JP2024503302A - ミセルナノ粒子及びその使用 - Google Patents

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ジン－ヒョブ リュ，
ユ ナ リム，
ヒュン ス ミン，
ハン ソク コ，
デ フン キム，
ヒョン－ジョン チョ，
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バイオーケストラ カンパニー， リミテッド
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Abstract

本開示は、（ｉ）水溶性ポリマー、（ｉｉ）正に荷電したキャリア、（ｉｉｉ）疎水性部分、及び（ｉｖ）架橋部分を含むカチオン性キャリアユニットを含み、カチオン性キャリアユニットがカチオン性キャリアユニットと静電的に相互作用するアニオン性ペイロード（例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチド）と混合される際に、得られる組成物が、アニオン性ペイロードをそのコアに封入しているミセルに自己組織化する。カチオン性キャリアユニットは、組織特異的標的化部分も含み得、これは、ミセルの表面に提示されることとなる。また本開示は、本開示のカチオン性キャリアユニットを含むミセル、カチオン性キャリアユニット及びミセルの製造方法、ミセルを含む医薬組成物、及びさらには、疾患または状態を治療する必要がある対象にミセルを投与することを含む、疾患または状態を治療する方法も含む。【選択図】図１Ａ

Description

関連出願の相互参照
本ＰＣＴ出願は、２０２０年１２月３０日に出願された米国特許仮出願６３／１９９，４７１号、２０２１年８月３１日に出願された同第６３／２６０，７８２号、及び２０２１年９月８日に出願された同第６３／２６０，９８９号の優先権の利益を主張するものであり、各出願の全体を本明細書に参照によって援用するものである。
電子的に提出された配列表の参照
本出願と共にＡＳＣＩＩテキストファイル（名称４３６６＿０３９ＰＣ０３＿Ｓｅｑｌｉｓｔｉｎｇ＿ＳＴ２５；サイズ：１５，９６６バイト；作成日：２０２１年１２月２７日）の形で提出される、電子的に提出される配列表の内容を、その全体にわたり参照により本明細書に援用に援用するものである。
本開示は、生理学的透過障壁（例えば、血液脳関門）を通してアニオン性ペイロード（例えば、オリゴヌクレオチド）を送達するために使用され得る、カチオン性キャリアユニット及びミセルシステムを提供する。
身体には、膜を通した薬物の透過性を制限するある特定の障壁が存在する。したがって、特定の物質のみが、この種の膜を通過することができる。重要及び特殊な生理学的障壁の中には、血液脳関門及び細胞膜がある。血液脳関門（ＢＢＢ）は、中枢神経系（ＣＮＳ）において脳及び細胞外液から循環血液を分離する非常に選択的な半透性の境界である。血液脳関門は、毛細血管壁の内皮細胞、毛細血管を覆っているアストロサイト終足、及び毛細血管基底膜に埋め込まれた周皮細胞により形成される。このシステムは、受動拡散による水、一部の気体、及び脂溶性分子の通過、ならびに神経機能に重要なグルコース及びアミノ酸などの分子の選択的輸送を可能にする。
血液脳関門は、脳脊髄液（ＣＳＦ）への病原体の通過、血液中の溶質、及び大きな分子または親水性分子の拡散を制限する一方で、Ｏ２、ＣＯ２、疎水性分子（例えば、ホルモン）、及び小さな極性分子の拡散を可能にする（Ｊｏｈａｎｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，（２０１７）Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｅｒｅｂｒａｌ Ｂｌｏｏｄ Ｆｌｏｗ ａｎｄ Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ．Ｅｐｕｂ（４）：６５９－６６８）。ＢＢＢは、大分子神経治療薬のうちのほぼ１００％及びすべての分子薬物のうちの９８％超を脳から排除する。Ｄａｎｅｍａｎ ＆ Ｐｒａｔ（２０１５）“Ｔｈｅ Ｂｌｏｏｄ Ｂｒａｉｎ Ｂａｒｒｉｅｒ” Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅｓ ｉｎ Ｂｉｏｌｏｇｙ ７（１）：ａ０２０４１２。脳の特定の領域に治療薬を送達する困難を克服することは、多くの脳疾患の治療において大きな課題となっている。したがって、ＢＢＢさえなければ診断及び治療に効果的であり得る治療用分子は、適当量でＢＢＢを通過しない。
多くの場合、細胞内標的化も、外因性分子が細胞質ゾルに到達するために、最初に細胞膜を通過しなければならないため、困難である。細胞膜は、脂溶性で細胞膜を通過することができる非極性治療薬に対して選択的に透過性である。一方で、オリゴヌクレオチドなどの大きく荷電した治療薬は、細胞膜により効果的に排除される。
ポリヌクレオチドは、負に荷電した膜とポリヌクレオチドの大きな負電荷との間の電荷反発のため、容易に細胞膜を透過しない。結果として、ポリヌクレオチドは、バイオアベイラビリティーが低く、細胞への取り込みが乏しい（通常、１％未満）（Ｄｈｅｕｒ ｅｔ ａｌ，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｖ．，９：５２２（１９９９）；Ｐａｒｋ ｅｔ ａｌ，Ｊ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ，９３：１８８（２００３））。一般にほとんどのポリヌクレオチドは５，０００Ｄａよりも大きいため、それらは容易に細胞膜を通って拡散できず、細胞への取り込みは主にピノサイトーシスまたはエンドサイトーシスプロセスに限定される。一旦細胞内に入ると、ポリヌクレオチドはリソソーム区画に蓄積し得、それらの細胞質または核への到達は限定される。非経口投与されたポリヌクレオチドは、細胞質の内部及び外部の両方のヌクレアーゼによる急速な分解を極めて受けやすい。研究により、静脈内投与後の血中ポリヌクレオチドの約３０分の半減期での急速な分解が示されている（Ｇｅａｒｙ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．２９６：８９０－８９７（２００１））。
したがって、ポリヌクレオチド、例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチドの送達が直面している問題は、大まかに２つに分けることができる。第１に、治療用ポリヌクレオチドは、細胞質に送達され得るような形で配合されなければならず、第２に、ポリヌクレオチドはインタクトで完全に機能する形で細胞核に到達しなければならない。オリゴヌクレオチド及びオリゴヌクレオチド類似体の治療薬としての応用における進歩にもかかわらず、改善された薬理学的特性、例えば、血清安定性、正しい臓器、組織または細胞への送達、及び膜透過送達を与える送達システムが求められている。
核酸及びオリゴヌクレオチドの膜透過送達を改善することを目的とした試みにおいて、タンパク質キャリア、抗体キャリア、リポソーム送達システム、エレクトロポレーション、直接注入、細胞融合、ウイルスベクター、及びリン酸カルシウム媒介形質転換が用いられてきた。しかしながら、これらの技術の多くは、膜透過輸送が可能な細胞の種類及びこうした輸送を実現するのに必要な条件によって制限される。したがって、荷電した治療薬（例えば、ａｎｔｉｍｉｒなどのアンチセンスオリゴヌクレオチド）を、特定の標的細胞または組織に、及び透過障壁（例えば、形質膜またはＢＢＢ）を通過して選択的に誘導することができる一方で、血清安定性及び／または内因性分解酵素（例えば、ＲＮアーゼ）に対する耐性を改善する送達システムが求められている。
Ｊｏｈａｎｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，（２０１７）Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｅｒｅｂｒａｌ Ｂｌｏｏｄ Ｆｌｏｗ ａｎｄ Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ．Ｅｐｕｂ（４）：６５９－６６８ Ｄａｎｅｍａｎ ＆ Ｐｒａｔ（２０１５）"Ｔｈｅ Ｂｌｏｏｄ Ｂｒａｉｎ Ｂａｒｒｉｅｒ" Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅｓ ｉｎ Ｂｉｏｌｏｇｙ ７（１）：ａ０２０４１２ Ｄｈｅｕｒ ｅｔ ａｌ，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｖ．，９：５２２（１９９９） Ｐａｒｋ ｅｔ ａｌ，Ｊ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ，９３：１８８（２００３） Ｇｅａｒｙ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．２９６：８９０－８９７（２００１）
本開示は、次の図式：
［ＣＣ］－Ｌ１－［ＣＭ］－Ｌ２－［ＨＭ］（図式Ｉ）、
［ＣＣ］－Ｌ１－［ＨＭ］－Ｌ２－［ＣＭ］（図式ＩＩ）、
［ＨＭ］－Ｌ１－［ＣＭ］－Ｌ２－［ＣＣ］（図式ＩＩＩ）、
［ＨＭ］－Ｌ１－［ＣＣ］－Ｌ２－［ＣＭ］（図式ＩＶ）、
［ＣＭ］－Ｌ１－［ＣＣ］－Ｌ２－［ＨＭ］（図式Ｖ）、または
［ＣＭ］－Ｌ１－［ＨＭ］－Ｌ２－［ＣＣ］（図式ＶＩ）、
（式中、
ＣＣは、正に荷電したキャリア部分であり、
ＣＭは、架橋部分であり、
ＨＭは、疎水性部分であり、
Ｌ１及びＬ２は、独立して任意選択のリンカーである）を含むカチオン性キャリアユニットであって、
ＨＭの数が、［ＣＣ］及び［ＣＭ］に対して約５０％未満である、カチオン性キャリアユニットを提供する。
いくつかの態様では、ＨＭの数は、［ＣＣ］及び［ＣＭ］に対して約４５％、約４０％、約３５％、約３０％、約２５％、約２０％、約１５％、約１０％、約９％、約８％、約７％、約６％、約５％、約４％、約３％、約２％、または約１％未満である。いくつかの態様では、ＨＭの数は、［ＣＣ］及び［ＣＭ］に対して約５０％～約１％、約５０％～約５％、約５０％～約１０％、約５０％～約１５％、約５０％～約２０％、約５０％～約２５％、約５０％～約３０％、約５０％～約３５％、約５０％～約４０％、約５０％～約４５％、約４５％～約１％、約４５％～約５％、約４５％～約１０％、約４５％～約１５％、約４５％～約２０％、約４５％～約２５％、約４５％～約３０％、約４５％～約３５％、約４５％～約４０％、約４０％～１％、約５０％～約５％、約４０％～約１０％、約４０％～約１５％、約４０％～約２０％、約４０％～約２５％、約４０％～約３０％、約４０％～約３５％、約３５％～約１％、約３５％～約５％、約３５％～約１０％、約３５％～約１５％、約３５％～約２０％、約３５％～約２５％、約３５％～約３０％、約３０％～約１％、約３０％～約５％、約３０％～約１０％、約３０％～約１５％、約３０～約２０％、約３０％～約２５％、約２５％～約１％、約２５％～約５％、約２５％～約１０％、約２５％～約１５％、約２５％～約２０％、約２０％～約１％、約２０％～約５％、約２０％～約１０％、約２０％～約１５％、約１５％～約１％、約１５％～約５％、約１５％～約１０％、約１０％～約１％、約１０％～約５％、または約５％～約１％である。いくつかの態様では、ＨＭの数は、約５０％～約４０％、約４０％～約３０％、約３０％～約２０％、約２０％～約１０％、約１０％～約５％、及び約５％～約１％である。いくつかの態様では、ＨＭの数は、約５０％、約４５％、約４０％、約３５％、約３０％、約２５％、約２０％、約１５％、約１０％、約５％、または約１％である。
いくつかの態様では、カチオン性キャリアユニットは、アニオン性ペイロードと相互作用することができる。いくつかの態様では、アニオン性ペイロードは、２００ヌクレオチド未満の長さを有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの態様では、アニオン性ペイロードは、約１５０、約１４０、約１３０、約１２０、約１１０、約１００、約９０、約８０、約７０、約６０、約５０、約４０、約３０、約２５、約２４、約２３、約２２、約２１、約２０、約１９、約１８、約１７、約１６、約１５、約１４、約１３、約１２、約１１、または約１０ヌクレオチド未満の長さを有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの態様では、アニオン性ペイロードは、約３０～約１０、約２５～約１１、約３０～約１５、約２５～約１５、約２４～約１５、または約２３～約１５ヌクレオチドの長さを有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの態様では、アニオン性ペイロードは、約３０、約２９、約２８、約２７、約２６、約２５、約２４、約２３、約２２、約２１、約２０、約１９、約１８、約１７、約１６、約１５、約１４、または約１３ヌクレオチドの長さを有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの態様では、アニオン性ペイロードは、約２２ヌクレオチドの長さを有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの態様では、アニオン性ペイロードは、ｍＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡスポンジ、タフデコイｍｉＲＮＡ、ａｎｔｉｍｉｒ、低分子ＲＮＡ、ｒＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｇＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ｐＤＮＡ、ＰＮＡ、ＢＮＡ、アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）、アプタマー、環状ジヌクレオチド、またはそれらの任意の組み合わせを含む。
いくつかの態様では、カチオン性キャリアユニットは、水溶性ポリマー（ＷＰ）をさらに含む。いくつかの態様では、水溶性ポリマーは、［ＣＣ］、［ＨＭ］、または［ＣＭ］に結合される。いくつかの態様では、水溶性ポリマーは、［ＣＣ］、［ＨＭ］、または［ＣＭ］のＮ末端に結合される。いくつかの態様では、水溶性ポリマーは、［ＣＣ］、［ＨＭ］、または［ＣＭ］のＣ末端に結合される。いくつかの態様では、カチオン性キャリアユニットは、
［ＷＰ］－Ｌ３］－［ＣＣ］－Ｌ１－［ＣＭ］－Ｌ２－［ＨＭ］（図式Ｉ’）、
［ＷＰ］－Ｌ３］－［ＣＣ］－Ｌ１－［ＨＭ］－Ｌ２－［ＣＭ］（図式ＩＩ’）、
［ＷＰ］－Ｌ３］－［ＨＭ］－Ｌ１－［ＣＭ］－Ｌ２－［ＣＣ］（図式ＩＩＩ’）、
［ＷＰ］－Ｌ３］－［ＨＭ］－Ｌ１－［ＣＣ］－Ｌ２－［ＣＭ］（図式ＩＶ’）、
［ＷＰ］－Ｌ３］－［ＣＭ］－Ｌ１－［ＣＣ］－Ｌ２－［ＨＭ］（図式Ｖ’）、または
［ＷＰ］－Ｌ３］－［ＣＭ］－Ｌ１－［ＨＭ］－Ｌ２－［ＣＣ］（図式ＶＩ’）を含む。
いくつかの態様では、水溶性ポリマーは、ポリ（アルキレングリコール）、ポリ（オキシエチル化ポリオール）、ポリ（オレフィンアルコール）、ポリ（ビニルピロリドン）、ポリ（ヒドロキシアルキルメタクリルアミド）、ポリ（ヒドロキシアルキルメタクリレート）、ポリ（サッカライド）、ポリ（α－ヒドロキシ酸）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリグリセロール、ポリホスファゼン、ポリオキサゾリン（「ＰＯＺ」）、ポリ（Ｎ－アクリロイルモルホリン）、またはそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの態様では、水溶性ポリマーは、ポリエチレングリコール（「ＰＥＧ」）、ポリグリセロール、またはポリ（プロピレングリコール）（「ＰＰＧ」）を含む。いくつかの態様では、水溶性ポリマーは、下式：
Figure 2024503302000002
 （式中、ｎは、１～１０００である）を含む。
いくつかの態様では、ｎは、少なくとも約１１０、少なくとも約１１１、少なくとも約１１２、少なくとも約１１３、少なくとも約１１４、少なくとも約１１５、少なくとも約１１６、少なくとも約１１７、少なくとも約１１８、少なくとも約１１９、少なくとも約１２０、少なくとも約１２１、少なくとも約１２２、少なくとも約１２３、少なくとも約１２４、少なくとも約１２５、少なくとも約１２６、少なくとも約１２７、少なくとも約１２８、少なくとも約１２９、少なくとも約１３０、少なくとも約１３１、少なくとも約１３２、少なくとも約１３３、少なくとも約１３４、少なくとも約１３５、少なくとも約１３６、少なくとも約１３７、少なくとも約１３８、少なくとも約１３９、少なくとも約１４０、または少なくとも約１４１である。いくつかの態様では、ｎは、約８０～約９０、約９０～約１００、約１００～約１１０、約１１０～約１２０、約１２０～約１３０、約１４０～約１５０、または約１５０～約１６０である。
いくつかの態様では、水溶性ポリマーは、直鎖状、分枝鎖状、または樹枝状である。いくつかの態様では、カチオン性キャリア部分は、１つ以上の塩基性アミノ酸を含む。いくつかの態様では、カチオン性キャリア部分は、少なくとも約３個、少なくとも約４個、少なくとも約５個、少なくとも約６個、少なくとも約７個、少なくとも約８個、少なくとも約９個、少なくとも約１０個、少なくとも約１１個、少なくとも約１２個、少なくとも約１３個、少なくとも約１４個、少なくとも約１５個、少なくとも約１６個、少なくとも約１７個、少なくとも約１８個、少なくとも約１９個、少なくとも約２０個、少なくとも約２１個、少なくとも約２２個、少なくとも約２３個、少なくとも約２４個、少なくとも約２５個、少なくとも約２６個、少なくとも約２７個、少なくとも約２８個、少なくとも約２９個、少なくとも約３０個、少なくとも約３１個、少なくとも約３２個、少なくとも約３３個、少なくとも約３４個、少なくとも約３５個、少なくとも約３６個、少なくとも約３７個、少なくとも約３８個、少なくとも約３９個、少なくとも約４０個、少なくとも約４１個、少なくとも約４２個、少なくとも約４３個、少なくとも約４４個、少なくとも約４５個、少なくとも約４６個、少なくとも約４７個、少なくとも約４８個、少なくとも約４９個、少なくとも５０個、少なくとも約５１個、少なくとも約５２個、少なくとも約５３個、少なくとも約５４個、少なくとも約５５個、少なくとも約５６個、少なくとも約５７個、少なくとも約５８個、少なくとも約５９個、少なくとも約６０個、少なくとも約６１個、少なくとも約６２個、少なくとも約６３個、少なくとも約６４個、少なくとも約６５個、少なくとも約６６個、少なくとも約６７個、少なくとも約６８個、少なくとも約６９個、少なくとも約７０個、少なくとも約７１個、少なくとも約７２個、少なくとも約７３個、少なくとも約７４個、少なくとも約７５個、少なくとも約７６個、少なくとも約７７個、少なくとも約７８個、少なくとも約７９個、または少なくとも約８０個の塩基性アミノ酸を含む。いくつかの態様では、カチオン性キャリア部分は、少なくとも２０個、少なくとも約３０個、少なくとも約４０個、少なくとも約５０個、少なくとも６０個、少なくとも約７０個、少なくとも約８０個、少なくとも約９０個、少なくとも約１００個、少なくとも約１１０個、少なくとも約１２０個、少なくとも約１３０個、少なくとも約１４０個、または少なくとも約１５０個の塩基性アミノ酸を含む。
いくつかの態様では、カチオン性キャリア部分は、約１０個～約６０個、約１５個～約６０個、約２０個～約６０個、約２５個～約６０個、約３０個～約６０個、約３５個～約６０個、約４０個～約６０個、約１０個～約５５個、約１５個～約５５個、約２０個～約５５個、約２５個～約５５個、約３０個～約５５個、約３５個～約５５個、約４０個～約５５個、約１０個～約５０個、約１５個～約５０個、約２０個～約５０個、約２５個～約５０個、約３０個～約５０個、約３５個～約５０個、約４０個～約５０個、約１０個～約４５個、約１５個～約４５個、約２０個～約４５個、約２５個～約４５個、約３０個～約４５個、約３５個～約４５個、約４０個～約４５個、約１０個～約４０個、約１５個～約４０個、約２０個～約４０個、約２５個～約４０個、約３０個～約４０個、約３５個～約４０個、約１０個～約３５個、約１５個～約３５個、約２０個～約３５個、約２５個～約３５個、約３０個～約３５個、約３５個～約３５個、約４０個～約３５個、または約４０個～約３５個の塩基性アミノ酸を含む。
いくつかの態様では、カチオン性キャリア部分は、約３０～約５０の塩基性アミノ酸を含む。いくつかの態様では、カチオン性キャリア部分は、約１０個、約２０個、約３０個、約４０個、約５０個、または約６０個の塩基性アミノ酸を含む。いくつかの態様では、塩基性アミノ酸は、アルギニン、リシン、ヒスチジン、またはそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの態様では、カチオン性キャリア部分は、約２０個、約３０個、約４０個、約５０個、または約６０個のリシンを含む。いくつかの態様では、カチオン性キャリア部分は、約３２個のリシンを含む。
いくつかの態様では、架橋部分は、架橋剤に連結された１つ以上のアミノ酸を含む。いくつかの態様では、架橋剤が、チオール基、チオール誘導体、またはそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの態様では、架橋部分は、チオール基を含む。
いくつかの態様では、架橋部分のアミノ酸は、少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個、少なくとも６個、少なくとも７個、少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個、少なくとも２０個、少なくとも２１個、少なくとも２２個、少なくとも２３個、少なくとも２４個、少なくとも２５個、少なくとも２６個、少なくとも２７個、少なくとも２８個、少なくとも２９個、少なくとも３０個、少なくとも３１個、少なくとも３２個、少なくとも３３個、少なくとも３４個、少なくとも３５個、少なくとも３６個、少なくとも３７個、少なくとも３８個、少なくとも３９個、または少なくとも４０個の塩基性アミノ酸を含む。いくつかの態様では、架橋部分のアミノ酸は、約１個～約４０個、約５個～約４０個、約１０個～約４０個、約１５個～約４０個、約２０個～約４０個、約１個～約３５個、約５個～約３５個、約１０個～約３５個、約１５個～約３５個、約２０個～約３５個、約１個～約３０個、約５個～約３０個、約１０個～約３０個、約１５個～約３０個、約２０個～約３０個、約１個～約２５個、約５個～約２５個、約１０個～約２５個、約１５個～約２５個、約２０個～約２５個、約１個～約２０個、約５個～約２０個、約１０個～約２０個、約１５個～約２０個、約１個～約１５個、約５個～約１５個、約１０個～約１５個、約１個～約１０個、約５個～約１０個、または約１個～約５個の塩基性アミノ酸を含む。
いくつかの態様では、架橋部分のアミノ酸は、約５個、約６個、約７個、約８個、約９個、約１０個、約１１個、約１２個、約１３個、約１４個、約１５個、約１６個、約１７個、約１８個、約１９個、約２０個、約２１個、約２２個、約２３個、約２４個、約２５個、約２６個、約２７個、約２８個、約２９個、または約３０個の塩基性アミノ酸を含む。いくつかの態様では、架橋部分の塩基性アミノ酸は、アルギニン、リシン、ヒスチジン、またはそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの態様では、架橋部分の塩基性アミノ酸は、約５個、約１０個、約１１個、約１２個、約１３個、約１４個、約１５個、約１６個、約１７個、約１８個、約１９個、約２０個、約２５個、約３０個、または約４０個のリシンを含む。いくつかの態様では、架橋部分の塩基性アミノ酸は、約１０個～約２０個のリシンを含む。いくつかの態様では、架橋部分の塩基性アミノ酸は、約１６個のリシンを含む。
いくつかの態様では、疎水性部分は、免疫反応、炎症反応、または組織微小環境を調節することができる。いくつかの態様では、疎水性部分は、免疫反応を調節することができる。いくつかの態様では、疎水性部分は、腫瘍を有する対象における腫瘍微小環境を調節することができる。
いくつかの態様では、疎水性部分は、腫瘍微小環境における低酸素状態を阻害または低減することができる。いくつかの態様では、疎水性部分は、イミダゾール誘導体、アミノ酸、ビタミン、またはそれらの任意の組み合わせに結合された１つ以上のアミノ酸を含む。
いくつかの態様では、疎水性部分は、炎症反応を阻害または低減することができる。いくつかの態様では、疎水性部分は、ビタミンに結合された１つ以上のアミノ酸である。いくつかの態様では、ビタミンは、環式環または環式ヘテロ原子環及びカルボキシル基またはヒドロキシル基を含む。
いくつかの態様では、ビタミンは、下式を含む：
Figure 2024503302000003
 式中、Ｙ１及びＹ２の各々は、Ｃ、Ｎ、Ｏ、ならびにＳから独立して選択され、ｎは、１または２である。
いくつかの態様では、ビタミンは、ビタミンＡ、ビタミンＢ１、ビタミンＢ２、ビタミンＢ３、ビタミンＢ６、ビタミンＢ７、ビタミンＢ９、ビタミンＢ１２、ビタミンＣ、ビタミンＤ２、ビタミンＤ３、ビタミンＥ、ビタミンＭ、ビタミンＨ、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。いくつかの態様では、ビタミンは、ビタミンＢ３である。
いくつかの態様では、疎水性部分は、それぞれがビタミンに結合された少なくとも２個、少なくとも約３個、少なくとも約４個、少なくとも約５個、少なくとも約６個、少なくとも約７個、少なくとも約８個、少なくとも約９個、少なくとも約１０個、少なくとも約１１個、少なくとも約１２個、少なくとも約１３個、少なくとも約１４個、少なくとも約１５個、少なくとも約１６個、少なくとも約１７個、少なくとも約１８個、少なくとも約１９個、少なくとも約２０個、少なくとも約２１個、少なくとも約２２個、少なくとも約２３個、少なくとも約２４個、少なくとも約２５個、少なくとも約２６個、少なくとも約２７個、少なくとも約２８個、少なくとも約２９個、少なくとも約３０個、少なくとも約３１個、少なくとも約３２個、少なくとも約３３個、少なくとも約３４個、少なくとも約３５個、少なくとも約３６個、少なくとも約３７個、少なくとも約３８個、少なくとも約３９個、少なくとも約４０個、少なくとも約４１個、少なくとも約４２個、少なくとも約４３個、少なくとも約４４個、少なくとも約４５個、少なくとも約４６個、少なくとも約４７個、少なくとも約４８個、少なくとも約４９個、少なくとも約５０個、少なくとも約５１個、少なくとも約５２個、少なくとも約５３個、少なくとも約５４個、少なくとも約５５個、少なくとも約５６個、少なくとも約５７個、少なくとも約５８個、少なくとも約５９個、少なくとも約６０個、少なくとも約６１個、少なくとも約６２個、少なくとも約６３個、少なくとも約６４個、少なくとも約６５個、少なくとも約６６個、少なくとも約６７個、少なくとも約６８個、少なくとも約６９個、少なくとも約７０個、少なくとも約７１個、少なくとも約７２個、少なくとも約７３個、少なくとも約７４個、少なくとも約７５個、少なくとも約７６個、少なくとも約７７個、少なくとも約７８個、少なくとも約７９個、または少なくとも約８０個のアミノ酸を含む。いくつかの態様では、疎水性部分は、それぞれがビタミンに結合された少なくとも２０個、少なくとも約３０個、少なくとも約４０個、少なくとも約５０個、少なくとも６０個、少なくとも約７０個、少なくとも約８０個、少なくとも約９０個、少なくとも約１００個、少なくとも約１１０個、少なくとも約１２０個、少なくとも約１３０個、少なくとも約１４０個、または少なくとも約１５０個のアミノ酸を含む。いくつかの態様では、疎水性部分は、それぞれがビタミンに結合された約１０個～約６０個、約１５個～約６０個、約２０個～約６０個、約２５個～約６０個、約３０個～約６０個、約３５個～約６０個、約４０個～約６０個、約１０個～約５５個、約１５個～約５５個、約２０個～約５５個、約２５個～約５５個、約３０個～約５５個、約３５個～約５５個、約４０個～約５５個、約１０個～約５０個、約１５個～約５０個、約２０個～約５０個、約２５個～約５０個、約３０個～約５０個、約３５個～約５０個、約４０個～約５０個、約１０個～約４５個、約１５個～約４５個、約２０個～約４５個、約２５個～約４５個、約３０個～約４５個、約３５個～約４５個、約４０個～約４５個、約１０個～約４０個、約１５個～約４０個、約２０個～約４０個、約２５個～約４０個、約３０個～約４０個、約３５個～約４０個、約１０個～約３５個、約１５個～約３５個、約２０個～約３５個、約２５個～約３５個、約３０個～約３５個、約３５個～約３５個、約４０個～約３５個、または約４０個～約３５個のアミノ酸を含む。いくつかの態様では、疎水性部分は、それぞれがビタミンに結合された約１０個、約２０個、約３０個、約４０個、約５０個、または約６０個のアミノ酸を含む。
いくつかの態様では、疎水性部分は、それぞれがビタミンＢ３に結合された約１０個のアミノ酸、約２０個のアミノ酸、約３０個のアミノ酸、約４０個のアミノ酸、または約５０個のアミノ酸を含む。
いくつかの態様では、カチオン性キャリアユニットは約２５個～約４０個のリシンを含み、架橋部分は約１０個～約２０個のリシン－チオールを含み、疎水性部分は約２５個～約４０個のリシン－ビタミンＢ３を含む。いくつかの態様では、カチオン性キャリア部分は約３０個～約３５個のリシンを含み、架橋部分は約１３個～約２０個のリシン－チオールを含み、疎水性部分は約３０個～約３５個のリシン－ビタミンＢ３を含む。いくつかの態様では、カチオン性キャリア部分は約３２個のリシンを含み、架橋部分は約１６個のリシン－チオールを含み、疎水性部分は約３２個のリシン－ビタミンＢ３を含む。
いくつかの態様では、カチオン性キャリアユニットは約３５個～約６０個のリシンを含み、架橋部分は約５個～約１５個のリシン－チオールを含み、疎水性部分は約１５個～約３０個のリシン－ビタミンＢ３を含む。
いくつかの態様では、カチオン性キャリアユニットは水溶性バイオポリマー部分を含み、水溶性バイオポリマー部分は約１２０個～約１３０個のＰＥＧ単位を含む。
いくつかの態様では、カチオン性キャリアユニットは、標的化部分（ＴＭ）をさらに含む。いくつかの態様では、標的化部分は、組織を標的化することができる。いくつかの態様では、組織は、肝臓、脳、腎臓、肺、卵巣、膵臓、甲状腺、乳房、胃、またはそれらの任意の組み合わせである。いくつかの態様では、標的化部分は、大型中性アミノ酸輸送体１（ＬＡＴ１）により輸送されることができる。いくつかの態様では、標的化部分は、アミノ酸である。いくつかの態様では、標的化部分は、分枝鎖または芳香族アミノ酸を含む。いくつかの態様では、標的化部分は、フェニルアラニン、バリン、ロイシン、及び／またはイソロイシンである。いくつかの態様では、アミノ酸は、フェニルアラニンである。いくつかの態様では、標的化部分は水溶性ポリマーに連結される。いくつかの態様では、標的化部分は、リンカーによって水溶性ポリマーに連結される。
本開示は、本明細書に開示されるカチオン性キャリアユニット及びアニオン性ペイロードを含むミセルも提供し、カチオン性キャリア複合体のカチオン性キャリア部分とアニオン性ペイロードとは互いに結合される。いくつかの態様では、結合は、共有結合である。他の態様では、結合は、非共有結合である。いくつかの態様では、結合は、イオン結合である。
いくつかの態様では、カチオン性キャリアユニットのカチオン性キャリア部分の正電荷は、溶液中でアニオン性ペイロードと混合される際にミセルを形成するのに十分であり、溶液中のカチオン性キャリアユニットのカチオン性キャリア部分の正電荷とアニオン性ペイロードの負電荷との全体のイオン比は、約１：３～約３：１である。いくつかの態様では、カチオン性キャリアユニットのカチオン性キャリア部分の正電荷は、溶液中でアニオン性ペイロードと混合される際にミセルを形成するのに十分であり、溶液中のカチオン性キャリアユニットのカチオン性キャリア部分の正電荷とアニオン性ペイロードの負電荷との全体のイオン比は、約１：３、約１：２．５、約１：２、約１：１．５、約１：１、約１：０．５、約０．５：１、約１．５：１、約２：１、約２．５：１、または約３：１である。いくつかの態様では、カチオン性キャリアユニットのカチオン性キャリア部分の正電荷は、溶液中でアニオン性ペイロードと混合される際にミセルを形成するのに十分であり、溶液中のカチオン性キャリアユニットのカチオン性キャリア部分の正電荷とアニオン性ペイロードの負電荷との全体のイオン比は、約１：３、約１：２．５、約１：２、約１：１．５、約１：１、約１：０．５、約０．５：１、約１．５：１、約２：１、約２．５：１、または約３：１である。いくつかの態様では、カチオン性キャリアユニットのカチオン性キャリア部分の正電荷は、溶液中でアニオン性ペイロードと混合される際にミセルを形成するのに十分であり、溶液中のカチオン性キャリアユニットのカチオン性キャリア部分の正電荷とアニオン性ペイロードの負電荷との全体のイオン比は、約１：１である。
いくつかの態様では、カチオン性キャリアユニットは、ＤＮアーゼ及び／またはＲＮアーゼによる分解からアニオン性ペイロードを保護することができる。いくつかの態様では、アニオン性ペイロードは、共有結合によりカチオン性キャリアユニットにコンジュゲートされていない、及び／またはアニオン性ペイロードは、イオン相互作用によってのみカチオン性キャリアユニットのカチオン性キャリア部分と相互作用する。
いくつかの態様では、アニオン性ペイロードの半減期は、ミセルに取り込まれていない遊離アニオン性ペイロードの半減期と比較して延長される。いくつかの態様では、ミセルにおけるカチオン性キャリアユニットのカチオン性キャリア部分の正電荷とアニオン性ペイロードの負電荷とのイオン比は、約３：１、約２．９：１、約２．８：１、約２．７：１、約２．６：１、約２．５：１、約２．４：１、約２．３：１、約２．２：１、約２：１、約１．９：１、約１．８：１、約１．７：１、約１．６：１、約１．５：１、約１．４：１、約１．３：１、約１．２：１、約１．１：１、約１：１、約１：１．１、約１：１．２、約１：１．３、約１：１．４、約１：１．５、約１：１．６、約１：１．７、約１：１．８、約１：１．９、約１：２、約１：２．１、約１：２．２、約１：２．３、約１：２．４、約１：２．５、約１：２．６、約１：２．７、約１：２．８、約１：２．９、または約１：３である。いくつかの態様では、ミセル中のカチオン性キャリアユニットのカチオン性キャリア部分の正電荷とアニオン性ペイロードの負電荷とのイオン比は、約３：１～約１：３である。
いくつかの態様では、ミセルの直径は、約１ｎｍ～１００ｎｍ、約１０ｎｍ～約１００ｎｍ、約１０ｎｍ～約９０ｎｍ、約１０ｎｍ～約８０ｎｍ、約１０ｎｍ～約７０ｎｍ、約２０ｎｍ～約１００ｎｍ、約２０ｎｍ～約９０ｎｍ、約２０ｎｍ～約８０ｎｍ、約２０ｎｍ～約７０ｎｍ、約３０ｎｍ～約１００ｎｍ、約３０ｎｍ～約９０ｎｍ、約３０ｎｍ～約８０ｎｍ、約３０ｎｍ～約７０ｎｍ、約４０ｎｍ～約１００ｎｍ、約４０ｎｍ～約９０ｎｍ、約４０ｎｍ～約８０ｎｍ、または約４０ｎｍ～約７０ｎｍである。
いくつかの態様では、アニオン性ペイロードは、核酸を含む。いくつかの態様では、核酸は、ｍＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡスポンジ、タフデコイｍｉＲＮＡ、ａｎｔｉｍｉｒ、低分子ＲＮＡ、ｒＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｇＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ｐＤＮＡ、ＰＮＡ、ＢＮＡ、アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）、アプタマー、環状ジヌクレオチド、またはそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの態様では、核酸は、少なくとも１つのヌクレオシドアナログを含む。いくつかの態様では、ヌクレオシドアナログは、ロックド核酸（ＬＮＡ）；２’－０－アルキルＲＮＡ；２’－アミノＤＮＡ；２’－フルオロＤＮＡ；アラビノ核酸（ＡＮＡ）；２’－フルオロＡＮＡ、ヘキシトール核酸（ＨＮＡ）、インターカレーティング核酸（ＩＮＡ）、拘束エチルヌクレオシド（ｃＥｔ）、２’－０－メチル核酸（２’－ＯＭｅ）、２’－０－メトキシエチル核酸（２’－ＭＯＥ）、またはそれらの任意の組み合わせを含む。
いくつかの態様では、核酸は、５～３０ヌクレオチド長を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの態様では、ヌクレオチド配列は、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、または２６ヌクレオチド長である。いくつかの態様では、ヌクレオチド配列は、ホスホジエステル結合、リン酸トリエステル結合、メチルホスホン酸結合、ホスホロアミダート結合、ホスホロチオエート結合、及びそれらの組み合わせを含む骨格を有する。いくつかの態様では、核酸は、配列番号１８（ｍｉＲ－４８５ ３ｐ阻害剤）に記載のヌクレオチド配列を含む。
本開示は、本明細書において開示されるカチオン性キャリアユニット及び負に荷電した分子を含む組成物も提供する。本明細書において開示されるカチオン性キャリアユニット、組成物、またはミセル、及び薬学的に許容されるキャリアを含む医薬組成物も提供される。
本開示は、カチオン性キャリア部分を架橋部分及び疎水性部分と連結することを含む、本明細書に開示されるカチオン性キャリアユニットを調製する方法も提供する。いくつかの態様では、方法は、水溶性ポリマーと標的化部分とを連結することをさらに含む。いくつかの態様では、本明細書に開示されるミセルを調製する方法は、溶液中でカチオン性キャリアユニットとアニオン性ペイロードとを、１：１のイオン比で混合することを含む。いくつかの態様では、本明細書に開示されるミセルを調製する方法は、溶液中でカチオン性キャリアユニットとアニオン性ペイロードとを、２：１のイオン比で混合することを含む。いくつかの態様では、本明細書に開示されるミセルを調製する方法は、溶液中でカチオン性キャリアユニットとアニオン性ペイロードとを、約１：３～約３：１のイオン比で混合することを含む。いくつかの態様では、本方法は、ミセルを精製することをさらに含む。
本開示は、疾患または状態の治療を必要とする対象の疾患または状態を治療する方法であって、本開示のミセルまたは医薬組成物を対象に投与することを含む方法も提供する。いくつかの態様では、ミセルの核のアニオン性ペイロードは、ミセルに組み込まれていない対応するアニオン性ペイロードより長い半減期を示す。いくつかの態様では、対象は哺乳動物である。
本開示は、神経変性疾患に罹患している対象における炎症を低減する方法も提供し、当該方法は、治療上有効量の本明細書において開示されるミセルを対象に投与することを含む。
本開示は、神経変性疾患に罹患している対象において神経形成を回復させ、及び／または誘発する方法も提供し、当該方法は、治療上有効量の本明細書において開示されるミセルを対象に投与することを含む。
本開示は、神経変性疾患に罹患している対象の認知機能を改善する方法も提供し、当該方法は、治療上有効量の本明細書において開示されるミセルを対象に投与することを含む。
いくつかの態様では、神経変性疾患は、アルツハイマー病である。
本開示は、アルツハイマー病に罹患している対象におけるアミロイドプラーク負荷を低減する方法も提供し、当該方法は、治療上有効量の本明細書において開示されるミセルを対象に投与することを含む。
本開示のキャリアユニット及びミセルの例示的な構造を示す。例示的なキャリアユニットは、任意選択の組織特異的標的化部分、水溶性ポリマー、及び、カチオン性部分と、架橋部分と、疎水性部分と（それぞれアニオン性ペイロードと相互作用することができる）を含むカチオン性キャリアユニットを含む。 本開示のキャリアユニット及びミセルの例示的な構造を示す。いくつかの態様では、カチオン性キャリアとアニオン性ペイロードとは繋留されておらず、静電的に相互作用する。アニオン性ペイロードの模式図を示す。 本開示のキャリアユニット及びミセルの例示的な構造を示す。いくつかの態様では、カチオン性キャリアとアニオン性ペイロードとは繋留されており、静電的に相互作用する。図１Ａ及び１Ｂのカチオン性キャリアとアニオン性ペイロードとを含むミセルの概略図を示す。 本開示のキャリアユニット及びミセルの例示的な構造を示す。ｓｉＲＮＡ及びコレステロール結合ｓｉＲＮＡ（例えば、アニオン性ペイロード）の模式図を示す。
（Ａ）～（Ｉ）カチオン性キャリアユニットの例示的な組成を示す。（Ａ）標的化部分と、水溶性ポリマー（例えば、ポリエチレングリコール）と、６０個のリシン残基を含むカチオン性キャリアユニットとを含むキャリアユニットを示し、ただし、すべてのリシン残基は修飾されていない（例えば、正に荷電したアミン、例えば、－ＮＨ３＋を含む）。（Ｂ）標的化部分と、水溶性ポリマー（例えば、ポリエチレングリコール）と、４５個のリシン残基を含むカチオン性キャリアユニットとを含むキャリアユニットを示し、ただし、３０個のリシン残基は修飾されておらず（例えば、正に荷電したアミン、例えば、－ＮＨ３ ＋を含む）、１５個のリシン残基は疎水性部分（例えば、ビタミン）を含むように修飾されている。（Ｃ）標的化部分と、水溶性ポリマー（例えば、ポリエチレングリコール）と、６０個のリシン残基を含むカチオン性キャリアユニットとを含むキャリアユニットを示し、ただし、３０個のリシン残基は修飾されておらず（例えば、正に荷電したアミン、例えば、－ＮＨ３ ＋を含む）、３０個のリシン残基は疎水性部分（例えば、ビタミン）を含むように修飾されている。（Ｄ）標的化部分と、水溶性ポリマー（例えば、ポリエチレングリコール）と、６０個のリシン残基を含むカチオン性キャリアユニットとを含むキャリアユニットを示し、ただし、３０個のリシン残基は修飾されておらず（例えば、正に荷電した第四級アミンを含む）、１０個のリシン残基は架橋のために修飾されており（例えば、チオール、アルキルチオール、またはリシン－チオールに連結されている）、２０個のリシン残基は疎水性部分（例えば、ビタミン）を含むように修飾されている。（Ｅ）標的化部分と、水溶性ポリマー（例えば、ポリエチレングリコール）と、８０個のリシン残基を含むカチオン性キャリアユニットとを含むキャリアユニットを示し、ただし、６０個のリシン残基は修飾されておらず（例えば、正に荷電した第四級アミンを含む）、５個のリシン残基は架橋のために修飾されており（例えば、チオール、アルキルチオール、またはリシン－チオールに連結されている）、１５個のリシン残基は疎水性部分（例えば、ビタミン）を含むように修飾されている。（Ｆ）標的化部分と、水溶性ポリマー（例えば、ポリエチレングリコール）と、８０個のリシン残基を含むカチオン性キャリアユニットとを含むキャリアユニットを示し、ただし、５０個のリシン残基は修飾されておらず（例えば、正に荷電した第四級アミンを含む）、５個のリシン残基は架橋のために修飾されており（例えば、チオール、アルキルチオール、またはリシン－チオールに連結されている）、２５個のリシン残基は疎水性部分（例えば、ビタミン）を含むように修飾されている。（Ｇ）標的化部分と、水溶性ポリマー（例えば、ポリエチレングリコール）と、８０個のリシン残基を含むカチオン性キャリアユニットとを含むキャリアユニットを示し、ただし、４５個のリシン残基は修飾されておらず（例えば、正に荷電した第四級アミンを含む）、５個のリシン残基は架橋のために修飾されており（例えば、チオール、アルキルチオール、またはリシン－チオールに連結されている）、３０個のリシン残基は疎水性部分（例えば、ビタミン）を含むように修飾されている。（Ｈ）標的化部分と、水溶性ポリマー（例えば、ポリエチレングリコール）と、８０個のリシン残基を含むカチオン性キャリアユニットとを含むキャリアユニットを示し、ただし、４０個のリシン残基は修飾されておらず（例えば、正に荷電したアミン、例えば、－ＮＨ３ ＋を含む）、１０個のリシン残基は架橋のために修飾されており（例えば、チオール、アルキルチオール、またはリシン－チオールに連結されている）、３０個のリシン残基は疎水性部分（例えば、ビタミン）を含むように修飾されている。（Ｉ）標的化部分と、水溶性ポリマー（例えば、ポリエチレングリコール）と、８０個のリシン残基を含むカチオン性キャリアユニットとを含むキャリアユニットを示し、ただし、３５個のリシン残基は修飾されておらず（例えば、正に荷電したアミン、例えば、－ＮＨ３ ＋を含む）、１５個のリシン残基は架橋のために修飾されており（例えば、チオール、アルキルチオール、またはリシン－チオールに連結されている）、３０個のリシン残基は疎水性部分（例えば、ビタミン）を含むように修飾されている。
ヌクレオチドミセル送達のための組織特異的標的化ポリマー構造及びキャリアの１Ｈ－ＮＭＲ特性を示す。標的化部分（「標的化分子」と表記されている）に相当する１Ｈ－ＮＭＲチャートは、標的化部分（脳の内皮細胞のＬＡＴ１標的に結合する環状構造を有するアミノ酸部分）が支障なく合成されたことを示す。第２の１Ｈ－ＮＭＲチャート（「ポリマー」と表記されている）は、カチオン性ＰＥＧブロックコポリマー（カチオン性キャリア部分及び疎水部分も含む）も合成されたことを示す。
（Ａ）～（Ｅ）アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）ミセルのカチオン性キャリアユニットの例示的な組成を示す。（Ａ）標的化部分と、水溶性ポリマー（例えば、ポリエチレングリコール）と、６０個のリシン残基を含むカチオン性キャリアユニットとを含むキャリアユニットを示し、ただし、６０個のリシン残基は修飾されていない（例えば、正に荷電したアミン、例えば、－ＮＨ３ ＋を含む）。（Ｂ）標的化部分と、水溶性ポリマー（例えば、ポリエチレングリコール）と、４５個のリシン残基を含むカチオン性キャリアユニットとを含むキャリアユニットを示し、ただし、３０個のリシン残基は修飾されておらず（例えば、正に荷電したアミン、例えば、－ＮＨ３ ＋を含む）、１５個のリシン残基は疎水性部分（例えば、ビタミン）を含むように修飾されている。（Ｃ）標的化部分と、水溶性ポリマー（例えば、ポリエチレングリコール）と、６０個のリシン残基を含むカチオン性キャリアユニットとを含むキャリアユニットを示し、ただし、３０個のリシン残基は修飾されておらず（例えば、正に荷電したアミン、例えば、－ＮＨ３ ＋を含む）、３０個のリシン残基は疎水性部分（例えば、ビタミン）を含むように修飾されている。（Ｄ）標的化部分と、水溶性ポリマー（例えば、ポリエチレングリコール）と、６０個のリシン残基を含むカチオン性キャリアユニットとを含むキャリアユニットを示し、ただし、３０個のリシン残基は修飾されておらず（例えば、正に荷電したアミン、例えば、－ＮＨ３ ＋を含む）、１０個のリシン残基は架橋のために修飾されており（例えば、チオール、アルキルチオール、またはリシン－チオールに連結されている）、２０個のリシン残基は疎水性部分（例えば、ビタミン）を含むように修飾されている。（Ｅ）標的化部分と、水溶性ポリマー（例えば、ポリエチレングリコール）と、８０個のリシン残基を含むカチオン性キャリアユニットとを含むキャリアユニットを示し、ただし、３５個のリシン残基は修飾されておらず（例えば、正に荷電したアミン、例えば、－ＮＨ３ ＋を含む）、１５個のリシン残基は架橋のために修飾されており（例えば、チオール、アルキルチオール、またはリシン－チオールに連結されている）、３０個のリシン残基は疎水性部分（例えば、ビタミン）を含むように修飾されている。
