JP2024502210A - RNA vaccines against SARS-CoV-2 variants - Google Patents

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チャベス モレノ，ディエゴ
ヴォルフガング グロース，ハンス
ファーレンホルスト，ドミニク
ラウホ，スザンネ
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    • C12N2830/50—Vector systems having a special element relevant for transcription regulating RNA stability, not being an intron, e.g. poly A signal

Abstract

本発明は、コロナウイルス、好ましくは、コロナウイルスSARS-CoV-2の感染、又はこのような感染、好ましくは、COVID-19と関連する障害の処置又は予防における使用に好適な核酸を対象とする。本発明はまた、組成物、ポリペプチド、及びワクチンを対象とする。組成物及びワクチンは、好ましくは、前記核酸配列、好ましくは、脂質ナノ粒子(LNP)と会合した核酸配列のうちの少なくとも1つを含む。本発明はまた、核酸、組成物、ポリペプチド、組み合わせ、ワクチン、並びにキットの第一及び第二の医学的使用、並びにコロナウイルス(coronavirus)感染、好ましくは、コロナウイルス(Coronavirus)感染を処置又は予防する方法を対象とする。【選択図】 図８ＡThe present invention is directed to nucleic acids suitable for use in the treatment or prevention of infection with coronaviruses, preferably coronavirus SARS-CoV-2, or disorders associated with such infections, preferably COVID-19. . The invention is also directed to compositions, polypeptides, and vaccines. Compositions and vaccines preferably comprise at least one of said nucleic acid sequences, preferably associated with lipid nanoparticles (LNPs). The present invention also provides first and second medical uses of the nucleic acids, compositions, polypeptides, combinations, vaccines, and kits for treating or treating coronavirus infections, preferably coronavirus infections. Targeting methods of prevention. [Selection diagram] Figure 8A

Description

本出願は、2020年12月22日に出願された米国仮出願第63/129,395号;2021年2月3日に出願されたPCT出願第PCT/EP2021/052455号;2021年7月14日に出願されたPCT出願第PCT/EP2021/069626号、及び2021年7月14日に出願されたPCT出願第PCT/EP2021/069632号に基づく優先権を主張する。前述の出願のそれぞれが、参照により本明細書に取り込まれる。 This application is filed under U.S. Provisional Application No. 63/129,395, filed on December 22, 2020; PCT Application No. PCT/EP2021/052455, filed on February 3, 2021; Claims priority based on PCT Application No. PCT/EP2021/069626 filed and PCT Application No. PCT/EP2021/069632 filed on July 14, 2021. Each of the aforementioned applications is herein incorporated by reference.

本発明は、とりわけ、限定するものではないが、C.1.2(南アフリカ)、B.1.1.529(オミクロン、南アフリカ)(BA.1_v1、BA.1_v0、B.1.1.529、BA.2、BA.1_v2、BA.1_v3、BA.1_v4、BA.1_v5を含む)、C.36.3(タイ)、B.1.619(カメルーン)、R.1(ケンタッキー、米国)、B.1.1.176(カナダ)、AZ.3、AY.1(インド)、AY.2(インド)、AY.4(インド)、AY.4.2(デルタプラス、インド)、B.1.617.3(インド)、B.1.351(ベータ、南アフリカ)、B.1.1.7(アルファ、英国)、P.1(ガンマ、ブラジル)、B.1.427/B.1.429(イプシロン、カリフォルニア、米国)、B.1.525(エータ、ナイジェリア)、B.1.258(チェコ共和国)、B.1.526(イオタ、ニューヨーク、米国)、A.23.1(ウガンダ)、B.1.617.1(カッパー、インド)、B.1.617.2(デルタ、インド)、P.2(ゼータ、ブラジル)、C37.1(ラムダ、ペルー)、P.3(シータ、フィリピン)、及び/若しくはB.1.621(ミュー、コロンビア)を含むSARS-CoV-2バリアントの感染、又はこのような感染に関連する障害の処置又は予防における使用に適したRNAを対象とする。本発明はまた、組成物、ポリペプチド、及びワクチンに関する。組成物及びワクチンは、前記RNA配列、好ましくは、脂質ナノ粒子(LNP)と会合したRNAの少なくとも1つを好ましくは含む。 The invention particularly relates to, but is not limited to, C.1.2 (South Africa), B.1.1.529 (Omicron, South Africa) (BA.1_v1, BA.1_v0, B.1.1.529, BA.2, BA .1_v2, BA.1_v3, BA.1_v4, BA.1_v5), C.36.3 (Thailand), B.1.619 (Cameroon), R.1 (Kentucky, USA), B.1.1.176 (Canada), AZ.3, AY.1 (India), AY.2 (India), AY.4 (India), AY.4.2 (Delta Plus, India), B.1.617.3 (India), B.1.351 (Beta, South Africa), B.1.1.7 (Alpha, UK), P.1 (Gamma, Brazil), B.1.427/B.1.429 (Epsilon, California, USA), B.1.525 (Eta, Nigeria), B.1.258 (Czech Republic), B.1.526 (Iota, New York, USA), A.23.1 (Uganda), B.1.617.1 (Copper, India), B.1.617.2 (Delta, India), P.2 (Zeta , Brazil), C37.1 (Lambda, Peru), P.3 (Theta, Philippines), and/or B.1.621 (Mu, Colombia); It is directed to RNA suitable for use in the treatment or prevention of related disorders. The invention also relates to compositions, polypeptides, and vaccines. Compositions and vaccines preferably contain at least one of said RNA sequences, preferably RNA associated with lipid nanoparticles (LNPs).

リスト
本発明はまた、RNA、組成物、ワクチン、及びキットの第一及び第二の医学的使用、並びに限定するものではないが、C.1.2(南アフリカ)、B.1.1.529(オミクロン、南アフリカ)(BA.1_v1、BA.1_v0、B.1.1.529、BA.2、BA.1_v2、BA.1_v3、BA.1_v4、BA.1_v5を含む)、C.36.3(タイ)、B.1.619(カメルーン)、R.1(ケンタッキー、米国)、B.1.1.176(カナダ)、AZ.3、AY.1(インド)、AY.2(インド)、AY.4(インド)、AY.4.2(デルタプラス、インド)、B.1.617.3(インド)、B.1.351(ベータ、南アフリカ)、B.1.1.7(アルファ、英国)、P.1(ガンマ、ブラジル)、B.1.427/B.1.429(イプシロン、カリフォルニア、米国)、B.1.525(エータ、ナイジェリア)、B.1.258(チェコ共和国)、B.1.526(イオタ、ニューヨーク、米国)、A.23.1(ウガンダ)、B.1.617.1(カッパー、インド)、B.1.617.2(デルタ、インド)、P.2(ゼータ、ブラジル)、C37.1(ラムダ、ペルー)、P.3(シータ、フィリピン)、及び/又はB.1.621(ミュー、コロンビア)を含むSARS-Cov-2バリアントによって引き起こされるSARS-CoV-2感染を処置又は予防する方法を対象とする。 List The present invention also describes first and second medical uses of RNA, compositions, vaccines and kits, as well as, but not limited to, C.1.2 (South Africa), B.1.1.529 (Omicron, South Africa). ) (including BA.1_v1, BA.1_v0, B.1.1.529, BA.2, BA.1_v2, BA.1_v3, BA.1_v4, BA.1_v5), C.36.3 (Thailand), B.1.619 ( Cameroon), R.1 (Kentucky, USA), B.1.1.176 (Canada), AZ.3, AY.1 (India), AY.2 (India), AY.4 (India), AY.4.2 ( Delta Plus, India), B.1.617.3 (India), B.1.351 (Beta, South Africa), B.1.1.7 (Alpha, UK), P.1 (Gamma, Brazil), B.1.427/B. 1.429 (Epsilon, California, USA), B.1.525 (Eta, Nigeria), B.1.258 (Czech Republic), B.1.526 (Iota, New York, USA), A.23.1 (Uganda), B.1.617.1 ( Copper, India), B.1.617.2 (Delta, India), P.2 (Zeta, Brazil), C37.1 (Lambda, Peru), P.3 (Theta, Philippines), and/or B.1.621( The present invention is directed to methods of treating or preventing SARS-CoV-2 infections caused by SARS-Cov-2 variants including Mu, Colombia).

コロナウイルスは、コロナウイルス科の強い伝染性のエンベロープ型のプラスの一本鎖人畜共通感染性RNAウイルスである。 Coronaviruses are highly contagious enveloped positive single-stranded zoonotic RNA viruses of the Coronaviridae family.

コロナウイルスは、遺伝子が非常に変わりやすく、個々のウイルス種は、種の障壁を乗り越えることによって、いくつかの宿主種に感染する潜在能力を有する。2019年の後期に、新規コロナウイルス株によって引き起こされた呼吸器系疾患の大流行が、中国湖北省武漢市で報告された。新規コロナウイルスは、「重症急性呼吸器症候群コロナウイルス2」(SARS-CoV-2)と命名された。COVID-19疾患とも称される、SARS-CoV-2によって引き起こされるウイルス感染の典型的な症状は、発熱、咳、息切れ、及び肺炎を含み、高齢者集団における高い死亡率を伴う。2020年3月に、WHOは、SARS-CoV-2大流行をパンデミックであると宣言した。さらに、一部の個人は、感染後数週～数カ月の間COVID-19感染の影響に苦しむ。この集団は、「ロングコビット」と称される。時間が経っても残っている一般的な徴候及び症状は、疲労、息切れ又は呼吸困難、咳、関節痛、胸痛、記憶力、集中力又は睡眠の問題、筋痛又は頭痛、速い又は激しい動悸、嗅覚又は味覚の喪失、うつ病又は不安、発熱、起立時の目眩、身体活動又は精神活動後に悪化する症状を含む。 Coronaviruses are genetically highly variable, and individual virus species have the potential to infect several host species by overcoming species barriers. In late 2019, an outbreak of respiratory disease caused by a novel coronavirus strain was reported in Wuhan, Hubei province, China. The novel coronavirus has been named ``Severe Acute Respiratory Syndrome Coronavirus 2'' (SARS-CoV-2). Typical symptoms of the viral infection caused by SARS-CoV-2, also referred to as COVID-19 disease, include fever, cough, shortness of breath, and pneumonia, with a high mortality rate in the elderly population. In March 2020, the WHO declared the SARS-CoV-2 outbreak a pandemic. Additionally, some individuals suffer from the effects of COVID-19 infection for weeks to months after infection. This group is called the "Longcovits". Common signs and symptoms that remain over time include fatigue, shortness of breath or difficulty breathing, cough, joint pain, chest pain, memory, concentration or sleep problems, muscle pain or headaches, rapid or severe heart palpitations, and loss of smell. or loss of taste, depression or anxiety, fever, dizziness on standing up, symptoms that worsen after physical or mental activity.

パンデミックの間、しばしば、オリジナルのSARS-CoV-2株よりも伝染性であるか、又は病原性である、新たなSARS-CoV-2バリアント株が出現していた。このような新たに出現したSARS-CoV-2株は、潜在的には、オリジナルのSARS-CoV-2株に対して開発された第一世代のワクチンの効率の低減を導き得る。さらに、オリジナルのSARS-CoV-2株に対してワクチン接種された対象における、新たに出現したSARS-CoV-2株に対して特異的に設計されたワクチンを用いたブーストワクチン接種が、新たに出現したSARS-CoV-2株に対する防御的免疫応答を導くかどうかは、不明である。 During the pandemic, new SARS-CoV-2 variant strains have often emerged that are more transmissible or pathogenic than the original SARS-CoV-2 strain. Such newly emerging SARS-CoV-2 strains could potentially lead to a reduction in the efficiency of first-generation vaccines developed against the original SARS-CoV-2 strains. Additionally, boost vaccination with vaccines specifically designed against newly emerging SARS-CoV-2 strains in subjects vaccinated against the original SARS-CoV-2 strain It is unclear whether it will lead to a protective immune response against emerging SARS-CoV-2 strains.

したがって、SARS-CoV-2感染、特に、新規に出現したSARS-CoV-2バリアント株によって引き起こされるSARS-CoV-2感染のためのRNAベースのワクチンを提供することが、根本的な本発明の1つの目的である。このような新規に出現した株は、限定するものではないが、C.1.2(南アフリカ)、B.1.1.529(オミクロン、南アフリカ)(BA.1_v1、BA.1_v0、B.1.1.529、BA.2、BA.1_v2、BA.1_v3、BA.1_v4、BA.1_v5を含む)、C.36.3(タイ)、B.1.619(カメルーン)、R.1(ケンタッキー、米国)、B.1.1.176(カナダ)、AZ.3、AY.1(インド)、AY.2(インド)、AY.4(インド)、AY.4.2(デルタプラス、インド)、B.1.617.3(インド)、B.1.351(ベータ、南アフリカ)、B.1.1.7(アルファ、英国)、P.1(ガンマ、ブラジル)、B.1.427/B.1.429(イプシロン、カリフォルニア、米国)、B.1.525(エータ、ナイジェリア)、B.1.258(チェコ共和国)、B.1.526(イオタ、ニューヨーク、米国)、A.23.1(ウガンダ)、B.1.617.1(カッパー、インド)、B.1.617.2(デルタ、インド)、P.2(ゼータ、ブラジル)、C37.1(ラムダ、ペルー)、P.3(シータ、フィリピン)、及び/又はB.1.621(ミュー、コロンビア)を含む。RNAベースのワクチン接種は、新たに出現したSARS-CoV-2ウイルスに対する新たなワクチンの最も有望な技術の1つを表す。RNAを、遺伝子操作し、新たに出現したSARS-CoV-2株に適合させ、ヒト対象に投与することができ、ここで、トランスフェクトされた細胞は、免疫学的応答をもたらす、RNAによってもたらされるコードされた抗原を直接産生する。 Therefore, it is a fundamental aspect of the present invention to provide an RNA-based vaccine for SARS-CoV-2 infections, particularly SARS-CoV-2 infections caused by newly emerging SARS-CoV-2 variant strains. It has one purpose. Such newly emerging strains include, but are not limited to, C.1.2 (South Africa), B.1.1.529 (Omicron, South Africa) (BA.1_v1, BA.1_v0, B.1.1.529, BA .2, BA.1_v2, BA.1_v3, BA.1_v4, BA.1_v5), C.36.3 (Thailand), B.1.619 (Cameroon), R.1 (Kentucky, USA), B.1.1.176 (Canada), AZ.3, AY.1 (India), AY.2 (India), AY.4 (India), AY.4.2 (Delta Plus, India), B.1.617.3 (India), B. 1.351 (Beta, South Africa), B.1.1.7 (Alpha, UK), P.1 (Gamma, Brazil), B.1.427/B.1.429 (Epsilon, California, USA), B.1.525 (Eta, Nigeria) , B.1.258 (Czech Republic), B.1.526 (Iota, New York, USA), A.23.1 (Uganda), B.1.617.1 (Copper, India), B.1.617.2 (Delta, India), P .2 (Zeta, Brazil), C37.1 (Lambda, Peru), P.3 (Theta, Philippines), and/or B.1.621 (Mu, Colombia). RNA-based vaccination represents one of the most promising technologies for new vaccines against the newly emerged SARS-CoV-2 virus. RNA can be genetically engineered and adapted to the newly emerged SARS-CoV-2 strain and administered to human subjects, where the transfected cells produce an immunological response produced by the RNA. directly produces the encoded antigen.

特許請求の範囲及び根本的な説明においてさらに定義される通り、これらの目的は、とりわけ、例えば、限定するものではないが、C.1.2(南アフリカ)、B.1.1.529(オミクロン、南アフリカ)(BA.1_v1、BA.1_v0、B.1.1.529、BA.2、BA.1_v2、BA.1_v3、BA.1_v4、BA.1_v5を含む)、C.36.3(タイ)、B.1.619(カメルーン)、R.1(ケンタッキー、米国)、B.1.1.176(カナダ)、AZ.3、AY.1(インド)、AY.2(インド)、AY.4(インド)、AY.4.2(デルタプラス、インド)、B.1.617.3(インド)、B.1.351(ベータ、南アフリカ)、B.1.1.7(アルファ、英国)、P.1(ガンマ、ブラジル)、B.1.427/B.1.429(イプシロン、カリフォルニア、米国)、B.1.525(エータ、ナイジェリア)、B.1.258(チェコ共和国)、B.1.526(イオタ、ニューヨーク、米国)、A.23.1(ウガンダ)、B.1.617.1(カッパー、インド)、B.1.617.2(デルタ、インド)、P.2(ゼータ、ブラジル)、C37.1(ラムダ、ペルー)、P.3(シータ、フィリピン)、及び/又はB.1.621(ミュー、コロンビア)を含むSARS-Cov-2株から誘導された少なくとも1つの変異を含む、SARS-CoV-2から誘導された少なくとも1つの抗原性ペプチド又はタンパク質をコードする少なくとも1つのコード配列を含むRNAを提供することによって解決される。 As further defined in the claims and the underlying description, these purposes include, but are not limited to, C.1.2 (South Africa), B.1.1.529 (Omicron, South Africa) ( BA.1_v1, BA.1_v0, B.1.1.529, BA.2, BA.1_v2, BA.1_v3, BA.1_v4, BA.1_v5), C.36.3 (Thailand), B.1.619 (Cameroon) , R.1 (Kentucky, USA), B.1.1.176 (Canada), AZ.3, AY.1 (India), AY.2 (India), AY.4 (India), AY.4.2 (Delta Plus) , India), B.1.617.3 (India), B.1.351 (Beta, South Africa), B.1.1.7 (Alpha, UK), P.1 (Gamma, Brazil), B.1.427/B.1.429( Epsilon, California, USA), B.1.525 (Eta, Nigeria), B.1.258 (Czech Republic), B.1.526 (Iota, New York, USA), A.23.1 (Uganda), B.1.617.1 (Copper, India), B.1.617.2 (Delta, India), P.2 (Zeta, Brazil), C37.1 (Lambda, Peru), P.3 (Theta, Philippines), and/or B.1.621 (Mu, an RNA comprising at least one coding sequence encoding at least one antigenic peptide or protein derived from SARS-CoV-2 containing at least one mutation derived from a SARS-Cov-2 strain including Colombia). solved by providing

本発明の好ましい実施形態では、RNA及びRNAベースのワクチンは、例えば、限定するものではないが、C.1.2(南アフリカ)、B.1.1.529(オミクロン、南アフリカ)(BA.1_v1、BA.1_v0、B.1.1.529、BA.2、BA.1_v2、BA.1_v3、BA.1_v4、BA.1_v5を含む)、C.36.3(タイ)、B.1.619(カメルーン)、R.1(ケンタッキー、米国)、B.1.1.176(カナダ)、AZ.3、AY.1(インド)、AY.2(インド)、AY.4(インド)、AY.4.2(デルタプラス、インド)、B.1.617.3(インド)、B.1.351(ベータ、南アフリカ)、B.1.1.7(アルファ、英国)、P.1(ガンマ、ブラジル)、B.1.427/B.1.429(イプシロン、カリフォルニア、米国)、B.1.525(エータ、ナイジェリア)、B.1.258(チェコ共和国)、B.1.526(イオタ、ニューヨーク、米国)、A.23.1(ウガンダ)、B.1.617.1(カッパー、インド)、B.1.617.2(デルタ、インド)、P.2(ゼータ、ブラジル)、C37.1(ラムダ、ペルー)、P.3(シータ、フィリピン)、及び/又はB.1.621(ミュー、コロンビア)を含むSARS-Cov-2株から誘導されたスパイクタンパク質を含む、SARS-CoV-2スパイクタンパク質から誘導された少なくとも1つの抗原性ペプチドをコードするRNAを含む。 In a preferred embodiment of the invention, RNA and RNA-based vaccines include, but are not limited to, C.1.2 (South Africa), B.1.1.529 (Omicron, South Africa) (BA.1_v1, BA.1_v0 , B.1.1.529, BA.2, BA.1_v2, BA.1_v3, BA.1_v4, BA.1_v5), C.36.3 (Thailand), B.1.619 (Cameroon), R.1 (Kentucky, USA), B.1.1.176 (Canada), AZ.3, AY.1 (India), AY.2 (India), AY.4 (India), AY.4.2 (Delta Plus, India), B.1.617 .3 (India), B.1.351 (Beta, South Africa), B.1.1.7 (Alpha, UK), P.1 (Gamma, Brazil), B.1.427/B.1.429 (Epsilon, California, USA), B.1.525 (Eta, Nigeria), B.1.258 (Czech Republic), B.1.526 (Iota, New York, USA), A.23.1 (Uganda), B.1.617.1 (Copper, India), B.1.617. SARS-Cov including 2 (Delta, India), P.2 (Zeta, Brazil), C37.1 (Lambda, Peru), P.3 (Theta, Philippines), and/or B.1.621 (Mu, Colombia) comprises RNA encoding at least one antigenic peptide derived from the SARS-CoV-2 spike protein, including the spike protein derived from the -2 strain.

共にLNP中に製剤化した、mRNAワクチンCV2CoV及びCV2CoV.351を用いてワクチン接種した群について、14日目(図1A～D)及び21日目(図1E～H)の、先祖SARS-CoV-2の受容体結合ドメイン(RBD)及びB.1.351バリアントのRBDに対する有意なIgG1及びIgG2a結合抗体応答を示す。14日目、図1Aは、すべての群(先祖SARS-CoV-2受容体結合ドメイン(RBD)タンパク質コーティング)について同等のIgG1応答を示し、図1Bは、すべてのワクチン接種設計(先祖RBDタンパク質コーティング)について同等のIgG2a力価を示す。14日目、図1Cは、すべてのワクチン接種設計(RBD B.1.351バリアントK417N、E484K、N501Yタンパク質コーティング)について同等のIgG1応答を示し、図1Dは、すべてのワクチン接種設計(RBD B.1.351バリアントK417N、E484K、N501Yタンパク質コーティング)について同等のIgG2a力価を示す。21日目、図1Eは、すべてのワクチン接種設計(先祖SARS-CoV-2受容体結合ドメイン(RBD)タンパク質コーティング)について同等のIgG1応答を示し、図1Fは、すべてのワクチン接種設計(先祖SARS-CoV-2受容体結合ドメイン(RBD)タンパク質コーティング)について同等のIgG2a力価を示す。21日目、図1Gは、すべてのワクチン接種設計(RBD B.1.351バリアントK417N、E484K、N501Yタンパク質コーティング)について同等のIgG1応答を示し、図1Hは、すべてのワクチン接種設計(RBD B.1.351バリアントK417N、E484K、N501Yタンパク質コーティング)について同等のIgG2a力価を示す。The ancestral SARS-CoV- Figure 2 shows significant IgG1 and IgG2a binding antibody responses to the receptor binding domain (RBD) of B.2 and the RBD of the B.1.351 variant. At day 14, Figure 1A shows comparable IgG1 responses for all groups (ancestral SARS-CoV-2 receptor binding domain (RBD) protein coating) and Figure 1B shows comparable IgG1 responses for all vaccination designs (ancestral RBD protein coating). ) show equivalent IgG2a titers. On day 14, Figure 1C shows comparable IgG1 responses for all vaccination designs (RBD B.1.351 variants K417N, E484K, N501Y protein coatings) and Figure 1D shows comparable IgG1 responses for all vaccination designs (RBD B.1.351 variants K417N, E484K, N501Y protein coating). K417N, E484K, N501Y protein coatings) show comparable IgG2a titers. At day 21, Figure 1E shows comparable IgG1 responses for all vaccination designs (ancestral SARS-CoV-2 receptor binding domain (RBD) protein coating) and Figure 1F shows comparable IgG1 responses for all vaccination designs (ancestral SARS-CoV-2 receptor binding domain (RBD) protein coating). - CoV-2 Receptor Binding Domain (RBD) protein coating) exhibiting comparable IgG2a titers. At day 21, Figure 1G shows comparable IgG1 responses for all vaccination designs (RBD B.1.351 variants K417N, E484K, N501Y protein coatings) and Figure 1H shows comparable IgG1 responses for all vaccination designs (RBD B.1.351 variants K417N, E484K, N501Y protein coating). K417N, E484K, N501Y protein coatings) show comparable IgG2a titers. 図１－１の続き。Continuation of Figure 1-1. 図１－２の続き。Continuation of Figure 1-2. 図１－３の続き。Continuation of Figure 1-3. 先祖SARS-CoV-2を使用した細胞変性効果(CPE)ベースのアッセイにおいて評価したウイルス中和力価(VNT)の有意な誘導を示す。図2Aは14日目及び図2Bは21日目に、すべての群B～HについてVNTの増加を示す。mRNAワクチンCV2CoVとCV2CoV.351の同じ脚(群F及びG)又は異なる脚(群H)への同時送達は、14日目及び21日目に両方のワクチンバリアントに対する応答を生じることができる。図2Cは42日目に、すべての群(群B～H)についてVNTレベルの増加を示す。両方のワクチンバリアントの同じ脚(群F及びG)又は異なる脚(群H)への同時送達は、42日目に両方のバリアントに対する応答を生じることができる。Figure 3 shows significant induction of virus neutralizing titer (VNT) assessed in a cytopathic effect (CPE) based assay using progenitor SARS-CoV-2. Figure 2A shows the increase in VNT on day 14 and Figure 2B on day 21 for all groups B-H. Co-delivery of mRNA vaccines CV2CoV and CV2CoV.351 to the same leg (groups F and G) or different legs (group H) can produce responses against both vaccine variants on days 14 and 21. Figure 2C shows an increase in VNT levels for all groups (Groups B-H) at day 42. Co-delivery of both vaccine variants to the same leg (groups F and G) or different legs (group H) can produce a response against both variants at day 42. 図２－１の続き。Continuation of Figure 2-1. B.1.351バリアントSARS-CoV-2を使用したCPEベースのアッセイにおいて評価したVNTの有意な誘導を示す。図3Aは14日目及び図3Bは21日目に、すべての群B～HについてVNTの増加を示す。mRNAワクチンCV2CoVとCV2CoV.351の同じ脚(群F及びG)又は異なる脚(群H)への同時送達は、14日目及び21日目に両方のワクチンバリアントに対する応答を生じることができる。図3Cは42日目に、すべての群(群B～H)についてVNTレベルの増加を示す。両方のワクチンバリアントの同じ脚(群F及びG)又は異なる脚(群H)への同時送達は、42日目に両方のバリアントに対する応答を生じることができる。B.1.351 shows significant induction of VNT assessed in a CPE-based assay using variant SARS-CoV-2. Figure 3A shows the increase in VNT on day 14 and Figure 3B on day 21 for all groups B-H. Co-delivery of mRNA vaccines CV2CoV and CV2CoV.351 to the same leg (groups F and G) or different legs (group H) can produce responses against both vaccine variants on days 14 and 21. Figure 3C shows an increase in VNT levels for all groups (Groups B-H) at day 42. Co-delivery of both vaccine variants to the same leg (groups F and G) or different legs (group H) can produce a response against both variants at day 42. 図３－１の続き。Continuation of Figure 3-1. B.1.1.7バリアントSARS-CoV-2(図4A)又はP.1(B.1.1.28)(図4B)を使用したCPEベースのアッセイにおいて評価したVNTの有意な誘導を示す。図4Aは42日目に、すべての群(群B～H)について、B.1.1.7バリアントを使用したVNTレベルの増加を示す。両方のワクチンバリアントの同じ脚(群F及びG)又は異なる脚(群H)への同時送達は、42日目に両方のバリアントに対する応答を生じることができる。図4Bは42日目に、すべての群(群B～H)についてB.1.1.28 P.1バリアントを使用したVNTレベルの増加を示す。両方のワクチンバリアントの同じ脚(群F及びG)又は異なる脚(群H)への同時送達は、42日目に両方のバリアントに対する応答を生じることができる。Figure 4 shows significant induction of VNT assessed in CPE-based assays using B.1.1.7 variant SARS-CoV-2 (Figure 4A) or P.1 (B.1.1.28) (Figure 4B). Figure 4A shows the increase in VNT levels using the B.1.1.7 variant for all groups (groups B-H) at day 42. Co-delivery of both vaccine variants to the same leg (groups F and G) or different legs (group H) can produce a response against both variants at day 42. Figure 4B shows the increase in VNT levels using the B.1.1.28 P.1 variant for all groups (Groups B-H) at day 42. Co-delivery of both vaccine variants to the same leg (groups F and G) or different legs (group H) can produce a response against both variants at day 42. CV2CoV及びCV2CoV.351をワクチン接種した群について、14日目(図5A～D)及び21日目(図5E～H)の、有意なIgG1及びIgG2a結合抗体応答を示す。14日目、図5A(IgG1力価)及び5B(IgG2a力価)は、用量0.5μg、2μg、8μg及び40μgを使用して結合抗体力価の用量依存性レベルを示し、40μg(先祖SARS-CoV-2受容体結合ドメイン(RBD)タンパク質コーティング)を用いてワクチン接種した群において飽和に達した。14日目、図5C(IgG1力価)及び5D(IgG2a力価)は、用量0.5μg、2μg、8μg及び40μgを使用して結合抗体力価の用量依存性レベルを示し、40μg(RBD B.1.351バリアントK417N、E484K、N501Yタンパク質コーティング)を用いてワクチン接種した群において飽和に達した。21日目、図5E(IgG1力価)及び5F(IgG2a力価)は、すべての量についてのCV2CoV.351ワクチン接種について結合抗体力価の用量依存性レベル並びに飽和IgG1力価及びIgG2a力価、並びにCV2CoV(先祖SARS-CoV-2受容体結合ドメイン(RBD)タンパク質コーティング)について量>8μg(群I)での飽和を示す。21日目、図5G(IgG1力価)及び5H(IgG2a力価)は、すべての量について、CV2CoV.351を用いたワクチン接種の際の結合抗体力価の用量依存性レベル、並びに飽和IgG1及びIgG2a力価、並びにmRNAワクチンCV2CoV(RBD B.1.351バリアントK417N、E484K、N501Yタンパク質コーティング)について量>8μg(群I)での飽和を示す。Significant IgG1 and IgG2a binding antibody responses are shown for the CV2CoV and CV2CoV.351 vaccinated groups at day 14 (FIG. 5A-D) and day 21 (FIG. 5E-H). On day 14, Figures 5A (IgG1 titers) and 5B (IgG2a titers) show dose-dependent levels of binding antibody titers using doses 0.5 μg, 2 μg, 8 μg and 40 μg, and 40 μg (ancestral SARS- Saturation was reached in the group vaccinated with CoV-2 receptor binding domain (RBD) protein coating). On day 14, Figures 5C (IgG1 titer) and 5D (IgG2a titer) show dose-dependent levels of binding antibody titers using doses 0.5 μg, 2 μg, 8 μg and 40 μg, and 40 μg (RBD B. Saturation was reached in the group vaccinated with 1.351 variant K417N, E484K, N501Y protein coating). Day 21, Figures 5E (IgG1 titers) and 5F (IgG2a titers) show dose-dependent levels of binding antibody titers and saturating IgG1 and IgG2a titers for all doses of CV2CoV.351 vaccination, and saturation at amounts >8 μg (group I) for CV2CoV (ancestral SARS-CoV-2 receptor binding domain (RBD) protein coating). On day 21, Figures 5G (IgG1 titer) and 5H (IgG2a titer) show the dose-dependent levels of binding antibody titers upon vaccination with CV2CoV.351 and saturating IgG1 and 5H (IgG2a titers) for all doses. IgG2a titers and saturation at amounts >8 μg (group I) are shown for the mRNA vaccine CV2CoV (RBD B.1.351 variant K417N, E484K, N501Y protein coating). 図５－１の続き。Continuation of Figure 5-1. 図５－２の続き。Continuation of Figure 5-2. 図５－３の続き。Continuation of Figure 5-3. 14日目、21日目及び42日目に先祖SARS-CoV-2(CV2CoV、図6A、6C及び6E)又はB.1.351バリアントSARS-CoV-2(CV2CoV.351、図6B、6D及び6F)を使用してCPEベースのアッセイにおいて評価したVNTの有意な誘導を示す。図6はまた、42日目にB.1.1.7バリアントSARS-CoV-2(図6G)又はB.1.1.28 P.1バリアント(図6H)を使用してCPEベースにおいて評価したVNTの有意な誘導を示す。図6Aは、B.1.351バリアントワクチンCV2CoV.351が、すべての用量群において14日目に先祖SARS-CoV-2に対して用量依存性VNT(異種応答)を誘導することを示す。CV2CoVを用いたワクチン接種の際の応答(同種応答)と比較して、CV2CoV.351をワクチン接種した群におけるVNTは、14日目に約2分の1に減少する。図6Bは、CV2CoV.351が、すべての用量群において14日目にB.1.351 SARS-CoV-2(同種応答)に対して用量依存性VNTを誘導することを示す。CV2CoV.351ワクチン接種は、先祖ウイルスに対する異種VNTと比較して、14日目に45倍増加した同種ウイルスに対する高レベルのVNTを誘発した(すべての用量群の平均差)。CV2CoVを用いたワクチン接種と比較して、CV2CoV.351によって誘導されたVNTは、14日目に41倍増加した(すべての用量群の平均差)。図6Cは、B.1.351バリアントワクチンCV2CoV.351が、すべての用量群において21日目に先祖SARS-CoV-2(異種応答)に対して用量依存性VNTを誘導することを示す。CV2CoV(同種応答)を用いたワクチン接種の際の応答と比較して、CV2CoV.351をワクチン接種した群におけるVNTは、21日目に約2分の1に減少する。図6Dは、CV2CoV.351が、すべての用量群において21日目に、B.1.351 SARS-CoV-2(同種応答)に対してわずかに用量依存性のVNTを誘導することを示す。CV2CoV.351ワクチン接種は、同種ウイルスに対して高レベルのVNTを誘発し、これは、先祖ウイルスに対する異種VNTと比較して、21日目に35倍増加した(すべての用量群の平均差)。CV2CoVを用いたワクチン接種と比較して、CV2CoV.351によって誘導されたVNTは、21日目に42倍増加した(すべての用量群の平均差)。図6Eは、B.1.351バリアントワクチンCV2CoV.351が、すべての用量群において42日目に、先祖SARS-CoV-2(異種応答)に対して用量依存性VNTを誘導したことを示す。0.5μgを用いたすべてのワクチン接種(群F)を除き、わずかに高い応答を、CV2CoV(同種応答)を用いたワクチン接種の際に示した。図6Fは、CV2CoV.351が、すべての用量群において42日目に、B.1.351 SARS-CoV-2(同種応答)に対して用量依存性VNTを誘導することを示す。CV2CoVを用いたワクチン接種と比較して、CV2CoV.351によって誘導されたVNTは、42日目に増加した。図6Gは、B.1.351バリアントワクチンCV2CoV.351が、すべての用量群において42日目に、B.1.1.7バリアントSARS-CoV-2(異種応答)に対して用量依存性VNTを誘導することを示す。0.5μgを用いたワクチン接種(群F)を除き、群Hについての同様の応答を、CV2CoV(同種応答)を用いたワクチン接種の際に示した。図6Hは、CV2CoV.351が、すべての用量群において42日目に、B.1.1.28 P.1バリアントSARS-CoV-2(同種応答)に対して用量依存性VNTを誘導することを示す。より低い応答を、CV2CoV(同種応答)を用いたワクチン接種の際に観察した。Ancestral SARS-CoV-2 (CV2CoV, Figures 6A, 6C and 6E) or B.1.351 variant SARS-CoV-2 (CV2CoV.351, Figures 6B, 6D and 6F) on days 14, 21 and 42 Figure 2 shows significant induction of VNT evaluated in a CPE-based assay using . Figure 6 also shows the significance of VNT assessed on a CPE basis using B.1.1.7 variant SARS-CoV-2 (Figure 6G) or B.1.1.28 P.1 variant (Figure 6H) at day 42. It shows a good guidance. Figure 6A shows that the B.1.351 variant vaccine CV2CoV.351 induces a dose-dependent VNT (heterogeneous response) against the progenitor SARS-CoV-2 at day 14 in all dose groups. Compared to the response upon vaccination with CV2CoV (allogeneic response), VNT in the group vaccinated with CV2CoV.351 is reduced by approximately 2-fold at day 14. Figure 6B shows that CV2CoV.351 induces dose-dependent VNT against B.1.351 SARS-CoV-2 (allogeneic response) at day 14 in all dose groups. CV2CoV.351 vaccination induced high levels of VNT against the homologous virus that increased by 45-fold at day 14 compared to the heterologous VNT against the ancestral virus (mean difference across all dose groups). Compared to vaccination with CV2CoV, VNT induced by CV2CoV.351 was increased 41-fold at day 14 (mean difference across all dose groups). Figure 6C shows that the B.1.351 variant vaccine CV2CoV.351 induces dose-dependent VNT against ancestral SARS-CoV-2 (heterogeneous response) at day 21 in all dose groups. Compared to the response upon vaccination with CV2CoV (allogeneic response), VNT in the group vaccinated with CV2CoV.351 is reduced by approximately 2-fold at day 21. Figure 6D shows that CV2CoV.351 induces a slightly dose-dependent VNT against B.1.351 SARS-CoV-2 (allologous response) at day 21 in all dose groups. CV2CoV.351 vaccination induced high levels of VNT against the homologous virus, which was increased by 35-fold at day 21 compared to the heterologous VNT against the ancestral virus (mean difference across all dose groups) . Compared to vaccination with CV2CoV, VNT induced by CV2CoV.351 was increased 42-fold at day 21 (mean difference across all dose groups). Figure 6E shows that the B.1.351 variant vaccine CV2CoV.351 induced dose-dependent VNT against progenitor SARS-CoV-2 (heterogeneous response) at day 42 in all dose groups. A slightly higher response was shown upon vaccination with CV2CoV (allogeneic response), except for all vaccinations with 0.5 μg (group F). Figure 6F shows that CV2CoV.351 induces dose-dependent VNT against B.1.351 SARS-CoV-2 (allologous response) at day 42 in all dose groups. Compared to vaccination with CV2CoV, VNT induced by CV2CoV.351 increased at day 42. Figure 6G shows that B.1.351 variant vaccine CV2CoV.351 induces dose-dependent VNT against B.1.1.7 variant SARS-CoV-2 (heterogeneous response) at day 42 in all dose groups. shows. Similar responses for group H were shown upon vaccination with CV2CoV (allogeneic response), except for vaccination with 0.5 μg (group F). Figure 6H shows that CV2CoV.351 induces dose-dependent VNT against B.1.1.28 P.1 variant SARS-CoV-2 (homologous response) at day 42 in all dose groups. . A lower response was observed upon vaccination with CV2CoV (allogeneic response). 図６－１の続き。Continuation of Figure 6-1. 図６－２の続き。Continuation of Figure 6-2. 図６－３の続き。Continuation of Figure 6-3. LNP中に製剤化した二価のmRNAワクチン組成物CV2CoV+CV2CoV.351を用いてワクチン接種した群についての、14日目(図7A～D)の有意なIgG1及びIgG2a結合抗体応答を示す。14日目に、図7A(IgG1力価)及び7B(IgG2a力価)は、用量0.5μg、2μg及び8μg(SARS-CoV-2先祖受容体結合ドメイン(RBD)タンパク質コーティング)を使用して、用量依存性レベルの結合抗体力価を示す。14日目に、図7C(IgG1力価)及び7D(IgG2a力価)は、用量0.5μg、2μg及び8μg(B.1.351 RBDバリアントK417N、E484K、N501Yタンパク質コーティング)を使用して、用量依存性レベルの結合抗体力価を示す。先祖SARS-CoV-2(図7E、7F及び7I)又はB.1.351バリアントSARS-CoV-2(図7G、7H及び7J)を使用した、それぞれ、14日目、21日目及び42日目の、CPEベースのアッセイにおいて評価したVNTの有意な誘導を示す。図7K及び7Lはまた、42日目に、1.1.7バリアントSARS-CoV-2(図7K)又はB.1.1.28 P.1バリアント(図7L)を使用して、CPEベースのアッセイにおいて評価したVNTの有意な誘導を示す。Figure 7 shows significant IgG1 and IgG2a binding antibody responses at day 14 (Figures 7A-D) for the group vaccinated with the bivalent mRNA vaccine composition CV2CoV+CV2CoV.351 formulated in LNP. At day 14, Figures 7A (IgG1 titer) and 7B (IgG2a titer) using doses 0.5 μg, 2 μg and 8 μg (SARS-CoV-2 ancestral receptor binding domain (RBD) protein coating) Dose-dependent levels of binding antibody titers are shown. On day 14, Figures 7C (IgG1 titer) and 7D (IgG2a titer) were dose-dependent using doses 0.5 μg, 2 μg and 8 μg (B.1.351 RBD variant K417N, E484K, N501Y protein coating). The level of binding antibody titer is shown. 14, 21 and 42 days using progenitor SARS-CoV-2 (Figures 7E, 7F and 7I) or B.1.351 variant SARS-CoV-2 (Figures 7G, 7H and 7J), respectively. , showing significant induction of VNT as assessed in a CPE-based assay. Figures 7K and 7L also evaluated in a CPE-based assay using the 1.1.7 variant SARS-CoV-2 (Figure 7K) or the B.1.1.28 P.1 variant (Figure 7L) at day 42. shows significant induction of VNT. 図７－１の続き。Continuation of Figure 7-1. 図７－２の続き。Continuation of Figure 7-2. 先祖SARS-CoV-2(図8A)を使用して又はB.1.351バリアントSARS-CoV-2(図8B)を使用して、CPEベースのアッセイにおいて評価したVNTを示す。CV2CoV又はB.1.351バリアントワクチンCV2CoV.351を用いたブーストは、同種及び異種応答について、先祖SARS-CoV-2及びB.1.351バリアントSARS-CoV-2に対する強いブースト能を示す。同種応答を、群B、D及びFについて図8Aに、群C、E及びGについて図8Bに示す。異種応答を、群C、E及びGについて図8Aに、群B、D及びFについて図8Bに示す。先祖SARS-CoV-2に対する、並びにSARS-CoV-2 B.1.1.7(アルファ)、B.1.351(ベータ)及びP.1(ガンマ)バリアントに対するウイルス中和応答を、ブーストの14日後、119日目に試験した(図8C～8F)(先祖SARS-CoV-2(図8C)、SARS-CoV-2 B.1.351(図8D)、SARS-CoV-2 B.1.1.7(図8E)及びP.1(図8F)に対するVNT)。VNT evaluated in a CPE-based assay using ancestral SARS-CoV-2 (Figure 8A) or using B.1.351 variant SARS-CoV-2 (Figure 8B). Boosting with CV2CoV or B.1.351 variant vaccine CV2CoV.351 shows strong boosting potential against ancestral SARS-CoV-2 and B.1.351 variant SARS-CoV-2 for homologous and heterologous responses. Allogeneic responses are shown in FIG. 8A for groups B, D and F and in FIG. 8B for groups C, E and G. The heterogeneous responses are shown in FIG. 8A for groups C, E and G and in FIG. 8B for groups B, D and F. After 14 days of boosting the viral neutralizing response against ancestral SARS-CoV-2 and against SARS-CoV-2 B.1.1.7 (alpha), B.1.351 (beta) and P.1 (gamma) variants, 119 (Figures 8C-8F) (progenitor SARS-CoV-2 (Figure 8C), SARS-CoV-2 B.1.351 (Figure 8D), SARS-CoV-2 B.1.1.7 (Figure 8E) and VNT for P.1 (Figure 8F)). 図８Ａの続き。Continuation of FIG. 8A. 図８Ｂの続き。Continuation of FIG. 8B. 図８Ｃの続き。Continuation of Figure 8C. 図８Ｄの続き。Continuation of Figure 8D. 図８Ｅの続き。Continuation of Figure 8E. すべての群について、14日目の先祖SARS-CoV-2 RBD(図9A)及びB.1.351 RBDバリアントK417N、E484K、N501Y(図9B)に対する有意な総IgGスパイク結合抗体応答を示す。経時的な異なるSARS-CoV-2バリアントに対するVNTの誘導を、図9C～F(図9C:先祖;図9D:B.1.1.7;図9E:B.1.351;図F:P1)に示す。図9G～Jは、細胞内サイトカイン染色アッセイを使用した、先祖SARS-CoV-2ペプチドライブラリーの混合物(図9G及びH)を用いて刺激した又はB.1.351 SARS-CoV-2ペプチドライブラリーの混合物(図9I及びJ)を用いて刺激したマウスにおけるCD8(図9G及び9I)並びにCD4(図9H及び9J)陽性T細胞の細胞免疫応答を示す。Significant total IgG spike-bound antibody responses against the ancestral SARS-CoV-2 RBD (Figure 9A) and B.1.351 RBD variants K417N, E484K, N501Y (Figure 9B) at day 14 are shown for all groups. The induction of VNT against different SARS-CoV-2 variants over time is shown in Figures 9C-F (Figure 9C: Ancestor; Figure 9D: B.1.1.7; Figure 9E: B.1.351; Figure F: P1). Figures 9G-J show the use of intracellular cytokine staining assays for the stimulation of ancestral SARS-CoV-2 peptide library mixtures (Figures 9G and H) or B.1.351 SARS-CoV-2 peptide libraries. Cellular immune responses of CD8 (FIGS. 9G and 9I) and CD4 (FIGS. 9H and 9J) positive T cells in mice stimulated with the mixture (FIGS. 9I and J) are shown. 図９－１の続き。Continuation of Figure 9-1. 図９－２の続き。Continuation of Figure 9-2. 図９－３の続き。Continuation of Figure 9-3. 図９－４の続き。Continuation of Figure 9-4. 細胞内サイトカイン染色アッセイを使用した、先祖SARS-CoV-2ペプチドライブラリーの混合物を用いて刺激したマウスにおけるCD8(図10B)及びCD4(図10A)陽性T細胞の細胞免疫応答を示す。Cellular immune responses of CD8 (FIG. 10B) and CD4 (FIG. 10A) positive T cells in mice stimulated with a mixture of ancestral SARS-CoV-2 peptide libraries using an intracellular cytokine staining assay. 第一のワクチン接種の133日後までの経時的な、ラットにおけるCVnCoV又はCV2CoVを用いたプライム及びブーストワクチン接種並びに二価のCV2CoV+CV2CoV.351ワクチン組成物を用いた第三のワクチン接種の際のVNTを示す(図11A:先祖SARS-CoV-2に対するVNT、図11B:SARS-CoV-2 B.1.351に対するVNT)。119日目の強く高いVNTが、先祖及びB.1.351 SARS-CoV-2に対してばかりでなく、B.1.1.7及びP.1 SARS-CoV-2バリアントに対しても誘導された(図11C:先祖、図11D:B.1.351、図11E:B.1.1.7、図11F:P.1)。Prime and boost vaccination with CVnCoV or CV2CoV in rats over time up to 133 days after the first vaccination and during the third vaccination with the bivalent CV2CoV+CV2CoV.351 vaccine composition. VNTs are shown (Figure 11A: VNT against ancestral SARS-CoV-2, Figure 11B: VNT against SARS-CoV-2 B.1.351). A strong and high VNT at day 119 was induced not only against the ancestor and B.1.351 SARS-CoV-2, but also against the B.1.1.7 and P.1 SARS-CoV-2 variants (Fig. 11C:Ancestor, Figure 11D:B.1.351, Figure 11E:B.1.1.7, Figure 11F:P.1). 図１１－１の続き。Continuation of Figure 11-1. ラットにおけるデルタバリアントSARS-CoV-2 B1.617.2の安定化したスパイク(S_stab pp)の異なるmRNAフォーマットをコードするワクチン組成物を用いたワクチン接種の際の抗体応答を示す(図12A及び12B:それぞれ、14日目及び42日目にデルタB.1.617.2バリアントRBDに対するELISAを介して検出したスパイク結合抗体;図12C、12D、12E:それぞれ、14日目、21日目、及び42日目のSARS-CoV-2 B.1.617.2に対するVNT)。同種SARS-CoV-2バリアント(B.1.617.2)に対してばかりでなく、異種SARS-CoV-2先祖並びにSARS-CoV-2バリアントB.1.351及びP.1に対しても強いVNTが誘導された(図12F:先祖、図G:B.1.351、図12H:P.1)。Showing antibody responses upon vaccination with vaccine compositions encoding different mRNA formats of the stabilized spike (S_stab pp) of delta variant SARS-CoV-2 B1.617.2 in rats (Figures 12A and 12B, respectively). , spike-binding antibodies detected via ELISA against Delta B.1.617.2 variant RBD on days 14 and 42; Figures 12C, 12D, 12E: on days 14, 21, and 42, respectively. VNT against SARS-CoV-2 B.1.617.2). Strong VNT induction not only against homologous SARS-CoV-2 variant (B.1.617.2) but also against heterologous SARS-CoV-2 ancestor and SARS-CoV-2 variants B.1.351 and P.1 (Figure 12F: Ancestor, Figure G: B.1.351, Figure 12H: P.1). 図１２－１の続き。Continuation of Figure 12-1. 図１２－２の続き。Continuation of Figure 12-2. ラットにおける異なるバリアントSARS-CoV-2のS_stab ppをコードする異なるmRNA構築物をコードするワクチン組成物を用いたワクチン接種の際の14日目の初期抗体応答(総IgG)を示す。さらに、二価のアプローチは、化学的に修飾したmRNAを修飾していないmRNAと比較する(図13A:先祖RBD;図13B:デルタRBD(L452R、T478K);図13C:ベータRBD(K417N、E484K、N501Y))。Initial antibody response (total IgG) at day 14 upon vaccination with vaccine compositions encoding different mRNA constructs encoding S_stab pp of different variant SARS-CoV-2 in rats. Additionally, a bivalent approach compares chemically modified mRNA to unmodified mRNA (Figure 13A: Ancestor RBD; Figure 13B: Delta RBD (L452R, T478K); Figure 13C: Beta RBD (K417N, E484K). , N501Y)). SARS-CoV-2バリアントB.1.351又はSARS CoV-2バリアントB.1.627.2のいずれかをマウスにチャレンジすることによる、ワクチン有効性を示す。チャレンジしたマウスの生存を、図14A:B.1.351を用いたチャレンジ及び図14B:B.1.617.2を用いたチャレンジ、に示す。平均パーセンテージ体重変化を、図14C:B.1.351を用いたチャレンジ及び図14D:B.1.617.2を用いたチャレンジ、に示す。唾液中のウイルスRNA量を、図14E:B.1.351チャレンジ群、及び図14F:B.1.617.2チャレンジ群に示す。上気道(URT)(甲介)中のウイルス量は、B.1.351チャレンジ群についての図14G及びB.617.2チャレンジ群についての図14Hを示し、下気道(LRT)(肺)中のウイルス量は、図14I(B.1.351を用いたチャレンジ)及びJ(B.1.617.2を用いたチャレンジ)に示す。脳中のウイルス量を、図14K～図Nに示す(小脳について図14K及びL、大脳について図14M及びN(チャレンジ群B.1.351について:図14K及びM、B.1.617.2について:図14L及びN))。抗RBD総免疫グロブリンの誘導を、図14O:チャレンジ群B.1.351及び図14P:チャレンジ群B.1.617.2に示し、VNTを、図14Q:チャレンジ後の群B.1.351、図14R:チャレンジ前の群B.1.617.2、及び図14S:チャレンジ後の群B.1.617.2に示す。Figure 3 shows vaccine efficacy by challenging mice with either SARS-CoV-2 variant B.1.351 or SARS-CoV-2 variant B.1.627.2. Survival of challenged mice is shown in Figure 14A: Challenge with B.1.351 and Figure 14B: Challenge with B.1.617.2. The average percentage weight change is shown in Figure 14C: Challenge with B.1.351 and Figure 14D: Challenge with B.1.617.2. The amount of viral RNA in saliva is shown in Figure 14E: B.1.351 challenge group and Figure 14F: B.1.617.2 challenge group. The viral load in the upper respiratory tract (URT) (turbinates) is shown in Figure 14G for the B.1.351 challenge group and Figure 14H for the B.617.2 challenge group, and the viral load in the lower respiratory tract (LRT) (lungs) is , shown in Figures 14I (challenge using B.1.351) and J (challenge using B.1.617.2). The viral load in the brain is shown in Figures 14K to N (for the cerebellum, Figures 14K and L, for the cerebrum, Figures 14M and N (for challenge group B.1.351: Figures 14K and M, for B.1.617.2: Figure 14L). and N)). Induction of anti-RBD total immunoglobulin is shown in Figure 14O: Challenge group B.1.351 and Figure 14P: Challenge group B.1.617.2, and VNT is shown in Figure 14Q: Group B.1.351 after challenge, Figure 14R: Before challenge. Group B.1.617.2, and Figure 14S: Group B.1.617.2 after challenge. 図１４－１の続き。Continuation of Figure 14-1. 図１４－２の続き。Continuation of Figure 14-2. 図１４－３の続き。Continuation of Figure 14-3. 図１４－４の続き。Continuation of Figure 14-4. SARS-CoV-2バリアントB.1.351をチャレンジしたハムスターにおけるワクチン有効性を示す。図15Aは、チャレンジ感染後の日数でのパーセンテージ体重変化を示す。唾液中のウイルスRNA量を図15Bに、肺組織中のウイルスRNA量を図15Cに示す。図15Dは、抗RBD総免疫グロブリン(Ig)の誘導を示し、図15Eは、VNTを示す。Showing vaccine efficacy in hamsters challenged with SARS-CoV-2 variant B.1.351. Figure 15A shows percentage body weight change in days post-challenge infection. The amount of viral RNA in saliva is shown in FIG. 15B, and the amount of viral RNA in lung tissue is shown in FIG. 15C. Figure 15D shows induction of anti-RBD total immunoglobulin (Ig) and Figure 15E shows VNT. 図１５－１の続き。Continuation of Figure 15-1. 図１５－２の続き。Continuation of Figure 15-2.

定義
明確かつ読みやすくするために、以下の定義が提供される。これらの定義について述べられている任意の技術的特色は、本発明のあらゆる実施形態で読み取ることができる。追加の定義及び説明は、これらの実施形態の文脈で具体的に提供され得る。 Definitions For clarity and readability, the following definitions are provided. Any technical features mentioned for these definitions can be read in any embodiment of the invention. Additional definitions and explanations may be provided specifically in the context of these embodiments.

数字の文脈でのパーセンテージは、それぞれの項目の総数に対する相対であると理解されるべきである。他の場合、文脈が別段示さない限り、パーセンテージは、重量パーセント(wt.-%)と理解されるべきである。 Percentages in the context of numbers should be understood as relative to the total number of the respective item. In other cases, unless the context indicates otherwise, percentages are to be understood as weight percent (wt.-%).

約:用語「約」は、決定要因又は値が、同一である、すなわち、100%同じである必要がない場合、使用される。したがって、「約」は、決定要因又は値が、0.1%～20%、又は0.1%～10%、これらの範囲内の任意のポイント;例えば、0.1%、0.2%、0.3%、0.4%、0.5%、0.6%、0.7%、0.8%、0.9%、1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%を含む、離れ得ることを意味する。当業者は、例えば、ある特定のパラメーター又は決定要因は、パラメーターが決定される方法に基づき、わずかに変動し得ることを知っている。例えば、ある特定の決定要因又は値が、例えば、「約1000ヌクレオチド」長を有すると本明細書で定義される場合、長さは、0.1%～20%、又は0.1%～10%、これらの範囲内の任意のポイント;例えば、0.1%、0.2%、0.3%、0.4%、0.5%、0.6%、0.7%、0.8%、0.9%、1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%を含む、離れ得る。したがって、当業者は、その特定の例では、長さは、1～200ヌクレオチド、若しくは1～100ヌクレオチド、特に、1、2、3、4、5、10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200ヌクレオチド、又は範囲内の任意の整数値、離れ得ることを知っている。 About: The term "about" is used when the determinants or values need not be the same, ie, 100% the same. Thus, "about" means that the determining factor or value is between 0.1% and 20%, or between 0.1% and 10%, any point within these ranges; for example, 0.1%, 0.2%, 0.3%, 0.4%, 0.5 %, 0.6%, 0.7%, 0.8%, 0.9%, 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, Includes 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, meaning that you can leave. Those skilled in the art will know, for example, that certain parameters or determinants may vary slightly based on how the parameters are determined. For example, if a particular determinant or value is defined herein as having a length of, e.g., "about 1000 nucleotides", the length may be between 0.1% and 20%, or between 0.1% and 10% of these Any point within the range; for example, 0.1%, 0.2%, 0.3%, 0.4%, 0.5%, 0.6%, 0.7%, 0.8%, 0.9%, 1%, 2%, 3%, 4%, 5% , including 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, can leave . The person skilled in the art will therefore understand that in that particular example, the length may be between 1 and 200 nucleotides, or between 1 and 100 nucleotides, in particular 1, 2, 3, 4, 5, 10, 20, 30, 40, 50, 60 nucleotides. , 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200 nucleotides, or any integer value within the range.

適応免疫応答:本明細書で使用される場合、用語「適応免疫応答」は、当業者によって認識され、理解され、例えば、免疫系(適応免疫系)の抗原特異的応答を指すことが意図される。抗原特異性により、特定の病原体又は病原体が感染した細胞に合わせた応答が生じる。これらの合わせた応答を開始する能力は、通常、「メモリー細胞」(B細胞)によって体内で維持される。本発明の文脈では、抗原は、SARS-CoV-2、例えば、限定するものではないが、C.1.2(南アフリカ)、B.1.1.529(オミクロン、南アフリカ)(BA.1_v1、BA.1_v0、B.1.1.529、BA.2、BA.1_v2、BA.1_v3、BA.1_v4、BA.1_v5を含む)、C.36.3(タイ)、B.1.619(カメルーン)、R.1(ケンタッキー、米国)、B.1.1.176(カナダ)、AZ.3、AY.1(インド)、AY.2(インド)、AY.4(インド)、AY.4.2(デルタプラス、インド)、B.1.617.3(インド)、B.1.351(ベータ、南アフリカ)、B.1.1.7(アルファ、英国)、P.1(ガンマ、ブラジル)、B.1.427/B.1.429(イプシロン、カリフォルニア、米国)、B.1.525(エータ、ナイジェリア)、B.1.258(チェコ共和国)、B.1.526(イオタ、ニューヨーク、米国)、A.23.1(ウガンダ)、B.1.617.1(カッパー、インド)、B.1.617.2(デルタ、インド)、P.2(ゼータ、ブラジル)、C37.1(ラムダ、ペルー)、P.3(シータ、フィリピン)、及び/又はB.1.621(ミュー、コロンビア)を含むSARS-Cov-2株から誘導された少なくとも1つの抗原性ペプチド又はタンパク質をコードするRNAによってもたらされる。好ましくは、抗原は、例えば、限定するものではないが、C.1.2(南アフリカ)、B.1.1.529(オミクロン、南アフリカ)(BA.1_v1、BA.1_v0、B.1.1.529、BA.2、BA.1_v2、BA.1_v3、BA.1_v4、BA.1_v5を含む)、C.36.3(タイ)、B.1.619(カメルーン)、R.1(ケンタッキー、米国)、B.1.1.176(カナダ)、AZ.3、AY.1(インド)、AY.2(インド)、AY.4(インド)、AY.4.2(デルタプラス、インド)、B.1.617.3(インド)、B.1.351(ベータ、南アフリカ)、B.1.1.7(アルファ、英国)、P.1(ガンマ、ブラジル)、B.1.427/B.1.429(イプシロン、カリフォルニア、米国)、B.1.525(エータ、ナイジェリア)、B.1.258(チェコ共和国)、B.1.526(イオタ、ニューヨーク、米国)、A.23.1(ウガンダ)、B.1.617.1(カッパー、インド)、B.1.617.2(デルタ、インド)、P.2(ゼータ、ブラジル)、C37.1(ラムダ、ペルー)、P.3(シータ、フィリピン)、及び/又はB.1.621(ミュー、コロンビア)を含むSARS-Cov-2株から誘導されたスパイクタンパク質を含むSARS-CoV-2スパイクタンパク質から誘導された少なくとも1つの抗原性ペプチドをコードするRNAによってもたらされる。 Adaptive immune response: As used herein, the term "adaptive immune response" is recognized and understood by those skilled in the art and is intended to refer to an antigen-specific response of the immune system (adaptive immune system), e.g. Ru. Antigen specificity results in a response that is tailored to a particular pathogen or the cells it infects. The ability to initiate these tailored responses is normally maintained in the body by "memory cells" (B cells). In the context of the present invention, antigens are SARS-CoV-2, such as, but not limited to, C.1.2 (South Africa), B.1.1.529 (Omicron, South Africa) (BA.1_v1, BA.1_v0, B.1.1.529, BA.2, BA.1_v2, BA.1_v3, BA.1_v4, BA.1_v5), C.36.3 (Thailand), B.1.619 (Cameroon), R.1 (Kentucky, USA) ), B.1.1.176 (Canada), AZ.3, AY.1 (India), AY.2 (India), AY.4 (India), AY.4.2 (Delta Plus, India), B.1.617. 3 (India), B.1.351 (Beta, South Africa), B.1.1.7 (Alpha, UK), P.1 (Gamma, Brazil), B.1.427/B.1.429 (Epsilon, California, USA), B .1.525 (Eta, Nigeria), B.1.258 (Czech Republic), B.1.526 (Iota, New York, USA), A.23.1 (Uganda), B.1.617.1 (Copper, India), B.1.617.2 SARS-Cov- including (Delta, India), P.2 (Zeta, Brazil), C37.1 (Lambda, Peru), P.3 (Theta, Philippines), and/or B.1.621 (Mu, Colombia) RNA encoding at least one antigenic peptide or protein derived from the two strains. Preferably, the antigen is for example, but not limited to, C.1.2 (South Africa), B.1.1.529 (Omicron, South Africa) (BA.1_v1, BA.1_v0, B.1.1.529, BA.2 , BA.1_v2, BA.1_v3, BA.1_v4, BA.1_v5), C.36.3 (Thailand), B.1.619 (Cameroon), R.1 (Kentucky, USA), B.1.1.176 (Canada) ), AZ.3, AY.1 (India), AY.2 (India), AY.4 (India), AY.4.2 (Delta Plus, India), B.1.617.3 (India), B.1.351 ( Beta, South Africa), B.1.1.7 (Alpha, UK), P.1 (Gamma, Brazil), B.1.427/B.1.429 (Epsilon, California, USA), B.1.525 (Eta, Nigeria), B .1.258 (Czech Republic), B.1.526 (Iota, New York, USA), A.23.1 (Uganda), B.1.617.1 (Copper, India), B.1.617.2 (Delta, India), P.2 spike proteins derived from SARS-Cov-2 strains containing (Zeta, Brazil), C37.1 (Lambda, Peru), P.3 (Theta, Philippines), and/or B.1.621 (Mu, Colombia). RNA encoding at least one antigenic peptide derived from the SARS-CoV-2 spike protein comprising:

抗原:本明細書で使用される場合、用語「抗原」は、当業者によって認識され、理解され、例えば、免疫系によって、好ましくは、適応免疫系によって認識され得、例えば、適応免疫応答の一部として抗体及び/又は抗原特異的T細胞の形成によって、抗原特異的免疫応答を誘発する能力がある物質を指すことが意図される。典型的には、抗原は、MHCによってT細胞に提示され得る、ペプチド又はタンパク質であってもよく、それを含んでいてもよい。また、例えば、SARS-CoV-2のスパイクタンパク質(S)、例えば、限定するものではないが、少なくとも1つのエピトープを含むC.1.2(南アフリカ)、B.1.1.529(オミクロン、南アフリカ)(BA.1_v1、BA.1_v0、B.1.1.529、BA.2、BA.1_v2、BA.1_v3、BA.1_v4、BA.1_v5を含む)、C.36.3(タイ)、B.1.619(カメルーン)、R.1(ケンタッキー、米国)、B.1.1.176(カナダ)、AZ.3、AY.1(インド)、AY.2(インド)、AY.4(インド)、AY.4.2(デルタプラス、インド)、B.1.617.3(インド)、B.1.351(ベータ、南アフリカ)、B.1.1.7(アルファ、英国)、P.1(ガンマ、ブラジル)、B.1.427/B.1.429(イプシロン、カリフォルニア、米国)、B.1.525(エータ、ナイジェリア)、B.1.258(チェコ共和国)、B.1.526(イオタ、ニューヨーク、米国)、A.23.1(ウガンダ)、B.1.617.1(カッパー、インド)、B.1.617.2(デルタ、インド)、P.2(ゼータ、ブラジル)、C37.1(ラムダ、ペルー)、P.3(シータ、フィリピン)、及び/又はB.1.621(ミュー、コロンビア)を含むSARS-Cov-2株のスパイクタンパク質(S)から誘導されたペプチド又はタンパク質のフラグメント、バリアント及び誘導体は、本発明の文脈で抗原として理解される。本発明の文脈では、抗原は、本明細書で特定される提供されるRNAの翻訳の産物であってもよい。 Antigen: As used herein, the term "antigen" is recognized and understood by those skilled in the art and is capable of being recognized, e.g., by the immune system, preferably by the adaptive immune system, e.g., as part of an adaptive immune response. It is intended to refer to substances capable of eliciting an antigen-specific immune response, in part by the formation of antibodies and/or antigen-specific T cells. Typically, antigens may be or include peptides or proteins that can be presented to T cells by MHC. Also, for example, the spike protein (S) of SARS-CoV-2, including, but not limited to, C.1.2 (South Africa), B.1.1.529 (Omicron, South Africa) (BA .1_v1, BA.1_v0, B.1.1.529, BA.2, BA.1_v2, BA.1_v3, BA.1_v4, BA.1_v5), C.36.3 (Thailand), B.1.619 (Cameroon), R.1 (Kentucky, USA), B.1.1.176 (Canada), AZ.3, AY.1 (India), AY.2 (India), AY.4 (India), AY.4.2 (Delta Plus, India), B.1.617.3 (India), B.1.351 (Beta, South Africa), B.1.1.7 (Alpha, UK), P.1 (Gamma, Brazil), B.1.427/B.1.429 (Epsilon) , California, USA), B.1.525 (Eta, Nigeria), B.1.258 (Czech Republic), B.1.526 (Iota, New York, USA), A.23.1 (Uganda), B.1.617.1 (Copper, India ), B.1.617.2 (Delta, India), P.2 (Zeta, Brazil), C37.1 (Lambda, Peru), P.3 (Theta, Philippines), and/or B.1.621 (Mu, Colombia) ) are understood as antigens in the context of the present invention. In the context of the present invention, an antigen may be a product of translation of the provided RNA specified herein.

抗原性ペプチド又はタンパク質:用語「抗原性ペプチド又はタンパク質」又は「免疫原性ペプチド又はタンパク質」は、当業者によって認識され、理解され、例えば、体の適応免疫系を刺激して、適応免疫応答をもたらす、(抗原性又は免疫原性)タンパク質から誘導されるペプチド、タンパク質を指すことが意図される。したがって、抗原性/免疫原性ペプチド又はタンパク質は、(例えば、SARS-CoV-2のスパイクタンパク質(S))から誘導される、例えば、限定するものではないが、C.1.2(南アフリカ)、B.1.1.529(オミクロン、南アフリカ)(BA.1_v1、BA.1_v0、B.1.1.529、BA.2、BA.1_v2、BA.1_v3、BA.1_v4、BA.1_v5を含む)、C.36.3(タイ)、B.1.619(カメルーン)、R.1(ケンタッキー、米国)、B.1.1.176(カナダ)、AZ.3、AY.1(インド)、AY.2(インド)、AY.4(インド)、AY.4.2(デルタプラス、インド)、B.1.617.3(インド)、B.1.351(ベータ、南アフリカ)、B.1.1.7(アルファ、英国)、P.1(ガンマ、ブラジル)、B.1.427/B.1.429(イプシロン、カリフォルニア、米国)、B.1.525(エータ、ナイジェリア)、B.1.258(チェコ共和国)、B.1.526(イオタ、ニューヨーク、米国)、A.23.1(ウガンダ)、B.1.617.1(カッパー、インド)、B.1.617.2(デルタ、インド)、P.2(ゼータ、ブラジル)、C37.1(ラムダ、ペルー)、P.3(シータ、フィリピン)、及び/又はB.1.621(ミュー、コロンビア)を含むSARS-Cov-2株由来のスパイクタンパク質(S)から誘導される、タンパク質の少なくとも1つのエピトープ又は抗原を含む。 Antigenic peptide or protein: The term "antigenic peptide or protein" or "immunogenic peptide or protein" is recognized and understood by those skilled in the art and is used to stimulate, for example, the body's adaptive immune system to produce an adaptive immune response. It is intended to refer to peptides derived from (antigenic or immunogenic) proteins, which give rise to proteins. Therefore, antigenic/immunogenic peptides or proteins may be derived from (e.g. spike protein (S) of SARS-CoV-2), such as, but not limited to, C.1.2 (South Africa), B .1.1.529 (Omicron, South Africa) (includes BA.1_v1, BA.1_v0, B.1.1.529, BA.2, BA.1_v2, BA.1_v3, BA.1_v4, BA.1_v5), C.36.3 (Thailand), B.1.619 (Cameroon), R.1 (Kentucky, USA), B.1.1.176 (Canada), AZ.3, AY.1 (India), AY.2 (India), AY.4 (India), AY.4.2 (Delta Plus, India), B.1.617.3 (India), B.1.351 (Beta, South Africa), B.1.1.7 (Alpha, UK), P.1 (Gamma, Brazil) ), B.1.427/B.1.429 (Epsilon, California, USA), B.1.525 (Eta, Nigeria), B.1.258 (Czech Republic), B.1.526 (Iota, New York, USA), A.23.1 (Uganda) ), B.1.617.1 (Copper, India), B.1.617.2 (Delta, India), P.2 (Zeta, Brazil), C37.1 (Lambda, Peru), P.3 (Theta, Philippines) , and/or at least one epitope of a protein or antigen derived from the spike protein (S) from a SARS-Cov-2 strain, including B.1.621 (Mu, Colombia).

カチオン性:異なる意味が、特定の文脈から明らかでない限り、用語「カチオン性」は、それぞれの構造が、恒常的又は非恒常的のいずれかで、しかし、ある特定の条件、例えば、pHに応答して、正電荷を帯びることを意味する。したがって、用語「カチオン性」は、「恒常的なカチオン性」と「カチオン化可能」の両方をカバーする。 Cationic: Unless a different meaning is clear from the specific context, the term "cationic" means that the respective structure is either constitutive or non-constitutive, but responsive to certain conditions, e.g. pH. This means that it has a positive charge. Thus, the term "cationic" covers both "constituently cationic" and "cationizable."

カチオン化可能:本明細書で使用される場合、用語「カチオン化可能」は、化合物、又は基若しくは原子が、より低いpHで正に荷電され、その環境のより高いpHで荷電されないことを意味する。また、pH値を決定することができない非水性環境では、カチオン化可能な化合物、基又は原子は、高い水素イオン濃度で正に荷電され、低い濃度又は活性の水素イオンで荷電されない。それは、荷電されるか、又は荷電されていない、pH又は水素イオン濃度での、カチオン化可能又はポリカチオン化可能な化合物の個々の特性、特に、それぞれのカチオン化可能な基又は原子のpKaに依存する。希釈水性環境において、正電荷を帯びたカチオン化可能な化合物、基又は原子の割合は、当業者に周知である、いわゆる、ヘンダーソン・ハッセルバルヒ式を使用して推定され得る。例えば、一部の実施形態では、化合物又は部分が、カチオン化可能である場合、それは、約1～9、好ましくは、4～9、5～8又はさらに6～8のpH値で、より好ましくは、9以下、8以下、7以下のpH値で、最も好ましくは、生理学的pH値、例えば、約7.3～7.4、すなわち、生理学的条件下、特に、in vivoでの細胞の生理学的塩条件下で、正に荷電されることが好ましい。他の実施形態では、カチオン化可能な化合物又は部分は、生理学的pH値、例えば、約7.0～7.4で主に中性であるが、より低いpH値で正に荷電されることが好ましい。一部の実施形態では、カチオン化可能な化合物又は部分のpKaの好ましい範囲は、約5～約7である。 Cationizable: As used herein, the term "cationizable" means that a compound, or group or atom, is positively charged at lower pHs and not at higher pHs of its environment. do. Also, in non-aqueous environments where the pH value cannot be determined, cationizable compounds, groups or atoms are positively charged at high hydrogen ion concentrations and uncharged at low concentrations or active hydrogen ions. It depends on the individual properties of cationizable or polycationizable compounds, in particular the pKa of the respective cationizable groups or atoms, charged or uncharged, pH or hydrogen ion concentration. Dependent. In a dilute aqueous environment, the proportion of positively charged cationizable compounds, groups or atoms can be estimated using the so-called Henderson-Hasselbalch equation, which is well known to those skilled in the art. For example, in some embodiments, when a compound or moiety is cationizable, it is more preferably at a pH value of about 1 to 9, preferably 4 to 9, 5 to 8 or even 6 to 8. is at a pH value of 9 or less, 8 or less, 7 or less, most preferably a physiological pH value, such as about 7.3 to 7.4, i.e. under physiological conditions, especially physiological salt conditions of the cells in vivo. It is preferable to be positively charged at the bottom. In other embodiments, the cationizable compound or moiety is primarily neutral at physiological pH values, eg, about 7.0-7.4, but is preferably positively charged at lower pH values. In some embodiments, the preferred range of pKa of the cationizable compound or moiety is from about 5 to about 7.

コード配列/コード領域:本明細書で使用される場合、用語「コード配列」又は「コード領域」及び対応する略語「cds」は、当業者によって認識され、理解され、例えば、ペプチド又はタンパク質に翻訳され得る、いくつかのヌクレオチドトリプレットの配列を指すことが意図される。本発明の文脈でのコード配列は、3で割ることができる数のヌクレオチドからなるRNA配列であってもよく、これは、開始コドンで始まり、好ましくは、終始コドンで終わる。 Coding sequence/coding region: As used herein, the term "coding sequence" or "coding region" and the corresponding abbreviation "cds" are recognized and understood by those skilled in the art and are translated into, for example, a peptide or protein. is intended to refer to the sequence of several nucleotide triplets that can be A coding sequence in the context of the present invention may be an RNA sequence consisting of a number of nucleotides divisible by three, which begins with a start codon and preferably ends with a stop codon.

から誘導される:核酸の文脈、すなわち、(別の)核酸「から誘導された」核酸について、本明細書全体で使用される場合、用語「から誘導される」は、(別の)核酸から誘導される核酸が、例えば、それが誘導される核酸と、少なくとも60%、70%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、又は99%の配列同一性を共有することを意味する。当業者は、配列同一性が、典型的には、同じタイプの核酸、すなわち、DNA配列又はRNA配列について計算されることを理解している。したがって、DNAが、RNA「から誘導される」場合、又はRNAが、DNA「から誘導される」場合、第一の工程で、RNA配列は、対応するDNA配列に変換される(特に、配列全体でウラシル(U)をチミジン(T)で置き換えることによって)か、又は逆も真なりで、DNA配列は、対応するRNA配列に変換される(特に、配列全体でTをUで置き換えることによって)ことは、理解される。その後、DNA配列の配列同一性又はRNA配列の配列同一性が決定される。好ましくは、核酸「から誘導される」核酸はまた、それが、例えば、さらにもっと及び/若しくは長くRNA安定性を増加させる、並びに/又はタンパク質産生を増加させるために誘導される核酸と比較して修飾されている核酸を指す。アミノ酸配列(例えば、抗原性ペプチド又はタンパク質)の文脈では、用語「から誘導される」は、(別の)アミノ酸配列から誘導されるアミノ酸配列が、例えば、それが誘導されるアミノ酸配列と、少なくとも60%、70%、75%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、又は99%の配列同一性を共有することを意味する。 Derived from: As used throughout this specification in the context of a nucleic acid, i.e. a nucleic acid "derived from" (another) nucleic acid, the term "derived from" refers to a nucleic acid derived from (another) nucleic acid. The nucleic acid to be derived is, for example, at least 60%, 70%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, means sharing 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% sequence identity. Those skilled in the art will understand that sequence identity is typically calculated for nucleic acids of the same type, ie, DNA or RNA sequences. Thus, when DNA is "derived from" RNA, or when RNA is "derived from" DNA, in a first step the RNA sequence is converted into the corresponding DNA sequence (in particular, the entire sequence (by replacing uracil (U) with thymidine (T)) or vice versa, a DNA sequence is converted into the corresponding RNA sequence (in particular by replacing T with U throughout the sequence) That is understood. The sequence identity of the DNA sequence or the sequence identity of the RNA sequence is then determined. Preferably, a nucleic acid "derived from" a nucleic acid also refers to a nucleic acid from which it is derived, e.g., even more and/or longer, to increase RNA stability and/or to increase protein production. Refers to modified nucleic acids. In the context of an amino acid sequence (e.g. an antigenic peptide or protein), the term "derived from" means that an amino acid sequence derived from (another) amino acid sequence is, for example, at least as similar to the amino acid sequence from which it is derived. 60%, 70%, 75%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93% , 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% sequence identity.

エピトープ:本明細書で使用される場合、用語「エピトープ」(当該技術分野で「抗原決定基」とも呼ばれる)は、当業者によって認識され、理解され、例えば、T細胞エピトープ及びB細胞エピトープを指すことが意図される。抗原性ペプチド又はタンパク質のT細胞エピトープ又は部分は、好ましくは、約6～約20以上のアミノ酸長を有するフラグメント、例えば、好ましくは、約8～約10アミノ酸長、例えば、8、9、又は10、(又はさらに11、又は12アミノ酸)長を有する、MHCクラスI分子によって処理され、提示されるフラグメント、或いは好ましくは、約13～約20以上のアミノ酸長を有する、MHCクラスI分子によって処理され提示されるフラグメントを含み得る。これらのフラグメントは、典型的には、ペプチドフラグメント及びMHC分子からなる複合体の形態で、T細胞によって認識され、すなわち、フラグメントは、典型的には、それらの天然の形態では認識されない。B細胞エピトープは、典型的には、好ましくは、5～15個のアミノ酸を有する、より好ましくは、5～12個のアミノ酸を有する、なおより好ましくは、6～9個のアミノ酸を有する、(天然の)タンパク質又はペプチド抗原の外表面に位置するフラグメントであり、すなわち、その天然の形態で抗体によって認識され得る。タンパク質又はペプチドのこのようなエピトープは、さらに、このようなタンパク質又はペプチドの本明細書で述べられるバリアントのいずれかから選択されてもよい。この文脈では、エピトープは、本明細書において定義されるタンパク質又はペプチドのアミノ酸配列において不連続であるが、単一のポリペプチド鎖から構成される3次元構造又は連続又は直鎖のエピトープで一緒になってもたらされる、本明細書において定義されるタンパク質又はペプチドのセグメントから構成される立体構造又は不連続エピトープであることができる。 Epitope: As used herein, the term "epitope" (also referred to in the art as "antigenic determinant") is recognized and understood by those skilled in the art and refers to, for example, T-cell epitopes and B-cell epitopes. It is intended that T cell epitopes or portions of antigenic peptides or proteins are preferably fragments having a length of about 6 to about 20 or more amino acids, such as, preferably, about 8 to about 10 amino acids in length, such as 8, 9, or 10 , (or even 11 or even 12 amino acids) in length; may include the fragments presented. These fragments are typically recognized by T cells in the form of complexes consisting of peptide fragments and MHC molecules, ie, the fragments are typically not recognized in their native form. B cell epitopes typically preferably have 5 to 15 amino acids, more preferably have 5 to 12 amino acids, even more preferably have 6 to 9 amino acids ( A fragment located on the outer surface of a protein or peptide antigen (naturally occurring), ie, can be recognized by antibodies in its native form. Such epitopes of proteins or peptides may further be selected from any of the variants described herein of such proteins or peptides. In this context, epitopes are discrete in the amino acid sequence of a protein or peptide as defined herein, but together in a three-dimensional structure composed of a single polypeptide chain or a continuous or linear epitope. It can be a conformational or discontinuous epitope made up of segments of a protein or peptide as defined herein, resulting from the formation of an epitope.

フラグメント:核酸配列(例えば、RNA又はDNA)又はアミノ酸配列の文脈で本明細書全体で使用される場合、用語「フラグメント」は、典型的には、その意図される機能を依然として保持している、例えば、核酸配列又はアミノ酸配列の全長配列のより短い部分であってもよい。したがって、フラグメントは、典型的には、全長配列内の対応する区画と同一である配列からなる。本発明の文脈での配列の好ましいフラグメントは、実体の連続する区画、例えば、フラグメントが誘導される分子中の実体の連続する区画に対応するヌクレオチド又はアミノ酸からなり、これは、フラグメントが誘導される総(すなわち、全長)分子の少なくとも40%、50%、60%、70%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、99.5%に相当する(例えば、SARS-CoV-2のスパイクタンパク質(S)、例えば、限定するものではないが、C.1.2(南アフリカ)、B.1.1.529(オミクロン、南アフリカ)(BA.1_v1、BA.1_v0、B.1.1.529、BA.2、BA.1_v2、BA.1_v3、BA.1_v4、BA.1_v5を含む)、C.36.3(タイ)、B.1.619(カメルーン)、R.1(ケンタッキー、米国)、B.1.1.176(カナダ)、AZ.3、AY.1(インド)、AY.2(インド)、AY.4(インド)、AY.4.2(デルタプラス、インド)、B.1.617.3(インド)、B.1.351(ベータ、南アフリカ)、B.1.1.7(アルファ、英国)、P.1(ガンマ、ブラジル)、B.1.427/B.1.429(イプシロン、カリフォルニア、米国)、B.1.525(エータ、ナイジェリア)、B.1.258(チェコ共和国)、B.1.526(イオタ、ニューヨーク、米国)、A.23.1(ウガンダ)、B.1.617.1(カッパー、インド)、B.1.617.2(デルタ、インド)、P.2(ゼータ、ブラジル)、C37.1(ラムダ、ペルー)、P.3(シータ、フィリピン)、及び/又はB.1.621(ミュー、コロンビア)を含むSARS-Cov-2株のスパイクタンパク質(S))。タンパク質又はペプチドの文脈で本明細書全体で使用される場合、用語「フラグメント」は、典型的には、本明細書において定義されるタンパク質又はペプチドの配列を含んでもよく、そのアミノ酸配列に関して、オリジナルのタンパク質のアミノ酸配列と比較して、N末端及び/又はC末端で切断されている。したがって、このようなトランケーションは、アミノ酸レベル又は対応して核酸レベルのいずれかで生じ得る。したがって、本明細書において定義されるこのようなフラグメントに関する配列同一性は、好ましくは、本明細書において定義されるタンパク質若しくはペプチド全体、又はこのようなタンパク質若しくはペプチドの(コード)核酸分子全体を指し得る。タンパク質又はペプチドのフラグメントは、これらのタンパク質又はペプチドの少なくとも1つのエピトープを含んでもよい。 Fragment: When used throughout this specification in the context of a nucleic acid sequence (e.g., RNA or DNA) or an amino acid sequence, the term "fragment" typically still retains its intended function. For example, it may be a shorter portion of the full length nucleic acid or amino acid sequence. Thus, a fragment typically consists of a sequence that is identical to a corresponding section within the full-length sequence. Preferred fragments of sequences in the context of the present invention consist of nucleotides or amino acids corresponding to consecutive sections of the entity, e.g., consecutive sections of the entity in the molecule from which the fragment is derived; at least 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89% of the total (i.e., full length) molecule , 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.5% (e.g. spike protein (S) of SARS-CoV-2 , for example, but not limited to, C.1.2 (South Africa), B.1.1.529 (Omicron, South Africa) (BA.1_v1, BA.1_v0, B.1.1.529, BA.2, BA.1_v2, BA.1_v3, BA.1_v4, BA.1_v5), C.36.3 (Thailand), B.1.619 (Cameroon), R.1 (Kentucky, USA), B.1.1.176 (Canada), AZ.3 , AY.1 (India), AY.2 (India), AY.4 (India), AY.4.2 (Delta Plus, India), B.1.617.3 (India), B.1.351 (Beta, South Africa), B.1.1.7 (Alpha, UK), P.1 (Gamma, Brazil), B.1.427/B.1.429 (Epsilon, California, USA), B.1.525 (Eta, Nigeria), B.1.258 (Czech Republic ), B.1.526 (Iota, New York, USA), A.23.1 (Uganda), B.1.617.1 (Copper, India), B.1.617.2 (Delta, India), P.2 (Zeta, Brazil) , C37.1 (Lambda, Peru), P.3 (Theta, Philippines), and/or B.1.621 (Mu, Colombia), including the spike protein (S) of SARS-Cov-2 strains. As used throughout this specification in the context of a protein or peptide, the term "fragment" typically may include the sequence of the protein or peptide as defined herein, and which, with respect to its amino acid sequence, is truncated at the N-terminus and/or C-terminus compared to the amino acid sequence of the protein. Such truncation may therefore occur either at the amino acid level or, correspondingly, at the nucleic acid level. Therefore, sequence identity with respect to such fragments as defined herein preferably refers to the entire protein or peptide as defined herein, or the entire (encoding) nucleic acid molecule of such protein or peptide. obtain. Fragments of proteins or peptides may contain at least one epitope of these proteins or peptides.

異種:核酸配列又はアミノ酸配列の文脈で本明細書全体で使用される場合、用語「異種」又は「異種配列」は、別の遺伝子、別の対立遺伝子、又は例えば、別の種若しくはウイルスから誘導される配列と理解されなければならない配列(例えば、RNA、DNA、アミノ酸)を指す。2つの配列は、典型的には、それらが同じ遺伝子又は同じ対立遺伝子から誘導可能でない場合、「異種」であると理解される。すなわち、異種配列は、本質的に、同じ生物又はウイルスから誘導可能であり得るが、それらは、同じ核酸又はタンパク質で生じない。 Heterologous: As used throughout this specification in the context of a nucleic acid or amino acid sequence, the term "heterologous" or "heterologous sequence" refers to a sequence derived from another gene, another allele, or, for example, another species or virus. refers to a sequence (e.g., RNA, DNA, amino acid) that must be understood as a sequence that is Two sequences are typically understood to be "heterologous" if they are not derivable from the same gene or the same allele. That is, although heterologous sequences may be derived from essentially the same organism or virus, they do not occur in the same nucleic acid or protein.

液性免疫応答:用語「液性免疫」又は「液性免疫応答」は、当業者によって認識され、理解され、例えば、B細胞介在性抗体産生、場合により抗体産生に伴う副次的プロセスを指すことが意図される。液性免疫応答は、典型的には、例えば、Th2活性化及びサイトカイン産生、胚中心形成及びアイソタイプスイッチング、親和性成熟並びにメモリー細胞生成によって特徴付けられ得る。液性免疫はまた、抗体のエフェクター機能を指してもよく、病原体及び毒素中和、古典的補体活性化、並びに食作用及び病原体除去のオプソニン促進を含む。 Humoral Immune Response: The term "humoral immunity" or "humoral immune response" is recognized and understood by those skilled in the art and refers to, for example, B cell-mediated antibody production, and optionally the collateral processes associated with antibody production. It is intended that Humoral immune responses can typically be characterized by, for example, Th2 activation and cytokine production, germinal center formation and isotype switching, affinity maturation, and memory cell generation. Humoral immunity may also refer to the effector functions of antibodies, including pathogen and toxin neutralization, classical complement activation, and opsonization of phagocytosis and pathogen clearance.

(配列の)同一性:核酸配列又はアミノ酸配列の文脈で本明細書全体で使用される場合、用語「同一性」は、当業者によって認識され、理解され、例えば、2つの配列が、その完全/全体の長さにわたり、又はその特定の指定された部分、領域若しくはドメインにわたり同一である、パーセンテージを指すことが意図される。例えば、その完全/全体の長さにわたり、又はその特定の指定された部分、領域若しくはドメインにわたり少なくとも40%、50%、60%、70%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、99.5%の同一性が存在する。2つの配列、例えば、本明細書において定義される核酸配列又はアミノ酸(aa)配列、好ましくは、本明細書において定義される核酸配列によってコードされるaa配列又はaa配列自体が同一であるパーセンテージを決定するために、配列は、整列されて、その後、互いに比較され得る。したがって、例えば、第一の配列の位置は、第二の配列の対応する位置と比較されてもよい。第一の配列中の位置が、第二の配列中の位置での場合と同じ残基によって占められている場合、2つの配列は、この位置で同一である。そうではない場合、配列は、この位置で異なる。挿入が、第一の配列と比較して第二の配列で生じる場合、ギャップを第一の配列に挿入して、さらなる整列が可能になり得る。欠失が、第一の配列と比較して第二の配列で生じる場合、ギャップを第二の配列に挿入して、さらなる整列が可能になり得る。次いで、2つの配列が同一であるパーセンテージは、1つの配列においてのみ占められるそれらの位置を含む、位置の総数によって割った同一位置の数の関数である。2つの配列が同一であるパーセンテージは、アルゴリズム、例えば、BLASTプログラムに統合されたアルゴリズムを使用して決定することができる。 (Sequence) Identity: As used throughout this specification in the context of nucleic acid or amino acid sequences, the term "identity" is recognized and understood by those skilled in the art, e.g. / is intended to refer to the percentage that is the same over the entire length or over certain designated parts, regions or domains thereof. For example, at least 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84 over its entire length or over certain designated parts, regions or domains thereof. %, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.5% There is identity. The percentage by which two sequences, e.g. the nucleic acid sequences or amino acid (aa) sequences as defined herein, preferably the aa sequences or the aa sequences encoded by the nucleic acid sequences as defined herein, are identical; To determine, sequences can be aligned and then compared to each other. Thus, for example, a position in a first sequence may be compared to a corresponding position in a second sequence. Two sequences are identical at a position in a first sequence if that position is occupied by the same residue as at that position in the second sequence. Otherwise, the arrays differ at this position. If an insertion occurs in the second sequence compared to the first sequence, a gap may be inserted into the first sequence to allow further alignment. If a deletion occurs in the second sequence compared to the first sequence, a gap may be inserted in the second sequence to allow further alignment. The percentage that two sequences are identical is then a function of the number of identical positions divided by the total number of positions, including those positions that are only occupied in one sequence. The percentage that two sequences are identical can be determined using an algorithm, such as an algorithm integrated into the BLAST program.

免疫原、免疫原性:用語「免疫原」又は「免疫原性」は、当業者によって認識され、理解され、例えば、免疫応答を刺激/誘導することができる化合物を指すことが意図される。好ましくは、免疫原は、ペプチド、ポリペプチド、又はタンパク質であってもよい。本発明の意味での免疫原は、SARS-CoV-2のスパイクタンパク質から誘導されたタンパク質、例えば、限定するものではないが、本明細書において定義されるC.1.2(南アフリカ)、B.1.1.529(オミクロン、南アフリカ)(BA.1_v1、BA.1_v0、B.1.1.529、BA.2、BA.1_v2、BA.1_v3、BA.1_v4、BA.1_v5を含む)、C.36.3(タイ)、B.1.619(カメルーン)、R.1(ケンタッキー、米国)、B.1.1.176(カナダ)、AZ.3、AY.1(インド)、AY.2(インド)、AY.4(インド)、AY.4.2(デルタプラス、インド)、B.1.617.3(インド)、B.1.351(ベータ、南アフリカ)、B.1.1.7(アルファ、英国)、P.1(ガンマ、ブラジル)、B.1.427/B.1.429(イプシロン、カリフォルニア、米国)、B.1.525(エータ、ナイジェリア)、B.1.258(チェコ共和国)、B.1.526(イオタ、ニューヨーク、米国)、A.23.1(ウガンダ)、B.1.617.1(カッパー、インド)、B.1.617.2(デルタ、インド)、P.2(ゼータ、ブラジル)、C37.1(ラムダ、ペルー)、P.3(シータ、フィリピン)、及び/又はB.1.621(ミュー、コロンビア)を含むSARS-Cov-2株のスパイクタンパク質から誘導されたタンパク質である少なくとも1つの抗原性ペプチドをコードする少なくとも1つのコード配列を含む提供されるRNAの翻訳の産物である。典型的には、免疫原は、適応免疫応答を誘発する。 Immunogen, immunogenicity: The term "immunogen" or "immunogenicity" is recognized and understood by those skilled in the art and is intended to refer to a compound capable of stimulating/inducing an immune response, for example. Preferably, the immunogen may be a peptide, polypeptide, or protein. Immunogens in the sense of the present invention are proteins derived from the spike protein of SARS-CoV-2, such as, but not limited to, C.1.2 (South Africa), B.1.1 as defined herein. .529 (Omicron, South Africa) (includes BA.1_v1, BA.1_v0, B.1.1.529, BA.2, BA.1_v2, BA.1_v3, BA.1_v4, BA.1_v5), C.36.3 (Thailand) ), B.1.619 (Cameroon), R.1 (Kentucky, USA), B.1.1.176 (Canada), AZ.3, AY.1 (India), AY.2 (India), AY.4 (India) ), AY.4.2 (Delta Plus, India), B.1.617.3 (India), B.1.351 (Beta, South Africa), B.1.1.7 (Alpha, UK), P.1 (Gamma, Brazil), B.1.427/B.1.429 (Epsilon, California, USA), B.1.525 (Eta, Nigeria), B.1.258 (Czech Republic), B.1.526 (Iota, New York, USA), A.23.1 (Uganda), B.1.617.1 (Copper, India), B.1.617.2 (Delta, India), P.2 (Zeta, Brazil), C37.1 (Lambda, Peru), P.3 (Theta, Philippines), and / or translation of a provided RNA comprising at least one coding sequence encoding at least one antigenic peptide that is a protein derived from the spike protein of a SARS-Cov-2 strain comprising B.1.621 (Mu, Colombia); It is a product of Typically, the immunogen elicits an adaptive immune response.

免疫応答:用語「免疫応答」は、当業者によって認識され、理解され、例えば、特定の抗原に対する適応免疫系の特異的な反応(いわゆる、特異的若しくは適応免疫応答)又は自然免疫系の非特異的反応(いわゆる、非特異的若しくは自然免疫応答)、或いはその組み合わせを指すことが意図される。好適なワクチンは、ワクチンが投与される正常な健康レシピエントにおいて効率的な免疫応答を誘導する。効率的な免疫応答を伴う、1回のワクチン接種は、ウイルス中和抗体力価をもたらす。さらに、又は代わりに、効率的な免疫応答は、適応免疫応答を誘発する。一部の実施形態では、効率的な免疫応答は、ワクチン接種されていない対照対象の中和抗体力価と比べて、少なくとも50%コロナウイルス感染を低減する。一部の実施形態では、効率的な免疫応答は、中和抗体力価及び/又はT細胞免疫応答が、ワクチン接種されていない対照対象の中和抗体力価と比べて、無症候性ウイルス感染の割合を低減するのに十分であるものである。効率的な免疫応答はまた、中和抗体力価及び/若しくはT細胞免疫応答が、対象におけるウイルス潜伏期を予防するのに十分であり、並びに/又は中和抗体力価が、ウイルスの対象の上皮細胞との融合を遮断するのに十分であるものであってもよい。一部の実施形態では、効率的な免疫応答は、治療有効量の核酸、組成物、ポリペプチド、又はワクチンの対象への投与が、対象においてコロナウイルスに対するT細胞免疫応答を誘導するものである。好ましい実施形態では、T細胞免疫応答は、CD4+T細胞免疫応答及び/又はCD8+T細胞免疫応答を含む。さらなる態様では、効率的な免疫応答は、免疫応答が、少なくとも約6カ月間、重篤なCOVID-19疾患から対象を保護し、及び/又はワクチン接種されていない人と比較して、入院の頻度を低減するものである。効率的な免疫応答はまた、ウイルスが感染したワクチン接種されていない人からの伝播と比較して、ウイルスの伝播を低減し得る。効率的な免疫応答はまた、異種免疫応答に起因したバリアントに対する一部の保護をもたらすものとみなされ得る。 Immune response: The term "immune response" is recognized and understood by those skilled in the art and includes, for example, the specific response of the adaptive immune system to a particular antigen (the so-called specific or adaptive immune response) or the non-specific response of the innate immune system. is intended to refer to a biological response (so-called non-specific or innate immune response), or a combination thereof. A suitable vaccine induces an efficient immune response in a normally healthy recipient to whom it is administered. A single vaccination, with an efficient immune response, results in virus-neutralizing antibody titers. Additionally or alternatively, an efficient immune response induces an adaptive immune response. In some embodiments, an efficient immune response reduces coronavirus infection by at least 50% compared to neutralizing antibody titers in unvaccinated control subjects. In some embodiments, an efficient immune response indicates that neutralizing antibody titers and/or T-cell immune responses are higher than neutralizing antibody titers in unvaccinated control subjects during asymptomatic viral infections. is sufficient to reduce the proportion of An efficient immune response also means that neutralizing antibody titers and/or T cell immune responses are sufficient to prevent viral latency in the subject, and/or that neutralizing antibody titers are sufficient to prevent viral epithelium in the subject. It may be sufficient to block fusion with cells. In some embodiments, an efficient immune response is one in which administration of a therapeutically effective amount of a nucleic acid, composition, polypeptide, or vaccine to a subject induces a T cell immune response against the coronavirus in the subject. . In preferred embodiments, the T cell immune response comprises a CD4+ T cell immune response and/or a CD8+ T cell immune response. In a further aspect, the efficient immune response is such that the immune response protects the subject from severe COVID-19 disease for at least about 6 months and/or reduces hospitalization compared to unvaccinated individuals. This reduces the frequency. An efficient immune response may also reduce transmission of the virus compared to transmission from an infected unvaccinated person. Efficient immune responses may also be considered to confer some protection against variants due to heterologous immune responses.

免疫系:用語「免疫系」は、当業者によって認識され、理解され、例えば、感染から生物を保護し得る生物の系を指すことが意図される。病原体が、生物の物的障壁を越えるのに成功し、この生物に侵入する場合、自然免疫系が、即時だが、特異的でない応答をもたらす。病原体が、この自然応答を逃れる場合、脊椎動物は、防御の第二の層である適応免疫系を有する。ここで、免疫系は、感染中にその応答を適応させて、病原体のその認識を改善する。次いで、この改善された応答は、病原体が排除された後、免疫記憶の形態で保持され、適応免疫系が、この病原体が遭遇するそれぞれの時に、より迅速でより強い攻撃を開始するのを可能にする。これにより、免疫系は、自然及び適応免疫系を含む。これらの2つのパートのそれぞれは、典型的には、いわゆる、液性及び細胞成分を含有する。 Immune system: The term "immune system" is recognized and understood by those skilled in the art and is intended to refer to the system of an organism that is capable of protecting the organism from, for example, infection. When a pathogen successfully crosses an organism's physical barriers and invades the organism, the innate immune system provides an immediate but non-specific response. When pathogens evade this natural response, vertebrates have a second layer of defense, the adaptive immune system. Here, the immune system adapts its response during infection to improve its recognition of pathogens. This improved response is then retained in the form of immune memory after the pathogen is eliminated, allowing the adaptive immune system to mount a faster and stronger attack each time this pathogen is encountered. Make it. The immune system thereby includes the innate and adaptive immune system. Each of these two parts typically contains so-called humoral and cellular components.

自然免疫系:用語「自然免疫系」(特異的でない、又は非特異的免疫系としても知られている)は、当業者によって認識され、理解され、例えば、典型的には、特異的でない様式で他の生物による感染から宿主を防御する細胞及び機序を含む系を指すことが意図される。これは、自然系の細胞が、一般的な方法で、病原体を認識し、応答し得るが、適応免疫系と異なり、それは、宿主に持続性又は防御的免疫を付与しないことを意味する。自然免疫系は、パターン認識受容体、例えば、Toll様受容体、NOD様受容体、又はRIG-I様受容体などのリガンドによって活性化され得る。 Innate immune system: The term "innate immune system" (also known as non-specific or non-specific immune system) is recognized and understood by those skilled in the art and is typically administered in a non-specific manner, e.g. is intended to refer to the system that includes cells and mechanisms that protect the host from infection by other organisms. This means that the cells of the innate system can recognize and respond to pathogens in a general way, but unlike the adaptive immune system, it does not confer lasting or protective immunity to the host. The innate immune system can be activated by ligands such as pattern recognition receptors, such as Toll-like receptors, NOD-like receptors, or RIG-I-like receptors.

リピドイド化合物:リピドイドとも称されるリピドイド化合物は、脂質様化合物、すなわち、脂質様の物性を有する両親媒性化合物である。本発明の文脈では、脂質という用語は、リピドイド化合物を包含するとみなされる。 Lipidoid compounds: Lipidoid compounds, also called lipidoids, are lipid-like compounds, ie amphipathic compounds with lipid-like physical properties. In the context of the present invention, the term lipid is considered to include lipidoid compounds.

恒常的カチオン性:本明細書で使用される場合、用語「恒常的カチオン性」は、当業者によって認識され、理解され、例えば、それぞれの化合物、又は基、又は原子は、その環境の任意のpH値又は水素イオン活性で正に荷電されることを意味する。典型的には、正電荷は、四級窒素原子の存在から生じる。化合物が、複数のこのような正電荷を有する場合、それは、恒常的ポリカチオン性と称され得る。 Consistently cationic: As used herein, the term "consistently cationic" is recognized and understood by those skilled in the art, e.g., each compound, or group, or atom is Meaning positively charged by pH value or hydrogen ion activity. Typically, the positive charge results from the presence of quaternary nitrogen atoms. If a compound has more than one such positive charge, it may be referred to as permanently polycationic.

RNA配列:用語「RNA配列」は、当業者によって認識され、理解され、例えば、そのリボヌクレオチドの連続の特定及び個々の順序を指す。 RNA sequence: The term "RNA sequence" is recognized and understood by those skilled in the art and refers, for example, to the specific and individual order of its ribonucleotide sequences.

安定化されたRNA:用語「安定化されたRNA」は、このような修飾を有さないRNAと比較して、例えば、環境因子又は酵素消化による、例えば、エキソヌクレアーゼ又はエンドヌクレアーゼ分解による、崩壊又は分解により安定であるように、修飾されているRNAを指す。好ましくは、本発明の文脈での安定化されたRNAは、細胞、例えば、原核生物又は真核生物の細胞、好ましくは、哺乳類細胞、例えば、ヒト細胞において安定化される。安定化効果はまた、例えば、安定化されたRNAを含む組成物の保存のため、例えば、緩衝液などにおいて細胞の外側で発揮されてもよい。 Stabilized RNA: The term "stabilized RNA" refers to the ability of RNA to be degraded, e.g. by environmental factors or by enzymatic digestion, e.g. by exonucleolytic or endonucleolytic degradation, as compared to RNA without such modifications. or RNA that has been modified so that it is stable upon degradation. Preferably, stabilized RNA in the context of the present invention is stabilized in a cell, eg a prokaryotic or eukaryotic cell, preferably a mammalian cell, eg a human cell. The stabilizing effect may also be exerted outside the cell, eg, in a buffer, eg, for preservation of compositions comprising stabilized RNA.

T細胞応答:本明細書で使用される場合、用語「細胞免疫」又は「細胞免疫応答」又は「細胞性T細胞応答」は、当業者によって認識され、理解され、例えば、マクロファージ、ナチュラルキラー細胞(NK)、抗原特異的細胞傷害性Tリンパ球の活性化、及び抗原に対する応答における様々なサイトカインの放出を指すことが意図される。より一般論としては、細胞免疫は、抗体に基づかないが、免疫系の細胞の活性化に基づく。典型的には、細胞免疫応答は、例えば、細胞、例えば、樹状細胞又は他の細胞などの特異的な免疫細胞においてアポトーシスを誘導することができる抗原特異的細胞傷害性Tリンパ球を活性化すること、それらの表面に外来抗原のエピトープを提示することによって、特徴付けられてもよい。 T cell response: As used herein, the term "cellular immunity" or "cellular immune response" or "cellular T cell response" is recognized and understood by those skilled in the art and includes, for example, macrophages, natural killer cells, (NK), is intended to refer to the activation of antigen-specific cytotoxic T lymphocytes and the release of various cytokines in response to antigen. More generally, cellular immunity is not based on antibodies, but on the activation of cells of the immune system. Typically, a cellular immune response activates antigen-specific cytotoxic T lymphocytes that can induce apoptosis in specific immune cells, such as cells, e.g. dendritic cells or other cells. may be characterized by displaying epitopes of foreign antigens on their surface.

UTR:用語「非翻訳領域」又は「UTR」又は「UTRエレメント」は、当業者によって認識され、理解され、例えば、典型的には、コード配列の5'に位置するか、又は3'に位置する核酸分子の一部を指すことが意図される。UTRは、タンパク質に翻訳されない。UTRは、核酸、例えば、DNA又はRNAの一部であってもよい。UTRは、調節エレメントとも呼ばれる、遺伝子発現を制御するためのエレメントを含んでもよい。このような調節エレメントは、例えば、リボソーム結合部位、miRNA結合部位などであってもよい。 UTR: The term "untranslated region" or "UTR" or "UTR element" is recognized and understood by those skilled in the art and is, for example, typically located 5' or 3' of a coding sequence. is intended to refer to a portion of a nucleic acid molecule that UTRs are not translated into proteins. A UTR may be part of a nucleic acid, such as DNA or RNA. A UTR may contain elements for controlling gene expression, also called regulatory elements. Such regulatory elements may be, for example, ribosome binding sites, miRNA binding sites, etc.

3'UTR:用語「3'非翻訳領域」又は「3'UTR」又は「3'UTRエレメント」は、当業者によって認識され、理解され、例えば、コード配列の3'(すなわち、下流)に位置し、タンパク質に翻訳されない核酸分子の一部を指すことが意図される。3'UTRは、コード配列と(任意の)ポリ(A)配列の間に位置するRNAの一部であってもよい。3'UTRは、調節エレメントとも呼ばれる、遺伝子発現を制御するためのエレメントを含んでもよい。このような調節エレメントは、例えば、リボソーム結合部位、miRNA結合部位などであってもよい。 3'UTR: The term "3' untranslated region" or "3'UTR" or "3'UTR element" is recognized and understood by those skilled in the art and includes, for example, a region located 3' (i.e. downstream) of a coding sequence. However, it is intended to refer to the portion of a nucleic acid molecule that is not translated into protein. The 3'UTR may be the part of the RNA located between the coding sequence and the (optional) poly(A) sequence. The 3'UTR may contain elements for controlling gene expression, also called regulatory elements. Such regulatory elements may be, for example, ribosome binding sites, miRNA binding sites, etc.

5'UTR:用語「5'非翻訳領域」又は「5'UTR」又は「5'UTRエレメント」は、当業者によって認識され、理解され、例えば、コード配列の5'(すなわち、上流)に位置し、タンパク質に翻訳されない核酸分子の一部を指すことが意図される。5'UTRは、コード配列と(任意の)5'キャップの間に位置するRNAの一部であってもよい。5'UTRは、調節エレメントとも呼ばれる、遺伝子発現を制御するためのエレメントを含んでもよい。このような調節エレメントは、例えば、リボソーム結合部位、miRNA結合部位などであってもよい。 5'UTR: The term "5' untranslated region" or "5'UTR" or "5'UTR element" is recognized and understood by those skilled in the art and includes, for example, a region located 5' (i.e. upstream) of a coding sequence. However, it is intended to refer to the portion of a nucleic acid molecule that is not translated into protein. The 5'UTR may be the part of the RNA located between the coding sequence and the (optional) 5' cap. The 5'UTR may contain elements for controlling gene expression, also called regulatory elements. Such regulatory elements may be, for example, ribosome binding sites, miRNA binding sites, etc.

(配列の)バリアント:核酸配列の文脈で本明細書全体で使用される場合、用語「バリアント」は、当業者によって認識され、理解され、例えば、別の核酸配列から誘導される核酸配列のバリアントを指すことが意図される。例えば、核酸配列のバリアントは、バリアントが誘導される核酸配列と比較して、1個以上のヌクレオチド欠失、挿入、付加及び/又は置換を示し得る。核酸配列のバリアントは、バリアントが誘導される核酸配列と少なくとも40%、50%、60%、70%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、99.5%同一であってもよい。バリアントは、それが誘導される配列の機能の少なくとも40%、50%、60%、70%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、99.5%以上を保持していたという意味で、機能的バリアントである。一実施形態では、核酸配列の「バリアント」は、このような核酸配列の少なくとも10、20、30、50、75又は100個のヌクレオチドの区画にわたり、少なくとも40%、50%、60%、70%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、99.5%のヌクレオチド同一性を有してもよい。 Variant (of a sequence): As used throughout this specification in the context of a nucleic acid sequence, the term "variant" is recognized and understood by those skilled in the art and includes, for example, a variant of a nucleic acid sequence derived from another nucleic acid sequence. is intended to refer to. For example, a variant of a nucleic acid sequence may exhibit one or more nucleotide deletions, insertions, additions and/or substitutions compared to the nucleic acid sequence from which the variant is derived. A variant of a nucleic acid sequence is at least 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87% of the nucleic acid sequence from which the variant is derived. , 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.5%. A variant has at least 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88 %, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.5% or more It is. In one embodiment, a "variant" of a nucleic acid sequence spans a section of at least 10, 20, 30, 50, 75 or 100 nucleotides of such nucleic acid sequence, and comprises at least 40%, 50%, 60%, 70% , 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96 %, 97%, 98%, 99%, 99.5% nucleotide identity.

タンパク質又はペプチドの文脈での本明細書全体で使用される場合、用語「バリアント」は、例えば、1個以上の変異/置換、例えば、1個以上の置換、挿入及び/又は欠失されたアミノ酸でオリジナルの配列と異なるアミノ酸配列を有するタンパク質又はペプチドバリアントを指すことが意図される。例えば、一部の態様では、タンパク質配列中の挿入は、1～10個のアミノ酸、例えば、1、2、3、4、5、6、7、8、9又は10個の連続するアミノ酸の挿入を含む。好ましくは、これらのフラグメント及び/又はバリアントは、同じ、又は同等の特異的な抗原特性(免疫原性バリアント、抗原性バリアント)を有してもよい。挿入及び置換は、特に、3次元構造に修飾を引き起こさないか、又は結合領域に影響しないその配列位置で可能である。挿入又は欠失による3次元構造への修飾は、例えば、CDスペクトル(円二色性スペクトル)を使用して容易に決定することができる。タンパク質又はペプチドの「バリアント」は、少なくとも10、20、30、50、75若しくは100個のアミノ酸の区画にわたり、又はこのようなタンパク質若しくはペプチドの長さ全体にわたり、少なくとも40%、50%、60%、70%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、99.5%のアミノ酸同一性を有してもよい。好ましくは、タンパク質のバリアントは、タンパク質の機能的バリアントを含んでもよく、それは、本発明の文脈で、バリアントは、それが誘導されるタンパク質と本質的に同じ、又は少なくとも40%、50%、60%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、98%以上の免疫原性を発揮することを意味する。 As used throughout this specification in the context of a protein or peptide, the term "variant" refers to, for example, one or more mutations/substitutions, e.g. one or more substitutions, insertions and/or deletions of amino acids. is intended to refer to a protein or peptide variant that has an amino acid sequence that differs from the original sequence. For example, in some embodiments, the insertion in the protein sequence is an insertion of 1 to 10 amino acids, such as an insertion of 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, or 10 contiguous amino acids. including. Preferably, these fragments and/or variants may have the same or equivalent specific antigenic properties (immunogenic variants, antigenic variants). Insertions and substitutions are possible, especially at those sequence positions that do not cause modifications to the three-dimensional structure or affect the binding region. Modifications to the three-dimensional structure due to insertions or deletions can be easily determined using, for example, CD spectroscopy (circular dichroism spectroscopy). A "variant" of a protein or peptide is defined as a "variant" over a section of at least 10, 20, 30, 50, 75 or 100 amino acids, or over the entire length of such protein or peptide, at least 40%, 50%, 60%. , 70%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95 %, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.5% amino acid identity. Preferably, a variant of a protein may include a functional variant of a protein, which in the context of the present invention means that a variant is essentially the same as the protein from which it is derived, or at least 40%, 50%, 60% %, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% or more of immunogenicity.

発明の簡単な説明
本発明は、SARS-CoV-2バリアントから誘導されたスパイクタンパク質をコードするRNAが、ヒト細胞において効率的に発現され、異なるSARS-CoV-2バリアント、例えば、限定するものではないが、C.1.2(南アフリカ)、B.1.1.529(オミクロン、南アフリカ)(BA.1_v1、BA.1_v0、B.1.1.529、BA.2、BA.1_v2、BA.1_v3、BA.1_v4、BA.1_v5を含む)、C.36.3(タイ)、B.1.619(カメルーン)、R.1(ケンタッキー、米国)、B.1.1.176(カナダ)、AZ.3、AY.1(インド)、AY.2(インド)、AY.4(インド)、AY.4.2(デルタプラス、インド)、B.1.617.3(インド)、B.1.351(ベータ、南アフリカ)、B.1.1.7(アルファ、英国)、P.1(ガンマ、ブラジル)、B.1.427/B.1.429(イプシロン、カリフォルニア、米国)、B.1.525(エータ、ナイジェリア)、B.1.258(チェコ共和国)、B.1.526(イオタ、ニューヨーク、米国)、A.23.1(ウガンダ)、B.1.617.1(カッパー、インド)、B.1.617.2(デルタ、インド)、P.2(ゼータ、ブラジル)、C37.1(ラムダ、ペルー)、P.3(シータ、フィリピン)、及び/又はB.1.621(ミュー、コロンビア)を含むSARS-Cov-2株を広く中和する動物において抗体応答を誘導することができるという知見に一部基づく。さらに、異なるSARS-CoV-2スパイクタンパク質バリアントをコードするRNAの混合物はまた、広範なSARS-CoV-2バリアントに対する中和抗体を産生するのに有効であることが示されている。これらの知見は、新たなRNAベースのコロナウイルスワクチンの基礎をもたらす。 BRIEF DESCRIPTION OF THE INVENTION The present invention provides that RNA encoding the spike protein derived from a SARS-CoV-2 variant can be efficiently expressed in human cells and that RNA encoding the spike protein derived from a SARS-CoV-2 variant can be efficiently expressed in human cells and that No, but C.1.2 (South Africa), B.1.1.529 (Omicron, South Africa) (BA.1_v1, BA.1_v0, B.1.1.529, BA.2, BA.1_v2, BA.1_v3, BA.1_v4 , BA.1_v5), C.36.3 (Thailand), B.1.619 (Cameroon), R.1 (Kentucky, USA), B.1.1.176 (Canada), AZ.3, AY.1 (India) , AY.2 (India), AY.4 (India), AY.4.2 (Delta Plus, India), B.1.617.3 (India), B.1.351 (Beta, South Africa), B.1.1.7 (Alpha , UK), P.1 (Gamma, Brazil), B.1.427/B.1.429 (Epsilon, California, USA), B.1.525 (Eta, Nigeria), B.1.258 (Czech Republic), B.1.526 (Iota , New York, USA), A.23.1 (Uganda), B.1.617.1 (Copper, India), B.1.617.2 (Delta, India), P.2 (Zeta, Brazil), C37.1 (Lambda, The finding that antibody responses can be induced in animals that broadly neutralize SARS-Cov-2 strains including P.3 (Theta, Philippines), and/or B.1.621 (Mu, Colombia); Based on department. Additionally, mixtures of RNA encoding different SARS-CoV-2 spike protein variants have also been shown to be effective in producing neutralizing antibodies against a wide range of SARS-CoV-2 variants. These findings provide the basis for new RNA-based coronavirus vaccines.

本明細書に記載されるRNA配列、組成物、又はワクチンは、以下の有利な特色の少なくとも一部を有する。
・注射/ワクチン接種の部位(例えば、筋肉)でのRNAの翻訳
・非常に少ない投薬量及び投薬レジメンでのコードされるSARS-CoV-2タンパク質に対する抗原特異的免疫応答の非常に効率的な誘導
・乳児及び/又は新生児又は高齢者、特に、高齢者のワクチン接種の適合性
・筋肉内投与用の組成物/ワクチンの適合性
・SARS-CoV-2バリアントに対する特異的かつ機能的な液性免疫応答の誘導
・SARS-CoV-2バリアントに対する広範な機能的細胞性T細胞応答の誘導
・SARS-CoV-2バリアントに対する特異的なB細胞メモリーの誘導
・SARS-CoV-2ウイルスバリアントを有効に中和することができる機能的抗体の誘導
・オリジナルのSARS-CoV-2ウイルスも有効に中和することができる機能的抗体の誘導
・粘膜IgA抗体の誘導による粘膜IgA免疫の誘発
・バランスのとれたB細胞及びT細胞応答の誘導
・SARS-CoV-2バリアントに対する防御的免疫の誘導
・SARS-CoV-2バリアントに対する免疫防御の早期開始
・SARS-CoV-2バリアントに対する誘導された免疫応答の長命
・ワクチン接種又は免疫病理学的効果に起因したSARS-CoV-2感染の増強なし
・RNAベースのSARS-CoV-2ワクチンによって引き起こされる抗体依存性増強(ADE)なし
・ワクチン接種の際の望ましくない高い反応源性を導き得る、ワクチン適用後の全身性サイトカイン又はケモカイン応答の過剰な誘導なし
・ワクチンの十分な忍容性、副作用なし、無毒性
・RNAベースのワクチンの有利な安定性特徴
・SARS-CoV-2バリアントワクチン産生の速度、適応性、単純さ及びスケーラビリティ
・十分な防御のため1又は2回のワクチン接種のみを必要とする有利なワクチン接種レジメン
・十分な防御のため低用量のワクチンのみを必要とする有利なワクチン接種レジメン
・多価ワクチンのためのRNAをもたらす異なる抗原の組み合わせを可能にする、十分な防御のための低用量の組成物/ワクチンのみを必要とする有利なワクチン接種レジメン
・好ましくは、SARS-CoV-2バリアントに対するさらなる免疫応答を誘導する、SARS-CoV-2に対する既存の免疫のブースト能
・異なる株に曝露されたか、又は異なる株に対するワクチンでワクチン接種された対象における異なるSARS-CoV-2株特異的免疫応答の誘導
・様々なSARS-CoV-2バリアントにわたる広範な免疫応答の誘導 The RNA sequences, compositions, or vaccines described herein have at least some of the following advantageous characteristics.
Translation of RNA at the site of injection/vaccination (e.g. muscle) Highly efficient induction of antigen-specific immune responses against encoded SARS-CoV-2 proteins with very low dosages and dosing regimens - Suitability for vaccination of infants and/or neonates or the elderly, especially the elderly - Suitability of compositions/vaccines for intramuscular administration - Specific and functional humoral immunity against SARS-CoV-2 variants Induction of responses - Induction of broad functional cellular T cell responses to SARS-CoV-2 variants - Induction of specific B cell memory to SARS-CoV-2 variants - Effectively neutralizing SARS-CoV-2 viral variants・Induction of functional antibodies that can also effectively neutralize the original SARS-CoV-2 virus ・Induction of mucosal IgA immunity by induction of mucosal IgA antibodies ・Balanced - Induction of B cell and T cell responses - Induction of protective immunity against SARS-CoV-2 variants - Early onset of immune defense against SARS-CoV-2 variants - Long-lived induced immune response against SARS-CoV-2 variants No enhancement of SARS-CoV-2 infection due to vaccination or immunopathological effects; No antibody-dependent enhancement (ADE) caused by RNA-based SARS-CoV-2 vaccines; Undesirable high No excessive induction of systemic cytokine or chemokine responses after vaccine application, which could lead to reactogenicity - Well-tolerated vaccine, no side effects, non-toxicity - Advantageous stability characteristics of RNA-based vaccines - SARS- Speed, adaptability, simplicity and scalability of CoV-2 variant vaccine production Advantageous vaccination regimen requiring only one or two vaccinations for adequate protection Only low doses of vaccine for adequate protection Advantageous vaccination regimens that require only low doses of compositions/vaccines for sufficient protection, allowing combinations of different antigens resulting in RNA for multivalent vaccines A regimen that preferably boosts existing immunity to SARS-CoV-2, inducing an additional immune response against SARS-CoV-2 variants. Subjects who have been exposed to a different strain or have been vaccinated with a vaccine against a different strain. Induction of different SARS-CoV-2 strain-specific immune responses and induction of broad immune responses across various SARS-CoV-2 variants

第一の態様では、本発明は、少なくとも1つのSARS-CoV-2スパイクタンパク質又はその免疫原性フラグメント若しくは免疫原性バリアントをコードするRNAを提供し、SARS-CoV-2スパイクタンパク質は、配列番号1の配列に対してH69;V70;A222;Y453;S477;I692;R403;K417;N437;N439;V445;G446;L455;F456;K458;A475;G476;T478;E484;G485、F486;N487;Y489;F490;Q493;S494;P499;T500;N501;V503;G504;Y505;Q506;Y144;A570;P681;T716;S982;D1118;L18;D80;D215;L242;A243;L244;R246;A701;T20;P26;D138;R190;H655;T1027;S13;W152;L452;R346;P384;G447;G502;T748;A522;V1176;T859;S247;Y248;L249;T250;P251;G252;G75;T76;D950;E154;G769;S254;Q613;F157;R158;Q957;D253;T95;F888;Q677;A67;Q414;N450;V483;G669;T732;Q949;Q1071;E1092;H1101;N1187;W258;T19;V126;H245;S12;A899;G142;E156;K558;及び/又はQ52に対応する位置において少なくとも1個のアミノ酸置換、欠失又は挿入を含み、RNAは、少なくとも1つの異種非翻訳領域を含む。ある特定の実施形態では、RNAは、SARS-CoV-2バリアントスパイクタンパク質(例えば、限定するものではないが、C.1.2(南アフリカ)、B.1.1.529(オミクロン、南アフリカ)(BA.1_v1、BA.1_v0、B.1.1.529、BA.2、BA.1_v2、BA.1_v3、BA.1_v4、BA.1_v5を含む)、C.36.3(タイ)、B.1.619(カメルーン)、R.1(ケンタッキー、米国)、B.1.1.176(カナダ)、AZ.3、AY.1(インド)、AY.2(インド)、AY.4(インド)、AY.4.2(デルタプラス、インド)、B.1.617.3(インド)、B.1.351(ベータ、南アフリカ)、B.1.1.7(アルファ、英国)、P.1(ガンマ、ブラジル)、B.1.427/B.1.429(イプシロン、カリフォルニア、米国)、B.1.525(エータ、ナイジェリア)、B.1.258(チェコ共和国)、B.1.526(イオタ、ニューヨーク、米国)、A.23.1(ウガンダ)、B.1.617.1(カッパー、インド)、B.1.617.2(デルタ、インド)、P.2(ゼータ、ブラジル)、C37.1(ラムダ、ペルー)、P.3(シータ、フィリピン)、及び/又はB.1.621(ミュー、コロンビア)を含むSARS-Cov-2株由来)の位置において少なくとも1個のアミノ酸置換、欠失又は挿入を含むSARS-CoV-2スパイクタンパク質をコードする。 In a first aspect, the invention provides RNA encoding at least one SARS-CoV-2 spike protein or an immunogenic fragment or variant thereof, wherein the SARS-CoV-2 spike protein is SEQ ID NO: H69;V70;A222;Y453;S477;I692;R403;K417;N437;N439;V445;G446;L455;F456;K458;A475;G476;T478;E484;G485,F486;N487; Y489; f490; Q493; s494; p499; t500; n501; n501; G504; Y506; Q506; Q506; Y144; A570; p681; t716; d1118; l18; d80; l 242; a243; L244; R246; a701; T20;P26;D138;R190;H655;T1027;S13;W152;L452;R346;P384;G447;G502;T748;A522;V1176;T859;S247;Y248;L249;T250;P251;G252;G75;T76; D950;E154;G769;S254;Q613;F157;R158;Q957;D253;T95;F888;Q677;A67;Q414;N450;V483;G669;T732;Q949;Q1071;E1092;H1101;N1187;W258;T1 9; contains at least one amino acid substitution, deletion or insertion at a position corresponding to V126;H245;S12;A899;G142;E156;K558; and/or Q52, and the RNA contains at least one heterologous untranslated region. In certain embodiments, the RNA is a SARS-CoV-2 variant spike protein (e.g., without limitation, C.1.2 (South Africa), B.1.1.529 (Omicron, South Africa) (BA.1_v1, BA.1_v0, B.1.1.529, BA.2, BA.1_v2, BA.1_v3, BA.1_v4, BA.1_v5), C.36.3 (Thailand), B.1.619 (Cameroon), R.1 (Kentucky, USA), B.1.1.176 (Canada), AZ.3, AY.1 (India), AY.2 (India), AY.4 (India), AY.4.2 (Delta Plus, India), B.1.617.3 (India), B.1.351 (Beta, South Africa), B.1.1.7 (Alpha, UK), P.1 (Gamma, Brazil), B.1.427/B.1.429 (Epsilon, California, USA), B.1.525 (Eta, Nigeria), B.1.258 (Czech Republic), B.1.526 (Iota, New York, USA), A.23.1 (Uganda), B.1.617.1 (Copper, India), B Contains .1.617.2 (Delta, India), P.2 (Zeta, Brazil), C37.1 (Lambda, Peru), P.3 (Theta, Philippines), and/or B.1.621 (Mu, Colombia) encodes a SARS-CoV-2 spike protein containing at least one amino acid substitution, deletion or insertion at a position (derived from SARS-Cov-2 strain).

第二の態様では、本発明は、第一の態様の少なくとも1つのRNAを含む、組成物、好ましくは、免疫原性組成物を提供する。好適には、組成物は、脂質ベースの担体、好ましくは、脂質ナノ粒子(LNP)中に製剤化された第一の態様の少なくとも1つのRNAを含む。好ましい実施形態では、第二の態様は、多価組成物、例えば、異なるアミノ酸コード配列(例えば、1つより多くのSARS-CoV-2バリアント株、例えば、限定するものではないが、C.1.2(南アフリカ)、B.1.1.529(オミクロン、南アフリカ)(BA.1_v1、BA.1_v0、B.1.1.529、BA.2、BA.1_v2、BA.1_v3、BA.1_v4、BA.1_v5を含む)、C.36.3(タイ)、B.1.619(カメルーン)、R.1(ケンタッキー、米国)、B.1.1.176(カナダ)、AZ.3、AY.1(インド)、AY.2(インド)、AY.4(インド)、AY.4.2(デルタプラス、インド)、B.1.617.3(インド)、B.1.351(ベータ、南アフリカ)、B.1.1.7(アルファ、英国)、P.1(ガンマ、ブラジル)、B.1.427/B.1.429(イプシロン、カリフォルニア、米国)、B.1.525(エータ、ナイジェリア)、B.1.258(チェコ共和国)、B.1.526(イオタ、ニューヨーク、米国)、A.23.1(ウガンダ)、B.1.617.1(カッパー、インド)、B.1.617.2(デルタ、インド)、P.2(ゼータ、ブラジル)、C37.1(ラムダ、ペルー)、P.3(シータ、フィリピン)、及び/又はB.1.621(ミュー、コロンビア)を含む1つより多くのSARS-Cov-2株由来のスパイクタンパク質を含む、1つより多くのSARS-CoV-2株由来のスパイクタンパク質)を有するSARS-CoV-2スパイクタンパク質をコードするRNAを含む、組成物に関する。 In a second aspect, the invention provides a composition, preferably an immunogenic composition, comprising at least one RNA of the first aspect. Suitably, the composition comprises at least one RNA of the first embodiment formulated in a lipid-based carrier, preferably lipid nanoparticles (LNPs). In a preferred embodiment, the second aspect comprises a multivalent composition, e.g., different amino acid coding sequences (e.g., more than one SARS-CoV-2 variant strain, e.g., without limitation, C.1.2). (South Africa), B.1.1.529 (Omicron, South Africa) (includes BA.1_v1, BA.1_v0, B.1.1.529, BA.2, BA.1_v2, BA.1_v3, BA.1_v4, BA.1_v5 ), C.36.3 (Thailand), B.1.619 (Cameroon), R.1 (Kentucky, USA), B.1.1.176 (Canada), AZ.3, AY.1 (India), AY.2 (India) ), AY.4 (India), AY.4.2 (Delta Plus, India), B.1.617.3 (India), B.1.351 (Beta, South Africa), B.1.1.7 (Alpha, UK), P. 1 (Gamma, Brazil), B.1.427/B.1.429 (Epsilon, California, USA), B.1.525 (Eta, Nigeria), B.1.258 (Czech Republic), B.1.526 (Iota, New York, USA), A.23.1 (Uganda), B.1.617.1 (Copper, India), B.1.617.2 (Delta, India), P.2 (Zeta, Brazil), C37.1 (Lambda, Peru), P.3 from more than one SARS-CoV-2 strain, including the spike protein from more than one SARS-Cov-2 strain, including (Theta, Philippines), and/or B.1.621 (Mu, Colombia). SARS-CoV-2 spike protein (spike protein) comprising RNA encoding the SARS-CoV-2 spike protein.

第三の態様では、本発明は、SARS-CoV-2バリアントワクチンを提供し、ワクチンは、第一の態様の少なくとも1つのRNA、又は第二の態様の少なくとも1つの組成物を含む。好ましい実施形態では、第二の態様は、多価SARS-CoV-2ワクチンに関する。好ましい実施形態では、第三の態様は、SARS-CoV-2バリアントブースターワクチンに関する。SARS-CoV-2バリアントブースターワクチンは、限定するものではないが、C.1.2(南アフリカ)、B.1.1.529(オミクロン、南アフリカ)(BA.1_v1、BA.1_v0、B.1.1.529、BA.2、BA.1_v2、BA.1_v3、BA.1_v4、BA.1_v5を含む)、C.36.3(タイ)、B.1.619(カメルーン)、R.1(ケンタッキー、米国)、B.1.1.176(カナダ)、AZ.3、AY.1(インド)、AY.2(インド)、AY.4(インド)、AY.4.2(デルタプラス、インド)、B.1.617.3(インド)、B.1.351(ベータ、南アフリカ)、B.1.1.7(アルファ、英国)、P.1(ガンマ、ブラジル)、B.1.427/B.1.429(イプシロン、カリフォルニア、米国)、B.1.525(エータ、ナイジェリア)、B.1.258(チェコ共和国)、B.1.526(イオタ、ニューヨーク、米国)、A.23.1(ウガンダ)、B.1.617.1(カッパー、インド)、B.1.617.2(デルタ、インド)、P.2(ゼータ、ブラジル)、C37.1(ラムダ、ペルー)、P.3(シータ、フィリピン)、及び/又はB.1.621(ミュー、コロンビア)を含む1つ以上のSARS-Cov-2株用のものであってもよい。 In a third aspect, the invention provides a SARS-CoV-2 variant vaccine, the vaccine comprising at least one RNA of the first aspect or at least one composition of the second aspect. In a preferred embodiment, the second aspect relates to a multivalent SARS-CoV-2 vaccine. In a preferred embodiment, the third aspect relates to a SARS-CoV-2 variant booster vaccine. SARS-CoV-2 variant booster vaccines include, but are not limited to, C.1.2 (South Africa), B.1.1.529 (Omicron, South Africa) (BA.1_v1, BA.1_v0, B.1.1.529, BA .2, BA.1_v2, BA.1_v3, BA.1_v4, BA.1_v5), C.36.3 (Thailand), B.1.619 (Cameroon), R.1 (Kentucky, USA), B.1.1.176 (Canada), AZ.3, AY.1 (India), AY.2 (India), AY.4 (India), AY.4.2 (Delta Plus, India), B.1.617.3 (India), B. 1.351 (Beta, South Africa), B.1.1.7 (Alpha, UK), P.1 (Gamma, Brazil), B.1.427/B.1.429 (Epsilon, California, USA), B.1.525 (Eta, Nigeria) , B.1.258 (Czech Republic), B.1.526 (Iota, New York, USA), A.23.1 (Uganda), B.1.617.1 (Copper, India), B.1.617.2 (Delta, India), P For one or more SARS-Cov-2 strains including .2 (Zeta, Brazil), C37.1 (Lambda, Peru), P.3 (Theta, Philippines), and/or B.1.621 (Mu, Colombia) It may be of.

第四の態様では、本発明は、第一の態様の少なくとも1つのRNA、及び/又は第二の態様の少なくとも1つの組成物、及び/又は第三の態様の少なくとも1つのSARS-CoV-2バリアントワクチンを含む、キット又はパーツのキット（kit of parts）を提供する。 In a fourth aspect, the invention provides at least one RNA of the first aspect, and/or at least one composition of the second aspect, and/or at least one SARS-CoV-2 composition of the third aspect. Provide kits or kits of parts containing variant vaccines.

第五の態様では、本発明は、少なくとも2つの別々の成分を含む組み合わせを提供し、少なくとも2つの別々の成分は、第一の態様のRNA種、及び/又は第二の態様の組成物、及び/又は第三の態様のSARS-CoV-2バリアントワクチンそれぞれであり、すなわち、それぞれの成分は、異なるSARS-Cov-2を対象とするRNA種、組成物及び/又はSARS-Cov-2バリアントワクチンであり、前記2つの別々の成分は、それぞれ、限定するものではないが、C.1.2(南アフリカ)、B.1.1.529(オミクロン、南アフリカ)(BA.1_v1、BA.1_v0、B.1.1.529、BA.2、BA.1_v2、BA.1_v3、BA.1_v4、BA.1_v5を含む)、C.36.3(タイ)、B.1.619(カメルーン)、R.1(ケンタッキー、米国)、B.1.1.176(カナダ)、AZ.3、AY.1(インド)、AY.2(インド)、AY.4(インド)、AY.4.2(デルタプラス、インド)、B.1.617.3(インド)、B.1.351(ベータ、南アフリカ)、B.1.1.7(アルファ、英国)、P.1(ガンマ、ブラジル)、B.1.427/B.1.429(イプシロン、カリフォルニア、米国)、B.1.525(エータ、ナイジェリア)、B.1.258(チェコ共和国)、B.1.526(イオタ、ニューヨーク、米国)、A.23.1(ウガンダ)、B.1.617.1(カッパー、インド)、B.1.617.2(デルタ、インド)、P.2(ゼータ、ブラジル)、C37.1(ラムダ、ペルー)、P.3(シータ、フィリピン)、及び/又はB.1.621(ミュー、コロンビア)を含むSARS-Cov-2バリアントを対象としていてもよい。 In a fifth aspect, the invention provides a combination comprising at least two separate components, the at least two separate components being the RNA species of the first aspect, and/or the composition of the second aspect; and/or a SARS-CoV-2 variant vaccine of the third embodiment, i.e. each component comprises a different SARS-Cov-2 directed RNA species, composition and/or SARS-Cov-2 variant vaccine. vaccine, said two separate components being, respectively, but not limited to, C.1.2 (South Africa), B.1.1.529 (Omicron, South Africa) (BA.1_v1, BA.1_v0, B.1.1 .529, BA.2, BA.1_v2, BA.1_v3, BA.1_v4, BA.1_v5), C.36.3 (Thailand), B.1.619 (Cameroon), R.1 (Kentucky, USA), B .1.1.176 (Canada), AZ.3, AY.1 (India), AY.2 (India), AY.4 (India), AY.4.2 (Delta Plus, India), B.1.617.3 (India) ), B.1.351 (Beta, South Africa), B.1.1.7 (Alpha, UK), P.1 (Gamma, Brazil), B.1.427/B.1.429 (Epsilon, California, USA), B.1.525 ( Eta, Nigeria), B.1.258 (Czech Republic), B.1.526 (Iota, New York, USA), A.23.1 (Uganda), B.1.617.1 (Copper, India), B.1.617.2 (Delta, SARS-Cov-2 variants including P.2 (Zeta, Brazil), C37.1 (Lambda, Peru), P.3 (Theta, Philippines), and/or B.1.621 (Mu, Colombia) It may be targeted.

本発明のさらなる態様は、対象におけるSARS-CoV-2感染を処置又は予防する方法、並びに核酸、組成物、及びワクチンの第一及び第二の医学的使用に関する。核酸、組成物、又はワクチンを製造する方法もまた提供される。 Further aspects of the invention relate to methods of treating or preventing SARS-CoV-2 infection in a subject, and first and second medical uses of the nucleic acids, compositions, and vaccines. Also provided are methods of producing the nucleic acids, compositions, or vaccines.

発明の詳細な説明
本出願は、本出願の説明の一部である、電気的フォーマットの配列表と一緒に出願されている(WIPO標準ST.25)。配列表に含まれる情報は、その全体が参照により本明細書に取り込まれる。本明細書において「配列番号」に言及する場合、それぞれの識別子を有する配列表中の対応する核酸配列又はアミノ酸(aa)配列を言及する。多くの配列について、配列表はまた、例えば、ある特定の構造特色、配列最適化、GenBank(NCBI)若しくはGISAID(epi)識別子に関するさらなる詳細な情報、又はそのコード能力に関するさらなる詳細な情報を提供する。特に、このような情報は、WIPO標準ST.25配列表中の数値識別子<223>下に提供される。したがって、前記数値識別子<223>下に提供される情報は、その全体が本明細書に明示的に含まれ、根本的な本発明の説明の不可欠な部分として理解されなければならない。 DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION This application has been filed together with a Sequence Listing in electronic format (WIPO Standard ST.25), which is part of the description of this application. The information contained in the Sequence Listing is incorporated herein by reference in its entirety. References herein to "SEQ ID NO:" refer to the corresponding nucleic acid sequence or amino acid (aa) sequence in the sequence listing with the respective identifier. For many sequences, the sequence listing also provides further detailed information regarding, for example, certain structural features, sequence optimizations, GenBank (NCBI) or GISAID (epi) identifiers, or further detailed information regarding its coding capabilities. . In particular, such information is provided under the numerical identifier <223> in the WIPO standard ST.25 sequence listing. Accordingly, the information provided under said numerical identifier <223> is expressly included herein in its entirety and must be understood as an integral part of the underlying description of the invention.

SARS-CoV-2バリアントワクチンに適したRNA:
第一の態様では、本発明は、SARS-CoV-2バリアントワクチンに適したRNAに関する。 RNA suitable for SARS-CoV-2 variant vaccines:
In a first aspect, the invention relates to RNA suitable for SARS-CoV-2 variant vaccines.

本発明の第一の態様、すなわち、本発明のRNAの文脈で記載される特定の特色及び実施形態は、第二の態様(本発明の組成物)、第三の態様(本発明のワクチン)、第四の態様(本発明のキット若しくはパーツのキット)、第五の態様(本発明の組み合わせ)、又は医学的使用及び処置方法を含むさらなる態様に同様に適用可能であることは、留意すべきである。 Certain features and embodiments described in the context of the first aspect of the invention, i.e. the RNA of the invention, are similar to those described in the second aspect (compositions of the invention), third aspect (vaccines of the invention). , the fourth aspect (kit or kit of parts of the invention), the fifth aspect (combinations of the invention) or further aspects including medical uses and methods of treatment. Should.

第一の態様のRNAは、RNAベースの組成物又はワクチンの基礎を形成する。一般的に、タンパク質ベースのワクチン、又は弱毒生ワクチンは、それらの高い生産コストに起因して、開発途上国での使用に最適以下である。さらに、タンパク質ベースのワクチン、又は弱毒生ワクチンは、長い開発時間を必要とし、パンデミックウイルス大流行、例えば、2019/2020年のSARS-CoV-2大流行の迅速な応答に適していない。対照的に、本発明によるRNAベースのワクチンは、非常に迅速かつコスト効率の高い生産を可能にする。したがって、公知のワクチンと比較して、本発明のRNAに基づくワクチンは、大幅により安くかつより迅速に生産することができ、これは、特に、開発途上国での使用に非常に有利である。RNAに基づくワクチンの1つのさらなる利点は、タンパク質又はペプチドベースのワクチンと比較した、その温度安定性であり得る。 The RNA of the first embodiment forms the basis of an RNA-based composition or vaccine. Generally, protein-based vaccines, or live attenuated vaccines, are suboptimal for use in developing countries due to their high production costs. Furthermore, protein-based vaccines, or live attenuated vaccines, require long development times and are not suitable for rapid response to pandemic virus outbreaks, such as the 2019/2020 SARS-CoV-2 outbreak. In contrast, RNA-based vaccines according to the invention allow for very rapid and cost-effective production. Therefore, compared to known vaccines, the RNA-based vaccines of the invention can be produced significantly cheaper and more quickly, which is of great advantage, especially for use in developing countries. One further advantage of RNA-based vaccines may be their temperature stability compared to protein- or peptide-based vaccines.

特に好ましい実施形態では、本発明の第一の態様は、SARS-CoV-2スパイクタンパク質又はその免疫原性フラグメント若しくは免疫原性バリアント由来の少なくとも1つの抗原性ペプチド又はタンパク質をコードする少なくとも1つのコード配列を含むRNAに関し、RNAは、少なくとも1つの異種非翻訳領域(UTR)を含み、SARS-CoV-2スパイクタンパク質は、SARS-CoV-2バリアント及び場合により、SARS-Co-2株の安定化変異から選択される少なくとも1個のアミノ酸置換を含む。 In a particularly preferred embodiment, the first aspect of the invention provides at least one code encoding at least one antigenic peptide or protein derived from the SARS-CoV-2 spike protein or an immunogenic fragment or variant thereof. With respect to RNA containing sequences, the RNA includes at least one heterologous untranslated region (UTR), and the SARS-CoV-2 spike protein stabilizes SARS-CoV-2 variants and, optionally, SARS-Co-2 strains. Contains at least one amino acid substitution selected from mutations.

用語「SARS-CoV-2スパイクタンパク質由来の抗原性ペプチド又はタンパク質」は、本明細書において、(i)SARS-CoV-2バリアントタンパク質(若しくはそのフラグメント)と同一である抗原性ペプチド又はタンパク質(若しくはそのフラグメント)のアミノ酸配列を有するSARS-CoV-2スパイクタンパク質である抗原、或いは(ii)対応するSARS-CoV-2バリアントタンパク質(若しくはそのフラグメント)と同一でない抗原性ペプチド又はタンパク質(若しくはそのフラグメント)のアミノ酸配列を有するSARS-CoV-2スパイクタンパク質から誘導される抗原を意味する。例えば、それぞれのSARS-CoV-2スパイクタンパク質は、SARS-CoV-2バリアント及び/又は少なくとも1つの融合前の安定化変異から選択される少なくとも1個のアミノ酸置換、挿入又は欠失を含んでもよい。 The term "antigenic peptide or protein derived from the SARS-CoV-2 spike protein" as used herein refers to (i) an antigenic peptide or protein (or (ii) an antigenic peptide or protein (or fragment thereof) that is not identical to the corresponding SARS-CoV-2 variant protein (or fragment thereof); refers to an antigen derived from the SARS-CoV-2 spike protein having the amino acid sequence of For example, each SARS-CoV-2 spike protein may include at least one amino acid substitution, insertion, or deletion selected from a SARS-CoV-2 variant and/or at least one prefusion stabilizing mutation. .

用語「免疫原性フラグメント」又は「免疫原性バリアント」は、本明細書において、対象において免疫応答を生じさせる能力がある対応するSARS-CoV-2抗原の任意のフラグメント/バリアントを意味する。好ましくは、第一の態様のRNAの筋肉内又は皮内投与は、対象においてコードされるSARS-CoV-2スパイクタンパク質の発現をもたらす。 The term "immunogenic fragment" or "immunogenic variant" as used herein means any fragment/variant of the corresponding SARS-CoV-2 antigen that is capable of generating an immune response in a subject. Preferably, intramuscular or intradermal administration of the RNA of the first embodiment results in expression of the encoded SARS-CoV-2 spike protein in the subject.

本明細書で使用される場合、用語「発現」は、SARS-CoV-2スパイクタンパク質の産生を指し、前記SARS-CoV-2スパイクタンパク質は、第一の態様のRNAのコード配列によって提供される。例えば、RNAの「発現」は、SARS-CoV-2コロナウイルスであるか、又はSARS-CoV-2コロナウイルスから誘導される、RNAのポリペプチド、例えば、ペプチド又はタンパク質への翻訳を介したタンパク質(例えば、前記RNAの細胞又は対象への投与後)の産生を指す。用語「発現」及び用語「産生」は、本明細書において互換的に使用され得る。さらに、用語「発現」は、好ましくは、RNAの細胞又は生物への投与の際のある特定のペプチド又はタンパク質の産生に関する。 As used herein, the term "expression" refers to the production of the SARS-CoV-2 spike protein, said SARS-CoV-2 spike protein being provided by the coding sequence of the RNA of the first aspect. . For example, "expression" of RNA is or is derived from the SARS-CoV-2 coronavirus, and protein via the translation of the RNA into a polypeptide, e.g., a peptide or protein. (e.g., following administration of said RNA to a cell or subject). The terms "expression" and "production" may be used interchangeably herein. Furthermore, the term "expression" preferably relates to the production of a particular peptide or protein upon administration of RNA to a cell or organism.

好ましい実施形態では、本発明のRNAは、SARS-CoV-2バリアントワクチンに適している。 In a preferred embodiment, the RNA of the invention is suitable for SARS-CoV-2 variant vaccines.

SARS-CoV-2スパイクタンパク質は、頭部(S1)及び幹(S2)からなるそれぞれのモノマーとともに、ウイルス表面に三量体として存在するI型ウイルス融合タンパク質である。個々の前駆体Sポリペプチドは、ホモ三量体を形成し、ゴルジ体内でのグリコシル化並びにシグナルペプチドを除去するための処理を受け、細胞タンパク質分解酵素によって切断されて、別々のS1及びS2ポリペプチド鎖を生じ、ホモ三量体内のS1/S2プロモーターとして会合したままであり、したがって、ヘテロ二量体の三量体である。スパイク糖タンパク質のS1ドメインは、アンギオテンシン変換酵素2受容体と係合し(最も可能性が高い)、宿主細胞へのウイルス融合を介在する受容体結合ドメイン(RBD)、標的細胞と最初に接触し得るN末端ドメイン、及び2つのサブドメインを含み、そのすべてが、中和抗体に感受性である。S2ドメインは、宿主エンドソーム膜との膜融合に関与する6つのヘリックス束融合コアからなり、中和の標的でもある。S2サブユニットは、2つの7アミノ酸繰り返し配列(HR1及びHR2)並びに融合糖タンパク質に典型的な中心ヘリックス、膜貫通型ドメイン、並びにサイトゾル側末端ドメインをさらに含む。 The SARS-CoV-2 spike protein is a type I viral fusion protein that exists as a trimer on the virus surface, with each monomer consisting of a head (S1) and a stem (S2). The individual precursor S polypeptides form homotrimers, undergo glycosylation within the Golgi and processing to remove the signal peptide, and are cleaved by cellular proteolytic enzymes to form separate S1 and S2 polypeptides. It produces a peptide chain and remains associated as the S1/S2 promoter within a homotrimer, thus being a trimer of heterodimers. The S1 domain of the spike glycoprotein is the receptor-binding domain (RBD) that engages (most likely) the angiotensin-converting enzyme 2 receptor and mediates virus fusion to the host cell, making initial contact with the target cell. It contains an N-terminal domain, and two subdomains, all of which are sensitive to neutralizing antibodies. The S2 domain consists of a six-helix bundle fusion core that is involved in membrane fusion with the host endosomal membrane and is also a target for neutralization. The S2 subunit further contains two heptad repeats (HR1 and HR2) and a central helix typical of fusion glycoproteins, a transmembrane domain, and a cytosolic terminal domain.

本発明の文脈では、SARS-CoV-2バリアントから選択されるか、又は誘導され、配列番号1と比較した場合、少なくとも1個のアミノ酸置換、欠失又は挿入を含む、任意のスパイクタンパク質が、使用されてもよく、第一の態様のコード配列又はRNAによって適当にコードされてもよい。さらに、少なくとも1つの抗原性ペプチド又はタンパク質が、合成的に作出された、又は人工SARS-CoV-2スパイクタンパク質を含むか、又はそれからなり得ることは、根本的な本発明の範囲内にある。用語「合成的に作出された」SARS-CoV-2スパイクタンパク質、又は用語「人工SARS-CoV-2スパイクタンパク質」又は用語「組換え」SARS-CoV-2スパイクタンパク質は、天然で生じないタンパク質に関する。したがって、「人工SARS-CoV-2スパイクタンパク質」又は「合成的に作出されたSARS-CoV-2スパイクタンパク質」又は用語「組換え」SARS-CoV-2スパイクタンパク質は、例えば、天然に存在するSARS-CoV-2スパイクタンパク質と比較して、少なくとも1つのアミノ酸が異なっていてもよく(例えば、天然に存在するSARS-CoV-2スパイクタンパク質と比較して、1つ以上の異種/導入されたアミノ酸を含む)、及び/又はさらなる異種ペプチド若しくはタンパク質エレメントを含んでもよく、及び/又はN末端若しくはC末端で伸長若しくは切断されていてもよい。 In the context of the present invention, any spike protein selected or derived from a SARS-CoV-2 variant and comprising at least one amino acid substitution, deletion or insertion when compared to SEQ ID NO: 1 may be used and suitably encoded by the coding sequence or RNA of the first embodiment. Furthermore, it is within the scope of the underlying invention that the at least one antigenic peptide or protein may comprise or consist of a synthetically produced or artificial SARS-CoV-2 spike protein. The term “synthetically produced” SARS-CoV-2 spike protein, or the term “artificial SARS-CoV-2 spike protein” or the term “recombinant” SARS-CoV-2 spike protein refers to a protein that does not occur in nature. . Therefore, "artificial SARS-CoV-2 spike protein" or "synthetically produced SARS-CoV-2 spike protein" or the term "recombinant" SARS-CoV-2 spike protein refers to, for example, the naturally occurring SARS-CoV-2 spike protein. - May differ by at least one amino acid compared to the CoV-2 spike protein (e.g. one or more foreign/introduced amino acids compared to the naturally occurring SARS-CoV-2 spike protein) ), and/or may contain additional heterologous peptide or protein elements, and/or may be extended or truncated at the N-terminus or C-terminus.

以下で、本発明のRNAによってもたらされる好ましい抗原性ペプチド又はタンパク質配列が、詳細に記載される。 In the following, preferred antigenic peptide or protein sequences provided by the RNA of the invention are described in detail.

SARS-CoV-2スパイクタンパク質(S)におけるアミノ酸(aa)残基及びそれらの位置に言及する場合、本明細書で使用される任意のナンバリングは、別段指定されない限り、配列番号1によるオリジナルのSARS-CoV-2コロナウイルス分離株EPI_ISL_402128の対応するスパイクタンパク質(S)におけるそれぞれのアミノ酸残基の位置に関することに注意されるべきである。それぞれのアミノ酸位置は、本開示全体で、オリジナルのSARS-CoV-2コロナウイルス分離株EPI_ISL_402128(配列番号1)のスパイクタンパク質(S)について例示的に示される。 When referring to amino acid (aa) residues and their positions in the SARS-CoV-2 spike protein (S), any numbering used herein refers to the original SARS according to SEQ ID NO: 1, unless otherwise specified. -It should be noted that regarding the position of each amino acid residue in the corresponding spike protein (S) of CoV-2 coronavirus isolate EPI_ISL_402128. Each amino acid position is exemplarily shown throughout this disclosure for the spike protein (S) of the original SARS-CoV-2 coronavirus isolate EPI_ISL_402128 (SEQ ID NO: 1).

本明細書で使用される場合、タンパク質アノテーションは、参照タンパク質としての配列番号1に関する。オリジナルのSARS-CoV-2コロナウイルス参照タンパク質の全長スパイクタンパク質(S)は、1273個のアミノ酸残基を有し、以下のエレメントを含む。
- 分泌型シグナルペプチド：アミノ酸位置aa1～aa15(配列番号28を参照)
- スパイクタンパク質フラグメントS1：アミノ酸位置aa1～aa681(配列番号27を参照)
- S1-N末端ドメイン(S1-NTD)：アミノ酸位置aa13～aa303(配列番号26992を参照)
- 受容体結合ドメイン(RBD)：アミノ酸位置aa319～aa541(配列番号13243を参照)
- 重要な中和ドメイン(CND)：アミノ酸位置aa329～aa529(配列番号13310を参照)
- スパイクタンパク質フラグメントS2：アミノ酸位置aa682～aa1273(配列番号30を参照)
- 膜貫通型ドメイン(TM)：アミノ酸位置aa1212～aa1273(配列番号49を参照)
- 膜貫通型ドメイン(TMflex)：アミノ酸位置aa1148～aa1273(配列番号13176を参照)
- フューリン切断部位領域(S1/S2)：アミノ酸位置aa681～aa685(配列番号26994を参照) As used herein, protein annotation refers to SEQ ID NO: 1 as the reference protein. The full-length spike protein (S) of the original SARS-CoV-2 coronavirus reference protein has 1273 amino acid residues and contains the following elements:
- Secretory signal peptide: amino acid positions aa1 to aa15 (see SEQ ID NO: 28)
- Spike protein fragment S1: amino acid positions aa1 to aa681 (see SEQ ID NO: 27)
- S1-N-terminal domain (S1-NTD): amino acid positions aa13 to aa303 (see SEQ ID NO: 26992)
- Receptor binding domain (RBD): amino acid positions aa319 to aa541 (see SEQ ID NO: 13243)
- Critical neutralization domain (CND): amino acid positions aa329 to aa529 (see SEQ ID NO: 13310)
- Spike protein fragment S2: amino acid positions aa682 to aa1273 (see SEQ ID NO: 30)
- Transmembrane domain (TM): amino acid positions aa1212 to aa1273 (see SEQ ID NO: 49)
- Transmembrane domain (TMflex): amino acid positions aa1148 to aa1273 (see SEQ ID NO: 13176)
- Furin cleavage site region (S1/S2): amino acid positions aa681 to aa685 (see SEQ ID NO: 26994)

アミノ酸レベルの変動は、異なるSARS-CoV-2分離株又はSARS-CoV-2バリアントから誘導されるスパイクタンパク質間で天然に生じることは、注意されるべきである。本発明の文脈では、このようなアミノ酸変動は、本明細書で記載されるスパイクタンパク質から誘導される抗原性ペプチド又はタンパク質に適用することができる。好適には、アミノ酸変動又は変異は、1)置換/変異が誘導されたSARS-CoV-2ウイルスバリアントに対する免疫応答を誘導するような、及び/又は(2)免疫応答を誘導するのに望ましい抗原性ペプチド若しくはタンパク質(例えば、スパイクタンパク質から誘導され、融合前の形態である抗原性ペプチド若しくはタンパク質)を産生するような方法で選択される。 It should be noted that variations in amino acid levels occur naturally between spike proteins derived from different SARS-CoV-2 isolates or SARS-CoV-2 variants. In the context of the present invention, such amino acid variations can be applied to antigenic peptides or proteins derived from the spike protein described herein. Preferably, the amino acid variation or mutation is such that 1) it induces an immune response against the SARS-CoV-2 virus variant in which the substitution/mutation has been induced, and/or (2) it is an antigen that is desirable for inducing an immune response. the antigenic peptide or protein (eg, an antigenic peptide or protein derived from the spike protein in its pre-fusion form).

したがって、特に好ましい実施形態では、本発明のRNAは、少なくとも1つのSARS-CoV-2スパイクタンパク質、又はその免疫原性フラグメント若しくは免疫原性バリアントをコードする少なくとも1つのコード配列を含み、SARS-CoV-2スパイクタンパク質は、SARS-CoV-2バリアントから選択される少なくとも1個のアミノ酸置換、欠失、又は挿入を含む。 Therefore, in a particularly preferred embodiment, the RNA of the invention comprises at least one coding sequence encoding at least one SARS-CoV-2 spike protein, or an immunogenic fragment or variant thereof, and The -2 spike protein contains at least one amino acid substitution, deletion, or insertion selected from a SARS-CoV-2 variant.

その文脈で、用語「SARS-CoV-2バリアントから選択される少なくとも1個のアミノ酸置換、欠失、又は挿入」は、本明細書において、オリジナルのSARS-CoV-2スパイクタンパク質(配列番号1の参照株による)と異なるSARS-CoV-2スパイクタンパク質(若しくはそのフラグメント)における少なくとも1つのアミノ酸位置を意味する。 In that context, the term "at least one amino acid substitution, deletion, or insertion selected from a SARS-CoV-2 variant" herein refers to the original SARS-CoV-2 spike protein (SEQ ID NO: 1). refers to at least one amino acid position in the SARS-CoV-2 spike protein (or fragment thereof) that differs from the reference strain).

