JP2024508709A - 抗ｃｄ１２３結合分子及びその使用法 - Google Patents
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Abstract
本開示は、ＣＤ１２３へ特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片もしくは誘導体を提供する。さらに提供されるのは、抗体またはその抗原結合断片もしくは誘導体をコードするポリヌクレオチド、ならびに当該ポリヌクレオチドを含むベクター及び宿主細胞である。本開示は、ＣＤ１２３へ特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片もしくは誘導体を産生及び／または使用するための方法をさらに提供する。TIFF2024508709000019.tif102165
Description
関連出願の相互参照
本出願は、２０２１年２月１７日に出願された米国仮特許出願シリアル番号第６３／１５０，４８８号、及び２０２１年９月２８日に出願された同第６３／２４９，４５５号の利益を主張し、それらの各々のすべては、参照することによってそれらの全体が本明細書に援用される。
本出願は、２０２１年２月１７日に出願された米国仮特許出願シリアル番号第６３／１５０，４８８号、及び２０２１年９月２８日に出願された同第６３／２４９，４５５号の利益を主張し、それらの各々のすべては、参照することによってそれらの全体が本明細書に援用される。
配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩフォーマットで電子的に提出された配列表を含有し、当該配列表は、参照することによってその全体が本明細書に援用される。ＡＳＣＩＩコピーは、２０２２年２月１７日に生成されたものであるが、０３８ＷＯ１－Ｓｅｑｕｅｎｃｅ－Ｌｉｓｔｉｎｇ．ｔｘｔと命名され、８４，５８８バイトのサイズである。
本出願は、ＡＳＣＩＩフォーマットで電子的に提出された配列表を含有し、当該配列表は、参照することによってその全体が本明細書に援用される。ＡＳＣＩＩコピーは、２０２２年２月１７日に生成されたものであるが、０３８ＷＯ１－Ｓｅｑｕｅｎｃｅ－Ｌｉｓｔｉｎｇ．ｔｘｔと命名され、８４，５８８バイトのサイズである。
背景
急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）は米国における白血病による死亡の主要原因であり、１年あたり２０，０００名超の新規患者が発生し、５年生存率は３０％未満であり、６０歳を上回る患者では生存率は１０％へ減少する（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ Ｓｕｒｖｅｉｌｌａｎｃｅ、Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｅｎｄ－Ｒｅｓｕｌｔ Ｐｒｏｇｒａｍ（ＳＥＥＲ）のデータ、Ｏｒａｎ ａｎｄ Ｗｅｉｓｄｏｒｆ ２０１２，Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｉｃａ ９７（１２）１９１６（非特許文献１））。過去４０年間ＡＭＬ患者の治療の進歩はほとんどなく、現行の治療選択肢は、主として激しい化学療法及び幹細胞移植からなる（Ｌｕｐｐｉ ｅｔ ａｌ．２０１８，Ｃａｎｃｅｒｓ １０，４２９（非特許文献２））。ＡＭＬ細胞上の細胞表面分子を標的として、ＡＭＬ細胞と結合及び殺傷するようにＴ細胞に指令するために、複数のアプローチがとられてきた。１つのかかる表面分子はＣＤ１２３（ＩＬ－３受容体アルファ鎖またはＩＬ－３Ｒαとしても公知である）であり、ＡＭＬ患者のうちの９０％超において、白血病細胞、そして白血病性幹細胞（多くの場合治療法後の疾患再発に関与する細胞タイプ）上で発現される（Ｋｏｖｔｕｎ ｅｔ ａｌ．２０１８，Ｂｌｏｏｄ Ａｄｖａｎｃｅｓ ２（８）８４８（非特許文献３）；Ｘｉｅ ｅｔ ａｌ ２０１７，Ｂｌｏｏｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｊｏｕｒｎａｌ ７，ｅ５６７（非特許文献４））。加えて、ＣＤ１２３は、非常に不良な予後に関連する遺伝子変異（ＦＬＴ３等）を有する患者において高度に発現される（Ｘｉｅ ｅｔ ａｌ ２０１７，Ｂｌｏｏｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｊｏｕｒｎａｌ ７，ｅ５６７（非特許文献４））。ＣＤ１２３の２つのヒトアイソフォームのアミノ酸配列は、配列番号１４（アイソフォーム、成熟タンパク質１：配列番号１４のおよそアミノ酸２３～３７８）及び配列番号１５（アイソフォーム、成熟タンパク質２：配列番号１５のおよそアミノ酸２３～３００）として提示され、カニクイザルＣＤ１２３アミノ酸配列は、配列番号１６（ヒトアイソフォーム１に約８７％同一、成熟タンパク質：およそ配列番号１６のアミノ酸２３～３７８）として提示され、マウスＣＤ１２３アミノ酸配列は、配列番号１７（ヒトアイソフォーム１に約３０％同一、成熟タンパク質：配列番号１７のおよそアミノ酸１７～３９６）として提示される。
急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）は米国における白血病による死亡の主要原因であり、１年あたり２０，０００名超の新規患者が発生し、５年生存率は３０％未満であり、６０歳を上回る患者では生存率は１０％へ減少する（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ Ｓｕｒｖｅｉｌｌａｎｃｅ、Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｅｎｄ－Ｒｅｓｕｌｔ Ｐｒｏｇｒａｍ（ＳＥＥＲ）のデータ、Ｏｒａｎ ａｎｄ Ｗｅｉｓｄｏｒｆ ２０１２，Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｉｃａ ９７（１２）１９１６（非特許文献１））。過去４０年間ＡＭＬ患者の治療の進歩はほとんどなく、現行の治療選択肢は、主として激しい化学療法及び幹細胞移植からなる（Ｌｕｐｐｉ ｅｔ ａｌ．２０１８，Ｃａｎｃｅｒｓ １０，４２９（非特許文献２））。ＡＭＬ細胞上の細胞表面分子を標的として、ＡＭＬ細胞と結合及び殺傷するようにＴ細胞に指令するために、複数のアプローチがとられてきた。１つのかかる表面分子はＣＤ１２３（ＩＬ－３受容体アルファ鎖またはＩＬ－３Ｒαとしても公知である）であり、ＡＭＬ患者のうちの９０％超において、白血病細胞、そして白血病性幹細胞（多くの場合治療法後の疾患再発に関与する細胞タイプ）上で発現される（Ｋｏｖｔｕｎ ｅｔ ａｌ．２０１８，Ｂｌｏｏｄ Ａｄｖａｎｃｅｓ ２（８）８４８（非特許文献３）；Ｘｉｅ ｅｔ ａｌ ２０１７，Ｂｌｏｏｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｊｏｕｒｎａｌ ７，ｅ５６７（非特許文献４））。加えて、ＣＤ１２３は、非常に不良な予後に関連する遺伝子変異（ＦＬＴ３等）を有する患者において高度に発現される（Ｘｉｅ ｅｔ ａｌ ２０１７，Ｂｌｏｏｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｊｏｕｒｎａｌ ７，ｅ５６７（非特許文献４））。ＣＤ１２３の２つのヒトアイソフォームのアミノ酸配列は、配列番号１４（アイソフォーム、成熟タンパク質１：配列番号１４のおよそアミノ酸２３～３７８）及び配列番号１５（アイソフォーム、成熟タンパク質２：配列番号１５のおよそアミノ酸２３～３００）として提示され、カニクイザルＣＤ１２３アミノ酸配列は、配列番号１６（ヒトアイソフォーム１に約８７％同一、成熟タンパク質：およそ配列番号１６のアミノ酸２３～３７８）として提示され、マウスＣＤ１２３アミノ酸配列は、配列番号１７（ヒトアイソフォーム１に約３０％同一、成熟タンパク質：配列番号１７のおよそアミノ酸１７～３９６）として提示される。
ＣＤ１２３は、芽球性形質細胞様樹状細胞腫瘍の治療のためにジフテリア毒素とコンジュゲートされた組み換えＩＬ－３サイトカインのＦＤＡ承認によって証明されるように、いくつかの血液悪性腫瘍のための臨床的に検証された標的である（Ｐｅｍｍａｒａｊｕ ｅｔ ａｌ ２０１９，ＮＥＪＭ ３８０：１６２８（非特許文献５））。このＣＤ１２３標的化剤及び他のＣＤ１２３標的化剤は、前臨床試験及び臨床試験において試験されている。初期の第１相臨床試験が、Ｘｅｎｃｏｒ（ＸｍＡｂ１４０４５ － ＩｇＧベース）、Ｍａｃｒｏｇｅｎｉｃｓ（フロテツズマブ － ＤＡＲＴ）、及びＪａｎｓｅｎ（ＪＮＪ－６３７０９１７８ － ｄｕｏｂｏｄｙ）による、ＣＤ１２３×ＣＤ３二重特異性抗体により行われた。臨床的有効性の初期の徴候がこれらの患者のうちの若干名で報告されたが、重症のサイトカイン放出症候群及び何名かの患者死亡もこのクラスの二重特異性薬物で観察された（Ｒａｖａｎｄｉ ｅｔ ａｌ ２０１８ Ｂｌｏｏｄ １３２：７６３（非特許文献６）；Ｊａｃｏｂｓ ｅｔ ａｌ ２０１８，Ｂｌｏｏｄ １３２：２７３８（非特許文献７）；Ｕｙ ｅｔ ａｌ ２０１８，Ｂｌｏｏｄ １３２：７６４（非特許文献８））。サイトカイン放出症候群（またはＣＲＳ）は、生命を脅かし得る、発熱、低血圧、血液凝固異常、及び毛細管の漏出を特徴し、かかる知見は、ＣＡＲ－Ｔ及びＢｉＴＥを含む他のＴ細胞が関与するアプローチにも付随する（Ｔｅａｃｈｌｅｙ ｅｔ ａｌ ２０１６，Ｃａｎｃｅｒ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ ６（６）６６４（非特許文献９）；Ｈａｙ ｅｔ ａｌ ２０１７，Ｂｌｏｏｄ １３０（２１）２２９５（非特許文献１０））。サイトカイン放出に関連するこれらの有害な安全性事象は、ＣＤ３と結合するＩｇＧベースの二重特異性抗体の用量制限毒性の性質を有する傾向があり、かかる薬剤の安全で効率的な忍容される投与への課題、及び可能性として、もたらされる投薬の限定に起因するこれらの治療剤の有効性の最適化能力への課題として現われる。
多量体化することができる抗体及び抗体様分子（ＩｇＡ及びＩｇＭの抗体等）は、例えば免疫腫瘍学及び感染性疾患の分野において、特異性の改善、アビディティーの改善、及び多重結合標的への結合能力を可能にする有望な薬物候補として浮上した。例えば米国特許第９，９５１，１３４号（特許文献１）、同第９，９３８，３４７号（特許文献２）、同第１０，５７０，１９１号（特許文献３）、同第１０，６０４，５５９号（特許文献４）、同第１０，６１８，９７８号（特許文献５）、同第１０，７８７，５２０号（特許文献６）及び同第１０，８９９，８３５号（特許文献７）、ならびに米国特許出願公開第２０１９－０１８５５７０号（特許文献８）、同第２０１９－０３３０３７４号（特許文献９）、同第２０１９－０３３８０４１号（特許文献１０）、同第２０１９－０３３０３６０号（特許文献１１）及び同第２０１９－０３３８０４０号（特許文献１２）（それらの内容は、参照することによってそれらの全体が本明細書に援用される）を参照されたい。
ＣＲＳを最小限に抑えながら、ＣＤ１２３を発現するＡＭＬ細胞を標的化し、それらの細胞のＴ細胞媒介性殺傷を誘導する必要性が依然として存在する。本発明のＣＤ３二重特異性ＩｇＭ技術によるＣＤ１２３の標的化が、ＣＤ１２３発現ＡＭＬ腫瘍細胞を、Ｔ細胞媒介性細胞傷害性のために有効に標的化するだけでなく、ＩｇＧベースのＣＤ１２３×ＣＤ３二重特異性抗体により治療される患者において時には重症であるサイトカイン放出症候群に好適な安全性プロファイルを備えた奏効も生ずるかどうかを評価した。加えて、ＩｇＭ抗体の高いアビディティーの結合は、本発明のＣＤ１２３×ＣＤ３二重特異性ＩｇＭが、ＩｇＧベースの二重特異性抗体と比較して、ＣＤ１２３を比較的低レベルの細胞表面発現で発現する腫瘍細胞を標的化することを可能にし得る。
Ｏｒａｎ ａｎｄ Ｗｅｉｓｄｏｒｆ ２０１２，Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｉｃａ ９７（１２）１９１６
Ｌｕｐｐｉ ｅｔ ａｌ．２０１８，Ｃａｎｃｅｒｓ １０，４２９
Ｋｏｖｔｕｎ ｅｔ ａｌ．２０１８，Ｂｌｏｏｄ Ａｄｖａｎｃｅｓ ２（８）８４８
Ｘｉｅ ｅｔ ａｌ ２０１７，Ｂｌｏｏｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｊｏｕｒｎａｌ ７，ｅ５６７
Ｐｅｍｍａｒａｊｕ ｅｔ ａｌ ２０１９，ＮＥＪＭ ３８０：１６２８
Ｒａｖａｎｄｉ ｅｔ ａｌ ２０１８ Ｂｌｏｏｄ １３２：７６３
Ｊａｃｏｂｓ ｅｔ ａｌ ２０１８，Ｂｌｏｏｄ １３２：２７３８
Ｕｙ ｅｔ ａｌ ２０１８，Ｂｌｏｏｄ １３２：７６４
Ｔｅａｃｈｌｅｙ ｅｔ ａｌ ２０１６，Ｃａｎｃｅｒ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ ６（６）６６４
Ｈａｙ ｅｔ ａｌ ２０１７，Ｂｌｏｏｄ １３０（２１）２２９５
概要
本明細書に提供されるのは、ＣＤ１２３へ特異的に結合する抗原結合ドメインを含む、抗体またはその抗原結合断片もしくは誘導体であって、抗原結合ドメインが、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、ＶＨ及びＶＬはそれぞれ、アミノ酸配列である配列番号７６及び配列番号７９、配列番号７７及び配列番号７９、配列番号７８及び配列番号７９、配列番号８０及び配列番号８３、配列番号８１及び配列番号８３、ならびに配列番号８２及び配列番号８３を含む、当該抗体またはその抗原結合断片もしくは誘導体である。いくつかの実施形態では、ＶＨ及びＶＬはそれぞれ、アミノ酸配列である配列番号７６及び配列番号７９を含む。
本明細書に提供されるのは、ＣＤ１２３へ特異的に結合する抗原結合ドメインを含む、抗体またはその抗原結合断片もしくは誘導体であって、抗原結合ドメインが、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、ＶＨ及びＶＬはそれぞれ、アミノ酸配列である配列番号７６及び配列番号７９、配列番号７７及び配列番号７９、配列番号７８及び配列番号７９、配列番号８０及び配列番号８３、配列番号８１及び配列番号８３、ならびに配列番号８２及び配列番号８３を含む、当該抗体またはその抗原結合断片もしくは誘導体である。いくつかの実施形態では、ＶＨ及びＶＬはそれぞれ、アミノ酸配列である配列番号７６及び配列番号７９を含む。
いくつかの実施形態では、抗体またはその断片もしくは誘導体は、Ｆｖ断片、一本鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）またはジスルフィド結合Ｆｖ断片（ｓｄＦｖ）である。
いくつかの実施形態では、抗体またはその断片もしくは誘導体は、５、６または２個の二価結合単位、及び１０、１２または４個の抗原結合ドメインを含む多量体抗体であり、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１または１２個の抗原結合ドメインは、ＣＤ１２３へ特異的に結合し、各結合単位は２つの重鎖を含み、当該２つの重鎖の各々が、ＩｇＭもしくはＩｇＡ定常領域、またはその多量体化断片もしくはバリアントを含み、多量体抗体の少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１または１２個の重鎖定常領域はＶＨのコピーと会合している。いくつかの実施形態では、抗体またはその断片もしくは誘導体は、２つの抗原結合ドメインを含む二価結合単位を含み、少なくとも１つの抗原結合ドメインは、ＣＤ１２３へ特異的に結合し、結合単位は２つの重鎖を含み、当該２つの重鎖の各々が重鎖定常領域またはその断片もしくはバリアントを含み、結合単位の少なくとも１つの重鎖定常領域またはその断片もしくはバリアントはＶＨのコピーへ融合される。
いくつかの実施形態では、抗体またはその断片もしくは誘導体は、２つの抗原結合ドメインを含む単一の二価結合単位を含み、少なくとも１つの抗原結合ドメインは、ＣＤ１２３へ特異的に結合し、結合単位は２つの重鎖を含み、当該２つの重鎖の各々が重鎖定常領域またはその断片もしくはバリアントを含み、結合単位の少なくとも１つの重鎖定常領域またはその断片もしくはバリアントはＶＨのコピーと会合している。いくつかの実施形態では、重鎖は、ＩｇＧ重鎖定常領域またはその断片もしくはバリアントを含む。
いくつかの実施形態では、抗体またはその断片もしくは誘導体は、２、５または６個の二価結合単位、及び４、１０または１２個の抗原結合ドメインを含む多量体抗体であり、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１または１２個の抗原結合ドメインは、ＣＤ１２３へ特異的に結合し、各結合単位は２つの重鎖を含み、当該２つの重鎖の各々が、ＩｇＡもしくはＩｇＭ定常領域、またはその多量体化断片もしくはバリアントを含み、多量体抗体の少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１または１２個の重鎖定常領域はＶＨのコピーへ融合される。いくつかの実施形態では、抗体またはその断片もしくは誘導体は、２、５または６個の二価結合単位、及び４、１０または１２個の抗原結合ドメインを含む多量体抗体であり、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１または１２個の抗原結合ドメインは、ＣＤ１２３へ特異的に結合し、各結合単位は２つの重鎖を含み、当該２つの重鎖の各々が、ＩｇＡもしくはＩｇＭ定常領域、またはその多量体化断片もしくはバリアントを含み、多量体抗体の少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１または１２個の重鎖定常領域はＶＨのコピーへ融合される。いくつかの実施形態では、各重鎖定常領域またはその多量体化断片もしくはバリアントはＶＨのコピーと会合している。いくつかの実施形態では、各重鎖定常領域またはその断片もしくはバリアントはＶＨのコピーへ融合される。
いくつかの実施形態では、各結合単位は２つの軽鎖をさらに含み、当該２つの軽鎖の各々が軽鎖定常領域またはその断片もしくはバリアントを含み、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１または１２個の軽鎖定常領域またはその断片もしくはバリアントはＶＬのコピーと会合している。いくつかの実施形態では、各結合単位は２つの軽鎖をさらに含み、当該２つの軽鎖の各々が軽鎖定常領域またはその断片もしくはバリアントを含み、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１または１２個の軽鎖定常領域またはその断片もしくはバリアントはＶＬのコピーへ融合される。いくつかの実施形態では、各軽鎖定常領域またはその断片もしくはバリアントはＶＬのコピーと会合している。いくつかの実施形態では、各軽鎖定常領域またはその断片もしくはバリアントはＶＬのコピーへ融合される。
いくつかの実施形態では、抗体またはその断片もしくは誘導体は、完全抗体、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片またはＦ（ａｂ’）２断片を含む。
いくつかの実施形態では、抗体またはその断片もしくは誘導体は二量体であり、かつ２つの二価ＩｇＡ結合単位、及びＪ鎖またはその断片もしくはバリアントを含み、各結合単位は、Ｃα３ドメイン及びαテールピース（αｔｐ）ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＩｇＡ重鎖定常領域またはその断片もしくはバリアントの各々は、Ｃα１ドメイン、Ｃα２ドメイン、ＩｇＡヒンジ領域、またはそれらの任意の組み合わせをさらに含む、
いくつかの実施形態では、抗体またはその断片もしくは誘導体は六量体または五量体であり、かつ５または６個の二価ＩｇＭ結合単位を含み、各結合単位は、Ｃμ４ドメイン及びμテールピース（μｔｐ）ドメイン、またはその断片もしくはバリアントを含む。いくつかの実施形態では、ＩｇＭ重鎖定常領域またはその多量体化断片もしくはバリアントの各々は、Ｃμ１ドメイン、Ｃμ２ドメイン、Ｃμ３ドメインまたはそれらの任意の組み合わせをさらに含む。いくつかの実施形態では、ＩｇＡ重鎖定常領域またはその断片もしくはバリアントは、ＩｇＡ１重鎖定常領域またはその断片もしくはバリアントである。いくつかの実施形態では、ＩｇＡ重鎖定常領域またはその断片もしくはバリアントは配列番号３を含む。いくつかの実施形態では、ＩｇＡ重鎖定常領域またはその断片もしくはバリアントは、ＩｇＡ２重鎖定常領域またはその断片もしくはバリアントである。いくつかの実施形態では、ＩｇＡ重鎖定常領域またはその断片もしくはバリアントは配列番号４を含む。
いくつかの実施形態では、各ＩｇＭ重鎖定常領域は、アミノ酸配列である配列番号１、配列番号２またはそのバリアントもしくは断片を含むヒトＩｇＭ定常領域またはその多量体化バリアントもしくは断片である。いくつかの実施形態では、抗体またはその断片もしくは誘導体はバリアントヒトＩｇＭ定常領域を含み、抗体またはその断片もしくは誘導体は、アミノ酸配列である配列番号１または配列番号２を含むＩｇＭ重鎖定常領域を含む抗体またはその抗原結合断片もしくは誘導体に比べて、低減されたＣＤＣ活性を有する。いくつかの実施形態では、各バリアントヒトＩｇＭ定常領域は、配列番号１もしくは配列番号２の位置Ｐ３１１に対応するアミノ酸置換、配列番号１もしくは配列番号２の位置Ｐ３１３に対応するアミノ酸置換、または配列番号１もしくは配列番号２の位置Ｐ３１１及びＰ３１３に対応するアミノ酸置換を含む。
いくつかの実施形態では、各ＩｇＭ重鎖定常領域またはその多量体化バリアントもしくは断片は、１つまたは複数の半減期改変的単一アミノ酸置換、欠失または挿入を除いてバリアントＩｇＭ重鎖定常領域と同一である参照ＩｇＭ重鎖定常領域と比較して、１つまたは複数の半減期改変的単一アミノ酸置換、欠失または挿入を有するバリアントヒトＩｇＭ定常領域であり；抗体またはその断片もしくは誘導体は、対象動物への投与に際して、同じ動物種に同じ手法で投与される参照ＩｇＭ重鎖定常領域を含む抗体またはその抗原結合断片もしくは誘導体に比べて、血清半減期の増加を示す。いくつかの実施形態では、バリアントＩｇＭ重鎖定常領域は、野生型ヒトＩｇＭ定常領域の配列番号１または配列番号２のアミノ酸Ｅ３４５Ａ、Ｓ４０１Ａ、Ｅ４０２ＡまたはＥ４０３Ａに対応する１つまたは複数のアミノ酸位置におけるアミノ酸の半減期改変的置換を含む。
いくつかの実施形態では、ＩｇＭ重鎖定常領域またはその多量体化バリアントもしくは断片の各々は、配列番号１または配列番号２のＮ４６、Ｎ２０９、Ｎ２７２もしくはＮ４４０に対応する１つまたは複数のグリコシル化置換を含み、１つまたは複数のグリコシル化置換はアスパラギン（Ｎ）結合型グリコシル化を防止する。
いくつかの実施形態では、抗体またはその断片もしくは誘導体は五量体であり、かつＪ鎖またはその断片またはそのバリアントをさらに含む。
いくつかの実施形態では、Ｊ鎖またはその断片もしくはバリアントは、アミノ酸配列である配列番号７を含む成熟ヒトＪ鎖、またはその断片、またはそのバリアントである。いくつかの実施形態では、抗体またはその断片もしくは誘導体はバリアントＪ鎖またはその断片を含み、バリアントＪ鎖は、配列番号７の野生型成熟ヒトＪ鎖のアミノ酸Ｙ１０２に対応するアミノ酸位置におけるアミノ酸置換を含み、バリアントＪ鎖を含むＩｇＭ抗体は、動物への投与に際して、Ｊ鎖における１つまたは複数の単一アミノ酸置換、欠失または挿入を除いて同一でありかつ同じ動物種に同じ手法で投与される参照ＩｇＭ抗体に比べて、血清半減期の増加を示す。いくつかの実施形態では、配列番号７のＹ１０２に対応するアミノ酸はアラニン（Ａ）で置換されている。いくつかの実施形態では、Ｊ鎖はアミノ酸配列である配列番号８を含む。
いくつかの実施形態では、Ｊ鎖またはその断片もしくはバリアントは、異種部分をさらに含む修飾Ｊ鎖であり、異種部分は、Ｊ鎖またはその断片もしくはバリアントへ融合またはコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、異種部分は、Ｊ鎖またはその断片もしくはバリアントへ融合されたポリペプチドである。いくつかの実施形態では、異種ポリペプチドは、少なくとも５個のアミノ酸であって２５個以下のアミノ酸を含むペプチドリンカーを介して、Ｊ鎖またはその断片もしくはバリアントへ融合される。いくつかの実施形態では、異種ポリペプチドはＪ鎖またはその断片もしくはバリアントのＮ末端へ、Ｊ鎖またはその断片もしくはバリアントのＣ末端へ、あるいはＪ鎖またはその断片もしくはバリアントのＮ末端及びＣ末端の両方へ融合され、Ｎ末端及びＣ末端の両方へ融合される異種ポリペプチドは、同じであり得る、または異なり得る。いくつかの実施形態では、Ｊ鎖またはその断片もしくはバリアントへ融合されたポリペプチドは、抗体の抗原結合ドメインまたはそのサブユニットである。いくつかの実施形態では、抗体の抗原結合ドメインはｓｃＦｖ断片を含む。
いくつかの実施形態では、異種ポリペプチドはＣＤ３へ結合する。いくつかの実施形態では、抗体またはその断片もしくは誘導体はＣＤ３に結合し得る。いくつかの実施形態では、抗体またはその断片もしくは誘導体は、本明細書に開示されるＣＤ３結合性のＶＨ及びＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体の抗原結合ドメインはＣＤ３へ結合し、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、ＶＨは、ＶＨ相補性決定領域ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３を含み、ＶＬは、ＶＬ相補性決定領域ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３を含み、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３はそれぞれ、アミノ酸配列である配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３２及び配列番号３３；配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２３、配列番号２４及び配列番号２５；配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３９、配列番号４０及び配列番号４１；配列番号４３、配列番号４４、配列番号４５、配列番号４７、配列番号４８及び配列番号４９；配列番号５１、配列番号５２、配列番号５３、配列番号５５、配列番号５６及び配列番号５７；配列番号５９、配列番号６０、配列番号６１、配列番号６３、配列番号６４及び配列番号６５；または配列番号６７、配列番号６８、配列番号６９、配列番号７１、配列番号７２及び配列番号７３を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３はそれぞれ、アミノ酸配列である配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３２及び配列番号３３を含む。いくつかの実施形態では、抗体の抗原結合ドメインは、それぞれ、配列番号１８及び配列番号２２、配列番号２６及び配列番号３０、配列番号３４及び配列番号３８、配列番号４２及び配列番号４６、配列番号５０及び配列番号５４、配列番号５８及び配列番号６２、または配列番号６６及び配列番号７０と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％または１００％同一であるＶＨ及びＶＬアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体の抗原結合ドメインは、それぞれ、ＶＨ及びＶＬアミノ酸配列である配列番号１８及び配列番号２２、配列番号２６及び配列番号３０、配列番号３４及び配列番号３８、配列番号４２及び配列番号４６、配列番号５０及び配列番号５４、配列番号５８及び配列番号６２、または配列番号６６及び配列番号７０を含む。いくつかの実施形態では、抗体の抗原結合ドメインは、それぞれ、ＶＨ及びＶＬアミノ酸配列である配列番号２６及び配列番号３０を含む。
いくつかの実施形態では、抗体またはその断片もしくは誘導体は、分泌成分またはその断片もしくはバリアントをさらに含む。
いくつかの実施形態では、抗体またはその断片もしくは誘導体は多重特異性である。いくつかの実施形態では、抗体またはその断片もしくは誘導体は二重特異性である。
いくつかの実施形態では、抗体またはその断片もしくは誘導体はヒトＣＤ１２３へ特異的に結合し得る。いくつかの実施形態では、抗体またはその断片もしくは誘導体は、５００ｎＭ、１００ｎＭ、５０．０ｎＭ、４０．０ｎＭ、３０．０ｎＭ、２０．０ｎＭ、１０．０ｎＭ、９．０ｎＭ、８．０ｎＭ、７．０ｎＭ、６．０ｎＭ、５．０ｎＭ、４．０ｎＭ、３．０ｎＭ、２．０ｎＭ、１．０ｎＭ、０．５０ｎＭ、０．１０ｎＭ、０．０５０ｎＭ、０．０１ｎＭ、０．００５ｎＭまたは０．００１ｎＭ以下の解離定数ＫＤによって特徴づけられる親和性でヒトＣＤ１２３へ特異的に結合する。
本明細書にさらに提供されるのは、本明細書に開示される抗体またはその断片もしくは誘導体を含む組成物である。本明細書にさらに提供されるのは、本明細書に開示される抗体またはその断片もしくは誘導体、あるいはそのサブユニットをコードする核酸配列を含む、ポリヌクレオチドである。本明細書にさらに提供されるのは、本明細書に開示されるポリヌクレオチドを含むベクターである。本明細書にさらに提供されるのは、本明細書に開示されるベクターを含む宿主細胞である。
本明細書にさらに提供されるのは、本明細書に開示される抗体またはその断片もしくは誘導体を生産する方法であって、本明細書に開示される宿主細胞を培養すること、及び抗体またはその断片もしくは誘導体を回収することを含む、当該方法である。
本明細書にさらに提供されるのは、がんを治療する方法であって、治療を必要とする対象に、有効量の、本明細書に開示される抗体またはその断片もしくは誘導体を投与することを含む、当該方法である。いくつかの実施形態では、対象はヒトである。いくつかの実施形態では、がんは血液がんである。いくつかの実施形態では、血液がんは急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）である。
詳細な説明
定義
「１つの（ａ）」または「１つの（ａｎ）」実体という用語は、１つまたは複数のその実体を指すことに留意されたい。例えば、「１つの結合分子（ａ ｂｉｎｄｉｎｇ ｍｏｌｅｃｕｌｅ）」は、１つまたは複数の結合分子を表わすように理解される。それゆえ、「１つの（ａ）」（または「１つの（ａｎ）」）、「１つまたは複数の」、及び「少なくとも１つの」という用語は、本明細書において互換的に使用され得る。
定義
「１つの（ａ）」または「１つの（ａｎ）」実体という用語は、１つまたは複数のその実体を指すことに留意されたい。例えば、「１つの結合分子（ａ ｂｉｎｄｉｎｇ ｍｏｌｅｃｕｌｅ）」は、１つまたは複数の結合分子を表わすように理解される。それゆえ、「１つの（ａ）」（または「１つの（ａｎ）」）、「１つまたは複数の」、及び「少なくとも１つの」という用語は、本明細書において互換的に使用され得る。
さらに、「及び／または」は、本明細書において使用される場合に、他のものが有りまたは無しの２つの指定された特色または構成要素の各々の具体的な開示と見なされる。したがって、「及び／または」という用語は、本明細書において「Ａ及び／またはＢ」等の表現中で使用される時、Ａ及びＢ、ＡまたはＢ、Ａ（単独）、ならびにＢ（単独）を包含することが意図される。同様に、「及び／または」という用語は、「Ａ、Ｂ、及び／またはＣ」等の表現中で使用される時、以下の実施形態の各々、すなわちＡ、Ｂ、及びＣ；Ａ、Ｂ、またはＣ；ＡまたはＣ；ＡまたはＢ；ＢまたはＣ；Ａ及びＣ；Ａ及びＢ；Ｂ及びＣ；Ａ（単独）；Ｂ（単独）；ならびにＣ（単独）を網羅することが意図される。