ゼータサイザーによって測定された、カチオン性キャリアユニット及びアンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）ミセルの異なる組成について、Ｎ／Ｐ比を増加させたときの粒径及び計数率を示す。化合物Ａの模式図を示す（図４（Ａ）参照）。Ｎ／Ｐ比０．２～２．４の、２１マーヌクレオチド（例えば、アニオン性ペイロード）及びカチオン性キャリアユニットとしての化合物Ａ～Ｄ及びＩを含むミセルの計数率、多分散指数（ＰＤＩ）及び粒径を示す。 ゼータサイザーによって測定された、カチオン性キャリアユニット及びアンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）ミセルの異なる組成について、Ｎ／Ｐ比を増加させたときの粒径及び計数率を示す。化合物Ｂの模式図を示す（図４（Ｂ）参照）。Ｎ／Ｐ比０．２～２．４の、２１マーヌクレオチド（例えば、アニオン性ペイロード）及びカチオン性キャリアユニットとしての化合物Ａ～Ｄ及びＩを含むミセルの計数率、多分散指数（ＰＤＩ）及び粒径を示す。 ゼータサイザーによって測定された、カチオン性キャリアユニット及びアンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）ミセルの異なる組成について、Ｎ／Ｐ比を増加させたときの粒径及び計数率を示す。化合物Ｃの模式図を示す（図４（Ｃ）参照）。Ｎ／Ｐ比０．２～２．４の、２１マーヌクレオチド（例えば、アニオン性ペイロード）及びカチオン性キャリアユニットとしての化合物Ａ～Ｄ及びＩを含むミセルの計数率、多分散指数（ＰＤＩ）及び粒径を示す。 ゼータサイザーによって測定された、カチオン性キャリアユニット及びアンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）ミセルの異なる組成について、Ｎ／Ｐ比を増加させたときの粒径及び計数率を示す。化合物Ｄの模式図を示す（図４（Ｄ）参照）。Ｎ／Ｐ比０．２～２．４の、２１マーヌクレオチド（例えば、アニオン性ペイロード）及びカチオン性キャリアユニットとしての化合物Ａ～Ｄ及びＩを含むミセルの計数率、多分散指数（ＰＤＩ）及び粒径を示す。 ゼータサイザーによって測定された、カチオン性キャリアユニット及びアンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）ミセルの異なる組成について、Ｎ／Ｐ比を増加させたときの粒径及び計数率を示す。化合物Ｉの模式図を示す（図４（Ｅ）参照）。Ｎ／Ｐ比０．２～２．４の、２１マーヌクレオチド（例えば、アニオン性ペイロード）及びカチオン性キャリアユニットとしての化合物Ａ～Ｄ及びＩを含むミセルの計数率、多分散指数（ＰＤＩ）及び粒径を示す。
ｍｉＲ－４８５阻害剤（配列番号１８）（「ＲＮＡ」として示される）を封入したミセルの単回脳室内投与後にマウスの脳皮質でＳＩＲＴ１及びＰＧＣ－１αの発現が増加することを示す。ｍｉＲ－４８５阻害剤をロードしたミセルの投与（１００μｇ／マウス）の６、２４、４８、及び７２時間後のＳＩＲＴ１（左のグラフ）及びＰＧＣ－１α（右のグラフ）の発現レベルを示す。ＳＩＲＴ１及びＰＧＣ－１αの発現レベルはコントロール（すなわち、ｍｉＲ－４８５阻害剤で処理しなかったマウスにおける発現レベル）に対して正規化して示されている。示されるパーセントの値は、ｍｉＲ－４８５阻害剤投与の４８時間後のコントロールに対するＳＩＲＴ１及びＰＧＣ－１αの発現の平均増加率（％）を表す。示されるｐ値は、ｔ検定のｐ値を表す。
ＲＮＡをロードしたミセル、すなわち、ｍｉＲ－４８５阻害剤（配列番号１８）を封入したミセルの単回脳室内投与後にマウスの海馬でＳＩＲＴ１及びＰＧＣ－１αの発現が増加することを示す。ｍｉＲ－４８５阻害剤の投与（１００μｇ／マウス）の６、２４、４８、及び７２時間後のＳＩＲＴ１（左のグラフ）及びＰＧＣ－１α（右のグラフ）の発現レベルを示す。ＳＩＲＴ１及びＰＧＣ－１αの発現レベルはコントロール（すなわち、ｍｉＲ－４８５阻害剤で処理しなかったマウスにおける発現レベル）に対して正規化して示されている。示されるパーセントの値は、ｍｉＲ－４８５阻害剤投与の２４時間後のコントロールに対するＳＩＲＴ１及びＰＧＣ－１αの発現の平均増加率（％）を表す。示されるｐ値は、ｔ検定のｐ値を表す。
ｍｉＲ－４８５阻害剤を含むミセルの単回脳室内投与（１００μｇ／マウス）後にマウスの脳でＣＤ３６の発現が増加することを示す。ｍｉＲ－４８５阻害剤の投与（１００μｇ／マウス）の２４、４８、７２、及び１２０時間後のＣＤ３６の発現レベルを示す。ＣＤ３６の発現はコントロール（すなわち、ｍｉＲ－４８５阻害剤で処理しなかったマウスにおける発現レベル）に対して正規化して示されている。示されるパーセントの値は、ｍｉＲ－４８５阻害剤投与の４８時間後のコントロールに対するＣＤ３６の発現の平均増加率（％）を表す。示されるｐ値は、ｔ検定のｐ値を表す。
コレステロール結合ｓｉＲＮＡと本明細書に記載のキャリアユニットとの間のミセル形成を推進する分子力の模式図を示す。
（Ａ）～（Ｄ）コレステロール結合ｓｉＲＮＡミセルのカチオン性キャリアユニットの例示的な組成を示す。（Ａ）標的化部分と、水溶性ポリマー（例えば、ポリエチレングリコール）と、８０個のリシン残基を含むカチオン性キャリアユニットとを含むキャリアユニットを示し、ただし、６０個のリシン残基は修飾されておらず（例えば、正に荷電したアミン、例えば、－ＮＨ３ ＋を含む）、５個のリシン残基は架橋のために修飾されており（例えば、チオール、アルキルチオール、またはリシン－チオールに連結されている）、１５個のリシン残基は疎水性部分（例えば、ビタミン）を含むように修飾されている。（Ｂ）標的化部分と、水溶性ポリマー（例えば、ポリエチレングリコール）と、８０個のリシン残基を含むカチオン性キャリアユニットとを含むキャリアユニットを示し、ただし、５０個のリシン残基は修飾されておらず（例えば、正に荷電したアミン、例えば、－ＮＨ３ ＋を含む）、５個のリシン残基は架橋のために修飾されており（例えば、チオール、アルキルチオール、またはリシン－チオールに連結されている）、２５個のリシン残基は疎水性部分（例えば、ビタミン）を含むように修飾されている。（Ｃ）標的化部分と、水溶性ポリマー（例えば、ポリエチレングリコール）と、８０個のリシン残基を含むカチオン性キャリアユニットとを含むキャリアユニットを示し、ただし、４５個のリシン残基は修飾されておらず（例えば、正に荷電したアミン、例えば、－ＮＨ３ ＋を含む）、５個のリシン残基は架橋のために修飾されており（例えば、チオール、アルキルチオール、またはリシン－チオールに連結されている）、３０個のリシン残基は疎水性部分（例えば、ビタミン）を含むように修飾されている。（Ｄ）標的化部分と、水溶性ポリマー（例えば、ポリエチレングリコール）と、８０個のリシン残基を含むカチオン性キャリアユニットとを含むキャリアユニットを示し、ただし、４０個のリシン残基は修飾されておらず（例えば、正に荷電したアミン、例えば、－ＮＨ３ ＋を含む）、１０個のリシン残基は架橋のために修飾されており（例えば、チオール、アルキルチオール、またはリシン－チオールに連結されている）、３０個のリシン残基は疎水性部分（例えば、ビタミン）を含むように修飾されている。
（Ａ）～（Ｄ）それぞれ図１０Ａ～１０Ｄに示されるミセルについて、ポリマー（例えば、キャリアユニット）とコレステロール結合ｓｉＲＮＡとのモル比、及びそれらの対応する粒径（ナノメートル）を示す。
図１０（Ａ）～１０（Ｄ）に示されるキャリアユニットについて、疎水性相互作用によるミセル封入効率の変化を表すチャートを示す。
最適なコレステロール結合ｓｉＲＮＡ（例えば、１４～３０マー）のミセル封入のためのキャリアユニットを示す。
ｓｉＲＮＡとポリマー（例えば、本明細書に記載のキャリアユニット）との間のミセル形成のための分子力を示す。
（Ａ）～（Ｅ）ｓｉＲＮＡ（例えば、２１マー）ミセルのカチオン性キャリアユニットの例示的な組成を示す。（Ａ）標的化部分と、水溶性ポリマー（例えば、ポリエチレングリコール）と、８０個のリシン残基を含むカチオン性キャリアユニットとを含むキャリアユニットを示し、ただし、６０個のリシン残基は修飾されておらず（例えば、正に荷電したアミン、例えば、－ＮＨ３ ＋を含む）、５個のリシン残基は架橋のために修飾されており（例えば、チオール、アルキルチオール、またはリシン－チオールに連結されている）、１５個のリシン残基は疎水性部分（例えば、ビタミン）を含むように修飾されている。（Ｂ）標的化部分と、水溶性ポリマー（例えば、ポリエチレングリコール）と、８０個のリシン残基を含むカチオン性キャリアユニットとを含むキャリアユニットを示し、ただし、５０個のリシン残基は修飾されておらず（例えば、正に荷電したアミン、例えば、－ＮＨ３ ＋を含む）、５個のリシン残基は架橋のために修飾されており（例えば、チオール、アルキルチオール、またはリシン－チオールに連結されている）、２５個のリシン残基は疎水性部分（例えば、ビタミン）を含むように修飾されている。（Ｃ）標的化部分と、水溶性ポリマー（例えば、ポリエチレングリコール）と、８０個のリシン残基を含むカチオン性キャリアユニットとを含むキャリアユニットを示し、ただし、４５個のリシン残基は修飾されておらず（例えば、正に荷電したアミン、例えば、－ＮＨ３ ＋を含む）、５個のリシン残基は架橋のために修飾されており（例えば、チオール、アルキルチオール、またはリシン－チオールに連結されている）、３０個のリシン残基は疎水性部分（例えば、ビタミン）を含むように修飾されている。（Ｄ）標的化部分と、水溶性ポリマー（例えば、ポリエチレングリコール）と、８０個のリシン残基を含むカチオン性キャリアユニットとを含むキャリアユニットを示し、ただし、４０個のリシン残基は修飾されておらず（例えば、正に荷電したアミン、例えば、－ＮＨ３ ＋を含む）、１０個のリシン残基は架橋のために修飾されており（例えば、チオール、アルキルチオール、またはリシン－チオールに連結されている）、３０個のリシン残基は疎水性部分（例えば、ビタミン）を含むように修飾されている。（Ｅ）標的化部分と、水溶性ポリマー（例えば、ポリエチレングリコール）と、８０個のリシン残基を含むカチオン性キャリアユニットとを含むキャリアユニットを示し、ただし、３５個のリシン残基は修飾されておらず（例えば、正に荷電したアミン、例えば、－ＮＨ３ ＋を含む）、１５個のリシン残基は架橋のために修飾されており（例えば、チオール、アルキルチオール、またはリシン－チオールに連結されている）、３０個のリシン残基は疎水性部分（例えば、ビタミン）を含むように修飾されている。
ゼータサイザーによって測定された、カチオン性キャリアユニット及びｓｉＲＮＡ（例えば、２１マー）ミセルの異なる組成について、Ｎ／Ｐ比を増加させたときの粒径及び計数率を示す。化合物Ｅの模式図を示す（図１５（Ａ）参照）。Ｎ／Ｐ比０．２～２．４の、２１マーヌクレオチド（例えば、アニオン性ペイロード）及びカチオン性キャリアユニットとしての化合物Ｅ～Ｉを含むミセルの計数率及び粒径も示す。 ゼータサイザーによって測定された、カチオン性キャリアユニット及びｓｉＲＮＡ（例えば、２１マー）ミセルの異なる組成について、Ｎ／Ｐ比を増加させたときの粒径及び計数率を示す。化合物Ｆの模式図を示す（図１５（Ｂ）参照）。Ｎ／Ｐ比０．２～２．４の、２１マーヌクレオチド（例えば、アニオン性ペイロード）及びカチオン性キャリアユニットとしての化合物Ｅ～Ｉを含むミセルの計数率及び粒径も示す。 ゼータサイザーによって測定された、カチオン性キャリアユニット及びｓｉＲＮＡ（例えば、２１マー）ミセルの異なる組成について、Ｎ／Ｐ比を増加させたときの粒径及び計数率を示す。化合物Ｇの模式図を示す（図１５（Ｃ）参照）。Ｎ／Ｐ比０．２～２．４の、２１マーヌクレオチド（例えば、アニオン性ペイロード）及びカチオン性キャリアユニットとしての化合物Ｅ～Ｉを含むミセルの計数率及び粒径も示す。 ゼータサイザーによって測定された、カチオン性キャリアユニット及びｓｉＲＮＡ（例えば、２１マー）ミセルの異なる組成について、Ｎ／Ｐ比を増加させたときの粒径及び計数率を示す。化合物Ｈの模式図を示す（図１５（Ｄ）参照）。Ｎ／Ｐ比０．２～２．４の、２１マーヌクレオチド（例えば、アニオン性ペイロード）及びカチオン性キャリアユニットとしての化合物Ｅ～Ｉを含むミセルの計数率及び粒径も示す。 ゼータサイザーによって測定された、カチオン性キャリアユニット及びｓｉＲＮＡ（例えば、２１マー）ミセルの異なる組成について、Ｎ／Ｐ比を増加させたときの粒径及び計数率を示す。化合物Ｉの模式図を示す（図１５（Ｅ）参照）。Ｎ／Ｐ比０．２～２．４の、２１マーヌクレオチド（例えば、アニオン性ペイロード）及びカチオン性キャリアユニットとしての化合物Ｅ～Ｉを含むミセルの計数率及び粒径も示す。
（Ａ）～（Ｅ）それぞれ、図１５（Ａ）～１５（Ｅ）のミセル（すなわち、化合物Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、及びＩ）について、ポリマー（例えば、キャリアユニット）とｓｉＲＮＡとのモル比を示す。
最適なｓｉＲＮＡ（例えば、１４～３０マー）のミセル封入のためのキャリアユニットを示す。
異なる濃度のｓｉＲＮＡミセルで処理した後のＧＬ２６１ Ｒｅｄ－ＦＬｕｃ細胞の細胞生存率を示す。
（Ａ）及び（Ｂ）ＩＶＩＳ（登録商標）によって測定した、ルシフェラーゼアッセイを使用したｓｉＲＮＡミセルのインビトロｍＲＮＡノックダウン効果を示す。
本開示は、水溶性バイオポリマー部分（例えば、ＰＥＧ）、荷電部分（例えば、ポリリシン）、架橋部分、及び疎水性部分を含むキャリアユニットを対象とする。カチオン性キャリアユニットは、ユニットがアニオン性ペイロードと相互作用する際、ミセルにパッケージ化することができ、その際、ペイロードはミセルのコアに位置し、水溶性バイオポリマー部分は溶媒に面し、架橋部分は１つのユニットを他のキャリアユニットと架橋し、疎水性部分はミセルの表面に露出する。様々な態様の非限定的な例を本開示に示す。
記載される特定の組成物またはプロセスステップは無論のこと異なりうることから、本開示をより詳細に記載するのに先立って、本開示は特定の組成物またはプロセスステップに限定されない点を理解されたい。本開示を読むことで当業者には明らかであるように、本明細書に記載及び図示される個々の態様の各々は、本開示の範囲または趣旨から逸脱することなく、他のいくつかの態様のいずれかから容易に分離され得るか、またはそれらの特徴と組み合わされ得る別個の構成要素及び特徴を有する。列挙されるいずれの方法も、列挙される事象の順序で、または論理的に可能な任意の他の順序で実施され得る。
本明細書に示される見出しは本開示の様々な態様を限定するものではなく、本開示の態様は、本明細書の全体を参照することによって定義されうるものである。本開示の範囲は添付の特許請求の範囲によってのみ限定されるものであるので、本明細書で使用される用語は、あくまで特定の態様を説明するためのものであって、限定することを目的としたものではない点も理解されるべきである。
したがって、直下に定義される用語は、明細書全体を参照することによって、より完全に定義される。
Ｉ．定義
本明細書がより容易に理解され得るように、特定の用語を最初に定義する。さらなる定義は、「発明を実施するための形態」の全体を通じて記載される。
「ａ」または「ａｎ」なる用語で示される実体は、その実体の１つ以上を指し、例えば、「ａ ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅ」（ヌクレオチド配列）は、１つ以上のヌクレオチド配列を表すものとして理解される点に留意されたい。したがって、「ａ」（または「ａｎ」）、ならびに「ｏｎｅ ｏｒ ｍｏｒｅ」（１つ以上の）、及び「ａｔ ｌｅａｓｔ ｏｎｅ」（少なくとも１つの）は、本開示では互換的に用いられる場合がある。各請求項は、あらゆる任意選択的な要素を除外するように起草される場合もある点にも留意されたい。したがって、この記載は、請求項の要素の記載との関連において「～だけの」、「～のみ」などといった除外的な語の使用に対する、または否定による限定の使用に対する先行詞としての役割を有するものとする。
さらに、本明細書で使用する場合、「及び／または」とは、他方を伴うかまたは伴わない、２つの特定の特性または要素のそれぞれの具体的な開示として理解されるべきである。したがって、本明細書で「Ａ及び／またはＢ」などの語句で使用される「及び／または」という用語は、「Ａ及びＢ」、「ＡまたはＢ」、「Ａ」（単独）、及び「Ｂ」（単独）を含むことが意図される。同様に、「Ａ、Ｂ、及び／またはＣ」といった語句で使用される「及び／または」なる用語は、以下の態様、すなわち、Ａ、Ｂ、及びＣ、Ａ、Ｂ、またはＣ、ＡまたはＣ、ＡまたはＢ、ＢまたはＣ、Ａ及びＣ、Ａ及びＢ、Ｂ及びＣ、Ａ（のみ）、Ｂ（のみ）、ならびにＣ（のみ）のそれぞれを包含するものとする。
本明細書において「ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ（含む）」なる文言で態様が説明されている場合は常に、「ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ（からなる）」及び／または「ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ（から本質的になる）」なる用語で記載される他の類似の態様も提供される点を理解されたい。
別段の定義がなされないかぎり、本明細書で使用されるすべての技術用語および科学用語は、本開示が関連する技術分野の当業者によって一般的に理解されるものと同じ意味を有するものとする。例えば、Ｃｏｎｃｉｓｅ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｂｉｏｍｅｄｉｃｉｎｅ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｕｏ，Ｐｅｉ－Ｓｈｏｗ，２ｎｄ ｅｄ．，２００２，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ、Ｔｈｅ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，３ｒｄ ｅｄ．，１９９９，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、及びＯｘｆｏｒｄ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ Ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｒｅｖｉｓｅｄ，２０００，Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓは、当業者に、本開示で使用される用語の多くについての一般的な辞書を与えるものである。
単位、接頭辞、及び記号は、それらのＳｙｓｔｅｍｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ｄｅ Ｕｎｉｔｅｓ（ＳＩ）で承認された形式で示される。数値範囲は、その範囲を規定する数値を含むものとする。数値の範囲が記載されている場合、その範囲の記載された上限と下限との間にあるそれぞれの介在する整数値、及びそのそれぞれの分数もまた、そのような値の間のそれぞれの部分範囲とともに具体的に開示される点は理解されるべきである。任意の範囲の上限値及び下限値は独立してその範囲に含まれる場合も、その範囲から除外される場合もあるが、どちらかの限界値が含まれるか、どちらの限界値も含まれないか、または両方の限界値が含まれるそれぞれの範囲もまた、本開示に包含される。したがって、本明細書に記載される範囲は、記載される端点を含む、その範囲内のすべての値の簡略的な表記であるものとして理解される。例えば、１～１０の範囲は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、及び１０からなる群からの任意の数、数の組み合わせ、または部分範囲を含むものとして理解される。
値が明示的に記載されている場合、記載されている値とほぼ同じ数または量である値もまた、本開示の範囲内に含まれる点を理解されたい。ある組み合わせが開示される場合、その組み合わせの要素の部分的な組み合わせのそれぞれも具体的に開示され、本開示の範囲内に含まれる。逆に、異なる要素または要素群が個別に開示される場合、それらの組み合わせも開示される。ある開示の任意の要素が複数の選択肢を有するものとして開示される場合、各選択肢が単独で、または他の選択肢との任意の組み合わせとして除外されるその開示の例もまた、本明細書に開示される。つまり、ある開示の複数の要素がそのような除外を有することができ、そのような除外を有する要素のすべての組み合わせが本明細書に開示される。
ヌクレオチドは、それらの広く認められている１文字の略号で呼称する。特に断らない限り、ヌクレオチド配列は５’から３’の方向に左から右に記載する。本明細書においてヌクレオチドは、ＩＵＰＡＣ－ＩＵＢ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ Ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎにより推奨される一般的に公知のヌクレオチドの１文字記号により表記される。したがって、「ａ」はアデニンを表し、「ｃ」はシトシンを表し、「ｇ」はグアニンを表し、「ｔ」はチミンを表し、「ｕ」はウラシルを表す。
アミノ酸配列はアミノ末端からカルボキシ末端の方向に左から右に記載する。本明細書においてアミノ酸は、ＩＵＰＡＣ－ＩＵＢ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ Ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎにより推奨される、一般的に公知のアミノ酸の３文字記号または１文字記号により表記される。
「約」という用語は、本明細書では、およそ、大体、おおよそ、またはその範囲内の意味で使用される。「約」という用語が数値範囲とともに使用される場合、記載される数値よりも上及び下の境界値を広げることによって、その範囲を修飾する。一般に、「約」という用語は、例えば、上または下に１０パーセント（より高いまたはより低い）の変動で、明示される値の上及び下に数値を修正することができる。
「投与」、「投与すること」という用語、及びその文法的変化形は、本開示のミセルなどの組成物を、薬学的に許容される経路により対象に導入することを指す。本開示のミセルなどの組成物の対象への導入は、腫瘍内、経口的、肺、鼻腔内、非経口的（静脈内、動脈内、筋肉内、腹腔内、または皮下）、直腸に、リンパ内、クモ膜下腔内、眼球周囲、または局所的が挙げられる任意の好適な経路によるものである。投与は、自己投与及び他者による投与を含む。適当な投与経路によって、組成物または薬剤はその目的とする機能を実行することができる。例えば、適当な経路が静脈内である場合、組成物は、組成物または薬剤を対象の静脈内に導入することによって投与される。
本明細書で使用する場合、「およそ」という用語は、対照とする１つ以上の値に適用される場合、規定の参照値と同様の値を指す。ある特定の態様では、「ほぼ」という用語は、特に明記しない限り、または他のことが文脈から明らかでない限り、明示される参照値の両方向に（数を超えるか、またはそれ未満の）１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、またはそれ以下の範囲内の値の範囲を指す（かかる数がとり得る値の１００％を超える場合を除く）。
本明細書で使用する場合、「保存された」という用語は、比較されている２つ以上の配列の同じ位置において不変に見出されるものである、それぞれポリヌクレオチド配列またはポリペプチド配列のヌクレオチドまたはアミノ酸残基を指す。相対的に保存されているヌクレオチドまたはアミノ酸は、配列の他の部分で出現するヌクレオチドまたはアミノ酸と比べてより関連する配列の間で保存されているものである。
カチオン性キャリアとの関連で使用される任意のアミノ酸、例えばリシンは、その天然の側基（例えば、リシンの－ＮＨ３ ＋）を有することによって、または修飾された側基を有することによって正電荷を有する。架橋部分または疎水性部分との関連で使用される任意のアミノ酸、例えばリシンは、正電荷を持たなくてもよく、それぞれ、アミド結合またはリンカーによって架橋剤（例えばチオール）または疎水性剤（例えばビタミンＢ３）と結合させることができる。
本明細書で使用する場合、「Ｎ／Ｐ比」という用語は、カチオン性キャリアユニットとアニオン性ペイロードが溶液中で互いに混合される際の、カチオン性キャリアユニットのカチオン性キャリア部分中のプロトン化アミンとアニオン性ペイロード中のリン酸塩とのモル比を意味する。
いくつかの態様では、２つ以上の配列は、それらが互いに１００％同一である場合、「完全に保存されている」または「同一である」と言われる。いくつかの態様では、２つ以上の配列は、それらが互いに少なくとも７０％同一であるか、少なくとも８０％同一であるか、少なくとも９０％同一であるか、または少なくとも９５％同一である場合、「高度に保存されている」と言われる。いくつかの態様では、２つ以上の配列は、それらが互いに約７０％同一であるか、約８０％同一であるか、約９０％同一であるか、約９５％同一であるか、約９８％同一であるか、または約９９％同一である場合、「高度に保存されている」と言われる。いくつかの態様では、２つ以上の配列は、それらが互いに少なくとも３０％同一であるか、少なくとも４０％同一であるか、少なくとも５０％同一であるか、少なくとも６０％同一であるか、少なくとも７０％同一であるか、少なくとも８０％同一であるか、少なくとも９０％同一であるか、または少なくとも９５％同一である場合、「保存されている」と言われる。いくつかの態様では、２つ以上の配列は、それらが互いに約３０％同一であるか、約４０％同一であるか、約５０％同一であるか、約６０％同一であるか、約７０％同一であるか、約８０％同一であるか、約９０％同一であるか、約９５％同一であるか、約９８％同一であるか、または約９９％同一である場合、「保存されている」と言われる。配列の保存は、ポリヌクレオチドまたはポリペプチドの全長に適用され得るか、または部分、領域、もしくはそれらの特徴に適用され得る。
本明細書で使用する場合、「由来する」という用語は、特定の分子もしくは生物または情報（例えば、アミノ酸または核酸の配列）を使用して、特定の分子もしくは生物から単離されるか、製造される構成要素を指す。例えば、第２の核酸配列に由来する核酸配列は、第２の核酸配列のヌクレオチド配列と同一であるか、または実質的に類似するヌクレオチド配列を含み得る。ヌクレオチドまたはポリペプチドの場合、派生した種は、例えば、自然に生じる変異誘発、人為的定方向突然変異誘発、または人為的ランダム変異誘発により得られ得る。ヌクレオチドまたはポリペプチドを派生させるために使用される変異誘発は、意図的に定方向、もしくは意図的にランダムであるか、または各々の組み合わせである。最初のものに由来する異なるヌクレオチドまたはポリペプチドを作製するためのヌクレオチドまたはポリペプチドの変異誘発は、ランダム事象（例えば、ポリメラーゼの不忠実さにより引き起こされる）であり得、派生したヌクレオチドまたはポリペプチドの同定は、例えば、本明細書において述べられる適切なスクリーニング法によりなされ得る。ポリペプチドの変異誘発は、通常、ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドの操作を伴う。一部の態様では、第２のヌクレオチドまたはアミノ酸配列に由来するヌクレオチドまたはアミノ酸配列は、それぞれ第２のヌクレオチドまたはアミノ酸配列に対する少なくとも約５０％、少なくとも約５１％、少なくとも約５２％、少なくとも約５３％、少なくとも約５４％、少なくとも約５５％、少なくとも約５６％、少なくとも約５７％、少なくとも約５８％、少なくとも約５９％、少なくとも約６０％、少なくとも約６１％、少なくとも約６２％、少なくとも約６３％、少なくとも約６４％、少なくとも約６５％、少なくとも約６６％、少なくとも約６７％、少なくとも約６８％、少なくとも約６９％、少なくとも約７０％、少なくとも約７１％、少なくとも約７２％、少なくとも約７３％、少なくとも約７４％、少なくとも約７５％、少なくとも約７６％、少なくとも約７７％、少なくとも約７８％、少なくとも約７９％、少なくとも約８０％、少なくとも約８１％、少なくとも約８２％、少なくとも約８３％、少なくとも約８４％、少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％の配列同一性を有し、ここで、第１のヌクレオチドまたはアミノ酸配列は、第２のヌクレオチドまたはアミノ酸配列の生物活性を保持する。
「相補的」及び「相補性」という用語は、ワトソン・クリック型塩基対形成則により互いに関連する２つ以上のオリゴマー（すなわち、それぞれが核酸塩基配列を含む）、またはオリゴマーと標的遺伝子との間を指す。例えば、核酸塩基配列「Ｔ－Ｇ－Ａ（５’→３’）」は、核酸塩基配列「Ａ－Ｃ－Ｔ（３’→５’）」に相補的である。相補性は「部分的」であり得、その場合、所与の核酸塩基配列の核酸塩基のすべてより少ないものが塩基対形成則に従って他の核酸塩基配列と一致している。例えば、いくつかの態様では、所与の核酸塩基配列と他の核酸塩基配列との間の相補性は、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、または約９５％であり得る。または例のような、「完璧な」または「完全な」（１００％）相補性が、所与の核酸塩基配列と他の核酸塩基配列との間に存在し得る。核酸塩基配列間の相補性の程度は、配列間のハイブリダイゼーションの効率及び強度に顕著な影響を与える。
「下流」という用語は、参照ヌクレオチド配列の３’側に存在するヌクレオチド配列を指す。ある特定の態様では、下流ヌクレオチド配列は、転写開始点に続く配列に関する。例えば、遺伝子の翻訳開始コドンは、転写開始部位の下流に存在する。
「賦形剤」及び「キャリア」という用語は、互換的に使用され、化合物の投与をさらに容易にするために医薬組成物に添加される不活性物質を指す。
本明細書で使用する場合、「相同性」という用語は、ポリマー分子間、例えば核酸分子間（例えば、ＤＮＡ分子及び／またはＲＮＡ分子）及び／またはポリペプチド分子間の全体的関連性を指す。一般に、「相同性」という用語は、２つの分子の進化的関係を意味する。したがって、相同な２つの分子は、共通の進化的祖先を有する。本開示との関連で、相同性という用語は、同一性及び類似性の両方を包含する。
いくつかの態様では、ポリマー分子は、分子における少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または少なくとも約９９％のモノマーが同一（厳密に同じモノマー）であるか、または類似する（保存的置換）場合、互いに「相同である」とみなされる。「相同である」という用語は、必然的に少なくとも２つの配列（ポリヌクレオチドまたはポリペプチド配列）間の比較を指す。
本明細書で使用する場合、「同一性」という用語は、ポリマー分子間、例えば、ポリペプチド分子またはポリヌクレオチド分子（例えば、ＤＮＡ分子及び／またはＲＮＡ分子）間の全体的なモノマー保存を指す。いかなる追加の修飾語もない「同一である」という用語、例えば、「タンパク質Ａはタンパク質Ｂと同一である」は、配列が１００％同一（１００％の配列同一性）であることを意味する。例えば、「７０％同一である」と２つの配列を表現することは、例えば、「７０％配列同一性」を有するとそれらを表現することに等しい。
２つのポリペプチドまたはポリヌクレオチド配列の同一率（％）の計算は、例えば、最適な比較のために２つの配列をアラインメントすることにより実行され得る（例えば、最適なアラインメントのために第１及び第２のポリペプチドまたはポリヌクレオチド配列の一方または両方にギャップが導入され得、同一でない配列が比較のために無視され得る）。ある特定の態様では、比較のためにアラインメントされる配列の長さは、参照配列の全長の少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または約１００％である。次いで、対応するアミノ酸位のアミノ酸、またはポリヌクレオチドの場合は塩基が比較される。
第１の配列におけるある位置が第２の配列における対応する位置と同じアミノ酸により占められる場合、分子はその位置で同一である。２つの配列間の同一率（％）は、２つの配列の最適なアラインメントのために導入される必要があるギャップの数及び各ギャップの長さを考慮した、配列により共有される同一の位置の数の関数である。配列の比較及び２つの配列間の同一率（％）の決定は、数学アルゴリズムを使用して達成され得る。
適当なソフトウェアプログラムは、さまざまな販売元から入手可能であり、タンパク質及びヌクレオチド配列の両方のアライメント用のものがある。配列同一率（％）を決定するための適当なプログラムの１つに、米国政府のＮａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ ＢＬＡＳＴウェブサイト（ｂｌａｓｔ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ）から入手可能なＢＬＡＳＴパッケージプログラムの一部であるｂｌ２ｓｅｑがある。Ｂｌ２ｓｅｑは、ＢＬＡＳＴＮまたはＢＬＡＳＴＰアルゴリズムのいずれかを使用して、２個の配列間の比較を行う。ＢＬＡＳＴＮが核酸配列を比較するために使用されるのに対して、ＢＬＡＳＴＰはアミノ酸配列を比較するために使用される。他の好適なプログラムは、例えば、ＥＭＢＯＳＳバイオインフォマティクスプログラム集の一部であり、またｗｗｗ．ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／Ｔｏｏｌｓ／ｐｓａのＥｕｒｏｐｅａｎ Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（ＥＢＩ）から利用可能である、Ｎｅｅｄｌｅ、Ｓｔｒｅｔｃｈｅｒ、Ｗａｔｅｒ、またはＭａｔｃｈｅｒである。
配列アライメントは、当該技術分野において公知の方法、例えば、ＭＡＦＦＴ、Ｃｌｕｓｔａｌ（ＣｌｕｓｔａｌＷ、Ｃｌｕｓｔａｌ Ｘ、またはＣｌｕｓｔａｌ Ｏｍｅｇａ）、ＭＵＳＣＬＥなどを使用して実施され得る。
ポリヌクレオチドまたはポリペプチド参照配列と整列する単一のポリヌクレオチドまたはポリペプチド標的配列内の異なる領域は、それぞれ、それら自体の配列同一率（％）を有することができる。配列同一率（％）は、１０分の１の位に四捨五入される点に留意されたい。たとえば、８０．１１、８０．１２、８０．１３、及び８０．１４は、８０．１に切り捨てられ、８０．１５、８０．１６、８０．１７、８０．１８、及び８０．１９は８０．２に切り上げられる。また、長さの値は常に整数である点に留意されたい。
ある特定の態様では、同一性パーセンテージ（％ＩＤ）または第１のアミノ酸配列（または核酸配列）の第２のアミノ酸配列（または核酸配列）に対する同一性パーセンテージ（％ＩＤ）は、％ＩＤ＝１００×（Ｙ／Ｚ）として計算され、式中、Ｙは、第１及び第２の配列のアラインメント（目視検査または特定の配列アライメントプログラムによりアラインメントされる）において完全な一致と評価されたアミノ酸残基（または核酸塩基）の数であり、Ｚは、第２の配列における残基の総数である。第１の配列の長さが第２の配列を超える場合、第１の配列の第２の配列に対する同一率（％）は、第２の配列の第１の配列に対する同一率（％）より高くなるであろう。
当業者であれば、配列同一率（％）を計算するための配列アラインメントの生成が、一次配列データによってのみ行われるバイナリー配列間比較に限定されない点は理解されよう。配列アライメントは、配列データを異種の供給源由来のデータ、例えば、構造データ（例えば、タンパク質結晶構造）、機能データ（例えば、変異の位置）、または系統学的データと統合することにより生成され得ることも理解されよう。異種のデータを統合して多重配列アラインメントを生成する好適なプログラムは、ｗｗｗ．ｔｃｏｆｆｅｅ．ｏｒｇで利用可能であり、代替的に例えば、ＥＢＩから利用可能なＴ－Ｃｏｆｆｅｅである。配列同一率（％）を計算するために使用される最終的なアラインメントは、自動または手動のいずれかで管理され得ることも理解されよう。
本明細書で使用する場合、「単離された」、「精製された」、「抽出された」という用語、及びそれらの文法的変化形は、互換的に使用され、１つ以上の精製プロセスを受けた本開示の所望の組成物の調製状態を指す。いくつかの態様では、本明細書で使用する場合、単離または精製は、夾雑物を含有する試料から本開示の組成物を取り出す、（例えば、画分を）部分的に取り出すプロセスである。いくつかの態様では、単離された組成物は、検出可能な望ましくない活性を有さないか、または代替的に、望ましくない活性のレベルもしくは量が許容可能なレベルまたは量以下である。他の態様では、単離された組成物は、許容可能な量及び／または濃度及び／または活性以上の量及び／または濃度の本開示の所望の組成物を有する。他の態様では、単離された組成物は、組成物が取得される出発物質と比較して濃縮される。この濃縮は、出発物質と比較して少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、少なくとも約９９．９％、少なくとも約９９．９９％、少なくとも約９９．９９９％、少なくとも約９９．９９９９％、または９９．９９９９％超であり得る。いくつかの態様では、単離された調製物は、残留する生物学的産物を実質的に含まない。いくつかの態様では、単離された調製物は、任意の混入している生物学的物質を１００％、少なくとも約９９％、少なくとも約９８％、少なくとも約９７％、少なくとも約９６％、少なくとも約９５％、少なくとも約９４％、少なくとも約９３％、少なくとも約９２％、少なくとも約９１％、または少なくとも約９０％含まない。残留する生物学的産物は、非生物物質（化学物質を含む）または不要な核酸、タンパク質、脂質、もしくは代謝産物を含み得る。
本明細書で使用する場合、「連結された」という用語は、共有結合または非共有結合によりそれぞれ第２のアミノ酸配列またはポリヌクレオチド配列に結合された、第１のアミノ酸配列またはポリヌクレオチド配列を指す。第１のアミノ酸またはポリヌクレオチド配列は、第２のアミノ酸またはポリヌクレオチド配列に直接的に結合もしくは並列され得るか、または代替的に介在配列が第１の配列から第２の配列までに共有結合により加わり得る。「連結された」という用語は、第１のポリヌクレオチド配列の第２のポリヌクレオチド配列への５’末端または３’末端での融合を意味するだけでなく、第２のポリヌクレオチド配列（または第１のポリヌクレオチド配列）における任意の２つのヌクレオチドへの第１のポリヌクレオチド配列（またはそれぞれ第２のポリヌクレオチド配列）全体の挿入も含む。第１のポリヌクレオチド配列は、ホスホジエステル結合またはリンカーにより第２のポリヌクレオチド配列に連結され得る。リンカーは、例えば、ポリヌクレオチドであり得る。
「ｍｉＲＮＡ」または「ｍｉＲ」または「マイクロＲＮＡ」という用語は、互換的に使用され、ＲＮＡベースの遺伝子調節に関与する真核生物において見出されるマイクロＲＮＡ分子を指す。この用語は、前駆体からプロセシングされた一本鎖ＲＮＡ分子を指すために使用される。本開示に関連するｍｉＲＮＡの名称及びそれらの配列は、本明細書において提供される。マイクロＲＮＡは、不完全な塩基対形成により標的ｍＲＮＡを認識及びそれに結合し、標的ｍＲＮＡの不安定化または翻訳阻害をもたらし、これにより、標的遺伝子発現を下方調節する。逆に、ｍｉＲＮＡ結合部位を含む分子（一般にｍｉＲＮＡのシード領域に相補的な配列を含む分子）によるｍｉＲＮＡの標的化は、ｍｉＲＮＡにより誘発される翻訳阻害を低減または阻害し得、標的遺伝子の上方調節をもたらす。
「ミスマッチ」または「複数のミスマッチ」という用語は、オリゴマー核酸塩基配列における塩基対形成則に従って標的プレｍＲＮＡと一致しない１つ以上の核酸塩基（連続しているまたは離れているにかかわらず）を指す。多くの場合、完全な相補性が所望されるが、いくつかの態様は、標的プレｍＲＮＡに対する１つ以上であるが、好ましくは６つ、５つ、４つ、３つ、２つ、または１つのミスマッチを含み得る。オリゴマー内の任意の位置でのバリエーションが含まれる。ある特定の態様では、本開示のアンチセンスオリゴマーは、末端近くでの核酸塩基配列のバリエーション、内部でのバリエーションを含み、存在する場合、通常、５’及び／または３’末端の約６、５、４、３、２、または１サブユニット以内に存在する。ある特定の態様では、１つ、２つ、または３つの核酸塩基が除去され得、依然として正確な結合を提供し得る。
本明細書で使用する場合、「調節する」、「修飾する」という用語、及びそれらの文法的変化形は、一般に、特定の濃度、レベル、発現、機能、または行動に適用される場合、例えば、アンタゴニストまたはアゴニストとして作用するために、特定の濃度、レベル、発現、機能、または行動を増加または減少させること、例えば、直接または間接的に、促進すること／刺激すること／上方調節することまたはそれらに干渉すること／それらを阻害すること／それらを下方調節することにより変化させる能力を指す。場合によっては、修飾因子は、ある特定の濃度、レベル、活性、または機能を、コントロールと比較して、または一般に予想される活性の平均レベルと比較して、もしくは活性の対照レベルと比較して増加及び／または減少させ得る。
「核酸」、「核酸分子」、「ヌクレオチド配列」、「ポリヌクレオチド」、及びそれらの文法的変化形は、互換的に使用され、一本鎖形態または二重螺旋のいずれかでのリン酸エステルポリマー形態のリボヌクレオシド（アデノシン、グアノシン、ウリジン、またはシチジン；「ＲＮＡ分子」）もしくはデオキシリボヌクレオシド（デオキシアデノシン、デオキシグアノシン、チミジン、またはデオキシシチジン；「ＤＮＡ分子」）、またはそれらの任意のホスホエステルアナログ、例えば、ホスホロチオネート及びチオエステルを指す。一本鎖核酸配列は、一本鎖ＤＮＡ（ｓｓＤＮＡ）または一本鎖ＲＮＡ（ｓｓＲＮＡ）を指す。二本鎖ＤＮＡ－ＤＮＡ、ＤＮＡ－ＲＮＡ、及びＲＮＡ－ＲＮＡ螺旋が可能である。核酸分子及び特にＤＮＡまたはＲＮＡ分子という用語は、分子の一次及び二次構造のみを指し、任意の特定の三次形態に限定されない。したがって、この用語は、とりわけ線形または環状ＤＮＡ分子（例えば、制限断片）、プラスミド、スーパーコイルＤＮＡ、及び染色体に見出される二本鎖ＤＮＡを含む。特定の二本鎖ＤＮＡ分子の構造について述べる際、配列は、ＤＮＡの非転写鎖（すなわち、ｍＲＮＡに相同な配列を有する鎖）に沿った５’～３’方向での配列のみを提供する通常の慣例に従って本明細書に記載され得る。「組換えＤＮＡ分子」は、分子生物学的操作を受けたＤＮＡ分子である。ＤＮＡとしては、限定されるものではないが、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ、プラスミドＤＮＡ、合成ＤＮＡ、及び半合成ＤＮＡが挙げられる。本開示の「核酸組成物」は、本明細書に記載されるような１つ以上の核酸を含む。
本明細書で使用する場合、語句「非経口投与」及び「非経口的に投与される」は、経腸投与及び局所投与以外の通常注射による投与様式を意味し、限定されるものではないが、静脈内、筋肉内、動脈内、クモ膜下腔内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内、被膜下、クモ膜下、脊髄内、及び胸骨内注射及び注入が挙げられる。
「薬学的に許容される担体」、「薬学的に許容される賦形剤」という用語、及びそれらの文法的変化形は、ヒトを含む動物に使用するための米国連邦政府の規制機関により承認されたか、または米国薬局方に列挙される薬剤のいずれか、ならびに対象への組成物の投与を禁止する程度まで望ましくない生理作用の発生を引き起こさず、投与される化合物の生物活性及び特性を抑制しない任意の担体または希釈剤を包含する。医薬組成物を調製するのに有用であり、一般に安全で、非毒性であり、望ましい賦形剤及び担体が含まれる。
本明細書で使用する場合、「医薬組成物」という用語は、１種以上の他の化学成分、例えば、薬学的に許容されるキャリア及び賦形剤と混合もしくは混ぜ合わされたか、またはそれらの中に懸濁された、例えば、本開示のミセルなどの本明細書に記載される化合物のうちの１種以上を指す。医薬組成物の１つの目的は、対象へのミセル調製物の投与を容易にすることである。
本明細書で使用する場合、「ポリヌクレオチド」という用語は、リボヌクレオチド、デオキシリボヌクレオチド、それらのアナログ、またはそれらの混合物が挙げられるヌクレオチドの任意の長さのポリマーを指す。この用語は分子の一次構造を指す。したがって、この用語は、三本鎖、二本鎖、及び一本鎖デオキシリボ核酸（「ＤＮＡ」）、ならびに三本鎖、二本鎖、及び一本鎖リボ核酸（「ＲＮＡ」）を含む。この用語は、例えば、アルキル化及び／またはキャッピングにより修飾されたポリヌクレオチド及び未修飾形態のポリヌクレオチドも含む。
より具体的には、「ポリヌクレオチド」という用語は、ポリデオキシリボヌクレオチド（２－デオキシ－Ｄ－リボースを含有する）、スプライシングされたまたはスプライシングされていないにかかわらず、ｔＲＮＡ、ｒＲＮＡ、ｈＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、及びｍＲＮＡが挙げられるポリリボヌクレオチド（Ｄ－リボースを含有する）、プリンまたはピリミジン塩基のＮ－またはＣ－配糖体である任意の他の種類のポリヌクレオチド、ならびに非ヌクレオチド骨格を含有する他のポリマー、例えば、ポリアミド（例えば、ペプチド核酸「ＰＮＡ」）及びポリモルホリノポリマー、ならびにＤＮＡ及びＲＮＡにおいて見出されるような塩基対形成及び塩基スタッキングを可能にする配置で核酸塩基を含有することを条件とする他の配列特異的合成核酸ポリマーを含む。
本開示のいくつかの態様では、ポリヌクレオチドは、例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチドなどのオリゴヌクレオチドであり得る。いくつかの態様では、オリゴヌクレオチドは、ＲＮＡである。いくつかの態様では、ＲＮＡは、合成ＲＮＡである。いくつかの態様では、合成ＲＮＡは、少なくとも１つの非天然核酸塩基を含む。いくつかの態様では、ある特定の種類のすべての核酸塩基が、非天然核酸塩基と置き換えられている（例えば、本明細書において開示されるポリヌクレオチドにおけるすべてのウリジンが、非天然核酸塩基、例えば、５－メトキシウリジンと置き換えられ得る）。
「ポリペプチド」、「ペプチド」及び「タンパク質」なる用語は、任意の長さのアミノ酸のポリマーを呼称するうえで本明細書で互換的に使用される。ポリマーは、修飾アミノ酸を含み得る。これらの用語は、自然に修飾された、または、例えば、ジスルフィド結合形成、グリコシル化、脂質化、アセチル化、リン酸化、または標識成分との結合など、他の任意の操作もしくは改変などの介入により修飾されたアミノ酸ポリマーも包含される。例えば、１つ以上のアミノ酸アナログ（例えば、ホモシステイン、オルニチン、ｐ－アセチルフェニルアラニン、Ｄ－アミノ酸、及びクレアチンなどの非天然アミノ酸が挙げられる）、及び当該技術分野において公知の他の修飾を含有するポリペプチドも定義の範囲内に含まれる。本明細書で使用する場合、「ポリペプチド」という用語は、任意のサイズ、構造、または機能のタンパク質、ポリペプチド、及びペプチドを指す。ポリペプチドとしては、遺伝子産物、天然に存在するポリペプチド、合成ポリペプチド、上述のもののホモログ、オーソログ、パラログ、断片及び他の等価物、バリアント、ならびにアナログが挙げられる。ポリペプチドは、単一のポリペプチドであり得るか、またはダイマー、トリマー、もしくはテトラマーなどの多分子複合体であり得る。それらは、一本鎖または多連鎖ポリペプチドも含み得る。最も一般的には、ジスルフィド結合が多連鎖ポリペプチドにおいて見出される。ポリペプチドという用語は、１つ以上のアミノ酸残基が、対応する天然に存在するアミノ酸の人工的な化学的アナログであるようなアミノ酸ポリマーにも適用されうる。いくつかの態様では、「ペプチド」は、５０アミノ酸長以下、例えば、約５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、または５０アミノ酸長であり得る。
本明細書で使用する場合、「予防する」、「予防すること」という用語、及びそれらの変化形は、疾患、障害、及び／または状態の発症を部分的または完全に遅延させること；特定の疾患、障害、及び／または状態の１つ以上の症状、特徴、または臨床徴候の発症を部分的または完全に遅延させること；特定の疾患、障害、及び／または状態の１つ以上の症状、特徴、または徴候の発症を部分的または完全に遅延させること；特定の疾患、障害、及び／または状態の進行を部分的または完全に遅延させること；及び／または疾患、障害、及び／または状態に関連する病理を生じるリスクを減少させることを指す。いくつかの態様では、転帰の予防は、予防的治療によって実現される。
本明細書で使用する場合、「予防」とは、疾患もしくは状態の発症を予防するために、または疾患もしくは状態に関連する症状を予防または遅延させるために使用される治療的行動または行動方針を指す。
本明細書で使用する場合、「予防法」は、健康を維持し、出血症状の発症を予防もしくは遅延させるために、または疾患もしくは状態に関連する症状を予防もしくは遅延させるために取られる手段を指す。
本明細書で使用する場合、「類似性」という用語は、ポリマー分子間、例えば、ポリヌクレオチド分子（例えば、ＤＮＡ分子及び／またはＲＮＡ分子）間、及び／またはポリペプチド分子間の全体的関連性を指す。ポリマー分子同士の互いに対する類似率（％）の計算は、類似率（％）の計算が当該技術分野で理解されるところの保存的置換を考慮している点を除いて、同一率（％）の計算と同様にして行うことができる。類似率（％）は、用いられる比較尺度、すなわち、アミノ酸同士が、例えばそれらの進化的な近さ、電荷、体積、柔軟性、極性、疎水性、芳香族性、等電点、抗原性、またはそれらの組み合わせのどれにしたがって比較されるかによって左右されることが理解される。