好ましい実施形態では、SARS-CoV-2バリアントは、以下のSARS-CoV-2系統:C.1.2(南アフリカ)、B.1.1.529(オミクロン、南アフリカ)(BA.1_v1、BA.1_v0、B.1.1.529、BA.2、BA.1_v2、BA.1_v3、BA.1_v4、BA.1_v5を含む)、C.36.3(タイ)、B.1.619(カメルーン)、R.1(ケンタッキー、米国)、B.1.1.176(カナダ)、AZ.3、AY.1(インド)、AY.2(インド)、AY.4(インド)、AY.4.2(デルタプラス、インド)、B.1.617.3(インド)、B.1.351(ベータ、南アフリカ)、B.1.1.7(アルファ、英国)、P.1(ガンマ、ブラジル)、B.1.427/B.1.429(イプシロン、カリフォルニア、米国)、B.1.525(エータ、ナイジェリア)、B.1.258(チェコ共和国)、B.1.526(イオタ、ニューヨーク、米国)、A.23.1(ウガンダ)、B.1.617.1(カッパー、インド)、B.1.617.2(デルタ、インド)、P.2(ゼータ、ブラジル)、C37.1(ラムダ、ペルー)、P.3(シータ、フィリピン)、及び/又はB.1.621(ミュー、コロンビア)から選択されるか、又は誘導される。 In a preferred embodiment, the SARS-CoV-2 variants are the following SARS-CoV-2 strains: C.1.2 (South Africa), B.1.1.529 (Omicron, South Africa) (BA.1_v1, BA.1_v0, B. 1.1.529, BA.2, BA.1_v2, BA.1_v3, BA.1_v4, BA.1_v5), C.36.3 (Thailand), B.1.619 (Cameroon), R.1 (Kentucky, USA), B.1.1.176 (Canada), AZ.3, AY.1 (India), AY.2 (India), AY.4 (India), AY.4.2 (Delta Plus, India), B.1.617.3 ( India), B.1.351 (Beta, South Africa), B.1.1.7 (Alpha, UK), P.1 (Gamma, Brazil), B.1.427/B.1.429 (Epsilon, California, USA), B.1.525 (Eta, Nigeria), B.1.258 (Czech Republic), B.1.526 (Iota, New York, USA), A.23.1 (Uganda), B.1.617.1 (Copper, India), B.1.617.2 (Delta , India), P.2 (Zeta, Brazil), C37.1 (Lambda, Peru), P.3 (Theta, Philippines), and/or B.1.621 (Mu, Colombia) or derived from be done.

特に好ましい実施形態では、SARS-CoV-2バリアントは、以下のSARS-CoV-2系統:B.1.351(南アフリカ)、P.1(ブラジル)、B.1.617.1(インド)、B.1.617.2(インド)、B.1.617.3(インド)、B.1.1.529(オミクロン、南アフリカ)(BA.1_v1、BA.1_v0、B.1.1.529、BA.2、BA.1_v2、BA.1_v3、BA.1_v4、BA.1_v5を含む)から選択されるか、又は誘導される。 In a particularly preferred embodiment, the SARS-CoV-2 variant is one of the following SARS-CoV-2 lineages: B.1.351 (South Africa), P.1 (Brazil), B.1.617.1 (India), B.1.617. 2 (India), B.1.617.3 (India), B.1.1.529 (Omicron, South Africa) (BA.1_v1, BA.1_v0, B.1.1.529, BA.2, BA.1_v2, BA.1_v3 , BA.1_v4, BA.1_v5) or derived from the following.

したがって、本明細書において提供され、本発明の文脈で好適な抗原として企図されるそれぞれのスパイクタンパク質は、リスト1において提供される以下のアミノ酸変動又は変異(参照配列番号1によるアミノ酸位置)のうちの1個以上を有してもよい。以下で提供される変動又は変異は、新たに出現したSARS-CoV-2ウイルスバリアントから誘導され、本発明のRNAによってコードされるスパイクタンパク質に組み込まれてもよい。 Accordingly, each spike protein provided herein and contemplated as a suitable antigen in the context of the present invention may be one of the following amino acid variations or mutations provided in Listing 1 (amino acid positions according to reference SEQ ID NO: 1): It may have one or more of the following. The variations or mutations provided below may be derived from newly emerged SARS-CoV-2 virus variants and incorporated into the spike protein encoded by the RNA of the invention.

リスト1A:置換、欠失及び/又は挿入のアミノ酸位置
H69;V70;A222;Y453;S477;I692;R403;K417;N437;N439;V445;G446;L455;F456;K458;A475;G476;T478;E484;G485;F486;N487;Y489;F490;Q493;S494;P499;T500;N501;V503;G504;Y505;Q506;Y144;A570;P681;T716;S982;D1118;L18;D80;D215;L242;A243;L244;R246;A701;T20;P26;D138;R190;H655;T1027;S13;W152;L452;R346;P384;G447;G502;T748;A522;V1176;T859;S247;Y248;L249;T250;P251;G252;G75;T76;D950;E154;G769;S254;Q613;F157;R158;Q957;D253;T95;F888;Q677;A67;Q414;N450;V483;G669;T732;Q949;Q1071;E1092;H1101;N1187;W258;T19;V126;H245;S12;A899;G142;E156;K558;G339;P9;C136;Y449;L24;P25;P26;A27;V213;S371;T376;D405;A701;I210;D936;S939;R357;R682;R683;A684;R685;V143;Y144;Y145;N211;L212;R214;E241;G339;S371;S373;S375;N440;G496;Q498;Y505;T547;D614;N679;P681;N764;D796;N856;Q954;N969;L981又はQ52(配列番号1の配列に対する)。 List 1A: Amino acid positions of substitutions, deletions and/or insertions
H69;V70;A222;Y453;S477;I692;R403;K417;N437;N439;V445;G446;L455;F456;K458;A475;G476;T478;E484;G485;F486;N487;Y489;F490;Q493; S494;P499;T500;N501;V503;G504;Y505;Q506;Y144;A570;P681;T716;S982;D1118;L18;D80;D215;L242;A243;L244;R246;A701;T20;P26;D138; R190; H655; t1027; w13; W152; L452; r346; p384; g447; G502; t748; v1176; T859; S247; L249; L249; T250; p251; g7 5; t76; d950; E154; g769; S254;Q613;F157;R158;Q957;D253;T95;F888;Q677;A67;Q414;N450;V483;G669;T732;Q949;Q1071;E1092;H1101;N1187;W258;T19;V126;H245;S12 ; A899;G142;E156;K558;G339;P9;C136;Y449;L24;P25;P26;A27;V213;S371;T376;D405;A701;I210;D936;S939;R357;R682;R683;A684;R685; V143;Y144;Y145;N211;L212;R214;E241;G339;S371;S373;S375;N440;G496;Q498;Y505;T547;D614;N679;P681;N764;D796;N856;Q954;N969;L981 or Q52 (for the sequence SEQ ID NO: 1).

リスト1B:アミノ酸置換、欠失又は挿入
H69del;V70del;A222V;Y453F;S477N;I692V;R403K;K417N;N437S;N439K;V445A;V445I;V445F;G446V;G446S;G446A;L455F;F456L;K458N;A475V;G476S;G476A;S477I;S477R;S477G;S477T;T478I;T478K;T478R;T478A;E484Q;E484K;E484A;E484D;G485R;G485S;F486L;N487I;Y489H;F490S;F490L;Q493L;Q493K;S494P;S494L;P499L;T500I;N501Y;N501T;N501S;V503F;V503I;G504D;Y505W;Q506K;Q506H;Y144del;A570D;P681H;T716I;S982A;D1118H;L18F;D80A;D215G;L242del;A243del;L244del;L242del;A243del;L244del;R246I;A701V;T20N;P26S;D138Y;R190S;H655Y;T1027I;S13I;W152C;L452R;R346T;P384L;L452M;F456A;F456K;F456V;E484P;K417T;G447V;L452Q;A475S;F486I;F490Y;Q493R;S494A;P499H;P499S;G502V;T748K;A522S;V1176F;T859N;S247del;Y248del;L249del;T250del;P251del;G252del;R246del;S247del;Y248del;L249del;T250del;P251del;G252del;G75V;T76I;G75V;T76I;D950N;P681R;E154K;G769V;S254F;Q613H;F157L;F157del;R158del;Q957R;D253G;T95I;F888L;Q677H;A67V;Q414K;N450K;V483A;G669S;T732A;Q949R;Q1071H;E1092K;H1101Y;N1187D;W258L;V70F;T19R;T19I;Y144T;Y145S;ins145N;R346K;R346S;V126A;H245Y;ins214TDR;S12F;W152R;A899S;G142D;E156G;K558N;P9L;C136F;Y449H;L24del;P25del;P26del;A27S;V213G;S371F;T376A;D405N;D253N;Y144S;I210T;D936N;S939F;W152L;T20I;R357K;D796H;Y145H;R682del;R683del;A684del;R685del;A701V;V143del;Y144del;Y145del;Y145N;N211del;L212del;L212I;ins214EPE;E241del;G339D;S371L;S373P;S375F;N440K;G496S;Q498R;Y505H;T547K;D614G;N679K;P681H;N764K;D796Y;N856K;Q954H;N969K;L981F又はQ52R(配列番号1の配列に対する)。 List 1B: Amino acid substitution, deletion or insertion
H69del;V70del;A222V;Y453F;S477N;I692V;R403K;K417N;N437S;N439K;V445A;V445I;V445F;G446V;G446S;G446A;L455F;F456L;K458N;A475V;G476S; G476A;S477I;S477R;S477G; S477T;T478I;T478K;T478R;T478A;E484Q;E484K;E484A;E484D;G485R;G485S;F486L;N487I;Y489H;F490S;F490L;Q493L;Q493K;S494P;S494L;P499 L;T500I;N501Y;N501T;N501S; V503F;V503I;G504D;Y505W;Q506K;Q506H;Y144del;A570D;P681H;T716I;S982A;D1118H;L18F;D80A;D215G;L242del;A243del;L244del;L242del;A243del;L244del ;R246I;A701V;T20N;P26S; D138Y;R190S;H655Y;T1027I;S13I;W152C;L452R;R346T;P384L;L452M;F456A;F456K;F456V;E484P;K417T;G447V;L452Q;A475S;F486I;F490Y;Q493 R;S494A;P499H;P499S;G502V; T748K;A522S;V1176F;T859N;S247del;Y248del;L249del;T250del;P251del;G252del;R246del;S247del;Y248del;L249del;T250del;P251del;G252del;G75V;T76I;G75V;T76I;D 950N;P681R;E154K;G769V; S254F;Q613H;F157L;F157del;R158del;Q957R;D253G;T95I;F888L;Q677H;A67V;Q414K;N450K;V483A;G669S;T732A;Q949R;Q1071H;E1092K;H1101Y;N11 87D;W258L;V70F;T19R;T19I; Y144T; Y145S; ins145N; R346K; R346S; V126A; H245Y; ins214TDR; S12F; W152R; A899S; G;S371F;T376A;D405N; D253N;Y144S;I210T;D936N;S939F;W152L;T20I;R357K;D796H;Y145H;R682del;R683del;A684del;R685del;A701V;V143del;Y144del;Y145del;Y145N;N211del;L212del ;L212I;ins214EPE;E241del;G339D; S371L; S373P; S375F; N440K; G496S; Q498R; Y505H; T547K; D614G; N679K; P681H; N764K; D796Y; N856K; Q954H; N969K;

好ましい実施形態では、少なくとも1つのSARS-CoV-2スパイクタンパク質又はその免疫原性フラグメント若しくは免疫原性バリアントをコードする少なくとも1つのコード配列を含むRNAが提供され、SARS-CoV-2スパイクタンパク質は、配列番号1の配列に対してH69;V70;A222;Y453;S477;I692;R403;K417;N437;N439;V445;G446;L455;F456;K458;A475;G476;T478;E484;G485;F486;N487;Y489;F490;Q493;S494;P499;T500;N501;V503;G504;Y505;Q506;Y144;A570;P681;T716;S982;D1118;L18;D80;D215;L242;A243;L244;R246;A701;T20;P26;D138;R190;H655;T1027;S13;W152;L452;R346;P384;G447;G502;T748;A522;V1176;T859;S247;Y248;L249;T250;P251;G252;G75;T76;D950;E154;G769;S254;Q613;F157;R158;Q957;D253;T95;F888;Q677;A67;Q414;N450;V483;G669;T732;Q949;Q1071;E1092;H1101;N1187;W258;T19;V126;H245;S12;A899;G142;E156;K558;及び/又はQ52に対応する位置において少なくとも1個のアミノ酸置換、欠失又は挿入を含み、RNAは、少なくとも1つの異種非翻訳領域を含む。ある特定の態様では、RNAは、配列番号268の配列を含む3'UTRを含まない。ある特定の態様では、RNAは、配列番号268の配列を含む3'UTRを含む。 In a preferred embodiment, an RNA is provided comprising at least one coding sequence encoding at least one SARS-CoV-2 spike protein or an immunogenic fragment or variant thereof, wherein the SARS-CoV-2 spike protein comprises: H69;V70;A222;Y453;S477;I692;R403;K417;N437;N439;V445;G446;L455;F456;K458;A475;G476;T478;E484;G485;F486; N487; y489; f490; Q493; s494; p499; t500; n501; n501; G503; 505; Q506; Q506; Y144; A570; p681 215; L242; a243; L244; R246; A701;T20;P26;D138;R190;H655;T1027;S13;W152;L452;R346;P384;G447;G502;T748;A522;V1176;T859;S247;Y248;L249;T250;P251;G252;G75; T76;D950;E154;G769;S254;Q613;F157;R158;Q957;D253;T95;F888;Q677;A67;Q414;N450;V483;G669;T732;Q949;Q1071;E1092;H1101;N1187;W25 8; contains at least one amino acid substitution, deletion or insertion at a position corresponding to T19;V126;H245;S12;A899;G142;E156;K558; and/or Q52, and the RNA contains at least one heterologous untranslated region. include. In certain embodiments, the RNA does not include a 3'UTR comprising the sequence of SEQ ID NO: 268. In certain embodiments, the RNA comprises a 3'UTR comprising the sequence of SEQ ID NO: 268.

特に好ましい実施形態では、SARS-CoV-2スパイクタンパク質は、配列番号1の配列に対してH69del;V70del;A222V;Y453F;S477N;I692V;R403K;K417N;N437S;N439K;V445A;V445I;V445F;G446V;G446S;G446A;L455F;F456L;K458N;A475V;G476S;G476A;S477I;S477R;S477G;S477T;T478I;T478K;T478R;T478A;E484Q;E484K;E484A;E484D;G485R;G485S;F486L;N487I;Y489H;F490S;F490L;Q493L;Q493K;S494P;S494L;P499L;T500I;N501Y;N501T;N501S;V503F;V503I;G504D;Y505W;Q506K;Q506H;Y144del;A570D;P681H;T716I;S982A;D1118H;L18F;D80A;D215G;L242del;A243del;L244del;L242del;A243del;L244del;R246I;A701V;T20N;P26S;D138Y;R190S;H655Y;T1027I;S13I;W152C;L452R;R346T;P384L;L452M;F456A;F456K;F456V;E484P;K417T;G447V;L452Q;A475S;F486I;F490Y;Q493R;S494A;P499H;P499S;G502V;T748K;A522S;V1176F;T859N;S247del;Y248del;L249del;T250del;P251del;G252del;R246del;S247del;Y248del;L249del;T250del;P251del;G252del;G75V;T76I;G75V;T76I;D950N;P681R;E154K;G769V;S254F;Q613H;F157L;F157del;R158del;Q957R;D253G;T95I;F888L;Q677H;A67V;Q414K;N450K;V483A;G669S;T732A;Q949R;Q1071H;E1092K;H1101Y;N1187D;W258L;V70F;T19R;Y144T;Y145S;ins145N;R346K;R346S;V126A;H245Y;ins214TDR;S12F;W152R;A899S;G142D;E156G;K558N;及び/又はQ52Rに対応する位置において少なくとも1個のアミノ酸置換、欠失又は挿入を含む。 In a particularly preferred embodiment, the SARS-CoV-2 spike protein is H69del;V70del;A222V;Y453F;S477N;I692V;R403K;K417N;N437S;N439K;V445A;V445I;V445F;G446V ;G446S;G446A;L455F;F456L;K458N;A475V;G476S;G476A;S477I;S477R;S477G;S477T;T478I;T478K;T478R;T478A;E484Q;E484K;E484A;E484D;G48 5R;G485S;F486L;N487I;Y489H ;F490S;F490L;Q493L;Q493K;S494P;S494L;P499L;T500I;N501Y;N501T;N501S;V503F;V503I;G504D;Y505W;Q506K;Q506H;Y144del;A570D;P681H;T71 6I;S982A;D1118H;L18F;D80A ;D215G;L242del;A243del;L244del;L242del;A243del;L244del;R246I;A701V;T20N;P26S;D138Y;R190S;H655Y;T1027I;S13I;W152C;L452R;R346T;P384L;L452M ;F456A;F456K;F456V;E484P ;K417T;G447V;L452Q;A475S;F486I;F490Y;Q493R;S494A;P499H;P499S;G502V;T748K;A522S;V1176F;T859N;S247del;Y248del;L249del;T250del;P251del;G2 52del;R246del;S247del;Y248del;L249del ;T250del;P251del;G252del;G75V;T76I;G75V;T76I;D950N;P681R;E154K;G769V;S254F;Q613H;F157L;F157del;R158del;Q957R;D253G;T95I;F888L;Q677H;A6 7V;Q414K;N450K;V483A ;G669S;T732A;Q949R;Q1071H;E1092K;H1101Y;N1187D;W258L;V70F;T19R;Y144T;Y145S;ins145N;R346K;R346S;V126A;H245Y;ins214TDR;S12F;W152R;A 899S;G142D;E156G;K558N;and /or contains at least one amino acid substitution, deletion or insertion at a position corresponding to Q52R.

ある特定の実施形態では、少なくとも1つのSARS-CoV-2スパイクタンパク質又はその免疫原性フラグメント若しくは免疫原性バリアントをコードする少なくとも1つのコード配列を含むRNAが提供され、SARS-CoV-2スパイクタンパク質は、配列番号1の配列に対してH69;V70;A222;Y453;S477;I692;R403;K417;N437;N439;V445;G446;L455;F456;K458;A475;G476;T478;E484;G485、F486;N487;Y489;F490;Q493;S494;P499;T500;N501;V503;G504;Y505;及び/又はQ506に対応する位置において少なくとも1個のアミノ酸置換、欠失又は挿入を含む。したがって、一部の実施形態では、SARS-CoV-2スパイクタンパク質は、配列番号1の配列に対してH69del;V70del;A222V;Y453F;S477N;I692V;R403K;K417N;N437S;N439K;V445A;V445I;V445F;G446V;G446S;G446A;L455F;F456L;K458N;A475V;G476S;G476A;S477I;S477R;S477G;S477T;T478I;T478K;T478R;T478A;E484Q;E484K;E484A;E484D;G485R;G485S;F486L;N487I;Y489H;F490S;F490L;Q493L;Q493K;S494P;S494L;P499L;T500I;N501Y;N501T;N501S;V503F;V503I;G504D;Y505W;Q506K;及び/又はQ506Hに対応する位置において少なくとも1個のアミノ酸置換、欠失又は挿入を含む。 In certain embodiments, RNA comprising at least one coding sequence encoding at least one SARS-CoV-2 spike protein or an immunogenic fragment or variant thereof is provided, and the SARS-CoV-2 spike protein is H69;V70;A222;Y453;S477;I692;R403;K417;N437;N439;V445;G446;L455;F456;K458;A475;G476;T478;E484;G485, Contains at least one amino acid substitution, deletion or insertion at a position corresponding to F486;N487;Y489;F490;Q493;S494;P499;T500;N501;V503;G504;Y505; and/or Q506. Thus, in some embodiments, the SARS-CoV-2 spike protein is H69del;V70del;A222V;Y453F;S477N;I692V;R403K;K417N;N437S;N439K;V445A;V445I; V445F;G446V;G446S;G446A;L455F;F456L;K458N;A475V;G476S;G476A;S477I;S477R;S477G;S477T;T478I;T478K;T478R;T478A;E484Q;E484K;E484 A;E484D;G485R;G485S;F486L; At least one in the position corresponding to N487I;Y489H;F490S;F490L;Q493L;Q493K;S494P;S494L;P499L;T500I;N501Y;N501T;N501S;V503F;V503I;G504D;Y505W;Q506K; and/or Q506H amino acids of Including substitutions, deletions or insertions.

さらなる実施形態では、少なくとも1つのSARS-CoV-2スパイクタンパク質又はその免疫原性フラグメント若しくは免疫原性バリアントをコードする少なくとも1つのコード配列を含むRNAが提供され、SARS-CoV-2スパイクタンパク質は、配列番号1の配列に対してH69;V70;A222;Y453;S477;I692;R403;K417;N437;N439;V445;G446;L455;F456;K458;A475;G476;T478;E484;G485;F486;N487;Y489;F490;Q493;S494;P499;T500;N501;V503;G504;Y505;Q506;Y144;A570;P681;T716;S982;D1118;L18;D80;D215;L242;A243;L244;R246;A701;T20;P26;D138;R190;H655;T1027;S13;W152;L452;R346;P384;G447;G502;T748;A522;又はV1176に対応する位置において少なくとも1個のアミノ酸置換、欠失又は挿入を含む。したがって、一部の実施形態では、SARS-CoV-2スパイクタンパク質は、配列番号1の配列に対してH69del;V70del;A222V;Y453F;S477N;I692V;R403K;K417N;N437S;N439K;V445A;V445I;V445F;G446V;G446S;G446A;L455F;F456L;K458N;A475V;G476S;G476A;S477I;S477R;S477G;S477T;T478I;T478K;T478R;T478A;E484Q;E484K;E484A;E484D;G485R;G485S;F486L;N487I;Y489H;F490S;F490L;Q493L;Q493K;S494P;S494L;P499L;T500I;N501Y;N501T;N501S;V503F;V503I;G504D;Y505W;Q506K;Q506H;Y144del;A570D;P681H;T716I;S982A;D1118H;L18F;D80A;D215G;L242del;A243del;L244del;L242del;A243del;L244del;R246I;A701V;T20N;P26S;D138Y;R190
S;H655Y;T1027I;S13I;W152C;L452R;R346T;P384L;L452M;F456A;F456K;F456V;E484P;K417T;G447V;L452Q;A475S;F486I;F490Y;Q493R;S494A;P499H;P499S;G502V;T748K;A522S;及び/又はV1176Fに対応する位置において少なくとも1個のアミノ酸置換、欠失又は挿入を含む。 In a further embodiment, there is provided an RNA comprising at least one coding sequence encoding at least one SARS-CoV-2 spike protein or an immunogenic fragment or variant thereof, the SARS-CoV-2 spike protein comprising: H69;V70;A222;Y453;S477;I692;R403;K417;N437;N439;V445;G446;L455;F456;K458;A475;G476;T478;E484;G485;F486; N487; y489; f490; Q493; s494; p499; t500; n501; n501; G503; 505; Q506; Q506; Y144; A570; p681 215; L242; a243; L244; R246; At least one amino acid substitution, deletion or insertion at a position corresponding to A701;T20;P26;D138;R190;H655;T1027;S13;W152;L452;R346;P384;G447;G502;T748;A522; or V1176 including. Thus, in some embodiments, the SARS-CoV-2 spike protein is H69del;V70del;A222V;Y453F;S477N;I692V;R403K;K417N;N437S;N439K;V445A;V445I; V445F;G446V;G446S;G446A;L455F;F456L;K458N;A475V;G476S;G476A;S477I;S477R;S477G;S477T;T478I;T478K;T478R;T478A;E484Q;E484K;E484 A;E484D;G485R;G485S;F486L; N487I;Y489H;F490S;F490L;Q493L;Q493K;S494P;S494L;P499L;T500I;N501Y;N501T;N501S;V503F;V503I;G504D;Y505W;Q506K;Q506H;Y144del;A570 D;P681H;T716I;S982A;D1118H; L18F;D80A;D215G;L242del;A243del;L244del;L242del;A243del;L244del;R246I;A701V;T20N;P26S;D138Y;R190
S;H655Y;T1027I;S13I;W152C;L452R;R346T;P384L;L452M;F456A;F456K;F456V;E484P;K417T;G447V;L452Q;A475S;F486I;F490Y;Q493R;S494A;P4 99H;P499S;G502V;T748K; A522S; and/or at least one amino acid substitution, deletion or insertion at a position corresponding to V1176F.

さらなる好ましい実施形態では、少なくとも1つのSARS-CoV-2スパイクタンパク質又はその免疫原性フラグメント若しくは免疫原性バリアントをコードする少なくとも1つのコード配列を含むRNAが提供され、SARS-CoV-2スパイクタンパク質は、配列番号1の配列に対してT859;R246;S247;Y248;L249;T250;P251;G252;G75;T76;D950;E154;G769;S254;Q613;F157;Q957;D253;T95;F888;Q677;A67;Q414;N450;V483;G669;T732;Q949;Q1071;E1092;H1101;N1187;F157;R158;W258;T19;H245;S12;A899;G142;E156;K558及び/又はQ52に対応する位置において少なくとも1個のアミノ酸置換、欠失又は挿入を含む。したがって、一部の実施形態では、SARS-CoV-2スパイクタンパク質は、配列番号1の配列に対してT859N;S247del;Y248del;L249del;T250del;P251del;G252del;R246del;S247del;Y248del;L249del;T250del;P251del;G252del;G75V;T76I;G75V;T76I;D950N;P681R;E154K;G769V;S254F;Q613H;F157L;Q957R;D253G;T95I;F888L;Q677H;A67V;Q414K;N450K;V483A;G669S;T732A;Q949R;Q1071H;E1092K;H1101Y;N1187D;F157del;R158del;W258L;V70F;T19R;Y144T;Y145S;ins145N;R346K;R346S;V126A;H245Y;ins214TDR;S12F;W152R;A899S;G142D;E156G;K558N及び/又はQ52Rに対応する位置において少なくとも1個のアミノ酸置換、欠失又は挿入を含む。 In a further preferred embodiment there is provided an RNA comprising at least one coding sequence encoding at least one SARS-CoV-2 spike protein or an immunogenic fragment or variant thereof, wherein the SARS-CoV-2 spike protein is , T859;R246;S247;Y248;L249;T250;P251;G252;G75;T76;D950;E154;G769;S254;Q613;F157;Q957;D253;T95;F888;Q677 ;A67;Q414;N450;V483;G669;T732;Q949;Q1071;E1092;H1101;N1187;F157;R158;W258;T19;H245;S12;A899;G142;E156;The position corresponding to K558 and/or Q52 contains at least one amino acid substitution, deletion or insertion. Thus, in some embodiments, the SARS-CoV-2 spike protein is T859N;S247del;Y248del;L249del;T250del;P251del;G252del;R246del;S247del;Y248del;L249del;T250del; P251del;G252del;G75V;T76I;G75V;T76I;D950N;P681R;E154K;G769V;S254F;Q613H;F157L;Q957R;D253G;T95I;F888L;Q677H;A67V;Q414K;N450K;V483 A;G669S;T732A;Q949R; Q1071H;E1092K;H1101Y;N1187D;F157del;R158del;W258L;V70F;T19R;Y144T;Y145S;ins145N;R346K;R346S;V126A;H245Y;ins214TDR;S12F;W152R;A899S;G1 42D;E156G;K558N and/or Q52R Contains at least one amino acid substitution, deletion or insertion at the corresponding position.

またさらなる実施形態では、少なくとも1つのSARS-CoV-2スパイクタンパク質又はその免疫原性フラグメント若しくは免疫原性バリアントをコードする少なくとも1つのコード配列を含むRNAが提供され、SARS-CoV-2スパイクタンパク質は、配列番号1の配列に対してD614;H49;V367;P1263;V483;S939;S943;L5;L8;S940;C1254;Q239;M153;V1040;A845;Y145;A831;及び/又はM1229に対応する位置において少なくとも1個のアミノ酸置換、欠失又は挿入を含む。したがって、一部の実施形態では、SARS-CoV-2スパイクタンパク質は、配列番号1の配列に対してD614G;H49Y;V367F;P1263L;V483A;S939F;S943P;L5F;L8V;S940F;C1254F;Q239K;M153T;V1040F;A845S;Y145H;A831V;及び/又はM1229Iに対応する位置において少なくとも1個のアミノ酸置換、欠失又は挿入を含む。 In still further embodiments, there is provided an RNA comprising at least one coding sequence encoding at least one SARS-CoV-2 spike protein or an immunogenic fragment or variant thereof, wherein the SARS-CoV-2 spike protein is , corresponding to D614;H49;V367;P1263;V483;S939;S943;L5;L8;S940;C1254;Q239;M153;V1040;A845;Y145;A831; and/or M1229 for the sequence SEQ ID NO: 1 Contains at least one amino acid substitution, deletion or insertion at the position. Thus, in some embodiments, the SARS-CoV-2 spike protein is D614G;H49Y;V367F;P1263L;V483A;S939F;S943P;L5F;L8V;S940F;C1254F;Q239K; Contains at least one amino acid substitution, deletion or insertion at a position corresponding to M153T; V1040F; A845S; Y145H; A831V; and/or M1229I.

またさらなる実施形態では、少なくとも1つのSARS-CoV-2スパイクタンパク質又はその免疫原性フラグメント若しくは免疫原性バリアントをコードする少なくとも1つのコード配列を含むRNAが提供され、SARS-CoV-2スパイクタンパク質は、配列番号1の配列に対してH69;V70;A222;Y453;S477;I692;R403;K417;N437;N439;V445;G446;L455;F456;K458;A475;G476;T478;E484;G485;F486;N487;Y489;F490;Q493;S494;P499;T500;N501;V503;G504;Y505;Q506;Y144;A570;P681;T716;S982;D1118;L18;D80;D215;L242;A243;L244;R246;A701;T20;P26;D138;R190;H655;T1027;S13;W152;L452;R346;P384;G447;G502;T748;A522;V1176;T859;S247;Y248;L249;T250;P251;G252;G75;T76;D950;E154;G769;S254;Q613;F157;Q957;D253;T95;F888;Q677;A67;Q414;N450;V483;G669;T732;Q949;Q1071;E1092;H1101;N1187及び/又はQ52に対応する位置において少なくとも1個のアミノ酸置換又は欠失を含む。したがって、一部の実施形態では、SARS-CoV-2スパイクタンパク質は、H69del;V70del;A222V;Y453F;S477N;I692V;R403K;K417N;N437S;N439K;V445A;V445I;V445F;G446V;G446S;G446A;L455F;F456L;K458N;A475V;G476S;G476A;S477I;S477R;S477G;S477T;T478I;T478K;T478R;T478A;E484Q;E484K;E484A;E484D;G485R;G485S;F486L;N487I;Y489H;F490S;F490L;Q493L;Q493K;S494P;S494L;P499L;T500I;N501Y;N501T;N501S;V503F;V503I;G504D;Y505W;Q506K;Q506H;Y144del;A570D;P681H;T716I;S982A;D1118H;L18F;D80A;D215G;L242del;A243del;L244del;L242del;A243del;L244del;R246I;A701V;T20N;P26S;D138Y;R190S;H655Y;T1027I;S13I;W152C;L452R;R346T;P384L;L452M;F456A;F456K;F456V;E484P;K417T;G447V;L452Q;A475S;F486I;F490Y;Q493R;S494A;P499H;P499S;G502V;T748K;A522S;V1176F;T859N;S247del;Y248del;L249del;T250del;P251del;G252del;R246del;S247del;Y248del;L249del;T250del;P251del;G252del;G75V;T76I;G75V;T76I;D950N;P681R;E154K;G769V;S254F;Q613H;F157L;F157del;R158del;Q957R;D253G;T95I;F888L;Q677H;A67V;Q414K;N450K;V483A;G669S;T732A;Q949R;Q1071H;E1092K;H1101Y;N1187D;W258L;V70F;T19R;Y144T;Y145S;R346K;R346S;V126A;H245Y;S12F;W152R;A899S;G142D;E156G;K558N;及び/又はQ52Rに対応する位置において少なくとも1個のアミノ酸置換又は欠失を含む。 In still further embodiments, there is provided an RNA comprising at least one coding sequence encoding at least one SARS-CoV-2 spike protein or an immunogenic fragment or variant thereof, wherein the SARS-CoV-2 spike protein is , H69;V70;A222;Y453;S477;I692;R403;K417;N437;N439;V445;G446;L455;F456;K458;A475;G476;T478;E484;G485;F486 N487; y489; f490; Q493; s494; p499; t500; n501; v503; G504; Q506; Q506; Y144; A570; p681; s982; d80; d80; d80 ; D215; L242; a243; L244; R246 ;A701;T20;P26;D138;R190;H655;T1027;S13;W152;L452;R346;P384;G447;G502;T748;A522;V1176;T859;S247;Y248;L249;T250;P251;G252;G75 ;T76;D950;E154;G769;S254;Q613;F157;Q957;D253;T95;F888;Q677;A67;Q414;N450;V483;G669;T732;Q949;Q1071;E1092;H1101;N1187 and/or Q52 contains at least one amino acid substitution or deletion at a position corresponding to. Thus, in some embodiments, the SARS-CoV-2 spike protein is H69del;V70del;A222V;Y453F;S477N;I692V;R403K;K417N;N437S;N439K;V445A;V445I;V445F;G446V;G446S;G446A; L455F;F456L;K458N;A475V;G476S;G476A;S477I;S477R;S477G;S477T;T478I;T478K;T478R;T478A;E484Q;E484K;E484B; L;N487I;Y489H;F490S;F490L; Q493L;Q493K;S494P;S494L;P499L;T500I;N501Y;N501T;N501S;V503F;V503I;G504D;Y505W;Q506K;Q506H;Y144del;A570D;P681H;T716I;S982A;D111 8H;L18F;D80A;D215G;L242del; A243del;L244del;L242del;A243del;L244del;R246I;A701V;T20N;P26S;D138Y;R190S;H655Y;T1027I;S13I;W152C;L452R;R346T;P384L;L452M;F456A;F456K; F456V;E484P;K417T;G447V; L452Q;A475S;F486I;F490Y;Q493R;S494A;P499H;P499S;G502V;T748K;A522S;V1176F;T859N;S247del;Y248del;L249del;T250del;P251del;G252del;R246del;S24 7del;Y248del;L249del;T250del;P251del; G252del;G75V;T76I;G75V;T76I;D950N;P681R;E154K;G769V;S254F;Q613H;F157L;F157del;R158del;Q957R;D253G;T95I;F888L;Q677H;A67V;Q414K;N450 K;V483A;G669S;T732A; Q949R; Q1071H; E1092K; H1101Y; N1187D; W258L; V70F; T19R; Y144T; Y145S; R346K; R346S; V126A; H245Y; S12F; W152R; At least in the position corresponding to Q52R Contains one amino acid substitution or deletion.

好ましい実施形態では、少なくとも1つのSARS-CoV-2スパイクタンパク質又はその免疫原性フラグメント若しくは免疫原性バリアントをコードする少なくとも1つのコード配列を含むRNAが提供され、SARS-CoV-2スパイクタンパク質は、配列番号1の配列に対してT19I;L24del;P25del;P26del;A27S;A67V;H69del;V70del;T95I;G142D;V143del;Y144del;Y145del;N211del;L212I;V213G;ins214EPE;G339D;S371L;S371F;S373P;S375F;T376A;D405N;K417N;N440K;G446S;S477N;T478K;E484A;Q493R;G496S;Q498R;N501Y;Y505H;T547K;D614G;H655Y;N679K;P681H;A701V;N764K;D796Y;N856K;Q954H;N969K;L981Fに対応する位置において少なくとも1個のアミノ酸置換、欠失又は挿入を含む。したがって、一部の実施形態では、SARS-CoV-2スパイクタンパク質は、配列番号1の配列に対してT19I;L24del;P25del;P26del;A27S;A67V;H69del;V70del;T95I;G142D;V143del;Y144del;Y145del;N211del;L212I;V213G;ins214EPE;G339D;S371L;S371F;S373P;S375F;T376A;D405N;K417N;N440K;G446S;S477N;T478K;E484A;Q493R;G496S;Q498R;N501Y;Y505H;T547K;D614G;H655Y;N679K;P681H;A701V;N764K;D796Y;N856K;Q954H;N969K;L981Fに対応する位置において少なくとも1個のアミノ酸置換、欠失又は挿入を含む。ある特定の実施形態では、SARS-CoV-2スパイクタンパク質は、配列番号10のアミノ酸配列と90%同一であり、配列番号1の配列に対してT19I;L24del;P25del;P26del;A27S;A67V;H69del;V70del;T95I;G142D;V143del;Y144del;Y145del;N211del;L212I;V213G;ins214EPE;G339D;S371L;S371F;S373P;S375F;T376A;D405N;K417N;N440K;G446S;S477N;T478K;E484A;Q493R;G496S;Q498R;N501Y;Y505H;T547K;D614G;H655Y;N679K;P681H;A701V;N764K;D796Y;N856K;Q954H;N969K;L981Fからなる群から選択されるアミノ酸置換、欠失又は挿入のうちの少なくとも3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39又は40個を含む。 In a preferred embodiment, an RNA is provided comprising at least one coding sequence encoding at least one SARS-CoV-2 spike protein or an immunogenic fragment or variant thereof, wherein the SARS-CoV-2 spike protein comprises: T19I;L24del;P25del;P26del;A27S;A67V;H69del;V70del;T95I;G142D;V143del;Y144del;Y145del;N211del;L212I;V213G;ins214EPE;G339D;S371L;S371F;S373P ; S375F;T376A; D405N; K;D796Y;N856K;Q954H;N969K; Contains at least one amino acid substitution, deletion or insertion at a position corresponding to L981F. Thus, in some embodiments, the SARS-CoV-2 spike protein is T19I;L24del;P25del;P26del;A27S;A67V;H69del;V70del;T95I;G142D;V143del;Y144del; Y145del;N211del;L212I;V213G;ins214EPE;G339D;S371L;S371F;S373P;S375F;T376A;D405N;K417N;N440K;G446S;S477N;T478K;E484A;Q493R;G496S;Q49 8R;N501Y;Y505H;T547K;D614G; Contains at least one amino acid substitution, deletion or insertion at a position corresponding to H655Y;N679K;P681H;A701V;N764K;D796Y;N856K;Q954H;N969K;L981F. In certain embodiments, the SARS-CoV-2 spike protein is 90% identical to the amino acid sequence of SEQ ID NO: 10 and T19I;L24del;P25del;P26del;A27S;A67V;H69del to the sequence of SEQ ID NO: 1. ;V70del;T95I;G142D;V143del;Y144del;Y145del;N211del;L212I;V213G;ins214EPE;G339D;S371L;S371F;S373P;S375F;T376A;D405N;K417N;N440K;G446S;S477 N;T478K;E484A;Q493R;G496S at least three of the amino acid substitutions, deletions or insertions selected from the group consisting of; 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39 or 40.

なおさらなる実施形態では、少なくとも1つのSARS-CoV-2スパイクタンパク質又はその免疫原性フラグメントをコードする少なくとも1つのコード配列を含むRNAが提供され、SARS-CoV-2スパイクタンパク質は、A67V、H69del、V70del、T95I、G142D、V143del、Y144del、Y145del、N211del、L212I、ins214EPE、G339D、S371L、S373P、S375F、S477N、T478K、E484A、Q493R、G496S、Q498R、N501Y、Y505H、T547K、D614G、H655Y、N679K、P681H、N764K、D796Y、N856K、Q954H、N969K及びL981Fに対応する少なくとも1個のアミノ酸置換、挿入又は欠失を含む。 In still further embodiments, there is provided an RNA comprising at least one coding sequence encoding at least one SARS-CoV-2 spike protein or immunogenic fragment thereof, wherein the SARS-CoV-2 spike protein is A67V, H69del, V70del, T95I, G142D, V143del, Y144del, Y145del, N211del, L212I, ins214EPE, G339D, S371L, S373P, S375F, S477N, T478K, E484A, Q493R, G496S, Q498R, N501Y, Y505H , T547K, D614G, H655Y, N679K, Contains at least one amino acid substitution, insertion or deletion corresponding to P681H, N764K, D796Y, N856K, Q954H, N969K and L981F.

好ましい実施形態では、SARS-CoV-2スパイクタンパク質は、RBDドメイン(アミノ酸位置aa319～aa541;参照配列番号1によるアミノ酸位置)又はCNDドメイン(アミノ酸位置aa329～aa529;参照配列番号1によるアミノ酸位置)に位置する位置におけるアミノ酸置換を含む。理論に束縛されることを望むものではなく、CNDドメインにおけるアミノ酸置換又は変異は、新たに出現したSARS-CoV-2バリアントが、第一世代のワクチン(オリジナルのSARS-CoV-2株に対して設計された)を用いてワクチン接種された対象において誘導されるか、又はオリジナルのSARS-CoV-2株の感染後の対象において誘導される、いくつかのタイプの抗体の抗体検出を逃れるのを助け得る。 In a preferred embodiment, the SARS-CoV-2 spike protein has an RBD domain (amino acid positions aa319 to aa541; amino acid positions according to reference SEQ ID NO: 1) or a CND domain (amino acid positions aa329 to aa529; amino acid positions according to reference SEQ ID NO: 1). including amino acid substitutions at the positions located. Without wishing to be bound by theory, amino acid substitutions or mutations in the CND domain may be useful in preventing newly emerging SARS-CoV-2 variants from being used in first-generation vaccines (versus the original SARS-CoV-2 strain). Some types of antibodies induced in subjects vaccinated with SARS-CoV-2 (designed) or in subjects after infection with the original SARS-CoV-2 strain can help evade antibody detection. I can help.

したがって、好ましい実施形態では、本発明の第一の態様は、SARS-CoV-2スパイクタンパク質又はその免疫原性フラグメント若しくは免疫原性バリアント由来の少なくとも1つの抗原性ペプチド又はタンパク質をコードする少なくとも1つのコード配列を含むRNAに関し、RNAは、少なくとも1つの異種非翻訳領域(UTR)を含み、SARS-CoV-2スパイクタンパク質は、RBDドメイン(アミノ酸位置aa319～aa541;参照配列番号1によるアミノ酸位置)又はCNDドメイン(アミノ酸位置aa329～aa529、参照配列番号1によるアミノ酸位置)に位置する位置において少なくとも1個のアミノ酸置換を含む。 Therefore, in a preferred embodiment, the first aspect of the invention provides at least one antigenic peptide or protein encoding at least one antigenic peptide or protein derived from the SARS-CoV-2 spike protein or an immunogenic fragment or variant thereof. With respect to RNA comprising a coding sequence, the RNA comprises at least one heterologous untranslated region (UTR), and the SARS-CoV-2 spike protein comprises an RBD domain (amino acid positions aa319 to aa541; amino acid positions according to reference SEQ ID NO: 1) or Contains at least one amino acid substitution at a position located in the CND domain (amino acid positions aa329 to aa529, amino acid positions according to reference SEQ ID NO: 1).

ある特定の好ましい実施形態では、SARS-CoV-2スパイクタンパク質は、以下の位置:R346;V367、P384;R403;K417;N437;N439;V445;G446;G447;N450;L452;Y453;L455;F456;A475;G476;S477;T478;E484;G485;F486;N487;Y489;F490;Q493;S494;P499;T500;N501;G502;V503;G504;Y505;Q506;A522(参照配列番号1によるアミノ酸位置)の少なくとも1つにおいてアミノ酸置換、挿入又は欠失を含む。 In certain preferred embodiments, the SARS-CoV-2 spike protein is at the following positions: R346;V367, P384; ;A475;G476;S477;T478;E484;G485;F486;N487;Y489;F490;Q493;S494;P499;T500;N501;G502;V503;G504;Y505;Q506;A522 (amino acid position according to reference SEQ ID NO. 1 ) contains an amino acid substitution, insertion or deletion in at least one of the following.

したがって、ある特定の好ましい実施形態では、本発明の第一の態様は、SARS-CoV-2スパイクタンパク質又はその免疫原性フラグメント若しくは免疫原性バリアント由来の少なくとも1つの抗原性ペプチド又はタンパク質をコードする少なくとも1つのコード配列を含むRNAに関し、SARS-CoV-2スパイクタンパク質は、K417;L452;T478;E484;N501及び/又はP681(参照配列番号1によるアミノ酸位置)から選択される位置において少なくとも1個のアミノ酸置換を含み、RNAは、少なくとも1つの異種非翻訳領域(UTR)を含む。 Accordingly, in certain preferred embodiments, the first aspect of the invention encodes at least one antigenic peptide or protein derived from the SARS-CoV-2 spike protein or an immunogenic fragment or variant thereof. With respect to the RNA comprising at least one coding sequence, the SARS-CoV-2 spike protein has at least one sequence selected from K417;L452;T478;E484;N501 and/or P681 (amino acid positions according to reference SEQ ID NO: 1). The RNA contains at least one heterologous untranslated region (UTR).

理論に束縛されることを望むものではなく、位置E484におけるアミノ酸置換は、SARS-CoV-2ウイルスバリアントが、第一世代のワクチン(オリジナルのSARS-CoV-2株に対して設計された)を用いてワクチン接種された対象において誘導されるか、又はオリジナルのSARS-CoV-2株の感染後の対象において誘導される、いくつかのタイプの抗体の抗体検出を逃れるのを助け得る。N501における変異/置換は、コロナウイルススパイクの頂上近くで生じ、ここで、それは、タンパク質の形状を変更させ得、いくつかのタイプのコロナウイルス抗体を逃れるのを助け得る。このようなSARS-CoV-2は、本発明全体でSARS-CoV-2 E484バリアントと呼ばれ、例えば、SARS-CoV-2 B.1.351(南アフリカ)、SARS-CoV-2 B.1.617(インド)、P.1(ブラジル)又はB.1.1.529(オミクロン、南アフリカ)(BA.1_v1、BA.1_v0、B.1.1.529、BA.2、BA.1_v2、BA.1_v3、BA.1_v4、BA.1_v5を含む)を含む。 Without wishing to be bound by theory, the amino acid substitution at position E484 suggests that the SARS-CoV-2 virus variants may may help evade detection of several types of antibodies induced in subjects vaccinated with SARS-CoV-2 or after infection with the original SARS-CoV-2 strain. The mutation/substitution in N501 occurs near the top of the coronavirus spike, where it may change the shape of the protein and help evade some types of coronavirus antibodies. Such SARS-CoV-2 is referred to throughout this invention as SARS-CoV-2 E484 variant, e.g. SARS-CoV-2 B.1.351 (South Africa), SARS-CoV-2 B.1.617 (India) , P.1 (Brazil) or B.1.1.529 (Omicron, South Africa) (BA.1_v1, BA.1_v0, B.1.1.529, BA.2, BA.1_v2, BA.1_v3, BA.1_v4, BA .1_v5 included).

したがって、一部の実施形態では、本発明のRNAが、ウイルスSARS-CoV-2 E484バリアントに対する効率的な免疫応答の誘導を可能にするための位置E484における置換を含むSARS-CoV-2スパイクタンパクを提供することは、有利であり得る。 Accordingly, in some embodiments, the RNA of the invention comprises a SARS-CoV-2 spike protein containing a substitution at position E484 to enable the induction of an efficient immune response against the viral SARS-CoV-2 E484 variant. It may be advantageous to provide.

好ましい実施形態では、SARS-CoV-2スパイクタンパク質は、位置E484におけるアミノ酸置換を含み、アミノ酸E484は、K、P、Q、A、又はD(参照配列番号1によるアミノ酸位置)で置換されている。したがって、SARS-CoV-2スパイクタンパク質から選択されるか、又は誘導される抗原性ペプチド又はタンパク質は、E484K、E484P、E484Q、E484A、E484Dアミノ酸置換を含む。 In a preferred embodiment, the SARS-CoV-2 spike protein comprises an amino acid substitution at position E484, wherein amino acid E484 is substituted with K, P, Q, A, or D (amino acid position according to reference SEQ ID NO: 1). . Accordingly, antigenic peptides or proteins selected or derived from the SARS-CoV-2 spike protein contain E484K, E484P, E484Q, E484A, E484D amino acid substitutions.

特に好ましい実施形態では、SARS-CoV-2スパイクタンパク質は、位置E484におけるアミノ酸置換を含み、アミノ酸E484は、K又はQ(参照配列番号1によるアミノ酸位置)で置換されている。したがって、SARS-CoV-2スパイクタンパク質から選択されるか、又は誘導される抗原性ペプチド又はタンパク質は、E484K又はE484Qアミノ酸置換を含む。ある特定の好ましい実施形態では、SARS-CoV-2スパイクタンパク質は、E484Kアミノ酸置換を含む。 In a particularly preferred embodiment, the SARS-CoV-2 spike protein comprises an amino acid substitution at position E484, wherein amino acid E484 is replaced with K or Q (amino acid position according to reference SEQ ID NO: 1). Accordingly, an antigenic peptide or protein selected or derived from the SARS-CoV-2 spike protein contains the E484K or E484Q amino acid substitution. In certain preferred embodiments, the SARS-CoV-2 spike protein comprises the E484K amino acid substitution.

好ましい実施形態では、SARS-CoV-2スパイクタンパク質は、位置N501におけるアミノ酸置換を含み、アミノ酸N501は、異なるアミノ酸で置換されている(参照配列番号1によるアミノ酸位置)。 In a preferred embodiment, the SARS-CoV-2 spike protein comprises an amino acid substitution at position N501, wherein amino acid N501 is replaced with a different amino acid (amino acid position according to reference SEQ ID NO: 1).

理論に束縛されることを望むものではなく、位置N501におけるアミノ酸置換は、SARS-CoV-2ウイルスバリアントが、第一世代のワクチン(オリジナルのSARS-CoV-2株に対して設計された)を用いてワクチン接種された対象において誘導されるか、又はオリジナルのSARS-CoV-2株の感染後の対象において誘導される、いくつかのタイプの抗体の抗体検出を逃れるのを助け得る。N501における変異/置換は、コロナウイルススパイクの頂上近くで生じ、ここで、それは、タンパク質の形状を変更させ得、いくつかのタイプのコロナウイルス抗体を逃れるのを助け得る。このようなSARS-CoV-2は、本発明全体でSARS-CoV-2 N501バリアントと呼ばれ、例えば、SARS-CoV-2 B.1.351(南アフリカ)、SARS-CoV-2 B.1.1.7(英国)、P.1(ブラジル)、又はB.1.1.529(オミクロン、南アフリカ)(BA.1_v1、BA.1_v0、B.1.1.529、BA.2、BA.1_v2、BA.1_v3、BA.1_v4、BA.1_v5を含む)を含む。 Without wishing to be bound by theory, the amino acid substitution at position N501 may indicate that SARS-CoV-2 virus variants are more susceptible to first-generation vaccines (designed against the original SARS-CoV-2 strain). may help evade detection of several types of antibodies induced in subjects vaccinated with SARS-CoV-2 or after infection with the original SARS-CoV-2 strain. The mutation/substitution in N501 occurs near the top of the coronavirus spike, where it may change the shape of the protein and help evade some types of coronavirus antibodies. Such SARS-CoV-2 is referred to throughout this invention as SARS-CoV-2 N501 variant, for example SARS-CoV-2 B.1.351 (South Africa), SARS-CoV-2 B.1.1.7 ( UK), P.1 (Brazil), or B.1.1.529 (Omicron, South Africa) (BA.1_v1, BA.1_v0, B.1.1.529, BA.2, BA.1_v2, BA.1_v3, BA. 1_v4, BA.1_v5).

したがって、本発明のRNAが、ウイルスSARS-CoV-2 N501バリアントに対する効率的な免疫応答の誘導を可能にするための、位置N501における置換を含むSARS-CoV-2スパイクタンパク質を提供することは、有利であり得る。 Therefore, the RNA of the invention provides a SARS-CoV-2 spike protein containing a substitution at position N501 to enable the induction of an efficient immune response against the viral SARS-CoV-2 N501 variant. It can be advantageous.

好ましい実施形態では、SARS-CoV-2スパイクタンパク質は、位置N501においてアミノ酸置換を含み、アミノ酸N501は、Y、T、S(参照配列番号1によるアミノ酸位置)で置換されている。したがって、SARS-CoV-2スパイクタンパク質から選択されるか、又は誘導される抗原性ペプチド又はタンパク質は、N501Y、N501T、N501Sアミノ酸置換を含む。 In a preferred embodiment, the SARS-CoV-2 spike protein comprises an amino acid substitution at position N501, where amino acid N501 is replaced with Y, T, S (amino acid position according to reference SEQ ID NO: 1). Accordingly, an antigenic peptide or protein selected or derived from the SARS-CoV-2 spike protein contains the N501Y, N501T, N501S amino acid substitutions.

特に好ましい実施形態では、SARS-CoV-2スパイクタンパク質は、位置N501におけるアミノ酸置換を含み、アミノ酸N501は、Y(参照配列番号1によるアミノ酸位置)で置換されている。したがって、SARS-CoV-2スパイクタンパク質から選択されるか、又は誘導される抗原性ペプチド又はタンパク質は、N501Yアミノ酸置換を含む。 In a particularly preferred embodiment, the SARS-CoV-2 spike protein comprises an amino acid substitution at position N501, wherein amino acid N501 is replaced with Y (amino acid position according to reference SEQ ID NO: 1). Accordingly, an antigenic peptide or protein selected from or derived from the SARS-CoV-2 spike protein contains the N501Y amino acid substitution.

好ましい実施形態では、SARS-CoV-2スパイクタンパク質は、位置K417におけるアミノ酸置換を含み、アミノ酸K417は、異なるアミノ酸で置換されている(参照配列番号1によるアミノ酸位置)。 In a preferred embodiment, the SARS-CoV-2 spike protein comprises an amino acid substitution at position K417, wherein amino acid K417 is replaced with a different amino acid (amino acid position according to reference SEQ ID NO: 1).

理論に束縛されることを望むものではなく、位置K417におけるアミノ酸置換は、SARS-CoV-2ウイルスバリアントが、配列番号1を使用してオリジナルのSARS-CoV-2株に対して設計されたワクチンを用いてワクチン接種された対象において誘導されるか、又は配列番号1を含むオリジナルのSARS-CoV-2株の感染後の対象において誘導される、いくつかのタイプの抗体の抗体検出を逃れるのを助け得る。K417における変異/置換は、コロナウイルススパイクの頂上近くで生じ、ここで、それは、タンパク質の形状を変更させ得、いくつかのタイプのコロナウイルス抗体を逃れるのを助け得る。このようなSARS-CoV-2は、本発明全体でSARS-CoV-2 K417バリアントと呼ばれ、例えば、SARS-CoV-2 B.1.351(南アフリカ)、SARS-CoV-2 B.1.1.7(英国)、P.1(ブラジル)、AY.1/AY.2又はB.1.1.529(オミクロン、南アフリカ)(BA.1_v1、BA.1_v0、B.1.1.529、BA.2、BA.1_v2、BA.1_v3、BA.1_v4、BA.1_v5を含む)を含む。 Without wishing to be bound by theory, the amino acid substitution at position K417 indicates that the SARS-CoV-2 virus variant is a vaccine designed against the original SARS-CoV-2 strain using SEQ ID NO:1. SARS-CoV-2, or in subjects following infection with the original SARS-CoV-2 strain containing SEQ ID NO: 1. can help. The mutation/substitution at K417 occurs near the top of the coronavirus spike, where it may change the shape of the protein and help evade some types of coronavirus antibodies. Such SARS-CoV-2 is referred to throughout this invention as SARS-CoV-2 K417 variant and is, for example, SARS-CoV-2 B.1.351 (South Africa), SARS-CoV-2 B.1.1.7 ( UK), P.1 (Brazil), AY.1/AY.2 or B.1.1.529 (Omicron, South Africa) (BA.1_v1, BA.1_v0, B.1.1.529, BA.2, BA.1_v2 , BA.1_v3, BA.1_v4, BA.1_v5).

したがって、本発明のRNAが、ウイルスSARS-CoV-2 K417バリアントに対する効率的な免疫応答の誘導を可能にするための、位置K417における置換を含むSARS-CoV-2スパイクタンパク質を提供することは、有利であり得る。 Therefore, the RNA of the invention provides a SARS-CoV-2 spike protein containing a substitution at position K417 to enable the induction of an efficient immune response against the viral SARS-CoV-2 K417 variant. It can be advantageous.

好ましい実施形態では、SARS-CoV-2スパイクタンパク質は、位置K417におけるアミノ酸置換を含み、アミノ酸N501は、S、T、Q又はN(参照配列番号1によるアミノ酸位置)で置換されている。したがって、SARS-CoV-2スパイクタンパク質から選択されるか、又は誘導される抗原性ペプチド又はタンパク質は、K417S、K417T、K417Q又はK417Nアミノ酸置換を含む。 In a preferred embodiment, the SARS-CoV-2 spike protein comprises an amino acid substitution at position K417 and amino acid N501 is replaced with S, T, Q or N (amino acid position according to reference SEQ ID NO: 1). Accordingly, an antigenic peptide or protein selected or derived from the SARS-CoV-2 spike protein comprises a K417S, K417T, K417Q or K417N amino acid substitution.

特に好ましい実施形態では、SARS-CoV-2スパイクタンパク質は、位置N501におけるアミノ酸置換を含み、アミノ酸K417は、T又はN(参照配列番号1によるアミノ酸位置)で置換されている。したがって、SARS-CoV-2スパイクタンパク質から選択されるか、又は誘導される抗原性ペプチド又はタンパク質は、K417T又はK417Nアミノ酸置換を含む。ある特定の好ましい実施形態では、SARS-CoV-2スパイクタンパク質から選択されるか、又は誘導される抗原性ペプチド又はタンパク質は、K417Nアミノ酸置換を含む。 In a particularly preferred embodiment, the SARS-CoV-2 spike protein comprises an amino acid substitution at position N501 and amino acid K417 is replaced with T or N (amino acid position according to reference SEQ ID NO: 1). Accordingly, an antigenic peptide or protein selected or derived from the SARS-CoV-2 spike protein contains the K417T or K417N amino acid substitution. In certain preferred embodiments, the antigenic peptide or protein selected or derived from the SARS-CoV-2 spike protein comprises the K417N amino acid substitution.

好ましい実施形態では、SARS-CoV-2スパイクタンパク質は、位置L452におけるアミノ酸置換を含み、アミノ酸L452は、異なるアミノ酸(参照配列番号1によるアミノ酸位置)で置換されている。 In a preferred embodiment, the SARS-CoV-2 spike protein comprises an amino acid substitution at position L452, wherein amino acid L452 is replaced with a different amino acid (amino acid position according to reference SEQ ID NO: 1).

理論に束縛されることを望むものではなく、位置L452におけるアミノ酸置換は、SARS-CoV-2ウイルスバリアントが、配列番号1に基づくオリジナルのSARS-CoV-2株に対して設計されたワクチンを用いてワクチン接種された対象において誘導されるか、又は配列番号1を有するオリジナルのSARS-CoV-2株の感染後の対象において誘導される、いくつかのタイプの抗体の抗体検出を逃れるのを助け得る。L452における変異/置換は、コロナウイルススパイクの頂上近くで生じ、ここで、それは、タンパク質の形状を変更させ得、いくつかのタイプのコロナウイルス抗体を逃れるのを助け得る。このようなSARS-CoV-2は、本発明全体でSARS-CoV-2 L452バリアントと呼ばれ、例えば、SARS-CoV-2 B.1.617.1(インド)、SARS-CoV-2 B.1.617.2(インド)、又はSARS-CoV-2 B.1.617.3(インド)を含む。 Without wishing to be bound by theory, the amino acid substitution at position L452 may indicate that the SARS-CoV-2 virus variant was Some types of antibodies induced in subjects vaccinated with or after infection with the original SARS-CoV-2 strain with SEQ ID NO: 1 help evade detection. obtain. The mutation/substitution in L452 occurs near the top of the coronavirus spike, where it may change the shape of the protein and help evade some types of coronavirus antibodies. Such SARS-CoV-2 is referred to throughout this invention as SARS-CoV-2 L452 variant, e.g. SARS-CoV-2 B.1.617.1 (India), SARS-CoV-2 B.1.617. 2 (India), or SARS-CoV-2 B.1.617.3 (India).

したがって、本発明のRNAが、ウイルスSARS-CoV-2 L452バリアントに対する効率的な免疫応答の誘導を可能にするための、位置L452における置換を含むSARS-CoV-2スパイクタンパク質を提供することは、有利であり得る。 Therefore, the RNA of the invention provides a SARS-CoV-2 spike protein containing a substitution at position L452 to enable the induction of an efficient immune response against the viral SARS-CoV-2 L452 variant. It can be advantageous.

好ましい実施形態では、SARS-CoV-2スパイクタンパク質は、位置L452におけるアミノ酸置換を含み、アミノ酸L452は、R又はQ(参照配列番号1によるアミノ酸位置)で置換されている。したがって、SARS-CoV-2スパイクタンパク質から選択されるか、又は誘導される抗原性ペプチド又はタンパク質は、L452R又はL452Qアミノ酸置換を含む。 In a preferred embodiment, the SARS-CoV-2 spike protein comprises an amino acid substitution at position L452, wherein amino acid L452 is replaced with R or Q (amino acid position according to reference SEQ ID NO: 1). Accordingly, an antigenic peptide or protein selected or derived from the SARS-CoV-2 spike protein comprises the L452R or L452Q amino acid substitution.

特に好ましい実施形態では、SARS-CoV-2スパイクタンパク質は、位置L452におけるアミノ酸置換を含み、アミノ酸L452は、R(参照配列番号1によるアミノ酸位置)で置換されている。したがって、SARS-CoV-2スパイクタンパク質から選択されるか、又は誘導される抗原性ペプチド又はタンパク質は、L452Rアミノ酸置換を含む。 In a particularly preferred embodiment, the SARS-CoV-2 spike protein comprises an amino acid substitution at position L452, wherein amino acid L452 is replaced with R (amino acid position according to reference SEQ ID NO: 1). Accordingly, an antigenic peptide or protein selected from or derived from the SARS-CoV-2 spike protein comprises the L452R amino acid substitution.

好ましい実施形態では、SARS-CoV-2スパイクタンパク質は、フューリン切断部位に位置する位置(アミノ酸位置aa681～685;参照配列番号1によるアミノ酸位置)においてアミノ酸置換を含む。この配列区画(配列番号1におけるPRRAR)は、フューリン切断のための認識部位として働くと考えられている。理論に束縛されることを望むものではなく、フューリン切断部位におけるアミノ酸置換又は変異は、新たに出現したSARS-CoV-2バリアントが、増加した膜融合を有し、したがって、増加した感染力を引き起こすことを助け得る。 In a preferred embodiment, the SARS-CoV-2 spike protein comprises amino acid substitutions at positions located at the furin cleavage site (amino acid positions aa681-685; amino acid positions according to reference SEQ ID NO: 1). This sequence segment (PRRAR in SEQ ID NO: 1) is thought to act as a recognition site for furin cleavage. Without wishing to be bound by theory, amino acid substitutions or mutations at the furin cleavage site may cause newly emerging SARS-CoV-2 variants to have increased membrane fusion and, therefore, increased infectivity. That can help.

好ましい実施形態では、SARS-CoV-2スパイクタンパク質は、フューリン切断部位における位置P681においてアミノ酸置換を含む。好適には、アミノ酸P681は、異なるアミノ酸(参照配列番号1によるアミノ酸位置)、好ましくは、フューリン切断を改善するアミノ酸で置換されている。このようなSARS-CoV-2は、本発明全体でSARS-CoV-2 P681バリアントと呼ばれ、例えば、SARS-CoV-2 B.1.617.1(インド)、SARS-CoV-2 B.1.617.2(インド)、又はSARS-CoV-2 B.1.617.3(インド)、SARS-CoV-2 B.1.1.7(英国)、SARS-CoV-2 A.23.1(ウガンダ)、又はB.1.1.529(オミクロン、南アフリカ)(BA.1_v1、BA.1_v0、B.1.1.529、BA.2、BA.1_v2、BA.1_v3、BA.1_v4、BA.1_v5を含む)を含む。 In a preferred embodiment, the SARS-CoV-2 spike protein contains an amino acid substitution at position P681 in the furin cleavage site. Suitably amino acid P681 is substituted with a different amino acid (amino acid position according to reference SEQ ID NO: 1), preferably an amino acid that improves furin cleavage. Such SARS-CoV-2 is referred to throughout this invention as SARS-CoV-2 P681 variant, e.g. SARS-CoV-2 B.1.617.1 (India), SARS-CoV-2 B.1.617. 2 (India), or SARS-CoV-2 B.1.617.3 (India), SARS-CoV-2 B.1.1.7 (UK), SARS-CoV-2 A.23.1 (Uganda), or B.1.1 .529 (Omicron, South Africa) (includes BA.1_v1, BA.1_v0, B.1.1.529, BA.2, BA.1_v2, BA.1_v3, BA.1_v4, BA.1_v5).

したがって、本発明のRNAが、ウイルスSARS-CoV-2 P681バリアントに対する効率的な免疫応答の誘導を可能にするための、位置P681における置換を含むSARS-CoV-2スパイクタンパク質を提供することは、有利であり得る。 Therefore, the RNA of the present invention provides a SARS-CoV-2 spike protein containing a substitution at position P681 to enable the induction of an efficient immune response against the viral SARS-CoV-2 P681 variant. It can be advantageous.

好ましい実施形態では、SARS-CoV-2スパイクタンパク質は、位置P681におけるアミノ酸置換を含み、アミノ酸P681は、R又はH(参照配列番号1によるアミノ酸位置)で置換されている。したがって、SARS-CoV-2スパイクタンパク質から選択されるか、又は誘導される抗原性ペプチド又はタンパク質は、P681R又はP681Hアミノ酸置換を含む。 In a preferred embodiment, the SARS-CoV-2 spike protein comprises an amino acid substitution at position P681, wherein amino acid P681 is replaced with R or H (amino acid position according to reference SEQ ID NO: 1). Accordingly, an antigenic peptide or protein selected or derived from the SARS-CoV-2 spike protein contains the P681R or P681H amino acid substitution.

特に好ましい実施形態では、SARS-CoV-2スパイクタンパク質は、位置P681におけるアミノ酸置換を含み、アミノ酸P681は、R(参照配列番号1によるアミノ酸位置)で置換されている。したがって、SARS-CoV-2スパイクタンパク質から選択されるか、又は誘導される抗原性ペプチド又はタンパク質は、P681Rアミノ酸置換を含む。 In a particularly preferred embodiment, the SARS-CoV-2 spike protein comprises an amino acid substitution at position P681, wherein amino acid P681 is replaced with R (amino acid position according to reference SEQ ID NO: 1). Accordingly, an antigenic peptide or protein selected or derived from the SARS-CoV-2 spike protein comprises the P681R amino acid substitution.

特に好ましい実施形態では、本発明のRNAによってコードされるSARS-CoV-2スパイクタンパク質は、本明細書において定義される位置L452におけるアミノ酸置換、好ましくは、L452R、及び本明細書において定義される位置P681におけるアミノ酸置換、好ましくは、P681Rを含む(参照配列番号1によるアミノ酸位置)。 In a particularly preferred embodiment, the SARS-CoV-2 spike protein encoded by the RNA of the invention comprises an amino acid substitution at position L452 as defined herein, preferably L452R; Amino acid substitutions at P681, preferably including P681R (amino acid position according to reference SEQ ID NO: 1).

別の特に好ましい実施形態では、本発明のRNAによってコードされるSARS-CoV-2スパイクタンパク質は、本明細書において定義される位置L452におけるアミノ酸置換、好ましくは、L452R、及び本明細書において定義される位置P681におけるアミノ酸置換、好ましくは、P681Rを含む(参照配列番号1によるアミノ酸位置)。さらに好ましい実施形態では、本発明のRNAによってコードされるSARS-CoV-2スパイクタンパク質は、本明細書において定義される位置L452におけるアミノ酸置換、好ましくは、L452R、本明細書において定義される位置P681におけるアミノ酸置換、好ましくは、P681R、及び本明細書において定義される位置D614における、好ましくは、D614Gを含む(参照配列番号1によるアミノ酸位置)。 In another particularly preferred embodiment, the SARS-CoV-2 spike protein encoded by the RNA of the invention comprises an amino acid substitution at position L452 as defined herein, preferably L452R, and an amino acid substitution at position P681, preferably P681R (amino acid position according to reference SEQ ID NO: 1). In a further preferred embodiment, the SARS-CoV-2 spike protein encoded by the RNA of the invention comprises an amino acid substitution at position L452 as herein defined, preferably L452R, position P681 as herein defined. preferably P681R, and preferably D614G at position D614 as defined herein (amino acid position according to reference SEQ ID NO: 1).

特に好ましい実施形態では、本発明のRNAによってコードされるSARS-CoV-2スパイクタンパク質は、本明細書において定義される位置N501におけるアミノ酸置換、好ましくは、N501Y、及び本明細書において定義される位置E484におけるアミノ酸置換、好ましくは、E484Kを含む(参照配列番号1によるアミノ酸位置)。 In a particularly preferred embodiment, the SARS-CoV-2 spike protein encoded by the RNA of the invention comprises an amino acid substitution at position N501 as defined herein, preferably N501Y; Amino acid substitutions at E484, preferably including E484K (amino acid position according to reference SEQ ID NO: 1).

特に好ましい実施形態では、本発明のRNAによってコードされるSARS-CoV-2スパイクタンパク質は、本明細書において定義される位置L452におけるアミノ酸置換、好ましくは、L452R、及び本明細書において定義される位置E484におけるアミノ酸置換、好ましくは、E484Qを含む(参照配列番号1によるアミノ酸位置)。 In a particularly preferred embodiment, the SARS-CoV-2 spike protein encoded by the RNA of the invention comprises an amino acid substitution at position L452 as defined herein, preferably L452R; Amino acid substitution at E484, preferably including E484Q (amino acid position according to reference SEQ ID NO: 1).

好ましい実施形態では、SARS-CoV-2スパイクタンパク質は、上で定義された置換(位置E484、N501、L452及び場合により、P681における)に加えて、リスト1A又はリスト1Bから選択される少なくとも1個、特に、1、2、3、4、5、6、7、8、9、又は10個のさらなるアミノ酸置換、挿入又は欠失を含む。 In a preferred embodiment, the SARS-CoV-2 spike protein comprises, in addition to the above defined substitutions (at positions E484, N501, L452 and optionally P681) at least one selected from List 1A or List 1B. , especially 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 or 10 additional amino acid substitutions, insertions or deletions.

特に好ましい実施形態では、本発明のRNAによってコードされるSARS-CoV-2スパイクタンパク質は、本明細書において定義される位置H69におけるアミノ酸置換又は欠失、好ましくは、H69del、及び本明細書において定義される位置V70におけるアミノ酸置換又は欠失、好ましくは、V70delを含む(参照配列番号1によるアミノ酸位置)。さらに好ましい実施形態では、本発明のRNAによってコードされるSARS-CoV-2スパイクタンパク質は、H69とV70の両方において欠失を含む。 In a particularly preferred embodiment, the SARS-CoV-2 spike protein encoded by the RNA of the invention has an amino acid substitution or deletion at position H69 as defined herein, preferably H69del, and an amino acid substitution or deletion at position V70, preferably including V70del (amino acid position according to reference SEQ ID NO: 1). In a further preferred embodiment, the SARS-CoV-2 spike protein encoded by the RNA of the invention comprises a deletion in both H69 and V70.

好ましい実施形態では、本発明のRNAによってコードされるSARS-CoV-2スパイクタンパク質は、以下のSARS-CoV-2分離株:C.1.2(南アフリカ)、B.1.1.529(オミクロン、南アフリカ)(BA.1_v1、BA.1_v0、B.1.1.529、BA.2、BA.1_v2、BA.1_v3、BA.1_v4、BA.1_v5を含む)、C.36.3(タイ)、B.1.619(カメルーン)、R.1(ケンタッキー、米国)、B.1.1.176(カナダ)、AZ.3、AY.1(インド)、AY.2(インド)、AY.4(インド)、AY.4.2(デルタプラス、インド)、B.1.617.3(インド)、B.1.351(ベータ、南アフリカ)、B.1.1.7(アルファ、英国)、P.1(ガンマ、ブラジル)、B.1.427/B.1.429(イプシロン、カリフォルニア、米国)、B.1.525(エータ、ナイジェリア)、B.1.258(チェコ共和国)、B.1.526(イオタ、ニューヨーク、米国)、A.23.1(ウガンダ)、B.1.617.1(カッパー、インド)、B.1.617.2(デルタ、インド)、P.2(ゼータ、ブラジル)、C37.1(ラムダ、ペルー)、P.3(シータ、フィリピン)、及び/又はB.1.621(ミュー、コロンビア)から選択される少なくとも1個のさらなるアミノ酸置換又は欠失を含む。 In a preferred embodiment, the SARS-CoV-2 spike protein encoded by the RNA of the invention is derived from the following SARS-CoV-2 isolates: C.1.2 (South Africa), B.1.1.529 (Omicron, South Africa) ( BA.1_v1, BA.1_v0, B.1.1.529, BA.2, BA.1_v2, BA.1_v3, BA.1_v4, BA.1_v5), C.36.3 (Thailand), B.1.619 (Cameroon) , R.1 (Kentucky, USA), B.1.1.176 (Canada), AZ.3, AY.1 (India), AY.2 (India), AY.4 (India), AY.4.2 (Delta Plus) , India), B.1.617.3 (India), B.1.351 (Beta, South Africa), B.1.1.7 (Alpha, UK), P.1 (Gamma, Brazil), B.1.427/B.1.429( Epsilon, California, USA), B.1.525 (Eta, Nigeria), B.1.258 (Czech Republic), B.1.526 (Iota, New York, USA), A.23.1 (Uganda), B.1.617.1 (Copper, India), B.1.617.2 (Delta, India), P.2 (Zeta, Brazil), C37.1 (Lambda, Peru), P.3 (Theta, Philippines), and/or B.1.621 (Mu, at least one additional amino acid substitution or deletion selected from Colombia).

好ましい実施形態では、本発明のRNAによってコードされるSARS-CoV-2スパイクタンパク質は、(配列番号1に対して):
・K986P、V987P、A67V、H69del、V70del、T95I、G142D、V143del、Y144del、Y145del、N211del、L212I、ins214EPE、G339D、S371L、S373P、S375F、S477N、T478K、E484A、Q493R、G496S、Q498R、N501Y、Y505H、T547K、D614G、H655Y、N679K、P681H、N764K、D796Y、N856K、Q954H、N969K、L981F(SA、BA.1_v1);
・K986P、V987P、A67V、H69del、V70del、T95I、G142D、V143del、Y144del、Y145del、N211del、L212I、ins214EPE、G339D、S371L、S373P、S375F、K417N、N440K、G446S、S477N、T478K、E484A、Q493R、G496S、Q498R、N501Y、Y505H、T547K、D614G、H655Y、N679K、P681H、N764K、D796Y、N856K、Q954H、N969K、L981F(SA、BA.1_v0);
・K986P、V987P、A67V、T95I、G339D、S371L、S373P、S375F、S477N、T478K、E484A、Q493R、G496S、Q498R、N501Y、Y505H、T547K、D614G、H655Y、N679K、P681H、D796Y、N856K、Q954H、N969K、L981F(SA、B.1.1.529);
・K986P、V987P、T19I、L24del、P25del、P26del、A27S、G142D、V213G、G339D、S371F、S373P、S375F、T376A、D405N、S477N、T478K、E484A、Q493R、Q498R、N501Y、Y505H、D614G、H655Y、N679K、P681H、D796Y、Q954H、N969K(SA、BA.2);
・K986P、V987P、A67V、H69del、V70del、T95I、G142D、V143del、Y144del、Y145del、N211del、L212I、ins214EPE、G339D、S371L、S373P、S375F、N440K、S477N、T478K、E484A、Q493R、G496S、Q498R、N501Y、Y505H、T547K、D614G、H655Y、N679K、P681H、N764K、D796Y、N856K、Q954H、N969K、L981F(SA、BA.1_v2);
・K986P、V987P、A67V、H69del、V70del、T95I、G142D、V143del、Y144del、Y145del、N211del、L212I、ins214EPE、G339D、S371L、S373P、S375F、S477N、T478K、E484A、Q493R、G496S、Q498R、N501Y、Y505H、T547K、D614G、H655Y、N679K、P681H、D796Y、N856K、Q954H、N969K、L981F(SA、BA.1_v3);
・K986P、V987P、A67V、H69del、V70del、T95I、G142D、V143del、Y144del、Y145del、N211del、L212I、ins214EPE、G339D、S371L、S373P、S375F、S477N、T478K、E484A、Q493R、G496S、Q498R、N501Y、Y505H、T547K、D614G、H655Y、N679K、P681H、A701V、N764K、D796Y、N856K、Q954H、N969K、L981F(SA、BA.1_v4);
・K986P、V987P、A67V、H69del、V70del、T95I、G142D、V143del、Y144del、Y145del、N211del、L212I、ins214EPE、G339D、S371L、S373P、S375F、G446S、S477N、T478K、E484A、Q493R、G496S、Q498R、N501Y、Y505H、T547K、D614G、H655Y、N679K、P681H、N764K、D796Y、N856K、Q954H、N969K、L981F(SA、BA.1_v5);
・E484K、N501Y、L18F、D80A、D215G、L242del、A243del、L244del、R246I、K417N、D614G、及びA701V;(SA;B.1.351)
・E484K、N501Y、L18F、D80A、D215G、L242del、A243del、L244del、K417N、D614G、及びA701V;(SA;B.1.351)
・E484K、N501Y、L18F、T20N、P26S、D138Y、R190S、K417T、D614G、H655Y、及びT1027I;(ブラジル;P1)
・E484K、N501Y、L18F、T20N、P26S、D138Y、R190S、K417T、D614G、H655Y、T1027I、及びV1176F;(ブラジル P1)
・L452R、P681R、及びD614G;(B.1.617.1;インド)
・L452R、E484Q、P681R、E154K、D614G、及びQ1071H;(B.1.617.2;インド)
・L452R、P681R、T19R、F157del、R158del、T478K、D614G、及びD950N;(B.1.617.2;インド)
・T19R、L452R、E484Q、D614G、P681R及びD950N;(B.1.617.3;インド)
・G75V、T76I、S247del、Y248del、L249del、T250del、P251del、G252del、D253del、L452Q、F490S、D614G、及びT859N;(C.37.1;ペルー)
・T95I、Y145N、R346K、E484K、N501Y、D614G、P681H、及びD950N;(B.1.1.621)
・T95I、Y144T、Y145S、ins145N、R346K、E484K、N501Y、D614G、P681H、及びD950N;(B.1.1.621)
・H69del、V70del、Y144del、E484K、N501Y、A570D、D614G、P681H、T716I、S982A、及びD1118H;(B.1.1.7 - E484K)
・S13I、W152C、L452R、及びD614G;(B.1.429)
・L452R;及びD614G;(B.1.429)
・H69del;V70del;N439K;D614G;(B.1.258)
・T95I;E484K;D614G;及びA701V;(B.1.526)
・L5F、T95I、D253G、E484K、D614G、及びA701V;(B.1.526)
・L5F、T95I、D253G、S477N、D614G、及びQ957R;(B.1.526)
・F157L;V367F;Q613H;及びP681R(A.23.1)
・S254F;D614G;P681R;及びG769V(A.23.1)
・T478K;D614G;P681H;及びT732A(B.1.1.519;メキシコ)
・P26S、H69del、V70del、V126A、Y144del、L242del、A243del、L244del、H245Y、S477N、E484K、D614G、P681H、T1027I及びD1118H;(B.1.620;アフリカ)
・ins214TDR、Q414K、N450K、D614G、及びT716I;(B.1.214.2)
・S12F、H69del、V70del、W152R、R346S、L452R、D614G、Q677H及びA899S;(C.36.3;タイ)
・E484K、D614G及びV1176F;(P2)
・Q52R;A67V;H69del;V70del;F157del;R158del;E484K;D614G;Q677H及びF888L;(B.1.525)
・Q52R;A67V;H69del;V70del;Y144del;E484K;D614G;Q677H及びF888L;(B.1.525)
・A67V;H69del;V70del;Y144del;E484K;D614G;Q677H及びF888L;(B.1.525)
・T19R;T95I;G142D;E156G;F157del;R158del;W258L;K417N;L452R;T478K;K558N;D614G;P681R;及びD950N;(AY.1)
・T19R;V70F;G142D;E156G;F157del;R158del;A222V;K417N;L452R;T478K;D614G;P681R;及びD950N;(AY.2)
・T19R;T95I;F157del;R158del;W258L;K417N;L452R;T478K;D614G;P681R;及びD950N;又は(AY.1)
・T19R;V70F;F157del;R158del;A222V;K417N;L452R;T478K;D614G;P681R;及びD950N;(AY.2)
・H69del、V70del及びD614G;
・D614G及びM1229I;
・A222V及びD614G;
・S477N及びD614G;
・N439K及びD614G;
・H69del;V70del;Y453F;D614G及びI692I;
・Y453F及びD614G;
・D614G及びI692V;
・H69del;V70del;A222V;Y453F;D614G及びI692I;
・N501Y及びD614G;
・K417N;E484K;N501Y及びD614G;又は
・E484K及びD614G
から選択されるアミノ酸置換又は欠失を含む。 In a preferred embodiment, the SARS-CoV-2 spike protein encoded by the RNA of the invention is (relative to SEQ ID NO: 1):
・K986P, V987P, A67V, H69del, V70del, T95I, G142D, V143del, Y144del, Y145del, N211del, L212I, ins214EPE, G339D, S371L, S373P, S375F, S477N, T478K, E484A, Q493R , G496S, Q498R, N501Y, Y505H , T547K, D614G, H655Y, N679K, P681H, N764K, D796Y, N856K, Q954H, N969K, L981F(SA, BA.1_v1);
・K986P, V987P, A67V, H69del, V70del, T95I, G142D, V143del, Y144del, Y145del, N211del, L212I, ins214EPE, G339D, S371L, S373P, S375F, K417N, N440K, G446S, S477N , T478K, E484A, Q493R, G496S , Q498R, N501Y, Y505H, T547K, D614G, H655Y, N679K, P681H, N764K, D796Y, N856K, Q954H, N969K, L981F(SA, BA.1_v0);
・K986P, V987P, A67V, T95I, G339D, S371L, S373P, S375F, S477N, T478K, E484A, Q493R, G496S, Q498R, N501Y, Y505H, T547K, D614G, H655Y, N679K, P681 H, D796Y, N856K, Q954H, N969K , L981F(SA, B.1.1.529);
・K986P, V987P, T19I, L24del, P25del, P26del, A27S, G142D, V213G, G339D, S371F, S373P, S375F, T376A, D405N, S477N, T478K, E484A, Q493R, Q498R, N501Y, Y 505H, D614G, H655Y, N679K , P681H, D796Y, Q954H, N969K(SA, BA.2);
・K986P, V987P, A67V, H69del, V70del, T95I, G142D, V143del, Y144del, Y145del, N211del, L212I, ins214EPE, G339D, S371L, S373P, S375F, N440K, S477N, T478K, E484A ,Q493R,G496S,Q498R,N501Y , Y505H, T547K, D614G, H655Y, N679K, P681H, N764K, D796Y, N856K, Q954H, N969K, L981F(SA, BA.1_v2);
・K986P, V987P, A67V, H69del, V70del, T95I, G142D, V143del, Y144del, Y145del, N211del, L212I, ins214EPE, G339D, S371L, S373P, S375F, S477N, T478K, E484A, Q493R , G496S, Q498R, N501Y, Y505H , T547K, D614G, H655Y, N679K, P681H, D796Y, N856K, Q954H, N969K, L981F(SA, BA.1_v3);
・K986P, V987P, A67V, H69del, V70del, T95I, G142D, V143del, Y144del, Y145del, N211del, L212I, ins214EPE, G339D, S371L, S373P, S375F, S477N, T478K, E484A, Q493R , G496S, Q498R, N501Y, Y505H , T547K, D614G, H655Y, N679K, P681H, A701V, N764K, D796Y, N856K, Q954H, N969K, L981F (SA, BA.1_v4);
・K986P, V987P, A67V, H69del, V70del, T95I, G142D, V143del, Y144del, Y145del, N211del, L212I, ins214EPE, G339D, S371L, S373P, S375F, G446S, S477N, T478K, E484A ,Q493R,G496S,Q498R,N501Y , Y505H, T547K, D614G, H655Y, N679K, P681H, N764K, D796Y, N856K, Q954H, N969K, L981F (SA, BA.1_v5);
・E484K, N501Y, L18F, D80A, D215G, L242del, A243del, L244del, R246I, K417N, D614G, and A701V; (SA;B.1.351)
・E484K, N501Y, L18F, D80A, D215G, L242del, A243del, L244del, K417N, D614G, and A701V; (SA; B.1.351)
・E484K, N501Y, L18F, T20N, P26S, D138Y, R190S, K417T, D614G, H655Y, and T1027I; (Brazil; P1)
・E484K, N501Y, L18F, T20N, P26S, D138Y, R190S, K417T, D614G, H655Y, T1027I, and V1176F; (Brazil P1)
・L452R, P681R, and D614G; (B.1.617.1; India)
・L452R, E484Q, P681R, E154K, D614G, and Q1071H; (B.1.617.2; India)
・L452R, P681R, T19R, F157del, R158del, T478K, D614G, and D950N; (B.1.617.2; India)
・T19R, L452R, E484Q, D614G, P681R and D950N; (B.1.617.3; India)
・G75V, T76I, S247del, Y248del, L249del, T250del, P251del, G252del, D253del, L452Q, F490S, D614G, and T859N; (C.37.1; Peru)
・T95I, Y145N, R346K, E484K, N501Y, D614G, P681H, and D950N; (B.1.1.621)
・T95I, Y144T, Y145S, ins145N, R346K, E484K, N501Y, D614G, P681H, and D950N; (B.1.1.621)
・H69del, V70del, Y144del, E484K, N501Y, A570D, D614G, P681H, T716I, S982A, and D1118H; (B.1.1.7 - E484K)
・S13I, W152C, L452R, and D614G; (B.1.429)
・L452R; and D614G; (B.1.429)
・H69del;V70del;N439K;D614G;(B.1.258)
・T95I;E484K;D614G;and A701V;(B.1.526)
・L5F, T95I, D253G, E484K, D614G, and A701V; (B.1.526)
・L5F, T95I, D253G, S477N, D614G, and Q957R; (B.1.526)
・F157L;V367F;Q613H;and P681R(A.23.1)
・S254F;D614G;P681R;and G769V(A.23.1)
・T478K;D614G;P681H;and T732A(B.1.1.519;Mexico)
・P26S, H69del, V70del, V126A, Y144del, L242del, A243del, L244del, H245Y, S477N, E484K, D614G, P681H, T1027I and D1118H; (B.1.620; Africa)
・ins214TDR, Q414K, N450K, D614G, and T716I; (B.1.214.2)
・S12F, H69del, V70del, W152R, R346S, L452R, D614G, Q677H and A899S; (C.36.3; Thailand)
・E484K, D614G and V1176F; (P2)
・Q52R;A67V;H69del;V70del;F157del;R158del;E484K;D614G;Q677H and F888L;(B.1.525)
・Q52R;A67V;H69del;V70del;Y144del;E484K;D614G;Q677H and F888L;(B.1.525)
・A67V;H69del;V70del;Y144del;E484K;D614G;Q677H and F888L;(B.1.525)
・T19R;T95I;G142D;E156G;F157del;R158del;W258L;K417N;L452R;T478K;K558N;D614G;P681R;and D950N;(AY.1)
・T19R;V70F;G142D;E156G;F157del;R158del;A222V;K417N;L452R;T478K;D614G;P681R;and D950N;(AY.2)
・T19R;T95I;F157del;R158del;W258L;K417N;L452R;T478K;D614G;P681R;and D950N; or (AY.1)
・T19R;V70F;F157del;R158del;A222V;K417N;L452R;T478K;D614G;P681R;and D950N;(AY.2)
・H69del, V70del and D614G;
・D614G and M1229I;
・A222V and D614G;
・S477N and D614G;
・N439K and D614G;
・H69del;V70del;Y453F;D614G and I692I;
・Y453F and D614G;
・D614G and I692V;
・H69del;V70del;A222V;Y453F;D614G and I692I;
・N501Y and D614G;
・K417N;E484K;N501Y and D614G;or ・E484K and D614G
including amino acid substitutions or deletions selected from

特に好ましい実施形態では、本発明のRNAによってコードされるSARS-CoV-2スパイクタンパク質は、以下のアミノ酸置換又は欠失(配列番号1に対して):
・E484K、N501Y、L18F、D80A、D215G、L242del、A243del、L244del、R246I、K417N、D614G、及びA701V;
・E484K、N501Y、L18F、D80A、D215G、L242del、A243del、L244del、K417N、D614G、及びA701V;
・E484K、N501Y、L18F、T20N、P26S、D138Y、R190S、K417T、D614G、H655Y、及びT1027I;
・E484K、N501Y、L18F、T20N、P26S、D138Y、R190S、K417T、D614G、H655Y、T1027I、及びV1176F;
・L452R、P681R、及びD614G;
・L452R、E484Q、P681R、E154K、D614G、及びQ1071H;又は
・L452R、P681R、T19R、F157del、R158del、T478K、D614G、及びD950N
を含む。 In a particularly preferred embodiment, the SARS-CoV-2 spike protein encoded by the RNA of the invention has the following amino acid substitutions or deletions (relative to SEQ ID NO: 1):
・E484K, N501Y, L18F, D80A, D215G, L242del, A243del, L244del, R246I, K417N, D614G, and A701V;
・E484K, N501Y, L18F, D80A, D215G, L242del, A243del, L244del, K417N, D614G, and A701V;
・E484K, N501Y, L18F, T20N, P26S, D138Y, R190S, K417T, D614G, H655Y, and T1027I;
・E484K, N501Y, L18F, T20N, P26S, D138Y, R190S, K417T, D614G, H655Y, T1027I, and V1176F;
・L452R, P681R, and D614G;
・L452R, E484Q, P681R, E154K, D614G, and Q1071H; or ・L452R, P681R, T19R, F157del, R158del, T478K, D614G, and D950N
including.

なおより好ましい実施形態では、本発明のRNAによってコードされるSARS-CoV-2スパイクタンパク質は、以下のアミノ酸置換又は欠失(配列番号1に対して):
・E484K、N501Y、L18F、D80A、D215G、L242del、A243del、L244del、R246I、K417N、D614G、及びA701V;又は
・E484K、N501Y、L18F、D80A、D215G、L242del、A243del、L244del、K417N、D614G、及びA701V
を含む。 In an even more preferred embodiment, the SARS-CoV-2 spike protein encoded by the RNA of the invention has the following amino acid substitutions or deletions (relative to SEQ ID NO: 1):
・E484K, N501Y, L18F, D80A, D215G, L242del, A243del, L244del, R246I, K417N, D614G, and A701V; or ・E484K, N501Y, L18F, D80A, D215G, L242del, A243del, L244del, K41 7N, D614G, and A701V
including.

さらに特に好ましい実施形態では、本発明のRNAによってコードされるSARS-CoV-2スパイクタンパク質は、以下のアミノ酸置換又は欠失(配列番号1に対して):
・L452R、P681R、及びD614G;
・L452R、E484Q、P681R、E154K、D614G、及びQ1071H;
・L452R、P681R、T19R、F157del、R158del、T478K、D614G、及びD950N;又は
・T19R、L452R、E484Q、D614G、P681R及びD950N
を含む。 In a more particularly preferred embodiment, the SARS-CoV-2 spike protein encoded by the RNA of the invention has the following amino acid substitutions or deletions (with respect to SEQ ID NO: 1):
・L452R, P681R, and D614G;
・L452R, E484Q, P681R, E154K, D614G, and Q1071H;
・L452R, P681R, T19R, F157del, R158del, T478K, D614G, and D950N; or ・T19R, L452R, E484Q, D614G, P681R and D950N
including.

なおより好ましい実施形態では、本発明のRNAによってコードされるSARS-CoV-2スパイクタンパク質は、配列番号1、10、22738、22740、22742、22744、22746、22748、22750、22752、22754、22756、22758、22959～22964、27087～27109、28540～28588、28917～28920のいずれか1つと同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一であるアミノ酸配列、又はこれらのいずれかの免疫原性フラグメント若しくは免疫原性バリアントの少なくとも1つを含むか、又はそれからなる。したがって、一部の実施形態では、SARS-CoV-2スパイクタンパク質は、配列番号1、10、22738、22740、22742、22744、22746、22748、22750、22752、22754、22756、22758、22959～22964、27087～27109、28540～28588、又は28917～28920のいずれか1つと少なくとも95%同一である。ある特定の実施形態では、SARS-CoV-2スパイクタンパク質は、配列番号22738、22740、22742、22744、22746、22748、22750、22752、22754、22756、22758、22959～22964、27087～27109、28540～28588、又は28917～28920のいずれか1つと同一である。前記アミノ酸配列に関するさらなる情報はまた、表1及びそれぞれの配列の配列番号のST25配列表の<223>識別子下に提供される。 In an even more preferred embodiment, the SARS-CoV-2 spike protein encoded by the RNA of the invention is SEQ ID NO. Identical to any one of 22758, 22959-22964, 27087-27109, 28540-28588, 28917-28920, or at least 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, Amino acid sequences that are 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical, or immunogenic fragments or immunogenicity of any of these. comprising or consisting of at least one variant. Thus, in some embodiments, the SARS-CoV-2 spike protein comprises SEQ ID NOs: 1, 10, 22738, 22740, 22742, 22744, 22746, 22748, 22750, 22752, 22754, 22756, 22758, 22959-22964, At least 95% identical to any one of 27087-27109, 28540-28588, or 28917-28920. In certain embodiments, the SARS-CoV-2 spike protein has SEQ ID NOs: 22738, 22740, 22742, 22744, 22746, 22748, 22750, 22752, 22754, 22756, 22758, 22959-22964, 27087-27109, 28540- Identical to 28588 or any one of 28917 to 28920. Further information regarding the amino acid sequences is also provided under the <223> identifier in Table 1 and the ST25 Sequence Listing of the SEQ ID NOs of the respective sequences.

一部の実施形態では、本明細書において定義されるスパイクタンパク質(S)のフラグメントは、本発明のRNAによってコードされてもよく、前記フラグメントは、N末端で切断されて、全長SARS-CoV-2バリアントタンパク質のN末端のアミノ酸1～最大100を欠いてもよく、及び/又は前記フラグメントは、C末端で切断されて、全長SARS-CoV-2バリアントタンパク質のC末端のアミノ酸(aa)531～最大aa1273を欠いてもよい。このような「スパイクタンパク質(S)のフラグメント」は、アミノ酸置換(本明細書に記載される)をさらに含んでもよく、少なくとも1つの異種ペプチド又はタンパク質エレメント(本明細書に記載される)をさらに含んでもよい。好ましい実施形態では、スパイクタンパク質(S)のフラグメントは、C末端で切断されて、これにより、C末端の膜貫通型ドメインを欠いてもよい(すなわち、aa1212～aa1273を欠くか、又はaa1148～aa1273を欠く)(参照配列番号1によるアミノ酸位置)。 In some embodiments, a fragment of the spike protein (S) as defined herein may be encoded by an RNA of the invention, said fragment being truncated at the N-terminus to 2 may lack amino acids 1 to up to 100 of the N-terminus of the variant protein, and/or the fragment may be truncated at the C-terminus to form amino acids (aa) 531 to 100 of the C-terminus of the full-length SARS-CoV-2 variant protein. May lack up to aa1273. Such "fragments of spike protein (S)" may further include amino acid substitutions (as described herein) and may further include at least one heterologous peptide or protein element (as described herein). May include. In a preferred embodiment, the spike protein (S) fragment may be truncated at the C-terminus, thereby lacking the C-terminal transmembrane domain (i.e., lacking aa1212-aa1273 or aa1148-aa1273). ) (amino acid position according to reference SEQ ID NO: 1).

他の実施形態では、SARS-CoV-2から誘導されるコードされるスパイクタンパク質(S)は、膜貫通型ドメイン(TM)(参照配列番号1によるアミノ酸位置aa1212～aa1273)を欠く。実施形態では、SARS-CoV-2から誘導されるコードされるスパイクタンパク質(S)は、膜貫通型ドメインの伸長された部分(TMflex)(参照配列番号1によるアミノ酸位置aa1148～aa1273)を欠く。理論に束縛されることを望むものではなく、本明細書において定義される膜貫通型ドメイン(TM又はTMflex)を欠くスパイクタンパク質(S)は、ワクチンに適することができ、したがって、タンパク質は、可溶性であり、細胞膜に固定されない。したがって、可溶性タンパク質は、対象への投与の際により高い濃度で産生され(すなわち、翻訳され)、改善された免疫応答を導き得る。 In other embodiments, the encoded spike protein (S) derived from SARS-CoV-2 lacks the transmembrane domain (TM) (amino acid positions aa1212-aa1273 according to reference SEQ ID NO: 1). In an embodiment, the encoded spike protein (S) derived from SARS-CoV-2 lacks the extended portion of the transmembrane domain (TMflex) (amino acid positions aa1148 to aa1273 according to reference SEQ ID NO: 1). Without wishing to be bound by theory, a spike protein (S) lacking a transmembrane domain (TM or TMflex) as defined herein may be suitable for vaccines, and thus the protein may be soluble and is not fixed to the cell membrane. Thus, soluble proteins may be produced (ie, translated) in higher concentrations upon administration to a subject, leading to an improved immune response.

理論に束縛されることを望むものではなく、アミノ酸位置について配列番号1を用いて参照される、RBD(aa319～aa541)及びCND(aa329～aa529)ドメインは、免疫原性に重要であり得る。両方の領域は、スパイクタンパク質のS1フラグメントに位置する。したがって、本発明の文脈で、抗原性ペプチド又はタンパク質が、スパイクタンパク質のS1フラグメント又はその免疫原性フラグメント若しくは免疫原性バリアントを含むか、又はそれからなることは、好適であり得る。好適には、このようなS1フラグメントは、上で定義された少なくともRBD及び/又はCNDドメインを含んでもよい。ある特定の実施形態では、本発明のRNAによってコードされるSARS-CoV-2スパイクタンパク質CNDドメインは、配列番号27051～27086のいずれか1つと同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一であるアミノ酸配列、又はこれらのいずれかの免疫原性フラグメント若しくは免疫原性バリアントの少なくとも1つを含むか、又はそれからなる。したがって、一部の実施形態では、SARS-CoV-2スパイクタンパク質CNDドメインは、配列番号27051～27086のいずれか1つと少なくとも95%同一である。ある特定の実施形態では、SARS-CoV-2スパイクタンパク質CNDドメインは、配列番号27051～27086のいずれか1つと同一である。前記アミノ酸配列に関するさらなる情報はまた、表1及びそれぞれの配列の配列番号のST25配列表の<223>識別子下に提供される。 Without wishing to be bound by theory, the RBD (aa319-aa541) and CND (aa329-aa529) domains, referenced using SEQ ID NO: 1 for amino acid positions, may be important for immunogenicity. Both regions are located in the S1 fragment of the spike protein. It may therefore be preferred in the context of the present invention that the antigenic peptide or protein comprises or consists of the S1 fragment of the spike protein or an immunogenic fragment or variant thereof. Suitably such an S1 fragment may comprise at least an RBD and/or a CND domain as defined above. In certain embodiments, the SARS-CoV-2 spike protein CND domain encoded by the RNA of the invention is identical to any one of SEQ ID NOs: 27051-27086, or at least 70%, 80%, 85% %, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical amino acid sequences; or comprises or consists of at least one immunogenic fragment or variant of any of these. Thus, in some embodiments, the SARS-CoV-2 spike protein CND domain is at least 95% identical to any one of SEQ ID NOs: 27051-27086. In certain embodiments, the SARS-CoV-2 spike protein CND domain is identical to any one of SEQ ID NOs: 27051-27086. Further information regarding the amino acid sequences is also provided under the <223> identifier in Table 1 and the ST25 Sequence Listing of the SEQ ID NOs of the respective sequences.

好ましい実施形態では、コードされる少なくとも1つの抗原性ペプチド又はタンパク質は、受容体結合ドメイン(RBD;aa319～aa541)を含むか、又はそれからなり、RBDは、スパイクタンパク質フラグメント、又はその免疫原性フラグメント若しくは免疫原性バリアントを含むか、又はそれからなる。ある特定の実施形態では、本発明のRNAによってコードされるSARS-CoV-2スパイクタンパク質RBDドメインは、配列番号27007～27046のいずれか1つと同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一であるアミノ酸配列、又はこれらのいずれかの免疫原性フラグメント若しくは免疫原性バリアントの少なくとも1つを含むか、又はそれからなる。したがって、一部の実施形態では、SARS-CoV-2スパイクタンパク質RBDドメインは、配列番号27007～27046のいずれか1つと少なくとも95%同一である。ある特定の実施形態では、SARS-CoV-2スパイクタンパク質RBDドメインは、配列番号27007～27046のいずれか1つと同一である。前記アミノ酸配列に関するさらなる情報はまた、表1及びそれぞれの配列の配列番号のST25配列表の<223>識別子下に提供される。 In a preferred embodiment, the at least one antigenic peptide or protein encoded comprises or consists of a receptor binding domain (RBD; aa319-aa541), wherein the RBD is a spike protein fragment, or an immunogenic fragment thereof. or comprises or consists of an immunogenic variant. In certain embodiments, the SARS-CoV-2 spike protein RBD domain encoded by the RNA of the invention is identical to any one of SEQ ID NOs: 27007-27046, or at least 70%, 80%, 85% %, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical amino acid sequences; or comprises or consists of at least one immunogenic fragment or variant of any of these. Thus, in some embodiments, the SARS-CoV-2 spike protein RBD domain is at least 95% identical to any one of SEQ ID NOs: 27007-27046. In certain embodiments, the SARS-CoV-2 spike protein RBD domain is identical to any one of SEQ ID NOs: 27007-27046. Further information regarding the amino acid sequences is also provided under the <223> identifier in Table 1 and the ST25 Sequence Listing of the SEQ ID NOs of the respective sequences.

さらに好ましい実施形態では、コードされる少なくとも1つの抗原性ペプチド又はタンパク質は、切断された受容体結合ドメイン(truncRBD;aa334～aa528)を含むか、又はそれからなり、RBDは、スパイクタンパク質フラグメント、又はその免疫原性フラグメント若しくは免疫原性バリアントを含むか、又はそれからなる。 In a further preferred embodiment, the at least one antigenic peptide or protein encoded comprises or consists of a truncated receptor binding domain (truncRBD; aa334 to aa528), the RBD being a spike protein fragment, or Contains or consists of an immunogenic fragment or variant.

このような「スパイクタンパク質(S)のフラグメント」(RBD;aa319～541又はtruncRBD、aa334～aa528)は、アミノ酸置換(本明細書に記載される)をさらに含んでもよく、少なくとも1つの異種ペプチド又はタンパク質エレメント(本明細書に記載される)をさらに含んでもよい。 Such "fragment of spike protein (S)" (RBD; aa319-541 or truncRBD, aa334-aa528) may further include amino acid substitutions (as described herein) and at least one heterologous peptide or It may further include protein elements (described herein).

特に好ましい実施形態では、コードされる少なくとも1つの抗原性ペプチド又はタンパク質は、スパイクタンパク質(S)を含むか、又はそれからなり、スパイクタンパク質(S)は、スパイクタンパク質フラグメントS1、又はその免疫原性フラグメント若しくは免疫原性バリアントを含むか、又はそれからなる。 In particularly preferred embodiments, the at least one antigenic peptide or protein encoded comprises or consists of spike protein (S), wherein spike protein (S) is spike protein fragment S1, or an immunogenic fragment thereof. or comprises or consists of an immunogenic variant.

好ましい実施形態では、コードされる少なくとも1つの抗原性ペプチド又はタンパク質は、スパイクタンパク質フラグメントS1を含み、スパイクタンパク質フラグメントS2(aa682～aa1273)の少なくとも70%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%又は100%を欠く。このような実施形態は、S1フラグメントが、中和エピトープを含むため、有益であり得る。 In a preferred embodiment, the at least one antigenic peptide or protein encoded comprises spike protein fragment S1 and comprises at least 70%, 80%, 81%, 82%, 83% of spike protein fragment S2 (aa682 to aa1273). , 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% or 100 Missing %. Such embodiments may be advantageous because the S1 fragment contains a neutralizing epitope.

理論に束縛されることを望むものではなく、免疫原性スパイクタンパク質の形成が促進され得るため、抗原性ペプチド又はタンパク質が、スパイクタンパク質フラグメントS1及びスパイクタンパク質フラグメントS2(の少なくともフラグメント)を含むか、又はそれからなることは、好適であり得る。 Without wishing to be bound by theory, the antigenic peptide or protein comprises (at least a fragment of) spike protein fragment S1 and spike protein fragment S2, as formation of an immunogenic spike protein may be promoted; or consisting of it may be suitable.

したがって、特に好ましい実施形態では、コードされる少なくとも1つの抗原性ペプチド又はタンパク質は、スパイクタンパク質(S)を含むか、又はそれからなり、スパイクタンパク質(S)は、スパイクタンパク質フラグメントS1又はその免疫原性フラグメント若しくは免疫原性バリアント、及びスパイクタンパク質フラグメントS2又はその免疫原性フラグメント若しくは免疫原性バリアントを含むか、又はそれからなる。 Thus, in particularly preferred embodiments, the at least one antigenic peptide or protein encoded comprises or consists of a spike protein (S), wherein the spike protein (S) is a spike protein fragment S1 or an immunogenic protein thereof. fragment or immunogenic variant, and comprises or consists of the spike protein fragment S2 or an immunogenic fragment or immunogenic variant thereof.

代わりの好ましい実施形態では、コードされる少なくとも1つの抗原性ペプチド又はタンパク質は、全長スパイクタンパク質又はこれらのいずれかの免疫原性フラグメント若しくは免疫原性バリアントを含むか、又はそれからなる。 In an alternative preferred embodiment, the at least one antigenic peptide or protein encoded comprises or consists of the full-length spike protein or an immunogenic fragment or variant of any of these.

用語「全長スパイクタンパク質」は、本質的に完全なスパイクタンパク質に対応するアミノ酸配列を有するSARS-CoV-2から誘導されるスパイクタンパク質と理解されなければならない。したがって、「全長スパイクタンパク質」は、aa1～aa1273(参照タンパク質:配列番号1)を含んでもよい。したがって、全長スパイクタンパク質は、典型的には、分泌型シグナルペプチド、スパイクタンパク質フラグメントS1、スパイクタンパク質フラグメントS2、受容体結合ドメイン(RBD)、及び重要な中和ドメインCND、及び膜貫通型ドメインを含んでもよい。特にまた、ある特定のアミノ酸置換(例えば、Sタンパク質の融合前の安定化を可能にする)又は天然で生じるアミノ酸欠失を含むバリアントは、用語「全長スパイクタンパク質」によって包含される。 The term "full-length spike protein" is to be understood as the spike protein derived from SARS-CoV-2, which has an amino acid sequence that essentially corresponds to the complete spike protein. Therefore, a "full-length spike protein" may include aa1 to aa1273 (reference protein: SEQ ID NO: 1). Therefore, a full-length spike protein typically contains a secreted signal peptide, spike protein fragment S1, spike protein fragment S2, a receptor binding domain (RBD), and an important neutralization domain CND, and a transmembrane domain. But that's fine. In particular, also variants containing certain amino acid substitutions (eg, allowing for pre-fusion stabilization of the S protein) or naturally occurring amino acid deletions are encompassed by the term "full-length spike protein".

特に好ましい実施形態では、第一の態様のRNAによってコードされるスパイクタンパク質(S)を設計又は適合して、融合前の立体構造の抗原を安定化する。中和抗体のいくつかの可能性のあるエピトープは、単に、前記融合前のタンパク質立体構造にアクセス可能であり得るため、融合前の立体構造は、効率的なコロナウイルスワクチンの文脈で特に有利である。さらに、融合前の立体構造のタンパク質の残りは、例えば、亢進疾患及び/又は抗体依存性増強(ADE)のような、免疫病理学的効果を回避することを目的とする。 In a particularly preferred embodiment, the spike protein (S) encoded by the RNA of the first aspect is designed or adapted to stabilize the antigen in its prefusion conformation. The prefusion conformation is particularly advantageous in the context of an efficient coronavirus vaccine, since some potential epitopes of neutralizing antibodies may simply be accessible in the prefusion protein conformation. be. Furthermore, the remainder of the protein in the pre-fusion conformation is intended to avoid immunopathological effects, such as eg disease-enhancing disease and/or antibody-dependent enhancement (ADE).

好ましい実施形態では、融合前の安定化されたスパイクタンパク質をコードするRNA(又は組成物若しくはワクチン)の対象への投与は、スパイクタンパク質中和抗体を誘発し、疾患亢進抗体を誘発しない。特に、融合前の安定化されたスパイクタンパク質をコードする核酸(又は組成物若しくはワクチン)の対象への投与は、例えば、亢進疾患及び/又は抗体依存性増強(ADE)のような、免疫病理学的効果を誘発しない。 In a preferred embodiment, administration to a subject of RNA encoding a pre-fusion stabilized spike protein (or composition or vaccine) elicits spike protein neutralizing antibodies and does not elicit disease-enhancing antibodies. In particular, administration of a nucleic acid (or composition or vaccine) encoding a pre-fusion stabilized spike protein to a subject may be associated with immunopathology, such as enhanced disease and/or antibody-dependent enhancement (ADE). does not induce any negative effects.

したがって、好ましい実施形態では、本発明のRNAは、SARS-CoV-2スパイクタンパク質(S)から選択されるか、又は誘導される少なくとも1つの抗原性ペプチド又はタンパク質をコードする少なくとも1つのコード配列を含み、SARS-CoV-2スパイクタンパク質(S)は、融合前の安定化されたスパイクタンパク質(S_stab)である。好適には、前記融合前の安定化されたスパイクタンパク質は、少なくとも1つの融合前の安定化変異を含む。 Therefore, in a preferred embodiment, the RNA of the invention comprises at least one coding sequence encoding at least one antigenic peptide or protein selected from or derived from the SARS-CoV-2 spike protein (S). The SARS-CoV-2 spike protein (S) is the pre-fusion stabilized spike protein (S_stab). Preferably, said pre-fusion stabilized spike protein comprises at least one pre-fusion stabilizing mutation.

本明細書で使用される場合、用語「融合前の立体構造」は、分泌系での成熟SARS-CoV-2 Sタンパク質への処理後、SARS-CoV-2 Sの融合後の立体構造への移行を導く膜融合現象の誘発前に、SARS-CoV-2 Sタンパク質の外部ドメインにがとる構造上の立体構造に関する。 As used herein, the term "pre-fusion conformation" refers to the transformation of SARS-CoV-2 S into the post-fusion conformation after processing into the mature SARS-CoV-2 S protein in the secretion system. Concerning the structural conformation adopted by the ectodomain of the SARS-CoV-2 S protein prior to the induction of membrane fusion events leading to translocation.

本明細書に記載される「融合前の安定化されたスパイクタンパク質(S_stab)」は、対応する天然のSARS-CoV-2 S配列から形成されたSARS-CoV-2 S外部ドメイン三量体と比較して、融合前の立体構造の増加した保持をもたらす、天然のSARS-CoV-2 S配列と比較して1個以上のアミノ酸置換、欠失、又は挿入を含む。1個以上のアミノ酸置換、欠失、又は挿入による融合前の立体構造の「安定化」は、例えば、エネルギー安定化(例えば、融合後の開放性立体構造と比べて、融合前の立体構造のエネルギーを低減すること)及び/又は動態学的安定化(例えば、融合前の立体構造から融合後の立体構造への移行の速度を低減すること)であり得る。加えて、融合前の立体構造のSARS-CoV-2 S外部ドメイン三量体の安定化は、対応する天然のSARS-CoV-2 S配列と比較して、変性に対する抵抗性の増加を含み得る。 The “pre-fusion stabilized spike protein (S_stab)” described herein refers to the SARS-CoV-2 S ectodomain trimer formed from the corresponding natural SARS-CoV-2 S sequence. In comparison, it contains one or more amino acid substitutions, deletions, or insertions compared to the native SARS-CoV-2 S sequence that results in increased retention of the prefusion conformation. "Stabilization" of the prefusion conformation by one or more amino acid substitutions, deletions, or insertions may include, for example, energy stabilization (e.g., increased stability of the prefusion conformation compared to the postfusion open conformation). energy) and/or kinetic stabilization (eg, reducing the rate of transition from the pre-fusion to the post-fusion conformation). In addition, stabilization of the SARS-CoV-2 S ectodomain trimer in the prefusion conformation may include increased resistance to denaturation compared to the corresponding native SARS-CoV-2 S sequence. .

したがって、好ましい実施形態では、SARS-CoV-2スパイクタンパク質は、融合前の立体構造のSタンパク質を安定化する1個以上のアミノ酸置換、例えば、融合前の立体構造のSタンパク質(N末端領域を含む)の膜遠位部分を安定化する置換を含む。 Therefore, in a preferred embodiment, the SARS-CoV-2 spike protein contains one or more amino acid substitutions that stabilize the S protein in the prefusion conformation, e.g. (including substitutions that stabilize the membrane distal portion of the membrane).

SARS-CoV-2コロナウイルススパイクタンパク質の安定化は、位置K986及び/又はV987における少なくとも1つのアミノ酸を、融合前の立体構造のスパイクタンパク質を安定化するアミノ酸で置換することによって得ることができる(参照配列番号1によるアミノ酸位置)。 Stabilization of the SARS-CoV-2 coronavirus spike protein can be obtained by replacing at least one amino acid at position K986 and/or V987 with an amino acid that stabilizes the spike protein in the prefusion conformation ( Amino acid position according to reference SEQ ID NO: 1).

好ましい実施形態では、融合前の安定化変異は、位置K986及びV987におけるアミノ酸置換を含み、アミノ酸K986及び/又はV987は、A、I、L、M、F、V、G、又はPから選択されるアミノ酸で置換されている(参照配列番号1によるアミノ酸位置)。 In a preferred embodiment, the pre-fusion stabilizing mutations include amino acid substitutions at positions K986 and V987, wherein amino acids K986 and/or V987 are selected from A, I, L, M, F, V, G, or P. (amino acid position according to reference SEQ ID NO: 1).

好ましくは、融合前の立体構造の安定化は、スパイクタンパク質中の残基K986及びV987において2つの連続するプロリン置換を導入することによって得られる(参照配列番号1によるアミノ酸位置)。 Preferably, pre-fusion conformational stabilization is obtained by introducing two consecutive proline substitutions at residues K986 and V987 in the spike protein (amino acid positions according to reference SEQ ID NO: 1).

したがって、好ましい実施形態では、融合前の安定化されたスパイクタンパク質(S_stab)は、少なくとも1つの融合前の安定化変異を含み、少なくとも1つの融合前の安定化変異は、以下のアミノ酸置換:K986P及びV987Pを含む(参照配列番号1によるアミノ酸位置)。 Accordingly, in a preferred embodiment, the prefusion stabilized spike protein (S_stab) comprises at least one prefusion stabilizing mutation, and the at least one prefusion stabilizing mutation is the following amino acid substitution: K986P and V987P (amino acid positions according to reference SEQ ID NO: 1).

特に好ましい実施形態では、本発明のRNAによってコードされるSARS-CoV-2スパイクタンパク質は、少なくとも1つの融合前の安定化K986P及びV987P変異を含み、さらに、以下のアミノ酸置換又は欠失(参照配列番号1によるアミノ酸位置):
・E484K、N501Y、及び場合により、L18F、D80A、D215G、L242del、A243del、L244del、R246I、K417N、D614G、A701V;
・E484K、N501Y、及び任意に、L18F、D80A、D215G、L242del、A243del、L244del、K417N、D614G、A701V;
・N501Y、P681H、及び任意に、H69del、V70del、Y144del、A570D、D614G、T716I、S982A、D1118H;
・N501Y、P681H、E484K、及び任意に、H69del、V70del、Y144del、A570D、D614G、T716I、S982A、D1118H;
・E484K、N501Y、及び任意に、L18F、T20N、P26S、D138Y、R190S、K417T、D614G、H655Y、T1027I;
・E484K、N501Y、及び任意に、L18F、T20N、P26S、D138Y、R190S、K417T、D614G、H655Y、T1027I、V1176F;
・N501Y、P681H、E484K、及び任意に、H69del、V70del、Y144del、A570D、D614G、T716I、S982A、D1118H;
・L452R、及び任意に、S13I、W152C、D614G;
・L452R、D614D及び任意に、P681R;
・L452R、D614D、P681R及び任意に、E484Q、E154K、Q1071H;
・L452R、D614D、P681R及び任意に、T19R、L452R、D950N;
・L452R、D614D、P681R及び任意に、T19R、F157del、T478K、D950N;
・E484K、及び任意に、Q52R、A67V、H69del、V70del、delY144、D614G、Q677H、F888L;
・E484K、及び任意に、A67V、H69del、V70del、Y144del、D614G、Q677H、F888L;
・E484K、及び任意に、L5F、T95I、D253G、D614G、A701V;
・P681R、及び任意に、F157L、V367F、Q613H;
・P681R、及び任意に、S254F、D614G、G769V;
・L452R、P681R、及び任意に、D614G;
・L452R、E484Q、P681R、及び任意に、E154K、D614G、Q1071H;
・L452R、P681R、及び任意に、T19R、F157del、R158del、T478K、D614G、D950N;
・E484K、及び任意に、D614G、V1176F;
・L452Q、及び任意に、G75V、T76I、R246del、S247del、Y248del、L249del、T250del、P251del、G252del、F490S、D614G、T859N;
・K417N、及び任意に、P681R;
・K417N、P681R、及び任意に、D614G;
・K417N、L452R、P681R、及び任意に、D614G;
・K417N、T478K、P681R、及び任意に、D614G;
・K417N、D950N、P681R、及び任意に、D614G.
・K417N、D614G、P681R、及び任意に、T478K;
・K417N、D614G、P681R、及び任意に、L452R;
・K417N、D614G、P681R、L452R及び任意に、T478K;
・S247del、Y248del、L249del、T250del、P251del、G252del、D253del及び任意に、D614G;
・S247del、Y248del、L249del、T250del、P251del、G252del、D253del及び任意に、L452Q、D614G;
・H69del、V70del及び任意に、D614G;
・H69del、V70del、E484K及び任意に、D614G;
・H69del、V70del、N501Y及び場合により、D614G;又は
・H69del、V70del、N501Y、E484K及び場合により、P681H
を含む、融合前の安定化されたスパイクタンパク質(S_stab)である。 In a particularly preferred embodiment, the SARS-CoV-2 spike protein encoded by the RNA of the invention comprises at least one pre-fusion stabilizing K986P and V987P mutations and further comprises the following amino acid substitutions or deletions (reference sequence Amino acid position by number 1):
・E484K, N501Y, and in some cases, L18F, D80A, D215G, L242del, A243del, L244del, R246I, K417N, D614G, A701V;
・E484K, N501Y, and optionally L18F, D80A, D215G, L242del, A243del, L244del, K417N, D614G, A701V;
・N501Y, P681H, and optionally H69del, V70del, Y144del, A570D, D614G, T716I, S982A, D1118H;
・N501Y, P681H, E484K, and optionally H69del, V70del, Y144del, A570D, D614G, T716I, S982A, D1118H;
・E484K, N501Y, and optionally L18F, T20N, P26S, D138Y, R190S, K417T, D614G, H655Y, T1027I;
・E484K, N501Y, and optionally L18F, T20N, P26S, D138Y, R190S, K417T, D614G, H655Y, T1027I, V1176F;
・N501Y, P681H, E484K, and optionally H69del, V70del, Y144del, A570D, D614G, T716I, S982A, D1118H;
・L452R, and optionally S13I, W152C, D614G;
・L452R, D614D and optionally, P681R;
・L452R, D614D, P681R and optionally, E484Q, E154K, Q1071H;
・L452R, D614D, P681R and optionally, T19R, L452R, D950N;
・L452R, D614D, P681R and optionally, T19R, F157del, T478K, D950N;
・E484K, and optionally Q52R, A67V, H69del, V70del, delY144, D614G, Q677H, F888L;
・E484K, and optionally A67V, H69del, V70del, Y144del, D614G, Q677H, F888L;
・E484K, and optionally L5F, T95I, D253G, D614G, A701V;
・P681R, and optionally F157L, V367F, Q613H;
・P681R, and optionally S254F, D614G, G769V;
・L452R, P681R, and optionally, D614G;
・L452R, E484Q, P681R, and optionally E154K, D614G, Q1071H;
・L452R, P681R, and optionally T19R, F157del, R158del, T478K, D614G, D950N;
・E484K, and optionally D614G, V1176F;
・L452Q, and optionally, G75V, T76I, R246del, S247del, Y248del, L249del, T250del, P251del, G252del, F490S, D614G, T859N;
・K417N, and optionally, P681R;
・K417N, P681R, and optionally, D614G;
・K417N, L452R, P681R, and optionally, D614G;
・K417N, T478K, P681R, and optionally, D614G;
・K417N, D950N, P681R, and optionally, D614G.
・K417N, D614G, P681R, and optionally, T478K;
・K417N, D614G, P681R, and optionally, L452R;
・K417N, D614G, P681R, L452R and optionally, T478K;
・S247del, Y248del, L249del, T250del, P251del, G252del, D253del and optionally, D614G;
・S247del, Y248del, L249del, T250del, P251del, G252del, D253del and optionally, L452Q, D614G;
・H69del, V70del and optionally, D614G;
・H69del, V70del, E484K and optionally, D614G;
・H69del, V70del, N501Y and in some cases, D614G; or ・H69del, V70del, N501Y, E484K and in some cases, P681H
The pre-fusion stabilized spike protein (S_stab) containing

特に好ましい実施形態では、本発明のRNAによってコードされるSARS-CoV-2スパイクタンパク質は、少なくとも1つの融合前の安定化K986P及びV987P変異を含み、さらに、以下のアミノ酸置換又は欠失(参照配列番号1によるアミノ酸位置):
・E484K、N501Y、L18F、D80A、D215G、L242del、A243del、L244del、R246I、K417N、D614G、及びA701V;
・E484K、N501Y、L18F、D80A、D215G、L242del、A243del、L244del、K417N、D614G、及びA701V;
・E484K、N501Y、L18F、T20N、P26S、D138Y、R190S、K417T、D614G、H655Y、及びT1027I;
・E484K、N501Y、L18F、T20N、P26S、D138Y、R190S、K417T、D614G、H655Y、T1027I、V1176F;
・L452R、P681R、及びD614G;
・L452R、E484Q、P681R、E154K、D614G、及びQ1071H;又は
・L452R、P681R、T19R、F157del、R158del、T478K、D614G、及びD950N
を含む、融合前の安定化されたスパイクタンパク質(S_stab)(又はそのフラグメント若しくはバリアント)である。 In a particularly preferred embodiment, the SARS-CoV-2 spike protein encoded by the RNA of the invention comprises at least one pre-fusion stabilizing K986P and V987P mutations and further comprises the following amino acid substitutions or deletions (reference sequence Amino acid position by number 1):
・E484K, N501Y, L18F, D80A, D215G, L242del, A243del, L244del, R246I, K417N, D614G, and A701V;
・E484K, N501Y, L18F, D80A, D215G, L242del, A243del, L244del, K417N, D614G, and A701V;
・E484K, N501Y, L18F, T20N, P26S, D138Y, R190S, K417T, D614G, H655Y, and T1027I;
・E484K, N501Y, L18F, T20N, P26S, D138Y, R190S, K417T, D614G, H655Y, T1027I, V1176F;
・L452R, P681R, and D614G;
・L452R, E484Q, P681R, E154K, D614G, and Q1071H; or ・L452R, P681R, T19R, F157del, R158del, T478K, D614G, and D950N
The pre-fusion stabilized spike protein (S_stab) (or a fragment or variant thereof) comprising:

特に好ましい実施形態では、本発明のRNAによってコードされるSARS-CoV-2スパイクタンパク質は、
・K986P、V987P、E484K、N501Y、L18F、D80A、D215G、L242del、A243del、L244del、R246I、K417N、D614G、及びA701V;又は
・K986P、V987P、E484K、N501Y、L18F、D80A、D215G、L242del、A243del、L244del、K417N、D614G、及びA701V
から選択されるアミノ酸置換又は欠失(参照配列番号1によるアミノ酸位置)を含む融合前の安定化されたスパイクタンパク質(S_stab)(又はそのフラグメント若しくはバリアント)である。 In a particularly preferred embodiment, the SARS-CoV-2 spike protein encoded by the RNA of the invention is
・K986P, V987P, E484K, N501Y, L18F, D80A, D215G, L242del, A243del, L244del, R246I, K417N, D614G, and A701V; or ・K986P, V987P, E484K, N501Y, L18F, D80A, D21 5G, L242del, A243del, L244del, K417N, D614G, and A701V
A pre-fusion stabilized spike protein (S_stab) (or a fragment or variant thereof) comprising an amino acid substitution or deletion (amino acid position according to reference SEQ ID NO: 1) selected from:

本発明の文脈の実施形態では、本明細書において定義される任意のSARS-CoV-2コロナウイルススパイクタンパク質を上記の通り変異させて(参照タンパク質配列番号1について例証される)、融合前の立体構造のスパイクタンパク質を安定化し得ることは、強調されなければならない。 In an embodiment in the context of the present invention, any SARS-CoV-2 coronavirus spike protein as defined herein is mutated as described above (exemplified for reference protein SEQ ID NO: 1) to form a pre-fusion It must be emphasized that the structure can stabilize the spike protein.

様々な実施形態によると、本発明のRNAは、本明細書において定義される少なくとも1つの抗原性SARS-CoV-2スパイクタンパク質、さらに、少なくとも1つの異種ペプチド又はタンパク質エレメントをコードする。 According to various embodiments, the RNA of the invention encodes at least one antigenic SARS-CoV-2 spike protein as defined herein, as well as at least one heterologous peptide or protein element.

好適には、少なくとも1つの異種ペプチド又はタンパク質エレメントは、コードされる抗原性SARS-CoV-2スパイクタンパク質の分泌(例えば、分泌型シグナル配列を介した)を促進するか、若しくは改善し、形質膜におけるコードされる抗原性SARS-CoV-2スパイクタンパク質の固定(例えば、膜貫通型エレメントを介した)を促進するか、若しくは改善し、抗原複合体の形成(例えば、多量体化ドメイン又は抗原クラスター形成エレメントを介した)を促進するか、若しくは改善し、又はウイルス様粒子形成(VLP形成配列)を促進するか、若しくは改善し得る。さらに、第一の態様のRNAは、ペプチドリンカーエレメント、自己切断ペプチド、免疫性アジュバント配列又は樹状細胞標的化配列をさらにコードしてもよい。 Suitably, the at least one heterologous peptide or protein element promotes or improves secretion (e.g., via a secretory signal sequence) of the encoded antigenic SARS-CoV-2 spike protein, and promote or improve the anchoring of the encoded antigenic SARS-CoV-2 spike protein in the cell (e.g., via transmembrane elements) and the formation of antigenic complexes (e.g., through multimerization domains or antigenic clusters). (via VLP forming elements) or may promote or improve virus-like particle formation (VLP forming sequences). Furthermore, the RNA of the first embodiment may further encode a peptide linker element, a self-cleaving peptide, an immune adjuvant sequence or a dendritic cell targeting sequence.

好適な多量体化ドメインは、WO2017/081082の配列番号1116～1167に記載のアミノ酸配列、又はこれらの配列のフラグメント若しくはバリアントのリストから選択されてもよい。好適な膜貫通型エレメントは、WO2017/081082の配列番号1228～1343に記載のアミノ酸配列、又はこれらの配列のフラグメント若しくはバリアントのリストから選択されてもよい。好適なVLP形成配列は、特許出願のWO2017/081082の配列番号1168～1227に記載のアミノ酸配列、又はこれらの配列のフラグメント若しくはバリアントのリストから選択されてもよい。好適なペプチドリンカーは、特許出願のWO2017/081082の配列番号1509～1565に記載のアミノ酸配列、又はこれらの配列のフラグメント若しくはバリアントのリストから選択されてもよい。好適な自己切断ペプチドは、特許出願のWO2017/081082の配列番号1434～1508に記載のアミノ酸配列、又はこれらの配列のフラグメント若しくはバリアントのリストから選択されてもよい。好適な免疫性アジュバント配列は、特許出願のWO2017/081082の配列番号1360～1421に記載のアミノ酸配列、又はこれらの配列のフラグメント若しくはバリアントのリストから選択されてもよい。好適な樹状細胞(DC)標的化配列は、特許出願のWO2017/081082の配列番号1344～1359に記載のアミノ酸配列、又はこれらの配列のフラグメント若しくはバリアントのリストから選択されてもよい。好適な分泌型シグナルペプチドは、公開されたPCT特許出願WO2017/081082の配列番号1～1115及び配列番号1728に記載のアミノ酸配列、又はこれらの配列のフラグメント若しくはバリアントのリストから選択されてもよい。 Suitable multimerization domains may be selected from the list of amino acid sequences set out in SEQ ID NOs: 1116-1167 of WO2017/081082, or fragments or variants of these sequences. Suitable transmembrane elements may be selected from the list of amino acid sequences set out in SEQ ID NO: 1228-1343 of WO2017/081082, or fragments or variants of these sequences. Suitable VLP-forming sequences may be selected from the list of amino acid sequences set out in SEQ ID NOs: 1168-1227 of patent application WO2017/081082, or fragments or variants of these sequences. Suitable peptide linkers may be selected from the list of amino acid sequences set out in SEQ ID NO: 1509-1565 of patent application WO2017/081082, or fragments or variants of these sequences. Suitable self-cleaving peptides may be selected from the list of amino acid sequences set out in SEQ ID NO: 1434-1508 of patent application WO2017/081082, or fragments or variants of these sequences. Suitable immune adjuvant sequences may be selected from the list of amino acid sequences set out in SEQ ID NO: 1360-1421 of patent application WO2017/081082, or fragments or variants of these sequences. Suitable dendritic cell (DC) targeting sequences may be selected from the list of amino acid sequences set out in SEQ ID NO: 1344-1359 of patent application WO2017/081082, or fragments or variants of these sequences. Suitable secreted signal peptides may be selected from the list of amino acid sequences set out in SEQ ID NO: 1-1115 and SEQ ID NO: 1728 of published PCT patent application WO2017/081082, or fragments or variants of these sequences.

好ましい実施形態では、少なくとも1つの抗原性SARS-CoV-2スパイクタンパク質をコードするRNAは、少なくとも1つの異種分泌型シグナル配列及び/又は三量体化エレメント、及び/又は抗原クラスター形成エレメント、及び/又はVLP形成配列をさらにコードする。 In a preferred embodiment, the RNA encoding at least one antigenic SARS-CoV-2 spike protein comprises at least one heterologous secretory signal sequence and/or trimerization element, and/or antigen clustering element, and/or or further encodes a VLP-forming sequence.

したがって、好ましい実施形態では、本発明のRNAによってコードされるSARS-CoV-2スパイクタンパク質は、配列番号22738、22740、22742、22744、22746、22748、22750、22752、22754、22756、22758、22959～22964、27087～27109、28540～28588、28917～28920のいずれか1つと同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一であるアミノ酸配列、又はこれらのいずれかの免疫原性フラグメント若しくは免疫原性バリアントの少なくとも1つを含むか、又はそれからなる。したがって、一部の実施形態では、SARS-CoV-2スパイクタンパク質は、配列番号22738、22740、22742、22744、22746、22748、22750、22752、22754、22756、22758、22959～22964、27087～27109、28540～28588、又は28917～28920のいずれか1つと少なくとも95%同一である。ある特定の実施形態では、SARS-CoV-2スパイクタンパク質は、配列番号22738、22740、22742、22744、22746、22748、22750、22752、22754、22756、22758、22959～22964、27087～27109、28540～28588、又は28917～28920のいずれか1つと同一である。前記アミノ酸配列に関するさらなる情報はまた、表1及びそれぞれの配列の配列番号のST25配列表の<223>識別子下に提供される。 Therefore, in a preferred embodiment, the SARS-CoV-2 spike protein encoded by the RNA of the invention comprises SEQ ID NOs: 22738, 22740, 22742, 22744, 22746, 22748, 22750, 22752, 22754, 22756, 22758, 22959 to Identical to any one of 22964, 27087-27109, 28540-28588, 28917-28920, or at least 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91 %, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical amino acid sequences, or at least one immunogenic fragment or variant of any of these. containing or consisting of one. Thus, in some embodiments, the SARS-CoV-2 spike protein is SEQ ID NO: 22738, 22740, 22742, 22744, 22746, 22748, 22750, 22752, 22754, 22756, 22758, 22959-22964, 27087-27109, At least 95% identical to any one of 28540-28588 or 28917-28920. In certain embodiments, the SARS-CoV-2 spike protein has SEQ ID NOs: 22738, 22740, 22742, 22744, 22746, 22748, 22750, 22752, 22754, 22756, 22758, 22959-22964, 27087-27109, 28540- Identical to 28588 or any one of 28917 to 28920. Further information regarding the amino acid sequences is also provided under the <223> identifier in Table 1 and the ST25 Sequence Listing of the SEQ ID NOs of the respective sequences.

したがって、好ましい実施形態では、本発明のRNAによってコードされるSARS-CoV-2スパイクタンパク質は、配列番号27093～27095、28552～28558のいずれか1つと同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一であるアミノ酸配列、又はこれらのいずれかの免疫原性フラグメント若しくは免疫原性バリアントの少なくとも1つを含むか、又はそれからなる。したがって、一部の実施形態では、SARS-CoV-2スパイクタンパク質は、配列番号27093～27095、28552～28558のいずれか1つと少なくとも95%同一である。ある特定の実施形態では、SARS-CoV-2スパイクタンパク質は、配列番号27093～27095、28552～28558のいずれか1つと同一である。 Therefore, in a preferred embodiment, the SARS-CoV-2 spike protein encoded by the RNA of the invention is at least 70%, 80% identical to any one of SEQ ID NOs: 27093-27095, 28552-28558. , 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical amino acids or an immunogenic fragment or variant of any of these sequences. Thus, in some embodiments, the SARS-CoV-2 spike protein is at least 95% identical to any one of SEQ ID NOs: 27093-27095, 28552-28558. In certain embodiments, the SARS-CoV-2 spike protein is identical to any one of SEQ ID NOs: 27093-27095, 28552-28558.

さらに好ましい実施形態では、本発明のRNAによってコードされるSARS-CoV-2スパイクタンパク質は、配列番号27095、28552～28557のいずれか1つと同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一であるアミノ酸配列、又はこれらのいずれかの免疫原性フラグメント若しくは免疫原性バリアントの少なくとも1つを含むか、又はそれからなる。したがって、一部の実施形態では、SARS-CoV-2スパイクタンパク質は、配列番号27095、28552～28557のいずれか1つと少なくとも95%同一である。ある特定の実施形態では、SARS-CoV-2スパイクタンパク質は、配列番号27095、28552～28557のいずれか1つと同一である。 In a further preferred embodiment, the SARS-CoV-2 spike protein encoded by the RNA of the invention is at least 70%, 80%, 85% identical to any one of SEQ ID NO: 27095, 28552-28557. , 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical amino acid sequences, or It comprises or consists of at least one immunogenic fragment or variant of any of these. Thus, in some embodiments, the SARS-CoV-2 spike protein is at least 95% identical to any one of SEQ ID NOs: 27095, 28552-28557. In certain embodiments, the SARS-CoV-2 spike protein is identical to any one of SEQ ID NOs: 27095, 28552-28557.

さらに好ましい実施形態では、本発明のRNAによってコードされるSARS-CoV-2スパイクタンパク質は、配列番号27095のいずれか1つと同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一であるアミノ酸配列、又はこれらのいずれかの免疫原性フラグメント若しくは免疫原性バリアントの少なくとも1つを含むか、又はそれからなる。したがって、一部の実施形態では、SARS-CoV-2スパイクタンパク質は、配列番号27095のいずれか1つと少なくとも95%同一である。ある特定の実施形態では、SARS-CoV-2スパイクタンパク質は、配列番号27095のいずれか1つと同一である。 In a further preferred embodiment, the SARS-CoV-2 spike protein encoded by the RNA of the invention is identical to any one of SEQ ID NO: 27095, or at least 70%, 80%, 85%, 86%, Amino acid sequences that are 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical, or any of these comprises or consists of at least one immunogenic fragment or variant of. Thus, in some embodiments, the SARS-CoV-2 spike protein is at least 95% identical to any one of SEQ ID NO: 27095. In certain embodiments, the SARS-CoV-2 spike protein is identical to any one of SEQ ID NO: 27095.

さらに好ましい実施形態では、本発明のRNAによってコードされるSARS-CoV-2スパイクタンパク質は、配列番号23090、23091、22960、22961、28540のいずれか1つと同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一であるアミノ酸配列若しくはアミノ酸コード配列、又はこれらのいずれかの免疫原性フラグメント若しくは免疫原性バリアントの少なくとも1つを含むか、又はそれからなる。したがって、一部の実施形態では、SARS-CoV-2スパイクタンパク質は、配列番号23090、23091、22960、22961、28540のいずれか1つと少なくとも95%同一である。ある特定の実施形態では、SARS-CoV-2スパイクタンパク質は、配列番号23090、23091、22960、22961、28540のいずれか1つと同一である。 In a further preferred embodiment, the SARS-CoV-2 spike protein encoded by the RNA of the invention is at least 70%, 80% identical to any one of SEQ ID NO: 23090, 23091, 22960, 22961, 28540. %, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical comprises or consists of at least one amino acid sequence or amino acid coding sequence, or an immunogenic fragment or variant of any of these. Thus, in some embodiments, the SARS-CoV-2 spike protein is at least 95% identical to any one of SEQ ID NO: 23090, 23091, 22960, 22961, 28540. In certain embodiments, the SARS-CoV-2 spike protein is identical to any one of SEQ ID NOs: 23090, 23091, 22960, 22961, 28540.

依然としてさらに好ましい実施形態では、本発明のRNAによってコードされるSARS-CoV-2スパイクタンパク質は、配列番号27096、28545のいずれか1つと同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一であるアミノ酸配列、又はこれらのいずれかの免疫原性フラグメント若しくは免疫原性バリアントの少なくとも1つを含むか、又はそれからなる。したがって、一部の実施形態では、SARS-CoV-2スパイクタンパク質は、配列番号27096、28545のいずれか1つと少なくとも95%同一である。ある特定の実施形態では、SARS-CoV-2スパイクタンパク質は、配列番号27096、28545のいずれか1つと同一である。 In still further preferred embodiments, the SARS-CoV-2 spike protein encoded by the RNA of the invention is identical to any one of SEQ ID NOs: 27096, 28545, or at least 70%, 80%, 85%, Amino acid sequences that are 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical, or comprises or consists of at least one immunogenic fragment or variant of any of the following. Thus, in some embodiments, the SARS-CoV-2 spike protein is at least 95% identical to any one of SEQ ID NOs: 27096, 28545. In certain embodiments, the SARS-CoV-2 spike protein is identical to any one of SEQ ID NOs: 27096, 28545.

依然としてさらに好ましい実施形態では、本発明のRNAによってコードされるSARS-CoV-2スパイクタンパク質は、配列番号22959のいずれか1つと同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一であるアミノ酸配列、又はこれらのいずれかの免疫原性フラグメント若しくは免疫原性バリアントの少なくとも1つを含むか、又はそれからなる。したがって、一部の実施形態では、SARS-CoV-2スパイクタンパク質は、配列番号22959のいずれか1つと少なくとも95%同一である。ある特定の実施形態では、SARS-CoV-2スパイクタンパク質は、配列番号22959のいずれか1つと同一である。 In still further preferred embodiments, the SARS-CoV-2 spike protein encoded by the RNA of the invention is at least 70%, 80%, 85%, 86% identical to any one of SEQ ID NO: 22959. , 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical amino acid sequences, or any of these. comprises or consists of at least one immunogenic fragment or variant of. Thus, in some embodiments, the SARS-CoV-2 spike protein is at least 95% identical to any one of SEQ ID NO: 22959. In certain embodiments, the SARS-CoV-2 spike protein is identical to any one of SEQ ID NO: 22959.

さらなる好ましい実施形態では、本発明のRNAによってコードされるSARS-CoV-2スパイクタンパク質は、配列番号28541～28544、28917～28920のいずれか1つと同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一であるアミノ酸配列、又はこれらのいずれかの免疫原性フラグメント若しくは免疫原性バリアントの少なくとも1つを含むか、又はそれからなる。したがって、一部の実施形態では、SARS-CoV-2スパイクタンパク質は、配列番号28541～28544、28917～28920のいずれか1つと少なくとも95%同一である。ある特定の実施形態では、SARS-CoV-2スパイクタンパク質は、配列番号28541～28544、28917～28920のいずれか1つと同一である。 In a further preferred embodiment, the SARS-CoV-2 spike protein encoded by the RNA of the invention is identical to any one of SEQ ID NOs: 28541-28544, 28917-28920, or at least 70%, 80%, Amino acid sequences that are 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical , or an immunogenic fragment or variant of any of these. Thus, in some embodiments, the SARS-CoV-2 spike protein is at least 95% identical to any one of SEQ ID NOs: 28541-28544, 28917-28920. In certain embodiments, the SARS-CoV-2 spike protein is identical to any one of SEQ ID NOs: 28541-28544, 28917-28920.

本明細書において定義されるSARS-CoV-2から誘導される好ましい抗原性ペプチド又はタンパク質が、表1に提供される。そこで、それぞれの列は、好適なSARS-CoV-2スパイクタンパク質構築物に対応する。表1のカラムAは、好適な抗原構築物の簡単な説明を提供する。表1のカラムBは、それぞれの抗原構築物のタンパク質(アミノ酸)の配列番号を提供する。表1のカラムCは、対応するG/C最適化核酸コード配列(opt1、gc)の配列番号を提供する。表1のカラムDは、対応するG/C含有量が修飾された核酸コード配列(opt10、gc mod)の配列番号を提供する(「コード配列」の詳細な説明について、段落「好適なコード配列」を参照)。 Preferred antigenic peptides or proteins derived from SARS-CoV-2 as defined herein are provided in Table 1. Each column then corresponds to a suitable SARS-CoV-2 spike protein construct. Column A of Table 1 provides a brief description of suitable antigen constructs. Column B of Table 1 provides the protein (amino acid) sequence number of each antigen construct. Column C of Table 1 provides the SEQ ID number of the corresponding G/C optimized nucleic acid coding sequence (opt1, gc). Column D of Table 1 provides the SEQ ID number of the corresponding G/C content modified nucleic acid coding sequence (opt10, gc mod) (see paragraph ``Preferred Coding Sequence'' for a detailed description of ``Coding Sequence''). ).

特に、発明の説明は、本出願のST25配列表の<223>識別子下で提供される情報を明示的に含む。表1のコード配列を含む好ましいRNA構築物、例えば、表1のコード配列を含むmRNA配列が、表2に提供される。 In particular, the description of the invention explicitly includes the information provided under the <223> identifier of the ST25 sequence listing of the present application. Preferred RNA constructs comprising the coding sequences of Table 1, eg, mRNA sequences comprising the coding sequences of Table 1, are provided in Table 2.

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好適なコード配列:
好ましい実施形態によると、本発明のRNAは、好ましくは、上で定義されたSARS-CoV-2スパイクタンパク質から選択されるか、又は誘導される少なくとも1つの抗原性ペプチド又はタンパク質又はそのフラグメント及びバリアントをコードする少なくとも1つのコード配列を含む。その文脈では、本明細書において定義される少なくとも1つの抗原性タンパク質SARS-CoV-2スパイクタンパク質、又はそのフラグメント及びバリアントをコードする任意のコード配列は、好適なコード配列として理解され得、したがって、本発明のRNAに含まれ得る。 Preferred code sequence:
According to a preferred embodiment, the RNA of the invention preferably comprises at least one antigenic peptide or protein selected from or derived from the SARS-CoV-2 spike protein as defined above or fragments and variants thereof. at least one code sequence encoding. In that context, any coding sequence encoding at least one antigenic protein SARS-CoV-2 spike protein as defined herein, or fragments and variants thereof, may be understood as a suitable coding sequence and therefore: It can be included in the RNA of the present invention.

好ましい実施形態では、第一の態様のRNAは、少なくとも1つの本明細書において定義されるSARS-CoV-2由来の抗原性ペプチド又はタンパク質をコードする、好ましくは、配列番号1、10、22738、22740、22742、22744、22746、22748、22750、22752、22754、22756、22758、22959～22964、27087～27109、28540～28588、28917～28920又はそのフラグメント若しくはバリアントのいずれか1つをコードする、少なくとも1つのコード配列を含むか、又はそれからなり得る。核酸レベルで、配列番号116、136、137、146、22765、22767、22769、22771、22773、22775、22777、22779、22781、22783、22785、23089～23148、23150～23184、27110～27247、28589～28637、28916、28921～28924のいずれか1つと同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一である、アミノ酸配列をコードする任意のRNA配列又はそのフラグメント若しくはバリアントが本発明の好適なコード配列として選択され得、したがって、理解され得ることは、理解されなければならない。ある特定の実施形態では、SARS-CoV-2スパイクタンパク質をコードするRNA配列は、配列番号116、136、137、146、22765、22767、22769、22771、22773、22775、22777、22779、22781、22783、22785、23089～23148、23150～23184、27110～27247、28589～28637、28916、又は28921～28924のいずれか1つと少なくとも95%同一である。 In a preferred embodiment, the RNA of the first aspect encodes at least one antigenic peptide or protein from SARS-CoV-2 as defined herein, preferably SEQ ID NO: 1, 10, 22738, encodes any one of 22740, 22742, 22744, 22746, 22748, 22750, 22752, 22754, 22756, 22758, 22959-22964, 27087-27109, 28540-28588, 28917-28920 or a fragment or variant thereof; at least It may contain or consist of one coding sequence. At the nucleic acid level, SEQ ID NOs: 116, 136, 137, 146, 22765, 22767, 22769, 22771, 22773, 22775, 22777, 22779, 22781, 22783, 22785, 23089-23148, 23150-23184, 27110-2724 7, 28589~ Identical to any one of 28637, 28916, 28921-28924, or at least 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93 %, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical, or a fragment or variant thereof, may be selected as a suitable coding sequence of the present invention. , so what can be understood must be understood. In certain embodiments, the RNA sequence encoding the SARS-CoV-2 spike protein is SEQ ID NO. , 22785, 23089-23148, 23150-23184, 27110-27247, 28589-28637, 28916, or 28921-28924.

好ましい実施形態では、第一の態様のRNAは、本明細書において定義されるSARS-CoV-2由来の少なくとも1つの抗原性ペプチド又はタンパク質をコードする、好ましくは、配列番号10、22738、22740、22742、22744、22746、22748、22750、22752、22754、22756、22758、22959～22964、27087～27109、28540～28588、28917～28920又はそのフラグメント若しくはバリアントのいずれか1つをコードする少なくとも1つのコード配列を含むか、又はそれからなり得る。核酸レベルで、配列番号137、146、22765、22767、22769、22771、22773、22775、22777、22779、22781、22783、22785、23089～23148、23150～23184、23095～23112、27110～27247、28589～28637、28921～28924のいずれか1つと同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一である、アミノ酸配列をコードする任意のRNA配列又はそのフラグメント若しくはバリアントが本発明の好適なコード配列として選択され得、したがって、理解され得ることは、理解されなければならない。ある特定の実施形態では、SARS-CoV-2スパイクタンパク質をコードするRNA配列は、配列番号137、146、22765、22767、22769、22771、22773、22775、22777、22779、22781、22783、22785、23089～23148、23150～23184、27110～27247、28589～28637、又は28921～28924のいずれか1つと少なくとも95%同一である。 In a preferred embodiment, the RNA of the first aspect encodes at least one antigenic peptide or protein from SARS-CoV-2 as defined herein, preferably SEQ ID NO: 10, 22738, 22740, At least one code encoding any one of 22742, 22744, 22746, 22748, 22750, 22752, 22754, 22756, 22758, 22959-22964, 27087-27109, 28540-28588, 28917-28920 or a fragment or variant thereof may include or consist of an array. At the nucleic acid level, SEQ ID NOs: 137, 146, 22765, 22767, 22769, 22771, 22773, 22775, 22777, 22779, 22781, 22783, 22785, 23089-23148, 23150-23184, 23095-23112, 27110- 27247, 28589～ 28637, 28921 to 28924, or at least 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, Any RNA sequence encoding an amino acid sequence or a fragment or variant thereof that is 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical may be selected as a suitable coding sequence of the present invention, and thus , what can be understood must be understood. In certain embodiments, the RNA sequence encoding the SARS-CoV-2 spike protein is SEQ ID NO: 137, 146, 22765, 22767, 22769, 22771, 22773, 22775, 22777, 22779, 22781, 22783, 22785, 23089 At least 95% identical to any one of ~23148, 23150-23184, 27110-27247, 28589-28637, or 28921-28924.

好ましい実施形態では、第一の態様のRNAは、本明細書において定義されるSARS-CoV-2由来の少なくとも1つの抗原性ペプチド又はタンパク質をコードする、好ましくは、配列番号10、22738、22740、22742、22744、22746、22748、22750、22752、22754、22756、22758、22959～22964、27087～27109、28540～28588、28917～28920又はそのフラグメント若しくはバリアントのいずれか1つをコードする少なくとも1つのコード配列を含むか、又はそれからなり得る。核酸レベルで、配列番号137、22765、22767、22769、22771、22773、22775、22777、22779、22781、22783、22785、23089～23148、27110～27201、28589～28637、28921～28924のいずれか1つと同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一である、アミノ酸配列をコードする任意のRNA配列又はそのフラグメント若しくはバリアントが、本発明の好適なコード配列として選択され得、したがって、理解され得ることは、理解されなければならない。ある特定の実施形態では、SARS-CoV-2スパイクタンパク質をコードするRNA配列は、配列番号137、22765、22767、22769、22771、22773、22775、22777、22779、22781、22783、22785、23089～23148、27110～27201、28589～28637、又は28921～28924のいずれか1つと少なくとも95%同一である。 In a preferred embodiment, the RNA of the first aspect encodes at least one antigenic peptide or protein from SARS-CoV-2 as defined herein, preferably SEQ ID NO: 10, 22738, 22740, At least one code encoding any one of 22742, 22744, 22746, 22748, 22750, 22752, 22754, 22756, 22758, 22959-22964, 27087-27109, 28540-28588, 28917-28920 or a fragment or variant thereof may include or consist of an array. At the nucleic acid level, SEQ ID NO: 137, 22765, 22767, 22769, 22771, 22773, 22775, 22777, 22779, 22781, 22783, 22785, 23089-23148, 27110-27201, 28589-28637, 28921-2892 with any one of 4 are the same or at least 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97 It is understood that any RNA sequence encoding an amino acid sequence or a fragment or variant thereof that is %, 98%, or 99% identical may be selected and therefore understood as a suitable coding sequence of the present invention. There must be. In certain embodiments, the RNA sequence encoding the SARS-CoV-2 spike protein is SEQ ID NO: 137, 22765, 22767, 22769, 22771, 22773, 22775, 22777, 22779, 22781, 22783, 22785, 23089-23148 , 27110-27201, 28589-28637, or 28921-28924.

好ましい実施形態では、第一の態様のRNAは、本明細書において定義されるSARS-CoV-2由来の少なくとも1つの抗原性ペプチド又はタンパク質をコードする、好ましくは、配列番号10、22738、22740、22742、22744、22746、22748、22750、22752、22754、22756、22758、22959～22964、27087～27109、28540～28588、28917～28920又はそのフラグメント若しくはバリアントのいずれか1つをコードする少なくとも1つのコード配列を含むか、又はそれからなり得る。核酸レベルで、配列番号146、23150～23184、27202～27247のいずれか1つと同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一である、アミノ酸配列をコードする任意のRNA配列又はそのフラグメント若しくはバリアントは、本発明の好適なコード配列として選択され得、したがって、理解され得ることは理解されなければならない。ある特定の実施形態では、SARS-CoV-2スパイクタンパク質をコードするRNA配列は、配列番号146、23150～23184又は27202～27247のいずれか1つと少なくとも95%同一である。 In a preferred embodiment, the RNA of the first aspect encodes at least one antigenic peptide or protein from SARS-CoV-2 as defined herein, preferably SEQ ID NO: 10, 22738, 22740, At least one code encoding any one of 22742, 22744, 22746, 22748, 22750, 22752, 22754, 22756, 22758, 22959-22964, 27087-27109, 28540-28588, 28917-28920 or a fragment or variant thereof may include or consist of an array. At the nucleic acid level, is at least 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90% identical to any one of SEQ ID NO: 146, 23150-23184, 27202-27247 , 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical to an amino acid sequence, or a fragment or variant thereof, is included in the present invention. It is to be understood that the preferred coding sequence of In certain embodiments, the RNA sequence encoding the SARS-CoV-2 spike protein is at least 95% identical to any one of SEQ ID NOs: 146, 23150-23184, or 27202-27247.

好ましい実施形態では、第一の態様のRNAは、配列番号22765、22767、22769、22771、22773、22775、22777、22779、22781、22783、22785、23089～23148、23150～23184、27110～27247、28589～28637、28921～28924に記載の配列と同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一である核酸配列又はこれらの配列のいずれかのフラグメント若しくはバリアントの少なくとも1つを含むコード配列を含む。ある特定の実施形態では、SARS-CoV-2スパイクタンパク質をコードするRNA配列は、配列番号22765、22767、22769、22771、22773、22775、22777、22779、22781、22783、22785、23089～23148、23150～23184、27110～27247、28589～28637、又は28921～28924のいずれか1つと少なくとも95%同一である。これらの好適な核酸配列のそれぞれに関するさらなる情報はまた、配列表、特に、識別子<223>の下そこで提供される詳細からもたらされ得る。 In a preferred embodiment, the RNA of the first aspect is SEQ ID NO: 22765, 22767, 22769, 22771, 22773, 22775, 22777, 22779, 22781, 22783, 22785, 23089-23148, 23150-23184, 27110-27247, 28589 -28637, 28921-28924, or at least 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93% , 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical, or a coding sequence comprising at least one fragment or variant of any of these sequences. In certain embodiments, the RNA sequence encoding the SARS-CoV-2 spike protein is SEQ ID NO: 22765, 22767, 22769, 22771, 22773, 22775, 22777, 22779, 22781, 22783, 22785, 23089-23148, 23150 At least 95% identical to any one of ~23184, 27110-27247, 28589-28637, or 28921-28924. Further information regarding each of these suitable nucleic acid sequences may also be obtained from the sequence listing, in particular the details provided there under the identifier <223>.

好ましい実施形態では、第一の態様のRNAは、配列番号22765、22767、22769、22771、22773、22775、22777、22779、22781、22783、22785、23089～23094、27110～27132、28589～28637、若しくは28921～28924に記載の配列と同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一である核酸配列又はこれらの配列のいずれかのフラグメント若しくはバリアントの少なくとも1つを含むコード配列を含む。ある特定の実施形態では、SARS-CoV-2スパイクタンパク質をコードするRNA配列は、配列番号22765、22767、22769、22771、22773、22775、22777、22779、22781、22783、22785、23089～23094、27110～27132、28589～28637、又は28921～28924のいずれか1つと少なくとも95%同一である。 In a preferred embodiment, the RNA of the first aspect is SEQ ID NO. 28921-28924, or at least 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94% , 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical, or a coding sequence comprising at least one fragment or variant of any of these sequences. In certain embodiments, the RNA sequence encoding the SARS-CoV-2 spike protein is SEQ ID NO: 22765, 22767, 22769, 22771, 22773, 22775, 22777, 22779, 22781, 22783, 22785, 23089-23094, 27110 At least 95% identical to any one of ~27132, 28589-28637, or 28921-28924.

好ましい実施形態では、第一の態様のRNAは、配列番号23150～23166若しくは27202～27224に記載の配列と同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一である核酸配列又はこれらの配列のいずれかのフラグメント若しくはバリアントの少なくとも1つを含むコード配列を含む。ある特定の実施形態では、SARS-CoV-2スパイクタンパク質をコードするRNA配列は、配列番号23150～23166又は27202～27224のいずれか1つと少なくとも95%同一である。 In a preferred embodiment, the RNA of the first aspect is identical to, or at least 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88 %, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical to a nucleic acid sequence or a fragment or fragment of any of these sequences. A coding sequence containing at least one of the variants. In certain embodiments, the RNA sequence encoding the SARS-CoV-2 spike protein is at least 95% identical to any one of SEQ ID NOs: 23150-23166 or 27202-27224.

好ましい実施形態では、第一の態様のRNAは、配列番号23150～23166、27202～27224、23114～23130若しくは27156～27178に記載の配列と同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一である核酸配列又はこれらの配列のいずれかのフラグメント若しくはバリアントの少なくとも1つを含むコード配列を含む。ある特定の実施形態では、SARS-CoV-2スパイクタンパク質をコードするRNA配列は、配列番号23114～23130又は27156～27178のいずれか1つと少なくとも95%同一である。 In a preferred embodiment, the RNA of the first aspect is at least 70%, 80%, 85% identical to the sequence set forth in SEQ ID NO: 23150-23166, 27202-27224, 23114-23130 or 27156-27178. , 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical nucleic acid sequences or these a coding sequence comprising at least one fragment or variant of any of the sequences. In certain embodiments, the RNA sequence encoding the SARS-CoV-2 spike protein is at least 95% identical to any one of SEQ ID NOs: 23114-23130 or 27156-27178.

好ましい実施形態では、第一の態様のRNAは、配列番号23150～23166、27202～27224、23167～23184若しくは27225～27247に記載の配列と同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一である核酸配列又はこれらの配列のいずれかのフラグメント若しくはバリアントの少なくとも1つを含むコード配列を含む。ある特定の実施形態では、SARS-CoV-2スパイクタンパク質をコードするRNA配列は、配列番号23167～23184又は27225～27247のいずれか1つと少なくとも95%同一である。 In a preferred embodiment, the RNA of the first aspect is at least 70%, 80%, 85% identical to the sequence set forth in SEQ ID NO: 23150-23166, 27202-27224, 23167-23184 or 27225-27247. , 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical nucleic acid sequences or these a coding sequence comprising at least one fragment or variant of any of the sequences. In certain embodiments, the RNA sequence encoding the SARS-CoV-2 spike protein is at least 95% identical to any one of SEQ ID NOs: 23167-23184 or 27225-27247.

