JP2024507859A

JP2024507859A - 眼病態に対するタンパク質ベースの療法

Info

Publication number: JP2024507859A
Application number: JP2023550534A
Authority: JP
Inventors: エイチ．ナガライラム; ビー．ナホミルーバン; エル．スタンコウスカドロタ
Original assignee: University of North Texas Health Science Center
Current assignee: University of North Texas Health Science Center
Priority date: 2021-02-22
Filing date: 2022-02-22
Publication date: 2024-02-21
Also published as: KR20230147163A; US20240131113A1; WO2022178409A3; CA3208705A1; EP4294520A2; WO2022178409A2; AU2022223603A1

Abstract

被験体における網膜疾患、傷害または病態に対するペプチドベースの療法が、Ｈｓｐ２０およびαＢ－クリスタリンを含む熱ショックタンパク質に由来する少なくとも１つのペプチドを含む医薬組成物を被験体に投与することを含む。投与されるペプチドは、アセチル化され、かつ／または細胞透過性ペプチドにコンジュゲートしていてもよい。このペプチドの投与は、網膜神経節細胞および網膜内皮細胞を含む少なくとも１つの網膜細胞型の喪失を低減または予防し得る。かかる細胞の喪失は、眼病態に罹患した患者において網膜損傷および視力喪失を引き起こす。医薬組成物は、投与デバイスを用いて硝子体内投与することができる。単回注射が様々な眼病態を治療するうえで治療的に十分であり得る。

Description

政府の権利の陳述
本発明は、助成金番号５Ｒ０１ＥＹ０２８１７９－０２の下、米国国立衛生研究所からの政府支援を受けて行われた。政府は本発明において一定の権利を有する。

関連出願の相互参照
本願は、２０２１年２月２２日に出願された「Protein-Based Therapies for Ocular Conditions」と題する米国仮特許出願第６３／１５２，１２８号明細書および２０２１年１０月２９日に出願された「Protein-Based Therapies for Ocular Conditions」と題する米国仮特許出願第６３／２７３，６４３号明細書の優先権を主張し、これらの各々の全体をあらゆる目的で参照により本明細書に援用するものとする。

技術分野
本開示は概して、傷害または疾患によって引き起こされる網膜損傷を治療するための組成物、システムおよび方法に関する。具体的な実施態様は、眼損傷に罹患したか、または発症するリスクがある被験体の網膜細胞への少なくとも１つの熱ショックペプチドまたはその一部の送達を含む。

発明の背景
緑内障には世界で７５００万人近くが罹患しており、およそ８００万人がこの疾患で失明している。米国だけでも３００万人近くが緑内障に罹患しており、この数は２０５０年までに２倍以上になると予想されている。緑内障に関連した視力喪失は、眼内圧として知られる眼球内部の圧力の上昇に主に起因することが多いため、従来の緑内障治療の第一選択は、通常は眼内圧を低下させるように配合された薬物の局所適用を含む。しかしながら、このアプローチにより圧力の低下に成功したとしても、軸索変性および網膜神経節細胞（「ＲＧＣ」）として知られる網膜内の細胞の継続的な死滅のために、多くの患者が失明することとなる。軸索変性およびＲＧＣ死に個別に、また特に組合せで寄与する因子の多様性から、緑内障および他の眼病態の治療は困難となっている。したがって、ＲＧＣ死および軸索変性に対抗する安全かつ効果的な方法が必要とされている。

発明の概要
本開示は、緑内障を含む様々な眼病態に対する新規のペプチドベースの療法を含む。実施形態には、熱ショックタンパク質（「ＨＳＰ」）に由来するペプチドが含まれる。開示のＨＳＰペプチドは、被験体の眼に標的局所効果をもたらすために硝子体内注射することができる。眼病態の少なくとも１つの症状の治療、予防および／または緩和の成功は、細胞透過および効果を高めるために細胞透過性ペプチド（「ＣＰＰ」）とコンジュゲートしていてもよい、開示のＨＳＰペプチドの１つ以上の投与によって達成することができる。本明細書に要約される実験データによって示されるように、開示のＨＳＰペプチド、医薬組成物および関連療法は、眼圧（intraocular tension）、ＲＧＣ死、網膜内皮細胞死、炎症性サイトカイン産生、軸索変性および／または網膜毛細血管変性を実質的に阻止、減速および／または低減することにより、網膜損傷を予防または治療することができる。

本開示の特定の実施形態によると、被験体における網膜疾患、傷害または病態の少なくとも１つの症状を治療、リスク低減、予防および／または緩和する方法は、Ｈｓｐ２０等の生物学的に活性な熱ショックタンパク質に由来する少なくとも１つのポリペプチドを含む治療有効量の組成物を被験体に硝子体内投与することを含み得る。少なくとも１つのポリペプチドは、Ｇ^７３ＨＦＳＶＬＬＤＶＫＨＦＳＰＥＥＩＡＶＫ^９１と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を有し得る。

方法の幾つかの実施形態では、ポリペプチドはアセチル化されていてもよい。方法の幾つかの実施形態では、ポリペプチドは、Ｇ^７３ＨＦＳＶＬＬＤＶＫ（アセチル）ＨＦＳＰＥＥＩＡＶＫ^９１と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を有し得る。方法の幾つかの実施形態では、ポリペプチドは分子シャペロン活性を示すことがある。方法の幾つかの実施形態では、組成物を眼科外科手術中または眼科外科手術後に投与することができる。幾つかの実施形態では、網膜疾患、傷害または病態は緑内障であり得る。方法の幾つかの実施形態では、網膜疾患、傷害または病態は、黄斑変性、糖尿病性網膜症、網膜剥離および網膜色素変性症からなる群から選択され得る。方法の幾つかの実施形態では、網膜疾患、傷害または病態は、興奮毒性損傷、物理的損傷、化学的損傷、神経栄養因子欠乏、酸化ストレス、炎症、ミトコンドリア機能不全、軸索輸送不全またはそれらの組合せによって引き起こされ得る。方法の幾つかの実施形態では、網膜疾患、傷害または病態は、ヒト網膜神経節細胞の喪失を含み得る。方法の幾つかの実施形態では、網膜疾患、傷害または病態は、高眼圧症を含み得る。方法の幾つかの実施形態では、網膜疾患、傷害または病態は、視神経変性を含み得る。方法の幾つかの実施形態では、網膜疾患、傷害または病態は、病的アポトーシスおよび／またはタンパク質凝集を含み得る。

本開示の特定の実施形態によると、被験体における網膜疾患、傷害または病態の少なくとも１つの症状を治療、リスク低減、予防または緩和するためのシステムは、Ｈｓｐ２０等の生物学的に活性な熱ショックタンパク質に由来する少なくとも１つのポリペプチドを含む治療有効量の組成物を含み得る。ポリペプチドは、Ｇ^７３ＨＦＳＶＬＬＤＶＫＨＦＳＰＥＥＩＡＶＫ^９１と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を有し得る。システムは、組成物を被験体に投与するように構成された硝子体内注射デバイスを含んでいてもよい。

システムの幾つかの実施形態では、ポリペプチドはアセチル化されていてもよい。システムの幾つかの実施形態では、ポリペプチドは、Ｇ^７３ＨＦＳＶＬＬＤＶＫ（アセチル）ＨＦＳＰＥＥＩＡＶＫ^９１と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を有し得る。システムの幾つかの実施形態では、硝子体内注射デバイスはツベルクリン、ＨａｍｉｌｔｏｎまたはＴｒｉｂｏｆｉｌｍＳｔａｃｌｅａｒタイプの注射器であってもよい。システムの幾つかの実施形態では、網膜疾患、傷害または病態は、緑内障、黄斑変性、糖尿病性網膜症、網膜剥離、網膜色素変性症、網膜神経節細胞喪失、網膜内皮細胞喪失、網膜毛細血管細胞喪失、高眼圧症、視神経変性、病的アポトーシスおよびタンパク質凝集からなる群から選択され得る。

本開示の特定の実施形態によると、医薬組成物は、Ｈｓｐ２０に由来する少なくとも１つのポリペプチドを含み得る。ポリペプチドは、Ｇ^７３ＨＦＳＶＬＬＤＶＫＨＦＳＰＥＥＩＡＶＫ^９１と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を有し得る。医薬組成物は、薬学的に許容可能な担体を含んでいてもよい。医薬組成物は、被験体における網膜疾患、傷害または病態の少なくとも１つの症状を治療、リスク低減、予防または緩和するように配合することができる。医薬組成物は、硝子体内投与用に配合することができる。

組成物の幾つかの実施形態では、ポリペプチドはアセチル化されていてもよい。組成物の幾つかの実施形態では、ポリペプチドは、Ｇ^７３ＨＦＳＶＬＬＤＶＫ（アセチル）ＨＦＳＰＥＥＩＡＶＫ^９１と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を有し得る。組成物の幾つかの実施形態では、網膜疾患、傷害または病態は、緑内障、黄斑変性、糖尿病性網膜症、網膜剥離、網膜色素変性症、網膜神経節細胞喪失、網膜内皮細胞喪失、網膜毛細血管細胞喪失、高眼圧症、視神経変性、病的アポトーシスおよびタンパク質凝集からなる群から選択され得る。

本開示の特定の実施形態によると、生物学的に活性な熱ショックタンパク質に由来する少なくとも１つのポリペプチドを含む医薬組成物は、被験体における網膜疾患、傷害または病態の少なくとも１つの症状を治療、リスク低減、予防または緩和するための薬剤の製造に使用することができる。熱ショックタンパク質はＨｓｐ２０であり得る。ポリペプチドは、Ｇ^７３ＨＦＳＶＬＬＤＶＫＨＦＳＰＥＥＩＡＶＫ^９１と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を有することができ、医薬組成物は硝子体内投与用に配合することができる。

幾つかの製造実施形態では、ポリペプチドはアセチル化されていてもよい。幾つかの製造実施形態では、ポリペプチドは、Ｇ^７３ＨＦＳＶＬＬＤＶＫ（アセチル）ＨＦＳＰＥＥＩＡＶＫ^９１と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を有し得る。幾つかの製造実施形態では、網膜疾患、傷害または病態は、緑内障、黄斑変性、糖尿病性網膜症、網膜剥離、網膜色素変性症、網膜神経節細胞喪失、網膜内皮細胞喪失、網膜毛細血管細胞喪失、高眼圧症、視神経変性、病的アポトーシスおよびタンパク質凝集からなる群から選択され得る。

本開示の特定の実施形態によると、被験体における網膜疾患、傷害または病態の少なくとも１つの症状を治療、リスク低減、予防および／または緩和する方法は、αＢ－クリスタリン等の生物学的に活性な熱ショックタンパク質に由来する少なくとも１つのポリペプチドを含む治療有効量の組成物を被験体に硝子体内投与することを含み得る。ポリペプチドは、^７３ＤＲＦＳＶＮＬＤＶＫＨＦＳＰＥＥＬＫＶＫＶ^９３と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を有し得る。

方法の幾つかの実施形態では、ポリペプチドは、細胞透過性ペプチドとコンジュゲートしていてもよい。方法の幾つかの実施形態では、細胞透過性ペプチドは、ＶＰＴＬＫと少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を有し得る。方法の幾つかの実施形態では、組成物を眼科外科手術中または眼科外科手術後に投与することができる。

方法の幾つかの実施形態では、網膜疾患、傷害または病態は緑内障であり得る。方法の幾つかの実施形態では、網膜疾患、傷害または病態は、ヒト網膜神経節細胞の喪失を含み得る。方法の幾つかの実施形態では、網膜疾患、傷害または病態は、ヒト網膜神経節細胞機能の喪失を含み得る。方法の幾つかの実施形態では、網膜疾患、傷害または病態は、物理的損傷、化学的損傷、神経栄養因子欠乏またはそれらの組合せによって引き起こされ得る。方法の幾つかの実施形態では、網膜疾患、傷害または病態は、高眼圧症を含み得る。方法の幾つかの実施形態では、網膜疾患、傷害または病態は、視神経変性を含み得る。

本開示の特定の実施形態によると、被験体における網膜疾患、傷害または病態の少なくとも１つの症状を治療、リスク低減、予防または緩和するためのシステムは、αＢ－クリスタリン等の生物学的に活性な熱ショックタンパク質に由来する少なくとも１つのポリペプチドを含む治療有効量の組成物を含み得る。ポリペプチドは、^７３ＤＲＦＳＶＮＬＤＶＫＨＦＳＰＥＥＬＫＶＫＶ^９３と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を含み得る。システムは、組成物を被験体に投与するように構成された硝子体内注射デバイスを含んでいてもよい。