「対象」、「患者」、「個体」、及び「宿主」なる用語、及びそれらの変化形は、本明細書において互換的に使用され、限定されるものではないが、ヒト、家庭用動物（例えば、イヌ、ネコなど）、家畜（例えば、ウシ、ヒツジ、ブタ、ウマなど）、及び実験動物（例えば、サル、ラット、マウス、ウサギ、モルモットなど）が挙げられる、診断、処置、または治療が所望される任意の哺乳動物対象、特にヒトを指す。本明細書に記載される方法は、ヒトの治療及び獣医学的用途の両方に適用可能である。
本明細書で使用する場合、「その必要がある対象」という表現は、例えば、止血を改善するために、本開示のミセルの投与から恩恵を受ける哺乳動物対象などの対象を含む。
本明細書で使用する場合、「全身投与」、「全身投与される」、「末梢投与」、及び「末梢投与される」という表現は、化合物、薬物、または他の物質の中枢神経系への直接投与以外の、それが患者の系に入り、したがって、代謝及び他の同様のプロセスに供されるような投与、例えば、皮下投与を意味する。
本明細書で使用する場合、「治療上有効量」という用語は、所望の治療効果、薬理学的、及び／または生理学的効果をもたらす必要がある対象に対する所望の治療効果、薬理学的、及び／または生理学的効果をもたらすのに十分な、本開示のミセルを含む試薬または医薬化合物の量である。治療上有効量は、予防が治療とみなされ得る場合、「予防上有効量」であり得る。
本明細書で使用する場合、「治療する」、「治療」、または「治療すること」という用語は、例えば、疾患または状態の重症度の低減、疾患経過の期間の低減、疾患または状態に関連する１つ以上の症状の改善または除去、疾患または状態を必ずしも治療しない、疾患または状態を有する対象に対する有益な効果の提供を指す。この用語には、疾患もしくは状態またはその症状の予防または防止も含まれる。一態様では、「治療すること」または「治療」なる用語は、対象に抗原に対する免疫応答を誘導することを意味する。
「上流」という用語は、参照ヌクレオチド配列の５’側に存在するヌクレオチド配列を指す。
ＩＩ．キャリアユニット
本開示は、ミセルに自己組織化し得るか、またはミセルに取り込まれ得るキャリアユニットを提供する。本開示のキャリアユニットは、水溶性バイオポリマー部分（例えば、ＰＥＧ）、荷電したキャリア部分、架橋部分、及び疎水性部分を含む。いくつかの態様では、荷電キャリア部分は、図１Ａ～１Ｄ及び２Ａ～２Ｉに例示されるように、カチオン性（例えば、ポリリシン）である。いくつかの態様では、カチオン性荷電キャリア部分とアニオン性ペイロードとは、互いに静電的に相互作用することができる。カチオン荷電キャリア部分とアニオン荷電ペイロードとが互いに混合されると、それらは互いに中和し、キャリアユニット：ペイロード複合体を生成することができる。得られるキャリアユニット：ペイロード複合体は、水溶性バイオポリマー部分を含む「頭部」と、アニオン性ペイロードに静電的に結合したカチオン性キャリア部分を含む「尾部」とを有し得る。
キャリアユニット：ペイロード複合体は、単独で、または他の分子との組み合わせで自己結合することで、アニオン性ペイロードがミセルのコアに存在し、水溶性バイオポリマー部分が溶媒に面したミセルをもたらし得る。「本開示のミセル」という用語は、典型的なミセルだけでなく小粒子、小型ミセル、ミセル、桿状構造、またはポリマソームも包含する。ポリマソームが内腔を含むことを考慮すると、典型的なミセルの「コア」に関連するすべての開示が、本開示のキャリアユニットを含むポリマソームにおける内腔に等しく適用されると理解されたい。
本開示のキャリアユニットは、１つ以上の任意選択のリンカーにより水溶性バイオポリマー部分に共有結合された標的化部分（例えば、標的化リガンド）を含み得る。ミセルが形成されると、標的化部分はミセルの表面に位置することができ、特定の標的組織、特定の細胞種にミセルを送達し得、及び／または生理学的バリア（例えば、細胞形質膜またはＢＢＢ）を通した輸送を促進することができる（図１Ｃ）。いくつかの態様では、本開示のミセルは、２種類以上の標的化部分を含み得る。
本開示のキャリアユニットは、荷電したカチオンキャリア部分に共有結合された疎水性部分（ＨＭ）も含み得る。疎水性部分は、例えば、治療効果、共治療効果を有するか、または標的細胞もしくは標的組織の恒常性にプラスの影響を及ぼすことができる。いくつかの態様では、ＨＭは、１つ以上のアミノ酸を含む。いくつかの態様では、ＨＭは、疎水性分子（例えば、ビタミン）に連結された１つ以上のアミノ酸を含む。いくつかの態様では、ＨＭは、疎水性分子（例えば、ビタミン）に共有結合された１つ以上のリシン残基を含む。
いくつかの態様では、アニオン性ペイロードは、キャリアユニットに共有結合によって連結されていない。しかしながら、他の態様では、カチオン性ペイロードは、カチオン性キャリアユニット、例えば、切断可能なリンカーなどのリンカーに共有結合によって連結され得る。
様々な態様の非限定的な例を本開示に示す。本開示は、特に、例えば、核酸などのアニオン性ペイロードを送達するための、カチオン性キャリアユニットの使用に関する。しかしながら、キャリア部分及びペイロードの電荷を逆転させること（すなわち、カチオン性ペイロードを送達するためにキャリアユニットにアニオン性キャリア部分を使用すること）により、またはアニオン性もしくはカチオン性キャリア部分と静電的相互作用するそれぞれカチオン性もしくはアニオン性アダプターに連結された中性ペイロードを使用することにより、本開示がカチオン性ペイロードの送達または中性ペイロードの送達に同様に適用され得ることが当業者には明らかであろう。
したがって、一態様において、本開示は、図式Ｉ～図式ＶＩ：
［ＣＣ］－Ｌ１－［ＣＭ］－Ｌ２－［ＨＭ］（図式Ｉ）、
［ＣＣ］－Ｌ１－［ＨＭ］－Ｌ２－［ＣＭ］（図式ＩＩ）、
［ＨＭ］－Ｌ１－［ＣＭ］－Ｌ２－［ＣＣ］（図式ＩＩＩ）、
［ＨＭ］－Ｌ１－［ＣＣ］－Ｌ２－［ＣＭ］（図式ＩＶ）、
［ＣＭ］－Ｌ１－［ＣＣ］－Ｌ２－［ＨＭ］（図式Ｖ）、または
［ＣＭ］－Ｌ１－［ＨＭ］－Ｌ２－［ＣＣ］（図式ＶＩ）、
（式中、
ＣＣは、カチオン性キャリア部分、例えば、ポリリシンであり、
ＣＭは、架橋部分であり、
ＨＭは、疎水性部分、例えば、ビタミン、例えば、ビタミンＢ３であり、
Ｌ１及びＬ２は、独立して任意選択のリンカーである）のカチオン性キャリアユニットであって、
ＨＭの数が、［ＣＣ］及び［ＣＭ］に対して約５０％未満である、カチオン性キャリアユニットを提供する。
いくつかの態様では、カチオン性キャリアユニットは、水溶性ポリマー（ＷＰ）をさらに含む。いくつかの態様では、水溶性ポリマーは、［ＣＣ］、［ＨＭ］、及び／または［ＣＭ］に結合される。いくつかの態様では、水溶性ポリマーは、［ＣＣ］、［ＨＭ］、または［ＣＭ］のＮ末端に結合される。いくつかの態様では、水溶性ポリマーは、［ＣＣ］のＮ末端に結合される。いくつかの態様では、水溶性ポリマーは、［ＣＣ］、［ＨＭ］、または［ＣＭ］のＣ末端に結合される。いくつかの態様では、水溶性ポリマーは、［ＣＣ］のＣ末端に結合される。
いくつかの態様では、カチオン性キャリアユニットは、
［ＷＰ］－Ｌ３－［ＣＣ］－Ｌ１－［ＣＭ］－Ｌ２－［ＨＭ］（図式Ｉ’）、
［ＷＰ］－Ｌ３－［ＣＣ］－Ｌ１－［ＨＭ］－Ｌ２－［ＣＭ］（図式ＩＩ’）、
［ＷＰ］－Ｌ３－［ＨＭ］－Ｌ１－［ＣＭ］－Ｌ２－［ＣＣ］（図式ＩＩＩ’）、
［ＷＰ］－Ｌ３－［ＨＭ］－Ｌ１－［ＣＣ］－Ｌ２－［ＣＭ］（図式ＩＶ’）、
［ＷＰ］－Ｌ３－［ＣＭ］－Ｌ１－［ＣＣ］－Ｌ２－［ＨＭ］（図式Ｖ’）、または
［ＷＰ］－Ｌ３－［ＣＭ］－Ｌ１－［ＨＭ］－Ｌ２－［ＣＣ］（図式ＶＩ’）を含む。
いくつかの態様では、カチオン性キャリアユニットは、アニオン性ペイロードと例えば静電的に相互作用することができる。
上記の図式Ｉ’～ＶＩ’のコンストラクトのいくつかの態様では、［ＷＰ］構成要素は、少なくとも１つの標的化部分、すなわち、［Ｔ］ｎ－［ＷＰ］－…に連結され得、式中、ｎは整数、例えば、１、２、または３である。
図２（Ａ）～２（Ｉ）は、本開示の例示的なカチオン性キャリアユニットの模式図を示す。簡単のために、図２（Ａ）～２（Ｉ）のユニットは、直線的に示されている。しかしながら、いくつかの態様では、キャリアユニットは、例えば、（ｉ）正に荷電したユニット（例えば、ポリリシン）を含むポリマーＣＣ部分と、（ｉｉ）ＣＣ部分のＮ末端またはＣ末端に結合されたＣＭ（例えば、架橋剤に連結されたリシン、例えばリシン－チオール）と、（ｉｉｉ）ＣＭのＮ末端またはＣ末端に結合されたＨＭ（例えば、疎水性物質に連結されたリシン、例えば、ビタミンＢ３に連結されたリシン）とを含む、分枝状のスカフォールド配置（図３を参照）として構成されたＣＣ、ＣＭ、及びＨＭを含むことができる。
本開示のカチオン性キャリアユニットとアニオン性ペイロード（例えば、核酸）とが約５：約１のイオン比（すなわち、アニオン性ペイロード中の負電荷の数が、カチオン性キャリア部分中の正電荷の数の約５倍大きい場合）～約１：約５のイオン比（すなわち、カチオン性キャリア部分中の正電荷の数が、アニオン性ペイロード中の負電荷の数の約５倍大きい場合）で混合される場合、主として静電的相互作用を介した、カチオン性キャリア部分中の正電荷によるアニオン性ペイロード中の負電荷の中和によって、変化のない親水性部分（ＷＰ部分を含む）と、大幅に疎水性が高い部分（カチオン性キャリア部分＋疎水性部分及び架橋部分とアニオン性ペイロードとの間の結合に起因する）とを有するカチオン性キャリアユニット：アニオン性ペイロード複合体が形成される。
いくつかの態様では、疎水性部分は、それ自身の正電荷を、アニオン性ペイロードの負電荷と相互作用するカチオン性キャリア部分の正電荷に与えることができる。カチオン性キャリア部分とアニオン性ペイロードとの間の相互作用（例えば、静電的相互作用）への言及は、疎水性部分及びカチオン性キャリア部分の電荷とアニオン性ペイロードの電荷との間の相互作用も包含することを理解されたい。
アニオン性ペイロードの負電荷との静電的相互作用による正電荷の中性化に起因するカチオン性キャリアユニットのカチオン性キャリア部分の疎水性の増加は、両親媒性複合体をもたらす。かかる両親媒性複合体は、単独でまたは他の両親媒性成分との組み合わせでミセルに自己組織化し得る。得られたミセルは、溶媒に面したＷＰ部分（すなわち、ＷＰ部分はミセルの外面に面する）を含む（図１Ｃ）のに対して、ＣＣ、ＣＭ、及びＨＭ部分、ならびに結合したペイロード（例えば、ヌクレオチド配列、例えば、オリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、「ａｎｔｉｍｉｒ」、またはそれらの任意の組み合わせ）はミセルのコアに存在する。
いくつかの特定の態様では、カチオン性キャリアユニットは、
（ａ）ＷＰ部分であって、水溶性バイオポリマーが、式ＩＩＩ（下記参照）のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）（ただし、ｎは約１２０～約ＰＥＧ１３０である）（例えば、ＰＥＧは、ＰＥＧ５０００またはＰＥＧ６０００である）である、ＷＰ部分と、
（ｂ）ＣＣ部分であって、カチオン性キャリア部分が、例えば、約３０個～約４０個のリシン（例えば、直鎖状ポリ（Ｌ－リシン）ｎ（ここで、ｎは約３０～約４０である））、ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）、またはキトサンを含む、ＣＣ部分と、
（ｃ）ＣＭ部分であって、架橋部分が、それぞれが架橋剤に結合した約１０個～約２０個のリシン（例えば１０個～２０個のリシン－チオール）を含む、ＣＭ部分と、
（ｃ）ＨＭ部分であって、疎水性部分が、それぞれがビタミンＢ３単位に結合した約３０個～約４０個のリシンを有する、ＨＭ部分と、を含む。
いくつかの態様では、カチオン性キャリアユニットは、
（ａ）ＣＣ部分であって、カチオン性キャリア部分が約３０個～約３５個のリシン、例えば約３２個のリシンを含む、ＣＣ部分と、
（ｂ）ＣＭ部分であって、架橋部分が、それぞれが架橋剤に結合した約１５個のリシン～約２０個のリシン、例えば１６個のリシン（例えば、リシン－チオール）を含む、ＣＭ部分と、
（ｃ）ＨＭ部分であって、疎水性部分が、それぞれが疎水性物質に結合した約３０個～約３５個のリシン、例えば約３２個のリシン（例えば、リシン－ビタミンＢ３）を含む、ＨＭ部分と、を含む。
いくつかの特定の態様では、カチオン性キャリアユニットは、
（ａ）ＣＣ部分であって、カチオン性キャリア部分が約２５個～約３５個のリシン、例えば約３０個、３１個、または３２個のリシンを含む、ＣＣ部分と、
（ｂ）ＣＭ部分であって、架橋部分が、それぞれが架橋剤に結合した約１５個のリシン～約２０個のリシン、例えば１５個、１６個、または１７個のリシン（例えば、リシン－チオール）を含む、ＣＭ部分と、
（ｃ）ＨＭ部分であって、疎水性部分が、それぞれが疎水性物質に結合した約２５個～約３５個のリシン、例えば約３０個、３１個、または３２個のリシン（例えば、リシン－ビタミンＢ３）を含む、ＨＭ部分と、を含む。
いくつかの態様では、カチオン性キャリアユニットは、
（ａ）ＣＣ部分であって、カチオン性キャリア部分が約３０個～約６０個のリシン、例えば約６０個のリシンを含む、ＣＣ部分と、
（ｂ）ＣＭ部分であって、架橋部分が、それぞれが架橋剤に結合した約５個のリシン～約１５個のリシン、例えば５個のリシン（例えば、リシン－チオール）を含む、ＣＭ部分と、
（ｃ）ＨＭ部分であって、疎水性部分が、それぞれが疎水性物質に結合した約１５個～約３０個のリシン、例えば約１５個のリシン（例えば、リシン－ビタミンＢ３）を含む、ＨＭ部分と、を含む。
いくつかの態様では、カチオン性キャリアユニットは、
（ａ）ＣＣ部分であって、カチオン性キャリア部分が約３０個～約６０個のリシン、例えば約５０個のリシンを含む、ＣＣ部分と、
（ｂ）ＣＭ部分であって、架橋部分が、それぞれが架橋剤に結合した約５個のリシン～約１５個のリシン、例えば５個のリシン（例えば、リシン－チオール）を含む、ＣＭ部分と、
（ｃ）ＨＭ部分であって、疎水性部分が、それぞれが疎水性物質に結合した約１５個～約３０個のリシン、例えば約２５個のリシン（例えば、リシン－ビタミンＢ３）を含む、ＨＭ部分と、を含む。
いくつかの態様では、カチオン性キャリアユニットは、
（ａ）ＣＣ部分であって、カチオン性キャリア部分が約３０個～約６０個のリシン、例えば約４５個のリシンを含む、ＣＣ部分と、
（ｂ）ＣＭ部分であって、架橋部分が、それぞれが架橋剤に結合した約５個のリシン～約１５個のリシン、例えば５個のリシン（例えば、リシン－チオール）を含む、ＣＭ部分と、
（ｃ）ＨＭ部分であって、疎水性部分が、それぞれが疎水性物質に結合した約１５個～約３０個のリシン、例えば約３０個のリシン（例えば、リシン－ビタミンＢ３）を含む、ＨＭ部分と、を含む。
いくつかの態様では、カチオン性キャリアユニットは、
（ａ）ＣＣ部分であって、カチオン性キャリア部分が約３０個～約６０個のリシン、例えば約４０個のリシンを含む、ＣＣ部分と、
（ｂ）ＣＭ部分であって、架橋部分が、それぞれが架橋剤に結合した約５個のリシン～約１５個のリシン、例えば１０個のリシン（例えば、リシン－チオール）を含む、ＣＭ部分と、
（ｃ）ＨＭ部分であって、疎水性部分が、それぞれが疎水性物質に結合した約１５個～約３０個のリシン、例えば約３０個のリシン（例えば、リシン－ビタミンＢ３）を含む、ＨＭ部分と、を含む。
いくつかの態様では、カチオン性キャリアユニットは、
（ａ）ＣＣ部分であって、カチオン性キャリア部分が約３０個～約６０個のリシン、例えば約３５個のリシンを含む、ＣＣ部分と、
（ｂ）ＣＭ部分であって、架橋部分が、それぞれが架橋剤に結合した約５個のリシン～約１５個のリシン、例えば１５個のリシン（例えば、リシン－チオール）を含む、ＣＭ部分と、
（ｃ）ＨＭ部分であって、疎水性部分が、それぞれが疎水性物質に結合した約１５個～約３０個のリシン、例えば約３０個のリシン（例えば、リシン－ビタミンＢ３）を含む、ＨＭ部分と、を含む。
いくつかの態様では、カチオン性キャリアユニットは、
（ａ）ＣＣ部分であって、カチオン性キャリア部分の数が電荷（例えば、ｓｉＲＮＡの電荷）数（例えば、１４マー～３１マーでは約１３～約３０）／２である、ＣＣ部分と、
（ｂ）ＣＭ部分であって、架橋部分（例えば、リシン－チオール）の数が少なくとも１個、少なくとも２個、少なくとも３個、またはそれ以上である、ＣＭ部分と、
（ｃ）ＨＭ部分であって、疎水性部分が疎水性物質に結合され（例えば、リシン－ビタミンＢ３）、ＣＭ部分とＨＭ部分との比が１：３である、ＨＭ部分と、を含み、
（陰イオン電荷／２）（Ｘ）＋ＣＭの数（Ｙ）＋ＨＭの数（Ｚ）の合計数が１７以上である。
いくつかの態様では、カチオン性キャリアユニットは、カチオン性キャリアユニットのＷＰ部分に結合された少なくとも１つの標的化部分をさらに含む。いくつかの態様では、ミセルの表面に提示される標的化部分の数及び／または密度は、標的化部分を有するカチオン性キャリアユニット対標的化部分を有さないカチオン性キャリアユニットの特定の比率を使用することにより調節され得る。いくつかの態様では、標的化部分を有するカチオン性キャリアユニット対標的化部分を有さないカチオン性キャリアユニットの比は、少なくとも約１：５、少なくとも約１：１０、少なくとも約１：２０、少なくとも約１：３０、少なくとも約１：４０、少なくとも約１：５０、少なくとも約１：６０、少なくとも約１：７０、少なくとも約１：８０、少なくとも約１：９０、少なくとも約１：１００、少なくとも約１：１２０、少なくとも約１：１４０、少なくとも約１：１６０、少なくとも約１：１８０、少なくとも約１：２００、少なくとも約１：２５０、少なくとも約１：３００、少なくとも約１：３５０、少なくとも約１：４００、少なくとも約１：４５０、少なくとも約１：５００、少なくとも約１：６００、少なくとも約１：７００、少なくとも約１：８００、少なくとも約１：９００、または少なくとも約１：１０００である。
いくつかの態様では、カチオン性キャリアユニットは、
（ｉ）輸送体ＬＡＴ１を標的とする標的化部分（Ａ）（例えば、フェニルアラニン）と、
（ｉｉ）ＰＥＧである水溶性ポリマーと、
（ｉｉｉ）リシンであるカチオン性ポリマーブロックを含むカチオン性キャリア部分と、
（ｉｖ）架橋部分に連結されたリシンである架橋ポリマーブロックを含む架橋部分と、
（ｖ）ビタミンＢ３に連結されたリシンである疎水性ポリマーブロックを含む疎水性部分と、を含む。
いくつかの態様では、カチオン性キャリアユニットは、
（ｉ）輸送体ＬＡＴ１を標的とする標的化部分（Ａ）（例えば、フェニルアラニン）と、
（ｉｉ）ＰＥＧである水溶性ポリマーであって、ｎ＝１００～２００、例えば、１００～１５０、例えば、１２０～１３０である、水溶性ポリマーと、
（ｉｉｉ）カチオン性ポリマーブロックを含むカチオン性キャリア部分、例えば、ポリリシンと、
（ｉｖ）架橋部分に連結されたリシンである架橋ポリマーブロックを含む架橋部分と、
（ｖ）ビタミンＢ３に連結されたリシンである疎水性ポリマーブロックを含む疎水性部分と、を含む。
いくつかの態様では、カチオン性キャリアユニットは、
（ｉ）輸送体ＬＡＴ１を標的とする標的化部分（Ａ）（例えば、フェニルアラニン）と、
（ｉｉ）ＰＥＧである水溶性ポリマーであって、ｎ＝１００～２００、例えば、１００～１５０、例えば、１２０～１３０である、水溶性ポリマーと、
（ｉｉｉ）カチオン性ポリマーブロックを含むカチオン性キャリア部分、例えば、１０～１００個のリシン、例えば、１０～５０個のリシン、例えば、３０～４０個のリシンと、
（ｉｖ）架橋部分に連結されたリシンである架橋ポリマーブロックを含む架橋部分と、
（ｖ）ビタミンＢ３に連結されたリシンである疎水性ポリマーブロックを含む疎水性部分と、を含む。
いくつかの態様では、カチオン性キャリアユニットは、
（ｉ）輸送体ＬＡＴ１を標的とする標的化部分（Ａ）（例えば、フェニルアラニン）と、
（ｉｉ）ＰＥＧである水溶性ポリマーであって、ｎ＝１００～２００、例えば、１００～１５０、例えば、１２０～１３０である、水溶性ポリマーと、
（ｉｉｉ）カチオン性ポリマーブロック（例えば、１０～１００個のリシン、例えば、１０～５０個のリシン、例えば、３０～４０個のリシン）を含むカチオン性キャリア部分、と、
（ｉｖ）架橋部分に連結されたリシンである架橋ポリマーブロック（例えば、１０～３０個のリシン－チオール、例えば１０～２０個のリシン－チオール）を含む架橋部分と、
（ｖ）ビタミンＢ３に連結されたリシンである疎水性ポリマーブロックを含む疎水性部分と、を含む。
いくつかの態様では、カチオン性キャリアユニットは、
（ｉ）輸送体ＬＡＴ１を標的とする標的化部分（Ａ）（例えば、フェニルアラニン）と、
（ｉｉ）ＰＥＧである水溶性ポリマーであって、ｎ＝１００～２００、例えば、１００～１５０、例えば、１２０～１３０である、水溶性ポリマーと、
（ｉｉｉ）カチオン性ポリマーブロック（例えば、１０～１００個のリシン、例えば、１０～５０個のリシン、例えば、３０～４０個のリシン）を含むカチオン性キャリア部分、と、
（ｉｖ）架橋部分に連結されたリシンである架橋ポリマーブロック（例えば、１０～３０個のリシン－チオール、例えば１０～２０個のリシン－チオール）を含む架橋部分と、
（ｖ）ビタミンＢ３に連結されたリシンである疎水性ポリマーブロック（例えば、１０～５０個のリシン－ビタミンＢ３、例えば、３０～４０個のリシン－ビタミンＢ３）を含む疎水性部分と、を含む。
いくつかの態様では、カチオン性キャリアユニットは、ＨＭを含み、ＨＭの数は、［ＣＣ］及び［ＣＭ］に対して約５０％～約１％、約５０％～約５％、約５０％～約１０％、約５０％～約１５％、約５０％～約２０％、約５０％～約２５％、約５０％～約３０％、約５０％～約３５％、約５０％～約４０％、約５０％～約４５％、約４５％～約１％、約４５％～約５％、約４５％～約１０％、約４５％～約１５％、約４５％～約２０％、約４５％～約２５％、約４５％～約３０％、約４５％～約３５％、約４５％～約４０％、約４０％～１％、約５０％～約５％、約４０％～約１０％、約４０％～約１５％、約４０％～約２０％、約４０％～約２５％、約４０％～約３０％、約４０％～約３５％、約３５％～約１％、約３５％～約５％、約３５％～約１０％、約３５％～約１５％、約３５％～約２０％、約３５％～約２５％、約３５％～約３０％、約３０％～約１％、約３０％～約５％、約３０％～約１０％、約３０％～約１５％、約３０～約２０％、約３０％～約２５％、約２５％～約１％、約２５％～約５％、約２５％～約１０％、約２５％～約１５％、約２５％～約２０％、約２０％～約１％、約２０％～約５％、約２０％～約１０％、約２０％～約１５％、約１５％～約１％、約１５％～約５％、約１５％～約１０％、約１０％～約１％、約１０％～約５％、または約５％～約１％である。いくつかの態様では、ＨＭの数は、約５０％～約４０％、約４０％～約３０％、約３０％～約２０％、約２０％～約１０％、約１０％～約５％、または約５％～約１％である。いくつかの態様では、ＨＭの数は、約５０％、約４５％、約４０％、約３５％、約３０％、約２５％、約２０％、約１５％、約１０％、約５％、または約１％である。いくつかの態様では、ＨＭの数は、［ＣＣ］及び［ＣＭ］に対して約４０％である。いくつかの態様では、ＨＭの数は、［ＣＣ］及び［ＣＭ］に対する［ＨＭ］の比率として表される。
いくつかの態様では、本開示のカチオン性キャリアユニットは、ｍｉＲ－４８５－３ｐを標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチドペイロード、例えば、ＡＧＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ（配列番号１８）と相互作用する。いくつかの態様では、ペイロードと複合体を形成したキャリアユニットは、ミセルを形成する。
いくつかの態様では、ビタミンＢ３ユニットは、好適なコンジュゲーション試薬、例えば、１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）－カルボジイミド（ＥＤＣ）及びＮ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）の存在下での例えば、リシンのＮＨ２基とビタミンＢ３のＣＯＯＨ基との間のカップリング反応によりＨＭ部分の側鎖に導入される。
本開示は、本開示のキャリアユニット（例えば、カチオン性キャリアユニット）を含む組成物を提供する。他の態様では、本開示は、ペイロード（例えば、ヌクレオチド配列などのアニオン性ペイロード、例えば、オリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、「ａｎｔｉｍｉｒ」、またはそれらの任意の組み合わせ）に非共有結合的に結合された、本開示のキャリアユニット（例えば、カチオン性キャリアユニットユニット）を含む複合体を提供し、ここで、キャリアユニット及びペイロードは、静電的相互作用する。他の態様では、本開示は、ペイロード（例えば、ヌクレオチド配列などのアニオン性ペイロード、例えば、オリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、「ａｎｔｉｍｉｒ」、またはそれらの任意の組み合わせ）に共有結合された、本開示のキャリアユニット（例えば、カチオン性キャリアユニットユニット）を含む結合体を提供し、ここで、キャリアユニット及びペイロードは、静電的相互作用する。いくつかの態様では、キャリアユニット及びペイロードは、切断可能なリンカーにより連結され得る。いくつかの態様では、キャリアユニット及びペイロードは、静電的相互作用することに加えて、共有結合的に相互作用し得る（例えば、静電的相互作用後、キャリアユニット及びペイロードは、ジスルフィド結合または切断可能な結合により「ロック」され得る）。
いくつかの特定の態様では、カチオン性キャリアユニットは、約１２０～約１３０個の単位を有するＰＥＧを含む水溶性ポリマーと、約３０～約４０個のリシン単位を有するポリリシンを含むカチオン性キャリア部分と、約１０～約２０個のリシン－チオール単位を含む架橋部分と、約３０～約４０個のビタミンＢ３に連結されたリシン単位を含む疎水性部分と、を含む。
いくつかの態様では、カチオン性キャリアユニットは、カチオン性キャリアユニットのカチオン性キャリア部分との少なくとも１つのイオン結合により（すなわち、静電的相互作用により）カチオン性キャリアユニットと相互作用する負に荷電したペイロード（例えば、ヌクレオチド配列、例えば、オリゴヌクレオチド（例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチド）、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、「ａｎｔｉｍｉｒ」、またはそれらの任意の組み合わせ）と会合している。
本開示のカチオン性キャリアユニットの具体的な構成要素を、以下に詳細に開示する。
ａ．水溶性バイオポリマー
いくつかの態様では、本開示のカチオン性キャリアユニットは、少なくとも１つの水溶性バイオポリマーを含む。本明細書で使用する場合、「水溶性バイオポリマー」という用語は、生体適合性、生物学的に不活性、非免疫原性、非毒性、かつ親水性のポリマー、例えば、ＰＥＧを指す。
いくつかの態様では、水溶性ポリマーは、ポリ（アルキレングリコール）、ポリ（オキシエチル化ポリオール）、ポリ（オレフィンアルコール）、ポリ（ビニルピロリドン）、ポリ（ヒドロキシアルキルメタクリルアミド）、ポリ（ヒドロキシアルキルメタクリレート）、ポリ（サッカライド）、ポリ（α－ヒドロキシ酸）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリグリセロール、ポリホスファゼン、ポリオキサゾリン（「ＰＯＺ」）、ポリ（Ｎ－アクリロイルモルホリン）、またはそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの態様では、水溶性バイオポリマーは、直鎖状、分枝鎖状、または樹枝状である。
いくつかの態様では、水溶性バイオポリマーは、ポリエチレングリコール（「ＰＥＧ」）、ポリグリセロール（「ＰＧ」）、またはポリ（プロピレングリコール）（「ＰＰＧ」）を含む。ＰＰＧは、ＰＥＧより毒性が少ないため、現在多くの生物学的製剤が、ＰＥＧの代わりにＰＰＧで製造されている。
いくつかの態様では、水溶性バイオポリマーは、式Ｒ３－（Ｏ－ＣＨ２－ＣＨ２）ｎ－またはＲ３－（０－ＣＨ２－ＣＨ２）ｎ－Ｏ－（式中、Ｒ３は水素、メチル、またはエチルであり、ｎは２～２００の値を有する）を特徴とするＰＥＧを含む。いくつかの態様では、ＰＥＧは、次式を有し、
Figure 2024503302000004
 式中、ｎは、１～１０００である。
いくつかの態様では、ＰＥＧのｎは、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７，１８，１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、１６９、１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８９、１８１、１８２、１８３、１８４、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、または２００の値を有する。
いくつかの態様では、ｎは、少なくとも約１０、少なくとも約２０、少なくとも約３０、少なくとも約４０、少なくとも約５０、少なくとも約６０、少なくとも約７０、少なくとも約８０、少なくとも約９０、少なくとも約１００、少なくとも約１１０、少なくとも１２０、少なくとも約１３０、少なくとも約１４０、少なくとも約１５０、少なくとも約１６０、少なくとも約１７０、少なくとも約１８０、少なくとも約１９０、少なくとも約２００、少なくとも約２１０、少なくとも約２２０、少なくとも約２３０、少なくとも約２４０、少なくとも約２５０、少なくとも約２６０、少なくとも約２７０、少なくとも約２８０、少なくとも約２９０、少なくとも約３００、少なくとも約３１０、少なくとも約３２０、少なくとも約３３０、少なくとも約３４０、少なくとも約３５０、少なくとも約３６０、少なくとも約３７０、少なくとも約３８０、少なくとも約３９０、少なくとも約４００、少なくとも約４１０、少なくとも約４２０、少なくとも約４３０、少なくとも約４４０、少なくとも約４５０、少なくとも約４６０、少なくとも約４７０、少なくとも約４８０、少なくとも約４９０、少なくとも約５００、少なくとも約５１０、少なくとも約５２０、少なくとも約５３０、少なくとも約５４０、少なくとも約５５０、少なくとも約５６０、少なくとも約６７０、少なくとも約５８０、少なくとも約５９０、少なくとも約６００、少なくとも約６１０、少なくとも約６２０、少なくとも約６３０、少なくとも約６４０、少なくとも約６５０、少なくとも約６６０、少なくとも約６７０、少なくとも約６８０、少なくとも約６９０、少なくとも約７００、少なくとも約７１０、少なくとも約７２０、少なくとも約７３０、少なくとも約７４０、少なくとも約７５０、少なくとも約７６０、少なくとも約７７０、少なくとも約７８０、少なくとも約７９０、少なくとも約８００、少なくとも約８１０、少なくとも約８２０、少なくとも約８３０、少なくとも約８４０、少なくとも約８５０、少なくとも約８６０、少なくとも約８７０、少なくとも約８８０、少なくとも約８９０、少なくとも約９００、少なくとも約９１０、少なくとも約９２０、少なくとも約９３０、少なくとも約９４０、少なくとも約９５０、少なくとも約９６０、少なくとも約９７０、少なくとも約９８０、少なくとも約９９０、または約１０００である。
いくつかの態様では、ｎは、約５０～約１００、約１００～約１５０、約１５０～約２００、約２００～約２５０、約２５０～約３００、約３００～約３５０、約３５０～約４００、約４００～約４５０、約４５０～約５００、約５００～約５５０、約５５０～約６００、約６００～約６５０、約６５０～約７００、約７００～約７５０、約７５０～約８００、約８００～約８５０、約８５０～約９００、約９００～約９５０、または約９５０～約１０００である。
いくつかの態様では、ｎは、少なくとも約８０、少なくとも約８１、少なくとも約８２、少なくとも約８３、少なくとも約８４、少なくとも約８５、少なくとも約８６、少なくとも約８７、少なくとも約８８、少なくとも約８９、少なくとも約９０、少なくとも約９１、少なくとも約９２、少なくとも約９３、少なくとも約９４、少なくとも約９５、少なくとも約９６、少なくとも約９７、少なくとも約９８、少なくとも約９９、少なくとも約１００、少なくとも約１０１、少なくとも約１０２、少なくとも約１０３、少なくとも約１０４、少なくとも約１０５、少なくとも約１０６、少なくとも約１０７、少なくとも約１０８、少なくとも約１０９、少なくとも１１０、少なくとも約１１１、少なくとも約１１２、少なくとも約１１３、少なくとも約１１４、少なくとも約１１５、少なくとも約１１６、少なくとも約１１７、少なくとも約１１８、少なくとも約１１９、少なくとも約１２０、少なくとも約１２１、少なくとも約１２２、少なくとも約１２３、少なくとも約１２４、少なくとも約１２５、少なくとも約１２６、少なくとも約１２７、少なくとも約１２８、少なくとも約１２９、少なくとも約１３０、少なくとも約１３１、少なくとも約１３２、少なくとも約１３３、少なくとも約１３４、少なくとも約１３５、少なくとも約１３６、少なくとも約１３７、少なくとも約１３８、少なくとも約１３９、少なくとも約１４０、少なくとも約１４１、少なくとも約１４２、少なくとも約１４３、少なくとも約１４４、少なくとも約１４５、少なくとも約１４６、少なくとも約１４７、少なくとも約１４８、少なくとも約１４９、少なくとも約１５０、少なくとも約１５１、少なくとも約１５２、少なくとも約１５３、少なくとも約１５４、少なくとも約１５５、少なくとも約１５６、少なくとも約１５７、少なくとも約１５８、少なくとも約１５９、または少なくとも約１６０である。
いくつかの態様では、ｎは、約８０～約９０、約９０～約１００、約１００～約１１０、約１１０～約１２０、約１２０～約１３０、約１３０～約１４０、約１４０～約１５０、約１５０～約１６０、約８５～約９５、約９５～約１０５、約１０５～約１１５、約１１５～約１２５、約１２５～約１３５、約１３５～約１４５、約１４５～約１５５、約１５５～約１６５、約８０～約１００、約１００～約１２０、約１２０～約１４０、約１４０～約１６０、約８５～約１０５、約１０５～約１２５、約１２５～約１４５、または約１４５～約１６５である。
いくつかの態様では、ｎは、約１００～約１５０である。いくつかの態様では、ｎは、約１００～約１４０である。いくつかの態様では、ｎは、約１００～約１３０である。いくつかの態様では、ｎは、約１１０～約１５０である。いくつかの態様では、ｎは、約１１０～約１４０である。いくつかの態様では、ｎは、約１１０～約１３０である。いくつかの態様では、ｎは、約１１０～約１２０である。いくつかの態様では、ｎは、約１２０～約１５０である。いくつかの態様では、ｎは、約１２０～約１４０である。いくつかの態様では、ｎは、約１２０～約１３０である。いくつかの態様では、ｎは、約１３０～約１５０である。いくつかの態様では、ｎは、約１３０～約１４０である。
したがって、いくつかの態様では、ＰＥＧは、分枝鎖ＰＥＧである。分枝鎖ＰＥＧは、中心コア基から延びる３～１０本のＰＥＧ鎖を有する。ある特定の態様では、ＰＥＧ部分は、単分散ポリエチレングリコールである。本開示の文脈において、単分散ポリエチレングリコール（ｍｄＰＥＧ）は、単一の既定の鎖長及び分子量を有するＰＥＧである。ｍｄＰＥＧは、通常、クロマトグラフィーによる重合混合物からの分離により生成される。ある特定の式において、単分散ＰＥＧ部分は、略語ｍｄＰＥＧを割り当てられる。
いくつかの態様では、ＰＥＧは、Ｓｔａｒ ＰＥＧである。Ｓｔａｒ ＰＥＧは、中心コア基から延びる１０～１００本のＰＥＧ鎖を有する。いくつかの態様では、ＰＥＧは、Ｃｏｍｂ ＰＥＧである。Ｃｏｍｂ ＰＥＧは、通常、ポリマー主鎖上にグラフトされた複数のＰＥＧ鎖を有する。
ある特定の態様では、ＰＥＧは、約１０００ｇ／ｍｏｌ～約２０００ｇ／ｍｏｌ、約２０００ｇ／ｍｏｌ～約３０００ｇ／ｍｏｌ、約３０００ｇ／ｍｏｌ～約４０００ｇ／ｍｏｌ、約４０００ｇ／ｍｏｌ～約５０００ｇ／ｍｏｌ、約５０００ｇ／ｍｏｌ～約６０００ｇ／ｍｏｌ、約６０００ｇ／ｍｏｌ～約７０００ｇ／ｍｏｌ、または７０００ｇ／ｍｏｌ～約８０００ｇ／ｍｏｌのモル質量を有する。
いくつかの態様では、ＰＥＧは、ＰＥＧ１００、ＰＥＧ２００、ＰＥＧ３００、ＰＥＧ４００、ＰＥＧ５００、ＰＥＧ６００、ＰＥＧ７００、ＰＥＧ８００、ＰＥＧ９００、ＰＥＧ１０００、ＰＥＧ１１００、ＰＥＧ１２００、ＰＥＧ１３００、ＰＥＧ１４００、ＰＥＧ１５００、ＰＥＧ１６００、ＰＥＧ１７００、ＰＥＧ１８００、ＰＥＧ１９００、ＰＥＧ２０００、ＰＥＧ２１００、ＰＥＧ２２００、ＰＥＧ２３００、ＰＥＧ２４００、ＰＥＧ２５００、ＰＥＧ１６００、ＰＥＧ１７００、ＰＥＧ１８００、ＰＥＧ１９００、ＰＥＧ２０００、ＰＥＧ２１００、ＰＥＧ２２００、ＰＥＧ２３００、ＰＥＧ２４００、ＰＥＧ２５００、ＰＥＧ２６００、ＰＥＧ２７００、ＰＥＧ２８００、ＰＥＧ２９００、ＰＥＧ３０００、ＰＥＧ３１００、ＰＥＧ３２００、ＰＥＧ３３００、ＰＥＧ３４００、ＰＥＧ３５００、ＰＥＧ３６００、ＰＥＧ３７００、ＰＥＧ３８００、ＰＥＧ３９００、ＰＥＧ４０００、ＰＥＧ４１００、ＰＥＧ４２００、ＰＥＧ４３００、ＰＥＧ４４００、ＰＥＧ４５００、ＰＥＧ４６００、ＰＥＧ４７００、ＰＥＧ４８００、ＰＥＧ４９００、ＰＥＧ５０００、ＰＥＧ５１００、ＰＥＧ５２００、ＰＥＧ５３００、ＰＥＧ５４００、ＰＥＧ５５００、ＰＥＧ５６００、ＰＥＧ５７００、ＰＥＧ５８００、ＰＥＧ５９００、ＰＥＧ６０００、ＰＥＧ６１００、ＰＥＧ６２００、ＰＥＧ６３００、ＰＥＧ６４００、ＰＥＧ６５００、ＰＥＧ６６００、ＰＥＧ６７００、ＰＥＧ６８００、ＰＥＧ６９００、ＰＥＧ７０００、ＰＥＧ７１００、ＰＥＧ７２００、ＰＥＧ７３００、ＰＥＧ７４００、ＰＥＧ７５００、ＰＥＧ７６００、ＰＥＧ７７００、ＰＥＧ７８００、ＰＥＧ７９００、またはＰＥＧ８０００である。いくつかの態様では、ＰＥＧは、ＰＥＧ５０００である。いくつかの態様では、ＰＥＧは、ＰＥＧ６０００である。いくつかの態様では、ＰＥＧは、ＰＥＧ４０００である。
いくつかの態様では、ＰＥＧは、単分散、例えば、ｍＰＥＧ１００、ｍＰＥＧ２００、ｍＰＥＧ３００、ｍＰＥＧ４００、ｍＰＥＧ５００、ｍＰＥＧ６００、ｍＰＥＧ７００、ｍＰＥＧ８００、ｍＰＥＧ９００、ｍＰＥＧ１０００、ｍＰＥＧ１１００、ｍＰＥＧ１２００、ｍＰＥＧ１３００、ｍＰＥＧ１４００、ｍＰＥＧ１５００、ｍＰＥＧ１６００、ｍＰＥＧ１７００、ｍＰＥＧ１８００、ｍＰＥＧ１９００、ｍＰＥＧ２０００、ｍＰＥＧ２１００、ｍＰＥＧ２２００、ｍＰＥＧ２３００、ｍＰＥＧ２４００、ｍＰＥＧ２５００、ｍＰＥＧ１６００、ｍＰＥＧ１７００、ｍＰＥＧ１８００、ｍＰＥＧ１９００、ｍＰＥＧ２０００、ｍＰＥＧ２１００、ｍＰＥＧ２２００、ｍＰＥＧ２３００、ｍＰＥＧ２４００、ｍＰＥＧ２５００、ｍＰＥＧ２６００、ｍＰＥＧ２７００、ｍＰＥＧ２８００、ｍＰＥＧ２９００、ｍＰＥＧ３０００、ｍＰＥＧ３１００、ｍＰＥＧ３２００、ｍＰＥＧ３３００、ｍＰＥＧ３４００、ｍＰＥＧ３５００、ｍＰＥＧ３６００、ｍＰＥＧ３７００、ｍＰＥＧ３８００、ｍＰＥＧ３９００、ｍＰＥＧ４０００、ｍＰＥＧ４１００、ｍＰＥＧ４２００、ｍＰＥＧ４３００、ｍＰＥＧ４４００、ｍＰＥＧ４５００、ｍＰＥＧ４６００、ｍＰＥＧ４７００、ｍＰＥＧ４８００、ｍＰＥＧ４９００、ｍＰＥＧ５０００、ｍＰＥＧ５１００、ｍＰＥＧ５２００、ｍＰＥＧ５３００、ｍＰＥＧ５４００、ｍＰＥＧ５５００、ｍＰＥＧ５６００、ｍＰＥＧ５７００、ｍＰＥＧ５８００、ｍＰＥＧ５９００、ｍＰＥＧ６０００、ｍＰＥＧ６１００、ｍＰＥＧ６２００、ｍＰＥＧ６３００、ｍＰＥＧ６４００、ｍＰＥＧ６５００、ｍＰＥＧ６６００、ｍＰＥＧ６７００、ｍＰＥＧ６８００、ｍＰＥＧ６９００、ｍＰＥＧ７０００、ｍＰＥＧ７１００、ｍＰＥＧ７２００、ｍＰＥＧ７３００、ｍＰＥＧ７４００、ｍＰＥＧ７５００、ｍＰＥＧ７６００、ｍＰＥＧ７７００、ｍＰＥＧ７８００、ｍＰＥＧ７９００、またはｍＰＥＧ８０００である。いくつかの態様では、ｍＰＥＧは、ｍＰＥＧ５０００である。いくつかの態様では、ｍＰＥＧは、ｍＰＥＧ６０００である。いくつかの態様では、ｍＰＥＧは、ｍＰＥＧ４０００である。
いくつかの態様では、水溶性バイオポリマー部分は、式（（Ｒ３－Ｏ－（ＣＨ２－ＣＨＯＨ－ＣＨ２Ｏ）ｎ－）で表現されるポリグリセロール（ＰＧ）であり、Ｒ３は、水素、メチル、またはエチルであり、ｎは３～２００の値を有する。いくつかの態様では、水溶性バイオポリマー部分は、式（Ｒ３－Ｏ－（ＣＨ２－ＣＨＯＲ５－ＣＨ２－Ｏ）ｎ－）で表現され、Ｒ５が水素である分枝鎖状ポリグリセロールまたは式（Ｒ３－Ｏ－（ＣＨ２－ＣＨＯＨ－ＣＨ２－Ｏ）ｎ－）で表現される直鎖状グリセロール鎖であり、Ｒ３は、水素、メチル、またはエチルである。いくつかの態様では、水溶性バイオポリマー部分は、式（Ｒ３－Ｏ－（ＣＨ２－ＣＨＯＲ５－ＣＨ２－Ｏ）ｎ－）で表現され、Ｒ５が水素である超分岐ポリグリセロール、または式（Ｒ３－Ｏ－（ＣＨ２－ＣＨＯＲ６－ＣＨ２－Ｏ）ｎ－）で表現され、Ｒ６が水素であるグリセロール鎖、または式（Ｒ３－Ｏ－（ＣＨ２－ＣＨＯＲ７－ＣＨ２－Ｏ）ｎ－）で表現され、Ｒ７水素であるグリセロール鎖、または式（Ｒ３－Ｏ－（ＣＨ２－ＣＨＯＨ－ＣＨ２－Ｏ）ｎ－）で表現される直鎖状グリセロール鎖であり、Ｒ３は、水素、メチル、またはエチルである。超分岐グリセロール及びその合成方法は、Ｏｕｄｓｈｏｒｎ ｅｔ ａｌ．（２００６）Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ ２７：５４７１－５４７９；Ｗｉｌｍｓ ｅｔ ａｌ．（２０１００ Ａｃｃ．Ｃｈｅｍ．Ｒｅｓ．４３，１２９－４１、及びその中で引用される参考文献に記載されている。
ある特定の態様では、ＰＧは、約１０００ｇ／ｍｏｌ～約２０００ｇ／ｍｏｌ、約２０００ｇ／ｍｏｌ～約３０００ｇ／ｍｏｌ、約３０００ｇ／ｍｏｌ～約４０００ｇ／ｍｏｌ、約４０００ｇ／ｍｏｌ～約５０００ｇ／ｍｏｌ、約５０００ｇ／ｍｏｌ～約６０００ｇ／ｍｏｌ、約６０００ｇ／ｍｏｌ～約７０００ｇ／ｍｏｌ、または７０００ｇ／ｍｏｌ～約８０００ｇ／ｍｏｌのモル質量を有する。
いくつかの態様では、ＰＧは、ＰＧ１００、ＰＧ２００、ＰＧ３００、ＰＧ４００、ＰＧ５００、ＰＧ６００、ＰＧ７００、ＰＧ８００、ＰＧ９００、ＰＧ１０００、ＰＧ１１００、ＰＧ１２００、ＰＧ１３００、ＰＧ１４００、ＰＧ１５００、ＰＧ１６００、ＰＧ１７００、ＰＧ１８００、ＰＧ１９００、ＰＧ２０００、ＰＧ２１００、ＰＧ２２００、ＰＧ２３００、ＰＧ２４００、ＰＧ２５００、ＰＧ１６００、ＰＧ１７００、ＰＧ１８００、ＰＧ１９００、ＰＧ２０００、ＰＧ２１００、ＰＧ２２００、ＰＧ２３００、ＰＧ２４００、ＰＧ２５００、ＰＧ２６００、ＰＧ２７００、ＰＧ２８００、ＰＧ２９００、ＰＧ３０００、ＰＧ３１００、ＰＧ３２００、ＰＧ３３００、ＰＧ３４００、ＰＧ３５００、ＰＧ３６００、ＰＧ３７００、ＰＧ３８００、ＰＧ３９００、ＰＧ４０００、ＰＧ４１００、ＰＧ４２００、ＰＧ４３００、ＰＧ４４００、ＰＧ４５００、ＰＧ４６００、ＰＧ４７００、ＰＧ４８００、ＰＧ４９００、ＰＧ５０００、ＰＧ５１００、ＰＧ５２００、ＰＧ５３００、ＰＧ５４００、ＰＧ５５００、ＰＧ５６００、ＰＧ５７００、ＰＧ５８００、ＰＧ５９００、ＰＧ６０００、ＰＧ６１００、ＰＧ６２００、ＰＧ６３００、ＰＧ６４００、ＰＧ６５００、ＰＧ６６００、ＰＧ６７００、ＰＧ６８００、ＰＧ６９００、ＰＧ７０００、ＰＧ７１００、ＰＧ７２００、ＰＧ７３００、ＰＧ７４００、ＰＧ７５００、ＰＧ７６００、ＰＧ７７００、ＰＧ７８００、ＰＧ７９００、またはＰＧ８０００である。いくつかの態様では、ＰＧは、ＰＧ５０００である。いくつかの態様では、ＰＧは、ＰＧ６０００である。いくつかの態様では、ＰＧは、ＰＧ４０００である。
いくつかの態様では、ＰＧは、単分散、例えば、ｍＰＧ１００、ｍＰＧ２００、ｍＰＧ３００、ｍＰＧ４００、ｍＰＧ５００、ｍＰＧ６００、ｍＰＧ７００、ｍＰＧ８００、ｍＰＧ９００、ｍＰＧ１０００、ｍＰＧ１１００、ｍＰＧ１２００、ｍＰＧ１３００、ｍＰＧ１４００、ｍＰＧ１５００、ｍＰＧ１６００、ｍＰＧ１７００、ｍＰＧ１８００、ｍＰＧ１９００、ｍＰＧ２０００、ｍＰＧ２１００、ｍＰＧ２２００、ｍＰＧ２３００、ｍＰＧ２４００、ｍＰＧ２５００、ｍＰＧ１６００、ｍＰＧ１７００、ｍＰＧ１８００、ｍＰＧ１９００、ｍＰＧ２０００、ｍＰＧ２１００、ｍＰＧ２２００、ｍＰＧ２３００、ｍＰＧ２４００、ｍＰＧ２５００、ｍＰＧ２６００、ｍＰＧ２７００、ｍＰＧ２８００、ｍＰＧ２９００、ｍＰＧ３０００、ｍＰＧ３１００、ｍＰＧ３２００、ｍＰＧ３３００、ｍＰＧ３４００、ｍＰＧ３５００、ｍＰＧ３６００、ｍＰＧ３７００、ｍＰＧ３８００、ｍＰＧ３９００、ｍＰＧ４０００、ｍＰＧ４１００、ｍＰＧ４２００、ｍＰＧ４３００、ｍＰＧ４４００、ｍＰＧ４５００、ｍＰＧ４６００、ｍＰＧ４７００、ｍＰＧ４８００、ｍＰＧ４９００、ｍＰＧ５０００、ｍＰＧ５１００、ｍＰＧ５２００、ｍＰＧ５３００、ｍＰＧ５４００、ｍＰＧ５５００、ｍＰＧ５６００、ｍＰＧ５７００、ｍＰＧ５８００、ｍＰＧ５９００、ｍＰＧ６０００、ｍＰＧ６１００、ｍＰＧ６２００、ｍＰＧ６３００、ｍＰＧ６４００、ｍＰＧ６５００、ｍＰＧ６６００、ｍＰＧ６７００、ｍＰＧ６８００、ｍＰＧ６９００、ｍＰＧ７０００、ｍＰＧ７１００、ｍＰＧ７２００、ｍＰＧ７３００、ｍＰＧ７４００、ｍＰＧ７５００、ｍＰＧ７６００、ｍＰＧ７７００、ｍ ＰＧ７８００、ｍＰＧ７９００、またはｍＰＧ８０００である。
いくつかの態様では、水溶性バイオポリマーは、ポリ（プロピレングリコール）（「ＰＰＧ」）を含む。いくつかの態様では、ＰＰＧは、以下の式を特徴とし、式中、ｎは、１～１０００の値を有する。
Figure 2024503302000005
いくつかの態様では、ＰＰＧのｎは、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、１６９、１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８９、１８１、１８２、１８３、１８４、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、または２００の値を有する。
いくつかの態様では、ＰＰＧのｎは、少なくとも約１０、少なくとも約２０、少なくとも約３０、少なくとも約４０、少なくとも約５０、少なくとも約６０、少なくとも約７０、少なくとも約８０、少なくとも約９０、少なくとも約１００、少なくとも約１１０、少なくとも１２０、少なくとも約１３０、少なくとも約１４０、少なくとも約１５０、少なくとも約１６０、少なくとも約１７０、少なくとも約１８０、少なくとも約１９０、少なくとも約２００、少なくとも約２１０、少なくとも約２２０、少なくとも約２３０、少なくとも約２４０、少なくとも約２５０、少なくとも約２６０、少なくとも約２７０、少なくとも約２８０、少なくとも約２９０、少なくとも約３００、少なくとも約３１０、少なくとも約３２０、少なくとも約３３０、少なくとも約３４０、少なくとも約３５０、少なくとも約３６０、少なくとも約３７０、少なくとも約３８０、少なくとも約３９０、少なくとも約４００、少なくとも約４１０、少なくとも約４２０、少なくとも約４３０、少なくとも約４４０、少なくとも約４５０、少なくとも約４６０、少なくとも約４７０、少なくとも約４８０、少なくとも約４９０、少なくとも約５００、少なくとも約５１０、少なくとも約５２０、少なくとも約５３０、少なくとも約５４０、少なくとも約５５０、少なくとも約５６０、少なくとも約６７０、少なくとも約５８０、少なくとも約５９０、少なくとも約６００、少なくとも約６１０、少なくとも約６２０、少なくとも約６３０、少なくとも約６４０、少なくとも約６５０、少なくとも約６６０、少なくとも約６７０、少なくとも約６８０、少なくとも約６９０、少なくとも約７００、少なくとも約７１０、少なくとも約７２０、少なくとも約７３０、少なくとも約７４０、少なくとも約７５０、少なくとも約７６０、少なくとも約７７０、少なくとも約７８０、少なくとも約７９０、少なくとも約８００、少なくとも約８１０、少なくとも約８２０、少なくとも約８３０、少なくとも約８４０、少なくとも約８５０、少なくとも約８６０、少なくとも約８７０、少なくとも約８８０、少なくとも約８９０、少なくとも約９００、少なくとも約９１０、少なくとも約９２０、少なくとも約９３０、少なくとも約９４０、少なくとも約９５０、少なくとも約９６０、少なくとも約９７０、少なくとも約９８０、少なくとも約９９０、または約１０００である。
いくつかの態様では、ＰＰＧのｎは、約５０～約１００、約１００～約１５０、約１５０～約２００、約２００～約２５０、約２５０～約３００、約３００～約３５０、約３５０～約４００、約４００～約４５０、約４５０～約５００、約５００～約５５０、約５５０～約６００、約６００～約６５０、約６５０～約７００、約７００～約７５０、約７５０～約８００、約８００～約８５０、約８５０～約９００、約９００～約９５０、または約９５０～約１０００である。
