JP2024506292A

JP2024506292A - Ｉｌ－１５融合タンパク質と、その製造法ならびに利用法

Info

Publication number: JP2024506292A
Application number: JP2023547194A
Authority: JP
Inventors: リージョン; ベザベービンヤム; ウーミン
Original assignee: サルブリスバイオセラピューティクス，インコーポレイティド
Priority date: 2021-02-05
Filing date: 2022-02-04
Publication date: 2024-02-13
Also published as: AU2022217812A1; MX2023009186A; CN117242099A; CA3206844A1; KR20230166078A; IL304916A; EP4288154A1; WO2022170063A1

Abstract

本開示は、ＣＴＬＡ－４に対して特異的な抗原結合ドメイン、ＩＬ－１５Ｒａｓｕｓｈｉドメイン、およびＩＬ－１５を含む組み換え融合タンパク質を提供する。本開示はさらに、がんの治療においてこれら組み換え融合タンパク質を利用する方法を提供する。

Description

関連する出願の相互参照
本出願は、２０２１年２月５日に出願されたアメリカ合衆国仮出願第６３／１４６，２４２号の優先権と恩恵を主張するものであり、その内容はその全体が参照によって本明細書に組み込まれている。

参照による配列リストの組み込み
本出願とともに電子的に提出されたテキストファイルの内容はその全体が参照によって本明細書に組み込まれている：配列リストのコンピュータ可読形式のコピー（ファイル名：ＳＢＴＩ－００２－００１ＷＯ＿ＳｅｑＬｉｓｔ＿ＳＴ２５．ｔｘｔ、記録された日付：２０２２年１月３１日、ファイルサイズ１４５キロバイト）。

がんは先進国における主要な死因の１つである。アメリカ合衆国だけでも２０２０年に推定で１８０万人が新たに診断され、６００，０００人を超えるがん死が起こった。がんでは、対象の細胞が異常に増殖して分裂し、周囲の組織へと広がる。それぞれのがんは遺伝子変化の組み合わせを持つと考えられている。その組み合わせはがんの間で異なる可能性があるため、がん細胞は細胞増殖に対する身体の天然の制御を逃れることが可能になり、がんが広がることが可能になる。いくつかのがんは現在治療することができるが、多くのがんはそうではない。がんを治療するため、本開示により、ＣＴＬＡ－４に対して特異的な抗原結合ドメイン、インターロイキン１５受容体サブユニットアルファ鎖（ＩＬ－１５Ｒａ）ｓｕｓｈｉドメイン、およびインターロイキン１５（ＩＬ－１５）を含む組み換え融合タンパク質と、それを含む組成物が提供される。

本開示は、抗ＣＴＬＡ－４抗原結合ドメインをＩＬ－１５およびＩＬ－１５Ｒａｓｕｓｈｉドメインと組み合わせて含む組み換え融合タンパク質を用いて免疫細胞の活性と増殖を効果的に促進することにより、免疫細胞ががん細胞の表面に発現したがん抗原に応答してがんに対する免疫応答を開始させてがんを治療できるという発見に基づく。予想に反し、抗ＣＴＬＡ－４抗原結合ドメイン、ＩＬ－１５Ｒａｓｕｓｈｉドメイン、およびＩＬ－１５を含む本開示の融合タンパク質は、生体内で、臨床研究においてＩＬ－１５の安全性と寛容性にマイナスの影響を与えると考えられている炎症性サイトカインであるインターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）の限定された誘導を示す一方で、ＣＤ８とＮＫ細胞の集団を増殖させる能力を維持する。

したがって本開示により、（ａ）インターロイキン１５（ＩＬ－１５）ドメイン；（ｂ）インターロイキン１５受容体サブユニットアルファ（ＩＬ－１５Ｒａ）ｓｕｓｈｉドメイン；および（ｃ）細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４（ＣＴＬＡ－４）抗原結合ドメイン、を含む組み換え融合タンパク質が提供される。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５ドメインとＩＬ－１５ＲａｓｕｓｈｉドメインはＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１５）リンカーによって分離されている。

本開示の組み換え融合タンパク質のいくつかの実施形態では、ＩＬ－１５ドメインは活性である。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒａｓｕｓｈｉドメインは、ＩＬ－１５ドメインの活性を、ＩＬ－１５Ｒａｓｕｓｈｉドメインを欠くこと以外は同等な組み換え融合タンパク質の中のＩＬ－１５ドメインの活性と比べて増大させる。

本開示の組み換え融合タンパク質のいくつかの実施形態では、ＩＬ－１５ドメインは、配列番号１の配列、またはそれと少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％一致する配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５ドメインは、配列番号１の配列を含むか、主に配列番号１の配列からなる。

本開示の組み換え融合タンパク質のいくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒａｓｕｓｈｉドメインは、配列番号２の配列、またはそれと少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％一致する配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒａｓｕｓｈｉドメインは、配列番号２の配列を含むか、主に配列番号２の配列からなる。

本開示の組み換え融合タンパク質のいくつかの実施形態では、ＣＴＬＡ－４抗原結合ドメインは、ＧＦＴＦＳＳＹＴ（配列番号５）、ＩＳＹＤＧＮＮＫ（配列番号６）、およびＡＲＴＧＷＬＧＰＦＤＹ（配列番号７）の相補性決定領域（ＣＤＲ）配列を含む重鎖を含む。いくつかの実施形態では、ＣＴＬＡ－４抗原結合ドメインは、ＱＳＶＧＳＳＹ（配列番号３）、ＧＡＦ、およびＱＱＹＧＳＳＰＷＴ（配列番号４）の相補性決定領域（ＣＤＲ）配列を含む軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、ＣＴＬＡ－４抗原結合ドメインは、一本鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）、単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）、抗体、または抗体フラグメントを含む。

本開示の組み換え融合タンパク質のいくつかの実施形態では、ＣＴＬＡ－４抗原結合ドメインはＣＴＬＡ－４抗体を含む。いくつかの実施形態では、ＣＴＬＡ－４抗原結合ドメインは第１と第２の重鎖を含む。いくつかの実施形態では、第１と第２の重鎖の両方が、配列番号１２の重鎖可変領域配列、またはそれと少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％一致する配列を含む。いくつかの実施形態では、第１と第２の重鎖の両方が、配列番号１２の重鎖可変領域配列を含む。いくつかの実施形態では、第１の重鎖は、配列番号１３の定常領域配列、またはそれと少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％一致する配列を含む。いくつかの実施形態では、第１の重鎖は配列番号１３の定常領域配列を含む。いくつかの実施形態では、第２の重鎖は、配列番号１４の定常領域配列、またはそれと少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％一致する配列を含む。いくつかの実施形態では、第２の重鎖は配列番号１４の定常領域配列を含む。いくつかの実施形態では、第１の重鎖は、配列番号１１の配列、またはそれと少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％一致する配列を含む。いくつかの実施形態では、第２の重鎖は、配列番号１０の配列、またはそれと少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％一致する配列を含む。いくつかの実施形態では、第１と第２の重鎖は優先的にヘテロ二量体を形成する。

本開示の組み換え融合タンパク質のいくつかの実施形態では、ＣＴＬＡ－４抗原結合ドメインはＣＴＬＡ－４抗体を含む。いくつかの実施形態では、ＣＴＬＡ－４抗原結合ドメインは第１と第２の重鎖を含む。いくつかの実施形態では、第２の重鎖は、Ｎ末端から末端へ、抗ＣＴＬＡ－４重鎖、第１のリンカー、ＩＬ－１５Ｒａｓｕｓｈｉドメイン、第２のリンカー、およびＩＬ－１５ドメインを含む。いくつかの実施形態では、第１の重鎖は配列番号１０の配列を含み、第２の重鎖は、Ｎ末端から末端へ、配列番号１１の重鎖配列、配列番号２６の配列を含む第１のリンカー、配列番号２の配列を含むＩＬ－１５Ｒａｓｕｓｈｉドメイン、配列番号１５の配列を含む第２のリンカー、および配列番号１の配列を含むＩＬ－１５ドメインを含む。いくつかの実施形態では、第１の重鎖は配列番号１０の配列を含み、第２の重鎖は配列番号１６の配列を含む。いくつかの実施形態では、第１の重鎖は配列番号１１の配列を含み、第２の重鎖は、Ｎ末端から末端へ、配列番号１０の重鎖配列、配列番号２６の配列を含む第１のリンカー、配列番号２の配列を含むＩＬ－１５Ｒａｓｕｓｈｉドメイン、配列番号１５の配列を含む第２のリンカー、および配列番号１の配列を含むＩＬ－１５ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＴＬＡ－４抗体は、配列番号９を含む軽鎖配列を含む。

本開示の組み換え融合タンパク質のいくつかの実施形態では、ＩＬ－１５ＲａｓｕｓｈｉドメインのＮ末端は第１または第２の重鎖のＣ末端に連結されている。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５ドメインのＮ末端はＩＬ－１５ＲａｓｕｓｈｉドメインのＣ末端に連結されている。いくつかの実施形態では、第１または第２の重鎖とＩＬ－１５Ｒａドメインはリンカーによって分離されている。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５ＲａｓｕｓｈｉドメインとＩＬ－１５ドメインはリンカーによって分離されている。いくつかの実施形態では、リンカーは、ＧＧＧＳ（配列番号２３）、ＧＧＧＧＳ（配列番号２４）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号２５）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号２６）、またはＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１５）の配列を含む。

本開示の組み換え融合タンパク質のいくつかの実施形態では、第１の重鎖、ＩＬ－１５Ｒａｓｕｓｈｉドメイン、およびＩＬ－１５ドメインは、配列番号１６の配列、またはそれと少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％一致する配列を含む。本開示の組み換え融合タンパク質のいくつかの実施形態では、第１の重鎖、ＩＬ－１５Ｒａｓｕｓｈｉドメイン、およびＩＬ－１５ドメインは、配列番号１６の配列を含む。

本開示の組み換え融合タンパク質のいくつかの実施形態では、ＣＴＬＡ－４抗体は、配列番号９を含む軽鎖配列、またはそれと少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％一致する配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＴＬＡ－４抗体は、配列番号９を含む軽鎖配列を含む。

本開示により、（ａ）Ｎ末端からＣ末端へ、第１のＣＴＬＡ－４抗体重鎖、ＩＬ－１５Ｒａｓｕｓｈｉドメイン、およびＩＬ－１５ドメインを含む第１のポリペプチド；（ｂ）第２のＣＴＬＡ－４重鎖の配列を含む第２のポリペプチド：および（ｃ）ＣＴＬＡ－４抗体軽鎖の配列を含む２つの追加ポリペプチドを含む組み換え融合タンパク質が提供される。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５ドメインとＩＬ－１５ＲａｓｕｓｈｉドメインはＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１５）リンカーによって連結されている。

本開示の組み換え融合タンパク質のいくつかの実施形態では、第１と第２のポリペプチドは優先的にヘテロ二量体を形成する。

本開示の組み換え融合タンパク質のいくつかの実施形態では、第１のポリペプチドは配列番号１６の配列を含み、第２のポリペプチドは配列番号１０の配列を含み、ＣＴＬＡ－４抗体軽鎖は、配列番号９の配列、またはそれと少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％一致する配列を含む。本開示の組み換え融合タンパク質のいくつかの実施形態では、第１のポリペプチドは配列番号１６の配列を含み、第２のポリペプチドは配列番号１０の配列を含み、ＣＴＬＡ－４抗体軽鎖は、配列番号９の配列を含む。

本開示により、本開示の組み換え融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドが提供される。

本開示により、本開示の第１のポリペプチド、第２のポリペプチド、またはＣＴＬＡ－４抗体軽鎖をコードするポリヌクレオチドが提供される。

本開示のポリヌクレオチドのいくつかの実施形態では、ＣＴＬＡ－４抗体軽鎖をコードする配列は、配列番号１７の配列、またはそれと少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％一致する配列を含む。いくつかの実施形態では、第１のポリペプチドをコードする配列は、配列番号１８の配列、またはそれと少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％一致する配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリペプチドをコードする配列は、配列番号１９の配列、またはそれと少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％一致する配列を含む。

本開示により、本開示のポリヌクレオチドを含むベクターが提供される。

本開示のベクターのいくつかの実施形態では、ベクターは、前記組み換え融合タンパク質またはポリヌクレオチドをコードする配列に機能可能に連結されたプロモータをさらに含む。

本開示により、本開示の組み換え融合タンパク質と、医薬として許容可能な基剤、希釈剤、または賦形剤を含む医薬組成物が提供される。

本開示の医薬組成物のいくつかの実施形態では、医薬組成物は非経口投与に適する。いくつかの実施形態では、非経口投与は、静脈内への輸液または注射、腫瘍内注射、または皮下注射を含む。

本開示により、疾患または障害を持つ対象を治療する方法が提供され、この方法は、本開示の組み換え融合タンパク質または医薬組成物を治療に有効な量で投与することを含む

本開示の方法のいくつかの実施形態では、疾患または障害はがんである。いくつかの実施形態では、がんは固形腫瘍または液体腫瘍を含む。いくつかの実施形態では、液体腫瘍に含まれるのは、白血病、急性骨髄性白血病、骨髄腫、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、ベータ細胞リンパ腫、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、マントル細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、ＮＫ細胞リンパ腫、Ｂ細胞リンパ腫、またはＮＫＴ細胞リンパ腫である。いくつかの実施形態では、がんは、黒色腫、腎細胞癌、中皮腫、小細胞肺がん、ぶどう膜黒色腫、膀胱がん、胃がん、頭頸部の扁平上皮癌、皮膚癌、非小細胞肺がん、結腸直腸がん、前立腺がん、卵巣がん、子宮頸がん、子宮内膜癌、乳がん、膵臓がん、尿路上皮がん、肝細胞癌、食道がん、膠芽腫、神経膠腫、または肉腫からなるグループから選択される。いくつかの実施形態では、がんは、黒色腫と腎細胞癌からなるグループから選択される。

本開示の方法のいくつかの実施形態では、前記組み換え融合タンパク質または医薬組成物は免疫細胞上のＣＴＬＡ－４の活性を阻害する。いくつかの実施形態では、前記組み換え融合タンパク質または医薬組成物は、免疫細胞上のインターロイキン２／インターロイキン１５受容体ベータ（ＩＬ－２Ｒｂ）／共通ガンマ鎖（ＩＬ－２ＲＧ）受容体複合体の活性を増大させる。いくつかの実施形態では、前記組み換え融合タンパク質または医薬組成物は免疫細胞において活性を促進する。いくつかの実施形態では、活性は、活性化、増殖、またはこれらの組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、またはＮＫ細胞である。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞はＣＤ８＋Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、前記組み換え融合タンパク質または医薬組成物はＮＫ細胞の増殖を増加させる。

本開示の方法のいくつかの実施形態では、前記組み換え融合タンパク質または医薬組成物を非経口投与する。いくつかの実施形態では、非経口投与は、静脈内への輸液または注射、腫瘍内注射、または皮下注射を含む。

本開示の方法のいくつかの実施形態では、前記組み換え融合タンパク質または医薬組成物の投与は前記がんの徴候または症状を緩和する。いくつかの実施形態では、前記組み換え融合タンパク質または医薬組成物の投与は前記がんの進行を阻害する。いくつかの実施形態では、前記組み換え融合タンパク質または医薬組成物の投与は前記がんの再発を予防するか遅延させる。いくつかの実施形態では、前記組み換え融合タンパク質または医薬組成物の投与は前記がんの部分的または全面的な寛解を誘導する。

本開示の方法のいくつかの実施形態では、方法は１つ以上の追加がん療法をさらに含む。いくつかの実施形態では、前記１つ以上の追加がん療法は、化学療法、小分子阻害剤、タンパク質に基づく療法または生物製剤療法、放射線、外科手術、免疫療法、または養子細胞療法を含む。いくつかの実施形態では、養子細胞療法は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞療法、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）Ｔ細胞療法、またはＣＡＲＮＫ細胞療法を含む。

本開示の方法のいくつかの実施形態では、前記組み換え融合タンパク質または前記医薬組成物の投与は、対象からの末梢血サンプル中のインターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）のレベルを実質的に上昇させない。いくつかの実施形態では、前記組み換え融合タンパク質または医薬組成物の投与は、対象からの末梢血サンプル中のインターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）のレベルを、同じモル量のＩＬ－１５、またはＩＬ－１５Ｒａｓｕｓｈｉドメインとの複合体になったＩＬ－１５の投与よりも少なく上昇させる。いくつかの実施形態では、前記組み換え融合タンパク質または医薬組成物の投与は免疫細胞の増殖を増加させるが、対象のＩＦＮγのレベルは実質的に上昇させない。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、ＮＫ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、またはこれらの組み合わせを含む。

本開示の方法のいくつかの実施形態では、前記組み換え融合タンパク質または医薬組成物を投与する結果として、ＩＬ－６とＩＦＮγの比が、２：１、３：１、４：１、５：１、６：１、７：１、８：１、９：１、または１０：１よりも大きいかその値と等しくなる。

本開示の方法のいくつかの実施形態では、前記組み換え融合タンパク質または医薬組成物を投与する結果として、同じモル量のＩＬ－１５、またはＩＬ－１５Ｒａｓｕｓｈｉドメインとの複合体になったＩＬ－１５の投与よりも毒性が少なくなる。

本開示の方法のいくつかの実施形態では、前記組み換え融合タンパク質を０．１μｇ／ｋｇ～１ｍｇ／ｋｇの用量で投与する。いくつかの実施形態では、前記組み換え融合タンパク質を１０μｇ／ｋｇ～０．３０ｍｇ／ｋｇの用量で投与する。

本開示の方法のいくつかの実施形態では、前記組み換え融合タンパク質または医薬組成物を静脈内、腫瘍内、または皮下に投与する。

本開示の方法のいくつかの実施形態では、前記組み換え融合タンパク質または医薬組成物を、毎日、２日ごとに、３日ごとに、４日ごとに、５日ごとに、６日ごとに、７日ごとに、８日ごとに、９日ごとに、１０日ごとに、２週間ごとに、３週間ごとに、または毎月投与する。

本開示の方法のいくつかの実施形態では、前記組み換え融合タンパク質または医薬組成物を少なくとも１週間、少なくとも２週間、少なくとも３週間、少なくとも４週間、少なくとも５週間、少なくとも６週間、少なくとも２ヶ月間、少なくとも３ヶ月間、少なくとも４ヶ月間、少なくとも５ヶ月間、少なくとも６ヶ月間、少なくとも８ヶ月間、少なくとも１０ヶ月間、少なくとも１２ヶ月間、少なくとも１４ヶ月間、少なくとも１６ヶ月間、少なくとも１８ヶ月間、少なくとも２０ヶ月間、少なくとも２２ヶ月間、または少なくとも２年間にわたって投与する。

本開示により、対象の疾患または障害を治療する方法で利用するための、本開示の組み換え融合タンパク質または医薬組成物が提供される。

本開示により、対象の疾患または障害を治療する薬の製造で利用するための、本開示の組み換え融合タンパク質が提供される。

本開示により、本開示の組み換え融合タンパク質を製造する方法が提供され、この方法は、（ａ）複数の細胞を、本開示のポリヌクレオチドまたはベクターと接触させ；（ｂ）前記複数の細胞に前記組み換え融合タンパク質を発現させ；（ｃ）前記組み換え融合タンパク質を精製することを含む。

本開示により、本開示の組み換え融合タンパク質、ポリヌクレオチド、ベクター、または医薬組成物を治療に有効な量で含むキットが提供される。

さまざまな目的と利点、ならびに本発明のより完全な理解は、以下の詳細な説明と添付の請求項を添付の図面と組み合わせて参照することによって明らかであるとともに、より容易に理解される。

図１Ａ～Ｅは、それぞれ、ＣＴＬＡ－４抗体と本開示の代表的なＣＴＬＡ－４抗体融合タンパク質を示す一連の模式図である。図１Ａ～Ｅは、それぞれ、ＣＴＬＡ－４抗体と本開示の代表的なＣＴＬＡ－４抗体融合タンパク質を示す一連の模式図である。図１Ａ～Ｅは、それぞれ、ＣＴＬＡ－４抗体と本開示の代表的なＣＴＬＡ－４抗体融合タンパク質を示す一連の模式図である。図１Ａ～Ｅは、それぞれ、ＣＴＬＡ－４抗体と本開示の代表的なＣＴＬＡ－４抗体融合タンパク質を示す一連の模式図である。図１Ａ～Ｅは、それぞれ、ＣＴＬＡ－４抗体と本開示の代表的なＣＴＬＡ－４抗体融合タンパク質を示す一連の模式図である。図２は、抗ＣＴＬＡ－４、ＩＬ－１５Ｒａｓｕｓｈｉドメイン、ＩＬ－１５融合タンパク質の２つのＦｃバリアントと、ＨＥＲ３抗体－ニューレグリン１融合タンパク質の熱安定性を比較する表である。ＷＴ：融合タンパク質のノブ重鎖は置換Ｓ３６６Ｗを持ち、穴重鎖は置換Ｙ４０７Ｔを持つ。ＷＳＡＶ：ノブ重鎖は置換Ｓ３６６Ｗを持ち、穴重鎖は、置換Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、およびＹ４０７Ｖを持つ。図３は、ＩＬ－１５ＲａｓｕｓｈｉドメインとＩＬ－１５に融合されていて定常領域に「穴」修飾を持つＣＴＬＡ－４抗体重鎖、定常領域に「ノブ」修飾を持つＣＴＬＡ－４抗体重鎖、およびＣＴＬＡ－４抗体軽鎖のための発現ベクターの構造を示すダ模式図である。図４は、異なる種に由来するＣＴＬＡ－４への抗ＣＴＬＡ－４抗体（イピリムマブ）と図１Ａに示されている設計の抗ＣＴＬＡ－４－ＩＬ－１５Ｒａ－ｓｕｓｈｉ－ＩＬ－１５融合タンパク質の結合交差反応性を示す一連のプロットである。αＣＴＬＡ－４－ＩＬ－１５Ｒａ－ＩＬ－１５：抗ＣＴＬＡ－４、ＩＬ－１５Ｒａｓｕｓｈｉドメイン、ＩＬ－１５融合タンパク質。図５は、細胞共培養アッセイ系におけるＣＴＬＡ－４受容体機能の阻害によるインターロイキン２（ＩＬ－２）分泌の誘導を示すプロットである。αＣＴＬＡ－４－ＩＬ１５Ｒａ－ＩＬ－１５：抗ＣＴＬＡ－４、ＩＬ－１５Ｒａｓｕｓｈｉドメイン、ＩＬ－１５融合タンパク質。図６は、抗ＣＴＬＡ－４－ＩＬ－１５Ｒａ－ｓｕｓｈｉ－ＩＬ－１５融合タンパク質（配列番号９、１０、および１６）の抗体依存性細胞傷害をＣＴＬＡ－４抗体と比較して示したプロットである。図７は、インターロイキン２受容体のβサブユニット（ＩＬ２Ｒβ）への抗ＣＴＬＡ－４－ＩＬ－１５Ｒａ－ｓｕｓｈｉ－ＩＬ－１５融合タンパク質の結合活性を示すプロットである。図８Ａ～８Ｂは、抗ＣＴＬＡ－４－ＩＬ－１５Ｒａ－ｓｕｓｈｉ－ＩＬ－１５融合タンパク質を用いた刺激に応答した野生型Ｔ細胞（図８Ａ）とＩＬ１５ＲＤ欠損Ｔ細胞（図８Ｂ）の増殖を示す一対のプロットである。図１Ａに示されているように、αＣＴＬＡ－４－ＩＬ－１５Ｒａ－ＩＬ－１５：抗ＣＴＬＡ－４、ＩＬ－１５Ｒａｓｕｓｈｉドメイン、ＩＬ－１５融合タンパク質；αＣＴＬＡ－４－ＩＬ－１５：ＩＬ－１５ＲａｓｕｓｈｉドメインなしでＩＬ－１５に融合したＣＴＬＡ－４抗体。図９Ａ～９Ｄは、それぞれ、本開示のさまざまな抗ＣＴＬＡ－４－ＩＬ－１５Ｒａ－ｓｕｓｈｉ－ＩＬ－１５融合コンストラクトを用いた刺激に応答した野生型Ｔ細胞（ＣＴＬＬ２－ＷＴ、図９Ａと９Ｃ）とＩＬ１５ＲＤ欠損Ｔ細胞（ＣＴＬＬ２－ＩＬ１５ＲＡＫＯ、図９Ｂと９Ｄ）の増殖を示すプロットである。コンストラクトの模式図が図１Ｂ～１Ｅに示されている。図９ＤのＢＳ３穴は、図１Ｅに示されているＢＳ３アーキテクチャを持つが、ノブ重鎖と穴重鎖の代わりに２つの穴重鎖がＩＬ－１５Ｒａ－ｓｕｓｈｉ＿ＩＬ－１５に融合したコンストラクトを意味する。図９Ａ～９Ｄは、それぞれ、本開示のさまざまな抗ＣＴＬＡ－４－ＩＬ－１５Ｒａ－ｓｕｓｈｉ－ＩＬ－１５融合コンストラクトを用いた刺激に応答した野生型Ｔ細胞（ＣＴＬＬ２－ＷＴ、図９Ａと９Ｃ）とＩＬ１５ＲＤ欠損Ｔ細胞（ＣＴＬＬ２－ＩＬ１５ＲＡＫＯ、図９Ｂと９Ｄ）の増殖を示すプロットである。コンストラクトの模式図が図１Ｂ～１Ｅに示されている。図９ＤのＢＳ３穴は、図１Ｅに示されているＢＳ３アーキテクチャを持つが、ノブ重鎖と穴重鎖の代わりに２つの穴重鎖がＩＬ－１５Ｒａ－ｓｕｓｈｉ＿ＩＬ－１５に融合したコンストラクトを意味する。図９Ａ～９Ｄは、それぞれ、本開示のさまざまな抗ＣＴＬＡ－４－ＩＬ－１５Ｒａ－ｓｕｓｈｉ－ＩＬ－１５融合コンストラクトを用いた刺激に応答した野生型Ｔ細胞（ＣＴＬＬ２－ＷＴ、図９Ａと９Ｃ）とＩＬ１５ＲＤ欠損Ｔ細胞（ＣＴＬＬ２－ＩＬ１５ＲＡＫＯ、図９Ｂと９Ｄ）の増殖を示すプロットである。コンストラクトの模式図が図１Ｂ～１Ｅに示されている。図９ＤのＢＳ３穴は、図１Ｅに示されているＢＳ３アーキテクチャを持つが、ノブ重鎖と穴重鎖の代わりに２つの穴重鎖がＩＬ－１５Ｒａ－ｓｕｓｈｉ＿ＩＬ－１５に融合したコンストラクトを意味する。図９Ａ～９Ｄは、それぞれ、本開示のさまざまな抗ＣＴＬＡ－４－ＩＬ－１５Ｒａ－ｓｕｓｈｉ－ＩＬ－１５融合コンストラクトを用いた刺激に応答した野生型Ｔ細胞（ＣＴＬＬ２－ＷＴ、図９Ａと９Ｃ）とＩＬ１５ＲＤ欠損Ｔ細胞（ＣＴＬＬ２－ＩＬ１５ＲＡＫＯ、図９Ｂと９Ｄ）の増殖を示すプロットである。コンストラクトの模式図が図１Ｂ～１Ｅに示されている。図９ＤのＢＳ３穴は、図１Ｅに示されているＢＳ３アーキテクチャを持つが、ノブ重鎖と穴重鎖の代わりに２つの穴重鎖がＩＬ－１５Ｒａ－ｓｕｓｈｉ＿ＩＬ－１５に融合したコンストラクトを意味する。図１０Ａ～１０Ｃは、それぞれ、Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおいて抗ＣＴＬＡ－４－ＩＬ－１５Ｒａ－ｓｕｓｈｉ－ＩＬ－１５融合タンパク質の投与に応答したＮＫ細胞とＣＤ８^＋Ｔ細胞の増殖を示す一対のプロットである。αＣＴＬＡ－４－ＩＬ－１５Ｒａ－ＩＬ－１５：ＩＬ－１５ＲａｓｕｓｈｉドメインとＩＬ－１５に融合したＣＴＬＡ－４抗体；αＣＴＬＡ－４－ＩＬ－１５：ｓｕｓｈｉドメインなしでＩＬ－１５に融合したＣＴＬＡ－４抗体。図１０Ａ～１０Ｃは、それぞれ、Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおいて抗ＣＴＬＡ－４－ＩＬ－１５Ｒａ－ｓｕｓｈｉ－ＩＬ－１５融合タンパク質の投与に応答したＮＫ細胞とＣＤ８^＋Ｔ細胞の増殖を示す一対のプロットである。αＣＴＬＡ－４－ＩＬ－１５Ｒａ－ＩＬ－１５：ＩＬ－１５ＲａｓｕｓｈｉドメインとＩＬ－１５に融合したＣＴＬＡ－４抗体；αＣＴＬＡ－４－ＩＬ－１５：ｓｕｓｈｉドメインなしでＩＬ－１５に融合したＣＴＬＡ－４抗体。図１１は、カニクイザルにおいて（配列番号９、１０、および１６の）抗ＣＴＬＡ－４－ＩＬ－１５Ｒａ－ｓｕｓｈｉ－ＩＬ－１５融合タンパク質を用いた治療に応答したＮＫ細胞、ＣＤ８^＋Ｔ細胞、およびＣＤ４^＋Ｔ細胞の増殖を示す一連のプロットである。図１２は、カニクイザルにおいて抗ＣＴＬＡ－４－ＩＬ－１５Ｒａ－ｓｕｓｈｉ－ＩＬ－１５融合タンパク質の投与に応答したサイトカイン誘導を示すプロットである。ｙ軸の単位はピコグラム（ｐｇ）／ミリリットル（ｍＬ）である。サイトカインのレベルは、週１回の４週間反復投与毒性研究において、投与の３日前（Ｄ－３）、次いで最初の投与後２時間、２４時間、および４８時間の時点（それぞれＤ１（２時間）、Ｄ１（２４時間）、およびＤ１（４８時間））に調べ、週１回の４週間反復投与毒性研究における４回目の投与の後２時間、２４時間、および４８時間の時点（それぞれ（Ｄ２２（２時間）、Ｄ２２（２４時間）、およびＤ２２（４８時間））に再び調べた。図１３Ａは、ヒトＣＴＬＡ－４を発現しているＭＣ３８異種移植腫瘍担持マウスにおいて、（配列番号９、１０、および１６の）抗ＣＴＬＡ－４－ＩＬ－１５Ｒａ－ｓｕｓｈｉ－ＩＬ－１５融合タンパク質を用いた治療後の抗腫瘍活性を示す一対のプロットである。図１３Ａは、ヒトＣＴＬＡ－４を発現しているＭＣ３８異種移植腫瘍担持マウスにおいて、（配列番号９、１０、および１６の）抗ＣＴＬＡ－４－ＩＬ－１５Ｒａ－ｓｕｓｈｉ－ＩＬ－１５融合タンパク質を用いた治療後の抗腫瘍活性を示す一対のプロットである。図１３Ｂは、ヒトＣＴＬＡ－４を発現しているＢ１６Ｆ１０異種移植腫瘍担持マウスにおいて、（配列番号９、１０、および１６の）抗ＣＴＬＡ－４－ＩＬ－１５Ｒａ－ｓｕｓｈｉ－ＩＬ－１５融合タンパク質を用いた治療後の抗腫瘍活性を示す一対のプロットである。図１３Ｂは、ヒトＣＴＬＡ－４を発現しているＢ１６Ｆ１０異種移植腫瘍担持マウスにおいて、（配列番号９、１０、および１６の）抗ＣＴＬＡ－４－ＩＬ－１５Ｒａ－ｓｕｓｈｉ－ＩＬ－１５融合タンパク質を用いた治療後の抗腫瘍活性を示す一対のプロットである。

インターロイキン－１５（ＩＬ－１５）は、リンパ球（ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、Ｔ細胞（ＣＤ８＋ αβ Ｔ細胞、γδ Ｔ細胞、およびＮＫＴ細胞など）、および上皮内Ｔリンパ球が含まれる）の発達、生存、増殖、および活性化においてある役割を果たす共通ガンマ鎖サイトカインである。ＩＬ－１５はＩＬ－２と受容体の共通ガンマ鎖を共有しており、似た生物学的効果を持つ。ＩＬ－１５は細胞内で第２のポリペプチドであるＩＬ－１５受容体アルファ（ＩＬ－１５Ｒα）とともに産生され、これら２つのタンパク質は安定なヘテロ二量体を形成して形質膜に輸送され、そこでＩＬ－１５Ｒαが可溶性ヘテロ二量体を細胞外空間と血漿循環に放出する。