システムの幾つかの実施形態では、ポリペプチドは、細胞透過性ペプチドとコンジュゲートしていてもよい。システムの幾つかの実施形態では、細胞透過性ペプチドは、ＶＰＴＬＫと少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を有し得る。システムの幾つかの実施形態では、硝子体内注射デバイスは、ツベルクリン注射器であってもよい。システムの幾つかの実施形態では、網膜疾患、傷害または病態は、緑内障、網膜神経節細胞喪失、網膜神経節細胞機能低下、網膜内皮細胞喪失、高眼圧症および視神経変性からなる群から選択され得る。

本開示の特定の実施形態によると、医薬組成物は、αＢ－クリスタリンに由来する少なくとも１つのポリペプチドを含み得る。ポリペプチドは、^７３ＤＲＦＳＶＮＬＤＶＫＨＦＳＰＥＥＬＫＶＫＶ^９３と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を有し得る。医薬組成物は、薬学的に許容可能な担体を含んでいてもよい。医薬組成物は、被験体における網膜疾患、傷害または病態の少なくとも１つの症状を治療、リスク低減、予防または緩和するように配合することができる。医薬組成物は、硝子体内投与用に配合することができる。

医薬組成物の幾つかの実施形態では、ポリペプチドは、ＶＰＴＬＫと少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を有し得る細胞透過性ペプチドとコンジュゲートしていてもよい。医薬組成物の幾つかの実施形態では、網膜疾患、傷害または病態は、緑内障、網膜神経節細胞喪失、網膜神経節細胞機能低下、網膜内皮細胞喪失、高眼圧症および視神経変性からなる群から選択され得る。

本開示の特定の実施形態によると、生物学的に活性な熱ショックタンパク質に由来する少なくとも１つのポリペプチドを含む医薬組成物は、被験体における網膜疾患、傷害または病態の少なくとも１つの症状を治療、リスク低減、予防または緩和するための薬剤の製造に使用することができる。熱ショックタンパク質は、αＢ－クリスタリンを含み得る。ポリペプチドは、^７３ＤＲＦＳＶＮＬＤＶＫＨＦＳＰＥＥＬＫＶＫ^９２と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を有し得る。医薬組成物は、硝子体内投与用に配合することができる。幾つかの製造実施形態では、ポリペプチドは、ＶＰＴＬＫと少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を有し得る細胞透過性ペプチドとコンジュゲートしていてもよい。幾つかの製造実施形態では、網膜疾患、傷害または病態は、緑内障、網膜神経節細胞喪失、網膜神経節細胞機能低下、網膜内皮細胞喪失、高眼圧症および視神経変性からなる群から選択され得る。

本概要は、本開示の完全な範囲（extent and scope）を代表すると意図されるものではなく、そのように解釈されるべきでもない。さらに、本明細書における「本開示」またはその態様への言及は、本開示の或る特定の実施形態を意味すると理解すべきであり、必ずしも全ての実施形態を特定の記載に限定すると解釈されるべきではない。本開示は、添付の図面および詳細な説明のみならず、本概要に様々な詳細度で記載され、本概要に要素、構成要素等を含めるか、または含めないことによる、本開示の範囲に関する限定は意図されない。開示の実施形態のいずれかからの特徴は、限定されることなく互いに組み合わせて用いることができる。加えて、本開示の他の特徴および利点が、以下の詳細な説明および添付の図面を検討することにより、当業者に明らかとなるであろう。

図面は、本発明の幾つかの実施形態を説明するものであるが、同一の参照番号は、図面に示される異なる図または実施形態において同一または類似の要素または特徴を指す。

本明細書に開示される実施形態による眼内圧に対するマイクロビーズ注射の効果を示す折れ線グラフである。本明細書に開示される実施形態によるマイクロビーズベースの高眼圧症のマウスモデルにおけるＲＧＣ死に対する硝子体内ＨＳＰペプチド投与の効果を示す棒グラフである。本明細書に開示される実施形態によるＢｒｎ３ａおよびβ－ＩＩＩチューブリン免疫染色を用いた健常マウスまたは高眼圧症に罹患したマウスに由来するＲＧＣに対する硝子体内ＨＳＰペプチド投与の効果を示す共焦点顕微鏡画像である。本明細書に開示される実施形態による眼内圧に対するシリコーン油注射の効果を示す折れ線グラフである。本明細書に開示される実施形態によるシリコーン油ベースの高眼圧症のマウスモデルにおけるＲＧＣ死に対する硝子体内ＨＳＰペプチド投与の効果を示す棒グラフである。本明細書に開示される実施形態によるＢｒｎ３ａ免疫染色を用いた健常マウスまたは高眼圧症に罹患したマウスに由来するＲＧＣに対する硝子体内ＨＳＰペプチド投与の効果を示す共焦点顕微鏡画像である。本明細書に開示される実施形態によるヒト網膜内皮細胞の生存に対する炎症誘発性サイトカイン曝露の効果を示す棒グラフおよび対応するウエスタンブロットである。本明細書に開示される実施形態による炎症誘発性サイトカイン曝露後のヒト網膜内皮細胞の生存に対するＨＳＰペプチド投与の効果を示す棒グラフおよび対応するウエスタンブロットである。本明細書に開示される実施形態によるペプチドの投与後のヒト網膜内皮細胞におけるＨＳＰペプチドレベルを示す棒グラフおよび対応するウエスタンブロットである。本明細書に開示される実施形態によるＨＳＰペプチドを硝子体内注射したマウスの網膜におけるＣｙ５色素でタグ付けされたＨＳＰペプチドの存在を示す共焦点顕微鏡画像である。図４Ａに示す網膜細胞において検出された蛍光レベルを示す棒グラフである。本明細書に開示される実施形態によるＨＳＰペプチドを硝子体内注射したマウスのＲＧＣにおける図４ＡのＨＳＰペプチドの存在を示す共焦点顕微鏡画像である。本明細書に開示される実施形態による眼傷害後の網膜毛細血管細胞変性に対するＨＳＰペプチド投与の効果を示す顕微鏡画像である。図５Ａにおいて検出された無細胞網膜細胞の数を示す棒グラフである。本明細書に開示される実施形態による眼傷害後の網膜における炎症性サイトカイン発現に対するＨＳＰペプチド投与の効果を示す３つの棒グラフである。本明細書に開示される実施形態による細胞透過性ペプチド（ＣＰＰ）とコンジュゲートしたペプテン－１（Ｐ１）の網膜内皮細胞への透過を示す棒グラフおよび対応するウエスタンブロットである。本明細書に開示される実施形態による栄養因子除去後のラット初代ＲＧＣの保護に対する細胞透過性ペプチドとコンジュゲートしたペプテン－１（Ｐ１－ＣＰＰ）の影響を示すＣｙｔａｔｉｏｎ５顕微鏡画像パネルである。本明細書に開示される実施形態による栄養因子除去後のラット初代ＲＧＣの保護に対する細胞透過性ペプチドとコンジュゲートしたペプテン－１（Ｐ１－ＣＰＰ）の定量的効果を示す棒グラフである。本明細書に開示される実施形態によるエンドセリン－３誘導死後のラット初代ＲＧＣの保護に対する細胞透過性ペプチドとコンジュゲートしたペプテン－１（Ｐ１－ＣＰＰ）の影響を示すＣｙｔａｔｉｏｎ５顕微鏡画像パネルである。本明細書に開示される実施形態によるエンドセリン－３誘導死後のラット初代ＲＧＣの保護に対する細胞透過性ペプチドとコンジュゲートしたペプテン－１（Ｐ１－ＣＰＰ）の定量的効果を示す棒グラフである。本明細書に開示される実施形態による網膜神経節細胞マーカーＢｒｎ３ａでの免疫標識によって検出されたMorrisonの高眼圧症モデルを用いた６週間の眼内圧上昇後の周辺網膜におけるラットＲＧＣの保護に対する細胞透過性ペプチドとコンジュゲートしたペプテン－１（Ｐ１－ＣＰＰ）の影響を示すＣｙｔａｔｉｏｎ５顕微鏡画像パネルである。本明細書に開示される実施形態によるブラウンノルウェーラットにおける６週間の眼内圧上昇後の周辺網膜でのＲＧＣ保護に対する細胞透過性ペプチドとコンジュゲートしたペプテン－１（Ｐ１－ＣＰＰ）の定量的効果を示す棒グラフである。本明細書に開示される実施形態によるブラウンノルウェーラットにおける６週間の眼内圧上昇後の中間周辺網膜でのＲＧＣの保護に対する細胞透過性ペプチドとコンジュゲートしたペプテン－１（Ｐ１－ＣＰＰ）の定量的効果を示す棒グラフである。本明細書に開示される実施形態による図１０Ａ～１０Ｃに反映される眼内圧上昇状態を検証するためにＩＯＰ上昇眼および対側眼において測定された眼内圧プロファイルを示す折れ線グラフである。本明細書に開示される実施形態によるブラウンノルウェーラットにおける６週間の眼内圧上昇後の視神経軸索の保護に対する細胞透過性ペプチドとコンジュゲートしたペプテン－１（Ｐ１－ＣＰＰ）の影響を示す光学顕微鏡画像パネルである。本明細書に開示される実施形態によるブラウンノルウェーラットにおける６週間の眼内圧上昇後のＲＧＣ機能に対する細胞透過性ペプチドとコンジュゲートしたペプテン－１（Ｐ１－ＣＰＰ）の影響を示す棒グラフである。図１２Ａの棒グラフに対応する一連のパターン網膜電図（「ＰＥＲＧ」）トレースである。本明細書に開示される実施形態によるＲＧＣ死のヒト網膜外植片モデルにおける７日間のｅｘｖｉｖｏ培養後のヒトＲＧＣの保護に対する細胞透過性ペプチドとコンジュゲートしたペプテン－１（Ｐ１－ＣＰＰ）の定量的効果を示す棒グラフである。図１３Ａに表すヒトＲＧＣの保護に対する細胞透過性ペプチドとコンジュゲートしたペプテン－１（Ｐ１－ＣＰＰ）の影響を示す共焦点顕微鏡画像パネルである。本明細書に開示される実施形態による２週間のＩＯＰ上昇およびビヒクル治療と比較した２週間のＩＯＰ上昇およびＰ１－ＣＰＰ治療後に単離されたラットＲＧＣにおいて有意に上方調節および下方調節された古典的経路を示すＲＮＡシークエンシング結果を表す棒グラフである。本明細書に開示される実施形態によるＩＯＰ上昇ビヒクル対照ラットから単離されたＲＧＣと比較したＩＯＰ上昇Ｐ１－ＣＰＰ治療ラットから単離されたＲＧＣの生存促進ＣＲＥＢ経路における上位１２個の差次的に発現された遺伝子のヒートマップ分析である。本明細書に開示される実施形態によるＩＯＰ上昇ビヒクル治療対照ラットと比較したＩＯＰ上昇Ｐ１－ＣＰＰ治療ラットから単離されたＲＧＣにおける相対Ｃｒｅｂ１遺伝子発現倍率変化を示す棒グラフである。

詳細な説明
本開示は、緑内障および関連する眼損傷を含む網膜疾患、傷害または病態の少なくとも１つの症状を治療、リスク低減、予防および／または緩和するための組成物、方法およびシステムに関する。実施形態は、Ｈｓｐ２０またはαＢ－クリスタリンに由来するペプチド等の少なくとも１つのＨＳＰペプチドを含む医薬組成物を投与することを含むペプチド送達アプローチによって網膜細胞死を低減または予防することを含む。幾つかの実施形態では、ＨＳＰペプチドはＣＰＰとコンジュゲートしていてもよく、これにより標的細胞、例えばＲＧＣへのＨＳＰペプチドの透過を増加させ、それによってＨＳＰペプチドの所望の効果を増加させることもできる。外因性ＨＳＰペプチドを網膜細胞に送達するために、医薬組成物を硝子体内投与することができる。許容可能な担体および／または添加剤も含み得る医薬組成物は、被験体が緑内障等の眼病態と診断される前および／もしくは後、または被験体が眼傷害を受けた後に１回以上投与することができる。開示の方法で、例えば被験体の片眼または両眼に直接、医薬組成物を投与すると、眼内の抗アポトーシスＨＳＰペプチドのレベルが上昇することで、網膜細胞死が顕著に阻害され、眼内圧が低下し、かつ／またはそうでなければ傷害もしくは眼病態の発症後に起こり得る軸索変性が低減する可能性がある。いかなる特定の理論にも限定されるものではないが、医薬組成物の投与により、生存促進ＣＲＥＢシグナル伝達経路の１つ以上の構成要素が上方調節され得る。これらの利点により、眼療法の分野で以前に検討されていなかった安全で効果的な方法で網膜損傷を予防、改善および／または妨害することができる。