好ましい実施形態では、第一の態様のRNAは、人工RNAである。 In a preferred embodiment, the RNA of the first aspect is an artificial RNA.

本明細書で使用される場合、用語「人工RNA」は、天然で生じないRNAを指すことが意図される。言い換えると、人工RNAは、非天然のRNA分子として理解され得る。このようなRNA分子は、その個々の配列(例えば、G/C含有量が修飾されたコード配列、UTR)に起因して、及び/又はヌクレオチドの他の修飾、例えば、構造修飾に起因して非天然であり得る。典型的には、人工RNAは、ヌクレオチドの所望される人工配列に対応させるための遺伝子操作によって、設計され、及び/又は生成され得る。この文脈では、人工RNAは、天然で生じ得ない配列、すなわち、野生型配列/天然に存在する配列とは少なくとも1ヌクレオチド異なる配列である。用語「人工RNA」は、「1つの単一RNA分子」を意味することに限定されないが、本質的に同一のRNA分子のアンサンブルを含むことが理解される。したがって、それは、複数の本質的に同一のRNA分子に関し得る。 As used herein, the term "artificial RNA" is intended to refer to RNA that does not occur in nature. In other words, artificial RNA can be understood as a non-natural RNA molecule. Such RNA molecules may be modified due to their individual sequences (e.g. coding sequences modified in G/C content, UTRs) and/or due to other modifications of the nucleotides, e.g. structural modifications. Can be non-natural. Typically, artificial RNA can be designed and/or produced by genetic manipulation to correspond to a desired artificial sequence of nucleotides. In this context, an artificial RNA is a sequence that cannot occur naturally, ie a sequence that differs by at least one nucleotide from the wild type sequence/naturally occurring sequence. It is understood that the term "artificial RNA" is not limited to meaning "one single RNA molecule," but includes an ensemble of essentially identical RNA molecules. Thus, it may relate to multiple essentially identical RNA molecules.

好ましい実施形態では、第一の態様のRNAは、修飾された及び/又は安定化されたRNA、好ましくは、修飾された及び/又は安定化された人工RNAである。 In a preferred embodiment, the RNA of the first aspect is a modified and/or stabilized RNA, preferably a modified and/or stabilized artificial RNA.

したがって、好ましい実施形態によると、本発明のRNAは、「安定化された人工RNA」又は「安定化されたコードRNA」として提供され得、すなわち、in vivo分解に対する改善された抵抗性を示すRNA及び/又はin vivoでの改善された安定性を示すRNA、及び/又はin vivoでの改善された翻訳可能性を示すRNAを言う。以下で、RNAを「安定化する」のに適している、この文脈での特定の好適な修飾/適合が記載される。好ましくは、本発明のRNAは、「安定化されたRNA」又は「安定化されたコードRNA」として提供され得る。 Thus, according to a preferred embodiment, the RNA of the invention may be provided as a "stabilized artificial RNA" or a "stabilized coding RNA", i.e. an RNA that exhibits improved resistance to in vivo degradation. and/or RNA that exhibits improved stability in vivo and/or RNA that exhibits improved translatability in vivo. Below, certain preferred modifications/adaptations in this context are described that are suitable for "stabilizing" RNA. Preferably, the RNA of the invention can be provided as "stabilized RNA" or "stabilized coding RNA."

このような安定化は、以下でさらに特定される、「乾燥させたRNA」及び/又は「精製されたRNA」をもたらすことによって影響され得る。それの代わりに、又は加えて、このような安定化は、例えば、本発明のRNAの修飾されたリン酸骨格によって影響され得る。本発明に関して骨格修飾は、核酸に含有されるヌクレオチドの骨格のリン酸が、化学的に修飾されている、修飾である。これに関連して使用され得るヌクレオチドは、例えば、ホスホロチオエート修飾されたリン酸骨格、好ましくは、硫黄原子によって置き換えられているリン酸骨格に含有されるリン酸酸素の少なくとも1つを含有する。安定化されたRNAは、例えば、非イオン性リン酸アナログ、例えば、アルキル及びアリールホスホネートをさらに含んでもよく、ここで、荷電したホスホネート酸素は、アルキル若しくはアリール基、又はホスホジエステル及びアルキルホスホトリエステルによって置き換えられ、荷電した酸素残基は、アルキル化形態で存在する。このような骨格修飾は、典型的には、いかなる制限も意味することなく、メチルホスホネート、ホスホルアミデート及びホスホロチオエート(例えば、シチジン-5'-O-(1-チオホスフェート))からなる群からの修飾を含む。 Such stabilization may be effected by providing "dried RNA" and/or "purified RNA", as further specified below. Alternatively or additionally, such stabilization can be influenced, for example, by a modified phosphate backbone of the RNA of the invention. In the context of the present invention, backbone modification is a modification in which the backbone phosphate of a nucleotide contained in a nucleic acid is chemically modified. Nucleotides that can be used in this connection, for example, contain a phosphorothioate-modified phosphate backbone, preferably at least one phosphate oxygen contained in the phosphate backbone being replaced by a sulfur atom. The stabilized RNA may further include, for example, nonionic phosphate analogs, such as alkyl and aryl phosphonates, where the charged phosphonate oxygen is an alkyl or aryl group, or a phosphodiester and alkyl phosphotriester. The charged oxygen residue is present in alkylated form. Such backbone modifications typically include, without implying any limitation, from the group consisting of methyl phosphonates, phosphoramidates and phosphorothioates (e.g., cytidine-5'-O-(1-thiophosphate)). Contains modifications.

以下で、本発明のRNAを「安定化する」能力がある、好適な修飾が記載される。 Below, suitable modifications are described that are capable of "stabilizing" the RNA of the invention.

好ましい実施形態では、RNAは、少なくとも1つのコドン修飾されたコード配列を含む。 In preferred embodiments, the RNA includes at least one codon modified coding sequence.

好ましい実施形態では、RNAの少なくとも1つのコード配列は、コドン修飾されたコード配列であり、ここで、少なくとも1つのコドン修飾されたコード配列によってコードされるアミノ酸配列は、好ましくは、対応する野生型コード配列又は参照コード配列によってコードされるアミノ酸配列と比較して修飾されていない。 In a preferred embodiment, at least one coding sequence of the RNA is a codon-modified coding sequence, wherein the amino acid sequence encoded by the at least one codon-modified coding sequence is preferably the corresponding wild-type coding sequence. Unmodified compared to the amino acid sequence encoded by the coding sequence or reference coding sequence.

用語「コドン修飾されたコード配列」は、対応する野生型又は参照コード配列と比較して、少なくとも1つのコドン(1つのアミノ酸をコードするヌクレオチドのトリプレット)が異なるコード配列に関する。好適には、本発明の文脈で、コドン修飾されたコード配列は、in vivoでの分解に対して改善された抵抗性及び/又はin vivoでの改善された安定性、及び/又はin vivoでの改善された翻訳可能性を示し得る。広義でのコドン修飾は、遺伝子コードの縮重を使用し、ここで、複数のコドンは、同じアミノ酸をコードし得、互換的に使用されて、in vivoでの適用のためコード配列が最適化/修飾され得る。 The term "codon-modified coding sequence" relates to a coding sequence that differs in at least one codon (a triplet of nucleotides encoding one amino acid) compared to the corresponding wild-type or reference coding sequence. Preferably, in the context of the present invention, a codon-modified coding sequence has improved resistance to degradation in vivo and/or improved stability in vivo. can show improved translatability. Codon modification in a broad sense takes advantage of the degeneracy of the genetic code, in which multiple codons can code for the same amino acid and are used interchangeably to optimize the coding sequence for in vivo applications. / May be qualified.

用語「参照コード配列」は、修飾され、及び/又は最適化されるべき起源の配列であったコード配列に関する。 The term "reference coding sequence" relates to a coding sequence that was the original sequence to be modified and/or optimized.

好ましい実施形態では、RNAの少なくとも1つのコード配列は、コドン修飾されたコード配列であり、ここで、コドン修飾されたコード配列は、C最大化コード配列、CAI最大化コード配列、ヒトコドン使用適合コード配列、G/C含有量が修飾されたコード配列、及びG/Cが最適化されたコード配列、又はそれらの任意の組み合わせから選択される。 In a preferred embodiment, at least one coding sequence of the RNA is a codon-modified coding sequence, wherein the codon-modified coding sequence is a C-maximizing coding sequence, a CAI-maximizing coding sequence, a human codon usage compatible code. sequence, a G/C content modified coding sequence, a G/C optimized coding sequence, or any combination thereof.

好ましい実施形態では、RNAの少なくとも1つのコード配列は、少なくとも約50%、55%、又は60%のG/C含有量を有する。特定の実施形態では、成分AのRNAの少なくとも1つのコード配列は、少なくとも約50%、51%、52%、53%、54%、55%、56%、57%、58%、59%、60%、61%、62%、63%、64%、65%、66%、67%、68%、69%、又は70%のG/C含有量を有する。 In preferred embodiments, at least one coding sequence of the RNA has a G/C content of at least about 50%, 55%, or 60%. In certain embodiments, at least one coding sequence of the RNA of component A is at least about 50%, 51%, 52%, 53%, 54%, 55%, 56%, 57%, 58%, 59%, having a G/C content of 60%, 61%, 62%, 63%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, or 70%.

哺乳類宿主細胞にトランスフェクトされる場合、コドン修飾されたコード配列を含むRNAは、12～18時間、又は18時間より長く、例えば、24、36、48、60、72、若しくは72時間より長い安定性を有し、哺乳類宿主細胞(例えば、筋肉細胞)によって発現される能力がある。 When transfected into a mammalian host cell, the RNA containing the codon-modified coding sequence is stable for 12 to 18 hours, or longer than 18 hours, such as 24, 36, 48, 60, 72, or 72 hours. and the ability to be expressed by mammalian host cells (eg, muscle cells).

哺乳類宿主細胞にトランスフェクトされる場合、コドン修飾されたコード配列を含むRNAは、タンパク質に翻訳され、ここで、タンパク質の量は、哺乳類宿主細胞にトランスフェクトされた天然に存在する又は野生型又は参照コード配列によって得られるタンパク質の量と少なくとも同等、又は好ましくは、それよりも少なくとも10%多い、若しくは少なくとも20%多い、若しくは少なくとも30%多い、若しくは少なくとも40%多い、若しくは少なくとも50%多い、若しくは少なくとも100%多い、若しくは少なくとも200%以上である。 When transfected into a mammalian host cell, the RNA containing the codon-modified coding sequence is translated into protein, where the amount of protein is greater than that of the naturally occurring or wild-type protein transfected into the mammalian host cell. at least equal to, or preferably at least 10% more, or at least 20% more, or at least 30% more, or at least 40% more, or at least 50% more than the amount of protein obtained by the reference coding sequence; At least 100% more, or at least 200% more.

一部の実施形態では、RNAは、修飾されていてもよく、ここで、少なくとも1つのコード配列のC含有量は、対応する野生型又は参照コード配列のC含有量と比較して、増加し、好ましくは、最大化され得る(本明細書において、「C最大化コード配列」と称される)。C最大化核酸配列の生成は、好適には、WO2015/062738に記載の修飾方法を使用して行われてもよい。この文脈で、WO2015/062738の開示は、参照により本明細書に含まれる。 In some embodiments, the RNA may be modified, wherein the C content of at least one coding sequence is increased compared to the C content of the corresponding wild type or reference coding sequence. , preferably maximized (referred to herein as a "C maximized coding sequence"). Generation of C-maximized nucleic acid sequences may suitably be performed using the modification method described in WO2015/062738. In this context, the disclosure of WO2015/062738 is incorporated herein by reference.

好ましい実施形態では、RNAは、修飾されていてもよく、ここで、少なくとも1つのコード配列のG/C含有量は、対応する野生型又は参照コード配列のG/C含有量と比較して、最適化され得る(本明細書において、「G/C含有量が最適化されたコード配列」と称される)。その文脈における「最適化」は、コード配列を指し、ここで、G/C含有量は、好ましくは、可能性のある本質的に最大のG/C含有量まで増加する。G/C含有量が最適化されたRNA配列の生成は、WO2002/098443に記載の方法を使用して行われてもよい。この文脈で、WO2002/098443の開示は、本発明においてその全範囲で含まれる。配列表の<223>識別子を含む説明全体で、G/Cが最適化されたコード配列は、略語「opt1」又は「gc」によって示される。 In a preferred embodiment, the RNA may be modified, wherein the G/C content of at least one coding sequence is compared to the G/C content of the corresponding wild type or reference coding sequence. (referred to herein as a "G/C content optimized coding sequence"). "Optimized" in that context refers to a coding sequence where the G/C content is preferably increased to essentially the maximum possible G/C content. Generation of RNA sequences with optimized G/C content may be performed using the method described in WO2002/098443. In this context, the disclosure of WO2002/098443 is included in the present invention in its entirety. Throughout the description, including the <223> identifier in the sequence listing, G/C optimized code sequences are indicated by the abbreviation "opt1" or "gc".

好ましい実施形態では、RNAは、修飾されていてもよく、ここで、少なくとも1つのコード配列中のコドンは、ヒトコドン使用に適合され得る(本明細書において、「ヒトコドン使用適合コード配列」と称される)。同じアミノ酸をコードするコドンは、ヒトにおいて異なる頻度で生じる。したがって、同じアミノ酸をコードするコドンの頻度が、ヒトコドン使用によるそのコドンの天然に存在する頻度に対応するように、核酸のコード配列は、好ましくは修飾される。例えば、アミノ酸Alaの場合、野生型又は参照コード配列は、コドン「GCC」が、0.40の頻度で使用され、コドン「GCT」が、0.28の頻度で使用され、コドン「GCA」が、0.22の頻度で使用され、コドン「GCG」が、0.10の頻度で使用されるなどの方法で、好ましくは適合される。したがって、このような手法(Alaについて例示される)を、核酸のコード配列がコードするそれぞれのアミノ酸に適合して、ヒトコドン使用に適合した配列を得る。配列表の<223>識別子を含む説明全体で、ヒトコドン使用適合コード配列は、略語「opt3」又は「ヒト」によって示される。 In a preferred embodiment, the RNA may be modified, wherein codons in at least one coding sequence are adapted to human codon usage (herein referred to as "human codon usage compatible coding sequences"). ). Codons encoding the same amino acid occur with different frequencies in humans. Accordingly, the coding sequence of the nucleic acid is preferably modified such that the frequency of codons encoding the same amino acid corresponds to the naturally occurring frequency of that codon due to human codon usage. For example, for the amino acid Ala, the wild type or reference coding sequence has the codon "GCC" used with a frequency of 0.40, the codon "GCT" with a frequency of 0.28, and the codon "GCA" with a frequency of 0.22. is preferably adapted in such a way that the codon "GCG" is used with a frequency of 0.10. Therefore, such an approach (exemplified for Ala) is applied to each amino acid encoded by a coding sequence of a nucleic acid to obtain a sequence compatible with human codon usage. Throughout the description, including the <223> identifier of the sequence listing, human codon usage compatible coding sequences are indicated by the abbreviation "opt3" or "human."

一部の実施形態では、RNAは、修飾されていてもよく、ここで、少なくとも1つのコード配列のG/C含有量は、対応する野生型又は参照コード配列のG/C含有量と比較して修飾され得る(本明細書において、「G/C含有量が修飾されたコード配列」と称される)。この文脈では、用語「G/C最適化」又は「G/C含有量修飾」は、対応する野生型又は参照コード配列と比較して、修飾された、好ましくは増加した数のグアノシン及び/又はシトシンヌクレオチドを含む核酸に関する。このような増加した数は、アデノシン又はチミジンヌクレオチドを含有するコドンの、グアノシン又はシトシンヌクレオチドを含有するコドンによる置換によって生成されてもよい。有利には、増加したG/C含有量を有する核酸配列は、増加したA/Uを有する配列よりも安定であるか、又は良好な発現を示す。好ましくは、核酸のコード配列のG/C含有量は、対応する野生型又は参照核酸配列のコード配列のG/C含有量と比較して、少なくとも10%、20%、30%、好ましくは、少なくとも40%増加する(本明細書において、「opt 10」又は「gc mod」と称される)。例えば、核酸のコード配列のG/C含有量は、配列番号28916のG/C含有量と比べて、好ましくは、少なくとも10%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、21%、22%、23%、24%又は25%増加する。 In some embodiments, the RNA may be modified, wherein the G/C content of at least one coding sequence is greater than that of the corresponding wild-type or reference coding sequence. (referred to herein as a "G/C content modified coding sequence"). In this context, the term "G/C optimization" or "G/C content modification" refers to a modified, preferably increased number of guanosines and/or Relating to nucleic acids containing cytosine nucleotides. Such an increased number may be generated by replacement of codons containing adenosine or thymidine nucleotides with codons containing guanosine or cytosine nucleotides. Advantageously, nucleic acid sequences with increased G/C content are more stable or exhibit better expression than sequences with increased A/U. Preferably, the G/C content of the coding sequence of the nucleic acid is at least 10%, 20%, 30%, preferably, compared to the G/C content of the coding sequence of the corresponding wild type or reference nucleic acid sequence. increase by at least 40% (referred to herein as "opt 10" or "gc mod"). For example, the G/C content of the coding sequence of the nucleic acid is preferably at least 10%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20% compared to the G/C content of SEQ ID NO: 28916. %, 21%, 22%, 23%, 24% or 25%.

一部の実施形態では、RNAは、修飾されていてもよく、ここで、コドン適合指標(CAI)は、少なくとも1つのコード配列で増加されるか、又は好ましくは最大化され得る(本明細書において、「CAI最大化コード配列」と称される)。例えば、ヒトにおいて比較的稀である野生型又は参照核酸配列のすべてのコドンが、例えば、ヒトにおいて頻繁であるそれぞれのコドンに交換されることが好ましく、ここで、頻繁なコドンは、比較的稀なコドンと同じアミノ酸をコードする。好適には、最も頻繁なコドンは、コードされるタンパク質のそれぞれのアミノ酸に使用される。好適には、RNAは、少なくとも1つのコード配列を含み、ここで、少なくとも1つのコード配列のコドン適合指標(CAI)は、少なくとも0.5、少なくとも0.8、少なくとも0.9又は少なくとも0.95である。最も好ましくは、少なくとも1つのコード配列のコドン適合指標(CAI)は、1(CAI=1)である。例えば、アミノ酸Alaの場合、野生型又は参照コード配列は、最も頻繁なヒトコドン「GCC」が、常に、前記アミノ酸に使用される方法で適合されてもよい。したがって、このような手法(Alaについて例示される)を、核酸のコード配列によってコードされるそれぞれのアミノ酸に適合して、CAI最大化コード配列を得てもよい。 In some embodiments, the RNA may be modified, wherein the codon compatibility index (CAI) may be increased or preferably maximized in at least one coding sequence (as described herein). (referred to as the "CAI maximizing code array" in 2013). For example, it is preferred that all codons of a wild type or reference nucleic acid sequence that are relatively rare in humans are replaced with respective codons that are frequent, for example, in humans, where frequent codons are code for the same amino acid as the codon. Preferably, the most frequent codon is used for each amino acid of the encoded protein. Preferably, the RNA comprises at least one coding sequence, wherein the codon compatibility index (CAI) of the at least one coding sequence is at least 0.5, at least 0.8, at least 0.9 or at least 0.95. Most preferably, the codon compatibility index (CAI) of at least one coding sequence is 1 (CAI=1). For example, in the case of the amino acid Ala, the wild type or reference coding sequence may be adapted in such a way that the most frequent human codon "GCC" is always used for said amino acid. Accordingly, such an approach (exemplified for Ala) may be applied to each amino acid encoded by a coding sequence of a nucleic acid to obtain a CAI-maximizing coding sequence.

特に好ましい実施形態では、核酸の少なくとも1つのコード配列は、コドン修飾されたコード配列であり、ここで、コドン修飾されたコード配列は、G/Cが最適化されたコード配列である。 In particularly preferred embodiments, at least one coding sequence of the nucleic acid is a codon-modified coding sequence, wherein the codon-modified coding sequence is a G/C-optimized coding sequence.

特に好ましい実施形態では、第一の態様のRNAは、配列番号137、22765、22767、22769、22771、22773、22775、22777、22779、22781、22783、22785、23089～23148、27110～27201、28589～28637、28921～28924からなる群から選択されるG/Cが最適化された核酸配列と同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一である、本明細書において定義されるSARS-CoV-2抗原をコードするG/Cが最適化されたコード配列又はこれらの配列のいずれかのフラグメント若しくはバリアントを含むか、又はそれからなる少なくとも1つのコード配列を含む。 In a particularly preferred embodiment, the RNA of the first aspect is SEQ ID NO: 137, 22765, 22767, 22769, 22771, 22773, 22775, 22777, 22779, 22781, 22783, 22785, 23089-23148, 27110-27201, 28589- G/C selected from the group consisting of 28637, 28921-28924 is identical to the optimized nucleic acid sequence, or at least 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89% , 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical to a SARS-CoV-2 antigen as defined herein. The G/C containing at least one coding sequence that comprises or consists of an optimized coding sequence or a fragment or variant of any of these sequences.

特に好ましい実施形態では、第一の態様のRNAは、配列番号146、23150～23184、27202～27247からなる群から選択されるG/Cが最適化された核酸配列と同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一である、本明細書において定義されるSARS-CoV-2抗原をコードするG/Cが最適化されたコード配列又はこれらの配列のいずれかのフラグメント若しくはバリアントを含むか、又はそれからなる少なくとも1つのコード配列を含む。 In particularly preferred embodiments, the RNA of the first aspect is identical to, or at least 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99 % identical, a G/C encoding a SARS-CoV-2 antigen as defined herein comprises or consists of an optimized coding sequence or a fragment or variant of any of these sequences. Contains one code sequence.

なおより好ましい実施形態では、第一の態様のRNAは、配列番号23090、23108、23126、23144、23162、23180、23091、23109、23127、23145、23163、23181、28589(B.1.315;C.1.2)からなる群から選択されるコドンが修飾された核酸配列と同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一である、本明細書において定義されるSARS-CoV-2抗原をコードするG/Cが最適化されたコード配列又はこれらの配列のいずれかのフラグメント若しくはバリアントを含むか、又はそれからなる少なくとも1つのコード配列を含む。一部の態様では、SARS-CoV-2抗原をコードする少なくとも1つのコード配列は、配列番号23090、23108、23126、23144、23162、23180、23091、23109、23127、23145、23163、23181又は28589と少なくとも95%同一である。一部の態様では、SARS-CoV-2抗原をコードする少なくとも1つのコード配列は、配列番号23090～23091、23162～23163又は28589と少なくとも95%同一である。 In an even more preferred embodiment, the RNA of the first aspect is SEQ ID NO. ) are at least 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91% identical to the modified nucleic acid sequence; Optimized G/C encoding a SARS-CoV-2 antigen as defined herein that is 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical or a fragment or variant of any of these sequences. In some embodiments, the at least one coding sequence encoding a SARS-CoV-2 antigen is SEQ ID NO. At least 95% identical. In some embodiments, at least one coding sequence encoding a SARS-CoV-2 antigen is at least 95% identical to SEQ ID NOs: 23090-23091, 23162-23163, or 28589.

なおより好ましい実施形態では、第一の態様のRNAは、配列番号27116、27139、27162、27185、27208、27231、27117、27140、27163、27186、27209、27232、27118、27141、27164、27187、27210、27233、28601～28607(B.1.617;B.1.617.1;B.1.617.2;AY.1;AY.2;AY.4;AY.4.2;B.1.617.3)からなる群から選択されるコドンが修飾された核酸配列と同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一である、本明細書において定義されるSARS-CoV-2抗原をコードするG/Cが最適化されたコード配列又はこれらの配列のいずれかのフラグメント若しくはバリアントを含むか、又はそれからなる少なくとも1つのコード配列を含む。一部の態様では、SARS-CoV-2抗原をコードする少なくとも1つのコード配列は、配列番号27116、27139、27162、27185、27208、27231、27117、27140、27163、27186、27209、27232、27118、27141、27164、27187、27210、27233、又は28601～28607と少なくとも95%同一である。一部の態様では、SARS-CoV-2抗原をコードする少なくとも1つのコード配列は、配列番号27116～27118、27208～27210又は28601～28607と少なくとも95%同一である。 In an even more preferred embodiment, the RNA of the first aspect is SEQ ID NO. , 27233, 28601 to 28607 (B.1.617;B.1.617.1;B.1.617.2;AY.1;AY.2;AY.4;AY.4.2;B.1.617.3) or at least 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, or G/C-optimized coding sequences encoding SARS-CoV-2 antigens as defined herein that are 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical. at least one coding sequence comprising, or consisting of, any fragment or variant of the sequence. In some embodiments, the at least one coding sequence encoding a SARS-CoV-2 antigen is SEQ ID NO: 27116, 27139, 27162, 27185, 27208, 27231, 27117, 27140, 27163, 27186, 27209, 27232, 27118, At least 95% identical to 27141, 27164, 27187, 27210, 27233, or 28601-28607. In some embodiments, at least one coding sequence encoding a SARS-CoV-2 antigen is at least 95% identical to SEQ ID NOs: 27116-27118, 27208-27210, or 28601-28607.

なおより好ましい実施形態では、第一の態様のRNAは、配列番号27118、27141、27164、27187、27210、27233若しくは28601～28606(B.1.617.2;AY.1;AY.2;AY.4;AY.4.2)からなる群から選択されるコドンが修飾された核酸配列と同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一である、本明細書において定義されるSARS-CoV-2抗原をコードするG/Cが最適化されたコード配列又はこれらの配列のいずれかのフラグメント若しくはバリアントを含むか、又はそれからなる少なくとも1つのコード配列を含む。一部の態様では、SARS-CoV-2抗原をコードする少なくとも1つのコード配列は、配列番号27118、27141、27164、27187、27210、27233又は28601～28606と少なくとも95%同一である。一部の態様では、SARS-CoV-2抗原をコードする少なくとも1つのコード配列は、配列番号27118、27210又は28601～28606と少なくとも95%同一である。 In an even more preferred embodiment, the RNA of the first aspect is SEQ ID NO. ;AY.4.2) is at least 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90% identical to the modified nucleic acid sequence; , 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical to a SARS-CoV-2 antigen as defined herein. C comprises at least one coding sequence that comprises or consists of an optimized coding sequence or a fragment or variant of any of these sequences. In some embodiments, at least one coding sequence encoding a SARS-CoV-2 antigen is at least 95% identical to SEQ ID NO: 27118, 27141, 27164, 27187, 27210, 27233, or 28601-28606. In some embodiments, at least one coding sequence encoding a SARS-CoV-2 antigen is at least 95% identical to SEQ ID NO: 27118, 27210, or 28601-28606.

なおより好ましい実施形態では、第一の態様のRNAは、配列番号27118、27141、27164、27187、27210若しくは27233(B.1.617.2)からなる群から選択されるコドンが修飾された核酸配列と同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一である、本明細書において定義されるSARS-CoV-2抗原をコードするG/Cが最適化されたコード配列又はこれらの配列のいずれかのフラグメント若しくはバリアントを含むか、又はそれからなる少なくとも1つのコード配列を含む。一部の態様では、SARS-CoV-2抗原をコードする少なくとも1つのコード配列は、配列番号27118、27141、27164、27187、27210又は27233と少なくとも95%同一である。一部の態様では、SARS-CoV-2抗原をコードする少なくとも1つのコード配列は、配列番号27118又は27210と少なくとも95%同一である。 In an even more preferred embodiment, the RNA of the first aspect comprises a codon-modified nucleic acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NO: 27118, 27141, 27164, 27187, 27210 or 27233 (B.1.617.2). are the same or at least 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97 %, 98%, or 99% identical to a G/C-optimized coding sequence encoding a SARS-CoV-2 antigen as defined herein or a fragment or variant of any of these sequences. at least one coding sequence comprising or consisting of. In some embodiments, at least one coding sequence encoding a SARS-CoV-2 antigen is at least 95% identical to SEQ ID NO: 27118, 27141, 27164, 27187, 27210, or 27233. In some embodiments, at least one coding sequence encoding a SARS-CoV-2 antigen is at least 95% identical to SEQ ID NO: 27118 or 27210.

さらに好ましい実施形態では、第一の態様のRNAは、配列番号28590～28593、28921～28924(B.1.1.529、オミクロン)からなる群から選択されるコドンが修飾された核酸配列と同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一である、本明細書において定義されるSARS-CoV-2抗原をコードするG/Cが最適化されたコード配列又はこれらの配列のいずれかのフラグメント若しくはバリアントを含むか、又はそれからなる少なくとも1つのコード配列を含む。一部の態様では、SARS-CoV-2抗原をコードする少なくとも1つのコード配列は、配列番号28590～28593と少なくとも95%同一である。一部の態様では、SARS-CoV-2抗原をコードする少なくとも1つのコード配列は、配列番号28590～28593、28921～28924と少なくとも95%同一である。 In a further preferred embodiment, the RNA of the first aspect is identical to a nucleic acid sequence modified in a codon selected from the group consisting of SEQ ID NO: 28590-28593, 28921-28924 (B.1.1.529, Omicron) or at least 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98 % or 99% identical to a G/C encoding a SARS-CoV-2 antigen as defined herein comprises an optimized coding sequence or a fragment or variant of any of these sequences; or at least one coding sequence consisting of. In some embodiments, at least one coding sequence encoding a SARS-CoV-2 antigen is at least 95% identical to SEQ ID NOs: 28590-28593. In some embodiments, at least one coding sequence encoding a SARS-CoV-2 antigen is at least 95% identical to SEQ ID NOs: 28590-28593, 28921-28924.

UTR:
好ましい実施形態では、本発明のRNAは、本明細書において定義される少なくとも1つのSARS-CoV-2スパイクタンパク質、又はその免疫原性フラグメント若しくは免疫原性バリアントをコードする少なくとも1つのコード配列を含み、ここで、RNAは、少なくとも1つの異種非翻訳領域(UTR)を含む。一部の態様では、実施形態のRNAは、配列番号268の配列を含む3'UTRを含まない。ある特定の態様では、実施形態のRNAは、配列番号268の配列を含む3'UTRを含む。 UTR:
In a preferred embodiment, the RNA of the invention comprises at least one coding sequence encoding at least one SARS-CoV-2 spike protein, or an immunogenic fragment or variant thereof, as defined herein. , where the RNA includes at least one heterologous untranslated region (UTR). In some aspects, the RNA of embodiments does not include a 3'UTR that includes the sequence of SEQ ID NO: 268. In certain aspects, the RNA of embodiments comprises a 3'UTR comprising the sequence of SEQ ID NO: 268.

好ましい実施形態では、本発明のRNAは、タンパク質コード領域(「コード配列」又は「cds」)、並びに5'UTR及び/又は3'UTRを含む。特に、UTRは、核酸、例えば、RNAターンオーバー、安定性、及び局在性を決定する調節配列エレメントを有し得る。さらに、UTRは、翻訳を強化する配列エレメントを有し得る。医薬適用では、RNAの少なくとも1つのペプチド又はタンパク質への翻訳は、治療有効性に最も重要なものである。3'UTR及び/又は5'UTRのある特定の組み合わせは、本発明のペプチド又はタンパク質をコードする作動可能に連結されたコード配列の発現を強化し得る。前記UTR組み合わせを有するRNA分子は、有利には、対象への投与後、好ましくは、筋肉内投与後に、抗原性ペプチド又はタンパク質の迅速かつ一過性の発現を可能にする。したがって、本明細書において提供される3'UTR及び/又は5'UTRのある特定の組み合わせを含むRNAは、特に、ワクチンとしての投与に適し、特に、対象の筋肉、真皮、又は表皮への投与に適する。 In a preferred embodiment, the RNA of the invention comprises a protein coding region ("coding sequence" or "cds") and a 5'UTR and/or 3'UTR. In particular, the UTR may contain regulatory sequence elements that determine nucleic acid, eg, RNA turnover, stability, and localization. Additionally, the UTR may have sequence elements that enhance translation. In pharmaceutical applications, the translation of RNA into at least one peptide or protein is of paramount importance for therapeutic efficacy. Certain combinations of 3'UTR and/or 5'UTR may enhance expression of operably linked coding sequences encoding peptides or proteins of the invention. RNA molecules with said UTR combinations advantageously allow rapid and transient expression of antigenic peptides or proteins after administration to a subject, preferably after intramuscular administration. Accordingly, RNA comprising certain combinations of 3'UTR and/or 5'UTR provided herein is particularly suitable for administration as a vaccine, particularly to the muscle, dermis, or epidermis of a subject. suitable for

好適には、本発明のRNAは、少なくとも1つの異種5'UTR及び/又は少なくとも1つの異種3'UTRを含む。前記異種5'UTR又は3'UTRは、天然に存在する遺伝子から誘導されてもよいか、又は合成的に作出されてもよい。好ましい実施形態では、RNAは、少なくとも1つの(異種)3'UTR及び/又は少なくとも1つの(異種)5'UTRに作動可能に連結された本明細書において定義される少なくとも1つのコード配列を含む。 Preferably, the RNA of the invention comprises at least one heterologous 5'UTR and/or at least one heterologous 3'UTR. The heterologous 5'UTR or 3'UTR may be derived from a naturally occurring gene or may be synthetically created. In a preferred embodiment, the RNA comprises at least one coding sequence as defined herein operably linked to at least one (heterologous) 3'UTR and/or at least one (heterologous) 5'UTR .

好ましい実施形態では、RNAは、少なくとも1つの異種3'UTRを含み、RNAは、配列番号268の配列を含む3'UTRを含まない。好ましくは、RNAは、強化された半減期を有するRNAに関する(すなわち、安定なRNAをもたらす)遺伝子から誘導可能であり得る、3'UTRを含む。 In a preferred embodiment, the RNA comprises at least one heterologous 3'UTR and the RNA does not comprise a 3'UTR comprising the sequence of SEQ ID NO: 268. Preferably, the RNA includes a 3'UTR that can be derived from a gene for RNA with enhanced half-life (ie, resulting in a stable RNA).

一部の実施形態では、3'UTRは、ポリアデニル化シグナル、細胞における核酸安定性若しくは位置に影響するタンパク質の結合部位、又は1つ以上のmiRNA若しくはmiRNAの結合部位のうちの1つ以上を含む。 In some embodiments, the 3'UTR comprises one or more of a polyadenylation signal, a binding site for a protein that affects nucleic acid stability or location in the cell, or one or more miRNAs or a binding site for an miRNA. .

マイクロRNA(又はmiRNA)は、核酸分子の3'UTRに結合し、核酸分子安定性を低減することによって、又は翻訳を阻害することによってのいずれかで、遺伝子発現を下方調節する19～25ヌクレオチド長の非コードRNAである。例えば、マイクロRNAは、RNAを調節し、これにより、例えば、肝臓(miR-122)、心臓(miR-ld、miR-149)、内皮細胞(miR-17-92、miR-126)、脂肪組織(let-7、miR-30c)、腎臓(miR-192、miR-194、miR-204)、骨髄細胞(miR-142-3p、miR-142-5p、miR-16、miR-21、miR-223、miR-24、miR-27)、筋肉(miR-133、miR-206、miR-208)、及び肺上皮細胞(let-7、miR-133、miR-126)におけるタンパク質発現を調節することが知られている。RNAは、1つ以上のマイクロRNA標的配列、マイクロRNA配列、又はマイクロRNAシードを含んでもよい。このような配列は、例えば、任意の公知のマイクロRNA、例えば、US2005/0261218及びUS2005/0059005に教示されるものに対応し得る。 MicroRNAs (or miRNAs) are 19-25 nucleotide molecules that bind to the 3'UTR of nucleic acid molecules and downregulate gene expression, either by reducing nucleic acid molecule stability or by inhibiting translation. It is a long non-coding RNA. For example, microRNAs regulate RNAs, which can be used in liver (miR-122), heart (miR-ld, miR-149), endothelial cells (miR-17-92, miR-126), adipose tissue, etc. (let-7, miR-30c), kidney (miR-192, miR-194, miR-204), bone marrow cells (miR-142-3p, miR-142-5p, miR-16, miR-21, miR- 223, miR-24, miR-27), muscle (miR-133, miR-206, miR-208), and lung epithelial cells (let-7, miR-133, miR-126). It has been known. The RNA may include one or more microRNA target sequences, microRNA sequences, or microRNA seeds. Such sequences may correspond, for example, to any known microRNA, such as those taught in US2005/0261218 and US2005/0059005.

したがって、上で定義されたmiRNA、又はmiRNAの結合部位は、RNAの発現を所望される細胞タイプ又は組織(例えば、筋肉細胞)に合わせるために、3'UTRから除去されるか、又は3'UTRに導入されてもよい。 Therefore, the miRNA, or binding site for the miRNA, as defined above may be removed from the 3'UTR or the 3' May be introduced in the UTR.

好ましい実施形態では、RNAは、PSMB3、ALB7、CASP1、COX6B1、GNAS、NDUFA1及びRPS9から選択される遺伝子、又はこれらの遺伝子のいずれか1つの相同体、フラグメント若しくはバリアントの3'UTRから誘導される核酸配列を含むか、又はそれからなる少なくとも1つの異種3'UTRを含む。一部の実施形態では、RNAは、少なくとも1つの異種3'UTRを含み、少なくとも1つの異種3'UTRは、好ましくは、配列番号253～266、22902～22905、22876～22895、26996～26999、28528～28539と同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一である核酸配列又はこれらのいずれかのフラグメント若しくはバリアントによる、PSMB3、ALB7、CASP1、COX6B1、GNAS、NDUFA1及びRPS9から選択される遺伝子、又はこれらの遺伝子のいずれか1つの相同体、フラグメント若しくはバリアントの3'UTRから誘導される核酸配列を含む。その文脈での特に好ましい核酸配列は、公開されたPCT出願WO2019/077001A1、特に、WO2019/077001A1の請求項9からもたらされ得る。WO2019/077001A1の請求項9の対応する3'UTR配列は、参照により本明細書に取り込まれる(例えば、WO2019/077001A1の配列番号23～34、又はそのフラグメント若しくはバリアント)。 In a preferred embodiment, the RNA is derived from the 3'UTR of a gene selected from PSMB3, ALB7, CASP1, COX6B1, GNAS, NDUFA1 and RPS9, or a homologue, fragment or variant of any one of these genes. Contains at least one heterologous 3'UTR comprising or consisting of a nucleic acid sequence. In some embodiments, the RNA comprises at least one heterologous 3'UTR, preferably SEQ ID NOs: 253-266, 22902-22905, 22876-22895, 26996-26999, 28528 to 28539, or at least 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, A gene selected from PSMB3, ALB7, CASP1, COX6B1, GNAS, NDUFA1 and RPS9, or a gene selected from PSMB3, ALB7, CASP1, COX6B1, GNAS, NDUFA1 and RPS9, with nucleic acid sequences that are 96%, 97%, 98% or 99% identical or fragments or variants of any of these. Includes nucleic acid sequences derived from the 3'UTR of any one homologue, fragment or variant of a gene. A particularly preferred nucleic acid sequence in that context may come from the published PCT application WO2019/077001A1, in particular claim 9 of WO2019/077001A1. The corresponding 3'UTR sequences of claim 9 of WO2019/077001A1 are incorporated herein by reference (eg SEQ ID NO: 23-34 of WO2019/077001A1, or a fragment or variant thereof).

さらなる実施形態では、RNAは、RPS9遺伝子から誘導される3'UTRを含む。RPS9遺伝子から誘導される前記3'UTRは、配列番号263若しくは264、22894、22895、22904、22905と同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一である核酸配列又はそのフラグメント若しくはバリアントを含むか、又はそれからなり得る。 In further embodiments, the RNA comprises a 3'UTR derived from the RPS9 gene. The 3'UTR derived from the RPS9 gene is at least 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88% identical to SEQ ID NO: 263 or 264, 22894, 22895, 22904, 22905. , 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical to a nucleic acid sequence or a fragment or variant thereof; It can be.

好ましい実施形態では、RNAは、PSMB3遺伝子から誘導される3'UTRを含む。PSMB3遺伝子から誘導される前記3'UTRは、配列番号253若しくは254、22892、22893、22902、22903、26996～26999、28528～28539と同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一である核酸配列又はそのフラグメント若しくはバリアントを含むか、又はそれからなり得る。 In a preferred embodiment, the RNA comprises a 3'UTR derived from the PSMB3 gene. The 3'UTR derived from the PSMB3 gene is identical to SEQ ID NO: 253 or 254, 22892, 22893, 22902, 22903, 26996-26999, 28528-28539, or at least 70%, 80%, 85%, Nucleic acid sequences or fragments thereof that are 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical or may comprise or consist of variants.

他の実施形態では、RNAは、配列番号22876～22891、28526、28527と同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一である核酸配列又はそのフラグメント若しくはバリアントを含むか、又はそれからなる3'UTRを含む。 In other embodiments, the RNA is at least 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, A 3'UTR comprising or consisting of a nucleic acid sequence or a fragment or variant thereof that is 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical.

他の実施形態では、RNAは、WO2016/107877に記載される3'UTRを含んでもよく、3'UTR配列に関するWO2016/107877の開示は、参照により本明細書に取り込まれる。好適な3'UTRは、WO2016/107877の配列番号1～24及び配列番号49～318、又はこれらの配列のフラグメント若しくはバリアントである。他の実施形態では、核酸は、WO2017/036580に記載される3'UTRを含み、3'UTR配列に関するWO2017/036580の開示は、参照により本明細書に取り込まれる。好適な3'UTRは、WO2017/036580の配列番号152～204、又はこれらの配列のフラグメント若しくはバリアントである。他の実施形態では、核酸は、WO2016/022914に記載される3'UTRを含み、3'UTR配列に関するWO2016/022914の開示は、参照により本明細書に取り込まれる。特に好ましい3'UTRは、WO2016/022914の配列番号20～36に記載の核酸配列、又はこれらの配列のフラグメント若しくはバリアントである。 In other embodiments, the RNA may include a 3'UTR as described in WO2016/107877, the disclosure of WO2016/107877 regarding 3'UTR sequences is incorporated herein by reference. Suitable 3'UTRs are SEQ ID NO: 1-24 and SEQ ID NO: 49-318 of WO2016/107877, or fragments or variants of these sequences. In other embodiments, the nucleic acid comprises a 3'UTR as described in WO2017/036580, the disclosure of WO2017/036580 regarding 3'UTR sequences is incorporated herein by reference. Suitable 3'UTRs are SEQ ID NOs: 152-204 of WO2017/036580, or fragments or variants of these sequences. In other embodiments, the nucleic acid comprises a 3'UTR as described in WO2016/022914, the disclosure of WO2016/022914 regarding 3'UTR sequences is incorporated herein by reference. Particularly preferred 3'UTRs are the nucleic acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 20-36 of WO2016/022914, or fragments or variants of these sequences.

好ましい実施形態では、RNAは、少なくとも1つの異種5'UTRを含む。 In a preferred embodiment, the RNA comprises at least one heterologous 5'UTR.

用語「5'非翻訳領域」又は「5'UTR」又は「5'UTRエレメント」は、当業者によって認識され、理解され、例えば、コード配列の5'(すなわち、「上流」)に位置し、タンパク質に翻訳されないRNA分子の一部を指すことが意図される。5'UTRは、コード配列の5'に位置する核酸の一部であってもよい。典型的には、5'UTRは、転写開始部位で始まり、コード配列の開始コドン前で終わる。5'UTRは、調節エレメントとも呼ばれる、遺伝子発現を制御するためのエレメントを含んでもよい。このような調節エレメントは、例えば、リボソーム結合部位、miRNA結合部位などであってもよい。5'UTRは、例えば、5'キャップ構造(例えば、mRNAのため)の酵素又は転写後付加によって、転写後修飾されてもよい。 The term "5' untranslated region" or "5' UTR" or "5' UTR element" is recognized and understood by those skilled in the art and is, for example, located 5' (i.e., "upstream") of a coding sequence; It is intended to refer to the part of an RNA molecule that is not translated into protein. A 5'UTR may be a portion of a nucleic acid located 5' to a coding sequence. Typically, the 5'UTR begins at the transcription start site and ends before the start codon of the coding sequence. The 5'UTR may contain elements for controlling gene expression, also called regulatory elements. Such regulatory elements may be, for example, ribosome binding sites, miRNA binding sites, etc. The 5'UTR may be post-transcriptionally modified, eg, by enzymatic or post-transcriptional addition of a 5' cap structure (eg, for mRNA).

好ましくは、RNAは、強化された半減期を有するRNAに関する(すなわち、安定なRNAをもたらす)遺伝子から誘導可能であり得る5'UTRを含む。 Preferably, the RNA includes a 5'UTR that can be derived from a gene for RNA with enhanced half-life (ie, resulting in a stable RNA).

一部の実施形態では、5'UTRは、細胞におけるRNA安定性若しくはRNA位置に影響するタンパク質の結合部位、又は1つ以上のmiRNA若しくはmiRNAの結合部位(上で定義された通り)のうちの1つ以上を含む。 In some embodiments, the 5'UTR is a protein binding site that affects RNA stability or RNA location in the cell, or one or more miRNAs or miRNA binding sites (as defined above). Contains one or more.

したがって、上で定義されたmiRNA又はmiRNAの結合部位は、核酸の発現を所望される細胞タイプ又は組織(例えば、筋肉細胞)に合わせるために、5'UTRから除去されるか、又は5'UTRに導入され得る。 Accordingly, the miRNA or miRNA binding site defined above may be removed from the 5'UTR or can be introduced.

好ましい実施形態では、RNAは、少なくとも1つの異種5'UTRを含み、ここで、少なくとも1つの異種5'UTRは、配列番号231～252、22870～22875と同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一である核酸配列又はこれらのいずれかのフラグメント若しくはバリアントによる、HSD17B4、RPL32、ASAH1、ATP5A1、MP68、NDUFA4、NOSIP、RPL31、SLC7A3、TUBB4B、及びUBQLN2から選択される遺伝子、又はこれらの遺伝子のいずれか1つの相同体、フラグメント若しくはバリアントからの5'UTRから誘導される核酸配列を含む。その文脈での特に好ましい核酸配列は、公開されたPCT出願WO2019/077001A1、特に、WO2019/077001A1の請求項9から選択することができる。WO2019/077001A1の請求項9の対応する5'UTR配列は、参照により本明細書に取り込まれる(例えば、WO2019/077001A1の配列番号1～20、又はそのフラグメント若しくはバリアント)。 In a preferred embodiment, the RNA comprises at least one heterologous 5'UTR, wherein the at least one heterologous 5'UTR is at least 70% identical to SEQ ID NO: 231-252, 22870-22875, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical A gene selected from HSD17B4, RPL32, ASAH1, ATP5A1, MP68, NDUFA4, NOSIP, RPL31, SLC7A3, TUBB4B, and UBQLN2, or any one of these genes, by a certain nucleic acid sequence or a fragment or variant of any of these. 5'UTRs from two homologs, fragments or variants. Particularly preferred nucleic acid sequences in that context can be selected from the published PCT application WO2019/077001A1, in particular claim 9 of WO2019/077001A1. The corresponding 5'UTR sequences of claim 9 of WO2019/077001A1 are incorporated herein by reference (eg SEQ ID NO: 1-20 of WO2019/077001A1, or a fragment or variant thereof).

好ましい実施形態では、RNAは、RPL31遺伝子から誘導される5'UTRを含み、RPL31遺伝子から誘導される前記5'UTRは、配列番号243、244、22872、22873と同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一である核酸配列又はそのフラグメント若しくはバリアントを含むか、又はそれからなる。 In a preferred embodiment, the RNA comprises a 5'UTR derived from the RPL31 gene, said 5'UTR derived from the RPL31 gene is identical to SEQ ID NO: 243, 244, 22872, 22873, or at least 70 %, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% Contains or consists of identical nucleic acid sequences or fragments or variants thereof.

他の実施形態では、RNAは、SLC7A3遺伝子から誘導される5'UTRを含み、SLC7A3遺伝子から誘導される前記5'UTRは、配列番号245、246、22874、22875と同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一である核酸配列又はそのフラグメント若しくはバリアントを含むか、又はそれからなる。 In other embodiments, the RNA comprises a 5'UTR derived from the SLC7A3 gene, and the 5'UTR derived from the SLC7A3 gene is identical to, or at least 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99 % identical nucleic acid sequences or fragments or variants thereof.

特に好ましい実施形態では、RNAは、HSD17B4遺伝子から誘導される5'UTRを含み、HSD17B4遺伝子から誘導される前記5'UTRは、配列番号231、232、22870、22871と同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一である核酸配列又はそのフラグメント若しくはバリアントを含むか、又はそれからなる。 In a particularly preferred embodiment, the RNA comprises a 5'UTR derived from the HSD17B4 gene, said 5'UTR derived from the HSD17B4 gene being identical to, or at least 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99 % identical nucleic acid sequences or fragments or variants thereof.

他の実施形態では、RNAは、配列番号22848～22867、28522～28525と同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一である核酸配列又はそのフラグメント若しくはバリアントを含むか、又はそれからなる5'UTRを含む。 In other embodiments, the RNA is at least 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, A 5'UTR that comprises or consists of a nucleic acid sequence or a fragment or variant thereof that is 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical.

他の実施形態では、RNAは、WO2013/143700に記載される5'UTRを含み、5'UTR配列に関するWO2013/143700の開示は、参照により本明細書に取り込まれる。特に好ましい5'UTRは、WO2013/143700の配列番号1～1363、配列番号1395、配列番号1421及び配列番号1422、又はこれらの配列のフラグメント若しくはバリアントから誘導される核酸配列である。他の実施形態では、核酸は、WO2016/10787号に記載される5'UTRを含み、5'UTR配列に関するWO2016/107877の開示は、参照により本明細書に取り込まれる。特に好ましい5'UTRは、WO2016/107877の配列番号25～30及び配列番号319～382に記載の核酸配列、又はこれらの配列のフラグメント若しくはバリアントである。他の実施形態では、核酸は、WO2017/036580に記載される5'UTRを含み、5'UTR配列に関するWO2017/036580の開示は、参照により本明細書に取り込まれる。特に好ましい5'UTRは、WO2017/036580の配列番号1～151に記載の核酸配列、又はこれらの配列のフラグメント若しくはバリアントである。他の実施形態では、核酸は、2016/022914に記載される5'UTRを含み、5'UTR配列に関するWO2016/022914の開示は、参照により本明細書に取り込まれる。特に好ましい5'UTRは、WO2016/022914の配列番号3～19に記載の核酸配列、又はこれらの配列のフラグメント若しくはバリアントである。 In other embodiments, the RNA comprises a 5'UTR as described in WO2013/143700, the disclosure of WO2013/143700 regarding 5'UTR sequences is incorporated herein by reference. Particularly preferred 5'UTRs are nucleic acid sequences derived from SEQ ID NO: 1-1363, SEQ ID NO: 1395, SEQ ID NO: 1421 and SEQ ID NO: 1422 of WO2013/143700, or fragments or variants of these sequences. In other embodiments, the nucleic acid comprises a 5'UTR as described in WO2016/10787, the disclosure of WO2016/107877 regarding 5'UTR sequences is incorporated herein by reference. Particularly preferred 5'UTRs are the nucleic acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 25-30 and SEQ ID NOs: 319-382 of WO2016/107877, or fragments or variants of these sequences. In other embodiments, the nucleic acid comprises a 5'UTR as described in WO2017/036580, the disclosure of WO2017/036580 regarding 5'UTR sequences is incorporated herein by reference. Particularly preferred 5'UTRs are the nucleic acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 1 to 151 of WO2017/036580, or fragments or variants of these sequences. In other embodiments, the nucleic acid comprises a 5'UTR as described in 2016/022914, the disclosure of WO2016/022914 regarding 5'UTR sequences is incorporated herein by reference. Particularly preferred 5'UTRs are the nucleic acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 3 to 19 of WO2016/022914, or fragments or variants of these sequences.

好適には、好ましい実施形態では、RNAは、本明細書において定義される少なくとも1つの抗原性タンパク質をコードする、本明細書において特定される、好ましくは、以下の5'UTR/3'UTR組み合わせ(「UTR設計とも呼ばれる」):
a-1(HSD17B4/PSMB3)、a-2(NDUFA4/PSMB3)、a-3(SLC7A3/PSMB3)、a-4(NOSIP/PSMB3)、a-5(MP68/PSMB3)、b-1(UBQLN2/RPS9)、b-2(ASAH1/RPS9)、b-3(HSD17B4/RPS9)、b-4(HSD17B4/CASP1)、b-5(NOSIP/COX6B1)、c-1(NDUFA4/RPS9)、c-2(NOSIP/NDUFA1)、c-3(NDUFA4/COX6B1)、c-4(NDUFA4/NDUFA1)、c-5(ATP5A1/PSMB3)、d-1(Rpl31/PSMB3)、d-2(ATP5A1/CASP1)、d-3(SLC7A3/GNAS)、d-4(HSD17B4/NDUFA1)、d-5(Slc7a3/Ndufa1)、e-1(TUBB4B/RPS9)、e-2(RPL31/RPS9)、e-3(MP68/RPS9)、e-4(NOSIP/RPS9)、e-5(ATP5A1/RPS9)、e-6(ATP5A1/COX6B1)、f-1(ATP5A1/GNAS)、f-2(ATP5A1/NDUFA1)、f-3(HSD17B4/COX6B1)、f-4(HSD17B4/GNAS)、f-5(MP68/COX6B1)、g-1(MP68/NDUFA1)、g-2(NDUFA4/CASP1)、g-3(NDUFA4/GNAS)、g-4(NOSIP/CASP1)、g-5(RPL31/CASP1)、h-1(RPL31/COX6B1)、h-2(RPL31/GNAS)、h-3(RPL31/NDUFA1)、h-4(Slc7a3/CASP1)、h-5(SLC7A3/COX6B1)、i-1(SLC7A3/RPS9)、i-2(RPL32/ALB7)、i-2(RPL32/ALB7)
から選択される3'UTR及び/又は5'UTRに作動可能に連結されたSARS-CoV-2から誘導される少なくとも1つのコード配列を含む。 Suitably, in a preferred embodiment, the RNA encodes at least one antigenic protein as defined herein, preferably the following 5'UTR/3'UTR combinations specified herein: (also called "UTR design"):
a-1 (HSD17B4/PSMB3), a-2 (NDUFA4/PSMB3), a-3 (SLC7A3/PSMB3), a-4 (NOSIP/PSMB3), a-5 (MP68/PSMB3), b-1 (UBQLN2) /RPS9), b-2(ASAH1/RPS9), b-3(HSD17B4/RPS9), b-4(HSD17B4/CASP1), b-5(NOSIP/COX6B1), c-1(NDUFA4/RPS9), c -2(NOSIP/NDUFA1), c-3(NDUFA4/COX6B1), c-4(NDUFA4/NDUFA1), c-5(ATP5A1/PSMB3), d-1(Rpl31/PSMB3), d-2(ATP5A1/ CASP1), d-3(SLC7A3/GNAS), d-4(HSD17B4/NDUFA1), d-5(Slc7a3/Ndufa1), e-1(TUBB4B/RPS9), e-2(RPL31/RPS9), e- 3(MP68/RPS9), e-4(NOSIP/RPS9), e-5(ATP5A1/RPS9), e-6(ATP5A1/COX6B1), f-1(ATP5A1/GNAS), f-2(ATP5A1/NDUFA1 ), f-3(HSD17B4/COX6B1), f-4(HSD17B4/GNAS), f-5(MP68/COX6B1), g-1(MP68/NDUFA1), g-2(NDUFA4/CASP1), g-3 (NDUFA4/GNAS), g-4(NOSIP/CASP1), g-5(RPL31/CASP1), h-1(RPL31/COX6B1), h-2(RPL31/GNAS), h-3(RPL31/NDUFA1) , h-4(Slc7a3/CASP1), h-5(SLC7A3/COX6B1), i-1(SLC7A3/RPS9), i-2(RPL32/ALB7), i-2(RPL32/ALB7)
at least one coding sequence derived from SARS-CoV-2 operably linked to a 3'UTR and/or 5'UTR selected from SARS-CoV-2.

特に好ましい実施形態では、RNAは、SARS-CoV-2から誘導される少なくとも1つの抗原性タンパク質をコードする、本明細書において特定される少なくとも1つのコード配列を含み、前記コード配列は、HSD17B4 5'UTR及びPSMB3 3'UTR(HSD17B4/PSMB3(UTR設計a-1))に作動可能に連結されている。 In particularly preferred embodiments, the RNA comprises at least one coding sequence as specified herein encoding at least one antigenic protein derived from SARS-CoV-2, said coding sequence comprising HSD17B4 5 'UTR and PSMB3 3' Operaably coupled to the UTR (HSD17B4/PSMB3 (UTR design a-1)).

この実施形態は、SARS-CoV-2に対する免疫応答の誘導に特に有益であることが、本発明者らによって示されている。この文脈では、既に1回のワクチン接種が、ウイルス中和抗体力価を生じるのに十分であることが示された。 This embodiment has been shown by the inventors to be particularly useful for inducing an immune response against SARS-CoV-2. In this context, it has already been shown that one vaccination is sufficient to generate virus-neutralizing antibody titers.

さらに好ましい実施形態では、核酸は、好ましくは、SARS-CoV-2(nCoV-2019)コロナウイルスから誘導される、本明細書において定義される少なくとも1つの抗原性タンパク質をコードする、本明細書において特定される少なくとも1つのコード配列を含み、前記コード配列は、SLC7A3 5'UTR及びPSMB3 3'UTR(SLC7A3/PSMB3(UTR設計a-3))に作動可能に連結されている。 In a further preferred embodiment, the nucleic acid herein encodes at least one antigenic protein as defined herein, preferably derived from the SARS-CoV-2 (nCoV-2019) coronavirus. at least one coding sequence identified, said coding sequence being operably linked to the SLC7A3 5'UTR and the PSMB3 3'UTR (SLC7A3/PSMB3 (UTR design a-3)).

さらに好ましい実施形態では、核酸は、好ましくは、SARS-CoV-2(nCoV-2019)コロナウイルスから誘導される、本明細書において定義される少なくとも1つの抗原性タンパク質をコードする、本明細書において特定される少なくとも1つのコード配列を含み、前記コード配列は、RPL31 5'UTR及びRPS9 3'UTR(RPL31/RPS9(UTR設計e-2))に作動可能に連結されている。 In a further preferred embodiment, the nucleic acid herein encodes at least one antigenic protein as defined herein, preferably derived from the SARS-CoV-2 (nCoV-2019) coronavirus. at least one coding sequence identified, said coding sequence being operably linked to the RPL31 5'UTR and the RPS9 3'UTR (RPL31/RPS9 (UTR design e-2)).

一部の実施形態では、RNAは、モノシストロニック、バイシストロニック、又はマルチシストロニックであってもよい。 In some embodiments, the RNA may be monocistronic, bicistronic, or multicistronic.

用語「モノシストロニック」は、当業者によって認識され、理解され、例えば、1つのコード配列のみを含む核酸を指すことが意図される。本明細書で使用される場合、用語「バイシストロニック」、又は「マルチシストロニック」は、当業者によって認識され、理解され、例えば、2つ(バイシストロニック)又はそれ以上(マルチシストロニック)のコード配列を含み得る核酸を指すことが意図される。 The term "monocistronic" is recognized and understood by those skilled in the art and is intended to refer to a nucleic acid that includes, for example, only one coding sequence. As used herein, the term "bicistronic" or "multicistronic" is recognized and understood by those skilled in the art and includes, for example, two (bicistronic) or more (multicistronic) is intended to refer to a nucleic acid that may include the coding sequence of.

好ましい実施形態では、第一の態様のRNAは、モノシストロニックである。 In a preferred embodiment, the RNA of the first aspect is monocistronic.

他の実施形態では、RNAは、モノシストロニックであり、前記核酸のコード配列は、SARS-CoV-2から誘導される少なくとも2つの異なる抗原性ペプチド又はタンパク質をコードする。したがって、前記コード配列は、アミノ酸リンカー配列で結合されるか、又はなしで結合される、SARS-CoV-2から誘導された少なくとも2、3、4、5、6、7、8つ以上の抗原性ペプチド又はタンパク質をコードしてもよく、前記リンカー配列は、強固なリンカー、可動性リンカー、切断可能なリンカー、又はそれらの組み合わせを含むことができる。このような構築物は、本明細書において「複数の抗原構築物」と称される。 In other embodiments, the RNA is monocistronic and the nucleic acid coding sequence encodes at least two different antigenic peptides or proteins derived from SARS-CoV-2. Accordingly, said coding sequence comprises at least two, three, four, five, six, seven, eight or more antigens derived from SARS-CoV-2, joined with or without an amino acid linker sequence. The linker sequence may include a rigid linker, a flexible linker, a cleavable linker, or a combination thereof. Such constructs are referred to herein as "multiple antigen constructs."

さらなる実施形態では、RNAは、バイシストロニック又はマルチシストロニックであってもよく、少なくとも2つのコード配列を含み、少なくとも2つのコード配列は、SARS-CoV-2から誘導される2つ以上の異なる抗原性ペプチド又はタンパク質をコードする。したがって、バイシストロニック又はマルチシストロニック核酸中のコード配列は、好適には、本明細書において定義される別個の抗原性タンパク質若しくはペプチド又はその免疫原性フラグメント若しくは免疫原性バリアントをコードする。好ましくは、前記バイシストロニック又はマルチシストロニック構築物中のコード配列は、少なくとも1つのIRES(配列内リボソーム進入部位)配列によって分けられ得る。したがって、用語「2つ以上の抗原性ペプチド又はタンパク質をコードする」は、限定するものではないが、バイシストロニック又はマルチシストロニック核酸が、例えば、異なるSARS-CoV-2分離株の少なくとも2、3、4、5、6つ以上の(好ましくは、異なる)抗原性ペプチド又はタンパク質をコードすることを意味し得る。或いは、バイシストロニック又はマルチシストロニック核酸は、例えば、同じSARS-CoV-2から誘導される少なくとも2、3、4、5、6つ以上の(好ましくは、異なる)抗原性ペプチド又はタンパク質をコードしてもよい。その文脈では、好適なIRES配列は、特許出願WO2017/081082の配列番号1566～1662に記載の核酸配列、又はこれらの配列のフラグメント若しくはバリアントのリストから選択され得る。この文脈では、IRES配列に関するWO2017/081082の開示は、参照により本明細書に取り込まれる。 In further embodiments, the RNA may be bicistronic or multicistronic and comprises at least two coding sequences, where the at least two coding sequences are derived from two or more different proteins derived from SARS-CoV-2. Encodes an antigenic peptide or protein. Thus, the coding sequence in a bicistronic or multicistronic nucleic acid preferably encodes a distinct antigenic protein or peptide, or an immunogenic fragment or variant thereof, as defined herein. Preferably, the coding sequences in said bicistronic or multicistronic construct may be separated by at least one IRES (internal ribosome entry site) sequence. Thus, the term "encodes two or more antigenic peptides or proteins" includes, but is not limited to, a bicistronic or multicistronic nucleic acid that encodes, for example, at least two antigenic peptides or proteins of different SARS-CoV-2 isolates. It can be meant to encode 3, 4, 5, 6 or more (preferably different) antigenic peptides or proteins. Alternatively, a bicistronic or multicistronic nucleic acid encodes, for example, at least two, three, four, five, six or more (preferably different) antigenic peptides or proteins derived from the same SARS-CoV-2. You may. In that context, suitable IRES sequences may be selected from the list of nucleic acid sequences set out in SEQ ID NOs: 1566-1662 of patent application WO2017/081082, or fragments or variants of these sequences. In this context, the disclosure of WO2017/081082 regarding IRES sequences is incorporated herein by reference.

本発明の文脈で、コード配列のある特定の組み合わせは、本明細書において定義される複数の抗原性ペプチド又はタンパク質をコードする核酸セットを得るための、モノシストロニック、バイシストロニック及びマルチシストロニックRNA構築物並びに/又は複数の抗原構築物の任意の組み合わせによって生成され得ることは理解されなければならない。 In the context of the present invention, certain combinations of coding sequences are monocistronic, bicistronic and multicistronic to obtain a set of nucleic acids encoding multiple antigenic peptides or proteins as defined herein. It should be understood that it can be produced by any combination of RNA constructs and/or multiple antigen constructs.

好ましい実施形態では、RNAのリボソーム結合部位の環境におけるA/U(A/T)含有量は、そのそれぞれの野生型又は参照RNAのリボソーム結合部位の環境におけるA/U(A/T)含有量と比較して、増加してもよい。この修飾(リボソーム結合部位周囲の増加したA/U(A/T)含有量)は、RNAへのリボソーム結合の効率を増加させる。リボソームのリボソーム結合部位への有効な結合は、次に、効率的な翻訳RNAの効果を有する。 In a preferred embodiment, the A/U (A/T) content in the environment of the ribosome binding site of the RNA is the A/U (A/T) content in the environment of the ribosome binding site of its respective wild-type or reference RNA. may be increased compared to This modification (increased A/U (A/T) content around the ribosome binding site) increases the efficiency of ribosome binding to RNA. Efficient binding of the ribosome to the ribosome binding site, in turn, has the effect of efficient translation of the RNA.

したがって、特に好ましい実施形態では、RNAは、配列番号180、181、22845～22847の配列、又はそのフラグメント若しくはバリアントのいずれか1つと同一であるか、又は少なくとも80%、85%、90%、95%同一である、「コザック配列」としても称される、リボソーム結合部位を含む。 Thus, in particularly preferred embodiments, the RNA is at least 80%, 85%, 90%, 95% identical to the sequence SEQ ID NO: 180, 181, 22845-22847, or any one of its fragments or variants. % identical, including the ribosome binding site, also referred to as the "Kozak sequence."

好ましい実施形態では、RNAは、少なくとも1つのポリ(N)配列、例えば、少なくとも1つのポリ(A)配列、少なくとも1つのポリ(U)配列、少なくとも1つのポリ(C)配列、又はそれらの組み合わせを含む。 In a preferred embodiment, the RNA comprises at least one poly(N) sequence, such as at least one poly(A) sequence, at least one poly(U) sequence, at least one poly(C) sequence, or a combination thereof. including.

好ましい実施形態では、本発明のRNAは、少なくとも1つのポリ(A)配列を含む。 In a preferred embodiment, the RNA of the invention comprises at least one poly(A) sequence.

本明細書で使用される場合、用語「ポリ(A)配列」、「ポリ(A)テール」又は「3'ポリ(A)テール」は、当業者によって認識され、理解され、例えば、典型的には、最大約1000個のアデノシンヌクレオチドの直鎖RNA(又は環状RNA中)の3'末端に位置する、アデノシンヌクレオチドの配列であることが意図される。好ましくは、前記ポリ(A)配列は、本質的にホモポリマー性であり、例えば、例えば100個のアデノシンヌクレオチドのポリ(A)配列は、本質的に100ヌクレオチド長を有する。他の実施形態では、ポリ(A)配列は、アデノシンヌクレオチドと異なる少なくとも1つのヌクレオチドによって中断され、例えば、例えば100個のアデノシンヌクレオチドのポリ(A)配列は、100より長いヌクレオチド長を有し得る(100個のアデノシンヌクレオチド及びさらに又はアデノシンヌクレオチと異なる、前記少なくとも1つのヌクレオチド又はヌクレオチドの区画を含む)。 As used herein, the terms "poly(A) sequence," "poly(A) tail," or "3' poly(A) tail" are recognized and understood by those skilled in the art, and include, for example, is intended to be a sequence of adenosine nucleotides located at the 3' end of a linear RNA (or in a circular RNA) of up to about 1000 adenosine nucleotides. Preferably, said poly(A) sequence is essentially homopolymeric, eg a poly(A) sequence of eg 100 adenosine nucleotides has a length of essentially 100 nucleotides. In other embodiments, the poly(A) sequence is interrupted by at least one nucleotide that is different from adenosine nucleotides, e.g., a poly(A) sequence of 100 adenosine nucleotides may have a length of greater than 100 nucleotides. (comprising said at least one nucleotide or segment of nucleotides different from 100 adenosine nucleotides and/or adenosine nucleotides).

ポリ(A)配列は、約10～約500個のアデノシンヌクレオチド、約10～約200個のアデノシンヌクレオチド、約40～約200個のアデノシンヌクレオチド、又は約40～約150個のアデノシンヌクレオチドを含んでもよい。好適には、ポリ(A)配列の長さは、少なくとも約10、50、64、75、100、200、300、400、若しくは500個のアデノシンヌクレオチド又はさらに約10、50、64、75、100、200、300、400、若しくは500個のアデノシンヌクレオチドより長くてもよい。ある特定の実施形態では、RNAは、30～200個のアデノシンヌクレオチドを含む少なくとも1つのポリ(A)配列を含み、前記RNAの3'末端のヌクレオチドは、アデノシンである。 The poly(A) sequence may include about 10 to about 500 adenosine nucleotides, about 10 to about 200 adenosine nucleotides, about 40 to about 200 adenosine nucleotides, or about 40 to about 150 adenosine nucleotides. good. Suitably, the length of the poly(A) sequence is at least about 10, 50, 64, 75, 100, 200, 300, 400, or 500 adenosine nucleotides or even about 10, 50, 64, 75, 100 , 200, 300, 400, or 500 adenosine nucleotides. In certain embodiments, the RNA comprises at least one poly(A) sequence comprising 30-200 adenosine nucleotides, and the nucleotide at the 3' end of the RNA is adenosine.

好ましい実施形態では、本発明のRNAは、約30～約200個のアデノシンヌクレオチドを含む少なくとも1つのポリ(A)配列を含む。特に好ましい実施形態では、ポリ(A)配列は、約64個のアデノシンヌクレオチド(A64)を含む。特に好ましい実施形態では、ポリ(A)配列は、約100個のアデノシンヌクレオチド(A100)を含む。他の実施形態では、ポリ(A)配列は、約150個のアデノシンヌクレオチドを含む。 In a preferred embodiment, the RNA of the invention comprises at least one poly(A) sequence comprising about 30 to about 200 adenosine nucleotides. In particularly preferred embodiments, the poly(A) sequence comprises about 64 adenosine nucleotides (A64). In particularly preferred embodiments, the poly(A) sequence comprises about 100 adenosine nucleotides (A100). In other embodiments, the poly(A) sequence comprises about 150 adenosine nucleotides.

さらなる実施形態では、本発明のRNAは、約100個のアデノシンヌクレオチドを含む少なくとも1つのポリ(A)配列を含み、ポリ(A)配列は、非アデノシンヌクレオチドによって、好ましくは、10個の非アデノシンヌクレオチド(A30-N10-A70)によって中断される。 In a further embodiment, the RNA of the invention comprises at least one poly(A) sequence comprising about 100 adenosine nucleotides, the poly(A) sequence being separated by non-adenosine nucleotides, preferably 10 non-adenosine nucleotides. Interrupted by nucleotides (A30-N10-A70).

本明細書において定義されるポリ(A)配列は、RNAの3'末端に直接、好ましくは、RNAの3'末端に直接位置してもよい。 The poly(A) sequence as defined herein may be located directly at the 3' end of the RNA, preferably directly at the 3' end of the RNA.

好ましい実施形態では、3'末端のヌクレオチド(ポリヌクレオチド鎖中の最後の3'末端のヌクレオチドである)は、少なくとも1つのポリ(A)配列の3'末端のAヌクレオチドである。用語「3'末端に直接位置する」は、3'末端に正確に位置すると理解されなければならず、言い換えると、核酸の3'末端は、ポリ(A)配列からなり、Aヌクレオチドで終結する。 In a preferred embodiment, the 3' terminal nucleotide (which is the last 3' terminal nucleotide in the polynucleotide chain) is the 3' terminal A nucleotide of at least one poly(A) sequence. The term "directly located at the 3' end" must be understood to mean located precisely at the 3' end, in other words, the 3' end of the nucleic acid consists of a poly(A) sequence and terminates with an A nucleotide. .

この実施形態は、SARS-CoV-2に対する免疫応答の誘導に特に有益であることは、本発明者らによって示されている。この文脈では、既に1回のワクチン接種が、ウイルス中和抗体力価を生じるのに十分であることが示された。 This embodiment has been shown by the inventors to be particularly useful for inducing an immune response against SARS-CoV-2. In this context, it has already been shown that one vaccination is sufficient to generate virus-neutralizing antibody titers.

特に好ましい実施形態では、RNA配列は、少なくとも70個のアデノシンヌクレオチドのポリ(A)配列を含み、ここで、3'末端のヌクレオチドは、アデノシンヌクレオチドである。 In particularly preferred embodiments, the RNA sequence comprises a poly(A) sequence of at least 70 adenosine nucleotides, where the 3' terminal nucleotide is an adenosine nucleotide.

この文脈では、アデノシンヌクレオチドで終わることは、RNAワクチンによるIFNアルファの誘導を減少することが示されている。IFNアルファの誘導は、もちろん、回避されなければならない、ワクチン接種された対象における発熱の誘導のための主要な要因であると考えられているため、これは特に重要である。 In this context, ending with adenosine nucleotides has been shown to reduce the induction of IFN alpha by RNA vaccines. This is of particular importance since the induction of IFN alpha is thought to be a major factor for the induction of fever in vaccinated subjects, which of course must be avoided.

好ましい実施形態では、RNAのポリ(A)配列は、RNA in vitro転写中にDNA鋳型から得られる。他の実施形態では、ポリ(A)配列は、必ずしもDNA鋳型から転写されるわけではなく、一般的な化学合成方法によってin vitroで得られる。他の実施形態では、ポリ(A)配列は、市販のポリアデニル化キット及び当該技術分野で公知の対応するプロトコールを使用した、RNAの酵素ポリアデニル化(RNA in vitro転写後)によって、又は代わりに、例えば、WO2016/174271に記載される方法及び手段を使用した、固定化ポリ(A)ポリメラーゼを使用することによって生成され、WO2016/174271の内容全体が、参照により本明細書に取り込まれる。 In a preferred embodiment, the RNA poly(A) sequence is obtained from a DNA template during RNA in vitro transcription. In other embodiments, the poly(A) sequence is not necessarily transcribed from a DNA template, but is obtained in vitro by common chemical synthesis methods. In other embodiments, poly(A) sequences are obtained by enzymatic polyadenylation of RNA (after RNA in vitro transcription) using commercially available polyadenylation kits and corresponding protocols known in the art, or alternatively, For example, produced by using immobilized poly(A) polymerase using the methods and means described in WO2016/174271, the entire contents of which are incorporated herein by reference.

一部の実施形態では、RNAは、酵素ポリアデニル化によって得られるポリ(A)配列を含み、RNA分子の大部分は、約100(+/-20)～約500(+/-50)、好ましくは、約250(+/-20)個のアデノシンヌクレオチドを含む。 In some embodiments, the RNA comprises a poly(A) sequence obtained by enzymatic polyadenylation, and the majority of the RNA molecules are about 100 (+/-20) to about 500 (+/-50), preferably contains approximately 250 (+/-20) adenosine nucleotides.

他の実施形態では、RNAは、鋳型DNAから誘導されるポリ(A)配列及び例えば、WO2016/091391に記載される、酵素ポリアデニル化によって生成される少なくとも1つのさらなるポリ(A)配列を含み、WO2016/091391の内容全体が、参照により本明細書に取り込まれる。 In other embodiments, the RNA comprises a poly(A) sequence derived from the template DNA and at least one additional poly(A) sequence generated by enzymatic polyadenylation, e.g. as described in WO2016/091391; The entire contents of WO2016/091391 are incorporated herein by reference.

さらなる実施形態では、RNAは、少なくとも1つのポリ(C)配列を含む。 In further embodiments, the RNA comprises at least one poly(C) sequence.

本明細書で使用される場合、用語「ポリ(C)配列」は、最大約200個のシトシンヌクレオチドのシトシンヌクレオチドの配列であることが意図される。好ましい実施形態では、ポリ(C)配列は、約10～約200個のシトシンヌクレオチド、約10～約100個のシトシンヌクレオチド、約20～約70個のシトシンヌクレオチド、約20～約60個のシトシンヌクレオチド、又は約10～約40個のシトシンヌクレオチドを含む。特に好ましい実施形態では、ポリ(C)配列は、約30個のシトシンヌクレオチドを含む。 As used herein, the term "poly(C) sequence" is intended to be a sequence of cytosine nucleotides of up to about 200 cytosine nucleotides. In preferred embodiments, the poly(C) sequence comprises about 10 to about 200 cytosine nucleotides, about 10 to about 100 cytosine nucleotides, about 20 to about 70 cytosine nucleotides, about 20 to about 60 cytosine nucleotides. nucleotides, or about 10 to about 40 cytosine nucleotides. In particularly preferred embodiments, the poly(C) sequence comprises about 30 cytosine nucleotides.

好ましい実施形態では、本発明のRNAは、少なくとも1つのヒストンステムループ(hSL)を含む。 In a preferred embodiment, the RNA of the invention comprises at least one histone stem loop (hSL).

用語「ヒストンステムループ」(例えば、配列表において「hSL」と略される)は、ヒストンmRNAで主に見られるステムループ二次構造を形成する核酸配列を指すことが意図される。 The term "histone stem-loop" (eg, abbreviated as "hSL" in the sequence listing) is intended to refer to nucleic acid sequences that form the stem-loop secondary structure found primarily in histone mRNAs.

ヒストンステム-ループ配列/構造は、好適には、WO2012/019780に開示されるヒストンステムループ配列から選択され得、WO2012/01978号の内容全体が、参照により本明細書に取り込まれ、ヒストンステムループ配列/ヒストンステムループ構造に関する開示が、参照により本明細書に取り込まれる。本発明内で使用され得るヒストンステムループ配列は、好ましくは、WO2012/019780の式(I)又は(II)から誘導され得る。さらなる好ましい実施形態によると、RNAは、特許出願WO2012/019780の特定の式(Ia)又は(IIa)の少なくとも1つから誘導される少なくとも1つのヒストンステムループ配列を含む。 The histone stem-loop sequences/structures may suitably be selected from the histone stem-loop sequences disclosed in WO2012/019780, the entire contents of which are incorporated herein by reference, and the histone stem-loop sequences/structures The disclosure regarding sequences/histone stem-loop structures is incorporated herein by reference. Histone stem-loop sequences that can be used within the present invention can preferably be derived from formula (I) or (II) of WO2012/019780. According to a further preferred embodiment, the RNA comprises at least one histone stem-loop sequence derived from at least one of the specific formulas (Ia) or (IIa) of patent application WO2012/019780.

好ましい実施形態では、本発明のRNAは、少なくとも1つのヒストンステムループを含み、前記ヒストンステムループ(hSL)は、配列番号178若しくは179、と同一であるか、又は少なくとも70%、80%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一である核酸配列又はそのフラグメント若しくはバリアントを含むか、又はそれからなる。 In a preferred embodiment, the RNA of the invention comprises at least one histone stem loop, said histone stem loop (hSL) being identical to SEQ ID NO: 178 or 179, or at least 70%, 80%, 90% %, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical to a nucleic acid sequence or a fragment or variant thereof.

他の実施形態では、RNAは、本明細書において定義されるヒストンステムループを含まない。 In other embodiments, the RNA does not include a histone stem loop as defined herein.

様々な実施形態では、RNAは、3'末端の配列エレメントを含む。前記3'末端の配列エレメントは、ポリ(A)配列及び場合により、ヒストンステムループ配列を含む。したがって、本発明のRNAは、配列番号254、22893、22903、26997、26999、28529、28531、28533、28535、28537、28539と同一であるか、又は少なくとも70%、80%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一である核酸配列又はそのフラグメント若しくはバリアントを含むか、又はそれからなる少なくとも1つの3'末端の配列エレメントを含む。 In various embodiments, the RNA includes a 3' terminal sequence element. The 3' terminal sequence element includes a poly(A) sequence and optionally a histone stem loop sequence. Therefore, the RNA of the invention is at least 70%, 80%, 90%, 91% identical to SEQ ID NO: 254, 22893, 22903, 26997, 26999, 28529, 28531, 28533, 28535, 28537, 28539. , 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical to a nucleic acid sequence, or a fragment or variant thereof. Contains elements.

好ましい実施形態では、RNAは、3'末端の配列エレメントを含む。前記3'末端の配列エレメントは、ポリ(A)配列を含む。したがって、本発明の核酸は、配列番号254、22903、26999、28531、28525、28539と同一であるか、又は少なくとも70%、80%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一である核酸配列又はそのフラグメント若しくはバリアントを含むか、又はそれからなる少なくとも1つの3'末端の配列エレメントを含む。 In a preferred embodiment, the RNA includes sequence elements at the 3' end. The 3' terminal sequence element includes a poly(A) sequence. Thus, the nucleic acids of the invention are at least 70%, 80%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, At least one 3' terminal sequence element that comprises or consists of a nucleic acid sequence, or a fragment or variant thereof, that is 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical.

好ましい実施形態では、RNAは、3'末端の配列エレメントを含む。前記3'末端の配列エレメントは、ポリ(A)配列及びヒストンステムループ配列を含む。したがって、本発明の核酸は、配列番号254、22893、26997、28529、28533、28537と同一であるか、又は少なくとも70%、80%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一である核酸配列又はそのフラグメント若しくはバリアントを含むか、又はそれからなる少なくとも1つの3'末端の配列エレメントを含む。 In a preferred embodiment, the RNA includes sequence elements at the 3' end. The 3' terminal sequence elements include a poly(A) sequence and a histone stem loop sequence. Thus, the nucleic acids of the invention are identical to, or at least 70%, 80%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, At least one 3' terminal sequence element that comprises or consists of a nucleic acid sequence, or a fragment or variant thereof, that is 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical.

様々な実施形態では、RNAは、配列番号176、177若しくは22840～22844に記載の5'末端の配列エレメント、又はそのフラグメント若しくはバリアントを含んでもよい。 In various embodiments, the RNA may include a 5' terminal sequence element set forth in SEQ ID NO: 176, 177, or 22840-22844, or a fragment or variant thereof.

さらなる実施形態では、RNAは、配列番号176、177若しくは22840～22844に記載の5'末端の配列エレメント、又はそのフラグメント若しくはバリアントを含んでもよい。このような5'末端の配列エレメントは、例えば、T7 RNAポリメラーゼの結合部位を含む。さらに、前記5'末端の開始配列の第一のヌクレオチドは、好ましくは、2'Oメチル化、例えば、2'Oメチル化されたグアノシン又は2'Oメチル化されたアデノシンを含んでもよい。 In further embodiments, the RNA may comprise a 5' terminal sequence element set forth in SEQ ID NO: 176, 177 or 22840-22844, or a fragment or variant thereof. Such 5' terminal sequence elements include, for example, a binding site for T7 RNA polymerase. Furthermore, the first nucleotide of said 5'-terminal initiation sequence may preferably comprise 2'O-methylated, for example a 2'O-methylated guanosine or a 2'O-methylated adenosine.

好ましい実施形態では、少なくとも1つの異種5'UTRは、HSD17B4由来の5'UTRから誘導された核酸配列を含むか、又はそれからなり、少なくとも1つの異種3'UTRは、PSMB3の3'UTRから誘導される核酸配列を含むか、又はそれからなる。ある特定の実施形態では、HSD17B4由来の5'UTRは、配列番号232と少なくとも約95%、96%、97%、98%～99%同一である。一部の実施形態では、PSMB3の3'UTRは、配列番号254と少なくとも約95%、96%、97%、98%～99%同一である。特に好ましい実施形態では、RNAは、5'から3'に、i)5'キャップ1構造;ii)HSD17B4遺伝子の5'UTRから誘導された、好ましくは、配列番号232に記載の5'UTR;iii)少なくとも1つのコード配列(実施形態のSARS-CoVスパイク抗原をコードする);iv)PSMB3遺伝子の3'UTRから誘導される、好ましくは、配列番号254に記載の3'UTR;v)場合により、ヒストンステムループ配列;及びvi)約100個のAヌクレオチドを含むポリ(A)配列を含み、前記RNAの3'末端のヌクレオチドは、アデノシンである。 In a preferred embodiment, the at least one heterologous 5'UTR comprises or consists of a nucleic acid sequence derived from a 5'UTR from HSD17B4, and the at least one heterologous 3'UTR is derived from a 3'UTR from PSMB3. or consisting of a nucleic acid sequence. In certain embodiments, the 5'UTR from HSD17B4 is at least about 95%, 96%, 97%, 98%-99% identical to SEQ ID NO: 232. In some embodiments, the 3'UTR of PSMB3 is at least about 95%, 96%, 97%, 98%-99% identical to SEQ ID NO: 254. In a particularly preferred embodiment, the RNA comprises, 5' to 3', i) a 5' cap 1 structure; ii) a 5' UTR derived from the 5' UTR of the HSD17B4 gene, preferably as set forth in SEQ ID NO: 232; iii) at least one coding sequence (encoding the SARS-CoV spike antigen of an embodiment); iv) the 3'UTR derived from the 3'UTR of the PSMB3 gene, preferably as set forth in SEQ ID NO: 254; v) if and vi) a poly(A) sequence comprising about 100 A nucleotides, the nucleotide at the 3' end of said RNA being adenosine.

好ましくは、RNAは、約50～約20000個のヌクレオチド、又は約500～約10000個のヌクレオチド、又は約1000～約10000個のヌクレオチド、又は好ましくは、約1000～約5000個のヌクレオチド、又はなおより好ましくは、約2000～約5000個のヌクレオチドを含む。 Preferably, the RNA has about 50 to about 20,000 nucleotides, or about 500 to about 10,000 nucleotides, or about 1,000 to about 10,000 nucleotides, or preferably about 1,000 to about 5,000 nucleotides, or even More preferably, it contains about 2000 to about 5000 nucleotides.

特に好ましい実施形態によると、RNAは、コードRNAである。好ましい実施形態では、コードRNAは、mRNA、(コード)自己複製RNA、(コード)環状RNA、(コード)ウイルスRNA、又は(コード)レプリコンRNAから選択され得る。 According to a particularly preferred embodiment, the RNA is coding RNA. In a preferred embodiment, the coding RNA may be selected from mRNA, (coding) self-replicating RNA, (coding) circular RNA, (coding) viral RNA, or (coding) replicon RNA.

他の実施形態では、コードRNAは、環状RNAである。本明細書で使用される場合、「環状RNA」又は「circRNA」は、本明細書において定義される少なくとも1つの抗原性ペプチド又はタンパク質をコードする環状ポリヌクレオチド構築物として理解されなければならない。好ましくは、このようなcircRNAは、一本鎖RNA分子である。好ましい実施形態では、前記circRNAは、SARS-CoV-2コロナウイルス由来の少なくとも1つの抗原性タンパク質、又はその免疫原性フラグメント若しくは免疫原性バリアントをコードする少なくとも1つのコード配列を含む。 In other embodiments, the coding RNA is circular RNA. As used herein, "circular RNA" or "circRNA" shall be understood as a circular polynucleotide construct encoding at least one antigenic peptide or protein as defined herein. Preferably such circRNAs are single-stranded RNA molecules. In a preferred embodiment, said circRNA comprises at least one coding sequence encoding at least one antigenic protein from the SARS-CoV-2 coronavirus, or an immunogenic fragment or variant thereof.

さらなる実施形態では、コードRNAは、レプリコンRNAである。用語「レプリコンRNA」は、当業者によって認識され、理解され、例えば、最適化された自己複製RNAであることが意図される。このような構築物は、例えば、アルファウイルス(例えば、SFV、SIN、VEE、又はRRV)から誘導されるレプリカーゼエレメント及び構造ウイルスタンパク質の目的の核酸(すなわち、SARS-CoV-2コロナウイルスの抗原性ペプチド又はタンパク質をコードするコード配列)での置換を含んでもよい。或いは、レプリカーゼは、非依存性コードRNA構築物又はコードDNA構築物において提供されてもよい。レプリカーゼの下流は、レプリコンRNAの複製を制御するサブゲノムプロモーターであってもよい。 In further embodiments, the coding RNA is a replicon RNA. The term "replicon RNA" is recognized and understood by those skilled in the art and is intended to be, for example, an optimized self-replicating RNA. Such constructs include, for example, replicase elements derived from alphaviruses (e.g., SFV, SIN, VEE, or RRV) and structural viral proteins of the nucleic acids of interest (i.e., antigenic peptides of the SARS-CoV-2 coronavirus). or a coding sequence encoding a protein). Alternatively, the replicase may be provided in an independent encoding RNA or DNA construct. Downstream of the replicase may be a subgenomic promoter that controls replication of the replicon RNA.

特に好ましい実施形態では、少なくとも1つの核酸は、レプリコンRNAでも自己複製RNAでもない。 In particularly preferred embodiments, the at least one nucleic acid is neither a replicon RNA nor a self-replicating RNA.

特に好ましい実施形態では、本発明のRNAは、mRNAである。 In particularly preferred embodiments, the RNA of the invention is mRNA.

好ましくは、mRNAは、レプリカーゼエレメント(例えば、レプリカーゼをコードする核酸)を含まない。 Preferably, the mRNA does not include a replicase element (eg, a replicase-encoding nucleic acid).

用語「RNA」及び「mRNA」は、当業者によって認識され、理解され、例えば、リボ核酸分子、すなわち、ヌクレオチドからなるポリマーであることが意図される。これらのヌクレオチドは、通常、いわゆる骨格に沿って互いに接続されている、アデノシン-一リン酸、ウリジン-一リン酸、グアノシン-一リン酸及びシチジン-一リン酸モノマーである。骨格は、隣接する第一のモノマーの糖、すなわちリボースと、第二のモノマーのリン酸部分の間のホスホジエステル結合によって形成される。モノマーの特定の連続は、RNA配列と呼ばれる。mRNA(メッセンジャーRNA)は、特定のペプチド又はタンパク質のアミノ酸配列に翻訳され得るヌクレオチドコード配列をもたらす。 The terms "RNA" and "mRNA" are recognized and understood by those skilled in the art and are intended, for example, to be ribonucleic acid molecules, ie, polymers composed of nucleotides. These nucleotides are usually adenosine-monophosphate, uridine-monophosphate, guanosine-monophosphate and cytidine-monophosphate monomers, which are connected to each other along a so-called backbone. The backbone is formed by phosphodiester bonds between the adjacent sugar, ie, ribose, of the first monomer and the phosphate moiety of the second monomer. A specific sequence of monomers is called an RNA sequence. mRNA (messenger RNA) provides a nucleotide coding sequence that can be translated into the amino acid sequence of a specific peptide or protein.

本発明の文脈では、RNA、好ましくは、mRNAは、投与後(例えば、対象、例えば、ヒト対象への投与後)(機能的)抗原に翻訳される、本明細書において定義されるSARS-CoV-2スパイクタンパク質由来の抗原性タンパク質をコードする少なくとも1つのコード配列をもたらす。 In the context of the present invention, RNA, preferably mRNA, is a SARS-CoV as defined herein that is translated into a (functional) antigen after administration (e.g. to a subject, e.g. a human subject). -2 provides at least one coding sequence encoding an antigenic protein derived from the spike protein.

好ましい実施形態では、RNA、好ましくは、mRNAは、SARS-CoV-2ワクチン、好ましくは、以下のSARS-CoV-2分離株:C.1.2(南アフリカ)、B.1.1.529(オミクロン、南アフリカ)(BA.1_v1、BA.1_v0、B.1.1.529、BA.2、BA.1_v2、BA.1_v3、BA.1_v4、BA.1_v5を含む)、C.36.3(タイ)、B.1.619(カメルーン)、R.1(ケンタッキー、米国)、B.1.1.176(カナダ)、AZ.3、AY.1(インド)、AY.2(インド)、AY.4(インド)、AY.4.2(デルタプラス、インド)、B.1.617.3(インド)、B.1.351(ベータ、南アフリカ)、B.1.1.7(アルファ、英国)、P.1(ガンマ、ブラジル)、B.1.427/B.1.429(イプシロン、カリフォルニア、米国)、B.1.525(エータ、ナイジェリア)、B.1.258(チェコ共和国)、B.1.526(イオタ、ニューヨーク、米国)、A.23.1(ウガンダ)、B.1.617.1(カッパー、インド)、B.1.617.2(デルタ、インド)、P.2(ゼータ、ブラジル)、C37.1(ラムダ、ペルー)、P.3(シータ、フィリピン)、及び/又はB.1.621(ミュー、コロンビア)の少なくとも1つに対するSARS-CoV-2ワクチンに適している。 In a preferred embodiment, the RNA, preferably mRNA, is a SARS-CoV-2 vaccine, preferably the following SARS-CoV-2 isolates: C.1.2 (South Africa), B.1.1.529 (Omicron, South Africa) (including BA.1_v1, BA.1_v0, B.1.1.529, BA.2, BA.1_v2, BA.1_v3, BA.1_v4, BA.1_v5), C.36.3 (Thailand), B.1.619 (Cameroon) ), R.1 (Kentucky, USA), B.1.1.176 (Canada), AZ.3, AY.1 (India), AY.2 (India), AY.4 (India), AY.4.2 (Delta) Plus, India), B.1.617.3 (India), B.1.351 (Beta, South Africa), B.1.1.7 (Alpha, UK), P.1 (Gamma, Brazil), B.1.427/B.1.429 (Epsilon, California, USA), B.1.525 (Eta, Nigeria), B.1.258 (Czech Republic), B.1.526 (Iota, New York, USA), A.23.1 (Uganda), B.1.617.1 (Kappa , India), B.1.617.2 (Delta, India), P.2 (Zeta, Brazil), C37.1 (Lambda, Peru), P.3 (Theta, Philippines), and/or B.1.621 (Mu , Colombia).

特に好ましい実施形態では、RNA、好ましくは、mRNAは、SARS-CoV-2ワクチン、好ましくは、B.1.351(南アフリカ)又はB.1.1.529(オミクロン、南アフリカ)(BA.1_v1、BA.1_v0、B.1.1.529、BA.2、BA.1_v2、BA.1_v3、BA.1_v4、BA.1_v5を含む)に対するSARS-CoV-2ワクチンに適している。 In a particularly preferred embodiment, the RNA, preferably mRNA, is a SARS-CoV-2 vaccine, preferably B.1.351 (South Africa) or B.1.1.529 (Omicron, South Africa) (BA.1_v1, BA.1_v0, B.1.1.529, BA.2, BA.1_v2, BA.1_v3, BA.1_v4, BA.1_v5).

好適には、RNAは、5'キャップ構造の付加によって修飾されてもよく、これにより好ましくは、RNAを安定化し、及び/又はコードされる抗原の発現を強化し、及び/又は自然免疫系(対象への投与後)の刺激を低減する。5'キャップ構造は、RNAが、直鎖コードRNA、例えば、直鎖mRNA又は直鎖コードレプリコンRNAである、実施形態において特に重要なものである。 Suitably, the RNA may be modified by the addition of a 5' cap structure, which preferably stabilizes the RNA and/or enhances expression of the encoded antigen and/or inhibits the innate immune system ( after administration to the subject). The 5' cap structure is of particular importance in embodiments where the RNA is a linear encoding RNA, such as a linear mRNA or a linear encoding replicon RNA.

したがって、好ましい実施形態では、RNA、特に、mRNAは、5'キャップ構造、好ましくは、キャップ0、キャップ1、キャップ2、修飾されたキャップ0、又は修飾されたキャップ1構造を含む。 Thus, in a preferred embodiment, the RNA, in particular the mRNA, comprises a 5' cap structure, preferably a cap0, cap1, cap2, modified cap0, or modified cap1 structure.

本明細書で使用される場合、用語「5'キャップ構造」は、当業者によって認識され、理解され、例えば、RNA、例えば、mRNAの5'末端に位置する、5'修飾されたヌクレオチド、特に、グアニンヌクレオチドを指すことが意図される。好ましくは、5'キャップ構造は、RNAへの5'-5'-三リン酸結合を介して接続される。 As used herein, the term "5' cap structure" is recognized and understood by those skilled in the art and includes, for example, a 5' modified nucleotide located at the 5' end of an RNA, e.g. , is intended to refer to a guanine nucleotide. Preferably, the 5' cap structure is connected via a 5'-5'-triphosphate bond to the RNA.

本発明の文脈で好適であり得る5'キャップ構造は、キャップ0(第一の核酸塩基、例えば、m7GpppNのメチル化)、キャップ1(m7GpppNの隣接するヌクレオチドのリボースのさらなるメチル化)、キャップ2(m7GpppNの下流の2番目のヌクレオチドのリボースのさらなるメチル化)、キャップ3(m7GpppNの下流の3番目のヌクレオチドのリボースのさらなるメチル化)、キャップ4(m7GpppNの下流の4番目のヌクレオチドのリボースのさらなるメチル化)、ARCA(抗リバースキャップアナログ)、修飾されたARCA(例えば、ホスホチオエート修飾されたARCA)、イノシン、N1-メチル-グアノシン、2'-フルオロ-グアノシン、7-デアザ-グアノシン、8-オキソ-グアノシン、2-アミノ-グアノシン、LNA-グアノシン、及び2-アジド-グアノシンである。 5' cap structures that may be suitable in the context of the present invention are cap 0 (methylation of the first nucleobase, e.g. m7GpppN), cap 1 (further methylation of the ribose of the adjacent nucleotide of m7GpppN), cap 2 (further methylation of the ribose at the second nucleotide downstream of m7GpppN), cap 3 (further methylation of the ribose at the third nucleotide downstream of m7GpppN), cap 4 (further methylation of the ribose at the fourth nucleotide downstream of m7GpppN), further methylation), ARCA (anti-reverse cap analog), modified ARCA (e.g. phosphothioate modified ARCA), inosine, N1-methyl-guanosine, 2'-fluoro-guanosine, 7-deaza-guanosine, 8- These are oxo-guanosine, 2-amino-guanosine, LNA-guanosine, and 2-azido-guanosine.

5'キャップ(キャップ0又はキャップ1)構造は、化学的RNA合成で、又はキャップアナログを使用したRNA in vitro転写(同時転写キャッピング)で形成することができる。 The 5' cap (cap 0 or cap 1) structure can be formed by chemical RNA synthesis or by RNA in vitro transcription using cap analogs (co-transcriptional capping).

本明細書で使用される場合、用語「キャップアナログ」は、当業者によって認識され、理解され、例えば、それが、翻訳若しくは局在性を促進し、及び/又は核酸分子の5'末端で取り込まれた場合、核酸分子、特に、RNA分子の分解を予防するという点で、キャップ機能性を有する重合不可能なジ-ヌクレオチド又はトリ-ヌクレオチドを指すことが意図される。重合不可能は、キャップアナログは、5'三リン酸を有さず、したがって、鋳型依存性ポリメラーゼによって、特に、鋳型依存性RNAポリメラーゼによって、3'方向に伸長することができないため、5'末端でのみ取り込まれることを意味する。キャップアナログの例は、限定するものではないが、m7GpppG、m7GpppA、m7GpppC;非メチル化キャップアナログ(例えば、GpppG);ジメチル化キャップアナログ(例えば、m2,7GpppG)、トリメチル化キャップアナログ(例えば、m2,2,7GpppG)、ジメチル化対称キャップアナログ(例えば、m7Gpppm7G)、又は抗リバースキャップアナログ(例えば、ARCA;m7,2'OmeGpppG、m7,2'dGpppG、m7,3'OmeGpppG、m7,3'dGpppG及びそれらのテトラリン酸誘導体)からなる群から選択される化学構造を含む。さらなるキャップアナログは、以前に記載されている(WO2008/016473、WO2008/157688、WO2009/149253、WO2011/015347、及びWO2013/059475)。その文脈でのさらなる好適なキャップアナログは、WO2017/066793、WO2017/066781、WO2017/066791、WO2017/066789、WO2017/053297、WO2017/066782、WO2018/075827及びWO2017/066797に記載され、キャップアナログに関する開示は、参照により本明細書に取り込まれる。 As used herein, the term "cap analog" is recognized and understood by those skilled in the art and is intended to be used, for example, to facilitate translation or localization and/or to incorporate at the 5' end of a nucleic acid molecule. When used, it is intended to refer to a non-polymerizable di- or tri-nucleotide that has cap functionality in preventing degradation of nucleic acid molecules, especially RNA molecules. Non-polymerizable means that the cap analog does not have a 5' triphosphate and therefore cannot be extended in the 3' direction by template-dependent polymerases, especially by template-dependent RNA polymerases at the 5' end. This means that it can only be imported. Examples of cap analogs include, but are not limited to, m7GpppG, m7GpppA, m7GpppC; unmethylated cap analogs (e.g., GpppG); dimethylated cap analogs (e.g., m2,7GpppG), trimethylated cap analogs (e.g., m2, ,2,7GpppG), dimethylated symmetric cap analogs (e.g., m7Gpppm7G), or anti-reverse cap analogs (e.g., ARCA; and their tetraphosphate derivatives). Additional cap analogs have been previously described (WO2008/016473, WO2008/157688, WO2009/149253, WO2011/015347, and WO2013/059475). Further suitable cap analogs in that context are described in WO2017/066793, WO2017/066781, WO2017/066791, WO2017/066789, WO2017/053297, WO2017/066782, WO2018/075827 and WO2017/066797, disclosures regarding cap analogs. is incorporated herein by reference.

一部の実施形態では、修飾されたキャップ1構造は、WO2017/053297、WO2017/066793、WO2017/066781、WO2017/066791、WO2017/066789、WO2017/066782、WO2018/075827及びWO2017/066797に開示されるトリ-ヌクレオチドキャップアナログを使用して生成され、前述のPCT出願の内容全体が、参照により本明細書に取り込まれる。特に、WO2017/053297の請求項1～5に開示される構造から誘導可能な任意のキャップ構造を適当に使用して、修飾されたキャップ構造1を同時転写的に生成してもよい。さらに、WO2018/075827の請求項1又は請求項21に定義される構造から誘導可能な任意のキャップ構造を適当に使用して、修飾されたキャップ構造1を同時転写的に生成してもよい。 In some embodiments, the modified cap 1 structure is disclosed in WO2017/053297, WO2017/066793, WO2017/066781, WO2017/066791, WO2017/066789, WO2017/066782, WO2018/075827 and WO2017/066797 generated using tri-nucleotide cap analogs, the entire contents of the aforementioned PCT applications are incorporated herein by reference. In particular, any cap structure derivable from the structures disclosed in claims 1 to 5 of WO2017/053297 may be suitably used to generate the modified cap structure 1 co-transcriptionally. Furthermore, any cap structure derivable from the structure defined in claim 1 or claim 21 of WO2018/075827 may be suitably used to generate the modified cap structure 1 co-transcriptionally.

好ましい実施形態では、RNA、特に、mRNAは、キャップ1構造を含む。 In a preferred embodiment, the RNA, particularly the mRNA, comprises a cap 1 structure.

好ましい実施形態では、5'キャップ構造は、好適には、本明細書において定義されるRNA in vitro転写反応において、本明細書において定義されるトリ-ヌクレオチドキャップアナログを使用して同時転写的に付加されてもよい。 In a preferred embodiment, the 5' cap structure is added co-transcriptionally, preferably using a tri-nucleotide cap analog as defined herein, in an RNA in vitro transcription reaction as defined herein. may be done.

好ましい実施形態では、本発明のコードRNAのキャップ1構造は、トリ-ヌクレオチドキャップアナログm7G(5')ppp(5')(2'OMeA)pG又はm7G(5')ppp(5')(2'OMeG)pGを使用した同時転写キャッピングを使用して形成される。その文脈での好ましいキャップ1アナログは、m7G(5')ppp(5')(2'OMeA)pGである。 In a preferred embodiment, the cap1 structure of the coding RNA of the invention is the tri-nucleotide cap analog m7G(5')ppp(5')(2'OMeA)pG or m7G(5')ppp(5')(2 'OMeG) formed using co-transcriptional capping with pG. A preferred cap1 analog in that context is m7G(5')ppp(5')(2'OMeA)pG.

他の好ましい実施形態では、本発明のRNAのキャップ1構造は、トリ-ヌクレオチドキャップアナログ3'OMe-m7G(5')ppp(5')(2'OMeA)pGを使用した同時転写キャッピングを使用して形成される。 In other preferred embodiments, the cap 1 structure of the RNA of the invention uses co-transcriptional capping with the tri-nucleotide cap analog 3'OMe-m7G(5')ppp(5')(2'OMeA)pG. It is formed by

他の実施形態では、本発明のRNAのキャップ0構造は、キャップアナログ3'OMe-m7G(5')ppp(5')Gを使用した同時転写キャッピングを使用して形成される。 In other embodiments, cap0 structures of RNAs of the invention are formed using co-transcriptional capping with the cap analog 3'OMe-m7G(5')ppp(5')G.

他の実施形態では、5'キャップ構造を、キャッピング酵素(例えば、ワクシニアウイルスキャッピング酵素及び/又はキャップ依存性2'-Oメチルトランスフェラーゼ)を使用した酵素キャッピングを介して形成して、キャップ0又はキャップ1又はキャップ2構造を生成する。5'キャップ構造(キャップ0又はキャップ1)は、WO2016/193226に開示される方法及び手段を使用した固定化キャッピング酵素及び/又はキャップ依存性2'-Oメチルトランスフェラーゼを使用して付加されてもよく、WO2016/193226の内容全体は、参照により本明細書に取り込まれる。 In other embodiments, the 5' cap structure is formed via enzymatic capping using a capping enzyme (e.g., vaccinia virus capping enzyme and/or cap-dependent 2'-O methyltransferase) to 1 or generate cap 2 structures. The 5' cap structure (cap 0 or cap 1) may be added using an immobilized capping enzyme and/or a cap-dependent 2'-O methyltransferase using the methods and means disclosed in WO2016/193226. Well, the entire contents of WO2016/193226 are incorporated herein by reference.

好ましい実施形態では、RNA(種)の約70%、75%、80%、85%、90%、95%は、キャッピングアッセイを使用して決定されたキャップ1構造を含む。好ましい実施形態では、RNA(種)の約20%、15%、10%、5%、4%、3%、2%、1%未満は、キャッピングアッセイを使用して決定されたキャップ1構造を含まない。他の好ましい実施形態では、RNA(種)の約70%、75%、80%、85%、90%、95%は、キャッピングアッセイを使用して決定されたキャップ0構造を含む。好ましい実施形態では、RNA(種)の約20%、15%、10%、5%、4%、3%、2%、1%未満は、キャッピングアッセイを使用して決定されたキャップ0構造を含まない。 In a preferred embodiment, about 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% of the RNA(species) contains a cap 1 structure determined using a capping assay. In preferred embodiments, less than about 20%, 15%, 10%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1% of the RNA(species) has a Cap1 structure determined using a capping assay. Not included. In other preferred embodiments, about 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% of the RNA(species) comprises a cap0 structure determined using a capping assay. In preferred embodiments, less than about 20%, 15%, 10%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1% of the RNA(species) has a cap0 structure determined using a capping assay. Not included.

用語「RNA種」は、「1つの単一分子」を意味するよう限定されず、本質的に同一のRNA分子のアンサンブルを含むと理解される。したがって、それは、複数の本質的に同一の(コード)RNA分子に関し得る。 The term "RNA species" is not limited to mean "one single molecule" but is understood to include ensembles of essentially identical RNA molecules. Therefore, it may relate to a plurality of essentially identical (encoding) RNA molecules.

キャップ0又はキャップ1構造の存在/非存在を決定するため、内容全体が参照により本明細書に取り込まれる、公開されたPCT出願WO第2015/101416に記載される、特に、公開されたPCT出願WO2015/101416の請求項27～46に記載されるキャッピングアッセイを使用することができる。RNAのキャップ0又はキャップ1構造の存在/非存在を決定するために使用され得る他のキャッピングアッセイは、PCT/EP2018/08667、又は公開されたPCT出願WO2014/152673及びWO2014/152659に記載され、前述のPCT出願の内容全体が、参照により本明細書に取り込まれる。 For determining the presence/absence of a cap 0 or cap 1 structure, in particular the published PCT application as described in published PCT application WO 2015/101416, the entire contents of which are hereby incorporated by reference. The capping assay described in claims 27 to 46 of WO2015/101416 can be used. Other capping assays that can be used to determine the presence/absence of Cap0 or Cap1 structures in RNA are described in PCT/EP2018/08667, or in published PCT applications WO2014/152673 and WO2014/152659, The entire contents of the aforementioned PCT applications are incorporated herein by reference.

好ましい実施形態では、RNAは、m7G(5')ppp(5')(2'OMeA)キャップ構造を含む。このような実施形態では、コードRNAは、5'末端のm7Gキャップ、及びm7GpppNの隣接するヌクレオチドのリボースのさらなるメチル化、その場合では、2'Oメチル化されたアデノシンを含む。好ましくは、RNA(種)の約70%、75%、80%、85%、90%、95%は、キャッピングアッセイを使用して決定されたこのようなキャップ1構造を含む。 In a preferred embodiment, the RNA comprises a m7G(5')ppp(5')(2'OMeA) cap structure. In such embodiments, the coding RNA includes an m7G cap at the 5' end and an additional ribose methylation of the adjacent nucleotide of m7GpppN, in that case a 2'O methylated adenosine. Preferably, about 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% of the RNA(species) contains such a cap 1 structure as determined using a capping assay.

他の好ましい実施形態では、RNAは、m7G(5')ppp(5')(2'OMeG)キャップ構造を含む。このような実施形態では、コードRNAは、5'末端のm7Gキャップ、及び隣接するヌクレオチドのリボースのさらなるメチル化、その場合では、2'Oメチル化されたグアノシンを含む。好ましくは、コードRNA(種)の約70%、75%、80%、85%、90%、95%は、キャッピングアッセイを使用して決定されたこのようなキャップ1構造を含む。 In other preferred embodiments, the RNA comprises a m7G(5')ppp(5')(2'OMeG) cap structure. In such embodiments, the coding RNA includes an m7G cap at the 5' end and additional methylation of the ribose of the adjacent nucleotide, in that case a 2'O methylated guanosine. Preferably, about 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% of the encoding RNA (species) contains such a cap 1 structure as determined using a capping assay.

したがって、前記RNA又はmRNA配列の第一のヌクレオチド、すなわち、m7G(5')ppp構造の下流のヌクレオチドは、2'Oメチル化されたグアノシン又は2'Oメチル化されたアデノシンであってもよい。 Therefore, the first nucleotide of said RNA or mRNA sequence, i.e. the nucleotide downstream of the m7G(5')ppp structure, may be a 2'O methylated guanosine or a 2'O methylated adenosine. .

一部の実施形態によると、RNAは、修飾されたRNAであり、修飾は、骨格修飾並びに糖修飾又は塩基修飾を含む化学修飾を指す。 According to some embodiments, the RNA is modified RNA, where modifications refer to chemical modifications, including backbone modifications as well as sugar or base modifications.

修飾されたRNAは、ヌクレオチドアナログ/修飾、例えば、骨格修飾、糖修飾又は塩基修飾を含んでもよい。本発明の文脈での骨格修飾は、修飾であり、ここで、RNAのヌクレオチドの骨格のリン酸は、化学的に修飾されている。本発明の文脈での糖修飾は、RNAのヌクレオチドの糖の化学修飾である。さらに、本発明の文脈での塩基修飾は、RNAのヌクレオチドの塩基部分の化学修飾である。この文脈では、ヌクレオチドアナログ又は修飾は、好ましくは、転写及び/又は翻訳に適用可能であるヌクレオチドアナログから選択される。 Modified RNA may include nucleotide analogs/modifications, such as backbone modifications, sugar modifications or base modifications. Backbone modification in the context of the present invention is a modification in which the phosphates of the backbone of the nucleotides of the RNA are chemically modified. Sugar modification in the context of the present invention is the chemical modification of the sugars of nucleotides of RNA. Furthermore, base modifications in the context of the present invention are chemical modifications of the base portion of the nucleotides of RNA. In this context, nucleotide analogs or modifications are preferably selected from nucleotide analogs that are applicable to transcription and/or translation.

特に好ましい実施形態では、本明細書に記載される修飾されたRNAに取り込まれ得るヌクレオチドアナログ/修飾は、好ましくは、2-アミノ-6-クロロプリンリボシド-5'-三リン酸、2-アミノプリン-リボシド-5'-三リン酸;2-アミノアデノシン-5'-三リン酸、2'-アミノ-2'-デオキシシチジン-三リン酸、2-チオシチジン-5'-三リン酸、2-チオウリジン-5'-三リン酸、2'-フルオロチミジン-5'-三リン酸、2'-O-メチル-イノシン-5'-三リン酸 4-チオウリジン-5'-三リン酸、5-アミノアリルシチジン-5'-三リン酸、5-アミノアリルウリジン-5'-三リン酸、5-ブロモシチジン-5'-三リン酸、5-ブロモウリジン-5'-三リン酸、5-ブロモ-2'-デオキシシチジン-5'-三リン酸、5-ブロモ-2'-デオキシウリジン-5'-三リン酸、5-ヨードシチジン-5'-三リン酸、5-ヨード-2'-デオキシシチジン-5'-三リン酸、5-ヨードウリジン-5'-三リン酸、5-ヨード-2'-デオキシウリジン-5'-三リン酸、5-メチルシチジン-5'-三リン酸、5-メチルウリジン-5'-三リン酸、5-プロピニル-2'-デオキシシチジン-5'-三リン酸、5-プロピニル-2'-デオキシウリジン-5'-三リン酸、6-アザシチジン-5'-三リン酸、6-アザウリジン-5'-三リン酸、6-クロロプリンリボシド-5'-三リン酸、7-デアザアデノシン-5'-三リン酸、7-デアザグアノシン-5'-三リン酸、8-アザアデノシン-5'-三リン酸、8-アジドアデノシン-5'-三リン酸、ベンゾイミダゾール-リボシド-5'-三リン酸、N1-メチルアデノシン-5'-三リン酸、N1-メチルグアノシン-5'-三リン酸、N6-メチルアデノシン-5'-三リン酸、O6-メチルグアノシン-5'-三リン酸、シュードウリジン-5'-三リン酸、又はピューロマイシン-5'-三リン酸、キサントシン-5'-三リン酸から選択される。5-メチルシチジン-5'-三リン酸、7-デアザグアノシン-5'-三リン酸、5-ブロモシチジン-5'-三リン酸、及びシュードウリジン-5'-三リン酸、ピリジン-4-オンリボヌクレオシド、5-アザ-ウリジン、2-チオ-5-アザ-ウリジン、2-チオウリジン、4-チオ-シュードウリジン、2-チオ-シュードウリジン、5-ヒドロキシウリジン、3-メチルウリジン、5-カルボキシメチル-ウリジン、1-カルボキシメチル-シュードウリジン、5-プロピニル-ウリジン、1-プロピニル-シュードウリジン、5-タウリノメチルウリジン、1-タウリノメチル-シュードウリジン、5-タウリノメチル-2-チオ-ウリジン、1-タウリノメチル-4-チオ-ウリジン、5-メチル-ウリジン、1-メチル-シュードウリジン、4-チオ-1-メチル-シュードウリジン、2-チオ-1-メチル-シュードウリジン、1-メチル-1-デアザ-シュードウリジン、2-チオ-1-メチル-1-デアザ-シュードウリジン、ジヒドロウリジン、ジヒドロシュードウリジン、2-チオ-ジヒドロウリジン、2-チオ-ジヒドロシュードウリジン、2-メトキシウリジン、2-メトキシ-4-チオ-ウリジン、4-メトキシ-シュードウリジン、及び4-メトキシ-2-チオ-シュードウリジン、5-アザ-シチジン、シュードイソシチジン、3-メチル-シチジン、N4-アセチルシチジン、5-ホルミルシチジン、N4-メチルシチジン、5-ヒドロキシメチルシチジン、1-メチル-シュードイソシチジン、ピロロ-シチジン、ピロロ-シュードイソシチジン、2-チオ-シチジン、2-チオ-5-メチル-シチジン、4-チオ-シュードイソシチジン、4-チオ-1-メチル-シュードイソシチジン、4-チオ-1-メチル-1-デアザ-シュードイソシチジン、1-メチル-1-デアザ-シュードイソシチジン、ゼブラリン、5-アザ-ゼブラリン、5-メチル-ゼブラリン、5-アザ-2-チオ-ゼブラリン、2-チオ-ゼブラリン、2-メトキシ-シチジン、2-メトキシ-5-メチル-シチジン、4-メトキシ-シュードイソシチジン、及び4-メトキシ-1-メチル-シュードイソシチジン、2-アミノプリン、2,6-ジアミノプリン、7-デアザ-アデニン、7-デアザ-8-アザ-アデニン、7-デアザ-2-アミノプリン、7-デアザ-8-アザ-2-アミノプリン、7-デアザ-2,6-ジアミノプリン、7-デアザ-8-アザ-2,6-ジアミノプリン、1-メチルアデノシン、N6-メチルアデノシン、N6-イソペンテニルアデノシン、N6-(シス-ヒドロキシイソペンテニル)アデノシン、2-メチルチオ-N6-(シス-ヒドロキシイソペンテニル)アデノシン、N6-グリシニルカルバモイルアデノシン、N6-スレオニルカルバモイルアデノシン、2-メチルチオ-N6-スレオニルカルバモイルアデノシン、N6,N6-ジメチルアデノシン、7-メチルアデニン、2-メチルチオ-アデニン、及び2-メトキシ-アデニン、イノシン、1-メチル-イノシン、ワイオシン、ワイブトシン、7-デアザ-グアノシン、7-デアザ-8-アザ-グアノシン、6-チオ-グアノシン、6-チオ-7-デアザ-グアノシン、6-チオ-7-デアザ-8-アザ-グアノシン、7-メチル-グアノシン、6-チオ-7-メチル-グアノシン、7-メチルイノシン、6-メトキシ-グアノシン、1-メチルグアノシン、N2-メチルグアノシン、N2,N2-ジメチルグアノシン、8-オキソ-グアノシン、7-メチル-8-オキソ-グアノシン、1-メチル-6-チオ-グアノシン、N2-メチル-6-チオ-グアノシン、及びN2,N2-ジメチル-6-チオ-グアノシン、5'-O-(1-チオホスフェート)-アデノシン、5'-O-(1-チオホスフェート)-シチジン、5'-O-(1-チオホスフェート)-グアノシン、5'-O-(1-チオホスフェート)-ウリジン、5'-O-(1-チオホスフェート)-シュードウリジン、6-アザ-シチジン、2-チオ-シチジン、アルファ-チオ-シチジン、シュードイソ-シチジン、5-アミノアリル-ウリジン、5-ヨード-ウリジン、N1-メチル-シュードウリジン、5,6-ジヒドロウリジン、アルファ-チオ-ウリジン、4-チオ-ウリジン、6-アザ-ウリジン、5-ヒドロキシ-ウリジン、デオキシ-チミジン、5-メチル-ウリジン、ピロロ-シチジン、イノシン、アルファ-チオ-グアノシン、6-メチル-グアノシン、5-メチル-シチジン、8-オキソ-グアノシン、7-デアザ-グアノシン、N1-メチル-アデノシン、2-アミノ-6-クロロ-プリン、N6-メチル-2-アミノ-プリン、シュード-イソ-シチジン、6-クロロ-プリン、N6-メチル-アデノシン、アルファ-チオ-アデノシン、8-アジド-アデノシン、7-デアザ-アデノシンからなる塩基修飾されたヌクレオチドの群から選択される塩基修飾のためのヌクレオチドが特に好ましい。 In particularly preferred embodiments, the nucleotide analogs/modifications that may be incorporated into the modified RNA described herein are preferably 2-amino-6-chloropurine riboside-5'-triphosphate, 2- Aminopurine-riboside-5'-triphosphate; 2-aminoadenosine-5'-triphosphate, 2'-amino-2'-deoxycytidine-triphosphate, 2-thiocytidine-5'-triphosphate, 2-thiouridine-5'-triphosphate, 2'-fluorothymidine-5'-triphosphate, 2'-O-methyl-inosine-5'-triphosphate 4-thiouridine-5'-triphosphate, 5-aminoallylcytidine-5'-triphosphate, 5-aminoallyluridine-5'-triphosphate, 5-bromocytidine-5'-triphosphate, 5-bromouridine-5'-triphosphate, 5-bromo-2'-deoxycytidine-5'-triphosphate, 5-bromo-2'-deoxyuridine-5'-triphosphate, 5-iodocytidine-5'-triphosphate, 5-iodo- 2'-deoxycytidine-5'-triphosphate, 5-iodouridine-5'-triphosphate, 5-iodo-2'-deoxyuridine-5'-triphosphate, 5-methylcytidine-5'- triphosphate, 5-methyluridine-5'-triphosphate, 5-propynyl-2'-deoxycytidine-5'-triphosphate, 5-propynyl-2'-deoxyuridine-5'-triphosphate, 6-azacytidine-5'-triphosphate, 6-azauridine-5'-triphosphate, 6-chloropurine riboside-5'-triphosphate, 7-deazaadenosine-5'-triphosphate, 7 -Deazaguanosine-5'-triphosphate, 8-azaadenosine-5'-triphosphate, 8-azidoadenosine-5'-triphosphate, benzimidazole-riboside-5'-triphosphate, N1- Methyladenosine-5'-triphosphate, N1-methylguanosine-5'-triphosphate, N6-methyladenosine-5'-triphosphate, O6-methylguanosine-5'-triphosphate, pseudouridine-5 '-triphosphate, or puromycin-5'-triphosphate, xanthosine-5'-triphosphate. 5-methylcytidine-5'-triphosphate, 7-deazaguanosine-5'-triphosphate, 5-bromocytidine-5'-triphosphate, and pseudouridine-5'-triphosphate, pyridine- 4-one ribonucleoside, 5-aza-uridine, 2-thio-5-aza-uridine, 2-thiouridine, 4-thio-pseudouridine, 2-thio-pseudouridine, 5-hydroxyuridine, 3-methyluridine, 5-Carboxymethyl-uridine, 1-carboxymethyl-pseudouridine, 5-propynyl-uridine, 1-propynyl-pseudouridine, 5-taurinomethyluridine, 1-taurinomethyl-pseudouridine, 5-taurinomethyl-2-thio- Uridine, 1-taurinomethyl-4-thio-uridine, 5-methyl-uridine, 1-methyl-pseudouridine, 4-thio-1-methyl-pseudouridine, 2-thio-1-methyl-pseudouridine, 1-methyl -1-deaza-pseudouridine, 2-thio-1-methyl-1-deaza-pseudouridine, dihydrouridine, dihydropseudouridine, 2-thio-dihydrouridine, 2-thio-dihydropseudouridine, 2-methoxyuridine, 2-methoxy-4-thio-uridine, 4-methoxy-pseudouridine, and 4-methoxy-2-thio-pseudouridine, 5-aza-cytidine, pseudoisocytidine, 3-methyl-cytidine, N4-acetylcytidine, 5-formylcytidine, N4-methylcytidine, 5-hydroxymethylcytidine, 1-methyl-pseudoisocytidine, pyrrolo-cytidine, pyrrolo-pseudoisocytidine, 2-thio-cytidine, 2-thio-5-methyl-cytidine, 4-thio-pseudoisocytidine, 4-thio-1-methyl-pseudoisocytidine, 4-thio-1-methyl-1-deaza-pseudoisocytidine, 1-methyl-1-deaza-pseudoisocytidine, zebularine, 5-aza-zebularine, 5-methyl-zebularine, 5-aza-2-thio-zebularine, 2-thio-zebularine, 2-methoxy-cytidine, 2-methoxy-5-methyl-cytidine, 4-methoxy-pseudoiso Cytidine, and 4-methoxy-1-methyl-pseudoisocytidine, 2-aminopurine, 2,6-diaminopurine, 7-deaza-adenine, 7-deaza-8-aza-adenine, 7-deaza-2-amino Purine, 7-deaza-8-aza-2-aminopurine, 7-deaza-2,6-diaminopurine, 7-deaza-8-aza-2,6-diaminopurine, 1-methyladenosine, N6-methyladenosine , N6-isopentenyladenosine, N6-(cis-hydroxyisopentenyl)adenosine, 2-methylthio-N6-(cis-hydroxyisopentenyl)adenosine, N6-glycinylcarbamoyladenosine, N6-threonylcarbamoyladenosine, 2-methylthio -N6-threonylcarbamoyladenosine, N6,N6-dimethyladenosine, 7-methyladenine, 2-methylthio-adenine, and 2-methoxy-adenine, inosine, 1-methyl-inosine, wyosine, wybutosine, 7-deaza-guanosine , 7-deaza-8-aza-guanosine, 6-thio-guanosine, 6-thio-7-deaza-guanosine, 6-thio-7-deaza-8-aza-guanosine, 7-methyl-guanosine, 6-thio -7-Methyl-guanosine, 7-methylinosine, 6-methoxy-guanosine, 1-methylguanosine, N2-methylguanosine, N2,N2-dimethylguanosine, 8-oxo-guanosine, 7-methyl-8-oxo-guanosine , 1-methyl-6-thio-guanosine, N2-methyl-6-thio-guanosine, and N2,N2-dimethyl-6-thio-guanosine, 5'-O-(1-thiophosphate)-adenosine, 5' -O-(1-thiophosphate)-cytidine, 5'-O-(1-thiophosphate)-guanosine, 5'-O-(1-thiophosphate)-uridine, 5'-O-(1-thiophosphate) )-pseudouridine, 6-aza-cytidine, 2-thio-cytidine, alpha-thio-cytidine, pseudoiso-cytidine, 5-aminoallyl-uridine, 5-iodo-uridine, N1-methyl-pseudouridine, 5,6- Dihydrouridine, alpha-thio-uridine, 4-thio-uridine, 6-aza-uridine, 5-hydroxy-uridine, deoxy-thymidine, 5-methyl-uridine, pyrrolo-cytidine, inosine, alpha-thio-guanosine, 6 -Methyl-guanosine, 5-methyl-cytidine, 8-oxo-guanosine, 7-deaza-guanosine, N1-methyl-adenosine, 2-amino-6-chloro-purine, N6-methyl-2-amino-purine, pseudo base-modified nucleotides selected from the group of base-modified nucleotides consisting of -iso-cytidine, 6-chloro-purine, N6-methyl-adenosine, alpha-thio-adenosine, 8-azido-adenosine, 7-deaza-adenosine. Particularly preferred are nucleotides for.

一部の実施形態では、少なくとも1つの修飾されたヌクレオチドは、シュードウリジン、N1-メチルシュードウリジン、N1-エチルシュードウリジン、2-チオウリジン、4'-チオウリジン、5-メチルシトシン、5-メチルウリジン、2-チオ-1-メチル-1-デアザ-シュードウリジン、2-チオ-1-メチル-シュードウリジン、2-チオ-5-アザ-ウリジン、2-チオ-ジヒドロシュードウリジン、2-チオ-ジヒドロウリジン、2-チオ-シュードウリジン、4-メトキシ-2-チオ-シュードウリジン、4-メトキシ-シュードウリジン、4-チオ-1-メチル-シュードウリジン、4-チオ-シュードウリジン、5-アザ-ウリジン、ジヒドロシュードウリジン、5-メトキシウリジン及び2'-O-メチルウリジンから選択される。 In some embodiments, the at least one modified nucleotide is pseudouridine, N1-methylpseudouridine, N1-ethylpseudouridine, 2-thiouridine, 4'-thiouridine, 5-methylcytosine, 5-methyluridine, 2-thio-1-methyl-1-deaza-pseudouridine, 2-thio-1-methyl-pseudouridine, 2-thio-5-aza-uridine, 2-thio-dihydropseudouridine, 2-thio-dihydrouridine , 2-thio-pseudouridine, 4-methoxy-2-thio-pseudouridine, 4-methoxy-pseudouridine, 4-thio-1-methyl-pseudouridine, 4-thio-pseudouridine, 5-aza-uridine, selected from dihydropseudouridine, 5-methoxyuridine and 2'-O-methyluridine.

一部の実施形態では、本明細書において定義されるコード配列におけるウラシルの100%は、化学修飾を有し、好ましくは、化学修飾は、ウラシルの5'位置にある。 In some embodiments, 100% of the uracils in the coding sequences defined herein have a chemical modification, preferably the chemical modification is at the 5' position of the uracil.

本発明の文脈で、シュードウリジン(ψ)、N1-メチルシュードウリジン(m1ψ)、5-メチルシトシン、及び5-メトキシウリジンが、特に好ましい。 In the context of the present invention, pseudouridine (ψ), N1-methylpseudouridine (m1ψ), 5-methylcytosine and 5-methoxyuridine are particularly preferred.

しかしながら、一部の実施形態では、本発明のRNAは、N1-メチルシュードウリジン(m1Ψ)置換された位置を含まない。さらなる態様では、実施形態のRNAは、シュードウリジン(ψ)、N1-メチルシュードウリジン(m1ψ)、5-メチルシトシン、及び5-メトキシウリジン置換された位置を含まない。依然としてさらなる実施形態では、本発明のRNAは、G、C、A及びUヌクレオチドのみからなるコード配列を含む。 However, in some embodiments, the RNA of the invention does not include a N1-methylpseudouridine (m1Ψ) substituted position. In further aspects, the RNA of embodiments does not include pseudouridine (ψ), N1-methylpseudouridine (m1ψ), 5-methylcytosine, and 5-methoxyuridine substituted positions. In yet a further embodiment, the RNA of the invention comprises a coding sequence consisting only of G, C, A and U nucleotides.

修飾されたヌクレオチド、例えば、シュードウリジン(ψ)、N1-メチルシュードウリジン(m1ψ)、5-メチルシトシン、及び/又は5-メトキシウリジンのRNAのコード配列への取り込みは、調整されるか、又は低減され得る(必要に応じて)不要な自然免疫応答(コードRNA又はワクチンの投与の際の)として有利であり得る。 The incorporation of modified nucleotides, such as pseudouridine (ψ), N1-methylpseudouridine (m1ψ), 5-methylcytosine, and/or 5-methoxyuridine into the coding sequence of the RNA is modulated or It may be advantageous as unnecessary innate immune responses (during administration of coding RNA or vaccines) may be reduced (if necessary).

一部の実施形態では、RNAは、本明細書において定義されるSARS-CoV-2抗原性タンパク質をコードする少なくとも1つのコード配列を含み、ここで、前記コード配列は、シュードウリジン(ψ)及びN1-メチルシュードウリジン(m1ψ)から選択される少なくとも1つの修飾されたヌクレオチドを含み、好ましくは、ここで、すべてのウラシルヌクレオチドは、シュードウリジン(ψ)ヌクレオチド及び/又はN1-メチルシュードウリジン(m1ψ)ヌクレオチドによって置き換えられている。 In some embodiments, the RNA comprises at least one coding sequence encoding a SARS-CoV-2 antigenic protein as defined herein, wherein the coding sequence comprises pseudouridine (ψ) and comprises at least one modified nucleotide selected from N1-methylpseudouridine (m1ψ), preferably wherein all uracil nucleotides are pseudouridine (ψ) nucleotides and/or N1-methylpseudouridine (m1ψ). ) has been replaced by a nucleotide.

好ましい実施形態では、RNAは、N1-メチルシュードウリジン(m1Ψ)置換された位置を含まない。さらなる実施形態では、RNAは、シュードウリジン(ψ)、N1-メチルシュードウリジン(m1ψ)、5-メチルシトシン、及び5-メトキシウリジン置換された位置を含まない。 In a preferred embodiment, the RNA does not contain N1-methylpseudouridine (m1Ψ) substituted positions. In further embodiments, the RNA does not include pseudouridine (ψ), N1-methylpseudouridine (m1ψ), 5-methylcytosine, and 5-methoxyuridine substituted positions.

好ましい実施形態では、RNAは、G、C、A及びUヌクレオチドのみからなるコード配列を含み、したがって、修飾されたヌクレオチド(5'末端のキャップ構造、例えば、キャップ1を除く)を含まない。 In a preferred embodiment, the RNA comprises a coding sequence consisting only of G, C, A and U nucleotides, and thus does not contain modified nucleotides (except for the 5' end cap structure, eg, cap 1).

コロナウイルスワクチンに好適な核酸、好ましくは、mRNA構築物:
様々な実施形態では、RNA、好ましくは、mRNAは、好ましくは、5'から3'の方向に以下のエレメント:
A)5'キャップ構造、好ましくは、本明細書において特定される5'キャップ構造;
B)5'末端の開始エレメント、好ましくは、本明細書において特定される5'末端の開始エレメント;
C)場合により、5'UTR、好ましくは、本明細書において特定される5'UTR;
D)リボソーム結合部位、好ましくは、本明細書において特定されるリボソーム結合部位;
E)少なくとも1つのコード配列、好ましくは、本明細書において特定される少なくとも1つのコード配列;
F)3'UTR、好ましくは、本明細書において特定される3'UTR;
G)場合により、ポリ(A)配列、好ましくは、本明細書において特定されるポリ(A)配列;
H)場合により、ポリ(C)配列、好ましくは、本明細書において特定されるポリ(C)配列;
I)場合により、ヒストンステムループ、好ましくは、本明細書において特定されるヒストンステムループ;
J)場合により、3'末端の配列エレメント、好ましくは、本明細書において特定される3'末端の配列エレメント
を含む。 Nucleic acid, preferably mRNA constructs suitable for coronavirus vaccines:
In various embodiments, the RNA, preferably mRNA, preferably includes the following elements in the 5' to 3' direction:
A) a 5' cap structure, preferably a 5' cap structure as specified herein;
B) a 5' terminal initiation element, preferably a 5' terminal initiation element as specified herein;
C) optionally a 5'UTR, preferably a 5'UTR as specified herein;
D) a ribosome binding site, preferably a ribosome binding site as specified herein;
E) at least one coding sequence, preferably at least one coding sequence specified herein;
F) 3'UTR, preferably 3'UTR as specified herein;
G) optionally a poly(A) sequence, preferably a poly(A) sequence as specified herein;
H) optionally a poly(C) sequence, preferably a poly(C) sequence as specified herein;
I) optionally a histone stem loop, preferably a histone stem loop as specified herein;
J) optionally comprising a 3' terminal sequence element, preferably a 3' terminal sequence element as specified herein.

特に好ましい実施形態では、核酸、好ましくは、mRNAは、5'から3'の方向に以下のエレメント:
A)本明細書において定義されるcap1構造;
B)本明細書において定義されるHSD17B4遺伝子から誘導される、好ましくは、配列番号231又は232に記載の5'UTR;
C)配列番号116、136、137、146、22765、22767、22769、22771、22773、22775、22777、22779、22781、22783、22785、23089～23148、23150～23184、27110～27247、28589～28637、28916、28921～28924又はそのフラグメント若しくはバリアントから選択されるコード配列;
D)本明細書において定義されるPSMB3遺伝子の3'UTRから誘導される、好ましくは、配列番号253又は254に記載の3'UTR;
E)配列番号178又は179から選択されるヒストンステムループ;
F)約100個のAヌクレオチドを含む、好ましくは、3'末端を表すポリ(A)配列
を含む。 In a particularly preferred embodiment, the nucleic acid, preferably mRNA, comprises in the 5' to 3' direction the following elements:
A) cap1 structure as defined herein;
B) 5'UTR, preferably as set forth in SEQ ID NO: 231 or 232, derived from the HSD17B4 gene as defined herein;
C) Sequence number 116, 136, 137, 146, 22765, 22767, 22769, 22771, 22773, 22775, 22777, 22779, 22781, 22783, 22785, 23089-23148, 23150-23184, 27110-27247, 28 589-28637, a coding sequence selected from 28916, 28921-28924 or a fragment or variant thereof;
D) a 3'UTR derived from the 3'UTR of the PSMB3 gene as defined herein, preferably as set forth in SEQ ID NO: 253 or 254;
E) histone stem loop selected from SEQ ID NO: 178 or 179;
F) preferably comprises a poly(A) sequence representing the 3' end, comprising about 100 A nucleotides.

さらなる好ましい実施形態では、核酸、好ましくは、mRNAは、5'から3'の方向に以下のエレメント:
A)本明細書において定義されるキャップ1構造;
B)本明細書において定義されるHSD17B4遺伝子から誘導される、好ましくは、配列番号231又は232に記載の5'UTR;
C)配列番号116、136、137、146、22765、22767、22769、22771、22773、22775、22777、22779、22781、22783、22785、23089～23148、23150～23184、27110～27247、28589～28637、28916、28921～28924又はそのフラグメント若しくはバリアントから選択されるコード配列;
D)本明細書において定義されるPSMB3遺伝子の3'UTRから誘導される、好ましくは、配列番号253又は254に記載の3'UTR;
F)約100個のAヌクレオチドを含む、好ましくは、3'末端を表すポリ(A)配列
を含む。 In a further preferred embodiment, the nucleic acid, preferably mRNA, comprises in the 5' to 3' direction the following elements:
A) Cap 1 structure as defined herein;
B) 5'UTR, preferably as set forth in SEQ ID NO: 231 or 232, derived from the HSD17B4 gene as defined herein;
C) Sequence number 116, 136, 137, 146, 22765, 22767, 22769, 22771, 22773, 22775, 22777, 22779, 22781, 22783, 22785, 23089-23148, 23150-23184, 27110-27247, 28 589-28637, a coding sequence selected from 28916, 28921-28924 or a fragment or variant thereof;
D) a 3'UTR derived from the 3'UTR of the PSMB3 gene as defined herein, preferably as set forth in SEQ ID NO: 253 or 254;
F) preferably comprises a poly(A) sequence representing the 3' end, comprising about 100 A nucleotides.

特に好ましい実施形態では、核酸、好ましくは、mRNAは、5'から3'の方向に以下のエレメント:
A)本明細書において定義されるキャップ1構造;
B)本明細書において定義されるHSD17B4遺伝子から誘導される、好ましくは、配列番号231又は232に記載の5'UTR;
C)配列番号27118、27141、27164、27187、27210、27233、28601～28606又はそのフラグメント若しくはバリアントから選択されるコード配列;
D)本明細書において定義されるPSMB3遺伝子の3'UTRから誘導される、好ましくは、配列番号253又は254記載の3'UTR;
E)配列番号178又は179から選択されるヒストンステムループ;
F)約100個のAヌクレオチドを含む、好ましくは、3'末端を表すポリ(A)配列
を含む。 In a particularly preferred embodiment, the nucleic acid, preferably the mRNA, contains in the 5' to 3' direction the following elements:
A) Cap 1 structure as defined herein;
B) 5'UTR, preferably as set forth in SEQ ID NO: 231 or 232, derived from the HSD17B4 gene as defined herein;
C) a coding sequence selected from SEQ ID NO: 27118, 27141, 27164, 27187, 27210, 27233, 28601-28606 or a fragment or variant thereof;
D) a 3'UTR derived from the 3'UTR of the PSMB3 gene as defined herein, preferably as set forth in SEQ ID NO: 253 or 254;
E) histone stem loop selected from SEQ ID NO: 178 or 179;
F) preferably comprises a poly(A) sequence representing the 3' end, comprising about 100 A nucleotides.

さらなる好ましい実施形態では、核酸、好ましくは、mRNAは、5'から3'の方向に以下のエレメント:
A)本明細書において定義されるキャップ1構造;
B)本明細書において定義されるHSD17B4遺伝子から誘導される、好ましくは、配列番号231又は232に記載の5'UTR;
C)配列番号27118、27141、27164、27187、27210、27233、28601～28606又はそのフラグメント若しくはバリアントから選択されるコード配列;
D)本明細書において定義されるPSMB3遺伝子の3'UTRから誘導される、好ましくは、配列番号253又は254に記載の3'UTR;
F)約100個のAヌクレオチドを含む、好ましくは、3'末端を表すポリ(A)配列
を含む。 In a further preferred embodiment, the nucleic acid, preferably mRNA, comprises in the 5' to 3' direction the following elements:
A) Cap 1 structure as defined herein;
B) 5'UTR, preferably as set forth in SEQ ID NO: 231 or 232, derived from the HSD17B4 gene as defined herein;
C) a coding sequence selected from SEQ ID NO: 27118, 27141, 27164, 27187, 27210, 27233, 28601-28606 or a fragment or variant thereof;
D) a 3'UTR derived from the 3'UTR of the PSMB3 gene as defined herein, preferably as set forth in SEQ ID NO: 253 or 254;
F) preferably comprises a poly(A) sequence representing the 3' end, comprising about 100 A nucleotides.

特に好ましい実施形態では、核酸、好ましくは、mRNAは、5'から3'の方向に以下のエレメント:
A)本明細書において定義されるキャップ1構造;
B)本明細書において定義されるHSD17B4遺伝子から誘導される、好ましくは、配列番号231又は232に記載の5'UTR;
C)配列番号27118、27141、27164、27187、27210、27233又はそのフラグメント若しくはバリアントから選択されるコード配列;
D)本明細書において定義されるPSMB3遺伝子の3'UTRから誘導される、好ましくは、配列番号253又は254に記載の3'UTR;
E)配列番号178又は179から選択されるヒストンステムループ;
F)約100個のAヌクレオチドを含む、好ましくは、3'末端を表すポリ(A)配列
を含む。 In a particularly preferred embodiment, the nucleic acid, preferably the mRNA, contains in the 5' to 3' direction the following elements:
A) Cap 1 structure as defined herein;
B) 5'UTR, preferably as set forth in SEQ ID NO: 231 or 232, derived from the HSD17B4 gene as defined herein;
C) a coding sequence selected from SEQ ID NO: 27118, 27141, 27164, 27187, 27210, 27233 or a fragment or variant thereof;
D) a 3'UTR derived from the 3'UTR of the PSMB3 gene as defined herein, preferably as set forth in SEQ ID NO: 253 or 254;
E) histone stem loop selected from SEQ ID NO: 178 or 179;
F) preferably comprises a poly(A) sequence representing the 3' end, comprising about 100 A nucleotides.

さらなる好ましい実施形態では、核酸、好ましくは、mRNAは、5'から3'の方向に以下のエレメント:
A)本明細書において定義されるキャップ1構造;
B)本明細書において定義されるHSD17B4遺伝子から誘導される、好ましくは、配列番号231又は232に記載の5'UTR;
C)配列番号27118、27141、27164、27187、27210、27233又はそのフラグメント若しくはバリアントから選択されるコード配列;
D)本明細書において定義されるPSMB3遺伝子の3'UTRから誘導される、好ましくは、配列番号253又は254に記載の3'UTR;
F)約100個のAヌクレオチドを含む、好ましくは、3'末端を表すポリ(A)配列
を含む。 In a further preferred embodiment, the nucleic acid, preferably mRNA, comprises in the 5' to 3' direction the following elements:
A) Cap 1 structure as defined herein;
B) 5'UTR, preferably as set forth in SEQ ID NO: 231 or 232, derived from the HSD17B4 gene as defined herein;
C) a coding sequence selected from SEQ ID NO: 27118, 27141, 27164, 27187, 27210, 27233 or a fragment or variant thereof;
D) a 3'UTR derived from the 3'UTR of the PSMB3 gene as defined herein, preferably as set forth in SEQ ID NO: 253 or 254;
F) preferably comprises a poly(A) sequence representing the 3' end, comprising about 100 A nucleotides.

特に好ましい実施形態では、核酸、好ましくは、mRNAは、5'から3'の方向に以下のエレメント:
A)本明細書において定義されるキャップ1構造;
B)本明細書において定義されるHSD17B4遺伝子から誘導される、好ましくは、配列番号231又は232に記載の5'UTR;
C)配列番号28590～28593、28921～28924又はそのフラグメント若しくはバリアントから選択されるコード配列;
D)本明細書において定義されるPSMB3遺伝子の3'UTRから誘導される、好ましくは、配列番号253又は254に記載の3'UTR;
E)配列番号178又は179から選択されるヒストンステムループ;
F)約100個のAヌクレオチドを含む、好ましくは、3'末端を表すポリ(A)配列
を含む。 In a particularly preferred embodiment, the nucleic acid, preferably the mRNA, contains in the 5' to 3' direction the following elements:
A) Cap 1 structure as defined herein;
B) 5'UTR, preferably as set forth in SEQ ID NO: 231 or 232, derived from the HSD17B4 gene as defined herein;
C) a coding sequence selected from SEQ ID NO: 28590-28593, 28921-28924 or a fragment or variant thereof;
D) a 3'UTR derived from the 3'UTR of the PSMB3 gene as defined herein, preferably as set forth in SEQ ID NO: 253 or 254;
E) histone stem loop selected from SEQ ID NO: 178 or 179;
F) preferably comprises a poly(A) sequence representing the 3' end, comprising about 100 A nucleotides.

さらなる好ましい実施形態では、核酸、好ましくは、mRNAは、5'から3'の方向に以下のエレメント:
A)本明細書において定義されるキャップ1構造;
B)本明細書において定義されるHSD17B4遺伝子から誘導される、好ましくは、配列番号231又は232に記載の5'UTR;
C)配列番号28590～28593、28921～28924又はそのフラグメント若しくはバリアントから選択されるコード配列;
D)本明細書において定義されるPSMB3遺伝子の3'UTRから誘導される、好ましくは、配列番号253又は254に記載の3'UTR;
F)約100個のAヌクレオチドを含む、好ましくは、3'末端を表すポリ(A)配列
を含む。 In a further preferred embodiment, the nucleic acid, preferably mRNA, comprises in the 5' to 3' direction the following elements:
A) Cap 1 structure as defined herein;
B) 5'UTR, preferably as set forth in SEQ ID NO: 231 or 232, derived from the HSD17B4 gene as defined herein;
C) a coding sequence selected from SEQ ID NO: 28590-28593, 28921-28924 or a fragment or variant thereof;
D) a 3'UTR derived from the 3'UTR of the PSMB3 gene as defined herein, preferably as set forth in SEQ ID NO: 253 or 254;
F) preferably comprises a poly(A) sequence representing the 3' end, comprising about 100 A nucleotides.

本発明の好ましいRNA配列、好ましくは、mRNA配列は、表2において提供される。そこで、それぞれの列は、本発明の特定の好適なSARS-CoV-2構築物を表し、ここで、SARS-CoV-2骨格構築物の説明は、表2のカラムA(Col A)に示され、好ましいコード配列を含む対応するRNA配列、特に、mRNA配列は、カラムC～G(Col.C～G)に提供される。表2aは、HSD17B4/PSMB3-hSL-A100(a-1)を含むRNA配列を提供する。表2bは、HSD17B4/PSMB3-A100(a-1)を含むRNA配列を提供する。 Preferred RNA sequences, preferably mRNA sequences, of the invention are provided in Table 2. Each column therefore represents a particular preferred SARS-CoV-2 construct of the invention, where a description of the SARS-CoV-2 scaffold construct is shown in column A (Col A) of Table 2; Corresponding RNA sequences, in particular mRNA sequences, containing preferred coding sequences are provided in columns C to G (Col.C to G). Table 2a provides RNA sequences containing HSD17B4/PSMB3-hSL-A100(a-1). Table 2b provides RNA sequences containing HSD17B4/PSMB3-A100(a-1).

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ある特定の実施形態では、RNA、好ましくは、mRNAは、配列番号148、149、151、162、163、165、22792、22794、22796、22798、22800、22802、22804、22806、22808、22810、22812、22819、22821、22823、22825、22827、22829、22831、22833、22835、22837、22839、23309～23368、23370～23404、23529～23588、23590～23624、24837～24944、27248～27907、28638～28915、28925～28940からなる群から選択される核酸配列と同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一である核酸配列又はこれらの配列のいずれかのフラグメント若しくはバリアントを含むか、又はそれからなる。ある特定の実施形態では、前記RNA配列中の少なくとも1つ、好ましくは、すべてのウラシルヌクレオチドは、シュードウリジン(ψ)ヌクレオチド及び/又はN1-メチルシュードウリジン(m1ψ)ヌクレオチドによって置き換えられている。 In certain embodiments, the RNA, preferably mRNA, is SEQ ID NO. , 22819, 22821, 22823, 22825, 22827, 22829, 22831, 22833, 22835, 22837, 22839, 23309-23368, 23370-23404, 23529-23588, 23590-23624, 24837-24 944, 27248-27907, 28638-28915 , 28925-28940, or at least 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92% , 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical, or a fragment or variant of any of these sequences. In certain embodiments, at least one, preferably all uracil nucleotides in said RNA sequence are replaced by pseudouridine (ψ) nucleotides and/or N1-methylpseudouridine (m1ψ) nucleotides.

ある特定の実施形態では、RNA、好ましくは、mRNAは、表2a若しくは表2bのカラムB～Gで提供される配列番号からなる群から選択される核酸配列と同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一である核酸配列又はこれらの配列のいずれかのフラグメント若しくはバリアントを含むか、又はそれからなる。ある特定の実施形態では、前記RNA配列中の少なくとも1つ、好ましくは、すべてのウラシルヌクレオチドは、シュードウリジン(ψ)ヌクレオチド及び/又はN1-メチルシュードウリジン(m1ψ)ヌクレオチドによって置き換えられている。 In certain embodiments, the RNA, preferably mRNA, is at least 70% identical to a nucleic acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs provided in columns B-G of Table 2a or Table 2b. , 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical or a fragment or variant of any of these sequences. In certain embodiments, at least one, preferably all uracil nucleotides in said RNA sequence are replaced by pseudouridine (ψ) nucleotides and/or N1-methylpseudouridine (m1ψ) nucleotides.

ある特定の実施形態では、RNA、好ましくは、mRNAは、配列番号27256、27279、27302、27325、27348、27371、27394、27417、27440、27463、27486、27509、27532、27555、27578、27601、27624、27647、27688、27729、27770、27811、27852、27893、28650～28655、28699～28704、28762、28789～28794、28852、28879～28884からなる群から選択される核酸配列と同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一である核酸配列又はこれらの配列のいずれかのフラグメント若しくはバリアントを含むか、又はそれからなる。ある特定の実施形態では、前記RNA配列中の少なくとも1つ、好ましくは、すべてのウラシルヌクレオチドは、シュードウリジン(ψ)ヌクレオチド及び/又はN1-メチルシュードウリジン(m1ψ)ヌクレオチドによって置き換えられている。 In certain embodiments, the RNA, preferably the mRNA, is SEQ ID NO: 27256, 27279, 27302, 27325, 27348, 27371, 27394, 27417, 27440, 27463, 27486, 27509, 27532, 27555, 27578, 27601, 27624 , 27647, 27688, 27729, 27770, 27811, 27852, 27893, 28650-28655, 28699-28704, 28762, 28789-28794, 28852, 28879-28884, or at least 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or Contains or consists of nucleic acid sequences that are 99% identical or fragments or variants of any of these sequences. In certain embodiments, at least one, preferably all uracil nucleotides in said RNA sequence are replaced by pseudouridine (ψ) nucleotides and/or N1-methylpseudouridine (m1ψ) nucleotides.

ある特定の実施形態では、RNA、好ましくは、mRNAは、配列番号27256、27279、27302、27325、27348、27371、27394、27417、27440、27463、27486、27509、27532、27555、27578、27601、27624、27647、27688、27729、27770、27811、27852、27893、28762、28852からなる群から選択される核酸配列と同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一である核酸配列又はこれらの配列のいずれかのフラグメント若しくはバリアントを含むか、又はそれからなる。ある特定の実施形態では、前記RNA配列中の少なくとも1つ、好ましくは、すべてのウラシルヌクレオチドは、シュードウリジン(ψ)ヌクレオチド及び/又はN1-メチルシュードウリジン(m1ψ)ヌクレオチドによって置き換えられている。 In certain embodiments, the RNA, preferably the mRNA, is SEQ ID NO: 27256, 27279, 27302, 27325, 27348, 27371, 27394, 27417, 27440, 27463, 27486, 27509, 27532, 27555, 27578, 27601, 27624 , or at least 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, Nucleic acid sequences or fragments of any of these sequences that are 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical or comprises or consists of a variant. In certain embodiments, at least one, preferably all uracil nucleotides in said RNA sequence are replaced by pseudouridine (ψ) nucleotides and/or N1-methylpseudouridine (m1ψ) nucleotides.

ある特定の実施形態では、RNA、好ましくは、mRNAは、配列番号28639～28642、28778～28781、28688～28691、28868～28871、28925～28940からなる群から選択される核酸配列と同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一である核酸配列又はこれらの配列のいずれかのフラグメント若しくはバリアントを含むか、又はそれからなる。ある特定の実施形態では、前記RNA配列中の少なくとも1つ、好ましくは、すべてのウラシルヌクレオチドは、シュードウリジン(ψ)ヌクレオチド及び/又はN1-メチルシュードウリジン(m1ψ)ヌクレオチドによって置き換えられている。 In certain embodiments, the RNA, preferably mRNA, is identical to a nucleic acid sequence selected from the group consisting of: , or at least 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% , or 99% identical nucleic acid sequences or fragments or variants of any of these sequences. In certain embodiments, at least one, preferably all uracil nucleotides in said RNA sequence are replaced by pseudouridine (ψ) nucleotides and/or N1-methylpseudouridine (m1ψ) nucleotides.

好ましい実施形態では、RNA、好ましくは、mRNAは、配列番号22792、22794、22796、22798、22800、22802、22804、22806、22808、22810、22812、23529～23534、27386～27408、23535～23552、27409～27431、23590～23606、27478～27500、28736～28776、28638～28686、28777～28825、28925～28928、28933～28936からなる群から選択される核酸配列と同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一である核酸配列又はこれらの配列のいずれかのフラグメント若しくはバリアントを含むか、又はそれからなる。それぞれの核酸配列に関するさらなる情報は、配列表におけるそれぞれの配列番号の<223>識別子下、及び表2(特に、カラムB～Gを参照)において提供される。 According to preferred embodiments, RNA, preferably MRNA, MRNA, SER sacred number 22792, 22796, 22796, 22800, 22802, 22806, 22806, 22810, 22810, 22810, 22812, 22812, 22812, 22386-23535 3552, 27409 is at least 70% identical to a nucleic acid sequence selected from the group consisting of ~27431, 23590-23606, 27478-27500, 28736-28776, 28638-28686, 28777-28825, 28925-28928, 28933-28936; 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical comprises or consists of certain nucleic acid sequences or fragments or variants of any of these sequences. Further information regarding each nucleic acid sequence is provided under the <223> identifier of each SEQ ID NO in the Sequence Listing and in Table 2 (see in particular columns BG).

好ましい実施形態では、RNA、好ましくは、mRNAは、配列番号27394、27417、27486、28762、28650～28655、28789～28794からなる群から選択される核酸配列と同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一である核酸配列又はこれらの配列のいずれかのフラグメント若しくはバリアントを含むか、又はそれからなる。 In a preferred embodiment, the RNA, preferably mRNA, is at least 70% identical to a nucleic acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NO: 27394, 27417, 27486, 28762, 28650-28655, 28789-28794; 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical comprises or consists of certain nucleic acid sequences or fragments or variants of any of these sequences.

好ましい実施形態では、RNA、好ましくは、mRNAは、配列番号27394、27417、27486、28762からなる群から選択される核酸配列と同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一である核酸配列又はこれらの配列のいずれかのフラグメント若しくはバリアントを含むか、又はそれからなる。 In a preferred embodiment, the RNA, preferably mRNA, is at least 70%, 80%, 85%, 86% identical to a nucleic acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 27394, 27417, 27486, 28762. , 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical to or of any of these sequences. Contains or consists of any fragment or variant.

好ましい実施形態では、RNA、好ましくは、mRNAは、配列番号28639～28642、28778～28781、28925～28928、28933～28936からなる群から選択される核酸配列と同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一である核酸配列又はこれらの配列のいずれかのフラグメント若しくはバリアントを含むか、又はそれからなる。 In a preferred embodiment, the RNA, preferably mRNA, is at least 70% identical to a nucleic acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 28639-28642, 28778-28781, 28925-28928, 28933-28936; 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical comprises or consists of certain nucleic acid sequences or fragments or variants of any of these sequences.

好ましい実施形態では、RNA、好ましくは、mRNAは、配列番号24837～24854、27524～27546、24855～24872、27547～27569、24909～24926、27616～27638、28827～28866、28687～28735、28867～28915、28929～28932、28937～28940からなる群から選択される核酸配列と同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一である核酸配列又はこれらの配列のいずれかのフラグメント若しくはバリアントを含むか、又はそれからなる。 According to the preferred embodiment, RNA, preferably MRNA, is the SEQ ID NO.837-24854, 27524-27546, 24855-24872, 27547-27569, 24909-24926, 27616-28638, 28827-28687, 28687735, 28867-28915 , 28929-28932, 28937-28940, or at least 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91 %, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical to a nucleic acid sequence or a fragment or variant of any of these sequences.

好ましい実施形態では、RNA、好ましくは、mRNAは、配列番号27532、27555、27624、28852、28699～28704、28879～28884からなる群から選択される核酸配列と同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一である核酸配列又はこれらの配列のいずれかのフラグメント若しくはバリアントを含むか、又はそれからなる。 In a preferred embodiment, the RNA, preferably mRNA, is at least 70% identical to a nucleic acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NO: 27532, 27555, 27624, 28852, 28699-28704, 28879-28884; 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical comprises or consists of certain nucleic acid sequences or fragments or variants of any of these sequences.

