JP2024506817A - 空間的に分離されたレーザにわたる散乱信号を使用して液滴遅延を判定するための方法及びシステム - Google Patents
空間的に分離されたレーザにわたる散乱信号を使用して液滴遅延を判定するための方法及びシステム Download PDFInfo
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Abstract
本開示の態様は、（例えば、粒子分析器内の）フローストリーム内の粒子の液滴遅延を判定するための方法を含む。ある特定の実施形態による方法は、フローストリーム内の粒子に、２つ以上の空間的に分離されたレーザで照射を行うことと、第１の光検出器チャネル及び第２の光検出器チャネル内の粒子からの光を検出して、第１の光検出器チャネル及び第２の光検出器チャネル内の検出された光に基づいて、フローストリーム内の粒子の速度を計算することと、計算された速度に基づいて、粒子の液滴遅延を判定することとを含む。２つ以上の空間的に分離されたレーザを有する光源と、主題の方法を実施するための光検出システムとを有するシステム（例えば、粒子分析器）もまた記載される。集積回路と、主題の方法に従って液滴遅延を判定するためのその上に記憶された命令を有する非一時的コンピュータ可読記憶媒体ともまた提供される。
Description
フローサイトメータは、血液試料の細胞、又は任意の他のタイプの生体試料若しくは化学試料内の関心対象の粒子などの、流体試料内の粒子を分析及びソートするために使用される。フローセル内では、粒子を含有するストリームの周りに液体シースが形成されて、フローストリームに実質的に均一な速度を付与する。フローストリームは、流体工学システム及び所望のソートレートに適切であるノズル直径を有するノズルを介してフローセルを出る。フローセルは、ストリーム内の粒子（例えば、細胞）を、照射源（例えば、レーザビーム）の中心を通過するように流体力学的に集束させる。
フローストリーム内の関心対象の粒子が照射源を通過する交差点は、しばしば検査ポイントと称される。関心対象の粒子（例えば、細胞）が検査ポイントを通って移動すると、照射源（例えば、レーザ）からの光が散乱される。この光は、また、流体試料に添加され、かつある特定の関心対象の細胞に付着した蛍光マーカーなどの、蛍光特性を有する細胞ストリーム内の成分を励起することができる。
静電法によって細胞をソートするフローサイトメータでは、所望の細胞は、電気的に帯電された小滴内に含有される。小滴を帯電するために、フローセルは、帯電素子を含む。セルストリームは、実質的に下向きの垂直方向にフローセルを出ることから、小滴も、また、小滴が形成された後に、その方向に伝播する。標的粒子が検査レーザによって検出されるとき、標的粒子を含有する小滴に電荷が与えられる。液滴遅延値は、ターゲット粒子が検出されるレーザ検査ポイントと、小滴が連続フローストリームから分裂するポイントとの間の時間距離である。分裂ポイントの上流では、フローストリームは、連続的で、かつ接続されており、分裂ポイントの下流では、フローストリームは、離散的な小滴として分離されている。一般に、液滴遅延は、検査レーザで標的粒子を検出した後、小滴に電荷を与える前にセルソータが待つこととなる時間の量（液滴当量での）である。フローストリーム内に存在する粒子のサイズの変動、又はフローサイトメータ構成要素のドリフトは、フローストリーム内の液滴が関心対象の粒子を含有するか否かの予測可能性に影響を与える可能性がある。粒子を含有する小滴の不正確な予測（例えば、間違った小滴に電荷を与えること）は、定性分析に有害であり、不正確なセルソーティング、ソートされた試料の汚染、及び生体試料の定量的損失をもたらす可能性がある。
本開示の態様は、フローストリーム内の（例えば、粒子分析器内の）複数の粒子についての液滴遅延を判定する方法を含む。ある特定の実施形態による方法は、フローストリーム内の複数の粒子を有する試料に、２つ以上の空間的に分離されたレーザで照射を行うことと、第１の光検出器チャネル及び第２の光検出器チャネル内の各粒子からの光を検出して、第１の光検出器チャネル及び第２の光検出器チャネル内の検出された光に基づいて、フローストリーム内の各粒子の速度を計算することと、計算された速度に基づいて、各粒子の液滴遅延を判定することとを含む。実施形態では、方法は、フローストリーム内の粒子に、第１の検査領域内の第１のレーザ及び第２の検査領域内の第２のレーザで照射を行うことを含む。いくつかの実施形態では、第２の検査領域は、第１のレーザの下流の位置にある。
いくつかの実施形態では、方法は、第１の光検出器チャネル内で検出された光に応答して、第１の光検出器信号パルスを生成することと、第２の光検出器チャネル内で検出された光に応答して、第２の光検出器信号パルスを生成することとを含む。いくつかの実施形態では、信号パルスの各々は、各光検出器チャネル内で出力された電圧パルスである。いくつかの実施形態では、各光検出器チャネル内の信号パルスは、照射が行われた粒子からの散乱光から生成される。ある特定の実施形態では、第１の光検出器チャネル内の信号パルスは、第１のレーザによって照射が行われた各粒子からの散乱光に応答して生成され、第２の光検出器チャネル内の信号パルスは、第２のレーザによって照射が行われた各粒子からの散乱光に応答して生成される。
フローストリーム内の粒子の速度を計算するために、いくつかの事例では、光検出器信号パルス間の時間の量が判定される。他の事例では、光検出器信号パルス間のピーク時間が判定される。他の事例では、光検出器信号パルスの一次モーメントが判定される。いくつかの事例では、フローストリーム内の各粒子の速度は、第１の光検出器信号パルスと第２の光検出器信号パルスとの間の時間の量と、第１のレーザの検査領域と第２のレーザの検査領域との間の距離とに基づいて計算される。他の事例では、フローストリーム内の各粒子の速度は、第１の光検出器信号パルスと第２の光検出器信号パルスとの間のピーク時間と、第１のレーザの検査領域と第２のレーザの検査領域との間の距離とに基づいて計算される。他の場合、フローストリーム内の各粒子の速度は、光検出器信号パルスの一次モーメントと、第１のレーザの検査領域と第２のレーザの検査領域との間の距離とに基づいて計算される。
いくつかの実施形態では、粒子分析器は、試料の粒子をソートするためなど、試料内の各粒子を含有する小滴を生成するためのフローセルノズルを有するフローセルを含む。ある特定の事例では、各粒子の液滴遅延は、フローストリーム内の粒子の計算された速度に、第１の検査領域又は第２の検査領域とフローセルノズルのオリフィスとの間の距離を乗算することによって判定される。いくつかの実施形態では、方法は、フローストリーム内の各粒子の計算された速度と、計算された液滴遅延とのうちの１つ以上に基づいて、試料内の粒子についての液滴遅延を調整することを更に含む。他の実施形態では、方法は、フローストリーム内の各粒子の計算された速度と、計算された液滴遅延とのうちの１つ以上に基づいて、粒子分析器の１つ以上のパラメータを調整することを更に含む。例えば、方法は、フローストリーム内の粒子の計算された速度と、計算された液滴遅延とのうちの１つ以上に基づいて、フローストリームを増加又は減少させることを含み得る。ある特定の事例では、小滴帯電（例えば、粒子ソータでの）のタイミングが調整され得る。
ある特定の実施形態では、フローストリーム内の試料に、複数のレーザで照射が行われ、各粒子からの光は、複数の光検出器チャネル内で検出される。光検出器チャネルの各々内で検出された光に応答して、光検出器信号パルスが生成され、光検出器チャネルのうちの２つ以上内で生成された光検出器信号パルスに基づいて、各粒子についての速度が計算される。いくつかの事例では、複数のレーザの各々からの光が、別個の検出器チャネル内で検出される。いくつかの事例では、複数のレーザは、１５０μｍ以下など、１２０μｍ以下など、１００μｍ以下など、５０μｍ以下など、１０μｍ以下などの、２００μｍ以下だけ、いくつかの事例では１０～１５０μｍなどの１～２００μｍの範囲で、互いに離間した位置で、フローストリームに照射を行うように位置付けられている。ある特定の事例では、複数のレーザは、第１の検査領域内のフローストリームに照射を行うように構成された第１のレーザと、第１の検査領域から下流にある第２の検査領域内のフローストリームに照射を行うように構成された第２のレーザと、第２の検査領域から下流にある第３の検査領域内のフローストリームに照射を行うように構成された第３のレーザと、第３の検査領域から下流にある第４の検査領域内のフローストリームに照射を行うように構成された第４のレーザとを含む。ある特定の実施形態では、フローストリーム内の照射が行われた各粒子の速度は、３つ以上の光検出器チャネル内で生成された光検出器信号パルスに基づいて計算される。ある特定の事例では、フローストリーム内の照射が行われた各粒子の速度は、全ての光検出器チャネル内で生成された光検出器信号パルスに基づいて計算される。
ある特定の事例では、各粒子についての速度及び液滴遅延のうちの１つ以上は、集積回路上で計算される。いくつかの実施形態では、集積回路は、フィールドプログラマブルゲートアレイ（ＦＰＧＡ）である。いくつかの実施形態では、集積回路は、特定用途向け集積回路（ＡＳＩＣ）である。いくつかの実施形態では、集積回路は、複合プログラマブルロジックデバイス（ＣＰＬＤ）である。
本開示の態様は、また、主題の方法を実施するためのシステムを含む。いくつかの実施形態では、システムは、第１のレーザ及び第２のレーザを有する光源であって、第１の検査領域内の第１のレーザで、及び第２の検査領域内の第２のレーザで、フローストリーム内の試料の複数の粒子に照射を行うように構成されている、光源と、第１の光検出器チャネル及び第２の光検出器チャネル内の各粒子からの光を検出するように構成された光検出器を有する光検出システムと、プロセッサであって、プロセッサに動作可能に結合されたメモリを有するプロセッサとを含み、メモリは、メモリ上に記憶された命令を有し、命令は、プロセッサによって実行されるときに、プロセッサに、第１の光検出器チャネル及び第２の光検出器チャネル内の検出された光に基づいて、フローストリーム内の各粒子についての速度を計算させ、かつ粒子についての計算された速度に基づいて、各粒子の液滴遅延を判定させる。いくつかの事例では、第２のレーザは、第１のレーザから、１５０μｍ以下など、１２０μｍ以下など、１００μｍ以下など、５０μｍ以下など、１０μｍ以下などの、２００μｍ以下である位置でなど、下流の位置で、いくつかの事例では、第１のレーザから１０～１５０μｍなどの、１～２００μｍの範囲の下流で、フローストリームに照射を行うように構成されている。
いくつかの実施形態では、メモリは、プロセッサに、第１の光検出器チャネル内で検出された光に応答して、第１の光検出器信号パルスを生成させ、かつ第２の光検出器チャネル内で検出された光に応答して、第２の光検出器信号パルスを生成させる命令を含む。いくつかの事例では、メモリは、プロセッサに、第１の光検出器信号パルスと第２の光検出器信号パルスとの間の時間の量をさせる命令を含む。いくつかの事例では、メモリは、プロセッサに、第１の光検出器信号パルスと第２の光検出器信号パルスとの間のピーク時間を判定させる命令を含む。いくつかの事例では、メモリは、プロセッサに、第１の光検出器信号パルス及び第２の光検出器信号パルスの一次モーメントを判定させる命令を含む。いくつかの実施形態では、光検出器信号パルスのうちの１つ以上は、電圧パルスである。ある特定の実施形態では、光検出器信号パルスの各々は、電圧パルスである。いくつかの事例では、光検出器は、粒子からの散乱光を検出するように構成されている。ある特定の事例では、第１の検出器チャネル内で検出された光は、第１のレーザによって照射が行われた粒子からの散乱光である。ある特定の事例では、第２の検出器チャネル内で検出された光は、第２のレーザによって照射が行われた粒子からの散乱光である。
いくつかの実施形態では、メモリは、第１の光検出器信号パルスと第２の光検出器信号パルスとの間の時間の量と、第１のレーザの中断領域と第２のレーザの検査領域との間の距離とに基づいて、フローストリーム内の各粒子の速度を計算するための命令を含む。いくつかの事例では、粒子分析器は、各粒子を含有する小滴を生成するためのフローセルノズルを有するフローセルを含む。いくつかの事例では、メモリは、フローストリーム内の各粒子についての計算された速度に、第１の検査領域又は第２の検査領域とフローセルノズルのオリフィスとの間の距離を乗算することによって、フローストリーム内の各粒子についての液滴遅延を計算するための命令を含む。いくつかの事例では、メモリは、フローストリーム内の各粒子についての計算された速度と、計算された液滴遅延とのうちの１つ以上に基づいて、液滴遅延を調整するための命令を含む。いくつかの事例では、メモリは、フローストリーム内の各粒子についての計算された速度と、計算された液滴遅延とのうちの１つ以上に基づいて、粒子分析器の１つ以上のパラメータを調整するための命令を含む。ある特定の事例では、メモリは、フローストリーム内の各粒子についての計算された速度と、計算された液滴遅延とのうちの１つ以上に基づいて、フローストリームの流量を増加させるための命令を含む。他の事例では、メモリは、フローストリーム内の各粒子についての計算された速度と、計算された液滴遅延とのうちの１つ以上に基づいて、フローストリームの流量を減少させるための命令を含む。ある特定の事例では、メモリは、フローストリーム内の各粒子についての計算された速度と、計算された液滴遅延とのうちの１つ以上に基づいて、小滴帯電のタイミングを調整するための命令を含む。
いくつかの実施形態では、システムは、複数のレーザを有する光源と、複数の光検出器チャネル内のフローストリーム内の粒子からの光を検出するように構成された光検出システムとを含む。いくつかの事例では、システムは、複数の光検出器の各々内の検出された光に応答して、光検出器信号パルスを生成するための命令と、複数の光検出器チャネルのうちの２つ以上内の光検出器信号パルスに基づいて、試料内の各粒子についての速度を計算するための命令とを有するメモリを含む。いくつかの事例では、複数のレーザは、１５０μｍ以下など、１２０μｍ以下など、１００μｍ以下など、５０μｍ以下など、１０μｍ以下などの、２００μｍ以下だけ、いくつかの事例では１０～１５０μｍなどの１～２００μｍの範囲で、互いに離間した位置で、フローストリームに照射を行うように構成されている。ある特定の事例では、複数のレーザは、第１の検査領域内のフローストリームに照射を行うように構成された第１のレーザと、第１のレーザから下流の位置で、フローストリームに照射を行うように構成された第２のレーザと、第２のレーザから下流の位置で、フローストリームに照射を行うように構成された第３のレーザと、第３のレーザから下流の位置で、フローストリームに照射を行うように構成された第４のレーザとを含む。いくつかの実施形態では、メモリは、プロセッサによって実行されるときに、複数のレーザの各々によるフローストリームの照射のタイミングを計算するための命令を含む。いくつかの事例では、メモリは、３つ以上の光検出器チャネル内の光検出器信号パルスに基づいて、フローストリーム内の各粒子についての速度を計算するための命令を含む。
本開示の態様は、また、フローストリーム内の試料内の複数の照射が行われた粒子の液滴遅延を判定するための集積回路を含む。ある特定の実施形態による集積回路は、第１の光検出器チャネル内の照射が行われた粒子から検出された光と、第２の光検出器チャネル内で検出された光とに基づいて、フローストリーム内の試料内の各粒子についての速度を計算するためのプログラミングと、計算された速度に基づいて、各粒子の液滴遅延を判定するためのプログラミングとを含む。いくつかの実施形態では、集積回路は、フィールドプログラマブルゲートアレイ（ＦＰＧＡ）である。いくつかの実施形態では、集積回路は、特定用途向け集積回路（ＡＳＩＣ）である。いくつかの実施形態では、集積回路は、複合プログラマブルロジックデバイス（ＣＰＬＤ）である。
いくつかの実施形態では、集積回路は、第１の光検出器からの信号パルスと第２の光検出器からの信号パルスとの間の時間の量を判定するためのプログラミングを含む。いくつかの事例では、集積回路は、第１の光検出器信号パルスと第２の光検出器信号パルスとの間のピーク時間を判定するためのプログラミングを含む。いくつかの事例では、集積回路は、第１の光検出器信号パルス及び第２の光検出器信号パルスの一次モーメントを判定するためのプログラミングを含む。いくつかの実施形態では、集積回路は、第１の光検出器信号パルスと第２の光検出器信号パルスとの間の時間の量に基づいて、フローストリーム内の各粒子についての速度を計算するためのプログラミングを含む。いくつかの実施形態では、集積回路は、フローストリーム内の各粒子についての計算された速度に、フローストリームの検査領域と、粒子を含有する小滴を生成するように構成されたフローセルノズルのオリフィスとの間の距離を乗算することによって、各粒子の液滴遅延を計算するためのプログラミングを含む。
ある特定の実施形態では、集積回路は、フローストリーム内の各粒子についての計算された速度と、計算された液滴遅延とのうちの１つ以上に基づいて、各粒子についての液滴遅延を調整するためのプログラミングを含む。いくつかの事例では、集積回路は、フローストリーム内の各粒子についての計算された速度と、計算された液滴遅延とのうちの１つ以上に基づいて、粒子分析器の１つ以上のパラメータを調整するためのプログラミングを含む。いくつかの事例では、集積回路は、フローストリーム内の各粒子についての計算された速度と、計算された液滴遅延とのうちの１つ以上に基づいて、フローストリームの流量を増加させるためのプログラミングを含む。他の事例では、集積回路は、フローストリーム内の各粒子についての計算された速度と、計算された液滴遅延とのうちの１つ以上に基づいて、フローストリームの流量を減少させるためのプログラミングを含む。他の事例では、集積回路は、フローストリーム内の各粒子についての計算された速度と、計算された液滴遅延とのうちの１つ以上に基づいて、小滴帯電のタイミングを調整するためのプログラミングを含む。
本開示の態様は、また、フローストリーム内の試料内の複数の照射が行われた粒子の液滴遅延を判定するための非一時的コンピュータ可読記憶媒体を含む。ある特定の実施形態による非一時的コンピュータ可読記憶媒体は、フローストリーム内の複数の粒子を含む試料に、第１の検査領域内の第１のレーザ及び第２の検査領域内の第２のレーザで照射を行うためのアルゴリズムと、第１の光検出器チャネル及び第２の光検出器チャネル内の各粒子からの光を検出するためのアルゴリズムと、第１の光検出器チャネル及び第２の光検出器チャネル内の検出された光に基づいて、フローストリーム内の各粒子についての速度を計算するためのアルゴリズムと、計算された速度に基づいて、各粒子の液滴遅延を判定するためのアルゴリズムとを含む。
いくつかの実施形態では、非一時的コンピュータ可読記憶媒体は、第１のレーザから下流の位置で、第２のレーザでフローストリームに照射を行うためのアルゴリズムを有する命令を含む。いくつかの事例では、非一時的コンピュータ可読記憶媒体は、第１の光検出器チャネル内で検出された光に応答して第１の光検出器信号パルスを生成するためのアルゴリズムと、第２の光検出器チャネル内で検出された光に応答して第２の光検出器信号パルスを生成するためのアルゴリズムとを含む。いくつかの事例では、命令は、第１の光検出器信号パルスと第２の光検出器信号パルスとの間の時間の量を判定するためのアルゴリズムを含む。いくつかの事例では、命令は、第１の光検出器信号パルスと第２の光検出器信号パルスとの間のピーク時間を判定するためのアルゴリズムを含む。いくつかの事例では、命令は、第１の光検出器信号パルス及び第２の光検出器信号パルスの一次モーメントを判定するためのアルゴリズムを含む。いくつかの事例では、命令は、第１の光検出器信号パルスと第２の光検出器信号パルスとの間の時間の量と、第１のレーザと第２のレーザとの間の距離とに基づいて、フローストリーム内の各粒子についての速度を計算するためのアルゴリズムを含む。
いくつかの実施形態では、非一時的コンピュータ可読記憶媒体は、粒子を含有する小滴を生成するためのフローセルノズルを有するフローセルを有する粒子分析器の一部であり、命令は、フローストリーム内の各粒子についての計算された速度に、第１の検査領域又は第２の検査領域とフローセルノズルのオリフィスとの間の距離を乗算することによって、フローストリーム内の各粒子についての液滴遅延を計算するためのアルゴリズムを含む。いくつかの事例では、命令は、フローストリーム内の各粒子についての計算された速度と、計算された液滴遅延とのうちの１つ以上に基づいて、各粒子の液滴遅延を調整するためのアルゴリズムを含む。いくつかの事例では、命令は、フローストリーム内の各粒子についての計算された速度と、計算された液滴遅延とのうちの１つ以上に基づいて、粒子分析器の１つ以上のパラメータを調整するためのアルゴリズムを含む。ある特定の事例では、命令は、フローストリーム内の各粒子についての計算された速度と、計算された液滴遅延とのうちの１つ以上に基づいて、フローストリームの流量を増加させるための命令を含む。他の事例では、命令は、フローストリーム内の各粒子についての計算された速度と、計算された液滴遅延とのうちの１つ以上に基づいて、フローストリームの流量を減少させるための命令を含む。他の事例では、命令は、フローストリーム内の各粒子についての計算された速度に基づいて、小滴帯電のタイミングを調整するためのアルゴリズムを含む。他の事例では、命令は、フローストリーム内の試料に複数のレーザで照射を行うためのアルゴリズムと、複数の光検出器チャネル内の各粒子からの光を検出するためのアルゴリズムと、光検出器チャネルの各々内の検出された光に応答して光検出器信号パルスを生成するためのアルゴリズムと、光検出器チャネルのうちの２つ以上内の光検出器信号パルスに基づいて、フローストリーム内の各粒子についての速度を計算するためのアルゴリズムとを含む。ある特定の事例では、非一時的コンピュータ可読記憶媒体は、レーザの各々によるフローストリームの照射のタイミングを計算するためのアルゴリズムを有する命令を含む。他の事例では、非一時的コンピュータ可読記憶媒体は、３つ以上の光検出器チャネル内の光検出器信号パルスに基づいて、フローストリーム内の各粒子についての速度を計算するためのアルゴリズムを有する命令を含む。
本発明は、添付の図面と併せて読む場合、以下の詳細な説明から最もよく理解することができる。図面には、以下の図が含まれる。
本開示の態様は、フローストリーム内の（例えば、粒子分析器内の）複数の粒子についての液滴遅延を判定する方法を含む。ある特定の実施形態による方法は、フローストリーム内の複数の粒子を有する試料に、２つ以上の空間的に分離されたレーザで照射を行うことと、第１の光検出器チャネル及び第２の光検出器チャネル内の各粒子からの光を検出して、第１の光検出器チャネル及び第２の光検出器チャネル内の検出された光に基づいて、フローストリーム内の各粒子の速度を計算することと、計算された速度に基づいて、各粒子の液滴遅延を判定することとを含む。
本発明がより詳細に説明される前に、本発明は、説明される特定の実施形態に限定されるものではなく、したがって、もちろん、変化し得ることが理解されるべきである。また、本発明の範囲は、添付の特許請求の範囲によってのみ限定されることになるため、本明細書で使用される用語は、特定の実施形態のみを説明する対象となるためのものであり、限定することが意図されるものではないことも理解されるべきである。
値の範囲が提供される場合、文脈が明確に別段の指示をしない限り、その範囲の上限と下限との間の、下限の単位の１０分の１までの各中間値、及びこの記載の範囲内の任意の他の記載される値又は中間値が本発明に包含されると理解する。これらのより小さな範囲の上限及び下限は、独立して、より小さな範囲に含まれ得、また、記述の範囲内の任意の特定の除外された限界に従うことを条件として、本発明内に包含される。記述の範囲が、限界の一方又は両方を含む場合、それらの含まれる限界の一方又は両方を除外する範囲も、また、本発明に含まれる。
本明細書では、数値の前に「約」という用語が付けられて、ある特定の範囲が提示される。「約」という用語は、本明細書では、それが先行する正確な数、並びにその用語が先行する数に近いか又はほぼそれである数についての文字上の支持を提供するために使用される。ある数が、具体的に列挙された数に近いか又はほぼその数であるかを決定する際に、列挙されていない数に近いか又はほぼその数は、提示される文脈において、具体的に列挙された数の実質的な同等性を提供する数であり得る。
別途定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、本発明が属する当業者に一般に理解される意味と同じ意味を有する。また、本明細書に記載のものと同様の又は同等な任意の方法及び材料が、本発明の実施又は試験に使用され得るが、代表的な例示的な方法及び材料が以下に記載される。
本明細書で引用される全ての刊行物及び特許は、あたかも各個々の刊行物又は特許が参照によって組み込まれるように具体的かつ個々に示されているかのように、参照によって組み込まれ、参照によって本明細書に組み込まれることによって、それらの刊行物が引用される関連した方法及び／又は材料を開示及び記載する。任意の刊行物の引用は、出願日以前のその開示についてのものであり、本発明が、先行発明の特色によってそのような刊行物に先行する権利がないことを認めるものとして解釈されるべきではない。更に、提供される刊行物の日付は、実際の公開日とは異なり得、これらは独立して確認する必要があり得る。
本明細書及び添付の特許請求の範囲で使用される場合、冠詞「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、別途文脈が明確に指示しない限り、複数の指示対象を含むことに留意されたい。特許請求の範囲は、あらゆる任意選択の要素を排除するように設計され得ることに更に留意されたい。したがって、この記述は、特許請求の範囲の要素の列挙に関連する「単独で」、「のみ」などのそのような排他的な用語の使用、又は「否定的」限定の使用の先行詞として機能することが意図される。
本開示を読むと当業者には明らかであるように、本明細書に記載及び例証される個々の実施形態の各々は、本発明の範囲又は趣旨から逸脱することなく、他のいくつかの実施形態のいずれかの特徴から容易に分離され得るか、又はこれらと組み合わされ得る別個の構成要素及び特徴を有する。任意の列挙された方法は、列挙された事象の順序、又は論理的に可能な任意の他の順序で実行され得る。
装置及び方法は、機能的な説明を伴う文法的流動性を有するか、又はこれのために記載されるが、特許請求の範囲は、米国特許法第１１２条下で明示的に策定されない限り、「手段」又は「ステップ」制限の構築によって必ずしもいかようにかに制限されると解釈されるものではなく、均等物の法制定基礎原則の下で特許請求の範囲によって提供される定義の意味及び均等物の全範囲を付与されるものであり、特許請求の範囲が米国特許法第１１２条下で明示的に策定される場合、米国特許法第１１２条下で完全な法定均等物が付与されるものであることを明示的に理解されたい。
上記にまとめたように、本開示は、フローストリーム内の複数の粒子についての液滴遅延を判定するための方法及びシステム（例えば、粒子分析器の光検出器）を提供する。本開示の実施形態の更なる記載において、第１の光検出器チャネル及び第２の光検出器チャネル内の各粒子からの光を検出することと、各光検出器チャネル内のフローストリーム内の各粒子の速度を計算することと、計算された速度に基づいて各粒子の液滴遅延を判定することとを含む方法を、最初に、より詳細に記載する。次に、主題の方法を実施するための光源及び光検出器を有するシステム（例えば、粒子分析器）を記載する。また、主題の方法による複数の粒子の各々についての液滴遅延を判定するためのプログラミングを有する非一時的コンピュータ可読記憶媒体及び集積回路を提供する。
フローストリーム内の複数の粒子についての液滴遅延を判定するための方法
本開示の態様は、例えば粒子分析器内などの、フローストリーム内の複数の粒子についての液滴遅延を判定するための方法を含む。本明細書に記載の方法は、フローストリーム内の個々の粒子毎の動的な粒子速度判定を提供する。ある特定の事例では、主題の方法は、照射が行われた試料内の関心対象のあらゆる粒子の速度を個々に判定することを提供する。本明細書に記載の方法は、また、リアルタイムでの動的粒子液滴遅延判定と、試料内の関心対象の各粒子についての固有の液滴遅延を判定することとを提供する。ある特定の事例では、主題の方法は、照射が行われた試料内の関心対象のあらゆる粒子の液滴遅延を個々に判定することを提供する。ある特定の実施形態では、主題の方法は、より正確かつ一貫した粒子ソーティングを提供する。いくつかの実施形態では、粒子ソーティングパラメータを、更なるユーザ介入無しに、リアルタイムなどで決定及び調整することができる。実施形態では、主題の開示による粒子ソーティングは、より大きな全体的な粒子ソート収率を呈する。
本開示の態様は、例えば粒子分析器内などの、フローストリーム内の複数の粒子についての液滴遅延を判定するための方法を含む。本明細書に記載の方法は、フローストリーム内の個々の粒子毎の動的な粒子速度判定を提供する。ある特定の事例では、主題の方法は、照射が行われた試料内の関心対象のあらゆる粒子の速度を個々に判定することを提供する。本明細書に記載の方法は、また、リアルタイムでの動的粒子液滴遅延判定と、試料内の関心対象の各粒子についての固有の液滴遅延を判定することとを提供する。ある特定の事例では、主題の方法は、照射が行われた試料内の関心対象のあらゆる粒子の液滴遅延を個々に判定することを提供する。ある特定の実施形態では、主題の方法は、より正確かつ一貫した粒子ソーティングを提供する。いくつかの実施形態では、粒子ソーティングパラメータを、更なるユーザ介入無しに、リアルタイムなどで決定及び調整することができる。実施形態では、主題の開示による粒子ソーティングは、より大きな全体的な粒子ソート収率を呈する。
ある特定の実施形態による方法は、フローストリーム内の複数の粒子を有する試料に、２つ以上の空間的に分離されたレーザで照射を行うことを含む。ある特定の実施形態では、フローストリーム内の粒子に、１つ以上の所定の時間間隔で連続波光源で照射が行われる。「連続波光源」という用語は、本明細書では、遮断されない光束を提供し、かつ光強度のほとんど又は全く望ましくない変化を伴わずにフローストリーム内の粒子の照射を維持する光源を指すように、その従来の意味で使用される。いくつかの実施形態では、連続光源は、非パルス化又は非ストロボ照射を放出する。ある特定の実施形態では、連続光源は、実質的に一定の放出光強度を提供する。例えば、連続光源は、照射の時間間隔中に、照射の時間間隔中の放出光強度が０．０００００１％以下だけ変動する場合を含む、９％以下だけなど、８％以下だけなど、７％以下だけなど、６％以下だけなど、５％以下だけなど、４％以下だけなど、３％以下だけなど、２％以下だけなど、１％以下だけなど、０．５％以下だけなど、０．１％以下だけなど、０．０１％以下だけなど、０．００１％以下だけなど、０．０００１％以下だけなど、０．００００１％以下だけなどの、１０％以下だけ変動する照射の時間間隔中の放出光強度を提供し得る。光出力の強度は、光検出器タイプの中でも、走査スリットプロファイラ、電荷結合デバイス（増感型電荷結合デバイスＩＣＣＤなどのＣＣＤ）、測位センサ、電力センサ（例えば、熱電対列電力センサ）、光学電力センサ、エネルギーメータ、デジタルレーザ光度計、レーザダイオード検出器を含むがこれらに限定されない、任意の好都合なプロトコルによって測定することができる。
