡＣＣＣＡＴＴＧＴＴＣＡＡＧＧＴＧＡＧＣＴＴＴＧＴＡＡＡＧＧＴＴＧＴＴＣＣＡＧＡＧＴＴＣＣＣＴＣＧＡＡＣＣＧＣＴＴＣＴＡＡＣＡＡＧＴＴＡＴＴＧＡＧＡＡＧＡＧＴＴＴＴＡＡＧＧＡＡＴＣＡＡＧＴＧＡＡＧＧＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＡＣＴＣＧＡＡＧＴＡＡＡＡＴＡＴＡＡ（配列番号７）。
幾つかの実施形態において、ポリヌクレオチドは、配列番号７に対して少なくとも８５％、少なくとも８７％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、もしくは少なくとも９９％、またはそれらの間の任意の値および範囲の相同性もしくは同一性を有する核酸配列を含む。各可能性は、本発明の別の実施形態を表す。幾つかの実施形態において、ポリヌクレオチドは、配列番号７に対して８５％～１００％、８８％～１００％、８５％～１００％、または９２％～１００％の相同性または同一性を有する核酸配列を含む。各可能性は、本発明の別の実施形態を表す。
幾つかの実施形態において、ポリヌクレオチドは、以下の核酸配列を含む、またはそれからなる：
ＡＴＧＧＡＧＡＴＣＡＣＴＡＡＡＡＧＣＡＴＣＣＡＡＧＡＡＴＴＡＧＧＡＴＴＡＣＡＡＧＡＴＣＴＡＣＴＡＡＡＣＡＣＴＧＧＡＴＴＡＡＣＡＣＣＴＡＡＴＧＡＴＧＣＡＡＡＡＴＣＡＣＴＧＣＡＡＡＴＣＧＡＧＡＴＴＡＡＡＣＡＣＡＴＣＡＴＴＡＡＴＡＧＴＣＡＡＡＣＴＡＣＴＡＡＴＴＣＡＡＡＣＣＣＡＧＴＴＧＡＧＴＴＡＴＧＧＣＧＴＣＡＡＡＴＣＡＣＴＴＣＴＧＣＡＡＡＧＣＴＧＣＴＴＡＡＡＣＣＣＴＣＴＴＡＴＣＣＴＣＡＴＴＣＧＴＴＧＣＡＣＣＡＧＣＴＣＡＴＣＴＡＣＴＡＣＧＣＧＧＴＧＴＡＣＴＧＴＡＡＣＴＡＴＧＡＴＧＣＡＴＣＣＡＴＣＴＡＴＧＧＴＣＣＴＣＣＣＣＴＧＴＡＴＴＧＧＴＴＴＣＣＡＴＣＴＧＡＡＡＴＴＧＡＴＴＣＴＡＡＡＡＧＧＴＣＡＡＡＣＴＴＧＧＧＧＡＡＣＡＴＴＡＴＧＧＡＡＡＣＴＣＡＴＧＧＡＣＣＡＡＧＧＣＴＴＣＴＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＴＡＣＡＡＡＧＡＴＣＣＴＡＴＣＡＣＧＡＧＴＴＡＴＡＡＡＣＡＧＴＴＣＣＡＡＡＡＧＴＴＣＴＣＴＧＴＴＣＡＡＣＡＴＣＴＡＧＡＧＧＴＧＴＡＴＴＧＧＴＣＴＣＴＴＧＴＧＴＴＡＧＡＡＡＡＧＣＴＴＴＣＡＡＴＣＣＡＡＴＴＴＣＡＧＧＡＡＣＧＴＣＣＡＡＡＡＴＧＴＡＴＡＧＴＡＧＡＴＡＣＴＴＣＴＧＡＣＡＡＡＴＣＡＡＡＡＣＡＣＧＧＧＧＧＣＡＣＡＴＧＧＣＴＴＣＣＣＧＧＴＴＣＡＧＴＴＴＴＧＡＡＣＡＴＴＧＣＧＧＡＧＴＧＴＴＧＴＡＴＡＴＴＧＴＣＡＡＣＴＡＧＴＧＡＡＡＣＡＧＡＴＧＡＴＡＡＧＧＴＴＧＣＧＡＴＴＧＴＡＴＧＧＣＧＧＧＡＴＧＡＡＡＧＡＴＧＴＧＡＴＡＡＴＣＴＧＧＡＴＧＴＡＡＡＣＡＡＧＡＴＧＡＣＡＴＴＣＡＡＡＧＡＡＴＴＧＣＧＡＣＡＡＣＡＡＧＴＡＡＴＧＴＴＧＧＴＴＧＣＡＡＡＴＧＣＡＴＴＧＡＡＧＴＴＡＴＴＧＴＴＴＴＣＡＡＡＡＧＧＡＧＡＴＣＣＴＡＴＴＧＣＡＡＴＴＧＡＴＡＴＧＣＣＡＡＴＧＡＣＡＧＴＴＡＣＴＧＣＡＧＴＡＡＴＴＣＴＡＴＡＴＴＴＧＧＣＧＡＴＴＧＴＡＴＡＴＴＣＴＧＧＡＴＴＴＧＴＧＧＴＴＧＴＡＴＣＴＡＴＡＧＣＴＧＡＣＡＧＴＴＴＴＧＣＡＧＣＴＡＡＡＧＡＧＡＴＴＧＣＡＡＣＡＣＧＡＴＴＡＣＧＴＧＴＡＴＣＴＡＡＴＧＣＡＡＡＧＧＣＴＡＴＣＴＴＴＡＣＴＣＡＡＧＡＴＴＡＣＡＴＴＧＴＴＣＧＡＧＧＴＧＧＴＣＧＡＡＧＡＴＴＴＣＣＴＴＴＧＴＡＣＡＧＴＣＧＡＧＴＴＡＴＴＧＡＡＧＣＣＡＣＣＣＡＡＴＧＴＡＧＡＧＣＣＡＴＣＧＴＧＧＴＴＣＣＴＧＣＧＡＴＡＧＧＧＧＡＡＡＡＣＧＴＡＧＡＡＧＴＴＡＴＴＴＴＡＡＧＡＡＡＡＣＡＧＧＡＣＡＴＴＴＣＡＴＧＧＧＧＣＧＡＴＴＴＴＣＴＴＴＣＴＧＧＴＧＣＡＡＡＡＣＡＧＣＴＴＣＣＴＡＧＣＣＣＧＧＡＴＴＡＴＴＧＣＴＣＴＣＣＡＧＴＣＴＡＴＣＡＡＴＣＣＡＴＡＧＡＣＡＣＧＴＴＧＡＣＡＡＡＣＡＴＡＣＴＣＴＴＣＴＣＴＴＣＧＧＧＡＡＣＡＡＣＡＧＧＡＧＡＣＣＣＡＡＡＡＧＣＴＡＴＡＣＣＡＴＧＧＡＣＧＣＡＡＡＴＡＴＣＴＣＣＡＡＴＧＡＧＡＴＧＴＧＣＴＧＣＴＧＡＣＧＧＡＴＧＧＧＣＴＣＡＴＡＴＧＧＡＴＡＴＴＣＡＧＧＣＴＧＧＡＧＡＴＧＴＴＴＡＴＴＧＴＴＧＧＣＣＣＡＣＡＡＡＴＣＴＧＧＧＡＴＧＧＧＴＣＡＴＧＧＧＡＣＣＣＡＴＴＧＴＡＣＴＴＴＡＣＴＣＧＡＧＴＴＴＴＣＴＴＡＣＣＧＧＴＧＣＡＡＣＡＴＴＧＧＣＴＣＴＴＴＡＴＡＡＴＧＧＣＴＣＣＣＣＴＣＴＴＧＧＴＣＡＴＧＧＴＴＴＴＧＧＡＡＡＡＴＴＴＧＴＴＣＡＧＧＡＴＧＣＡＧＧＡＧＴＧＡＣＡＡＴＴＴＴＧＧＧＣＡＣＧＧＴＴＣＣＡＡＧＣＡＴＡＧＴＣＡＡＧＴＣＴＴＧＧＡＡＧＡＧＴＡＣＡＡＧＡＴＧＴＡＴＧＧＡＡＧＧＡＣＴＧＧＡＣＴＧＧＡＣＡＡＡＧＡＴＡＡＡＧＧＣＡＴＴＴＧＧＧＴＣＧＡＣＴＧＧＴＧＡＡＧＣＴＴＣＴＡＡＴＧＴＣＧＡＣＧＡＴＧＡＣＣＴＴＴＧＧＣＴＴＴＣＣＴＣＡＡＡＧＧＣＣＴＡＣＴＡＣＡＡＡＣＣＴＧＴＴＣＴＴＧＡＡＴＧＣＴＧＴＧＧＡＧＧＴＡＣＣＧＡＧＣＴＴＧＣＡＴＣＴＴＣＴＴＡＴＧＴＴＣＡＡＧＧＧＡＡＴＣＴＴＣＴＡＣＡＧＣＣＡＣＡＡＧＣＣＴＴＴＧＧＡＧＣＡＴＴＡＡＧＣＴＣＴＧＣＴＴＣＡＡＴＧＧＧＡＡＣＣＧＧＡＴＴＴＧＴＣＡＴＡＴＴＴＧＡＣＧＡＴＣＡＴＧＧＡＧＴＴＣＣＴＴＡＣＣＣＧＧＡＣＧＡＴＧＡＡＣＣＣＴＧＴＧＴＴＧＧＴＧＡＡＧＴＧＧＧＴＴＴＧＴＴＴＣＣＡＧＴＡＴＡＴＡＴＧＧＧＡＧＣＡＴＣＴＧＡＴＡＧＡＣＴＡＣＴＧＡＡＴＧＣＡＧＡＴＣＡＴＧＡＡＡＡＡＡＴＴＴＡＣＴＴＣＡＡＧＧＧＡＡＴＧＣＣＧＡＧＴＴＡＣＡＡＡＧＧＡＡＴＧＣＡＡＣＴＡＡＧＧＡＧＡＣＡＴＧＧＡＧＡＴＡＴＣＡＴＣＡＡＧＡＧＡＡＣＡＡＴＴＧＧＡＧＧＡＴＡＴＴＴＧＧＴＴＧＴＡＣＡＡＧＧＣＡＧＧＧＣＴＧＡＴＧＡＴＡＣＣＡＴＧＡＡＣＣＴＴＧＧＴＧＧＣＡＴＡＡＡＧＡＣＧＡＧＣＴＣＡＡＴＡＧＡＡＡＴＴＧＡＧＣＧＴＧＴＴＴＧＴＧＡＡＣＡＡＧＣＴＧＡＴＧＧＡＡＧＣＡＴＣＡＴＧＧＡＡＡＣＴＧＣＴＧＣＡＧＴＣＡＧＴＧＴＴＧＣＡＣＣＴＧＣＡＡＣＣＧＧＴＧＧＴＣＣＡＧＡＡＣＴＡＴＴＡＧＣＣＡＴＡＴＴＴＧＴＧＧＴＡＣＴＡＡＡＧＡＡＣＧＧＴＴＧＣＡＡＣＡＣＴＣＡＡＣＣＡＣＡＧＧＡＣＣＴＡＡＡＧＡＴＧＡＴＡＴＴＴＴＣＡＡＡＧＧＣＣＡＴＴＣＡＡＡＡＡＡＡＣＣＴＣＡＡＣＣＣＡＴＴＧＴＴＣＡＡＧＧＴＴＴＴＣＴＣＣＴＡＡ（配列番号８）。
幾つかの実施形態において、ポリヌクレオチドは、配列番号８に対して少なくとも８４％、少なくとも８７％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、もしくは少なくとも９９％、またはそれらの間の任意の値および範囲の相同性もしくは同一性を有する核酸配列を含む。各可能性は、本発明の別の実施形態を表す。幾つかの実施形態において、ポリヌクレオチドは、配列番号８に対して８４％～１００％、８８％～１００％、９０％～１００％、または９５％～１００％の相同性または同一性を有する核酸配列を含む。各可能性は、本発明の別の実施形態を表す。
幾つかの実施形態において、ポリヌクレオチドは、以下の核酸配列を含む、またはそれからなる：
ＡＴＧＧＴＧＴＡＣＡＡＧＴＣＴＴＴＧＡＡＴＴＣＡＡＴＡＴＣＣＡＴＡＴＣＡＧＡＴＡＴＡＧＴＡＡＡＴＣＴＴＧＧＴＡＴＡＴＣＡＣＣＴＧＡＡＡＣＴＧＣＡＡＣＴＣＡＡＣＴＴＣＡＴＣＡＧＡＡＡＣＴＡＡＣＴＧＡＡＡＴＣＡＴＴＣＡＧＡＴＴＴＡＴＧＧＴＴＴＴＧＡＴＧＣＴＣＣＴＣＡＡＡＣＡＴＧＧＡＣＣＣＡＧＡＴＡＴＣＣＡＣＣＣＧＧＡＴＴＣＴＴＣＡＴＣＣＧＧＡＣＣＴＴＣＣＣＴＴＴＴＧＴＴＴＴＣＡＴＣＡＧＡＴＧＡＴＧＴＡＴＴＡＴＧＧＡＴＧＣＴＡＴＧＴＴＧＡＴＴＴＴＧＧＡＣＣＧＧＡＴＣＣＴＣＣＴＧＣＴＴＧＧＴＣＡＣＣＣＧＡＣＣＣＧＡＡＧＧＡＴＧＣＡＡＡＧＴＴＡＡＣＡＡＡＣＡＴＡＧＧＴＡＧＴＴＴＡＴＴＡＧＡＧＡＧＡＣＧＣＧＧＡＡＡＧＧＡＧＴＴＣＴＴＧＧＧＧＣＣＴＡＧＴＴＡＴＡＡＡＧＡＴＣＣＣＡＴＴＴＣＡＡＧＣＴＡＣＴＣＴＧＣＴＣＴＴＣＡＧＧＡＡＴＴＴＴＣＡＧＣＣＴＴＡＡＡＴＣＴＡＧＡＧＧＴＧＴＴＴＴＧＧＡＡＡＡＣＡＡＴＡＴＴＧＧＡＴＧＡＡＡＴＧＡＡＴＡＴＡＡＣＡＴＴＴＴＣＴＧＴＧＣＣＴＣＣＡＡＡＡＣＧＣＡＴＡＴＴＡＧＴＴＧＡＴＧＡＣＣＴＧＴＣＴＡＡＡＧＡＡＡＧＣＣＡＧＴＴＡＴＴＧＣＡＴＣＣＡＧＧＴＧＧＴＣＧＡＴＧＧＣＴＴＣＣＣＧＧＡＧＣＴＴＡＴＧＴＡＡＡＴＣＣＡＧＣＴＡＧＡＡＡＴＴＧＴＴＴＧＡＧＴＴＴＡＡＧＴＡＧＣＡＡＧＡＧＡＡＧＧＴＴＡＡＧＴＧＡＴＡＴＡＧＣＡＧＴＴＡＴＡＴＧＧＣＧＴＧＡＴＧＡＡＧＧＡＡＡＴＧＡＴＧＡＴＡＴＧＣＣＧＧＴＣＡＡＣＡＡＡＡＴＧＡＣＧＴＴＴＣＡＧＣＡＧＴＴＧＣＧＣＴＣＡＧＡＧＧＴＴＴＧＧＴＴＡＧＴＴＧＣＡＴＡＴＧＣＡＣＴＴＧＡＴＡＣＡＴＴＧＧＧＡＧＴＧＧＡＡＡＡＡＧＧＡＴＣＴＧＣＡＡＴＴＧＣＡＡＴＣＧＡＴＡＴＧＣＣＴＡＴＧＧＡＴＧＴＣＡＡＡＴＣＴＧＴＧＧＴＧＡＴＴＴＡＴＣＴＡＧＣＣＡＴＴＧＴＴＴＴＡＧＣＡＧＧＣＴＡＴＧＴＧＧＴＴＧＴＡＴＣＴＡＴＴＧＣＡＧＡＴＡＧＴＴＴＴＧＣＴＧＣＴＧＧＴＧＡＡＡＴＴＴＣＧＡＣＣＡＧＡＣＴＴＧＴＡＴＴＡＴＣＡＡＡＡＧＣＡＡＡＡＧＣＡＡＴＴＴＴＴＡＣＴＣＡＧＧＡＴＴＴＧＡＴＣＡＴＴＣＧＴＧＧＴＧＡＣＡＧＡＡＧＣＣＡＴＣＣＣＴＴＧＴＡＣＡＧＣＣＧＡＧＴＴＧＴＴＧＡＴＧＣＴＣＡＡＴＣＡＣＣＴＣＴＡＧＣＡＡＴＴＧＴＣＡＴＴＣＣＴＡＣＧＡＧＡＧＧＣＴＣＡＡＧＴＴＴＴＡＧＴＡＴＡＡＡＡＴＴＡＣＧＴＧＡＣＧＧＴＧＡＴＡＴＴＴＣＴＴＧＧＣＡＴＧＡＴＴＴＴＣＴＧＧＡＡＣＧＡＧＣＴＡＡＣＡＣＴＴＡＣＡＧＧＡＡＴＧＴＴＧＡＧＴＴＴＧＴＴＧＣＴＧＴＴＧＡＡＣＧＡＣＣＣＧＴＴＧＡＡＧＣＴＴＴＣＴＣＡＡＡＴＡＴＣＣＴＴＴＴＣＴＣＡＴＣＡＧＧＡＡＣＴＡＣＡＧＧＧＧＡＡＣＣＧＡＡＧＧＣＡＡＴＴＣＣＡＴＧＧＡＣＣＣＴＴＧＣＡＡＣＡＣＣＴＴＴＣＡＡＧＧＣＴＧＧＴＧＣＡＧＡＣＧＣＴＴＧＧＴＧＣＣＡＣＡＴＧＧＡＴＧＴＣＣＡＣＡＡＡＧＧＴＧＡＴＧＴＴＧＴＴＧＣＡＴＧＧＣＣＴＡＣＴＡＡＴＣＴＴＧＧＡＴＧＧＡＴＧＡＴＧＧＧＴＣＣＴＴＧＧＣＴＡＡＴＡＴＡＴＧＣＴＴＣＡＴＴＧＴＴＡＡＡＴＧＧＧＧＧＣＴＣＡＣＴＴＧＣＡＴＴＡＴＡＣＡＡＣＧＧＡＴＣＴＣＣＣＣＴＧＡＣＴＴＣＴＧＧＡＴＴＴＧＣＣＡＡＧＴＴＴＧＴＴＣＡＧＧＡＴＧＣＡＡＡＡＧＴＡＡＣＡＴＴＧＴＴＧＧＧＡＧＴＧＡＴＡＣＣＡＡＧＴＡＴＴＧＴＧＡＧＧＧＣＡＴＧＧＡＧＡＡＣＡＡＡＣＡＡＴＡＧＴＡＣＡＧＣＣＧＧＣＴＴＴＧＡＣＴＧＧＴＣＡＡＣＣＡＴＣＣＧＧＴＧＣＴＴＴＧＧＡＴＣＧＡＣＣＧＧＴＧＡＧＧＣＣＴＣＴＡＡＴＡＣＴＧＡＴＧＡＡＴＧＴＣＴＴＴＧＧＣＴＧＡＴＧＧＧＡＡＧＡＧＣＴＣＡＴＴＡＣＡＡＡＣＣＧＧＴＣＡＴＣＧＡＧＴＡＴＴＧＣＧＧＴＧＧＣＡＣＡＧＡＧＡＴＴＧＧＴＧＧＴＧＧＴＴＴＴＡＴＴＡＣＡＧＧＡＴＣＴＴＴＡＣＴＧＣＡＧＣＣＴＣＡＧＴＧＴＴＴＧＴＣＴＧＣＴＴＴＣＡＧＣＡＣＡＣＣＡＡＧＴＴＴＧＧＧＴＴＧＴＡＡＡＣＴＧＴＴＡＡＴＴＣＴＴＧＧＣＧＡＡＧＡＴＧＧＡＡＴＣＣＣＴＡＴＡＣＣＡＣＡＡＡＡＣＧＣＴＣＣＴＧＧＡＡＴＴＧＧＴＧＡＡＴＴＧＧＣＴＣＴＧＡＡＴＣＣＣＣＴＣＡＴＧＴＴＴＧＧＧＧＣＡＴＣＧＡＧＣＡＣＡＣＴＡＣＴＡＡＡＴＧＣＡＡＡＣＣＡＣＴＡＴＧＡＴＧＴＣＴＡＣＴＴＴＡＡＡＧＧＣＡＴＧＣＣＣＴＣＴＴＧＧＡＡＴＧＧＴＡＡＧＧＴＴＣＴＡＡＧＡＡＧＧＣＡＴＧＧＡＧＡＴＧＴＡＴＴＴＧＡＧＣＧＣＡＣＧＴＣＴＡＡＡＧＧＡＴＡＣＴＡＴＣＧＴＧＣＣＣＡＴＧＧＴＣＧＴＧＣＡＧＡＴＧＡＴＡＣＴＡＴＧＡＡＴＣＴＴＧＧＧＧＧＴＡＴＴＡＡＧＧＴＡＡＧＴＴＣＧＧＴＴＧＡＧＡＴＴＧＡＡＣＧＴＧＴＡＴＧＣＡＡＣＴＣＧＡＴＴＧＡＴＧＡＣＡＧＡＡＴＴＣＴＣＧＡＧＡＣＡＧＣＧＧＣＴＡＴＡＧＧＧＧＴＴＡＣＡＣＣＴＴＣＴＧＧＴＧＧＣＧＧＧＣＣＡＧＡＧＡＧＧＴＴＧＧＴＡＡＴＴＧＴＴＧＴＴＧＣＴＴＴＴＡＡＡＧＡＴＧＧＣＡＧＴＧＧＴＴＣＧＡＡＡＣＣＣＧＡＣＴＴＡＡＴＣＡＡＧＴＴＧＡＡＧＧＴＣＡＣＡＣＴＧＡＡＴＴＣＡＧＣＴＴＴＡＣＡＡＡＡＧＡＡＴＣＴＧＡＡＣＣＣＴＴＴＧＴＴＴＡＡＧＧＴＴＴＣＴＧＡＴＧＴＧＧＴＧＣＣＣＴＴＴＣＣＡＴＣＡＣＴＴＣＣＴＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＣＡＡＡＣＡＡＧＧＴＡＡＴＧＡＧＡＡＧＧＧＴＴＴＴＧＣＧＡＣＡＧＣＡＧＴＴＧＡＣＴＣＡＡＡＴＴＧＧＴＣＡＡＡＡＴＡＧＣＡＡＧＣＴＡＴＡＡ（配列番号９）。
幾つかの実施形態において、ポリヌクレオチドは、配列番号９に対して少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、もしくは少なくとも９９％、またはそれらの間の任意の値および範囲の相同性もしくは同一性を有する核酸配列を含む。各可能性は、本発明の別の実施形態を表す。幾つかの実施形態において、ポリヌクレオチドは、配列番号９に対して８８％～１００％、９０％～１００％、９３～１００％、または９６％～１００％の相同性または同一性を有する核酸配列を含む。各可能性は、本発明の別の実施形態を表す。
幾つかの実施形態において、ポリヌクレオチドは、以下の核酸配列を含む、またはそれからなる：
ＡＴＧＡＣＧＴＴＴＣＡＧＣＡＧＴＴＧＣＧＣＴＣＡＧＡＧＧＴＴＴＧＧＴＴＡＧＴＴＧＣＡＴＡＴＧＣＡＣＴＴＧＡＴＡＣＡＴＴＧＧＧＡＧＴＧＧＡＡＡＡＡＧＧＡＴＣＴＧＣＡＡＴＴＧＣＡＡＴＣＧＡＴＡＴＧＣＣＴＡＴＧＧＡＴＧＴＣＡＡＡＴＣＴＧＴＧＧＴＧＡＴＴＴＡＴＣＴＡＧＣＣＡＴＴＧＴＴＴＴＡＧＣＡＧＧＣＴＡＴＧＴＧＧＴＴＧＴＡＴＣＴＡＴＴＧＣＡＧＡＴＡＧＴＴＴＴＧＣＴＧＣＴＧＧＴＧＡＡＡＴＴＴＣＧＡＣＣＡＧＡＣＴＴＧＴＡＴＴＡＴＣＡＡＡＡＧＣＡＡＡＡＧＣＡＡＴＴＴＴＴＡＣＴＣＡＧＧＡＴＴＴＧＡＴＣＡＴＴＣＧＴＧＧＴＧＡＣＡＧＡＡＧＣＣＡＴＣＣＣＴＴＧＴＡＣＡＧＣＣＧＡＧＴＴＧＴＴＧＡＴＧＣＴＣＡＡＴＣＡＣＣＴＣＴＡＧＣＡＡＴＴＧＴＣＡＴＴＣＣＴＡＣＧＡＧＡＧＧＣＴＣＡＡＧＴＴＴＴＡＧＴＡＴＡＡＡＡＴＴＡＣＧＴＧＡＣＧＧＴＧＡＴＡＴＴＴＣＴＴＧＧＣＡＴＧＡＴＴＴＴＣＴＧＧＡＡＣＧＡＧＣＴＡＡＣＡＣＴＴＡＣＡＧＧＡＡＴＧＴＴＧＡＧＴＴＴＧＴＴＧＣＴＧＴＴＧＡＡＣＧＡＣＣＣＧＴＴＧＡＡＧＣＴＴＴＣＴＣＡＡＡＴＡＴＣＣＴＴＴＴＣＴＣＡＴＣＡＧＧＡＡＣＴＡＣＡＧＧＧＧＡＡＣＣＧＡＡＧＧＣＡＡＴＴＣＣＡＴＧＧＡＣＣＣＴＴＧＣＡＡＣＡＣＣＴＴＴＣＡＡＧＧＣＴＧＧＴＧＣＡＧＡＣＧＣＴＴＧＧＴＧＣＣＡＣＡＴＧＧＡＴＧＴＣＣＡＣＡＡＡＧＧＴＧＡＴＧＴＴＧＴＴＧＣＡＴＧＧＣＣＴＡＣＴＡＡＴＣＴＴＧＧＡＴＧＧＡＴＧＡＴＧＧＧＴＣＣＴＴＧＧＣＴＡＡＴＡＴＡＴＧＣＴＴＣＡＴＴＧＴＴＡＡＡＴＧＧＧＧＧＣＴＣＡＣＴＴＧＣＡＴＴＡＴＡＣＡＡＣＧＧＡＴＣＴＣＣＣＣＴＧＡＣＴＴＣＴＧＧＡＴＴＴＧＣＣＡＡＧＴＴＴＧＴＴＣＡＧＧＡＴＧＣＡＡＡＡＧＴＡＡＣＡＴＴＧＴＴＧＧＧＡＧＴＧＡＴＡＣＣＡＡＧＴＡＴＴＧＴＧＡＧＧＧＣＡＴＧＧＡＧＡＡＣＡＡＡＣＡＡＴＡＧＴＡＣＡＧＣＣＧＧＣＴＴＴＧＡＣＴＧＧＴＣＡＡＣＣＡＴＣＣＧＧＴＧＣＴＴＴＧＧＡＴＣＧＡＣＣＧＧＴＧＡＧＧＣＣＴＣＴＡＡＴＡＣＴＧＡＴＧＡＡＴＧＴＣＴＴＴＧＧＣＴＧＡＴＧＧＧＡＡＧＡＧＣＴＣＡＴＴＡＣＡＡＡＣＣＧＧＴＣＡＴＣＧＡＧＴＡＴＴＧＣＧＧＴＧＧＣＡＣＡＧＡＧＡＴＴＧＧＴＧＧＴＧＧＴＴＴＴＡＴＴＡＣＡＧＧＡＴＣＴＴＴＡＣＴＧＣＡＧＣＣＴＣＡＧＴＧＴＴＴＧＴＣＴＧＣＴＴＴＣＡＧＣＡＣＡＣＣＡＡＧＴＴＴＧＧＧＴＴＧＴＡＡＡＣＴＧＴＴＡＡＴＴＣＴＴＧＧＣＧＡＡＧＡＴＧＧＡＡＴＣＣＣＴＡＴＡＣＣＡＣＡＡＡＡＣＧＣＴＣＣＴＧＧＡＡＴＴＧＧＴＧＡＡＴＴＧＧＣＴＣＴＧＡＡＴＣＣＣＣＴＣＡＴＧＴＴＴＧＧＧＧＣＡＴＣＧＡＧＣＡＣＡＣＴＡＣＴＡＡＡＴＧＣＡＡＡＣＣＡＣＴＡＴＧＡＴＧＴＣＴＡＣＴＴＴＡＡＡＧＧＣＡＴＧＣＣＣＴＣＴＴＧＧＡＡＴＧＧＴＡＡＧＧＴＴＣＴＡＡＧＡＡＧＧＣＡＴＧＧＡＧＡＴＧＴＡＴＴＴＧＡＧＣＧＣＡＣＧＴＣＴＡＡＡＧＧＡＴＡＣＴＡＴＣＧＴＧＣＣＣＡＴＧＧＴＣＧＴＧＣＡＧＡＴＧＡＴＡＣＴＡＴＧＡＡＴＣＴＴＧＧＧＧＧＴＡＴＴＡＡＧＧＴＡＡＧＴＴＣＧＧＴＴＧＡＧＡＴＴＧＡＡＣＧＴＧＴＡＴＧＣＡＡＣＴＣＧＡＴＴＧＡＴＧＡＣＡＧＡＡＴＴＣＴＣＧＡＧＡＣＡＧＣＧＧＣＴＡＴＡＧＧＧＧＴＴＡＣＡＣＣＴＴＣＴＧＧＴＧＧＣＧＧＧＣＣＡＧＡＧＡＧＧＴＴＧＧＴＡＡＴＴＧＴＴＧＴＴＧＣＴＴＴＴＡＡＡＧＡＴＧＧＣＡＧＴＧＧＴＴＣＧＡＡＡＣＣＣＧＡＣＴＴＡＡＴＣＡＡＧＴＴＧＡＡＧＧＴＣＡＣＡＣＴＧＡＡＴＴＣＡＧＣＴＴＴＡＣＡＡＡＡＧＡＡＴＣＴＧＡＡＣＣＣＴＴＴＧＴＴＴＡＡＧＧＴＴＴＣＴＧＡＴＧＴＧＧＴＧＣＣＣＴＴＴＣＣＡＴＣＡＣＴＴＣＣＴＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＣＡＡＡＣＡＡＧＧＴＡＡＴＧＡＧＡＡＧＧＧＴＴＴＴＧＣＧＡＣＡＧＣＡＧＴＴＧＡＣＴＣＡＡＡＴＴＧＧＴＣＡＡＡＡＴＡＧＣＡＡＧＣＴＡＴＡＡ（配列番号１０）。