以下に別段の定義がない限り、本明細書で使用される技術用語および科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。本発明の目的上、以下の用語を明確にするために定義する。

本明細書で使用される場合、「ＨＳＰ」は、それぞれ約８０～約１００アミノ酸残基の範囲のクリスタリンコアドメインを有するストレスタンパク質である。ＨＳＰは、更なる生理的機能の中でも、それらが存在する細胞内で抗アポトーシス活性および分子シャペロン活性を示すことがある。ＨＳＰは、低分子量ＨＳＰペプチド（約１２～４３ｋＤａ）と高分子量ＨＳＰペプチド（約１００～１１０ｋＤａ）とに分類することができる。低分子量ＨＳＰペプチドの例としては、α－クリスタリン（αＡおよびαＢの２つのサブユニットから構成される）、Ｈｓｐ２０およびＨｓｐ２７が挙げられる。

本明細書で言及する「ＨＳＰペプチド」は、Ｈｓｐ２０およびαＢ－クリスタリン等のＨＳＰに由来するポリペプチドである。「ペプチド」または「ポリペプチド」という用語は、本明細書において区別なく使用され得る。各ＨＳＰペプチドを構成するアミノ酸の数は、異なることがあり、様々な実施形態において、約２～約５０、約６～約４０、約１０～約３０、約１２～約２８、約１４～約２６、約１６～約２４、約１８～約２２、約１９、約２０または約２１アミノ酸の範囲である。ＨＳＰペプチドはそれぞれ、それらが由来する完全長タンパク質のクリスタリンコアドメインの一部を構成することがある。例えば、ＨＳＰペプチドは、それらが由来するＨＳＰのクリスタリンコアドメインに存在するアミノ酸の約２０～２５％を含み得る。ＨＳＰペプチドは、サイズがより小さいにもかかわらず、対応するフルサイズのクリスタリンコアドメインの分子シャペロンおよび抗アポトーシス特性を保持する可能性がある。各アミノ酸の各アミノ基は、ペプチド結合を介して別のアミノ酸のカルボキシル基に連結している。本明細書に開示されるＨＳＰペプチドは、ヒトまたは非ヒト起源の天然に存在するＨＳＰから酵素的および／または化学的切断によって直接得ることができる。代替的には、ＨＳＰペプチドをペプチド合成技術によって作製することができる。得られるＨＳＰペプチドは、或る程度の三次元フォールディングを有するまたは有しないアミノ酸の鎖等の様々な形態で存在し得る。開示のＨＳＰペプチドは、それらが由来するＨＳＰと同様、細胞透過性である可能性があり、タンパク質凝集およびアポトーシスを阻害する可能性があり、強固な分子シャペロン活性を示す可能性がある。したがって、このペプチドは、タンパク質凝集およびアポトーシスが関与する疾患または病態の予防または治療に効果的であり得る。

ＨＳＰペプチドは、幾つかの実施形態ではアセチル化され、他の実施形態ではアセチル化されていなくてもよい。「アセチル化」ペプチドは、少なくとも１つのアセチル化アミノ酸、例えばリジンを含むペプチドである。幾つかの例では、医薬組成物に加える前にアセチル化ＨＳＰペプチドを生成するために化学的アセチル化が行われ得る。本明細書に開示されるアセチル化ペプチドは、タンパク質分解酵素の影響を受けにくいため、ｉｎｖｉｖｏでより安定している可能性がある。

本明細書で使用される場合、「被験体」は、ヒトまたは他の哺乳動物を意味する。非ヒト被験体には、例えば家庭用ペットおよび／または家畜等の様々な哺乳動物が含まれ得るが、これらに限定されない。被験体は、治療を必要とするとみなすことができる。開示の組成物、方法およびシステムは、健常なヒト被験体、緑内障もしくは糖尿病性網膜症と診断された患者、１つ以上の他の眼疾患と診断された患者、様々な眼傷害を患っている患者、糖尿病患者、または視力喪失を起こしている患者の治療に効果的であり得る。

本明細書で使用される場合、「眼病態」は、被験体の片眼または両眼に悪影響を及ぼすものを含む、眼に関係する全ての疾患または病態を包含する。本明細書に開示される治療方法の標的とされる眼疾患、傷害および病態は特に、ＲＧＣ、網膜内皮細胞および網膜毛細血管を含む網膜組織を損傷する可能性がある。本明細書で企図される眼病態の非限定的な例としては、緑内障、黄斑変性、白内障形成、糖尿病性眼疾患、糖尿病性網膜症、網膜剥離、網膜色素変性症、ＲＧＣ死、眼内圧上昇、高眼圧症、軸索変性、興奮毒性損傷、物理的損傷（例えば、虚血および／または再灌流）、化学的損傷、神経栄養因子欠乏、酸化ストレス、炎症、ミトコンドリア機能不全、軸索輸送不全またはそれらの組合せを挙げることができる。

本明細書で使用される場合、「緑内障」は、視神経の不可逆的損傷による視覚機能の永久的喪失を特徴とする疾患を指す。緑内障の２つの主なタイプは、原発性開放隅角緑内障および閉塞隅角緑内障であり、これらの一方または両方を本明細書に記載される実施形態に従って治療することができる。

本明細書で使用される場合、「眼内圧」という用語は、眼球内の液体の圧力を指す。正常なヒトの眼の眼内圧は通例、約１０～約２１ｍｍＨｇの範囲である。眼内圧「上昇」または「高眼圧症」は従来、約２１ｍｍＨｇ以上と考えられる。眼内圧上昇は、緑内障の発症のリスク因子であり得る。

本明細書で企図される網膜損傷の治療は、疾患、傷害または他の病態によって引き起こされるか、またはそれと関連する網膜損傷の少なくとも１つの症状を治療、リスク低減、予防または緩和することを包含する。したがって、「治療する」、「治療」または「緩和」は、治療処置および予防（prophylactic or preventative）措置の両方を指し、その目的は、標的の病的状態および／または症状を予防または減速（軽減）することである。治療を必要とする人には、病態を罹患または発症する傾向がある人だけでなく、既に病態と診断された人が含まれる。被験体が本開示の方法に従って治療有効量の医薬組成物を受けた後、視力障害、視力喪失、視力異常、軸索変性、ＲＧＣ死、網膜内皮細胞死および／または網膜毛細血管変性のうちの１つ以上の観察可能かつ／もしくは測定可能な低減、またはその欠如を示す場合、被験体は網膜損傷の「治療」に成功する。「治療する（treat）」または「治療する（treating）」という用語は、本明細書において説明を簡単にするためだけに一貫して使用され、したがって限定的なものと解釈されるべきではない。

「低減する（Reducing）」、「低減する（reduce）」または「低減」は、網膜損傷の重症度、範囲、頻度または長さを減少させることを意味する。

ＨＳＰペプチドまたはＨＳＰペプチドの組合せを含む組成物の「有効量」は、具体的に記載された目的を果たすのに十分な量であり、記載の目的に関して経験的に日常的な方法で決定することができる。例えば、本明細書で使用される「有効量」は、被験体に投与すると、被験体のＲＧＣ、網膜内皮細胞および／または網膜毛細血管細胞における天然のＨＳＰレベルを回復または超過させるＨＳＰペプチドの量と定義することができる。「治療有効量」という用語は、被験体における網膜疾患、傷害または病態の少なくとも１つの症状を検出可能に繰り返して治療、リスク低減、予防または緩和するＨＳＰペプチドを含む組成物の量を指す。これには、眼内圧上昇、ＲＧＣ死、網膜内皮細胞死、網膜毛細血管変性、視力喪失、ＲＧＣ細胞体変性および／またはＲＧＣ軸索変性等の疾患の兆候または症状の頻度または重症度の低減が含まれるが、これらに限定されない。かかる改善は、本明細書に開示される方法に従って開示の医薬組成物を投与していない被験体の眼と比べて検討され得る。治療により病状が改善し得るが、疾患の完全な治癒ではない可能性があることが当業者には理解される。例えば、緑内障患者の治療の成功は、患眼における視野喪失がそれ以上進行しないこと、または患眼における視野喪失の進行速度が減速することから明らかであり得る。

化合物、組成物または作用物質「の投与」および「を投与する」は、本明細書に記載される化合物、組成物もしくは作用物質、化合物、組成物もしくは作用物質のプロドラッグ、または医薬組成物の提供を意味すると理解されるべきである。化合物、作用物質または組成物は、他者が被験体へと（例えば、硝子体内に）提供もしくは投与してもよく、または被験体が自己投与してもよい。

「医薬組成物」または「医薬配合物」は、或る量（例えば単位投与量）の開示の化合物、例えば、任意にＣＰＰとコンジュゲートしたアセチル化または非アセチル化ＨＳＰペプチドの１つ以上を、担体、希釈剤および／またはアジュバントを含む１つ以上の非毒性の薬学的に許容可能な添加物、ならびに任意に他の生物学的に活性な成分とともに含む組成物である。「医薬組成物」または「医薬配合物」は、或る量（例えば単位投与量）の開示の化合物、例えばｒＡＡＶ－ＨＳＰの１つ以上を、担体、希釈剤および／またはアジュバントを含む１つ以上の非毒性の薬学的に許容可能な添加物、ならびに任意に他の生物学的に活性な成分とともに含む組成物である。かかる医薬組成物は、Remington’s Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., Easton, Pa. (19th Edition)に開示されているような標準的な医薬配合技術によって調製することができる。

本明細書で使用される場合、「薬学的に許容可能な添加剤」または「薬学的に許容可能な担体」は、医薬組成物の所望の形態または粘稠度に寄与する薬学的に許容可能な材料、組成物またはビヒクルを意味する。各々の添加剤または担体は、被験体に投与した場合に本開示の組成物の有効性を実質的に低下させる相互作用、および薬学的に許容可能でない医薬組成物をもたらす相互作用が回避されるように、混合した場合に医薬組成物の他の成分に適合する必要がある。加えて、各々の添加剤または担体は、薬学的に許容可能となるように十分に高純度である必要がある。薬学的に許容可能な担体の非限定的な例としては、ラクトース、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、デンプン、アカシアゴム、リン酸カルシウム、アルギン酸塩、ゼラチン、ケイ酸カルシウム、微結晶性セルロース、ポリビニルピロリドン、セルロース、水、シロップ、メチルセルロース、メチルヒドロキシベンゾエート、プロピルヒドロキシベンゾエート、タルク、ステアリン酸マグネシウム、鉱油等を挙げることができる。付加的または代替的には、担体は滑沢剤、湿潤剤、香料、乳化剤、懸濁化剤、防腐剤等を含むことがある。

本明細書で使用される場合、「野生型」は、ｉｎｖｉｖｏで通常存在するように、天然に存在するタンパク質またはその一部を指す。

本明細書に記載される実施態様において使用される作用物質、化合物、組成物、抗体等は、使用前に精製および／または単離されているとみなされる。精製された材料は通例、「実質的に純粋」であり、すなわち、ＨＳＰペプチドまたは他の分子は、天然でそれに付随する成分から分離されている。例えば、ＨＳＰペプチドは、天然でそれに付随するタンパク質および他の有機分子を少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、９８％または９９（重量）％含まない場合に、実質的に純粋であるとみなすことができる。

本明細書で使用される場合、「同一性」または「類似性」という用語は、配列を比較することによって決定される２つ以上のポリペプチド配列またはそれらの基礎となる核酸配列間の関係を表す。当該技術分野において、「同一性」はまた、配列の文字列間の一致によって決定されるポリペプチドまたはポリヌクレオチド配列間の配列関連性の程度を意味する。

単数形の用語「a」、「an」および「the」は、文脈上明らかに他の指定がない限り、複数の指示対象を含む。同様に、「または」という語は、文脈上明らかに他の指定がない限り、「および」を含むことを意図したものである。「含む（comprises）」という用語は「含む（includes）」を意味する。また、「ＡまたはＢを含む」とは、文脈上明らかに他の指定がない限り、ＡもしくはＢまたはＡおよびＢを含むことを意味する。本開示の実施または試験において、本明細書に記載されるものと類似または同等の方法および材料を使用することができるが、好適な方法および材料を以下に記載する。加えて、材料、方法および例は例示にすぎず、限定を意図したものではない。

別段の定義がない限り、本明細書で使用される全ての技術用語および科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。矛盾する場合には、定義を含む本明細書が優先される。本明細書で言及される全ての刊行物、特許出願、特許および他の参照文献は、参照により本明細書に援用される。本明細書で引用される参照文献は、請求項に係る発明の先行技術であるとは認められない。