好ましい実施形態では、RNA、好ましくは、mRNAは、配列番号27532、27555、27624、28852からなる群から選択される核酸配列と同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一である核酸配列又はこれらの配列のいずれかのフラグメント若しくはバリアントを含むか、又はそれからなる。 In a preferred embodiment, the RNA, preferably mRNA, is at least 70%, 80%, 85%, 86% identical to a nucleic acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 27532, 27555, 27624, 28852. , 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical to or of any of these sequences. Contains or consists of any fragment or variant.

好ましい実施形態では、RNA、好ましくは、mRNAは、配列番号28688～28691、28868～28871、28929～28932、28937～28940からなる群から選択される核酸配列と同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一である核酸配列又はこれらの配列のいずれかのフラグメント若しくはバリアントを含むか、又はそれからなる。 In a preferred embodiment, the RNA, preferably mRNA, is at least 70% identical to a nucleic acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 28688-28691, 28868-28871, 28929-28932, 28937-28940; 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical comprises or consists of certain nucleic acid sequences or fragments or variants of any of these sequences.

好ましい実施形態では、RNA、好ましくは、mRNAは、配列番号22792、22794、22796、22798、22800、22802、22804、22806、22808、22810、22812、23529～23534、27386～27408、23535～23552、27409～27431、23590～23606、27478～27500、28736～28776、28638～28686、28777～28825、28925～28928、28933～28936からなる群から選択される核酸配列と同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一である核酸配列又はこれらの配列のいずれかのフラグメント若しくはバリアントを含むか、又はそれからなり、ここで、前記RNA配列中の少なくとも1つ、好ましくは、すべてのウラシルヌクレオチドは、シュードウリジン(ψ)ヌクレオチド及び/又はN1-メチルシュードウリジン(m1ψ)ヌクレオチドによって置き換えられている。 According to preferred embodiments, RNA, preferably MRNA, MRNA, SER sacred number 22792, 22796, 22796, 22800, 22802, 22806, 22806, 22810, 22810, 22810, 22812, 22812, 22812, 22386-23535 3552, 27409 is at least 70% identical to a nucleic acid sequence selected from the group consisting of ~27431, 23590-23606, 27478-27500, 28736-28776, 28638-28686, 28777-28825, 28925-28928, 28933-28936; 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical comprises or consists of certain nucleic acid sequences or fragments or variants of any of these sequences, wherein at least one, preferably all uracil nucleotides in said RNA sequence are pseudouridine (ψ) nucleotides and /or replaced by N1-methylpseudouridine (m1ψ) nucleotides.

好ましい実施形態では、RNA、好ましくは、mRNAは、配列番号27394、27417、27486、28762、28650～28655、28789～28794からなる群から選択される核酸配列と同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一である核酸配列又はこれらの配列のいずれかのフラグメント若しくはバリアントを含むか、又はそれからなり、ここで、前記RNA配列中の少なくとも1つ、好ましくは、すべてのウラシルヌクレオチドは、シュードウリジン(ψ)ヌクレオチド及び/又はN1-メチルシュードウリジン(m1ψ)ヌクレオチドによって置き換えられている。 In a preferred embodiment, the RNA, preferably mRNA, is at least 70% identical to a nucleic acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NO: 27394, 27417, 27486, 28762, 28650-28655, 28789-28794; 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical comprises or consists of certain nucleic acid sequences or fragments or variants of any of these sequences, wherein at least one, preferably all uracil nucleotides in said RNA sequence are pseudouridine (ψ) nucleotides and /or replaced by N1-methylpseudouridine (m1ψ) nucleotides.

好ましい実施形態では、RNA、好ましくは、mRNAは、配列番号27394、27417、27486、28762からなる群から選択される核酸配列と同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一である核酸配列又はこれらの配列のいずれかのフラグメント若しくはバリアントを含むか、又はそれからなり、ここで、前記RNA配列中の少なくとも1つ、好ましくは、すべてのウラシルヌクレオチドは、シュードウリジン(ψ)ヌクレオチド及び/又はN1-メチルシュードウリジン(m1ψ)ヌクレオチドによって置き換えられている。 In a preferred embodiment, the RNA, preferably mRNA, is at least 70%, 80%, 85%, 86% identical to a nucleic acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 27394, 27417, 27486, 28762. , 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical to or of any of these sequences. comprising or consisting of any fragment or variant, wherein at least one, preferably all uracil nucleotides in said RNA sequence are pseudouridine (ψ) nucleotides and/or N1-methylpseudouridine ( m1ψ) nucleotides.

好ましい実施形態では、RNA、好ましくは、mRNAは、配列番号28639～28642、28778～28781、28925～28928、28933～28936からなる群から選択される核酸配列と同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一である核酸配列又はこれらの配列のいずれかのフラグメント若しくはバリアントを含むか、又はそれからなり、ここで、前記RNA配列中の少なくとも1つ、好ましくは、すべてのウラシルヌクレオチドは、シュードウリジン(ψ)ヌクレオチド及び/又はN1-メチルシュードウリジン(m1ψ)ヌクレオチドによって置き換えられている。 In a preferred embodiment, the RNA, preferably mRNA, is at least 70% identical to a nucleic acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 28639-28642, 28778-28781, 28925-28928, 28933-28936; 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical comprises or consists of certain nucleic acid sequences or fragments or variants of any of these sequences, wherein at least one, preferably all uracil nucleotides in said RNA sequence are pseudouridine (ψ) nucleotides and /or replaced by N1-methylpseudouridine (m1ψ) nucleotides.

好ましい実施形態では、RNA、好ましくは、mRNAは、配列番号24837～24854、27524～27546、24855～24872、27547～27569、24909～24926、27616～27638、28827～28866、28687～28735、28867～28915、28929～28932、28937～28940からなる群から選択される核酸配列と同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一である核酸配列又はこれらの配列のいずれかのフラグメント若しくはバリアントを含むか、又はそれからなり、ここで、前記RNA配列中の少なくとも1つ、好ましくは、すべてのウラシルヌクレオチドは、シュードウリジン(ψ)ヌクレオチド及び/又はN1-メチルシュードウリジン(m1ψ)ヌクレオチドによって置き換えられている。 According to the preferred embodiment, RNA, preferably MRNA, is the SEQ ID NO.837-24854, 27524-27546, 24855-24872, 27547-27569, 24909-24926, 27616-28638, 28827-28687, 28687735, 28867-28915 , 28929-28932, 28937-28940, or at least 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91 %, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical to a nucleic acid sequence or a fragment or variant of any of these sequences; Here, at least one, preferably all, uracil nucleotides in said RNA sequence are replaced by pseudouridine (ψ) nucleotides and/or N1-methylpseudouridine (m1ψ) nucleotides.

好ましい実施形態では、RNA、好ましくは、mRNAは、配列番号27532、27555、27624、28852、28699～28704、28879～28884からなる群から選択される核酸配列と同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一である核酸配列又はこれらの配列のいずれかのフラグメント若しくはバリアントを含むか、又はそれからなり、ここで、前記RNA配列中の少なくとも1つ、好ましくは、すべてのウラシルヌクレオチドは、シュードウリジン(ψ)ヌクレオチド及び/又はN1-メチルシュードウリジン(m1ψ)ヌクレオチドによって置き換えられている。 In a preferred embodiment, the RNA, preferably mRNA, is at least 70% identical to a nucleic acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NO: 27532, 27555, 27624, 28852, 28699-28704, 28879-28884; 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical comprises or consists of certain nucleic acid sequences or fragments or variants of any of these sequences, wherein at least one, preferably all uracil nucleotides in said RNA sequence are pseudouridine (ψ) nucleotides and /or replaced by N1-methylpseudouridine (m1ψ) nucleotides.

好ましい実施形態では、RNA、好ましくは、mRNAは、配列番号27532、27555、27624、28852からなる群から選択される核酸配列と同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一である核酸配列又はこれらの配列のいずれかのフラグメント若しくはバリアントを含むか、又はそれからなり、ここで、前記RNA配列中の少なくとも1つ、好ましくは、すべてのウラシルヌクレオチドは、シュードウリジン(ψ)ヌクレオチド及び/又はN1-メチルシュードウリジン(m1ψ)ヌクレオチドによって置き換えられている。 In a preferred embodiment, the RNA, preferably mRNA, is at least 70%, 80%, 85%, 86% identical to a nucleic acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 27532, 27555, 27624, 28852. , 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical to or of any of these sequences. comprising or consisting of any fragment or variant, wherein at least one, preferably all uracil nucleotides in said RNA sequence are pseudouridine (ψ) nucleotides and/or N1-methylpseudouridine ( m1ψ) nucleotides.

好ましい実施形態では、RNA、好ましくは、mRNAは、配列番号28688～28691、28868～28871、28929～28932、28937～28940からなる群から選択される核酸配列と同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一である核酸配列又はこれらの配列のいずれかのフラグメント若しくはバリアントを含むか、又はそれからなり、ここで、前記RNA配列中の少なくとも1つ、好ましくは、すべてのウラシルヌクレオチドは、シュードウリジン(ψ)ヌクレオチド及び/又はN1-メチルシュードウリジン(m1ψ)ヌクレオチドによって置き換えられている。 In a preferred embodiment, the RNA, preferably mRNA, is at least 70% identical to a nucleic acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 28688-28691, 28868-28871, 28929-28932, 28937-28940; 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical comprises or consists of certain nucleic acid sequences or fragments or variants of any of these sequences, wherein at least one, preferably all uracil nucleotides in said RNA sequence are pseudouridine (ψ) nucleotides and /or replaced by N1-methylpseudouridine (m1ψ) nucleotides.

特定の実施形態では、本発明のRNAは、化学合成、例えば、固相RNA合成、並びにin vitro方法、例えば、RNA in vitro転写反応を含む当該技術分野で公知の任意の方法を使用して調製されてもよい。したがって、好ましい実施形態では、RNAは、RNA in vitro転写によって得られる。 In certain embodiments, the RNA of the invention is prepared using any method known in the art, including chemical synthesis, e.g., solid phase RNA synthesis, as well as in vitro methods, e.g., RNA in vitro transcription reactions. may be done. Therefore, in a preferred embodiment, RNA is obtained by RNA in vitro transcription.

したがって、好ましい実施形態では、本発明のRNAは、好ましくは、in vitroで転写されたRNAである。 Therefore, in a preferred embodiment, the RNA of the invention is preferably in vitro transcribed RNA.

用語「RNA in vitro転写」又は「in vitro転写」は、RNAが細胞を含まない系(in vitro)で合成されるプロセスに関する。RNAは、本発明による、直鎖状プラスミドDNA鋳型又はPCR増幅されたDNA鋳型である適切なDNA鋳型のDNA依存性in vitro転写によって得られてもよい。RNA in vitro転写を制御するためのプロモーターは、任意のDNA依存性RNAポリメラーゼのための任意のプロモーターであり得る。DNA依存性RNAポリメラーゼの具体例は、T7、T3、SP6、又はSyn5 RNAポリメラーゼである。本発明の好ましい実施形態では、DNA鋳型は、好適な制限酵素で直鎖状にされ、その後、それは、RNA in vitro転写に供される。 The term "RNA in vitro transcription" or "in vitro transcription" refers to the process by which RNA is synthesized in a cell-free system (in vitro). RNA may be obtained by DNA-dependent in vitro transcription of a suitable DNA template, which is a linear plasmid DNA template or a PCR amplified DNA template, according to the invention. A promoter for controlling RNA in vitro transcription can be any promoter for any DNA-dependent RNA polymerase. Examples of DNA-dependent RNA polymerases are T7, T3, SP6, or Syn5 RNA polymerases. In a preferred embodiment of the invention, the DNA template is linearized with a suitable restriction enzyme, after which it is subjected to RNA in vitro transcription.

RNA in vitro転写で使用される試薬は、典型的には、そのそれぞれのRNAポリメラーゼ、例えば、バクテリオファージにコードされるRNAポリメラーゼ(T7、T3、SP6、若しくはSyn5)に対して高い結合親和性を有するプロモーター配列を有するDNA鋳型(直鎖状プラスミドDNA若しくはPCR産物);4種の塩基(アデニン、シトシン、グアニン及びウラシル)のためのリボヌクレオチド三リン酸(NTP);場合により、本明細書において定義されるキャップアナログ;場合により、本明細書において定義されるさらに修飾されたヌクレオチド;DNA鋳型内のプロモーター配列に結合する能力があるDNA依存性RNAポリメラーゼ(例えば、T7、T3、SP6、若しくはSyn5 RNAポリメラーゼ);場合により、任意の可能性のあるコンタミしているRNaseを不活性化するためのリボヌクレアーゼ (RNase)阻害剤;場合により、RNA in vitro転写を阻害し得る、ピロリン酸を分解するためのピロホスファターゼ;ポリメラーゼのための補助因子としてMg2+イオンを供給する、MgCl2;酸化防止剤(例えば、DTT)、及び/又はポリアミン、例えば、最適な濃度でのスペルミジン、例えば、WO2017/109161に開示されるTRISクエン酸塩を含む緩衝液系も含有し得る、好適なpH値を維持するための緩衝液(TRIS若しくはHEPES)を含む。 Reagents used in RNA in vitro transcription typically have high binding affinity for their respective RNA polymerases, e.g., bacteriophage-encoded RNA polymerases (T7, T3, SP6, or Syn5). a DNA template (linear plasmid DNA or PCR product) having a promoter sequence with; ribonucleotide triphosphates (NTPs) for the four bases (adenine, cytosine, guanine and uracil); optionally herein a cap analog as defined; optionally a further modified nucleotide as defined herein; a DNA-dependent RNA polymerase (e.g., T7, T3, SP6, or Syn5) capable of binding to a promoter sequence within a DNA template; RNA polymerase); optionally a ribonuclease (RNase) inhibitor to inactivate any potentially contaminating RNase; optionally to degrade pyrophosphate, which can inhibit RNA in vitro transcription. pyrophosphatase; supplying Mg 2+ ions as cofactors for the polymerase, MgCl 2 ; antioxidants (e.g. DTT), and/or polyamines, e.g. spermidine at optimal concentrations, e.g. WO2017/109161 A buffer system containing TRIS citrate as disclosed in , which may also contain a buffer (TRIS or HEPES) for maintaining a suitable pH value.

好ましい実施形態では、本発明のRNAのキャップ1構造は、トリ-ヌクレオチドキャップアナログm7G(5')ppp(5')(2'OMeA)pG又はm7G(5')ppp(5')(2'OMeG)pGを使用した同時転写キャッピングを使用して形成される。本発明のコードRNAの製造に好適に使用され得る好ましいキャップ1アナログは、m7G(5')ppp(5')(2'OMeA)pGである。 In a preferred embodiment, the cap 1 structure of the RNA of the invention is the tri-nucleotide cap analog m7G(5')ppp(5')(2'OMeA)pG or m7G(5')ppp(5')(2' OMeG) is formed using co-transcriptional capping with pG. A preferred cap1 analog that can be suitably used for producing the coded RNA of the present invention is m7G(5')ppp(5')(2'OMeA)pG.

特に好ましい実施形態では、本発明のRNAのキャップ1構造は、トリ-ヌクレオチドキャップアナログ3'OMe-m7G(5')ppp(5')(2'OMeA)pGを使用した同時転写キャッピングを使用して形成される。 In a particularly preferred embodiment, the cap1 structure of the RNA of the invention is prepared using co-transcriptional capping using the tri-nucleotide cap analog 3'OMe-m7G(5')ppp(5')(2'OMeA)pG. It is formed by

他の実施形態では、本発明のRNAのキャップO構造は、キャップアナログ3'OMe-m7G(5')ppp(5')Gを使用した同時転写キャッピングを使用して形成される。 In other embodiments, cap O structures of RNAs of the invention are formed using co-transcriptional capping with the cap analog 3'OMe-m7G(5')ppp(5')G.

追加の実施形態では、RNA in vitro転写に使用されるヌクレオチド混合物は、さらに、本明細書において定義される修飾されたヌクレオチドを含んでもよい。その文脈では、好ましい修飾されたヌクレオチドは、シュードウリジン(ψ)、N1-メチルシュードウリジン(m1ψ)、5-メチルシトシン、及び5-メトキシウリジンから選択され得る。特定の実施形態では、ヌクレオチド混合物中のウラシルヌクレオチドをシュードウリジン(ψ)及び/又はN1-メチルシュードウリジン(m1ψ)によって置き換えて(部分的又は完全のいずれか)、修飾されたRNAを得る。 In additional embodiments, the nucleotide mixture used for RNA in vitro transcription may further include modified nucleotides as defined herein. In that context, preferred modified nucleotides may be selected from pseudouridine (ψ), N1-methylpseudouridine (m1ψ), 5-methylcytosine, and 5-methoxyuridine. In certain embodiments, uracil nucleotides in the nucleotide mixture are replaced (either partially or completely) by pseudouridine (ψ) and/or N1-methylpseudouridine (m1ψ) to obtain modified RNA.

好ましい実施形態では、RNA in vitro転写に使用されるヌクレオチド混合物は、本明細書において定義される修飾されたヌクレオチドを含まない。好ましい実施形態では、RNA in vitro転写に使用されるヌクレオチド混合物は、G、C、A及びUヌクレオチド、並びに場合により、本明細書において定義されるキャップアナログのみを含む。 In a preferred embodiment, the nucleotide mixture used for RNA in vitro transcription does not contain modified nucleotides as defined herein. In a preferred embodiment, the nucleotide mixture used for RNA in vitro transcription comprises only G, C, A and U nucleotides and optionally a cap analog as defined herein.

好ましい実施形態では、RNA in vitro転写反応のため使用されるヌクレオチド混合物(すなわち、混合物中のそれぞれのヌクレオチドの画分)は、所定のRNA配列、好ましくは、WO2015/188933に記載される所定のRNA配列に最適化されてもよく、WO2015/188933の内容全体は、参照により本明細書に取り込まれる。 In a preferred embodiment, the nucleotide mixture (i.e. the fraction of each nucleotide in the mixture) used for the RNA in vitro transcription reaction is a predetermined RNA sequence, preferably a predetermined RNA as described in WO2015/188933. The entire contents of WO2015/188933 are incorporated herein by reference.

この文脈では、in vitro転写は、配列が最適化されたヌクレオチド混合物及び場合により、キャップアナログの存在下で行われ、好ましくは、ここで、配列が最適化されたヌクレオチド混合物は、化学的に修飾されたヌクレオチドを含まない。 In this context, in vitro transcription is carried out in the presence of a sequence-optimized nucleotide mixture and optionally a cap analogue, preferably where the sequence-optimized nucleotide mixture is chemically modified. Contains no added nucleotides.

この文脈では、配列が最適化されたヌクレオシド三リン酸(NTP)ミックスは、4種のヌクレオシド三リン酸(NTP)GTP、ATP、CTP及びUTPを含む所定の配列のRNA分子のin vitro転写反応における使用のためのヌクレオシド三リン酸(NTP)の混合物であり、ここで、配列が最適化されたヌクレオシド三リン酸(NTP)ミックス中の4種のヌクレオシド三リン酸(NTP)のそれぞれの画分は、前記RNA分子中のそれぞれのヌクレオチドの画分に対応する。リボヌクレオチドがRNA分子に存在しない場合、対応するヌクレオシド三リン酸も、配列が最適化されたヌクレオシド三リン酸(NTP)ミックスに存在しない。 In this context, a sequence-optimized nucleoside triphosphate (NTP) mix is used for the in vitro transcription reaction of RNA molecules of a given sequence, including the four nucleoside triphosphates (NTPs) GTP, ATP, CTP and UTP. a mixture of nucleoside triphosphates (NTPs) for use in a sequence-optimized nucleoside triphosphate (NTP) mix, in which fractions of each of the four nucleoside triphosphates (NTPs) in a sequence-optimized nucleoside triphosphate (NTP) mix are The minutes correspond to the fraction of each nucleotide in the RNA molecule. If a ribonucleotide is not present in an RNA molecule, the corresponding nucleoside triphosphate will also not be present in a sequence-optimized nucleoside triphosphate (NTP) mix.

本明細書において定義される1個より多くの異なるRNAが生産されなければならない、例えば、2、3、4、5、6、7、8、9、10又はさらに多い異なるRNAが生産されなければならない(第二の態様を参照)実施形態では、WO2017/109134に記載される手法が、好適に使用されてもよい。 More than one different RNA as defined herein must be produced, e.g. 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 or more different RNAs must be produced. In embodiments where this is not the case (see second aspect), the approach described in WO2017/109134 may be suitably used.

RNAベースのワクチン生産の文脈では、GMPグレードの核酸、例えば、GMPグレードのRNAを用意することが要求され得る。GMPグレードのRNAは、規制当局によって承認された製造プロセスを使用して生産され得る。したがって、特に好ましい実施形態では、RNA生産は、DNA(鋳型)及びRNAレベルでの様々な品質管理工程、好ましくは、WO2016/180430に記載の品質管理工程を行う現行の優良医薬品製造基準(GMP)下で行われる。好ましい実施形態では、本発明のRNAは、GMPグレードのRNA、特に、GMPグレードのmRNAである。したがって、ワクチンのためのRNAは、好ましくは、GMPグレードのRNAである。 In the context of RNA-based vaccine production, it may be required to provide GMP-grade nucleic acids, eg, GMP-grade RNA. GMP grade RNA can be produced using manufacturing processes approved by regulatory agencies. Therefore, in a particularly preferred embodiment, the RNA production is carried out according to current Good Manufacturing Practice (GMP) with various quality control steps at the DNA (template) and RNA level, preferably as described in WO2016/180430. It takes place below. In a preferred embodiment, the RNA of the invention is GMP grade RNA, in particular GMP grade mRNA. Therefore, RNA for vaccines is preferably GMP grade RNA.

得られたRNA産物は、好ましくは、PureMessenger(登録商標)(CureVac、テュービンゲン、ドイツ;WO2008/077592に記載のRP-HPLC)及び/又はタンジェント流濾過(WO2016/193206に記載される)及び/又はオリゴd(T)精製(WO2016/180430を参照)を使用して精製される。 The resulting RNA product is preferably subjected to PureMessenger® (CureVac, Tübingen, Germany; RP-HPLC as described in WO2008/077592) and/or tangential flow filtration (as described in WO2016/193206) and/or Purified using oligo d(T) purification (see WO2016/180430).

さらなる好ましい実施形態では、RNAを凍結乾燥させて(例えば、WO2016/165831又はWO2011/069586に記載、両方のPCT出願の内容全体が、参照により本明細書に取り込まれる)、温度安定な乾燥させたRNA(粉末)を得る。RNAをまた、スプレー乾燥又はスプレー凍結乾燥を使用して乾燥させて(例えば、WO2016/184575又はWO2016/184576に記載)、本明細書において定義される温度安定なRNA(粉末)を得てもよい。したがって、核酸、特に、RNAの製造及び精製の文脈で、WO2017/109161、WO2015/188933、WO2016/180430、WO2008/077592、WO2016/193206、WO2016/165831、WO2011/069586、WO2016/184575、及びWO2016/184576の開示は、参照により本明細書に取り込まれる。 In a further preferred embodiment, the RNA is lyophilized (e.g. as described in WO2016/165831 or WO2011/069586, both PCT applications herein incorporated by reference in their entirety) to provide a temperature stable drying solution. Obtain RNA (powder). RNA may also be dried using spray drying or spray lyophilization (e.g. as described in WO2016/184575 or WO2016/184576) to obtain temperature stable RNA (powder) as defined herein. . Therefore, in the context of the production and purification of nucleic acids, in particular RNA, WO2017/109161, WO2015/188933, WO2016/180430, WO2008/077592, WO2016/193206, WO2016/165831, WO2011/069586, WO2016/184575, and WO20 16/ 184576 is incorporated herein by reference.

したがって、好ましい実施形態では、RNAは、乾燥させたRNAである。 Therefore, in a preferred embodiment, the RNA is dried RNA.

本明細書で使用される場合、用語「乾燥させたRNA」は、温度安定な乾燥させたRNA(粉末)を得るために、上で定義された通り、凍結乾燥された、又はスプレー乾燥された、又はスプレー凍結乾燥されたRNAと理解されなければならない。 As used herein, the term "dried RNA" means lyophilized or spray-dried RNA, as defined above, to obtain a temperature-stable dried RNA (powder). , or spray lyophilized RNA.

好ましい実施形態では、本発明の核酸は、精製された核酸、特に、精製されたRNAである。 In a preferred embodiment, the nucleic acid of the invention is a purified nucleic acid, in particular purified RNA.

本明細書で使用される場合、用語「精製された核酸」は、ある特定の精製工程後に、出発材料よりも高い純度を有する核酸と理解されるべきである。本質的には、精製された核酸に存在しない典型的な不純物は、ペプチド若しくはタンパク質、スペルミジン、BSA、不不全核酸配列、核酸フラグメント、遊離ヌクレオチド、細菌不純物、又は精製手法から誘導される不純物を含む。したがって、それは、これに関して、できるだけ100%に近い「核酸純度の程度」が望ましい。それはまた、全長核酸の量ができるだけ100%に近い核酸純度の程度が望ましい。したがって、本明細書で使用される場合、「精製された核酸」は、75%、80%、85%より高い、非常に具体的には、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%より高く、最も好ましくは99%以上の純度の程度を有する。純度の程度は、例えば、分析HPLCによって決定されてもよく、ここで、上でもたらされたパーセンテージは、標的核酸のピークの面積と副産物を表すすべてのピークの合計範囲の間の比に対応する。或いは、純度の程度は、例えば、分析アガロースゲル電気泳動又はキャピラリーゲル電気泳動によって決定されてもよい。 As used herein, the term "purified nucleic acid" is to be understood as a nucleic acid that, after certain purification steps, has a higher purity than the starting material. In essence, typical impurities not present in purified nucleic acids include peptides or proteins, spermidine, BSA, defective nucleic acid sequences, nucleic acid fragments, free nucleotides, bacterial impurities, or impurities derived from purification techniques. . Therefore, it is desirable in this regard to have a "degree of nucleic acid purity" as close to 100% as possible. It is also desirable to have a degree of nucleic acid purity where the amount of full-length nucleic acid is as close to 100% as possible. Thus, as used herein, "purified nucleic acid" refers to higher than 75%, 80%, 85%, and very specifically 90%, 91%, 92%, 93%, 94% %, 95%, 96%, 97%, 98%, most preferably 99% or higher. The degree of purity may be determined, for example, by analytical HPLC, where the percentages yielded above correspond to the ratio between the area of the target nucleic acid peak and the total range of all peaks representing by-products. . Alternatively, the degree of purity may be determined by, for example, analytical agarose gel electrophoresis or capillary gel electrophoresis.

好ましい実施形態では、本発明の核酸は、精製されたRNAである。 In a preferred embodiment, the nucleic acid of the invention is purified RNA.

本明細書で使用される場合、用語「精製されたRNA」又は「精製されたmRNA」は、ある特定の精製工程(例えば、HPLC、TFF、オリゴd(T)精製、沈殿工程)後に出発材料(例えば、in vitroで転写されたRNA)よりも高い純度を有するRNAと理解されるべきである。本質的に精製されたRNAに存在しない典型的な不純物は、ペプチド又はタンパク質(例えば、DNA依存性RNA in vitro転写から誘導される酵素、例えば、RNAポリメラーゼ、RNase、ピロホスファターゼ、制限エンドヌクレアーゼ、DNase)、スペルミジン、BSA、不全RNA配列、RNAフラグメント(短い二本鎖RNAフラグメント、不全配列など)、遊離ヌクレオチド(修飾されたヌクレオチド、従来のNTP、キャップアナログ)、鋳型DNAフラグメント、緩衝液成分(HEPES、TRIS、MgCl2)などを含む。例えば、発酵手法から誘導され得る他の可能性のある不純物は、細菌不純物(バイオバーデン、細菌DNA)又は精製手法から誘導される不純物(有機溶媒など)を含む。したがって、それは、これに関して、できるだけ100%に近い「RNA純度の程度」が望ましい。それはまた、全長RNA転写物の量ができるだけ100%に近いRNA純度の程度が望ましい。したがって、本明細書で使用される場合、「精製されたRNA」は、75%、80%、85%より高い、非常に具体的には、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%より高い、最も好ましくは、99%以上の純度の程度を有する。純度の程度は、例えば、分析HPLCによって決定されてもよく、ここで、上でもたらされたパーセンテージは、標的RNAのピークの面積と副産物を表すすべてのピークの合計範囲の間の比に対応する。或いは、純度の程度は、例えば、分析アガロースゲル電気泳動又はキャピラリーゲル電気泳動によって決定されてもよい。 As used herein, the term "purified RNA" or "purified mRNA" refers to the starting material after a certain purification step (e.g., HPLC, TFF, oligo d(T) purification, precipitation step). (e.g., in vitro transcribed RNA). Typical impurities not present in essentially purified RNA include peptides or proteins (e.g., enzymes derived from DNA-dependent RNA in vitro transcription, e.g., RNA polymerases, RNases, pyrophosphatases, restriction endonucleases, DNases). ), spermidine, BSA, defective RNA sequences, RNA fragments (short double-stranded RNA fragments, defective sequences, etc.), free nucleotides (modified nucleotides, conventional NTPs, cap analogs), template DNA fragments, buffer components (HEPES , TRIS, MgCl 2 ), etc. For example, other possible impurities that may be derived from fermentation procedures include bacterial impurities (bioburden, bacterial DNA) or impurities derived from purification procedures (such as organic solvents). Therefore, it is desirable in this regard to have a "degree of RNA purity" as close to 100% as possible. It is also desirable for the amount of full-length RNA transcripts to be as close to 100% as possible for RNA purity. Thus, as used herein, "purified RNA" refers to higher than 75%, 80%, 85%, and very specifically 90%, 91%, 92%, 93%, 94% %, 95%, 96%, 97%, 98%, most preferably 99% or higher. The degree of purity may be determined, for example, by analytical HPLC, where the percentages yielded above correspond to the ratio between the area of the target RNA peak and the total range of all peaks representing by-products. . Alternatively, the degree of purity may be determined by, for example, analytical agarose gel electrophoresis or capillary gel electrophoresis.

特に好ましい実施形態では、RNAをRP-HPLC及び/又はTFFによって精製して、二本鎖RNA、キャッピングされていないRNA及び/又はRNAフラグメントが除去されている。 In particularly preferred embodiments, the RNA is purified by RP-HPLC and/or TFF to remove double-stranded RNA, uncapped RNA and/or RNA fragments.

例えば、RNA in vitro転写中の副産物としての二本鎖RNAの形成は、先天性免疫応答、特に、ワクチン接種された対象において発熱を誘導する主要な因子であるIFNアルファの誘導を導き得、それはもちろん望ましくない副作用である。dsRNAの免疫ブロッティングの現行の技術(ドットブロット、血清学的特異的電子顕微鏡(SSEM)又はELISAなどを介した)は、核酸の混合物からdsRNA種を検出し、サイズ分類するため使用される。 For example, the formation of double-stranded RNA as a by-product during RNA in vitro transcription can lead to the induction of innate immune responses, particularly IFN alpha, which is a major factor inducing fever in vaccinated subjects. Of course, this is an undesirable side effect. Current techniques of immunoblotting of dsRNA (via dot blots, serology-specific electron microscopy (SSEM) or ELISA, etc.) are used to detect and size dsRNA species from mixtures of nucleic acids.

好適には、本発明のRNAを本明細書に記載されるRP-HPLC及び/又はTFFによって精製して、dsRNAの量が低減される。 Preferably, the RNA of the invention is purified by RP-HPLC and/or TFF as described herein to reduce the amount of dsRNA.

好ましくは、本発明によるRNAは、RP-HPLCを使用して、好ましくは、マクロ多孔性スチレン/ジビニルベンゼンカラム(例えば、粒子サイズ30μm、孔サイズ4000Å)を用いた逆相高圧液体クロマトグラフィー(RP-HPLC)を使用して、さらに、約100kDaの分子量カットオフを有するセルロースベースの膜を備えたフィルターカセットを使用して精製される。 Preferably, the RNA according to the invention is purified using RP-HPLC, preferably by reverse phase high pressure liquid chromatography (RP -HPLC) and further purified using a filter cassette equipped with a cellulose-based membrane with a molecular weight cutoff of approximately 100 kDa.

この文脈では、精製されたRNAがRP-HPLC及び/又はTFFによって精製され、RP-HPLC及び/又はTFFで精製されていないRNA中の副産物より約5%、10%、又は20%少ない二本鎖RNA副産物をもたらすことが特に好ましい。したがって、本発明のRNAは、RP-HPLC及び/又はTFFで精製されていないRNA中の副産物より約5%、10%、又は20%少ない二本鎖RNA副産物を含む。 In this context, purified RNA is purified by RP-HPLC and/or TFF and has approximately 5%, 10%, or 20% less by-products than RNA that is not purified by RP-HPLC and/or TFF. Particularly preferred is the production of stranded RNA by-products. Accordingly, the RNA of the invention contains about 5%, 10%, or 20% less double-stranded RNA byproduct than in RNA that is not purified by RP-HPLC and/or TFF.

或いは、RP-HPLC及び/又はTFFによって精製された精製されたRNAは、オリゴdT精製、沈殿、濾過及び/又はアニオン交換クロマトグラフィーを用いて精製されたRNA中の副産物より約5%、10%、又は20%少ない二本鎖RNA副産物を含む。したがって、本発明のRP-HPLC及び/又はTFF精製されたRNAは、オリゴdT精製、沈殿、濾過及び/又はAEXを用いて精製されたRNA中の副産物より約5%、10%、又は20%少ない二本鎖RNA副産物を含む。 Alternatively, purified RNA purified by RP-HPLC and/or TFF has about 5% to 10% less by-products than RNA purified using oligo-dT purification, precipitation, filtration and/or anion exchange chromatography. , or contains 20% less double-stranded RNA byproducts. Therefore, the RP-HPLC and/or TFF purified RNA of the present invention is about 5%, 10%, or 20% less by-product than in RNA purified using oligo-dT purification, precipitation, filtration, and/or AEX. Contains less double-stranded RNA byproducts.

実施形態では、RNA in vitro転写を行うための自動装置を使用して、本発明の核酸を生産し、精製してもよい。このような装置をまた使用して、組成物又はワクチンを生産してもよい(態様2及び3を参照)。好ましくは、WO2020/002598(その内容全体が、参照により本明細書に取り込まれる)に記載される装置、特に、WO2020/002598の請求項1～59並びに/又は68～76(及び図1～18)に記載される装置が好適に使用され得る。 In embodiments, automated equipment for performing RNA in vitro transcription may be used to produce and purify the nucleic acids of the invention. Such devices may also be used to produce compositions or vaccines (see embodiments 2 and 3). Preferably, the apparatus described in WO2020/002598 (the entire contents of which are incorporated herein by reference), in particular claims 1 to 59 and/or 68 to 76 of WO2020/002598 (and FIGS. 1 to 18 ) can be suitably used.

本明細書に記載される方法は、好ましくは、以下でさらに詳細に記載されるRNA組成物又はワクチンを生産する方法に適用され得る。 The methods described herein may preferably be applied to methods of producing RNA compositions or vaccines as described in further detail below.

組成物、医薬組成物:
第二の態様は、第一の態様の少なくとも1つのRNAを含む組成物に関する。 Composition, pharmaceutical composition:
A second embodiment relates to a composition comprising at least one RNA of the first embodiment.

特に、第二の態様の組成物に関する実施形態は、同様に、第三の態様のワクチンの好適な実施形態で読み取られ、理解されてもよい。また、第三の態様のワクチンに関する実施形態は、同様に、第二の態様の組成物(第一の態様の少なくとも1つのRNAを含む)の好適な実施形態で読み取られ、理解されてもよい。さらに、第一の態様(本発明のRNA)の文脈で記載される特色及び実施形態は、第二の態様の組成物の好適な実施形態として読み取られなければならず、理解されなければならない。 In particular, the embodiments relating to the composition of the second aspect may similarly be read and understood in the preferred embodiments of the vaccine of the third aspect. Embodiments relating to vaccines of the third aspect may also be read and understood in the preferred embodiments of compositions of the second aspect (comprising at least one RNA of the first aspect). . Furthermore, features and embodiments described in the context of the first aspect (RNA of the invention) must be read and understood as preferred embodiments of the composition of the second aspect.

好ましい実施形態では、組成物は、SARS-CoV-2スパイクタンパク質、又はその免疫原性フラグメント若しくは免疫原性バリアントであるか、又はそれから誘導される少なくとも1つの抗原性ペプチド又はタンパク質をコードする第一の態様による少なくとも1つのRNAを含む。 In a preferred embodiment, the composition comprises a first protein encoding at least one antigenic peptide or protein that is or is derived from the SARS-CoV-2 spike protein, or an immunogenic fragment or variant thereof. at least one RNA according to embodiments of the present invention.

好ましい実施形態では、組成物は、第一の態様によるSARS-CoV-2スパイクタンパク質、又はその免疫原性フラグメント若しくは免疫原性バリアントから選択されるか、又は誘導される少なくとも1つの抗原性ペプチド又はタンパク質をコードする少なくとも1つのRNAを含み、ここで、前記組成物は、好ましくは、筋肉内又は皮内投与されるものである。 In a preferred embodiment, the composition comprises at least one antigenic peptide selected from or derived from the SARS-CoV-2 spike protein according to the first aspect, or an immunogenic fragment or variant thereof; at least one RNA encoding a protein, wherein the composition is preferably administered intramuscularly or intradermally.

好ましくは、前記組成物の筋肉内又は皮内投与は、対象におけるコードされるSARS-CoV-2スパイクタンパク質構築物の発現をもたらす。好ましい実施形態では、組成物の投与は、RNAの翻訳をもたらし、対象におけるコードされるSARS-CoV-2スパイクタンパク質の産生に至る。 Preferably, intramuscular or intradermal administration of the composition results in expression of the encoded SARS-CoV-2 spike protein construct in the subject. In a preferred embodiment, administration of the composition results in translation of the RNA and production of the encoded SARS-CoV-2 spike protein in the subject.

好ましくは、第二の態様の組成物は、ワクチンに適しており、特に、SARS-CoV-2ワクチン、好ましくは、以下のSARS-CoV-2分離株:C.1.2(南アフリカ)、B.1.1.529(オミクロン、南アフリカ)(BA.1_v1、BA.1_v0、B.1.1.529、BA.2、BA.1_v2、BA.1_v3、BA.1_v4、BA.1_v5を含む)、C.36.3(タイ)、B.1.619(カメルーン)、R.1(ケンタッキー、米国)、B.1.1.176(カナダ)、AZ.3、AY.1(インド)、AY.2(インド)、AY.4(インド)、AY.4.2(デルタプラス、インド)、B.1.617.3(インド)、B.1.351(ベータ、南アフリカ)、B.1.1.7(アルファ、英国)、P.1(ガンマ、ブラジル)、B.1.427/B.1.429(イプシロン、カリフォルニア、米国)、B.1.525(エータ、ナイジェリア)、B.1.258(チェコ共和国)、B.1.526(イオタ、ニューヨーク、米国)、A.23.1(ウガンダ)、B.1.617.1(カッパー、インド)、B.1.617.2(デルタ、インド)、P.2(ゼータ、ブラジル)、C37.1(ラムダ、ペルー)、P.3(シータ、フィリピン)、及び/又はB.1.621(ミュー、コロンビア)の少なくとも1つに対するSARS-CoV-2ワクチンに適している。 Preferably, the composition of the second aspect is suitable for a vaccine, in particular a SARS-CoV-2 vaccine, preferably for the following SARS-CoV-2 isolates: C.1.2 (South Africa), B.1.1 .529 (Omicron, South Africa) (includes BA.1_v1, BA.1_v0, B.1.1.529, BA.2, BA.1_v2, BA.1_v3, BA.1_v4, BA.1_v5), C.36.3 (Thailand) ), B.1.619 (Cameroon), R.1 (Kentucky, USA), B.1.1.176 (Canada), AZ.3, AY.1 (India), AY.2 (India), AY.4 (India) ), AY.4.2 (Delta Plus, India), B.1.617.3 (India), B.1.351 (Beta, South Africa), B.1.1.7 (Alpha, UK), P.1 (Gamma, Brazil), B.1.427/B.1.429 (Epsilon, California, USA), B.1.525 (Eta, Nigeria), B.1.258 (Czech Republic), B.1.526 (Iota, New York, USA), A.23.1 (Uganda), B.1.617.1 (Copper, India), B.1.617.2 (Delta, India), P.2 (Zeta, Brazil), C37.1 (Lambda, Peru), P.3 (Theta, Philippines), and / or suitable for SARS-CoV-2 vaccines against at least one of B.1.621 (Mu, Colombia).

特に好ましい実施形態では、第二の態様の組成物は、B.1.351(ベータ、南アフリカ)に対するSARS-CoV-2ワクチンに適している。 In a particularly preferred embodiment, the composition of the second aspect is suitable for a SARS-CoV-2 vaccine against B.1.351 (Beta, South Africa).

特に好ましい実施形態では、第二の態様の組成物は、B.1.617.2、AY.1、AY.2、AY.4又はAY.4.2に対するSARS-CoV-2ワクチンに適している。 In a particularly preferred embodiment, the composition of the second aspect is suitable for a SARS-CoV-2 vaccine against B.1.617.2, AY.1, AY.2, AY.4 or AY.4.2.

特に好ましい実施形態では、第二の態様の組成物は、B.1.617.2に対するSARS-CoV-2ワクチンに適している。 In a particularly preferred embodiment, the composition of the second aspect is suitable for a SARS-CoV-2 vaccine against B.1.617.2.

特に好ましい実施形態では、第二の態様の組成物は、B.1.1.529、B.1.1.529.1/BA.1(オミクロン)及び/又はB.1.1.529.2/BA.2に対するSARS-CoV-2ワクチンに適している。 In a particularly preferred embodiment, the composition of the second aspect is directed against SARS-CoV- 2 suitable for vaccines.

特に好ましい実施形態では、第二の態様の組成物は、BA.1_v1、BA.1_v0、B.1.1.529、BA.2、BA.1_v2、BA.1_v3、BA.1_v4、及び/又はBA.1_v5に対するSARS-CoV-2ワクチンに適している。 In particularly preferred embodiments, the composition of the second aspect comprises BA.1_v1, BA.1_v0, B.1.1.529, BA.2, BA.1_v2, BA.1_v3, BA.1_v4, and/or BA. Suitable for SARS-CoV-2 vaccine against 1_v5.

特に好ましい実施形態では、第二の態様の組成物は、B.1.1.529及びB.1.617.2に対するSARS-CoV-2ワクチンに適している。 In a particularly preferred embodiment, the composition of the second aspect is suitable for SARS-CoV-2 vaccines against B.1.1.529 and B.1.617.2.

本発明の文脈では、「組成物」は、特定の成分(例えば、SARS-CoV-2から、例えば、脂質ベースの担体と関連して選択されるか、又は誘導される少なくとも1つの抗原性ペプチド又はタンパク質をコードするRNA)が、場合により、任意のさらなる構成要素と共に、通常、少なくとも1つの薬学的に許容される担体又は賦形剤と共に取り込まれ得る、任意のタイプの組成物を指す。組成物は、乾燥組成物、例えば、粉末若しくは顆粒、又は固形単位、例えば、凍結乾燥された形態であってもよい。或いは、組成物は、液体形態であってもよく、それぞれの構成要素は、溶解又は分散された(例えば、懸濁されたか、若しくは乳化された)形態で独立して取り込まれてもよい。 In the context of the present invention, a "composition" refers to at least one antigenic peptide selected or derived from certain components (e.g. SARS-CoV-2, e.g. in association with a lipid-based carrier). or RNA encoding a protein) may be incorporated, optionally with any additional components, usually with at least one pharmaceutically acceptable carrier or excipient. The composition may be in the form of a dry composition, eg a powder or granules, or a solid unit, eg lyophilized. Alternatively, the composition may be in liquid form and each component may be incorporated separately in dissolved or dispersed (eg, suspended or emulsified) form.

第二の態様の好ましい実施形態では、組成物は、第一の態様の少なくとも1つのRNA、及び場合により、少なくとも1つの薬学的に許容される担体又は賦形剤を含む。 In a preferred embodiment of the second aspect, the composition comprises at least one RNA of the first aspect and optionally at least one pharmaceutically acceptable carrier or excipient.

本明細書で使用される場合、用語「薬学的に許容される担体」又は「薬学的に許容される賦形剤」は、好ましくは、投与のための組成物の液体又は非液体主成分を含む。組成物が液体形態で提供される場合、担体は、水、例えば、パイロジェンを含まない水;等張食塩水又は緩衝(水)溶液、例えば、リン酸塩、クエン酸塩など、緩衝溶液であってもよい。ナトリウム塩、好ましくは、少なくとも50mMのナトリウム塩、カルシウム塩、好ましくは、少なくとも0.01mMのカルシウム塩、及び場合により、カリウム塩、好ましくは、少なくとも3mMのカリウム塩を含有する、水又は好ましくは緩衝液、より好ましくは、水性緩衝液が使用されてもよい。好ましい実施形態によると、ナトリウム、カルシウム及び場合により、カリウム塩は、それらのハロゲン化物、例えば、塩化物、ヨウ化物、又は臭化物の形態、それらの水酸化物、炭酸塩、炭酸水素、若しくは硫酸塩の形態などで生じてもよい。ナトリウム塩の例としては、NaCl、NaI、NaBr、Na2CO3、NaHCO3、Na2SO4が挙げられ、場合によるカリウム塩の例としては、KCl、KI、KBr、K2CO3、KHCO3、K2SO4が挙げられ、カルシウム塩の例としては、CaCl2、CaI2、CaBr2、CaCO3、CaSO4、Ca(OH)2が挙げられる。 As used herein, the term "pharmaceutically acceptable carrier" or "pharmaceutically acceptable excipient" preferably refers to a liquid or non-liquid base component of a composition for administration. include. When the composition is provided in liquid form, the carrier can be water, e.g., pyrogen-free water; isotonic saline or a buffered (aqueous) solution, e.g., phosphate, citrate, and the like. You can. Water or preferably a buffer containing a sodium salt, preferably at least 50mM sodium salt, a calcium salt, preferably at least 0.01mM calcium salt, and optionally a potassium salt, preferably at least 3mM potassium salt. More preferably, an aqueous buffer may be used. According to a preferred embodiment, the sodium, calcium and optionally potassium salts are in the form of their halides, e.g. chlorides, iodides or bromides, their hydroxides, carbonates, bicarbonates or sulphates. It may occur in the form of Examples of sodium salts include NaCl, NaI, NaBr , Na2CO3 , NaHCO3 , Na2SO4 ; examples of optional potassium salts include KCl, KI, KBr , K2CO3 , KHCO Examples of calcium salts include CaCl2 , CaI2 , CaBr2 , CaCO3 , CaSO4 , Ca(OH) 2 .

さらに、前述のカチオンの有機アニオンは、緩衝液中であってもよい。したがって、実施形態では、核酸組成物は、例えば、in vivoでの安定性を増加させ、細胞トランスフェクションを増加させ、持続性若しくは遅延性を可能にし、コードされるコロナウイルスタンパク質の翻訳を増加させ、及び/又はin vivoでのコードされるコロナウイルスタンパク質の放出プロファイルを変更させるための1つ以上の薬学的に許容される担体又は賦形剤を使用した、薬学的に許容される担体又は賦形剤を含んでもよい。伝統的な賦形剤、例えば、任意及びすべての溶媒、分散媒、希釈剤、又は他の液体ビヒクルに加えて、本発明の分散又は懸濁助剤、表面活性剤、等張剤、増粘又は乳化剤、保存剤、賦形剤は、限定することなく、リピドイド、リポソーム、脂質ナノ粒子、ポリマー、リポプレックス、コアシェルナノ粒子、ペプチド、タンパク質、ポリヌクレオチドでトランスフェクトされた細胞、ヒアルロニダーゼ、ナノ粒子模倣物及びそれらの組み合わせを含むことができる。実施形態では、1つ以上の適合性固体若しくは液体充填剤又は希釈剤又は封入化合物は、同様に使用されてもよく、それらは、対象への投与に好適である。本明細書で使用される場合、用語「適合性」は、組成物の構成要素が、典型的な使用条件(例えば、筋肉内又は皮内投与)下での組成物の生物学的活性又は医薬有効性を実質的に低減する相互作用が生じない様式で、組成物の少なくとも1つの核酸及び場合により複数の核酸と混合される能力があることを意味する。薬学的に許容される担体又は賦形剤は、処置されるべき対象への投与に適するように十分に高い純度及び十分に低い毒性を有さなければならない。薬学的に許容される担体又は賦形剤として使用され得る化合物は、糖、例えば、ラクトース、グルコース、トレハロース、マンノース、及びスクロース;デンプン、例えば、トウモロコシデンプン又はジャガイモデンプン;デキストロース;セルロース及びその誘導体、例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロース、酢酸セルロース;粉末トラガカント;麦芽;ゼラチン;獣脂;固体滑剤、例えば、ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム;硫酸カルシウム塩;植物油、例えば、落花生油、綿実油、ゴマ油、オリーブ油、トウモロコシ油及びカカオ属由来の油;ポリオール、例えば、ポリプロピレングリコール、グリセロール、ソルビトール、マンニトール及びポリエチレングリコール;アルギン酸であってもよい。 Additionally, the organic anions of the aforementioned cations may be in a buffer. Thus, in embodiments, the nucleic acid compositions can, for example, increase stability in vivo, increase cellular transfection, enable persistence or delay, and increase translation of encoded coronavirus proteins. and/or using one or more pharmaceutically acceptable carriers or excipients to alter the release profile of the encoded coronavirus protein in vivo. It may also contain excipients. In addition to traditional excipients, such as any and all solvents, dispersion media, diluents, or other liquid vehicles, the present dispersion or suspension aids, surfactants, isotonic agents, thickeners, etc. or emulsifiers, preservatives, excipients, including, without limitation, lipidoids, liposomes, lipid nanoparticles, polymers, lipoplexes, core-shell nanoparticles, cells transfected with peptides, proteins, polynucleotides, hyaluronidase, nanoparticles. can include mimetics and combinations thereof. In embodiments, one or more compatible solid or liquid fillers or diluents or encapsulating compounds may be used as well, which are suitable for administration to a subject. As used herein, the term "compatibility" means that the components of the composition exhibit the biological activity or pharmaceutical activity of the composition under typical conditions of use (e.g., intramuscular or intradermal administration). It is meant to be capable of being mixed with at least one nucleic acid and optionally multiple nucleic acids of the composition in a manner that does not result in interactions that substantially reduce efficacy. A pharmaceutically acceptable carrier or excipient must have sufficiently high purity and sufficiently low toxicity to be suitable for administration to the subject to be treated. Compounds that can be used as pharmaceutically acceptable carriers or excipients include sugars, such as lactose, glucose, trehalose, mannose, and sucrose; starches, such as corn starch or potato starch; dextrose; cellulose and its derivatives; For example, sodium carboxymethylcellulose, ethylcellulose, cellulose acetate; powdered tragacanth; malt; gelatin; tallow; solid lubricants, such as stearic acid, magnesium stearate; calcium sulfate; vegetable oils, such as peanut oil, cottonseed oil, sesame oil, olive oil, corn oils and oils from the cocoa genus; polyols such as polypropylene glycol, glycerol, sorbitol, mannitol and polyethylene glycol; alginic acid.

組成物の少なくとも1つの薬学的に許容される担体又は賦形剤は、好ましくは、前記組成物の筋肉内又は皮内送達/投与に好適であるよう選択されてもよい。したがって、組成物は、好ましくは、医薬組成物、好適には、筋肉内投与用の組成物である。 The at least one pharmaceutically acceptable carrier or excipient of the composition may preferably be selected to be suitable for intramuscular or intradermal delivery/administration of said composition. The composition is therefore preferably a pharmaceutical composition, preferably a composition for intramuscular administration.

組成物、好ましくは、医薬組成物の投与が企図される対象は、限定するものではないが、ヒト及び/若しくは他の霊長類;商業的に関連する哺乳動物、例えば、ウシ、ブタ、ウマ、ヒツジ、ネコ、イヌ、マウス、及び/若しくはラットを含む哺乳動物;並びに/又は商業的に関連する鳥類、例えば、家禽、ニワトリ、アヒル、ガチョウ、及び/又は七面鳥を含む鳥類を含む。 Subjects to which the composition, preferably the pharmaceutical composition, is intended to be administered include, but are not limited to, humans and/or other primates; commercially relevant mammals such as cows, pigs, horses, Mammals, including sheep, cats, dogs, mice, and/or rats; and/or commercially relevant birds, including poultry, chickens, ducks, geese, and/or turkeys.

本発明の医薬組成物は、好適には、無菌及び/又はパイロジェンを含まないものであり得る。 Pharmaceutical compositions of the invention may suitably be sterile and/or pyrogen-free.

本発明の多価組成物:
実施形態では、本明細書において定義される組成物(例えば、多価組成物)は、本発明の第一の態様の文脈で定義されるRNA種の複数又は1つより多くを含んでもよい。好ましくは、本明細書において定義される組成物は、それぞれ第一の態様の文脈で定義される2、3、4、5、6、7、8、9、又は10個の異なるRNA種を含み得る。 Multivalent composition of the invention:
In embodiments, a composition as defined herein (eg, a multivalent composition) may comprise a plurality or more than one of the RNA species as defined in the context of the first aspect of the invention. Preferably, the composition as defined herein comprises 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 or 10 different RNA species, each defined in the context of the first aspect. obtain.

実施形態では、組成物(例えば、多価組成物)は、それぞれ少なくとも1つの異なるSARS-CoV-2スパイクタンパク質(第一の態様の文脈で定義される)をコードする、第一の態様の文脈で定義される少なくとも2、3、4、5、6、7、8、9、10個又はさらに多い異なるRNA種を含む。 In embodiments, the compositions (e.g., multivalent compositions) each encode at least one different SARS-CoV-2 spike protein (as defined in the context of the first aspect). at least 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 or more different RNA species defined as

この文脈で、異なるSARS-CoV-2スパイクタンパク質又は融合前の安定化されたスパイクタンパク質が、
・K986、V987P、A67V、H69del、V70del、T95I、G142D、V143del、Y144del、Y145del、N211del、L212I、ins214EPE、G339D、S371L、S373P、S375F、S477N、T478K、E484A、Q493R、G496S、Q498R、N501Y、Y505H、T547K、D614G、H655Y、N679K、P681H、N764K、D796Y、N856K、Q954H、N969K、及びL981F;
・K986P、V987P、A67V、H69del、V70del、T95I、G142D、V143del、Y144del、Y145del、N211del、L212I、ins214EPE、G339D、S371L、S373P、S375F、K417N、N440K、G446S、S477N、T478K、E484A、Q493R、G496S、Q498R、N501Y、Y505H、T547K、D614G、H655Y、N679K、P681H、N764K、D796Y、N856K、Q954H、N969K、及びL981F;
・K986P、V987P、A67V、T95I、G339D、S371L、S373P、S375F、S477N、T478K、E484A、Q493R、G496S、Q498R、N501Y、Y505H、T547K、D614G、H655Y、N679K、P681H、D796Y、N856K、Q954H、N969K、及びL981F;
・K986P、V987P、T19I、L24del、P25del、P26del、A27S、G142D、V213G、G339D、S371F、S373P、S375F、T376A、D405N、S477N、T478K、E484A、Q493R、Q498R、N501Y、Y505H、D614G、H655Y、N679K、P681H、D796Y、Q954H、及びN969K;
・K986P、V987P、A67V、H69del、V70del、T95I、G142D、V143del、Y144del、Y145del、N211del、L212I、ins214EPE、G339D、S371L、S373P、S375F、N440K、S477N、T478K、E484A、Q493R、G496S、Q498R、N501Y、Y505H、T547K、D614G、H655Y、N679K、P681H、N764K、D796Y、N856K、Q954H、N969K、及びL981F;
・K986P、V987P、A67V、H69del、V70del、T95I、G142D、V143del、Y144del、Y145del、N211del、L212I、ins214EPE、G339D、S371L、S373P、S375F、S477N、T478K、E484A、Q493R、G496S、Q498R、N501Y、Y505H、T547K、D614G、H655Y、N679K、P681H、D796Y、N856K、Q954H、N969K、及びL981F;
・K986P、V987P、A67V、H69del、V70del、T95I、G142D、V143del、Y144del、Y145del、N211del、L212I、ins214EPE、G339D、S371L、S373P、S375F、S477N、T478K、E484A、Q493R、G496S、Q498R、N501Y、Y505H、T547K、D614G、H655Y、N679K、P681H、A701V、N764K、D796Y、N856K、Q954H、N969K、及びL981F;
・K986P、V987P、A67V、H69del、V70del、T95I、G142D、V143del、Y144del、Y145del、N211del、L212I、ins214EPE、G339D、S371L、S373P、S375F、G446S、S477N、T478K、E484A、Q493R、G496S、Q498R、N501Y、Y505H、T547K、D614G、H655Y、N679K、P681H、N764K、D796Y、N856K、Q954H、N969K、及びL981F;
・E484K、N501Y、L18F、D80A、D215G、L242del、A243del、L244del、R246I、K417N、D614G、及びA701V;
・E484K、N501Y、L18F、D80A、D215G、L242del、A243del、L244del、K417N、D614G、及びA701V;
・E484K、N501Y、L18F、T20N、P26S、D138Y、R190S、K417T、D614G、H655Y、及びT1027I;
・E484K、N501Y、L18F、T20N、P26S、D138Y、R190S、K417T、D614G、H655Y、T1027I、及びV1176F;
・L452R、P681R、及びD614G;
・L452R、E484Q、P681R、E154K、D614G、及びQ1071H;又は
・L452R、P681R、T19R、F157del、R158del、T478K、D614G、及びD950N
を含むスパイクタンパク質におけるアミノ酸変化を有することが、さらに好ましい。 In this context, different SARS-CoV-2 spike proteins or pre-fusion stabilized spike proteins
・K986, V987P, A67V, H69del, V70del, T95I, G142D, V143del, Y144del, Y145del, N211del, L212I, ins214EPE, G339D, S371L, S373P, S375F, S477N, T478K, E484A, Q493R, G496S, Q498R, N501Y, Y505H , T547K, D614G, H655Y, N679K, P681H, N764K, D796Y, N856K, Q954H, N969K, and L981F;
・K986P, V987P, A67V, H69del, V70del, T95I, G142D, V143del, Y144del, Y145del, N211del, L212I, ins214EPE, G339D, S371L, S373P, S375F, K417N, N440K, G446S, S477N , T478K, E484A, Q493R, G496S , Q498R, N501Y, Y505H, T547K, D614G, H655Y, N679K, P681H, N764K, D796Y, N856K, Q954H, N969K, and L981F;
・K986P, V987P, A67V, T95I, G339D, S371L, S373P, S375F, S477N, T478K, E484A, Q493R, G496S, Q498R, N501Y, Y505H, T547K, D614G, H655Y, N679K, P681 H, D796Y, N856K, Q954H, N969K , and L981F;
・K986P, V987P, T19I, L24del, P25del, P26del, A27S, G142D, V213G, G339D, S371F, S373P, S375F, T376A, D405N, S477N, T478K, E484A, Q493R, Q498R, N501Y, Y 505H, D614G, H655Y, N679K , P681H, D796Y, Q954H, and N969K;
・K986P, V987P, A67V, H69del, V70del, T95I, G142D, V143del, Y144del, Y145del, N211del, L212I, ins214EPE, G339D, S371L, S373P, S375F, N440K, S477N, T478K, E484A ,Q493R,G496S,Q498R,N501Y , Y505H, T547K, D614G, H655Y, N679K, P681H, N764K, D796Y, N856K, Q954H, N969K, and L981F;
・K986P, V987P, A67V, H69del, V70del, T95I, G142D, V143del, Y144del, Y145del, N211del, L212I, ins214EPE, G339D, S371L, S373P, S375F, S477N, T478K, E484A, Q493R , G496S, Q498R, N501Y, Y505H , T547K, D614G, H655Y, N679K, P681H, D796Y, N856K, Q954H, N969K, and L981F;
・K986P, V987P, A67V, H69del, V70del, T95I, G142D, V143del, Y144del, Y145del, N211del, L212I, ins214EPE, G339D, S371L, S373P, S375F, S477N, T478K, E484A, Q493R , G496S, Q498R, N501Y, Y505H , T547K, D614G, H655Y, N679K, P681H, A701V, N764K, D796Y, N856K, Q954H, N969K, and L981F;
・K986P, V987P, A67V, H69del, V70del, T95I, G142D, V143del, Y144del, Y145del, N211del, L212I, ins214EPE, G339D, S371L, S373P, S375F, G446S, S477N, T478K, E484A ,Q493R,G496S,Q498R,N501Y , Y505H, T547K, D614G, H655Y, N679K, P681H, N764K, D796Y, N856K, Q954H, N969K, and L981F;
・E484K, N501Y, L18F, D80A, D215G, L242del, A243del, L244del, R246I, K417N, D614G, and A701V;
・E484K, N501Y, L18F, D80A, D215G, L242del, A243del, L244del, K417N, D614G, and A701V;
・E484K, N501Y, L18F, T20N, P26S, D138Y, R190S, K417T, D614G, H655Y, and T1027I;
・E484K, N501Y, L18F, T20N, P26S, D138Y, R190S, K417T, D614G, H655Y, T1027I, and V1176F;
・L452R, P681R, and D614G;
・L452R, E484Q, P681R, E154K, D614G, and Q1071H; or ・L452R, P681R, T19R, F157del, R158del, T478K, D614G, and D950N
It is further preferred to have an amino acid change in the spike protein comprising:

この文脈で、異なるSARS-CoV-2スパイクタンパク質又は融合前の安定化されたスパイクタンパク質が、
・E484K、N501Y、L18F、D80A、D215G、L242del、A243del、L244del、R246I、K417N、D614G、及びA701V;又は
・E484K、N501Y、L18F、D80A、D215G、L242del、A243del、L244del、K417N、D614G、及びA701V
を含むスパイクタンパク質におけるアミノ酸変化を有することが、なおより好ましい。 In this context, different SARS-CoV-2 spike proteins or pre-fusion stabilized spike proteins may
・E484K, N501Y, L18F, D80A, D215G, L242del, A243del, L244del, R246I, K417N, D614G, and A701V; or ・E484K, N501Y, L18F, D80A, D215G, L242del, A243del, L244del, K41 7N, D614G, and A701V
It is even more preferred to have an amino acid change in the spike protein comprising.

この文脈で、異なるSARS-CoV-2スパイクタンパク質又は融合前の安定化されたスパイクタンパク質が、
スパイクタンパク質における以下のアミノ酸変化:
K986P、V987P、A67V、H69del、V70del、T95I、G142D、V143del、Y144del、Y145del、N211del、L212I、ins214EPE、G339D、S371L、S373P、S375F、S477N、T478K、E484A、Q493R、G496S、Q498R、N501Y、Y505H、T547K、D614G、H655Y、N679K、P681H、N764K、D796Y、N856K、Q954H、N969K、及びL981F
を有する少なくとも1つのSARS-CoV-2スパイクタンパク質又は融合前の安定化されたスパイクタンパク質;並びに
スパイクタンパク質における以下のアミノ酸変化:
L452R、E484Q、P681R、E154K、D614G、及びQ1071H;若しくは
L452R、P681R、T19R、F157del、R158del、T478K、D614G、及びD950N
を有する少なくとも1つのSARS-CoV-2スパイクタンパク質又は融合前の安定化されたスパイクタンパク質
を含むスパイクタンパク質におけるアミノ酸変化を有することが、なおより好ましい。 In this context, different SARS-CoV-2 spike proteins or pre-fusion stabilized spike proteins
The following amino acid changes in the spike protein:
K986P, V987P, A67V, H69del, V70del, T95I, G142D, V143del, Y144del, Y145del, N211del, L212I, ins214EPE, G339D, S371L, S373P, S375F, S477N, T478K, E484A, Q493R, G 496S, Q498R, N501Y, Y505H, T547K, D614G, H655Y, N679K, P681H, N764K, D796Y, N856K, Q954H, N969K, and L981F
at least one SARS-CoV-2 spike protein or pre-fusion stabilized spike protein having the following amino acid changes in the spike protein:
L452R, E484Q, P681R, E154K, D614G, and Q1071H; or
L452R, P681R, T19R, F157del, R158del, T478K, D614G, and D950N
It is even more preferred to have an amino acid change in the spike protein, including at least one SARS-CoV-2 spike protein having a pre-fusion stabilized spike protein.

好ましい実施形態では、組成物(例えば、多価組成物)は、2、3、4又は5個のRNA種及び場合により、少なくとも1つの薬学的に許容される担体又は賦形剤を含み、ここで、前記RNA種は、配列番号22792、22794、22796、22798、22800、22802、22804、22806、22808、22810、22812、23529～23534、27386～27408、23535～23552、27409～27431、23590～23606、27478～27500、28736～28776、28638～28686、28777～28825、28925～28928、28933～28936からなる群から選択される核酸配列と同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一である核酸配列を含むか、又はそれからなり、ここで、2、3、4又は5個の核酸種のそれぞれは、異なるSARS-CoV-2スパイクタンパク質をコードする。 In preferred embodiments, the composition (e.g., a multivalent composition) comprises 2, 3, 4 or 5 RNA species and optionally at least one pharmaceutically acceptable carrier or excipient, wherein The RNA species are SEQ ID NOs: 22792, 22794, 22796, 22798, 22800, 22802, 22804, 22806, 22808, 22810, 22812, 23529-23534, 27386-27408, 23535-23552, 27409-27431, 23590～23606 , or at least 70%, 80%, 85%, Contains nucleic acid sequences that are 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical , or consisting of 2, 3, 4 or 5 nucleic acid species, each of which encodes a different SARS-CoV-2 spike protein.

好ましい実施形態では、組成物(例えば、多価組成物)は、2、3、4又は5個のRNA種及び場合により、少なくとも1つの薬学的に許容される担体又は賦形剤を含み、ここで、前記RNA種は、配列番号24837～24854、27524～27546、24855～24872、27547～27569、24909～24926、27616～27638、28827～28866、28687～28735、28867～28915、28937～28940からなる群から選択される核酸配列と同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一である核酸配列を含むか、又はそれからなり、ここで、2、3、4又は5個の核酸種のそれぞれは、異なるSARS-CoV-2スパイクタンパク質をコードする。 In preferred embodiments, the composition (e.g., a multivalent composition) comprises 2, 3, 4 or 5 RNA species and optionally at least one pharmaceutically acceptable carrier or excipient, wherein The RNA species are SEQ ID NOs: 24837-24854, 27524-27546, 24855-24872, 27547-27569, 24909-24926, 27616-27638, 28827-28866, 28687-28735, 28867-28915, 28937- Consists of 28940 or at least 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94% identical to a nucleic acid sequence selected from the group , comprising or consisting of nucleic acid sequences that are 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical, where each of the 2, 3, 4, or 5 nucleic acid species is a different SARS- Encodes the CoV-2 spike protein.

以下で、多価組成物の特に好ましい実施形態が提供される。 Below, particularly preferred embodiments of multivalent compositions are provided.

好ましい実施形態では、多価組成物は、配列番号10のいずれか1つと同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一であるアミノ酸配列をコードするコード配列を含む1つのRNA種を含み、ここで、多価組成物は、さらに、
i)配列番号27108～27109のいずれか1つと同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一であるアミノ酸配列をコードするコード配列を含む1個のRNA種;及び/又は
ii)配列番号22960～22961、28540のいずれか1つと同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一であるアミノ酸配列をコードするコード配列を含む1個のRNA種;及び/又は
iii)配列番号27093～27095、28552～28558のいずれか1つと同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一であるアミノ酸配列をコードするコード配列を含む1個のRNA種;及び/又は
iv)配列番号27096、28545のいずれか1つと同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一であるアミノ酸配列をコードするコード配列を含む1個のRNA種;及び/又は
v)配列番号22959のいずれか1つと同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一であるアミノ酸配列をコードするコード配列を含む1個のRNA種;及び/又は
vi)配列番号27095、28552～28558のいずれか1つと同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一であるアミノ酸配列をコードするコード配列を含む1個のRNA種;及び/又は
vii)配列番号27095のいずれか1つと同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一であるアミノ酸配列をコードするコード配列を含む1個のRNA種;及び/又は
viii)配列番号28541～28544、28917～28920のいずれか1つと同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一であるアミノ酸配列をコードするコード配列を含む1個のRNA種
から選択される少なくとも2、3、4個のさらなるRNA種を含む。 In preferred embodiments, the multivalent composition is identical to any one of SEQ ID NO: 10, or at least 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, one RNA species comprising a coding sequence that encodes an amino acid sequence that is 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical, where multiple The composition further comprises:
i) Identical to any one of SEQ ID NOs: 27108-27109, or at least 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93 %, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical coding sequences; and/or
ii) Identical to, or at least 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92% of any one of SEQ ID NO: 22960-22961, 28540 , one RNA species comprising a coding sequence that encodes an amino acid sequence that is 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical; and/or
iii) is identical to or at least 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, one RNA species comprising a coding sequence that encodes an amino acid sequence that is 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical; and/or
iv) Identical to any one of SEQ ID NO: 27096, 28545, or at least 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93 %, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical coding sequences; and/or
v) is identical to, or at least 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93% to any one of SEQ ID NO: 22959; one RNA species comprising a coding sequence that encodes an amino acid sequence that is 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical; and/or
vi) is at least 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92% identical to any one of SEQ ID NOs: 27095, 28552 to 28558; , one RNA species comprising a coding sequence that encodes an amino acid sequence that is 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical; and/or
vii) is identical to, or at least 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93% to any one of SEQ ID NO: 27095; one RNA species comprising a coding sequence that encodes an amino acid sequence that is 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical; and/or
viii) is at least 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91% identical to any one of SEQ ID NOs: 28541-28544, 28917-28920; at least two, three, selected from one RNA species comprising a coding sequence encoding an amino acid sequence that is 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical; Contains 4 additional RNA species.

好ましい実施形態では、多価組成物は、配列番号27093～27095、28552～28558のいずれか1つと同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一であるアミノ酸配列をコードするコード配列を含む1個のRNA種を含み、ここで、多価組成物は、さらに、
i)配列番号27108～27109のいずれか1つと同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一であるアミノ酸配列をコードするコード配列を含む1個のRNA種;及び/又は
ii)配列番号22960～22961、28540のいずれか1つと同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一であるアミノ酸配列をコードするコード配列を含む1個のRNA種;及び/又は
iii)配列番号10のいずれか1つと同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一であるアミノ酸配列をコードするコード配列を含む1個のRNA種;及び/又は
iv)配列番号27096、28545のいずれか1つと同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一であるアミノ酸配列をコードするコード配列を含む1個のRNA種;及び/又は
v)配列番号22959のいずれか1つと同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一であるアミノ酸配列をコードするコード配列を含む1個のRNA種;及び/又は
vi)配列番号28541～28544、28917～28920のいずれか1つと同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一であるアミノ酸配列をコードするコード配列を含む1個のRNA種
から選択される少なくとも2、3、4個のさらなるRNA種を含む。 In preferred embodiments, the multivalent composition is identical to, or at least 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, One RNA species that contains a coding sequence that encodes an amino acid sequence that is 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical wherein the multivalent composition further comprises:
i) Identical to any one of SEQ ID NOs: 27108-27109, or at least 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93 %, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical coding sequences; and/or
ii) Identical to, or at least 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92% of any one of SEQ ID NO: 22960-22961, 28540 , one RNA species comprising a coding sequence that encodes an amino acid sequence that is 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical; and/or
iii) is identical to, or at least 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93% to any one of SEQ ID NO: 10; one RNA species comprising a coding sequence that encodes an amino acid sequence that is 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical; and/or
iv) Identical to any one of SEQ ID NO: 27096, 28545, or at least 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93 %, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical coding sequences; and/or
v) is identical to, or at least 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93% to any one of SEQ ID NO: 22959; one RNA species comprising a coding sequence that encodes an amino acid sequence that is 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical; and/or
vi) is at least 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91% identical to any one of SEQ ID NOs: 28541-28544, 28917-28920; at least two, three, selected from one RNA species comprising a coding sequence encoding an amino acid sequence that is 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical; Contains 4 additional RNA species.

好ましい実施形態では、多価組成物は、配列番号27095、28552～28558のいずれか1つと同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一であるアミノ酸配列をコードするコード配列を含む1個のRNA種を含み、ここで、多価組成物は、さらに、
i)配列番号27108～27109のいずれか1つと同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一であるアミノ酸配列をコードするコード配列を含む1個のRNA種;及び/又は
ii)配列番号22960～22961、28540のいずれか1つと同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一であるアミノ酸配列をコードするコード配列を含む1個のRNA種;及び/又は
iii)配列番号10のいずれか1つと同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一であるアミノ酸配列をコードするコード配列を含む1個のRNA種;及び/又は
iv)配列番号27096、28545のいずれか1つと同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一であるアミノ酸配列をコードするコード配列を含む1個のRNA種;及び/又は
v)配列番号22959のいずれか1つと同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一であるアミノ酸配列をコードするコード配列を含む1個のRNA種;及び/又は
vi)配列番号28541～28544、28917～28920のいずれか1つと同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一であるアミノ酸配列をコードするコード配列を含む1個のRNA種
から選択される少なくとも2、3、4個のさらなるRNA種を含む。 In preferred embodiments, the multivalent composition is at least 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89% identical to any one of SEQ ID NOs: 27095, 28552-28558. , one RNA species comprising a coding sequence encoding an amino acid sequence that is 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical , where the multivalent composition further comprises:
i) Identical to any one of SEQ ID NOs: 27108-27109, or at least 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93 %, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical coding sequences; and/or
ii) Identical to, or at least 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92% of any one of SEQ ID NO: 22960-22961, 28540 , one RNA species comprising a coding sequence that encodes an amino acid sequence that is 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical; and/or
iii) is identical to, or at least 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93% to any one of SEQ ID NO: 10; one RNA species comprising a coding sequence that encodes an amino acid sequence that is 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical; and/or
iv) Identical to any one of SEQ ID NO: 27096, 28545, or at least 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93 %, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical coding sequences; and/or
v) is identical to, or at least 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93% to any one of SEQ ID NO: 22959; one RNA species comprising a coding sequence that encodes an amino acid sequence that is 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical; and/or
vi) is at least 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91% identical to any one of SEQ ID NOs: 28541-28544, 28917-28920; at least two, three, selected from one RNA species comprising a coding sequence encoding an amino acid sequence that is 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical; Contains 4 additional RNA species.

好ましい実施形態では、多価組成物は、配列番号27095のいずれか1つと同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一であるアミノ酸配列をコードするコード配列を含む1個のRNA種を含み、ここで、多価組成物は、さらに、
i)配列番号27108～27109のいずれか1つと同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一であるアミノ酸配列をコードするコード配列を含む1個のRNA種;及び/又は
ii)配列番号22960～22961、28540のいずれか1つと同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一であるアミノ酸配列をコードするコード配列を含む1個のRNA種;及び/又は
iii)配列番号10のいずれか1つと同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一であるアミノ酸配列をコードするコード配列を含む1個のRNA種;及び/又は
iv)配列番号27096、28545のいずれか1つと同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一であるアミノ酸配列をコードするコード配列を含む1個のRNA種;及び/又は
v)配列番号22959のいずれか1つと同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一であるアミノ酸配列をコードするコード配列を含む1個のRNA種;及び/又は
vi)配列番号28541～28544、28917～28920のいずれか1つと同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一であるアミノ酸配列をコードするコード配列を含む1個のRNA種
から選択される少なくとも2、3、4個のさらなるRNA種を含む。 In preferred embodiments, the multivalent composition is identical to any one of SEQ ID NO: 27095, or at least 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, one RNA species comprising a coding sequence encoding an amino acid sequence that is 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical, where: The multivalent composition further comprises:
i) Identical to any one of SEQ ID NOs: 27108-27109, or at least 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93 %, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical coding sequences; and/or
ii) Identical to, or at least 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92% of any one of SEQ ID NO: 22960-22961, 28540 , one RNA species comprising a coding sequence that encodes an amino acid sequence that is 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical; and/or
iii) is identical to, or at least 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93% to any one of SEQ ID NO: 10; one RNA species comprising a coding sequence that encodes an amino acid sequence that is 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical; and/or
iv) Identical to any one of SEQ ID NO: 27096, 28545, or at least 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93 %, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical coding sequences; and/or
v) is identical to, or at least 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93% to any one of SEQ ID NO: 22959; one RNA species comprising a coding sequence that encodes an amino acid sequence that is 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical; and/or
vi) is at least 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91% identical to any one of SEQ ID NOs: 28541-28544, 28917-28920; at least two, three, selected from one RNA species comprising a coding sequence encoding an amino acid sequence that is 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical; Contains 4 additional RNA species.

好ましい実施形態では、多価組成物は、配列番号22960～22961、28540のいずれか1つと同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一であるアミノ酸配列をコードするコード配列を含む1個のRNA種を含み、ここで、多価組成物は、さらに、
i)配列番号27108～27109のいずれか1つと同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一であるアミノ酸配列をコードするコード配列を含む1個のRNA種;及び/又は
ii)配列番号10のいずれか1つと同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一であるアミノ酸配列をコードするコード配列を含む1個のRNA種;及び/又は
iii)配列番号27093～27095、28552～28558のいずれか1つと同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一であるアミノ酸配列をコードするコード配列を含む1個のRNA種;及び/又は
iv)配列番号27096、28545のいずれか1つと同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一であるアミノ酸配列をコードするコード配列を含む1個のRNA種;及び/又は
v)配列番号22959のいずれか1つと同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一であるアミノ酸配列をコードするコード配列を含む1個のRNA種;及び/又は
vi)配列番号27095、28552～28558のいずれか1つと同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一であるアミノ酸配列をコードするコード配列を含む1個のRNA種;及び/又は
vii)配列番号27095のいずれか1つと同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一であるアミノ酸配列をコードするコード配列を含む1個のRNA種;及び/又は
viii)配列番号28541～28544、28917～28920のいずれか1つと同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一であるアミノ酸配列をコードするコード配列を含む1個のRNA種
から選択される少なくとも2、3、4個のさらなるRNA種を含む。 In preferred embodiments, the multivalent composition is at least 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89% identical to any one of SEQ ID NO: 22960-22961, 28540 , one RNA species comprising a coding sequence encoding an amino acid sequence that is 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical , where the multivalent composition further comprises:
i) Identical to any one of SEQ ID NOs: 27108-27109, or at least 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93 %, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical coding sequences; and/or
ii) is identical to, or at least 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93% to any one of SEQ ID NO: 10; one RNA species comprising a coding sequence that encodes an amino acid sequence that is 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical; and/or
iii) is identical to or at least 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, one RNA species comprising a coding sequence that encodes an amino acid sequence that is 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical; and/or
iv) Identical to any one of SEQ ID NO: 27096, 28545, or at least 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93 %, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical coding sequences; and/or
v) is identical to, or at least 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93% to any one of SEQ ID NO: 22959; one RNA species comprising a coding sequence that encodes an amino acid sequence that is 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical; and/or
vi) is at least 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92% identical to any one of SEQ ID NOs: 27095, 28552 to 28558; , one RNA species comprising a coding sequence that encodes an amino acid sequence that is 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical; and/or
vii) is identical to, or at least 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93% to any one of SEQ ID NO: 27095; one RNA species comprising a coding sequence that encodes an amino acid sequence that is 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical; and/or
viii) is at least 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91% identical to any one of SEQ ID NOs: 28541-28544, 28917-28920; at least two, three, selected from one RNA species comprising a coding sequence encoding an amino acid sequence that is 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical; Contains 4 additional RNA species.

好ましい実施形態では、多価組成物は、配列番号28541～28544、28917～28920のいずれか1つと同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一であるアミノ酸配列をコードするコード配列を含む1個のRNA種を含み、ここで、多価組成物は、さらに、
i)配列番号27108～27109のいずれか1つと同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一であるアミノ酸配列をコードするコード配列を含む1個のRNA種;及び/又は
ii)配列番号10のいずれか1つと同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一であるアミノ酸配列をコードするコード配列を含む1個のRNA種;及び/又は
iii)配列番号27093～27095、28552～28558のいずれか1つと同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一であるアミノ酸配列をコードするコード配列を含む1個のRNA種;及び/又は
iv)配列番号27096、28545のいずれか1つと同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一であるアミノ酸配列をコードするコード配列を含む1個のRNA種;及び/又は
v)配列番号22959のいずれか1つと同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一であるアミノ酸配列をコードするコード配列を含む1個のRNA種;及び/又は
vi)配列番号27095、28552～28558のいずれか1つと同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一であるアミノ酸配列をコードするコード配列を含む1個のRNA種;及び/又は
vii)配列番号27095のいずれか1つと同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一であるアミノ酸配列をコードするコード配列を含む1個のRNA種;及び/又は
viii)配列番号22960～22961、28540のいずれか1つと同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一であるアミノ酸配列をコードするコード配列を含む1個のRNA種
から選択される少なくとも2、3、4個のさらなるRNA種を含む。 In preferred embodiments, the multivalent composition is identical to, or at least 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, One RNA species that contains a coding sequence that encodes an amino acid sequence that is 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical wherein the multivalent composition further comprises:
i) Identical to any one of SEQ ID NOs: 27108-27109, or at least 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93 %, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical coding sequences; and/or
ii) is identical to, or at least 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93% to any one of SEQ ID NO: 10; one RNA species comprising a coding sequence that encodes an amino acid sequence that is 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical; and/or
iii) is identical to or at least 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, one RNA species comprising a coding sequence that encodes an amino acid sequence that is 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical; and/or
iv) Identical to any one of SEQ ID NO: 27096, 28545, or at least 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93 %, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical coding sequences; and/or
v) is identical to, or at least 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93% to any one of SEQ ID NO: 22959; one RNA species comprising a coding sequence that encodes an amino acid sequence that is 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical; and/or
vi) is at least 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92% identical to any one of SEQ ID NOs: 27095, 28552 to 28558; , one RNA species comprising a coding sequence that encodes an amino acid sequence that is 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical; and/or
vii) is identical to, or at least 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93% to any one of SEQ ID NO: 27095; one RNA species comprising a coding sequence that encodes an amino acid sequence that is 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical; and/or
viii) is at least 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92% identical to any one of SEQ ID NO: 22960-22961, 28540; , 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical to at least 2, 3, or 4 RNA species selected from one RNA species comprising coding sequences encoding amino acid sequences that are 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical. further RNA species.

好ましい実施形態では、組成物、好ましくは、多価組成物は、C.1.2(南アフリカ)、B.1.1.529(オミクロン、南アフリカ)(BA.1_v1、BA.1_v0、B.1.1.529、BA.2、BA.1_v2、BA.1_v3、BA.1_v4、BA.1_v5を含む)、C.36.3(タイ)、B.1.619(カメルーン)、R.1(ケンタッキー、米国)、B.1.1.176(カナダ)、AZ.3、AY.1(インド)、AY.2(インド)、AY.4(インド)、AY.4.2(デルタプラス、インド)、B.1.617.3(インド)、B.1.351(ベータ、南アフリカ)、B.1.1.7(アルファ、英国)、P.1(ガンマ、ブラジル)、B.1.427/B.1.429(イプシロン、カリフォルニア、米国)、B.1.525(エータ、ナイジェリア)、B.1.258(チェコ共和国)、B.1.526(イオタ、ニューヨーク、米国)、A.23.1(ウガンダ)、B.1.617.1(カッパー、インド)、B.1.617.2(デルタ、インド)、P.2(ゼータ、ブラジル)、C37.1(ラムダ、ペルー)、P.3(シータ、フィリピン)、及び/又はB.1.621(ミュー、コロンビア)に対するワクチンに適している。 In a preferred embodiment, the composition, preferably a multivalent composition, is C.1.2 (South Africa), B.1.1.529 (Omicron, South Africa) (BA.1_v1, BA.1_v0, B.1.1.529, BA .2, BA.1_v2, BA.1_v3, BA.1_v4, BA.1_v5), C.36.3 (Thailand), B.1.619 (Cameroon), R.1 (Kentucky, USA), B.1.1.176 (Canada), AZ.3, AY.1 (India), AY.2 (India), AY.4 (India), AY.4.2 (Delta Plus, India), B.1.617.3 (India), B. 1.351 (Beta, South Africa), B.1.1.7 (Alpha, UK), P.1 (Gamma, Brazil), B.1.427/B.1.429 (Epsilon, California, USA), B.1.525 (Eta, Nigeria) , B.1.258 (Czech Republic), B.1.526 (Iota, New York, USA), A.23.1 (Uganda), B.1.617.1 (Copper, India), B.1.617.2 (Delta, India), P .2 (Zeta, Brazil), C37.1 (Lambda, Peru), P.3 (Theta, Philippines), and/or B.1.621 (Mu, Colombia).

実施形態では、組成物に含まれるRNAは、約100ng～約500μgの量で、約1μg～約200μgの量で、約1μg～約100μgの量で、約5μg～約100μgの量で、好ましくは、約10μg～約50μgの量で、具体的には、約1μg、2μg、3μg、4μg、5μg、6μg、7μg、8μg、9μg、10μg、11μg、12μg、13μg、14μg、15μg、20μg、25μg、30μg、35μg、40μg、45μg、50μg、55μg、60μg、65μg、70μg、75μg、80μg、85μg、90μg、95μg又は100μgの量で提供される。 In embodiments, the RNA included in the composition is in an amount of about 100 ng to about 500 μg, in an amount of about 1 μg to about 200 μg, in an amount of about 1 μg to about 100 μg, preferably in an amount of about 5 μg to about 100 μg. , in an amount of about 10 μg to about 50 μg, specifically about 1 μg, 2 μg, 3 μg, 4 μg, 5 μg, 6 μg, 7 μg, 8 μg, 9 μg, 10 μg, 11 μg, 12 μg, 13 μg, 14 μg, 15 μg, 20 μg, 25 μg, Provided in amounts of 30μg, 35μg, 40μg, 45μg, 50μg, 55μg, 60μg, 65μg, 70μg, 75μg, 80μg, 85μg, 90μg, 95μg or 100μg.

組成物が、本明細書において定義されるRNA種の複数又は少なくとも1個より多くを含む場合(多価組成物)、それぞれのRNA種についてのRNAの量は、約100ng～約500μgの量で、約1μg～約200μgの量で、約1μg～約100μgの量で、約5μg～約100μgの量で、好ましくは、約10μg～約50μgの量で、具体的には、約1μg、2μg、3μg、4μg、5μg、6μg、7μg、8μg、9μg、10μg、11μg、12μg、13μg、14μg、15μg、20μg、25μg、30μg、35μg、40μg、45μg、50μg、55μg、60μg、65μg、70μg、75μg、80μg、85μg、90μg、95μg又は100μgの量で提供される。 If the composition comprises more than one or more than one of the RNA species defined herein (a multivalent composition), the amount of RNA for each RNA species is in an amount of about 100 ng to about 500 μg. , in an amount of about 1 μg to about 200 μg, in an amount of about 1 μg to about 100 μg, in an amount of about 5 μg to about 100 μg, preferably in an amount of about 10 μg to about 50 μg, specifically about 1 μg, 2 μg, 3μg, 4μg, 5μg, 6μg, 7μg, 8μg, 9μg, 10μg, 11μg, 12μg, 13μg, 14μg, 15μg, 20μg, 25μg, 30μg, 35μg, 40μg, 45μg, 50μg, 55μg, 60μg, 65μg, 70μg, 75μg, Provided in amounts of 80μg, 85μg, 90μg, 95μg or 100μg.

一部の実施形態では、それぞれのRNA種についてのRNAの量は、本質的には質量が等しい。他の実施形態では、それぞれのRNA種についてのRNAの量は、等モルであるよう選択される。 In some embodiments, the amount of RNA for each RNA species is essentially equal in mass. In other embodiments, the amount of RNA for each RNA species is selected to be equimolar.

複合体化:
第二の態様の好ましい実施形態では、少なくとも1つのRNA、好ましくは、少なくとも1つのmRNAを、さらなる化合物と複合体化するか、又は会合させて、複合体化された製剤化組成物が得られる。複合体化された製剤は、トランスフェクション剤の機能を有し得る。複合体化された製剤化組成物はまた、RNA及び/又はmRNAを分解から保護する機能を有し得る。 Complexation:
In a preferred embodiment of the second aspect, at least one RNA, preferably at least one mRNA, is complexed or associated with a further compound to obtain a complexed formulated composition. . The complexed formulation may have the function of a transfection agent. The complexed formulated composition may also function to protect RNA and/or mRNA from degradation.

第二の態様の好ましい実施形態では、少なくとも1つのRNA、好ましくは、少なくとも1つのmRNA、及び場合により少なくとも1つのさらなるRNAは、1つ以上のカチオン性若しくはポリカチオン性化合物、好ましくは、カチオン性若しくはポリカチオン性ポリマー、カチオン性若しくはポリカチオン性多糖、カチオン性若しくはポリカチオン性脂質、カチオン性若しくはポリカチオン性タンパク質、カチオン性若しくはポリカチオン性ペプチド、又はそれらの任意の組み合わせと複合体化されるか、若しくは会合されるか、又は少なくとも部分的に複合体化されるか、若しくは部分的に会合される。 In a preferred embodiment of the second aspect, at least one RNA, preferably at least one mRNA, and optionally at least one further RNA, is one or more cationic or polycationic compounds, preferably cationic or is complexed with a polycationic polymer, a cationic or polycationic polysaccharide, a cationic or polycationic lipid, a cationic or polycationic protein, a cationic or polycationic peptide, or any combination thereof. or associated or at least partially complexed or partially associated.

本明細書で使用される場合、用語「カチオン性又はポリカチオン性化合物」は、当業者によって認識され、理解され、例えば、約1～9の範囲にあるpH値で、約3～8の範囲にあるpH値で、約4～8の範囲にあるpH値で、約5～8の範囲にあるpH値で、より好ましくは、約6～8の範囲にあるpH値で、なおより好ましくは、約7～8の範囲にあるpH値で、最も好ましくは、例えば、約7.2～約7.5の範囲にある生理学的pHで正に荷電されている、荷電された分子を指すことが意図される。したがって、カチオン性成分、例えば、カチオン性ペプチド、カチオン性タンパク質、カチオン性ポリマー、カチオン性多糖、カチオン性脂質は、生理学的条件下で正に荷電されている任意の正に荷電された化合物又はポリマーであってもよい。「カチオン性若しくはポリカチオン性ペプチド又はタンパク質」は、例えば、Arg、His、Lys若しくはOrnから選択される少なくとも1個の正に荷電されたアミノ酸、又は1個より多くの正に荷電されたアミノ酸を含有してもよい。したがって、「ポリカチオン性」成分はまた、所定の条件下での1つより多くの正電荷を示す範囲内である。 As used herein, the term "cationic or polycationic compound" is recognized and understood by those skilled in the art and is, for example, at a pH value in the range of about 1 to 9, in the range of about 3 to 8. at a pH value in the range of about 4 to 8, more preferably at a pH value in the range of about 5 to 8, even more preferably at a pH value in the range of about 6 to 8. , is intended to refer to a charged molecule that is positively charged at a pH value ranging from about 7 to 8, most preferably at a physiological pH ranging from about 7.2 to about 7.5. . Thus, a cationic component, such as a cationic peptide, cationic protein, cationic polymer, cationic polysaccharide, cationic lipid, can be any positively charged compound or polymer that is positively charged under physiological conditions. It may be. A "cationic or polycationic peptide or protein" includes at least one positively charged amino acid selected from, for example, Arg, His, Lys or Orn, or more than one positively charged amino acid. May be contained. Thus, "polycationic" moieties are also within ranges that exhibit more than one positive charge under given conditions.

この文脈で特に好ましいカチオン性又はポリカチオン性化合物は、以下のリストのカチオン性若しくはポリカチオン性ペプチド又はタンパク質又はそのフラグメント:プロタミン、ヌクレオリン、スペルミン若しくはスペルミジン、又は他のカチオン性ペプチド若しくはタンパク質、例えば、ポリ-L-リジン(PLL)、ポリ-アルギニン、塩基性ポリペプチド、HIV結合ペプチド、HIV-1 Tat(HIV)、Tat誘導ペプチド、ペネトラチン、VP22誘導若しくはアナログペプチドを含む細胞透過性ペプチド(CPP)、HSV VP22(単純ヘルペス)、MAP、KALA若しくはタンパク質形質導入ドメイン(PTD)、PpT620、プロリンリッチなペプチド、アルギニンリッチなペプチド、リジンリッチなペプチド、MPGペプチド、Pep-1、L-オリゴマー、カルシトニンペプチド、アンテナペディア誘導ペプチド、pAntp、pIsl、FGF、ラクトフェリン、トランスポータン、ブホリン-2、Bac715-24、SynB、SynB(1)、pVEC、hCT誘導ペプチド、SAP、或いはヒストンから選択され得る。より好ましくは、核酸(例えば、DNA又はRNA)、例えば、コードRNA、好ましくは、mRNAは、1つ以上のポリカチオンと、好ましくはプロタミン又はオリゴフェクタミンと、最も好ましくはプロタミンと複合体化される。 Particularly preferred cationic or polycationic compounds in this context are cationic or polycationic peptides or proteins or fragments thereof of the following list: protamine, nucleolin, spermine or spermidine, or other cationic peptides or proteins, e.g. Cell-penetrating peptides (CPPs) including poly-L-lysine (PLL), poly-arginine, basic polypeptides, HIV-binding peptides, HIV-1 Tat (HIV), Tat-inducing peptides, penetratin, VP22-inducing or analogue peptides , HSV VP22 (herpes simplex), MAP, KALA or protein transduction domain (PTD), PpT620, proline-rich peptide, arginine-rich peptide, lysine-rich peptide, MPG peptide, Pep-1, L-oligomer, calcitonin peptide , Antennapedia-inducing peptide, pAntp, pIsl, FGF, lactoferrin, transportan, buforin-2, Bac715-24, SynB, SynB(1), pVEC, hCT-inducing peptide, SAP, or histones. More preferably, the nucleic acid (e.g. DNA or RNA), e.g. coding RNA, preferably mRNA, is complexed with one or more polycations, preferably with protamine or oligofectamine, most preferably with protamine. be done.

トランスフェクション又は複合体化剤として使用することができるさらに好ましいカチオン性又はポリカチオン性化合物は、カチオン性多糖、例えば、キトサン、ポリブレンなど;カチオン性脂質、例えば、DOTMA、DMRIE、ジ-C14-アミジン、DOTIM、SAINT、DC-Chol、BGTC、CTAP、DOPC、DODAP、DOPE:ジオレイルホスファチジルエタノール-アミン、DOSPA、DODAB、DOIC、DMEPC、DOGS、DIMRI、DOTAP、DC-6-14、CLIP1、CLIP6、CLIP9、オリゴフェクタミン;又はカチオン性若しくはポリカチオン性ポリマー、例えば、修飾されたポリアミノ酸、例えば、ベータ-アミノ酸-ポリマー若しくは逆性ポリアミドなど、修飾されたポリエチレン、例えば、PVPなど、修飾されたアクリレート、例えば、pDMAEMAなど、修飾されたアミドアミン、例えば、pAMAMなど、修飾されたポリベータアミノエステル(PBAE)、例えば、ジアミン末端が修飾された1,4ブタンジオールジアクリレート-co-5-アミノ-1-ペンタノールポリマーなど、デンドリマー、例えば、ポリプロピルアミンデンドリマー若しくはpAMAMベースのデンドリマーなど、ポリイミン、例えば、PEI、ポリ(プロピレンイミン)など、ポリアリルアミン、糖骨格ベースのポリマー、例えば、シクロデキストリンベースのポリマー、デキストランベースのポリマーなど、シラン骨格ベースのポリマー、例えば、PMOXA-PDMSコポリマーなど、1つ以上のカチオン性ブロック(例えば、上述のカチオン性ポリマーから選択される)と1つ以上の親水性若しくは疎水性ブロック(例えば、ポリエチレングリコール)の組み合わせからなるブロックポリマーなどを含んでもよい。 Further preferred cationic or polycationic compounds that can be used as transfection or complexing agents are cationic polysaccharides such as chitosan, polybrene, etc.; cationic lipids such as DOTMA, DMRIE, di-C14-amidine. , DOTIM, SAINT, DC-Chol, BGTC, CTAP, DOPC, DODAP, DOPE:dioleylphosphatidylethanol-amine, DOSPA, DODAB, DOIC, DMEPC, DOGS, DIMRI, DOTAP, DC-6-14, CLIP1, CLIP6, CLIP9, oligofectamine; or cationic or polycationic polymers, e.g. modified polyamino acids, e.g. beta-amino acid-polymers or reverse polyamides, modified polyethylenes, e.g. PVP, etc. acrylates, e.g. pDMAEMA, modified amidoamines, e.g. pAMAM, modified polybeta-amino esters (PBAEs), e.g. diamine-terminated 1,4-butanediol diacrylate-co-5-amino- 1-pentanol polymers, dendrimers, e.g. polypropylamine dendrimers or pAMAM-based dendrimers, polyimines, e.g. PEI, poly(propylene imine), etc., polyallylamines, sugar backbone-based polymers, e.g. cyclodextrin-based polymers. , a silane backbone-based polymer, such as a dextran-based polymer, e.g. a PMOXA-PDMS copolymer, with one or more cationic blocks (e.g. selected from the cationic polymers mentioned above) and one or more hydrophilic or hydrophobic It may also include a block polymer consisting of a combination of polyethylene glycol blocks (eg, polyethylene glycol).

様々な実施形態によると、本発明の組成物は、少なくとも1つのRNA、好ましくは、第一の態様の文脈で定義された少なくとも1つのmRNA、及びポリマー性担体を含む。 According to various embodiments, the composition of the invention comprises at least one RNA, preferably at least one mRNA as defined in the context of the first aspect, and a polymeric carrier.

本明細書で使用される場合、用語「ポリマー性担体」は、当業者によって認識され、理解され、例えば、別の化合物(例えば、カーゴ核酸)の輸送及び/又は複合体化を促進する化合物を指すことが意図される。ポリマー性担体は、典型的には、ポリマーから形成される担体である。ポリマー性担体は、共有結合性又は非共有結合性相互作用によって、そのカーゴ(例えば、DNA、又はRNA)に会合されてもよい。ポリマーは、異なるサブユニット、例えば、コポリマーに基づいてもよい。 As used herein, the term "polymeric carrier" is recognized and understood by those skilled in the art and includes, for example, a compound that facilitates the transport and/or complexation of another compound (e.g., a cargo nucleic acid). intended to point. A polymeric carrier is typically a carrier formed from a polymer. A polymeric carrier may be associated with its cargo (eg, DNA, or RNA) by covalent or non-covalent interactions. Polymers may be based on different subunits, for example copolymers.

その文脈での、好適なポリマー性担体は、例えば、ポリアクリレート、ポリアルキシアノアクリレート、ポリ乳酸、ポリ乳酸-ポリグリコリドコポリマー、ポリカプロラクトン、デキストラン、アルブミン、ゼラチン、アルギン酸塩、コラーゲン、キトサン、シクロデキストリン、プロタミン、ペグ化プロタミン、ペグ化PLL及びポリエチレンイミン(PEI)、ジチオビス(スクシンイミジルプロピオン酸塩)(DSP)、ジメチル-3,3'-ジチオビスプロピオンイミデート(DTBP)、ポリ(エチレンイミン)ビスカルバメート(PEIC)、ポリ(L-リジン)(PLL)、ヒスチジン修飾されたPLL、ポリ(N-ビニルピロリドン)(PVP)、ポリ(プロピレンイミン(PPI)、ポリ(アミドアミン)(PAMAM)、ポリ(アミドエチレンイミン)(SS-PAEI)、トリエチレンテトラミン(TETA)、ポリ(β-アミノエステル)、ポリ(4-ヒドロキシ-L-プロインエステル)(PHP)、ポリ(アリルアミン)、ポリ(α-[4-アミノブチル]-L-グリコール酸(PAGA)、ポリ(D,L-乳酸-co-グリコール酸(PLGA)、ポリ(N-エチル-4-ビニルピリジニウムブロミド)、ポリ(ホスファゼン)(PPZ)、ポリ(ホスホエステル)(PPE)、ポリ(ホスホルアミデート)(PPA)、ポリ(N-2-ヒドロキシプロピルメタクリルアミド)(pHPMA)、ポリ(2-(ジメチルアミノ)エチルメタクリレート)(pDMAEMA)、ポリ(2-アミノエチルプロピレンホスフェート)PPE_EA)、ガラクトシル化キトサン、N-ドデシル化キトサン、ヒストン、コラーゲン及びデキストラン-スペルミンを含んでもよい。一実施形態では、ポリマーは、不活性なポリマー、例えば、限定するものではないが、PEGであってもよい。一実施形態では、ポリマーは、カチオン性ポリマー、例えば、限定するものではないが、PEI、PLL、TETA、ポリ(アリルアミン)、ポリ(N-エチル-4-ビニルピリジニウムブロミド)、pHPMA及びpDMAEMAであってもよい。一実施形態では、ポリマーは、生分解性PEI、例えば、限定するものではないが、DSP、DTBP及びPEICであってもよい。一実施形態では、ポリマーは、生分解性、例えば、限定するものではないが、ヒスチジン修飾されたPLL、SS-PAEI、ポリ(β-アミノエステル)、PHP、PAGA、PLGA、PPZ、PPE、PPA及びPPE-EAであってもよい。 In that context, suitable polymeric carriers are, for example, polyacrylates, polyalxianoacrylates, polylactic acid, polylactic acid-polyglycolide copolymers, polycaprolactone, dextran, albumin, gelatin, alginate, collagen, chitosan, cyclodextrin. , protamine, pegylated protamine, pegylated PLL and polyethyleneimine (PEI), dithiobis(succinimidylpropionate) (DSP), dimethyl-3,3'-dithiobispropionimidate (DTBP), poly(ethylene imine) biscarbamate (PEIC), poly(L-lysine) (PLL), histidine-modified PLL, poly(N-vinylpyrrolidone) (PVP), poly(propylene imine (PPI), poly(amidoamine) (PAMAM) , poly(amide ethyleneimine) (SS-PAEI), triethylenetetramine (TETA), poly(β-amino ester), poly(4-hydroxy-L-proine ester) (PHP), poly(allylamine), poly (α-[4-aminobutyl]-L-glycolic acid (PAGA), poly(D,L-lactic-co-glycolic acid (PLGA), poly(N-ethyl-4-vinylpyridinium bromide), poly(phosphazene) ) (PPZ), poly(phosphoester) (PPE), poly(phosphoramidate) (PPA), poly(N-2-hydroxypropylmethacrylamide) (pHPMA), poly(2-(dimethylamino)ethyl methacrylate) ) (pDMAEMA), poly(2-aminoethylpropylene phosphate) PPE_EA), galactosylated chitosan, N-dodecylated chitosan, histones, collagen and dextran-spermine. In one embodiment, the polymer is an inert The polymer may be a cationic polymer, such as, but not limited to, PEG. In one embodiment, the polymer may be a cationic polymer, such as, but not limited to, PEI, PLL, TETA, poly(allylamine), Poly(N-ethyl-4-vinylpyridinium bromide), pHPMA and pDMAEMA. In one embodiment, the polymer is a biodegradable PEI, such as, but not limited to, DSP, DTBP and PEIC. In one embodiment, the polymer is biodegradable, such as, but not limited to, histidine-modified PLL, SS-PAEI, poly(β-amino ester), PHP, PAGA, PLGA, May be PPZ, PPE, PPA and PPE-EA.

LNP中への封入/複合体化:
第二の態様の好ましい実施形態では、少なくとも1つのRNA、好ましくは、少なくとも1つのmRNA、及び場合により、少なくとも1つのさらなるRNAは、1つ以上の脂質(例えば、カチオン性脂質及び/又は中性脂質)と複合体化され、封入され、部分的に封入されるか、又は会合されて、これにより、脂質ベースの担体、例えば、リポソーム、脂質ナノ粒子(LNP)、リポプレックス、及び/又はナノリポソームが形成される。 Encapsulation/complexation in LNP:
In a preferred embodiment of the second aspect, the at least one RNA, preferably at least one mRNA, and optionally at least one further RNA, comprises one or more lipids (e.g. cationic lipids and/or neutral lipids). lipids), thereby forming lipid-based carriers, such as liposomes, lipid nanoparticles (LNPs), lipoplexes, and/or nanoparticles. Liposomes are formed.

リポソーム、脂質ナノ粒子(LNP)、リポプレックス、及び/又はナノリポソームに取り込まれたRNAは、脂質層/膜内の、リポソーム、脂質ナノ粒子(LNP)、リポプレックス、及び/若しくはナノリポソームの内部空間に完全若しくは部分的に位置するか、又は脂質層/膜の外部表面と会合し得る。 RNA incorporated into liposomes, lipid nanoparticles (LNPs), lipoplexes, and/or nanoliposomes can be found within the lipid layer/membrane, inside the liposomes, lipid nanoparticles (LNPs), lipoplexes, and/or nanoliposomes. It may be located completely or partially in space or associated with the external surface of the lipid layer/membrane.

RNAのリポソーム/LNPへの取り込みは、本明細書において、「封入」とも称され、ここで、RNAは、リポソーム、脂質ナノ粒子(LNP)、リポプレックス、及び/又はナノリポソームの内部空間に完全に含有される。RNAをリポソーム、脂質ナノ粒子(LNP)、リポプレックス、及び/又はナノリポソームを取り込む目的は、核酸の迅速な排出を引き起こす核酸及び/又は系若しくは受容体を分解する酵素又は化学物質又は条件を含有し得る環境からRNAを保護することである。さらに、RNAをリポソーム、脂質ナノ粒子(LNP)、リポプレックス、及び/又はナノリポソームに取り込むことは、RNAの取り込みを促進し得、故に、抗原性SARS-CoV-2スパイクタンパク質をコードするRNAの治療効果を強化し得る。したがって、少なくとも1つのRNAをリポソーム、脂質ナノ粒子(LNP)、リポプレックス、及び/又はナノリポソームに取り込むことは、SARS-CoV-2ワクチン、例えば、筋肉内及び/又は皮内投与に特に好適であり得る。 The incorporation of RNA into liposomes/LNPs is also referred to herein as "encapsulation," where the RNA is completely contained within the interior space of liposomes, lipid nanoparticles (LNPs), lipoplexes, and/or nanoliposomes. Contained in The purpose of incorporating RNA into liposomes, lipid nanoparticles (LNPs), lipoplexes, and/or nanoliposomes containing enzymes or chemicals or conditions that degrade the nucleic acids and/or systems or receptors that cause rapid excretion of the nucleic acids The goal is to protect RNA from the environment that can damage it. Furthermore, incorporating RNA into liposomes, lipid nanoparticles (LNPs), lipoplexes, and/or nanoliposomes may facilitate the uptake of RNA and, therefore, the uptake of RNA encoding the antigenic SARS-CoV-2 spike protein. It may enhance the therapeutic effect. Therefore, incorporating at least one RNA into liposomes, lipid nanoparticles (LNPs), lipoplexes, and/or nanoliposomes is particularly suitable for SARS-CoV-2 vaccines, e.g. intramuscular and/or intradermal administration. could be.

この文脈では、用語「複合体化された」又は「会合された」は、共有結合なしでより大きい複合体又は集合体へのRNAの1つ以上の脂質との本質的に安定な組み合わせを指す。 In this context, the term "complexed" or "associated" refers to the essentially stable combination of RNA with one or more lipids into a larger complex or assembly without covalent bonds. .

「LNP」とも称される、用語「脂質ナノ粒子」は、任意の特定の形態に限定されず、カチオン性脂質及び場合により1つ以上のさらなる脂質が例えば、水性環境中及び/又はRNAの存在下で合わされた場合に生じる任意の形態を含む。例えば、リポソーム、脂質複合体、リポプレックスなどは、脂質ナノ粒子(LNP)の範囲内にある。 The term "lipid nanoparticles", also referred to as "LNPs", is not limited to any particular form, and may include cationic lipids and optionally one or more further lipids, e.g. in an aqueous environment and/or in the presence of RNA. Includes any form that occurs when combined below. For example, liposomes, lipid complexes, lipoplexes, etc. are within the scope of lipid nanoparticles (LNPs).

リポソーム、脂質ナノ粒子(LNP)、リポプレックス、及び/又はナノリポソームは、異なるサイズ、例えば、限定するものではないが、直径が数百ナノメートルであり得、細い水性区画によって分けられた一連の同心円状二重層を含有し得る多重層小胞(MLV)、直径が50nmより短くてもよい小細胞性小胞(SUV)、及び直径50nm～500nmであり得る大きな単層小胞(LUV)のものであることができる。 Liposomes, lipid nanoparticles (LNPs), lipoplexes, and/or nanoliposomes can be of different sizes, such as, but not limited to, hundreds of nanometers in diameter, and are a series of nanoparticles separated by thin aqueous compartments. multilamellar vesicles (MLVs), which may contain concentric bilayers, small cellular vesicles (SUVs), which may be less than 50 nm in diameter, and large unilamellar vesicles (LUVs), which may be between 50 nm and 500 nm in diameter. It can be something.

本発明のLNPは、好適には、1つ以上の二重層の膜によって外側の媒体から隔離された内部の水空間を有する顕微鏡レベルの小胞として特徴付けられる。LNPの二重層の膜は、典型的には、両親媒性分子、例えば、空間的に分けられた親水性及び疎水性ドメインを含む合成又は天然起源の脂質によって形成される。リポソームの二重層の膜はまた、両親媒性ポリマー及び界面活性剤(例えば、ポリマーソーム、ニオソームなど)によって形成することができる。本発明の文脈では、LNPは、典型的には、標的組織へ少なくとも1つのRNAを輸送するのに働く。 The LNPs of the invention are preferably characterized as microscopic vesicles with an internal aqueous space separated from the outer medium by one or more bilayer membranes. Bilayer membranes of LNPs are typically formed by amphipathic molecules, such as lipids of synthetic or natural origin containing spatially separated hydrophilic and hydrophobic domains. Bilayer membranes of liposomes can also be formed by amphiphilic polymers and surfactants (eg, polymersomes, niosomes, etc.). In the context of the present invention, LNPs typically serve to transport at least one RNA to a target tissue.

したがって、第二の態様の好ましい実施形態では、少なくとも1つのRNAは、1つ以上の脂質と複合体化され、これにより、脂質ナノ粒子(LNP)が形成される。好ましくは、前記LNPは、筋肉内及び/又は皮内投与に特に適している。LNPは、典型的には、カチオン性脂質、並びに中性脂質、荷電された脂質、ステロイド及びポリマーコンジュゲートされた脂質(例えば、ペグ化脂質)から選択される1つ以上の賦形剤を含む。少なくとも1つのRNAは、LNPの脂質部分又はLNPの一部若しくは完全な脂質部分によって包膜された水性空間に封入されてもよい。RNA又はその部分はまた、LNPと会合し、複合体化されてもよい。LNPは、RNAが結合されるか、又は1つ以上のRNA種が封入される粒子を形成する能力がある任意の脂質を含み得る。好ましくは、RNAを含むLNPは、1つ以上のカチオン性脂質、及び1つ以上の安定化脂質を含む。安定化脂質は、中性脂質及びペグ化脂質を含む。 Accordingly, in a preferred embodiment of the second aspect, at least one RNA is complexed with one or more lipids, thereby forming lipid nanoparticles (LNPs). Preferably, said LNPs are particularly suitable for intramuscular and/or intradermal administration. LNPs typically include cationic lipids and one or more excipients selected from neutral lipids, charged lipids, steroids, and polymer-conjugated lipids (e.g., pegylated lipids). . At least one RNA may be encapsulated in the lipid portion of the LNP or in an aqueous space enveloped by a partial or complete lipid portion of the LNP. RNA or portions thereof may also be associated with and complexed with LNPs. LNPs can include any lipid capable of forming particles to which RNA is bound or into which one or more RNA species are encapsulated. Preferably, the LNP containing RNA includes one or more cationic lipids and one or more stabilizing lipids. Stabilizing lipids include neutral lipids and pegylated lipids.

好ましくは、本発明のLNPは、
(i)少なくとも1つのカチオン性脂質;
(ii)少なくとも1つの中性脂質;
(iii)少なくとも1つのステロイド又はステロイドアナログ、好ましくは、コレステロール;及び
(iv)少なくとも1つのポリマーコンジュゲートされた脂質、好ましくは、PEG脂質を含み、
ここで、(i)～(iv)は、約20～60%カチオン性脂質、5～25%中性脂質、25～55%ステロール、及び0.5～15%ポリマーコンジュゲートされた脂質のモル比である。 Preferably, the LNPs of the invention are
(i) at least one cationic lipid;
(ii) at least one neutral lipid;
(iii) at least one steroid or steroid analog, preferably cholesterol; and
(iv) comprising at least one polymer-conjugated lipid, preferably a PEG lipid;
where (i) to (iv) are the molar ratios of approximately 20-60% cationic lipids, 5-25% neutral lipids, 25-55% sterols, and 0.5-15% polymer-conjugated lipids. be.

LNPのカチオン性脂質は、カチオン化可能であってもよく、すなわち、pHが、脂質のイオン化可能な基のpK未満に下がるとプロトン化され、より高いpH値で漸進的により中性になる。次いで、pK未満のpH値で、脂質は、負に荷電された核酸と会合することができる。ある特定の実施形態では、カチオン性脂質は、pH減少に対して正電荷を帯びる双性イオン脂質を含む。 The cationic lipids of the LNPs may be cationizable, ie, become protonated when the pH falls below the pK of the ionizable groups of the lipids, becoming progressively more neutral at higher pH values. At pH values below pK, lipids can then associate with negatively charged nucleic acids. In certain embodiments, cationic lipids include zwitterionic lipids that are positively charged with respect to pH reduction.

このような脂質は、限定するものではないが、DSDMA、N,N-ジオレイル-N,N-ジメチルアンモニウムクロリド(DODAC)、N,N-ジステアリル-N,N-ジメチルアンモニウムブロミド(DDAB)、1,2-ジオレオイルトリメチルアンモニウムプロパンクロリド(DOTAP)(N-(2,3-ジオレオイルオキシ)プロピル)-N,N,N-トリメチルアンモニウムクロリド及び1,2-ジオレイルオキシ-3-トリメチルアミノプロパンクロリド塩としても知られる)、N-(1-(2,3-ジオレイルオキシ)プロピル)-N,N,N-トリメチルアンモニウムクロリド(DOTMA)、N,N-ジメチル-2,3-ジオレイルオキシ)プロピルアミン(DODMA)、ckk-E12、ckk、1,2-ジリノレイルオキシ-N,N-ジメチルアミノプロパン(DLinDMA)、1,2-ジリノレニルオキシ-N,N-ジメチルアミノプロパン(DLenDMA)、1,2-ジ-y-リノレニルオキシ-N,N-ジメチルアミノプロパン(γ-DLenDMA)、98N12-5、1,2-ジリノレイルカルバモイルオキシ-3-ジメチルアミノプロパン(DLin-C-DAP)、1,2-ジリノレイオキシ-3-(ジメチルアミノ)アセトキシプロパン(DLin-DAC)、1,2-ジリノレイオキシ-3-モルホリノプロパン(DLin-MA)、1,2-ジリノレオイル-3-ジメチルアミノプロパン(DLinDAP)、1,2-ジリノレイルチオ-3-ジメチルアミノプロパン(DLin-S-DMA)、1-リノレオイル-2-リノレイルオキシ-3-ジメチルアミノプロパン(DLin-2-DMAP)、1,2-ジリノレイルオキシ-3-トリメチルアミノプロパンクロリド塩(DLin-TMA.Cl)、ICE(イミダゾールベース)、HGT5000、HGT5001、DMDMA、CLinDMA、CpLinDMA、DMOBA、DOcarbDAP、DLincarbDAP、DLinCDAP、KLin-K-DMA、DLin-K-XTC2-DMA、XTC(2,2-ジリノレイル-4-ジメチルアミノエチル-[1,3]-ジオキソラン)HGT4003、1,2-ジリノレオイル-3-トリメチルアミノプロパンクロリド塩(DLin-TAP.Cl)、1,2-ジリノレイルオキシ-3-(N-メチルピペラジノ)プロパン(DLin-MPZ)、若しくは3-(N,N-ジリノレイルアミノ)-1,2-プロパンジオール(DLinAP)、3-(N,N-ジオレイルアミノ)-1,2-プロパンジオ(DOAP)、1,2-ジリノレイルオキソ-3-(2-N,N-ジメチルアミノ)エトキシプロパン(DLin-EG-DM A)、2,2-ジリノレイル-4-ジメチルアミノメチル-[1,3]-ジオキソラン(DLin-K-DMA)若しくはそのアナログ、(3aR,5s,6aS)-N,N-ジメチル-2,2-ジ((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニル)テトラヒドロ-3aH-シクロペンタ[d][1,3]ジオキソール-5-アミン、(6Z,9Z,28Z,31Z)-ヘプタトリアコンタ-6,9,28,31-テトラエン-19-イル-4-(ジメチルアミノ)ブタノエート(MC3)、ALNY-100((3aR,5s,6aS)-N,N-ジメチル-2,2-ジ((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニル)テトラヒドロ-3aH-シクロペンタ[d][1,3]ジオキソール-5-アミン))、1,1'-(2-(4-(2-((2-(ビス(2-ヒドロキシドデシル)アミノ)エチル)(2-ヒドロキシドデシル)アミノ)エチル)ピペラジン-1-イル)エチルアザネジイル)ジドデカン-2-オール(C12-200)、2,2-ジリノレイル-4-(2-ジメチルアミノエチル)-[1,3]-ジオキソラン(DLin-K-C2-DMA)、2,2-ジリノレイル-4-ジメチルアミノメチル-[1,3]-ジオキソラン(DLin-K-DMA)、NC98-5(4,7,13-トリス(3-オキソ-3-(ウンデシルアミノ)プロピル)-N1,N16-ジウンデシル-4,7,10,13-テトラアザヘキサデカン-1,16-ジアミド)、(6Z,9Z,28Z,31Z)-ヘプタトリアコンタ-6,9,28,31-テトラエン-19-イル4-(ジメチルアミノ)ブタノエート(DLin-M-C3-DMA)、3-((6Z,9Z,28Z,31Z)-ヘプタトリアコンタ-6,9,28,31-テトラエン-19-イルオキシ)-N,N-ジメチルプロパン-1-アミン(MC3エーテル)、4-((6Z,9Z,28Z,31Z)-ヘプタトリアコンタ-6,9,28,31-テトラエン-19-イルオキシ)-N,N-ジメチルブタン-1-アミン(MC4エーテル)、LIPOFECTIN(登録商標)(GIBCO/BRL、Grand Island、N.Y.からのDOTMA及び1,2-ジオレオイル-sn-3ホスホエタノールアミン(DOPE)を含む市販のカチオン性リポソーム);LIPOFECTAMINE(登録商標)(GIBCO/BRLからのN-(1-(2,3ジオレイルオキシ)プロピル)-N-(2-(スペルミンカルボキサミド)エチル)-N,N-ジメチルアンモニウムトリフルオロアセテート(DOSPA)及び(DOPE)を含む市販のカチオン性リポソーム);並びにTRANSFECTAM(登録商標)(Promega Corp.、Madison、Wis.からのエタノール中のジオクタデシルアミドグリシルカルボキシスペルミン(DOGS)を含む市販のカチオン性脂質）又は前述のいずれかの任意の組み合わせを含む。本発明の組成物及び方法において使用するためのさらなる好適なカチオン性脂質は、両方が参照により本明細書に取り込まれる、国際特許出願公開のWO2010/053572(及び特に、段落[00225]に記載されるCI 2-200)及びWO2012/170930に記載されるもの、HGT4003、HGT5000、HGTS001、HGT5001、HGT5002(US2015/0140070A1を参照)を含む。 Such lipids include, but are not limited to, DSDMA, N,N-dioleyl-N,N-dimethylammonium chloride (DODAC), N,N-distearyl-N,N-dimethylammonium bromide (DDAB), 1,2-Dioleoyltrimethylammoniumpropane chloride (DOTAP)(N-(2,3-dioleoyloxy)propyl)-N,N,N-trimethylammonium chloride and 1,2-dioleyloxy-3- (also known as trimethylaminopropane chloride salt), N-(1-(2,3-dioleyloxy)propyl)-N,N,N-trimethylammonium chloride (DOTMA), N,N-dimethyl-2,3 -dioleyloxy)propylamine (DODMA), ckk-E12, ckk, 1,2-dilinoleyloxy-N,N-dimethylaminopropane (DLinDMA), 1,2-dilinolenyloxy-N,N- Dimethylaminopropane (DLenDMA), 1,2-di-y-linolenyloxy-N,N-dimethylaminopropane (γ-DLenDMA), 98N12-5, 1,2-dilinoleylcarbamoyloxy-3-dimethylaminopropane ( DLin-C-DAP), 1,2-dilinoleoxy-3-(dimethylamino)acetoxypropane (DLin-DAC), 1,2-dilinoleoxy-3-morpholinopropane (DLin-MA), 1,2-dilinoleoyl-3 -dimethylaminopropane (DLinDAP), 1,2-dilinoleylthio-3-dimethylaminopropane (DLin-S-DMA), 1-linoleoyl-2-linoleyloxy-3-dimethylaminopropane (DLin-2-DMAP), 1,2-Dilinoleyloxy-3-trimethylaminopropane chloride salt (DLin-TMA.Cl), ICE (imidazole base), HGT5000, HGT5001, DMDMA, CLinDMA, CpLinDMA, DMOBA, DOcarbDAP, DLincarbDAP, DLinCDAP, KLin- K-DMA, DLin-K-XTC2-DMA, DLin-TAP.Cl), 1,2-dilinoleyloxy-3-(N-methylpiperazino)propane (DLin-MPZ), or 3-(N,N-dilinoleylamino)-1,2-propanediol (DLinAP), 3-(N,N-dioleylamino)-1,2-propanedio(DOAP), 1,2-dilinoleyloxo-3-(2-N,N-dimethylamino)ethoxypropane( DLin-EG-DM A), 2,2-dilinoleyl-4-dimethylaminomethyl-[1,3]-dioxolane (DLin-K-DMA) or its analog, (3aR,5s,6aS)-N,N- Dimethyl-2,2-di((9Z,12Z)-octadeca-9,12-dienyl)tetrahydro-3aH-cyclopenta[d][1,3]dioxol-5-amine, (6Z,9Z,28Z,31Z) -Heptatriaconta-6,9,28,31-tetraen-19-yl-4-(dimethylamino)butanoate (MC3), ALNY-100((3aR,5s,6aS)-N,N-dimethyl-2, 2-di((9Z,12Z)-octadeca-9,12-dienyl)tetrahydro-3aH-cyclopenta[d][1,3]dioxol-5-amine)), 1,1'-(2-(4- (2-((2-(bis(2-hydroxydodecyl)amino)ethyl)(2-hydroxydodecyl)amino)ethyl)piperazin-1-yl)ethylazanediyl)didodecan-2-ol(C12-200) , 2,2-dilinoleyl-4-(2-dimethylaminoethyl)-[1,3]-dioxolane (DLin-K-C2-DMA), 2,2-dilinoleyl-4-dimethylaminomethyl-[1,3 ]-Dioxolane (DLin-K-DMA), NC98-5(4,7,13-tris(3-oxo-3-(undecylamino)propyl)-N1,N16-diundecyl-4,7,10,13 -tetraazahexadecane-1,16-diamide), (6Z,9Z,28Z,31Z)-heptatriaconta-6,9,28,31-tetraen-19-yl 4-(dimethylamino)butanoate (DLin-M -C3-DMA), 3-((6Z,9Z,28Z,31Z)-heptatriaconta-6,9,28,31-tetraen-19-yloxy)-N,N-dimethylpropan-1-amine (MC3 ether), 4-((6Z,9Z,28Z,31Z)-heptatriaconta-6,9,28,31-tetraen-19-yloxy)-N,N-dimethylbutan-1-amine (MC4 ether), LIPOFECTIN® (a commercially available cationic liposome containing DOTMA and 1,2-dioleoyl-sn-3 phosphoethanolamine (DOPE) from GIBCO/BRL, Grand Island, N.Y.); LIPOFECTAMINE® (GIBCO/ Commercially available products containing N-(1-(2,3dioleyloxy)propyl)-N-(2-(sperminecarboxamido)ethyl)-N,N-dimethylammonium trifluoroacetate (DOSPA) and (DOPE) from BRL cationic liposomes); and TRANSFECTAM® (a commercially available cationic lipid containing dioctadecylamide glycylcarboxyspermine (DOGS) in ethanol from Promega Corp., Madison, Wis.) or any of the foregoing. Including any combination. Further suitable cationic lipids for use in the compositions and methods of the invention are described in International Patent Application Publication WO2010/053572 (and in particular paragraph [00225]), both of which are incorporated herein by reference. CI 2-200) and those described in WO2012/170930, HGT4003, HGT5000, HGTS001, HGT5001, HGT5002 (see US2015/0140070A1).

実施形態では、カチオン性脂質は、アミノ脂質であってもよい。 In embodiments, the cationic lipid may be an aminolipid.

代表的なアミノ脂質は、限定するものではないが、1,2-ジリノレイオキシ-3-(ジメチルアミノ)アセトキシプロパン(DLin-DAC)、1,2-ジリノレイオキシ-3モルホリノプロパン(DLin-MA)、1,2-ジリノレオイル-3-ジメチルアミノプロパン(DLinDAP)、1,2-ジリノレイルチオ-3-ジメチルアミノプロパン(DLin-S-DMA)、1-リノレオイル-2-リノレイルオキシ-3ジメチルアミノプロパン(DLin-2-DMAP)、1,2-ジリノレイルオキシ-3-トリメチルアミノプロパンクロリド塩(DLin-TMA.Cl)、1,2-ジリノレオイル-3-トリメチルアミノプロパンクロリド塩(DLin-TAP.Cl)、1,2-ジリノレイルオキシ-3-(N-メチルピペラジノ)プロパン(DLin-MPZ)、3-(N,Nジリノレイルアミノ)-1,2-プロパンジオール(DLinAP)、3-(N,N-ジオレイルアミノ)-1,2-プロパンジオール(DOAP)、1,2-ジリノレイルオキソ-3-(2-N,N-ジメチルアミノ)エトキシプロパン(DLin-EG-DMA)、及び2,2-ジリノレイル-4-ジメチルアミノメチル-[1,3]-ジオキソラン(DLin-K-DMA)、2,2-ジリノレイル-4-(2-ジメチルアミノエチル)-[1,3]-ジオキソラン(DLin-KC2-DMA);ジリノレイル-メチル-4-ジメチルアミノブチレート(DLin-MC3-DMA);MC3(US20100324120)を含む。 Representative amino lipids include, but are not limited to, 1,2-dilinoleioxy-3-(dimethylamino)acetoxypropane (DLin-DAC), 1,2-dilinoleioxy-3morpholinopropane (DLin-MA), 1 ,2-Dilinoleoyl-3-dimethylaminopropane (DLinDAP), 1,2-dilinoleylthio-3-dimethylaminopropane (DLin-S-DMA), 1-linoleoyl-2-linoleyloxy-3dimethylaminopropane (DLin- 2-DMAP), 1,2-dilinoleyloxy-3-trimethylaminopropane chloride salt (DLin-TMA.Cl), 1,2-dilinoleoyl-3-trimethylaminopropane chloride salt (DLin-TAP.Cl), 1,2-Dilinoleyloxy-3-(N-methylpiperazino)propane (DLin-MPZ), 3-(N,N dilinoleylamino)-1,2-propanediol (DLinAP), 3-(N, N-dioleylamino)-1,2-propanediol (DOAP), 1,2-dilinoleyloxo-3-(2-N,N-dimethylamino)ethoxypropane (DLin-EG-DMA), and 2 ,2-dilinoleyl-4-dimethylaminomethyl-[1,3]-dioxolane (DLin-K-DMA), 2,2-dilinoleyl-4-(2-dimethylaminoethyl)-[1,3]-dioxolane ( DLin-KC2-DMA); dilinoleyl-methyl-4-dimethylaminobutyrate (DLin-MC3-DMA); MC3 (US20100324120).

実施形態では、カチオン性脂質は、アミノアルコールリピドイドであってもよい。 In embodiments, the cationic lipid may be an aminoalcohol lipidoid.

本発明で使用され得るアミノアルコールリピドイドは、全体が参照により本明細書に取り込まれる、米国特許第8,450,298号に記載される方法によって調製されてもよい。好適な(イオン化可能な)脂質はまた、参照により本明細書に取り込まれるWO2017/075531A1の表1、2及び3に開示され、請求項1～24において定義される化合物であることもできる。 Aminoalcohol lipidoids that may be used in the present invention may be prepared by the methods described in US Pat. No. 8,450,298, herein incorporated by reference in its entirety. Suitable (ionizable) lipids can also be the compounds disclosed in Tables 1, 2 and 3 of WO2017/075531A1, which are incorporated herein by reference, and as defined in claims 1 to 24.

別の実施形態では、好適な脂質はまた、全体が参照により本明細書に取り込まれる、WO2015/074085A1(すなわち、ATX-001～ATX-032又は請求項1～26において特定される化合物)、米国特許出願第61/905,724号及び第15/614,499号又は米国特許第9,593,077号及び第9,567,296号に開示される化合物であることもできる。 In another embodiment, suitable lipids also include compounds identified in WO2015/074085A1 (i.e., ATX-001 to ATX-032 or claims 1 to 26), herein incorporated by reference in their entirety. It can also be the compounds disclosed in patent application Ser. Nos. 61/905,724 and 15/614,499 or US Pat.

他の実施形態では、好適なカチオン性脂質はまた、全体が参照により本明細書に取り込まれる、WO2017/117530A1(すなわち、脂質13、14、15、16、17、18、19、20、又は請求項において特定される化合物)において開示される化合物であることもできる。 In other embodiments, suitable cationic lipids also include WO2017/117530A1 (i.e., lipids 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, or claims It can also be a compound disclosed in Section 1 (Compounds specified in Section 1).

好ましい実施形態では、イオン化可能又はカチオン性脂質はまた、WO2018/078053A1(すなわち、WO2018/078053A1の式I、II、及びIIIから誘導される脂質、又はWO2018/078053A1の請求項1～12において特定される脂質)において開示される脂質から選択されてもよく、WO2018/078053A1の開示は、その全体が参照により本明細書に取り込まれる。その文脈で、WO2018/078053A1の表7において開示される脂質(例えば、式I-1～I-41から誘導される脂質)及びWO2018/078053A1の表8において開示される脂質(例えば、式II-1～II-36から誘導される脂質)は、好適には、本発明の文脈で使用されてもよい。したがって、WO2018/078053A1の式I-1～式I-41及び式II-1～式II-36、並びにそれと関連する特定の開示は、参照により本明細書に取り込まれる。 In a preferred embodiment, the ionizable or cationic lipids are also WO2018/078053A1 (i.e. lipids derived from formulas I, II and III of WO2018/078053A1 or as specified in claims 1 to 12 of WO2018/078053A1). The disclosure of WO2018/078053A1 is incorporated herein by reference in its entirety. In that context, the lipids disclosed in Table 7 of WO2018/078053A1 (e.g. lipids derived from formulas I-1 to I-41) and the lipids disclosed in Table 8 of WO2018/078053A1 (e.g. lipids derived from formulas II- 1 to II-36) may be suitably used in the context of the present invention. Accordingly, Formula I-1 to Formula I-41 and Formula II-1 to Formula II-36 of WO2018/078053A1 and the specific disclosures associated therewith are incorporated herein by reference.

好ましい実施形態では、カチオン性脂質は、公開されたPCT特許出願WO2018/078053A1の式IIIから誘導されてもよい。したがって、WO2018/078053A1の式III、及びそれと関連する特定の開示は、参照により本明細書に取り込まれる。 In a preferred embodiment, the cationic lipid may be derived from formula III of published PCT patent application WO2018/078053A1. Accordingly, Formula III of WO2018/078053A1 and the specific disclosures associated therewith are incorporated herein by reference.

特に好ましい実施形態では、組成物の少なくとも1つのRNA、好ましくは、少なくとも1つのmRNAは、1つ以上の脂質と複合体化され、これにより、LNPが形成され、ここで、LNPのカチオン性脂質は、公開されたPCT特許出願WO2018/078053A1の表9の構造III-1～III-36から選択される。したがって、WO2018/078053A1の式III-1～III-36、及びそれと関連する特定の開示は、参照により本明細書に取り込まれる。 In particularly preferred embodiments, at least one RNA, preferably at least one mRNA, of the composition is complexed with one or more lipids, thereby forming LNPs, wherein the cationic lipids of the LNPs are selected from structures III-1 to III-36 in Table 9 of published PCT patent application WO2018/078053A1. Accordingly, Formulas III-1 to III-36 of WO2018/078053A1 and the specific disclosures associated therewith are incorporated herein by reference.

第二の態様の特に好ましい実施形態では、少なくとも1つのRNA、好ましくは、少なくとも1つのmRNAは、1つ以上の脂質と複合体化され、これにより、LNPが形成され、ここで、LNPは、式III-3: In a particularly preferred embodiment of the second aspect, at least one RNA, preferably at least one mRNA, is complexed with one or more lipids, thereby forming LNPs, wherein the LNPs are Formula III-3:

Figure 2024502210000027
のカチオン性脂質を含む。
Figure 2024502210000027
 Contains cationic lipids.

本明細書で好適に使用される式III-3の脂質は、ALC-0315とも称される、化学用語((4-ヒドロキシブチル)アザネジイル)ビス(ヘキサン-6,1-ジイル)ビス(2-ヘキシルデカノエート)を有する。 The lipid of formula III-3 preferably used herein is also referred to as ALC-0315, with the chemical term ((4-hydroxybutyl)azanediyl)bis(hexane-6,1-diyl)bis(2- hexyl decanoate).

ある特定の実施形態では、本明細書において定義されるカチオン性脂質、より好ましくは、カチオン性脂質化合物III-3は、LNPの総脂質含有量に対して、約30～約95モルパーセントの量でLNP中に存在する。1つより多くのカチオン性脂質が、LNP内に取り込まれる場合、このようなパーセンテージを合わせたカチオン性脂質に適用する。 In certain embodiments, the cationic lipid as defined herein, more preferably cationic lipid compound III-3, is present in an amount of about 30 to about 95 mole percent, relative to the total lipid content of the LNP. exists in LNP. If more than one cationic lipid is incorporated into the LNP, such percentage applies to the combined cationic lipids.

実施形態では、カチオン性脂質は、約30～約70モルパーセントの量でLNP中に存在する。一実施形態では、カチオン性脂質は、約40～約60モルパーセント、例えば、それぞれ、約40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59又は60モルパーセントの量でLNP中に存在する。実施形態では、カチオン性脂質は、約47～約48モルパーセント、例えば、それぞれ、約47.0、47.1、47.2、47.3、47.4、47.5、47.6、47.7、47.8、47.9、50.0モルパーセントの量でLNP中に存在し、ここで、47.7モルパーセントが特に好ましい。 In embodiments, the cationic lipid is present in the LNP in an amount of about 30 to about 70 mole percent. In one embodiment, the cationic lipid is about 40 to about 60 mole percent, e.g., about 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, respectively. , 54, 55, 56, 57, 58, 59 or 60 mole percent in the LNP. In embodiments, the cationic lipid is in the LNP in an amount of about 47 to about 48 mole percent, such as about 47.0, 47.1, 47.2, 47.3, 47.4, 47.5, 47.6, 47.7, 47.8, 47.9, 50.0 mole percent, respectively. , where 47.7 mole percent is particularly preferred.

一部の実施形態では、カチオン性脂質は、LNPに存在する総脂質の約20mol%～約70又は75mol%或いは約45～約65mol%又は約20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、若しくは約70mol%の比で存在する。さらなる実施形態では、LNPは、カチオン性脂質をモルベースで約25%～約75%、例えば、モルベースで約20～約70%、約35～約65%、約45～約65%、約60%、約57.5%、約57.1%、約50%又は約40%含む(脂質ナノ粒子中の脂質の100%総モルに基づく)。一部の実施形態では、カチオン性脂質とRNAとの比は、約3～約15、例えば、約5～約13又は約7～約11である。 In some embodiments, the cationic lipid comprises about 20 mol% to about 70 or 75 mol% or about 45 to about 65 mol% or about 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50 mol% of the total lipids present in the LNP. , 55, 60, 65, or about 70 mol%. In further embodiments, the LNPs contain about 25% to about 75% cationic lipids on a molar basis, such as about 20% to about 70%, about 35% to about 65%, about 45% to about 65%, about 60% on a molar basis. , about 57.5%, about 57.1%, about 50% or about 40% (based on 100% total moles of lipid in the lipid nanoparticles). In some embodiments, the ratio of cationic lipid to RNA is about 3 to about 15, such as about 5 to about 13 or about 7 to about 11.

他の好適な(カチオン性又はイオン化可能な)脂質は、WO2009/086558、WO2009/127060、WO2010/048536、WO2010/054406、WO2010/088537、WO2010/129709、WO2011/153493、WO2013/063468、US2011/0256175、US2012/0128760、US2012/0027803、US8158601、WO2016/118724、WO2016/118725、WO2017/070613、WO2017/070620、WO2017/099823、WO2012/040184、WO2011/153120、WO2011/149733、WO2011/090965、WO2011/043913、WO2011/022460、WO2012/061259、WO2012/054365、WO2012/044638、WO2010/080724、WO2010/21865、WO2008/103276、WO2013/086373、WO2013/086354、米国特許第7,893,302号、第7,404,969号、第8,283,333号、第8,466,122号及び第8,569,256号並びに米国特許公開第US2010/0036115、US2012/0202871、US2013/0064894、US2013/0129785、US2013/0150625、US2013/0178541、US2013/0225836、US2014/0039032及びWO2017/112865に開示される。その文脈では、LNPに好適な(カチオン性)脂質に特に関するWO2009/086558、WO2009/127060、WO2010/048536、WO2010/054406、WO2010/088537、WO2010/129709、WO2011/153493、WO2013/063468、US2011/0256175、US2012/0128760、US2012/0027803、US8158601、WO2016/118724、WO2016/118725、WO2017/070613、WO2017/070620、WO2017/099823、WO2012/040184、WO2011/153120、WO2011/149733、WO2011/090965、WO2011/043913、WO2011/022460、WO2012/061259、WO2012/054365、WO2012/044638、WO2010/080724、WO2010/21865、WO2008/103276、WO2013/086373、WO2013/086354、米国特許第7,893,302号、第7,404,969号、第8,283,333号、第8,466,122号及び第8,569,256号並びに米国特許公開第US2010/0036115、US2012/0202871、US2013/0064894、US2013/0129785、US2013/0150625、US2013/0178541、US2013/0225836及びUSS2014/0039032並びにWO2017/112865の開示は、参照により本明細書に取り込まれる。 Other suitable (cationic or ionizable) lipids are WO2009/086558, WO2009/127060, WO2010/048536, WO2010/054406, WO2010/088537, WO2010/129709, WO2011/153493, WO2013/063468, US2 011/0256175 , US2012/0128760, US2012/0027803, US8158601, WO2016/118724, WO2016/118725, WO2017/070613, WO2017/070620, WO2017/099823, WO2012/040184, WO2011/1 53120, WO2011/149733, WO2011/090965, WO2011/043913 , WO2011/022460, WO2012/061259, WO2012/054365, WO2012/044638, WO2010/080724, WO2010/21865, WO2008/103276, WO2013/086373, WO2013/086354, US Patent No. 7,8 No. 93,302, No. 7,404,969, No. 8,283,333 , No. 8,466,122 and No. 8,569,256 and U.S. Patent Publication Nos. 5836, disclosed in US2014/0039032 and WO2017/112865 be done. In that context, WO2009/086558, WO2009/127060, WO2010/048536, WO2010/054406, WO2010/088537, WO2010/129709, WO2011/153493, WO2013/063468, relating specifically to (cationic) lipids suitable for LNPs, US2011/ 0256175, US2012/0128760, US2012/0027803, US8158601, WO2016/118724, WO2016/118725, WO2017/070613, WO2017/070620, WO2017/099823, WO2012/040184, WO2011/153120, WO2011/149733, WO2011/090965, WO2011/ 043913, WO2011/022460, WO2012/061259, WO2012/054365, WO2012/044638, WO2010/080724, WO2010/21865, WO2008/103276, WO2013/086373, WO2013/086354, U.S. Patents 7,893,302, 7,404,969, 8,283,333 No. 8,466,122 and 8,569,256 and U.S. Patent Publication Nos. 25836 and USS2014/0039032 and WO2017/112865 The disclosure is incorporated herein by reference.

実施形態では、脂質が、生理学的pH(例えば、pH7.4)以下のpHで正に荷電され、第二のpH、好ましくは、生理学的pH以上で中性であるように、本明細書において定義されるアミノ又はカチオン性脂質は、少なくとも1つのプロトン化可能又は脱プロトン化可能な基を有する。もちろん、pHの機能としてのプロトンの付加又は除去は、平衡化プロセスであること、及び荷電された又は中性脂質への言及は、優勢な種の性質を指し、脂質のすべてが、荷電された又は中性の形態で存在しなければならないことを必要としないことは理解されるだろう。1つより多くのプロトン化可能又は脱プロトン化可能な基を有するか、又は双性イオンである脂質は、除外されず、同様に本発明の文脈で好適であり得る。一部の実施形態では、プロトン化可能な脂質は、約4～約11の範囲のプロトン化可能な基のpKa、例えば、約5～約7のpKaを有する。 In embodiments, the lipids herein are positively charged at a pH below a physiological pH (e.g. pH 7.4) and neutral at a second pH, preferably above a physiological pH. Amino or cationic lipids as defined have at least one protonatable or deprotonatable group. Of course, the addition or removal of protons as a function of pH is an equilibration process, and references to charged or neutral lipids refer to the nature of the predominant species; all of the lipids are charged It will be understood that there is no need for the compound to be present in neutral or neutral form. Lipids that have more than one protonatable or deprotonatable group or are zwitterionic are not excluded and may likewise be suitable in the context of the present invention. In some embodiments, the protonatable lipid has a pKa of the protonatable group ranging from about 4 to about 11, such as a pKa of about 5 to about 7.

LNPは、本明細書において定義される2つ以上の(異なる)カチオン性脂質を含むことができる。異なる有利な特性に寄与するようにカチオン性脂質が選択されてもよい。例えば、特性、例えば、アミンpKa、化学的安定性、循環中の半減期、組織での半減期、組織での正味の蓄積、又は毒性が異なるカチオン性脂質は、LNPにおいて使用することができる。特に、混合されたLNPの特性が、個々の脂質の単一のLNPの特性よりも望ましくあるように、カチオン性脂質を選択することができる。 LNPs can contain two or more (different) cationic lipids as defined herein. Cationic lipids may be selected to contribute different advantageous properties. For example, cationic lipids that differ in properties such as amine pKa, chemical stability, circulation half-life, tissue half-life, net tissue accumulation, or toxicity can be used in LNPs. In particular, cationic lipids can be selected such that the properties of the mixed LNPs are more desirable than the properties of a single LNP of the individual lipids.

恒常的カチオン性脂質又はリピドイドの量は、核酸カーゴの量を考慮して選択されてもよい。一実施形態では、これらの量は、例えば、約0.1～約20の範囲のナノ粒子又は組成物のN/P比をもたらすように選択される。この文脈では、N/P比は、脂質又はリピドイドの塩基性窒素含有基の窒素原子(「N」)とカーゴとして使用される核酸のリン酸基(「P」)とのモル比として定義される。N/P比は、例えば、1μg RNAが典型的には、約3nmolリン酸残基を含有することに基づき計算されてもよく、但し、RNAは、塩基の統計学的分布を示す。脂質又はリピドイドの「N」値は、その分子量並びに恒常的カチオン性及び存在する場合、カチオン化可能な基の相対的含有量に基づき計算されてもよい。 The amount of constitutive cationic lipid or lipidoid may be selected with consideration to the amount of nucleic acid cargo. In one embodiment, these amounts are selected to provide a nanoparticle or composition N/P ratio ranging from, for example, about 0.1 to about 20. In this context, the N/P ratio is defined as the molar ratio of the nitrogen atom (“N”) of the basic nitrogen-containing group of the lipid or lipidoid to the phosphate group (“P”) of the nucleic acid used as cargo. Ru. The N/P ratio may be calculated, for example, on the basis that 1 μg RNA typically contains about 3 nmol phosphate residues, although RNA exhibits a statistical distribution of bases. The "N" value of a lipid or lipidoid may be calculated based on its molecular weight and constitutive cationicity and relative content of cationizable groups, if present.

LNPのin vivo特徴及び行動を親水性ポリマーコーティング、例えば、ポリエチレングリコール(PEG)のLNP表面への付加によって修飾して、立体的な安定化を付与することができる。さらに、LNPは、リガンド(例えば、抗体、ペプチド、及び炭水化物)を結合されたPEG鎖のその表面又は末端に結合させること(例えば、ペグ化脂質又はペグ化コレステロールを介して)によって、特異的な標的化のため使用することができる。 The in vivo characteristics and behavior of LNPs can be modified by the addition of hydrophilic polymer coatings, such as polyethylene glycol (PEG), to the LNP surface to confer steric stabilization. In addition, LNPs can be made specific by attaching ligands (e.g., antibodies, peptides, and carbohydrates) to their surfaces or termini of attached PEG chains (e.g., via pegylated lipids or pegylated cholesterol). Can be used for targeting.

一部の実施形態では、LNPは、ポリマーコンジュゲートされた脂質を含む。用語「ポリマーコンジュゲートされた脂質」は、脂質部分とポリマー部分の両方を含む分子を指す。ポリマーコンジュゲートされた脂質の例は、ペグ化脂質である。用語「ペグ化脂質」は、脂質部分とポリエチレングリコール部分の両方を含む分子を指す。ペグ化脂質は、当該技術分野で公知であり、1-(モノメトキシ-ポリエチレングリコール)-2,3-ジミリストイルグリセロール(PEG-s-DMG)などを含む。 In some embodiments, the LNPs include polymer-conjugated lipids. The term "polymer-conjugated lipid" refers to a molecule that includes both lipid and polymer moieties. An example of a polymer-conjugated lipid is a pegylated lipid. The term "pegylated lipid" refers to a molecule that includes both a lipid moiety and a polyethylene glycol moiety. Pegylated lipids are known in the art and include 1-(monomethoxy-polyethylene glycol)-2,3-dimyristoylglycerol (PEG-s-DMG) and the like.

本明細書において定義されるポリマーコンジュゲートされた脂質、例えば、PEG脂質は、凝集を低減する脂質として働き得る。 Polymer-conjugated lipids as defined herein, such as PEG lipids, can act as aggregation-reducing lipids.

ある特定の実施形態では、LNPは、ポリエチレングリコール-脂質(ペグ化脂質)である安定化脂質を含む。好適なポリエチレングリコール-脂質は、PEG修飾されたホスファチジルエタノールアミン、PEG修飾されたホスファチジン酸、PEG修飾されたセラミド(例えば、PEG-CerC14又はPEG-CerC20)、PEG修飾されたジアルキルアミン、PEG修飾されたジアシルグリセロール、PEG修飾されたジアルキルグリセロールを含む。代表的なポリエチレングリコール-脂質は、PEG-c-DOMG、PEG-c-DMA、及びPEG-s-DMGを含む。一実施形態では、ポリエチレングリコール-脂質は、N-[(メトキシポリ(エチレングリコール)2000)カルバミル]-1,2-ジミリスチルオキシルプロピル-3-アミン(PEG-c-DMA)である。好ましい実施形態では、ポリエチレングリコール-脂質は、PEG-2000-DMGである。一実施形態では、ポリエチレングリコール-脂質は、PEG-c-DOMGである。他の実施形態では、LNPは、ペグ化ジアシルグリセロール(PEG-DAG)、例えば、1-(モノメトキシ-ポリエチレングリコール)-2,3-ジミリストイルグリセロール(PEG-DMG)、ペグ化ホスファチジルエタノールアミン(PEG-PE)、PEGスクシネートジアシルグリセロール(PEG-S-DAG)、例えば、4-O-(2',3'-ジ(テトラデカノイルオキシ)プロピル-1-O-(ω-メトキシ(ポリエトキシ)エチル)ブタンジオエート(PEG-S-DMG)、ペグ化セラミド(PEG-cer)、又はPEGジアルコキシプロピルカルバメート、例えば、ω-メトキシ(ポリエトキシ)エチル-N-(2,3ジ(テトラデカノキシ)プロピル)カルバメート又は2,3-ジ(テトラデカノキシ)プロピル-N-(ω-メトキシ(ポリエトキシ)エチル)カルバメートを含む。 In certain embodiments, the LNP comprises a stabilizing lipid that is a polyethylene glycol-lipid (pegylated lipid). Suitable polyethylene glycol-lipids include PEG-modified phosphatidylethanolamine, PEG-modified phosphatidic acid, PEG-modified ceramide (e.g., PEG-CerC14 or PEG-CerC20), PEG-modified dialkylamine, PEG-modified Contains diacylglycerols and PEG-modified dialkylglycerols. Representative polyethylene glycol-lipids include PEG-c-DOMG, PEG-c-DMA, and PEG-s-DMG. In one embodiment, the polyethylene glycol-lipid is N-[(methoxypoly(ethylene glycol)2000)carbamyl]-1,2-dimyristyloxylpropyl-3-amine (PEG-c-DMA). In a preferred embodiment, the polyethylene glycol-lipid is PEG-2000-DMG. In one embodiment, the polyethylene glycol-lipid is PEG-c-DOMG. In other embodiments, the LNPs are pegylated diacylglycerols (PEG-DAG), e.g., 1-(monomethoxy-polyethylene glycol)-2,3-dimyristoylglycerol (PEG-DMG), pegylated phosphatidylethanolamine ( PEG-PE), PEG succinate diacylglycerol (PEG-S-DAG), e.g. 4-O-(2',3'-di(tetradecanoyloxy)propyl-1-O-(ω-methoxy( polyethoxy)ethyl)butanedioate (PEG-S-DMG), pegylated ceramide (PEG-cer), or PEG dialkoxypropyl carbamate, such as ω-methoxy(polyethoxy)ethyl-N-(2,3 di(tetradecanoxy) )propyl)carbamate or 2,3-di(tetradecanoxy)propyl-N-(ω-methoxy(polyethoxy)ethyl)carbamate.

好ましい実施形態では、ペグ化脂質は、好ましくは、公開されたPCT特許出願WO2018/078053A1の式(IV)から誘導される。したがって、公開されたPCT特許出願WO2018/078053A1の式(IV)から誘導されるペグ化脂質及びそれと関連するそれぞれの開示は、参照により本明細書に取り込まれる。 In a preferred embodiment, the pegylated lipid is preferably derived from formula (IV) of published PCT patent application WO2018/078053A1. Accordingly, the pegylated lipids derived from formula (IV) of published PCT patent application WO2018/078053A1 and the respective disclosures associated therewith are incorporated herein by reference.

特に好ましい実施形態では、組成物の少なくとも1つのRNAは、1つ以上の脂質と複合体化され、これにより、LNPが形成され、ここで、LNPは、ペグ化脂質を含み、ここで、PEG脂質は、好ましくは、公開されたPCT特許出願WO2018/078053A1の式(IVa)から誘導される。したがって、公開されたPCT特許出願WO2018/078053A1の式(IVa)から誘導されるペグ化脂質及びそれと関連するそれぞれの開示は、参照により本明細書に取り込まれる。 In particularly preferred embodiments, at least one RNA of the composition is complexed with one or more lipids, thereby forming LNPs, wherein the LNPs include a PEGylated lipid, wherein the LNPs include PEG The lipid is preferably derived from formula (IVa) of published PCT patent application WO2018/078053A1. Accordingly, the pegylated lipids derived from formula (IVa) of published PCT patent application WO2018/078053A1 and the respective disclosures associated therewith are incorporated herein by reference.

特に好ましい実施形態では、少なくとも1つのRNAは、1つ以上の脂質と複合体化され、これにより、脂質ナノ粒子(LNP)が形成され、ここで、LNPは、ペグ化脂質/PEG脂質を含む。好ましくは、前記PEG脂質は、式(IVa): In particularly preferred embodiments, at least one RNA is complexed with one or more lipids, thereby forming lipid nanoparticles (LNPs), wherein the LNPs include pegylated lipids/PEG lipids. . Preferably, said PEG lipid has formula (IVa):

Figure 2024502210000028
(式中、nは、30～60の範囲の、例えば、約30±2、32±2、34±2、36±2、38±2、40±2、42±2、44±2、46±2、48±2、50±2、52±2、54±2、56±2、58±2、又は60±2の平均値を有する)のものである。最も好ましい実施形態では、nは約49である。さらに好ましい態様では、前記PEG脂質は、式(IVa)(式中、nは、PEG脂質の平均分子量が、約2000g/mol～約3000g/mol又は約2300g/mol～約2700g/mol、なおより好ましくは、約2500g/molであるように、選択される整数である)のものである。
Figure 2024502210000028
 (where n is in the range of 30 to 60, e.g., approximately 30±2, 32±2, 34±2, 36±2, 38±2, 40±2, 42±2, 44±2, 46 ±2, 48±2, 50±2, 52±2, 54±2, 56±2, 58±2, or 60±2). In the most preferred embodiment, n is about 49. In further preferred embodiments, the PEG lipid has the formula (IVa), where n is an average molecular weight of the PEG lipid of about 2000 g/mol to about 3000 g/mol, or about 2300 g/mol to about 2700 g/mol, even more 2500 g/mol).

本明細書において好適に使用される式IVaの脂質は、ALC-0159とも称される、化学用語2[(ポリエチレングリコール)-2000]-N,N-ジテトラデシルアセトアミドを有する。 The lipid of formula IVa preferably used herein has the chemical term 2[(polyethylene glycol)-2000]-N,N-ditetradecylacetamide, also referred to as ALC-0159.

その文脈で好適なPEG-脂質のさらなる例は、US2015/0376115A1及びWO2015/199952において提供され、そのそれぞれが、その全体が参照により取り込まれる。 Further examples of PEG-lipids suitable in that context are provided in US2015/0376115A1 and WO2015/199952, each of which is incorporated by reference in its entirety.

一部の実施形態では、LNPは、LNP中の脂質の総モルに基づき、約3、2、又は1モルパーセント未満のPEG又はPEG修飾された脂質を含む。さらなる実施形態では、LNPは、モルベースで約0.1%～約20%のPEG修飾された脂質、例えば、モルベースで(LNP中の脂質の100%総モルに基づき)約0.5～約10%、約0.5～約5%、約10%、約5%、約3.5%、約3%、約2,5%、約2%、約1.5%、約1%、約0.5%、又は約0.3%を含む。好ましい実施形態では、LNPは、モルベースで約1.0%～約2.0%のPEG修飾された脂質、例えば、約1.2～約1.9%、約1.2～約1.8%、約1.3～約1.8%、約1.4～約1.8%、約1.5～約1.8%、約1.6～約1.8%、特に、約1.4%、約1.5%、約1.6%、約1.7%、約1.8%、約1.9%、最も好ましくは、1.7%(LNP中の脂質の100%総モルに基づき)を含む。様々な実施形態では、カチオン性脂質とペグ化脂質とのモル比は、約100:1～約25:1の範囲にある。 In some embodiments, the LNPs contain less than about 3, 2, or 1 mole percent PEG or PEG-modified lipids, based on the total moles of lipids in the LNPs. In further embodiments, the LNPs contain about 0.1% to about 20% PEG-modified lipid on a molar basis, such as about 0.5 to about 10% on a molar basis (based on 100% total moles of lipid in the LNP), about 0.5 to about 5%, about 10%, about 5%, about 3.5%, about 3%, about 2.5%, about 2%, about 1.5%, about 1%, about 0.5%, or about 0.3%. In preferred embodiments, the LNPs contain about 1.0% to about 2.0% PEG-modified lipids on a molar basis, such as about 1.2 to about 1.9%, about 1.2 to about 1.8%, about 1.3 to about 1.8%, about 1.4 to about 1.8%, about 1.5 to about 1.8%, about 1.6 to about 1.8%, especially about 1.4%, about 1.5%, about 1.6%, about 1.7%, about 1.8%, about 1.9%, most preferably 1.7% (based on 100% total moles of lipids in LNP). In various embodiments, the molar ratio of cationic lipid to pegylated lipid ranges from about 100:1 to about 25:1.

好ましい実施形態では、LNPは、1つ以上の脂質を含み、それが、それらの形成中又は製造中に粒子の形成を安定化する(例えば、中性脂質及び/又は1つ以上のステロイド若しくはステロイドアナログ)。 In a preferred embodiment, the LNPs include one or more lipids that stabilize the formation of the particles during their formation or manufacture (e.g., neutral lipids and/or one or more steroids or analog).

第二の態様の好ましい実施形態では、少なくとも1つのRNAは、1つ以上の脂質と複合体化され、これにより、脂質ナノ粒子(LNP)が形成され、ここで、LNPは、1つ以上の中性脂質及び/又は1つ以上のステロイド若しくはステロイドアナログを含む。 In a preferred embodiment of the second aspect, the at least one RNA is complexed with one or more lipids, thereby forming lipid nanoparticles (LNPs), wherein the LNPs have one or more lipids. Contains neutral lipids and/or one or more steroids or steroid analogs.