ある特定の実施形態では、フローストリーム内の粒子に、１つ以上の所定の時間間隔でパルス光源で照射が行われる。「パルス光源」という用語は、本明細書では、各時間間隔が所定の照射持続時間（すなわち、パルス幅）を有する所定の時間間隔で光を放出する光源を指すための、その従来の意味で使用される。ある特定の実施形態では、パルス光源は、周期的な光の点滅で光検出器に照射を行うように構成されている。例えば、各光パルスの周波数は、１００ｋＨｚ以上を含む、０．０００５ｋＨｚ以上など、０．００１ｋＨｚ以上など、０．００５ｋＨｚ以上など、０．０１ｋＨｚ以上など、０．０５ｋＨｚ以上など、０．１ｋＨｚ以上など、０．５ｋＨｚ以上など、１ｋＨｚ以上など、２．５ｋＨｚ以上など、５ｋＨｚ以上など、１０ｋＨｚ以上など、２５ｋＨｚ以上など、５０ｋＨｚ以上などの、０．０００１ｋＨｚ以上であり得る。ある特定の事例では、光源によるパルス照射の周波数は、１ｋＨｚ～１００ｋＨｚを含む、０．００００５ｋＨｚ～９００ｋＨｚなど、０．０００１ｋＨｚ～８００ｋＨｚなど、０．０００５ｋＨｚ～７００ｋＨｚなど、０．００１ｋＨｚ～６００ｋＨｚなど、０．００５ｋＨｚ～５００ｋＨｚなど、０．０１ｋＨｚ～４００ｋＨｚなど、０．０５ｋＨｚ～３００ｋＨｚなど、０．１ｋＨｚ～２００ｋＨｚなどの、０．００００１ｋＨｚ～１０００ｋＨｚの範囲である。各光パルスの光照射の持続時間（すなわち、パルス幅）は、変動してもよく、５００ミリ秒以上を含む、０．０００００５ミリ秒以上など、０．００００１ミリ秒以上など、０．００００５ミリ秒以上など、０．０００１ミリ秒以上など、０．０００５ミリ秒以上など、０．００１ミリ秒以上など、０．００５ミリ秒以上など、０．０１ミリ秒以上など、０．０５ミリ秒以上など、０．１ミリ秒以上など、０．５ミリ秒以上など、１ミリ秒以上など、２ミリ秒以上など、３ミリ秒以上など、４ミリ秒以上など、５ミリ秒以上など、１０ミリ秒以上など、２５ミリ秒以上など、５０ミリ秒以上など、１００ミリ秒以上などの、０．０００００１ミリ秒以上であり得る。例えば、光照射の持続時間は、１０ミリ秒～３００ミリ秒を含む、０．０００００５ミリ秒～９５０ミリ秒など、０．００００１ミリ秒～９００ミリ秒など、０．００００５ミリ秒～８５０ミリ秒など、０．０００１ミリ秒～８００ミリ秒など、０．０００５ミリ秒～７５０ミリ秒など、０．００１ミリ秒～７００ミリ秒など、０．００５ミリ秒～６５０ミリ秒など、０．０１ミリ秒～６００ミリ秒など、０．０５ミリ秒～５５０ミリ秒など、０．１ミリ秒～５００ミリ秒など、０．５ミリ秒～４５０ミリ秒など、１ミリ秒～４００ミリ秒など、５ミリ秒～３５０ミリ秒などの、０．０００００１ミリ秒～１０００ミリ秒の範囲であり得る。
実施形態では、光源は、任意の便利な光源であってもよく、レーザ光源及び非レーザ光源を含んでもよい。ある特定の実施形態では、光源は、特定の波長又は狭い範囲の波長を放射する狭帯域光源などの、非レーザ光源である。いくつかの事例では、狭帯域光源は、４０ｎｍ以下など、３０ｎｍ以下など、２５ｎｍ以下など、２０ｎｍ以下など、１５ｎｍ以下など、１０ｎｍ以下など、５ｎｍ以下など、２ｎｍ以下などの、例えば５０ｎｍ以下などの狭い範囲の波長を有する光を放出し、特定の波長の光（すなわち、単色光）を放出する光源を含む。狭波長ＬＥＤなどの、任意の便利な狭帯域光源プロトコルが採用されてもよい。
他の実施形態では、光源は、１つ以上の光学バンドパスフィルタ、回折格子、モノクロメータ、又はこれらの任意の組み合わせに結合された、広帯域光源などの、広帯域光源である。いくつかの事例では、広帯域光源は、５００ｎｍ以上に及ぶものを含む、１００ｎｍ以上など、１５０ｎｍ以上など、２００ｎｍ以上など、２５０ｎｍ以上など、３００ｎｍ以上など、３５０ｎｍ以上など、４００ｎｍ以上などの、例えば５０ｎｍ以上に及ぶなどの、広い範囲の波長を有する光を放出する。例えば、ある好適な広帯域光源は、２００ｎｍ～１５００ｎｍの波長を有する光を放出する。好適な広帯域光源の別の実施例は、４００ｎｍ～１０００ｎｍの波長を有する光を放出する光源を含む。広帯域光源の中でも、ハロゲンランプ、重水素アークランプ、キセノンアークランプ、安定化ファイバ結合広帯域光源、連続スペクトルを有する広帯域ＬＥＤ、超高輝度発光ダイオード、半導体発光ダイオード、広域スペクトルＬＥＤ白色光源、マルチＬＥＤ統合白色光源、又はそれらの任意の組み合わせなど、任意の好都合な広帯域光源プロトコルが採用され得る。ある特定の実施形態では、光源は、ＬＥＤのアレイを含む。ある特定の事例では、光源は、各単色発光ダイオードが異なる波長を有する光を出力する、複数の単色発光ダイオードを含む。いくつかの事例では、光源は、複数の多色発光ダイオードが、５００ｎｍ～１２００ｎｍを含む、２２５ｎｍ～１４７５ｎｍなど、２５０ｎｍ～１４５０ｎｍなど、２７５ｎｍ～１４２５ｎｍなど、３００ｎｍ～１４００ｎｍなど、３２５ｎｍ～１３７５ｎｍなど、３５０ｎｍ～１３５０ｎｍなど、３７５ｎｍ～１３２５ｎｍなど、４００ｎｍ～１３００ｎｍなど、４２５ｎｍ～１２７５ｎｍなど、４５０ｎｍ～１２５０ｎｍなど、４７５ｎｍ～１２２５ｎｍなどの、２００ｎｍ～１５００ｎｍの範囲のスペクトル幅の範囲を有する光をまとめて出力する場合などの、所定のスペクトル幅を有する光を出力する複数の多色発光ダイオードを含む。
いくつかの実施形態では、光源は、パルス波レーザ又は連続波レーザなどのレーザである。例えば、レーザは、紫外線ダイオードレーザ、可視ダイオードレーザ、及び近赤外線ダイオードレーザなどのダイオードレーザであってもよい。他の実施形態では、レーザは、ヘリウムネオン（ＨｅＮｅ）レーザであり得る。いくつかの事例では、レーザは、ヘリウムネオンレーザ、アルゴンレーザ、クリプトンレーザ、キセノンレーザ、窒素レーザ、ＣＯ２レーザ、ＣＯレーザ、アルゴンフッ素（ＡｒＦ）エキシマレーザ、クリプトンフッ素（ＫｒＦ）エキシマレーザ、キセノン塩素（ＸｅＣｌ）エキシマレーザ、又はキセノンフッ素（ＸｅＦ）エキシマレーザ、若しくはそれらの組み合わせなどのガスレーザである。他の事例では、主題のシステムは、スチルベンレーザ、クマリンレーザ、又はローダミンレーザなどの色素レーザを含む。更に他の事例では、関心対象のレーザは、ヘリウム－カドミウム（ＨｅＣｄ）レーザ、ヘリウム－水銀（ＨｅＨｇ）レーザ、ヘリウム－セレン（ＨｅＳｅ）レーザ、ヘリウム－銀（ＨｅＡｇ）レーザ、ストロンチウムレーザ、ネオン－銅（ＮｅＣｕ）レーザ、銅レーザ、又は金レーザ、及びそれらの組み合わせなどの金属蒸気レーザを含む。更に他の事例では、主題のシステムは、ルビーレーザ、Ｎｄ：ＹＡＧレーザ、ＮｄＣｒＹＡＧレーザ、Ｅｒ：ＹＡＧレーザ、Ｎｄ：ＹＬＦレーザ、Ｎｄ：ＹＶＯ４レーザ、Ｎｄ：ＹＣａ４Ｏ（ＢＯ３）３レーザ、Ｎｄ：ＹＣＯＢレーザ、チタンサファイアレーザ、スリムＹＡＧレーザ、イッテルビウムＹＡＧレーザ、Ｙｂ２Ｏ３レーザ、又はセリウムドープレーザ、及びそれらの組み合わせなどの固体レーザを含む。
いくつかの実施形態では、光源は、狭帯域幅光源である。いくつかの事例では、光源は、４００ｎｍ～８００ｎｍを含む、２５０ｎｍ～１２５０ｎｍなど、３００ｎｍ～１０００ｎｍなど、３５０ｎｍ～９００ｎｍなどの、２００ｎｍ～１５００ｎｍの特定の波長を出力する光源である。ある特定の実施形態では、連続波光源は、３６５ｎｍ、３８５ｎｍ、４０５ｎｍ、４６０ｎｍ、４９０ｎｍ、５２５ｎｍ、５５０ｎｍ、５８０ｎｍ、６３５ｎｍ、６６０ｎｍ、７４０ｎｍ、７７０ｎｍ、又は８５０ｎｍの波長を有する光を放出する。
いくつかの実施形態では、光源は、例えば、光源の１つ以上の構成要素の出力スペクトルが、２０ｎｍ以上だけを含む、２ｎｍ以上だけなど、３ｎｍ以上だけなど、４ｎｍ以上だけなど、５ｎｍ以上だけなど、６ｎｍ以上だけなど、７ｎｍ以上だけなど、８ｎｍ以上だけなど、９ｎｍ以上だけなど、１０ｎｍ以上だけなどの、１ｎｍ以上だけ重複する場合などの、重複する波長を有する光を放出する。いくつかの実施形態では、光源によって放出される光の波長は、重複を呈さない。例えば、光源の出力スペクトルは、２０ｎｍ以上だけを含む、２ｎｍ以上だけなど、３ｎｍ以上だけなど、４ｎｍ以上だけなど、５ｎｍ以上だけなど、６ｎｍ以上だけなど、７ｎｍ以上だけなど、８ｎｍ以上だけなど、９ｎｍ以上だけなど、１０ｎｍ以上だけなどの、１ｎｍ以上だけ分離され得る。
実施形態では、フローストリーム内の粒子に、７つ以上を含む、３つ以上、４つ以上、５つ以上、６つ以上の空間的に分離された光源などの、２つ以上の空間的に分離された光源で照射が行われる。いくつかの実施形態では、１つ以上の光源は、レーザであり、フローストリーム内の粒子に、７つ以上を含む、２つ以上、３つ以上、４つ以上、５つ以上、６つ以上の空間的に分離されたレーザなどの、１つ以上の空間的に分離されたレーザで照射が行われる。以下により詳細に記載されるように、各光源は、フローストリーム上の別異する位置に照射を行うように構成されている。いくつかの事例では、光源の各々は、１００μｍ以上だけを含む、０．０５μｍ以上だけなど、０．１μｍ以上だけなど、０．５μｍ以上だけなど、１μｍ以上だけなど、２μｍ以上だけなど、３μｍ以上だけなど、４μｍ以上だけなど、５μｍ以上だけなど、１０μｍ以上だけなど、１５μｍ以上だけなど、２５μｍ以上だけなど、５０μｍ以上だけなどの、０．０１μｍ以上だけ互いに離間したフローストリーム上の位置に独立に照射を行うように構成されている。例えば、光源の各々は、１０μｍ～１００μｍを含む、０．０５μｍ～４５０μｍなど、０．１μｍ～４００μｍなど、０．５μｍ～３５０μｍなど、１μｍ～２００μｍなど、５μｍ～１５０μｍなどの、０．０１μｍ～５００μｍの距離だけ互いに離間したフローストリーム上の位置に独立に照射を行うように構成されている。ある特定の事例では、光源の各々は、５μｍ以下だけ離間したフローストリーム上の位置を含む、９μｍ以下など、８μｍ以下など、７μｍ以下など、６μｍ以下などの、１０μｍ以下だけ互いに離間したフローストリーム上の位置に独立に照射を行うように構成されている。
いくつかの実施形態では、方法は、フローストリーム内の粒子に、第１の検査領域内の第１のレーザ及び第２の検査領域内の第２のレーザで照射を行うことを含む。各検査領域のサイズは、ノズルオリフィスのサイズ及び試料注入ポートサイズ（以下により詳細に記載されるような）などの、フローストリームを生成するために使用されるフローノズルの特性に応じて変わり得る。実施形態では、検査領域は、１０ｍｍ以上を含む、０．０５ｍｍ以上など、０．１ｍｍ以上など、０．５ｍｍ以上など、１ｍｍ以上など、２ｍｍ以上など、３ｍｍ以上など、５ｍｍ以上などの、０．０１ｍｍ以上である幅を有し得る。検査領域の長さも変わり得、いくつかの事例では、５０ｍｍ以上を含む、０．１ｍｍ以上など、０．５ｍｍ以上など、１ｍｍ以上など、１．５ｍｍ以上など、２ｍｍ以上など、３ｍｍ以上など、５ｍｍ以上など、１０以上など、１５ｍｍ以上など、２０ｍｍ以上など、２５ｍｍ以上などの、０．０１ｍｍ以上に沿った範囲で変わり得る。
フローストリームに、１００ｍｍ以上の距離におけるものを含む、０．００５ｍｍ以上など、０．０１ｍｍ以上など、０．０５ｍｍ以上など、０．１ｍｍ以上など、０．５ｍｍ以上など、１ｍｍ以上など、５ｍｍ以上など、１０ｍｍ以上など、２５ｍｍ以上などの、０．００１ｍｍ以上の距離におけるなどの、任意の好適な距離から各光源によって照射が行われ得る。加えて、フローストリームの照射は、３０°～６０°、例えば９０°の角度を含む、１５°～８５°など、２０°～８０°など、２５°～７５°などの、１０°～９０°の範囲の角度におけるなどの任意の好適な角度であり得る。
主題の方法を実施する際に、各粒子からの光は、光検出システムによって検出される。実施形態では、光検出システムは、１０個以上の光検出器を含む、２つ以上など、３つ以上など、４つ以上など、５つ以上など、６つ以上など、７つ以上など、８つ以上など、９つ以上などの、１つ以上の光検出器を含む。本主題の方法を実施するための光検出器は、限定されるものではないが、光検出器の中でも、アクティブピクセルセンサ（ＡＰＳ）、象限フォトダイオード、画像センサ、電荷結合デバイス（ＣＣＤ）、強化電荷結合デバイス（ＩＣＣＤ）、発光ダイオード、フォトンカウンタ、ボロメータ、焦電検出器、光抵抗器、太陽電池、フォトダイオード、光電子増倍管、フォトトランジスタ、量子ドット光伝導体又はフォトダイオード、並びにこれらの組み合わせなどの光センサ又は光検出器を含む、任意の好都合な光検出プロトコルであってもよい。ある特定の実施形態では、光検出器は、１ｃｍ２～５ｃｍ２を含む、０．０５ｃｍ２～９ｃｍ２など、０．１ｃｍ２～８ｃｍ２など、０．５ｃｍ２～７ｃｍ２などの、０．０１ｃｍ２～１０ｃｍ２の範囲の各領域の活性な検出表面積を有する光電子増倍管などの光電子増倍管である。
フローストリーム内の粒子から４００個以上の異なる波長の光を測定することを含めて、２つ以上の波長など、５つ以上の異なる波長など、１０個以上の異なる波長など、２５個以上の異なる波長など、５０個以上の異なる波長など、１００個以上の異なる波長など、２００個以上の異なる波長など、３００個以上の異なる波長などの、１つ以上の波長の光が光検出器によって測定され得る。光は、連続的に、又は離散的な間隔で測定され得る。いくつかの事例では、関心対象の検出器は、光の測定を連続的に行うように構成されている。他の事例では、関心対象の検出器は、１０００ミリ秒毎を含む、０．００１ミリ秒毎、０．０１ミリ秒毎、０．１ミリ秒毎、１ミリ秒毎、１０ミリ秒毎、１００ミリ秒毎、又は何らかの他の間隔毎に光を測定するなど、離散間隔において測定するように構成される。
光源からの光の測定は、離散的な各間隔中に、１０回以上を含めて、２回以上など、３回以上など、５回以上など、１回以上行われ得る。ある特定の実施形態では、光源からの光は、光検出器によって２回以上測定され、ある特定の事例では、データが平均化される。
いくつかの実施形態では、試料内の各粒子から検出された光は、明視野光検出器で検出された光などの透過光である。他の実施形態では、試料内の各粒子から検出された光は、粒子ルミネッセンス（すなわち、蛍光又はリン光）などの放出光である。これらの実施形態では、各粒子は、２つ以上の光源による照射に応答して蛍光を放出する１つ以上のフルオロフォアを含み得る。例えば、各粒子は、１０個以上の光検出器を含む、３つ以上など、４つ以上など、５つ以上など、６つ以上など、７つ以上など、８つ以上など、９つ以上などの、２つ以上の光検出器を含み得る。いくつかの事例では、各粒子は、第１のレーザによる照射に応答して蛍光を放出する第１のフルオロフォアと、第２のレーザによる照射に応答して蛍光を放出する第２のフルオロフォアとを含む。いくつかの実施形態では、関心対象のフルオロフォアとしては、限定されるものではないが、アクリジン染料、アントラキノン染料、アリールメタン染料、ジアリールメタン染料（例えば、ジフェニルメタン染料）、クロロフィル含有染料、トリアリールメタン染料（例えば、トリフェニルメタン染料）、アゾ染料、ジアゾニウム染料、ニトロ染料、ニトロソ染料、フタロシアニン染料、シアニン染料、非対称シアニン染料、キノン－イミン染料、アジン染料、ユーロジン染料、サフラニン染料、インダミン、インドフェノール染料、フルオリン染料、オキサジン染料、オキサゾン染料、チアジン線量、チアゾール染料、キサンテン染料、フルオレン染料、ピロニン染料、フッ素染料、ローダミン染料、フェナントリジン染料、並びに上記の染料のうちの２つ以上を組み合わせた（例えば、タンデムでの）染料、１つ以上のモノマー染料単位を有するポリマー染料、及びそれらの上記の染料のうちの２つ以上の混合物などの、分析用途（例えば、フローサイトメトリ、撮像など）での使用に好適な染料が挙げられ得る。多数の染料が、例えば、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ（Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ）、Ｄｙｏｍｉｃｓ ＧｍｂＨ（Ｊｅｎａ，Ｇｅｒｍａｎｙ）、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）、Ｓｉｒｉｇｅｎ，Ｉｎｃ．（Ｓａｎｔａ Ｂａｒｂａｒａ，ＣＡ）、及びＥｘｃｉｔｏｎ（Ｄａｙｔｏｎ，ＯＨ）などの様々な供給源から市販されている。例えば、フルオロフォアとしては、４－アセトアミド－４’－イソチオシアナトスチルベン－２，２’ジスルホン酸；アクリジン、並びにアクリジン、アクリジンオレンジ、アクリジンイエロー、アクリジンレッド、及びアクリジンイソチオシアネートなどの誘導体；アロフィコシアニン、フィコエリトリン、ペリジニン－クロロフィルタンパク質、５－（２’－アミノエチル）アミノナフタレン－１－スルホン酸（ＥＤＡＮＳ）；４－アミノ－Ｎ－［３－ビニルスルホニル）フェニル］ナフタルイミド－３，５ジスルホネート（ルシファーイエローＶＳ）；Ｎ－（４－アニリノ－１－ナフチル）マレイミド；アントラニルアミド；ブリリアントイエロー；クマリン、及びクマリン、７－アミノ－４－メチルクマリン（ＡＭＣ、クマリン１２０）、７－アミノ－４－トリフルオロメチルクマリン（クマラン１５１）などの誘導体；シアニン、並びにシアノシン、Ｃｙ３、Ｃｙ３．５、Ｃｙ５、Ｃｙ５．５、及びＣｙ７などの誘導体；４’，６－ジアミニジノ－２－フェニルインドール（ＤＡＰＩ）；５’，５’’－ジブロモピロガロール－スルホンフタレイン（ブロモピロガロールレッド）；７－ジエチルアミノ－３－（４’－イソチオシアナトフェニル）－４－メチルクマリン；ジエチルアミノクマリン；ジエチレントリアミン五酢酸塩；４，４’－ジイソチオシアナトジヒドロ－スチルベン－２，２’－ジスルホン酸；４，４’－ジイソチオシアナトスチルベン－２，２’－ジスルホン酸；５－［ジメチルアミノ］ナフタレン－１－スルホニルクロライド（ＤＮＳ、ダンシルクロライド）；４－（４’－ジメチルアミノフェニルアゾ）安息香酸（ＤＡＢＣＹＬ）；４－ジメチルアミノフェニルアゾフェニル－４’－イソチオシアネート（ＤＡＢＩＴＣ）；エオシン、並びにエオシン及びエオシンイソチオシアネートなどの誘導体；エリスロシン、並びにエリスロシンＢ及びエリスロシンイソチオシアネートなどの誘導体；エチジウム；フルオレセイン、並びに５－カルボキシフルオレセイン（ＦＡＭ）、５－（４，６－ジクロロトリアジン－２－イル）アミノフルオレセイン（ＤＴＡＦ）、２’７’－ジメトキシ－４’５’－ジクロロ－６－カルボキシフルオレセイン（ＪＯＥ）、フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）、フルオレセインクロロトリアジニル、ナフトフルオレセイン、及びＱＦＩＴＣ（ＸＲＩＴＣ）などの誘導体；フルオレスカミン；ＩＲ１４４；ＩＲ１４４６；緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）；サンゴ礁蛍光タンパク質（ＲＣＦＰ）；Ｌｉｓｓａｍｉｎｅ（商標）；リサミンローダミン、ルシファーイエロー；マラカイトグリーンイソチオシアネート；４－メチルウンベリフェロン；オルトクレゾールフタレイン；ニトロチロシン；パラローザニリン；ナイルレッド；オレゴングリーン；フェノールレッド；Ｂ－フィコエリトリン；ｏ－フタルジアルデヒド；ピレン、並びにピレン、ピレンブチレート及びスクシンイミジル１－ピレンブチレートなどの誘導体；リアクティブレッド４（Ｃｉｂａｃｒｏｎ（商標）ブリリアントレッド３Ｂ－Ａ）；ローダミン、並びに６－カルボキシ－Ｘ－ローダミン（ＲＯＸ）、６－カルボキシローダミン（Ｒ６Ｇ）、４，７－ジクロロローダミンリサミン、ローダミンＢ塩化スルホニル、ローダミン（Ｒｈｏｄ）、ローダミンＢ、ローダミン１２３、ローダミンＸイソチオシアネート、スルホローダミンＢ、スルホローダミン１０１、スルホローダミン１０１の塩化スルホニル誘導体（テキサスレッド）、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチル－６－カルボキシローダミン（ＴＡＭＲＡ）、テトラメチルローダミン、及びテトラメチルローダミンイソチオシアネート（ＴＲＩＴＣ）などの誘導体；リボフラビン；ロソリン酸及びテルビウムキレート誘導体；キサンテン；フルオレセインイソチオシアネートデキストランなどの色素共役ポリマー（すなわち、ポリマー結合色素）、並びに２つ以上の色素を（例えば、タンデムで）組み合わせた色素、１つ以上のモノマー色素単位を有するポリマー色素、及び上記の染料のうちの２つ以上の混合物、又はそれらの組み合わせが挙げられ得る。
いくつかの事例では、フルオロフォア（すなわち、染料）は、蛍光ポリマー色素である。主題の方法及びシステムで利用される蛍光ポリマー染料は、様々である。方法のいくつかの事例では、ポリマー色素は、共役ポリマーを含む。共役ポリマー（ＣＰ）は、交互の不飽和結合（例えば、二重結合及び／又は三重結合）及び飽和（例えば、単結合）結合の主鎖を含む非局在化電子構造によって特徴付けられ、π電子は、一方の結合から他方の結合に移動することができる。したがって、共役主鎖は、ポリマーの反復単位間の結合角度を制限して、ポリマー色素に、延伸した線状構造を付与し得る。例えば、タンパク質及び核酸は、ポリマーでもあるが、いくつかの場合では、延伸したロッド構造を形成せず、むしろ高次の三次元形状に折り畳まれる。加えて、ＣＰは、「リジッドロッド」ポリマー骨格を形成し、ポリマー骨格鎖に沿ったモノマー反復単位間の制限されたツイスト（例えば、ねじれ）角度を経験し得る。いくつかの事例では、ポリマー色素は、リジッドロッド構造を有するＣＰを含む。上記にまとめたように、高分子染料の構造特性は、分子の蛍光特性に影響を及ぼし得る。
任意の好都合なポリマー色素が、主題の方法及びシステムで利用され得る。いくつかの事例では、高分子染料は、フルオロフォアの蛍光出力を増幅するために光を収集することができる構造を有するマルチクロモフォアである。いくつかの事例では、ポリマー色素は、光を収集し、かつこの光をより長い波長の放出光に効率的に変換することができる。いくつかの場合では、ポリマー色素は、近くの発光種（例えば、「シグナル伝達クロモフォア」）に効率的にエネルギーを伝達することができる光収集マルチクロモフォア系を有する。エネルギー伝達のための機構としては、例えば、共振エネルギー伝達（例えば、Ｆｏｒｓｔｅｒ（又は蛍光）共振エネルギー伝達、ＦＲＥＴ）、量子電荷交換（Ｄｅｘｔｅｒエネルギー伝達）などが挙げられる。いくつかの事例では、これらのエネルギー伝達機構は、比較的短距離であり、すなわち、シグナル伝達クロモフォアへの光収集マルチクロモフォア系の近接は、効率的なエネルギー伝達を提供する。効率的なエネルギー伝達のための条件下では、シグナル伝達クロモフォアからの放出の増幅は、光収集マルチクロモフォア系内の個々のクロモフォアの数が多いときに生じ、すなわち、シグナル伝達クロモフォアからの放出は、入射光（「励起光」）が、シグナル伝達クロモフォアがポンプ光によって直接励起されるときよりも、光収集マルチクロモフォア系によって吸収される波長にあるときに、シグナル伝達クロモフォアからの放出は、より強い。
マルチクロモフォアは、共役ポリマーであり得る。共役ポリマー（ＣＰ）は、非局在化電子構造によって特徴付けられ、化学的標的及び生物学的標的のための高応答性光学レポータとして使用され得る。有効共役長がポリマー鎖の長さよりも実質的に短いため、骨格は、近接した多数の共役セグメントを含有する。したがって、共役ポリマーは、光収集に効率的であり、エネルギー伝達を介した光増幅を可能にする。
いくつかの事例では、ポリマーは、直接蛍光レポータ、例えば、高消光係数、高輝度などを有する蛍光ポリマーとして使用され得る。いくつかの事例では、ポリマーは、色又は光学密度が指標として使用される強力な発色団として使用され得る。
関心対象の高分子染料として、限定されるものではないが、米国公開第２００４／０１４２３４４号、同第２００８／０２９３１６４号、同第２００８／００６４０４２号、同第２０１０／０１３６７０２号、同第２０１１／０２５６５４９号、同第２０１２／００２８８２８号、同第２０１２／０２５２９８６号、同第２０１３／０１９０１９３号、及び同第２０１６／００２５７３５号（これらの開示全体が、参照により本明細書に組み込まれる）でＧａｙｌｏｒｄ ｅｔ ａｌ．によって、並びにＧａｙｌｏｒｄ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，２００１，１２３（２６），ｐｐ６４１７－６４１８、Ｆｅｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｒｅｖ．，２０１０，３９，２４１１－２４１９、及びＴｒａｉｎａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ，２０１１，１３３（３２），ｐｐ１２６００－１２６０７（これらの開示全体が、参照により本明細書に組み込まれる）によって記載されたそれらの染料が挙げられる。
ある特定の実施形態では、試料から検出される光は、散乱光である。「散乱光」という用語は、本明細書では、光ビームの反射、屈折、又は偏向などによって、入射ビーム経路から偏向された（例えば、フローストリーム内で流れている）試料内の粒子からの光エネルギーの伝播を指すための、その従来の意味で使用される。ある特定の事例では、フローストリーム内の粒子から検出された散乱光は、前方散乱光（ＦＳＣ）である。他の事例では、フローストリーム内の粒子から検出された散乱光は、側方散乱光である。更に他の事例では、フローストリーム内の粒子から検出された散乱光は、後方散乱光である。
フローストリームからの光は、１０個以上の光検出器チャネルを含む、３つ以上など、４つ以上など、５つ以上など、６つ以上など、７つ以上など、８つ以上など、９つ以上などの、２つ以上の光検出器チャネル内で検出される。いくつかの実施形態では、光は、フローストリームに照射を行うために使用される各光源（例えば、各レーザ）に対して異なる光検出器内で検出される。例えば、フローストリーム内の粒子に第１のレーザ及び第２のレーザによって照射が行われる場合、第１のレーザによって照射が行われたフローストリーム内の各粒子からの光は、第１の光検出器チャネル内で検出され得、第２のレーザによって照射が行われたフローストリーム内の各粒子からの光は、第２の光検出器チャネル内で検出され得る。ある特定の実施形態では、第１のレーザによって照射が行われたフローストリーム内の各粒子からの散乱光は、第１の光検出器チャネル内で検出され、第２のレーザによって照射が行われたフローストリーム内の各粒子からの散乱光は、第２の光検出器チャネル内で検出される。
実施形態では、検出された光に応答して、１つ以上の信号パルスが各光検出器チャネル内で生成される。いくつかの実施形態では、検出された光に応答して、各光検出器チャネル内で１０個以上の信号パルスを生成することを含めて、２つ以上の信号パルスなど、３つ以上の信号パルスなど、４つ以上の信号パルスなど、５つ以上の信号パルスなど、６つ以上の信号パルスなど、７つ以上の信号パルスなど、８つ以上の信号パルスなど、９つ以上の信号パルスなどの、複数の信号パルスが、検出された光に応答して、各光検出器チャネル内で生成される。いくつかの実施形態では、各光源（例えば、各レーザ）によって照射が行われた粒子から検出された光に応答して、１つ以上の信号パルスが異なる光検出器チャネル内で生成される。例えば、フローストリーム内の粒子に第１のレーザ及び第２のレーザによって照射が行われる場合、第１のレーザによって照射が行われた各粒子から検出された光に応答して、第１の光検出器チャネル内で信号パルスが生成され得、第２のレーザによって照射が行われた各粒子から検出された光に応答して、第２の光検出器チャネル内で信号パルスが生成され得る。
いくつかの実施形態では、信号パルスは、電圧パルスである。電圧パルスは、５０００ｍＶ以上によることを含む、０．００５ｍＶ以上によるなど、０．０１ｍＶ以上によるなど、０．０５ｍＶ以上によるなど、０．１ｍＶ以上によるなど、０．５ｍＶ以上によるなど、１ｍＶ以上によるなど、５ｍＶ以上によるなど、１０ｍＶ以上によるなど、２５ｍＶ以上によるなど、５０ｍＶ以上によるなど、１００ｍＶ以上によるなど、２５０ｍＶ以上によるなど、５００ｍＶ以上によるなど、１０００ｍＶ以上によるなど、２５００ｍＶ以上によるなどの、０．００１ｍＶ以上のパルスであり得る。いくつかの実施形態では、検出された光が、５０００ｍＶ以上の所定の閾値を含む、０．００００５ｍＶ以上など、０．０００１ｍＶ以上など、０．０００５ｍＶ以上など、０．００１ｍＶ以上など、０．００５ｍＶ以上など、０．０１ｍＶ以上など、０．０５ｍＶ以上など、０．１ｍＶ以上など、０．５ｍＶ以上など、１ｍＶ以上など、５ｍＶ以上など、１０ｍＶ以上など、２５ｍＶ以上など、５０ｍＶ以上など、１００ｍＶ以上など、２５０ｍＶ以上など、５００ｍＶ以上など、１０００ｍＶ以上など、２５００ｍＶ以上などの、０．００００１ｍＶ以上の所定の閾値を超える電圧を生成するときに、各光検出器チャネル内で信号パルスが生成される。
いくつかの実施形態では、方法は、光検出器信号パルス間の時間の量を判定することを含む。いくつかの事例では、方法は、１０個以上の異なる光検出器チャネル内の信号パルス間の時間の量を判定することを含めて、３つ以上の異なる光検出器チャネルなど、４つ以上の異なる光検出器チャネルなど、５つ以上の異なる光検出器チャネルなど、６つ以上の異なる光検出器チャネルなど、７つ以上の異なる光検出器チャネルなど、８つ以上の異なる光検出器チャネルなど、９つ以上の異なる光検出器チャネルなどの、２つ以上の異なる光検出器チャネル内の信号パルス間の時間の量を判定することを含む。いくつかの事例では、２つ以上の異なる光検出器チャネル内の信号パルス間の時間は、１０００μｓ以上を含む、０．００００５μｓ以上など、０．０００１μｓ以上など、０．０００５μｓ以上など、０．００１μｓ以上など、０．００５μｓ以上など、０．０１μｓ以上など、０．０５μｓ以上など、０．１μｓ以上など、０．５μｓ以上など、１μｓ以上など、５μｓ以上など、１０μｓ以上など、２５μｓ以上など、５０μｓ以上など、１００μｓ以上など、５００μｓ以上などの、０．００００１μｓ以上であり得る。ある特定の事例では、２つ以上の異なる光検出器チャネル内の信号パルス間の時間は、１μｓ～５００μｓを含む、０．０００１μｓ～４０００μｓなど、０．００１μｓ～３０００μｓなど、０．０１μｓ～２０００μｓなど、０．１μｓ～１０００μｓなどの、０．００００１μｓ～５０００μｓの範囲である。