ＨＳＰペプチド
本開示のＨＳＰペプチドには、ヒトＨＳＰに由来する実質的に純粋なポリペプチドが含まれる。ＨＳＰペプチドは、細胞透過性である可能性があり、タンパク質凝集および／またはアポトーシスを阻害する可能性がある。

実施形態には、Ｈｓｐ２０に由来する１つ以上のペプチド、αＢ－クリスタリンに由来する１つ以上のペプチド、またはＨｓｐ２０およびαＢ－クリスタリンに由来する１つ以上のペプチドの混合物が含まれ得る。付加的なＨＳＰに由来するペプチドを用いることもでき、その非限定的な例としては、αＡ－クリスタリンおよびＨｓｐ２７を挙げることができる。幾つかの例では、Ｈｓｐ２０ペプチドは、眼傷害または疾患と関連するＲＧＣ死を予防、低減および／または減速するのに最も効果的であり得る。更なる例では、αＢ－クリスタリンペプチドが網膜内皮細胞死、網膜毛細血管変性および／または炎症性サイトカイン産生の予防、低減または抑制等の同じまたは異なる目的で最も効果的であり得る。特定のＨＳＰペプチドは、治療する被験体および／もしくは病態、ならびに／または治療方法に応じて様々なレベルの有効性を示すことがある。

Ｈｓｐ２０ペプチドは、Ｇ^７３ＨＦＳＶＬＬＤＶＫＨＦＳＰＥＥＩＡＶＫ^９１（配列番号１）と少なくとも約９０％、少なくとも約９５％または１００％同一のアミノ酸配列を有し得る。Ｈｓｐ２０ペプチドは、幾つかの実施形態ではアセチル化されていてもよい。アセチル化Ｈｓｐ２０ペプチドの一例は、Ｇ^７３ＨＦＳＶＬＬＤＶＫ（アセチル）ＨＦＳＰＥＥＩＡＶＫ^９１（配列番号２）と少なくとも約９０％、少なくとも約９５％または１００％同一のアミノ酸配列を有し得る。配列番号１または２と類似または同一のＨｓｐ２０ペプチドの硝子体内投与は、緑内障および／またはそれと関連する１つ以上の病態、例えば高眼圧症もしくは軸索変性に罹患した被験体においてＲＧＣ死を予防、低減および／または減速するのに効果的であり得る。

αＢ－クリスタリンペプチドは、^７３ＤＲＦＳＶＮＬＤＶＫＨＦＳＰＥＥＬＫＶＫＶ^９３（配列番号３）と少なくとも約９０％、少なくとも約９５％または１００％同一のアミノ酸配列を有し得る。αＢ－クリスタリンペプチドも幾つかの実施形態ではアセチル化されていてもよい。配列番号３と類似または同一のαＢ－クリスタリンペプチドは、緑内障および／またはそれと関連する１つ以上の病態、例えば高眼圧症もしくは軸索変性に罹患した被験体においてＲＧＣ死を予防、低減および／または減速するのに効果的であり得る。配列番号３と類似または同一のαＢ－クリスタリンペプチドの投与は、無細胞毛細血管の数の増加から明らかであり得る、網膜内皮細胞死および／または網膜毛細血管細胞の不可逆的損傷を予防、低減および／または減速するのに効果的な場合もある。幾つかの例では、配列番号３と類似または同一のαＢ－クリスタリンペプチドの投与は、眼傷害後の１つ以上の炎症誘発性サイトカインの発現を低減または抑制するのに効果的な場合もある。

実施形態には、少なくとも１つのＣＰＰとコンジュゲートしたＨＳＰペプチドが含まれ得る。ＣＰＰは、それとコンジュゲートしたＨＳＰペプチドの網膜細胞透過を増加させる可能性があり、それにより、ＨＳＰペプチド単独の送達と比べて、眼の最も高い内境界膜へのＨＳＰペプチドの送達が増加または最大化し得る。結果として、ＣＰＰコンジュゲートＨＳＰペプチドの硝子体内投与は、眼傷害または疾患と関連するＲＧＣ死および／または機能低下をさらに予防、低減および／または減速することができる。幾つかの非限定的な実施形態では、ＣＰＰは、配列番号３と類似または同一のαＢ－クリスタリンペプチドと特異的にコンジュゲートすることができる。実施形態には、配列番号１または２と類似または同一のアミノ酸配列を有し得る１つ以上のＨｓｐ２０ペプチドにコンジュゲートしたＣＰＰも含まれ得る。開示のＨＳＰペプチドの１つ以上とコンジュゲートすることができるＣＰＰの一例は、ＶＰＴＬＫ（配列番号６）と少なくとも約８０％または１００％同一のアミノ酸配列を有し得る。配列番号６と少なくとも約８０％または１００％同一のアミノ酸配列を有するＣＰＰとコンジュゲートした、例えば配列番号２または３を有するＨＳＰペプチドの投与により、ＲＧＣ死が特に顕著に低減および／または減速し、軸索完全性が維持される可能性があり、これはＣＲＥＢシグナル伝達経路の１つ以上の構成要素の上方調節によって少なくとも部分的に駆動され得る。

医薬組成物
本開示の医薬組成物は、ＲＧＣ死、網膜内皮細胞死および／または網膜毛細血管変性を含む、網膜細胞機能低下および／または網膜細胞死によって引き起こされるか、またはそれと関連する眼疾患、傷害および／または病態の少なくとも１つの症状を治療、リスク低減、予防または緩和するのに適している。医薬組成物の実施形態は、ＣＰＰとコンジュゲートしていてもよい、少なくとも１つのＨＳＰペプチドを含み得る。医薬組成物は、被験体の標的部位へのＨＳＰペプチドの送達を促進および／または安定化するように構成される薬学的に許容可能な担体を含んでいてもよい。

幾つかの実施形態では、医薬組成物は、１つ以上がＣＰＰとコンジュゲートしていてもよい、２つ以上の異なるＨＳＰペプチドの混合物を含んでいてもよい。例えば、医薬組成物は、Ｈｓｐ２０ペプチドとαＢ－クリスタリンペプチドとの混合物を含み得る。かかる例によると、Ｈｓｐ２０ペプチドとαＢ－クリスタリンペプチドとの比率は、約１：１、約２：１、約３：１、約４：１、約５：１、約６：１、約７：１、約８：１、約９：１、約１０：１、約１：１０、約１：９、約１：８、約１：７、約１：６、約１：５、約１：４、約１：３または約１：２であり得る。

実施形態において、医薬組成物は１つ以上の添加剤を含むか、またはそれと同時に投与することができる。好適な添加剤は、用いられる特定の剤形によって異なることがある。加えて、好適な添加剤は、安定な剤形の製造を容易にする能力等の特定の機能によって選ばれ得る。添加剤は、規則遵守のために選ばれることもある。非限定的な添加剤の例としては、充填剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、流動促進剤、造粒剤、コーティング剤、湿潤剤、溶媒、共溶媒、懸濁化剤、乳化剤、着色料、固化防止剤、保湿剤、キレート剤、可塑剤、粘性剤、酸化防止剤、防腐剤、安定剤および界面活性剤が挙げられる。幾つかの実施形態では、１つ以上の送達ビヒクルを用いてもよく、その非限定的な例としては、ナノ粒子、ナノゲルおよび／またはアデノ随伴ウイルスベクター（「ＡＡＶベクター」）を挙げることができる。当業者であれば、或る特定の薬学的に許容可能な添加剤が２つ以上の機能を果たすことがあり、最終組成物中に添加剤がどの程度存在し、組成物中に他のどの成分が存在するかに応じて代替的な機能を果たすことがあることを理解するであろう。

実施形態において、ＨＳＰペプチドを１つ以上の緩衝剤および／または希釈剤と同時に投与することができ、その非限定的な例としては、様々な濃度の水酸化ナトリウムおよびリン酸ナトリウムを挙げることができる。

特定の添加剤および／または担体の含有は、投与経路によって異なり得る。例えば、非経口投与用の調製物には、滅菌水溶液、非水溶媒、懸濁液、エマルション、凍結乾燥調製物および／または坐剤が含まれ得る。非水溶媒としては、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、植物油および／または注射用エステルを挙げることができる。坐剤の基剤としては、ｗｉｔｅｐｓｏｌ、マクロゴール、ｔｗｅｅｎ６１、カカオバター、ラウリンバター、グリセロゼラチン等を使用することができる。ペプチドの安定性または吸収性を高めるために、グルコース、スクロースもしくはデキストラン等の炭水化物、アスコルビン酸もしくはグルタチオン等の酸化防止剤、キレート剤、低分子量タンパク質、または他の安定剤を使用することができる。

幾つかの実施形態では、医薬組成物は局所組成物、例えば液滴形態で提供してもよい。点眼剤は１つ以上の分散剤、可溶化剤および／または懸濁剤も含む水性または非水性基剤を用いて配合することができる。かかる実施形態によると、医薬組成物中のＨＳＰペプチドの濃度は、硝子体内実施態様に用いられる濃度よりも高いことがある。

治療的アプローチ
眼病態を治療する方法は、治療有効量の本明細書に開示されるＨＳＰペプチド組成物を被験体の眼に投与することを含み得る。組成物は、眼科外科手術を含み得る眼傷害を受けた後、または眼疾患が診断された後に投与することができる。実施形態は、被験体が疾患を発症するのを予防するか、または疾患発症時の症状の重症度を軽減するために、未診断の被験体に開示のＨＳＰペプチド組成物を投与することも含み得る。幾つかの例では、予防的投与は、被験体に平均を上回る眼疾患発症リスクがあるか、または眼傷害を受ける平均を上回るリスクを有すると決定された後に行ってもよい。幾つかの実施形態では、開示の医薬組成物の硝子体内投与は、例えばＲＧＣ（またはＲＧＣ細胞体）、網膜内皮細胞および／または網膜毛細血管を含む、被験体の網膜細胞における１つ以上のＨＳＰの天然レベルを回復または超過させるのに独自に効果的であり得る。かかるレベルは、未治療のままであれば不可逆的網膜損傷を引き起こし得る網膜細胞喪失を低減するのに十分であり得る。

ＨＳＰペプチド組成物は、急性閉塞隅角緑内障に罹患した被験体の外科手術の直後および／または外科手術中に被験体の片眼または両眼に注射することができる。かかる治療は、視神経変性を低減し、最終的に完全な視力喪失を減速または予防し得る。Ｈｓｐ２０および／またはαＢ－クリスタリンに由来するＨＳＰペプチドを含むＨＳＰペプチド組成物の投与は、原発性開放隅角緑内障および正常眼圧緑内障と診断された被験体においてＲＧＣ死を低減、予防または減速する可能性もある。αＢ－クリスタリンに由来するＨＳＰペプチドを含む組成物の投与は、ＣＰＰコンジュゲートの有無にかかわらず、ＲＧＣ死、網膜内皮細胞死、網膜毛細血管変性および／または網膜細胞機能低下を低減、予防および／または抑制するのに特に効果的であり得る。幾つかの実施形態では、ＨＳＰペプチド組成物の投与は、被験体が外傷性脳損傷を受けた後に脳神経細胞を保護する可能性がある。同じＨＳＰ組成物が、糖尿病患者において腎臓近位尿細管上皮細胞を保護するのにも効果的であり得る。

前節で述べたように、医薬組成物は、少なくとも１つの薬学的に許容可能な担体を含むか、またはそれと同時に投与することができる。関連して、医薬組成物は単独で、または他の治療剤と組み合わせて連続的もしくは同時に投与することができる。かかる付加的な作用物質は、同じ眼病態を治療するために配合しても、またはそうでなくてもよい。

本明細書に開示される医薬組成物の投与の頻度は異なることがある。実施形態において、薬学的有効量の組成物を毎日、毎週、毎月または毎年投与することができる。開示の組成物を被験体に投与する回数は、治療期間の長さとともに、網膜損傷を引き起こすか、またはそのリスクがある病態の重症度またはタイプによって異なり得る。例えば、医薬組成物を投与して眼傷害を治療する実施形態は、より持続的な治療アプローチを必要とし得る、ＨＳＰペプチド組成物を投与して緑内障等の疾患を治療する実施形態よりも少ない個別投与を含むことがある。治療期間の長さも患者特有であり、医師または他の医療供給者によって定期的に再評価され得る。様々な実施形態において、医薬組成物は傷害の直後、例えば傷害から１、２、６、１２または２４時間以内に投与することができる。配合物は１回または複数回、例えば２、３、４、５、６、７、８、９、１０回またはそれ以上投与することができる。

本明細書に開示される医薬組成物は、本明細書に記載される目的で特別に構成され得るツベルクリン注射器または点滴デバイス等の注射デバイスを用いて投与することができる。幾つかの例では、投与デバイスは単回使用デバイスであってもよく、これは単回用量の医薬組成物も含むキットに含まれていてもよい。したがって、注射デバイスは、網膜損傷の少なくとも１つの症状を治療、リスク低減、予防または緩和するためのシステムの一部を構成し得る。