いくつかの態様では、ＰＰＧのｎは、少なくとも約８０、少なくとも約８１、少なくとも約８２、少なくとも約８３、少なくとも約８４、少なくとも約８５、少なくとも約８６、少なくとも約８７、少なくとも約８８、少なくとも約８９、少なくとも約９０、少なくとも約９１、少なくとも約９２、少なくとも約９３、少なくとも約９４、少なくとも約９５、少なくとも約９６、少なくとも約９７、少なくとも約９８、少なくとも約９９、少なくとも約１００、少なくとも約１０１、少なくとも約１０２、少なくとも約１０３、少なくとも約１０４、少なくとも約１０５、少なくとも約１０６、少なくとも約１０７、少なくとも約１０８、少なくとも約１０９、少なくとも１１０、少なくとも約１１１、少なくとも約１１２、少なくとも約１１３、少なくとも約１１４、少なくとも約１１５、少なくとも約１１６、少なくとも約１１７、少なくとも約１１８、少なくとも約１１９、少なくとも約１２０、少なくとも約１２１、少なくとも約１２２、少なくとも約１２３、少なくとも約１２４、少なくとも約１２５、少なくとも約１２６、少なくとも約１２７、少なくとも約１２８、少なくとも約１２９、少なくとも約１３０、少なくとも約１３１、少なくとも約１３２、少なくとも約１３３、少なくとも約１３４、少なくとも約１３５、少なくとも約１３６、少なくとも約１３７、少なくとも約１３８、少なくとも約１３９、少なくとも約１４０、少なくとも約１４１、少なくとも約１４２、少なくとも約１４３、少なくとも約１４４、少なくとも約１４５、少なくとも約１４６、少なくとも約１４７、少なくとも約１４８、少なくとも約１４９、少なくとも約１５０、少なくとも約１５１、少なくとも約１５２、少なくとも約１５３、少なくとも約１５４、少なくとも約１５５、少なくとも約１５６、少なくとも約１５７、少なくとも約１５８、少なくとも約１５９、または少なくとも約１６０である。
いくつかの態様では、ＰＰＧのｎは、約８０～約９０、約９０～約１００、約１００～約１１０、約１１０～約１２０、約１２０～約１３０、約１３０～約１４０、約１４０～約１５０、約１５０～約１６０、約８５～約９５、約９５～約１０５、約１０５～約１１５、約１１５～約１２５、約１２５～約１３５、約１３５～約１４５、約１４５～約１５５、約１５５～約１６５、約８０～約１００、約１００～約１２０、約１２０～約１４０、約１４０～約１６０、約８５～約１０５、約１０５～約１２５、約１２５～約１４５、または約１４５～約１６５である。
したがって、いくつかの態様では、ＰＰＧは、分枝鎖状ＰＰＧである。分枝鎖状ＰＰＧは、中心コア基から延びる３～１０本のＰＰＧ鎖を有する。ある特定の態様では、ＰＰＧ部分は、単分散ポリエチレングリコールである。本開示の文脈において、単分散ポリエチレングリコール（ｍｄＰＰＧ）は、単一の既定の鎖長及び分子量を有するＰＰＧである。ｍｄＰＥＧは、通常、クロマトグラフィーによる重合混合物からの分離により生成される。ある特定の式において、単分散ＰＰＧ部分は、略語ｍｄＰＰＧを割り当てられる。
いくつかの態様では、ＰＰＧは、Ｓｔａｒ ＰＰＧである。Ｓｔａｒ ＰＰＧは、中心コア基から延びる１０～１００本のＰＰＧ鎖を有する。いくつかの態様では、ＰＰＧは、Ｃｏｍｂ ＰＰＧである。Ｃｏｍｂ ＰＰＧは、通常、ポリマー主鎖上にグラフトされた複数のＰＰＧ鎖を有する。
ある特定の態様では、ＰＰＧは、約１０００ｇ／ｍｏｌ～約２０００ｇ／ｍｏｌ、約２０００ｇ／ｍｏｌ～約３０００ｇ／ｍｏｌ、約３０００ｇ／ｍｏｌ～約４０００ｇ／ｍｏｌ、約４０００ｇ／ｍｏｌ～約５０００ｇ／ｍｏｌ、約５０００ｇ／ｍｏｌ～約６０００ｇ／ｍｏｌ、約６０００ｇ／ｍｏｌ～約７０００ｇ／ｍｏｌ、または７０００ｇ／ｍｏｌ～約８０００ｇ／ｍｏｌのモル質量を有する。
いくつかの態様では、ＰＰＧは、ＰＰＧ１００、ＰＰＧ２００、ＰＰＧ３００、ＰＰＧ４００、ＰＰＧ５００、ＰＰＧ６００、ＰＰＧ７００、ＰＰＧ８００、ＰＰＧ９００、ＰＰＧ１０００、ＰＰＧ１１００、ＰＰＧ１２００、ＰＰＧ１３００、ＰＰＧ１４００、ＰＰＧ１５００、ＰＰＧ１６００、ＰＰＧ１７００、ＰＰＧ１８００、ＰＰＧ１９００、ＰＰＧ２０００、ＰＰＧ２１００、ＰＰＧ２２００、ＰＰＧ２３００、ＰＰＧ２４００、ＰＰＧ２５００、ＰＰＧ１６００、ＰＰＧ１７００、ＰＰＧ１８００、ＰＰＧ１９００、ＰＰＧ２０００、ＰＰＧ２１００、ＰＰＧ２２００、ＰＰＧ２３００、ＰＰＧ２４００、ＰＰＧ２５００、ＰＰＧ２６００、ＰＰＧ２７００、ＰＰＧ２８００、ＰＰＧ２９００、ＰＰＧ３０００、ＰＰＧ３１００、ＰＰＧ３２００、ＰＰＧ３３００、ＰＰＧ３４００、ＰＰＧ３５００、ＰＰＧ３６００、ＰＰＧ３７００、ＰＰＧ３８００、ＰＰＧ３９００、ＰＰＧ４０００、ＰＰＧ４１００、ＰＰＧ４２００、ＰＰＧ４３００、ＰＰＧ４４００、ＰＰＧ４５００、ＰＰＧ４６００、ＰＰＧ４７００、ＰＰＧ４８００、ＰＰＧ４９００、ＰＰＧ５０００、ＰＰＧ５１００、ＰＰＧ５２００、ＰＰＧ５３００、ＰＰＧ５４００、ＰＰＧ５５００、ＰＰＧ５６００、ＰＰＧ５７００、ＰＰＧ５８００、ＰＰＧ５９００、ＰＰＧ６０００、ＰＰＧ６１００、ＰＰＧ６２００、ＰＰＧ６３００、ＰＰＧ６４００、ＰＰＧ６５００、ＰＰＧ６６００、ＰＰＧ６７００、ＰＰＧ６８００、ＰＰＧ６９００、ＰＰＧ７０００、ＰＰＧ７１００、ＰＰＧ７２００、ＰＰＧ７３００、ＰＰＧ７４００、ＰＰＧ７５００、ＰＰＧ７６００、ＰＰＧ７７００、ＰＰＧ７８００、ＰＰＧ７９００、またはＰＰＧ８０００である。いくつかの態様では、ＰＰＧは、ＰＰＧ５０００である。いくつかの態様では、ＰＰＧは、ＰＰＧ６０００である。いくつかの態様では、ＰＰＧは、ＰＰＧ４０００である。
いくつかの態様では、ＰＰＧは、単分散、例えば、ｍＰＰＧ１００、ｍＰＰＧ２００、ｍＰＰＧ３００、ｍＰＰＧ４００、ｍＰＰＧ５００、ｍＰＰＧ６００、ｍＰＰＧ７００、ｍＰＰＧ８００、ｍＰＰＧ９００、ｍＰＰＧ１０００、ｍＰＰＧ１１００、ｍＰＰＧ１２００、ｍＰＰＧ１３００、ｍＰＰＧ１４００、ｍＰＰＧ１５００、ｍＰＰＧ１６００、ｍＰＰＧ１７００、ｍＰＰＧ１８００、ｍＰＰＧ１９００、ｍＰＰＧ２０００、ｍＰＰＧ２１００、ｍＰＰＧ２２００、ｍＰＰＧ２３００、ｍＰＰＧ２４００、ｍＰＰＧ２５００、ｍＰＰＧ１６００、ｍＰＰＧ１７００、ｍＰＰＧ１８００、ｍＰＰＧ１９００、ｍＰＰＧ２０００、ｍＰＰＧ２１００、ｍＰＰＧ２２００、ｍＰＰＧ２３００、ｍＰＰＧ２４００、ｍＰＰＧ２５００、ｍＰＰＧ２６００、ｍＰＰＧ２７００、ｍＰＰＧ２８００、ｍＰＰＧ２９００、ｍＰＰＧ３０００、ｍＰＰＧ３１００、ｍＰＰＧ３２００、ｍＰＰＧ３３００、ｍＰＰＧ３４００、ｍＰＰＧ３５００、ｍＰＰＧ３６００、ｍＰＰＧ３７００、ｍＰＰＧ３８００、ｍＰＰＧ３９００、ｍＰＰＧ４０００、ｍＰＰＧ４１００、ｍＰＰＧ４２００、ｍＰＰＧ４３００、ｍＰＰＧ４４００、ｍＰＰＧ４５００、ｍＰＰＧ４６００、ｍＰＰＧ４７００、ｍＰＰＧ４８００、ｍＰＰＧ４９００、ｍＰＰＧ５０００、ｍＰＰＧ５１００、ｍＰＰＧ５２００、ｍＰＰＧ５３００、ｍＰＰＧ５４００、ｍＰＰＧ５５００、ｍＰＰＧ５６００、ｍＰＰＧ５７００、ｍＰＰＧ５８００、ｍＰＰＧ５９００、ｍＰＰＧ６０００、ｍＰＰＧ６１００、ｍＰＰＧ６２００、ｍＰＰＧ６３００、ｍＰＰＧ６４００、ｍＰＰＧ６５００、ｍＰＰＧ６６００、ｍＰＰＧ６７００、ｍＰＰＧ６８００、ｍＰＰＧ６９００、ｍＰＰＧ７０００、ｍＰＰＧ７１００、ｍＰＰＧ７２００、ｍＰＰＧ７３００、ｍＰＰＧ７４００、ｍＰＰＧ７５００、ｍＰＰＧ７６００、ｍＰＰＧ７７００、ｍ ＰＰＧ７８００、ｍＰＰＧ７９００、またはｍＰＰＧ８０００である。いくつかの態様では、ｍＰＰＧは、ｍＰＰＧ５０００である。いくつかの態様では、ｍＰＰＧは、ｍＰＰＧ６０００である。いくつかの態様では、ｍＰＰＧは、ｍＰＰＧ４０００である。
ｂ．カチオン性キャリア
いくつかの態様では、本開示のカチオン性キャリアユニットは、少なくとも１つのカチオン性キャリア部分を含む。「カチオン性キャリア」という用語は、アニオン性ペイロード（またはペイロードに結合されたアニオン性キャリア）と静電的相互作用し、結合することができる複数の正電荷を含む、本開示のカチオン性キャリアユニットの部分または一部を指す。いくつかの態様では、カチオン性キャリアの正電荷または正に荷電した基の数は、アニオン性ペイロード（またはペイロードに結合されたアニオン性キャリア）の負電荷または負に荷電した基の数と同程度である。いくつかの態様では、カチオン性キャリアは、バイオポリマー、例えば、ペプチド（例えば、ポリリシン）を含む。
いくつかの態様では、カチオン性キャリアは、１つ以上の塩基性アミノ酸（例えば、リシン、アルギニン、ヒスチジン、またはそれらの組み合わせ）を含む。いくつかの態様では、カチオン性キャリアは、少なくとも約３個、少なくとも約４個、少なくとも約５個、少なくとも約６個、少なくとも約７個、少なくとも約８個、少なくとも約９個、少なくとも約１０個、少なくとも約１１個、少なくとも約１２個、少なくとも約１３個、少なくとも約１４個、少なくとも約１５個、少なくとも約１６個、少なくとも約１７個、少なくとも約１８個、少なくとも約１９個、少なくとも約２０個、少なくとも約２１個、少なくとも約２２個、少なくとも約２３個、少なくとも約２４個、少なくとも約２５個、少なくとも約２６個、少なくとも約２７個、少なくとも約２８個、少なくとも約２９個、少なくとも約３０個、少なくとも約３１個、少なくとも約３２個、少なくとも約３３個、少なくとも約３４個、少なくとも約３５個、少なくとも約３６個、少なくとも約３７個、少なくとも約３８個、少なくとも約３９個、少なくとも約４０個、少なくとも約４１個、少なくとも約４２個、少なくとも約４３個、少なくとも約４４個、少なくとも約４５個、少なくとも約４６個、少なくとも約４７個、少なくとも約４８個、少なくとも約４９個、少なくとも約５０個、少なくとも約５１個、少なくとも約５２個、少なくとも約５３個、少なくとも約５４個、少なくとも約５５個、少なくとも約５６個、少なくとも約５７個、少なくとも約５８個、少なくとも約５９個、少なくとも約６０個、少なくとも約６１個、少なくとも約６２個、少なくとも約６３個、少なくとも約６４個、少なくとも約６５個、少なくとも約６６個、少なくとも約６７個、少なくとも約６８個、少なくとも約６９個、少なくとも約７０個、少なくとも約７１個、少なくとも約７２個、少なくとも約７３個、少なくとも約７４個、少なくとも約７５個、少なくとも約７６個、少なくとも約７７個、少なくとも約７８個、少なくとも約７９個、少なくとも約８０個の塩基性アミノ酸、例えば、リシン、アルギニン、またはそれらの組み合わせを含む。
いくつかの態様では、カチオン性キャリアユニットは、少なくとも約３０個の塩基性アミノ酸、例えば、リシンを含む。いくつかの態様では、カチオン性キャリアユニットは、少なくとも約３５個の塩基性アミノ酸、例えば、リシンを含む。いくつかの態様では、カチオン性キャリアユニットは、少なくとも約４０個の塩基性アミノ酸、例えば、リシンを含む。いくつかの態様では、カチオン性キャリアユニットは、少なくとも約４５個の塩基性アミノ酸、例えば、リシンを含む。いくつかの態様では、カチオン性キャリアユニットは、少なくとも約５０個の塩基性アミノ酸、例えば、リシンを含む。いくつかの態様では、カチオン性キャリアユニットは、少なくとも約５５個の塩基性アミノ酸、例えば、リシンを含む。いくつかの態様では、カチオン性キャリアユニットは、少なくとも約６０個の塩基性アミノ酸、例えば、リシンを含む。いくつかの態様では、カチオン性キャリアユニットは、少なくとも約６５個の塩基性アミノ酸、例えば、リシンを含む。いくつかの態様では、カチオン性キャリアユニットは、少なくとも約７０個の塩基性アミノ酸、例えば、リシンを含む。いくつかの態様では、カチオン性キャリアユニットは、少なくとも約７５個の塩基性アミノ酸、例えば、リシンを含む。いくつかの態様では、カチオン性キャリアユニットは、少なくとも約８０個の塩基性アミノ酸、例えば、リシンを含む。
いくつかの態様では、カチオン性キャリアユニットは、約３０個～約１０００個、約３０個～約９００個、約３０個～約８００個、約３０個～約７００個、約３０個～約６００個、約３０個～約５００個、約３０個～約４００個、約３０個～約３００個、約３０個～約２００個、約３０個～約１００個、約４０個～約１０００個、約４０個～約９００個、約４０個～約８００個、約４０個～約７００個、約４０個～約６００個、約４０個～約５００個、約４０個～約４００個、約４０個～約３００個、約４０個～約２００個、または約４０個～約１００個の塩基性アミノ酸、例えば、リシンを含む。いくつかの態様では、塩基性アミノ酸、例えばリシンは、第四級アミン（例えば、正電荷）を有するように修飾されていない。
いくつかの態様では、カチオン性キャリアユニットは、約３０個～約１００個、約３０個～約９０個、約３０個～約８０個、約３０個～約７０個、約３０個～約６０個、約３０個～約５０個、約３０個～約４０個、約４０個～約１００個、約４０個～約９０個、約４０個～約８０個、約４０個～約７０個、約４０個～約６０個、約７０個～約８０個、約７５個～約８５個、約６５個～約７５個、約６５個～約８０個、約６０個～約８５個、または約４０個～約５００個の塩基性アミノ酸、例えば、リシンを含む。
いくつかの態様では、カチオン性キャリアユニットは、約１００個～約１０００個、約１００個～約９００個、約１００個～約８００個、約１００個～約７００個、約１００個～約６００個、約１００個～約５００個、約１００個～約４００個、約１００個～約３００個、約１００個～約２００個、約２００個～約１０００個、約２００個～約９００個、約２００個～約８００個、約２００個～約７００個、約２００個～約６００個、約２００個～約５００個、約２００個～約４００個、約２００個～約３００個、約３００個～約１０００個、約３００個～約９００個、約３００個～約８００個、約３００個～約７００個、約３００個～約６００個、約３００個～約５００個、約３００個～約４００個、約４００個～約１０００個、約４００個～約９００個、約４００個～約８００個、約４００個～約７００個、約４００個～約６００個、約４００個～約５００個、約５００個～約１０００個、約５００個～約９００個、約５００個～約８００個、約５００個～約７００個、約５００個～約６００個、約６００個～約１０００個、約６００個～約９００個、約６００個～約８００個、約６００個～約７００個、約７００個～約１０００個、約７００個～約９００個、約７００個～約８００個、約８００個～約１０００個、約８００個～約９００個、または約９００個～約１０００個の塩基性アミノ酸、例えば、リシンを含む。
いくつかの態様では、塩基性アミノ酸、例えば、リシン、アルギニン、ヒスチジン、またはそれらの組み合わせの数は、アニオン性ペイロード（例えば、一本鎖の核酸または二本鎖の核酸）の長さ、及び／またはアニオン性ペイロードの電荷に基づいて調整することができる。例えば、より長い配列を有するアニオン性ペイロードは、より大きな数の塩基性アミノ酸（例えば、リシン）と対合させることができる。いくつかの態様では、カチオン性キャリアユニットの塩基性アミノ酸、例えば、リシンの数は、ポリマー中のプロトン化アミンと、アニオン性ペイロード、例えば、オリゴヌクレオチド、例えば、ａｎｔｉｍｉｒ中のリン酸とのモル比（Ｎ／Ｐ比）が、約１．０、約１．１、約１．２、約１．３、約１．４、約１．５、約１．６、約１．７、約１．８、約１．９、約２．０、約２．１、約２．２、約２．３、約２．４、約２．５、約２．６、約２．７、約２．８、約２．９、または約３となるように計算することができる。いくつかの態様では、カチオン性キャリアユニットの塩基性アミノ酸、例えば、リシンの数は、ポリマー中のプロトン化アミンと、アニオン性ペイロード、例えば、オリゴヌクレオチド、例えば、ａｎｔｉｍｉｒ中のリン酸とのモル比（Ｎ／Ｐ比）が、約１．３～約１．７、例えば、約１．５となるように計算される。いくつかの態様では、カチオン性キャリアユニットの塩基性アミノ酸、例えば、リシンの数は、ポリマー中のプロトン化アミンと、アニオン性ペイロード、例えば、オリゴヌクレオチド、例えば、ａｎｔｉｍｉｒ中のリン酸とのモル比（Ｎ／Ｐ比）が、約１．４となるように計算される。いくつかの態様では、カチオン性キャリアユニットの塩基性アミノ酸、例えば、リシンの数は、ポリマー中のプロトン化アミンと、アニオン性ペイロード、例えば、オリゴヌクレオチド、例えば、ａｎｔｉｍｉｒ中のリン酸とのモル比（Ｎ／Ｐ比）が、約１．６となるように計算される。いくつかの態様では、カチオン性キャリアユニットの塩基性アミノ酸、例えば、リシンの数は、ポリマー中のプロトン化アミンと、アニオン性ペイロード、例えば、オリゴヌクレオチド、例えば、ａｎｔｉｍｉｒ中のリン酸とのモル比（Ｎ／Ｐ比）が、約１．３となるように計算される。いくつかの態様では、カチオン性キャリアユニットの塩基性アミノ酸、例えば、リシンの数は、ポリマー中のプロトン化アミンと、アニオン性ペイロード、例えば、オリゴヌクレオチド、例えば、ａｎｔｉｍｉｒ中のリン酸とのモル比（Ｎ／Ｐ比）が、約１．７となるように計算される。
いくつかの態様では、カチオン性キャリアユニットの塩基性アミノ酸、例えば、リシンの数は、ポリマー中のプロトン化アミンと、アニオン性ペイロード、例えば、コレステロール結合ｓｉＲＮＡ中のリン酸とのモル比（Ｎ／Ｐ比）が、約１．０となるように計算される。
いくつかの態様では、カチオン性キャリアユニットの塩基性アミノ酸、例えば、リシンの数は、ポリマー中のプロトン化アミンと、アニオン性ペイロード、例えばｓｉＲＮＡ中のリン酸とのモル比（Ｎ／Ｐ比）が、約２．０となるように計算される。
当業者は、カチオン性キャリア部分の役割はペイロードの負電荷（例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチドのリン酸骨格における負電荷）を静電的相互作用により中性化することであるため、いくつかの態様では（例えば、ペイロードがａｎｔｉｍｉｒなどの核酸である場合）、カチオン性キャリアの長さ、カチオン性キャリアの正に荷電した基の数、ならびにカチオン性キャリアに存在する電荷の分布及び配置は、ペイロード分子の長さ及び電荷分布に依存することを理解するであろう。
いくつかの態様では、カチオン性キャリアは、約５個～約１０個、約１０個～約１５個、約１５個～約２０個、約２０個～約２５個、約２５個～約３０個、約３０個～約３５個、約３５個～約４０個、約４０個～約４５個、約４５個～約５０個、約５０個～約５５個、約５５個～約６０個、約６０個～約６５個、約７０個、約７０個～約７５個、または約７５個～約８０個の塩基性アミノ酸を含む。いくつかの特定の態様では、正に荷電したキャリアは、３０個～約５０個の塩基性アミノ酸を含む。いくつかの特定の態様では、正に荷電したキャリアは、７０個～約８０個の塩基性アミノ酸を含む。
いくつかの態様では、塩基性アミノ酸は、アルギニン、リシン、ヒスチジン、またはそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの態様では、塩基性アミノ酸は、Ｄ－アミノ酸である。いくつかの態様では、塩基性アミノ酸は、Ｌ－アミノ酸である。いくつかの態様では、正に荷電したキャリアは、Ｄ－アミノ酸及びＬ－アミノ酸を含む。いくつかの態様では、塩基性アミノ酸は、少なくとも１つの非天然アミノ酸またはその誘導体を含む。いくつかの態様では、塩基性アミノ酸は、アルギニン、リジン、ヒスチジン、Ｌ－４－アミノメチル－フェニルアラニン、Ｌ－４－グアニジン－フェニルアラニン、Ｌ－４－アミノメチル－Ｎ－イソプロピル－フェニルアラニン、Ｌ－３－ピリジル－アラニン、Ｌ－ｔｒａｎｓ－４－アミノメチルシクロヘキシル－アラニン、Ｌ－４－ピペリジニル－アラニン、Ｌ－４－アミノシクヘキシル－アラニン、４－グアニジノ酪酸、Ｌ－２－アミノ－３－グアニジノプロピオン酸、ＤＬ－５－ヒドロキシリジン、ピロリジン、５－ヒドロキシ－Ｌ－リジン、メチルリジン、ヒプシン、またはそれらの任意の組み合わせである。特定の態様では、正に荷電したキャリアは、約４０個のリシンを含む。特定の態様では、正に荷電したキャリアは、約５０個のリシンを含む。特定の態様では、正に荷電したキャリアは、約６０個のリシンを含む。特定の態様では、正に荷電したキャリアは、約７０個のリシンを含む。特定の態様では、正に荷電したキャリアは、約８０個のリシンを含む。特定の態様では、正に荷電したキャリアは、約３０個のリシンを含む。特定の態様では、正に荷電したキャリアは、約４０個のリシンを含む。特定の態様では、正に荷電したキャリアは、約３８個のリシンを含む。特定の態様では、正に荷電したキャリアは、約３２個のリシンを含む。特定の態様では、正に荷電したキャリアは、約３５個のリシンを含む。
他の態様では、カチオン性キャリアは、少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個、少なくとも６個、少なくとも７個、少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個、少なくとも２０個、少なくとも２１個、少なくとも２２個、少なくとも２３個、少なくとも２４個、少なくとも２５個、少なくとも２６個、少なくとも２７個、少なくとも２８個、少なくとも２９個、少なくとも３０個、少なくとも３１個、少なくとも３２個、少なくとも３３個、少なくとも３４個、少なくとも３５個、少なくとも３６個、少なくとも３７個、少なくとも３８個、少なくとも３９個、少なくとも４０個、少なくとも４１個、少なくとも４２個、少なくとも４３個、少なくとも４４個、少なくとも４５個、少なくとも４６個、少なくとも４７個、少なくとも４８個、少なくとも４９個、少なくとも５０個、少なくとも５１個、少なくとも５２個、少なくとも５３個、少なくとも５４個、少なくとも５５個、少なくとも５６個、少なくとも５７個、少なくとも５８個、少なくとも５９個、少なくとも６０個、少なくとも６１個、少なくとも６２個、少なくとも６３個、少なくとも６４個、少なくとも６５個、少なくとも６６個、少なくとも６７個、少なくとも６８個、少なくとも６９個、少なくとも７０個、少なくとも７１個、少なくとも７２個、少なくとも７３個、少なくとも７４個、少なくとも７５個、少なくとも７６個、少なくとも７７個、少なくとも７８個、少なくとも７９個、または少なくとも８０個のカチオン性基（例えば、アミノ基）を含むポリマーまたはコポリマーを含む。いくつかの態様では、カチオン性キャリアは、約５～約１０のカチオン性基、約１０～約１５のカチオン性基、約１５～約２０のカチオン性基、約２０～約２５のカチオン性基、約２５～約３０のカチオン性基、約３０～約３５のカチオン性基、約３５～約４０のカチオン性基、約４０～約４５のカチオン性基、約４５～約５０のカチオン性基、約５０～約５５のカチオン性基、約５５～約６０のカチオン性基、約６０～約６５のカチオン性基、約６５～約７０のカチオン性基、約７０～約７５のカチオン性基、または約４５～約５０のカチオン性基（例えば、アミノ基）を含むポリマーまたはコポリマーを含む。いくつかの特定の態様では、カチオン性キャリアは、３０～約５０のカチオン性基（例えば、アミノ基）を含むポリマーまたはコポリマーを含む。いくつかの特定の態様では、カチオン性キャリアは、７０～約８０のカチオン性基（例えば、アミノ基）を含むポリマーまたはコポリマーを含む。いくつかの態様では、ポリマーまたはコポリマーは、アクリレート、ポリアルコール、または多糖である。
いくつかの態様では、カチオン性キャリア部分は、単一のペイロード分子に結合する。他の態様では、カチオン性キャリア部分は、同一であり得るか、または異なり得る複数のペイロード分子に結合し得る。
いくつかの態様では、カチオン性キャリア部分の正電荷と核酸ペイロードの負電荷とのイオン比は、約５：１、約４：１、約３：１、約２．９：１、約２．８：１、約２．７：１、約２．６：１、約２．５：１、約２．４：１、約２．３：１、約２．２：１、約２．１：１、約２：１、約１．９：１、約１．８：１、約１．７：１、約１．６：１、約１．５：１、約１．４：１、約１．３：１、約１．２：１、約１．１：１、約１：１、約１：１．１、約１：１．２、約１：１．３、約１：１．４、約１：１．５、約１：１．６、約１：１．７、約１：１．８、約１：１．９、約１：２、約１：２．１、約１：２．２、約１：２．３、約１：２．４、約１：２．５、約１：２．６、約１：２．７、約１：２．８、約１：２．９、約１：３、約１：４、または約１：５である。いくつかの態様では、カチオン性キャリア部分の正電荷と核酸ペイロードの負電荷との電荷比は、１：１である。いくつかの態様では、カチオン性キャリア部分の正電荷と核酸ペイロードの負電荷との電荷比は、２：１である。いくつかの態様では、カチオン性キャリア部分の正電荷と核酸ペイロードの負電荷との電荷比は、３：２である。いくつかの態様では、カチオン性キャリア部分の正電荷と核酸ペイロードの負電荷との電荷比は、２：３である。いくつかの態様では、カチオン性キャリア部分の正電荷と核酸ペイロードの負電荷との電荷比は、１：１である。
いくつかの態様では、カチオン性キャリア部分は、自由末端を有し、ここで、末端基は反応性基である。いくつかの態様では、カチオン性キャリア部分は、自由末端（例えば、ポリリジンカチオン性キャリア部分におけるＣ末端）を有し、ここで、末端基は、アミノ（－ＮＨ２）基である。いくつかの態様では、カチオン性キャリア部分は、自由末端を有し、ここで、末端基はスルフヒドリル基である。いくつかの態様では、カチオン性キャリア部分の反応性基は、疎水性部分、例えば、ビタミンＢ３疎水性部分に結合される。
ｃ．架橋部分
いくつかの態様では、本開示のカチオン性キャリアユニットは、少なくとも１つの架橋部分を含む。「架橋部分」という用語は、架橋を形成することができる複数の物質を含むポリマーブロックの化学部分または部分を指す。いくつかの態様では、架橋を形成することができるいくつかの物質は、架橋剤の側鎖を有するアミノ酸を含む。いくつかの態様では、ＣＭは、バイオポリマー、例えば、架橋剤に連結されたペプチド（例えば、ポリリシン）を含む。
いくつかの態様では、架橋部分は、１つ以上のアミノ酸（例えば、リシン、アルギニン、ヒスチジン、またはそれらの組み合わせ）を含む。いくつかの態様では、架橋部分は、それぞれが架橋剤に連結された少なくとも約３個、少なくとも約４個、少なくとも約５個、少なくとも約６個、少なくとも約７個、少なくとも約８個、少なくとも約９個、少なくとも約１０個、少なくとも約１１個、少なくとも約１２個、少なくとも約１３個、少なくとも約１４個、少なくとも約１５個、少なくとも約１６個、少なくとも約１７個、少なくとも約１８個、少なくとも約１９個、少なくとも約２０個、少なくとも約２１個、少なくとも約２２個、少なくとも約２３個、少なくとも約２４個、少なくとも約２５個、少なくとも約２６個、少なくとも約２７個、少なくとも約２８個、少なくとも約２９個、または少なくとも約３０個のアミノ酸、例えば、リシン、アルギニン、またはそれらの組み合わせを含む。
いくつかの態様では、架橋部分の各リシンは、中性電荷を有する（例えば、第三級アミンを含む）。いくつかの態様では、架橋部分の各リシンは、チオール（例えば、リシン－チオール）及び第三級アミンを含み、それにより各リシンは中性電荷を有する。いくつかの局面において、架橋部分は、第三級アミンを介して架橋を形成する。いくつかの局面において、架橋部分は、チオールを介して架橋を形成する。本明細書で使用される場合、架橋部分との関連における「リシン」とは、架橋部分のリシンがキャリアユニットの全体的な電荷に寄与しないような、中性の電荷を有する（例えば、第三級アミンを含む）リシンを指す。いくつかの態様では、架橋部分の各リシンは、アミド結合により架橋剤に連結される。
いくつかの態様では、架橋部分は、それぞれが架橋剤に連結された少なくとも約５個のアミノ酸（例えば、リシン）を含む。いくつかの態様では、架橋部分は、それぞれが架橋剤に連結された少なくとも約１０個のアミノ酸（例えば、リシン）を含む。いくつかの態様では、架橋部分は、それぞれが架橋剤に連結された少なくとも約１１個のアミノ酸（例えば、リシン）を含む。いくつかの態様では、架橋部分は、それぞれが架橋剤に連結された少なくとも約１２個のアミノ酸（例えば、リシン）を含む。いくつかの態様では、架橋部分は、それぞれが架橋剤に連結された少なくとも約１３個のアミノ酸（例えば、リシン）を含む。いくつかの態様では、架橋部分は、それぞれが架橋剤に連結された少なくとも約１４個のアミノ酸（例えば、リシン）を含む。いくつかの態様では、架橋部分は、それぞれが架橋剤に連結された少なくとも約１５個のアミノ酸（例えば、リシン）を含む。いくつかの態様では、架橋部分は、それぞれが架橋剤に連結された少なくとも約１６個のアミノ酸（例えば、リシン）を含む。いくつかの態様では、架橋部分は、それぞれが架橋剤に連結された少なくとも約１７個のアミノ酸（例えば、リシン）を含む。いくつかの態様では、架橋部分は、それぞれが架橋剤に連結された少なくとも約１８個のアミノ酸（例えば、リシン）を含む。いくつかの態様では、架橋部分は、それぞれが架橋剤に連結された少なくとも約１９個のアミノ酸（例えば、リシン）を含む。いくつかの態様では、架橋部分は、それぞれが架橋剤に連結された少なくとも約２０個のアミノ酸（例えば、リシン）を含む。
いくつかの態様では、架橋剤はチオールである。いくつかの態様では、架橋剤はチオール誘導体である。
ｃ．疎水性部分
いくつかの態様では、本開示のカチオン性キャリアユニットは、少なくとも１つの疎水性部分を含む。本明細書で使用する場合、「疎水性部分」という用語は、例えば、（ｉ）ペイロードの治療活性もしくは予防活性を補足し得るか、（ｉｉ）ペイロードの治療活性もしくは予防活性を調節し得るか、（ｉｉｉ）標的組織もしくは標的細胞において治療薬及び／または予防薬として機能し得るか、（ｉｖ）生理学的バリア、例えば、ＢＢＢ及び／または形質膜を通したカチオン性キャリアユニットの輸送を促進し得るか、（ｖ）標的組織もしくは標的細胞の恒常性を改善し得るか、（ｖｉ）正に荷電した基をカチオン性キャリア部分に提供し得るか、または（ｖｉｉ）それらの任意の組み合わせであり得る分子実体を指す。
いくつかの態様では、疎水性部分の各リシンは、中性電荷を有する（例えば、第三級アミンを含む）。いくつかの態様では、疎水性部分の各リシンは、チオール（例えば、リシン－チオール）及び第三級アミンを含み、それにより各リシンは中性電荷を有する。いくつかの態様では、疎水性部分は、第三級アミン（例えば、中性電荷アミン）を介してビタミンに連結され、それにより、疎水性部分の各リシンはキャリアユニットの全体的な電荷に寄与しない。いくつかの態様では、疎水性部分は、チオールを介してビタミンに連結され、それにより、疎水性部分の各リシンはキャリアユニットの全体的な電荷に寄与しない。いくつかの態様では、疎水性部分の各リシンは、アミド結合によりビタミンに連結される。
いくつかの態様では、疎水性部分は、例えば、免疫反応、炎症反応、または組織微小環境を調節することができる。
いくつかの態様では、免疫反応を調節することができる疎水性部分は、例えば、チロシンまたはドーパミンを含み得る。チロシンは、Ｌ－ドーパに変換され得、次いで、２ステップの酵素反応によりドーパミンに変換される。通常、ドーパミンレベルは、パーキンソン病患者において低い。したがって、いくつかの態様では、チロシンは、パーキンソン病の治療に使用されるカチオン性キャリアユニットにおける疎水性部分である。トリプトファンは、食欲、感情、ならびに運動機能、認知機能、及び自律神経機能において役割を果たすと考えられている神経伝達物質であるセロトニンに変換され得る。したがって、いくつかの態様では、低セロトニンレベルに関連する疾患または状態の治療に使用される本開示のカチオン性キャリアユニットは、疎水性部分としてトリプトファンを含む。
いくつかの態様では、疎水性部分は、例えば、腫瘍微小環境における低酸素状態を阻害または低減することにより、腫瘍を有する対象における腫瘍微小環境を調節し得る。
いくつかの態様では、疎水性部分は、例えば、イミダゾール誘導体、ビタミン、またはそれらの任意の組み合わせに連結されたアミノ酸を含む。
いくつかの態様では、疎水性部分は、下式を含むイミダゾール誘導体に連結されたアミノ酸（例えば、リシン）：
Figure 2024503302000006
 （式中、Ｇ１及びＧ２のそれぞれは、独立して、Ｈ、芳香環、もしくは１～１０アルキルであるか、またはＧ１及びＧ２は、ともに芳香環を形成し、ｎは１～１０である。）を含む。
いくつかの態様では、疎水性部分は、ニトロイミダゾールに連結されたアミノ酸（例えば、リシン）を含む。ニトロイミダゾールは、抗生物質として機能する。ニトロイミダゾールにおけるニトロ複素環は、低酸素細胞において還元的に活性化され得、次いで、酸化還元リサイクルを受け得るか、または細胞毒性産物に分解し得る。還元は、通常、嫌気性細菌または無酸素組織においてのみ起こるため、それらのヒト細胞または好気性細菌に対する影響は比較的小さい。いくつかの態様では、疎水性部分は、メトロニダゾール、チニダゾール、ニモラゾール、ジメトリダゾール、プレトマニド、オルニダゾール、メガゾール、アザニダゾール、ベンズニダゾール、ニトロイミダゾール、またはそれらの任意の組み合わせに連結されたアミノ酸（例えば、リシン）を含む。
いくつかの態様では、疎水性部分は、下式に連結されたアミノ酸（例えば、リシン）を含む：
Figure 2024503302000007
Figure 2024503302000008
いくつかの態様では、疎水性部分は、炎症反応を阻害または低減することができる。
いくつかの態様では、疎水性部分は、ビタミンに連結されたアミノ酸（例えば、リシン）を含む。いくつかの態様では、ビタミンは、環式環または環式ヘテロ原子環及びカルボキシル基またはヒドロキシル基を含む。いくつかの態様では、ビタミンは、下式を含む：
Figure 2024503302000009
 （式中、Ｙ１及びＹ２のそれぞれは、Ｃ、Ｎ、Ｏ、またはＳであり、ｎは１または２である）。
いくつかの態様では、ビタミンは、ビタミンＡ（レチノール）、ビタミンＢ１（チアミン塩化物）、ビタミンＢ２（リボフラビン）、ビタミンＢ３（ナイアシンアミド）、ビタミンＢ６（ピリドキサール）、ビタミンＢ７（ビオチン）、ビタミンＢ９（葉酸）、ビタミンＢ１２（コバラミン）、ビタミンＣ（アスコルビン酸）、ビタミンＤ２、ビタミンＤ３、ビタミンＥ（トコフェロール）、ビタミンＭ、ビタミンＨ、それらの誘導体、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。
いくつかの態様では、ビタミンは、以下のビタミンＢ３（ナイアシンまたはニコチン酸としても公知）である。
Figure 2024503302000010
いくつかの態様では、疎水性部分は、それぞれがビタミンＢ３に連結された少なくとも約２個、少なくとも約３個、少なくとも約４個、少なくとも約５個、少なくとも約６個、少なくとも約７個、少なくとも約８個、少なくとも約９個、少なくとも約１０個、少なくとも約１１個、少なくとも約１２個、少なくとも約１３個、少なくとも約１４個、少なくとも約１５個、少なくとも約１６個、少なくとも約１７個、少なくとも約１８個、少なくとも約１９個、少なくとも約２０個、少なくとも約２１個、少なくとも約２２個、少なくとも約２３個、少なくとも約２４個、少なくとも約２５個、少なくとも約２６個、少なくとも約２７個、少なくとも約２８個、少なくとも約２９個、少なくとも約３０個、少なくとも約３１個、少なくとも約３２個、少なくとも約３３個、少なくとも約３４個、少なくとも約３５個、少なくとも約３６個、少なくとも約３７個、少なくとも約３８個、少なくとも約３９個、または少なくとも約４０個のアミノ酸（例えば、リシン）を含む。いくつかの態様では、疎水性部分は、それぞれがビタミンＢ３に連結された少なくとも約３０個のアミノ酸（例えば、リシン）を含む。いくつかの態様では、疎水性部分は、それぞれがビタミンＢ３に連結された少なくとも約３１個のアミノ酸（例えば、リシン）を含む。いくつかの態様では、疎水性部分は、それぞれがビタミンＢ３に連結された少なくとも約３２個のアミノ酸（例えば、リシン）を含む。いくつかの態様では、疎水性部分は、それぞれがビタミンＢ３に連結された少なくとも約３３個のアミノ酸（例えば、リシン）を含む。いくつかの態様では、疎水性部分は、それぞれがビタミンＢ３に連結された少なくとも約３４個のアミノ酸（例えば、リシン）を含む。いくつかの態様では、疎水性部分は、それぞれがビタミンＢ３に連結された少なくとも約３５個のアミノ酸（例えば、リシン）を含む。いくつかの態様では、疎水性部分は、それぞれがビタミンＢ３に連結された少なくとも約３６個のアミノ酸（例えば、リシン）を含む。いくつかの態様では、疎水性部分は、それぞれがビタミンＢ３に連結された少なくとも約３７個のアミノ酸（例えば、リシン）を含む。いくつかの態様では、疎水性部分は、それぞれがビタミンＢ３に連結された少なくとも約３８個のアミノ酸（例えば、リシン）を含む。いくつかの態様では、疎水性部分は、それぞれがビタミンＢ３に連結された少なくとも約３９個のアミノ酸（例えば、リシン）を含む。いくつかの態様では、疎水性部分は、それぞれがビタミンＢ３に連結された少なくとも約４０個のアミノ酸（例えば、リシン）を含む。
いくつかの態様では、疎水性部分は、それぞれがビタミンＢ３に結合された約２０個～約２５個のアミノ酸（例えば、リシン）、それぞれがビタミンＢ３に結合された約２５個～約３０個のアミノ酸（例えば、リシン）、それぞれがビタミンＢ３に結合された約３０個～約３５個のアミノ酸（例えば、リシン）、それぞれがビタミンＢ３に結合された約３５個～約４０個のアミノ酸（例えば、リシン）、それぞれがビタミンＢ３に結合された約４０個～約４５個のアミノ酸（例えば、リシン）、またはそれぞれがビタミンＢ３に結合された約４５個～約５０個のアミノ酸（例えば、リシン）を含む。いくつかの態様では、疎水性部分は、それぞれがビタミンＢ３に結合された約２０個～約３０個のアミノ酸（例えば、リシン）、それぞれがビタミンＢ３に結合された約３０個～約４０個のアミノ酸（例えば、リシン）、それぞれがビタミンＢ３に結合された約４０個～約５０個のアミノ酸（例えば、リシン）、それぞれがビタミンＢ３に結合された約２５個～約３５個のアミノ酸（例えば、リシン）、またはそれぞれがビタミンＢ３に結合された約３５個～約４５個のアミノ酸（例えば、リシン）を含む。
ナイアシンは、インビボにおいて補酵素であるニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤ）及びニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸（ＮＡＤＰ）の前駆体である。ＮＡＤは、酵素ＮＡＤ＋キナーゼの存在下でのリン酸化によりＮＡＤＰに変換される。ＮＡＤＰ及びＮＡＤは、多数の水素転移プロセスに関与する多数のデヒドロゲナーゼの補酵素である。ＮＡＤは、脂肪、炭水化物、タンパク質、及びアルコールの異化、ならびに細胞シグナル伝達及びＤＮＡ修復に重要であり、ＮＡＤＰは、主に同化反応、例えば、脂肪酸及びコレステロール合成に重要である。エネルギー必要量が高い（脳）か、または代謝回転速度が速い器官（消化管、皮膚）は、通常、それらの欠乏に最も感受性が高い。
ナイアシンは、脳、消化管、皮膚、及び血管組織を含む種々の組織においてＮＩＡＣＲ１の活性化により顕著な抗炎症効果をもたらす。ナイアシンは、神経炎症を減弱することが示されており、多発性硬化症及びパーキンソン病などの神経免疫障害の処置における有効性を有し得る。Ｏｆｆｅｒｍａｎｎｓ ＆ Ｓｃｈｗａｎｉｎｇｅｒ（２０１５）Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ２１：２４５－２６６；Ｃｈａｉ ｅｔ ａｌ（２０１３）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ Ｒｅｐｏｒｔｓ １５：３２５；Ｇｒａｆｆ ｅｔ ａｌ．（２０１６）Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ ６５：１０２－１３；及びＷａｋａｄｅ ＆ Ｃｈｏｎｇ（２０１４）Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｔｈｅ Ｎｅｕｒｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ３４７：３４－８（参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる）を参照のこと。
ｄ．標的化部分
いくつかの態様では、カチオン性キャリアユニットは、任意選択的にリンカーにより水溶性ポリマーに連結されている標的化部分を含む。本明細書で使用する場合、「標的化部分」という用語は、特定の生体物質または部位に結合する生体認識分子を指す。いくつかの態様では、標的化部分は、ある特定の標的分子に対して特異的（例えば、受容体を標的とするリガンドまたは表面タンパク質を標的とする抗体）であるか、組織に対して特異的（例えば、特定の器官または組織、例えば、肝臓、脳、または内皮にミセルを優先的に輸送する分子）であるか、または生理学的バリアを通した輸送を促進する（例えば、血液脳関門または形質膜を通した輸送を促進し得るペプチドまたは他の分子）。
ペイロード（例えば、ヌクレオチド分子、例えば、マイクロＲＮＡに結合するアンチセンスオリゴヌクレオチド）を本開示に従って標的化するために、標的化部分は、カチオン性キャリアユニットに連結され得、これによって、ミセルの外面に連結され得る一方で、ミセルは、その核内に封入されたペイロードを有する。
いくつかの態様では、標的化部分は、本開示のミセルを組織に標的化することができる標的化部分である。いくつかの態様では、組織は、肝臓、脳、腎臓、肺、卵巣、膵臓、甲状腺、乳房、胃、またはそれらの任意の組み合わせである。いくつかの態様では、組織は、がん組織、例えば、肝臓癌、脳癌、腎臓癌、肺癌、卵巣癌、膵臓癌、甲状腺癌、乳癌、胃癌、またはそれらの任意の組み合わせである。
特定の態様では、組織は、肝臓である。特定の態様では、肝臓を標的とする標的化部分は、コレステロールである。他の態様では、肝臓を標的とする標的化部分は、アシアロ糖タンパク質受容体標的化部分と結合するリガンドである。いくつかの態様では、アシアロ糖タンパク質受容体標的化部分は、ＧａｌＮＡｃクラスターを含む。いくつかの態様では、ＧａｌＮＡｃクラスターは、一価、二価、三価、または四価のＧａｌＮＡｃクラスターである。
別の態様では、組織は、膵臓である。いくつかの態様では、膵臓を標的とする標的化部分は、膵臓細胞上のαｖβ３インテグリン受容体を標的とするリガンドを含む。いくつかの態様では、標的化部分は、アルギニルグリシルアスパラギン酸（ＲＧＤ）ペプチド配列（Ｌ－アルギニル－グリシル－Ｌ－アスパラギン酸、Ａｒｇ－Ｇｌｙ－Ａｓｐ）を含む。
いくつかの態様では、組織は、中枢神経系の組織、例えば、神経組織である。いくつかの態様では、中枢神経系を標的とする標的化部分は、大型中性アミノ酸輸送体１（ＬＡＴ１）により輸送されることができる。ＬＡＴ１（ＳＬＣ７Ａ５）は、大型中性アミノ酸及びいくつかの医薬品の両方の取り込みのための輸送体である。ＬＡＴ１は、Ｌ－ドーパまたはガバペンチンなどの薬物を輸送し得る。
いくつかの態様では、標的化部分は、グルコース輸送体１（またはＧＬＵＴ１）に結合することができ、ＢＢＢを通過することができるグルコース、例えば、Ｄ－グルコースを含む。溶質輸送体ファミリー２促進性グルコース輸送体メンバー１（ＳＬＣ２Ａ１）としても公知のＧＬＵＴ１は、ヒトにおいてＳＬＣ２Ａ１遺伝子によりコードされる単輸送体タンパク質である。ＧＬＵＴ１は、哺乳動物細胞の形質膜を通したグルコースの輸送を促進する。この遺伝子は、哺乳動物の血液脳関門における主要なグルコース輸送体をコードする。
いくつかの態様では、標的化部分は、ＧＬＵＴ１輸送体に結合することができ、ＢＢＢを通過することができるガラクトース（例えば、Ｄ－ガラクトース）を含む。いくつかの態様では、標的化部分は、アセチルコリンエステラーゼ阻害剤（ＡＣｈＥＩ）及び／またはＥＡＡＴ阻害剤に結合することができ、ＢＢＢを通過することができるグルタミン酸を含む。アセチルコリンエステラーゼは、コリンエステラーゼ酵素ファミリーの主要なメンバーである酵素である。アセチルコリンエステラーゼ阻害剤（ＡＣｈＥＩ）は、アセチルコリンエステラーゼがアセチルコリンをコリン及び酢酸に分解するのを阻害し、これにより、アセチルコリン受容体が豊富である中枢神経系、自律神経節、及び神経筋接合部における神経伝達物質アセチルコリンのレベル及び作用持続時間の両方を増加させる阻害剤である。アセチルコリンエステラーゼ阻害剤は、２種類のコリンエステラーゼ阻害剤のうちの１つであり、もう一方は、ブチリルコリンエステラーゼ阻害剤である。
いくつかの態様では、標的化部分は、ＧＡＢＡ受容体に結合することができ、ＢＢＢを通過することができるＧＡＢＡである。ＧＡＢＡ受容体は、成熟脊椎動物の中枢神経系における主要な抑制性化合物である神経伝達物質γ－アミノ酪酸（ＧＡＢＡ）に反応する受容体のクラスである。ＧＡＢＡＡとＧＡＢＡＢの２つのクラスのＧＡＢＡ受容体がある。ＧＡＢＡＡ受容体は、リガンド依存性イオンチャネル（イオンチャネル型受容体としても知られる）であり、一方、ＧＡＢＡＢ受容体は、代謝型受容体とも称されるＧタンパク質共役受容体である。
いくつかの態様では、標的化部分は、ＬＡＴ１に結合することができ、ＢＢＢを通過することができるチロシンを含む。いくつかの態様では、標的化部分は、ＬＡＴ１に結合することができ、ＢＢＢを通過することができるリシンを含む。いくつかの態様では、標的化部分は、ＬＡＴ１に結合することができ、ＢＢＢを通過することができるグルタミンを含む。いくつかの態様では、標的化部分は、ＧＡＢＡ受容体、ＬＡＴ１、ＣＮＳ逆転写酵素阻害剤、及び／またはドーパミン（ＤＡ）受容体に結合することができ、ＢＢＢを通過することができるフェニルアラニンを含む。ドーパミン受容体は、脊椎動物中枢神経系（ＣＮＳ）において顕著であるＧタンパク質共役受容体のクラスである。ドーパミン受容体は、Ｇタンパク質カップリングによってだけでなく、異なるタンパク質（ドーパミン受容体－相互作用タンパク質）相互作用によるシグナル伝達によっても異なるエフェクターを活性化する。神経伝達物質ドーパミンは、ドーパミン受容体の主要な内因性リガンドである。
ドーパミン受容体は、動機付け、快感、認知、記憶、学習、及び細かい運動制御、ならびに神経内分泌シグナル伝達の調節を含む多数の神経プロセスに関与するとされる。異常なドーパミン受容体シグナル伝達及びドーパミン作動性神経機能は、いくつかの神経精神障害に関係付けられている。したがって、ドーパミン受容体は、神経薬の一般的な標的であり、抗精神病薬が、多くの場合、ドーパミン受容体アンタゴニストである一方で、精神刺激薬が、通常、ドーパミン受容体の間接的アゴニストである。
いくつかの態様では、標的化部分は、ＣＮＳ逆転写酵素阻害剤に結合することができ、ＢＢＢを通過することができるバリンを含む。いくつかの態様では、標的化部分は、ＧＡＢＡ受容体及び／またはＣＮＳ逆転写酵素阻害剤に結合することができ、ＢＢＢを通過することができるトリプトファンを含む。いくつかの態様では、標的化部分は、ＧＡＢＡ受容体及び／またはＣＮＳ逆転写酵素阻害剤に結合することができ、ＢＢＢを通過することができるロイシンを含む。いくつかの態様では、標的化部分は、ＧＡＢＡ受容体及び／またはＣＮＳ逆転写酵素阻害剤に結合することができ、ＢＢＢを通過することができるメチオニンを含む。いくつかの態様では、標的化部分は、ＧＡＢＡ受容体に結合することができ、ＢＢＢを通過することができるヒスチジンを含む。いくつかの態様では、標的化部分は、ＣＮＳ逆転写酵素阻害剤に結合することができ、ＢＢＢを通過することができるイソロイシンを含む。いくつかの態様では、標的化部分は、ＧＳＨ輸送体に結合することができ、ＢＢＢを通過することができるグルタチオンを含む。いくつかの態様では、標的化部分は、ＧＳＨ輸送体に結合することができ、ＢＢＢを通過することができるグルタチオン－Ｍｅｔを含む。いくつかの態様では、標的化部分は、一酸化窒素合成酵素（ＮＯＳ）に結合することができ、ＢＢＢに結合することができる尿素／チオ尿素を含む。いくつかの態様では、標的化部分は、酸化還元機構によりＢＢＢを通過することができるＮＡＤ＋／ＮＡＤＨを含む。いくつかの態様では、標的化部分は、プリンを含み、ＢＢＢを通過することができる。ＣＮＳを標的化するための標的化部分のさらなる例が、Ｓｕｔｅｒａ ｅｔ ａｌ．（２０１６）：Ｓｍａｌｌ ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ａｓ ｍｏｉｅｔｙ ｔｏ ｉｍｐｒｏｖｅ ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｏｆ ＣＮＳ ｄｒｕｇｓ，Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｏｎ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ，ＤＯＩ：１０．１０８０／１７４２５２４７．２０１６．１２０８６５１に示されており、本明細書に参照によりその全容を援用する。