いくつかの実施形態では、方法は、光検出器信号パルス間のピーク時間の持続時間を判定することを含む。「ピーク時間」という用語は、本明細書では、各光検出器チャネル内の生成信号パルスのピーク（例えば、信号パルス中の光検出器チャネル内の最高検出電圧の値）間の持続時間を指すための、その従来の意味で使用される。例えば、ピーク時間の持続時間は、１０個以上の異なる光検出器チャネル内の信号パルス間のピーク時間の持続時間を判定することを含めて、３つ以上の異なる光検出器チャネルなど、４つ以上の異なる光検出器チャネルなど、５つ以上の異なる光検出器チャネルなど、６つ以上の異なる光検出器チャネルなど、７つ以上の異なる光検出器チャネルなど、８つ以上の異なる光検出器チャネルなど、９つ以上の異なる光検出器チャネルなどの、２つ以上の異なる光検出器チャネル内の信号パルス間で判定され得る。いくつかの事例では、２つ以上の異なる光検出器チャネル内の信号パルス間のピーク時間の持続時間は、１０００μｓ以上を含む、０．００００５μｓ以上など、０．０００１μｓ以上など、０．０００５μｓ以上など、０．００１μｓ以上など、０．００５μｓ以上など、０．０１μｓ以上など、０．０５μｓ以上など、０．１μｓ以上など、０．５μｓ以上など、１μｓ以上など、５μｓ以上など、１０μｓ以上など、２５μｓ以上など、５０μｓ以上など、１００μｓ以上など、５００μｓ以上などの、０．００００１μｓ以上であり得る。ある特定の事例では、２つ以上の異なる光検出器チャネル内の信号パルス間のピーク時間の持続時間は、１μｓ～５００μｓを含む、０．０００１μｓ～４０００μｓなど、０．００１μｓ～３０００μｓなど、０．０１μｓ～２０００μｓなど、０．１μｓ～１０００μｓなどの、０．００００１μｓ～５０００μｓの範囲である。ある特定の実施形態では、方法は、１０個以上の光検出器チャネル内の信号パルスの一次モーメントを判定することを含めて、３つ以上の光検出器チャネルなど、４つ以上の光検出器チャネルなど、５つ以上の光検出器チャネルなど、６つ以上の光検出器チャネルなど、７つ以上の光検出器チャネルなど、８つ以上の光検出器チャネルなど、９つ以上の光検出器チャネルなどの、２つ以上の光検出器チャネル内の信号パルスの一次モーメントなどの、各々の光検出器チャネル内の信号パルスの一次モーメントを判定することを含む。
いくつかの実施形態では、フローストリーム内の粒子は、フローストリーム内の粒子が独立して異なる速度を有する、不均一な速度によって特徴付けられる。いくつかの事例では、粒子の速度の不均一性は、フローストリーム内の粒子の位置に依存する。コアストリーム及び周囲のシースフローを有するフローストリーム内で、ある特定の事例では、コアストリームの中心近くを流れている粒子の速度は、コアストリームの周囲に沿って流れている粒子の速度よりも高い。図１は、ある特定の実施形態による、フローストリーム内の粒子速度の不均一性を示す。図１では、フローストリーム１０５が、キュベット１００内に形成され、キュベット壁１００ａで収容されたコアストリーム１０１及び周囲のシース流体１０２を含む。図１に示されるように、コアストリーム１０１の中心を下流へ流れる粒子は、コアストリーム１０１の周辺（すなわち、コアストリーム１０１とシース流体１０２との間の界面）で流れる粒子と比較して、より高い粒子流速１０３を呈する。
いくつかの実施形態では、方法は、フローストリーム内の関心対象の各粒子の速度を計算することを含む。いくつかの事例では、試料内の５００個以上の粒子の速度を独立に計算することを含めて、試料内の２つ以上の粒子の速度など、試料内の５つ以上の粒子の速度など、試料内の１０個以上の粒子の速度など、試料内の２５個以上の粒子の速度など、試料内の５０個以上の粒子の速度など、試料内の１００個以上の粒子の速度など、試料内の２５０個以上の粒子の速度などの、試料内の１つ以上の粒子の速度は、独立に判定される。例えば、試料内の粒子のうちの９０％以上の速度を独立に計算することを含めて、０．０００５％以上など、０．００１％以上など、０．００５％以上など、０．０１％以上など、０．０５％以上など、０．１％以上など、０．５％以上など、１％以上など、５％以上など、１０％以上など、２５％以上など、５０％以上など、７５％以上などの、試料内の粒子のうちの０．０００１％以上の速度は、独立に計算され得る。
いくつかの実施形態では、各粒子についての速度は、２つ以上の光検出器チャネル内の信号パルス間の時間の量と、２つ以上の検査領域間の距離と、に基づいて計算される。一実施形態では、各粒子についての速度は、第１の光検出器チャネルからの信号パルスと第２の光検出器チャネルからの信号パルスとの間の時間の量と、第１のレーザの検査領域と第２のレーザの検査領域との間の距離とに基づいて計算される。いくつかの事例では、第１の検査領域と第２の検査領域との間の距離は、フローストリーム上の第１のレーザによる照射の位置と、フローストリーム上の第２のレーザによる照射の位置との間の距離に基づいて判定される。例えば、ある特定の事例における粒子分析器に応じて、第１の検査領域と第２の検査領域との間の距離は、１００μｍ以上によることを含めて、０．０５μｍ以上によるなど、０．１μｍ以上によるなど、０．５μｍ以上によるなど、１μｍ以上によるなど、２μｍ以上によるなど、３μｍ以上によるなど、４μｍ以上によるなど、５μｍ以上によるなど、１０μｍ以上によるなど、１５μｍ以上によるなど、２５μｍ以上によるなど、５０μｍ以上によるなど、０．０１μｍ以上である。他の事例では、第１の検査領域と第２の検査領域との間の距離は、１０μｍ～１００μｍを含む、０．０５μｍ～４５０μｍなど、０．１μｍ～４００μｍなど、０．５μｍ～３５０μｍなど、１μｍ～２００μｍなど、５μｍ～１５０μｍなどの、０．０１μｍ～５００μｍの範囲である。
図２Ａ及び２Ｂは、ある特定の実施形態によるフローストリーム内の粒子の速度を判定することを示す。図２Ａは、３つの空間的に分離されたレーザを使用した粒子の照射に応答した信号パルスの生成を示す。フローストリーム２００内の粒子２０１に、３つの空間的に分離されたレーザ（Ａ、Ｂ、Ｃ）によって照射が行われる。レーザＡによる粒子の照射から検出された光に応答して、信号パルス２０２Ａが光検出器チャネル内で生成される。レーザＢによる照射から検出された光に応答して、第２の信号パルス２０２Ｂが光検出器チャネル内で生成される。信号パルス２０２Ａと信号パルス２０２Ｂとの間の持続時間ｔ１は、粒子２０１が距離ｄ１（すなわち、レーザＡ及びレーザＢによる照射のポイントからの）を流れる時間の量である。レーザＣによる照射から検出された光に応答して、第３の信号パルス２０２Ｃが光検出器チャネル内で生成される。信号パルス２０２Ｂと信号パルス２０２Ｃとの間の持続時間ｔ２は、粒子２０１が距離ｄ２（すなわち、レーザＢ及びレーザＣによる照射のポイントからの）を流れる時間の量である。粒子２０１の速度は、距離ｄ１を時間ｔ１で除算することによって、又は距離ｄ２を時間ｔ２で除算することによって推定される。
図２Ｂは、ある特定の実施形態によるフローストリーム内の粒子の速度を判定することを示す。レーザＡ、レーザＢ、及びレーザＣは、フローストリーム２００の位置Ｂが位置Ａから下流にある場合の種々の位置で、フローストリーム２００に照射を行うように構成された空間的に分離された光源である。フローストリーム２００の位置Ｃは、位置Ａ及び位置Ｂから下流にある。一実施形態では、粒子２０１の速度は、距離ｄ１と、位置Ａでの粒子２０１の光照射に応答して生成された信号パルスと位置Ｂでの粒子２０１の光照射に応答して生成された信号パルスとの間の時間の量とに基づいて判定される。別の実施形態では、粒子２０１の速度は、距離ｄ２と、位置Ｂでの粒子２０１の光照射に応答して生成された信号パルスと位置Ｃでの粒子２０１の光照射に応答して生成された信号パルスとの間の時間の量とに基づいて判定される。
実施形態では、各粒子の液滴遅延は、計算された速度と、光源のうちの１つ以上の検査領域とフローセルノズルオリフィスとの間の距離とに基づいて判定される。いくつかの実施形態では、各粒子の液滴遅延は、関心対象の各粒子の計算された速度に、光源のうちの１つ以上の検査領域とフローセルノズルオリフィスとの間の距離を乗算することによって独立に判定される。例えば、ある特定の事例における粒子分析器に応じて、各検査領域とフローセルノズルオリフィスとの間の距離は、１００μｍ以上によることを含めて、０．０５μｍ以上によるなど、０．１μｍ以上によるなど、０．５μｍ以上によるなど、１μｍ以上によるなど、２μｍ以上によるなど、３μｍ以上によるなど、４μｍ以上によるなど、５μｍ以上によるなど、１０μｍ以上によるなど、１５μｍ以上によるなど、２５μｍ以上によるなど、５０μｍ以上によるなど、独立して０．０１μｍ以上である。他の事例では、各検査領域とフローセルノズルオリフィスとの間の距離は、１０μｍ～１００μｍを含む、０．０５μｍ～４５０μｍなど、０．１μｍ～４００μｍなど、０．５μｍ～３５０μｍなど、１μｍ～２００μｍなど、５μｍ～１５０μｍなどの、０．０１μｍ～５００μｍの範囲である。
いくつかの実施形態では、方法は、フローストリーム内の各粒子についての計算された速度及び計算された液滴遅延のうちの１つ以上に基づいて、粒子分析器の１つ以上のパラメータを調整することを含む。いくつかの事例では、フローストリームの流量は、フローストリーム内の各粒子についての計算された速度及び計算された液滴遅延のうちの１つ以上に基づいて増加される。ある特定の事例では、流量は、フローストリームの流量を９９．９％以上だけ増加させることを含めて、５％以上だけなど、１０％以上だけなど、１５％以上だけなど、２５％以上だけなど、５０％以上だけなど、７５％以上だけなど、９０％以上だけなど、９５％以上だけなど、９７％以上だけなど、９９％以上だけなどの、１％以上だけ増加され得る。いくつかの実施形態では、フローストリームの流量は、１０００μＬ／秒以上を含む、２μＬ／秒以上など、５μＬ／秒以上など、１０μＬ／秒以上など、２５μＬ／秒以上など、５０μＬ／秒以上など、１００μＬ／秒以上など、２５０μＬ／秒以上など、５００μＬ／秒以上など、７５０μＬ／秒以上などの、１μＬ／秒以上だけ増加される。他の実施形態では、フローストリームの流量は、フローストリームの流量が１０ｍｍ／秒以上だけ増加される場合を含めて、０．００５ｍｍ／秒以上だけなど、０．０１ｍｍ／秒以上だけなど、０．０５ｍｍ／秒以上だけなど、０．１ｍｍ／秒以上だけなど、０．５ｍｍ／秒以上だけなど、１ｍｍ／秒以上だけなど、５ｍｍ／秒以上などの、０．００１ｍｍ／秒以上だけ増加される。
他の事例では、フローストリームの流量は、フローストリーム内の各粒子についての計算された速度及び計算された液滴遅延のうちの１つ以上に基づいて減少される。ある特定の事例では、流量は、フローストリームの流量を９９．９％以上だけ減少させることを含めて、５％以上だけなど、１０％以上だけなど、１５％以上だけなど、２５％以上だけなど、５０％以上だけなど、７５％以上だけなど、９０％以上だけなど、９５％以上だけなど、９７％以上だけなど、９９％以上だけなどの、１％以上だけ減少され得る。いくつかの実施形態では、フローストリームの流量は、１０００μＬ／秒以上を含む、２μＬ／秒以上など、５μＬ／秒以上など、１０μＬ／秒以上など、２５μＬ／秒以上など、５０μＬ／秒以上など、１００μＬ／秒以上など、２５０μＬ／秒以上など、５００μＬ／秒以上など、７５０μＬ／秒以上などの、１μＬ／秒以上だけ減少される。他の実施形態では、フローストリームの流量は、フローストリームの流量が１０ｍｍ／秒以上だけ減少される場合を含めて、０．００５ｍｍ／秒以上だけなど、０．０１ｍｍ／秒以上だけなど、０．０５ｍｍ／秒以上だけなど、０．１ｍｍ／秒以上だけなど、０．５ｍｍ／秒以上だけなど、１ｍｍ／秒以上だけなど、５ｍｍ／秒以上などの、０．００１ｍｍ／秒以上だけ減少される。
いくつかの実施形態では、方法は、フローストリーム内の各粒子についての計算された速度及び計算された液滴遅延のうちの１つ以上に基づいて、小滴帯電のタイミングを調整することを含む。いくつかの事例では、小滴帯電のタイミングは、５０％以上だけを含めて、０．０５％以上だけなど、０．１％以上だけなど、０．５％以上だけなど、１％以上だけなど、２％以上だけなど、５％以上だけなど、１０％以上だけなど、１５％以上だけなど、２５％以上だけなどの、０．０１％以上だけ遅延され得る。例えば、小滴帯電のタイミングは、フローストリーム内の各粒子についての計算された速度及び計算された液滴遅延に応答して、５００μｓ以上だけ小滴帯電を遅延させることを含めて、フローストリーム内の各粒子についての計算された速度及び計算された液滴遅延に応答して、０．０００５μｓ以上だけなど、０．００１μｓ以上だけなど、０．００５μｓ以上だけなど、０．０１μｓ以上だけなど、０．０５μｓ以上だけなど、０．１μｓ以上だけなど、０．５μｓ以上だけなど、１μｓ以上だけなど、５μｓ以上だけなど、１０μｓ以上だけなど、２５μｓ以上だけなど、５０μｓ以上だけなど、１００μｓ以上だけなどの、０．０００１μｓ以上だけ遅延され得る。他の事例では、小滴帯電のタイミングは、５０％以上だけを含めて、０．０５％以上だけなど、０．１％以上だけなど、０．５％以上だけなど、１％以上だけなど、２％以上だけなど、５％以上だけなど、１０％以上だけなど、１５％以上だけなど、２５％以上だけなどの、０．０１％以上だけ早められ得る。例えば、小滴帯電のタイミングは、フローストリーム内の各粒子についての計算された速度及び計算された液滴遅延に応答して、５００μｓ以上だけを含む、０．０００５μｓ以上だけなど、０．００１μｓ以上だけなど、０．００５μｓ以上だけなど、０．０１μｓ以上だけなど、０．０５μｓ以上だけなど、０．１μｓ以上だけなど、０．５μｓ以上だけなど、１μｓ以上だけなど、５μｓ以上だけなど、１０μｓ以上だけなど、２５μｓ以上だけなど、５０μｓ以上だけなど、１００μｓ以上だけなどの、０．０００１μｓ以上だけ早められるように調整され得る。
他の実施形態では、方法は、フローストリーム内の各粒子についての計算された速度及び計算された液滴遅延のうちの１つ以上に基づいて、液滴駆動周波数を調整することを含む。いくつかの事例では、液滴駆動周波数は、２５Ｈｚ以上だけを含む、０．０１Ｈｚ以上だけなど、０．０５Ｈｚ以上だけなど、０．１Ｈｚ以上だけなど、０．２５Ｈｚ以上だけなど、０．５Ｈｚ以上だけなど、１Ｈｚ以上だけなど、２．５Ｈｚ以上だけなど、５Ｈｚ以上だけなど、１０Ｈｚ以上だけなど増加される。例えば、液滴駆動周波数は、液滴駆動周波数を９０％以上だけ増加させることを含めて、５％以上だけなど、１０％以上だけなど、１５％以上だけなど、２５％以上だけなど、５０％以上だけなど、７５％以上だけなどの、１％以上だけ増加され得る。他の事例では、液滴駆動周波数は、２５Ｈｚ以上だけを含む、０．０１Ｈｚ以上だけなど、０．０５Ｈｚ以上だけなど、０．１Ｈｚ以上だけなど、０．２５Ｈｚ以上だけなど、０．５Ｈｚ以上だけなど、１Ｈｚ以上だけなど、２．５Ｈｚ以上だけなど、５Ｈｚ以上だけなど、１０Ｈｚ以上だけなど低減される。例えば、液滴駆動周波数は、液滴周波数を９０％以上だけ低減することを含めて、５％以上だけなど、１０％以上だけなど、１５％以上だけなど、２５％以上だけなど、５０％以上だけなど、７５％以上だけなどの、１％以上だけ低減され得る。
更に他の実施形態では、方法は、フローストリーム内の各粒子についての計算された速度及び計算された液滴遅延のうちの１つ以上に基づいて、液滴遅延を調整することを含む。いくつかの事例では、液滴遅延は、液滴遅延を１０μｓ以上だけ増加させることを含めて、０．０１μｓ以上だけなど、０．０５μｓ以上だけなど、０．１μｓ以上だけなど、０．３μｓ以上だけなど、０．５μｓ以上だけなど、１μｓ以上だけなど、２．５μｓ以上だけなど、５μｓ以上だけなど、７．５μｓ以上だけなど増加される。例えば、液滴遅延は、液滴遅延を９０％以上だけ増加させることを含めて、５％以上だけなど、１０％以上だけなど、１５％以上だけなど、２５％以上だけなど、５０％以上だけなど、７５％以上だけなどの、１％以上だけ増加され得る。他の事例では、液滴周波数は、液滴遅延を１０μｓ以上だけ低減することを含めて、０．０１μｓ以上だけなど、０．０５μｓ以上だけなど、０．１μｓ以上だけなど、０．３μｓ以上だけなど、０．５μｓ以上だけなど、１μｓ以上だけなど、２．５μｓ以上だけなど、５μｓ以上だけなど、７．５μｓ以上だけなど低減される。例えば、液滴遅延は、液滴遅延を９０％以上だけ低減することを含めて、５％以上だけなど、１０％以上だけなど、１５％以上だけなど、２５％以上だけなど、５０％以上だけなど、７５％以上だけなどの、１％以上だけ低減され得る。
図３は、ある特定の実施形態による、フローストリーム内の試料内の複数の粒子の液滴遅延を判定するためのフローチャートを示す。ステップ３０１において、フローストリーム内の粒子に、第１のレーザで照射が行われる。第１のレーザで照射が行われた粒子からの光がステップ３０２において検出され、信号パルスが第１の光検出器チャネル内で生成される。ステップ３０３において、粒子に、空間的に分離された、かつ第１のレーザから下流の第２のレーザで照射が行われる。第２のレーザで照射が行われた粒子からの光がステップ３０４において検出され、信号パルスが第２の光検出器チャネル内で生成される。ステップ３０５において、粒子の速度は、第１のレーザの照射ポイントと第２のレーザの照射ポイントとの間の距離と、第１の光検出器チャネル内で生成された信号パルスと第２の光検出器チャネル内で生成された信号パルスとの間の時間とに基づいて推定される。粒子の液滴遅延は、ステップ３０６において、推定された速度に基づいて計算される。ある特定の実施形態では、粒子分析器の１つ以上のパラメータが、液滴遅延を増加又は減少させる、フローストリーム流量を増加又は減少させる、小滴帯電タイミングを調整する、及び小滴駆動周波数を調整するなど、推定された粒子速度又は計算された液滴遅延を使用して調整される（ステップ３０７）。
ある特定の実施形態では、方法は、また、試料の粒子をソートすることを含む。「ソートする」という用語は、本明細書では、試料の成分（例えば、細胞を含有する小滴、生体高分子などの非細胞粒子を含有する小滴）を分離すること、いくつかの事例では、分離された成分を１つ以上の試料収集容器に送達することを指すための、その従来の意味で使用される。例えば、方法は、試料の２５個以上の成分をソートすることを含めて、３つ以上の成分など、４つ以上の成分など、５つ以上の成分など、１０個以上の成分など、１５個以上の成分などの、試料の２つ以上の成分をソートすることを含み得る。実施形態では、細胞の生成された画像マスクに基づいて細胞をソートすることを含む方法。
細胞をソートする際に、方法は、コンピュータなどを用いた、データ取得（例えば、試料内の関心対象の各粒子の速度を判定すること、各粒子の液滴遅延を判定することなどによって）、分析、及び記録を含み、複数のデータチャネルは、細胞の画像、画像マスク、又はマスクされた画像（例えば、散乱検出器、明視野光検出器、又は蛍光検出器）を生成する際に使用される各検出器からデータを記録する。これらの実施形態では、分析は、各粒子が、デジタル化されたパラメータ値のセットとして存在するように、粒子を分類し、計数することを含む。（以下に記載の）主題のシステムは、関心対象の粒子を背景及びノイズから区別するために、選択されたパラメータでトリガするように設定され得る。
次いで、関心対象の特定の部分集団が、集団全体について収集されたデータに基づいて、「ゲーティング」によって更に分析され得る。適切なゲートを選択するために、部分集団のできる限り最良の分離を得るように、データがプロットされる。この手順は、前方光散乱（ＦＳＣ）対側方（すなわち、直交）光散乱（ＳＳＣ）を二次元ドットプロット上にプロットすることによって実行され得る。次いで、粒子の部分集団（すなわち、ゲート内のそれらの細胞）が選択され、ゲート内にない粒子が除外される。必要に応じて、コンピュータ画面上のカーソルを使用して、所望の部分集団の周りにラインを描くことによって、ゲートが選択され得る。次いで、ゲート内のそれらの粒子のみが、例えば、蛍光など、これらの粒子の他のパラメータをプロットすることによって、更に分析される。必要に応じて、上記の分析は、試料内の関心対象の粒子の計数をもたらすように構成され得る。
いくつかの実施形態では、方法は、米国特許第第１０，００６，８５２号、同第９，９５２，０７６号、同第９，９３３，３４１号、同第９，７８４，６６１号、同第９，７２６，５２７号、同第９，４５３，７８９号、同第９，２００，３３４号、同第９，０９７，６４０号、同第９，０９５，４９４号、同第９，０９２，０３４号、同第８，９７５，５９５号、同第８，７５３，５７３号、同第８，２３３，１４６号、同第８，１４０，３００号、同第７，５４４，３２６号、同第７，２０１，８７５号、同第７，１２９，５０５号、同第６，８２１，７４０号、同第６，８１３，０１７号、同第６，８０９，８０４号、同第６，３７２，５０６号、同第５，７００，６９２号、同第５，６４３，７９６号、同第５，６２７，０４０号、同第５，６２０，８４２号、同第５，６０２，０３９に記載されたものなどの試料の成分をソートすることを含み、それらの開示全体が、参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、試料の成分をソートするための方法は、米国特許公開第２０１７／０２９９４９３号に記載されたものなどの、密閉型粒子ソーティングモジュールを用いて粒子（例えば、生体試料内の細胞）をソートすることを含み、その開示が、参照により本明細書に組み込まれる。ある特定の実施形態では、試料の粒子（例えば、細胞）は、米国特許公開第２０２０／０２５６７８１号に記載されたものなどの、複数のソート意思決定ユニットを有するソート意思決定モジュールを使用してソートされ、その開示が、参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、試料の成分をソートするための方法は、２０１７年３月２８日に出願された米国特許公開第２０１７／０２９９４９３号に記載されたものなどの、偏光板を有する粒子ソートモジュールを用いて粒子（例えば、生体試料内の細胞）をソートすることを含み、その開示が、参照により本明細書に組み込まれる。
フローストリーム内の複数の粒子の液滴遅延を判定するためのシステム
本開示の態様は、また、フローストリーム内の複数の粒子の液滴遅延を決定するための光源及び光検出システムを有するシステムを含む。実施形態では、システムは、フローストリーム内の複数の粒子に照射を行うように構成された２つ以上の空間的に分離された光源を含む。いくつかの実施形態では、光源は、中断されない光束を提供し、かつ光強度のほとんど又は全く望ましくない変化を伴わずにフローストリーム内の粒子の照射を維持するなどの連続波光源である。いくつかの実施形態では、連続光源は、非パルス化又は非ストロボ照射を放出する。ある特定の実施形態では、連続光源は、実質的に一定の放出光強度を提供する。例えば、連続光源は、照射の時間間隔中に、照射の時間間隔中の放出光強度が０．０００００１％以下だけ変動する場合を含む、９％以下だけなど、８％以下だけなど、７％以下だけなど、６％以下だけなど、５％以下だけなど、４％以下だけなど、３％以下だけなど、２％以下だけなど、１％以下だけなど、０．５％以下だけなど、０．１％以下だけなど、０．０１％以下だけなど、０．００１％以下だけなど、０．０００１％以下だけなど、０．００００１％以下だけなどの、１０％以下だけ変動する照射の時間間隔中の放出光強度を提供し得る。光出力の強度は、光検出器タイプの中でも、走査スリットプロファイラ、電荷結合デバイス（増感型電荷結合デバイスＩＣＣＤなどのＣＣＤ）、測位センサ、電力センサ（例えば、熱電対列電力センサ）、光学電力センサ、エネルギーメータ、デジタルレーザ光度計、レーザダイオード検出器を含むがこれらに限定されない、任意の好都合なプロトコルによって測定することができる。
本開示の態様は、また、フローストリーム内の複数の粒子の液滴遅延を決定するための光源及び光検出システムを有するシステムを含む。実施形態では、システムは、フローストリーム内の複数の粒子に照射を行うように構成された２つ以上の空間的に分離された光源を含む。いくつかの実施形態では、光源は、中断されない光束を提供し、かつ光強度のほとんど又は全く望ましくない変化を伴わずにフローストリーム内の粒子の照射を維持するなどの連続波光源である。いくつかの実施形態では、連続光源は、非パルス化又は非ストロボ照射を放出する。ある特定の実施形態では、連続光源は、実質的に一定の放出光強度を提供する。例えば、連続光源は、照射の時間間隔中に、照射の時間間隔中の放出光強度が０．０００００１％以下だけ変動する場合を含む、９％以下だけなど、８％以下だけなど、７％以下だけなど、６％以下だけなど、５％以下だけなど、４％以下だけなど、３％以下だけなど、２％以下だけなど、１％以下だけなど、０．５％以下だけなど、０．１％以下だけなど、０．０１％以下だけなど、０．００１％以下だけなど、０．０００１％以下だけなど、０．００００１％以下だけなどの、１０％以下だけ変動する照射の時間間隔中の放出光強度を提供し得る。光出力の強度は、光検出器タイプの中でも、走査スリットプロファイラ、電荷結合デバイス（増感型電荷結合デバイスＩＣＣＤなどのＣＣＤ）、測位センサ、電力センサ（例えば、熱電対列電力センサ）、光学電力センサ、エネルギーメータ、デジタルレーザ光度計、レーザダイオード検出器を含むがこれらに限定されない、任意の好都合なプロトコルによって測定することができる。
いくつかの実施形態では、光源は、光が所定の時間間隔で放出されるなどの、１つ以上のパルス光源を含み、各時間間隔は、所定の照射持続時間（すなわち、パルス幅）を有する。ある特定の実施形態では、パルス光源は、周期的な光の点滅で光検出器に照射を行うように構成されている。例えば、各光パルスの周波数は、１００ｋＨｚ以上を含む、０．０００５ｋＨｚ以上など、０．００１ｋＨｚ以上など、０．００５ｋＨｚ以上など、０．０１ｋＨｚ以上など、０．０５ｋＨｚ以上など、０．１ｋＨｚ以上など、０．５ｋＨｚ以上など、１ｋＨｚ以上など、２．５ｋＨｚ以上など、５ｋＨｚ以上など、１０ｋＨｚ以上など、２５ｋＨｚ以上など、５０ｋＨｚ以上などの、０．０００１ｋＨｚ以上であり得る。ある特定の事例では、光源によるパルス照射の周波数は、１ｋＨｚ～１００ｋＨｚを含む、０．００００５ｋＨｚ～９００ｋＨｚなど、０．０００１ｋＨｚ～８００ｋＨｚなど、０．０００５ｋＨｚ～７００ｋＨｚなど、０．００１ｋＨｚ～６００ｋＨｚなど、０．００５ｋＨｚ～５００ｋＨｚなど、０．０１ｋＨｚ～４００ｋＨｚなど、０．０５ｋＨｚ～３００ｋＨｚなど、０．１ｋＨｚ～２００ｋＨｚなどの、０．００００１ｋＨｚ～１０００ｋＨｚの範囲である。各光パルスの光照射の持続時間（すなわち、パルス幅）は、変動してもよく、５００ミリ秒以上を含む、０．０００００５ミリ秒以上など、０．００００１ミリ秒以上など、０．００００５ミリ秒以上など、０．０００１ミリ秒以上など、０．０００５ミリ秒以上など、０．００１ミリ秒以上など、０．００５ミリ秒以上など、０．０１ミリ秒以上など、０．０５ミリ秒以上など、０．１ミリ秒以上など、０．５ミリ秒以上など、１ミリ秒以上など、２ミリ秒以上など、３ミリ秒以上など、４ミリ秒以上など、５ミリ秒以上など、１０ミリ秒以上など、２５ミリ秒以上など、５０ミリ秒以上など、１００ミリ秒以上などの、０．０００００１ミリ秒以上であり得る。例えば、光照射の持続時間は、１０ミリ秒～３００ミリ秒を含む、０．０００００５ミリ秒～９５０ミリ秒など、０．００００１ミリ秒～９００ミリ秒など、０．００００５ミリ秒～８５０ミリ秒など、０．０００１ミリ秒～８００ミリ秒など、０．０００５ミリ秒～７５０ミリ秒など、０．００１ミリ秒～７００ミリ秒など、０．００５ミリ秒～６５０ミリ秒など、０．０１ミリ秒～６００ミリ秒など、０．０５ミリ秒～５５０ミリ秒など、０．１ミリ秒～５００ミリ秒など、０．５ミリ秒～４５０ミリ秒など、１ミリ秒～４００ミリ秒など、５ミリ秒～３５０ミリ秒などの、０．０００００１ミリ秒～１０００ミリ秒の範囲であり得る。
実施形態では、システムは、任意の便利な光源を含んでもよく、レーザ光源及び非レーザ光源を含んでもよい。ある特定の実施形態では、光源は、特定の波長又は狭い範囲の波長を放射する狭帯域光源などの、非レーザ光源である。いくつかの例では、狭帯域光源は、４０ｎｍ以下など、３０ｎｍ以下など、２５ｎｍ以下など、２０ｎｍ以下など、１５ｎｍ以下など、１０ｎｍ以下など、５ｎｍ以下など、２ｎｍ以下などの、例えば５０ｎｍ以下などの狭い範囲の波長を有する光を放出し、特定の波長の光（すなわち、単色光）を放出する光源を含む。狭波長ＬＥＤなどの、任意の便利な狭帯域光源プロトコルが採用されてもよい。
他の実施形態では、光源は、１つ以上の光学バンドパスフィルタ、回折格子、モノクロメータ、又はこれらの任意の組み合わせに結合された、広帯域光源などの、広帯域光源である。いくつかの事例では、広帯域光源は、５００ｎｍ以上に及ぶものを含む、１００ｎｍ以上など、１５０ｎｍ以上など、２００ｎｍ以上など、２５０ｎｍ以上など、３００ｎｍ以上など、３５０ｎｍ以上など、４００ｎｍ以上などの、例えば５０ｎｍ以上に及ぶ、広い範囲の波長を有する光を放出する。例えば、ある好適な広帯域光源は、２００ｎｍ～１５００ｎｍの波長を有する光を放出する。好適な広帯域光源の別の実施例は、４００ｎｍ～１０００ｎｍの波長を有する光を放出する光源を含む。広帯域光源の中でも、ハロゲンランプ、重水素アークランプ、キセノンアークランプ、安定化ファイバ結合広帯域光源、連続スペクトルを有する広帯域ＬＥＤ、超高輝度発光ダイオード、半導体発光ダイオード、広域スペクトルＬＥＤ白色光源、マルチＬＥＤ統合白色光源、又はそれらの任意の組み合わせなど、任意の好都合な広帯域光源プロトコルが採用され得る。ある特定の実施形態では、光源は、ＬＥＤのアレイを含む。ある特定の事例では、光源は、各単色発光ダイオードが異なる波長を有する光を出力する、複数の単色発光ダイオードを含む。いくつかの事例では、光源は、所定のスペクトル幅を有する光を出力する複数の多色発光ダイオードを含み、複数の多色発光ダイオードは、５００ｎｍ～１２００ｎｍを含む、２２５ｎｍ～１４７５ｎｍなど、２５０ｎｍ～１４５０ｎｍなど、２７５ｎｍ～１４２５ｎｍなど、３００ｎｍ～１４００ｎｍなど、３２５ｎｍ～１３７５ｎｍなど、３５０ｎｍ～１３５０ｎｍなど、３７５ｎｍ～１３２５ｎｍなど、４００ｎｍ～１３００ｎｍなど、４２５ｎｍ～１２７５ｎｍなど、４５０ｎｍ～１２５０ｎｍなど、４７５ｎｍ～１２２５ｎｍなどの、２００ｎｍ～１５００ｎｍの範囲のスペクトル幅の範囲を有する光をまとめて出力する。