投与経路は異なることがあり、複数の経路が許容され得るが、開示の組成物の硝子体内投与が、１つ以上の眼病態を治療するのに最も効果的な可能性がある。硝子体内投与は、治療中および治療後に被験体が痛みを感じる可能性があることから、従来支持されないことがある。硝子体内投与は出血、網膜裂孔および剥離、白内障形成、ならびに眼感染の可能性を増加させることもある。しかしながら、かかる潜在的な副作用よりも、本明細書に記載される特定のＨＳＰペプチド組成物の局所的な硝子体内投与によって達成される強い有効性および全身性副作用の軽減の方が重要であり得る。

硝子体内投与の潜在的な代替手段としては、眼への局所適用、腹腔内注射を挙げることができる。腹腔内注射後に、開示のＨＳＰペプチド組成物は、血液房水関門を効果的に通過し、最終的に網膜細胞に入ることができ、そこで注射した組成物のＨＳＰペプチドが網膜損傷を予防、低減または他の形で改善し得る。許容可能な投与方法の他の非限定的な例としては、静脈内投与、筋肉内投与、皮下投与または局所投与を挙げることができる。

被験体に投与される医薬組成物の治療有効量は異なることがある。実施形態において、被験体に提供される医薬組成物の各硝子体内用量は、約１００μｇ／ｍＬ～約５００μｇ／ｍＬの範囲のＨＳＰペプチド濃度を含み得る。投与は、例えば治療される病態、病態の重症度、配合物の性質（例えば、ＣＰＰコンジュゲーションの有無）、投与方法、被験体の状態、被験体の年齢、被験体の体重、またはそれらの組合せによって異なり得る。投与量レベルは通例、ｉｎｖｉｔｒｏ、ｉｎｖｉｖｏまたは組織培養において有効であることが示された濃度と少なくとも同じ濃度を作用部位で達成するのに十分なものである。

複数の投与技術およびスケジュールに対応するために、本明細書に開示される医薬組成物は、当業者に用いられる方法に従い、薬学的に許容可能な担体および／または添加剤とともに単位投与形態または複数投与形態で調製することができる。例示的な配合物は、水性もしくは油性溶液、懸濁液、またはエマルションの形態であり得る。安定性の向上および長期保存のために、医薬組成物を凍結乾燥してもよい。

以下の実験例は、本発明の例示的な実施形態を説明するために提供され、限定的なものとみなすべきではない。

実施例
実施例１
ＲＧＣ死に対するＨｓｐ２０およびαＢ－クリスタリンペプチドの効果を決定するために、マウスに各ペプチドの硝子体内注射を行う第１の高眼圧症マウスモデルを採用した。

第１の高眼圧症モデルは、初めにマウスを０．５％塩酸プロパラカインの局所適用で補助したケタミン／キシラジンの腹腔内注射によって麻酔することによって作製した。ポリスチレンマイクロビーズ（直径１０μｍ、ＰＢＳ１ｍＬ当たり５００万個のビーズ）を各動物の右眼の前房に注射することにより、高眼圧症を片側でのみ誘導した。３３Ｇ針を用いて角膜の中央付近を静かに穿刺し、小さな気泡を注入して前眼房を持ち上げた。少量（２μＬ）のマイクロビーズを、ハミルトン注射器に接続したマイクロピペットによって気泡下の前房に注射した。感染を予防するために、注射した眼に抗生物質軟膏を局所適用した。

眼圧計を用い、眼内圧を６週間にわたって毎週測定した。特に、イソフルランの持続流（酸素と混合した２Ｌ／分の５％イソフルラン）で満たした麻酔室にマウスを入れた。毎週のチェックイン毎に眼圧計により５回測定し、最高および最低の読取り値を除外し、残りの読取り値から各マウスについて平均眼内圧を生成した。

眼内圧を上昇させるための３週間にわたる毎週のマイクロビーズ注射後に、ＰＢＳ中の配列番号２を有するＨｓｐ２０ペプチド（ペプテン－３ａ）または配列番号３を有するαＢ－クリスタリンペプチド（ペプテン－１）のいずれか１μｇ用量を３週間にわたって週１回硝子体内注射した。マイクロビーズ注射の６週間後に眼を解剖し、４％ＰＦＡを用いて４℃で一晩、後固定した。網膜を続いて解剖し、ＰＢＳで３回洗浄した後、一晩ブロッキングした（ＰＢＳ中の５％正常ロバ血清および１％ＴｒｉｔｏｎＸ－１００）。次いで、全載網膜をＲＧＣおよび軸索細胞のマーカーであるＢｒｎ３ａおよびβＩＩＩ－チューブリン（１：５００希釈）についてそれぞれ免疫染色した。次いで、網膜をＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ４８８ロバ抗マウスまたはテキサスレッドコンジュゲートヤギ抗ウサギＩｇＧ（１：２５０希釈）で染色した。Zeissコンフォーカルにより２０倍レンズを用いて各網膜領域から４つの画像フィールドを得た。Ｂｒｎ３ａ陽性ＲＧＣ数は、ＩｍａｇｅＪソフトウェア（NIH）を用いて、全載網膜の４つの象限から中間周辺部で計数した（細胞／ｍｍ^２）。対側の無傷眼を対照として用いた。

図１Ａに示されるように、眼マイクロビーズ注射により、眼内圧は１週間で１２ｍｍＨｇから３０ｍｍＨｇ超に上昇した。眼内圧は、その後徐々に低下し、４週間の時点で最低値に達した。この低下にもかかわらず、眼内圧は、マイクロビーズを注射していない対照マウスよりも有意に高いままであった（^＊ｐ＜０．０５、^＊＊ｐ＜０．０１、^＊＊＊＊ｐ＜０．０００１、０日目と比較）。

ＲＧＣ生存に対する硝子体内ペプチド注射の影響を図１Ｂにグラフで示す。ここで、ｎｓ＝有意でない、^＊＊＊ｐ＜０．００１、^＊＊＊＊ｐ＜０．０００１である。示されるように、対照マウス（「Ｃｏｎｔ」）から摘出した網膜は、研究参加の６週間後に１ｍｍ^２当たりほぼ３４００個のＲＧＣを有していた。対照的に、マイクロビーズおよびＰＢＳを注射した非治療マウス（「ビヒクル」）は、６週間後に１ｍｍ^２当たり２３００個未満のＲＧＣを有していた。ペプテン－１で治療したマウス（「Ｐｅｐｔ－１」）から摘出した網膜は、６週間後に１ｍｍ^２当たり３２００個を超えるＲＧＣを有し、ペプテン－３ａで治療したマウス（「Ｐｅｐｔ－３ａ」）から摘出した網膜は、６週間後に１ｍｍ^２当たり約３０００個のＲＧＣを有していた。したがって、ビヒクル対照と比べ、ペプテン－１およびペプテン－３ａはどちらも、高眼圧レベルまで上昇した眼内圧を有する網膜内に存在するＲＧＣの喪失を有意に（また同程度に）低減した。

図１Ｂの定量的ＲＧＣ濃度を得た網膜の共焦点顕微鏡画像を図１Ｃに示す。より高いＢｒｎ３ａ陽性ＲＧＣ染色から明らかなように、ＲＧＣ数は、健常治療群１０２から摘出した網膜において最も高かった。非治療高眼圧症群１０４におけるＢｒｎ３ａ染色は、はるかに低かった。ペプテン－１群１０６およびペプテン－３ａ群１０８は、（ビヒクル対照群と比較して）それぞれ４％および１２％のＲＧＣ死の有意な減少を示した。同時のβＩＩＩ－チューブリン免疫染色により、ペプテン－１およびペプテン－３ａの両方が、軸索細胞死の減少から明らかなように軸索変性も阻害することが確認された。

実施例２
高眼圧症に罹患したマウスにおけるＲＧＣ死に対する同じＨｓｐ２０（ペプテン－３ａ）およびαＢ－クリスタリン（ペプテン－１）ペプチドの効果を確認するために、マウスに各ペプチドの硝子体内注射を行う第２の高眼圧症マウスモデルを開発した。

第２の高眼圧症モデルは、マウスを０．５％塩酸プロパラカインの局所適用で補助したケタミン／キシラジンの腹腔内注射によって麻酔することによって作製した。３３Ｇ針が水晶体または虹彩を傷つけることなく前房に到達するよう、縁郭に近い上側頭側で各試験眼の角膜を貫通させた。この穴に続いて、約２マイクロリットルのシリコーン油（１０００ｍＰａ・ｓ）を、生じる油滴が広がって虹彩の大部分を覆うまで前房にゆっくりと注射し、針をゆっくりと引き抜いた。注射後、角膜切開を閉じ、油漏れを最小限に抑えるために上眼瞼を優しくマッサージし、感染を予防するために、注射した眼の表面に動物用抗生物質軟膏を適用した。

２週間後にシリコーン油滴を除去した。３３Ｇ針を用い、角膜の中央よりも上の１箇所のトンネル切開および角膜の中央よりも下の１箇所のトンネル切開の２回の角膜トンネル切開を行った。３ｍＬルアーロック注射器に取り付けた３３Ｇ針を用い、下方トンネル切開からシリコーン油が流れ出るように、ＰＢＳを各眼の前房に注射した。油除去後に眼の表面に動物用抗生物質軟膏を適用した。

油除去の２日後に、ＰＢＳ中のペプテン－３ａまたはペプテン－１のいずれか１μｇ用量を硝子体内注射した。各眼の眼内圧を、イソフルランの持続流（酸素と混合した２Ｌ／分の５％イソフルラン）による麻酔下で眼圧計を用いてシリコーン油注射の４週間後まで週１回モニタリングした。油除去の２週間後（２８日目）に網膜を摘出し、Ｂｒｎ３ａおよびβＩＩＩ－チューブリン抗体で免疫染色して、生存ＲＧＣを可視化および計数した。

図２Ａに示されるように、シリコーン油（「ＳＯ」）の注射により、眼内圧は２週間で約１２ｍｍＨｇから約２５ｍｍＨｇまで上昇した。眼内圧は油除去の２日後に約１３ｍｍＨｇまで低下し、２８日目まで約１２ｍｍＨｇの正常範囲内に留まった。

ＲＧＣ生存に対する硝子体内ペプチド注射の影響を図２Ｂにグラフで示す。ここで、シリコーン油除去の２週間後に対照サンプルと比較して、ｎｓ＝有意でない、^＊ｐ＜０．０５、^＊＊ｐ＜０．０１および^＊＊＊ｐ＜０．００１である。シリコーン油注射の２週間後の対照サンプルについては、＃＃＃ｐ＜０．００１である。

左の２本の棒に示されるように、健常対照マウス（シリコーン油を注射していない）から摘出した網膜は、１ｍｍ^２当たりほぼ３９００個のＲＧＣを有していたのに対し（「２ｗｋ」）、シリコーン油を注射した網膜は、シリコーン油注射の２週間後に１ｍｍ^２当たり２４００個のＲＧＣしか有していなかった。加えて、健常対照マウス（シリコーン油を注射していない）から摘出した網膜は、シリコーン油除去の２週間後に１ｍｍ^２当たりほぼ３４００個のＲＧＣを有していたのに対し（「２＋２ｗｋ」）、高眼圧症マウス（「ビヒクル」）から摘出した網膜は、シリコーン油除去の２週間後に１ｍｍ^２当たり約２０００個のＲＧＣしか有していなかった。ペプテン－１で治療したマウス（「Ｐｅｐｔ－１」）から摘出した網膜は、ペプテン－３ａで治療したマウス（「Ｐｅｐｔ－３ａ」）から摘出した網膜と同様、シリコーン油除去の２週間後に１ｍｍ^２当たり２９００個弱のＲＧＣを有していた（「２＋２ｗｋ」）。このデータからも、ビヒクル対照と比べ、ペプテン－１およびペプテン－３ａはどちらも、高眼圧レベルまで上昇した眼内圧を有する網膜内に存在するＲＧＣの喪失を有意に（また同程度に）低減したことが示される。