幾つかの実施形態において、ポリヌクレオチドは、配列番号１０に対して少なくとも８９％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、もしくは少なくとも９７％、またはそれらの間の任意の値および範囲の相同性もしくは同一性を有する核酸配列を含む。各可能性は、本発明の別の実施形態を表す。幾つかの実施形態において、ポリヌクレオチドは、配列番号１０に対して８９％～１００％、９２％～１００％、９５％～１００％、または９７％～１００％の相同性または同一性を有する核酸配列を含む。各可能性は、本発明の別の実施形態を表す。
幾つかの実施形態において、ポリヌクレオチドは、以下の核酸配列を含む、またはそれからなる：
ＡＴＧＡＡＴＡＴＡＡＣＡＴＴＴＴＣＴＧＴＧＣＣＴＣＣＡＡＡＡＣＧＣＡＴＡＴＴＡＧＴＴＧＡＴＧＡＣＣＴＧＴＣＴＡＡＡＧＡＡＡＧＣＣＡＧＴＴＡＴＴＧＣＡＴＣＣＡＧＧＴＧＧＴＣＧＡＴＧＧＣＴＴＣＣＣＧＧＡＧＣＴＴＡＴＧＴＡＡＡＴＣＣＡＧＣＴＡＧＡＡＡＴＴＧＴＴＴＧＡＧＴＴＴＡＡＧＴＡＧＣＡＡＧＡＧＡＡＧＧＴＴＡＡＧＴＧＡＴＡＴＡＧＣＡＧＴＴＡＴＡＴＧＧＣＧＴＧＡＴＧＡＡＧＧＡＡＡＴＧＡＴＧＡＴＡＴＧＣＣＧＧＴＣＡＡＣＡＡＡＡＴＧＡＣＧＴＴＴＣＡＧＣＡＧＴＴＧＣＧＣＴＣＡＧＡＧＧＴＴＴＧＧＴＴＡＧＴＴＧＣＡＴＡＴＧＣＡＣＴＴＧＡＴＡＣＡＴＴＧＧＧＡＧＴＧＧＡＡＡＡＡＧＧＡＴＣＴＧＣＡＡＴＴＧＣＡＡＴＣＧＡＴＡＴＧＣＣＴＡＴＧＧＡＴＧＴＣＡＡＡＴＣＴＧＴＧＧＴＧＡＴＴＴＡＴＣＴＡＧＣＣＡＴＴＧＴＴＴＴＡＧＣＡＧＧＣＴＡＴＧＴＧＧＴＴＧＴＡＴＣＴＡＴＴＧＣＡＧＡＴＡＧＴＴＴＴＧＣＴＧＣＴＧＧＴＧＡＡＡＴＴＴＣＧＡＣＣＡＧＡＣＴＴＧＴＡＴＴＡＴＣＡＡＡＡＧＣＡＡＡＡＧＣＡＡＴＴＴＴＴＡＣＴＣＡＧＧＡＴＴＴＧＡＴＣＡＴＴＣＧＴＧＧＴＧＡＣＡＧＡＡＧＣＣＡＴＣＣＣＴＴＧＴＡＣＡＧＣＣＧＡＧＴＴＧＴＴＧＡＴＧＣＴＣＡＡＴＣＡＣＣＴＣＴＡＧＣＡＡＴＴＧＴＣＡＴＴＣＣＴＡＣＧＡＧＡＧＧＣＴＣＡＡＧＴＴＴＴＡＧＴＡＴＡＡＡＡＴＴＡＣＧＴＧＡＣＧＧＴＧＡＴＡＴＴＴＣＴＴＧＧＣＡＴＧＡＴＴＴＴＣＴＧＧＡＡＣＧＡＧＣＴＡＡＣＡＣＴＴＡＣＡＧＧＡＡＴＧＴＴＧＡＧＴＴＴＧＴＴＧＣＴＧＴＴＧＡＡＣＧＡＣＣＣＧＴＴＧＡＡＧＣＴＴＴＣＴＣＡＡＡＴＡＴＣＣＴＴＴＴＣＴＣＡＴＣＡＧＧＡＡＣＴＡＣＡＧＧＧＧＡＡＣＣＧＡＡＧＧＣＡＡＴＴＣＣＡＴＧＧＡＣＣＣＴＴＧＣＡＡＣＡＣＣＴＴＴＣＡＡＧＧＣＴＧＧＴＧＣＡＧＡＣＧＣＴＴＧＧＴＧＣＣＡＣＡＴＧＧＡＴＧＴＣＣＡＣＡＡＡＧＧＴＧＡＴＧＴＴＧＴＴＧＣＡＴＧＧＣＣＴＡＣＴＡＡＴＣＴＴＧＧＡＴＧＧＡＴＧＡＴＧＧＧＴＣＣＴＴＧＧＣＴＡＡＴＡＴＡＴＧＣＴＴＣＡＴＴＧＴＴＡＡＡＴＧＧＧＧＧＣＴＣＡＣＴＴＧＣＡＴＴＡＴＡＣＡＡＣＧＧＡＴＣＴＣＣＣＣＴＧＡＣＴＴＣＴＧＧＡＴＴＴＧＣＣＡＡＧＴＴＴＧＴＴＣＡＧＧＡＴＧＣＡＡＡＡＧＴＡＡＣＡＴＴＧＴＴＧＧＧＡＧＴＧＡＴＡＣＣＡＡＧＴＡＴＴＧＴＧＡＧＧＧＣＡＴＧＧＡＧＡＡＣＡＡＡＣＡＡＴＡＧＴＡＣＡＧＣＣＧＧＣＴＴＴＧＡＣＴＧＧＴＣＡＡＣＣＡＴＣＣＧＧＴＧＣＴＴＴＧＧＡＴＣＧＡＣＣＧＧＴＧＡＧＧＣＣＴＣＴＡＡＴＡＣＴＧＡＴＧＡＡＴＧＴＣＴＴＴＧＧＣＴＧＡＴＧＧＧＡＡＧＡＧＣＴＣＡＴＴＡＣＡＡＡＣＣＧＧＴＣＡＴＣＧＡＧＴＡＴＴＧＣＧＧＴＧＧＣＡＣＡＧＡＧＡＴＴＧＧＴＧＧＴＧＧＴＴＴＴＡＴＴＡＣＡＧＧＡＴＣＴＴＴＡＣＴＧＣＡＧＣＣＴＣＡＧＴＧＴＴＴＧＴＣＴＧＣＴＴＴＣＡＧＣＡＣＡＣＣＡＡＧＴＴＴＧＧＧＴＴＧＴＡＡＡＣＴＧＴＴＡＡＴＴＣＴＴＧＧＣＧＡＡＧＡＴＧＧＡＡＴＣＣＣＴＡＴＡＣＣＡＣＡＡＡＡＣＧＣＴＣＣＴＧＧＡＡＴＴＧＧＴＧＡＡＴＴＧＧＣＴＣＴＧＡＡＴＣＣＣＣＴＣＡＴＧＴＴＴＧＧＧＧＣＡＴＣＧＡＧＣＡＣＡＣＴＡＣＴＡＡＡＴＧＣＡＡＡＣＣＡＣＴＡＴＧＡＴＧＴＣＴＡＣＴＴＴＡＡＡＧＧＣＡＴＧＣＣＣＴＣＴＴＧＧＡＡＴＧＧＴＡＡＧＧＴＴＣＴＡＡＧＡＡＧＧＣＡＴＧＧＡＧＡＴＧＴＡＴＴＴＧＡＧＣＧＣＡＣＧＴＣＴＡＡＡＧＧＡＴＡＣＴＡＴＣＧＴＧＣＣＣＡＴＧＧＴＣＧＴＧＣＡＧＡＴＧＡＴＡＣＴＡＴＧＡＡＴＣＴＴＧＧＧＧＧＴＡＴＴＡＡＧＧＴＡＡＧＴＴＣＧＧＴＴＧＡＧＡＴＴＧＡＡＣＧＴＧＴＡＴＧＣＡＡＣＴＣＧＡＴＴＧＡＴＧＡＣＡＧＡＡＴＴＣＴＣＧＡＧＡＣＡＧＣＧＧＣＴＡＴＡＧＧＧＧＴＴＡＣＡＣＣＴＴＣＴＧＧＴＧＧＣＧＧＧＣＣＡＧＡＧＡＧＧＴＴＧＧＴＡＡＴＴＧＴＴＧＴＴＧＣＴＴＴＴＡＡＡＧＡＴＧＧＣＡＧＴＧＧＴＴＣＧＡＡＡＣＣＣＧＡＣＴＴＡＡＴＣＡＡＧＴＴＧＡＡＧＧＴＣＡＣＡＣＴＧＡＡＴＴＣＡＧＣＴＴＴＡＣＡＡＡＡＧＡＡＴＣＴＧＡＡＣＣＣＴＴＴＧＴＴＴＡＡＧＧＴＴＴＣＴＧＡＴＧＴＧＧＴＧＣＣＣＴＴＴＣＣＡＴＣＡＣＴＴＣＣＴＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＣＡＡＡＣＡＡＧＧＴＡＡＴＧＡＧＡＡＧＧＧＴＴＴＴＧＣＧＡＣＡＧＣＡＧＴＴＧＡＣＴＣＡＡＡＴＴＧＧＴＣＡＡＡＡＴＡＧＣＡＡＧＣＴＡＴＡＡ（配列番号１１）。
幾つかの実施形態において、ポリヌクレオチドは、配列番号１１に対して少なくとも８９％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、もしくは少なくとも９７％、またはそれらの間の任意の値および範囲の相同性もしくは同一性を有する核酸配列を含む。各可能性は、本発明の別の実施形態を表す。幾つかの実施形態において、ポリヌクレオチドは、配列番号１１に対して８９％～１００％、９０％～１００％、９５％～１００％、または９７％～１００％の相同性または同一性を有する核酸配列を含む。各可能性は、本発明の別の実施形態を表す。
幾つかの実施形態において、本発明のポリヌクレオチドは、１，２００～２５，００のヌクレオチドを含む。幾つかの実施形態において、本発明のポリヌクレオチドは、１，２００～１５，００のヌクレオチド長である。
幾つかの実施形態において、１，２００～２５，００のヌクレオチドは、少なくとも１，２５０ヌクレオチド、少なくとも１，５００ヌクレオチド、少なくとも１，７５０ヌクレオチド、少なくとも１，９５０ヌクレオチド、少なくとも２，０５０ヌクレオチド、少なくとも２，１５０ヌクレオチド、少なくとも２，２５０ヌクレオチド、少なくとも２，３００ヌクレオチド、もしくは少なくとも２，４５０ヌクレオチド、またはそれらの間の任意の値および範囲を含む。各可能性は、本発明の別の実施形態を表す。幾つかの実施形態において、１，２００～２５，００のヌクレオチドは、１，２００～１，９５０ヌクレオチド、１，３００～２，２５０ヌクレオチド、１，２５０～２，５００ヌクレオチド、１，３５０～２，３５０ヌクレオチド、１，５５０～２，２００ヌクレオチド、１，４００～２，０５０ヌクレオチド、または１，２７５～２，３２５ヌクレオチドを含む。各可能性は、本発明の別の実施形態を表す。
幾つかの実施形態において、ポリヌクレオチドは、複数のポリヌクレオチドを含む。幾つかの実施形態において、ポリヌクレオチドは、複数の型のポリヌクレオチドを含む。本明細書で用いられる用語「複数」は、２以上の任意の整数を含む。幾つかの実施形態において、ポリヌクレオチドは、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０もしくは１１の異なる核酸配列、またはそれらの間の任意の値および範囲を含み、異なる核酸配列のそれぞれは、配列番号１～１１から選択される。各可能性は、本発明の別の実施形態を表す。幾つかの実施形態において、ポリヌクレオチドは、２～３、２～４、２～５、２～６、２～７、２～８、２～９、２～１０、２～１１、３～５、３～７、３～９、３～１１、４～５、４～７、４～９、４～１１、５～７、５～９、５～１１、６～７、６～９、６～１１、７～９、７～１１、８～９、８～１１、９～１１、または１０～１１の異なる核酸配列を含み、異なる核酸配列のそれぞれは、配列番号１～１１から選択される。
幾つかの実施形態において、ポリヌクレオチドは、複数のポリヌクレオチド分子であり、複数のポリヌクレオチド分子のそれぞれは、異なる核酸配列を含み、異なる核酸配列は、配列番号１～１１から選択される。
幾つかの実施形態において、ポリヌクレオチドは、アシル活性化酵素（ＡＡＥ）活性を特徴とするタンパク質をコード化する。幾つかの実施形態において、ポリヌクレオチドは、ＡＡＥタンパク質をコード化する。幾つかの実施形態において、ＡＡＥは、ヘリクリサム・アンブラクリゲルムに由来するＡＡＥである。
本明細書で用いられる用語「アシル活性化酵素」および「ＡＡＥ」は、互換的であり、カルボン酸の活性化を触媒することが可能な任意のペプチド、ポリペプチド、またはタンパク質を指す。幾つかの実施形態において、ＡＡＥ活性は、チオエーテル結合を形成すること、またはチオエーテル結合の形成を含む。幾つかの実施形態において、ＡＡＥ活性は、カルボキシル基をアミン基にカップリングすることを含む。幾つかの実施形態において、ＡＡＥ活性は、カルボキシル基をアルコールにカップリングすることを含む。幾つかの実施形態において、ＡＡＥは、酸－チオールリガーゼである。
幾つかの実施形態によれば、本明細書に開示されたポリヌクレオチドを含む人工核酸分子が提供される。
幾つかの実施形態において、人工ベクターは、プラスミドを含む。幾つかの実施形態において、人工ベクターは、人工核酸分子を含むアグロバクテリウムを含む、または該アグロバクテリウムである。幾つかの実施形態において、人工ベクターは、発現ベクターである。幾つかの実施形態において、人工ベクターは、植物発現ベクターである。幾つかの実施形態において、人工ベクターは、本明細書に開示されたとおりのＡＡＥコード化核酸配列の発現に使用するためである。幾つかの実施形態において、人工ベクターは、細胞、組織または生物における本明細書に開示されたとおりのＡＡＥコード化核酸配列の異種発現に使用するためである。幾つかの実施形態において、人工ベクターは、細胞、組織、または生物においてアシルコエンザイムＡ（アシル－ＣｏＡ）を生成すること、またはアシル－ＣｏＡの生成に使用するためである。
細胞内でのポリヌクレオチドの発現は、当業者に周知である。それは、多くの方法の中でも、トランスフェクション、ウイルス感染、または細胞のゲノムの直接変更により実行され得る。幾つかの実施形態において、ポリヌクレオチドは、プラスミドまたはウイルスベクターなどの発現ベクター内にある。ベクターの核酸配列は一般にプロモーター、細胞における増大のための少なくとも１つの複製起点と、場合により追加のエレメント、例えば異種ポリヌクレオチド配列、発現制御エレメント（例えば、プロモーター、エンハンサ）、選択マーカー（例えば、抗生物質耐性）、ポリアデニン配列を含有する。
ベクターは、非ウイルス法を介して、またはウイルス法を介して送達されるＤＮＡプラスミドであってもよい。ウイルスベクターは、レトロウイルスベクター、ヘルペスウイルスベクター、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、ビルガウイルス科ウイルスベクター、またはポックスウイルスベクターであってもよい。ムギ斑葉モザイクウイルス（ＢＳＭＶ）、タバコ茎壊疽ウイルスおよびキャベツ葉巻ゲミニウイルス（ＣｂＬＣＶ）もまた、用いられてもよい。プロモーターは、植物細胞において活性であってもよい。プロモーターは、ウイルスプロモーターであってもよい。
幾つかの実施形態において、本明細書に開示されたポリヌクレオチドは、プロモーターに作動可能に連結される。用語「作動可能に連結される」は、目的のヌクレオチド配列が、（例えば、ベクターが宿主細胞に導入される場合にインビトロ転写／翻訳系において、または宿主細胞において）ヌクレオチド配列の発現を可能にするように調節エレメントまたは複数の調節エレメントに連結されることを意味する。幾つかの実施形態において、プロモーターは、本発明のポリヌクレオチドに作動可能に連結される。幾つかの実施形態において、プロモーターは、異種プロモーターである。幾つかの実施形態において、プロモーターは、内因性プロモーターである。
幾つかの実施形態において、ベクターは、電気穿孔（例えば、Ｆｒｏｍ ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ８２， ５８２４ （１９８５）に記載されたとおり）、ヒートショック、ウイルスベクターによる感染、小さなビーズもしくは粒子のマトリクス内または表面のどちらかに核酸を有する小粒子の高速弾道貫通（ｈｉｇｈ ｖｅｌｏｃｉｔｙ ｂａｌｌｉｓｔｉｃ ｐｅｎｅｔｒａｔｉｏｎ）（Ｋｌｅｉｎ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔｕｒｅ ３２７． ７０－７３ （１９８７））、例えばコーティングされた粒子、針状の粒子、アグロバクテリウムＴｉプラスミドおよび／またはその他のバイオリスティック使用を含む標準法により細胞内に導入される。
本明細書で用いられる用語「プロモーター」は、ＲＮＡポリメラーゼ、即ちＲＮＡポリメラーゼＩＩの開始部位周辺に集合する転写制御モジュールの群を指す。プロモーターは、別個の機能モジュールで構成され、モジュールのそれぞれが、およそ７～２０ｂｐのＤＮＡからなり、転写アクチベーターまたはリプレッサータンパク質の１つまたは複数の認識部位を含有する。プロモーターは、転写開始部位の上流または下流まで伸長してもよく、数塩基対～数キロ塩基の範囲内の任意のサイズであってもよい。
幾つかの実施形態において、ポリヌクレオチドは、ＲＮＡポリメラーゼＩＩ（ＲＮＡＰ ＩＩおよびＰｏｌ ＩＩ）により転写される。ＲＮＡＰ ＩＩは、ＤＮＡの転写を触媒して、ｍＲＮＡならびにほとんどのｓｎＲＮＡおよびｍｉｃｒｏＲＮＡの前駆体を合成することが知られる、真核細胞内で見出される酵素である。
幾つかの実施形態において、植物発現ベクターが、用いられる。一実施形態において、ポリペプチドコード配列の発現は、複数のプロモーターにより駆動される。幾つかの実施形態において、ウイルスプロモーター、例えばＣａＭＶの３５Ｓ ＲＮＡおよび１９Ｓ ＲＮＡプロモーター［Ｂｒｉｓｓｏｎ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔｕｒｅ ３１０：５１１－５１４（１９８４）］、またはＴＭＶのコートタンパク質プロモーター［Ｔａｋａｍａｔｓｕ ｅｔ ａｌ．， ＥＭＢＯ Ｊ． ６：３０７－３１１ （１９８７）］が、用いられる。別の実施形態において、植物プロモーター、例えば、ＲＵＢＩＳＣＯの小サブユニット［Ｃｏｒｕｚｚｉ ｅｔ ａｌ．， ＥＭＢＯ Ｊ． ３： １６７１－１６８０ （１９８４）；およびＢｒｏｇｌｉ ｅｔ ａｌ．， Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２４：８３８－８４３（１９８４）］、またはヒートショックプロモーター、例えば大豆ｈｓｐｌ７．５－Ｅもしくはｈｓｐｌ７．３－Ｂ［Ｇｕｒｌｅｙ ｅｔ ａｌ．， Ｍｏｌ． Ｃｅｌｌ． Ｂｉｏｌ． ６：５５９－５６５ （１９８６）］が、用いられる。一実施形態において、構築物は、Ｔｉプラスミド、Ｒｉプラスミド、植物ウイルスベクター、直接ＤＮＡ形質転換、マイクロインジェクション、電気穿孔および当業者に周知の他の技術を利用して植物細胞内に導入される。例えばＷｅｉｓｓｂａｃｈ ＆ Ｗｅｉｓｓｂａｃｈ［Ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ Ｐｌａｎｔ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ， Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ， ＮＹ， Ｓｅｃｔｉｏｎ ＶＩＩＩ， ｐｐ ４２１－４６３ （１９８８）］を参照されたい。当該技術分野で周知である昆虫および哺乳動物宿主細胞系などの他の発現系もまた、本発明により用いられ得る。