いくつかの実施形態では、光源は、パルス波レーザ又は連続波レーザなどのレーザである。例えば、レーザは、紫外線ダイオードレーザ、可視ダイオードレーザ、及び近赤外線ダイオードレーザなどのダイオードレーザであってもよい。他の実施形態では、レーザは、ヘリウムネオン（ＨｅＮｅ）レーザであり得る。いくつかの事例では、レーザは、ヘリウムネオンレーザ、アルゴンレーザ、クリプトンレーザ、キセノンレーザ、窒素レーザ、ＣＯ２レーザ、ＣＯレーザ、アルゴンフッ素（ＡｒＦ）エキシマレーザ、クリプトンフッ素（ＫｒＦ）エキシマレーザ、キセノン塩素（ＸｅＣｌ）エキシマレーザ、又はキセノンフッ素（ＸｅＦ）エキシマレーザ、若しくはそれらの組み合わせなどのガスレーザである。他の事例では、主題のシステムは、スチルベンレーザ、クマリンレーザ、又はローダミンレーザなどの色素レーザを含む。更に他の事例では、関心対象のレーザは、ヘリウム－カドミウム（ＨｅＣｄ）レーザ、ヘリウム－水銀（ＨｅＨｇ）レーザ、ヘリウム－セレン（ＨｅＳｅ）レーザ、ヘリウム－銀（ＨｅＡｇ）レーザ、ストロンチウムレーザ、ネオン－銅（ＮｅＣｕ）レーザ、銅レーザ、又は金レーザ、及びそれらの組み合わせなどの金属蒸気レーザを含む。更に他の事例では、主題のシステムは、ルビーレーザ、Ｎｄ：ＹＡＧレーザ、ＮｄＣｒＹＡＧレーザ、Ｅｒ：ＹＡＧレーザ、Ｎｄ：ＹＬＦレーザ、Ｎｄ：ＹＶＯ４レーザ、Ｎｄ：ＹＣａ４Ｏ（ＢＯ３）３レーザ、Ｎｄ：ＹＣＯＢレーザ、チタンサファイアレーザ、スリムＹＡＧレーザ、イッテルビウムＹＡＧレーザ、Ｙｂ２Ｏ３レーザ、又はセリウムドープレーザ、及びそれらの組み合わせなどの固体レーザを含む。
いくつかの実施形態では、光源は、狭帯域幅光源である。いくつかの事例では、光源は、４００ｎｍ～８００ｎｍを含む、２５０ｎｍ～１２５０ｎｍなど、３００ｎｍ～１０００ｎｍなど、３５０ｎｍ～９００ｎｍなどの、２００ｎｍ～１５００ｎｍの特定の波長を出力する光源である。ある特定の実施形態では、連続波光源は、３６５ｎｍ、３８５ｎｍ、４０５ｎｍ、４６０ｎｍ、４９０ｎｍ、５２５ｎｍ、５５０ｎｍ、５８０ｎｍ、６３５ｎｍ、６６０ｎｍ、７４０ｎｍ、７７０ｎｍ、又は８５０ｎｍの波長を有する光を放出する。
いくつかの実施形態では、光源は、例えば、光源の１つ以上の構成要素の出力スペクトルが、２０ｎｍ以上だけを含む、２ｎｍ以上だけなど、３ｎｍ以上だけなど、４ｎｍ以上だけなど、５ｎｍ以上だけなど、６ｎｍ以上だけなど、７ｎｍ以上だけなど、８ｎｍ以上だけなど、９ｎｍ以上だけなど、１０ｎｍ以上だけなどの、１ｎｍ以上だけ重複する場合などの、重複する波長を有する光を放出する。いくつかの実施形態では、光源によって放出される光の波長は、重複を呈さない。例えば、光源の出力スペクトルは、２０ｎｍ以上だけを含む、２ｎｍ以上だけなど、３ｎｍ以上だけなど、４ｎｍ以上だけなど、５ｎｍ以上だけなど、６ｎｍ以上だけなど、７ｎｍ以上だけなど、８ｎｍ以上だけなど、９ｎｍ以上だけなど、１０ｎｍ以上だけなどの、１ｎｍ以上だけ分離され得る。
実施形態では、主題のシステムの光源は、空間的に分離されている。いくつかの実施形態では、システムは、７つ以上の空間的に分離された光源を含む、３つ以上など、４つ以上など、５つ以上など、６つ以上などの、２つ以上の空間的に分離された光源を含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の光源は、７つ以上の空間的に分離されたレーザを含む、３つ以上など、４つ以上など、５つ以上など、６つ以上などの、２つ以上の空間的に分離されたレーザである。各光源は、フローストリーム上の別異する位置に照射を行うように構成されている。いくつかの事例では、光源の各々は、１００μｍ以上だけを含む、０．０５μｍ以上だけなど、０．１μｍ以上だけなど、０．５μｍ以上だけなど、１μｍ以上だけなど、２μｍ以上だけなど、３μｍ以上だけなど、４μｍ以上だけなど、５μｍ以上だけなど、１０μｍ以上だけなど、１５μｍ以上だけなど、２５μｍ以上だけなど、５０μｍ以上だけなどの、０．０１μｍ以上だけ互いに離間したフローストリーム上の位置に独立に照射を行うように構成されている。例えば、光源の各々は、１０μｍ～１００μｍを含む、０．０５μｍ～４５０μｍなど、０．１μｍ～４００μｍなど、０．５μｍ～３５０μｍなど、１μｍ～２００μｍなど、５μｍ～１５０μｍなどの、０．０１μｍ～５００μｍの距離だけ互いに離間したフローストリーム上の位置に独立に照射を行うように構成されている。ある特定の事例では、光源の各々は、５μｍ以下だけ離間したフローストリーム上の位置を含む、９μｍ以下など、８μｍ以下など、７μｍ以下など、６μｍ以下などの、１０μｍ以下だけ互いに離間したフローストリーム上の位置に独立に照射を行うように構成されている。
いくつかの実施形態では、システムは、第１の検査領域内のフローストリームに照射を行うように構成された第１のレーザと、第２の検査領域内の第２のレーザとを含む。各検査領域のサイズは、ノズルオリフィスのサイズ及び試料注入ポートサイズなどの、フローストリームを生成するために使用されるフローノズルの特性に応じて変わり得る。いくつかの実施形態では、検査領域は、１０ｍｍ以上を含む、０．０５ｍｍ以上など、０．１ｍｍ以上など、０．５ｍｍ以上など、１ｍｍ以上など、２ｍｍ以上など、３ｍｍ以上など、５ｍｍ以上などの、０．０１ｍｍ以上である幅を有し得る。検査領域の長さも変わり得、いくつかの事例では、５０ｍｍ以上を含む、０．１ｍｍ以上など、０．５ｍｍ以上など、１ｍｍ以上など、１．５ｍｍ以上など、２ｍｍ以上など、３ｍｍ以上など、５ｍｍ以上など、１０以上など、１５ｍｍ以上など、２０ｍｍ以上など、２５ｍｍ以上などの、０．０１ｍｍ以上に沿った範囲で変わり得る。
ある特定の事例での各検査領域は、発生するフローストリームの平面断面の照射を容易にするように構成され得るか、又は所定の長さの拡散場（例えば、拡散レーザ又はランプによる）の照射を容易にするように構成され得る。いくつかの実施形態では、主題のシステムにおけるフローストリームの検査領域は、１０ｍｍ以上を含む、１ｍｍ以上など、２ｍｍ以上など、３ｍｍ以上など、４ｍｍ以上など、５ｍｍ以上などなどの、発生するフローストリームの所定の長さの照射を容易にする透明窓を含む。（以下に記載のような）発生するフローストリームに照射を行うために使用される光源に応じて、検査領域は、５００ｎｍ～８００ｎｍを含む、１５０ｎｍ～１４００ｎｍなど、２００ｎｍ～１３００ｎｍなど、２５０ｎｍ～１２００ｎｍなど、３００ｎｍ～１１００ｎｍなど、３５０ｎｍ～１０００ｎｍなど、４００ｎｍ～９００ｎｍなどの、１００ｎｍ～１５００ｎｍの範囲の光を通過させるように構成され得る。
各光源は、フローストリームから、１００ｍｍ以上の距離におけるものを含む、０．００５ｍｍ以上など、０．０１ｍｍ以上など、０．０５ｍｍ以上など、０．１ｍｍ以上など、０．５ｍｍ以上など、１ｍｍ以上など、５ｍｍ以上など、１０ｍｍ以上など、２５ｍｍ以上などの、０．００１ｍｍ以上の距離におけるなどの、任意の好適な距離を隔てて位置付けられ得る。加えて、各光源は、フローストリームに対して、３０°～６０°、例えば９０°の角度を含む、１５°～８５°など、２０°～８０°など、２５°～７５°などの、１０°～９０°の範囲の角度になどの、任意の好適な角度に位置付けられてもよい。
ある特定の実施形態による光源は、また、１つ以上の光学調整構成要素を含み得る。「光学調整」という用語は、本明細書では、例えば、照射方向、波長、ビーム幅、ビーム強度、及び焦点などの、光源からの照射の空間幅又は何らかの他の特性を変更することができる任意のデバイスを指すための、その従来の意味で使用される。光学調整プロトコルは、限定されるものではないが、レンズ、ミラー、フィルタ、光ファイバ、波長分離器、ピンホール、スリット、コリメーティングプロトコル、及びそれらの組み合わせを含む、光源の１つ以上の特性を調整する任意の好都合なデバイスであり得る。ある特定の実施形態では、関心対象のシステムは、１つ以上の集束レンズを含む。一例では、集束レンズは、非拡大レンズであってもよい。別の例では、集束レンズは、拡大レンズである。他の実施形態では、関心対象のシステムは、１つ以上のミラーを含む。更に他の実施形態では、関心対象のシステムは、光ファイバを含む。
光学調整構成要素が移動するように構成されている場合、光学調整構成要素は、連続的に、又は離散的な間隔で移動するように構成され得る。いくつかの実施形態では、光学調整構成要素の移動は、連続的である。他の実施形態では、光学調整構成要素は、２５ｍｍ以上の増分を含む、０．０５ミクロン以上など、０．１ミクロン以上など、０．５ミクロン以上など、１ミクロン以上など、１０ミクロン以上など、１００ミクロン以上など、５００ミクロン以上など、１ｍｍ以上、５ｍｍ以上、１０ｍｍ以上などの、例えば０．０１ミクロン以上などの、離散的な間隔で移動可能である。
移動可能な支持ステージに結合されるか、又はモータのタイプの中でも、ステッピングモータ、サーボモータ、ブラシレス電気モータ、ブラシ付きＤＣモータ、マイクロステップドライブモータ、高分解能ステッピングモータを採用したものなどの、モータ作動並進ステージ、リードスクリュー並進アセンブリ、ギア式並進デバイスと直接結合されるなどの、光学調整構成要素構造を移動させるための任意の変位プロトコルが採用されてもよい。
主題のシステムの光検出器は、限定されるものではないが、光検出器の中でも、アクティブピクセルセンサ（ＡＰＳ）、象限フォトダイオード、画像センサ、電荷結合デバイス（ＣＣＤ）、強化電荷結合デバイス（ＩＣＣＤ）、発光ダイオード、フォトンカウンタ、ボロメータ、焦電検出器、光抵抗器、太陽電池、フォトダイオード、光電子増倍管、フォトトランジスタ、量子ドット光伝導体又はフォトダイオード、並びにそれらの組み合わせなどの光センサ又は光検出器を含む、任意の好都合な光検出プロトコルであり得る。ある特定の実施形態では、光検出器は、１ｃｍ２～５ｃｍ２を含む、０．０５ｃｍ２～９ｃｍ２など、０．１ｃｍ２～８ｃｍ２など、０．５ｃｍ２～７ｃｍ２などの、０．０１ｃｍ２～１０ｃｍ２の範囲の各領域の活性な検出表面積を有する光電子増倍管などの光電子増倍管である。
本開示の実施形態では、光検出器は、４００個以上の異なる波長の光を測定することを含めて、５つ以上の異なる波長など、１０個以上の異なる波長など、２５個以上の異なる波長など、５０個以上の異なる波長など、１００個以上の異なる波長など、２００個以上の異なる波長など、３００個以上の異なる波長などの、２つ以上の波長などの、１つ以上の波長の光を測定するように構成され得る。
実施形態では、光検出器は、連続的に、又は離散的な間隔で光を測定するように構成され得る。いくつかの事例では、関心対象の検出器は、光の測定を連続的に行うように構成されている。他の事例では、関心対象の検出器は、１０００ミリ秒毎を含む、０．００１ミリ秒毎、０．０１ミリ秒毎、０．１ミリ秒毎、１ミリ秒毎、１０ミリ秒毎、１００ミリ秒毎、又は何らかの他の間隔毎に光を測定するなど、離散間隔において測定するように構成される。
光検出器は、離散的な各時間間隔中に、１０回以上を含む、２回以上など、３回以上など、５回以上などの、１回以上、光源からの光の測定を行うように構成され得る。ある特定の実施形態では、光源からの光は、光検出器によって２回以上測定され、ある特定の事例では、データが平均化される。
いくつかの実施形態では、光検出システムは、粒子ルミネッセンス（すなわち、蛍光又はリン光）などの、試料内の粒子からの放出光を検出するように構成されている。他の実施形態では、光検出システムは、光検出システムが明視野光検出器を含む場合など、透過光を検出するように構成されている。
ある特定の実施形態では、光検出システムは、散乱光を検出するように構成されている。実施形態では、本開示による散乱光は、蛍光でもリン光でもない。いくつかの実施形態では、主題のシステムの散乱光検出器によって検出される散乱光は、フローストリーム内の粒子によるミー散乱を含む。他の実施形態では、主題のシステムの散乱光検出器によって検出される散乱光は、フローストリーム内の粒子によるレイリー散乱を含む。更に他の実施形態では、主題のシステムの散乱光検出器によって検出される散乱光は、フローストリーム内の粒子によるミー散乱及びレイリー散乱を含む。散乱光検出器は、側方散乱光検出器、前方散乱光検出器、後方散乱光検出器、及びそれらの組み合わせであり得る。
ある特定の実施形態による光検出システムは、非フィルタリング光散乱検出器を含む。「フィルタリング無し」という用語は、本明細書では、試料から光散乱検出器の活性表面への光の１つ以上の波長（例えば、試料に照射を行うために使用されるレーザの光の波長）の伝播を制限、低減、又は別様に限定するように構成された光学構成要素を介して伝達されていない試料からの光を受信する光散乱検出器を指すために使用される。例えば、いくつかの実施形態では、関心対象のフィルタリング無し光散乱検出器は、バンドパスフィルタを介して試料と光通信しない。他の実施形態では、関心対象のフィルタリング無し光散乱検出器は、ダイクロイックミラーを介して試料と光通信しない。ある特定の事例では、試料からの散乱光は、フィルタリング無し光散乱検出器の活性表面に直接伝達される。他の事例では、試料からの散乱光は、光の１つ以上の波長の伝播を低減、制限、又は限定することなく光ビームの方向又は焦点を変化させる光学構成要素などの１つ以上の光伝播光学構成要素を介して、フィルタリング無し光散乱検出器の活性表面に伝達される。ある特定の実施形態では、試料からの散乱光は、１つ以上のビームスプリッタ、ミラー、レンズ、又はコリメータを使用して、フィルタリング無し光散乱検出器の活性表面に伝達される。
いくつかの実施形態では、光検出システムは、１つ以上のフィルタリング有り光散乱検出器を含む。「フィルタリング有り」という用語は、本明細書では、試料から光散乱検出器の活性表面への光の少なくとも１つ以上の波長（例えば、試料に照射を行うために使用されるレーザの光の波長のうちの１つ以上）の伝播を制限、低減、又は限定するように構成された光学構成要素を介して伝達された試料からの光を受信する光散乱検出器を指すために使用される。光散乱光検出器に伝達される光は、５００個以上の異なる波長の光の伝播を限定することを含めて、５つ以上など、１０個以上など、２５個以上など、５０個以上など、１００個以上など、２００個以上、３００個以上などの、１つ以上の異なる波長の光の伝播を限定する光学構成要素を含み得る。例えば、いくつかの実施形態では、試料からの散乱光は、バンドパスフィルタを介してフィルタリング有り光散乱検出器の活性表面に伝達される。他の実施形態では、試料からの散乱光は、ダイクロイックミラーを介してフィルタリング有り光散乱検出器の活性表面に伝達される。
散乱光は、散乱光検出器が光照射の入射ビームに対して１８０°以上の角度で試料内の粒子から光を検出するように構成されている場合を含めて、１０°以上など、１５°以上など、２０°以上など、２５°以上など、３０°以上など、４５°以上など、６０°以上など、７５°以上など、９０°以上など、１３５°以上など、１５０°以上などの、１°以上の角度でなど、光照射の入射ビームに対してある角度で各光検出器によって検出され得る。ある特定の事例では、フィルタリング有り光散乱検出器及びフィルタリング無し光散乱検出器のうちの１つ以上は、光検出器が、６０°～９０°を含む、４５°～１０５°などの、光照射の入射ビームに対して３０°～１２０°に伝播される散乱光を検出するように位置付けられた場合などの、側方散乱光検出器である。ある特定の事例では、フィルタリング有り光散乱検出器及びフィルタリング無し光散乱検出器のうちの１つ以上は、光照射の入射ビームに対して９０°の角度に位置付けられた側方散乱光検出器である。他の事例では、フィルタリング有り光散乱検出器及びフィルタリング無し光散乱検出器のうちの１つ以上は、検出器が、光照射の入射ビームに対して、光照射の入射ビームに対して１４０°～１８０°を含む、１００°～２２０°など、１２０°～２００°などの、１２０°～２４０°に伝播される散乱光を検出するように位置付けられた場合などの、前方散乱検出器である。ある特定の事例では、フィルタリング有り光散乱検出器及びフィルタリング無し光散乱検出器のうちの１つ以上は、光照射の入射ビームに対して１８０°の角度に伝播される散乱光を検出するように位置付けられた前方散乱光検出器である。更に他の事例では、フィルタリング有り光散乱検出器及びフィルタリング無し光散乱検出器のうちの１つ以上は、光照射の入射ビームに対して、光照射の入射ビームに対して１０°～２０°を含む、５°～２５°などの１°～３０°に伝播された散乱光を検出するように位置付けられた後方散乱光検出器である。ある特定の事例では、フィルタリング有り光散乱検出器及びフィルタリング無し光散乱検出器のうちの１つ以上は、光照射の入射ビームに対して３０°の角度に伝播される散乱光を検出するように位置付けられた後方散乱光検出器である。
フローストリームからの光は、１０個以上の光検出器チャネルを含む、３つ以上など、４つ以上など、５つ以上など、６つ以上など、７つ以上など、８つ以上など、９つ以上などの、２つ以上の光検出器チャネル内で検出される。いくつかの実施形態では、光は、フローストリームに照射を行うために使用される各光源（例えば、各レーザ）に対して異なる光検出器内で検出される。例えば、フローストリーム内の粒子に第１のレーザ及び第２のレーザによって照射が行われる場合、第１のレーザによって照射が行われたフローストリーム内の各粒子からの光は、第１の光検出器チャネル内で検出され得、第２のレーザによって照射が行われたフローストリーム内の各粒子からの光は、第２の光検出器チャネル内で検出され得る。ある特定の実施形態では、第１のレーザによって照射が行われたフローストリーム内の各粒子からの散乱光は、第１の光検出器チャネル内で検出され、第２のレーザによって照射が行われたフローストリーム内の各粒子からの散乱光は、第２の光検出器チャネル内で検出される。
いくつかの実施形態では、メモリは、検出された光に応答して、プロセッサに、各光検出器チャネル内で１つ以上の信号パルスを生成させる命令を含む。いくつかの事例では、メモリは、検出された光に応答して、各光検出器チャネル内で１０個以上の信号パルスを生成することを含めて、２つ以上の信号パルスなど、３つ以上の信号パルスなど、４つ以上の信号パルスなど、５つ以上の信号パルスなど、６つ以上の信号パルスなど、７つ以上の信号パルスなど、８つ以上の信号パルスなど、９つ以上の信号パルスなどの、複数の信号パルスを、検出された光に応答して、各光検出器チャネル内で生成さするための命令を含む。いくつかの事例では、メモリは、各光源（例えば、各レーザ）によって照射が行われた粒子から検出された光に応答して、異なる光検出器チャネル内で１つ以上の信号パルスを生成するための命令を含む。例えば、フローストリーム内の粒子に第１のレーザ及び第２のレーザによって照射が行われる場合、メモリは、第１のレーザによって照射が行われた各粒子から検出された光に応答して、第１の光検出器チャネル内で信号パルスを生成するための命令と、第２のレーザによって照射が行われた各粒子から検出された光に応答して、第２の光検出器チャネル内で信号パルスを生成するための命令とを含み得る。
いくつかの実施形態では、メモリは、プロセッサに光検出器信号パルス間の時間の量を判定させる命令を含む。いくつかの事例では、メモリは、１０個以上の異なる光検出器チャネル内の信号パルス間の時間の量を判定するための命令を含む、３つ以上の異なる光検出器チャネルなど、４つ以上の異なる光検出器チャネルなど、５つ以上の異なる光検出器チャネルなど、６つ以上の異なる光検出器チャネルなど、７つ以上の異なる光検出器チャネルなど、８つ以上の異なる光検出器チャネルなど、９つ以上の異なる光検出器チャネルなどの、２つ以上の異なる光検出器チャネル内の信号パルス間の時間の量を判定するための命令を含む。いくつかの事例では、２つ以上の異なる光検出器チャネル内の信号パルス間の時間は、１０００μｓ以上を含む、０．００００５μｓ以上など、０．０００１μｓ以上など、０．０００５μｓ以上など、０．００１μｓ以上など、０．００５μｓ以上など、０．０１μｓ以上など、０．０５μｓ以上など、０．１μｓ以上など、０．５μｓ以上など、１μｓ以上など、５μｓ以上など、１０μｓ以上など、２５μｓ以上など、５０μｓ以上など、１００μｓ以上など、５００μｓ以上などの、０．００００１μｓ以上であり得る。ある特定の事例では、２つ以上の異なる光検出器チャネル内の信号パルス間の時間は、１μｓ～５００μｓを含む、０．０００１μｓ～４０００μｓなど、０．００１μｓ～３０００μｓなど、０．０１μｓ～２０００μｓなど、０．１μｓ～１０００μｓなどの、０．００００１μｓ～５０００μｓの範囲である。
いくつかの実施形態では、メモリは、プロセッサに光検出器信号パルス間のピーク時間の持続時間を判定させる命令を含む。いくつかの事例では、メモリは、１０個以上の異なる光検出器チャネル内の信号パルス間のピーク時間の持続時間を判定するための命令を含む、３つ以上の異なる光検出器チャネルなど、４つ以上の異なる光検出器チャネルなど、５つ以上の異なる光検出器チャネルなど、６つ以上の異なる光検出器チャネルなど、７つ以上の異なる光検出器チャネルなど、８つ以上の異なる光検出器チャネルなど、９つ以上の異なる光検出器チャネルなどの、２つ以上の異なる光検出器チャネル内の信号パルス間のピーク時間の持続時間を判定するための命令を含む。いくつかの事例では、２つ以上の異なる光検出器チャネル内の信号パルス間のピーク時間の持続時間は、１０００μｓ以上を含む、０．００００５μｓ以上など、０．０００１μｓ以上など、０．０００５μｓ以上など、０．００１μｓ以上など、０．００５μｓ以上など、０．０１μｓ以上など、０．０５μｓ以上など、０．１μｓ以上など、０．５μｓ以上など、１μｓ以上など、５μｓ以上など、１０μｓ以上など、２５μｓ以上など、５０μｓ以上など、１００μｓ以上など、５００μｓ以上などの、０．００００１μｓ以上であり得る。ある特定の事例では、２つ以上の異なる光検出器チャネル内の信号パルス間のピーク時間の持続時間は、１μｓ～５００μｓを含む、０．０００１μｓ～４０００μｓなど、０．００１μｓ～３０００μｓなど、０．０１μｓ～２０００μｓなど、０．１μｓ～１０００μｓなどの、０．００００１μｓ～５０００μｓの範囲である。いくつかの実施形態では、メモリは、光検出器チャネルのうちの１０個以上内の信号パルスの一次モーメントを判定することを含めて、３つ以上の光検出器チャネルなど、４つ以上の光検出器チャネルなど、５つ以上の光検出器チャネルなど、６つ以上の光検出器チャネルなど、７つ以上の光検出器チャネルなど、８つ以上の光検出器チャネルなど、９つ以上の光検出器チャネルなどの、２つ以上の光検出器チャネル内の信号パルスの一次モーメントなどの、各々の光検出器チャネル内の信号パルスの一次モーメントをプロセッサに判定させる命令を含む。
いくつかの実施形態では、システムは、メモリを有するプロセッサを含み、メモリは、プロセッサに動作可能に結合されており、メモリは、メモリ上に記憶された命令を有し、命令は、プロセッサによって実行されるときに、プロセッサに、フローストリーム内の関心対象の各粒子の速度を計算させる。いくつかの事例では、メモリは、試料内の５００個以上の粒子の速度を独立に計算することを含めて、試料内の２つ以上の粒子の速度など、試料内の５つ以上の粒子の速度など、試料内の１０個以上の粒子の速度など、試料内の２５個以上の粒子の速度など、試料内の５０個以上の粒子の速度など、試料内の１００個以上の粒子の速度など、試料内の２５０個以上の粒子の速度などの、試料内の１つ以上の粒子の速度を独立に計算するための命令を含む。例えば、メモリは、試料内の粒子のうちの９０％以上の速度を独立に計算するための命令を含む、０．０００５％以上など、０．００１％以上など、０．００５％以上など、０．０１％以上など、０．０５％以上など、０．１％以上など、０．５％以上など、１％以上など、５％以上など、１０％以上など、２５％以上など、５０％以上など、７５％以上などの、試料内の粒子のうちの０．０００１％以上の速度を独立に計算するための命令を含み得る。
いくつかの実施形態では、メモリは、２つ以上の光検出器チャネル内の信号パルス間の時間の量と、２つ以上の検査領域間の距離とに基づいて、各粒子についての速度をプロセッサに計算させる命令を含む。一実施形態では、メモリは、第１の光検出器チャネルからの信号パルスと第２の光検出器チャネルからの信号パルスとの間の時間の量と、第１のレーザの検査領域と第２のレーザの検査領域との間の距離とに基づいて、各粒子についての速度を計算するための命令を含む。いくつかの事例では、メモリは、フローストリーム上の第１のレーザによる照射の位置と、フローストリーム上の第２のレーザによる照射の位置との間の距離に基づいて、第１の検査領域と第２の検査領域との間の距離を判定するための命令を含む。例えば、ある特定の事例における粒子分析器に応じて、第１の検査領域と第２の検査領域との間の距離は、１００μｍ以上によることを含めて、０．０５μｍ以上によるなど、０．１μｍ以上によるなど、０．５μｍ以上によるなど、１μｍ以上によるなど、２μｍ以上によるなど、３μｍ以上によるなど、４μｍ以上によるなど、５μｍ以上によるなど、１０μｍ以上によるなど、１５μｍ以上によるなど、２５μｍ以上によるなど、５０μｍ以上によるなど、０．０１μｍ以上である。他の事例では、第１の検査領域と第２の検査領域との間の距離は、１０μｍ～１００μｍを含む、０．０５μｍ～４５０μｍなど、０．１μｍ～４００μｍなど、０．５μｍ～３５０μｍなど、１μｍ～２００μｍなど、５μｍ～１５０μｍなどの、０．０１μｍ～５００μｍの範囲である。
いくつかの実施形態では、メモリは、計算された速度と、光源のうちの１つ以上の検査領域とフローセルノズルオリフィスとの間の距離とに基づいて、プロセッサに各粒子の液滴遅延を計算させる命令を含む。いくつかの実施形態では、メモリは、関心対象の各粒子の計算された速度に、光源のうちの１つ以上の調査領域とフローセルノズルオリフィスとの間の距離を乗算することによって、各粒子の液滴遅延を独立に判定するための命令を含む。例えば、ある特定の事例における粒子分析器に応じて、各検査領域とフローセルノズルオリフィスとの間の距離は、１００μｍ以上によることを含めて、０．０５μｍ以上によるなど、０．１μｍ以上によるなど、０．５μｍ以上によるなど、１μｍ以上によるなど、２μｍ以上によるなど、３μｍ以上によるなど、４μｍ以上によるなど、５μｍ以上によるなど、１０μｍ以上によるなど、１５μｍ以上によるなど、２５μｍ以上によるなど、５０μｍ以上によるなど、独立して０．０１μｍ以上である。他の事例では、各検査領域とフローセルノズルオリフィスとの間の距離は、１０μｍ～１００μｍを含む、０．０５μｍ～４５０μｍなど、０．１μｍ～４００μｍなど、０．５μｍ～３５０μｍなど、１μｍ～２００μｍなど、５μｍ～１５０μｍなどの、０．０１μｍ～５００μｍの範囲である。
ある特定の実施形態では、システムは、メモリを有するプロセッサを含み、メモリは、プロセッサに動作可能に結合されており、メモリは、メモリ上に記憶された命令を有し、命令は、プロセッサによって実行されるときに、プロセッサに、フローストリーム内の各粒子についての計算された速度と、計算された液滴遅延とのうちの１つ以上に基づいて、粒子分析器の１つ以上のパラメータを調整させる。いくつかの事例では、メモリは、フローストリーム内の各粒子についての計算された速度と、計算された液滴遅延とのうちの１つ以上に基づいて、フローストリームの流量を増加させるための命令を含む。ある特定の事例では、流量は、フローストリームの流量を９９．９％以上だけ増加させることを含めて、５％以上だけなど、１０％以上だけなど、１５％以上だけなど、２５％以上だけなど、５０％以上だけなど、７５％以上だけなど、９０％以上だけなど、９５％以上だけなど、９７％以上だけなど、９９％以上だけなどの、１％以上だけ増加され得る。いくつかの実施形態では、フローストリームの流量は、１０００μＬ／秒以上を含む、２μＬ／秒以上など、５μＬ／秒以上など、１０μＬ／秒以上など、２５μＬ／秒以上など、５０μＬ／秒以上など、１００μＬ／秒以上など、２５０μＬ／秒以上など、５００μＬ／秒以上など、７５０μＬ／秒以上などの、１μＬ／秒以上だけ増加される。他の実施形態では、フローストリームの流量は、フローストリームの流量が１０ｍｍ／秒以上だけ増加される場合を含めて、０．００５ｍｍ／秒以上だけなど、０．０１ｍｍ／秒以上だけなど、０．０５ｍｍ／秒以上だけなど、０．１ｍｍ／秒以上だけなど、０．５ｍｍ／秒以上だけなど、１ｍｍ／秒以上だけなど、５ｍｍ／秒以上だけなどの、０．００１ｍｍ／秒以上だけ増加される。
他の事例では、メモリは、フローストリーム内の各粒子についての計算された速度と、計算された液滴遅延とのうちの１つ以上に基づいて、フローストリームの流量を減少させるための命令を含む。ある特定の事例では、流量は、フローストリームの流量を９９．９％以上だけ減少させることを含めて、５％以上だけなど、１０％以上だけなど、１５％以上だけなど、２５％以上だけなど、５０％以上だけなど、７５％以上だけなど、９０％以上だけなど、９５％以上だけなど、９７％以上だけなど、９９％以上だけなどの、１％以上だけ減少され得る。いくつかの実施形態では、フローストリームの流量は、１０００μＬ／秒以上を含む、２μＬ／秒以上など、５μＬ／秒以上など、１０μＬ／秒以上など、２５μＬ／秒以上など、５０μＬ／秒以上など、１００μＬ／秒以上など、２５０μＬ／秒以上など、５００μＬ／秒以上など、７５０μＬ／秒以上などの、１μＬ／秒以上だけ減少される。他の実施形態では、フローストリームの流量は、フローストリームの流量が１０ｍｍ／秒以上だけ減少される場合を含めて、０．００５ｍｍ／秒以上だけなど、０．０１ｍｍ／秒以上だけなど、０．０５ｍｍ／秒以上だけなど、０．１ｍｍ／秒以上だけなど、０．５ｍｍ／秒以上だけなど、１ｍｍ／秒以上だけなど、５ｍｍ／秒以上などの、０．００１ｍｍ／秒以上だけ減少される。
他の事例では、メモリは、フローストリーム内の各粒子についての計算された速度と、計算された液滴遅延とのうちの１つ以上に基づいて、小滴帯電のタイミングを調整するための命令を含む。いくつかの事例では、小滴帯電のタイミングは、５０％以上だけを含めて、０．０５％以上だけなど、０．１％以上だけなど、０．５％以上だけなど、１％以上だけなど、２％以上だけなど、５％以上だけなど、１０％以上だけなど、１５％以上だけなど、２５％以上だけなどの、０．０１％以上だけ遅延され得る。例えば、小滴帯電のタイミングは、フローストリーム内の各粒子についての計算された速度及び計算された液滴遅延に応答して、５００μｓ以上だけ小滴帯電を遅延させることを含めて、フローストリーム内の各粒子についての計算された速度及び計算された液滴遅延に応答して、０．０００５μｓ以上だけなど、０．００１μｓ以上だけなど、０．００５μｓ以上だけなど、０．０１μｓ以上だけなど、０．０５μｓ以上だけなど、０．１μｓ以上だけなど、０．５μｓ以上だけなど、１μｓ以上だけなど、５μｓ以上だけなど、１０μｓ以上だけなど、２５μｓ以上だけなど、５０μｓ以上だけなど、１００μｓ以上だけなどの、０．０００１μｓ以上だけ遅延され得る。他の事例では、小滴帯電のタイミングは、５０％以上だけを含めて、０．０５％以上だけなど、０．１％以上だけなど、０．５％以上だけなど、１％以上だけなど、２％以上だけなど、５％以上だけなど、１０％以上だけなど、１５％以上だけなど、２５％以上だけなどの、０．０１％以上だけ早められ得る。例えば、小滴帯電のタイミングは、フローストリーム内の各粒子についての計算された速度及び計算された液滴遅延に応答して、５００μｓ以上だけを含む、０．０００５μｓ以上だけなど、０．００１μｓ以上だけなど、０．００５μｓ以上だけなど、０．０１μｓ以上だけなど、０．０５μｓ以上だけなど、０．１μｓ以上だけなど、０．５μｓ以上だけなど、１μｓ以上だけなど、５μｓ以上だけなど、１０μｓ以上だけなど、２５μｓ以上だけなど、５０μｓ以上だけなど、１００μｓ以上だけなどの、０．０００１μｓ以上だけ早められるように調整され得る。
