JP2024503703A - 武装型セネカバレーウイルス腫瘍溶解療法組成物およびその方法 - Google Patents

武装型セネカバレーウイルス腫瘍溶解療法組成物およびその方法 Download PDF

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Abstract

本明細書で提供されるのは、治療ペイロードを運ぶように、すなわち、がんを治療するための薬剤をコードするように改変された武装型セネカバレーウイルスである。これらの武装型セネカバレーウイルスは腫瘍溶解性であり、がん治療剤を発現する。また、本明細書には、対象においてがんを治療するために武装型セネカバレーウイルスを使用する組成物および方法が提供される。【選択図】なし

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０２１年１月１９日に出願された米国仮出願第６３／１３８，９９９号の優先権を主張するものであり、その開示内容は参照によりその全体が組み込まれる。
配列表
本出願には、ＡＳＣＩＩ形式で電子的に提出された配列表が含まれており、参照によりその全体が本出願に組み込まれる。２０２２年１月１９日に作成された当該ＡＳＣＩＩコピーは、115029_000049_SL.txtと命名され、サイズは１４２，３９８バイトである。
技術分野
開示された発明は、がんを治療するための組成物および方法に関する。より詳細には、開示された発明は、がんの治療に役立つ治療剤をコードするように操作された腫瘍溶解性ウイルス、特にセネカバレーウイルスを用いて対象のがんを治療する分野に関する。
がんは米国で２番目に多い死因である。４人に１人ががんで死亡し、毎年１００万人以上が新たにがんと診断されている。この病気は、異常に変化した細胞の無秩序な増殖と成長から始まる。しかし、その定義は１つの病気の説明で終わるものではなく、何百種類もの異なる病気の説明である。同じがんは二つとなく、クローン性もない。細胞形質転換中に引き起こされる突然変異および獲得される突然変異は類似しているかもしれないが、決して同一ではない。この難問が、患者が発症する病態の複雑さと異質性に拍車をかけている。化学療法や放射線療法を含む現在のがん治療は、免疫調節剤と組み合わせて抗腫瘍微小環境を作り、強化することで最も効果を発揮する。多くの悪性腫瘍は、このような従来の方法による治療に耐性がある可能性がある。
腫瘍溶解性ウイルスは抗がん剤として大きな可能性を秘めている。ピコルナウイルス・セネカバレーウイルス（ＳＶＶ）は一本鎖（＋）ＲＮＡウイルスであり、腫瘍溶解療法として研究されてきた。ＳＶＶは小細胞がん、非小細胞肺がん、小児固形腫瘍を含む多くの難治性悪性腫瘍を標的とし、その退縮を促進できることが示されている。多くの場合、このような腫瘍溶解性ウイルスはがん治療に有用な別の化合物と併用される。このような併用療法では、異なる化合物を異なる経路で投与する必要がある。
従って、腫瘍溶解性ウイルス、特にＳＶＶをがん治療に有用な別の薬剤と併用する改良された治療法が必要とされている。
本明細書で提供されるのは、がんの治療に有用な薬剤を発現するように遺伝子操作された武装型セネカバレーウイルスである。特定の実施形態において、薬剤は、抗ＰＤ－１抗体の結合断片、ＣＸＣＬ９、ＴＧＦβ受容体デコイ、ＩＬ－２変異体、またはニトロレダクターゼである。特定の実施形態において、本開示は、セネカバレーウイルスまたはその腫瘍溶解性断片と、インターロイキン、ケモカイン、またはチェックポイント阻害剤として作用するナノボディなどの目的の治療タンパク質をコードする核酸とを含む、武装型セネカバレーウイルスを提供する。特定の実施形態において、武装型セネカバレーウイルスは、目的の治療タンパク質をコードする核酸が挿入されたセネカバレーウイルスまたはその腫瘍溶解性断片を含む。
武装型セネカバレーウイルスは、配列ＩＤ番号：１、３、５、７、９、１１、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、または５１の核酸と少なくとも８５％、９５％、９９％、または１００％同一の核酸が挿入されたセネカバレーウイルスまたはその腫瘍溶解性断片の配列を含むことができる。あるいは、武装型セネカバレーウイルスは、配列ＩＤ番号：２、４、６、８、１０、１２、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０、または５２のアミノ酸配列と少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％同一のタンパク質をコードする核酸が挿入されたセネカバレーウイルスまたはその腫瘍溶解性断片の配列を含む。
あるいは、武装型セネカバレーウイルスは、配列ＩＤ番号：１３のヌクレオチド１－７７６２；配列ＩＤ番号：１４のヌクレオチド１－７７８３；配列ＩＤ番号：１５のヌクレオチド１－７７５９；配列ＩＤ番号：１６のヌクレオチド１－７９８４；配列ＩＤ番号：１７のヌクレオチド１－８１４０；または配列ＩＤ番号：１８のヌクレオチド１－７７３８と少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％同一なヌクレオチド配列を含む。
本開示はまた、武装型セネカバレーウイルスを含むプラスミドなどのベクターを提供する。特定の実施形態において、プラスミドは、配列ＩＤ番号：１３～１８もしくは５３～６４またはそれらの断片を含む。
また、本明細書では、がんの治療に有用な薬剤を発現するように遺伝子操作された武装型セネカバレーウイルスを使用する、がんを治療するための改良された方法、組成物、キット、および医薬組成物も提供する。
特に、前記がんは、トリプルネガティブ乳がん、小細胞肺がん、非小細胞肺がん、非小細胞扁平上皮がん、腺がん、膠芽腫、皮膚がん、肝細胞がん、結腸がん、子宮頸がん、卵巣がん、子宮内膜がん、神経内分泌がん、膵臓がん、甲状腺がん、腎臓がん、骨がん、食道がん、または軟部組織がんを含む。また、前記がんは、神経芽細胞腫、黒色腫、神経内分泌がん、小細胞肺がん（ＳＣＬＣ）腫瘍であってもよい。
本発明の１つの実施形態は、がんを治療するのに有用な薬剤を発現するように遺伝子操作されたウイルスである、武装型セネカバレーウイルスの有効量を対象に投与する工程を含む、それを必要とする対象のがんを治療する方法である。
本発明の別の実施態様は、有効量の武装型セネカバレーウイルスを投与する工程を含む、腫瘍溶解性がんウイルス治療の成功を改善する方法であり、ここで、ウイルスは、がんを治療するのに有用な薬剤を発現するように遺伝子操作されている。
また、本明細書では、対象においてがんを治療するための医薬組成物であって、前記医薬組成物は、武装型ＳＶＶ、および医薬的に許容される担体を含み、前記武装型ＳＶＶは、がんを治療するのに有用な薬剤を発現するように遺伝子操作されている、医薬組成物が提供される。
さらに本明細書では、武装型セネカバレーウイルスを含む、対象においてがんを治療するためのキットであって、武装型ＳＶＶががんの治療に有用な薬剤を発現するように改変されている、キットが提供される。
さらに、本明細書において提供されるのは、がんの治療のための医薬の製造において使用するための武装型セネカバレーウイルス（ＳＶＶ）であって、前記武装型ＳＶＶは、がんの治療に有用な薬剤をコードする、武装型セネカバレーウイルスが提供される。
本発明の別の実施形態は、武装型ＳＶＶである。さらに別の実施形態は、武装型ＳＶＶを生成する方法である。武装型ＳＶＶは、がんの治療に有用な薬剤をコードする核酸を運ぶように改変されている。
本発明の他の特徴および利点は、後に続く詳細な説明および実施例から明らかになるであろう。
要約、および以下の詳細な説明は、添付の図面と併せて読むことにより、さらに理解される。本発明を説明する目的で、本発明の例示的な実施形態が図面に示されている。しかしながら、本発明は、開示された特定の方法および組成物に限定されず、本発明は、図面に描かれた実施形態の正確な配置および器具に限定されない。加えて、図面は必ずしも縮尺どおりに描かれていない。図面において：
図１は、プラスミドｐＮＴＸ－１１ ＶＨＨ ａＰＤＬ－１（配列ＩＤ番号：１３）のマップを示す。 図２は、プラスミドｐＮＴＸ－１１ ＶＨＨ ａＰＤＬ－１（配列ＩＤ番号：１３）を作製する方法を示す概要図である。 図３は、プラスミドｐＮＴＸ－１１ ＩＬ２ ｑｕａｄ変異体（配列ＩＤ番号：１４）のマップを示す。 図４は、プラスミドｐＮＴＸ－１１ ＩＬ２ ｑｕａｄ変異体（配列ＩＤ番号：１４）を作製する方法を示す概要図である。 図５は、プラスミドｐＮＴＸ－１１ ＣＸＣＬ９（配列ＩＤ番号：１５）のマップを示す。 図６は、プラスミドｐＮＴＸ－１１ ＣＸＣＬ９（配列ＩＤ番号：１５）を作製する方法を示す概要図である。 図７は、プラスミドｐＮＴＸ－１１＋ＴＧＦｂＤＮＲＩＩ（配列ＩＤ番号：１６）のマップを示す。 図８は、プラスミドｐＮＴＸ－１１＋ＴＧＦｂＤＮＲＩＩ（配列ＩＤ番号：１６）を作製する方法を示す概要図である。 図９は、プラスミドｐＮＴＸ－１１ ｎｆｓａ ｍｕｔ ２２（配列ＩＤ番号：１７）のマップを示す。 図１０は、プラスミドｐＮＴＸ－１１ ｎｆｓａ ｍｕｔ ２２（配列ＩＤ番号：１７）を作製する方法を示す概要図である。 図１１は、プラスミドｐＮＴＸ－１１ Ｎｅｏｌｅｕｋｉｎ ２－１５（配列ＩＤ番号：１８）のマップを示す。 図１２は、プラスミドｐＮＴＸ－１１ Ｎｅｏｌｅｕｋｉｎ ２－１５（配列ＩＤ番号：１８）を作製する方法を示す概要図である。 図１３は、プラスミドｐＮＴＸ－１１ ｏｖａ＋ｃｏｖｉｄエピトープ（配列ＩＤ番号：１９）のマップを示す。 図１４は、プラスミドｐＮＴＸ－１１ ｏｖａ＋ｃｏｖｉｄエピトープ（配列ＩＤ番号：１９）を作製する方法を示す概要図である。 図１５Ａは、セネカバレーウイルス（ＳＶＶ－００１）ゲノムの概要図である。具体的には、図１５Ａは、ＳＶＶタンパク質２ＡおよびＳＶＶタンパク質２Ｂをコードするヌクレオチド配列間の本発明の武装型構築物の挿入部位を示す。 図１５Ｂは、制限酵素結合部位を含む挿入部位のクローズアップ概要図である。 図１５Ｃは、ＳＶＶ－００１ゲノムへの外来性ＧＦＰコード配列の挿入戦略を示している。ＳＶＶ－００１ポリタンパク質の一部がダッシュで示された接合部間の長い配列のギャップとともに再現されている。タンパク質分解イベントは矢印で、リボソームスキップは先端が菱形で示されている。 図１６Ａおよび図１６Ｂは、細胞株における武装型ＳＶＶウイルスの迅速な生成を示す。図１６ＡはＳＶＶ－ＧＦＰ（ＧＦＰを発現するように操作されたＳＶＶ）の結果を示し、図１６ＢはＳＶＶ－ｍＣｈｅｒｒｙ（ｍＣｈｅｒｒｙを発現するように操作されたＳＶＶ）の結果を示す。 図１７は、ＩＬ－２、ＣＸＣＬ９、およびＩＬ－２／１５を発現するように作製された武装型ＳＶＶのＲＴ－ＰＣＲデータを示す。ＲＴ－ＰＣＲデータは、武装型ＳＶＶが治療用導入遺伝子を発現することを示す。 図１８は、ＰｅｒＣ－Ｔ７ ｐｏｌ細胞における線状ＤＮＡのトランスフェクションを示す。 図１９Ａおよび図１９Ｂは、ＩＬ－２およびＩＬ２－１５のバイオアッセイを示す。 図２０Ａおよび図２０Ｂは、ＳＶＶ－ＩＬ２およびＳＶＶ－ＩＬ２／１５（Ｎｅｏｌｅｕｋｉｎ２－１５）の機能活性を示す。図２０Ａは、ＳＶＶ－ＩＬ２およびＳＶＶ－ＩＬ２／１５（Ｎｅｏｌｅｕｋｉｎ２－１５）についての活性を示す。図２０Ｂは、ＩＬ－２標準陽性対照についての活性を示す。 図２１Ａおよび図２１Ｂは、ＳＶＶ－ＣＸＣＬ９ Ｅｌｉｓａのデータを示す。図２１Ａは、ヒトＣＸＣＬ標準曲線を示す。図２１Ｂは、増幅ＳＶＶ－ＣＸＣＬ９上清中のヒトＣＸＣＬ９レベル検出を示す。 図２２Ａは、配列ＩＤ番号：３０の抗ＣＬＡナノボディをコードする武装型ＳＶＶを含むプラスミドｐＳＶＶ－ａＣＴＬＡ４ ＶＨＨ（配列ＩＤ番号：５３）の核酸配列を示す。 図２２ＢはプラスミドｐＳＶＶ－ａＣＴＬＡ４ ＶＨＨのマップを示す。 図２３Ａは、配列ＩＤ番号：３２の抗ＣＤ３ナノボディをコードする武装型ＳＶＶを含むプラスミドｐＳＶＶ－ＣＤ３ ＶＨＨ（配列ＩＤ番号：５４）の核酸配列を示す。 図２３ＢはプラスミドｐＳＶＶ－ＣＤ３ ＶＨＨのマップを示す。 図２４Ａは、配列ＩＤ番号：３４の抗ＰＤＬ１ナノボディをコードする武装型ＳＶＶを含むプラスミドｐＳＶＶ－ｎｅｗ ａＰＤＬ１ ＶＨＨ ｖ．２（配列ＩＤ番号：５５）の核酸配列を示す。 図２４ＢはプラスミドｐＳＶＶ－ｎｅｗ ａＰＤＬ１ ＶＨＨ ｖ．２のマップを示す。 図２５Ａは、配列ＩＤ番号：３６の抗ＰＤＬ１および抗ＣＴＬＡ４ナノボディをコードする武装型ＳＶＶを含むプラスミドｐＳＶＶ－ｎｅｗ ａＰＤＬ１－ＧＳＳ－ａＣＴＬＡ４（配列ＩＤ番号：５６）の核酸配列を示す。 図２６Ａは、配列ＩＤ番号：３８の抗ＣＤ３および抗ＣＴＬＡ４ナノボディをコードする武装型ＳＶＶを含むプラスミドｐＳＶＶ－ａＣＤ３－ＧＳＳ－ａＣＴＬＡ４（配列ＩＤ番号：５７）の核酸配列を示す。 図２６ＢはプラスミドｐＳＶＶ－ａＣＤ３－ＧＳＳ－ａＣＴＬＡ４のマップを示す。 図２７Ａは、配列ＩＤ番号：４０の抗ＣＤ３および抗ＰＤＬ１ナノボディをコードする武装型ＳＶＶを含むプラスミドｐＳＶＶ－ｎｅｗ ａＰＤＬ１－ＧＳＳ－ａＣＤ３（配列ＩＤ番号：５８）の核酸配列を示す。 図２７ＢはプラスミドｐＳＶＶ－ｎｅｗ ａＰＤＬ１－ＧＳＳ－ａＣＤ３のマップを示す。 図２８Ａは、配列ＩＤ番号：４２のＩＬ－２をコードする武装型ＳＶＶを含むプラスミドｐＳＶＶ－ｈＩＬ－２ ｖ．３ ｎｏ ｓｉｇｎａｌ ｓｅｑ（配列ＩＤ番号：５９）の核酸配列を示す。 図２８Ｂは、プラスミドｐＳＶＶ－ｈＩＬ－２ ｖ．３ ｎｏ ｓｉｇｎａｌ ｓｅｑのマップを示す。 図２９Ａは、配列ＩＤ番号：４４のＩＬ－２をコードする武装型ＳＶＶを含むプラスミドｐＳＶＶ－ｈＩＬ－２ ｖ．２（配列ＩＤ番号：６０）の核酸配列を示す。 図２９ＢはプラスミドｐＳＶＶ－ｈＩＬ－２ ｖ．２のマップを示す。 図３０Ａは、配列ＩＤ番号：４６のＴＧＦ－ベータＲＩＩデコイをコードする武装型ＳＶＶを含むプラスミドｐＳＶＶ－ＴＧＦｂＲ ＤＮ ｖ．２ ｎｏ ｓｉｇｎａｌ ｓｅｑ＋ｍｅｔ＋ｐｒｏ（配列ＩＤ番号：６１）の核酸配列を示す。 図３０Ｂは、ｐＳＶＶ－ＴＧＦｂＲ ＤＮ ｖ．２ ｎｏ ｓｉｇｎａｌ ｓｅｑ＋ｍｅｔ＋ｐｒｏのマップを示す。 図３１Ａは、配列ＩＤ番号：４８のＴＧＦ－βＲＩＩデコイをコードする武装型ＳＶＶを含むプラスミドｐＳＶＶ－ＴＧＦｂＲ ＤＮ ｄｅｌｔａ ｖ．３ ｓｅｒ＋ｍｅｔ（配列ＩＤ番号：６２）の核酸配列を示す。 図３１ＢはプラスミドｐＳＶＶ－ＴＧＦｂＲ ＤＮ ｄｅｌｔａ ｖ．３ ｓｅｒ＋ｍｅｔのマップを示す。 図３２Ａは、配列ＩＤ番号：５０のシトシンデアミナーゼをコードするプラスミドｐＳＶＶ－ＦＣＹ２＋３変異体（配列ＩＤ番号：６３）の核酸配列を示す。 図３２ＢはプラスミドｐＳＶＶ－ＦＣＹ２＋３の変異のマップを示す。 図３３Ａは、配列ＩＤ番号：５２のＮｆｓａ変異体をコードするプラスミドｐＳＶＶ－ｎｆｓａ ｍｕｔ ２２－７８の核酸配列を示す。 図３３ＢはプラスミドｐＳＶＶ－ｎｆｓａ ｍｕｔ ２２－７８のマップを示す。
一般的な説明および以下の詳細な説明は、例示的および説明的なものに過ぎず、添付の特許請求の範囲に定義される本発明を制限するものではない。本発明の他の態様は、本明細書で提供される本発明の詳細な説明を考慮すれば、当業者には明らかであろう。
本発明は、がんの治療に有用な薬剤をコードする武装型セネカバレーウイルス（ＳＶＶ）に関する。本発明はまた、このような武装型ＳＶＶを生成する方法に関する。
定義
別段の定義がない限り、本明細書で使用されるすべての技術用語および科学用語は、本発明が属する技術分野における当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。本明細書に記載したものと類似または同等の任意の方法および材料を、本発明の試験の実施に使用することができるが、好ましい材料および方法を本明細書に記載する。本発明を説明および請求する際には、以下の用語を使用する。
また、本明細書で使用される用語は、特定の実施形態を説明するためだけのものであり、限定することを意図したものではないことを理解されたい。
本明細書で使用される場合、冠詞「ａ」および「ａｎ」は、冠詞の文法的目的語の１つまたは２つ以上（すなわち、少なくとも１つ）を指すために使用される。例として、「要素」（「ａｎ ｅｌｅｍｅｎｔ」）は、１つの要素または２つ以上の要素を意味する。
本明細書において、量、持続時間などの測定可能な値に言及する場合、「約」という用語は、開示された方法を実施するのに適切な変動として、規定値から±２０％または±１０％、より好ましくは±５％、さらに好ましくは±１％、さらに好ましくは±０．１％の変動を包含することを意味する。
用語「生物学的」または「生物学的試料」は、生物または生物の構成要素（例えば、細胞）から得られた試料を指す。試料は、生物学的組織または液体のいずれであってもよい。多くの場合、試料は患者由来の試料である「臨床試料」である。このような試料には、骨髄、心臓組織、喀痰、血液、リンパ液、血球（例えば、白血球）、組織または細針生検試料、尿、腹膜液、胸水、またはそれらの細胞が含まれるが、これらに限定されない。生物学的試料には、組織学的目的のために採取された凍結切片などの組織の切片も含まれる。
本明細書で使用される場合、用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「含む（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」、および「～によって特徴付けられる」は、交換可能であり、包括的であり、容易に変更可能であり、追加の、暗黙の要素または方法ステップを排除するものではない。本明細書における、特に組成物の成分の説明または装置の要素の説明における「含む」という用語のあらゆる記載は、記載された成分または要素から本質的になる、およびそれらからなる組成物および方法を包含するものと理解される。
本明細書で使用される場合、「からなる」という用語は、特許請求の範囲の要素で指定されていない要素、工程、または成分を除外する。
本明細書中で使用される用語「セネカバレーウイルス」または「ＳＶＶ」は、野生型ＳＶＶまたはＳＶＶ誘導体を包含する。例示的な適切なＳＳＶ株は、ＳＶＶ－００１、ＮＴＸ－０１０、およびＡＴＣＣ特許寄託番号ＰＴＡ－５３４３を有するＳＶＶ株を含む。本明細書で使用される場合、用語「誘導体」は、ウイルスの誘導体が鋳型ウイルス核酸またはアミノ酸配列に関して核酸またはアミノ酸配列の相違を有し得ることを規定する。本明細書で使用される場合、ＳＶＶという用語は、ＳＶＶの溶菌活性を維持するＳＶＶの断片も包含する。例えば、ＳＶＶ誘導体は、ＡＴＣＣ特許寄託番号ＰＴＡ－５３４３の野生型ＳＶＶ核酸またはアミノ酸配列に関して異なる核酸またはアミノ酸配列を有するＳＶＶを指すことができる。他の実施形態において、ＳＶＶ誘導体は、ＯＮＣＲ－７８８であり得る。いくつかの実施形態において、ＳＶＶ誘導体は、ＳＶＶ変異体、ＳＶＶ変異体または改変ＳＶＶ（例えば、遺伝子操作されたＳＶＶ）を包含する。いくつかの実施形態において、改変ＳＶＶ誘導体は、異なる細胞受容体を認識することができるように、または免疫系を回避することができるように改変される一方で、目的の細胞（すなわち、がん細胞）に侵入し、複製し、殺傷することができる。一般に、ＳＶＶまたはＳＶＶ誘導体は、より多くのウイルスを産生するために継代された、既に存在するウイルスストックから誘導することができる。ＳＶＶまたはＳＶＶ誘導体はプラスミドから誘導することもできる。
本明細書で使用される場合、「武装型セネカバレーウイルス」または「武装型ＳＶＶ」という語句は、がんの治療に有用な薬剤を発現するように改変された、上記で定義された「セネカバレーウイルス」または「ＳＶＶ」を包含する。武装型ＳＶＶは、がんの治療に有用な薬剤をコードする。武装型ＳＶＶは、治療遺伝子を発現するように操作されている。
本明細書で使用される「より高い」とは、対照基準値よりも少なくとも１０％またはそれ以上、例えば２０％、３０％、４０％、または５０％、６０％、７０％、８０％、９０％高いまたはそれ以上の発現レベル、および／または１．１倍、１．２倍、１．４倍、１．６倍、１．８倍、２．０倍高いまたはそれ以上の発現レベル、およびその間のあらゆる全体的または部分的な増分を指す。本明細書で開示される基準値より高い発現レベルとは、健常な対象で測定された発現（ｍＲＮＡまたはタンパク質）、または当該技術分野で定義もしくは使用されている発現（ｍＲＮＡまたはタンパク質）から、正常レベルまたは対照レベルより高い発現レベル（ｍＲＮＡまたはタンパク質）を指す。
本明細書で使用される「より低い」とは、対照基準値よりも少なくとも１０％またはそれ以上低い発現レベル、例えば、２０％、３０％、４０％、または５０％、６０％、７０％、８０％、９０％以上低い発現レベル、および／または１．１倍、１．２倍、１．４倍、１．６倍、１．８倍、２．０倍以上低い発現レベル、およびその間のあらゆる全体的または部分的な増分を指す。本明細書で開示される基準値より低い発現レベルとは、健常な対象で測定された発現（ｍＲＮＡまたはタンパク質）、または当該技術分野で定義もしくは使用されている発現（ｍＲＮＡまたはタンパク質）から、正常レベルまたは対照レベルより低い発現レベル（ｍＲＮＡまたはタンパク質）を指す。
本明細書で使用される場合、「対照」または「参照」という用語は互換的に使用することができ、比較の基準として使用される値を指す。
本明細書において、「併用療法」とは、第一の薬剤が他の薬剤と併用して投与されることを意味する。「と組み合わせて」または「と併用して」とは、別の治療手段に加えて１つの治療手段を投与することを意味する。このように、「と組み合わせて」とは、個体への他の治療様式を送達する前、送達中、または送達後に、１つの治療手段を投与することを指す。このような組み合わせは、単一の治療レジメンまたはレジメンの一部とみなされる。本明細書において、併用療法は、同じ腫瘍またはがんなどの同じ過剰増殖性疾患または病態を治療するための腫瘍溶解性ウイルスおよび別の抗がん剤の投与をそれぞれ含む治療レジメンを含むことができる。併用療法はまた、非武装型ＳＶＶと組み合わせて武装型ＳＶＶを使用することも含み得る。
本明細書において、「ペプチド」、「ポリペプチド」、「タンパク質」という用語は互換的に使用され、ペプチド結合によって共有結合したアミノ酸残基で構成される化合物を指す。タンパク質またはペプチドは、少なくとも２つのアミノ酸を含まなければならず、タンパク質またはペプチドの配列を含むことができるアミノ酸の最大数に制限はない。ポリペプチドには、ペプチド結合によって互いに結合した２つ以上のアミノ酸を含むペプチドまたはタンパク質が含まれる。本明細書において、この用語は、例えば、一般にペプチド、オリゴペプチドおよびオリゴマーとしても当技術分野で言及される短鎖と、一般にタンパク質として当技術分野で言及される、多くの種類がある長鎖の両方を指す。「ポリペプチド」には、例えば、生物学的に活性な断片、実質的に相同なポリペプチド、オリゴペプチド、ホモダイマー、ヘテロダイマー、ポリペプチドの変異体、修飾ポリペプチド、誘導体、類似体、融合タンパク質などが含まれる。ポリペプチドには、天然ペプチド、組換えペプチド、合成ペプチド、またはそれらの組み合わせが含まれる。
本明細書で使用される「ＲＮＡ」という用語は、リボ核酸と定義される。
本発明の文脈において使用される「治療」という用語は、疾患または障害の治療的処置ならびに予防的処置または抑制的処置を含むことを意味する。本明細書で使用される場合、用語「治療」および「治療する」および「治療する工程」などの関連用語は、疾患状態またはその少なくとも１つの症状の進行、重症度および／または持続期間の軽減を意味する。したがって、「治療」という用語は、対象に利益をもたらすことができるあらゆるレジメンを指す。治療は、既存の病態に関するものであってもよいし、予防的なもの（予防治療）であってもよい。治療には、治癒効果、緩和効果、または予防効果が含まれ得る。本明細書における「治療的」及び「予防的」処置への言及は、その最も広い文脈で考慮される。「治療的」という用語は、対象が完全に回復するまで治療されることを必ずしも意味しない。同様に、「予防的」とは、対象が最終的に疾患状態に罹患しないことを必ずしも意味しない。したがって、例えば、治療という用語には、疾患または障害の発症前または発症後に薬剤を投与し、それによって疾患または障害の兆候をすべて予防または除去することが含まれる。別の例として、疾患の臨床症状発現後に、疾患の症状と闘うために薬剤を投与することは、疾患の「治療」を含む。