幾つかの実施形態において、レトロウイルスなどの真核生物ウイルスからの調節エレメントを含有する発現ベクターが、本発明により用いられる。ＳＶ４０ベクターは、ｐＳＶＴ７およびｐＭＴ２を含む。幾つかの実施形態において、ウシパピローマウイルスに由来するベクターとしては、ｐＢＶ－ｌＭＴＨＡが挙げられ、エプスタイン・バーウイルスに由来するベクターは、ｐＨＥＢＯおよびｐ２０５を含む。他の例示的ベクターは、ｐＭＳＧ、ｐＡＶ００９／Ａ＋、ｐＭＴＯ１０／Ａ＋、ｐＭＡＭｎｅｏ－５、バキュロウイルスｐＤＳＶＥ、ならびにＳＶ－４０早期プロモーター、ＳＶ－４０後期プロモーター、メタロチオネインプロモーター、ネズミ乳腺腫瘍ウイルスプロモーター、ロータスサルコーマウイルスプロモーター、ポリヘドリンプロモーター、または真核細胞内での発現に効果的であることが示された他のプロモーターの指揮の下でタンパク質の発現を可能にする他のベクターを含む。
幾つかの実施形態において、全身感染および標的化特異性などの利点を提供する組換えウイルスベクターが、インビボ発現に用いられる。一実施形態において、全身感染は、例えばレトロウイルスの生活環に固有であり、単一の感染細胞が多くの子孫ビリオンを生成して隣接する細胞に感染する工程である。一実施形態において、その結果、大きな領域が急速に感染されるようになるが、そのほとんどが、元のウイルス粒子に当初感染していなかった。一実施形態において、全身に伝播することができないウイルスベクターが、生成される。一実施形態において、この特徴は、所望の目的が、指定された遺伝子をごく限定された数の標的細胞に導入することである場合には、有用であり得る。
幾つかの実施形態において、植物ウイルスベクターが、用いられる。幾つかの実施形態において、野生型ウイルスが、用いられる。幾つかの実施形態において、当該技術分野で知られるような分解されたウイルスが、用いられる。幾つかの実施形態において、アグロバクテリウムが、本発明のベクターをウイルスに導入するために用いられる。
様々な方法を使用して、本発明の発現ベクターを細胞に導入することができる。そのような方法は一般に、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．， Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇｓ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ （１９８９， １９９２）、Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．， Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ， Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ， Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ， Ｍｄ．（１９８９）、Ｃｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．， Ｓｏｍａｔｉｃ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ， ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ， Ａｎｎ、Ｖｅｇａ ｅｔ ａｌ．， Ｇｅｎｅ Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ， ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ， Ａｎｎ Ａｒｂｏｒ Ｍｉｃｈ．（１９９５）、Ｖｅｃｔｏｒｓ： Ａ Ｓｕｒｖｅｙ ｏｆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｖｅｃｔｏｒｓ ａｎｄ Ｔｈｅｉｒ Ｕｓｅｓ， Ｂｕｔｔｅｒｗｏｒｔｈｓ， Ｂｏｓｔｏｎ Ｍａｓｓ．（１９８８）およびＧｉｌｂｏａ ｅｔ ａｔ．［Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ４ （６）： ５０４－５１２， １９８６］に記載されており、例えば安定なまたは一過性のトランスフェクション、リポフェクション、電気穿孔、アグロバクテリウムＴｉプラスミドおよび組換えウイルスベクターによる感染が挙げられる。加えて、正／負選択法について、米国特許第５，４６４，７６４号および同第５，４８７，９９２号を参照されたい。
本発明の発現構築物が、挿入されたコード配列（ポリペプチドをコード化する）の転写および翻訳のために必要なエレメントを含有すること以外に、発現されたポリペプチドの安定性、生成、精製、収率または活性を最適化するように操作された配列も含み得ることは、認識されよう。
幾つかの実施形態において、人工ベクターは、本明細書に記載されたアミノ酸配列を含むタンパク質をコード化するポリヌクレオチドを含む。
幾つかの実施形態によれば、（ａ）本明細書に開示されたポリペプチド；（ｂ）本明細書に開示された人工ベクター；または本明細書に開示されたプラスミドもしくはアグロバクテリウム、によりコード化されたタンパク質が提供される。
幾つかの実施形態において、タンパク質は、配列番号１～１１を含む、またはそれらからなるポリペプチドによりコード化される。
幾つかの実施形態において、タンパク質は、配列番号１２～２２のいずれか１つに対して少なくとも８２％、少なくとも８５％、少なくとも８７％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９３％、少なくとも９５％、少なくとも９７％の、または少なくとも相同性もしくは同一性を有するアミノ酸配列を含む。
幾つかの実施形態において、タンパク質は、単離タンパク質である。
本明細書で用いられる用語「ペプチド」、「ポリペプチド」および「タンパク質」は、互換的であり、アミノ酸残基のポリマーを指す。別の実施形態において、本明細書で用いられる用語「ペプチド」、「ポリペプチド」および「タンパク質」は、ネイティブペプチド、ペプチド模倣体（典型的には非ペプチド結合または他の合成修飾を含む）ならびにペプチド類似体ペプトイドおよびセミペプトイド、またはそれらの任意の組合わせを包含する。別の実施形態において、記載されたペプチド、ポリペプチドおよびタンパク質は、それらを、生物内にありながらより安定にする修飾、または細胞への浸透をより可能にする修飾を有する。一実施形態において、用語「ペプチド」、「ポリペプチド」および「タンパク質」は、天然に存在するアミノ酸ポリマーに適用される。別の実施形態において、用語「ペプチド」、「ポリペプチド」および「タンパク質」は、１つまたは複数のアミノ酸残基が、対応する天然に存在するアミノ酸の人工化学的類似体であるアミノ酸ポリマーに適用される。
本明細書で用いられる用語「単離タンパク質」は、天然の核酸に関連する炭水化物、脂質、または他のタンパク質性不純物などの混入細胞成分を本質的に含まないタンパク質を指す。典型的には、単離タンパク質の調製物は、タンパク質を高度に精製された形態で、例えば少なくとも約８０％純粋、少なくとも約９０％純粋、少なくとも約９５％純粋、９５％を超えて純粋、または９９％を超えて純粋な形態で含有する。幾つかの実施形態において、単離タンパク質は、合成タンパク質である。タンパク質の合成は、当該技術分野で周知であり、例えば本明細書に例示されたような形質転換細胞における異種発現により、実施されてもよい。
幾つかの実施形態において、タンパク質は、以下のアミノ酸配列を含む、またはそれからなる：
ＭＴＳＳＫＫＦＴＶＥＶＥＰＡＩＰＡＫＤＧＫＰＳＡＧＰＶＹＲＳＩＦＡＫＤＧＦＰＡＨＩＤＧＬＤＳＣＷＤＩＦＲＬＳＶＥＫＹＰＮＮＲＭＬＧＴＲＥＦＶＮＧＫＨＧＰＹＶＷＳＴＹＫＱＶＹＤＫＶＩＫＶＧＮＡＩＲＡＣＧＶＥＰＧＧＲＣＧＩＹＧＡＮＣＡＥＷＩＭＳＭＥＡＣＮＡＨＧＬＹＣＶＰＬＹＤＴＬＧＡＧＡＩＥＦＩＬＣＨＡＥＶＴＩＡＦＶＥＥＫＫＩＰＥＬＬＫＴＦＰＫＡＧＥＦＬＫＴＩＶＳＦＧＫＶＴＰＥＱＲＥＱＡＥＮＦＧＬＫＩＨＳＷＤＥＦＬＴＬＧＤＤＫＮＦＤＬＰＬＫＥＫＴＤＩＣＴＩＭＹＴＳＧＴＴＧＤＰＫＧＶＬＩＳＮＮＳＭＡＴＬＩＡＧＶＮＲＬＬＤＳＡＫＥＳＬＮＱＨＤＶＹＬＳＦＬＰＬＡＨＩＦＤＲＶＩＥＥＣＦＩＮＨＧＡＳＩＧＦＷＲＧＤＶＫＬＬＩＥＤＩＧＥＬＫＰＴＩＦＣＡＶＰＲＶＬＤＲＩＹＳＧＬＱＱＫＩＳＡＧＧＦＩＫＲＮＬＦＮＬＡＹＳＹＫＬＲＮＭＫＧＧＫＴＨＳＥＡＳＰＬＳＤＫＩＶＦＳＫＶＫＱＧＬＧＧＮＶＲＩＩＬＳＧＡＡＰＬＡＰＨＶＥＡＹＬＫＶＶＡＣＳＨＶＬＱＧＹＧＬＴＥＴＣＡＧＳＦＶＳＬＰＮＥＭＥＭＬＧＴＶＧＰＰＶＰＶＬＤＡＲＬＥＳＶＰＥＭＮＹＤＡＣＳＳＫＰＱＧＥＩＣＩＲＧＤＶＬＦＳＧＹＹＫＲＥＤＬＴＫＥＶＦＶＤＧＷＦＨＴＧＤＩＧＥＷＱＰＤＧＳＭＫＩＩＤＲＫＫＮＩＦＫＬＳＱＧＥＹＶＡＶＥＮＬＥＮＶＹＧＮＶＳＤＩＤＴＩＷＩＹＧＮＳＦＥＦＣＬＶＡＶＶＮＰＮＥＰＡＩＫＲＹＡＥＡＮＮＩＳＧＤＦＤＳＬＣＥＮＰＫＩＫＥＹＩＬＧＥＬＡＲＩＧＫＥＫＫＬＫＧＦＥＦＶＫＡＶＨＬＤＰＶＰＦＤＭＥＲＤＬＬＴＰＴＦＫＫＫＲＰＱＭＬＫＹＹＱＤＶＩＤＮＭＹＫＴＩＮＫＫ（配列番号１２）。
幾つかの実施形態において、タンパク質は、配列番号１２に対して少なくとも９１％、少なくとも９３％、少なくとも９５％、もしくは少なくとも９７％、またはそれらの間の任意の値および範囲の相同性もしくは同一性を有するアミノ酸配列を含む。各可能性は、本発明の別の実施形態を表す。幾つかの実施形態において、タンパク質は、配列番号１２に対して９１％～１００％、９２％～１００％、９３％～１００％、または９５％～１００％の相同性または同一性を有するアミノ酸配列を含む。各可能性は、本発明の別の実施形態を表す。
幾つかの実施形態において、タンパク質は、以下のアミノ酸配列を含む、またはそれからなる：
ＭＤＡＬＲＫＰＮＳＡＮＳＳＰＬＴＰＩＧＦＬＥＲＡＡＶＶＦＡＮＳＰＳＩＶＹＮＮＬＩＹＴＷＳＤＴＦＨＲＣＬＲＬＡＳＳＩＳＲＬＡＩＲＫＧＤＶＶＳＶＬＡＰＮＩＰＡＩＹＥＬＨＦＧＩＴＭＴＧＡＩＩＮＴＩＮＴＲＬＤＡＲＴＩＳＩＬＬＣＨＳＥＳＫＬＶＦＶＤＹＱＬＴＲＬＩＲＥＡＶＳＬＭＰＤＡＣＶＰＰＱＬＶＬＩＶＤＤＧＨＮＬＳＬＬＳＤＱＦＩＮＴＹＥＡＭＶＥＴＧＤＰＧＦＮＷＶＲＰＤＳＤＷＤＰＬＴＬＮＹＴＳＧＴＴＳＳＰＫＧＶＶＮＳＨＲＧＳＦＩＶＡＦＤＳＬＬＥＷＨＶＰＫＱＰＩＭＬＷＴＬＰＭＦＨＡＮＧＷＳＦＶＷＧＭＡＡＶＧＧＴＮＶＣＬＲＫＦＤＡＴＩＩＹＤＴＩＲＮＨＨＶＴＨＭＣＧＡＰＶＶＬＮＭＬＳＥＧＫＰＬＥＨＴＶＨＩＭＴＡＧＡＰＰＰＡＡＶＬＬＲＴＥＳＬＧＦＥＶＴＨＧＦＧＭＴＥＴＧＧＬＶＶＳＣＳＷＫＫＥＷＮＲＬＰＶＴＥＫＡＲＬＫＡＲＱＧＶＲＴＬＧＭＴＥＶＤＩＶＤＰＥＳＧＶＳＶＴＲＤＧＬＴＱＧＥＬＶＬＲＧＧＳＩＭＬＧＹＬＫＤＰＥＴＴＮＫＳＶＫＮＧＷＦＹＴＧＤＶＡＶＭＨＰＤＧＹＬＥＩＫＤＲＳＫＤＶＩＩＳＧＧＥＮＩＳＳＶＥＶＥＳＩＬＹＱＨＰＡＩＮＥＡＡＶＶＧＲＰＤＥＦＷＧＥＳＰＣＡＦＶＳＬＫＤＤＮＧＫＶＡＶＰＴＡＤＥＩＭＫＦＣＫＧＫＬＰＧＹＭＶＰＫＳＶＶＦＫＫＤＬＰＫＴＳＴＧＫＩＱＫＹＶＬＲＫＬＡＫＤＬＧＦＡＶＫＳＲＩ（配列番号１３）。
幾つかの実施形態において、タンパク質は、配列番号１３に対して少なくとも８３％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、もしくは少なくとも９９％、またはそれらの間の任意の値および範囲の相同性もしくは同一性を有するアミノ酸配列を含む。各可能性は、本発明の別の実施形態を表す。幾つかの実施形態において、タンパク質は、配列番号１３に対して８３％～１００％、８５％～１００％、９０％～１００％、または９５％～１００％の相同性または同一性を有するアミノ酸配列を含む。各可能性は、本発明の別の実施形態を表す。
幾つかの実施形態において、タンパク質は、以下のアミノ酸配列を含む、またはそれからなる：
ＭＴＥＥＥＫＮＫＡＥＳＭＧＩＫＴＹＡＷＳＤＦＬＨＬＧＳＫＮＰＳＥＬＱＴＰＫＡＴＤＩＣＴＩＭＹＴＳＧＴＳＧＤＰＫＧＶＩＬＴＨＥＮＡＴＴＮＩＲＧＶＤＬＦＭＥＱＦＥＤＫＭＴＶＤＤＶＹＩＳＦＬＰＬＡＨＩＬＤＲＭＩＥＥＹＦＦＲＳＧＡＳＶＧＦＹＨＧＤＩＮＡＬＫＥＤＬＡＥＬＫＰＴＦＬＡＧＶＰＲＶＬＥＫＩＨＥＧＶＬＫＧＬＥＥＶＮＰＲＲＲＫＩＦＳＩＬＹＮＨＫＬＫＹＭＫＡＧＹＫＨＫＹＡＳＰＬＡＤＬＬＡＦＲＫＶＫＮＲＬＧＧＲＩＲＬＭＶＳＧＧＡＰＬＳＴＥＩＥＥＦＭＲＶＴＳＣＡＦＶＡＱＧＹＧＬＴＥＴＣＧＬＡＴＬＧＦＰＤＥＭＣＭＩＧＴＶＧＳＰＦＶＹＴＥＬＲＬＥＥＶＳＤＭＧＹＤＰＬＡＮＰＰＲＧＥＩＣＶＫＧＫＴＰＦＡＧＹＹＫＮＰＥＬＴＮＥＶＭＫＤＧＷＦＨＴＧＤＩＧＥＭＱＰＮＧＶＬＫＩＩＤＲＫＫＨＬＩＫＬＳＱＧＥＹＩＡＬＥＹＬＥＫＶＹＣＩＴＰＩＬＥＤＩＷＶＹＧＤＳＦＫＳＳＬＶＡＶＡＶＰＮＫＥＮＡＥＫＷＡＤＱＫＧＬＫＶＳＹＳＥＬＣＴＬＴＱＦＲＤＹＩＱＳＥＬＫＳＴＡＥＲＮＫＬＲＧＦＥＨＩＫＡＩＩＶＥＰＲＴＦＥＧＤＱＥＬＬＴＡＴＭＫＫＲＲＮＫＬＬＮＲＹＫＥＧＩＤＮＬＹＫＮＬＡＡＮＫＲ（配列番号１４）。
幾つかの実施形態において、タンパク質は、配列番号１４に対して少なくとも８６％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、もしくは少なくとも９９％、またはそれらの間の任意の値および範囲の相同性もしくは同一性を有するアミノ酸配列を含む。各可能性は、本発明の別の実施形態を表す。幾つかの実施形態において、タンパク質は、配列番号１４に対して８６％～１００％、８９％～１００％、９０％～１００％、または９２％～１００％の相同性を有するアミノ酸配列を含む。各可能性は、本発明の別の実施形態を表す。
幾つかの実施形態において、タンパク質は、以下のアミノ酸配列を含む、またはそれからなる：
ＭＶＹＫＳＬＮＳＩＳＩＳＤＩＶＮＬＧＩＳＰＥＴＡＴＱＬＨＱＫＬＴＥＩＩＱＩＹＧＦＤＡＰＱＴＷＴＱＩＳＴＲＩＬＨＰＤＬＰＦＣＦＨＱＭＭＹＹＧＣＹＶＤＦＧＰＤＰＰＡＷＳＰＤＰＫＤＡＫＬＴＮＩＧＳＬＬＥＲＲＧＫＥＦＬＧＰＳＹＫＤＰＩＳＳＹＳＡＬＱＥＦＳＡＬＮＬＥＶＦＷＫＴＩＬＤＥＭＮＩＴＦＳＶＰＰＫＲＩＬＶＤＤＬＳＫＥＳＱＬＬＨＰＧＧＲＷＬＰＧＡＹＶＮＰＡＲＮＣＬＳＬＳＳＫＲＲＬＳＤＩＡＶＩＷＲＤＥＧＮＤＤＭＰＶＮＫＭＴＦＱＱＬＲＳＥＶＷＬＶＡＹＡＬＤＴＬＧＶＥＫＧＳＡＩＡＩＤＭＰＭＤＶＫＳＶＶＩＹＬＡＩＶＬＡＧＹＶＶＶＳＩＡＤＳＦＡＡＧＥＩＳＴＲＬＶＬＳＫＡＫＡＩＦＴＱＤＬＩＩＲＧＤＲＳＨＰＬＹＳＲＶＶＤＡＱＳＰＬＡＩＶＩＰＴＲＧＳＳＦＳＩＫＬＲＤＧＤＩＳＷＨＤＦＬＥＲＡＮＴＹＲＮＶＥＦＶＡＶＥＲＰＶＥＡＦＳＮＩＬＦＳＳＧＴＴＧＥＰＫＡＩＰＷＴＬＡＴＰＦＫＡＧＡＤＡＷＣＨＭＤＶＨＫＧＤＶＶＡＷＰＴＮＬＧＷＭＭＧＰＷＬＩＹＡＳＬＬＮＧＧＳＬＡＬＹＮＧＳＰＬＴＳＧＦＡＫＦＶＱＤＡＫＶＴＬＬＧＶＩＰＳＩＶＲＡＷＲＴＮＮＳＴＡＧＦＤＷＳＴＩＲＣＦＧＳＴＧＥＡＳＮＴＤＥＣＬＷＬＭＧＲＡＨＹＫＰＶＩＥＹＣＧＧＴＥＩＧＧＧＦＩＴＧＳＬＬＱＰＱＣＬＳＡＦＳＴＰＳＬＧＣＫＬＬＩＬＧＥＤＧＩＰＩＰＱＮＡＰＧＩＧＥＬＡＬＮＰＬＭＦＧＡＳＳＴＬＬＮＡＮＨＹＤＶＹＦＫＧＭＰＳＷＮＧＫＶＬＲＲＨＧＤＶＦＥＲＴＳＫＧＹＹＲＡＨＧＲＡＤＤＴＭＮＬＧＧＩＫＶＳＳＶＥＩＥＲＶＣＮＳＩＤＤＲＩＬＥＴＡＡＩＧＶＴＰＳＧＧＧＰＥＲＬＶＩＶＶＡＦＫＤＧＳＧＳＫＰＤＬＩＫＬＫＶＴＬＮＳＡＬＱＫＮＬＮＰＬＦＫＶＳＤＶＶＰＦＰＳＬＰＲＴＡＴＮＫＶＭＲＲＶＬＲＱＱＬＴＱＩＧＱＮＳＫＬ（配列番号１５）。