別段定義されない限り、本明細書において使用される技術用語及び科学用語は、本開示が関連する技術分野の当業者によって共通して理解されるものと同じ意味を有する。例えば、ｔｈｅ Ｃｏｎｃｉｓｅ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｂｉｏｍｅｄｉｃｉｎｅ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｕｏ，Ｐｅｉ－Ｓｈｏｗ，２ｎｄ ｅｄ．，２００２，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ；Ｔｈｅ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，３ｒｄ ｅｄ．，１９９９，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ；ａｎｄ ｔｈｅ Ｏｘｆｏｒｄ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｒｅｖｉｓｅｄ，２０００，Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓは、本開示において使用される用語の多くについての全般的な辞書を当業者に提供する。
単位、接頭語、及び記号は、Ｓｙｓｔｅｍｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ｄｅ Ｕｎｉｔｅｓ（ＳＩ）で容認された形態で表わされる。数値範囲は、当該範囲を定義する数を含む。別段の指示のない限り、アミノ酸配列は、アミノからカルボキシの方向で左から右に記載される。本明細書において提供される見出しは、様々な実施形態または本開示の実施形態の限定ではなく、それらは、全体として本明細書への参照により含められ得る。したがって、直後で定義される用語は、本明細書を全体で参照することによってより完全に定義される。
本明細書において使用される時、「ポリペプチド（ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ）」という用語は、単数の「ポリペプチド（ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ）」、そして複数の「ポリペプチド（ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅｓ）」を網羅することが意図され、アミド結合（ペプチド結合としても知られる）によって直線的に連結される単量体（アミノ酸）から構成される分子を指す。「ポリペプチド」という用語は、２つ以上のアミノ酸の任意の鎖（複数可）を指し、産物の特定の長さを指さない。したがって、ペプチド、ジペプチド、トリペプチド、オリゴペプチド、「タンパク質」、「アミノ酸鎖」、または２つ以上のアミノ酸の鎖（複数可）を指すために使用される他の用語は、「ポリペプチド」の定義内に含まれ、「ポリペプチド」という用語は、これらの用語のうちの任意のものの代わりに、またはそれらと互換的に使用され得る。「ポリペプチド」という用語は、ポリペプチドの発現後修飾の産物も指すように意図され、当該発現後修飾としては、糖鎖付加、アセチル化、リン酸化、アミド化、及び公知の保護基／ブロック基による誘導体化、タンパク質溶解性切断、または天然に存在しないアミノ酸による修飾が限定されずに挙げられる。ポリペプチドは、生物学的供給源に由来し得るか、または組み換え技術によって産生され得るが、指定された核酸配列から必ずしも翻訳されない。ポリペプチドは、化学合成によるもの包含する任意の様式で生成され得る。
ポリペプチドは、本明細書において開示される時、約３以上、５以上、１０以上、２０以上、２５以上、５０以上、７５以上、１００以上、２００以上、５００以上、１，０００以上、または２，０００以上のアミノ酸のサイズであり得る。ポリペプチドは定義された三次元構造を有し得るが、必ずしもかかる構造を有していない。定義された三次元構造を備えたポリペプチドは、折りたたまれている、と称され、定義された三次元構造を保持しないが、むしろ多数の異なる立体配座を採用し得るポリペプチドは、折りたたまれていない、と称される。本明細書において使用される時、糖タンパク質という用語は、アミノ酸（例えばセリンまたはアスパラギン）の酸素含有側鎖または窒素含有側面鎖を経由してタンパク質へ付加される少なくとも１つの炭水化物部分へ結合されたタンパク質を指す。
「単離された」ポリペプチド、またはその断片、バリアント、もしくは誘導体は、その天然環境中にないポリペプチドが意図される。特定の精製レベルは要求されない。例えば、単離されたポリペプチドは、その本来の環境または天然環境から取り出され得る。宿主細胞中で発現された組み換えにより産生されたポリペプチド及びタンパク質は、本明細書において開示される時、単離されており、任意の好適な技法によって分離、分画、または部分的もしくは実質的に精製された、自然のポリペプチドまたは組み換えポリペプチドであるとみなされる。
本明細書において使用される時、「天然に存在しないポリペプチド」という用語またはその任意の文法的な変形は、「天然に存在する」ポリペプチドである形態、あるいは「天然に存在する」と裁判官または行政機関もしくは裁判機関によって決定または解釈され得るポリペプチドの形態を明示的に除外し、但しこのような形態のみを除外する、条件付き定義である。
本明細書において開示される他のポリペプチドは、前述のポリペプチドの断片、誘導体、類似体、またはバリアント、及びそれらの任意の組み合わせである。「断片」、「バリアント」、「誘導体」、及び「類似体」という用語は、本明細書において開示される時、対応するネイティブの抗体またはポリペプチドの特性のうちの少なくともいくつか（例えば抗原へ特異的に結合すること）を保持する、任意のポリペプチドを包含する。ポリペプチドの断片としては、例えばタンパク質分解断片、そして欠失断片に加えて、本明細書の他の箇所で検討される特異的抗体断片が挙げられる。例えばポリペプチドのバリアントとしては、上で記載される断片、及びアミノ酸の置換、欠失、または挿入に起因して変更されたアミノ酸配列を備えたポリペプチドが挙げられる。ある特定の実施形態において、バリアントは、天然に存在しないものであり得る。天然に存在しないバリアントは、当技術分野で公知の変異誘発技法を使用して産生され得る。バリアントポリペプチドは、保存的または非保存的なアミノ酸の置換、欠失、または付加を含み得る。誘導体は、元のポリペプチド上で見出されない追加の特色を示すように変更されたポリペプチドである。例としては、融合タンパク質が挙げられる。バリアントポリペプチドは、本明細書において「ポリペプチド類似体」として言及され得る。本明細書において使用される時、ポリペプチドの「誘導体」は、官能性側基の反応によって化学的に誘導体化された１つまたは複数のアミノ酸を有する対象ポリペプチドも指し得る。２０の標準アミノ酸の１つまたは複数の誘導体を含有するペプチドも、「誘導体」として包含される。例えば、４－ヒドロキシプロリンはプロリンを置換することができ、５－ヒドロキシリシンはリジンを置換することができ；３－メチルヒスチジンはヒスチジンを置換することができる。ホモセリンはセリンを置換することができる。オルニチンはリジンを置換することができる。
「保存的アミノ酸置換」とは、類似する側鎖を有する別のアミノ酸により１つのアミノ酸が置き換えられることである。類似する側鎖を有するアミノ酸のファミリーは、当技術分野において定義され、当該類似する側鎖としては、塩基性側鎖（例えばリジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えばアスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電性極性側鎖（例えばアスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、チロシン、システイン）、非極性側鎖（例えばグリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）、β分岐側鎖（例えばスレオニン、バリン、イソロイシン）、及び芳香族側鎖（例えばチロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）が挙げられる。例えば、チロシンをフェニルアラニンで置換することは、保存的置換である。ある特定の実施形態において、本開示のポリペプチド及び抗体の配列中の保存的置換は、アミノ酸配列を含有するポリペプチドまたは抗体が、抗原（ポリペプチドまたは抗体が結合する）へ、結合することを無効にしない。抗原結合を消失させないヌクレオチド及びアミノ酸の保存的置換を同定する方法は、当技術分野において周知である（例えばＢｒｕｍｍｅｌｌ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．３２：１１８０－１ １８７（１９９３）、Ｋｏｂａｙａｓｈｉ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．１２（１０）：８７９－８８４（１９９９）、及びＢｕｒｋｓ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９４：．４１２－４１７（１９９７）を参照）。
「ポリヌクレオチド」という用語は、単一の核酸そして複数の核酸を網羅するように意図され、単離された核酸分子またはコンストラクト（例えばメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、ｃＤＮＡ、またはプラスミドＤＮＡ（ｐＤＮＡ））を指す。ポリヌクレオチドは、従来のホスホジエステル結合または従来のものではない結合（例えばペプチド核酸（ＰＮＡ）中で見出されるもの等のアミド結合）を含み得る。「核酸」または「核酸配列」という用語は、ポリヌクレオチド中に存在する任意の１つまたは複数の核酸セグメント（例えばＤＮＡまたはＲＮＡ断片）を指す。
「単離された」核酸またはポリヌクレオチドは、その自然の環境から分離された核酸またはポリヌクレオチドの任意の形態が意図される。例えば、ゲル精製されたポリヌクレオチド、またはベクター中に含有されるポリペプチドをコードする組み換えポリヌクレオチドは、「単離された」とみなされるであろう。また、クローニングのための制限部位を有するように操作されたポリヌクレオチドセグメント（例えばＰＣＲ産物）は、「単離された」とみなされる。単離されたポリヌクレオチドのさらなる例としては、異種宿主細胞中で維持された組み換えポリヌクレオチド、または非自然溶液（バッファーまたは塩類溶液等）中の精製された（部分的または実質的に）ポリヌクレオチドが挙げられる。単離されたＲＮＡ分子としては、その転写物が天然で見出されるものではない、ポリヌクレオチドのインビボまたはインビトロのＲＮＡ転写物が挙げられる。単離されたポリヌクレオチドまたは核酸としては、合成により産生されたかかる分子がさらに挙げられる。加えて、ポリヌクレオチドまたは核酸は、調節エレメント（プロモーター、リボソーム結合部位、または転写ターミネーター等）であり得るか、またはこれらを含み得る。
本明細書において使用される時、「天然に存在しないポリヌクレオチド」という用語またはその任意の文法的な変化形は、「天然に存在する」核酸またはポリヌクレオチドである形態、あるいは「天然に存在する」と裁判官または行政機関もしくは裁判機関によって決定または解釈され得る核酸またはポリヌクレオチドの形態を明示的に除外し、但しこのような形態のみを除外する、条件付き定義である。
本明細書において使用される時、「コード領域」は、アミノ酸へと翻訳されるコドンからなる核酸の部分である。「終止コドン」（ＴＡＧ、ＴＧＡ、またはＴＡＡ）は、アミノ酸へと翻訳されないが、コード領域の一部分とみなすことができる。しかし任意の隣接配列（例えばプロモーター、リボソーム結合部位、転写ターミネーター、イントロン、及び同種のもの）は、コード領域の一部分ではない。２つ以上のコード領域は、単一ポリヌクレオチドコンストラクト（例えば単一ベクター上）、または分離したポリヌクレオチドコンストラクト（例えば分離した（異なる）ベクター上）中に存在し得る。さらに、任意のベクターは、単一のコード領域を含有することができるか、または２つ以上のコード領域を含むことができ、例えば単一ベクターは、免疫グロブリン重鎖可変領域及び免疫グロブリン軽鎖可変領域を別々にコードし得る。加えて、ベクター、ポリヌクレオチド、または核酸は別のコード領域へ融合されるか、または融合されずに、異種コード領域を含み得る。異種コード領域としては、特殊化されたエレメントまたはモチーフ（分泌シグナルペプチドまたは異種の機能的ドメイン等）をコードするものが、限定されずに挙げられる。
ある特定の実施形態において、ポリヌクレオチドまたは核酸は、ＤＮＡである。ＤＮＡの場合、ポリペプチドをコードする核酸を含むポリヌクレオチドは通常、１つまたは複数のコード領域と作動可能に会合された、プロモーター及び／または他の転写もしくは翻訳の制御エレメントを含み得る。作動可能な会合とは、遺伝子産物（例えばポリペプチド）についてのコード領域が、調節配列（複数可）の影響または制御下で遺伝子産物を発現させるような様式で、１つまたは複数の調節配列と会合された場合である。２つのＤＮＡ断片（ポリペプチドコード領域、及びそれと会合されたプロモーター等）は、プロモーター機能の誘導が、所望される遺伝子産物をコードするｍＲＮＡの転写をもたらすならば、且つ、２つのＤＮＡ断片の間のリンケージの性質が、発現調節配列が遺伝子産物の発現を指令する能力を妨害しないか、またはＤＮＡ鋳型が転写される能力を妨害しないならば、「作動可能に会合されている」。したがって、プロモーターがその核酸の転写を成し遂げることが可能なならば、プロモーター領域はポリペプチドをコードする核酸と作動可能に会合されているだろう。プロモーターは、所定の細胞におけるＤＮＡの実質的な転写を指令する細胞特異的なプロモーターであり得る。プロモーター以外の他の転写制御エレメント（例えばエンハンサー、オペレーター、リプレッサー、及び転写終結シグナル）が、細胞特異的転写を指令するようにポリヌクレオチドと作動可能に会合され得る。
様々な転写制御領域が当業者に公知である。これらの転写制御領域としては、サイトメガロウイルス（イントロン－Ａと併用した最初期プロモーター）、シミアンウイルス４０（初期プロモーター）、及びレトロウイルス（ラウス肉腫ウイルス等）からのプロモーター及びエンハンサーのセグメント等であるがこれらに限定されない、脊椎動物細胞中で機能する転写制御領域が、限定されずに挙げられる。他の転写制御領域としては、脊椎動物遺伝子に由来するもの（アクチン、熱ショックタンパク質、ウシ成長ホルモン、及びウサギβ－グロビン等）、そして真核生物細胞中で遺伝子発現を制御することが可能な他の配列が挙げられる。追加の好適な転写制御領域としては、組織特異的プロモーター及びエンハンサー、そしてリンホカイン誘導可能プロモーター（例えばインターフェロンまたはインターロイキンによって誘導可能プロモーター）が挙げられる。
同様に、様々な翻訳制御エレメントが当業者に公知である。これらの翻訳制御エレメントとしては、リボソーム結合部位、翻訳開始コドン及び翻訳終結コドン、ならびにピコルナウイルスに由来するエレメント（特に内部リボソーム進入部位またはＩＲＥＳ、ＣＩＴＥ配列とも称される）が挙げられるがこれらに限定されない。
他の実施形態において、ポリヌクレオチドは、ＲＮＡ、例えばメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、トランスファーＲＮＡ、またはリボソームＲＮＡの形態であり得る。
ポリヌクレオチド及び核酸のコード領域は、本明細書において開示されるポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドの分泌物を指令する、分泌ペプチドまたはシグナルペプチドをコードする追加のコード領域と会合され得る。シグナル仮説によれば、哺乳動物細胞によって分泌されるタンパク質は、シグナルペプチドまたは分泌リーダー配列を有し、それは、一旦粗面小胞体を横切って成長するタンパク鎖の搬出が開始されたならば、成熟タンパク質から切断される。当業者は、脊椎動物細胞によって分泌されるポリペプチドが、ポリペプチドのＮ末端へ融合されたシグナルペプチドを有し得、当該シグナルペプチドが完成したペプチドまたは「全長」ポリペプチドから切断されて、ポリペプチドの分泌形態または「成熟」形態を産生することを承知している。ある特定の実施形態において、自然のシグナルペプチド（例えば免疫グロブリンの重鎖または軽鎖のシグナルペプチド）または配列と作動可能に会合されているポリペプチドの分泌を指令する能力を保持するその配列の機能的誘導体が使用される。代替的に、異種の哺乳動物シグナルペプチドまたはその機能的誘導体が使用され得る。例えば、野生型リーダー配列が、ヒト組織プラスミノーゲン活性化因子（ＴＰＡ）またはマウスβ－グルクロニダーゼのリーダー配列により置換され得る。
本明細書において使用される時、「結合分子」という用語は、その最も幅広い意味で、結合標的（例えばエピトープまたは抗原決定基）へ特異的に結合する分子を指す。本明細書においてさらに記載されるように、結合分子は、本明細書において記載される１つまたは複数の「抗原結合ドメイン」を含み得る。結合分子の非限定的例は、抗原特異的結合性を保持する抗体もしくは抗体様分子、または抗原特異的結合性を保持する本明細書に詳細に記載される抗体様分子もしくはその断片である。ある特定の実施形態において、「結合分子」は、本明細書に詳細に記載される抗体または抗体様分子を含む。
本明細書において使用される時、「結合ドメイン」または「抗原結合ドメイン」（互換的に使用され得る）という用語は、結合標的（例えばエピトープ）へ特異的に結合するのに必要且つ十分な結合分子（例えば抗体または抗体様分子）の領域または断片を指す。例えば、「Ｆｖ」（例えば２つの別個のポリペプチドサブユニットまたは一本鎖のいずれかとしての、抗体の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域）は、「結合ドメイン」であるとみなされる。他の抗原結合ドメインとしては、ラクダ科の動物種に由来する抗体の重鎖可変領域（ＶＨＨ）、または足場（例えばフィブロネクチン足場）中で発現される６つの免疫グロブリン相補性決定領域（ＣＤＲ）が、限定されずに挙げられる。本明細書において記載される「結合分子」、例えば「抗体」または抗体様分子は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、または場合によってはそれ以上の「抗原結合ドメイン」を含み得る。本明細書において使用される時、「結合単位会合抗原結合ドメイン」は、抗体重鎖及び／または抗体軽鎖の一部分である抗原結合ドメインを指す。「Ｊ鎖会合抗原結合ドメイン」という用語は、本明細書において記載される修飾Ｊ鎖と会合された抗原結合ドメイン（例えば野生型ヒトＪ鎖、またはその機能的断片もしくはバリアントへ融合されたｓｃＦｖ）を指す。
「抗体」及び「免疫グロブリン」という用語は、本明細書において互換的に使用され得る。本開示において提供される抗体は、抗原へ特異的に結合するものでなければならず、つまり、それは、少なくとも重鎖の可変ドメイン（ラクダ科の動物種のための）または少なくとも重鎖及び軽鎖の可変ドメインを含む。脊椎動物系における基本的な免疫グロブリン構造は、比較的良好に理解されている。例えばＨａｒｌｏｗ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，２ｎｄ ｅｄ．１９８８）を参照されたい。別段明記されない限り、「抗体」という用語は、抗体の小さな抗原結合断片からフルサイズの抗体（例えば、２つのＩｇＧ重鎖またはその断片と２つの完全な軽鎖とを含むＩｇＧ抗体、２、４もしくは８個の重鎖またはその多量体化断片と２、４もしくは８個の軽鎖とを含み、Ｊ鎖及び／または分泌成分を任意選択で含むＩｇＡ抗体、あるいは１０または１２個の完全な重鎖と１０または１２個の完全な軽鎖とを含み、Ｊ鎖またはその機能的断片もしくはバリアントを任意選択で含むＩｇＭ抗体）までの範囲のものをすべて網羅する。
「免疫グロブリン」という用語は、生化学的に区別され得る様々な幅広いクラスのポリペプチドを含む。当業者は、重鎖が、例えば、ガンマ、ミュー、アルファ、デルタ、またはイプシロン（γ、μ、α、δ、ε）として分類され、それらの中でいくつかのサブクラス（例えばγ１～γ４またはα１～α２）が有ることを認識するだろう。この鎖の性質が、抗体の「アイソタイプ」をそれぞれＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、またはＩｇＥとして決定する。免疫グロブリンサブクラス（サブタイプ）、例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２などは、十分に特徴づけられており、機能的な特殊化を付与することが公知である。これらの免疫グロブリンの各々の修飾バージョンは、本開示を考慮して当業者に容易に認識可能であり、したがって本開示の範囲内である。
軽鎖は、カッパまたはラムダ（κ、λ）のいずれかとして分類される。各々の重鎖クラスは、κ軽鎖またはλ軽鎖のいずれかと会合し得る。概して、軽鎖及び重鎖はジスルフィド結合によって互いに共有結合され、免疫グロブリンが、例えばハイブリドーマ、Ｂ細胞、または遺伝子操作宿主細胞によって発現される場合に、２つの重鎖の「テール」部分は、共有結合性のジスルフィド結合または非共有結合性の連結によって互いに結合される。重鎖中で、アミノ酸配列は、Ｙの立体配置の分岐した端部のＮ末端から、各々の鎖の下部のＣ末端まで延びる。ある特定の抗体（例えばＩｇＧ抗体）の基本的な構造は、ジスルフィド結合を経由して共有結合で接続されて「Ｙ」の構造を形成する、２つの重鎖サブユニット及び２つの軽鎖サブユニットを含み、本明細書において「Ｈ２Ｌ２」構造または「結合単位」とも称される。
「結合単位」という用語は、本明細書において、標準的な「Ｈ２Ｌ２」免疫グロブリン構造（例えば２つの重鎖またはその断片及び２つの軽鎖またはその断片）に対応する結合分子の部分（例えば抗体または抗体様分子）を指すように使用される。ある特定の実施形態において、結合単位は、例えばラクダ科の動物抗体において、２つの重鎖に対応し得る。ある特定の実施形態において、例えば結合分子が二価のＩｇＧ抗体または抗体様分子である場合に、「結合分子」及び「結合単位」という用語は等価である。他の実施形態において、例えば結合分子が多量体（例えば二量体もしくは四量体のＩｇＡ抗体もしくはＩｇＡ様抗体、五量体のＩｇＭ抗体もしくはＩｇＭ様抗体、または六量体のＩｇＭ抗体もしくはＩｇＭ様抗体）である場合に、結合分子は２つ以上の「結合単位」を含む。ＩｇＡ二量体または四量体の場合には４つのうちの２つ、ＩｇＭの五量体または六量体の場合にはそれぞれ５または６である。結合単位は全長抗体の重鎖及び軽鎖を含む必要がないが、典型的には二価であり、すなわち上で定義されるような、２つの「抗原結合ドメイン」を含むだろう。本明細書において使用される時、本開示において提供されるある特定の結合分子は「二量体」または「四量体」であり、ＩｇＡ重鎖定常領域またはその多量体化断片を含む、２つまたは４つの二価結合単位を含む。本開示において提供されるある特定の結合分子は「五量体」または「六量体」であり、ＩｇＭ重鎖定常領域またはその多量体化断片を含む、５または６の二価結合単位を含む。２つ以上の（例えば２、４、５、または６の）結合単位を含む結合分子（例えば抗体または抗体様分子）は、本明細書において、「多量体である」と称される。
「Ｊ鎖」という用語は、本明細書において使用される時、任意の動物種の五量体ＩｇＭまたは二量体もしくは四量体ＩｇＡ抗体と会合したＪ鎖、任意のそれらの機能的断片、それらの誘導体、及び／またはそれらのバリアントの抗体を指し、アミノ酸配列が配列番号７として提示される成熟ヒトＪ鎖が挙げられる。様々なＪ鎖バリアント及び修飾Ｊ鎖誘導体が、本明細書において開示される。当業者は、「機能的断片」または「機能的バリアント」は、ＩｇＭ重鎖定常領域と会合して五量体ＩｇＭ抗体を形成し得る（または代替的にＩｇＡ重鎖定常領域と会合して二量体または四量体ＩｇＡ抗体を形成し得る）、それらの断片及びバリアントを包含することを認識するだろう。
「修飾Ｊ鎖」という用語は、本明細書において、異種部分（例えば異種ポリペプチド、例えば自然配列の中へ導入される外来性結合ドメイン）を含む、自然配列Ｊ鎖ポリペプチドの誘導体を指すように使用される。導入は、異種ポリペプチドもしくは他の部分の直接的もしくは間接的な融合、またはペプチドもしくは化学的リンカーを介する付加を包含する、任意の手段によって達成され得る。「修飾ヒトＪ鎖」という用語は、異種部分（例えば異種ポリペプチド、例えば外来性結合ドメイン）の導入によって修飾された、配列番号７のアミノ酸配列を含むヒトＪ鎖、またはその機能的断片もしくは機能的そのバリアントを、限定されずに網羅する。ある特定の実施形態において、異種部分は、ＩｇＭの五量体への、またはＩｇＡの二量体もしくは四量体への効率的な重合、及びかかるポリマーの標的への結合を妨害しない。例示的な修飾Ｊ鎖は、例えば米国特許第９，９５１，１３４号、同１０，９７５，１４７号、同１０，４００，０３８号及び同１０，６１８，９７８号、ならびに米国特許出願公開第ＵＳ－２０１９－０１８５５７０号（それらの各々は、参照することによってそれらの全体が本明細書に援用される）中に見出され得る。
本明細書において使用される時、「ＩｇＭ由来結合分子」、「ＩｇＭ様抗体」、「ＩｇＭ様結合単位」、または「ＩｇＭ様重鎖定常領域」という用語は、抗原へ結合する及び多量体（すなわち六量体）を形成する能力、またはＪ鎖と会合して五量体を形成する能力を付与するのに必要なＩｇＭ重鎖の構造的部分を依然として保持する、バリアント抗体由来の、結合分子、抗体、結合単位、または重鎖定常領域を指す。ＩｇＭ様抗体またはＩｇＭ由来結合分子は、典型的には、ＩｇＭ定常領域及びその抗原結合ドメインまたはサブユニットの少なくともＣμ４及びμテールピース（μｔｐ）ドメインを含むが、同じ種または異なる種からの他の抗体アイソタイプ（例えばＩｇＧ）からの重鎖定常領域ドメインを含み得る。ＩｇＭ様抗体またはＩｇＭ由来結合分子は同様に、ＩｇＭ様抗体が抗原に結合することならびに六量体及び／または五量体を形成することが可能である限り、１つまたは複数の定常領域が欠失される抗体断片であり得る。したがって、ＩｇＭ様抗体またはＩｇＭ由来結合分子は、例えばハイブリッドＩｇＭ／ＩｇＧ抗体であり得るか、またはＩｇＭ抗体の「多量体化断片」であり得る。
本明細書において使用される時、「ＩｇＡ由来結合分子」、「ＩｇＡ様抗体」、「ＩｇＡ様結合単位」、または「ＩｇＡ様重鎖定常領域」という用語は、Ｊ鎖と会合して抗原に結合する及び多量体（すなわち二量体または四量体）を形成する能力を付与するのに必要なＩｇＡ重鎖の構造的部分を依然として保持する、バリアント抗体由来の、結合分子、抗体、結合単位、または重鎖定常領域を指す。ＩｇＡ様抗体またはＩｇＡ由来結合分子は、典型的には、ＩｇＡ定常領域及びその抗原結合ドメインまたはサブユニットの少なくともＣα３及びαテールピース（αｔｐ）ドメインを含むが、同じ種または異なる種からの他の抗体アイソタイプ（例えばＩｇＧ）からの重鎖定常領域ドメインを含み得る。ＩｇＡ様抗体またはＩｇＡ由来結合分子は同様に、ＩｇＡ様抗体がＪ鎖と会合して抗原に結合することならびに二量体を形成することが可能である限り、１つまたは複数の定常領域が欠失される抗体断片であり得る。したがって、ＩｇＡ様抗体またはＩｇＡ由来結合分子は、例えばハイブリッドＩｇＡ／ＩｇＧ抗体であり得るか、またはＩｇＡ抗体の「多量体化断片」であり得る。
「価数」、「一価」、「二価」、「多価」という用語、及び文法上の同等語は、所与の結合分子（例えば抗体または抗体様分子）または所与の結合単位中の抗原結合ドメインの数を指す。それゆえ、所与の結合分子（例えばＩｇＭ抗体、ＩｇＭ様抗体、それらの多量体化断片）を参照した「二価」、「四価」、及び「六価」という用語は、それぞれ２つの抗原結合ドメイン、４つの抗原結合ドメイン、及び６つの抗原結合ドメインの存在を表わす。各々の結合単位が二価である典型的なＩｇＭ抗体、またはＩｇＭ様抗体もしくはＩｇＭ由来結合分子は、１０または１２の価数を有し得る。二価または多価の結合分子（例えば抗体または抗体様分子）は、単一特異性であり得る（すなわち抗原結合ドメインのすべては同じである）か、または二重特異性または多重特異性であり得る（例えば２つ以上の抗原結合ドメインが異なる場合に、例えば同じ抗原上の異なるエピトープに結合するか、または完全に異なる抗原に結合する）。
「エピトープ」という用語は、抗体または抗体様分子の抗原結合ドメインへの特異的結合ができる任意の分子的決定基を含む。ある特定の実施形態において、エピトープは、分子の化学的活性表面基群（アミノ酸、糖側鎖、ホスホリル、またはスルホニル等）を含むことができ、ある特定の実施形態において、三次元構造の特徴及び／または特異的電荷の特徴を有し得る。エピトープは、抗体の抗原結合ドメインによって結合される標的の領域である。
「標的」という用語は、結合分子（例えば抗体または抗体様分子）によって結合され得る物質を包含するように、最も幅広い意味で使用される。標的は、例えばポリペプチド、核酸、炭水化物、脂質、または他の分子であり得る。さらに、「標的」は、結合分子（例えば抗体または抗体様分子）によって結合され得るエピトープを含む、例えば細胞、器官、または生物体であり得る。
抗体または抗体様分子の軽鎖及び重鎖の両方は、構造的相同性及び機能的相同性の領域へと分類される。「定常」及び「可変」という用語は、機能的に使用されるが、分子の特定の構造を指す。軽鎖（ＶＬ）及び重鎖（ＶＨ）の両方の可変領域は、抗原認識及び特異性を決定する。これとは逆に、軽鎖（ＣＬ）及び重鎖の定常ドメイン（例えばＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、またはＣＨ４）は、生物学的特性（多量体化する能力、分泌、経胎盤移動性、Ｆｃ受容体結合、補体結合等）を付与する。慣例により、定常領域ドメインのナンバリングは、定常領域ドメインが抗体の抗原結合領域またはアミノ末端からより遠位になるにつれて増加する。Ｎ末端部分は可変領域であり、Ｃ末端部分は定常領域であり、ＣＨ３（またはＩｇＭの場合はＣＨ４）及びＣＬドメインは、実際にそれぞれ重鎖及び軽鎖のカルボキシ末端を含む。
「全長ＩｇＭ抗体重鎖」は、Ｎ末端からＣ末端への方向で、抗体重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、抗体重鎖定常ドメイン１（ＣＭ１またはＣμ１）、抗体重鎖定常ドメイン２（ＣＭ２またはＣμ２）、抗体重鎖定常ドメイン３（ＣＭ３またはＣμ３）、及びテールピースを含み得る抗体重鎖定常ドメイン４（ＣＭ４またはＣμ４）を含む、ポリペプチドである。
上記のように、可変領域（複数可）は、抗体または抗体様分子の抗原結合ドメインを形成して、それが抗原上のエピトープに対して選択的に認識する及び特異的に結合することを可能にする。すなわち、結合分子（例えば抗体または抗体様分子）のＶＬドメイン及びＶＨドメイン、または相補性決定領域（ＣＤＲ）の抗原結合性サブセットが組み合わされて抗原結合ドメインを形成する。より具体的には、抗原結合ドメインは、ＶＨ鎖及びＶＬ鎖の各々上の３つのＣＤＲによって定義され得る。ある特定の抗体または抗体様分子は、より大きな構造を形成する。例えば、ＩｇＡ重鎖は、ジスルフィド結合により共有結合で接続された２つまたは４つのＨ２Ｌ２結合単位及びＪ鎖を含む分子を形成することができ、当該分子は分泌成分とさらに会合することができ、ＩｇＭ重鎖は、ジスルフィド結合により共有結合で接続された５または６のＨ２Ｌ２結合単位及び任意選択でＪ鎖を含む、五量体または六量体の分子を形成することができる。