他の事例では、メモリは、フローストリーム内の各粒子についての計算された速度と、計算された液滴遅延とのうちの１つ以上に基づいて、液滴駆動周波数を調整するための命令を含む。いくつかの事例では、液滴駆動周波数は、２５Ｈｚ以上だけを含む、０．０１Ｈｚ以上だけなど、０．０５Ｈｚ以上だけなど、０．１Ｈｚ以上だけなど、０．２５Ｈｚ以上だけなど、０．５Ｈｚ以上だけなど、１Ｈｚ以上だけなど、２．５Ｈｚ以上だけなど、５Ｈｚ以上だけなど、１０Ｈｚ以上だけなど増加される。例えば、液滴駆動周波数は、液滴駆動周波数を９０％以上だけ増加させることを含めて、５％以上だけなど、１０％以上だけなど、１５％以上だけなど、２５％以上だけなど、５０％以上だけなど、７５％以上だけなどの、１％以上だけ増加され得る。他の事例では、液滴駆動周波数は、２５Ｈｚ以上だけを含む、０．０１Ｈｚ以上だけなど、０．０５Ｈｚ以上だけなど、０．１Ｈｚ以上だけなど、０．２５Ｈｚ以上だけなど、０．５Ｈｚ以上だけなど、１Ｈｚ以上だけなど、２．５Ｈｚ以上だけなど、５Ｈｚ以上だけなど、１０Ｈｚ以上だけなど低減される。例えば、液滴駆動周波数は、液滴周波数を９０％以上だけ低減することを含めて、５％以上だけなど、１０％以上だけなど、１５％以上だけなど、２５％以上だけなど、５０％以上だけなど、７５％以上だけなどの、１％以上だけ低減され得る。
他の事例では、メモリは、フローストリーム内の各粒子についての計算された速度と、計算された液滴遅延とのうちの１つ以上に基づいて、液滴遅延を調整するための命令を含む。いくつかの事例では、液滴遅延は、液滴遅延を１０μｓ以上だけ増加させることを含めて、０．０１μｓ以上だけなど、０．０５μｓ以上だけなど、０．１μｓ以上だけなど、０．３μｓ以上だけなど、０．５μｓ以上だけなど、１μｓ以上だけなど、２．５μｓ以上だけなど、５μｓ以上だけなど、７．５μｓ以上だけなど増加される。例えば、液滴遅延は、液滴遅延を９０％以上だけ増加させることを含めて、５％以上だけなど、１０％以上だけなど、１５％以上だけなど、２５％以上だけなど、５０％以上だけなど、７５％以上だけなどの、１％以上だけ増加され得る。他の事例では、液滴周波数は、液滴遅延を１０μｓ以上だけ低減することを含めて、０．０１μｓ以上だけなど、０．０５μｓ以上だけなど、０．１μｓ以上だけなど、０．３μｓ以上だけなど、０．５μｓ以上だけなど、１μｓ以上だけなど、２．５μｓ以上だけなど、５μｓ以上だけなど、７．５μｓ以上だけなど低減される。例えば、液滴遅延は、液滴遅延を９０％以上だけ低減することを含めて、５％以上だけなど、１０％以上だけなど、１５％以上だけなど、２５％以上だけなど、５０％以上だけなど、７５％以上だけなどの、１％以上だけ低減され得る。
いくつかの実施形態では、システムは、フローストリーム内の粒子を伝播するように構成されたフローセルを更に含む。流体試料を試料検査領域に伝播する任意の好都合なフローセルが採用されてもよく、いくつかの実施形態では、フローセルは、長手方向軸を画定する近位円筒形部分と、長手方向軸に対して横方向であるオリフィスを有する平坦な表面で終端する遠位円錐台形部分とを含む。近位円筒形部分の長さ（長手方向軸に沿って測定される）は、４ｍｍ～８ｍｍを含む、１．５ｍｍ～１２．５ｍｍなど、２ｍｍ～１０ｍｍなど、３ｍｍ～９ｍｍなどの、１ｍｍ～１５ｍｍの範囲で変わり得る。遠位円錐台形部分の長さ（長手方向軸に沿って測定される）も同様に、４ｍｍ～７ｍｍを含む、２ｍｍ～９ｍｍなど、３ｍｍ～８ｍｍなどの、１ｍｍ～１０ｍｍの範囲で変わり得る。フローセルノズルチャンバの直径は、いくつかの実施形態では、４ｍｍ～７ｍｍを含む、２ｍｍ～９ｍｍなど、３ｍｍ～８ｍｍなどの、１ｍｍ～１０ｍｍの範囲で変わり得る。
ある特定の事例では、フローセルは、円筒形部分を含まず、フローセル内部チャンバ全体が円錐台形に形成されている。これらの実施形態では、円錐台形内部チャンバの長さ（ノズルオリフィスに対して横方向の長手方向軸に沿って測定される）は、４ｍｍ～８ｍｍを含む、１．５ｍｍ～１２．５ｍｍなど、２ｍｍ～１０ｍｍなど、３ｍｍ～９ｍｍなどの、１ｍｍ～１５ｍｍの範囲であり得る。円錐台形内部チャンバの近位部分の直径は、４ｍｍ～７ｍｍを含む、２ｍｍ～９ｍｍなど、３ｍｍ～８ｍｍなどの、１ｍｍ～１０ｍｍの範囲であり得る。
いくつかの実施形態では、試料フローストリームは、フローセルの遠位縁部でオリフィスから発せられる。フローストリームの所望の特性に応じて、フローセルオリフィスは、任意の好適な形状であってもよく、関心対象の断面形状は、これらに限定されないが、例えば、正方形、長方形、台形、三角形、六角形などの直線断面形状、例えば、円形、楕円形などの曲線断面形状、並びに、例えば、平面上部に結合されている放物線底部などの不規則形状を含む。ある特定の実施形態では、関心対象のフローセルは、円形オリフィスを有する。ノズルオリフィスのサイズは、いくつかの実施形態では、１５０μｍ～５００μｍを含む、２μｍ～１７５００μｍなど、５μｍ～１５０００μｍなど、１０μｍ～１２５００μｍなど、１５μｍ～１００００μｍなど、２５μｍ～７５００μｍなど、５０μｍ～５０００μｍなど、７５μｍ～１０００μｍなど、１００μｍ～７５０μｍなどの、１μｍ～２００００μｍの範囲で変わり得る。特定の実施形態では、ノズルオリフィスは、１００μｍである。
いくつかの実施形態では、フローセルは、試料をフローセルに提供するように構成されている試料注入ポートを含む。実施形態では、試料注入システムは、フローセル内部チャンバに試料の好適なフローを提供するように構成される。フローストリームの所望の特性に応じて、試料注入ポートによってフローセルチャンバに伝達される試料の速度は、１００μＬ／分以上を含む、２μＬ／分以上など、３μＬ／分以上など、５μＬ／分以上など、１０μＬ／分以上など、１５μＬ／分以上など、２５μＬ／分以上など、５０μＬ／分以上などの、１μＬ／分以上であってもよく、いくつかの事例では、試料注入ポートによってフローセルチャンバに伝達される試料の速度は、１００μＬ／秒以上を含む、２μＬ／秒以上など、３μＬ／秒以上など、５μＬ／秒以上など、１０μＬ／秒以上など、１５μＬ／秒以上など、２５μＬ／秒以上など、５０μＬ／秒以上などの、１μＬ／秒以上である。
試料注入ポートは、内部チャンバの壁に位置付けられたオリフィスであってもよく、又は、内部チャンバの近位端に位置付けられた導管であってもよい。試料注入ポートが内部チャンバの壁に位置付けられたオリフィスである場合、試料注入ポートオリフィスは、任意の好適な形状であってもよく、関心対象の断面形状は、限定されるものではないが、例えば、正方形、長方形、台形、三角形、六角形などの直線断面形状、例えば、円形、楕円形などの曲線断面形状、並びに、例えば、平面上部に結合されている放物線底部などの不規則形状を含む。ある特定の実施形態では、試料注入ポートは、円形オリフィスを有する。試料注入ポートオリフィスのサイズは、形状に応じて変わり得、ある特定の事例では、１．２５ｍｍ～１．７５ｍｍ、例えば１．５ｍｍを含む、０．２～３．０ｍｍなど、０．５ｍｍ～２．５ｍｍなど、０．７５ｍｍ～２．２５ｍｍなど、１ｍｍ～２ｍｍなどの、０．１ｍｍ～５．０ｍｍの範囲の開口部を有する。
ある特定の事例では、試料注入ポートは、フローセル内部チャンバの近位端に位置付けられた導管である。例えば、試料注入ポートは、フローセルオリフィスに沿った試料注入ポートのオリフィスを有するように配置された導管であってもよい。試料注入ポートが、フローセルオリフィスに沿って配置された導管である場合、試料注入チューブの断面形状は、任意の好適な形状であってもよく、関心対象の断面形状は、これらに限定されないが、例えば、正方形、長方形、台形、三角形、六角形などの直線断面形状、例えば、円形、楕円形などの曲線断面形状、並びに、例えば、平面上部に結合されている放物線底部などの不規則形状を含む。導管のオリフィスは、形状に応じて変わり得、ある特定の事例では、１．２５ｍｍ～１．７５ｍｍを含む、例えば０．２～３．０ｍｍ、例えば０．５ｍｍ～２．５ｍｍ、０．７５ｍｍ～２．２５ｍｍなど、１ｍｍ～２ｍｍなどの、０．１ｍｍ～５．０ｍｍの範囲の開口部を有し、例えば１．５ｍｍである。試料注入ポートの先端部の形状は、試料注入管の断面形状と同じであるか、又は異なってもよい。例えば、試料注入ポートのオリフィスは、５°のベベル角を含む、２°～９°など、３°～８°など、４°～７°などの、１°～１０°の範囲のベベル角を有する傾斜した先端部を含み得る。
いくつかの実施形態では、フローセルは、また、フローセルにシース流体を提供するように構成されているシース流体注入ポートも含む。実施形態では、シース流体注入システムは、例えば、試料と併せて、フローセル内部チャンバにシース流体のフローを提供して、試料フローストリームを取り囲むシース流体の積層フローストリームを生成するように構成される。フローストリームの所望の特性に応じて、フローセルチャンバに伝達されるシース流体の速度は、２５００μＬ／秒以上を含む、５０μＬ／秒以上など、７５μＬ／秒以上など、１００μＬ／秒以上など、２５０μＬ／秒以上など、５００μＬ／秒以上など、７５０μＬ／秒以上など、１０００μＬ／秒以上などの、２５μＬ／秒以上であってもよい。
いくつかの実施形態では、シース流体注入ポートは、内部チャンバの壁に位置付けられたオリフィスである。シース流体注入ポートオリフィスは、任意の好適な形状であってもよく、関心対象の断面形状は、これらに限定されないが、例えば、正方形、長方形、台形、三角形、六角形などの直線断面形状、例えば、円形、楕円形などの曲線断面形状、並びに、例えば、平面上部に結合されている放物線底部などの不規則形状を含む。試料注入ポートオリフィスのサイズは、形状に応じて変わり得、ある特定の事例では、１．２５ｍｍ～１．７５ｍｍ、例えば１．５ｍｍを含む、例えば０．２～３．０ｍｍ、例えば０．５ｍｍ～２．５ｍｍ、０．７５ｍｍ～２．２５ｍｍなど、１ｍｍ～２ｍｍなどの、０．１ｍｍ～５．０ｍｍの範囲の開口部を有する。
いくつかの実施形態では、システムは、フローセルを通じてフローストリームを伝搬させるためにフローセルと流体連通するポンプを更に含む。フローセルを通るフローストリームのフローを制御するために、任意の好都合な流体ポンププロトコルが、採用されてもよい。ある特定の事例では、システムは、パルスダンパを有する蠕動ポンプなどの、蠕動ポンプを含む。主題のシステム内のポンプは、フローストリーム内の試料から光を検出するために好適な速度でフローセルを通して流体を伝達するように構成されている。いくつかの事例では、フローセル内の試料フローの速度は、１０００μＬ／分以上を含む、２μＬ／分以上など、３μＬ／分以上など、５μＬ／分以上など、１０μＬ／分以上など、２５μＬ／分以上など、５０μＬ／分以上など、７５μＬ／分以上など、１００μＬ／分以上など、２５０μＬ／分以上など、５００μＬ／分以上など、７５０μＬ／分以上などの、１μＬ／分（マイクロリットル毎分）以上である。例えば、システムは、１０μＬ／分～５０μＬ／分を含む、１ｕＬ／分～２５０ｕＬ／分など、１ｕＬ／分～１００ｕＬ／分など、２μＬ／分～９０μＬ／分など、３μＬ／分～８０μＬ／分など、４μＬ／分～７０μＬ／分など、５μＬ／分～６０μＬ／分などの、１μＬ／分～５００μＬ／分の範囲の速度でフローセルを通して試料を流すように構成されたポンプを含み得る。ある特定の実施形態では、フローストリームの流量は、５μＬ／分～６μＬ／分である。
ある特定の実施形態では、主題のシステムは、フローサイトメトリックシステムである。好適なフローサイトメトリシステムは、限定されるものではないが、Ｏｒｍｅｒｏｄ（ｅｄ．）、Ｆｌｏｗ Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ，Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖ．Ｐｒｅｓｓ（１９９７）、Ｊａｒｏｓｚｅｓｋｉ ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．），Ｆｌｏｗ Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ Ｎｏ．９１，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ（１９９７）、Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｆｌｏｗ Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ，３ｒｄ ｅｄ．，Ｗｉｌｅｙ－Ｌｉｓｓ（１９９５）、Ｖｉｒｇｏ，ｅｔ ａｌ．（２０１２）Ａｎｎ Ｃｌｉｎ Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊａｎ；４９（ｐｔ１）：１７－２８、Ｌｉｎｄｅｎ，ｅｔ．ａｌ．，Ｓｅｍｉｎ Ｔｈｒｏｍ Ｈｅｍｏｓｔ．２００４ Ｏｃｔ；３０（５）：５０２－１１、Ａｌｉｓｏｎ，ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｐａｔｈｏｌ，２０１０ Ｄｅｃ；２２２（４）：３３５－３４４、及びＨｅｒｂｉｇ，ｅｔ ａｌ．（２００７）Ｃｒｉｔ Ｒｅｖ Ｔｈｅｒ Ｄｒｕｇ Ｃａｒｒｉｅｒ Ｓｙｓｔ．２４（３）：２０３－２５５に記載されたものを含んでもよく、それらの開示が、参照により本明細書に組み込まれる。ある特定の事例では、関心対象のフローサイトメトリシステムとしては、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ ＦＡＣＳＣａｎｔｏ（商標）ＩＩフローサイトメータ、ＢＤ Ａｃｃｕｒｉ（商標）フローサイトメータ、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ ＦＡＣＳＣｅｌｅｓｔａ（商標）フローサイトメータ、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ ＦＡＣＳＬｙｒｉｃ（商標）フローサイトメータ、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ ＦＡＣＳＶｅｒｓｅ（商標）フローサイトメータ、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ ＦＡＣＳｙｍｐｈｏｎｙ（商標）フローサイトメータ、 ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ ＬＳＲＦｏｒｔｅｓｓａ（商標）フローサイトメータ、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ ＬＳＲＦｏｒｔｅｓｓ（商標）Ｘ－２０フローサイトメータ、及びＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒ（商標）セルソータ、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ ＦＡＣＳＣｏｕｎｔ（商標）セルソータ、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ ＦＡＣＳＬｙｒｉｃ（商標）セルソータ、及びＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｖｉａ（商標）セルソータ、 ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｉｎｆｌｕｘ（商標）セルソータ、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｊａｚｚ（商標）セルソータ、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ Ａｒｉａ（商標）セルソータ、及びＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ ＦＡＣＳＭｅｌｏｄｙ（商標）セルソータなどが挙げられる。
いくつかの実施形態では、主題のシステムは、米国特許第１０，００６，８５２号、同第９，９５２，０７６号、同第９，９３３，３４１号、同第９，７８４，６６１号、同第９，７２６，５２７号、同第９，４５３，７８９号、同第９，２００，３３４号、同第９，０９７，６４０号、同第９，０９５，４９４号、同第９，０９２，０３４号、同第８，９７５，５９５号、同第８，７５３，５７３号、同第８，２３３，１４６号、同第８，１４０，３００号、同第７，５４４，３２６号、同第７，２０１，８７５号、同第７，１２９，５０５号、同第６，８２１，７４０号、同第６，８１３，０１７号、同第６，８０９，８０４号、同第６，３７２，５０６号、同第５，７００，６９２号、同第５，６４３，７９６号、同第５，６２７，０４０号、同第５，６２０，８４２号、同第５，６０２，０３９号に記載されたものなどの粒子ソーティングシステムであり、それらの開示全体が、参照により本明細書に組み込まれる。
いくつかの実施形態では、主題のシステムは、米国特許公開第２０１７／０２９９４９３号に記載されたものなどの、密閉された粒子ソーティングモジュールを用いて粒子をソートするように構成されており、その開示が、参照により、本明細書に組み込まれる。ある特定の実施形態では、試料の粒子（例えば、細胞）は、米国特許公開第２０２０／０２５６７８１号に記載されたものなどの、複数のソート意思決定ユニットを有するソート意思決定モジュールを使用してソートされ、その開示が、参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、主題のシステムは、２０１７年３月２８日に出願された米国特許公開第２０１７／０２９９４９３号に記載されたものなどの、偏向板を有する粒子ソーティングモジュールを含み、その開示が、参照により本明細書に組み込まれる。
ある特定の事例では、関心対象のシステムは、Ｄｉｅｂｏｌｄ，ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ Ｐｈｏｔｏｎｉｃｓ Ｖｏｌ．７（１０）；８０６－８１０（２０１３）に記載されたもの、並びに米国特許第９，４２３，３５３号、同第９，７８４，６６１号、及び同第１０，００６，８５２号、及び米国特許公開第２０１７／０１３３８５７号、及び同第２０１７／０３５０８０３号に記載されたものなどの、高周波タグ付き発光を使用する蛍光撮像（ＦＩＲＥ）によって、フローストリーム内の粒子を撮像するように構成されたフローサイトメトリシステムであり、それらの開示が、参照により本明細書に組み込まれる。
いくつかの実施形態では、システムは、粒子分析システム４０１（図４Ａ）を使用して、粒子を収集容器中に物理的にソートすることの有無にかかわらず、粒子を分析及び特性評価することができる、粒子分析器である。図４Ａは、計算ベースの試料分析及び粒子特性評価のための粒子分析システムの機能ブロック図を示す。いくつかの実施形態では、粒子分析システム４０１は、フローシステムである。図４Ａに示される粒子分析システム４０１は、全体的又は部分的に、本明細書に記載の方法を実行するように構成され得る。粒子分析システム４０１は、流体工学システム４０２を含む。流体工学システム４０２は、試料管４０５と、試料の粒子４０３（例えば、細胞）が共通試料経路４０９に沿って内部を移動する、試料管内の移動流体カラムとを含み得るか、又はそれらと連結され得る。
粒子分析システム４０１は、各粒子が共通試料経路に沿って１つ以上の検出ステーションを通過するときに、各粒子から信号を収集するように構成された検出システム４０４を含む。検出ステーション４０８は、概して、共通試料経路の監視エリア４０７を指す。いくつかの実施態様では、検出は、粒子４０３が監視エリア４０７を通過するときに、それらの粒子の光、又は１つ以上の他の特性を検出することを含み得る。図４Ａでは、１つの監視エリア４０７を有する１つの検出ステーション４０８が示されている。粒子分析システム４０１のいくつかの実施態様は、複数の検出ステーションを含むことができる。更に、いくつかの検出ステーションは、２つ以上の領域を監視することができる。
各信号には、各粒子に対してデータポイントを形成するための信号値が割り当てられる。上述したように、このデータは、事象データと称され得る。データポイントは、粒子に対して測定されたそれぞれの特性の値を含む多次元データポイントであり得る。検出システム４０４は、一連のそのようなデータポイントを第１の時間間隔で収集するように構成されている。
粒子分析システム４０１は、また、制御システム３０６も含むことができる。制御システム４０６は、１つ以上のプロセッサ、振幅制御回路、及び／又は周波数制御回路を含むことができる。示された制御システムは、流体工学システム４０２に動作可能に関連付けられ得る。制御システムは、ポアソン分布、及び第１の期間中に検出システム４０４によって収集されたデータポイントの数に基づいて、第１の期間の少なくとも一部分について計算された信号周波数を生成するように構成され得る。制御システム４０６は、第１の期間の一部分におけるデータポイントの数に基づいて、実験的な信号周波数を生成するように更に構成され得る。制御システム４０６は、追加的に、実験的な信号周波数を、計算された信号周波数又は所定の信号周波数のそれと比較することができる。
図４Ｂは、本発明の例示的な実施形態による、フローサイトメトリのためのシステム４００を示す。このシステム４００は、フローサイトメータ４１０、コントローラ／プロセッサ４９０、及びメモリ４９５を含む。フローサイトメータ４１０は、１つ以上の励起レーザ４１５ａ～４１５ｃ、集束レンズ４２０、フローチャンバ４２５、前方散乱検出器４３０、側方散乱検出器４３５、蛍光収集レンズ４４０、１つ以上のビームスプリッタ４４５ａ～４４５ｇ、１つ以上のバンドパスフィルタ４５０ａ～４５０ｅ、１つ以上のロングパス（「ＬＰ」）フィルタ４５５ａ～４５５ｂ、及び１つ以上の蛍光検出器４６０ａ～４６０ｆを含む。
励起レーザ１１５ａ～ｃは、レーザビームの形態の光を放出する。励起レーザ４１５ａ～４１５ｃから放出されるレーザビームの波長は、図４Ｂの例示的なシステムにおいて、それぞれ、４８８ｎｍ、６３３ｎｍ、及び３２５ｎｍである。レーザビームは、まず、ビームスプリッタ４４５ａ及び４４５ｂのうちの１つ以上を通して導かれる。ビームスプリッタ４４５ａは、４８８ｎｍの光を透過し、６３３ｎｍの光を反射する。ビームスプリッタ４４５ｂは、ＵＶ光（１０～４００ｎｍの範囲の波長を有する光）を透過し、４８８ｎｍ及び６３３ｎｍの光を反射する。
次いで、レーザビームは、集束レンズ４２０に導かれ、集束レンズ４２０は、試料の粒子がフローチャンバ４２５内に位置する流体ストリームの部分上にビームを集束させる。フローチャンバは、調査のために、通常一度に１つ、ストリーム中の粒子を集束レーザビームに誘導する流体工学システムの一部である。フローチャンバは、ベンチトップフローサイトメータ内にフローセルを、又はストリームインエアサイトメータ内にノズル先端部を備えることができる。
レーザビームからの光は、粒子のサイズ、内部構造、及び粒子の上若しくは中に付属されるか若しくは自然に存在する１つ以上の蛍光分子の存在などの粒子の特性に応じて、様々な異なる波長での再放出を伴う回折、屈折、反射、散乱、及び吸収によって、試料内の粒子と相互作用する。蛍光放出、並びに回折光、屈折光、反射光、及び散乱光は、ビームスプリッタ４４５ａ～４４５ｇ、バンドパスフィルタ４５０ａ～４５０ｅ、ロングパスフィルタ４５５ａ～４５５ｂ、及び蛍光収集レンズ４４０のうちの１つ以上を通して、前方散乱検出器４３０、側方散乱検出器４３５、及び１つ以上の蛍光検出器４６０ａ～４６０ｆのうちの１つ以上へと経路設定され得る。
蛍光収集レンズ４４０は、粒子レーザビーム間の相互作用から放出された光を収集し、１つ以上のビームスプリッタ及びフィルタに向けてその光を経路設定する。バンドパスフィルタ４５０ａ～４５０ｅなどのバンドパスフィルタは、狭い波長範囲がフィルタを通過することを可能にする。例えば、バンドパスフィルタ４５０ａは、５１０／２０フィルタである。第１番目の数字は、スペクトル帯域の中心を表す。第２番目の数字は、スペクトル帯域の範囲を提供する。したがって、５１０／２０フィルタは、スペクトル帯域の中心の各側に１０ｎｍ、又は５００ｎｍ～５２０ｎｍに広がる。ショートパスフィルタは、指定された波長以下の光の波長を透過する。ロングパスフィルタ４５５ａ～４５５ｂなどのロングパスフィルタは、指定された波長以上の光の波長を透過する。例えば、６７０ｎｍのロングパスフィルタであるロングパスフィルタ４５５ａは、６７０ｎｍ以上の光を透過する。フィルタは、特定の蛍光色素に対する検出器の特異性を最適化するために選択される場合が多い。それらのフィルタは、検出器に透過された光のスペクトル帯域が蛍光色素の放出ピークに近くなるように構成され得る。
ビームスプリッタは、異なる波長の光を、異なる方向に導く。ビームスプリッタは、ショートパス及びロングパスなどのフィルタ特性によって特徴付けられ得る。例えば、ビームスプリッタ４４５ｇは、６２０ＳＰビームスプリッタであり、これは、ビームスプリッタ４４５ｇが、６２０ｎｍ以下の波長の光を透過し、６２０ｎｍよりも長い波長の光を異なる方向に反射させることを意味する。一実施形態では、ビームスプリッタ４４５ａ～４４５ｇは、ダイクロイックミラーなどの光学ミラーを含むことができる。
前方散乱検出器４３０は、フローセルを通る直接ビームから軸外にわずかに離れて位置付けられ、回折光、粒子を通って又はその周りをほとんど前方方向に移動する励起光を検出するように構成される。前方散乱検出器によって検出された光の強度は、粒子のサイズ全体に依存する。前方散乱検出器は、フォトダイオードを含むことができる。側方散乱検出器４３５は、粒子の表面及び内部構造からの回折光及び反射光を検出するように構成され、粒子構造が複雑になるにつれて増加する傾向がある。粒子に関連付けられた蛍光分子からの蛍光放出は、１つ以上の蛍光検出器４６０ａ～４６０ｆによって検出され得る。側方散乱検出器４３５及び蛍光検出器は、光電子増倍管を含むことができる。前方散乱検出器４３０、側方散乱検出器４３５、及び蛍光検出器で検出された信号は、検出器によって電子信号（電圧）に変換され得る。このデータは、試料に関する情報を提供することができる。
当業者は、本発明の一実施形態によるフローサイトメータが、図４Ｂに示されるフローサイトメータに限定されず、当該技術分野で既知の任意のフローサイトメータを含み得ることを認識する。例えば、フローサイトメータは、様々な波長で、かつ様々な異なる構成で、任意の数のレーザ、ビームスプリッタ、フィルタ、及び検出器を有してもよい。
動作中、フローサイトメータの動作は、コントローラ／プロセッサ４９０によって制御され、検出器からの測定データは、メモリ４９５内に記憶されて、コントローラ／プロセッサ４９０によって処理され得る。明示的には示されていないが、コントローラ／プロセッサ１９０は、検出器に結合されて、その検出器から出力信号を受け取り、また、フローサイトメータ４００の電気構成要素及び電気機械構成要素に結合されて、レーザ、流体流パラメータなどを制御することができる。入力／出力（Ｉ／Ｏ）機能部４９７は、システム内にも提供され得る。メモリ４９５、コントローラ／プロセッサ４９０、及びＩ／Ｏ４９７は、全体的に、フローサイトメータ４１０の不可欠な部分として提供され得る。そのような実施形態では、ディスプレイは、また、フローサイトメータ４００のユーザに実験的なデータを提示するための、Ｉ／Ｏ機能部４９７の一部も形成し得る。代替的に、メモリ４９５及びコントローラ／プロセッサ４９０及びＩ／Ｏ機能部の一部又は全ては、汎用コンピュータなどの１つ以上の外部デバイスの一部であってもよい。いくつかの実施形態では、メモリ４９５及びコントローラ／プロセッサ４９０の一部又は全ては、フローサイトメータ４１０と無線又は有線で通信することができる。メモリ４９５及びＩ／Ｏ４９７と併せて、コントローラ／プロセッサ４９０は、フローサイトメータ実験の調製及び分析に関連する様々な機能を実行するように構成され得る。
図４Ｂに例示されるシステムは、フローセル４２５から各検出器へのビーム経路におけるフィルタ及び／又はスプリッタの構成によって画定されるように、６つの異なる波長帯域（本明細書では、所与の検出器についての「フィルタウィンドウ」と称され得る）内の蛍光を検出する６つの異なる検出器を含む。フローサイトメータ実験に使用される異なる蛍光分子は、それら独自の特性波長帯域の光を放出する。実験に使用される特定の蛍光標識、及びそれらの関連する蛍光放出帯域は、検出器のフィルタウィンドウと概ね一致するように、選択され得る。ただし、より多くの検出器が提供され、かつより多くの標識が利用されるため、フィルタウィンドウと蛍光放出スペクトルとの間の完全な対応は、不可能である。特定の蛍光分子の放出スペクトルのピークは、１つの特定の検出器のフィルタウィンドウ内に存在する場合があるが、その標識の発光スペクトルの一部が、また、１つ以上の他の検出器のフィルタウィンドウとも重複することは、一般的に正しい。これは、こぼれ信号と称され得る。Ｉ／Ｏ４９７は、蛍光標識のパネルを有するフローサイトメータ実験、及び複数のマーカーを有する複数の細胞母集団に関係するデータを受信するように構成され得、各細胞母集団は、複数のマーカーのサブセットを有する。Ｉ／Ｏ４９７は、また、１つ以上のマーカーを１つ以上の細胞母集団に割り当てる生体データ、マーカー濃度データ、発光スペクトルデータ、１つ以上のマーカーに標識を割り当てるデータ、及びサイトメータ構成データも受信するように構成され得る。標識スペクトル特性及びフローサイトメータ構成データなどのフローサイトメータ実験データも、また、メモリ４９５内に記憶され得る。コントローラ／プロセッサ４９０は、マーカーに対する標識の１つ以上の割り当てを評価するように構成され得る。
図５は、生体事象を分析及び表示するための、分析コントローラ５００などの、粒子分析器制御システムの一実施例の機能ブロック図を示す。分析コントローラ５００は、生体事象のグラフィック表示を制御するための様々なプロセスを実施するように構成され得る。
粒子分析器又はソーティングシステム５０２は、生体事象データを取得するように構成され得る。例えば、フローサイトメータは、フローサイトメトリック事象データを生成することができる。粒子分析器５０２は、生体事象データを分析コントローラ５００に提供するように構成され得る。データ通信チャネルが、粒子分析器又はソーティングシステム５０２と分析コントローラ５００との間に含まれ得る。生体事象データは、データ通信チャネルを介して、分析コントローラ５００に提供され得る。
分析コントローラ５００は、粒子分析器又はソーティングシステム５０２から生体事象データを受信するように構成され得る。粒子分析器又はソーティングシステム５０２から受信された生体事象データは、フローサイトメトリック事象データを含むことができる。分析コントローラ５００は、生体事象データの第１のプロットを含むグラフィカル表示を表示デバイス５０６に提供するように構成され得る。分析コントローラ５００は、関心対象の領域を、表示デバイス５０６によって示される生体事象データの母集団の周辺のゲートとして、例えば、第１のプロット上に重ねられて、レンダリングするように更に構成され得る。いくつかの実施形態では、そのゲートは、単一パラメータのヒストグラム又は二変量プロット上に描かれる、関心対象の１個以上の画像領域の論理結合であり得る。いくつかの実施形態では、そのディスプレイを使用して、粒子パラメータ又は飽和した検出器データを表示することができる。