本明細書で使用される場合、「核酸」という用語は、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）、および必要に応じてリボ核酸（ＲＮＡ）などのポリヌクレオチドを指す。この用語はまた、等価物として、ヌクレオチド類似体から作製されたＲＮＡまたはＤＮＡのいずれかの類似体、および記載される実施形態に適用可能な場合、一本鎖（センスまたはアンチセンス）および二本鎖ポリヌクレオチドも含むと理解されるべきである。ＥＳＴ、染色体、ｃＤＮＡ、ｍＲＮＡ、およびｒＲＮＡは、核酸と呼ばれ得る分子の代表例である。本明細書において、配列決定された核酸がＤＮＡ配列として提供される場合、ＲＮＡ配列もまた使用され得ることが理解されるべきである。
核酸は一本鎖でも二本鎖でもよく、二本鎖と一本鎖の両方の配列の一部を含むこともできる。核酸は、ＤＮＡ、ゲノムおよびｃＤＮＡの両方、ＲＮＡ、またはハイブリッドであり得、ここで核酸は、デオキシリボおよびリボヌクレオチドの組み合わせ、ならびにウラシル、アデニン、チミン、シトシン、グアニン、イノシン、キサンチンヒポキサンチン、イソシトシンおよびイソグアニンを含む塩基の組み合わせを含み得る。核酸は、化学合成法または組換え法によって得ることができる。本明細書で使用する「動作可能に連結された」とは、遺伝子の発現が空間的に連結されたプロモーターの制御下にあることを意味する。プロモーターは、その制御下にある遺伝子の５’（上流）または３’（下流）に位置し得る。プロモーターと遺伝子との間の距離は、プロモーターが由来する遺伝子において、そのプロモーターとそれが制御する遺伝子との間の距離とほぼ同じであり得る。当該技術分野で知られているように、この距離の変動は、プロモーターの機能を損なうことなく対応することができる。
本明細書で使用される「実質的に同一」とは、第１および第２のアミノ酸配列が、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００、１１００またはそれ以上のアミノ酸の領域にわたって、少なくとも６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％であることを意味し得る。また、実質的に同一とは、第１の核酸配列と第２の核酸配列とが、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００、１１００またはそれ以上のヌクレオチドの領域にわたって、少なくとも６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％であることを意味し得る。
本明細書で使用する「コード配列」または「コード核酸」とは、タンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む核酸（RNAまたはDNA分子）を意味する。コード配列は、核酸が投与される個体または哺乳動物の細胞における発現を指示することができるプロモーターおよびポリアデニル化シグナルを含む調節エレメントに作動可能に連結された開始シグナルおよび終結シグナルをさらに含み得る。
本明細書で使用する「相補体」または「相補的」とは、核酸分子のヌクレオチドまたはヌクレオチド類似体間のワトソン－クリック（例えば、Ａ－Ｔ／ＵおよびＣＧ）またはフーグスティーン型塩基対を意味する。
本明細書で用いる「コンセンサス」または「コンセンサス配列」とは、特定の抗原の複数の亜型のアラインメントの解析に基づいて構築された合成核酸配列、または対応するポリペプチド配列を意味する。この配列は、特定の抗原の複数の亜型、血清型、または株に対する広範な免疫を誘導するために使用することができる。融合タンパク質のような合成抗原は、コンセンサス配列（またはコンセンサス抗原）を生成するために操作することができる。
本明細書で使用する「断片」とは、腫瘍溶解性可能な武装型ＳＶＶをコードし、がんを治療することができるタンパク質をコードする核酸配列またはその一部を意味する。
本明細書において２つ以上の核酸またはポリペプチド配列の文脈で使用される「同一」または「同一性」とは、配列が特定の領域にわたって同一である残基の特定の割合を有することを意味する。この割合は、２つの配列を最適にアライメントし、指定された領域にわたって２つの配列を比較し、両方の配列において同一の残基が生じる位置の数を決定して一致した位置の数を得、一致した位置の数を指定された領域における位置の総数で除算し、その結果に１００を乗じて配列同一性の割合を得ることによって計算することができる。２つの配列の長さが異なる場合、またはアライメントにより１つ以上の付着末端が生成され、比較の指定領域が単一配列のみを含む場合、単一配列の残基は分母に含まれるが、計算の分子には含まれない。同一性確認は、手作業で行うことも、ＢＬＡＳＴやＢＬＡＳＴ ２．０などのコンピューター配列アルゴリズムを使用して行うこともできる。
核酸に関して本明細書で使用される「変異体」とは、（ｉ）参照されるヌクレオチド配列の一部または断片；（ｉｉ）参照されるヌクレオチド配列またはその一部の相補体；（ｉｉｉ）参照される核酸またはその相補体と実質的に同一である核酸；または（ｉｖ）参照される核酸、その相補体、またはそれらと実質的に同一な配列とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸を意味する。
変異体はさらに、アミノ酸の挿入、欠失、または保存的置換によってアミノ酸配列が異なるが、少なくとも１つの生物学的活性を保持するペプチドまたはポリペプチドとして定義することができる。「生物学的活性」の代表例としては、特定の抗体に結合する能力、免疫反応を促進する能力などが挙げられる。変異体はまた、少なくとも１つの生物学的活性を保持するアミノ酸配列を有する参照タンパク質と実質的に同一のアミノ酸配列を有するタンパク質を意味し得る。アミノ酸の保存的置換、すなわち、アミノ酸を類似の性質（例えば、親水性、荷電領域の程度および分布）を有する異なるアミノ酸で置換することは、典型的には、軽微な変化を伴うものとして当技術分野で認識されている。これらの軽微な変化は、部分的には、当技術分野で理解されているように、アミノ酸の親水性指数を考慮することによって同定することができる。Kyte et al., J. Mol. Biol. 157:105-132 (1982)。アミノ酸の疎水性指数は、その疎水性および電荷の考察に基づいている。類似の疎水性指数を有するアミノ酸を置換してもタンパク質の機能を保持できることは当技術分野で知られている。一つの態様では、±２の疎水性指数を有するアミノ酸が置換される。アミノ酸の親水性はまた、タンパク質が生物学的機能を保持することになる置換を明らかにするために使用することができる。ペプチドを構成するアミノ酸の親水性を考慮することにより、そのペプチドの最大の局所平均親水性を計算することができる。類似の親水性値を有するアミノ酸の置換は、当該技術分野で理解されているように、生物学的活性、例えば免疫原性を保持するペプチドをもたらすことができる。置換は、互いに±２以内の親水性値を有するアミノ酸で行うことができる。アミノ酸の疎水性指数と親水性値の両方は、そのアミノ酸の特定の側鎖によって影響される。その観察と一致して、生物学的機能に適合するアミノ酸置換は、疎水性、親水性、電荷、サイズ、および他の特性によって明らかにされるアミノ酸、特にそれらのアミノ酸の側鎖の相対的類似性に依存すると理解される。
変異体は、全遺伝子配列またはその断片の全長にわたって実質的に同一である核酸配列であってもよい。核酸配列は、遺伝子配列またはその断片の全長にわたって８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であってもよい。変異体は、アミノ酸配列またはその断片の全長にわたって実質的に同一であるアミノ酸配列であってもよい。アミノ酸配列は、アミノ酸配列またはその断片の全長にわたって８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であってもよい。
本明細書で用いる「ベクター」とは、複製起点を含む核酸配列を意味する。ベクターは、ウイルスベクター、バクテリオファージ、細菌人工染色体、または酵母人工染色体であり得る。ベクターは、ＤＮＡまたはＲＮＡベクターであり得る。ベクターは、自己複製する染色体外ベクターであり得、好ましくは、ＤＮＡプラスミドである。
本明細書で使用される場合、「医薬組成物」という用語は、本発明内で有用な少なくとも１つの化合物と、担体、安定剤、希釈剤、アジュバント、分散剤、懸濁化剤、増粘剤、および／または賦形剤などの他の化学成分との混合物を指す。医薬組成物は、生物への化合物の投与を容易にする。腫瘍内投与、静脈内投与、胸膜内投与、経口投与、エアロゾル投与、非経口投与、点眼投与、肺投与および局所投与を含むがこれらに限定されない、化合物を投与する複数の技術が当該技術分野に存在する。
「薬学的に許容される担体」には、薬学的に許容される塩、薬学的に許容される材料、組成物または担体、例えば液体または固体の充填剤、希釈剤、賦形剤、溶媒またはカプセル化材料が含まれ、本発明の化合物（単数または複数）（例えば、武装型ＳＶＶ）がその意図される機能を果たすように、対象内または対象への運搬または輸送に関与する。典型的には、このような化合物は、ある臓器または身体の一部から、別の臓器または身体の一部に運搬または輸送される。各塩または担体は、製剤の他の成分と適合性があり、対象に害を与えないという意味で「許容可能」でなければならない。薬学的に許容される担体として機能しうる物質の例としては：ラクトース、グルコースおよびスクロースなどの糖；トウモロコシデンプンおよびジャガイモデンプンなどのデンプン；カルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロースおよび酢酸セルロースなどのセルロースおよびその誘導体；粉末トラガカント；麦芽；ゼラチン；タルク；ココアバターおよび座薬ワックスなどの賦形剤；ピーナッツ油、綿実油、サフラワー油、ゴマ油、オリーブ油、コーン油、大豆油などの油；プロピレングリコールなどのグリコール；グリセリン、ソルビトール、マンニトール、ポリエチレングリコールなどのポリオール；オレイン酸エチル、ラウリン酸エチルなどのエステル；寒天；水酸化マグネシウム、水酸化アルミニウムなどの緩衝剤；アルギン酸；パイロジェンフリー水；等張食塩水；リンゲル液；エチルアルコール；リン酸緩衝液；希釈剤；造粒剤；滑沢剤；結合剤；崩壊剤；湿潤剤；乳化剤；着色剤；離型剤；コーティング剤；甘味剤；香味剤；香料；防腐剤；酸化防止剤；可塑剤；ゲル化剤；増粘剤；硬化剤；凝結剤；懸濁化剤；界面活性剤；保湿剤；担体；安定剤；および医薬製剤に使用される他の非毒性の適合物質、またはそれらの任意の組み合わせが含まれる。本明細書で使用する「薬学的に許容される担体」には、化合物の活性に適合し、対象に生理学的に許容されるあらゆるコーティング剤、抗菌剤、抗真菌剤、吸収遅延剤なども含まれる。補助的な活性化合物を組成物に組み込むこともできる。
本明細書で使用される場合、用語「有効量」または「治療上有効な量」とは、特定の疾患状態を予防するのに必要な、または疾患状態もしくはその少なくとも１つの症状もしくはそれに関連する状態の重症度を軽減および／もしくは改善する、本発明のベクターから生成されるウイルス粒子または感染単位の量を意味する。
本明細書で使用される場合、チェックポイント阻害剤による「単剤療法に抵抗性のがん」という語句は、チェックポイント阻害剤による単剤療法に対して治療開始時に抵抗性である可能性がある、または治療中にチェックポイント阻害剤による単剤療法に対して抵抗性になるがんを指す。この語句には、チェックポイント阻害剤による治療を受けたが奏効しなかった（すなわち、がん治療に対して抵抗性のある）がんも含まれる。この語句には、チェックポイント阻害剤で治療され、当初は治療に反応したが、その後腫瘍が再発した（再発／抵抗性）がんも含まれる。本定義では、チェックポイント阻害剤単剤療法とは、チェックポイント阻害剤を唯一の抗がん剤として治療したがんを指す。このようながんの例としては、免疫系に認識されていない、あるいは免疫系による強い反応を引き起こしていないがんであるコールド腫瘍がある。コールド腫瘍は、チェックポイント阻害剤および／またはチェックポイント遮断に抵抗性を示す。
ここで使用される「対象」または「患者」は、ヒトまたは非ヒト哺乳動物であり得る。非ヒト哺乳動物には、例えば、家畜およびペット、例えばヒツジ、ウシ、ブタ、イヌ、ネコおよびネズミの哺乳動物が含まれる。好ましくは、対象はヒトである。
範囲：本開示を通じて、本発明の様々な態様は範囲形式で示すことができる。範囲形式での説明は、単に便宜上、簡潔にするためのものであり、本発明の範囲を柔軟に限定するものと解釈すべきではないことを理解されたい。したがって、範囲の説明は、すべての可能な部分範囲およびその範囲内の個々の数値を具体的に開示したものとみなされるべきである。例えば、１から６などの範囲の記述は、１から３、１から４、１から５、２から４、２から６、３から６のような部分範囲、およびその範囲内の個々の数値、例えば、１、２、２．７、３、４、５、５．３、および６を具体的に開示したとみなされるべきである。これは範囲の広さに関係なく適用される。
武装型ＳＶＶ
本開示は、治療ペイロード、すなわち、がんを治療するための薬剤をコードするように改変された武装型セネカバレーウイルスを提供する。理論に束縛されることなく、そのような武装型ＳＶＶががんを治療するために使用される場合、がん治療の成功は、武装していないセネカバレーウイルス（すなわち、治療ペイロードを担持していないＳＶＶ）を使用する治療と比較して改善されることが企図される。
特定の実施形態において、本開示は、抗ＰＤ－１抗体、ＣＸＣＬ９、ＴＧＦβ受容体デコイ、ＩＬ－２変異体、またはニトロレダクターゼの結合断片をコードするように改変されたセネカバレーウイルスを提供する。
本開示の追加の実施形態は：抗ＣＴＬＡ４ナノボディをコードする武装型ＳＶＶ；抗ＣＤ３ナノボディをコードする武装型ＳＶＶ；抗ＰＤＬ１ナノボディをコードする武装型ＳＶＶ；抗ＣＴＬＡ４＋抗ＰＤＬ１ナノボディの両方をコードする武装型ＳＶＶ；抗ＣＴＬＡ４＋抗ＣＤ３ナノボディの両方をコードする武装型ＳＶＶ；抗ＣＤ３＋抗ＰＤＬ１ナノボディの両方をコードする武装型ＳＶＶ；ＩＬ－２（バージョン２および３）をコードする武装型ＳＶＶ；ＴＧＦ－ベータドミナントネガティブＲＩＩデコイ－ＳＳ ｖ．２なしをコードする武装型ＳＶＶ；ＴＧＦ－ベータドミナントネガティブＲＩＩデコイをコードする武装型ＳＶＶ；シトシンデアミナーゼをコードする武装型ＳＶＶ；およびＮｆｓａ ｍｕｔ ２２－７８をコードする武装型ＳＶＶを含む。
一実施形態において、本開示は、ＩＬ－２四重変異体Ｔ３Ａ／Ｆ４２Ａ／Ｙ４５Ａ／Ｌ７２Ｇ（Ｃ１２５Ａ）のようなＩＬ－２四重変異体をコードする核酸を含む武装型セネカバレーウイルスを提供する。別の実施形態において、本開示は、Ｎｅｏｌｅｕｋｉｎ２－１５を含む武装型ＳＶＶを提供する。
特定の実施形態において、本開示は、武装型セネカバレーウイルスに関するものであり、武装型セネカバレーウイルスは、セネカバレーウイルスまたはその腫瘍溶解性断片と、目的の治療タンパク質をコードする核酸とを含む。特定の実施形態において、目的のタンパク質は、インターロイキン、ケモカイン、またはチェックポイント阻害剤として作用するナノボディである。例えば、目的のタンパク質は、抗ＰＤ－Ｌ１ナノボディ、ＩＬ－２、ＣＸＣＬ９、ＩＬ－１５、ＩＬ－２／ＩＬ－１５、ＴＧＦ－βデコイ、ＮｆｓＡであり得る。他の実施形態において、関心対象のタンパク質は、インターロイキン、ケモカイン、またはチェックポイント阻害剤として作用するナノボディを含む。いくつかの実施形態において、目的の治療タンパク質は、抗ＰＤ－Ｌ１ナノボディ、ＩＬ－２またはその変異体、ＣＸＣＬ９、ＩＬ－１５、ＩＬ－２／ＩＬ－１５（Ｎｅｏｌｅｕｋｉｎ２－１５）、ＴＧＦ－βデコイまたはその変異体、ＮｆｓＡまたはその変異体、抗ＣＴＬＡ４ナノボディ、抗ＣＤ３ナノボディ、抗ＣＴＬＡ－４＋抗ＰＤＬＩ－１ナノボディ、抗ＣＬＴＡ４＋抗ＰＬＤ－１ナノボディ、またはシトシンデアミナーゼを含む。
特定の実施形態において、武装型セネカバレーウイルスは、目的の治療タンパク質をコードする核酸が挿入されたセネカバレーウイルスまたはその断片を含む。
特定の実施形態において、武装型セネカバレーウイルスは、セネカバレーウイルスまたはその腫瘍溶解性断片のゲノム内、タンパク質２Ａと２Ｂのコード配列の間に治療タンパク質をコードする核酸配列を挿入することによって生成される。
ＴＧＦ－βデコイ受容体は、ＴＧＦ－β（例えばＴＧＦ－β１、ＴＧＦ－β２および／またはＴＧＦ－β３）に結合し、膜貫通ドメインをコードするアミノ酸配列を欠いたＴＧＦ－β受容体に由来する。ＴＧＦ－βデコイの発現は、腫瘍微小環境における免疫抑制的環境を減少させ、Ｔ細胞応答を増強する。
Ｎｅｏｌｅｕｋｉｎ２－１５は、ＩＬ－２Ｒα（ＣＤ２５とも呼ばれる）またはＩＬ－１５Ｒα（ＣＤ２１５とも呼ばれる）との結合部位を欠いた改良型ＩＬ－２変異体である。この分子は安定性が高く、天然サイトカインよりも高い親和性でヒトおよびマウスのＩＬ－２Ｒβγｃと結合する。この分子は安定性が高く、天然サイトカインよりも高い親和性でヒトおよびマウスのＩＬ－２Ｒβγｃと結合する。
特定の実施形態では、ＳＶＶは、ＩＬ－２受容体のＣＤ１２２およびＣＤ１３２（ベータ鎖およびガンマ鎖）のみに結合することができ、ＣＤ２５結合ドメインを欠くＩＬ－２ムテインで武装されている。
本発明の特定の実施形態は、配列ＩＤ番号：１、３、５、７、９、１１、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、または５１の核酸をセネカバレーウイルスに挿入することによって生成される、武装型セネカバレーウイルスに関するものであり、ここで、得られる武装型セネカバレーウイルスは、腫瘍溶解性であり、そしてここで、配列ＩＤ番号：１、３、５、７、９、１１、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、または５１によってコードされる治療タンパク質が発現される：１、３、５、７、９、１１、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、または５１によってコードされる治療タンパク質が、セネカバレーウイルスががん細胞に投与されたときに発現される。
本発明の特定の実施形態は、配列ＩＤ番号：１、３、５、７、９、１１、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９または５１と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一の核酸をセネカバレーウイルスに挿入することによって生成される、武装型セネカバレーウイルスに関するものであり、ここで、得られた武装型セネカバレーウイルスは腫瘍溶解性であり、配列ＩＤ番号：１、３、５、７、９、１１、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９または５１によってコードされる治療タンパク質は、前記セネカバレーウイルスががん細胞に投与されたときに発現される。
本発明の別の実施形態は、武装型セネカバレーウイルスであって、配列ＩＤ番号：２、４、６、８、１０、１２、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０、または５２のタンパク質を発現するように改変されたセネカバレーウイルスまたはその腫瘍溶解性断片の配列を含み、ここで、前記武装型セネカバレーウイルスは腫瘍溶解性であり、および、前記治療タンパク質は、前記セネカバレーウイルスががん細胞に投与されたときに発現される。
本発明のさらに別の実施形態は、武装型セネカバレーウイルスであって、配列ＩＤ番号：２、４、６、８、１０、１２、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０、または５２のタンパク質配列と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一のタンパク質を発現するように改変されたセネカバレーウイルスまたはその腫瘍溶解性断片の配列を含み、ここで、前記武装型セネカバレーウイルスは腫瘍溶解性であり、および、前記治療タンパク質は、前記セネカバレーウイルスががん細胞に投与されたときに発現される。
本発明の代替の実施形態は、武装型セネカバレーウイルスであって、配列ＩＤ番号：２、４、６、８、１０、１２、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０、または５２のタンパク質をコードする核酸配列を含むように改変されたセネカバレーウイルスまたはその腫瘍溶解性断片の配列を含み、ここで、前記武装型セネカバレーウイルスは腫瘍溶解性であり、および、前記治療タンパク質は、前記セネカバレーウイルスががん細胞に投与されたときに発現される。
本発明のさらに別の実施形態は、武装型セネカバレーウイルスであって、配列ＩＤ番号：２、４、６、８、１０、１２、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０、または５２のタンパク質配列と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一のタンパク質をコードする核酸配列を含むように改変されたセネカバレーウイルスまたはその腫瘍溶解性断片の配列を含み、ここで、前記武装型セネカバレーウイルスは腫瘍溶解性であり、および、前記治療タンパク質は、前記セネカバレーウイルスががん細胞に投与されたときに発現される。
一実施形態では、武装型セネカバレーウイルスは、配列ＩＤ番号：１３のヌクレオチド１－７７６２を含む。別の実施形態では、武装型セネカバレーウイルスは、配列ＩＤ番号：１３のヌクレオチド１－７７６２と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であるヌクレオチド配列を含む。
別の実施形態では、武装型セネカバレーウイルスは、配列ＩＤ番号：１４のヌクレオチド１－７７８３を含む。別の実施形態では、武装型セネカバレーウイルスは、配列ＩＤ番号：１４のヌクレオチド１－７７８３と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であるヌクレオチド配列を含む。
代替の実施形態では、武装型セネカバレーウイルスは、配列ＩＤ番号：１５のヌクレオチド１－７７５９を含む。別の実施形態では、武装型セネカバレーウイルスは、配列ＩＤ番号：１５のヌクレオチド１－７７５９と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であるヌクレオチド配列を含む。
さらに別の実施形態では、武装型セネカバレーウイルスは、配列ＩＤ番号：１６のヌクレオチド１－７９８４を含む。別の実施形態では、武装型セネカバレーウイルスは、配列ＩＤ番号：１６のヌクレオチド１－７９８４と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であるヌクレオチド配列を含む。
さらに別の実施形態では、武装型セネカバレーウイルスは、配列ＩＤ番号：１７のヌクレオチド１－８１４０を含む。別の実施形態では、武装型セネカバレーウイルスは、配列ＩＤ番号：１７のヌクレオチド１－８１４０と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であるヌクレオチド配列を含む。
さらに追加の実施形態では、武装型セネカバレーウイルスは、配列ＩＤ番号：１８のヌクレオチド１－７７３８を含む。別の実施形態では、武装型セネカバレーウイルスは、配列ＩＤ番号：１８のヌクレオチド１－７７３８と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であるヌクレオチド配列を含む。