抗体抗原結合ドメイン中に存在する６つの「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」は、短い連続していないアミノ酸の配列であり、抗体が水性環境中でその三次元立体配置をとる時に抗原結合ドメインを形成するように特異的に配置される。抗原結合ドメイン中の残りのアミノ酸は「フレームワーク」領域と称され、より少ない分子間の変動を示す。フレームワーク領域は主としてβ－シート立体配座を採用し、ＣＤＲは、β－シート構造を接続するループを形成し、いくつかの事例において当該ループはβ－シート構造の一部分を形成する。したがって、フレームワーク領域は、鎖間の非共有結合性相互作用によってＣＤＲを正しい方向で配置させることを提供する足場を形成するように作用する。配置されたＣＤＲによって形成された抗原結合ドメインは、標的抗原上のエピトープに相補的な表面を画成する。この相補的な表面は、抗体がその同族のエピトープの非共有結合的に結合することを促進させる。ＣＤＲ及びフレームワーク領域をそれぞれ構成するアミノ酸は、様々な異なる手法で定義されているので、任意の与えられた重鎖または軽鎖の可変領域について当業者によって容易に特定され得る（“Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，”Ｋａｂａｔ，Ｅ．，ｅｔ ａｌ．，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，（１９８３）；及びＣｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１９６：９０１－９１７（１９８７）を参照、それらは、参照することによってそれらの全体が本明細書に援用される）。
当該技術分野内で使用される及び／または許容される用語の定義が２つ以上のある事例において、本明細書において使用される用語の定義は、相反することが明示的に述べられない限り、かかる意味をすべて含むように意図される。具体的な例は、重鎖ポリペプチド及び軽鎖ポリペプチドの両方の可変領域内で見出される連続していない抗原結合部位を記載する、「相補性決定領域」（「ＣＤＲ」）という用語の使用である。これらの特定の領域は、例えばＫａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐｔ．ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，“Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ”（１９８３）及びＣｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７（１９８７）（それらは参照することによって本明細書に援用される）によって記載された。Ｋａｂａｔ及びＣｈｏｔｈｉａの定義は、互いに比較した場合に、アミノ酸のオーバーラップまたはサブセットを含む。それにもかかわらず、抗体またはそのバリアントのＣＤＲを指す、いずれかの定義（または当業者に公知の他の定義）の適用も、別段の指示のない限り、本明細書において定義及び使用される用語の範囲内であることが意図される。上で引用される参照の各々によって定義されるＣＤＲを網羅する適切なアミノ酸が、比較として、表１中で以下に示される。特定のＣＤＲを網羅する正確なアミノ酸番号は、ＣＤＲの配列及びサイズに依存して変動するだろう。当業者は、抗体の可変領域アミノ酸配列を考慮して、どのアミノ酸が特定のＣＤＲを構成するかをルーチンに決定することができる。
抗体可変ドメインは、ＣＤＲを含む可変領域セグメントを特定するために、例えばＩＭＧＴ ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍ（ｉｍｇｔ＿ｄｏｔ＿ｃｉｎｅｓ＿ｄｏｔ＿ｆｒ／）（ＩＭＧＴ（登録商標）／Ｖ－Ｑｕｅｓｔ）を使用しても分析され得る（例えばＢｒｏｃｈｅｔ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，３６：Ｗ５０３－５０８，２００８を参照）。
Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．は、任意の抗体へ適用可能な可変領域及び定常領域の配列についてのナンバリングシステムも定義した。当業者は、配列それ自体を超えて任意の実験データに頼ること無しに、「Ｋａｂａｔのナンバリング」のこのシステムを、任意の可変領域配列に明確に割り当てることができる。本明細書において使用される時、「Ｋａｂａｔのナンバリング」は、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐｔ．ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，“Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ”（１９８３）によって示されるナンバリングシステムを指す。しかしながらＫａｂａｔのナンバリングシステムの使用が明示的に指示されない限り、本開示におけるすべてのアミノ酸配列について、通しのナンバリングが使用される。
ヒトＩｇＭ定常ドメインについてのＫａｂａｔのナンバリングシステムは、Ｋａｂａｔ，ｅｔ ａｌ．“Ｔａｂｕｌａｔｉｏｎ ａｎｄ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ ａｎｄ ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄ Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｅｃｕｒｓｏｒｓ，Ｖ－Ｒｅｇｉｏｎｓ，Ｃ－Ｒｅｇｉｏｎｓ，Ｊ－Ｃｈａｉｎ，Ｔ－Ｃｅｌｌ Ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ｆｏｒ Ａｎｔｉｇｅｎ，Ｔ－Ｃｅｌｌ Ｓｕｒｆａｃｅ Ａｎｔｉｇｅｎｓ，β－２ Ｍｉｃｒｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓ，Ｍａｊｏｒ Ｈｉｓｔｏｃｏｍｐａｔｉｂｉｌｉｔｙ Ａｎｔｉｇｅｎｓ，Ｔｈｙ－１，Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ，Ｃ－Ｒｅａｃｔｉｖｅ Ｐｒｏｔｅｉｎ，Ｔｈｙｍｏｐｏｉｅｔｉｎ，Ｉｎｔｅｇｒｉｎｓ，Ｐｏｓｔ－ｇａｍｍａ Ｇｌｏｂｕｌｉｎ，α－２ Ｍａｃｒｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓ，ａｎｄ Ｏｔｈｅｒ Ｒｅｌａｔｅｄ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，”Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐｔ．ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ（１９９１）中で見出され得る。ＩｇＭ定常領域は、逐次的に（すなわちアミノ酸＃１は定常領域の第１のアミノ酸で開始する）、またはＫａｂａｔ付番スキームの使用によって、付番され得る。ヒトＩｇＭ定常領域の２つの対立遺伝子の、逐次的付番（配列番号１（対立遺伝子ＩＧＨＭ＊０３）及び配列番号２（対立遺伝子ＩＧＨＭ＊０４）として本明細書において提示される）及びＫａｂａｔシステムによる付番の比較は、以下に記載される。下線が引かれたアミノ酸残基は、Ｋａｂａｔシステムにおいて考慮されない（以下で二重下線が引かれた
は、セリン（Ｓ）（配列番号１）またはグリシン（Ｇ）（配列番号２）であり得る）。
結合分子（例えば抗体、抗体様分子、抗原結合断片、それらのバリアントもしくは誘導体、及び／またはそれらの多量体化断片）としては、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、またはキメラ抗体、一本鎖抗体、エピトープ結合断片（例えばＦａｂ、Ｆａｂ’、及びＦ（ａｂ’）２、Ｆｄ、Ｆｖｓ、一本鎖Ｆｖｓ（ｓｃＦｖ）、一本鎖抗体、ジスルフィドで連結されたＦｖｓ（ｓｄＦｖ）、ＶＬまたはＶＨのドメインを含む断片、Ｆａｂ発現ライブラリーによって産生された断片）が挙げられるがこれらに限定されない。ｓｃＦｖ分子は、例えば特許第５，８９２，０１９号中で記載される。
「特異的に結合する」は、概して、結合分子（例えば抗体または抗体様分子）が、その抗原結合ドメインを介してエピトープへ結合し、結合が、抗原結合ドメインとエピトープとの間の何らかの相補性を引き起こすことが意味される。この定義によれば、結合分子が、ランダムで無関係なエピトープへ結合するよりも容易に、当該結合分子の抗原結合ドメインを介してエピトープへ結合する場合に、結合分子（例えば抗体または抗体様分子）は、そのエピトープへ「特異的に結合する」と表現される。「特異性」という用語は、本明細書において、ある特定の結合分子がある特定のエピトープへ結合する相対的親和性を定性化するのに使用される。例えば、結合分子「Ａ」は、結合分子「Ｂ」よりも所与のエピトープについて高い特異性を有すると見なされ得るか、または、結合分子「Ａ」は、関連するエピトープ「Ｄ」よりも高い特異性でエピトープ「Ｃ」へ結合すると表現され得る。
結合分子（例えば本明細書において開示される抗体または抗体様分子）は、５×１０－２秒－１、１０－２秒－１、５×１０－３秒－１、１０－３秒－１、５×１０－４秒－１、１０－４秒－１、５×１０－５秒－１、１０－５秒－１、５×１０－６秒－１、１０－６秒－１、５×１０－７秒－１、または１０－７秒－１以下のオフレート（ｋ（ｏｆｆ））で、標的抗原と結合すると表現され得る。
結合分子（例えば本明細書において開示される抗体または抗体様分子）は、１０３Ｍ－１秒－１、５×１０３Ｍ－１秒－１、１０４Ｍ－１秒－１、５×１０４Ｍ－１秒－１、１０５Ｍ－１秒－１、５×１０５Ｍ－１秒－１、１０６Ｍ－１秒－１、５×１０６Ｍ－１秒－１、または１０７Ｍ－１秒－１以上のオンレート（ｋ（ｏｎ））で、標的抗原と結合すると表現され得る。
結合分子（例えば抗体または抗体様分子）が、参照抗体または抗原結合断片のエピトープへの結合をある程度まで遮断する程度に、そのエピトープへ優先的に結合するならば、参照抗体または抗体様分子の所与のエピトープへの結合を競合的に阻害すると表現される。競合的阻害は、当技術分野において公知の任意の方法（例えば競合ＥＬＩＳＡアッセイまたはＯＣＴＥＴアッセイ）によっても決定され得る。結合分子は、参照抗体または抗体様分子の所与のエピトープへの結合を、少なくとも９０％、少なくとも８０％、少なくとも７０％、少なくとも６０％、または少なくとも５０％競合的に阻害すると表現され得る。
本明細書において使用される時、「親和性」という用語は、１つまたは複数の抗原結合ドメイン（例えば抗体または抗体様分子の）と個別のエピトープの結合の強度の尺度を指す。例えばＨａｒｌｏｗ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，２ｎｄ ｅｄ．１９８８）の２７～２８ページを参照されたい。本明細書において使用される時、「アビディティー」という用語は、抗原結合ドメインの集団と抗原との間の複合体の全体的な安定性を指す。例えばＨａｒｌｏｗの２９～３４ページを参照されたい。アビディティーは、特異的エピトープと集団中の個別の抗原結合ドメインの親和性、ならびに免疫グロブリン及び抗原の価数の両方に関連する。例えば、二価モノクローナル抗体と高度に反復するエピトープ構造（ポリマー等）を備えた抗原との間の相互作用は、高いアビディティーの１つであるだろう。同様に、４、８、１０または１２の価数を有する多量体抗体と特異的エピトープの集団との相互作用は、高いアビディティーの１つであるだろう。二価モノクローナル抗体と細胞表面上に高密度で存在する受容体との間の相互作用も、高いアビディティーであるだろう。
結合分子（例えば本明細書において開示される抗体、またはその断片、バリアント、もしくは誘導体）は、それらの交差反応性に関しても記載または規定され得る。本明細書において使用される時、「交差反応性」という用語は、１つの抗原について特異的な結合分子（例えば抗体、またはその断片、バリアント、もしくは誘導体）が第２の抗原と反応する能力を指し、２つの異なる抗原性物質間の相関性の尺度である。したがって、結合分子が、結合分子の形成を誘導したエピトープ以外のエピトープへ結合するならば、交差反応性である。交差反応性エピトープは、概して誘導性エピトープと同じ相補的構造の特色の多くを含有し、いくつかの事例において、実際にオリジナルのものよりも良好に適合し得る。
結合分子（例えば抗体、またはその断片、バリアント、もしくは誘導体）は、それらの抗原への結合親和性に関しても記載または規定され得る。例えば、結合分子は、５×１０－２Ｍ、１０－２Ｍ、５×１０－３Ｍ、１０－３Ｍ、５×１０－４Ｍ、１０－４Ｍ、５×１０－５Ｍ、１０－５Ｍ、５×１０－６Ｍ、１０－６Ｍ、５×１０－７Ｍ、１０－７Ｍ、５×１０－８Ｍ、１０－８Ｍ、５×１０－９Ｍ、１０－９Ｍ、５×１０－１０Ｍ、１０－１０Ｍ、５×１０－１１Ｍ、１０－１１Ｍ、５×１０－１２Ｍ、１０－１２Ｍ、５×１０－１３Ｍ、１０－１３Ｍ、５×１０－１４Ｍ、１０－１４Ｍ、５×１０－１５Ｍ、または１０－１５Ｍ以下の解離定数またはＫＤで、抗原へ結合し得る。
単独で、あるいは以下、すなわちヒンジ領域、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、もしくはＣＨ４ドメイン、Ｊ鎖、または分泌成分うちの１つまたは複数と組み合わせて存在し得る、本明細書に提供される「結合分子または抗体の抗原結合断片」（一本鎖抗体または他の抗原結合ドメインを包含する）。また、ヒンジ領域、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、もしくはＣＨ４ドメイン、Ｊ鎖、または分泌成分のうちの１つもしくは複数と、抗原に結合するのに十分な可変領域（複数可）との任意の組み合わせを含み得る抗原結合断片も含まれる。結合分子（例えば抗体または抗体様分子）は、鳥類及び哺乳動物を包含する任意の動物起源からものであり得る。抗体は、例えばヒト、マウス、ロバ、ウサギ、ヤギ、モルモット、ラクダ、ラマ、ウマ、またはニワトリの抗体であり得る。別の実施形態において、可変領域は、軟骨魚類（ｃｏｎｄｒｉｃｔｈｏｉｄ）起源（例えばサメから）であり得る。本明細書において使用される時、「ヒト」抗体は、ヒト免疫グロブリンのアミノ酸配列を有する抗体を包含し、ヒト免疫グロブリンライブラリーから、または１つまたは複数のヒト免疫グロブリンについての遺伝子導入動物から単離された抗体を包含し、下で及び例えばＫｕｃｈｅｒｌａｐａｔｉ ｅｔ ａｌ．による米国特許第５，９３９，５９８号中で記載されるように、いくつかの実例において内在性免疫グロブリンを発現することができ、そして発現しないこともある。本開示の実施形態によれば、本明細書において提供されるＩｇＭ、またはＩｇＭ様抗体もしくはＩｇＭ由来結合分子は、ＩｇＭまたはＩｇＭ様抗体が多量体（例えば六量体または五量体）を形成することが可能な限り、抗体（例えばｓｃＦｖ）の抗原結合断片を包含し得る。
本明細書において使用される時、「重鎖サブユニット」という用語は、免疫グロブリン重鎖に由来するアミノ酸配列を含む。重鎖サブユニットを含む結合分子（例えば抗体または抗体様分子）は、ＶＨドメインと、ＣＨ１ドメイン、ヒンジ（例えば上部、中央、及び／または下部のヒンジ領域）ドメイン、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメイン、ＣＨ４ドメイン、μテールピース（μｔｐ）、またはそれらのバリアントもしくは断片のうちの１つもしくは複数とを含み得る。例えば、結合分子（例えば抗体、抗体様分子、またはそれらの断片、バリアント、もしくは誘導体）は、ＶＨドメインに加えて、１つまたは複数の抗体アイソタイプ及び／または種のＣＨ１ドメイン、ヒンジ、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメイン、ＣＨ４ドメイン、またはμテールピース（μｔｐ）の任意の組み合わせを限定されずに含み得る。ある特定の実施形態において、結合分子（例えば抗体、抗体様分子、またはそれらの断片、バリアント、もしくは誘導体）は、ＶＨドメインに加えて、ＣＨ１ドメイン、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメイン、ＣＨ４ドメイン、μテールピース（μｔｐ）ドメイン及びＪ鎖の１つもしくは複数（ＩｇＭの場合）、またはＣＨ１ドメイン、ヒンジ領域、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメイン、αテールピース（αｔｐ）ドメイン及びＪ鎖の１つもしくは複数（ＩｇＡの場合）を含み得る。さらに、本開示において提供される結合分子（例えば抗体または抗体様分子）は、ある特定の定常領域部分（例えば、ＣＨ１ドメイン、ヒンジ、ＣＨ２ドメインまたはＣＨ３ドメインのすべてまたは一部分）を欠如し得る。これらのドメイン（例えば重鎖サブユニット）は、それらは元の免疫グロブリン分子からアミノ酸配列が変動するように修飾され得る。本開示の実施形態によれば、本明細書において提供されるＩｇＭまたはＩｇＭ様抗体は、ＩｇＭまたはＩｇＭ様抗体が多量体（例えば六量体または五量体）を形成することを可能にするように、ＩｇＭ重鎖定常領域の十分な部分を含む（例えばＩｇＭ重鎖定常領域は、ＩｇＭ重鎖定常領域の「多量体化断片」を含む）。
本明細書において使用される時、「軽鎖サブユニット」という用語は、免疫グロブリン軽鎖に由来するアミノ酸配列を含む。軽鎖サブユニットは少なくともＶＬを含み、ＣＬ（例えばＣκまたはＣλ）ドメインをさらに含み得る。
結合分子（例えば抗体、抗体様分子、抗原結合断片、それらのバリアントもしくは誘導体、またはそれらの多量体化断片）は、それらが認識または特異的に結合する、抗原のエピトープ（複数可）または部分（複数可）に関して記載または規定され得る。抗体の抗原結合ドメインと特異的に相互作用する標的抗原の部分は、「エピトープ」または「抗原決定基」である。標的抗原は単一のエピトープまたは２つ以上のエピトープを含み、抗原のサイズ、立体配座、及びタイプに依存して、任意の数のエピトープを含み得る。
本明細書において使用される時、「ヒンジ領域」という用語は、ＩｇＧ、ＩｇＡ、及びＩｇＤ重鎖中でＣＨ１ドメインをＣＨ２ドメインへ繋ぐ重鎖分子の部分を含む。このヒンジ領域は、およそ２５のアミノ酸を含み、柔軟であり、したがって２つのＮ末端抗原結合領域が独立して動くことを可能にする。
本明細書において使用される時、「ジスルフィド結合」という用語は、２つの硫黄原子の間に形成された共有結合を包含する。アミノ酸システインはチオール基を含み、当該チオ―ル基は、第２のチオール基とのジスルフィド結合または架橋を形成し得る。
本明細書において使用される時、「キメラ抗体」という用語は、免疫反応性の領域または部位が第１の種から得られるかまたはそれに由来し、定常領域（インタクト、部分的、修飾されたものであり得る）が第２の種から得られる抗体を指す。いくつかの実施形態において、標的結合領域または標的結合部位は、非ヒト供給源（例えばマウスまたは霊長動物）からであり、定常領域はヒトである。
「多重特異性抗体」または「二重特異性抗体」という用語は、単一の抗体分子内の２つ以上の異なるエピトープに対する抗原結合ドメインを有する抗体または抗体様分子を指す。カノニカルな抗体構造に加える他の結合分子が、２つの結合特異性により構築され得る。
本明細書において使用される時、「操作された抗体」という用語は、重鎖及び軽鎖または両方のいずれかの可変ドメインが、少なくともＣＤＲまたはフレームワーク領域のいずれか中の１つまたは複数のアミノ酸の部分的な置き換えによって変更される抗体を指す。ある特定の実施形態において、既知の特異性の抗体からの全体のＣＤＲが、異種抗体のフレームワーク領域の中へグラフトされ得る。代替ＣＤＲは、フレームワーク領域が由来する抗体と同じクラスまたは場合によっては同じサブクラスの抗体に由来し得るが、ＣＤＲは、異なるクラスの抗体に（例えば異なる種からの抗体に）も由来し得る。既知の特異性の非ヒト抗体からの１つまたは複数の「ドナー」ＣＤＲが、ヒト重鎖または軽鎖のフレームワーク領域の中へグラフトされる、操作された抗体は、本明細書において「ヒト化抗体」と称される。ある特定の実施形態において、すべてのＣＤＲがドナー可変領域からの完全なＣＤＲにより置き換えられるとは限らないが、それでもなおドナーの抗原結合能力は、レシピエントの可変ドメインへ移行させられ得る。ヒト化の例示的な方法は、米国特許第５，５８５，０８９号、同第５，６９３，７６１号、同第５，６９３，７６２号、及び同第６，１８０，３７０号に記載されている。
本明細書において使用される時、「操作された」という用語は、合成手段による（例えば組み換え技法、インビトロのペプチド合成、ペプチド、核酸、もしくはグリカンの酵素的または化学的なカップリング、またはこれらの技法のうちのいくつかの組み合わせによる）、核酸分子またはポリペプチド分子の処理を包含する。
本明細書において使用される時、「連結された」、「融合された」、もしくは「融合」という用語、または他の文法上の同等語は、互換的に使用され得る。これらの用語は、化学的コンジュゲーションまたは組み換え手段を含む任意の手段によって、２つ以上のエレメントまたは構成要素を一緒に繋ぐことを指す。「インフレームの融合」は、元のＯＲＦの翻訳のリーディングフレームを維持する様式で、２つ以上のポリヌクレオチドのオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を繋いで、連続的なより長いＯＲＦを形成することを指す。したがって、組み換え融合タンパク質は、元のＯＲＦによってコードされたポリペプチドに対応する２つ以上のセグメント（これらのセグメントは通常は天然でそのように繋がれない）を含有する単一のタンパク質である。リーディングフレームは、融合されたセグメントを通してこのように連続的にされるが、セグメントは、例えばインフレームのリンカー配列によって物理的または空間的に分離され得る。例えば、免疫グロブリン可変部領域のＣＤＲをコードするポリヌクレオチドは、インフレームで融合され得るが、「融合」ＣＤＲが連続的なポリペプチドの一部分として共翻訳される限り、少なくとも１つの免疫グロブリンフレームワーク領域または追加のＣＤＲ領域をコードするポリヌクレオチドによって分離され得る。「会合した」という用語、及びその文法的に等価な語は、一緒に機能し、結び付けられ得るまたは融合され得るにもかかわらずいかなる特定の方法でも連結されずに近傍に存在するものであり得、例えばトランスで相互作用している、２つ以上の要素の相互作用を指す。
ポリペプチドの文脈において、「線状配列」または「配列」は、アミノ末端からカルボキシル末端への方向でのポリペプチド中のアミノ酸の順序であり、配列中で互いに隣り合うアミノ酸はポリペプチドの一次構造において連続する。ポリペプチドの別の部分に対して「アミノ末端」または「Ｎ末端」であるポリペプチドの部分は、連続するポリペプチド鎖において先に現れる部分である。同様に、ポリペプチドの別の部分に対して「カルボキシ末端」または「Ｃ末端」であるポリペプチドの部分は、連続するポリペプチド鎖において後に現れる部分である。例えば典型的な抗体において、可変ドメインは定常領域に対して「Ｎ末端」であり、定常領域は可変ドメインに対して「Ｃ末端」である。
「発現」という用語は、本明細書において使用される時、遺伝子が生化学物質（例えばポリペプチド）を産生するプロセスを指す。当該プロセスは、細胞内の遺伝子の機能的存在の任意の現れ（遺伝子ノックダウン、そして一過性発現及び安定的発現の両方が限定されずに挙げられる）を包含する。当該プロセスは、ＲＮＡ（例えばメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ））への遺伝子の転写、及びポリペプチド（複数可）へのかかるｍＲＮＡの翻訳を限定されずに包含する。最終的な所望の産物が生化学物質であるならば、発現はその生化学物質及び任意の前駆体の生成を包含する。遺伝子の発現は「遺伝子産物」を産生する。本明細書において使用される時、遺伝子産物は、遺伝子の転写によって産生される核酸（例えばメッセンジャーＲＮＡ）、または転写物からの翻訳されるポリペプチドのいずれかであり得る。本明細書において記載される遺伝子産物としては、転写後修飾（例えばポリアデニル化）の有る核酸、または翻訳後修飾（例えばメチル化、糖鎖付加、脂質の添加）の有るポリペプチド、他のタンパク質サブユニットとの会合、タンパク質分解性切断等がさらに挙げられる。
「治療する」もしくは「治療」もしくは「治療すること」または「緩和する」もしくは「緩和すること」等の用語は、既存の診断された疾患、病理学的状態、または障害を、治癒する、減速する、それらの症状を軽減する、及び／またはそれらの進行もしくは減速を停止する、治療的処置を指す。「防止する」、「防止」、「回避する」、「制止」等の用語、及び同種のものは、診断されていない標的とされる疾患、病理学的状態、または障害の発症を防止する、予防的または防止的な措置を指す。したがって、「治療を必要とする対象」としては、既に疾患、病状の有る対象が挙げられ得る。「防止を必要とする対象」という用語の場合は、疾患、病状または障害を有する傾向のある対象、及び疾患、病状または障害が防止される対象である。
本明細書において使用される時、「血清半減期」または「血漿内半減期」という用語は、投与後にタンパク質または薬物（例えば本明細書において記載される結合分子、抗体または抗体様分子等）の血清または血漿中の濃度が５０％低減するのにかかる時間（例えば分、時間または日で）を指す。以下の２つの半減期が記載され得る。アルファ半減期、α半減期、またはｔ１／２αは、中央コンパートメント（例えば静脈内送達の場合は血液）から末梢コンパートメント（例えば組織または器官）への薬物再分布のプロセスに起因する血漿濃度の低下の速度であり、ベータ半減期、β半減期、またはｔ１／２βは、排泄または代謝のプロセスに起因する低下の速度である。
本明細書において使用される時、「血漿薬物濃度－時間曲線下面積」または「ＡＵＣ」という用語は、ある用量の薬物の投与後の薬物への実際の身体曝露を反映し、ｍｇ＊ｈ／Ｌで表現される。この曲線下面積は、時間０（ｔ０）から無限大（∞）まで測定され、身体からの薬物の排出の速度及び投与された用量に依存する。
本明細書において使用される時、「平均滞留時間」または「ＭＲＴ」という用語は、薬物が身体中に残存する時間の平均長を指す。
「対象」または「個体」または「動物」または「患者」または「哺乳動物」は、診断、予後、または治療が所望される任意の哺乳動物の対象を意味する。哺乳動物の対象としては、ヒト、飼育動物、家畜、及び動物園の動物、スポーツ用の動物、または愛玩動物（イヌ、ネコ、モルモット、ウサギ、ラット、マウス、ウマ、ブタ、ウシ、クマ等）が挙げられる。
抗ＣＤ１２３抗原結合ドメイン
本明細書に提供されるのは、ＣＤ１２３へ特異的に結合する抗原結合ドメインを含む、抗体またはその抗原結合断片もしくは誘導体であって、抗原結合ドメインが、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、ＶＨ及びＶＬがそれぞれ、アミノ酸配列である配列番号７６及び配列番号７９、配列番号７７及び配列番号７９、配列番号７８及び配列番号７９、配列番号８０及び配列番号８３、配列番号８１及び配列番号８３、ならびに配列番号８２及び配列番号８３を含む、当該抗体またはその抗原結合断片もしくは誘導体である。
本明細書に提供されるのは、ＣＤ１２３へ特異的に結合する抗原結合ドメインを含む、抗体またはその抗原結合断片もしくは誘導体であって、抗原結合ドメインが、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、ＶＨ及びＶＬがそれぞれ、アミノ酸配列である配列番号７６及び配列番号７９、配列番号７７及び配列番号７９、配列番号７８及び配列番号７９、配列番号８０及び配列番号８３、配列番号８１及び配列番号８３、ならびに配列番号８２及び配列番号８３を含む、当該抗体またはその抗原結合断片もしくは誘導体である。
ある特定の実施形態では、上記に提供される抗原結合ドメインは、Ｆｖ断片、例えば、一本鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）またはジスルフィド結合Ｆｖ断片（ｓｄＦｖ）である。ある特定の実施形態では、上記に提供される抗原結合ドメインはｓｃＦｖである。
ある特定の実施形態では、上記に提供される抗原結合ドメインは、本明細書の他の箇所で記載されているように、抗体 抗体様分子の中に含まれている。いくつかの実施形態では、上記に提供される抗原結合ドメインは、抗体または抗体様分子の中に含まれており、抗体または抗体様分子は、多重特異性、例えば二重特異性、三重特異性または四重特異性である。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される多重特異性抗体または抗体様分子は、ＣＤ１２３へ、及びエフェクター細胞上の標的、例えばＣＤ１６またはＣＤ３へ、特異的に結合する。
ある特定の実施形態では、抗体または抗体様分子は、２つの抗原結合ドメインを含む二価結合単位を含み、少なくとも１つの抗原結合ドメインはＣＤ１２３へ特異的に結合する。この実施形態によれば、結合単位は２つの重鎖を含み、当該２つの重鎖の各々が重鎖定常領域またはその断片もしくはバリアントを含み、結合単位の少なくとも１つの重鎖定常領域またはその断片もしくはバリアントは、抗原結合ドメインの提供されるＶＨのコピーと会合、例えば融合される。ある特定の実施形態では、結合単位の重鎖定常領域またはその断片もしくはバリアントは両方とも、抗原結合ドメインの提供されるＶＨのコピーと会合、例えば融合される。ある特定の実施形態では、重鎖は、ＩｇＧ重鎖定常領域またはその断片もしくはバリアントを含む。様々なＩｇＧ重鎖定常領域及びその断片もしくはバリアントが知られており、例えば、Ｋａｎｇ，ｅｔ ａｌ．，２０１９，Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ＆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，５１：１－９、Ｂｒｅｚｓｋｉ，ｅｔ ａｌ．，２０１６，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，４０：６２－６９、Ｏｋａｚａｋｉ，ｅｔ ａｌ．，２００４，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，３３６（５）：１２３９－１２４９、Ｋａｎｇ，ｅｔ ａｌ．，２０１９，Ｆｒｏｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１０（５６２）：１－１１、及びＳａｘｅｎａ，ｅｔ ａｌ．，２０１６，Ｆｒｏｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，７（５８０）：１－１１に記載されているものが挙げられる。ある特定の実施形態では、二価結合単位は２つの軽鎖をさらに含み、当該２つの軽鎖の各々が軽鎖定常領域またはその断片もしくはバリアントを含む。ある特定の実施形態では、少なくとも１つの軽鎖定常領域は、抗原結合ドメインの提供されるＶＬのコピーへ融合される。ある特定の実施形態では、二価結合単位は、完全抗体、例えば完全ＩｇＧ抗体またはＦ（ａｂ’）２断片を含む。ある特定の実施形態では、結合単位の軽鎖定常領域またはその断片もしくはバリアントは両方とも、抗原結合ドメインの提供されるＶＬのコピーに融合される。ある特定の実施形態では、二価結合単位は、完全抗体、例えば、完全ＩｇＧ抗体またはＦ（ａｂ’）２断片を含む。ある特定の実施形態では、二価結合単位は、完全抗体、例えば完全ＩｇＧ重鎖定常領域を含む。ある特定の実施形態では、二価結合単位は、ヒトＩｇＧ抗体、その断片もしくは誘導体である。