いくつかの態様では、標的化部分により標的とされる組織は、骨格筋である。いくつかの態様では、骨格筋を標的とする標的化部分は、大型中性アミノ酸輸送体１（ＬＡＴ１）により輸送されることができる。
ＬＡＴ１は、Ｔ細胞、がん細胞、及び脳内皮細胞を含む多数の細胞種で発現される。ＬＡＴ１は、脳微小血管内皮細胞において一貫して高レベルで発現される。溶質輸送体が主にＢＢＢに存在するため、本開示のミセルのＬＡＴ１への標的化により、ＢＢＢを通した送達を可能となる。いくつかの態様では、本開示のミセルをＬＡＴ１輸送体に標的化する標的化部分は、アミノ酸、例えば、分枝鎖または芳香族アミノ酸である。いくつかの態様では、アミノ酸は、バリン、ロイシン、及び／またはイソロイシンである。いくつかの態様では、アミノ酸は、トリプトファン及び／またはチロシンである。いくつかの態様では、アミノ酸は、トリプトファンである。他の態様では、アミノ酸は、チロシンである。
いくつかの態様では、標的化部分は、トリプトファン、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、メチオニン、チロキシン、メルファラン、Ｌ－ドーパ、ガバペンチン、３，５－Ｉ－ジヨードチロシン、３－ヨード－Ｉ－チロシン、フェンクロニン、アシビシン、ロイシン、ＢＣＨ、メチオニン、ヒスチジン、バリン、またはそれらの任意の組み合わせから選択されるＬＡＴ１リガンドである。
いくつかの態様では、ＬＡＴ１リガンドは、以下に示されるとおり［１］ｌ－フェニルアラニン、［２］ｏ－サルコリシン、［３］ｍ－サルコリシン、［４］メルファラン、［５］２－アミノ－２－ノルボルナンカルボン酸（ＢＣＨ）、［６］（±）－２－アミノ－１，２，３，４－テトラヒドロ－２－ナフトエ酸、［７］ｄｌ－２－ＮＡＭ－５、［８］ｄｌ－２－ＮＡＭ－６、［９］ｄｌ－２－ＮＡＭ－７、［１０］ｄｌ－２－ＮＡＭ－８、［１１］ｄｌ－脱塩素化ＮＡＭ、［１２］ｄｌ－１－ＮＡＭ－７、［１３］（±）－２－アミノインダン－２－カルボン酸、［１４］（±）－２－アミノベンゾ－ビシクロ－［２．２．１］ヘプタン－２’－エキソ－カルボン酸、［１５］（±）－２－アミノ－（ビス－２－クロロエチル）－５－アミノインダン－２－カルボン酸、［１６］（±）－２－エンド－アミノ－ビス（２－クロロエチル）－７’－アミノベンゾビシクロ［２．２．１］ヘプタン－２－エキソ－カルボン酸、［１７］ｌ－６－ジアゾ－５－オキソ－ノルロイシン（ｌ－ＤＯＮ）、［１８］アシビシン、［１９］アザセリン、［２０］ブチオニンスルホキシミン（ＢＳＯ）、［２１］ｌ－１－ナフチルアラニン、［２２］ｏ－ベンジル－ｌ－チロシン、［２３］ｌ－２－アミノ－ノナン酸、［２４］ｌ－チロシン、［２５］α－メチルチロシン、［２６］ｌ－ドーパ、［２７］α－メチルドパ、［２８］３－ｏ－メチルドパ、［２９］ドロキシドパ、［３０］カルビドパ、［３１］ドーパミン、［３２］チラミン、［３３］α－メチルフェニルアラニン、［３４］Ｎ－メチルフェニルアラニン、［３５］フェニルアラニンメチルエステル、［３６］ガバペンチン、［３７］３，３’－ジヨードチロニン、［３８］ｌ－Ｔ３、［３９］３’，５’，３－トリヨードチロニン（ｒｌ－Ｔ３）、もしくは［４０］ｌ－Ｔ４、またはそれらの任意の組み合わせである。
Figure 2024503302000011
Figure 2024503302000012
 、またはそれらの任意の組み合わせ。
いくつかの態様では、ＬＡＴ１リガンドは、以下に示されるＬＡＴ１標的化プロドラッグ
Figure 2024503302000013
 、またはそれらの任意の組み合わせである。
Ｓｉｎｇｈ ＆ Ｅｃｋｅｒ（２０１８）“Ｉｎｓｉｇｈｔｓ ｉｎｔｏ ｔｈｅ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，Ｆｕｎｃｔｉｏｎ，ａｎｄ Ｌｉｇａｎｄ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ ｏｆ ｔｈｅ Ｌａｒｇｅ Ｎｅｕｔｒａｌ Ａｍｉｎｏ Ａｃｉｄ Ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ １，ＬＡＴ１，” Ｉｎｔ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｓｃｉ．１９：１２７８；Ｇｅｉｅｒ ｅｔ ａｌ．（２０１３）“Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ－ｂａｓｅｄ ｌｉｇａｎｄ ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｌａｒｇｅ－ｎｅｕｔｒａｌ Ａｍｉｎｏ Ａｃｉｄ Ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ １，ＬＡＴ－１，” Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １１０：５４８０－８５；及びＣｈｉｅｎ ｅｔ ａｌ．（２０１８）“Ｒｅｅｖａｌｕａｔｉｎｇ ｔｈｅ Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ Ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ ｏｆ ｔｈｅ Ｌ－ｔｙｐｅ Ａｍｉｎｏ Ａｃｉｄ Ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ（ＬＡＴ１），” Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．６１：７３５８－７３（参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる）を参照のこと。
標的化部分の非限定的な例が、以下に記載される。
ｉ．リガンド
リガンドは、別の物質に対する選択的（または特異的）親和性を有する選択的に結合可能な物質として定義される標的化部分の一種として機能する。リガンドは、必ずしもではないが、通常、より大きな特異的に結合する物体または「結合パートナー」または「受容体」により認識及び結合される。標的化に好適なリガンドの例は、とりわけ、抗原、ハプテン、ビオチン、ビオチン誘導体、レクチン、ガラクトサミン及びフコシルアミン部分、受容体、基質、補酵素、ならびに補因子である。
本開示のミセルに適用される場合、リガンドとしては、その対応する抗体もしくはその断片により、またはそれらに結合されることができる抗原またはハプテンが挙げられる。任意のＤＮＡ及びＲＮＡウイルス、ＡＩＤＳ、ＨＩＶ、及び肝炎ウイルス、アデノウイルス、アルファウイルス、アレナウイルス、コロナウイルス、フラビウイルス、ヘルペスウイルス、ミクソウイルス、オンコルナウイルス、パポバウイルス、パラミクソウイルス、パルボウイルス、ピコルナウイルス、ポックスウイルス、レオウイルス、ラブドウイルス、ライノウイルス、トガウイルス、及びウイロイド由来のものを含むウイルス抗原またはヘマグルチニン及びノイラミニダーゼ及びヌクレオカプシド；グラム陰性細菌及びグラム陽性細菌、Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ属、Ａｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒ属、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ属、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ属、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ属、腸内細菌、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ属、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ属、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｃｕｓ属、またはＳｔｒｅｐｔｏｃｃｏｃｕｓ属のものを含む任意の細菌抗原；Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ属、Ｃａｎｄｉｄａ属、Ｃｏｃｃｉｄｉｏｄｅｓ属、真菌症、藻菌類、及び酵母のものを含む任意の真菌抗原；任意のマイコプラズマ抗原；任意のリケッチア抗原；任意の原生動物抗原；任意の寄生虫抗原；血液細胞、ウイルス感染細胞、遺伝マーカー、心疾患、腫瘍性タンパク質、血漿タンパク質、補体因子、リウマチ因子のものを含む任意のヒト抗原も挙げられる。がん及び腫瘍抗原、例えば、とりわけ、αフェトプロテイン、前立腺特異抗原（ＰＳＡ）及びＣＥＡ、がんマーカー、ならびに腫瘍性タンパク質も挙げられる。
本開示のミセルを標的化するためのリガンドとして機能し得る他の物質は、ある特定のビタミン（すなわち、葉酸、Ｂ１２）、ステロイド、プロスタグランジン、炭水化物、脂質、抗生物質、薬物、ジゴキシン、殺虫剤、麻薬、神経伝達物質、及びリガンドとして機能するように使用または修飾される物質である。
いくつかの態様では、標的化部分は、細胞親和性を有するタンパク質またはタンパク質断片（例えば、ホルモン、毒素）及び合成または天然ポリペプチドを含む。リガンドとしては、組換えＤＮＡ、遺伝子工学、及び分子工学により作製される、リゲーターに対する選択的親和性を有する様々な物質も挙げられる。特に明示される場合を除き、本開示のリガンドには、米国特許第３，８１７，８３７号（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）において定義されるリガンドも含まれる。
ｉｉ．リゲーター
リゲーターは、必ずしもではないが、通常、結合することができるリガンドより大きな特異的に結合する物体または「パートナー」または「受容体」と本開示において定義される標的化部分の一種として機能する。本開示の目的のため、リゲーターは、特異的リガンドとの選択的親和性結合ができる特異的な物質または材料または化学物質または「反応物質」であり得る。リゲーターは、抗体などのタンパク質、タンパク質でない結合する物体、または「特異的反応を示すもの」であり得る。
本開示に適用される場合、リゲーターとしては、すべてのクラスの抗体、モノクローナル抗体、キメラ抗体、Ｆａｂ断片、それらの断片及び誘導体を含むと定義される抗体が挙げられる。「抗体」という用語は、天然であるか、または一部もしくは全体が合成により生成されたかどうかにかかわらず、免疫グロブリン及びその断片を包含する。この用語はまた、免疫グロブリン結合ドメインに相同である結合ドメインを有するあらゆるタンパク質を包含する。「抗体」には、抗原を特異的に結合及び認識する、免疫グロブリン遺伝子またはその断片由来のフレームワーク領域を含むポリペプチドもさらに含まれる。抗体という用語の使用は、全長抗体、ポリクローナル、モノクローナル、及び組換え抗体、それらの断片を含み、一本鎖抗体、ヒト化抗体、マウス抗体、キメラ、マウス／ヒト、マウス／霊長類、霊長類／ヒトモノクローナル抗体、抗イディオタイプ抗体、抗体断片、例えば、ｓｃＦｖ、ｓｃＦａｂ、（ｓｃＦａｂ）２、（ｓｃＦｖ）２、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、及び、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆ（ａｂ１）２、Ｆｖ、ｄＡｂ、ならびにＦｄ断片、ダイアボディ、ならびに抗体関連ポリペプチドをさらに含むことを意図する。抗体は、所望の生物学的活性または機能を有するものである限り、二重特異性抗体及び多重特異性抗体を含む。本開示のいくつかの態様では、標的化部分は、抗体または分子であって、その抗原結合断片を含む、抗体または分子である。いくつかの態様では、抗体は、ナノボディである。いくつかの態様では、抗体は、ＡＤＣである。「抗体薬物コンジュゲート」及び「ＡＤＣ」という用語は、互換的に使用され、例えば、共有結合により治療薬（場合により、本明細書において、薬剤、薬物、または活性医薬成分と称される）または薬剤に連結された抗体を指す。本開示のいくつかの態様では、標的化部分は、抗体薬物コンジュゲートである。
ある特定の状況では、本開示は、他の物質のリゲーターとしての使用にも適用可能である。例えば、標的化に好適な他のリゲーターとしては、ホルモン、ビタミン、薬物、抗生物質、がんマーカー、遺伝マーカー、ウイルス、及び組織適合性マーカーに特異的に結合する、天然に存在する受容体、任意のヘマグルチニン及び細胞膜及び核の誘導体が挙げられる。別の類のリゲーターとしては、任意のＲＮＡ及びＤＮＡ結合物質、例えば、ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）及びポリペプチドまたはタンパク質、例えば、ヒストン及びプロタミンが挙げられる。
他のリゲーターとしては、酵素、特にノイラミニダーゼなどの細胞表面酵素、血漿タンパク質、アビジン、ストレプトアビジン、ケイロン、キャビタンド、チログロブリン、内因子、グロブリン、キレート剤、界面活性剤、有機金属物質、ブドウ球菌プロテインＡ、プロテインＧ、リボソーム、バクテリオファージ、シトクロム、レクチン、ある特定の樹脂、及び有機ポリマーも挙げられる。
標的化部分としては、様々な物質、例えば、組換えＤＮＡ、遺伝子工学、及び分子工学により作製される、任意の細胞、組織、または微生物の表面に対する親和性を有する任意のタンパク質、タンパク質断片、またはポリペプチドも挙げられる。したがって、いくつかの態様では、標的化部分は、本開示のミセルを特定の組織（すなわち、肝臓組織または脳組織）、特定の種類の細胞（例えば、ある特定の種類のがん細胞）、または生理学的区画もしくは生理学的バリア（例えば、ＢＢＢ）に誘導する。
ｅ．リンカー
前述したように、本明細書において開示されるカチオン性キャリアユニットは、例えば、図２（Ａ）～（Ｉ）に示すように、１つ以上のリンカーを含み得る。本明細書で使用する場合、「リンカー」という用語は、主な機能が本明細書において開示されるカチオン性キャリアユニットにおける２つの部分を連結することである、ペプチドもしくはポリペプチド配列（例えば、合成ペプチドまたはポリペプチド配列）、または非ペプチドリンカーを指す。いくつかの態様では、本開示のカチオン性キャリアユニットは、組織特異的標的化部分（ＴＭ）を水溶性ポリマー（ＷＳ）と連結する少なくとも１つのリンカー、水溶性バイオポリマー（ＷＰ）をカチオン性キャリア（ＣＣ）もしくは疎水性部分（ＨＭ）もしくは架橋部分（ＣＭ）と連結する少なくとも１つのリンカー、カチオン性キャリア（ＣＣ）を疎水性部分（ＨＭ）と連結する少なくとも１つのリンカー、またはそれらの任意の組み合わせを含み得る。いくつかの態様では、２つ以上のリンカーを直列に連結することができる。
複数のリンカーが本明細書において開示されるカチオン性キャリアユニットに存在する場合、リンカーの各々は、同一であり得るか、または異なり得る。一般に、リンカーは、カチオン性キャリアユニットに柔軟性を提供する。リンカーは、通常切断されないが、ある特定の態様では、かかる切断が望ましいことがあり得る。したがって、いくつかの態様では、リンカーは、リンカーの配列内に位置するかまたはリンカー配列のいずれかの末端でリンカーに隣接させることができる１つ以上のプロテアーゼ切断部位を含むことができる。
一態様では、リンカーは、ペプチドリンカーである。いくつかの態様では、ペプチドリンカーは、少なくとも約２個、少なくとも約３個、少なくとも約４個、少なくとも約５個、少なくとも約１０個、少なくとも約１５個、少なくとも約２０個、少なくとも約２５個、少なくとも約３０個、少なくとも約３５個、少なくとも約４０個、少なくとも約４５個、少なくとも約５０個、少なくとも約５５個、少なくとも約６０個、少なくとも約６５個、少なくとも約７０個、少なくとも約７５個、少なくとも約８０個、少なくとも約８５個、少なくとも約９０個、少なくとも約９５個、または少なくとも約１００個のアミノ酸を含むことができる。
いくつかの態様では、ペプチドリンカーは、少なくとも約１１０個、少なくとも約１２０個、少なくとも約１３０個、少なくとも約１４０個、少なくとも約１５０個、少なくとも約１６０個、少なくとも約１７０個、少なくとも約１８０個、少なくとも約１９０個、または少なくとも約２００個のアミノ酸を含むことができる。
他の態様では、ペプチドリンカーは、少なくとも約２００個、少なくとも約２５０個、少なくとも約３００個、少なくとも約３５０個、少なくとも約４００個、少なくとも約４５０個、少なくとも約５００個、少なくとも５５０個、少なくとも約６００個、少なくとも約６５０個、少なくとも約７００個、少なくとも約７５０個、少なくとも約８００個、少なくとも約８５０個、少なくとも約９００個、少なくとも約９５０個、または少なくとも約１，０００個のアミノ酸を含むことができる。
ペプチドリンカーは、１～約５個の個のアミノ酸、１～約１０個のアミノ酸、１～約２０個のアミノ酸、約１０～約５０個のアミノ酸、約５０～約１００個のアミノ酸、約１００～約２００個のアミノ酸、約２００～約３００個のアミノ酸、約３００～約４００個のアミノ酸、約４００～約５００個のアミノ酸、約５００～約６００個のアミノ酸、約６００～約７００個のアミノ酸、約７００～約８００個のアミノ酸、約８００～約９００個のアミノ酸、または約９００～約１０００アミノ酸を含むことができる。
ペプチドリンカーの例は、当該技術分野では周知のものである。いくつかの態様では、リンカーはグリシン／セリンリンカーである。いくつかの態様では、ペプチドリンカーは、式［（Ｇｌｙ）ｎ－Ｓｅｒ］ｍによるグリシン／セリンリンカーであり、式中、ｎは、１～１００の任意の整数であり、ｍは、１～１００から任意の整数である。他の態様では、グリシン／セリンリンカーは、式［（Ｇｌｙ）ｘ－Ｓｅｒｙ］ｚ（配列番号１）によるものであり、式中、ｘは、１～４の整数であり、ｙは、０または１であり、ｚは、１～５０の整数である。一態様では、ペプチドリンカーは、配列Ｇｎを含み、式中、ｎは、１～１００の整数であり得る。特定の態様では、ペプチドリンカーの配列は、ＧＧＧＧ（配列番号２）である。
いくつかの態様では、ペプチドリンカーは、配列（ＧｌｙＡｌａ）ｎ（配列番号３）を含み得、式中、ｎは、１～１００の整数である。他の態様では、ペプチドリンカーは、配列（ＧｌｙＧｌｙＳｅｒ）ｎ（配列番号４）を含み得、式中、ｎは、１～１００の整数である。
他の態様では、ペプチドリンカーは、配列（ＧＧＧＳ）ｎ（配列番号５）を含む。さらに他の態様では、ペプチドリンカーは、配列（ＧＧＳ）ｎ（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号６）を含む。これらの例において、ｎは、１～１００の整数であり得る。他の例において、ｎは、１～２０の整数、すなわち、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０であり得る。
リンカーの例としては、限定されるものではないが、ＧＧＧ、ＳＧＧＳＧＧＳ（配列番号７）、ＧＧＳＧＧＳＧＧＳＧＧＳＧＧＧ（配列番号８）、ＧＧＳＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号９）、ＧＧＳＧＧＳＧＧＳＧＧＳＧＧＳＧＧＳ（配列番号１０）、またはＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１１）が挙げられる。他の態様では、リンカーは、ポリＧ配列（ＧＧＧＧ）ｎ（配列番号１２）であり、式中、ｎは、１～１００の整数であり得る。
一態様では、ペプチドリンカーは、合成、すなわち、非天然である。一態様では、ペプチドリンカーは、アミノ酸の第１の直線配列を、第１の直線配列が自然には連結されていない、または遺伝子的に融合されていないアミノ酸の第２の直線配列に連結または遺伝子的に融合するアミノ酸配列を含むペプチド（またはポリペプチド）（例えば、天然または非天然ペプチド）を含む。例えば、一態様では、ペプチドリンカーは、天然に存在するポリペプチドの改変された形態（例えば、付加、置換または欠失などの変異を含む）である非天然のポリペプチドを含むことができる。別の態様では、ペプチドリンカーは、非天然アミノ酸を含み得る。別の態様では、ペプチドリンカーは、自然に生じない直鎖状配列で生じる天然に存在するアミノ酸を含み得る。さらに別の態様では、ペプチドリンカーは、天然に存在するポリペプチド配列を含み得る。
いくつかの態様では、リンカーは、非ペプチドリンカーを含む。他の態様では、リンカーは、非ペプチドリンカーからなる。いくつかの態様では、非ペプチドリンカーは、例えば、マレイミドカプロイル（ＭＣ）、マレイミドプロパノイル（ＭＰ）、メトキシルポリエチレングリコール（ＭＰＥＧ）、４－（Ｎ－マレイミドメチル）－シクロヘキサン－１－カルボン酸スクシンイミジル（ＳＭＣＣ）、ｍ－マレイミドベンゾイル－Ｎ－ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＭＢＳ）、４－（ｐ－マレイミドフェニル）酪酸スクシンイミジル（ＳＭＰＢ）、（４－ヨードアセチル）アミノ安息香酸Ｎ－スクシンイミジル（ＳＩＡＢ）、６－［３－（２－ピリジルジチオ）－プロピオンアミド］ヘキサン酸スクシンイミジル（ＬＣ－ＳＰＤＰ）、４－スクシンイミジルオキシカルボニル－α－メチル－α－（２－ピリジルジチオ）トルエン（ＳＭＰＴ）、など（米国特許第７，３７５，０７８号を参照のこと）であり得る。
リンカーは、当該技術分野において公知の技術（例えば、化学的コンジュゲーション、組換え技術、またはペプチド合成）を使用してポリペプチド配列に導入され得る。修飾は、ＤＮＡ配列解析により確認され得る。いくつかの態様では、リンカーは、組換え技術を使用して導入され得る。他の態様では、リンカーは、固相ペプチド合成を使用して導入され得る。ある特定の態様では、本明細書において開示されるカチオン性キャリアユニットは、組換え技術を使用して導入された１つ以上のリンカー、及び固相ペプチド合成または当該技術分野において公知の化学的コンジュゲーションの方法を使用して導入された１つ以上のリンカーを同時に含有し得る。いくつかの態様では、リンカーは切断部位を含む。
ＩＩＩ．ペイロード
本明細書で使用する場合、「ペイロード」という用語は、生物活性分子、例えば、それ自体で、もしくはアダプターを介して本開示のカチオン性キャリアユニットと相互作用的であり得、本開示のミセルのコアに含まれ得る治療薬を指す。
他の生物活性分子は、とりわけ、任意のＤＮＡ及びＲＮＡウイルス、ＡＩＤＳ、ＨＩＶ及び肝炎ウイルス、アデノウイルス、アルファウイルス、アレナウイルス、コロナウイルス、フラビウイルス、ヘルペスウイルス、ミクソウイルス、オンコルナウイルス、パポバウイルス、パラミクソウイルス、パルボウイルス、ピコルナウイルス、ポックスウイルス、レオウイルス、ラブドウイルス、ライノウイルス、トガウイルス及びウイロイドに対するものが含まれる抗ウイルス薬、核酸、及び他の抗ウイルス物質；グラム陰性細菌及びグラム陽性細菌、Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ属、Ａｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒ属、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ属、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ属、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ属、腸内細菌、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ属、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ属、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｃｕｓ属、またはＳｔｒｅｐｔｏｃｃｏｃｕｓ属に対するものが含まれる任意の抗菌薬、核酸、及び他の抗菌物質；Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ属、Ｃａｎｄｉｄａ属、Ｃｏｃｃｉｄｉｏｄｅｓ属、真菌症、藻菌類、及び酵母に対するものが含まれる任意の抗真菌薬、核酸、及び他の抗真菌物質；マイコプラズマ及びリケッチアに対する任意の薬物、核酸、及び他の物質；任意の抗原虫薬、核酸、及び他の物質；任意の抗寄生虫薬、核酸、及び他の物質；心疾患、腫瘍、及びウイルス感染細胞に対する任意の薬物、核酸、及び他の物質である。
（ａ）核酸
いくつかの態様では、生物活性分子（ペイロード）は、核酸、例えば、ＲＮＡまたはＤＮＡである。本開示のミセルを使用した送達に好適な核酸活性薬剤としては、オリゴヌクレオチド、例えば、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）、ハイブリダイゼーション、またはＤＮＡ塩基配列決定で使用されるプローブ及びプライマーも含まれるすべての種類のＲＮＡ及びすべての種類のＤＮＡが挙げられる。いくつかの態様では、核酸は、ｍＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡスポンジ、タフデコイｍｉＲＮＡ（ＴＤ）、ａｎｔｉｍｉｒ（ａｎｔａｇｏｍｉｒ）、低分子ＲＮＡ、ｒＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｇＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ｐＤＮＡ、ＰＮＡ、ＢＮＡ、アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）、アプタマー、環状ジヌクレオチド、またはそれらの任意の組み合わせを含む。
いくつかの態様では、生物活性分子（ペイロード）は、配列特異的転写後遺伝子サイレンシングを誘発することができ、これにより、遺伝子発現を減少させるか、またはさらには阻害する二本鎖ＲＮＡである低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）を含む。例えば、ｓｉＲＮＡは、ｓｉＲＮＡ及び標的ＲＮＡの両方の間の配列が相同な領域内で、ｍＲＮＡなどの相同なＲＮＡ分子の特異的な分解を引き起こすことができる。非限定的な例示的ｓｉＲＮＡは、ＷＯ０２／４４３２１に開示されており、これはその全体が参照により組み込まれる。いくつかの態様では、ｓｉＲＮＡは、長さが約２０～２７塩基対であり得る。
いくつかの態様では、ｓｉＲＮＡは化学修飾され得る。いくつかの態様では、ｓｉＲＮＡはコレステロールと結合させることができる。いくつかの態様では、コレステロールは、ｓｉＲＮＡのセンス鎖またはアンチセンス鎖の３’末端に結合させることができる。いくつかの態様では、コレステロールは、ｓｉＲＮＡのセンス鎖またはアンチセンス鎖の５’末端に結合させることができる。いくつかの態様では、コレステロールは、ｓｉＲＮＡのセンス鎖またはアンチセンス鎖の３’及び５’末端の両方に結合させることができる。
本明細書において、ｓｉＲＮＡの電荷の数は、ヌクレオチドの数－２である。
いくつかの態様では、生物活性分子（例えば、アニオン性ペイロード）は、短鎖ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）を含む。いくつかの態様では、生物活性分子は、ｍｉＲＮＡまたはｍｉＲＮＡ阻害剤（ａｎｔｉｍｉＲ）を含む。いくつかの態様では、生物活性分子（例えば、アニオン性ペイロード）は、１０～３０ヌクレオチドの長さ、例えば、１４～２５ヌクレオチドの長さであり得る。いくつかの態様では、生物活性分子（例えば、アニオン性ペイロード）は、１６～３０ヌクレオチド、１８～２５ヌクレオチド、特に１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、または２５ヌクレオチドの長さを有する。いくつかの態様では、生物活性分子（例えば、アニオン性ペイロード）は、２００ヌクレオチド未満の長さを有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの態様では、アニオン性ペイロードは、約１５０、約１４０、約１３０、約１２０、約１１０、約１００、約９０、約８０、約７０、約６０、約５０、約４０、約３０、約２５、約２４、約２３、約２２、約２１、約２０、約１９、約１８、約１７、約１６、約１５、約１４、約１３、約１２、約１１、または約１０ヌクレオチド未満の長さを有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの態様では、アニオン性ペイロードは、約３０～約１０、約２５～約１１、約３０～約１５、約２５～約１５、約２４～約１５、または約２３～約１５ヌクレオチドの長さを有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの態様では、アニオン性ペイロードは、約３０、約２９、約２８、約２７、約２６、約２５、約２４、約２３、約２２、約２１、約２０、約１９、約１８、約１７、約１６、約１５、約１４、または約１３ヌクレオチドの長さを有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの態様では、アニオン性ペイロードは、約２２ヌクレオチドの長さを有するヌクレオチド配列を含む。
ｍｉＲＮＡの配列は、例えば、ｍｉＲＢａｓｅレジストリ（Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ－Ｊｏｎｅｓ，ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，３６（Ｄａｔａｂａｓｅ Ｉｓｓｕｅ）：Ｄ１５４－Ｄ１５８（２００８）、Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ－Ｊｏｎｅｓ，ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，３６（Ｄａｔａｂａｓｅ Ｉｓｓｕｅ）：Ｄ１４０－Ｄ１４４（２００８）、Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ－Ｊｏｎｅｓ，ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，３６（Ｄａｔａｂａｓｅ Ｉｓｓｕｅ）：Ｄ１０９－Ｄ１１１（２００８））及び他の公的にアクセス可能なデータベースにより公的に入手可能である。
いくつかの態様では、ｍｉＲＮＡ阻害剤は、リボ核酸（ＲＮＡ）またはデオキシリボ核酸（ＤＮＡ）またはそれらの修飾形態のオリゴマーまたはポリマーである。いくつかの態様では、ｍｉＲＮＡアンタゴニストは、ａｎｔｉｍｉｒである。ａｎｔｉｍｉｒは、例えば、Ｓｔｏｆｆｅｌ ｅｔ ａｌに属するＵＳ２００７／０２１３２９２に記載されている特定のクラスのｍｉＲＮＡ阻害剤である。ａｎｔｉｍｉｒは、ＲＮアーゼ保護及び薬理学的特性、例えば、組織及び細胞取り込みの増強のための様々な修飾を含有するＲＮＡ様オリゴヌクレオチドである。ａｎｔｉｍｉｒは、糖の完全な２’－Ｏ－メチル化、ホスホロチオエート骨格、及び３’末端のコレステロール部分を有するところが通常のＲＮＡと異なる。
ａｎｔｉｍｉｒ及び他のｍｉＲＮＡ阻害剤の非限定的な例は、ＷＯ２００９／０２０７７１、ＷＯ２００８／０９１７０３、ＷＯ２００８／０４６９１１、ＷＯ２００８／０７４３２８、ＷＯ２００７／０９００７３、ＷＯ２００７／０２７７７５、ＷＯ２００７／０２７８９４、ＷＯ２００７／０２１８９６、ＷＯ２００６／０９３５２６、ＷＯ２００６／１１２８７２、ＷＯ２００７／１１２７５３、ＷＯ２００７／１１２７５４、ＷＯ２００５／０２３９８６、またはＷＯ２００５／０１３９０１において記載されており、これらのすべては参照により本明細書に組み込まれる。
いくつかの態様では、アニオン性ペイロードは、ｍＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡスポンジ、タフデコイｍｉＲＮＡ、ａｎｔｉｍｉｒ、低分子ＲＮＡ、ｒＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｇＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ｐＤＮＡ、ＰＮＡ、ＢＮＡ、アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）、アプタマー、環状ジヌクレオチド、またはそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの態様では、アニオン性ペイロードは、ｓｉＲＮＡである。いくつかの態様では、アニオン性ペイロードは、ｍＲＮＡである。いくつかの態様では、アニオン性ペイロードは、ＰＮＡである。
いくつかの態様では、核酸は、リン酸ジエステルアンチセンスオリゴヌクレオチド、及び糖リン酸「骨格」が、誘導体化されているか、または「骨格アナログ」、例えば、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホロアミダート、アルキルリン酸トリエステル、またはメチルホスホン酸結合と置き換えられている任意のオリゴヌクレオチドである。いくつかの態様では、核酸活性薬剤は、アンチセンスオリゴヌクレオチド、及び非リン骨格アナログ、例えば、スルファメート、３’－チオホルムアセタール、メチレン（メチルイミノ）（ＭＭＩ）、３’－Ｎ－カルバメート、またはモルホリノカルバメートを有する任意のオリゴヌクレオチドまたはオリゴデオキシヌクレオチドである。
いくつかの態様では、生物活性分子（ペイロード）は、ａｎｔｉｍｉｒである。本明細書で使用する場合、「ａｎｔｉｍｉｒ」、「アンチマイクロＲＮＡ」、「アンチｍｉＲＮＡ」という用語、及びそれらの変化形は、所望の反応のために細胞におけるマイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）機能を無力化するために使用される分子（例えば、合成により生成された分子）を指す。ｍｉＲＮＡは、ＲＮＡの切断または翻訳の抑制に関与するｍＲＮＡに相補的な配列（約２０～２２ｂｐ）である。細胞においてｍＲＮＡを調節するｍｉＲＮＡを制御することにより、ａｎｔｉｍｉｒ（アンチｍｉＲＮＡオリゴヌクレオチド、ＡＭＯ、またはａｎｔａｇｏｍｉｒとも称される）は、さらなる調節、ならびにある特定の細胞障害の治療目的で使用され得る。この調節は、ステリックブロック機構ならびにｍｉＲＮＡとのハイブリダイゼーションにより起こり得る。
ａｎｔｉｍｉｒとｍｉＲＮＡとの間の身体内でのこれらの相互作用は、過剰／過小発現が起こるか、またはｍｉＲＮＡにおける異常がコーディングにおける問題をもたらす障害の治療のためであり得る。ヒトが遭遇するｍｉＲＮＡに関連する障害のうちのいくつかとしては、がん、筋疾患、自己免疫障害、及びウイルスが挙げられる。
ａｎｔｉｍｉｒの各種構成要素は、ａｎｔｉｍｉｒの結合親和性及び効力に影響を及ぼすように操作され得る。ａｎｔｉｍｉｒの２’－糖は、フッ素及び様々なメチル基で置換されるように修飾され得、ほぼすべてにおいて結合親和性が増加する。しかしながら、これらの修飾された２’－糖ａｎｔｉｍｉｒの一部は、細胞増殖に対する悪い影響をもたらす。５’－３’ホスホジエステル骨格結合をホスホロチオエート（Ｐ－Ｓ）骨格結合に修飾することも、標的親和性に対する効果を有することが公知である。Ｐ－Ｓ変異の使用は、オリゴヌクレオチドのＴｍを減少させ、このことが、より低い標的親和性をもたらすことが示された。ａｎｔｉｍｉｒの最後の必要条件は、ミスマッチ特異性及び長さの制限である。「シード」（共有）配列を共有し、２、３の追加のヌクレオチドのみが異なる同じファミリーのｍｉＲＮＡに起因して、１つのａｎｔｉｍｉｒが、複数のｍｉＲＮＡ配列を潜在的に標的とし得る。ａｎｔｉｍｉｒまたはｍｉＲＮＡ配列の１つ以上の例を、以下の表に示す。
Figure 2024503302000014
いくつかの態様では、ペイロードは、５～３０ヌクレオチドの長さを有するヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドである。いくつかの態様では、ポリヌクレオチドは、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、または３０ヌクレオチドの長さを有する。いくつかの態様では、ヌクレオチド配列は、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、または２６ヌクレオチドの長さを有する。いくつかの態様では、ペイロードは、２００ヌクレオチド未満の長さを有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの態様では、ペイロードは、約１５０、約１４０、約１３０、約１２０、約１１０、約１００、約９０、約８０、約７０、約６０、約５０、約４０、約３０、約２５、約２４、約２３、約２２、約２１、約２０、約１９、約１８、約１７、約１６、約１５、約１４、約１３、約１２、約１１、または約１０ヌクレオチド未満の長さを有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの態様では、ペイロードは、約３０～約１０、約２５～約１１、約３０～約１５、約２５～約１５、約２４～約１５、または約２３～約１５ヌクレオチドの長さを有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの態様では、ペイロードは、約３０、約２９、約２８、約２７、約２６、約２５、約２４、約２３、約２２、約２１、約２０、約１９、約１８、約１７、約１６、約１５、約１４、または約１３ヌクレオチドの長さを有するヌクレオチド配列を含む。
いくつかの態様では、ペイロード（例えば、ａｎｔｉｍｉｒ）は、ｈｓａ－ｍｉＲ－４８５を標的とするヌクレオチド配列、例えば、ｈｓａ－ｍｉＲ－４８５－３ｐである。いくつかの態様では、ｈｓａ－ｍｉＲ－４８５－３ｐは、配列ＧＵＣＡＵＡＣＡＣＧＧＣＵＣＵＣＣＵＣＵＣＵ（配列番号１７）を有する。いくつかの態様では、ペイロード（例えば、ａｎｔｉｍｉｒ）は、ＡＧＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ（配列番号１８）を含むか、本質的にそれからなるか、またはそれからなるヌクレオチド配列であり、ここで、Ｕは任意選択的にＴであり得る。いくつかの態様では、ペイロード（例えば、ａｎｔｉｍｉｒ）は、ＡＧＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ（配列番号１８）を含むか、本質的にそれからなるか、またはそれからなるヌクレオチド配列であり、ここで、ヌクレオチド配列は、１つのミスマッチ、２つのミスマッチ、３つのミスマッチ、または４つのミスマッチを有する。いくつかの態様では、ペイロード（例えば、ａｎｔｉｍｉｒ）は、ＡＧＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ（配列番号１８）を含むか、本質的にそれからなるか、またはそれからなるヌクレオチド配列であり、ここで、ヌクレオチド配列は、１つまたは２つのミスマッチを有する。他の態様では、ペイロード（例えば、ａｎｔｉｍｉｒ）は、ｈｓａ－ｍｉＲ－４８５－３ｐ（ＵＣＡＵＡＣＡ；配列番号１９）のシード配列を標的とするヌクレオチド配列である。いくつかの態様では、ペイロード（例えば、ａｎｔｉｍｉｒ）は、ＵＣＡＵＡＣＡ（配列番号１９）を含むヌクレオチド配列であり、ここで、Ｕは任意選択的にＴ（シードの相補体）であり得、ヌクレオチド配列は、約１０ヌクレオチド～３０ヌクレオチド（例えば、１０～２５、１０～２４、１０～２３、１０～２２、１０～２１、１０～２０、１０～１９、または１０～１８）の長さである。いくつかの態様では、ペイロード（例えば、ａｎｔｉｍｉｒ）は、ＵＧＵＡＵＧＡ（配列番号２０）を含むヌクレオチド配列であり、ここで、Ｕは任意選択的にＴ（シードの相補体）であり得、ここで、ヌクレオチド配列は、シード配列の相補体の５’末端の１、２ ３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０核酸及び／またはシード配列の相補体の３’末端の１、２ ３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０核酸を含む。
いくつかの態様では、ペイロードは、５’－ＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号２３）、５’－ＧＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号２４）、５’－ＣＧＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号２５）、５’－ＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号２６）、５’－ＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号２７）、５’－ＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号２８）、５’－ＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号２９）、５’－ＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号３０）、５’－ＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号３１）、５’－ＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号３２）、５’－ＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号３３）、５’－ＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号３４）、５’－ＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号３５）、５’－ＧＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号３６）；５’－ＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号３７）、５’－ＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号３８）、５’－ＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号３９）、５’－ＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号４０）、５’－ＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号４１）、５’－ＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号４２）、５’－ＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号４３）、５’－ＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号４４）、５’－ＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号４５）、５’－ＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号４６）、５’－ＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号４７）、５’－ＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号４８）、５’－ＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号４９）、または５’－ＧＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号５０）からなる群から選択されるヌクレオチド配列である。
いくつかの態様では、ペイロードは、５’－ＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号５１）、５’－ＧＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号５２）、５’－ＣＧＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号５３）、５’－ＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号５４）、５’－ＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号５５）、５’－ＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号５６）、５’－ＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号５７）、５’－ＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号５８）、５’－ＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号５９）、５’－ＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号６０）、５’－ＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号６１）、５’－ＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号６２）、５’－ＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号６３）、５’－ＧＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号６４）；５’－ＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号６５）、５’－ＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号６６）、５’－ＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号６７）、５’－ＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号６８）、５’－ＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号６９）、５’－ＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号７０）、５’－ＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号７１）、５’－ＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号７２）、５’－ＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号７３）、５’－ＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号７４）、５’－ＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号７５）、５’－ＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号７６）、５’－ＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号７７）、または５’－ＧＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号７８）を含むヌクレオチド配列である。