ＩＬ－１５はＩＬ－２とは異なり細胞傷害性免疫応答を促進することが示されているが、活性化によって誘導される細胞死（自己反応性Ｔ細胞の排除を通じて自己免疫のリスクを低下させる機構）も合わせて促進することはない。マウスがんモデルでは、ＩＬ－１５の投与によってＣＤ８＋Ｔ細胞の生体内抗腫瘍活性が増強され、生存を延長させることが示されている。理論に囚われないと、ＩＬ－１５はリンパ球が腫瘍の中に入るのを誘導してその細胞傷害性を増大させるほか、増殖とホメオスタシスに影響を与えると考えられる。したがって組み換えＩＬ－１５は、単量体であれ可溶性ヘテロ二量体であれ、がん治療剤としての１つの魅力的な標的である。

しかし単量体またはヘテロ二量体としての組み換えＩＬ－１５の投与は、顕著な毒性と関係する。ヒトがん患者に組み換えヒトＩＬ－１５を静脈内ボーラスによって毎日投与すると、ＩＬ－６、ＩＬ－８、およびＩＦＮγのほか、ＩＬ－１０、腫瘍壊死因子α、およびＩＬ－１βのレベルが顕著に上昇した。これらの増加は臨床毒性（発熱、寒気、悪寒、および血圧変化など）と同時に起こったため、研究者たちは、組み換えヒトＩＬ－１５を静脈内ボーラス用量として投与するのは難しすぎると結論した（Ｃｏｎｌｏｎｅｔａｌ．（２０１５）ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｌｉｎｉｃａｌＯｎｃｏｌｏｇｙ３３：７４－８２）。同様に、ＩＬ－１５をＩＬ－１５Ｒαとの複合体にしてマウスに投与したとき、顕著な毒性が観察され、その中には低体温症、体重減少、急性肝損傷、および死亡が含まれていた（Ｇｕｏｅｔａｌ．（２０１５）ＪＩｍｍｕｎｏｌ１９５３：２３５３－２３６４）。ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒαヘテロ二量体の毒性効果は、主にＮＫ細胞の増殖と活性化によって媒介され、それはＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒαヘテロ二量体の投与後に起こったインターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）の発現増加の結果であるように見えた。同様に、転移性の、または切除不能な固形腫瘍を持つ１４人の患者が漸増用量研究においてＩＬ－１５－ＩＬ－１５Ｒａヘテロ二量体で治療されたとき、深刻な有害事象が３人の患者で観察され、その中には水疱性皮膚炎、紫斑病、および急性腎臓損傷が含まれていた（Ｃｏｎｌｏｎｅｔａｌ．Ｊ．ＩｍｍｕｎｏｔｈｅｒＣａｎｃｅｒ２０２１，９：ｅ００３３８８）。ＩＦＮγを含むいくつかのサイトカインの誘導も観察され、ＩＦＮγの増加の程度は、測定した他のすべてのサイトカインの増加の程度を超えていた。

したがって上記の組み換えＩＬ－１５、またはＩＬ－１５Ｒαとの複合体になったＩＬ－１５と比べて毒性が低下した改良されたＩＬ－１５に基づく治療剤の必要性が存在する。発明者らは、予想に反し、ＩＬ－１５Ｒα ｓｕｓｈｉドメインに融合されたＩＬ－１５は、ＣＴＬＡ－４抗原結合ドメインにも融合されたとき、ＩＦＮγのレベル上昇につながらないことを見いだした。したがって本開示により、ＣＴＬＡ－４抗原結合ドメイン、ＩＬ－１５Ｒα ｓｕｓｈｉドメイン、およびＩＬ－１５を含んでいて、本分野で知られている組み換えヒトＩＬ－１５またはＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒαヘテロ二量体と比べて薬力学活性が保持されていて安全性が優れた融合タンパク質が提供される。

細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４（ＣＴＬＡ－４）は免疫チェックポイントとして機能する膜貫通受容体であり、免疫応答を下方調節する。ＣＴＬＡ－４は、Ｔ細胞活性化にとって極めて重要なＴ細胞共刺激受容体であるＣＤ２８と相同である。ＣＴＬＡ－４分子とＣＤ２８分子の両方とも抗原提示細胞上のＣＤ８０とＣＤ８６に競合しながら結合することができ、そのことによって免疫応答を変化させ、ＣＴＬＡ－４は抑制性シグナルをＴ細胞に伝達する一方でＣＤ２８は刺激性シグナルを伝達する。ＣＴＬＡ－４はＣＤ２８よりも大きな親和性でＣＤ８０とＣＤ８６に結合するため、そのリガンドを求めて競合するときＣＤ２８に勝つことが可能になる。ＣＴＬＡ－４は制御性Ｔ細胞の中で構成的に発現するが、活性化後にエフェクタＴ細胞の中で上方調節されるだけである。抗ＣＴＬＡ－４抗体であるイピリムマブは、ＦＤＡによって認可されたがんのための最初の免疫チェックポイント阻害剤療法である。徹底した研究にもかかわらず、イピリムマブがその免疫治療効果を及ぼす分子機構については議論が続いている。最初の前提は、抗ＣＴＬＡ－４抗体がエフェクタＴ細胞への抑制性シグナルを阻止することによって機能するというものだったが、最近の研究は、イピリムマブの生体内抗腫瘍活性がＡＤＣＣ機構を通じて制御性Ｔ細胞の疲弊に寄与する可能性があることを示唆した（ＳｉｍｐｓｏｎＴ．Ｒ．，ｅｔａｌ．，２０１３，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．２１０（９）：１６９５－１７１０；ＤｕＸ．，ｅｔａｌ．，２０１８，ＣｅｌｌＲｅｓｅａｒｃｈ０：１－１５）。理論に囚われることは望まないため、ＩＬ－１５は、ＣＴＬＡ－４抗体がＣＤ８Ｔ細胞とＮＫ細胞を増殖させるその能力を通じて制御性Ｔ細胞を疲弊させる能力を増強することができると考える。

したがって本明細書では、細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４（ＣＴＬＡ－４であり、ＣＤ１５２としても知られる）に結合する抗体、インターロイキン１５受容体アルファ鎖（ＩＬ－１５ＲａまたはＩＬ－１５Ｒα）のｓｕｓｈｉドメイン、およびインターロイキン１５（ＩＬ－１５）を含む組み換え融合タンパク質が提供される。本明細書では、これら組み換え融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドとベクターのほか、これら組み換え融合タンパク質を含む医薬組成物と、それを製造する方法およびそれを利用する方法が提供される。組み換え融合タンパク質を用いてがんを含むさまざまな疾患と障害を治療することができる。

定義
特に断わらない限り、本明細書で使用される科学技術用語は、本発明が属する分野の当業者によって一般に理解されるのと同じ意味を持つ。

本明細書を解釈する目的で以下の定義が適用され、そして適切な場合にはいつでも、単数で使用されている用語は複数も含み、逆も同様である。下に示されているいずれかの定義が参照によって本明細書に組み込まれているいずれかの文書と矛盾する場合には、下に示されている定義が優先する。

「活性な」という用語は、本明細書では、生物活性または生物学的機能を持つフラグメントを意味する。いくつかの実施形態では、活性は、野生型タンパク質の活性と同じかほぼ同じである。

本明細書で用いられる「対象」という用語の非限定的な例に含まれるのは、哺乳類（例えばヒト、非ヒト霊長類（例えばサル）、マウス、ブタ、ウシ、ヤギ、ウサギ、ラット、モルモット、ハムスター、ウマ、サル、ヒツジ、または他の非ヒト哺乳類が含まれる）、非哺乳類（例えば脊椎非哺乳類（鳥類（例えばニワトリまたはアヒル）または魚類など）；および無脊椎非哺乳類が含まれる）である。いくつかの実施形態では、本発明の方法と組成物は非ヒト動物を（予防的および／または治療的の両方で）治療するために用いられる。「対象」という用語は、患者、すなわち医療を待っているか受けている個体も意味することができる。

「医薬組成物」という用語は、本明細書では、対象（動物またはヒトが含まれる）で医薬として利用するのに適した組成物を意味する。医薬組成物は一般に、有効量の活性剤（例えば本発明の組み換え融合タンパク質）と、医薬として許容可能な基剤、希釈剤、または賦形剤（例えばバファ、アジュバントなど）を含む。

「有効な量」という用語は、望む結果を生じさせるのに十分な用量または量を意味する。望む結果は、レシピエントにおける用量または量の客観的または主観的な改善（例えば長期生存、腫瘍の数および／またはサイズの減少、疾患状態の有効な予防など）を含むことができる。

「予防的治療」は、疾患、病変、または医学的障害の徴候または症状を示さない対象、または疾患、病変、または障害の初期の徴候または症状だけを示す対象に投与される治療であるため、治療は、その疾患、病変、または医学的障害が進展するリスクを減らす、予防する、または低下させるために投与される。予防的治療は、疾患または障害に対する予防的治療として機能する。「予防活性」は、病変、疾患、または障害の徴候または症状を示さない（または病変、疾患、または障害の初期の徴候または症状だけを示す）対象に投与されたときに対象でその病変、疾患、または障害が進展するリスクを減らす、予防する、または低下させる薬剤（本発明の組み換え融合タンパク質またはその組成物など）の活性である。「予防に役立つ」薬剤または化合物（例えば本発明の組み換え融合タンパク質）は、病変、疾患、または障害の進展を少なくする、予防する、治療する、または減少させるのに有用な薬剤または化合物を意味する。

「治療的治療」は、病変、疾患、または障害の症状または徴候を示す対象に投与される治療であり、その治療は、病変、疾患、または障害のこれら徴候または症状を減らすかなくす目的で対象に投与される。「治療活性」は、病変、疾患、または障害の徴候または症状をなくすか減らすことが、そのような徴候または症状に苦しんでいる対象に投与されたときに実現される薬剤（そのような本発明の組み換え融合タンパク質またはその組成物）の活性である。「治療に役立つ」薬剤または化合物（例えば本発明の組み換え融合タンパク質）は、ある薬剤または化合物が、病変、疾患、または障害のそのような徴候または症状を減らす、治療する、またはなくすのに役立つことを示す。

「がんを治療する」という用語は、本明細書では、特に断わらない限り、対象において腫瘍の増殖、腫瘍の転移、または他のがんを引き起こす細胞または新生物細胞の成長を部分的に、または完全に逆転させる、緩和する、その進行を阻害する、または予防することを意味する。「治療」という用語は、本明細書では、特に断わらない限り、治療する行為を意味する。

２つ以上の核酸またはポリペプチドの配列の文脈における「同じ」または「一致率」という用語は、対応を最大にするため比較してアラインメントさせたとき、同じであるか、特定の割合のヌクレオチドまたはアミノ酸残基が同じである２つ以上の配列または部分配列を意味する。一致率を求めるため、配列は、最適な比較を目的としてアラインメントさせる（例えばギャップを第１のアミノ酸の配列または核酸の配列に導入して、第２のアミノ酸または核酸の配列との最適なアラインメントにすることができる）。その後、対応するアミノ酸位置またはヌクレオチド位置のアミノ酸残基またはヌクレオチドを比較する。第１の配列内のある位置が第２の配列内の対応する位置と同じアミノ酸残基またはヌクレオチドによって占められているとき、それら分子はその位置が一致する。２つの配列の間の一致率は、それらの配列が共有する同じ位置の数の関数である（すなわち一致率は、同じ位置の数／位置の総数（例えば重複している位置）×１００に等しい）。いくつかの実施形態では、それら２つの配列は同じ長さである。

２つの核酸またはポリペプチドの文脈における「実質的に同じ」という表現は、（例えば下記の方法の１つ以上を利用して求めたときに）少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％一致する、または少なくとも９９％一致する２つ以上の配列または部分配列を意味する。

２つの配列間の一致率は数学的アルゴリズムを用いて求めることができる。２つの配列の比較に使用される数学的アルゴリズムの非限定的な一例は、ＫａｒｌｉｎａｎｄＡｌｔｓｃｈｕｌ，１９９０，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８７：２２６４－２２６８のアルゴリズムをＫａｒｌｉｎａｎｄＡｌｔｓｃｈｕｌ，１９９３，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９０：５８７３－５８７７におけるように改変したものである。このようなアルゴリズムは、Ａｌｔｓｃｈｕｌｅｔａｌ．，１９９０，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３－４１０のプログラムＮＢＬＡＳＴとＸＢＬＡＳＴに組み込まれている。興味あるタンパク質をコードする核酸と相同なヌクレオチド配列を求めるため、ＢＬＡＳＴヌクレオチド検索をＮＢＬＡＳＴプログラムでスコア＝１００、ワード長＝１２にして実施することができる。興味あるタンパク質と相同なアミノ酸配列を得るため、ＢＬＡＳＴタンパク質検索をＸＢＬＡＳＴプログラムでスコア＝５０、ワード長＝３にして実施することができる。比較を目的としたギャップ付きアラインメントを得るため、ギャップ付きＢＬＡＳＴをＡｌｔｓｃｈｕｌｅｔａｌ．，１９９７，ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓＲｅｓ．２５：３３８９－３４０２に記載されているようにして用いることができる。あるいはＰＳＩ－Ｂｌａｓｔを用いて反復検索を実施することができ、分子の間の離れた関係が検出される（同上）。プログラムＢＬＡＳＴ、ギャップ付きＢＬＡＳＴ、およびＰＳＩ－ＢＬＡＳＴを使用するとき、それぞれのプログラム（例えばＸＢＬＡＳＴとＮＢＬＡＳＴ）のデフォルトパラメータを用いることができる。配列の比較に使用される別の非限定的な一例は、ＭｙｅｒｓａｎｄＭｉｌｌｅｒ，ＣＡＢＩＯＳ（１９８９）のアルゴリズムである。そのようなアルゴリズムは、ＧＣＧ配列アラインメントソフトウエアパッケージの一部であるＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）に組み込まれている。ＡＬＩＧＮプログラムを用いてアミノ酸配列を比較するとき、ＰＡＭ１２０重み残差表、ギャップ長ペナルティ＝１２、およびギャップペナルティ＝４を用いることができる。配列分析の追加アルゴリズムは本分野で知られており、その中には、ＴｏｒｅｌｌｉｓａｎｄＲｏｂｏｔｔｉ，１９９４，Ｃｏｍｐｕｔ．Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｓｃｉ．１０：３－５に記載されているＡＤＶＡＮＣＥおよびＡＤＡＭと；ＰｅａｒｓｏｎａｎｄＬｉｐｍａｎ，１９８８，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８５：２４４４－８に記載されているＦＡＳＴＡが含まれる。あるいはＨｉｇｇｉｎｓｅｔａｌ．，１９９６，ＭｅｔｈｏｄｓＥｎｚｙｍｏｌ．２６６：３８３－４０２によって記載されているように、ＣＬＵＳＴＡＬＷアルゴリズムを用いてタンパク質配列アラインメントを実施することができる。

本明細書では、結合する」、「に特異的に結合する」、または「に対して特異的」であるという表現は、測定可能で再現可能な相互作用（標的と抗体の間の結合など）を意味し、それが、生体分子を含む分子の異種混交集団が存在している中に標的が存在することを決定的にする。例えば標的（エピトープが可能）に特異的に結合する抗体は、この標的と、他の標的への結合と比べてより大きな親和性、アビディティで、より容易に、および／またはより長く結合する抗体である。一実施形態では、無関係な標的への抗体の結合の程度は、例えばラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）によって測定するとき、標的への抗体の結合の約１０％未満である。ある実施形態では、標的に特異的に結合する抗体は、１μＭ未満、１００ｎＭ未満、１０ｎＭ未満、１ｎＭ未満、または０．１ｎＭ未満の解離定数（Ｋｄ）を持つ。

ある実施形態では、抗体は、異なる種からのタンパク質の間で保存されているタンパク質上のエピトープに特異的に結合する。別の一実施形態では、特異的結合に排他的結合を含めることができるが、そうせねばならないわけではない。

本明細書では、文脈が明らかに異なることを述べているのでなければ、単数形「１つの」、「１つの」、および「その」に複数が含まれる。「その製剤」または「その方法」への言及には、本明細書に記載されている、および／または本開示を当業者が読んだときに明らかになるタイプの１つ以上の製剤、方法、および／または工程が含まれる。

「ポリペプチド」という用語は、アミノ酸のポリマーおよびその等価物を意味し、生成物が特定の長さであることを意味しない；したがって「ペプチド」と「タンパク質」はポリペプチドの定義に含まれる。１つのタンパク質は１つ以上のポリペプチドを持つことができる。ポリペプチドの定義には、本明細書で定義される「抗体」も含まれる。「ポリペプチド領域」はポリペプチドの１つの区画を意味し、その区画は、例えば１つ以上のドメインまたはモチーフを含有することができる（例えば抗体のポリペプチド領域は例えば１つ以上の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含有することができる）。「フラグメント」という用語は、ポリペプチドの一部で、天然状態のポリペプチド全体よりも短いものを意味する。

文脈に異なることが示されている場合を除き、「誘導体」は、第２のポリペプチドと比べて１つ以上の非保存的または保存的アミノ酸置換を持つポリペプチドまたはそのフラグメント（「バリアントとも呼ばれる）；または第２の分子の共有結合によって（例えば異種ポリペプチドの付着によって、またはグリコシル化、アセチル化、リン酸化などによってなど）改変されたポリペプチドまたはそのフラグメントである。「誘導体」の定義にさらに含まれるのは、例えばアミノ酸の１つ以上の類似体（例えば非天然アミノ酸など）を含有するポリペプチド、置換されていない結合のほか本分野で知られている他の修飾を持つポリペプチドであり、天然と非天然の両方が含まれる。

「単離された」ポリペプチドは、その天然環境の成分から同定されて分離された、および／または回収されものである。その天然環境の汚染成分は、そのポリペプチドを診断または治療で利用することを妨げる材料であり、酵素、ホルモン、および他のタンパク質性溶質または非タンパク質性溶質を含んでいる可能性がある。単離されたポリペプチドには、単離された抗体、またはフラグメント、またはこれらの誘導体が含まれる。

Ｔ細胞はリンパ球の一種であり、その細胞表面にＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を発現し、適応免疫応答において中心的な役割を果たす。Ｔ細胞は骨髄の中中の造血幹細胞によって産生され、胸腺に移動して成熟する。Ｔ細胞のタイプに含まれるのは、ＣＤ４＋ヘルパーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、メモリＴ細胞、およびＮＫＴ細胞である。Ｔ細胞のタイプは、マーカー（ＣＤ４、ＣＤ８、およびＣＤ４５ＲＯなど）の組み合わせの発現によって当業者には容易にわかるであろう。

ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞は細胞傷害性リンパ球の一種であり、自然免疫応答においてある役割を果たす。ＮＫ細胞は、ストレスを受けた細胞を抗体およびまたは主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）の発現の不在下で認識して殺傷し、迅速な免疫応答を生じさせることができる。それに加え、抗原に結合する抗体は、ＮＫ細胞の表面に発現したＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）受容体によって認識されることが可能であり、その結果として、ＮＫ活性化、細胞溶解性顆粒の放出、および細胞アポトーシスが起こる。ＮＫ細胞は、Ｔ細胞と同様に造血幹細胞から分化する。ＮＫ細胞は、マーカー、またはマーカーの組み合わせ（例えばＣＤ５６＋とＣＤ３－）の発現を通じて当業者には明らかであろう。

Ｔ細胞とＮＫ細胞を活性化させるとは、その生物学的状態の変化を誘導し、そのことによって細胞が活性化マーカーを発現すること、サイトカインを産生すること、増殖すること、および／または標的細胞に対して細胞傷害性になることを意味する。

Ｔ細胞にとって、通常、休止しているナイーブＴ細胞またはメモリＴ細胞の持続的活性化を誘導するのにＴ細胞受容体（ＴＣＲ）への係合だけでは十分でない。十分なＴ細胞活性化にはコンピテント抗原提示細胞（ＡＰＣ）からの第２の共刺激シグナルが必要とされる。共刺激は、Ｔ細胞上の共刺激細胞表面受容体とＡＰＣの表面上の適切なカウンター受容体の相互作用によって自然に実現される。ＡＰＣは通常は宿主起源の細胞であり、免疫応答を刺激する部分を提示する。ＡＰＣに含まれるのは、単球／マクロファージ、樹状細胞、Ｂ細胞に加え、Ｔ細胞によって認識されるタンパク質を表面に発現する任意の数のウイルス感染細胞または腫瘍細胞である。免疫原性であるためには、ＡＰＣはその表面に共刺激分子も発現せねばならない。このようなＡＰＣは、Ｔ細胞と直接相互作用したとき、Ｔ細胞増殖を刺激すること、サイトカイン産生を誘導すること、および細胞溶解性Ｔ細胞のための標的として機能することができる。

ＮＫ細胞にとって、活性化は、抑制性受容体と活性化受容体の刺激のバランスによって少なくとも一部が決まる。代表的な活性化受容体に含まれるのはＬｙ４９、ＮＣＲ受容体、およびＣＤ１６であるのに対し、代表的な抑制性受容体に含まれるのは、キラー細胞免疫グロブリン様受容体（ＫＩＲ）、ＣＤ９４／ＮＫＧ２、およびＬＩＲである。サイトカインはＮＫ細胞活性化においてある役割を果たす。ストレス（例えば感染、患部におけるＮＫ細胞病原体の存在のストレス）下の細胞によって放出されるサイトカイン。ＮＫ活性化に関与するサイトカインに含まれるのは、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＩＬ－１８、ＩＬ－２、およびＣＣＬ５である。ＮＫ細胞は、インターフェロン、またはマクロファージ由来のサイトカインにも応答して活性化される。

Ｂ細胞はＢリンパ球としても知られ、リンパ球サブタイプの白血球細胞の一種である。Ｂ細胞は抗体を分泌することによって適応免疫系の液性免疫成分において機能する。

「自家」という用語は、同じ個体に由来するあらゆる材料を意味し、その材料が後にその個体に再導入される。

「同種異系」という用語は、材料が導入される個体と同じ種の異なる動物に由来する任意の材料を意味する。２つ以上の個体は、１つ以上の遺伝子座で遺伝子が同じでないとき、互いに同種異系であると言われる。いくつかの側面では、同じ種の個体からの同種異系材料は、抗原として相互作用するほど遺伝子的に十分に似ていない可能性がある。

「約」という用語は、本明細書では、量表現において±５％、または別の一実施形態では±１０％、または別の一実施形態では±１５％、または別の一実施形態では±２０％を意味する。

本明細書に記載されているすべての方法は適切な任意の順番で実施することができるが、本明細書にそうでないことが示されている場合、または文脈に明らかに矛盾する場合は別である。本明細書に提示されているどの実施例または例示の用語（例えば「など」）の使用も、単に本発明をよりよく説明することが目的であり、本発明の範囲に制限を課すことはないが、そうでないと主張されている場合は別である。明細書のどの表現も、請求項にない要素が本発明の実施にとって不可欠であることを示していると解釈すべきではない。

本明細書で言及されているあらゆる刊行物、特許、および特許出願は、個々の刊行物、特許、または特許出願が具体的かつ個別に参照によって組み込まれていることを示しているのと同じ程度で参照によって本明細書に組み込まれている。

組み換え融合タンパク質
本開示により、インターロイキン１５（ＩＬ－１５）ドメイン；インターロイキン１５受容体サブユニットアルファ（ＩＬ－１５Ｒａ）ｓｕｓｈｉドメイン、および細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４（ＣＴＬＡ－４）に対して特異的な抗原結合ドメインを含む組み換え融合タンパク質が提供される。

インターロイキン１５（ＩＬ－１５）
本開示により、インターロイキン１５（ＩＬ－１５）、またはその活性なフラグメントまたは誘導体を含む組み換え融合タンパク質が提供される。

ＩＬ－１５は免疫調節サイトカインであり、インターロイキン－２（ＩＬ－２）、インターロイキン－４（ＩＬ－４）、インターロイキン－７（ＩＬ－７）、インターロイキン－９（ＩＬ－９）、およびインターロイキン－２１（ＩＬ－２１）を含むサイトカインのファミリーに属する。ＩＬ－１５は、ＩＬ－２と同様、ＩＬ－２／ＩＬ－１５受容体β（ＩＬ－２ＲβまたはＩＬ－２Ｒｂであり、ＣＤ１２２とも呼ばれる）サブユニットと共通ガンマ鎖（γＣ）（ＩＬ－２ＲＧまたはＣＤ１３２）受容体サブユニットを含む受容体複合体に結合し、この受容体複合体を通じてシグナルを伝達する。ＩＬ－１５は多くの機能を持っており、その非限定的な例に含まれるのは、Ｔ細胞応答の調節、組織修復とＢ細胞ホーミングの調節、炎症の調整、およびＮＫ細胞の活性化である。ＩＬ－１５シグナル伝達は一群の下流経路を刺激することができ、細胞増殖の増加、アポトーシスの減少、および免疫細胞の活性化と移動の増強につながる。ＩＬ－１５は、ＮＫＴ細胞の発達と生存においてもある役割を果たしていると考えられる。ＩＬ－１５はＴ細胞とＮＫ細胞の増殖、生存、および細胞傷害機能を刺激して細胞傷害性リンパ球の生成を誘導することができるため、増強された抗腫瘍応答につながる。

ＩＬ－１５は１４～１５ｋＤａの糖タンパク質である。ヒトＩＬ－１５遺伝子は９つのエキソン（１～８と４Ａ）と８つのイントロンを含んでおり、そのうちの４つ（エキソン５～８）が成熟タンパク質をコードしている。ＩＬ－１５の選択的スプライシングの２つの転写産物バリアント（これらは細胞内輸送が異なるが同じ成熟タンパク質をコードする）が報告されている。ＩＬ－１５遺伝子は例えばＮＣＢＩ記録ＮＧ＿０２９６０５．２に記載されている（その内容は全体が参照によって本明細書に組み込まれている）。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載されている組み換え融合タンパク質のＩＬ－１５ドメインは活性である。ＩＬ－１５活性の非限定的な例に含まれるのは、免疫細胞活性化の促進、免疫細胞の増殖促進、免疫細胞のアポトーシス減少、免疫細胞の応答調節、免疫細胞によるサイトカイン放出の調節、および免疫細胞の分化調節である。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５活性は、免疫細胞の活性化促進、免疫細胞の増殖促進、またはこれらの組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、またはこれらの組み合わせを含む。

いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５ドメインは、ＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＤＴＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳ（配列番号１）の配列、またはそれと少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、または少なくとも９９％一致する配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５ドメインは、配列番号１の配列、またはそれと少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、または少なくとも９９％一致する配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５ドメインは、配列番号１を含むか、主に配列番号１からなる。

いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５ドメインは、ＡＡＴＴＧＧＧＴＣＡＡＣＧＴＧＡＴＣＴＣＣＧＡＣＣＴＧＡＡＧＡＡＧＡＴＣＧＡＧＧＡＣＣＴＧＡＴＣＣＡＧＴＣＣＡＴＧＣＡＣＡＴＣＧＡＣＧＣＴＡＣＣＣＴＧＴＡＣＡＣＣＧＡＧＴＣＣＧＡＣＧＴＧＣＡＣＣＣＴＴＣＣＴＧＴＡＡＡＧＴＧＡＣＣＧＣＣＡＴＧＡＡＧＴＧＣＴＴＴＣＴＧＣＴＧＧＡＡＣＴＧＣＡＡＧＴＧＡＴＣＴＣＣＣＴＧＧＡＡＴＣＣＧＧＣＧＡＣＧＣＣＴＣＴＡＴＣＣＡＣＧＡＣＡＣＣＧＴＧＧＡＡＡＡＣＣＴＧＡＴＣＡＴＣＣＴＧＧＣＣＡＡＣＡＡＣＴＣＣＣＴＧＴＣＣＴＣＣＡＡＣＧＧＣＡＡＣＧＴＧＡＣＣＧＡＧＴＣＴＧＧＣＴＧＣＡＡＡＧＡＧＴＧＣＧＡＧＧＡＡＣＴＧＧＡＡＧＡＧＡＡＧＡＡＣＡＴＣＡＡＡＧＡＧＴＴＣＣＴＣＣＡＧＴＣＣＴＴＣＧＴＧＣＡＣＡＴＣＧＴＧＣＡＧＡＴＧＴＴＣＡＴＣＡＡＣＡＣＣＡＧＣ（配列番号２１）を含む配列、またはそれと少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％または一致する配列によってコードされる。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５ドメインは、配列番号２１を含む配列、またはそれと少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％または一致する配列によってコードされる。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５ドメインは、配列番号２１を含む配列によってコードされる。

ＩＬ－１５Ｒα Ｓｕｓｈｉドメイン
本開示により、ＩＬ－１５、ＩＬ－１５Ｒａｓｕｓｈｉドメイン、および抗ＣＴＬＡ－４抗体を含む組み換え融合タンパク質が提供される。

インターロイキン１５受容体サブユニットアルファ（ＩＬ－１５ＲαまたはＩＬ－１５Ｒａ）はＩＬ－１５サイトカイン－受容体複合体の極めて重要な構成要素である。ＩＬ－１５Ｒαは、ＩＬ－１５に対する親和性が非常に大きい膜貫通タンパク質であり、ＩＬ－１５が小胞体（ＥＲ）から細胞質を通って移動し、細胞表面にＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒα複合体が提示されるのを容易にする。会合して細胞質全体に残ることと細胞表面での発現に加え、ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒαは複合体として切断されて細胞外空間にも出る。ＩＬ－１５とＩＬ－１５Ｒサブユニットのこれらの特殊性がサイトカイン送達の機構を独自なものにする。ＩＬ－１５のためのシグナル伝達サブユニットの選択的発現とは異なり、このサイトカインそのものとＩＬ－１５Ｒαは大半のタイプの細胞（造血細胞と非造血細胞の両方が含まれる）で広く発現するが、骨髄細胞で最大である。

ＩＬ－１５Ｒａｓｕｓｈｉドメインは細胞外タンパク質－タンパク質相互作用ドメインであり、４つのシステインを含有していて２つのジスルフィド結合を１－３パターンと２－４パターンで形成する。理論に囚われないと、ＩＬ－１５Ｒａｓｕｓｈｉドメインは、ＩＬ－１５がＩＬ－２Ｒベータ／ＩＬ－２Ｒガンマヘテロ二量体受容体複合体を通じて免疫細胞に結合するのを増強することによってＩＬ－１５アゴニストとして機能し、免疫細胞に影響を与えると考えられる。

いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒａｓｕｓｈｉドメインは、ＩＬ－１５ドメインの活性を、ＩＬ－１５Ｒａｓｕｓｈｉドメインを欠くこと以外は同等な組み換え融合タンパク質におけるＩＬ－１５ドメインの活性と比べて増大させる。例えば本明細書に記載されている組み換え融合タンパク質の一部としてのＩＬ－１５Ｒａｓｕｓｈｉドメインの存在は、ＩＬ－１５ドメインが一部となっている組み換え融合タンパク質が免疫細胞の増殖、活性化、またはこれらの組み合わせに及ぼす効果を増大させることができる。

ヒトＩＬ－１５Ｒａは例えばＵｎｉＰｒｏｔＫＢ記録Ｑ１３２６１．１に記載されている（その内容はその全体が参照によって組み込まれている）。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒａは、
１ＭＡＰＲＲＡＲＧＣＲＴＬＧＬＰＡＬＬＬＬＬＬＬＲＰＰＡＴＲＧＩＴＣＰＰＰＭＳＶＥＨＡＤＩＷＶＫＳＹＳＬＹＳＲＥＲＹＩＣＮ
６１ＳＧＦＫＲＫＡＧＴＳＳＬＴＥＣＶＬＮＫＡＴＮＶＡＨＷＴＴＰＳＬＫＣＩＲＤＰＡＬＶＨＱＲＰＡＰＰＳＴＶＴＴＡＧＶＴＰＱＰＥ
１２１ＳＬＳＰＳＧＫＥＰＡＡＳＳＰＳＳＮＮＴＡＡＴＴＡＡＩＶＰＧＳＱＬＭＰＳＫＳＰＳＴＧＴＴＥＩＳＳＨＥＳＳＨＧＴＰＳＱＴＴＡ
１８１ＫＮＷＥＬＴＡＳＡＳＨＱＰＰＧＶＹＰＱＧＨＳＤＴＴＶＡＩＳＴＳＴＶＬＬＣＧＬＳＡＶＳＬＬＡＣＹＬＫＳＲＱＴＰＰＬＡＳＶＥ
２４１ＭＥＡＭＥＡＬＰＶＴＷＧＴＳＳＲＤＥＤＬＥＮＣＳＨＨＬ（配列番号２０）の配列を含む。
上記の配列番号２０では、ｓｕｓｈｉドメインに下線が引かれている。当業者は、ｓｕｓｈｉドメインの全体または一部を包含するＩＬ－１５Ｒａの断片であってＮ末端とＣ末端において１、２、３、４、５個、またはそれよりも多い個数のアミノ酸が異なるものはｓｕｓｈｉドメイン活性を持つ可能性があり、本発明の範囲内であると考えられることを理解するであろう。

いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒａｓｕｓｈｉドメインは、ＩＴＣＰＰＰＭＳＶＥＨＡＤＩＷＶＫＳＹＳＬＹＳＲＥＲＹＩＣＮＳＧＦＫＲＫＡＧＴＳＳＬＴＥＣＶＬＮＫＡＴＮＶＡＨＷＴＴＰＳＬＫＣＩＲＤＰＡＬＶＨＱＲＰＡＰＰＳＴＶ（配列番号２）の配列、またはそれと少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、または少なくとも９９％一致する配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒａｓｕｓｈｉドメインは、配列番号２の配列、またはそれと少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、または少なくとも９９％一致する配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒａｓｕｓｈｉドメインは、配列番号２の配列を含むか、主に配列番号２の配列からなる。

いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒａｓｕｓｈｉドメインは、ＡＴＴＡＣＡＴＧＣＣＣＴＣＣＴＣＣＡＡＴＧＴＣＣＧＴＧＧＡＡＣＡＣＧＣＣＧＡＣＡＴＣＴＧＧＧＴＣＡＡＧＴＣＣＴＡＣＡＧＣＣＴＧＴＡＣＴＣＣＡＧＡＧＡＧＣＧＧＴＡＣＡＴＣＴＧＣＡＡＣＴＣＣＧＧＣＴＴＣＡＡＧＡＧＡＡＡＧＧＣＣＧＧＣＡＣＣＴＣＴＡＧＣＣＴＧＡＣＣＧＡＧＴＧＣＧＴＧＣＴＧＡＡＣＡＡＧＧＣＣＡＣＣＡＡＴＧＴＧＧＣＣＣＡＣＴＧＧＡＣＣＡＣＡＣＣＴＡＧＣＣＴＧＡＡＧＴＧＣＡＴＣＡＧＧＧＡＣＣＣＣＧＣＴＣＴＧＧＴＴＣＡＴＣＡＧＡＧＧＣＣＴＧＣＴＣＣＴＣＣＡＴＣＴＡＣＣＧＴＴ（配列番号２２）を含む配列、またはそれと少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％または一致する配列によってコードされる。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒａドメインは、配列番号２２を含む配列、またはそれと少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％または一致する配列によってコードされる。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒａドメインは、配列番号２２を含む配列によってコードされる。

ＣＴＬＡ－４抗原結合ドメイン
本開示により、ＣＴＬＡ－４に対して特異的な抗原結合ドメインを含む融合タンパク質が提供される。適切な任意のＣＴＬＡ－４抗原結合ドメインが本開示の範囲内で考えられ、その非限定的な例に含まれるのは、一本鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）、単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）（ＶＨＨ単一ドメイン抗体など）、抗体、または抗体フラグメントである。

ヒトＣＴＬＡ－４はＣＤ１５２としても知られ、免疫グロブリンスーパーファミリーの中の膜結合単一Ｖドメインサブファミリーのメンバーであり、主に活性化されたＴ細胞と制御性Ｔ細胞の表面に見られる。Ｔリンパ球（Ｔ細胞）は抗原に対する適応免疫応答にとって重要である。ナイーブＴ細胞の十分な活性化には少なくとも２つのシグナルが必要とされる。第１の抗原特異的シグナルは、抗原提示細胞（ＡＰＣ）上でのＴ細胞受容体（ＴＣＲ）とＭＨＣ／ペプチド複合体の相互作用によって提供される。第２の共刺激シグナルは、Ｔ細胞上の受容体と、抗原提示細胞（ＡＰＣ）上の対応するリガンドの間の相互作用によって提供される。ＴＣＲ／ＭＨＣと共刺激相互作用の両方が関与することで、多数の細胞内経路を通じたＴ細胞活性化と、多数のエフェクタ化合物（ＩＬ－２などのサイトカインが含まれる）のための転写因子のその後の活性化につながる。これらのイベントが、Ｔ細胞の増殖、ＣＤ４^＋ヘルパーＴ細胞（Ｔ^Ｈ）プールの生成、および活性化したＣＤ８^＋細胞傷害性Ｔ細胞の増殖につながる。共刺激は十分なＴ細胞活性化にとって極めて重要であるだけでなく、ＴＣＲ／ＭＨＣ係合中にそれが不在である結果としてアネルギーおよび／またはアポトーシスが起こる。１つの極めて重要な相互作用が、Ｔ細胞上のＣＤ２８と、ＡＰＣ上のＢ７－１（ＣＤ８０）およびＢ７－２（ＣＤ８６）の間で起こる。ＣＤ２８はＴ細胞が分化してＴＨ１表現型細胞になるのを促進し、Ｂ細胞による抗体産生とＴ細胞の活性化を増強する。Ｔ細胞の活性化後、負の調節をする受容体として機能するＣＴＬＡ－４がＴ細胞上で上方調節される。ＣＴＬＡ－４は免疫応答をいくつかのやり方で阻害する：ＣＴＬＡ－４はＢ７リガンドをＣＤ２８と競合するため、共刺激を阻止する；ＣＴＬＡ－４は負のシグナルを伝達してＴ細胞の活性化を阻害する；そしてＣＴＬＡ－４は、対立する細胞からトランス－エンドサイトーシスによってＣＤ８０とＣＤ８６を捕獲することができ、その結果としてＣＤ２８を通じた共刺激が損なわれる。ＣＴＬＡ－４は免疫チェックポイントとして機能し、ＣＴＬＡ－４が活性化すると免疫応答は下方調節される。例えばＣＴＬＡ－４アンタゴニストとして作用するＣＴＬＡ－４に対して特異的な抗原結合ドメインの使用を通じてＣＴＬＡ－４活性化に拮抗することにより、ＣＴＬＡ－４を媒介とした免疫応答の下方調節を阻止すること、または減らすことが可能である。

いくつかの実施形態では、ＣＴＬＡ－４に対して特異的な本開示の抗原結合ドメインは、ＣＴＬＡ－４アンタゴニストとして機能することができる。いくつかの実施形態では、ＣＴＬＡ－４抗原結合ドメインは、ＣＴＬＡ－４を媒介とした免疫応答の下方調節を阻止するか減らす。ＣＴＬＡ－４アンタゴニストは例えばがんと感染症に対する免疫系寛容の発達を減らし、免疫細胞の活性を促進することができる。例えばＣＴＬＡ－４アンタゴニストは免疫細胞の活性化と増殖を促進することができる。

いくつかの実施形態では、ＣＴＬＡ－４に対して特異的な抗原結合ドメインは抗体（例えばモノクローナル抗体）である。

「抗原結合領域」という用語は、本明細書では、抗原結合部分と抗原の間の特異的結合にとって重要な抗原結合部分のドメインを意味する。例えば抗体またはそのフラグメントの抗原結合領域は、重鎖（本明細書ではＶＨと略する）と軽鎖（本明細書ではＶＬと略する）のＮ末端可変領域のアミノ酸残基によって形成される。ＶＨとＶＬそれぞれの可変領域は、相補性決定領域（ＣＤＲ）と名づけられた３つの超可変領域を含む。ＶＨの３つのＣＤＲとＶＬの３つのＣＤＲが互いに三次元的に配置されて抗原結合表面を形成する。

本明細書では、「抗体」は、免疫グロブリン遺伝子、または免疫グロブリン遺伝子のフラグメントによって実質的に、または部分的にコードされている１つ以上のポリペプチドを含むタンパク質を意味する。知られている免疫グロブリン遺伝子に含まれるのは、カッパ、ラムダ、アルファ、ガンマ、デルタ、イプシロン、およびミュー定常領域遺伝子のほか、多彩な免疫グロブリン可変領域遺伝子である。軽鎖はカッパまたはラムダとして分類される。重鎖は、ガンマ、ミュー、アルファ、デルタ、またはイプシロンとして分類され、これらが今度は免疫グロブリンのクラス、すなわちＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、およびＩｇＥをそれぞれ規定する。典型的な免疫グロブリン（例えば抗体）構造単位は四量体を含む。それぞれの四量体は、図１Ａに示されているように、ポリペプチド鎖の２つの同じペアからなり、それぞれのペアは１つの「軽」鎖（約２５ｋＤ）と１つの「重」鎖（約５０～７０ｋＤ）を持つ。それぞれの鎖のＮ末端は、抗原認識にとって最も重要な約１００～１１０個、またはそれよりも多数個のアミノ酸からなる可変領域を規定する。可変軽鎖（ＶＬ）と可変重鎖（ＶＨ）という用語は、これら軽鎖と重鎖をそれぞれ意味する。

抗体は、インタクト免疫グロブリンとして、またはさまざまなペプチダーゼを用いた消化によって生じる多数のよく特徴づけられた断片として存在する。したがって例えばペプシンは抗体をヒンジ領域内のジスルフィド結合の下方で消化してＦ（ａｂ’）２（Ｆａｂの二量体であり、Ｆａｂ自体はジスルフィド結合によってＶＨ－ＣＨ１に接合された軽鎖である）を生じさせる。Ｆ（ａｂ’）２を穏やかな条件下で還元してヒンジ領域内のジスルフィド結合を破断させることにより、Ｆ（ａｂ’）２二量体をＦａｂ’単量体に変換する。Ｆａｂ’単量体は本質的にヒンジ領域の一部を有するＦａｂである（他の抗体フラグメントのより詳細な記述に関しては、ＦｕｎｄａｍｅｎｔａｌＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｗ．Ｅ．Ｐａｕｌ，ｅｄ．，ＲａｖｅｎＰｒｅｓｓ，ＮｅｗＹｏｒｋ（１９９９）を参照されたい）。さまざまな抗体フラグメントがインタクト抗体の消化に関して明確にされているが、当業者は、そのようなＦａｂ’フラグメントなどを、化学的に、または組み換えＤＮＡ法を利用して新たに合成できることを認識しているであろう。したがって抗体という用語は、本明細書では、抗体全体の修飾によって作製するか、組み換えＤＮＡ法を利用して新たに合成した抗体フラグメントも含む。

天然の「抗体」は、ジスルフィド結合によって相互に接続された少なくとも２つの重（Ｈ）鎖と２つの軽（Ｌ）鎖を含むタンパク質である。それぞれの重鎖は重鎖可変領域（本明細書ではＶＨと略する）と重鎖定常領域からなる。重鎖定常領域は、３つのドメイン、すなわちＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３からなる。それぞれの軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書ではＶＬと略する）と軽鎖定常領域からなる。軽鎖定常領域は１つのドメインＣＬからなる。ＶＨ領域とＶＬ領域は、より保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる領域が間に散在した相補性決定領域（ＣＤＲ）と名づけられた超可変性の領域にさらに分割することができる。それぞれのＶＨとＶＬは３つのＣＤＲと４つのＦＲからなり、それらがアミノ末端からカルボキシ末端へ以下の順番、すなわちＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４の順番で配置されている。抗体の定常領域は、宿主の組織または因子（免疫系のさまざまな細胞（例えばエフェクタ細胞）と古典的補体系の第１成分（Ｃ１ｑ）が含まれる）への免疫グロブリンの結合を媒介することができる。

抗体には一本鎖抗体が含まれ、その中には一本鎖Ｆｖ（ｓＦｖまたはｓｃＦｖ）抗体が含まれていて、その中で可変重鎖と可変軽鎖が（直接に、またはペプチドリンカーを介して）互いに接合されて連続したポリペプチドを形成している。

抗体には単一ドメイン抗体が含まれる。単一ドメイン抗体は、抗原ドメインに選択的に結合することのできる単一の単量体可変抗体ドメインからなる抗体フラグメントを含む。非限定的な例に含まれるのは、重鎖抗体、天然状態で軽鎖を欠く抗体、従来の４鎖抗体に由来する単一ドメイン抗体、操作された抗体、および抗体に由来するのではない単一ドメイン足場である。単一ドメイン抗体として、本分野の任意のもの、または将来の任意の単一ドメイン抗体が可能である。単一ドメイン抗体は、任意の種（その非限定的な例に含まれるのは、マウス、ヒト、ラクダ、ラマ、ヤギ、ウサギ、ウシである）に由来することができる。本発明の１つの側面によれば、単一ドメイン抗体は、本明細書では、軽鎖を欠く重鎖抗体として知られる天然の単一ドメイン抗体である。そのような単一ドメイン抗体は例えばＷＯ９４０４６７８に開示されている。明確にするという理由で、天然状態で軽鎖を欠く重鎖抗体に由来するこの可変ドメインは、４つの鎖免疫グロブリンからなる従来のＶＨと識別するため本明細書ではＶＨＨとして知られる。そのようなＶＨＨ分子は、ラクダ科の種（例えばラクダ、ラマ、ヒトコブラクダ、アルパカ、およびグアナコ）の中で生じる抗体に由来することが可能である。

融合タンパク質の抗体ドメインは、場合により、免疫グロブリン分子の全体または一部を含み、場合により、免疫グロブリン可変領域の全体または一部（すなわち疾患関連抗原に対する特異性領域）を含有するとともに、場合により、Ｖ遺伝子および／またはＤ遺伝子および／またはＪ遺伝子によってコードされる領域を含む。

上に説明したように（上記の定義参照）、抗体は、本明細書では、実施形態の具体的な条件に応じ、場合により、Ｆ（ａｂ）２、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、単一ドメイン抗体などを含む。いくつかの実施形態は、ＩｇＧドメインを含む融合タンパク質を用いる。しかし他の実施形態は、交互になった免疫グロブリン（ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、およびＩｇＥなど）を含む。さらに、さまざまな免疫グロブリンの可能なすべてのアイソタイプも本明細書の実施形態に包含される。したがってＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３などは、本発明で使用される抗体融合タンパク質の抗体ドメインの中のあらゆる可能な分子である。免疫グロブリンとアイソタイプのタイプの選択における選択に加え、本発明の異なる実施形態はさまざまなヒンジ領域（またはその機能的等価物）を含む。そのようなヒンジ領域は、抗体融合タンパク質の異なるドメインの間の可撓性を提供する。例えばＰｅｎｉｃｈｅｔ，ｅｔａｌ．２００１“Ａｎｔｉｂｏｄｙ－ｃｙｔｏｋｉｎｅｆｕｓｉｏｎｐｒｏｔｅｉｎｓｆｏｒｔｈｅｔｈｅｒａｐｙｏｆｃａｎｃｅｒ”ＪＩｍｍｕｎｏｌＭｅｔｈｏｄｓ２４８：９１－１０１を参照されたい。

いくつかの実施形態では、ＣＴＬＡ－４抗原結合ドメインは軽鎖可変領域と重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、重鎖可変領域は、ＧＦＴＦＳＳＹＴ（配列番号５）、ＩＳＹＤＧＮＮＫ（配列番号６）、およびＡＲＴＧＷＬＧＰＦＤＹ（配列番号７）の相補性決定領域（ＣＤＲ）配列を含む。いくつかの実施形態では、軽鎖可変領域は、ＱＳＶＧＳＳＹ（配列番号３）、ＧＡＦ、およびＱＱＹＧＳＳＰＷＴ（配列番号４）のＣＤＲ配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＴＬＡ－４抗原結合ドメインは軽鎖と重鎖を含む。重鎖のいくつかでは、配列番号５、配列番号６、および配列番号７のＣＤＲ配列を含む。いくつかの実施形態では、軽鎖は、配列番号３、ＧＡＦ、および配列番号４のＣＤＲ配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＴＬＡ－４抗原結合ドメインは、配列番号５、６、および７のＣＤＲ配列を含む重鎖と、配列番号３、ＧＡＦ、および配列番号４のＣＤＲ配列を含む軽鎖を含む。

ＣＴＬＡ－４ＣＤＲ配列の代表的だが非限定的な例が下記の表１に示されている。

いくつかの実施形態では、ＣＴＬＡ－４抗原結合ドメインは抗体を含む。いくつかの実施形態では、ＣＴＬＡ－４抗体は重鎖と軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、ＣＴＬＡ－４抗体は、第１の重鎖、第２の重鎖、および２つの軽鎖を含み（例えば図１Ａ参照）、その２つの鎖の配列は同じではない。代表的なＣＴＬＡ－４抗体配列が、重鎖、軽鎖、定常領域、および可変領域を含め、下記の表２に示されている。

いくつかの実施形態では、ＣＴＬＡ－４抗体は、配列番号９の配列を含む軽鎖配列、またはそれと少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％一致する配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＴＬＡ－４抗体は、配列番号９を含むか主に配列番号９からなる軽鎖配列を含む。

いくつかの実施形態では、ＣＴＬＡ－４抗体は、配列番号１２の重鎖可変領域配列、またはそれと少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％一致する配列を含む１つ以上の重鎖配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＴＬＡ－４抗体は、配列番号１２の重鎖可変領域配列、またはそれと少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％一致する配列を含む１つ以上の重鎖配列を含む。いくつかの実施形態では、重鎖可変領域配列は、配列番号１２を含むか、主に配列番号１２からなる。いくつかの実施形態では、重鎖可変領域は、配列番号２８の配列を含むポリヌクレオチドによってコードされる。

いくつかの実施形態では、ＣＴＬＡ－４抗体は第１と第２の重鎖を含み、その２つの重鎖の配列は同じでない。いくつかの実施形態では、第１と第２の重鎖の両方とも、配列番号１２の重鎖可変領域配列、またはそれと少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％一致する配列を含む。いくつかの実施形態では、第１と第２の重鎖の両方とも、配列番号１２を含むか主に配列番号１２からなる重鎖可変領域配列を含む。

本明細書に記載されている抗体の重鎖定常領域を操作して２つの異なる重鎖からなるヘテロ二量体を優先的に形成することができる。このような操作の非限定的な一例は「ノブを穴の中に」技術であり、例えばＷＯ９６／０２７０１１、Ｒｉｄｇｗａｙ，Ｊ．Ｂ．，ｅｔａｌ．，ＰｒｏｔｅｉｎＥｎｇ．９（１９９６）６１７－６２１；およびＭｅｒｃｈａｎｔ，Ａ．Ｍ．，ｅｔａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１６（１９９８）６７７－６８１にいくつかの例とともに詳細に記載されている。この方法では、２つのＣＨ３ドメインの相互作用表面を変化させてこれら２つのＣＨ３ドメインを含有する両方の重鎖のヘテロ二量体化を増加させる。（２つの重鎖の）２つのＣＨ３ドメインの一方を「ノブ」にすることができ、他方は「穴」である。例えばイピリムマブ重鎖（配列番号８）を操作して変異Ｔ３６７Ｓ、Ｌ３６９Ａ、およびＹ４０８Ｖを持つ「穴」重鎖を生成させるとともに、変異Ｔ３６７Ｗを持つ「ノブ」重鎖を生成させることができる。これらの置換を有するノブ重鎖と穴重鎖は、ノブ／ノブまたは穴／穴ホモ二量体の代わりにノブ／穴ヘテロ二量体を優先的に（すなわちより大きな頻度で）形成することになろう。

いくつかの実施形態では、第１と第２の重鎖は定常領域内の少なくとも１個のアミノ酸が異なる。例えば第１と第２の重鎖は、重鎖定常領域内の１、２、３、４、または５個のアミノ酸が異なっている可能性がある。いくつかの実施形態では、第１と第２の重鎖は定常領域内の３個のアミノ酸が異なる。例えば第１と第２の重鎖は、配列番号１３または配列番号１４の２４９位、２５１位２９０位、またはこれらの任意の組み合わせが異なっている可能性がある。いくつかの実施形態では、第１の重鎖は、配列番号１３または配列番号１４の２４９位にＳ、２５１位にＡ、２９０位にＶを含むのに対し、第２の重鎖は、配列番号１３または１４の２４９位にＷ、２５１位にＬ、２９０位にＹを含む。

いくつかの実施形態では、第１と第２の重鎖は、配列番号１０または１１の３５０位、３５５位、３６７位、３６９位、４０８位、またはこれらの任意の組み合わせが異なっている可能性がある。

いくつかの実施形態では、第１の重鎖は、配列番号１０または１１の３６７位にＳ、３６９位にＡ、４０８位にＴを含み、第２の重鎖は、配列番号１０または１１の３６７位にＷを含む。いくつかの実施形態では、第１の重鎖は、配列番号１０または１１の３６７位にＳ、３６９位にＡ、４０８位にＶを含み、第２の重鎖は、配列番号１０または１１の３６７位にＷを含む。場合により、第１の重鎖は配列番号１０または１１の３５０位にＣを含み、第２の重鎖は配列番号１０または１１の３５５位にＣを含む。

いくつかの実施形態では、第１の重鎖は配列番号１０または１１の４０８位にＴを含み、第２の重鎖は配列番号１０または１１の３６７位にＷを含む。

これまでのどの実施形態でも、第１の重鎖および／または第２の重鎖は、配列番号１０または１１の２３５位にＦ、２５０位にＡ、４３５位にＡを含むことができる。

いくつかの実施形態では、第１の重鎖は、配列番号１３の配列、またはそれと少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％一致する配列を含むとともに、配列番号１３の２５１位にＡ、２９０位にＶを含む。いくつかの実施形態では、第１の重鎖は配列番号１３の配列を含む。いくつかの実施形態では、第２の重鎖は、配列番号１４の配列、またはそれと少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％一致する配列を含むとともに、配列番号１４の２４９位にＷ、２５１位にＬ、３００位にＹを含む。いくつかの実施形態では、第２の重鎖は配列番号１４の配列を含む。いくつかの実施形態では、第１の重鎖は配列番号１３の配列を含み、第２の重鎖は配列番号１４の配列を含む。

いくつかの実施形態では、第１の重鎖は、配列番号１１の配列、またはそれと少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％一致する配列を含む。いくつかの実施形態では、第１の重鎖は、配列番号１１の配列、またはそれと少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％一致する配列を含むとともに、配列番号１１の３６７位にＳ、３６９位にＡ、４０８位にＶを含む。いくつかの実施形態では、第１の重鎖は、配列番号１１を含むか、主に配列番号１１からなる。いくつかの実施形態では、第２の重鎖は、配列番号１０の配列、またはそれと少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％一致する配列を含む。いくつかの実施形態では、第１の重鎖は、配列番号１０の配列、またはそれと少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％一致する配列を含むとともに、配列番号１０の３６７位にＷを含む。いくつかの実施形態では、第２の重鎖は、配列番号１０を含むか、主に配列番号１０からなる。いくつかの実施形態では、第１の重鎖は配列番号１１を含むか、主に配列番号１１からなり、第２の重鎖は配列番号１０を含むか、主に配列番号１０からなる。

リンカー
本開示の融合タンパク質のいくつかの実施形態では、融合タンパク質は１つ以上のリンカーを含む。例えば抗ＣＴＬＡ－４抗体の重鎖に融合したＩＬ－１５ドメインとＩＬ－１５Ｒａｓｕｓｈｉドメインを持つ融合タンパク質では、重鎖、ＩＬ－１５ドメイン、およびＩＬ－１５Ｒａドメインの１つ以上をリンカーによって分離することができる。

「リンカー」という用語は本分野で認められており、１個の分子（その非限定的な例に含まれるのは、修飾されていないか修飾された核酸またはアミノ酸である）または２つの化合物（２つのポリペプチドなど）を接続する一群の分子（例えば２個以上、例えば２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００個、またはそれよりも多数個）を意味する。リンカーは単一の連結分子からなること、または連結分子と、その連結分子と化合物を特定の距離だけ分離することを意図した少なくとも１つのスペーサ分子を含むことができる。

いくつかの実施形態では、リンカーはグリシン－セリン（ＧＳ）リンカーを含む。代表的なＧＳリンカーの非限定的な例に含まれるのは、ＧＧＧＳ（配列番号２３）、ＧＧＧＧＳ（配列番号２４）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号２５）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号２６）、およびＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１５）である。

いくつかの実施形態では、ＣＴＬＡ－４抗原結合ドメインとＩＬ－１５Ｒａドメインはリンカーによって分離される。いくつかの実施形態（例えばＣＴＬＡ－４抗原結合ドメインが抗体である実施形態）では、抗体の第１または第２の重鎖とＩＬ－１５Ｒａドメインはリンカーによって分離される。いくつかの実施形態では、リンカーは、ＧＧＧＳ（配列番号２３）、ＧＧＧＧＳ（配列番号２４）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号２５）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号２６）、またはＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１５）を含む。いくつかの実施形態では、リンカーはＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号２６）を含む。いくつかの実施形態では、リンカーをコードする配列は、ＧＧＣＧＧＡＧＧＣＧＧＡＧＧＡＴＣＴＧＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＣＧＧＣＧＧＡＧＧＣＴＣＴ（配列番号２７）の配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５ＲａｓｕｓｈｉドメインとＩＬ－１５ドメインはリンカーによって分離される。いくつかの実施形態では、リンカーは、ＧＧＧＳ（配列番号２３）、ＧＧＧＧＳ（配列番号２４）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号２５）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号２６）、またはＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１５）を含む。いくつかの実施形態では、リンカーはＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１５）を含む。いくつかの実施形態では、リンカーをコードする配列はＧＧＴＧＧＣＧＧＡＧＧＴＡＧＣＧＧＴＧＧＴＧＧＣＧＧＴＡＧＣＧＧＡＧＧＣＧＧＴＧＧＴＴＣＴＧＧＣＧＧＡＧＧＣＧＧＴＴＣＴ（配列番号３２）の配列を含む。

本明細書に記載されている組み換え融合タンパク質のいくつかの実施形態では、ＣＴＬＡ－４に対して特異的な抗原結合ドメインは抗体を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、図１Ａに見られるように、２つの重鎖と２つの軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、２つの重鎖（本明細書では第１と第２の重鎖と呼ぶ）の配列は同じではない。例えば第１の重鎖は「穴」バリアントを生成させるため定常領域に対する１つ以上の修飾を含み、第２の重鎖は「ノブ」バリアントを生成させるため定常領域に対する１つ以上の修飾を含む、またはその逆である。いくつかの実施形態では、穴バリアントとノブバリアントは優先的に会合してヘテロ二量体を形成する。いくつかの実施形態では、第１の重鎖は配列番号１３の定常領域配列を含み、第２の重鎖は配列番号１４の定常領域配列を含む。代わりの実施形態では、第１の重鎖は配列番号１４の配列を含み、第２の重鎖は配列番号１３の配列を含む。

ポリペプチド
本開示により、（ａ）Ｎ末端からＣ末端へ、第１のＣＴＬＡ－４抗体重鎖、ＩＬ－１５Ｒａｓｕｓｈｉドメイン、およびＩＬ－１５ドメインを含む第１のポリペプチドの配列；（ｂ）第２のＣＴＬＡ－４重鎖の配列を含む第２のポリペプチド；および（ｃ）ＣＴＬＡ－４抗体軽鎖の配列を含む２つの追加ポリペプチドを含む組み換え融合タンパク質が提供される。

いくつかの実施形態では、第１のポリペプチドは、Ｎ末端から末端へ、抗ＣＴＬＡ－４抗体の重鎖、第１のリンカー、ＩＬ－１５Ｒａｓｕｓｈｉドメイン、第２のリンカー、およびＩＬ－１５ドメインの配列を含む。いくつかの実施形態では、組み換え融合タンパク質は、抗ＣＴＬＡ－４抗体の第２の重鎖の配列（その配列は第１の重鎖と同じではなく、例えば第１の重鎖は穴バリアントを含み、第２の重鎖はノブバリアントを含む、またはその逆）を含む第２のポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、第１と第２のポリペプチドは優先的にヘテロ二量体を形成する。いくつかの実施形態では、重鎖とＩＬ－１５Ｒａｓｕｓｈｉドメインは第１のリンカーによって分離される。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５ＲａｓｕｓｈｉドメインとＩＬ－１５ドメインは第２のリンカーによって分離される。いくつかの実施形態では、第１および／または第２のリンカーはグリシン－セリンリンカーである。

いくつかの実施形態では、第１のポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端へ、配列番号１１の抗ＣＴＬＡ重鎖、配列番号２６の第１のリンカー、配列番号２のＩＬ－１５Ｒａｓｕｓｈｉドメイン、配列番号１５の第２のリンカー、および配列番号１のＩＬ－１５ドメインの配列を含むか、それらと少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％一致する配列を含む。いくつかの実施形態では、第１のポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端へ、配列番号１１の抗ＣＴＬＡ重鎖、配列番号２６の第１のリンカー、配列番号２のＩＬ－１５Ｒａｓｕｓｈｉドメイン、配列番号１５の第２のリンカー、および配列番号１のＩＬ－１５ドメインの配列を含む。いくつかの実施形態では、第１のポリペプチドは、配列番号１６の配列、またはそれと少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％一致する配列を含む。いくつかの実施形態では、第１のポリペプチドは配列番号１６の配列を含むか、主に配列番号１６の配列からなる。いくつかの実施形態では、第１のポリペプチドは、配列番号１８の配列、またはそれと少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％一致する配列を含むポリヌクレオチドによってコードされる。いくつかの実施形態では、第１のポリペプチドは、配列番号１８の配列を含むポリヌクレオチドによってコードされる。

いくつかの実施形態では、抗ＣＴＬＡ－４抗体の第２の重鎖を含む第２のポリペプチドは、任意の追加異種ドメイン（ＩＬ－１５ＲａｓｕｓｈｉドメインまたはＩＬ－１５ドメインなど）への第２の重鎖の融合体を含まない。いくつかの実施形態では、第２の重鎖は、配列番号１０の配列、またはそれと少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％一致する配列を含むか、主にその配列からなる。いくつかの実施形態では、第２の重鎖は、配列番号１０の配列を含むか、主に配列番号１０の配列からなる。いくつかの実施形態では、第２のポリペプチドは、配列番号１９の配列、またはそれと少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％一致する配列を含むポリヌクレオチドによってコードされる。いくつかの実施形態では、第２のポリペプチドは、配列番号１９の配列を含むポリヌクレオチドによってコードされる。

いくつかの実施形態では、組み換え融合タンパク質はさらに、抗ＣＴＬＡ－４抗体の軽鎖の配列を含む２つの追加ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＴＬＡ－４軽鎖を含む前記２つのポリペプチドは、配列番号９の配列、またはそれと少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％一致する配列を含むか、主にその配列からなる。いくつかの実施形態では、抗ＣＴＬＡ－４軽鎖を含む前記２つの追加ポリペプチドは、配列番号９の配列を含むか、主に配列番号９の配列からなる。いくつかの実施形態では、前記２つの追加ポリペプチドの抗ＣＴＬＡ－４抗体軽鎖配列は、配列番号１７の配列、またはそれと少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％一致する配列を含むポリヌクレオチドによってコードされる。いくつかの実施形態では、前記２つの追加ポリペプチドの抗ＣＴＬＡ－４抗体軽鎖配列は、配列番号１７の配列を含むポリヌクレオチドによってコードされる。

いくつかの実施形態では、組み換え融合タンパク質は、配列番号１６の配列を含む第１のポリペプチド、配列番号１０の配列を含む第２のポリペプチド、および配列番号９の配列を含む２つの追加ポリペプチドを含む。

ポリヌクレオチドとベクター
本開示により、本明細書に記載されている組み換え融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドが提供される。

本開示により、第１のポリペプチドをコードする配列を含む第１のポリヌクレオチドとして、Ｎ末端からＣ末端へ、配列番号１１の抗ＣＴＬＡ重鎖の第１の重鎖、配列番号２６の第１のリンカー、配列番号２のＩＬ－１５Ｒａｓｕｓｈｉドメイン、配列番号１５の第２のリンカー、および配列番号１のＩＬ－１５ドメインを含むものが提供される。いくつかの実施形態では、第１のポリヌクレオチドは、配列番号１６の配列、またはそれと少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％一致する配列を含む。いくつかの実施形態では、第１のポリヌクレオチドは配列番号１６の配列を含む。

本開示により、配列番号１０の抗ＣＴＬＡ－４抗体の第２の重鎖を含む第２のポリペプチドをコードする配列を含む第２のポリヌクレオチドが提供される。いくつかの実施形態では、第２の重鎖は追加異種ドメイン（ＩＬ－１５ＲａｓｕｓｈｉドメインまたはＩＬ－１５ドメインなど）に融合されない。いくつかの実施形態では、第２の重鎖は、配列番号１０の配列を含むか、主に配列番号１０の配列からなり、第２のポリヌクレオチドは、配列番号１９の配列、またはそれと少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％一致する配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドは配列番号１９の配列を含む。

本開示により、抗ＣＴＬＡ－４抗体の軽鎖をコードする第３のポリヌクレオチドをコードする配列を含む第３のポリヌクレオチドが提供される。いくつかの実施形態では、抗ＣＴＬＡ－４抗体軽鎖は、配列番号９の配列の配列を含むか、主に配列番号９の配列からなり、第３のポリヌクレオチドは、配列番号１７の配列、またはそれと少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％一致する配列を含む。いくつかの実施形態では、第３のポリヌクレオチドは配列番号１７の配列を含む。