ある特定の実施形態では、提供される抗原結合ドメインは、２、５または６個の二価結合単位を含む多量体抗体または抗体様分子の中に含まれており、抗体は、４、８、１０または１２個の抗原結合ドメインを含む。ある特定の実施形態では、抗原結合ドメインの少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１または１２個は、ＣＤ１２３へ特異的に結合する。本明細書に提供される場合、抗原結合ドメインの少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１または１２個は、本明細書に提供されるＶＨ及びＶＬアミノ酸配列を含む。これらの実施形態によれば、各結合単位は２つの重鎖を含み、当該２つの重鎖の各々が、ＩｇＡもしくはＩｇＭ定常領域、またはその多量体化断片もしくはバリアントを含み、結合単位の重鎖定常領域の少なくとも１つは、提供される抗原結合ドメインの提供されるＶＨのコピーと会合、例えば融合される。ある特定の実施形態では多量体抗体または抗体様分子はヒト抗体である。
ある特定の実施形態では、提供される多量体抗体または抗体様分子は二量体または四量体であり、２つの二価ＩｇＡ結合単位、及びＪ鎖またはその機能性断片もしくはバリアントを含み、各結合単位は、２つのＩｇＡ重鎖定常領域、例えばＩｇＡ１もしくはＩｇＡ２重鎖定常領域、またはその多量体化断片もしくはバリアントを含む。ある特定の実施形態では、二量体または四量体抗体または抗体様分子は、分泌成分またはその断片もしくはバリアントをさらに含み得る。ある特定の実施形態では、ＩｇＡ重鎖定常領域またはその多量体化断片もしくはバリアントの各々はＣα３ドメイン及びαテールピース（αｔｐ）ドメインを含み、Ｃα１ドメイン、Ｃα２ドメイン、ＩｇＡヒンジ領域またはそれらの任意の組み合わせをさらに含み得る。
ある特定の実施形態では、提供される多量体抗体または抗体様分子は六量体または五量体であり、かつ５または６個の二価ＩｇＭ結合単位を含み、各結合単位は２つのＩｇＭ重鎖定常領域またはその多量体化断片もしくはバリアントを含む。ある特定の実施形態では、ＩｇＭ重鎖定常領域またはその多量体化断片もしくはバリアントの各々は、Ｃμ４ドメイン及びμテールピース（μｔｐ）ドメインドメイン、またはその断片もしくはバリアントを含み、Ｃμ１ドメイン、Ｃμ２ドメイン、Ｃμ３ドメインまたはそれらの任意の組み合わせをさらに含み得る。ある特定の実施形態では、多量体抗体または抗体様分子は五量体であり、かつＪ鎖またはその機能性断片もしくはその機能性バリアントをさらに含む。ある特定の実施形態では、各結合単位は２つの軽鎖をさらに含み、当該２つの軽鎖の各々が軽鎖定常領域またはその断片もしくはバリアントを含み、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１または１２個の軽鎖定常領域は抗原結合ドメインの提供されるＶＬのコピーへ融合される。ある特定の実施形態では、多量体抗体または抗体様分子はヒト抗体である。
本明細書に提供される抗体または抗体様分子は、ある特定の実施形態では、多重特異性であり得る。
ある特定の実施形態では、提供される抗原結合ドメイン、あるいは抗原結合ドメインを含む抗体またはその断片もしくは誘導体、抗体様分子は、ヒトＣＤ１２３へ特異的に結合し得る。ある特定の実施形態では、提供される抗原結合ドメイン、あるいは抗原結合ドメインを含む抗体または断片もしくは誘導体は、５００ｎＭ、１００ｎＭ、５０．０ｎＭ、４０．０ｎＭ、３０．０ｎＭ、２０．０ｎＭ、１０．０ｎＭ、９．０ｎＭ、８．０ｎＭ、７．０ｎＭ、６．０ｎＭ、５．０ｎＭ、４．０ｎＭ、３．０ｎＭ、２．０ｎＭ、１．０ｎＭ、０．５０ｎＭ、０．１０ｎＭ、０．０５０ｎＭ、０．０１ｎＭ、０．００５ｎＭまたは０．００１ｎＭ以下の解離定数ＫＤによって特徴づけられる親和性でＣＤ１２３へ結合し、ＣＤ１２３はヒトＣＤ１２３である。
ＩｇＭ抗体、ＩｇＭ様抗体、及びＩｇＭ由来結合分子
ＩｇＭは、抗原による刺激に応答してＢ細胞によって産生される第１の免疫グロブリンであり、天然では血清中におよそ１．５ｍｇ／ｍｌで存在し、半減期は約５日である。ＩｇＭは、五量体または六量体の分子であり、したがって５または６の結合単位を含む。ＩｇＭ結合単位は、典型的には２つの軽鎖及び２つの重鎖を含む。ＩｇＧ重鎖定常領域は３つの重鎖定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３）を含有するが、ＩｇＭの重鎖（μ）定常領域は第４の定常ドメイン（ＣＨ４）を追加で含有し、Ｃ末端のμ「テールピース」（μｔｐ）を含む。複数のヒト対立遺伝子が存在するが、ヒトＩｇＭ定常領域は、典型的にはアミノ酸配列である配列番号１（ＩＭＧＴ対立遺伝子ＩＧＨＭ＊０３、例えばＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ｐｉｒ｜｜Ｓ３７７６８に同一）または配列番号２（ＩＭＧＴ対立遺伝子ＩＧＨＭ＊０４、例えばＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ｓｐ｜Ｐ０１８７１．４に同一）を含む。ヒトＣμ１領域は、配列番号１または配列番号２のアミノ酸約５～約アミノ酸１０２の範囲であり、ヒトＣμ２領域は、配列番号１または配列番号２のアミノ酸約１１４～約アミノ酸２０５の範囲であり、ヒトＣμ３領域は、配列番号１または配列番号２のアミノ酸約２２４～約アミノ酸３１９の範囲であり、Ｃμ４領域は、配列番号１または配列番号２のアミノ酸約３２９～約アミノ酸４３０の範囲であり、テールピースは、配列番号１または配列番号２のアミノ酸約４３１～約アミノ酸４５３の範囲である。
ＩｇＭは、抗原による刺激に応答してＢ細胞によって産生される第１の免疫グロブリンであり、天然では血清中におよそ１．５ｍｇ／ｍｌで存在し、半減期は約５日である。ＩｇＭは、五量体または六量体の分子であり、したがって５または６の結合単位を含む。ＩｇＭ結合単位は、典型的には２つの軽鎖及び２つの重鎖を含む。ＩｇＧ重鎖定常領域は３つの重鎖定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３）を含有するが、ＩｇＭの重鎖（μ）定常領域は第４の定常ドメイン（ＣＨ４）を追加で含有し、Ｃ末端のμ「テールピース」（μｔｐ）を含む。複数のヒト対立遺伝子が存在するが、ヒトＩｇＭ定常領域は、典型的にはアミノ酸配列である配列番号１（ＩＭＧＴ対立遺伝子ＩＧＨＭ＊０３、例えばＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ｐｉｒ｜｜Ｓ３７７６８に同一）または配列番号２（ＩＭＧＴ対立遺伝子ＩＧＨＭ＊０４、例えばＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ｓｐ｜Ｐ０１８７１．４に同一）を含む。ヒトＣμ１領域は、配列番号１または配列番号２のアミノ酸約５～約アミノ酸１０２の範囲であり、ヒトＣμ２領域は、配列番号１または配列番号２のアミノ酸約１１４～約アミノ酸２０５の範囲であり、ヒトＣμ３領域は、配列番号１または配列番号２のアミノ酸約２２４～約アミノ酸３１９の範囲であり、Ｃμ４領域は、配列番号１または配列番号２のアミノ酸約３２９～約アミノ酸４３０の範囲であり、テールピースは、配列番号１または配列番号２のアミノ酸約４３１～約アミノ酸４５３の範囲である。
多少の配列変動の有るヒトＩｇＭ定常領域の他の形態が存在し、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＣＡＢ３７８３８．１及びｐｉｒ｜｜ＭＨＨＵが限定されずに挙げられる。配列番号１または配列番号２に対応する位置でのアミノ酸の置換、挿入、及び／または欠失は、本開示中の他の箇所で記載及び請求される代替ヒトＩｇＭ配列の中へ、そして他の種のＩｇＭ定常領域アミノ酸配列の中へ同様に取り込まれ得る。
各々のＩｇＭ重鎖定常領域は、抗原結合ドメイン（例えばｓｃＦｖ）または抗原結合ドメインのサブユニット（例えばＶＨ領域）と会合する。
５つのＩｇＭ結合単位は、追加の小さなポリペプチド鎖（Ｊ鎖）、またはその機能的断片、バリアント、もしくは誘導体と複合体を形成して、五量体のＩｇＭ抗体またはＩｇＭ様抗体を形成し得る。ヒトＪ鎖の前駆体形態は、配列番号１として示される。シグナルペプチド（下線が引かれている）は、配列番号１のアミノ酸１から約アミノ酸２２へ伸長し、成熟ヒトＪ鎖は、配列番号１の約アミノ酸２３からアミノ酸１５９へ伸長する。成熟ヒトＪ鎖はアミノ酸配列である配列番号２を有する。
例示的なバリアント及び修飾Ｊ鎖は、本明細書の他の箇所で提供される。Ｊ鎖が無いと、ＩｇＭ抗体またはＩｇＭ様抗体は、典型的には、６つの結合単位及び最大１２の結合単位に会合された抗原結合ドメインを含む六量体へと組み立てられる。Ｊ鎖が有ると、Ｊ鎖が、例えば追加のＪ鎖会合抗原結合ドメイン（複数可）であり得る１つまたは複数の異種ポリペプチドを含む修飾Ｊ鎖であるならば、ＩｇＭ抗体またはＩｇＭ様抗体は、典型的には、５つの結合単位及び最大１０の結合単位またはそれ以上に会合された抗原結合ドメインを含む五量体へと組み立てられる。五量体または六量体のＩｇＭ抗体またはＩｇＭ様抗体への５または６のＩｇＭ結合単位の集合は、Ｃμ４及びμテールピースドメイン間の相互作用が関与すると考えられる。例えばＢｒａａｔｈｅｎ，Ｒ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７７：４２７５５－４２７６２（２００２）を参照されたい。したがって、本開示において提供される五量体または六量体のＩｇＭ抗体の定常領域または抗体様分子は、典型的には、少なくともＣμ４及び／またはμテールピースドメインを含む。ＩｇＭ重鎖定常領域の「多量体化断片」は、したがって少なくともＣμ４ドメイン及びμｔｐドメインを含む。ＩｇＭ重鎖定常領域は、Ｃμ３ドメインもしくはその断片、Ｃμ２ドメインもしくはその断片、及び／またはＣμ１ドメインもしくはその断片を追加で含み得る。ある特定の実施形態において、結合分子（例えば本明細書において提供されるＩｇＭ抗体またはＩｇＭ様抗体）は、完全なＩｇＭ重（μ）鎖定常ドメイン（例えば配列番号１、配列番号２）、または例えば本明細書において提供されるそれらの多量体化バリアント、誘導体、もしくは類似体を含み得る。
ある特定の実施形態において、本開示は、５つの二価結合単位を含む五量体のＩｇＭまたはＩｇＭ様抗体を提供し、各々の結合単位は、２つのＩｇＭ重鎖定常領域、またはその多量体化断片もしくはバリアントを含み、当該ＩｇＭ重鎖定常領域、またはその多量体化断片もしくはバリアントの各々が、抗原結合ドメインまたは抗原結合ドメインのサブユニットと会合する。ある特定の実施形態において、２つのＩｇＭ重鎖定常領域は、ヒト重鎖定常領域である。
本明細書において提供されるＩｇＭまたはＩｇＭ様抗体が五量体である場合に、ＩｇＭまたはＩｇＭ様抗体は、典型的にはＪ鎖、またはその機能的断片もしくはバリアントをさらに含む。いくつかの実施形態において、Ｊ鎖は、異種部分、例えばＪ鎖会合抗原結合ドメインを含む、修飾Ｊ鎖である。ある特定の実施形態では、Ｊ鎖会合抗原結合ドメインは、免疫エフェクター細胞（例えばＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ細胞またはＮＫ細胞）へ特異的に結合する。ある特定の実施形態において、修飾Ｊ鎖は、それへ付加された１つまたは複数の異種部分（例えば免疫刺激剤）を含む。ある特定の実施形態において、Ｊ鎖は、本開示の他の箇所で論じられるように、本明細書において提供されるＩｇＭまたはＩｇＭ様抗体の血清半減期に影響する（例えば向上させる）ように変異され得る。ある特定の実施形態において、Ｊ鎖は、本開示中の他の箇所で論じられるように、糖鎖付加に影響するように変異され得る。
いくつかの実施形態において、本明細書に提供されるＩｇＭまたはＩｇＭ様抗体は六量体であり、６つの二価結合単位を含む。いくつかの実施形態において、各々の結合単位は、２つのＩｇＭ重鎖定常領域、またはその多量体化断片もしくはバリアントを含む。
ＩｇＭ重鎖定常領域は、Ｃμ１ドメインまたはその断片もしくはバリアント、Ｃμ２ドメインまたはその断片もしくはバリアント、Ｃμ３ドメインまたはその断片もしくはバリアント、Ｃμ４ドメインまたはその断片もしくはバリアント、及び／またはμテールピース（μｔｐ）またはその断片もしくはバリアントのうちの１つまたは複数を含み得るが、但し、定常領域は、例えば第２のＩｇＭ定常領域と会合して１、２、もしくはそれ以上の抗原結合ドメイン（複数可）を備えた結合単位を形成して、及び／または他の結合単位と会合して（及び五量体の事例において、Ｊ鎖）六量体もしくは五量体を形成して、ＩｇＭまたはＩｇＭ様抗体において所望の機能を供することができる。ある特定の実施形態において、個別の結合単位内の２つのＩｇＭ重鎖定常領域またはその断片もしくはバリアントは各々、Ｃμ４ドメインまたはその断片もしくはバリアント、μテールピース（μｔｐ）またはその断片もしくはバリアント、あるいはＣμ４ドメイン及びμｔｐ、またはそれらの断片もしくはバリアントの組み合わせを含む。ある特定の実施形態において、個別の結合単位内の２つのＩｇＭ重鎖定常領域、またはその断片もしくはバリアントは各々、Ｃμ３ドメイン、またはその断片もしくはバリアント、Ｃμ２ドメイン、またはその断片もしくはバリアント、Ｃμ１ドメイン、またはその断片もしくはバリアント、あるいはそれらの任意の組み合わせをさらに含む。
いくつかの実施形態において、ＩｇＭまたはＩｇＭ様抗体の結合単位は、２つの軽鎖を含む。いくつかの実施形態において、ＩｇＭまたはＩｇＭ様抗体の結合単位は、２つの軽鎖の断片を含む。いくつかの実施形態において、軽鎖は、κ軽鎖である。いくつかの実施形態において、軽鎖は、λ軽鎖である。いくつかの実施形態において、軽鎖は、ハイブリッドκ及びλ軽鎖である。いくつかの実施形態において、各々の結合単位は、免疫グロブリン軽鎖定常領域に対してアミノ末端に位置するＶＬを各々含む２つの免疫グロブリン軽鎖を含む。
向上した血清半減期を備えた、ＩｇＭ抗体、ＩｇＭ様抗体、及びＩｇＭ由来結合分子
本明細書において提供されるある特定のＩｇＭ由来の多量体結合分子、例えば抗体または抗体様分子は、向上した血清半減期を有するように修飾され得る。ＩｇＭ由来結合分子の血清半減期を向上させ得る例示的なＩｇＭ重鎖定常領域の変異は、米国特許第１０，８９９，８３５号中で開示され、それは、参照することによってその全体が本明細書に援用される。例えば、本明細書において提供されるＩｇＭ由来結合分子のバリアントＩｇＭ重鎖定常領域は、野生型ヒトＩｇＭ定常領域（例えば配列番号１または配列番号２）のアミノ酸Ｓ４０１、Ｅ４０２、Ｅ４０３、Ｒ３４４、及び／またはＥ３４５に対応するアミノ酸位置でのアミノ酸置換を含み得る。「野生型ヒトＩｇＭ定常領域のアミノ酸Ｓ４０１、Ｅ４０２、Ｅ４０３、Ｒ３４４、及び／またはＥ３４５に対応するアミノ酸」は、ヒトＩｇＭ定常領域中のＳ４０１、Ｅ４０２、Ｅ４０３、Ｒ３４４、及び／またはＥ３４５に相同である、任意の種のＩｇＭ定常領域の配列中のアミノ酸を意味する。ある特定の実施形態において、配列番号１または配列番号２のＳ４０１、Ｅ４０２、Ｅ４０３、Ｒ３４４、及び／またはＥ３４５に対応するアミノ酸は、任意のアミノ酸（例えばアラニン）により置換され得る。
本明細書において提供されるある特定のＩｇＭ由来の多量体結合分子、例えば抗体または抗体様分子は、向上した血清半減期を有するように修飾され得る。ＩｇＭ由来結合分子の血清半減期を向上させ得る例示的なＩｇＭ重鎖定常領域の変異は、米国特許第１０，８９９，８３５号中で開示され、それは、参照することによってその全体が本明細書に援用される。例えば、本明細書において提供されるＩｇＭ由来結合分子のバリアントＩｇＭ重鎖定常領域は、野生型ヒトＩｇＭ定常領域（例えば配列番号１または配列番号２）のアミノ酸Ｓ４０１、Ｅ４０２、Ｅ４０３、Ｒ３４４、及び／またはＥ３４５に対応するアミノ酸位置でのアミノ酸置換を含み得る。「野生型ヒトＩｇＭ定常領域のアミノ酸Ｓ４０１、Ｅ４０２、Ｅ４０３、Ｒ３４４、及び／またはＥ３４５に対応するアミノ酸」は、ヒトＩｇＭ定常領域中のＳ４０１、Ｅ４０２、Ｅ４０３、Ｒ３４４、及び／またはＥ３４５に相同である、任意の種のＩｇＭ定常領域の配列中のアミノ酸を意味する。ある特定の実施形態において、配列番号１または配列番号２のＳ４０１、Ｅ４０２、Ｅ４０３、Ｒ３４４、及び／またはＥ３４５に対応するアミノ酸は、任意のアミノ酸（例えばアラニン）により置換され得る。
低減したＣＤＣの活性を備えた、ＩｇＭ抗体、ＩｇＭ様抗体、及びＩｇＭ由来結合分子
本明細書において提供されるある特定のＩｇＭ由来の多量体結合分子、例えば抗体または抗体様分子は、低減したＣＤＣの活性を付与する変異を除いて同一である対応する参照ヒトＩｇＭ定常領域の有る参照ＩｇＭ抗体またはＩｇＭ様抗体に比べて、補体の存在下において細胞への低減した補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）活性を示すように操作され得る。これらのＣＤＣの変異は、本明細書において提供される、Ｎ結合型糖鎖付加を遮断する、及び／または増加した血清半減期を付与する変異のうちの任意のものとも組み合わせられ得る。「対応する参照ヒトＩｇＭ定常領域」は、ＣＤＣの活性に影響する定常領域中の修飾（複数可）を除いて、バリアントＩｇＭ定常領域に同一であるヒトＩｇＭ定常領域またはその部分（例えばＣμ３ドメイン）を意味する。ある特定の実施形態において、バリアントヒトＩｇＭ定常領域は、例えば米国特許出願公開第ＵＳ２０２１－０１４７５６７号（それは、参照することによってその全体が本明細書に援用される）中で記載されるような、野生型ヒトＩｇＭ定常領域に比べて、例えばＣμ３ドメイン中で１つまたは複数のアミノ酸置換を含む。ＣＤＣの測定のためのアッセイは当業者に周知であり、例示的なアッセイは例えば米国特許出願公開第２０２１－０１４７５６７号（それは、参照することによってその全体が本明細書に援用される）中で記載される。
本明細書において提供されるある特定のＩｇＭ由来の多量体結合分子、例えば抗体または抗体様分子は、低減したＣＤＣの活性を付与する変異を除いて同一である対応する参照ヒトＩｇＭ定常領域の有る参照ＩｇＭ抗体またはＩｇＭ様抗体に比べて、補体の存在下において細胞への低減した補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）活性を示すように操作され得る。これらのＣＤＣの変異は、本明細書において提供される、Ｎ結合型糖鎖付加を遮断する、及び／または増加した血清半減期を付与する変異のうちの任意のものとも組み合わせられ得る。「対応する参照ヒトＩｇＭ定常領域」は、ＣＤＣの活性に影響する定常領域中の修飾（複数可）を除いて、バリアントＩｇＭ定常領域に同一であるヒトＩｇＭ定常領域またはその部分（例えばＣμ３ドメイン）を意味する。ある特定の実施形態において、バリアントヒトＩｇＭ定常領域は、例えば米国特許出願公開第ＵＳ２０２１－０１４７５６７号（それは、参照することによってその全体が本明細書に援用される）中で記載されるような、野生型ヒトＩｇＭ定常領域に比べて、例えばＣμ３ドメイン中で１つまたは複数のアミノ酸置換を含む。ＣＤＣの測定のためのアッセイは当業者に周知であり、例示的なアッセイは例えば米国特許出願公開第２０２１－０１４７５６７号（それは、参照することによってその全体が本明細書に援用される）中で記載される。
ある特定の実施形態において、低減したＣＤＣの活性を付与するバリアントヒトＩｇＭ定常領域は、配列番号１（ヒトＩｇＭ定常領域対立遺伝子ＩＧＨＭ＊０３）または配列番号２（ヒトＩｇＭ定常領域対立遺伝子ＩＧＨＭ＊０４）の位置Ｌ３１０、Ｐ３１１、Ｐ３１３、及び／またはＫ３１５での野生型ヒトＩｇＭ定常領域に対応する、アミノ酸置換を含む。ある特定の実施形態において、低減したＣＤＣの活性を付与するバリアントヒトＩｇＭ定常領域は、配列番号１または配列番号２の位置Ｐ３１１での野生型ヒトＩｇＭ定常領域に対応する、アミノ酸置換を含む。他の実施形態において、本明細書において提供されるバリアントＩｇＭ定常領域は、配列番号１または配列番号２の位置Ｐ３１３での、野生型ヒトＩｇＭ定常領域に対応する、アミノ酸置換を含有する。他の実施形態において、本明細書において提供されるバリアントＩｇＭ定常領域は、配列番号１もしくは配列番号２の位置Ｐ３１１及び／または配列番号１もしくは配列番号２のＰ３１３での野生型ヒトＩｇＭ定常領域に対応する、置換の組み合わせを含有する。これらのプロリン残基は、独立して任意のアミノ酸により（例えばアラニンまたはセリンまたはグリシンにより）置換され得る。ある特定の実施形態において、低減したＣＤＣの活性を付与するバリアントヒトＩｇＭ定常領域は、配列番号１または配列番号２の位置Ｋ３１５での野生型ヒトＩｇＭ定常領域に対応する、アミノ酸置換を含む。リジン残基は、独立して任意のアミノ酸により（例えばアラニン、セリン、グリシン、またはアスパラギン酸により）置換され得る。ある特定の実施形態において、低減したＣＤＣの活性を付与するバリアントヒトＩｇＭ定常領域は、配列番号１または配列番号２の位置Ｋ３１５での野生型ヒトＩｇＭ定常領域に対応する、アスパラギン酸によるアミノ酸置換を含む。ある特定の実施形態において、低減したＣＤＣの活性を付与するバリアントヒトＩｇＭ定常領域は、配列番号１または配列番号２の位置Ｌ３１０での野生型ヒトＩｇＭ定常領域に対応する、アミノ酸置換を含む。リジン残基は、独立して任意のアミノ酸により（例えばアラニン、セリン、グリシン、またはアスパラギン酸により）置換され得る。ある特定の実施形態において、低減したＣＤＣの活性を付与するバリアントヒトＩｇＭ定常領域は、配列番号１または配列番号２の位置Ｌ３１０での野生型ヒトＩｇＭ定常領域に対応する、アスパラギン酸によるアミノ酸置換を含む。
糖修飾ＩｇＭ抗体、ＩｇＭ様抗体、及びＩｇＭ由来結合分子
ヒト及びある特定の非ヒト霊長動物ＩｇＭ定常領域は、典型的には５つの天然に存在するアスパラギン（Ｎ）－結合型糖鎖付加モチーフまたは部位を含む。本明細書において使用される時、「Ｎ－結合型糖鎖付加モチーフ」はアミノ酸配列Ｎ－Ｘ１－Ｓ／Ｔを含むかまたはそれからなり、配列中、Ｎはアスパラギンであり、Ｘ１はプロリン（Ｐ）以外の任意のアミノ酸であり、Ｓ／Ｔはセリン（Ｓ）またはスレオニン（Ｔ）である。グリカンは、アスパラギン残基の窒素原子に付加される。例えばＤｒｉｃｋａｍｅｒ Ｋ，Ｔａｙｌｏｒ ＭＥ（２００６），Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｔｏ Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌｏｇｙ（２ｎｄ ｅｄ．）．Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，ＵＳＡを参照されたい。Ｎ－結合型糖鎖付加モチーフは、配列番号１または配列番号２のヒトＩｇＭ重鎖定常領域において生じ、位置４６（「Ｎ１」）、２０９（「Ｎ２」）、２７２（「Ｎ３」）、２７９（「Ｎ４」）、及び４４０（「Ｎ５」）で開始する。これらの５つのモチーフは非ヒト霊長動物ＩｇＭ重鎖定常領域において保存され、５つのうちの４つはマウスＩｇＭ重鎖定常領域において保存される。したがっていくつかの実施形態において、本明細書において提供される多量体結合分子のＩｇＭ重鎖定常領域は、５つのＮ－結合型糖鎖付加モチーフ：Ｎ１、Ｎ２、Ｎ３、Ｎ４、及びＮ５を含む。いくつかの実施形態において、各々のＩｇＭ重鎖定常領域上のＮ結合型糖鎖付加モチーフのうちの少なくとも３（例えばＮ１、Ｎ２、及びＮ３）は、複雑なグリカンによって占められる。
ヒト及びある特定の非ヒト霊長動物ＩｇＭ定常領域は、典型的には５つの天然に存在するアスパラギン（Ｎ）－結合型糖鎖付加モチーフまたは部位を含む。本明細書において使用される時、「Ｎ－結合型糖鎖付加モチーフ」はアミノ酸配列Ｎ－Ｘ１－Ｓ／Ｔを含むかまたはそれからなり、配列中、Ｎはアスパラギンであり、Ｘ１はプロリン（Ｐ）以外の任意のアミノ酸であり、Ｓ／Ｔはセリン（Ｓ）またはスレオニン（Ｔ）である。グリカンは、アスパラギン残基の窒素原子に付加される。例えばＤｒｉｃｋａｍｅｒ Ｋ，Ｔａｙｌｏｒ ＭＥ（２００６），Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｔｏ Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌｏｇｙ（２ｎｄ ｅｄ．）．Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，ＵＳＡを参照されたい。Ｎ－結合型糖鎖付加モチーフは、配列番号１または配列番号２のヒトＩｇＭ重鎖定常領域において生じ、位置４６（「Ｎ１」）、２０９（「Ｎ２」）、２７２（「Ｎ３」）、２７９（「Ｎ４」）、及び４４０（「Ｎ５」）で開始する。これらの５つのモチーフは非ヒト霊長動物ＩｇＭ重鎖定常領域において保存され、５つのうちの４つはマウスＩｇＭ重鎖定常領域において保存される。したがっていくつかの実施形態において、本明細書において提供される多量体結合分子のＩｇＭ重鎖定常領域は、５つのＮ－結合型糖鎖付加モチーフ：Ｎ１、Ｎ２、Ｎ３、Ｎ４、及びＮ５を含む。いくつかの実施形態において、各々のＩｇＭ重鎖定常領域上のＮ結合型糖鎖付加モチーフのうちの少なくとも３（例えばＮ１、Ｎ２、及びＮ３）は、複雑なグリカンによって占められる。
ある特定の実施形態において、Ｎ－Ｘ１－Ｓ／Ｔモチーフのうちの少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、または少なくとも４つは、そのモチーフで糖鎖付加を防止するアミノ酸の挿入、欠失、または置換を含み得る。ある特定の実施形態において、ＩｇＭ由来の多量体結合分子は、モチーフＮ１、モチーフＮ２、モチーフＮ３、モチーフＮ５、またはモチーフＮ１、Ｎ２、Ｎ３、もしくはＮ５のうちの２つ以上、３以上、もしくはすべての４つの任意の組み合わせで、アミノ酸の挿入、欠失、または置換（そこで、アミノ酸の挿入、欠失、または置換はそのモチーフでの糖鎖付加を防止する）を含み得る。いくつかの実施形態において、ＩｇＭ定常領域は、配列番号１（ヒトＩｇＭ定常領域対立遺伝子ＩＧＨＭ＊０３）または配列番号２（ヒトＩｇＭ定常領域対立遺伝子ＩＧＨＭ＊０４）の位置４６、２０９、２７２、または４４０での野生型ヒトＩｇＭ定常領域に比べて、１つまたは複数の置換を含む。例えばＰＣＴ出願公開第ＷＯ２０２１／０４１２５０号（それは、参照することによってその全体が本明細書に援用される）を参照されたい。
ＩｇＡ抗体、ＩｇＡ様抗体、及びＩｇＡ由来結合分子
ＩｇＡは粘膜免疫において重要な役割を果たし、産生される総免疫グロブリンのうちの約１５％を構成する。ＩｇＡは単量体または多量体であり得、主として二量体分子を形成するが、三量体、四量体、及び／または五量体としても組み立てられ得る。例えばｄｅ Ｓｏｕｓａ－Ｐｅｒｅｉｒａ，Ｐ．，ａｎｄ Ｊ．Ｍ．Ｗｏｏｆ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ８：５７（２０１９）を参照されたい。
ＩｇＡは粘膜免疫において重要な役割を果たし、産生される総免疫グロブリンのうちの約１５％を構成する。ＩｇＡは単量体または多量体であり得、主として二量体分子を形成するが、三量体、四量体、及び／または五量体としても組み立てられ得る。例えばｄｅ Ｓｏｕｓａ－Ｐｅｒｅｉｒａ，Ｐ．，ａｎｄ Ｊ．Ｍ．Ｗｏｏｆ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ８：５７（２０１９）を参照されたい。
いくつかの実施形態において、多量体結合分子は二量体であり、かつ２つの二価結合単位、またはそのバリアントもしくは断片を含む。いくつかの実施形態において、多量体結合分子は二量体または四量体であり、それぞれ２つまたは４つの二価結合単位、またはそのバリアントもしくは断片を含み、本明細書において記載されるＪ鎖、またはその機能的断片もしくはバリアントをさらに含む。いくつかの実施形態において、多量体結合分子は二量体であり、２つの二価結合単位、またはそのバリアントもしくは断片を含み、かつ、本明細書において記載されるＪ鎖、またはその機能的断片もしくはバリアントをさらに含み、各々の結合単位は、２つのＩｇＡ重鎖定常領域、またはその多量体化断片もしくはバリアントを含む。
いくつかの実施形態において、多量体結合分子は四量体であり、４つの二価結合単位、またはそのバリアントもしくは断片を含む。いくつかの実施形態において、多量体結合分子は四量体であり、４つの二価結合単位、またはそのバリアントもしくは断片を含み、本明細書において記載されるＪ鎖、またはその機能的断片もしくはバリアントをさらに含む。いくつかの実施形態において、多量体結合分子は四量体であり、４つの二価結合単位、またはそのバリアントもしくは断片を含み、本明細書において記載されるＪ鎖、またはその機能的断片もしくはバリアントをさらに含み、各々の結合単位は、２つのＩｇＡ重鎖定常領域、またはその多量体化断片もしくはバリアントを含む。
ある特定の実施形態において、本開示によって提供される多量体結合分子は、４つのＩｇＡ重鎖定常領域またはその多量体化断片を含む二量体結合分子であり、各々は、合計で４つの抗原結合ドメインで抗原結合ドメインと会合される。本明細書において提供されるように、二量体ＩｇＡ抗体、ＩｇＡ由来結合分子、またはＩｇＡ様抗体は、２つの結合単位、及び１つのＪ鎖（例えば本明細書の他の箇所で記載されるような、ＣＤ３へ結合するｓｃＦｖ抗体断片を含む修飾Ｊ鎖、あるいはｓｃＦｖ抗体断片を含む修飾Ｊ鎖へ融合されたＩＬ－１５及び／またはＩＬ－１５受容体－αスシドメイン）を含む。提供される各々の結合単位は、２つのＩｇＡ重鎖定常領域、またはその多量体化断片もしくはバリアントを含む。ある特定の実施形態において、多量体結合分子の少なくとも３またはすべての４つの抗原結合ドメインが、同じ標的抗原へ結合する。ある特定の実施形態において、多量体結合分子の少なくとも３またはすべての４つの結合ポリペプチドは、同一である。
二価ＩｇＡ由来結合単位は、２つのＩｇＡ重鎖定常領域を含み、二量体ＩｇＡ由来結合分子は、２つの結合単位を含む。ＩｇＡは、以下の重鎖定常ドメイン、すなわちＣα１（または代替的にＣＡ１もしくはＣＨ１）、ヒンジ領域、Ｃα２（または代替的にＣＡ２もしくはＣＨ２）、及びＣα３（または代替的にＣＡ３もしくはＣＨ３）、ならびにＣ末端「テールピース」を含有する。ヒトＩｇＡは、２つのサブタイプ、すなわちＩｇＡ１及びＩｇＡ２を有する。ヒトＩｇＡ１定常領域は、典型的にはアミノ酸配列である配列番号３を含む。ヒトＣα１ドメインは、配列番号３のアミノ酸約６からアミノ酸約９８へ伸長し、ヒトＩｇＡ１ヒンジ領域は、配列番号３のアミノ酸約１０２からアミノ酸約１２４へ伸長し、ヒトＣα２ドメインは、配列番号３のアミノ酸約１２５からアミノ酸約２１９へ伸長し、ヒトＣα３ドメインは、配列番号３のアミノ酸約２２８からアミノ酸約３３０へ伸長し、テールピースは、配列番号３のアミノ酸約３３１からアミノ酸約３５２へ伸長する。ヒトＩｇＡ２定常領域は、典型的にはアミノ酸配列である配列番号４を含む。ヒトＣα１ドメインは、配列番号４のアミノ酸約６からアミノ酸約９８へ伸長し、ヒトＩｇＡ２ヒンジ領域は、配列番号４のアミノ酸約１０２からアミノ酸約１１１へ伸長し、ヒトＣα２ドメインは、配列番号４のアミノ酸約１１３からアミノ酸約２０６へ伸長し、ヒトＣα３ドメインは、配列番号４のアミノ酸約２１５からアミノ酸約３１７へ伸長し、テールピースは、配列番号４のアミノ酸約３１８からアミノ酸約３４０へ伸長する。