幾つかの実施形態において、タンパク質は、配列番号１５に対して少なくとも８６％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、もしくは少なくとも９９％、またはそれらの間の任意の値および範囲の相同性もしくは同一性を有するアミノ酸配列を含む。各可能性は、本発明の別の実施形態を表す。幾つかの実施形態において、タンパク質は、配列番号１５に対して８６％～１００％、８９％～１００％、９０％～１００％、または９２％～１００％の相同性を有するアミノ酸配列を含む。各可能性は、本発明の別の実施形態を表す。
幾つかの実施形態において、タンパク質は、以下のアミノ酸配列を含む、またはそれからなる：
ＭＧＤＳＥＧＳＳＩＳＴＰＴＴＥＱＶＧＦＬＳＮＩＭＥＤＫＳＹＳＡＡＶＡＩＭＶＡＩＡＶＰＬＶＬＳＳＶＦＡＡＫＫＫＶＫＱＲＧＶＰＶＱＶＧＧＥＰＧＦＡＭＲＮＳＲＳＮＫＬＶＤＶＰＷＥＧＡＲＴＭＡＡＬＦＥＱＳＣＫＫＨＳＱＬＲＦＬＧＴＲＫＬＩＥＲＳＦＶＳＧＳＤＧＲＫＦＥＫＬＨＬＧＥＹＱＷＥＴＹＧＱＩＦＥＲＶＣＮＦＡＳＧＬＩＱＬＧＨＤＰＤＴＲＩＡＩＦＳＤＴＲＡＥＷＬＩＡＦＥＧＣＦＲＱＮＩＴＶＶＴＩＹＡＳＬＧＤＤＡＬＩＨＳＬＮＥＴＫＶＳＴＬＩＣＤＳＫＬＬＫＫＶＡＡＶＳＳＳＬＫＴＶＥＮＦＩＹＦＥＳＤＮＴＥＡＬＮＥＩＧＤＷＫＩＳＳＦＳＥＶＥＳＬＧＱＫＳＰＶＳＡＲＬＰＩＫＫＤＶＡＶＩＭＹＴＳＧＳＴＧＬＰＫＧＶＭＭＴＨＧＮＶＶＡＴＡＡＡＶＭＴＶＩＰＮＩＧＴＮＤＶＹＬＡＹＬＰＬＡＨＩＦＥＬＡＡＥＴＶＭＶＴＡＧＩＰＩＧＹＧＳＡＬＴＬＴＤＴＳＮＫＩＫＫＧＴＬＧＤＡＳＩＬＫＰＴＬＭＡＡＶＰＡＩＬＤＲＶＲＤＧＶＬＫＫＶＥＥＫＧＧＬＴＴＫＩＦＮＩＡＹＫＲＲＬＬＡＶＤＧＳＷＬＧＡＷＧＬＥＫＬＬＷＤＡＩＶＦＫＫＩＲＳＶＬＧＧＤＩＲＦＭＬＣＧＧＡＰＬＡＡＤＴＱＲＦＩＮＶＣＶＧＡＰＩＧＱＧＹＧＬＴＥＴＣＡＧＡＡＦＳＥＡＤＤＮＳＶＧＲＶＧＰＰＬＰＣＶＹＩＫＬＶＳＷＤＥＧＧＹＬＴＳＤＫＰＭＰＲＧＥＶＶＶＧＧＹＳＶＴＡＧＹＦＮＮＥＥＫＴＮＥＶＹＫＶＤＥＳＧＭＲＷＦＹＴＧＤＩＧＲＦＨＰＤＧＣＬＥＩＩＤＲＫＫＤＩＶＫＬＱＨＧＥＹＩＳＬＧＫＶＥＡＡＬＡＳＳＫＹＶＥＮＶＭＬＨＡＤＰＦＨＴＹＣＶＡＬＶＶＰＡＲＱＶＩＥＱＷＡＱＤＡＧＩＳＹＱＤＦＡＥＬＣＤＫＫＥＴＶＳＥＶＱＱＳＬＴＫＶＡＫＤＡＫＬＤＫＦＥＴＰＡＫＩＫＬＭＰＤＰＷＴＰＥＳＧＬＶＴＡＡＬＫＬＫＲＥＱＬＫＳＫＦＫＤＤＬＤＫＬＹＧ（配列番号１６）。
幾つかの実施形態において、タンパク質は、配列番号１６に対して少なくとも８９％、少なくとも９２％、少なくとも９４％、少なくとも９７％、もしくは少なくとも９９％、またはそれらの間の任意の値および範囲の相同性もしくは同一性を有するアミノ酸配列を含む。各可能性は、本発明の別の実施形態を表す。幾つかの実施形態において、タンパク質は、配列番号１６に対して８９％～１００％、９１％～１００％、９３％～１００％、または９５％～１００％の相同性を有するアミノ酸配列を含む。各可能性は、本発明の別の実施形態を表す。
幾つかの実施形態において、タンパク質は、以下のアミノ酸配列を含む、またはそれからなる：
ＭＳＶＹＴＶＫＶＥＤＳＲＡＡＳＧＥＴＰＳＡＧＰＶＹＲＣＩＹＡＫＤＡＬＭＥＬＰＰＧＹＥＳＰＷＤＦＦＳＥＳＶＫＲＮＰＫＮＰＡＬＧＲＲＱＶＩＤＧＫＡＧＧＹＳＷＬＳＹＱＥＡＹＮＳＡＬＲＩＡＳＡＩＲＳＲＳＶＮＰＧＤＲＣＧＩＹＧＰＮＣＰＥＷＩＩＳＭＥＡＣＮＳＮＧＩＴＹＶＰＬＹＤＴＬＧＡＮＡＶＥＹＩＩＮＨＡＥＩＳＬＶＦＶＱＥＮＫＬＳＡＩＬＳＣＬＰＮＣＳＳＮＬＫＴＩＶＳＦＧＫＦＳＥＳＱＫＮＥＡＭＥＨＧＶＤＣＦＳＷＥＥＦＳＳＭＧＮＬＥＤＥＬＰＡＫＮＫＴＤＩＣＴＩＭＹＴＳＧＴＴＧＥＰＫＧＶＶＬＳＮＲＡＦＭＳＥＶＬＳＭＨＥＬＬＩＥＴＤＫＰＧＴＥＥＤＴＹＦＳＦＬＰＬＡＨＩＦＤＱＩＭＥＴＹＦＩＹＳＧＡＳＩＧＦＷＱＧＤＩＲＹＬＩＥＤＬＬＶＬＱＰＴＩＦＣＧＶＰＲＶＹＤＲＩＹＴＧＩＭＡＫＩＳＴＧＧＡＩＲＫＡＬＦＤＦＡＹＮＹＫＬＲＮＬＥＫＧＩＱＱＤＫＳＡＰＬＬＤＫＬＶＦＤＫＩＫＱＧＦＧＧＲＶＲＬＭＬＳＧＡＡＰＬＰＫＨＶＥＥＦＬＲＶＴＣＣＴＶＬＳＱＧＹＧＬＴＥＳＣＧＧＣＦＴＳＩＡＮＶＹＳＭＩＧＴＶＧＶＰＭＴＴＩＥＡＲＬＥＳＶＰＥＭＧＹＤＡＬＳＳＶＰＣＧＥＩＣＬＲＧＮＴＬＦＳＧＹＨＫＲＤＤＬＴＤＡＶＬＶＤＧＷＦＨＴＧＤＩＧＥＷＱＡＤＧＡＭＫＩＩＤＲＫＫＮＩＦＫＬＳＱＧＥＹＶＡＶＥＳＩＥＳＴＹＳＲＣＰＬＶＴＳＩＷＶＹＧＮＳＦＥＳＦＬＶＡＶＶＶＰＤＲＶＡＶＥＥＦＡＡＫＮＮＥＳＧＤＹＡＳＬＣＫＮＰＮＶＲＫＹＶＬＥＥＬＮＡＥＡＱＣＮＫＬＲＧＦＥＭＬＫＡＶＨＬＤＰＶＰＦＤＦＥＲＤＬＩＴＰＴＦＫＬＫＲＱＱＬＬＫＹＹＫＤＣＶＥＱＬＹＡＥＡＫＴＳＫＫ（配列番号１７）。
幾つかの実施形態において、タンパク質は、配列番号１７に対して少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、もしくは少なくとも９９％、またはそれらの間の任意の値および範囲の相同性もしくは同一性を有するアミノ酸配列を含む。各可能性は、本発明の別の実施形態を表す。幾つかの実施形態において、タンパク質は、配列番号１７に対して９３％～１００％、９５％～１００％、９７％～１００％、または９９％～１００％の相同性を有するアミノ酸配列を含む。各可能性は、本発明の別の実施形態を表す。
幾つかの実施形態において、タンパク質は、以下のアミノ酸配列を含む、またはそれからなる：
ＭＥＴＨＧＰＲＬＬＧＡＡＹＫＤＰＩＴＳＹＫＱＦＱＫＦＳＶＱＨＬＥＶＹＷＳＬＶＬＥＫＬＳＩＱＦＱＥＲＰＫＣＩＶＤＴＳＤＫＳＫＨＧＧＴＷＬＰＧＳＶＬＮＩＡＥＣＣＩＬＳＴＴＥＴＤＥＫＶＡＩＶＷＲＤＥＲＣＤＮＬＤＶＮＫＭＴＦＫＥＬＲＱＱＶＭＬＶＡＮＡＬＫＬＬＦＳＫＧＤＰＩＡＩＤＭＰＭＴＶＴＡＶＩＬＹＬＡＩＶＹＳＧＦＶＶＶＳＩＡＤＳＦＡＡＫＥＩＡＴＲＬＲＶＳＮＡＫＡＩＦＴＱＤＹＩＶＲＧＧＲＲＦＰＬＹＳＲＶＩＥＡＴＱＣＲＡＩＶＶＰＡＩＧＥＮＶＥＶＩＬＲＫＱＤＩＳＷＧＤＦＬＳＧＡＫＱＬＰＳＰＤＹＣＳＰＶＹＱＳＩＤＴＬＴＮＩＬＦＳＳＧＴＴＧＤＰＫＡＩＰＷＴＱＩＳＰＭＲＣＡＡＤＧＷＡＨＭＤＩＱＡＧＤＶＹＣＷＰＴＮＬＧＷＶＭＧＰＩＶＬＹＳＳＦＬＴＧＡＴＬＡＬＹＮＧＳＰＬＧＨＧＦＧＫＦＶＱＤＡＧＶＴＩＬＧＴＶＰＳＩＶＫＳＷＫＳＴＲＣＭＥＧＬＤＷＴＫＩＫＡＦＧＳＴＧＥＡＳＮＶＤＤＤＬＷＬＳＳＫＡＹＹＫＰＶＬＥＣＣＧＧＴＥＬＡＳＳＹＶＱＧＮＬＬＱＰＱＡＦＧＡＬＳＳＡＳＭＧＴＧＦＶＩＦＤＤＨＧＶＰＹＰＤＤＥＰＣＶＧＥＶＧＬＦＰＶＹＭＧＡＳＤＲＬＬＮＡＤＨＥＫＩＹＦＫＧＭＰＳＹＫＧＭＱＬＲＲＨＧＤＩＩＫＲＴＩＧＧＹＬＶＶＱＧＲＡＤＤＴＭＮＬＧＧＩＫＴＳＳＩＥＩＥＲＶＣＥＱＡＤＧＳＩＭＥＴＡＡＶＳＶＡＰＡＴＧＧＰＥＬＬＡＩＦＶＶＬＫＮＧＣＮＴＱＰＱＤＬＫＭＩＦＳＫＡＩＱＫＮＬＮＰＬＦＫＶＳＦＶＫＶＶＰＥＦＰＲＴＡＳＮＫＬＬＲＲＶＬＲＮＱＶＫＥＥＬＱＴＲＳＫＩ（配列番号１８）。
幾つかの実施形態において、タンパク質は、配列番号１８に対して少なくとも８４％、少なくとも８７％、少なくとも９１％、少なくとも９５％、もしくは少なくとも９９％、またはそれらの間の任意の値および範囲の相同性もしくは同一性を有するアミノ酸配列を含む。各可能性は、本発明の別の実施形態を表す。幾つかの実施形態において、タンパク質は、配列番号１８に対して８４％～１００％、８７％～１００％、９０％～１００％、または９５％～１００％の相同性を有するアミノ酸配列を含む。各可能性は、本発明の別の実施形態を表す。
幾つかの実施形態において、タンパク質は、以下のアミノ酸配列を含む、またはそれからなる：
ＭＥＩＴＫＳＩＱＥＬＧＬＱＤＬＬＮＴＧＬＴＰＮＤＡＫＳＬＱＩＥＩＫＨＩＩＮＳＱＴＴＮＳＮＰＶＥＬＷＲＱＩＴＳＡＫＬＬＫＰＳＹＰＨＳＬＨＱＬＩＹＹＡＶＹＣＮＹＤＡＳＩＹＧＰＰＬＹＷＦＰＳＥＩＤＳＫＲＳＮＬＧＮＩＭＥＴＨＧＰＲＬＬＧＡＡＹＫＤＰＩＴＳＹＫＱＦＱＫＦＳＶＱＨＬＥＶＹＷＳＬＶＬＥＫＬＳＩＱＦＱＥＲＰＫＣＩＶＤＴＳＤＫＳＫＨＧＧＴＷＬＰＧＳＶＬＮＩＡＥＣＣＩＬＳＴＳＥＴＤＤＫＶＡＩＶＷＲＤＥＲＣＤＮＬＤＶＮＫＭＴＦＫＥＬＲＱＱＶＭＬＶＡＮＡＬＫＬＬＦＳＫＧＤＰＩＡＩＤＭＰＭＴＶＴＡＶＩＬＹＬＡＩＶＹＳＧＦＶＶＶＳＩＡＤＳＦＡＡＫＥＩＡＴＲＬＲＶＳＮＡＫＡＩＦＴＱＤＹＩＶＲＧＧＲＲＦＰＬＹＳＲＶＩＥＡＴＱＣＲＡＩＶＶＰＡＩＧＥＮＶＥＶＩＬＲＫＱＤＩＳＷＧＤＦＬＳＧＡＫＱＬＰＳＰＤＹＣＳＰＶＹＱＳＩＤＴＬＴＮＩＬＦＳＳＧＴＴＧＤＰＫＡＩＰＷＴＱＩＳＰＭＲＣＡＡＤＧＷＡＨＭＤＩＱＡＧＤＶＹＣＷＰＴＮＬＧＷＶＭＧＰＩＶＬＹＳＳＦＬＴＧＡＴＬＡＬＹＮＧＳＰＬＧＨＧＦＧＫＦＶＱＤＡＧＶＴＩＬＧＴＶＰＳＩＶＫＳＷＫＳＴＲＣＭＥＧＬＤＷＴＫＩＫＡＦＧＳＴＧＥＡＳＮＶＤＤＤＬＷＬＳＳＫＡＹＹＫＰＶＬＥＣＣＧＧＴＥＬＡＳＳＹＶＱＧＮＬＬＱＰＱＡＦＧＡＬＳＳＡＳＭＧＴＧＦＶＩＦＤＤＨＧＶＰＹＰＤＤＥＰＣＶＧＥＶＧＬＦＰＶＹＭＧＡＳＤＲＬＬＮＡＤＨＥＫＩＹＦＫＧＭＰＳＹＫＧＭＱＬＲＲＨＧＤＩＩＫＲＴＩＧＧＹＬＶＶＱＧＲＡＤＤＴＭＮＬＧＧＩＫＴＳＳＩＥＩＥＲＶＣＥＱＡＤＧＳＩＭＥＴＡＡＶＳＶＡＰＡＴＧＧＰＥＬＬＡＩＦＶＶＬＫＮＧＣＮＴＱＰＱＤＬＫＭＩＦＳＫＡＩＱＫＮＬＮＰＬＦＫＶＦＳ（配列番号１９）。
幾つかの実施形態において、タンパク質は、配列番号１９に対して少なくとも８２％、少なくとも８７％、少なくとも９１％、少なくとも９５％、もしくは少なくとも９９％、またはそれらの間の任意の値および範囲の相同性もしくは同一性を有するアミノ酸配列を含む。各可能性は、本発明の別の実施形態を表す。幾つかの実施形態において、タンパク質は、配列番号１９に対して８２％～１００％、８５％～１００％、８９％～１００％、または９０％～１００％の相同性を有するアミノ酸配列を含む。各可能性は、本発明の別の実施形態を表す。
幾つかの実施形態において、タンパク質は、以下のアミノ酸配列を含む、またはそれからなる：
ＭＶＹＫＳＬＮＳＩＳＩＳＤＩＶＮＬＧＩＳＰＥＴＡＴＱＬＨＱＫＬＴＥＩＩＱＩＹＧＦＤＡＰＱＴＷＴＱＩＳＴＲＩＬＨＰＤＬＰＦＣＦＨＱＭＭＹＹＧＣＹＶＤＦＧＰＤＰＰＡＷＳＰＤＰＫＤＡＫＬＴＮＩＧＳＬＬＥＲＲＧＫＥＦＬＧＰＳＹＫＤＰＩＳＳＹＳＡＬＱＥＦＳＡＬＮＬＥＶＦＷＫＴＩＬＤＥＭＮＩＴＦＳＶＰＰＫＲＩＬＶＤＤＬＳＫＥＳＱＬＬＨＰＧＧＲＷＬＰＧＡＹＶＮＰＡＲＮＣＬＳＬＳＳＫＲＲＬＳＤＩＡＶＩＷＲＤＥＧＮＤＤＭＰＶＮＫＭＴＦＱＱＬＲＳＥＶＷＬＶＡＹＡＬＤＴＬＧＶＥＫＧＳＡＩＡＩＤＭＰＭＤＶＫＳＶＶＩＹＬＡＩＶＬＡＧＹＶＶＶＳＩＡＤＳＦＡＡＧＥＩＳＴＲＬＶＬＳＫＡＫＡＩＦＴＱＤＬＩＩＲＧＤＲＳＨＰＬＹＳＲＶＶＤＡＱＳＰＬＡＩＶＩＰＴＲＧＳＳＦＳＩＫＬＲＤＧＤＩＳＷＨＤＦＬＥＲＡＮＴＹＲＮＶＥＦＶＡＶＥＲＰＶＥＡＦＳＮＩＬＦＳＳＧＴＴＧＥＰＫＡＩＰＷＴＬＡＴＰＦＫＡＧＡＤＡＷＣＨＭＤＶＨＫＧＤＶＶＡＷＰＴＮＬＧＷＭＭＧＰＷＬＩＹＡＳＬＬＮＧＧＳＬＡＬＹＮＧＳＰＬＴＳＧＦＡＫＦＶＱＤＡＫＶＴＬＬＧＶＩＰＳＩＶＲＡＷＲＴＮＮＳＴＡＧＦＤＷＳＴＩＲＣＦＧＳＴＧＥＡＳＮＴＤＥＣＬＷＬＭＧＲＡＨＹＫＰＶＩＥＹＣＧＧＴＥＩＧＧＧＦＩＴＧＳＬＬＱＰＱＣＬＳＡＦＳＴＰＳＬＧＣＫＬＬＩＬＧＥＤＧＩＰＩＰＱＮＡＰＧＩＧＥＬＡＬＮＰＬＭＦＧＡＳＳＴＬＬＮＡＮＨＹＤＶＹＦＫＧＭＰＳＷＮＧＫＶＬＲＲＨＧＤＶＦＥＲＴＳＫＧＹＹＲＡＨＧＲＡＤＤＴＭＮＬＧＧＩＫＶＳＳＶＥＩＥＲＶＣＮＳＩＤＤＲＩＬＥＴＡＡＩＧＶＴＰＳＧＧＧＰＥＲＬＶＩＶＶＡＦＫＤＧＳＧＳＫＰＤＬＩＫＬＫＶＴＬＮＳＡＬＱＫＮＬＮＰＬＦＫＶＳＤＶＶＰＦＰＳＬＰＲＴＡＴＮＫＶＭＲＲＶＬＲＱＱＬＴＱＩＧＱＮＳＫＬ（配列番号２０）。
幾つかの実施形態において、タンパク質は、配列番号２０に対して少なくとも８６％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、もしくは少なくとも９９％、またはそれらの間の任意の値および範囲の相同性もしくは同一性を有するアミノ酸配列を含む。各可能性は、本発明の別の実施形態を表す。幾つかの実施形態において、タンパク質は、配列番号２０に対して８６％～１００％、８９％～１００％、９１％～１００％、または９３％～１００％の相同性を有するアミノ酸配列を含む。各可能性は、本発明の別の実施形態を表す。
幾つかの実施形態において、タンパク質は、以下のアミノ酸配列を含む、またはそれからなる：
ＭＴＦＱＱＬＲＳＥＶＷＬＶＡＹＡＬＤＴＬＧＶＥＫＧＳＡＩＡＩＤＭＰＭＤＶＫＳＶＶＩＹＬＡＩＶＬＡＧＹＶＶＶＳＩＡＤＳＦＡＡＧＥＩＳＴＲＬＶＬＳＫＡＫＡＩＦＴＱＤＬＩＩＲＧＤＲＳＨＰＬＹＳＲＶＶＤＡＱＳＰＬＡＩＶＩＰＴＲＧＳＳＦＳＩＫＬＲＤＧＤＩＳＷＨＤＦＬＥＲＡＮＴＹＲＮＶＥＦＶＡＶＥＲＰＶＥＡＦＳＮＩＬＦＳＳＧＴＴＧＥＰＫＡＩＰＷＴＬＡＴＰＦＫＡＧＡＤＡＷＣＨＭＤＶＨＫＧＤＶＶＡＷＰＴＮＬＧＷＭＭＧＰＷＬＩＹＡＳＬＬＮＧＧＳＬＡＬＹＮＧＳＰＬＴＳＧＦＡＫＦＶＱＤＡＫＶＴＬＬＧＶＩＰＳＩＶＲＡＷＲＴＮＮＳＴＡＧＦＤＷＳＴＩＲＣＦＧＳＴＧＥＡＳＮＴＤＥＣＬＷＬＭＧＲＡＨＹＫＰＶＩＥＹＣＧＧＴＥＩＧＧＧＦＩＴＧＳＬＬＱＰＱＣＬＳＡＦＳＴＰＳＬＧＣＫＬＬＩＬＧＥＤＧＩＰＩＰＱＮＡＰＧＩＧＥＬＡＬＮＰＬＭＦＧＡＳＳＴＬＬＮＡＮＨＹＤＶＹＦＫＧＭＰＳＷＮＧＫＶＬＲＲＨＧＤＶＦＥＲＴＳＫＧＹＹＲＡＨＧＲＡＤＤＴＭＮＬＧＧＩＫＶＳＳＶＥＩＥＲＶＣＮＳＩＤＤＲＩＬＥＴＡＡＩＧＶＴＰＳＧＧＧＰＥＲＬＶＩＶＶＡＦＫＤＧＳＧＳＫＰＤＬＩＫＬＫＶＴＬＮＳＡＬＱＫＮＬＮＰＬＦＫＶＳＤＶＶＰＦＰＳＬＰＲＴＡＴＮＫＶＭＲＲＶＬＲＱＱＬＴＱＩＧＱＮＳＫＬ（配列番号２１）。
幾つかの実施形態において、タンパク質は、配列番号２１に対して少なくとも８９％、少なくとも９２％、少なくとも９４％、少なくとも９７％、もしくは少なくとも９９％、またはそれらの間の任意の値および範囲の相同性もしくは同一性を有するアミノ酸配列を含む。各可能性は、本発明の別の実施形態を表す。幾つかの実施形態において、タンパク質は、配列番号２１に対して８９％～１００％、９１％～１００％、９３％～１００％、または９５％～１００％の相同性を有するアミノ酸配列を含む。各可能性は、本発明の別の実施形態を表す。
幾つかの実施形態において、タンパク質は、以下のアミノ酸配列を含む、またはそれからなる：
ＭＮＩＴＦＳＶＰＰＫＲＩＬＶＤＤＬＳＫＥＳＱＬＬＨＰＧＧＲＷＬＰＧＡＹＶＮＰＡＲＮＣＬＳＬＳＳＫＲＲＬＳＤＩＡＶＩＷＲＤＥＧＮＤＤＭＰＶＮＫＭＴＦＱＱＬＲＳＥＶＷＬＶＡＹＡＬＤＴＬＧＶＥＫＧＳＡＩＡＩＤＭＰＭＤＶＫＳＶＶＩＹＬＡＩＶＬＡＧＹＶＶＶＳＩＡＤＳＦＡＡＧＥＩＳＴＲＬＶＬＳＫＡＫＡＩＦＴＱＤＬＩＩＲＧＤＲＳＨＰＬＹＳＲＶＶＤＡＱＳＰＬＡＩＶＩＰＴＲＧＳＳＦＳＩＫＬＲＤＧＤＩＳＷＨＤＦＬＥＲＡＮＴＹＲＮＶＥＦＶＡＶＥＲＰＶＥＡＦＳＮＩＬＦＳＳＧＴＴＧＥＰＫＡＩＰＷＴＬＡＴＰＦＫＡＧＡＤＡＷＣＨＭＤＶＨＫＧＤＶＶＡＷＰＴＮＬＧＷＭＭＧＰＷＬＩＹＡＳＬＬＮＧＧＳＬＡＬＹＮＧＳＰＬＴＳＧＦＡＫＦＶＱＤＡＫＶＴＬＬＧＶＩＰＳＩＶＲＡＷＲＴＮＮＳＴＡＧＦＤＷＳＴＩＲＣＦＧＳＴＧＥＡＳＮＴＤＥＣＬＷＬＭＧＲＡＨＹＫＰＶＩＥＹＣＧＧＴＥＩＧＧＧＦＩＴＧＳＬＬＱＰＱＣＬＳＡＦＳＴＰＳＬＧＣＫＬＬＩＬＧＥＤＧＩＰＩＰＱＮＡＰＧＩＧＥＬＡＬＮＰＬＭＦＧＡＳＳＴＬＬＮＡＮＨＹＤＶＹＦＫＧＭＰＳＷＮＧＫＶＬＲＲＨＧＤＶＦＥＲＴＳＫＧＹＹＲＡＨＧＲＡＤＤＴＭＮＬＧＧＩＫＶＳＳＶＥＩＥＲＶＣＮＳＩＤＤＲＩＬＥＴＡＡＩＧＶＴＰＳＧＧＧＰＥＲＬＶＩＶＶＡＦＫＤＧＳＧＳＫＰＤＬＩＫＬＫＶＴＬＮＳＡＬＱＫＮＬＮＰＬＦＫＶＳＤＶＶＰＦＰＳＬＰＲＴＡＴＮＫＶＭＲＲＶＬＲＱＱＬＴＱＩＧＱＮＳＫＬ（配列番号２２）。