本発明の別の実施形態は、セネカバレーウイルスのゲノム内、タンパク質２Ａと２Ｂのコード配列の間に治療タンパク質をコードする核酸配列を挿入することによって生成される武装型セネカバレーウイルスである。治療タンパク質をコードする核酸配列は、配列ＩＤ番号：１、３、５、７、９、１１、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、または５１の核酸；配列ＩＤ番号：１、３、５、７、９、１１、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、または５１の核酸と少なくとも８５％、９５％または９９％同一の核酸；配列ＩＤ番号：２、４、６、８、１０、１２、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０、または５２のアミノ酸配列をコードする核酸；または配列ＩＤ番号：２、４、６、８、１０、１２、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０、または５２のアミノ酸配列と少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または９９％同一のタンパク質をコードする核酸を含み得る。特定の実施形態において、武装型セネカバレーウイルスは、ＳＶＶ－００１を武装させることによって生成される。
他の実施形態において、武装型セネカバレーウイルスは、配列ＩＤ番号：１３のヌクレオチド３５０８－３８８５、配列ＩＤ番号：１４のヌクレオチド３５０５－３９０６、配列ＩＤ番号：１５のヌクレオチド３５０８－３８８２、配列ＩＤ番号：１６のヌクレオチド３５０８－４１０７、配列ＩＤ番号：１７のヌクレオチド３５０８－４２６３、または配列ＩＤ番号：１８のヌクレオチド３５０８－３８６１が挿入されたセネカバレーウイルスまたはその腫瘍溶解性断片の配列を含む。さらに別の実施形態において、武装型セネカバレーウイルスは、配列ＩＤ番号：１３のヌクレオチド３５０８－３８８５、配列ＩＤ番号：１４のヌクレオチド３５０５－３９０６、配列ＩＤ番号：１５のヌクレオチド３５０８－３８８２、配列ＩＤ番号：１６のヌクレオチド３５０８－４１０７、配列ＩＤ番号：１７のヌクレオチド３５０８－４２６３、または配列ＩＤ番号：１８のヌクレオチド３５０８－３８６１と少なくとも８５％、９５％、または９９％同一の核酸が挿入されたセネカバレーウイルスまたはその腫瘍溶解性断片の配列を含む。核酸は、ＳＶＶまたはＳＶＶ誘導体中のタンパク質２Ａおよび２Ｂのコード配列の間に挿入され得る。
武装型ＳＳＶを運搬するベクター
本開示はまた、本開示の武装型ＳＶＶ構築物を含むベクターも提供する。ベクターは、複製起点を含む核酸配列を有し得る。ベクターは、プラスミド、バクテリオファージ、細菌人工染色体、または酵母人工染色体であり得る。ベクターは、自己複製する染色体外ベクター、または、宿主ゲノムに組み込まれるベクターのいずれかであり得る。
一つの実施形態において、ベクターは、配列ＩＤ番号：１３～１８または５３～６４の核酸配列と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一の核酸配列を含む。
特定の実施形態において、ベクターは、配列ＩＤ番号：１３～１８もしくは５３～６４のいずれか１つの核酸配列、または配列ＩＤ番号：１３～１８もしくは５３～６４の核酸配列と実質的に同一の核酸を形成するプラスミドである。
一つの実施形態において、プラスミドは、配列ＩＤ番号：１３のヌクレオチド１－７７６２を含む。別の実施形態において、プラスミドは、配列ＩＤ番号：１３のヌクレオチド１－７７６２と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であるヌクレオチド配列を含む。
別の実施形態において、プラスミドは、配列ＩＤ番号：１４のヌクレオチド１－７７８３を含む。別の実施形態において、プラスミドは、配列ＩＤ番号：１４のヌクレオチド１－７７８３と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であるヌクレオチド配列を含む。
別の実施形態において、プラスミドは、配列ＩＤ番号：１５のヌクレオチド１－７７５９を含む。別の実施形態において、プラスミドは、配列ＩＤ番号：１５のヌクレオチド１－７７５９と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であるヌクレオチド配列を含む。
別の実施形態において、プラスミドは、配列ＩＤ番号：１６のヌクレオチド１－７９８４を含む。別の実施形態において、プラスミドは、配列ＩＤ番号：１６のヌクレオチド１－７９８４と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であるヌクレオチド配列を含む。
別の実施形態において、プラスミドは、配列ＩＤ番号：１７のヌクレオチド１－８１４０を含む。別の実施形態において、プラスミドは、配列ＩＤ番号：１７のヌクレオチド１－８１４０と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であるヌクレオチド配列を含む。
さらなる実施形態において、プラスミドは、配列ＩＤ番号：１８のヌクレオチド１－７７３８を含む。別の実施形態において、プラスミドは、配列ＩＤ番号：１８のヌクレオチド１－７７３８と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であるヌクレオチド配列を含む。
１つ以上のベクターは発現構築物であり得、発現構築物は一般に、標的細胞に特定の遺伝子を導入するために用いられるプラスミドである。発現ベクターが細胞内に入ると、その遺伝子によってコードされるタンパク質が、細胞内の転写および翻訳機構のリボソーム複合体によって産生される。プラスミドは、エンハンサーおよびプロモーター領域として働き、発現ベクター上に運搬された遺伝子の効率的な転写を導く調節配列を含むように、しばしば操作される。本発明のベクターは、大量の安定なメッセンジャーＲＮＡ、したがってタンパク質を発現する。ベクターは、強力なプロモーター、強力な終止コドン、プロモーターとクローニングされた遺伝子との間の距離の調節、転写終結配列およびＰＴＩＳ（移植可能な翻訳開始配列）の挿入などの発現シグナルを有し得る。
ＳＶＶを武装させる方法
本開示はまた、治療タンパク質を発現するようにセネカバレーウイルスを武装させる方法を提供する。この方法は、ＳＶＶ－００１、ＮＴＸ－０１０、およびＡＴＣＣ特許寄託番号ＰＴＡ－５３４３を有するＳＶＶ株の核酸配列のようなセネカバレーウイルス核酸配列を提供する工程と、および、適切な位置に治療タンパク質を挿入する工程とを含み、それによって、結果として生じる武装型ＳＳＶウイルスは、腫瘍溶解性であり、治療タンパク質を発現する。特定の実施形態において、治療タンパク質は、ＳＶＶの２Ａペプチドをコードする核酸配列と２Ｂペプチドをコードする核酸配列の間、セネカバレーウイルスに挿入される。この挿入部位の概要図を図１５Ａ～Ｃに示す。
特定の実施形態において、本発明の方法は、最大８００塩基対の長さの治療タンパク質をコードする核酸を含むようにＳＶＶを武装させるために使用され得る。該方法の１つの実施形態において、セネカバレーウイルスはＮＴＸ－０１０またはＳＶＶ－００１である。
一実施形態において、本開示は、以下の工程を含む、武装型ＳＶＶ構築物を生成する方法を提供する：（１）武装型ＳＶＶプラスミドを構築；（２）武装型ＳＶＶプラスミドを線形化して３’末端を規定；（３）Ｔ７ポリメラーゼを用いたｉｎ ｖｉｔｒｏ転写反応により、真正な５’末端および３’末端を有するＲＮＡ転写物を生成；（４）標的細胞にＲＮＡをトランスフェクト；および（５）武装型ＳＶＶウイルスを単離。
別の実施形態において、本開示は、以下の工程を含む、武装型ＳＶＶ構築物を生成する方法を提供する：（１）Ｔ７ポリメラーゼ最適化哺乳動物発現プラスミドを標的細胞株にクローニング；（２）武装型ＳＶＶプラスミドを線形化；（３）プラスミドをＴ７－ｐｏｌ細胞にトランスフェクトする；および（４）武装型ＳＶＶウイルスを単離。
代替の実施態様において、本方法は：セネカバレーウイルスまたはその腫瘍溶解性断片と、目的の治療タンパク質をコードする核酸とを含むプラスミドを構築する工程と；プラスミドを線形化して３’末端を規定する工程と；Ｔ７ポリメラーゼを用いたｉｎ ｖｉｔｒｏ転写反応により、真正な５’末端および３’末端を有するＲＮＡ転写物を生成する工程と；前記ＲＮＡ転写物を標的細胞にトランスフェクトする工程と；および武装型ＳＶＶウイルスを単離する工程とを含む。
さらに別の実施態様において、本方法は：Ｔ７ポリメラーゼ最適化哺乳動物発現プラスミドを標的細胞にクローニングする工程と；セネカバレーウイルスまたはその腫瘍溶解性断片と、目的の治療タンパク質をコードする核酸とを含む線形化武装型ＳＶＶプラスミドを提供する工程と；武装型ＳＶＶプラスミドをＴ７－ｐｏｌ標的細胞にトランスフェクトする工程と；および武装型セネカバレーウイルスを単離する工程とを含む。
特定の実施形態において、武装型ＳＶＶ構築物は、以下の実施例に示される方法を用いて生成され得る。
本発明の特定の実施形態において、本方法は、配列ＩＤ番号：１、３、５、７、９、１１、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、または５１の核酸をセネカバレーウイルスに挿入する工程を含む。他の実施形態において、本方法は、配列ＩＤ番号：１、３、５、７、９、１１、２９、３１、３３、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、または５１と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一の核酸をセネカバレーウイルスまたはその腫瘍溶解性断片に挿入する工程を含む。あるいは、本方法は、配列ＩＤ番号：２、４、６、８、１０、１２、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０、または５２のタンパク質をコードする核酸をセネカバレーウイルスに挿入する工程を含む。本方法はまた、配列ＩＤ番号：２、４、６、８、１０、１２、３０、３２、３６、３８、４０、４２、４４、４８、５０、または５２のタンパク質配列と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一のタンパク質をコードする核酸を挿入する工程を含み得る。本方法により、腫瘍溶解性であり、機能的な治療タンパク質またはその機能的断片を産生する、すなわち、治療タンパク質またはその断片が治療機能を維持する、武装型ＳＳＶが産生される。
免疫原性ＳＶＶ構築物
本開示はまた、例えばオバルブミンおよびＣＯＶＩＤエピトープのようなスクリーニング用タンパク質を含むように改変されたセネカバレーウイルスも提供する。従って、１つの実施形態は、配列ＩＤ番号：１９の核酸１－７８９１を含むセネカバレーウイルスである。本発明の別の実施形態は、配列ＩＤ番号：１９のヌクレオチド１－７８９１と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一である核酸配列を含むセネカバレーウイルスである。
さらに別の実施形態は、タンパク質２Ａおよび２Ｂのコード配列間のセネカバレーウイルスのゲノムに核酸配列を挿入することによって生成されるＳＶＶ構築物であり、ここで、核酸配列は、配列ＩＤ番号：１９のヌクレオチド３５０８－４０１４を含む、または、配列ＩＤ番号：１９のヌクレオチド３５０８－４０１４と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一である核酸配列を含む。
特定の実施形態において、ＳＶＶ構築物は、セネカバレーウイルスおよび／または武装型セネカバレーウイルスのｉｎ ｖｉｖｏ免疫原性を評価するために使用され得る。具体的には、ＳＶＶ構築物は、ＳＶＶの免疫活性化特性を試験するために使用され得る。
武装型ＳＶＶによってがんを治療する方法
本開示は、武装型セネカバレーウイルスを利用する、がんを治療するための方法、組成物、キット、および医薬組成物を提供し、それによって、武装型セネカバレーウイルスは、がんを治療するために有用な薬剤をコードする。特に、本開示は、本明細書に記載されるような武装型セネカバレーウイルスを利用する、がんを治療するための方法、組成物、キット、および医薬組成物を提供する。
本明細書で提供されるがんの治療には、固形腫瘍の治療または転移の治療が含まれる。転移は、形質転換した細胞または悪性細胞が移動して、ある部位から別の部位にがんを広げるがんの形態である。このようながんには、皮膚、乳房、脳、子宮頸部、精巣などのがんが含まれる。より詳細には、がんには、以下の器官または系：心臓、肺、胃腸、泌尿生殖器、肝臓、骨、神経系、婦人科、血液、皮膚、および副腎が含まれ得るが、これらに限定されない。より詳細には、本明細書中の方法は、神経膠腫（神経鞘腫、神経膠芽腫、星状細胞腫）、神経芽腫、褐色細胞腫、傍神経節腫、髄膜腫、副腎皮質がん、腎臓がん、様々な種類の血管がん、骨芽細胞性骨がん、前立腺がん、卵巣がん、子宮平滑筋腫、唾液腺がん、脈絡叢がん、乳腺がん、膵臓がん、結腸がん、巨核芽球性白血病の治療に使用することができる。皮膚がんには、悪性黒色腫、基底細胞がん、扁平上皮がん、カポジ肉腫、ほくろ異形成母斑、脂肪腫、血管腫、皮膚線維腫、ケロイド、横紋筋肉腫、髄芽腫、乾癬が含まれる。
いくつかの実施形態において、本明細書で開示されている方法によって治療されるがんは、トリプルネガティブ乳がん、小細胞肺がん、非小細胞肺がん、非小細胞扁平上皮がん、腺がん、神経膠芽腫、皮膚がん、肝細胞がん、結腸がん、子宮頸がん、卵巣がん、子宮内膜がん、神経内分泌がん、膵臓がん、甲状腺がん、腎臓がん、骨がん、食道がん、または軟部組織がんを含む。
他の実施形態では、がんは神経芽細胞腫または黒色腫である。さらに別の実施形態では、がんは神経内分泌がんまたは小細胞肺がん（ＳＣＬＣ）腫瘍である。
併用療法
本明細書に記載の武装型ＳＶＶを用いて対象のがんを治療するための組成物および方法は、がんの治療に有用な少なくとも１つの追加化合物と組み合わせてもよい。追加の化合物は、がんおよび／または転移の症状を治療、予防、または軽減することが知られている、市販の化合物を含むことができる。
一態様において、本明細書に開示される医薬組成物は、武装型ＳＶＶおよび薬学的に許容される担体を含む。組成物はまた、追加のＳＶＶを含んでもよい。医薬組成物は、化学療法剤、抗細胞増殖剤またはそれらの任意の組み合わせを含むがこれらに限定されない抗腫瘍剤などの治療剤と組み合わせて使用することができる。例えば、以下の非限定的な例示的クラスの任意の従来の化学療法剤：アルキル化剤；ニトロソウレア；代謝拮抗剤；抗腫瘍抗生物質；植物アルキロイド；タキサン；ホルモン剤；および種々の薬剤が本発明に含まれる。別の態様において、本明細書に開示される医薬組成物は、放射線療法と組み合わせて使用され得る。
ほとんどのアルキル化剤は細胞周期非特異的である。特定の態様では、ＤＮＡ二重らせん鎖のグアニン塩基を架橋することによって腫瘍の増殖を止める。非限定的な例としては、ブスルファン、カルボプラチン、クロラムブシル、シスプラチン、シクロホスファミド、ダカルバジン、イホスファミド、塩酸メクロレタミン、メルファラン、プロカルバジン、チオテパ、および、ウラシルマスタードなどがある。
代謝拮抗剤は、細胞周期の合成（Ｓ）期におけるＤＮＡへの塩基の取り込みを阻害し、正常な発生と分裂を妨げる。代謝拮抗剤の非限定的な例は、５－フルオロウラシル、６－メルカプトプリン、カペシタビン、シトシンアラビノシド、フロクスウリジン、フルダラビン、ゲムシタビン、メトトレキサート、チオグアニンなどの薬剤を含む。
抗腫瘍抗生物質は一般に、細胞分裂に必要な酵素を阻害するか、細胞を取り囲む膜を変化させることによって細胞分裂を阻止する。このクラスに含まれるのは、ドキソルビシンなどのアントラサイクリン系で、ＤＮＡの構造を破壊してその機能を停止させることにより細胞分裂を阻止するように作用する。これらの薬剤は細胞周期非特異的である。抗腫瘍抗生物質の非限定的な例としては、アクラシノマイシン、アクチノマイシン、アントラマイシン、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カリチアマイシン、カルビシン、カミノマイシン、カルジノフィリン、クロモマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン、６－ジアゾ－５－オキソ－Ｌ－ノルロイシン、ドキソルビシン、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マルセロマイシン、マイトマイシン、ミトキサントロン、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポルフィロマイシン、ピューロマイシン、ケラマイシン、ロドルビシン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジノスタチン、およびゾルビシンを含む。
植物アルカロイドは、有糸分裂を阻害または停止させるか、または、細胞が細胞増殖に必要なタンパク質を生成するのを妨げる酵素を阻害する。よく使用される植物アルカロイドには、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、ビノレルビンなどがある。しかし、本発明はこれらの植物アルカロイドのみに限定して解釈されるべきではない。
タキサンは、細胞機能に重要な微小管と呼ばれる細胞構造に作用する。正常な細胞増殖では、細胞分裂が始まると微小管が形成されるが、細胞分裂が停止すると微小管は分解または破壊される。タキサンは微小管の分解を阻害するため、がん細胞は微小管が詰まって増殖および分裂できなくなる。非限定的な例示的タキサンには、パクリタキセルとドセタキセルが含まれる。
ホルモン剤およびホルモン様薬剤は、白血病、リンパ腫、多発性骨髄腫など、特定の種類のがんに使用される。これらの薬剤は、その効果を高めるために他の種類の化学療法薬と併用されることが多い。性ホルモンは、女性ホルモンや男性ホルモンの作用や産生を変化させるもので、乳がん、前立腺がん、子宮内膜がんなどの成長を遅らせるために使用される。これらのホルモンの産生（アロマターゼ阻害剤）や作用（タモキシフェン）を阻害することは、治療の補助としてしばしば用いられる。その他の腫瘍にもホルモン依存性のものがある。タモキシフェンは、乳がん細胞の増殖を促進するエストロゲンの活性を阻害するホルモン剤の非限定的な例である。
種々の薬剤としては、ブレオマイシン、ヒドロキシ尿素、Ｌ－アスパラギナーゼ、プロカルバジンなどの化学療法剤がある。
化学療法剤の他の例としては、以下およびそれらの薬学的に許容される塩、酸および誘導体が挙げられるが、これらに限定されない：これらに限定されないがレファメチニブ、セルメチニブ、トラメチニブまたはコビメチニブなどのＭＥＫ阻害剤；クロラムブシル、クロマファジン、クロロホスファミド、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシド塩酸塩、メルファラン、ノベンビチン、フェネステリン、プレドニムスチン、トロホスファミド、ウラシルマスタードなどのナイトロジェン・マスタード；カルムスチン、クロロゾトシン、フォテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、ラニムスチンなどのニトロソウレア；フルダラビン、６－メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニンなどのプリン類似体；アンシタビン、アザシチジン、６－アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジン、５－ＦＵなどのピリミジン類似体；カルステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトンなどのアンドロゲン；アミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタンなどの抗副腎剤；フロリン酸などの葉酸補充剤；アセグラトン；アルドホスファミドグリコシド；アミノレブリン酸；アムサクリン；ベストラブシル；ビサントレン；エダトレキサート；デフォファミン；デメコルシン；ジアジクオン；エフロルニチン；酢酸エリプチニウム；エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキシ尿素；レンチナン；ロニダミン；ミトグアゾン；ミトキサントロン；モピダモール；ニトラクリン；ペントスタチン；フェナメット；ピラルビシン；ポドフィリン酸；２－エチルヒドラジド；プロカルバジン；多糖類－Ｋ（ＰＳＫ）；ラゾキサン；シゾフラン；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジコン；２，２’，２"－トリクロロトリエチルアミン；ウレタン；ビンデシン；ダカルバジン；マンノムスチン；ミトブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン；アラビノシド（「Ａｒａ－Ｃ」）；シクロホスファミド；チオテパ；タキソイド、例えば、パクリタキセル（ＴＡＸＯＬＯ、Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ、Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ、Ｎ．Ｊ．）およびドセタキセル（ＴＡＸＯＴＥＲＥ、Ｒｈｏｎｅ－Ｐｏｕｌｅｎｃ Ｒｏｒｅｒ、Ａｎｔｏｎｙ、フランス）；クロラムブシル；ゲムシタビン；６－チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキサート；シスプラチンおよびカルボプラチンなどの白金類似体；ビンブラスチン；白金；エトポシド（ＶＰ－１６）；イホスファミド；マイトマイシンＣ；ミトキサントロン；ビンクリスチン；ビノレルビン；ナベルビン；ノバントロン；テニポシド；ダウノマイシン；アミノプテリン；ゼローダ；イバンドロネート；ＣＰＴ－１１；トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ２０００；ジフルオロメチルオルニチン（ＤＭＦＯ）；レチノイン酸；エスペラミシン；およびカペシタビン。
抗細胞増殖剤はさらに、アポトーシス誘導剤または細胞毒性剤として定義することができる。アポトーシス誘導剤は、グランザイム、Ｂｃｌ－２ファミリーメンバー、シトクロムＣ、カスパーゼ、またはそれらの組み合わせであり得る。例示的なグランザイムとしては、グランザイムＡ、グランザイムＢ、グランザイムＣ、グランザイムＤ、グランザイムＥ、グランザイムＦ、グランザイムＧ、グランザイムＨ、グランザイムＩ、グランザイムＪ、グランザイムＫ、グランザイムＬ、グランザイムＭ、グランザイムＮ、またはそれらの組み合わせが挙げられる。他の特定の態様において、Ｂｃｌ－２ファミリーメンバーは、例えば、Ｂａｘ、Ｂａｋ、Ｂｃｌ－Ｘｓ、Ｂａｄ、Ｂｉｄ、Ｂｉｋ、Ｈｒｋ、Ｂｏｋ、またはそれらの組み合わせである。
さらなる態様では、カスパーゼはカスパーゼ－１、カスパーゼ－２、カスパーゼ－３、カスパーゼ－４、カスパーゼ－５、カスパーゼ－６、カスパーゼ－７、カスパーゼ－８、カスパーゼ－９、カスパーゼ－１０、カスパーゼ－１１、カスパーゼ－１２、カスパーゼ－１３、カスパーゼ－１４、またはそれらの組み合わせである。特定の態様において、細胞傷害性薬剤は、ＴＮＦ－α、ジェロニン、プロディジオシン、リボソーム阻害タンパク質（ＲＩＰ）、緑膿菌外毒素、クロストリジウム・ディフィシレ毒素Ｂ、ヘリコバクター・ピロリＶａｃＡ、エルシニア・エンテロコリチカＹｏｐＴ、ビオラセイン、ジエチレントリアミン五酢酸、イロフルベン、ジフテリア毒素、ミトギリン、リシン、ボツリヌス毒素、コレラ毒素、サポリン６、またはそれらの組み合わせである。