いくつかの実施形態では、第１、第２、および第３のポリペプチドのそれぞれをコードするポリヌクレオチド配列は１つ以上のプロモータに機能可能に連結されている。例えばこれらポリペプチドの２つ以上の配列は同じプロモータ（の制御下で）機能可能に連結することができ、別々のポリペプチド（自己切断ポリペプチドなど）を生じさせる１つ以上のエレメント（内部リボソーム侵入部位など）によって分離されている。

代わりの実施形態では、第１の重鎖、第２の重鎖、および軽鎖を含む第１第２、および第３のポリペプチドをコードする配列第１、第２、および第３のポリヌクレオチドは３つの別々のプロモータの制御下にある。例えば第１、第２、および第３のポリヌクレオチドのそれぞれは別々の発現ベクターにクローニングすることができ、各ベクターはそれ自身のプロモータおよび／または調節配列を含む。いくつかの実施形態では、第１、第２、および第３のポリヌクレオチドのそれぞれに機能可能に連結されたプロモータは同じである。いくつかの実施形態では、第１、第２、および第３のポリヌクレオチドのそれぞれに機能可能に連結されたプロモータは同じではない。

いくつかの実施形態では、第１の重鎖、第２の重鎖、および軽鎖を含む第１、第２、および第３のポリペプチドをコードする第１、第２、および第３のポリヌクレオチドの１つ以上は単一の連続ポリヌクレオチド分子の一部である。

代わりの実施形態では、第１の重鎖、第２の重鎖、および軽鎖を含む第１、第２、および第３のポリペプチドは、それぞれ、異なる不連続なポリヌクレオチド分子上のポリヌクレオチド配列によってコードされる。

いくつかの実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、当業者に知られている手続きと方法を利用してＰＣＲ技術を用いて調製される。いくつかの実施形態では、手続きは２つの異なるＤＮＡ配列の連結を含む（例えば“ＣｕｒｒｅｎｔＰｒｏｔｏｃｏｌｓｉｎＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ”，ｅｄｓ．Ａｕｓｕｂｅｌｅｔａｌ．，ＪｏｈｎＷｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，１９９２を参照されたい）。

ポリヌクレオチド配列が「機能可能に連結されている」のは、それが別のポリヌクレオチド配列と機能的な関係に置かれているときである。例えばポリヌクレオチドプレ配列または分泌リーダーがポリペプチドをコードする核酸に機能可能に連結されているのは、それがポリペプチドの分泌に関与するプレタンパク質として発現する場合である；プロモータまたはエンハンサがコード配列に機能可能に連結されているのは、それがその配列の転写に影響を与える場合である；またはリボソーム結合部位がコード配列に機能可能に連結されているのは、それが翻訳を容易にする位置にある場合である。一般に、「機能可能に連結された」は、連結されたポリヌクレオチド配列が連続していることを意味し、分泌リーダーの場合には、連続していてリーディングフレームの中にあることを意味する。しかしエンハンサは場合により連続である。連結は、例えば都合のよい制限部位での連結によって実現することができる。そのような部位が存在しない場合には、合成オリゴヌクレオチドアダプタ、リンカー、または本分野で知られている他の方法を利用することができる。別の一実施形態では、「機能可能に連結された」は、本明細書に記載されている抗ＣＴＬＡ－４抗体とＩＬ－１５ＲａｓｕｓｈｉドメインとＩＬ－１５をやはり本明細書に記載されているリンカー配列によって組み合わせる場合のように、別々のアミノ酸配列、ペプチド、またはタンパク質の機能的対形成も意味する。

本開示により、本明細書に記載されている組み換え融合タンパク質を含むポリヌクレオチドを含むベクターが提供される。

「ベクター」、「クローニングベクター」、および「発現ベクター」という用語は、宿主を形質転換して導入された配列の発現（例えば転写と翻訳）を促進するため、ＤＮＡ配列またはＲＮＡ配列（例えば外来遺伝子）を宿主細胞の中に導入することのできる担体を意味する。ベクターに含まれるのは、プラスミド、ファージ、ウイルスなどである。

「発現する」と「発現」という用語は、遺伝子またはＤＮＡ配列の中の情報の顕在化を可能にすること、または引き起こすこと（例えば対応する遺伝子またはＤＮＡ配列の転写と翻訳に関与する細胞機能を活性化することによりタンパク質を産生させること）を意味する。ＤＮＡ配列は細胞の中で発現するか細胞によって発現されて「発現産物」（タンパク質など）を形成する。発現産物そのもの（例えば得られるタンパク質）も細胞によって「発現される」と言うことができる。発現産物は、細胞内、細胞外、または膜貫通として特徴づけることができる。「細胞内」という用語は、細胞の内部にある何かを意味する。「細胞外」という用語は、細胞の外部にある何かを意味する。膜貫通という用語は、細胞の外部にある細胞外ドメイン、細胞膜に埋め込まれている部分、および細胞の内部にある細胞内ドメインを持つ何かを意味する。

いくつかの実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは発現ベクター（すなわち核酸コンストラクト）に挿入されて本明細書に記載されている組み換え融合タンパク質とポリペプチドの発現が可能になる。

いくつかの実施形態では、本発明の発現ベクターは、このベクターを原核生物における複製と組み込みに適した状態にする追加配列を含む。いくつかの実施形態では、本発明の発現ベクターは、このベクターを真核生物における複製と組み込みに適した状態にする追加配列を含む。いくつかの実施形態では、本発明の発現ベクターは、このベクターを原核生物と真核生物の両方における複製と組み込みに適した状態にするシャトルベクターを含む。例えばそのようなベクターは、真核細胞と原核細胞の両方に適した選択マーカーを含むことができる。適切なマーカーは当業者には明らかであろう。

いくつかの実施形態では、クローニングベクターは、そこから発現するポリペプチドの発現を増強するため、転写と翻訳の開始配列（例えばプロモータ、エンハンサ）と、転写と翻訳のターミネータ（例えばポリアデニル化シグナル）を含む。適切な翻訳ターミネータの非限定的な例に含まれるのは、ウシ成長ホルモンポリアデニル化シグナル（ＢＧＨポリＡ）などである。適切なプロモータは当業者には明らかであり、ＣＭＶプロモータ、アクチンプロモータなどを含むであろう。

いくつかの実施形態では、本発明の発現ベクターはさらに、例えば単一のｍＲＮＡ（内部リボソーム侵入部位（ＩＲＥＳ）や、プロモータ－キメラポリペプチドをゲノムに組み込むための配列など）からいくつかのタンパク質の翻訳を可能にする追加ポリヌクレオチド配列を含むことができる。

いくつかの実施形態では、本発明の発現ベクターは、本発明の組み換え融合タンパク質の発現を増加させるエレメントを含む。このような特徴の非限定的な例に含まれるのは、プロモータとポリアデニル化の選択である。いくつかの実施形態では、ポリアデニル化配列はウシ成長ホルモン（ＢＧＨ）ポリアデニル化配列である。いくつかの実施形態では、プロモータは構成的に活性なプロモータを含む。いくつかの実施形態では、プロモータはサイトメガロウイルスプロモータ（ｐＣＭＶ）を含む。プロモータは、いくつかの実施形態では、本開示の組み換えタンパク質の発現を促進するため追加エレメントと組み合わせることができる（イントロン（例えばウサギベータグロビンイントロン、ＥＦ１ａイントロンなど）とエンハンサエレメント（ＣＭＶ前初期エンハンサ、ＳＶ４０エンハンサ、ＥＦ１ａエンハンサ、アデノウイルス主要後期タンパク質エンハンサなど）など）。

代表的な哺乳類発現ベクターの非限定的な例に含まれるのは、ｐｃＤＮＡ３、ｐｃＤＮＡ３．１（＋／－）、ｐＧＬ３、ｐＺｅｏＳＶ２（＋／－）、ｐＳｅｃＴａｇ２、ｐＤｉｓｐｌａｙ、ｐＥＦ／ｍｙｃ／ｃｙｔｏ、ｐＣＭＶ／ｍｙｃ／ｃｙｔｏ、ｐＣＲ３．１、ｐＳｉｎＲｅｐ５、ＤＨ２６Ｓ、ＤＨＢＢ、ｐＮＭＴ１、ｐＮＭＴ４１、ｐＮＭＴ８１（これらはＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎから入手できる）、ｐＣＩ（これはＰｒｏｍｅｇａから入手できる）、ｐＭｂａｃ、ｐＰｂａｃ、ｐＢＫ－ＲＳＶ、およびｐＢＫ－ＣＭＶ（これらはＳｔｒａｔｅｇｅｎｅから入手できる）、ｐＴＲＥＳ（これはＣｌｏｎｔｅｃｈから入手できる）、およびこれらの誘導体である。

いくつかの実施形態では、真核生物ウイルス（レトロウイルスなど）からの調節エレメントを含有する発現ベクターが本発明によって使用される。ＳＶ４０ベクターにはｐＳＶＴ７とｐＭＴ２が含まれる。いくつかの実施形態では、ウシパピローマウイルスに由来するベクターにはｐＢＶ－１ＭＴＨＡが含まれ、エプスタイン・バールウイルスに由来するベクターにはｐＨＥＢＯとｐ２０５が含まれる。他の代表的なベクターに含まれるのは、ｐＭＳＧ、ｐＡＶ００９／Ａ＋、ｐＭＴＯ１０／Ａ＋、ｐＭＡＭｎｅｏ－５、バキュロウイルスｐＤＳＶＥと、真核細胞における発現に有効であることが示されているＳＶ－４０初期プロモータ、ＳＶ－４０後期プロモータ、メタロチオネインプロモータ、マウス乳腺腫瘍ウイルスプロモータ、ラウス肉腫ウイルスプロモータ、ポリヘドリンプロモータ、または他のプロモータの指示下でタンパク質の発現を可能にする他の任意のベクターである。

いくつかの実施形態では、例えば本発明の組み換え融合タンパク質を発現させるのに用いる細菌系において、発現させようとするタンパク質に応じて有利な多数の発現ベクターを選択することができる。いくつかの実施形態では、おそらくは疎水性シグナル配列との融合体としてのタンパク質産物の高レベルの発現を指示するベクターが望ましく、疎水性シグナル配列は発現した産物が細菌のペリプラズムまたは培地に入ることを指示し、そこでタンパク質産物は容易に精製される。一実施形態では、ある融合タンパク質であって、そのポリペプチドの回収を容易にするため特別な切断部位を持つように改変されたもの。一実施形態では、そのような操作に適合するベクターの非限定的な例に含まれるのは、大腸菌発現ベクターのｐＥＴシリーズである［Ｓｔｕｄｉｅｒｅｔａｌ．，ＭｅｔｈｏｄｓｉｎＥｎｚｙｍｏｌ．１８５：６０－８９（１９９０）］。

いくつかの実施形態では、酵母発現系を用いて本開示の組み換え融合タンパク質を発現させる。一実施形態では、アメリカ合衆国特許第５，９３２，４４７号に開示されているように、構成的プロモータまたは誘導性プロモータを含有する多数のベクターを酵母で用いることができる。別の一実施形態では、酵母染色体への外来ＤＮＡ配列の組み込みを促進するベクターが使用される。

いくつかの実施形態では、組み換えウイルスベクターは、水平感染や標的特異性などの利点を提供してくれるため、本発明のポリペプチドの生体内発現に有用である。一実施形態では、水平感染は、例えばレトロウイルスのライフサイクルに生得的に備わっており、単一の感染した細胞は多くの子孫ビリオンを産生して出芽して離れ、近傍の細胞に感染するプロセスである。一実施形態では、結果は、広い範囲が急速に感染した状態になるというものであり、その大半は元のウイルス粒子が最初に感染したものではなかった。一実施形態では、水平感染で広がることができないウイルスベクターが生成する。一実施形態では、この特徴は、望む目的が特定の遺伝子を局在化した数の標的細胞にだけ導入することである場合に有用である可能性がある。

いくつかの実施形態では、哺乳類細胞発現系を用いて本開示の組み換え融合タンパク質を発現させる。哺乳類細胞として、例えばチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞またはその誘導体が可能であり、ベクターは、ＣＨＯ細胞における組み換え融合タンパク質の発現に適したベクターである。

本発明の発現コンストラクトは、（ポリペプチドをコードする）挿入されたコード配列の転写と翻訳に必要なエレメントを含有する以外に、発現するポリペプチドの安定性、作製、精製、収率、または活性が最適になるように操作された配列も含むことができることがわかるであろう。

製造の方法
本開示により、ＣＴＬＡ－４抗原結合ドメイン、ＩＬ－１５Ｒａｓｕｓｈｉドメイン、およびＩＬ－１５ドメインを含む組み換え融合タンパク質を作製する方法が提供され、この方法は、（ａ）複数の細胞を、組み換え融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドまたはベクターと接触させ；（ｂ）前記複数の細胞に組み換え融合タンパク質を発現させ；（ｃ）前記組み換え融合タンパク質を精製することを含む。

多彩な原核細胞または真核細胞を宿主－発現系として用いて本発明の組み換え融合タンパク質を発現させることができる。いくつかの実施形態では、その非限定的な例に含まれるのは、微生物（ポリペプチドをコードする配列を含有する組み換えバクテリオファージＤＮＡ、プラスミドＤＮＡ、またはコスミドＤＮＡ発現ベクターで形質転換された細菌など）；ポリペプチドをコードする配列を含有する組み換え酵母発現ベクターで形質転換された酵母である。

いくつかの実施形態では、前記複数の細胞に真核細胞が含まれる。いくつかの実施形態では、真核細胞は哺乳類細胞である。組み換え融合タンパク質の発現に適した哺乳類細胞には、ＣＨＯ細胞、ＰＥＲ．Ｃ６細胞、マウスＮＳ０細胞、およびＨＥＫ２９３細胞が含まれる。適切な細胞系の選択は、当業者には明らかであろう。

いくつかの実施形態では、前記複数の細胞に原核細胞細胞（例えば大腸菌細胞）が含まれる。

いくつかの実施形態では、前記複数の細胞を組み換え融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドまたはベクターと接触させることにはトランスフェクションが含まれる。

「トランスフェクション」という用語は、組み換えＤＮＡ技術を用いて外来核酸を細胞の中に導入することを意味する。「形質転換」という用語は、「外来」（すなわち外部または細胞外）遺伝子、ＤＮＡ配列、またはＲＮＡ配列を宿主細胞に導入することを意味するため、宿主細胞は導入された遺伝子または配列を発現して望む物質、典型的には導入された遺伝子または配列によってコードされるタンパク質または酵素を産生することになる。導入された遺伝子または配列は、「クローニングされた」または「外来の」遺伝子または配列と呼ぶこともでき、調節配列または制御配列（細胞の遺伝機構によって使用される開始、停止、プロモータ、シグナル、分泌、または他の配列など）を含むことができる。前記遺伝子または配列は、機能しない配列、または機能が知られていない配列を含んでいてもよい。導入されたＤＮＡまたはＲＮＡを受け入れて発現させる宿主細胞は「形質転換されて」おり、「形質転換体」または「クローン」である。宿主細胞に導入されたＤＮＡまたはＲＮＡは任意の供給源（宿主細胞と同じ属または種の細胞、または異なる属または種の細胞が含まれる）に由来することができる。

いくつかの実施形態では、前記複数の細胞を、組み換え融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドまたはベクターに接触させることに、形質導入が含まれる。「形質導入」という用語は、ウイルスベクター（レンチウイルスベクターなど）を用いて外来核酸を細胞に導入することを意味する。

いくつかの実施形態では、非細菌発現系（例えばＣＨＯ細胞などの哺乳類発現系）を用いて本発明のポリペプチドを発現させる。いくつかの実施形態では、哺乳類細胞の中で本発明のポリヌクレオチドを発現させるのに用いる発現ベクターは、ＣＭＶプロモータとネオマイシン耐性遺伝子を含む。代わりの実施形態では、哺乳類細胞の中で本発明のポリヌクレオチドを発現させるのに用いる発現ベクターは、ＳＶ４０プロモータの制御下にあるグルタミンシンターゼ（ＧＳ）マーカーを含む。

いくつかの実施形態では、さまざまな方法を利用して本発明の組み換え融合タンパク質をコードする発現ベクターを細胞に導入することができる。そのような方法が一般に記載されているのは、Ｓａｍｂｒｏｏｋｅｔａｌ．，ＭｏｌｅｃｕｌａｒＣｌｏｎｉｎｇ：ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ，ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇｓＨａｒｂｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｙ，ＮｅｗＹｏｒｋ（１９８９，１９９２）、Ａｕｓｕｂｅｌｅｔａｌ．，ＣｕｒｒｅｎｔＰｒｏｔｏｃｏｌｓｉｎＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ，ＪｏｈｎＷｉｌｅｙａｎｄＳｏｎｓ，Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，Ｍｄ．（１９８９）、Ｃｈａｎｇｅｔａｌ．，ＳｏｍａｔｉｃＧｅｎｅＴｈｅｒａｐｙ，ＣＲＣＰｒｅｓｓ，ＡｎｎＡｒｂｏｒ，Ｍｉｃｈ．（１９９５）、Ｖｅｇａｅｔａｌ．，ＧｅｎｅＴａｒｇｅｔｉｎｇ，ＣＲＣＰｒｅｓｓ，ＡｎｎＡｒｂｏｒＭｉｃｈ．（１９９５）、Ｖｅｃｔｏｒｓ：ＡＳｕｒｖｅｙｏｆＭｏｌｅｃｕｌａｒＣｌｏｎｉｎｇＶｅｃｔｏｒｓａｎｄＴｈｅｉｒＵｓｅｓ，Ｂｕｔｔｅｒｗｏｒｔｈｓ，ＢｏｓｔｏｎＭａｓｓ．（１９８８）、およびＧｉｌｂｏａｅｔａｔ．［Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ４（６）：５０４－５１２，１９８６］であり、方法に含まれるのは、例えば安定なトランスフェクションまたは一過性のトランスフェクション、リポフェクション、電気穿孔、および組み換えウイルスベクターの感染である。それに加え、陽性－陰性選択の方法についてはアメリカ合衆国特許第５，４６４，７６４号と第５，４８７，９９２号を参照されたい。

いくつかの実施形態では、ウイルス感染による核酸の導入は、他の方法（リポフェクションや電気穿孔など）と比べていくつかの利点を提供する。なぜなら、ウイルスは感染性であるという性質のため、より大きいトランスフェクション効率が得られるからである。

いくつかの実施形態では、形質転換された細胞は、大量の組み換え融合タンパク質またはポリペプチドの発現を可能にする有効な条件下で培養される。いくつかの実施形態では、有効な培養条件の非限定的な例に含まれるのは、タンパク質の産生を可能にする有効な培地、バイオリアクター、温度、ｐＨ、および酸素条件である。一実施形態では、有効な培地は、細胞を培養して本発明の組み換えポリペプチドを産生させる任意の培地を意味する。いくつかの実施形態では、培地は、典型的には、同化性炭素、窒素、およびリン酸塩の供給源と、適切な塩、ミネラル、および他の栄養素（ビタミンなど）を有する水溶液を含む。いくつかの実施形態では、本発明の細胞は、従来の発酵バイオリアクター、震盪フラスコ、試験管、微量滴定皿、およびペトリ皿の中で培養することができる。いくつかの実施形態では、培養は、組み換え細胞に適した温度、ｐＨ、および酸素含量で実施される。いくつかの実施形態では、培養条件は当業者の専門知識の範囲内である。

例えば真核細胞の培養に適した培地の非限定的な例に含まれるのは、イスコフ改変ダルベッコ培地、ＲＰＭＩ１６４０、最少必須培地－アルファ（ＭＥＭ－アルファ）、ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）、グレース完全昆虫培地、Ｌ－グルタミンを含むハムのＦ－１０またはＦ－１２、シュナイダー昆虫培地、または当業者に知られている他の任意の培地である。それに加え、本明細書に記載されている培地の非限定的な例に含まれるのは、化学的に明確な培地、炭水化物含有培地、および単純な培地である。特定のタイプの細胞に関する適切な培地と細胞培養条件の選択は当業者には明らかであろう。

いくつかの実施形態では、産生に用いるベクターと宿主系に応じ、得られる本発明のポリペプチドは、組み換え細胞の中に留まる、発酵培地の中に分泌される、２つの細胞膜の間の空間（大腸菌の中のペリプラズムなど）に分泌される；または細胞の外面またはウイルスの膜の表面に保持される。

いくつかの実施形態では、培養物の中で所定の時間が経過した後、組み換え融合タンパク質またはポリペプチドが回収される。

一実施形態では、「組み換えポリペプチドを回収する」という表現は、本明細書では、ポリペプチドを含有する発酵培地全体を回収することを意味し、分離または精製の追加工程を意味する必要はない。

いくつかの実施形態では、本発明のポリペプチドは多彩な標準的タンパク質精製技術を用いて精製される。タンパク質精製技術の非限定的な例は、アフィニティクロマトグラフィ、イオン交換クロマトグラフィ、濾過、電気泳動、疎水性相互作用クロマトグラフィ、ゲル濾過クロマトグラフィ、逆相クロマトグラフィ、コンカナバリンＡクロマトグラフィ、クロマトフォーカシング、および分別可溶化（ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｓｏｌｕｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ）などである。

いくつかの実施形態では、回収を容易にするため、発現するコード配列を操作し、本発明のポリペプチドと、融合した切断部分をコードしているようにすることができる。一実施形態では、融合タンパク質は、ポリペプチドを、例えば切断部分に対して特異的なカラムに固定化することによりアフィニティクロマトグラフィによって容易に単離できるよう設計することができる。一実施形態では、切断部位をポリペプチドとその切断部分の間で操作し、そのポリペプチドを、融合タンパク質をこの部位で特異的に切断する適切な酵素または薬剤を用いた処理によってクロマトグラフィのカラムから放出させることができる［例えばＢｏｏｔｈｅｔａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｌｅｔｔ．１９：６５－７０（１９８８）と；Ｇａｒｄｅｌｌａｅｔａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６５：１５８５４－１５８５９（１９９０）を参照されたい］。

いくつかの実施形態では、本発明のポリペプチドは「実質的に純粋な」形態で回収される。「実質的に純粋な」という表現は、本明細書に記載されている用途でタンパク質を有効に使用することを可能にする純度を意味する。

いくつかの実施形態では、本発明のポリペプチドは、インビトロ発現系を用いて合成することもできる。一実施形態では、インビトロ合成法は本分野で周知であり、系の構成成分は市販されている。

いくつかの実施形態では、ポリペプチドが合成されて精製され、治療におけるその有効性が生体内またはインビトロで調べられる。

医薬組成物
本開示により、ＣＴＬＡ－４抗原結合ドメイン、ＩＬ－１５Ｒａｓｕｓｈｉドメイン、およびＩＬ－１５ドメインを含む組み換え融合タンパク質と、医薬として許容可能な基剤、希釈剤、または賦形剤を含む医薬組成物が提供される。

本明細書では、「医薬用基剤」に含まれるのは、生理学的に適合したあらゆる溶媒、分散媒体、コーティング、抗菌剤と抗真菌剤、等張化剤、および吸収遅延剤などである。基剤の材料は非毒性であり、活性成分の生物活性の有効性を妨げない。このような調製物は、通常、塩、緩衝剤、保存剤、適合した基剤、および場合により他の治療剤を含有することができる。医薬として許容可能なこのような調製物は、通常、適合した固体または液体の充填剤、希釈剤、またはヒトへの投与に適したカプセル化物質も含有することができる。「基剤」という用語は、天然または合成の有機または無機の成分を表わし、それと活性成分を組み合わせて容易に適用できるようにする。基剤は、（例えば注射または輸液による）静脈内、筋肉内、皮下、非経口、脊椎、または表皮への投与に適していることが好ましい。

医薬として許容可能な希釈剤には生理食塩水と水性緩衝溶液が含まれる。医薬用基剤には、減菌水溶液または分散液と、減菌注射溶液または分散液の即席調製物にするための減菌粉末が含まれる。医薬として活性な物質にするためのそのような媒体と薬剤の利用は本分野で知られている。

医薬組成物は、本分野で知られていて治療で用いるのに許容できる形態で存在することができる。いくつかの実施形態では、本発明の医薬組成物は液体製剤である。他の実施形態では、本発明の医薬組成物は凍結乾燥されている。さらなる実施形態では、本発明の医薬組成物は再構成された液体製剤である。いくつかの実施形態では、本発明の液体製剤は水性製剤である。他の実施形態では、液体製剤は非水性である。

本開示の組み換え融合タンパク質を含む組成物は、本分野で知られている多彩な方法によって投与するための製剤にすることができる。投与の経路および／または様式は望む結果によって異なることが当業者にはわかるであろう。ある投与経路によって本開示の組成物を投与するには、組成物を、その不活性化を阻止する材料とともに投与せねばならない可能性がある。例えば組み換え融合タンパク質は、適切な基剤（例えばリポソームまたは希釈剤）の中に入れて対象に投与することができる。

いくつかの実施形態では、対象に投与するための調製物には、減菌された水性または非水性の溶液、懸濁液、およびエマルションが含まれる。いくつかの実施形態は、非水性溶媒（プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、植物油（例えばオリーブ油）、有機エステル（例えばオレイン酸エチル）、および当業者に知られている他の溶媒など）を含む。生理学的に許容可能な基剤（または賦形剤）が、場合により本発明のある実施形態で使用される。その例に含まれるのは、例えば生理食塩水、ＰＢＳ、リンガー溶液、乳酸リンガー溶液などである。それに加え、保存剤と添加剤が場合により組成物に添加されて、安定性と無菌性を確実にするのを助ける。例えば抗生剤と他の殺菌剤、抗酸化剤、キレート化剤などがすべて、場合により本明細書の組成物のさまざまな実施形態の中に存在する。

選択した投与経路に関係なく、適切な水和形態および／または本発明の医薬組成物にして使用できる本開示の組成物は、当業者に知られている従来の方法により、医薬として許容可能な剤型の製剤にされる。

組み換え融合タンパク質またはそれを含む医薬組成物は、場合により、適切な任意の減菌医薬用基剤の中に入れて、（治療的または予防的な）治療を必要とする対象に投与される。そのような医薬用基剤は融合タンパク質の溶解度と作用を維持する機能がある。

いくつかの実施形態では、本明細書に開示されている方法で用いるための組成物は溶液またはエマルションを含み、それは、いくつかの実施形態では、安全かつ有効な量の本明細書に開示されている化合物を含むとともに、場合により他の化合物を含む水溶液またはエマルションであり、さまざまな投与経路が想定されている。

組成物は、減菌されていて、注射器によって送達できる程度に流動性がなければならない。基剤は、水に加え、等張緩衝化生理食塩溶液であることが好ましい。適切な流動性の維持は、例えばコーティング（レシチンなど）を使用することによって、分散液の場合には必要な粒径を維持することによって、そして界面活性剤を使用することによって可能である。多くの場合、組成物の中に等張化剤、例えば糖、多糖（マンニトールまたはソルビトールなど）、および塩化ナトリウムが含まれることが好ましい。

本発明の医薬組成物に含まれる活性成分の実際の用量レベルは、特定の対象、組成、および投与様式について望む治療応答を実現するのに有効な量の活性成分を、その対象にとって毒性なしに得ようとすると、多様になる可能性がある。選択される用量レベルは、多彩な薬物動態因子（そこに含まれるのは、使用する本発明の特別な組成物の活性、投与経路、投与時刻、使用する具体的な化合物の排泄速度、治療期間、他の薬、使用する具体的な組成物と組み合わせて使用される化合物および／または材料、年齢、性別、体重、状態、一般的な健康、および治療する対象の以前の病歴である）と、医学分野で周知の同様の因子に依存する。

治療法
本開示により、疾患または障害の治療を必要とする対象でそれを治療する方法が提供され、この方法は、本明細書に開示されている組み換え融合タンパク質、またはその組み換え融合タンパク質を含む医薬組成物を治療に有効な量で投与することを含む。

本明細書に記載されている方法のいくつかの実施形態では、組み換え融合タンパク質またはそれを含む医薬組成物は、対象の免疫細胞の表面のＣＴＬＡ－４の活性を阻害する。例えば組み換え融合タンパク質のＣＴＬＡ－４抗原結合ドメインはＣＴＬＡ－４アンタゴニストとして作用する。

いくつかの実施形態では、組み換え融合タンパク質または医薬組成物は、インターロイキン２／インターロイキン１５受容体ベータ（ＩＬ－２Ｒｂ）／共通ガンマ鎖（ＩＬ－２ＲＧ）受容体複合体免疫細胞の活性を増大させる。例えばＩＬ－１５ＲａｓｕｓｈｉドメインとＩＬ－１５ドメインの組み合わせはＩＬ－２／ＩＬ－１５Ｒｂ／共通ガンマ鎖受容体複合体に結合してこの複合体を活性化させる。免疫細胞として、対象の免疫細胞、または対象に例えば養子細胞療法の一部として投与される免疫細胞が可能である。

いくつかの実施形態では、組み換え融合タンパク質または医薬組成物は免疫細胞における活性を促進する。いくつかの実施形態では、活性は、活性化、増殖、またはこれらの組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、またはＮＫ細胞である。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞はＣＤ８＋Ｔ細胞である。

いくつかの実施形態では、組み換え融合タンパク質または医薬組成物はＮＫ細胞の増殖を増大させる。

疾患と障害

本開示により、対象の疾患または障害を治療する方法が提供され、この方法は、対象に、ＣＴＬＡ－４抗原結合ドメイン、ＩＬ－１５Ｒａｓｕｓｈｉドメイン、およびＩＬ－１５ドメインを含む組み換え融合タンパク質またはそれを含む医薬組成物を投与することを含む。

いくつかの実施形態では、疾患または障害はがんである。いくつかの実施形態では、がんは液体腫瘍または固形腫瘍を含む。

いくつかの実施形態では、液体腫瘍に含まれるのは、白血病、急性骨髄性白血病、骨髄腫、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、ベータ細胞リンパ腫、慢性リンパ性白血病、または慢性骨髄性白血病、マントル細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、ＮＫ細胞リンパ腫、Ｂ細胞リンパ腫、またはＮＫＴ細胞リンパ腫である。

いくつかの実施形態では、がんは固形腫瘍を含む。いくつかの実施形態では、がんは、黒色腫、腎細胞癌、中皮腫、小細胞肺がん、ぶどう膜黒色腫、膀胱がん、胃がん、頭頸部の扁平上皮癌、皮膚癌、非小細胞肺がん、結腸直腸がん、前立腺がん、卵巣がん、子宮頸がん、子宮内膜癌、乳がん、膵臓がん、尿路上皮がん、食道がん、肝細胞癌、膠芽腫、神経膠腫、または肉腫からなるグループから選択される。

いくつかの実施形態では、がんは、黒色腫と腎細胞癌からなるグループから選択される。

いくつかの実施形態では、がんの選択は、副腎皮質癌、エイズ関連がん、エイズ関連リンパ腫、肛門がん、肛門直腸がん、肛門管のがん、虫垂がん、小児小脳星細胞腫、小児小脳星細胞腫、基底細胞癌、皮膚がん（非黒色腫）、胆道がん、肝臓外胆管がん、肝内胆管がん、膀胱がん、膀胱がん、骨と関節のがん、骨肉腫と悪性線維性組織球腫、脳がん、脳腫瘍、脳幹グリオーマ、小脳星細胞腫、小脳星細胞腫／悪性グリオーマ、上衣腫、髄芽腫、テント上原始神経外胚葉腫瘍、視路と視床下部のグリオーマ、乳がん、気管支腺腫／カルチノイド、カルチノイド腫瘍、胃腸、神経系がん、神経系リンパ腫、中枢神経系がん、中枢神経系リンパ腫、子宮頸がん、小児がん、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性骨髄増殖性疾患、大腸がん、結腸直腸がん、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、リンパ系新生物、菌状息肉症、セザリー症候群、子宮内膜がん、食道がん、頭蓋外胚細胞腫瘍、性腺外胚細胞腫瘍、肝臓外胆管がん、目がん、眼内黒色腫、網膜芽細胞腫、胆嚢がん、胃がん、胃腸カルチノイド腫瘍、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、胚細胞腫瘍、卵巣胚細胞腫瘍、妊娠性絨毛腫瘍グリオーマ、頭頸部がん、肝細胞（肝臓）がん、ホジキンリンパ腫、マントル細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、下咽頭がん、眼内黒色腫、眼がん、膵島細胞腫瘍（膵内分泌組織）、カポジ肉腫、腎臓がん、腎がん、腎臓がん、咽頭がん、急性リンパ芽球性白血病、急性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、有毛細胞性白血病、口唇と口腔のがん、肝臓がん、肺がん、非小細胞肺がん、小細胞肺がん、エイズ関連リンパ腫、非ホジキンリンパ腫、原発性中枢神経系リンパ腫、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、髄芽腫、黒色腫、眼内（目）黒色腫、メルケル細胞癌、悪性中皮腫、中皮腫、転移性頭頸部扁平上皮がん、口がん、舌のがん、多発性内分泌腫瘍症候群、菌状息肉症、骨髄異形成症候群、骨髄異形成／骨髄増殖性疾患、慢性骨髄性白血病、急性骨髄性白血病、多発性骨髄腫、慢性骨髄増殖性疾患、鼻咽頭がん、神経芽腫、口腔がん、口腔がん、口腔咽頭がん、卵巣がん、卵巣上皮がん、卵巣低悪性度腫瘍、膵臓がん、膵島腫がん、副鼻腔と鼻腔のがん、副甲状腺がん、陰茎がん、咽頭がん、褐色細胞腫、松果体芽腫とテント上原始神経外胚葉腫瘍、下垂体腫瘍、形質細胞腫／多発性骨髄腫、胸膜肺芽腫、前立腺がん、直腸がん、腎盂尿管がん、移行上皮がん、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、唾液腺がん、ユーイングファミリーの肉腫腫瘍、カポジ肉腫、軟組織肉腫、上皮型肉腫、滑膜肉腫、子宮がん、子宮肉腫、皮膚がん（非黒色腫）、皮膚がん（黒色腫）、メルケル細胞皮膚癌、小腸がん、軟組織肉腫、扁平上皮癌、胃がん、テント上原始神経外胚葉腫瘍、精巣がん、咽頭がん、胸腺腫、胸腺腫と胸腺癌、甲状腺がん、腎盂尿管と他の泌尿器の移行上皮がん、妊娠性絨毛腫瘍、尿道がん、子宮内膜・子宮がん、子宮肉腫、子宮体がん、膣がん、陰門がん、ウィルムス腫瘍からなるグループからなされる。