幾つかの実施形態において、タンパク質は、配列番号２２に対して少なくとも８８％、少なくとも９２％、少なくとも９４％、少なくとも９７％、もしくは少なくとも９９％、またはそれらの間の任意の値および範囲の相同性もしくは同一性を有するアミノ酸配列を含む。各可能性は、本発明の別の実施形態を表す。幾つかの実施形態において、タンパク質は、配列番号２２に対して８８％～１００％、９０％～１００％、９２％～１００％、または９５％～１００％の相同性を有するアミノ酸配列を含む。各可能性は、本発明の別の実施形態を表す。
本明細書で互換的に用いられる用語「相同性」または「同一性」は、２つのアミノ酸配列間、または２つの核酸配列間の配列同一性を指し、同一性は、より厳密な比較である。語句「パーセント同一性または相同性」および「％同一性または相同性」は、２つ以上のアミノ酸配列または核酸配列の比較において見出される配列同一性のパーセンテージを指す。２つ以上の配列は、０～１００％のいずれか、またはそれらの間の任意の値の％同一であり得る。同一性は、参照配列との比較を目的として整列させることができる各配列のある位置を比較することにより決定され得る。比較された配列の位置が、同じヌクレオチド塩基またはアミノ酸により占められる場合、その分子は、その位置で同一である。アミノ酸配列の同一性の度合いは、アミノ酸配列により共有される位置での同一アミノ酸の数の関数である。核酸配列間の同一性の度合いは、核酸配列により共有される位置での同一または一致するヌクレオチドの数の関数である。アミノ酸配列の相同性の度合いは、ポリペプチド配列により共有される位置でのアミノ酸の数の関数である。
以下は、２つの配列間の相同性または配列同一性を計算するための非限定的例である（それらの用語は、本明細書で互換的に用いられる）。配列を、最適比較の目的で整列させる（例えば、ギャップを、最適アライメントのための第一および第二のアミノ酸または核酸配列の一方または両方に導入してもよく、非相同配列を、比較目的では無視することができる）。最適アライメントは、ギャップペナルティー１２、ギャップ伸長ペナルティ４、およびフレームシフトギャップペナルティ５でのＢｌｏｓｓｕｍ ６２スコアリングマトリクスを有するＧＣＧソフトウエアパッケージ内のＧＡＰプログラムを用いて最良スコアとして決定される。対応するアミノ酸位置またはヌクレオチド位置のアミノ酸残基またはヌクレオチドを、その後、比較する。第一の配列における位置が、第二の配列の対応する位置と同じアミノ酸残基またはヌクレオチドにより占められる場合、分子は、その位置で同一である。２つの配列間のパーセント同一性は、配列により共有される同一位置の数の関数である。
幾つかの実施形態において、本明細書に記載された％相同性または同一性は、ベーシックローカルアライメントサーチツール（ＢＬＡＳＴ）を用いて計算または決定される。幾つかの実施形態において、本明細書に記載された％相同性または同一性は、Ｂｌｏｓｓｕｍ６２スコア行列を用いて計算または決定される。
幾つかの実施形態において、タンパク質は、アシル活性化酵素活性を含む、または特徴とする。
幾つかの実施形態において、アシルは、Ｃ１～Ｃ８アルキル鎖、アルファ不飽和フェニルアルキルカルボン酸、アルファ飽和フェニルアルキルカルボン酸から選択される。
幾つかの実施形態において、アシルは、Ｃ１アルキル鎖である。幾つかの実施形態において、アシルは、Ｃ２アルキル鎖である。幾つかの実施形態において、アシルは、Ｃ３アルキル鎖である。幾つかの実施形態において、アシルは、Ｃ４アルキル鎖である。幾つかの実施形態において、アシルは、Ｃ５アルキル鎖である。幾つかの実施形態において、アシルは、Ｃ６アルキル鎖である。幾つかの実施形態において、アシルは、Ｃ７アルキル鎖である。幾つかの実施形態において、アシルは、Ｃ８アルキル鎖である。
幾つかの実施形態において、Ｃ１～Ｃ８アルキル鎖は、ヘキサン酸である。幾つかの実施形態において、アシルは、ヘキサン酸である。
幾つかの実施形態において、アルファ不飽和フェニルアルキルカルボン酸は、桂皮酸またはその誘導体を含む。
幾つかの実施形態において、桂皮酸誘導体は、桂皮酸のヒドロキシル化誘導体を含む。
幾つかの実施形態において、桂皮酸のヒドロキシル化誘導体は、クマル酸を含む、またはクマル酸である。
幾つかの実施形態によれば、（ａ）本明細書に開示されたポリヌクレオチド；（ｂ）本明細書に開示された人工核酸分子；（ｃ）本明細書に開示されたプラスミドもしくはアグロバクテリウム；（ｄ）本明細書に開示されたタンパク質；またはそれらの任意の組合わせ、を含むトランスジェニック細胞が提供される。
本明細書で用いられる用語「トランスジェニック細胞」は、ゲノムまたは遺伝子レベルでヒトの操作を受けた任意の細胞を指す。幾つかの実施形態において、トランスジェニック細胞は、本明細書に開示された単離ＤＮＡ分子などの外因性ポリヌクレオチドが細胞内に導入されている。幾つかの実施形態において、トランスジェニック細胞は、細胞内に導入された人工ベクターを有する細胞を含む。幾つかの実施形態において、トランスジェニック細胞は、ゲノム変異または改変を受けた細胞である。幾つかの実施形態において、トランスジェニック細胞は、ＣＲＩＳＰＲゲノム編集を受けた細胞である。幾つかの実施形態において、トランスジェニック細胞は、そのゲノムの少なくとも１つの塩基対の標的化変異を受けた細胞である。幾つかの実施形態において、外因性ポリヌクレオチド（例えば、本明細書に開示された単離ＤＮＡ分子）またはベクターは、細胞内に安定して組み込まれる。幾つかの実施形態において、トランスジェニック細胞は、本発明のポリヌクレオチドを発現する。幾つかの実施形態において、トランスジェニック細胞は、本発明のベクターを発現する。幾つかの実施形態において、トランスジェニック細胞は、本発明のタンパク質を発現する。幾つかの実施形態において、トランスジェニック細胞は、本発明のポリヌクレオチドを含むように形質転換された、または遺伝子改変された、本発明のポリヌクレオチドを欠く細胞である。幾つかの実施形態において、ＣＲＩＳＰＲ技術を使用して、本明細書に記載されたとおり、細胞のゲノムを改変する。
幾つかの実施形態において、細胞は、単細胞生物、多細胞生物の細胞、および培養物中の細胞である。
幾つかの実施形態において、単細胞生物は、真菌または細菌を含む。
幾つかの実施形態において、真菌は、酵母細胞である。
幾つかの実施形態において、細胞は、昆虫細胞である。幾つかの実施形態において、細胞は、昆虫細胞株を含む。
形質転換および／または異種発現に適した昆虫細胞株の型は、一般的であり、当業者に自明であろう。そのような昆虫細胞株の非限定的例としては、Ｓｆ－９細胞、ＳＲ＋シュナイダー細胞、Ｓ２細胞および他のものが挙げられるが、これらに限定されない。
幾つかの実施形態によれば、本明細書に開示されたトランスジェニック細胞またはその任意の画分に由来する抽出物が提供される。
幾つかの実施形態において、抽出物は、本発明のポリヌクレオチド、本明細書に開示された単離ＤＮＡ分子、本明細書に開示されたタンパク質、またはそれらの任意の組合わせを含む。
幾つかの実施形態によれば、本明細書に開示されたトランスジェニック細胞に由来するホモジネート、溶解物、抽出物、それらの任意の組合わせ、またはそれらの任意の画分が提供される。
細胞またはそれの培養物を抽出するため、溶解するため、均質化するため、分画するため、またはそれらの任意の組合わせの方法および／または手段は、一般的であり、細胞生物学および生化学の技術分野の当業者に自明であろう。非限定的例としては、圧力分解（例えば、フレンチプレスを用いるなど）、酵素分解、可溶性－不溶性相分離（上清およびペレットを得るためなど）、洗浄剤に基づく分解、溶媒（例えば、極性または非極性溶媒）、液体クロマトグラフィー質量分析、または他のものが挙げられるが、これらに限定されない。
幾つかの実施形態によれば、トランスジェニック植物、トランスジェニック植物組織または植物部分が提供される。幾つかの実施形態において、本発明の少なくとも１つのトランスジェニック植物細胞を含むトランスジェニック植物、またはそれらの任意の一部、種子、組織もしくは器官が提供される。幾つかの実施形態において、トランスジェニック植物、トランスジェニック植物組織または植物部分は、（ａ）本明細書に開示されたポリヌクレオチド；（ｂ）本明細書に開示された人工物；（ｃ）本明細書に開示されたプラスミドもしくはアグロバクテリウム；（ｄ）本発明のタンパク質；（ｅ）本明細書に開示されたトランスジェニック細胞；またはそれらの任意の組合わせを含む。
幾つかの実施形態において、トランスジェニック植物、トランスジェニック植物組織、または植物部分は、本発明のトランスジェニック植物細胞からなる。幾つかの実施形態において、トランスジェニック植物、トランスジェニック植物組織、または植物部分は、少なくとも２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、もしくは９９％、またはそれらの間の任意の値および範囲の本発明のトランスジェニック細胞を含む。各可能性は、本発明の別の実施形態を表す。幾つかの実施形態において、トランスジェニック植物、トランスジェニック植物組織、または植物部分は、２０％～５０％、２０％～６０％、２０％～７０％、２０％～８０％、２０％～９０％、または２０％～１００％の本発明のトランスジェニック細胞を含む。各可能性は、本発明の別の実施形態を表す。
幾つかの実施形態において、トランスジェニック植物、トランスジェニック植物組織、または植物部分は、カンナビス・サティバ植物である、またはカンナビス・サティバ植物に由来する。幾つかの実施形態において、トランスジェニック植物は、Ｃ．サティバ植物である。
幾つかの実施形態において、トランスジェニック植物、トランスジェニック植物組織、または植物部分は、ヘンプである、またはヘンプに由来する。幾つかの実施形態において、Ｃ．サティバは、ヘンプを含む、またはヘンプである。
幾つかの実施形態によれば、本明細書に開示された（ａ）本発明のポリヌクレオチド（例えば、単離ＤＮＡ分子）；（ｂ）人工ベクター；（ｃ）プラスミドまたはアグロバクテリウム；（ｄ）本発明のタンパク質；（ｅ）トランスジェニック細胞；（ｆ）抽出物；（ｇ）トランスジェニック植物組織または植物部分；および（ｈ）（ａ）～（ｇ）の任意の組合わせのうちのいずれか１つと、許容できる担体と、を含む組成物が提供される。
本明細書で用いられる用語「担体」、「賦形剤、または「アジュバント」は、活性剤ではない組成物の任意の成分、例えば医薬品または栄養補助食品を指す。本明細書で用いられる用語「薬学的に許容できる担体」は、非毒性で不活性な固体、半固体、液体の充填剤、希釈剤、カプセル化材料、任意の型の製剤補助剤、または単に生理食塩水などの滅菌水性媒体を指す。薬学的に許容できる担体として役立ち得る材料の幾つかの例は、ラクトース、グルコースおよびスクロースなどの糖；コーンスターチおよびジャガイモデンプンなどのデンプン；カルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロースおよび酢酸セルロースなどのセルロースおよびその誘導体；粉末トラガカント；麦芽；ゼラチン；タルク；ココアバターおよび坐剤ワックスなどの賦形剤；ピーナッツ油、綿実油、紅花油、ゴマ油、オリーブ油、コーン油および大豆油などの油；プロピレングリコールなどのグリコール；グリセリン、ソルビトール、マンニトールおよびポリエチレングリコールなどのポリオール；オレイン酸エチルおよびラウリン酸エチルなどのエステル；寒天；水酸化マグネシウムおよび水酸化アルミニウムなどの緩衝剤；アルギン酸；パイロジェンフリー水；等張生理食塩水、リンゲル液；エチルアルコールおよびリン酸緩衝溶液、ならびに医薬製剤中で用いられる他の非毒性適合性物質である。本明細書で担体として役立ち得る物質の幾つかの非限定的例としては、糖、デンプン、セルロースおよびその誘導体、粉末トラガカント、麦芽、ゼラチン、タルク、ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、硫酸カルシウム、植物油、ポリオール、アルギン酸、パイロジェンフリー水、等張生理食塩水、リン酸緩衝溶液、ココアバター（坐剤基剤）、乳化剤（例えば、カルボマー、ヒドロキシプロピルセルロース、ラウリル硫酸ナトリウム）、および他の医薬製剤中で用いられる他の非毒性医薬適合性物質が挙げられる。ラウリル硫酸ナトリウムなどの湿潤剤および滑沢剤に加え、着色剤、香味剤、賦形剤、安定化剤、抗酸化剤、および防腐剤もまた、存在してもよい。任意の非毒性で不活性かつ有効な担体が、本明細書で企図される組成物を製剤化するために用いられてもよい。この点において好適な薬学的に許容できる担体、賦形剤、および希釈剤、例えば全ての内容が全体として参照により本明細書に組み入れられる、Ｔｈｅ Ｍｅｒｃｋ Ｉｎｄｅｘ， Ｔｈｉｒｔｅｅｎｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ， Ｂｕｄａｖａｒｉ ｅｔ ａｌ．， Ｅｄｓ．， Ｍｅｒｃｋ ＆ Ｃｏ．， Ｉｎｃ．， Ｒａｈｗａｙ， Ｎ．Ｊ． （２００１）； ｔｈｅ ＣＴＦＡ （Ｃｏｓｍｅｔｉｃ， Ｔｏｉｌｅｔｒｙ， ａｎｄ Ｆｒａｇｒａｎｃｅ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ） Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｏｓｍｅｔｉｃ Ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ａｎｄ Ｈａｎｄｂｏｏｋ， Ｔｅｎｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ （２００４）；およびｔｈｅ “Ｉｎａｃｔｉｖｅ Ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔ Ｇｕｉｄｅ，” Ｕ．Ｓ． Ｆｏｏｄ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ （ＦＤＡ） Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｄｒｕｇ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ （ＣＤＥＲ） Ｏｆｆｉｃｅ ｏｆ Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔに記載されたものが、当業者に周知である。本発明の組成物中で有用である薬学的に許容できる賦形剤、担体、および希釈剤の例としては、蒸留水、生理食塩水、リンゲル液、デキストロース溶液、ハンクス液、およびＤＭＳＯが挙げられる。これらの追加の不活性成分に加え、有効な製剤および投与手順は、当該技術分野で周知であり、それぞれが全体として参照により本明細書に組み入れられる、Ｇｏｏｄｍａｎ ａｎｄ Ｇｉｌｌｍａｎ’ｓ： Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｅｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ， ８ｔｈ Ｅｄ．， Ｇｉｌｍａｎ ｅｔ ａｌ． Ｅｄｓ． Ｐｅｒｇａｍｏｎ Ｐｒｅｓｓ （１９９０）； Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ， １８ｔｈ Ｅｄ．， Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．， Ｅａｓｔｏｎ， Ｐａ． （１９９０）；およびＲｅｍｉｎｇｔｏｎ： Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ， ２１ｓｔ Ｅｄ．， Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ， Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ， Ｐａ．， （２００５）などの標準の教書に記載されている。本明細書に記載された組成物はまた、リポソーム、ＩＳＣＯＭＳ、徐放性粒子、および血清中のペプチドまたはポリペプチドの半減期を増加させる他のビヒクルなどの人工的に作製された構造の中に含有されてもよい。リポソームは、エマルジョン、フォーム、ミセル、不溶性単層、液晶、リン脂質分散体、ラメラ層および同様のものを含む。本明細書に記載されたペプチドと共に使用するためのリポソームは、一般に中性および負電荷リン脂質、ならびにコレステロールなどのステロールを含む、標準の小胞形成脂質から形成される。脂質の選択は一般に、リポソームサイズおよび血中での安定性などを考慮して決定される。例えば、Ｃｏｌｉｇａｎ， Ｊ． Ｅ． ｅｔ ａｌ， Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ， １９９９， Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ， Ｉｎｃ．， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，により論評されたとおり、種々の方法がリポソームを調製するために利用可能であり、米国特許第４，２３５，８７１号、同第４，５０１，７２８号、同第４，８３７，０２８号および同第５，０１９，３６９号も参照されたい。