２つのＩｇＡ結合単位が、２つの追加のポリペプチド鎖（Ｊ鎖（例えば配列番号７）及び分泌成分（前駆体は配列番号５、成熟体は配列番号５の約アミノ酸１９～約アミノ酸７６４）と複合体を形成して、本明細書において提供される二価分泌型ＩｇＡ（ｓＩｇＡ）由来結合分子を形成し得る。２つのＩｇＡ結合単位の二量体ＩｇＡ由来結合分子への組み立ては、Ｃα３及びテールピースのドメインが関与していると考えられる。例えばＢｒａａｔｈｅｎ，Ｒ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７７：４２７５５－４２７６２（２００２）を参照されたい。したがって、本開示において提供される多量体化二量体ＩｇＡ由来結合分子は、典型的には少なくともＣα３及びαテールピースのドメインを含むＩｇＡ定常領域を含む。４つのＩｇＡ結合単位は、同様にＪ鎖と四量体複合体を形成し得る。ｓＩｇＡ抗体も、高次多量体（例えば四量体）は形成し得る。
ＩｇＡ重鎖定常領域は、Ｃα２ドメインもしくはその断片、ＩｇＡヒンジ領域もしくはその断片、Ｃα１ドメインもしくはその断片、及び／または例えばＩｇＧヒンジ領域を含む他のＩｇＡ（または他の免疫グロブリン、例えばＩｇＧ）重鎖ドメインを追加で含み得る。ある特定の実施形態において、本明細書において提供される結合分子は、完全なＩｇＡ重（α）鎖定常ドメイン（例えば配列番号３または配列番号４）、またはそのバリアント、誘導体、もしくは類似体を含み得る。いくつかの実施形態において、ＩｇＡ重鎖定常領域またはその多量体化断片は、ヒトＩｇＡ定常領域である。
ある特定の実施形態において、本明細書において提供される多量体結合分子の各々の結合単位は、２つのＩｇＡ重鎖定常領域、またはその多量体化断片もしくはバリアントを含み、各々は、少なくともＩｇＡ Ｃα３ドメイン及びＩｇＡテールピースドメインを含む。ある特定の実施形態において、ＩｇＡ重鎖定常領域は各々、ＩｇＡ Ｃα３及びＩｇＡテールピースドメインに対してＮ末端に位置するＩｇＡ Ｃα２ドメインをさらに含み得る。例えば、ＩｇＡ重鎖定常領域は、配列番号３のアミノ酸１２５～３５３または配列番号４のアミノ酸１１３～３４０を含み得る。ある特定の実施形態において、ＩｇＡ重鎖定常領域は各々、ＩｇＡ Ｃα２ドメインに対してＮ末端に位置するＩｇＡまたはＩｇＧのヒンジ領域をさらに含み得る。例えば、ＩｇＡ重鎖定常領域は、配列番号３のアミノ酸１０２～３５３または配列番号４のアミノ酸１０２～３４０を含み得る。ある特定の実施形態において、ＩｇＡ重鎖定常領域は各々、ＩｇＡヒンジ領域に対してＮ末端に位置するＩｇＡ Ｃα１ドメインをさらに含み得る。
いくつかの実施形態において、ＩｇＡ抗体、ＩｇＡ様抗体、または他のＩｇＡ由来結合分子の各々結合単位は、２つの軽鎖を含む。いくつかの実施形態において、ＩｇＡ抗体、ＩｇＡ様抗体、または他のＩｇＡ由来結合分子の各々結合単位は、２つの軽鎖の断片を含む。いくつかの実施形態において、軽鎖は、κ軽鎖である。いくつかの実施形態において、軽鎖は、λ軽鎖である。いくつかの実施形態において、軽鎖は、キメラのκ－λ軽鎖である。いくつかの実施形態において、各々の結合単位は、免疫グロブリン軽鎖定常領域に対してアミノ末端に位置するＶＬを各々含む２つの免疫グロブリン軽鎖を含む。
修飾Ｊ鎖及び／またはバリアントＪ鎖
ある特定の実施形態において、本明細書において提供される多量体結合分子、例えば抗体または抗体様分子は、Ｊ鎖、またはその機能的断片もしくはバリアントを含む。ある特定の実施形態において、本明細書において提供される多量体結合分子は、五量体ＩｇＭ抗体またはＩｇＭ抗体様分子であり、Ｊ鎖、またはその機能的断片もしくはバリアントを含む。ある特定の実施形態において、本明細書において提供される多量体結合分子は、二量体ＩｇＡ抗体またはＩｇＡ抗体様分子であり、Ｊ鎖、またはその機能的断片もしくはバリアントを含む。いくつかの実施形態において、多量体結合分子は、成熟ヒトＪ鎖配列（例えば配列番号７）等の天然に存在するＪ鎖を含み得る。いくつかの実施形態において、多量体結合分子は、天然に存在するＪ鎖の機能的断片または機能的バリアントを含み得る。
ある特定の実施形態において、本明細書において提供される多量体結合分子、例えば抗体または抗体様分子は、Ｊ鎖、またはその機能的断片もしくはバリアントを含む。ある特定の実施形態において、本明細書において提供される多量体結合分子は、五量体ＩｇＭ抗体またはＩｇＭ抗体様分子であり、Ｊ鎖、またはその機能的断片もしくはバリアントを含む。ある特定の実施形態において、本明細書において提供される多量体結合分子は、二量体ＩｇＡ抗体またはＩｇＡ抗体様分子であり、Ｊ鎖、またはその機能的断片もしくはバリアントを含む。いくつかの実施形態において、多量体結合分子は、成熟ヒトＪ鎖配列（例えば配列番号７）等の天然に存在するＪ鎖を含み得る。いくつかの実施形態において、多量体結合分子は、天然に存在するＪ鎖の機能的断片または機能的バリアントを含み得る。
ある特定の実施形態において、本明細書において提供される五量体のＩｇＭもしくはＩｇＭ様抗体または二量体のＩｇＡもしくはＩｇＡ様抗体のＪ鎖は、ＩｇＭもしくはＩｇＭ様抗体またはＩｇＡもしくはＩｇＡ様抗体が組み立てられ、その結合標的（複数可）へ結合する能力を妨害せずに、例えば１つの異種部分または２つ以上の異種部分（例えばポリペプチド）の導入によって修飾され得る。米国特許第９，９５１，１３４号、同第１０，９７５，１４７号、同第１０，４００，０３８号及び同第１０，６１８，９７８号、ならびに米国特許出願公開第ＵＳ－２０１９－０１８５５７０号（それらの各々は、参照することによってそれらの全体が本明細書に援用される）を参照されたい。したがって、本明細書において提供されるＩｇＭもしくはＩｇＭ様抗体またはＩｇＡもしくはＩｇＡ様抗体（本明細書の他の箇所で記載される二重特異性または多重特異性のＩｇＭもしくはＩｇＭ様抗体またはＩｇＡもしくはＩｇＡ様抗体を含む）は、修飾Ｊ鎖、またはその機能的断片もしくはバリアントを含み、Ｊ鎖、またはその断片もしくはバリアントは、その中へ導入された異種部分（例えば異種ポリペプチド）をさらに含み得る。ある特定の実施形態において、異種部分は、インフレームで融合されるか、あるいはＪ鎖、またはその断片もしくはバリアントへ化学的にコンジュゲートされる、ペプチドまたはポリペプチドであり得る。例えば、異種ポリペプチドは、Ｊ鎖、またはその機能的断片もしくはバリアントへ融合され得る。ある特定の実施形態において、異種ポリペプチドは、リンカー（例えば最も少なくとも５アミノ酸からなるが、典型的には２５アミノ酸より多くなることはない、ペプチドリンカー）により、Ｊ鎖、またはその機能的断片もしくはバリアントへ融合される。ある特定の実施形態において、ペプチドリンカーは、ＧＧＧＧＳ（配列番号９）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１０）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１１）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１２）、またはＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１３）からなる。ある特定の実施形態において、異種部分は、Ｊ鎖へコンジュゲートされる化学的部分であり得る。Ｊ鎖へ付加される異種部分としては、結合部分（例えば抗体またはその抗原結合断片、例えば一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）分子）、ＩｇＭもしくはＩｇＭ様抗体の半減期を増加させ得る安定化ペプチド、または化学的部分（ポリマーまたはサイトトキシン等）が限定されずに挙げられ得る。いくつかの実施形態において、異種部分は、結合分子（例えばヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）またはＨＳＡ結合分子）の半減期を増加させ得る安定化ペプチドを含む。
いくつかの実施形態において、修飾Ｊ鎖は、Ｊ鎖会合抗原結合ドメイン（例えば標的抗原へ特異的に結合することができるポリペプチド）を含み得る。ある特定の実施形態において、Ｊ鎖会合抗原結合ドメインは、本明細書の他の箇所で記載される抗体またはその抗原結合断片であり得る。ある特定の実施形態において、Ｊ鎖会合抗原結合ドメインは、例えばラクダ科の動物または軟骨魚類の抗体に由来する一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）抗原結合ドメインまたは一本鎖抗原結合ドメインであり得る。Ｊ鎖会合抗原結合ドメインは、Ｊ鎖機能、または会合されたＩｇＭもしくはＩｇＡ抗体の機能を妨害せずに、Ｊ鎖会合抗原結合ドメインがその結合標的へ結合することを可能にする任意の位置で、Ｊ鎖の中へ導入され得る。挿入位置としては、Ｃ末端もしくはその付近、Ｎ末端もしくはその付近、またはＪ鎖の三次元構造に基づいて接近可能な内部の場所が挙げられるがこれらに限定されない。ある特定の実施形態において、Ｊ鎖会合抗原結合ドメインは、配列番号７のシステイン残基９２と１０１との間で、配列番号７の成熟ヒトＪ鎖の中へ導入され得る。さらなる実施形態において、Ｊ鎖会合抗原結合ドメインは、配列番号７のヒトＪ鎖の中のグリコシル化部位またはその近傍へ導入され得る。さらなる実施形態において、Ｊ鎖会合抗原結合ドメインは、Ｃ末端から約１０のアミノ酸残基内、またはＮ末端から約１０のアミノ酸内で、配列番号７のヒトＪ鎖の中へ導入され得る。本明細書の他の箇所で記載されるように、本開示は、修飾Ｊ鎖を含む多量体の二重特異性結合分子を提供し、修飾Ｊ鎖は、免疫エフェクター細胞（例えばＴ細胞（ＣＤ４＋Ｔ細胞またはＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ細胞等）またはＮＫ細胞）へ特異的に結合するＪ鎖会合抗原結合ドメインを含む。
いくつかの実施形態において、修飾Ｊ鎖は、免疫刺激剤（ＩＳＡ）、例えばサイトカイン（例えばインターロイキン－２（ＩＬ－２）またはインターロイキン－１５（ＩＬ－１５））、またはその受容体結合断片もしくはバリアントをさらに含み、それらは、ある特定の実施形態において、結合または共有結的な付加のいずれかによってその受容体の一部分（例えばＩＬ－１５受容体－αのスシドメイン）と会合し得る。かかるＩＳＡは、同時係属中のＰＣＴ公開第ＷＯ２０２１／０３０６８８号（それは、参照することによってその全体が本明細書に援用される）中で詳細に記載される。
ある特定の実施形態において、本明細書において提供されるＩｇＭ抗体、ＩｇＭ様抗体、ＩｇＡ抗体、ＩｇＡ様抗体、ＩｇＭ由来結合分子、またはＩｇＡ由来結合分子のＪ鎖は、例えば本明細書において提供されるＩｇＭ抗体、ＩｇＭ様抗体、ＩｇＡ抗体、ＩｇＡ様抗体、ＩｇＭ由来結合分子、またはＩｇＡ由来結合分子の血清半減期を変更し得る、１つまたは複数のアミノ酸置換を含むバリアントＪ鎖である。例えば、ある特定のアミノ酸の置換、欠失、または挿入は、バリアントＪ鎖中の１つまたは複数の単一アミノ酸の置換、欠失、または挿入を除いて同一であり、且つ同じ動物種へ同じ方法を使用して投与される参照ＩｇＭ由来結合分子に比べて、対象動物への投与に際して血清半減期の増加を示すＩｇＭ由来結合分子をもたらし得る。ある特定の実施形態において、バリアントＪ鎖は、参照Ｊ鎖に比べて、１、２、３、または４の単一アミノ酸の置換、欠失、または挿入を含み得る。
いくつかの実施形態において、多量体結合分子は、バリアントＪ鎖配列（低減した糖鎖付加を備えるか、または１つもしくは複数のポリマーＩｇ受容体（例えばｐＩｇＲ、Ｆｃアルファ－ミュー受容体（ＦｃαμＲ）、またはＦｃミュー受容体（ＦｃμＲ））への低減した結合を備える、本明細書において記載されるバリアント配列等）を含み得る。例えば米国特許第１０，８９９，８３５号（それは、参照することによってその全体が本明細書に援用される）を参照されたい。ある特定の実施形態において、バリアントＪ鎖は、成熟野生型ヒトＪ鎖（配列番号７）のアミノ酸Ｙ１０２に対応するアミノ酸位置で、アミノ酸置換を含み得る。「成熟野生型ヒトＪ鎖のアミノ酸Ｙ１０２に対応するアミノ酸」は、ヒトＪ鎖中のＹ１０２に相同な任意の種のＪ鎖の配列中のアミノ酸を意味する。米国特許第１０，８９９，８３５号（それは、参照することによってその全体が本明細書に援用される）を参照されたい。配列番号７中のＹ１０２に対応する位置は、少なくとも４３の他の種のＪ鎖アミノ酸配列中で保存される。米国特許第９，９５１，１３４号（それは、参照することによって本明細書に援用される）の図４を参照されたい。配列番号７のＹ１０２に対応する位置での特定の変異は、特定の免疫グロブリン受容体（例えばヒトもしくはマウスのＦｃαμ受容体、マウスＦｃμ受容体、及び／またはヒトもしくはマウスのポリマーＩｇ受容体（ｐＩｇ受容体））が、変異Ｊ鎖を含むＩｇＭ五量体へ結合することを阻害し得る。配列番号７のＹ１０２に対応するアミノ酸で変異を含むＩｇＭ抗体、ＩｇＭ様抗体、及びＩｇＭ由来結合分子は、置換を除いて同一であり、且つ同じ種へ同じ様式で投与される対応する抗体、抗体様分子、または結合分子よりも、動物へ投与された場合に改善された血清半減期を有する。ある特定の実施形態において、配列番号７のＹ１０２に対応するアミノ酸は、任意のアミノ酸により置換され得る。ある特定の実施形態において、配列番号７のＹ１０２に対応するアミノ酸は、アラニン（Ａ）、セリン（Ｓ）、またはアルギニン（Ｒ）により置換され得る。特定の実施形態において、配列番号７のＹ１０２に対応するアミノ酸は、アラニンにより置換され得る。特定の実施形態において、Ｊ鎖、またはその機能的断片もしくはバリアントはバリアントヒトＪ鎖であり、アミノ酸配列である配列番号８（本明細書において「Ｊ＊」と称されるＪ鎖）を含む。
野生型Ｊ鎖は、典型的には１つのＮ結合型糖鎖付加部位を含む。ある特定の実施形態において、本明細書において提供される多量体結合分子のバリアントＪ鎖またはその機能的断片は、アスパラギン（Ｎ）結合型糖鎖付加モチーフＮ－Ｘ１－Ｓ／Ｔ（例えば成熟ヒトＪ鎖（配列番号７）またはＪ＊（配列番号８）のアミノ酸４９（モチーフＮ６）に対応するアミノ酸位置で開始する）内で変異を含み、配列中、Ｎはアスパラギンであり、Ｘ１はプロリン以外の任意のアミノ酸であり、Ｓ／Ｔはセリンまたはスレオニンであり、変異はそのモチーフでの糖鎖付加を防止する。米国特許第１０，８９９，８３５号中で実証されるように、この部位での糖鎖付加を防止する変異は、バリアントＪ鎖中の糖鎖付加を防止する変異（複数可）を除いて同一であり、且つ同じ動物種へ同じ手法で投与される参照多量体結合分子に比べて、対象動物への投与に際して増加した血清半減期を示す本明細書において提供される多量体結合分子をもたらし得る。
例えば特定の実施形態において、本明細書において提供されるＪ鎖を含む結合分子のバリアントＪ鎖もしくはその機能的断片は、配列番号７もしくは配列番号８のアミノ酸Ｎ４９もしくはアミノ酸Ｓ５１に対応するアミノ酸位置でのアミノ酸置換を含み得るが、但し、Ｓ５１に対応するアミノ酸はスレオニン（Ｔ）により置換されないか、またはバリアントＪ鎖は、配列番号７もしくは配列番号８のアミノ酸Ｎ４９及びＳ５１の両方に対応するアミノ酸位置でのアミノ酸置換を含む。ある特定の実施形態において、配列番号７または配列番号８のＮ４９に対応する位置は、任意のアミノ酸（例えばアラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、スレオニン（Ｔ）、セリン（Ｓ）、アスパラギン酸（Ｄ））により置換される。特定の実施形態において、配列番号７または配列番号８のＮ４９に対応する位置は、アラニン（Ａ）により置換され得る。別の実施形態において、配列番号７または配列番号８のＮ４９に対応する位置は、アスパラギン酸（Ｄ）により置換され得る。いくつかの実施形態において、配列番号７または配列番号８のＳ５１に対応する位置は、アラニン（Ａ）またはグリシン（Ｇ）により置換される。いくつかの実施形態において、配列番号７または配列番号８のＳ５１に対応する位置は、アラニン（Ａ）により置換される。
免疫エフェクター細胞へ結合する修飾Ｊ鎖を備えた、多量体の二重特異性または多重特異性の抗ＣＤ１２３結合分子
本開示は、がん（例えば血液がん、例えば急性骨髄性白血病（ＡＭＬ））の治療における使用のための多量体の二重特異性または多重特異性の結合分子を提供し、結合分子は二重特異性であり、高いアビディティーによりがん細胞上のＣＤ１２３（ＩＬ－３Ｒα）を標的化しながら、一つの抗原結合ドメインを介して免疫エフェクター細胞（例えばＣＤ４＋Ｔ細胞もしくはＣＤ８＋Ｔ細胞またはＮＫ細胞）も標的化し、それによって、がん細胞のエフェクター細胞媒介性殺傷を容易にしながら、同時にサイトカインの過剰な放出を最小限にする。ある特定の実施形態において、多量体の二重特異性抗ＣＤ１２３結合分子は、抗ＣＤ１２３×抗ＣＤ３結合分子である。
本開示は、がん（例えば血液がん、例えば急性骨髄性白血病（ＡＭＬ））の治療における使用のための多量体の二重特異性または多重特異性の結合分子を提供し、結合分子は二重特異性であり、高いアビディティーによりがん細胞上のＣＤ１２３（ＩＬ－３Ｒα）を標的化しながら、一つの抗原結合ドメインを介して免疫エフェクター細胞（例えばＣＤ４＋Ｔ細胞もしくはＣＤ８＋Ｔ細胞またはＮＫ細胞）も標的化し、それによって、がん細胞のエフェクター細胞媒介性殺傷を容易にしながら、同時にサイトカインの過剰な放出を最小限にする。ある特定の実施形態において、多量体の二重特異性抗ＣＤ１２３結合分子は、抗ＣＤ１２３×抗ＣＤ３結合分子である。
したがって、本開示は、２つのＩｇＡもしくはＩｇＡ様または５つのＩｇＭもしくはＩｇＭ様の二価結合単位及び１つの修飾Ｊ鎖を含む、多量体の二重特異性または多重特異性の結合分子を提供し、修飾Ｊ鎖は、少なくとも野生型Ｊ鎖、またはその機能的断片もしくはバリアント、及び免疫エフェクター細胞へ特異的に結合するＪ鎖会合抗原結合ドメインを含む。各々の結合単位は２つの抗体重鎖を含み、当該重鎖の各々は、ＩｇＡ、ＩｇＡ様、ＩｇＭ、もしくはＩｇＭ様の重鎖定常領域、またはその多量体化断片（本明細書の他の箇所で記載されるように）、及び少なくとも結合単位会合抗原結合ドメインの重鎖可変領域（ＶＨ）部分を含む。結合単位会合抗原結合ドメインのうちの少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、またはすべての１０が、ＣＤ１２３へ特異的に結合する。本明細書において提供される結合分子は、ＣＤ１２３を発現する細胞（例えばがん細胞）の免疫エフェクター細胞依存性殺傷を誘導し得る。
ある特定の実施形態において、本明細書において提供される結合分子の修飾Ｊ鎖は、野生型Ｊ鎖のバリアント、またはその断片を含み、バリアントは、野生型Ｊ鎖に比べて、結合分子の血清半減期に影響し得る、１つまたは複数の単一アミノ酸の置換、欠失、または挿入を含み、結合分子は、Ｊ鎖中の１つまたは複数の単一アミノ酸の置換、欠失、または挿入を除いて同一であり、且つ同じ動物種へ同じ方法で投与される参照結合分子に比べて、動物への投与に際して血清半減期の増加を示す。例えば特定の実施形態において、Ｊ鎖は、アミノ酸配列である配列番号８を含むバリアントヒトＪ鎖（「Ｊ＊」）である。
ある特定の実施形態において、提供される結合分子のＪ鎖会合抗原結合ドメインは、抗体またはその断片を含む。ある特定の実施形態において、抗体断片は、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）である。ｓｃＦｖは、Ｊ鎖または断片もしくはバリアント（例えばＪ＊）へ融合され得るか、または化学的にコンジュゲートされ得る。ある特定の実施形態において、ｓｃＦｖは、ペプチドリンカー（例えば配列番号９～１３）によりＪ鎖へ融合される。本開示中の他の箇所で指摘されるように、Ｊ鎖の機能（すなわちＩｇＭ、ＩｇＭ様、ＩｇＡ、またはＩｇＡ様の結合単位と共に集合して、二量体または五量体を形成すること）が影響されない限り、ｓｃＦｖは、Ｊ鎖、またはその断片もしくはバリアントへ任意の手法で融合され得る。例えば、ｓｃＦｖは、Ｊ鎖、またはその断片もしくはバリアントのＮ末端、Ｊ鎖、またはその断片もしくはバリアントのＣ末端へ、あるいはＪ鎖、またはその断片もしくはバリアントのＮ末端及びＣ末端の両方へ融合され得る。
修飾Ｊ鎖の抗原結合ドメインが結合する免疫エフェクター細胞は、ＣＤ１２３によって標的化されたがん細胞と会合された場合に有益な効果（例えばＣＤ１２３＋がん細胞の細胞ベースの殺傷を媒介する）を付与する、任意の免疫エフェクター細胞であり得る。ある特定の実施形態において、免疫エフェクター細胞は、限定されずに、Ｔ細胞（例えばＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＮＫＴ細胞、またはγδＴ細胞）、Ｂ細胞、形質細胞、マクロファージ、樹状細胞、またはナチュラルキラー（ＮＫ）細胞であり得る。ある特定の実施形態において、免疫エフェクター細胞は、Ｔ細胞（例えばＣＤ４＋またはＣＤ８＋のＴ細胞）である。ある特定の実施形態において、免疫エフェクター細胞は、ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ細胞である。ある特定の実施形態において、免疫エフェクター細胞は、ＮＫ細胞である。
免疫エフェクター細胞がＴ細胞（例えばＣＤ８＋Ｔ細胞）である場合に、Ｊ鎖会合抗体またはその断片、例えばｓｃＦｖは、Ｔ細胞表面抗原ＣＤ３（例えばＣＤ３ε）へ特異的に結合し得る。ある特定の実施形態において、抗ＣＤ３ ｓｃＦｖは、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、ＶＨは、ＶＨ相補性決定領域ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２及びＶＨＣＤＲ３を含み、ＶＬはＶＬ相補性決定領域ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２及びＶＬＣＤＲ３を含み、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２及びＶＬＣＤＲ３はそれぞれ、アミノ酸配列である配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２３、配列番号２４及び配列番号２５；配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３２及び配列番号３３；配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３９、配列番号４０及び配列番号４１；配列番号４３、配列番号４４、配列番号４５、配列番号４７、配列番号４８及び配列番号４９；配列番号５１、配列番号５２、配列番号５３、配列番号５５、配列番号５６及び配列番号５７；配列番号５９、配列番号６０、配列番号６１、配列番号６３、配列番号６４及び配列番号６５；または配列番号６７、配列番号６８、配列番号６９、配列番号７１、配列番号７２及び配列番号７３を０、１または２個のアミノ酸置換を伴って含む。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖはそれぞれ、ＶＨ及びＶＬアミノ酸配列である配列番号１８及び配列番号２２、配列番号２６及び配列番号３０、配列番号３４及び配列番号３８、配列番号４２及び配列番号４６、配列番号５０及び配列番号５４、配列番号５８及び配列番号６２、または配列番号６６及び配列番号７０を含む。
ある特定の他の実施形態において、免疫エフェクター細胞はＮＫ細胞でありＪ鎖会合抗体またはその断片、例えばｓｃＦｖはＣＤ１６またはＣＤ５６へ特異的に結合し得る。多くのＣＤ１６及びＣＤ５６ ｓｃＦｖが知られており、例えば、米国特許第９，０３５，０２６号、同第９，７０１，７５０号、同第１０，７３０，９４１号、同第１１，００１，６３３号、ＭｃＣａｌｌ ｅｔ ａｌ．，１９９９．Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ．７：４３３－４４５に開示されているものが挙げられる。
多量体の二重特異性抗ＣＤ１２３結合分子（例えば本明細書において提供される抗ＣＤ１２３×抗ＣＤ３結合分子）の修飾Ｊ鎖は、Ｊ鎖へ付加された追加の異種部分を含むようにさらに修飾され得る。例示的な部分は、例えば米国特許第９，９５１，１３４号、米国特許出願公開第ＵＳ２０１９－０１８５５７０号、米国特許第１０，６１８，９７８号及びＰＣＴ公開第ＷＯ２０２１／０３０６８８号（それらのすべては、参照することによってそれらの全体が本明細書に援用される）中で記載される。ある特定の実施形態において、多量体の二重特異性抗ＣＤ１２３結合分子（例えば本明細書において提供される抗ＣＤ１２３×抗ＣＤ３結合分子）の修飾Ｊ鎖は、Ｊ鎖、またはその断片もしくはバリアントへ融合されるか、または化学的にコンジュゲートされる免疫刺激剤（「ＩＳＡ」）をさらに含み得る。例えば、ＩＳＡは、サイトカイン、またはその受容体結合断片もしくはバリアントを含み得る。特定の実施形態において、Ｊ鎖会合ＩＳＡは、（ａ）インターロイキン－１５（ＩＬ－１５）タンパク質、またはその受容体結合断片もしくはバリアント（「Ｉ」）、及び（ｂ）Ｉと会合することができるスシドメインまたはそのバリアントを含むインターロイキン－１５受容体－α（ＩＬ－１５Ｒα）断片（「Ｒ」）を含み、Ｊ鎖、またはその断片もしくはバリアント、ならびにＩ及びＲのうちの少なくとも１つ、またはＩ及びＲの両方は、融合タンパク質として会合し、Ｉ及びＲは会合してＩＳＡとして機能し得る。ある特定の実施形態において、ＩＳＡは、ペプチドリンカーを経由してＪ鎖へ融合され得る。
ポリヌクレオチド、ベクター、及び宿主細胞
本開示は、本明細書に提供される抗原結合ドメイン、または本明細書において提供される抗体もしくは抗体様分子（例えば、二量体、六量体または五量体の抗体または抗体様分子）のポリペプチドサブユニットをコードする核酸配列を含む、ポリヌクレオチド（例えば単離ポリヌクレオチド、組み換えポリヌクレオチド、及び／または天然に存在しないポリヌクレオチド）をさらに提供する。「ポリペプチドサブユニット」は、独立して翻訳され得る、抗体もしくは抗体様分子の部分、結合単位、または抗原結合ドメインを意味する。例としては、抗体可変ドメイン（例えばＶＨまたはＶＬ）、Ｊ鎖（本明細書において提供される修飾Ｊ鎖を包含する）、分泌成分、一本鎖Ｆｖ、抗体重鎖、抗体軽鎖、抗体重鎖定常領域、抗体軽鎖定常領域、及び／または任意のそれらの断片、バリアント、もしくは誘導体が、限定されずに挙げられる。
本開示は、本明細書に提供される抗原結合ドメイン、または本明細書において提供される抗体もしくは抗体様分子（例えば、二量体、六量体または五量体の抗体または抗体様分子）のポリペプチドサブユニットをコードする核酸配列を含む、ポリヌクレオチド（例えば単離ポリヌクレオチド、組み換えポリヌクレオチド、及び／または天然に存在しないポリヌクレオチド）をさらに提供する。「ポリペプチドサブユニット」は、独立して翻訳され得る、抗体もしくは抗体様分子の部分、結合単位、または抗原結合ドメインを意味する。例としては、抗体可変ドメイン（例えばＶＨまたはＶＬ）、Ｊ鎖（本明細書において提供される修飾Ｊ鎖を包含する）、分泌成分、一本鎖Ｆｖ、抗体重鎖、抗体軽鎖、抗体重鎖定常領域、抗体軽鎖定常領域、及び／または任意のそれらの断片、バリアント、もしくは誘導体が、限定されずに挙げられる。
ある特定の実施形態では、本明細書に記載の結合分子のポリペプチドサブユニットをコードする核酸配列を含むポリヌクレオチド。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、結合分子の重鎖定常領域と結合ドメインの少なくとも抗体ＶＨ部分とを含む、ポリペプチドサブユニットをコードする。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、結合分子の重鎖を含むポリペプチドサブユニットをコードする。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３領域を含むＶＨを含んだポリペプチドサブユニットをコードし、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３はそれぞれ、配列番号７６、配列番号７７、配列番号７８、配列番号８０、配列番号８１または配列番号８２のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、結合分子の軽鎖定常領域と結合ドメインの少なくとも抗体ＶＬ部分とを含む、ポリペプチドサブユニットをコードする。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、結合分子の軽鎖を含むポリペプチドサブユニットをコードする。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３領域を含むＶＬを含んだポリペプチドサブユニットをコードし、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３はそれぞれ、配列番号７９または配列番号８３のアミノ酸配列を含む。
ある特定の実施形態において、ポリペプチドサブユニットとしては、ＩｇＭ重鎖定常領域もしくはＩｇＭ様重鎖定常領域、またはそれらの多量体化断片、あるいはＩｇＡ重鎖定常領域もしくはＩｇＡ様重鎖定常領域、またはそれらの多量体化断片が挙げられ得、それらは、抗原結合ドメインまたはそのサブユニットへ（例えば抗原結合ドメインのＶＨ部分、または抗原結合ドメインのＶＬ部分へ）、すべて本明細書において提供されるように融合される。ある特定の実施形態において、ポリヌクレオチドは、ヒトＩｇＭ重鎖定常領域、ヒトＩｇＭ様重鎖定常領域、ヒトＩｇＡ重鎖定常領域、ヒトＩｇＡ様重鎖定常領域、またはその多量体化断片（例えば配列番号１、配列番号２、配列番号３、または配列番号４）を含むポリペプチドサブユニットをコードし、そのうちの任意のものが、抗原結合ドメインまたはそのサブユニット（例えばＶＨのＣ末端）と会合される、例えば融合される。
ＣＤ１２３に特異的に結合する抗体の抗原結合ドメインまたは可変領域を形成するためには、提供されるポリヌクレオチドは、例えば単量体抗体（例えばＩｇＧ抗体）のためまたはＩｇＧ及び／またはＩｇＡ構造体のための発現ベクター鋳型内に挿入され得、それによって、単一の結合単位を含む単量体抗体、あるいは多量体抗体、または少なくとも２つの二価結合単位を有するその多量体化断片もしくは誘導体が生み出され得る。手短に述べると、重軽鎖可変ドメイン配列をコードする核酸配列が合成され得るかまたは既存分子から増幅され得、ベクター内に適切な配向で、発現時にベクターが完全長重鎖または軽鎖を生成することになるようなインフレームで、挿入され得る。これらの目的のために有用となるベクターは当技術分野で公知である。そのようなベクターは、エンハンサー、及び所望の鎖の発現を実現するために必要とされる他の配列も含み得る。複数のベクターまたは単一のベクターが使用され得る。これらのベクターは、宿主細胞にトランスフェクトされ、その後、鎖が発現され、精製される。文献において報告されているように、発現の際、鎖は、完全に機能的な多量体結合分子を形成する。完全に組み立てられた多量体結合分子は、その後、標準的な方法によって精製され得る。発現及び精製プロセスは、必要に応じて商業的規模で実施され得る。