分析コントローラ５００は、ゲート内の表示デバイス５０６上に生体事象データを、ゲートの外側の生体事象データ内の他の事象とは異なって表示するように更に構成され得る。例えば、分析コントローラ５００は、ゲート内に含まれる生体事象データの色を、ゲートの外側の生体事象データの色とは区別するようレンダリングするように構成され得る。表示デバイス５０６は、モニタ、タブレットコンピュータ、スマートフォン、又はグラフィカルインターフェースを提示するように構成されている他の電子デバイスとして、実装され得る。
分析コントローラ５００は、第１の入力デバイスからゲートを識別するゲート選択信号を受信するように構成され得る。例えば、第１の入力デバイスは、マウス５１０として実装され得る。このマウス５１０は、表示デバイス５０６を介して表示又は操作されるゲートを識別する分析コントローラ５００に対して、（例えば、カーソルをそこに位置決めするときに、所望のゲートをクリックすることによって）ゲート選択信号を始動させることができる。いくつかの実施態様では、第１のデバイスは、キーボード５０８、又はタッチスクリーン、入力用ペン、光検出器、若しくは音声認識システムなどの、入力信号を分析コントローラ５００に提供するための他の手段として実装され得る。いくつかの入力デバイスは、複数の入力機能を含み得る。そのような実施態様では、入力機能は、各々、入力デバイスとみなされ得る。例えば、図５に示されるように、マウス５１０は、右マウスボタン及び左マウスボタンを含み得、それらの各々は、起動事象を生成し得る。
この起動事象は、分析コントローラ５００に、データが表示される方法、データのどの部分が実際に表示デバイス５０６上に表示されるかを変更させ、かつ／又は粒子ソーティングの対象の母集団の選択などの更なる処理への入力を提供させ得る。
いくつかの実施形態では、分析コントローラ５００は、ゲート選択がマウス５１０によっていつ始動されたかを検出するように構成され得る。分析コントローラ５００は、プロットの視覚化を自動的に修正して、ゲート制御プロセスを容易にするように更に構成され得る。この修正は、分析コントローラ５００によって受信された生体事象データの特定の分布に基づき得る。
分析コントローラ５００は、記憶デバイス５０４に接続され得る。この記憶デバイス５０４は、分析コントローラ５００から生体事象データを受信及び記憶するように構成され得る。記憶デバイス５０４は、また、分析コントローラ５００からフローサイトメトリック事象データも受信及び記憶するように構成され得る。記憶デバイス５０４は、分析コントローラ５００によって、フローサイトメトリック事象データなどの生体事象データの検索を可能にするように更に構成され得る。
表示デバイス５０６は、分析コントローラ５００から表示データを受信するように構成され得る。表示データは、生体事象データのプロット、及びそのプロットの区画の輪郭を描くゲートを含み得る。表示デバイス５０６は、粒子分析器５０２、記憶デバイス５０４、キーボード５０８、及び／又はマウス５１０からの入力と併せて、分析コントローラ５００から受信した入力に従って提示された情報を変更するように更に構成され得る。
いくつかの実施態様では、分析コントローラ５００は、ユーザインターフェースを生成して、ソーティングのための例示的な事象を受信することができる。例えば、このユーザインターフェースは、例示的な事象又は例示的な画像を受信するための制御を含むことができる。例示的な事象若しくは画像、又は例示的ゲートは、試料についての事象データの収集前に、又は試料の一部分についての事象の初期セットに基づいて提供され得る。
図６Ａは、本明細書に提示される一実施形態による、粒子ソータシステム６００（例えば、粒子分析器又はソーティングシステム５０２）の概略図である。いくつかの実施形態では、粒子ソータシステム６００は、セルソータシステムである。図６Ａに示されるように、液滴形成トランスデューサ６０２（例えば、圧電発振器）は、流体導管６０１に結合されており、流体導管６０１は、ノズル６０３に結合され得るか、ノズル６０３を含み得るか、又はノズル６０３であり得る。流体導管６０１内で、シース流体６０４が、粒子６０９を含む試料流体６０６を流体力学的に集束させて移動流体カラム６０８（例えば、ストリーム）とする。移動流体カラム６０８内で、粒子６０９（例えば、細胞）は、１列縦隊に並べられて、監視エリア６１１（例えば、レーザストリーム交差点）を横切り、照射源６１２（例えば、レーザ）によって照射が行われる。液滴形成トランスデューサ６０２の振動によって、移動流体カラム６０８は、複数の液滴６１０に分断され、そのうちのいくつかは、粒子６０９を含有する。
動作中、検出ステーション６１４（例えば、事象検出器）は、関心対象の粒子（又は関心対象の細胞）が監視エリア６１１を横切るときを識別する。検出ステーション６１４は、タイミング回路６２８に入力供給し、次いで、タイミング回路６２８は、フラッシュ電荷回路６３０に入力供給する。時限液滴遅延（Δｔ）によって通知される液滴分裂ポイントでは、フラッシュ電荷が移動流体カラム６０８に与えられ得、したがって、関心対象の液滴が電荷を担う。関心対象の液滴は、ソートされるべき１つ以上の粒子又は細胞を含み得る。次いで、荷電液滴を、偏向板（図示せず）を作動させることによってソートして、液滴を、収集管、又はウェル若しくはマイクロウェルが特別の関心対象の液滴に関連付けられ得るマルチウェル若しくはマイクロウェル試料プレートなどの、容器内に偏向させることができる。図６Ａに示されるように、液滴は、ドレイン受容器６３８内に収集され得る。
検出システム６１６（例えば、液滴境界検出器）は、関心対象の粒子が監視エリア６１１を通過するときに、液滴駆動信号の位相を自動的に判定する役割を果たす。例示的な液滴境界検出器が、米国特許第７，６７９，０３９号に記載されており、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。検出システム６１６は、機器が、液滴内の検出された各粒子の位置を正確に計算することを可能にする。検出システム６１６は、振幅信号６２０及び／又は位相信号６１８に入力供給し得、振幅信号６２０及び／又は位相信号６１８は、次いで、振幅制御回路６２６及び／又は周波数制御回路６２４に（増幅器６２２を介して）入力供給する。振幅制御回路６２６及び／又は周波数制御回路６２４は、次いで、液滴形成トランスデューサ６０２を制御する。振幅制御回路６２６及び／又は周波数制御回路６２４は、制御システム内に含まれ得る。
いくつかの実装態様では、ソートエレクトロニクス（例えば、検出システム６１６、検出ステーション６１４、及びプロセッサ６４０）は、検出された事象と検出された事象に基づくソート意思決定とを記憶するように構成されたメモリと結合され得る。ソート意思決定は、粒子に対する事象データに含まれ得る。いくつかの実装態様では、検出システム６１６及び検出ステーション６１４は、単一の検出ユニットとして実装され得るか、又は事象測定値が、検出システム６１６若しくは検出ステーション６１４のうちの一方によって収集され、かつ非収集要素に提供され得るように、通信可能に連結され得る。
図６Ｂは、本明細書に提示される一実施形態による、粒子ソータシステムの概略図である。図６Ｂに示される粒子ソータシステム６００は、偏向板６５２及び６５４を含む。バーブ内のストリーム帯電ワイヤを介して電荷が与えられ得る。これにより、分析のために粒子６１０を含有する小滴６１０のストリームが作り出される。粒子に、光散乱及び蛍光情報を生成するために、１つ以上の光源（例えば、レーザ）で照射が行われ得る。粒子についての情報は、ソーティングエレクトロニクス又は他の検出システム（図６Ｂには図示せず）によるなどして分析される。偏向板６５２及び６５４は、独立に制御されて、荷電小滴を誘引又は反発して、小滴を目的の収集受容器（例えば、６７２、６７４、６７６、又は６７８のうちの１つ）に向けて誘導し得る。図６Ｂに示されるように、偏向板６５２及び６５４は、粒子を第１の経路６６２に沿って受容器６７４に向けて、又は第２の経路６６８に沿って受容器６７８に向けて導くように制御され得る。粒子が関心対象でない（例えば、指定されたソート範囲内の散乱又は照明情報を呈さない）場合、偏向板は、粒子がフロー経路６６４に沿って進み続けることを可能にし得る。そのような非荷電の小滴は、吸引器６７０を介してなど、廃棄物容器内に移行し得る。
ソーティングエレクトロニクスは、測定値の収集を始動し、粒子に関する蛍光信号を受信し、偏向板をどのように調整して粒子のソーティングを引き起こすかを決定するために含まれ得る。図６Ｂに示される実施形態の例示的実装態様としては、Ｂｅｃｔｏｎ，Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ（Ｆｒａｎｋｌｉｎ Ｌａｋｅｓ，ＮＪ）によって市販されているＢＤ ＦＡＣＳＡｒｉａ（登録商標）系のフローサイトメータが挙げられる。
コンピュータ制御システム
本開示の態様は、コンピュータ制御システムを更に含み、システムは、完全な自動化又は部分的な自動化のための１つ以上のコンピュータを更に含む。いくつかの実施形態では、システムは、コンピュータプログラムが記憶されたコンピュータ可読記憶媒体を有するコンピュータを含み、コンピュータプログラムは、コンピュータ上にロードされたときに、フローストリーム内の複数の粒子を含む試料に、第１の検査領域内の第１のレーザ及び第２の検査領域内の第２のレーザで照射を行うための命令と、第１の光検出器チャネル及び第２の光検出器チャネル内の各粒子からの光を検出するための命令と、第１の光検出器チャネル及び第２の光検出器チャネル内の検出された光に基づいて、フローストリーム内の各粒子についての速度を計算するための命令と、計算された速度に基づいて、各粒子の液滴遅延を判定するための命令とを含む。
本開示の態様は、コンピュータ制御システムを更に含み、システムは、完全な自動化又は部分的な自動化のための１つ以上のコンピュータを更に含む。いくつかの実施形態では、システムは、コンピュータプログラムが記憶されたコンピュータ可読記憶媒体を有するコンピュータを含み、コンピュータプログラムは、コンピュータ上にロードされたときに、フローストリーム内の複数の粒子を含む試料に、第１の検査領域内の第１のレーザ及び第２の検査領域内の第２のレーザで照射を行うための命令と、第１の光検出器チャネル及び第２の光検出器チャネル内の各粒子からの光を検出するための命令と、第１の光検出器チャネル及び第２の光検出器チャネル内の検出された光に基づいて、フローストリーム内の各粒子についての速度を計算するための命令と、計算された速度に基づいて、各粒子の液滴遅延を判定するための命令とを含む。
実施形態では、システムは、入力モジュール、処理モジュール、及び出力モジュールを含む。主題のシステムは、ハードウェア構成要素及びソフトウェア構成要素の両方を含んでもよく、ハードウェア構成要素は、例えば、サーバの形態で１つ以上のプラットフォームの形態をとってもよく、その結果、システムの機能要素、すなわち、特定のタスク（情報の入出力の管理、情報の処理など）を実行するシステムのそれらの要素は、システムに表される１つ以上のコンピュータプラットフォーム上で及びそれにわたってソフトウェアアプリケーションの実行によって実行されてもよい。
システムは、ディスプレイ及びオペレータ入力デバイスを含んでもよい。オペレータ入力デバイスは、例えば、キーボード、マウスなどであってもよい。処理モジュールは、主題の方法のステップを実行するために記憶された命令を有するメモリにアクセスするプロセッサを含む。処理モジュールは、オペレーティングシステム、グラフィカルユーザインターフェース（ＧＵＩ）コントローラ、システムメモリ、メモリ記憶デバイス、及び入出力コントローラ、キャッシュメモリ、データバックアップユニット、並びに多くの他のデバイスを含み得る。プロセッサは、市販のプロセッサであり得るか、又は利用可能であるか、若しくは利用可能になる他のプロセッサのうちの１つであり得る。プロセッサは、オペレーティングシステムを実行し、オペレーティングシステムは、周知の方法でファームウェア及びハードウェアとインターフェース接続し、当該技術分野で既知であるように、Ｊａｖａ、Ｐｅｒｌ、Ｃ＋＋、他の高級言語又は低級言語、並びにそれらの組み合わせなどの様々なプログラミング言語で記述され得る様々なコンピュータプログラムの機能を、プロセッサが連携及び実行することを容易にする。オペレーティングシステムは、通常、プロセッサと協調して、コンピュータの他の構成要素の機能を調整し、実行する。オペレーティングシステムは、また、全て既知の技術に従って、スケジューリング、入出力制御、ファイル及びデータ管理、メモリ管理、並びに通信制御及び関連サービスを提供する。プロセッサは、任意の好適なアナログ又はデジタルシステムであり得る。いくつかの実施形態では、プロセッサは、第１の光信号及び第２の光信号に基づいて、ユーザが、光源をフローストリームと手動で位置合わせさせることを可能にするアナログ電子機器を含む。いくつかの実施形態では、プロセッサは、例えば、負帰還制御などのフィードバック制御を提供するアナログ電子機器を含む。
システムメモリは、様々な既知又は将来のメモリ記憶デバイスのいずれかであり得る。例としては、任意の一般的に入手可能なランダムアクセスメモリ（ＲＡＭ）、常駐ハードディスク若しくはテープなどの磁気媒体、リードライトコンパクトディスクなどの光学媒体、フラッシュメモリデバイス、又は他のメモリ記憶デバイスが挙げられる。メモリ記憶デバイスは、コンパクトディスクドライブ、テープドライブ、リムーバブルハードディスクドライブ、又はディスクドライブを含む、様々な既知又は将来のデバイスのいずれかであり得る。そのようなタイプのメモリ記憶デバイスは、通常、それぞれ、コンパクトディスク、磁気テープ、リムーバブルハードディスク、又は磁気ディスクなどのプログラム記憶媒体（図示せず）から読み出し、及び／又はプログラム記憶媒体に書き込む。これらのプログラム記憶媒体のいずれか、又は現在使用されている、若しくは後に開発され得る他のものは、コンピュータプログラム製品とみなされ得る。理解されるように、これらのプログラム記憶媒体は、通常、コンピュータソフトウェアプログラム及び／又はデータを記憶する。コンピュータ制御ロジックとも呼ばれるコンピュータソフトウェアプログラムは、通常、システムメモリ、及び／又はメモリ記憶デバイスと併せて使用されるプログラム記憶デバイスに記憶される。
いくつかの実施形態では、コンピュータプログラム製品は、内部に記憶された制御ロジック（プログラムコードを含むコンピュータソフトウェアプログラム）を有するコンピュータ使用可能媒体を備えて記載される。制御ロジックは、プロセッサによって実行されるとコンピュータ、プロセッサに、本明細書に記載された機能を実行させる。他の実施形態では、いくつかの機能は、例えば、ハードウェアステートマシンを使用して、主にハードウェア内に実装される。本明細書に記載される機能を実行するためのハードウェアステートマシンの実装は、関連技術分野の当業者には明らかである。
メモリは、磁気、光学、又はソリッドステート記憶デバイス（磁気若しくは光学ディスク、又はテープ、又はＲＡＭ、又は固定型若しくは携帯型のいずれかの任意の他の好適なデバイスを含む）などの、プロセッサがデータを記憶し、取り出すことができる任意の好適なデバイスであり得る。プロセッサは、必要なプログラムコードを担持するコンピュータ可読媒体から好適にプログラムされた汎用デジタルマイクロプロセッサを含み得る。プログラミングは、通信チャネルを介してプロセッサにリモートで提供され得るか、又はメモリ又は何らかの他の携帯型若しくは固定型のコンピュータ可読記憶媒体などのコンピュータプログラム製品に、メモリと一緒にそれらのデバイスのいずれかを使用して、あらかじめ保存され得る。例えば、磁気又は光学ディスクは、プログラミングを担持し得、ディスクライタ／リーダによって読み取ることができる。本発明のシステムは、例えば、コンピュータプログラム製品の形態のプログラミング、上記の方法を実施する際に使用するためのアルゴリズムも含む。本発明によるプログラミングは、コンピュータ可読媒体、例えば、コンピュータによって直接読み取り及びアクセスすることができる任意の媒体に記録され得る。そのような媒体としては、以下に限定されないが、磁気ディスク、ハードディスク記憶媒体、及び磁気テープなどの磁気記憶媒体、ＣＤ－ＲＯＭなどの光学記憶媒体、ＲＡＭ及びＲＯＭなどの電気記憶媒体、ポータブルフラッシュドライブ、並びに磁気／光学記憶媒体などのこれらのカテゴリのハイブリッドが挙げられる。
プロセッサは、また、リモート位置でユーザと通信するための通信チャネルへのアクセスを有し得る。リモート位置とは、ユーザがシステムと直接接触せず、広域ネットワーク（「ＷＡＮ」）、電話ネットワーク、衛星ネットワーク、又は携帯電話（すなわち、スマートフォン）を含む任意の他の好適な通信チャネルに接続されたコンピュータなど、外部デバイスから入力マネージャに入力情報を中継することを意味する。
いくつかの実施形態では、本開示によるシステムは、通信インターフェースを含むように構成され得る。いくつかの実施形態では、通信インターフェースは、ネットワーク及び／又は別のデバイスと通信するための受信機及び／又は送信機を含む。通信インターフェースは、無線周波数（ＲＦ）通信（例えば、無線周波数特定（ＲＦＩＤ）、ジグビー通信プロトコル、ＷｉＦｉ、赤外線、無線ユニバーサルシリアルバス（ＵＳＢ）、超広帯域（ＵＷＢ）、Ｂｌｕｅｔｏｏｔｈ（登録商標）通信プロトコル、及び符号分割多元接続（ＣＤＭＡ）又はモバイル通信のためのグローバルシステム（ＧＳＭ）などのセルラー通信を含むが、これらに限定されない、有線又は無線通信のために構成され得る。
一実施形態では、通信インターフェースは、主題のシステムと、同様の補完的データ通信のために構成される（例えば、診療所又は病院環境における）コンピュータ端末などの他の外部デバイスとの間のデータ通信を可能にするために、例えば、ＵＳＢポート、ＲＳ－２３２ポート、又は任意の他の好適な電気接続ポートなどの物理ポート又はインターフェースなど、１つ以上の通信ポートを含むように構成される。
一実施形態では、通信インターフェースは、赤外線通信、Ｂｌｕｅｔｏｏｔｈ（登録商標）通信、又は任意の他の好適な無線通信プロトコルのために構成され、主題のシステムが、コンピュータ端末及び／又はネットワーク、通信可能な携帯電話、パーソナルデジタルアシスタント、又はユーザが併せて使用し得る任意の他の通信デバイスなどの、他のデバイスと通信することを可能にする。
一実施形態では、通信インターフェースは、携帯電話ネットワーク、ショートメッセージサービス（ＳＭＳ）、インターネットに接続されたローカルエリアネットワーク（ＬＡＮ）上のパーソナルコンピュータ（ＰＣ）への無線接続、又はＷｉＦｉホットスポットでのインターネットへのＷｉＦｉ接続を介して、インターネットプロトコル（ＩＰ）を利用するデータ転送のための接続を提供するように構成されている。
一実施形態では、主題のシステムは、例えば、８０２．１１若しくはＢｌｕｅｔｏｏｔｈ（登録商標）ＲＦプロトコル、又はＩｒＤＡ赤外線プロトコルなどの共通標準を使用して、通信インターフェースを介してサーバデバイスと無線で通信するように構成されている。サーバデバイスは、スマートフォン、パーソナルデジタルアシスタント（ＰＤＡ）若しくはノートブックコンピュータなどの別のポータブルデバイス、又はデスクトップコンピュータ、アプライアンスなどのより大きなデバイスであってもよい。いくつかの実施形態では、サーバデバイスは、液晶ディスプレイ（ＬＣＤ）などのディスプレイ、並びにボタン、キーボード、マウス、又はタッチスクリーンなどの入力デバイスを有する。
いくつかの実施形態では、通信インターフェースは、上述の通信プロトコル及び／又は機構のうちの１つ以上を使用して、ネットワーク又はサーバデバイスと、主題のシステム内、例えば、任意選択のデータ記憶ユニット内に記憶されたデータを自動的に又は半自動で通信するように構成されている。
出力コントローラは、人間であろうと機械であろうと、ローカルであろうとリモートであろうと、ユーザに情報を提示するための様々な既知の表示デバイスのいずれかのためのコントローラを含み得る。表示デバイスのうちの１つが視覚情報を提供する場合、この情報は、通常、画素のアレイとして論理的及び／又は物理的に編成され得る。グラフィカルユーザインターフェース（ＧＵＩ）コントローラは、システムとユーザとの間にグラフィカル入力及び出力インターフェースを提供するための、及びユーザ入力を処理するための、様々な既知又は将来のソフトウェアプログラムのいずれかを含み得る。コンピュータの機能要素は、システムバスを介して互いに通信し得る。これらの通信のいくつかは、ネットワーク又は他のタイプのリモート通信を使用する代替の実施形態で達成され得る。出力マネージャは、また、既知の技術に従って、例えば、インターネット、電話、又は衛星ネットワークを介して、リモート位置でユーザに、処理モジュールによって生成された情報を提供し得る。出力マネージャによるデータの提示は、様々な既知の技術に従って実施され得る。いくつかの例として、データは、ＳＱＬ、ＨＴＭＬ、若しくはＸＭＬドキュメント、電子メール若しくは他のファイル、又は他の形態のデータを含み得る。データは、ユーザが追加のＳＱＬ、ＨＴＭＬ、ＸＭＬ、又は他のドキュメント若しくはデータをリモートソースから取り出すことができるように、インターネットＵＲＬアドレスを含み得る。主題のシステム内に存在する１つ以上のプラットフォームは、通常、一般的にサーバと称されるコンピュータのクラスのものであるが、任意のタイプの既知のコンピュータプラットフォーム又は将来開発されるタイプであってもよい。また一方、それらは、メインフレームコンピュータ、ワークステーション、又は他のコンピュータタイプであってもよい。それらは、任意の既知又は将来のタイプのケーブル配線、又はネットワーク化されているか、又はされていないかのいずれかの無線システムを含む、他の通信システムを介して接続され得る。それらは、同一場所に配置され得るか、又は物理的に分離され得る。場合により、選定されたコンピュータプラットフォームのタイプ及び／又は構成に応じて、様々なオペレーティングシステムが、コンピュータプラットフォームのいずれかで採用され得る。適切なオペレーティングシステムとしては、Ｗｉｎｄｏｗｓ ＮＴ（登録商標）、Ｗｉｎｄｏｗｓ ＸＰ、Ｗｉｎｄｏｗｓ ７、Ｗｉｎｄｏｗｓ ８、ｉＯＳ、Ｓｕｎ Ｓｏｌａｒｉｓ、Ｌｉｎｕｘ（登録商標）、ＯＳ／４００、Ｃｏｍｐａｑ Ｔｒｕ６４ Ｕｎｉｘ、ＳＧＩ ＩＲＩＸ、Ｓｉｅｍｅｎｓ Ｒｅｌｉａｎｔ Ｕｎｉｘなどが挙げられる。
図７は、ある特定の実施形態による、例示的なコンピューティングデバイス６００の一般的なアーキテクチャを示す。図７に示されるコンピューティングデバイス７００の一般的なアーキテクチャは、コンピュータハードウェア及びソフトウェア構成要素の配置を含む。コンピューティングデバイス７００は、図７に示される要素よりも多くの（又はよりも少ない）要素を含み得る。ただし、有効な開示を提供するためには、これらの一般的に伝統的な要素の全てが、必ずしも示される必要はない。図示のように、コンピューティングデバイス７００は、処理ユニット７１０、ネットワークインターフェース７２０、コンピュータ可読媒体ドライブ７３０、入力／出力デバイスインターフェース７４０、ディスプレイ７５０、及び入力デバイス７６０を含み、それらの全ては、通信バスを経由して互いに通信することができる。ネットワークインターフェース７２０は、１つ以上のネットワーク又はコンピューティングシステムに対するコネクティビティを提供し得る。したがって、処理ユニット７１０は、ネットワークを介して、他のコンピューティングシステム又はサービスから情報及び命令を受信することができる。処理ユニット７１０は、また、メモリ７７０との間でも通信することができ、入力／出力デバイスインターフェース７４０を介して、任意選択のディスプレイ７５０のための出力情報を更に提供することができる。入力／出力デバイスインターフェース７４０は、また、キーボード、マウス、デジタルペン、マイクロフォン、タッチスクリーン、ジェスチャー認識システム、音声認識システム、ゲームパッド、加速度計、ジャイロスコープ、又は他の入力デバイスなどの、任意選択の入力デバイス７６０から入力を受信することもできる。
メモリ７７０は、処理ユニット７１０が順番に実行して１つ以上の実施形態を実施するコンピュータプログラム命令（いくつかの実施形態では、モジュール又は構成要素としてグループ化される）を含むことができる。メモリ７７０は、一般的に、ＲＡＭ、ＲＯＭ、及び／又は他の永続的、補助的、又は非一時的なコンピュータ可読媒体を含む。メモリ７７０は、コンピューティングデバイス７００の一般的な管理及び動作において、処理ユニット７１０によって使用されるためのコンピュータプログラム命令を提供するオペレーティングシステム７７２を記憶することができる。メモリ７７０は、本開示の態様を実装するためのコンピュータプログラム命令及び他の情報を更に含むことができる。
コンピュータ可読記憶媒体
本開示の態様は、主題の方法を実施するための命令を有する非一時的コンピュータ可読記憶媒体を更に含む。コンピュータ可読記憶媒体は、本明細書に記載の方法を実施するためのシステムの完全な自動化又は部分的な自動化のために、１つ以上のコンピュータの上で採用され得る。ある特定の実施形態では、本明細書に記載の方法による命令は、「プログラミング」の形態でコンピュータ可読媒体にコード化され得、この場合、「コンピュータ可読媒体」という用語は、本明細書で使用される場合、実行及び処理のために命令及びデータをコンピュータに提供することに関与する任意の非一時的記憶媒体を指す。好適な非一時的記憶媒体の例は、磁気ディスク、ハードディスク、光ディスク、光磁気ディスク、ＣＤ－ＲＯＭ、ＣＤ－Ｒ、磁気テープ、不揮発性メモリカード、ＲＯＭ、ＤＶＤ－ＲＯＭ、Ｂｌｕｅ－ｒａｙディスク、ソリッドステートディスク、及びネットワーク接続型記憶装置（ＮＡＳ）を含むが、このようなデバイスが、コンピュータの内部にあるか、又は外部にあるかを問わない。情報を含むファイルは、コンピュータ可読媒体に「記憶」することができ、ここで、「記憶」とは、その情報がコンピュータによって後日アクセス可能及び検索可能であるように、その情報を記録することを意味する。本明細書に記載のコンピュータ実施方法は、任意の数のコンピュータプログラミング言語のうちの１つ以上で記述することができるプログラミングを使用して、実行され得る。そのような言語としては、例えば、Ｊａｖａ（Ｓｕｎ Ｍｉｃｒｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ．、Ｓａｎｔａ Ｃｌａｒａ，ＣＡ）、Ｖｉｓｕａｌ Ｂａｓｉｃ（Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ Ｃｏｒｐ．、Ｒｅｄｍｏｎｄ，ＷＡ）、及びＣ＋＋（ＡＴ＆Ｔ Ｃｏｒｐ．、Ｂｅｄｍｉｎｓｔｅｒ，ＮＪ）、並びに任意の多くの他の言語が挙げられる。
本開示の態様は、主題の方法を実施するための命令を有する非一時的コンピュータ可読記憶媒体を更に含む。コンピュータ可読記憶媒体は、本明細書に記載の方法を実施するためのシステムの完全な自動化又は部分的な自動化のために、１つ以上のコンピュータの上で採用され得る。ある特定の実施形態では、本明細書に記載の方法による命令は、「プログラミング」の形態でコンピュータ可読媒体にコード化され得、この場合、「コンピュータ可読媒体」という用語は、本明細書で使用される場合、実行及び処理のために命令及びデータをコンピュータに提供することに関与する任意の非一時的記憶媒体を指す。好適な非一時的記憶媒体の例は、磁気ディスク、ハードディスク、光ディスク、光磁気ディスク、ＣＤ－ＲＯＭ、ＣＤ－Ｒ、磁気テープ、不揮発性メモリカード、ＲＯＭ、ＤＶＤ－ＲＯＭ、Ｂｌｕｅ－ｒａｙディスク、ソリッドステートディスク、及びネットワーク接続型記憶装置（ＮＡＳ）を含むが、このようなデバイスが、コンピュータの内部にあるか、又は外部にあるかを問わない。情報を含むファイルは、コンピュータ可読媒体に「記憶」することができ、ここで、「記憶」とは、その情報がコンピュータによって後日アクセス可能及び検索可能であるように、その情報を記録することを意味する。本明細書に記載のコンピュータ実施方法は、任意の数のコンピュータプログラミング言語のうちの１つ以上で記述することができるプログラミングを使用して、実行され得る。そのような言語としては、例えば、Ｊａｖａ（Ｓｕｎ Ｍｉｃｒｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ．、Ｓａｎｔａ Ｃｌａｒａ，ＣＡ）、Ｖｉｓｕａｌ Ｂａｓｉｃ（Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ Ｃｏｒｐ．、Ｒｅｄｍｏｎｄ，ＷＡ）、及びＣ＋＋（ＡＴ＆Ｔ Ｃｏｒｐ．、Ｂｅｄｍｉｎｓｔｅｒ，ＮＪ）、並びに任意の多くの他の言語が挙げられる。
いくつかの実施形態では、関心対象のコンピュータ可読記憶媒体は、コンピュータ可読記憶媒体上に記憶されたコンピュータプログラムを含み、コンピュータプログラムは、命令であって、コンピュータ上にロードされたときに、フローストリーム内の複数の粒子を含む試料に、第１の検査領域内の第１のレーザ及び第２の検査領域内の第２のレーザで照射を行うためのアルゴリズムと、第１の光検出器チャネル及び第２の光検出器チャネル内の各粒子からの光を検出するためのアルゴリズムと、第１の光検出器チャネル及び第２の光検出器チャネル内の検出された光に基づいて、フローストリーム内の各粒子についての速度を計算するためのアルゴリズムと、計算された速度に基づいて、各粒子の液滴遅延を判定するためのアルゴリズムとを有する命令を含む。
いくつかの実施形態では、非一時的コンピュータ可読記憶媒体は、第１のレーザから下流の位置で、第２のレーザでフローストリームに照射を行うためのアルゴリズムを有する命令を含む。いくつかの事例では、非一時的コンピュータ可読記憶媒体は、第１の光検出器チャネル内で検出された光に応答して、第１の光検出器信号パルスを生成するためのアルゴリズムと、第２の光検出器チャネル内で検出された光に応答して、第２の光検出器信号パルスを生成するためのアルゴリズムとを含む。いくつかの事例では、命令は、第１の光検出器信号パルスと第２の光検出器信号パルスとの間の時間の量を判定するためのアルゴリズムを含む。いくつかの事例では、命令は、第１の光検出器信号パルスと第２の光検出器信号パルスとの間のピーク時間を判定するためのアルゴリズムを含む。いくつかの事例では、命令は、第１の光検出器信号パルス及び第２の光検出器信号パルスの一次モーメントを判定するためのアルゴリズムを含む。いくつかの事例では、命令は、第１の光検出器信号パルスと第２の光検出器信号パルスとの間の時間の量と、第１のレーザと第２のレーザとの間の距離とに基づいて、フローストリーム内の各粒子についての速度を計算するためのアルゴリズムを含む。