いくつかの態様では、ペイロード（例えば、ａｎｔｉｍｉｒ）は、ｈｓａ－ｍｉＲ－２０４、例えば、ｈｓａ－ｍｉＲ－２０４－５ｐを標的とするヌクレオチド配列である。ｈｓａ－ｍｉＲ－２０４－５ｐは、ＵＵＣＣＣＵＵＵＧＵＣＡＵＣＣＵＡＵＧＣＣＵ（配列番号１３）として表１に示される。いくつかの態様では、ペイロード（例えば、ａｎｔｉｍｉｒ）は、ＡＧＧＣＡＵＡＧＧＡＵＧＡＣＡＡＡＧＧＧＡＡ（配列番号１５）を含むか、本質的にそれからなるか、またはそれからなるヌクレオチド配列であり、ここで、Ｕは任意選択的にＴであり得る。いくつかの態様では、ペイロード（例えば、ａｎｔｉｍｉｒ）は、ＡＧＧＣＡＵＡＧＧＡＵＧＡＣＡＡＡＧＧＧＡＡ（配列番号１５）を含むか、本質的にそれからなるか、またはそれからなるヌクレオチド配列であり、ここで、Ｕは任意選択的にＴであり得、ヌクレオチド配列は、１つのミスマッチ、２つのミスマッチ、３つのミスマッチ、または４つのミスマッチを有する。いくつかの態様では、ペイロード（例えば、ａｎｔｉｍｉｒ）は、ＡＧＧＣＡＵＡＧＧＡＵＧＡＣＡＡＡＧＧＧＡＡ（配列番号１５）を含むか、本質的にそれからなるか、またはそれからなるヌクレオチド配列であり、ここで、Ｕは任意選択的にＴであり得、ヌクレオチド配列は、１つまたは２つのミスマッチを有する。他の態様では、ペイロード（例えば、ａｎｔｉｍｉｒ）は、ｈｓａ－ｍｉＲ－２０４－５ｐ（ＵＣＣＣＵＵＵ；配列番号２１）のシード配列を標的とするヌクレオチド配列である。いくつかの態様では、ペイロード（例えば、ａｎｔｉｍｉｒ）は、ＡＡＡＧＧＧＡ（配列番号２２）（シードの相補体）を含むヌクレオチド配列であり、ここで、Ｕは任意選択的にＴであり得、ヌクレオチド配列は、約１０ヌクレオチド～３０ヌクレオチド（例えば、１０～２５、１０～２４、１０～２３、１０～２２、１０～２１、１０～２０、１０～１９、または１０～１８）の長さである。いくつかの態様では、ペイロード（例えば、ａｎｔｉｍｉｒ）は、ＡＡＡＧＧＧＡ（配列番号２２）（シードの相補体）を含むヌクレオチド配列であり、ここで、ヌクレオチド配列は、シード配列の相補体の５’末端の１、２ ３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０核酸及び／またはシード配列の相補体の３’末端の１、２ ３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０核酸を含む。
ｉ．化学修飾されたポリヌクレオチド
いくつかの態様では、本開示のポリヌクレオチド（例えば、ａｎｔｉｍｉｒ、例えば、ｍｉＲ４８５ ａｎｔｉｍｉｒ）は、少なくとも１つの化学修飾されたヌクレオシド及び／またはヌクレオチドを含む。本開示のポリヌクレオチドが化学修飾されている場合、ポリヌクレオチドは、「修飾されたポリヌクレオチド」と称され得る。
「ヌクレオシド」は、糖分子（例えば、ペントースまたはリボース）またはその誘導体を、有機塩基（例えば、プリンまたはピリミジン）またはその誘導体（本明細書において「核酸塩基」とも称される）とともに含有する化合物を指す。
「ヌクレオチド」は、リン酸基を含むヌクレオシドを指す。修飾されたヌクレオチドは、１つ以上の修飾された非天然ヌクレオシドを含むように、任意の有用な方法により、例えば、化学的に、酵素的に、または組換えにより合成され得る。
ポリヌクレオチドは、連結されたヌクレオシドの領域または複数の領域を含み得る。かかる領域は、可変的な骨格結合を有し得る。連結は、標準的なホスホジエステル結合であり得、その場合、ポリヌクレオチドはヌクレオチドの領域を含む。
本明細書において開示される修飾されたポリヌクレオチドは、様々な異なる修飾を含み得る。いくつかの態様では、修飾されたポリヌクレオチドは、１種、２種、またはそれ以上（任意選択的に異なる）のヌクレオシドまたはヌクレオチド修飾を含有する。いくつかの態様では、修飾されたポリヌクレオチドは、１つ以上の所望の特性、例えば、未修飾ポリヌクレオチドと比較して改善された熱または化学安定性、低減された免疫原性、低減された分解、標的マイクロＲＮＡに対する結合の増加、他のマイクロＲＮＡまたは他の分子に対する低減された非特異的結合を示し得る。
いくつかの態様では、本開示のポリヌクレオチドは、化学修飾されている。本明細書で使用する場合、ポリヌクレオチドに関して、「化学修飾」または必要に応じて「化学修飾された」という用語は、アデノシン（Ａ）、グアノシン（Ｇ）、ウリジン（Ｕ）、チミジン（Ｔ）、またはシチジン（Ｃ）リボヌクレオシドまたはデオキシリボヌクレオシドに対する、限定されるものではないが、それらの核酸塩基、糖、骨格、またはそれらの任意の組み合わせが挙げられるそれらの位置、パターン、パーセント、または集団のうちの１つ以上における修飾を指す。
いくつかの態様では、本開示のポリヌクレオチド（例えば、ａｎｔｉｍｉｒ）は、同じヌクレオシド種類のすべてもしくはいずれかの均一な化学修飾、または同じヌクレオシド種類のすべてもしくはいずれかにおける同じ出発修飾の下方滴定（ｄｏｗｎｗａｒｄ ｔｉｔｒａｔｉｏｎ）によって生成される修飾の群、またはランダムな組み込みを伴うことを除いて同じヌクレオシド種類のすべてもしくはいずれかの測定されたパーセントの化学修飾を有し得る。別の態様では、本開示のポリヌクレオチド（例えば、ａｎｔｉｍｉｒ）は、ポリヌクレオチド全体にわたって同じヌクレオシド種類のうちの２つ、３つ、または４つの均一な化学修飾を有し得る（例えば、すべてのウリジン及びすべてのシトシンなどが、同じように修飾される）。
修飾されたヌクレオチドの塩基対形成は、標準的なアデニン－チミン、アデニン－ウラシル、またはグアニン－シトシン塩基対だけでなく、ヌクレオチド及び／または非標準的もしくは修飾塩基を含む修飾ヌクレオチドの間で形成される塩基対も包含し、ここで、水素結合ドナー及び水素結合アクセプターの配置が、非標準的塩基と標準的塩基との間、または２つの相補的な非標準的塩基構造間の水素結合を可能にする。かかる非標準的塩基対形成の１つの例は、修飾された核酸塩基イノシンとアデニン、シトシン、またはウラシルとの間の塩基対形成である。塩基／糖またはリンカーの任意の組み合わせが、本開示のポリヌクレオチドに組み込まれ得る。
当業者は、特に注記される場合を除き、本出願に記載されるポリヌクレオチド配列は、代表的なＤＮＡ配列において「Ｔ」を列挙するが、配列がＲＮＡを表す場合、「Ｔ」は「Ｕ」と置換されることを理解するであろう。例えば、本開示のＴＤは、ＲＮＡとして、ＤＮＡとして、またはＲＮＡ及びＤＮＡユニットの両方を含むハイブリッド分子として投与され得る。
いくつかの態様では、ポリヌクレオチド（例えば、ａｎｔｉｍｉｒ、例えば、ｍｉＲ４８５ ａｎｔｉｍｉｒ）は、少なくとも２つ（例えば、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、８つ、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１８、２０以上）の修飾された核酸塩基の組み合わせを含む。
いくつかの態様では、ポリヌクレオチド（例えば、ａｎｔｉｍｉｒ、例えば、ｍｉＲ４８５ ａｎｔｉｍｉｒ）における核酸塩基、糖、骨格結合、またはそれらの任意の組み合わせは、少なくとも約５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％修飾される。
１．塩基修飾
ある特定の態様では、化学修飾は、本開示のポリヌクレオチド（例えば、ａｎｔｉｍｉｒ、例えば、ｍｉＲ４８５ ａｎｔｉｍｉｒ）における核酸塩基に存在する。いくつかの態様では、少なくとも１つの化学修飾ヌクレオシドは、修飾されたウリジン（例えば、シュードウリジン（ψ）、２－チオウリジン（ｓ２Ｕ）、１－メチル－シュードウリジン（ｍ１ψ）、１－エチル－シュードウリジン（ｅ１ψ）、または５－メトキシ－ウリジン（ｍｏ５Ｕ））、修飾されたシトシン（例えば、５－メチルシチジン（ｍ５Ｃ））、修飾されたアデノシン（例えば、１－メチル－アデノシン（ｍ１Ａ）、Ｎ６－メチル－アデノシン（ｍ６Ａ）、または２－メチルアデニン（ｍ２Ａ））、修飾されたグアノシン（例えば、７－メチルグアノシン（ｍ７Ｇ）または１－メチルグアノシン（ｍ１Ｇ））、またはそれらの組み合わせである。
いくつかの態様では、本開示のポリヌクレオチド（例えば、ａｎｔｉｍｉｒ、例えば、ｍｉＲ４８５ ａｎｔｉｍｉｒ）は、特定の修飾について均一に修飾される（例えば、完全に修飾される、配列全体にわたって修飾される）。例えば、ポリヌクレオチドは、同じ種類の塩基修飾、例えば、５－メチルシチジン（ｍ５Ｃ）により均一に修飾され得、これは、ポリヌクレオチド配列におけるすべてのシトシン残基が、５－メチルシチジン（ｍ５Ｃ）と置き換えられることを意味する。同様に、ポリヌクレオチドは、配列に存在する任意の種類のヌクレオシド残基について、修飾されたヌクレオシド、例えば、上記に記載されるもののいずれかとの置換により均一に修飾され得る。
いくつかの態様では、本開示のポリヌクレオチド（例えば、ａｎｔｉｍｉｒ、例えば、ｍｉＲ４８５ ａｎｔｉｍｉｒ）は、少なくとも２つ（例えば、２つ、３つ、４つ、またはそれ以上）の修飾された核酸塩基の組み合わせを含む。いくつかの態様では、本開示のポリヌクレオチド（例えば、ａｎｔｉｍｉｒ、例えば、ｍｉＲ４８５ ａｎｔｉｍｉｒ）における１種類の核酸塩基の少なくとも約５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％が、修飾された核酸塩基である。
２．骨格修飾
いくつかの態様では、ペイロードは、「本開示のポリヌクレオチド」（例えば、ａｎｔｉｍｉｒ、例えば、ｍｉＲ４８５ ａｎｔｉｍｉｒを含む）を含み得、ここで、ポリヌクレオチドは、ヌクレオシド間の連結に任意の有用な修飾を含む。本開示の組成物において有用な、骨格修飾を含むそのような結合としては、これらに限定されるものではないが、以下のものが挙げられる：３’－アルキレンホスホネート、３’－アミノホスホロアミダート、アルケン含有骨格、アミノアルキルホスホロアミダート、アミノアルキルホスホトリエステル、ボラノホスフェート、－ＣＨ２－Ｏ－Ｎ（ＣＨ３）－ＣＨ２－、－ＣＨ２－Ｎ（ＣＨ３）－Ｎ（ＣＨ３）－ＣＨ２－、－ＣＨ２－ＮＨ－ＣＨ２－、キラルホスホネート、キラルホスホロチオネート、ホルムアセチル及びチオホルムアセチル骨格、メチレン（メチルイミノ）、メチレンホルムアセチル及びチオホルムアセチル骨格、メチレンイミノ及びメチレンヒドラジノ骨格、モルホリノ結合、－Ｎ（ＣＨ３）－ＣＨ２－ＣＨ２－、ヘテロ原子ヌクレオシド間結合を有するオリゴヌクレオシド、ホスフィナート、ホスホロアミダート、ホスホロジチオエート、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合、ホスホロチオネート、ホスホトリエステル、ＰＮＡ、シロキサン骨格、スルファメート骨格、スルフィド、スルホキシド、及びスルホン骨格、スルホネート及びスルホンアミド骨格、チオノアルキルホスホネート、チオノアルキルホスホトリエステル、ならびにチオノホスホロアミダート。
いくつかの態様では、上記に開示される骨格結合の存在は、本開示のポリヌクレオチド（例えば、ａｎｔｉｍｉｒ、例えば、ｍｉＲ４８５ ａｎｔｉｍｉｒ）の安定性（例えば、熱的安定性）及び／または分解（例えば、酵素分解）に対する耐性を増加させる。いくつかの態様では、修飾されたポリヌクレオチドにおける安定性及び／または分解に対する耐性は、修飾されていない対応するポリヌクレオチド（参照または対照ポリヌクレオチド）と比較して少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または少なくとも約１００％増加する。
いくつかの態様では、本開示のポリヌクレオチド（（例えば、ａｎｔｉｍｉｒ、例えば、ｍｉＲ４８５ ａｎｔｉｍｉｒ）における少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％の骨格結合が修飾される（例えば、それらのすべてがホスホロチオエートである）。
いくつかの態様では、本開示のポリヌクレオチド（例えば、ａｎｔｉｍｉｒ、例えば、ｍｉＲ４８５ ａｎｔｉｍｉｒ）における１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、または２１の骨格結合が修飾される（例えば、ホスホロチオエート）。
いくつかの態様では、骨格は、ホスホジエステル結合、ホスホトリエステル結合、メチルホスホン酸結合、ホスホロアミダート結合、ホスホロチオエート結合、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される結合を含む。
３．糖修飾
本開示のポリヌクレオチド（例えば、ａｎｔｉｍｉｒ、例えば、ｍｉＲ４８５ ａｎｔｉｍｉｒ）に組み込まれ得る修飾されたヌクレオシド及びヌクレオチドは、核酸の糖に対して修飾され得る。したがって、いくつかの態様では、ペイロードは、核酸を含み、ここで、核酸は、少なくとも１つのヌクレオシド類似体（例えば、糖修飾を有するヌクレオシド）を含む。
いくつかの態様では、糖修飾は、ポリヌクレオチドのその標的ｍｉＲＮＡへの結合の親和性を増加させる。ポリヌクレオチドに親和性を増強するヌクレオチド類似体、例えば、ＬＮＡまたは２’置換された糖を組み込むことは、ポリヌクレオチドの長さが低減されるのを可能にし得、非特異的または異常な結合が起こらないポリヌクレオチドサイズの上限も緩和し得る。
いくつかの態様では、本開示のポリヌクレオチド（例えば、ａｎｔｉｍｉｒ、例えば、ｍｉＲ４８５ ａｎｔｉｍｉｒ）における少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％のヌクレオチドが糖修飾（例えば、ＬＮＡ）を含有する。
いくつかの態様では、本開示のポリヌクレオチド（例えば、ａｎｔｉｍｉｒ、例えば、ｍｉＲ４８５ ａｎｔｉｍｉｒ）における１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、または２２ヌクレオチド単位が糖修飾される（例えば、ＬＮＡ）。
一般に、ＲＮＡは、酸素を有する五員環である糖基リボースを含む。非限定的な例示的修飾ヌクレオチドとしては、リボースにおける酸素の（例えば、Ｓ、Ｓｅ、またはアルキレン、例えば、メチレンまたはエチレンとの）置換；二重結合の付加（例えば、リボースのシクロペンテニルまたはシクロヘキセニルとの置換）；リボースの環縮小（例えば、シクロブタンまたはオキセタンの四員環の形成）；リボースの環拡大（例えば、追加の炭素またはヘテロ原子を有し、６または七員環の形成、例えば、アンヒドロヘキシトール、アルトリトール、マンニトール、シクロヘキサニル、シクロヘキセニル、及びホスホロアミダート骨格も有するモルホリノ）；多環式形態（例えば、トリシクロ）；及び「アンロックド」形態、例えば、グリコール核酸（ＧＮＡ）（例えば、Ｒ－ＧＮＡまたはＳ－ＧＮＡ、ここで、リボースは、ホスホジエステル結合に結合されたグリコールユニットと置き換えられる）、トレオース核酸（ＴＮＡ、ここで、リボースは、α－Ｌ－トレオフラノシル－（３’→２’）と置き換えられる）、及びペプチド核酸（ＰＮＡ、ここで、２－アミノ－エチル－グリシン結合が、リボース及びホスホジエステル骨格と置き換わる）が挙げられる。糖基は、リボースにおける対応する炭素と反対の立体化学配置を有する１つ以上の炭素も含有し得る。したがって、ポリヌクレオチド分子は、糖として、例えば、アラビノースを含有するヌクレオチドを含み得る。
リボースの２’ヒドロキシ基（ＯＨ）は、いくつかの異なる置換基で修飾または置換され得る。２’－位での例示的な置換としては、限定されるものではないが、Ｈ、ハロ、任意選択的に置換されたＣ１～６アルキル；任意選択的に置換されたＣ１～６アルコキシ；任意選択的に置換されたＣ６～１０アリールオキシ；任意選択的に置換されたＣ３～８シクロアルキル；任意選択的に置換されたＣ３～８シクロアルコキシ；任意選択的に置換されたＣ６～１０アリールオキシ；任意選択的に置換されたＣ６～１０アリール－Ｃ１～６アルコキシ、任意選択的に置換されたＣ１～１２（ヘテロシクリル）オキシ；糖（例えば、リボース、ペントース、または本明細書に記載されるいずれか）；ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、－Ｏ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎＣＨ２ＣＨ２ＯＲ（ここで、Ｒは、Ｈまたは任意選択的に置換されたアルキルであり、ｎは、０～２０（例えば、０～４、０～８、０～１０、０～１６、１～４、１～８、１～１０、１～１６、１～２０、２～４、２～８、２～１０、２～１６、２～２０、４～８、４～１０、４～１６、及び４～２０）の整数である）；「ロックド」核酸（ＬＮＡ）（２’－ヒドロキシが、Ｃ１～６アルキレンまたはＣ１～６ヘテロアルキレン架橋により、同じリボース糖の４’－炭素に連結されており、ここで、例示的な架橋としては、メチレン、プロピレン、エーテル、アミノ架橋、アミノアルキル、アミノアルコキシ、アミノ、及びアミノ酸が挙げられる）が挙げられる。
いくつかの態様では、本開示のポリヌクレオチド（例えば、ａｎｔｉｍｉｒ、例えば、ｍｉＲ４８５ ａｎｔｉｍｉｒ）に存在するヌクレオシド類似体は、例えば、２’－Ｏ－アルキル－ＲＮＡユニット、２’－ＯＭｅ－ＲＮＡユニット、２’－Ｏ－アルキル－ＳＮＡ、２’－アミノ－ＤＮＡユニット、２’－フルオロ－ＤＮＡユニット、ＬＮＡユニット、アラビノ核酸（ＡＮＡ）ユニット、２’－フルオロ－ＡＮＡユニット、ＨＮＡユニット、ＩＮＡ（インターカレーティング核酸）ユニット、２’ＭＯＥユニット、またはそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの態様では、ＬＮＡは、例えば、オキシＬＮＡ（例えば、β－Ｄ－オキシ－ＬＮＡまたはα－Ｌ－オキシ－ＬＮＡ）、アミノＬＮＡ（例えば、β－Ｄ－アミノ－ＬＮＡまたはα－Ｌ－アミノ－ＬＮＡ）、チオＬＮＡ（例えば、β－Ｄ－チオ０－ＬＮＡまたはα－Ｌ－チオ－ＬＮＡ）、ＥＮＡ（例えば、β－Ｄ－ＥＮＡまたはα－Ｌ－ＥＮＡ）、またはそれらの任意の組み合わせである。
いくつかの態様では、本開示のポリヌクレオチドに存在するヌクレオシドアナログは、ロックド核酸（ＬＮＡ）；２’－０－アルキルＲＮＡ；２’－アミノＤＮＡ；２’－フルオロＤＮＡ；アラビノ核酸（ＡＮＡ）；２’－フルオロＡＮＡ、ヘキシトール核酸（ＨＮＡ）、インターカレーティング核酸（ＩＮＡ）、拘束エチルヌクレオシド（ｃＥｔ）、２’－０－メチル核酸（２’－ＯＭｅ）、２’－０－メトキシエチル核酸（２’－ＭＯＥ）、またはそれらの任意の組み合わせを含む。
いくつかの態様では、本開示のポリヌクレオチド（例えば、ａｎｔｉｍｉｒ、例えば、ｍｉＲ４８５ ａｎｔｉｍｉｒ）は、修飾されたＲＮＡヌクレオチド類似体（例えば、ＬＮＡ）及びＤＮＡユニットの両方を含み得る。いくつかの態様では、本開示のポリヌクレオチドは、ギャップマーである。例えば、米国特許第８，４０４，６４９号、同第８，５８０，７５６号、同第８，１６３，７０８号、同第９，０３４，８３７号（これらのすべてが参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる）を参照のこと。いくつかの態様では、本開示のポリヌクレオチドは、マイクロｍｉｒである。米国特許公開第ＵＳ２０１８０２０１９２８号（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）を参照のこと。
ＩＶ．ミセル
本開示は、本開示のカチオン性キャリアユニットを含むミセルも提供する。本開示のミセルは、本開示のカチオン性キャリアユニット及び負に荷電したペイロードを含み、ここで、負に荷電したペイロード及びカチオン性キャリアユニットは、互いに結合している。いくつかの態様では、結合は、共有結合を含む。他の態様では、結合は、共有結合を含まない。他の態様では、結合は、イオン結合、すなわち、静電的相互作用によるものである。いくつかの態様では、負に荷電したペイロード（例えば、ＤＮＡ及び／またはＲＮＡ）は、共有結合によりカチオン性キャリアユニットに結合されていない、及び／または負に荷電したペイロードは、イオン相互作用によってのみカチオン性キャリアユニットのカチオン性キャリア部分と相互作用する。
いくつかの態様では、本開示のカチオン性キャリアユニット及びミセルは、ペイロード（例えば、ＤＮＡ及び／またはＲＮＡ）を（例えば、ＤＮアーゼ及び／またはＲＮアーゼによる）分解から保護する。第１に、カチオン性キャリアユニットは、静電的相互作用によりペイロードを保護することができる。第２に、ミセルは、ペイロードをミセルの核に、すなわち、ＤＮアーゼ及び／またはＲＮアーゼの影響が及ぶ範囲外に隔離する。いくつかの態様では、循環する酵素（例えば、ヌクレアーゼ）からのペイロードの保護は、負に荷電したペイロード（例えば、ＤＮＡ及び／またはＲＮＡ）の半減期を遊離ペイロードと比較して増加させ得る。いくつかの態様では、本開示のミセルへのペイロードのカプセル化は、ペイロードの血漿半減期を、遊離ペイロードと比較して少なくとも約２倍、少なくとも約３倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、少なくとも約６倍、少なくとも約７倍、少なくとも約８倍、少なくとも約９倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約１１倍、少なくとも約１２倍、少なくとも約１３倍、少なくとも約１４倍、少なくとも約１５倍、少なくとも約１６倍、少なくとも約１７倍、少なくとも約１８倍、少なくとも約１９倍、少なくとも約２０倍、少なくとも約２１倍、少なくとも約２２倍、少なくとも約２３倍、少なくとも約２４倍、少なくとも約２５倍、少なくとも約２６倍、少なくとも約２７倍、少なくとも約２８倍、少なくとも約２９倍、または少なくとも約３０倍増加させ得る。
いくつかの態様では、カチオン性キャリアユニットの正電荷、特にカチオン性キャリア部分の電荷は、溶液中で負に荷電したペイロード（例えば、核酸）と混合される際にミセルを形成するのに十分であり、カチオン性キャリアユニット、特にそのカチオン性キャリア部分と負に荷電したペイロード（例えば、核酸）との全体のイオン比は、約１：１である。いくつかの態様では、カチオン性キャリアユニットの正電荷、特にカチオン性キャリア部分の電荷は、溶液中で負に荷電したペイロード（例えば、核酸）と混合される際にミセルを形成するのに十分であり、カチオン性キャリアユニット、特にそのカチオン性キャリア部分と負に荷電したペイロード（例えば、核酸）との全体のイオン比は、約２：１である。いくつかの態様では、カチオン性キャリアユニット、特にそのカチオン性キャリア部分と負に荷電したペイロード（例えば、核酸）との全体のイオン比は、１：１よりも高い（すなわち、過剰量のカチオン性キャリアユニットが使用される）。いくつかの態様では、カチオン性キャリアユニット、特にそのカチオン性キャリア部分と負に荷電したペイロード（例えば、核酸）との全体のイオン比は、１：１よりも低い（すなわち、過剰量の負に荷電したペイロードが使用される）。
いくつかの態様では、好適な緩衝剤（例えば、ＰＢＳ）と組み合わせると、本開示のカチオン性キャリアユニットとペイロード（例えば、ａｎｔｉｍｉｒなどのアンチセンスオリゴヌクレオチド）との間に形成される複合体は、自己組織化して、ミセルをもたらす。
ミセルは、１つ以上の両親媒性分子から構成される水溶性またはコロイド状の構造または集合体である。両親媒性分子は、少なくとも１つの親水性（極性）部分及び少なくとも１つの疎水性（非極性）部分を含有する分子である。「典型的なミセル」は、親水性層または「殻」により囲まれた単一の、中心の、かつ主に疎水性の区画または「核」を有する。水溶液において、ミセルは、両親媒性分子の親水性の「頭部」領域が周囲の溶媒と接触しており、両親媒性分子の疎水性の単一尾部領域をミセル核に隔離している集合体を形成する。ミセルの形状は、ほぼ球状である。他の形状、例えば、楕円体、円柱、桿状構造、またはポリマソームも可能である。開示されるミセルの形状及びサイズ、ならびにしたがって、ローディング容量は、水溶性バイオポリマー（例えば、ＰＥＧ）とカチオン性キャリア（例えば、ポリリシン）との間の比率を変化させることにより修飾され得る。比率に応じて、キャリアユニットは、小粒子、小型ミセル、ミセル、桿状構造、またはポリマソームとして組織化し得る。したがって、「本開示のミセル」という用語は、典型的なミセルだけでなく小粒子、小型ミセル、ミセル、桿状構造、またはポリマソームも包含する。
本開示のミセルは、疎水性及び親水性部分を含有する単一の単分子ポリマー、または極性溶液（すなわち、水溶液）中で、臨界ミセル濃度（ＣＭＣ）以上で形成された多数の両親媒性（すなわち界面活性剤）分子を含有する集合体の混合物のいずれかから構成され得る。ミセルは、１つ以上の両親媒性分子から自己組織化され、ここで、部分は、主に疎水性の内部核及び主に親水性の外側をもたらすように配向される。
本開示のミセルは、５～約２０００ナノメートルの範囲のサイズであり得る。いくつかの態様では、ミセルの直径は、約１０ｎｍ～約２００ｎｍである。いくつかの態様では、ミセルの直径は、約１ｎｍ～約１００ｎｍ、約１０ｎｍ～約１００ｎｍ、約１０ｎｍ～約９０ｎｍ、約１０ｎｍ～約８０ｎｍ、約１０ｎｍ～約７０ｎｍ、約２０ｎｍ～約１００ｎｍ、約２０ｎｍ～約９０ｎｍ、約２０ｎｍ～約８０ｎｍ、約２０ｎｍ～約７０ｎｍ、約３０ｎｍ～約１００ｎｍ、約３０ｎｍ～約９０ｎｍ、約３０ｎｍ～約８０ｎｍ、約３０ｎｍ～約７０ｎｍ、約４０ｎｍ～約１００ｎｍ、約４０ｎｍ～約９０ｎｍ、約４０ｎｍ～約８０ｎｍ、または約４０ｎｍ～約７０ｎｍである。いくつかの態様では、本開示のミセルの直径は、約３０ｎｍ～約６０ｎｍである。いくつかの態様では、本開示のミセルの直径は、約１５ｎｍ～約９０ｎｍである。いくつかの態様では、本開示のミセルの直径は、約１５ｎｍ～約８０ｎｍである。いくつかの態様では、本開示のミセルの直径は、約１５ｎｍ～約７０ｎｍである。いくつかの態様では、本開示のミセルの直径は、約１５ｎｍ～約６０ｎｍである。いくつかの態様では、本開示のミセルの直径は、約１５ｎｍ～約５０ｎｍである。いくつかの態様では、本開示のミセルの直径は、約２０ｎｍ～約６０ｎｍである。いくつかの態様では、本開示のミセルの直径は、約２０ｎｍ～約５０ｎｍである。いくつかの態様では、本開示のミセルの直径は、約２０ｎｍ～約４０ｎｍである。いくつかの態様では、本開示のミセルの直径は、約２５ｎｍ～約３５ｎｍである。いくつかの態様では、本開示のミセルの直径は、約３２ｎｍである。
いくつかの態様では、ミセルは、単一種類のａｎｔｉｍｉｒ（例えば、ｍｉＲ４８５ ａｎｔｉｍｉｒ）を含み得る。他の態様では、ミセルは、２種類以上のａｎｔｉｍｉｒ、例えば、（ｉ）同じｍｉＲＮＡを標的とする異なる構造を有するａｎｔｉｍｉｒ、（ｉｉ）異なるｍｉＲＮＡを標的とする異なる構造を有するａｎｔｉｍｉｒ、（ｉｉｉ）同じｍｉＲＮＡを標的とする同じ構造を有するａｎｔｉｍｉｒ、または（ｉｖ）それらの組み合わせを含み得る。
いくつかの態様では、本開示のミセルは、単一種類のカチオン性キャリアユニットを含む。他の態様では、本開示のミセルは、２種類以上のカチオン性キャリアユニット（例えば、標的細胞表面上の異なる受容体を標的とする）を含む。いくつかの態様では、本開示のミセルは、異なる標的化部分、（例えば、異なるペイロードを収容するための）異なるカチオン性キャリア部分、及び／または異なる疎水性及び／または架橋ユニットを有するカチオン性キャリアユニットを含み得る。
ミセルをペイロードとともに形成させるために、異なる種類のカチオン性またはアニオン性キャリアユニットが、一緒に組み合わされ得る。例えば、血液脳関門を標的とするために、本開示のミセルは、標的化部分に連結されたカチオン性（またはアニオン性）キャリアユニット及び標的化部分に連結されていないカチオン性（またはアニオン性）キャリアユニットを含み得る。いくつかの態様では、ミセルは、約５０～約２００のカチオン性またはアニオン性キャリアユニットを含む。他の態様では、ミセルは、約５０～約１５０、約５０～約１４０、約５０～約１３０、約５０～約１２０、約５０～約１１０、または約５０～約１００のカチオン性またはアニオン性キャリアユニットを含む。いくつかの態様では、ミセルは、約６０～約２００のカチオン性またはアニオン性キャリアユニットを含む。他の態様では、ミセルは、約６０～約１５０、約６０～約１４０、約６０～約１３０、約６０～約１２０、約６０～約１１０、約６０～約１００、約６０～約９０、約６０～約８０、または約６０～約７０のカチオン性またはアニオン性キャリアユニットを含む。いくつかの態様では、ミセルは、約７０～約２００のカチオン性またはアニオン性キャリアユニットを含む。他の態様では、ミセルは、約７０～約１５０、約７０～約１４０、約７０～約１３０、約７０～約１２０、約７０～約１１０、約７０～約１００、約７０～約９０、または約７０～約８０のカチオン性またはアニオン性キャリアユニットを含む。いくつかの態様では、ミセルは、約８０～約２００のカチオン性またはアニオン性キャリアユニットを含む。他の態様では、ミセルは、約８０～約１５０、約８０～約１４０、約８０～約１３０、約８０～約１２０、約８０～約１１０、約８０～約１００、または約８０～約９０のカチオン性またはアニオン性キャリアユニットを含む。いくつかの態様では、ミセルは、約９０～約２００のカチオン性またはアニオン性キャリアユニットを含む。他の態様では、ミセルは、約９０～約１５０、約９０～約１４０、約９０～約１３０、約９０～約１２０、約９０～約１１０、または約９０～約１００のカチオン性またはアニオン性キャリアユニットを含む。いくつかの態様では、ミセルは、約１００～約２００のカチオン性またはアニオン性キャリアユニットを含む。他の態様では、ミセルは、約１００～約１５０、約１００～約１４０、約１００～約１３０、約１００～約１２０、約１００～約１１０、または約１００～約１００のカチオン性またはアニオン性キャリアユニットを含む。
本開示は、（ｉ）ヌクレオチド配列（例えば、約１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、または２４ヌクレオチド長のオリゴヌクレオチド）、及び（ｉｉ）本明細書に記載されるカチオン性キャリアユニットを含むミセルも含む。いくつかの態様では、本開示は、（ｉ）ヌクレオチド配列、例えば、ｍｉＲＮＡまたはｍｉＲＮＡ阻害剤（例えば、約１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、または２４ヌクレオチドの長さのオリゴヌクレオチド）、及び（ｉｉ）約８０個～約１２０個（例えば、約８５個～約１１５個、約９０個～約１１０個、約９５個～約１０５個）の本明細書に記載されるカチオン性キャリアユニット、例えば、図式Ｉ～ＶＩ、図式Ｉ’～ＶＩ’、またはそれらの組み合わせ（図２Ａ～２Ｉを参照）を含むミセルに関する。
いくつかの態様では、ミセルは、（ｉ）ヌクレオチド配列、例えば、ｍｉＲＮＡまたはｍｉＲＮＡ阻害剤（例えば、約１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、または２４ヌクレオチドの長さのオリゴヌクレオチド）、及び（ｉｉ）約８０個～約１２０個（例えば、約８０個、約８５個、約９０個、約９５個、約１００個、約１０５個、または約１１０個）の本明細書に記載されるカチオン性キャリアユニット、例えば、任意選択の［ＣＣ］－Ｌ１－［ＣＭ］－Ｌ２－［ＨＭ］（図２を参照）を含む。いくつかの態様では、ミセルは、（ｉ）ヌクレオチド配列、例えば、ｍｉＲＮＡまたはｍｉＲＮＡ阻害剤（例えば、約１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、または２４ヌクレオチドの長さのオリゴヌクレオチド）、及び（ｉｉ）約９０個～約１１０個、例えば、約１００個のカチオン性キャリアユニットを含み、（ａ）カチオン性キャリアユニットのうちの約４５個～約９０個、例えば、約８０個は、［ＣＣ］－Ｌ１－［ＣＭ］－Ｌ２－［ＨＭ］を含み、（ｂ）カチオン性キャリアユニットのうちの約４５個～約５５個、例えば、約５０個は、ＷＰ－ＣＣ－ＣＭを含み、ただし、ＴＭは、フェニルアラニンであり、ＷＰは、（ＰＥＧ）５０００であり、ＣＣは、約４０個～約５０個のリシン、例えば、約４５個、約４６個、約４７個、約４８個、約４９個、または約５０個のリシンであり、リシンのうちの約５個～約１５個、約１０個のリシンのそれぞれは、ビタミンＢ３（ニコチンアミド）に融合されている。
いくつかの態様では、本開示は、（ｉ）ヌクレオチド配列、例えばｓｉＲＮＡ（例えば、２１マー）、及び（ｉｉ）約３５個～約６０個（例えば、約３５個、約４０個、約４５個、約５０個、約５５個または約６０個）の本明細書に開示されるカチオン性キャリアユニットを含み、カチオン性キャリアとｓｉＲＮＡとの電荷比は約２．０である（図１５Ａ～１５Ｅ及び１７Ａ～１７Ｅを参照）。
いくつかの態様では、本開示は、（ｉ）ヌクレオチド配列、例えばコレステロール結合ｓｉＲＮＡ（例えば、２１マー）、及び（ｉｉ）約３５個～約６０個（例えば、約３５個、約４０個、約４５個、約５０個、約５５個または約６０個）の本明細書に開示されるカチオン性キャリアユニットを含み、カチオン性キャリアとｓｉＲＮＡとの電荷比は約１．０である（図８Ａ～８Ｄ及び９Ａ～９Ｄを参照）。
いくつかの態様では、本開示のミセルは、（ｉ）ヌクレオチド配列、例えば、ｍｉＲ４８５－３ｐ阻害剤、例えば、５’－ＡＧＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号１８）、及び（ｉｉ）約１００のカチオン性キャリアユニットを含み、ここで、（ａ）約５０のカチオン性キャリアユニットが、ＴＭ－ＷＰ－ＣＣ－ＡＭを含み、（ｂ）約５０のカチオン性キャリアユニットが、ＷＰ－ＣＣ－ＣＭを含み、ここで、ＴＭは、フェニルアラニンであり、ＷＰは、（ＰＥＧ）５０００であり、ＣＣは、約４７のリジンであり、約１０のリジンの各々は、ビタミンＢ３（ニコチンアミド）に融合されている。
いくつかの態様では、ミセルは、単一のペイロード（例えば、単一のオリゴヌクレオチド、例えば、ａｎｔｉｍｉｒ）を含み得る。他の態様では、ミセルは、２種以上のペイロード（例えば、複数のオリゴヌクレオチド、例えば、複数のａｎｔｉｍｉｒ）を含み得る。
Ｖ．製造方法
本開示は、本開示のカチオン性キャリアユニット及びミセルを作製する方法も提供する。概して、本開示は、例えば、実施例セクションに記載されるようにカチオン性キャリアユニットを合成することを含む、本開示のカチオン性キャリアユニットを調製する方法を提供する。本明細書で使用する場合、「合成する」という語は、当該技術分野では周知の方法を用いてカチオン性キャリアユニットをアセンブルすることを指す。例えば、タンパク質構成要素（例えば、抗体標的化部分）は、組換えにより調製され得、その後に、カチオン性キャリアユニットの他の構成要素に結合され得る。いくつかの態様では、カチオン性キャリアユニットの構成要素のそれぞれは、当該技術分野において公知の方法、例えば、組換えタンパク質生成、固相ペプチドまたは核酸合成、化学合成、酵素合成、またはそれらの任意の組み合わせを使用して調製され得、得られた構成要素は、当該技術分野において公知の化学的方法及び／または酵素による方法を使用して結合され得る。
本開示のカチオン性キャリアユニットは、夾雑物を除去するために精製され得る。いくつかの態様では、カチオン性キャリアユニットは、カチオン性キャリアユニットの均一な集団を含む。しかしながら、他の態様では、カチオン性キャリアユニットは、複数の種類を含み得る（例えば、それらの一部は標的化部分を含み、一部は残りの部分を含むが、標的化部分を有さない）。いくつかの態様では、本開示のカチオン性キャリアユニットの製造は、凍結乾燥または再構成に好適な任意の他の種類の乾燥保存を含む。いくつかの態様では、カチオン性キャリアユニットをペイロード（例えば、核酸）と組み合わせた後に、乾燥形態のカチオン性キャリアユニットの調製が行われる。
いくつかの態様では、本開示のミセルを調製する方法は、カチオン性キャリアユニットを負に荷電したペイロード（例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチドなどの核酸、例えば、ａｎｔｉｍｉｒ）と１：１のイオン比率で混合することを含む。いくつかの態様では、カチオン性キャリアユニットと負に荷電したペイロードとは溶液中で組み合わされる。いくつかの態様では、溶液中でカチオン性キャリア及び負に荷電したペイロードを組み合わせた後に、得られた溶液が凍結乾燥または乾燥される。いくつかの態様では、カチオン性キャリア及び負に荷電したペイロードの組み合わせは、乾燥形態で実施される。
カチオン性キャリア部分（Ｂ、例えば、ポリリシン）におけるモノマーユニット（例えば、リシン）の数ｍに対する水溶性ポリマー（Ａ、例えば、ＰＥＧ）におけるモノマーユニットの数ｎの比率（いずれの場合においても、ユニットの数ｎまたはｍは、最高１，０００ユニットであり得る）は、得られるミセルのサイズ及び形状に影響を及ぼす。０．５のｍＢ／（ｎＡ＋ｍＢ）比率では、得られるミセルは、古典的なミセルである。ｍＢ／（ｎＡ＋ｍＢ）が０．５超である場合、得られるミセルは、桿状ミセルまたはポリマソームである。ｍＢ／（ｎＡ＋ｍＢ）が０．５未満である場合、得られるミセルは、小型ミセルまたは小粒子である。
本開示のミセルは、当該技術分野において公知の技術のいずれか、例えば、ボルテックスすること、押出し、または音波処理を使用して生成され得る。ミセルの形成は、本開示のカチオン性キャリアユニットを含む溶液の臨界ミセル濃度（ＣＭＣ）を越える条件を適用することに依存する。それらがある特定の値の濃度に達した後、界面活性剤が会合し始め、より複雑なユニット、例えば、ミセルに自己組織化し始める。本開示のカチオン性キャリアを含む溶液のＣＭＣは、ＣＭＣ周辺で明白な遷移を示す任意の物理的性質（例えば、表面張力）により決定され得る。
周知のＳｍｉｔｈ－Ｅｗａｒｔ理論により、ＣＭＣを超える濃度でミセルの形成を引き起こす核生成した粒子の数は、界面活性剤（本開示では、アニオン性ペイロードと複合体形成または会合したカチオン性キャリアユニット）濃度の０．６乗と比例すると予測される。これは、所与の界面活性剤では、形成されるミセルの数は、一般に界面活性剤濃度の増加とともに増加するためである。
いくつかの態様では、本開示のミセルは、例えば、夾雑物を除去するため、及び／または均一なミセルの集団（例えば、同じサイズを有するミセル、または同じペイロードもしくは同じ標的化部分を有するミセル）を生成するために精製され得る。
ＶＩ．医薬組成物
本開示は、対象への投与に好適である本開示のカチオン性キャリアユニット及び／またはミセル（すなわち、本開示のカチオン性キャリアユニットを含むミセル）を含む医薬組成物も提供する。上記のように、本開示のミセルは、均一であり得る（すなわち、すべてのミセルが同じ種類のカチオン性キャリアユニットを、同じ標的化部分及び同じペイロードとともに含む）。しかしながら、他の態様では、ミセルは、複数の標的化部分、複数のペイロードなどを含み得る。
医薬組成物は、一般に、本開示のカチオン性キャリアユニット及び／またはミセル、ならびに薬学的に許容される賦形剤または担体を、対象への投与に好適な形態で含む。薬学的に許容される賦形剤または担体は、投与される特定の組成物、及び組成物を投与するために使用される特定の方法により部分的に決定される。
本開示のミセルを含む医薬組成物の多種多様な好適な製剤が存在する（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．１８ｔｈ ｅｄ．（１９９０）を参照のこと）。医薬組成物は一般に、無菌状態で、米国食品医薬品局の適正製造基準（ＧＭＰ）規制のすべてに完全に準拠したものとして製剤化される。いくつかの態様では、医薬組成物は、本明細書に記載される１つ以上のミセルを含む。
ある特定の態様では、本明細書に記載されるミセルは、薬学的に許容される担体中で１種以上の追加の治療薬と同時投与される。いくつかの態様では、本明細書に記載されるミセルを含む医薬組成物は、追加の治療薬（複数可）の投与前に投与される。他の態様では、本明細書に記載されるミセルを含む医薬組成物は、追加の治療薬（複数可）の投与後に投与される。さらなる態様では、本明細書に記載されるミセルを含む医薬組成物は、追加の治療薬（複数可）と同時に投与される。
いくつかの態様では、薬学的担体は、ミセル形成後に添加される。他の態様では、薬学的担体は、ミセル形成前に添加される。
許容可能な担体、賦形剤、または安定剤は、用いられる投与量及び濃度でレシピエント（例えば、動物またはヒト）に対し無毒性であり、これらとしては、緩衝剤、例えば、リン酸、クエン酸、及び他の有機酸；アスコルビン酸及びメチオニンが挙げられる抗酸化剤；防腐剤（例えば、オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチル、またはベンジルアルコール；アルキルパラベン、例えば、メチルまたはプロピルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３－ペンタノール；及びｍ－クレゾール）；低分子量（約１０残基未満の）ポリペプチド；タンパク質、例えば、血清アルブミン、ゼラチン、または免疫グロブリン；親水性ポリマー、例えば、ポリビニルピロリドン；アミノ酸、例えば、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、またはリジン；グルコース、マンノース、またはデキストリンが挙げられる単糖、二糖、及び他の炭水化物；キレート剤、例えば、ＥＤＴＡ；糖、例えば、スクロース、マンニトール、トレハロース、またはソルビトール；塩形成性対イオン、例えば、ナトリウム；金属錯体（例えば、Ｚｎ－タンパク質錯体）；及び／または非イオン性活性剤、例えば、ＴＷＥＥＮ（商標）、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）、またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）が挙げられる。
担体または希釈剤の例としては、これらに限定されるものではないが、水、生理食塩水、リンガー液、デキストロース溶液、及び５％ヒト血清アルブミンが挙げられる。薬学的活性物質のためのかかる媒体及び化合物の使用は当該技術分野では周知のものである。任意の従来の媒体または化合物が、本明細書に開示されるカチオン性キャリアユニットまたはミセルと不適合でない限り、組成物におけるそれらの使用は想到される。
補助的治療薬も本開示の組成物に組み込まれ得る。一般的に、医薬組成物は、その意図される投与経路に適合するように配合される。本明細書に記載されるミセルは、非経口、局所、静脈内、経口、皮下、動脈内、皮内、経皮、直腸、頭蓋内、腹腔内、鼻腔内、腫瘍内、筋肉内経路により、または吸入剤として投与され得る。ある特定の態様では、本明細書に記載される医薬組成物のミセルは、例えば、注射により静脈内投与される。本明細書に記載されるミセルは、任意選択的に、本明細書に記載されるミセルが対象とする疾患、障害、または状態を処置するのに少なくとも部分的に効果的である他の治療薬と組み合わせて投与され得る。
溶液または懸濁液は、以下の構成要素を含み得る：無菌の希釈剤、例えば、水、生理食塩液、不揮発性油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコール、または他の合成溶媒；抗菌化合物、例えば、ベンジルアルコールまたはメチルパラベン；抗酸化剤、例えば、アスコルビン酸または亜硫酸水素ナトリウム；キレート化合物、例えば、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）；緩衝剤、例えば、酢酸塩、クエン酸塩またはホスフェート、及び張度の調整のための化合物、例えば、塩化ナトリウムまたはデキストロース。ｐＨは、塩酸や水酸化ナトリウムなどの酸または塩基によって調整することができる。製剤は、ガラスもしくはプラスチックで形成されたアンプル、使い捨て注射器、または複数用量バイアルに封入することができる。
注射可能な使用に適した医薬組成物としては、滅菌水溶液（水溶性の場合）または分散液及び滅菌粉末が挙げられる。静脈内投与の場合、適当な担体として、生理食塩水、静菌水、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ ＥＬ（商標）（ＢＡＳＦ，Ｐａｒｓｉｐｐａｎｙ，Ｎ．Ｊ．）またはリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）が挙げられる。組成物は一般的に無菌であり、容易に注射器で使用できる程度の流動性を有する。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、及び液体ポリエチレングリコールなど）、及びそれらの適当な混合物を含有する溶媒または分散媒とすることができる。適正な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティングの使用によって、分散液の場合には必要な粒径の維持によって、及び界面活性剤の使用によって維持することができる。微生物の活動の防止は、さまざまな抗菌化合物及び抗真菌化合物、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸、チメロサールなどによって実現することができる。必要に応じて、等張性化合物、例えば、糖、多価アルコール、例えば、マンニトール、ソルビトール、及び塩化ナトリウムが組成物に添加され得る。例えば、モノステアリン酸アルミニウムまたはゼラチンなどの吸収を遅延させる化合物を組成物に含めることによって注射用組成物の長期的吸収をもたらすことができる。
本開示の医薬組成物は、従来の周知の滅菌技術により滅菌され得る。水溶液は、使用するために包装され得るか、または無菌条件下濾過され、凍結乾燥され、凍結乾燥された調製物は、投与の前に無菌の水溶液と組み合わされる。
無菌注射剤は、所望される場合、本明細書において列挙される成分の１つまたは組み合わせとともに、本明細書に記載されるミセルを有効量でかつ適切な溶媒中に組み込むことにより調製され得る。一般に、分散体は、本明細書に記載されるミセルを基本的な分散媒及び任意の所望の他の成分を含有する無菌のビヒクルに組み込むことにより調製される。滅菌注射液の調製用の滅菌粉末の場合、調製方法は、真空乾燥及びフリーズドライであり、予め滅菌濾過したその溶液から有効成分及び任意の追加的な所望の成分の粉末が得られる。本明細書に記載されるミセルは、本明細書に記載されるミセルの持続放出またはパルス放出を可能にするような様式で製剤化され得る、蓄積注射またはインプラント調製物の形態で投与され得る。
本明細書に記載されるミセルを含む組成物の全身投与は、経粘膜手段によるものであり得る。経粘膜投与のために、浸透すべき障壁に適切な浸透剤が製剤に使用される。かかる浸透剤は、当該技術分野では周知のものであり、例えば、経粘膜投与の場合では、洗剤、胆汁酸塩、及びフシジン酸誘導体が挙げられる。経粘膜投与は、例えば、鼻内噴霧を使用することにより達成され得る。
ある特定の態様では、本明細書に記載されるミセルを含む医薬組成物は、医薬組成物から恩恵を受ける対象に静脈内投与される。ある特定の態様では、組成物は、例えば、リンパ管内注射もしくは結節内注射（例えば、Ｓｅｎｔｉ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ １０５（４６）：１７９０８（２００８）参照のこと）によりリンパ系に、または筋肉内注射により、皮下投与により、腫瘍内注射により、胸腺または肝臓への直接注入により投与される。
ある特定の態様では、本明細書に記載されるミセルを含む医薬組成物は、懸濁液として投与される。ある特定の態様では、医薬組成物は、投与後の貯留物を形成することができる製剤として投与される。ある特定の好ましい態様では、貯留物は、本明細書に記載されるミセルを血行にゆっくりと放出するか、または貯留物形態で残存する。
通常、薬学的に許容される組成物は、夾雑物を含まないように高度に精製されており、生体適合性でありかつ有毒でなく、対象への投与に適している。水がキャリアの構成成分である場合、水は、夾雑物（例えば、エンドトキシン）を含まないように高度に精製及び処理される。
薬学的に許容されるキャリアは、ラクトース、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、デンプン、アラビアゴム、リン酸カルシウム、アルギナート、ゼラチン、ケイ酸カルシウム、微結晶性セルロース、ポリビニルピロリドン、セルロース、水、シロップ、メチルセルロース、ヒドロキシ安息香酸メチル、ヒドロキシ安息香酸プロピル、タルク、ステアリン酸マグネシウム、及び／または鉱油であり得るが、それらに限定されない。医薬組成物は、滑沢剤、湿潤剤、甘味剤、風味増強剤、乳化剤、沈殿防止剤、及び／または防腐剤をさらに含み得る。