免疫療法剤は、インターロイキン－２または他のサイトカイン、ＰＤ－１に結合するモノクローナル抗体、イピリムマブなどのプログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ－１）シグナル伝達阻害剤であるが、これらに限定されるものではない。免疫療法剤はまた、細胞傷害性Ｔリンパ球関連抗原Ａ－４（ＣＴＬＡ－４）シグナル伝達を阻害することができ、がんワクチンや樹状細胞を用いた療法に関連することもできる。
一実施形態では、がんに罹患している対象は、以下からなる群：チェックポイント阻害剤、ＰＤ－１阻害剤、ＰＤ－Ｌ１阻害剤、ＣＴＬＡ－４阻害剤、サイトカイン、成長因子、光増感剤、毒素、ｓｉＲＮＡ分子、シグナル伝達調節剤、抗がん抗生物質、抗がん抗体、血管新生阻害剤、化学療法化合物、抗転移性化合物、免疫療法化合物、ＣＡＲ療法、樹状細胞ベースの療法、がんワクチン、腫瘍溶解性ウイルス、人工抗がんウイルスまたはウイルス誘導体、およびそれらの任意の組み合わせから選択される少なくとも１つの抗がん治療剤を投与される。
特定の実施形態において、対象はチェックポイント阻害剤を投与される。チェックポイント阻害剤は、ＰＤ－１阻害剤、ＰＤ－Ｌ１阻害剤、ＣＴＬＡ－４阻害剤、またはそれらの組み合わせであり得る。特定の実施形態において、チェックポイント阻害剤は、抗ＰＤ１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、または抗ＣＴＬＡ－４抗体である。特定の実施形態において、チェックポイント阻害剤は、がん細胞上の以下のチェックポイントタンパク質：ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ－４、Ｂ７－１、Ｂ７－２の１つ以上をブロックする。他の実施形態では、チェックポイント阻害剤は、以下のチェックポイントタンパク質：ＬＡＧ－３；ＴＩＭ－３；ＴＩＧＩＴ；ＶＩＳＴＡ、Ｂ７－Ｈ３、ＢＴＬＡ、およびＳｉｇｌｅｃ－１５の１つ以上をブロックする。Qin, S. et al. Mol Cancer 18, 155 (2019); Gaynor et al. Semin Cancer Biol. 2020 Jul 2; S1044-579X(20)30152-8を参照。チェックポイント阻害剤は、例えば、モノクローナル抗体などの抗体であってもよい。
追加の例示的な好適なチェックポイント阻害剤としては、イピリムマブ（ヤーボイ（Ｙｅｒｖｏｙ）（登録商標））、ペムブロリズマブ（キイトルーダ（Ｋｅｙｔｒｕｄａ）（登録商標））、ニボルマブ（オプジーボ（Ｏｐｄｉｖｏ）（登録商標））、及びアテゾリズマブ（テセントリク（Ｔｅｃｅｎｔｒｉｑ）（登録商標））が挙げられるが、これらに限定されない。一実施形態では、チェックポイント阻害剤は抗ＰＤ－１抗体である。
一実施形態では、少なくとも１つの抗がん治療薬は、武装型ＳＶＶの投与の前、同時、またはその後に投与される。
一実施形態において、対象は、ＩＦＮ－Ｉ阻害剤を投与される。本明細書で使用されるＩＦＮ－Ｉ阻害剤は、ＩＦＮタイプＩ経路を部分的または完全に、一時的または永続的に阻害、抑制、または低減するための当該分野で公知の任意の薬剤を包含する。いくつかの実施形態において、ＩＦＮ－Ｉ阻害剤の阻害効果は可逆的であり得る。他の実施形態では、ＩＦＮ－Ｉの阻害は逆転する。
阻害剤は、ｓｉＲＮＡ、リボザイム、アンチセンス分子、アプタマー、ペプチド模倣体、小分子、ｍＴＯＲ阻害剤、ヒストン脱アセチル化酵素（ＨＤＡＣ）阻害剤、ヤヌスキナーゼ（ＪＡＫ）阻害剤、ＩＦＮ阻害剤、ＩＦＮ抗体、ＩＦＮ－α受容体１抗体、ＩＦＮ－α受容体２抗体、ウイルスペプチド、およびこれらの組み合わせを含む。ウイルスペプチドとしては、インフルエンザウイルス由来のＮＳ１タンパク質、デングウイルス由来のＮＳ２Ｂ３プロテアーゼ複合体などが挙げられるが、これらに限定されない。
ｍＴＯＲ経路とその阻害は、がんなど様々な疾患に関与していることが知られている。ラパマイシンはストレプトマイセス・ヒグロスコピクス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｈｙｇｒｏｓｃｏｐｉｃｕｓ）という細菌が産生する天然物であり、その細胞内受容体ＦＫ－５０６結合タンパク質１２（ＦＫＢＰ１２）と会合することでｍＴＯＲを阻害することができる。ＦＫＢＰ１２－ラパマイシン複合体は、ｍＴＯＲのＦＫＢＰ１２－ラパマイシン結合ドメインに直接結合する。ｍＴＯＲは、２つの異なる分子複合体、ｍＴＯＲ複合体１（ｍＴＯＲＣ１）とｍＴＯＲ複合体２（ｍＴＯＲＣ２）の触媒サブユニットとして機能する。ｍＴＯＲＣ１は、ｍＴＯＲの制御関連タンパク質（Ｒａｐｔｏｒ）と哺乳類ＬＳＴ８／Ｇタンパク質βサブユニット様タンパク質（ｍＬＳＴ８／ＧβＬ）から構成される。この複合体は栄養素／エネルギー／酸化還元センサーとして機能し、タンパク質合成を制御する役割を担っている。ｍＴＯＲＣ１の活性は、インスリン、成長因子、血清、ホスファチジン酸、アミノ酸（特にロイシン）、酸化ストレスによって刺激される（Hay and Sonenberg, Genes Dev. 18(16):1926-1945, 2004; Wullschleger et al., Cell 124(3):471-484）。対照的に、ｍＴＯＲＣ１は低栄養レベル、成長因子欠乏、還元ストレス、カフェイン、ラパマイシン、ファルネシルチオサリチル酸、クルクミンによって阻害されることが知られている（Beevers et al., Int. J. Cancer 119(4):757-764, 2006; McMahon et al., Mol. Endocrinol. 19(1):175-183)。ｍＴＯＲＣ２の構成要素は、ｍＴＯＲのラパマイシン非感受性コンパニオン（Ｒｉｃｔｏｒ）、ＧβＬ、哺乳類ストレス活性化プロテインキナーゼ相互作用タンパク質１およびｍＴＯＲである。ｍＴＯＲＣ２は、Ｆ－アクチン応力線維、パキシリン、ＲｈｏＡ、Ｒａｃ１、Ｃｄｃ４２およびプロテインキナーゼＣアルファの刺激を通じて、細胞骨格の重要な制御因子として機能することが示されている（Sarbassov et al., Curr. Biol. 14(14): 1296-302, 2004; Sarbassov et al., Science 307(5712): 1098-101, 2005)。ｍＴＯＲＣ１とは異なり、ｍＴＯＲＣ２はラパマイシンに感受性がない。
多くのｍＴＯＲ阻害剤が当該技術分野で知られており、強力な免疫抑制活性および抗腫瘍活性を有する。ラパマイシンまたはラパマイシン類似体もしくは誘導体などのｍＴＯＲ阻害剤は、免疫抑制作用および抗増殖作用を示すことが知られている。他のｍＴＯＲ阻害剤としては、エベロリムス、タクロリムス、ゾタロリムス（ＡＢＴ－５７８）、ピメクロリムス、ビオリムス、ＦＫ－５０６、ＰＰ２４２（２－（４－アミノ－１－イソプロピル－１Ｈ－ピラゾロ［３，４－ｄ］ピリミジン－３－イル）－１Ｈ－インドール－５－オール）、Ｋｕ－００６３７９４（ｒｅ１－５－［２－［（２Ｒ，６Ｓ）－２，６－ジメチル－４－モルホリニル］－４－（４－モルホリニル）ピリド［２，３－ｄ］ピリミジン－７－イル］－２－メトキシベンゼンメタノール）、ＰＩ－１０３（３－（４－（４－モルホリニル）ピリド［３’，２’：４，５］フロ［３，２－ｄ］ピリミジン－２－イル）フェノール）、ＰＫＩ－１７９（Ｎ－［４－［４－（４－モルホリニル）－６－（３－オキサ－８－アザビシクロ［３．２．１］ｏｃｔ－８－イル）－１，３，５－トリアジン－２－イル］フェニル］－Ｎ’－４－ピリジニル尿素塩酸塩）、ＡＺＤ８０５５（５－［２，４－ビス［（３Ｓ）－３－メチル－４－モルホリニル］ピリド［２，３－ｄ］ピリミジン－７－イル］－２－メトキシベンゼンメタノール）、ＷＹＥ－１３２／ＷＹＥ－１２５１３２（１－｛４－［１－（１，４－ジオキサ－スピロ［４．５］ｄｅｃ－８－イル）－４－（８－オキサ－３－アザ－ビシクロ［３．２．１］ｏｃｔ－３－イル）－１Ｈ－ピラゾロ［３，４－ｄ］ピリミジン－６－イル］－フェニル｝－３－メチル－尿素）、ＷＹＥ－２３（４－｛６－［４－（３－シクロプロピル－ウレイド）－フェニル］－４－モルホリン－４－イル－ピラゾロ［３，４－ｄ］ピリミジン－１－イル｝－ピペリジン－１－カルボン酸メチルエステル）、ＷＹＥ－２８（４－（６－｛４－［３－（４－ヒドロキシメチル－フェニル）－ウレイド］－フェニル｝－４－モルホリン－４－イル－ピラゾロ［３，４－ｄ］ピリミジン－１－イル）－ピペリジン－１－カルボン酸メチルエステル）、ＷＹＥ－３５４（４－［６－［４－［（メトキシカルボニル）アミノ］フェニル］－４－（４－モルホリニル）－１Ｈ－ピラゾロ［３，４－ｄ］ピリミジン－１－イル］－１－ピペリジンカルボン酸メチルエステル）、Ｃ２０－メタリルラパマイシンおよびＣ１６－（Ｓ）－ブチルスルホンアミドラパマイシン、Ｃ１６－（Ｓ）－３－メチルインドールラパマイシン（Ｃ１６－ｉＲａｐ）、Ｃ１６－（Ｓ）－７－メチルインドールラパマイシン（ＡＰ２１９６７／Ｃ１６－ＡｉＲａｐ）、ＣＣＩ－７７９（テムシロリムス）、ＲＡＤ００１（４０－Ｏ－（２－ヒドロキシエチル）－ラパマイシン）、ＡＰ－２３５７５、ＡＰ－２３６７５、ＡＰ－２３５７３、２０－チアラパマイシン、１５－デオキソ－１９－スルホキシルラパマイシン、ＷＹＥ－５９２、ＩＬＳ－９２０、７－ｅｐｉ－ラパマイシン、７－チオメチル－ラパマイシン、（３Ｓ，６Ｒ，７Ｅ，９Ｒ，１０Ｒ，１２Ｒ，１４Ｓ，１５Ｅ，１７Ｅ，１９Ｅ，２１Ｓ，２３Ｓ，２６Ｒ，２７Ｒ，３４ａＳ）－９，１０，１２，１３，１４，２－１，２２，２３，２４，２５，２６，２７，３２，３３，３４，３４ａ－ヘキサデカヒドロ－９，２７－ジヒドロキシ－３－［（１Ｒ）－２－［（－１Ｓ，３Ｒ，４Ｒ）－３－メトキシ－４－テトラゾール－１－イル）シクロヘキシル］－１－メチルエチル］－１０，２１－ジメトキシ－６，８，１２，１４，２０，２６－ヘキサメチル－２３，２７－エポキシ－３Ｈ－ピリド［２，１，４］オキサアザシクロヘントリアコンチン－１，５，１１，２８，２９（４Ｈ，６Ｈ，３１Ｈ）－ペントン）（米国特許第６，０１５，８１５号）、Ａ－９４５０７、デフォロリムス、ＡＰ－２３６７５、ＡＰ－２３８４１、ゾタロリムス、ＣＣＩ７７９／テムシロリムス、ＲＡＤ－００１／エベロリムス、７－エピ－トリメトキシ－ラパマイシン、２－デスメチル－ラパマイシン、４２－Ｏ－（２－ヒドロキシ）エチル－ラパマイシン、リダフォロリムス、ＡＢＩ－００９、ＭＫ８６６９、ＴＯＰ２１６、ＴＡＦＡ９３、ＴＯＲＩＳＥＬ（商標）（プロドラッグ）、ＣＥＲＴＩＣＡＮ（商標）、Ｋｕ－００６３７９４、ＰＰ３０、Ｔｏｒｉｎ１、Ｔｏｒｉｎ２、ＥＣＯ３７１、ＡＰ２３１０２、ＡＰ２３５７３、ＡＰ２３４６４、ＡＰ２３８４１；４０－（２－ヒドロキシエチル）ラパマイシン、４０－［３－ヒドロキシ（ヒドロキシメチル）メチルプロパノエート］－ラパマイシン（ＣＣ１７７９とも呼ばれる）、３２－デオキソラパマイシン、および、１６－ペンチニルオキシ－３２（Ｓ）－ジヒドロラパマイシンを含む。非ラパマイシン類似体ｍＴＯＲ阻害化合物としては、ＬＹ２９４００２、ウォルトマンニン、ケルセチン、ミリセンチン、スタウロスポリン、およびＡＴＰ競合阻害剤が挙げられるが、これらに限定されない。適切なｍＴＯＲ阻害剤の他の例は、米国特許第６，３２９，３８６号、米国特許出願公開第２００３／１２９２１５号明細書、および米国特許出願公開第２００２／１２３５０５号明細書に記載されている。
いくつかの実施形態において、ｍＴＯＲ阻害剤は、ｍＴＯＲＣ１およびｍＴＯＲＣ２の少なくとも一方を阻害する。他の実施形態において、ｍＴＯＲ阻害剤は、Ｔｏｒｉｎ１またはＴｏｒｉｎ２である。
多くのＨＤＡＣ阻害剤が知られており、当技術分野で使用されている。最も一般的なＨＤＡＣ阻害剤は、ＨＤＡＣの亜鉛含有触媒ドメインに結合する。これらのHDAC阻害剤は、その化学構造および亜鉛イオンに結合する化学部分に従って命名されたいくつかのグループに分類することができる。いくつかの例としては、ヒドロキサム酸またはヒドロキサム酸塩（トリコスタチンＡ（ＴＳＡ）またはボリノスタット／ＳＡＨＡ（ＦＤＡ承認）など）、アミノベンズアミドエンチノスタット（ＭＳ－２７５）、タセジナリン（ＣＩ９９４）、モセチノスタット（ＭＧＣＤ０１０３）、環状ペプチド（アピシジン、ロミデプシン（ＦＤＡ承認））、環状テトラペプチドまたはエポキシケトン（トラポキシンＢなど）、デプシペプチド、ベンズアミド、求電子ケトン、カルボン脂肪族酸化合物（酪酸塩、フェニル酪酸塩、バルプロエート、バルプロ酸など）が挙げられるが、これらに限定されない。他のＨＤＡＣ阻害剤としては、ベリノスタット（ＰＸＤ１０１）、ＬＡＱ８２４、および、パノビノスタット（ＬＢＨ５８９）が挙げられるが、これらに限定されない。臨床試験中のＨＤＣＡ阻害剤の例としては、パノビノスタット（ＬＢＨ－５８９）、ベリノスタット（ＰＸＤ１０１）、エンチノスタット（ＭＳ２７５）、モセチノスタット（ＭＧＣＤ０１０３０）、ジビノスタット（ＩＴＦ２３５７）、プラクチノスタット（ＳＢ９３９）、チダミド（ＣＳ０５５／ＨＢＩ－８０００）、キシノスタット（ＪＮＪ－２６４８１５８５）、アベキシノスタット（ＰＣＩ－２４７８１）、ＣＨＲ－３９９６およびＡＲ－Ｚ２が挙げられる。一実施形態では、ＨＤＡＣ阻害剤は、トリコスタチンＡである。
ＪＡＫ阻害剤（ＪＡＫ／ＳＡＴ阻害剤とも呼ばれる）は、ヤヌスキナーゼファミリーの１つ以上の酵素（例えば、ＪＡＫ１、ＪＡＫ２、ＪＡＫ３、および／またはＴＹＫ２）の活性を阻害し、それによってＪＡＫ－ＳＴＡＴシグナル伝達経路を阻害する。様々なＪＡＫ阻害剤が知られており、炎症性疾患またはがんの治療のために当該技術分野で使用されている。ＪＡＫ阻害剤の非限定的な例としては、ルキソリチニブ（Ｊａｋａｆｉ／Ｊａｋａｖｉ）、トファシチニブ（Ｊａｋｖｉｎｕｓ、以前はタソシチニブおよびＣＰ－６９０５５０として知られていた）、オクラシチニブ（Ａｐｏｑｕｅｌ）、バリシチニブ（オルミエント、ＬＹ３００９１０４）、デセルノチニブ（ＶＸ－５０９）を含むＦＤＡ承認化合物がある。その他のＪＡＫ阻害剤も臨床試験中、および／または実験薬として使用されている。例えば、これらは、フィルゴチニブ（Ｇ－１４６０３４、ＧＬＰＧ－０６３４）、セルデュラチニブ（ＰＲＴ０６２０７０）、ガンドチニブ（ＬＹ－２７８４５４４）、レスタウルチニブ（ＣＥＰ－７０１）、モメロチニブ（ＧＳ－０３８７、ＣＹＴ－３８７）、パクリチニブ（ＳＢ１５１８）、ＰＦ－０４９６５８４２、ウパダシチニブ（ＡＢＴ－４９４）、ペフィシチニブ（ＡＳＰ０１５Ｋ、ＪＮＪ－５４７８１５３２）、フェドラチニブ（ＳＡＲ３０２５０３）、ククルビタシン Ｉ、ＣＨＺ８６８、ＡＢＴ－４９４、フマル酸ジメチル（ＤＭＦ、テクフィデラ）、ＧＬＰＧ０６３４、およびＣＥＰ－３３７７９を含む。一実施形態では、ＪＡＫ／ＳＴＡＴ阻害剤は、プロテインキナーゼＣ（ＰＫＣ）の阻害剤であるスタウロスポリン（ＳＴＳ；抗生物質ＡＭ－２２８２）である。
一実施形態では、対象は、ＨＤＡＣ阻害剤、ＪＡＫ／ＳＴＡＴ阻害剤、ＩＦＮ阻害剤、ＩＦＮ抗体、ＩＦＮ－α受容体１抗体、ＩＦＮ－α受容体２抗体およびウイルスペプチド、ならびにそれらの組み合わせからなる群から選択される少なくとも１つのＩＦＮ－Ｉ阻害剤をさらに投与される。別の実施形態において、少なくとも１つのＩＦＮ－Ｉ阻害剤は、武装型ＳＶＶの投与の前、同時、またはその後に投与される。いくつかの実施形態において、少なくとも１つのＩＦＮ－Ｉ阻害剤は、武装型ＳＶＶが腫瘍細胞内で複製されたら、抗がん治療剤（例えばチェックポイント阻害剤）を添加する前に、除去される。
一実施形態において、抗がん治療剤は、少なくとも１つのＩＦＮ－Ｉ阻害剤の投与の前、同時、または後に投与される。一実施形態において、抗がん治療剤は、少なくとも１つのＩＦＮ－Ｉ阻害剤の投与の後に投与される。別の実施態様において、抗がん治療剤は、少なくとも１つのＩＦＮ－Ｉ阻害剤及び武装型ＳＶＶの投与に引き続いて投与される。
一実施形態では、武装型ＳＶＶによる治療は、ＩＦＮ－Ｉ阻害剤の投与によって先行される。一実施形態では、武装型ＳＶＶの複製およびがん細胞の死が確認されると、ＩＦＮ－Ｉ阻害剤の投与を終了する。例えば、がん細胞は、武装型ＳＶＶ治療の２４時間前に、ＩＦＮ－Ｉ阻害剤（例えば、（５－（テトラデシルオキシ）－２－フロ酸）、アセチル－ＣｏＡカルボキシラーゼ阻害剤：ＴＯＦＡ）で治療でき、その後、強力な武装型ＳＶＶ複製が観察され、細胞死のマーカーが検出されるまで、両処置を数週間続けることができる。その後、ＩＦＮ－Ｉ阻害剤による治療を終了し、 抗がん治療剤を開始することができる。武装型ＳＶＶの複製が行われると、様々な核酸や細胞の残骸が生成され、これが免疫細胞（例えばＴ細胞、ＮＫ細胞、ＡＰＣなど）の流入の活性化の引き金となり、がん細胞の阻害、減少、および／または排除／殺傷が進行する。この免疫反応のプロセスは、ＩＦＮ－Ｉ阻害の停止によってさらに強化される。
医薬組成物
特定の実施形態において、本発明は、武装型ＳＶＶを含む医薬組成物に関するものであり、それによって、武装型ＳＶＶは、がんを治療するための薬剤をコードする。特定の実施形態において、医薬組成物は、上記に開示された１つ以上の薬剤で補充され得る。
本明細書に提供されるのは、それを必要とする対象においてがんを治療するための医薬組成物である。医薬組成物は、武装型ＳＶＶ、および薬学的に許容される担体を含み；それによって、武装型ＳＶＶは、がんを治療するための薬剤をコードする。
また、本明細書において、それを必要とする対象においてがんを治療するための医薬組成物が提供される。医薬組成物は、武装型ＳＶＶ、および薬学的に許容される担体を含み；それによって、武装型ＳＶＶは、がんを治療するための薬剤をコードする。
このような医薬組成物は、対象への投与に適した形態であるか、または医薬組成物は、１つ以上の薬学的に許容される担体、１つ以上の追加成分、またはこれらの何らかの組み合わせをさらに含むことができる。医薬組成物の種々の成分は、当該技術分野で周知のように、生理学的に許容されるカチオンまたはアニオンと組み合わせたような、生理学的に許容される塩の形態で存在してもよい。
本明細書に提供される実施形態において、本発明の方法を実施するのに有用な医薬組成物は、１ｎｇ／ｋｇ／日から１００ｍｇ／ｋｇ／日の間の用量を送達するように投与され得る。別の実施形態において、本発明の実施に有用な医薬組成物は、１ｎｇ／ｋｇ／日から５００ｍｇ／ｋｇ／日の間の用量を送達するように投与され得る。本発明の医薬組成物中の活性成分、薬学的に許容される担体、および任意の追加成分の相対量は、治療される対象の独自性、大きさ、および状態に応じて、さらに組成物が投与される経路に応じて変化する。例として、組成物は０．１％～１００％（ｗ／ｗ）の活性成分を含むことができる。
本発明の方法において有用な医薬組成物は、吸入、経口、直腸、膣、非経口、局所、経皮、肺、鼻腔内、口腔、眼、髄腔内、静脈内、または他の投与経路用に好適に開発され得る。その他の製剤としては、投射ナノ粒子、リポソーム製剤、活性成分を含む再封入赤血球、免疫学的製剤などが考えられる。投与経路は、当業者には容易に明らかであり、治療される疾患の種類および重症度、治療される家畜またはヒト患者の種類および年齢などを含む任意の数の要因に依存する。
本明細書に記載される医薬組成物の製剤は、薬理学の技術分野において既知または今後開発される任意の方法によって調製することができる。一般に、このような調製方法には、活性成分を担体または１つ以上の他の補助成分と結合させる工程、次いで、必要または望ましい場合には、製品を所望の単回投与単位または複数回投与単位に成形または包装する工程が含まれる。いくつかの実施形態において、ＳＶＶは、天然のカプシド、修飾されたカプシド、裸のＲＮＡとして、または保護コート中にカプセル化された状態で製剤化され得る。
活性成分の量は、一般に、対象に投与されるであろう活性成分の投与量に等しいか、または例えば、そのような用量の２分の１もしくは３分の１などのそのような用量の都合のよい分数に等しい。単位剤形は、１日１回用量であってもよいし、１日複数回用量（例えば、１日あたり約１～４回またはそれ以上）であってもよい。１日複数回用量が使用される場合、単位剤形は、各用量について同じであっても異なっていてもよい。
本明細書で提供される医薬組成物の記載は、主にヒトへの倫理的投与に適した医薬組成物に関するが、当業者には、このような組成物は一般にあらゆる種類の動物への投与に適していることが理解される。ヒトへの投与に適する医薬組成物を種々の動物への投与に適したものにするための修飾は十分に理解されており、通常の熟練した獣医薬理学者は、たとえあるとしても通常の実験だけでそのような修飾を設計し実行することができる。本発明の医薬組成物の投与が企図される対象としては、ヒトおよび他の霊長類、ウシ、ブタ、ウマ、ヒツジ、ネコ、およびイヌのような商業的に関連する哺乳動物を含む哺乳動物が挙げられるが、これらに限定されない。一実施形態において、対象は、ヒト、または非ヒト哺乳動物、例えば、ウマ、ヒツジ、ウシ、ブタ、イヌ、ネコ、およびネズミであるが、これらに限定されない。一実施形態では、対象はヒトである。
一実施形態において、組成物は、１つ以上の薬学的に許容される賦形剤または担体を用いて製剤化される。一態様では、対象のがんを治療するための医薬組成物が開示される。医薬組成物は、武装型ＳＶＶおよび薬学的に許容される担体を含む。有用な薬学的に許容される担体としては、グリセロール、水、生理食塩水、エタノール、およびリン酸塩や有機酸の塩のような他の薬学的に許容される塩溶液が挙げられるが、これらに限定されない。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、液体ポリエチレングリコールなど）、それらの適切な混合物、および植物油を含む溶媒または分散媒であってもよい。適切な流動性は、例えば、レシチンのようなコーティング剤の使用、分散液の場合の必要な粒子径の維持、界面活性剤の使用によって維持することができる。微生物の作用の防止は、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸、チメロサールなどの種々の抗菌剤および抗真菌剤によって達成することができる。多くの場合、等張化剤、例えば糖類、塩化ナトリウム、マンニトールやソルビトールなどの多価アルコールを組成物に含めることが好ましい。注射用組成物の持続的な吸収は、組成物中に吸収を遅延させる薬剤、例えばモノステアリン酸アルミニウムまたはゼラチンを含有させることによってもたらすことができる。
製剤は、従来の賦形剤、すなわち、経口、非経口、経鼻、静脈内、皮下、経腸、または当該技術分野で知られている他の任意の適切な投与様式に適した薬学的に許容される有機または無機の担体物質との混合物で使用することができる。医薬製剤は、滅菌することができ、所望であれば、補助剤、例えば、滑沢剤、防腐剤、安定剤、湿潤剤、乳化剤、浸透圧緩衝剤に影響を与えるための塩、着色料、香料および／または芳香物質などと混合されてもよい。これらはまた、必要に応じて、他の活性剤、例えば他の鎮痛剤と組み合わせてもよい。
組成物は、組成物の総重量に対して約０．００５％～２．０％の防腐剤を含むことができる。防腐剤は、環境中の汚染物質に曝された場合の腐敗を防止するために使用される。本発明に従って有用な防腐剤の例としては、ベンジルアルコール、ソルビン酸、パラベン、イミド尿素、およびそれらの組み合わせからなる群から選択されるものが挙げられるが、これらに限定されない。特に好ましい防腐剤は、約０．５％～２．０％のベンジルアルコールと０．０５％～０．５％のソルビン酸の組み合わせである。
組成物は、化合物の分解を阻害する酸化防止剤およびキレート剤を含んでもよい。いくつかの化合物に対して好ましい酸化防止剤は、組成物の総重量に対して約０．０１重量％～０．３重量％の好ましい範囲のＢＨＴ、ＢＨＡ、アルファ－トコフェロールおよびアスコルビン酸であり、より好ましくは０．０３重量％～０．１重量％の範囲のＢＨＴである。好ましくは、キレート剤は、組成物の全重量に対して０．０１重量％～０．５重量％の量で存在する。特に好ましいキレート剤としては、組成物の総重量に対して約０．０１重量％～０．２０重量％、より好ましくは０．０２重量％～０．１０重量％の範囲のエデト酸塩（例えばエデト酸二ナトリウム）およびクエン酸が挙げられる。キレート剤は、製剤の保存性に悪影響を及ぼす可能性のある組成物中の金属イオンをキレート化するのに有用である。ＢＨＴおよびエデト酸二ナトリウムは、いくつかの化合物に対してそれぞれ特に好ましい酸化防止剤およびキレート化剤であるが、当業者に知られているように、他の適切かつ同等の酸化防止剤およびキレート化剤で代用することもできる。