本開示の組み換え融合タンパク質またはそれを含む医薬組成物を用いて治療するがんは、アメリカがん合同委員会（ＡＪＣＣ）分類に従ってステージＩ、ステージＩＩＡ、ステージＩＩＢ、ステージＩＩＩＡ、ステージＩＩＩＢ、ステージＩＩＩＣ、またはステージＩＶに分類することができる。治療すべきがんには、ＡＪＣＣ分類に従うグレードを、グレードＧＸ（例えばグレードを評価できない）、グレード１、グレード２、グレード３、またはグレード４として割り当てることができる。治療すべきがんは、ＡＪＣＣ病変分類（ｐＮ）に従い、ｐＮＸ、ｐＮ０、ＰＮ０（Ｉ－）、ＰＮ０（Ｉ＋）、ＰＮ０（ｍｏｌ－）、ＰＮ０（ｍｏｌ＋）、ＰＮ１、ＰＮ１（ｍｉ）、ＰＮ１ａ、ＰＮ１ｂ、ＰＮ１ｃ、ｐＮ２、ｐＮ２ａ、ｐＮ２ｂ、ｐＮ３、ｐＮ３ａ、ｐＮ３ｂ、またはｐＮ３ｃというステージに分けることができる。その代わりに、またはそれに加えて、がんは、大半のタイプのがんを４つのステージに分けるＴＮＭステージングシステムに従ってステージ分類することができる。ステージ１は通常は、がんが比較的小さく、発生点の中にとどまっていることを意味する。ステージ２のがんは通常は周囲の組織に広がり始めていないが、腫瘍はステージ１よりも大きい。いくつかの実施形態では、ステージ２は、がんが腫瘍近傍のリンパ節に広がったことを意味する。ステージ３のがんは通常はより大きく、周囲の組織とリンパ節に広がり始めている。ステージ４または転移性がんは、典型的には、体内の発生点から他の器官へと広がったがんである。

本明細書では、「正常な細胞」は、「細胞増殖性障害」の一部に分類することのできない細胞である。正常な細胞は、望まない状態または疾患の進展につながる可能性がある制御されていない増殖と異常な増殖の一方または両方がない。好ましくは、正常な細胞は正常に機能する細胞周期チェックポイント制御機構を有する。

本明細書では、「細胞に接触させる」は、組み換え融合タンパク質または他の材料組成物を、細胞と直接接触させる条件、または細胞内で望む生物学的効果を誘導するのに十分なだけ近づける条件を意味する。

本明細書では、「単剤療法」は、単一の活性化合物または治療用化合物を、それを必要とする対象に投与することを意味する。好ましくは、単剤療法は、治療に有効な量の活性化合物を投与することを含む。単剤療法は併用療法とは対照的である可能性があり、後者では多くの活性化合物の組み合わせが投与され、好ましくはその組み合わせの各成分が治療に有効な量で存在する。

本明細書では、「治療している」または「治療する」は、疾患状態または障害と闘うことを目的とした対象の管理または世話を記述しており、がんの症状または合併症を緩和するため、またはがんを排除するため、本開示の組み換え融合タンパク質またはそれを含む医薬組成物を投与することを含む。

本明細書では、「緩和する」という用語は、がんの徴候または症状の重症度が低下するプロセスを記述することが想定されている。重要なことだが、徴候または症状は、除去されることなしに緩和することができる。好ましい一実施形態では、本開示の組み換え融合タンパク質または医薬組成物の投与は徴候または症状の除去につながるが、除去が必要とされることはない。有効な用量は、徴候または症状の重症度を低下させることが期待される。例えば多くの場所で発生する可能性がある障害（がんなど）の徴候または症状は、そのがんの重症度が多くの場所の少なくとも１つにおいて低下する場合に緩和される。

本明細書では、「重症度」という用語は、がんが前がん状態または良性状態から悪性状態へと変化する潜在力を記述することが想定されている。その代わりに、またはそれに加えて、重症度は、例えば（国際対がん連合（ＵＩＣＣ）とアメリカがん合同委員会（ＡＪＣＣ）によって受け入れられている）ＴＮＭシステムに従うか、本分野で認められている他の方法によるがんのステージを記述することが想定されている。がんのステージは、原発腫瘍の位置、腫瘍のサイズ、腫瘍の数、およびリンパ節の関与（リンパ節へのがんの広がり）などの因子に基づくがんの程度または重症度を意味する。その代わりに、またはそれに加えて、重症度は、本分野で認められている方法（アメリカ国立がん研究所、ｗｗｗ．ｃａｎｃｅｒ．ｇｏｖ参照）による腫瘍グレードを記述することが想定されている。腫瘍グレードは、顕微鏡下でどれほど異常に見えるかと、腫瘍がどれほど迅速に増殖して広がるかに関してがん細胞を分類するシステムである。細胞の構造と増殖パターンを含めて腫瘍グレードを判断するとき、多くの因子が考慮される。腫瘍グレードを判断するのに用いる具体的な因子は、それぞれのタイプのがんによって異なる。重症度は、分化とも呼ばれる組織学的グレードも記述する。これは、腫瘍細胞が同じタイプの組織の正常な細胞とどれくらい似ているかを意味する（アメリカ国立がん研究所、ｗｗｗ．ｃａｎｃｅｒ．ｇｏｖ参照）。さらに、重症度は、核グレードを記述する。これは、腫瘍細胞の中の核の形およびサイズと、分化している腫瘍細胞の割合を意味する（アメリカ国立がん研究所、ｗｗｗ．ｃａｎｃｅｒ．ｇｏｖ参照）。

本明細書では、「攻撃的」という用語は、素早く増殖する、形成される、広がることのできるがんを示す。攻撃的と名づけられたがんは治療に対して感受性であるか、治療に抵抗する可能性がある。攻撃的がんはあらゆる種類のがんを含むことができる。その代わりに、またはそれに加えて、「攻撃的」という用語は、通常よりも厳しい、または集中的な形態の治療を必要とするがんを記述することができる。

本明細書では、「難治性」という用語は、試みた治療形態に応答しないがんを記述する。難治性がんは抵抗性がんと名づけることもできる。

本開示の別の１つの側面では、重症度は、腫瘍が増殖因子を分泌した程度、細胞外マトリックスを分解した程度、血管を形成した程度、隣接した組織への接着を失った程度、または転移した程度を記述する。さらに、重症度は、原発腫瘍が転移した場所の数を記述する。最後に、重症度は、さまざまなタイプと場所の腫瘍を治療する困難さを含む。例えば手術不能な腫瘍、多くの体内システムにより多くアクセスするがん（血液系腫瘍と免疫系腫瘍）、および伝統的な治療に対して最も抵抗性であるがんが、最も重症であると見なされる。こうした状況では、対象の余命の延長および／または疼痛の減少、がん性細胞の割合の減少、または１つの系への細胞の制限と、がんのステージ／腫瘍のグレード／組織学的グレード／核グレードの改善が、がんの徴候または症状の緩和と見なされる。

本明細書では、「症状」という用語は、疾患、病気、損傷、または体内の正常でない何かの表出と定義される。症状は、症状を経験している個人によって感じられるか気づかれるが、他の人が容易に気づくことはなかろう。他の人は非医療従事者と定義される。

本明細書では、「徴候」という用語は、体内の何かが正常でないことの表出とも定義される。しかし徴候は、医師、看護師、または他の医療従事者が見ることのできる事項と定義される。

がんは、ほぼすべての徴候または症状を生じさせる可能性がある一群の疾患である。徴候と症状は、がんがどこにあるか、がんのサイズ、および近傍の器官または構造にどれほど影響を与えているかに依存するであろう。がんが広がる（転移する）のであれば、症状は身体の異なる部分に出現する可能性がある。

がんは、成長するにつれて、近傍の器官、血管、および神経を圧迫し始める。この圧力が、がんの徴候と症状のいくつかを生じさせる。がんは複数の場所に形成される可能性があり、そこではがんが成長して極めて大きくなるまでいかなる症状も生じさせない。

がんは、発熱、疲労、または体重減少などの症状も引き起こす可能性がある。これは、がん細胞が身体のエネルギー供給の多くを使い果たすか、身体の代謝を変化させる物質を放出することによる可能性がある。あるいはがんは、免疫系に、これらの症状を生じさせる反応を起こさせる可能性がある。上に列挙した徴候と症状はがんに見られる最も一般的なものだが、一般性がより低く本明細書に列挙していないものが他に多く存在する。しかしがんに関して本分野で認められているあらゆる徴候と症状が本開示によって考慮され、包含される。

がんを治療した結果、腫瘍のサイズが縮小する可能性がある。腫瘍のサイズ縮小は「腫瘍退縮」と呼ぶこともできる。好ましくは、本開示の方法による治療の後、腫瘍のサイズが治療前のサイズと比べて５％以上縮小し；より好ましくは腫瘍のサイズが１０％以上縮小し；より好ましくは２０％以上縮小し；より好ましくは３０％以上縮小し；より好ましくは４０％以上縮小し；より一層好ましくは５０％以上縮小し；最も好ましくは７５％以上縮小する。腫瘍のサイズは、再現可能な任意の測定手段によって測定することができる。腫瘍のサイズは腫瘍の直径として測定することができる。

がんを治療した結果、腫瘍の体積が減少する可能性がある。好ましくは、本開示の方法による治療の後、腫瘍の体積は治療前のサイズと比べて５％以上減少し；より好ましくは腫瘍の体積は１０％以上減少し；より好ましくは２０％以上減少し；より好ましくは３０％以上減少し；より好ましくは４０％以上減少し；より一層好ましくは５０％以上減少し；最も好ましくは７５％以上減少する。腫瘍の体積は、再現可能な任意の測定手段によって測定することができる。

がんを治療した結果、腫瘍の数が減少する可能性がある。好ましくは、治療後、腫瘍の数が治療前の数と比べて５％以上減少し；より好ましくは腫瘍の数が１０％以上減少し；より好ましくは２０％以上減少し；より好ましくは３０％以上減少し；より好ましくは４０％以上減少し；より一層好ましくは５０％以上減少し；最も好ましくは７５％超減少する。腫瘍の数は、再現可能な任意の測定手段によって測定することができる。腫瘍の数は、肉眼で、または指定された倍率で見える腫瘍を数えることによって測定できる。好ましくは、指定された倍率は、２倍、３倍、４倍、５倍、１０倍、または５０倍である。

がんを治療した結果、原発腫瘍部位から離れた他の組織または器官に転移した病巣の数が減少する可能性がある。好ましくは本開示の方法による治療の後、病巣の数が利用前の数と比べて５％以上減少し；より好ましくは転移した病巣の数が１０％以上減少し；より好ましくは２０％以上減少し；より好ましくは３０％以上減少し；より好ましくは４０％減少し；より一層好ましくは５０％以上減少し；最も好ましくは７５％超減少する。転移した病巣の数は、再現可能な任意の測定手段によって測定することができる。転移した病巣の数は、裸眼で、または指定された倍率で見える転移した病巣を数えることによって測定できる。好ましくは、指定された倍率は、２倍、３倍、４倍、５倍、１０倍、または５０倍である。

がんを治療した結果、治療した対象の集団の平均生存期間が、本開示の組み換え融合タンパク質またはそれを含む医薬組成物を投与されない集団と比べて増加する可能性がある。好ましくは、平均生存期間は３０日超増加し；より好ましくは６０日超増加し；より好ましくは９０日超超増加し；最も好ましくは１２０日超増加する。ある集団の平均生存期間の増加は、再現可能な任意の測定手段によって測定することができる。ある集団の平均生存期間の増加は、例えばある集団で活性化合物を用いた治療を開始した後の平均生存期間を計算することによって測定することができる。ある集団の平均生存期間の増加は、例えばある集団で活性化合物を用いた第１ラウンドの治療が完了した後の平均生存期間を計算することによって測定することもできる。

がんを治療した結果、治療した対象の集団の死亡率が、本開示の組み換え融合タンパク質またはそれを含む医薬組成物を投与されない集団と比べて低下する可能性がある。がんを治療した結果、治療した対象の集団の死亡率が治療なしの集団と比べて低下する可能背がある。がんを治療した結果、治療した対象の集団の死亡率が、本開示の組み換え融合タンパク質または医薬組成物ではない薬を用いた単剤療法を受けた集団と比べて低下する可能性がある。治療された対象の集団の死亡率の低下は、再現可能な任意の測定手段によって測定することができる。ある集団の死亡率の低下は、例えばある集団について活性化合物を用いた治療を開始した後の単位時間当たりの疾患関連死の平均数を計算することによって測定することができる。集団の死亡率の低下は、例えばある集団で組み換え融合タンパク質を用いた第１ラウンドの治療が完了した後の単位時間当たりの疾患関連死の平均数を計算することによって測定することもできる。

がんを治療した結果、腫瘍の増殖速度が低下する可能性がある。好ましくは、治療後、腫瘍の増殖速度は、治療前の数と比べて少なくとも５％低下し；より好ましくは、腫瘍の増殖速度は少なくとも１０％低下し；より好ましくは少なくとも２０％低下し；より好ましくは少なくとも３０％低下し；より好ましくは少なくとも４０％低下し；より好ましくは少なくとも５０％低下し；より一層好ましくは少なくとも５０％低下し；最も好ましくは少なくとも７５％低下する。腫瘍の増殖速度は、再現可能な任意の測定手段によって測定することができる。腫瘍の増殖速度は、単位時間当たりの腫瘍の直径の変化に従って測定することができる。

がんを治療した結果、腫瘍の再増殖が減少する可能性がある。好ましくは、治療後、腫瘍の再増殖は５％未満であり；より好ましくは腫瘍の再増殖は１０％未満であり；より好ましくは２０％未満であり；より好ましくは３０％未満であり；より好ましくは４０％未満であり；より好ましくは５０％未満であり；より一層好ましくは５０％未満であり；最も好ましくは７５％未満である。腫瘍の再増殖は、再現可能な任意の測定手段によって測定することができる。腫瘍の再増殖は、例えば治療後の以前の腫瘍縮小以降の腫瘍の直径の増加を測定することによって測定される。腫瘍の再増殖の減少は、治療を停止した後に腫瘍が再出現しないことによって示される。

がんを治療した結果、細胞増殖の速度が低下する可能性がある。好ましくは、治療後、細胞増殖の速度は少なくとも５％低下し；より好ましくは少なくとも１０％低下し；より好ましくは少なくとも２０％低下し；より好ましくは少なくとも３０％低下し；より好ましくは少なくとも４０％低下し；より好ましくは少なくとも５０％低下し；より一層好ましくは少なくとも５０％低下し；最も好ましくは少なくとも７５％低下する。細胞増殖の速度は、再現可能な任意の測定手段によって測定することができる。細胞増殖の速度は、例えば組織サンプル中で単位時間当たりに分化している細胞の数を測定することによって測定される。

がんを治療した結果、増殖している細胞の割合が減少する可能性がある。好ましくは、治療後、増殖している細胞の割合は少なくとも５％減少し；より好ましくは少なくとも１０％減少し；より好ましくは少なくとも２０％減少し；より好ましくは少なくとも３０％減少し；より好ましくは少なくとも４０％減少し；より好ましくは少なくとも５０％減少し；より一層好ましくは少なくとも５０％減少し；最も好ましくは少なくとも７５％減少する。増殖している細胞の割合は、再現可能な任意の測定手段によって測定することができる。好ましくは、増殖している細胞の割合は、例えば組織サンプル中で分化していない細胞の数と比べて分化している細胞の数を定量することによって測定される。増殖している細胞の割合は、有糸分裂指数と等しい可能性がある。

がんを治療した結果、細胞増殖の領域または帯域のサイズが縮小する可能性がある。好ましくは、治療後、細胞増殖の領域または帯域のサイズは、治療前のサイズと比べて少なくとも５％縮小し；より好ましくは少なくとも１０％縮小し；より好ましくは少なくとも２０％縮小し；より好ましくは少なくとも３０％縮小し；より好ましくは少なくとも４０％縮小し；より好ましくは少なくとも５０％縮小し；より一層好ましくは少なくとも５０％縮小し；最も好ましくは少なくとも７５％縮小する。細胞増殖の領域または帯域のサイズは、再現可能な任意の測定手段によって測定することができる。細胞増殖の領域または帯域のサイズは、細胞増殖の領域または帯域の直径または幅として測定することができる。

がんを治療した結果、異常な外見または形状を持つ細胞の数または割合が減少する可能性がある。好ましくは、治療後、異常な外見または形状を持つ細胞の数は、治療前のサイズと比べて少なくとも５％減少し；より好ましくは少なくとも１０％減少し；より好ましくは少なくとも２０％減少し；より好ましくは少なくとも３０％減少し；より好ましくは少なくとも４０％減少し；より好ましくは少なくとも５０％減少し；より一層好ましくは少なくとも５０％減少し；最も好ましくは少なくとも７５％減少する。異常な外見または形状は、再現可能な任意の測定手段によって測定することができる。異常な細胞形状は、顕微鏡によって（例えば倒立組織培養顕微鏡を用いて）測定することができる。異常な細胞形状は、核多型性の形態を取る可能性がある。

がんを治療した結果、細胞死が起こる可能性があり、好ましくは細胞死の結果として集団内の細胞の数が少なくとも１０％減少する。より好ましくは、細胞死は、少なくとも２０％の減少；より好ましくは少なくとも３０％の減少；より好ましくは少なくとも４０％の減少；より好ましくは少なくとも５０％の減少；最も好ましくは少なくとも７５％の減少を意味する。集団内の細胞の数は、再現可能な任意の測定手段によって測定することができる。集団内の細胞の数は、蛍光活性化セルソーティング（ＦＡＣＳ）、免疫蛍光顕微鏡法、および光学顕微鏡法によって測定することができる。細胞死を測定する方法は、Ｌｉｅｔａｌ．，ＰｒｏｃＮａｔｌＡｃａｄＳｃｉＵＳＡ．１００（５）：２６７４－８，２００３に示されている。１つの側面では、細胞死はアポトーシスによって起こる。

併用療法

いくつかの実施形態では、追加のがん治療が、組み換え融合タンパク質またはそれを含む医薬組成物と組み合わせて投与されることが望ましい可能性がある。例えばいくつかの治療計画では、化学療法剤、抗生剤、本発明の組み換え融合タンパク質を含む追加製剤、および１つ以上の標準療法剤などがすべて、場合により本発明の組成物とともに含まれる。いくつかの実施形態では、組み換え融合タンパク質は、化学療法、小分子阻害剤、タンパク質に基づく療法または生物製剤療法、放射線、外科手術、免疫療法、または養子細胞療法の１つ以上と組み合わせて投与される。

本明細書では、「併用治療」、「併用療法」、および「共療法」は交換可能に用いられ、一般に、本明細書に提示されている組み換え融合タンパク質またはそれを含む医薬組成物と追加の治療剤または方法を特徴とする治療方式を意味する。典型的には、併用治療方式は、治療剤の組み合わせの同時作用からの有益な効果を提供することを想定した１つの特別な治療計画の一部である。組み合わせの有益な効果の非限定的な例に含めることができるのは、治療剤の組み合わせから生じる薬物動態または薬力学の共作用である。これら治療剤の組み合わせ投与は、典型的には、規定の期間（選択された組み合わせに応じて通常は数分間、数時間、数日、または数週間）をかけて実施される。いくつかの実施形態では、併用治療は、２つ以上の治療剤を逐次的に投与すること（その場合に各治療剤は異なる時期に投与される）のほか、これら治療剤、または治療剤の少なくとも２つを実質的に同時に投与することを含む。実質的な同時投与は、例えば各治療剤を固定比にした単回剤型で、または治療剤を多数の別々の剤型で対象に投与することによって実現することができる。各治療剤の逐次的投与、または実質的な同時投与は、適切な任意の経路（その非限定的な例に含まれるのは経口経路、静脈内経路、筋肉内経路、および粘膜組織を通じた直接的吸収である）によって実行することができる。治療剤は同じ経路または異なる経路によって投与することができる。治療剤は、同じか異なる投与間隔で投与することができる。例えば選択された組み合わせの第１の治療剤は静脈内注射によって投与するのに対して組み合わせの他方の治療剤は経口投与することができる。あるいは、例えばすべての治療剤を経口で投与すること、またはすべての治療剤を静脈内注射によって投与することができる。

いくつかの実施形態では、併用療法は、上記の治療剤を他の生物活性な成分および非薬物療法（例えば外科手術または放射線治療）とさらに組み合わせて投与することも包含する。併用療法が非薬物治療をさらに含む場合には、非薬物治療は、治療剤と非薬物治療の組み合わせの共作用からの有益な効果が実現される限り、適切な任意の時期に実施することができる。例えば適切なケースでは、有益な効果は、非薬物治療が治療剤の投与から一時的に（おそらく数日、それどころか数週間）取り除かれたときでも実現される。

いくつかの実施形態では、追加の治療剤は、化学療法剤（抗新生物剤または抗増殖剤とも呼ばれる）、例えばアルキル化剤；抗生剤；抗代謝産物；解毒剤；インターフェロン；ポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体；ＥＧＦＲ阻害剤；ＨＥＲ２阻害剤；ヒストンデアセチラーゼ阻害剤；ホルモン；有糸分裂阻害剤；ＭＴＯＲ阻害剤；マルチ－キナーゼ阻害剤；セリン／トレオニンキナーゼ阻害剤；チロシンキナーゼ阻害剤；ＶＥＧＦ／ＶＥＧＦＲ阻害剤；タキサンまたはタキサン誘導体、アロマターゼ阻害剤、アントラサイクリン、微小管標的薬、トポイソメラーゼ阻害薬、分子標的または酵素（例えばキナーゼまたはタンパク質メチルトランスフェラーゼ）の阻害剤、シチジン類似薬または任意の化学療法剤、免疫チェックポイント阻害剤、白金に基づく抗新生物剤、ＣＤＫ阻害剤、ＰＡＲＰ阻害剤、または当業者に知られている任意の抗新生物剤または抗増殖剤である。

本明細書に提示されている併用治療方式に従って用いるのに適した代表的なアルキル化剤の非限定的な例に含まれるのは、シクロホスファミド（シトキサン；ネオサール）；クロラムブシル（リューケラン）；メルファラン（アルケラン）；カルムスチン（ＢｉＣＮＵ）；ブスルファン（ブスルフェクス）；ロムスチン（ＣｅｅＮＵ）；ダカルバジン（ＤＴＩＣ－ドーム）；オキサリプラチン（エロキサチン）；カルムスチン（グリアデル）；イホスファミド（イフェクス）；メクロレタミン（ムスタルゲン）；ブスルファン（マイレラン）；カルボプラチン（パラプラチン）；シスプラチン（ＣＤＤＰ；プラチノール）；テモゾロミド（テモダール）；チオテパ（チオプレクス）；ベンダムスチン（トレアンダ）；またはストレプトゾシン（ザノサー）である。

代表的な適切なアントラサイクリンの非限定的な例に含まれるのは、ドキソルビシン（アドリアマイシン）；リポソーム化ドキソルビシン（ドキシル）；ミトキサントロン（ノバントロン）；ブレオマイシン（ブレノキサン）；ダウノルビシン（セルビジン）；リポソーム化ダウノルビシン（ダウノキソーム）；ダクチノマイシン（コスメゲン）；エピルビシン（エレンス）；イダルビシン（イダマイシン）；プリカマイシン（ミトラシン）；マイトマイシン（ムタマイシン）；ペントスタチン（ニペント）；またはバルルビシン（バルスター）である。

代表的な抗代謝産物の非限定的な例に含まれるのは、フルオロウラシル（アドルシル）；カペシタビン（ゼローダ）；ヒドロキシウレア（ハイドレア）；メルカプトプリン（プリンソール）；ペメトレキセド（アリムタ）；フルダラビン（フルダラ）；ネララビン（アラノン）；クラドリビン（クラドリビンノバプラス）；クロファラビン（クロラー）；シタラビン（サイトサール－Ｕ）；デシタビン（ダコゲン）；リポソーム化シタラビン（ＤｅｐｏＣｙｔ）；ヒドロキシウレア（ドロキシア）；プララトレキサート（フォロチン）；フロクスウリジン（ＦＵＤＲ）；ゲムシタビン（ジェムザール）；クラドリビン（ロイスタチン）；フルダラビン（オフォルタ）；メトトレキサート（ＭＴＸ；リウマトレックス）；メトトレキサート（トレキサール）；チオグアニン（タブロイド）；ＴＳ－１、またはシタラビン（タラビンＰＦＳ）である。

代表的な解毒剤の非限定的な例に含まれるのは、アミフォスチン（エチオール）またはメスナ（メスネクス）である。

代表的なインターフェロンの非限定的な例に含まれるのは、インターフェロンアルファ－２ｂ（イントロンＡ）またはインターフェロンアルファ－２ａ（ロフェロン－Ａ）である。

代表的なポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体の非限定的な例に含まれるのは、トラスツズマブ（ハーセプチン）；オファツムマブ（アルゼラ）；ベバシズマブ（アバスチン）；リツキシマブ（リツキサン）；セツキシマブ（アービタックス）；パニツムマブ（ベクティビックス）；トシツモマブ／ヨウ素－１３１トシツモマブ（ベキサール）；アレムツズマブ（キャンパス）；イブリツモマブ（ゼバリン；Ｉｎ－１１１；Ｙ－９０ゼバリン）；ゲムツズマブ（マイロターグ）；エクリズマブ（ソリリス）、またはデノスマブである。

代表的なＥＧＦＲ阻害剤の非限定的な例に含まれるのは、ゲフィチニブ（イレッサ）；ラパチニブ（タイケルブ）；セツキシマブ（アービタックス）；エルロチニブ（タルセバ）；パニツムマブ（ベクティビックス）；ＰＫＩ－１６６；カネルチニブ（ＣＩ－１０３３）；マツズマブ（ＥＭＤ７２０００）、またはＥＫＢ－５６９である。

代表的なＨＥＲ２阻害剤の非限定的な例に含まれるのは、トラスツズマブ（ハーセプチン）；ラパチニブ（タイケルブ）、またはＡＣ－４８０である。

ヒストンデアセチラーゼ阻害剤の非限定的な例に含まれるのは、ボリノスタット（ゾリンザ）である。

代表的なホルモンの非限定的な例に含まれるのは、タモキシフェン（ソルタモクス；ノルバデクス）；ラロキシフェン（エビスタ）；メゲストロール（メガス）；リュープロリド（リュープロン；リュープロン・デポ；エリガード；ビアデュール）；フルベストラント（フェソロデックス）；レトロゾール（フェマラ）；トリプトレリン（トレルスターＬＡ；トレルスター・デポ）；エキセメスタン（アロマシン）；ゴセレリン（ゾラデックス）；ビカルタミド（カソデックス）；アナストロゾール（アリミデックス）；フルオキシメステロン（アンドロキシ；ハロテスチン）；メドロキシプロゲステロン（プロベラ；デポ－プロベラ）；エストラムスチン（Ｅｍｃｙｔ）；フルタミド（ユーレキシン）；トレミフェン（ファレストン）；デガレリクス（フィルマゴン）；ニルタミド（ニランドロン）；アバレリクス（プレナクシス）；またはテストラクトン（テスラック）である。

代表的な有糸分裂阻害剤の非限定的な例に含まれるのは、パクリタキセル（タキソール；オンキソール；アブラキサン）；ドセタキセル（タキソテール）；ビンクリスチン（オンコビン；ビンカサールＰＦＳ）；ビンブラスチン（ベルバン）；エトポシド（トポサール；エトポホス；ベペシド）；テニポシド（ブモン）；イクサベピロン（イクゼンプラ）；ノコダゾール；エポチロン；ビノレルビン（ナベルビン）；カンプトテシン（ＣＰＴ）；イリノテカン（カンプトサール）；トポテカン（ハイカムチン）；アムサクリン、またはラメラリンＤ（ＬＡＭ－Ｄ）である。

代表的なＭＴＯＲ阻害剤の非限定的な例に含まれるのは、エベロリムス（アフィニトール）またはテムシロリムス（トリセル）；ラパミューン、リダフォロリムス；またはＡＰ２３５７３である。

代表的なマルチ－キナーゼ阻害剤の非限定的な例に含まれるのは、ソラフェニブ（ネクサバール）；スニチニブ（スーテント）；ＢＩＢＷ２９９２；Ｅ７０８０；Ｚｄ６４７４；ＰＫＣ－４１２；モテサニブ；またはＡＰ２４５３４である。

代表的なセリン／トレオニンキナーゼ阻害剤の非限定的な例に含まれるのは、ルボキシスタウリン；エリル／塩酸ファスジル；フラボピリドール；セリシクリブ（ＣＹＣ２０２；ロスコビチン）；ＳＮＳ－０３２（ＢＭＳ－３８７０３２）；Ｐｋｃ４１２；ブリオスタチン；ＫＡＩ－９８０３；ＳＦ１１２６；ＶＸ－６８０；Ａｚｄ１１５２；Ａｒｒｙ－１４２８８６（ＡＺＤ－６２４４）；ＳＣＩＯ－４６９；ＧＷ６８１３２３；ＣＣ－４０１；ＣＥＰ－１３４７、またはＰＤ３３２９９１である。

代表的なチロシンキナーゼ阻害剤の非限定的な例に含まれるのは、エルロチニブ（タルセバ）；ゲフィチニブ（イレッサ）；イマチニブ（グリベック）；ソラフェニブ（ネクサバール）；スニチニブ（スーテント）；トラスツズマブ（ハーセプチン）；ベバシズマブ（アバスチン）；リツキシマブ（リツキサン）；ラパチニブ（タイケルブ）；セツキシマブ（アービタックス）；パニツムマブ（ベクティビックス）；エベロリムス（アフィニトール）；アレムツズマブ（キャンパス）；ゲムツズマブ（マイロターグ）；テムシロリムス（トリセル）；パゾパニブ（ボトリエント）；ダサチニブ（スプリセル）；ニロチニブ（タシグナ）；バタラニブ（Ｐｔｋ７８７；ＺＫ２２２５８４）；ＣＥＰ－７０１；ＳＵ５６１４；ＭＬＮ５１８；ＸＬ９９９；ＶＸ－３２２；Ａｚｄ０５３０；ＢＭＳ－３５４８２５；ＳＫＩ－６０６ＣＰ－６９０；ＡＧ－４９０；ＷＨＩ－Ｐ１５４；ＷＨＩ－Ｐ１３１；ＡＣ－２２０；またはＡＭＧ８８８である。

代表的なＶＥＧＦ／ＶＥＧＦＲ阻害剤の非限定的な例に含まれるのは、ベバシズマブ（アバスチン）、ソラフェニブ（ネクサバール）、スニチニブ（スーテント）、ラニビズマブ、パガプタニブ、またはバンデチニブである。

代表的な微小管標的薬の非限定的な例に含まれるのは、パクリタキセル、ドセタキセル、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ノコダゾール、エポチロン、およびナベルビンである。

代表的なトポイソメラーゼ阻害薬の非限定的な例に含まれるのは、テニポシド、エトポシド、アドリアマイシン、カンプトテシン、ダウノルビシン、ダクチノマイシン、ミトキサントロン、アムサクリン、エピルビシン、およびイダルビシンである。