担体は、総量で、本明細書に提示された医薬組成物の約０．１重量％～約９９．９９９９９重量％を構成し得る。
合成の方法
幾つかの実施形態によれば、アシルコエンザイムＡ（ＣｏＡ）を合成する方法が提供される。
幾つかの実施形態によれば、方法は、（ａ）配列番号１～１１のいずれか１つに対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８９％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、もしくは少なくとも９９％の相同性もしくは同一性を有する核酸配列、またはそれらの任意の組合わせを含む人工ベクターを含む細胞を提供するステップと；（ｂ）ステップ（ａ）からの細胞を培養して、人工ベクターによりコード化されたタンパク質が発現され、それによりアシルＣｏＡを合成するステップと、を含む。各可能性は、本発明の別の実施形態を表す。
幾つかの実施形態によれば、方法は、配列番号１２～２２のいずれか１つに対して少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９３％、もしくは少なくとも９５％の相同性もしくは同一性を有するアミノ酸配列、またはそれらの任意の組合わせを含むタンパク質の存在下でＣｏＡをアシル基と接触させ、それによりアシルＣｏＡを合成することを含む。各可能性は、本発明の別の実施形態を表す。
幾つかの実施形態によれば、トランスジェニック細胞またはトランスフェクト細胞から抽出物を得る方法が提供される。
幾つかの実施形態において、方法は、トランスジェニック細胞またはトランスフェクト細胞を培地中で培養すること、およびトランスジェニック細胞またはトランスフェクト細胞を抽出すること、を含む。
幾つかの実施形態において、方法は、（ａ）トランスジェニック細胞またはトランスフェクト細胞を培地中で培養するステップと；（ｂ）トランスジェニック細胞またはトランスフェクト細胞を抽出し、それによりトランスジェニック細胞またはトランスフェクト細胞から抽出物を得るステップと、を含む。
幾つかの実施形態において、トランスジェニック細胞またはトランスフェクト細胞は、配列番号１～１１のいずれか１つに対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８９％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、もしくは少なくとも９９％、またはそれらの間の任意の値および範囲の相同性もしくは同一性を有する核酸配列、またはそれらの任意の組合わせを含む人工ベクターを含む。各可能性は、本発明の別の実施形態を表す。
幾つかの実施形態において、トランスジェニック細胞またはトランスフェクト細胞は、本明細書に開示されたとおり、本発明のポリヌクレオチドまたはその複数を含む。
幾つかの実施形態において、トランスジェニック細胞またはトランスフェクト細胞は、本明細書に開示されたとおりの人工核酸分子またはベクターを含む。
幾つかの実施形態において、細胞は、本明細書に開示されたポリヌクレオチドを有するトランスジェニック細胞、または該ポリヌクレオチドをトランスフェクトした細胞である。
幾つかの実施形態において、培養は、細胞に有効量のアシル基を補充することを含む。幾つかの実施形態において、補充することは、細胞が培養される生育または培養培地を介してである。
幾つかの実施形態において、アシル基は、タンパク質の存在下でアシルＣｏＡを得るためにＣｏＡにコンジュゲートされる。幾つかの実施形態において、コンジュゲートされることは、ライゲートされることである。幾つかの実施形態において、タンパク質は、アシル基とＣｏＡの間の共有結合の形成を触媒し、それによりアシルＣｏＡの形成を生成または触媒する。
幾つかの実施形態において、アシルＣｏＡは、アセチルルＣｏＡ、ブチリルＣｏＡ、ヘキサノイルＣｏＡ、オクタノイルＣｏＡ、シンナモイルＣｏＡ、クマロイルＣｏＡ、またはそれらの任意の組合わせから選択される。
幾つかの実施形態において、アシルＣｏＡは、ヘキサノイルＣｏＡである、またはそれを含む。
幾つかの実施形態において、方法は、細胞に、本明細書に開示された人工核酸分子またはベクターを導入またはトランスフェクトすることを含む、ステップ（ａ）に先行するステップをさらに含む。
細胞に人工核酸分子またはベクターを導入またはトランスフェクトする方法は、一般的であり、当業者に自明であろう。
幾つかの実施形態において、導入することまたはトランスフェクトすることは、本明細書に開示されたポリヌクレオチドを含む人工核酸分子もしくはベクターを細胞内に導入すること；または本明細書に開示されたポリヌクレオチドを含むように細胞のゲノムを改変すること、を含む。幾つかの実施形態において、導入することは、トランスフェクションを含む。幾つかの実施形態において、導入することは、形質転換を含む。幾つかの実施形態において、導入することは、リポフェクションを含む。幾つかの実施形態において、導入することは、ヌクレオフェクションを含む。幾つかの実施形態において、導入することは、ウイルス感染を含む。
本明細書で用いられる用語「トランスフェクトすること」および「導入すること」は、互換的である。
幾つかの実施形態において、接触させることは、無細胞系においてである。
本明細書に開示されたとおりの本発明のポリヌクレオチドまたはその複数、および本発明のタンパク質またはその複数、のうちのいずれか１つを利用してアシルＣｏＡを合成するための好適な無細胞系の型は、当業者に自明であろう。
幾つかの実施形態において、方法は、培地から培養トランスジェニック細胞または培養トランスフェクト細胞を分離することを含む、ステップ（ｂ）に先行するステップをさらに含む。
細胞を培地から分離する方法は、一般的であり、当業者に自明であるように、遠心分離、超遠心分離、または他の方法を含み得るが、それらに限定されない。
幾つかの実施形態によれば、本明細書に開示された方法に従って得られたトランスジェニック細胞またはトランスフェクト細胞の抽出物が提供される。
幾つかの実施形態によれば、本明細書に開示された方法に従って得られた培養トランスジェニック細胞または培養トランスフェクト細胞から分離された培地またはその一部が提供される。
幾つかの実施形態によれば、本明細書に記載されたとおり、（ａ）本明細書に開示された抽出物；（ｂ）本明細書に開示された培地もしくはその一部；または（ｃ）（ａ）および（ｂ）の任意の組合せと、許容できる担体と、を含む組成物が提供される。
幾つかの実施形態において、一部は、画分またはその複数を含む。
値の範囲が、提供されている場合、文脈が他に明確に指示しない限り下限の単位の１０倍までの各介入値、範囲内の上限と下限との間、および述べられた範囲内の任意の他の述べられた値または介入値が本発明に包含されることが、理解される。これらのより小さな範囲の上限および加減は、独立してより小さな範囲内に含まれてもよく、同じく本発明に包含され、述べられた範囲内の任意の具体的に除外された限定の対象となる。述べられた範囲が、該限定の一方または両方を含む場合、それらの含まれる限定のどちらかまたは両方を除外した範囲もまた、本発明に包含される。
本明細書で用いられる、値と組み合わされた場合の用語「約」は、参照値の±１０％を指す。例えば約１，０００ナノメートル（ｎｍ）の長さは、１，０００ｎｍ±１００ｎｍの長さを指す。
本明細書および添付の特許請求の範囲で用いられるとおり、単数形「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」、および「その（ｔｈｅ）」は、文脈が他に明確に指示しない限り、複数の言及を含む。したがって、例えば「ポリヌクレオチド」という言及は、そのようなポリヌクレオチドの複数を含み、「ポリペプチド」という言及は、１つまたは複数のポリペプチドおよび当業者に公知のその均等物の言及を含む、などとなる。さらに特許請求の範囲は、いかなる任意選択による要素も除外するように起草され得ることが留意される。そのためこの言明は、特許請求の範囲の要素の列挙または「負の」限定の使用と共に「唯一の」、「だけの」などのような排他的用語法の使用のための前提として役立つと意図される。
「Ａ、Ｂ、およびＣなどのうちの少なくとも１つ」と類似の慣例が用いられるそれらの例において、一般にそのような構文は、当業者が慣例を理解するという意味で意図される（例えば、「Ａ、Ｂ、およびＣの少なくとも１つを有する系」は、Ａのみ、Ｂのみ、Ｃのみ、ＡおよびＢと共に、ＡおよびＣを共に、ＢおよびＣを共に、ならびに／またはＡ、Ｂ、およびＣと共に有する系を含むが、これらに限定されない）。さらに、特許明細書、特許請求の範囲、または図面のいずれかにかかわらず、２つ以上の代替用語を示す事実上いずれの離接語および／または語句も、用語の１つ、用語のどちらか、または両方の用語を含む可能性を企図することが理解されなければならないことは、当業者に理解されよう。例えば語句「ＡまたはＢ」は、「Ａ」または「Ｂ」または「ＡおよびＢ」の可能性を含むものと理解されよう。
明瞭にするために、別の実施形態の文脈に記載された本発明の特定の特色がまた、１つの実施形態との組合わせで提供され得ることは、認識されよう。反対に、簡潔にするために、１つの実施形態の文脈に記載された本発明の様々な特色はまた、個別に、または任意の適切な部分的組合わせで提供され得る。本発明に関係する実施形態の全ての組合わせが、あらゆる全ての組合わせが個別かつ明白に開示されるかの如く、本発明により具体的に包含され、本明細書に開示される。加えて、様々な実施形態およびその要素の全ての部分的組合わせもまた、あらゆる全てのそのような部分的組み合わせが個別かつ明白に開示されるかの如く、本発明により具体的に包含され、本明細書に開示される。
本発明の追加の目的、利点、および新規特色は、以下の実施形態の検討により当業者に明白となるが、実施形態は限定ではないと意図される。加えて、本明細書の先に叙述され、以下の特許請求の範囲の節に請求された、本発明の様々な実施形態および態様のそれぞれは、以下の実施例において実験的裏づけを見出す。
本明細書の先に叙述され、以下の特許請求の範囲の節に請求された、本発明の様々な実施形態および態様は、以下の実施例において実験的裏づけを見出す。
実施例
一般に本明細書で用いられる命名法、および本発明で用いられる検査室手順は、分子的、生化学的、微生物学的、および組換えＤＮＡの技術を含む。そのような技術は、文献に完全に説明されている。例えば、全てが参照により組み込まれる、”Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ： Ａ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ” Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．， （１９８９）； ”Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ” Ｖｏｌｕｍｅｓ Ｉ－ＩＩＩ Ａｕｓｕｂｅｌ， Ｒ． Ｍ．， ｅｄ． （１９９４）； Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．， ”Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ”， Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ， Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ， Ｍａｒｙｌａｎｄ （１９８９）； Ｐｅｒｂａｌ， ”Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ”， Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ （１９８８）； Ｗａｔｓｏｎ ｅｔ ａｌ．， ”Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ＤＮＡ”， Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｂｏｏｋｓ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ； Ｂｉｒｒｅｎ ｅｔ ａｌ． （ｅｄｓ） ”Ｇｅｎｏｍｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ Ｓｅｒｉｅｓ”， Ｖｏｌｓ． １－４， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ （１９９８）； 米国特許第４，６６６，８２８号；同第４，６８３，２０２号；同第４，８０１，５３１号；同第５，１９２，６５９号および同第５，２７２，０５７号に示された方法論；”Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｈａｎｄｂｏｏｋ”， Ｖｏｌｕｍｅｓ Ｉ－ＩＩＩ Ｃｅｌｌｉｓ， Ｊ． Ｅ．， ｅｄ． （１９９４）； ”Ｃｕｌｔｕｒｅ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌｓ － Ａ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｂａｓｉｃ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ” ｂｙ Ｆｒｅｓｈｎｅｙ， Ｗｉｌｅｙ－Ｌｉｓｓ， Ｎ． Ｙ． （１９９４）、 Ｔｈｉｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ； ”Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ” Ｖｏｌｕｍｅｓ Ｉ－ＩＩＩ Ｃｏｌｉｇａｎ Ｊ． Ｅ．， ｅｄ． （１９９４）； Ｓｔｉｔｅｓ ｅｔ ａｌ． （ｅｄｓ）， ”Ｂａｓｉｃ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ” （８ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ）， Ａｐｐｌｅｔｏｎ ＆ Ｌａｎｇｅ， Ｎｏｒｗａｌｋ， ＣＴ （１９９４）； Ｍｉｓｈｅｌｌ ａｎｄ Ｓｈｉｉｇｉ （ｅｄｓ）、 ”Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ ｆｏｒ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ － Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｃｏｕｒｓｅ Ｍａｎｕａｌ” ＣＳＨＬ Ｐｒｅｓｓ （１９９６）を参照されたい。他の一般的参考文献は、この文書全体で提供されている。