本開示はさらに、２つ以上のポリヌクレオチドであって、本明細書に記載の抗原結合ドメインまたは抗体もしくは抗体様分子（例えば、単量体、二量体、六量体または五量体抗体）を一括的にコードし得る、当該２つ以上のポリヌクレオチドを含む、組成物を提供する。ある特定の実施形態では、組成物は、上記のＩｇＧ、ＩｇＭ及び／またはＩｇＡの重鎖またはその断片（例えば、ヒトＩｇＧ、ＩｇＭまたはＩｇＡの重鎖）をコードするポリヌクレオチドを含み得、ＩｇＧ、ＩｇＭ及び／またはＩｇＡの重鎖が、本明細書に提供のＣＤ１２３抗原結合ドメインの提供されるＶＨを少なくとも含むものであり、さらに、本明細書に提供されるＣＤ１２３抗原結合ドメインの提供されるＶＬを少なくとも含む軽鎖またはその断片（例えばヒトκまたはλ軽鎖）をコードするポリヌクレオチドを含み得る。提供されるポリヌクレオチド組成物はさらに、Ｊ鎖、例えばヒトＪ鎖、またはその断片、バリアントもしくは誘導体をコードする、ポリヌクレオチドを含み得る。ある特定の実施形態では、本明細書に提供される組成物を構成しているポリヌクレオチドは、２つ、３つまたはそれより多くの別個のベクター、例えば発現ベクターの上に位置し得る。そのようなベクターは本開示によって提供されている。ある特定の実施形態では、本明細書に提供される組成物を構成しているポリヌクレオチドの２つ以上は、単一のベクター、例えば発現ベクターの上に位置し得る。そのようなベクターは本開示によって提供されている。
ある特定の実施形態において、本開示は、本明細書において提供される２、３、またはそれ以上のポリヌクレオチドを含む組成物を提供し、ポリヌクレオチドは一緒に、抗ＣＤ１２３結合分子、例えば、多量体の二重特異性抗ＣＤ１２３結合分子（例えば本明細書において提供される抗ＣＤ１２３×抗ＣＤ３結合分子）をコードし得る。ある特定の実施形態において、ポリヌクレオチドは、別個のベクター上に位置し得る。ある特定の実施形態において、２つ以上のポリヌクレオチドは、同じベクター上に位置し得る。かかるベクターは、本開示によって同様に提供される。
本開示は、抗ＣＤ１２３結合分子、例えば多量体の二重特異性抗ＣＤ１２３結合分子（例えば本明細書において提供される抗ＣＤ１２３×抗ＣＤ３結合分子、またはその任意のサブユニット）をコードする１つのポリヌクレオチドまたは２つ以上のポリヌクレオチド、本明細書において提供されるポリヌクレオチド組成物、あるいは本明細書において提供される結合分子またはその任意のサブユニットを集合的にコードするベクター、または２、３、もしくは以上のベクターを含む、宿主細胞（例えば原核生物宿主細胞または真核生物宿主細胞）をさらに提供する。
関連する実施形態において、本開示は、本開示によって提供される多量体結合分子を産生する方法を提供し、当該方法は、本明細書において提供される宿主細胞を培養すること、及び多量体結合分子を回収することを含む。
使用方法
本開示は、治療を必要とする対象における疾患または障害（例えばがんまたは他の悪性腫瘍、例えば血液がんまたは血液悪性腫瘍）を治療する方法をさらに提供し、当該方法は、治療有効量の抗ＣＤ１２３抗体またはその抗原結合断片もしくは誘導体（例えば本明細書において提供される抗ＣＤ１２３×抗ＣＤ３抗体）を対象へ投与することを含む。「治療有効用量または治療有効量」または「有効量」は、投与された場合に、正の応答（例えば対象における腫瘍細胞の殺傷）をもたらす結合分子の量を意図する。
本開示は、治療を必要とする対象における疾患または障害（例えばがんまたは他の悪性腫瘍、例えば血液がんまたは血液悪性腫瘍）を治療する方法をさらに提供し、当該方法は、治療有効量の抗ＣＤ１２３抗体またはその抗原結合断片もしくは誘導体（例えば本明細書において提供される抗ＣＤ１２３×抗ＣＤ３抗体）を対象へ投与することを含む。「治療有効用量または治療有効量」または「有効量」は、投与された場合に、正の応答（例えば対象における腫瘍細胞の殺傷）をもたらす結合分子の量を意図する。
ある特定の実施形態において、治療されるがんは、悪性細胞がＣＤ１２３を発現または過剰発現する任意のがんであり得る。例えば、がんは、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、Ｂ細胞急性リンパ芽球性白血病（Ｂ細胞ＡＬＬ）、古典的ホジキンリンパ腫、有毛細胞性白血病、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、全身性肥満細胞症、または形質細胞様樹状細胞白血病）であり得る。
がんの治療のための組成物の有効用量は、多くの異なる要因（投与の手段、標的部位、対象の生理的状態、対象がヒトまたは動物であるか、投与される他の医薬物、及び処置が予防的または治療的であるか、が挙げられる）に依存して、変動し得る。通常、対象はヒトであるが、遺伝子導入哺乳動物を含む非ヒト哺乳動物も治療され得る。
治療される対象は、治療を必要とする任意の哺乳動物であり得、ある特定の実施形態において、対象はヒト対象である。
その最も単純な形態において、対象へ投与される調製物は、従来の投薬形態において投与された抗ＣＤ１２３抗体、またはその誘導体の抗原結合断片（例えば本明細書において提供される抗ＣＤ１２３×抗ＣＤ３抗体）であり、それらは、本明細書の他の箇所で記載される医薬賦形剤、担体、または希釈物質と組み合わせられ得る。
本開示の組成物は、任意の好適な方法（例えば非経口、脳室内、経口、吸入噴霧、局所、経直腸、経鼻、頬側、経腟で、または植え込み型リザーバーを介して）によって投与され得る。「非経口」という用語は、本明細書において使用される時、皮下、静脈内、筋肉内、関節内、滑液内、胸骨内、髄腔内、肝臓内、病巣内、及び頭蓋内の注射または点滴の技法を包含する。
医薬組成物及び投与方法
抗ＣＤ１２３抗体またはその抗原結合断片もしくは誘導体（例えば本明細書において提供される抗ＣＤ１２３の×抗ＣＤ３抗体）を調製し、それを必要とする対象へ投与する方法は、当業者に周知であるか、または本開示を考慮して当業者によって容易に決定される。投与経路は、例えば腫瘍内、経口、非経口、吸入による、または局所であり得る。非経口という用語は、本明細書において使用される時、例えば、静脈内、動脈内、腹腔内、筋肉内、皮下、直腸、または経腟の投与を包含する。これらの投与形態が好適な形態として企図されているが、別の投与形態の例は、注射のための、腫瘍内、静脈内、または動脈内の注射または点滴のための溶液であるだろう。好適な医薬組成物は、緩衝剤（例えば酢酸緩衝剤、リン酸緩衝剤、またはクエン酸緩衝剤）、界面活性剤（例えばポリソルベート）、任意選択で安定化剤（例えばヒトアルブミン）などを含み得る。
抗ＣＤ１２３抗体またはその抗原結合断片もしくは誘導体（例えば本明細書において提供される抗ＣＤ１２３の×抗ＣＤ３抗体）を調製し、それを必要とする対象へ投与する方法は、当業者に周知であるか、または本開示を考慮して当業者によって容易に決定される。投与経路は、例えば腫瘍内、経口、非経口、吸入による、または局所であり得る。非経口という用語は、本明細書において使用される時、例えば、静脈内、動脈内、腹腔内、筋肉内、皮下、直腸、または経腟の投与を包含する。これらの投与形態が好適な形態として企図されているが、別の投与形態の例は、注射のための、腫瘍内、静脈内、または動脈内の注射または点滴のための溶液であるだろう。好適な医薬組成物は、緩衝剤（例えば酢酸緩衝剤、リン酸緩衝剤、またはクエン酸緩衝剤）、界面活性剤（例えばポリソルベート）、任意選択で安定化剤（例えばヒトアルブミン）などを含み得る。
本明細書において論じられるように、抗ＣＤ１２３抗体、またはその抗原結合断片もしくは誘導体（例えば本明細書において提供される抗ＣＤ１２３×抗ＣＤ３抗体）は、それを必要とする対象の治療のための薬学的有効量で投与され得る。この点に関して、開示される抗体またはその抗原結合断片もしくは誘導体は、投与を容易にし、且つ活性剤の安定性を増進するために製剤化され得ることが理解されるだろう。医薬組成物は、したがって薬学的に許容される非毒性の滅菌担体（生理的塩類溶液、非毒性緩衝剤、防腐剤、及び同種のもの等）を含み得る。本明細書において提供されるＩＳＡを含む抗体またはその抗原結合断片もしくは誘導体の薬学的有効量は、標的への有効な結合を達成し、且つ治療利益を達成するのに十分な量を意味する。好適な製剤は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、例えば第２１版（Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ）（２００５）中に記載される。
本明細書において提供されるある特定の医薬組成物は、許容される投薬形態（例えばカプセル、錠剤、水性懸濁、または溶液が挙げられる）で経口投与され得る。ある特定の医薬組成物は、鼻エアロゾルまたは吸入によっても投与され得る。かかる組成物は、ベンジルアルコールもしくは他の好適な防腐剤、生物学的利用能を向上させる吸収促進剤、及び／または他の従来の可溶化剤もしくは分散剤を用いて、塩類溶液中の溶液として調製され得る。
単一投薬形態を産生するために担体材料により組み合わせられ得る、本明細書に開示される抗ＣＤ１２３抗体または抗体様分子（例えば抗ＣＤ１２３×抗ＣＤ３抗体）の量は、例えば治療される対象及び特定の投与モードを依存して変動するだろう。組成物は、単回用量、複数回用量、または点滴において確立された期間にわたってとして投与され得る。投薬量レジメンも、最適な所望の応答（例えば治療応答または予防応答）を提供するように調整され得る。
本開示の範囲に沿って、抗ＣＤ１２３抗体または抗体様分子（例えば本明細書において提供される抗ＣＤ１２３×抗ＣＤ３抗体）は、治療効果を産生するのに十分な量で治療法を必要とする対象へ投与され得る。抗ＣＤ１２３抗体または抗体様分子（例えば本明細書において提供される抗ＣＤ１２３×抗ＣＤ３抗体）は、公知の技法に従って、本開示の抗体または抗体様分子を従来の薬学的に許容される担体または希釈物質と組み合わせることによって調製された従来の投薬形態で、対象へ投与され得る。薬学的に許容される担体または希釈物質の形態及び性質は、それが組み合わせられる活性成分の量、投与経路、及び他の周知の可変要素によって定められ得る。
本開示は、がんまたは他の悪性腫瘍を治療、予防、または管理するための医薬品の製造における、抗ＣＤ１２３抗体または抗体様分子（例えば本明細書において提供される抗ＣＤ１２３×抗ＣＤ３抗体）の使用も提供する。本開示は、がんを治療、予防、または管理することにおける使用のための抗ＣＤ１２３抗体または抗体様分子（例えば本明細書において提供される抗ＣＤ１２３×抗ＣＤ３結合分子）も提供する。
本開示は、別段の指示のない限り、細胞生物学、細胞培養、分子生物学、遺伝子導入生物学、微生物学、組み換えＤＮＡ、及び免疫学の従来の技法を用い、それは当業者の技能の範囲内である。かかる技法は、文献において十分に説明されている。例えばＧｒｅｅｎ ａｎｄ Ｓａｍｂｒｏｏｋ，ｅｄ．（２０１２）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（４ｔｈ ｅｄ．；Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ）、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，ｅｄ．（１９９２）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇｓ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，ＮＹ）、Ｄ．Ｎ．Ｇｌｏｖｅｒ ａｎｄ Ｂ．Ｄ．Ｈａｍｅｓ，ｅｄｓ．，（１９９５）ＤＮＡ Ｃｌｏｎｉｎｇ ２ｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ（ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ），Ｖｏｌｕｍｅｓ １－４、Ｇａｉｔ，ｅｄ．（１９９０）Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ）、Ｍｕｌｌｉｓ ｅｔ ａｌ．米国特許第４，６８３，１９５号、Ｈａｍｅｓ ａｎｄ Ｈｉｇｇｉｎｓ，ｅｄｓ．（１９８５）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ（ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ）、Ｈａｍｅｓ ａｎｄ Ｈｉｇｇｉｎｓ，ｅｄｓ．（１９８４）Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ Ａｎｄ Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ（ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ）、Ｆｒｅｓｈｎｅｙ（２０１６）Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌｓ，７ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｗｉｌｅｙ－Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ）、Ｗｏｏｄｗａｒｄ，Ｊ．，Ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ Ｃｅｌｌｓ Ａｎｄ Ｅｎｚｙｍｅｓ（ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ）（１９８５）、Ｐｅｒｂａｌ（１９８８）Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｇｕｉｄｅ Ｔｏ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ；２ｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｗｉｌｅｙ－Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ）、Ｍｉｌｌｅｒ ａｎｄ Ｃａｌｏｓ ｅｄｓ．（１９８７）Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ Ｖｅｃｔｏｒｓ Ｆｏｒ Ｍａｍｍａｌｉａｎ Ｃｅｌｌｓ，（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）、Ｓ．Ｃ．Ｍａｋｒｉｄｅｓ（２００３）Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ ａｎｄ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ Ｍａｍｍａｌｉａｎ Ｃｅｌｌｓ（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ Ｓｃｉｅｎｃｅ）、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌｓ．１５１－１５５（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．，Ｎ．Ｙ．）、Ｍａｙｅｒ ａｎｄ Ｗａｌｋｅｒ，ｅｄｓ．（１９８７）Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｌｏｎｄｏｎ）、Ｗｅｉｒ ａｎｄ Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ，ｅｄｓ．、及びＡｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．（１９９５）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ）を参照されたい。
抗体操作の一般的な原理は、例えばＳｔｒｏｈｌ，Ｗ．Ｒ．，ａｎｄ Ｌ．Ｍ．Ｓｔｒｏｈｌ（２０１２），Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ（Ｗｏｏｄｈｅａｄ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ）中で説明される。タンパク質操作の一般的な原理は、例えばＰａｒｋ ａｎｄ Ｃｏｃｈｒａｎ，ｅｄｓ．（２００９），Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ａｎｄ Ｄｅｓｉｇｎ（ＣＤＣ Ｐｒｅｓｓ）中で説明される。免疫学の一般的な原理は、例えばＡｂｂａｓ ａｎｄ Ｌｉｃｈｔｍａｎ（２０１７）Ｃｅｌｌｕｌａｒ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ９ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ）中で説明される。追加で、当技術分野において公知の免疫学における標準的方法は、例えばＣｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｗｉｌｅｙ Ｏｎｌｉｎｅ Ｌｉｂｒａｒｙ）、Ｗｉｌｄ，Ｄ．（２０１３），Ｔｈｅ Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ Ｈａｎｄｂｏｏｋ ４ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ Ｓｃｉｅｎｃｅ）、Ｇｒｅｅｎｆｉｅｌｄ，ｅｄ．（２０１３），Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，２ｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ）、及び Ｏｓｓｉｐｏｗ ａｎｄ Ｆｉｓｃｈｅｒ，ｅｄｓ．，（２０１４），Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ（Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ）中のものに従い得る。
前掲の参照文献のすべて、そして本明細書において引用されるすべて参考文献は、参照することによってそれらの全体が本明細書に援用される。
以下の実施例は、限定としてではなく例証として提供される。
例示的実施形態
提供される実施形態の中でも特に挙げられるのは以下である。
提供される実施形態の中でも特に挙げられるのは以下である。
実施形態１
ＣＤ１２３へ特異的に結合する抗原結合ドメインを含む、抗体またはその抗原結合断片もしくは誘導体であって、
前記抗原結合ドメインが、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、
前記ＶＨ及び前記ＶＬがそれぞれ、アミノ酸配列である配列番号７６及び配列番号７９、配列番号７７及び配列番号７９、配列番号７８及び配列番号７９、配列番号８０及び配列番号８３、配列番号８１及び配列番号８３、ならびに配列番号８２及び配列番号８３を含む、
前記抗体またはその抗原結合断片もしくは誘導体。
ＣＤ１２３へ特異的に結合する抗原結合ドメインを含む、抗体またはその抗原結合断片もしくは誘導体であって、
前記抗原結合ドメインが、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、
前記ＶＨ及び前記ＶＬがそれぞれ、アミノ酸配列である配列番号７６及び配列番号７９、配列番号７７及び配列番号７９、配列番号７８及び配列番号７９、配列番号８０及び配列番号８３、配列番号８１及び配列番号８３、ならびに配列番号８２及び配列番号８３を含む、
前記抗体またはその抗原結合断片もしくは誘導体。
実施形態２
前記ＶＨ及び前記ＶＬがそれぞれ、アミノ酸配列である配列番号７６及び配列番号７９を含む、実施形態１の抗体またはその断片もしくは誘導体。
前記ＶＨ及び前記ＶＬがそれぞれ、アミノ酸配列である配列番号７６及び配列番号７９を含む、実施形態１の抗体またはその断片もしくは誘導体。
実施形態３
５、６または２個の二価結合単位、及び１０、１２または４個の抗原結合ドメインを含む多量体抗体であり、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１または１２個の抗原結合ドメインが、ＣＤ１２３へ特異的に結合し、各結合単位が２つの重鎖を含み、前記２つの重鎖の各々が、ＩｇＭもしくはＩｇＡ定常領域、またはその多量体化断片もしくはバリアントを含み、前記多量体抗体の少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１または１２個の前記重鎖定常領域が前記ＶＨのコピーと会合している、実施形態１または実施形態２の抗体またはその断片もしくは誘導体。
５、６または２個の二価結合単位、及び１０、１２または４個の抗原結合ドメインを含む多量体抗体であり、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１または１２個の抗原結合ドメインが、ＣＤ１２３へ特異的に結合し、各結合単位が２つの重鎖を含み、前記２つの重鎖の各々が、ＩｇＭもしくはＩｇＡ定常領域、またはその多量体化断片もしくはバリアントを含み、前記多量体抗体の少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１または１２個の前記重鎖定常領域が前記ＶＨのコピーと会合している、実施形態１または実施形態２の抗体またはその断片もしくは誘導体。
実施形態４
２つの抗原結合ドメインを含む単一の二価結合単位を含み、
少なくとも１つの抗原結合ドメインが、ＣＤ１２３へ特異的に結合し、前記結合単位が２つの重鎖を含み、前記２つの重鎖の各々が重鎖定常領域またはその断片もしくはバリアントを含み、前記結合単位の少なくとも１つの前記重鎖定常領域またはその断片もしくはバリアントが前記ＶＨのコピーと会合している、
実施形態１または実施形態２の抗体またはその断片もしくは誘導体。
２つの抗原結合ドメインを含む単一の二価結合単位を含み、
少なくとも１つの抗原結合ドメインが、ＣＤ１２３へ特異的に結合し、前記結合単位が２つの重鎖を含み、前記２つの重鎖の各々が重鎖定常領域またはその断片もしくはバリアントを含み、前記結合単位の少なくとも１つの前記重鎖定常領域またはその断片もしくはバリアントが前記ＶＨのコピーと会合している、
実施形態１または実施形態２の抗体またはその断片もしくは誘導体。
実施形態５
前記重鎖がＩｇＧ重鎖定常領域またはその断片もしくはバリアントを含む、実施形態４の抗体またはその断片もしくは誘導体。
前記重鎖がＩｇＧ重鎖定常領域またはその断片もしくはバリアントを含む、実施形態４の抗体またはその断片もしくは誘導体。
実施形態６
Ｆｖ断片、一本鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）またはジスルフィド結合Ｆｖ断片（ｓｄＦｖ）である、実施形態１または実施形態２の抗体またはその断片もしくは誘導体。
Ｆｖ断片、一本鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）またはジスルフィド結合Ｆｖ断片（ｓｄＦｖ）である、実施形態１または実施形態２の抗体またはその断片もしくは誘導体。
実施形態７
多重特異性である、実施形態１～６のいずれか１つの抗体またはその断片もしくは誘導体。
多重特異性である、実施形態１～６のいずれか１つの抗体またはその断片もしくは誘導体。
実施形態８
二重特異性である、実施形態７の抗体またはその断片もしくは誘導体。
二重特異性である、実施形態７の抗体またはその断片もしくは誘導体。
実施形態９
ＣＤ３に結合し得る、実施形態７または実施形態８の抗体またはその断片もしくは誘導体。
ＣＤ３に結合し得る、実施形態７または実施形態８の抗体またはその断片もしくは誘導体。
実施形態１０
ヒトＣＤ１２３へ特異的に結合し得る、実施形態１～９のいずれか１つの抗体またはその断片もしくは誘導体。
ヒトＣＤ１２３へ特異的に結合し得る、実施形態１～９のいずれか１つの抗体またはその断片もしくは誘導体。
実施形態１１
５００ｎＭ、１００ｎＭ、５０．０ｎＭ、４０．０ｎＭ、３０．０ｎＭ、２０．０ｎＭ、１０．０ｎＭ、９．０ｎＭ、８．０ｎＭ、７．０ｎＭ、６．０ｎＭ、５．０ｎＭ、４．０ｎＭ、３．０ｎＭ、２．０ｎＭ、１．０ｎＭ、０．５０ｎＭ、０．１０ｎＭ、０．０５０ｎＭ、０．０１ｎＭ、０．００５ｎＭまたは０．００１ｎＭ以下の解離定数ＫＤによって特徴づけられる親和性でヒトＣＤ１２３へ特異的に結合する、実施形態１０の抗体またはその断片もしくは誘導体。
５００ｎＭ、１００ｎＭ、５０．０ｎＭ、４０．０ｎＭ、３０．０ｎＭ、２０．０ｎＭ、１０．０ｎＭ、９．０ｎＭ、８．０ｎＭ、７．０ｎＭ、６．０ｎＭ、５．０ｎＭ、４．０ｎＭ、３．０ｎＭ、２．０ｎＭ、１．０ｎＭ、０．５０ｎＭ、０．１０ｎＭ、０．０５０ｎＭ、０．０１ｎＭ、０．００５ｎＭまたは０．００１ｎＭ以下の解離定数ＫＤによって特徴づけられる親和性でヒトＣＤ１２３へ特異的に結合する、実施形態１０の抗体またはその断片もしくは誘導体。
実施形態１２
５、６または２個の二価結合単位、及び１０、１２または４個の抗原結合ドメインを含む、多量体抗体であって、
少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１または１２個の抗原結合ドメインが、ＣＤ１２３へ特異的に結合し、
前記抗原結合ドメインが、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、
前記ＶＨ及び前記ＶＬがそれぞれ、アミノ酸配列である配列番号７６及び配列番号７９、配列番号７７及び配列番号７９、配列番号７８及び配列番号７９、配列番号８０及び配列番号８３、配列番号８１及び配列番号８３、ならびに配列番号８２及び配列番号８３を含み、
各結合単位が２つの重鎖を含み、前記２つの重鎖の各々が、ＩｇＭもしくはＩｇＡ定常領域、またはその多量体化断片もしくはバリアントを含み、
前記多量体抗体の少なくとも３、４、５、６、７、８、９、１０、１１または１２個の重鎖定常領域が前記ＶＨのコピーと会合している、
前記多量体抗体。
５、６または２個の二価結合単位、及び１０、１２または４個の抗原結合ドメインを含む、多量体抗体であって、
少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１または１２個の抗原結合ドメインが、ＣＤ１２３へ特異的に結合し、
前記抗原結合ドメインが、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、
前記ＶＨ及び前記ＶＬがそれぞれ、アミノ酸配列である配列番号７６及び配列番号７９、配列番号７７及び配列番号７９、配列番号７８及び配列番号７９、配列番号８０及び配列番号８３、配列番号８１及び配列番号８３、ならびに配列番号８２及び配列番号８３を含み、
各結合単位が２つの重鎖を含み、前記２つの重鎖の各々が、ＩｇＭもしくはＩｇＡ定常領域、またはその多量体化断片もしくはバリアントを含み、
前記多量体抗体の少なくとも３、４、５、６、７、８、９、１０、１１または１２個の重鎖定常領域が前記ＶＨのコピーと会合している、
前記多量体抗体。
実施形態１３
前記ＶＨ及び前記ＶＬがそれぞれ、アミノ酸配列である配列番号７６及び配列番号７９を含む、実施形態１２の多量体抗体。
前記ＶＨ及び前記ＶＬがそれぞれ、アミノ酸配列である配列番号７６及び配列番号７９を含む、実施形態１２の多量体抗体。
実施形態１４
五量体または六量体であり、かつ５または６個の二価ＩｇＭ結合単位を含み、
各結合単位が、Ｃμ４ドメイン及びμテールピース（μｔｐ）ドメイン、またはその多量体化断片もしくはバリアントを含む、
実施形態１２または実施形態１３の多量体抗体。
五量体または六量体であり、かつ５または６個の二価ＩｇＭ結合単位を含み、
各結合単位が、Ｃμ４ドメイン及びμテールピース（μｔｐ）ドメイン、またはその多量体化断片もしくはバリアントを含む、
実施形態１２または実施形態１３の多量体抗体。
実施形態１５
ＩｇＭ重鎖定常領域またはその多量体化断片もしくはバリアントの各々が、Ｃμ１ドメイン、Ｃμ２ドメイン、Ｃμ３ドメインまたはそれらの任意の組み合わせをさらに含む、実施形態１４の多量体抗体。
ＩｇＭ重鎖定常領域またはその多量体化断片もしくはバリアントの各々が、Ｃμ１ドメイン、Ｃμ２ドメイン、Ｃμ３ドメインまたはそれらの任意の組み合わせをさらに含む、実施形態１４の多量体抗体。
実施形態１６
各ＩｇＭ重鎖定常領域が、アミノ酸配列である配列番号１、配列番号２、またはその多量体化バリアントもしくは断片を含むヒトＩｇＭ定常領域またはその多量体化バリアントもしくは断片である、実施形態１２～１５のいずれか１つの多量体抗体。
各ＩｇＭ重鎖定常領域が、アミノ酸配列である配列番号１、配列番号２、またはその多量体化バリアントもしくは断片を含むヒトＩｇＭ定常領域またはその多量体化バリアントもしくは断片である、実施形態１２～１５のいずれか１つの多量体抗体。
実施形態１７
バリアントヒトＩｇＭ定常領域を含み、アミノ酸配列である配列番号１または配列番号２を含むＩｇＭ重鎖定常領域を含む多量体抗体に比べて低減されたＣＤＣ活性を有する、
実施形態１５または実施形態１６の多量体抗体。
バリアントヒトＩｇＭ定常領域を含み、アミノ酸配列である配列番号１または配列番号２を含むＩｇＭ重鎖定常領域を含む多量体抗体に比べて低減されたＣＤＣ活性を有する、
実施形態１５または実施形態１６の多量体抗体。
実施形態１８
各バリアントヒトＩｇＭ定常領域が、配列番号１もしくは配列番号２の位置Ｐ３１１に対応するアミノ酸置換、配列番号１もしくは配列番号２の位置Ｐ３１３に対応するアミノ酸置換、または配列番号１もしくは配列番号２の位置Ｐ３１１及びＰ３１３に対応するアミノ酸置換を含む、実施形態１７の多量体抗体。
各バリアントヒトＩｇＭ定常領域が、配列番号１もしくは配列番号２の位置Ｐ３１１に対応するアミノ酸置換、配列番号１もしくは配列番号２の位置Ｐ３１３に対応するアミノ酸置換、または配列番号１もしくは配列番号２の位置Ｐ３１１及びＰ３１３に対応するアミノ酸置換を含む、実施形態１７の多量体抗体。
実施形態１９
各ＩｇＭ重鎖定常領域またはその多量体化バリアントもしくは断片が、参照ＩｇＭ重鎖定常領域と比較して１つまたは複数の単一アミノ酸置換、欠失または挿入を有するバリアントヒトＩｇＭ定常領域であり、前記参照ＩｇＭ重鎖定常領域が、前記１つまたは複数の単一アミノ酸置換、欠失または挿入を除いて前記バリアントＩｇＭ重鎖定常領域と同一であり；前記多量体抗体が、対象動物への投与に際して、同じ動物種に同じ手法で投与される参照ＩｇＭ重鎖定常領域を含む多量体抗体に比べて、血清半減期の増加を示す、実施形態１５～１８のいずれか１つの多量体抗体。
各ＩｇＭ重鎖定常領域またはその多量体化バリアントもしくは断片が、参照ＩｇＭ重鎖定常領域と比較して１つまたは複数の単一アミノ酸置換、欠失または挿入を有するバリアントヒトＩｇＭ定常領域であり、前記参照ＩｇＭ重鎖定常領域が、前記１つまたは複数の単一アミノ酸置換、欠失または挿入を除いて前記バリアントＩｇＭ重鎖定常領域と同一であり；前記多量体抗体が、対象動物への投与に際して、同じ動物種に同じ手法で投与される参照ＩｇＭ重鎖定常領域を含む多量体抗体に比べて、血清半減期の増加を示す、実施形態１５～１８のいずれか１つの多量体抗体。
実施形態２０
前記バリアントＩｇＭ重鎖定常領域が、配列番号１または配列番号２のアミノ酸Ｅ３４５、Ｓ４０１、Ｅ４０２またはＥ４０３に対応する１つまたは複数のアミノ酸位置におけるアミノ酸置換を含む、実施形態１９の多量体抗体。
前記バリアントＩｇＭ重鎖定常領域が、配列番号１または配列番号２のアミノ酸Ｅ３４５、Ｓ４０１、Ｅ４０２またはＥ４０３に対応する１つまたは複数のアミノ酸位置におけるアミノ酸置換を含む、実施形態１９の多量体抗体。