本明細書に開示される医薬組成物は、化学療法剤、抗細胞増殖剤またはそれらの任意の組み合わせを含むがこれらに限定されない抗腫瘍剤などの追加の治療剤と組み合わせて使用され得る。例えば、以下の非限定的な例示的クラスの任意の従来の化学療法剤：アルキル化剤；ニトロソウレア；代謝拮抗剤；抗腫瘍抗生物質；植物アルキロイド；タキサン；ホルモン剤；および様々な薬剤が本発明に含まれる。別の態様において、本明細書に開示される医薬組成物は、放射線療法と組み合わせて使用され得る。
投与／用量
武装型ＳＶＶは、当該技術分野で公知の適切な投与経路を用いて投与することができる。特定の実施形態において、武装型ＳＶＶは、がんを治療するのに有用な追加の化合物と組み合わせて使用される。他の実施形態において、武装型ＳＶＶは、（武装していない）ＳＶＶと組み合わせて使用される。
本発明のある実施形態では、武装型ＳＶＶと、がんの治療に有用な追加化合物は同時に投与される。他の実施形態において、追加化合物は、武装型ＳＶＶが投与される前に投与される。別の実施形態では、追加阻害剤は武装型ＳＶＶ投与後に投与される。
投与のレジメンは、有効量を構成するものに影響を及ぼす可能性がある。例えば、治療用製剤は、がんに関連する外科的介入の前または後に、あるいは患者ががんと診断された直後に、患者対象に投与することができる。さらに、数回に分割した用量、および時間をずらした投与量を毎日または順次投与してもよいし、用量を連続的に注入してもよいし、ボーラス注射してもよい。さらに、治療用製剤の用量は、治療的または予防的状況の緊急性に応じて比例的に増減することができる。
一般に、ＳＶＶまたは武装型ＳＶＶは１０７から１×１０１１ｖｐ／ｋｇの間の量で投与される。投与される正確な量は、患者の年齢、体重、性別、治療される腫瘍の大きさや重症度を含む様々な要因に依存する。
ＳＶＶまたは武装型ＳＶＶは通常、治療上有効な用量で投与される。治療上有効な用量とは、患者の症状の改善または生存期間の延長をもたらすウイルスの量を指す。ウイルスの毒性および治療効果は、細胞培養または実験動物における標準的な手順、例えば、ＬＤ５０（動物または細胞の集団の５０％を致死させる用量；ウイルスの場合、用量はｖｐ／ｋｇの単位）、および、ＥＤ５０（用量、ｖｐ／ｋｇ、動物または細胞の集団の５０％に治療上有効）、またはＴＣ１０（腫瘍細胞の５０％の阻害を可能にする治療濃度または用量であり、ＰＦＵに関連し得る）、またはＥＣ５０（動物または細胞の集団の５０％に有効な濃度、ｖｐ／細胞）によって決定することができる。毒性効果と治療効果の間の用量比は治療指数であり、ＬＤ５０とＥＤ５０またはＥＣ５０間の比として表すことができる。ウイルスの用量は、毒性がほとんどまたは全くないＥＤ５０またはＥＣ５０を含む循環濃度の範囲内にあることが好ましい。用量は、採用される剤形および利用される投与経路に応じて、この範囲内で変化し得る。
ＳＶＶまたは武装型ＳＶＶは、組成物中に複数回用量および単回用量で存在することができ、少なくとも、または少なくとも約１×１０５、１×１０６、１×１０７、１×１０８、１×１０９、２×１０９、３×１０９、４×１０９、５×１０９、６×１０９、７×１０９、８×１０９、９×１０９、１×１０１０、１×１０１１、または１×１０１２ｐｆｕのような、約１×１０５～１×１０１２ｐｆｕ、１×１０６～１×１０１０ｐｆｕ、または１×１０７～１×１０１０ｐｆｕの間、それぞれが含まれるが、これらに限定されない。
組成物の容量は任意の容量とすることができ、単回用量投与用または複数回用量投与用とすることができ、これには限定されないが、約０．０１ｍＬ～１００ｍＬ、０．１ｍＬ～１００ｍＬ、１ｍＬ～１００ｍＬ、１０ｍＬ～１００ｍＬ、０．０１ｍＬ～１０ｍＬ、０．１ｍＬ～１０ｍＬ、１ｍＬ～１０ｍＬ、０．０２ｍＬ～２０ｍＬ、０．０５ｍＬ～５ｍＬ、０．５ｍＬ～５０ｍＬ、または０．５ｍＬ～５ｍＬが、それぞれ包含される。
ＳＶＶおよび／または武装型ＳＶＶの感染性は、例えば、血液または血清などの体液に曝露されたときの、腫瘍溶解性ウイルスの力価または半減期の増加によって顕在化され得る。感染性は、少なくとも１．１倍、１．２倍、１．３倍、１．４倍、１．５倍、１．６倍、１．７倍、１．８倍、１．９倍、２．０倍、２．５倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、または１０倍を含むがこれらに限定されない任意の量で増加させることができる。
本発明の組成物の患者対象、好ましくは哺乳動物、より好ましくはヒトへの投与は、公知の手順を用いて、対象のがんを治療するのに有効な用量および投与期間で実施することができる。治療効果を達成するために必要な治療化合物の有効量は、採用される特定の化合物の活性；投与時間；化合物の排泄速度；治療期間；化合物と組み合わせて使用される他の薬物、化合物または材料；治療される患者の疾患または障害の状態、年齢、性別、体重、状態、一般的な健康状態および以前の病歴、ならびに医学技術において周知のような要因に応じて変化し得る。投与レジメンは、最適な治療反応を提供するように調整することができる。例えば、数回に分けて毎日投与してもよいし、治療状況の緊急性に応じて投与量を比例的に減らしてもよい。治療用化合物の有効用量範囲の非限定的な例は、約０．０１～約５０ｍｇ／ｋｇ体重／日である。
武装型ＳＶＶは、１日に数回という頻度で対象に投与することができ、あるいは、１日に１回、１週間に１回、２週間に１回、１ヶ月に１回、あるいはさらに少ない頻度、例えば数ヶ月に１回、あるいは１年に１回以下の頻度で投与することもできる。１日あたりに投与される化合物の量は、非限定的な例では、毎日、１日おき、２日おき、３日おき、４日おき、または５日おきに投与され得ることが理解される。例えば、隔日投与の場合、１日あたり５ｍｇの用量を月曜日に開始し、その後の１回目の１日あたり５ｍｇの用量を水曜日に投与し、その後の２回目の１日あたり５ｍｇの投与を金曜日に投与する、とすることができる。用量の頻度は、当業者には容易に明らかであり、治療される疾患の種類および重症度、動物の種類および年齢などの任意の数の要因に依存するが、これらに限定されない。本発明の医薬組成物中の活性成分の実際の用量レベルは、特定の患者、組成物、および投与様式に対して所望の治療応答を達成するのに有効な活性成分の量を、患者に毒性であることなく得るように変化させることができる。当技術分野における通常の技術を有する医師、例えば、医師または獣医師は、必要とされる医薬組成物の有効量を容易に決定し、処方することができる。例えば、医師または獣医師は、所望の治療効果を達成するために必要なレベルよりも低いレベルで、医薬組成物中に使用される本発明の化合物の用量を、所望の治療効果を達成するために必要なレベルよりも低いレベルで開始し、所望の効果が達成されるまで徐々に用量を増加することができる。
特定の実施形態において、投与の容易さおよび投与量の均一性のために、化合物を投与単位形態で製剤化することが特に有利である。本明細書で使用される投与単位形態とは、治療される患者に対する単位投与量として適した物理的に別個の単位を指し、各単位は、必要な医薬ビヒクルとの関連において所望の治療効果をもたらすように計算された所定量の治療化合物を含む。本発明の投与単位形態は、（ａ）治療用化合物の固有の特性および達成されるべき特定の治療効果、および（ｂ）患者のがんを治療するためのそのような治療用化合物を配合／製剤化する技術に固有の制限によって規定され、直接これに依存する。
投与経路
当業者であれば、投与のために複数の経路を使用することができるが、特定の経路は他の経路よりも即時的でより効果的な反応を提供することができることを認識するであろう。一実施形態では、武装型ＳＶＶは腫瘍内に投与される。
開示された組成物（武装型SVVを含む）の投与経路は、吸入、経口、経鼻、直腸、非経口、舌下、経皮、経粘膜（例えば、舌下、舌、（経）頬、（経）尿道、膣（例えば、経膣および膣周囲）、（経）鼻腔、および（経）直腸）、膀胱内、肺内、十二指腸内、胃内、髄腔内、皮下、筋肉内、皮内、動脈内、静脈内、気管支内、吸入、および局所投与を含む。適切な組成物および剤形としては、例えば、錠剤、カプセル、カプレット、丸薬、ゲルキャップ、トローチ、分散剤、懸濁剤、溶液、シロップ、顆粒、ビーズ、経皮パッチ、ゲル、粉末、ペレット、マグマ剤、ロゼンジ、クリーム、ペースト、プラスター、ローション、ディスク、坐剤、鼻腔内投与または経口投与のための液体スプレー、吸入のための乾燥粉末またはエアロゾル化製剤、膀胱内投与のための組成物および剤形が含まれる。本発明において有用であろう製剤および組成物は、本明細書に記載される特定の製剤および組成物に限定されないことが理解されるべきである。一実施形態において、武装型ＳＶＶ治療は、吸入、経口、直腸、膣、非経口、局所、経皮、肺、鼻腔内、頬内、眼、肝動脈内、胸腔内、髄腔内、腫瘍内、静脈内、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される投与経路を含む。
キット
本発明はまた、武装型ＳＶＶを含むキットも含み、それによってキットはがんの治療に使用される。
さらなる実施形態では、本明細書の他の箇所に記載されるような、がんを治療または改善するためのキットが提供され、ここでキットは以下：ａ）武装型ＳＶＶまたは武装型ＳＶＶを含む組成物；および任意にｂ）本明細書に記載されるような追加の薬剤または療法を含む。キットは、がんを治療または改善するためにキットを使用するための指示書またはラベルをさらに含み得る。キットはまた、がんがチェックポイント阻害剤に対して実際に不応性であることを確認するためのアッセイを含むことができる。さらに他の実施形態において、本発明は、本明細書に記載されるように、所定のがん（小細胞肺がんまたはトリプルネガティブ乳がんなどであるが、これらに限定されない）に対するキットアッセイに及ぶ。このようなキットは、例えば、ＰＣＲもしくは他の核酸ハイブリダイゼーション技術（マイクロアレイ）の試薬、または免疫学的に基づく検出技術（例えば、ＥＬＩＳｐｏｔ、ＥＬＩＳＡ）の試薬を含むことができる。
実施例
次に、本発明を以下の実施例を参照して説明する。これらの実施例は、例示のみを目的として提供されるものであり、本発明は、決してこれらの実施例に限定されるものとして解釈されるべきではなく、むしろ、本明細書で提供される教示の結果として明らかになるあらゆる変形例を包含するものとして解釈されるべきである。
これ以上の説明は省略するが、当業者であれば、先の説明および以下の例示的実施例を用いて、本発明の化合物を製造および利用し、特許請求される方法を実施することができると考えられる。従って、以下の実施例は、本発明の好ましい実施形態を具体的に指摘するものであり、本開示の残りの部分をいかなる意味においても限定するものとして解釈されるものではない。
実施例１：武装型セネカバレーウイルスの構築
Hales et al., 2008はＳＶＶ－００１のゲノム配列について記載している。ＳＶＶ－００１のＲＮＡゲノムは、３９のポリ（Ａ）テールを除いた７２８０ｎｔで構成され、６６６ｎｔの５’ＵＴＲとそれより短い３’ＵＴＲ（７１ｎｔ）を有する。オープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）の推定アミノ酸配列から、２１８１ａａのポリタンパク質前駆体をコードする可能性のある、６５４３ｂｐの大きな単一ＯＲＦが明らかになった。
Poirer et al., 2012は、以下に示すように、ＧＦＰ ｃＤＮＡがＳＶＶ ２Ａと２Ｂのコード配列の間に挿入される、ＧＦＰをコードするＳＶＶプラスミドであるｐＮＴＸ－１１の構築を記載している。Ｐｏｉｒｅｒらが用いた方法を実施例２に示す。
治療用ｃＤＮＡをＳＶＶ－００１クローンＧＦＰ欠失ｐＮＴＸ－１１に挿入し、ここで、ＧＦＰ ｃＤＮＡを切除し、ｎｔ．３５０８で治療遺伝子と置換する。このように、すべての治療遺伝子の挿入は、示されているように、ＧＦＰ欠失ｐＮＴＸ－１１のヌクレオチド３５０８で起こる。クローニングを容易にするため、Ｎｈｅ Ｉ（ｎｔ３１９９）からＨｉｎｄ ＩＩＩ（ｎｔ４４８４）部位までのＳＶＶ配列を組み込む新規導入遺伝子を合成し、ＧＦＰ欠失ｐＮＴＸ－１１バックボーンに容易にクローニングが可能になる。ＳＶＶゲノムはＧＦＰ欠失ｐＮＴＸ－１１プラスミドのｎｔ．１で始まり、ＳＶＶ ＯＲＦは７２８１で終わる。ｐＧＥＭ４Ｚプラスミド配列は、SＶＶ３’ＵＴＲと（Ａ）ｎ配列のｎｔ．７３８３－９８８５の後にある。
上記の手順で武装型SVVを作製する場合、ＧＦＰの核酸配列の代わりに、がん治療に有用な薬剤をコードする核酸配列が使用される。具体的には、治療用ｃＤＮＡをＳＶＶ－００１クローンｐＮＴＸ－１１ ＧＦＰに挿入し、そこでＧＦＰ ｃＤＮＡを切除し、ｎｔ．３５０８で治療遺伝子と置換する。ＳＶＶ－治療ポリタンパク質の翻訳中、リボソームはまずＳＶＶ ２Ａタンパク質の「ＴＮＰＧ↓Ｐ」モチーフで「スキップ」し、次にＴ２Ａタンパク質の別の「ＴＮＰＧ↓Ｐ」モチーフでもう一度「スキップ」する。リボソームがスキップする２回の事象により、１つの余分なＮ末端プロリンとＣ末端Ｔ２Ａ切断産物に隣接された治療用ペイロードタンパク質が放出される。
本実施例に記載した全ての武装型ＳＶＶウイルスの親プラスミドはＧＦＰ欠失ｐＮＴＸ－１１であり、これはＧＦＰ ｃＤＮＡがｎｔ．３５０８－４２１８から欠失したＧＦＰをコードする１０，５９６ｂｐプラスミドであるｐＮＴＸ－１１から誘導された９，８８５ｂｐプラスミドである。ｐＮＴＸ－１１のＳＶＶゲノムはｐＧＥＭ－４Ｚプラスミドバックボーン（Ｐｒｏｍｅｇａ）に含まれている。他の親プラスミドを使用することもできる。
武装型ＳＶＶおよび治療タンパク質を有するプラスミドが構築された（配列ＩＤ番号：１５～１８を参照）。これらのプラスミドは以下のとおりである：ｐＮＴＸ－１１ ＣＸＣＬ９（配列ＩＤ番号：１５）；ｐＮＴＸ－１１＋ＴＧＦｂＤＮＲＩＩ（配列ＩＤ番号：１６）；ｐＮＴＸ－１１ ｎｆｓａ ｍｕｔ ２２（配列ＩＤ番号：１７）；およびｐＮＴＸ－１１ Ｎｅｏｌｅｕｋｉｎ ２－１５（配列ＩＤ番号：１８）。さらに、ニワトリオボアルブミンおよびＳａｒｓ－Ｃｏｖ－２（Ｃｏｖｉｄウイルス）の両方のエピトープを運搬するプラスミドが設計されている（ｐＮＴＸ－１１ ｏｖａ＋ｃｏｖｉｄエピトープ（配列ＩＤ番号：１９））。
表１にプラスミド中の武装型ＳＶＶとタンパク質の位置を示す。各プラスミドの詳細な説明は以下のとおりである。
Figure 2024503703000001
抗ＰＤＬ－１をコードする武装型ＳＶＶの構築
抗ＰＤＬ－１をコードする武装型ＳＶＶを構築するために、抗ＰＤＬ－１をコードするＶＨＨナノボディ（配列ＩＤ番号：１）のヌクレオチド配列を、本明細書に記載の手順を用いて、ＧＦＰ欠失ｐＮＴＸ－１１に挿入した。得られたプラスミドｐＮＴＸ－１１ ＶＨＨ ａＰＤＬ－１のプラスミドマップを図１に示す。このプラスミド（ｐＮＴＸ－１１ ＶＨＨ ａＰＤＬ－１）の生成の概要図を図２に示す。得られた改変ＳＶＶは抗ＰＤＬ１タンパク質（配列ＩＤ番号：２）を発現する。
Figure 2024503703000002
武装型ＳＶＶ構築物を運搬する、得られたプラスミド（配列ＩＤ番号：１３）を参照すると、ＳＶＶ－抗ＰＤ－Ｌ１ウイルスは１－７７６２である。抗ＰＤ－Ｌ１ ｃＤＮＡはｎｔ．３５０８－３８８５である。ＳＶＶ武装ウイルスを生成するために使用された配列は、ＷＯ ２０１７／１５７３３４ Ａの配列ＩＤ番号：１に由来する。
ＩＬ－２四重変異体をコードする武装型ＳＶＶの構築
四重変異型ＩＬ－２はＣＤ２５（アルファ受容体）には結合せず、ＩＬ－２受容体のＣＤ１２２とＣＤ１３２（ベータ鎖とガンマ鎖）のみに結合する。ＣＤ２５結合ドメインを除去すると、Ｔサプレッサーの発生が減少し、血管漏出症候群を介するＩＬ－２毒性の可能性が減少する。
ＩＬ－２四重変異体をコードする武装型ＳＶＶを構築するために、ＩＬ－２四重変異体（Ｔ３Ａ／Ｆ４２Ａ／Ｙ４５Ａ／Ｌ７２Ｇ）（配列ＩＤ番号：３）のヌクレオチド配列を、本明細書に記載の手順を用いて、ＧＦＰ欠失ｐＮＴＸ－１１に挿入した。得られたプラスミドｐＮＴＸ－１１ ＩＬ２ ｑｕａｄ変異体のプラスミドマップを図３に示す。このプラスミド（ｐＮＴＸ－１１ ＩＬ２ ｑｕａｄ変異体）の生成の概要図を図４に示す。得られた改変ＳＶＶは、ＩＬ－２四重変異体タンパク質（配列ＩＤ番号：４）を発現する。
Figure 2024503703000003
武装型ＳＶＶ構築物を運搬する、得られたプラスミド（配列ＩＤ番号：１４）を参照すると、ＳＶＶ ＩＬ－２ ｑｕａｄ変異たんぱく質ウイルスの配列は１－７７８３である。ＩＬ－２ ｑｕａｄ変異たんぱく質ｃＤＮＡ配列は、ＳＶＶウイルスの３５０８－３９０６である。武装型ＳＶＶを作製するために使用されたＩＬ－２ ｑｕａｄ変異たんぱく質は、Ast et al., 2010、ＥＰ３０７５７４５Ｂ１、およびＵＳ９２６６９３８Ｂ２に由来する。
ＣＸＣＬ９をコードする武装型ＳＶＶ（４１７ｂｐ）の構築
ＣＸＣＬ９はＴ細胞輸送に関与すると考えられているケモカインである。コードされたタンパク質はＣ－Ｘ－Ｃモチーフケモカイン３に結合し、リンパ球の化学誘引物質であるが、好中球の化学誘引物質ではない。ＣＸＣＬ９はＭＩＧ－１（インターフェロン－ガンマによって誘導されるモノカイン）としても知られている。ＣＸＣＬ９は１２５のアミノ酸を有し、分子量は１４，０１９ Ｄａである。
ＣＸＣＬ９をコードする武装型ＳＶＶを構築するために、ＣＸＣＬ９のヌクレオチド配列（配列ＩＤ番号：５）を、本明細書に記載の手順を用いて、ＧＦＰ欠失ｐＮＴＸ－１１に挿入した。ＧＦＰ遺伝子をｐＮＴＸ－１１から切除し、ＣＸＣＬ９ ｃＤＮＡをＳＶＶ－００１クローンのｎｔ．３５０８に挿入した。ＳＶＶ－ＣＸＣＬ９ポリタンパク質の翻訳中、リボソームは最初にＳＶＶ ２Ａタンパク質の「ＴＮＰＧ↓」モチーフでスキップし、次にＴ２Ａタンパク質の別の「ＴＮＰＧ↓Ｐ」モチーフでもう一度スキップした。リボソームがスキップする２回の事象により、１つの余分なＮ末端プロリンとＣ末端Ｔ２Ａ切断産物に隣接されたＣＸＣＬ９タンパク質が放出される。
得られたプラスミドｐＮＴＸ－１１ ＣＸＣＬ９のプラスミドマップを図５に示す。このプラスミド（ｐＮＴＸ－１１ ＩＬ２ ｑｕａｄ変異体）の生成の概要図を図６に示す。得られた改変ＳＶＶは、ＣＸＣＬ９タンパク質（配列ＩＤ番号：６）を発現する。
Figure 2024503703000004
武装型ＳＶＶ構築物を運搬する、得られたプラスミド（配列ＩＤ番号：１５）を参照すると、ＳＶＶ ＣＸＣＬ９ウイルスの配列は１－７７５９である。ＣＸＣＬ９ ｃＤＮＡ配列は、ＳＶＶウイルスの３５０８－３８８２である。
ＴＧＦ－ベータデコイをコードする武装型ＳＶＶの構築
この武装型ＳＶＶの構築には、ヒトＴＧβＲＩ ＥＣＤ１－１２８（３８４ｂｐ）とＴβＲＩＩ ＥＣＤ１－１８４（４８６ｂｐ）の細胞外ドメインをコードする核酸を用いた。ＴＧＦ－βデコイ受容体は、ＴＧＦ－β（例えば、ＴＧＦ－β１、ＴＧＦ－β２、及び／またはＴＧＦ－β３）に結合し、膜貫通ドメインをコードするアミノ酸配列を欠くＴＧＦ－β受容体に由来する。ＴＧＦ－βデコイの発現は、腫瘍微小環境における免疫抑制的環境を減少させ、Ｔ細胞応答を増強する。
ＴＧＦ－ベータデコイをコードする武装型ＳＶＶを構築するために、本明細書に記載の手順を用いて、ＴＧＦ－ベータデコイのヌクレオチド配列（配列ＩＤ番号：７）を、ＧＦＰ欠失ｐＮＴＸ－１１に挿入した。得られたプラスミド ｐＮＴＸ－１１＋ＴＧＦｂＤＮＲＩＩのプラスミドマップを図７に示す。このプラスミド（ｐＮＴＸ－１１＋ＴＧＦｂＤＮＲＩＩ）の生成の概要図を図８に示す。得られた改変ＳＶＶはＴＧＦ－ベータデコイタンパク質（配列ＩＤ番号：８）を発現する。この構築物は、タンパク質のＣＯＯＨ－テールにｍｙｃタグが付加されている。この配列はＡｄｄｇｅｎｅ－プラスミド－１３０８８８から入手した。ｍｙｃタグは除去してもよい。
Figure 2024503703000005
武装型ＳＶＶ構築物を運搬する、得られたプラスミド（配列ＩＤ番号：１６）を参照すると、ＳＶＶ ＴＧＦ－ベータデコイウイルスの配列は１－７９８４である。ＴＧＦ－ベータデコイｃＤＮＡ配列はＳＶＶウイルスの３５０８－４１０７である。
ＮｆｓＡを発現する武装型ＳＶＶの構築
遺伝子指向性酵素プロドラッグ療法（GDEPT）は、非毒性のプロドラッグを細胞毒性産物に変換できる酵素をコードする外因性遺伝子を腫瘍細胞に導入する、がん治療のための発展途上の戦略である。原理的には、がん細胞内で反応性の高い細胞毒を局所的に生成することで、最適な治療効果が得られるが、全身毒性は従来の化学療法よりも低いままである。大腸菌由来のニトロ還元酵素ＮｆｓＢは、プロドラッグＣＢ１９５４を活性化し、強力な二官能性アルキル化剤とすることができる。ＮｆｓＡはＣＢ１９５４の２－ＮＯ２基を優先的に還元し、その結果、Ｎｆｓｂと比較してバイスタンダー細胞の殺傷力が向上した。全体として、この結果は、ＧＤＥＰＴにおいてＣＢ１９５４または他のいくつかのニトロ芳香族プロドラッグを併用する場合において、ＮｆｓＡがＮｆｓＢよりも優れている可能性を示唆している。
ＮｆｓＡをコードする武装型ＳＶＶを構築するために、ＮｆｓＡのヌクレオチド配列（配列ＩＤ番号：９）を、本明細書に記載の手順を用いてＧＦＰ欠失ｐＮＴＸ－１１に挿入した。得られたプラスミドｐＮＴＸ－１１ ｎｆｓａ ｍｕｔ ２２のプラスミドマップを図９に示す。このプラスミド（ｐＮＴＸ－１１ ｎｆｓａ ｍｕｔ ２２）の生成の概要図を図１０に示す。得られた改変ＳＶＶは、Ｎｆｓａタンパク質（配列ＩＤ番号：１０）を発現する。
Figure 2024503703000006
得られたプラスミド（配列ＩＤ番号：１７）を参照すると、ＳＶＶ Ｎｆｓａウイルスの配列は１－８１４０である。Ｎｆｓａ ｃＤＮＡ配列は、ＳＶＶウイルスの３５０８－４２６３である。
この武装型ＳＶＶを構築するために使用したＮｓＦＡ配列は、ＷＯ２０１２００８８６０の配列ＩＤ番号：３２に由来する。Vass, S., Jarrom, D., Wilson, W. et al. E. coli NfsA: an alternative nitroreductase for prodrug activation gene therapy in combination with CB1954.Br J Cancer 100, 1903-1911 (2009). https://doi.org/10.1038/sj.bjc.6605094も参照。
Ｎｅｏｌｅｕｋｉｎ２－１５を発現する武装型ＳＶＶの構築
Ｎｅｏｌｅｕｋｉｎ２－１５は、ＩＬ－２Ｒα（ＣＤ２５とも呼ばれる）またはＩＬ－１５Ｒα（ＣＤ２１５とも呼ばれる）との結合部位を欠いた改良型ＩＬ－２変異体である。この分子は非常に安定で、天然サイトカインよりも高い親和性でヒトおよびマウスのＩＬ－２Ｒβγｃと結合し、より強力である。
Ｎｅｏｌｅｕｋｉｎ ２－１５をコードする武装型ＳＶＶを構築するために、Ｎｅｏｌｅｕｋｉｎ ２－１５（配列ＩＤ番号：１１）のヌクレオチド配列を、本明細書に記載の手順を用いて、ＧＦＰ欠失ｐＮＴＸ－１１に挿入した。得られたプラスミドｐＮＴＸ－１１ ｓｉｇ ｓｅｑ Ｎｅｏｌｅｕｋｉｎのプラスミドマップを図１１に示す。このプラスミド（ｐＮＴＸ－１１ ｓｉｇ ｓｅｑ Ｎｅｏｌｅｕｋｉｎ）の生成の概要図を図１２に示す。得られた改変ＳＶＶはＮｅｏｌｅｕｋｉｎ２－１５（配列ＩＤ番号：１２）を発現する。
Figure 2024503703000007
得られたプラスミド（配列ＩＤ番号：１８）を参照すると、ＳＶＶＮｅｏｌｅｕｋｉｎ２－１５ウイルスの配列は１－７７３８である。Ｎｅｏｌｅｕｋｉｎ２－１５ ｃＤＮＡ配列はＳＶＶウイルスの３５０８－３８６１である。
この構築物の生成に使用した配列は、Silva DA, Yu S, Ulge UY, et al. De novo design of potent and selective mimics of IL-2 and IL-15.Nature.2019;565(7738):186-191に由来する。
ＳＶＶ免疫原構築物の構築