本明細書に記載される医薬組成物は、本明細書に記載されるミセル及び任意選択的に薬学的活性薬剤または治療薬を含む。治療薬は、生物学的薬剤、低分子薬剤、または核酸薬剤であり得る。
本明細書に記載されるミセルを含む剤形が提供される。いくつかの態様では、剤形は、静脈内注射のための懸濁液として製剤化される。
本明細書において開示されるミセルまたはミセルを含む医薬組成物は、他の薬物と同時に使用され得る。具体的には、本開示のミセルまたは医薬組成物は、薬剤、例えば、ホルモン治療薬、化学療法薬、免疫治療薬剤、細胞増殖因子または細胞増殖因子受容体の作用を阻害する薬剤などとともに使用され得る。
ＶＩＩ．治療方法及び使用方法
本開示は、疾患または状態を処置する必要がある対象の疾患または状態を処置する方法も提供し、当該方法は、本開示のミセルまたはその組み合わせを対象、例えば、ヒト対象などの哺乳動物に投与することを含む。いくつかの態様では、本開示は、神経変性障害またはがんを処置する必要がある対象の神経変性障害またはがんを処置する方法も提供し、当該方法は、治療上有効量の本開示のミセルまたは本開示の医薬組成物を対象に投与することを含む。
いくつかの態様では、本開示のミセルは、静脈内、筋肉内、動脈内、クモ膜下腔内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内、被膜下、クモ膜下、脊髄内、及び胸骨内注射及び注入により投与され得る。
いくつかの態様では、本開示のミセルは、本明細書において開示される疾患及び症状の処置に好適な他の薬剤または処置と同時に使用され得る。
本開示は、送達のためにペイロードをカプセル化する方法も提供し、当該方法は、ペイロード、例えば、核酸などのアニオン性ペイロード（例えば、ａｎｔｉｍｉｒ）を本開示のミセルに組み込むことを含む。
本開示は、ペイロードの分解（例えば、ヌクレアーゼにより媒介される分解）への耐性を増加させる方法も提供し、当該方法は、ペイロード、例えば、核酸などのアニオン性ペイロード（例えば、ａｎｔｉｍｉｒ）を本開示のミセルに組み込むことを含む。
いくつかの態様では、本開示は、血液脳関門（ＢＢＢ）を通過する方法を提供し、当該方法は、本明細書において開示されるミセル、例えば、標的化部分としてトリプトファン及び／またはチロシンを含むミセルを投与することを含む。アンチｍｉＲＮＡがロードされた本開示のミセルは、上記に開示されるように、ＢＢＢの受容体、例えば、ＬＡＴ１に標的化され得る。一旦ミセルが受容体により媒介されるトランスサイトーシスによりＢＢＢを通して移動され、脳細胞（例えば、神経細胞、アストロサイト、またはミクログリア）による細胞内取り込みを受けると、ペイロード（例えば、ａｎｔｉｍｉｒ）が放出され、細胞内の標的と相互作用する（例えば、ａｎｔｉｍｉｒが標的マイクロＲＮＡに結合し得、ＲＮアーゼＨにより媒介される分解を引き起こし得る）。
いくつかの態様では、本開示のミセルへのペイロードのカプセル化は、ペイロードの分解への耐性を、遊離ペイロード（すなわち、ミセル内でない、例えば、溶液中で遊離しているペイロード）と比較して少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または少なくとも約１００％増加させ得る。
いくつかの態様では、本開示のミセルへのペイロードのカプセル化は、ペイロードの分解への耐性を、遊離ペイロードと比較して少なくとも約２倍、少なくとも約３倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、少なくとも約６倍、少なくとも約７倍、少なくとも約８倍、少なくとも約９倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約１１倍、少なくとも約１２倍、少なくとも約１３倍、少なくとも約１４倍、少なくとも約１５倍、少なくとも約１６倍、少なくとも約１７倍、少なくとも約１８倍、少なくとも約１９倍、少なくとも約２０倍、少なくとも約２１倍、少なくとも約２２倍、少なくとも約２３倍、少なくとも約２４倍、少なくとも約２５倍、少なくとも約２６倍、少なくとも約２７倍、少なくとも約２８倍、少なくとも約２９倍、または少なくとも約３０倍に増加させ得る。
本開示は、投与の間（例えば、対象の血流中に存在する間）のペイロードの安定性を増加させる方法も提供し、当該方法は、ペイロード、例えば、核酸などのアニオン性ペイロード（例えば、ａｎｔｉｍｉｒ）を本開示のミセルに組み込むことを含む。
いくつかの態様では、本開示のミセルへのペイロードのカプセル化は、ペイロードの安定性を、遊離ペイロードと比較して少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または少なくとも約１００％増加させ得る（例えば、ヌクレアーゼに対する耐性を増加させる）。
いくつかの態様では、本開示のミセルへのペイロードのカプセル化は、ペイロードの安定性を、遊離ペイロードと比較して少なくとも約２倍、少なくとも約３倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、少なくとも約６倍、少なくとも約７倍、少なくとも約８倍、少なくとも約９倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約１１倍、少なくとも約１２倍、少なくとも約１３倍、少なくとも約１４倍、少なくとも約１５倍、少なくとも約１６倍、少なくとも約１７倍、少なくとも約１８倍、少なくとも約１９倍、少なくとも約２０倍、少なくとも約２１倍、少なくとも約２２倍、少なくとも約２３倍、少なくとも約２４倍、少なくとも約２５倍、少なくとも約２６倍、少なくとも約２７倍、少なくとも約２８倍、少なくとも約２９倍、または少なくとも約３０倍増加させ得る（例えば、ヌクレアーゼに対する耐性を増加させる）。
本開示は、ペイロードの血漿半減期を増加させる方法も提供し、当該方法は、ペイロード、例えば、核酸などのアニオン性ペイロード（例えば、ａｎｔｉｍｉｒ）を本開示のミセルに組み込むことを含む。
いくつかの態様では、本開示のミセルへのペイロードのカプセル化は、ペイロードの血漿半減期を、遊離ペイロードと比較して少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約１００％、少なくとも約２００％、少なくとも約３００％、少なくとも約４００％、少なくとも約５００％、少なくとも約６００％、少なくとも約７００％、少なくとも約８００％、少なくとも約９００％、少なくとも約１０００％、少なくとも約１１００％、少なくとも約１２００％、少なくとも約１３００％、少なくとも約１４００％、少なくとも約１５００％、少なくとも約１６００％、少なくとも約１７００％、少なくとも約１８００％、少なくとも約１９００％、または少なくとも約２０００％増加させ得る。
いくつかの態様では、本開示のミセルへのペイロードのカプセル化は、ペイロードの血漿半減期を、遊離ペイロードと比較して少なくとも約２倍、少なくとも約３倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、少なくとも約６倍、少なくとも約７倍、少なくとも約８倍、少なくとも約９倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約１１倍、少なくとも約１２倍、少なくとも約１３倍、少なくとも約１４倍、少なくとも約１５倍、少なくとも約１６倍、少なくとも約１７倍、少なくとも約１８倍、少なくとも約１９倍、少なくとも約２０倍、少なくとも約２１倍、少なくとも約２２倍、少なくとも約２３倍、少なくとも約２４倍、少なくとも約２５倍、少なくとも約２６倍、少なくとも約２７倍、少なくとも約２８倍、少なくとも約２９倍、または少なくとも約３０倍増加させ得る。
いくつかの態様では、カプセル化されたペイロードは、本明細書において開示されるａｎｔｉｍｉｒ、例えば、配列番号１８のアンチセンスオリゴヌクレオチドまたはそのバリアントもしくは誘導体（例えば、配列番号１８のアンチセンスオリゴヌクレオチドに対する少なくとも約７０％の同一性を有するオリゴヌクレオチド）であり、ここで、本開示のミセルへのａｎｔｉｍｉｒのカプセル化は、ａｎｔｉｍｉｒの血漿半減期を、遊離ａｎｔｉｍｉｒの血漿半減期と比較して少なくとも約１０倍、少なくとも約１２倍、少なくとも約１４倍、少なくとも約１６倍、少なくとも約１８倍、または少なくとも約２０倍増加させる。特定の一態様では、カプセル化されたペイロードは、本明細書において開示されるａｎｔｉｍｉｒ、例えば、配列番号１８のアンチセンスオリゴヌクレオチドまたはそのバリアントもしくは誘導体（例えば、配列番号１８のアンチセンスオリゴヌクレオチドに対する少なくとも約７０％の同一性を有するオリゴヌクレオチド）であり、ここで、本開示のミセルへのａｎｔｉｍｉｒのカプセル化は、ａｎｔｉｍｉｒの血漿半減期を、遊離ａｎｔｉｍｉｒの血漿半減期と比較して少なくとも約２０倍に増加させる。いくつかの態様では、本開示のミセルにカプセル化されたａｎｔｉｍｉｒの血漿半減期は、少なくとも約３０分、少なくとも約４０分、少なくとも約５０分、少なくとも約６０分、少なくとも約７０分、少なくとも約８０分、少なくとも約９０分、少なくとも約１００分、または少なくとも約１２０分である。特定の一態様では、本開示のミセルにカプセル化されたａｎｔｉｍｉｒ（例えば、配列番号１８のアンチセンスオリゴヌクレオチド）の血漿半減期は、少なくとも約９０分である。
本開示は、生理学的バリア、例えば、ＢＢＢまたは形質膜を通したペイロードの透過、送達、移動、または輸送を増加させる方法も提供し、当該方法は、ペイロード、例えば、核酸などのアニオン性ペイロード（例えば、ａｎｔｉｍｉｒ）を本開示のミセルに組み込むことを含む。
いくつかの態様では、本開示のミセルへのペイロードのカプセル化は、生理学的バリア、例えば、ＢＢＢまたは形質膜を通したペイロードの透過、送達、移動、または輸送を、遊離ペイロードと比較して少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または少なくとも約１００％増加させ得る。
いくつかの態様では、本開示のミセルへのペイロードのカプセル化は、生理学的バリア、例えば、ＢＢＢまたは形質膜を通したペイロードの透過、送達、移動、または輸送を、遊離ペイロードと比較して少なくとも約２倍、少なくとも約３倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、少なくとも約６倍、少なくとも約７倍、少なくとも約８倍、少なくとも約９倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約１１倍、少なくとも約１２倍、少なくとも約１３倍、少なくとも約１４倍、少なくとも約１５倍、少なくとも約１６倍、少なくとも約１７倍、少なくとも約１８倍、少なくとも約１９倍、少なくとも約２０倍、少なくとも約２１倍、少なくとも約２２倍、少なくとも約２３倍、少なくとも約２４倍、少なくとも約２５倍、少なくとも約２６倍、少なくとも約２７倍、少なくとも約２８倍、少なくとも約２９倍、または少なくとも約３０倍に増加させ得る。
いくつかの態様では、本開示のミセルは、幹細胞を標的とするために、例えば、治療用分子（例えば、治療用ポリヌクレオチド）または遺伝子治療成分を送達するために使用され得る。他の態様では、本開示のミセルは、がんを処置するために使用され得る。例えば、本開示のミセルは、ある特定の種類のがん、例えば、神経膠腫、乳癌、膵臓癌、肝臓癌、皮膚癌、または子宮頸癌に特異的なマーカーを標的とし得、治療用分子（例えば、治療用ポリヌクレオチド、ペプチド、または低分子）をペイロードとして保有し得る。
特定の態様では、本開示のミセルは、膵臓癌を処置するために使用され得る。いくつかの態様では、本開示のミセルを膵臓組織に誘導する標的化部分は、環状ＲＧＤペプチドである。他の態様では、本開示のミセルを膵臓組織に誘導する標的化部分は、正常またはがん性膵臓細胞の表面に主にまたはもっぱら発現されるバイオマーカーである。いくつかの態様では、本開示のミセルのペイロードは、Ｋ－Ｒａｓを標的とするオリゴヌクレオチドであり、ここで、膵臓組織へのペイロードの送達は、Ｋ－Ｒａｓの発現を効果的に低減する。
いくつかの態様では、本開示のミセルは、神経変性疾患、例えば、アルツハイマー病の症状を処置または改善するために使用され得る。いくつかの態様では、本開示のミセルは、アルツハイマー病神経組織において過剰発現される分子、例えば、ｍｉＲＮＡ－４８５－３ｐを標的とするペイロード（例えば、ａｎｔｉｍｉｒ）を含む。いくつかの態様では、したがって、本開示のミセル（例えば、ＢＢＢを通してミセル及びｍｉＲＮＡ－４８５－３ｐを標的とするａｎｔｉｍｉｒペイロードを効果的に輸送するためのＬＡＴ１標的化部分を含むミセル）のアルツハイマー病患者への投与は、アルツハイマー病の症状、例えば、アポトーシス、ミトコンドリア機能の喪失、または炎症を予防または改善し得る。
いくつかの態様では、本開示は、神経変性疾患（例えば、アルツハイマー病）に罹患している対象における炎症（例えば、神経炎症）を低減する方法を提供し、当該方法は、治療上有効量の本開示のミセルを対象に投与することを含み、ミセルは、対象における炎症（例えば、神経炎症）を効果的に低減することができる治療薬を含む。いくつかの態様では、神経炎症は、皮質の炎症である。いくつかの態様では、神経炎症は、海馬の炎症である。いくつかの態様では、治療薬は、ｍｉＲＮＡ－４８５－３ｐを標的とするａｎｔｉｍｉｒ（例えば、配列番号１８のａｎｔｉｍｉｒまたはその断片もしくはバリアント）であり、ここで、ａｎｔｉｍｉｒは、対象におけるｍｉＲＮＡ－４８５－３ｐのレベルを低減することができる。
いくつかの態様では、神経変性疾患（例えば、アルツハイマー病）に罹患している対象への本開示のミセルの投与は、神経炎症のレベルを、本開示のミセルで処置されていない対象または対象の集団において観察される神経炎症のレベルと比較して少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または約１００％の神経炎症を減少させ得る。
いくつかの態様では、本開示は、アルツハイマー病に罹患している対象におけるアミロイドプラーク負荷を低減する方法を提供し、当該方法は、治療上有効量の本開示のミセルを対象に投与することを含み、ミセルは、対象におけるアミロイドプラーク負荷を効果的に低減することができる治療薬を含む。いくつかの態様では、治療薬は、ｍｉＲＮＡ－４８５－３ｐを標的とするａｎｔｉｍｉｒ（例えば、配列番号１８のａｎｔｉｍｉｒまたはその断片もしくはバリアント）であり、ここで、ａｎｔｉｍｉｒは、対象におけるｍｉＲＮＡ－４８５－３ｐのレベルを低減することができる。
いくつかの態様では、神経変性疾患（例えば、アルツハイマー病）に罹患している対象への本開示のミセルの投与は、対象におけるアミロイドプラーク負荷を、本開示のミセルで処置されていない対象または対象の集団において観察されるアミロイドプラーク負荷と比較して、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または約１００％減少させ得る。
いくつかの態様では、本開示は、神経変性疾患（例えば、アルツハイマー病）に罹患している対象における神経形成を回復さる、及び／または誘発する方法を提供し、当該方法は、治療上有効量の本開示のミセルを対象に投与することを含み、ミセルは、対象における神経形成を効果的に回復させ、及び／または誘発することができる治療薬を含む。いくつかの態様では、治療薬は、ｍｉＲＮＡ－４８５－３ｐを標的とするａｎｔｉｍｉｒ（例えば、配列番号１８のａｎｔｉｍｉｒまたはその断片もしくはバリアント）であり、ここで、ａｎｔｉｍｉｒは、対象におけるｍｉＲＮＡ－４８５－３ｐのレベルを低減することができる。
いくつかの態様では、神経変性疾患（例えば、アルツハイマー病）に罹患している対象への本開示のミセルの投与は、対象における神経形成を、本開示のミセルで処置されていない対象または対象の集団において観察される神経形成のレベルと比較して少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または約１００％回復させる、及び／または誘発させ得る。
いくつかの態様では、本開示は、神経変性疾患（例えば、アルツハイマー病）に罹患している対象の認知機能を改善する方法を提供し、当該方法は、治療上有効量の本開示のミセルを対象に投与することを含み、ミセルは、対象の認知機能を効果的に改善することができる治療薬を含む。いくつかの態様では、治療薬は、ｍｉＲＮＡ－４８５－３ｐを標的とするａｎｔｉｍｉｒ（例えば、配列番号１８のａｎｔｉｍｉｒまたはその断片もしくはバリアント）であり、ここで、ａｎｔｉｍｉｒは、対象におけるｍｉＲＮＡ－４８５－３ｐのレベルを低減することができる。
いくつかの態様では、神経変性疾患（例えば、アルツハイマー病）に罹患している対象への本開示のミセルの投与は、対象の認知機能を、本開示のミセルで処置されていない対象または対象の集団において観察される認知機能と比較して少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または約１００％増加させ得る。
ＶＩＩＩ．キット
本開示は、本開示のカチオン性キャリアユニット、ミセル、または医薬組成物、及び任意選択的に使用説明書を含むキットまたは製造品も提供する。いくつかの態様では、キットまたは製造品は、本開示のカチオン性キャリアユニット、ミセル、または医薬組成物を１つ以上の容器に含む。いくつかの態様では、キットまたは製造品は、本開示のカチオン性キャリアユニット、ミセル、または医薬組成物、及びパンフレットを含む。いくつかの態様では、キットまたは製造品は、本開示のカチオン性キャリアユニット、ミセル、または医薬組成物、及び使用説明書を含む。当業者は、本開示のカチオン性キャリアユニット、ミセル、もしくは医薬組成物、またはそれらの組み合わせが、技術分野において周知である確立されたキットフォーマットのうちの１つに容易に組み込まれ得ることを容易に理解するであろう。
いくつかの態様では、キットまたは製造品は、容器（例えば、ガラスバイアル）内の乾燥形態の本開示のカチオン性キャリアユニット、及び任意選択的に乾燥したカチオン性キャリアユニットを水和させるのに好適な溶媒を有するバイアル、及び任意選択的にカチオン性キャリアユニットの水和及びミセルの形成のための使用説明書を含む。いくつかの態様では、キットまたは製造品は、ミセルのアニオン性ペイロード（例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチド）を有する少なくとも１つの追加の容器（例えば、ガラスバイアル）をさらに含む。いくつかの態様では、キットまたは製造品は、乾燥形態の本開示のカチオン性キャリアユニット及び同様に乾燥形態のミセルのアニオン性ペイロードを同じ容器に、または異なる容器に含む。いくつかの態様では、キットまたは製造品は、溶液中の本開示のカチオン性キャリアユニット及び同様に溶液中のミセルのアニオン性ペイロードを同じ容器に、または異なる容器に含む。いくつかの態様では、キットまたは製造品は、溶液中の本開示のミセル及び使用説明書を含む。いくつかの態様では、キットまたは製造品は、乾燥形態の本開示のミセル及び使用説明書（例えば、再構成及び投与のための使用説明書）を含む。
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本開示の実施は、特に明記しない限り、当業者の技能範囲内にある、細胞生物学、細胞培養、分子生物学、トランスジェニック生物学、微生物学、組換えＤＮＡ、及び免疫学の従来技術を用いるであろう。かかる技術は文献に充分な説明がなされている例えば、下記を参照されたい：Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，ｅｄ．（１９８９）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（２ｎｄ ｅｄ．；Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ）；Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，ｅｄ．（１９９２）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇｓ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，ＮＹ）；Ｄ．Ｎ．Ｇｌｏｖｅｒ ｅｄ．，（１９８５）ＤＮＡ Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ｖｏｌｕｍｅｓ Ｉ ａｎｄ ＩＩ；Ｇａｉｔ，ｅｄ．（１９８４）Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ；Ｍｕｌｌｉｓ ｅｔ ａｌ．米国特許第４，６８３，１９５号；Ｈａｍｅｓ ａｎｄ Ｈｉｇｇｉｎｓ，ｅｄｓ．（１９８４）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ；Ｈａｍｅｓ ａｎｄ Ｈｉｇｇｉｎｓ，ｅｄｓ．（１９８４）Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ Ａｎｄ Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ；Ｆｒｅｓｈｎｅｙ（１９８７）Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌｓ（Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．）；Ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ Ｃｅｌｌｓ Ａｎｄ Ｅｎｚｙｍｅｓ（ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ）（１９８６）；Ｐｅｒｂａｌ（１９８４）Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｇｕｉｄｅ Ｔｏ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ；ｔｈｅ ｔｒｅａｔｉｓｅ，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．，Ｎ．Ｙ．）；Ｍｉｌｌｅｒ ａｎｄ Ｃａｌｏｓ ｅｄｓ．（１９８７）Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ Ｖｅｃｔｏｒｓ Ｆｏｒ Ｍａｍｍａｌｉａｎ Ｃｅｌｌｓ，（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）；Ｗｕ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌｓ．１５４ ａｎｄ １５５；Ｍａｙｅｒ ａｎｄ Ｗａｌｋｅｒ，ｅｄｓ．（１９８７）Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｉｎ Ｃｅｌｌ Ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｌｏｎｄｏｎ）；Ｗｅｉｒ ａｎｄ Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ，ｅｄｓ．，（１９８６）Ｈａｎｄｂｏｏｋ Ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌｕｍｅｓ Ｉ－ＩＶ；Ｍａｎｉｐｕｌａｔｉｎｇ ｔｈｅ Ｍｏｕｓｅ Ｅｍｂｒｙｏ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，（１９８６）；）；Ｃｒｏｏｋｅ，Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ ｄｒｕｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ： Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ，Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，２ｎｄ Ｅｄ．ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ（２００７）ａｎｄ ｉｎ Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．（１９８９）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，Ｍｄ．）。
上記で引用された参考文献のすべて、及び本明細書において引用されるすべての参考文献は、本明細書に参照によりその全容を援用するものである。
以下の実施例は、例示のために示すものであって、限定のためのものではない。
実施例１
カチオン性キャリアの合成
（ａ）アルキン修飾チロシンの合成：アセトニトリル（４．０ｍｌ）中、Ｎ－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－Ｌ－チロシンメチルエステル（Ｂｏｃ－Ｔｙｒ－ＯＭｅ）（０．５ｇ，１．６９ｍｍｏｌ）及びＫ２ＣＯ３（１．５当量，２．５４ｍｍｏｌ）の混合物を、臭化プロパルギル（１．２当量，２．０３ｍｍｏｌ）に滴下した。反応混合物を６０℃で１６時間加熱した。反応後、反応混合物を、水と酢酸エチル（ＥＡ）を使用して抽出した。次いで、有機層を、ブライン液で洗浄した。
粗製物を、フラッシュカラム（ヘキサン中、１０％ＥＡ）により精製した。次に、得られた生成物をテトラヒドロフラン（７．０ｍｌ）及び６．０Ｍ ＨＣｌ（７．０ｍｌ）に溶解し、６５℃で１６時間加熱した。ジオキサンを除去し、ＥＡにより抽出した。次いで、水性ＮａＯＨ（１．０Ｍ）溶液をｐＨが７になるまで混合物に加えた。反応物質をエバポレーターで濃縮し、１２，０００ｒｐｍで０℃で遠心分離した。沈殿物を脱イオン水で洗浄して使用に先立って凍結乾燥した。
（ｂ）（メトキシまたは）アジド－ポリ（エチレングリコール）ｂ－ポリ（Ｌ－リシン）（ＰＥＧ－ＰＬＬ）（化合物Ａ）の合成：ポリ（エチレングリコール）－ｂ－ポリ（Ｌ－リシン）を、Ｌｙｓ（ＴＦＡ）－ＮＣＡと高分子開始剤としてのアジドＰＥＧ（Ｎ３－ＰＥＧ）との開環重合により合成した。要約すると、Ｎ３－ＰＥＧ（６００ｍｇ，０．１２ｍｍｏｌ）及びＬｙｓ（ＴＦＡ）－ＮＣＡ（１４４７ｍｇ，５．４ｍｍｏｌ）を、１Ｍのチオ尿素を含んだＤＭＦとＤＭＦに別々に溶解した。Ｌｙｓ（ＴＦＡ）－ＮＣＡ溶液を、マイクロシリンジの針によりＮ３－ＰＥＧ溶液に滴下し、反応混合物を３７℃で３日間撹拌した。反応ボトルをＡｒ及び真空によりパージした。すべての反応はＡｒ雰囲気下で行った。
反応後、混合物を過剰量のジエチルエーテル中で沈殿させた。混合物を濾過し、減圧下で乾燥後に生成物を白色粉末として得た。ＰＥＧ－ＰＬＬ（ＴＦＡ）のＴＦＡ基を脱保護するため、Ｎ３－ＰＥＧ－ＰＬＬ（５００ｍｇ）をメタノール（６０ｍＬ）と１ＮのＮａＯＨ（６ｍＬ）に溶解し、撹拌しながらポリマー溶液に滴下した。混合物を３７℃で攪拌しながら１日維持した。反応混合物を１０ｍＭのＨＥＰＥＳ及び蒸留水に対して４回透析した。凍結乾燥後にＮ３－ＰＥＧ－ＰＬＬ（ＮＨ２）の白色粉末を得た。ＰＥＧ５Ｋ－ＰＬＬ（ＮＨ３ ＋／Ｃｌ－）４６、ＰＥＧ５Ｋ－ＰＬＬ（ＮＨ３ ＋／Ｃｌ－）５８、及びＰＥＧ５Ｋ－ＰＬＬ（ＮＨ３ ＋／Ｃｌ－）８０も、試薬の供給量を制御することにより、この合成法によって重合させた。ＰＥＧ５Ｋ－ＰＬＬ（ＮＨ３ ＋／Ｃｌ－）５８の模式図を図２Ａに示す（化合物Ａ）。
（ｃ）（メトキシまたは）アジドポリ（エチレングリコール）－ｂ－ポリ（Ｌ－リシン／ニコチンアミド）（ＰＥＧ５Ｋ－ＰＬＬ４６（Ｎｉｃ１５））（化合物Ｂ）の合成：ミセルの安定性を高めるために、ニコチンアミド及びチオール末端基をアジュバント部分としてポリマー主鎖に導入した。最初に、（メトキシまたは）アジド－ポリ（エチレングリコール）－ｂ－ポリ（Ｌ－リシン／ニコチンアミド）（（ＭｅＯ－または）Ｎ３ＰＥＧ５Ｋ－ＰＬＬ４６（Ｎｉｃ１５））を、ＥＤＣ／ＮＨＳの存在下、ＰＥＧ５Ｋ－ＰＬＬ４６－ＮＨ２及びニコチン酸の化学修飾により合成した。
ＰＥＧ５Ｋ－ＰＬＬ４６－ＮＨ２，１５１．６ｍｇ）及びニコチン酸（１０７．８ｍｇ，ＰＥＧ－ＰＬＬのＮＨ２に対して１．４当量）を、脱イオン水とメタノールの（１：１）混合物に別々に溶解した。ＥＤＣ（２５１．８ｍｇ，ＰＥＧ－ＰＬＬのＮＨ２に対して２．０当量）をニコチン酸溶液に加え、ＮＨＳ（１５１．２ｍｇ，ＰＥＧ－ＰＬＬのＮＨ２に対して２．０当量）を混合物に段階的に加えた。
室温で３０分間ポストインキュベーションした後、反応混合物をＮ３－ＰＥＧ－ＰＬＬ（ＮＨ２）溶液に加えた。反応混合物を撹拌しながら３７℃で１６時間維持した。粗生成物を脱イオン水に対して２４時間透析した。溶液をシリンジフィルター（０．４５μｍ）で濾過し、２日間凍結乾燥した。ＰＥＧ５Ｋ－ＰＬＬ４６（Ｎｉｃ１５）の模式図を図２Ｂに示す。
（ｄ）（メトキシまたは）アジドポリ（エチレングリコール）－ｂ－ポリ（Ｌ－リシン／ニコチンアミド）（ＰＥＧ５Ｋ－ＰＬＬ５８（Ｎｉｃ３０））（化合物Ｃ）の合成：ミセルの安定性を高めるために、ニコチンアミド及びチオール末端基をアジュバント部分としてポリマー主鎖に導入した。最初に、（メトキシまたは）アジド－ポリ（エチレングリコール）－ｂ－ポリ（Ｌ－リシン／ニコチンアミド）（（ＭｅＯ－または）Ｎ３－ＰＥＧ５Ｋ－ＰＬＬ５６（Ｎｉｃ３０））を、ＥＤＣ／ＮＨＳの存在下、ＰＥＧ５Ｋ－ＰＬＬ５６－ＮＨ２及びニコチン酸の化学修飾により合成した。
ＰＥＧ５Ｋ－ＰＬＬ５６－ＮＨ２，３００ｍｇ）及びニコチン酸（２３４．３ｍｇ，ＰＥＧ－ＰＬＬのＮＨ２に対して２．０当量）を、脱イオン水とメタノールの（１：１）混合物に別々に溶解した。ＥＤＣ（７２９．７ｍｇ，ＰＥＧ－ＰＬＬのＮＨ２に対して３．０当量）をニコチン酸溶液に加え、ＮＨＳ（４３８．１ｍｇ，ＰＥＧ－ＰＬＬのＮＨ２に対して３．０当量）を混合物に段階的に加えた。
室温で３０分間ポストインキュベーションした後、反応混合物をＮ３－ＰＥＧ－ＰＬＬ（ＮＨ２）溶液に加えた。反応混合物を撹拌しながら３７℃で１６時間維持した。粗生成物を脱イオン水に対して２４時間透析した。溶液をシリンジフィルター（０．４５μｍ）で濾過し、２日間凍結乾燥した。ＰＥＧ５Ｋ－ＰＬＬ５８（Ｎｉｃ３０）の模式図を図２Ｃに示す。
（ｅ）（メトキシまたは）アジドポリ（エチレングリコール）－ｂ－ポリ（Ｌ－リシン／ニコチンアミド／メルカプトプロパンアミド（ＰＥＧ５Ｋ－ＰＬＬ５８（Ｎｉｃ２３／ＳＨ８））（化合物Ｄ）の合成：ミセルの安定性を高めるために、ニコチンアミド及びチオール末端基をアジュバント部分としてポリマー主鎖に導入した。最初に、（メトキシまたは）アジド－ポリ（エチレングリコール）－ｂ－ポリ（Ｌ－リシン／ニコチンアミド／メルカプトプロパンアミド）（（ＭｅＯ－または）Ｎ３－ＰＥＧ５Ｋ－ＰＬＬ５８（Ｎｉｃ２３／ＳＨ８））を、ＥＤＣ／ＮＨＳの存在下、ＰＥＧ５Ｋ－ＰＬＬ５６－ＮＨ２及びニコチン酸の化学修飾により合成した。
ＰＥＧ５Ｋ－ＰＬＬ５６－ＮＨ２，１５０ｍｇ）及びニコチン酸（５７．５ｍｇ，ＰＥＧ－ＰＬＬのＮＨ２に対して０．８当量）を、脱イオン水とメタノールの（１：１）混合物に別々に溶解した。ＥＤＣ（１３４．０ｍｇ，ＰＥＧ－ＰＬＬのＮＨ２に対して１．２当量）をニコチン酸溶液に加え、ＮＨＳ（８０．４ｍｇ，ＰＥＧ－ＰＬＬのＮＨ２に対して１．２当量）を混合物に段階的に加えた。
室温で３０分間ポストインキュベーションした後、反応混合物をＮ３－ＰＥＧ－ＰＬＬ（ＮＨ２）溶液に加えた。反応混合物を撹拌しながら３７℃で１６時間維持した。次に、３，３’－ジチオジプロピオン酸（２５．４ｍｇ、ＰＥＧ－ＰＬＬのＮＨ２に対して０．２当量）、ＥＤＣ（３４．７ｍｇ、ＰＥＧ－ＰＬＬのＮＨ２に対して０．３当量）、及びＮＨＳ（２０．８ｍｇ、ＰＥＧ－ＰＬＬのＮＨ２に対して０．３当量）をＭｅＯＨに溶解し、反応混合物に直接加えた。混合物を３７℃で４時間攪拌した後、反応物をＭｅＯＨに対して２時間透析し（ＭＷＣＯ＝７，０００～８，０００）、１，４－ジチオトリトール（ＤＴＴ、１３．０ｍｇ、ＰＥＧ－ＰＬＬのＮＨ２に対して０．１４当量）を膜に直接加えて、ポリマー側鎖のジスルフィド結合を切断した。膜を３０分間インキュベートし、５０％ＭｅＯＨに対して２時間透析し、脱イオン水に対して２４時間透析した。溶液をシリンジフィルター（０．４５μｍ）で濾過し、２日間凍結乾燥した。ＰＥＧ５Ｋ－ＰＬＬ５８（Ｎｉｃ２３／ＳＨ８）の模式図を図２Ｄに示す。
（ｆ）（メトキシまたは）アジドポリ（エチレングリコール）－ｂ－ポリ（Ｌ－リシン／ニコチンアミド／メルカプトプロパンアミド）（ＰＥＧ５Ｋ－ＰＬＬ８０（Ｎｉｃ１４／ＳＨ６））（化合物Ｅ）の合成：ミセルの安定性を高めるために、ニコチンアミド及びチオール末端基をアジュバント部分としてポリマー主鎖に導入した。最初に、（メトキシまたは）アジド－ポリ（エチレングリコール）－ｂ－ポリ（Ｌ－リシン／ニコチンアミド／メルカプトプロパンアミド）（（ＭｅＯ－または）Ｎ３－ＰＥＧ５Ｋ－ＰＬＬ８０（Ｎｉｃ１４／ＳＨ６））を、ＥＤＣ／ＮＨＳの存在下、ニコチン酸及び３，３’－ジチオジプロピオン酸からのＰＥＧ５Ｋ－ＰＬＬ８０－ＮＨ２の化学修飾により合成した。
ＰＥＧ５Ｋ－ＰＬＬ８０－ＮＨ２（２００．０ｍｇ）、ニコチン酸（Ｎｉｃ、２２．１ｍｇ、１７当量）、３，３’－ジチオジプロピオン酸（ＤＴＤＰＡ、１０．２ｍｇ、４．５当量）、Ｎ－（３－ジメチルアミノプロピル）－Ｎ’－エチルカルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ、５２．５ｍｇ、２５当量）、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ、３１．５ｍｇ、２５当量）、及びトリエチルアミン（ＴＥＡ、３０．０μＬ、２０当量）を２０ｍＬのジメチルスルホキシドに別々に溶解した。
反応混合物を撹拌しながら３７℃で１６時間維持した。反応終了後、粗生成物を脱イオン水に対して２時間透析し（ＭＷＣＯ＝７，０００～８，０００）、１，４－ジチオトリトール（ＤＴＴ、２２．５ｍｇ、１３当量）を膜に直接加えて、ポリマー側鎖のジスルフィド結合を切断した。膜を３０分間インキュベートし、脱イオン水に対して２時間透析し、脱イオン水に対して２４時間透析した。溶液をシリンジフィルター（０．４５μｍ）で濾過し、２日間凍結乾燥した。ＰＥＧ５Ｋ－ＰＥＧ５Ｋ－ＰＬＬ８０（Ｎｉｃ１４／ＳＨ６））の模式図を図２Ｅに示す。
（ｇ）（メトキシまたは）アジドポリ（エチレングリコール）－ｂ－ポリ（Ｌ－リシン／ニコチンアミド／メルカプトプロパンアミド）（ＰＥＧ５Ｋ－ＰＬＬ８０（Ｎｉｃ２３／ＳＨ６））（化合物Ｆ）の合成：ミセルの安定性を高めるために、ニコチンアミド及びチオール末端基をアジュバント部分としてポリマー主鎖に導入した。最初に、（メトキシまたは）アジド－ポリ（エチレングリコール）－ｂ－ポリ（Ｌ－リシン／ニコチンアミド／メルカプトプロパンアミド）（（ＭｅＯ－または）Ｎ３－ＰＥＧ５Ｋ－ＰＬＬ８０（Ｎｉｃ２３／ＳＨ６））を、ＥＤＣ／ＮＨＳの存在下、ニコチン酸（ＮＡ）及び３，３’－ジチオジプロピオン酸（ＤＴＤＰＡ）からのＰＥＧ５Ｋ－ＰＬＬ８０－ＮＨ２の化学修飾により合成した。
ＰＥＧ５Ｋ－ＰＬＬ８０－ＮＨ２（２００ｍｇ）、ＮＡ（３６．８ｍｇ、２７．５当量）、ＤＴＤＰＡ（８．７ｍｇ、４当量）、ＥＤＣ（７８．３ｍｇ、３７．５当量）、ＮＨＳ（４７．０ｍｇ、３７．５当量）、及びトリエチルアミン（ＴＥＡ、５０．１μＬ、３３当量）を２０ｍＬのジメチルスルホキシドに別々に溶解した。反応混合物を撹拌しながら３７℃で１６時間維持した。反応終了後、粗生成物を脱イオン水に対して２時間透析した（ＭＷＣＯ＝７，０００～８，０００）。１，４－ジチオトリトール（ＤＴＴ、１９．０ｍｇ、１１当量）を膜に直接加えて、ポリマー側鎖のジスルフィド結合を切断した。膜を３０分間インキュベートし、脱イオン水に対して２時間透析し、脱イオン水に対して２４時間透析した。溶液をシリンジフィルター（０．４５μｍ）で濾過し、２日間凍結乾燥した。ＰＥＧ５Ｋ－ＰＬＬ８０（Ｎｉｃ２３／ＳＨ６）の模式図を図２Ｆに示す。
（ｈ）（メトキシまたは）アジドポリ（エチレングリコール）－ｂ－ポリ（Ｌ－リシン／ニコチンアミド／メルカプトプロパンアミド）（ＰＥＧ５Ｋ－ＰＬＬ８０（Ｎｉｃ２８／ＳＨ８））（化合物Ｇ）の合成：ミセルの安定性を高めるために、ニコチンアミド及びチオール末端基をアジュバント部分としてポリマー主鎖に導入した。最初に、（メトキシまたは）アジド－ポリ（エチレングリコール）－ｂ－ポリ（Ｌ－リシン／ニコチンアミド／メルカプトプロパンアミド）（（ＭｅＯ－または）Ｎ３－ＰＥＧ５Ｋ－ＰＬＬ８０（Ｎｉｃ２８／ＳＨ８））を、ＥＤＣ／ＮＨＳの存在下、ニコチン酸（ＮＡ）及び３，３’－ジチオジプロピオン酸（ＤＴＤＰＡ）からのＰＥＧ５Ｋ－ＰＬＬ８０－ＮＨ２の化学修飾により合成した。
ＰＥＧ５Ｋ－ＰＬＬ８０－ＮＨ２（２００．０ｍｇ）、ＮＡ（４４．２ｍｇ、３３当量）、ＤＴＤＰＡ（７．８ｍｇ、３．４当量）、ＥＤＣ（９１．２ｍｇ、４４当量）、ＮＨＳ（５４．８ｍｇ、４４当量）、及びトリエチルアミン（ＴＥＡ、６０．０μＬ、４０当量）を２０ｍＬのジメチルスルホキシドに別々に溶解した。反応混合物を撹拌しながら３７℃で１６時間維持した。反応終了後、粗生成物を脱イオン水に対して２時間透析し（ＭＷＣＯ＝７，０００～８，０００）、１，４－ジチオトリトール（ＤＴＴ、１７．３ｍｇ、１０当量）を膜に直接加えて、ポリマー側鎖のジスルフィド結合を切断した。膜を３０分間インキュベートし、脱イオン水に対して２時間透析し、脱イオン水に対して２４時間透析した。溶液をシリンジフィルター（０．４５μｍ）で濾過し、２日間凍結乾燥した。ＰＥＧ５Ｋ－ＰＬＬ８０（Ｎｉｃ２８／ＳＨ８）の模式図を図２Ｇに示す。
（ｉ）（メトキシまたは）アジドポリ（エチレングリコール）－ｂ－ポリ（Ｌ－リシン／ニコチンアミド／メルカプトプロパンアミド）（ＰＥＧ５Ｋ－ＰＬＬ８０（Ｎｉｃ３１／ＳＨ１１））（化合物Ｈ）の合成：ミセルの安定性を高めるために、ニコチンアミド及びチオール末端基をアジュバント部分としてポリマー主鎖に導入した。最初に、（メトキシまたは）アジド－ポリ（エチレングリコール）－ｂ－ポリ（Ｌ－リシン／ニコチンアミド／メルカプトプロパンアミド）（（ＭｅＯ－または）Ｎ３－ＰＥＧ５Ｋ－ＰＬＬ８０（Ｎｉｃ３１／ＳＨ１１））を、ＥＤＣ／ＮＨＳの存在下、ニコチン酸（ＮＡ）及び３，３’－ジチオジプロピオン酸（ＤＴＤＰＡ）からのＰＥＧ５Ｋ－ＰＬＬ８０－ＮＨ２の化学修飾により合成した。
ＰＥＧ５Ｋ－ＰＬＬ８０－ＮＨ２（２００．０ｍｇ）、ＮＡ（４４．２ｍｇ、３３当量）、ＤＴＤＰＡ（１５．７ｍｇ、７当量）、ＥＤＣ（９９．８ｍｇ、４８当量）、ＮＨＳ（５９．９ｍｇ、４８当量）、及びトリエチルアミン（ＴＥＡ、６０．０μＬ、４０当量）を２０ｍＬのジメチルスルホキシドに別々に溶解した。反応混合物を撹拌しながら３７℃で１６時間維持した。反応終了後、粗生成物を脱イオン水に対して２時間透析し（ＭＷＣＯ＝７，０００～８，０００）、１，４－ジチオトリトール（ＤＴＴ、３４．６ｍｇ、２１当量）を膜に直接加えて、ポリマー側鎖のジスルフィド結合を切断した。膜を３０分間インキュベートし、脱イオン水に対して２時間透析し、脱イオン水に対して２４時間透析した。溶液をシリンジフィルター（０．４５μｍ）で濾過し、２日間凍結乾燥した。ＰＥＧ５Ｋ－ＰＬＬ８０（Ｎｉｃ３１／ＳＨ１１）の模式図を図２Ｈに示す。
（ｊ）（メトキシまたは）アジドポリ（エチレングリコール）－ｂ－ポリ（Ｌ－リシン／ニコチンアミド／メルカプトプロパンアミド）（ＰＥＧ５Ｋ－ＰＬＬ８０（Ｎｉｃ３０／ＳＨ１５））（化合物Ｉ）の合成：ミセルの安定性を高めるために、ニコチンアミド及びチオール末端基をアジュバント部分としてポリマー主鎖に導入した。最初に、（メトキシまたは）アジド－ポリ（エチレングリコール）－ｂ－ポリ（Ｌ－リシン／ニコチンアミド／メルカプトプロパンアミド）（（ＭｅＯ－または）Ｎ３－ＰＥＧ５Ｋ－ＰＬＬ８０（Ｎｉｃ３１／ＳＨ１５））を、ＥＤＣ／ＮＨＳの存在下、ニコチン酸（ＮＡ）及び３，３’－ジチオジプロピオン酸（ＤＴＤＰＡ）からのＰＥＧ５Ｋ－ＰＬＬ８０－ＮＨ２の化学修飾により合成した。
ＰＥＧ５Ｋ－ＰＬＬ８０－ＮＨ２（２００．０ｍｇ）、ＮＡ（４４．２ｍｇ、３３当量）、ＤＴＤＰＡ（２３．６ｍｇ、１０当量）、ＥＤＣ（１０８．４ｍｇ、５２当量）、ＮＨＳ（６５．１ｍｇ、５２当量）、及びトリエチルアミン（ＴＥＡ、６０．０μＬ、４０当量）を２０ｍＬのジメチルスルホキシドに別々に溶解した。反応混合物を撹拌しながら３７℃で１６時間維持した。反応終了後、粗生成物を脱イオン水に対して２時間透析し（ＭＷＣＯ＝７，０００～８，０００）、１，４－ジチオトリトール（ＤＴＴ、５１．９ｍｇ、３１当量）を膜に直接加えて、ポリマー側鎖のジスルフィド結合を切断した。膜を３０分間インキュベートし、脱イオン水に対して２時間透析し、脱イオン水に対して２４時間透析した。溶液をシリンジフィルター（０．４５μｍ）で濾過し、２日間凍結乾燥した。ＰＥＧ５Ｋ－ＰＬＬ８０（Ｎｉｃ３０／ＳＨ１５）の模式図を図２Ｉに示す。
（ｋ）フェニルアラニン－ポリ（エチレングリコール）－ｂ－ポリ（Ｌ－リシン／ニコチンアミド／メルカプトプロパンアミド）（Ｐｈｅ－ＰＥＧ－ＰＬＬ（Ｎｉｃ／ＳＨ））の合成：血流によって脳内皮組織を標的化するため、フェニルアラニン（ＬＡＴ１標的化アミノ酸）を、銅触媒の存在下でＮ３－ＰＥＧ－ＰＬＬ（Ｎｉｃ／ｓｓ）とアルキン修飾したチロシンとのクリック反応により導入した。
要約すると、Ｎ３－ＰＥＧ－ＰＬＬ（Ｎｉｃ／ｓｓ）（３０ｍｇ，３．２μｍｏｌ）及びアルキン修飾されたフェニルアラニン（１．３１ｍｇ，６．４μｍｏｌ）を脱イオン水に溶解した。次いで、ＣｕＳＯ４・Ｈ２Ｏ（０．１７２ｍｇ，０．６９μｍｏｌ）とアスコルビン酸（０．３ｍｇ，１．７μｍｏｌ）を混合溶液に加えた。反応混合物を、１６時間、撹拌しながら室温に維持した。反応後、混合物を透析膜（ＭＷＣＯ＝７，０００）に移し、脱イオン水に対して１日間透析した。最終生成物を凍結乾燥後に得た。
実施例２
ポリイオン複合体（ＰＩＣ）ミセルの調製
本開示のカチオン性キャリアユニットを実施例１に記載したように作製した後、ミセルを作製した。本実施例に記載されるミセルは、アンチセンスオリゴヌクレオチドペイロードと組み合わされたカチオン性キャリアユニットからなるものである。
ＭｅＯ－またはＰｈｅ－ＰＥＧ－ＰＬＬ（Ｎｉｃ）（例えば、化合物Ｄ）とｍｉＲＮＡ（例えば、配列番号１８）を混合することによりナノサイズのＰＩＣミセルを調製した。ＰＥＧ－ＰＬＬ（Ｎｉｃ）を、０．５ｍｇ／ｍＬでＨＥＰＥＳ緩衝液（１０ｍＭ）に溶解した。次いで、ＲＮアーゼ非含有水中のｍｉＲＮＡ溶液（２２．５μＭ）を、１：１のＮ／Ｐ比（正電荷／負電荷）のポリマーとｍｉＲＮＡの比でポリマー溶液と混合した。
ポリマーとアンチｍｉＲＮＡとの混合比は、ミセル形成条件、すなわち、ポリマー中のアミン（本開示のキャリア）とアンチｍｉＲＮＡ中のリン酸（ペイロード）との比を最適化することにより決定した。ポリマー（キャリア）とアンチｍｉＲＮＡ（ペイロード）との混合物を、マルチボルテックスにより３０００ｒｐｍで９０秒間激しく混合し、室温で３０分間維持して、ミセルを安定化した。
粒径分布及び散乱光強度（ＳＬＩ）をＺｅｔａ－ｓｉｚｅｒにより６３４ｎｍの波長で測定した。アンチｍｉＲＮＡをロードしたミセルは、低いＰＤＩ分布を有する６０ｎｍ未満の粒径を有し、複合体が均一な粒子であることを示した。分布のピークは３２ｎｍであった。
使用に先立ち、ミセル（１０μＭのアンチｍｉＲ４８５－３ｐ阻害剤（配列番号１８）濃度）を４℃で保存した。ＭｅＯ－ミセルまたはＰｈｅ－ミセルを同じ方法を用いて調製し、ミセル調製時に両方のポリマーを混合することにより異なる量のＰｈｅ（２５％～７５％）を含有するミセルも調製した。
実施例３
ポリイオンコンプレックス（ＰＩＣ）ミセルの調製
ＡＳＯペイロード
本開示のカチオン性キャリアユニットを実施例１に記載したように作製した後、ミセルを作製した。本実施例に記載されるミセルは、ＡＳＯペイロードと組み合わされたカチオン性キャリアユニットを含んでいた。
（ａ）ＭｅＯ－またはＰｈｅ－ＰＥＧ５Ｋ－ＰＬＬ（ＮＨ３ ＋／Ｃｌ－）５８（化合物Ａ）によるＮ対Ｐ比の最適化：ＭｅＯ－またはＰｈｅ－ＰＥＧ５Ｋ－ＰＬＬ（ＮＨ３ ＋／Ｃｌ－）５８とＡＳＯを混合することによりナノサイズのＰＩＣミセルを調製した。ＰＥＧ５Ｋ－ＰＬＬ（ＮＨ３ ＋／Ｃｌ－）５８を、ＨＥＰＥＳ緩衝液（１０ｍＭ）に２．５ｍｇ／ｍＬ（ストック溶液）で溶解した。適切なＮ対Ｐ比濃度を得るために、ポリマーストック溶液を希釈した。次いで、ＲＮアーゼ非含有水中のＡＳＯ溶液（２２．５μＭ）を、２：１（ｖ／ｖ）のＡＳＯ対ポリマー比でポリマー溶液と混合した。ポリマーとＡＳＯとの混合物を、マルチボルテックスにより３０００ｒｐｍで１分間、激しく混合し、室温で３０分間維持して、ミセルを安定化した。粒径分布及び散乱光強度（ＳＬＩ）をＺｅｔａ－ｓｉｚｅｒにより６３４ｎｍの波長で測定した。図５Ａを参照。
（ｂ）ＭｅＯ－またはＰｈｅ－ＰＥＧ５Ｋ－ＰＬＬ４６（Ｎｉｃ１５）（化合物Ｂ）によるＮ対Ｐ比の最適化：ＭｅＯ－またはＰｈｅ－ＰＥＧ５Ｋ－ＰＬＬ４６（Ｎｉｃ１５）とＡＳＯを混合することによりナノサイズのＰＩＣミセルを調製した。ＰＥＧ５Ｋ－ＰＬＬ４６（Ｎｉｃ１５）を、ＨＥＰＥＳ緩衝液（１０ｍＭ）に２．５ｍｇ／ｍＬ（ストック溶液）で溶解した。適切なＮ対Ｐ比濃度を得るために、ポリマーストック溶液を希釈した。次いで、ＲＮアーゼ非含有水中のＡＳＯ溶液（２２．５μＭ）を、２：１（ｖ／ｖ）のＡＳＯ対ポリマー比でポリマー溶液と混合した。ポリマーとＡＳＯとの混合物を、マルチボルテックスにより３０００ｒｐｍで１分間、激しく混合し、室温で３０分間維持して、ミセルを安定化した。粒径分布及び散乱光強度（ＳＬＩ）をＺｅｔａ－ｓｉｚｅｒにより６３４ｎｍの波長で測定した。図５Ｂを参照。
（ｃ）ＭｅＯ－またはＰｈｅ－ＰＥＧ５Ｋ－ＰＬＬ５８（Ｎｉｃ３０）（化合物Ｃ）によるＮ対Ｐ比の最適化：ＭｅＯ－またはＰｈｅ－ＰＥＧ５Ｋ－ＰＬＬ５８（Ｎｉｃ３０）とＡＳＯを混合することによりナノサイズのＰＩＣミセルを調製した。ＭｅＯ－またはＰｈｅ－ＰＥＧ５Ｋ－ＰＬＬ５８（Ｎｉｃ３０）を、ＨＥＰＥＳ緩衝液（１０ｍＭ）に２．５ｍｇ／ｍＬ（ストック溶液）で溶解した。適切なＮ対Ｐ比濃度を得るために、ポリマーストック溶液を希釈した。次いで、ＲＮアーゼ非含有水中のＡＳＯ溶液（２２．５μＭ）を、２：１（ｖ／ｖ）のＡＳＯ対ポリマー比でポリマー溶液と混合した。ポリマーとＡＳＯとの混合物を、マルチボルテックスにより３０００ｒｐｍで１分間、激しく混合し、室温で３０分間維持して、ミセルを安定化した。粒径分布及び散乱光強度（ＳＬＩ）をＺｅｔａ－ｓｉｚｅｒにより６３４ｎｍの波長で測定した。図５Ｃを参照。
（ｄ）ＡＳＯとＭｅＯ－またはＰｈｅ－ＰＥＧ５Ｋ－ＰＬＬ５８（Ｎｉｃ２３／ＳＨ８）（化合物Ｄ）とで配合されたミセル：ＭｅＯ－またはＰｈｅ－ＰＥＧ５Ｋ－ＰＬＬ５８（Ｎｉｃ２３／ＳＨ８）とＡＳＯを混合することによりナノサイズのＰＩＣミセルを調製した。ＰＥＧ５Ｋ－ＰＬＬ５８（Ｎｉｃ２３／ＳＨ８）を、４００ｍＭのＤＴＴ溶液（１０ｍＭのＨＥＰＥＳ緩衝液中）に２．５ｍｇ／ｍＬ（ストック溶液）で溶解した。適切なＮ対Ｐ比濃度を得るために、１０ｍＭのＨＥＰＥＳバッファーを使用してポリマーストック溶液を希釈した。ポリマー溶液を撹拌しながら３０分間インキュベートした。次いで、ＲＮアーゼ非含有水中のＡＳＯ溶液（２２．５μＭ）を、２：１（ｖ／ｖ）のＡＳＯ対ポリマー比でポリマー溶液と混合した。ポリマーとｓｉＲＮＡとの混合比は、ミセル形成条件の最適化により、すなわち、ポリマー中のアミン（Ｎ）とＡＳＯ中のリン酸（Ｐ）との比を最適化することにより決定した。最適なＮ対Ｐ比は１．４であった。ポリマーとｓｉＲＮＡとの混合物を、マルチボルテックスにより３０００ｒｐｍで１分間、激しく混合し、室温で３０分間維持して、ミセルを安定化した。粒径分布及び散乱光強度（ＳＬＩ）をＺｅｔａ－ｓｉｚｅｒにより６３４ｎｍの波長で測定した。図５Ｄを参照。
（ｅ）ＡＳＯとＭｅＯ－またはＰｈｅ－ＰＥＧ５Ｋ－ＰＬＬ８０（Ｎｉｃ３０／ＳＨ１５）（化合物Ｉ）とで配合されたミセル：ＭｅＯ－またはＰｈｅ－ＰＥＧ５Ｋ－ＰＬＬ８０（Ｎｉｃ３０／ＳＨ１５）とＡＳＯを混合することによりナノサイズのＰＩＣミセルを調製した。ＰＥＧ５Ｋ－ＰＬＬ８０（Ｎｉｃ３０／ＳＨ１５）を、２００ｍＭのＤＴＴ溶液（１０ｍＭのＨＥＰＥＳ緩衝液中）に０．７８ｍｇ／ｍＬで溶解した。ポリマー溶液を撹拌しながら３０分間インキュベートした。次いで、ＲＮアーゼ非含有水中のＡＳＯ溶液（２２．５μＭ）を、２：１（ｖ／ｖ）のＡＳＯ対ポリマー比でポリマー溶液と混合した。ポリマーとｓｉＲＮＡとの混合比は、ミセル形成条件の最適化により、すなわち、ポリマー中のアミン（Ｎ）とＡＳＯ中のリン酸（Ｐ）との比を最適化することにより決定した。最適なＮ対Ｐ比は１．４であった。ポリマーとｓｉＲＮＡとの混合物を、マルチボルテックスにより３０００ｒｐｍで１分間、激しく混合し、室温で３０分間維持して、ミセルを安定化した。粒径分布及び散乱光強度（ＳＬＩ）をＺｅｔａ－ｓｉｚｅｒにより６３４ｎｍの波長で測定した。使用に先立ち、ミセル（１５μＭのＡＳＯ濃度）を４℃で保存した。図５Ｅを参照。