好適な安定化脂質は、中性脂質及びアニオン性脂質を含む。用語「中性脂質」は、生理学的pHで荷電されていない又は中性双性イオン形態のいずれかで存在するいくつかの脂質種のいずれか1つを指す。代表的な中性脂質は、ジアシルホスファチジルコリン、ジアシルホスファチジルエタノールアミン、セラミド、スフィンゴミエリン、ジヒドロスフィンゴミエリン、セファリン、及びセレブロシドを含む。 Suitable stabilizing lipids include neutral lipids and anionic lipids. The term "neutral lipid" refers to any one of several lipid species that exist in either uncharged or neutral zwitterionic forms at physiological pH. Representative neutral lipids include diacylphosphatidylcholine, diacylphosphatidylethanolamine, ceramide, sphingomyelin, dihydrosphingomyelin, cephalin, and cerebroside.

第二の態様の実施形態では、LNPは、1つ以上の中性脂質を含み、ここで、中性脂質は、ジステアロイルホスファチジルコリン(DSPC)、ジオレオイルホスファチジルコリン(DOPC)、ジパルミトイルホスファチジルコリン(DPPC)、ジオレオイルホスファチジルグリセロール(DOPG)、ジパルミトイルホスファチジルグリセロール(DPPG)、ジオレオイル-ホスファチジルエタノールアミン(DOPE)、パルミトイルオレオイルホスファチジルコリン(POPC)、パルミトイルオレオイル-ホスファチジルエタノールアミン(POPE)及びジオレオイル-ホスファチジルエタノールアミン4-(N-マレイミドメチル)-シクロヘキサン-1カルボキシレート(DOPE-mal)、ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン(DPPE)、ジミリストイルホスホエタノールアミン(DMPE)、ジステアロイル-ホスファチジルエタノールアミン(DSPE)、16-O-モノメチルPE、16-O-ジメチルPE、18-1-トランスPE、1-ステアリオイル-2-オレオイルホスファチジエタノールアミン(SOPE)、及び1,2-ジエライドイル-sn-グリセロ-3-ホスホエタノールアミン(トランスDOPE)、又はそれらの混合物を含む群から選択される。 In an embodiment of the second aspect, the LNP comprises one or more neutral lipids, wherein the neutral lipids are distearoyl phosphatidylcholine (DSPC), dioleoylphosphatidylcholine (DOPC), dipalmitoylphosphatidylcholine (DPPC) ), dioleoylphosphatidylglycerol (DOPG), dipalmitoylphosphatidylglycerol (DPPG), dioleoylphosphatidylethanolamine (DOPE), palmitoyloleoylphosphatidylcholine (POPC), palmitoyloleoylphosphatidylethanolamine (POPE) and dioleoylphosphatidyl Ethanolamine 4-(N-maleimidomethyl)-cyclohexane-1 carboxylate (DOPE-mal), dipalmitoylphosphatidylethanolamine (DPPE), dimyristoylphosphoethanolamine (DMPE), distearoyl-phosphatidylethanolamine (DSPE), 16-O-monomethyl PE, 16-O-dimethyl PE, 18-1-trans PE, 1-stearyoyl-2-oleoylphosphatidiethanolamine (SOPE), and 1,2-dieridoyl-sn-glycero-3- selected from the group comprising phosphoethanolamine (trans-DOPE), or mixtures thereof;

一部の実施形態では、LNPは、DSPC、DPPC、DMPC、DOPC、POPC、DOPE及びSMから選択される中性脂質を含む。様々な実施形態では、カチオン性脂質と中性脂質とのモル比は、約2:1～約8:1の範囲にある。 In some embodiments, the LNP comprises a neutral lipid selected from DSPC, DPPC, DMPC, DOPC, POPC, DOPE and SM. In various embodiments, the molar ratio of cationic lipids to neutral lipids ranges from about 2:1 to about 8:1.

好ましい実施形態では、中性脂質は、1,2-ジステアロイル-sn-グリセロ-3-ホスホコリン(DSPC)である。カチオン性脂質とDSPCとのモル比は、約2:1～約8:1の範囲にあり得る。 In a preferred embodiment, the neutral lipid is 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphocholine (DSPC). The molar ratio of cationic lipid to DSPC can range from about 2:1 to about 8:1.

好ましい実施形態では、ステロイドは、コレステロールである。カチオン性脂質とコレステロールとのモル比は、約2:1～約1:1の範囲にあり得る。一部の実施形態では、コレステロールは、PEG化されていてもよい。 In a preferred embodiment, the steroid is cholesterol. The molar ratio of cationic lipid to cholesterol can range from about 2:1 to about 1:1. In some embodiments, cholesterol may be PEGylated.

ステロールは、脂質粒子の約10mol%～約60mol%又は約25mol%～約40mol%であり得る。一実施形態では、ステロールは、脂質粒子に存在する総脂質の約10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、又は約60mol%である。別の実施形態では、LNPは、ステロールのモルベースで約5%～約50%、例えば、モルベースで(脂質ナノ粒子中の脂質の100%総モルに基づき)約15%～約45%、約20%～約40%、約48%、約40%、約38.5%、約35%、約34.4%、約31.5%又は約31%を含む。 The sterol can be about 10 mol% to about 60 mol% or about 25 mol% to about 40 mol% of the lipid particles. In one embodiment, the sterol is about 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, or about 60 mol% of the total lipids present in the lipid particle. In another embodiment, the LNPs are about 5% to about 50% on a molar basis of sterols, such as about 15% to about 45% on a molar basis (based on 100% total moles of lipid in the lipid nanoparticles), about 20% % to about 40%, about 48%, about 40%, about 38.5%, about 35%, about 34.4%, about 31.5% or about 31%.

好ましくは、脂質ナノ粒子(LNP)は、(a)第一の態様の少なくとも1つのRNA、(b)カチオン性脂質、(c)凝集低減剤(例えば、ポリエチレングリコール(PEG)脂質又はPEG修飾された脂質)、(d)場合により、非カチオン性脂質(例えば、中性脂質)、及び(e)場合によりステロールを含む。 Preferably, the lipid nanoparticles (LNPs) contain (a) at least one RNA of the first embodiment, (b) a cationic lipid, (c) an aggregation reducing agent (e.g., a polyethylene glycol (PEG) lipid or a PEG-modified (d) optionally non-cationic lipids (eg, neutral lipids), and (e) optionally sterols.

一部の実施形態では、カチオン性脂質(上で定義された)、非カチオン性脂質(上で定義された)、コレステロール(上で定義された)、及び/又はPEG修飾された脂質(上で定義された)は、様々な相対的モル比で合わされ得る。例えば、カチオン性脂質と非カチオン性脂質、コレステロールベースの脂質、ペグ化脂質との比は、それぞれ、約30～60:20～35:20～30:1～15、又は約40:30:25:5、50:25:20:5、50:27:20:3、40:30:20:10、40:32:20:8、40:32:25:3若しくは40:33:25:2の比、又は約50:25:20:5、50:20:25:5、50:27:20:3 40:30:20:10、40:30:25:5若しくは40:32:20:8、40:32:25:3若しくは40:33:25:2の比であってもよい。 In some embodiments, cationic lipids (as defined above), non-cationic lipids (as defined above), cholesterol (as defined above), and/or PEG-modified lipids (as defined above) defined) can be combined in various relative molar ratios. For example, the ratio of cationic lipids to non-cationic lipids, cholesterol-based lipids, pegylated lipids is about 30-60:20-35:20-30:1-15, or about 40:30:25, respectively. :5, 50:25:20:5, 50:27:20:3, 40:30:20:10, 40:32:20:8, 40:32:25:3 or 40:33:25:2 or approximately 50:25:20:5, 50:20:25:5, 50:27:20:3 40:30:20:10, 40:30:25:5 or 40:32:20: The ratio may be 8, 40:32:25:3 or 40:33:25:2.

一部の実施形態では、LNPは、式(III)の脂質、本明細書において定義される少なくとも1つのRNA、中性脂質、ステロイド及びペグ化脂質を含む。好ましい実施形態では、式(III)の脂質は脂質化合物III-3(ALC-0315)であり、中性脂質はDSPCであり、ステロイドはコレステロールであり、ペグ化脂質は式(IVa)(ALC-0159)の化合物である。 In some embodiments, the LNP comprises a lipid of formula (III), at least one RNA as defined herein, a neutral lipid, a steroid, and a pegylated lipid. In a preferred embodiment, the lipid of formula (III) is lipid compound III-3 (ALC-0315), the neutral lipid is DSPC, the steroid is cholesterol, and the pegylated lipid is of formula (IVa) (ALC-0315). 0159).

第二の態様の好ましい実施形態では、LNPは、約20～60%カチオン性脂質、5～25%中性脂質、25～55%ステロール、0.5～15% PEG-脂質のモル比で、(i)少なくとも1つのカチオン性脂質;(ii)中性脂質;(iii)ステロール、例えば、コレステロール;及び(iv)PEG-脂質、例えば、PEG-DMG又はPEG-cDMAから本質的になる。 In a preferred embodiment of the second aspect, the LNPs are comprised of (i ) at least one cationic lipid; (ii) a neutral lipid; (iii) a sterol, such as cholesterol; and (iv) a PEG-lipid, such as PEG-DMG or PEG-cDMA.

特に好ましい実施形態では、少なくともRNAは、1つ以上の脂質と複合体化され、これにより、脂質ナノ粒子(LNP)が形成され、ここで、LNPは、
(i)本明細書において定義される少なくとも1つのカチオン性脂質、好ましくは、式(III)の脂質、より好ましくは、脂質III-3(ALC-0315);
(ii)本明細書において定義される少なくとも1つの中性脂質、好ましくは、1,2-ジステアロイル-sn-グリセロ-3-ホスホコリン(DSPC);
(iii)本明細書において定義される少なくとも1つのステロイド又はステロイドアナログ、好ましくは、コレステロール;及び
(iv)本明細書において定義される少なくとも1つのPEG-脂質、例えば、PEG-DMG又はPEG-cDMA、好ましくは、式(IVa)(ALC-0159)であるか、又はそれから誘導されるペグ化脂質
を含む。 In particularly preferred embodiments, at least the RNA is complexed with one or more lipids, thereby forming lipid nanoparticles (LNPs), wherein the LNPs are
(i) at least one cationic lipid as defined herein, preferably a lipid of formula (III), more preferably lipid III-3 (ALC-0315);
(ii) at least one neutral lipid as defined herein, preferably 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphocholine (DSPC);
(iii) at least one steroid or steroid analog as defined herein, preferably cholesterol; and
(iv) PEGylation of at least one PEG-lipid as defined herein, such as PEG-DMG or PEG-cDMA, preferably of formula (IVa) (ALC-0159) or derived therefrom; Contains lipids.

特に好ましい実施形態では、少なくとも1つのRNAは、1つ以上の脂質と複合体化され、これにより、脂質ナノ粒子(LNP)が形成され、ここで、LNPは、約20～60%カチオン性脂質、5～25%中性脂質、25～55%ステロール、0.5～15%PEG-脂質のモル比で(i)～(iv)を含む。 In particularly preferred embodiments, at least one RNA is complexed with one or more lipids, thereby forming lipid nanoparticles (LNPs), wherein the LNPs have about 20-60% cationic lipids. (i) to (iv) in molar ratios of , 5-25% neutral lipids, 25-55% sterols, 0.5-15% PEG-lipids.

1つの好ましい実施形態では、脂質ナノ粒子は、式(III)を有するカチオン性脂質並びに/又は式(IV)を有するPEG脂質、場合により中性脂質、好ましくは、1,2-ジステアロイル-sn-グリセロ-3-ホスホコリン(DSPC)及び場合によりステロイド、好ましくは、コレステロールを含み、ここで、カチオン性脂質とDSPCとのモル比は、場合により約2:1～8:1の範囲にあり、ここで、カチオン性脂質とコレステロールとのモル比は、場合により約2:1～1:1の範囲にある。 In one preferred embodiment, the lipid nanoparticles are cationic lipids having formula (III) and/or PEG lipids having formula (IV), optionally neutral lipids, preferably 1,2-distearoyl-sn - glycero-3-phosphocholine (DSPC) and optionally a steroid, preferably cholesterol, wherein the molar ratio of cationic lipid to DSPC optionally ranges from about 2:1 to 8:1; Here, the molar ratio of cationic lipid to cholesterol is optionally in the range of about 2:1 to 1:1.

特に好ましい実施形態では、少なくとも1つのRNAを含む第二の態様の組成物は、脂質ナノ粒子(LNP)を含み、約50:10:38.5:1.5、好ましくは、47.5:10:40.8:1.7以上、より好ましくは、47.4:10:40.9:1.7のモル比を有する(すなわち、カチオン性脂質(好ましくは、脂質III-3(ALC-0315))、DSPC、コレステロール及びPEG-脂質(好ましくは、n=49を有する式(IVa)のPEG-脂質、なおより好ましくは、n=45(ALC-0159)を有する式(IVa)のPEG-脂質)の割合(mol%);エタノール中に溶解される)。 In a particularly preferred embodiment, the composition of the second aspect comprising at least one RNA comprises lipid nanoparticles (LNPs) and is about 50:10:38.5:1.5, preferably 47.5:10:40.8:1.7 or more. , more preferably with a molar ratio of 47.4:10:40.9:1.7 (i.e. cationic lipid (preferably lipid III-3 (ALC-0315)), DSPC, cholesterol and PEG-lipid (preferably n Proportion (mol%) of PEG-lipid of formula (IVa) with n=49, even more preferably PEG-lipid of formula (IVa) with n=45 (ALC-0159); dissolved in ethanol ).

好ましくは、第二の態様の組成物は、カチオン性脂質III-3(ALC-0315)、DSPC、コレステロール及び式(IVa)(n=49を有するか、又はn=45(ALC-0159)を有する)のPEG-脂質の約50:10:38.5:1.5、好ましくは、47.5:10:40.8:1.7又はより好ましくは、47.4:10:40.9:1.7の割合(mol%)のモル比を有する、脂質ナノ粒子(LNP)中に製剤化された配列番号24837～24854、27524～27546、24855～24872、27547～27569、24909～24926、27616～27638、28827～28866、28687～28735、28867～28915、28929～28932、28937～28940の核酸配列と同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一である少なくとも1つのRNAを含む。 Preferably, the composition of the second aspect has cationic lipid III-3 (ALC-0315), DSPC, cholesterol and formula (IVa) (n=49) or n=45 (ALC-0159). having a molar ratio (mol%) of PEG-lipids of about 50:10:38.5:1.5, preferably 47.5:10:40.8:1.7 or more preferably 47.4:10:40.9:1.7; SEQ ID NOs: 24837-24854, 27524-27546, 24855-24872, 27547-27569, 24909-24926, 27616-27638, 28827-28866, 28687-28735, 28867-28915, formulated in lipid nanoparticles (LNPs); 28929-28932, 28937-28940, or at least 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93% , 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical.

好ましくは、第二の態様の組成物は、カチオン性脂質III-3(ALC-0315)、DSPC、コレステロール及び式(IVa)(n=49を有するか、又はn=45(ALC-0159)を有する)のPEG-脂質の約50:10:38.5:1.5、好ましくは、47.5:10:40.8:1.7又はより好ましくは、47.4:10:40.9:1.7の割合(mol%)のモル比を有する、脂質ナノ粒子(LNP)中に製剤化された配列番号27532、27555、27624、28852、28699～28704、28879～28884の核酸配列と同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一である少なくとも1つのRNAを含む。 Preferably, the composition of the second aspect has cationic lipid III-3 (ALC-0315), DSPC, cholesterol and formula (IVa) (n=49) or n=45 (ALC-0159). having a molar ratio (mol%) of PEG-lipids of about 50:10:38.5:1.5, preferably 47.5:10:40.8:1.7 or more preferably 47.4:10:40.9:1.7; Identical to, or at least 70%, 80%, 85%, 86, a nucleic acid sequence of SEQ ID NO: 27532, 27555, 27624, 28852, 28699-28704, 28879-28884 formulated in a lipid nanoparticle (LNP) Contains at least one RNA that is %, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical .

好ましくは、第二の態様の組成物は、カチオン性脂質III-3(ALC-0315)、DSPC、コレステロール及び式(IVa)(n=49を有するか、又はn=45(ALC-0159)を有する)のPEG-脂質の約50:10:38.5:1.5、好ましくは、47.5:10:40.8:1.7又はより好ましくは、47.4:10:40.9:1.7の割合(mol%)のモル比を有する、脂質ナノ粒子(LNP)中に製剤化された配列番号27532、27555、27624、28852の核酸配列と同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一である少なくとも1つのRNAを含む。 Preferably, the composition of the second aspect has cationic lipid III-3 (ALC-0315), DSPC, cholesterol and formula (IVa) (n=49) or n=45 (ALC-0159). having a molar ratio (mol%) of PEG-lipids of about 50:10:38.5:1.5, preferably 47.5:10:40.8:1.7 or more preferably 47.4:10:40.9:1.7; is at least 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88% identical to the nucleic acid sequence of SEQ ID NO: 27532, 27555, 27624, 28852 formulated in a lipid nanoparticle (LNP); Contains at least one RNA that is 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical.

好ましくは、第二の態様の組成物は、カチオン性脂質III-3(ALC-0315)、DSPC、コレステロール及び式(IVa)(n=49を有するか、又はn=45(ALC-0159を有する))のPEG-脂質の約50:10:38.5:1.5、好ましくは、47.5:10:40.8:1.7又はより好ましくは、47.4:10:40.9:1.7の割合(mol%)のモル比を有する、脂質ナノ粒子(LNP)中に製剤化された配列番号28688～28691、28868～28871、28929～28932、28937～28940の核酸配列と同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一である少なくとも1つのRNAを含む。 Preferably, the composition of the second aspect has cationic lipid III-3 (ALC-0315), DSPC, cholesterol and formula (IVa) (n=49) or has n=45 (ALC-0159). )) having a molar ratio (mol%) of PEG-lipids of about 50:10:38.5:1.5, preferably 47.5:10:40.8:1.7 or more preferably 47.4:10:40.9:1.7; Identical to, or at least 70%, 80%, 85%, 86, a nucleic acid sequence of SEQ ID NO: 28688-28691, 28868-28871, 28929-28932, 28937-28940 formulated in a lipid nanoparticle (LNP) Contains at least one RNA that is %, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical .

好ましくは、第二の態様の組成物は、カチオン性脂質III-3(ALC-0315)、DSPC、コレステロール及び式(IVa)(n=49を有するか、又はn=45(ALC-0159)を有する)のPEG-脂質の約50:10:38.5:1.5、好ましくは、47.5:10:40.8:1.7又はより好ましくは、47.4:10:40.9:1.7の割合(mol%)のモル比を有する、脂質ナノ粒子(LNP)中に製剤化された配列番号22792、22794、22796、22798、22800、22802、22804、22806、22808、22810、22812、23529～23534、27386～27408、23535～23552、27409～27431、23590～23606、27478～27500、28736～28776、28638～28686、28777～28825、28925～28928、28933～28936の核酸配列と同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一である少なくとも1つのRNAを含む。 Preferably, the composition of the second aspect has cationic lipid III-3 (ALC-0315), DSPC, cholesterol and formula (IVa) (n=49) or n=45 (ALC-0159). having a molar ratio (mol%) of PEG-lipids of about 50:10:38.5:1.5, preferably 47.5:10:40.8:1.7 or more preferably 47.4:10:40.9:1.7; SEQ ID NO: 22792, 22794, 22796, 22798, 22800, 22802, 22804, 22806, 22808, 22810, 22812, 23529-23534, 27386-27408, 23535-23552, 27409- formulated in lipid nanoparticles (LNPs) 27431, 23590-23606, 27478-27500, 28736-28776, 28638-28686, 28777-28825, 28925-28928, 28933-28936, or at least 70%, 80%, 85%, 86 Contains at least one RNA that is %, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical .

好ましくは、第二の態様の組成物は、カチオン性脂質III-3(ALC-0315)、DSPC、コレステロール及び式(IVa)(n=49を有するか、又はn=45(ALC-0159)を有する)のPEG-脂質の約50:10:38.5:1.5、好ましくは、47.5:10:40.8:1.7又はより好ましくは、47.4:10:40.9:1.7の割合(mol%)のモル比を有する、脂質ナノ粒子(LNP)中に製剤化された配列番号27394、27417、27486、28762、28650～28655、28789～28794の核酸配列と同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一である少なくとも1つのRNAを含む。 Preferably, the composition of the second aspect has cationic lipid III-3 (ALC-0315), DSPC, cholesterol and formula (IVa) (n=49) or n=45 (ALC-0159). having a molar ratio (mol%) of PEG-lipids of about 50:10:38.5:1.5, preferably 47.5:10:40.8:1.7 or more preferably 47.4:10:40.9:1.7; Identical to, or at least 70%, 80%, 85%, 86, a nucleic acid sequence of SEQ ID NO: 27394, 27417, 27486, 28762, 28650-28655, 28789-28794 formulated in a lipid nanoparticle (LNP) Contains at least one RNA that is %, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical .

好ましくは、第二の態様の組成物は、カチオン性脂質III-3(ALC-0315)、DSPC、コレステロール及び式(IVa)(n=49を有するか、又はn=45(ALC-0159)を有する)のPEG-脂質の約50:10:38.5:1.5、好ましくは、47.5:10:40.8:1.7又はより好ましくは、47.4:10:40.9:1.7の割合(mol%)のモル比を有する、脂質ナノ粒子(LNP)中に製剤化された配列番号27394、27417、27486、28762の核酸配列と同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一である少なくとも1つのRNAを含む。 Preferably, the composition of the second aspect has cationic lipid III-3 (ALC-0315), DSPC, cholesterol and formula (IVa) (n=49) or n=45 (ALC-0159). having a molar ratio (mol%) of PEG-lipids of about 50:10:38.5:1.5, preferably 47.5:10:40.8:1.7 or more preferably 47.4:10:40.9:1.7; identical or at least 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88% to the nucleic acid sequence of SEQ ID NO: 27394, 27417, 27486, 28762 formulated in a lipid nanoparticle (LNP); Contains at least one RNA that is 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical.

好ましくは、第二の態様の組成物は、カチオン性脂質III-3(ALC-0315)、DSPC、コレステロール及び式(IVa)(n=49を有するか、又はn=45(ALC-0159)を有する)のPEG-脂質の約50:10:38.5:1.5、好ましくは、47.5:10:40.8:1.7又はより好ましくは、47.4:10:40.9:1.7の割合(mol%)のモル比を有する、脂質ナノ粒子(LNP)中に製剤化された配列番号28639～28642、28778～28781、28925～28928、28933～28936の核酸配列と同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一である少なくとも1つのRNAを含む。 Preferably, the composition of the second aspect has cationic lipid III-3 (ALC-0315), DSPC, cholesterol and formula (IVa) (n=49) or n=45 (ALC-0159). having a molar ratio (mol%) of PEG-lipids of about 50:10:38.5:1.5, preferably 47.5:10:40.8:1.7 or more preferably 47.4:10:40.9:1.7; Identical to, or at least 70%, 80%, 85%, 86, a nucleic acid sequence of SEQ ID NO: 28639-28642, 28778-28781, 28925-28928, 28933-28936 formulated in a lipid nanoparticle (LNP) Contains at least one RNA that is %, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical .

組成物が上で定義された多価組成物である実施形態では、多価組成物のRNA種、好ましくは、mRNA種は、別々に製剤化されてもよく、例えば、リポソーム又はLNPに別々に製剤化されてもよい。好適には、多価組成物のRNA種は、カチオン性脂質III-3(ALC-0315)、DSPC、コレステロール及び式(IVa)(n=49を有するか、又はn=45を有する)のPEG-脂質の約50:10:38.5:1.5、好ましくは、47.5:10:40.8:1.7又はより好ましくは、47.4:10:40.9:1.7の割合(mol%)のモル比を有する、LNP中に別々に製剤化される。上で定義された(セクション「本発明の多価組成物」を参照)多価組成物のための核酸種が、好ましくは選択される。 In embodiments where the composition is a multivalent composition as defined above, the RNA species, preferably the mRNA species, of the multivalent composition may be formulated separately, e.g. separately in liposomes or LNPs. It may also be formulated into a formulation. Preferably, the RNA species of the multivalent composition include cationic lipid III-3 (ALC-0315), DSPC, cholesterol and PEG of formula (IVa) (with n=49 or with n=45). - separately in LNPs with a molar ratio of lipids of about 50:10:38.5:1.5, preferably 47.5:10:40.8:1.7 or more preferably 47.4:10:40.9:1.7 (mol%); It is formulated into Nucleic acid species for multivalent compositions as defined above (see section "Multivalent compositions of the invention") are preferably selected.

その文脈では、組成物は、
- カチオン性脂質III-3(ALC-0315)、DSPC、コレステロール及び式(IVa)(n=49を有するか、又はn=45(ALC-0159)を有する)のPEG-脂質の約50:10:38.5:1.5、好ましくは、47.5:10:40.8:1.7又はより好ましくは、47.4:10:40.9:1.7の割合(mol%)のモル比を有する、脂質ナノ粒子(LNP)中に製剤化された配列番号149の核酸配列と同一であるか、又は少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一である少なくとも1つのRNA;並びに/或いは
- カチオン性脂質III-3(ALC-0315)、DSPC、コレステロール及び式(IVa)(n=49を有するか、又はn=45(ALC-0159)を有する)PEG-脂質の約50:10:38.5:1.5、好ましくは、47.5:10:40.8:1.7又はより好ましくは、47.4:10:40.9:1.7の割合(mol%)のモル比を有する、脂質ナノ粒子(LNP)中に製剤化された配列番号22792、22794、22796、22798、22800、22802、22804、22806、22808、22810、22812、23529～23534、27386～27408、23535～23552、27409～27431、23590～23606、27478～27500、28736～28776、28638～28686、28777～28825、28925～28928、28933～28936の核酸配列と同一であるか、又は少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一である少なくとも1つのRNA;並びに/或いは
- カチオン性脂質III-3(ALC-0315)、DSPC、コレステロール及び式(IVa)(n=49を有するか、又はn=45(ALC-0159)を有する)のPEG-脂質の約50:10:38.5:1.5、好ましくは、47.5:10:40.8:1.7又はより好ましくは、47.4:10:40.9:1.7の割合(mol%)のモル比を有する、脂質ナノ粒子(LNP)中に製剤化された配列番号27394、27417、27486、28762、28650～28655、28789～28794の核酸配列と同一であるか、又は少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一である少なくとも1つのRNA;並びに/或いは
- カチオン性脂質III-3(ALC-0315)、DSPC、コレステロール及び式(IVa)(n=49を有するか、又はn=45(ALC-0159)を有する)のPEG-脂質の約50:10:38.5:1.5、好ましくは、47.5:10:40.8:1.7又はより好ましくは、47.4:10:40.9:1.7の割合(mol%)のモル比を有する、脂質ナノ粒子(LNP)中に製剤化された配列番号27394、27417、27486、28762の核酸配列と同一であるか、又は少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一である少なくとも1つのRNA;並びに/或いは
- カチオン性脂質III-3(ALC-0315)、DSPC、コレステロール及び式(IVa)(n=49を有するか、又はn=45(ALC-0159)を有する)のPEG-脂質の約50:10:38.5:1.5、好ましくは、47.5:10:40.8:1.7又はより好ましくは、47.4:10:40.9:1.7の割合(mol%)のモル比を有する、脂質ナノ粒子(LNP)中に製剤化された配列番号28639～28642、28778～28781、28925～28928、28933～28936の核酸配列と同一であるか、又は少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一である少なくとも1つのRNA
を含んでもよい。 In that context, the composition is
- about 50:10 of cationic lipid III-3 (ALC-0315), DSPC, cholesterol and PEG-lipid of formula (IVa) (with n=49 or with n=45 (ALC-0159)) :38.5:1.5, preferably 47.5:10:40.8:1.7 or more preferably 47.4:10:40.9:1.7. or at least 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical to the nucleic acid sequence of SEQ ID NO: 149 RNA; and/or
- about 50:10 of cationic lipid III-3 (ALC-0315), DSPC, cholesterol and PEG-lipid of formula (IVa) (with n=49 or with n=45 (ALC-0159)): formulated into lipid nanoparticles (LNPs) having a molar ratio (mol%) of 38.5:1.5, preferably 47.5:10:40.8:1.7 or more preferably 47.4:10:40.9:1.7. SEQ ID NO: 22792, 22794, 22796, 22798, 22800, 22802, 22804, 22806, 22808, 22810, 22812, 23529-23534, 27386-27408, 23535-23552, 27409-27431, 23590-2 3606, 27478~27500, 28736~ 28776, 28638-28686, 28777-28825, 28925-28928, 28933-28936, or at least 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97 %, 98%, or 99% identical; and/or
- about 50:10 of cationic lipid III-3 (ALC-0315), DSPC, cholesterol and PEG-lipid of formula (IVa) (with n=49 or with n=45 (ALC-0159)) :38.5:1.5, preferably 47.5:10:40.8:1.7 or more preferably 47.4:10:40.9:1.7. or at least 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, at least one RNA that is 97%, 98%, or 99% identical; and/or
- about 50:10 of cationic lipid III-3 (ALC-0315), DSPC, cholesterol and PEG-lipid of formula (IVa) (with n=49 or with n=45 (ALC-0159)) :38.5:1.5, preferably 47.5:10:40.8:1.7 or more preferably 47.4:10:40.9:1.7. or at least 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99 % at least one RNA that is identical; and/or
- about 50:10 of cationic lipid III-3 (ALC-0315), DSPC, cholesterol and PEG-lipid of formula (IVa) (with n=49 or with n=45 (ALC-0159)) :38.5:1.5, preferably 47.5:10:40.8:1.7 or more preferably 47.4:10:40.9:1.7. or at least 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, At least one RNA that is 97%, 98%, or 99% identical
May include.

その文脈では、組成物は、
- カチオン性脂質III-3(ALC-0315)、DSPC、コレステロール及び式(IVa)(n=49を有するか、又はn=45を有する(ALC-0159))のPEG-脂質の約50:10:38.5:1.5、好ましくは、47.5:10:40.8:1.7又はより好ましくは、47.4:10:40.9:1.7の割合(mol%)のモル比を有する、脂質ナノ粒子(LNP)中に製剤化された配列番号24837の核酸配列と同一であるか、又は少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一である少なくとも1つのRNA;並びに/或いは
- カチオン性脂質III-3(ALC-0315)、DSPC、コレステロール及び式(IVa)(n=49を有するか、又はn=45を有する(ALC-0159))のPEG-脂質の約50:10:38.5:1.5、好ましくは、47.5:10:40.8:1.7又はより好ましくは、47.4:10:40.9:1.7の割合(mol%)のモル比を有する、脂質ナノ粒子(LNP)中に製剤化された配列番号24837～24854、27524～27546、24855～24872、27547～27569、24909～24926、27616～27638、28827～28866、28687～28735、28867～28915、28929～28932、28937～28940の核酸配列と同一であるか、又は少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一である少なくとも1つのRNA;並びに/或いは
- カチオン性脂質III-3(ALC-0315)、DSPC、コレステロール及び式(IVa)(n=49を有するか、又はn=45(ALC-0159)を有する)のPEG-脂質の約50:10:38.5:1.5、好ましくは、47.5:10:40.8:1.7又はより好ましくは、47.4:10:40.9:1.7の割合(mol%)のモル比を有する、脂質ナノ粒子(LNP)中に製剤化された配列番号27532、27555、27624、28852、28699～28704、28879～28884の核酸配列と同一であるか、又は少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一である少なくとも1つのRNA;並びに/或いは
- カチオン性脂質III-3(ALC-0315)、DSPC、コレステロール及び式(IVa)(n=49を有するか、又はn=45(ALC-0159)を有する)のPEG-脂質の約50:10:38.5:1.5、好ましくは、47.5:10:40.8:1.7又はより好ましくは、47.4:10:40.9:1.7の割合(mol%)のモル比を有する、脂質ナノ粒子(LNP)中に製剤化された配列番号27532、27555、27624、28852の核酸配列と同一であるか、又は少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一である少なくとも1つのRNA;並びに/或いは
- カチオン性脂質III-3(ALC-0315)、DSPC、コレステロール及び式(IVa)(n=49を有するか、又はn=45(ALC-0159)を有する)のPEG-脂質の約50:10:38.5:1.5、好ましくは、47.5:10:40.8:1.7又はより好ましくは、47.4:10:40.9:1.7の割合(mol%)のモル比を有する、脂質ナノ粒子(LNP)中に製剤化された配列番号28688～28691、28868～28871、28929～28932、28937～28940の核酸配列と同一であるか、又は少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一である少なくとも1つのRNA
を含んでもよい。 In that context, the composition is
- about 50:10 of cationic lipid III-3 (ALC-0315), DSPC, cholesterol and PEG-lipid of formula (IVa) (with n=49 or with n=45 (ALC-0159)) :38.5:1.5, preferably 47.5:10:40.8:1.7 or more preferably 47.4:10:40.9:1.7. or at least 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical to the nucleic acid sequence of SEQ ID NO: 24837. RNA; and/or
- about 50:10 of cationic lipid III-3 (ALC-0315), DSPC, cholesterol and PEG-lipid of formula (IVa) (with n=49 or with n=45 (ALC-0159)) :38.5:1.5, preferably 47.5:10:40.8:1.7 or more preferably 47.4:10:40.9:1.7. SEQ ID NOs: 24837-24854, 27524-27546, 24855-24872, 27547-27569, 24909-24926, 27616-27638, 28827-28866, 28687-28735, 28867-28915, 28929-28932, Nucleic acid sequence of 28937-28940 and at least one RNA that is identical or at least 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical; and/or
- about 50:10 of cationic lipid III-3 (ALC-0315), DSPC, cholesterol and PEG-lipid of formula (IVa) (with n=49 or with n=45 (ALC-0159)) :38.5:1.5, preferably 47.5:10:40.8:1.7 or more preferably 47.4:10:40.9:1.7. or at least 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, at least one RNA that is 97%, 98%, or 99% identical; and/or
- about 50:10 of cationic lipid III-3 (ALC-0315), DSPC, cholesterol and PEG-lipid of formula (IVa) (with n=49 or with n=45 (ALC-0159)) :38.5:1.5, preferably 47.5:10:40.8:1.7 or more preferably 47.4:10:40.9:1.7. or at least 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99 % at least one RNA that is identical; and/or
- about 50:10 of cationic lipid III-3 (ALC-0315), DSPC, cholesterol and PEG-lipid of formula (IVa) (with n=49 or with n=45 (ALC-0159)) :38.5:1.5, preferably 47.5:10:40.8:1.7 or more preferably 47.4:10:40.9:1.7. or at least 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, At least one RNA that is 97%, 98%, or 99% identical
May include.

組成物が上で定義された多価組成物である実施形態では、多価組成物の核酸種(例えば、DNA又はRNA)、好ましくは、RNA種は、共製剤化、好ましくは、リポソーム又はLNP中に共製剤化されてもよい。好適には、多価組成物のRNA種は、カチオン性脂質III-3(ALC-0315)、DSPC、コレステロール及び式(IVa)(n=49を有するか、又はn=45を有する)のPEG-脂質の約50:10:38.5:1.5、好ましくは、47.5:10:40.8:1.7又はより好ましくは、47.4:10:40.9:1.7の割合(mol%)のモル比を有する、LNP中に共製剤化される。上で定義された(セクション「本発明の多価組成物」を参照)多価組成物のための核酸種が、好ましくは選択される。 In embodiments where the composition is a multivalent composition as defined above, the nucleic acid species (e.g. DNA or RNA), preferably RNA species, of the multivalent composition are co-formulated, preferably liposomes or LNPs. may be co-formulated in Preferably, the RNA species of the multivalent composition include cationic lipid III-3 (ALC-0315), DSPC, cholesterol and PEG of formula (IVa) (with n=49 or with n=45). - having a molar ratio of lipids of about 50:10:38.5:1.5, preferably 47.5:10:40.8:1.7 or more preferably 47.4:10:40.9:1.7 (mol%) in LNPs; Formulated. Nucleic acid species for multivalent compositions as defined above (see section "Multivalent compositions of the invention") are preferably selected.

脂質ナノ粒子中のRNAの総量は、変動してもよく、例えば、核酸と総脂質とのw/w比に依存して定義される。本発明の一実施形態では、核酸、特に、RNAと総脂質との比は、0.06w/w未満、好ましくは、0.03w/w～0.04w/wである。 The total amount of RNA in a lipid nanoparticle may vary and is defined, for example, depending on the w/w ratio of nucleic acid to total lipid. In one embodiment of the invention, the ratio of nucleic acids, in particular RNA, to total lipids is less than 0.06 w/w, preferably between 0.03 w/w and 0.04 w/w.

一部の実施形態では、脂質ナノ粒子(LNP)は、3種の脂質成分、すなわち、イミダゾールコレステロールエステル(ICE)、1,2-ジオレオイル-sn-グリセロ-3-ホスホエタノールアミン(DOPE)、及び1,2-ジミリストイル-sn-グリセロール、メトキシポリエチレングリコール(DMG-PEG-2K)のみから構成される。 In some embodiments, lipid nanoparticles (LNPs) contain three lipid components: imidazole cholesterol ester (ICE), 1,2-dioleoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine (DOPE), and Consists only of 1,2-dimyristoyl-sn-glycerol and methoxypolyethylene glycol (DMG-PEG-2K).

一実施形態では、組成物の脂質ナノ粒子は、カチオン性脂質、ステロイド;中性脂質;及びポリマーコンジュゲートされた脂質、好ましくは、ペグ化脂質を含む。好ましくは、ポリマーコンジュゲートされた脂質は、ペグ化脂質又はPEG-脂質である。特定の実施形態では、脂質ナノ粒子は、以下の式 In one embodiment, the lipid nanoparticles of the composition include cationic lipids, steroids; neutral lipids; and polymer-conjugated lipids, preferably pegylated lipids. Preferably, the polymer-conjugated lipid is a pegylated lipid or PEG-lipid. In certain embodiments, lipid nanoparticles have the following formula:

Figure 2024502210000029
に従う、カチオン性脂質COATSOME(登録商標)SS-EC(旧名:SS-33/4PE-15;NOF Corporation、東京、日本)に似ているカチオン性脂質を含む。
Figure 2024502210000029
 Contains a cationic lipid similar to the cationic lipid COATSOME® SS-EC (formerly SS-33/4PE-15; NOF Corporation, Tokyo, Japan), according to the US Pat.

以下でさらに記載される通り、それらの脂質ナノ粒子は、「GN01」と呼ばれる。 As described further below, these lipid nanoparticles are called "GN01."

さらに、特定の実施形態では、GN01脂質ナノ粒子は、構造1,2-ジフィタノイル-sn-グリセロ-3-ホスホエタノールアミン(DPhyPE): Furthermore, in certain embodiments, the GN01 lipid nanoparticles have the structure 1,2-diphytanoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine (DPhyPE):

Figure 2024502210000030
に似ている中性脂質を含む。
Figure 2024502210000030
 Contains neutral lipids similar to

さらに、特定の実施形態では、GN01脂質ナノ粒子は、ポリマーコンジュゲートされた脂質、好ましくは、以下の構造: Additionally, in certain embodiments, the GN01 lipid nanoparticles are polymer-conjugated lipids, preferably having the following structure:

Figure 2024502210000031
を有する1,2-ジミリストイル-rac-グリセロ-3-メトキシポリエチレングリコール2000(DMG-PEG2000)であるペグ化脂質を含む。
Figure 2024502210000031
 The pegylated lipid is 1,2-dimyristoyl-rac-glycero-3-methoxypolyethylene glycol 2000 (DMG-PEG2000).

当該技術分野で使用される場合、「DMG-PEG2000」は、約97:3の比の1,2-DMG-PEG2000と1,3-DMG-PEG 2000の混合物とみなされる。 As used in the art, "DMG-PEG2000" is considered a mixture of 1,2-DMG-PEG2000 and 1,3-DMG-PEG 2000 in a ratio of approximately 97:3.

したがって、好ましい実施形態のうちの1つによるGN01脂質ナノ粒子(GN01-LNP)は、SS-ECカチオン性脂質、中性脂質DPhyPE、コレステロール、及びポリマーコンジュゲートされた脂質(ペグ化脂質)1,2-ジミリストイル-rac-グリセロ-3-メトキシポリエチレングリコール(PEG-DMG)を含む。 Therefore, GN01 lipid nanoparticles (GN01-LNP) according to one of the preferred embodiments contain SS-EC cationic lipid, neutral lipid DPhyPE, cholesterol, and polymer-conjugated lipid (PEGylated lipid) 1, Contains 2-dimyristoyl-rac-glycero-3-methoxypolyethylene glycol (PEG-DMG).

好ましい実施形態では、GN01 LNPは、
(a)45～65mol%の量のカチオン性脂質SS-EC(旧名:SS-33/4PE-15;NOF Corporation、東京、日本);
(b)25～45mol%の量のコレステロール;
(c)8～12mol%の量のDPhyPE;及び
(d)1～3mol%の量のPEG-DMG2000
を含み、それぞれの量は、GN01脂質ナノ粒子のすべての脂質賦形剤の総モル量に対する。 In a preferred embodiment, the GN01 LNP is
(a) cationic lipid SS-EC (former name: SS-33/4PE-15; NOF Corporation, Tokyo, Japan) in an amount of 45-65 mol%;
(b) cholesterol in an amount of 25-45 mol%;
(c) DPhyPE in an amount of 8-12 mol%; and
(d) PEG-DMG2000 in an amount of 1-3 mol%
and each amount is relative to the total molar amount of all lipid excipients in the GN01 lipid nanoparticles.

さらなる好ましい実施形態では、本明細書に記載されるGN01脂質ナノ粒子は、59mol%カチオン性脂質、10mol%中性脂質、29.3mol%ステロイド及び1.7mol%ポリマーコンジュゲート脂質、好ましくは、ペグ化脂質を含む。最も好ましい実施形態では、本明細書に記載されるGN01脂質ナノ粒子は、59mol%カチオン性脂質SS-EC、10mol% DPhyPE、29.3mol%コレステロール及び1.7mol% DMG-PEG2000を含む。 In a further preferred embodiment, the GN01 lipid nanoparticles described herein contain 59 mol% cationic lipids, 10 mol% neutral lipids, 29.3 mol% steroids and 1.7 mol% polymer conjugated lipids, preferably pegylated lipids. including. In the most preferred embodiment, the GN01 lipid nanoparticles described herein comprise 59 mol% cationic lipid SS-EC, 10 mol% DPhyPE, 29.3 mol% cholesterol and 1.7 mol% DMG-PEG2000.

GN01脂質ナノ粒子中の核酸の量に対するカチオン性脂質の量はまた、重量比(すなわち、「m/m」と略される)として表されてもよい。例えば、GN01脂質ナノ粒子は、ある量で、例えば、約20～約60、又は約10～約50の範囲の脂質とRNAとの重量比を達成するために、少なくとも1つの核酸、好ましくは、少なくとも1つのRNAを含む。他の実施形態では、カチオン性脂質と核酸又はRNAとの比は、約3～約15、例えば、約5～約13、約4～約8又は約7～約11である。本発明の非常に好ましい実施形態では、総脂質/RNA質量比は、RNA封入を確実にするために約40又は40、すなわち約40又は40倍質量が過剰である。別の好ましいRNA/脂質比は、約1～約10、約2～約5、約2～約4、又は好ましくは、約3である。 The amount of cationic lipid to the amount of nucleic acid in the GN01 lipid nanoparticles may also be expressed as a weight ratio (ie, abbreviated as "m/m"). For example, the GN01 lipid nanoparticles contain at least one nucleic acid, preferably in order to achieve a weight ratio of lipid to RNA in the range of, for example, from about 20 to about 60, or from about 10 to about 50. Contains at least one RNA. In other embodiments, the ratio of cationic lipid to nucleic acid or RNA is about 3 to about 15, such as about 5 to about 13, about 4 to about 8, or about 7 to about 11. In a highly preferred embodiment of the invention, the total lipid/RNA mass ratio is about 40 or 40, ie about 40 or 40 times in mass excess to ensure RNA encapsulation. Another preferred RNA/lipid ratio is about 1 to about 10, about 2 to about 5, about 2 to about 4, or preferably about 3.

さらに、カチオン性脂質の量は、核酸カーゴ、例えば、RNA化合物の量を考慮して選択されてもよい。一実施形態では、N/P比は、約1～約50の範囲にあることができる。別の実施形態では、範囲は、約1～約20、約1～約10、約1～約5である。1つの好ましい実施形態では、これらの量は、約10～約20の範囲内のGN01脂質ナノ粒子又は組成物のN/P比をもたらすように、選択される。さらに非常に好ましい実施形態では、N/Pは、14(すなわち、核酸封入を確実にするための14倍のモル過剰の正電荷)である。 Additionally, the amount of cationic lipid may be selected with consideration to the amount of nucleic acid cargo, eg, RNA compound. In one embodiment, the N/P ratio can range from about 1 to about 50. In another embodiment, the range is about 1 to about 20, about 1 to about 10, about 1 to about 5. In one preferred embodiment, these amounts are selected to provide an N/P ratio of the GN01 lipid nanoparticle or composition within the range of about 10 to about 20. In a further highly preferred embodiment, N/P is 14 (ie, a 14-fold molar excess of positive charge to ensure nucleic acid encapsulation).

好ましい実施形態では、GN01脂質ナノ粒子は、59mol%カチオン性脂質COATSOME(登録商標)SS-EC(旧名:実施例セクションから明らかなSS-33/4PE-15;NOF Corporation、東京、日本)、ステロイドとして29.3mol%コレステロール、中性脂質/リン脂質として10mol% DPhyPE及びポリマーコンジュゲートされた脂質として1.7mol% DMG-PEG2000を含む。DPhyPEの使用と関連するさらなる本発明の利点は、その巨大な尾部に起因して、膜融合性の高い能力を有し、これにより、それは、エンドソーム脂質と高いレベルで融合することができる。「GN01」、N/P(脂質と核酸との、例えば、RNA mol比)は、好ましくは14であり、総脂質/RNA質量比は、好ましくは40(m/m)である。 In a preferred embodiment, the GN01 lipid nanoparticles contain 59 mol% cationic lipid COATSOME® SS-EC (formerly SS-33/4PE-15 as seen from the Examples section; NOF Corporation, Tokyo, Japan), a steroid Contains 29.3 mol% cholesterol, 10 mol% DPhyPE as neutral lipid/phospholipid, and 1.7 mol% DMG-PEG2000 as polymer-conjugated lipid. A further inventive advantage associated with the use of DPhyPE is that due to its large tail, it has a high capacity for membrane fusogenicity, which allows it to fuse to high levels with endosomal lipids. "GN01", N/P (lipid to nucleic acid, for example, RNA mol ratio) is preferably 14, and total lipid/RNA mass ratio is preferably 40 (m/m).

他の実施形態では、少なくとも1つのRNA、好ましくは、少なくとも1つのmRNAは、1つ以上の脂質と複合体化され、これにより、脂質ナノ粒子(LNP)が形成され、ここで、LNPは、
I 少なくとも1つのカチオン性脂質;
Ii 少なくとも1つの中性脂質;
Iii 少なくとも1つのステロイド又はステロイドアナログ;及び
Iiii 本明細書において定義される少なくとも1つのPEG-脂質を含み、
ここで、カチオン性脂質は、DLin-KC2-DMA(50mol%)又はDLin-MC3-DMA(50mol%)であり、中性脂質はDSPC(10mol%)であり、PEG脂質はPEG-DOMG(1.5mol%)であり、構造脂質はコレステロール(38.5mol%)である。 In other embodiments, at least one RNA, preferably at least one mRNA, is complexed with one or more lipids, thereby forming lipid nanoparticles (LNPs), wherein the LNPs are
I at least one cationic lipid;
Ii at least one neutral lipid;
III at least one steroid or steroid analog; and
Iiii comprising at least one PEG-lipid as defined herein;
Here, the cationic lipid is DLin-KC2-DMA (50 mol%) or DLin-MC3-DMA (50 mol%), the neutral lipid is DSPC (10 mol%), and the PEG lipid is PEG-DOMG (1.5 mol%). mol%), and the structural lipid is cholesterol (38.5mol%).

他の実施形態では、少なくとも1つのRNA、好ましくは、少なくとも1つのmRNAは、1つ以上の脂質と複合体化され、これにより、脂質ナノ粒子(LNP)が形成され、ここで、LNPは、mol%50/38.5/10/1.5でSS15/Chol/DOPE(又はDOPC)/DSG-5000を含む。 In other embodiments, at least one RNA, preferably at least one mRNA, is complexed with one or more lipids, thereby forming lipid nanoparticles (LNPs), wherein the LNPs are Contains SS15/Chol/DOPE (or DOPC)/DSG-5000 at mol%50/38.5/10/1.5.

他の実施形態では、本発明のRNAは、リポソーム、例えば、WO2019/222424、WO2019/226925、WO2019/232095、WO2019/232097、又はWO2019/232208に記載されるリポソーム中で製剤化されてもよく、リポソーム又は脂質ベースの担体分子に関するWO2019/222424、WO2019/226925、WO2019/232095、WO2019/232097、又はWO2019/232208の開示は、参照により本明細書に取り込まれる。 In other embodiments, the RNA of the invention may be formulated in liposomes, such as those described in WO2019/222424, WO2019/226925, WO2019/232095, WO2019/232097, or WO2019/232208, The disclosures of WO2019/222424, WO2019/226925, WO2019/232095, WO2019/232097, or WO2019/232208 regarding liposomes or lipid-based carrier molecules are incorporated herein by reference.

様々な実施形態では、本発明の少なくとも1つのRNAを好適に封入するLNPは、約50nm～約200nm、約60nm～約200nm、約70nm～約200nm、約80nm～約200nm、約90nm～約200nm、約90nm～約190nm、約90nm～約180nm、約90nm～約170nm、約90nm～約160nm、約90nm～約150nm、約90nm～約140nm、約90nm～約130nm、約90nm～約120nm、約90nm～約100nm、約70nm～約90nm、約80nm～約90nm、約70nm～約80nm、又は約30nm、35nm、40nm、45nm、50nm、55nm、60nm、65nm、70nm、75nm、80nm、85nm、90nm、95nm、100nm、105nm、110nm、115nm、120nm、125nm、130nm、135nm、140nm、145nm、150nm、160nm、170nm、180nm、190nm、若しくは200nmの平均直径を有し、実質的に無毒性である。本明細書で使用される場合、平均直径は、当該技術分野で一般的に知られている動的光散乱によって決定されたz平均によって表されてもよい。 In various embodiments, LNPs suitably encapsulating at least one RNA of the invention are about 50 nm to about 200 nm, about 60 nm to about 200 nm, about 70 nm to about 200 nm, about 80 nm to about 200 nm, about 90 nm to about 200 nm. , about 90nm to about 190nm, about 90nm to about 180nm, about 90nm to about 170nm, about 90nm to about 160nm, about 90nm to about 150nm, about 90nm to about 140nm, about 90nm to about 130nm, about 90nm to about 120nm, about 90nm to about 100nm, about 70nm to about 90nm, about 80nm to about 90nm, about 70nm to about 80nm, or about 30nm, 35nm, 40nm, 45nm, 50nm, 55nm, 60nm, 65nm, 70nm, 75nm, 80nm, 85nm, 90nm , 95nm, 100nm, 105nm, 110nm, 115nm, 120nm, 125nm, 130nm, 135nm, 140nm, 145nm, 150nm, 160nm, 170nm, 180nm, 190nm, or 200nm and are substantially non-toxic. As used herein, average diameter may be represented by the z-average determined by dynamic light scattering as commonly known in the art.

ナノ粒子の多分散指数(PDI)は、典型的には、0.1～0.5の範囲にある。特定の実施形態では、PDIは、0.2未満である。典型的には、PDIは、動的光散乱によって決定される。 The polydispersity index (PDI) of nanoparticles typically ranges from 0.1 to 0.5. In certain embodiments, the PDI is less than 0.2. Typically, PDI is determined by dynamic light scattering.

本発明の別の好ましい実施形態では、脂質ナノ粒子は、それぞれ、約50nm～約300nm、又は約60nm～約250nm、約60nm～約150nm、若しくは約60nm～約120nmの範囲の流体力学的径を有する。 In another preferred embodiment of the invention, the lipid nanoparticles each have a hydrodynamic diameter ranging from about 50 nm to about 300 nm, or from about 60 nm to about 250 nm, from about 60 nm to about 150 nm, or from about 60 nm to about 120 nm. have

本発明の別の好ましい実施形態では、脂質ナノ粒子は、それぞれ、約50nm～約300nm、又は約60nm～約250nm、約60nm～約150nm、若しくは約60nm～約120nmの範囲の流体力学的径を有する。 In another preferred embodiment of the invention, the lipid nanoparticles each have a hydrodynamic diameter ranging from about 50 nm to about 300 nm, or from about 60 nm to about 250 nm, from about 60 nm to about 150 nm, or from about 60 nm to about 120 nm. have

本発明のRNA種の1つより多く又は複数、例えば、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15が組成物に含まれる実施形態では、本発明のRNA種の前記1つより多く又は前記複数、例えば、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15が、1つ以上の脂質内で複合体化され、これにより、異なるRNA種の1つより多く又は複数、例えば、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15を含むLNPが形成されてもよい。 Embodiments where more than one or more of the RNA species of the invention are included in the composition, e.g. 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 in which one or more of said RNA species of the invention, such as 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, complexed within more than one lipid, thereby allowing one or more of different RNA species, e.g. LNPs containing 14,15 may be formed.

好ましい実施形態によると、好ましくは、RNAを封入するか、又は含むLNPは、少なくとも1つの精製工程によって、好ましくは、TFFの少なくとも1つの工程及び/又は清澄化の少なくとも1つの工程及び/又は濾過の少なくとも1つの工程によって精製される。この精製は、特に、脂質製剤のため使用されている、組成物中のエタノールの量の低減を導く。 According to a preferred embodiment, the LNPs encapsulating or comprising RNA are preferably subjected to at least one purification step, preferably at least one step of TFF and/or at least one step of clarification and/or filtration. purified by at least one step of This purification leads to a reduction in the amount of ethanol in the composition, which in particular is used for lipid formulations.

この文脈では、組成物が、精製後、約500ppM未満のエタノール、好ましくは、約50ppM未満のエタノール、より好ましくは、約5ppM未満のエタノールを含むことは、特に好ましい。 In this context, it is particularly preferred that the composition comprises less than about 500 ppM ethanol, preferably less than about 50 ppM ethanol, more preferably less than about 5 ppM ethanol after purification.

実施形態では、本明細書に記載されるLNPは、製剤及び/又はRNAの保存安定性を改善するために凍結乾燥されてもよい。実施形態では、本明細書に記載されるLNPは、製剤及び/又は核酸の保存安定性を改善するためにスプレー乾燥されてもよい。凍結乾燥のためのリオプロテクタント及び又はスプレー乾燥は、トレハロース、スクロース、マンノース、デキストラン及びイヌリンから選択されてもよい。好ましいリオプロテクタントはスクロースであり、場合によりさらなるリオプロテクタントを含んでいる。さらなる好ましいリオプロテクタントはトレハロースであり、場合によりさらなるリオプロテクタントを含んでいる。 In embodiments, the LNPs described herein may be lyophilized to improve storage stability of the formulation and/or RNA. In embodiments, the LNPs described herein may be spray dried to improve storage stability of the formulation and/or nucleic acid. Lyoprotectants for freeze drying and or spray drying may be selected from trehalose, sucrose, mannose, dextran and inulin. A preferred lyoprotectant is sucrose, optionally containing further lyoprotectants. A further preferred lyoprotectant is trehalose, optionally comprising further lyoprotectants.

したがって、組成物、例えば、LNPを含む組成物を凍結乾燥して(例えば、それぞれが、全体が参照により本明細書に取り込まれる、WO2016/165831又はWO2011/069586による)、本明細書において定義される温度安定な乾燥核酸(粉末)組成物(例えば、RNA又はDNA)を得る。組成物、例えば、LNPを含む組成物をまた、スプレー乾燥又はスプレー凍結乾燥(例えば、WO2016/184575又はWO2016/184576による)を使用して乾燥させて、本明細書において定義される温度安定な組成物(粉末)を得てもよい。 Accordingly, a composition, e.g., a composition comprising LNPs, may be lyophilized (e.g., according to WO2016/165831 or WO2011/069586, each of which is hereby incorporated by reference in its entirety), as defined herein. A temperature-stable dry nucleic acid (powder) composition (eg, RNA or DNA) is obtained. Compositions, e.g., compositions comprising LNPs, can also be dried using spray drying or spray lyophilization (e.g., according to WO2016/184575 or WO2016/184576) to form temperature-stable compositions as defined herein. You may also obtain a product (powder).

したがって、好ましい実施形態では、組成物は、乾燥された組成物である。 Therefore, in a preferred embodiment, the composition is a dried composition.

本明細書で使用される場合、用語「乾燥された組成物」は、例えば、LNP複合体化RNA(上で定義された)を含む温度安定な乾燥された組成物(粉末)を得るために、上で定義された凍結乾燥、又はスプレー乾燥、又はスプレー凍結乾燥されている組成物と理解されなければならない。 As used herein, the term "dried composition" means, for example, to obtain a temperature-stable dried composition (powder) containing LNP-conjugated RNA (as defined above). , freeze-dried, or spray-dried, or spray-freeze-dried compositions as defined above.

さらなる実施形態によると、第二の態様の組成物は、少なくとも1つのアジュバントを含んでもよい。 According to a further embodiment, the composition of the second aspect may include at least one adjuvant.

好適には、アジュバントを好ましくは加えて、組成物の免疫刺激特性を強化する。 Suitably, an adjuvant is preferably added to enhance the immunostimulatory properties of the composition.

本明細書で使用される場合、用語「アジュバント」は、当業者によって認識され、理解され、例えば、他の薬剤の効果を修飾、例えば、強化し得るか、又は組成物の投与及び送達を支持するのに好適であり得る薬理学的及び/又は免疫学的薬剤を指すことが意図される。用語「アジュバント」は、広範なスペクトルの物質を指す。典型的には、これらの物質は、抗原の免疫原性を増加させることができる。例えば、アジュバントは、自然免疫系によって認識されてもよく、例えば、自然免疫応答(すなわち、特異的でない免疫応答)を誘発してもよい。「アジュバント」は、典型的には、適応免疫応答を誘発しない。本発明の文脈では、アジュバントは、核酸によって提供される抗原性ペプチド又はタンパク質の効果を強化し得る。その文脈では、少なくとも1つのアジュバントは、当業者に公知の任意のアジュバントから選択され、本場合、すなわち、対象、例えば、ヒト対象における免疫応答の誘導を支持するのに好適であり得る。 As used herein, the term "adjuvant" is recognized and understood by those skilled in the art and may, for example, modify, e.g. enhance, the effect of other agents or support the administration and delivery of the composition. is intended to refer to pharmacological and/or immunological agents that may be suitable for The term "adjuvant" refers to a broad spectrum of substances. Typically, these substances can increase the immunogenicity of the antigen. For example, an adjuvant may be recognized by the innate immune system, and may, for example, induce an innate immune response (ie, a non-specific immune response). An "adjuvant" typically does not elicit an adaptive immune response. In the context of the present invention, an adjuvant may enhance the effect of the antigenic peptide or protein provided by the nucleic acid. In that context, the at least one adjuvant may be selected from any adjuvant known to the person skilled in the art and suitable for supporting the induction of an immune response in the present case, ie a subject, for example a human subject.

したがって、第二の態様の組成物は、少なくとも1つのアジュバントを含んでもよく、ここで、少なくとも1つのアジュバントは、好適には、参照により本明細書に取り込まれる、WO2016/203025において提供される任意のアジュバントから選択されてもよい。WO2016/203025の請求項2～17のいずれかに開示されるアジュバント、好ましくは、WO2016/203025の請求項17に開示されるアジュバントが、特に好適であり、それと関連する具体的な内容は参照により本明細書に取り込まれる。アジュバントを第二の態様の組成物、又は第四の態様のワクチンにおいて好適に使用し、含んで、例えば、コードされるタンパク質に対する十分な免疫応答のため必要な核酸の量を低減し、及び/又は高齢者の処置/ワクチン接種のための組成物/ワクチンの有効性を改善してもよい。好適なアジュバントは、コロナウイルス組成物又はワクチン(特に、第三の態様のポリペプチドを含む組成物について)の文脈で、Toll様受容体9(TLR9)アゴニストアジュバントCpG 1018TMであってもよい。 Accordingly, the composition of the second aspect may comprise at least one adjuvant, wherein the at least one adjuvant is preferably any of those provided in WO2016/203025, herein incorporated by reference. may be selected from the following adjuvants: The adjuvants disclosed in any of claims 2 to 17 of WO2016/203025, preferably the adjuvants disclosed in claim 17 of WO2016/203025, are particularly suitable, and the specific content associated therewith can be found by reference. Incorporated herein. An adjuvant is suitably used and included in the composition of the second aspect or the vaccine of the fourth aspect, for example to reduce the amount of nucleic acid required for an adequate immune response against the encoded protein, and/or or may improve the effectiveness of compositions/vaccines for the treatment/vaccination of the elderly. A suitable adjuvant, in the context of coronavirus compositions or vaccines (particularly for compositions comprising the polypeptide of the third aspect), may be the Toll-like receptor 9 (TLR9) agonist adjuvant CpG 1018TM.

第二の態様の組成物は、本明細書において特定される成分に加えて、さらなる抗原(例えば、ペプチド若しくはタンパク質の形態、好ましくは、コロナウイルスから誘導される)又はさらなる抗原をコードする核酸(好ましくは、ペプチド若しくはタンパク質をコードする、好ましくは、コロナウイルスから誘導される);さらなる免疫治療剤;1つ以上の補助物質(サイトカイン、例えば、モノカイン、リンホカイン、インターロイキン又はケモカイン);或いはヒトToll様受容体へのその結合親和性(リガンドとして)に起因して免疫刺激性であることが知られている、任意のさらなる化合物;及び/或いはアジュバント核酸、好ましくは、免疫刺激性RNA(isRNA)、例えば、CpG-RNAなどからなる群から選択され得る少なくとも1つのさらなる成分を含んでもよい。 The composition of the second aspect comprises, in addition to the components specified herein, a further antigen (e.g. in the form of a peptide or protein, preferably derived from a coronavirus) or a nucleic acid encoding the further antigen ( further immunotherapeutic agents; one or more auxiliary substances (cytokines, e.g. monokines, lymphokines, interleukins or chemokines); or human Toll. and/or an adjuvant nucleic acid, preferably an immunostimulatory RNA (isRNA). , for example CpG-RNA and the like.

好ましい実施形態では、少なくとも1つのRNAを封入する脂質ベースの担体(例えば、LNP)を含む組成物は、液体としての保存後安定であり、例えば、少なくとも2週間、約5℃の温度で液体として保存後安定である。 In a preferred embodiment, the composition comprising a lipid-based carrier (e.g., LNP) encapsulating at least one RNA is stable after storage as a liquid, e.g., at a temperature of about 5° C. for at least two weeks. Stable after storage.

本明細書で使用される場合、様々な生理化学的パラメーターについて測定された値が、保存後の定義された範囲内にある場合、「安定な」は、RNAを封入する脂質ベースの担体(例えば、LNP)を含む液体組成物を指す。一実施形態では、RNAを封入する脂質ベースの担体を含む液体組成物を分析して、様々なパラメーターによる安定性が評価される。好適な安定性パラメーターは、限定することなく、RNA完全性、Z平均粒子サイズ、多分散指数(PDI)、液体組成物中の遊離のRNAの量、RNAの封入効率(脂質ベースの担体で取り込まれたRNAの割合、パーセント)、RNAを封入する脂質ベースの担体の形状及び形態、pH、浸透圧、又は濁度を含む。さらに、様々な機能的パラメーターについての測定された値が、保存後に定義された範囲内である場合、「安定な」は、RNAを封入する脂質ベースの担体を含む液体組成物を指す。一実施形態では、RNAを封入する脂質ベースの担体を含む液体組成物を分析して、例えば、コードされるペプチド又はタンパク質の発現、特異的な抗体力価の誘導、中和抗体力価の誘導、T細胞の誘導、例えば、自然免疫応答の誘導を含む液体組成物の反応源性などを含む液体組成物の効力が評価される。 As used herein, "stable" means a lipid-based carrier encapsulating RNA (e.g. , LNP). In one embodiment, a liquid composition comprising a lipid-based carrier encapsulating RNA is analyzed to assess stability according to various parameters. Suitable stability parameters include, without limitation, RNA integrity, Z-average particle size, polydispersity index (PDI), amount of free RNA in the liquid composition, encapsulation efficiency of RNA (incorporated in lipid-based carriers), (percentage of RNA), shape and morphology of the lipid-based carrier that encapsulates the RNA, pH, osmolarity, or turbidity. Furthermore, "stable" refers to a liquid composition comprising a lipid-based carrier that encapsulates the RNA if the measured values for the various functional parameters are within defined ranges after storage. In one embodiment, a liquid composition comprising a lipid-based carrier encapsulating RNA is analyzed, e.g., for expression of the encoded peptide or protein, induction of specific antibody titers, induction of neutralizing antibody titers. The efficacy of the liquid composition is evaluated, including the reactogenicity of the liquid composition, including induction of T cells, e.g., induction of innate immune responses.

好ましい実施形態では、用語「安定な」は、RNA完全性を指す。 In a preferred embodiment, the term "stable" refers to RNA integrity.

用語「RNA完全性」は、一般的に、完全なRNA配列が液体組成物に存在するかどうかを記載する。低いRNA完全性は、中でも、RNA分解、RNA切断、RNAの不正確若しくは不完全な化学合成、不正確な塩基対形成、修飾されたヌクレオチドの組込み若しくは既に組込まれたヌクレオチドの修飾、キャッピングの欠如若しくは不完全なキャッピング、ポリアデニル化の欠如若しくは不完全なポリアデニル化、又は不完全なRNA in vitro転写に起因し得る。RNAは、容易に分解することができる脆弱な分子であり、それは、RNA完全性及び結果的にRNAの機能性を低減し得る、例えば、温度、リボヌクレアーゼ、pH又は他の要因(例えば、求核性攻撃、加水分解など)によって引き起こされ得る。 The term "RNA integrity" generally describes whether a complete RNA sequence is present in a liquid composition. Poor RNA integrity can be caused by, among others, RNA degradation, RNA cleavage, incorrect or incomplete chemical synthesis of RNA, incorrect base pairing, incorporation of modified nucleotides or modification of already incorporated nucleotides, lack of capping. or may be due to incomplete capping, lack of or incomplete polyadenylation, or incomplete RNA in vitro transcription. RNA is a fragile molecule that can be easily degraded, and it is affected by factors such as temperature, ribonucleases, pH or other factors (e.g. nucleophilic sexual attack, hydrolysis, etc.).

好ましい実施形態では、組成物のRNAは、少なくとも約50%、好ましくは、少なくとも約60%、より好ましくは、少なくとも約70%、最も好ましくは、少なくとも約80%又は約90%のRNA完全性を有する。RNAは、好適には、分析HPLC、好ましくは、分析RP-HPLCを使用して決定される。 In preferred embodiments, the RNA of the composition has an RNA integrity of at least about 50%, preferably at least about 60%, more preferably at least about 70%, most preferably at least about 80% or about 90%. have RNA is suitably determined using analytical HPLC, preferably analytical RP-HPLC.

当業者は、RNA完全性を決定するための様々な異なるクロマトグラフィー法又は電気泳動法から選択することができる。クロマトグラフィー法及び電気泳動法は、当該技術分野で周知である。クロマトグラフィーが使用される(例えば、RP-HPLC)場合、RNAの完全性の分析は、対応するクロマトグラムにおける全長RNAのピーク面積(又は「ピーク下面積」)の決定に基づいてもよい。ピーク面積は、検出器システムのシグナルを評価する任意の好適なソフトウエアによって決定されてもよい。ピーク面積を決定するプロセスはまた、統合とも呼ばれる。全長RNAを表すピーク面積は、典型的には、それぞれの試料中の総RNAのピーク面積に関連して設定される。RNA完全性は、%RNA完全性で表されてもよい。 One skilled in the art can choose from a variety of different chromatographic or electrophoretic methods for determining RNA integrity. Chromatographic and electrophoretic methods are well known in the art. If chromatography is used (eg, RP-HPLC), analysis of RNA integrity may be based on determining the peak area (or "area under the peak") of full-length RNA in the corresponding chromatogram. Peak areas may be determined by any suitable software that evaluates the signal of the detector system. The process of determining peak areas is also called integration. The peak area representing full-length RNA is typically set in relation to the peak area of total RNA in each sample. RNA integrity may be expressed as %RNA integrity.

本発明の態様の文脈では、RNA完全性は、分析(RP)HPLCを使用して決定されてもよい。典型的には、RNAを封入する脂質ベースの担体を含む液体組成物の試験試料を界面活性剤(例えば、約2%Triton X100)を用いて処理して、脂質ベースの担体が解離され、封入されたRNAが放出されてもよい。放出されたRNAは、本質的には製造元の指示に従い、好適な結合化合物、例えば、Agencourt AMPure XPビーズ(Beckman Coulter、Brea、CA、米国)を使用して捕獲されてもよい。RNA試料の調製後、分析(RP)HPLCを行い、RNAの完全性が決定されてもよい。典型的には、RNA完全性を決定するため、RNA試料は、例えば、注射用水(WFI)を使用して、0.1g/lの濃度に希釈されてもよい。約10μl希釈されたRNA試料は、HPLCカラム(例えば、一体化ポリ(スチレン-ジビニルベンゼン)マトリックス)に注入されてもよい。分析(RP)HPLCは、標準的な条件、例えば、勾配1:緩衝液A(0.1M TEAA(pH7.0));25%アセトニトリルを含有する緩衝液B(0.1M TEAA(pH7.0))を使用して行われてもよい。30%緩衝液B勾配で開始し、2分で32%緩衝液Bに拡大し、続いて流速1ml/分で15分かけて55%緩衝液Bに拡大する。HPLCクロマトグラムは、典型的には、波長260nmで記録される。得られたクロマトグラムは、ソフトウエアを使用して評価されてもよく、相対的ピーク面積は、当該技術分野で一般的に知られているパーセント(%)で決定されてもよい。相対的ピーク面積は、100%RNA完全性を有するRNAの量を示す。HPLCに注入されるRNAの量は典型的に知られているため、相対的ピーク面積の分析は、RNAの完全性についての情報をもたらす。したがって、例えば、100ng RNAが合計で注入され、100ngが相対的ピーク面積として決定される場合、RNA完全性は100%である。例えば、相対的ピーク面積が80ngに対応する場合、RNA完全性は80%である。したがって、RNA完全性は、本発明の文脈で、分析HPLC、好ましくは、分析RP-HPLCを使用して決定される。 In the context of embodiments of the invention, RNA integrity may be determined using analytical (RP) HPLC. Typically, a test sample of a liquid composition containing a lipid-based carrier encapsulating RNA is treated with a detergent (e.g., approximately 2% Triton The released RNA may be released. Released RNA may be captured using a suitable binding compound, such as Agencourt AMPure XP beads (Beckman Coulter, Brea, Calif., USA) essentially according to the manufacturer's instructions. After preparation of the RNA sample, analytical (RP) HPLC may be performed to determine the integrity of the RNA. Typically, to determine RNA integrity, the RNA sample may be diluted to a concentration of 0.1 g/l using, for example, water for injection (WFI). Approximately 10 μl of diluted RNA sample may be injected onto an HPLC column (eg, integrated poly(styrene-divinylbenzene) matrix). Analytical (RP) HPLC was performed using standard conditions, e.g., gradient 1: buffer A (0.1 M TEAA (pH 7.0)); buffer B (0.1 M TEAA (pH 7.0)) containing 25% acetonitrile. It may be done using. Start with a 30% Buffer B gradient and expand to 32% Buffer B in 2 min, followed by 55% Buffer B over 15 min at a flow rate of 1 ml/min. HPLC chromatograms are typically recorded at a wavelength of 260 nm. The resulting chromatograms may be evaluated using software and relative peak areas may be determined in percentages (%) as commonly known in the art. Relative peak areas indicate the amount of RNA with 100% RNA integrity. Since the amount of RNA injected into HPLC is typically known, analysis of relative peak areas yields information about RNA integrity. Thus, for example, if 100ng RNA is injected in total and 100ng is determined as the relative peak area, the RNA integrity is 100%. For example, if the relative peak area corresponds to 80ng, the RNA integrity is 80%. RNA integrity is therefore determined in the context of the present invention using analytical HPLC, preferably analytical RP-HPLC.

好ましい実施形態では、液体組成物に含まれるRNAの80%は封入され、好ましくは、組成物に含まれるRNAの85%は封入され、組成物に含まれるRNAの90%は封入され、最も好ましくは、組成物に含まれるRNAの95%以上は封入される。封入のパーセンテージは、当該技術分野で公知のRibogreenアッセイによって決定されてもよい。 In a preferred embodiment, 80% of the RNA contained in the liquid composition is encapsulated, preferably 85% of the RNA contained in the composition is encapsulated, and most preferably 90% of the RNA contained in the composition is encapsulated. 95% or more of the RNA contained in the composition is encapsulated. Percentage of encapsulation may be determined by the Ribogreen assay known in the art.

実施形態では、組成物は、パターン認識受容体を感知する少なくとも1つのRNAの少なくとも1つのアンタゴニストを含む。このようなアンタゴニストは、好ましくは、本明細書において定義される脂質ベースの担体中で共製剤化されてもよい。 In embodiments, the composition comprises at least one antagonist of at least one RNA that senses a pattern recognition receptor. Such antagonists may preferably be co-formulated in a lipid-based carrier as defined herein.

パターン認識受容体を感知する少なくとも1つのRNAの好適なアンタゴニストは、PCT特許出願PCT/EP2020/072516において開示され、完全な開示が参照により本明細書に取り込まれる。特に、PCT/EP2020/072516の請求項1～94のいずれか1つにおいて定義されるパターン認識受容体を感知する少なくとも1つのRNAの好適なアンタゴニストに関する開示が取り込まれる。 Suitable antagonists of at least one RNA sensing pattern recognition receptor are disclosed in PCT patent application PCT/EP2020/072516, the entire disclosure of which is incorporated herein by reference. In particular, the disclosure regarding suitable antagonists of at least one RNA sensing pattern recognition receptor as defined in any one of claims 1 to 94 of PCT/EP2020/072516 is incorporated.

好ましい実施形態では、組成物は、Toll様受容体、好ましくは、TLR7及び/又はTLR8から選択されるパターン認識受容体を感知する少なくとも1つのRNAの少なくとも1つのアンタゴニストを含む。 In a preferred embodiment, the composition comprises at least one antagonist of at least one RNA sensing a Toll-like receptor, preferably a pattern recognition receptor selected from TLR7 and/or TLR8.

実施形態では、パターン認識受容体を感知する少なくとも1つのRNAの少なくとも1つのアンタゴニストは、ヌクレオチド、ヌクレオチドアナログ、核酸、ペプチド、タンパク質、小分子、脂質、又はこれらのいずれかのフラグメント、バリアント若しくは誘導体から選択される。 In embodiments, the at least one antagonist of the at least one RNA sensing pattern recognition receptor is from a nucleotide, nucleotide analog, nucleic acid, peptide, protein, small molecule, lipid, or a fragment, variant, or derivative of any of these. selected.

好ましい実施形態では、パターン認識受容体を感知する少なくとも1つのRNAの少なくとも1つのアンタゴニストは、一本鎖オリゴヌクレオチド、好ましくは、一本鎖RNAオリゴヌクレオチドである。 In a preferred embodiment, the at least one antagonist of the at least one RNA sensing pattern recognition receptor is a single-stranded oligonucleotide, preferably a single-stranded RNA oligonucleotide.

実施形態では、パターン認識受容体を感知する少なくとも1つのRNAのアンタゴニストは、PCT/EP2020/072516の配列番号85～212からなる群から選択される核酸配列と同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一である核酸配列又はこれらの配列のいずれかのフラグメントを含むか、又はそれからなる一本鎖オリゴヌクレオチドである。 In embodiments, the at least one RNA antagonist sensing pattern recognition receptor is at least 70% identical to a nucleic acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 85-212 of PCT/EP2020/072516; 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical A single-stranded oligonucleotide comprising or consisting of certain nucleic acid sequences or fragments of any of these sequences.

好ましい実施形態では、パターン認識受容体を感知する少なくとも1つのRNAのアンタゴニストは、PCT/EP2020/072516の配列番号85～87、149～212からなる群から選択される核酸配列と同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一である核酸配列又はこれらの配列のいずれかのフラグメントを含むか、又はそれからなる一本鎖オリゴヌクレオチドである。 In a preferred embodiment, the at least one RNA antagonist sensing pattern recognition receptor is identical to a nucleic acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 85-87, 149-212 of PCT/EP2020/072516; or at least 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or a single-stranded oligonucleotide comprising or consisting of a nucleic acid sequence that is 99% identical or a fragment of any of these sequences.

パターン認識受容体を感知する少なくとも1つのRNAの特に好ましいアンタゴニストは、本発明の文脈で、5'-GAG CGmG CCA-3'(PCT/EP2020/072516の配列番号85)、又はそのフラグメントである。 A particularly preferred antagonist of at least one RNA sensing pattern recognition receptor, in the context of the present invention, is 5'-GAG CGmG CCA-3' (SEQ ID NO: 85 of PCT/EP2020/072516), or a fragment thereof.

実施形態では、本明細書において定義されるパターン認識受容体を感知する少なくとも1つのRNAの少なくとも1つのアンタゴニストと少なくとも1つの核酸、好ましくは、本明細書において定義されるSRAS-CoV-2抗原性ペプチド又はタンパク質をコードするRNAとのモル比は、好適には、約1:1～約100:1の範囲にあるか、又は約20:1～約80:1の範囲にある。 In embodiments, at least one antagonist of at least one RNA sensing pattern recognition receptor as defined herein and at least one nucleic acid, preferably SRAS-CoV-2 antigenic as defined herein The molar ratio to RNA encoding the peptide or protein suitably ranges from about 1:1 to about 100:1, or from about 20:1 to about 80:1.

実施形態では、本明細書において定義されるパターン認識受容体を感知する少なくとも1つのRNAの少なくとも1つのアンタゴニストと少なくとも1つの核酸、好ましくは、本明細書において定義されるSRAS-CoV-2抗原性ペプチド又はタンパク質をコードするRNAとの重量と重量との比は、好適には、約1:1～約1:30の範囲にあるか、又は約1:2～約1:10の範囲にある。 In embodiments, at least one antagonist of at least one RNA sensing pattern recognition receptor as defined herein and at least one nucleic acid, preferably SRAS-CoV-2 antigenic as defined herein The weight to weight ratio of the RNA encoding the peptide or protein is preferably in the range of about 1:1 to about 1:30, or in the range of about 1:2 to about 1:10. .

ワクチン:
第三の態様では、本発明は、ワクチン、例えば、COVID-19疾患を引き起こすSARS-CoV-2(以前は、nCoV-2019)コロナウイルスに対するワクチンを提供する。ワクチンは、複数のSARS-CoV-2コロナウイルスに対して有効であってもよい。ワクチンはまた、1つ以上のSARS-CoV-2コロナウイルスと1つ以上の非コロナウイルスの両方に対して有効であってもよい(例えば、ワクチンは、SARS-CoV-2ウイルスとインフルエンザウイルスの両方に対して有効であってもよい)。 vaccine:
In a third aspect, the invention provides a vaccine, eg, a vaccine against the SARS-CoV-2 (formerly nCoV-2019) coronavirus that causes the COVID-19 disease. A vaccine may be effective against multiple SARS-CoV-2 coronaviruses. The vaccine may also be effective against both one or more SARS-CoV-2 coronaviruses and one or more non-coronaviruses (e.g., the vaccine may be effective against both the SARS-CoV-2 virus and the influenza virus). may be valid for both).

第四の態様の好ましい実施形態では、ワクチンは、少なくとも1つの核酸(例えば、DNA又はRNA)、好ましくは、第一の態様の少なくとも1つのRNA、又は第二の態様の組成物を含む。 In a preferred embodiment of the fourth aspect, the vaccine comprises at least one nucleic acid (eg DNA or RNA), preferably at least one RNA of the first aspect, or a composition of the second aspect.

他の実施形態では、ワクチンは、第三の態様において定義される少なくとも1つのポリペプチドを含む。 In other embodiments, the vaccine comprises at least one polypeptide as defined in the third aspect.

他の実施形態では、ワクチンは、第一の態様において定義される少なくとも1つのプラスミドDNA又はアデノウイルスDNAを含む。 In other embodiments, the vaccine comprises at least one plasmid DNA or adenoviral DNA as defined in the first aspect.

特に、第二の態様の組成物に関する実施形態も同様に読み取られ、第四の態様のワクチンの好適な実施形態と理解されてもよい。また、第四の態様のワクチンに関する実施形態も同様に読み取られ、第二の態様の組成物の好適な実施形態と理解されてもよい。さらに、第一の態様(本発明の核酸)の文脈で記載される特色及び実施形態は、第四の態様の組成物の好適な実施形態として読み取られなければならず、理解されなければならない。 In particular, the embodiments relating to the composition of the second aspect may be similarly read and understood as preferred embodiments of the vaccine of the fourth aspect. The embodiments relating to vaccines of the fourth aspect may also be similarly read and understood as preferred embodiments of the compositions of the second aspect. Furthermore, features and embodiments described in the context of the first aspect (nucleic acids of the invention) must be read and understood as preferred embodiments of the composition of the fourth aspect.

用語「ワクチン」は、当業者によって認識され、理解され、例えば、少なくとも1つのエピトープ又は抗原、好ましくは、免疫原をもたらす予防又は治療材料であることが意図される。本発明の文脈で、抗原又は抗原性機能は、好適には、第一の態様の本発明の核酸(SARS-CoV-2コロナウイルスから誘導される抗原性ペプチド又はタンパク質をコードするコード配列を含む前記核酸)又は第二の態様の組成物(第一の態様の少なくとも1つの核酸を含む)によってもたらされる。他の実施形態では、抗原又は抗原性機能は、第三の態様の本発明のポリペプチドによってもたらされる。 The term "vaccine" is recognized and understood by those skilled in the art and is intended to be a prophylactic or therapeutic material that provides for example at least one epitope or antigen, preferably an immunogen. In the context of the present invention, an antigen or an antigenic function preferably comprises a nucleic acid of the invention of the first aspect (a coding sequence encoding an antigenic peptide or protein derived from the SARS-CoV-2 coronavirus). said nucleic acid) or a composition of the second aspect (comprising at least one nucleic acid of the first aspect). In other embodiments, the antigen or antigenic function is provided by the polypeptide of the invention of the third aspect.

好ましい実施形態では、ワクチン、又は第二の態様の組成物は、適応免疫応答、好ましくは、コロナウイルスに対する、好ましくは、SARS-CoV-2コロナウイルスに対する適応免疫応答を誘発する。 In a preferred embodiment, the vaccine, or the composition of the second aspect, induces an adaptive immune response, preferably against a coronavirus, preferably against the SARS-CoV-2 coronavirus.

特に好ましい実施形態では、ワクチン、又は第二の態様の組成物は、ウイルス、好ましくは、SARS-CoV-2コロナウイルスを有効に中和することができる機能的抗体を誘発する。 In particularly preferred embodiments, the vaccine, or composition of the second aspect, elicits functional antibodies that are capable of effectively neutralizing the virus, preferably the SARS-CoV-2 coronavirus.

さらに好ましい実施形態では、ワクチン、又は第二の態様の組成物は、粘膜IgA抗体を誘導することによって、粘膜IgA免疫を誘発する。 In a further preferred embodiment, the vaccine, or composition of the second aspect, induces mucosal IgA immunity by inducing mucosal IgA antibodies.

特に好ましい実施形態では、ワクチン、又は第二の態様の組成物は、ウイルス、好ましくは、SARS-CoV-2コロナウイルスを有効に中和することができる機能的抗体を誘発する。 In particularly preferred embodiments, the vaccine, or composition of the second aspect, elicits functional antibodies that are capable of effectively neutralizing the virus, preferably the SARS-CoV-2 coronavirus.

さらに特に好ましい実施形態では、ワクチン、又は第二の態様の組成物は、コロナウイルスに対する、好ましくは、SARS-CoV-2コロナウイルスに対する広範な機能的細胞性T細胞応答を誘導する。 In a more particularly preferred embodiment, the vaccine, or composition of the second aspect, induces a broad functional cellular T cell response against a coronavirus, preferably against the SARS-CoV-2 coronavirus.

さらに特に好ましい実施形態では、ワクチン、又は第二の態様の組成物は、コロナウイルスに対する、好ましくは、SARS-CoV-2コロナウイルスに対するバランスのとれたB細胞及びT細胞応答を誘導する。 In a more particularly preferred embodiment, the vaccine, or composition of the second aspect, induces a balanced B cell and T cell response against a coronavirus, preferably against the SARS-CoV-2 coronavirus.

好ましい実施形態によると、本明細書において定義されるワクチンは、薬学的に許容される担体及び場合により、第二の態様の文脈で特定される少なくとも1つのアジュバントをさらに含んでもよい。 According to a preferred embodiment, the vaccine as defined herein may further comprise a pharmaceutically acceptable carrier and optionally at least one adjuvant as specified in the context of the second aspect.

好適なアジュバントは、その文脈で、WO2016/203025の請求項17において開示されるアジュバントから選択されてもよい。 Suitable adjuvants may in that context be selected from the adjuvants disclosed in claim 17 of WO2016/203025.

好ましい実施形態では、ワクチンは、一価のワクチンである。 In a preferred embodiment, the vaccine is a monovalent vaccine.

用語「一価(monovalent)ワクチン」、「一価(monovalent)組成物」、「一価(univalent)ワクチン」又は「一価(univalent)組成物」は、当業者によって認識され、理解され、例えば、病原体由来の1つの抗原又は抗原構築物のみを含む組成物又はワクチンを指すことが意図される。したがって、前記ワクチン又は組成物は、単一生物の単一抗原又は抗原構築物をコードする1つの核酸種のみを含む。用語「一価ワクチン」は、単一の力価に対する免疫を含む。本発明の文脈では、一価のSARS-CoV-2コロナウイルスワクチン又は組成物は、1つの特定のSARS-CoV-2コロナウイルスから誘導される1つの単一の抗原性ペプチド又はタンパク質をコードする少なくとも1つの核酸を含む。 The terms "monovalent vaccine", "monovalent composition", "univalent vaccine" or "univalent composition" are recognized and understood by those skilled in the art and include, for example , is intended to refer to a composition or vaccine containing only one antigen or antigen construct from a pathogen. Accordingly, the vaccine or composition comprises only one nucleic acid species encoding a single antigen or antigen construct of a single organism. The term "monovalent vaccine" includes immunization against a single titer. In the context of the present invention, a monovalent SARS-CoV-2 coronavirus vaccine or composition encodes one single antigenic peptide or protein derived from one particular SARS-CoV-2 coronavirus. Contains at least one nucleic acid.

実施形態では、ワクチンは、第一の態様の文脈で定義される核酸種の複数又は少なくとも1つより多くを含む多価ワクチンである。第二の態様の文脈で開示される多価組成物に関する実施形態も同様に読み取られ、多価ワクチンの好適な実施形態と理解されてもよい。 In an embodiment, the vaccine is a multivalent vaccine comprising a plurality or at least more than one of the nucleic acid species defined in the context of the first aspect. The embodiments relating to multivalent compositions disclosed in the context of the second aspect may be similarly read and understood as preferred embodiments of multivalent vaccines.

用語「多価(polyvalent)ワクチン」、「多価(polyvalent)組成物」、「多価(multivalent)ワクチン」又は「多価(multivalent)組成物」は、当業者によって認識され、理解され、例えば、1つより多くのウイルス由来の抗原(例えば、異なるSARS-CoV-2コロナウイルス分離株)を含むか、又は同じSARS-CoV-2コロナウイルスの異なる抗原若しくは抗原構築物、或いはその任意の組み合わせを含む組成物又はワクチンを指すことが意図される。用語は、前記ワクチン又は組成物が、1価より多くの力価を有することを記載する。本発明の文脈では、多価のSARS-CoV-2コロナウイルスワクチンは、いくつかの異なるSARS-CoV-2コロナウイルスから誘導される抗原性ペプチド若しくはタンパク質(例えば、異なるSARS-CoV-2コロナウイルス分離株)をコードする核酸配列を含むか、又は同じSARS-CoV-2コロナウイルス由来の異なる抗原若しくは抗原構築物をコードする核酸配列、或いはそれらの組み合わせを含む。 The terms "polyvalent vaccine", "polyvalent composition", "multivalent vaccine" or "multivalent composition" are recognized and understood by those skilled in the art and include, for example , contains antigens from more than one virus (e.g., different SARS-CoV-2 coronavirus isolates), or contains different antigens or antigen constructs of the same SARS-CoV-2 coronavirus, or any combination thereof. is intended to refer to compositions or vaccines containing. The term describes that the vaccine or composition has more than one potency. In the context of the present invention, a multivalent SARS-CoV-2 coronavirus vaccine comprises antigenic peptides or proteins derived from several different SARS-CoV-2 coronaviruses (e.g. isolate) or different antigens or antigen constructs from the same SARS-CoV-2 coronavirus, or combinations thereof.

好ましい実施形態では、多価(polyvalent)又は多価(multivalent)ワクチンは、第二の態様において定義される少なくとも1つの多価組成物を含む。セクション「本発明の多価組成物」において定義される多価組成物が、特に好ましい。 In a preferred embodiment, the polyvalent or multivalent vaccine comprises at least one multivalent composition as defined in the second aspect. Particularly preferred are the multivalent compositions defined in the section "Multivalent compositions of the invention".

一部の実施形態では、ワクチンは、第二の態様において定義されたパターン認識受容体を感知する少なくとも1つのRNAの少なくとも1つのアンタゴニストを含む。 In some embodiments, the vaccine comprises at least one antagonist of at least one RNA that senses the pattern recognition receptor defined in the second aspect.

ワクチンは、典型的には、安全かつ有効な量の核酸(例えば、DNA又はRNA)、好ましくは、第一の態様のRNA又は第二の態様の組成物(又は第三の態様のポリペプチド)を含む。本明細書で使用される場合、「安全かつ有効な量」は、コロナウイルス、好ましくは、SARS-CoV-2コロナウイルスの感染と関連する疾患又は障害の陽性修飾を有意に誘導するのに十分な核酸又は組成物の量を意味する。同時に、「安全かつ有効な量」は、重篤な副作用を回避するのに十分少ない。本発明の核酸、組成物、又はワクチンに関して、表現「安全かつ有効な量」は、好ましくは、過剰又は損傷する免疫反応(例えば、自然免疫応答)が達成されない様式で、コロナウイルスに対する適応免疫系を刺激するのに好適である核酸、組成物、又はワクチンの量を意味する。 The vaccine typically comprises a safe and effective amount of a nucleic acid (e.g. DNA or RNA), preferably RNA of the first embodiment or a composition of the second embodiment (or a polypeptide of the third embodiment). including. As used herein, a "safe and effective amount" is sufficient to significantly induce a positive modification of a disease or disorder associated with infection with a coronavirus, preferably the SARS-CoV-2 coronavirus. means the amount of nucleic acid or composition. At the same time, a "safe and effective amount" is low enough to avoid serious side effects. With respect to the nucleic acids, compositions, or vaccines of the invention, the expression "a safe and effective amount" preferably means that the adaptive immune system against the coronavirus is refers to the amount of nucleic acid, composition, or vaccine that is suitable for stimulating.

上で定義された核酸、組成物、又はワクチンの「安全かつ有効な量」は、処置されるべき特定の状態に関して、並びに当業者の知識及び経験内の、処置されるべき患者の年齢及び健康状態、状態の重症度、処置の持続期間、付随する療法の性質、又は使用される特定の薬学的に許容される担体、及び同様の要因にも関して変動するだろう。さらに、核酸、組成物、又はワクチンの「安全かつ有効な量」は、適用/送達経路(皮内、筋肉内、鼻腔内)、適用装置(ジェット注射、針注射、マイクロニードルパッチ、エレクトロポレーション装置)及び/又は複合体化/製剤(プロタミン複合体化若しくはLNP封入、DNA若しくはRNA)に依存し得る。さらに、核酸、組成物、又はワクチンの「安全かつ有効な量」は、処置される対象(幼児、妊婦、易感染性のヒト対象など)の健康状態に依存し得る。 A "safe and effective amount" of a nucleic acid, composition, or vaccine as defined above is determined with respect to the particular condition to be treated and within the knowledge and experience of those skilled in the art, the age and health of the patient to be treated. It will also vary with respect to the condition, the severity of the condition, the duration of treatment, the nature of any accompanying therapy, or the particular pharmaceutically acceptable carrier used, and similar factors. Additionally, a "safe and effective amount" of a nucleic acid, composition, or vaccine may include the route of application/delivery (intradermal, intramuscular, intranasal), application device (jet injection, needle injection, microneedle patch, electroporation). device) and/or conjugation/formulation (protamine conjugation or LNP encapsulation, DNA or RNA). Additionally, a "safe and effective amount" of a nucleic acid, composition, or vaccine may depend on the health status of the subject being treated (such as an infant, a pregnant woman, a susceptible human subject, etc.).

ワクチンは、ヒト医学の目的のため及び獣医学の目的(哺乳動物、脊椎動物、又はトリ種)のためにも、本発明に従い使用することができる。 Vaccines can be used according to the invention for human medical purposes and also for veterinary purposes (mammalian, vertebrate or avian species).

本明細書で使用される場合、薬学的に許容される担体は、好ましくは、ワクチンの液体又は非液体主成分を含む。ワクチンが液体形態で提供される場合、担体は、水、典型的には、パイロジェンを含まない水;等張食塩水又は緩衝(水)溶液、例えば、リン酸塩、クエン酸塩などで緩衝溶液である。好ましくは、乳酸リンゲル液が、参照により本明細書に取り込まれる、WO2006/122828、好適な緩衝溶液に関する開示において記載される通り、本発明によるワクチン又は組成物の液体主成分として使用される。ワクチン又は組成物、特に、LNPを含む組成物/ワクチンの液体主成分として使用される他の好ましい溶液は、スクロース及び/又はトレハロースを含む。 As used herein, a pharmaceutically acceptable carrier preferably comprises the liquid or non-liquid main component of the vaccine. When the vaccine is provided in liquid form, the carrier is water, typically pyrogen-free water; isotonic saline or a buffered (aqueous) solution, e.g. buffered with phosphate, citrate, etc. It is. Preferably, lactated Ringer's solution is used as the liquid main component of the vaccine or composition according to the invention, as described in WO2006/122828, disclosure regarding suitable buffer solutions, which is incorporated herein by reference. Other preferred solutions for use as the liquid base of vaccines or compositions, particularly compositions/vaccines containing LNPs, include sucrose and/or trehalose.

本明細書において定義される薬学的に許容される担体の選択は、原則として、本発明による医薬組成物又はワクチンが投与される様式によって決定される。ワクチンは、好ましくは局所投与される。局所投与の経路は、一般的に、例えば、局部投与経路を含むが、皮内、経皮、皮下、若しくは筋肉内注射又は病巣内、頭蓋内、肺内、心臓内、関節内及び舌下注射もまた含む。より好ましくは、本発明による組成物又はワクチンは、皮内、皮下、又は筋肉内経路によって、好ましくは、針のない及び/又は針注射であってもよい、注射によって投与されてもよい。本発明の文脈で、筋肉内注射が好ましい。したがって、組成物/ワクチンは、好ましくは、液体又は固体形態で製剤化される。投与されるべき本発明によるワクチン又は組成物の好適な量は、慣習的な実験によって、例えば、動物モデルを使用することによって決定することができる。このようなモデルは、いかなる制限も意味することなく、ウサギ、ヒツジ、マウス、ラット、イヌ及び非ヒト霊長類モデルを含む。注射の好ましい単位投薬形態は、水、生理食塩水又はその混合物の無菌溶液を含む。このような溶液のpHは、約7.4に調整されるべきである。 The choice of a pharmaceutically acceptable carrier as defined herein is determined in principle by the manner in which the pharmaceutical composition or vaccine according to the invention is administered. The vaccine is preferably administered locally. Routes of local administration generally include, for example, intradermal, transdermal, subcutaneous, or intramuscular injections or intralesional, intracranial, intrapulmonary, intracardiac, intraarticular, and sublingual injections. Also includes. More preferably, the composition or vaccine according to the invention may be administered by intradermal, subcutaneous or intramuscular route, preferably by injection, which may be needleless and/or needle injection. In the context of the present invention, intramuscular injection is preferred. The composition/vaccine is therefore preferably formulated in liquid or solid form. Suitable amounts of vaccines or compositions according to the invention to be administered can be determined by routine experimentation, for example by using animal models. Such models include, without implying any limitation, rabbit, sheep, mouse, rat, dog and non-human primate models. Preferred unit dosage forms for injection include sterile solutions of water, saline, or mixtures thereof. The pH of such solutions should be adjusted to about 7.4.

本明細書において定義されるワクチン又は組成物は、免疫原性をさらに増加させるために、上で定義された1つ以上の補助物質又はアジュバントを含んでもよい。場合により、上で記載されたワクチン又は組成物と共製剤化(又は別々に製剤化)され得る、組成物/ワクチンに含有される核酸と補助物質との相乗作用は、好ましくは、これにより達成される。このような免疫原性増加剤又は化合物は、別々に(ワクチンとも組成物とも共製剤化されない)提供され、個別に投与されてもよい。 The vaccine or composition as defined herein may contain one or more auxiliary substances or adjuvants as defined above to further increase immunogenicity. Synergy between the nucleic acid and the auxiliary substance contained in the composition/vaccine, which may optionally be co-formulated (or separately formulated) with the vaccine or composition described above, is preferably thereby achieved. be done. Such immunogenicity-enhancing agents or compounds may be provided separately (not co-formulated with either the vaccine or the composition) and administered separately.

ワクチンは、好ましくは、凍結乾燥又はスプレー乾燥形態(第二の態様の文脈で記載された)で提供される。このような凍結乾燥又はスプレー乾燥ワクチンは、典型的には、トレハロース及び/又はスクロースを含み、対象への投与前に、好適な液体緩衝液中で再構成される。一部の態様では、実施形態の凍結乾燥ワクチンは、LNPと複合体化された実施形態のmRNAを含む。一部の態様では、凍結乾燥組成物は、約10%未満の水含有量を有する。例えば、凍結乾燥組成物は、約0.1%～10%、0.1%～7.5%、又は0.5%～7.5%の水含有量を有することができ、好ましくは、凍結乾燥組成物は、約0.5%～約5.0%の水含有量を有する。 The vaccine is preferably provided in lyophilized or spray-dried form (as described in the context of the second aspect). Such lyophilized or spray-dried vaccines typically contain trehalose and/or sucrose and are reconstituted in a suitable liquid buffer prior to administration to a subject. In some aspects, lyophilized vaccines of embodiments include mRNA of embodiments conjugated to LNPs. In some embodiments, the lyophilized composition has a water content of less than about 10%. For example, the lyophilized composition can have a water content of about 0.1% to 10%, 0.1% to 7.5%, or 0.5% to 7.5%; preferably, the lyophilized composition has a water content of about 0.5% to 10%; It has a water content of approximately 5.0%.

好ましい実施形態では、対象への治療有効量の核酸、組成物、ポリペプチド、ワクチンの投与は、対象におけるSARS-CoV-2コロナウイルスに対する中和抗体力価を誘導する。 In preferred embodiments, administration of a therapeutically effective amount of a nucleic acid, composition, polypeptide, vaccine to a subject induces neutralizing antibody titers against the SARS-CoV-2 coronavirus in the subject.

一部の実施形態では、中和抗体力価は、1ミリリットル当たり少なくとも100中和単位(NU/mL)、少なくとも500NU/mL、又は少なくとも1000NU/mLである。 In some embodiments, the neutralizing antibody titer is at least 100 neutralizing units per milliliter (NU/mL), at least 500 NU/mL, or at least 1000 NU/mL.

一部の実施形態では、検出可能なレベルのコロナウイルス抗原は、核酸、組成物、ポリペプチド、又はワクチンの投与の約1～約72時間後に対象において産生される。 In some embodiments, detectable levels of coronavirus antigen are produced in the subject from about 1 to about 72 hours after administration of the nucleic acid, composition, polypeptide, or vaccine.

一部の実施形態では、少なくとも100NU/ml、少なくとも500NU/ml、又は少なくとも1000NU/mlの中和抗体力価(コロナウイルスに対する)は、核酸、組成物、ポリペプチド、又はワクチンの投与の約1日～約72日後に対象の血清において産生される。 In some embodiments, the neutralizing antibody titer (against the coronavirus) of at least 100 NU/ml, at least 500 NU/ml, or at least 1000 NU/ml is about 1 ml of the administration of the nucleic acid, composition, polypeptide, or vaccine. It is produced in the subject's serum after 1 day to about 72 days.

一部の実施形態では、中和抗体力価は、ワクチン接種されていない対照対象の中和抗体力価に比べて、又は弱毒生ウイルスワクチン、不活化ウイルスワクチン、若しくはタンパク質サブユニットウイルスワクチンでワクチン接種した対象の中和抗体力価に比べて少なくとも50%コロナウイルス感染を低減するのに十分である。 In some embodiments, the neutralizing antibody titer is compared to the neutralizing antibody titer in an unvaccinated control subject or vaccinated with a live attenuated virus vaccine, an inactivated virus vaccine, or a protein subunit virus vaccine. Sufficient to reduce coronavirus infection by at least 50% compared to the neutralizing antibody titer in vaccinated subjects.

一部の実施形態では、中和抗体力価及び/又はT細胞免疫応答は、ワクチン接種されていない対照対象の中和抗体力価に比べて、無症候性ウイルス感染の割合を低減するのに十分である。 In some embodiments, neutralizing antibody titers and/or T cell immune responses reduce the rate of asymptomatic viral infection compared to neutralizing antibody titers in unvaccinated control subjects. It is enough.

一部の実施形態では、中和抗体力価及び/又はT細胞免疫応答は、対象におけるウイルス潜伏期を予防するのに十分である。 In some embodiments, neutralizing antibody titers and/or T cell immune responses are sufficient to prevent viral latency in the subject.

一部の実施形態では、中和抗体力価は、ウイルスの対象の上皮細胞との融合を遮断するのに十分である。 In some embodiments, the neutralizing antibody titer is sufficient to block fusion of the virus with the subject's epithelial cells.

一部の実施形態では、中和抗体力価は、核酸、組成物、ポリペプチド、若しくはワクチンの1μg～100μg1回用量後20日以内、又は核酸、組成物、ポリペプチド、若しくはワクチンの2回目の1μg～100μg用量後40日以内に誘導される。 In some embodiments, neutralizing antibody titers are determined within 20 days after a single 1 μg to 100 μg dose of a nucleic acid, composition, polypeptide, or vaccine, or after a second dose of a nucleic acid, composition, polypeptide, or vaccine. Induced within 40 days after a dose of 1 μg to 100 μg.

好ましい実施形態では、対象への治療有効量の核酸、組成物、ポリペプチド、又はワクチンの投与は、対象におけるコロナウイルスに対するT細胞免疫応答を誘導する。好ましい実施形態では、T細胞免疫応答は、CD4+T細胞免疫応答及び/又はCD8+T細胞免疫応答を含む。 In preferred embodiments, administration of a therapeutically effective amount of a nucleic acid, composition, polypeptide, or vaccine to a subject induces a T cell immune response against the coronavirus in the subject. In preferred embodiments, the T cell immune response comprises a CD4+ T cell immune response and/or a CD8+ T cell immune response.

キット又はパーツのキット、適用、医学的使用、処置方法:
第四の態様では、本発明は、コロナウイルス感染を処置又は予防するのに好適なキット又はパーツのキットを提供する。好ましくは、前記キット又はパーツのキットは、コロナウイルス、好ましくは、SARS-CoV-2(以前は、nCoV-2019)コロナウイルス感染を処置又は予防するのに好適である。 Kit or kit of parts, application, medical use, method of treatment:
In a fourth aspect, the invention provides a kit or kit of parts suitable for treating or preventing coronavirus infection. Preferably, said kit or kit of parts is suitable for treating or preventing coronavirus infection, preferably SARS-CoV-2 (formerly nCoV-2019) coronavirus infection.

特に、第一の態様の核酸、第二の態様の組成物、第三の態様のポリペプチド、及び第四の態様のワクチンに関する実施形態も同様に読み取られ、本発明の第五の態様のキット又はパーツのキットの好適な実施形態と理解されてもよい。 In particular, the embodiments relating to the nucleic acids of the first aspect, the compositions of the second aspect, the polypeptides of the third aspect and the vaccines of the fourth aspect are read as well, and the kits of the fifth aspect of the invention. Alternatively, it may be understood as a preferred embodiment of a kit of parts.

好ましい実施形態では、キット又はパーツのキットは、少なくとも1つの核酸(例えば、RNA若しくはDNA)、好ましくは、少なくとも1つの第一の態様のRNA、少なくとも1つの第二の態様の組成物、及び/又は少なくとも1つの第三の態様のポリペプチド、及び/又は少なくとも1つの第四の態様のワクチンを含む。 In a preferred embodiment, the kit or kit of parts comprises at least one nucleic acid (e.g. RNA or DNA), preferably at least one RNA of the first embodiment, at least one composition of the second embodiment, and/or a composition of the second embodiment. or at least one polypeptide of the third aspect and/or at least one vaccine of the fourth aspect.

実施形態では、キット又はパーツのキットは、第一の態様において定義される少なくとも1つのDNA、例えば、少なくとも1つのプラスミドDNA及び/又は少なくとも1つのアデノウイルスDNAを含む。 In an embodiment, the kit or kit of parts comprises at least one DNA as defined in the first aspect, such as at least one plasmid DNA and/or at least one adenoviral DNA.

実施形態では、キット又はパーツのキットは、第三の態様において定義される少なくとも1つのポリペプチドを含む。 In an embodiment, the kit or kit of parts comprises at least one polypeptide as defined in the third aspect.

さらに、キット又はパーツのキットは、溶解のための液体ビヒクル並びに/又は成分の投与及び投薬量に関する情報をもたらすための技術指示書を含んでもよい。 Additionally, the kit or kit of parts may include a liquid vehicle for dissolution and/or technical instructions for providing information regarding administration and dosage of the components.

キットは、第二の態様の組成物及び/又は第四の態様のワクチンの文脈で記載されるさらなる成分をさらに含んでもよい。 The kit may further comprise further components as described in the context of the composition of the second aspect and/or the vaccine of the fourth aspect.

前記キットの技術指示書は、投与及び投薬量並びに患者群についての情報を含有してもよい。このようなキット、好ましくは、パーツのキットは、コロナウイルス、好ましくは、SARS-CoV-2コロナウイルスによって引き起こされる感染若しくは疾患、又はそれと関連する障害の処置又は予防のための、例えば、本明細書で述べられる適用又は使用のいずれか、好ましくは、第一の態様の核酸、第二の態様の組成物、第三の態様のポリペプチド、又は第四の態様のワクチンの使用のため適用されてもよい。 The technical instructions for the kit may contain information about administration and dosage and patient groups. Such a kit, preferably a kit of parts, is suitable for the treatment or prevention of an infection or disease caused by a coronavirus, preferably the SARS-CoV-2 coronavirus, or a disorder associated therewith, e.g. preferably for the use of a nucleic acid of the first aspect, a composition of the second aspect, a polypeptide of the third aspect, or a vaccine of the fourth aspect. You can.

好ましくは、核酸、組成物、ポリペプチド、又はワクチンは、キットの別々の一部で提供され、ここで、核酸、組成物、ポリペプチド、又はワクチンは、好ましくは、凍結乾燥される。 Preferably, the nucleic acids, compositions, polypeptides, or vaccines are provided in separate parts of the kit, where the nucleic acids, compositions, polypeptides, or vaccines are preferably lyophilized.

キットは、核酸、組成物、ポリペプチド、又はワクチンを溶解するためのビヒクル(例えば、緩衝液)を一部としてさらに含有してもよい。 The kit may further contain as part of a vehicle (eg, a buffer) for dissolving the nucleic acid, composition, polypeptide, or vaccine.

好ましい実施形態では、本明細書において定義されるキット又はパーツのキットは、乳酸リンゲル液を含む。 In a preferred embodiment, the kit or kit of parts as defined herein comprises lactated Ringer's solution.

好ましい実施形態では、本明細書において定義されるキット又はパーツのキットは、組成物/ワクチンの投与のための複数用量の容器を含む。 In a preferred embodiment, the kit or kit of parts as defined herein comprises multi-dose containers for administration of the composition/vaccine.

上記のキットのいずれかは、本明細書において定義される処置又は予防において使用されてもよい。より好ましくは、上記のキットのいずれかは、ワクチン、好ましくは、コロナウイルスによって引き起こされる、好ましくは、SARS-CoV-2コロナウイルスによって引き起こされる感染に対するワクチンとして使用されてもよい。 Any of the above kits may be used in treatment or prophylaxis as defined herein. More preferably, any of the above kits may be used as a vaccine, preferably against an infection caused by a coronavirus, preferably the SARS-CoV-2 coronavirus.

好ましい実施形態では、キット又はパーツのキットは、以下の成分:
a)本明細書において定義される組成物又はSARS-CoV-2ワクチンを含む少なくとも1つの容器又はバイアル、ここで、組成物又はSARS-CoV-2ワクチンは、核酸濃度、好ましくは、約100μg/ml～約1mg/mlの範囲、好ましくは、約100μg/ml～約500μg/mlの範囲、例えば、約270μg/mlのRNA濃度を有する;
b)無菌希釈緩衝液、好適には、NaClを含み、場合により保存剤を含む緩衝液を含む、少なくとも1つの希釈容器又はバイアル;
c)組成物又はワクチンを保存容器から希釈容器に移行させるための少なくとも1つの手段;及び
d)最終の希釈された組成物又はワクチンを対象に投与するための、好ましくは、ヒト対象への筋肉内投与のため構成された少なくとも1つのシリンジ、ここで、最終の希釈された組成物又はワクチンは、核酸濃度、好ましくは、約10μg/ml～約100μg/mlの範囲、好ましくは、約10μg/ml～約50μg/mlの範囲、例えば、約24μg/mlのRNA濃度を有する
を含む。 In a preferred embodiment, the kit or kit of parts includes the following components:
a) at least one container or vial comprising a composition or SARS-CoV-2 vaccine as defined herein, wherein the composition or SARS-CoV-2 vaccine has a nucleic acid concentration of preferably about 100 μg/ having an RNA concentration in the range of about 1 mg/ml to about 1 mg/ml, preferably in the range of about 100 μg/ml to about 500 μg/ml, such as about 270 μg/ml;
b) at least one dilution container or vial containing a sterile dilution buffer, preferably a buffer containing NaCl and optionally a preservative;
c) at least one means for transferring the composition or vaccine from the storage container to the dilution container; and
d) at least one syringe for administering the final diluted composition or vaccine to a subject, preferably configured for intramuscular administration to a human subject, where the final diluted composition or The vaccine comprises a nucleic acid concentration, preferably in the range of about 10 μg/ml to about 100 μg/ml, preferably in the range of about 10 μg/ml to about 50 μg/ml, for example having an RNA concentration of about 24 μg/ml.

一実施形態では、キット又はパーツのキットは、1つより多くのmRNAベースのSARS-CoV-2組成物/ワクチン、好ましくは、
- 第一のバイアル又は容器において提供される、本明細書において定義される少なくとも1つのワクチン、ここで、ワクチンは、カチオン性脂質III-3(ALC-0315)、DSPC、コレステロール及び式(IVa)(n=49を有するか、又はn=45(ALC-0159)を有する)のPEG-脂質の約50:10:38.5:1.5、好ましくは、47.5:10:40.8:1.7又はより好ましくは、47.4:10:40.9:1.7の割合(mol%)のモル比を有する、好ましくは、脂質ナノ粒子(LNP)中に製剤化された配列番号163、149又は24837の核酸配列と同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一である少なくとも1つの核酸、好ましくは、RNAを含む。好ましくは、核酸、好ましくは、mRNAは、化学的に修飾されず;並びに/或いは
- 第一のバイアル又は容器において提供される、本明細書において定義される少なくとも1つのさらなるワクチン、ここで、組成物/ワクチンは、カチオン性脂質III-3(ALC-0315)、DSPC、コレステロール及び式(IVa)(n=49を有するか、又はn=45(ALC-0159)を有する)のPEG-脂質の約50:10:38.5:1.5、好ましくは、47.5:10:40.8:1.7又はより好ましくは、47.4:10:40.9:1.7の割合(mol%)のモル比を有する、好ましくは、脂質ナノ粒子(LNP)中に製剤化された配列番号22792、22794、22796、22798、22800、22802、22804、22806、22808、22810、22812、23529～23534、27386～27408、23535～23552、27409～27431、23590～23606、27478～27500、28736～28776、28638～28686、28777～28825、28925～28928、28933～28936の核酸配列と同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一である少なくとも1つの核酸、好ましくは、RNAを含む。好ましくは、核酸、好ましくは、mRNAは、化学的に修飾されず;並びに/或いは
- 第一のバイアル又は容器において提供される、本明細書において定義される少なくとも1つのさらなるワクチン、ここで、組成物/ワクチンは、カチオン性脂質III-3(ALC-0315)、DSPC、コレステロール及び式(IVa)(n=49を有するか、又はn=45(ALC-0159)を有する)のPEG-脂質の約50:10:38.5:1.5、好ましくは、47.5:10:40.8:1.7又はより好ましくは、47.4:10:40.9:1.7の割合(mol%)のモル比を有する、好ましくは、脂質ナノ粒子(LNP)中に製剤化された配列番号27394、27417、27486、28762、28650～28655、28789～28794の核酸配列と同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一である少なくとも1つの核酸、好ましくは、RNAを含む。好ましくは、核酸、好ましくは、mRNAは、化学的に修飾されず;並びに/或いは
- 第一のバイアル又は容器において提供される、本明細書において定義される少なくとも1つのさらなるワクチン、ここで、組成物/ワクチンは、カチオン性脂質III-3(ALC-0315)、DSPC、コレステロール及び式(IVa)(n=49を有するか、又はn=45(ALC-0159)を有する)のPEG-脂質の約50:10:38.5:1.5、好ましくは、47.5:10:40.8:1.7又はより好ましくは、47.4:10:40.9:1.7の割合(mol%)のモル比を有する、好ましくは、脂質ナノ粒子(LNP)中に製剤化された配列番号27394、27417、27486、28762の核酸配列と同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一である少なくとも1つの核酸、好ましくは、RNAを含む。好ましくは、核酸、好ましくは、mRNAは、化学的に修飾されず;並びに/或いは
- 第一のバイアル又は容器において提供される、本明細書において定義される少なくとも1つのさらなるワクチン、ここで、組成物/ワクチンは、カチオン性脂質III-3(ALC-0315)、DSPC、コレステロール及び式(IVa)(n=49を有するか、又はn=45(ALC-0159)を有する)のPEG-脂質の約50:10:38.5:1.5、好ましくは、47.5:10:40.8:1.7又はより好ましくは、47.4:10:40.9:1.7の割合(mol%)のモル比を有する、好ましくは、脂質ナノ粒子(LNP)中に製剤化された配列番号28639～28642、28778～28781、28925～28928、28933～28936の核酸配列と同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一である少なくとも1つの核酸、好ましくは、RNAを含む。好ましくは、核酸、好ましくは、mRNAは、化学的に修飾されない
を含む。 In one embodiment, the kit or kit of parts comprises more than one mRNA-based SARS-CoV-2 composition/vaccine, preferably
- at least one vaccine as defined herein provided in a first vial or container, wherein the vaccine comprises cationic lipid III-3 (ALC-0315), DSPC, cholesterol and formula (IVa) (with n=49 or with n=45 (ALC-0159)) about 50:10:38.5:1.5, preferably 47.5:10:40.8:1.7 or more preferably 47.4 :10:40.9:1.7 ratio (mol%), preferably identical to the nucleic acid sequence of SEQ ID NO: 163, 149 or 24837, formulated into lipid nanoparticles (LNPs); or at least 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or Contains at least one nucleic acid, preferably RNA, that is 99% identical. Preferably, the nucleic acid, preferably the mRNA, is not chemically modified; and/or
- at least one further vaccine as defined herein provided in the first vial or container, wherein the composition/vaccine comprises cationic lipid III-3 (ALC-0315), DSPC, cholesterol and about 50:10:38.5:1.5, preferably 47.5:10:40.8:1.7 or more of PEG-lipid of formula (IVa) (with n=49 or with n=45 (ALC-0159)) SEQ ID NO: 22792, 22794, 22796, 22798, 22800, 22802, preferably formulated into lipid nanoparticles (LNPs), preferably having a molar ratio (mol%) of 47.4:10:40.9:1.7. , 22804, 22806, 22808, 22810, 22812, 23529-23534, 27386-27408, 23535-23552, 27409-27431, 23590-23606, 27478-27500, 28736-28776, 28638-28 686, 28777-28825, 28925-28928 , 28933-28936, or at least 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94% , 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical, preferably RNA. Preferably, the nucleic acid, preferably the mRNA, is not chemically modified; and/or
- at least one further vaccine as defined herein provided in the first vial or container, wherein the composition/vaccine comprises cationic lipid III-3 (ALC-0315), DSPC, cholesterol and about 50:10:38.5:1.5, preferably 47.5:10:40.8:1.7 or more of PEG-lipid of formula (IVa) (with n=49 or with n=45 (ALC-0159)) SEQ ID NOs: 27394, 27417, 27486, 28762, 28650-28655, preferably formulated into lipid nanoparticles (LNPs), preferably having a molar ratio (mol%) of 47.4:10:40.9:1.7. , 28789-28794, or at least 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94% , 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical, preferably RNA. Preferably, the nucleic acid, preferably the mRNA, is not chemically modified; and/or
- at least one further vaccine as defined herein provided in the first vial or container, wherein the composition/vaccine comprises cationic lipid III-3 (ALC-0315), DSPC, cholesterol and about 50:10:38.5:1.5, preferably 47.5:10:40.8:1.7 or more of PEG-lipid of formula (IVa) (with n=49 or with n=45 (ALC-0159)) Preferably, the nucleic acid sequences of SEQ ID NO: 27394, 27417, 27486, 28762, preferably formulated into lipid nanoparticles (LNPs), have a molar ratio (mol%) of 47.4:10:40.9:1.7. are the same or at least 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97 %, 98%, or 99% identical, preferably RNA. Preferably, the nucleic acid, preferably the mRNA, is not chemically modified; and/or
- at least one further vaccine as defined herein provided in the first vial or container, wherein the composition/vaccine comprises cationic lipid III-3 (ALC-0315), DSPC, cholesterol and about 50:10:38.5:1.5, preferably 47.5:10:40.8:1.7 or more of PEG-lipid of formula (IVa) (with n=49 or with n=45 (ALC-0159)) SEQ ID NOs: 28639-28642, 28778-28781, 28925-28928, preferably formulated into lipid nanoparticles (LNPs), preferably having a molar ratio (mol%) of 47.4:10:40.9:1.7. , 28933-28936, or at least 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94% , 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical, preferably RNA. Preferably, the nucleic acid, preferably the mRNA, is not chemically modified.

一実施形態では、キット又はパーツのキットは、1つより多くのmRNAベースのSARS-CoV-2組成物/ワクチン、好ましくは、
- 第一のバイアル又は容器において提供される、本明細書において定義される少なくとも1つのワクチン、ここで、ワクチンは、カチオン性脂質III-3(ALC-0315)、DSPC、コレステロール及び式(IVa)(n=49を有するか、又はn=45(ALC-0159)を有する)のPEG-脂質の約50:10:38.5:1.5、好ましくは、47.5:10:40.8:1.7又はより好ましくは、47.4:10:40.9:1.7の割合(mol%)のモル比を有する、好ましくは、脂質ナノ粒子(LNP)中に製剤化された配列番号163、149又は24837の核酸配列と同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一である少なくとも1つの核酸、好ましくは、RNAを含む。好ましくは、核酸、好ましくは、mRNAは、化学的に修飾されず;並びに/或いは
- 第一のバイアル又は容器において提供される、本明細書において定義される少なくとも1つのさらなるワクチン、ここで、組成物/ワクチンは、カチオン性脂質III-3(ALC-0315)、DSPC、コレステロール及び式(IVa)(n=49を有するか、又はn=45(ALC-0159)を有する)のPEG-脂質の約50:10:38.5:1.5、好ましくは、47.5:10:40.8:1.7又はより好ましくは、47.4:10:40.9:1.7の割合(mol%)のモル比を有する、好ましくは、脂質ナノ粒子(LNP)中に製剤化された配列番号24837～24854、27524～27546、24855～24872、27547～27569、24909～24926、27616～27638、28827～28866、28687～28735、28867～28915、28929～28932、28937～28940の核酸配列と同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一である少なくとも1つの核酸、好ましくは、RNAを含む。好ましくは、核酸、好ましくは、mRNAは、化学的に修飾されず;並びに/或いは
- 第一のバイアル又は容器において提供される、本明細書において定義される少なくとも1つのさらなるワクチン、ここで、組成物/ワクチンは、カチオン性脂質III-3(ALC-0315)、DSPC、コレステロール及び式(IVa)(n=49を有するか、又はn=45(ALC-0159)を有する)のPEG-脂質の約50:10:38.5:1.5、好ましくは、47.5:10:40.8:1.7又はより好ましくは、47.4:10:40.9:1.7の割合(mol%)のモル比を有する、好ましくは、脂質ナノ粒子(LNP)中に製剤化された配列番号27532、27555、27624、28852、28699～28704、28879～28884の核酸配列と同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一である少なくとも1つの核酸、好ましくは、RNAを含む。好ましくは、核酸、好ましくは、mRNAは、化学的に修飾されず;並びに/或いは
- 第一のバイアル又は容器において提供される、本明細書において定義される少なくとも1つのさらなるワクチン、ここで、組成物/ワクチンは、カチオン性脂質III-3(ALC-0315)、DSPC、コレステロール及び式(IVa)(n=49を有するか、又はn=45(ALC-0159)を有する)のPEG-脂質の約50:10:38.5:1.5、好ましくは、47.5:10:40.8:1.7又はより好ましくは、47.4:10:40.9:1.7の割合(mol%)のモル比を有する、好ましくは、脂質ナノ粒子(LNP)中に製剤化された配列番号27532、27555、27624、28852の核酸配列と同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一である少なくとも1つの核酸、好ましくは、RNAを含む。好ましくは、核酸、好ましくは、mRNAは、化学的に修飾されず;並びに/或いは
- 第一のバイアル又は容器において提供される、本明細書において定義される少なくとも1つのさらなるワクチン、ここで、組成物/ワクチンは、カチオン性脂質III-3(ALC-0315)、DSPC、コレステロール及び式(IVa)(n=49を有するか、又はn=45(ALC-0159)を有する)のPEG-脂質の約50:10:38.5:1.5、好ましくは、47.5:10:40.8:1.7又はより好ましくは、47.4:10:40.9:1.7の割合(mol%)のモル比を有する、好ましくは、脂質ナノ粒子(LNP)中に製剤化された配列番号28688～28691、28868～28871、28929～28932、28937～28940の核酸配列と同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一である少なくとも1つの核酸、好ましくは、RNAを含む。好ましくは、核酸、好ましくは、mRNAは、化学的に修飾されない
を含む。 In one embodiment, the kit or kit of parts comprises more than one mRNA-based SARS-CoV-2 composition/vaccine, preferably
- at least one vaccine as defined herein provided in a first vial or container, wherein the vaccine comprises cationic lipid III-3 (ALC-0315), DSPC, cholesterol and formula (IVa) (with n=49 or with n=45 (ALC-0159)) about 50:10:38.5:1.5, preferably 47.5:10:40.8:1.7 or more preferably 47.4 :10:40.9:1.7 ratio (mol%), preferably identical to the nucleic acid sequence of SEQ ID NO: 163, 149 or 24837, formulated into lipid nanoparticles (LNPs); or at least 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or Contains at least one nucleic acid, preferably RNA, that is 99% identical. Preferably, the nucleic acid, preferably the mRNA, is not chemically modified; and/or
- at least one further vaccine as defined herein provided in the first vial or container, wherein the composition/vaccine comprises cationic lipid III-3 (ALC-0315), DSPC, cholesterol and about 50:10:38.5:1.5, preferably 47.5:10:40.8:1.7 or more of PEG-lipid of formula (IVa) (with n=49 or with n=45 (ALC-0159)) SEQ ID NOs: 24837-24854, 27524-27546, 24855-24872, preferably formulated into lipid nanoparticles (LNPs), preferably having a molar ratio (mol%) of 47.4:10:40.9:1.7. , or at least 70%, 80%, 85 %, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical Nucleic acids, preferably RNA. Preferably, the nucleic acid, preferably the mRNA, is not chemically modified; and/or
- at least one further vaccine as defined herein provided in the first vial or container, wherein the composition/vaccine comprises cationic lipid III-3 (ALC-0315), DSPC, cholesterol and about 50:10:38.5:1.5, preferably 47.5:10:40.8:1.7 or more of PEG-lipid of formula (IVa) (with n=49 or with n=45 (ALC-0159)) SEQ ID NO: 27532, 27555, 27624, 28852, 28699-28704, preferably formulated into lipid nanoparticles (LNPs), preferably having a molar ratio (mol%) of 47.4:10:40.9:1.7. , 28879-28884, or at least 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94% , 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical, preferably RNA. Preferably, the nucleic acid, preferably the mRNA, is not chemically modified; and/or
- at least one further vaccine as defined herein provided in the first vial or container, wherein the composition/vaccine comprises cationic lipid III-3 (ALC-0315), DSPC, cholesterol and about 50:10:38.5:1.5, preferably 47.5:10:40.8:1.7 or more of PEG-lipid of formula (IVa) (with n=49 or with n=45 (ALC-0159)) Preferably, the nucleic acid sequences of SEQ ID NO: 27532, 27555, 27624, 28852 are preferably formulated into lipid nanoparticles (LNPs) having a molar ratio (mol%) of 47.4:10:40.9:1.7. are the same or at least 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97 %, 98%, or 99% identical, preferably RNA. Preferably, the nucleic acid, preferably the mRNA, is not chemically modified; and/or
- at least one further vaccine as defined herein provided in the first vial or container, wherein the composition/vaccine comprises cationic lipid III-3 (ALC-0315), DSPC, cholesterol and about 50:10:38.5:1.5, preferably 47.5:10:40.8:1.7 or more of PEG-lipid of formula (IVa) (with n=49 or with n=45 (ALC-0159)) SEQ ID NOS: 28688-28691, 28868-28871, 28929-28932, preferably formulated into lipid nanoparticles (LNPs), preferably having a molar ratio (mol%) of 47.4:10:40.9:1.7. , 28937-28940, or at least 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94% , 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical, preferably RNA. Preferably, the nucleic acid, preferably the mRNA, is not chemically modified.

一実施形態では、キット又はパーツのキットは、プライムワクチン接種及びブーストワクチン接種のための2つの異なるSARS-CoV-2ワクチンを含む:
- 第一のバイアル又は容器において提供される、本明細書において定義される少なくとも1つのプライムワクチン、ここで、ワクチンは、本明細書において定義されるmRNAベースのSARS-CoV-2ワクチンであり;及び
- 第一のバイアル又は容器において提供される、本明細書において定義される少なくとも1つのブーストワクチン、ここで、組成物/ワクチンは、本明細書において定義されるアデノウイルスベースのSARS-CoV-2ワクチンである。 In one embodiment, the kit or kit of parts includes two different SARS-CoV-2 vaccines for prime vaccination and boost vaccination:
- at least one prime vaccine as defined herein provided in a first vial or container, wherein the vaccine is an mRNA-based SARS-CoV-2 vaccine as defined herein; as well as
- at least one boosted vaccine as defined herein provided in a first vial or container, wherein the composition/vaccine is an adenovirus-based SARS-CoV-2 as defined herein It's a vaccine.

一実施形態では、キット又はパーツのキットは、プライムワクチン接種及びブーストワクチン接種のための2つの異なるSARS-CoV-2ワクチンを含む:
- 第一のバイアル又は容器において提供される、本明細書において定義される少なくとも1つのブーストワクチン、ここで、ワクチンは、本明細書において定義されるmRNAベースのSARS-CoV-2ワクチンであり;及び
- 第一のバイアル又は容器において提供される、本明細書において定義される少なくとも1つのプライムワクチン、ここで、組成物/ワクチンは、本明細書において定義されるアデノウイルスベースのSARS-CoV-2ワクチンである。 In one embodiment, the kit or kit of parts includes two different SARS-CoV-2 vaccines for prime vaccination and boost vaccination:
- at least one boost vaccine as defined herein provided in a first vial or container, wherein the vaccine is an mRNA-based SARS-CoV-2 vaccine as defined herein; as well as
- at least one prime vaccine as defined herein provided in a first vial or container, wherein the composition/vaccine is an adenovirus-based SARS-CoV-2 as defined herein; It's a vaccine.

組み合わせ:
第五の態様は、第一の態様において定義される少なくとも2つの核酸配列、第二の態様の文脈で定義される少なくとも2つの組成物、第三の態様において定義される少なくとも2つのポリペプチド、第四の態様の文脈で定義される少なくとも2つのワクチン、又は第五の態様において定義される少なくとも2つのキットの組み合わせに関する。 combination:
A fifth aspect provides at least two nucleic acid sequences as defined in the first aspect, at least two compositions as defined in the context of the second aspect, at least two polypeptides as defined in the third aspect, It relates to a combination of at least two vaccines as defined in the context of the fourth aspect or at least two kits as defined in the fifth aspect.

本発明の文脈では、用語「組み合わせ」は、好ましくは、少なくとも2つの成分、好ましくは、第一の態様において定義される少なくとも2つの核酸配列、第二の態様の文脈で定義される少なくとも2つの組成物、第三の態様において定義される少なくとも2つのポリペプチド、第四の態様の文脈で定義される少なくとも2つのワクチン、又は第五の態様において定義される少なくとも2つのキットの合わせた存在を意味する。このような組み合わせの成分は、別々の実体として生じてもよい。したがって、組み合わせの成分の投与は、同じ部位の投与又は異なる部位の投与のいずれかで、同時又は時間をずらして生じてもよい。 In the context of the present invention, the term "combination" preferably refers to at least two components, preferably at least two nucleic acid sequences defined in the first embodiment, at least two nucleic acid sequences defined in the context of the second embodiment. the combined presence of a composition, at least two polypeptides as defined in the third aspect, at least two vaccines as defined in the context of the fourth aspect, or at least two kits as defined in the fifth aspect. means. The components of such combinations may occur as separate entities. Thus, administration of the components of the combination may occur simultaneously or staggered, either at the same site or at different sites.

特に、第一の態様の核酸、第二の態様の組成物、第三の態様のポリペプチド、及び第四の態様のワクチン、又は第五の態様のキット若しくはパーツのキットに関する実施形態も同様に読み取られ、第六の態様の組み合わせの成分の好適な実施形態として理解され得る。 In particular, embodiments relating to a nucleic acid according to the first aspect, a composition according to the second aspect, a polypeptide according to the third aspect, and a vaccine according to the fourth aspect, or a kit or kit of parts according to the fifth aspect as well. may be read and understood as a preferred embodiment of the components of the combination of the sixth aspect.

実施形態では、組み合わせは、核酸種、例えば、本発明の第一の態様の文脈で定義されるRNA種の複数又は少なくとも1つより多くを含んでもよい、ここで、核酸種は、別々の成分として提供される。 In embodiments, the combination may comprise more than one or more than one nucleic acid species, e.g. RNA species as defined in the context of the first aspect of the invention, where the nucleic acid species are separate components. provided as.

好ましくは、本明細書において定義される組み合わせは、2、3、4、5、6、7、8、9、又は10個以上の異なる核酸、例えば、本発明の第一の態様の文脈で定義されるRNA種;2、3、4、5、6、7、8、9、又は10個の本発明の第二の態様の文脈で定義される異なる組成物;2、3、4、5、6、7、8、9、又は10個の本発明の第三の態様の文脈で定義される異なるポリペプチド;2、3、4、5、6、7、8、9、又は10個の本発明の第三の態様の文脈で定義される異なるワクチンを含んでもよく、ここで、核酸種、組成物、ポリペプチド、ワクチンは、別々の成分として提供される。 Preferably, the combination as defined herein comprises 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 or 10 or more different nucleic acids, e.g. as defined in the context of the first aspect of the invention. 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 or 10 different compositions as defined in the context of the second aspect of the invention; 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 or 10 different polypeptides defined in the context of the third aspect of the invention; 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 or 10 books; It may include different vaccines as defined in the context of the third aspect of the invention, where the nucleic acid species, composition, polypeptide, vaccine are provided as separate components.

実施形態では、組み合わせは、別々の成分に含まれる2、3、4又は5個のRNA、好ましくは、RNA種、及び場合により、少なくとも1つの薬学的に許容される担体又は賦形剤を含み、ここで、前記核酸種は、配列番号149、22792、22794、22796、22798、22800、22802、22804、22806、22808、22810、22812、23529～23534、27386～27408、23535～23552、27409～27431、23590～23606、27478～27500、28736～28776、28638～28686、28777～28825、28925～28928、28933～28936からなる群から選択される核酸配列と同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一である核酸配列を含むか、又はそれからなり、2、3、4又は5個の核酸種のそれぞれは、SARS-CoV-2コロナウイルスの異なる抗原性ペプチド又はタンパク質をコードする。 In embodiments, the combination comprises 2, 3, 4 or 5 RNA, preferably RNA species, in separate components and optionally at least one pharmaceutically acceptable carrier or excipient. , where the nucleic acid species are SEQ ID NO: 149, 22792, 22794, 22796, 22798, 22800, 22802, 22804, 22806, 22808, 22810, 22812, 23529-23534, 27386-27408, 23535-23552, 27409 ~27431 , or at least 70%, 80% identical to a nucleic acid sequence selected from the group consisting of , 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical. Each of the two, three, four or five nucleic acid species comprising or consisting of a sequence encodes a different antigenic peptide or protein of the SARS-CoV-2 coronavirus.

実施形態では、組み合わせは、別々の成分に含まれる2、3、4又は5個のRNA、好ましくは、RNA種、及び場合により、少なくとも1つの薬学的に許容される担体又は賦形剤を含み、ここで、前記核酸種は、配列番号24837～24854、27524～27546、24855～24872、27547～27569、24909～24926、27616～27638、28827～28866、28687～28735、28867～28915、28929～28932、28937～28940からなる群から選択される核酸配列と同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一である核酸配列を含むか、又はそれからなり、2、3、4又は5個の核酸種のそれぞれは、SARS-CoV-2コロナウイルスの異なる抗原性ペプチド又はタンパク質をコードする。 In embodiments, the combination comprises 2, 3, 4 or 5 RNA, preferably RNA species, in separate components and optionally at least one pharmaceutically acceptable carrier or excipient. , where the nucleic acid species are SEQ ID NOs: 24837-24854, 27524-27546, 24855-24872, 27547-27569, 24909-24926, 27616-27638, 28827-28866, 28687-28735, 28867-28915, 289 29～28932 , 28937-28940, or at least 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92% , 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical, each of the 2, 3, 4, or 5 nucleic acid species comprising: Encode different antigenic peptides or proteins of the SARS-CoV-2 coronavirus.

以下で、特に好ましい実施形態の組み合わせが提供され、ここで、組み合わせのそれぞれの成分は、別々の実体として提供される。 Below, particularly preferred embodiment combinations are provided, where each component of the combination is provided as a separate entity.

好ましくは、少なくとも2、3、4、5、6、7、8、9、10個又はなおさらに異なる核酸種、組成物、ワクチンの組み合わせはそれぞれ、異なる融合前の安定化されたスパイクタンパク質(第一の態様において定義される)をコードする。好ましくは、融合前の立体構造の安定化は、スパイクタンパク質における残基K986及びV987において2つの連続するプロリン置換を導入することによって得られる(参照配列番号1によるアミノ酸位置)。したがって、好ましい実施形態では、少なくとも2、3、4、5、6、7、8、9、10個の融合前の安定化されたスパイクタンパク質(S_stab)はそれぞれ、少なくとも1つの融合前の安定化変異を含み、ここで、少なくとも1つの融合前の安定化変異は、以下のアミノ酸置換:K986P及びV987Pを含む(参照配列番号1によるアミノ酸位置)。 Preferably, the combinations of at least 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 or even different nucleic acid species, compositions, vaccines each contain a different pre-fusion stabilized spike protein (as defined in one embodiment). Preferably, pre-fusion conformational stabilization is obtained by introducing two consecutive proline substitutions at residues K986 and V987 in the spike protein (amino acid positions according to reference SEQ ID NO: 1). Thus, in a preferred embodiment, each of the at least 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 prefusion stabilized spike proteins (S_stab) has at least one prefusion stabilized mutations, wherein the at least one pre-fusion stabilizing mutation comprises the following amino acid substitutions: K986P and V987P (amino acid positions according to reference SEQ ID NO: 1).

したがって、少なくとも2、3、4、5、6、7、8、9、10個又はなおさらに異なる核酸種、組成物、ワクチンの組み合わせはそれぞれ、異なる融合前の安定化されたスパイクタンパク質をコードし、ここで、少なくとも2、3、4、5、6、7、8、9、10個又はなおさらに安定化されたスパイクタンパク質は、配列番号10、22738、22740、22742、22744、22746、22748、22750、22752、22754、22756、22758、22959～22964、27087～27109、28540～28588、28917～28920のいずれか1つと同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一であるアミノ酸配列又はこれらのいずれかの免疫原性フラグメント若しくは免疫原性バリアントから選択される。 Thus, each combination of at least 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 or even different nucleic acid species, compositions, vaccines encodes a different prefusion stabilized spike protein. , wherein at least 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 or even more stabilized spike proteins are SEQ ID NO: 10, 22738, 22740, 22742, 22744, 22746, 22748, Identical to any one of 22750, 22752, 22754, 22756, 22758, 22959-22964, 27087-27109, 28540-28588, 28917-28920, or at least 70%, 80%, 85%, 86%, 87 %, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical amino acid sequence or immunity to any of these selected from fragments or immunogenic variants.

好ましい実施形態では、組み合わせは、配列番号10のいずれか1つと同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一であるアミノ酸配列をコードするコード配列を含む1つの核酸種、組成物、ワクチンを含み、ここで、多価組成物は、さらに、
i)配列番号22961のいずれか1つと同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一であるアミノ酸配列をコードするコード配列を含む1個の核酸種;及び/或いは
ii)配列番号22960のいずれか1つと同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一であるアミノ酸配列をコードするコード配列を含む1個の核酸種;及び/或いは
iii)配列番号22963のいずれか1つと同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一であるアミノ酸配列をコードするコード配列を含む1個の核酸種;及び/或いは
iv)配列番号22959のいずれか1つと同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一であるアミノ酸配列をコードするコード配列を含む1個の核酸種;
v)配列番号27070、27093のいずれか1つと同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一であるアミノ酸配列をコードするコード配列を含む1個の核酸種;
vi)配列番号27071、27094のいずれか1つと同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一であるアミノ酸配列をコードするコード配列を含む1個の核酸種;
vii)配列番号27072、27095のいずれか1つと同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一であるアミノ酸配列をコードするコード配列を含む1個の核酸種;
viii)配列番号27073、27096、28545のいずれか1つと同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一であるアミノ酸配列をコードするコード配列を含む1個の核酸種;及び/或いは
ix)配列番号22964のいずれか1つと同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一であるアミノ酸配列をコードするコード配列を含む1個の核酸種;
x)配列番号28541～28544、28917～28920のいずれか1つと同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一であるアミノ酸配列をコードするコード配列を含む1個の核酸種
から選択される少なくとも2、3、4個のさらなるRNA種を含む。 In a preferred embodiment, the combination is identical to any one of SEQ ID NO: 10, or at least 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, includes one nucleic acid species, composition, vaccine comprising a coding sequence that encodes an amino acid sequence that is 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical; , the multivalent composition further comprises:
i) is identical to, or at least 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93% to any one of SEQ ID NO: 22961; one nucleic acid species comprising a coding sequence that encodes an amino acid sequence that is 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical; and/or
ii) is identical to, or at least 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93% to any one of SEQ ID NO: 22960; one nucleic acid species comprising a coding sequence that encodes an amino acid sequence that is 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical; and/or
iii) is identical to, or at least 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93% to any one of SEQ ID NO: 22963; one nucleic acid species comprising a coding sequence that encodes an amino acid sequence that is 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical; and/or
iv) is identical to, or at least 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93% to any one of SEQ ID NO: 22959; one nucleic acid species comprising a coding sequence that encodes an amino acid sequence that is 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical;
v) Identical to any one of SEQ ID NO: 27070, 27093, or at least 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93 %, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical coding sequences that encode amino acid sequences;
vi) Identical to any one of SEQ ID NO: 27071, 27094, or at least 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93 %, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical coding sequences that encode amino acid sequences;
vii) Identical to any one of SEQ ID NO: 27072, 27095, or at least 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93 %, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical coding sequences that encode amino acid sequences;
viii) is at least 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92% identical to any one of SEQ ID NO: 27073, 27096, 28545; , one nucleic acid species comprising a coding sequence encoding an amino acid sequence that is 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical; and/or
ix) is identical to, or at least 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93% to any one of SEQ ID NO: 22964; one nucleic acid species comprising a coding sequence that encodes an amino acid sequence that is 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical;
x) is identical to, or at least 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91% of, any one of SEQ ID NOs: 28541-28544, 28917-28920; at least two, three, selected from one nucleic acid species comprising coding sequences encoding amino acid sequences that are 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical; Contains 4 additional RNA species.

好ましくは、少なくとも2、3、4、5、6、7、8、9、10個又はさらに多くの異なる核酸種、組成物、ワクチンの組み合わせは、それぞれ異なる融合前の安定化されたスパイクタンパク質をコードする核酸コード配列を含み、ここで、少なくとも2、3、4、5、6、7、8、9、10個又はさらに多くの核酸コード配列は、配列番号116、136、137、146、148、149、151、162、163、165、22765、22767、22769、22771、22773、22775、22777、22779、22781、22783、22785、22792、22794、22796、22798、22800、22802、22804、22806、22808、22810、22812、22819、22821、22823、22825、22827、22829、22831、22833、22835、22837、22839、28916、23089～23148、23150～23184、23309～23368、23370～23404、23529～23588、23590～23624、24837～24944、27110～27907、28589～28915、28916、28921～28940のいずれか1つと同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一である核酸配列又はこれらのいずれかのフラグメント若しくはバリアントから選択される。好ましくは、mRNA種のそれぞれは、キャップ1構造を含み、場合により、mRNA種のそれぞれは、修飾されたヌクレオチドを含まない。 Preferably, the combination of at least 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 or more different nucleic acid species, compositions, vaccines, each comprising a different pre-fusion stabilized spike protein. 116, 136, 137, 146, 148. , 149, 151, 162, 163, 165, 22765, 22767, 22769, 22771, 22773, 22775, 22777, 22779, 22781, 22783, 22785, 22792, 22794, 22796, 22798, 22800, 22802, 22804, 22806, 22808 , 22810, 22812, 22819, 22821, 22823, 22825, 22827, 22829, 22831, 22833, 22835, 22837, 22839, 28916, 23089-23148, 23150-23184, 23309-23368, 23 370-23404, 23529-23588, 23590 ~23624, 24837~24944, 27110~27907, 28589~28915, 28916, 28921~28940, or at least 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, selected from nucleic acid sequences that are 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical, or fragments or variants of any of these. Ru. Preferably, each of the mRNA species includes a cap 1 structure, and optionally each of the mRNA species does not include modified nucleotides.

特定の実施形態では、組み合わせの第一の成分は、ウイルスベクターワクチン/組成物、例えば、アデノウイルスベクターベースのワクチン、例えば、ADZ1222又はAd26.COV-2.Sを含み、第二の成分は、核酸ベースのワクチン/組成物、好ましくは、本明細書において定義されるmRNAベースのワクチンを含む。 In certain embodiments, the first component of the combination comprises a viral vector vaccine/composition, e.g. an adenovirus vector-based vaccine, e.g. ADZ1222 or Ad26.COV-2.S, and the second component comprises: Nucleic acid-based vaccines/compositions, preferably mRNA-based vaccines as defined herein.

第一及び第二の/さらなる医学的使用:
さらなる態様は、提供される核酸、組成物、ワクチン、キット、又は組み合わせの第一の医学的使用に関する。 First and second/further medical uses:
Further embodiments relate to first medical uses of the provided nucleic acids, compositions, vaccines, kits, or combinations.

特に、第一の態様の核酸、第二の態様の組成物、第三の態様のポリペプチド、及び第四の態様のワクチン、又は第五の態様のキット若しくはパーツのキット、或いは組み合わせに関する実施形態も同様に読み取られ、本発明の医学的使用の好適な実施形態として理解され得る。 In particular, embodiments relating to a nucleic acid according to the first aspect, a composition according to the second aspect, a polypeptide according to the third aspect, and a vaccine according to the fourth aspect, or a kit or kit of parts according to the fifth aspect, or a combination. may likewise be read and understood as preferred embodiments of the medical use of the invention.

したがって、本発明は、少なくとも1つの核酸(例えば、DNA若しくはRNA)、好ましくは、医薬として使用するための第一の態様において定義されるRNA、医薬として使用するための第二の態様において定義される組成物、医薬として使用するための第三の態様において定義されるポリペプチド、医薬として使用するための第四の態様において定義されるワクチン、及び医薬として使用するための第五の態様において定義されるキット又はパーツのキット、並びに組み合わせを提供する。 The invention therefore provides at least one nucleic acid (e.g. DNA or RNA), preferably RNA as defined in the first embodiment for use as a medicament, as defined in the second embodiment for use as a medicament. a polypeptide as defined in the third aspect for use as a medicament; a vaccine as defined in the fourth aspect for use as a medicament; and a polypeptide as defined in the fifth aspect for use as a medicament. We provide kits or kits of parts, as well as combinations.

本発明はさらに、核酸、組成物、ポリペプチド、ワクチン、若しくはキット、又は組み合わせのいくつかの適用及び使用を提供する。 The invention further provides several applications and uses of the nucleic acids, compositions, polypeptides, vaccines or kits, or combinations.

特に、核酸(好ましくは、RNA)、組成物、ポリペプチド、ワクチン、若しくはキット、又は組み合わせは、ヒト医学の目的のため及び獣医学の目的、好ましくは、ヒト医学の目的のためにも使用され得る。 In particular, the nucleic acids (preferably RNA), compositions, polypeptides, vaccines or kits or combinations are used for human medical purposes and also for veterinary medical purposes, preferably for human medical purposes. obtain.

特に、核酸(好ましくは、RNA)、組成物、ポリペプチド、ワクチン、又はキット若しくはパーツのキット或いは組み合わせは、ヒト医学の目的のための医薬としての使用のためであり、ここで、前記核酸(好ましくは、RNA)、組成物、ポリペプチド、ワクチン、又はキット若しくはパーツのキットは、幼児、新生児、易感染性（immunocompromised）レシピエント、並びに妊婦及び授乳中の女性並びに高齢者に好適であり得る。特に、核酸(好ましくは、RNA)、組成物、ポリペプチド、ワクチン、又はキット若しくはパーツのキットは、ヒト医学の目的のための医薬としての使用のためであり、ここで、前記核酸(好ましくは、RNA)、組成物、ポリペプチド、ワクチン、又はキット若しくはパーツのキットは、高齢ヒト対象に特に適している。 In particular, a nucleic acid (preferably RNA), a composition, a polypeptide, a vaccine, or a kit or combination of parts is for use as a medicament for human medical purposes, wherein said nucleic acid ( Preferably, the composition, polypeptide, vaccine, or kit or kit of parts may be suitable for infants, newborns, immunocompromised recipients, as well as pregnant and lactating women and the elderly. . In particular, a nucleic acid (preferably RNA), a composition, a polypeptide, a vaccine, or a kit or kit of parts is for use as a medicament for human medical purposes, wherein said nucleic acid (preferably , RNA), compositions, polypeptides, vaccines, or kits or kits of parts are particularly suitable for elderly human subjects.

前記核酸(好ましくは、RNA)、組成物、ポリペプチド、ワクチン、若しくはキット又は組み合わせは、ヒト医学の目的のための医薬としての使用のためであり、ここで、前記RNA、組成物、ワクチン、又はキット若しくはパーツのキットは、筋肉内注射又は皮内注射に特に適し得る。 Said nucleic acid (preferably RNA), composition, polypeptide, vaccine or kit or combination is for use as a medicament for human medical purposes, wherein said RNA, composition, vaccine, Or the kit or kit of parts may be particularly suitable for intramuscular or intradermal injection.

なお別の態様では、本発明は、提供される核酸、組成物、ポリペプチド、ワクチン、若しくはキット又は組み合わせの第二の医学的使用に関する。 In yet another aspect, the invention relates to a second medical use of a provided nucleic acid, composition, polypeptide, vaccine, or kit or combination.

したがって、本発明は、少なくとも1つの核酸、好ましくは、コロナウイルス、好ましくは、SARS-CoV-2コロナウイルスの感染、又はこのような感染、例えば、COVID-19と関連する障害若しくは疾患の処置又は予防のための、第一の態様において定義されたRNA;コロナウイルス、好ましくは、SARS-CoV-2コロナウイルスの感染、又はこのような感染、例えば、COVID-19と関連する障害若しくは疾患の処置又は予防のための、第二の態様において定義される組成物;コロナウイルス、好ましくは、SARS-CoV-2コロナウイルスの感染、又はこのような感染、例えば、COVID-19と関連する障害若しくは疾患の処置又は予防のための、第三の態様において定義されるポリペプチド;コロナウイルス、好ましくは、SARS-CoV-2コロナウイルスの感染、又はこのような感染、例えば、COVID-19と関連する障害若しくは疾患の処置又は予防のための、第四の態様において定義されるワクチン;コロナウイルス、好ましくは、SARS-CoV-2コロナウイルスの感染、又はこのような感染、例えば、COVID-19と関連する障害若しくは疾患の処置又は予防のための、第五の態様において定義されるキット又はパーツのキット;コロナウイルス、好ましくは、SARS-CoV-2コロナウイルスの感染、又はこのような感染、例えば、COVID-19と関連する障害若しくは疾患の処置又は予防のための、第六の態様において定義される組み合わせを提供する。 The present invention therefore provides a method for treating at least one nucleic acid, preferably a coronavirus, preferably a SARS-CoV-2 coronavirus infection, or a disorder or disease associated with such an infection, e.g. COVID-19. RNA as defined in the first aspect for the prophylaxis; infection of a coronavirus, preferably the SARS-CoV-2 coronavirus, or the treatment of a disorder or disease associated with such an infection, e.g. COVID-19 or for the prophylaxis of an infection of a coronavirus, preferably the SARS-CoV-2 coronavirus, or a disorder or disease associated with such an infection, e.g. COVID-19. A polypeptide as defined in the third aspect for the treatment or prevention of an infection of a coronavirus, preferably the SARS-CoV-2 coronavirus, or a disorder associated with such an infection, e.g. COVID-19. or a vaccine as defined in the fourth aspect for the treatment or prevention of a disease; an infection of a coronavirus, preferably a SARS-CoV-2 coronavirus, or associated with such an infection, e.g. COVID-19. A kit or kit of parts as defined in the fifth aspect for the treatment or prevention of a disorder or disease; infection with a coronavirus, preferably the SARS-CoV-2 coronavirus, or such an infection, e.g. COVID There is provided a combination as defined in the sixth aspect for the treatment or prevention of a disorder or disease associated with -19.

実施形態では、第一の態様の核酸、好ましくはRNA、第二の態様の組成物、第三の態様のポリペプチド、第四の態様のワクチン、又は第五の態様のキット若しくはパーツのキット、或いは第六の態様の組み合わせは、コロナウイルス、好ましくは、SARS-CoV-2コロナウイルスの感染の処置又は予防における使用のためのものである。 In embodiments, the nucleic acid, preferably RNA, of the first aspect, the composition of the second aspect, the polypeptide of the third aspect, the vaccine of the fourth aspect, or the kit or kit of parts of the fifth aspect, Alternatively, the combination of the sixth aspect is for use in the treatment or prevention of infection with a coronavirus, preferably the SARS-CoV-2 coronavirus.

特に、第一の態様の核酸、好ましくはRNA、第二の態様の組成物、第三の態様のポリペプチド、第四の態様のワクチン、又は第五の態様のキット若しくはパーツのキット、或いは第六の態様の組み合わせは、コロナウイルス、好ましくは、SARS-CoV-2コロナウイルスによって引き起こされる感染の予防(曝露前の予防若しくは曝露後の予防)及び/又は治療的処置の方法において使用され得る。 In particular, a nucleic acid, preferably RNA, according to the first aspect, a composition according to the second aspect, a polypeptide according to the third aspect, a vaccine according to the fourth aspect, or a kit or kit of parts according to the fifth aspect; The combination of the six embodiments may be used in a method of prevention (pre-exposure prophylaxis or post-exposure prophylaxis) and/or therapeutic treatment of infections caused by coronaviruses, preferably SARS-CoV-2 coronavirus.

特に、第一の態様の核酸、好ましくはRNA、第二の態様の組成物、第三の態様のポリペプチド、第四の態様のワクチン、又は第五の態様のキット若しくはパーツのキット、或いは第六の態様の組み合わせは、SARS-CoV-2コロナウイルス感染によって引き起こされるCOVID-19疾患の予防(曝露前の予防若しくは曝露後の予防)及び/又は治療的処置の方法において使用され得る。 In particular, a nucleic acid, preferably RNA, according to the first aspect, a composition according to the second aspect, a polypeptide according to the third aspect, a vaccine according to the fourth aspect, or a kit or kit of parts according to the fifth aspect; The combination of the six embodiments may be used in a method of prevention (pre-exposure prophylaxis or post-exposure prophylaxis) and/or therapeutic treatment of the COVID-19 disease caused by the SARS-CoV-2 coronavirus infection.

核酸、組成物、ポリペプチド、若しくはワクチン、又は組み合わせは、好ましくは、局所投与され得る。特に、組成物若しくはポリペプチド若しくはワクチン又は組み合わせは、皮内、皮下、鼻腔内、又は筋肉内経路によって投与され得る。実施形態では、本発明の核酸、組成物、ポリペプチド、ワクチンは、従来の針注射又は針のないジェット注射によって投与され得る。その文脈では、筋肉内注射が好ましい。 The nucleic acid, composition, polypeptide, or vaccine, or combination, may preferably be administered locally. In particular, the composition or polypeptide or vaccine or combination may be administered by intradermal, subcutaneous, intranasal, or intramuscular routes. In embodiments, the nucleic acids, compositions, polypeptides, vaccines of the invention may be administered by conventional needle injection or needleless jet injection. In that context, intramuscular injection is preferred.

プラスミドDNAが組成物若しくはワクチン又は組み合わせにおいて使用され、含まれる実施形態では、組成物/ワクチン/組み合わせは、エレクトロポレーション装置、例えば、皮内又は筋肉内送達のためのエレクトロポレーション装置を使用したエレクトロポレーションによって投与されてもよい。好適には、米国特許第7,245,963B2号に記載される装置、特に、米国特許第7,245,963B2号の請求項1～68によって定義される装置が使用され得る。 In embodiments where plasmid DNA is used in a composition or vaccine or combination, the composition/vaccine/combination is prepared using an electroporation device, e.g., an electroporation device for intradermal or intramuscular delivery. It may also be administered by electroporation. Preferably, the device described in US Pat. No. 7,245,963B2 may be used, in particular the device defined by claims 1 to 68 of US Pat. No. 7,245,963B2.

アデノウイルスDNAが組成物若しくはワクチン又は組み合わせにおいて使用され、含まれる実施形態では、組成物/ワクチン/組み合わせは、鼻腔内投与によって投与され得る。 In embodiments where adenoviral DNA is used in a composition or vaccine or combination, the composition/vaccine/combination may be administered by intranasal administration.

実施形態では、本明細書において定義される組成物若しくはワクチン又は組み合わせにおいて含まれる核酸は、約100ng～約500μgの量で、約1μg～約200μgの量で、約1μg～約100μgの量で、約5μg～約100μgの量で、好ましくは、約10μg～約50μgの量で、具体的には、約1μg、2μg、3μg、4μg、5μg、8μg、9μg、10μg、11μg、12μg、13μg、14μg、15μg、16μg、20μg、25μg、30μg、35μg、40μg、45μg、50μg、55μg、60μg、65μg、70μg、75μg、80μg、85μg、90μg、95μg又は100μgの量で提供される。 In embodiments, the nucleic acids included in a composition or vaccine or combination as defined herein are in an amount of about 100 ng to about 500 μg, in an amount of about 1 μg to about 200 μg, in an amount of about 1 μg to about 100 μg, In an amount of about 5 μg to about 100 μg, preferably in an amount of about 10 μg to about 50 μg, specifically about 1 μg, 2 μg, 3 μg, 4 μg, 5 μg, 8 μg, 9 μg, 10 μg, 11 μg, 12 μg, 13 μg, 14 μg , 15μg, 16μg, 20μg, 25μg, 30μg, 35μg, 40μg, 45μg, 50μg, 55μg, 60μg, 65μg, 70μg, 75μg, 80μg, 85μg, 90μg, 95μg or 100μg.