代表的なタキサンまたはタキサン誘導体の非限定的な例に含まれるのは、パクリタキセルとドセタキソールである。

代表的な免疫チェックポイント阻害剤に含まれるのは、プログラムされた細胞死１（ＰＤ－１）阻害剤とＣＤ２７４分子（ＰＤ－Ｌ１）阻害剤である。代表的なＰＤ－１阻害剤に含まれるのは、ペムブロリズマブ、ニボルマブ、およびセミプリマブである。ＰＤ－１阻害剤のさらなる例に含まれるのは、レチファンリマブ、スパルタリズマブ、カムレリズマブ、チスレリズマブ、トリパリマブ、およびドスタルリマブである。代表的なＰＤ－Ｌ１阻害剤に含まれるのは、アテゾリズマブ、アベルマブ、およびデュルバルマブである。ＰＤ－Ｌ１阻害剤のさらなる例に含まれるのはエンファボリマブである。

白金に基づく代表的な抗新生物剤に含まれるのはシスプラチンとカルボプラチンである。

代表的なサイクリン依存性キナーゼ（ＣＤＫ）阻害剤に含まれるのは、アベマシクリブ、パルボシクリブ、およびリボシクリブである。

代表的なポリ（ＡＤＰ－リボース）ポリメラーゼ（ＰＡＲＰ）阻害剤に含まれるのは、タラゾパリブ、オラパリブ、ルカパリブ、ニラパリブ、およびベリパリブである。

代表的な一般的な化学療法剤、抗新生物剤、抗増殖剤の非限定的な例に含まれるのは、アルトレタミン（ヘキサレン）；イソトレチノイン（アキュテイン；アムネスティーム；クララビス；ソトレット）；トレチノイン（ベサノイド）；アザシチジン（ビダザ）；ボルテゾミブ（ベルケイド）アスパラギナーゼ（エルスパー）；レバミゾール（エルガミゾール）；ミトタン（リソドレン）；プロカルバジンマツレン）；ペガスパルガーゼ（オンキャスパー）；デニロイキンジフチトクス（オンタック）；ポルフィマー（フォトフリン）；アルデスロイキン（プロロイキン）；レナリドミド（レブリミド）；ベキサロテン（タルグレチン）；サリドマイド（サロミド）；テムシロリムス（トリセル）；三酸化ヒ素（トリセノックス）；ベルテポルフィン（ビスダイン）；ミモシン（ロイセノール）；（１Ｍのテガフール－０．４Ｍの５－クロロ－２，４－ジヒドロキシピリミジン－１Ｍのオキソン酸カリウム）、またはロバスタチンである。

小分子阻害剤は、小さいという理由でがん細胞が発現する細胞外と細胞内のタンパク質の両方を標的にして使用できる薬を意味する。小分子阻害剤が標的とするのは、セリン／トレオニン／チロシンキナーゼ、マトリックスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）、熱ショックタンパク質（ＨＳＰ）、プロテオソーム、およびシグナル伝達経路においてある役割を果たす他のタンパク質である。代表的な小分子阻害剤に含まれるのは、アクチニブ、エルロチニブ、イマチニブ、ゲフィチニブ、スニチニブ、ラパチニブ、ノリチニブ、カボザンチニブ、クリゾチニブ、ソラフェニブ、ベムラフェニブ、トラメチニブ、エベロリムス、テミソロリムス、ルクソリチニブ、ボルテゾミブ、パゾパニブ、ルゾリチニブ、バンデチニブ、ボスチニブ、カボザンチニブ、ポナチニブ、レゴラフェニブ、イブルチニブ、トラメチニブ、ペリフォシン、バチミスタット、ネオバスタット、プリノマスタット、レビマスタット、ガネテスピブ、マリマスタット、オバトクラックス、ナビトクラックス、およびカルフィルゾミブである。

タンパク質または生物製剤に基づく療法は、治療用タンパク質、細胞、ベクター、またはワクチンの投与を含む療法を意味する。生物製剤に基づく代表的な療法の非限定的な例に含まれるのは、抗体療法と養子細胞療法（キメラ抗原受容体Ｔ細胞（ＣＡＲ－Ｔ）またはＴ細胞受容体Ｔ細胞（ＴＣＲ－Ｔ）療法など）である。代表的な抗体療法の非限定的な例に含まれるのは、免疫チェックポイント阻害剤（ＰＤ－１チェックポイントの阻害剤（ニボルマブ、ペムブロリズマブ、アテゾリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ、セミプリマブ）など）、増殖因子であるＥＧＦＲに対する抗体（セツキシマブ、パニツマブ、ニモツズマブ、ネシツムマブ）またはＨＥＲ２に対する抗体（トラスツズマブ、ペルツズマブ）、およびがん抗原に対する抗体（例えばリツキシマブ、ブレンツキシマブ、ゲムツズマブ、イブリツモマブ、ブリナツムマブ、イノツズマブなど）である。代表的なベクターの非限定的な例に含まれるのは、治療用タンパク質をコードする核酸の送達に使用できるベクター（アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターやレンチウイルスベクターなど）である。代表的なワクチンに含まれるのはがんワクチンである。

いくつかの実施形態では、追加の治療剤がサイトカイン（例えばＧ－ＣＳＦ（顆粒球コロニー刺激因子））である併用治療方式が提供される。

いくつかの実施形態では、本明細書に提示されている医薬組成物は放射線療法と組み合わせて投与することができる。放射線療法は、多剤療法の一部として、本明細書に提示されている医薬組成物および本明細書に記載されている別の化学療法剤と組み合わせて投与することもできる。さらに別の１つの側面では、本明細書に提示されている医薬組成物は、標準的な化学療法の組み合わせと組み合わせて投与することができる。標準的な化学療法の非限定的な例に含まれるのは、例えばＣＭＦ（シクロホスファミド、メトトレキサート、および５－フルオロウラシル）、ＣＡＦ（シクロホスファミド、アドリアマイシン、および５－フルオロウラシル）、ＡＣ（アドリアマイシンとシクロホスファミド）、ＦＥＣ（５－フルオロウラシル、エピルビシン、およびシクロホスファミド）、ＡＣＴまたはＡＴＣ（アドリアマイシン、シクロホスファミド、およびパクリタキセル）、リツキシマブ、ゼローダ（カペシタビン）、シスプラチン（ＣＤＤＰ）、カルボプラチン、ＴＳ－１（テガフール、ギメスタット、およびオタスタットカリウムａｔモル比例が１：０．４：１）、カンプトテシン－１１（ＣＰＴ－１１、イリノテカン、またはカンプトサール（商標））、ＣＨＯＰ（シクロホスファミド、ヒドロキシダウノルビシン、オンコビン、およびプレドニゾンまたはプレドニゾロン）、Ｒ－ＣＨＯＰ（リツキシマブ、シクロホスファミド、ヒドロキシダウノルビシン、オンコビン、プレドニゾンまたはプレドニゾロン）、またはＣＭＦＰ（シクロホスファミド、メトトレキサート、５－フルオロウラシル、およびプレドニゾン）である。

いくつかの好ましい実施形態では、本明細書に提示されている医薬組成物は、酵素の阻害剤（受容体キナーゼまたは非受容体キナーゼなど）とともに投与することができる。受容体キナーゼと非受容体キナーゼは例えばチロシンキナーゼまたはセリン／トレオニンキナーゼである。本明細書に記載されているキナーゼ阻害剤は、小分子、ポリ核酸、ポリペプチド、または抗体である。

代表的なキナーゼ阻害剤の非限定的な例に含まれるのは、ベバシズマブ（ＶＥＧＦを標的とする）、ＢＩＢＷ２９９２（ＥＧＦＲとＥｒｂ２を標的とする）、セツキシマブ／アービタックス（Ｅｒｂ１を標的とする）、イマチニブ／グリベック（Ｂｃｒ－Ａｂｌを標的とする）、トラルズマブ（Ｅｒｂ２を標的とする）、ゲフィチニブ／イレッサ（ＥＧＦＲを標的とする）、ラニビズマブ（ＶＥＧＦを標的とする）、ペガプタニブ（ＶＥＧＦを標的とする）、エルロチニブ／タルセバ（Ｅｒｂ１を標的とする）、ニロチニブ（Ｂｃｒ－Ａｂｌを標的とする）、ラパチニブ（Ｅｒｂ１とＥｒｂ２／Ｈｅｒ２を標的とする）、ＧＷ－５７２０１６／ジトシル酸ラパチニブ（ＨＥＲ２／Ｅｒｂ２を標的とする）、パニツムマブ／ベクティビックス（ＥＧＦＲを標的とする）、バンデチニブ（ＲＥＴ／ＶＥＧＦＲを標的とする）、Ｅ７０８０（ＲＥＴとＶＥＧＦＲを含む多数を標的とする）、ハーセプチン（ＨＥＲ２／Ｅｒｂ２を標的とする）、ＰＫＩ－１６６（ＥＧＦＲを標的とする）、カネルチニブ／ＣＩ－１０３３（ＥＧＦＲを標的とする）、スニチニブ／ＳＵ－１１４６４／スーテント（ＥＧＦＲとＦＬＴ３を標的とする）、マツズマブ／Ｅｍｄ７２００（ＥＧＦＲを標的とする）、ＥＫＢ－５６９（ＥＧＦＲを標的とする）、Ｚｄ６４７４（ＥＧＦＲとＶＥＧＦＲを標的とする）、ＰＫＣ－４１２（ＶＥＧＲとＦＬＴ３を標的とする）、バタラニブ／Ｐｔｋ７８７／ＺＫ２２２５８４（ＶＥＧＲを標的とする）、ＣＥＰ－７０１（ＦＬＴ３を標的とする）、ＳＵ５６１４（ＦＬＴ３を標的とする）、ＭＬＮ５１８（ＦＬＴ３を標的とする）、ＸＬ９９９（ＦＬＴ３を標的とする）、ＶＸ－３２２（ＦＬＴ３を標的とする）、Ａｚｄ０５３０（ＳＲＣを標的とする）、ＢＭＳ－３５４８２５（ＳＲＣを標的とする）、ＳＫＩ－６０６（ＳＲＣを標的とする）、ＣＰ－６９０（ＪＡＫを標的とする）、ＡＧ－４９０（ＪＡＫを標的とする）、ＷＨＩ－Ｐ１５４（ＪＡＫを標的とする）、ＷＨＩ－Ｐ１３１（ＪＡＫを標的とする）、ソラフェニブ／ネクサバール（ＲＡＦキナーゼ、ＶＥＧＦＲ－１、ＶＥＧＦＲ－２、ＶＥＧＦＲ－３、ＰＤＧＦＲ－β、ＫＩＴ、ＦＬＴ－３、およびＲＥＴを標的とする）、ダサチニブ／スプリセル（ＢＣＲ／ＡＢＬとＳｒｃ）、ＡＣ－２２０（Ｆｌｔ３を標的とする）、ＡＣ－４８０（全ＨＥＲタンパク質「ｐａｎＨＥＲ」を標的とする）、二リン酸モテサニブ（ＶＥＧＦ１－３、ＰＤＧＦＲ、およびｃ－ｋｉｔを標的とする）、デノスマブ（ＲＡＮＫＬを標的とし、ＳＲＣを阻害する）、ＡＭＧ８８８（ＨＥＲ３を標的とする）、およびＡＰ２４５３４（Ｆｌｔ３を含む多くの標的）である。

いくつかの実施形態では、組み換え融合タンパク質またはそれを含む医薬組成物は養子細胞療法と組み合わせて投与される。いくつかの実施形態では、養子細胞療法は、キメラ抗原受容体Ｔ細胞（ＣＡＲＴ）、ＴＣＲＴ細胞療法、またはＣＡＲＮＫ細胞療法である。

本明細書では、「キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）」という用語は、（ｉ）少なくとも１つの所定のＣＡＲリガンドまたは抗原に結合することのできる細胞外ドメイン（ｉｉ）細胞外ドメインが由来するポリペプチドとは異なるシグナル伝達タンパク質に由来する１つ以上の細胞質ドメインを含む細胞内区画、および（ｉｉｉ）膜貫通ドメイン、を含む人工膜貫通タンパク質受容体を意味する。多くの異なるＣＡＲが本分野で知られており、それらすべてが、本発明ならば範囲内であると考えられる。

本明細書では、ＴＣＲＴ細胞療法は、少なくとも１つの所定のＴＣＲリガンドまたは抗原に結合することのできるＴＣＲを発現するよう操作されたＴ細胞を意味する。多くの異なるＴＣＲが本分野で知られており、それらすべてが、本発明ならば範囲内であると考えられる。

いくつかの実施形態では、ＣＴＬＡ－４抗原結合ドメイン、ＩＬ－１５Ｒａｓｕｓｈｉドメイン、およびＩＬ－１５ドメインを含む組み換え融合タンパク質またはそれを含む医薬組成物は、毎日、２日ごとに、３日ごとに、４日ごとに、５日ごとに、６日ごとに、７日ごとに、８日ごとに、９日ごとに、１０日ごとに、１１日ごとに、１２日ごとに、１３日ごとに、２週間ごとに、３週間ごとに、４週間ごとに、５週間ごとに、６週間ごとに、７週間ごとに、８週間ごとに、９週間ごとに、１０週間ごとに、１１週間ごとに、１２週間ごとに、１３週間ごとに、２ヶ月ごとに、３ヶ月ごとに、４ヶ月ごとに対象に投与される。

いくつかの実施形態では、ＣＴＬＡ－４抗原結合ドメイン、ＩＬ－１５Ｒａｓｕｓｈｉドメイン、およびＩＬ－１５ドメインを含む組み換え融合タンパク質またはそれを含む医薬組成物は、毎日、２日ごとに、３日ごとに、４日ごとに、５日ごとに、６日ごとに、７日ごとに、８日ごとに、９日ごとに、１０日ごとに、２週間ごとに、３週間ごとに、または毎月対象に投与される。

いくつかの実施形態では、ＣＴＬＡ－４抗原結合ドメイン、ＩＬ－１５Ｒａｓｕｓｈｉドメイン、およびＩＬ－１５ドメインを含む組み換え融合タンパク質またはそれを含む医薬組成物は対象に１日に１回投与される。いくつかの実施形態では、組み換え融合タンパク質またはそれを含む医薬組成物は対象に２日ごとに投与される。いくつかの実施形態では、組み換え融合タンパク質またはそれを含む医薬組成物は対象に３日ごとに投与される。いくつかの実施形態では、組み換え融合タンパク質またはそれを含む医薬組成物は対象に４日ごとに投与される。いくつかの実施形態では、組み換え融合タンパク質またはそれを含む医薬組成物は対象に５日ごとに投与される。いくつかの実施形態では、組み換え融合タンパク質またはそれを含む医薬組成物は対象に６日ごとに投与される。いくつかの実施形態では、組み換え融合タンパク質またはそれを含む医薬組成物は対象に７日ごとに投与される。いくつかの実施形態では、組み換え融合タンパク質またはそれを含む医薬組成物は対象に８日ごとに投与される。いくつかの実施形態では、組み換え融合タンパク質またはそれを含む医薬組成物は対象に９日ごとに投与される。いくつかの実施形態では、組み換え融合タンパク質またはそれを含む医薬組成物は対象に１０日ごとに投与される。いくつかの実施形態では、組み換え融合タンパク質またはそれを含む医薬組成物は対象に１１日ごとに投与される。いくつかの実施形態では、組み換え融合タンパク質またはそれを含む医薬組成物は対象に１２日ごとに投与される。いくつかの実施形態では、組み換え融合タンパク質またはそれを含む医薬組成物は対象に１３日ごとに投与される。いくつかの実施形態では、組み換え融合タンパク質またはそれを含む医薬組成物は対象に２週間ごとに投与される。いくつかの実施形態では、組み換え融合タンパク質またはそれを含む医薬組成物は対象に３週間ごとに投与される。いくつかの実施形態では、組み換え融合タンパク質またはそれを含む医薬組成物は対象に毎月投与される。いくつかの実施形態では、組み換え融合タンパク質またはそれを含む医薬組成物は対象に１年に２回以上投与される。いくつかの実施形態では、組み換え融合タンパク質またはそれを含む医薬組成物は対象に２年ごとに２回以上投与される。いくつかの実施形態では、組み換え融合タンパク質またはそれを含む医薬組成物は対象に２年以上ごとに２回以上投与される。

いくつかの実施形態では、組み換え融合タンパク質またはそれを含む医薬組成物７～１４日ごとに１回投与される。いくつかの実施形態では、組み換え融合タンパク質またはそれを含む医薬組成物１０～２０日ごとに１回投与される。いくつかの実施形態では、組み換え融合タンパク質またはそれを含む医薬組成物５～１５日ごとに１回投与される。いくつかの実施形態では、組み換え融合タンパク質またはそれを含む医薬組成物１５～３０日ごとに１回投与される。

いくつかの実施形態では、組み換え融合タンパク質またはそれを含む医薬組成物は３６時間ごとに少なくとも１回投与される。いくつかの実施形態では、組み換え融合タンパク質またはそれを含む医薬組成物は４８時間ごとに少なくとも１回投与される。いくつかの実施形態では、組み換え融合タンパク質またはそれを含む医薬組成物は６０時間ごとに少なくとも１回投与される。いくつかの実施形態では、組み換え融合タンパク質またはそれを含む医薬組成物は７２時間ごとに少なくとも１回投与される。いくつかの実施形態では、組み換え融合タンパク質またはそれを含む医薬組成物は８４時間ごとに少なくとも１回投与される。いくつかの実施形態では、組み換え融合タンパク質またはそれを含む医薬組成物は９６時間ごとに少なくとも１回投与される。いくつかの実施形態では、組み換え融合タンパク質またはそれを含む医薬組成物は５日ごとに少なくとも１回投与される。いくつかの実施形態では、組み換え融合タンパク質またはそれを含む医薬組成物は６日ごとに少なくとも１回投与される。いくつかの実施形態では、組み換え融合タンパク質またはそれを含む医薬組成物は７日ごとに少なくとも１回投与される。いくつかの実施形態では、組み換え融合タンパク質またはそれを含む医薬組成物は８～１０日ごとに少なくとも１回投与される。いくつかの実施形態では、組み換え融合タンパク質またはそれを含む医薬組成物は１０～１２日ごとに少なくとも１回投与される。いくつかの実施形態では、組み換え融合タンパク質またはそれを含む医薬組成物は１２～１５日ごとに少なくとも１回投与される。いくつかの実施形態では、組み換え融合タンパク質またはそれを含む医薬組成物は１５～２５日ごとに少なくとも１回投与される。いくつかの実施形態では、組み換え融合タンパク質またはそれを含む医薬組成物は２０～３０日ごとに少なくとも１回投与される。

いくつかの実施形態では、組み換え融合タンパク質またはそれを含む医薬組成物１ヶ月ごとに少なくとも１回、２ヶ月ごとに少なくとも１回、３ヶ月ごとに少なくとも１回、４ヶ月ごとに少なくとも１回、または６ヶ月ごとに少なくとも１回投与される。一実施形態では、ある用量の組み換え融合タンパク質またはそれを含む医薬組成物は６～１２ヶ月ごとに少なくとも１回投与される。いくつかの実施形態では、組み換え融合タンパク質またはそれを含む医薬組成物は年に４回投与される。いくつかの実施形態では、組み換え融合タンパク質またはそれを含む医薬組成物は毎日、毎週、２週間に１回、毎月、または毎年投与される。いくつかの実施形態では、組み換え融合タンパク質またはそれを含む医薬組成物は、１日、１週間、１ヶ月、または１年に１回、２回、または２回以上投与される。別の一実施形態では、前記用量は２年ごと、３年ごと、４年ごと、または少なくとも５年ごとに投与される。

いくつかの実施形態では、組み換え融合タンパク質またはそれを含む医薬組成物の投与は休薬日を含む。例えば組み換え融合タンパク質またはそれを含む医薬組成物３日ごとに投与された後、投与なしが１週間、２週間、３週間、または１ヶ月続き、その後に投与が再開される。当業者はこの休薬日が例示であることを理解するであろう。他の期間と頻度の休薬日が本開示の範囲で考えられる。

いくつかの実施形態では、組み換え融合タンパク質または医薬組成物は、少なくとも１週間、少なくとも２週間、少なくとも３週間、少なくとも４週間、少なくとも５週間、少なくとも６週間、少なくとも２ヶ月、少なくとも３ヶ月、少なくとも４ヶ月、少なくとも５ヶ月、少なくとも６ヶ月、少なくとも７ヶ月、少なくとも８ヶ月、少なくとも９ヶ月、少なくとも１０ヶ月、少なくとも１１ヶ月、少なくとも１２ヶ月、少なくとも１４ヶ月、少なくとも１６ヶ月、少なくとも１８ヶ月、少なくとも２０ヶ月、少なくとも２２ヶ月、少なくとも２年間、少なくとも２．５年間、または少なくとも３年間にわたって投与される。

いくつかの実施形態では、ＣＴＬＡ－４抗原結合ドメイン、ＩＬ－１５Ｒａｓｕｓｈｉドメイン、およびＩＬ－１５ドメインを含む組み換え融合タンパク質またはそれを含む医薬組成物は、０．０１μｇ／ｋｇ～２．０ｍｇ／ｋｇ、０．０１μｇ／ｋｇ～１．５ｍｇ／ｋｇ、０．０１μｇ／ｋｇ～１．０ｍｇ／ｋｇ、０．０１μｇ／ｋｇ～０．９ｍｇｋｇ、０．０１μｇ／ｋｇ～０．８ｍｇ／ｋｇ、０．０１μｇ／ｋｇ～０．７ｍｇ／ｋｇ、０．０１μｇ／ｋｇ～０．６ｍｇ／ｋｇ、０．０１μｇ／ｋｇ～０．５ｍｇ／ｋｇ、０．０１μｇ／ｋｇ～０．４ｍｇ／ｋｇ、０．０１μｇ／ｋｇ～０．３ｍｇ／ｋｇ、０．０１μｇ／ｋｇ～０．２ｍｇ／ｋｇ、０．０１μｇ／ｋｇ～１００μｇ／ｋｇ、０．０１μｇ／ｋｇ～５０μｇ／ｋｇ、０．０１μｇ／ｋｇ～２０μｇ／ｋｇ、０．０１μｇ／ｋｇ～１０μｇ／ｋｇ、０．１μｇ／ｋｇ～２．０ｍｇ／ｋｇ、０．１μｇ／ｋｇ～１．５ｍｇ／ｋｇ、０．１μｇ／ｋｇ～１．０ｍｇ／ｋｇ、０．１μｇ／ｋｇ～０．９ｍｇ／ｋｇ、０．１μｇ／ｋｇ～０．８ｍｇ／ｋｇ、０．１μｇ／ｋｇ～０．７ｍｇ／ｋｇ、０．１μｇ／ｋｇ～０．６ｍｇ／ｋｇ、０．１μｇ／ｋｇ～０．５ｍｇ／ｋｇ、０．１μｇ／ｋｇ～０．４ｍｇ／ｋｇ、０．１μｇ／ｋｇ～０．３ｍｇ／ｋｇ、０．１μｇ／ｋｇ～０．２ｍｇ／ｋｇ、０．１μｇ／ｋｇ～１００μｇ／ｋｇ、０．１μｇ／ｋｇ～５０μｇ／ｋｇ、０．１μｇ／ｋｇ～２０μｇ／ｋｇ、０．１μｇ／ｋｇ～１０μｇ／ｋｇ、１μｇ／ｋｇ～２．０ｍｇ／ｋｇ、１μｇ／ｋｇ～１．５ｍｇ／ｋｇ、１μｇ／ｋｇ～１．０ｍｇ／ｋｇ、１μｇ／ｋｇ～０．９ｍｇ／ｋｇ、１μｇ／ｋｇ～０．８ｍｇ／ｋｇ、１μｇ／ｋｇ～０．７ｍｇ／ｋｇ、１μｇ／ｋｇ～０．６ｍｇ／ｋｇ、１μｇ／ｋｇ～０．５ｍｇ／ｋｇ、１μｇ／ｋｇ～０．４ｍｇ／ｋｇ、１μｇ／ｋｇ～０．３ｍｇ／ｋｇ、１μｇ／ｋｇ～０．２ｍｇ／ｋｇ、１μｇ／ｋｇ～１００μｇ／ｋｇ、１μｇ／ｋｇ～５０μｇ／ｋｇ、１μｇ／ｋｇ～２０μｇ／ｋｇ、１μｇ／ｋｇ～１０μｇ／ｋｇ、１０μｇ／ｋｇ～２．０ｍｇ／ｋｇ、１０μｇ／ｋｇ～１．５ｍｇ／ｋｇ，１０μｇ／ｋｇ～１．０ｍｇ／ｋｇ、１０μｇ／ｋｇ～０．９ｍｇ／ｋｇ、１０μｇ／ｋｇ～０．８ｍｇ／ｋｇ、１０μｇ／ｋｇ～０．７ｍｇ／ｋｇ、１０μｇ／ｋｇ～０．６ｍｇ／ｋｇ、１０μｇ／ｋｇ～０．５ｍｇ／ｋｇ、１０μｇ／ｋｇ～０．４ｍｇ／ｋｇ、１０μｇ／ｋｇ～０．３ｍｇ／ｋｇ、１０μｇ／ｋｇ～０．２ｍｇ／ｋｇ、１０μｇ／ｋｇ～１００μｇ／ｋｇ、１０μｇ／ｋｇ～５０μｇ／ｋｇ、１０μｇ／ｋｇ～２０μｇ／ｋｇ、５０μｇ／ｋｇ～１．０ｍｇ／ｋｇ、５０μｇ／ｋｇ～０．５ｍｇ／ｋｇ、５０μｇ／ｋｇ～１００μｇ／ｋｇ、１００μｇ／ｋｇ～２．０ｍｇ／ｋｇ、１００μｇ／ｋｇ～１．５ｍｇ／ｋｇ、１００μｇ／ｋｇ～１．０ｍｇ／ｋｇ、１００μｇ／ｋｇ～０．５ｍｇ／ｋｇ、１００μｇ／ｋｇ～０．３ｍｇ／ｋｇ、または１００μｇ／ｋｇ～２００μｇ／ｋｇの用量で投与される。

いくつかの実施形態では、ＣＴＬＡ－４抗原結合ドメイン、ＩＬ－１５Ｒａｓｕｓｈｉドメイン、およびＩＬ－１５ドメインを含む組み換え融合タンパク質またはそれを含む医薬組成物は、０．０１μｇ／ｋｇ～２．０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。いくつかの実施形態では、組み換え融合タンパク質またはそれを含む医薬組成物は、０．１μｇ／ｋｇ～１．０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。いくつかの実施形態では、組み換え融合タンパク質またはそれを含む医薬組成物は、１．０μｇ／ｋｇ～０．５ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。いくつかの実施形態では、組み換え融合タンパク質またはそれを含む医薬組成物は、１０μｇ／ｋｇ～３００μｇ／ｋｇの用量で投与される。いくつかの実施形態では、組み換え融合タンパク質またはそれを含む医薬組成物は、５０μｇ／ｋｇ～２００μｇ／ｋｇの用量で投与される。いくつかの実施形態では、組み換え融合タンパク質またはそれを含む医薬組成物は、１００μｇ／ｋｇ～２００μｇ／ｋｇの用量で投与される。

いくつかの実施形態では、組み換え融合タンパク質またはそれを含む医薬組成物は、１０μｇ～５００ｍｇ、１０μｇ～４００ｍｇ、１０μｇ～３００ｍｇ、１０μｇ～２００ｍｇ、１０μｇ～１００ｍｇ、１０μｇ～７５ｍｇ、１０μｇ～５０ｍｇ、１０μｇ～４０ｍｇ、１０μｇ～３０ｍｇ、１０μｇ～２０ｍｇ、１０μｇ～１０ｍｇ、１００μｇ～５００ｍｇ、１００μｇ～４００ｍｇ、１００μｇ～３００ｍｇ、１００μｇ～２００ｍｇ、１００μｇ～１００ｍｇ、１００μｇ～５０ｍｇ、１００μｇ～４０ｍｇ、１００μｇ～３０ｍｇ、１００μｇ～２０ｍｇ、１００μｇ～１０ｍｇ、３００μｇ～５００ｍｇ、３００μｇ～４００ｍｇ、３００μｇ～３００ｍｇ、３００μｇ～２００ｍｇ、３００μｇ～１００ｍｇ、３００μｇ～５０ｍｇ、３００μｇ～４０ｍｇ、３００μｇ～３０ｍｇ、３００μｇ～２０ｍｇ、３００μｇ～１０ｍｇ、５００μｇ～５００ｍｇ、５００μｇ～４００ｍｇ、５００μｇ～３００ｍｇ、５００μｇ～２００ｍｇ、５００μｇ～１００ｍｇ、５００μｇ～５０ｍｇ、５００μｇ～４０ｍｇ、５００μｇ～３０ｍｇ、５００μｇ～２０ｍｇ、５００μｇ～１０ｍｇ、６００μｇ～５００ｍｇ、６００μｇ～４００ｍｇ、６００μｇ～３００ｍｇ、６００μｇ～２００ｍｇ、６００μｇ～１００ｍｇ、６００μｇ～５０ｍｇ、６００μｇ～４０ｍｇ、６００μｇ～３０ｍｇ、６００μｇ～２０ｍｇ、６００μｇ～１０ｍｇ、７００μｇ～５００ｍｇ、７００μｇ～７００ｍｇ、７００μｇ～３００ｍｇ、７００μｇ～２００ｍｇ、７００μｇ～１００ｍｇ、７００μｇ～５０ｍｇ、７００μｇ～４０ｍｇ、７００μｇ～３０ｍｇ、７００μｇ～２０ｍｇ、７００μｇ～１０ｍｇ、８００μｇ～５００ｍｇ、８００μｇ～４００ｍｇ、８００μｇ～３００ｍｇ、８００μｇ～２００ｍｇ、８００μｇ～１００ｍｇ、８００μｇ～５０ｍｇ、８００μｇ～４０ｍｇ、８００μｇ～３０ｍｇ、８００μｇ～２０ｍｇ、８００μｇ～１０ｍｇ、１ｍｇ～５００ｍｇ、１ｍｇ～４００ｍｇ、１ｍｇ～３００ｍｇ、１ｍｇ～２００ｍｇ、１ｍｇ～１００ｍｇ、１ｍｇ～５０ｍｇ、１ｍｇ～４０ｍｇ、１ｍｇ～３０ｍｇ、１ｍｇ～２０ｍｇ、１ｍｇ～１０ｍｇ、５ｍｇ～５００ｍｇ、５ｍｇ～４００ｍｇ、５ｍｇ～３００ｍｇ、５ｍｇ～２００ｍｇ、５ｍｇ～１００ｍｇ、５ｍｇ～５０ｍｇ、５ｍｇ～４０ｍｇ、５ｍｇ～３０ｍｇ、５ｍｇ～２０ｍｇ、５ｍｇ～１０ｍｇ、１０ｍｇ～５００ｍｇ、１０ｍｇ～４００ｍｇ、１０ｍｇ～３００ｍｇ、１０ｍｇ～２００ｍｇ、１０ｍｇ～１００ｍｇ、１０ｍｇ～５０ｍｇ、２０ｍｇ～５００ｍｇ、２０ｍｇ～３００ｍｇ、２０ｍｇ～２００ｍｇ、５ｍｇ～１００ｍｇ、または２０ｍｇ～５０ｍｇの範囲の用量で対象に投与される。