染色したＲＧＣの共焦点顕微鏡画像を図２Ｃに示す。より高いＢｒｎ３ａ陽性染色から明らかなように、注射の２週間後のＲＧＣ数は、シリコーン油を注射していない健常対照群２０２から摘出した網膜において最も高く、シリコーン油を注射したマウス（高眼圧症群２０４）から摘出した網膜において最も低かった。対照群２０２と比べ、非治療高眼圧症群２０４ではＲＧＣ数が３９％減少した。４週目の健常対照群２０６におけるＲＧＣ数は高いままであったが、非治療高眼圧症群２０８ではシリコーン油除去の２週間後にＲＧＣ数が有意に減少し、４週目にＰＢＳ治療群２０６と比較して４１％減少していた。ペプテン－１治療２１０およびペプテン－３ａ治療２１２は、ＲＧＣ死を（ＰＢＳ治療対照２０６と比較して）それぞれ１５．７％および１４．２％有意に減少させた。

実施例３
第３の実験を行い、特に糖尿病性網膜症のマーカーを治療するペプテン－１の能力を評価した。網膜内皮細胞死および網膜毛細血管細胞死が、糖尿病性網膜症に罹患した被験体によく見られるため、ペプチドの投与を伴う場合および伴わない場合の炎症誘発性サイトカイン媒介アポトーシス後のそれらの生存をｉｎｖｉｔｒｏで測定した。

ヒト網膜内皮細胞（「ＨＲＥＣ」）を無血清培地にてペプテン－１またはスクランブル対照ペプチドのいずれか２００μｇ／ｍＬで３時間処理した。第１のスクランブル対照ペプチドの配列は、ＳＬＫＥＫＲＮＦＤＶＳＥＶＫＨＶＬＦＶＤＰ（配列番号４）であり、第２のスクランブル対照ペプチドの配列は、ＦＥＰＳＶＲＦＳＫＶＤＨＬＶＫＥＮＤＬＶＫ（配列番号５）であった。次いで、全ての試験細胞を炎症誘発性サイトカインの組合せ（５０Ｕ／ｍＬのＩＦＮ－γ＋２０ｎｇ／ｍＬのＴＮＦ－α＋２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１β）で４８時間処理した。

プロテアーゼ阻害剤カクテルを含有する１倍ＲＩＰＡバッファーを用いて細胞溶解物を調製した。ＢＣＡ法を用いて細胞溶解物のタンパク質濃度を測定し、２５μｇのタンパク質を免疫ブロット法に使用した。ＨＲＥＣアポトーシスを測定するために、細胞をアポトーシスのマーカーである活性型（切断型）カスパーゼ－３について特異的に免疫染色した。ハウスキーピングタンパク質のレベルを測定し、カスパーゼ－３レベルと比較してタンパク質密度を算出するための対照として、β－アクチン抗体染色を用いた。切断型カスパーゼ－３抗体で処理したウエスタンブロットメンブレンを最終的にストリップし、ペプテン－１抗体についてもプローブした。

図３Ａに示されるように、炎症誘発性サイトカイン混合物（「ＣＭ」）は、ＣＭで処理していない対照細胞と比べてはるかに高い切断型カスパーゼ－３レベルが示すように、ＨＲＥＣアポトーシスの有意な（^＊＊＊ｐ＜０．００１）増加を引き起こした（タンパク質レベル＝三連測定の平均±ＳＤ）。β－アクチンのレベルは、ウエスタンブロット画像に示されるように、対照細胞およびＣＭで処理した細胞で同様であった。アポトーシスを示唆する切断型カスパーゼ－３の強固なレベルが、図の上部のウエスタンブロット画像と、測定されたカスパーゼ－３レベルとβ－アクチンレベルとの密度比を示す、その下の定量的棒グラフ（デンシトメトリープロット）に示されている。示されるように、ＣＭで処理していない対照細胞は、β－アクチンに対して切断型カスパーゼ－３を殆ど含まなかったが、ＣＭで処理した細胞は、カスパーゼ－３とβ－アクチンとの密度比がおよそ１：１であった。

図３Ｂは、ウエスタンブロッティングによって検出される、ＣＭおよびペプテン－１で処理した細胞についての切断型カスパーゼ－３とβ－アクチンレベルとの密度比の減少（約０．５）によって示され、またＣＭおよびペプテン－１で処理した細胞において、ＣＭのみで処理した細胞ならびにＣＭおよびスクランブルペプチドで処理した細胞（「Ｓｃｒ－１」および「Ｓｃｒ－２」）と比べて、明らかにより薄い切断型カスパーゼ－３のバンドを生じたメンブレンブロットの右端の３つのレーンに示されるように、ＣＭのみで処理した対照ＨＲＥＣと比べ、ＣＭおよびペプテン－１で処理したＨＲＥＣが、有意に大きな程度まで生存したことを示している（^＊ｐ＜０．０５、^＊＊ｐ＜０．０１）。ＣＭおよびスクランブルペプチドで処理したＨＲＥＣでは、かかるサンプルについての切断型カスパーゼ－３とβ－アクチンとのより大きな密度比によってグラフで示されるように、ペプテン－１処理細胞と比べ、有意に多くの細胞死も観察された（^＊ｐ＜０．０５）。

図３Ｃは、ペプテン－１レベルが、ＣＭおよびペプテン－１で処理した細胞において実際に有意により高かったことを示している。特に、ＣＭおよびペプテン－１で処理した細胞は、ＣＭのみで処理した細胞ならびにＣＭおよびスクランブル対照ペプチドで処理した細胞（「Ｓｃｒ－１」および「Ｓｃｒ－２」）と比較して、ペプテン－１とβ－アクチンとの密度比が有意に大きかった（約２．２５）。棒グラフの上のブロット画像は、ＣＭのみで処理した細胞ならびにＣＭおよびスクランブルペプチドで処理した細胞では、目に見えるペプテン－１バンドがないことを示している。

実施例４
第４の実験を行い、ペプテン－１がマウスにおいて硝子体内注射後に網膜に移行し得るかを決定した。

ペプチドの視覚追跡を可能にするために、Ｃ末端にシステイン残基を有するペプテン－１とスルホ－シアニン５マレイミド（Ｃｙ５）色素とのコンジュゲーションを行った。マウス（Ｃ５７ＢＬ６／Ｊ）に、２μＬのＰＢＳ中のＣｙ５とコンジュゲートしたペプテン－１１μｇを硝子体内注射した。対側眼を陰性対照として用いた。４時間後に、網膜フラットマウントおよびホモジナイズ組織におけるＣｙ５蛍光強度を測定した。

図４Ａの網膜フラットマウントに示されるように、Ｃｙ５蛍光は、対照サンプルと比べ、ペプテン－１－Ｃｙ５を注射したマウスの網膜において有意に大きかった。図４Ｂにグラフで示す蛍光データ（ホモジナイズした網膜組織から得られた）により、ペプテン－１が、転移試薬を用いることなく、硝子体内注射後にマウスの網膜組織に透過したことが確認される。有意な網膜血管透過がペプテン－１－Ｃｙ５注射の２４時間後の図４Ｃにも示され、画像の第１の列は、網膜細胞の核内に存在するＤＮＡに結合する４’，６－ジアミジノ－２－フェニルインドール（「ＤＡＰＩ」）で染色された網膜血管を示している。上段の中央の画像に見られるように、ペプテン－１－ｃｙ５を注射していない対照細胞ではＣｙ５蛍光は検出されなかったが、ペプテン－１－ｃｙ５を注射したマウス（下段、中央の画像）では、網膜神経節細胞の核が有意なレベルのペプチドを含んでいた。したがって、硝子体内注射したペプテン－１は、注射の約４時間後に試験した網膜全体に分布していた。

実施例５
第５の実験を行い、硝子体内注射したペプテン－１が眼傷害後の網膜毛細血管細胞を効果的に治療および／または保護するかを決定した。

この高眼圧症モデルは、初めに１２週齢のＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスを０．５％塩酸プロパラカインの局所適用で補助したケタミン／キシラジンの腹腔内注射によって麻酔することによって作製した。Ｉ／Ｒ傷害を行うために、２５０ｍｌの０．９％ＮａＣｌ溶液が入った高置パウチに接続した３３ゲージ針を右眼の前房にカニューレ挿入した。これにより、眼内圧が６０分かけて１２０ｍｍＨｇまで上昇した。ペプテン－１またはスクランブルペプチド（１μＬのＰＢＳ中０．５μｇ）をＩ／Ｒ傷害の直後と１週間後に再び硝子体内注射した。ＰＢＳ注射眼をビヒクル対照として用いた。対側眼を付加的な対照として用いた。

Ｉ／Ｒ傷害または最初のペプテン－１の硝子体内注射の１４日後に、マウスを屠殺し、眼球摘出した。網膜を光学顕微鏡下での解剖により単離し、エラスターゼ（４０Ｕ／ｍＬ）を用いて３７℃で３５分間、穏やかに撹拌しながら処理した。内境界膜（ＩＬＭ）を慎重に除去した後、網膜をｐＨ７．８のＴｒｉｓ－ＨＣｌバッファーが入った１２ウェルプレートに入れ、続いて一晩振盪して残りのＲＧＣをばらばらにした。次いで、網膜をガラス顕微鏡スライドに移し、Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ中で２０μＬピペットによって穏やかに撹拌することで、残りの神経組織を慎重に取り除いた。過ヨウ素酸シッフ（ＰＡＳ）染色を用いて単離網膜毛細血管層を可視化した。倒立蛍光顕微鏡を使用して、マウントした毛細血管を撮像し、各治療群からの無細胞毛細血管を計数および分析した。

図５Ａに示されるように、Ｉ／Ｒ傷害（「ビヒクル」）は、Ｉ／Ｒ傷害を受けていない網膜（「対照」）に対し、ＰＢＳのみを注射したビヒクル対照眼において、網膜損傷の一般的なマーカーである無細胞変性網膜毛細血管細胞の数を有意に増加させた。スクランブルペプチドの硝子体内注射（「Ｓｃｒｂ」）は、ビヒクル治療と同様のパターンを示した。しかしながら、ペプテン－１の硝子体内注射（「Ｐｅｐｔ－１」）は、網膜細胞をＩ／Ｒ傷害から保護した。これは、図の右下の画像に示され、また図５Ｂのグラフにグラフ表示されるように、非処理細胞と比べてペプテン－１処理細胞に存在する網膜当たりの無細胞毛細血管の数が少ないことから明らかである。ここで、ｎｓ＝有意でない、^＊＊ｐ＜０．０１および^＊＊＊＊ｐ＜０．０００１である。このため、ペプテン－１の硝子体内投与は、そうでなければＩ／Ｒ傷害後に自然に起こるであろう毛細血管変性を低減した。

実施例６
第６の実験を行い、ペプテン－１（配列番号３）が眼傷害後のマウスの網膜において炎症性サイトカインの産生を抑制するかを決定した。マウスをＩ／Ｒ傷害に供し、Ｉ／Ｒ傷害の直後に０．５μｇのペプテン－１またはスクランブルペプチドを硝子体内注射した。炎症誘発性サイトカインレベルを測定するために、Ｉ／Ｒ傷害の２日後にマウスを屠殺し、網膜を解剖した。次いで、網膜から全ＲＮＡを溶解させ、２マイクログラムのＲＮＡを逆転写してｃＤＮＡを合成し、定量的リアルタイムＰＣＲを行った。ＰＣＲプライマーの配列は、以下のとおりであった：ＴＮＦ－αフォワードプライマー－５’－ＧＡＣＡＡＧＧＣＴＧＣＣＣＣＧＡＣＴＡ－３’およびリバースプライマー－５’－ＡＧＧＧＣＴＣＴＴＧＡＴＧＧＣＡＧＡＧＡ－３’；ＩＬ－１βフォワードプライマー－５’－ＧＡＡＡＴＧＣＣＡＣＣＴＴＴＴＧＡＣＡＧＴＧ－３’およびリバースプライマー－５’－ＴＧＧＡＴＧＣＴＣＴＣＡＴＣＡＧＧＡＣＡＧ－３’；ＩＦＮ－γフォワードプライマー－５’－ＣＡＧＧＣＣＡＧＡＣＡＧＣＡＣＴＣＧＡＡＴＧ－３’およびリバースプライマー－５’－ＡＧＧＧＡＡＧＣＡＣＣＡＧＧＴＧＴＣＡＡＧＴ－３’。ｍＲＮＡレベルを、比較Ｃｔ法（２－ΔΔＣＴ）を用いて分析した後、β－アクチン（フォワードプライマー－５’－ＡＧＡＡＡＡＴＣＴＧＧＣＡＣＣＡＣＡＣＣ－３’およびリバースプライマー－５’－ＧＧＧＧＴＧＴＴＧＡＡＧＧＴＣＴＣＡＡＡ－３’）に対して正規化した。