材料と方法
化学薬品および試薬
ＣＢＧＡ、酢酸、プロピオン酸、酪酸、ペンタン酸、ヘキサン酸、ヘプタン酸、オクタン酸、±２－メチル酪酸、フェニルアラニン、およびヘキサン酸－Ｄ１１は、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ（イスラエル レホボト）から購入した。酢酸－Ｄ３（Ｄ＞９９％）、プロピオン酸－Ｄ５（Ｄ＞９９％）、酪酸－Ｄ５（Ｄ＞９８％）、ペンタン酸－Ｄ９（Ｄ＞９８％）、ヘプタン酸－Ｄ５（Ｄ＞９９％）、オクタン酸－Ｄ５（Ｄ＞９９％）、イソ酪酸－Ｄ７（Ｄ＞９８％）、±２－メチル酪酸－Ｄ９（Ｄ＞９９％）、イソ吉草酸－Ｄ９（Ｄ＞９８％）、イソカプロン酸－Ｄ１１（Ｄ＞９８％）は、Ｃ／Ｄ／Ｎ ｉｓｏｔｏｐｅｓ（カナダ ケベック州）から購した。フェニルアラニン－Ｄ５（Ｄ＞９８％）およびフェニルアラニン－１３Ｃ９，１５Ｎ１（１３Ｃ、１５Ｎ＞９９％）は、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ Ｉｓｏｔｏｐｅ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（ＭＡ州アンドーバー）が合成した。ＨｅｌｉＣＢＧＡ（ＮＰ００９５２５）は、Ａｎａｌｙｔｉｃｏｎ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ ＧｍｂＨ（ドイツ ポツダム）から購入した。
供給実験（Ｆｅｅｄｉｎｇ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ）
全ての供給溶液を、前駆体の０．５ｍｇ／ｍｌ水溶液として調製した。短鎖および中鎖脂肪酸（ＦＡ）溶液のｐＨを、５．５～６．０の範囲内になるように調整した。フェニルアラニン供給実験は、水中で（供給効率に影響を及ぼし得る、小花柄への空気透過を回避するため）鋏を用いて小花柄の近位側を切断して、小花柄の１～２ｃｍを付着したままにすることにより、切り取られた若い母植物からの葉について実施した。ＦＡ供給実験では、１０ｃｍの若い切断物を、母植物から得た。下部の葉を除去し、各茎に４～５枚の葉を残し、茎の皮をむいて、標識溶液の取込みを増加させた。３～４枚の葉または若い切断物を、水溶液１．８ｍｌを含むエッペンドルフ管に浸漬した［ＤＤＷ（対照）、非標識または標識前駆体。各群は、最小で３つの生物学的反復実験からなった］。全ての供給実験を、２５℃、ならびに一定の蛍光照明および湿度の下で４８～９６時間、制御された環境で実施した。試験管に、実験期間全体で特異的溶液を定期的に再充填した。終了時に、新鮮な葉を少量の水ですすぎ、外部から供給された前駆体の全痕跡量を除去し、穏やかに乾燥し、凍結して、乳鉢および乳棒を用いて微粉末に粉砕した。次に、凍結および粉砕した植物組織１００ｍｇがエタノール３００μｌで抽出し、１５分間音波処理し、オービタルシェーカで３０分間撹拌し、その後１４，０００ｇで１０分間遠心分離した。上清を０．２２μｍシリンジフィルターで濾過し、試料をさらに希釈することなく分析した。
Ｈ．アンブラクリゲルム組織からのカンナビノイドのＵＰＬＣ－ｑＴＯＦ分析
６つの異なる組織の新鮮な試料：若葉、古葉、小筒花および花托、茎、ならびに根を、開花段階で植物から採取した。小筒花および花托を、外科用メスを用いて切り離し、別々に抽出した。組織の全てを液体Ｎ２中で急速冷凍し、乳棒で微粉末に粉砕し、１ｍｌエタノールで以前に記載されたとおり抽出した。
試料を、ＸＥＶＯ Ｇ２－Ｓ ＱＴｏｆ（Ｗａｔｅｒｓ）またはＳｙｎａｐｔ ＨＤＭＳ（Ｗａｔｅｒｓ）のどちらかに連結されたダイオードアレイ検出器を有するＵＰＬＣ（Ｗａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ）で構成された高分離超高速液体クロマトグラフィー・タンデム・四重極飛行時間（ＵＰＬＣ－ｑＴＯＦ）システムを用いて分析した。化合物のクロマトグラフィー分離は、１００ｍｍ×２．１ｍｍ ｉ．ｄ．（内径）、１．７μｍ ＵＰＬＣ ＢＥＨ Ｃ１８カラム（Ｗａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ）で実施した。移動相は、アセトニトリル：水（５：９５ｖ／ｖ）中の０．１％ギ酸（Ａ相）およびアセトニトリル中の０．１％ギ酸（Ｂ相）からなった。流速は、０．３ｍｌ／分であり、カラム温度を、３５℃に保持した。化合物を、２９分間の多段階勾配法を利用して分析した：初期条件は４０％Ｂで１分間であり、２３分まで１００％Ｂに上昇し、１００％Ｂで３．８分間保持し、２７分まで４０％Ｂに低下し、システムの再平衡のために２９分まで４０％Ｂで保持した。エレクトロスプレーイオン化（ＥＳＩ）を、５０～１，０００Ｄａのｍ／ｚ範囲での陰イオン化で用いた。溶出した化合物の質量を、以下の設定で検出した：キャピラリー １ｋＶ、ソース温度 １４０℃、脱溶媒温度 ４５０℃、および脱溶媒ガス流量 ８００ｌ／ｈ。アルゴンを、衝突ガスとして用いた。ＭＳ／ＭＳ実験を、観察された脱プロトン化質量に従って陰イオン化モードで実施した。以下の設定を用いた：１ｋＶのキャピラリースプレー；３０ｅＶのコーン電圧；１５～５０ｅＶの衝突エネルギー勾配。
毛状突起の単離
若葉を採取し、氷冷蒸留水に浸し、その後、ＢｅａｄＢｅａｔｅｒ装置（Ｂｉｏｓｐｅｃ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ、ＯＫ州バートルズビル）を用いて破砕した。ポリカーボネートチャンバーに、植物材料１５ｇを充填し、容積半分のガラスビーズ（０．５ｍｍ径）およびＸＡＤ－４樹脂（１ｇ／ｇ植物材料）を加え、全容積までエタノール８０％を充填した。葉を、それぞれ１分の操作での２～４パルスにより連打した。この手順を、４℃で実行し、各パルスの後、チャンバーを氷中で冷却した。破砕後、チャンバーの内容物を最初、料理用メッシュストレイナで濾過し、その後、１００μｍナイロンメッシュで濾過して、植物材料、ガラスビーズおよびＸＡＤ－４樹脂を除去した。残存する植物材料およびビーズを、メッシュからこすり落とし、追加の８０％エタノールで２回すすぎ、これを同じく１００μｍメッシュに通した。高濃度の腺毛状突起分泌細胞の存在が、倒立光学顕微鏡での視覚化により確認された。
Ｈ．アンブラクリゲルムのゲノムシークエンシングおよびアセンブリ
Ｈ．アンブラクリゲルムのゲノムサイズを、フローサイトメトリーにより推定した。手短に述べると、核を、ヘリクリサムおよびトマト（既知の参照として使用）の若葉組織を単離緩衝液中で切り刻むことにより単離した。試料を、ヨウ化プロピジウムで染色し、少なくとも１０，０００の核を、フローサイトメトリーで分析し、両方の試料の間のＧ１ピーク平均の比を、計算した。高分子量ＤＮＡを、若い凍結葉から抽出し、ＵＣ ＤａｖｉｓのＧｅｎｏｍｅ Ｃｅｎｔｅｒにおいてシークエンシングするために送付した。ＤＮＡの性質を、ＴａｐｅＳｔａｔｉｏｎトレースおよびＱｕｂｉｔ蛍光計（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）により確認した。シークエンシングを、Ｐａｃｂｉｏ Ｓｅｑｕｅｌ ＩＩプラットフォームで実施し、約１２キロ塩基のＤＮＡ ＳＭＡＲＴｂｅｌｌライブラリを、製造業者のプロトコルに従って調製した。３つの異なるＳＭＲＴ ８Ｍ Ｃｅｌｌを用いて、５７．８ＧｂのＨｉＦｉデータ（約４４×ハプロイドカバレッジ（ｈａｐｌｏｉｄ ｃｏｖｅｒａｇｅ））を生じた。Ｐａｃｂｉｏ ＨｉＦｉデータに加えて、ＰＥ ２×１５０ Ｉｌｌｕｍｉｎａ Ｈｉ－Ｃデータの２００Ｍリードを、Ｐｈａｓｅ Ｇｅｎｏｍｉｃｓにより得た。Ｈｉｆｉａｓｍソフトウエアを使用して、Ｐａｃｂｉｏ ＨｉＦｉおよびＨｉＣの両方のデータを統合し、染色体スケールのハプロタイプ分解アセンブリを生成した。
プライマリアセンブリのさらなるスキャフォールディングを、Ｈｉ－ＣデータおよびＳＡＬＳＡソフトウエアを用いて実施した。Ｒａｇｔａｇを、各ハプロタイプのシンテニー足場に達するように、一次アセンブリを参照として用いる最終ラウンドの順序づけのために用いた。Ｈｉ－Ｃデータの視覚化を、Ｊｕｉｃｅｒで実施し、全ゲノムアライメントを、ｐａｆｒパッケージ（ｈｔｔｐｓ：／／ｄｗｉｎｔｅｒ．ｇｉｔｈｕｂ．ｉｏ／ｐａｆｒ／）で実施した。最後に、アセンブリに、ＥＤＴＡを用いて反復エレメントに関してソフトマスクを行った。
Ｈ．アンブラクリゲルムのＲＮＡシークエンシングおよびゲノムアノテーション
ＲＮＡを、７種の異なる組織：若葉、古葉、小筒花および花托、茎、根および毛状突起から抽出した。ＲＮＡの完全性を、ＴａｐｅＳｔａｔｉｏｎ装置を用いてチェックした。ペアードエンドのイルミナライブラリを、組織のうちの５つについて調製し、Ｉｌｌｕｍｉｎａ ＨｉＳｅｑ ３０００装置でシークエンシングした（ＰＥ ２×１５０、約４０Ｍ リード／試料）。ランダムシークエンシングエラーを、Ｒｃｏｒｒｅｃｔｏｒ１８を用いて補正し、補正不能のリードを除去した。アダプターおよびクオリティートリミングを、以下のパラメータのＴｒｉｍＧａｌｏｒｅ！を用いて実施した：－－ｌｅｎｇｔｈ ３６ －ｑ ５ －－ｓｔｒｉｎｇｅｎｃｙ １ －ｅ ０．１（ｈｔｔｐｓ：／／ｇｉｔｈｕｂ．ｃｏｍ／ＦｅｌｉｘＫｒｕｅｇｅｒ／ＴｒｉｍＧａｌｏｒｅ）。リボソームＲＮＡを、ｂｏｗｔｉｅ２ －－ｖｅｒｙ－ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ－ｌｏｃａｌ ｍｏｄｅを用いてＳＩＬＶＡ＿１３２＿ＬＳＵＲｅｆおよびＳＩＬＶＡ＿１３８＿ＳＳＵＲｅｆ非冗長性データベースにマッピングするリードを廃棄することによりフィルタリングした。ステップのそれぞれに関するＦａｓｔｑ品質チェックを、ＭｕｌｔｉＱＣを用いて実施した。残りのリードをプールし、Ｔｒｉｎｉｔｙを用いたゲノムガイドによるデノボトランスクリプトームアセンブリに用いた。Ｉｓｏ－Ｓｅｑデータを、組織のうちの４つから得て、ｉｓｏｓｅｑ３およびｃＤＮＡ Ｃｕｐｃａｋｅ ＴｏＦＵパイプライン（ｈｔｔｐｓ：／／ｇｉｔｈｕｂ．ｃｏｍ／Ｍａｇｄｏｌｌ／ｃＤＮＡ＿Ｃｕｐｃａｋｅ）を用いて処理した。融合されてスプライシングされていない転写産物を除去し、ポリＡ陽性転写産物のみを、ハイクオリティーアイソフォームのユニークセットについて保持した。Ｉｓｏ－ＳｅｑおよびＴｒｉｎｉｔｙ転写産物を、ｍｉｎｉｍａｐ２を用いてアセンブリにアライメントし、ＢＡＭファイルをＰＡＳＡパイプラインで用いて、ＲＮＡに基づく遺伝子モデル構造を作製した。加えて、ノボ遺伝子構造を、ソフトウエアｂｒａｋｅｒ２および外因性訓練の証拠として言及されたＢＡＭファイルを用いて得た。最後に、ａｂ ｉｎｉｔｉｏおよびＲＮＡに基づく遺伝子モデルを、ＥｖｉｄｅｎｃｅＭｏｄｅｌｅｒおよびＰＡＳＡパイプラインの最終ラウンドを用いて組み合わせた。遺伝子の機能アノテーションを、ＰＦＡＭデータベースに対するＨＭＭＥＲヒットおよびＵｎｉｐｒｏｔデータベースに対するＢＬＡＳＴＰヒットを類似性保持基準に関して考慮するＴｒａｎｓＤｅｃｏｄｅｒ（ｈｔｔｐｓ：／／ｇｉｔｈｕｂ．ｃｏｍ／ＴｒａｎｓＤｅｃｏｄｅｒ／ＴｒａｎｓＤｅｃｏｄｅｒ）を用いて、予測された成熟転写産物について実施した。タンパク質をコード化する転写産物のさらなるアノテーションを、厳選された植物タンパク質データベースに対するＢＬＡＳＴＰ検索により実施し、ＧＯおよびＫＥＧＧ用語を、Ｔｒｉａｎｎｏｔａｔｅによって得た。
７つの組織の３回の反復実験によるＵＭＩに基づく３’ＲＮＡｓｅｑを、先に記載したものと類似の方法で得た。アダプターおよびクオリティートリミングを、ポリＡトリミングモードを含む２段階のＴｒｉｍＧａｌｏｒｅ！を用いて実施した。リードを、ＳＴＡＲを用いてゲノムにマッピングし、ｕｍｉｔｏｏｌｓを用いてＵＭＩの重複を排除し、カウントをｆｅａｔｕｒｅＣｏｕｎｔで得た。正規化を、ＤＥＳｅｑ２のｖａｒｉａｎｃｅＳｔａｂｉｌｉｚｉｎｇＴｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎアルゴリズムで実施し、ＣＥＭＩｔｏｏｌｓパッケージを、共発現解析に用いた(相違性閾値０．６、ｐ値０．１）。目的の代謝産物の存在と一致する発現プロファイルを有するモジュールの遺伝子を、解析した。候補遺伝子を、機能アノテーションおよび公知の酵素とのＢｌａｓｔヒットに基づいて選択した。
大腸菌ＢＬ２１（ＤＥ３）細胞におけるＡＡＥ発現およびタンパク質精製
Ｈ．アンブラクリゲルムからの全てのＡＡＥ遺伝子を、個々にｐＥＴ２８ｂベクター内にクローニングし、大腸菌ＢＬ２１（ＤＥ３）細胞において発現させた。細菌細胞を、ＬＢ培地中、３７℃で成長させた。培養物が、６００ｎｍ吸光度＝０．６に達した場合、タンパク質発現を、イソプロピル－１－チオ－β－ｄ－ガラクトピラノシド（ＩＰＴＧ）２００μＭにより１５℃で２４時間誘導した。細菌細胞を、５０ｍＭ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ ｐＨ７．５、５００ｍＭ ＮａＣｌ、１ｍＭ ＰＭＳＦ、１０％グリセロールおよびプロテアーゼ阻害剤カクテル（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ）中での音波処理により溶解した。全細胞抽出物のアリコートを、さらなる分析のために保持した。可溶性タンパク質を、Ｎｉ－ＮＴＡアガロースビーズ（Ａｄａｒ Ｂｉｏｔｅｃｈ）で精製し、５０ｍＭ ＮａＨ２ＰＯ４ ｐＨ７．５および３００ｍＭ ＮａＣｌを含有する緩衝液中の３００ｍＭイミダゾールで溶出した。全細胞抽出物および溶出された画分を、ＩｎｓｔａｔＢｌｕｅで染色したＳＤＳ－ＰＡＧＥにより分析した。
ＡＡＥ酵素アッセイ
アシル－ＣｏＡ合成酵素アッセイを、０．１μｇ組換えＡＡＥ、５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ ｐＨ９、８ｍＭ ＡＴＰ、１０ｍＭ ＭｇＣｌ２、０．５ｍＭ ＣｏＡおよび４ｍＭヘキサン酸ナトリウムを含有する反応ミックス２０μｌ中、４０℃で１０分間実施した。反応を、１Ｍ ＨＣｌ ２μｌで停止させ、分析まで氷中で貯蔵した。１５０００ｇ、４℃で５分間の遠心分離の後、試料を水で１：１００希釈し、ＵＰＬＣ－ＭＳ／ＭＳにより分析した（Ｓｔｏｕｔ ｅｔ ａｌ．， ２０１２）。