一部の実施形態では、核酸を含むワクチン、又は核酸を含む組成物は、対象において抗原特異的免疫応答を生じさせるための有効量で製剤化される。一部の実施形態では、核酸の有効量は、1μg～200μg、1μg～100μg、又は5μg～100μgの総用量である。 In some embodiments, a vaccine comprising a nucleic acid, or a composition comprising a nucleic acid, is formulated in an amount effective to generate an antigen-specific immune response in a subject. In some embodiments, the effective amount of nucleic acid is a total dose of 1 μg to 200 μg, 1 μg to 100 μg, or 5 μg to 100 μg.

核酸が脂質ベースの担体、例えば、LNP中に提供される実施形態では、1用量に含まれる本明細書において定義されるPEG-脂質の量は、約50μgより少ないPEG脂質、好ましくは、約45μgより少ないPEG脂質、より好ましくは約40μgより少ないPEG脂質である。 In embodiments where the nucleic acid is provided in a lipid-based carrier, e.g. LNP, the amount of PEG-lipid as defined herein included in one dose is less than about 50 μg PEG-lipid, preferably about 45 μg Less PEG lipid, more preferably less than about 40 μg PEG lipid.

1用量中に少ない量のPEG脂質を有することは、有害効果(例えば、アレルギー)のリスクを低減し得る。 Having lower amounts of PEG lipids in one dose may reduce the risk of adverse effects (eg, allergies).

特に好ましい実施形態では、1用量に含まれるPEG-脂質の量は、約3.5μgPEG脂質～約35μgPEG脂質の範囲である。 In particularly preferred embodiments, the amount of PEG-lipid included in one dose ranges from about 3.5 μg PEG lipid to about 35 μg PEG lipid.

核酸が脂質ベースの担体、例えば、LNP中に提供される実施形態では、1用量に含まれる本明細書において定義されるカチオン性脂質の量は、約400μgより少ないカチオン性脂質、好ましくは、約350μgより少ないカチオン性脂質、より好ましくは、約300μgより少ないカチオン性脂質である。 In embodiments where the nucleic acid is provided in a lipid-based carrier, such as LNP, the amount of cationic lipid as defined herein included in one dose is less than about 400 μg of cationic lipid, preferably about Less than 350 μg cationic lipid, more preferably less than about 300 μg cationic lipid.

1用量中に少ない量のカチオン性脂質を有することは、有害効果(例えば、発熱)のリスクを低減し得る。 Having lower amounts of cationic lipids in one dose may reduce the risk of adverse effects (eg, fever).

特に好ましい実施形態では、1用量に含まれるカチオン性脂質の量は、約30μgPEG脂質～約300μgPEG脂質の範囲である。 In particularly preferred embodiments, the amount of cationic lipid included in one dose ranges from about 30 μg PEG lipid to about 300 μg PEG lipid.

一実施形態では、コロナウイルス、好ましくは、SARS-CoV-2コロナウイルスに対する対象の処置又は予防のための免疫プロトコールは、1回用量の組成物又はワクチンを含む。 In one embodiment, the immunization protocol for the treatment or prophylaxis of a subject against a coronavirus, preferably the SARS-CoV-2 coronavirus, comprises a single dose of the composition or vaccine.

一部の実施形態では、有効量は、1回のワクチン接種において対象に投与される1μgの用量である。一部の実施形態では、有効量は、1回のワクチン接種において対象に投与される2μgの用量である。一部の実施形態では、有効量は、1回のワクチン接種において対象に投与される3μgの用量である。一部の実施形態では、有効量は、1回のワクチン接種において対象に投与される4μgの用量である。一部の実施形態では、有効量は、1回のワクチン接種において対象に投与される5μgの用量である。1回のワクチン接種において対象に投与される6μg。一部の実施形態では、有効量は、1回のワクチン接種において対象に投与される7μgの用量である。一部の実施形態では、有効量は、1回のワクチン接種において対象に投与される8μgの用量である。一部の実施形態では、有効量は、1回のワクチン接種において対象に投与される9μgの用量である。一部の実施形態では、有効量は、1回のワクチン接種において対象に投与される10μgの用量である。一部の実施形態では、有効量は、1回のワクチン接種において対象に投与される11μgの用量である。一部の実施形態では、有効量は、1回のワクチン接種において対象に投与される12μgの用量である。一部の実施形態では、有効量は、1回のワクチン接種において対象に投与される13μgの用量である。一部の実施形態では、有効量は、1回のワクチン接種において対象に投与される14μgの用量である。一部の実施形態では、有効量は、1回のワクチン接種において対象に投与される16μgの用量である。一部の実施形態では、有効量は、1回のワクチン接種において対象に投与される20μgの用量である。一部の実施形態では、有効量は、1回のワクチン接種において対象に投与される25μgの用量である。一部の実施形態では、有効量は、1回のワクチン接種において対象に投与される30μgの用量である。一部の実施形態では、有効量は、1回のワクチン接種において対象に投与される40μgの用量である。一部の実施形態では、有効量は、1回のワクチン接種において対象に投与される50μgの用量である。一部の実施形態では、有効量は、1回のワクチン接種において対象に投与される100μgの用量である。一部の実施形態では、有効量は、1回のワクチン接種において対象に投与される200μgの用量である。この文脈での「用量」は、核酸、好ましくは、本明細書において定義されるmRNAの有効量に関する。 In some embodiments, the effective amount is a 1 μg dose administered to a subject in one vaccination. In some embodiments, the effective amount is a 2 μg dose administered to a subject in one vaccination. In some embodiments, the effective amount is a 3 μg dose administered to a subject in one vaccination. In some embodiments, the effective amount is a 4 μg dose administered to a subject in one vaccination. In some embodiments, the effective amount is a 5 μg dose administered to a subject in one vaccination. 6 μg administered to a subject in one vaccination. In some embodiments, the effective amount is a 7 μg dose administered to a subject in one vaccination. In some embodiments, the effective amount is an 8 μg dose administered to a subject in one vaccination. In some embodiments, the effective amount is a 9 μg dose administered to a subject in one vaccination. In some embodiments, the effective amount is a 10 μg dose administered to a subject in one vaccination. In some embodiments, the effective amount is a dose of 11 μg administered to a subject in one vaccination. In some embodiments, the effective amount is a 12 μg dose administered to a subject in one vaccination. In some embodiments, the effective amount is a 13 μg dose administered to a subject in one vaccination. In some embodiments, the effective amount is a 14 μg dose administered to a subject in one vaccination. In some embodiments, the effective amount is a 16 μg dose administered to a subject in one vaccination. In some embodiments, the effective amount is a 20 μg dose administered to a subject in one vaccination. In some embodiments, the effective amount is a 25 μg dose administered to a subject in one vaccination. In some embodiments, the effective amount is a 30 μg dose administered to a subject in one vaccination. In some embodiments, the effective amount is a 40 μg dose administered to a subject in one vaccination. In some embodiments, the effective amount is a 50 μg dose administered to a subject in one vaccination. In some embodiments, the effective amount is a 100 μg dose administered to a subject in one vaccination. In some embodiments, the effective amount is a 200 μg dose administered to a subject in one vaccination. A "dose" in this context relates to an effective amount of a nucleic acid, preferably an mRNA as defined herein.

好ましい実施形態では、コロナウイルス、好ましくは、SARS-CoV-2コロナウイルス感染の処置又は予防のための免疫プロトコールは、一連の1回用量又は投薬量の組成物又はワクチンを含む。本明細書で使用される場合、1回投薬量は、それぞれ、開始/第一の用量、免疫反応を「ブーストする」ために好ましくは投与される第二の用量又は任意のさらなる用量を指す。 In a preferred embodiment, the immunization protocol for the treatment or prevention of coronavirus infection, preferably SARS-CoV-2 coronavirus infection, comprises a series of single doses or doses of the composition or vaccine. As used herein, a single dose refers to a starting/first dose, a second dose or any further dose preferably administered to "boost" the immune response, respectively.

一部の実施形態では、有効量は、計2回で対象に投与される1μgの用量である。一部の実施形態では、有効量は、計2回で対象に投与される2μgの用量である。一部の実施形態では、有効量は、計2回で対象に投与される3μgの用量である。一部の実施形態では、有効量は、計2回で対象に投与される4μgの用量である。一部の実施形態では、有効量は、計2回で対象に投与される5μgの用量である。一部の実施形態では、有効量は、計2回で対象に投与される6μgの用量である。一部の実施形態では、有効量は、計2回で対象に投与される7μgの用量である。一部の実施形態では、有効量は、計2回で対象に投与される8μgの用量である。一部の実施形態では、有効量は、計2回で対象に投与される9μgの用量である。一部の実施形態では、有効量は、計2回で対象に投与される10μgの用量である。一部の実施形態では、有効量は、計2回で対象に投与される11μgの用量である。一部の実施形態では、有効量は、計2回で対象に投与される12μgの用量である。一部の実施形態では、有効量は、計2回で対象に投与される13μgの用量である。一部の実施形態では、有効量は、計2回で対象に投与される14μgの用量である。一部の実施形態では、有効量は、計2回で対象に投与される16μgの用量である。一部の実施形態では、有効量は、計2回で対象に投与される20μgの用量である。一部の実施形態では、有効量は、計2回で対象に投与される25μgの用量である。一部の実施形態では、有効量は、計2回で対象に投与される30μgの用量である。一部の実施形態では、有効量は、計2回で対象に投与される40μgの用量である。一部の実施形態では、有効量は、計2回で対象に投与される50μgの用量である。一部の実施形態では、有効量は、計2回で対象に投与される100μgの用量である。一部の実施形態では、有効量は、計2回で対象に投与される200μgの用量である。その文脈での「用量」は、核酸、好ましくは、本明細書において定義されるmRNAの有効量に関する。 In some embodiments, the effective amount is a 1 μg dose administered to a subject in two total doses. In some embodiments, the effective amount is a 2 μg dose administered to a subject in two total doses. In some embodiments, the effective amount is a 3 μg dose administered to a subject in two total doses. In some embodiments, the effective amount is a 4 μg dose administered to a subject in two total doses. In some embodiments, the effective amount is a 5 μg dose administered to a subject in two total doses. In some embodiments, the effective amount is a 6 μg dose administered to a subject in two total doses. In some embodiments, the effective amount is a 7 μg dose administered to a subject in two total doses. In some embodiments, the effective amount is an 8 μg dose administered to a subject in two total doses. In some embodiments, the effective amount is a 9 μg dose administered to a subject in two total doses. In some embodiments, the effective amount is a 10 μg dose administered to a subject in two total doses. In some embodiments, the effective amount is a dose of 11 μg administered to a subject in two total doses. In some embodiments, the effective amount is a 12 μg dose administered to a subject in two total doses. In some embodiments, the effective amount is a 13 μg dose administered to a subject in two total doses. In some embodiments, the effective amount is a 14 μg dose administered to a subject in two total doses. In some embodiments, the effective amount is a 16 μg dose administered to a subject in two total doses. In some embodiments, the effective amount is a 20 μg dose administered to a subject in two total doses. In some embodiments, the effective amount is a 25 μg dose administered to a subject in two total doses. In some embodiments, the effective amount is a 30 μg dose administered to a subject in two total doses. In some embodiments, the effective amount is a 40 μg dose administered to a subject in two total doses. In some embodiments, the effective amount is a 50 μg dose administered to a subject in two total doses. In some embodiments, the effective amount is a 100 μg dose administered to a subject in two total doses. In some embodiments, the effective amount is a 200 μg dose administered to a subject in two total doses. "Dose" in that context relates to an effective amount of a nucleic acid, preferably an mRNA as defined herein.

好ましい実施形態では、ワクチン/組成物/組み合わせは、少なくとも1年間、好ましくは、少なくとも2年間、コロナウイルスに対して、好ましくは、SARS-CoV-2コロナウイルス感染に対して(本明細書において定義される投与の際に)対象を免疫する。好ましい実施形態では、ワクチン/組成物/組み合わせは、2年より長い間、より好ましくは、3年より長い間、なおより好ましくは、4年より長い間、なおより好ましくは、5～10年より長い間、コロナウイルスに対して、好ましくは、SARS-CoV-2コロナウイルスに対して対象を免疫する。 In a preferred embodiment, the vaccine/composition/combination is administered against coronavirus, preferably against SARS-CoV-2 coronavirus infection (as defined herein) for at least 1 year, preferably for at least 2 years. immunize the subject (during administration). In a preferred embodiment, the vaccine/composition/combination is administered for more than 2 years, more preferably for more than 3 years, even more preferably for more than 4 years, even more preferably for more than 5 to 10 years. The subject is immunized against a coronavirus for an extended period of time, preferably against the SARS-CoV-2 coronavirus.

処置方法及び使用、診断方法及び使用:
別の態様では、本発明は、障害を処置又は予防する方法に関する。 Treatment methods and uses, diagnostic methods and uses:
In another aspect, the invention relates to a method of treating or preventing a disorder.

特に、第一の態様の核酸、第二の態様の組成物、第三の態様のポリペプチド、及び第四の態様のワクチン、第五の態様のキット若しくはパーツのキット、第六の態様の組み合わせ、又は医学的使用に関する実施形態は同様に読み取られ、本明細書において提供される処置方法の好適な実施形態として理解され得る。さらに、本明細書において提供される処置方法に関する特定の特徴及び実施形態はまた、本発明の医学的使用に適用し得る。 In particular, a nucleic acid according to the first aspect, a composition according to the second aspect, a polypeptide according to the third aspect, and a vaccine according to the fourth aspect, a kit or kit of parts according to the fifth aspect, a combination according to the sixth aspect. , or embodiments relating to medical use may similarly be read and understood as preferred embodiments of the treatment methods provided herein. Additionally, certain features and embodiments of the treatment methods provided herein may also be applied to medical uses of the invention.

疾患、特に、コロナウイルス感染の予防(阻害)又は処置は、例えば、疾患、例えば、コロナウイルス感染のリスクのある対象における疾患又は状態の完全な発症の阻害に関する。「処置」は、疾患又は病態が発症し始めた後、その徴候又は症状を回復させる治療的介入を指す。疾患又は病態に関して、用語「回復させること」は、処置の任意の観察可能な有益な効果を指す。疾患の阻害は、疾患のリスクの予防又は低減、例えば、ウイルス感染のリスクの予防又は低減を含むことができる。有益な効果は、例えば、感受性の対象における疾患の臨床症状の発症の遅延、疾患の一部若しくはすべての臨床症状の重症度の低減、疾患の進行をゆっくりにすること、ウイルス量の低減、対象の全体的な健康若しくは幸福の改善によって、又は特定の疾患に特異的である他のパラメーターによって証明することができる。「予防的」処置は、病状を発症するリスクを減少させる目的のため、疾患の徴候を示さないか、又は早期の徴候のみを示す対象に投与される処置である。 Prevention (inhibition) or treatment of a disease, in particular a coronavirus infection, relates to, for example, inhibition of the full development of a disease, eg, a disease or condition in a subject at risk of coronavirus infection. "Treatment" refers to therapeutic intervention that reverses the signs or symptoms of a disease or condition after it has begun to develop. With respect to a disease or condition, the term "ameliorating" refers to any observable beneficial effect of treatment. Inhibiting a disease can include preventing or reducing the risk of a disease, eg, preventing or reducing the risk of viral infection. Beneficial effects may include, for example, delaying the onset of clinical symptoms of the disease in susceptible subjects, reducing the severity of some or all clinical symptoms of the disease, slowing the progression of the disease, reducing viral load, or by other parameters that are specific to a particular disease. A "prophylactic" treatment is a treatment administered to a subject who shows no signs of disease, or only early signs, for the purpose of reducing the risk of developing a medical condition.

好ましい実施形態では、本発明は、障害を処置又は予防する方法に関し、ここで、方法は、それを必要とする対象に、少なくとも1つの、第一の態様の核酸、第二の態様の組成物、第三の態様のポリペプチド、第四の態様のワクチン、又は第五の態様のキット若しくはパーツのキット、或いは第六の態様の組み合わせを適用するか、又は投与することを含む。 In a preferred embodiment, the invention relates to a method of treating or preventing a disorder, wherein the method comprises administering to a subject in need thereof at least one nucleic acid of the first aspect, a composition of the second aspect. , a polypeptide of the third aspect, a vaccine of the fourth aspect, or a kit or kit of parts of the fifth aspect, or a combination of the sixth aspect.

好ましい実施形態では、障害は、コロナウイルスの感染、又はこのような感染に関連する障害、特に、SARS-CoV-2コロナウイルスの感染、又はこのような感染に関連する障害、例えば、COVID-19である。 In a preferred embodiment, the disorder is an infection of a coronavirus, or a disorder associated with such an infection, in particular an infection of the SARS-CoV-2 coronavirus, or a disorder associated with such an infection, such as COVID-19. It is.

好ましい実施形態では、本発明は、上で定義された障害を処置又は予防する方法に関し、ここで、方法は、それを必要とする対象に、少なくとも1つの、第一の態様の核酸、第二の態様の組成物、第三の態様のポリペプチド、第四の態様のワクチン、又は第五の態様のキット若しくはパーツのキット、或いは第六の態様の組み合わせを適用するか、又は投与することを含み、ここで、必要とする対象は、好ましくは、哺乳類対象である。 In a preferred embodiment, the present invention relates to a method of treating or preventing a disorder as defined above, wherein the method comprises administering to a subject in need thereof at least one nucleic acid of the first aspect, a second applying or administering a composition of an embodiment of the invention, a polypeptide of the third embodiment, a vaccine of the fourth embodiment, or a kit or kit of parts of the fifth embodiment, or a combination of the sixth embodiment. including, wherein the subject in need thereof is preferably a mammalian subject.

ある特定の実施形態では、それを必要とする対象に、少なくとも1つの、第一の態様の核酸、第二の態様の組成物、第三の態様のポリペプチド、第四の態様のワクチン、又は第五の態様のキット若しくはパーツのキット、或いは第六の態様の組み合わせを適用又は投与することによって、疾患を処置又は予防する方法は、対象における疾患の負担を低減する方法としてさらに定義される。例えば、方法は、好ましくは、COVID-19疾患の1つ以上の症状の重症度及び/又は持続期間を低減する。一部の態様では、方法は、対象が、入院、集中治療室への入院、酸素の補給を用いた処置及び/又は人工呼吸器を用いた処置を必要とする可能性を低減する。さらなる態様では、方法は、対象が、発熱、呼吸困難、嗅覚の喪失及び/又は味覚の喪失を発症する可能性を低減する。好ましい態様では、方法は、対象が、重篤又は中程度のCOVID-19疾患を発症する可能性を低減する。ある特定の態様では、実施形態の方法は、対象が実施形態の組成物を投与された後、約2週間～1カ月間、2カ月間、3カ月間、4カ月間、5カ月間、6カ月間、1年間又は2年間、対象における重篤又は中程度のCOVID-19疾患を予防する。好ましい態様では、実施形態の方法は、症候性COVID-19疾患を予防する。さらなる態様では、実施形態の方法は、対象が実施形態の組成物を投与された後、約2週間～1カ月間、2カ月間、3カ月間、4カ月間、5カ月間、6カ月間、1年間又は2年間、対象における検出可能なレベルのSARS-CoV-2核酸を予防する。さらなる態様では、実施形態の方法は、対象におけるコロナウイルス感染(例えば、SARS-CoV-2感染)に対する防御的免疫を提供する方法として定義される。なおさらなる態様では、実施形態の方法は、処置される対象の少なくとも80%、85%、90%又は95%における中程度及び重篤なCOVID-19疾患を予防する。なおさらなる態様では、実施形態の方法は、第二又は続く免疫原性組成物(例えば、ブースター投与)の投与の約2週間～約1年後、処置された対象の少なくとも80%、85%、90%又は95%における中程度及び重篤なCOVID-19疾患を予防する。なおさらなる態様では、実施形態の方法は、第二又は続く組成物の投与の約2週間～約3カ月、6カ月、9カ月、1年、1.5年、2年又は3年後、処置された対象の少なくとも80%、85%、90%又は95%における中程度及び重篤なCOVID-19疾患を予防する。 In certain embodiments, at least one of the nucleic acid of the first aspect, the composition of the second aspect, the polypeptide of the third aspect, the vaccine of the fourth aspect, or A method of treating or preventing a disease by applying or administering a kit or kit of parts of the fifth aspect or a combination of the sixth aspect is further defined as a method of reducing the burden of disease in a subject. For example, the method preferably reduces the severity and/or duration of one or more symptoms of COVID-19 disease. In some embodiments, the method reduces the likelihood that the subject will require hospitalization, admission to an intensive care unit, treatment with supplemental oxygen, and/or treatment with a ventilator. In a further aspect, the method reduces the likelihood that the subject will develop a fever, difficulty breathing, loss of smell, and/or loss of taste. In preferred embodiments, the method reduces the likelihood that the subject will develop severe or moderate COVID-19 disease. In certain aspects, the methods of the embodiments are performed for about 2 weeks to 1 month, 2 months, 3 months, 4 months, 5 months, 6 months after the subject is administered the compositions of the embodiments. Prevent severe or moderate COVID-19 disease in a subject for a period of one month, one year, or two years. In preferred aspects, the methods of embodiments prevent symptomatic COVID-19 disease. In further aspects, the methods of the embodiments are performed for about 2 weeks to 1 month, 2 months, 3 months, 4 months, 5 months, 6 months after the subject is administered the compositions of the embodiments. , prevent detectable levels of SARS-CoV-2 nucleic acid in a subject for 1 or 2 years. In a further aspect, the methods of embodiments are defined as methods of providing protective immunity against coronavirus infection (eg, SARS-CoV-2 infection) in a subject. In still further aspects, the methods of embodiments prevent moderate and severe COVID-19 disease in at least 80%, 85%, 90% or 95% of treated subjects. In still further aspects, the methods of the embodiments provide at least 80%, 85%, Prevents moderate and severe COVID-19 disease in 90% or 95%. In still further aspects, the methods of the embodiments provide that the treatment is performed from about 2 weeks to about 3 months, 6 months, 9 months, 1 year, 1.5 years, 2 years, or 3 years after administration of the second or subsequent composition. Prevent moderate and severe COVID-19 disease in at least 80%, 85%, 90% or 95% of subjects.

さらなる態様では、実施形態の方法は、(i)実施形態の組成物(例えば、ワクチン組成物)を得ること、ここで、組成物は凍結乾燥されている;(ii)薬学的に許容される液体担体において凍結乾燥された組成物を溶解して、液体組成物を生成すること;及び(iii)有効量の液体組成物を対象に投与することを含む。一部の態様では、凍結乾燥された組成物は、約10%未満の水含有量を含む。例えば、凍結乾燥された組成物は、好ましくは、約0.1%～約10%、0.5%～7.5%又は0.5%～5.0%水を含むことができる。 In further aspects, methods of embodiments include (i) obtaining a composition of an embodiment (e.g., a vaccine composition), wherein the composition is lyophilized; (ii) a pharmaceutically acceptable dissolving the lyophilized composition in a liquid carrier to produce a liquid composition; and (iii) administering an effective amount of the liquid composition to the subject. In some embodiments, the lyophilized composition contains less than about 10% water content. For example, lyophilized compositions can preferably contain about 0.1% to about 10%, 0.5% to 7.5%, or 0.5% to 5.0% water.

なおさらなる態様では、実施形態の方法は、対象に、それぞれのmRNAが、それぞれが配列番号10(例えば、LNPとの複合体中)と少なくとも約95%同一である異なるSARS-CoV-2スパイクポリペプチドをコードする、少なくとも2つの異なるmRNAを含むワクチン組成物を投与することを含む。さらなる態様では、このような方法は、少なくとも約6カ月間、対象を重篤なCOVID-19疾患から保護するために対象において十分な免疫応答をもたらす。例えば、一部の態様では、対象は、約6カ月間～約1年間、1.5年間、2年間、2.5年間、3年間、4年間又は5年間、重篤なCOVID-19疾患から保護される。したがって、一部の態様では、実施形態の方法は、対象に重篤な疾患からの防御の延長(例えば、6カ月間より長い)をもたらし得る1回用量のワクチン組成物を提供する。 In still further aspects, the methods of embodiments provide the method of providing a subject with different SARS-CoV-2 spike polynucleotides, each of which has a respective mRNA that is at least about 95% identical to SEQ ID NO: 10 (e.g., in complex with LNP). administering a vaccine composition comprising at least two different mRNAs encoding peptides. In further embodiments, such methods produce a sufficient immune response in the subject to protect the subject from severe COVID-19 disease for at least about 6 months. For example, in some embodiments, the subject is protected from severe COVID-19 disease for about 6 months to about 1 year, 1.5 years, 2 years, 2.5 years, 3 years, 4 years, or 5 years. Thus, in some aspects, the methods of embodiments provide a single dose of a vaccine composition that can provide a subject with extended protection from serious disease (eg, for longer than 6 months).

本明細書で使用される場合、重篤なCOVID-19疾患は、以下:
・重篤な全身性の病気の指標である安静時の臨床徴候(呼吸数≧1分当たり30回の呼吸、心拍数≧1分当たり125、SpO2≦海面、室内気で93%又はPaO2/FIO2<300mm Hg(高度により調整))
・呼吸不全(高流量の酸素、非侵襲的人工呼吸、機械的人工呼吸又はECMOの必要として定義される)
・ショック状態の証拠(SBP<90mmHg、DBP<60mmHg、又は昇圧剤が必要)
・顕著な腎臓、肝臓、又は神経機能障害
・ICUへの入院
・死亡
のうちの1つ以上を示す対象と定義される。 As used herein, severe COVID-19 disease means:
・Clinical signs at rest that are indicators of serious systemic illness (respiratory rate ≥30 breaths per minute, heart rate ≥125 per minute, SpO2 ≤ sea level, 93% or PaO2/FIO2 on room air) <300mm Hg (adjusted according to altitude)
Respiratory failure (defined as the need for high-flow oxygen, non-invasive ventilation, mechanical ventilation or ECMO)
- Evidence of shock (SBP<90mmHg, DBP<60mmHg, or vasopressors required)
Defined as subjects exhibiting one or more of the following: - Significant renal, hepatic, or neurological dysfunction - ICU admission - Death.

本明細書で使用される場合、中程度のCOVID-19疾患は、以下:
・息切れ又は呼吸困難
・呼吸数≧1分当たり20回の呼吸
・異常なSpO2だが、依然として>海面、室内気で93%(高度により調整)
・下気道疾患の臨床又はX線検査の証拠
・深部静脈血栓症(DVT)のX線検査の証拠
のうちの1つ以上を示す対象と定義される。 As used herein, moderate COVID-19 disease is:
・Shortness of breath or difficulty breathing ・Respiratory rate ≧20 breaths per minute ・Abnormal SpO2 but still >93% at sea level, room air (adjusted for altitude)
Defined as subjects exhibiting one or more of the following: - clinical or radiographic evidence of lower respiratory tract disease - radiographic evidence of deep vein thrombosis (DVT).

本明細書で使用される場合、軽度COVID-19疾患は、以下:
・症候性AND
・息切れも呼吸困難ANDもなし
・低酸素血症(高度により調整)ANDなし
・中程度又は重篤なCOVID-19疾患の症例定義に合致しない
のすべてを示す対象と定義される。 As used herein, mild COVID-19 disease is:
・Symptomatic AND
・No shortness of breath or dyspnea AND ・Hypoxemia (adjusted for altitude) ・No AND ・Not meeting the case definition for moderate or severe COVID-19 illness.

特に好ましい実施形態では、必要な対象は、哺乳類対象、好ましくは、ヒト対象、例えば、新生児、妊婦、易感染性、及び/又は高齢者である。一部の実施形態では、対象は、6カ月～100歳、6カ月～80歳、1歳～80歳、1歳～70歳、2歳～80歳又は2歳～60歳の年齢である。他の実施形態では、対象は、3歳以下、2歳以下、1.5歳以下、1歳(12カ月)以下、9カ月、6カ月又は3カ月以下の新生児又は幼児である。ある特定の実施形態では、ヒト対象は、高齢ヒト対象である。一部の他の実施形態では、対象は、少なくとも50、60、65、又は70歳の年齢の高齢者の対象である。さらなる態様では、実施形態による処置のための対象は、61歳以上の年齢である。なおさらなる態様では、対象は、18歳～60歳である。 In particularly preferred embodiments, the subject in need is a mammalian subject, preferably a human subject, such as a newborn, pregnant, immunocompromised, and/or elderly. In some embodiments, the subject is between the ages of 6 months to 100 years, 6 months to 80 years, 1 year to 80 years, 1 year to 70 years, 2 years to 80 years, or 2 years to 60 years. In other embodiments, the subject is a newborn or infant who is 3 years old or younger, 2 years old or younger, 1.5 years old or younger, 1 year old (12 months) or younger, 9 months old, 6 months old, or 3 months old or younger. In certain embodiments, the human subject is an elderly human subject. In some other embodiments, the subject is an elderly subject at least 50, 60, 65, or 70 years of age. In a further aspect, a subject for treatment according to embodiments is 61 years of age or older. In still further embodiments, the subject is between 18 and 60 years old.

さらなる実施形態では、哺乳類対象は、60歳以下のヒト対象である。ある特定の実施形態では、ヒト対象は、55歳、50歳、45歳又は40歳以下のヒト対象である。したがって、一部の実施形態では、ヒト対象は約12歳～60歳、12歳～55歳、12歳～50歳、12歳～45歳、又は12歳～40歳である。さらなる実施形態では、ヒト対象は、約18歳～60歳、18歳～55歳、18歳～50歳、18歳～45歳、又は18歳～40歳である。一部の実施形態では、ヒト対象は、18歳～50歳又は18歳～40歳である。 In further embodiments, the mammalian subject is a human subject under the age of 60. In certain embodiments, the human subject is 55 years old, 50 years old, 45 years old, or under 40 years old. Thus, in some embodiments, the human subject is between about 12 years old and 60 years old, between 12 years old and 55 years old, between 12 years old and 50 years old, between 12 years old and 45 years old, or between 12 years old and 40 years old. In further embodiments, the human subject is about 18 to 60 years old, 18 to 55 years old, 18 to 50 years old, 18 to 45 years old, or 18 to 40 years old. In some embodiments, the human subject is between 18 and 50 years old or between 18 and 40 years old.

ある特定の実施形態では、実施形態による処置のための対象は、妊娠中の対象、例えば、妊娠中のヒトである。一部の態様では、対象は、約1カ月、2カ月、3カ月、4カ月、5カ月、6カ月、7カ月又は8カ月より長い間妊娠中である。 In certain embodiments, a subject for treatment according to embodiments is a pregnant subject, eg, a pregnant human. In some embodiments, the subject has been pregnant for more than about 1 month, 2 months, 3 months, 4 months, 5 months, 6 months, 7 months, or 8 months.

ある特定の態様では、実施形態による処置のための対象は、ネイティブアメリカン、アフリカ、アジア又はヨーロッパの遺伝形質を有する。一部の態様では、対象は、少なくとも約10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%又は90%のネイティブアメリカン、アフリカ、アジア又はヨーロッパの遺伝形質を有する。ある特定の態様では、対象は、ネイティブアメリカンの遺伝形質、例えば、少なくとも約10%、25%又は50%のネイティブアメリカンの遺伝形質を有する。さらなる態様では、対象は、ネイティブアメリカンの遺伝形質を有する高齢者の対象、例えば、少なくとも55、60、65又は70歳の年齢である対象である。 In certain aspects, subjects for treatment according to embodiments have Native American, African, Asian, or European genetic traits. In some embodiments, the subject has at least about 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, Have 75%, 80%, 85% or 90% Native American, African, Asian or European genetic traits. In certain embodiments, the subject has Native American genetic traits, such as at least about 10%, 25% or 50% Native American genetic traits. In further embodiments, the subject is an elderly subject with Native American genetic traits, eg, a subject who is at least 55, 60, 65 or 70 years of age.

さらなる態様では、実施形態による処置のための対象は、疾患を有するか、又は免疫無防備状態である。一部の態様では、対象は、肝臓疾患、腎臓疾患、糖尿病、高血圧、心疾患又は肺疾患を有する。さらなる態様では、実施形態による処置のための対象は、アレルギー反応の既往歴を有する対象、例えば、食物アレルギーを有する対象である。一部の態様では、対象は、ワクチンに対する従前のアレルギー反応、例えば、アナフィラキシー性反応を有していた。なおさらなる態様では、方法による処置のための対象は、血清中に検出可能な抗PEG抗体、例えば、検出可能な抗PEG IgEを有する対象である。 In further aspects, subjects for treatment according to embodiments have a disease or are immunocompromised. In some embodiments, the subject has liver disease, kidney disease, diabetes, hypertension, heart disease, or lung disease. In a further aspect, a subject for treatment according to embodiments is a subject with a history of allergic reactions, eg, a subject with a food allergy. In some embodiments, the subject had a prior allergic reaction to the vaccine, such as an anaphylactic reaction. In still further embodiments, the subject for treatment by the method is a subject with detectable anti-PEG antibodies, eg, detectable anti-PEG IgE, in serum.

さらなる態様では、実施形態による処置のための対象は、以下から選択される少なくとも1つの共存症を有する。
(i)慢性腎疾患:腎機能は、ここ3～6カ月以内の血清クレアチニン測定値から確認され、慢性腎臓病疫学共同研究(CKD-EPI)の方程式を使用して推定糸球体濾過量(eGFR)に変換され、腎機能の損傷はeGFR<60mL/分/1.73m2として定義される。
- 軽度の慢性腎疾患は、eGFR60～89mL/分/1.73m2として定義される。
- 中程度の慢性腎疾患は、eGFR31～59mL/分/1.73m2として定義され、少なくとも6カ月間にわたる、安定な療法及び良好な維持を伴う(Clinical Practice Clinical Guidelines for Chronic Kidney Disease:Am J Kidney Dis、2002から改変)。
(ii)COPD(肺気腫及び慢性気管支炎を含む)。
- 咳又は痰の生成を伴うか、又は伴わない軽度のCOPDは、1秒間の努力呼気量/努力肺活量(FEV1/FVC)<0.7及びFEV1≧推定80%として定義される。
- 咳又は痰の生成を伴うか、又は伴わない中程度のCOPDは、安定な処置(COPD重症度の黄金基準)を用いてFEV1/FVC<0.7及びFEV1≧50%だが、<推定80%として定義される。
(iii)肥満度指数(BMI)>32kg/m2を有する肥満-任意の極度の病的肥満も含まれる。
(iv)以下を含む慢性心血管状態(心不全、冠動脈疾患、心筋症、動脈性高血圧)。
- 機能的又は構造的心障害のない、将来的に心不全を発症する高いリスクの可能性を有するクラスIの心不全。
- クラスIIの心不全:身体活動性のわずかな制限をもたらす心疾患を有する対象。安静時に快適。
- 従来の身体活動性が疲労、動悸、呼吸困難、又は狭心痛を生じる。
- 身体活動性の顕著な制限を伴うが、安静時に快適であるが、従来の活動未満で症状を生じる、クラスIIIの心不全。
- いずれのステージの症状もない構造的な心障害。
- 通常、あまり臨床的な徴候を生じない、軽度の左心室収縮期又は拡張機能障害。
- 医薬を用いて安定な、ニューヨーク心臓病学会(NYHA)による労作性呼吸困難又は起座呼吸困難又は発作性夜間呼吸困難を伴う中程度の左心室不全(クラスII～III)。
- 医薬を用いて安定な、2以上の代謝相当量域値(MET)から中程度の冠動脈疾患。(METは、安静時の座位で消費される酸素量として定義され、体重1kg当たり3.5ml O2×分と等しく、正常である4は、階段を上ったり、坂道を歩いたりすることができ、その他の激しい活動に参加することができ、1は、自分のことは自分でできるが、自分を管理することができず、労作に制約を受けることがある。)
- 医薬を用いて、2～3のMETの非感染性及び代謝性起源の心筋症。
- 医薬を用いて安定かつ制御された、ステージ1の高血圧又はステージ2の高血圧。
(v)登録前12カ月以内に採取された血液試料によって証明された、安定なウイルス血症(<50コピー/mL)及びCD4カウント>350/mLを伴う慢性HIV感染。(50～350コピー/mLの一過性の変化を伴うウイルス量<50コピー/mLが許容される。)
(vi)医薬を用いて制御されている[ヘモグロビンA1c(HbA1c)<58mmol/mol(7.45%)]か、又は最近のHbA1c>58mmol/mol(7.45%)を有する、制御されていない;[(HbA1c%-2.15)×10.929=HbA1c mmol/mol]2型糖尿病、制御されていないDMでは、HbA1cは<10%以内の変動であるべきであり、過去3カ月以内の、糖尿病性ケトアシドーシス又は重篤な症候性低血糖のエピソードの既往歴を有するべきではない。
(vii)拒絶反応リスクが低いと分類される、医薬を用いて少なくとも6カ月間安定な状態下の、少なくとも1年前に腎移植を受けた対象。 In further aspects, subjects for treatment according to embodiments have at least one comorbidity selected from:
(i) Chronic kidney disease: Kidney function was ascertained from serum creatinine measurements within the last 3 to 6 months and estimated glomerular filtration rate (eGFR) using the Chronic Kidney Disease Epidemiology Collaboration (CKD-EPI) equation. ), and impaired renal function is defined as eGFR<60mL/min/ 1.73m2 .
- Mild chronic kidney disease is defined as eGFR60-89mL/min/ 1.73m2 .
- Moderate chronic kidney disease is defined as eGFR 31-59 mL/min/1.73 m2 with stable therapy and good maintenance for at least 6 months (Clinical Practice Clinical Guidelines for Chronic Kidney Disease: Am J Kidney (Adapted from Dis, 2002).
(ii) COPD (including emphysema and chronic bronchitis);
- Mild COPD with or without cough or sputum production is defined as forced expiratory volume in 1 second/forced vital capacity (FEV1/FVC) <0.7 and FEV1 ≥80% estimated.
- Moderate COPD with or without cough or sputum production with FEV1/FVC<0.7 and FEV1 ≥50% but <estimated as 80% using stable treatment (gold standard for COPD severity) defined.
(iii) Obesity with body mass index (BMI)>32 kg/m 2 - also includes any extreme morbid obesity.
(iv) chronic cardiovascular conditions (heart failure, coronary artery disease, cardiomyopathy, arterial hypertension), including:
- Class I heart failure without functional or structural heart failure, with a possible high risk of developing heart failure in the future.
- Class II heart failure: subjects with heart disease that results in slight limitations in physical activity. Comfortable at rest.
- Conventional physical activity results in fatigue, palpitations, difficulty breathing, or angina.
- Class III heart failure with significant limitation of physical activity, comfortable at rest, but producing symptoms with less than conventional activity.
- Structural heart failure without symptoms at any stage.
- Mild left ventricular systolic or diastolic dysfunction that usually produces few clinical signs.
- Moderate left ventricular failure (class II-III) with exertional dyspnea or orthopnea or paroxysmal nocturnal dyspnea according to the New York Heart Association (NYHA), stable with medication.
- Moderate coronary artery disease with a metabolic equivalent threshold (MET) of 2 or higher, stable with medication. (MET is defined as the amount of oxygen consumed in a sitting position at rest, equal to 3.5 ml O 2 × min per kg of body weight; a normal 4 is the amount of oxygen consumed in a sitting position, while a normal , able to participate in other strenuous activities; 1 is able to take care of oneself, but is unable to manage oneself and may be limited in exertion.)
- Cardiomyopathy of non-infectious and metabolic origin of 2-3 METs with medicines.
- Stage 1 hypertension or stage 2 hypertension that is stable and controlled with medication.
(v) Chronic HIV infection with stable viremia (<50 copies/mL) and CD4 count >350/mL, as evidenced by a blood sample drawn within 12 months prior to enrollment. (Viral load <50 copies/mL with transient changes between 50 and 350 copies/mL is acceptable.)
(vi) controlled with medication [hemoglobin A1c (HbA1c) <58 mmol/mol (7.45%)] or uncontrolled with recent HbA1c >58 mmol/mol (7.45%); HbA1c% - 2.15) × 10.929 = HbA1c mmol/mol] In type 2 diabetes, uncontrolled DM, HbA1c should fluctuate within <10%, and in case of diabetic ketoacidosis or severe There should be no history of severe symptomatic hypoglycemic episodes.
(vii) Subjects who received a kidney transplant at least 1 year ago under stable conditions for at least 6 months on medications classified as having a low risk of rejection.

なおさらなる態様では、実施形態による処置のための対象は、過去6カ月間で14日より長い間、免疫抑制薬を用いて処置されていない。一部の態様では、実施形態による処置のための対象は、投与前少なくとも28日間、生ワクチンを受けておらず、及び/又は投与前少なくとも14日間、不活化ワクチンを受けていない。さらなる態様では、実施形態による処置のための対象は、以下を有さない。
- ウイルス学的に確認されたCOVID-19病を有していた;
- 女性について、実施形態の組成物の投与前の1カ月以内に妊娠又は授乳を経験した;
- 実施形態の組成物の投与に先立ち28日以内に、治験又は登録されていない製品(例えば、ワクチン若しくは薬物)を用いた処置を有した;
- 実施形態の組成物の投与前28日以内(生ワクチンについて)又は14日以内(不活化ワクチンについて)に許可されたワクチンを受けた;
- いずれかの治験SARS-CoV-2ワクチン又は別のコロナウイルス(SARS-CoV、MERS-CoV)ワクチンを用いて以前又は現在処置されている;
- 実施形態の組成物の投与に先立ち6カ月間以内に計>14日間、免疫抑制剤又は他の免疫修飾薬(例えば、コルチコステロイド、生物製剤及びメトトレキセート)を用いて処置されている;
- ヒト免疫不全ウイルス(HIV)、B型肝炎ウイルス(HBV)又はC型肝炎ウイルス(HCV)の既知の感染を含む医学既往歴及び身体検査;白血病、リンパ腫、ホジキン病、多発性骨髄腫、又は全身性悪性腫瘍を含むがんの現在の診断又は処置;慢性腎不全又はネフローゼ症候群;及び器官若しくは骨髄移植を受けることに基づき、いずれかの医学的に診断されたか、又は疑われる免疫抑制又は免疫不全状態を有していた。
- 血管浮腫(遺伝性若しくは特発性)の既往歴、又はいずれかのアナフィラキシー性反応若しくはpIMDの既往歴を有していた。
- CVnCoVワクチンのいずれかの成分に対するアレルギーの既往歴。
- 実施形態の組成物の投与前3カ月以内に、免疫グロブリン又は任意の血液生成物が投与されている;
- 顕著な急性又は慢性の医学的又は精神の病気を経験した;並びに/或いは
- 重篤な及び/又は制御されていない心血管疾患、胃腸疾患、肝疾患、腎疾患、呼吸器系疾患、内分泌障害、並びに神経学的及び精神の病気を経験した。 In still further aspects, the subject for treatment according to embodiments has not been treated with an immunosuppressant for more than 14 days in the past 6 months. In some aspects, a subject for treatment according to embodiments has not received a live vaccine for at least 28 days prior to administration, and/or has not received an inactivated vaccine for at least 14 days prior to administration. In a further aspect, a subject for treatment according to embodiments does not have:
- had virologically confirmed COVID-19 disease;
- For women, experienced pregnancy or lactation within one month prior to administration of the compositions of the embodiments;
- had treatment with a non-investigative or non-registered product (e.g., vaccine or drug) within 28 days prior to administration of a composition of an embodiment;
- received an authorized vaccine within 28 days (for live vaccines) or 14 days (for inactivated vaccines) prior to administration of the composition of the embodiment;
- Previously or currently treated with any investigational SARS-CoV-2 vaccine or another coronavirus (SARS-CoV, MERS-CoV) vaccine;
- has been treated with an immunosuppressant or other immunomodulating agent (e.g., corticosteroids, biologics, and methotrexate) for a total of >14 days within the 6 months prior to administration of the compositions of embodiments;
- Medical history and physical examination including known infection with human immunodeficiency virus (HIV), hepatitis B virus (HBV), or hepatitis C virus (HCV); leukemia, lymphoma, Hodgkin's disease, multiple myeloma, or Current diagnosis or treatment of cancer, including systemic malignancies; chronic renal failure or nephrotic syndrome; and any medically diagnosed or suspected immunosuppression or immunity based on undergoing organ or bone marrow transplantation. He had an incompetent condition.
- Had a history of angioedema (hereditary or idiopathic) or any anaphylactic reaction or pIMD.
- History of allergy to any component of the CVnCoV vaccine.
- immunoglobulin or any blood product has been administered within 3 months prior to administration of the composition of the embodiment;
- experienced a significant acute or chronic medical or psychiatric illness; and/or
- Experienced severe and/or uncontrolled cardiovascular disease, gastrointestinal disease, liver disease, renal disease, respiratory disease, endocrine disorders, and neurological and psychiatric illnesses.

ある特定の態様では、実施形態の方法による処置のための対象は、いかなる免疫介在性疾患(pIMD)も有さない。さらなる態様では、実施形態の処置方法は、処置される対象においていかなるpIMDも誘導しない。本明細書で使用される場合、pIMDは、セリアック病;クローン病;潰瘍性大腸炎;潰瘍性直腸炎;自己免疫性胆管炎;自己免疫性肝炎;原発性胆汁性肝硬変;原発性硬化性胆管炎;アジソン病;自己免疫性甲状腺炎(橋本病の甲状腺炎を含む);I型糖尿病;グレーブス病又はバセドウ病;抗シンテターゼ症候群;皮膚筋炎;若年性慢性関節炎(スチル病を含む);混合型結合組織障害;リウマチ性多発筋痛症;多発性筋炎;乾癬性関節炎;再発性多発軟骨炎;関節リウマチ;強皮症(例えば、びまん性全身性形態及びCREST症候群を含む);脊椎関節炎(例えば、強直性脊椎炎、反応性関節炎(ライター症候群)及び未分化型脊椎関節炎を含む);全身性エリテマトーデス;全身性硬化症;急性散在性脳脊髄炎(部位特異的なバリアント(例えば、非感染性脳炎、脳脊髄炎、脊髄炎、骨髄根髄炎)を含む);脳神経障害(例えば、麻痺/不完全麻痺(例えば、ベル麻痺)を含む);ギラン・バレー症候群(例えば、ミラー・フィッシャー症候群及び他のバリアントを含む);免疫介在性末梢神経障害、パーソネージ・ターナー症候群並びに神経叢障害(例えば、慢性炎症性脱髄性多発神経炎、多巣性運動ニューロパチー、及び単クローン性免疫グロブリン血症と関連する多発ニューロパチーを含む);多発性硬化症;ナルコレプシー;視神経炎;横断性脊髄炎;円形脱毛症;天疱瘡、類天疱瘡及び疱疹状皮膚炎を含む、自己免疫性水疱性皮膚疾患;皮膚エリテマトーデス;結節性紅斑;モルフェア;扁平苔癬;乾癬;スイート症候群;白斑;大血管炎(例えば、巨細胞性動脈炎、例えば、高安動脈炎及び側頭動脈炎を含む);中サイズ及び/又は小さい血管炎(例えば、結節性多発性動脈炎、川崎病、顕微鏡的多発血管炎、ウェゲナー肉芽腫症、チャーグ・ストラウス症候群(アレルギー性肉芽腫性血管炎)、バージャー病、閉塞性血栓血管炎、壊死性血管炎及び抗好中球細胞質抗体(ANCA)陽性脈管炎(非特定型)、ヘノッホ・シェーンライン紫斑病、ベーチェット症候群、白血球破壊性血管炎を含む);抗リン脂質症候群;自己免疫性溶血性貧血;自己免疫性糸球体腎炎(IgAネフロパシー、急速進行性糸球体腎炎、膜性糸球体腎炎、膜性増殖性糸球体腎炎、及びメサンギウム増殖性糸球体腎炎を含む);自己免疫性心筋炎/心筋症;自己免疫性血小板減少症;グッドパスチャー症候群;特発性肺線維症;悪性貧血;レイノー症状;サルコイドーシス;シェーグレン症候群;スティーブンス・ジョンソン症候群;ぶどう膜炎)として定義される。 In certain aspects, the subject for treatment according to the methods of embodiments does not have any immune-mediated disease (pIMD). In further aspects, the treatment methods of embodiments do not induce any pIMD in the treated subject. As used herein, pIMD refers to celiac disease; Crohn's disease; ulcerative colitis; ulcerative proctitis; autoimmune cholangitis; autoimmune hepatitis; primary biliary cirrhosis; primary sclerosing bile duct Addison's disease; autoimmune thyroiditis (including Hashimoto's thyroiditis); type I diabetes; Graves' or Graves' disease; antisynthetase syndrome; dermatomyositis; juvenile chronic arthritis (including Still's disease); mixed type connective tissue disorders; polymyalgia rheumatica; polymyositis; psoriatic arthritis; relapsing polychondritis; rheumatoid arthritis; scleroderma (e.g., including diffuse systemic forms and CREST syndrome); spondyloarthritis (e.g. systemic lupus erythematosus; systemic sclerosis; acute disseminated encephalomyelitis (including site-specific variants (e.g., non-infectious (including encephalitis, encephalomyelitis, myelitis, myeloradiculomyelitis); cranial nerve disorders (including, for example, paralysis/incomplete paralysis (e.g., Bell's palsy)); Guillain-Barré syndrome (e.g., Miller-Fisher syndrome and including other variants); immune-mediated peripheral neuropathies, Parsonage-Turner syndrome, and plexopathies (e.g., chronic inflammatory demyelinating polyneuritis, multifocal motor neuropathies, and monoclonal gammopathy); including associated polyneuropathies); multiple sclerosis; narcolepsy; optic neuritis; transverse myelitis; alopecia areata; autoimmune bullous skin diseases including pemphigus, pemphigoid and dermatitis herpetiformis; skin lupus erythematosus; erythema nodosum; morphea; lichen planus; psoriasis; Sweet syndrome; vitiligo; macroangiitis (e.g., giant cell arteritis, including e.g. Takayasu arteritis and temporal arteritis); medium-sized and/or Small vasculitis (e.g., polyarteritis nodosa, Kawasaki disease, microscopic polyangiitis, Wegener's granulomatosis, Churg-Strauss syndrome (allergic granulomatous vasculitis), Buerger's disease, thromboangiitis obliterans, Necrotizing vasculitis and anti-neutrophil cytoplasmic antibody (ANCA)-positive vasculitis (including unspecified type), Henoch-Schönlein purpura, Behçet syndrome, and leukocytoclastic vasculitis); antiphospholipid syndrome; autoimmunity hemolytic anemia; autoimmune glomerulonephritis (including IgA nephropathy, rapidly progressive glomerulonephritis, membranous glomerulonephritis, membranous proliferative glomerulonephritis, and mesangial proliferative glomerulonephritis); autoimmune myocarditis/cardiomyopathy; autoimmune thrombocytopenia; Goodpasture syndrome; idiopathic pulmonary fibrosis; pernicious anemia; Raynaud's syndrome; sarcoidosis; Sjogren's syndrome; Stevens-Johnson syndrome; uveitis).

ある特定の態様では、実施形態のワクチン接種法は、任意の特に関心のある有害事象(AESI)を経験している対象において行わない。本明細書で使用される場合、AESIは、上で列挙されたpIMD;アナフィラキシー;血管炎;免疫後の亢進した疾患;小児の多系統炎症症候群;急性呼吸促迫症候群;COVID-19疾患;急性心外傷;細小血管症;心不全及び心原性ショック;ストレス性心筋症;冠動脈疾患;不整脈;心筋炎、心膜炎;血小板減少症;深部静脈血栓症;肺塞栓症;脳血管発作;下肢虚血;出血性疾患;急性腎障害;肝損傷;全身痙攣;ギラン・バレー症候群;急性散在性脳脊髄炎;嗅覚脱失、味覚消失;髄膜脳炎;凍瘡様病変;単一臓器血管炎; 多形性紅斑;免疫後の重篤な局所/全身性ARとして定義される。 In certain aspects, the vaccination methods of embodiments are not performed in a subject experiencing any adverse event of particular interest (AESI). As used herein, AESI refers to the pIMDs listed above; anaphylaxis; vasculitis; post-immunization enhanced disease; multisystem inflammatory syndrome in children; acute respiratory distress syndrome; COVID-19 disease; Trauma; microangiopathy; heart failure and cardiogenic shock; stress cardiomyopathy; coronary artery disease; arrhythmia; myocarditis, pericarditis; thrombocytopenia; deep vein thrombosis; pulmonary embolism; cerebrovascular accident; lower extremity ischemia ;haemorrhagic disease;acute kidney injury;liver damage;generalized convulsions;Guillain-Barre syndrome;acute disseminated encephalomyelitis;anosmia, loss of taste;meningoencephalitis;chill-like lesions;single organ vasculitis;polymorphism erythema; defined as severe local/systemic AR after immunization.

特に、このような処置方法は、
a)少なくとも1つの核酸(例えば、DNA又はRNA)、好ましくは、少なくとも1つの第一の態様のRNA、少なくとも1つの第二の態様の組成物、少なくとも1つの第三の態様のポリペプチド、少なくとも1つの第四の態様のワクチン、又は第五の態様のキット若しくはパーツのキットを用意する工程;
b)前記核酸、組成物、ポリペプチド、ワクチン、又はキット若しくはパーツのキットを対象に第一の用量で適用するか、又は投与する工程
c)場合により、前記核酸、組成物、ポリペプチド、ワクチン、又はキット若しくはパーツのキットを対象に第二の用量又はさらなる用量として、好ましくは、第一の用量の少なくとも3、4、5、6、7、8、9、10、11、12カ月後に適用するか、又は投与する工程
を含んでもよい。 In particular, such treatment methods
a) at least one nucleic acid (e.g. DNA or RNA), preferably at least one RNA of the first embodiment, at least one composition of the second embodiment, at least one polypeptide of the third embodiment; providing a vaccine according to one of the fourth aspects, or a kit or kit of parts according to the fifth aspect;
b) applying or administering said nucleic acid, composition, polypeptide, vaccine, or kit or kit of parts to a subject in a first dose;
c) optionally as a second or further dose to said nucleic acid, composition, polypeptide, vaccine or kit or kit of parts, preferably at least 3, 4, 5, 6 of the first dose; , 7, 8, 9, 10, 11, 12 months later.

本明細書で使用される場合、1回投薬量は、それぞれ、開始/第一の用量、免疫反応を「ブーストする」ために好ましくは投与される第二の用量又は任意のさらなる用量を指す。ある特定の態様では、ワクチン/組成物は、対象に、1回、2回、3回、4回以上投与される。一部の態様では、ワクチン/組成物は、対象に、少なくとも1回目及び2回目(例えば、プライム及びブースト)で投与される。一部の態様では、届けられる投与は、1回目の投与の少なくとも10日、14日、21日、28日、35日、42日、49日又は56日後である。一部の態様では、第一の投与と第二の投与の間の期間は、約7日間～約56日間、約14日間～約56日間、約21日間～約56日間、又は約28日間～約56日間である。さらなる態様では、ワクチン/組成物は、対象に3回以上投与される。ある特定の態様では、ワクチン/組成物のそれぞれの投与の間に、少なくとも10日間、14日間、21日間、28日間、35日間、42日間、49日間又は56日間存在する。 As used herein, a single dose refers to a starting/first dose, a second dose or any further dose preferably administered to "boost" the immune response, respectively. In certain embodiments, the vaccine/composition is administered to a subject once, twice, three times, four or more times. In some embodiments, the vaccine/composition is administered to the subject at least a first and second time (eg, a prime and a boost). In some embodiments, the delivered dose is at least 10, 14, 21, 28, 35, 42, 49, or 56 days after the first administration. In some embodiments, the period between the first administration and the second administration is from about 7 days to about 56 days, from about 14 days to about 56 days, from about 21 days to about 56 days, or from about 28 days to Approximately 56 days. In further embodiments, the vaccine/composition is administered to the subject three or more times. In certain embodiments, there are at least 10, 14, 21, 28, 35, 42, 49 or 56 days between each administration of the vaccine/composition.

一部の態様では、実施形態による処置のための対象は、SARS-CoV-2に以前に感染しているか、又は少なくとも第一のSARS-CoV-2ワクチン組成物を用いて以前に処置されている。一部の態様では、対象は、1、2、3回以上の用量の第一のSARS-CoV-2ワクチン組成物を用いて処置された。一部の態様では、対象を処置するために使用される実施形態の組成物は、対象を処置するために以前に使用された組成物と異なるタイプのワクチン組成物である。一部の態様では、対象は、mRNAワクチン、例えば、BNT162又はmRNA-1273を用いて以前に処置された。さらなる態様では、対象は、タンパク質サブユニットワクチン、例えば、スパイクタンパク質ベースのワクチン、例えば、NVX-CoV2373又はCOVAXを用いて以前に処置された。ある特定の好ましい態様では、タンパク質サブユニットワクチン組成物は、アジュバントを含む。さらなる態様では、対象は、ウイルスベクターワクチン、例えば、アデノウイルスベクターベースのワクチン、例えば、ADZ1222又はAd26.COV-2.Sを用いて以前に処置された。なおさらなる態様では、対象は、SARS-CoV-2に対する不活化ウイルスワクチン、例えば、CoronaVac、BBIBP-CorV又はBBV152を用いて以前に処置された。さらなる態様では、ワクチン組成物を用いて以前に処置された対象は、検出可能なSARS-CoV-2結合抗体、例えば、SARS-CoV-2 Sタンパク質結合抗体又はSARS-CoV-2 Nタンパク質結合抗体を有する。さらなる態様では、実施形態による処置のための対象は、少なくとも約3カ月、6カ月、9カ月、1年、1.5年、2年又は3年前、第一のSARS-CoV-2ワクチン組成物を用いて処置された。なおさらなる態様では、実施形態による処置のための対象は、約3カ月～2年前又は約6カ月～2年前、第一のSARS-CoV-2ワクチン組成物を用いて処置された。一部の態様では、実施形態のさらなるワクチン組成物で処置される対象は、処置される対象の少なくとも80%、85%、90%又は95%において中程度及び重篤なCOVID-19疾患から保護される。例えば、処置される対象は、さらなる組成物の投与後約2週間～約1年間、処置される対象の少なくとも80%、85%、90%又は95%において中程度及び重篤なCOVID-19疾患から保護することができる。なおさらなる態様では、実施形態のさらなるワクチン組成物の投与は、前記投与後約2週間～約3カ月間、6カ月間、9カ月間、1年間、1.5年間、2年間又は3年間、処置される対象の少なくとも80%、85%、90%又は95%において中程度及び重篤なCOVID-19疾患を予防する。このような組み合わせワクチン接種ストラテジーの例は、以下に示される:
用量1のmRNAワクチン-T1-用量2のmRNAワクチン-T2-用量3のmRNAワクチン
用量1のmRNAワクチン-T1-用量2のmRNAワクチン-T2-用量3のタンパク質サブユニットワクチン
用量1のmRNAワクチン-T1-用量2のmRNAワクチン-T2-用量3のウイルスベクターワクチン
用量1のmRNAワクチン-T1-用量2のmRNAワクチン-T2-用量3の不活化ウイルスワクチン
用量1のタンパク質サブユニットワクチン-T1-用量2のタンパク質サブユニットワクチン-T2-用量3のmRNAワクチン
用量1の不活化ウイルスワクチン-T1-用量2の不活化ウイルスワクチン-T2-用量3のmRNAワクチン
用量1のウイルスベクターワクチン-T1-用量2のウイルスベクターワクチン-T2-用量3のmRNAワクチン
用量1のウイルスベクターワクチン-T2-用量2のmRNAワクチン
用量1のタンパク質サブユニットワクチン-T2-用量2のmRNAワクチン
用量1の不活化ウイルスワクチン-T2-用量2のmRNAワクチン
用量1のmRNAワクチン-T2-用量2のmRNAワクチン
例では、上記の期間1(T1)は、典型的には、2～6週間、好ましくは、3～4週間である。期間2(T2)は、ある場合では、約3カ月間、6カ月間、9カ月間、1年間、1.5年間、2年間又は3年間である。 In some aspects, the subject for treatment according to embodiments has been previously infected with SARS-CoV-2 or has been previously treated with at least a first SARS-CoV-2 vaccine composition. There is. In some embodiments, the subject was treated with one, two, three or more doses of the first SARS-CoV-2 vaccine composition. In some aspects, the composition of embodiments used to treat the subject is a different type of vaccine composition than the composition previously used to treat the subject. In some embodiments, the subject was previously treated with an mRNA vaccine, eg, BNT162 or mRNA-1273. In a further embodiment, the subject has been previously treated with a protein subunit vaccine, such as a spike protein-based vaccine, such as NVX-CoV2373 or COVAX. In certain preferred embodiments, protein subunit vaccine compositions include an adjuvant. In a further embodiment, the subject has been previously treated with a viral vector vaccine, eg, an adenovirus vector-based vaccine, eg, ADZ1222 or Ad26.COV-2.S. In still further embodiments, the subject has been previously treated with an inactivated virus vaccine against SARS-CoV-2, such as CoronaVac, BBIBP-CorV or BBV152. In a further aspect, the subject previously treated with the vaccine composition has a detectable SARS-CoV-2 binding antibody, such as a SARS-CoV-2 S protein binding antibody or a SARS-CoV-2 N protein binding antibody. has. In further aspects, the subject for treatment according to embodiments received the first SARS-CoV-2 vaccine composition at least about 3 months, 6 months, 9 months, 1 year, 1.5 years, 2 years, or 3 years ago. treated using. In still further aspects, the subject for treatment according to embodiments was treated with a first SARS-CoV-2 vaccine composition about 3 months to 2 years ago or about 6 months to 2 years ago. In some aspects, subjects treated with the additional vaccine compositions of embodiments are protected from moderate and severe COVID-19 disease in at least 80%, 85%, 90% or 95% of the treated subjects. be done. For example, the treated subjects may have moderate and severe COVID-19 disease in at least 80%, 85%, 90% or 95% of the treated subjects for about 2 weeks to about 1 year after administration of the additional composition. can be protected from. In still further aspects, the administration of the additional vaccine composition of the embodiment is carried out for about 2 weeks to about 3 months, 6 months, 9 months, 1 year, 1.5 years, 2 years or 3 years after said administration. prevent moderate and severe COVID-19 disease in at least 80%, 85%, 90% or 95% of subjects affected. Examples of such combination vaccination strategies are shown below:
Dose 1 mRNA vaccine - T1 - Dose 2 mRNA vaccine - T2 - Dose 3 mRNA vaccine Dose 1 mRNA vaccine - T1 - Dose 2 mRNA vaccine - T2 - Dose 3 protein subunit vaccine Dose 1 mRNA vaccine - T1 - mRNA vaccine in dose 2 - T2 - viral vector vaccine in dose 3 mRNA vaccine in dose 1 - T1 - mRNA vaccine in dose 2 - T2 - inactivated virus vaccine in dose 3 protein subunit vaccine in dose 1 - T1 - dose 2 protein subunit vaccines - T2 - Dose 3 mRNA vaccine Dose 1 inactivated virus vaccine - T1 - Dose 2 inactivated virus vaccine - T2 - Dose 3 mRNA vaccine Dose 1 viral vector vaccine - T1 - Dose 2 Viral Vector Vaccine - T2 - mRNA Vaccine at Dose 3 Viral Vector Vaccine at Dose 1 - T2 - mRNA Vaccine at Dose 2 Protein Subunit Vaccine at Dose 1 - T2 - mRNA Vaccine at Dose 2 Inactivated Virus Vaccine at Dose 1 - T2 - Dose 2 mRNA vaccine Dose 1 mRNA vaccine - T2 - Dose 2 mRNA vaccine In the example, period 1 (T1) above is typically 2 to 6 weeks, preferably 3 to 4 weeks. . Time period 2 (T2) is, in some cases, approximately 3 months, 6 months, 9 months, 1 year, 1.5 years, 2 years, or 3 years.

一部の態様では、実施形態の方法は、複数用量のワクチン組成物を対象に投与することを含む。さらなる態様では、SARS-CoV-2ブースターワクチン組成物の反応源性を低減する方法が提供される。一部の態様では、開始ワクチン接種後、高レベルの反応源性を示している対象は、開始ワクチン組成物と異なるブースターワクチンが投与される。例えば、一部の態様では、開始ワクチンは、BNT162又はmRNA-1273であり、ブースターワクチンは、実施形態のmRNAワクチン組成物である。一部の態様では、高い反応源性を有する対象のためのブースターワクチン組成物は、以前に投与されたワクチン組成物と比較して、低い濃度のPEG又はPEGコンジュゲートを有することに基づき選択される。一部の態様では、高い反応源性を有する対象のためのブースターワクチン組成物は、以前に投与されたワクチン組成物と比較して、低い濃度のmRNA又はLNPに基づき選択される。 In some aspects, the methods of embodiments include administering multiple doses of the vaccine composition to the subject. In a further aspect, a method of reducing the reactogenicity of a SARS-CoV-2 booster vaccine composition is provided. In some embodiments, after the initial vaccination, subjects exhibiting high levels of reactogenicity are administered a booster vaccine that is different from the starting vaccine composition. For example, in some embodiments, the starting vaccine is BNT162 or mRNA-1273 and the booster vaccine is the mRNA vaccine composition of the embodiments. In some embodiments, a booster vaccine composition for a subject with high reactogenicity is selected based on having a lower concentration of PEG or PEG conjugate compared to a previously administered vaccine composition. Ru. In some embodiments, booster vaccine compositions for subjects with high reactogenicity are selected based on lower concentrations of mRNA or LNPs compared to previously administered vaccine compositions.

ある特定の態様では、実施形態による処置のための対象は、ブースターワクチンとしてワクチン組成物が投与され、コロナウイルスワクチン組成物の1回以上の投与で以前に処置されている。ある特定の態様では、以前にブースターワクチンを用いて処置されている対象は、スパイクタンパク質抗原又はスパイクタンパク質抗原をコードする核酸分子を含んだワクチン組成物を用いて処置された。一部の態様では、ブースターワクチンを用いた処置のため選択される対象は、ブースターワクチンのスパイクタンパク質と異なるアミノ酸配列を有するスパイクタンパク質を含むか、又はコードするワクチン組成物を以前に投与された。ある特定の態様では、以前に投与されたワクチン組成物は、ブースターワクチン組成物と比べて少なくとも1、2、3、4、5、6、7、8、9、又は10個のアミノ酸が異なるスパイク(例えば、SARS-CoV-2スパイク)タンパク質を含んでいたか、又はコードしていた。ある特定の態様では、ブースターワクチン組成物は、以前に投与されたワクチン組成物と比べて約1～50;約3～30;約5～30又は約10～25個のアミノ酸が異なるスパイクタンパク質をコードするRNAを含む。なおさらなる態様では、ブースターワクチン組成物は、異なるアミノ酸配列を有する2、3、4つ以上の別個のスパイクタンパク質をコードするRNAを含む。 In certain aspects, subjects for treatment according to embodiments are administered a vaccine composition as a booster vaccine and have been previously treated with one or more administrations of a coronavirus vaccine composition. In certain embodiments, a subject previously treated with a booster vaccine was treated with a vaccine composition comprising a spike protein antigen or a nucleic acid molecule encoding a spike protein antigen. In some embodiments, the subject selected for treatment with the booster vaccine has previously been administered a vaccine composition that includes or encodes a spike protein that has a different amino acid sequence than the spike protein of the booster vaccine. In certain embodiments, the previously administered vaccine composition differs by at least 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, or 10 amino acids compared to the booster vaccine composition. (e.g., SARS-CoV-2 spike) contained or encoded a protein. In certain embodiments, the booster vaccine composition differs in the spike protein by about 1 to 50; about 3 to 30; about 5 to 30, or about 10 to 25 amino acids compared to the previously administered vaccine composition. Contains encoding RNA. In still further embodiments, the booster vaccine composition comprises RNA encoding two, three, four or more distinct spike proteins with different amino acid sequences.

さらなる態様では、実施形態の方法は、2つ以上のブースターワクチン組成物を対象に投与することを含み、ここで、それぞれのブースターワクチン組成物は、異なるアミノ酸配列を有する別個のスパイクタンパク質をコードするRNAを含む。一部の態様では、このような別個のブースターワクチン組成物は、本質的に同時又は約10分、20分、30分、1時間若しくは2時間未満離して投与される。一部の態様では、別個のブースターワクチン組成物は、同じ部位に投与され、例えば、対象の同じ腕に筋肉内注射される。さらなる態様では、別個のブースターワクチン組成物は、異なる部位に投与され、例えば、異なる腕又は一方若しくは両方の腕及びもう一方の足の筋肉に筋肉内注射される。 In further aspects, the methods of embodiments include administering to the subject two or more booster vaccine compositions, wherein each booster vaccine composition encodes a distinct spike protein having a different amino acid sequence. Contains RNA. In some embodiments, such separate booster vaccine compositions are administered essentially simultaneously or less than about 10 minutes, 20 minutes, 30 minutes, 1 hour or 2 hours apart. In some embodiments, separate booster vaccine compositions are administered at the same site, eg, intramuscularly injected into the same arm of the subject. In a further aspect, separate booster vaccine compositions are administered at different sites, eg, intramuscularly injected into different arms or muscles of one or both arms and the other leg.

ある特定の態様では、実施形態の方法は、対象における抗体又はCD8+T細胞応答を刺激する方法としてさらに定義される。一部の態様では、方法は、対象における中和抗体応答を刺激する方法として定義される。さらなる態様では、方法は、対象における防御的免疫応答を刺激する方法として定義される。なおさらなる態様では、方法は、対象におけるTH2指向性免疫応答を刺激する方法として定義される。 In certain aspects, the methods of embodiments are further defined as methods of stimulating antibody or CD8+ T cell responses in a subject. In some embodiments, a method is defined as a method of stimulating a neutralizing antibody response in a subject. In a further aspect, a method is defined as a method of stimulating a protective immune response in a subject. In yet a further aspect, a method is defined as a method of stimulating a TH2-directed immune response in a subject.

さらなる態様では、実施形態のワクチン/組成物/組み合わせの投与は、対象においてコロナウイルス中和抗体毎に約10～約500のコロナウイルススパイクタンパク質結合抗体を生じる抗体応答を刺激する。例えば、投与は、コロナウイルス中和抗体毎に約200以下のスパイクタンパク質結合抗体を生じる抗体応答を刺激することができる。さらなる態様では、投与は、コロナウイルス中和抗体毎に約10～約300、約20～約300、約20～約200、約30～約100、又は約30～約80のコロナウイルススパイクタンパク質結合抗体を生じる抗体応答を刺激する。なおさらなる態様では、平均回復期患者血清(コロナウイルス感染から回復した対象由来)において見られるスパイクタンパク質結合抗体とコロナウイルス中和抗体との比の20%、15%、10%又は5%を伴う、スパイクタンパク質結合抗体とコロナウイルス中和抗体との比を含む、実施形態の組成物の投与は、対象における抗体応答を刺激する。 In further aspects, administration of the vaccines/compositions/combinations of embodiments stimulates an antibody response in the subject that yields about 10 to about 500 coronavirus spike protein binding antibodies for every coronavirus neutralizing antibody. For example, administration can stimulate an antibody response that yields about 200 or fewer spike protein binding antibodies for every coronavirus neutralizing antibody. In further embodiments, the administration comprises about 10 to about 300, about 20 to about 300, about 20 to about 200, about 30 to about 100, or about 30 to about 80 coronavirus spike protein binding molecules per coronavirus neutralizing antibody. Stimulating an antibody response that produces antibodies. In still further embodiments, the ratio of spike protein binding antibodies to coronavirus neutralizing antibodies found in average convalescent serum (from subjects who have recovered from coronavirus infection) is 20%, 15%, 10% or 5%. administration of an embodiment of a composition comprising a ratio of a spike protein binding antibody to a coronavirus neutralizing antibody stimulates an antibody response in a subject.

なおさらなる態様では、実施形態のワクチン/組成物/組み合わせの投与は、対象においてコロナウイルス中和抗体毎に約1～約500のコロナウイルススパイクタンパク質受容体結合ドメイン(RBD)結合抗体を生じる抗体応答を刺激する。さらなる態様では、投与は、コロナウイルス中和抗体毎に約50以下のスパイクタンパク質RBD結合抗体を生じる抗体応答を刺激する。なおさらなる態様では、投与は、コロナウイルス中和抗体毎に約1～約200、約2～約100、約3～約200、約5～約100、約5～約50、又は約5～約20のスパイクタンパク質RBD結合抗体を生じる抗体応答を刺激する。なおさらなる態様では、平均回復期患者血清(コロナウイルス感染から回復した対象由来)において見られるスパイクタンパク質RBD結合抗体とコロナウイルス中和抗体との比の20%、15%、10%又は5%を伴う、スパイクタンパク質RBD結合抗体とコロナウイルス中和抗体との比を含む、実施形態の組成物の投与は、対象における抗体応答を刺激する。 In still further aspects, administration of the vaccines/compositions/combinations of embodiments results in an antibody response that produces about 1 to about 500 coronavirus spike protein receptor binding domain (RBD) binding antibodies for every coronavirus neutralizing antibody in the subject. stimulate. In a further embodiment, the administration stimulates an antibody response that yields about 50 or fewer spike protein RBD binding antibodies for every coronavirus neutralizing antibody. In still further embodiments, the administration comprises about 1 to about 200, about 2 to about 100, about 3 to about 200, about 5 to about 100, about 5 to about 50, or about 5 to about Stimulating an antibody response resulting in 20 spike protein RBD binding antibodies. In still further embodiments, the ratio of spike protein RBD binding antibodies to coronavirus neutralizing antibodies found in average convalescent serum (from subjects who have recovered from coronavirus infection) is 20%, 15%, 10% or 5%. administering a composition of an embodiment comprising a ratio of a spike protein RBD binding antibody to a coronavirus neutralizing antibody with a ratio of spike protein RBD binding antibody to coronavirus neutralizing antibody stimulates an antibody response in the subject.

なおさらなる態様では、実施形態のワクチン/組成物/組み合わせの投与は、対象におけるIL-4、IL-13、TNF及び/又はIL-1βの増加を本質的に誘導しない。さらなる態様では、実施形態のワクチン/組成物の投与は、対象における血清IL-4、IL-13、TNF及び/又はIL-1βにおける増加を本質的に誘導しない。一部の態様では、実施形態のワクチン/組成物の投与は、対象における注射部位(例えば、筋肉内注射部位)でのIL-4、IL-13、TNF及び/又はIL-1βの増加を本質的に誘導しない。 In still further aspects, administration of the vaccines/compositions/combinations of embodiments does not essentially induce an increase in IL-4, IL-13, TNF and/or IL-1β in the subject. In a further aspect, administration of the vaccines/compositions of the embodiments does not essentially induce an increase in serum IL-4, IL-13, TNF and/or IL-1β in the subject. In some aspects, administration of the vaccines/compositions of embodiments results in an increase in IL-4, IL-13, TNF and/or IL-1β at the injection site (e.g., intramuscular injection site) in the subject. Do not guide the person.

なおさらなる態様では、実施形態の方法は、疾患を有するヒト対象への実施形態のワクチン/組成物の投与を含む。ある特定の態様では、対象は、心血管疾患、腎疾患、肺疾患又は自己免疫疾患を有する。一部の態様では、実施形態のワクチン/組成物は、抗凝固療法を受けている対象に投与される。 In still further aspects, the methods of the embodiments include administering the vaccines/compositions of the embodiments to a human subject having a disease. In certain embodiments, the subject has cardiovascular disease, renal disease, pulmonary disease, or autoimmune disease. In some aspects, the vaccines/compositions of embodiments are administered to a subject undergoing anticoagulant therapy.

なおさらなる態様では、ヒト対象へ実施形態のワクチン/組成物/組み合わせを投与することにより、対象の20%、15%、10%、7.5%又は5%以下がグレード3の局所有害事象を経験することとなる(以下の表3aを参照)。例えば、一部の態様では、対象の10%以下が、組成物の第一の又は第二の用量後に、グレード3の局所有害事象を経験する。好ましい態様では、ヒト対象へ実施形態の組成物を投与することにより、対象の40%、30%、25%、20%、15%、10%、7.5%又は5%以下がグレード2のより酷い局所有害事象を経験することとなる。例えば、一部の態様では、対象の30%以下が、組成物の第一の又は第二の用量後に、グレード2以上の局所有害事象を経験する。一部の態様では、ヒト対象へ実施形態の組成物を投与することにより、対象の10%以下が注射部位でグレード3の疼痛、発赤、腫脹及び/又は痒みを経験することとなる。 In still further aspects, upon administering the vaccines/compositions/combinations of embodiments to human subjects, no more than 20%, 15%, 10%, 7.5% or 5% of the subjects experience a Grade 3 local adverse event. (see Table 3a below). For example, in some embodiments, 10% or less of subjects experience a Grade 3 local adverse event after the first or second dose of the composition. In preferred embodiments, administration of compositions of embodiments to human subjects results in less than 40%, 30%, 25%, 20%, 15%, 10%, 7.5%, or 5% of the subjects exhibiting grade 2 or worse. Local adverse events will be experienced. For example, in some embodiments, 30% or less of subjects experience a Grade 2 or higher local adverse event after the first or second dose of the composition. In some aspects, administration of the compositions of embodiments to human subjects results in 10% or less of the subjects experiencing Grade 3 pain, redness, swelling, and/or itching at the injection site.

さらなる態様では、ヒト対象へ実施形態のワクチン/組成物/組み合わせを投与することにより、対象の30%、25%、20%、15%、10%又は5%以下がグレード3の全身性有害事象を経験することとなる(以下の表Bを参照)。例えば、一部の態様では、組成物の第一の用量後に、対象の25%以下が、グレード3の全身性有害事象を経験する。一部の態様では、組成物の第二の用量後に、対象の40%以下が、グレード3の全身性有害事象を経験する。一部の態様では、ヒト対象へ実施形態の組成物を投与することにより、対象の30%、25%、20%、15%、10%又は5%以下がグレード3の発熱、頭痛、疲労、悪寒、筋肉痛、関節痛、悪心及び/又は下痢を経験することとなる。 In further aspects, administration of the vaccines/compositions/combinations of embodiments to human subjects results in no more than 30%, 25%, 20%, 15%, 10% or 5% of the subjects experiencing grade 3 systemic adverse events. (see Table B below). For example, in some embodiments, 25% or less of subjects experience a grade 3 systemic adverse event after the first dose of the composition. In some embodiments, 40% or less of the subjects experience a grade 3 systemic adverse event after the second dose of the composition. In some embodiments, administering a composition of an embodiment to a human subject results in less than 30%, 25%, 20%, 15%, 10%, or 5% of the subjects experiencing grade 3 fever, headache, fatigue, or You will experience chills, muscle and joint pain, nausea and/or diarrhea.

Figure 2024502210000032
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Figure 2024502210000033
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さらなる態様によると、本発明はまた、コロナウイルスから誘導される少なくとも1つのペプチド若しくはタンパク質、又はそのフラグメント若しくはバリアントを含む少なくとも1つのポリペプチドを発現させる方法を提供し、ここで、方法は、好ましくは、以下の:
a)少なくとも1つの第一の態様の核酸又は少なくとも1つの第二の態様の組成物を用意する工程;及び
b)発現系(細胞)、組織、生物に、前記核酸又は組成物を適用するか、又は投与する工程を含む。ポリペプチド(本発明の核酸によってコードされる)を発現するのに適した細胞は、ショウジョウバエ(Drosophila)S2昆虫細胞株であってもよい。
を含む。 According to a further aspect, the invention also provides a method for expressing at least one polypeptide comprising at least one peptide or protein derived from a coronavirus, or a fragment or variant thereof, wherein the method preferably comprises Below is:
a) providing at least one nucleic acid of the first embodiment or at least one composition of the second embodiment; and
b) applying or administering said nucleic acid or composition to an expression system (cell), tissue or organism. A suitable cell for expressing a polypeptide (encoded by a nucleic acid of the invention) may be the Drosophila S2 insect cell line.
including.

発現方法は、検査用、研究用、診断用、ペプチド若しくはタンパク質の商業生産用及び/又は治療目的のために適用されてもよい。方法はさらに、特定の疾患の処置、特に、感染性疾患、特にコロナウイルス感染、好ましくは、SARS-CoV-2コロナウイルス感染及び疾患COVID-19の処置の文脈で行われてもよい。 The expression method may be applied for testing, research, diagnostic, commercial production of peptides or proteins and/or therapeutic purposes. The method may further be carried out in the context of the treatment of certain diseases, in particular the treatment of infectious diseases, especially coronavirus infections, preferably SARS-CoV-2 coronavirus infections and the disease COVID-19.

同様に、別の態様によると、本発明はまた、好ましくは、診断又は治療目的のため、例えば、コードされるコロナウイルス抗原性ペプチド若しくはタンパク質の発現のための、核酸、組成物、ポリペプチド、ワクチン、又はキット若しくはパーツのキットの使用を提供する。 Similarly, according to another aspect, the invention also provides nucleic acids, compositions, polypeptides, preferably for diagnostic or therapeutic purposes, e.g. for the expression of encoded coronavirus antigenic peptides or proteins. Provide for the use of vaccines or kits or kits of parts.

特定の実施形態では、前記核酸、ポリペプチド、組成物、ワクチン、組み合わせの組織又は生物への適用又は投与には、例えば、誘導されたコロナウイルス抗体、例えば、SARS-CoV-2コロナウイルス特異的(モノクローナル)抗体を得る工程又は生成されたSARS-CoV-2コロナウイルスタンパク質構築物(Sタンパク質)を得る工程が続いてもよい。 In certain embodiments, application or administration of said nucleic acids, polypeptides, compositions, vaccines, combinations to tissues or organisms includes, for example, induced coronavirus antibodies, e.g., SARS-CoV-2 coronavirus-specific A step of obtaining (monoclonal) antibodies or a step of obtaining a generated SARS-CoV-2 coronavirus protein construct (S protein) may follow.

使用は、(診断)検査用、研究用、診断用、ペプチド、タンパク質、若しくはSARS-CoV-2コロナウイルス抗体の商業生産用及び/又は治療目的のため適用されてもよい。使用は、in vitro、in vivo又はex vivoで行われてもよい。使用はさらに、特定の疾患の処置、特に、コロナウイルス感染(例えば、COVID-19)又は関連する障害の処置の文脈で行われてもよい。 The use may be applied for (diagnostic) testing, research, diagnostics, commercial production of peptides, proteins or SARS-CoV-2 coronavirus antibodies and/or for therapeutic purposes. The use may be performed in vitro, in vivo or ex vivo. Use may further be carried out in the context of the treatment of certain diseases, particularly coronavirus infections (eg, COVID-19) or related disorders.

さらなる態様によると、本発明はまた、組成物又はワクチンを製造する方法であって、
a)好ましくは、表2において提供される核酸配列を有するキャップされたmRNAを得るためのキャップアナログの存在下でDNA鋳型を使用した、RNA in vitro転写工程;
b)RP-HPLC、及び/若しくはTFF、及び/若しくはオリゴ(dT)精製を使用した、並びに/又はAEX、好ましくは、RP-HPLCを使用した、工程a)の得られたキャッピングされたRNAを精製する工程;
c)工程b)の精製されたキャッピングされたRNAを含む第一の液体組成物を用意する工程;
d)少なくとも1つの、本明細書において定義されるカチオン性脂質、本明細書において定義される中性脂質、本明細書において定義されるステロイド又はステロイドアナログ、及び本明細書において定義されるPEG-脂質を含む第二の液体組成物を用意する工程;
e)第一の液体組成物及び第二の液体組成物を少なくとも1つの混合手段に導入して、キャッピングされたRNAを含むLNPの形成を可能にする工程;
f)得られたキャッピングされたRNAを含むLNPを精製する工程;
g)場合により、精製されたキャッピングされたRNAを含むLNPを凍結乾燥させる工程
を含む方法を提供する。 According to a further aspect, the invention also provides a method of manufacturing a composition or a vaccine, comprising:
a) an RNA in vitro transcription step, preferably using a DNA template in the presence of a cap analog to obtain a capped mRNA having the nucleic acid sequence provided in Table 2;
b) The resulting capped RNA of step a) using RP-HPLC and/or TFF and/or oligo(dT) purification and/or using AEX, preferably RP-HPLC. the process of refining;
c) providing a first liquid composition comprising the purified capped RNA of step b);
d) at least one of a cationic lipid as defined herein, a neutral lipid as defined herein, a steroid or steroid analog as defined herein, and a PEG- as defined herein; providing a second liquid composition comprising a lipid;
e) introducing the first liquid composition and the second liquid composition into at least one mixing means to enable formation of LNPs comprising capped RNA;
f) purifying the obtained LNPs containing the capped RNA;
g) optionally lyophilizing LNPs containing purified capped RNA.

好ましくは、工程e)の混合手段は、Tピースコネクター又は微少流体混合装置である。好ましくは、精製工程f)は、沈殿工程、透析工程、濾過工程、TFF工程から選択される少なくとも1つの工程を含む。場合により、酵素ポリアデニル化工程は、工程a)又はb)の後に行われてもよい。場合により、さらなる精製工程を行って、例えば、残るDNA、緩衝液、小さいRNA副産物などが除去されてもよい。場合により、RNA in vitro転写は、キャップアナログの非存在下で行われ、酵素キャッピング工程は、RNA vitro転写後に行われる。場合により、RNA in vitro転写は、少なくとも1つの本明細書において定義される修飾されたヌクレオチドの存在下で行われる。 Preferably, the mixing means of step e) is a T-piece connector or a microfluidic mixing device. Preferably, purification step f) comprises at least one step selected from a precipitation step, a dialysis step, a filtration step, a TFF step. Optionally, an enzymatic polyadenylation step may be performed after step a) or b). Optionally, further purification steps may be performed to remove, for example, remaining DNA, buffers, small RNA byproducts, etc. Optionally, RNA in vitro transcription is performed in the absence of a cap analog, and an enzymatic capping step is performed after RNA vitro transcription. Optionally, RNA in vitro transcription is performed in the presence of at least one modified nucleotide as defined herein.

実施形態では、工程a、好ましくは、工程a～c、より好ましくは、上で概説されたすべての工程(a～g)は、RNA in vitro転写用の自動装置において行われる。このような装置をまた使用して、組成物又はワクチンを生成してもよい(態様2及び3を参照)。好ましくは、WO2020/002598に記載される装置、特に、WO2020/002598の請求項1～59並びに/又は68～76(及び図1～18)に記載される装置が、好適に使用されてもよい。 In an embodiment, step a, preferably steps a to c, more preferably all steps (a to g) outlined above, are performed in an automatic device for RNA in vitro transcription. Such devices may also be used to produce compositions or vaccines (see embodiments 2 and 3). Preferably, the devices described in WO2020/002598, particularly the devices described in claims 1 to 59 and/or 68 to 76 (and FIGS. 1 to 18) of WO2020/002598, may be suitably used. .

リスト及び表の簡単な説明
リスト1a:置換、欠失及び/又は挿入についてのアミノ酸位置
リスト1b:アミノ酸置換、欠失又は挿入
表1:好ましいコロナウイルス構築物(アミノ酸配列及び核酸コード配列)
表2a:コロナウイルスワクチンに適したRNA構築物
表2b:コロナウイルスワクチンに適したRNA構築物
表3a:規定された（solicited）局所有害事象についての強度グレーディング
表3b:規定された全身有害事象についての強度グレーディング
表4:異なるSARS-CoV-2 S抗原設計をコードするRNA構築物(実施例において使用される)
表5:実施例の脂質ベースの担体組成物
表6:ワクチン接種レジメン
表7:VNT中央値(42日目)
表8:ワクチン接種レジメン(実施例3)
表9:ワクチン接種レジメン(実施例4)
表10:ワクチン接種レジメン(実施例5)
表11:ワクチン接種レジメン(実施例6)
表12:ワクチン接種レジメン(実施例7)
表13:ワクチン接種レジメン(実施例8)
表14A:ワクチン接種レジメン(実施例9A)
表14B:ワクチン接種レジメン(実施例9B)
表15:ワクチン接種レジメン(実施例10)
表16:ワクチン接種レジメン(実施例11)
表17:ワクチン接種レジメン(実施例12)
表18:ワクチン接種レジメン(実施例13)
表19:ワクチン接種レジメン(実施例14) Brief Description of Lists and Tables List 1a: Amino acid positions for substitutions, deletions and/or insertions List 1b: Amino acid substitutions, deletions or insertions Table 1: Preferred coronavirus constructs (amino acid sequences and nucleic acid coding sequences) )
Table 2a: RNA constructs suitable for coronavirus vaccines Table 2b: RNA constructs suitable for coronavirus vaccines Table 3a: Intensity grading for solicited local adverse events Table 3b: Intensity for solicited systemic adverse events Grading Table 4: RNA constructs encoding different SARS-CoV-2 S antigen designs (used in the examples)
Table 5: Example lipid-based carrier compositions Table 6: Vaccination regimen Table 7: Median VNT (day 42)
Table 8: Vaccination regimen (Example 3)
Table 9: Vaccination regimen (Example 4)
Table 10: Vaccination regimen (Example 5)
Table 11: Vaccination regimen (Example 6)
Table 12: Vaccination regimen (Example 7)
Table 13: Vaccination regimen (Example 8)
Table 14A: Vaccination regimen (Example 9A)
Table 14B: Vaccination regimen (Example 9B)
Table 15: Vaccination regimen (Example 10)
Table 16: Vaccination regimen (Example 11)
Table 17: Vaccination regimen (Example 12)
Table 18: Vaccination regimen (Example 13)
Table 19: Vaccination regimen (Example 14)

以下の実施例は、本発明の様々な実施形態及び態様を説明する。本発明は、本明細書において記載される特定の実施形態によって範囲が決して限定されることを意図されない。以下の調製物及び実施例は、当業者が、当業者が本発明をより明確に理解し、実施することを可能にするために提供される、しかしながら、本発明は、本発明の単一の態様の説明のみが意図される例示される実施形態によって範囲が限定されず、機能的に均等である方法は、本発明の範囲内である。実際、本発明の様々な改変は、本明細書に記載される改変に加えて、前述の説明、添付の図面及び以下の実施例から当業者にとって容易に明らかになるであろう。このような改変すべてが、添付の特許請求の範囲内である。 The following examples illustrate various embodiments and aspects of the invention. The invention is not intended to be limited in scope by the particular embodiments described herein. The following Preparations and Examples are provided to enable those skilled in the art to more clearly understand and practice the present invention. The scope is not limited by the illustrated embodiments, which are intended to be illustrative of aspects only, and functionally equivalent methods are within the scope of the invention. Indeed, various modifications of the invention, in addition to those described herein, will become readily apparent to those skilled in the art from the foregoing description, accompanying drawings, and the following examples. All such modifications are within the scope of the appended claims.

[実施例1]
DNA及びRNA構築物、組成物、及びワクチンの調製
本実施例は、本発明のRNAを得る方法並びに本発明の組成物又はワクチンを生成する方法を提供する。 [Example 1]
Preparation of DNA and RNA constructs, compositions, and vaccines
This example provides methods for obtaining RNA of the invention as well as methods of producing compositions or vaccines of the invention.

1.1.DNA及びRNA構築物の調製:
異なるSARS-CoV-2 Sタンパク質設計物をコードするDNA配列を調製し、続くRNA in vitro転写反応に使用した。DNA配列を、安定化及び発現の最適化のため、G/C最適化又は修飾したコード配列(例えば、「cds opt1」)を導入することによって、DNA配列をコードする野生型又は参照を修飾することによって調製した。配列をpUC駆動DNAベクターに導入して、アデノシン(例えば、A64又はA100)の区画、及び場合により、ヒストンステムループ(hSL)構造、及び場合により、30シトシン(例えば、C30)の区画をさらに有する安定化3'UTR配列及び5'UTR配列を生成した(表4を参照、コロナウイルス抗原設計の概要については、リスト1又は表1を参照)。 1.1. Preparation of DNA and RNA constructs:
DNA sequences encoding different SARS-CoV-2 S protein designs were prepared and used in subsequent RNA in vitro transcription reactions. Modify the wild type or reference encoding DNA sequence by introducing a G/C optimized or modified coding sequence (e.g. "cds opt1") for stabilization and optimization of expression. It was prepared by The sequence is introduced into a pUC-driven DNA vector to further have a patch of adenosines (e.g., A64 or A100), and optionally a histone stem loop (hSL) structure, and optionally a patch of 30 cytosines (e.g., C30). Stabilized 3'UTR and 5'UTR sequences were generated (see Table 4; see Listing 1 or Table 1 for a summary of coronavirus antigen design).

得られたプラスミドDNA構築物を、当該技術分野で公知の一般的なプロトコールを使用して、細菌において形質転換し、増やした。プラスミドDNA構築物を抽出し、精製し、続くRNA in vitro転写に使用した(セクション1.2.を参照)。 The resulting plasmid DNA constructs were transformed and propagated in bacteria using common protocols known in the art. Plasmid DNA constructs were extracted, purified, and used for subsequent RNA in vitro transcription (see section 1.2.).

或いは、DNAプラスミドをPCR増幅のための鋳型として使用することができる(セクション1.3.を参照)。 Alternatively, DNA plasmids can be used as templates for PCR amplification (see Section 1.3.).

1.2.プラスミドDNA鋳型からのRNA in vitro転写:
セクション1.1により調製したDNAプラスミドを、制限酵素を使用して酵素的に直鎖状にし、好適な緩衝液条件下、ヌクレオチド混合物(ATP/GTP/CTP/UTP)及びキャップアナログ(例えば、m7GpppG、m7G(5')ppp(5')(2'OMeA)pG、m7G(5')ppp(5')(2'OMeG)pG)、又は3'OMe-m7G(5')ppp(5')(2'OMeA)pG)の存在下でT7 RNAポリメラーゼを使用したDNA依存性RNA in vitro転写に使用した。得られたRNA構築物を、RP-HPLC(PureMessenger(登録商標)、CureVac AG、テュービンゲン、ドイツ;WO2008/077592)を使用して精製し、in vitro及びin vivo実験に使用した。DNA鋳型をまたPCRを使用して生成してもよい。このようなPCR鋳型を、本明細書において概説する通り、RNAポリメラーゼを使用したDNA依存性RNA in vitro転写に使用することができる。 1.2. RNA in vitro transcription from plasmid DNA templates:
The DNA plasmid prepared according to section 1.1 was enzymatically linearized using restriction enzymes and a mixture of nucleotides (ATP/GTP/CTP/UTP) and cap analogs (e.g. m7GpppG, m7G (5')ppp(5')(2'OMeA)pG, m7G(5')ppp(5')(2'OMeG)pG), or 3'OMe-m7G(5')ppp(5')( 2'OMeA)pG) was used for DNA-dependent RNA in vitro transcription using T7 RNA polymerase. The resulting RNA constructs were purified using RP-HPLC (PureMessenger®, CureVac AG, Tübingen, Germany; WO2008/077592) and used for in vitro and in vivo experiments. DNA templates may also be generated using PCR. Such PCR templates can be used for DNA-dependent RNA in vitro transcription using RNA polymerase, as outlined herein.

化学的に修飾されたmRNAを得るために、RNA in vitro転写を、ウラシルの代わりにN(1)-メチルシュードウリジン(m1ψ)又はシュードウリジン(ψ)を含む修飾したヌクレオチド混合物の存在下で行った。得られたm1ψ又はψによって化学的に修飾したRNAを、RP-HPLC(PureMessenger(登録商標)、CureVac AG、テュービンゲン、ドイツ;WO2008/077592)を使用して精製し、さらなる実験に使用した。 To obtain chemically modified mRNA, RNA in vitro transcription was performed in the presence of a modified nucleotide mixture containing N(1)-methylpseudouridine (m1ψ) or pseudouridine (ψ) instead of uracil. Ta. The resulting m1ψ or ψ chemically modified RNA was purified using RP-HPLC (PureMessenger®, CureVac AG, Tübingen, Germany; WO2008/077592) and used for further experiments.

酵素キャッピングを使用したキャッピングされたRNAの生成(予想):
一部のRNA構築物を、キャップアナログの非存在下でin vitroで転写する。次いで、キャップ構造(キャップ0又はキャップ1)を、当該技術分野で一般的に知られているキャッピング酵素を使用して酵素的に加える。in vitroで転写させたRNAをキャッピングキットを使用してキャッピングして、キャップ0-RNAを得る。キャップ0-RNAをキャップ特異的2'-O-メチルトランスフェラーゼを使用してさらに修飾して、キャップ1-RNAを得る。キャップ1-RNAを、例えば、上で説明した通り精製し、さらなる実験に使用する。 Generation of capped RNA using enzymatic capping (expected):
Some RNA constructs are transcribed in vitro in the absence of cap analogs. The cap structure (Cap 0 or Cap 1) is then added enzymatically using capping enzymes commonly known in the art. Cap the in vitro transcribed RNA using a capping kit to obtain cap0-RNA. Cap0-RNA is further modified using a cap-specific 2'-O-methyltransferase to obtain cap1-RNA. Cap1-RNA is purified, eg, as described above, and used for further experiments.

臨床開発のためのRNAを、例えば、DNA及びRNAレベルで様々な品質管理工程を行うWO2016/180430に記載の現行の優良医薬品製造基準の下で生成する。 RNA for clinical development is produced under current good manufacturing practices as described in WO2016/180430, for example with various quality control steps at the DNA and RNA level.

実施例のRNA構築物:
コードされる抗原性タンパク質及びそこに示すそれぞれのUTRエレメントを含む生成したRNA配列/構築物を、表4に提供する。別段示していない場合、表4のRNA配列/構築物を、m7GpppG、m7G(5')ppp(5')(2'OMeA)pGの存在下でRNA in vitro転写を使用して生成し、したがって、RNA配列/構築物は、5'キャップ1構造を含む。別段示していない場合、表4のRNA配列/構築物を、化学的に修飾されたヌクレオチド(例えば、シュードウリジン(ψ)又はN(1)-メチルシュードウリジン(m1ψ))の非存在下で生成した。 Example RNA constructs:
The generated RNA sequences/constructs containing the encoded antigenic proteins and their respective UTR elements shown therein are provided in Table 4. Unless otherwise indicated, the RNA sequences/constructs in Table 4 were produced using RNA in vitro transcription in the presence of m7GpppG, m7G(5')ppp(5')(2'OMeA)pG, and thus The RNA sequence/construct includes a 5' cap 1 structure. Unless otherwise indicated, the RNA sequences/constructs in Table 4 were generated in the absence of chemically modified nucleotides (e.g., pseudouridine (ψ) or N(1)-methylpseudouridine (m1ψ)). .

1.3.PCR増幅したDNA鋳型からのRNA in vitro転写(予想):
段落1.1に従い調製した、精製したPCR増幅したDNA鋳型を、好適な緩衝液条件下でヌクレオチド混合物(ATP/GTP/CTP/UTP)及びキャップアナログ(m7GpppG又は3'-O-Me-m7G(5')ppp(5')G))の存在下でDNA依存性T7 RNAポリメラーゼを使用してin vitroで転写する。或いは、PCR増幅したDNAを、好適な緩衝液条件下、修飾したヌクレオチド混合物(ATP、GTP、CTP、N1-メチルシュードウリジン(m1ψ)又はシュードウリジン(ψ)）及びキャップアナログ(m7GpppG、m7G(5')ppp(5')(2'OMeA)pG又はm7G(5')ppp(5')(2'OMeG)pG)の存在下でDNA依存性T7 RNAポリメラーゼを使用してin vitroで転写する。一部のRNA構築物を、キャップアナログの非存在下でin vitroで転写し、キャップ構造(キャップ0又はキャップ1)を、当該技術分野で一般的に知られているキャッピング酵素を使用して酵素的に加える。得られたRNAを、例えば、上で説明した通り精製し、さらなる実験に使用する。得られたmRNAを、例えば、RP-HPLC(PureMessenger(登録商標)、CureVac AG、テュービンゲン、ドイツ;WO2008/077592)を使用して精製し、in vitro及びin vivo実験に使用する。 1.3. RNA in vitro transcription from PCR-amplified DNA template (expected):
Purified PCR-amplified DNA template prepared according to paragraph 1.1 was mixed with a nucleotide mixture (ATP/GTP/CTP/UTP) and a cap analog (m7GpppG or 3'-O-Me-m7G (5')ppp(5')G)) in vitro using DNA-dependent T7 RNA polymerase. Alternatively, PCR amplified DNA can be injected with modified nucleotide mixtures (ATP, GTP, CTP, N1-methylpseudouridine (m1ψ) or pseudouridine (ψ)) and cap analogs (m7GpppG, m7G(5)) under suitable buffer conditions. transcribed in vitro using DNA-dependent T7 RNA polymerase in the presence of ')ppp(5')(2'OMeA)pG or m7G(5')ppp(5')(2'OMeG)pG) . Some RNA constructs are transcribed in vitro in the absence of a cap analog, and the cap structure (cap 0 or cap 1) is enzymatically isolated using capping enzymes commonly known in the art. Add to. The resulting RNA is purified, eg, as described above, and used for further experiments. The resulting mRNA is purified using, for example, RP-HPLC (PureMessenger®, CureVac AG, Tübingen, Germany; WO2008/077592) and used for in vitro and in vivo experiments.

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1.4.LNP製剤化mRNA組成物の調製:
LNPを、カチオン性脂質、構造脂質、PEG-脂質、及びコレステロールを使用して調製した。脂質溶液(エタノール中)を、微少流体混合装置を使用してRNA溶液(水性緩衝液)と混合した。得られたLNPを透析を介して炭水化物緩衝液中で再緩衝し、超遠心分離管を使用して標的濃度まで濃縮した。LNP製剤化mRNAを、in vitro又はin vivo実験において使用するまで-80℃で保存した。 1.4. Preparation of LNP formulated mRNA composition:
LNPs were prepared using cationic lipids, structured lipids, PEG-lipids, and cholesterol. The lipid solution (in ethanol) was mixed with the RNA solution (aqueous buffer) using a microfluidic mixing device. The resulting LNPs were rebuffered in carbohydrate buffer via dialysis and concentrated to target concentrations using ultracentrifuge tubes. LNP formulated mRNA was stored at -80°C until used in in vitro or in vivo experiments.

脂質ナノ粒子を、完全な開示が参照により本明細書に取り込まれるPCT公開であるWO2015/199952、WO2017/004143及びWO2017/075531に記載される一般的な手法に従い調製し、試験した。脂質ナノ粒子(LNP)製剤化mRNAを、イオン化可能なアミノ脂質(カチオン性脂質)、リン脂質、コレステロール及びペグ化脂質を使用して調製した。LNPを以下の通り調製した。式III-3(ALC-0315)によるカチオン性脂質、DSPC、コレステロール及び式IVa(ALC-0159)によるPEG-脂質を、約47.5:10:40.8:1.7のモル比でエタノール中に溶解した(表5を参照)。化合物III-3を含む脂質ナノ粒子(LNP)を、mRNAの比(配列、表4を参照)で総脂質0.03～0.04w/wに調製した。簡単に言うと、mRNAを、10～50mMクエン酸緩衝液、pH4中0.05～0.2mg/mLに希釈した。シリンジポンプを使用して、15ml/分より速い総流速で、約1:5～1:3(vol/vol)の比でエタノール性脂質溶液をmRNA水溶液と混合した。次いで、エタノールを除去し、外部緩衝液を透析によってPBSで置き換えた。最後に、脂質ナノ粒子を0.2μm孔の無菌フィルターを通して濾過した。脂質ナノ粒子の粒子径は、Malvern Zetasizer Nano(Malvern、英国)を使用した準弾性光散乱によって決定して60～90nmであった。 Lipid nanoparticles were prepared and tested according to the general procedure described in PCT publications WO2015/199952, WO2017/004143 and WO2017/075531, the complete disclosure of which is incorporated herein by reference. Lipid nanoparticle (LNP) formulated mRNA was prepared using ionizable amino lipids (cationic lipids), phospholipids, cholesterol and pegylated lipids. LNPs were prepared as follows. Cationic lipid according to formula III-3 (ALC-0315), DSPC, cholesterol and PEG-lipid according to formula IVa (ALC-0159) were dissolved in ethanol in a molar ratio of approximately 47.5:10:40.8:1.7 (Table 5). Lipid nanoparticles (LNPs) containing compound III-3 were prepared with a ratio of mRNA (sequence, see Table 4) of total lipids of 0.03 to 0.04 w/w. Briefly, mRNA was diluted to 0.05-0.2 mg/mL in 10-50 mM citrate buffer, pH 4. The ethanolic lipid solution was mixed with the aqueous mRNA solution at a ratio of approximately 1:5 to 1:3 (vol/vol) using a syringe pump at a total flow rate of greater than 15 ml/min. The ethanol was then removed and the external buffer was replaced with PBS by dialysis. Finally, the lipid nanoparticles were filtered through a sterile filter with 0.2 μm pores. The particle size of the lipid nanoparticles was 60-90 nm as determined by quasi-elastic light scattering using a Malvern Zetasizer Nano (Malvern, UK).

Figure 2024502210000044
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1.5.抗原組み合わせを含む組み合わせmRNAワクチンの調製(二価又は多価のワクチン組成物):
組み合わせmRNAワクチンを、別々又は共製剤化方法のいずれかでLNPを用いて製剤化した。別々に混合又は製剤化したmRNAワクチンについては、それぞれのmRNA成分を調製し、別々に、実施例1.4に記載した通りLNP製剤化し、続いて、異なるLNP製剤化成分を混同した。共製剤化したmRNAワクチンについては、異なるmRNA成分を一緒にまず混合し、続いて実施例1.4に記載した通り、LNP中に共製剤化する。 1.5. Preparation of combinatorial mRNA vaccines containing antigen combinations (bivalent or multivalent vaccine compositions):
Combination mRNA vaccines were formulated with LNPs either separately or in a co-formulation method. For separately mixed or formulated mRNA vaccines, each mRNA component was prepared and separately formulated into LNPs as described in Example 1.4, and the different LNP formulation components were subsequently mixed. For co-formulated mRNA vaccines, the different mRNA components are first mixed together and then co-formulated into LNPs as described in Example 1.4.

[実施例2]
ラットにおける多価の力価研究:ウィスターラットにおけるi.m.投与の際の二価のCV2CoV(R9709)及びCV2CoV.351(R10384)ワクチンの免疫原性
本研究では、LNP製剤化二価mRNAワクチンCV2CoV/CV2CoV.351(R9709/R10384)が誘導した液性免疫原性を、CV2CoV(R9709)又はCV2CoV.351(R10384)と比較して、ウィスターラットにおいて評価した。 [Example 2]
Multivalent titer studies in rats: Immunogenicity of bivalent CV2CoV (R9709) and CV2CoV.351 (R10384) vaccines upon im administration in Wistar rats.
In this study, we compared the humoral immunogenicity induced by LNP-formulated bivalent mRNA vaccine CV2CoV/CV2CoV.351(R9709/R10384) with CV2CoV(R9709) or CV2CoV.351(R10384) in Wistar rats. evaluated.

LNP製剤化mRNAワクチンの調製:
SARS-CoV-2 mRNA構築物(全長の融合前の安定化された先祖SARS-CoV-2 SをコードするCV2CoV-mRNAベースのSARS-CoV-2ワクチン及び全長の融合前の安定化されたSARS-CoV-2 B.1.351 SをコードするCV2CoV.351-mRNAベースのSARS-CoV-2ワクチン)を、実施例1.2(RNA in vitro転写)において記載した通り調製した。HPLC精製したmRNAを、in vivoワクチン接種実験において使用する前に実施例1.4及び実施例1.5に従いLNPを用いて製剤化した(二価のmRNAワクチン(群F、G、H)については別々に混合したか、又は製剤化した「混合した2つのLNP」又は共製剤化した「混合した1つのLNP」)。 Preparation of LNP formulated mRNA vaccine:
SARS-CoV-2 mRNA constructs (CV2CoV-2 mRNA-based SARS-CoV-2 vaccines encoding full-length prefusion stabilized progenitor SARS-CoV-2 S and full-length prefusion stabilized SARS- CV2CoV.351-mRNA-based SARS-CoV-2 vaccine encoding CoV-2 B.1.351 S) was prepared as described in Example 1.2 (RNA in vitro transcription). HPLC-purified mRNA was formulated using LNPs according to Example 1.4 and Example 1.5 before use in in vivo vaccination experiments (mixed separately for bivalent mRNA vaccines (groups F, G, H)). ``Two LNPs mixed together'' or ``One LNP mixed together'' co-formulated).

免疫:
ラットに、表6に示すmRNAワクチン組成物及び用量を用いて筋肉内(i.m.)注射した。緩衝液をワクチン接種した動物を陰性対照(群A)とした。すべての動物に0日目及び21日目にワクチン接種した。血液試料を、液性免疫応答の決定のため14日目、21日目及び42日目に採取した。 Immunity:
Rats were injected intramuscularly (im) with the mRNA vaccine compositions and doses shown in Table 6. Buffer vaccinated animals served as negative controls (group A). All animals were vaccinated on days 0 and 21. Blood samples were taken on days 14, 21, and 42 for determination of humoral immune responses.

Figure 2024502210000045
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ELISAを使用したIgG1及びIgG2スパイク結合抗体力価の決定:
IgG1及びIgG2aについてのエンドポイント力価として示される抗SARS-CoV-2スパイクRBDタンパク質特異的結合抗体を、14日目及び21日目に単離した血清において決定した。組換えSARS-CoV-2スパイクRBDタンパク質又は組換えSARS-CoV-2 B.1.351スパイクタンパク質RBD(K417N、E484K、N501Y)を、コーティングのため使用した。コーティングしたプレートを、それぞれの血清希釈液を使用してインキュベートし、特異的な抗体のRBDへの結合を、ビオチン化抗体を用いて検出した。 Determination of IgG1 and IgG2 spike-binding antibody titers using ELISA:
Anti-SARS-CoV-2 spike RBD protein specific binding antibodies, expressed as endpoint titers for IgG1 and IgG2a, were determined in serum isolated on days 14 and 21. Recombinant SARS-CoV-2 spike RBD protein or recombinant SARS-CoV-2 B.1.351 spike protein RBD (K417N, E484K, N501Y) was used for coating. Coated plates were incubated with respective serum dilutions and specific antibody binding to the RBD was detected using biotinylated antibodies.

VNTの決定
ラット血清のVNTの分析のため、1:10の希釈で開始し、続いて1:2連続希釈した二重で試験した熱不活化血清(56℃、30分間)の連続希釈液を、SARS-CoV-2の100 TCID50とインキュベートした。このために、異なるウイルスを利用した:
・先祖SARS-CoV-2:EVAgから誘導した株2019-nCov/Italy-INMI
・B.1.351バリアントSARS-CoV-2:株hCoV-19/Netherlands/NoordHolland_10159/2021、南アフリカバリアント、次の株のクレード20H、EVAgが供給した系統B.1.351
・B.1.1.7バリアントSARS-CoV-2:先祖ウイルスと比較して以下の変異:N501Y、A570D、T572I、D614G、P681H、T716I、S735L、S982A、D1118Hを含有する、VisMederi Researchが単離した株14484ヒトスワブ。注目すべきことに、これらの変異は、バリアント4のコンセンサス配列と異なり、すなわち、欠失dH69/V70及びdY144を欠き、T572I及びS735Lはさらなる変異を表す。
・P.1バリアントSARS-CoV-2株:野生型SARS-CoV-2(EVAgから誘導した株2019-nCov/Italy-INMI)又はB.1.351バリアントSARS-CoV-2(株hCoV-19/Ntherlands/NoordHolland_10159/2021、南アフリカバリアント、次の株のクレード20H、EVAgが供給した系統B.1.351)の以下の変異:L18F、T20N、P26S、D138Y、R190S、K417T、E484K、N501Y、D614G、H655Y、T1027I及びV1176Fを含有する、シエナ大学が単離したPG_253。 Determination of VNT For analysis of VNT in rat serum, serial dilutions of heat-inactivated serum (56°C, 30 min) were tested in duplicate, starting with a 1:10 dilution, followed by 1:2 serial dilutions. , incubated with 100 TCID50 of SARS-CoV-2. For this we used different viruses:
・Strain 2019-nCov/Italy-INMI derived from ancestor SARS-CoV-2:EVAg
B.1.351 variant SARS-CoV-2: strain hCoV-19/Netherlands/NoordHolland_10159/2021, South African variant, clade 20H of the following strains, strain B.1.351 sourced by EVAg
B.1.1.7 variant SARS-CoV-2: isolated by VisMederi Research, containing the following mutations compared to the ancestral virus: N501Y, A570D, T572I, D614G, P681H, T716I, S735L, S982A, D1118H Strain 14484 human swab. Of note, these mutations differ from the consensus sequence of variant 4, namely lacking deletions dH69/V70 and dY144, with T572I and S735L representing additional mutations.
・P.1 variant SARS-CoV-2 strain: wild type SARS-CoV-2 (strain 2019-nCov/Italy-INMI derived from EVAg) or B.1.351 variant SARS-CoV-2 (strain hCoV-19/Ntherlands) /NoordHolland_10159/2021, South African variant, clade 20H of the following strains, EVAg-sourced strain B.1.351) with the following mutations: L18F, T20N, P26S, D138Y, R190S, K417T, E484K, N501Y, D614G, H655Y, T1027I and PG_253 isolated by the University of Siena, containing V1176F.

ウイルスを、1時間、37℃でインキュベートした。すべてのプレートは、細胞及び培地のみを含有する、細胞対照のための専用の列(8ウェル)、並びに細胞及びウイルスのみを含有する、ウイルス対照のための専用の列を含有していた。コンフルエントな層のVero E6細胞(ATCC、カタログ1586)を含む100μlのウイルス-血清混合物のインキュベーション、続いて37℃での3日間(先祖SARS-CoV-2)又は4日間(SARS-CoV-2 B.1.351、B.1.1.7及びP.1)のインキュベーション、及びCPE形成のための顕微鏡スコアリングの際、感染性ウイルスを定量した。正しい範囲のTCID50の機能するウイルス溶液を検証するために、それぞれの実行についてバックタイトレーションを行った。Reed及びMuenchが記載した方法に従い、VN力価を計算した。中和を観察しなかった場合(MNt<10)、任意の値である5を報告した。分析を、VisMederi srl(Siena、イタリア)で行った。 Virus was incubated for 1 hour at 37°C. All plates contained a dedicated column (8 wells) for the cell control, containing only cells and medium, and a column for the virus control, containing only cells and virus. Incubation of 100 μl of virus-serum mixture with a confluent layer of Vero E6 cells (ATCC, catalog 1586) followed by 3 days (ancestral SARS-CoV-2) or 4 days (SARS-CoV-2 B) at 37°C. Infectious virus was quantified during incubation of .1.351, B.1.1.7 and P.1) and microscopic scoring for CPE formation. Backtitration was performed for each run to verify a working virus solution with the correct range of TCID50. VN titers were calculated according to the method described by Reed and Muench. If no neutralization was observed (MNt<10), an arbitrary value of 5 was reported. Analyzes were performed on VisMederi srl (Siena, Italy).

結果:
図1に示す通り、14日目(図1A～D)及び21日目(図1E～H)で先祖SARS-CoV-2の受容体結合ドメイン(RBD)及びB.351バリアントのRBDへの有意なIgG1及びIgG2a結合抗体応答を、CV2CoV及びCV2CoV.351をワクチン接種した群について検出した。14日目に、図1Aに示す通り、すべての群(先祖受容体結合ドメイン(RBD)タンパク質コーティング)について同等のIgG1応答及びすべての群について同等のIgG2a力価(図1B)を検出した(先祖SARS-CoV-2受容体結合ドメイン(RBD)タンパク質コーティング)。14日目に、図1Cに示す通り、すべてのワクチン接種設計物(RBD B.1.351バリアントK417N、E484K、N501Yタンパク質コーティング)について同等のIgG1応答及びすべてのワクチン接種設計物についての同等のIgG2a力価(図1D)を検出した(RBD B.1.351バリアントK417N、E484K、N501Yタンパク質コーティング)。21日目に、図1Eに示す通り、すべてのワクチン接種設計物(先祖SARS-CoV-2受容体結合ドメイン(RBD)タンパク質コーティング)について同等のIgG1応答及びすべてのワクチン接種設計物について同等のIgG2a力価(図1F)を検出した(先祖SARS-CoV-2受容体結合ドメイン(RBD)タンパク質コーティング)。21日目に、図1Gに示す通り、すべてのワクチン接種設計物(RBD B.1.351バリアントK417N、E484K、N501Yタンパク質コーティング)について同等のIgG1応答及びすべてのワクチン接種設計物について同等のIgG2a力価(図1H)を示した(RBD B.1.351バリアントK417N、E484K、N501Yタンパク質コーティング)。全体的に、単独で(群B～C)、逐次的な組み合わせで(群D～E)、並びに同じ脚又は異なる脚に注射する1つ及び2つのLNP中の両方のワクチンバリアント(二価のワクチンCV2CoV/CV2CoV.351)の同時送達として(群F～H)投与されたCV2CoV及びCV2CoV.351は、先祖SARS-CoV-2 RBD及びB.1.351バリアントのRBDに対する同等のレベルの結合抗体を誘導した。 result:
As shown in Figure 1, the receptor binding domain (RBD) of the ancestral SARS-CoV-2 and the B.351 variant significantly increased on the RBD at day 14 (Figure 1A-D) and day 21 (Figure 1E-H). IgG1 and IgG2a binding antibody responses were detected in the CV2CoV and CV2CoV.351 vaccinated groups. At day 14, we detected comparable IgG1 responses for all groups (ancestral receptor binding domain (RBD) protein coating) and comparable IgG2a titers for all groups (Figure 1B), as shown in Figure 1A (ancestral receptor binding domain (RBD) protein coating). SARS-CoV-2 receptor binding domain (RBD) protein coating). On day 14, comparable IgG1 responses for all vaccination designs (RBD B.1.351 variant K417N, E484K, N501Y protein coating) and comparable IgG2a titers for all vaccination designs, as shown in Figure 1C. (Figure 1D) was detected (RBD B.1.351 variants K417N, E484K, N501Y protein coating). At day 21, equivalent IgG1 responses for all vaccination designs (ancestral SARS-CoV-2 receptor binding domain (RBD) protein coating) and equivalent IgG2a responses for all vaccination designs, as shown in Figure 1E. titer (Figure 1F) was detected (ancestral SARS-CoV-2 receptor binding domain (RBD) protein coating). On day 21, comparable IgG1 responses for all vaccination designs (RBD B.1.351 variants K417N, E484K, N501Y protein coatings) and comparable IgG2a titers for all vaccination designs ( Figure 1H) was shown (RBD B.1.351 variants K417N, E484K, N501Y protein coating). Overall, both vaccine variants (bivalent CV2CoV and CV2CoV.351 administered as co-delivery of vaccine CV2CoV/CV2CoV.351 (Groups F-H) induced comparable levels of binding antibodies against the ancestral SARS-CoV-2 RBD and the RBD of the B.1.351 variant. did.

図2A(14日目)及び2B(21日目)に示す通り、CV2CoV及びCV2CoV.351を用いたワクチン接種は、ラットにおける先祖SARS-CoV-2に対する有意なレベルのVNTを誘導した(群B～H)。全体的に、ワクチン単独又は組み合わせ(群B～H)のいずれかでのワクチン接種は、高いVNTレベルを生じた。特に、群BでのCV2CoVを用いた2回のワクチン接種、群DにおけるCV2CoV及びCV2CoV.351を用いた逐次的なワクチン接種並びに異なる脚への両方のワクチンバリアント(二価のワクチンCV2CoV/CV2CoV.351)の同時送達(群H)は、これらの早い時点での増加したVNTを示した。42日目に、増加したレベルのVNTを、すべての群(群B～H)について検出した(図2C)。二価のワクチン(群F～H)は、より低い用量のそれぞれのワクチンを使用したにも関わらず、42日目に一価ワクチン(群B～E)と同等である応答を誘導した。 As shown in Figures 2A (day 14) and 2B (day 21), vaccination with CV2CoV and CV2CoV.351 induced significant levels of VNT against the progenitor SARS-CoV-2 in rats (group B ～H). Overall, vaccination with either vaccines alone or in combination (Groups B-H) resulted in high VNT levels. In particular, two vaccinations with CV2CoV in group B, sequential vaccination with CV2CoV and CV2CoV.351 in group D and both vaccine variants in different legs (bivalent vaccine CV2CoV/CV2CoV. Co-delivery of 351) (group H) showed increased VNT at these early time points. On day 42, increased levels of VNT were detected for all groups (groups B-H) (Figure 2C). The bivalent vaccines (Groups F-H) induced responses that were comparable to the monovalent vaccines (Groups B-E) at day 42, even though a lower dose of each vaccine was used.

図3A(14日目)及び3B(21日目)に示す通り、CV2CoV及びCV2CoV.351を用いたワクチン接種は、B.1.351バリアントSARS-CoV-2に対して有意なレベルのVNTを誘導した(群B～H)。全体として、ワクチン単独又は組み合わせ(群B～H)のいずれかを用いたワクチン接種は、十分なVNTレベルを生じた。群CにおけるCV2CoV.351を用いた2回のワクチン接種、群EにおけるCV2CoV.351及びCV2CoVを用いた逐次的なワクチン接種並びに異なる脚への両方のワクチンバリアント(二価のワクチンCV2CoV/CV2CoV.351)の同時送達(群H)は、早い時点での増加したVNTを示した。42日目に、増加したレベルのVNTを、すべての群(群B～H)について示した(図3C)。二価のワクチン(群F～H)は、より低い用量のそれぞれのワクチンを使用したにも関わらず、42日目に一価ワクチン(群B～E)と同等である応答を誘導した。 As shown in Figures 3A (day 14) and 3B (day 21), vaccination with CV2CoV and CV2CoV.351 induced significant levels of VNT against B.1.351 variant SARS-CoV-2. (Groups B-H). Overall, vaccination with either vaccines alone or in combination (groups B-H) produced sufficient VNT levels. Two vaccinations with CV2CoV.351 in group C, sequential vaccination with CV2CoV.351 and CV2CoV in group E and both vaccine variants in different legs (bivalent vaccine CV2CoV/CV2CoV.351 ) co-delivery (group H) showed increased VNT at earlier time points. At day 42, increased levels of VNT were exhibited for all groups (Groups B-H) (Figure 3C). The bivalent vaccines (Groups F-H) induced responses that were comparable to the monovalent vaccines (Groups B-E) at day 42, even though a lower dose of each vaccine was used.

図4に示す通り、B.1.1.7バリアントSARS-CoV-2(図4A)又はB.1.1.28 P.1(図4B)を使用したすべての群(群B～H)についてCPEベースのアッセイにおいて評価したVNTの有意な誘導を、42日目に検出した。両方のワクチンバリアントの同じ脚(群F及びG)又は異なる脚(群H)への同時送達は、42日目に両方のバリアントに対する応答を生じることができる。表7に、42日目の先祖、B.1.1.7、B.1.351及びP1 SARS-CoV-2バリアントに対するVNT中央値をまとめる。 As shown in Figure 4, CPE-based Significant induction of VNT, assessed in the assay, was detected on day 42. Co-delivery of both vaccine variants to the same leg (groups F and G) or different legs (group H) can produce a response against both variants at day 42. Table 7 summarizes the median VNT for the ancestral, B.1.1.7, B.1.351 and P1 SARS-CoV-2 variants at day 42.

Figure 2024502210000046
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全体として、二価のワクチンは、強固なレベルのRBD結合抗体並びに両方の先祖及びB.1.351 SARS-CoV-2並びにバリアントB.1.1.7及びB.1.1.28 P.1を中和することができるウイルス中和抗体の両方を誘発した。 Overall, the bivalent vaccine neutralizes robust levels of RBD-binding antibodies as well as both progenitor and B.1.351 SARS-CoV-2 and variants B.1.1.7 and B.1.1.28 P.1. Both elicited virus-neutralizing antibodies.

[実施例3]
用量応答研究:ウィスターラットにおけるi.m.投与の際のCV2CoVと比較したCV2CoV.351の免疫原性
この研究の目的は、用量応答研究におけるラットでのCV2CoV.351ワクチンの免疫原性及び早期自然刺激を評価することであった。 [Example 3]
Dose-response study: Immunogenicity of CV2CoV.351 compared to CV2CoV upon im administration in Wistar rats
The purpose of this study was to evaluate the immunogenicity and early spontaneous stimulation of the CV2CoV.351 vaccine in rats in a dose-response study.

LNP製剤化mRNAワクチンの調製:
実施例1.2(RNA in vitro転写)に記載した通り、SARS-CoV-2 mRNA構築物(全長の融合前の安定化された先祖SARS-CoV-2 SをコードするCV2CoV-LNP製剤化mRNAベースのSARS-CoV-2ワクチン及び全長の融合前の安定化されたSARS-CoV-2 B.1.351SをコードするCV2CoV.351-LNP製剤化mRNAベースのSARS-CoV-2ワクチン)を調製した。in vivoワクチン接種実験において使用する前に、実施例1.4に従い、HPLC精製したmRNAをLNPを用いて製剤化した。 Preparation of LNP formulated mRNA vaccine:
As described in Example 1.2 (RNA in vitro transcription), the SARS-CoV-2 mRNA construct (CV2CoV-LNP-formulated mRNA-based SARS encoding full-length prefusion stabilized progenitor SARS-CoV-2 S A -CoV-2 vaccine and a CV2CoV.351-LNP-formulated mRNA-based SARS-CoV-2 vaccine encoding full-length prefusion stabilized SARS-CoV-2 B.1.351S were prepared. Prior to use in in vivo vaccination experiments, HPLC-purified mRNA was formulated using LNPs according to Example 1.4.

免疫:
ラットに、表8に示すmRNAワクチン組成物及び用量を用いて、筋肉内(i.m.)注射した。緩衝液をワクチン接種した動物を陰性対照(群A)とした。すべての動物に0日目及び21日目にワクチン接種した。血液試料を、抗体力価の決定のため14日目、21日目及び42日目に採取した。 Immunity:
Rats were injected intramuscularly (im) with the mRNA vaccine compositions and doses shown in Table 8. Buffer vaccinated animals served as negative controls (group A). All animals were vaccinated on days 0 and 21. Blood samples were taken on days 14, 21 and 42 for determination of antibody titers.

Figure 2024502210000047
Figure 2024502210000047

実施例2に記載した通り、ELISAを使用したIgG1及びIgG2スパイク結合抗体力価の決定並びにVNTの決定を行った。 Determination of IgG1 and IgG2 spike-bound antibody titers and determination of VNT using ELISA were performed as described in Example 2.

結果:
先祖とB.1.351 SARS-CoV-2の両方に対する抗原特異的結合抗体力価(ELISAを介して分析した)及びVNTは、両方のワクチンでワクチン接種した動物において用量依存的に検出可能であった。結合抗体並びに中和抗体は、経時的に用量の増加に伴い増加した。 result:
Antigen-specific binding antibody titers (analyzed via ELISA) and VNT against both ancestral and B.1.351 SARS-CoV-2 were detectable in animals vaccinated with both vaccines in a dose-dependent manner . Bound as well as neutralizing antibodies increased with increasing dose over time.

図5A(IgG1)及び5B(IgG2a)(先祖SARS-CoV-2 RBDコーティング)及び5C(IgG1)及び5D(IgG2a)(B.1.351バリアントRBD K417N、E484K、N501Yコーティング)に示す通り、CV2CoV(群B～E)及びCV2CoV.351(群F～I)を用いたワクチン接種は、14日目に、ラットにおける用量0.5μg、2μg、8μg及び40μgを使用して、スパイク結合抗体力価を誘導した。図5E(IgG1)、図5F(IgG2a)(先祖SARS-CoV-2 RBDコーティング)及び図5G(IgG1)及び5H(IgG2a)(B.1.351バリアントRBD K417N、E484K、N501Yコーティング)に示す通り、CV2CoV(群B～E)及びCV2CoV.351(群F～I)を用いたワクチン接種は、21日目に、用量0.5μg、2μg及び8μg及び40μgを使用して、ラットにおいてスパイク結合抗体力価を誘導した。 CV2CoV (group Vaccination with B-E) and CV2CoV.351 (groups F-I) induced spike-binding antibody titers on day 14 using doses 0.5 μg, 2 μg, 8 μg and 40 μg in rats. . CV2CoV as shown in Figure 5E (IgG1), Figure 5F (IgG2a) (ancestral SARS-CoV-2 RBD coating) and Figure 5G (IgG1) and 5H (IgG2a) (B.1.351 variant RBD K417N, E484K, N501Y coating). Vaccination with (Groups B-E) and CV2CoV.351 (Groups F-I) increased spike-binding antibody titers in rats on day 21 using doses 0.5μg, 2μg and 8μg and 40μg. guided.

図6Aに示す通り、B.1.351バリアントワクチンCV2CoV.351(群B～E)は、すべての用量群において14日目に先祖SARS-CoV-2(異種応答)に対する用量依存性VNTを誘導した。CV2CoV(同種応答)を用いたワクチン接種の際の応答と比較して、CV2CoV.351ワクチン接種群におけるVNTは、14日目に、約2分の1に減少する。図6Bは、CV2CoV.351(群B～E)が、すべての用量群において14日目にB.1.351 SARS-CoV-2(同種応答)に対して用量依存性VNTを誘導することを示す。CV2CoV.351ワクチン接種は、先祖ウイルスに対する異種VNTと比較して、14日目に45倍増加した同種ウイルスに対する高レベルのVNTを誘発した(すべての用量群の平均差)。CV2CoV(群F～I)を用いたワクチン接種と比較して、CV2CoV.351が誘導したVNTは、14日目に、41倍増加した(すべての用量群の平均差)。 As shown in Figure 6A, the B.1.351 variant vaccine CV2CoV.351 (groups B-E) induced dose-dependent VNT against ancestral SARS-CoV-2 (heterologous response) at day 14 in all dose groups. Compared to the response upon vaccination with CV2CoV (allogeneic response), VNT in the CV2CoV.351 vaccinated group is reduced by approximately 2-fold at day 14. Figure 6B shows that CV2CoV.351 (groups BE) induces dose-dependent VNT against B.1.351 SARS-CoV-2 (allologous response) at day 14 in all dose groups. CV2CoV.351 vaccination induced high levels of VNT against the homologous virus that increased by 45-fold at day 14 compared to the heterologous VNT against the ancestral virus (mean difference across all dose groups). Compared to vaccination with CV2CoV (groups F-I), CV2CoV.351-induced VNT was increased 41-fold (mean difference across all dose groups) at day 14.

図6Cに示す通り、B.1.351バリアントワクチンCV2CoV.351(群B～E)は、すべての用量群において21日目に先祖SARS-CoV-2(異種応答)に対して用量依存性VNTを誘導した。CV2CoV(同種応答)を用いたワクチン接種の際の応答と比較して、CV2CoV.351ワクチン接種群におけるVNTは、21日目に約2分の1に減少する。図6Dに示す通り、CV2CoV.351は、すべての用量群において21日目にB.1.351 SARS-CoV-2(同種応答)に対してわずかに用量依存性のVNTを誘導する。CV2CoV.351ワクチン接種は、先祖ウイルスに対する異種VNTと比較して、21日目に35倍増加した同種ウイルスに対する高レベルのVNTを誘発した(すべての用量群の平均差)。CV2CoVを用いたワクチン接種と比較して、CV2CoV.351により誘導されたVNTは、21日目に42倍増加した(すべての用量群の平均差)。図6Eに示す通り、B.1.351バリアントワクチンCV2CoV.351は、すべての用量群において41日目に、先祖SARS-CoV-2(異種応答)に対するVNTを誘導した。0.5μg用量群(群F)を除き、わずかに高い応答を、CV2CoV(同種応答)を用いたワクチン接種の際に示した。図6Fに示す通り、CV2CoV.351は、すべての用量群において42日目にB.1.351 SARS-CoV-2(同種応答)に対するVNTを誘導した。CV2CoVを用いたワクチン接種と比較して、CV2CoV.351により誘導されたVNTは、42日目に増加した。図6Gに示す通り、B.1.351バリアントワクチンCV2CoV.351は、すべての用量群において42日目にB.1.1.7バリアントSARS-CoV-2(異種応答)に対するVNTを誘導した。同様の応答が、CV2CoV(異種応答)を用いたワクチン接種の際に示された。図6Hに示す通り、CV2CoV.351は、すべての用量群において42日目にB.1.1.28 P.1 SARS-CoV-2(同種応答)に対するVNTを誘導した。より低い応答を、CV2CoV(異種応答)を用いたワクチン接種で検出した。 As shown in Figure 6C, B.1.351 variant vaccine CV2CoV.351 (groups B-E) induced dose-dependent VNT against progenitor SARS-CoV-2 (heterologous response) at day 21 in all dose groups. did. Compared to the response upon vaccination with CV2CoV (allogeneic response), VNT in the CV2CoV.351 vaccinated group decreases by approximately 2-fold at day 21. As shown in Figure 6D, CV2CoV.351 induces a slight dose-dependent VNT against B.1.351 SARS-CoV-2 (allologous response) at day 21 in all dose groups. CV2CoV.351 vaccination induced high levels of VNT against the homologous virus that increased by 35-fold at day 21 compared to the heterologous VNT against the ancestral virus (mean difference across all dose groups). Compared to vaccination with CV2CoV, VNT induced by CV2CoV.351 was increased 42-fold at day 21 (mean difference across all dose groups). As shown in Figure 6E, the B.1.351 variant vaccine CV2CoV.351 induced VNT against ancestral SARS-CoV-2 (heterologous response) at day 41 in all dose groups. Except for the 0.5 μg dose group (group F), a slightly higher response was shown upon vaccination with CV2CoV (allogeneic response). As shown in Figure 6F, CV2CoV.351 induced VNT against B.1.351 SARS-CoV-2 (allogeneic response) at day 42 in all dose groups. Compared to vaccination with CV2CoV, VNT induced by CV2CoV.351 increased at day 42. As shown in Figure 6G, the B.1.351 variant vaccine CV2CoV.351 induced VNT against B.1.1.7 variant SARS-CoV-2 (heterogeneous response) at day 42 in all dose groups. A similar response was shown upon vaccination with CV2CoV (heterologous response). As shown in Figure 6H, CV2CoV.351 induced VNT against B.1.1.28 P.1 SARS-CoV-2 (allogeneic response) at day 42 in all dose groups. A lower response was detected with vaccination with CV2CoV (heterologous response).

全体として、SARS-CoV-2 B.1.351バリアントmRNAワクチン候補CV2CoV.351は、結合抗体力価及びウイルス中和抗体力価によって決定して、ラットにおいて強固な液性免疫応答を誘導した。B.1.351に対するウイルス中和力価は、CV2CoVを用いたワクチン接種と比較して、CV2CoV.351を用いたワクチン接種で実質的に増加した。 Overall, SARS-CoV-2 B.1.351 variant mRNA vaccine candidate CV2CoV.351 induced robust humoral immune responses in rats as determined by binding and virus-neutralizing antibody titers. Viral neutralizing titers against B.1.351 were substantially increased with vaccination with CV2CoV.351 compared to vaccination with CV2CoV.

[実施例4]
拡大した多価の力価のワクチン接種研究:ウィスターラットにおけるi.m.投与の際の二価のCV2CoV及びCV2CoV.351ワクチンの免疫原性(予想)
本研究の目的は、ラットにおける第三のワクチン接種における二価のCV2CoV/CV2CoV.351ワクチンの免疫原性及び早期自然刺激を評価することである。 [Example 4]
Expanded multi-titer vaccination study: Immunogenicity (predicted) of bivalent CV2CoV and CV2CoV.351 vaccines upon im administration in Wistar rats.
The aim of this study is to evaluate the immunogenicity and early spontaneous stimulation of bivalent CV2CoV/CV2CoV.351 vaccine at the third vaccination in rats.

LNP製剤化mRNAワクチンの調製:
実施例1.2(RNA in vitro転写)に記載した通り、SARS-CoV-2 mRNA構築物(全長の融合前の安定化された先祖SARS-CoV-2 SをコードするCV2CoV-LNP製剤化mRNAベースのSARS-CoV-2ワクチン及び全長の融合前の安定化されたSARS-CoV-2 B.1.351 SをコードするCV2CoV.351-LNP製剤化mRNAベースのSARS-CoV-2ワクチン)を調製する。in vivoワクチン接種実験における使用の前に、実施例1.4及び実施例1.5(二価のmRNAワクチンについて、別々に混合又は製剤化)に従い、HPLC精製したmRNAをLNPを用いて製剤化する。 Preparation of LNP formulated mRNA vaccine:
As described in Example 1.2 (RNA in vitro transcription), the SARS-CoV-2 mRNA construct (CV2CoV-LNP-formulated mRNA-based SARS encoding full-length prefusion stabilized progenitor SARS-CoV-2 S -Prepare a CoV-2 vaccine and a CV2CoV.351-LNP formulation encoding a full-length prefusion stabilized SARS-CoV-2 B.1.351 S (mRNA-based SARS-CoV-2 vaccine). Prior to use in in vivo vaccination experiments, HPLC-purified mRNA is formulated with LNPs according to Example 1.4 and Example 1.5 (for bivalent mRNA vaccines, mixed or formulated separately).

免疫:
ラットに、表9に示すmRNAワクチン組成物及び用量を用いて、筋肉内(i.m.)注射する。緩衝液をワクチン接種した動物を陰性対照(群A)とする。すべての動物を、0週目、3週目(21日目)にワクチン接種し、群Bについては、15週目(105日目)にさらにワクチン接種する。血液試料を、抗体力価の決定のため0日目、14日目、21日目、42日目、77日目、105日目、119日目及び133日目に採取する。 Immunity:
Rats are injected intramuscularly (im) with the mRNA vaccine compositions and doses shown in Table 9. Animals vaccinated with buffer serve as the negative control (group A). All animals are vaccinated at week 0, week 3 (day 21) and for group B, further vaccinated at week 15 (day 105). Blood samples are collected on days 0, 14, 21, 42, 77, 105, 119 and 133 for determination of antibody titers.

Figure 2024502210000048
Figure 2024502210000048

実施例2に記載した通り、ELISAを使用したIgG1及びIgG2スパイク結合抗体力価の決定並びにVNTの決定を行う。 Determination of IgG1 and IgG2 spike-bound antibody titers and determination of VNT using ELISA are performed as described in Example 2.

[実施例5]
ワクチンの同時送達:先祖SARS-CoV2抗原(CV2CoV)及びバリアントB.1.351のSARS-CoV2抗原(CV2CoV.351)をコードするmRNAを用いたラットのワクチン接種
本研究内において、先祖とB.1.351 SARS-CoV-2の両方に対する抗体応答を測定した。 [Example 5]
Co-delivery of vaccines: Vaccination of rats with mRNA encoding ancestral SARS-CoV2 antigen (CV2CoV) and variant B.1.351 SARS-CoV2 antigen (CV2CoV.351)
Within this study, antibody responses to both ancestral and B.1.351 SARS-CoV-2 were measured.

LNP製剤化mRNAワクチンの調製:
実施例1.2(RNA in vitro転写)に記載した通り、SARS-CoV-2 mRNA構築物(全長の融合前の安定化された先祖SARS-CoV-2 SをコードするCV2CoV-mRNAベースのSARS-CoV-2ワクチン及び全長の融合前の安定化されたSARS-CoV-2 B.1.351 SをコードするCV2CoV.351-mRNAベースのSARS-CoV-2ワクチン)を調製した。in vivoでの使用前に、実施例1.4及び実施例1.5(二価のmRNAワクチンについて別々に混合又は製剤化)に従い、HPLC精製したmRNAをLNPを用いて製剤化した。 Preparation of LNP formulated mRNA vaccine:
As described in Example 1.2 (RNA in vitro transcription), the SARS-CoV-2 mRNA construct (CV2CoV-mRNA-based SARS-CoV-encoding full-length prefusion stabilized progenitor SARS-CoV-2 S) A CV2CoV.351-mRNA-based SARS-CoV-2 vaccine encoding a full-length prefusion stabilized SARS-CoV-2 B.1.351 S vaccine was prepared. Prior to in vivo use, HPLC-purified mRNA was formulated with LNPs according to Example 1.4 and Example 1.5 (mixed or formulated separately for bivalent mRNA vaccines).

免疫:
ラットに、表10に示すmRNAワクチン組成物及び用量を用いて、筋肉内(i.m.)注射した。陰性対照として、1つの群のラットを、緩衝液を用いてワクチン接種した(群A)。すべての動物に、0週目及び3週目(21日目)にワクチン接種した。血液試料を、抗体力価の決定のため0日目、14日目、21日目、及び42日目に採取した。 Immunity:
Rats were injected intramuscularly (im) with the mRNA vaccine compositions and doses shown in Table 10. As a negative control, one group of rats was vaccinated with buffer (group A). All animals were vaccinated at week 0 and week 3 (day 21). Blood samples were taken on days 0, 14, 21, and 42 for determination of antibody titers.

Figure 2024502210000049
Figure 2024502210000049

実施例2に記載した通り、ELISAを使用したIgG1及びIgG2aスパイク結合抗体力価の決定並びにVNTの決定を行った。 Determination of IgG1 and IgG2a spike-bound antibody titers and determination of VNT using ELISA were performed as described in Example 2.

結果:
全体として、二価のワクチン組成物CV2CoV+CV2CoV.351は、14日目に、先祖及びB.1.351バリアントRBDに対する同等のレベルのスパイク結合抗体を誘導した(図7A～7D)。有意なレベルのスパイク結合抗体が、注射後14日目に、2μg又は8μgの二価のワクチン組成物CV2CoV+CV2CoV.351をワクチン接種したすべての動物において検出可能であった。用量依存性レベルのIgG1及びIgG2aスパイク結合抗体力価を、0.5μg、2μg又は8μgの二価のワクチン組成物CV2CoV+CV2CoV.351を注射したすべての群において誘導した。IgG1とIgG2a抗体の間の比は、2μgの用量について、IgG1と比較してわずかに低いIgG2a抗体の誘導を示した。図7A及び7Bは、先祖SARS-CoV-2 RBDに対する結合抗体を示し、図7C及び7Dは、B.1.351バリアントRBDに対する結合抗体を示す。強固なVNTが、2及び8μgの群について用量依存性の様式で、先祖SARS-CoV-2に対して(図7E(14日目)、7F(21日目)、及び7I(42日目))、及びB.1.351バリアントSARS-CoV-2に対して(図7G(14日目)、7H(21日目)、及び7J(42日目))経時的に誘導された。図7K及び7Lは、2μg及び8μgの用量群についての、それぞれ、バリアントB.1.1.7及びP.1に対するVNTの用量依存性誘導を示す。 result:
Overall, the bivalent vaccine composition CV2CoV+CV2CoV.351 induced comparable levels of spike-binding antibodies against the ancestral and B.1.351 variant RBDs at day 14 (Figures 7A-7D). Significant levels of spike-binding antibodies were detectable in all animals vaccinated with 2 μg or 8 μg of bivalent vaccine composition CV2CoV+CV2CoV.351 at day 14 post-injection. Dose-dependent levels of IgG1 and IgG2a spike-binding antibody titers were induced in all groups injected with 0.5 μg, 2 μg or 8 μg of the bivalent vaccine composition CV2CoV+CV2CoV.351. The ratio between IgG1 and IgG2a antibodies showed a slightly lower induction of IgG2a antibodies compared to IgG1 for the 2 μg dose. Figures 7A and 7B show binding antibodies to the ancestral SARS-CoV-2 RBD, and Figures 7C and 7D show binding antibodies to the B.1.351 variant RBD. Robust VNT was observed against the ancestral SARS-CoV-2 in a dose-dependent manner for the 2 and 8 μg groups (Figures 7E (day 14), 7F (day 21), and 7I (day 42)). ), and against B.1.351 variant SARS-CoV-2 (Figures 7G (day 14), 7H (day 21), and 7J (day 42)) over time. Figures 7K and 7L show the dose-dependent induction of VNT for variants B.1.1.7 and P.1 for the 2 μg and 8 μg dose groups, respectively.

[実施例6]
ブースト研究:ウィスターラットにおけるi.m.投与の際の二価のCVnCoV及びCVnCoV.351ワクチンを用いたラットのワクチン接種
同種ブーストが異種バリアント(B.1.351)に対する免疫応答の有意な増加を誘発することができるかどうかを決定するよう、本研究を設計した。 [Example 6]
Boost Study: Vaccination of Rats with Bivalent CVnCoV and CVnCoV.351 Vaccines During Im Administration in Wistar Rats
This study was designed to determine whether allogeneic boosting can induce a significant increase in immune response against the heterologous variant (B.1.351).

LNP製剤化mRNAワクチンの調製:
実施例1.2(RNA in vitro転写)に記載した通り、SARS-CoV-2 mRNA構築物(全長の融合前の安定化された先祖SARS-CoV-2 SをコードするCV2CoV-LNP製剤化mRNAベースのSARS-CoV-2ワクチン及び全長の融合前の安定化されたSARS-CoV-2 B.1.351 SをコードするCV2CoV.351-LNP製剤化mRNAベースのSARS-CoV-2ワクチン)を調製した。表4及び11に示す通り、一部の構築物において、ウリジンを1-メチルシュードウリジンで置き換えた。in vivoでの使用前に、実施例1.4に従い、HPLC精製したmRNAをLNPを用いて製剤化した。 Preparation of LNP formulated mRNA vaccine:
As described in Example 1.2 (RNA in vitro transcription), the SARS-CoV-2 mRNA construct (CV2CoV-LNP-formulated mRNA-based SARS encoding full-length prefusion stabilized progenitor SARS-CoV-2 S A -CoV-2 vaccine and a CV2CoV.351-LNP-formulated mRNA-based SARS-CoV-2 vaccine encoding a full-length prefusion stabilized SARS-CoV-2 B.1.351 S were prepared. In some constructs, uridine was replaced with 1-methylpseudouridine, as shown in Tables 4 and 11. Prior to in vivo use, HPLC-purified mRNA was formulated using LNP according to Example 1.4.

免疫:
ラットに、表11に示すmRNAワクチン組成物及び用量を用いて、筋肉内(i.m.)注射した。陰性対照として、1つの群のラットを、緩衝液を用いてワクチン接種した(群A)。すべての動物に、0週目(1日目)及び3週目(21日目)に同じワクチン組成物を用いてワクチン接種した。15週目に、動物に、一部異なるワクチン組成物を用いて3回目のワクチン接種をした。血液試料を、VNTの決定のため0日目、15日目、21日目、42日目、77日目、105日目、119日目、及び133日目に採取した。 Immunity:
Rats were injected intramuscularly (im) with the mRNA vaccine compositions and doses shown in Table 11. As a negative control, one group of rats was vaccinated with buffer (group A). All animals were vaccinated with the same vaccine composition at week 0 (day 1) and week 3 (day 21). At week 15, animals were vaccinated a third time with a partially different vaccine composition. Blood samples were taken on days 0, 15, 21, 42, 77, 105, 119, and 133 for determination of VNT.

Figure 2024502210000050
Figure 2024502210000050

実施例2に記載した通り、VNTの決定を行った。 VNT determination was performed as described in Example 2.

結果:
全体として、CVnCoV、CV2CoV又は「m1ψ先祖S」(R10162)を用いた2回のプライムワクチン接種の3カ月後のCV2CoV又はCV2CoV.351のいずれかを用いたブーストは、先祖とB.1.351 SARS-CoV-2の両方に対するウイルス中和抗体の有意な増加を誘導した(それぞれ、図8A及び8B)。CV2CoVとCV2CoV.351の両方を用いたブーストは、先祖SARS-CoV-2並びにSARS-CoV-2 B.1.351、B.1.1.7及びP.1バリアントを中和することができるVNTを誘導した(図8C～8F)。 result:
Overall, a boost with either CV2CoV or CV2CoV.351 3 months after two prime vaccinations with CVnCoV, CV2CoV or "m1ψ Ancestor S" (R10162) showed that the Ancestral and B.1.351 SARS- induced a significant increase in virus-neutralizing antibodies against both CoV-2 (Figures 8A and 8B, respectively). Boosting with both CV2CoV and CV2CoV.351 induced VNTs capable of neutralizing ancestral SARS-CoV-2 as well as SARS-CoV-2 B.1.351, B.1.1.7 and P.1 variants (Figures 8C-8F).

先祖SARS-CoV-2に対するVNT(図8A):
CVnCoVは、ラットにおける2回のワクチン接種後に、先祖SARS-CoV-2に対して強固なVNTを誘導した(群G及びF)。力価は、経時的に測定して少し減少したが、d105にブーストするまで容易に検出可能なままであった。 VNT against ancestral SARS-CoV-2 (Figure 8A):
CVnCoV induced robust VNT against the ancestor SARS-CoV-2 after two vaccinations in rats (groups G and F). The titer decreased slightly as measured over time but remained easily detectable until boosted to d105.

CV2CoV(同種ワクチン)は、CVnCoVプライムワクチン接種(群F)のバックグラウンドに対する高いブースト能を示し、先祖SARS-CoV-2に対するVNTは、CV2CoVのブーストの際に、109倍(d105対d119)有意に増加した。 CV2CoV (homogeneous vaccine) showed a high boosting ability over the background of CVnCoV prime vaccination (group F), with VNT against the ancestral SARS-CoV-2 significantly higher by a factor of 109 (d105 vs. d119) upon boosting of CV2CoV. increased to

CV2CoVを用いたブーストの際の応答と比較して、先祖SARS-CoV-2に対するCV2CoV.351(異種ワクチン)を用いたブーストにより誘導した力価は低かった(群G)。d105とd119に検出した力価間の観察された差は、6倍の増加に達した。しかしながら、差は統計上有意ではなかった。 Compared to the response upon boosting with CV2CoV, the titer induced by boosting with CV2CoV.351 (heterologous vaccine) against ancestral SARS-CoV-2 was lower (group G). The observed difference between the titers detected on d105 and d119 amounted to a 6-fold increase. However, the difference was not statistically significant.

同様の結果を、CV2CoV又は「m1ψ先祖S」(R10162)を用いたプライムワクチン接種で達成することができ、これにより、105日目の第三の(「ブースト」)ワクチン接種前の力価は、CVnCoV誘導性VNTと比較して有意に増加する。 Similar results can be achieved with prime vaccination with CV2CoV or “m1ψ Ancestor S” (R10162), whereby the titer before the third (“boost”) vaccination on day 105 is , significantly increased compared to CVnCoV-induced VNT.

SARS-CoV-2 B.1.351に対するVNT(図8B):
CVnCoVは、ラットにおける2回のワクチン接種後に、SARS-CoV-2 B.1.351に対して強固なVNTを誘導した。しかしながら、力価は、全体として、先祖SARS-CoV-2に対するものよりも低かった(図8Bを図8Aと比較する)。CV2CoV.351(同種ワクチン)を用いたブーストは、d105対d119(群G)に検出したVNTと比較して109倍の有意な増加を誘導した。 VNT against SARS-CoV-2 B.1.351 (Figure 8B):
CVnCoV induced robust VNT against SARS-CoV-2 B.1.351 after two vaccinations in rats. However, the titers were overall lower than against the progenitor SARS-CoV-2 (compare Figure 8B with Figure 8A). Boosting with CV2CoV.351 (homogeneous vaccine) induced a significant 109-fold increase in VNT detected on d105 versus d119 (group G).

CV2CoV(異種ワクチン)は、CVnCoVプライムワクチン接種(群F)のバックグラウンドに対して高いブースト能を示し、SARS-CoV-2 B.1.351に対するVNTは、CV2CoVブーストの際に、256倍有意に増加した(d105対d119)。 CV2CoV (heterologous vaccine) showed high boosting ability against the background of CVnCoV prime vaccination (group F), and VNT against SARS-CoV-2 B.1.351 was significantly increased by 256-fold upon CV2CoV boosting I did (d105 vs. d119).

同様の結果を、CV2CoV又は「m1ψ先祖S」(R10162)を用いたプライムワクチン接種で達成することができ、これにより、第三の(「ブースト」)ワクチン接種前の力価は、CVnCoV誘導性VNTと比較して有意に増加する。 Similar results can be achieved with prime vaccination with CV2CoV or “m1ψ Ancestor S” (R10162), whereby the titer before the third (“boost”) vaccination increases the CVnCoV-induced significantly increased compared to VNT.

先祖SARS-CoV-2に対するウイルス中和応答並びにSARS-CoV-2 B.1.1.7(アルファ)、B.1.351(ベータ)及びP.1(ガンマ)バリアントに対するウイルス中和応答を、ブーストの14日後に試験した(図8C～8F)。 Boosting viral neutralizing responses to ancestral SARS-CoV-2 and to SARS-CoV-2 B.1.1.7 (alpha), B.1.351 (beta) and P.1 (gamma) variants Tested days later (Figures 8C-8F).

CV2CoV.351(同種ワクチン、群C、E、及びG)を用いたブーストは、d119(図8D)に、SARS-CoV-2 B.1.351に対してだけでなく、先祖SARS-CoV-2(図8C)、SARS-CoV-2 B.1.1.7(図8E)及びP.1(図8F)(異種ワクチン)に対しても強いVNTを誘導した。 Boosting with CV2CoV.351 (homogeneous vaccine, groups C, E, and G) on d119 (Figure 8D) not only against SARS-CoV-2 B.1.351 but also against the ancestral SARS-CoV-2 ( Figure 8C), SARS-CoV-2 B.1.1.7 (Figure 8E) and P.1 (Figure 8F) (heterologous vaccines) also induced strong VNT.

[実施例7]
SARS-CoV-2バリアントをコードするmRNAワクチンを用いたマウスのワクチン接種
本研究を、SARS-CoV-2バリアントをコードするmRNAワクチンを用いたワクチン接種が、交差中和能を有する免疫原性を誘導するかどうかを決定するために設計した。 [Example 7]
Vaccination of mice with mRNA vaccines encoding SARS-CoV-2 variants
This study was designed to determine whether vaccination with mRNA vaccines encoding SARS-CoV-2 variants induces immunogenicity with cross-neutralizing capacity.

LNP製剤化mRNAワクチンの調製:
実施例1.2(RNA in vitro転写)に記載した通り、全長の融合前の安定化された先祖又はバリアントSARS-CoV-2をコードするSARS-CoV-2 mRNA構築物CV2CoV-mRNAベースのSARS-CoV-2ワクチンを調製した。HPLC精製したmRNAを、in vivoでの使用の前に、実施例1.4に従いLNPで製剤化した。 Preparation of LNP formulated mRNA vaccine:
SARS-CoV-2 mRNA construct CV2CoV-mRNA-based SARS-CoV-2 encoding a full-length prefusion stabilized progenitor or variant SARS-CoV-2 as described in Example 1.2 (RNA in vitro transcription) 2 vaccines were prepared. HPLC-purified mRNA was formulated in LNPs according to Example 1.4 prior to in vivo use.

免疫:
マウスを、表12に示すmRNAワクチン組成物及び用量を用いて筋肉内(i.m.)注射した。陰性対照として、1つの群のマウスを、緩衝液を用いてワクチン接種した(群1)。すべての動物を0日目及び21日目にワクチン接種した。血液試料を、抗体力価の決定のため0日目、14日目、21日目、及び42日目に採取した。 Immunity:
Mice were injected intramuscularly (im) with the mRNA vaccine compositions and doses shown in Table 12. As a negative control, one group of mice was vaccinated with buffer (group 1). All animals were vaccinated on days 0 and 21. Blood samples were taken on days 0, 14, 21, and 42 for determination of antibody titers.

Figure 2024502210000051
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ELISAを使用したIgG1抗体力価の決定:
コーティングのため組換えSARS-CoV-2 Sタンパク質(先祖SARS-CoV-2 RBD又はB.1.351 RBDバリアント(K427N、E484K、N501Y))を使用してELISAを行った。コーティングしたプレートを、それぞれの血清希釈液を使用してインキュベートし、特異的な抗体のSARS-CoV-2 RBD又はRBDバリアントへの結合を、ビオチン化アイソタイプ特異的抗マウス抗体、続いて基質としてのAmplexと共にストレプトアビジン-HRP(セイヨウワサビペルオキシダーゼ)を使用して検出した。抗体のエンドポイント力価を、プライムワクチン接種後14日目、ELISAにより測定した。 Determination of IgG1 antibody titer using ELISA:
ELISA was performed using recombinant SARS-CoV-2 S protein (ancestral SARS-CoV-2 RBD or B.1.351 RBD variants (K427N, E484K, N501Y)) for coating. The coated plates were incubated with the respective serum dilutions to determine the binding of specific antibodies to the SARS-CoV-2 RBD or RBD variants, followed by biotinylated isotype-specific anti-mouse antibodies as substrates. Detection was performed using streptavidin-HRP (horseradish peroxidase) with Amplex. Endpoint titers of antibodies were measured by ELISA 14 days after prime vaccination.