いくつかの実施形態では、組み換え融合タンパク質またはそれを含む医薬組成物は対象に０．０５μｇ～１，０００ｍｇの範囲の用量で投与される。いくつかの実施形態では、組み換え融合タンパク質またはそれを含む医薬組成物は対象に５μｇ～１，０００ｍｇの範囲の用量で投与される。いくつかの実施形態では、組み換え融合タンパク質またはそれを含む医薬組成物は対象に５０μｇ～５００ｍｇの範囲の用量で投与される。いくつかの実施形態では、組み換え融合タンパク質またはそれを含む医薬組成物は対象に５０μｇ～１００ｍｇの範囲の用量で投与される。いくつかの実施形態では、組み換え融合タンパク質またはそれを含む医薬組成物は対象に１００μｇ～５００ｍｇの範囲の用量で投与される。いくつかの実施形態では、組み換え融合タンパク質またはそれを含む医薬組成物は対象に１００μｇ～１００ｍｇの範囲の用量で投与される。いくつかの実施形態では、組み換え融合タンパク質またはそれを含む医薬組成物は対象に５００μｇ～１０００ｍｇの範囲の用量で投与される。いくつかの実施形態では、組み換え融合タンパク質またはそれを含む医薬組成物は対象に５００μｇ～１００ｍｇの範囲の用量で投与される。いくつかの実施形態では、組み換え融合タンパク質またはそれを含む医薬組成物は対象に１ｍｇ～５００ｍｇの範囲の用量で投与される。いくつかの実施形態では、組み換え融合タンパク質またはそれを含む医薬組成物は対象に１ｍｇ～１００ｍｇの範囲の用量で投与される。いくつかの実施形態では、組み換え融合タンパク質またはそれを含む医薬組成物は対象に５００μｇ～５０ｍｇの範囲の用量で投与される。いくつかの実施形態では、組み換え融合タンパク質またはそれを含む医薬組成物は対象に５００μｇ～４０ｍｇの範囲の用量で投与される。いくつかの実施形態では、組み換え融合タンパク質またはそれを含む医薬組成物は対象に５００μｇ～３６ｍｇの範囲の用量で投与される。いくつかの実施形態では、組み換え融合タンパク質またはそれを含む医薬組成物は対象に５００μｇ～３０ｍｇの範囲の用量で投与される。いくつかの実施形態では、組み換え融合タンパク質またはそれを含む医薬組成物は対象に５００μｇ～２０ｍｇの範囲の用量で投与される。いくつかの実施形態では、組み換え融合タンパク質またはそれを含む医薬組成物は対象に７００μｇ～１００ｍｇの範囲の用量で投与される。いくつかの実施形態では、組み換え融合タンパク質またはそれを含む医薬組成物は対象に７００μｇ～５０ｍｇの範囲の用量で投与される。いくつかの実施形態では、組み換え融合タンパク質またはそれを含む医薬組成物は対象に７００μｇ～４０ｍｇの範囲の用量で投与される。いくつかの実施形態では、組み換え融合タンパク質またはそれを含む医薬組成物は対象に７００μｇ～３６ｍｇの範囲の用量で投与される。いくつかの実施形態では、組み換え融合タンパク質またはそれを含む医薬組成物は対象に７００μｇ～３０ｍｇの範囲の用量で投与される。いくつかの実施形態では、組み換え融合タンパク質またはそれを含む医薬組成物は対象に７００μｇ～２０ｍｇの範囲の用量で投与される。いくつかの実施形態では、組み換え融合タンパク質またはそれを含む医薬組成物は対象に８００μｇ～１００ｍｇの範囲の用量で投与される。いくつかの実施形態では、組み換え融合タンパク質またはそれを含む医薬組成物は対象に８００μｇ～５０ｍｇの範囲の用量で投与される。いくつかの実施形態では、組み換え融合タンパク質またはそれを含む医薬組成物は対象に５ｍｇ～１，０００ｍｇの範囲の用量で投与される。いくつかの実施形態では、組み換え融合タンパク質またはそれを含む医薬組成物は対象に１０ｍｇ～５００ｍｇの範囲の用量で投与される。いくつかの実施形態では、組み換え融合タンパク質またはそれを含む医薬組成物は対象に１０ｍｇ～１００ｍｇの範囲の用量で投与される。

一実施形態では、１回だけの用量の組み換え融合タンパク質またはそれを含む医薬組成物が対象に投与される。別の一実施形態では、合計２回の用量が対象に投与される。別の一実施形態では、合計で２回以上の用量が対象に投与される。いくつかの実施形態では、単回用量が１回の注射で投与される。いくつかの実施形態では、単回用量が多数回の注射、例えば１、２、３、４、またはより多い回数の注射で投与される。

いくつかの実施形態では、組み換え融合タンパク質またはそれを含む医薬組成物は、液体調製物の静脈内、動脈内、皮下、腫瘍内、または筋肉内への注射によって投与される。いくつかの実施形態では、液体製剤に、溶液、懸濁液、分散液、エマルション、油などが含まれる。いくつかの実施形態では、組み換え融合タンパク質または医薬組成物は静脈内投与されるため、静脈内投与に適した形態の製剤にされる。いくつかの実施形態では、組み換え融合タンパク質または医薬組成物は動脈内投与されるため、動脈内投与に適した形態の製剤にされる。いくつかの実施形態では、組み換え融合タンパク質または医薬組成物は皮下投与されるため、皮下投与に適した形態の製剤にされる。いくつかの実施形態では、組み換え融合タンパク質または医薬組成物は腫瘍内投与されるため、腫瘍内投与に適した形態の製剤にされる。

いくつかの実施形態では、本明細書に開示されている方法で利用するための組成物は溶液またはエマルションを含み、それはいくつかの実施形態では、本明細書に開示されている化合物の安全で有効な量を含むとともに場合により他の化合物を含む水溶液またはエマルションであり、静脈内投与または皮下投与が想定されている。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載されている組み換え融合タンパク質またはそれを含む医薬組成物の投与は、対象からの末梢血サンプル中のインターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）のレベルを実質的に上昇させない。いくつかの実施形態では、本開示の組み換え融合タンパク質またはそれを含む医薬組成物の投与は、同じモル量のＩＬ－１５、またはＩＬ－１５Ｒａｓｕｓｈｉドメインとの複合体にされたＩＬ－１５の投与よりも対象からの末梢血サンプル中のインターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）のレベルの上昇が少ない。いくつかの実施形態では、末梢血サンプルは全血を含む。いくつかの実施形態では、末梢血サンプルは血漿を含む。いくつかの実施形態では、末梢血サンプルは血清を含む。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載されている組み換え融合タンパク質またはそれを含む医薬組成物の投与は、対象の免疫細胞の増殖を増加させる。その代わりに、またはそれに加えて、本明細書に記載されている組み換え融合タンパク質またはそれを含む医薬組成物の投与は対象の免疫細胞の数を増加させる。免疫細胞の数は、免疫細胞の生存、増殖、またはこれらの組み合わせによる影響を受ける可能性がある。その代わりに、またはそれに加えて、本明細書に記載されている組み換え融合タンパク質またはそれを含む医薬組成物の投与は、対象の活性な免疫細胞の数を増やす。いくつかの実施形態では、免疫細胞の増殖、生存、活性、または数は増大する一方で、対象のＩＦＮγのレベルは実質的に上昇しない。いくつかの実施形態では、免疫細胞はナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を含む。いくつかの実施形態では、免疫細胞はＴ細胞（例えばＣＤ８＋Ｔ細胞）を含む。いくつかの実施形態では、免疫細胞はＮＫ細胞とＴ細胞の組み合わせを含む。免疫細胞の数の増加は、本明細書に記載されている組み換え融合タンパク質と医薬組成物を投与した後、少なくとも２、３、４、５、６、７日間、またはより多くの日数持続する可能性がある。

サイトカイン（ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－６、ＩＬ－８、ＩＬ－１０、ＴＮＦα、およびＩＦＮγなど）のレベルを調べる方法は当業者に周知であり、方法には特に、対象から抽出した全血または血漿のサンプルでのイムノアッセイ（ＥＬＩＳＡアッセイなど）が含まれる。ＩＦＮγの検査法は本分野で知られており、市場で入手することができる。代表的な検査法にＱｕａｎｔｉＦＥＲＯＮ－ＴＢＧｏｌｄ（ＱＦＴ）検査が含まれる。ＩＦＮγのベースラインレベルは検査法によって変動するため、検査法専用の参照サンプルによって設定することができる。しかし２ピコグラム（ｐ）／ｍＬ未満、３ｐｇ／ｍＬ未満、５ｐｇ／ｍＬ未満、または１０ｐｇ／ｍＬ未満のレベルは一般に、健康な対象にとってＩＦＮγの正常範囲と見なされる。したがって組み換え融合タンパク質とそれを含む医薬組成物の投与後の３ｐｇ／ｍＬ未満、５ｐｇ／ｍＬ未満、１０ｐｇ／ｍＬ未満、または２０ｐｇ／ｍＬ未満というＩＦＮγのレベルはＩＦＮγの実質的な増加ではないと見なされる。同様に、本明細書に記載されている組み換え融合タンパク質と医薬組成物の投与よりも前にＩＦＮγのベースラインレベルから１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、または２倍未満のＩＦＮγの増加が測定されることは、ＩＦＮγの実質的な増加ではない。ＩＬ－６の検査法は本分野で同様に知られており、市場で（例えばＱｕｅｓｔＤｉａｇｎｏｓｔｉｃｓから）入手することができる。

いくつかの実施形態では、ＩＦＮγのレベルは、本明細書に記載されている組み換え融合タンパク質またはそれを含む医薬組成物を投与する前に測定してベースラインを確立し、次いで本明細書に記載されている組み換え融合タンパク質または医薬組成物を投与した後に測定して投与によるＩＦＮγのレベル増加を求める。いくつかの実施形態では、ＩＦＮγのレベルは、本明細書に記載されている組み換え融合タンパク質または医薬組成物の投与後約１時間、２時間、２時間、３時間、５時間、６時間、８時間、１０時間、１２時間、１４時間、１６時間、１８時間、２０時間、２４時間、３６時間、４８時間、または７２時間、またはこれらの組み合わせの時点で測定する。

あるいは本明細書に記載されている融合タンパク質を投与した後のＩＦＮγのレベルを、抗ＣＴＬＡ－４抗原結合ドメインを欠く同等なＩＬ－１５Ｒａｓｕｓｈｉ／ＩＬ－１５融合タンパク質の投与と比較することができる。いくつかの実施形態では、対象への本開示の融合タンパク質の投与は対象のＩＦＮγのレベルを上昇させるが、それは、抗ＣＴＬＡ－４抗原結合ドメインを欠く同等なＩＬ－１５Ｒａｓｕｓｈｉ／ＩＬ－１５融合タンパク質の投与未満である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されている融合タンパク質の投与はＩＦＮγの増加を引き起こすが、それは、抗ＣＴＬＡ－４抗原結合ドメインを欠く同等なＩＬ－１５Ｒａｓｕｓｈｉ／ＩＬ－１５融合タンパク質で見られる増加の６０％未満、５０％未満、４０％未満、３０％未満、２０％未満、１０％未満、５％未満である。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載されている融合タンパク質を投与した結果、対象におけるＩＬ－６とＩＦＮγの比は、２：１、３：１、４：１、５：１、６：１、７：１、８：１、９：１、１０：１、１５：１、２０：１、２５：１、３０：１、３５：１、４０：１、４５：１、または５０：１に等しいかそれ以上になる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されている融合タンパク質を投与した結果、対象におけるＩＬ－６とＩＦＮγの比は、２：１、３：１、４：１、５：１、６：１、７：１、８：１、９：１、または１０：１に等しいかそれ以上になる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されている融合タンパク質を投与した結果、対象におけるＩＬ－６とＩＦＮγの比は、３：１に等しいかそれ以上になる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されている融合タンパク質を投与した結果、対象におけるＩＬ－６とＩＦＮγの比は、５：１に等しいかそれ以上になる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されている融合タンパク質を投与した結果、対象におけるＩＬ－６とＩＦＮγの比は、８：１に等しいかそれ以上になる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されている融合タンパク質を投与した結果、対象におけるＩＬ－６とＩＦＮγの比は、１０：１に等しいかそれ以上になる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されている融合タンパク質を投与した結果、対象におけるＩＬ－６とＩＦＮγの比は、１５：１に等しいかそれ以上になる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されている融合タンパク質を投与した結果、対象におけるＩＬ－６とＩＦＮγの比は、２０：１に等しいかそれ以上になる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されている融合タンパク質を投与した結果、対象におけるＩＬ－６とＩＦＮγの比は、２：１と５０：１の間、３：１と３０：１の間、５：１と２０：１の間、３：１と１０：１の間、３：１と５：１の間、５：１と３０：１の間、５：１と２０：１の間、５：１と１０：１の間、１０：１と５０：１の間、または１０：１と２０：１の間になる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されている融合タンパク質を投与した結果、対象におけるＩＬ－６とＩＦＮγの比は３：１と３０：１の間になる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されている融合タンパク質を投与した結果、対象におけるＩＬ－６とＩＦＮγの比は３：１と２０：１の間になる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されている融合タンパク質を投与した結果、ＩＬ－６とＩＦＮγの比は２：１と２０：１の間になる。

キットと製品
本発明によりさらに、対象においてがんを予防する、治療する、または遅延させるための本開示の組み換え融合タンパク質またはそれを含む医薬組成物を含むキットが提供され、そのキットは、１回以上の用量の医薬組成物と、医薬調製物または組成物をどのように使用するかに関する指示を含む。

いくつかの実施形態では、キットは、注射器、バイアルのラベル、および／または医薬調製物または組成物をどのように使用するかに関する指示を含む。

本開示のキットのいくつかの実施形態では、組成物のさまざまな成分は、あらかじめ測定されている、および／またはあらかじめ包装されている、および／または追加測定などなしに使用する準備ができている。本発明は場合により、本発明の方法を実施する、および／または組成物を利用するためのキットも含む。特に、これらのキットは場合により、例えば適切な組み換え融合タンパク質（と、場合により、上記の併用治療を実施するための追加試薬）を含む。それに加え、このようなキットは、本発明の治療的治療および／または予防的治療を実施するための適切な賦形剤（例えば医薬として許容可能な賦形剤）も含むことができる。このようなキットは、場合により、本発明の組成物を構成および／または利用するための追加成分（その非限定的な例に含まれるのは例えば希釈剤などである）を含有する。

本明細書に記載されている組成物は、場合により、本発明の方法を実施する、または本発明の組成物を利用するのに必要なすべて（またはほぼすべて）の構成要素（場合により、例えば本発明の方法／組成物を利用するための書面の指示を含む）を含むように包装される。例えばキットは、場合により、例えばバッファ、試薬、血清タンパク質、抗体、基質などの成分を含むことができる。あらかじめ包装された試薬の場合には、キットは場合により、あらかじめ測定されているかあらかじめ決められていて測定せずに方法に容易に組み込まれる量（例えばキットの最終使用者が容易に再構成することのできるあらかじめ測定された流体アリコート、またはあらかじめ計量されるか測定された固体試薬）を含む。

このようなキットは、典型的には、本発明の方法を実施する、および／または本発明の組成物を使用するための適切な指示も含む。いくつかの実施形態では、キット／パッケージの構成要素は、保管が長引いている間の分解またはそれ以外の（例えば漏れによる）損失を防止するため、安定化された形態で提供される。多数の安定化プロセス／剤が、保管すべき試薬などに関して広く利用されており、それは、化学的安定剤（すなわち酵素阻害剤、殺微生物剤／静菌剤、抗凝固剤）を含めることなどである。

以下の実施例は、本発明の好ましい実施形態をより十分に説明するために提示されている。しかし実施例は、いかなる意味でも本発明の広い範囲を制限すると解釈されてはならない。

実施例１：抗ＣＴＬＡ－４－ＩＬ－１５Ｒａ－ｓｕｓｈｉ－ＩＬ－１５融合タンパク質と発現ベクターの構築
ＩＬ－１５ＲａｓｕｓｈｉドメインとＩＬ－１５に融合されたＣＴＬＡ－４抗体のほか、ＣＴＬＡ－４抗体ＩＬ－１５融合タンパク質この実施例で使用され、それらの模式図が図１Ａに示されている。

以下のコンストラクトをコードするＤＮＡ配列がＧＥＮＥＷＩＺによって合成された：
（１）ヘテロ二量体化を促進するため修飾された定常領域を持ち、ＩＬ－１５ＲａｓｕｓｈｉドメインにＧ４Ｓリンカーによって分離されて融合されたイピリムマブ由来の抗ＣＴＬＡ－４抗体重鎖（「ノブを穴の中に」ヘテロ二量体化ペアの「穴」コンストラクト）、配列番号１６のアミノ酸配列に対応する配列番号１８；
（２）ヘテロ二量体化を促進するため修飾された定常領域を持つイピリムマブ由来の抗ＣＴＬＡ－４抗体重鎖（「ノブ」コンストラクト）、配列番号１０のアミノ酸配列に対応する配列番号配列番号１９；および
（３）抗ＣＴＬＡ－４抗体軽鎖（イピリムマブ）、配列番号９のアミノ酸配列に対応する配列番号１７。

発現ベクターｐＣＨＯＧＵＮをＨｏｒｉｚｏｎＤｉｓｃｏｖｅｒｙ（ケンブリッジ、連合王国）からライセンス契約のもとで取得した。抗ＣＴＬＡ－４－ＩＬ－１５Ｒａ－ｓｕｓｈｉ－ＩＬ－１５融合タンパク質発現プラスミドの構築は、図３に概略を示してあるようにして実施した。簡単に述べると、ｐＣＨＯＧＵＮベクターを制限酵素ＢｆｕＡＩによって直線状にし、ＮｃｏＩとＡｓｃＩによる二重制限酵素消化の後に２つの重鎖と軽鎖の遺伝子インサートフラグメントを精製した。直線状にされたベクターｐＣＨＯＧＵＮ／ＢｆｕＡＩと２つの重鎖と軽鎖の精製された遺伝子インサートフラグメントをそれぞれ標準的プロトコルによって連結した後、大腸菌ＤＨ５αコンピテント細胞を形質転換した。形質転換されたＤＨ５α細胞を播種し、３７℃で一晩インキュベートした。重鎖または軽鎖の配列インサートを有するプラスミドを単離し、制限酵素消化によって確認した。３つのコンストラクトのすべてを含有するプラスミドコンストラクトを同定し、インサートをさらにＤＮＡシークエンシングによって確認した。シークエンシングされて検証された３つのプラスミドを宿主細胞系ＨＤ－ＢＩＯＰ３にトランスフェクトし、抗ＣＴＬＡ－４－ＩＬ－１５Ｒａ－ｓｕｓｈｉ－ＩＬ－１５融合タンパク質を発現させるための産生細胞系を生成させた。

イピリムマブ－ＩＬ－１５融合タンパク質（ＩＬ－１５Ｒａｓｕｓｈｉドメインなし、図１Ａの中央の図参照）の重鎖のための発現ベクターを上に記載したのと同様の戦略を用いてクローニングした。このコンストラクトでは上と同じ軽鎖コンストラクトを使用した。この抗ＣＴＬＡ－４－ＩＬ－１５融合タンパク質の配列は下記の表３に示されている。

ＢＳ３コンストラクトは配列番号９の軽鎖を用いる。図１Ｅの中のＴ３６６Ｗは配列番号１０の３６７位を意味するのに対し、Ｙ４０７Ｔは配列番号４２の４０８位を意味する。

温度安定性を評価するため、サンプルを最初に１×ＰＢＳ、ｐＨ７．４の中で１ｍｇ／ｍｌに希釈し、１０μｌのサンプル／キャピラリーをＰｒｏｍｅｔｈｅｕｓＮＴ．４８装置（ＮａｎｏＴｅｍｐｅｒＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓＩｎｃ．）のための標準的プロトコルを利用して三連でロードした。サンプルに２０℃から９５℃まで１．０℃／分の温度勾配を与え、３５０ｎｍと３３０ｎｍで蛍光強度を連続的にモニタした。データはＰｒｏｍｅｔｈｅｕｓＮＴＴｈｅｒｍＣｏｎｔｒｏｌソフトウエア（ＮａｎｏＴｅｍｐｅｒＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓＩｎｃ．）を用いて分析した。

結果が図２に示されている。抗ＨＥＲ３－ニューレグリン－１融合タンパク質からの結果が参考として示されている。図２では、抗ＣＴＬＡ４－ＩＬ１５－ＳｕｓｈｉＷＴは、定常領域にＹ４０７Ｔ穴変異とＴ３６６Ｗノブ変異（配列番号４２と１０の４０８位と３６７位にそれぞれ対応）を持つ、図１Ｅ、右図に示されているＢＳ３コンストラクトを意味する。抗ＣＴＬＡ４－ＩＬ１５－ＳｕｓｈｉＷＳＡＶは、配列番号１０と１６の重鎖、置換Ｓ３６６Ｗを有するノブ重鎖、および置換Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、およびＹ４０７Ｖ（これらは配列番号１０と１６のそれぞれ３６７位、３６９位、および４０８位に対応することに注意されたい）を有する穴重鎖を含むコンストラクトを意味する。ＷＳＡＶバリアントはより安定であったため、ノブ－穴コンストラクトとして追加実験のために使用した。

実施例２：抗ＣＴＬＡ－４－ＩＬ－１５Ｒａ－ｓｕｓｈｉ－ＩＬ－１５融合タンパク質はＣＴＬＡ－４と相互作用する
ＣＴＬＡ－４抗体、ＩＬ－１５Ｒａｓｕｓｈｉドメイン、およびＩＬ－１５が融合したコンストラクト（抗ＣＴＬＡ－４－ＩＬ－１５Ｒａ－ｓｕｓｈｉ－ＩＬ－１５）はＣＴＬＡ－４と相互作用してＣＴＬＡ－４の阻害活性を中和し、ＣＤ２８共刺激シグナル伝達経路を回復させる。

異なる種（ヒト、カニクイザル、ラット、およびマウスが含まれる）に由来する組み換えＣＴＬＡ－４タンパク質への抗ＣＴＬＡ－４－ＩＬ－１５Ｒａ－ｓｕｓｈｉ－ＩＬ－１５融合タンパク質の結合活性を酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）によって求めた。簡単に述べると、９６ウエルのプレートを、ＰＢＳに希釈した１Ｐｇ／ｍＬのＣＴＬＡ－４タンパク質で４℃にて一晩被覆した。プレートを１％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）で室温にて１時間ブロックした後、１Ｐｇ／ｍＬから開始した２倍段階希釈の抗ＣＴＬＡ－４－ＩＬ－１５Ｒａ－ｓｕｓｈｉ－ＩＬ－１５融合タンパク質、イピリムマブ、またはヒトＩｇＧ１アイソタイプ対照とともにさらに２時間インキュベートした。ヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｆｃ特異的）－ペルオキシダーゼ抗体（Ｓｉｇｍａ、１：５０００希釈）をプレートに添加し、室温で１時間インキュベートした。洗浄後、３，３’，５，５’－テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）基質をウエルに添加して発色させ、Ｍｕｌｔｉｓｋａｎプレートリーダー（Ｔｈｅｒｍｏ）を用いて４５０ｎｍで吸光度を測定した。光学密度４５０（ＯＤ４５０）値を抗体濃度に対してプロットした。図４に示されているように、抗ＣＴＬＡ－４－ＩＬ－１５Ｒａ－ｓｕｓｈｉ－ＩＬ－１５融合タンパク質は、イピリムマブと同様、ヒトとカニクイザルからのＣＴＬＡ－４タンパク質に結合できるが、ラットまたはマウスからのＣＴＬＡ－４タンパク質には結合できない。

抗ＣＴＬＡ－４－ＩＬ－１５Ｒａ－ｓｕｓｈｉ－ＩＬ－１５融合タンパク質のＣＴＬＡ－４阻害活性を、Ｇｅｎｓｃｒｉｐｔによって開発された細胞に基づく抗ＣＴＬＡ－４生物活性アッセイで検証した。簡単に述べると、ヒトＣＤ８０発現細胞系ＧＳ－Ｃ１を９６ウエルの細胞培養プレートに５０ＰＬ／ウエルと１×１０^６個の細胞／ｍＬの密度で播種した。抗ＣＴＬＡ－４－ＩＬ－１５Ｒａ－ｓｕｓｈｉ－ＩＬ－１５融合タンパク質、イピリムマブ、およびヒトＩｇＧ１アイソタイプ対照を、２．０７ＰＭ（３×最終濃度）から出発して２倍段階希釈で調製した後、プレートに５０ＰＬ／ウエルで添加した。ＣＤ２８発現Ｔ細胞系であるＧＳ－Ｊ１を懸濁させて２×１０^６個の細胞／ｍＬの密度にし、ヒトＣＴＬＡ４－Ｆｃ融合タンパク質（Ｓｉｎｏｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ、６ｍｇ／ｍＬ）およびＰＨＡ（Ｓｉｇｍａ、１５ｍｇ／ｍＬ）と混合した後、プレートに５０ＰＬ／ウエルで添加してアッセイを開始した。３７℃かつ５％ＣＯ２で２４時間インキュベートした後、各ウエルの中のならし培地を回収し、ヒトＩＬ－２ＱｕａｎｔｉｋｉｎｅＥＬＩＳＡキットを製造者の指示（Ｒ＆Ｄ）に従って用いてＩＬ－２の分泌を調べた。図５に示されているように、抗ＣＴＬＡ－４－ＩＬ－１５Ｒａ－ｓｕｓｈｉ－ＩＬ－１５融合タンパク質とイピリムマブの両方ともＣＴＬＡ－４／ＣＤ８０相互作用を阻害し、ＣＤ２８共刺激シグナル伝達経路を回復させてＩＬ－２を分泌させた。

実施例３：抗ＣＴＬＡ－４－ＩＬ－１５Ｒａ－ｓｕｓｈｉ－ＩＬ－１５融合タンパク質は、ＣＴＬＡ－４を発現している標的細胞に対する抗体依存性細胞傷害活性を保持する
抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性の評価を、Ｐｒｏｍｅｇａによって開発されたＡＤＣＣＲｅｐｏｒｔｅｒＢｉｏａｓｓａｙを用いて実施した。簡単に述べると、ＦｃγＲＩＩＩａ受容体と、ホタルルシフェラーゼの発現を駆動するＮＦＡＴ（活性化されたＴ細胞の核因子）応答エレメントを安定に発現している操作されたＪｕｒｋａｔ細胞をエフェクタ細胞として使用した。抗体が標的細胞の表面上の抗原とエフェクタ細胞の表面上のＦｃγＲＩＩＩａ受容体に結合するとき、これら２つのタイプの細胞の多重架橋が起こり、ＡＤＣＣＭＯＡ（作用機構）につながるため、それを、ＮＦＡＴ経路活性化によって生じるルシフェラーゼを通じて定量することができる。Ｊｕｒｋａｔ－ＮＦＡＴ細胞系はＰｒｏｍｅｇａから取得し、Ｒａｊｉ－ｈＣＴＬＡ４細胞系（標的細胞）はＩｎｖｉｖｏＧｅｎから取得した。Ｒａｊｉ－ｈＣＴＬＡ４細胞を９６ウエルの白壁細胞培養プレートに２５μｌ／ウエルかつ６×１０^５個の細胞／ｍＬの密度で播種した。抗ＣＴＬＡ－４－ＩＬ－１５Ｒａ－ｓｕｓｈｉ－ＩＬ－１５融合タンパク質（配列番号９、１０、および１６）とイピリムマブを５倍段階希釈（１８００ｎＭから開始）で調製した後、プレートに２５μＬ／ウエルで添加した。Ｊｕｒｋａｔ－ＮＦＡＴ細胞を最終的に２５μｌ／ウエルかつ３×１０^６個の細胞／ｍＬの密度で播種した。３７℃かつ５％ＣＯ２で２０時間インキュベートした後、ＮＦＡＴ経路活性化を促進する抗ＣＴＬＡ－４－ＩＬ－１５Ｒａ－ｓｕｓｈｉ－ＩＬ－１５融合タンパク質の活性を、Ｂｉｏ－Ｇｌｏ蛍光キット（Ｐｒｏｍｅｇａ）を用いて評価した。各ウエルでの蛍光の読み取りを抗体濃度に対してプロットした。

図６に示されているように、抗ＣＴＬＡ－４－ＩＬ－１５Ｒａ－ｓｕｓｈｉ－ＩＬ－１５融合タンパク質とイピリムマブの両方がルシフェラーゼ産生を同様のレベルまで誘導することができる。

実施例４：抗ＣＴＬＡ－４－ＩＬ－１５Ｒａ－ｓｕｓｈｉ－ＩＬ－１５融合タンパク質はＩＬ－２受容体（ＩＬ２Ｒβ）のβサブユニットと相互作用する
ＩＬ２Ｒβへの抗ＣＴＬＡ－４－ＩＬ－１５Ｒａ－ｓｕｓｈｉ－ＩＬ－１５融合タンパク質（配列番号９、１０、および１６）の結合活性を酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）によって求めた。簡単に述べると、９６ウエルのプレートを、ＰＢＳに希釈して２Ｐｇ／ｍＬにした抗ＣＴＬＡ－４－ＩＬ－１５Ｒａ－ｓｕｓｈｉ－ＩＬ－１５融合タンパク質（クローン３１Ｅ２Ｅ３、自家製）に対する抗イディオタイプ抗体で４℃にて一晩被覆した。プレートを１％ＢＳＡで室温にて１時間ブロックした後、１Ｐｇ／ｍＬの抗ＣＴＬＡ－４－ＩＬ－１５Ｒａ－ｓｕｓｈｉ－ＩＬ－１５融合タンパク質および４倍段階希釈したヒトＩＬ２Ｒβ／ｈｉｓタグ付きタンパク質（４Ｐｇ／ｍＬから開始）とともに順番にインキュベートした。ｈｉｓタグ付き組み換えヒトＩＬ２Ｒβタンパク質はＡｃｒｏＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓから取得した。抗６×ｈｉｓ－ペルオキシダーゼ抗体（Ｓｉｇｍａ、１：５０００に希釈）をプレートに添加し、室温で１時間インキュベートした。洗浄後、ＴＭＢ基質をウエルに添加して発色させ、Ｍｕｌｔｉｓｋａｎプレートリーダー（Ｔｈｅｒｍｏ）を用いて４５０ｎｍで吸光度を測定した。ＯＤ４５０値をＩＬ２Ｒβの濃度に対してプロットした。図７に示されているように、抗ＣＴＬＡ－４－ＩＬ－１５Ｒａ－ｓｕｓｈｉ－ＩＬ－１５融合タンパク質はＩＬ２Ｒβと効果的に相互作用することができる。

実施例５：抗ＣＴＬＡ－４－ＩＬ－１５Ｒａ－ｓｕｓｈｉ－ＩＬ－１５融合タンパク質はＴ細胞の増殖を促進する
抗ＣＴＬＡ－４－ＩＬ－１５Ｒａ－ｓｕｓｈｉ－ＩＬ－１５融合タンパク質は、インビトロで野生型Ｔ細胞とＩＬ１５ＲＤ－欠損Ｔ細胞の両方を増殖させる強い活性を示す。

抗ＣＴＬＡ－４－ＩＬ－１５Ｒａ－ｓｕｓｈｉ－ＩＬ－１５融合タンパク質（配列番号９、１０、および１６）がＴ細胞増殖を促進する活性を、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ蛍光細胞生死判別アッセイキット（Ｐｒｏｍｅｇａ）を用いて評価した。マウスＴ細胞系ＣＴＬＬ－２（野生型）をＡＴＣＣから取得し、ＩＬ１５ＲＤ－欠損ＣＴＬＬ－２細胞を自製した。野生型ＣＴＬＬ－２細胞とＩＬ１５ＲＤ－欠損ＣＴＬＬ－２細胞の両方を９６ウエルの白壁細胞培養プレートに７５ＰＬ／ウエルかつ１．３３×１０^６個の細胞／ｍＬの密度で播種した。抗ＣＴＬＡ－４－ＩＬ－１５Ｒａ－ｓｕｓｈｉ－ＩＬ－１５融合タンパク質、抗ＣＴＬＡ－４－ＩＬ－１５融合タンパク質（ｓｕｓｈｉドメインなし）、およびイピリムマブを５倍段階希釈（２ＰＭから開始）で調製し、プレートに２５ＰＬ／ウエルで添加した。３７℃かつ５％ＣＯ２で７２時間インキュベートした後、生きている細胞の数を製造者の指示に従って評価した。各ウエルでの蛍光の読み取りをブランク対照ウエルからのバックグラウンド値によって補正し、蛍光の読み取りの比（ブランクに対する検体）を抗体の濃度に対してプロットした。予想に反し、図８Ａに示されているように、野生型ＣＴＬＬ－２細胞については、ｓｕｓｈｉなしの抗ＣＴＬＡ－４－ＩＬ－１５融合タンパク質と抗ＣＴＬＡ４－ＩＬ－１５Ｒａ－ｓｕｓｈｉ－ＩＬ－１５融合タンパク質の両方が、蛍光によって測定したときルシフェラーゼの増殖を誘導することができた。さらに、ｓｕｓｈｉドメインなしの抗ＣＴＬＡ－４－ＩＬ－１５融合タンパク質は、抗ＣＴＬＡ４－ＩＬ－１５Ｒａ－ｓｕｓｈｉ－ＩＬ－１５よりも大きな増殖誘導能力を示した。やはり予想に反し、図８Ｂに示されているように、（ＩＬ１５ＲＤ欠損ＣＴＬＬ－２細胞を用いることによって）ＩＬ－１５Ｒａを機能しなくしたとき、抗ＣＴＬＡ４－ＩＬ－１５Ｒａ－ｓｕｓｈｉ－ＩＬ－１５融合タンパク質は増殖を誘導する能力を保持していたのに対し、ｓｕｓｈｉドメインなしの抗ＣＴＬＡ－４－ＩＬ－１５融合タンパク質によって誘導された増殖は実質的に減衰した。