実施例４
ミセルを使用した脳へのｍｉＲ－４８５阻害剤の送達
本明細書に開示されるミセル中でのｍｉＲ－４８５阻害剤の送達をさらに評価するため、単一用量（１００μｇ／マウス；５ｍｇ／ｋｇ）のｍｉＲ－４８５阻害剤含有ミセル（実施例２を参照）を、ＫＯＡＴＥＣＨ（Ｋｏｒｅａ）より購入した野生型雄Ｃｒｌ：ＣＤ１（ＩＣＲ）マウスに（脳室内投与により）投与した後のＳＩＲＴ１、ＰＧＣ－１α、及びＣＤ３６の発現を試験した。ＳＩＲＴ１、ＰＧＣ－１α、及びＣＤ３６の発現がｍｉＲ－４８５阻害剤によって増加するという仮説を立てた。コントロール動物にはｍｉＲ－コントロールを投与した。動物を投与後の異なる時点で屠殺し、ウエスタンブロットを用いて脳の皮質及び海馬領域の両方におけるＳＩＲＴ１、ＰＧＣ－１α、及びＣＤ３６の発現レベルを評価した。
図６、７及び８に示されるように、ｍｉＲ－４８５阻害剤を含有するミセルの単回投与によって、皮質及び海馬の両方でＳＩＲＴ１、ＰＧＣ－１α、及びＣＤ３６の発現が急速に増加した。ＳＩＲＴ１では、発現のピークが投与の約４８時間後に皮質で観察され（コントロール動物における発現に対して約３００％の増加）、投与の約２４時間後に海馬で観察された（コントロールに対して約１５０％の増加）（それぞれ、図６及び７を参照）。ＰＧＣ－１αの発現のピークが、投与の約４８時間後に皮質で（コントロールに対して約１００％の増加）、投与の約２４時間後に海馬でやはり観察された（コントロールに対して約５０％の増加）。同様の結果がＣＤ３６についても観察された（図８を参照）。
実施例５
ポリイオン複合体（ＰＩＣ）ミセルの調製
ｓｉＲＮＡペイロード
本開示のカチオン性キャリアユニットを実施例１に記載したように作製した後、ミセルを作製した。本実施例に記載されるミセルは、ｓｉＲＮＡペイロードと組み合わされたカチオン性キャリアユニットを含んでいた。
ｓｉＲＮＡとＭｅＯ－またはＰｈｅ－ＰＥＧ５Ｋ－ＰＬＬ８０（Ｎｉｃ３１／ＳＨ１１）（化合物Ｈ）とで配合されたミセル：ＭｅＯ－またはＰｈｅ－ＰＥＧ５Ｋ－ＰＬＬ８０（Ｎｉｃ３１／ＳＨ１１）とｓｉＲＮＡを混合することによりナノサイズのＰＩＣミセルを調製した。ＰＥＧ５Ｋ－ＰＬＬ８０（Ｎｉｃ１５／ＳＨ６）を、２００ｍＭのＤＴＴ溶液（１０ｍＭのＨＥＰＥＳ緩衝液中）に１ｍｇ／ｍＬで溶解した。ポリマー溶液を撹拌しながら３０分間インキュベートした。ＲＮアーゼ非含有水中のｓｉＲＮＡ溶液（１５μＭ）を、２：１（ｖ／ｖ）のｓｉＲＮＡ対ポリマー比でポリマー溶液と混合した。ポリマーとｓｉＲＮＡとの混合比は、ミセル形成条件の最適化により、すなわち、ポリマー中のアミン（Ｎ）とｓｉＲＮＡ中のリン酸（Ｐ）との比を最適化することにより決定した。最適なＮ対Ｐ比は１．６であった。ポリマーとｓｉＲＮＡとの混合物を、マルチボルテックスにより３０００ｒｐｍで１分間、激しく混合し、室温で３０分間維持して、ミセルを安定化した。粒径分布及び散乱光強度（ＳＬＩ）をＺｅｔａ－ｓｉｚｅｒにより６３４ｎｍの波長で測定した。使用に先立ち、ミセル（１０μＭのｓｉＲＮＡ濃度）を４℃で保存した。
ｓｉＲＮＡとＰＥＧ５Ｋ－ＰＬＬ８０（Ｎｉｃ３０／ＳＨ１５）（化合物Ｉ）とで配合されたミセル：ＭｅＯ－またはＰｈｅ－ＰＥＧ５Ｋ－ＰＬＬ８０（Ｎｉｃ３０／ＳＨ１５）とｓｉＲＮＡを混合することによりナノサイズのＰＩＣミセルを調製した。ＰＥＧ５Ｋ－ＰＬＬ８０（Ｎｉｃ２２／ＳＨ６）を、２００ｍＭのＤＴＴ溶液（１０ｍＭのＨＥＰＥＳ緩衝液中）に０．８７ｍｇ／ｍＬで溶解した。ポリマー溶液を撹拌しながら３０分間インキュベートした。ＲＮアーゼ非含有水中のｓｉＲＮＡ溶液（１５μＭ）を、２：１（ｖ／ｖ）のｓｉＲＮＡ対ポリマー比でポリマー溶液と混合した。ポリマーとｓｉＲＮＡとの混合比は、ミセル形成条件の最適化により、すなわち、ポリマー中のアミン（Ｎ）とｓｉＲＮＡ中のリン酸（Ｐ）との比を最適化することにより決定した。最適なＮ対Ｐ比は１．０であった。ポリマーとｓｉＲＮＡとの混合物を、マルチボルテックスにより３０００ｒｐｍで１分間、激しく混合し、室温で３０分間維持して、ミセルを安定化した。粒径分布及び散乱光強度（ＳＬＩ）をＺｅｔａ－ｓｉｚｅｒにより６３４ｎｍの波長で測定した。使用に先立ち、ミセル（１０μＭのｓｉＲＮＡ濃度）を４℃で保存した。
実施例６
ポリイオン複合体（ＰＩＣ）ミセルの調製
ｓｉＲＮＡ－コレステロールペイロード
ｓｉＲＮＡ－コレステロールとＰＥＧ５Ｋ－ＰＬＬ８０（Ｎｉｃ１４／ＳＨ６）（化合物Ｅ）とで配合されたミセル：ＭｅＯ－またはＰｈｅ－ＰＥＧ５Ｋ－ＰＬＬ８０（Ｎｉｃ１５／ＳＨ６）とｓｉＲＮＡを混合することによりナノサイズのＰＩＣミセルを調製した。ＰＥＧ５Ｋ－ＰＬＬ８０（Ｎｉｃ１５／ＳＨ６）を、２００ｍＭのＤＴＴ溶液（１０ｍＭのＨＥＰＥＳ緩衝液中）に０．６３ｍｇ／ｍＬで溶解した。次いで、ポリマー溶液を撹拌しながら３０分間インキュベートした。次いで、ＲＮアーゼ非含有水中のｓｉＲＮＡ溶液（１５μＭ）を、２：１（ｖ／ｖ）のｓｉＲＮＡ対ポリマー比でポリマー溶液と混合した。ポリマーとｓｉＲＮＡとの混合比は、ミセル形成条件の最適化により、すなわち、ポリマー中のアミン（Ｎ）とｓｉＲＮＡ中のリン酸（Ｐ）との比を最適化することにより決定した。最適なＮ対Ｐ比は１．６であった。ポリマーとｓｉＲＮＡとの混合物を、マルチボルテックスにより３０００ｒｐｍで１分間、激しく混合し、室温で３０分間維持して、ミセルを安定化した。粒径分布及び散乱光強度（ＳＬＩ）をＺｅｔａ－ｓｉｚｅｒにより６３４ｎｍの波長で測定した。使用に先立ち、ミセル（１０μＭのｓｉＲＮＡ濃度）を４℃で保存した。
ｓｉＲＮＡ－コレステロールとＰＥＧ５Ｋ－ＰＬＬ８０（Ｎｉｃ２２／ＳＨ６）（化合物Ｆ）とで配合されたミセル：ＭｅＯ－またはＰｈｅ－ＰＥＧ５Ｋ－ＰＬＬ８０（Ｎｉｃ２２／ＳＨ６）とｓｉＲＮＡを混合することによりナノサイズのＰＩＣミセルを調製した。ＰＥＧ５Ｋ－ＰＬＬ８０（Ｎｉｃ２２／ＳＨ６）を、２００ｍＭのＤＴＴ溶液（１０ｍＭのＨＥＰＥＳ緩衝液中）に０．７４ｍｇ／ｍＬで溶解した。次いで、ＲＮアーゼ非含有水中のｓｉＲＮＡ溶液（１５μＭ）を、２：１（ｖ／ｖ）のｓｉＲＮＡ対ポリマー比でポリマー溶液と混合した。ポリマーとｓｉＲＮＡとの混合比は、ミセル形成条件の最適化により、すなわち、ポリマー中のアミン（Ｎ）とｓｉＲＮＡ中のリン酸（Ｐ）との比を最適化することにより決定した。最適なＮ対Ｐ比は１．６であった。ポリマーとｓｉＲＮＡとの混合物を、マルチボルテックスにより３０００ｒｐｍで１分間、激しく混合し、室温で３０分間維持して、ミセルを安定化した。粒径分布及び散乱光強度（ＳＬＩ）をＺｅｔａ－ｓｉｚｅｒにより６３４ｎｍの波長で測定した。使用に先立ち、ミセル（１０μＭのｓｉＲＮＡ濃度）を４℃で保存した。
ｓｉＲＮＡ－コレステロールとＰＥＧ５Ｋ－ＰＬＬ８０（Ｎｉｃ２８／ＳＨ７）（化合物Ｇ）とで配合されたミセル：ＭｅＯ－またはＰｈｅ－ＰＥＧ５Ｋ－ＰＬＬ８０（Ｎｉｃ２８／ＳＨ７）とｓｉＲＮＡを混合することによりナノサイズのＰＩＣミセルを調製した。ＰＥＧ５Ｋ－ＰＬＬ８０（Ｎｉｃ２８／ＳＨ７）を、２００ｍＭのＤＴＴ溶液（１０ｍＭのＨＥＰＥＳ緩衝液中）に０．８９ｍｇ／ｍＬで溶解した。次いで、ＲＮアーゼ非含有水中のｓｉＲＮＡ溶液（１５μＭ）を、２：１（ｖ／ｖ）のｓｉＲＮＡ対ポリマー比でポリマー溶液と混合した。ポリマーとｓｉＲＮＡとの混合比は、ミセル形成条件の最適化により、すなわち、ポリマー中のアミン（Ｎ）とｓｉＲＮＡ中のリン酸（Ｐ）との比を最適化することにより決定した。最適なＮ対Ｐ比は１．６であった。ポリマーとｓｉＲＮＡとの混合物を、マルチボルテックスにより３０００ｒｐｍで１分間、激しく混合し、室温で３０分間維持して、ミセルを安定化した。粒径分布及び散乱光強度（ＳＬＩ）をＺｅｔａ－ｓｉｚｅｒにより６３４ｎｍの波長で測定した。使用に先立ち、ミセル（１０μＭのｓｉＲＮＡ濃度）を４℃で保存した。
ｓｉＲＮＡ－コレステロールとＰＥＧ５Ｋ－ＰＬＬ８０（Ｎｉｃ３１／ＳＨ１０）（化合物Ｈ）とで配合されたミセル：ＭｅＯ－またはＰｈｅ－ＰＥＧ５Ｋ－ＰＬＬ８０（Ｎｉｃ３１／ＳＨ１０）とｓｉＲＮＡを混合することによりナノサイズのＰＩＣミセルを調製した。ＰＥＧ５Ｋ－ＰＬＬ８０（Ｎｉｃ３１／ＳＨ１０）を、２００ｍＭのＤＴＴ溶液（１０ｍＭのＨＥＰＥＳ緩衝液中）に１．０３ｍｇ／ｍＬで溶解した。次いで、ＲＮアーゼ非含有水中のｓｉＲＮＡ溶液（１５μＭ）を、２：１（ｖ／ｖ）のｓｉＲＮＡ対ポリマー比でポリマー溶液と混合した。ポリマーとｓｉＲＮＡとの混合比は、ミセル形成条件の最適化により、すなわち、ポリマー中のアミン（Ｎ）とｓｉＲＮＡ中のリン酸（Ｐ）との比を最適化することにより決定した。最適なＮ対Ｐ比は１．６であった。ポリマーとｓｉＲＮＡとの混合物を、マルチボルテックスにより３０００ｒｐｍで１分間、激しく混合し、室温で３０分間維持して、ミセルを安定化した。粒径分布及び散乱光強度（ＳＬＩ）をＺｅｔａ－ｓｉｚｅｒにより６３４ｎｍの波長で測定した。使用に先立ち、ミセル（１０μＭのｓｉＲＮＡ濃度）を４℃で保存した。
実施例７
インビトロ細胞毒性
細胞培養：ＧＬ２６１ Ｒｅｄ－ＦＬｕｃ細胞を、３７℃の加湿５％ＣＯ２インキュベーター内で、１０％ＦＢＳ及び抗生物質（１００μｇｍＬ－１のストレプトマイシン及び１００ＵｍＬ－１のペニシリン、Ｇｉｂｃｏ、ＵＳＡ）を添加したダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ、Ｇｉｂｃｏ、ＵＳＡ）でインキュベートした。
細胞毒性：１０，０００細胞／ウェルの密度の細胞を９６ウェルプレートに播種し、処理前に２４時間増殖させた。細胞をｓｉＬｕｃ含有ミセルで処理し、４８時間増殖させた。細胞生存率を、細胞計数キット－８（ＣＣＫ－８）アッセイを使用して決定した。ＣＣＫ－８溶液（ウェル当たり１０ｕｌ）を細胞に添加し、１時間インキュベートした。マイクロプレートリーダー（ＥＬＩＳＡ）を使用して４５０ｎｍの波長の吸光度を測定した。
結果：ＧＬ２６１ Ｒｅｄ－Ｆｌｕｃ細胞及び細胞生存率アッセイを使用してｓｉＲＮＡをロードしたミセルの細胞毒性を評価した。細胞を９６プレートに播種した後、ｓｉＲＮＡをロードしたミセルを異なる濃度で（１０ｎＭ～１０００ｎＭのｓｉＲＮＡ濃度）をプレートに加えた。コントロール群として、ＰＢＳまたはＨ２Ｏ２も細胞に別々に添加した。その結果、Ｈ２Ｏ２処理群では低い細胞生存率が示されたが、ミセル処理群では、ミセル濃度が高くても細胞死は観察されなかった。この結果は、ｓｉＲＮＡをロードしたミセルが１０ｎＭ～１０００ｎＭの範囲のｓｉＲＮＡ濃度で細胞毒性を示さなかったことを示すものである。図１９を参照。
実施例８
インビトロｍＲＮＡノックダウンルシフェラーゼ（ＫＤ－Ｌｕｃ）アッセイ
細胞培養：細胞培養：ＧＬ２６１ Ｒｅｄ－ＦＬｕｃ細胞を、３７℃の加湿５％ＣＯ２インキュベーター内で、１０％ＦＢＳ及び抗生物質（１００μｇｍＬ－１のストレプトマイシン及び１００ＵｍＬ－１のペニシリン、Ｇｉｂｃｏ、ＵＳＡ）を添加したダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ、Ｇｉｂｃｏ、ＵＳＡ）でインキュベートした。
インビトロでの生物発光イメージング（ＢＬＩ）：ルシフェラーゼ活性を測定するため、ＧＬ２６１＿Ｌｕｃ細胞（１×１０４／ウェル）を９６ウェルプレートに播種した。細胞を、異なる濃度のミセル含有ｓｉＬｕｃで処理した。４８時間のインキュベーション後、細胞をＰＢＳで３回洗浄した。Ｄ－ルシフェリンを培地に添加して最終濃度を１５μｇ／ｍｌとした。５分間のインキュベーション後、ＩＶＩＳ（登録商標）Ｌｕｍｉｎａ ＬＴ Ｓｅｒｉｅｓ ＩＩＩ（Ｃａｌｉｐｅｒ）イメージャーを使用して発光画像の光子数を取得した。Ｌｉｖｉｎｇ Ｉｍａｇｅソフトウェア（バージョン２．６）を使用してデータを分析した。
結果：ルシフェラーゼアッセイを用いて、ｓｉＲＮＡをロードしたミセルのインビトロでのｍＲＮＡノックダウンを評価した。細胞を９６ウェルプレートに播種し、ｓｉＲＮＡをロードしたミセルを異なる濃度で各ウェルに加えた。５分間のインキュベーション後、細胞の発光強度をＩＶＩＳ（登録商標）で測定した。細胞の発光強度は、使用したｓｉＲＮＡをロードしたミセルの濃度が高くなるにつれて減少した。図２０Ａ～２０Ｂを参照。
＊＊＊
特許請求の範囲を解釈するうえで、「発明の概要」及び「要約」のセクションではなく、「発明の詳細な説明」のセクションを用いることが意図されている点は認識されるべきである。発明の概要及び要約セクションは、本発明者（複数可）により意図される１つ以上であるが、すべてではない本開示の例示的態様を示し得、したがって、本開示及び添付の特許請求の範囲を如何様にも限定することを意図しない。
本開示は、特定の機能及びそれらの関係の実施を示す機能的構成単位を用いて上記された。これらの機能的要素の境界は、説明の便宜上、本明細書では任意に定義されている。特定の機能及びそれらの関係性が適切に実施されている限り、代替的な境界を定義することもできる。
具体的な実施形態の上記の具体的な説明は本開示の一般的な性質を余すところなく示しているため、他者は、当業者の技能の範囲内の知識を適用することで、不要な実験を行うことなく、本開示の一般的概念から逸脱せずに、かかる具体的な実施形態を容易に改変し、かつ／またはさまざまな用途に適合させることができる。したがって、そのような適合及び改変は、本明細書に示される教示及び助言に基づき、開示される実施形態の均等物の意味及び範囲内に包含されるものとする。本明細書における語句または用語は、説明を目的としたものであって、限定を目的とするものではなく、本明細書における語句または用語は本明細書の教示及び助言を考慮することで当業者によって理解されるはずである。
本開示の幅及び範囲は、上記に記載した例示的な実施形態のいずれによっても限定されるべきでなく、下記の請求項及びそれらの均等物のみにしたがって定義されるべきものである。

Claims (109)

  1. 次の図式：
    ［ＣＣ］－Ｌ１－［ＣＭ］－Ｌ２－［ＨＭ］（図式Ｉ）、
    ［ＣＣ］－Ｌ１－［ＨＭ］－Ｌ２－［ＣＭ］（図式ＩＩ）、
    ［ＨＭ］－Ｌ１－［ＣＭ］－Ｌ２－［ＣＣ］（図式ＩＩＩ）、
    ［ＨＭ］－Ｌ１－［ＣＣ］－Ｌ２－［ＣＭ］（図式ＩＶ）、
    ［ＣＭ］－Ｌ１－［ＣＣ］－Ｌ２－［ＨＭ］（図式Ｖ）、または
    ［ＣＭ］－Ｌ１－［ＨＭ］－Ｌ２－［ＣＣ］（図式ＶＩ）、
    （式中、
    ＣＣは、正に荷電したキャリア部分であり、
    ＣＭは、架橋部分であり、
    ＨＭは、疎水性部分であり、
    Ｌ１及びＬ２は、独立して任意選択のリンカーである）を含むカチオン性キャリアユニットであって、
    ＨＭの数が、［ＣＣ］及び［ＣＭ］に対して約５０％未満である、前記カチオン性キャリアユニット。
  2. ＨＭの数が、［ＣＣ］及び［ＣＭ］に対して約４５％、約４０％、約３５％、約３０％、約２５％、約２０％、約１５％、約１０％、約９％、約８％、約７％、約６％、約５％、約４％、約３％、約２％、または約１％未満である、請求項１に記載のカチオン性キャリアユニット。
  3. ＨＭの数が、［ＣＣ］及び［ＣＭ］に対して約５０％～約１％、約５０％～約５％、約５０％～約１０％、約５０％～約１５％、約５０％～約２０％、約５０％～約２５％、約５０％～約３０％、約５０％～約３５％、約５０％～約４０％、約５０％～約４５％、約４５％～約１％、約４５％～約５％、約４５％～約１０％、約４５％～約１５％、約４５％～約２０％、約４５％～約２５％、約４５％～約３０％、約４５％～約３５％、約４５％～約４０％、約４０％～１％、約５０％～約５％、約４０％～約１０％、約４０％～約１５％、約４０％～約２０％、約４０％～約２５％、約４０％～約３０％、約４０％～約３５％、約３５％～約１％、約３５％～約５％、約３５％～約１０％、約３５％～約１５％、約３５％～約２０％、約３５％～約２５％、約３５％～約３０％、約３０％～約１％、約３０％～約５％、約３０％～約１０％、約３０％～約１５％、約３０～約２０％、約３０％～約２５％、約２５％～約１％、約２５％～約５％、約２５％～約１０％、約２５％～約１５％、約２５％～約２０％、約２０％～約１％、約２０％～約５％、約２０％～約１０％、約２０％～約１５％、約１５％～約１％、約１５％～約５％、約１５％～約１０％、約１０％～約１％、約１０％～約５％、または約５％～約１％である、請求項１に記載のカチオン性キャリアユニット。
  4. ＨＭの数が、約５０％～約４０％、約４０％～約３０％、約３０％～約２０％、約２０％～約１０％、約１０％～約５％、及び約５％～約１％である、請求項１に記載のカチオン性キャリアユニット。
  5. ＨＭの数が、約５０％、約４５％、約４０％、約３５％、約３０％、約２５％、約２０％、約１５％、約１０％、約５％、または約１％である、請求項１に記載のカチオン性キャリアユニット。
  6. アニオン性ペイロードと相互作用することができる、請求項１～５のいずれか１項に記載のカチオン性キャリアユニット。
  7. 前記アニオン性ペイロードが、２００ヌクレオチド未満の長さを有するヌクレオチド配列を含む、請求項６に記載のカチオン性キャリアユニット。
  8. 前記アニオン性ペイロードが、約１５０、約１４０、約１３０、約１２０、約１１０、約１００、約９０、約８０、約７０、約６０、約５０、約４０、約３０、約２５、約２４、約２３、約２２、約２１、約２０、約１９、約１８、約１７、約１６、約１５、約１４、約１３、約１２、約１１、または約１０ヌクレオチド未満の長さを有するヌクレオチド配列を含む、請求項６に記載のカチオン性キャリアユニット。
  9. 前記アニオン性ペイロードが、約３０～約１０、約２５～約１１、約３０～約１５、約２５～約１５、約２４～約１５、または約２３～約１５ヌクレオチドの長さを有するヌクレオチド配列を含む、請求項６に記載のカチオン性キャリアユニット。
  10. 前記アニオン性ペイロードが、約３０、約２９、約２８、約２７、約２６、約２５、約２４、約２３、約２２、約２１、約２０、約１９、約１８、約１７、約１６、約１５、約１４、または約１３ヌクレオチドの長さを有するヌクレオチド配列を含む、請求項６に記載のカチオン性キャリアユニット。
  11. 前記アニオン性ペイロードが、約２２ヌクレオチドの長さを有するヌクレオチド配列を含む、請求項６に記載のカチオン性キャリアユニット。
  12. 前記アニオン性ペイロードが、ｍＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡスポンジ、タフデコイｍｉＲＮＡ、ａｎｔｉｍｉｒ、低分子ＲＮＡ、ｒＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｇＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ｐＤＮＡ、ＰＮＡ、ＢＮＡ、アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）、アプタマー、環状ジヌクレオチド、またはそれらの任意の組み合わせを含む、請求項６～１１に記載のカチオン性キャリアユニット。
  13. 水溶性ポリマー（ＷＰ）をさらに含む、請求項１～１２のいずれか１項に記載のカチオン性キャリアユニット。
  14. 前記水溶性ポリマーが、［ＣＣ］、［ＨＭ］、または［ＣＭ］に結合されている、請求項１３に記載のカチオン性キャリアユニット。
  15. 前記水溶性ポリマーが、［ＣＣ］、［ＨＭ］、または［ＣＭ］のＮ末端に結合されている、請求項１３または１４に記載のカチオン性キャリアユニット。
  16. 前記水溶性ポリマーが、［ＣＣ］、［ＨＭ］、または［ＣＭ］のＣ末端に結合されている、請求項１３または１４に記載のカチオン性キャリアユニット。
  17. ［ＷＰ］－Ｌ３－［ＣＣ］－Ｌ１－［ＣＭ］－Ｌ２－［ＨＭ］（図式Ｉ’）、
    ［ＷＰ］－Ｌ３－［ＣＣ］－Ｌ１－［ＨＭ］－Ｌ２－［ＣＭ］（図式ＩＩ’）、
    ［ＷＰ］－Ｌ３－［ＨＭ］－Ｌ１－［ＣＭ］－Ｌ２－［ＣＣ］（図式ＩＩＩ’）、
    ［ＷＰ］－Ｌ３－［ＨＭ］－Ｌ１－［ＣＣ］－Ｌ２－［ＣＭ］（図式ＩＶ’）、
    ［ＷＰ］－Ｌ３－［ＣＭ］－Ｌ１－［ＣＣ］－Ｌ２－［ＨＭ］（図式Ｖ’）、または
    ［ＷＰ］－Ｌ３－［ＣＭ］－Ｌ１－［ＨＭ］－Ｌ２－［ＣＣ］（図式ＶＩ’）を含む、請求項１３～１５のいずれか１項に記載のカチオン性キャリアユニット。
  18. 前記水溶性ポリマーが、ポリ（アルキレングリコール）、ポリ（オキシエチル化ポリオール）、ポリ（オレフィンアルコール）、ポリ（ビニルピロリドン）、ポリ（ヒドロキシアルキルメタクリルアミド）、ポリ（ヒドロキシアルキルメタクリレート）、ポリ（サッカライド）、ポリ（α－ヒドロキシ酸）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリグリセロール、ポリホスファゼン、ポリオキサゾリン（「ＰＯＺ」）、ポリ（Ｎ－アクリロイルモルホリン）、またはそれらの任意の組み合わせを含む、請求項１３～１７のいずれか１項に記載のカチオン性キャリアユニット。
  19. 前記水溶性ポリマーが、ポリエチレングリコール（「ＰＥＧ」）、ポリグリセロール、またはポリ（プロピレングリコール）（「ＰＰＧ」）を含む、請求項１３～１７のいずれか１項に記載のカチオン性キャリアユニット。
  20. 前記水溶性ポリマーが、下式：
    （式中、ｎは、１～１０００である）を含む、請求項１３～１９のいずれか１項に記載のカチオン性キャリアユニット。
  21. 前記ｎが、少なくとも約１１０、少なくとも約１１１、少なくとも約１１２、少なくとも約１１３、少なくとも約１１４、少なくとも約１１５、少なくとも約１１６、少なくとも約１１７、少なくとも約１１８、少なくとも約１１９、少なくとも約１２０、少なくとも約１２１、少なくとも約１２２、少なくとも約１２３、少なくとも約１２４、少なくとも約１２５、少なくとも約１２６、少なくとも約１２７、少なくとも約１２８、少なくとも約１２９、少なくとも約１３０、少なくとも約１３１、少なくとも約１３２、少なくとも約１３３、少なくとも約１３４、少なくとも約１３５、少なくとも約１３６、少なくとも約１３７、少なくとも約１３８、少なくとも約１３９、少なくとも約１４０、または少なくとも約１４１である、請求項２０に記載のカチオン性キャリアユニット。
  22. 前記ｎが、約８０～約９０、約９０～約１００、約１００～約１１０、約１１０～約１２０、約１２０～約１３０、約１４０～約１５０、または約１５０～約１６０である、請求項２０に記載のカチオン性キャリアユニット。
  23. 前記水溶性ポリマーが、直鎖状、分枝鎖状、または樹枝状である、請求項１３～２２のいずれか１項に記載のカチオン性キャリアユニット。
  24. 前記カチオン性キャリア部分が、１つ以上の塩基性アミノ酸を含む、請求項１～２３のいずれか１項に記載のカチオン性キャリアユニット。
  25. 前記カチオン性キャリア部分が、少なくとも約３個、少なくとも約４個、少なくとも約５個、少なくとも約６個、少なくとも約７個、少なくとも約８個、少なくとも約９個、少なくとも約１０個、少なくとも約１１個、少なくとも約１２個、少なくとも約１３個、少なくとも約１４個、少なくとも約１５個、少なくとも約１６個、少なくとも約１７個、少なくとも約１８個、少なくとも約１９個、少なくとも約２０個、少なくとも約２１個、少なくとも約２２個、少なくとも約２３個、少なくとも約２４個、少なくとも約２５個、少なくとも約２６個、少なくとも約２７個、少なくとも約２８個、少なくとも約２９個、少なくとも約３０個、少なくとも約３１個、少なくとも約３２個、少なくとも約３３個、少なくとも約３４個、少なくとも約３５個、少なくとも約３６個、少なくとも約３７個、少なくとも約３８個、少なくとも約３９個、少なくとも約４０個、少なくとも約４１個、少なくとも約４２個、少なくとも約４３個、少なくとも約４４個、少なくとも約４５個、少なくとも約４６個、少なくとも約４７個、少なくとも約４８個、少なくとも約４９個、少なくとも約５０個、少なくとも約５１個、少なくとも約５２個、少なくとも約５３個、少なくとも約５４個、少なくとも約５５個、少なくとも約５６個、少なくとも約５７個、少なくとも約５８個、少なくとも約５９個、少なくとも約６０個、少なくとも約６１個、少なくとも約６２個、少なくとも約６３個、少なくとも約６４個、少なくとも約６５個、少なくとも約６６個、少なくとも約６７個、少なくとも約６８個、少なくとも約６９個、少なくとも約７０個、少なくとも約７１個、少なくとも約７２個、少なくとも約７３個、少なくとも約７４個、少なくとも約７５個、少なくとも約７６個、少なくとも約７７個、少なくとも約７８個、少なくとも約７９個、または少なくとも約８０個の塩基性アミノ酸を含む、請求項２４に記載のカチオン性キャリアユニット。
  26. 前記カチオン性キャリア部分が、少なくとも２０個、少なくとも約３０個、少なくとも約４０個、少なくとも約５０個、少なくとも６０個、少なくとも約７０個、少なくとも約８０個、少なくとも約９０個、少なくとも約１００個、少なくとも約１１０個、少なくとも約１２０個、少なくとも約１３０個、少なくとも約１４０個、または少なくとも約１５０個の塩基性アミノ酸を含む、請求項２４に記載のカチオン性キャリアユニット。
  27. 前記カチオン性キャリア部分が、約１０個～約６０個、約１５個～約６０個、約２０個～約６０個、約２５個～約６０個、約３０個～約６０個、約３５個～約６０個、約４０個～約６０個、約１０個～約５５個、約１５個～約５５個、約２０個～約５５個、約２５個～約５５個、約３０個～約５５個、約３５個～約５５個、約４０個～約５５個、約１０個～約５０個、約１５個～約５０個、約２０個～約５０個、約２５個～約５０個、約３０個～約５０個、約３５個～約５０個、約４０個～約５０個、約１０個～約４５個、約１５個～約４５個、約２０個～約４５個、約２５個～約４５個、約３０個～約４５個、約３５個～約４５個、約４０個～約４５個、約１０個～約４０個、約１５個～約４０個、約２０個～約４０個、約２５個～約４０個、約３０個～約４０個、約３５個～約４０個、約１０個～約３５個、約１５個～約３５個、約２０個～約３５個、約２５個～約３５個、約３０個～約３５個、約３５個～約３５個、約４０個～約３５個、または約４０個～約３５個の塩基性アミノ酸を含む、請求項２４に記載のカチオン性キャリアユニット。
  28. 前記カチオン性キャリア部分が、約１０個、約２０個、約３０個、約４０個、約５０個、または約６０個の塩基性アミノ酸を含む、請求項２４に記載のカチオン性キャリアユニット。
  29. 前記塩基性アミノ酸が、アルギニン、リシン、ヒスチジン、またはそれらの任意の組み合わせを含む、請求項２４～２８のいずれか１項に記載のカチオン性キャリアユニット。
  30. 前記カチオン性キャリア部分が、約２０個、約３０個、約４０個、約５０個、または約６０個のリシンを含む、請求項１～２９のいずれか１項に記載のカチオン性キャリアユニット。
  31. 前記カチオン性キャリア部分が、約３２個のリシンを含む、請求項１～２９のいずれか１項に記載のカチオン性キャリアユニット。
  32. 前記架橋部分が、架橋剤で連結された１つ以上のアミノ酸を含む、請求項１～３１のいずれか１項に記載のカチオン性キャリアユニット。
  33. 前記架橋剤が、チオール基、チオール誘導体、またはそれらの任意の組み合わせを含む、請求項３２に記載のカチオン性キャリアユニット。
  34. 前記架橋剤が、チオール基を含む、請求項３２に記載のカチオン性キャリアユニット。
  35. 前記架橋部分の前記アミノ酸が、少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個、少なくとも６個、少なくとも７個、少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個、少なくとも２０個、少なくとも２１個、少なくとも２２個、少なくとも２３個、少なくとも２４個、少なくとも２５個、少なくとも２６個、少なくとも２７個、少なくとも２８個、少なくとも２９個、少なくとも３０個、少なくとも３１個、少なくとも３２個、少なくとも３３個、少なくとも３４個、少なくとも３５個、少なくとも３６個、少なくとも３７個、少なくとも３８個、少なくとも３９個、または少なくとも４０個の塩基性アミノ酸を含む、請求項３２～３４に記載のカチオン性キャリアユニット。
  36. 前記架橋部分の前記アミノ酸が、約１個～約４０個、約５個～約４０個、約１０個～約４０個、約１５個～約４０個、約２０個～約４０個、約１個～約３５個、約５個～約３５個、約１０個～約３５個、約１５個～約３５個、約２０個～約３５個、約１個～約３０個、約５個～約３０個、約１０個～約３０個、約１５個～約３０個、約２０個～約３０個、約１個～約２５個、約５個～約２５個、約１０個～約２５個、約１５個～約２５個、約２０個～約２５個、約１個～約２０個、約５個～約２０個、約１０個～約２０個、約１５個～約２０個、約１個～約１５個、約５個～約１５個、約１０個～約１５個、約１個～約１０個、約５個～約１０個、または約１個～約５個の塩基性アミノ酸を含む、請求項３２～３５のいずれか１項に記載のカチオン性キャリアユニット。
  37. 前記架橋部分の前記アミノ酸が、約５個、約６個、約７個、約８個、約９個、約１０個、約１１個、約１２個、約１３個、約１４個、約１５個、約１６個、約１７個、約１８個、約１９個、約２０個、約２１個、約２２個、約２３個、約２４個、約２５個、約２６個、約２７個、約２８個、約２９個、または約３０個の塩基性アミノ酸を含む、請求項３２～３６に記載のカチオン性キャリアユニット。
  38. 前記架橋部分の前記塩基性アミノ酸が、アルギニン、リシン、ヒスチジン、またはそれらの任意の組み合わせを含む、請求項３２～３７のいずれか１項に記載のカチオン性キャリアユニット。
  39. 前記架橋部分の前記塩基性アミノ酸が、約５個、約１０個、約１１個、約１２個、約１３個、約１４個、約１５個、約１６個、約１７個、約１８個、約１９個、約２０個、約２５個、約３０個、または約４０個のリシンを含む、請求項３２～３８のいずれか１項に記載のカチオン性キャリアユニット。
  40. 前記架橋部分の前記塩基性アミノ酸が、約１０個～約２０個のリシンを含む、請求項３２～３９のいずれか１項に記載のカチオン性キャリアユニット。
  41. 前記架橋部分の前記塩基性アミノ酸が、約１６個のリシンを含む、請求項３２～３９のいずれか１項に記載のカチオン性キャリアユニット。
  42. 前記疎水性部分が、免疫反応、炎症反応、及び／または組織微小環境を調節することができる、請求項１～４１のいずれか１項に記載のカチオン性キャリアユニット。
  43. 前記疎水性部分が、免疫反応を調節することができる、請求項４２に記載のカチオン性キャリアユニット。
  44. 前記疎水性部分が、腫瘍を有する対象における腫瘍微小環境を調節することができる、請求項４２に記載のカチオン性キャリアユニット。
  45. 前記疎水性部分が、前記腫瘍微小環境における低酸素状態を阻害または低減することができる、請求項４２に記載のカチオン性キャリアユニット。
  46. 前記疎水性部分が、イミダゾール誘導体、アミノ酸、ビタミン、またはそれらの任意の組み合わせに結合された１つ以上のアミノ酸を含む、請求項４２～４５のいずれか１項に記載のカチオン性キャリアユニット。
  47. 前記疎水性部分が、炎症反応を阻害または低減することができる、請求項４２に記載のカチオン性キャリアユニット。
  48. 前記疎水性部分が、ビタミンに結合された１つ以上のアミノ酸である、請求項４７に記載のカチオン性キャリアユニット。
  49. 前記ビタミンが、環式環または環式ヘテロ原子環及びカルボキシル基またはヒドロキシル基を含む、請求項４８に記載のカチオン性キャリアユニット。
  50. 前記ビタミンが、次式：
    Figure 2024503302000017
     （式中、Ｙ１及びＹ２のそれぞれは、Ｃ、Ｎ、Ｏ、またはＳであり、ｎは１または２である）を含む、請求項４８に記載のカチオン性キャリアユニット。
  51. 前記ビタミンが、ビタミンＡ、ビタミンＢ１、ビタミンＢ２、ビタミンＢ３、ビタミンＢ６、ビタミンＢ７、ビタミンＢ９、ビタミンＢ１２、ビタミンＣ、ビタミンＤ２、ビタミンＤ３、ビタミンＥ、ビタミンＭ、ビタミンＨ、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、請求項４８～５０のいずれか１項に記載のカチオン性キャリアユニット。
  52. 前記ビタミンが、ビタミンＢ３である、請求項５１のいずれか１項に記載のカチオン性キャリアユニット。
  53. 前記疎水性部分が、それぞれがビタミンに結合された少なくとも約２個、少なくとも約３個、少なくとも約４個、少なくとも約５個、少なくとも約６個、少なくとも約７個、少なくとも約８個、少なくとも約９個、少なくとも約１０個、少なくとも約１１個、少なくとも約１２個、少なくとも約１３個、少なくとも約１４個、少なくとも約１５個、少なくとも約１６個、少なくとも約１７個、少なくとも約１８個、少なくとも約１９個、少なくとも約２０個、少なくとも約２１個、少なくとも約２２個、少なくとも約２３個、少なくとも約２４個、少なくとも約２５個、少なくとも約２６個、少なくとも約２７個、少なくとも約２８個、少なくとも約２９個、少なくとも約３０個、少なくとも約３１個、少なくとも約３２個、少なくとも約３３個、少なくとも約３４個、少なくとも約３５個、少なくとも約３６個、少なくとも約３７個、少なくとも約３８個、少なくとも約３９個、少なくとも約４０個、少なくとも約４１個、少なくとも約４２個、少なくとも約４３個、少なくとも約４４個、少なくとも約４５個、少なくとも約４６個、少なくとも約４７個、少なくとも約４８個、少なくとも約４９個、少なくとも約５０個、少なくとも約５１個、少なくとも約５２個、少なくとも約５３個、少なくとも約５４個、少なくとも約５５個、少なくとも約５６個、少なくとも約５７個、少なくとも約５８個、少なくとも約５９個、少なくとも約６０個、少なくとも約６１個、少なくとも約６２個、少なくとも約６３個、少なくとも約６４個、少なくとも約６５個、少なくとも約６６個、少なくとも約６７個、少なくとも約６８個、少なくとも約６９個、少なくとも約７０個、少なくとも約７１個、少なくとも約７２個、少なくとも約７３個、少なくとも約７４個、少なくとも約７５個、少なくとも約７６個、少なくとも約７７個、少なくとも約７８個、少なくとも約７９個、または少なくとも約８０個のアミノ酸を含む、請求項１～５２のいずれか１項に記載のカチオン性キャリアユニット。
  54. 前記疎水性部分が、それぞれがビタミンに結合された少なくとも２０個、少なくとも３０個、少なくとも４０個、少なくとも５０個、少なくとも６０個、少なくとも約７０個、少なくとも約８０個、少なくとも約９０個、少なくとも約１００個、少なくとも約１１０個、少なくとも約１２０個、少なくとも約１３０個、少なくとも約１４０個、または少なくとも約１５０個のアミノ酸を含む、請求項１～５２のいずれか１項に記載のカチオン性キャリアユニット。
  55. 前記疎水性部分が、それぞれがビタミンに結合された約１０個～約６０個、約１５個～約６０個、約２０個～約６０個、約２５個～約６０個、約３０個～約６０個、約３５個～約６０個、約４０個～約６０個、約１０個～約５５個、約１５個～約５５個、約２０個～約５５個、約２５個～約５５個、約３０個～約５５個、約３５個～約５５個、約４０個～約５５個、約１０個～約５０個、約１５個～約５０個、約２０個～約５０個、約２５個～約５０個、約３０個～約５０個、約３５個～約５０個、約４０個～約５０個、約１０個～約４５個、約１５個～約４５個、約２０個～約４５個、約２５個～約４５個、約３０個～約４５個、約３５個～約４５個、約４０個～約４５個、約１０個～約４０個、約１５個～約４０個、約２０個～約４０個、約２５個～約４０個、約３０個～約４０個、約３５個～約４０個、約１０個～約３５個、約１５個～約３５個、約２０個～約３５個、約２５個～約３５個、約３０個～約３５個、約３５個～約３５個、約４０個～約３５個、または約４０個～約３５個のアミノ酸を含む、請求項１～５２のいずれか１項に記載のカチオン性キャリアユニット。
  56. 前記疎水性部分が、それぞれがビタミンに結合された約１０個、約２０個、約３０個、約４０個、約５０個、または約６０個のアミノ酸を含む、請求項１～５２のいずれか１項に記載のカチオン性キャリアユニット。
  57. 前記疎水性部分が、それぞれがビタミンＢ３に結合された約１０個のビタミンＢ３、約２０個のビタミンＢ３、約３０個のビタミンＢ３、約４０個のビタミンＢ３、または約５０個のアミノ酸を含む、請求項５３～５５のいずれか１項に記載のカチオン性キャリアユニット。
  58. 前記カチオン性キャリア部分が、約２５個～約４０個のリシンを含み、前記架橋部分が約１０個～約２０個のリシン－チオールを含み、前記疎水性部分が約２５個～約４０個のリシン－ビタミンＢ３を含む、請求項１～５７に記載のカチオン性キャリアユニット。
  59. 前記カチオン性キャリア部分が、約３０個～約３５個のリシンを含み、前記架橋部分が約１３個～約２０個のリシン－チオールを含み、前記疎水性部分が約３０個～約３５個のリシン－ビタミンＢ３を含む、請求項１～５８のいずれか１項に記載のカチオン性キャリアユニット。
  60. 前記カチオン性キャリア部分が、約３２個のリシンを含み、前記架橋部分が約１６個のリシン－チオールを含み、前記疎水性部分が約３２個のリシン－ビタミンＢ３を含む、請求項１～５９のいずれか１項に記載のカチオン性キャリアユニット。
  61. 前記カチオン性キャリア部分が、約３５個～約６０個のリシンを含み、前記架橋部分が約５個～約１５個のリシン－チオールを含み、前記疎水性部分が約１５個～約３０個のリシン－ビタミンＢ３を含む、請求項１～５７に記載のカチオン性キャリアユニット。
  62. 前記水溶性バイオポリマー部分が、約１２０個～約１３０個のＰＥＧ単位を含む、請求項１７～６１のいずれか１項に記載のカチオン性キャリアユニット。
  63. 標的化部分（ＴＭ）をさらに含む、請求項１～６２のいずれか１項に記載のカチオン性キャリアユニット。
  64. 前記標的化部分が、組織を標的化することができる、請求項６３に記載のカチオン性キャリアユニット。
  65. 前記組織が、肝臓、脳、腎臓、肺、卵巣、膵臓、甲状腺、乳房、胃、またはそれらの任意の組み合わせである、請求項６４に記載のカチオン性キャリアユニット。
  66. 前記標的化部分が、大型中性アミノ酸輸送体１（ＬＡＴ１）により輸送されることができる、請求項６４に記載のカチオン性キャリアユニット。
  67. 前記標的化部分が、アミノ酸である、請求項６６に記載のカチオン性キャリアユニット。
  68. 前記標的化部分が、分枝鎖または芳香族アミノ酸を含む、請求項６６に記載のカチオン性キャリアユニット。
  69. 前記標的化部分が、フェニルアラニン、バリン、ロイシン、及び／またはイソロイシンである、請求項６７に記載のカチオン性キャリアユニット。
  70. 前記アミノ酸が、フェニルアラニンである、請求項６９に記載のカチオン性キャリアユニット。
  71. 前記標的化部分が前記水溶性ポリマーに連結されている、請求項６３～７０のいずれか１項に記載のカチオン性キャリアユニット。
  72. 前記標的化部分がリンカーによって前記水溶性ポリマーに連結されている、請求項７１に記載のカチオン性キャリアユニット。
  73. 請求項１～７２のいずれか１項に記載のカチオン性キャリアユニットと、アニオン性ペイロードと、を含むミセルであって、前記カチオン性キャリア複合体の前記カチオン性キャリア部分と前記アニオン性ペイロードとが互いに結合している、前記ミセル。
  74. 前記結合が、共有結合である、請求項７３に記載のミセル。
  75. 前記結合が、非共有結合である、請求項７３に記載のミセル。
  76. 前記結合が、イオン結合である、請求項７３に記載のミセル。
  77. 前記カチオン性キャリアユニットの前記カチオン性キャリア部分の正電荷が、溶液中でアニオン性ペイロードと混合される際にミセルを形成するのに十分であり、前記溶液中の前記カチオン性キャリアユニットの前記カチオン性キャリア部分の前記正電荷と前記アニオン性ペイロードの負電荷との全体のイオン比が、約１：３～約３：１である、請求項７３～７６のいずれか１項に記載のミセル。
  78. 前記カチオン性キャリアユニットの前記カチオン性キャリア部分の正電荷が、溶液中でアニオン性ペイロードと混合される際にミセルを形成するのに十分であり、前記溶液中の前記カチオン性キャリアユニットの前記カチオン性キャリア部分の前記正電荷と前記アニオン性ペイロードの負電荷との全体のイオン比が、約１：３、約１：２．５、約１：２、約１：１．５、約１：１、約１：０．５、約０．５：１、約１．５：１、約２：１、約２．５：１、または約３：１である、請求項７７に記載のミセル。
  79. 前記カチオン性キャリアユニットの前記カチオン性キャリア部分の正電荷が、溶液中でアニオン性ペイロードと混合される際にミセルを形成するのに十分であり、前記溶液中の前記カチオン性キャリアユニットの前記カチオン性キャリア部分の前記正電荷と前記アニオン性ペイロードの負電荷との全体のイオン比が、約１：１である、請求項７７に記載のミセル。
  80. 前記カチオン性キャリアユニットが、ＤＮアーゼ及び／またはＲＮアーゼによる分解から前記アニオン性ペイロードを保護することができる、請求項７３～７９のいずれか１項に記載のミセル。
  81. 前記アニオン性ペイロードが、共有結合により前記カチオン性キャリアユニットにコンジュゲートされていない、及び／または前記アニオン性ペイロードが、イオン相互作用によってのみ前記カチオン性キャリアユニットの前記カチオン性キャリア部分と相互作用する、請求項７３～８０のいずれか１項に記載のミセル。
  82. 前記アニオン性ペイロードの半減期が、ミセルに取り込まれていない遊離アニオン性ペイロードの半減期と比較して延長される、請求項７３～８１のいずれか１項に記載のミセル。
  83. 前記ミセルにおける前記カチオン性キャリアユニットの前記カチオン性キャリア部分の正電荷と前記アニオン性ペイロードの負電荷とのイオン比が、約２：１、約１．９：１、約１．８：１、約１．７：１、約１．６：１、約１．５：１、約１．４：１、約１．３：１、約１．２：１、約１：１、約１：１．１、約１：１．２、約１：１．３、約１：１．４、約１：１．５、約１：１．６、約１：１．７、約１：１．８、約１：１．９、または約１：２である、請求項７３に記載のミセル。
  84. 前記ミセルにおける前記カチオン性キャリアユニットの前記カチオン性キャリア部分の正電荷と前記アニオン性ペイロードの負電荷とのイオン比が、約３：１、約２．９：１、約２．８：１、約２．７：１、約２．６：１、約２．５：１、約２．４：１、約２．３：１、約２．２：１、約２．１：１、約１：２．１、約１：２．２、約１：２．３、約１：２．４、約１：２．５、約１：２．６、約１：２．７、約１：２．８、約１：２．９、または約１：３である、請求項７３に記載のミセル。
  85. 前記ミセルの直径が、約１ｎｍ～１００ｎｍ、約１０ｎｍ～約１００ｎｍ、約１０ｎｍ～約９０ｎｍ、約１０ｎｍ～約８０ｎｍ、約１０ｎｍ～約７０ｎｍ、約２０ｎｍ～約１００ｎｍ、約２０ｎｍ～約９０ｎｍ、約２０ｎｍ～約８０ｎｍ、約２０ｎｍ～約７０ｎｍ、約３０ｎｍ～約１００ｎｍ、約３０ｎｍ～約９０ｎｍ、約３０ｎｍ～約８０ｎｍ、約３０ｎｍ～約７０ｎｍ、約４０ｎｍ～約１００ｎｍ、約４０ｎｍ～約９０ｎｍ、約４０ｎｍ～約８０ｎｍ、または約４０ｎｍ～約７０ｎｍである、請求項７３～８４のいずれか１項に記載のミセル。
  86. 前記アニオン性ペイロードが核酸を含む、請求項７３～８５のいずれか１項に記載のミセル。
  87. 前記核酸が、ｍＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡスポンジ、タフデコイｍｉＲＮＡ、ａｎｔｉｍｉｒ、低分子ＲＮＡ、ｒＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｇＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ｐＤＮＡ、ＰＮＡ、ＢＮＡ、アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）、アプタマー、環状ジヌクレオチド、またはそれらの任意の組み合わせを含む、請求項８６に記載のミセル。
  88. 前記核酸が、少なくとも１つのヌクレオシドアナログを含む、請求項８６または８７に記載のミセル。
  89. 前記ヌクレオシドアナログが、ロックド核酸（ＬＮＡ）；２’－０－アルキルＲＮＡ；２’－アミノＤＮＡ；２’－フルオロＤＮＡ；アラビノ核酸（ＡＮＡ）；２’－フルオロＡＮＡ、ヘキシトール核酸（ＨＮＡ）、インターカレーティング核酸（ＩＮＡ）、拘束エチルヌクレオシド（ｃＥｔ）、２’－０－メチル核酸（２’－ＯＭｅ）、２’－０－メトキシエチル核酸（２’－ＭＯＥ）、またはそれらの任意の組み合わせを含む、請求項８８に記載のミセル。
  90. 前記核酸が、５～３０ヌクレオチドの長さを有するヌクレオチド配列を含む、請求項８６～８９のいずれか１項に記載のミセル。
  91. 前記ヌクレオチド配列が、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、または２６ヌクレオチドの長さである、請求項９０に記載のミセル。
  92. 前記ヌクレオチド配列が、ホスホジエステル結合、リン酸トリエステル結合、メチルホスホン酸結合、ホスホロアミダート結合、ホスホロチオエート結合、及びそれらの組み合わせを含む骨格を有する、請求項９０または９１に記載のミセル。
  93. 前記核酸が、配列番号１８（ｍｉＲ－４８５ ３ｐ阻害剤）に記載のヌクレオチド配列を含む、請求項８６に記載のミセル。
  94. 請求項１～７２のいずれか１項に記載のカチオン性キャリアユニットと、アニオン性ペイロードと、を含む組成物。
  95. 請求項１～７２のいずれか１項に記載のカチオン性キャリアユニット、請求項７３～９３のいずれか１項に記載のミセル、請求項９４に記載の組成物、及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物。
  96. 前記カチオン性キャリア部分を、前記架橋部分及び前記疎水性部分と連結することを含む、請求項１～７２のいずれか１項に記載のカチオン性キャリアユニットを調製する方法。
  97. 水溶性ポリマーと標的化部分とをさらに連結する、請求項９６に記載の方法。
  98. 溶液中で前記カチオン性キャリアユニットと前記アニオン性ペイロードとを、１：１のイオン比で混合することを含む、請求項７３～９３のいずれか１項に記載のミセルを調製する方法。
  99. 溶液中で前記カチオン性キャリアユニットと前記アニオン性ペイロードとを、２：１のイオン比で混合することを含む、請求項７３～９３のいずれか１項に記載のミセルを調製する方法。
  100. 溶液中で前記カチオン性キャリアユニットと前記アニオン性ペイロードとを、約１：３～約３：１のイオン比で混合することを含む、請求項７３～９３のいずれか１項に記載のミセルを調製する方法。
  101. 前記ミセルを精製することをさらに含む、請求項１００に記載の方法。
  102. 疾患または状態の治療を必要とする対象の疾患または状態を治療する方法であって、請求項７３～９３のいずれか１項に記載のミセル、または請求項９４のいずれか１項に記載の医薬組成物を前記対象に投与することを含む、前記方法。
  103. 前記ミセルのコア中の前記アニオン性ペイロードが、ミセルに組み込まれていない対応するアニオン性ペイロードよりも長い半減期を示す、請求項１０２に記載の方法。
  104. 前記対象が、哺乳動物である、請求項１０２または１０３に記載の方法。
  105. 神経変性疾患に罹患している対象の炎症を低減する方法であって、治療有効量の請求項７３～９３のいずれか１項に記載のミセルを前記対象に投与することを含む、前記方法。
  106. 神経変性疾患に罹患している対象の神経形成を回復及び／または誘導する方法であって、治療有効量の請求項７３～９３のいずれか１項に記載のミセルを前記対象に投与することを含む、前記方法。
  107. 神経変性疾患に罹患している対象の認知機能を改善する方法であって、治療有効量の請求項７３～９３のいずれか１項に記載のミセルを前記対象に投与することを含む、前記方法。
  108. 前記神経変性疾患が、アルツハイマー病である、請求項１０２～１０７のいずれか１項に記載の方法。
  109. アルツハイマー病に罹患している対象のアミロイドプラーク負荷を低減する方法であって、治療有効量の請求項７３～９３のいずれか１項に記載のミセルを前記対象に投与することを含む、前記方法。
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