ＳＩＩＮＦＥＫＹＬおよび免疫原性ＣＯＶＩＤペプチド：ｇｌｙ－ｐｒｏ－ｌｙｓ－ｌｙｓ－ｓｅｒ－ｔｈｒ－ａｓｎ－ｌｅｕを含む、ニワトリのオバルブミン由来の複数の免疫原性エピトープをコードする新規の武装型ウイルスを設計した。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のスパイク（Ｓ）タンパク質に由来する免疫原性ＣｏｖｉｄマウスＨ２－Ｄｄ－制限ＣＤ８＋ＣＴＬエピトープＧＰＫＫＳＴＮＬ（ａａ ５２６－５３３）は、Muraoka et al., 2020に記載されている。
このＳＶＶ構築物（ＮＴＸ－１１ ｏｖａ＋ｃｏｖｉｄエピトープ）を運搬するプラスミドのマップを図１３に示す。図１４は、このプラスミドを生成する概要図である。得られたプラスミド（配列ＩＤ番号：１９）を参照すると、ＳＶＶ ｏｖａ＋ｃｏｖｉｄエピトープウイルス配列は１－７８９１である。ｏｖａ＋ｃｏｖｉｄエピトープｃＤＮＡ配列はＳＶＶウイルスの３５０８－４０１４である。
実施例２：完全長ＳＶＶ ｃＤＮＡのクローニング、挿入、およびＳＶＶ－ＧＦＰのレスキュー
長ＳＶＶ－００１ゲノムの合成および細菌プラスミドへのクローニングは、以前に記載されている（Poirier et al.）。ＳＶＶ－００１のＧＦＰ発現誘導体の作製はhttp://vir.sgmjournals.org 2611に記載され、その開示は本明細書に組み込まれる。
簡単に説明すると、全長ＳＶＶ００１ゲノムを表す３つのｃＤＮＡ断片を、６セットのＳＶＶ００１特異的プライマーを用いた３回のＰＣＲ反応によって増幅した（表２参照）。
Figure 2024503703000008
 ＰＣＲにはＴｕｒｂｏ Ｐｆｕポリメラーゼ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）を用いた。まず、ＳＶＶ－００１ゲノムの５’末端を表す断片をプライマー５９ＳＶＶ－００１－ＡとＳＶＶ００１１０２９ＲＴ－ＲＩで増幅し、得られた断片をＡｐａＩとＥｃｏＲＩで切断してゲル精製した。ゲル精製した断片を、５’末端に操作されたＮｄｅＩ部位、中央にＴ７コアプロモーター配列、３９末端にＡｐａＩ部位を持つＳＶＶ－００１の最初の１７ｎｔを含むアニールオリゴヌクレオチド二重鎖であるＮｄｅＡｐａ Ｔ７ＳＶＶ－００１にライゲーションし、ｐＧＥＭ－３Ｚ（Ｐｒｏｍｅｇａ）のＮｄｅＩ部位とＥｃｏＲＩ部位に三元ライゲーションでクローニングし、ｐＮＴＸ－０３を作製した。
次に、ウイルスゲノムの３’末端を表す断片をプライマーＳＶＶ－００１６０５６とＳＶＶ－００１７３０９ＮｓｉＢを用いてＰＣＲで増幅した。リバースプライマーであるＳＶＶ００１７３０９ＮｓｉＢは、ｐＧＥＭ－３ＺプラスミドのＰｓｔＩ部位にクローニングするために、長さ３０ｎｔのポリ（Ａ）テールと３’末端のＮｓｉＩ認識配列を導入するために使用された。得られたＰＣＲ産物をＢａｍＨＩで消化し、ゲル精製した。
ウイルスゲノムの内部をカバーする断片をプライマーＳＶＶ－００１９１１ＬとＳＶＶ００１６１５７Ｒで増幅した。得られたＰＣＲ産物をＥｃｏＲＩとＢａｍＨＩで消化し、ゲル精製した。ＳＶＶゲノムの中間と３’末端に相当する２つのゲル精製断片をｐＧＥＭ－４ＺのＥｃｏＲＩとＳｍａＩ部位に三元ライゲーションでクローニングし、ｐＮＴＸ－０２を作製した。
完全長ＳＶＶ－００１ ｃＤＮＡを作製するために、ｐＮＴＸ－０２をＥｃｏＲＩとＮｓｉＩで消化し、得られた７．３ｋｂ断片をゲル精製してｐＮＴＸ－０３のＥｃｏＲＩとＰｓｔＩ部位にクローニングした。ｐＮＴＸ－０４はＰＥＲ．Ｃ６細胞へのＲＮＡトランスフェクション後のｉｎ ｖｉｔｒｏ転写とウイルスのレスキューを促進するために、さらに５’末端と３’末端の両方でさらに修飾された。
最初に、ＳｗａＩ制限酵素部位をポリ（Ａ）テールのすぐ下流に挿入し、ｉｎ ｖｉｔｒｏ転写の前にプラスミドバックボーンからＳＶＶ－００１ ｃＤＮＡの３’末端を遊離させ、終結のための平滑末端を提供した。プライマー対ＳＶＶ－００１６０５６およびＳＶＶ００１３ＳｗａＲｅｖと鋳型としてのｐＮＴＸ－０４を用いて、ＰＣＲ法により部位を挿入した。リバースプライマーＳＶＶ００１３ＳｗａＲｅｖは、ＳＶＶ－００１ゲノムの３’末端を表す５８ｎｔと、ＳｗａＩおよびＳｐｈＩ制限酵素部位の認識配列が含まれていた。得られたＰＣＲ断片をＢａｍＨＩとＳｐｈＩで消化し、ｐＮＴＸ０４の対応する断片を置換するために使用してｐＮＴＸ－０６を作製した。次に、ｐＮＴＸ－０６内のＴ７プロモーター転写開始部位とＳＶＶ－００１ ｃＤＮＡの５９末端との間に存在する４つの余分なヌクレオチドを、アニールしたオリゴヌクレオチド二重鎖アプローチを用いて除去した。二重鎖オリゴヌクレオチドは、ＫｐｎＩ認識部位、Ｔ７コアプロモーター配列、および３’末端にＡｐａＩ部位を持つＳＶＶ－００１の最初の１７ｎｔを含むように操作された。アニールされたオリゴヌクレオチドを使用して、ＫｐｎＩとＡｐａＩ部位を用いてｐＮＴＸ－０６の対応する部分を置換し、ｐＮＴＸ－０７を作製した。最後に、ｐＮＴＸ－０７の３Ｄポリメラーゼコード領域で観察された２ｂｐの欠失を、ＢａｍＨＩおよびＳｐｈＩ断片を、ＰＣＲによってＳＶＶ－００１ ｃＤＮＡから増幅した対応する断片と置換することによって修復し、ｐＮＴＸ－０９を作製した。
完全長ＳＶＶ００１プラスミドへのＧＦＰコード配列の挿入
ＳＶＶ－００１ ２Ａ－コード領域と２Ｂ－コード領域の間にＦ２Ａタンパク質と融合したＧＦＰコード配列を挿入するために、オーバーラップ伸長ＰＣＲが用いられた。６つのプライマーが設計され、それぞれが３つのＰＣＲ断片を増幅するオーバーラップ配列を持っていた。最初のＰＣＲ断片（ＰＣＲ ａ－ｂ）は、２Ａ配列の上流に結合したフォワードプライマーＮＩ－０３と、１８ｂｐの２Ａ配列、３ｂｐの２Ｂ配列、および１５ｂｐの５’ＧＦＰ配列を結合したリバースプライマーＮＩ－０４を用いて増幅した。２Ａ配列９ｂｐ、２Ｂ配列３ｂｐ、ＧＦＰ ５’配列２９ｂｐのフォワードプライマーＮＩ－０５と、ＧＦＰ ３’配列２１ｂｐ、Ｆ２Ａ配列４８ｂｐのリバースプライマー（ＮＩ－０６）を用いて、ＧＦＰをコードする配列を持つ第２のＰＣＲ断片（ＰＣＲ ｃ－ｄ）を増幅した。第３のＰＣＲ断片（ＰＣＲ ｅ－ｆ）は、４６ｂｐのＦ２Ａ配列と２４ｂｐの２Ｂ配列を含むフォワードプライマーＮＩ－０７と、ＳＶＶ－００１ ２Ａ配列の下流６１５ｂｐに結合するリバースプライマーＮＩ－０８を用いて増幅した。ＰＣＲ断片ａ－ｂおよびｃ－ｄをプライマーＮＩ－０３およびＮＩ－０６を用いた増幅により融合し、ＰＣＲ ａ－ｄ断片を生成した。最後に、ＰＣＲ ａ－ｄ断片とｅ－ｆ断片をプライマーＮＩ－０３とＮＩ－０８を用いた増幅により融合し、ＰＣＲ ａ－ｆ断片を生成した。ＰＣＲ ａ－ｆ断片をＮｈｅＩとＨｉｎｄＩＩＩで消化し、ｐＮＴＸ－０９の対応する部位に挿入して、Ｆ２Ａに融合したＧＦＰコード配列を含むＳＶＶ全長プラスミド、ｐＮＴＸ－１１を作製した。
ＲＮＡのｉｎ ｖｉｔｒｏ転写と感染性
ｉｎ ｖｉｔｒｏ転写されたＲＮＡの感染性は、まずｐＮＴＸ－０９をＳｗａＩで消化して、プラスミドバックボーンからＳＶＶ－００１配列の３’末端を遊離させることにより試験した。線形化したプラスミドを、Ｔ７ ＲＮＡポリメラーゼ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を用いてインビトロ転写に供した。ＳＶＶ寛容細胞におけるｉｎ ｖｉｔｒｏ転写ＲＮＡのトランスフェクションを評価するために、ＰＥＲ．Ｃ６細胞を６ウェル組織培養皿にプレーティングした。翌日、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ試薬（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いて、供給元の推奨に従ってｉｎ ｖｉｔｒｏ転写ＲＮＡ（１．５ｍｇ）を細胞にトランスフェクトした。トランスフェクション後３６時間までにウイルス産生によるＣＰＥが認められた。トランスフェクトした細胞を３回凍結融解サイクルに曝し、さらにＰＥＲ．Ｃ６細胞に感染させて溶解物中のウイルスの存在を確認した。
結果
野生型ＳＶＶ－００１の全長ゲノムをコードするｃＤＮＡをｐＧＥＭ－４Ｚ発現ベクターにクローニングした。ＧＦＰを発現する組換えレポーターウイルスを作製するために、ＧＦＰとＦ２Ａタンパク質の融合タンパク質をｐＮＴＸ－０９のＳＶＶ－００１ ２Ａ（Ｓ２Ａ）タンパク質に続いてクローニングし、図１５Ａ～Ｃに描かれているようにｐＮＴＸ－１１を得た。
Ｆ２Ａ配列はＳ２Ａ配列の繰り返しではなく、重複配列間の望ましくない組換え事象を防ぐために選択された。ＳＶＶ－ＧＦＰポリペプチドの翻訳中、リボソームはＳ２Ａ配列のＴＮＰＧＱＰでスキップし、フレーム内で続けてＳＶＶ－００１ ２Ｂ（Ｓ２Ｂ）からＮ末端プロリンを１つ追加したＧＦＰ－Ｆ２Ａ融合タンパク質を産生し、Ｆ２Ａ ＳＮＰＧＱＰ配列で２回目をスキップし、フレーム内で２回目を続けてＳＶＶ－００１ポリタンパク質の残りを翻訳する。ｐＮＴＸ－１１ を ＳｗａＩ で消化し、ｉｎ ｖｉｔｒｏ転写の鋳型とした。ＲＮＡ転写物をＰＥＲ．Ｃ６細胞の１５ｃｍディッシュ１０個にトランスフェクトした。ＧＦＰ発現プラークが観察され、精製された。プラークを精製し、増幅したＳＶＶ－ＧＦＰを用いてＳＣＬＣ Ｈ４４６細胞に感染させた。野生型ＳＶＶ－００１感染に典型的な細胞障害効果（ＣＰＥ）が観察され、明るい緑色の蛍光も観察された。個々の感染細胞は十分に明るく、フローサイトメトリーでは４ｌｏｇ以上、蛍光スキャンでは様々な大きさのプラークとして容易に検出できた。ＳＶＶ００１またはＳＶＶ－ＧＦＰに感染したＨ４４６細胞からタンパク質を抽出し、ＧＦＰ、Ｆ２Ａエピトープ、グリセルアルデヒド３リン酸デヒドロゲナーゼについてウェスタンブロッティングを行った。ＧＦＰ－Ｆ２Ａ融合タンパク質に相当する３０ｋＤａに、ＧＦＰとＦ２Ａの両方に対する強いシグナルが検出された。
上述のアプローチは、治療用導入遺伝子の組み込みにも適用できる。ＳＶＶ－ＧＦＰの作製に成功したことは、８００ｂｐまでの導入遺伝子が収容可能であることを示している。
実施例３：哺乳動物Ｔ７ポリメラーゼ細胞株（ＰｅｒＣ．６－Ｔ７＃２）の開発
武装型ＳＶＶ構築物を作製する現在のシステムには、以下の工程：（１）武装型ＳＶＶプラスミドを構築する；（２）武装型ＳＶＶプラスミドを線形化して３’末端を規定する；（３）Ｔ７ポリメラーゼを用いたｉｎ ｖｉｔｒｏ転写反応により、本物の５’末端と３’末端を持つＲＮＡ転写物を生成する；（４）ＲＮＡを標的細胞にトランスフェクトする；（５）武装型ＳＶＶウイルスを単離する、が必要である。
武装型ＳＶＶ構築物を迅速に作製する新しいシステムが考案された。この新しいシステムは、哺乳類のＴ７ポリメラーゼ細胞株（ＰｅｒＣ．６－Ｔ７＃２）によるものである。この新しいシステムには以下の工程：（１）哺乳動物細胞での発現に最適化されたＴ７ポリメラーゼプラスミドを開発する；（２）Ｔ７ポリメラーゼに最適化された哺乳動物発現プラスミドを標的細胞株にクローニングし、最適なクローン（ＰｅｒＣ．６－Ｔ７＃２）を選択する；（２）武装型ＳＶＶプラスミドを線形化する；（３）プラスミドをＴ７－ｐｏｌ細胞にトランスフェクトする；（４）武装型ＳＶＶウイルスを単離する、が必要である。
現行システムと新システムの両方を用いて、武装型ＳＶＶ構築物を設計し、武装型ＳＶＶウイルスを作製した。両システムの武装型ＳＶＶウイルスは同等に機能した。
図１６Ａおよび図１６Ｂは、新しいシステム（ＰｅｒＣ．６－Ｔ７＃２）を用いた、細胞株における武装型ＳＶＶウイルスの迅速な生成を示す。図１６ＡはＳＶＶ－ＧＦＰ（ＧＦＰを発現するように操作されたＳＶＶ）の結果を示し、図１６ＢはＳＶＶ－ｍＣｈｅｒｒｙ（ｍＣｈｅｒｒｙを発現するように操作されたＳＶＶ）の結果を示す。このデータは、現在のシステムを用いて様々なＳＶＶ構築物を作製することが可能であることを示している。
現在のシステムを用いて、ＩＬ－２、ＣＸＣＬ９、およびＩＬ－２／１５を発現する武装型ＳＶＶ構築物が作製された。図１７は、ＩＬ－２、ＣＸＣＬ９、およびＩＬ－２／１５を発現するように生成された武装型ＳＶＶのＲＴ－ＰＣＲデータを示す。ＲＴ－ＰＣＲデータは、武装型ＳＶＶが治療導入遺伝子を発現することを示す。
さらに、この新しいシステムを用いて、ＧＦＰを運搬する武装型ＳＶＶ構築物を設計した。図１８は、ＰｅｒＣ－Ｔ７ ｐｏｌ細胞における線形化ＤＮＡのトランスフェクションを示す。図１８から明らかなように、ＰｅｒＣ６－Ｔ７ ｐｏｌ細胞を用いて武装型ＳＶＶ構築物を作製することが可能である。
実施例４：ＩＬ－２とＩＬ－２／－１５による武装型ＳＶＶの試験
インターロイキン－２（ＩＬ－２）は、１９７６年に「Ｔ細胞成長因子」として報告されたもので、ＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、活性化樹状細胞など、様々な細胞種から分泌される１５．５ｋＤａの小さな単量体である。ＩＬ－２は免疫系に多面的な影響を及ぼす。ＩＬ－２は、ＣＤ４＋制御性Ｔ細胞の生成、維持、増殖において重要な役割を果たし、ＮＫ細胞およびＣＤ８＋細胞の細胞傷害活性を促進し、活性化誘導性細胞死による有害な自己反応性Ｔ細胞の排除を通じて恒常性を制御する。ＩＬ－２は、中間親和性の二量体ＣＤ１２２／ＣＤ１３２ ＩＬ－２Ｒまたは三量体ＣＤ２５／ＣＤ１２２／ＣＤ１３２から構成される高親和性ＩＬ－２受容体を介してシグナル伝達することができる。
インターロイキン－１５（ＩＬ－１５）はインターロイキン－２（ＩＬ－２）と構造的に類似したサイトカインである。ＩＬ－２のように、ＩＬ－１５はＩＬ－２／ＩＬ－１５受容体ベータ鎖（ＣＤ１２２）と共通ガンマ鎖（ＣＤ１３２）から構成される複合体に結合し、シグナルを伝達する。ＩＬ－１５は多くの細胞型と組織で構成的に発現している。このサイトカインはナチュラルキラー細胞、すなわちウイルス感染細胞を殺すことを主な役割とする自然免疫系の細胞の増殖を誘導する。ＩＬ－１５は多能性サイトカインであり、自然免疫および適応免疫において重要な役割を果たしている。ＩＬ－１５はＣＤ８＋Ｔ細胞の抗腫瘍免疫を増強することが示されている。
ＩＬ－２およびＩＬ－２／－１５を発現するように操作した武装型ＳＶＶ構築物を作製し、活性を試験した。構築物は、上記の実施例１に記載された一般的な手順を使用して作製した。
ＩＬ－２バイオアッセイ細胞は、ＩＬ－２シグナルに応答してｌｕｃ２を発現するように操作されている。ＩＬ－２がＩＬ－２バイオアッセイ細胞に結合すると、受容体は発光をもたらす細胞内シグナルを伝達する。生物発光シグナルは検出され、定量される。ＩＬ－２の非存在下では、ＩＬ－２Ｒの下流でシグナル伝達は起こらず、発光シグナルは生成されない。ＩＬ－２受容体（ＩＬ－２Ｒ）は３つのサブユニット：ＩＬ－２Ｒα（ＣＤ２５）、ＩＬ－２Ｒβ（ＣＤ１２２）およびＩＬ－２Ｒγ（ＣＤ１３２）から構成される。ＩＬ－１５はＩＬ－２Ｒβ（ＣＤ１２２）とＩＬ－２Ｒγ（ＣＤ１３２）を介してシグナルを伝達する。従って、ＩＬ－２バイオアッセイ細胞は、ＩＬ－２またはＩＬ－１５受容体を介したサイトカイン結合およびシグナル伝達を検出することができる。これらのバイオアッセイを図１９Ａおよび図１９Ｂに示す。
これらのバイオアッセイを用いて、武装型ＳＶＶ構築物の活性を評価した。この試験の結果を図２０Ａおよび図２０Ｂに示す。図２０Ａは、ＳＶＶ－ＩＬ２およびＳＶＶ－ＩＬ２／１５（Ｎｅｏｌｅｕｋｉｎ２－１５）についての活性を示す。図２０Ｂは、ＩＬ－２標準陽性対照についての活性を示す。ＳＶＶ－ＩＬ２／１５（Ｎｅｏｌｅｕｋｉｎ２－１５）タンパク質活性は、上清およびペレット中のものである。ＳＶＶ－ＩＬ－２タンパク質活性はペレットのみである。この試験により、ＳＶＶをトランスフェクションしてＩＬ－２およびＩＬ－２／１５（Ｎｅｏｌｅｕｋｉｎ２－１５）を発現させることができることが示された。
実施例５：ＣＸＣＬ９による武装型ＳＶＶの試験
ケモカイン（Ｃ－Ｘ－Ｃモチーフ）リガンド９（ＣＸＣＬ９）はＣＸＣケモカインファミリーに属する小さなサイトカインであり、ガンマインターフェロンによって誘導されるモノカイン（ＭＩＧ）としても知られている。ＣＸＣＬ９は、走化性を誘導し、白血球の分化と増殖を促進し、組織外遊走を引き起こす役割を果たすケモカインの一つである。
ＣＸＣＬ９／ＣＸＣＲ３受容体は、免疫細胞遊走、分化および活性化を制御している。抗腫瘍免疫反応は、細胞傷害性リンパ球（ＣＴＬ）、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫＴ細胞、マクロファージなどの免疫細胞の動員を通じて起こる。ＣＸＣＬ９は主にリンパ球の腫瘍部位への浸潤を媒介し、腫瘍の増殖を抑制する。
ＰｅｒＣ．６－Ｔ７＃２細胞をプラスミドｐＳＶＶ－ＣＸＣＬ９でトランスフェクトし、上清（Ｓ）とペレット溶解物（ＰＳ）を用いて新鮮なＰｅｒＣ．６細胞を感染させた。上清試料は１、２、３日目（Ｄ１～３）に採取し、ＣＸＣＬ９ ＥＬＩＳＡを用いて試験した。
この試験の結果を図２１Ａおよび図２１Ｂに示す。図２１Ａおよび図２１Ｂは、ＳＶＶ－ＣＸＣＬ９ Ｅｌｉｓａのデータを示す。図２１Ａは、ヒトＣＸＣＬ標準曲線を示す。図２１Ｂは、増幅ＳＶＶ－ＣＸＣＬ９上清中のヒトＣＸＣＬ９レベル検出を示す。上記の実施例３と同様に、この実施例は、トランスフェクション後に細胞内で機能的に発現される治療タンパク質を運ぶためにＳＶＶが武装されていることを確認する。
実施例６：追加の武装型ＳＶＶ構築物の構築
実施例１に示した一般的な手順を用いて、追加のＳＶＶ構築物を作製した。具体的には、以下のＳＶＶ武装型構築物：抗ＣＴＬＡ４ナノボディをコードする武装型ＳＶＶ；抗ＣＤ３ナノボディをコードする武装型ＳＶＶ；抗ＰＤＬ１ナノボディをコードする武装型ＳＶＶ；抗ＣＴＬＡ４＋抗ＰＤＬ１ナノボディの両方をコードする武装型ＳＶＶ；抗ＣＴＬＡ４＋抗ＣＤ３ナノボディの両方をコードする武装型ＳＶＶ；抗ＣＤ３＋抗ＰＤＬ１ナノボディの両方をコードする武装型ＳＶＶ；ＩＬ－２（バージョン２および３）をコードする武装型ＳＶＶ；ＴＧＦ－ベータドミナントネガティブＲＩＩデコイ－ＳＳ ｖ．２なしをコードする武装型ＳＶＶ；ＴＧＦ－ベータドミナントネガティブＲＩＩデコイ－デルタ ＳｅｒＭｅｔ ｖ．３をコードする武装型ＳＶＶ；シトシンデアミナーゼ（ＦＣＹ２＋３）をコードする武装型ＳＶＶ；およびＮｆｓａ ｍｕｔ ２２－７８をコードする武装型ＳＶＶ、を設計した。
これらの挿入物のタンパク質および核酸配列を以下の表２に示す。
Figure 2024503703000009
Figure 2024503703000010
Figure 2024503703000011
Figure 2024503703000012
これらの構築物を有するプラスミド（配列ＩＤ番号：５３～６４）の配列およびこれらのプラスミドのマップを図２２Ａ～３３Ｂに示す。
例示的実施形態
ここに提供されるのは、開示される技術の例示的な実施形態である。これらの実施形態は例示に過ぎず、本開示の範囲または添付の特許請求の範囲を限定するものではない。
さらなる実施形態１．改変されたセネカバレーウイルスであって、前記改変されたセネカバレーウイルスは、配列ＩＤ番号：１９のヌクレオチド１－７８９１と少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％同一である核酸が挿入されたセネカバレーウイルスまたはその腫瘍溶解性断片の配列を含む、改変されたセネカバレーウイルス。
さらなる実施形態２．武装型セネカバレーウイルスであって、前記武装型セネカバレーウイルスは、配列ＩＤ番号：１、３、５、７、９、または１１の核酸配列が挿入されたセネカバレーウイルスまたはその腫瘍溶解性断片の配列を含む、武装型セネカバレーウイルス。
さらなる実施形態３．武装型セネカバレーウイルスであって、前記武装型セネカバレーウイルスは、配列ＩＤ番号：２、４、６、８、１０、または１２のアミノ酸配列をコードする核酸が挿入されたセネカバレーウイルスまたはその腫瘍溶解性断片の配列を含む、武装型セネカバレーウイルス。
さらなる実施形態４．武装型セネカバレーウイルスであって、前記武装型セネカバレーウイルスが、配列ＩＤ番号：２、４、６、８、１０、または１２のアミノ酸配列と少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％同一のタンパク質をコードする核酸が挿入されたセネカバレーウイルスまたはその腫瘍溶解性断片の配列を含む、武装型セネカバレーウイルス。
さらなる実施形態５．武装型セネカバレーウイルスであって、前記武装型セネカバレーウイルスは、配列ＩＤ番号：１３のヌクレオチド３５０８－３８８５、配列ＩＤ番号：１４のヌクレオチド３５０５－３９０６、配列ＩＤ番号：１５のヌクレオチド３５０８－３８８２、配列ＩＤ番号：１５のヌクレオチド３５０８－４１０７、配列ＩＤ番号：１６のヌクレオチド３５０８－４１０７、配列ＩＤ番号：１７のヌクレオチド３５０８－４２６３、または配列ＩＤ番号：１８のヌクレオチド３５０８－３８６１が挿入されたセネカバレーウイルスまたはその腫瘍溶解性断片の配列を含む、武装型セネカバレーウイルス。
さらなる実施形態６．武装型セネカバレーウイルスであって、前記武装型セネカバレーウイルスは、配列ＩＤ番号：１３のヌクレオチド３５０８－３８８５、配列ＩＤ番号：１４のヌクレオチド３５０５－３９０６、配列ＩＤ番号：１５のヌクレオチド３５０８－３８８２、配列ＩＤ番号：１５のヌクレオチド３５０８－４１０７、配列ＩＤ番号：１６のヌクレオチド３５０８－４１０７、配列ＩＤ番号：１７のヌクレオチド３５０８－４２６３、または配列ＩＤ番号：１８のヌクレオチド３５０８－３８６１が挿入されたセネカバレーウイルスまたはその腫瘍溶解性断片の配列を含む、武装型セネカバレーウイルス。
さらなる実施形態７．武装型セネカバレーウイルスであって、前記武装型セネカバレーウイルスは、配列ＩＤ番号：１３のヌクレオチド１－７７６２と少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または、少なくとも９９％同一なヌクレオチド配列；配列ＩＤ番号：１４のヌクレオチド１－７７８３と少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または、少なくとも９９％同一なヌクレオチド配列；配列ＩＤ番号：１５のヌクレオチド１－７７５９と少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または、少なくとも９９％同一なヌクレオチド配列；配列ＩＤ番号：１６のヌクレオチド１－７９８４と少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または、少なくとも９９％同一なヌクレオチド配列；配列ＩＤ番号：１７のヌクレオチド１－８１４０と少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または、少なくとも９９％同一なヌクレオチド配列；または配列ＩＤ番号：１８のヌクレオチド１－７７３８と少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％同一なヌクレオチド配列を含む、武装型セネカバレーウイルス。
さらなる実施形態８．タンパク質２Ａおよび２Ｂのコード配列間のセネカバレーウイルスのゲノムに治療タンパク質をコードする核酸配列を挿入する工程によって作製される、武装型セネカバレーウイルスであって、前記治療タンパク質をコードする核酸は、配列ＩＤ番号：１、３、５、７、９、または１１の核酸；配列ＩＤ番号：１、３、５、７、９、または１１の核酸と少なくとも８５％、９５％、または９９％同一である核酸；配列ＩＤ番号：２、４、６、８、１０、または１２のアミノ酸配列をコードする核酸；または、配列ＩＤ番号：２、４、６、８、１０、または１２のアミノ酸配列と少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または９９％同一であるタンパク質をコードする核酸を含む、武装型セネカバレーウイルス。
さらなる実施形態９．さらなる実施形態８記載の武装型セネカバレーウイルスにおいて、前記セネカバレーウイルスがＳＶＶ－００１である、武装型セネカバレーウイルス。