VNTの決定:
実施例2に記載した通り、CPEベースのアッセイにおいて評価したVNTの決定を行った。SARS-CoV-2デルタバリアントに対するVNTの検出のため、以下の変異:T19R、E156G、d157F、d158R、L452R、T478K、D614G、P681R、D950Nを含むウイルス株hCoV-19/France/IDF-APHP-HEGP-20-23-2131905084/2021|EPI_ISL_2029113|2021-04-27を使用した。 Determination of VNT:
Determination of VNT evaluated in a CPE-based assay was performed as described in Example 2. Viral strains hCoV-19/France/IDF-APHP-HEGP containing the following mutations: T19R, E156G, d157F, d158R, L452R, T478K, D614G, P681R, D950N for detection of VNT against SARS-CoV-2 delta variants. -20-23-2131905084/2021|EPI_ISL_2029113|2021-04-27 was used.

細胞内サイトカイン染色:
当該技術分野で公知の標準的なプロトコールに従い、42日目に、ワクチン接種したマウスから脾細胞を単離した。簡単に言うと、単離した脾臓を細胞濾過器を通して細かくし、PBS/1%FBSにおいて洗浄し、続いて赤血球細胞を溶解した。PBS/1%FBSを用いた大規模洗浄工程後、脾細胞を96ウェルプレート(1ウェル当たり2×106細胞)に播種した。タンパク質輸送阻害剤の存在下、37℃で6時間、2.5μg/mlの抗CD28抗体(BD Biosciences)の存在下のSARS-CoV-2先祖Sタンパク質特異的ペプチド(1μg/ml)の混合物を用いて細胞を刺激した。同じ手法を、SARS-CoV-2 B.1.351 Sタンパク質特異的ペプチドの混合物を用いて脾細胞を刺激するため繰り返した。刺激後、細胞を洗浄し、製造元の指示に従い、Cytofix/Cytoperm試薬(BD Biosciences)を使用して細胞内サイトカインについて染色した。以下の抗体:Thy1.2-FITC(1:200)、CD8-APC-Cy7(1:200)、TNF-PE(1:100)、IFNγ-APC(1:100)(eBioscience)、CD4-BD Horizon V450(1:200)(BD Biosciences)を染色のため使用し、1:100希釈したFcγ-ブロックと共にインキュベートした。Aqua Dyeを使用して、生/死細胞を区別した(Invitrogen)。ZE5フローサイトメーター(Bio-Rad)を使用して、細胞を取得した。FlowJoソフトウエアパッケージ(Tree Star, Inc.)を使用して、フローサイトメトリーのデータを分析した。 Intracellular cytokine staining:
Splenocytes were isolated from vaccinated mice on day 42 following standard protocols known in the art. Briefly, isolated spleens were minced through a cell strainer and washed in PBS/1% FBS, followed by lysis of red blood cells. After an extensive washing step with PBS/1% FBS, splenocytes were seeded into 96-well plates (2 x 106 cells per well). using a mixture of SARS-CoV-2 ancestral S protein-specific peptides (1 μg/ml) in the presence of 2.5 μg/ml anti-CD28 antibody (BD Biosciences) for 6 h at 37 °C in the presence of protein transport inhibitors. cells were stimulated. The same procedure was repeated to stimulate splenocytes with a mixture of SARS-CoV-2 B.1.351 S protein-specific peptides. After stimulation, cells were washed and stained for intracellular cytokines using Cytofix/Cytoperm reagent (BD Biosciences) according to the manufacturer's instructions. The following antibodies: Thy1.2-FITC (1:200), CD8-APC-Cy7 (1:200), TNF-PE (1:100), IFNγ-APC (1:100) (eBioscience), CD4-BD Horizon V450 (1:200) (BD Biosciences) was used for staining and incubated with Fcγ-block diluted 1:100. Aqua Dye was used to differentiate live/dead cells (Invitrogen). Cells were obtained using a ZE5 flow cytometer (Bio-Rad). Flow cytometry data were analyzed using the FlowJo software package (Tree Star, Inc.).

結果:
14日目、全長の融合前の安定化された先祖又はバリアントSARS-CoV-2をコードする、すべての試験したSARS-CoV-2 mRNAワクチン構築物は、先祖SARS-CoV-2 RBD(図9A)及びB.1.351バリアントRBD(K417N、E484K、N501Y)に対して高いIgG抗体応答を誘導した、図9B。 result:
At day 14, all tested SARS-CoV-2 mRNA vaccine constructs encoding full-length prefusion stabilized ancestral or variant SARS-CoV-2 contained the ancestral SARS-CoV-2 RBD (Figure 9A). and induced high IgG antibody responses against B.1.351 variant RBD (K417N, E484K, N501Y), FIG. 9B.

試験したmRNAワクチン構築物のすべてが、42日目にVNTの強い誘導を示し、これは、最も突出しており、同種中和(図9C:群2、先祖;図9D:群3、B.1.1.7;図9E:群4及び7、B.1.351;図F:群6、P1)についてはより早い時点(d14、d21)で検出可能である。 All of the mRNA vaccine constructs tested showed strong induction of VNT at day 42, most prominently due to homoneutralization (Figure 9C: group 2, ancestral; Figure 9D: group 3, B.1.1). 7; Figure 9E: Groups 4 and 7, B.1.351; Figure F: Group 6, P1) can be detected at earlier time points (d14, d21).

図9G～Jに示す通り、異なるバリアント全長S安定化されたタンパク質をコードするmRNAを用いたワクチン接種は、先祖(図G及びH)又はB.1.351(図I及びJ)ペプチドライブラリーを用いた脾細胞の刺激の際と同様の程度まで、2回のワクチン接種後の42日目に強固なレベルの抗原特異的CD4+及びCD8+IFN/TNF二重陽性T細胞を誘導した。 As shown in Figures 9G-J, vaccination with mRNA encoding different variant full-length S-stabilized proteins was performed using ancestral (Figures G and H) or B.1.351 (Figures I and J) peptide libraries. induced robust levels of antigen-specific CD4 + and CD8 + IFN/TNF double-positive T cells at day 42 after two vaccinations, to a similar extent as during stimulation of splenocytes that had been vaccinated.

[実施例8]
SARS-CoV-2バリアントをコードするmRNAワクチンを用いたマウスのワクチン接種
本研究を、SARS-CoV-2バリアントをコードするmRNAワクチンを用いたワクチン接種が、交差中和能を有する免疫原性を誘導するかどうかを決定するために設計した。 [Example 8]
Vaccination of mice with mRNA vaccines encoding SARS-CoV-2 variants
This study was designed to determine whether vaccination with mRNA vaccines encoding SARS-CoV-2 variants induces immunogenicity with cross-neutralizing capacity.

LNP製剤化mRNAワクチンの調製:
実施例1.2(RNA in vitro転写)に記載した通り、SARS-CoV-2 mRNA構築物（全長の融合前の安定化された先祖又はバリアントSARS-CoV-2 S(S_stab)をコードするCV2CoV-LNP製剤化mRNAベースのSARS-CoV-2ワクチン）を調製した。HPLC精製したmRNAを、in vivoでの使用の前に、実施例1.4に従いLNPを用いて製剤化した。 Preparation of LNP formulated mRNA vaccine:
CV2CoV-LNP formulation encoding a SARS-CoV-2 mRNA construct (full-length pre-fusion stabilized progenitor or variant SARS-CoV-2 S (S_stab)) as described in Example 1.2 (RNA in vitro transcription) We prepared a modified mRNA-based SARS-CoV-2 vaccine). HPLC purified mRNA was formulated with LNPs according to Example 1.4 prior to in vivo use.

免疫:
マウスに、表13に示すmRNAワクチン組成物及び用量を用いて筋肉内(i.m.)注射した。陰性対照として、1つの群のマウスに、緩衝液を用いてワクチン接種した(群13)。すべての動物に0日目及び21日目にワクチン接種した。血液試料を、抗体力価の決定のため0日目、14日目、21日目、及び42日目に採取した。 Immunity:
Mice were injected intramuscularly (im) with the mRNA vaccine compositions and doses shown in Table 13. As a negative control, one group of mice was vaccinated with buffer (group 13). All animals were vaccinated on days 0 and 21. Blood samples were taken on days 0, 14, 21, and 42 for determination of antibody titers.

Figure 2024502210000052
Figure 2024502210000052

実施例2に記載した通り、同種及び異種バリアントを用いたVNTの決定を行うことができる。T細胞分析のため、脾細胞を42日目に単離した。 Determination of VNT using homologous and heterologous variants can be performed as described in Example 2. Splenocytes were isolated on day 42 for T cell analysis.

細胞内サイトカイン染色(ICS)によるT細胞分析:
当該技術分野で公知の標準的なプロトコールに従い、ワクチン接種したマウスから脾細胞を単離した。簡単に言うと、単離した脾臓を細胞濾過器を通して細かくし、PBS/1%FBSにおいて洗浄し、続いて赤血球を溶解した。PBS/1%FBSを用いた広範な洗浄工程後、脾細胞を96ウェルプレートに播種した(1ウェル当たり2×106細胞)。タンパク質輸送阻害剤の存在下、37℃で6時間、2.5μg/mlの抗CD28抗体(BD Biosciences)の存在下のSARS-CoV-2先祖Sタンパク質特異的ペプチド(1μg/ml)の混合物を用いて細胞を刺激した。刺激後、細胞を洗浄し、Cytofix/Cytoperm試薬(BD Biosciences)を製造元の指示に従い使用して細胞内サイトカインについて染色した。以下の抗体:Thy1.2-FITC(1:200)、CD8-APC-Cy7(1:200)、TNF-PE(1:100)、IFNγ-APC(1:100)(eBioscience)、CD4-BD Horizon V450(1:200)(BD Biosciences)を染色のため使用し、1:100希釈したFcγ-ブロックと共にインキュベートした。Aqua Dyeを使用して、生/死細胞を区別した(Invitrogen)。ZE5フローサイトメーター(Bio-Rad)を使用して、細胞を取得した。FlowJoソフトウエアパッケージ(Tree Star, Inc.)を使用して、フローサイトメトリーのデータを分析した。 T cell analysis by intracellular cytokine staining (ICS):
Splenocytes were isolated from vaccinated mice following standard protocols known in the art. Briefly, isolated spleens were minced through a cell strainer and washed in PBS/1% FBS, followed by lysis of red blood cells. After extensive washing steps with PBS/1% FBS, splenocytes were seeded into 96-well plates (2×10 6 cells per well). using a mixture of SARS-CoV-2 ancestral S protein-specific peptides (1 μg/ml) in the presence of 2.5 μg/ml anti-CD28 antibody (BD Biosciences) for 6 h at 37 °C in the presence of protein transport inhibitors. cells were stimulated. After stimulation, cells were washed and stained for intracellular cytokines using Cytofix/Cytoperm reagent (BD Biosciences) according to the manufacturer's instructions. The following antibodies: Thy1.2-FITC (1:200), CD8-APC-Cy7 (1:200), TNF-PE (1:100), IFNγ-APC (1:100) (eBioscience), CD4-BD Horizon V450 (1:200) (BD Biosciences) was used for staining and incubated with Fcγ-block diluted 1:100. Aqua Dye was used to differentiate live/dead cells (Invitrogen). Cells were obtained using a ZE5 flow cytometer (Bio-Rad). Flow cytometry data were analyzed using the FlowJo software package (Tree Star, Inc.).

結果:
図10に示す通り、異なるバリアント全長S安定化されたタンパク質をコードするmRNAを用いたワクチン接種は、先祖ペプチドライブラリーを用いた脾細胞の刺激の際、2回のワクチン接種後の42日目に強固なレベルの抗原特異的CD4+及びCD8+IFNγ/TNF二重陽性T細胞を誘導した(それぞれ、図10A及びB)。液性応答(ELISA又はVNT)は、実施例7(表13のワクチン構築物についてはまだ試験していない)に示したのと同様に挙動するように思われる。 result:
As shown in Figure 10, vaccination with mRNA encoding different variant full-length S-stabilized proteins was performed on day 42 after two vaccinations during stimulation of splenocytes with the ancestral peptide library. induced robust levels of antigen-specific CD4 + and CD8 + IFNγ/TNF double-positive T cells (FIGS. 10A and B, respectively). The humoral response (ELISA or VNT) appears to behave similarly to that shown in Example 7 (vaccine constructs in Table 13 not yet tested).

[実施例9A]
SARS-CoV-2バリアントをコードするmRNAワクチンを用いたマウスのワクチン接種(予想)
本研究内において、SARS-CoV-2バリアントをコードするmRNAワクチンを用いたワクチン接種が、交差中和能を有する免疫原性を誘導するかどうかを決定することができる。 [Example 9A]
Vaccination of mice with mRNA vaccines encoding SARS-CoV-2 variants (prospective)
Within this study, it can be determined whether vaccination with mRNA vaccines encoding SARS-CoV-2 variants induces immunogenicity with cross-neutralizing capacity.

LNP製剤化mRNAワクチンの調製:
実施例1.2(RNA in vitro転写)に記載した通り、SARS-CoV-2 mRNA構築物(全長の融合前の安定化された先祖又はバリアントSARS-CoV-2 S(S_stab)をコードするCV2CoV-mRNAベースのSARS-CoV-2ワクチン)を調製する。in vivoでの使用前に、実施例1.4に従い、HPLC精製したmRNAをLNPを用いて製剤化する。 Preparation of LNP formulated mRNA vaccine:
As described in Example 1.2 (RNA in vitro transcription), construct a SARS-CoV-2 mRNA construct (CV2CoV-mRNA base encoding a full-length prefusion stabilized progenitor or variant SARS-CoV-2 S (S_stab)). SARS-CoV-2 vaccine). Prior to in vivo use, HPLC-purified mRNA is formulated using LNPs according to Example 1.4.

免疫:
マウスに、表14Aに示すmRNAワクチン組成物及び用量を用いて筋肉内(i.m.)注射する。陰性対照として、1つの群のマウスに、緩衝液を用いてワクチン接種する(群1)。すべての動物に0日目及び21日目にワクチン接種する。血液試料を、抗体力価の決定のため0日目、14日目、21日目、及び42日目に採取する。 Immunity:
Mice are injected intramuscularly (im) with the mRNA vaccine compositions and doses shown in Table 14A. As a negative control, one group of mice is vaccinated with buffer (group 1). All animals will be vaccinated on days 0 and 21. Blood samples are taken on days 0, 14, 21, and 42 for determination of antibody titers.

Figure 2024502210000053
Figure 2024502210000053

実施例2及び実施例7に記載した通り、同種及び異種バリアントを用いてVNTの決定を行う。T細胞分析のため、42日目に脾細胞を単離する。実施例8に記載した通り、細胞内サイトカイン染色(ICS)によるT細胞分析を行う。同様の方法で、新たに現れるバリアントをコードするさらなる構築物を試験することができる。 VNT determination is performed using homologous and heterologous variants as described in Examples 2 and 7. Isolate splenocytes on day 42 for T cell analysis. T cell analysis by intracellular cytokine staining (ICS) is performed as described in Example 8. Additional constructs encoding newly emerging variants can be tested in a similar manner.

[実施例9B]
SARS-CoV-2バリアントをコードするmRNAワクチンを用いたラットのワクチン接種(予想)
本研究内において、SARS-CoV-2バリアントをコードするmRNAワクチンを用いたワクチン接種が、交差中和能を有する免疫原性を誘導するかどうかを決定することができる。 [Example 9B]
Vaccination of rats with mRNA vaccines encoding SARS-CoV-2 variants (prospective)
Within this study, it can be determined whether vaccination with mRNA vaccines encoding SARS-CoV-2 variants induces immunogenicity with cross-neutralizing capacity.

LNP製剤化mRNAワクチンの調製:
実施例1.2(RNA in vitro転写)に記載した通り、SARS-CoV-2 mRNA構築物(全長の融合前の安定化されたオミクロンバリアントSARS-CoV-2 S(S_stab)をコードするCV2CoV-mRNAベースのSARS-CoV-2ワクチン)を調製する。in vivoでの使用前に、実施例1.4に従い、HPLC精製したmRNAをLNPを用いて製剤化する。 Preparation of LNP formulated mRNA vaccine:
The SARS-CoV-2 mRNA construct (CV2CoV-mRNA-based encoding full-length prefusion stabilized omicron variant SARS-CoV-2 S (S_stab)) was prepared as described in Example 1.2 (RNA in vitro transcription). SARS-CoV-2 vaccine). Prior to in vivo use, HPLC-purified mRNA is formulated using LNPs according to Example 1.4.

免疫:
ウィスターラットに、表14Bに示すmRNAワクチン組成物及び用量を用いて筋肉内(i.m.)注射する。陰性対照として、1つの群のラットに、緩衝液を用いてワクチン接種する(群1)。すべての動物に0日目及び21日目にワクチン接種する。血液試料を、抗体力価の決定のため0日目、14日目、21日目、及び42日目に採取する。 Immunity:
Wistar rats are injected intramuscularly (im) with the mRNA vaccine compositions and doses shown in Table 14B. As a negative control, one group of rats is vaccinated with buffer (group 1). All animals will be vaccinated on days 0 and 21. Blood samples are taken on days 0, 14, 21, and 42 for determination of antibody titers.

Figure 2024502210000054
Figure 2024502210000054

実施例2に記載した通り、同種及び異種SARS-CoV-2バリアントを用いてVNTの決定を行う。T細胞分析のため、42日目に脾細胞を単離する。実施例8に記載した通り、細胞内サイトカイン染色(ICS)によるT細胞分析を行う。同様の方法で、新たに現れるバリアントをコードするさらなる構築物を試験することができる。 VNT determination is performed using homologous and heterologous SARS-CoV-2 variants as described in Example 2. Isolate splenocytes on day 42 for T cell analysis. T cell analysis by intracellular cytokine staining (ICS) is performed as described in Example 8. Additional constructs encoding newly emerging variants can be tested in a similar manner.

[実施例10]
多価ワクチン接種の拡大研究:ウィスターラットにおけるi.m.投与の際の二価のCV2CoV及びCV2CoV.351ワクチンの免疫原性
本研究の目的は、多価CV2CoV/CV2CoV.351を用いた3回目のワクチン接種の際のCVnCoVワクチン接種後のブースト応答を評価することである。 [Example 10]
Multivalent vaccination expansion study: Immunogenicity of bivalent CV2CoV and CV2CoV.351 vaccines upon im administration in Wistar rats.
The aim of this study is to evaluate the boost response after CVnCoV vaccination during the third vaccination with multivalent CV2CoV/CV2CoV.351.

LNP製剤化mRNAワクチンの調製:
実施例1.2(RNA in vitro転写)に記載した通り、SARS-CoV-2 mRNA構築物(全長の融合前の安定化された先祖SARS-CoV-2 SをコードするCV2CoV-mRNAベースのSARS-CoV-2ワクチン及び全長の融合前の安定化されたSARS-CoV-2 B.1.351 SをコードするCV2CoV.351-mRNAベースのSARS-CoV-2ワクチン)を調製した。in vivoワクチン接種実験での使用前に、実施例1.4及び実施例1.5(二価mRNAワクチンのため別々に混合するか、又は製剤化した)に従い、HPLC精製したmRNAをLNPを用いて製剤化した。 Preparation of LNP formulated mRNA vaccine:
As described in Example 1.2 (RNA in vitro transcription), the SARS-CoV-2 mRNA construct (CV2CoV-mRNA-based SARS-CoV-encoding full-length prefusion stabilized progenitor SARS-CoV-2 S) A CV2CoV.351-mRNA-based SARS-CoV-2 vaccine encoding a full-length prefusion stabilized SARS-CoV-2 B.1.351 S vaccine was prepared. Prior to use in in vivo vaccination experiments, HPLC-purified mRNA was formulated using LNPs according to Example 1.4 and Example 1.5 (mixed or formulated separately for bivalent mRNA vaccines). .

免疫:
ラットに、表14に示すmRNAワクチン組成物及び用量を用いて筋肉内(i.m.)注射した。緩衝液でワクチン接種した動物は、陰性対照(群C)とした。すべての動物に0週目、3週目(21日目)及び15週目(105日目)にワクチン接種した。血液試料を、抗体力価の決定のため0日目、14日目、21日目、42日目、77日目、105日目、119日目及び133日目に採取した。 Immunity:
Rats were injected intramuscularly (im) with the mRNA vaccine compositions and doses shown in Table 14. Animals vaccinated with buffer served as negative controls (group C). All animals were vaccinated at week 0, week 3 (day 21) and week 15 (day 105). Blood samples were taken on days 0, 14, 21, 42, 77, 105, 119 and 133 for determination of antibody titers.

Figure 2024502210000055
Figure 2024502210000055

実施例2に記載した通り、VNTの決定を行った。 VNT determination was performed as described in Example 2.

結果:
図11Aに示す通り、CVnCoV及びCV2CoVは、ラットにおいて2回のワクチン接種後に、先祖SARS-CoV-2に対して強固なVNTを誘導した。力価は、CVnCoVについて経時的に測定して少し減少したが、d105にブーストするまで容易に検出可能なままであった。 result:
As shown in Figure 11A, CVnCoV and CV2CoV induced robust VNT against the progenitor SARS-CoV-2 after two vaccinations in rats. Titers decreased slightly as measured over time for CVnCoV, but remained readily detectable until boosted to d105.

二価のCV2CoV+CV2CoV.351ワクチン組成物は、CVnCoVプライムワクチン接種のバックグラウンドに対する高いブースト能を示し、先祖SARS-CoV-2に対するVNTは、CV2CoV+CV2CoV.351ブーストの際、30倍(d105対d119)及び45倍(d105対d133)有意に増加した(群B)。CV2CoVプライムワクチン接種のバックグラウンドに対し、二価のCV2CoV+CV2CoV.351ワクチン組成物は、105日目に既に高いVNTであるさらなるブースト能を示した。 The bivalent CV2CoV+CV2CoV.351 vaccine composition showed a high boosting ability against the background of CVnCoV prime vaccination, with VNT against the ancestral SARS-CoV-2 increasing by 30 times (d105) upon CV2CoV+CV2CoV.351 boosting. vs. d119) and 45-fold (d105 vs. d133) significantly increased (group B). Against the background of CV2CoV prime vaccination, the bivalent CV2CoV+CV2CoV.351 vaccine composition showed further boosting potential, already high VNT at day 105.

図11Bに示す通り、CVnCoVは、ラットにおいて2回のワクチン接種後にSARS-CoV-2 B.1.351に対する強固なVNTを誘導した。B.1.351に対する力価は、先祖ウイルスに対する力価よりも全体的に低かった。力価は、CVnCoV及びCV2CoVワクチン接種した動物について、経時的に測定したVNTが少し減少したが、105日目にブーストするまで容易に検出可能なままであった。二価のCV2CoV+CV2CoV.351ワクチン組成物は、CVnCoVプライムワクチン接種のバックグラウンドに対する高いブースト能を示し、SARS-CoV-2 B.1.351に対するVNTは、CV2CoV+CV2CoV.351ブーストの際、19倍(d105対d119)及び75倍(d105対d133)有意に増加した。CV2CoVプライムワクチン接種のバックグラウンドに対し、二価のCV2CoV+CV2CoV.351ワクチン組成物は、105日目にSARS-CoV-2 B.1.351に対する既に高いVNTであるさらなるブースト能を示した。 As shown in Figure 11B, CVnCoV induced robust VNT against SARS-CoV-2 B.1.351 in rats after two vaccinations. Titers against B.1.351 were overall lower than those against the ancestral virus. Titers remained readily detectable until boosting at day 105, although there was a slight decrease in VNT measured over time for CVnCoV and CV2CoV vaccinated animals. The bivalent CV2CoV+CV2CoV.351 vaccine composition showed high boosting ability against the background of CVnCoV prime vaccination, with VNT against SARS-CoV-2 B.1.351 being 19 times higher upon CV2CoV+CV2CoV.351 boosting. (d105 vs. d119) and 75-fold (d105 vs. d133) significantly increased. Against the background of CV2CoV prime vaccination, the bivalent CV2CoV+CV2CoV.351 vaccine composition showed further boosting potential, already high VNT against SARS-CoV-2 B.1.351 at day 105.

B.1.351に対して検出した中和力価は、実験の105日目まで、先祖SARS-CoV-2に対して誘導した力価よりも低いままである一方、CV2CoV+CV2CoV.351ワクチン組成物を用いたブーストの際に測定した両方のウイルスに対するVNTは、133日目までに同等のレベルに達した(図11A対図11B)。 The neutralizing titers detected against B.1.351 remained lower than those induced against the progenitor SARS-CoV-2 until day 105 of the experiment, while the CV2CoV+CV2CoV.351 vaccine composition The VNT for both viruses measured upon boosting with VNT reached comparable levels by day 133 (FIG. 11A vs. FIG. 11B).

図11C～11Fに示す通り、両方の群B及びCにおいて、119日目に、先祖及びB.1.351 SARS-CoV-2に対してだけでなく、B.1.1.7及びP.1 SARS-CoV-2バリアントに対しても強固かつ高いVNTが誘導された(図11C:先祖、図11D:B.1.351、図11E:B.1.1.7、図11F:P.1)。 As shown in Figures 11C to 11F, in both groups B and C, at day 119, ancestral and B.1.351 SARS-CoV-2 as well as B.1.1.7 and P.1 SARS-CoV A strong and high VNT was also induced for the -2 variant (Figure 11C: Ancestor, Figure 11D: B.1.351, Figure 11E: B.1.1.7, Figure 11F: P.1).

結論として、CVnCoV又はCV2CoVを用いた2回のプライムワクチン接種の3カ月後の二価のCV2CoV+CV2CoV.351ワクチン組成物を用いたブーストは、先祖SARS-CoV-2並びにSARS-CoV-2 B.1.351に対するVNTの有意な増加を誘導し、B.1.1.7及びP.1バリアントに対する高レベルのVNTを誘発した。 In conclusion, a boost with the bivalent CV2CoV+CV2CoV.351 vaccine composition 3 months after two prime vaccinations with CVnCoV or CV2CoV is effective against progenitor SARS-CoV-2 as well as SARS-CoV-2 B. .1.351 and high levels of VNT against the B.1.1.7 and P.1 variants.

[実施例11]
SARS-CoV-2バリアントB1.617.2 S_stab抗原をコードするmRNAを用いたラットのワクチン接種
LNP製剤化mRNAワクチンの調製:
実施例1.2(RNA in vitro転写)に記載した通り、デルタバリアント(B1.617.2)の安定化されたスパイク(S_stab)をコードするmRNA構築物を調製した。表4及び11に示す通り、一部の構築物において、ウリジンを、シュードウリジン(ψ)又は1-メチルシュードウリジン(m1ψ)で置き換えた。in vivoワクチン接種実験での使用前に、実施例1.4に従い、HPLC精製したmRNAをLNPを用いて製剤化した。 [Example 11]
Vaccination of rats with mRNA encoding the SARS-CoV-2 variant B1.617.2 S_stab antigen
Preparation of LNP formulated mRNA vaccine:
An mRNA construct encoding the stabilized spike (S_stab) of the delta variant (B1.617.2) was prepared as described in Example 1.2 (RNA in vitro transcription). As shown in Tables 4 and 11, in some constructs uridine was replaced with pseudouridine (ψ) or 1-methylpseudouridine (m1ψ). Prior to use in in vivo vaccination experiments, HPLC-purified mRNA was formulated using LNPs according to Example 1.4.

免疫:
ウィスターラット(n=8)に、表13に示すmRNAワクチン組成物及び用量を用いて筋肉内(i.m.)注射した。陰性対照として、1つの群のラットに、緩衝液を用いてワクチン接種した(群1、n=6)。すべての動物に0日目及び21日目にワクチン接種した。血液試料を、抗体力価の決定のため21日目(プライム後)及び42日目(ブースト後)に採取した。 Immunity:
Wistar rats (n=8) were injected intramuscularly (im) with the mRNA vaccine compositions and doses shown in Table 13. As a negative control, one group of rats was vaccinated with buffer (group 1, n=6). All animals were vaccinated on days 0 and 21. Blood samples were taken on day 21 (post-prime) and day 42 (post-boost) for determination of antibody titers.

Figure 2024502210000056
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実施例2に記載した通り、ELISAを使用した総IgGスパイク結合抗体力価の決定及びVNTの決定を行った。組換えSARS-CoV-2スパイクB.1.617.2 RBDタンパク質(L452R、T478K、デルタバリアント)を、ELISA IgG決定のため使用した。(デルタB.1.617.2に対するVNTのため、以下の株:系統:デルタ-B.1.617.2、株:hCoV-19/France/IDF-APHP-HEGP-20-23-2131905084/2021|EPI_ISL_2029113|2021-04-27(T19R、E156G、d157F、d158R、L452R、T478K、D614G、P681R、D950Nを使用した)。 Determination of total IgG spike-bound antibody titers using ELISA and determination of VNT were performed as described in Example 2. Recombinant SARS-CoV-2 Spike B.1.617.2 RBD protein (L452R, T478K, delta variant) was used for ELISA IgG determination. (For VNT against Delta B.1.617.2, the following strains: Strain: Delta-B.1.617.2, Strain: hCoV-19/France/IDF-APHP-HEGP-20-23-2131905084/2021|EPI_ISL_2029113| 2021-04-27 (Used T19R, E156G, d157F, d158R, L452R, T478K, D614G, P681R, D950N).

結果:
図12A及びBに示す通り、LNP中に製剤化した全長S安定化されたタンパク質(デルタバリアントB1.617.2)をコードする異なるmRNAフォーマットを用いたワクチン接種は、ラットにおいて、用量2μg、8μg、及び20μgを使用して、14日目及び42日目に有意なレベルのスパイク結合抗体力価を誘導した。2回目のワクチン接種は、抗体力価のさらなる増加を導いた。 result:
As shown in Figures 12A and B, vaccination with different mRNA formats encoding a full-length S-stabilized protein (delta variant B1.617.2) formulated in LNPs at doses of 2 μg, 8 μg, and 20 μg was used to induce significant levels of spike-binding antibody titers on days 14 and 42. The second vaccination led to a further increase in antibody titers.

2、8、及び20μgの群について用量依存性の様式でSARS-CoV-2バリアントB1.617.2に対して強固なVNTが誘導され、これは、経時的に増加した。VNTは、2μg用量(図12A、14日目)、図12B(21日目)、及び図12C(42日目)を含むすべての群について、1回目の注射後d14に早くも検出可能であった。先祖SARS-CoV-2(図12F)に対する、SARS-CoV-2バリアントB.1.351(図12G)に対する、及びSARS-CoV-2バリアントP.1(図12H)に対する強固な異種VNTも誘導された。 Robust VNT was induced against SARS-CoV-2 variant B1.617.2 in a dose-dependent manner for the 2, 8, and 20 μg groups, which increased over time. VNT was detectable as early as d14 after the first injection for all groups, including the 2 μg dose (Figure 12A, day 14), Figure 12B (day 21), and Figure 12C (day 42). Ta. Robust heterologous VNTs against ancestral SARS-CoV-2 (Figure 12F), against SARS-CoV-2 variant B.1.351 (Figure 12G), and against SARS-CoV-2 variant P.1 (Figure 12H) were also induced. .

結果は、天然のヌクレオチド(群2～7)又は化学的に修飾したヌクレオチド((ψ(シュードウリジン、群8～10)又はm1ψ(1-メチルシュードウリジン、群11～13))のmRNA構築物への導入が、42日目に異なるバリアントに対して同等のレベルのVNTを誘導し、これは、化学的に修飾したヌクレオチド(群8～13)を使用することによってVNTを改善する傾向があることを示す。 Results indicate that natural nucleotides (groups 2-7) or chemically modified nucleotides ((ψ(pseudouridine, groups 8-10) or m1ψ(1-methylpseudouridine, groups 11-13)) can be used in mRNA constructs. introduced comparable levels of VNT for different variants at day 42, which tends to improve VNT by using chemically modified nucleotides (groups 8-13). shows.

[実施例12]
ラットにおける多価力価研究:ウィスターラットにおけるi.m.投与の際の二価ワクチン組成物の免疫原性
本研究において、異なるLNP製剤化の二価mRNAワクチン組成物によって誘導される液性免疫原性を、ウィスターラットにおいて評価した。 [Example 12]
Multivalent titer studies in rats: Immunogenicity of bivalent vaccine compositions upon im administration in Wistar rats
In this study, the humoral immunogenicity induced by bivalent mRNA vaccine compositions of different LNP formulations was evaluated in Wistar rats.

LNP製剤化mRNAワクチンの調製:
実施例1.2(RNA in vitro転写)に記載した通り、SARS-CoV-2 mRNA構築物(全長の融合前の安定化されたバリアントSARS-CoV-2 SをコードするmRNAベースのSARS-CoV-2)を調製した。in vivoワクチン接種実験での使用前に、実施例1.4及び実施例1.5(二価mRNAワクチンのため、別々に混合するか、又は製剤化した)に従い、HPLC精製したmRNAをLNPを用いて製剤化した。 Preparation of LNP formulated mRNA vaccine:
SARS-CoV-2 mRNA construct (mRNA-based SARS-CoV-2 encoding full-length prefusion stabilized variant SARS-CoV-2 S) as described in Example 1.2 (RNA in vitro transcription) was prepared. HPLC-purified mRNA was formulated using LNPs according to Example 1.4 and Example 1.5 (mixed or formulated separately for bivalent mRNA vaccines) before use in in vivo vaccination experiments. did.

免疫:
ラットに、表6に示す二価のmRNAワクチン組成物及び用量を用いて筋肉内(i.m.)注射した。緩衝液を用いてワクチン接種した動物は、陰性対照とした(群1)。すべての動物に0日目及び21日目にワクチン接種した。血液試料を、液性免疫応答の決定のため14日目、21日目及び42日目に採取した。 Immunity:
Rats were injected intramuscularly (im) with the bivalent mRNA vaccine compositions and doses shown in Table 6. Animals vaccinated with buffer served as negative controls (group 1). All animals were vaccinated on days 0 and 21. Blood samples were taken on days 14, 21, and 42 for determination of humoral immune responses.

Figure 2024502210000057
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実施例2に記載した通り、ELISAを使用した、総IgGスパイク結合抗体力価の決定を行った。コーティングのため、先祖SARS-CoV-2の組換えスパイクRBDタンパク質、バリアントB.1.617.2のRBD(L452R、T478K:デルタ)、又はB.1.351のRBD(K417N、E484K、N501Y:ベータ)を使用した。 Determination of total IgG spike-bound antibody titers using ELISA was performed as described in Example 2. For coating, use the recombinant spike RBD protein of ancestral SARS-CoV-2, the RBD of variant B.1.617.2 (L452R, T478K:Delta), or the RBD of B.1.351 (K417N, E484K, N501Y: Beta) did.

結果:
LNP中に製剤化した、異なるバリアント(さらなる詳細については、表17を参照)の全長の安定化されたスパイクタンパク質をコードする、天然又は化学的に修飾したヌクレオチド(m1ψ(1-メチルシュードウリジン))を含む異なるmRNAフォーマットを含む二価のワクチン組成物を用いたワクチン接種は、ラットにおいて、14日目に強固かつ高レベルのスパイク結合抗体力価を誘導した。図13は、同種並びに異種応答を示す(図13A:先祖SARS-CoV-2 RBD;図13B:B.1.617.2 RBD(L452R、T478K、デルタ);図13C:B.1.351 RBD(K417N、E484K、N501Y、ベータ)。修飾したヌクレオチドを含む構築物は、同種応答について、並びに異種応答について、天然のヌクレオチドを含む構築物よりも高い総IgG力価を誘導する。 result:
Naturally or chemically modified nucleotides (m1ψ(1-methylpseudouridine)) encoding full-length stabilized spike proteins of different variants (see Table 17 for further details) formulated into LNPs ) Vaccination with a bivalent vaccine composition containing different mRNA formats induced robust and high levels of spike-binding antibody titers at day 14 in rats. Figure 13 shows homologous and heterologous responses (Figure 13A: Ancestral SARS-CoV-2 RBD; Figure 13B: B.1.617.2 RBD (L452R, T478K, Delta); Figure 13C: B.1.351 RBD (K417N, E484K). , N501Y, Beta). Constructs containing modified nucleotides induce higher total IgG titers than constructs containing natural nucleotides for homologous responses as well as for heterologous responses.

[実施例13]
SARS-CoV-2 B.1.351及びB.1.617.2を用いたk18-hACE2マウスにおけるチャレンジ研究
一般に、マウスは、SARS-CoV-2の感染に対して感受性でないが、K18プロモーター下でのウイルスの宿主細胞への侵入に必要なヒト受容体ACE2(hACE2)を発現する遺伝子操作したマウスモデルを開発した。モデルは、元々、SARS(SARS-CoV)の原因物質を調べるために開発された(MCCRAY, Paul B., et al. Lethal infection of K18-hACE2 mice infected with severe acute respiratory syndrome coronavirus. Journal of virology, 2007, 81. Jg., Nr. 2、S. 813-821)が、現在では、COVID-19の好適な小動物モデルとしても使用されている。以前に、hACE2マウスは、SARS-CoV-2に対して感受性であり、体重減少、肺の病態、及びヒトにおける症状と類似の症状を伴った疾患経過を示すことが示されている(例えば、BAO, Linlin, et al. The pathogenicity of SARS-CoV-2 in hACE2 transgenic mice. Nature, 2020, 583. Jg., Nr. 7818, S. 830-833、又はYINDA, Claude Kwe, et al. K18-hACE2 mice develop respiratory disease resembling severe COVID-19. PLoS pathogens, 2021, 17. Jg., Nr. 1、S. e1009195;DE ALWIS, Ruklanthi M., et al. A Single Dose of Self-Transcribing and Replicating RNA Based SARS-CoV-2 Vaccine Produces Protective Adaptive Immunity In Mice. BioRxiv, 2020.)。原則として、K18-hACE2マウスは、SARS-CoV-2若しくはSARS-CoV-2バリアントの感染の予防又はウイルス量の低減を調べ、同時に、一般に、マウスモデルについて利用可能である十分に確立した免疫学的方法を用いたCOVID-19に対するmRNAワクチンの防御的効果の相関及び原因を調べるためのワクチン研究に適している。 [Example 13]
Challenge study in k18-hACE2 mice with SARS-CoV-2 B.1.351 and B.1.617.2
In general, mice are not susceptible to SARS-CoV-2 infection, but genetically engineered mouse models that express the human receptor ACE2 (hACE2), which is required for viral entry into host cells under the K18 promoter, have been developed. developed. The model was originally developed to investigate the causative agent of SARS (SARS-CoV) (MCCRAY, Paul B., et al. Lethal infection of K18-hACE2 mice infected with severe acute respiratory syndrome coronavirus. Journal of virology, 2007, 81. Jg., Nr. 2, S. 813-821) is currently also used as a suitable small animal model for COVID-19. Previously, hACE2 mice have been shown to be susceptible to SARS-CoV-2 and exhibit a disease course with weight loss, pulmonary pathology, and symptoms similar to those in humans (e.g. BAO, Linlin, et al. The pathogenicity of SARS-CoV-2 in hACE2 transgenic mice. Nature, 2020, 583. Jg., Nr. 7818, S. 830-833, or YINDA, Claude Kwe, et al. K18- hACE2 mice develop respiratory disease reassembling severe COVID-19. PLoS pathogens, 2021, 17. Jg., Nr. 1, S. e1009195;DE ALWIS, Ruklanthi M., et al. A Single Dose of Self-Transcribing and Replicating RNA Based SARS-CoV-2 Vaccine Produces Protective Adaptive Immunity In Mice. BioRxiv, 2020.). In principle, K18-hACE2 mice can be used to investigate prevention of infection or reduction of viral load with SARS-CoV-2 or SARS-CoV-2 variants, while generally using well-established immunological methods available for mouse models. It is suitable for vaccine research to investigate the correlation and cause of the protective effect of mRNA vaccines against COVID-19 using conventional methods.

本実施例は、SARS-CoV-2バリアントS mRNAワクチンが、SARS-CoV-2ウイルスチャレンジからK18-hACE2マウスを防御することができることを示し、これは、例えば、感染した動物のウイルス量を測定することによって、体重減少、肺の病態及び他の症状を含む疾患の進行をモニタリングすることによって、又は病理組織学及び生存によって示すことができる。 This example shows that the SARS-CoV-2 variant S mRNA vaccine is able to protect K18-hACE2 mice from SARS-CoV-2 virus challenge, which is important for e.g. By monitoring disease progression, including weight loss, pulmonary pathology and other symptoms, or by histopathology and survival.

LNP製剤化mRNAワクチンの調製:
実施例1.2(RNA in vitro転写)に記載した通り、SARS-CoV-2ワクチンのためのmRNA構築物を調製した。in vivoワクチン接種実験での使用前に、実施例1.4及び実施例1.5(二価のmRNAワクチンのため、別々に混合するか、又は製剤化した)に従い、HPLC精製したmRNAをLNPを用いて製剤化した。 Preparation of LNP formulated mRNA vaccine:
The mRNA construct for the SARS-CoV-2 vaccine was prepared as described in Example 1.2 (RNA in vitro transcription). HPLC-purified mRNA was formulated using LNP according to Example 1.4 and Example 1.5 (mixed or formulated separately for bivalent mRNA vaccines) before use in in vivo vaccination experiments. It became.

免疫及びチャレンジ:
K18-hACE2トランスジェニックマウス(メス、n=2×10)に、表18に示すmRNAワクチン組成物を用いて筋肉内(i.m.)注射した(群1～4)。陰性対照として、1つの群のマウスに緩衝液を用いて処置した(群5)。体積20μlの示した用量を用いて、0日目及び28日目に、動物にワクチン接種した。血液試料を、抗体力価の決定のため0日目、28日目(プライム後)、56日目(ブースト後)及び66日目(チャレンジ後)に採取した。動物に、56日目に、SARS-CoV-2ウイルス((オリジナルの物質のバックタイトレーションから計算して、マウス当たりSARS-CoV-2 B.1.351の104.375 TCID50及びSARS-CoV-2 B.1.617.2の104.375TCID50)をi.n.でチャレンジ/感染させ、体重、一般的な健康及び生存の変化を10日間モニタリングし、それが、チャレンジからの防御を示す。防御のさらなるパラメーターは、肺及び他の器官におけるウイルス量の低減並びに肺の病態の低減を含む。Hoffmannら、2021年(Hoffmann, D., Corleis、B., Rauch、S. et al. CVnCoV and CV2CoV protect human ACE2 transgenic mice from ancestral B BavPat1 and emerging B.1.351 SARS-CoV-2. Nat Commun 12, 4048 (2021))に記載の通り、RNA抽出並びにRT-qPCR及びsgRNA RT-PCRを行った。 Immunization and challenge:
K18-hACE2 transgenic mice (female, n=2×10) were injected intramuscularly (im) with the mRNA vaccine compositions shown in Table 18 (groups 1-4). As a negative control, one group of mice was treated with buffer (group 5). Animals were vaccinated on days 0 and 28 using the indicated doses in a volume of 20 μl. Blood samples were taken on day 0, day 28 (post-prime), day 56 (post-boost) and day 66 (post-challenge) for determination of antibody titers. On day 56, the animals were infected with SARS-CoV-2 virus ((calculated from backtitration of the original material, 10 4.375 TCID 50 of SARS-CoV-2 B.1.351 and SARS-CoV-2 B per mouse). .1.617.2 of 10 4.375 TCID 50 ) in challenge/infection and changes in body weight, general health and survival were monitored for 10 days, indicating protection from challenge. Further parameters of protection were: including reducing viral load in the lungs and other organs and reducing pulmonary pathology. Hoffmann et al., 2021 (Hoffmann, D., Corleis, B., Rauch, S. et al. CVnCoV and CV2CoV protect human ACE2 transgenic mice RNA extraction and RT-qPCR and sgRNA RT-PCR were performed as described in ancestral B BavPat1 and emerging B.1.351 SARS-CoV-2. Nat Commun 12, 4048 (2021)).

Figure 2024502210000058
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RBD抗体酵素結合免疫吸着アッセイ(ELISA)
SARS-CoV-2のRBD(先祖)に基づく間接的複数種ELISAを使用して、血清を分析した。このため、ELISAプレート(Greiner Bio-One GmbH)を、0.1M炭酸緩衝液(1.59gのNa2CO3及び2.93gのNaHCO3を1Lの蒸留水に混合、pH9.6)中、4℃で一晩、100ng/ウェルRBDを用いてコーティングするか、又はコーティング緩衝液のみで処理した。その後、PBS中の5%スキムミルクを使用して、37℃で1時間、プレートをブロッキングした。血清をTBS-Tween(TBST)中1/100に予め希釈し、室温で1時間、コーティングしたウェル及びコーティングしていないウェル上でインキュベートした。複数種のコンジュゲート(SBVMILK;ID Screen(登録商標) Schmallenberg virus Milk Indirect ELISAから得た;IDvet)を1/80希釈し、次いで室温で1時間加えた。テトラメチルベンジジン基質(IDEXX)の添加後、Tecan Spectra Mini装置(Tecan Group Ltd.)において波長450nmでELISAを読み取った。それぞれの工程の間で、TBSTを用いてプレートを3回洗浄した。それぞれの試料について、タンパク質コーティングしたウェルから得た値から、コーティングしていないウェル上で測定した光学密度を引くことによって、吸光度を計算した。注目すべきことは、ELISAは、抗RBD Igレベルの相対量を決定し、したがって、異なる研究間の直接的な比較は可能でない。 RBD antibody enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA)
Sera were analyzed using an indirect multispecies ELISA based on the RBD (ancestor) of SARS-CoV-2. For this, ELISA plates (Greiner Bio-One GmbH) were prepared at 4 °C in 0.1 M carbonate buffer (1.59 g of Na 2 CO 3 and 2.93 g of NaHCO 3 mixed in 1 L of distilled water, pH 9.6). Coated with 100 ng/well RBD or coated with coating buffer alone overnight. Plates were then blocked using 5% skim milk in PBS for 1 hour at 37°C. Serum was pre-diluted 1/100 in TBS-Tween (TBST) and incubated on coated and uncoated wells for 1 hour at room temperature. The multiple conjugate (SBVMILK; obtained from the ID Screen® Schmallenberg virus Milk Indirect ELISA; IDvet) was diluted 1/80 and then added for 1 hour at room temperature. After addition of the tetramethylbenzidine substrate (IDEXX), the ELISA was read at a wavelength of 450 nm in a Tecan Spectra Mini instrument (Tecan Group Ltd.). Plates were washed three times with TBST between each step. For each sample, absorbance was calculated by subtracting the optical density measured on the uncoated wells from the value obtained from the protein-coated wells. Of note, ELISA determines the relative amount of anti-RBD Ig levels and therefore direct comparisons between different studies are not possible.

ウイルス中和試験(VNT)
96ウェルの深ウェルマスタープレートにおいて、血清をDMEMで1/16又は1/32に予め希釈した。3回のレプリケート研究において、100μlのこの予め希釈した試料を、96ウェルプレートに移した。50μlのDMEM中に50μlの血清希釈液を継代し、それぞれのウェルに50μlの血清希釈液を残すことによって、log2希釈を行った。続いて、50μlのそれぞれのSARS-CoV-2(B.1.351又はB.1.617.2)ウイルス希釈液(100 TCID50/ウェル)をそれぞれのウェルに加え、37℃で1時間インキュベートした。最後に、1%ペニシリン/ストレプトマイシン添加物を含むDMEM中のトリプシン処理したVeroE6細胞(100ml当たり1つのコンフルエントなTC175フラスコの細胞)100μlをそれぞれのウェルに加えた。37℃で72時間のインキュベーション後、ウェルを、光学顕微鏡によって評価した。特異的なCPEが見えない場合、血清希釈を中和としてカウントした。ウイルス力価を、ウイルスタイトレーションにより確認し、陽性及び陰性血清試料が含まれていた。 Virus neutralization test (VNT)
Serum was pre-diluted 1/16 or 1/32 in DMEM in a 96-well deep-well master plate. In three replicate studies, 100 μl of this prediluted sample was transferred to a 96-well plate. Log2 dilutions were performed by passage 50 μl of serum dilution into 50 μl of DMEM, leaving 50 μl of serum dilution in each well. Subsequently, 50 μl of each SARS-CoV-2 (B.1.351 or B.1.617.2) virus dilution (100 TCID50/well) was added to each well and incubated for 1 hour at 37°C. Finally, 100 μl of trypsinized VeroE6 cells (1 confluent TC175 flask of cells per 100 ml) in DMEM with 1% penicillin/streptomycin supplement was added to each well. After 72 hours of incubation at 37°C, wells were evaluated by light microscopy. If no specific CPE was visible, serum dilution was counted as neutralization. Virus titer was confirmed by virus titration and positive and negative serum samples were included.

結果:
SARS-CoV-2バリアントB.1.351又はSARS-CoV-2バリアントB.1.627.2のいずれかをマウスにチャレンジすることによって、ワクチン有効性を試験した。図14に示す通り、すべてのワクチン接種群(群1～4)のマウスは、SARS-CoV-2先祖又はバリアントスパイクタンパク質をコードするmRNAを含む組成物を用いたワクチン接種の恩恵を受ける。図14A及びBは、感染/チャレンジ後の日数におけるチャレンジしたマウスの生存を示す(図14A:B.1.351でチャレンジ、図14B:B.1.617.2でチャレンジ)。すべての試験したmRNAワクチンを用いたワクチン接種は、コードされるスパイクバリアントに関係なく、両方の試験したSARS-CoV-2バリアントに対してマウスの完全な防御(100%の生存)をもたらした(群1:先祖、群2:B.1.351、群3:B.1.617.2、群4:B.1.351+3 B.1.617.2)。図14C及びDは、感染/チャレンジ後の日数における体重変化パーセンテージを示す(図14C:B.1.351でチャレンジ、図14D:B.1.617.2でチャレンジ、平均パーセンテージ体重)。すべてのワクチン接種群(群1～4)のマウスは、有意な体重減少を示さなかった。 result:
Vaccine efficacy was tested by challenging mice with either SARS-CoV-2 variant B.1.351 or SARS-CoV-2 variant B.1.627.2. As shown in Figure 14, mice in all vaccination groups (groups 1-4) benefit from vaccination with a composition containing mRNA encoding the SARS-CoV-2 ancestral or variant spike protein. Figures 14A and B show the survival of challenged mice in days after infection/challenge (Figure 14A: challenged with B.1.351, Figure 14B: challenged with B.1.617.2). Vaccination with all tested mRNA vaccines resulted in complete protection (100% survival) of mice against both tested SARS-CoV-2 variants, regardless of the encoded spike variant ( Group 1: Ancestor, Group 2: B.1.351, Group 3: B.1.617.2, Group 4: B.1.351+3 B.1.617.2). Figures 14C and D show the percentage change in body weight in days after infection/challenge (Figure 14C: challenged with B.1.351, Figure 14D: challenged with B.1.617.2, mean percentage body weight). Mice in all vaccination groups (groups 1-4) showed no significant weight loss.

ワクチン接種が、複製しているSARS-CoV-2の増殖性感染又は播種を予防するかどうかを調べるために、感染後4日目に、経口スワブを採取して、唾液中のウイルスRNA量をモニタリングした。偽群において、8/9又は6/9試料は、それぞれ、SARS-CoV-2バリアントB.1.351又はSARS-CoV-2 B.1.617.2の感染後に、ウイルスゲノムについて陽性であった(図14E:B.1.351チャレンジ群、図14F:B.1.617.2チャレンジ群)。対照的に、mRNAワクチン接種後、ワクチン群に関係なく、いずれのチャレンジ群の経口スワブにおいても、ウイルスゲノムを検出しなかった(CV2CoVワクチン接種群の1匹のマウスにおいてのみ、ウイルスゲノムを検出した、図14E、群1)。チャレンジ後のウイルス複製の予防をさらに調査するために、上気道(URT)(甲介)及び下気道(LRT)(肺)、並びに中枢神経系(脳、小脳/大脳)におけるウイルス量を、感染後10日目に分析した。SARS-CoV-2 B.1.351でチャレンジしたマウスにおいて、ワクチン接種していないマウス(群5)と比較して、すべてのワクチン接種群において、URT中の検出可能なウイルス複製の低減を観察した(図14G)。この効果は、SARS-CoV-2バリアントB.1.617.2をチャレンジしたマウスについてより顕著であった(図14H)。SARS-CoV-2スパイクバリアントB.1.617.2をコードするLNP-mRNAを用いてワクチン接種したマウス(群3)は、同種ウイルスチャレンジ後、甲介において複製を示さなかった(図14H)。LRTにおけるSARS-CoV-2 RNAについて低レベルで陽性な動物はおらず、これは、すべての群におけるSARS-CoV-2バリアントB.1.351及びSARS-CoV-2バリアントB.1.617.2による感染からの防御を示している(それぞれ、図14I及びJ)。脳について、類似の結果を得た(小脳について図14K及びL、大脳について図14M及びN(チャレンジ群B.1.351について:図14K及びM、B.1.617.2について:図14L及びN)。 To determine whether vaccination prevents productive infection or dissemination of replicating SARS-CoV-2, oral swabs were taken on day 4 postinfection to determine the amount of viral RNA in saliva. Monitored. In the sham group, 8/9 or 6/9 samples were positive for the viral genome after infection with SARS-CoV-2 variant B.1.351 or SARS-CoV-2 B.1.617.2, respectively (Figure 14E :B.1.351 challenge group, Figure 14F:B.1.617.2 challenge group). In contrast, after mRNA vaccination, we did not detect viral genomes in oral swabs of any challenge group, regardless of vaccine group (viral genomes were detected only in one mouse in the CV2CoV vaccinated group) , Figure 14E, group 1). To further investigate the prevention of viral replication post-challenge, viral loads in the upper respiratory tract (URT) (turbinates) and lower respiratory tract (LRT) (lungs), as well as the central nervous system (brain, cerebellum/cerebrum), were determined after infection. Analyzed 10 days later. In mice challenged with SARS-CoV-2 B.1.351, we observed a detectable reduction in virus replication during URT in all vaccinated groups compared to unvaccinated mice (group 5). Figure 14G). This effect was more pronounced for mice challenged with SARS-CoV-2 variant B.1.617.2 (Figure 14H). Mice vaccinated with LNP-mRNA encoding SARS-CoV-2 spike variant B.1.617.2 (group 3) showed no replication in the turbinates after homologous virus challenge (Figure 14H). No animals were positive for SARS-CoV-2 RNA at low levels in the LRT, indicating that infection with SARS-CoV-2 variant B.1.351 and SARS-CoV-2 variant B.1.617.2 in all groups protection (Figures 14I and J, respectively). Similar results were obtained for the brain (Fig. 14K and L for the cerebellum, Fig. 14M and N for the cerebrum (for challenge group B.1.351: Fig. 14K and M, for B.1.617.2: Fig. 14L and N).

二価のワクチン(群4)は、より低い用量のそれぞれのワクチンを使用したにも関わらず、一価ワクチン(群1～3)と同等の、両方のウイルスバリアント(B.1.351及びB.1.617.2)に対する防御を誘導した。 The bivalent vaccine (group 4) was equivalent to the monovalent vaccine (groups 1-3), even though lower doses of each vaccine were used, and both virus variants (B.1.351 and B.1.617) were used. .2) induced defense against.

28日目(チャレンジ群B.1.351についてのみ試験した)及び56日目(両方の群について)に、すべてのワクチン接種したマウスから採取した血清は、mRNAがどのバリアントスパイクをコードしているかに関係なく、抗RBD総免疫グロブリン(Ig)の強い誘導を示した(図14O:チャレンジ群B.1.351、図14P:チャレンジ群B.1.617.2)。高いウイルス中和力価(VNT)は、mRNAワクチン群における抗RBD抗体の強い誘導を反映していた(図14Q:チャレンジ後の群B.1.351、図14R:チャレンジ前の群B.1.617.2、図14S:チャレンジ後の群B.1.617.2)。全体として、試験したmRNAワクチンは、in vitroでSARS-CoV-2バリアントB.1.351とSARS-CoV-2 B.1.617.2の両方を効率的に中和する能力があり、プライム-ブーストレジームにおいて強固な抗体応答を誘導した。 Sera collected from all vaccinated mice on day 28 (tested only for challenge group B.1.351) and day 56 (for both groups) showed that the mRNA encoded a variant spike. 14O: challenge group B.1.351, FIG. 14P: challenge group B.1.617.2). The high virus neutralization titer (VNT) reflected the strong induction of anti-RBD antibodies in the mRNA vaccine group (Figure 14Q: group B.1.351 after challenge, Figure 14R: group B.1.617.2 before challenge). , Figure 14S: Group B.1.617.2) after challenge. Overall, the tested mRNA vaccines were capable of efficiently neutralizing both SARS-CoV-2 variants B.1.351 and SARS-CoV-2 B.1.617.2 in vitro and in a prime-boost regime. induced a robust antibody response.

[実施例14]
CV2CoV又はCV2CoV.351を用いてワクチン接種したハムスターのチャレンジ研究
LNP中に製剤化したバリアントB.1.351 S_stabをコードするLNP-mRNAの防御的有効性(CV2CoV.351)を、シリアンハムスターにおいて取り組んだ。このモデルは、軽度から中程度のヒト肺疾患の病態を表し、ヒト関連の免疫原性及び病原性を調べるための認められており、許容されるモデルの1つである(Munoz-Fontela et al, PMID 32967005)。ハムスターは、野生型SARS-CoV-2感染に感受性であり、その結果、高レベルのウイルス複製及びウイルス標的器官における病理組織学的変化が生じる。 [Example 14]
Challenge study of hamsters vaccinated with CV2CoV or CV2CoV.351
The protective efficacy of LNP-mRNA encoding variant B.1.351 S_stab formulated in LNP (CV2CoV.351) was addressed in Syrian hamsters. This model represents the pathology of mild to moderate human lung disease and is one of the recognized and acceptable models for investigating human-relevant immunogenicity and pathogenicity (Muñoz-Fontela et al. , PMID 32967005). Hamsters are susceptible to wild-type SARS-CoV-2 infection, resulting in high levels of viral replication and histopathological changes in virus target organs.

LNP製剤化mRNAワクチンの調製:
実施例1(RNA in vitro転写)に記載した通り、SARS-CoV-2 S mRNA構築物を調製した。in vivoワクチン接種実験での使用前に、実施例1.4に従い、HPLC精製したmRNAをLNPを用いて製剤化した。 Preparation of LNP formulated mRNA vaccine:
SARS-CoV-2 S mRNA constructs were prepared as described in Example 1 (RNA in vitro transcription). Prior to use in in vivo vaccination experiments, HPLC-purified mRNA was formulated using LNPs according to Example 1.4.

免疫及びチャレンジ:
シリアンゴールデンハムスター(n=9/群)に、表19に示すmRNAワクチン組成物及び用量を用いて筋肉内(i.m.)注射した。陰性対照として、1つの群のハムスターを処置せず、偽感染させ(緩衝液)(群A)、別の群に、緩衝液対照としてNaClを注射した。56日目に、ハムスター当たり105.25 TCID50を使用して(オリジナルの物質のバックタイトレーションから計算した)、70μlのSARS-CoV-2バリアントB.1.351を用いた短期の吸入麻酔下で、動物に鼻腔内チャレンジした。感染後の日数について、日常的な身体検査及び体重測定のルーティンに加えて、ウイルス排出をモニタリングした。ウイルス排出を評価するために、短期のイソフルラン麻酔下でそれぞれのハムスターから鼻の洗浄液を個々に採取した。血液試料を、抗体力価の決定のため28日目(プライム後)、55日目(ブースト後)及び60日目(チャレンジ感染後)に採取した。 Immunization and challenge:
Syrian golden hamsters (n=9/group) were injected intramuscularly (im) with the mRNA vaccine compositions and doses shown in Table 19. As a negative control, one group of hamsters was untreated and mock infected (buffer) (group A), and another group was injected with NaCl as a buffer control. On day 56, animals were given under short-term inhalation anesthesia with 70 μl of SARS-CoV-2 variant B.1.351 using 10 5.25 TCID50 per hamster (calculated from backtitration of the original material). I took the intranasal challenge. Viral shedding was monitored in addition to routine physical examination and weight measurement routines for days post-infection. To assess viral shedding, nasal washes were collected individually from each hamster under short-term isoflurane anesthesia. Blood samples were taken on day 28 (post-prime), day 55 (post-boost) and day 60 (post-challenge infection) for determination of antibody titers.

Figure 2024502210000059
Figure 2024502210000059

抗体分析
血液試料を、ELISAを介した総IgG抗体の決定のため0、28、55、及び60日目に採取した。37℃で4～5時間、1μg/mlのSARS-CoV-2 S先祖RBDを用いてプレートをコーティングした。プレートを、10%ミルクにおいて一晩ブロッキングし、洗浄し、室温で2時間、血清と共にインキュベートした。検出のため、ハムスター血清を、ビオチンヤギ抗ハムスター(Syrian)IgG抗体(BioLegend、カタログ:405601)とインキュベートし、続いてHRP-ストレプトアビジン(BD、カタログ:554066)とインキュベートした。励起530/25、放出検出590/35及び感度45を用いて、BioTek SynergyHTXプレートリーダーにおいて特異的なシグナルを検出した。 Antibody Analysis Blood samples were taken on days 0, 28, 55, and 60 for determination of total IgG antibodies via ELISA. Plates were coated with 1 μg/ml SARS-CoV-2 S ancestor RBD for 4-5 hours at 37°C. Plates were blocked overnight in 10% milk, washed, and incubated with serum for 2 hours at room temperature. For detection, hamster serum was incubated with biotin goat anti-hamster (Syrian) IgG antibody (BioLegend, catalog: 405601) followed by HRP-streptavidin (BD, catalog: 554066). Specific signals were detected in a BioTek Synergy HTX plate reader using excitation 530/25, emission detection 590/35 and sensitivity 45.

SARS-CoV-2ウイルスバリアントB.1.351のみを使用することによって、実施例13に記載した通り、ハムスター血清試料のウイルス中和抗体力価(VNT)を分析した。 Hamster serum samples were analyzed for virus neutralizing antibody titers (VNT) as described in Example 13 by using only the SARS-CoV-2 virus variant B.1.351.

気道におけるウイルス量
経時的な鼻の洗浄液、及びチャレンジ感染後4日目の肺組織試料(頭側、中側、尾側)から、RNAを単離した。Hoffmannら、2021年(Hoffmann, D., Corleis、B., Rauch, S. et al. CVnCoV and CV2CoV protect human ACE2 transgenic mice from ancestral B BavPat1 and emerging B.1.351 SARS-CoV-2. Nat Commun 12, 4048 (2021))に記載された通り、RNA抽出、続いてRT-qPCRによるサブゲノムRNA(sgRNA)の検出を行った。 Viral Load in the Airways RNA was isolated from nasal washes over time and from lung tissue samples (cranial, medial, caudal) on day 4 post-challenge infection. Hoffmann et al., 2021 (Hoffmann, D., Corleis, B., Rauch, S. et al. CVnCoV and CV2CoV protect human ACE2 transgenic mice from ancestral B BavPat1 and emerging B.1.351 SARS-CoV-2. Nat Commun 12, 4048 (2021)), RNA extraction was performed, followed by detection of subgenomic RNA (sgRNA) by RT-qPCR.

結果
SARS-CoV-2バリアントB.1.351の105.25 TCID50用量/ハムスターを用いてハムスターにチャレンジすることによって、ワクチン有効性を試験した。図15Aは、チャレンジ後の日数における体重変化パーセンテージを示す。すべてのワクチン接種群(群2～4)のマウスは、有意な体重減少を示さなかった。処置していないマウスの体重は、経時的に体重の90%まで減少した(群1)。 result
Vaccine efficacy was tested by challenging hamsters with 10 5.25 TCID50 doses/hamster of SARS-CoV-2 variant B.1.351. Figure 15A shows the percentage change in body weight in days post-challenge. Mice in all vaccination groups (groups 2-4) showed no significant weight loss. The weight of untreated mice decreased by 90% of body weight over time (group 1).

ワクチン接種が、SARS-CoV-2の増殖性感染を予防したかどうかを調べるために、鼻の洗浄液を、感染後2、4、8、及び12日目に分析して、感染した動物のウイルスRNA量をモニタリングした。ワクチン接種群(群2～4)において、sgRNAを検出することによって決定したウイルス量は、処置していない対照(群1)と比較して、わずかに低減した(図15B)。より顕著な有意に低減したウイルスゲノム(sgRNAを検出することによる)を、mRNAワクチン接種後、下気道(LRT)(頭側、中側、尾側の肺葉の)において検出した。1匹の動物のみが、12μgのCV2CoV.351ワクチン群(群4)におけるSARS-CoV-2 B.1.351 RNAについて低レベルで陽性であり、これは、SARS-CoV-2バリアントB.1.351による感染からの防御を示している(図15C)。 To determine whether vaccination prevented productive infection of SARS-CoV-2, nasal washes were analyzed on days 2, 4, 8, and 12 postinfection to determine whether the virus was present in infected animals. The amount of RNA was monitored. In the vaccinated groups (groups 2-4), the viral load determined by detecting sgRNA was slightly reduced compared to the untreated control (group 1) (Figure 15B). A more pronounced and significantly reduced viral genome (by detecting sgRNA) was detected in the lower respiratory tract (LRT) (of the rostral, middle, and caudal lung lobes) after mRNA vaccination. Only one animal was positive at low levels for SARS-CoV-2 B.1.351 RNA in the 12 μg CV2CoV.351 vaccine group (group 4), indicating infection with SARS-CoV-2 variant B.1.351. (Figure 15C).

28日目、55日目及び60日目に採取したマウス由来の血清は、抗RBD総免疫グロブリン(Ig)の強い誘導を示した(図15D)。強固なウイルス中和力価(VNT)は、mRNAワクチン群における抗RBD抗体のこの誘導を反映した(図15E参照(塗りつぶしていない記号はチャレンジ前(55日目)、塗りつぶした記号はチャレンジ後60日目)。全体として、試験したmRNAワクチンは、SARS-CoV-2バリアントB.1.351を効率的に中和する能力があり、プライム-ブーストレジームにおいて強固な抗体応答を誘導した。 Sera from mice collected on days 28, 55, and 60 showed strong induction of anti-RBD total immunoglobulins (Ig) (FIG. 15D). Robust virus neutralization titers (VNTs) reflected this induction of anti-RBD antibodies in the mRNA vaccine group (see Figure 15E (open symbols are pre-challenge (day 55), filled symbols are 60 days post-challenge). Overall, the tested mRNA vaccines were capable of efficiently neutralizing SARS-CoV-2 variant B.1.351 and induced robust antibody responses in the prime-boost regime.

[実施例15(予想)]
mRNAワクチン組成物の安全性及び効果を示すために、臨床試験(フェーズI)を開始する。臨床試験において、ヒトボランティアのコホートに、本発明によるLNP中に製剤化したバリアントSARS-CoV-2スパイクタンパク質をコードするmRNAを少なくとも2回(例えば、0日目及び28日目)筋肉内注射する。本発明によるワクチン組成物の安全性プロファイルを評価するために、対象を投与後モニタリングする(バイタルサイン、ワクチン接種部位の忍容性評価、血液学的分析)。ワクチン接種した対象由来の血清中のウイルス中和力価(VNT)の決定により、免疫の有効性を分析する。血液試料を、ベースラインとして0日目、及びワクチン接種完了後に採取する。血清を、ウイルス中和抗体について分析する。 [Example 15 (forecast)]
A clinical trial (Phase I) will be initiated to demonstrate the safety and efficacy of the mRNA vaccine composition. In a clinical trial, a cohort of human volunteers is injected intramuscularly at least twice (e.g., on days 0 and 28) with mRNA encoding a variant SARS-CoV-2 spike protein formulated in LNPs according to the invention. . To evaluate the safety profile of the vaccine composition according to the invention, subjects are monitored post-administration (vital signs, vaccination site tolerability assessment, hematological analysis). The effectiveness of immunization is analyzed by determining the virus neutralizing titer (VNT) in serum from vaccinated subjects. Blood samples will be taken on day 0 as baseline and after completion of vaccination. Serum is analyzed for virus-neutralizing antibodies.

[実施例15(予想)]
mRNAワクチン組成物の安全性及び効果を示すために、臨床試験(フェーズI)を開始する。臨床試験において、ヒトボランティアのコホートに、本発明によるLNP中に製剤化したバリアントSARS-CoV-2スパイクタンパク質をコードするmRNAを少なくとも2回(例えば、0日目及び28日目)筋肉内注射する。本発明によるワクチン組成物の安全性プロファイルを評価するために、対象を投与後モニタリングする(バイタルサイン、ワクチン接種部位の忍容性評価、血液学的分析)。ワクチン接種した対象由来の血清中のウイルス中和力価(VNT)の決定により、免疫の有効性を分析する。血液試料を、ベースラインとして0日目、及びワクチン接種完了後に採取する。血清を、ウイルス中和抗体について分析する。

本発明は以下を提供する。
１． 少なくとも1つのSARS-CoV-2スパイクタンパク質又はその免疫原性フラグメント若しくは免疫原性バリアントをコードする少なくとも1つのコード配列を含むRNAであって、SARS-CoV-2スパイクタンパク質が、配列番号1の配列と比較して、K986、V987、A67、H69、V70、T95、G142、V143、Y144、Y145、N211、L212、214、G339、S371、S373、S375、S477、T478、E484、Q493、G496、Q498、N501、Y505、T547、D614、H655、N679、P681、N764、D796、N856、Q954、N969、L981に対応する位置において少なくとも1個のアミノ酸置換、欠失又は挿入を含む、RNA。
２． 少なくとも1つのSARS-CoV-2スパイクタンパク質又はその免疫原性フラグメント若しくは免疫原性バリアントをコードする少なくとも1つのコード配列を含むRNAであって、SARS-CoV-2スパイクタンパク質が、配列番号1の配列と比較して、K986P、V987P、A67V、H69del、V70del、T95I、G142D、V143del、Y144del、Y145del、N211del、L212I、N212del、ins214EPE、G339D、S371L、S373P、S375F、S477N、T478K、E484A、Q493R、G496S、Q498R、N501Y、Y505H、T547K、D614G、H655Y、N679K、P681H、N764K、D796Y、N856K、Q954H、N969K、及びL981Fに対応する位置において少なくとも1個のアミノ酸置換、欠失又は挿入を含む、RNA。
３． 少なくとも1つのSARS-CoV-2スパイクタンパク質又はその免疫原性フラグメント若しくは免疫原性バリアントをコードする少なくとも1つのコード配列であって、SARS-CoV-2スパイクタンパク質は、配列番号1の配列と比較して、K986、V987、A67、H69、V70、T95、G142、V143、Y144、Y145、N211、L212、214、G339、S371、S373、S375、S477、T478、E484、Q493、G496、Q498、N501、Y505、T547、D614、H655、N679、P681、N764、D796、N856、Q954、N969、L981に対応する位置において少なくとも1個のアミノ酸置換、欠失又は挿入を含むコード配列;並びに
少なくとも1つのSARS-CoV-2スパイクタンパク質又はその免疫原性フラグメント若しくは免疫原性バリアントをコードする少なくとも1つのコード配列であって、SARS-CoV-2スパイクタンパク質は、配列番号1の配列と比較して、
L452、E484、P681、E154、D614、及びQ1071;又は
L452、P681、T19、E156、F157、R158、T478、D614、及びD950
に対応する位置において少なくとも1個のアミノ酸置換、欠失又は挿入を含むコード配列、
を含む、RNA。
４． 少なくとも1つのSARS-CoV-2スパイクタンパク質又はその免疫原性フラグメント若しくは免疫原性バリアントをコードする少なくとも1つのコード配列であって、SARS-CoV-2スパイクタンパク質は、配列番号1の配列と比較して、K986P、V987P、A67V、H69del、V70del、T95I、G142D、V143del、Y144del、Y145del、N211del、L212I、ins214EPE、G339D、S371L、S373P、S375F、S477N、T478K、E484A、Q493R、G496S、Q498R、N501Y、Y505H、T547K、D614G、655Y、N679K、P681H、N764K、D796Y、N856K、Q954H、N969K、及びL981Fに対応する位置において少なくとも1個のアミノ酸置換、欠失又は挿入を含むコード配列:並びに
少なくとも1つのSARS-CoV-2スパイクタンパク質又はその免疫原性フラグメント若しくは免疫原性バリアントをコードする少なくとも1つのコード配列であって、SARS-CoV-2スパイクタンパク質は、配列番号1の配列と比較して、
L452R、E484Q、P681R、E154K、D614G、及びQ1071H;又は
L452R、P681R、T19R、E156G、F157del、R158del、T478K、D614G、及びD950N
に対応する位置において少なくとも1個のアミノ酸置換、欠失又は挿入を含むコード配列、
を含む、RNA。
５． 少なくとも1つのSARS-CoV-2スパイクタンパク質が、配列番号28540～28588、28917～28920のいずれか1つと同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一であるアミノ酸配列の少なくとも1つを含むか、又はそれからなる、上記のいずれか一項に記載のRNA。
６． スパイクタンパク質(S)が、スパイクタンパク質フラグメントS1、又はその免疫原性フラグメント若しくは免疫原性バリアントを含むか、又はそれからなる、上記のいずれかに記載のRNA。
７． 少なくとも1つのSARS-CoV-2スパイクタンパク質が、配列番号28540～28588、28917～28920のいずれか1つと同一であるか、又は少なくとも95%同一であるアミノ酸配列の少なくとも1つを含むか、又はそれからなる、上記のいずれかに記載のRNA。
８． スパイクタンパク質(S)が、少なくとも1つの融合前の安定化変異を含む融合前の安定化されたスパイクタンパク質(S_stab)である、上記のいずれかに記載のRNA。
９． 少なくとも1つの融合前の安定化変異が、以下のアミノ酸置換:K986P及びV987Pを含む、上記8に記載のRNA。
１０． 少なくとも1つのコード配列が、シグナルペプチド、リンカー、ヘルパーエピトープ、抗原クラスター形成エレメント、三量体化エレメント、膜貫通型エレメント、及び/又はVLP形成配列から選択される1つ以上の異種ペプチド又はタンパク質エレメントをさらにコードする、上記のいずれかに記載のRNA。
１１． 少なくとも1つの異種ペプチド又はタンパク質エレメントが、異種抗原クラスター形成エレメント、異種三量体化エレメント、及び/又はVLP形成配列である、上記10に記載のRNA。
１２． 少なくとも1つのコード配列が、コドン修飾されたコード配列であり、少なくとも1つのコドン修飾されたコード配列によりコードされるアミノ酸配列が、好ましくは、対応する野生型又は参照コード配列によってコードされるアミノ酸配列と比較して、修飾されていない、上記のいずれかに記載のRNA。
１３． 少なくとも1つのコドン修飾されたコード配列が、C最大化コード配列、CAI最大化コード配列、ヒトコドン使用適合コード配列、G/C含有量が修飾されたコード配列、及びG/Cが最適化されたコード配列、又はそれらの任意の組み合わせから選択される、上記12に記載のRNA。
１４． 少なくとも1つのコドン修飾されたコード配列が、G/Cが最適化されたコード配列、ヒトコドン使用適合コード配列、又はG/C含有量が修飾されたコード配列である、上記12又は13に記載のRNA。
１５． 少なくとも1つのコード配列が、少なくとも約50%、55%、又は60%のG/C含有量を有する、上記のいずれかに記載のRNA。
１６． 少なくとも1つのコード配列が、融合前の安定化K986P及びV987P変異を含むSタンパク質をコードし、コード配列が、配列番号28589～28637、28921～28924と少なくとも95%同一である核酸配列を含むG/Cが最適化されたコード配列を含むか、又はそれからなる、上記のいずれかに記載のRNA。
１７． 好ましくは、30～200個のアデノシンヌクレオチド及び/又は少なくとも1つのポリ(C)配列を含む、好ましくは、10～40個のシトシンヌクレオチドを含む、少なくとも1つのポリ(A)配列を含む、上記のいずれかに記載のRNA。
１８． 少なくとも1つのヒストンステムループを含む、上記のいずれかに記載のRNA。
１９． RNAが、30～200個のアデノシンヌクレオチドを含む少なくとも1つのポリ(A)配列を含み、前記RNAの3'末端のヌクレオチドが、アデノシンである、上記のいずれかに記載のRNA。
２０． 少なくとも1つの異種3'UTRが、PSMB3、ALB7、CASP1、COX6B1、GNAS、NDUFA1及びRPS9から選択される遺伝子、又はこれらの遺伝子のいずれか1つの相同体、フラグメント若しくはバリアントの3'UTRから誘導される核酸配列を含むか、又はそれからなる、上記のいずれかに記載のRNA。
２１． 少なくとも1つの異種5'UTRが、HSD17B4、RPL32、ASAH1、ATP5A1、MP68、NDUFA4、NOSIP、RPL31、SLC7A3、TUBB4B及びUBQLN2から選択される遺伝子、又はこれらの遺伝子のいずれか1つの相同体、フラグメント若しくはバリアントの5'UTRから誘導される核酸配列を含むか、又はそれからなる、上記のいずれかに記載のRNA。
２２． HSD17B4由来の5'UTRから誘導される核酸配列を含むか、又はそれからなる少なくとも1つの異種5'UTR及びPSMB3の3'UTRから誘導される核酸配列を含むか、又はそれからなる少なくとも1つの異種3'UTRを含む、上記のいずれかに記載のRNA。
２３． 5'から3'に:
i)5'キャップ1構造;
ii)HSD17B4遺伝子の5'UTRから誘導される、好ましくは配列番号232に記載の5'UTR
iii)少なくとも1つのコード配列;
iv)PSMB3遺伝子の3'UTRから誘導される、好ましくは配列番号254に記載の3'UTR;
v)場合により、ヒストンステムループ配列;及び
vi)約100個のAヌクレオチドを含むポリ(A)配列
を含み、前記RNAの3'末端のヌクレオチドがアデノシンである、上記のいずれかに記載のRNA。
２４． mRNA、自己複製RNA、環状RNA、又はレプリコンRNAである、上記のいずれかに記載のRNA。
２５． mRNAである、上記のいずれかに記載のRNA。
２６． mRNAが、レプリコンRNA又は自己複製RNAではない、上記25に記載のRNA。
２７． 5'キャップ構造、好ましくは、m7G、キャップ0、キャップ1、キャップ2、修飾されたキャップ0又は修飾されたキャップ1構造、好ましくは、5'キャップ1構造を含む、上記のいずれかに記載のRNA。
２８． 1-メチルシュードウリジン置換を含まない、上記のいずれかに記載のRNA。
２９． 化学的に修飾されたヌクレオチドを含まない、上記のいずれかに記載のRNA。
３０． シュードウリジン又は1-メチルシュードウリジン置換を含む、上記のいずれかに記載のRNA。
３１． RNAが、in vitroで転写されたRNAであり、RNA in vitro転写が、配列が最適化されたヌクレオチド混合物及びキャップアナログの存在下で行われ、好ましくは、配列が最適化されたヌクレオチド混合物が、化学的に修飾されたヌクレオチドを含まない、上記のいずれかに記載のRNA。
３２． 精製されたRNA、好ましくは、RP-HPLC及び/又はTFFにより精製されたRNAである、上記のいずれかに記載のRNA。
３３． RP-HPLC及び/又はTFFにより精製されたRNAであり、RP-HPLC及び/又はTFFを用いて精製されていないRNAとして約5%、10%、又は20%少ない二本鎖RNA副産物を含む、上記のいずれかに記載のRNA。
３４． RP-HPLC及び/又はTFFにより精製された精製されたRNAであり、オリゴdT精製、沈殿、濾過及び/又はアニオン交換クロマトグラフィーを用いて精製されたRNAとして約5%、10%、又は20%少ない二本鎖RNA副産物を含む、上記のいずれかに記載のRNA。
３５． 上記のいずれかに記載のRNAを含む組成物であって、場合により、少なくとも1つの薬学的に許容される担体を含む、組成物。
３６． 上記1から34のいずれかに記載のRNAに加えて、複数又は少なくとも1つのさらなるRNAを含む多価組成物である、上記35に記載の組成物。
３７． 多価組成物の複数又は少なくとも1つより多くのRNAそれぞれが、異なるスパイクタンパク質、好ましくは、融合前の安定化されたスパイクタンパク質をコードする、上記36に記載の組成物。
３８． 異なるスパイクタンパク質又は融合前の安定化されたスパイクタンパク質が、異なるSARS-CoV-2ウイルスバリアント/分離株から誘導される、上記37に記載の組成物。
３９． 異なるスパイクタンパク質又は融合前の安定化されたスパイクタンパク質が、B.1.1.529(オミクロン、南アフリカ)(BA.1_v1、BA.1_v0、B.1.1.529、BA.2、BA.1_v2、BA.1_v3、BA.1_v4、BA.1_v5を含む)、B.1.351(南アフリカ)、B.1.1.7(英国)、P.1(ブラジル)、B.1.429(カリフォルニア)、B.1.525(ナイジェリア)、B.1.258(チェコ共和国)、B.1.526(ニューヨーク)、A.23.1(ウガンダ)、B.1.617.1(インド)、B.1.617.2(インド)、B.1.617.3(インド)、P.2(ブラジル)、C37.1(ペルー)又はB.1.1.621バリアントから誘導される、上記38に記載の組成物。
４０． 異なるスパイクタンパク質又は融合前の安定化されたスパイクタンパク質が、少なくともB.1.1.529、BA.1_v1、BA.1_v0、BA.1_v2、BA.1_v3、BA.1_v4、及び/又はBA.1_v5並びにB.1.617.2バリアントから誘導される、上記38又は39に記載の組成物。
４１． 70%以上のRNA完全性を有するRNAを含む、上記35から40のいずれかに記載の組成物。
４２． 組成物が、70%以上のキャッピング程度を有するRNAを含み、好ましくは、RNA種の少なくとも70%、80%、又は90%が、キャップ1構造を含む、上記35から40のいずれかに記載の組成物。
４３． RNAが、1つ以上のカチオン性又はポリカチオン性化合物、好ましくは、カチオン性若しくはポリカチオン性ポリマー、カチオン性若しくはポリカチオン性多糖、カチオン性若しくはポリカチオン性脂質、カチオン性若しくはポリカチオン性タンパク質、カチオン性若しくはポリカチオン性ペプチド、又はそれらの任意の組み合わせと複合体化されるか、若しくは会合するか、又は少なくとも部分的に複合体化されるか、若しくは部分的に会合する、上記35から40のいずれかに記載の組成物。
４４． RNAが、1つ以上の脂質又は脂質ベースの担体と複合体化するか、又は会合し、これにより、好ましくは少なくとも1つのRNAを封入する、リポソーム、脂質ナノ粒子(LNP)、リポプレックス、及び/又はナノリポソームを形成する、上記43に記載の組成物。
４５． RNAが、1つ以上の脂質と複合体化され、これにより、脂質ナノ粒子を形成する、上記43又は44に記載の組成物。
４６． LNPが、式III-3:_(III-3)によるカチオン性脂質を含む、上記44又は45に記載の組成物。
４７． LNPが、式(IVa):_(IVa)
(式中、nは、30～60の範囲にある平均値を有し、好ましくは、nは、約45、46、47、48、49、50、51、52、53、54の平均値を有し、最も好ましくは、nは49又は45の平均値を有する)のPEG脂質を含む、上記44から45のいずれかに記載の組成物。
４８． LNPが、式(IVa):_(IVa)
(式中、nは、PEG脂質の平均分子量が約2500g/molであるように選択される整数である)のPEG脂質を含む、上記44から47のいずれかに記載の組成物。
４９． LNPが、1つ以上の中性脂質及び/又は1つ以上のステロイド若しくはステロイドアナログを含む、上記44から48のいずれかに記載の組成物。
５０． 中性脂質が、1,2-ジステアロイル-sn-グリセロ-3-ホスホコリン(DSPC)であり、好ましくは、カチオン性脂質とDSPCとのモル比が、約2:1～約8:1の範囲にある、上記49に記載の組成物。
５１． ステロイドが、コレステロールであり、好ましくは、カチオン性脂質とコレステロールとのモル比が、約2:1～約1:1の範囲にある、上記49に記載の組成物。
５２． LNPが、
(i)少なくとも1つのカチオン性脂質、好ましくは、式(III)の脂質、より好ましくは、脂質III-3;
(ii)少なくとも1つの中性脂質、好ましくは、1,2-ジステアロイル-sn-グリセロ-3-ホスホコリン(DSPC);
(iii)少なくとも1つのステロイド又はステロイドアナログ、好ましくは、コレステロール;及び
(iv)少なくとも1つのポリマーコンジュゲートされた脂質、好ましくは、式(IVa、n=49)から誘導されるPEG-脂質
を含み、
(i)～(iv)が、約20～60%のカチオン性脂質、5～25%の中性脂質、25～55%のステロール、及び0.5～15%のPEG-脂質のモル比にある、上記44から51のいずれかに記載の組成物。
５３． LNPが、
(i)少なくとも1つのカチオン性脂質、好ましくは、式(III)の脂質、より好ましくは、脂質III-3;
(ii)少なくとも1つの中性脂質、好ましくは、1,2-ジステアロイル-sn-グリセロ-3-ホスホコリン(DSPC);
(iii)少なくとも1つのステロイド又はステロイドアナログ、好ましくは、コレステロール;及び
(iv)少なくとも1つのポリマーコンジュゲートされた脂質、好ましくは、式(IVa、n=45)から誘導されるPEG-脂質
を含み、
(i)～(iv)が、約20～60%のカチオン性脂質、5～25%の中性脂質、25～55%のステロール、及び0.5～15%のPEG-脂質のモル比にある、上記44から51のいずれかに記載の組成物。
５４． (i)～(iv)が、約50:10:38.5:1.5、好ましくは、47.4:10:40.9:1.7のモル比にある、上記52又は53に記載の組成物。
５５． 約20%未満の遊離(複合体化されていないか、又は封入されていない)RNA、好ましくは、約15%未満の遊離RNA、より好ましくは、約10%未満の遊離RNAを含む、上記45から54のいずれかに記載の組成物。
５６． 脂質とRNAとのwt/wt比が、約10:1～約60:1、好ましくは、約20:1～約30:1、例えば、約25:1である、上記45から55のいずれかに記載の組成物。
５７． RNAを封入するLNPのn/p比が、約1～約10の範囲、好ましくは、約5～約7の範囲、より好ましくは、約6である、上記45から56のいずれかに記載の組成物。
５８． 約0.4未満、好ましくは、約0.3未満、より好ましくは、約0.2未満、最も好ましくは、約0.1未満の多分散指数(PDI)値を有する、上記45から57のいずれかに記載の組成物。
５９． LNPが、
(a)約60nm～約120nmの範囲、好ましくは、約120nm未満、より好ましくは、約100nm未満、最も好ましくは、約80nm未満のZ-平均サイズを有し;
(b)約500nmを超える粒子サイズを有する約10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%、1%未満のLNPを含み;及び/又は
(c)約20nmより小さい粒子サイズを有する約10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%、1%未満のLNPを含む、上記44から58のいずれかに記載の組成物。
６０． 脂質ベースの担体の少なくとも約80%、85%、90%、95%が、好ましくは固体コア又は部分的に固体のコアを含む、球状形態を有する、上記44から59のいずれかに記載の組成物。
６１． 約150FNU～約0.0FNUの範囲、好ましくは、約50FNU以下、より好ましくは、約25FNU以下の濁度を有する、上記44から60のいずれかに記載の組成物。
６２． (a)約50～約300mMの濃度の糖、好ましくは、約150mMの濃度のスクロース;
(b)約10mM～約200mMの濃度の塩、好ましくは、約75mMの濃度のNaCl;及び/又は
(c)濃度1mM～約100mMの緩衝剤、好ましくは、約10mMの濃度のNa3PO4
をさらに含む、上記35から61のいずれかに記載の組成物。
６３． 約pH7.0～約pH8.0の範囲にある、好ましくは、約pH7.4のpHを有する、上記35から62のいずれかに記載の組成物。
６４． 凍結乾燥された組成物である、上記35から60のいずれかに記載の組成物。
６５． 凍結乾燥された組成物が、約10%未満の水含有量を有し、好ましくは、凍結乾燥された組成物が、約0.5%～5%の水含有量を有する、上記64に記載の組成物。
６６． RNAの少なくとも70%、75%、80%、85%、90%又は95%が、約5℃の温度で液体として保存後少なくとも約2週間未変化である、上記35から63のいずれかに記載の組成物。
６７． RNAの少なくとも70%、75%、80%、85%、90%又は95%が、約5℃の温度で液体として保存後約2週間～約1カ月間、2カ月間、3カ月間、4カ月間、5カ月間、6カ月間又は1年間未変化である、上記66に記載の組成物。
６８． RNAの少なくとも80%が、約5℃の温度で液体として約2週間の保存後未変化である、上記66に記載の組成物。
６９． RNA及びRNAを封入する脂質ベースの担体が、少なくとも1つの精製工程により、好ましくは、TFFの少なくとも1つの工程及び/又は清澄化の少なくとも1つの工程及び/又は濾過の少なくとも1つの工程によって精製されている、上記35から68のいずれかに記載の組成物。
７０． 上記1から34のいずれかに記載のRNA及び/又は上記35から69のいずれかに記載の組成物を含む、ワクチン。
７１． コロナウイルスに対する、好ましくは、コロナウイルスSARS-CoV-2に対する、適応免疫応答、好ましくは、防御的適応免疫応答を誘発する、上記70に記載のワクチン。
７２． 上記1から34のいずれかに記載のRNAの複数若しくは少なくとも1つより多く、又は上記35から69のいずれかに記載の組成物の複数若しくは少なくとも1つより多くを含む多価ワクチンである、上記70又は71に記載のワクチン。
７３． 上記1から34のいずれかに記載のRNA及び/又は上記35から69のいずれかに記載の組成物、及び/又は上記70から72のいずれかに記載のワクチンを含み、場合により、溶解のための液体ビヒクルを含み、場合により、成分の投与及び投薬量についての情報を提供する技術指示書を含む、キット又はパーツのキット(kit of parts)。
。
７４． 医薬としての使用のための、上記1から34のいずれかに記載のRNA、上記35から69のいずれかに記載の組成物、上記70から72のいずれかに記載のワクチン、上記73に記載のキット又はパーツのキット。
７５． コロナウイルス、好ましくは、SARS-CoV-2コロナウイルスの感染、又はこのような感染、好ましくは、COVID-19と関連する障害の処置又は予防における使用のための、上記1から34のいずれかに記載のRNA、上記35から69のいずれかに記載の組成物、上記70から72のいずれかに記載のワクチン、上記73に記載のキット又はパーツのキット。
７６． 障害を処置又は予防する方法であって、それを必要とする対象に、上記1から34のいずれかに記載のRNA、上記35から69のいずれかに記載の組成物、上記70から72のいずれかに記載のワクチン、上記73に記載のキット又はパーツのキットを適用するか、又は投与することを含む、方法。
７７． 障害が、コロナウイルス、好ましくは、SARS-CoV-2コロナウイルスの感染、又はこのような感染、好ましくは、COVID-19と関連する障害である、上記76に記載の障害を処置又は予防する方法。
７８． SARS-CoV-2コロナウイルス感染又はこのような感染、好ましくは、COVID-19と関連する障害を予防する方法としてさらに定義される、上記76又は77に記載の障害を処置又は予防する方法。
７９． SARS-CoV-2コロナウイルス感染又はこのような感染と関連する障害を予防する方法としてさらに定義され、感染が、B.1.1.529(オミクロン、南アフリカ)(BA.1_v1、BA.1_v0、B.1.1.529、BA.2、BA.1_v2、BA.1_v3、BA.1_v4、BA.1_v5を含む)、B.1.351(南アフリカ)、B.1.1.7(英国)、P.1(ブラジル)、B.1.429(カリフォルニア)、B.1.525(ナイジェリア)、B.1.258(チェコ共和国)、B.1.526(ニューヨーク)、A.23.1(ウガンダ)、B.1.617.1(インド)、B.1.617.2(インド)、B.1.617.3(インド)、P.2(ブラジル)、C37.1(ペルー)及びB.1.1.621から選択されるSARS-CoV-2分離株によるものである、上記76に記載の障害を処置又は予防する方法。
８０． SARS-CoV-2コロナウイルス感染又はこのような感染と関連する障害を予防する方法としてさらに定義され、感染が、上記1から4のいずれかに記載のアミノ酸置換、欠失又は挿入を含むSARS-CoV-2分離株によるものである、上記76に記載の障害を処置又は予防する方法。
８１． 必要とする対象が、哺乳類対象、好ましくは、ヒト対象である、上記76から80のいずれかに記載の障害を処置又は予防する方法。
８２． ヒト対象が、好ましくは、少なくとも50、60、65、又は70歳の年齢の、高齢ヒト対象である、上記81に記載の障害を処置又は予防する方法。
８３． ヒト対象が、好ましくは、3歳以下、2歳以下、1.5歳以下、1歳(12カ月)以下、9カ月以下、6カ月以下若しくは3カ月以下の年齢、又は6カ月～2歳の年齢の、新生児又は幼児である、上記81に記載の障害を処置又は予防する方法。
８４． ヒト対象が、18～60歳の年齢である、上記81に記載の障害を処置又は予防する方法。
８５． ヒト対象が、60歳未満、55歳未満、50歳未満、45歳未満又は40歳未満の年齢である、上記81に記載の障害を処置又は予防する方法。
８６． ヒト対象が、約12～60歳;12～55歳;12～50歳;12～45歳;又は12～40歳の年齢である、上記85に記載の障害を処置又は予防する方法。
８７． ヒト対象が、約18～55歳;18～50歳;18～45歳;又は18～40歳の年齢である、上記81に記載の障害を処置又は予防する方法。
８８． ヒト対象が、約12～60歳;12～55歳;12～50歳;12～45歳;又は12～40歳の年齢である、上記81に記載の障害を処置又は予防する方法。
８９． ヒト対象が、約18～60歳;18～55歳;18～50歳;18～45歳;又は18～40歳の年齢である、上記81に記載の障害を処置又は予防する方法。
９０． ヒト対象が、約18～50歳の年齢である、上記81に記載の障害を処置又は予防する方法。
９１． COVID-19疾患の1つ以上の症状の重症度を低減する、上記82に記載の方法。
９２． 対象が、入院、集中治療室への入院、酸素の補給を用いた処置及び/又は人工呼吸器を用いた処置を必要とする可能性を低減する、上記91に記載の方法。
９３． 対象が、重篤又は中程度のCOVID-19疾患を発症する可能性を低減する、上記91に記載の方法。
９４． 少なくとも約6カ月間、対象における重篤なCOVID-19疾患を予防する、上記91に記載の方法。
９５． 対象が、発熱、呼吸困難;嗅覚の喪失及び/又は味覚の喪失を発症する可能性を低減する、上記91に記載の方法。
９６． 対象における抗体、CD4+T細胞応答又はCD8+T細胞応答を刺激する方法としてさらに定義される、上記81から95のいずれかに記載の方法。
９７． 対象における中和抗体応答を刺激する方法としてさらに定義される、上記81から96のいずれかに記載の方法。
９８． 対象が、約1μg～約50μgのRNA;約2μg～約50μgのRNA;約2μg～約25μgのRNA;約5μg～約50μgのRNA;約5μg～約25μgのRNA;約10μg～約50μgのRNA;約10μg～約30μgのRNA;又は約12μgのRNAを含む組成物を投与される、上記81から97のいずれかに記載の方法。
９９． 投与が、組成物が投与される対象の100%においてセロコンバージョンをもたらす、上記98に記載の方法。
１００． 対象が、SARS CoV-2に以前に感染した、上記81から97のいずれかに記載の方法。
１０１． 対象が、少なくとも第一のSARS CoV-2ワクチン組成物で以前に処置された、上記81から97のいずれかに記載の方法。
１０２． 第一のSARS CoV-2ワクチン組成物が、mRNAワクチンであった、上記101に記載の方法。
１０３． 第一のSARS CoV-2ワクチン組成物が、CVnCoV;BNT162;及び/又はmRNA-1273であった、上記102に記載の方法。
１０４． 第一のSARS CoV-2ワクチン組成物が、タンパク質サブユニットワクチンであった、上記102に記載の方法。
１０５． 第一のSARS CoV-2ワクチン組成物が、NVX-CoV2373又はCOVAXであった、上記102に記載の方法。
１０６． 第一のSARS CoV-2ワクチン組成物が、アデノウイルスベクターワクチンであった、上記102に記載の方法。
１０７． 第一のSARS CoV-2ワクチン組成物が、ADZ1222又はAd26.COV-2.Sであった、上記106に記載の方法。
１０８． 対象が、検出可能なSARS CoV-2 Sタンパク質結合抗体を有する、上記81から97のいずれかに記載の方法。
１０９． 少なくとも1つのSARS-CoV-2スパイクタンパク質又はその免疫原性フラグメント若しくは免疫原性バリアントをコードする少なくとも1つのコード配列を含むRNAであって、SARS-CoV-2スパイクタンパク質が、配列番号1の配列と比較して、H69;V70;A222;Y453;S477;I692;R403;K417;N437;N439;V445;G446;L455;F456;K458;A475;G476;T478;E484;G485;F486;N487;Y489;F490;Q493;S494;P499;T500;N501;V503;G504;Y505;Q506;Y144;A570;P681;T716;S982;D1118;L18;D80;D215;L242;A243;L244;R246;A701;T20;P26;D138;R190;H655;T1027;S13;W152;L452;R346;P384;G447;G502;T748;A522;V1176;T859;S247;Y248;L249;T250;P251;G252;G75;T76;D950;E154;G769;S254;Q613;F157;R158;Q957;D253;T95;F888;Q677;A67;Q414;N450;V483;G669;T732;Q949;Q1071;E1092;H1101;N1187;W258;T19;V126;H245;S12;A899;G142;E156;K558;及び/又はQ52に対応する位置において少なくとも1個のアミノ酸置換、欠失又は挿入を含み、RNAが、少なくとも1つの異種非翻訳領域(UTR)を含む、RNA。
１１０． SARS-CoV-2スパイクタンパク質が、配列番号1の配列と比較して、H69del;V70del;A222V;Y453F;S477N;I692V;R403K;K417N;N437S;N439K;V445A;V445I;V445F;G446V;G446S;G446A;L455F;F456L;K458N;A475V;G476S;G476A;S477I;S477R;S477G;S477T;T478I;T478K;T478R;T478A;E484Q;E484K;E484A;E484D;G485R;G485S;F486L;N487I;Y489H;F490S;F490L;Q493L;Q493K;S494P;S494L;P499L;T500I;N501Y;N501T;N501S;V503F;V503I;G504D;Y505W;Q506K;Q506H;Y144del;A570D;P681H;T716I;S982A;D1118H;L18F;D80A;D215G;L242del;A243del;L244del;L242del;A243del;L244del;R246I;A701V;T20N;P26S;D138Y;R190S;H655Y;T1027I;S13I;W152C;L452R;R346T;P384L;L452M;F456A;F456K;F456V;E484P;K417T;G447V;L452Q;A475S;F486I;F490Y;Q493R;S494A;P499H;P499S;G502V;T748K;A522S;V1176F;T859N;S247del;Y248del;L249del;T250del;P251del;G252del;R246del;S247del;Y248del;L249del;T250del;P251del;G252del;G75V;T76I;G75V;T76I;D950N;P681R;E154K;G769V;S254F;Q613H;F157L;F157del;R158del;Q957R;D253G;T95I;F888L;Q677H;A67V;Q414K;N450K;V483A;G669S;T732A;Q949R;Q1071H;E1092K;H1101Y;N1187D;W258L;V70F;T19R;Y144T;Y145S;ins145N;R346K;R346S;V126A;H245Y;ins214TDR;S12F;W152R;A899S;G142D;E156G;K558N;及び/又はQ52Rに対応する位置において少なくとも1個のアミノ酸置換、欠失又は挿入を含む、上記109に記載のRNA。
１１１． SARS-CoV-2スパイクタンパク質が、配列番号1の配列と比較して、H69;V70;A222;Y453;S477;I692;R403;K417;N437;N439;V445;G446;L455;F456;K458;A475;G476;T478;E484;G485、F486;N487;Y489;F490;Q493;S494;P499;T500;N501;V503;G504;Y505;及び/又はQ506に対応する位置において少なくとも1個のアミノ酸置換、欠失又は挿入を含む、上記109に記載のRNA。
１１２． SARS-CoV-2スパイクタンパク質が、配列番号1の配列と比較して、H69del;V70del;A222V;Y453F;S477N;I692V;R403K;K417N;N437S;N439K;V445A;V445I;V445F;G446V;G446S;G446A;L455F;F456L;K458N;A475V;G476S;G476A;S477I;S477R;S477G;S477T;T478I;T478K;T478R;T478A;E484Q;E484K;E484A;E484D;G485R;G485S;F486L;N487I;Y489H;F490S;F490L;Q493L;Q493K;S494P;S494L;P499L;T500I;N501Y;N501T;N501S;V503F;V503I;G504D;Y505W;Q506K;及び/又はQ506Hに対応する位置において少なくとも1個のアミノ酸置換、欠失又は挿入を含む、上記111に記載のRNA。
１１３． SARS-CoV-2スパイクタンパク質が、配列番号1の配列と比較して、H69;V70;A222;Y453;S477;I692;R403;K417;N437;N439;V445;G446;L455;F456;K458;A475;G476;T478;E484;G485、F486;N487;Y489;F490;Q493;S494;P499;T500;N501;V503;G504;Y505;Q506;Y144;A570;P681;T716;S982;D1118;L18;D80;D215;L242;A243;L244;R246;A701;T20;P26;D138;R190;H655;T1027;S13;W152;L452;R346;P384;G447;G502;T748;A522;又はV1176に対応する位置において少なくとも1個のアミノ酸置換、欠失又は挿入を含む、上記109に記載のRNA。
１１４． SARS-CoV-2スパイクタンパク質が、配列番号1の配列と比較して、H69del;V70del;A222V;Y453F;S477N;I692V;R403K;K417N;N437S;N439K;V445A;V445I;V445F;G446V;G446S;G446A;L455F;F456L;K458N;A475V;G476S;G476A;S477I;S477R;S477G;S477T;T478I;T478K;T478R;T478A;E484Q;E484K;E484A;E484D;G485R;G485S;F486L;N487I;Y489H;F490S;F490L;Q493L;Q493K;S494P;S494L;P499L;T500I;N501Y;N501T;N501S;V503F;V503I;G504D;Y505W;Q506K;Q506H;Y144del;A570D;P681H;T716I;S982A;D1118H;L18F;D80A;D215G;L242del;A243del;L244del;L242del;A243del;L244del;R246I;A701V;T20N;P26S;D138Y;R190S;H655Y;T1027I;S13I;W152C;L452R;R346T;P384L;L452M;F456A;F456K;F456V;E484P;K417T;G447V;L452Q;A475S;F486I;F490Y;Q493R;S494A;P499H;P499S;G502V;T748K;A522S;及び/又はV1176Fに対応する位置において少なくとも1個のアミノ酸置換、欠失又は挿入を含む、上記113に記載のRNA。
１１５． SARS-CoV-2スパイクタンパク質が、配列番号1の配列と比較して、T859;R246;S247;Y248;L249;T250;P251;G252;G75;T76;D950;E154;G769;S254;Q613;F157;Q957;D253;T95;F888;Q677;A67;Q414;N450;V483;G669;T732;Q949;Q1071;E1092;H1101;N1187;F157;R158;W258;T19;H245;S12;A899;G142;E156;K558及び/又はQ52に対応する位置において少なくとも1個のアミノ酸置換、欠失又は挿入を含む、上記109に記載のRNA。
１１６． SARS-CoV-2スパイクタンパク質が、配列番号1の配列と比較して、T859N;S247del;Y248del;L249del;T250del;P251del;G252del;R246del;S247del;Y248del;L249del;T250del;P251del;G252del;G75V;T76I;G75V;T76I;D950N;P681R;E154K;G769V;S254F;Q613H;F157L;Q957R;D253G;T95I;F888L;Q677H;A67V;Q414K;N450K;V483A;G669S;T732A;Q949R;Q1071H;E1092K;H1101Y;N1187D;F157del;R158del;W258L;V70F;T19R;Y144T;Y145S;ins145N;R346K;R346S;V126A;H245Y;ins214TDR;S12F;W152R;A899S;G142D;E156G;K558N及び/又はQ52Rに対応する位置において少なくとも1個のアミノ酸置換、欠失又は挿入を含む、上記115に記載のRNA。
１１７． SARS-CoV-2スパイクタンパク質が、配列番号1の配列と比較して、D614;H49;V367;P1263;V483;S939;S943;L5;L8;S940;C1254;Q239;M153;V1040;A845;Y145;A831;及び/又はM1229に対応する位置において少なくとも1個のアミノ酸置換、欠失又は挿入をさらに含む、上記109に記載のRNA。
１１８． SARS-CoV-2スパイクタンパク質が、配列番号1の配列と比較して、D614G;H49Y;V367F;P1263L;V483A;S939F;S943P;L5F;L8V;S940F;C1254F;Q239K;M153T;V1040F;A845S;Y145H;A831V;及び/又はM1229Iに対応する位置において少なくとも1個のアミノ酸置換、欠失又は挿入をさらに含む、上記117に記載のRNA。
１１９． SARS-CoV-2スパイクタンパク質が、RBDドメイン(アミノ酸位置aa319～aa541;参照配列番号1によるアミノ酸位置)又はCNDドメイン(アミノ酸位置aa329～aa529;参照配列番号1によるアミノ酸位置)に位置する位置に少なくとも1個のアミノ酸置換、欠失又は挿入を含む、上記のいずれかに記載のRNA。
１２０． SARS-CoV-2スパイクタンパク質が、配列番号1の配列と比較して、H69;V70;A222;Y453;S477;I692;R403;K417;N437;N439;V445;G446;L455;F456;K458;A475;G476;T478;E484;G485;F486;N487;Y489;F490;Q493;S494;P499;T500;N501;V503;G504;Y505;Q506;Y144;A570;P681;T716;S982;D1118;L18;D80;D215;L242;A243;L244;R246;A701;T20;P26;D138;R190;H655;T1027;S13;W152;L452;R346;P384;G447;G502;T748;A522;V1176;T859;S247;Y248;L249;T250;P251;G252;G75;T76;D950;E154;G769;S254;Q613;F157;Q957;D253;T95;F888;Q677;A67;Q414;N450;V483;G669;T732;Q949;Q1071;E1092;H1101;N1187及び/又はQ52に対応する位置において少なくとも1個のアミノ酸置換又は欠失を含む、上記のいずれかに記載のRNA。
１２１． SARS-CoV-2スパイクタンパク質が、配列番号1の配列と比較して、K417、E484、N501、及び/又はL452に対応する位置において少なくとも1個のアミノ酸置換を含む、上記109に記載のRNA。
１２２． K417に対応する位置における少なくとも1個のアミノ酸置換が、S、T、Q又はN置換である、上記121に記載のRNA。
１２３． K417に対応する位置における少なくとも1個のアミノ酸置換が、K417N置換である、上記122に記載のRNA。
１２４． E484に対応する位置における少なくとも1個のアミノ酸置換が、K、P、Q、A、又はD置換である、上記121に記載のRNA。
１２５． E484に対応する位置における少なくとも1個のアミノ酸置換が、E484K又はE484Q置換である、上記124に記載のRNA。
１２６． E484に対応する位置における少なくとも1個のアミノ酸置換が、E484K置換である、上記125に記載のRNA。
１２７． N501に対応する位置における少なくとも1個のアミノ酸置換が、Y、T、又はS置換である、上記121に記載のRNA。
１２８． N501に対応する位置における少なくとも1個のアミノ酸置換が、N501Y置換である、上記127に記載のRNA。
１２９． L452に対応する位置における少なくとも1個のアミノ酸置換が、R又はQ置換である、上記121に記載のRNA。
１３０． L452に対応する位置における少なくとも1個のアミノ酸置換が、L452R置換である、上記129に記載のRNA。
１３１． SARS-CoV-2スパイクタンパク質が、N501及びE484に対応する位置にアミノ酸置換、好ましくは、N501Y及びE484K置換を含む、上記のいずれかに記載のRNA。
１３２． SARS-CoV-2スパイクタンパク質が、フューリン切断部位領域に位置する少なくとも1個のアミノ酸置換を含む、上記のいずれかに記載のRNA。
１３３． フューリン切断部位におけるアミノ酸置換が、配列番号1に対してP681に対応する位置に位置する、上記132に記載のRNA。
１３４． P681に対応する位置のアミノ酸置換が、R又はH置換である、上記133に記載のRNA。
１３５． P681に対応する位置のアミノ酸置換が、P681R置換である、上記134に記載のRNA。
１３６． SARS-CoV-2スパイクタンパク質が、L452及びP681に対応する位置に少なくとも1個のアミノ酸置換、好ましくは、L452R及びP681Rを含む、上記のいずれかに記載のRNA。
１３７． SARS-CoV-2スパイクタンパク質が、L452、T478及びP681に対応する位置に少なくとも1個のアミノ酸置換、好ましくは、L452R、T478K及びP681Rを含む、上記のいずれかに記載のRNA。
１３８． SARS-CoV-2スパイクタンパク質が、以下のSARS CoV-2分離株:B.1.1.529(オミクロン、南アフリカ)(BA.1_v1、BA.1_v0、B.1.1.529、BA.2、BA.1_v2、BA.1_v3、BA.1_v4、BA.1_v5を含む)、B.1.351(南アフリカ)、B.1.1.7(英国)、P.1(ブラジル)、B.1.429(カリフォルニア)、B.1.525(ナイジェリア)、B.1.258(チェコ共和国)、B.1.526(ニューヨーク)、A.23.1(ウガンダ)、B.1.617.1(インド)、B.1.617.2(インド)、B.1.617.3(インド)、P.2(ブラジル)、C37.1(ペルー)及びB.1.1.621から選択される少なくとも1個のさらなるアミノ酸置換又は欠失を含む、上記のいずれかに記載のRNA。
１３９． SARS-CoV-2スパイクタンパク質が、配列番号1の配列と比較して、
・E484K、N501Y、L18F、D80A、D215G、L242del、A243del、L244del、R246I、K417N、D614G、及びA701V;
・E484K、N501Y、L18F、D80A、D215G、L242del、A243del、L244del、K417N、D614G、及びA701V;
・E484K、N501Y、L18F、T20N、P26S、D138Y、R190S、K417T、D614G、H655Y、及びT1027I;
・E484K、N501Y、L18F、T20N、P26S、D138Y、R190S、K417T、D614G、H655Y、T1027I、及びV1176F;
・L452R、P681R、及びD614G;
・L452R、E484Q、P681R、E154K、D614G、及びQ1071H;
・L452R、P681R、T19R、F157del、R158del、T478K、D614G、及びD950N;
・T19R、L452R、E484Q、D614G、P681R及びD950N;
・G75V、T76I、S247del、Y248del、L249del、T250del、P251del、G252del、D253del、L452Q、F490S、D614G、及び/又はT859N;
・T95I、Y145N、R346K、E484K、N501Y、D614G、P681H、及びD950N;
・T95I、Y144T、Y145S、ins145N、R346K、E484K、N501Y、D614G、P681H、及びD950N;
・H69del、V70del、Y144del、E484K、N501Y、A570D、D614G、P681H、T716I、S982A、及びD1118H;
・S13I、W152C、L452R、及びD614G;
・L452R;及びD614G;
・69del;70del;N439K;D614G;
・T95I;E484K;D614G;及びA701V;
・L5F、T95I、D253G、E484K、D614G、及びA701V;
・L5F、T95I、D253G、S477N、D614G、及びQ957R;
・F157L、V367F、Q613H、及びP681R;
・S254F、D614G、P681R、及びG769V;
・T478K、D614G、P681H、及びT732A;
・P26S、H69del、V70del、V126A、Y144del、L242del、A243del、L244del、H245Y、S477N、E484K、D614G、P681H、T1027I及びD1118H;
・ins214TDR、Q414K、N450K、D614G、及びT716I;
・S12F、H69del、V70del、W152R、R346S、L452R、D614G、Q677H及びA899S;
・E484K、D614G及びV1176F;
・Q52R、A67V、H69del、V70del、F157del、R158del、E484K、D614G、Q677H及びF888L;
・Q52R、A67V、H69del、V70del、Y144del、E484K、D614G、Q677H及びF888L;
・A67V、H69del、V70del、Y144del、E484K、D614G、Q677H及びF888L;
・T19R、T95I、G142D、E156G、F157del、R158del、W258L、K417N、L452R、T478K、K558N、D614G、P681R、及びD950N;
・T19R、V70F、G142D、E156G、F157del、R158del、A222V、K417N、L452R、T478K、D614G、P681R、及びD950N;
・T19R、T95I、F157del、R158del、W258L、K417N、L452R、T478K、D614G、P681R、及びD950N;
・T19R、V70F、F157del、R158del、A222V、K417N、L452R、T478K、D614G、P681R、及びD950N;
・H69del、V70del及びD614G;
・D614G及びM1229I;
・A222V及びD614G;
・S477N及びD614G;
・N439K及びD614G;
・H69del、V70del、Y453F、D614G及びI692I;
・Y453F及びD614G;
・D614G及びI692V;
・H69del、V70del、A222V、Y453F、D614G及びI692I;
・N501Y及びD614G;
・K417N、E484K、N501Y及びD614G;並びに
・E484K及びD614G
から選択されるアミノ酸置換、欠失又は挿入を含む、上記のいずれかに記載のRNA。
１４０． SARS-CoV-2スパイクタンパク質が、配列番号1の配列と比較して、
・E484K、N501Y、L18F、D80A、D215G、L242del、A243del、L244del、R246I、K417N、D614G、及びA701V;並びに
・E484K、N501Y、L18F、D80A、D215G、L242del、A243del、L244del、K417N、D614G、及びA701V
から選択されるアミノ酸置換、又は欠失を含む、上記のいずれかに記載のRNA。
１４１． SARS-CoV-2スパイクタンパク質が、配列番号1の配列と比較して、以下の
・K986P、V987P、E484K、N501Y、L18F、D80A、D215G、L242del、A243del、L244del、R246I、K417N、D614G、及びA701V;並びに
・K986P、V987P、E484K、N501Y、L18F、D80A、D215G、L242del、A243del、L244del、K417N、D614G、及びA701V
から選択されるアミノ酸置換、又は欠失を含む、上記のいずれかに記載のRNA。
１４２． SARS-CoV-2スパイクタンパク質が、配列番号1の配列と比較して、
・L452R、P681R、及びD614G;
・L452R、E484Q、P681R、E154K、D614G、及びQ1071H;
・L452R、P681R、T19R、F157del、R158del、T478K、D614G、及びD950N;並びに
・T19R、L452R、E484Q、D614G、P681R及びD950N
から選択されるアミノ酸置換、又は欠失を含む、上記109から139のいずれかに記載のRNA。
１４３． 少なくとも1つのSARS-CoV-2スパイクタンパク質が、配列番号1、10、22738、22740、22742、22744、22746、22748、22750、22752、22754、22756、22758、22959～22964、27087～27109のいずれか1つと同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一であるアミノ酸配列又はこれらのいずれかの免疫原性フラグメント若しくは免疫原性バリアントの少なくとも1つを含むか、又はそれからなる、上記のいずれかに記載のRNA。
１４４． スパイクタンパク質(S)が、スパイクタンパク質フラグメントS1、又はその免疫原性フラグメント若しくは免疫原性バリアントを含むか、又はそれからなる、上記129から143のいずれかに記載のRNA。
１４５． 少なくとも1つのSARS-CoV-2スパイクタンパク質が、配列番号1、10、22738、22740、22742、22744、22746、22748、22750、22752、22754、22756、22758、22959～22964、27087～27109のいずれか1つと同一であるか、又は95%同一であるアミノ酸配列の少なくとも1つを含むか、又はそれからなる、上記のいずれかに記載のRNA。
１４６． スパイクタンパク質(S)が、少なくとも1つの融合前の安定化変異を含む融合前の安定化されたスパイクタンパク質(S_stab)である、上記129から145のいずれかに記載のRNA。
１４７． 少なくとも1つの融合前の安定化変異が、以下のアミノ酸置換:K986P及びV987Pを含む、上記146に記載のRNA。
１４８． 少なくとも1つのコード配列が、シグナルペプチド、リンカー、ヘルパーエピトープ、抗原クラスター形成エレメント、三量体化エレメント、膜貫通型エレメント、及び/又はVLP形成配列から選択される1つ以上の異種ペプチド又はタンパク質エレメントをさらにコードする、上記のいずれかに記載のRNA。
１４９． 少なくとも1つの異種ペプチド又はタンパク質エレメントが、異種抗原クラスター形成エレメント、異種三量体化エレメント、及び/又はVLP形成配列である、上記148に記載のRNA。
１５０． 少なくとも1つのコード配列が、コドン修飾されたコード配列であり、少なくとも1つのコドン修飾されたコード配列によりコードされるアミノ酸配列が、好ましくは、対応する野生型又は参照コード配列によりコードされるアミノ酸配列と比較して修飾されていない、上記のいずれかに記載のRNA。
１５１． 少なくとも1つのコドン修飾されたコード配列が、C最大化コード配列、CAI最大化コード配列、ヒトコドン使用適合コード配列、G/C含有量が修飾されたコード配列、及びG/Cが最適化されたコード配列、又はそれらの任意の組み合わせから選択される、上記150に記載のRNA。
１５２． 少なくとも1つのコドン修飾されたコード配列が、G/Cが最適化されたコード配列、ヒトコドン使用適合コード配列、又はG/C含有量が修飾されたコード配列である、上記150又は151に記載のRNA。
１５３． 少なくとも1つのコード配列が、配列番号136、137、146、22765、22767、22769、22771、22773、22775、22777、22779、22781、22783、22785、23089～23148、23150～23184、27110～27247のいずれか1つと同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一である配列又はこれらの配列のいずれかのフラグメント若しくはバリアントを含むか、又はそれからなる、上記のいずれかに記載のRNA。
１５４． 少なくとも1つのコード配列が、配列番号136、137、146、22765、22767、22769、22771、22773、22775、22777、22779、22781、22783、22785、23089～23148、23150～23184、27110～27247のいずれか1つと同一であるか、又は少なくとも90%同一である配列を含むか、又はそれからなる、上記のいずれかに記載のRNA。
１５５． 少なくとも1つのコード配列が、少なくとも約50%、55%、又は60%のG/C含有量を有する、上記のいずれかに記載のRNA。
１５６． 少なくとも1つのコード配列が、融合前の安定化K986P及びV987P変異を含むSタンパク質をコードし、コード配列が、配列番号136、137、146、22765、22767、22769、22771、22773、22775、22777、22779、22781、22783、22785、23089～23148、23150～23184、27110～27247と少なくとも95%同一である核酸配列を含むG/Cが最適化されたコード配列を含むか、又はそれからなる、上記のいずれかに記載のRNA。
１５７． 好ましくは、30～200個のアデノシンヌクレオチド及び/又は少なくとも1つのポリ(C)配列を含む、好ましくは、10～40個のシトシンヌクレオチドを含む、少なくとも1つのポリ(A)配列を含む、上記のいずれかに記載のRNA。
１５８． 少なくとも1つのヒストンステムループを含む、上記のいずれかに記載のRNA。
１５９． RNAが、30～200個のアデノシンヌクレオチドを含む少なくとも1つのポリ(A)配列を含み、前記RNAの3'末端のヌクレオチドがアデノシンである、上記のいずれかに記載のRNA。
１６０． 少なくとも1つの異種3'UTRが、PSMB3、ALB7、CASP1、COX6B1、GNAS、NDUFA1及びRPS9から選択される遺伝子、又はこれらの遺伝子のいずれか1つの相同体、フラグメント若しくはバリアントの3'UTRから誘導される核酸配列を含むか、又はそれからなる、上記のいずれかに記載のRNA。
１６１． 少なくとも1つの異種5'UTRが、HSD17B4、RPL32、ASAH1、ATP5A1、MP68、NDUFA4、NOSIP、RPL31、SLC7A3、TUBB4B及びUBQLN2から選択される遺伝子、又はこれらの遺伝子のいずれか1つの相同体、フラグメント若しくはバリアントの5'UTRから誘導される核酸配列を含むか、又はそれからなる、上記のいずれかに記載のRNA。
１６２． HSD17B4由来の5'UTRから誘導される核酸配列を含むか、又はそれからなる少なくとも1つの異種5'UTR及びPSMB3の3'UTRから誘導される核酸配列を含むか、又はそれからなる少なくとも1つの異種3'UTRを含む、上記のいずれかに記載のRNA。
１６３． 5'から3'に:
i)5'キャップ1構造;
ii)HSD17B4遺伝子の5'UTRから誘導される、好ましくは配列番号232に記載の5'UTR
iii)少なくとも1つのコード配列;
iv)PSMB3遺伝子の3'UTRから誘導される、好ましくは配列番号254に記載の3'UTR;
v)場合により、ヒストンステムループ配列;及び
vi)約100個のAヌクレオチドを含むポリ(A)配列
を含み、前記RNAの3'末端のヌクレオチドがアデノシンである、上記のいずれかに記載のRNA。
１６４． mRNA、自己複製RNA、環状RNA、又はレプリコンRNAである、上記のいずれかに記載のRNA。
１６５． mRNAである、上記のいずれかに記載のRNA。
１６６． mRNAが、レプリコンRNA又は自己複製RNAではない、上記165に記載のRNA。
１６７． 5'キャップ構造、好ましくは、m7G、キャップ0、キャップ1、キャップ2、修飾されたキャップ0又は修飾されたキャップ1構造、好ましくは、5'キャップ1構造を含む、上記のいずれかに記載のRNA。
１６８． 1-メチルシュードウリジン置換を含まない、上記のいずれかに記載のRNA。
１６９． 化学的に修飾されたヌクレオチドを含まない、上記のいずれかに記載のRNA。
１７０． シュードウリジン又は1-メチルシュードウリジン置換を含む、上記109から167のいずれかに記載のRNA。
１７１． RNAが、in vitroで転写されたRNAであり、RNA in vitro転写が、配列が最適化されたヌクレオチドの混合物及びキャップアナログの存在下で行われ、好ましくは、配列が最適化されたヌクレオチドの混合物が、化学的に修飾されたヌクレオチドを含まない、上記のいずれかに記載のRNA。
１７２． 精製されたRNA、好ましくは、RP-HPLC及び/又はTFFにより精製されたRNAである、上記のいずれかに記載のRNA。
１７３． RP-HPLC及び/又はTFFにより精製された精製されたRNAであり、RP-HPLC及び/又はTFFで精製されていないRNAとして約5%、10%、又は20%少ない二本鎖RNA副産物を含む、上記のいずれかに記載のRNA。
１７４． RP-HPLC及び/又はTFFにより精製された精製されたRNAであり、オリゴdT精製、沈殿、濾過及び/又はアニオン交換クロマトグラフィーで精製されたRNAとして約5%、10%、又は20%少ない二本鎖RNA副産物を含む、上記のいずれかに記載のRNA。
１７５． 上記1から66のいずれかに記載のRNAを含む組成物であって、場合により、少なくとも1つの薬学的に許容される担体を含む、組成物。
１７６． 上記1から56のいずれかに記載の複数又は少なくとも1つより多いRNAを含む多価組成物である、上記175に記載の組成物。
１７７． 多価組成物の複数又は少なくとも1つより多いRNAがそれぞれ、異なるスパイクタンパク質、好ましくは、融合前の安定化されたスパイクタンパク質をコードする、上記176に記載の組成物。
１７８． 異なるスパイクタンパク質又は融合前の安定化されたスパイクタンパク質が、異なるSARS-CoV-2ウイルスバリアント/分離株から誘導される、上記177に記載の組成物。
１７９． 異なるスパイクタンパク質又は融合前の安定化されたスパイクタンパク質が、B.1.351(南アフリカ)、B.1.1.7(英国)、P.1(ブラジル)、B.1.429(カリフォルニア)、B.1.525(ナイジェリア)、B.1.258(チェコ共和国)、B.1.526(ニューヨーク)、A.23.1(ウガンダ)、B.1.617.1(インド)、B.1.617.2(インド)、B.1.617.3(インド)、P.2(ブラジル)、C37.1(ペルー)又はB.1.1.621バリアントから誘導される、上記178に記載の組成物。
１８０． 異なるスパイクタンパク質又は融合前の安定化されたスパイクタンパク質が、少なくともB.1.1.7、B.1.351、P.1、CAL.20C、B.1.1.519、B.1.621又はC.37から誘導される、上記178又は179に記載の組成物。
１８１． 異なるスパイクタンパク質又は融合前の安定化されたスパイクタンパク質の少なくとも1つが、配列番号1の配列と比較して、E484、N501、P681、D614及び/又はL452に対応する位置に少なくとも1個のアミノ酸置換を含む、上記178に記載の組成物。
１８２． 異なるスパイクタンパク質又は融合前の安定化されたスパイクタンパク質の少なくとも1つが、配列番号1の配列と比較して、E484K、N501Y、P681R、D614G及び/又はL452Rに対応する位置に少なくとも1個のアミノ酸置換を含む、上記181に記載の組成物。
１８３． 異なるスパイクタンパク質又は融合前の安定化されたスパイクタンパク質の少なくとも1つが、配列番号1の配列と比較して、L452R、P681R、及びD614Gに対応する位置にアミノ酸置換を含む、上記182に記載の組成物。
１８４． 70%以上のRNA完全性を有するRNAを含む、上記175から180のいずれかに記載の組成物。
１８５． 組成物が、70%以上のキャッピング程度を有するRNAを含み、好ましくは、RNA種の少なくとも70%、80%、又は90%が、キャップ1構造を含む、上記175から184のいずれかに記載の組成物。
１８６． RNAが、1つ以上のカチオン性若しくはポリカチオン性化合物、好ましくは、カチオン性若しくはポリカチオン性ポリマー、カチオン性若しくはポリカチオン性多糖、カチオン性若しくはポリカチオン性脂質、カチオン性若しくはポリカチオン性タンパク質、カチオン性若しくはポリカチオン性ペプチド、又はそれらの任意の組み合わせと複合体化されるか、若しくは会合するか、又は少なくとも部分的に複合体化されるか、若しくは部分的に会合する、上記175から185のいずれかに記載の組成物。
１８７． RNAが、1つ以上の脂質又は脂質ベースの担体と複合体化されるか、又は会合し、これにより、好ましくは少なくとも1つのRNAを封入する、リポソーム、脂質ナノ粒子(LNP)、リポプレックス、及び/又はナノリポソームを形成する、上記186に記載の組成物。
１８８． RNAが、1つ以上の脂質と複合体化され、これにより、脂質ナノ粒子を形成する、上記186又は187に記載の組成物。
１８９． LNPが、式III-3:

Figure 2024502210000109
によるカチオン性脂質を含む、上記187又は188に記載の組成物。
１９０． LNPが、式(IVa):
Figure 2024502210000110
 (式中、nは、30～60の範囲にある平均値を有し、好ましくは、nは、約45、46、47、48、49、50、51、52、53、54の平均値を有し、最も好ましくは、nは49又は45の平均値を有する)のPEG脂質を含む、上記187から189のいずれかに記載の組成物。
１９１． LNPが、式(IVa):
Figure 2024502210000111
 (式中、nは、PEG脂質の平均分子量が約2500g/molであるように選択される整数である)のPEG脂質を含む、上記187から189のいずれかに記載の組成物。
１９２． LNPが、1つ以上の中性脂質及び/又は1つ以上のステロイド若しくはステロイドアナログを含む、上記187から191のいずれかに記載の組成物。
１９３． 中性脂質が、1,2-ジステアロイル-sn-グリセロ-3-ホスホコリン(DSPC)であり、好ましくは、カチオン性脂質とDSPCとのモル比が、約2:1～約8:1の範囲にある、上記192に記載の組成物。
１９４． ステロイドが、コレステロールであり、好ましくは、カチオン性脂質とコレステロールとのモル比が、約2:1～約1:1の範囲にある、上記192に記載の組成物。
１９５． LNPが、
(i)少なくとも1つのカチオン性脂質、好ましくは、式(III)の脂質、より好ましくは、脂質III-3;
(ii)少なくとも1つの中性脂質、好ましくは、1,2-ジステアロイル-sn-グリセロ-3-ホスホコリン(DSPC);
(iii)少なくとも1つのステロイド又はステロイドアナログ、好ましくは、コレステロール;及び
(iv)少なくとも1つのポリマーコンジュゲートされた脂質、好ましくは、式(IVa、n=49)から誘導されるPEG-脂質
を含み、
(i)～(iv)が、約20～60%のカチオン性脂質、5～25%の中性脂質、25～55%のステロール、及び0.5～15%のPEG-脂質のモル比にある、上記187から194のいずれかに記載の組成物。
１９６． LNPが、
(i)少なくとも1つのカチオン性脂質、好ましくは、式(III)の脂質、より好ましくは、脂質III-3;
(ii)少なくとも1つの中性脂質、好ましくは、1,2-ジステアロイル-sn-グリセロ-3-ホスホコリン(DSPC);
(iii)少なくとも1つのステロイド又はステロイドアナログ、好ましくは、コレステロール;及び
(iv)少なくとも1つのポリマーコンジュゲートされた脂質、好ましくは、式(IVa、n=45)から誘導されるPEG-脂質
を含み、
(i)～(iv)が、約20～60%のカチオン性脂質、5～25%の中性脂質、25～55%のステロール、及び0.5～15%のPEG-脂質のモル比にある、上記187から194のいずれかに記載の組成物。
１９７． (i)～(iv)が、約50:10:38.5:1.5、好ましくは、47.4:10:40.9:1.7のモル比にある、上記195又は196に記載の組成物。
１９８． 約20%未満の遊離(複合体化されていないか、又は封入されていない)RNA、好ましくは、約15%未満の遊離RNA、より好ましくは、約10%未満の遊離RNAを含む、上記188から197のいずれかに記載の組成物。
１９９． 脂質とRNAとのwt/wt比が、約10:1～約60:1、好ましくは、約20:1～約30:1、例えば、約25:1である、上記188から198のいずれかに記載の組成物。
２００． RNAを封入するLNPのn/p比が、約1～約10の範囲、好ましくは、約5～約7の範囲、より好ましくは、約6である、上記188から199のいずれかに記載の組成物。
２０１． 約0.4未満、好ましくは、約0.3未満、より好ましくは、約0.2未満、最も好ましくは、約0.1未満の多分散指数(PDI)値を有する、上記188から200のいずれかに記載の組成物。
２０２． LNPが、
(a)約60nm～約120nmの範囲、好ましくは、約120nm未満、より好ましくは、約100nm未満、最も好ましくは、約80nm未満のZ-平均サイズを有し;
(b)約500nmを超える粒子サイズを有する約10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%、1%未満のLNPを含み;及び/又は
(c)約20nmより小さい粒子サイズを有する約10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%、1%未満のLNPを含む、上記187から201のいずれかに記載の組成物。
２０３． 脂質ベースの担体の少なくとも約80%、85%、90%、95%が、好ましくは固体のコア又は部分的に固体のコアを含む球状形態を有する、上記187から202のいずれかに記載の組成物。
９６． 約150FNU～約0.0FNUの範囲、好ましくは、約50FNU以下、より好ましくは、約25FNU以下の濁度を有する、上記187から203のいずれかに記載の組成物。
２０４． (a)約50～約300mMの濃度の糖、好ましくは、約150mMの濃度のスクロース;
(b)約10mM～約200mMの濃度の塩、好ましくは、約75mMの濃度のNaCl;及び/又は
(c)濃度1mM～約100mMの緩衝剤、好ましくは、約10mMの濃度のNa3PO4
をさらに含む、上記175から204のいずれかに記載の組成物。
２０５． 約pH7.0～約pH8.0の範囲、好ましくは、約pH7.4のpHを有する、上記175から204のいずれかに記載の組成物。
２０６． 凍結乾燥された組成物である、上記175から200のいずれかに記載の組成物。
２０７． 凍結乾燥された組成物が、約10%未満の水含有量を有し、好ましくは、凍結乾燥された組成物が、約0.5%～5%の水含有量を有する、上記206に記載の組成物。
２０８． RNAの少なくとも70%、75%、80%、85%、90%又は95%が、約5℃の温度で液体として保存後少なくとも約2週間未変化である、上記187から205のいずれかに記載の組成物。
２０９． RNAの少なくとも70%、75%、80%、85%、90%又は95%が、約5℃の温度で液体として保存後約2週間～約1カ月間、2カ月間、3カ月間、4カ月間、5カ月間、6カ月間又は1年間未変化である、上記208に記載の組成物。
２１０． RNAの少なくとも80%が、約5℃の温度で液体として約2週間の保存後未変化である、上記208に記載の組成物。
２１１． RNA及びRNAを封入する脂質ベースの担体が、少なくとも1つの精製工程により、好ましくは、TFFの少なくとも1つの工程及び/又は清澄化の少なくとも1つの工程及び/又は濾過の少なくとも1つの工程によって精製されている、上記187から210のいずれかに記載の組成物。
２１２． 上記109から174のいずれかに記載のRNA及び/又は上記165から200のいずれかに記載の組成物を含む、ワクチン。
２１３． コロナウイルスに対する、好ましくは、コロナウイルスSARS-CoV-2に対する、適応免疫応答、好ましくは、防御的適応免疫応答を誘発する、上記212に記載のワクチン。
２１４． 上記109から181のいずれかに記載のRNAの複数若しくは少なくとも1つより多く、又は上記182から104のいずれかに記載の組成物の複数若しくは少なくとも1つより多くを含む多価ワクチンである、上記212又は213に記載のワクチン。
２１５． 上記109から174のいずれかに記載のRNA及び/又は上記182から104のいずれかに記載の組成物、及び/又は上記105から107のいずれかに記載のワクチンを含み、場合により、溶解のための液体ビヒクルを含み、場合により、成分の投与及び投薬量についての情報を提供する技術指示書を含む、キット又はパーツのキット。
２１６． 医薬としての使用のための、上記109から174のいずれかに記載のRNA、上記175から211のいずれかに記載の組成物、上記212から214のいずれかに記載のワクチン、上記215に記載のキット又はパーツのキット。
２１７． コロナウイルス、好ましくは、SARS-CoV-2コロナウイルスの感染、又はこのような感染、好ましくは、COVID-19と関連する障害の処置又は予防における使用のための、上記109から174のいずれかに記載のRNA、上記175から211のいずれかに記載の組成物、上記212から214のいずれかに記載のワクチン、上記215に記載のキット又はパーツのキット。
２１８． 障害を処置又は予防する方法であって、それを必要とする対象に、上記109から174のいずれかに記載のRNA、上記175から211のいずれかに記載の組成物、上記212から214のいずれかに記載のワクチン、及び／又は上記215に記載のキット若しくはパーツのキットを適用するか、又は投与することを含む、方法。
２１９． 障害が、コロナウイルス、好ましくは、SARS-CoV-2コロナウイルスの感染、又はこのような感染、好ましくは、COVID-19と関連する障害である、上記218に記載の障害を処置又は予防する方法。
２２０． SARS-CoV-2コロナウイルス感染又はこのような感染、好ましくは、COVID-19と関連する障害を予防する方法としてさらに定義される、上記218又は219に記載の障害を処置又は予防する方法。
２２１． SARS-CoV-2コロナウイルス感染又はこのような感染と関連する障害を予防する方法としてさらに定義され、感染が、B.1.1.529(オミクロン、南アフリカ)(BA.1_v1、BA.1_v0、B.1.1.529、BA.2、BA.1_v2、BA.1_v3、BA.1_v4、BA.1_v5を含む)、B.1.351(南アフリカ)、B.1.1.7(英国)、P.1(ブラジル)、B.1.429(カリフォルニア)、B.1.525(ナイジェリア)、B.1.258(チェコ共和国)、B.1.526(ニューヨーク)、A.23.1(ウガンダ)、B.1.617.1(インド)、B.1.617.2(インド)、B.1.617.3(インド)、P.2(ブラジル)、C37.1(ペルー)及びB.1.1.621から選択されるSARS-CoV-2分離株によるものである、上記212に記載の障害を処置又は予防する方法。
２２３． SARS-CoV-2コロナウイルス感染又はこのような感染と関連する障害を予防する方法としてさらに定義され、感染が、上記1から33のいずれかに記載のアミノ酸置換、欠失又は挿入を含むSARS-CoV-2分離株によるものである、上記212に記載の障害を処置又は予防する方法。
２２４． 必要とする対象が、哺乳類対象、好ましくは、ヒト対象である、上記218から219のいずれかに記載の障害を処置又は予防する方法。
２２５． ヒト対象が、好ましくは、少なくとも50歳、60歳、65歳、又は70歳の年齢の、高齢ヒト対象である、上記224に記載の障害を処置又は予防する方法。
２２６． ヒト対象が、好ましくは、3歳以下、2歳以下、1.5歳以下、1歳(12カ月)以下、9カ月以下、6カ月以下若しくは3カ月以下の年齢の、又は6カ月～2歳の年齢の、新生児又は幼児である、上記224に記載の障害を処置又は予防する方法。
２２７． ヒト対象が、18～60歳の年齢である、上記224に記載の障害を処置又は予防する方法。
２２８． ヒト対象が、60歳未満、55歳未満、50歳未満、45歳未満又は40歳未満の年齢である、上記224に記載の障害を処置又は予防する方法。
２２９． ヒト対象が、約12～60歳;12～55歳;12～50歳;12～45歳;又は12～40歳の年齢である、上記228に記載の障害を処置又は予防する方法。
２３０． ヒト対象が、約18～55歳;18～50歳;18～45歳;又は18～40歳の年齢である、上記228に記載の障害を処置又は予防する方法。
２３１． ヒト対象が、約12～60歳;12～55歳;12～50歳;12～45歳;又は12～40歳の年齢である、上記224に記載の障害を処置又は予防する方法。
２３２． ヒト対象が、約18～60歳;18～55歳;18～50歳;18～45歳;又は18～40歳の年齢である、上記224に記載の障害を処置又は予防する方法。
２３３． ヒト対象が、約18～50歳の年齢である、上記224に記載の障害を処置又は予防する方法。
２３４． COVID-19疾患のうちの1つ以上の症状の重症度を低減する、上記225に記載の方法。
２３５． 対象が、入院、集中治療室への入院、酸素の補給を用いた処置及び/又は人工呼吸器を用いた処置を必要とする可能性を低減する、上記234に記載の方法。
２３６． 対象が、重篤又は中程度のCOVID-19疾患を発症する可能性を低減する、上記234に記載の方法。
２３７． 少なくとも約6カ月間、対象における重篤なCOVID-19疾患を予防する、上記234に記載の方法。
２３８． 対象が、発熱、呼吸困難;嗅覚の喪失及び/又は味覚の喪失を発症する可能性を低減する、上記234に記載の方法。
２３９． 対象における抗体、CD4+T細胞応答又はCD8+T細胞応答を刺激する方法としてさらに定義される、上記218から238のいずれかに記載の方法。
２４０． 対象における中和抗体応答を刺激する方法としてさらに定義される、上記218から238のいずれかに記載の方法。
２４１． 対象が、約1μg～約50μgのRNA;約2μg～約50μgのRNA;約2μg～約25μgのRNA;約5μg～約50μgのRNA;約5μg～約25μgのRNA;約10μg～約50μgのRNA;約10μg～約30μgのRNA;又は約12μgのRNAを含む組成物を投与される、上記218から240のいずれかに記載の方法。
２４２． 投与が、組成物が投与される対象の100%においてセロコンバージョンをもたらす、上記241に記載の方法。
２４３． 対象が、SARS CoV-2に以前に感染した、上記218から240のいずれかに記載の方法。
２４４． 対象が、少なくとも第一のSARS CoV-2ワクチン組成物で以前に処置された、上記218から240のいずれかに記載の方法。
２４５． 第一のSARS CoV-2ワクチン組成物が、mRNAワクチンであった、上記244に記載の方法。
２４６． 第一のSARS CoV-2ワクチン組成物が、CVnCoV;BNT162;及び/又はmRNA-1273であった、上記245に記載の方法。
２４７． 第一のSARS CoV-2ワクチン組成物が、タンパク質サブユニットワクチンであった、上記244に記載の方法。
２４８． 第一のSARS CoV-2ワクチン組成物が、NVX-CoV2373又はCOVAXであった、上記247に記載の方法。
２４９． 第一のSARS CoV-2ワクチン組成物が、アデノウイルスベクターワクチンであった、上記244に記載の方法。
２５０． 第一のSARS CoV-2ワクチン組成物が、ADZ1222又はAd26.COV-2.Sであった、上記249に記載の方法。
２５１． 対象が、検出可能なSARS CoV-2 Sタンパク質結合抗体を有する、上記218から240のいずれかに記載の方法。
[Example 15 (forecast)]
A clinical trial (Phase I) will be initiated to demonstrate the safety and efficacy of the mRNA vaccine composition. In a clinical trial, a cohort of human volunteers is injected intramuscularly at least twice (e.g., on days 0 and 28) with mRNA encoding a variant SARS-CoV-2 spike protein formulated in LNPs according to the invention. . To evaluate the safety profile of the vaccine composition according to the invention, subjects are monitored post-administration (vital signs, vaccination site tolerability assessment, hematological analysis). The effectiveness of immunization is analyzed by determining the virus neutralizing titer (VNT) in serum from vaccinated subjects. Blood samples will be taken on day 0 as baseline and after completion of vaccination. Serum is analyzed for virus-neutralizing antibodies.