図６のグラフは、Ｉ／Ｒ傷害の２日後に、ＩＬ－１βおよびＴＮＦ－αのｍＲＮＡレベルが、対側網膜（「対照」）と比較してビヒクル対照群（「ビヒクル」）において有意に上昇し（それぞれ１２．６倍および１２．０倍）、スクランブルペプチド治療群がＩ／Ｒ傷害後にビヒクル群と同様のパターンを示した（それぞれ３０．９倍および１０．４倍の上昇）ことを示す（Ｓｃｒｂ＝スクランブルペプチド、ｎｓ＝有意でない、^＊ｐ＜０．０５、^＊＊ｐ＜０．０１および^＊＊＊ｐ＜０．００１、ｎ＝３～４）。ＩＦＮ－γのｍＲＮＡレベルは、いずれの群においても有意に変化しなかった。ペプテン－１治療は、Ｉ／Ｒ傷害後にビヒクル群と比較してＩＬ－１β発現の増加を４．６倍、ＴＮＦ－α発現の増加を６．２倍低減した。したがって、ペプテン－１の硝子体内注射は、そうでなければＩ／Ｒ傷害後に自然に起こるであろう網膜細胞における炎症誘発性サイトカインの上方調節を低減した。したがって、いかなる特定の理論にも束縛されるものではないが、ペプテン－１は、眼傷害後の網膜毛細血管変性に寄与する１つ以上の炎症経路を遮断する可能性がある。

実施例７
第７の実験を行い、ＨＲＥＣにおけるペプテン－１（Ｐ１）レベルが、ＣＰＰにコンジュゲートしたＰ１（Ｐ１－ＣＰＰ）とともに細胞を２０時間インキュベートした後に、Ｐ１のみとの２０時間のインキュベーションと比べて高いかを決定した。

プロテアーゼ阻害剤カクテルを含有する１倍ＲＩＰＡバッファーを用いてＨＲＥＣ溶解物を調製した。ＢＣＡ法を用いて細胞溶解物のタンパク質濃度を測定し、２５μｇのタンパク質を免疫ブロット法に使用した。培養したＨＲＥＣにおけるＰ１レベルを、インキュベーション期間後に抗Ｐ１抗体を用いて測定した。ハウスキーピングタンパク質のレベルを測定し、Ｐ１／β－アクチン密度と比較してタンパク質密度を算出するための対照として、β－アクチン抗体染色を用いた。

図７のウエスタンブロット画像に示されるように、Ｐ１またはＰ１－ＣＰＰで処理していない対照細胞におけるβ－アクチンのレベルは、Ｐ１またはＰ１－ＣＰＰのいずれかとインキュベートした細胞において測定されたレベルと同様であった。β－アクチンに対するＰ１の密度によって測定される、Ｐ１とインキュベートした細胞内で検出されたＰ１のレベルは、対照細胞よりも高かった。対照的に、Ｐ１－ＣＰＰで処理した細胞において検出されたＰ１のレベルは、Ｐ１とβ－アクチンとの密度比が、Ｐ１のみとインキュベートした細胞と比較して有意に高いことから示されるように、Ｐ１のみの細胞において検出されたＰ１のレベルよりも有意に高かった（Ｐ１対Ｐ１－ＣＰＰ、^＊＊＊ｐ＜０．００１）。このように、ＣＰＰは、２０時間にわたってＨＲＥＣにおけるＰ１の透過および保持を効果的に増大させた。

実施例８
第８の実験を行い、Ｐ１－ＣＰＰが、栄養因子除去によって作製される緑内障の齧歯類モデルにおいてＲＧＣ死を阻害し得るかを決定した。

初めに、初代ＲＧＣを４～６日齢の範囲の出生後仔ラットから単離した。次いで、単離ＲＧＣの処理群を培養し、１２．５μｇ／ｍＬのＰ１－ＣＰＰ存在下で４８時間にわたって栄養因子を除去した。対照細胞（ビヒクルで処理した）を別に培養し、４８時間にわたって栄養因子を除去したが、Ｐ１－ＣＰＰは添加しなかった。次いで、両群におけるＲＧＣ生存を、ＣｙｔｏＣａｌｃｅｉｎ（商標）Ｖｉｏｌｅｔ４５０蛍光によって細胞をモニタリングすることで評価した。実験は統計的有意性のために４回行った。

図８Ａの顕微鏡画像に示され、図８Ｂの定量的棒グラフで確認されるように、同様の数の対照ＲＧＣおよびＰ１－ＣＰＰで処理したＲＧＣが、標準栄養因子レベル（脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ、５０ｎｇ／ｍＬ；Peprotech，Rocky Hill，NJ，USA）、毛様体神経栄養因子（ＣＮＴＦ、１０ｎｇ／ｍＬ；Peprotech）およびホルスコリン（５ｎｇ／ｍＬ；Sigma-Aldrich Corp.，St. Louis，MO，USA））を有する完全培地中で生存した。Ｐ１－ＣＰＰ処理は、神経栄養因子媒介ＲＧＣ喪失を６４％有意に低下させた（^＊＊＊＊ｐ＜０．０００１；ｎｓ＝有意でない）。したがって、Ｐ１－ＣＰＰは、栄養因子除去によって通常誘導される死からラットＲＧＣを保護した。

実施例９
第９の実験を行い、Ｐ１－ＣＰＰが、エンドセリン－３媒介死によって作製される緑内障の齧歯類モデルにおいてＲＧＣ喪失を阻害し得るかを決定した。

初代ＲＧＣを４～６日齢の範囲の出生後仔ラットから単離した。初代ＲＧＣを、Ｐ１－ＣＰＰ（１２．５μｇ／ｍＬ）またはビヒクルのいずれかの存在下にてエンドセリン－３（ＥＴ－３；１００ｎＭ）で処理した後、膜透過性生細胞標識色素であるＣｙｔｏＣａｌｃｅｉｎ（商標）Ｖｉｏｌｅｔ４５０（Invitrogen）をモニタリングすることによってＲＧＣ生存を評価した。実験は統計的有意性のために２回行った。

図９Ａの蛍光画像および対応する図９Ｂの棒グラフに示されるように、エンドセリン－３の適用は、Ｐ１－ＣＰＰで処理していない細胞におけるＲＧＣ生存を有意に減少させた（６４％の生存）（ｐ^＊＊＊＜０．００１）。さらに示されるように、より大きな割合のエンドセリン－３処理ＲＧＣが、ビヒクル対照の存在下（^＊＊ｐ＜０．０１）よりもＰ１－ＣＰＰの存在下で生存した（７９．５％の生存）。エンドセリン－３に供したＰ１－ＣＰＰ処理細胞における生存ＲＧＣの割合は、エンドセリン－３またはＰ１－ＣＰＰに供していない対照細胞と比べて、実際には同様であった。

したがって、Ｐ１－ＣＰＰは、エンドセリン－３誘導死からラットＲＧＣを効果的に保護した。

実施例１０
第１０の実験を行い、眼内圧上昇によって作製した緑内障の齧歯類モデル（Morrisonの緑内障モデル）においてＰ１－ＣＰＰの硝子体内投与がＲＧＣ喪失を阻害し得るかを決定した。

眼内圧（ＩＯＰ）を上昇させるために、およそ５０～１００μＬの１．８ＭＮａＣｌをラットの眼の強膜上静脈に、房水叢（aqueous plexus）を白くするのに十分な力で注射した。この手順により小柱網の瘢痕が生じ、結果としてＩＯＰが上昇し、視神経が損傷する。次いで、ＩＯＰ上昇眼に、２μｇ（片眼当たり）のＰ１－ＣＰＰまたはビヒクル対照のいずれかを合計６週間にわたって毎週硝子体内注射した。非治療ナイーブラットを陰性対照として用いた。６週間後に眼を解剖し、４％ＰＦＡを用いて４℃で一晩固定した。次いで、網膜を一次抗体であるヤギ抗Ｂｒｎ３ａ（１：２００、ＳＣ－３１９８４、Santa Cruz Biotechnology, Inc.）と４℃で３日間インキュベートした。ＰＢＳで３回洗浄した後、網膜を対応する二次抗体：Ａｌｅｘａ４８８コンジュゲートロバ抗ヤギ抗体（１：１０００希釈、Ａ１１０５５、Invitrogen）中にて４℃で一晩インキュベートした。洗浄後に４つの象限（上方、下方、鼻側および耳側）に切れ目を入れ、網膜フラットマウントを作製し、ＰｒｏｌｏｎｇＧｏｌｄａｎｔｉ－ｆａｄｅ（Life Technologies）を用いてマウントした。実験は統計的有意性のために３回行った。フラットマウントの画像は、Ｃｙｔａｔｉｏｎ５顕微鏡にて２０倍の倍率を用いて取得した。画像は、視神経頭から網膜周辺部までの距離の３分の１（中間周辺）および３分の２（周辺）に位置する２つの異なる偏心で撮影した。上方、下方、鼻側および耳側の象限を含む４つの象限のそれぞれにおいて各偏心で２枚の画像を取得し、網膜当たり合計１６枚の画像とした。ＲＧＣ数を手動計数によって決定した。計数は、動物の治療群を知らない盲検観察者によって行われた。

図１０Ａの蛍光画像および対応する図１０Ｂの棒グラフに示されるように、Ｐ１－ＣＰＰ適用後に、圧力上昇ビヒクル注射対照細胞よりも多くの圧力上昇（「ＩＯＰ」）周辺網膜神経節細胞が生存した（^＊ｐ＜０．０３；ｎｓ＝有意でない）。結果は、図１０Ｃに示されるように中間周辺網膜細胞でも同様であり（^＊＊＊ｐ＜０．００１）、Ｐ１－ＣＰＰ治療が、眼内圧上昇を受けた齧歯類眼においてＲＧＣ生存を高めたことが示される。図１０Ｄから、ｍｍＨｇで測定される眼内圧が、対側対照と比べ、試験の６週間にわたって各ラットの標的眼において実際に有意に上昇したことが確認される。

実施例１１
第１１の実験を行い、眼内圧上昇によって生じる緑内障の齧歯類モデル（Morrisonの緑内障モデル）においてＰ１－ＣＰＰの硝子体内投与が視神経軸索保護を促進し得るかを決定した。

実施例１０と同様に、ブラウンノルウェーラットの眼において眼内圧を上昇させた後、２μｇ（片眼当たり）のＰ１－ＣＰＰまたはビヒクル対照のいずれかを合計６週間にわたって毎週硝子体内注射した。非治療ナイーブラットを陰性対照として用いた。視神経を０．１Ｍカコジル酸ナトリウムバッファー中の２％パラホルムアルデヒド、２．５％グルタルアルデヒドで固定した。脱水前に視神経をＰＢＳ中の２％四酸化オスミウムに１時間移し、エポンに包埋した。ウルトラミクロトームを用いて視神経横断切片を得て、１％ＰＰＤで染色し、染色切片の画像を、ＺｅｉｓｓＬＳＭ５１０ＭＥＴＡ共焦点顕微鏡にて１００倍の油浸倍率を用いて撮影した。画像は、全ての視神経切片の各象限の中心および周辺部をカバーする５点で撮影した。

図１１の顕微鏡画像は、眼内圧上昇を受けた網膜神経節細胞のうち、Ｐ１－ＣＰＰによる治療と比べ、ビヒクル対照による治療後により多くの崩壊した軸索（矢印によって示す）が観察されたことを示している。したがって、Ｐ１－ＣＰＰは、眼内圧の上昇によって作製したラット緑内障モデルにおいて視神経軸索保護を促進した。

実施例１２
第１２の実験を行い、眼内圧上昇によって作製した緑内障の齧歯類モデル（ラットにおけるMorrisonの緑内障モデル）においてＰ１－ＣＰＰの硝子体内投与がＲＧＣ機能低下を緩和し得るかを決定した。