いくつかの実施形態では、非一時的コンピュータ可読記憶媒体は、粒子を含有する小滴を生成するためのフローセルノズルを有するフローセルを有する粒子分析器の一部であり、命令は、フローストリーム内の各粒子についての計算された速度に、第１の検査領域又は第２の検査領域とフローセルノズルのオリフィスとの間の距離を乗算することによって、フローストリーム内の各粒子についての液滴遅延を計算するためのアルゴリズムを含む。いくつかの事例では、命令は、フローストリーム内の各粒子についての計算された速度と、計算された液滴遅延とのうちの１つ以上に基づいて、各粒子の液滴遅延を調整するためのアルゴリズムを含む。いくつかの事例では、命令は、フローストリーム内の各粒子についての計算された速度と、計算された液滴遅延とのうちの１つ以上に基づいて、粒子分析器の１つ以上のパラメータを調整するためのアルゴリズムを含む。ある特定の事例では、命令は、フローストリーム内の各粒子についての計算された速度と、計算された液滴遅延とのうちの１つ以上に基づいて、フローストリームの流量を増加させるための命令を含む。他の事例では、命令は、フローストリーム内の各粒子についての計算された速度と、計算された液滴遅延とのうちの１つ以上に基づいて、フローストリームの流量を減少させるための命令を含む。他の事例では、命令は、フローストリーム内の各粒子についての計算された速度に基づいて、小滴帯電のタイミングを調整するためのアルゴリズムを含む。他の事例では、命令は、フローストリーム内の試料に複数のレーザで照射を行うためのアルゴリズムと、複数の光検出器チャネル内の各粒子からの光を検出するためのアルゴリズムと、光検出器チャネルの各々内の検出された光に応答して、光検出器信号パルスを生成するためのアルゴリズムと、光検出器チャネルのうちの２つ以上内の光検出器信号パルスに基づいて、フローストリーム内の各粒子についての速度を計算するためのアルゴリズムとを含む。ある特定の事例では、非一時的コンピュータ可読記憶媒体は、レーザの各々によるフローストリームの照射のタイミングを計算するためのアルゴリズムを有する命令を含む。他の事例では、非一時的コンピュータ可読記憶媒体は、３つ以上の光検出器チャネル内の光検出器信号パルスに基づいて、フローストリーム内の各粒子についての速度を計算するためのアルゴリズムを有する命令を含む。
非一時的コンピュータ可読記憶媒体は、ディスプレイ及びオペレータ入力デバイスを有する１つ以上のコンピュータシステム上で採用され得る。オペレータ入力デバイスは、例えば、キーボード、マウスなどであってもよい。処理モジュールは、主題の方法のステップを実行するために記憶された命令を有するメモリにアクセスするプロセッサを含む。処理モジュールは、オペレーティングシステム、グラフィカルユーザインターフェース（ＧＵＩ）コントローラ、システムメモリ、メモリ記憶デバイス、及び入出力コントローラ、キャッシュメモリ、データバックアップユニット、並びに多くの他のデバイスを含み得る。プロセッサは、市販のプロセッサであり得るか、又は利用可能であるか、若しくは利用可能になる他のプロセッサのうちの１つであり得る。プロセッサは、オペレーティングシステムを実行し、オペレーティングシステムは、周知の方法でファームウェア及びハードウェアとインターフェース接続し、当該技術分野で既知であるように、Ｊａｖａ、Ｐｅｒｌ、Ｃ＋＋、他の高級言語又は低級言語、並びにそれらの組み合わせなどの様々なプログラミング言語で記述され得る様々なコンピュータプログラムの機能を、プロセッサが連携及び実行することを容易にする。オペレーティングシステムは、通常、プロセッサと協調して、コンピュータの他の構成要素の機能を調整し、実行する。オペレーティングシステムは、また、全て既知の技術に従って、スケジューリング、入出力制御、ファイル及びデータ管理、メモリ管理、並びに通信制御及び関連サービスを提供する。
集積回路デバイス
本開示の態様は、また、本明細書に記載の方法に従って、フローストリーム内の試料内の複数の照射が行われた粒子の液滴遅延を判定するための集積回路を含む。ある特定の実施形態による集積回路は、第１の光検出器チャネル内の照射が行われた粒子から検出された光と、第２の光検出器チャネル内で検出された光とに基づいて、フローストリーム内の試料内の各粒子についての速度を計算するためのプログラミングと、計算された速度に基づいて、各粒子の液滴遅延を判定するためのプログラミングとを含む。いくつかの実施形態では、集積回路は、フィールドプログラマブルゲートアレイ（ＦＰＧＡ）である。いくつかの実施形態では、集積回路は、特定用途向け集積回路（ＡＳＩＣ）である。いくつかの実施形態では、集積回路は、複合プログラマブルロジックデバイス（ＣＰＬＤ）である。
本開示の態様は、また、本明細書に記載の方法に従って、フローストリーム内の試料内の複数の照射が行われた粒子の液滴遅延を判定するための集積回路を含む。ある特定の実施形態による集積回路は、第１の光検出器チャネル内の照射が行われた粒子から検出された光と、第２の光検出器チャネル内で検出された光とに基づいて、フローストリーム内の試料内の各粒子についての速度を計算するためのプログラミングと、計算された速度に基づいて、各粒子の液滴遅延を判定するためのプログラミングとを含む。いくつかの実施形態では、集積回路は、フィールドプログラマブルゲートアレイ（ＦＰＧＡ）である。いくつかの実施形態では、集積回路は、特定用途向け集積回路（ＡＳＩＣ）である。いくつかの実施形態では、集積回路は、複合プログラマブルロジックデバイス（ＣＰＬＤ）である。
いくつかの実施形態では、集積回路は、第１の光検出器からの信号パルスと第２の光検出器からの信号パルスとの間の時間の量を判定するためのプログラミングを含む。いくつかの事例では、集積回路は、第１の光検出器信号パルスと第２の光検出器信号パルスとの間のピーク時間を判定するためのプログラミングを含む。いくつかの事例では、集積回路は、第１の光検出器信号パルス及び第２の光検出器信号パルスの一次モーメントを判定するためのプログラミングを含む。いくつかの実施形態では、集積回路は、第１の光検出器信号パルスと第２の光検出器信号パルスとの間の時間の量に基づいて、フローストリーム内の各粒子についての速度を計算するためのプログラミングを含む。いくつかの実施形態では、集積回路は、フローストリーム内の各粒子についての計算された速度に、フローストリームの検査領域と、粒子を含有する小滴を生成するように構成されたフローセルノズルのオリフィスとの間の距離を乗算することによって、各粒子の液滴遅延を計算するためのプログラミングを含む。
ある特定の実施形態では、集積回路は、フローストリーム内の各粒子についての計算された速度と、計算された液滴遅延とのうちの１つ以上に基づいて、各粒子についての液滴遅延を調整するためのプログラミングを含む。いくつかの事例では、集積回路は、フローストリーム内の各粒子についての計算された速度と、計算された液滴遅延とのうちの１つ以上に基づいて、粒子分析器の１つ以上のパラメータを調整するためのプログラミングを含む。いくつかの事例では、集積回路は、フローストリーム内の各粒子についての計算された速度と、計算された液滴遅延とのうちの１つ以上に基づいて、フローストリームの流量を増加させるためのプログラミングを含む。他の事例では、集積回路は、フローストリーム内の各粒子についての計算された速度と、計算された液滴遅延とのうちの１つ以上に基づいて、フローストリームの流量を減少させるためのプログラミングを含む。他の事例では、集積回路は、フローストリーム内の各粒子についての計算された速度と、計算された液滴遅延とのうちの１つ以上に基づいて、小滴帯電のタイミングを調整するためのプログラミングを含む。
キット
主題のシステムの１つ以上の構成要素を有するキットもまた提供される。ある特定の実施形態によるキットは、２つの連続波レーザなどの２つ以上の光源と、光検出器（例えば、光電子増倍管）とを含む。キットは、また、フローセルノズル、及びフローストリームに照射を行うためのキュベットを含んでもよい。キットは、また、レンズ、ミラー、フィルタ、光ファイバ、波長分離器、ピンホール、スリット、コリメーティングプロトコル、及びそれらの組み合わせなどの光調整構成要素を含んでもよい。
主題のシステムの１つ以上の構成要素を有するキットもまた提供される。ある特定の実施形態によるキットは、２つの連続波レーザなどの２つ以上の光源と、光検出器（例えば、光電子増倍管）とを含む。キットは、また、フローセルノズル、及びフローストリームに照射を行うためのキュベットを含んでもよい。キットは、また、レンズ、ミラー、フィルタ、光ファイバ、波長分離器、ピンホール、スリット、コリメーティングプロトコル、及びそれらの組み合わせなどの光調整構成要素を含んでもよい。
上記の構成要素に加えて、主題のキットは、主題の方法を実施するための命令を（ある特定の実施形態では）更に含み得る。これらの説明書は、様々な形態で主題のキット内に存在し得、そのうちの１つ以上が、キット内に存在し得る。これらの説明書が存在し得る１つの形態は、例えば、情報が印刷される１枚又は複数枚の紙などの好適な媒体又は基板上、キットのパッケージ中、添付文書などの中の印刷情報としてである。これらの説明書の更に別の形態は、情報が記録されたコンピュータ可読媒体、例えば、ディスケット、コンパクトディスク（ＣＤ）、ポータブルフラッシュドライブなどである。存在し得る、これらの説明書の更に別の形態は、隔たったサイトで情報にアクセスするために、インターネットを介して使用され得るウェブサイトアドレスである。
有用性
主題の方法、システム、及びコンピュータシステムは、粒子の識別、特性評価、及びソーティングを最適化することが望ましい、様々な用途での使用を見出す。主題の方法及びシステムは、リアルタイムで動的な粒子速度及び液滴遅延決定を提供する。本開示は、また、フローサイトメトリにおける使用も見出され、ここでは改善されたセルソーティング精度、強化された粒子収集、低減されたエネルギー消費、粒子帯電効率、より正確な粒子帯電、及びセルソーティング中の強化された粒子偏向を有するフローサイトメータを提供することが望ましい。実施形態では、本開示は、フローサイトメータによる試料分析中のユーザ入力又は手動調整の必要性を低減させる。ある特定の実施形態では、主題の方法及びシステムは、完全に自動化されたプロトコルを提供し、その結果、使用中のフローサイトメータへの調整が、任意のヒト入力があっても、ほとんど必要としない。
主題の方法、システム、及びコンピュータシステムは、粒子の識別、特性評価、及びソーティングを最適化することが望ましい、様々な用途での使用を見出す。主題の方法及びシステムは、リアルタイムで動的な粒子速度及び液滴遅延決定を提供する。本開示は、また、フローサイトメトリにおける使用も見出され、ここでは改善されたセルソーティング精度、強化された粒子収集、低減されたエネルギー消費、粒子帯電効率、より正確な粒子帯電、及びセルソーティング中の強化された粒子偏向を有するフローサイトメータを提供することが望ましい。実施形態では、本開示は、フローサイトメータによる試料分析中のユーザ入力又は手動調整の必要性を低減させる。ある特定の実施形態では、主題の方法及びシステムは、完全に自動化されたプロトコルを提供し、その結果、使用中のフローサイトメータへの調整が、任意のヒト入力があっても、ほとんど必要としない。
添付の特許請求の範囲にかかわらず、本明細書に記載される開示は、以下の付記によっても定義される。
１．粒子分析器内のフローストリーム内の複数の粒子についての液滴遅延を判定するための方法であって、
フローストリーム内の複数の粒子を含む試料に、第１の検査領域内の第１のレーザ及び第２の検査領域内の第２のレーザで照射を行うことと、
第１の光検出器チャネル及び第２の光検出器チャネル内の各粒子からの光を検出することと、
第１の光検出器チャネル及び第２の光検出器チャネル内の検出された光に基づいて、フローストリーム内の各粒子についての速度を計算することと、
粒子についての計算された速度に基づいて、各粒子の液滴遅延を判定することと
を含む、方法。
２．第２のレーザが、第１のレーザから下流の位置で、フローストリームに照射を行うように構成されている、付記１に記載の方法。
３．第２のレーザが、第１のレーザから２００μｍ以下の下流の位置で、フローストリームに照射を行うように構成されている、付記２に記載の方法。
４．第１の光検出器チャネル内で検出された光に応答して、第１の光検出器信号パルスを生成することと、
第２の光検出器チャネル内で検出された光に応答して、第２の光検出器信号パルスを生成することと
を含む、付記１～３のいずれか一つに記載の方法。
５．第１の光検出器信号パルスと第２の光検出器信号パルスとの間の時間の量を判定することを更に含む、付記４に記載の方法。
フローストリーム内の複数の粒子を含む試料に、第１の検査領域内の第１のレーザ及び第２の検査領域内の第２のレーザで照射を行うことと、
第１の光検出器チャネル及び第２の光検出器チャネル内の各粒子からの光を検出することと、
第１の光検出器チャネル及び第２の光検出器チャネル内の検出された光に基づいて、フローストリーム内の各粒子についての速度を計算することと、
粒子についての計算された速度に基づいて、各粒子の液滴遅延を判定することと
を含む、方法。
２．第２のレーザが、第１のレーザから下流の位置で、フローストリームに照射を行うように構成されている、付記１に記載の方法。
３．第２のレーザが、第１のレーザから２００μｍ以下の下流の位置で、フローストリームに照射を行うように構成されている、付記２に記載の方法。
４．第１の光検出器チャネル内で検出された光に応答して、第１の光検出器信号パルスを生成することと、
第２の光検出器チャネル内で検出された光に応答して、第２の光検出器信号パルスを生成することと
を含む、付記１～３のいずれか一つに記載の方法。
５．第１の光検出器信号パルスと第２の光検出器信号パルスとの間の時間の量を判定することを更に含む、付記４に記載の方法。
６．第１の光検出器信号パルスと第２の光検出器信号パルスとの間のピーク時間を判定することを更に含む、付記４に記載の方法。
７．第１の光検出器信号パルス及び第２の光検出器信号パルスの一次モーメントを判定することを更に含む、付記４に記載の方法。
８．各光検出器信号パルスが、電圧パルスである、付記４～７のいずれか一つに記載の方法。
９．粒子から検出される光が、散乱光である、付記１～８のいずれか一つに記載の方法。
１０．第１の光検出器チャネル内で検出された光が、第１のレーザによって照射が行われた粒子からの散乱光を含む、付記９に記載の方法。
７．第１の光検出器信号パルス及び第２の光検出器信号パルスの一次モーメントを判定することを更に含む、付記４に記載の方法。
８．各光検出器信号パルスが、電圧パルスである、付記４～７のいずれか一つに記載の方法。
９．粒子から検出される光が、散乱光である、付記１～８のいずれか一つに記載の方法。
１０．第１の光検出器チャネル内で検出された光が、第１のレーザによって照射が行われた粒子からの散乱光を含む、付記９に記載の方法。
１１．第２の光検出器チャネル内で検出された光が、第２のレーザによって照射が行われた粒子からの散乱光を含む、付記９又は１０に記載の方法。
１２．フローストリーム内の各粒子についての速度が、
第１の光検出器信号パルスと第２の光検出器信号パルスとの間の時間の量と、
第１のレーザの検査領域と第２のレーザの検査領域との間の距離と
に基づいて計算される、付記４～１１のいずれか一つに記載の方法。
１３．粒子分析器が、各粒子を含有する小滴を生成するためのフローセルノズルを有するフローセルを備える、付記１～１２のいずれか一つに記載の方法。
１４．各粒子についての液滴遅延が、フローストリーム内の各粒子についての計算された速度に、第１の検査領域又は第２の検査領域とフローセルノズルのオリフィスとの間の距離を乗算することによって判定される、付記１３に記載の方法。
１５．フローストリーム内の各粒子についての計算された速度と、計算された液滴遅延とのうちの１つ以上に基づいて、各粒子についての液滴遅延を調整することを更に含む、付記１～１４のいずれか一つに記載の方法。
１２．フローストリーム内の各粒子についての速度が、
第１の光検出器信号パルスと第２の光検出器信号パルスとの間の時間の量と、
第１のレーザの検査領域と第２のレーザの検査領域との間の距離と
に基づいて計算される、付記４～１１のいずれか一つに記載の方法。
１３．粒子分析器が、各粒子を含有する小滴を生成するためのフローセルノズルを有するフローセルを備える、付記１～１２のいずれか一つに記載の方法。
１４．各粒子についての液滴遅延が、フローストリーム内の各粒子についての計算された速度に、第１の検査領域又は第２の検査領域とフローセルノズルのオリフィスとの間の距離を乗算することによって判定される、付記１３に記載の方法。
１５．フローストリーム内の各粒子についての計算された速度と、計算された液滴遅延とのうちの１つ以上に基づいて、各粒子についての液滴遅延を調整することを更に含む、付記１～１４のいずれか一つに記載の方法。
１６．フローストリーム内の各粒子についての計算された速度及び計算された液滴遅延のうちの１つ以上に基づいて、粒子分析器の１つ以上のパラメータを調整することを更に含む、付記１～１４のいずれか一つに記載の方法。
１７．フローストリーム内の各粒子についての計算された速度及び計算された液滴遅延のうちの１つ以上に基づいて、フローストリームの流量を増加させることを含む、付記１６に記載の方法。
１８．フローストリーム内の各粒子についての計算された速度及び計算された液滴遅延のうちの１つ以上に基づいて、フローストリームの流量を減少させることを含む、付記１６に記載の方法。
１９．フローストリーム内の各粒子についての計算された速度及び計算された液滴遅延のうちの１つ以上に基づいて、小滴帯電のタイミングを調整することを含む、付記１６～１８のいずれか一つに記載の方法。
２０．フローストリーム内の試料に複数のレーザで照射を行うことと、
複数の光検出器チャネル内の各粒子からの光を検出することと、
光検出器チャネルの各々内の検出された光に応答して、光検出器信号パルスを生成することと、
２つ以上の光検出器チャネル内の光検出器信号パルスに基づいて、試料内の各粒子についての速度を計算することと
を含む、付記１～１９のいずれか一つに記載の方法。
１７．フローストリーム内の各粒子についての計算された速度及び計算された液滴遅延のうちの１つ以上に基づいて、フローストリームの流量を増加させることを含む、付記１６に記載の方法。
１８．フローストリーム内の各粒子についての計算された速度及び計算された液滴遅延のうちの１つ以上に基づいて、フローストリームの流量を減少させることを含む、付記１６に記載の方法。
１９．フローストリーム内の各粒子についての計算された速度及び計算された液滴遅延のうちの１つ以上に基づいて、小滴帯電のタイミングを調整することを含む、付記１６～１８のいずれか一つに記載の方法。
２０．フローストリーム内の試料に複数のレーザで照射を行うことと、
複数の光検出器チャネル内の各粒子からの光を検出することと、
光検出器チャネルの各々内の検出された光に応答して、光検出器信号パルスを生成することと、
２つ以上の光検出器チャネル内の光検出器信号パルスに基づいて、試料内の各粒子についての速度を計算することと
を含む、付記１～１９のいずれか一つに記載の方法。
２１．複数のレーザが、互いに２００μｍ以下離間した位置で、フローストリームに照射を行うように構成されている、付記２０に記載の方法。
２２．複数のレーザが、
第１のレーザから下流の位置で、フローストリームに照射を行うように構成された第２のレーザと、
第２のレーザから下流の位置で、フローストリームに照射を行うように構成された第３のレーザと、
第３のレーザから下流の位置で、フローストリームに照射を行うように構成された第４のレーザと
を備える、付記２０又は２１に記載の方法。
２３．レーザの各々によるフローストリームの照射のタイミングを計算することを更に含む、付記２０～２２のいずれか一つに記載の方法。
２４．フローストリーム内の各粒子についての速度が、３つ以上の光検出器チャネル内の光検出器信号パルスに基づいて計算される、付記２０～２３のいずれか一つに記載の方法。
２５．レーザのうちの１つ以上が、連続波レーザである、付記１～２４のいずれか一つに記載の方法。
２２．複数のレーザが、
第１のレーザから下流の位置で、フローストリームに照射を行うように構成された第２のレーザと、
第２のレーザから下流の位置で、フローストリームに照射を行うように構成された第３のレーザと、
第３のレーザから下流の位置で、フローストリームに照射を行うように構成された第４のレーザと
を備える、付記２０又は２１に記載の方法。
２３．レーザの各々によるフローストリームの照射のタイミングを計算することを更に含む、付記２０～２２のいずれか一つに記載の方法。
２４．フローストリーム内の各粒子についての速度が、３つ以上の光検出器チャネル内の光検出器信号パルスに基づいて計算される、付記２０～２３のいずれか一つに記載の方法。
２５．レーザのうちの１つ以上が、連続波レーザである、付記１～２４のいずれか一つに記載の方法。
２６．フローストリーム内の各粒子についての速度が、集積回路上で計算される、付記１～２５のいずれか一つに記載の方法。
２７．各粒子の液滴遅延が、集積回路上で判定される、付記１～２６のいずれか一つに記載の方法。
２８．集積回路が、フィールドプログラマブルゲートアレイである、付記２６又は２７に記載の方法。
２７．各粒子の液滴遅延が、集積回路上で判定される、付記１～２６のいずれか一つに記載の方法。
２８．集積回路が、フィールドプログラマブルゲートアレイである、付記２６又は２７に記載の方法。
２９．粒子分析器であって、
第１のレーザ及び第２のレーザを備える光源であって、フローストリーム内の複数の粒子を含む試料に、第１の検査領域内の第１のレーザ及び第２の検査領域内の第２のレーザで照射を行うように構成されている、光源と、
第１の光検出器チャネル及び第２の光検出器チャネル内の試料内の各粒子からの光を検出するように構成された光検出器を備える、光検出システムと、
プロセッサであって、プロセッサに動作可能に結合されたメモリを備え、メモリが、メモリ上に記憶された命令を有し、命令が、プロセッサによって実行されるときに、プロセッサに、
第１の光検出器チャネル及び第２の光検出器チャネル内の検出された光に基づいて、フローストリーム内の各粒子についての速度を計算することと、
粒子についての計算された速度に基づいて、各粒子の液滴遅延を判定することと
を行わせる、プロセッサと
を備える、粒子分析器。
３０．第２のレーザが、第１のレーザから下流の位置で、フローストリームに照射を行うように構成されている、付記２９に記載の粒子分析器。
３１．第２のレーザが、第１のレーザから２００μｍ以下の下流の位置で、フローストリームに照射を行うように構成されている、付記３０に記載の粒子分析器。
３２．メモリが、メモリ上に記憶された命令を有し、命令が、プロセッサによって実行されるときに、プロセッサに、
第１の光検出器チャネル内で検出された光に応答して、第１の光検出器信号パルスを生成することと、
第２の光検出器チャネル内で検出された光に応答して、第２の光検出器信号パルスを生成することと
を行わせる、付記２９～３１のいずれか一つに記載の粒子分析器。
３３．メモリが、メモリ上に記憶された命令を有し、命令が、プロセッサによって実行されるときに、プロセッサに、第１の光検出器信号パルスと第２の光検出器信号パルスとの間の時間の量を判定させる、付記３２に記載の粒子分析器。
第１のレーザ及び第２のレーザを備える光源であって、フローストリーム内の複数の粒子を含む試料に、第１の検査領域内の第１のレーザ及び第２の検査領域内の第２のレーザで照射を行うように構成されている、光源と、
第１の光検出器チャネル及び第２の光検出器チャネル内の試料内の各粒子からの光を検出するように構成された光検出器を備える、光検出システムと、
プロセッサであって、プロセッサに動作可能に結合されたメモリを備え、メモリが、メモリ上に記憶された命令を有し、命令が、プロセッサによって実行されるときに、プロセッサに、
第１の光検出器チャネル及び第２の光検出器チャネル内の検出された光に基づいて、フローストリーム内の各粒子についての速度を計算することと、
粒子についての計算された速度に基づいて、各粒子の液滴遅延を判定することと
を行わせる、プロセッサと
を備える、粒子分析器。
３０．第２のレーザが、第１のレーザから下流の位置で、フローストリームに照射を行うように構成されている、付記２９に記載の粒子分析器。
３１．第２のレーザが、第１のレーザから２００μｍ以下の下流の位置で、フローストリームに照射を行うように構成されている、付記３０に記載の粒子分析器。
３２．メモリが、メモリ上に記憶された命令を有し、命令が、プロセッサによって実行されるときに、プロセッサに、
第１の光検出器チャネル内で検出された光に応答して、第１の光検出器信号パルスを生成することと、
第２の光検出器チャネル内で検出された光に応答して、第２の光検出器信号パルスを生成することと
を行わせる、付記２９～３１のいずれか一つに記載の粒子分析器。
３３．メモリが、メモリ上に記憶された命令を有し、命令が、プロセッサによって実行されるときに、プロセッサに、第１の光検出器信号パルスと第２の光検出器信号パルスとの間の時間の量を判定させる、付記３２に記載の粒子分析器。
３４．メモリが、メモリ上に記憶された命令を有し、命令が、プロセッサによって実行されるときに、プロセッサに、第１の光検出器信号パルスと第２の光検出器信号パルスとの間のピーク時間を判定させる、付記３２に記載の粒子分析器。
３５．メモリが、メモリ上に記憶された命令を有し、命令が、プロセッサによって実行されるときに、プロセッサに、第１の光検出器信号パルス及び第２の光検出器信号パルスの一次モーメントを判定させる、付記３２に記載の粒子分析器。
３６．各光検出器信号パルスが、電圧パルスである、付記３２～３５のいずれか一つに記載の粒子分析器。
３７．光検出器が、粒子からの散乱光を検出するように構成されている、付記２９～３６のいずれか一つに記載の粒子分析器。
３８．第１の光検出器チャネル内で検出された光が、第１のレーザによって照射が行われた粒子からの散乱光を含む、付記３７に記載の粒子分析器。
３５．メモリが、メモリ上に記憶された命令を有し、命令が、プロセッサによって実行されるときに、プロセッサに、第１の光検出器信号パルス及び第２の光検出器信号パルスの一次モーメントを判定させる、付記３２に記載の粒子分析器。
３６．各光検出器信号パルスが、電圧パルスである、付記３２～３５のいずれか一つに記載の粒子分析器。
３７．光検出器が、粒子からの散乱光を検出するように構成されている、付記２９～３６のいずれか一つに記載の粒子分析器。
３８．第１の光検出器チャネル内で検出された光が、第１のレーザによって照射が行われた粒子からの散乱光を含む、付記３７に記載の粒子分析器。
３９．第２の光検出器チャネル内で検出された光が、第２のレーザによって照射が行われた粒子からの散乱光を含む、付記３７又は３８に記載の粒子分析器。
４０．メモリが、メモリ上に記憶された命令を有し、命令が、プロセッサによって実行されるときに、プロセッサに、
第１の光検出器信号パルスと第２の光検出器信号パルスとの間の時間の量と、第１のレーザの検査領域と第２のレーザの検査領域との間の距離とに基づいて、フローストリーム内の各粒子についての速度を計算させる、付記３２～３９のいずれか一つに記載の粒子分析器。
４１．粒子分析器が、各粒子を含有する小滴を生成するためのフローセルノズルを有するフローセルを備える、付記２９～４０のいずれか一つに記載の粒子分析器。
４２．メモリが、メモリ上に記憶された命令を有し、命令が、プロセッサによって実行されるときに、プロセッサに、フローストリーム内の各粒子についての計算された速度に、第１の検査領域又は第２の検査領域とフローセルノズルのオリフィスとの間の距離を乗算することによって、フローストリーム内の各粒子についての液滴遅延を計算させる、付記４１に記載の粒子分析器。
４３．メモリが、メモリ上に記憶された命令を有し、命令が、プロセッサによって実行されるときに、プロセッサに、フローストリーム内の各粒子についての計算された速度と、計算された液滴遅延とのうちの１つ以上に基づいて、各粒子についての液滴遅延を調整させる、付記２９～４２のいずれか一つに記載の粒子分析器。
４０．メモリが、メモリ上に記憶された命令を有し、命令が、プロセッサによって実行されるときに、プロセッサに、
第１の光検出器信号パルスと第２の光検出器信号パルスとの間の時間の量と、第１のレーザの検査領域と第２のレーザの検査領域との間の距離とに基づいて、フローストリーム内の各粒子についての速度を計算させる、付記３２～３９のいずれか一つに記載の粒子分析器。
４１．粒子分析器が、各粒子を含有する小滴を生成するためのフローセルノズルを有するフローセルを備える、付記２９～４０のいずれか一つに記載の粒子分析器。
４２．メモリが、メモリ上に記憶された命令を有し、命令が、プロセッサによって実行されるときに、プロセッサに、フローストリーム内の各粒子についての計算された速度に、第１の検査領域又は第２の検査領域とフローセルノズルのオリフィスとの間の距離を乗算することによって、フローストリーム内の各粒子についての液滴遅延を計算させる、付記４１に記載の粒子分析器。
４３．メモリが、メモリ上に記憶された命令を有し、命令が、プロセッサによって実行されるときに、プロセッサに、フローストリーム内の各粒子についての計算された速度と、計算された液滴遅延とのうちの１つ以上に基づいて、各粒子についての液滴遅延を調整させる、付記２９～４２のいずれか一つに記載の粒子分析器。
４４．メモリが、メモリ上に記憶された命令を有し、命令が、プロセッサによって実行されるときに、プロセッサに、フローストリーム内の各粒子についての計算された速度と、計算された液滴遅延とのうちの１つ以上に基づいて、粒子分析器の１つ以上のパラメータを調整させる、付記２９～４３のいずれか一つに記載の粒子分析器。
４５．メモリが、メモリ上に記憶された命令を有し、命令が、プロセッサによって実行されるときに、プロセッサに、フローストリーム内の各粒子についての計算された速度と、計算された液滴遅延とのうちの１つ以上に基づいて、フローストリームの流量を増加させる、付記４４に記載の粒子分析器。
４６．メモリが、メモリ上に記憶された命令を有し、命令が、プロセッサによって実行されるときに、プロセッサに、フローストリーム内の各粒子についての計算された速度と、計算された液滴遅延とのうちの１つ以上に基づいて、フローストリームの流量を減少させる、付記４４に記載の粒子分析器。
４７．メモリが、メモリ上に記憶された命令を有し、命令が、プロセッサによって実行されるときに、プロセッサに、フローストリーム内の各粒子についての計算された速度と、計算された液滴遅延とのうちの１つ以上に基づいて、小滴帯電のタイミングを調整させる、付記４５又は４６に記載の粒子分析器。
４８．システムが、
複数のレーザを備える光源と、
複数の光検出器チャネル内の粒子からの光を検出するように構成された光検出器を備える光検出システムと、