多重反応モニタリング（ＭＲＭ）モードのＴｒｉｐｌｅ Ｑｕａｄ検出器（ＴＱ－Ｓ、Ｗａｔｅｒｓ）に連結されたＵＰＬＣ（Ｗａｔｅｒｓ）に注入を実施した。クロマトグラフィー分離を、以前に記載されたものと類似のカラムを利用して行った。移動相は、水性緩衝液 ｐＨ７．０（１０ｍＭ酢酸アンモニウム、５ｍＭ ＮＨ４ＨＣＯ２、Ａ相）およびアセトニトリル（Ｂ相）からなった。流速は、０．３ｍｌ／分であり、カラム温度は、２５℃で保持した。化合物を、１５分の多段階勾配法を利用して分析し：初期条件は１％Ｂであり、１０．５分まで３５％Ｂに上昇し、その後、１１分まで１００％Ｂに上昇させ、１００％Ｂで１分間保持し、１２．５分まで１％Ｂに低下させ、系の再平衡のために１５分まで１％Ｂを保持した。装置は、キャピラリー電圧３．０ｋＶおよびコーン電圧５０Ｖでのポジティブモードで操作した。代謝産物の同一性を、基準化合物（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ）で確認した。２つの異なる転移を、アセチル－ＣｏＡ（８１０．５２＞３０３．３０，２７．０Ｖ；８１０．５２＞４２８．２５，２４．０Ｖ）；ブチリル－ＣｏＡ（８３８．５８＞３３１．３０，２８．０Ｖ； ８３８．５８＞３３１．３０，２５．０Ｖ）；ヘキサノイル－ＣｏＡ（８６６．６５＞３５９．４０，２８．０Ｖ；８６６．６５＞４２８．２５，２６．０Ｖ）；オクタノイル－ＣｏＡ（８９４．６５＞３８７．５５，３０．０Ｖ；８９４．６５＞４２８．２５，２８．０ Ｖ）；クマロイル－ＣｏＡ（９１４．５９＞４０７．３７，３０．０Ｖ；９１４．５９＞４２８．２５，２８．０Ｖ）；シンナモイル－ＣｏＡ（８９８．５９＞３９１．３７，３０．０Ｖ；８９８．５９＞４２８．２５，２８．０Ｖ）の分析に用いた。
実施例１
ヘリクリサム組織のＵＰＬＣ－ｑＴＯＦプロファイリング
Ｈ．アンブラクリゲルムの６つの組織（若葉、古葉、小筒花および花托、茎、ならびに根）を最初に、ＵＰＬＣ－ｑＴＯＦを利用してプロファイリングした。ＣＢＧＡおよびそのフェネチル類似体（ｈｅｌｉＣＢＧＡ）が、根以外の全ての組織で観察された。これらの化合物は、分析標準物質との比較により同定された（図１Ａ～１Ｂ）。ヘキサノイルＣｏＡは、アルキル型カンナビノイドの拘束前駆体であるが、アラルキル型カンナビノイドの前駆体は、まだ同定していない。そこで、これらの化合物がそれぞれＣＢＧＡおよびｈｅｌｉＣＢＧＡの前駆体であることを、同位体標識したヘキサン酸（ヘキサン酸－Ｄ１１）およびフェニルアラニン（フェニルアラニン－Ｄ５またはフェニルアラニン－１３Ｃ９）の供給を介して実証した（図２）。
大麻は、異なる直鎖状短鎖ＦＡに由来する種々の長さ（１～７炭素）の脂肪族鎖を有する他のＣＢＧＡ型類似体も生成する。それぞれ３、４、６、および７炭素鎖に対応するカンナビゲロバリン酸（ＣＢＧＶＡ、Ｃ２、図３）、カンナビゲロール酪酸（ＣＢＧＢＡ、Ｃ３、図３）、カンナビゲロヘキソール酸（ｃａｎｎａｂｉｇｅｒｏｈｅｘｏｌｉｃ ａｃｉｄ）（ＣＢＧＨＡ、Ｃ４、図３）、およびカンナビゲロホロール酸（ＣＢＧＰＡ、Ｃ５、図３）を含むこれらの類似体の複数もまた、Ｈ．アンブラクリゲルムにおいて初めて観察した。化合物の同定は、種々の鎖長を有する同位体標識短鎖および中鎖脂肪酸（ＦＡ）の供給を介し、そしてＭＳ／ＭＳフラグメンテーションスペクトルを介した。類似の質量およびフラグメンテーションパターンを有するＣＢＧＡおよびＣＢＧＨＡの前に溶出した２種の化合物が、分枝状カンナビノイドとして同定された（Ｃ６およびＣ７、図３）。これらの分枝状カンナビノイドは、大麻中では同定されない。追加のプレニル化アシルフロログルシノイドは、供給実験に従ってカンナビノイドと類似の前駆体に由来した（図４）。
実施例２
アシル活性化酵素（ＡＡＥ）の機能的特徴づけ
大麻において、カンナビノイド生合成のためのヘキサノイルコエンザイムＡ（ＣｏＡ）前駆体は、毛状突起の特異的アシル活性化酵素１（ＣｓＡＡＥ１）により形成される（Ｓｔｏｕｔ ｅｔ ａｌ．， ２０１２）。ＣｓＡＡＥ１は、ヘキサノアートならびに他の短鎖および中鎖脂肪酸を活性化して、対応するＣｏＡを形成する。Ｈ．アンブラクリゲルムトランスクリプトーム分析に基づき、本発明者らは、推定上のＡＡＥをコード化する１１の候補遺伝子を同定した。それらのうち、Ｈ．アンブラクリゲルムからのＨｕＡＡＥ４（配列番号４）が、ＣｓＡＡＥ１に対して大きい相同性を示した（アミノ酸レベルで約６８％、図５）。
次に本発明者らは、それぞれ大腸菌の中で７つのＡＥＥのうち６つを個々に組換え発現させ、各タンパク質を精製して、基質のアレイ（酢酸、酪酸、ヘキサン酸、オクタン酸、桂皮酸、およびクマル酸）を用いてそれらの活性を試験した。ＨｕＡＡＥ２（配列番号２）およびＨｕＡＡＥ４（配列番号４）酵素は、他の基質と比較してブチリルＣｏＡを効率的に生成したが、ＨｕＡＡＥ３（配列番号３）は、酢酸に対して高い活性を示し、アセチルＣｏＡを形成した（図６）。これらのＡＡＥ酵素は、桂皮酸およびクマル酸基質に対して無視できるほどの、または低い活性を示した。興味深いこととして、ＨｕＡＡＥ６（配列番号６）は、ヘキサン酸およびオクタン酸のような中鎖脂肪酸に対して非常に高い活性を示したが、それは、それぞれ桂皮酸およびクマル酸とも反応して、シンナモイルＣｏＡおよびクマロイルＣｏＡを形成した（図６）。このためＨｕＡＡＥ６は、Ｈ．アンブラクリゲルムにおけるアルキル型およびアラルキル型カンナビノイド生合成に必要とされるアルキル（例えば、ヘキサン酸およびオクタン酸）およびアラルキル（例えば、桂皮酸およびクマル酸）前駆体の両方を活性化することが示された。
本発明を、具体的実施形態と併せて説明してきたが、多くの代替、改良、および変更が当業者に自明であることは、明らかである。したがって、本発明は、添付の特許請求の範囲の主旨および広い範囲に含まれる全てのそのような代替、改変および変更を包含するものとする。

Claims (48)

  1. 配列番号１～１１に対して少なくとも８９％の相同性を有する核酸配列、またはそれらの任意の組合わせを含む単離ＤＮＡ分子。
  2. 配列番号１～１１のいずれか１つに対して少なくとも８９％の相同性を有する前記核酸配列が、１，２００～２，５００ヌクレオチド長である、請求項１に記載の単離ＤＮＡ分子。
  3. 前記核酸配列が、アシル活性化酵素活性を特徴とするタンパク質をコード化する、請求項１または２に記載の単離ＤＮＡ分子。
  4. 配列番号１～１１のいずれか１つに対して少なくとも８９％の相同性を有する核酸配列、またはそれらの任意の組合わせを含む人工核酸分子。
  5. 配列番号１～１１のいずれか１つに対して少なくとも８９％の相同性を有する核酸配列、またはそれらの任意の組合わせを含むプラスミドまたはアグロバクテリウム。
  6. ａ．請求項１～３のいずれか１項に記載の単離ＤＮＡ分子；
    ｂ．請求項４に記載の人工ベクター；および
    ｃ．請求項５に記載のプラスミドまたはアグロバクテリウム、
    のうちのいずれか１つによりコード化された単離タンパク質。
  7. 配列番号１２～２２のいずれか１つに対して少なくとも９３％の相同性を有するアミノ酸配列を含む、請求項６に記載の単離タンパク質。
  8. 配列番号１２～２２のいずれか１つのアミノ酸配列からなる、請求項６または７に記載の単離タンパク質。
  9. アシル活性化酵素活性を特徴とする、請求項６～８のいずれか１項に記載の単離タンパク質。
  10. 前記アシルが、Ｃ１～Ｃ８アルキル鎖、およびアルファ不飽和フェニルアルキルカルボン酸からなる群から選択される、請求項９に記載の単離タンパク質。
  11. 前記Ｃ１～Ｃ８アルキル鎖が、ヘキサン酸である、請求項１０に記載の単離タンパク質。
  12. 前記アルファ不飽和フェニルアルキルカルボン酸が、桂皮酸またはその誘導体を含む、請求項１０または１１に記載の単離タンパク質。
  13. 前記桂皮酸誘導体が、桂皮酸のヒドロキシル化誘導体である、請求項１２に記載の単離タンパク質。
  14. 桂皮酸の前記ヒドロキシル化誘導体が、クマル酸である、請求項１３に記載の単離タンパク質。
  15. ａ．配列番号１～１１のいずれか１つに対して少なくとも８９％の相同性を有する核酸配列、もしくはそれらの任意の組合わせ；
    ｂ．請求項４に記載の人工核酸分子；
    ｃ．請求項５に記載のプラスミドもしくはアグロバクテリウム；
    ｄ．請求項６～１４のいずれか１項に記載の単離タンパク質；または
    ｅ．（ａ）～（ｄ）の任意の組合わせ、
    を含むトランスジェニック細胞。
  16. 単細胞生物、多細胞生物の細胞、および培養物中の細胞のうちのいずれか１つである、請求項１５に記載のトランスジェニック細胞。
  17. 前記単細胞生物が、真菌または細菌を含む、請求項１６に記載のトランスジェニック細胞。
  18. 前記真菌が、酵母細胞である、請求項１７に記載のトランスジェニック細胞。
  19. 請求項１５～１８のいずれか１項に記載のトランスジェニック細胞に由来する抽出物、またはその任意の画分。
  20. 前記単離ＤＮＡ分子、前記単離タンパク質、またはそれらの両方を含む、請求項１９に記載の抽出物。
  21. ａ．配列番号１～１１のいずれか１つに対して少なくとも８９％の相同性を有する核酸配列、もしくはそれらの任意の組合わせ；
    ｂ．請求項４に記載の人工ベクター；
    ｃ．請求項５に記載のプラスミドもしくはアグロバクテリウム；
    ｄ．請求項６～１４のいずれか１項に記載の単離タンパク質；
    ｅ．請求項１５～１８のいずれか１項に記載のトランスジェニック細胞；または
    ｆ．（ａ）～（ｅ）の任意の組合わせ、
    を含む、トランスジェニック植物、トランスジェニック植物組織または植物部分。
  22. カンナビス・サティバ植物である、請求項２１に記載のトランスジェニック植物。
  23. ａ．請求項１～３のいずれか１項に記載の単離ＤＮＡ分子；
    ｂ．請求項４に記載の人工ベクター；
    ｃ．請求項５に記載のプラスミドもしくはアグロバクテリウム；
    ｄ．請求項６～１４のいずれか１項に記載の単離タンパク質；
    ｅ．請求項１５～１８のいずれか１項に記載のトランスジェニック細胞；
    ｆ．請求項１９もしくは２０に記載の抽出物；
    ｇ．請求項２１もしくは２２に記載のトランスジェニック植物組織もしくは植物部分；または
    ｈ．（ａ）～（ｇ）の任意の組合わせ、
    と、許容できる担体と、
    を含む組成物。
  24. アシルコエンザイムＡ（ＣｏＡ）を合成する方法であって、
    ａ．配列番号１～１１のいずれか１つに対して少なくとも８９％の相同性を有する核酸配列を含む人工ベクターを含む細胞を提供するステップと；
    ｂ．ステップ（ａ）からの前記細胞を培養して、前記人工ベクターによりコード化されたタンパク質が発現させ、それによりアシルＣｏＡを合成するステップと、
    を含む、方法。
  25. 前記タンパク質が、アシル活性化酵素活性を有することを特徴とする、請求項２４に記載の方法。
  26. 前記培養することが、前記細胞に有効量のアシル基を補充することを含む、請求項２４または２５に記載の方法。
  27. 前記アシル基が、前記タンパク質の存在下で前記アシルＣｏＡを得るために前記ＣｏＡにコンジュゲートされる、請求項２６に記載の方法。
  28. 前記アシル基が、Ｃ１～Ｃ８アルキル鎖、およびアルファ不飽和フェニルアルキルカルボン酸からなる群から選択される、請求項２６または２７に記載の方法。
  29. 前記Ｃ１～Ｃ８アルキル鎖が、ヘキサン酸である、請求項２８に記載の方法。
  30. 前記桂皮酸誘導体が、桂皮酸のヒドロキシル化誘導体である、請求項２９に記載の方法。
  31. 桂皮酸の前記ヒドロキシル化誘導体が、クマル酸である、請求項３０に記載の方法。
  32. 前記人工ベクターが、発現ベクターである、請求項２４～３１のいずれか１項に記載の方法。
  33. 前記細胞が、原核細胞または真核細胞である、請求項２４～３２のいずれか１項に記載の方法。
  34. 前記細胞が、請求項１～３のいずれか１項に記載の単離ＤＮＡ分子もしくは請求項４に記載の人工ベクターを有するトランスジェニック細胞、または請求項１～３のいずれか１項に記載の単離ＤＮＡ分子もしくは請求項４に記載の人工ベクターをトランスフェクトした細胞である、請求項２４～３３のいずれか１項に記載の方法。
  35. 前記アシルＣｏＡが、アセチルＣｏＡ、ブチリルＣｏＡ、ヘキサノイルＣｏＡ、オクタノイルＣｏＡ、シンナモイルＣｏＡ、クマロイルＣｏＡ、およびそれらの任意の組合わせからなる群から選択される、請求項２４～３４のいずれか１項に記載の方法。
  36. 前記細胞に前記人工ベクターを導入またはトランスフェクトすることを含む、（ａ）に先行するステップをさらに含む、請求項２４～３５のいずれか１項に記載の方法。
  37. 配列番号１２～２２のいずれか１つに対して少なくとも９３％の相同性を有するアミノ酸配列を含むタンパク質の存在下で、ＣｏＡをアシル基と接触させ、それによりアシルＣｏＡを合成することを含む、アシルＣｏＡを合成する方法。
  38. 前記アシル基が、Ｃ１～Ｃ８アルキル鎖、およびアルファ不飽和フェニルアルキルカルボン酸からなる群から選択される、請求項３７に記載の方法。
  39. 前記Ｃ１～Ｃ８アルキル鎖が、ヘキサン酸である、請求項３８に記載の方法。
  40. 前記桂皮酸誘導体が、桂皮酸のヒドロキシル化誘導体である、請求項３９に記載の方法。
  41. 桂皮酸の前記ヒドロキシル化誘導体が、クマル酸である、請求項４０に記載の方法。
  42. 前記アシルＣｏＡが、アセチルＣｏＡ、ブチリルＣｏＡ、ヘキサノイルＣｏＡ、オクタノイルＣｏＡ、シンナモイルＣｏＡ、クマロイルＣｏＡ、およびそれらの任意の組合わせからなる群から選択される、請求項３７～４１のいずれか１項に記載の方法。
  43. 前記接触させることが、無細胞系においてである、請求項３７～４２のいずれか１項に記載の方法。
  44. トランスジェニック細胞またはトランスフェクト細胞から抽出物を得る方法でああって、
    ａ．トランスジェニック細胞またはトランスフェクト細胞を培地中で培養するステップであって、前記トランスジェニック細胞または前記トランスフェクト細胞が、配列番号１～１１のいずれか１つに対して少なくとも８９％の相同性を有する核酸配列を含む、ステップと；
    ｂ．前記トランスジェニック細胞または前記トランスフェクト細胞を抽出し、それにより前記トランスジェニック細胞または前記トランスフェクト細胞から抽出物を得るステップと、
    を含む、方法。
  45. 前記培地から前記培養トランスジェニック細胞または前記培養トランスフェクト細胞を分離することを含む、ステップ（ｂ）に先行するステップをさらに含む、請求項４４に記載の方法。
  46. 請求項４４または４５に記載の方法に従って得られたトランスジェニック細胞またはトランスフェクト細胞の抽出物。
  47. 請求項４５に記載の方法に従って得られた、培養トランスジェニック細胞または培養トランスフェクト細胞から分離された培地またはその一部。
  48. ａ．請求項４６に記載の抽出物；
    ｂ．請求項４７に記載の培地もしくはその一部；または
    ｃ．（ａ）および（ｂ）の組合わせ、
    と、許容できる担体と、
    を含む組成物。
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