実施形態２１
前記ＩｇＭ重鎖定常領域またはその多量体化バリアントもしくは断片の各々が、配列番号１または配列番号２のアミノ酸位置Ｎ４６、Ｎ２０９、Ｎ２７２もしくはＮ４４０に対応する１つまたは複数のアミノ酸置換を含み、１つまたは複数の単一アミノ酸置換がアスパラギン（Ｎ）結合型グリコシル化を防止する、実施形態１５～２０のいずれか１つの多量体抗体。
前記ＩｇＭ重鎖定常領域またはその多量体化バリアントもしくは断片の各々が、配列番号１または配列番号２のアミノ酸位置Ｎ４６、Ｎ２０９、Ｎ２７２もしくはＮ４４０に対応する１つまたは複数のアミノ酸置換を含み、１つまたは複数の単一アミノ酸置換がアスパラギン（Ｎ）結合型グリコシル化を防止する、実施形態１５～２０のいずれか１つの多量体抗体。
実施形態２２
各重鎖定常領域またはその多量体化断片もしくはバリアントが、前記ＶＨのコピーと会合している、実施形態１２～２１のいずれか１つの多量体抗体。
各重鎖定常領域またはその多量体化断片もしくはバリアントが、前記ＶＨのコピーと会合している、実施形態１２～２１のいずれか１つの多量体抗体。
実施形態２３
各結合単位が２つの軽鎖をさらに含み、前記２つの軽鎖の各々が、軽鎖定常領域またはその断片もしくはバリアントを含み、
少なくとも３、４、５、６、７、８、９、１０、１１または１２個の軽鎖定常領域またはその断片もしくはバリアントが、前記ＶＬのコピーと会合している、
実施形態１２～２２のいずれか１つの多量体抗体。
各結合単位が２つの軽鎖をさらに含み、前記２つの軽鎖の各々が、軽鎖定常領域またはその断片もしくはバリアントを含み、
少なくとも３、４、５、６、７、８、９、１０、１１または１２個の軽鎖定常領域またはその断片もしくはバリアントが、前記ＶＬのコピーと会合している、
実施形態１２～２２のいずれか１つの多量体抗体。
実施形態２４
各軽鎖定常領域またはその断片もしくはバリアントが前記ＶＬのコピーと会合している、実施形態２３の多量体抗体。
各軽鎖定常領域またはその断片もしくはバリアントが前記ＶＬのコピーと会合している、実施形態２３の多量体抗体。
実施形態２５
五量体であり、かつＪ鎖またはその断片またはそのバリアントをさらに含む、実施形態１４～２０のいずれか１つの多量体抗体。
五量体であり、かつＪ鎖またはその断片またはそのバリアントをさらに含む、実施形態１４～２０のいずれか１つの多量体抗体。
実施形態２６
二量体であり、かつ２つの二価ＩｇＡ結合単位、及びＪ鎖またはその断片もしくはバリアントを含み、
各結合単位がＣα３ドメイン及びαテールピース（αｔｐ）ドメインを含む、
実施形態１２または実施形態１３の多量体抗体。
二量体であり、かつ２つの二価ＩｇＡ結合単位、及びＪ鎖またはその断片もしくはバリアントを含み、
各結合単位がＣα３ドメイン及びαテールピース（αｔｐ）ドメインを含む、
実施形態１２または実施形態１３の多量体抗体。
実施形態２７
前記Ｊ鎖またはその断片もしくはバリアントが、アミノ酸配列である配列番号７を含む成熟ヒトＪ鎖、またはその断片、またはそのバリアントである、実施形態２６の多量体抗体。
前記Ｊ鎖またはその断片もしくはバリアントが、アミノ酸配列である配列番号７を含む成熟ヒトＪ鎖、またはその断片、またはそのバリアントである、実施形態２６の多量体抗体。
実施形態２８
前記ＩｇＡ重鎖定常領域またはその多量体化断片もしくはバリアントの各々が、Ｃα１ドメイン、Ｃα２ドメイン、ＩｇＡヒンジ領域またはそれらの任意の組み合わせをさらに含む、実施形態２６または実施形態２７の多量体抗体。
前記ＩｇＡ重鎖定常領域またはその多量体化断片もしくはバリアントの各々が、Ｃα１ドメイン、Ｃα２ドメイン、ＩｇＡヒンジ領域またはそれらの任意の組み合わせをさらに含む、実施形態２６または実施形態２７の多量体抗体。
実施形態２９
前記ＩｇＡ重鎖定常領域またはその多量体化断片もしくはバリアントが、ＩｇＡ１重鎖定常領域またはその多量体化断片もしくはバリアントである、実施形態２８の多量体抗体。
前記ＩｇＡ重鎖定常領域またはその多量体化断片もしくはバリアントが、ＩｇＡ１重鎖定常領域またはその多量体化断片もしくはバリアントである、実施形態２８の多量体抗体。
実施形態３０
前記ＩｇＡ重鎖定常領域が配列番号３を含む、実施形態２９の多量体抗体。
前記ＩｇＡ重鎖定常領域が配列番号３を含む、実施形態２９の多量体抗体。
実施形態３１
前記ＩｇＡ重鎖定常領域またはその多量体化断片もしくはバリアントが、ＩｇＡ２重鎖またはその多量体化断片もしくはバリアントである、実施形態２８の多量体抗体。
前記ＩｇＡ重鎖定常領域またはその多量体化断片もしくはバリアントが、ＩｇＡ２重鎖またはその多量体化断片もしくはバリアントである、実施形態２８の多量体抗体。
実施形態３２
前記ＩｇＡ重鎖定常領域が配列番号４を含む、実施形態３１の多量体抗体。
前記ＩｇＡ重鎖定常領域が配列番号４を含む、実施形態３１の多量体抗体。
実施形態３３
分泌成分またはその断片もしくはバリアントをさらに含む、実施形態２５～３２のいずれか１つの多量体抗体。
分泌成分またはその断片もしくはバリアントをさらに含む、実施形態２５～３２のいずれか１つの多量体抗体。
実施形態３４
多重特異性である、実施形態１２～３３のいずれか１つの多量体抗体。
多重特異性である、実施形態１２～３３のいずれか１つの多量体抗体。
実施形態３５
二重特異性である、実施形態３４の多量体抗体。
二重特異性である、実施形態３４の多量体抗体。
実施形態３６
ＣＤ３に結合し得る、実施形態３４または実施形態３５の多量体抗体。
ＣＤ３に結合し得る、実施形態３４または実施形態３５の多量体抗体。
実施形態３７
前記Ｊ鎖またはその断片もしくはバリアントが、アミノ酸配列である配列番号７を含む成熟ヒトＪ鎖、またはその断片、またはそのバリアントである、実施形態２５の多量体抗体。
前記Ｊ鎖またはその断片もしくはバリアントが、アミノ酸配列である配列番号７を含む成熟ヒトＪ鎖、またはその断片、またはそのバリアントである、実施形態２５の多量体抗体。
実施形態３８
前記Ｊ鎖またはその断片が、配列番号７のアミノ酸Ｙ１０２に対応するアミノ酸位置におけるアミノ酸置換を含むバリアントＪ鎖であり、前記バリアントＪ鎖を含むＩｇＭ抗体が、動物への投与に際して、前記Ｊ鎖における前記アミノ酸置換を除いて同一でありかつ同じ動物種に同じ手法で投与される参照ＩｇＭ抗体に比べて、血清半減期の増加を示す、実施形態３７の多量体抗体。
前記Ｊ鎖またはその断片が、配列番号７のアミノ酸Ｙ１０２に対応するアミノ酸位置におけるアミノ酸置換を含むバリアントＪ鎖であり、前記バリアントＪ鎖を含むＩｇＭ抗体が、動物への投与に際して、前記Ｊ鎖における前記アミノ酸置換を除いて同一でありかつ同じ動物種に同じ手法で投与される参照ＩｇＭ抗体に比べて、血清半減期の増加を示す、実施形態３７の多量体抗体。
実施形態３９
配列番号７のＹ１０２に対応する前記アミノ酸がアラニン（Ａ）で置換されている、実施形態３８の多量体抗体。
配列番号７のＹ１０２に対応する前記アミノ酸がアラニン（Ａ）で置換されている、実施形態３８の多量体抗体。
実施形態４０
前記バリアントＪ鎖がアミノ酸配列である配列番号８を含む、実施形態３９の多量体抗体。
前記バリアントＪ鎖がアミノ酸配列である配列番号８を含む、実施形態３９の多量体抗体。
実施形態４１
前記Ｊ鎖またはその断片もしくはバリアントが、異種部分をさらに含む修飾Ｊ鎖であり、前記異種部分が、前記Ｊ鎖またはその断片もしくはバリアントへ融合またはコンジュゲートされる、実施形態２５～４０のいずれか１つの多量体抗体。
前記Ｊ鎖またはその断片もしくはバリアントが、異種部分をさらに含む修飾Ｊ鎖であり、前記異種部分が、前記Ｊ鎖またはその断片もしくはバリアントへ融合またはコンジュゲートされる、実施形態２５～４０のいずれか１つの多量体抗体。
実施形態４２
前記異種部分が、前記Ｊ鎖またはその断片もしくはバリアントへ融合された異種ポリペプチドである、実施形態４１の多量体抗体。
前記異種部分が、前記Ｊ鎖またはその断片もしくはバリアントへ融合された異種ポリペプチドである、実施形態４１の多量体抗体。
実施形態４３
前記異種ポリペプチドが、少なくとも５個のアミノ酸であって２５個以下のアミノ酸を含むペプチドリンカーを介して、前記Ｊ鎖またはその断片もしくはバリアントへ融合される、実施形態４２の多量体抗体。
前記異種ポリペプチドが、少なくとも５個のアミノ酸であって２５個以下のアミノ酸を含むペプチドリンカーを介して、前記Ｊ鎖またはその断片もしくはバリアントへ融合される、実施形態４２の多量体抗体。
実施形態４４
前記異種ポリペプチドが前記Ｊ鎖またはその断片もしくはバリアントのＮ末端へ、前記Ｊ鎖またはその断片もしくはバリアントのＣ末端へ、あるいは前記Ｊ鎖またはその断片もしくはバリアントのＮ末端及びＣ末端の両方へ融合され、前記Ｎ末端及びＣ末端の両方へ融合される前記異種ポリペプチドが、同じであり得る、または異なり得る、実施形態４２または実施形態４３の多量体抗体。
前記異種ポリペプチドが前記Ｊ鎖またはその断片もしくはバリアントのＮ末端へ、前記Ｊ鎖またはその断片もしくはバリアントのＣ末端へ、あるいは前記Ｊ鎖またはその断片もしくはバリアントのＮ末端及びＣ末端の両方へ融合され、前記Ｎ末端及びＣ末端の両方へ融合される前記異種ポリペプチドが、同じであり得る、または異なり得る、実施形態４２または実施形態４３の多量体抗体。
実施形態４５
前記異種ポリペプチドが抗体の抗原結合ドメインまたはそのサブユニットである、実施形態４２～４４のいずれか１つの多量体抗体。
前記異種ポリペプチドが抗体の抗原結合ドメインまたはそのサブユニットである、実施形態４２～４４のいずれか１つの多量体抗体。
実施形態４６
前記抗体の抗原結合ドメインがｓｃＦｖ断片を含む、実施形態４５の多量体抗体。
前記抗体の抗原結合ドメインがｓｃＦｖ断片を含む、実施形態４５の多量体抗体。
実施形態４７
前記異種ポリペプチドがＣＤ３へ結合する、実施形態４４～４６のいずれか１つの多量体抗体。
前記異種ポリペプチドがＣＤ３へ結合する、実施形態４４～４６のいずれか１つの多量体抗体。
実施形態４８
前記抗体の抗原結合ドメインがＣＤ３へ結合し、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、前記ＶＨが、ＶＨ相補性決定領域ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３を含み、前記ＶＬが、ＶＬ相補性決定領域ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３を含み、前記ＶＨＣＤＲ１、前記ＶＨＣＤＲ２、前記ＶＨＣＤＲ３、前記ＶＬＣＤＲ１、前記ＶＬＣＤＲ２、及び前記ＶＬＣＤＲ３がそれぞれ、アミノ酸配列である配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３２及び配列番号３３；配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２３、配列番号２４及び配列番号２５；配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３９、配列番号４０及び配列番号４１；配列番号４３、配列番号４４、配列番号４５、配列番号４７、配列番号４８及び配列番号４９；配列番号５１、配列番号５２、配列番号５３、配列番号５５、配列番号５６及び配列番号５７；配列番号５９、配列番号６０、配列番号６１、配列番号６３、配列番号６４及び配列番号６５；または配列番号６７、配列番号６８、配列番号６９、配列番号７１、配列番号７２及び配列番号７３を含む、実施形態４６または実施形態４７の多量体抗体。
前記抗体の抗原結合ドメインがＣＤ３へ結合し、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、前記ＶＨが、ＶＨ相補性決定領域ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３を含み、前記ＶＬが、ＶＬ相補性決定領域ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３を含み、前記ＶＨＣＤＲ１、前記ＶＨＣＤＲ２、前記ＶＨＣＤＲ３、前記ＶＬＣＤＲ１、前記ＶＬＣＤＲ２、及び前記ＶＬＣＤＲ３がそれぞれ、アミノ酸配列である配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３２及び配列番号３３；配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２３、配列番号２４及び配列番号２５；配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３９、配列番号４０及び配列番号４１；配列番号４３、配列番号４４、配列番号４５、配列番号４７、配列番号４８及び配列番号４９；配列番号５１、配列番号５２、配列番号５３、配列番号５５、配列番号５６及び配列番号５７；配列番号５９、配列番号６０、配列番号６１、配列番号６３、配列番号６４及び配列番号６５；または配列番号６７、配列番号６８、配列番号６９、配列番号７１、配列番号７２及び配列番号７３を含む、実施形態４６または実施形態４７の多量体抗体。
実施形態４９
前記ＶＨＣＤＲ１、前記ＶＨＣＤＲ２、前記ＶＨＣＤＲ３、前記ＶＬＣＤＲ１、前記ＶＬＣＤＲ２、及び前記ＶＬＣＤＲ３がそれぞれ、アミノ酸配列である配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３２及び配列番号３３を含む、実施形態４８の多量体抗体。
前記ＶＨＣＤＲ１、前記ＶＨＣＤＲ２、前記ＶＨＣＤＲ３、前記ＶＬＣＤＲ１、前記ＶＬＣＤＲ２、及び前記ＶＬＣＤＲ３がそれぞれ、アミノ酸配列である配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３２及び配列番号３３を含む、実施形態４８の多量体抗体。
実施形態５０
前記抗体の抗原結合ドメインが、配列番号１８及び配列番号２２、配列番号２６及び配列番号３０、配列番号３４及び配列番号３８、配列番号４２及び配列番号４６、配列番号５０及び配列番号５４、配列番号５８及び配列番号６２、または配列番号６６及び配列番号７０と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％または１００％同一であるそれぞれＶＨ及びＶＬアミノ酸配列を含む、実施形態４８の多量体抗体。
前記抗体の抗原結合ドメインが、配列番号１８及び配列番号２２、配列番号２６及び配列番号３０、配列番号３４及び配列番号３８、配列番号４２及び配列番号４６、配列番号５０及び配列番号５４、配列番号５８及び配列番号６２、または配列番号６６及び配列番号７０と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％または１００％同一であるそれぞれＶＨ及びＶＬアミノ酸配列を含む、実施形態４８の多量体抗体。
実施形態５１
前記抗体の抗原結合ドメインがそれぞれ、前記ＶＨ及びＶＬアミノ酸配列である配列番号１８及び配列番号２２、配列番号２６及び配列番号３０、配列番号３４及び配列番号３８、配列番号４２及び配列番号４６、配列番号５０及び配列番号５４、配列番号５８及び配列番号６２、または配列番号６６及び配列番号７０を含む、実施形態５０の多量体抗体。
前記抗体の抗原結合ドメインがそれぞれ、前記ＶＨ及びＶＬアミノ酸配列である配列番号１８及び配列番号２２、配列番号２６及び配列番号３０、配列番号３４及び配列番号３８、配列番号４２及び配列番号４６、配列番号５０及び配列番号５４、配列番号５８及び配列番号６２、または配列番号６６及び配列番号７０を含む、実施形態５０の多量体抗体。
実施形態５２
前記抗体の抗原結合ドメインがそれぞれ、前記ＶＨ及びＶＬアミノ酸配列である配列番号２６及び配列番号３０を含む、実施形態５１の多量体抗体。
前記抗体の抗原結合ドメインがそれぞれ、前記ＶＨ及びＶＬアミノ酸配列である配列番号２６及び配列番号３０を含む、実施形態５１の多量体抗体。
実施形態５３
ヒトＣＤ１２３へ特異的に結合し得る、実施形態１２～５２のいずれか１つの多量体抗体。
ヒトＣＤ１２３へ特異的に結合し得る、実施形態１２～５２のいずれか１つの多量体抗体。
実施形態５４
５００ｎＭ、１００ｎＭ、５０．０ｎＭ、４０．０ｎＭ、３０．０ｎＭ、２０．０ｎＭ、１０．０ｎＭ、９．０ｎＭ、８．０ｎＭ、７．０ｎＭ、６．０ｎＭ、５．０ｎＭ、４．０ｎＭ、３．０ｎＭ、２．０ｎＭ、１．０ｎＭ、０．５０ｎＭ、０．１０ｎＭ、０．０５０ｎＭ、０．０１ｎＭ、０．００５ｎＭまたは０．００１ｎＭ以下の解離定数ＫＤによって特徴づけられる親和性でヒトＣＤ１２３へ特異的に結合する、実施形態５３の多量体抗体。
５００ｎＭ、１００ｎＭ、５０．０ｎＭ、４０．０ｎＭ、３０．０ｎＭ、２０．０ｎＭ、１０．０ｎＭ、９．０ｎＭ、８．０ｎＭ、７．０ｎＭ、６．０ｎＭ、５．０ｎＭ、４．０ｎＭ、３．０ｎＭ、２．０ｎＭ、１．０ｎＭ、０．５０ｎＭ、０．１０ｎＭ、０．０５０ｎＭ、０．０１ｎＭ、０．００５ｎＭまたは０．００１ｎＭ以下の解離定数ＫＤによって特徴づけられる親和性でヒトＣＤ１２３へ特異的に結合する、実施形態５３の多量体抗体。
実施形態５５
実施形態１～１１のいずれか１つの抗体またはその断片もしくは誘導体、あるいは実施形態１２～５４のいずれか１つの多量体抗体を含む、組成物。
実施形態１～１１のいずれか１つの抗体またはその断片もしくは誘導体、あるいは実施形態１２～５４のいずれか１つの多量体抗体を含む、組成物。
実施形態５６
実施形態１～１１のいずれか１つの抗体またはその断片もしくは誘導体、あるいは実施形態１２～５４のいずれか１つの多量体抗体またはそのサブユニットをコードする核酸配列を含む、ポリヌクレオチド。
実施形態１～１１のいずれか１つの抗体またはその断片もしくは誘導体、あるいは実施形態１２～５４のいずれか１つの多量体抗体またはそのサブユニットをコードする核酸配列を含む、ポリヌクレオチド。
実施形態５７
実施形態５６のポリヌクレオチドを含む、ベクター。
実施形態５６のポリヌクレオチドを含む、ベクター。
実施形態５８
実施形態５７のベクターを含む、宿主細胞。
実施形態５７のベクターを含む、宿主細胞。
実施形態５９
実施形態１～１１のいずれか１つの抗体またはその断片もしくは誘導体、あるいは実施形態１２～５４のいずれか１つの多量体抗体を生産する方法であって、
実施形態５８の宿主細胞を培養すること、及び
前記抗体またはその断片もしくは誘導体、あるいは前記多量体抗体を回収すること
を含む、前記方法。
実施形態１～１１のいずれか１つの抗体またはその断片もしくは誘導体、あるいは実施形態１２～５４のいずれか１つの多量体抗体を生産する方法であって、
実施形態５８の宿主細胞を培養すること、及び
前記抗体またはその断片もしくは誘導体、あるいは前記多量体抗体を回収すること
を含む、前記方法。
実施形態６０
がんを治療する方法であって、治療を必要とする対象に、有効量の、実施形態１～１１のいずれか１つの抗体またはその断片もしくは誘導体、あるいは実施形態１２～５４のいずれか１つの多量体抗体を投与することを含む、前記方法。
がんを治療する方法であって、治療を必要とする対象に、有効量の、実施形態１～１１のいずれか１つの抗体またはその断片もしくは誘導体、あるいは実施形態１２～５４のいずれか１つの多量体抗体を投与することを含む、前記方法。
実施形態６１
前記対象がヒトである、実施形態６０の方法。
前記対象がヒトである、実施形態６０の方法。
実施形態６２
前記がんが血液がんである、実施形態６０または実施形態６１の方法。
前記がんが血液がんである、実施形態６０または実施形態６１の方法。
実施形態６３
前記血液がんが急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）である、実施形態６２の方法。
前記血液がんが急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）である、実施形態６２の方法。
実施例１：抗ＣＤ１２３抗体のヒト化
抗ＣＤ１２３抗体３２７１６の配列は、Ｄｕ（２００７）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ ３０：６０７－１３に記載されている。３２７１６相同体モデルは、マウスＡｂ ２Ｈ４（ＰＤＢ ５ＹＷＦ）の結晶構造に基づいてＢｉｏＬｕｍｉｎａｔｅにて生成された。Ａｂ ２Ｈ４との３２７１６の相同性は、配列アライメントを用いて以下：ＶＨ同一性８１％、ＶＬ同一性７１％、ＶＨフレームワーク同一性９１％、ＶＬフレームワーク同一性８０％、となるように決定され、さらには、ＣＤＲの長さは（軽鎖ＣＤＲ１を除く）５／６のＣＤＲにおいて同一であった。
抗ＣＤ１２３抗体３２７１６の配列は、Ｄｕ（２００７）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ ３０：６０７－１３に記載されている。３２７１６相同体モデルは、マウスＡｂ ２Ｈ４（ＰＤＢ ５ＹＷＦ）の結晶構造に基づいてＢｉｏＬｕｍｉｎａｔｅにて生成された。Ａｂ ２Ｈ４との３２７１６の相同性は、配列アライメントを用いて以下：ＶＨ同一性８１％、ＶＬ同一性７１％、ＶＨフレームワーク同一性９１％、ＶＬフレームワーク同一性８０％、となるように決定され、さらには、ＣＤＲの長さは（軽鎖ＣＤＲ１を除く）５／６のＣＤＲにおいて同一であった。
２つのヒト抗体をフレームワーク受容体として選定した：７５％のＶＨフレームワーク同一性（図１Ａ）及び７０％のＶＫフレームワーク同一性（図１Ｂ）を有する４Ｄ９Ｑ、ならびに６５％のＶＨフレームワーク同一性（図１Ｃ）及び８０％のＶＫフレームワーク同一性（図１Ｄ）を有する４ＮＷＴ。図１Ａ～Ｄの各フレームワークに基づいていくつかのヒト化配列を設計した。表２に記載されるように、標準的なクローニングプロトコールに従って、親３２７１６ ＶＨ及びＶＬ、ならびにヒト化３２７１６ ＶＨ及びＶＬ配列の６つの組み合わせをヒトＩｇＧ型にクローニングした。ヒトＩｇＧ構築物は、商業的供給業者（ＡＴＵＭ及びＣｅｌｌｔｈｅｏｎ）によって合成、発現及び精製された。
実施例２：ヒト化３２７１６ＩｇＧ抗体のバイオレイヤー干渉法による親和性測定アッセイ
親３２７１６ ＩｇＧ及びヒト化バリアントと組み換えヒトＣＤ１２３タンパク質（ＣＤ１２３）－Ｈｉｓ Ａｃｒｏｂｉｏ＃ＩＬＡ－Ｈ５２Ｈ６）との結合親和性を、抗ペンタＨｉｓバイオセンサー（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ）を使用してＯｃｔｅｔ－３８４（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ／Ｆｏｒｔｅｂｉｏ，ＮＹ，ＵＳＡ）でＢＬＩによって決定した。ＰＢＳＴ（１×ＰＢＳ＋１％ＢＳＡ＋０．０５％Ｔｗｅｅｎ－２０）緩衝液を抗体／ＣＤ１２３希釈用及びセンサー水和用緩衝液として使用した。実験は、２４℃での５ステップの逐次アッセイに従って行った。まず、バイオセンサーを１０分間にわたって水和させた。試料及び緩衝液を３８４ウェルプレートに塗布した。６０秒間にわたる初期ベースラインの後、センサーに７ｎＭのｈｕ ＩＬ－３Ｒアルファ（ＣＤ１２３）－Ｈｉｓ Ａｃｒｏｂｉｏ＃ＩＬＡ－Ｈ５２Ｈ６をロードした。バイオセンサーをＰＢＳＴに２０秒間浸してベースラインに到達させ、次いで、会合のために、１０ｎＭから出発する２倍連続希釈抗ＣＤ１２３抗体と４２０秒間インキュベーションし、その後、解離のために、ＰＢＳＴ中で９００秒間インキュベーションした。結果を、ＦｏｒｔｅＢｉｏデータ解析ソフトウェア９．０によって１：１グローバルフィットモデルを用いて解析した。
親３２７１６ ＩｇＧ及びヒト化バリアントと組み換えヒトＣＤ１２３タンパク質（ＣＤ１２３）－Ｈｉｓ Ａｃｒｏｂｉｏ＃ＩＬＡ－Ｈ５２Ｈ６）との結合親和性を、抗ペンタＨｉｓバイオセンサー（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ）を使用してＯｃｔｅｔ－３８４（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ／Ｆｏｒｔｅｂｉｏ，ＮＹ，ＵＳＡ）でＢＬＩによって決定した。ＰＢＳＴ（１×ＰＢＳ＋１％ＢＳＡ＋０．０５％Ｔｗｅｅｎ－２０）緩衝液を抗体／ＣＤ１２３希釈用及びセンサー水和用緩衝液として使用した。実験は、２４℃での５ステップの逐次アッセイに従って行った。まず、バイオセンサーを１０分間にわたって水和させた。試料及び緩衝液を３８４ウェルプレートに塗布した。６０秒間にわたる初期ベースラインの後、センサーに７ｎＭのｈｕ ＩＬ－３Ｒアルファ（ＣＤ１２３）－Ｈｉｓ Ａｃｒｏｂｉｏ＃ＩＬＡ－Ｈ５２Ｈ６をロードした。バイオセンサーをＰＢＳＴに２０秒間浸してベースラインに到達させ、次いで、会合のために、１０ｎＭから出発する２倍連続希釈抗ＣＤ１２３抗体と４２０秒間インキュベーションし、その後、解離のために、ＰＢＳＴ中で９００秒間インキュベーションした。結果を、ＦｏｒｔｅＢｉｏデータ解析ソフトウェア９．０によって１：１グローバルフィットモデルを用いて解析した。
親３２７１６ ＩｇＧ及びヒト化バリアントの結合性を図２Ａ～Ｇにそれぞれ示す。ＫＤ、ｋｏｎ及びｋｄｉｓを表３に示す。ヒト化ＩｇＧ抗体は、ＣＤ１２３に対する親和性を元のマウス抗体の１．５倍以内で保持していた。ｈ３２７１６－３－１ ＩｇＧは、元のマウスＩｇＧ抗体に比べてわずかによりよい親和性を示した。
実施例３：ＣＤ１２３発現細胞株に対する結合性
ヒトＣＤ１２３を発現しているＣＨＯ細胞の上のＣＤ１２３に対するＩｇＧ抗体の結合能力を評価するために、結合アッセイを行った。ヒトＣＤ１２３を発現しているＣＨＯ細胞を、トリプシンを使用してフラスコから剥がした。細胞（１×１０５）をピペット操作で丸底９６ウェルプレート内のウェルに入れ、ＦＡＣＳ染色用緩衝液（ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｇｅｎ カタログ＃５５４６５６）で洗浄し、室温で１０分間にわたってＦｃ Ｂｌｏｃｋ（ＢＤ、＃５６４２２０）と前インキュベーションし、その後、４℃で３０分間にわたって３２７１６またはｈ３２７１６ ＩｇＧ抗体の連続希釈物とインキュベーションした。細胞を２回洗浄し、Ａｌｅｘａ６４７とコンジュゲートしたマウス抗ヒトκ抗体（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ、クローンＳＢ８１ａ）によって染色した。細胞をフローサイトメトリーによって分析した。結果を図３に示す。平均蛍光強度（ＭＦＩ）値を、４パラメーターロジスティックモデルを用いてＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍによって解析した。データを表４に示す。３２７１６抗ＣＤ１２３のすべてのヒト化ＩｇＧ抗体は同程度の親和性及び強度で結合した。
ヒトＣＤ１２３を発現しているＣＨＯ細胞の上のＣＤ１２３に対するＩｇＧ抗体の結合能力を評価するために、結合アッセイを行った。ヒトＣＤ１２３を発現しているＣＨＯ細胞を、トリプシンを使用してフラスコから剥がした。細胞（１×１０５）をピペット操作で丸底９６ウェルプレート内のウェルに入れ、ＦＡＣＳ染色用緩衝液（ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｇｅｎ カタログ＃５５４６５６）で洗浄し、室温で１０分間にわたってＦｃ Ｂｌｏｃｋ（ＢＤ、＃５６４２２０）と前インキュベーションし、その後、４℃で３０分間にわたって３２７１６またはｈ３２７１６ ＩｇＧ抗体の連続希釈物とインキュベーションした。細胞を２回洗浄し、Ａｌｅｘａ６４７とコンジュゲートしたマウス抗ヒトκ抗体（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ、クローンＳＢ８１ａ）によって染色した。細胞をフローサイトメトリーによって分析した。結果を図３に示す。平均蛍光強度（ＭＦＩ）値を、４パラメーターロジスティックモデルを用いてＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍによって解析した。データを表４に示す。３２７１６抗ＣＤ１２３のすべてのヒト化ＩｇＧ抗体は同程度の親和性及び強度で結合した。
実施例４：ヒト化３２７１６抗ＣＤ１２３のＩｇＭへの変換及びＣＤ１２３に対する結合速度論
ＩｇＭヒト化構築物を生成するために、標準的なクローニングプロトコールに従ってヒト化抗ＣＤ１２３配列の２つのＶＨ及びＶＬ領域を、ＣＤ３結合ｓｃＦｖ（配列番号８４）を含む修飾Ｊ鎖を有するＩｇＭに組み込んで、二重特異性ＩｇＭ抗体を形成した。ＩｇＭ抗体構築物はＥｘｐｉ２９３またはＣＨＯ細胞において発現された。Ｋｅｙｔ，Ｂ．，ｅｔ ａｌ．Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：９：５３，ｄｏｉ：１０．３３９０／ａｎｔｉｂ９０４００５３（２０２０）に記載されている方法に従ってＩｇＭ抗体を精製した。ＩｇＭ抗体はＪ鎖によって五量体として組み立てられた。
ＩｇＭヒト化構築物を生成するために、標準的なクローニングプロトコールに従ってヒト化抗ＣＤ１２３配列の２つのＶＨ及びＶＬ領域を、ＣＤ３結合ｓｃＦｖ（配列番号８４）を含む修飾Ｊ鎖を有するＩｇＭに組み込んで、二重特異性ＩｇＭ抗体を形成した。ＩｇＭ抗体構築物はＥｘｐｉ２９３またはＣＨＯ細胞において発現された。Ｋｅｙｔ，Ｂ．，ｅｔ ａｌ．Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：９：５３，ｄｏｉ：１０．３３９０／ａｎｔｉｂ９０４００５３（２０２０）に記載されている方法に従ってＩｇＭ抗体を精製した。ＩｇＭ抗体はＪ鎖によって五量体として組み立てられた。
ＣＤ１２３×ＣＤ３ ＩｇＭ抗体である３２７１６ＩｇＭ、ｈ３２７１６－１－１ ＩｇＭ、及びｈ３２７１６－４－２ ＩｇＭの、組み換えヒトＣＤ１２３タンパク質（ＣＤ１２３，Ｆｃ－Ｆｕｓｉｏｎ（ＩｇＧ１）Ａｖｉ－Ｔａｇ，Ｂｉｏｔｉｎ－Ｌａｂｅｌｅｄ，ＢＰＳ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ Ｃａｔ．１０００６８－２）との結合親和性を、実施例２に記載されているように抗ヒトＦｃ（ＡＦＣ）バイオセンサー（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ）を使用してＯｃｔｅｔ－３８４（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ／Ｆｏｒｔｅｂｉｏ，ＮＹ，ＵＳＡ）でＢＬＩによって決定した。
ＣＤ１２３に対する親３２７１６ ＩｇＭ、ｈ３２７１６－１－１ ＩｇＭ、及びｈ３２７１６－４－２ ＩｇＭの結合性をそれぞれ図４Ａ～Ｃに示す。ＫＤ、ｋｏｎ及びｋｄｉｓを表５に示す。ヒト化ＩｇＭ抗体はＣＤ１２３に対する親和性を元のマウス抗体の１．５倍以内で保持していた。
実施例５：ＥＬＩＳＡによって測定されたＩｇＭ抗体特異性