プロセッサであって、プロセッサに動作可能に結合されたメモリを備え、メモリが、メモリ上に記憶された命令を有し、命令が、プロセッサによって実行されるときに、プロセッサに、
光検出器チャネルの各々内の検出された光に応答して、光検出器信号パルスを生成することと、
光検出器チャネルのうちの２つ以上内の光検出器信号パルスに基づいて、試料内の各粒子についての速度を計算することと
を行わせる、プロセッサと
を備える、付記２９～４７のいずれか一つに記載の粒子分析器。
４５．メモリが、メモリ上に記憶された命令を有し、命令が、プロセッサによって実行されるときに、プロセッサに、フローストリーム内の各粒子についての計算された速度と、計算された液滴遅延とのうちの１つ以上に基づいて、フローストリームの流量を増加させる、付記４４に記載の粒子分析器。
４６．メモリが、メモリ上に記憶された命令を有し、命令が、プロセッサによって実行されるときに、プロセッサに、フローストリーム内の各粒子についての計算された速度と、計算された液滴遅延とのうちの１つ以上に基づいて、フローストリームの流量を減少させる、付記４４に記載の粒子分析器。
４７．メモリが、メモリ上に記憶された命令を有し、命令が、プロセッサによって実行されるときに、プロセッサに、フローストリーム内の各粒子についての計算された速度と、計算された液滴遅延とのうちの１つ以上に基づいて、小滴帯電のタイミングを調整させる、付記４５又は４６に記載の粒子分析器。
４８．システムが、
複数のレーザを備える光源と、
複数の光検出器チャネル内の粒子からの光を検出するように構成された光検出器を備える光検出システムと、
プロセッサであって、プロセッサに動作可能に結合されたメモリを備え、メモリが、メモリ上に記憶された命令を有し、命令が、プロセッサによって実行されるときに、プロセッサに、
光検出器チャネルの各々内の検出された光に応答して、光検出器信号パルスを生成することと、
光検出器チャネルのうちの２つ以上内の光検出器信号パルスに基づいて、試料内の各粒子についての速度を計算することと
を行わせる、プロセッサと
を備える、付記２９～４７のいずれか一つに記載の粒子分析器。
４９．複数のレーザが、互いに２００μｍ以下離間した位置で、フローストリームに照射を行うように構成されている、付記４８に記載の粒子分析器。
５０．複数のレーザが、
第１のレーザから下流の位置で、フローストリームに照射を行うように構成された第２のレーザと、
第２のレーザから下流の位置で、フローストリームに照射を行うように構成された第３のレーザと、
第３のレーザから下流の位置で、フローストリームに照射を行うように構成された第４のレーザと
を備える、付記４８又は４９に記載の粒子分析器。
５１．メモリが、メモリ上に記憶された命令を有し、命令が、プロセッサによって実行されるときに、プロセッサに、レーザの各々によるフローストリームの照射のタイミングを計算させる、付記４８～５０のいずれか一つに記載の粒子分析器。
５２．メモリが、メモリ上に記憶された命令を有し、命令が、プロセッサによって実行されるときに、プロセッサに、３つ以上の光検出器チャネル内の光検出器信号パルスに基づいて、フローストリーム内の各粒子についての速度を計算させる、付記４８～５１のいずれか一つに記載の粒子分析器。
５３．レーザのうちの１つ以上が、連続波レーザである、付記２９～５２のいずれか一つに記載の粒子分析器。
５０．複数のレーザが、
第１のレーザから下流の位置で、フローストリームに照射を行うように構成された第２のレーザと、
第２のレーザから下流の位置で、フローストリームに照射を行うように構成された第３のレーザと、
第３のレーザから下流の位置で、フローストリームに照射を行うように構成された第４のレーザと
を備える、付記４８又は４９に記載の粒子分析器。
５１．メモリが、メモリ上に記憶された命令を有し、命令が、プロセッサによって実行されるときに、プロセッサに、レーザの各々によるフローストリームの照射のタイミングを計算させる、付記４８～５０のいずれか一つに記載の粒子分析器。
５２．メモリが、メモリ上に記憶された命令を有し、命令が、プロセッサによって実行されるときに、プロセッサに、３つ以上の光検出器チャネル内の光検出器信号パルスに基づいて、フローストリーム内の各粒子についての速度を計算させる、付記４８～５１のいずれか一つに記載の粒子分析器。
５３．レーザのうちの１つ以上が、連続波レーザである、付記２９～５２のいずれか一つに記載の粒子分析器。
５４．粒子分析器が、フローストリーム内の各粒子についての速度を計算するようにプログラムされた集積回路を備える、付記２９～５３のいずれか一つに記載の粒子分析器。
５５．粒子分析器が、フローストリーム内の各粒子についての液滴遅延を計算するようにプログラムされた集積回路を備える、付記２９～５４のいずれか一つに記載の粒子分析器。
５６．集積回路が、フィールドプログラマブルゲートアレイである、付記５４又は５５に記載の粒子分析器。
５７．光検出器が、フォトダイオードを含む、付記２９～５６のいずれか一つに記載の粒子分析器。
５８．光検出器が、光電子増倍管を含む、付記２９～５７のいずれか一つに記載の粒子分析器ム。
５５．粒子分析器が、フローストリーム内の各粒子についての液滴遅延を計算するようにプログラムされた集積回路を備える、付記２９～５４のいずれか一つに記載の粒子分析器。
５６．集積回路が、フィールドプログラマブルゲートアレイである、付記５４又は５５に記載の粒子分析器。
５７．光検出器が、フォトダイオードを含む、付記２９～５６のいずれか一つに記載の粒子分析器。
５８．光検出器が、光電子増倍管を含む、付記２９～５７のいずれか一つに記載の粒子分析器ム。
５９．粒子分析器が、フローサイトメータの一部である、付記２９～５８のいずれか一つに記載の粒子分析器。
６０．フローセルが、シース流体入力及びサンプル入力を含む、付記４１～５９のいずれか一つに記載の粒子分析器。
６１．メモリが、メモリ上に記憶された命令を有し、命令が、プロセッサによって実行されるときに、プロセッサに、フローストリーム内の各粒子についての計算された速度に基づいて、シース流体の入力流量を増加させる、付記６０に記載の粒子分析器。
６２．メモリが、メモリ上に記憶された命令を有し、命令が、プロセッサによって実行されるときに、プロセッサに、フローストリーム内の各粒子についての計算された速度に基づいて、サンプルの入力流量を増加させる、付記６１に記載の粒子分析器。
６０．フローセルが、シース流体入力及びサンプル入力を含む、付記４１～５９のいずれか一つに記載の粒子分析器。
６１．メモリが、メモリ上に記憶された命令を有し、命令が、プロセッサによって実行されるときに、プロセッサに、フローストリーム内の各粒子についての計算された速度に基づいて、シース流体の入力流量を増加させる、付記６０に記載の粒子分析器。
６２．メモリが、メモリ上に記憶された命令を有し、命令が、プロセッサによって実行されるときに、プロセッサに、フローストリーム内の各粒子についての計算された速度に基づいて、サンプルの入力流量を増加させる、付記６１に記載の粒子分析器。
６３．粒子分析器内のフローストリーム内の試料内の複数の照射が行われた粒子の液滴遅延を判定するためにプログラムされた集積回路であって、
第１の光検出器チャネル内の照射が行われた粒子から検出された光と、第２の光検出器チャネル内で検出された光とに基づいて、フローストリーム内の試料内の各粒子についての速度を計算するためのプログラミングと、
計算された速度に基づいて、各粒子の液滴遅延を判定するためのプログラミングと
を備える、集積回路。
６４．第１の光検出器チャネル内で検出された光に応答して、第１の光検出器信号パルスを生成することと、第２の光検出器チャネル内で検出された光に応答して、第２の光検出器信号パルスを生成することとのためのプログラミングを含む、付記６３に記載の集積回路。
６５．第１の光検出器信号パルスと第２の光検出器信号パルスとの間の時間の量を判定するためのプログラミングを含む、付記６３に記載の集積回路。
６６．第１の光検出器信号パルスと第２の光検出器信号パルスとの間のピーク時間を判定するためのプログラミングを含む、付記６３に記載の集積回路。
６７．第１の光検出器信号パルス及び第２の光検出器信号パルスの一次モーメントを判定するためのプログラミングを含む、付記６３に記載の集積回路。
第１の光検出器チャネル内の照射が行われた粒子から検出された光と、第２の光検出器チャネル内で検出された光とに基づいて、フローストリーム内の試料内の各粒子についての速度を計算するためのプログラミングと、
計算された速度に基づいて、各粒子の液滴遅延を判定するためのプログラミングと
を備える、集積回路。
６４．第１の光検出器チャネル内で検出された光に応答して、第１の光検出器信号パルスを生成することと、第２の光検出器チャネル内で検出された光に応答して、第２の光検出器信号パルスを生成することとのためのプログラミングを含む、付記６３に記載の集積回路。
６５．第１の光検出器信号パルスと第２の光検出器信号パルスとの間の時間の量を判定するためのプログラミングを含む、付記６３に記載の集積回路。
６６．第１の光検出器信号パルスと第２の光検出器信号パルスとの間のピーク時間を判定するためのプログラミングを含む、付記６３に記載の集積回路。
６７．第１の光検出器信号パルス及び第２の光検出器信号パルスの一次モーメントを判定するためのプログラミングを含む、付記６３に記載の集積回路。
６８．各光検出器信号パルスが、電圧パルスである、付記６４～６７のいずれか一つに記載の集積回路。
６９．第１の光検出器信号パルスと第２の光検出器信号パルスとの間の時間の量に基づいて、フローストリーム内の各粒子についての速度を計算するためのプログラミングを含む、付記６４～６８のいずれか一つに記載の集積回路。
７０．フローストリーム内の各粒子についての計算された速度に、フローストリームの検査領域と、粒子を含有する小滴を生成するように構成されたフローセルノズルのオリフィスとの間の距離を乗算することによって、各粒子の液滴遅延を計算するためのプログラミングを含む、付記６３～６９のいずれか一つに記載の集積回路。
７１．フローストリーム内の各粒子についての計算された速度と、計算された液滴遅延とのうちの１つ以上に基づいて、各粒子についての液滴遅延を調整するためのプログラミングを含む、付記６３～７０のいずれか一つに記載の集積回路。
７２．フローストリーム内の各粒子についての計算された速度と、計算された液滴遅延とのうちの１つ以上に基づいて、粒子分析器の１つ以上のパラメータを調整するためのプログラミングを含む、付記６３～７１のいずれか一つに記載の集積回路。
６９．第１の光検出器信号パルスと第２の光検出器信号パルスとの間の時間の量に基づいて、フローストリーム内の各粒子についての速度を計算するためのプログラミングを含む、付記６４～６８のいずれか一つに記載の集積回路。
７０．フローストリーム内の各粒子についての計算された速度に、フローストリームの検査領域と、粒子を含有する小滴を生成するように構成されたフローセルノズルのオリフィスとの間の距離を乗算することによって、各粒子の液滴遅延を計算するためのプログラミングを含む、付記６３～６９のいずれか一つに記載の集積回路。
７１．フローストリーム内の各粒子についての計算された速度と、計算された液滴遅延とのうちの１つ以上に基づいて、各粒子についての液滴遅延を調整するためのプログラミングを含む、付記６３～７０のいずれか一つに記載の集積回路。
７２．フローストリーム内の各粒子についての計算された速度と、計算された液滴遅延とのうちの１つ以上に基づいて、粒子分析器の１つ以上のパラメータを調整するためのプログラミングを含む、付記６３～７１のいずれか一つに記載の集積回路。
７３．フローストリーム内の各粒子についての計算された速度と、計算された液滴遅延とのうちの１つ以上に基づいて、フローストリームの流量を増加させるためのプログラミングを含む、付記７２に記載の集積回路。
７４．フローストリーム内の各粒子についての計算された速度と、計算された液滴遅延とのうちの１つ以上に基づいて、フローストリームの流量を減少させるためのプログラミングを含む、付記７２に記載の集積回路。
７５．フローストリーム内の各粒子についての計算された速度と、計算された液滴遅延とのうちの１つ以上に基づいて、小滴帯電のタイミングを調整するためのプログラミングを含む、付記７２～７４のいずれか一つに記載の集積回路。
７６．フィールドプログラマブルゲートアレイ（ＦＰＧＡ）である、付記６３～７５のいずれか一つに記載の集積回路。
７７．特定用途向け集積回路（ＡＳＩＣ）を含む、付記６３～７５のいずれか一つに記載の集積回路。
７８．複合プログラマブル論理デバイス（ＣＰＬＤ）を含む、付記６３～７５のいずれか一つに記載の集積回路。
７４．フローストリーム内の各粒子についての計算された速度と、計算された液滴遅延とのうちの１つ以上に基づいて、フローストリームの流量を減少させるためのプログラミングを含む、付記７２に記載の集積回路。
７５．フローストリーム内の各粒子についての計算された速度と、計算された液滴遅延とのうちの１つ以上に基づいて、小滴帯電のタイミングを調整するためのプログラミングを含む、付記７２～７４のいずれか一つに記載の集積回路。
７６．フィールドプログラマブルゲートアレイ（ＦＰＧＡ）である、付記６３～７５のいずれか一つに記載の集積回路。
７７．特定用途向け集積回路（ＡＳＩＣ）を含む、付記６３～７５のいずれか一つに記載の集積回路。
７８．複合プログラマブル論理デバイス（ＣＰＬＤ）を含む、付記６３～７５のいずれか一つに記載の集積回路。
７９．非一時的コンピュータ可読記憶媒体であって、
粒子分析器内のフローストリーム内の複数の粒子の液滴遅延を判定するための、非一時的コンピュータ可読記憶媒体上に記憶された命令を備え、
命令が、
フローストリーム内の複数の粒子を含む試料に、第１の検査領域内の第１のレーザ及び第２の検査領域内の第２のレーザで照射を行うためのアルゴリズムと、
第１の光検出器チャネル及び第２の光検出器チャネル内の各粒子からの光を検出するためのアルゴリズムと、
第１の光検出器チャネル及び第２の光検出器チャネル内の検出された光に基づいて、フローストリーム内の各粒子についての速度を計算するためのアルゴリズムと、
計算された速度に基づいて、各粒子についての液滴遅延を判定するためのアルゴリズムと
を含む、非一時的コンピュータ可読記憶媒体。
８０．命令が、第１のレーザから下流の位置で、フローストリームに第２のレーザで照射を行うためのアルゴリズムを含む、付記７９に記載の非一時的コンピュータ可読記憶媒体。
８１．命令が、
第１の光検出器チャネル内で検出された光に応答して、第１の光検出器信号パルスを生成するためのアルゴリズムと、
第２の光検出器チャネル内で検出された光に応答して、第２の光検出器信号パルスを生成するためのアルゴリズムと
を含む、付記７９又は８０に記載の非一時的コンピュータ可読記憶媒体。
８２．命令が、第１の光検出器信号パルスと第２の光検出器信号パルスとの間の時間の量を判定するためのアルゴリズムを含む、付記８１に記載の非一時的コンピュータ可読記憶媒体。
８３．命令が、第１の光検出器信号パルスと第２の光検出器信号パルスとの間のピーク時間を判定するためのアルゴリズムを含む、付記８２に記載の非一時的コンピュータ可読記憶媒体。
粒子分析器内のフローストリーム内の複数の粒子の液滴遅延を判定するための、非一時的コンピュータ可読記憶媒体上に記憶された命令を備え、
命令が、
フローストリーム内の複数の粒子を含む試料に、第１の検査領域内の第１のレーザ及び第２の検査領域内の第２のレーザで照射を行うためのアルゴリズムと、
第１の光検出器チャネル及び第２の光検出器チャネル内の各粒子からの光を検出するためのアルゴリズムと、
第１の光検出器チャネル及び第２の光検出器チャネル内の検出された光に基づいて、フローストリーム内の各粒子についての速度を計算するためのアルゴリズムと、
計算された速度に基づいて、各粒子についての液滴遅延を判定するためのアルゴリズムと
を含む、非一時的コンピュータ可読記憶媒体。
８０．命令が、第１のレーザから下流の位置で、フローストリームに第２のレーザで照射を行うためのアルゴリズムを含む、付記７９に記載の非一時的コンピュータ可読記憶媒体。
８１．命令が、
第１の光検出器チャネル内で検出された光に応答して、第１の光検出器信号パルスを生成するためのアルゴリズムと、
第２の光検出器チャネル内で検出された光に応答して、第２の光検出器信号パルスを生成するためのアルゴリズムと
を含む、付記７９又は８０に記載の非一時的コンピュータ可読記憶媒体。
８２．命令が、第１の光検出器信号パルスと第２の光検出器信号パルスとの間の時間の量を判定するためのアルゴリズムを含む、付記８１に記載の非一時的コンピュータ可読記憶媒体。
８３．命令が、第１の光検出器信号パルスと第２の光検出器信号パルスとの間のピーク時間を判定するためのアルゴリズムを含む、付記８２に記載の非一時的コンピュータ可読記憶媒体。
８４．命令が、第１の光検出器信号パルス及び第２の光検出器信号パルスの一次モーメントを判定するためのアルゴリズムを含む、付記８２に記載の非一時的コンピュータ可読記憶媒体。
８５．命令が、
第１の光検出器信号パルスと第２の光検出器信号パルスとの間の時間の量と、第１のレーザと第２のレーザとの間の距離とに基づいて、フローストリーム内の各粒子についての速度を計算するためのアルゴリズムを含む、付記８１～８４のいずれか一つに記載の非一時的コンピュータ可読記憶媒体。
８６．粒子分析器が、粒子を含有する小滴を生成するためのフローセルノズルを有するフローセルを備え、命令が、フローストリーム内の各粒子についての計算された速度に、第１の検査領域又は第２の検査領域とフローセルノズルのオリフィスとの間の距離を乗算することによって、フローストリーム内の各粒子についての液滴遅延を計算するためのアルゴリズムを含む、付記７９～８５のいずれか一つに記載の非一時的コンピュータ可読記憶媒体。
８７．命令が、フローストリーム内の各粒子についての計算された速度と、計算された液滴遅延とのうちの１つ以上に基づいて、各粒子の液滴遅延を調整するためのアルゴリズムを含む、付記７９～８６のいずれか一つに記載の非一時的コンピュータ可読記憶媒体。
８８．命令が、フローストリーム内の各粒子についての計算された速度と、計算された液滴遅延とのうちの１つ以上に基づいて、粒子分析器の１つ以上のパラメータを調整するためのアルゴリズムを含む、付記７９～８７のいずれか一つに記載の非一時的コンピュータ可読記憶媒体。
８５．命令が、
第１の光検出器信号パルスと第２の光検出器信号パルスとの間の時間の量と、第１のレーザと第２のレーザとの間の距離とに基づいて、フローストリーム内の各粒子についての速度を計算するためのアルゴリズムを含む、付記８１～８４のいずれか一つに記載の非一時的コンピュータ可読記憶媒体。
８６．粒子分析器が、粒子を含有する小滴を生成するためのフローセルノズルを有するフローセルを備え、命令が、フローストリーム内の各粒子についての計算された速度に、第１の検査領域又は第２の検査領域とフローセルノズルのオリフィスとの間の距離を乗算することによって、フローストリーム内の各粒子についての液滴遅延を計算するためのアルゴリズムを含む、付記７９～８５のいずれか一つに記載の非一時的コンピュータ可読記憶媒体。
８７．命令が、フローストリーム内の各粒子についての計算された速度と、計算された液滴遅延とのうちの１つ以上に基づいて、各粒子の液滴遅延を調整するためのアルゴリズムを含む、付記７９～８６のいずれか一つに記載の非一時的コンピュータ可読記憶媒体。
８８．命令が、フローストリーム内の各粒子についての計算された速度と、計算された液滴遅延とのうちの１つ以上に基づいて、粒子分析器の１つ以上のパラメータを調整するためのアルゴリズムを含む、付記７９～８７のいずれか一つに記載の非一時的コンピュータ可読記憶媒体。
８９．命令が、フローストリーム内の各粒子についての計算された速度と、計算された液滴遅延とのうちの１つ以上に基づいて、フローストリームの流量を増加させるためのアルゴリズムを含む、付記８８に記載の非一時的コンピュータ可読記憶媒体。
９０．命令が、フローストリーム内の各粒子についての計算された速度と、計算された液滴遅延とのうちの１つ以上に基づいて、フローストリームの流量を減少させるためのアルゴリズムを含む、付記８８に記載の非一時的コンピュータ可読記憶媒体。
９１．命令が、フローストリーム内の各粒子についての計算された速度に基づいて、小滴帯電のタイミングを調整するためのアルゴリズムを含む、付記８８～９０のいずれか一つに記載の非一時的コンピュータ可読記憶媒体。
９２．命令が、
フローストリーム内の試料に複数のレーザで照射を行うためのアルゴリズムと、
複数の光検出器チャネル内の各粒子からの光を検出するためのアルゴリズムと、
光検出器チャネルの各々内の検出された光に応答して、光検出器信号パルスを生成するためのアルゴリズムと、
光検出器チャネルのうちの２つ以上内の光検出器信号パルスに基づいて、フローストリーム内の各粒子についての速度を計算するためのアルゴリズムと
を含む、付記７９～９１のいずれか一つに記載の非一時的コンピュータ可読記憶媒体。
９３．命令が、レーザの各々によるフローストリームの照射のタイミングを計算するためのアルゴリズムを含む、付記９２に記載の非一時的コンピュータ可読記憶媒体。
９４．命令が、３つ以上の光検出器チャネル内の光検出器信号パルスに基づいて、フローストリーム内の各粒子についての速度を計算するためのアルゴリズムを含む、付記９２又は９３に記載の非一時的コンピュータ可読記憶媒体。
９０．命令が、フローストリーム内の各粒子についての計算された速度と、計算された液滴遅延とのうちの１つ以上に基づいて、フローストリームの流量を減少させるためのアルゴリズムを含む、付記８８に記載の非一時的コンピュータ可読記憶媒体。
９１．命令が、フローストリーム内の各粒子についての計算された速度に基づいて、小滴帯電のタイミングを調整するためのアルゴリズムを含む、付記８８～９０のいずれか一つに記載の非一時的コンピュータ可読記憶媒体。
９２．命令が、
フローストリーム内の試料に複数のレーザで照射を行うためのアルゴリズムと、
複数の光検出器チャネル内の各粒子からの光を検出するためのアルゴリズムと、
光検出器チャネルの各々内の検出された光に応答して、光検出器信号パルスを生成するためのアルゴリズムと、
光検出器チャネルのうちの２つ以上内の光検出器信号パルスに基づいて、フローストリーム内の各粒子についての速度を計算するためのアルゴリズムと
を含む、付記７９～９１のいずれか一つに記載の非一時的コンピュータ可読記憶媒体。
９３．命令が、レーザの各々によるフローストリームの照射のタイミングを計算するためのアルゴリズムを含む、付記９２に記載の非一時的コンピュータ可読記憶媒体。
９４．命令が、３つ以上の光検出器チャネル内の光検出器信号パルスに基づいて、フローストリーム内の各粒子についての速度を計算するためのアルゴリズムを含む、付記９２又は９３に記載の非一時的コンピュータ可読記憶媒体。
前述の発明は、明確な理解のために例示及び例によって多少詳しく説明されてきたが、当業者であれば、本発明の教示に照らして、添付の特許請求の範囲の趣旨又は範囲から逸脱することなく、それらの発明に対してある特定の変更及び修正が行われ得ることは、容易に明らかである。
したがって、先述したものは、本発明の原理を単に例示しているに過ぎない。当業者は、本明細書に明示的に記載又は示されていないが、本発明の原理を具現化し、その趣旨及び範囲内に含まれる様々な構成を考案することが可能であることが理解される。更に、本明細書に列挙される全ての例及び条件付き言語は、主に、本発明の原理及び本発明者によって当該技術分野を促進するために寄与する概念を閲読者が理解することを支援する点を意図しており、そのような具体的に列挙される例及び条件に限定されるものではないと解釈されるものである。更に、本発明の原理、態様、及び実施形態、並びにそれらの特定の実施例を列挙する本明細書の全ての記述は、それらの構造的及び機能的同等物の両方を包含することが意図される。加えて、そのような同等物は、現在知られている同等物及び将来開発される同等物の両方、すなわち、構造に関係なく、同じ機能を実施する開発される任意の要素を含むことが意図される。更に、本明細書に開示のいかなるものも、そのような開示が特許請求の範囲に明示的に列挙されているか否かにかかわらず、公共に供することを意図しない。
したがって、本発明の範囲は、本明細書に示され、記載される例示的な実施形態に限定されることを意図されていない。むしろ、本発明の範囲及び趣旨は、添付の特許請求の範囲によって具現化される。特許請求の範囲において、米国特許法第１１２条（ｆ）又は米国特許法第１１２条（６）は、特許請求の範囲への限定の始まりの正確な語句「のための手段」又は正確な語句「のためのステップ」が列挙されている場合にのみ、そのような特許請求の範囲に限定するために行使されると明示的に定義され、そのような正確な語句が、特許請求の範囲への限定において使用されない場合、米国特許法第１１２条（ｆ）又は米国特許法第１１２条（６）は行使されない。
相互参照
米国特許法第１１９条（ｅ）に従って、本出願は、２０２１年１月２５日に出願された米国仮特許出願第６３／１４１，２７２号の出願日に対する優先権を主張し、その出願の開示全体が、参照により本明細書に組み込まれる。
米国特許法第１１９条（ｅ）に従って、本出願は、２０２１年１月２５日に出願された米国仮特許出願第６３／１４１，２７２号の出願日に対する優先権を主張し、その出願の開示全体が、参照により本明細書に組み込まれる。
Claims (15)
- 粒子分析器内のフローストリーム内の複数の粒子についての液滴遅延を判定するための方法であって、
前記フローストリーム内の前記複数の粒子を含む試料に、第１の検査領域内の第１のレーザ及び第２の検査領域内の第２のレーザで照射を行うことと、
第１の光検出器チャネル及び第２の光検出器チャネル内の各粒子からの光を検出することと、
前記第１の光検出器チャネル及び前記第２の光検出器チャネル内の検出された光に基づいて、前記フローストリーム内の各粒子についての速度を計算することと、
前記粒子についての計算された速度に基づいて、各粒子の前記液滴遅延を判定することと
を含む、方法。 - 前記第２のレーザが、前記第１のレーザから下流の位置で、前記フローストリームに照射を行うように構成されている、請求項１に記載の方法。
- 前記第１の光検出器チャネル内で検出された前記光に応答して、第１の光検出器信号パルスを生成することと、
前記第２の光検出器チャネル内で検出された前記光に応答して、第２の光検出器信号パルスを生成することと
を含む、請求項１又は２に記載の方法。 - 前記第１の光検出器信号パルスと前記第２の光検出器信号パルスとの間の時間の量、前記第１の光検出器信号パルスと前記第２の光検出器信号パルスとの間のピーク時間、又は前記第１の光検出器信号パルス及び前記第２の光検出器信号パルスの一次モーメントのうちの少なくとも１つを判定することを更に含む、請求項３に記載の方法。
- 各光検出器信号パルスが、電圧パルスである、請求項４に記載の方法。
- 前記粒子から検出される光が、散乱光である、請求項１～５のいずれか一項に記載の方法。
- 前記フローストリーム内の各粒子についての速度が、
前記第１の光検出器信号パルスと前記第２の光検出器信号パルスとの間の時間の量と、
前記第１のレーザの前記検査領域と前記第２のレーザの前記検査領域との間の距離と
に基づいて計算される、請求項３～６のいずれか一項に記載の方法。 - 粒子分析器が、各粒子を含有する小滴を生成するためのフローセルノズルを有するフローセルを備える、請求項１～７のいずれか一項に記載の方法。
- 各粒子についての前記液滴遅延が、前記フローストリーム内の各粒子についての計算された速度に、前記第１の検査領域又は第２の検査領域と前記フローセルノズルのオリフィスとの間の距離を乗算することによって判定される、請求項８に記載の方法。
- 前記フローストリーム内の各粒子についての計算された速度と、計算された液滴遅延とのうちの１つ以上に基づいて、各粒子についての液滴遅延を調整することを更に含む、請求項１～９のいずれか一項に記載の方法。
- 前記フローストリーム内の前記試料に複数のレーザで照射を行うことと、
複数の光検出器チャネル内の各粒子からの光を検出することと、
前記光検出器チャネルの各々内の検出された光に応答して、光検出器信号パルスを生成することと、
２つ以上の前記光検出器チャネル内の前記光検出器信号パルスに基づいて、前記試料内の各粒子についての速度を計算することと
を含む、請求項１～１０のいずれか一項に記載の方法。 - 前記複数のレーザが、互いに２００μｍ以下離間した位置で、前記フローストリームに照射を行うように構成されている、請求項１１に記載の方法。
- 粒子分析器であって、
第１のレーザ及び第２のレーザを備える光源であって、フローストリーム内の複数の粒子を含む試料に、第１の検査領域内の前記第１のレーザ及び第２の検査領域内の前記第２のレーザで照射を行うように構成されている、光源と、
第１の光検出器チャネル及び第２の光検出器チャネル内の前記試料内の各粒子からの光を検出するように構成された光検出器を備える、光検出システムと、
プロセッサであって、前記プロセッサに動作可能に結合されたメモリを備え、前記メモリが、前記メモリ上に記憶された命令を有し、前記命令が、前記プロセッサによって実行されるときに、前記プロセッサに、
前記第１の光検出器チャネル及び前記第２の光検出器チャネル内の検出された光に基づいて、前記フローストリーム内の各粒子についての速度を計算することと、
前記粒子についての前記計算された速度に基づいて、各粒子の前記液滴遅延を判定することと
を行わせる、プロセッサと
を備える、粒子分析器。 - 粒子分析器内のフローストリーム内の試料内の複数の照射が行われた粒子の液滴遅延を判定するためにプログラムされた集積回路であって、
第１の光検出器チャネル内の照射が行われた粒子から検出された光と、第２の光検出器チャネル内で検出された光とに基づいて、前記フローストリーム内の前記試料内の各粒子についての速度を計算するためのプログラミングと、
計算された速度に基づいて、各粒子の前記液滴遅延を判定するためのプログラミングと
を備える、集積回路。 - 非一時的コンピュータ可読記憶媒体であって、
粒子分析器内のフローストリーム内の複数の粒子の液滴遅延を判定するための、前記非一時的コンピュータ可読記憶媒体上に記憶された命令を有し、
前記命令が、
フローストリーム内の前記複数の粒子を含む試料に、第１の検査領域内の第１のレーザ及び第２の検査領域内の第２のレーザで照射を行うためのアルゴリズムと、
第１の光検出器チャネル及び第２の光検出器チャネル内の各粒子からの光を検出するためのアルゴリズムと、
前記第１の光検出器チャネル及び前記第２の光検出器チャネル内の検出された光に基づいて、前記フローストリーム内の各粒子についての速度を計算するためのアルゴリズムと、
計算された速度に基づいて、各粒子についての前記液滴遅延を判定するためのアルゴリズムと
を含む、非一時的コンピュータ可読記憶媒体。
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