さらなる実施形態１０．さらなる実施形態７～９記載の武装型セネカバレーウイルスであって、前記武装型セネカバレーウイルスは、配列ＩＤ番号：１３のヌクレオチド１－７７６２；配列ＩＤ番号：１４のヌクレオチド１－７７８３；配列ＩＤ番号：１５のヌクレオチド１－７７５９；配列ＩＤ番号：１６のヌクレオチド１－７９８４；配列ＩＤ番号：１７のヌクレオチド１－８１４０；または、配列ＩＤ番号：１８のヌクレオチド１－７７３８を含む、武装型セネカバレーウイルス。
さらなる実施形態１１．さらなる実施形態１～１０のいずれか１つに記載の武装型セネカバレーウイルスであって、前記武装型セネカバレーウイルスは腫瘍溶解性であり、前記武装型セネカバレーウイルスは、がんを治療することができる治療薬またはその機能的断片を発現する、武装型セネカバレーウイルス。
さらなる実施形態１２．さらなる実施形態１～１１のいずれか１つに記載の武装型セネカバレーウイルスを含むベクター。
さらなる実施形態１３．配列ＩＤ番号：１３～１８または５３～６４の核酸配列を含むプラスミド。
さらなる実施形態１４．配列ＩＤ番号：１３～１８または５３～６４の核酸配列と少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または少なくとも９９％同一な核酸を含むプラスミド。
さらなる実施形態１５．配列ＩＤ番号：１３～１８または５３～６４の核酸配列のいずれか１つのヌクレオチド６７７－８０５０と少なくとも８５％または少なくとも９０％同一な核酸を含む、プラスミド。
さらなる実施形態１６．セネカバレーウイルスに、配列ＩＤ番号：１、３、５、７、９、もしくは１１の核酸、または配列ＩＤ番号：２、４、６、８、１０、もしくは１２のアミノ酸配列をコードする核酸を挿入する工程を含む、武装型セネカバレーウイルスを生成する方法。
さらなる実施形態１７．核酸をセネカバレーウイルスに挿入する工程を含む、武装型セネカバレーウイルスを生成する方法であって、前記核酸は、配列ＩＤ番号：１３のヌクレオチド１－７７６２；配列ＩＤ番号：１４のヌクレオチド１－７７８３；配列ＩＤ番号：１５のヌクレオチド１－７７５９；配列ＩＤ番号：１６のヌクレオチド１－７９８４；配列ＩＤ番号：１７のヌクレオチド１－８１４０；または配列ＩＤ番号：１８のヌクレオチド１－７７３８と、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％同一である、方法。
さらなる実施形態１８．さらなる実施形態１６または１７に記載の方法において、前記核酸は、タンパク質２Ａおよび２Ｂのコード配列の間のセネカバレーウイルスのゲノムに挿入される、方法。
さらなる実施形態１９．さらなる実施形態１６～１８のいずれか１つに記載の方法において、前記セネカバレーウイルスがＳＶＶ－００１である、方法。
さらなる実施形態２０．さらなる実施形態１６～１９のいずれか１つに記載の方法において、前記武装型セネカバレーウイルスは腫瘍溶解性であり、前記武装型セネカバレーウイルスは、がんを治療することができる治療薬またはその機能的断片を発現する、方法。
さらなる実施形態２１．それを必要とする対象においてがんを治療する方法であって、前記方法は、さらなる実施形態１～１１のいずれか１つに記載の武装型セネカバレーウイルスの有効量を前記対象に投与する工程を含む、方法。
さらなる実施形態２２．さらなる実施形態２１記載の方法において、前記対象は、チェックポイント阻害剤、ＰＤ－１阻害剤、ＰＤ－Ｌ１阻害剤、ＣＴＬＡ－４阻害剤、サイトカイン、成長因子、光増感剤、毒素、ｓｉＲＮＡ分子、シグナル伝達調節剤、抗がん抗生物質、抗がん抗体、血管新生阻害剤、化学療法化合物、抗転移性化合物、免疫療法化合物、ＣＡＲ療法、樹状細胞ベースの療法、がんワクチン、腫瘍溶解性ウイルス、ＩＦＮ－Ｉ阻害剤、人工抗がんウイルスまたはウイルス誘導体、およびそれらの組み合わせからなる群より選択される少なくとも１つの抗がん治療剤を投与される、方法。
さらなる実施形態２３．さらなる実施形態２１または２２記載の方法において、少なくとも１つの抗がん治療剤が、前記武装型セネカバレーウイルスを投与する工程の前、同時または後に投与される、方法。
さらなる実施形態２４．さらなる実施形態２１～２３のいずれか１つに記載の方法において、前記対象は、ＨＤＡＣ阻害剤、ＪＡＫ／ＳＴＡＴ阻害剤、ＩＦＮ阻害剤、ＩＦＮ抗体、ＩＦＮ－α受容体１抗体、ＩＦＮ－α受容体２抗体およびウイルスペプチド、ならびにそれらの組み合わせからなる群から選択される少なくとも１つの追加のＩＦＮ－Ｉ阻害剤をさらに投与される、方法。
さらなる実施形態２５．さらなる実施形態２４記載の方法において、前記ＨＤＡＣ阻害剤がトリコスタチンＡである、方法。
さらなる実施形態２６．さらなる実施形態２４記載の方法において、前記ＪＡＫ／ＳＴＡＴ阻害剤がスタウロスポリンである、方法。
さらなる実施形態２７．さらなる実施形態２１～２６のいずれか１つに記載の方法において、前記がんは、トリプルネガティブ乳がん、小細胞肺がん、非小細胞肺がん、非小細胞扁平上皮がん、腺がん、神経膠芽腫、皮膚がん、肝細胞がん、結腸がん、子宮頸がん、卵巣がん、子宮内膜がん、神経内分泌がん、膵臓がん、甲状腺がん、腎臓がん、骨がん、食道がん、または軟部組織がんを含む、方法。
さらなる実施形態２８．さらなる実施形態２１～２２７のいずれか１つに記載の方法において、前記がん治療の成功が、武装していないセネカバレーウイルスを用いた治療と比較して改善される、方法。
さらなる実施形態２９．それを必要とする対象においてがんを治療するための医薬組成物であって、前記医薬組成物は、さらなる実施形態１～９のいずれか１つに記載の武装型セネカバレーウイルスと、薬学的に許容される担体とを含む、医薬組成物。
さらなる実施形態３０．さらなる実施形態２９記載の医薬組成物であって、前記組成物は、チェックポイント阻害剤、ＰＤ－１阻害剤、ＰＤ－Ｌ１阻害剤、ＣＴＬＡ－４阻害剤、サイトカイン、成長因子、光増感剤、毒素、ｓｉＲＮＡ分子、シグナル伝達調節剤、抗がん抗生物質、抗がん抗体、血管新生阻害剤、化学療法化合物、抗転移性化合物、免疫療法化合物、ＣＡＲ療法、樹状細胞ベースの療法、がんワクチン、腫瘍溶解性ウイルス、ＩＦＮ－Ｉ阻害剤、人工抗がんウイルスまたはウイルス誘導体、およびそれらの組み合わせを含む、医薬組成物。
さらなる実施形態３１．さらなる実施形態２９または３０に記載の医薬組成物において、前記がんは、トリプルネガティブ乳がん、小細胞肺がん、非小細胞肺がん、非小細胞扁平上皮がん、腺がん、神経膠芽腫、皮膚がん、肝細胞がん、結腸がん、子宮頸がん、卵巣がん、子宮内膜がん、神経内分泌がん、膵臓がん、甲状腺がん、腎臓がん、骨がん、食道がん、または軟部組織がんを含む、医薬組成物。
さらなる実施形態３２．がんを治療するための薬物の製造において使用するための、さらなる実施形態１～１１のいずれか１つに記載の武装型セネカバレーウイルス。
さらなる実施形態３３．がんを治療するための、さらなる実施形態１～１１のいずれか１つに記載の武装型セネカバレーウイルスの使用。
さらなる実施形態３４．さらなる実施形態３２または３３記載の使用において、前記がんは、トリプルネガティブ乳がん、小細胞肺がん、非小細胞肺がん、非小細胞扁平上皮がん、腺がん、神経膠芽腫、皮膚がん、肝細胞がん、結腸がん、子宮頸がん、卵巣がん、子宮内膜がん、神経内分泌がん、膵臓がん、甲状腺がん、腎臓がん、骨がん、食道がん、または軟部組織がんを含む、使用。
さらなる実施形態３５．さらなる実施形態１～１のいずれか１つに記載の武装型セネカバレーウイルス、さらなる実施形態１０もしくは１１記載のベクター、またはさらなる実施形態１１～１３のいずれか１つに記載のプラスミドであって、前記核酸がＲＮＡである、武装型セネカバレーウイルス。
さらなる実施形態３６．配列ＩＤ番号：１９のヌクレオチド１－７８９１を含む、改変されたセネカバレーウイルス。
さらなる実施形態３７．タンパク質２Ａおよび２Ｂのコード配列間のセネカバレーウイルスのゲノムに核酸配列を挿入する工程によって作製される、改変されたセネカバレーウイルスであって、前記核酸配列は、配列ＩＤ番号：１９のヌクレオチド３５０８－４０１４；または配列ＩＤ番号：１９のヌクレオチド３５０８－４０１４と少なくとも８５％、少なくとも９５％、もしくは少なくとも９９％同一である核酸配列を含む、改変されたセネカバレーウイルス。
さらなる実施形態３８．配列ＩＤ番号：１９のヌクレオチド１－７８９１を含む、ベクターまたはプラスミド。
代替実施形態１．改変されたセネカバレーウイルスであって、前記改変されたセネカバレーウイルスは、配列ＩＤ番号：１９のヌクレオチド１－７８９１と少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％同一である核酸が挿入されたセネカバレーウイルスまたはその腫瘍溶解性断片の配列を含む、改変されたセネカバレーウイルス。
代替実施形態２．実施形態１記載の改変セネカバレーウイルスをコードするベクターまたはプラスミド。
代替実施形態３．配列ＩＤ番号：１９、または配列ＩＤ番号：１９のヌクレオチド１－７８９１と少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一であるヌクレオチドを含むプラスミド。
代替実施形態４：改変されたセネカバレーウイルスであって、前記改変されたウイルスは腫瘍溶解性であり、ｏｖａおよびＣｏｖｉｄエピトープを発現する、改変されたセネカバレーウイルス。
代替実施形態４．核酸をセネカバレーウイルスに挿入する工程を含む、改変されたセネカバレーウイルスを生成する方法であって、前記核酸は、配列ＩＤ番号：１９のヌクレオチド１－７８９１と少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％同一である、方法。
追加の実施形態１．武装型セネカバレーウイルスであって、前記武装型セネカバレーウイルスは、セネカバレーウイルスまたはその腫瘍溶解性断片と、目的の治療タンパク質をコードする核酸とを含む、武装型セネカバレーウイルス。
追加の実施形態２．追加の実施形態１記載の武装型セネカバレーウイルスにおいて、前記目的のタンパク質は、インターロイキン、ケモカイン、またはチェックポイント阻害剤として作用するナノボディを含む、武装型セネカバレーウイルス。
追加の実施形態３．追加の実施形態２記載の武装型セネカバレーウイルスにおいて、前記目的の治療タンパク質は、抗ＰＤ－Ｌ１ナノボディ、ＩＬ－２またはその変異体、ＣＸＣＬ９、ＩＬ－１５、ＩＬ－２／ＩＬ－１５（Ｎｅｏｌｅｕｋｉｎ２－１５）、ＴＧＦ－βデコイまたはその変異体、ＮｆｓＡまたはその変異体、抗ＣＴＬＡ４ナノボディ、抗ＣＤ３ナノボディ、抗ＣＴＬＡ－４＋抗ＰＤＬＩ－１ナノボディ、抗ＣＬＴＡ４＋抗ＰＬＤ－１ナノボディ、またはシトシンデアミナーゼを含む、武装型セネカバレーウイルス。
追加の実施形態４．追加の実施形態１～３のいずれか１つに記載の武装型セネカバレーウイルスにおいて、前記目的の治療タンパク質は、ＩＬ－２、ＣＸＣＬ－９、またはＩＬ－２／ＩＬ－１５を含む、武装型セネカバレーウイルス。
追加の実施形態５．追加の実施形態１～４のいずれか１つに記載の武装型セネカバレーウイルスであって、前記武装型セネカバレーウイルスは、目的の治療タンパク質をコードする核酸が挿入されたセネカバレーウイルスまたはその腫瘍溶解性断片を含む、武装型セネカバレーウイルス。
追加の実施形態６．追加の実施形態５記載の武装型セネカバレーウイルスであって、前記武装型セネカバレーウイルスは、配列ＩＤ番号：１、３、５、７、９、１１、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、または５１の核酸配列が挿入されたセネカバレーウイルスまたはその腫瘍溶解性断片の配列を含む、武装型セネカバレーウイルス。
追加の実施形態７．追加の実施形態５記載の武装型セネカバレーウイルスであって、前記武装型セネカバレーウイルスは、配列ＩＤ番号：２、４、６、８、１０、１２、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０、または５２のアミノ酸配列をコードする核酸が挿入されたセネカバレーウイルスまたはその腫瘍溶解性断片の配列を含む、武装型セネカバレーウイルス。
追加の実施形態８．追加の実施形態５記載の武装型セネカバレーウイルスであって、前記武装型セネカバレーウイルスは、配列ＩＤ番号：２、４、６、８、１０、１２、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０、または５２のアミノ酸配列と少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または９９％同一のタンパク質をコードする核酸が挿入されたセネカバレーウイルスまたはその腫瘍溶解性断片の配列を含む、武装型セネカバレーウイルス。
追加の実施形態９．追加の実施形態５記載の武装型セネカバレーウイルスであって、前記武装型セネカバレーウイルスは、配列ＩＤ番号：１３のヌクレオチド３５０８－３８８５、配列ＩＤ番号：１４のヌクレオチド３５０５－３９０６、配列ＩＤ番号：１５のヌクレオチド３５０８－３８８２、配列ＩＤ番号：１５のヌクレオチド３５０８－４１０７、配列ＩＤ番号：１６のヌクレオチド３５０８－４１０７、配列ＩＤ番号：１７のヌクレオチド３５０８－４２６３、または配列ＩＤ番号：１８のヌクレオチド３５０８－３８６１が挿入されたセネカバレーウイルスまたはその腫瘍溶解性断片の配列を含む、武装型セネカバレーウイルス。
追加の実施形態１０．追加の実施形態５記載の武装型セネカバレーウイルスであって、前記武装型セネカバレーウイルスは、配列ＩＤ番号：１３のヌクレオチド３５０８－３８８５、配列ＩＤ番号：１４のヌクレオチド３５０５－３９０６、配列ＩＤ番号：１５のヌクレオチド３５０８－３８８２、配列ＩＤ番号：１５のヌクレオチド３５０８－４１０７、配列ＩＤ番号：１６のヌクレオチド３５０８－４１０７、配列ＩＤ番号：１７のヌクレオチド３５０８－４２６３、または配列ＩＤ番号：１８のヌクレオチド３５０８－３８６１が挿入されたセネカバレーウイルスまたはその腫瘍溶解性断片の配列を含む、武装型セネカバレーウイルス。
追加の実施形態１１．追加の実施形態５記載の武装型セネカバレーウイルスであって、前記武装型セネカバレーウイルスは、（ａ）配列ＩＤ番号：１３のヌクレオチド１－７７６２と少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％同一なヌクレオチド配列；（ｂ）配列ＩＤ番号：１４のヌクレオチド１－７７８３と少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％同一なヌクレオチド配列；（ｃ）配列ＩＤ番号：１５のヌクレオチド１－７７５９と少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％同一なヌクレオチド配列；（ｄ）配列ＩＤ番号：１６のヌクレオチド１－７９８４と少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％同一なヌクレオチド配列；（ｅ）配列ＩＤ番号：１７のヌクレオチド１－８１４０と少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％同一なヌクレオチド配列；または、（ｆ）配列ＩＤ番号：１８のヌクレオチド１－７７３８と少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％同一なヌクレオチド配列を含む、武装型セネカバレーウイルス。
追加の実施形態１２．追加の実施形態５記載の武装型セネカバレーウイルスであって、前記武装型セネカバレーウイルスは、タンパク質２Ａおよび２Ｂのコード配列間のセネカバレーウイルスのゲノムに治療タンパク質をコードする核酸配列を挿入する工程によって作製されるものであり、前記治療タンパク質をコードする核酸は、（ａ）配列ＩＤ番号：１、３、５、７、９、１１、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、または５１の核酸；（ｂ）配列ＩＤ番号：１、３、５、７、９、１１、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、または５１の核酸と少なくとも８５％、９５％または９９％同一である核酸；（ｃ）配列ＩＤ番号：２、４、６、８、１０、１２、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０、または５２のアミノ酸配列をコードする核酸；または（ｄ）配列ＩＤ番号：２、４、６、８、１０、１２、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０、または５２のアミノ酸配列と少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または９９％同一のタンパク質をコードする核酸、を含む、武装型セネカバレーウイルス。
追加の実施形態１３．追加の実施形態１～１２のいずれか１つに記載の武装型セネカバレーウイルスにおいて、前記セネカバレーウイルスがＳＶＶ－００１である、武装型セネカバレーウイルス。
追加の実施形態１４．追加の実施形態１３記載の武装型セネカバレーウイルスであって、前記武装型セネカバレーウイルスは、（ａ）配列ＩＤ番号：１３のヌクレオチド１－７７６２；（ｂ）配列ＩＤ番号：１４のヌクレオチド１－７７８３；（ｃ）配列ＩＤ番号：１５のヌクレオチド１－７７５９；（ｄ）配列ＩＤ番号：１６のヌクレオチド１－７９８４；（ｅ）配列ＩＤ番号：１７のヌクレオチド１－８１４０；または、（ｆ）配列ＩＤ番号：１８のヌクレオチド１－７７３８を含む、武装型セネカバレーウイルス。
追加の実施形態１５．武装型セネカバレーウイルスであって、前記武装型セネカバレーウイルスは、配列ＩＤ番号：１９のヌクレオチド１－７８９１と少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％同一である核酸が挿入されたセネカバレーウイルスまたはその腫瘍溶解性断片の配列を含む、武装型セネカバレーウイルス。
追加の実施形態１６．追加の実施形態１～１５のいずれか１つに記載の武装型セネカバレーウイルスであって、前記武装型セネカバレーウイルスは腫瘍溶解性であり、前記武装型セネカバレーウイルスは、がんを治療することができる治療薬またはその機能的断片を発現する、武装型セネカバレーウイルス。
追加の実施形態１７．追加の実施形態１～１６のいずれか１つに記載の武装型セネカバレーウイルスを含むベクター。
追加の実施形態１８．追加の実施形態１～１６のいずれか１つに記載の武装型セネカバレーウイルスを含むプラスミド。
追加の実施形態１９．追加の実施形態１８記載のプラスミドにおいて、前記プラスミドは、配列ＩＤ番号：１３～１８または５３～６４の核酸配列を含む、プラスミド。
追加の実施形態２０．追加の実施形態１８記載のプラスミドにおいて、前記プラスミドは、配列ＩＤ番号：１３～１８または５３～６４の核酸配列と少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または少なくとも９９％同一である核酸を含む、プラスミド。
追加の実施形態２１．追加の実施形態１８記載のプラスミドであって、前記プラスミドは、配列ＩＤ番号：１３～１８または５３～６４の核酸配列のいずれか１つのヌクレオチド６７７－８０５０と少なくとも８５％または少なくとも９０％同一な核酸を含む、プラスミド。
追加の実施形態２２．目的の治療タンパク質をコードする核酸をセネカバレーウイルスまたはその腫瘍溶解性断片に挿入する工程を含む、武装型セネカバレーウイルスを生成する方法。
追加の実施形態２３．追加の実施形態２２記載の方法において、前記目的のタンパク質は、インターロイキン、ケモカイン、またはチェックポイント阻害剤として作用するナノボディを含む、方法。
追加の実施形態２４．追加の実施形態２３記載の方法において、前記目的の治療タンパク質は、抗ＰＤ－Ｌ１ナノボディ、ＩＬ－２、ＣＸＣＬ９、ＩＬ－１５、ＩＬ－２／ＩＬ－１５、ＴＧＦ－βデコイ、ＮｆｓＡを含む、方法。
追加の実施形態２５．追加の実施形態２２～２４のいずれか１つに記載の方法において、前記目的の治療タンパク質はＩＬ－２、ＣＸＣＬ－９、またはＩＬ－２／ＩＬ－１５を含む、方法。
追加の実施形態２６．追加の実施形態２２～２６のいずれか１つに記載の方法であって、前記方法は、セネカバレーウイルスまたはその腫瘍溶解性断片と、目的の治療タンパク質をコードする核酸とを含むプラスミドを構築する工程と、プラスミドを線形化して３’末端を規定する工程と、Ｔ７ポリメラーゼを用いたｉｎ ｖｉｔｒｏ転写反応により、真正な５’末端および３’末端を有するＲＮＡ転写物を生成する工程と、前記ＲＮＡ転写物を標的細胞にトランスフェクトする工程と；および武装型ＳＶＶウイルスを単離する工程とを含む、方法。
追加の実施形態２７．追加の実施形態２２～２７のいずれか１つに記載の方法であって、前記方法は、Ｔ７ポリメラーゼ最適化哺乳動物発現プラスミドを標的細胞にクローニングする工程と、セネカバレーウイルスまたはその腫瘍溶解性断片と、目的の治療タンパク質をコードする核酸とを含む線形化武装型ＳＶＶプラスミドを提供する工程と；前記武装型ＳＶＶプラスミドをＴ７－ｐｏｌ標的細胞にトランスフェクトする工程と；および前記武装型セネカバレーウイルスを単離する工程とを含む、方法。
追加の実施形態２８．追加の実施形態２７記載の方法において、前記セネカバレーウイルスまたはその腫瘍溶解性断片と、目的の治療タンパク質をコードする核酸とを含むプラスミドを構築する工程をさらに含む、方法。
追加の実施形態２９．追加の実施形態２８記載の方法であって、前記方法は、線形化武装型ＳＶＶプラスミドを生成する工程をさらに含む、方法。
追加の実施形態３０．追加の実施形態２２～２９のいずれか１つに記載の方法において、前記核酸は、タンパク質２Ａおよび２Ｂのコード配列の間のセネカバレーウイルスのゲノムに挿入される、方法。
追加の実施形態３１．追加の実施形態２２～３０のいずれか１つに記載の方法において、前記セネカバレーウイルスがＳＶＶ－００１である、方法。
追加の実施形態３２．追加の実施形態２２～３１のいずれか１つに記載の方法において、前記武装型セネカバレーウイルスは腫瘍溶解性であり、前記武装型セネカバレーウイルスは、がんを治療することができる治療薬またはその機能的断片を発現する、方法。
追加の実施形態３３．追加の実施形態２２～３２のいずれか１つに記載の方法であって、前記方法は、配列ＩＤ番号：１、３、５、７、９、１１、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、もしくは５１の核酸、または、配列ＩＤ番号：２、４、６、８、１０、１２、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０、もしくは５２のアミノ酸配列をコードする核酸を、セネカバレーウイルスまたはその腫瘍溶解性断片に挿入する工程を含む、方法。
追加の実施形態３４．追加の実施形態２２～３２のいずれか１つに記載の方法であって、前記方法は、セネカバレーウイルスまたはその腫瘍溶解性断片に核酸を挿入する工程を含み、前記核酸は、配列ＩＤ番号：１３のヌクレオチド１－７７６２、配列ＩＤ番号：１４のヌクレオチド１－７７８３、配列ＩＤ番号：１５のヌクレオチド１－７７５９、配列ＩＤ番号：１６のヌクレオチド１－７９８４、配列ＩＤ番号：１７のヌクレオチド１－８１４０、または、配列ＩＤ番号：１８のヌクレオチド１－７７３８と少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％同一である、方法。
追加の実施形態３５．それを必要とする対象においてがんを治療する方法であって、前記方法は、追加の実施形態１～１６のいずれか１つに記載の武装型セネカバレーウイルスの有効量を前記対象に投与する工程を含む、方法。
追加の実施形態３６．追加の実施形態３５記載の方法において、前記対象は、チェックポイント阻害剤、ＰＤ－１阻害剤、ＰＤ－Ｌ１阻害剤、ＣＴＬＡ－４阻害剤、サイトカイン、成長因子、光増感剤、毒素、ｓｉＲＮＡ分子、シグナル伝達調節剤、抗がん抗生物質、抗がん抗体、血管新生阻害剤、化学療法化合物、抗転移性化合物、免疫療法化合物、ＣＡＲ療法、樹状細胞ベースの療法、がんワクチン、腫瘍溶解性ウイルス、ＩＦＮ－Ｉ阻害剤、人工抗がんウイルスまたはウイルス誘導体、およびそれらの組み合わせからなる群より選択される少なくとも１つの抗がん治療剤を投与される、方法。