抗ＣＴＬＡ－４抗体、ＩＬ－１５、ＩＬ－１５Ｒａｓｕｓｈｉドメイン、およびリンカーの配置が異なる追加の抗ＣＴＬＡ－４－ＩＬ－１５Ｒａ－ｓｕｓｈｉ－ＩＬ－１５融合タンパク質でも、このアッセイを利用してＴ細胞増殖を促進する能力を調べた。コンストラクトの模式図が図１Ｂ～１Ｅに示され、配列が表４と表５に示されている。

結果が図９Ａ～９Ｄに示されている。Ａｂ－ＩＬ１５（表３の中の配列）、Ａｂ－ＩＬ－１５Ｓｕ、Ｇ３、Ｇ４、Ｇ６、またはＧ６Ｇ３の構成のどれも、ＩＬ１５ＲＤ－欠損（ＣＴＬＬ２－ＩＬ１５ＲＡＫＯ、図９Ｂ）Ｔ細胞の中では増殖しなかった。コンストラクトＢＳ３（表４の中の配列）は、ＣＴＬＬ２－ＩＬ１５ＲＡＫＯＴ細胞の増殖誘導に関してＢＳ２よりも大きな活性を示した（図９Ｄ）。

追加コンストラクトは配列番号９の軽鎖を使用する。

Ａｂ－ＩＬ１５：図１ＢからのＴ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｔ、およびＹ３５０Ｃは、配列番号４１のそれぞれ３６７位、３６９位、４０８位、および３５０位を意味する。Ｌ２３４Ｆ、Ｓ２３９Ａ、およびＮ４３４Ａは、配列番号４１の２３５位、２４０位、および４３５位を意味し、例えばＴ３６６ＷとＳ３５４Ｃは、配列番号３９の３６７位と３５５位を意味する。

Ａｂ－１５ＩＬ１５Ｓｕ：図１ＢからのＴ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｔ、およびＹ３５０Ｃは、配列番号４４のそれぞれ３６７位、３６９位、４０８位、および３５０位を意味する。Ｌ２３４Ｆ、Ｓ２３９Ａ、およびＮ４３４Ａは、配列番号４４の２３５位、２４０位、および４３５位を意味し、例えばＴ３６６ＷとＳ３５４Ｃは、配列番号３９の３６７位と３５５位を意味する。

Ｇ２；Ａｂ－ＩＬ１５；図１ＣからのＴ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＹ３５０Ｃは、配列番号４８のそれぞれ３６７位、３６９位、４０８位、および３５０位を意味する。Ｌ２３４Ｆ、Ｓ２３９Ａ、およびＮ４３４Ａは、配列番号４８の２３５位、２４０位、および４３５位を意味し、例えばＴ３６６ＷとＳ３５４Ｃは、配列番号４６の３６７位と３５５位を意味する。

Ｇ３：図１ＤからのＴ３６６Ｗは配列番号５０の３６６位を意味する。Ｌ２３４Ｆ、Ｓ２３９Ａ、およびＮ４３４Ａは、配列番号５２の２３５位、２４０位、および４３５位を意味し、例えばＹ４０７Ｔは配列番号５２の４０８位を意味する。

Ｇ４、Ｇ６、およびＧ６Ｇ３図１Ｃ～１Ｄのノブ－穴変異は同様に、表５に示されている配列内の対応する位置を意味する。

実施例６：抗ＣＴＬＡ－４－ＩＬ－１５Ｒａ－ｓｕｓｈｉ－ＩＬ－１５融合タンパク質はＣ５７ＢＬ／６マウスにおいてＮＫ細胞とＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖を促進する
９～１１週齢のＣ５７ＢＬ／６マウス（ＧｅｍＰｈａｒｍａｔｅｃｈ、南京、中国）を無作為に５つの群（１５匹の動物／群）に分け、それぞれに以下の治療の１つを割り当てた：ＰＢＳ（ビヒクル対照）、抗ＣＴＬＡ－４－ＩＬ－１５融合タンパク質（０．３ｍｇ／ｋｇ）、抗ＣＴＬＡ－４－ＩＬ－１５融合タンパク質（１ｍｇ／ｋｇ）、抗ＣＴＬＡ－４－ＩＬ－１５Ｒａ－ｓｕｓｈｉ－ＩＬ－１５（０．３ｍｇ／ｋｇ）、および抗ＣＴＬＡ－４－ＩＬ－１５Ｒａ－ｓｕｓｈｉ－ＩＬ－１５（１ｍｇ／ｋｇ）。マウスには腹腔内注射を通じて単回用量の治療を与えた。治療してから３日目、５日目、および７日目の時点で各群から５匹の動物を従来の手続きを利用して安楽死させ、新鮮な血液と脾臓細胞を回収した。ＰＥで標識した抗マウスＣＤ３（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）、ＦＩＴＣで標識した抗マウスＣＤ４（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）、ＰＥ／Ｃｙ７で標識した抗マウスＣＤ８ａ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）、およびＡＰＣで標識した抗マウスＣＤ３３５（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）を含む各サンプルを抗体の混合物で染色した。血液と脾臓のサンプルの中のＮＫ細胞とＣＤ８＋Ｔ細胞をフローサイトメトリーによって分析し、データを全細胞集団の中のＮＫ細胞またはＣＤ８＋Ｔ細胞の割合として表示した（平均値±ＳＥＭ、ｎ＝５）。治療の統計分析を一元配置分散分析＋対応のあるｔ検定によってビヒクル対照と比較して実施し、差は、ｐ＜０．０５である場合に有意であると見なした。

図１０Ａ～１０Ｃに示されているように、抗ＣＴＬＡ－４－ＩＬ－１５Ｒａ－ｓｕｓｈｉ－ＩＬ－１５は両方の用量（０．３と１ｍｇ／ｋｇ）で、治療を受けた動物の末梢血と脾臓においてＮＫ細胞とＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖を促進する強い活性を示したが、活性化応答は末梢血においてより顕著であった。ＣＤ８＋Ｔ細胞を刺激する活性はＩＬ－１５Ｒａｓｕｓｈｉドメインありとなしの抗ＣＴＬＡ－４ＩＬ１５融合タンパク質の間で同等であるように見えたが、ＮＫ細胞集団の増殖に対するＩＬ－１５Ｒａｓｕｓｈｉドメインを持つ融合タンパク質の効力は、ＩＬ－１５Ｒａｓｕｓｈｉドメインなしの融合タンパク質の効力よりもはるかに大きかった。

ビヒクル対照と比べると、０．３ｍｇ／ｋｇの用量で治療を受けた動物では有意な体重減少はなかった。しかし有意な体重減少が、抗ＣＴＬＡ－４－ＩＬ－１５Ｒａ－ｓｕｓｈｉ－ＩＬ－１５または抗ＣＴＬＡ－４－ＩＬ－１５を１ｍｇ／ｋｇの用量で投与されたマウスで観察された。しかし観察された体重減少は、あったとしても、すべて、研究全体を通じて開始時の体重の１０％未満であったため、これは治療が動物によってよく忍容されたことを示唆する。

実施例７：抗ＣＴＬＡ－４－ＩＬ－１５Ｒａ－ｓｕｓｈｉ－ＩＬ－１５融合タンパク質はカニクイザルにおいてＴ細胞とＮＫ細胞の増殖を促進する
それぞれが２．５～４歳で体重２．５～４ｋｇの合計４０匹のカニクイザル（１つの群につき５匹／性）を４つの群（群１～４）に無作為に割り当てた。すべての群に週に１回、連続した４週間にわたって投与がなされ、群１をビヒクル対照群とした。群２と３は、それぞれ、皮下注射（ｓ．ｃ．）によって０．４と０．８ｍｇ／ｋｇの抗ＣＴＬＡ－４－ＩＬ－１５Ｒａ－ｓｕｓｈｉ－ＩＬ－１５（配列番号９、１０、および１６）を投与された。群４は、最初の投与では１．６ｍｇ／ｋｇの抗ＣＴＬＡ－４－ＩＬ－１５Ｒａ－ｓｕｓｈｉ－ＩＬ－１５を皮下注射によって投与され、第２の、第３の、および第４の投与では１．０ｍｇ／ｋｇのＪＫ０８を皮下注射によって投与された。免疫表現型分析のため、投与前、２日目、６日目、２３日目、および２７日目の時点で、約１．０ｍＬの血液をヘパリンナトリウム抗凝固剤チューブの中に取り込んだ。

サンプルを氷の上に保管し、血液を採取した時刻から２時間以内に分析した。

図１１に示されているように、抗ＣＴＬＡ－４－ＩＬ－１５Ｒａ－ｓｕｓｈｉ－ＩＬ－１５は、ＮＫ細胞の集団を表わすＣＤ１６＋細胞、ＣＤ３＋ＣＤ４＋Ｔ細胞、およびＣＤ３＋ＣＤ８＋Ｔ細胞の顕著な増殖を誘導した。示されている時点で末梢血を回収し、それに続けてＣＤ１６、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、およびＣＤ６９に関して標準抗体染色し、それに続けてＦＡＣＳ分析を実施した。

末梢血の中のサイトカインのレベルも図１２に示されている時点で調べた。血清サンプルを全血サンプルから単離し、分析を実施するまで－６５℃以下で保管した。分析は、検証されている電気化学発光（ＭＳＤ）法で実施した。図１２に示されているように、抗ＣＴＬＡ－４－ＩＬ－１５Ｒａ－ｓｕｓｈｉ－ＩＬ－１５はサイトカインの発現を誘導することが末梢血で検出され、発現は、ＩＬ－６とＩＬ－１０に関しては用量に依存していた。予想に反し、ＩＦＮγのレベルは、抗ＣＴＬＡ－４－ＩＬ－１５Ｒａ－ｓｕｓｈｉ－ＩＬ－１５融合タンパク質の投与によって顕著には上昇しなかった。図１２に示されているようにＩＬ－６のレベル上昇が観察されたため、これは特に驚くべきことであった。さらに、ＴＮＦα、ＩＬ－２、ＩＬ－４、およびＩＬ－８のレベルは上昇せず、ほぼ検出限界未満にとどまった（示さない）。

実施例８：抗ＣＴＬＡ－４－ＩＬ－１５Ｒａ－ｓｕｓｈｉ－ＩＬ－１５融合タンパク質は、ヒトＣＴＬＡ－４を発現するマウスにおいて抗がん活性を示す
腫瘍を発達させるため、Ｂ－ｈＣＴＬＡ４マウス（Ｂｉｏｃｙｔｏｇｅｎ、北京、中国）の右前脇腹に、０．１ｍＬのＰＢＳに懸濁させたＭＣ３８大腸癌腫瘍細胞（５×１０^５個の細胞、ＳｈｕｎｒａｎＳｈａｎｇｈａｉＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙＣｏ．）を皮下注射した。腫瘍の平均サイズが９９ｍｍ^３に達したとき、腫瘍担持動物を無作為に７つの研究群に分けた。それぞれの群は８匹のマウスで構成した。７つの群は、Ｇ１ビヒクル、Ｇ２イピリムマブ（０．３ｍｇ／ｋｇ）、Ｇ３ＩＬ１５＋ＳｕｓｈｉドメインＩｇＧ融合タンパク質（１ｍｇ／ｋｇ）、Ｇ４抗ＣＴＬＡ－４－ＩＬ－１５Ｒａ－ｓｕｓｈｉ－ＩＬ－１５（配列番号９、１０、および１６）低（０．１ｍｇ／ｋｇ）、Ｇ５抗ＣＴＬＡ－４－ＩＬ－１５Ｒａ－ｓｕｓｈｉ－ＩＬ－１５中（０．３ｍｇ／ｋｇ）、Ｇ６抗ＣＴＬＡ－４－ＩＬ－１５Ｒａ－ｓｕｓｈｉ－ＩＬ－１５高（１ｍｇ／ｋｇ）、およびＧ７抗ＣＴＬＡ－４－ＩＬ－１５Ｒａ－ｓｕｓｈｉ－ＩＬ－１５中（０．３ｍｇ／ｋｇ）であった。Ｇ１、Ｇ２、およびＧ７では腫瘍担持マウスに腹腔内（ｉ．ｐ．）投与が週に２回の頻度で合計８回なされ、Ｇ３～Ｇ６では腫瘍担持マウスに腹腔内投与が週に１回の頻度で合計４回なされた。すべての投与物はＰＢＳに希釈し、投与に適した体積で望む用量レベルを実現した。腫瘍の体積と体重を週に２回測定して記録した。この研究は最初の投与から３６日後に終えた。実験終了時、安楽死させた動物から腫瘍を取り出し、計量し、撮影した。

腫瘍を発達させるため、Ｂ－ｈＣＴＬＡ４マウス（Ｂｉｏｃｙｔｏｇｅｎ、北京、中国）の右前脇腹に、０．１ｍＬのＰＢＳに懸濁させたＢ１６Ｆ１０肺癌腫瘍細胞（１×１０^５個）（ＡＴＣＣ）を皮下注射した。腫瘍の平均サイズが９９ｍｍ^３に達したとき、腫瘍担持動物を無作為に７つの研究群に割り当てた。それぞれの群は８匹のマウスで構成した。７つの群は、Ｇ１ビヒクル、Ｇ２イピリムマブ（５．０ｍｇ／ｋｇ）、Ｇ３ＩＬ１５＋ＳｕｓｈｉドメインＩｇＧ融合タンパク質（１ｍｇ／ｋｇ）、Ｇ４抗ＣＴＬＡ－４－ＩＬ－１５Ｒａ－ｓｕｓｈｉ－ＩＬ－１５（配列番号９、１０、および１６）低（０．１ｍｇ／ｋｇ）、Ｇ５抗ＣＴＬＡ－４－ＩＬ－１５Ｒａ－ｓｕｓｈｉ－ＩＬ－１５中（０．３ｍｇ／ｋｇ）、Ｇ６抗ＣＴＬＡ－４－ＩＬ－１５Ｒａ－ｓｕｓｈｉ－ＩＬ－１５高（１ｍｇ／ｋｇ）、およびＧ７抗ＣＴＬＡ－４－ＩＬ－１５Ｒａ－ｓｕｓｈｉ－ＩＬ－１５中（０．３ｍｇ／ｋｇ）であった。Ｇ１、Ｇ２、およびＧ７では腫瘍担持マウスに腹腔内投与が週に２回の頻度で合計６回なされ、Ｇ３～Ｇ６では腫瘍担持マウスに腹腔内投与が週に１回の頻度で合計３回なされた。すべての投与物はＰＢＳに希釈し、投与に適した体積で望む用量レベルを実現した。腫瘍の体積と体重を週に２回測定して記録した。この研究は最初の投与から１８日後に終えた。実験終了時、安楽死させた動物から腫瘍を取り出し、計量し、撮影した。

結果が図１３Ａ（ＭＣ３８）と１３Ｂ（Ｂ１６Ｆ１０）に示されている。図１３Ａに示されているように、１ｍｇ／ｋｇＩＬの抗ＣＴＬＡ－４－ＩＬ－１５Ｒａ－ｓｕｓｈｉ－ＩＬ－１５を投与すると腫瘍の体積と腫瘍の重量がＭＣ３８マウス（図１３Ａ）とＢ１６Ｆ１０マウス（図１３Ｂ）の両方で有意に減少した。

Claims

ａ．インターロイキン１５（ＩＬ－１５）ドメイン；
ｂ．インターロイキン１５受容体サブユニットアルファ（ＩＬ－１５Ｒａ）ｓｕｓｈｉドメイン；および
ｃ．細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４（ＣＴＬＡ－４）抗原結合ドメインを含み、
前記ＩＬ－１５ドメインと前記ＩＬ－１５ＲａｓｕｓｈｉドメインがＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１５）リンカーによって分離されている組み換え融合タンパク質。
前記ＩＬ－１５ドメインが活性である、請求項１に記載の組み換え融合タンパク質。
前記ＩＬ－１５Ｒａｓｕｓｈｉドメインが、前記ＩＬ－１５ドメインの活性を、前記ＩＬ－１５Ｒａｓｕｓｈｉドメインを欠くこと以外は同等な組み換え融合タンパク質の中のＩＬ－１５ドメインの活性と比べて増大させる、請求項１または２に記載の組み換え融合タンパク質。
前記ＩＬ－１５ドメインが、ＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＤＴＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳ（配列番号１）の配列、またはそれと少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％一致する配列を含む、請求項１～３のいずれか１項に記載の組み換え融合タンパク質。
前記ＩＬ－１５ドメインが配列番号１の配列を含む、請求項１～３のいずれか１項に記載の組み換え融合タンパク質。
前記ＩＬ－１５Ｒａｓｕｓｈｉドメインが、ＩＴＣＰＰＰＭＳＶＥＨＡＤＩＷＶＫＳＹＳＬＹＳＲＥＲＹＩＣＮＳＧＦＫＲＫＡＧＴＳＳＬＴＥＣＶＬＮＫＡＴＮＶＡＨＷＴＴＰＳＬＫＣＩＲＤＰＡＬＶＨＱＲＰＡＰＰＳＴＶ（配列番号２）の配列、またはそれと少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％一致する配列を含む、請求項１～５のいずれか１項に記載の組み換え融合タンパク質。
前記ＩＬ－１５Ｒａｓｕｓｈｉドメインが配列番号２の配列を含む、請求項１～５のいずれか１項に記載の組み換え融合タンパク質。
前記ＣＴＬＡ－４抗原結合ドメインが、ＧＦＴＦＳＳＹＴ（配列番号５）、ＩＳＹＤＧＮＮＫ（配列番号６）、およびＡＲＴＧＷＬＧＰＦＤＹ（配列番号７）の相補性決定領域（ＣＤＲ）配列を含む重鎖を含む、請求項１～７のいずれか１項に記載の組み換え融合タンパク質。
前記ＣＴＬＡ－４抗原結合ドメインが、ＱＳＶＧＳＳＹ（配列番号３）、ＧＡＦ、およびＱＱＹＧＳＳＰＷＴ（配列番号４）の相補性決定領域（ＣＤＲ）配列を含む軽鎖を含む、請求項１～８のいずれか１項に記載の組み換え融合タンパク質。
前記ＣＴＬＡ－４抗原結合ドメインが、一本鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）、単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）、抗体、または抗体フラグメントを含む、請求項１～９のいずれか１項に記載の組み換え融合タンパク質。
前記ＣＴＬＡ－４抗原結合ドメインがＣＴＬＡ－４抗体を含む、請求項１～９のいずれか１項に記載の組み換え融合タンパク質。
前記ＣＴＬＡ－４抗体が第１と第２の重鎖を含む、請求項１１に記載の組み換え融合タンパク質。
前記第１と第２の重鎖の両方が、ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＴＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＴＦＩＳＹＤＧＮＮＫＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＩＹＹＣＡＲＴＧＷＬＧＰＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１２）の重鎖可変領域配列、またはそれと少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％一致する配列を含む、請求項１２に記載の組み換え融合タンパク質。
前記第１と第２の重鎖の両方が配列番号１２の重鎖可変領域配列を含む、請求項１２に記載の組み換え融合タンパク質。
前記第１の重鎖が、ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＳＣＡＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＶＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号１３）の定常領域配列、またはそれと少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％一致する配列を含む、請求項１２～１４のいずれか１項に記載の組み換え融合タンパク質。
前記第１の重鎖が配列番号１３の定常領域配列を含む、請求項１２～１４のいずれか１項に記載の組み換え融合タンパク質。
前記第２の重鎖が、ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＷＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号１４）の定常領域配列、またはそれと少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％一致する配列を含む、請求項１２～１６のいずれか１項に記載の組み換え融合タンパク質。
前記第２の重鎖が配列番号１４の定常領域配列を含む、請求項１２～１６のいずれか１項に記載の組み換え融合タンパク質。
前記第１の重鎖が、ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＴＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＴＦＩＳＹＤＧＮＮＫＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＩＹＹＣＡＲＴＧＷＬＧＰＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＳＣＡＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＶＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号１１）の配列、またはそれと少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％一致する配列を含む、請求項１２～１６のいずれか１項に記載の組み換え融合タンパク質。
前記第２の重鎖が、ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＴＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＴＦＩＳＹＤＧＮＮＫＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＩＹＹＣＡＲＴＧＷＬＧＰＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＷＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号１０）の配列、またはそれと少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％一致する配列を含む、請求項１２～１９のいずれか１項に記載の組み換え融合タンパク質。
前記第１と第２の重鎖が優先的にヘテロ二量体を形成する、請求項１２～２０のいずれか１項に記載の組み換え融合タンパク質。
前記ＩＬ－１５ＲａｓｕｓｈｉドメインのＮ末端が前記第１または第２の重鎖のＣ末端に連結されている、請求項１２～２１のいずれか１項に記載の組み換え融合タンパク質。
前記ＩＬ－１５ドメインのＮ末端が前記ＩＬ－１５ＲａｓｕｓｈｉドメインのＣ末端に連結されている、請求項１～２２のいずれか１項に記載の組み換え融合タンパク質。
前記第１または第２の重鎖と前記ＩＬ－１５Ｒａドメインがリンカーによって分離されている、請求項２２または２３に記載の組み換え融合タンパク質。
前記リンカーが、ＧＧＧＳ（配列番号２３）、ＧＧＧＧＳ（配列番号２４）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号２５）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号２６）、またはＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１５）の配列を含む、請求項２４に記載の組み換え融合タンパク質。
前記第１の重鎖、前記ＩＬ－１５Ｒａｓｕｓｈｉドメイン、および前記ＩＬ－１５ドメインが、ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＴＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＴＦＩＳＹＤＧＮＮＫＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＩＹＹＣＡＲＴＧＷＬＧＰＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＳＣＡＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＶＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＩＴＣＰＰＰＭＳＶＥＨＡＤＩＷＶＫＳＹＳＬＹＳＲＥＲＹＩＣＮＳＧＦＫＲＫＡＧＴＳＳＬＴＥＣＶＬＮＫＡＴＮＶＡＨＷＴＴＰＳＬＫＣＩＲＤＰＡＬＶＨＱＲＰＡＰＰＳＴＶＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＤＴＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳ（配列番号１６）の配列、またはそれと少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％一致する配列を含む、請求項２２～２５のいずれか１項に記載の組み換え融合タンパク質。
前記ＣＴＬＡ－４抗体が、ＥＩＶＬＴＱＳＰＧＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＧＳＳＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＧＡＦＳＲＡＴＧＩＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＲＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＹＧＳＳＰＷＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号９）を含む軽鎖配列、またはそれと少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％一致する配列を含む、請求項１１～２６のいずれか１項に記載の組み換え融合タンパク質。
前記ＣＴＬＡ－４抗体が、配列番号９を含む軽鎖配列を含む、請求項１１～２６のいずれか１項に記載の組み換え融合タンパク質。
ａ．Ｎ末端からＣ末端へ、第１のＣＴＬＡ－４抗体重鎖、ＩＬ－１５Ｒａｓｕｓｈｉドメイン、およびＩＬ－１５ドメインを含む第１のポリペプチド（ただし前記ＩＬ－１５ドメインと前記ＩＬ－１５ＲａｓｕｓｈｉドメインはＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１５）リンカーを用いて連結されている）；
ｂ．第２のＣＴＬＡ－４重鎖の配列を含む第２のポリペプチド：および
ｃ．ＣＴＬＡ－４抗体軽鎖の配列を含む２つの追加ポリペプチド
を含む組み換え融合タンパク質。
前記第１と第２のポリペプチドが優先的にヘテロ二量体を形成する、請求項２９に記載の組み換え融合タンパク質。
前記第１のポリペプチドが配列番号１６の配列を含み、前記第２のポリペプチドが配列番号１０の配列を含み、前記ＣＴＬＡ－４抗体軽鎖が、配列番号９の配列、またはそれと少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％一致する配列を含む、請求項２９または３０に記載の組み換え融合タンパク質。
請求項１～２８のいずれか１項に記載の組み換え融合タンパク質をコードするポリヌクレオチド。
請求項２９～３２のいずれか１項に記載の第１のポリペプチド、第２のポリペプチド、またはＣＬＴＡ－４抗体軽鎖をコードするポリヌクレオチド。
前記ＣＴＬＡ－４抗体軽鎖をコードする配列が、配列番号１７の配列、またはそれと少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％一致する配列を含む、請求項３３に記載のポリヌクレオチド。
前記第１のポリペプチドをコードする配列が、配列番号１８の配列、またはそれと少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％一致する配列を含む、請求項３３に記載のポリヌクレオチド。
前記第２のポリペプチドをコードする配列が、配列番号１９の配列、またはそれと少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％一致する配列を含む、請求項３３に記載のポリヌクレオチド。
請求項３２～３６のいずれか１項に記載のポリヌクレオチドを含むベクター。
前記組み換え融合タンパク質または前記ポリヌクレオチドをコードする配列に機能可能に連結されたプロモータをさらに含む、請求項３７に記載のベクター。
請求項１～３１のいずれか１項に記載の組み換え融合タンパク質と、医薬として許容可能な基剤、希釈剤、または賦形剤を含む医薬組成物。
非経口投与に適する、請求項３９に記載の医薬組成物。
前記非経口投与が、静脈内への輸液または注射、腫瘍内注射、または皮下注射を含む、請求項３９または４０に記載の医薬組成物。
疾患または障害を持つ対象を治療する方法であって、請求項１～３１のいずれか１項に記載の組み換え融合タンパク質または請求項３９～４１のいずれか１項に記載の医薬組成物を治療に有効な量で投与することを含む方法。
前記疾患または障害が、がんである、請求項４２に記載の方法。
前記がんが固形腫瘍または液体腫瘍を含む、請求項４３に記載の方法。
前記液体腫瘍に含まれるのが、白血病、急性骨髄性白血病、骨髄腫、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、ベータ細胞リンパ腫、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、マントル細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、ＮＫ細胞リンパ腫、Ｂ細胞リンパ腫、またはＮＫＴ細胞リンパ腫である、請求項４４に記載の方法。
前記がんが、黒色腫、腎細胞癌、中皮腫、小細胞肺がん、ぶどう膜黒色腫、膀胱がん、胃がん、頭頸部の扁平上皮癌、皮膚癌、非小細胞肺がん、結腸直腸がん、前立腺がん、卵巣がん、子宮頸がん、子宮内膜癌、乳がん、膵臓がん、尿路上皮がん、肝細胞癌、食道がん、膠芽腫、神経膠腫、または肉腫からなるグループから選択される、請求項４３に記載の方法。
前記がんが、黒色腫と腎細胞癌からなるグループから選択される、請求項４３に記載の方法。
前記組み換え融合タンパク質または前記医薬組成物が、免疫細胞上のＣＴＬＡ－４の活性を阻害する、請求項４２～４７のいずれか１項に記載の方法。
前記組み換え融合タンパク質または前記医薬組成物が、免疫細胞上のインターロイキン２／インターロイキン１５受容体ベータ（ＩＬ－２Ｒｂ）／共通ガンマ鎖（ＩＬ－２ＲＧ）受容体複合体の活性を増大させる、請求項４２～４８のいずれか１項に記載の方法。
前記組み換え融合タンパク質または前記医薬組成物が免疫細胞において活性を促進する、請求項４２～４９のいずれか１項に記載の方法。
前記活性が、活性化、増殖、またはこれらの組み合わせを含む、請求項５０に記載の方法。
前記免疫細胞が、Ｔ細胞、Ｂ細胞、またはＮＫ細胞である、請求項４８～５１のいずれか１項に記載の方法。
前記Ｔ細胞がＣＤ８＋Ｔ細胞である、請求項５２に記載の方法。
前記組み換え融合タンパク質または前記医薬組成物がＮＫ細胞の増殖を増加させる、請求項４２～５３のいずれか１項に記載の方法。
前記組み換え融合タンパク質または前記医薬組成物を非経口投与する、請求項４２～５４のいずれか１項に記載の方法。
前記非経口投与が、静脈内への輸液または注射、腫瘍内注射、または皮下注射を含む、請求項５５に記載の方法。
前記組み換え融合タンパク質または前記医薬組成物の投与が前記がんの徴候または症状を緩和する、請求項４３～５６のいずれか１項に記載の方法。
前記組み換え融合タンパク質または前記医薬組成物の投与が前記がんの進行を阻害する、請求項４３～５６のいずれか１項に記載の方法。
１つ以上の追加がん療法をさらに含む、請求項４３～５８のいずれか１項に記載の方法。
前記１つ以上の追加がん療法が、化学療法、小分子阻害剤、タンパク質または生物製剤に基づく療法、放射線、外科手術、免疫療法、または養子細胞療法を含む、請求項５９に記載の方法。
前記養子細胞療法が、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞療法、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）Ｔ細胞療法、またはＣＡＲＮＫ細胞療法を含む、請求項６０に記載の方法。
前記組み換え融合タンパク質または前記医薬組成物の投与が、前記対象からの末梢血サンプル中のインターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）のレベルを実質的に上昇させない、請求項４２～６１のいずれか１項に記載の方法。
前記組み換え融合タンパク質または前記医薬組成物の投与が免疫細胞の増殖を増加させるが、前記対象のＩＦＮγのレベルは実質的に上昇させない、請求項４２～６１のいずれか１項に記載の方法。
前記免疫細胞が、ＮＫ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、またはこれらの組み合わせを含む、請求項６３に記載の方法。
前記組み換え融合タンパク質または前記医薬組成物の投与が、前記対象からの末梢血サンプル中のインターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）のレベルを、同じモル量のＩＬ－１５、または前記ＩＬ－１５Ｒａｓｕｓｈｉドメインとの複合体になったＩＬ－１５の投与よりも少なく上昇させる、請求項４２～６４のいずれか１項に記載の方法。
前記組み換え融合タンパク質または前記医薬組成物を投与する結果として、同じモル量のＩＬ－１５、または前記ＩＬ－１５Ｒａｓｕｓｈｉドメインとの複合体になったＩＬ－１５の投与よりも毒性が少なくなる、請求項４２～６５のいずれか１項に記載の方法。
前記組み換え融合タンパク質または前記医薬組成物を投与する結果として、ＩＬ－６とＩＦＮγの比が、２：１、３：１、４：１、５：１、６：１、７：１、８：１、９：１、または１０：１よりも大きいかその値と等しくなる、請求項４２～６６のいずれか１項に記載の方法。
前記組み換え融合タンパク質を０．１μｇ／ｋｇ～１ｍｇ／ｋｇの用量で投与する、請求項４２～６７のいずれか１項に記載の方法。
前記組み換え融合タンパク質を１０μｇ／ｋｇ～０．３０ｍｇ／ｋｇの用量で投与する、請求項４２～６７のいずれか１項に記載の方法。
前記組み換え融合タンパク質または前記医薬組成物を静脈内、腫瘍内、または皮下に投与する、請求項４２～６９のいずれか１項に記載の方法。
前記組み換え融合タンパク質または前記医薬組成物を、毎日、２日ごとに、３日ごとに、４日ごとに、５日ごとに、６日ごとに、７日ごとに、８日ごとに、９日ごとに、１０日ごとに、２週間ごとに、３週間ごとに、または毎月投与する、請求項４２～７０のいずれか１項に記載の方法。
前記組み換え融合タンパク質または前記医薬組成物を少なくとも１週間、少なくとも２週間、少なくとも３週間、少なくとも４週間、少なくとも５週間、少なくとも６週間、少なくとも２ヶ月間、少なくとも３ヶ月間、少なくとも４ヶ月間、少なくとも５ヶ月間、少なくとも６ヶ月間、少なくとも８ヶ月間、少なくとも１０ヶ月間、少なくとも１２ヶ月間、少なくとも１４ヶ月間、少なくとも１６ヶ月間、少なくとも１８ヶ月間、少なくとも２０ヶ月間、少なくとも２２ヶ月間、または少なくとも２年間にわたって投与する、請求項４２～７１のいずれか１項に記載の方法。
対象の疾患または障害を治療する方法で利用するための、請求項１～３１のいずれか１項に記載の組み換え融合タンパク質または請求項３９～４１のいずれか１項に記載の医薬組成物。
対象の疾患または障害を治療する薬の製造で利用するための、請求項１～３１のいずれか１項に記載の組み換え融合タンパク質。
請求項１～３１のいずれか１項に記載の組み換え融合タンパク質を製造する方法であって、
ａ．複数の細胞を、請求項３２～３６のいずれか１項に記載のポリヌクレオチド、または請求項３７または３８に記載のベクターと接触させ；
ｂ．前記複数の細胞に前記組み換え融合タンパク質を発現させ；
ｃ．前記組み換え融合タンパク質を精製することを含む方法。
請求項１～３１のいずれか１項に記載の組み換え融合タンパク質、請求項３２～３６のいずれか１項に記載のポリヌクレオチド、請求項３７または３８に記載のベクター、または請求項３９～４１のいずれか１項に記載の医薬組成物を治療に有効な量で含むキット。