抗ＣＤ１２３×ＣＤ３ ＩｇＭ抗体である３２７１６ＩｇＭ、ｈ３２７１６－１－１ ＩｇＭ、及びｈ３２７１６－４－２ ＩｇＭの、ヒトＣＤ１２３及びＣＤ３εに対する特異性を、ＥＬＩＳＡアッセイにおいて以下のとおりに測定した。９６ウェル白色ポリスチレン製ＥＬＩＳＡプレート（Ｐｉｅｒｃｅ １５０４２）を１ウェルあたり１００μＬの０．２μｇ／ｍＬの組み換えヒトＣＤ１２３タンパク質（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ １０５１８－Ｈ０８Ｈ－５０）または０．５μｇ／ｍｌの組み換えヒトＣＤ３εタンパク質（Ａｃｒｏ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、ＣＤＥ－Ｈ５２５６－１００）で一晩にわたって４℃で被覆した。その後、プレートを０．０５％のＰＢＳ－Ｔｗｅｅｎで５回洗浄し、２％のＢＳＡ－ＰＢＳで遮断した。ブロッキング後に、１００μＬのＣＤ１２３×ＣＤ３ ＩｇＭ抗体の連続希釈、標準、及び対照を、ウェルへ添加し、室温で２時間インキュベーションした。次いでプレートを１０回洗浄し、ＨＲＰコンジュゲートマウス抗ヒトκ（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ、９２３０－０５。２％のＢＳＡ－ＰＢＳ中で１：６０００に希釈した）により３０分間インキュベーションした。０．０５％のＰＢＳ－Ｔｗｅｅｎを使用して１０回の最終的な洗浄をした後に、プレートを、ＳｕｐｅｒＳｉｇｎａｌ化学発光基質（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ、３７０７０）を使用して読み取った。発光データをＥｎＶｉｓｉｏｎプレートリーダー（Ｐｅｒｋｉｎ－Ｅｌｍｅｒ）で収集し、４－パラメーターロジスティックモデルを使用してＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍにより解析した。ＣＤ１２３に対するＩｇＭ二重特異性抗体の結合性を図５Ａに示し、ＣＤ３εに対する結合性を図５Ｂに示す。
抗ＣＤ１２３×ＣＤ３ ＩｇＭ抗体である３２７１６ＩｇＭ、ｈ３２７１６－１－１ ＩｇＭ、及びｈ３２７１６－４－２ ＩｇＭの、ヒトＣＤ１２３及びＣＤ３εに対する特異性を、ＥＬＩＳＡアッセイにおいて以下のとおりに測定した。９６ウェル白色ポリスチレン製ＥＬＩＳＡプレート（Ｐｉｅｒｃｅ １５０４２）を１ウェルあたり１００μＬの０．２μｇ／ｍＬの組み換えヒトＣＤ１２３タンパク質（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ １０５１８－Ｈ０８Ｈ－５０）または０．５μｇ／ｍｌの組み換えヒトＣＤ３εタンパク質（Ａｃｒｏ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、ＣＤＥ－Ｈ５２５６－１００）で一晩にわたって４℃で被覆した。その後、プレートを０．０５％のＰＢＳ－Ｔｗｅｅｎで５回洗浄し、２％のＢＳＡ－ＰＢＳで遮断した。ブロッキング後に、１００μＬのＣＤ１２３×ＣＤ３ ＩｇＭ抗体の連続希釈、標準、及び対照を、ウェルへ添加し、室温で２時間インキュベーションした。次いでプレートを１０回洗浄し、ＨＲＰコンジュゲートマウス抗ヒトκ（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ、９２３０－０５。２％のＢＳＡ－ＰＢＳ中で１：６０００に希釈した）により３０分間インキュベーションした。０．０５％のＰＢＳ－Ｔｗｅｅｎを使用して１０回の最終的な洗浄をした後に、プレートを、ＳｕｐｅｒＳｉｇｎａｌ化学発光基質（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ、３７０７０）を使用して読み取った。発光データをＥｎＶｉｓｉｏｎプレートリーダー（Ｐｅｒｋｉｎ－Ｅｌｍｅｒ）で収集し、４－パラメーターロジスティックモデルを使用してＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍにより解析した。ＣＤ１２３に対するＩｇＭ二重特異性抗体の結合性を図５Ａに示し、ＣＤ３εに対する結合性を図５Ｂに示す。
実施例６：ＡＭＬ細胞株に対するＩｇＭ抗体の結合性
抗ＣＤ１２３×ＣＤ３ ＩｇＭ抗体である３２７１６ＩｇＭ、ｈ３２７１６－１－１ ＩｇＭ、及びｈ３２７１６－４－２ ＩｇＭが、ＣＤ１２３タンパク質を発現するＡＭＬ細胞上のＣＤ１２３と結合する能力を査定するために、結合アッセイを行った。ＭＶ４１１細胞をＦＡＣＳ染色用緩衝液（ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｇｅｎ カタログ＃５５４６５６）により洗浄し、Ｆｃブロック（ＢＤ、５６４２２０）により室温で１０分間にわたって前インキュベーションした。５×１０４の細胞を、ＩｇＭ抗体の連続希釈物により４℃で３０分間染色した。細胞を２回洗浄し、次いで、５μｇ／ｍＬの抗ヒトＩｇＭ－ＰＥ標識二次抗体（ＳＢ、クローンＳＡ－ＤＡ４）により４℃で３０分間染色した。細胞を２回洗浄し、ＦＡＣＳ染色用緩衝液中で再度懸濁させ、フローサイトメトリーによって捕捉した。結果を図６に示す。
抗ＣＤ１２３×ＣＤ３ ＩｇＭ抗体である３２７１６ＩｇＭ、ｈ３２７１６－１－１ ＩｇＭ、及びｈ３２７１６－４－２ ＩｇＭが、ＣＤ１２３タンパク質を発現するＡＭＬ細胞上のＣＤ１２３と結合する能力を査定するために、結合アッセイを行った。ＭＶ４１１細胞をＦＡＣＳ染色用緩衝液（ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｇｅｎ カタログ＃５５４６５６）により洗浄し、Ｆｃブロック（ＢＤ、５６４２２０）により室温で１０分間にわたって前インキュベーションした。５×１０４の細胞を、ＩｇＭ抗体の連続希釈物により４℃で３０分間染色した。細胞を２回洗浄し、次いで、５μｇ／ｍＬの抗ヒトＩｇＭ－ＰＥ標識二次抗体（ＳＢ、クローンＳＡ－ＤＡ４）により４℃で３０分間染色した。細胞を２回洗浄し、ＦＡＣＳ染色用緩衝液中で再度懸濁させ、フローサイトメトリーによって捕捉した。結果を図６に示す。
実施例７：ヒト化３２７１６ ＩｇＭ二重特異性抗体はＴ細胞指向的ＡＭＬ細胞傷害力価を保持する
抗ＣＤ１２３×ＣＤ３ ＩｇＭ抗体である３２７１６ＩｇＭ、ｈ３２７１６－１－１ ＩｇＭ、及びｈ３２７１６－４－２ ＩｇＭがヒトＴ細胞の存在下で標的細胞を殺傷する能力を実証するために、本発明者らは共培養実験を行った。（ホタルルシフェラーゼを発現する）７×１０３個の腫瘍細胞ＫＧ１ａ及びＭＶ４－１１を、９６丸底組織培養プレート上で、１ウェルあたり３％の非動化ウシ胎仔血清（ＦＢＳ、ＨｙＣｌｏｎｅ、＃ＳＨ３００７１０３ＨＩ）を補足した１００μＬの全体積のＡＩＭ－Ｖ細胞培養培地（ＧＩＢＣＯ、＃１２０５５０９１）中の抗ＣＤ１２３×ＣＤ３ ＩｇＭ抗体の連続希釈物の存在下において、７：１のエフェクター対標的（Ｅ：Ｔ）比でＴ細胞と共培養した。５％のＣＯ２インキュベーター中の３７℃での７２時間のインキュベーション後に、５０μｌの上清を取り出し、後のサイトカイン放出分析のために－８０℃で冷凍した。５０μｌのルシフェラーゼ基質（例えばＯＮＥ－Ｇｌｏ ＥＸ Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ Ａｓｓａｙ Ｓｙｓｔｅｍ、Ｐｒｏｍｅｇａ）を、ウェルへ添加した。プレートを短時間振盪して試薬を混合し、ルシフェラーゼ発光シグナルをＥｎＶｉｓｉｏｎプレートリーダー（Ｐｅｒｋｉｎ－Ｅｌｍｅｒ）で測定した。次いでデータをＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍにより分析して、ＥＣ５０を決定した。ＫＧ１ａ及びＭＶ４１１についての代表的な用量応答曲線を図７Ａ～図７Ｂに示し、最大殺傷百分率及びＥＣ５０値を表６に示す。
抗ＣＤ１２３×ＣＤ３ ＩｇＭ抗体である３２７１６ＩｇＭ、ｈ３２７１６－１－１ ＩｇＭ、及びｈ３２７１６－４－２ ＩｇＭがヒトＴ細胞の存在下で標的細胞を殺傷する能力を実証するために、本発明者らは共培養実験を行った。（ホタルルシフェラーゼを発現する）７×１０３個の腫瘍細胞ＫＧ１ａ及びＭＶ４－１１を、９６丸底組織培養プレート上で、１ウェルあたり３％の非動化ウシ胎仔血清（ＦＢＳ、ＨｙＣｌｏｎｅ、＃ＳＨ３００７１０３ＨＩ）を補足した１００μＬの全体積のＡＩＭ－Ｖ細胞培養培地（ＧＩＢＣＯ、＃１２０５５０９１）中の抗ＣＤ１２３×ＣＤ３ ＩｇＭ抗体の連続希釈物の存在下において、７：１のエフェクター対標的（Ｅ：Ｔ）比でＴ細胞と共培養した。５％のＣＯ２インキュベーター中の３７℃での７２時間のインキュベーション後に、５０μｌの上清を取り出し、後のサイトカイン放出分析のために－８０℃で冷凍した。５０μｌのルシフェラーゼ基質（例えばＯＮＥ－Ｇｌｏ ＥＸ Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ Ａｓｓａｙ Ｓｙｓｔｅｍ、Ｐｒｏｍｅｇａ）を、ウェルへ添加した。プレートを短時間振盪して試薬を混合し、ルシフェラーゼ発光シグナルをＥｎＶｉｓｉｏｎプレートリーダー（Ｐｅｒｋｉｎ－Ｅｌｍｅｒ）で測定した。次いでデータをＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍにより分析して、ＥＣ５０を決定した。ＫＧ１ａ及びＭＶ４１１についての代表的な用量応答曲線を図７Ａ～図７Ｂに示し、最大殺傷百分率及びＥＣ５０値を表６に示す。
実施例８：ヒト化がＩｇＭ安定性及び凝集に及ぼす影響
等濃度の３２７１６ ＩｇＭ、ｈ３２７１６－１－１ ＩｇＭ、及びｈ３２７１６－４－２ ＩｇＭを、同じ緩衝液で製剤化した。高分子量凝集体、すなわちＪ鎖を有する五量体ＩｇＭよりも大きな分子量を有する分子の初期（ｔ＝０）での百分率（％ＨＭＷ）をサイズ排除高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によって決定した。各抗体のアリコートを、－８０℃で２～２０時間、及び２５℃で２時間にわたってアリコートを保存する凍結解凍サイクルに３～５回曝した。他のアリコートを４℃または４０℃で１週間保存した。処理後にすべてのアリコートの％ＨＭＷを測定した。結果を図８に示す。
等濃度の３２７１６ ＩｇＭ、ｈ３２７１６－１－１ ＩｇＭ、及びｈ３２７１６－４－２ ＩｇＭを、同じ緩衝液で製剤化した。高分子量凝集体、すなわちＪ鎖を有する五量体ＩｇＭよりも大きな分子量を有する分子の初期（ｔ＝０）での百分率（％ＨＭＷ）をサイズ排除高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によって決定した。各抗体のアリコートを、－８０℃で２～２０時間、及び２５℃で２時間にわたってアリコートを保存する凍結解凍サイクルに３～５回曝した。他のアリコートを４℃または４０℃で１週間保存した。処理後にすべてのアリコートの％ＨＭＷを測定した。結果を図８に示す。
ｈ３２７１６－１－１ ＩｇＭは、３２７１６ＩｇＭ及びｈ３２７１６－４－２ ＩｇＭに比べてより良好な安定性プロファイル及びより低い凝集傾向を示した。
実施例９：ヒト化３２７１６によるＩｎ Ｖｉｖｏ処理
８週齢の雌性ＭＨＣ－／－ＮＳＧマウスを、Ｔｈｅ Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙから購入した。マウス１匹あたり１０×１０６個の健常ヒトドナー由来末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を生着させることによってマウスをヒト化した。ヒトＰＢＭＣ生着の１０日後に、５×１０６個のＭＶ４－１１－ｇｆｐ－ｌｕｃ腫瘍細胞をＭａｔｒｉｇｅｌ（１×のリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）との１：１）と混合したものをマウスの右腹側に皮下埋植した。腫瘍埋植の１日後にマウスに、静脈内（ｉ．ｖ．）への３日ごとで計８回用量のビヒクル、ｉ．ｖ．への３日ごとで計５回用量の０．１ｍｇ／ｋｇの抗ＣＤ１２３×ＣＤ３ ＩｇＧ ＃１（配列番号８５及び配列番号８６のＣＤ１２３のＶＨ及びＶＬ、ならびに配列番号８７のＣＤ３ ｓｃＦｖを含む）、ｉ．ｖ．への３日ごとで計８回用量の５ｍｇ／ｋｇのｈ３２７１６－１－１ ＩｇＭ抗体、またはｉ．ｖ．への３日ごとで計８回用量の１５ｍｇ／ｋｇのｈ３２７１６－１－１ ＩｇＭ抗体による投薬を行った（ｎ＝１０動物／群）。
８週齢の雌性ＭＨＣ－／－ＮＳＧマウスを、Ｔｈｅ Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙから購入した。マウス１匹あたり１０×１０６個の健常ヒトドナー由来末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を生着させることによってマウスをヒト化した。ヒトＰＢＭＣ生着の１０日後に、５×１０６個のＭＶ４－１１－ｇｆｐ－ｌｕｃ腫瘍細胞をＭａｔｒｉｇｅｌ（１×のリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）との１：１）と混合したものをマウスの右腹側に皮下埋植した。腫瘍埋植の１日後にマウスに、静脈内（ｉ．ｖ．）への３日ごとで計８回用量のビヒクル、ｉ．ｖ．への３日ごとで計５回用量の０．１ｍｇ／ｋｇの抗ＣＤ１２３×ＣＤ３ ＩｇＧ ＃１（配列番号８５及び配列番号８６のＣＤ１２３のＶＨ及びＶＬ、ならびに配列番号８７のＣＤ３ ｓｃＦｖを含む）、ｉ．ｖ．への３日ごとで計８回用量の５ｍｇ／ｋｇのｈ３２７１６－１－１ ＩｇＭ抗体、またはｉ．ｖ．への３日ごとで計８回用量の１５ｍｇ／ｋｇのｈ３２７１６－１－１ ＩｇＭ抗体による投薬を行った（ｎ＝１０動物／群）。
７５日間にわたる経時的な平均腫瘍体積を図９Ａに示す。７５日目の個別の腫瘍体積を図９Ｂに示す。ビヒクル、抗ＣＤ１２３×ＣＤ３ ＩｇＧ ＃１処置、５ｍｇ／ｋｇのｈ３２７１６－１－１ ＩｇＭ抗体、及び１５ｍｇ／ｋｇのｈ３２７１６－１－１ ＩｇＭ抗体について、７５日間にわたる経時的な個別の腫瘍体積を図１０Ａ～Ｄにそれぞれ示す。
５ｍｇ／ｋｇのｈ３２７１６－１－１ ＩｇＭ抗体による処置は、ビヒクル処置と比較して腫瘍体積を著しく減少させた。試験の７５日目に、５ｍｇ／ｋｇのｈ３２７１６－１－１ ＩｇＭ抗体の群では１０匹中７匹のマウスの腫瘍がなくなり、１５ｍｇ／ｋｇのｈ３２７１６－１－１ ＩｇＭ抗体の群では１０匹中６匹のマウスの腫瘍がなくなった。
実施例１０：ＣＤ１２３×ＣＤ３ ＩｇＭはＩｎ ＶｉｔｒｏヒトＡＭＬコロニー形成を阻害する
ＣＤ１２３×ＣＤ３ ＩｇＭが多発性骨髄腫細胞の成長に及ぼす影響をｉｎ ｖｉｔｒｏで試験するために、コロニー形成アッセイを用いた。４名の別個な急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）ドナーからの凍結骨髄単核細胞を解凍し、サイトカイン（ＩＬ－３、ＧＭ－ＣＳＦ及びＳＣＦ）を含有する液体系培地の中に０．５×１０６細胞／ｍＬで再懸濁させ、１２ウェルプレートのウェル内に播種した。試験抗体を７つの異なる濃度（１５０、５０、１０、２、０．４、０．０８、０．０６μｇ／ｍＬ）で各ウェルに加えた。さらに、５０、１０及び１ｎＭのダウノルビシン対照を評価した。溶媒対照だけを含有するウェルも含めた。１２ウェルプレートを３７℃、５％ＣＯ２の加湿されたインキュベーター内で７２時間インキュベーションした。インキュベーション後、各ウェル内の細胞をピペット操作によって慎重に分散させた。４００μＬの細胞（及び培地）を各ウェルから取り出し、ＩＬ－３、ＧＭ－ＣＳＦ及びＳＣＦを含有する４．０ｍＬのメチルセルロースへ添加した。メチルセルロースのチューブをボルテックスして細胞がマトリックス全体にわたって均等に分布することを確保した。条件１つあたり３反復の培養物入り３５ｍｍ皿を用意した。反復皿を計１４～１６日間にわたって３７℃で５％ＣＯ２の下に置き、その後、得られたコロニーを形態学に基づいて評価及び計数した。各ドナーについて、用いたエフェクター細胞対Ｔ細胞の比（Ｅ：Ｔ）を図１１に示す。
ＣＤ１２３×ＣＤ３ ＩｇＭが多発性骨髄腫細胞の成長に及ぼす影響をｉｎ ｖｉｔｒｏで試験するために、コロニー形成アッセイを用いた。４名の別個な急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）ドナーからの凍結骨髄単核細胞を解凍し、サイトカイン（ＩＬ－３、ＧＭ－ＣＳＦ及びＳＣＦ）を含有する液体系培地の中に０．５×１０６細胞／ｍＬで再懸濁させ、１２ウェルプレートのウェル内に播種した。試験抗体を７つの異なる濃度（１５０、５０、１０、２、０．４、０．０８、０．０６μｇ／ｍＬ）で各ウェルに加えた。さらに、５０、１０及び１ｎＭのダウノルビシン対照を評価した。溶媒対照だけを含有するウェルも含めた。１２ウェルプレートを３７℃、５％ＣＯ２の加湿されたインキュベーター内で７２時間インキュベーションした。インキュベーション後、各ウェル内の細胞をピペット操作によって慎重に分散させた。４００μＬの細胞（及び培地）を各ウェルから取り出し、ＩＬ－３、ＧＭ－ＣＳＦ及びＳＣＦを含有する４．０ｍＬのメチルセルロースへ添加した。メチルセルロースのチューブをボルテックスして細胞がマトリックス全体にわたって均等に分布することを確保した。条件１つあたり３反復の培養物入り３５ｍｍ皿を用意した。反復皿を計１４～１６日間にわたって３７℃で５％ＣＯ２の下に置き、その後、得られたコロニーを形態学に基づいて評価及び計数した。各ドナーについて、用いたエフェクター細胞対Ｔ細胞の比（Ｅ：Ｔ）を図１１に示す。
図１１は、ｈ３２７１６－１－１で処理した後の、４名の異なるドナーからの多発性骨髄腫細胞のｉｎ ｖｉｔｒｏでのコロニー形成を示す。ｈ３２７１６－１－１による処理は、試験したすべてのドナーについてコロニー形成を減少させた。
実施例１１：ＣＤ１２３×ＣＤ３ ＩｇＭ抗体の薬物動態特性
様々なＣＤ１２３×ＣＤ３ ＩｇＭ抗体について、ｉｎ ｖｉｖｏマウスモデルにおいて薬物動態パラメータを以下のとおりに測定した。Ｂａｌｂ／ｃマウスに、静脈内ボーラス投与によって５ｍｇ／ｋｇのｈ３２７１６、ｈ３２７１６－４－２またはｈ３２７１６－１－１を注射した。時間点１つあたりマウス２匹として、抗体１つにつき計８つの時間点で血液試料を採取した。サンドイッチＥＬＩＳＡアッセイを用いて各時間点での各抗体の血漿中濃度を測定した。すべてのＥＬＩＳＡにおいて品質基準が検証され、ｔ１／２、クリアランス（ＣＬ）、濃度曲線下面積（ＡＵＣ）及び最大濃度（Ｃｍａｘ）を含めたＰＫパラメータは、非線形曲線近似技術（ＷｉｎＮｏｎＬｉｎ，Ｐｈｏｅｎｉｘ Ｓｏｆｔｗａｒｅ）を用いて導き出された。経時的な濃度のグラフを図１２に示し、ＰＫパラメータを表７に示す。
様々なＣＤ１２３×ＣＤ３ ＩｇＭ抗体について、ｉｎ ｖｉｖｏマウスモデルにおいて薬物動態パラメータを以下のとおりに測定した。Ｂａｌｂ／ｃマウスに、静脈内ボーラス投与によって５ｍｇ／ｋｇのｈ３２７１６、ｈ３２７１６－４－２またはｈ３２７１６－１－１を注射した。時間点１つあたりマウス２匹として、抗体１つにつき計８つの時間点で血液試料を採取した。サンドイッチＥＬＩＳＡアッセイを用いて各時間点での各抗体の血漿中濃度を測定した。すべてのＥＬＩＳＡにおいて品質基準が検証され、ｔ１／２、クリアランス（ＣＬ）、濃度曲線下面積（ＡＵＣ）及び最大濃度（Ｃｍａｘ）を含めたＰＫパラメータは、非線形曲線近似技術（ＷｉｎＮｏｎＬｉｎ，Ｐｈｏｅｎｉｘ Ｓｏｆｔｗａｒｅ）を用いて導き出された。経時的な濃度のグラフを図１２に示し、ＰＫパラメータを表７に示す。
実施例１２：ＣＤ１２３×ＣＤ３ ＩｇＭはＴ細胞からより低いレベルのサイトカインを誘導する
ＴＤＣＣアッセイ方法
ＰＫＨ２６赤色蛍光細胞リンカーキット（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｃａｔ＃ＭＩＮＩ２６－１ｋｔ）を製造業者の指示に従って使用してＭＶ４－１１白血病細胞をＰＫＨ２６赤色蛍光タグで標識付けした。手短に述べると、５×１０６個のＭＶ４－１１細胞を無血清ＲＰＭＩ－１６４０培地（Ｇｉｂｃｏ、ＲＥＦ２２４００－０７１）で洗浄した。遠心分離後、０．２５ｍｌの希釈剤Ｃを細胞ペレットに転化し、穏やかにピペット操作で再懸濁させた。染色の直前に、ポリプロピレン製遠心管に入った１．５ｍｌの希釈剤Ｃ（２×）に４μｌのＰＫＨ２６のエタノール色素溶液を添加し、よく混合して分散させ、これによって２×の色素溶液が得られた。０．２５ｍｌの２×の色素溶液を０．２５ｍｌの２×の細胞懸濁液に速やかに添加し、試料をすぐさま混合した。試料を５分間インキュベーションし、０．５ｍｌの非動化ＦＢＳを添加して染色を停止した。細胞を遠心分離し、培養培地に再懸濁させて２．５×１０５／ｍｌの終濃度とした。ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）（ＩＱ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、ＩＱＢ－ＰＢＭＣ１０３）を洗浄し、培養培地に２×１０６／ｍｌで再懸濁させた。８０μｌのＭＶ４－１１細胞、１００μｌのＰＢＭＣ、及び２０μｌの５倍連続希釈試験抗体を各ウェルに５ｎＭの最高終濃度で加えた。プレートを４８時間及び７２時間にわたってインキュベーションした。ＦＡＣＳ分析を行って生存腫瘍細胞の数を決定した。
ＴＤＣＣアッセイ方法
ＰＫＨ２６赤色蛍光細胞リンカーキット（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｃａｔ＃ＭＩＮＩ２６－１ｋｔ）を製造業者の指示に従って使用してＭＶ４－１１白血病細胞をＰＫＨ２６赤色蛍光タグで標識付けした。手短に述べると、５×１０６個のＭＶ４－１１細胞を無血清ＲＰＭＩ－１６４０培地（Ｇｉｂｃｏ、ＲＥＦ２２４００－０７１）で洗浄した。遠心分離後、０．２５ｍｌの希釈剤Ｃを細胞ペレットに転化し、穏やかにピペット操作で再懸濁させた。染色の直前に、ポリプロピレン製遠心管に入った１．５ｍｌの希釈剤Ｃ（２×）に４μｌのＰＫＨ２６のエタノール色素溶液を添加し、よく混合して分散させ、これによって２×の色素溶液が得られた。０．２５ｍｌの２×の色素溶液を０．２５ｍｌの２×の細胞懸濁液に速やかに添加し、試料をすぐさま混合した。試料を５分間インキュベーションし、０．５ｍｌの非動化ＦＢＳを添加して染色を停止した。細胞を遠心分離し、培養培地に再懸濁させて２．５×１０５／ｍｌの終濃度とした。ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）（ＩＱ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、ＩＱＢ－ＰＢＭＣ１０３）を洗浄し、培養培地に２×１０６／ｍｌで再懸濁させた。８０μｌのＭＶ４－１１細胞、１００μｌのＰＢＭＣ、及び２０μｌの５倍連続希釈試験抗体を各ウェルに５ｎＭの最高終濃度で加えた。プレートを４８時間及び７２時間にわたってインキュベーションした。ＦＡＣＳ分析を行って生存腫瘍細胞の数を決定した。
ＭＳＤアッセイ方法
４８時間目及び７２時間目にＭＶ４－１１細胞ＴＤＣＣアッセイから採集された上清からのサイトカインレベルをＭＳＤ炎症促進パネル１（ヒト）キット（Ｖ－ＰＬＥＸ、Ｃａｔ＃Ｋ１５０４９Ｄ－２）によって測定した。手短に述べると、ＴＤＣＣ培地を希釈剤２によって２５倍、５倍または２倍希釈した。検出抗体溶液は、６０μＬのＳＵＬＦＯ－ＴＡＧ抗ヒトＩＦＮ－γ、ＩＬ－６またはＩＬ－１０を２．４ｍｌの希釈剤３に添加することによって調製された。プレートを２００μｌ／ウェルの洗浄用緩衝液で３回洗浄し、次いで、５０μＬ／ウェルの希釈試料または標準物質と室温で２時間にわたって振盪しながらインキュベーションした。２００μｌ／ウェルの洗浄用緩衝液で３回洗浄した後、プレートを２５μＬの検出抗体溶液と室温で２時間にわたって振盪しながらインキュベーションした。その後、プレートを２００μｌ／ウェルの洗浄用緩衝液で３回洗浄した。１５０ｕＬの２×の読取り用緩衝液Ｔをプレートの各ウェルに加え、ＭＳＤ装置でプレートを分析した。
４８時間目及び７２時間目にＭＶ４－１１細胞ＴＤＣＣアッセイから採集された上清からのサイトカインレベルをＭＳＤ炎症促進パネル１（ヒト）キット（Ｖ－ＰＬＥＸ、Ｃａｔ＃Ｋ１５０４９Ｄ－２）によって測定した。手短に述べると、ＴＤＣＣ培地を希釈剤２によって２５倍、５倍または２倍希釈した。検出抗体溶液は、６０μＬのＳＵＬＦＯ－ＴＡＧ抗ヒトＩＦＮ－γ、ＩＬ－６またはＩＬ－１０を２．４ｍｌの希釈剤３に添加することによって調製された。プレートを２００μｌ／ウェルの洗浄用緩衝液で３回洗浄し、次いで、５０μＬ／ウェルの希釈試料または標準物質と室温で２時間にわたって振盪しながらインキュベーションした。２００μｌ／ウェルの洗浄用緩衝液で３回洗浄した後、プレートを２５μＬの検出抗体溶液と室温で２時間にわたって振盪しながらインキュベーションした。その後、プレートを２００μｌ／ウェルの洗浄用緩衝液で３回洗浄した。１５０ｕＬの２×の読取り用緩衝液Ｔをプレートの各ウェルに加え、ＭＳＤ装置でプレートを分析した。
分析物質濃度を算出するために用いた較正曲線は、標準物質からの信号を１／Ｙ２の重み付けで４パラメーターロジスティックモデルに近似することによって確立された。分析物質濃度は、較正曲線へのバックフィッティングによってＥＣＬ信号から決定された。較正曲線を確立するため及び濃度を決定するための計算は、ＭＳＤ ＤＩＳＣＯＶＥＲＹ ＷＯＲＫＢＥＮＣＨ解析ソフトウェアを使用して行われた。
ＣＤ１２３×ＣＤ３ ＩｇＧ ＃１かｈ３２７１６－１－１かのどちらかを使用したＴＤＣＣの４８時間後の生存細胞の数、ＩＦＮγ、ＩＬ－６及びＩＬ－１０の量を図１３Ａ～Ｄにそれぞれ示し、ＣＤ１２３×ＣＤ３ ＩｇＧ ＃１かｈ３２７１６－１－１かのどちらかを使用したＴＤＣＣの７２時間後のものを図１４Ａ～Ｄにそれぞれ示す。等しいレベルの細胞殺傷をもたらす濃度において、ｈ３２７１６－１－１は、ＣＤ１２３×ＣＤ３ ＩｇＧ ＃１に比べてよりはるかに低いレベルのサイトカインの産生をもたらした。
Claims (27)
- ＣＤ１２３へ特異的に結合する抗原結合ドメインを含む、抗体またはその抗原結合断片もしくは誘導体であって、
前記抗原結合ドメインが、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、
前記ＶＨ及び前記ＶＬがそれぞれ、アミノ酸配列である配列番号７６及び配列番号７９、配列番号７７及び配列番号７９、配列番号７８及び配列番号７９、配列番号８０及び配列番号８３、配列番号８１及び配列番号８３、ならびに配列番号８２及び配列番号８３を含む、
前記抗体またはその抗原結合断片もしくは誘導体。 - ２つの抗原結合ドメインを含む単一の二価結合単位を含み、
少なくとも１つの抗原結合ドメインが、ＣＤ１２３へ特異的に結合し、
前記結合単位が２つの重鎖を含み、前記２つの重鎖の各々が重鎖定常領域またはその断片もしくはバリアントを含み、
前記結合単位の少なくとも１つの重鎖定常領域またはその断片もしくはバリアントが、前記ＶＨのコピーと会合している、
請求項１に記載の抗体またはその断片もしくは誘導体。 - ５、６または２個の二価結合単位、及び１０、１２または４個の抗原結合ドメインを含む、多量体抗体であって、
少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１または１２個の抗原結合ドメインが、ＣＤ１２３へ特異的に結合し、
前記抗原結合ドメインが、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、
前記ＶＨ及び前記ＶＬがそれぞれ、アミノ酸配列である配列番号７６及び配列番号７９、配列番号７７及び配列番号７９、配列番号７８及び配列番号７９、配列番号８０及び配列番号８３、配列番号８１及び配列番号８３、ならびに配列番号８２及び配列番号８３を含み、
各結合単位が２つの重鎖を含み、前記２つの重鎖の各々が、ＩｇＭもしくはＩｇＡ定常領域、またはその多量体化断片もしくはバリアントを含み、
前記多量体抗体の少なくとも３、４、５、６、７、８、９、１０、１１または１２個の重鎖定常領域が前記ＶＨのコピーと会合している、
前記多量体抗体。 - 各重鎖定常領域またはその多量体化断片もしくはバリアントが、前記ＶＨのコピーと会合している、請求項３に記載の多量体抗体。
- 各結合単位が２つの軽鎖をさらに含み、前記２つの軽鎖の各々が、軽鎖定常領域またはその断片もしくはバリアントを含み、
少なくとも３、４、５、６、７、８、９、１０、１１または１２個の軽鎖定常領域またはその断片もしくはバリアントが、前記ＶＬのコピーと会合している、
請求項４に記載の多量体抗体。 - 五量体または六量体であり、かつ５または６個の二価ＩｇＭ結合単位を含み、
各結合単位が、Ｃμ４ドメイン及びμテールピース（μｔｐ）ドメイン、またはその多量体化断片もしくはバリアントを含む、
請求項３に記載の多量体抗体。 - ＩｇＭ重鎖定常領域またはその多量体化断片もしくはバリアントの各々が、Ｃμ１ドメイン、Ｃμ２ドメイン、Ｃμ３ドメインまたはそれらの任意の組み合わせをさらに含む、請求項６に記載の多量体抗体。
- 各ＩｇＭ重鎖定常領域が、アミノ酸配列である配列番号１、配列番号２、またはその多量体化バリアントもしくは断片を含むヒトＩｇＭ定常領域またはその多量体化バリアントもしくは断片である、請求項７に記載の多量体抗体。
- 五量体であり、かつＪ鎖またはその断片、またはそのバリアントをさらに含む、請求項３～８のいずれか１項に記載の多量体抗体。
- 二量体であり、かつ２つの二価ＩｇＡ結合単位、及びＪ鎖またはその断片もしくはバリアントを含み、
各結合単位が、Ｃα１ドメイン、Ｃα２ドメイン、ＩｇＡヒンジ領域、Ｃα３ドメイン及びαテールピース（αｔｐ）ドメインを含む、
請求項３に記載の多量体抗体。 - 前記Ｊ鎖またはその断片もしくはバリアントが、アミノ酸配列である配列番号７を含む成熟ヒトＪ鎖、またはその断片、またはそのバリアントである、請求項９または請求項１０に記載の多量体抗体。
- 前記Ｊ鎖またはその断片が、配列番号７のアミノ酸Ｙ１０２に対応するアミノ酸位置におけるアミノ酸置換を含むバリアントＪ鎖であり、
前記バリアントＪ鎖を含むＩｇＭ抗体が、動物への投与に際して、前記Ｊ鎖における前記アミノ酸置換を除いて同一でありかつ同じ動物種に同じ手法で投与される参照ＩｇＭ抗体に比べて、血清半減期の増加を示す、
請求項１１に記載の多量体抗体。 - 配列番号７のアミノ酸Ｙ１０２に対応する前記アミノ酸位置がアラニン（Ａ）で置換されており、前記バリアントＪ鎖がアミノ酸配列である配列番号８を含む、請求項１２に記載の多量体抗体。
- 前記Ｊ鎖またはその断片もしくはバリアントが、異種部分をさらに含む修飾Ｊ鎖であり、前記異種部分が、前記Ｊ鎖またはその断片もしくはバリアントへ融合またはコンジュゲートされる、請求項９～１３のいずれか１項に記載の多量体抗体。
- 前記異種部分が、前記Ｊ鎖またはその断片もしくはバリアントへ融合された異種ポリペプチドである、請求項１４に記載の多量体抗体。
- 前記異種ポリペプチドが抗体の抗原結合ドメインまたはそのサブユニットである、請求項１５に記載の多量体抗体。
- 前記抗体の抗原結合ドメインがｓｃＦｖ断片を含む、請求項１６に記載の多量体抗体。
- 前記抗体の抗原結合ドメインがＣＤ３へ結合する、請求項１７に記載の多量体抗体。
- 請求項１に記載の抗体またはその断片もしくは誘導体、あるいは請求項３～１８のいずれか１項に記載の多量体抗体を含む、組成物。
- 請求項１に記載の抗体またはその断片もしくは誘導体、あるいは請求項３～１８のいずれか１項に記載の多量体抗体またはそのサブユニットをコードする核酸配列を含む、ポリヌクレオチド。
- 請求項２０に記載のポリヌクレオチドを含む、ベクター。
- 請求項２１に記載のベクターを含む、宿主細胞。
- 請求項１に記載の抗体またはその断片もしくは誘導体、あるいは請求項３～１８のいずれか１項に記載の多量体抗体を生産する方法であって、
請求項２２に記載の宿主細胞を培養すること、及び
前記抗体またはその断片もしくは誘導体、あるいは前記多量体抗体を回収すること
を含む、前記方法。 - がんを治療する方法であって、治療を必要とする対象に、有効量の、請求項１に記載の抗体またはその断片もしくは誘導体、あるいは請求項３～１８のいずれか１項に記載の多量体抗体を投与することを含む、前記方法。
- 前記対象がヒトである、請求項２４に記載の方法。
- 前記がんが血液がんである、請求項２４または請求項２５に記載の方法。
- 前記血液がんが急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）である、請求項２６に記載の方法。
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