追加の実施形態３７．追加の実施形態３５または３６記載の方法において、少なくとも１つの抗がん治療剤が、前記武装型セネカバレーウイルスを投与する工程の前、同時または後に投与される、方法。
追加の実施形態３８．追加の実施形態３５～３７のいずれか１つに記載の方法において、前記対象は、ＨＤＡＣ阻害剤、ＪＡＫ／ＳＴＡＴ阻害剤、ＩＦＮ阻害剤、ＩＦＮ抗体、ＩＦＮ－α受容体１抗体、ＩＦＮ－α受容体２抗体およびウイルスペプチド、ならびにそれらの組み合わせからなる群から選択される少なくとも１つの追加のＩＦＮ－Ｉ阻害剤をさらに投与される、方法。
追加の実施形態３９．追加の実施形態３５～３８のいずれか１つに記載の方法において、前記ＨＤＡＣ阻害剤がトリコスタチンＡである、方法。
追加の実施形態４０．追加の実施形態３５～３８のいずれか１つに記載の方法において、前記ＪＡＫ／ＳＴＡＴ阻害剤がスタウロスポリンである、方法。
追加の実施形態４１．追加の実施形態３５～４０のいずれか１つに記載の方法において、前記がんは、トリプルネガティブ乳がん、小細胞肺がん、非小細胞肺がん、非小細胞扁平上皮がん、腺がん、神経膠芽腫、皮膚がん、肝細胞がん、結腸がん、子宮頸がん、卵巣がん、子宮内膜がん、神経内分泌がん、膵臓がん、甲状腺がん、腎臓がん、骨がん、食道がん、または軟部組織がんを含む、方法。
追加の実施形態４２．追加の実施形態３５～４１のいずれか１つに記載の方法において、前記がん治療の成功が、武装していないセネカバレーウイルスを用いた治療と比較して改善される、方法。
追加の実施形態４３．それを必要とする対象においてがんを治療するための医薬組成物であって、追加の実施形態１～１０のいずれか１つに記載の武装型セネカバレーウイルスおよび薬学的に許容される担体を含む、医薬組成物。
追加の実施形態４４．追加の実施形態４３記載の医薬組成物であって、前記組成物は、チェックポイント阻害剤、ＰＤ－１阻害剤、ＰＤ－Ｌ１阻害剤、ＣＴＬＡ－４阻害剤、サイトカイン、成長因子、光増感剤、毒素、ｓｉＲＮＡ分子、シグナル伝達調節剤、抗がん抗生物質、抗がん抗体、血管新生阻害剤、化学療法化合物、抗転移性化合物、免疫療法化合物、ＣＡＲ療法、樹状細胞ベースの療法、がんワクチン、腫瘍溶解性ウイルス、ＩＦＮ－Ｉ阻害剤、人工抗がんウイルスまたはウイルス誘導体、およびそれらの組み合わせを含む、医薬組成物。
追加の実施形態４５．追加の実施形態４３記載の医薬組成物において、前記がんは、トリプルネガティブ乳がん、小細胞肺がん、非小細胞肺がん、非小細胞扁平上皮がん、腺がん、神経膠芽腫、皮膚がん、肝細胞がん、結腸がん、子宮頸がん、卵巣がん、子宮内膜がん、神経内分泌がん、膵臓がん、甲状腺がん、腎臓がん、骨がん、食道がん、または軟部組織がんを含む、医薬組成物。
追加の実施形態４６．がんを治療するための薬物の製造において使用するための、追加の実施形態１～１６のいずれか１つに記載の武装型セネカバレーウイルス。
追加の実施形態４７．追加の実施形態４６記載の使用において、前記がんは、トリプルネガティブ乳がん、小細胞肺がん、非小細胞肺がん、非小細胞扁平上皮がん、腺がん、神経膠芽腫、皮膚がん、肝細胞がん、結腸がん、子宮頸がん、卵巣がん、子宮内膜がん、神経内分泌がん、膵臓がん、甲状腺がん、腎臓がん、骨がん、食道がん、または軟部組織がんを含む、使用。
追加の実施形態４８．がんを治療するための、追加の実施形態１～１０のいずれか１つに記載の武装型セネカバレーウイルスの使用。
追加の実施形態４９．追加の実施形態４８記載の使用において、前記がんは、トリプルネガティブ乳がん、小細胞肺がん、非小細胞肺がん、非小細胞扁平上皮がん、腺がん、神経膠芽腫、皮膚がん、肝細胞がん、結腸がん、子宮頸がん、卵巣がん、子宮内膜がん、神経内分泌がん、膵臓がん、甲状腺がん、腎臓がん、骨がん、食道がん、または軟部組織がんを含む、使用。
追加の実施形態５０．配列ＩＤ番号：１９のヌクレオチド１－７８９１を含む、武装型セネカバレーウイルス。
追加の実施形態５１．タンパク質２Ａおよび２Ｂのコード配列間のセネカバレーウイルスのゲノムに核酸配列を挿入する工程によって作製される、武装型セネカバレーウイルスであって、前記核酸配列は、配列ＩＤ番号：１９のヌクレオチド３５０８－４０１４を含む核酸配列、または、配列ＩＤ番号：１９のヌクレオチド３５０８－４０１４と少なくとも８５％、少なくとも９５％、もしくは少なくとも９９％同一である核酸配列を含む、武装型セネカバレーウイルス。
追加の実施形態５２．配列ＩＤ番号：１９のヌクレオチド１－７８９１を含む、ベクターまたはプラスミド。
本開示をその好ましい具体的な実施形態と併せて説明してきたが、前述の説明およびそれに続く実施例は、本開示の範囲を説明するためのものであり、限定するものではないことを理解されたい。当業者には、本開示の範囲を逸脱することなく、様々な変更を加えることができ、等価物を代用することができ、さらに、本開示が関係する当業者には、他の態様、利点、および修正が明らかであることが理解されよう。本明細書に記載される実施形態に加えて、本開示は、本明細書に引用される開示の特徴および本開示の特徴を補完する引用される先行技術文献の特徴の組み合わせから生じる発明を企図し、特許請求する。同様に、任意の記載された材料、特徴、または物品は、任意の他の材料、特徴、または物品と組み合わせて使用され得、そのような組み合わせは、本開示の範囲内とみなされることが理解されるであろう。
本明細書に引用または記載された各特許、特許出願、および刊行物の開示は、あらゆる目的のために、それぞれその全体が参照により本明細書に組み込まれる。

Claims (52)

  1. 武装型セネカバレーウイルスであって、前記武装型セネカバレーウイルスは、セネカバレーウイルスまたはその腫瘍溶解性断片と、目的の治療タンパク質をコードする核酸とを含む、武装型セネカバレーウイルス。
  2. 請求項１記載の武装型セネカバレーウイルスにおいて、前記目的のタンパク質は、インターロイキン、ケモカイン、またはチェックポイント阻害剤として作用するナノボディを含む、武装型セネカバレーウイルス。
  3. 請求項２記載の武装型セネカバレーウイルスにおいて、前記目的の治療タンパク質は、抗ＰＤ－Ｌ１ナノボディ、ＩＬ－２またはその変異体、ＣＸＣＬ９、ＩＬ－１５、ＩＬ－２／ＩＬ－１５（Ｎｅｏｌｅｕｋｉｎ２－１５）、ＴＧＦ－βデコイまたはその変異体、ＮｆｓＡまたはその変異体、抗ＣＴＬＡ４ナノボディ、抗ＣＤ３ナノボディ、抗ＣＴＬＡ－４＋抗ＰＤＬＩ－１ナノボディ、抗ＣＬＴＡ４＋抗ＰＬＤ－１ナノボディ、またはシトシンデアミナーゼを含む、武装型セネカバレーウイルス。
  4. 請求項３記載の武装型セネカバレーウイルスにおいて、前記目的の治療タンパク質は、ＩＬ－２、ＣＸＣＬ－９、またはＩＬ－２／ＩＬ－１５を含む、武装型セネカバレーウイルス。
  5. 請求項１記載の武装型セネカバレーウイルスであって、前記武装型セネカバレーウイルスは、目的の治療タンパク質をコードする核酸が挿入されたセネカバレーウイルスまたはその腫瘍溶解性断片を含む、武装型セネカバレーウイルス。
  6. 請求項５記載の武装型セネカバレーウイルスであって、前記武装型セネカバレーウイルスは、配列ＩＤ番号：１、３、５、７、９、１１、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、または５１の核酸配列が挿入されたセネカバレーウイルスまたはその腫瘍溶解性断片の配列を含む、武装型セネカバレーウイルス。
  7. 請求項５記載の武装型セネカバレーウイルスであって、前記武装型セネカバレーウイルスは、配列ＩＤ番号：２、４、６、８、１０、１２、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０、または５２のアミノ酸配列をコードする核酸が挿入されたセネカバレーウイルスまたはその腫瘍溶解性断片の配列を含む、武装型セネカバレーウイルス。
  8. 請求項５記載の武装型セネカバレーウイルスであって、前記武装型セネカバレーウイルスは、配列ＩＤ番号：２、４、６、８、１０、１２、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０、または５２のアミノ酸配列と少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または９９％同一のタンパク質をコードする核酸が挿入されたセネカバレーウイルスまたはその腫瘍溶解性断片の配列を含む、武装型セネカバレーウイルス。
  9. 請求項５記載の武装型セネカバレーウイルスであって、前記武装型セネカバレーウイルスは、配列ＩＤ番号：１３のヌクレオチド３５０８－３８８５、配列ＩＤ番号：１４のヌクレオチド３５０５－３９０６、配列ＩＤ番号：１５のヌクレオチド３５０８－３８８２、配列ＩＤ番号：１５のヌクレオチド３５０８－４１０７、配列ＩＤ番号：１６のヌクレオチド３５０８－４１０７、配列ＩＤ番号：１７のヌクレオチド３５０８－４２６３、または配列ＩＤ番号：１８のヌクレオチド３５０８－３８６１が挿入されたセネカバレーウイルスまたはその腫瘍溶解性断片の配列を含む、武装型セネカバレーウイルス。
  10. 請求項５記載の武装型セネカバレーウイルスであって、前記武装型セネカバレーウイルスは、配列ＩＤ番号：１３のヌクレオチド３５０８－３８８５、配列ＩＤ番号：１４のヌクレオチド３５０５－３９０６、配列ＩＤ番号：１５のヌクレオチド３５０８－３８８２、配列ＩＤ番号：１５のヌクレオチド３５０８－４１０７、配列ＩＤ番号：１６のヌクレオチド３５０８－４１０７、配列ＩＤ番号：１７のヌクレオチド３５０８－４２６３、または配列ＩＤ番号：１８のヌクレオチド３５０８－３８６１が挿入されたセネカバレーウイルスまたはその腫瘍溶解性断片の配列を含む、武装型セネカバレーウイルス。
  11. 請求項５記載の武装型セネカバレーウイルスであって、前記武装型セネカバレーウイルスは、
    （ａ）配列ＩＤ番号：１３のヌクレオチド１－７７６２と少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％同一なヌクレオチド配列；
    （ｂ）配列ＩＤ番号：１４のヌクレオチド１－７７８３と少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％同一なヌクレオチド配列；
    （ｃ）配列ＩＤ番号：１５のヌクレオチド１－７７５９と少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％同一なヌクレオチド配列；
    （ｄ）配列ＩＤ番号：１６のヌクレオチド１－７９８４と少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％同一なヌクレオチド配列；
    （ｅ）配列ＩＤ番号：１７のヌクレオチド１－８１４０と少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％同一なヌクレオチド配列；または、
    （ｆ）配列ＩＤ番号：１８のヌクレオチド１－７７３８と少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％同一なヌクレオチド配列、
    を含む、武装型セネカバレーウイルス。
  12. 請求項５記載の武装型セネカバレーウイルスであって、前記武装型セネカバレーウイルスは、タンパク質２Ａおよび２Ｂのコード配列間のセネカバレーウイルスのゲノムに治療タンパク質をコードする核酸配列を挿入する工程によって作製されるものであり、前記治療タンパク質をコードする核酸は、
    （ａ）配列ＩＤ番号：１、３、５、７、９、１１、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、または５１の核酸；
    （ｂ）配列ＩＤ番号：１、３、５、７、９、１１、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、または５１の核酸と少なくとも８５％、９５％または９９％同一である核酸；
    （ｃ）配列ＩＤ番号：２、４、６、８、１０、１２、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０、または５２のアミノ酸配列をコードする核酸；または
    （ｄ）配列ＩＤ番号：２、４、６、８、１０、１２、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０、または５２のアミノ酸配列と少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または９９％同一のタンパク質をコードする核酸、
    を含む、武装型セネカバレーウイルス。
  13. 請求項１記載の武装型セネカバレーウイルスにおいて、前記セネカバレーウイルスはＳＶＶ－００１である、武装型セネカバレーウイルス。
  14. 請求項１３記載の武装型セネカバレーウイルスであって、前記武装型セネカバレーウイルスは、
    （ａ）配列ＩＤ番号：１３のヌクレオチド１－７７６２；
    （ｂ）配列ＩＤ番号：１４のヌクレオチド１－７７８３；
    （ｃ）配列ＩＤ番号：１５のヌクレオチド１－７７５９；
    （ｄ）配列ＩＤ番号：１６のヌクレオチド１－７９８４；
    （ｅ）配列ＩＤ番号：１７のヌクレオチド１－８１４０；または
    （ｆ）配列ＩＤ番号：１８のヌクレオチド１－７７３８
    を含む、武装型セネカバレーウイルス。
  15. 武装型セネカバレーウイルスであって、前記武装型セネカバレーウイルスは、配列ＩＤ番号：１９のヌクレオチド１－７８９１と少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％同一である核酸が挿入されたセネカバレーウイルスまたはその腫瘍溶解性断片の配列を含む、武装型セネカバレーウイルス。
  16. 請求項１～１０のいずれか１つに記載の武装型セネカバレーウイルスであって、前記武装型セネカバレーウイルスは腫瘍溶解性であり、前記武装型セネカバレーウイルスは、がんを治療することができる治療薬またはその機能的断片を発現する、武装型セネカバレーウイルス。
  17. 請求項１～１０のいずれか１つに記載の武装型セネカバレーウイルスを含むベクター。
  18. 請求項１～１０のいずれか１つに記載の武装型セネカバレーウイルスを含むプラスミド。
  19. 請求項１８記載のプラスミドにおいて、前記プラスミドは、配列ＩＤ番号：１３～１８または５３～６４の核酸配列を含む、プラスミド。
  20. 請求項１８記載のプラスミドにおいて、前記プラスミドは、配列ＩＤ番号：１３～１８または５３～６４の核酸配列と少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または少なくとも９９％同一である核酸を含む、プラスミド。
  21. 請求項１８記載のプラスミドであって、前記プラスミドは、配列ＩＤ番号：１３～１８または５３～６４の核酸配列のいずれか１つのヌクレオチド６７７－８０５０と少なくとも８５％または少なくとも９０％同一な核酸を含む、プラスミド。
  22. 目的の治療タンパク質をコードする核酸をセネカバレーウイルスまたはその腫瘍溶解性断片に挿入する工程を含む、武装型セネカバレーウイルスを生成する方法。
  23. 請求項２２記載の方法において、前記目的のタンパク質は、インターロイキン、ケモカイン、またはチェックポイント阻害剤として作用するナノボディを含む、方法。
  24. 請求項２３記載の方法において、前記目的の治療タンパク質は、抗ＰＤ－Ｌ１ナノボディ、ＩＬ－２、ＣＸＣＬ９、ＩＬ－１５、ＩＬ－２／ＩＬ－１５、ＴＧＦ－βデコイ、ＮｆｓＡを含む、方法。
  25. 請求項２４記載の方法において、前記目的の治療タンパク質はＩＬ－２、ＣＸＣＬ－９、またはＩＬ－２／ＩＬ－１５を含む、方法。
  26. 請求項２２記載の方法であって、前記方法は、
    セネカバレーウイルスまたはその腫瘍溶解性断片と、目的の治療タンパク質をコードする核酸とを含むプラスミドを構築する工程と、
    プラスミドを線形化して３’末端を規定する工程と、
    Ｔ７ポリメラーゼを用いたｉｎ ｖｉｔｒｏ転写反応により、真正な５’末端および３’末端を有するＲＮＡ転写物を生成する工程と、
    前記ＲＮＡ転写物を標的細胞にトランスフェクトする工程と；および
    武装型ＳＶＶウイルスを単離する工程と
    を含む、方法。
  27. 請求項２２記載の方法であって、前記方法は、
    Ｔ７ポリメラーゼ最適化哺乳動物発現プラスミドを標的細胞にクローニングする工程と、
    セネカバレーウイルスまたはその腫瘍溶解性断片と、目的の治療タンパク質をコードする核酸とを含む線形化武装型ＳＶＶプラスミドを提供する工程と、
    前記武装型ＳＶＶプラスミドをＴ７－ｐｏｌ標的細胞にトランスフェクトする工程と、および
    前記武装型セネカバレーウイルスを単離する工程と
    を含む、方法。
  28. 請求項２７記載の方法において、前記セネカバレーウイルスまたはその腫瘍溶解性断片と、目的の治療タンパク質をコードする核酸とを含むプラスミドを構築する工程をさらに含む、方法。
  29. 請求項２８記載の方法であって、前記方法は、線形化武装型ＳＶＶプラスミドを生成する工程をさらに含む、方法。
  30. 請求項２２記載の方法において、前記核酸は、タンパク質２Ａおよび２Ｂのコード配列の間のセネカバレーウイルスのゲノムに挿入される、方法。
  31. 請求項２２記載の方法において、前記セネカバレーウイルスがＳＶＶ－００１である、方法。
  32. 請求項２２記載の方法において、前記武装型セネカバレーウイルスは腫瘍溶解性であり、前記武装型セネカバレーウイルスは、がんを治療することができる治療薬またはその機能的断片を発現する、方法。
  33. 請求項２２～３２のいずれか１つに記載の方法であって、前記方法は、配列ＩＤ番号：１、３、５、７、９、１１、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、もしくは５１の核酸、または、配列ＩＤ番号：２、４、６、８、１０、１２、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０、もしくは５２のアミノ酸配列をコードする核酸を、セネカバレーウイルスまたはその腫瘍溶解性断片に挿入する工程を含む、方法。
  34. 請求項２２～３２のいずれか１つに記載の方法であって、前記方法は、セネカバレーウイルスまたはその腫瘍溶解性断片に核酸を挿入する工程を含み、前記核酸は、配列ＩＤ番号：１３のヌクレオチド１－７７６２、配列ＩＤ番号：１４のヌクレオチド１－７７８３、配列ＩＤ番号：１５のヌクレオチド１－７７５９、配列ＩＤ番号：１６のヌクレオチド１－７９８４、配列ＩＤ番号：１７のヌクレオチド１－８１４０、または、配列ＩＤ番号：１８のヌクレオチド１－７７３８と少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％同一である、方法。
  35. それを必要とする対象においてがんを治療する方法であって、前記方法は、請求項１～１０のいずれか１つに記載の武装型セネカバレーウイルスの有効量を前記対象に投与する工程を含む、方法。
  36. 請求項３５記載の方法において、前記対象は、チェックポイント阻害剤、ＰＤ－１阻害剤、ＰＤ－Ｌ１阻害剤、ＣＴＬＡ－４阻害剤、サイトカイン、成長因子、光増感剤、毒素、ｓｉＲＮＡ分子、シグナル伝達調節剤、抗がん抗生物質、抗がん抗体、血管新生阻害剤、化学療法化合物、抗転移性化合物、免疫療法化合物、ＣＡＲ療法、樹状細胞ベースの療法、がんワクチン、腫瘍溶解性ウイルス、ＩＦＮ－Ｉ阻害剤、人工抗がんウイルスまたはウイルス誘導体、およびそれらの組み合わせからなる群より選択される少なくとも１つの抗がん治療剤を投与される、方法。
  37. 請求項３５記載の方法において、少なくとも１つの抗がん治療剤が、前記武装型セネカバレーウイルスを投与する工程の前、同時または後に投与される、方法。
  38. 請求項３５記載の方法において、前記対象は、ＨＤＡＣ阻害剤、ＪＡＫ／ＳＴＡＴ阻害剤、ＩＦＮ阻害剤、ＩＦＮ抗体、ＩＦＮ－α受容体１抗体、ＩＦＮ－α受容体２抗体およびウイルスペプチド、ならびにそれらの組み合わせからなる群から選択される少なくとも１つの追加のＩＦＮ－Ｉ阻害剤をさらに投与される、方法。
  39. 請求項３５記載の方法において、前記ＨＤＡＣ阻害剤がトリコスタチンＡである、方法。
  40. 請求項３５記載の方法において、前記ＪＡＫ／ＳＴＡＴ阻害剤がスタウロスポリンである、方法。
  41. 請求項３５記載の方法において、前記がんは、トリプルネガティブ乳がん、小細胞肺がん、非小細胞肺がん、非小細胞扁平上皮がん、腺がん、神経膠芽腫、皮膚がん、肝細胞がん、結腸がん、子宮頸がん、卵巣がん、子宮内膜がん、神経内分泌がん、膵臓がん、甲状腺がん、腎臓がん、骨がん、食道がん、または軟部組織がんを含む、方法。
  42. 請求項３５記載の方法において、前記がん治療の成功が、武装していないセネカバレーウイルスを用いた治療と比較して改善される、方法。
  43. それを必要とする対象においてがんを治療するための医薬組成物であって、請求項１～１０のいずれか１つに記載の武装型セネカバレーウイルスおよび薬学的に許容される担体を含む、医薬組成物。
  44. 請求項４３記載の医薬組成物であって、前記組成物は、チェックポイント阻害剤、ＰＤ－１阻害剤、ＰＤ－Ｌ１阻害剤、ＣＴＬＡ－４阻害剤、サイトカイン、成長因子、光増感剤、毒素、ｓｉＲＮＡ分子、シグナル伝達調節剤、抗がん抗生物質、抗がん抗体、血管新生阻害剤、化学療法化合物、抗転移性化合物、免疫療法化合物、ＣＡＲ療法、樹状細胞ベースの療法、がんワクチン、腫瘍溶解性ウイルス、ＩＦＮ－Ｉ阻害剤、人工抗がんウイルスまたはウイルス誘導体、およびそれらの組み合わせを含む、医薬組成物。
  45. 請求項４３記載の医薬組成物において、前記がんは、トリプルネガティブ乳がん、小細胞肺がん、非小細胞肺がん、非小細胞扁平上皮がん、腺がん、神経膠芽腫、皮膚がん、肝細胞がん、結腸がん、子宮頸がん、卵巣がん、子宮内膜がん、神経内分泌がん、膵臓がん、甲状腺がん、腎臓がん、骨がん、食道がん、または軟部組織がんを含む、医薬組成物。
  46. がんを治療するための薬物の製造において使用するための、請求項１～１０のいずれか１つに記載の武装型セネカバレーウイルス。
  47. 請求項４６記載の使用において、前記がんは、トリプルネガティブ乳がん、小細胞肺がん、非小細胞肺がん、非小細胞扁平上皮がん、腺がん、神経膠芽腫、皮膚がん、肝細胞がん、結腸がん、子宮頸がん、卵巣がん、子宮内膜がん、神経内分泌がん、膵臓がん、甲状腺がん、腎臓がん、骨がん、食道がん、または軟部組織がんを含む、使用。
  48. がんを治療するための、請求項１～１０のいずれか１つに記載の武装型セネカバレーウイルスの使用。
  49. 請求項４８記載の使用において、前記がんは、トリプルネガティブ乳がん、小細胞肺がん、非小細胞肺がん、非小細胞扁平上皮がん、腺がん、神経膠芽腫、皮膚がん、肝細胞がん、結腸がん、子宮頸がん、卵巣がん、子宮内膜がん、神経内分泌がん、膵臓がん、甲状腺がん、腎臓がん、骨がん、食道がん、または軟部組織がんを含む、使用。
  50. 配列ＩＤ番号：１９のヌクレオチド１－７８９１を含む、武装型セネカバレーウイルス。
  51. タンパク質２Ａおよび２Ｂのコード配列間のセネカバレーウイルスのゲノムに核酸配列を挿入する工程によって作製される、武装型セネカバレーウイルスであって、前記核酸配列は、配列ＩＤ番号：１９のヌクレオチド３５０８－４０１４、または、配列ＩＤ番号：１９のヌクレオチド３５０８－４０１４と少なくとも８５％、少なくとも９５％、もしくは少なくとも９９％同一である核酸配列を含む、武装型セネカバレーウイルス。
  52. 配列ＩＤ番号：１９のヌクレオチド１－７８９１を含む、ベクターまたはプラスミド。
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