実施例１０および１１と同様に、ブラウンノルウェーラットの眼において眼内圧を上昇させた後、２μｇ（片眼当たり）のＰ１－ＣＰＰまたはビヒクル対照のいずれかを合計６週間にわたって毎週硝子体内注射した。非治療ナイーブラットを陰性対照として用い、ＲＧＣ機能を、ＩＯＰ上昇手術後６週間の時点で測定されるパターン網膜電図（ＰＥＲＧ）振幅によって評価した。簡潔に述べると、ラットを最終濃度がそれぞれ５５．６ｍｇ／ｍＬ／５．６ｍｇ／ｍＬのケタミン（VEDCO，Saint Joseph，MO）／キシラジン（VEDCO，Saint Joseph，MO）のカクテルの腹腔内注射（１００μＬ／１００ｇ体重）によって麻酔した。ＰＥＲＧ測定は、Ｊｏｒｖｅｃ機器（Intelligent Hearing Systems，Miami，FL）のＭｉａｍｉＰＥＲＧシステム（Jorvec，Miami，FL）を用い、製造業者の指示に従って行った。基準電極および接地電極は、それぞれ頭皮および尾部の皮下に配置し、角膜電極は眼球と接触する下円蓋部に配置した。角膜乾燥を防ぐために、少量のＧｅｌＴｅａｒ点眼液を両眼に適用した。システムに取り付けた２つの異なるＬＥＤモニターを用い、空間周波数０．０９５サイクル／度および輝度５００ｃｄ／ｍ^２でコントラスト反転水平バーを表示させた。表示モニターと眼との距離は１０ｃｍに保った。光信号のより良好な投影のために、ＬＥＤモニターをおよそ６０度の角度で設置した。次いで、両眼からの３７２回の掃引（オン－オフ）からなる各ランについて生成されたＰＥＲＧ波形をＰＥＲＧソフトウェアによって各眼別々に処理し、平均した。ＰＥＲＧソフトウェアを用いて総平均ＰＥＲＧ波形を分析して、主要な陽性波（Ｐ１）および陰性波（Ｎ２）を特定し、振幅および潜時を算出した。ＰＥＲＧ振幅読取り値（μＶで測定）を図１２Ａに示す。ＰＥＲＧ振幅は、ＩＯＰ上昇によりナイーブラット（７．６５μＶ）と比較して６３％低下し（４．５５μＶ）、Ｐ１－ＣＰＰ治療によって維持された（７．５５μＶ）。（^＊＊ｐ＜０．００１；^＊ｐ＜０．０３；ｎｓ＝有意でない）。対応するＰＥＲＧトレースを図１２Ｂに示す。したがって、Ｐ１－ＣＰＰ治療は、眼内圧の上昇によって作製したラット緑内障モデルにおいてＲＧＣの視覚機能を改善した。

実施例７～１２から、Ｐ１－ＣＰＰが、Ｐ１単独と比較してＰ１の網膜細胞透過を改善し得るだけでなく、初代ラットＲＧＣを神経栄養因子欠乏およびエンドセリン－３誘導細胞死から保護し得ることが示される。また、Ｐ１－ＣＰＰの硝子体内投与は、６週間の眼内圧上昇期間にわたってＲＧＣ軸索を崩壊から保護することができ、同じ条件に供したＲＧＣに機能保護をもたらすことができる。総合すると、これらの結果から、Ｐ１－ＣＰＰをヒトにおける緑内障の治療のための神経保護剤として開発し得ることが示唆される。

実施例１３
第１３の実験を行い、神経栄養因子欠乏によって作製したＲＧＣ死のヒト網膜外植片モデルにおいてＰ１－ＣＰＰがＲＧＣ喪失を阻害し得るかを決定した。

ｅｘｖｉｖｏヒト網膜外植片（ｎ＝３ドナー）を死後１２時間以内に得て、神経栄養因子欠乏に供し、１２．５μｇ／ｍＬのＰ１－ＣＰＰまたはビヒクル対照のいずれかと７日間インキュベートした（７ｄｅｖ）。神経栄養因子欠乏に供していない網膜外植片を対照として用いた（０ｄｅｖ）。次いで、外植片をＲＧＣマーカーであるＲＢＰＭＳで染色し、ＩｍａｇｅＪを用いて生存ＲＧＣを計数した。図１３Ａの棒グラフに表され、図１３Ｂの共焦点顕微鏡画像に見られる、より多くのＲＢＰＭＳ^＋細胞によって示されるように、神経栄養因子欠乏に供したＲＧＣに７日間のＰ１－ＣＰＰ処理を適用すると、外植片におけるＲＧＣ喪失がビヒクル対照細胞と比べて有意に（ｐ＜０．００５）低減した。これらの結果から、Ｐ１－ＣＰＰ処理がヒト網膜外植片において神経栄養因子欠乏媒介ＲＧＣ喪失を減少させることが示される。

実施例１４
第１４の実験を行い、眼内圧上昇によって作製した緑内障の齧歯類モデル（ラットにおけるMorrisonの緑内障モデル）において、Ｐ１－ＣＰＰ治療によって影響を受ける分子経路を特定した。

ブラウンノルウェーラットの眼において眼内圧を上昇させた後、２μｇ（片眼当たり）のＰ１－ＣＰＰまたはビヒクル対照のいずれかを２週間にわたって週１回硝子体内注射した。非治療ナイーブラットを陰性対照として用いた。ラットを安楽死させ、初代成体ＲＧＣを修正イムノパニング法によって単離した。Ｔｒｉｚｏｌ／カラム法を用いて全ＲＮＡを単離し、Ｉｌｌｕｍｉｎａプラットフォームを用いてＲＮＡシークエンシングを行った。得られたＦＡＳＴＱファイルをＧａｌａｘｙにアップロードし、ＦＡＳＴＱＣ、ＲＮＡＳＴＡＲ、ｆｅａｔｕｒｅｃｏｕｎｔｓおよびＤＥＳｅｑ２で分析した。次いで、ＤＥＳｅｑ２からの結果を、QiagenのＩｎｇｅｎｕｉｔｙＰａｔｈｗａｙＡｎａｌｙｓｉｓ（ＩＰＡ）を用いて評価し、有意に上方調節および下方調節された経路を特定した。

２週間のＩＯＰ上昇後に単離されたラットＲＧＣのＲＮＡシークエンシング分析により、Ｐ１－ＣＰＰで処理したＲＧＣが、ビヒクル処理群と比較して、６３４３個の有意に上方調節された遺伝子および５９６０個の有意に下方調節された遺伝子を含む、幾つかの差次的に発現される経路を有することが明らかになった。Ｐ１－ＣＰＰ処理後に有意に上方調節された経路および分子過程には、ファゴソーム形成、神経細胞におけるＣＲＥＢシグナル伝達、オキシトシンシグナル伝達、シナプス長期抑圧、運動性、ホスホリパーゼ、ＴＲＥＭ１シグナル伝達、ｐ３８ＭＡＰＫシグナル伝達、ＧＰＣＲセンシングおよびエイコサノイドシグナル伝達が含まれていた（図１４Ａ）。注目すべきことに、ＩＯＰ処理ＲＧＣおよびビヒクル処理ＲＧＣは、ナイーブ群と比較した場合に、Ｃｒｅｂ－１、ｃ－ＲＡＦ、ＭＥＫ１／２、ＥＲＫ１／２およびｐ９０ＲＳＫを含む、ＣＲＥＢシグナル伝達経路の複数の構成要素の発現の減少を示した。この減少は、図１４Ｂに示すＣＲＥＢ経路における上位１２個の差次的に発現された遺伝子のヒートマップで説明されるようにＰ１－ＣＰＰ処理によって阻止された。定量的ＰＣＲにより、ＲＮＡシークエンシングによって得られた結果がさらに確認され、ビヒクル治療群におけるＣｒｅｂ－１発現と比較して、Ｐ１－ＣＰＰ治療ラットにおけるＣｒｅｂ－１の発現の増加が示された（図１４Ｃ）。

これらのデータを考慮すると、齧歯類でモデル化した緑内障の治療におけるＰ１－ＣＰＰの潜在的な作用機序には、細胞死および視力喪失を予防するための生存促進ＣＲＥＢシグナル伝達経路の活性化、ファゴソーム形成およびシナプス長期抑圧が含まれる。

以上、様々な代表的な実施形態および実施態様を或る程度まで詳細に説明したが、当業者であれば、明細書および特許請求の範囲に記載される本発明の主題の趣旨または範囲から逸脱することなく、開示の実施形態に多数の変更を加えることができる。場合によっては、本明細書に直接または間接的に記載される方法論において、様々な工程および操作が或る可能な操作順序で記載されるが、当業者であれば、本開示の趣旨および範囲から必ずしも逸脱することなく、工程および操作を再編成、置換えまたは除外し得ることを認識するであろう。上記の説明に含まれるか、または添付の図面に示されるあらゆる事項が例示にすぎず、限定的なものではないと解釈されることが意図される。詳細または構造の変更は、添付の特許請求の範囲に定義される本開示の趣旨から逸脱することなく行うことができる。

Claims

被験体における網膜疾患、傷害または病態の少なくとも１つの症状を治療、リスク低減、予防または緩和する方法であって、
前記被験体の眼に、生物学的に活性な熱ショックタンパク質に由来する少なくとも１つのポリペプチドを含む治療有効量の組成物を硝子体内投与することを含み、
前記熱ショックタンパク質がＨｓｐ２０を含み、
前記少なくとも１つのポリペプチドが細胞透過性ペプチドとコンジュゲートしている、
方法。
前記細胞透過性ペプチドが、ＶＰＴＬＫと少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を有する、請求項１記載の方法。
前記少なくとも１つのポリペプチドが、Ｇ^７３ＨＦＳＶＬＬＤＶＫ（アセチル）ＨＦＳＰＥＥＩＡＶＫ^９１と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を有する、請求項１または２記載の方法。
前記少なくとも１つのポリペプチドが、^７３ＤＲＦＳＶＮＬＤＶＫＨＦＳＰＥＥＬＫＶＫＶ^９３と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を有する、請求項１または２記載の方法。
前記組成物を眼科外科手術中または眼科外科手術後に投与する、請求項１から４までのいずれか１項記載の方法。
前記網膜疾患、傷害または病態が緑内障である、請求項１から５までのいずれか１項記載の方法。
前記網膜疾患、傷害または病態が黄斑変性、糖尿病性網膜症、網膜剥離または網膜色素変性症を含む、請求項１から５までのいずれか１項記載の方法。
前記網膜疾患、傷害または病態が興奮毒性損傷、物理的損傷、化学的損傷、神経栄養因子欠乏、酸化ストレス、炎症、ミトコンドリア機能不全、軸索輸送不全またはそれらの組合せによって引き起こされる、請求項１から７までのいずれか１項記載の方法。
前記網膜疾患、傷害または病態がヒト網膜神経節細胞の喪失、高眼圧症、視神経変性、病的アポトーシスまたはタンパク質凝集を含む、請求項１から８までのいずれか１項記載の方法。
被験体における網膜疾患、傷害または病態の少なくとも１つの症状を治療、リスク低減、予防または緩和するためのシステムであって、
生物学的に活性な熱ショックタンパク質に由来する少なくとも１つのポリペプチドを含む治療有効量の組成物であって、
前記熱ショックタンパク質がＨｓｐ２０を含み、
前記少なくとも１つのポリペプチドが細胞透過性ペプチドとコンジュゲートしている、
組成物と、
前記組成物を前記被験体に投与するように構成された硝子体内注射デバイスと
を含む、システム。
前記細胞透過性ペプチドが、ＶＰＴＬＫと少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を有する、請求項１０記載のシステム。
前記少なくとも１つのポリペプチドが、Ｇ^７３ＨＦＳＶＬＬＤＶＫ（アセチル）ＨＦＳＰＥＥＩＡＶＫ^９１と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を有する、請求項１０または１１記載のシステム。
前記少なくとも１つのポリペプチドが、^７３ＤＲＦＳＶＮＬＤＶＫＨＦＳＰＥＥＬＫＶＫＶ^９３と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を有する、請求項１０または１１記載のシステム。
前記網膜疾患、傷害または病態が緑内障である、請求項１０から１３までのいずれか１項記載のシステム。
前記網膜疾患、傷害または病態が黄斑変性、糖尿病性網膜症、網膜剥離または網膜色素変性症を含む、請求項１０から１３までのいずれか１項記載のシステム。
前記網膜疾患、傷害または病態が網膜神経節細胞喪失、網膜内皮細胞喪失、網膜毛細血管細胞喪失、高眼圧症、視神経変性、病的アポトーシスおよびタンパク質凝集を含む、請求項１０から１５までのいずれか１項記載のシステム。
医薬組成物であって、
Ｈｓｐ２０に由来する少なくとも１つのポリペプチドであって、細胞透過性ペプチドとコンジュゲートしている少なくとも１つのポリペプチドと、
薬学的に許容可能な担体と
を含み、
前記医薬組成物が被験体における網膜疾患、傷害または病態の少なくとも１つの症状を治療、リスク低減、予防または緩和するように配合され、
前記医薬組成物が硝子体内投与用に配合される、
医薬組成物。
前記細胞透過性ペプチドが、ＶＰＴＬＫと少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を有する、請求項１７記載の医薬組成物。
前記少なくとも１つのポリペプチドが、Ｇ^７３ＨＦＳＶＬＬＤＶＫ（アセチル）ＨＦＳＰＥＥＩＡＶＫ^９１または^７３ＤＲＦＳＶＮＬＤＶＫＨＦＳＰＥＥＬＫＶＫＶ^９３と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を有する、請求項１７または１８記載の医薬組成物。
前記網膜疾患、傷害または病態が緑内障である、請求項１７から１９までのいずれか１項記載の医薬組成物。