The present invention provides the following.
1. RNA comprising at least one coding sequence encoding at least one SARS-CoV-2 spike protein or an immunogenic fragment or variant thereof, wherein the SARS-CoV-2 spike protein has the sequence of SEQ ID NO: 1. Compared to K986, V987, A67, H69, V70, T95, G142, V143, Y144, Y145, N211, L212, 214, G339, S371, S373, S375, S477, T478, E484, Q493, G496, Q498 , N501, Y505, T547, D614, H655, N679, P681, N764, D796, N856, Q954, N969, L981.
2. RNA comprising at least one coding sequence encoding at least one SARS-CoV-2 spike protein or an immunogenic fragment or variant thereof, wherein the SARS-CoV-2 spike protein has the sequence of SEQ ID NO: 1. Compared to K986P, V987P, A67V, H69del, V70del, T95I, G142D, V143del, Y144del, Y145del, N211del, L212I, N212del, ins214EPE, G339D, S371L, S373P, S375F, S477N, T478K, E4 84A, Q493R, G496S , Q498R, N501Y, Y505H, T547K, D614G, H655Y, N679K, P681H, N764K, D796Y, N856K, Q954H, N969K, and L981F.
3. at least one coding sequence encoding at least one SARS-CoV-2 spike protein or an immunogenic fragment or variant thereof, wherein the SARS-CoV-2 spike protein is compared to the sequence of SEQ ID NO:1. K986, V987, A67, H69, V70, T95, G142, V143, Y144, Y145, N211, L212, 214, G339, S371, S373, S375, S477, T478, E484, Q493, G496, Q498, N501, a coding sequence containing at least one amino acid substitution, deletion or insertion at a position corresponding to Y505, T547, D614, H655, N679, P681, N764, D796, N856, Q954, N969, L981; and at least one SARS- at least one coding sequence encoding a CoV-2 spike protein or an immunogenic fragment or variant thereof, wherein the SARS-CoV-2 spike protein comprises:
L452, E484, P681, E154, D614, and Q1071; or
L452, P681, T19, E156, F157, R158, T478, D614, and D950
a coding sequence comprising at least one amino acid substitution, deletion or insertion at a position corresponding to
including RNA.
4. at least one coding sequence encoding at least one SARS-CoV-2 spike protein or an immunogenic fragment or variant thereof, wherein the SARS-CoV-2 spike protein is compared to the sequence of SEQ ID NO:1. K986P, V987P, A67V, H69del, V70del, T95I, G142D, V143del, Y144del, Y145del, N211del, L212I, ins214EPE, G339D, S371L, S373P, S375F, S477N, T478K, E484A, Q493 R, G496S, Q498R, N501Y, a coding sequence comprising at least one amino acid substitution, deletion, or insertion at a position corresponding to Y505H, T547K, D614G, 655Y, N679K, P681H, N764K, D796Y, N856K, Q954H, N969K, and L981F: and at least one SARS - at least one coding sequence encoding a CoV-2 spike protein or an immunogenic fragment or variant thereof, wherein the SARS-CoV-2 spike protein is compared to the sequence of SEQ ID NO: 1;
L452R, E484Q, P681R, E154K, D614G, and Q1071H; or
L452R, P681R, T19R, E156G, F157del, R158del, T478K, D614G, and D950N
a coding sequence comprising at least one amino acid substitution, deletion or insertion at a position corresponding to
including RNA.
5. at least one SARS-CoV-2 spike protein is at least 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88% identical to any one of SEQ ID NOs: 28540-28588, 28917-28920; , 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical amino acid sequences. , RNA according to any one of the above.
6. RNA according to any of the above, wherein the spike protein (S) comprises or consists of the spike protein fragment S1, or an immunogenic fragment or variant thereof.
7. at least one SARS-CoV-2 spike protein is identical to, or comprises at least one amino acid sequence that is at least 95% identical to, any one of SEQ ID NOs: 28540-28588, 28917-28920, or from The RNA according to any of the above.
8. RNA according to any of the above, wherein the spike protein (S) is a pre-fusion stabilized spike protein (S_stab) comprising at least one pre-fusion stabilizing mutation.
9. 8. RNA according to 8 above, wherein the at least one pre-fusion stabilizing mutation comprises the following amino acid substitutions: K986P and V987P.
10. one or more heterologous peptide or protein elements in which at least one coding sequence is selected from signal peptides, linkers, helper epitopes, antigen clustering elements, trimerization elements, transmembrane elements, and/or VLP-forming sequences RNA according to any of the above, further encoding.
11. 11. RNA according to 10 above, wherein the at least one heterologous peptide or protein element is a heterologous antigen clustering element, a heterologous trimerization element, and/or a VLP-forming sequence.
12. at least one coding sequence is a codon-modified coding sequence, and the amino acid sequence encoded by the at least one codon-modified coding sequence is preferably an amino acid sequence encoded by the corresponding wild-type or reference coding sequence. RNA according to any of the above, unmodified compared to.
13. At least one codon-modified coding sequence is a C-maximized coding sequence, a CAI-maximized coding sequence, a human codon usage compatible coding sequence, a coding sequence modified for G/C content, and a G/C optimized coding sequence. 13. RNA according to 12 above, selected from coding sequences, or any combination thereof.
14. 12 or 13 above, wherein the at least one codon-modified coding sequence is a G/C-optimized coding sequence, a human codon usage compatible coding sequence, or a coding sequence modified in G/C content. RNA.
15. RNA according to any of the above, wherein at least one coding sequence has a G/C content of at least about 50%, 55%, or 60%.
16. At least one coding sequence encodes an S protein containing prefusion stabilizing K986P and V987P mutations, and the coding sequence comprises a nucleic acid sequence that is at least 95% identical to SEQ ID NOs: 28589-28637, 28921-28924. RNA according to any of the above, wherein C comprises or consists of an optimized coding sequence.
17. Preferably comprising at least one poly(A) sequence, preferably comprising 30 to 200 adenosine nucleotides and/or at least one poly(C) sequence, preferably comprising 10 to 40 cytosine nucleotides. RNA described in either.
18. RNA according to any of the above, comprising at least one histone stem loop.
19. The RNA according to any of the above, wherein the RNA comprises at least one poly(A) sequence comprising 30 to 200 adenosine nucleotides, and the nucleotide at the 3' end of the RNA is adenosine.
20. The at least one heterologous 3'UTR is derived from the 3'UTR of a gene selected from PSMB3, ALB7, CASP1, COX6B1, GNAS, NDUFA1 and RPS9, or a homolog, fragment or variant of any one of these genes. RNA according to any of the above, comprising or consisting of a nucleic acid sequence.
21. at least one heterologous 5'UTR is a gene selected from HSD17B4, RPL32, ASAH1, ATP5A1, MP68, NDUFA4, NOSIP, RPL31, SLC7A3, TUBB4B and UBQLN2, or a homologue, fragment or fragment of any one of these genes. RNA according to any of the above, comprising or consisting of a nucleic acid sequence derived from the 5'UTR of the variant.
22. At least one heterologous 5'UTR comprising or consisting of a nucleic acid sequence derived from the 5'UTR from HSD17B4 and at least one heterologous 3 comprising or consisting of a nucleic acid sequence derived from the 3'UTR of PSMB3. 'RNA as described in any of the above, including the UTR.
23. 5' to 3':
i) 5' cap 1 structure;
ii) 5'UTR derived from the 5'UTR of the HSD17B4 gene, preferably as set forth in SEQ ID NO: 232
iii) at least one coding sequence;
iv) a 3'UTR derived from the 3'UTR of the PSMB3 gene, preferably as set forth in SEQ ID NO: 254;
v) optionally histone stem-loop sequences; and
vi) RNA according to any of the above, comprising a poly(A) sequence comprising about 100 A nucleotides, and the nucleotide at the 3' end of said RNA is adenosine.
24. RNA according to any of the above, which is mRNA, self-replicating RNA, circular RNA, or replicon RNA.
25. RNA according to any of the above, which is mRNA.
26. 26. The RNA according to 25 above, wherein the mRNA is not a replicon RNA or self-replicating RNA.
27. any of the above, comprising a 5' cap structure, preferably m7G, cap 0, cap 1, cap 2, modified cap 0 or modified cap 1 structure, preferably 5' cap 1 structure RNA.
28. RNA according to any of the above, which does not contain a 1-methylpseudouridine substitution.
29. RNA according to any of the above, which does not contain chemically modified nucleotides.
30. RNA according to any of the above, comprising a pseudouridine or 1-methylpseudouridine substitution.
31. the RNA is in vitro transcribed RNA, the RNA in vitro transcription is performed in the presence of a sequence optimized nucleotide mixture and a cap analog, preferably the sequence optimized nucleotide mixture is RNA according to any of the above, which does not contain chemically modified nucleotides.
32. RNA according to any of the above, which is purified RNA, preferably RNA purified by RP-HPLC and/or TFF.
33. RNA purified by RP-HPLC and/or TFF and containing about 5%, 10%, or 20% less double-stranded RNA byproducts as RNA not purified using RP-HPLC and/or TFF; RNA according to any of the above.
34. Purified RNA purified by RP-HPLC and/or TFF, approximately 5%, 10%, or 20% as RNA purified using oligo-dT purification, precipitation, filtration, and/or anion exchange chromatography. RNA according to any of the above, comprising reduced double-stranded RNA by-products.
35. A composition comprising RNA according to any of the above, optionally comprising at least one pharmaceutically acceptable carrier.
36. 36. The composition according to 35 above, which is a multivalent composition comprising, in addition to the RNA according to any one of 1 to 34 above, a plurality or at least one additional RNA.
37. 37. The composition according to claim 36, wherein each of the plurality or more than one RNA of the multivalent composition encodes a different spike protein, preferably a pre-fusion stabilized spike protein.
38. 38. The composition according to claim 37, wherein the different spike proteins or pre-fusion stabilized spike proteins are derived from different SARS-CoV-2 virus variants/isolates.
39. Different spike proteins or pre-fusion stabilized spike proteins were used as B.1.1.529 (Omicron, South Africa) (BA.1_v1, BA.1_v0, B.1.1.529, BA.2, BA.1_v2, BA. 1_v3, BA.1_v4, BA.1_v5), B.1.351 (South Africa), B.1.1.7 (UK), P.1 (Brazil), B.1.429 (California), B.1.525 (Nigeria), B.1.258 (Czech Republic), B.1.526 (New York), A.23.1 (Uganda), B.1.617.1 (India), B.1.617.2 (India), B.1.617.3 (India), P .2 (Brazil), C37.1 (Peru) or B.1.1.621 variant.
40. The different spike proteins or pre-fusion stabilized spike proteins are at least B.1.1.529, BA.1_v1, BA.1_v0, BA.1_v2, BA.1_v3, BA.1_v4, and/or BA.1_v5 and B. .1.617.2 variant, the composition according to 38 or 39 above.
41. 41. The composition according to any one of 35 to 40 above, comprising RNA having RNA integrity of 70% or more.
42. 40, wherein the composition comprises RNA having a degree of capping of 70% or more, preferably at least 70%, 80% or 90% of the RNA species comprises a cap 1 structure. Composition.
43. The RNA contains one or more cationic or polycationic compounds, preferably cationic or polycationic polymers, cationic or polycationic polysaccharides, cationic or polycationic lipids, cationic or polycationic proteins, 35 to 40 of the above conjugated or associated, or at least partially conjugated or partially associated with a cationic or polycationic peptide, or any combination thereof. The composition according to any one of.
44. Liposomes, lipid nanoparticles (LNPs), lipoplexes, and the like, wherein the RNA is complexed or associated with one or more lipids or lipid-based carriers, thereby preferably encapsulating at least one RNA. 44. The composition according to 43 above, which forms nanoliposomes.
45. 45. The composition according to 43 or 44 above, wherein the RNA is complexed with one or more lipids, thereby forming lipid nanoparticles.
46. 46. The composition according to 44 or 45 above, wherein the LNP comprises a cationic lipid according to formula III-3:_(III-3).
47. LNP is expressed as (IVa):_(IVa)
(where n has an average value ranging from 30 to 60, preferably n has an average value of about 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54 45. The composition according to any one of 44 to 45 above, comprising a PEG lipid having an average value of 49 or 45, most preferably n having an average value of 49 or 45.
48. LNP is expressed as (IVa):_(IVa)
48. The composition according to any of 44 to 47 above, wherein n is an integer selected such that the average molecular weight of the PEG lipid is about 2500 g/mol.
49. 49. The composition according to any of 44 to 48 above, wherein the LNP comprises one or more neutral lipids and/or one or more steroids or steroid analogs.
50. The neutral lipid is 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphocholine (DSPC), and preferably the molar ratio of cationic lipid to DSPC is in the range of about 2:1 to about 8:1. 49. The composition according to 49 above.
51. 50. The composition according to claim 49, wherein the steroid is cholesterol, and preferably the molar ratio of cationic lipid to cholesterol is in the range of about 2:1 to about 1:1.
52. LNP is
(i) at least one cationic lipid, preferably a lipid of formula (III), more preferably lipid III-3;
(ii) at least one neutral lipid, preferably 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphocholine (DSPC);
(iii) at least one steroid or steroid analog, preferably cholesterol; and
(iv) comprising at least one polymer-conjugated lipid, preferably a PEG-lipid derived from formula (IVa, n=49);
(i) to (iv) are in a molar ratio of about 20-60% cationic lipids, 5-25% neutral lipids, 25-55% sterols, and 0.5-15% PEG-lipids; 52. The composition according to any one of 44 to 51 above.
53. LNP is
(i) at least one cationic lipid, preferably a lipid of formula (III), more preferably lipid III-3;
(ii) at least one neutral lipid, preferably 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphocholine (DSPC);
(iii) at least one steroid or steroid analog, preferably cholesterol; and
(iv) comprising at least one polymer-conjugated lipid, preferably a PEG-lipid derived from formula (IVa, n=45);
(i) to (iv) are in a molar ratio of about 20-60% cationic lipids, 5-25% neutral lipids, 25-55% sterols, and 0.5-15% PEG-lipids; 52. The composition according to any one of 44 to 51 above.
54. Composition according to 52 or 53 above, wherein (i) to (iv) are in a molar ratio of about 50:10:38.5:1.5, preferably 47.4:10:40.9:1.7.
55. 45 above, comprising less than about 20% free (uncomplexed or unencapsulated) RNA, preferably less than about 15% free RNA, more preferably less than about 10% free RNA. The composition according to any one of 54 to 54.
56. Any of 45 to 55 above, wherein the wt/wt ratio of lipid to RNA is about 10:1 to about 60:1, preferably about 20:1 to about 30:1, such as about 25:1. The composition described in.
57. 57, wherein the LNP encapsulating RNA has an n/p ratio in the range of about 1 to about 10, preferably in the range of about 5 to about 7, more preferably in the range of about 6. Composition.
58. 58. The composition according to any of 45 to 57 above, having a polydispersity index (PDI) value of less than about 0.4, preferably less than about 0.3, more preferably less than about 0.2, most preferably less than about 0.1.
59. LNP is
(a) has a Z-average size in the range of about 60 nm to about 120 nm, preferably less than about 120 nm, more preferably less than about 100 nm, most preferably less than about 80 nm;
(b) contains less than about 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1% LNPs having a particle size greater than about 500 nm; and/or
(c) from 44 above, comprising less than about 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1% LNPs having a particle size smaller than about 20 nm; 58. The composition according to any one of 58.
60. Composition according to any of 44 to 59 above, wherein at least about 80%, 85%, 90%, 95% of the lipid-based carrier has a spherical morphology, preferably comprising a solid or partially solid core. thing.
61. 61. The composition according to any of 44 to 60 above, having a turbidity in the range of about 150 FNU to about 0.0 FNU, preferably about 50 FNU or less, more preferably about 25 FNU or less.
62. (a) sugar at a concentration of about 50 to about 300 mM, preferably sucrose at a concentration of about 150 mM;
(b) salt at a concentration of about 10mM to about 200mM, preferably NaCl at a concentration of about 75mM; and/or
(c) a buffer at a concentration of 1mM to about 100mM, preferably Na 3 PO 4 at a concentration of about 10mM;
62. The composition according to any one of 35 to 61 above, further comprising:
63. 63. The composition according to any of the above 35 to 62, having a pH in the range of about pH 7.0 to about pH 8.0, preferably about pH 7.4.
64. 61. The composition according to any one of 35 to 60 above, which is a lyophilized composition.
65. 65. The composition of claim 64, wherein the lyophilized composition has a water content of less than about 10%, preferably the lyophilized composition has a water content of about 0.5% to 5%. thing.
66. Any of 35 to 63 above, wherein at least 70%, 75%, 80%, 85%, 90% or 95% of the RNA is unchanged for at least about 2 weeks after storage as a liquid at a temperature of about 5°C. Composition of.
67. At least 70%, 75%, 80%, 85%, 90% or 95% of the RNA remains stable for about 2 weeks to about 1 month, 2 months, 3 months, 4 67. The composition according to 66 above, which remains unchanged for 1 month, 5 months, 6 months or 1 year.
68. 67. The composition of claim 66, wherein at least 80% of the RNA is unchanged after storage as a liquid for about 2 weeks at a temperature of about 5°C.
69. The RNA and the lipid-based carrier encapsulating the RNA are purified by at least one purification step, preferably by at least one step of TFF and/or at least one step of clarification and/or at least one step of filtration. 69. The composition according to any one of 35 to 68 above.
70. A vaccine comprising the RNA according to any one of 1 to 34 above and/or the composition according to any one of 35 to 69 above.
71. 71. The vaccine according to 70 above, which induces an adaptive immune response, preferably a protective adaptive immune response, against a coronavirus, preferably against the coronavirus SARS-CoV-2.
72. A multivalent vaccine comprising a plurality or more than at least one of the RNAs according to any of 1 to 34 above, or a plurality or more than at least one of the compositions according to any of 35 to 69 above, 70 or 71.
73. RNA according to any of 1 to 34 above and/or composition according to any of 35 to 69 above, and/or vaccine according to any of 70 to 72 above, optionally for lysis A kit or kit of parts containing a liquid vehicle and optionally technical instructions providing information on the administration and dosage of the ingredients.
.
74. The RNA according to any one of 1 to 34 above, the composition according to any one of 35 to 69 above, the vaccine according to any one of 70 to 72 above, the vaccine according to any one of 73 above, for use as a medicine. A kit or kit of parts.
75. Any of 1 to 34 above for use in the treatment or prevention of infection with a coronavirus, preferably the SARS-CoV-2 coronavirus, or a disorder associated with such an infection, preferably COVID-19. RNA as described above, composition as described in any one of 35 to 69 above, vaccine as described in any one of 70 to 72 above, kit or kit of parts as described in 73 above.
76. A method for treating or preventing a disorder, in which the RNA according to any one of 1 to 34 above, the composition according to any one of 35 to 69 above, or any one of 70 to 72 above is administered to a subject in need thereof. A method comprising applying or administering a vaccine according to claim 73, a kit or a kit of parts according to claim 73 above.
77. 76 above, wherein the disorder is an infection with a coronavirus, preferably the SARS-CoV-2 coronavirus, or a disorder associated with such an infection, preferably COVID-19. .
78. 78. A method of treating or preventing a disorder according to 76 or 77 above, further defined as a method of preventing a SARS-CoV-2 coronavirus infection or a disorder associated with such an infection, preferably COVID-19.
79. Further defined as a method of preventing SARS-CoV-2 coronavirus infection or disorders associated with such infection, infection is caused by B.1.1.529 (Omicron, South Africa) (BA.1_v1, BA.1_v0, B. 1.1.529, BA.2, BA.1_v2, BA.1_v3, BA.1_v4, BA.1_v5), B.1.351 (South Africa), B.1.1.7 (UK), P.1 (Brazil), B.1.429 (California), B.1.525 (Nigeria), B.1.258 (Czech Republic), B.1.526 (New York), A.23.1 (Uganda), B.1.617.1 (India), B.1.617.2 (India), B.1.617.3 (India), P.2 (Brazil), C37.1 (Peru) and B.1.1.621. A method of treating or preventing a disorder described in .
80. further defined as a method of preventing SARS-CoV-2 coronavirus infection or disorders associated with such infection, wherein the infection comprises a SARS-CoV-2 coronavirus infection comprising an amino acid substitution, deletion or insertion as described in any of 1 to 4 above. 77. A method of treating or preventing a disorder according to 76 above, which is caused by a CoV-2 isolate.
81. 81. A method of treating or preventing a disorder according to any of 76 to 80 above, wherein the subject in need thereof is a mammalian subject, preferably a human subject.
82. 82. A method of treating or preventing a disorder according to claim 81, wherein the human subject is an elderly human subject, preferably of an age of at least 50, 60, 65 or 70 years.
83. The human subject is preferably below the age of 3 years, below 2 years, below 1.5 years, below 1 year (12 months), below 9 months, below 6 months or below 3 months, or between 6 months and 2 years of age. , a newborn baby or an infant, a method for treating or preventing the disorder according to item 81 above.
84. 82. A method of treating or preventing a disorder according to item 81 above, wherein the human subject is between the ages of 18 and 60 years.
85. 82. A method of treating or preventing a disorder according to item 81 above, wherein the human subject is less than 60 years old, less than 55 years old, less than 50 years old, less than 45 years old, or less than 40 years old.
86. 86. A method of treating or preventing a disorder according to claim 85, wherein the human subject is between about 12 and 60 years old; 12 and 55 years old; 12 and 50 years old; 12 and 45 years old; or 12 and 40 years old.
87. 82. A method of treating or preventing a disorder according to claim 81, wherein the human subject is between about 18 and 55 years old; 18 and 50 years old; 18 and 45 years old; or 18 and 40 years old.
88. 82. A method of treating or preventing a disorder according to claim 81, wherein the human subject is between about 12 and 60 years old; 12 and 55 years old; 12 and 50 years old; 12 and 45 years old; or 12 and 40 years old.
89. 82. A method of treating or preventing a disorder according to claim 81, wherein the human subject is about 18 to 60 years old; 18 to 55 years old; 18 to 50 years old; 18 to 45 years old; or 18 to 40 years old.
90. 82. A method of treating or preventing a disorder according to claim 81, wherein the human subject is between about 18 and 50 years of age.
91. 83. The method of 82 above, which reduces the severity of one or more symptoms of COVID-19 disease.
92. 92. The method of 91 above, which reduces the likelihood that the subject will require hospitalization, admission to an intensive care unit, treatment with supplemental oxygen, and/or treatment with a ventilator.
93. 92. The method of 91 above, which reduces the likelihood that the subject will develop severe or moderate COVID-19 disease.
94. 92. The method of 91 above, wherein the method prevents severe COVID-19 disease in a subject for at least about 6 months.
95. 92. The method of 91 above, wherein the subject reduces the likelihood of developing fever, difficulty breathing; loss of smell and/or loss of taste.
96. 96. The method of any of 81-95 above, further defined as a method of stimulating an antibody, CD4+ T cell response or CD8+ T cell response in a subject.
97. 97. The method of any of 81-96 above, further defined as a method of stimulating a neutralizing antibody response in a subject.
98. The target is about 1μg to about 50μg RNA; about 2μg to about 50μg RNA; about 2μg to about 25μg RNA; about 5μg to about 50μg RNA; about 5μg to about 25μg RNA; about 10μg to about 50μg RNA 98. The method of any of 81 to 97 above, wherein the composition comprises: about 10 μg to about 30 μg of RNA; or about 12 μg of RNA.
99. 99. The method of claim 98, wherein the administration results in seroconversion in 100% of the subjects to whom the composition is administered.
100. The method of any of paragraphs 81 to 97 above, wherein the subject was previously infected with SARS CoV-2.
101. 98. The method of any of 81-97 above, wherein the subject has been previously treated with at least a first SARS CoV-2 vaccine composition.
102. 102. The method of 101 above, wherein the first SARS CoV-2 vaccine composition is an mRNA vaccine.
103. 103. The method according to 102 above, wherein the first SARS CoV-2 vaccine composition was CVnCoV; BNT162; and/or mRNA-1273.
104. 103. The method of claim 102, wherein the first SARS CoV-2 vaccine composition is a protein subunit vaccine.
105. 103. The method of 102 above, wherein the first SARS CoV-2 vaccine composition was NVX-CoV2373 or COVAX.
106. 103. The method of claim 102, wherein the first SARS CoV-2 vaccine composition is an adenovirus vector vaccine.
107. 107. The method of 106 above, wherein the first SARS CoV-2 vaccine composition was ADZ1222 or Ad26.COV-2.S.
108. 98. The method of any of 81 to 97 above, wherein the subject has detectable SARS CoV-2 S protein binding antibodies.
109. RNA comprising at least one coding sequence encoding at least one SARS-CoV-2 spike protein or an immunogenic fragment or variant thereof, wherein the SARS-CoV-2 spike protein has the sequence of SEQ ID NO: 1. Compared to H69;V70;A222;Y453;S477;I692;R403;K417;N437;N439;V445;G446;L455;F456;K458;A475;G476;T478;E484;G485;F486;N487;Y489 ;F490;Q493;S494;P499;T500;N501;V503;G504;Y505;Q506;Y144;A570;P681;T716;S982;D1118;L18;D80;D215;L242;A243;L244;R246;A701;T20 ;P26;D138;R190;H655;T1027;S13;W152;L452;R346;P384;G447;G502;T748;A522;V1176;T859;S247;Y248;L249;T250;P251;G252;G75;T76;D950 ;E154;G769;S254;Q613;F157;R158;Q957;D253;T95;F888;Q677;A67;Q414;N450;V483;G669;T732;Q949;Q1071;E1092;H1101;N1187;W258;T19;V1 26 ;H245;S12;A899;G142;E156;K558; and/or at least one amino acid substitution, deletion or insertion at a position corresponding to Q52, and the RNA contains at least one heterologous untranslated region (UTR) Contains RNA.
110. SARS-CoV-2 spike protein compared to the sequence of SEQ ID NO. ;L455F;F456L;K458N;A475V;G476S;G476A;S477I;S477R;S477G;S477T;T478I;T478K;T478R;T478A;E484Q;E484K;E484A;E484D;G485R;G485S;F48 6L;N487I;Y489H;F490S;F490L ;Q493L;Q493K;S494P;S494L;P499L;T500I;N501Y;N501T;N501S;V503F;V503I;G504D;Y505W;Q506K;Q506H;Y144del;A570D;P681H;T716I;S982A;D11 18H;L18F;D80A;D215G;L242del ;A243del;L244del;L242del;A243del;L244del;R246I;A701V;T20N;P26S;D138Y;R190S;H655Y;T1027I;S13I;W152C;L452R;R346T;P384L;L452M;F456A;F456K ;F456V;E484P;K417T;G447V ;L452Q;A475S;F486I;F490Y;Q493R;S494A;P499H;P499S;G502V;T748K;A522S;V1176F;T859N;S247del;Y248del;L249del;T250del;P251del;G252del;R246del;S2 47del;Y248del;L249del;T250del;P251del ;G252del;G75V;T76I;G75V;T76I;D950N;P681R;E154K;G769V;S254F;Q613H;F157L;F157del;R158del;Q957R;D253G;T95I;F888L;Q677H;A67V;Q414K;N45 0K;V483A;G669S;T732A ;Q949R;Q1071H;E1092K;H1101Y;N1187D;W258L;V70F;T19R;Y144T;Y145S;ins145N;R346K;R346S;V126A;H245Y;ins214TDR;S12F;W152R;A899S;G142D;E 156G; K558N; and/or Q52R 109 above, comprising at least one amino acid substitution, deletion or insertion at the corresponding position.
111. SARS-CoV-2 spike protein is H69;V70;A222;Y453;S477;I692;R403;K417;N437;N439;V445;G446;L455;F456;K458;A475 ;G476;T478;E484;G485, F486;N487;Y489;F490;Q493;S494;P499;T500;N501;V503;G504;Y505; 109 above, wherein the RNA contains deletions or insertions.
112. SARS-CoV-2 spike protein compared to the sequence of SEQ ID NO. ;L455F;F456L;K458N;A475V;G476S;G476A;S477I;S477R;S477G;S477T;T478I;T478K;T478R;T478A;E484Q;E484K;E484A;E484D;G485R;G485S;F48 6L;N487I;Y489H;F490S;F490L ;Q493L;Q493K;S494P;S494L;P499L;T500I;N501Y;N501T;N501S;V503F;V503I;G504D;Y505W;Q506K; The RNA described in 111 above, comprising:
113. SARS-CoV-2 spike protein is H69;V70;A222;Y453;S477;I692;R403;K417;N437;N439;V445;G446;L455;F456;K458;A475 G476; t478; E484; g485, f486; n489; n489; f490; s493; p499; p499; t500; n501; G503; G505; Q506; p681 ; T716; s982; d1118; L18; D80 ;D215;L242;A243;L244;R246;A701;T20;P26;D138;R190;H655;T1027;S13;W152;L452;R346;P384;G447;G502;T748;A522; 109 above, comprising at least one amino acid substitution, deletion or insertion.
114. SARS-CoV-2 spike protein compared to the sequence of SEQ ID NO. ;L455F;F456L;K458N;A475V;G476S;G476A;S477I;S477R;S477G;S477T;T478I;T478K;T478R;T478A;E484Q;E484K;E484A;E484D;G485R;G485S;F48 6L;N487I;Y489H;F490S;F490L ;Q493L;Q493K;S494P;S494L;P499L;T500I;N501Y;N501T;N501S;V503F;V503I;G504D;Y505W;Q506K;Q506H;Y144del;A570D;P681H;T716I;S982A;D11 18H;L18F;D80A;D215G;L242del ;A243del;L244del;L242del;A243del;L244del;R246I;A701V;T20N;P26S;D138Y;R190S;H655Y;T1027I;S13I;W152C;L452R;R346T;P384L;L452M;F456A;F456K ;F456V;E484P;K417T;G447V ;L452Q;A475S;F486I;F490Y;Q493R;S494A;P499H;P499S;G502V;T748K;A522S; and/or as described in 113 above, comprising at least one amino acid substitution, deletion or insertion at a position corresponding to V1176F RNA.
115. SARS-CoV-2 spike protein has T859;R246;S247;Y248;L249;T250;P251;G252;G75;T76;D950;E154;G769;S254;Q613;F157 ;Q957;D253;T95;F888;Q677;A67;Q414;N450;V483;G669;T732;Q949;Q1071;E1092;H1101;N1187;F157;R158;W258;T19;H245;S12;A899;G142;E15 6 ; RNA according to 109 above, comprising at least one amino acid substitution, deletion or insertion at a position corresponding to K558 and/or Q52.
116. The SARS-CoV-2 spike protein is T859N;S247del;Y248del;L249del;T250del;P251del;G252del;R246del;S247del;Y248del;L249del;T250del;P251del;G252del;G75V;T76I ;G75V;T76I;D950N;P681R;E154K;G769V;S254F;Q613H;F157L;Q957R;D253G;T95I;F888L;Q677H;A67V;Q414K;N450K;V483A;G669S;T732A;Q949R;Q 1071H;E1092K;H1101Y;N1187D In the position corresponding to; at least 1 piece 115. The RNA according to 115 above, comprising an amino acid substitution, deletion, or insertion.
117. The SARS-CoV-2 spike protein is D614;H49;V367;P1263;V483;S939;S943;L5;L8;S940;C1254;Q239;M153;V1040;A845;Y145 The RNA according to 109 above, further comprising at least one amino acid substitution, deletion or insertion at a position corresponding to ;A831; and/or M1229.
118. SARS-CoV-2 spike protein compared to the sequence of SEQ ID NO. ;A831V; and/or M1229I, the RNA according to 117 above, further comprising at least one amino acid substitution, deletion, or insertion at a position corresponding to;
119. The SARS-CoV-2 spike protein contains at least one of the following: RNA according to any of the above, comprising one amino acid substitution, deletion or insertion.
120. SARS-CoV-2 spike protein is H69;V70;A222;Y453;S477;I692;R403;K417;N437;N439;V445;G446;L455;F456;K458;A475 G476; t478; E484; f486; n487; n489; f490; Q493; s493; p499; t500; n501; n501; G505; ; T716; s982; d1118; L18; D80 D215; L242; L243; L244; R246; r201; T20; t20; p26; R138; r190; H655; t1027; s13; s13; w152; r346; p384; G447; G502; T722; ; V1176; t859; s247; Y248 ;L249;T250;P251;G252;G75;T76;D950;E154;G769;S254;Q613;F157;Q957;D253;T95;F888;Q677;A67;Q414;N450;V483;G669;T732;Q949;Q1071 ;E1092;H1101;N1187 and/or RNA according to any of the above, comprising at least one amino acid substitution or deletion at a position corresponding to Q52.
121. 109 above, wherein the SARS-CoV-2 spike protein comprises at least one amino acid substitution at a position corresponding to K417, E484, N501, and/or L452 compared to the sequence of SEQ ID NO: 1.
122. 122. The RNA according to 121 above, wherein at least one amino acid substitution at the position corresponding to K417 is an S, T, Q or N substitution.
123. 123. The RNA according to 122 above, wherein at least one amino acid substitution at the position corresponding to K417 is a K417N substitution.
124. 122. The RNA according to 121 above, wherein at least one amino acid substitution at the position corresponding to E484 is a K, P, Q, A, or D substitution.
125. 125. The RNA according to 124 above, wherein at least one amino acid substitution at the position corresponding to E484 is an E484K or E484Q substitution.
126. 125. The RNA according to 125 above, wherein at least one amino acid substitution at the position corresponding to E484 is an E484K substitution.
127. 122. The RNA according to 121 above, wherein at least one amino acid substitution at the position corresponding to N501 is a Y, T, or S substitution.
128. 127. The RNA according to 127 above, wherein at least one amino acid substitution at the position corresponding to N501 is an N501Y substitution.
129. 122. The RNA according to 121 above, wherein at least one amino acid substitution at the position corresponding to L452 is an R or Q substitution.
130. 129 above, wherein at least one amino acid substitution at the position corresponding to L452 is an L452R substitution.
131. RNA according to any of the above, wherein the SARS-CoV-2 spike protein comprises amino acid substitutions at positions corresponding to N501 and E484, preferably N501Y and E484K substitutions.
132. RNA according to any of the above, wherein the SARS-CoV-2 spike protein comprises at least one amino acid substitution located in the furin cleavage site region.
133. 133. The RNA according to 132 above, wherein the amino acid substitution at the furin cleavage site is located at a position corresponding to P681 with respect to SEQ ID NO: 1.
134. 133 above, wherein the amino acid substitution at the position corresponding to P681 is an R or H substitution.
135. 134. The RNA according to 134 above, wherein the amino acid substitution at the position corresponding to P681 is a P681R substitution.
136. RNA according to any of the above, wherein the SARS-CoV-2 spike protein comprises at least one amino acid substitution at positions corresponding to L452 and P681, preferably L452R and P681R.
137. RNA according to any of the above, wherein the SARS-CoV-2 spike protein comprises at least one amino acid substitution at a position corresponding to L452, T478 and P681, preferably L452R, T478K and P681R.
138. The SARS-CoV-2 spike protein was detected in the following SARS CoV-2 isolates: B.1.1.529 (Omicron, South Africa) (BA.1_v1, BA.1_v0, B.1.1.529, BA.2, BA.1_v2 , BA.1_v3, BA.1_v4, BA.1_v5), B.1.351 (South Africa), B.1.1.7 (UK), P.1 (Brazil), B.1.429 (California), B.1.525 ( Nigeria), B.1.258 (Czech Republic), B.1.526 (New York), A.23.1 (Uganda), B.1.617.1 (India), B.1.617.2 (India), B.1.617.3 (India ), P.2 (Brazil), C37.1 (Peru) and B.1.1.621.
139. SARS-CoV-2 spike protein compared to the sequence of SEQ ID NO: 1.
・E484K, N501Y, L18F, D80A, D215G, L242del, A243del, L244del, R246I, K417N, D614G, and A701V;
・E484K, N501Y, L18F, D80A, D215G, L242del, A243del, L244del, K417N, D614G, and A701V;
・E484K, N501Y, L18F, T20N, P26S, D138Y, R190S, K417T, D614G, H655Y, and T1027I;
・E484K, N501Y, L18F, T20N, P26S, D138Y, R190S, K417T, D614G, H655Y, T1027I, and V1176F;
・L452R, P681R, and D614G;
・L452R, E484Q, P681R, E154K, D614G, and Q1071H;
・L452R, P681R, T19R, F157del, R158del, T478K, D614G, and D950N;
・T19R, L452R, E484Q, D614G, P681R and D950N;
・G75V, T76I, S247del, Y248del, L249del, T250del, P251del, G252del, D253del, L452Q, F490S, D614G, and/or T859N;
・T95I, Y145N, R346K, E484K, N501Y, D614G, P681H, and D950N;
・T95I, Y144T, Y145S, ins145N, R346K, E484K, N501Y, D614G, P681H, and D950N;
・H69del, V70del, Y144del, E484K, N501Y, A570D, D614G, P681H, T716I, S982A, and D1118H;
・S13I, W152C, L452R, and D614G;
・L452R; and D614G;
・69del;70del;N439K;D614G;
・T95I;E484K;D614G;and A701V;
・L5F, T95I, D253G, E484K, D614G, and A701V;
・L5F, T95I, D253G, S477N, D614G, and Q957R;
・F157L, V367F, Q613H, and P681R;
・S254F, D614G, P681R, and G769V;
・T478K, D614G, P681H, and T732A;
・P26S, H69del, V70del, V126A, Y144del, L242del, A243del, L244del, H245Y, S477N, E484K, D614G, P681H, T1027I and D1118H;
・ins214TDR, Q414K, N450K, D614G, and T716I;
・S12F, H69del, V70del, W152R, R346S, L452R, D614G, Q677H and A899S;
・E484K, D614G and V1176F;
・Q52R, A67V, H69del, V70del, F157del, R158del, E484K, D614G, Q677H and F888L;
・Q52R, A67V, H69del, V70del, Y144del, E484K, D614G, Q677H and F888L;
・A67V, H69del, V70del, Y144del, E484K, D614G, Q677H and F888L;
・T19R, T95I, G142D, E156G, F157del, R158del, W258L, K417N, L452R, T478K, K558N, D614G, P681R, and D950N;
・T19R, V70F, G142D, E156G, F157del, R158del, A222V, K417N, L452R, T478K, D614G, P681R, and D950N;
・T19R, T95I, F157del, R158del, W258L, K417N, L452R, T478K, D614G, P681R, and D950N;
・T19R, V70F, F157del, R158del, A222V, K417N, L452R, T478K, D614G, P681R, and D950N;
・H69del, V70del and D614G;
・D614G and M1229I;
・A222V and D614G;
・S477N and D614G;
・N439K and D614G;
・H69del, V70del, Y453F, D614G and I692I;
・Y453F and D614G;
・D614G and I692V;
・H69del, V70del, A222V, Y453F, D614G and I692I;
・N501Y and D614G;
・K417N, E484K, N501Y and D614G; and ・E484K and D614G
RNA according to any of the above, comprising an amino acid substitution, deletion or insertion selected from:
140. SARS-CoV-2 spike protein compared to the sequence of SEQ ID NO: 1.
・E484K, N501Y, L18F, D80A, D215G, L242del, A243del, L244del, R246I, K417N, D614G, and A701V; and ・E484K, N501Y, L18F, D80A, D215G, L242del, A243del, L244del, K4 17N, D614G, and A701V
RNA according to any of the above, comprising an amino acid substitution or deletion selected from:
141. Compared to the sequence of SEQ ID NO: 1, the SARS-CoV-2 spike protein has the following: K986P, V987P, E484K, N501Y, L18F, D80A, D215G, L242del, A243del, L244del, R246I, K417N, D614G, and A701V ; and K986P, V987P, E484K, N501Y, L18F, D80A, D215G, L242del, A243del, L244del, K417N, D614G, and A701V
RNA according to any of the above, comprising an amino acid substitution or deletion selected from:
142. SARS-CoV-2 spike protein compared to the sequence of SEQ ID NO: 1.
・L452R, P681R, and D614G;
・L452R, E484Q, P681R, E154K, D614G, and Q1071H;
・L452R, P681R, T19R, F157del, R158del, T478K, D614G, and D950N; and ・T19R, L452R, E484Q, D614G, P681R and D950N
139. The RNA according to any one of 109 to 139 above, comprising an amino acid substitution or deletion selected from:
143. at least one SARS-CoV-2 spike protein is any of SEQ ID NO: 1, 10, 22738, 22740, 22742, 22744, 22746, 22748, 22750, 22752, 22754, 22756, 22758, 22959-22964, 27087-27109 Identical to one or at least 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96% , 97%, 98%, or 99% identical, or an immunogenic fragment or variant of any of these. .
144. 144. RNA according to any of 129 to 143 above, wherein the spike protein (S) comprises or consists of spike protein fragment S1, or an immunogenic fragment or variant thereof.
145. at least one SARS-CoV-2 spike protein is any of SEQ ID NO: 1, 10, 22738, 22740, 22742, 22744, 22746, 22748, 22750, 22752, 22754, 22756, 22758, 22959-22964, 27087-27109 RNA according to any of the above, comprising or consisting of at least one amino acid sequence that is identical or 95% identical to one.
146. 145. The RNA according to any one of 129 to 145 above, wherein the spike protein (S) is a pre-fusion stabilized spike protein (S_stab) comprising at least one pre-fusion stabilizing mutation.
147. 146, above, wherein the at least one prefusion stabilizing mutation comprises the following amino acid substitutions: K986P and V987P.
148. one or more heterologous peptide or protein elements in which at least one coding sequence is selected from signal peptides, linkers, helper epitopes, antigen clustering elements, trimerization elements, transmembrane elements, and/or VLP-forming sequences RNA according to any of the above, further encoding.
149. 148. The RNA according to 148 above, wherein the at least one heterologous peptide or protein element is a heterologous antigen clustering element, a heterologous trimerization element, and/or a VLP-forming sequence.
150. at least one coding sequence is a codon-modified coding sequence, and the amino acid sequence encoded by the at least one codon-modified coding sequence is preferably an amino acid sequence encoded by the corresponding wild-type or reference coding sequence. RNA according to any of the above, unmodified compared to.
151. At least one codon-modified coding sequence is a C-maximized coding sequence, a CAI-maximized coding sequence, a human codon usage compatible coding sequence, a coding sequence modified for G/C content, and a G/C optimized coding sequence. 150. RNA according to 150 above, selected from coding sequences, or any combination thereof.
152. 150 or 151 above, wherein the at least one codon-modified coding sequence is a G/C-optimized coding sequence, a human codon usage compatible coding sequence, or a coding sequence modified in G/C content. RNA.
153. At least one code array is an array number 136, 137, 146, 22765, 22767, 22771, 22773, 22777, 22777, 22781, 22783, 22783, 22783, 22785 Either 27247 or at least 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96 %, 97%, 98%, or 99% identical, or a fragment or variant of any of these sequences.
154. At least one code array is an array number 136, 137, 146, 22765, 22767, 22771, 22773, 22777, 22777, 22781, 22783, 22783, 22783, 22785 Either 27247 RNA according to any of the above, comprising or consisting of a sequence that is identical or at least 90% identical to one of the above.
155. RNA according to any of the above, wherein at least one coding sequence has a G/C content of at least about 50%, 55%, or 60%.
156. at least one coding sequence encodes an S protein containing prefusion stabilizing K986P and V987P mutations, the coding sequence comprising SEQ ID NOs: 136, 137, 146, 22765, 22767, 22769, 22771, 22773, 22775, 22777, 22779, 22781, 22783, 22785, 23089-23148, 23150-23184, 27110-27247, wherein the G/C comprises or consists of an optimized coding sequence; RNA described in either.
157. Preferably comprising at least one poly(A) sequence, preferably comprising 30 to 200 adenosine nucleotides and/or at least one poly(C) sequence, preferably comprising 10 to 40 cytosine nucleotides. RNA described in either.
158. RNA according to any of the above, comprising at least one histone stem loop.
159. RNA according to any of the above, wherein the RNA comprises at least one poly(A) sequence comprising 30 to 200 adenosine nucleotides, and the nucleotide at the 3' end of the RNA is adenosine.
160. The at least one heterologous 3'UTR is derived from the 3'UTR of a gene selected from PSMB3, ALB7, CASP1, COX6B1, GNAS, NDUFA1 and RPS9, or a homolog, fragment or variant of any one of these genes. RNA according to any of the above, comprising or consisting of a nucleic acid sequence.
161. at least one heterologous 5'UTR is a gene selected from HSD17B4, RPL32, ASAH1, ATP5A1, MP68, NDUFA4, NOSIP, RPL31, SLC7A3, TUBB4B and UBQLN2, or a homologue, fragment or fragment of any one of these genes. RNA according to any of the above, comprising or consisting of a nucleic acid sequence derived from the 5'UTR of the variant.
162. At least one heterologous 5'UTR comprising or consisting of a nucleic acid sequence derived from the 5'UTR from HSD17B4 and at least one heterologous 3 comprising or consisting of a nucleic acid sequence derived from the 3'UTR of PSMB3. 'RNA as described in any of the above, including the UTR.
163. 5' to 3':
i) 5' cap 1 structure;
ii) 5'UTR derived from the 5'UTR of the HSD17B4 gene, preferably as set forth in SEQ ID NO: 232
iii) at least one coding sequence;
iv) a 3'UTR derived from the 3'UTR of the PSMB3 gene, preferably as set forth in SEQ ID NO: 254;
v) optionally histone stem-loop sequences; and
vi) RNA according to any of the above, comprising a poly(A) sequence comprising about 100 A nucleotides, and the nucleotide at the 3' end of said RNA is adenosine.
164. RNA according to any of the above, which is mRNA, self-replicating RNA, circular RNA, or replicon RNA.
165. RNA according to any of the above, which is mRNA.
166. 165 above, wherein the mRNA is not a replicon RNA or self-replicating RNA.
167. any of the above, comprising a 5' cap structure, preferably m7G, cap 0, cap 1, cap 2, modified cap 0 or modified cap 1 structure, preferably 5' cap 1 structure RNA.
168. RNA according to any of the above, which does not contain a 1-methylpseudouridine substitution.
169. RNA according to any of the above, which does not contain chemically modified nucleotides.
170. 167. The RNA according to any one of 109 to 167 above, comprising a pseudouridine or 1-methylpseudouridine substitution.
171. the RNA is in vitro transcribed RNA, the RNA in vitro transcription is performed in the presence of a mixture of sequence-optimized nucleotides and a cap analog, preferably a mixture of sequence-optimized nucleotides; RNA according to any of the above, wherein the RNA does not contain chemically modified nucleotides.
172. RNA according to any of the above, which is purified RNA, preferably RNA purified by RP-HPLC and/or TFF.
173. Purified RNA that has been purified by RP-HPLC and/or TFF and contains approximately 5%, 10%, or 20% less double-stranded RNA byproducts as RNA that has not been purified by RP-HPLC and/or TFF. , RNA according to any of the above.
174. Purified RNA purified by RP-HPLC and/or TFF and containing approximately 5%, 10%, or 20% less dilution as RNA purified by oligo-dT purification, precipitation, filtration, and/or anion exchange chromatography. RNA according to any of the above, comprising a double-stranded RNA byproduct.
175. 67. A composition comprising RNA according to any of 1 to 66 above, optionally comprising at least one pharmaceutically acceptable carrier.
176. 175. The composition according to 175 above, which is a multivalent composition comprising a plurality or more than at least one RNA according to any of 1 to 56 above.
177. 177. The composition according to 176 above, wherein the plurality or at least more than one RNA of the multivalent composition each encodes a different spike protein, preferably a pre-fusion stabilized spike protein.
178. 177. The composition of claim 177, wherein the different spike proteins or pre-fusion stabilized spike proteins are derived from different SARS-CoV-2 virus variants/isolates.
179. Different spike proteins or pre-fusion stabilized spike proteins are present in B.1.351 (South Africa), B.1.1.7 (UK), P.1 (Brazil), B.1.429 (California), B.1.525 (Nigeria). ), B.1.258 (Czech Republic), B.1.526 (New York), A.23.1 (Uganda), B.1.617.1 (India), B.1.617.2 (India), B.1.617.3 (India) , P.2 (Brazil), C37.1 (Peru) or B.1.1.621 variant.
180. The different spike proteins or pre-fusion stabilized spike proteins are derived from at least B.1.1.7, B.1.351, P.1, CAL.20C, B.1.1.519, B.1.621 or C.37. The composition according to 178 or 179 above.
181. At least one of the different spike proteins or the pre-fusion stabilized spike protein has at least one amino acid substitution at a position corresponding to E484, N501, P681, D614 and/or L452 compared to the sequence of SEQ ID NO: 1 178. The composition according to 178 above, comprising:
182. At least one of the different spike proteins or the pre-fusion stabilized spike protein has at least one amino acid substitution at a position corresponding to E484K, N501Y, P681R, D614G and/or L452R compared to the sequence of SEQ ID NO: 1 182. The composition according to 181 above, comprising:
183. 183, above, wherein at least one of the different spike proteins or the pre-fusion stabilized spike protein comprises amino acid substitutions at positions corresponding to L452R, P681R, and D614G compared to the sequence of SEQ ID NO: 1. thing.
184. 181. The composition according to any one of 175 to 180 above, comprising RNA having RNA integrity of 70% or more.
185. 185 according to any of the above 175 to 184, wherein the composition comprises RNA with a degree of capping of 70% or more, preferably at least 70%, 80% or 90% of the RNA species comprises a cap 1 structure. Composition.
186. The RNA contains one or more cationic or polycationic compounds, preferably cationic or polycationic polymers, cationic or polycationic polysaccharides, cationic or polycationic lipids, cationic or polycationic proteins, 175 to 185 above, conjugated or associated, or at least partially conjugated or partially associated with a cationic or polycationic peptide, or any combination thereof. The composition according to any one of.
187. liposomes, lipid nanoparticles (LNPs), lipoplexes, in which the RNA is complexed or associated with one or more lipids or lipid-based carriers, thereby preferably encapsulating at least one RNA; and/or the composition according to 186 above, which forms nanoliposomes.
188. 188. The composition of 186 or 187 above, wherein the RNA is complexed with one or more lipids, thereby forming lipid nanoparticles.
189. LNP has the formula III-3:
Figure 2024502210000109
 189. The composition according to 187 or 188 above, comprising a cationic lipid according to.
190. LNP has the formula (IVa):
Figure 2024502210000110
 (where n has an average value ranging from 30 to 60, preferably n has an average value of about 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54 189, most preferably n having an average value of 49 or 45).
191. LNP has the formula (IVa):
Figure 2024502210000111
 189, wherein n is an integer selected such that the average molecular weight of the PEG lipid is about 2500 g/mol.
192. 192. The composition according to any of 187 to 191 above, wherein the LNP comprises one or more neutral lipids and/or one or more steroids or steroid analogs.
193. The neutral lipid is 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphocholine (DSPC), and preferably the molar ratio of cationic lipid to DSPC is in the range of about 2:1 to about 8:1. 192. The composition according to 192 above, located in
194. 193. The composition of claim 192, wherein the steroid is cholesterol, and preferably the molar ratio of cationic lipid to cholesterol is in the range of about 2:1 to about 1:1.
195. LNP is
(i) at least one cationic lipid, preferably a lipid of formula (III), more preferably lipid III-3;
(ii) at least one neutral lipid, preferably 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphocholine (DSPC);
(iii) at least one steroid or steroid analog, preferably cholesterol; and
(iv) comprising at least one polymer-conjugated lipid, preferably a PEG-lipid derived from formula (IVa, n=49);
(i) to (iv) are in a molar ratio of about 20-60% cationic lipids, 5-25% neutral lipids, 25-55% sterols, and 0.5-15% PEG-lipids; The composition according to any one of 187 to 194 above.
196. LNP is
(i) at least one cationic lipid, preferably a lipid of formula (III), more preferably lipid III-3;
(ii) at least one neutral lipid, preferably 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphocholine (DSPC);
(iii) at least one steroid or steroid analog, preferably cholesterol; and
(iv) comprising at least one polymer-conjugated lipid, preferably a PEG-lipid derived from formula (IVa, n=45);
(i) to (iv) are in a molar ratio of about 20-60% cationic lipids, 5-25% neutral lipids, 25-55% sterols, and 0.5-15% PEG-lipids; The composition according to any one of 187 to 194 above.
197. 197. A composition according to 195 or 196 above, wherein (i) to (iv) are in a molar ratio of about 50:10:38.5:1.5, preferably 47.4:10:40.9:1.7.
198. 188 above, comprising less than about 20% free (uncomplexed or unencapsulated) RNA, preferably less than about 15% free RNA, more preferably less than about 10% free RNA. The composition according to any one of 197 to 197.
199. Any of 188 to 198 above, wherein the wt/wt ratio of lipid to RNA is about 10:1 to about 60:1, preferably about 20:1 to about 30:1, such as about 25:1. The composition described in .
200. 199, wherein the LNP encapsulating RNA has an n/p ratio in the range of about 1 to about 10, preferably in the range of about 5 to about 7, more preferably in the range of about 6. Composition.
201. 200. The composition according to any of 188 to 200 above, having a polydispersity index (PDI) value of less than about 0.4, preferably less than about 0.3, more preferably less than about 0.2, most preferably less than about 0.1.
202. LNP is
(a) has a Z-average size in the range of about 60 nm to about 120 nm, preferably less than about 120 nm, more preferably less than about 100 nm, most preferably less than about 80 nm;
(b) contains less than about 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1% LNPs having a particle size greater than about 500 nm; and/or
(c) from 187 above, comprising less than about 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1% LNPs with a particle size smaller than about 20 nm; 201. The composition according to any one of 201.
203. Composition according to any of 187 to 202 above, wherein at least about 80%, 85%, 90%, 95% of the lipid-based carrier has a spherical morphology, preferably comprising a solid or partially solid core. thing.
96. 204. The composition according to any of 187 to 203 above, having a turbidity in the range of about 150 FNU to about 0.0 FNU, preferably about 50 FNU or less, more preferably about 25 FNU or less.
204. (a) sugar at a concentration of about 50 to about 300 mM, preferably sucrose at a concentration of about 150 mM;
(b) salt at a concentration of about 10mM to about 200mM, preferably NaCl at a concentration of about 75mM; and/or
(c) a buffer at a concentration of 1mM to about 100mM, preferably Na 3 PO 4 at a concentration of about 10mM;
205. The composition according to any one of 175 to 204 above, further comprising:
205. 205. The composition according to any one of 175 to 204 above, having a pH in the range of about pH 7.0 to about pH 8.0, preferably about pH 7.4.
206. 200. The composition according to any one of 175 to 200 above, which is a lyophilized composition.
207. 206, above, wherein the lyophilized composition has a water content of less than about 10%, preferably the lyophilized composition has a water content of about 0.5% to 5%. thing.
208. Any of 187 to 205 above, wherein at least 70%, 75%, 80%, 85%, 90% or 95% of the RNA is unchanged for at least about 2 weeks after storage as a liquid at a temperature of about 5°C. Composition of.
209. At least 70%, 75%, 80%, 85%, 90% or 95% of the RNA remains stable for about 2 weeks to about 1 month, 2 months, 3 months, 4 209. The composition according to 208 above, which remains unchanged for 1 month, 5 months, 6 months or 1 year.
210. 209. The composition of claim 208, wherein at least 80% of the RNA is unchanged after storage as a liquid for about 2 weeks at a temperature of about 5°C.
211. The RNA and the lipid-based carrier encapsulating the RNA are purified by at least one purification step, preferably by at least one step of TFF and/or at least one step of clarification and/or at least one step of filtration. 210. The composition according to any one of 187 to 210 above.
212. A vaccine comprising the RNA according to any one of 109 to 174 above and/or the composition according to any one of 165 to 200 above.
213. 213. The vaccine according to claim 212, which induces an adaptive immune response, preferably a protective adaptive immune response, against a coronavirus, preferably against the coronavirus SARS-CoV-2.
214. The above is a multivalent vaccine comprising a plurality or more than at least one of the RNAs according to any of 109 to 181 above, or a plurality or more than at least one of the compositions according to any of 182 to 104 above. The vaccine described in 212 or 213.
215. RNA according to any of 109 to 174 above and/or composition according to any of 182 to 104 above, and/or vaccine according to any of 105 to 107 above, optionally for lysis. A kit or kit of parts containing a liquid vehicle for the components and optionally technical instructions providing information about the administration and dosage of the ingredients.
216. The RNA according to any one of 109 to 174 above, the composition according to any one of 175 to 211 above, the vaccine according to any one of 212 to 214 above, the vaccine according to any one of 215 above, for use as a medicine. A kit or kit of parts.
217. Any of 109 to 174 above for use in the treatment or prevention of infection with a coronavirus, preferably the SARS-CoV-2 coronavirus, or a disorder associated with such an infection, preferably COVID-19. RNA as described above, a composition as described in any one of 211 above, a vaccine as described in any one of 212 to 214 above, a kit or a kit of parts as described in 215 above.
218. A method for treating or preventing a disorder, wherein the RNA according to any one of 109 to 174 above, the composition according to any one of 175 to 211 above, or any one of 212 to 214 above is administered to a subject in need thereof. 216. A method comprising applying or administering a vaccine according to item 215 above and/or a kit or kit of parts according to item 215 above.
219. Method for treating or preventing a disorder according to item 218 above, wherein the disorder is an infection with a coronavirus, preferably the SARS-CoV-2 coronavirus, or a disorder associated with such an infection, preferably COVID-19. .
220. A method of treating or preventing a disorder according to 218 or 219 above, further defined as a method of preventing a SARS-CoV-2 coronavirus infection or a disorder associated with such an infection, preferably COVID-19.
221. Further defined as a method of preventing SARS-CoV-2 coronavirus infection or disorders associated with such infection, infection is caused by B.1.1.529 (Omicron, South Africa) (BA.1_v1, BA.1_v0, B. 1.1.529, BA.2, BA.1_v2, BA.1_v3, BA.1_v4, BA.1_v5), B.1.351 (South Africa), B.1.1.7 (UK), P.1 (Brazil), B.1.429 (California), B.1.525 (Nigeria), B.1.258 (Czech Republic), B.1.526 (New York), A.23.1 (Uganda), B.1.617.1 (India), B.1.617.2 (India), B.1.617.3 (India), P.2 (Brazil), C37.1 (Peru) and B.1.1.621. A method of treating or preventing a disorder described in .
223. further defined as a method of preventing SARS-CoV-2 coronavirus infection or disorders associated with such infection, wherein the infection comprises a SARS-CoV-2 coronavirus infection comprising an amino acid substitution, deletion or insertion as described in any of 1 to 33 above. A method of treating or preventing a disorder according to 212 above, which is caused by a CoV-2 isolate.
224. 220. A method of treating or preventing a disorder according to any of 218 to 219 above, wherein the subject in need thereof is a mammalian subject, preferably a human subject.
225. 225. A method of treating or preventing a disorder according to claim 224, wherein the human subject is an elderly human subject, preferably of at least 50, 60, 65 or 70 years of age.
226. The human subject is preferably less than 3 years old, less than 2 years old, less than 1.5 years old, less than 1 year (12 months), less than 9 months, less than 6 months or less than 3 months old, or between 6 months and 2 years old. A method for treating or preventing the disorder according to item 224 above in a newborn baby or an infant.
227. 225. A method of treating or preventing a disorder according to 224 above, wherein the human subject is between the ages of 18 and 60 years.
228. 225. A method of treating or preventing a disorder according to claim 224, wherein the human subject is less than 60 years old, less than 55 years old, less than 50 years old, less than 45 years old, or less than 40 years old.
229. 229. A method of treating or preventing a disorder according to claim 228, wherein the human subject is between about 12 and 60 years old; 12 and 55 years old; 12 and 50 years old; 12 and 45 years old; or 12 and 40 years old.
230. 229. A method of treating or preventing a disorder according to claim 228, wherein the human subject is about 18 to 55 years old; 18 to 50 years old; 18 to 45 years old; or 18 to 40 years old.
231. 225. A method of treating or preventing a disorder according to claim 224, wherein the human subject is between about 12 and 60 years old; 12 and 55 years old; 12 and 50 years old; 12 and 45 years old; or 12 and 40 years old.
232. 225. A method of treating or preventing a disorder according to claim 224, wherein the human subject is between about 18 and 60 years old; 18 and 55 years old; 18 and 50 years old; 18 and 45 years old; or 18 and 40 years old.
233. 225. A method of treating or preventing a disorder according to claim 224, wherein the human subject is between about 18 and 50 years of age.
234. The method of 225 above, which reduces the severity of one or more symptoms of COVID-19 disease.
235. 235. The method of 234 above, which reduces the likelihood that the subject will require hospitalization, admission to an intensive care unit, treatment with supplemental oxygen, and/or treatment with a ventilator.
236. 235. The method of 234 above, wherein the subject reduces the likelihood of developing severe or moderate COVID-19 disease.
237. 235. The method of 234 above, which prevents severe COVID-19 disease in a subject for at least about 6 months.
238. 235. The method of 234 above, wherein the subject reduces the likelihood of developing fever, difficulty breathing; loss of smell and/or loss of taste.
239. 239. The method of any of 218-238 above, further defined as a method of stimulating an antibody, CD4+ T cell response or CD8+ T cell response in a subject.
240. 239. The method of any of 218-238 above, further defined as a method of stimulating a neutralizing antibody response in a subject.
241. The target is about 1μg to about 50μg RNA; about 2μg to about 50μg RNA; about 2μg to about 25μg RNA; about 5μg to about 50μg RNA; about 5μg to about 25μg RNA; about 10μg to about 50μg RNA or about 12 μg of RNA.
242. 242. The method of claim 241, wherein the administration results in seroconversion in 100% of the subjects to whom the composition is administered.
243. The method of any of paragraphs 218 to 240 above, wherein the subject was previously infected with SARS CoV-2.
244. The method of any of 218-240 above, wherein the subject has been previously treated with at least a first SARS CoV-2 vaccine composition.
245. 244. The method of 244 above, wherein the first SARS CoV-2 vaccine composition was an mRNA vaccine.
246. 245. The method according to 245 above, wherein the first SARS CoV-2 vaccine composition was CVnCoV; BNT162; and/or mRNA-1273.
247. 245. The method of 244 above, wherein the first SARS CoV-2 vaccine composition is a protein subunit vaccine.
248. 247. The method of 247 above, wherein the first SARS CoV-2 vaccine composition was NVX-CoV2373 or COVAX.
249. 244. The method of 244 above, wherein the first SARS CoV-2 vaccine composition is an adenovirus vector vaccine.
250. 249. The method of 249 above, wherein the first SARS CoV-2 vaccine composition was ADZ1222 or Ad26.COV-2.S.
251. 241. The method of any of 218-240 above, wherein the subject has detectable SARS CoV-2 S protein binding antibodies.

Claims (251)

少なくとも1つのSARS-CoV-2スパイクタンパク質又はその免疫原性フラグメント若しくは免疫原性バリアントをコードする少なくとも1つのコード配列を含むRNAであって、SARS-CoV-2スパイクタンパク質が、配列番号1の配列と比較して、K986、V987、A67、H69、V70、T95、G142、V143、Y144、Y145、N211、L212、214、G339、S371、S373、S375、S477、T478、E484、Q493、G496、Q498、N501、Y505、T547、D614、H655、N679、P681、N764、D796、N856、Q954、N969、L981に対応する位置において少なくとも1個のアミノ酸置換、欠失又は挿入を含む、RNA。 RNA comprising at least one coding sequence encoding at least one SARS-CoV-2 spike protein or an immunogenic fragment or variant thereof, wherein the SARS-CoV-2 spike protein has the sequence of SEQ ID NO: 1. Compared to K986, V987, A67, H69, V70, T95, G142, V143, Y144, Y145, N211, L212, 214, G339, S371, S373, S375, S477, T478, E484, Q493, G496, Q498 , N501, Y505, T547, D614, H655, N679, P681, N764, D796, N856, Q954, N969, L981. 少なくとも1つのSARS-CoV-2スパイクタンパク質又はその免疫原性フラグメント若しくは免疫原性バリアントをコードする少なくとも1つのコード配列を含むRNAであって、SARS-CoV-2スパイクタンパク質が、配列番号1の配列と比較して、K986P、V987P、A67V、H69del、V70del、T95I、G142D、V143del、Y144del、Y145del、N211del、L212I、N212del、ins214EPE、G339D、S371L、S373P、S375F、S477N、T478K、E484A、Q493R、G496S、Q498R、N501Y、Y505H、T547K、D614G、H655Y、N679K、P681H、N764K、D796Y、N856K、Q954H、N969K、及びL981Fに対応する位置において少なくとも1個のアミノ酸置換、欠失又は挿入を含む、RNA。 RNA comprising at least one coding sequence encoding at least one SARS-CoV-2 spike protein or an immunogenic fragment or variant thereof, wherein the SARS-CoV-2 spike protein has the sequence of SEQ ID NO: 1. Compared to K986P, V987P, A67V, H69del, V70del, T95I, G142D, V143del, Y144del, Y145del, N211del, L212I, N212del, ins214EPE, G339D, S371L, S373P, S375F, S477N, T478K, E4 84A, Q493R, G496S , Q498R, N501Y, Y505H, T547K, D614G, H655Y, N679K, P681H, N764K, D796Y, N856K, Q954H, N969K, and L981F. 少なくとも1つのSARS-CoV-2スパイクタンパク質又はその免疫原性フラグメント若しくは免疫原性バリアントをコードする少なくとも1つのコード配列であって、SARS-CoV-2スパイクタンパク質は、配列番号1の配列と比較して、K986、V987、A67、H69、V70、T95、G142、V143、Y144、Y145、N211、L212、214、G339、S371、S373、S375、S477、T478、E484、Q493、G496、Q498、N501、Y505、T547、D614、H655、N679、P681、N764、D796、N856、Q954、N969、L981に対応する位置において少なくとも1個のアミノ酸置換、欠失又は挿入を含むコード配列;並びに
少なくとも1つのSARS-CoV-2スパイクタンパク質又はその免疫原性フラグメント若しくは免疫原性バリアントをコードする少なくとも1つのコード配列であって、SARS-CoV-2スパイクタンパク質は、配列番号1の配列と比較して、
L452、E484、P681、E154、D614、及びQ1071;又は
L452、P681、T19、E156、F157、R158、T478、D614、及びD950
に対応する位置において少なくとも1個のアミノ酸置換、欠失又は挿入を含むコード配列、
を含む、RNA。 at least one coding sequence encoding at least one SARS-CoV-2 spike protein or an immunogenic fragment or variant thereof, wherein the SARS-CoV-2 spike protein is compared to the sequence of SEQ ID NO:1. K986, V987, A67, H69, V70, T95, G142, V143, Y144, Y145, N211, L212, 214, G339, S371, S373, S375, S477, T478, E484, Q493, G496, Q498, N501, a coding sequence containing at least one amino acid substitution, deletion or insertion at a position corresponding to Y505, T547, D614, H655, N679, P681, N764, D796, N856, Q954, N969, L981; and at least one SARS- at least one coding sequence encoding a CoV-2 spike protein or an immunogenic fragment or variant thereof, the SARS-CoV-2 spike protein comprising:
L452, E484, P681, E154, D614, and Q1071; or
L452, P681, T19, E156, F157, R158, T478, D614, and D950
a coding sequence comprising at least one amino acid substitution, deletion or insertion at a position corresponding to
including RNA. 少なくとも1つのSARS-CoV-2スパイクタンパク質又はその免疫原性フラグメント若しくは免疫原性バリアントをコードする少なくとも1つのコード配列であって、SARS-CoV-2スパイクタンパク質は、配列番号1の配列と比較して、K986P、V987P、A67V、H69del、V70del、T95I、G142D、V143del、Y144del、Y145del、N211del、L212I、ins214EPE、G339D、S371L、S373P、S375F、S477N、T478K、E484A、Q493R、G496S、Q498R、N501Y、Y505H、T547K、D614G、655Y、N679K、P681H、N764K、D796Y、N856K、Q954H、N969K、及びL981Fに対応する位置において少なくとも1個のアミノ酸置換、欠失又は挿入を含むコード配列:並びに
少なくとも1つのSARS-CoV-2スパイクタンパク質又はその免疫原性フラグメント若しくは免疫原性バリアントをコードする少なくとも1つのコード配列であって、SARS-CoV-2スパイクタンパク質は、配列番号1の配列と比較して、
L452R、E484Q、P681R、E154K、D614G、及びQ1071H;又は
L452R、P681R、T19R、E156G、F157del、R158del、T478K、D614G、及びD950N
に対応する位置において少なくとも1個のアミノ酸置換、欠失又は挿入を含むコード配列、
を含む、RNA。 at least one coding sequence encoding at least one SARS-CoV-2 spike protein or an immunogenic fragment or variant thereof, wherein the SARS-CoV-2 spike protein is compared to the sequence of SEQ ID NO:1. K986P, V987P, A67V, H69del, V70del, T95I, G142D, V143del, Y144del, Y145del, N211del, L212I, ins214EPE, G339D, S371L, S373P, S375F, S477N, T478K, E484A, Q493 R, G496S, Q498R, N501Y, a coding sequence comprising at least one amino acid substitution, deletion, or insertion at a position corresponding to Y505H, T547K, D614G, 655Y, N679K, P681H, N764K, D796Y, N856K, Q954H, N969K, and L981F: and at least one SARS - at least one coding sequence encoding a CoV-2 spike protein or an immunogenic fragment or variant thereof, wherein the SARS-CoV-2 spike protein is compared to the sequence of SEQ ID NO: 1;
L452R, E484Q, P681R, E154K, D614G, and Q1071H; or
L452R, P681R, T19R, E156G, F157del, R158del, T478K, D614G, and D950N
a coding sequence comprising at least one amino acid substitution, deletion or insertion at a position corresponding to
including RNA. 少なくとも1つのSARS-CoV-2スパイクタンパク質が、配列番号28540～28588、28917～28920のいずれか1つと同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一であるアミノ酸配列の少なくとも1つを含むか、又はそれからなる、先行する請求項のいずれか一項に記載のRNA。 at least one SARS-CoV-2 spike protein is at least 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88% identical to any one of SEQ ID NOs: 28540-28588, 28917-28920; , 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical amino acid sequences. , RNA according to any one of the preceding claims. スパイクタンパク質(S)が、スパイクタンパク質フラグメントS1、又はその免疫原性フラグメント若しくは免疫原性バリアントを含むか、又はそれからなる、先行する請求項のいずれか一項に記載のRNA。 RNA according to any one of the preceding claims, wherein the spike protein (S) comprises or consists of the spike protein fragment S1, or an immunogenic fragment or variant thereof. 少なくとも1つのSARS-CoV-2スパイクタンパク質が、配列番号28540～28588、28917～28920のいずれか1つと同一であるか、又は少なくとも95%同一であるアミノ酸配列の少なくとも1つを含むか、又はそれからなる、先行する請求項のいずれか一項に記載のRNA。 at least one SARS-CoV-2 spike protein is identical to, or comprises at least one amino acid sequence that is at least 95% identical to, any one of SEQ ID NOs: 28540-28588, 28917-28920, or from RNA according to any one of the preceding claims. スパイクタンパク質(S)が、少なくとも1つの融合前の安定化変異を含む融合前の安定化されたスパイクタンパク質(S_stab)である、先行する請求項のいずれか一項に記載のRNA。 RNA according to any one of the preceding claims, wherein the spike protein (S) is a pre-fusion stabilized spike protein (S_stab) comprising at least one pre-fusion stabilizing mutation. 少なくとも1つの融合前の安定化変異が、以下のアミノ酸置換:K986P及びV987Pを含む、請求項8に記載のRNA。 9. The RNA of claim 8, wherein the at least one prefusion stabilizing mutation comprises the following amino acid substitutions: K986P and V987P. 少なくとも1つのコード配列が、シグナルペプチド、リンカー、ヘルパーエピトープ、抗原クラスター形成エレメント、三量体化エレメント、膜貫通型エレメント、及び/又はVLP形成配列から選択される1つ以上の異種ペプチド又はタンパク質エレメントをさらにコードする、先行する請求項のいずれか一項に記載のRNA。 one or more heterologous peptide or protein elements in which at least one coding sequence is selected from signal peptides, linkers, helper epitopes, antigen clustering elements, trimerization elements, transmembrane elements, and/or VLP-forming sequences RNA according to any one of the preceding claims, further encoding. 少なくとも1つの異種ペプチド又はタンパク質エレメントが、異種抗原クラスター形成エレメント、異種三量体化エレメント、及び/又はVLP形成配列である、請求項10に記載のRNA。 11. RNA according to claim 10, wherein the at least one heterologous peptide or protein element is a heterologous antigen clustering element, a heterologous trimerization element, and/or a VLP-forming sequence. 少なくとも1つのコード配列が、コドン修飾されたコード配列であり、少なくとも1つのコドン修飾されたコード配列によりコードされるアミノ酸配列が、好ましくは、対応する野生型又は参照コード配列によってコードされるアミノ酸配列と比較して、修飾されていない、先行する請求項のいずれか一項に記載のRNA。 at least one coding sequence is a codon-modified coding sequence, and the amino acid sequence encoded by the at least one codon-modified coding sequence is preferably an amino acid sequence encoded by the corresponding wild-type or reference coding sequence. RNA according to any one of the preceding claims, which is unmodified compared to. 少なくとも1つのコドン修飾されたコード配列が、C最大化コード配列、CAI最大化コード配列、ヒトコドン使用適合コード配列、G/C含有量が修飾されたコード配列、及びG/Cが最適化されたコード配列、又はそれらの任意の組み合わせから選択される、請求項12に記載のRNA。 At least one codon-modified coding sequence is a C-maximized coding sequence, a CAI-maximized coding sequence, a human codon usage compatible coding sequence, a coding sequence modified for G/C content, and a G/C optimized coding sequence. 13. RNA according to claim 12, selected from coding sequences, or any combination thereof. 少なくとも1つのコドン修飾されたコード配列が、G/Cが最適化されたコード配列、ヒトコドン使用適合コード配列、又はG/C含有量が修飾されたコード配列である、請求項12又は13に記載のRNA。 Claim 12 or 13, wherein the at least one codon modified coding sequence is a G/C optimized coding sequence, a human codon usage compatible coding sequence, or a coding sequence modified for G/C content. RNA. 少なくとも1つのコード配列が、少なくとも約50%、55%、又は60%のG/C含有量を有する、先行する請求項のいずれか一項に記載のRNA。 RNA according to any one of the preceding claims, wherein at least one coding sequence has a G/C content of at least about 50%, 55%, or 60%. 少なくとも1つのコード配列が、融合前の安定化K986P及びV987P変異を含むSタンパク質をコードし、コード配列が、配列番号28589～28637、28921～28924と少なくとも95%同一である核酸配列を含むG/Cが最適化されたコード配列を含むか、又はそれからなる、先行する請求項のいずれか一項に記載のRNA。 At least one coding sequence encodes an S protein containing prefusion stabilizing K986P and V987P mutations, and the coding sequence comprises a nucleic acid sequence that is at least 95% identical to SEQ ID NOs: 28589-28637, 28921-28924. RNA according to any one of the preceding claims, wherein C comprises or consists of an optimized coding sequence. 好ましくは、30～200個のアデノシンヌクレオチド及び/又は少なくとも1つのポリ(C)配列を含む、好ましくは、10～40個のシトシンヌクレオチドを含む、少なくとも1つのポリ(A)配列を含む、先行する請求項のいずれか一項に記載のRNA。 Preferably comprising 30 to 200 adenosine nucleotides and/or at least one poly(C) sequence, preferably comprising 10 to 40 cytosine nucleotides, comprising at least one poly(A) sequence, preceded by RNA according to any one of claims. 少なくとも1つのヒストンステムループを含む、先行する請求項のいずれか一項に記載のRNA。 RNA according to any one of the preceding claims, comprising at least one histone stem loop. RNAが、30～200個のアデノシンヌクレオチドを含む少なくとも1つのポリ(A)配列を含み、前記RNAの3'末端のヌクレオチドが、アデノシンである、先行する請求項のいずれか一項に記載のRNA。 RNA according to any one of the preceding claims, wherein the RNA comprises at least one poly(A) sequence comprising 30 to 200 adenosine nucleotides, and the nucleotide at the 3' end of said RNA is adenosine. . 少なくとも1つの異種3'UTRが、PSMB3、ALB7、CASP1、COX6B1、GNAS、NDUFA1及びRPS9から選択される遺伝子、又はこれらの遺伝子のいずれか1つの相同体、フラグメント若しくはバリアントの3'UTRから誘導される核酸配列を含むか、又はそれからなる、先行する請求項のいずれか一項に記載のRNA。 The at least one heterologous 3'UTR is derived from the 3'UTR of a gene selected from PSMB3, ALB7, CASP1, COX6B1, GNAS, NDUFA1 and RPS9, or a homolog, fragment or variant of any one of these genes. RNA according to any one of the preceding claims, comprising or consisting of a nucleic acid sequence comprising: 少なくとも1つの異種5'UTRが、HSD17B4、RPL32、ASAH1、ATP5A1、MP68、NDUFA4、NOSIP、RPL31、SLC7A3、TUBB4B及びUBQLN2から選択される遺伝子、又はこれらの遺伝子のいずれか1つの相同体、フラグメント若しくはバリアントの5'UTRから誘導される核酸配列を含むか、又はそれからなる、先行する請求項のいずれか一項に記載のRNA。 at least one heterologous 5'UTR is a gene selected from HSD17B4, RPL32, ASAH1, ATP5A1, MP68, NDUFA4, NOSIP, RPL31, SLC7A3, TUBB4B and UBQLN2, or a homologue, fragment or fragment of any one of these genes. RNA according to any one of the preceding claims, comprising or consisting of a nucleic acid sequence derived from the 5'UTR of the variant. HSD17B4由来の5'UTRから誘導される核酸配列を含むか、又はそれからなる少なくとも1つの異種5'UTR及びPSMB3の3'UTRから誘導される核酸配列を含むか、又はそれからなる少なくとも1つの異種3'UTRを含む、先行する請求項のいずれか一項に記載のRNA。 At least one heterologous 5'UTR comprising or consisting of a nucleic acid sequence derived from the 5'UTR from HSD17B4 and at least one heterologous 3 comprising or consisting of a nucleic acid sequence derived from the 3'UTR of PSMB3. RNA according to any one of the preceding claims, comprising the 'UTR. 5'から3'に:
i)5'キャップ1構造;
ii)HSD17B4遺伝子の5'UTRから誘導される、好ましくは配列番号232に記載の5'UTR
iii)少なくとも1つのコード配列;
iv)PSMB3遺伝子の3'UTRから誘導される、好ましくは配列番号254に記載の3'UTR;
v)場合により、ヒストンステムループ配列;及び
vi)約100個のAヌクレオチドを含むポリ(A)配列
を含み、前記RNAの3'末端のヌクレオチドがアデノシンである、先行する請求項のいずれか一項に記載のRNA。 5' to 3':
i) 5' cap 1 structure;
ii) 5'UTR derived from the 5'UTR of the HSD17B4 gene, preferably as set forth in SEQ ID NO: 232
iii) at least one coding sequence;
iv) a 3'UTR derived from the 3'UTR of the PSMB3 gene, preferably as set forth in SEQ ID NO: 254;
v) optionally histone stem-loop sequences; and
vi) RNA according to any one of the preceding claims, comprising a poly(A) sequence comprising about 100 A nucleotides, the nucleotide at the 3' end of said RNA being adenosine. mRNA、自己複製RNA、環状RNA、又はレプリコンRNAである、先行する請求項のいずれか一項に記載のRNA。 RNA according to any one of the preceding claims, which is mRNA, self-replicating RNA, circular RNA or replicon RNA. mRNAである、先行する請求項のいずれか一項に記載のRNA。 RNA according to any one of the preceding claims, which is mRNA. mRNAが、レプリコンRNA又は自己複製RNAではない、請求項25に記載のRNA。 26. The RNA of claim 25, wherein the mRNA is not a replicon RNA or self-replicating RNA. 5'キャップ構造、好ましくは、m7G、キャップ0、キャップ1、キャップ2、修飾されたキャップ0又は修飾されたキャップ1構造、好ましくは、5'キャップ1構造を含む、先行する請求項のいずれか一項に記載のRNA。 Any of the preceding claims comprising a 5' cap structure, preferably m7G, cap 0, cap 1, cap 2, modified cap 0 or modified cap 1 structure, preferably 5' cap 1 structure RNA according to item 1. 1-メチルシュードウリジン置換を含まない、先行する請求項のいずれか一項に記載のRNA。 RNA according to any one of the preceding claims, which does not contain 1-methylpseudouridine substitutions. 化学的に修飾されたヌクレオチドを含まない、先行する請求項のいずれか一項に記載のRNA。 RNA according to any one of the preceding claims, which is free of chemically modified nucleotides. シュードウリジン又は1-メチルシュードウリジン置換を含む、先行する請求項のいずれか一項に記載のRNA。 RNA according to any one of the preceding claims, comprising a pseudouridine or 1-methylpseudouridine substitution. RNAが、in vitroで転写されたRNAであり、RNA in vitro転写が、配列が最適化されたヌクレオチド混合物及びキャップアナログの存在下で行われ、好ましくは、配列が最適化されたヌクレオチド混合物が、化学的に修飾されたヌクレオチドを含まない、先行する請求項のいずれか一項に記載のRNA。 the RNA is in vitro transcribed RNA, the RNA in vitro transcription is performed in the presence of a sequence optimized nucleotide mixture and a cap analog, preferably the sequence optimized nucleotide mixture is RNA according to any one of the preceding claims, which is free of chemically modified nucleotides. 精製されたRNA、好ましくは、RP-HPLC及び/又はTFFにより精製されたRNAである、先行する請求項のいずれか一項に記載のRNA。 RNA according to any one of the preceding claims, which is purified RNA, preferably RNA purified by RP-HPLC and/or TFF. RP-HPLC及び/又はTFFにより精製されたRNAであり、RP-HPLC及び/又はTFFを用いて精製されていないRNAとして約5%、10%、又は20%少ない二本鎖RNA副産物を含む、先行する請求項のいずれか一項に記載のRNA。 RNA purified by RP-HPLC and/or TFF and containing about 5%, 10%, or 20% less double-stranded RNA byproducts as RNA not purified using RP-HPLC and/or TFF; RNA according to any one of the preceding claims. RP-HPLC及び/又はTFFにより精製された精製されたRNAであり、オリゴdT精製、沈殿、濾過及び/又はアニオン交換クロマトグラフィーを用いて精製されたRNAとして約5%、10%、又は20%少ない二本鎖RNA副産物を含む、先行する請求項のいずれか一項に記載のRNA。 Purified RNA purified by RP-HPLC and/or TFF, approximately 5%, 10%, or 20% as RNA purified using oligo-dT purification, precipitation, filtration, and/or anion exchange chromatography. RNA according to any one of the preceding claims, comprising low double-stranded RNA by-products. 先行する請求項のいずれか一項に記載のRNAを含む組成物であって、場合により、少なくとも1つの薬学的に許容される担体を含む、組成物。 A composition comprising RNA according to any one of the preceding claims, optionally comprising at least one pharmaceutically acceptable carrier. 請求項1から34のいずれか一項に記載のRNAに加えて、複数又は少なくとも1つのさらなるRNAを含む多価組成物である、請求項35に記載の組成物。 36. The composition according to claim 35, which is a multivalent composition comprising, in addition to the RNA according to any one of claims 1 to 34, a plurality or at least one further RNA. 多価組成物の複数又は少なくとも1つより多くのRNAそれぞれが、異なるスパイクタンパク質、好ましくは、融合前の安定化されたスパイクタンパク質をコードする、請求項36に記載の組成物。 37. A composition according to claim 36, wherein each of the plurality or more than one RNA of the multivalent composition encodes a different spike protein, preferably a pre-fusion stabilized spike protein. 異なるスパイクタンパク質又は融合前の安定化されたスパイクタンパク質が、異なるSARS-CoV-2ウイルスバリアント/分離株から誘導される、請求項37に記載の組成物。 38. The composition of claim 37, wherein the different spike proteins or pre-fusion stabilized spike proteins are derived from different SARS-CoV-2 virus variants/isolates. 異なるスパイクタンパク質又は融合前の安定化されたスパイクタンパク質が、B.1.1.529(オミクロン、南アフリカ)(BA.1_v1、BA.1_v0、B.1.1.529、BA.2、BA.1_v2、BA.1_v3、BA.1_v4、BA.1_v5を含む)、B.1.351(南アフリカ)、B.1.1.7(英国)、P.1(ブラジル)、B.1.429(カリフォルニア)、B.1.525(ナイジェリア)、B.1.258(チェコ共和国)、B.1.526(ニューヨーク)、A.23.1(ウガンダ)、B.1.617.1(インド)、B.1.617.2(インド)、B.1.617.3(インド)、P.2(ブラジル)、C37.1(ペルー)又はB.1.1.621バリアントから誘導される、請求項38に記載の組成物。 Different spike proteins or pre-fusion stabilized spike proteins were used as B.1.1.529 (Omicron, South Africa) (BA.1_v1, BA.1_v0, B.1.1.529, BA.2, BA.1_v2, BA. 1_v3, BA.1_v4, BA.1_v5), B.1.351 (South Africa), B.1.1.7 (UK), P.1 (Brazil), B.1.429 (California), B.1.525 (Nigeria), B.1.258 (Czech Republic), B.1.526 (New York), A.23.1 (Uganda), B.1.617.1 (India), B.1.617.2 (India), B.1.617.3 (India), P 39. The composition of claim 38, wherein the composition is derived from the B.1.1.621 variant. 異なるスパイクタンパク質又は融合前の安定化されたスパイクタンパク質が、少なくともB.1.1.529、BA.1_v1、BA.1_v0、BA.1_v2、BA.1_v3、BA.1_v4、及び/又はBA.1_v5並びにB.1.617.2バリアントから誘導される、請求項38又は39に記載の組成物。 The different spike proteins or pre-fusion stabilized spike proteins are at least B.1.1.529, BA.1_v1, BA.1_v0, BA.1_v2, BA.1_v3, BA.1_v4, and/or BA.1_v5 and B. 40. A composition according to claim 38 or 39, derived from the .1.617.2 variant. 70%以上のRNA完全性を有するRNAを含む、請求項35から40のいずれか一項に記載の組成物。 41. A composition according to any one of claims 35 to 40, comprising RNA with RNA integrity of 70% or more. 組成物が、70%以上のキャッピング程度を有するRNAを含み、好ましくは、RNA種の少なくとも70%、80%、又は90%が、キャップ1構造を含む、請求項35から40のいずれか一項に記載の組成物。 41. Any one of claims 35 to 40, wherein the composition comprises RNA with a degree of capping of 70% or more, preferably at least 70%, 80% or 90% of the RNA species comprises a cap 1 structure. The composition described in. RNAが、1つ以上のカチオン性又はポリカチオン性化合物、好ましくは、カチオン性若しくはポリカチオン性ポリマー、カチオン性若しくはポリカチオン性多糖、カチオン性若しくはポリカチオン性脂質、カチオン性若しくはポリカチオン性タンパク質、カチオン性若しくはポリカチオン性ペプチド、又はそれらの任意の組み合わせと複合体化されるか、若しくは会合するか、又は少なくとも部分的に複合体化されるか、若しくは部分的に会合する、請求項35から40のいずれか一項に記載の組成物。 The RNA contains one or more cationic or polycationic compounds, preferably cationic or polycationic polymers, cationic or polycationic polysaccharides, cationic or polycationic lipids, cationic or polycationic proteins, from claim 35 conjugated or associated, or at least partially conjugated or partially associated with a cationic or polycationic peptide, or any combination thereof. 40. The composition according to any one of 40. RNAが、1つ以上の脂質又は脂質ベースの担体と複合体化するか、又は会合し、これにより、好ましくは少なくとも1つのRNAを封入する、リポソーム、脂質ナノ粒子(LNP)、リポプレックス、及び/又はナノリポソームを形成する、請求項43に記載の組成物。 Liposomes, lipid nanoparticles (LNPs), lipoplexes, and the like, wherein the RNA is complexed or associated with one or more lipids or lipid-based carriers, thereby preferably encapsulating at least one RNA. 44. A composition according to claim 43, wherein the composition forms nanoliposomes. RNAが、1つ以上の脂質と複合体化され、これにより、脂質ナノ粒子を形成する、請求項43又は44に記載の組成物。 45. The composition of claim 43 or 44, wherein the RNA is complexed with one or more lipids, thereby forming lipid nanoparticles. LNPが、式III-3:_(III-3)によるカチオン性脂質を含む、請求項44又は45に記載の組成物。 46. A composition according to claim 44 or 45, wherein the LNP comprises a cationic lipid according to formula III-3:_(III-3). LNPが、式(IVa):_(IVa)
(式中、nは、30～60の範囲にある平均値を有し、好ましくは、nは、約45、46、47、48、49、50、51、52、53、54の平均値を有し、最も好ましくは、nは49又は45の平均値を有する)のPEG脂質を含む、請求項44から45のいずれか一項に記載の組成物。 LNP is expressed as (IVa):_(IVa)
(where n has an average value in the range 30 to 60, preferably n has an average value of about 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54 46. A composition according to any one of claims 44 to 45, comprising PEG lipids having a mean value of 49 or 45, most preferably n having an average value of 49 or 45. LNPが、式(IVa):_(IVa)
(式中、nは、PEG脂質の平均分子量が約2500g/molであるように選択される整数である)のPEG脂質を含む、請求項44から47のいずれか一項に記載の組成物。 LNP is expressed as (IVa):_(IVa)
48. The composition of any one of claims 44 to 47, comprising a PEG lipid where n is an integer selected such that the average molecular weight of the PEG lipid is about 2500 g/mol. LNPが、1つ以上の中性脂質及び/又は1つ以上のステロイド若しくはステロイドアナログを含む、請求項44から48のいずれか一項に記載の組成物。 49. A composition according to any one of claims 44 to 48, wherein the LNP comprises one or more neutral lipids and/or one or more steroids or steroid analogs. 中性脂質が、1,2-ジステアロイル-sn-グリセロ-3-ホスホコリン(DSPC)であり、好ましくは、カチオン性脂質とDSPCとのモル比が、約2:1～約8:1の範囲にある、請求項49に記載の組成物。 The neutral lipid is 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphocholine (DSPC), and preferably the molar ratio of cationic lipid to DSPC is in the range of about 2:1 to about 8:1. 50. The composition of claim 49, wherein the composition is ステロイドが、コレステロールであり、好ましくは、カチオン性脂質とコレステロールとのモル比が、約2:1～約1:1の範囲にある、請求項49に記載の組成物。 50. The composition of claim 49, wherein the steroid is cholesterol and preferably the molar ratio of cationic lipid to cholesterol is in the range of about 2:1 to about 1:1. LNPが、
(i)少なくとも1つのカチオン性脂質、好ましくは、式(III)の脂質、より好ましくは、脂質III-3;
(ii)少なくとも1つの中性脂質、好ましくは、1,2-ジステアロイル-sn-グリセロ-3-ホスホコリン(DSPC);
(iii)少なくとも1つのステロイド又はステロイドアナログ、好ましくは、コレステロール;及び
(iv)少なくとも1つのポリマーコンジュゲートされた脂質、好ましくは、式(IVa、n=49)から誘導されるPEG-脂質
を含み、
(i)～(iv)が、約20～60%のカチオン性脂質、5～25%の中性脂質、25～55%のステロール、及び0.5～15%のPEG-脂質のモル比にある、請求項44から51のいずれか一項に記載の組成物。 LNP is
(i) at least one cationic lipid, preferably a lipid of formula (III), more preferably lipid III-3;
(ii) at least one neutral lipid, preferably 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphocholine (DSPC);
(iii) at least one steroid or steroid analog, preferably cholesterol; and
(iv) comprising at least one polymer-conjugated lipid, preferably a PEG-lipid derived from formula (IVa, n=49);
(i) to (iv) are in a molar ratio of about 20-60% cationic lipids, 5-25% neutral lipids, 25-55% sterols, and 0.5-15% PEG-lipids; 52. A composition according to any one of claims 44 to 51. LNPが、
(i)少なくとも1つのカチオン性脂質、好ましくは、式(III)の脂質、より好ましくは、脂質III-3;
(ii)少なくとも1つの中性脂質、好ましくは、1,2-ジステアロイル-sn-グリセロ-3-ホスホコリン(DSPC);
(iii)少なくとも1つのステロイド又はステロイドアナログ、好ましくは、コレステロール;及び
(iv)少なくとも1つのポリマーコンジュゲートされた脂質、好ましくは、式(IVa、n=45)から誘導されるPEG-脂質
を含み、
(i)～(iv)が、約20～60%のカチオン性脂質、5～25%の中性脂質、25～55%のステロール、及び0.5～15%のPEG-脂質のモル比にある、請求項44から51のいずれか一項に記載の組成物。 LNP is
(i) at least one cationic lipid, preferably a lipid of formula (III), more preferably lipid III-3;
(ii) at least one neutral lipid, preferably 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphocholine (DSPC);
(iii) at least one steroid or steroid analog, preferably cholesterol; and
(iv) comprising at least one polymer-conjugated lipid, preferably a PEG-lipid derived from formula (IVa, n=45);
(i) to (iv) are in a molar ratio of about 20-60% cationic lipids, 5-25% neutral lipids, 25-55% sterols, and 0.5-15% PEG-lipids; 52. A composition according to any one of claims 44 to 51. (i)～(iv)が、約50:10:38.5:1.5、好ましくは、47.4:10:40.9:1.7のモル比にある、請求項52又は53に記載の組成物。 54. A composition according to claim 52 or 53, wherein (i) to (iv) are in a molar ratio of about 50:10:38.5:1.5, preferably 47.4:10:40.9:1.7. 約20%未満の遊離(複合体化されていないか、又は封入されていない)RNA、好ましくは、約15%未満の遊離RNA、より好ましくは、約10%未満の遊離RNAを含む、請求項45から54のいずれか一項に記載の組成物。 Claims comprising less than about 20% free (uncomplexed or unencapsulated) RNA, preferably less than about 15% free RNA, more preferably less than about 10% free RNA. 55. The composition according to any one of 45 to 54. 脂質とRNAとのwt/wt比が、約10:1～約60:1、好ましくは、約20:1～約30:1、例えば、約25:1である、請求項45から55のいずれか一項に記載の組成物。 Any of claims 45 to 55, wherein the wt/wt ratio of lipid to RNA is about 10:1 to about 60:1, preferably about 20:1 to about 30:1, such as about 25:1. The composition according to item 1. RNAを封入するLNPのn/p比が、約1～約10の範囲、好ましくは、約5～約7の範囲、より好ましくは、約6である、請求項45から56のいずれか一項に記載の組成物。 57. Any one of claims 45 to 56, wherein the n/p ratio of the LNPs encapsulating RNA is in the range of about 1 to about 10, preferably in the range of about 5 to about 7, more preferably in the range of about 6. The composition described in. 約0.4未満、好ましくは、約0.3未満、より好ましくは、約0.2未満、最も好ましくは、約0.1未満の多分散指数(PDI)値を有する、請求項45から57のいずれか一項に記載の組成物。 58. According to any one of claims 45 to 57, having a polydispersity index (PDI) value of less than about 0.4, preferably less than about 0.3, more preferably less than about 0.2, most preferably less than about 0.1. Composition. LNPが、
(a)約60nm～約120nmの範囲、好ましくは、約120nm未満、より好ましくは、約100nm未満、最も好ましくは、約80nm未満のZ-平均サイズを有し;
(b)約500nmを超える粒子サイズを有する約10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%、1%未満のLNPを含み;及び/又は
(c)約20nmより小さい粒子サイズを有する約10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%、1%未満のLNPを含む、請求項44から58のいずれか一項に記載の組成物。 LNP is
(a) has a Z-average size in the range of about 60 nm to about 120 nm, preferably less than about 120 nm, more preferably less than about 100 nm, most preferably less than about 80 nm;
(b) contains less than about 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1% LNPs having a particle size greater than about 500 nm; and/or
44. (c) comprising less than about 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1% LNPs having a particle size of less than about 20 nm. 58. The composition according to any one of 58 to 58. 脂質ベースの担体の少なくとも約80%、85%、90%、95%が、好ましくは固体コア又は部分的に固体のコアを含む、球状形態を有する、請求項44から59のいずれか一項に記載の組成物。 59. According to any one of claims 44 to 59, at least about 80%, 85%, 90%, 95% of the lipid-based carrier has a spherical morphology, preferably comprising a solid or partially solid core. Compositions as described. 約150FNU～約0.0FNUの範囲、好ましくは、約50FNU以下、より好ましくは、約25FNU以下の濁度を有する、請求項44から60のいずれか一項に記載の組成物。 61. A composition according to any one of claims 44 to 60, having a turbidity in the range of about 150 FNU to about 0.0 FNU, preferably about 50 FNU or less, more preferably about 25 FNU or less. (a)約50～約300mMの濃度の糖、好ましくは、約150mMの濃度のスクロース;
(b)約10mM～約200mMの濃度の塩、好ましくは、約75mMの濃度のNaCl;及び/又は
(c)濃度1mM～約100mMの緩衝剤、好ましくは、約10mMの濃度のNa3PO4
をさらに含む、請求項35から61のいずれか一項に記載の組成物。 (a) sugar at a concentration of about 50 to about 300 mM, preferably sucrose at a concentration of about 150 mM;
(b) salt at a concentration of about 10mM to about 200mM, preferably NaCl at a concentration of about 75mM; and/or
(c) a buffer at a concentration of 1mM to about 100mM, preferably Na 3 PO 4 at a concentration of about 10mM;
62. The composition of any one of claims 35-61, further comprising: 約pH7.0～約pH8.0の範囲にある、好ましくは、約pH7.4のpHを有する、請求項35から62のいずれか一項に記載の組成物。 63. A composition according to any one of claims 35 to 62, having a pH in the range of about pH 7.0 to about pH 8.0, preferably about pH 7.4. 凍結乾燥された組成物である、請求項35から60のいずれか一項に記載の組成物。 61. A composition according to any one of claims 35 to 60, which is a lyophilized composition. 凍結乾燥された組成物が、約10%未満の水含有量を有し、好ましくは、凍結乾燥された組成物が、約0.5%～5%の水含有量を有する、請求項64に記載の組成物。 65. The lyophilized composition has a water content of less than about 10%, preferably the lyophilized composition has a water content of about 0.5% to 5%. Composition. RNAの少なくとも70%、75%、80%、85%、90%又は95%が、約5℃の温度で液体として保存後少なくとも約2週間未変化である、請求項35から63のいずれか一項に記載の組成物。 Any one of claims 35-63, wherein at least 70%, 75%, 80%, 85%, 90% or 95% of the RNA remains unchanged for at least about 2 weeks after storage as a liquid at a temperature of about 5°C. The composition described in Section. RNAの少なくとも70%、75%、80%、85%、90%又は95%が、約5℃の温度で液体として保存後約2週間～約1カ月間、2カ月間、3カ月間、4カ月間、5カ月間、6カ月間又は1年間未変化である、請求項66に記載の組成物。 At least 70%, 75%, 80%, 85%, 90% or 95% of the RNA remains stable for about 2 weeks to about 1 month, 2 months, 3 months, 4 67. The composition of claim 66, which remains unchanged for 1 month, 5 months, 6 months or 1 year. RNAの少なくとも80%が、約5℃の温度で液体として約2週間の保存後未変化である、請求項66に記載の組成物。 67. The composition of claim 66, wherein at least 80% of the RNA is unchanged after storage as a liquid for about 2 weeks at a temperature of about 5<0>C. RNA及びRNAを封入する脂質ベースの担体が、少なくとも1つの精製工程により、好ましくは、TFFの少なくとも1つの工程及び/又は清澄化の少なくとも1つの工程及び/又は濾過の少なくとも1つの工程によって精製されている、請求項35から68のいずれか一項に記載の組成物。 The RNA and the lipid-based carrier encapsulating the RNA are purified by at least one purification step, preferably by at least one step of TFF and/or at least one step of clarification and/or at least one step of filtration. 69. A composition according to any one of claims 35 to 68, wherein the composition comprises: 請求項1から34のいずれか一項に記載のRNA及び/又は請求項35から69のいずれか一項に記載の組成物を含む、ワクチン。 A vaccine comprising an RNA according to any one of claims 1 to 34 and/or a composition according to any one of claims 35 to 69. コロナウイルスに対する、好ましくは、コロナウイルスSARS-CoV-2に対する、適応免疫応答、好ましくは、防御的適応免疫応答を誘発する、請求項70に記載のワクチン。 71. A vaccine according to claim 70, which induces an adaptive immune response, preferably a protective adaptive immune response, against a coronavirus, preferably against coronavirus SARS-CoV-2. 請求項1から34のいずれか一項に記載のRNAの複数若しくは少なくとも1つより多く、又は請求項35から69のいずれか一項に記載の組成物の複数若しくは少なくとも1つより多くを含む多価ワクチンである、請求項70又は71に記載のワクチン。 A polypeptide comprising more than one or more of the RNAs according to any one of claims 1 to 34 or more than one or more of the compositions according to any one of claims 35 to 69. 72. The vaccine according to claim 70 or 71, which is a valent vaccine. 請求項1から34のいずれか一項に記載のRNA及び/又は請求項35から69のいずれか一項に記載の組成物、及び/又は請求項70から72のいずれか一項に記載のワクチンを含み、場合により、溶解のための液体ビヒクルを含み、場合により、成分の投与及び投薬量についての情報を提供する技術指示書を含む、キット又はパーツのキット(kit of parts)。
。 RNA according to any one of claims 1 to 34 and/or the composition according to any one of claims 35 to 69 and/or the vaccine according to any one of claims 70 to 72 a kit or kit of parts, optionally comprising a liquid vehicle for dissolution and optionally technical instructions providing information on the administration and dosage of the components.
. 医薬としての使用のための、請求項1から34のいずれか一項に記載のRNA、請求項35から69のいずれか一項に記載の組成物、請求項70から72のいずれか一項に記載のワクチン、請求項73に記載のキット又はパーツのキット。 RNA according to any one of claims 1 to 34, a composition according to any one of claims 35 to 69, a composition according to any one of claims 70 to 72, for use as a medicament. 74. A vaccine according to claim 73, a kit or a kit of parts according to claim 73. コロナウイルス、好ましくは、SARS-CoV-2コロナウイルスの感染、又はこのような感染、好ましくは、COVID-19と関連する障害の処置又は予防における使用のための、請求項1から34のいずれか一項に記載のRNA、請求項35から69のいずれか一項に記載の組成物、請求項70から72のいずれか一項に記載のワクチン、請求項73に記載のキット又はパーツのキット。 Any of claims 1 to 34 for use in the treatment or prevention of infection with a coronavirus, preferably the SARS-CoV-2 coronavirus, or a disorder associated with such an infection, preferably COVID-19. 74. An RNA according to claim 1, a composition according to any one of claims 35 to 69, a vaccine according to any one of claims 70 to 72, a kit or kit of parts according to claim 73. 障害を処置又は予防する方法であって、それを必要とする対象に、請求項1から34のいずれか一項に記載のRNA、請求項35から69のいずれか一項に記載の組成物、請求項70から72のいずれか一項に記載のワクチン、請求項73に記載のキット又はパーツのキットを適用するか、又は投与することを含む、方法。 A method of treating or preventing a disorder, comprising administering to a subject in need thereof the RNA according to any one of claims 1 to 34, the composition according to any one of claims 35 to 69, 74. A method comprising applying or administering a vaccine according to any one of claims 70 to 72, a kit or a kit of parts according to claim 73. 障害が、コロナウイルス、好ましくは、SARS-CoV-2コロナウイルスの感染、又はこのような感染、好ましくは、COVID-19と関連する障害である、請求項76に記載の障害を処置又は予防する方法。 Treating or preventing a disorder according to claim 76, wherein the disorder is an infection of a coronavirus, preferably the SARS-CoV-2 coronavirus, or a disorder associated with such an infection, preferably COVID-19. Method. SARS-CoV-2コロナウイルス感染又はこのような感染、好ましくは、COVID-19と関連する障害を予防する方法としてさらに定義される、請求項76又は77に記載の障害を処置又は予防する方法。 78. A method of treating or preventing a disorder according to claim 76 or 77, further defined as a method of preventing a SARS-CoV-2 coronavirus infection or a disorder associated with such an infection, preferably COVID-19. SARS-CoV-2コロナウイルス感染又はこのような感染と関連する障害を予防する方法としてさらに定義され、感染が、B.1.1.529(オミクロン、南アフリカ)(BA.1_v1、BA.1_v0、B.1.1.529、BA.2、BA.1_v2、BA.1_v3、BA.1_v4、BA.1_v5を含む)、B.1.351(南アフリカ)、B.1.1.7(英国)、P.1(ブラジル)、B.1.429(カリフォルニア)、B.1.525(ナイジェリア)、B.1.258(チェコ共和国)、B.1.526(ニューヨーク)、A.23.1(ウガンダ)、B.1.617.1(インド)、B.1.617.2(インド)、B.1.617.3(インド)、P.2(ブラジル)、C37.1(ペルー)及びB.1.1.621から選択されるSARS-CoV-2分離株によるものである、請求項76に記載の障害を処置又は予防する方法。 Further defined as a method of preventing SARS-CoV-2 coronavirus infection or disorders associated with such infection, infection is caused by B.1.1.529 (Omicron, South Africa) (BA.1_v1, BA.1_v0, B. 1.1.529, BA.2, BA.1_v2, BA.1_v3, BA.1_v4, BA.1_v5), B.1.351 (South Africa), B.1.1.7 (UK), P.1 (Brazil), B.1.429 (California), B.1.525 (Nigeria), B.1.258 (Czech Republic), B.1.526 (New York), A.23.1 (Uganda), B.1.617.1 (India), B.1.617.2 (India), B.1.617.3 (India), P.2 (Brazil), C37.1 (Peru) and B.1.1.621. 76. A method of treating or preventing the disorder described in 76. SARS-CoV-2コロナウイルス感染又はこのような感染と関連する障害を予防する方法としてさらに定義され、感染が、請求項1から4のいずれか一項に記載のアミノ酸置換、欠失又は挿入を含むSARS-CoV-2分離株によるものである、請求項76に記載の障害を処置又は予防する方法。 Further defined as a method of preventing SARS-CoV-2 coronavirus infection or disorders associated with such infection, wherein the infection comprises an amino acid substitution, deletion or insertion according to any one of claims 1 to 4. 77. A method of treating or preventing a disorder according to claim 76, which is caused by a SARS-CoV-2 isolate comprising: 必要とする対象が、哺乳類対象、好ましくは、ヒト対象である、請求項76から80のいずれか一項に記載の障害を処置又は予防する方法。 81. A method of treating or preventing a disorder according to any one of claims 76 to 80, wherein the subject in need thereof is a mammalian subject, preferably a human subject. ヒト対象が、好ましくは、少なくとも50、60、65、又は70歳の年齢の、高齢ヒト対象である、請求項81に記載の障害を処置又は予防する方法。 82. A method of treating or preventing a disorder according to claim 81, wherein the human subject is an elderly human subject, preferably at least 50, 60, 65 or 70 years of age. ヒト対象が、好ましくは、3歳以下、2歳以下、1.5歳以下、1歳(12カ月)以下、9カ月以下、6カ月以下若しくは3カ月以下の年齢、又は6カ月～2歳の年齢の、新生児又は幼児である、請求項81に記載の障害を処置又は予防する方法。 The human subject is preferably below the age of 3 years, below 2 years, below 1.5 years, below 1 year (12 months), below 9 months, below 6 months or below 3 months, or between 6 months and 2 years of age. 82. A method of treating or preventing a disorder according to claim 81, in a newborn baby or an infant. ヒト対象が、18～60歳の年齢である、請求項81に記載の障害を処置又は予防する方法。 82. A method of treating or preventing a disorder according to claim 81, wherein the human subject is between the ages of 18 and 60 years. ヒト対象が、60歳未満、55歳未満、50歳未満、45歳未満又は40歳未満の年齢である、請求項81に記載の障害を処置又は予防する方法。 82. A method of treating or preventing a disorder according to claim 81, wherein the human subject is less than 60 years of age, less than 55 years of age, less than 50 years of age, less than 45 years of age, or less than 40 years of age. ヒト対象が、約12～60歳;12～55歳;12～50歳;12～45歳;又は12～40歳の年齢である、請求項85に記載の障害を処置又は予防する方法。 86. A method of treating or preventing a disorder according to claim 85, wherein the human subject is between the ages of about 12 to 60 years; 12 to 55 years; 12 to 50 years; 12 to 45 years; or 12 to 40 years. ヒト対象が、約18～55歳;18～50歳;18～45歳;又は18～40歳の年齢である、請求項81に記載の障害を処置又は予防する方法。 82. A method of treating or preventing a disorder according to claim 81, wherein the human subject is between the ages of about 18 to 55 years; 18 to 50 years; 18 to 45 years; or 18 to 40 years. ヒト対象が、約12～60歳;12～55歳;12～50歳;12～45歳;又は12～40歳の年齢である、請求項81に記載の障害を処置又は予防する方法。 82. A method of treating or preventing a disorder according to claim 81, wherein the human subject is between the ages of about 12 to 60 years; 12 to 55 years; 12 to 50 years; 12 to 45 years; or 12 to 40 years. ヒト対象が、約18～60歳;18～55歳;18～50歳;18～45歳;又は18～40歳の年齢である、請求項81に記載の障害を処置又は予防する方法。 82. A method of treating or preventing a disorder according to claim 81, wherein the human subject is between the ages of about 18-60 years; 18-55 years; 18-50 years; 18-45 years; or 18-40 years. ヒト対象が、約18～50歳の年齢である、請求項81に記載の障害を処置又は予防する方法。 82. A method of treating or preventing a disorder according to claim 81, wherein the human subject is between the ages of about 18 and 50 years. COVID-19疾患の1つ以上の症状の重症度を低減する、請求項82に記載の方法。 83. The method of claim 82, wherein the method reduces the severity of one or more symptoms of COVID-19 disease. 対象が、入院、集中治療室への入院、酸素の補給を用いた処置及び/又は人工呼吸器を用いた処置を必要とする可能性を低減する、請求項91に記載の方法。 92. The method of claim 91, which reduces the likelihood that the subject will require hospitalization, admission to an intensive care unit, treatment with supplemental oxygen, and/or treatment with a ventilator. 対象が、重篤又は中程度のCOVID-19疾患を発症する可能性を低減する、請求項91に記載の方法。 92. The method of claim 91, wherein the method reduces the likelihood that the subject will develop severe or moderate COVID-19 disease. 少なくとも約6カ月間、対象における重篤なCOVID-19疾患を予防する、請求項91に記載の方法。 92. The method of claim 91, wherein the method prevents severe COVID-19 disease in the subject for at least about 6 months. 対象が、発熱、呼吸困難;嗅覚の喪失及び/又は味覚の喪失を発症する可能性を低減する、請求項91に記載の方法。 92. The method of claim 91, wherein the subject reduces the likelihood of developing fever, difficulty breathing; loss of smell and/or loss of taste. 対象における抗体、CD4+T細胞応答又はCD8+T細胞応答を刺激する方法としてさらに定義される、請求項81から95のいずれか一項に記載の方法。 96. The method of any one of claims 81-95, further defined as a method of stimulating an antibody, CD4+ T cell response or CD8+ T cell response in a subject. 対象における中和抗体応答を刺激する方法としてさらに定義される、請求項81から96のいずれか一項に記載の方法。 97. The method of any one of claims 81-96, further defined as a method of stimulating a neutralizing antibody response in a subject. 対象が、約1μg～約50μgのRNA;約2μg～約50μgのRNA;約2μg～約25μgのRNA;約5μg～約50μgのRNA;約5μg～約25μgのRNA;約10μg～約50μgのRNA;約10μg～約30μgのRNA;又は約12μgのRNAを含む組成物を投与される、請求項81から97のいずれか一項に記載の方法。 The target is about 1μg to about 50μg RNA; about 2μg to about 50μg RNA; about 2μg to about 25μg RNA; about 5μg to about 50μg RNA; about 5μg to about 25μg RNA; about 10μg to about 50μg RNA 98. The method of any one of claims 81-97, wherein a composition comprising: about 10 μg to about 30 μg of RNA; or about 12 μg of RNA is administered. 投与が、組成物が投与される対象の100%においてセロコンバージョンをもたらす、請求項98に記載の方法。 99. The method of claim 98, wherein administering results in seroconversion in 100% of subjects to whom the composition is administered. 対象が、SARS CoV-2に以前に感染した、請求項81から97のいずれか一項に記載の方法。 98. The method of any one of claims 81-97, wherein the subject was previously infected with SARS CoV-2. 対象が、少なくとも第一のSARS CoV-2ワクチン組成物で以前に処置された、請求項81から97のいずれか一項に記載の方法。 98. The method of any one of claims 81-97, wherein the subject has been previously treated with at least a first SARS CoV-2 vaccine composition. 第一のSARS CoV-2ワクチン組成物が、mRNAワクチンであった、請求項101に記載の方法。 102. The method of claim 101, wherein the first SARS CoV-2 vaccine composition was an mRNA vaccine. 第一のSARS CoV-2ワクチン組成物が、CVnCoV;BNT162;及び/又はmRNA-1273であった、請求項102に記載の方法。 103. The method of claim 102, wherein the first SARS CoV-2 vaccine composition was CVnCoV; BNT162; and/or mRNA-1273. 第一のSARS CoV-2ワクチン組成物が、タンパク質サブユニットワクチンであった、請求項102に記載の方法。 103. The method of claim 102, wherein the first SARS CoV-2 vaccine composition was a protein subunit vaccine. 第一のSARS CoV-2ワクチン組成物が、NVX-CoV2373又はCOVAXであった、請求項102に記載の方法。 103. The method of claim 102, wherein the first SARS CoV-2 vaccine composition was NVX-CoV2373 or COVAX. 第一のSARS CoV-2ワクチン組成物が、アデノウイルスベクターワクチンであった、請求項102に記載の方法。 103. The method of claim 102, wherein the first SARS CoV-2 vaccine composition was an adenovirus vector vaccine. 第一のSARS CoV-2ワクチン組成物が、ADZ1222又はAd26.COV-2.Sであった、請求項106に記載の方法。 107. The method of claim 106, wherein the first SARS CoV-2 vaccine composition was ADZ1222 or Ad26.COV-2.S. 対象が、検出可能なSARS CoV-2 Sタンパク質結合抗体を有する、請求項81から97のいずれか一項に記載の方法。 98. The method of any one of claims 81-97, wherein the subject has detectable SARS CoV-2 S protein binding antibodies. 少なくとも1つのSARS-CoV-2スパイクタンパク質又はその免疫原性フラグメント若しくは免疫原性バリアントをコードする少なくとも1つのコード配列を含むRNAであって、SARS-CoV-2スパイクタンパク質が、配列番号1の配列と比較して、H69;V70;A222;Y453;S477;I692;R403;K417;N437;N439;V445;G446;L455;F456;K458;A475;G476;T478;E484;G485;F486;N487;Y489;F490;Q493;S494;P499;T500;N501;V503;G504;Y505;Q506;Y144;A570;P681;T716;S982;D1118;L18;D80;D215;L242;A243;L244;R246;A701;T20;P26;D138;R190;H655;T1027;S13;W152;L452;R346;P384;G447;G502;T748;A522;V1176;T859;S247;Y248;L249;T250;P251;G252;G75;T76;D950;E154;G769;S254;Q613;F157;R158;Q957;D253;T95;F888;Q677;A67;Q414;N450;V483;G669;T732;Q949;Q1071;E1092;H1101;N1187;W258;T19;V126;H245;S12;A899;G142;E156;K558;及び/又はQ52に対応する位置において少なくとも1個のアミノ酸置換、欠失又は挿入を含み、RNAが、少なくとも1つの異種非翻訳領域(UTR)を含む、RNA。 RNA comprising at least one coding sequence encoding at least one SARS-CoV-2 spike protein or an immunogenic fragment or variant thereof, wherein the SARS-CoV-2 spike protein has the sequence of SEQ ID NO: 1. Compared to H69;V70;A222;Y453;S477;I692;R403;K417;N437;N439;V445;G446;L455;F456;K458;A475;G476;T478;E484;G485;F486;N487;Y489 ;F490;Q493;S494;P499;T500;N501;V503;G504;Y505;Q506;Y144;A570;P681;T716;S982;D1118;L18;D80;D215;L242;A243;L244;R246;A701;T20 ;P26;D138;R190;H655;T1027;S13;W152;L452;R346;P384;G447;G502;T748;A522;V1176;T859;S247;Y248;L249;T250;P251;G252;G75;T76;D950 ;E154;G769;S254;Q613;F157;R158;Q957;D253;T95;F888;Q677;A67;Q414;N450;V483;G669;T732;Q949;Q1071;E1092;H1101;N1187;W258;T19;V1 26 ;H245;S12;A899;G142;E156;K558; and/or at least one amino acid substitution, deletion or insertion at a position corresponding to Q52, and the RNA contains at least one heterologous untranslated region (UTR) Contains RNA. SARS-CoV-2スパイクタンパク質が、配列番号1の配列と比較して、H69del;V70del;A222V;Y453F;S477N;I692V;R403K;K417N;N437S;N439K;V445A;V445I;V445F;G446V;G446S;G446A;L455F;F456L;K458N;A475V;G476S;G476A;S477I;S477R;S477G;S477T;T478I;T478K;T478R;T478A;E484Q;E484K;E484A;E484D;G485R;G485S;F486L;N487I;Y489H;F490S;F490L;Q493L;Q493K;S494P;S494L;P499L;T500I;N501Y;N501T;N501S;V503F;V503I;G504D;Y505W;Q506K;Q506H;Y144del;A570D;P681H;T716I;S982A;D1118H;L18F;D80A;D215G;L242del;A243del;L244del;L242del;A243del;L244del;R246I;A701V;T20N;P26S;D138Y;R190S;H655Y;T1027I;S13I;W152C;L452R;R346T;P384L;L452M;F456A;F456K;F456V;E484P;K417T;G447V;L452Q;A475S;F486I;F490Y;Q493R;S494A;P499H;P499S;G502V;T748K;A522S;V1176F;T859N;S247del;Y248del;L249del;T250del;P251del;G252del;R246del;S247del;Y248del;L249del;T250del;P251del;G252del;G75V;T76I;G75V;T76I;D950N;P681R;E154K;G769V;S254F;Q613H;F157L;F157del;R158del;Q957R;D253G;T95I;F888L;Q677H;A67V;Q414K;N450K;V483A;G669S;T732A;Q949R;Q1071H;E1092K;H1101Y;N1187D;W258L;V70F;T19R;Y144T;Y145S;ins145N;R346K;R346S;V126A;H245Y;ins214TDR;S12F;W152R;A899S;G142D;E156G;K558N;及び/又はQ52Rに対応する位置において少なくとも1個のアミノ酸置換、欠失又は挿入を含む、請求項109に記載のRNA。 SARS-CoV-2 spike protein compared to the sequence of SEQ ID NO. ;L455F;F456L;K458N;A475V;G476S;G476A;S477I;S477R;S477G;S477T;T478I;T478K;T478R;T478A;E484Q;E484K;E484A;E484D;G485R;G485S;F48 6L;N487I;Y489H;F490S;F490L ;Q493L;Q493K;S494P;S494L;P499L;T500I;N501Y;N501T;N501S;V503F;V503I;G504D;Y505W;Q506K;Q506H;Y144del;A570D;P681H;T716I;S982A;D11 18H;L18F;D80A;D215G;L242del ;A243del;L244del;L242del;A243del;L244del;R246I;A701V;T20N;P26S;D138Y;R190S;H655Y;T1027I;S13I;W152C;L452R;R346T;P384L;L452M;F456A;F456K ;F456V;E484P;K417T;G447V ;L452Q;A475S;F486I;F490Y;Q493R;S494A;P499H;P499S;G502V;T748K;A522S;V1176F;T859N;S247del;Y248del;L249del;T250del;P251del;G252del;R246del;S2 47del;Y248del;L249del;T250del;P251del ;G252del;G75V;T76I;G75V;T76I;D950N;P681R;E154K;G769V;S254F;Q613H;F157L;F157del;R158del;Q957R;D253G;T95I;F888L;Q677H;A67V;Q414K;N45 0K;V483A;G669S;T732A ;Q949R;Q1071H;E1092K;H1101Y;N1187D;W258L;V70F;T19R;Y144T;Y145S;ins145N;R346K;R346S;V126A;H245Y;ins214TDR;S12F;W152R;A899S;G142D;E 156G; K558N; and/or Q52R 110. RNA according to claim 109, comprising at least one amino acid substitution, deletion or insertion at the corresponding position. SARS-CoV-2スパイクタンパク質が、配列番号1の配列と比較して、H69;V70;A222;Y453;S477;I692;R403;K417;N437;N439;V445;G446;L455;F456;K458;A475;G476;T478;E484;G485、F486;N487;Y489;F490;Q493;S494;P499;T500;N501;V503;G504;Y505;及び/又はQ506に対応する位置において少なくとも1個のアミノ酸置換、欠失又は挿入を含む、請求項109に記載のRNA。 SARS-CoV-2 spike protein is H69;V70;A222;Y453;S477;I692;R403;K417;N437;N439;V445;G446;L455;F456;K458;A475 ;G476;T478;E484;G485, F486;N487;Y489;F490;Q493;S494;P499;T500;N501;V503;G504;Y505; 110. The RNA of claim 109, comprising deletions or insertions. SARS-CoV-2スパイクタンパク質が、配列番号1の配列と比較して、H69del;V70del;A222V;Y453F;S477N;I692V;R403K;K417N;N437S;N439K;V445A;V445I;V445F;G446V;G446S;G446A;L455F;F456L;K458N;A475V;G476S;G476A;S477I;S477R;S477G;S477T;T478I;T478K;T478R;T478A;E484Q;E484K;E484A;E484D;G485R;G485S;F486L;N487I;Y489H;F490S;F490L;Q493L;Q493K;S494P;S494L;P499L;T500I;N501Y;N501T;N501S;V503F;V503I;G504D;Y505W;Q506K;及び/又はQ506Hに対応する位置において少なくとも1個のアミノ酸置換、欠失又は挿入を含む、請求項111に記載のRNA。 SARS-CoV-2 spike protein compared to the sequence of SEQ ID NO. ;L455F;F456L;K458N;A475V;G476S;G476A;S477I;S477R;S477G;S477T;T478I;T478K;T478R;T478A;E484Q;E484K;E484A;E484D;G485R;G485S;F48 6L;N487I;Y489H;F490S;F490L ;Q493L;Q493K;S494P;S494L;P499L;T500I;N501Y;N501T;N501S;V503F;V503I;G504D;Y505W;Q506K; 112. The RNA of claim 111, comprising. SARS-CoV-2スパイクタンパク質が、配列番号1の配列と比較して、H69;V70;A222;Y453;S477;I692;R403;K417;N437;N439;V445;G446;L455;F456;K458;A475;G476;T478;E484;G485、F486;N487;Y489;F490;Q493;S494;P499;T500;N501;V503;G504;Y505;Q506;Y144;A570;P681;T716;S982;D1118;L18;D80;D215;L242;A243;L244;R246;A701;T20;P26;D138;R190;H655;T1027;S13;W152;L452;R346;P384;G447;G502;T748;A522;又はV1176に対応する位置において少なくとも1個のアミノ酸置換、欠失又は挿入を含む、請求項109に記載のRNA。 SARS-CoV-2 spike protein is H69;V70;A222;Y453;S477;I692;R403;K417;N437;N439;V445;G446;L455;F456;K458;A475 G476; t478; E484; g485, f486; n489; n489; f490; s493; p499; p499; t500; n501; G503; G505; Q506; p681 ; T716; s982; d1118; L18; D80 ;D215;L242;A243;L244;R246;A701;T20;P26;D138;R190;H655;T1027;S13;W152;L452;R346;P384;G447;G502;T748;A522; 110. The RNA of claim 109, comprising at least one amino acid substitution, deletion or insertion. SARS-CoV-2スパイクタンパク質が、配列番号1の配列と比較して、H69del;V70del;A222V;Y453F;S477N;I692V;R403K;K417N;N437S;N439K;V445A;V445I;V445F;G446V;G446S;G446A;L455F;F456L;K458N;A475V;G476S;G476A;S477I;S477R;S477G;S477T;T478I;T478K;T478R;T478A;E484Q;E484K;E484A;E484D;G485R;G485S;F486L;N487I;Y489H;F490S;F490L;Q493L;Q493K;S494P;S494L;P499L;T500I;N501Y;N501T;N501S;V503F;V503I;G504D;Y505W;Q506K;Q506H;Y144del;A570D;P681H;T716I;S982A;D1118H;L18F;D80A;D215G;L242del;A243del;L244del;L242del;A243del;L244del;R246I;A701V;T20N;P26S;D138Y;R190S;H655Y;T1027I;S13I;W152C;L452R;R346T;P384L;L452M;F456A;F456K;F456V;E484P;K417T;G447V;L452Q;A475S;F486I;F490Y;Q493R;S494A;P499H;P499S;G502V;T748K;A522S;及び/又はV1176Fに対応する位置において少なくとも1個のアミノ酸置換、欠失又は挿入を含む、請求項113に記載のRNA。 SARS-CoV-2 spike protein compared to the sequence of SEQ ID NO. ;L455F;F456L;K458N;A475V;G476S;G476A;S477I;S477R;S477G;S477T;T478I;T478K;T478R;T478A;E484Q;E484K;E484A;E484D;G485R;G485S;F48 6L;N487I;Y489H;F490S;F490L ;Q493L;Q493K;S494P;S494L;P499L;T500I;N501Y;N501T;N501S;V503F;V503I;G504D;Y505W;Q506K;Q506H;Y144del;A570D;P681H;T716I;S982A;D11 18H;L18F;D80A;D215G;L242del ;A243del;L244del;L242del;A243del;L244del;R246I;A701V;T20N;P26S;D138Y;R190S;H655Y;T1027I;S13I;W152C;L452R;R346T;P384L;L452M;F456A;F456K ;F456V;E484P;K417T;G447V ;L452Q;A475S;F486I;F490Y;Q493R;S494A;P499H;P499S;G502V;T748K;A522S; RNA as described. SARS-CoV-2スパイクタンパク質が、配列番号1の配列と比較して、T859;R246;S247;Y248;L249;T250;P251;G252;G75;T76;D950;E154;G769;S254;Q613;F157;Q957;D253;T95;F888;Q677;A67;Q414;N450;V483;G669;T732;Q949;Q1071;E1092;H1101;N1187;F157;R158;W258;T19;H245;S12;A899;G142;E156;K558及び/又はQ52に対応する位置において少なくとも1個のアミノ酸置換、欠失又は挿入を含む、請求項109に記載のRNA。 SARS-CoV-2 spike protein has T859;R246;S247;Y248;L249;T250;P251;G252;G75;T76;D950;E154;G769;S254;Q613;F157 ;Q957;D253;T95;F888;Q677;A67;Q414;N450;V483;G669;T732;Q949;Q1071;E1092;H1101;N1187;F157;R158;W258;T19;H245;S12;A899;G142;E15 6 RNA according to claim 109, comprising at least one amino acid substitution, deletion or insertion at a position corresponding to ;K558 and/or Q52. SARS-CoV-2スパイクタンパク質が、配列番号1の配列と比較して、T859N;S247del;Y248del;L249del;T250del;P251del;G252del;R246del;S247del;Y248del;L249del;T250del;P251del;G252del;G75V;T76I;G75V;T76I;D950N;P681R;E154K;G769V;S254F;Q613H;F157L;Q957R;D253G;T95I;F888L;Q677H;A67V;Q414K;N450K;V483A;G669S;T732A;Q949R;Q1071H;E1092K;H1101Y;N1187D;F157del;R158del;W258L;V70F;T19R;Y144T;Y145S;ins145N;R346K;R346S;V126A;H245Y;ins214TDR;S12F;W152R;A899S;G142D;E156G;K558N及び/又はQ52Rに対応する位置において少なくとも1個のアミノ酸置換、欠失又は挿入を含む、請求項115に記載のRNA。 The SARS-CoV-2 spike protein is T859N;S247del;Y248del;L249del;T250del;P251del;G252del;R246del;S247del;Y248del;L249del;T250del;P251del;G252del;G75V;T76I ;G75V;T76I;D950N;P681R;E154K;G769V;S254F;Q613H;F157L;Q957R;D253G;T95I;F888L;Q677H;A67V;Q414K;N450K;V483A;G669S;T732A;Q949R;Q 1071H;E1092K;H1101Y;N1187D In the position corresponding to; at least 1 piece 116. The RNA of claim 115, comprising an amino acid substitution, deletion or insertion of. SARS-CoV-2スパイクタンパク質が、配列番号1の配列と比較して、D614;H49;V367;P1263;V483;S939;S943;L5;L8;S940;C1254;Q239;M153;V1040;A845;Y145;A831;及び/又はM1229に対応する位置において少なくとも1個のアミノ酸置換、欠失又は挿入をさらに含む、請求項109に記載のRNA。 The SARS-CoV-2 spike protein is D614;H49;V367;P1263;V483;S939;S943;L5;L8;S940;C1254;Q239;M153;V1040;A845;Y145 RNA according to claim 109, further comprising at least one amino acid substitution, deletion or insertion at a position corresponding to ;A831; and/or M1229. SARS-CoV-2スパイクタンパク質が、配列番号1の配列と比較して、D614G;H49Y;V367F;P1263L;V483A;S939F;S943P;L5F;L8V;S940F;C1254F;Q239K;M153T;V1040F;A845S;Y145H;A831V;及び/又はM1229Iに対応する位置において少なくとも1個のアミノ酸置換、欠失又は挿入をさらに含む、請求項117に記載のRNA。 SARS-CoV-2 spike protein compared to the sequence of SEQ ID NO. 118. The RNA of claim 117, further comprising at least one amino acid substitution, deletion or insertion at a position corresponding to ;A831V; and/or M1229I. SARS-CoV-2スパイクタンパク質が、RBDドメイン(アミノ酸位置aa319～aa541;参照配列番号1によるアミノ酸位置)又はCNDドメイン(アミノ酸位置aa329～aa529;参照配列番号1によるアミノ酸位置)に位置する位置に少なくとも1個のアミノ酸置換、欠失又は挿入を含む、先行する請求項のいずれか一項に記載のRNA。 The SARS-CoV-2 spike protein contains at least one of the following: RNA according to any one of the preceding claims, comprising a single amino acid substitution, deletion or insertion. SARS-CoV-2スパイクタンパク質が、配列番号1の配列と比較して、H69;V70;A222;Y453;S477;I692;R403;K417;N437;N439;V445;G446;L455;F456;K458;A475;G476;T478;E484;G485;F486;N487;Y489;F490;Q493;S494;P499;T500;N501;V503;G504;Y505;Q506;Y144;A570;P681;T716;S982;D1118;L18;D80;D215;L242;A243;L244;R246;A701;T20;P26;D138;R190;H655;T1027;S13;W152;L452;R346;P384;G447;G502;T748;A522;V1176;T859;S247;Y248;L249;T250;P251;G252;G75;T76;D950;E154;G769;S254;Q613;F157;Q957;D253;T95;F888;Q677;A67;Q414;N450;V483;G669;T732;Q949;Q1071;E1092;H1101;N1187及び/又はQ52に対応する位置において少なくとも1個のアミノ酸置換又は欠失を含む、先行する請求項のいずれか一項に記載のRNA。 SARS-CoV-2 spike protein is H69;V70;A222;Y453;S477;I692;R403;K417;N437;N439;V445;G446;L455;F456;K458;A475 G476; t478; E484; f486; n487; n489; f490; Q493; s493; p499; t500; n501; n501; G505; ; T716; s982; d1118; L18; D80 D215; L242; L243; L244; R246; r201; T20; t20; p26; R138; r190; H655; t1027; s13; s13; w152; r346; p384; G447; G502; T722; ; V1176; t859; s247; Y248 ;L249;T250;P251;G252;G75;T76;D950;E154;G769;S254;Q613;F157;Q957;D253;T95;F888;Q677;A67;Q414;N450;V483;G669;T732;Q949;Q1071 RNA according to any one of the preceding claims, comprising at least one amino acid substitution or deletion at a position corresponding to ;E1092;H1101;N1187 and/or Q52. SARS-CoV-2スパイクタンパク質が、配列番号1の配列と比較して、K417、E484、N501、及び/又はL452に対応する位置において少なくとも1個のアミノ酸置換を含む、請求項109に記載のRNA。 RNA according to claim 109, wherein the SARS-CoV-2 spike protein comprises at least one amino acid substitution at positions corresponding to K417, E484, N501, and/or L452 compared to the sequence of SEQ ID NO: 1. . K417に対応する位置における少なくとも1個のアミノ酸置換が、S、T、Q又はN置換である、請求項121に記載のRNA。 122. The RNA of claim 121, wherein the at least one amino acid substitution at the position corresponding to K417 is an S, T, Q or N substitution. K417に対応する位置における少なくとも1個のアミノ酸置換が、K417N置換である、請求項122に記載のRNA。 123. The RNA of claim 122, wherein the at least one amino acid substitution at the position corresponding to K417 is a K417N substitution. E484に対応する位置における少なくとも1個のアミノ酸置換が、K、P、Q、A、又はD置換である、請求項121に記載のRNA。 122. The RNA of claim 121, wherein the at least one amino acid substitution at the position corresponding to E484 is a K, P, Q, A, or D substitution. E484に対応する位置における少なくとも1個のアミノ酸置換が、E484K又はE484Q置換である、請求項124に記載のRNA。 125. The RNA of claim 124, wherein the at least one amino acid substitution at the position corresponding to E484 is an E484K or E484Q substitution. E484に対応する位置における少なくとも1個のアミノ酸置換が、E484K置換である、請求項125に記載のRNA。 126. The RNA of claim 125, wherein the at least one amino acid substitution at the position corresponding to E484 is an E484K substitution. N501に対応する位置における少なくとも1個のアミノ酸置換が、Y、T、又はS置換である、請求項121に記載のRNA。 122. The RNA of claim 121, wherein the at least one amino acid substitution at the position corresponding to N501 is a Y, T, or S substitution. N501に対応する位置における少なくとも1個のアミノ酸置換が、N501Y置換である、請求項127に記載のRNA。 128. The RNA of claim 127, wherein the at least one amino acid substitution at the position corresponding to N501 is an N501Y substitution. L452に対応する位置における少なくとも1個のアミノ酸置換が、R又はQ置換である、請求項121に記載のRNA。 122. The RNA of claim 121, wherein the at least one amino acid substitution at the position corresponding to L452 is an R or Q substitution. L452に対応する位置における少なくとも1個のアミノ酸置換が、L452R置換である、請求項129に記載のRNA。 130. The RNA of claim 129, wherein the at least one amino acid substitution at the position corresponding to L452 is a L452R substitution. SARS-CoV-2スパイクタンパク質が、N501及びE484に対応する位置にアミノ酸置換、好ましくは、N501Y及びE484K置換を含む、先行する請求項のいずれか一項に記載のRNA。 RNA according to any one of the preceding claims, wherein the SARS-CoV-2 spike protein comprises amino acid substitutions at positions corresponding to N501 and E484, preferably N501Y and E484K substitutions. SARS-CoV-2スパイクタンパク質が、フューリン切断部位領域に位置する少なくとも1個のアミノ酸置換を含む、先行する請求項のいずれか一項に記載のRNA。 RNA according to any one of the preceding claims, wherein the SARS-CoV-2 spike protein comprises at least one amino acid substitution located in the furin cleavage site region. フューリン切断部位におけるアミノ酸置換が、配列番号1に対してP681に対応する位置に位置する、請求項132に記載のRNA。 133. The RNA of claim 132, wherein the amino acid substitution at the furin cleavage site is located at a position corresponding to P681 relative to SEQ ID NO:1. P681に対応する位置のアミノ酸置換が、R又はH置換である、請求項133に記載のRNA。 134. The RNA according to claim 133, wherein the amino acid substitution at the position corresponding to P681 is an R or H substitution. P681に対応する位置のアミノ酸置換が、P681R置換である、請求項134に記載のRNA。 135. The RNA according to claim 134, wherein the amino acid substitution at the position corresponding to P681 is a P681R substitution. SARS-CoV-2スパイクタンパク質が、L452及びP681に対応する位置に少なくとも1個のアミノ酸置換、好ましくは、L452R及びP681Rを含む、先行する請求項のいずれか一項に記載のRNA。 RNA according to any one of the preceding claims, wherein the SARS-CoV-2 spike protein comprises at least one amino acid substitution at the position corresponding to L452 and P681, preferably L452R and P681R. SARS-CoV-2スパイクタンパク質が、L452、T478及びP681に対応する位置に少なくとも1個のアミノ酸置換、好ましくは、L452R、T478K及びP681Rを含む、先行する請求項のいずれか一項に記載のRNA。 RNA according to any one of the preceding claims, wherein the SARS-CoV-2 spike protein comprises at least one amino acid substitution at the position corresponding to L452, T478 and P681, preferably L452R, T478K and P681R. . SARS-CoV-2スパイクタンパク質が、以下のSARS CoV-2分離株:B.1.1.529(オミクロン、南アフリカ)(BA.1_v1、BA.1_v0、B.1.1.529、BA.2、BA.1_v2、BA.1_v3、BA.1_v4、BA.1_v5を含む)、B.1.351(南アフリカ)、B.1.1.7(英国)、P.1(ブラジル)、B.1.429(カリフォルニア)、B.1.525(ナイジェリア)、B.1.258(チェコ共和国)、B.1.526(ニューヨーク)、A.23.1(ウガンダ)、B.1.617.1(インド)、B.1.617.2(インド)、B.1.617.3(インド)、P.2(ブラジル)、C37.1(ペルー)及びB.1.1.621から選択される少なくとも1個のさらなるアミノ酸置換又は欠失を含む、先行する請求項のいずれか一項に記載のRNA。 The SARS-CoV-2 spike protein was detected in the following SARS CoV-2 isolates: B.1.1.529 (Omicron, South Africa) (BA.1_v1, BA.1_v0, B.1.1.529, BA.2, BA.1_v2 , BA.1_v3, BA.1_v4, BA.1_v5), B.1.351 (South Africa), B.1.1.7 (UK), P.1 (Brazil), B.1.429 (California), B.1.525 ( Nigeria), B.1.258 (Czech Republic), B.1.526 (New York), A.23.1 (Uganda), B.1.617.1 (India), B.1.617.2 (India), B.1.617.3 (India ), P.2 (Brazil), C37.1 (Peru) and B.1.1.621. RNA. SARS-CoV-2スパイクタンパク質が、配列番号1の配列と比較して、
・E484K、N501Y、L18F、D80A、D215G、L242del、A243del、L244del、R246I、K417N、D614G、及びA701V;
・E484K、N501Y、L18F、D80A、D215G、L242del、A243del、L244del、K417N、D614G、及びA701V;
・E484K、N501Y、L18F、T20N、P26S、D138Y、R190S、K417T、D614G、H655Y、及びT1027I;
・E484K、N501Y、L18F、T20N、P26S、D138Y、R190S、K417T、D614G、H655Y、T1027I、及びV1176F;
・L452R、P681R、及びD614G;
・L452R、E484Q、P681R、E154K、D614G、及びQ1071H;
・L452R、P681R、T19R、F157del、R158del、T478K、D614G、及びD950N;
・T19R、L452R、E484Q、D614G、P681R及びD950N;
・G75V、T76I、S247del、Y248del、L249del、T250del、P251del、G252del、D253del、L452Q、F490S、D614G、及び/又はT859N;
・T95I、Y145N、R346K、E484K、N501Y、D614G、P681H、及びD950N;
・T95I、Y144T、Y145S、ins145N、R346K、E484K、N501Y、D614G、P681H、及びD950N;
・H69del、V70del、Y144del、E484K、N501Y、A570D、D614G、P681H、T716I、S982A、及びD1118H;
・S13I、W152C、L452R、及びD614G;
・L452R;及びD614G;
・69del;70del;N439K;D614G;
・T95I;E484K;D614G;及びA701V;
・L5F、T95I、D253G、E484K、D614G、及びA701V;
・L5F、T95I、D253G、S477N、D614G、及びQ957R;
・F157L、V367F、Q613H、及びP681R;
・S254F、D614G、P681R、及びG769V;
・T478K、D614G、P681H、及びT732A;
・P26S、H69del、V70del、V126A、Y144del、L242del、A243del、L244del、H245Y、S477N、E484K、D614G、P681H、T1027I及びD1118H;
・ins214TDR、Q414K、N450K、D614G、及びT716I;
・S12F、H69del、V70del、W152R、R346S、L452R、D614G、Q677H及びA899S;
・E484K、D614G及びV1176F;
・Q52R、A67V、H69del、V70del、F157del、R158del、E484K、D614G、Q677H及びF888L;
・Q52R、A67V、H69del、V70del、Y144del、E484K、D614G、Q677H及びF888L;
・A67V、H69del、V70del、Y144del、E484K、D614G、Q677H及びF888L;
・T19R、T95I、G142D、E156G、F157del、R158del、W258L、K417N、L452R、T478K、K558N、D614G、P681R、及びD950N;
・T19R、V70F、G142D、E156G、F157del、R158del、A222V、K417N、L452R、T478K、D614G、P681R、及びD950N;
・T19R、T95I、F157del、R158del、W258L、K417N、L452R、T478K、D614G、P681R、及びD950N;
・T19R、V70F、F157del、R158del、A222V、K417N、L452R、T478K、D614G、P681R、及びD950N;
・H69del、V70del及びD614G;
・D614G及びM1229I;
・A222V及びD614G;
・S477N及びD614G;
・N439K及びD614G;
・H69del、V70del、Y453F、D614G及びI692I;
・Y453F及びD614G;
・D614G及びI692V;
・H69del、V70del、A222V、Y453F、D614G及びI692I;
・N501Y及びD614G;
・K417N、E484K、N501Y及びD614G;並びに
・E484K及びD614G
から選択されるアミノ酸置換、欠失又は挿入を含む、先行する請求項のいずれか一項に記載のRNA。 SARS-CoV-2 spike protein compared to the sequence of SEQ ID NO: 1.
・E484K, N501Y, L18F, D80A, D215G, L242del, A243del, L244del, R246I, K417N, D614G, and A701V;
・E484K, N501Y, L18F, D80A, D215G, L242del, A243del, L244del, K417N, D614G, and A701V;
・E484K, N501Y, L18F, T20N, P26S, D138Y, R190S, K417T, D614G, H655Y, and T1027I;
・E484K, N501Y, L18F, T20N, P26S, D138Y, R190S, K417T, D614G, H655Y, T1027I, and V1176F;
・L452R, P681R, and D614G;
・L452R, E484Q, P681R, E154K, D614G, and Q1071H;
・L452R, P681R, T19R, F157del, R158del, T478K, D614G, and D950N;
・T19R, L452R, E484Q, D614G, P681R and D950N;
・G75V, T76I, S247del, Y248del, L249del, T250del, P251del, G252del, D253del, L452Q, F490S, D614G, and/or T859N;
・T95I, Y145N, R346K, E484K, N501Y, D614G, P681H, and D950N;
・T95I, Y144T, Y145S, ins145N, R346K, E484K, N501Y, D614G, P681H, and D950N;
・H69del, V70del, Y144del, E484K, N501Y, A570D, D614G, P681H, T716I, S982A, and D1118H;
・S13I, W152C, L452R, and D614G;
・L452R; and D614G;
・69del;70del;N439K;D614G;
・T95I;E484K;D614G;and A701V;
・L5F, T95I, D253G, E484K, D614G, and A701V;
・L5F, T95I, D253G, S477N, D614G, and Q957R;
・F157L, V367F, Q613H, and P681R;
・S254F, D614G, P681R, and G769V;
・T478K, D614G, P681H, and T732A;
・P26S, H69del, V70del, V126A, Y144del, L242del, A243del, L244del, H245Y, S477N, E484K, D614G, P681H, T1027I and D1118H;
・ins214TDR, Q414K, N450K, D614G, and T716I;
・S12F, H69del, V70del, W152R, R346S, L452R, D614G, Q677H and A899S;
・E484K, D614G and V1176F;
・Q52R, A67V, H69del, V70del, F157del, R158del, E484K, D614G, Q677H and F888L;
・Q52R, A67V, H69del, V70del, Y144del, E484K, D614G, Q677H and F888L;
・A67V, H69del, V70del, Y144del, E484K, D614G, Q677H and F888L;
・T19R, T95I, G142D, E156G, F157del, R158del, W258L, K417N, L452R, T478K, K558N, D614G, P681R, and D950N;
・T19R, V70F, G142D, E156G, F157del, R158del, A222V, K417N, L452R, T478K, D614G, P681R, and D950N;
・T19R, T95I, F157del, R158del, W258L, K417N, L452R, T478K, D614G, P681R, and D950N;
・T19R, V70F, F157del, R158del, A222V, K417N, L452R, T478K, D614G, P681R, and D950N;
・H69del, V70del and D614G;
・D614G and M1229I;
・A222V and D614G;
・S477N and D614G;
・N439K and D614G;
・H69del, V70del, Y453F, D614G and I692I;
・Y453F and D614G;
・D614G and I692V;
・H69del, V70del, A222V, Y453F, D614G and I692I;
・N501Y and D614G;
・K417N, E484K, N501Y and D614G; and ・E484K and D614G
RNA according to any one of the preceding claims, comprising an amino acid substitution, deletion or insertion selected from: SARS-CoV-2スパイクタンパク質が、配列番号1の配列と比較して、
・E484K、N501Y、L18F、D80A、D215G、L242del、A243del、L244del、R246I、K417N、D614G、及びA701V;並びに
・E484K、N501Y、L18F、D80A、D215G、L242del、A243del、L244del、K417N、D614G、及びA701V
から選択されるアミノ酸置換、又は欠失を含む、先行する請求項のいずれか一項に記載のRNA。 SARS-CoV-2 spike protein compared to the sequence of SEQ ID NO: 1.
・E484K, N501Y, L18F, D80A, D215G, L242del, A243del, L244del, R246I, K417N, D614G, and A701V; and ・E484K, N501Y, L18F, D80A, D215G, L242del, A243del, L244del, K4 17N, D614G, and A701V
RNA according to any one of the preceding claims, comprising an amino acid substitution or deletion selected from. SARS-CoV-2スパイクタンパク質が、配列番号1の配列と比較して、以下の
・K986P、V987P、E484K、N501Y、L18F、D80A、D215G、L242del、A243del、L244del、R246I、K417N、D614G、及びA701V;並びに
・K986P、V987P、E484K、N501Y、L18F、D80A、D215G、L242del、A243del、L244del、K417N、D614G、及びA701V
から選択されるアミノ酸置換、又は欠失を含む、先行する請求項のいずれか一項に記載のRNA。 Compared to the sequence of SEQ ID NO: 1, the SARS-CoV-2 spike protein has the following: K986P, V987P, E484K, N501Y, L18F, D80A, D215G, L242del, A243del, L244del, R246I, K417N, D614G, and A701V ; and K986P, V987P, E484K, N501Y, L18F, D80A, D215G, L242del, A243del, L244del, K417N, D614G, and A701V
RNA according to any one of the preceding claims, comprising an amino acid substitution or deletion selected from. SARS-CoV-2スパイクタンパク質が、配列番号1の配列と比較して、
・L452R、P681R、及びD614G;
・L452R、E484Q、P681R、E154K、D614G、及びQ1071H;
・L452R、P681R、T19R、F157del、R158del、T478K、D614G、及びD950N;並びに
・T19R、L452R、E484Q、D614G、P681R及びD950N
から選択されるアミノ酸置換、又は欠失を含む、請求項109から139のいずれか一項に記載のRNA。 SARS-CoV-2 spike protein compared to the sequence of SEQ ID NO: 1.
・L452R, P681R, and D614G;
・L452R, E484Q, P681R, E154K, D614G, and Q1071H;
・L452R, P681R, T19R, F157del, R158del, T478K, D614G, and D950N; and ・T19R, L452R, E484Q, D614G, P681R and D950N
140. RNA according to any one of claims 109 to 139, comprising an amino acid substitution or deletion selected from: 少なくとも1つのSARS-CoV-2スパイクタンパク質が、配列番号1、10、22738、22740、22742、22744、22746、22748、22750、22752、22754、22756、22758、22959～22964、27087～27109のいずれか1つと同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一であるアミノ酸配列又はこれらのいずれかの免疫原性フラグメント若しくは免疫原性バリアントの少なくとも1つを含むか、又はそれからなる、先行する請求項のいずれか一項に記載のRNA。 at least one SARS-CoV-2 spike protein is any of SEQ ID NO: 1, 10, 22738, 22740, 22742, 22744, 22746, 22748, 22750, 22752, 22754, 22756, 22758, 22959-22964, 27087-27109 Identical to one or at least 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96% , 97%, 98%, or 99% identical, or an immunogenic fragment or variant of any of these. RNA as described in Section. スパイクタンパク質(S)が、スパイクタンパク質フラグメントS1、又はその免疫原性フラグメント若しくは免疫原性バリアントを含むか、又はそれからなる、請求項129から143のいずれか一項に記載のRNA。 144. RNA according to any one of claims 129 to 143, wherein the spike protein (S) comprises or consists of the spike protein fragment S1, or an immunogenic fragment or variant thereof. 少なくとも1つのSARS-CoV-2スパイクタンパク質が、配列番号1、10、22738、22740、22742、22744、22746、22748、22750、22752、22754、22756、22758、22959～22964、27087～27109のいずれか1つと同一であるか、又は95%同一であるアミノ酸配列の少なくとも1つを含むか、又はそれからなる、先行する請求項のいずれか一項に記載のRNA。 at least one SARS-CoV-2 spike protein is any of SEQ ID NO: 1, 10, 22738, 22740, 22742, 22744, 22746, 22748, 22750, 22752, 22754, 22756, 22758, 22959-22964, 27087-27109 RNA according to any one of the preceding claims, comprising or consisting of at least one amino acid sequence that is identical or 95% identical to one. スパイクタンパク質(S)が、少なくとも1つの融合前の安定化変異を含む融合前の安定化されたスパイクタンパク質(S_stab)である、請求項129から145のいずれか一項に記載のRNA。 146. RNA according to any one of claims 129 to 145, wherein the spike protein (S) is a pre-fusion stabilized spike protein (S_stab) comprising at least one pre-fusion stabilizing mutation. 少なくとも1つの融合前の安定化変異が、以下のアミノ酸置換:K986P及びV987Pを含む、請求項146に記載のRNA。 147. The RNA of claim 146, wherein the at least one prefusion stabilizing mutation comprises the following amino acid substitutions: K986P and V987P. 少なくとも1つのコード配列が、シグナルペプチド、リンカー、ヘルパーエピトープ、抗原クラスター形成エレメント、三量体化エレメント、膜貫通型エレメント、及び/又はVLP形成配列から選択される1つ以上の異種ペプチド又はタンパク質エレメントをさらにコードする、先行する請求項のいずれか一項に記載のRNA。 one or more heterologous peptide or protein elements in which at least one coding sequence is selected from signal peptides, linkers, helper epitopes, antigen clustering elements, trimerization elements, transmembrane elements, and/or VLP-forming sequences RNA according to any one of the preceding claims, further encoding. 少なくとも1つの異種ペプチド又はタンパク質エレメントが、異種抗原クラスター形成エレメント、異種三量体化エレメント、及び/又はVLP形成配列である、請求項148に記載のRNA。 149. The RNA of claim 148, wherein the at least one heterologous peptide or protein element is a heterologous antigen clustering element, a heterologous trimerization element, and/or a VLP-forming sequence. 少なくとも1つのコード配列が、コドン修飾されたコード配列であり、少なくとも1つのコドン修飾されたコード配列によりコードされるアミノ酸配列が、好ましくは、対応する野生型又は参照コード配列によりコードされるアミノ酸配列と比較して修飾されていない、先行する請求項のいずれか一項に記載のRNA。 at least one coding sequence is a codon-modified coding sequence, and the amino acid sequence encoded by the at least one codon-modified coding sequence is preferably an amino acid sequence encoded by the corresponding wild-type or reference coding sequence. RNA according to any one of the preceding claims, which is unmodified compared to. 少なくとも1つのコドン修飾されたコード配列が、C最大化コード配列、CAI最大化コード配列、ヒトコドン使用適合コード配列、G/C含有量が修飾されたコード配列、及びG/Cが最適化されたコード配列、又はそれらの任意の組み合わせから選択される、請求項150に記載のRNA。 At least one codon-modified coding sequence is a C-maximized coding sequence, a CAI-maximized coding sequence, a human codon usage compatible coding sequence, a coding sequence modified for G/C content, and a G/C optimized coding sequence. 151. The RNA of claim 150, selected from coding sequences, or any combination thereof. 少なくとも1つのコドン修飾されたコード配列が、G/Cが最適化されたコード配列、ヒトコドン使用適合コード配列、又はG/C含有量が修飾されたコード配列である、請求項150又は151に記載のRNA。 Claim 150 or 151, wherein the at least one codon modified coding sequence is a G/C optimized coding sequence, a human codon usage compatible coding sequence, or a coding sequence modified for G/C content. RNA. 少なくとも1つのコード配列が、配列番号136、137、146、22765、22767、22769、22771、22773、22775、22777、22779、22781、22783、22785、23089～23148、23150～23184、27110～27247のいずれか1つと同一であるか、又は少なくとも70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、若しくは99%同一である配列又はこれらの配列のいずれかのフラグメント若しくはバリアントを含むか、又はそれからなる、先行する請求項のいずれか一項に記載のRNA。 At least one code array is an array number 136, 137, 146, 22765, 22767, 22771, 22773, 22777, 22777, 22781, 22783, 22783, 22783, 22785 Either 27247 or at least 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96 %, 97%, 98%, or 99% identical, or fragments or variants of any of these sequences. 少なくとも1つのコード配列が、配列番号136、137、146、22765、22767、22769、22771、22773、22775、22777、22779、22781、22783、22785、23089～23148、23150～23184、27110～27247のいずれか1つと同一であるか、又は少なくとも90%同一である配列を含むか、又はそれからなる、先行する請求項のいずれか一項に記載のRNA。 At least one code array is an array number 136, 137, 146, 22765, 22767, 22771, 22773, 22777, 22777, 22781, 22783, 22783, 22783, 22785 Either 27247 RNA according to any one of the preceding claims, comprising or consisting of a sequence that is identical or at least 90% identical to one of the preceding claims. 少なくとも1つのコード配列が、少なくとも約50%、55%、又は60%のG/C含有量を有する、先行する請求項のいずれか一項に記載のRNA。 RNA according to any one of the preceding claims, wherein at least one coding sequence has a G/C content of at least about 50%, 55%, or 60%. 少なくとも1つのコード配列が、融合前の安定化K986P及びV987P変異を含むSタンパク質をコードし、コード配列が、配列番号136、137、146、22765、22767、22769、22771、22773、22775、22777、22779、22781、22783、22785、23089～23148、23150～23184、27110～27247と少なくとも95%同一である核酸配列を含むG/Cが最適化されたコード配列を含むか、又はそれからなる、先行する請求項のいずれか一項に記載のRNA。 at least one coding sequence encodes an S protein containing prefusion stabilizing K986P and V987P mutations, the coding sequence comprising SEQ ID NOs: 136, 137, 146, 22765, 22767, 22769, 22771, 22773, 22775, 22777, 22779, 22781, 22783, 22785, 23089-23148, 23150-23184, 27110-27247 comprising a nucleic acid sequence that is at least 95% identical to 22779, 22781, 22783, 22785, 23089-23148, 23150-23184, 27110-27247. RNA according to any one of claims. 好ましくは、30～200個のアデノシンヌクレオチド及び/又は少なくとも1つのポリ(C)配列を含む、好ましくは、10～40個のシトシンヌクレオチドを含む、少なくとも1つのポリ(A)配列を含む、先行する請求項のいずれか一項に記載のRNA。 Preferably comprising 30 to 200 adenosine nucleotides and/or at least one poly(C) sequence, preferably comprising 10 to 40 cytosine nucleotides, comprising at least one poly(A) sequence, preceded by RNA according to any one of claims. 少なくとも1つのヒストンステムループを含む、先行する請求項のいずれか一項に記載のRNA。 RNA according to any one of the preceding claims, comprising at least one histone stem loop. RNAが、30～200個のアデノシンヌクレオチドを含む少なくとも1つのポリ(A)配列を含み、前記RNAの3'末端のヌクレオチドがアデノシンである、先行する請求項のいずれか一項に記載のRNA。 RNA according to any one of the preceding claims, wherein the RNA comprises at least one poly(A) sequence comprising 30 to 200 adenosine nucleotides, and the nucleotide at the 3' end of said RNA is adenosine. 少なくとも1つの異種3'UTRが、PSMB3、ALB7、CASP1、COX6B1、GNAS、NDUFA1及びRPS9から選択される遺伝子、又はこれらの遺伝子のいずれか1つの相同体、フラグメント若しくはバリアントの3'UTRから誘導される核酸配列を含むか、又はそれからなる、先行する請求項のいずれか一項に記載のRNA。 The at least one heterologous 3'UTR is derived from the 3'UTR of a gene selected from PSMB3, ALB7, CASP1, COX6B1, GNAS, NDUFA1 and RPS9, or a homolog, fragment or variant of any one of these genes. RNA according to any one of the preceding claims, comprising or consisting of a nucleic acid sequence comprising: 少なくとも1つの異種5'UTRが、HSD17B4、RPL32、ASAH1、ATP5A1、MP68、NDUFA4、NOSIP、RPL31、SLC7A3、TUBB4B及びUBQLN2から選択される遺伝子、又はこれらの遺伝子のいずれか1つの相同体、フラグメント若しくはバリアントの5'UTRから誘導される核酸配列を含むか、又はそれからなる、先行する請求項のいずれか一項に記載のRNA。 at least one heterologous 5'UTR is a gene selected from HSD17B4, RPL32, ASAH1, ATP5A1, MP68, NDUFA4, NOSIP, RPL31, SLC7A3, TUBB4B and UBQLN2, or a homologue, fragment or fragment of any one of these genes. RNA according to any one of the preceding claims, comprising or consisting of a nucleic acid sequence derived from the 5'UTR of the variant. HSD17B4由来の5'UTRから誘導される核酸配列を含むか、又はそれからなる少なくとも1つの異種5'UTR及びPSMB3の3'UTRから誘導される核酸配列を含むか、又はそれからなる少なくとも1つの異種3'UTRを含む、先行する請求項のいずれか一項に記載のRNA。 At least one heterologous 5'UTR comprising or consisting of a nucleic acid sequence derived from the 5'UTR from HSD17B4 and at least one heterologous 3 comprising or consisting of a nucleic acid sequence derived from the 3'UTR of PSMB3. RNA according to any one of the preceding claims, comprising the 'UTR. 5'から3'に:
i)5'キャップ1構造;
ii)HSD17B4遺伝子の5'UTRから誘導される、好ましくは配列番号232に記載の5'UTR
iii)少なくとも1つのコード配列;
iv)PSMB3遺伝子の3'UTRから誘導される、好ましくは配列番号254に記載の3'UTR;
v)場合により、ヒストンステムループ配列;及び
vi)約100個のAヌクレオチドを含むポリ(A)配列
を含み、前記RNAの3'末端のヌクレオチドがアデノシンである、先行する請求項のいずれか一項に記載のRNA。 5' to 3':
i) 5' cap 1 structure;
ii) 5'UTR derived from the 5'UTR of the HSD17B4 gene, preferably as set forth in SEQ ID NO: 232
iii) at least one coding sequence;
iv) a 3'UTR derived from the 3'UTR of the PSMB3 gene, preferably as set forth in SEQ ID NO: 254;
v) optionally histone stem-loop sequences; and
vi) RNA according to any one of the preceding claims, comprising a poly(A) sequence comprising about 100 A nucleotides, the nucleotide at the 3' end of said RNA being adenosine. mRNA、自己複製RNA、環状RNA、又はレプリコンRNAである、先行する請求項のいずれか一項に記載のRNA。 RNA according to any one of the preceding claims, which is mRNA, self-replicating RNA, circular RNA, or replicon RNA. mRNAである、先行する請求項のいずれか一項に記載のRNA。 RNA according to any one of the preceding claims, which is mRNA. mRNAが、レプリコンRNA又は自己複製RNAではない、請求項165に記載のRNA。 166. The RNA of claim 165, wherein the mRNA is not a replicon RNA or self-replicating RNA. 5'キャップ構造、好ましくは、m7G、キャップ0、キャップ1、キャップ2、修飾されたキャップ0又は修飾されたキャップ1構造、好ましくは、5'キャップ1構造を含む、先行する請求項のいずれか一項に記載のRNA。 Any of the preceding claims comprising a 5' cap structure, preferably m7G, cap 0, cap 1, cap 2, modified cap 0 or modified cap 1 structure, preferably 5' cap 1 structure RNA according to item 1. 1-メチルシュードウリジン置換を含まない、先行する請求項のいずれか一項に記載のRNA。 RNA according to any one of the preceding claims, which does not contain 1-methylpseudouridine substitutions. 化学的に修飾されたヌクレオチドを含まない、先行する請求項のいずれか一項に記載のRNA。 RNA according to any one of the preceding claims, which is free of chemically modified nucleotides. シュードウリジン又は1-メチルシュードウリジン置換を含む、請求項109から167のいずれか一項に記載のRNA。 168. RNA according to any one of claims 109 to 167, comprising a pseudouridine or 1-methylpseudouridine substitution. RNAが、in vitroで転写されたRNAであり、RNA in vitro転写が、配列が最適化されたヌクレオチドの混合物及びキャップアナログの存在下で行われ、好ましくは、配列が最適化されたヌクレオチドの混合物が、化学的に修飾されたヌクレオチドを含まない、先行する請求項のいずれか一項に記載のRNA。 the RNA is in vitro transcribed RNA, the RNA in vitro transcription is performed in the presence of a mixture of sequence-optimized nucleotides and a cap analog, preferably a mixture of sequence-optimized nucleotides; RNA according to any one of the preceding claims, wherein the RNA does not contain chemically modified nucleotides. 精製されたRNA、好ましくは、RP-HPLC及び/又はTFFにより精製されたRNAである、先行する請求項のいずれか一項に記載のRNA。 RNA according to any one of the preceding claims, which is purified RNA, preferably RNA purified by RP-HPLC and/or TFF. RP-HPLC及び/又はTFFにより精製された精製されたRNAであり、RP-HPLC及び/又はTFFで精製されていないRNAとして約5%、10%、又は20%少ない二本鎖RNA副産物を含む、先行する請求項のいずれか一項に記載のRNA。 Purified RNA that has been purified by RP-HPLC and/or TFF and contains approximately 5%, 10%, or 20% less double-stranded RNA byproducts as RNA that has not been purified by RP-HPLC and/or TFF. , RNA according to any one of the preceding claims. RP-HPLC及び/又はTFFにより精製された精製されたRNAであり、オリゴdT精製、沈殿、濾過及び/又はアニオン交換クロマトグラフィーで精製されたRNAとして約5%、10%、又は20%少ない二本鎖RNA副産物を含む、先行する請求項のいずれか一項に記載のRNA。 Purified RNA purified by RP-HPLC and/or TFF and containing approximately 5%, 10%, or 20% less dilution as RNA purified by oligo-dT purification, precipitation, filtration, and/or anion exchange chromatography. RNA according to any one of the preceding claims, comprising a double-stranded RNA by-product. 請求項1から66のいずれか一項に記載のRNAを含む組成物であって、場合により、少なくとも1つの薬学的に許容される担体を含む、組成物。 67. A composition comprising RNA according to any one of claims 1 to 66, optionally comprising at least one pharmaceutically acceptable carrier. 請求項1から56のいずれか一項に記載の複数又は少なくとも1つより多いRNAを含む多価組成物である、請求項175に記載の組成物。 176. The composition of claim 175, which is a multivalent composition comprising a plurality or more than at least one RNA according to any one of claims 1-56. 多価組成物の複数又は少なくとも1つより多いRNAがそれぞれ、異なるスパイクタンパク質、好ましくは、融合前の安定化されたスパイクタンパク質をコードする、請求項176に記載の組成物。 177. The composition of claim 176, wherein the plurality or at least one more than one RNA of the multivalent composition each encodes a different spike protein, preferably a pre-fusion stabilized spike protein. 異なるスパイクタンパク質又は融合前の安定化されたスパイクタンパク質が、異なるSARS-CoV-2ウイルスバリアント/分離株から誘導される、請求項177に記載の組成物。 178. The composition of claim 177, wherein the different spike proteins or pre-fusion stabilized spike proteins are derived from different SARS-CoV-2 virus variants/isolates. 異なるスパイクタンパク質又は融合前の安定化されたスパイクタンパク質が、B.1.351(南アフリカ)、B.1.1.7(英国)、P.1(ブラジル)、B.1.429(カリフォルニア)、B.1.525(ナイジェリア)、B.1.258(チェコ共和国)、B.1.526(ニューヨーク)、A.23.1(ウガンダ)、B.1.617.1(インド)、B.1.617.2(インド)、B.1.617.3(インド)、P.2(ブラジル)、C37.1(ペルー)又はB.1.1.621バリアントから誘導される、請求項178に記載の組成物。 Different spike proteins or pre-fusion stabilized spike proteins are present in B.1.351 (South Africa), B.1.1.7 (UK), P.1 (Brazil), B.1.429 (California), B.1.525 (Nigeria). ), B.1.258 (Czech Republic), B.1.526 (New York), A.23.1 (Uganda), B.1.617.1 (India), B.1.617.2 (India), B.1.617.3 (India) 179. The composition of claim 178, wherein the composition is derived from a B.1.1.621 variant. 異なるスパイクタンパク質又は融合前の安定化されたスパイクタンパク質が、少なくともB.1.1.7、B.1.351、P.1、CAL.20C、B.1.1.519、B.1.621又はC.37から誘導される、請求項178又は179に記載の組成物。 The different spike proteins or pre-fusion stabilized spike proteins are derived from at least B.1.1.7, B.1.351, P.1, CAL.20C, B.1.1.519, B.1.621 or C.37. 179. The composition of claim 178 or 179. 異なるスパイクタンパク質又は融合前の安定化されたスパイクタンパク質の少なくとも1つが、配列番号1の配列と比較して、E484、N501、P681、D614及び/又はL452に対応する位置に少なくとも1個のアミノ酸置換を含む、請求項178に記載の組成物。 At least one of the different spike proteins or the pre-fusion stabilized spike protein has at least one amino acid substitution at a position corresponding to E484, N501, P681, D614 and/or L452 compared to the sequence of SEQ ID NO: 1 179. The composition of claim 178, comprising: 異なるスパイクタンパク質又は融合前の安定化されたスパイクタンパク質の少なくとも1つが、配列番号1の配列と比較して、E484K、N501Y、P681R、D614G及び/又はL452Rに対応する位置に少なくとも1個のアミノ酸置換を含む、請求項181に記載の組成物。 At least one of the different spike proteins or the pre-fusion stabilized spike protein has at least one amino acid substitution at a position corresponding to E484K, N501Y, P681R, D614G and/or L452R compared to the sequence of SEQ ID NO: 1 182. The composition of claim 181, comprising: 異なるスパイクタンパク質又は融合前の安定化されたスパイクタンパク質の少なくとも1つが、配列番号1の配列と比較して、L452R、P681R、及びD614Gに対応する位置にアミノ酸置換を含む、請求項182に記載の組成物。 183, wherein at least one of the different spike proteins or pre-fusion stabilized spike proteins comprises amino acid substitutions at positions corresponding to L452R, P681R, and D614G compared to the sequence of SEQ ID NO: 1. Composition. 70%以上のRNA完全性を有するRNAを含む、請求項175から180のいずれか一項に記載の組成物。 181. The composition of any one of claims 175-180, comprising RNA having RNA integrity of 70% or more. 組成物が、70%以上のキャッピング程度を有するRNAを含み、好ましくは、RNA種の少なくとも70%、80%、又は90%が、キャップ1構造を含む、請求項175から184のいずれか一項に記載の組成物。 185. Any one of claims 175 to 184, wherein the composition comprises RNA with a degree of capping of 70% or more, preferably at least 70%, 80% or 90% of the RNA species comprises a cap 1 structure. The composition described in. RNAが、1つ以上のカチオン性若しくはポリカチオン性化合物、好ましくは、カチオン性若しくはポリカチオン性ポリマー、カチオン性若しくはポリカチオン性多糖、カチオン性若しくはポリカチオン性脂質、カチオン性若しくはポリカチオン性タンパク質、カチオン性若しくはポリカチオン性ペプチド、又はそれらの任意の組み合わせと複合体化されるか、若しくは会合するか、又は少なくとも部分的に複合体化されるか、若しくは部分的に会合する、請求項175から185のいずれか一項に記載の組成物。 The RNA contains one or more cationic or polycationic compounds, preferably cationic or polycationic polymers, cationic or polycationic polysaccharides, cationic or polycationic lipids, cationic or polycationic proteins, from claim 175 conjugated or associated, or at least partially conjugated or partially associated with a cationic or polycationic peptide, or any combination thereof. 185. The composition according to any one of 185. RNAが、1つ以上の脂質又は脂質ベースの担体と複合体化されるか、又は会合し、これにより、好ましくは少なくとも1つのRNAを封入する、リポソーム、脂質ナノ粒子(LNP)、リポプレックス、及び/又はナノリポソームを形成する、請求項186に記載の組成物。 liposomes, lipid nanoparticles (LNPs), lipoplexes, in which the RNA is complexed or associated with one or more lipids or lipid-based carriers, thereby preferably encapsulating at least one RNA; and/or forming nanoliposomes. RNAが、1つ以上の脂質と複合体化され、これにより、脂質ナノ粒子を形成する、請求項186又は187に記載の組成物。 188. The composition of claim 186 or 187, wherein the RNA is complexed with one or more lipids, thereby forming lipid nanoparticles. LNPが、式III-3:
Figure 2024502210000060
 によるカチオン性脂質を含む、請求項187又は188に記載の組成物。 LNP has the formula III-3:
Figure 2024502210000060
 189. A composition according to claim 187 or 188, comprising a cationic lipid according to. LNPが、式(IVa):
Figure 2024502210000061
 (式中、nは、30～60の範囲にある平均値を有し、好ましくは、nは、約45、46、47、48、49、50、51、52、53、54の平均値を有し、最も好ましくは、nは49又は45の平均値を有する)のPEG脂質を含む、請求項187から189のいずれか一項に記載の組成物。 LNP has the formula (IVa):
Figure 2024502210000061
 (where n has an average value in the range 30 to 60, preferably n has an average value of about 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54 189. A composition according to any one of claims 187 to 189, comprising PEG lipids having a mean value of 49 or 45, most preferably n having an average value of 49 or 45. LNPが、式(IVa):
Figure 2024502210000062
 (式中、nは、PEG脂質の平均分子量が約2500g/molであるように選択される整数である)のPEG脂質を含む、請求項187から189のいずれか一項に記載の組成物。 LNP has the formula (IVa):
Figure 2024502210000062
 189. The composition of any one of claims 187-189, comprising a PEG lipid where n is an integer selected such that the average molecular weight of the PEG lipid is about 2500 g/mol. LNPが、1つ以上の中性脂質及び/又は1つ以上のステロイド若しくはステロイドアナログを含む、請求項187から191のいずれか一項に記載の組成物。 192. A composition according to any one of claims 187 to 191, wherein the LNP comprises one or more neutral lipids and/or one or more steroids or steroid analogs. 中性脂質が、1,2-ジステアロイル-sn-グリセロ-3-ホスホコリン(DSPC)であり、好ましくは、カチオン性脂質とDSPCとのモル比が、約2:1～約8:1の範囲にある、請求項192に記載の組成物。 The neutral lipid is 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphocholine (DSPC), and preferably the molar ratio of cationic lipid to DSPC is in the range of about 2:1 to about 8:1. 193. The composition of claim 192, wherein: ステロイドが、コレステロールであり、好ましくは、カチオン性脂質とコレステロールとのモル比が、約2:1～約1:1の範囲にある、請求項192に記載の組成物。 193. The composition of claim 192, wherein the steroid is cholesterol and preferably the molar ratio of cationic lipid to cholesterol is in the range of about 2:1 to about 1:1. LNPが、
(i)少なくとも1つのカチオン性脂質、好ましくは、式(III)の脂質、より好ましくは、脂質III-3;
(ii)少なくとも1つの中性脂質、好ましくは、1,2-ジステアロイル-sn-グリセロ-3-ホスホコリン(DSPC);
(iii)少なくとも1つのステロイド又はステロイドアナログ、好ましくは、コレステロール;及び
(iv)少なくとも1つのポリマーコンジュゲートされた脂質、好ましくは、式(IVa、n=49)から誘導されるPEG-脂質
を含み、
(i)～(iv)が、約20～60%のカチオン性脂質、5～25%の中性脂質、25～55%のステロール、及び0.5～15%のPEG-脂質のモル比にある、請求項187から194のいずれか一項に記載の組成物。 LNP is
(i) at least one cationic lipid, preferably a lipid of formula (III), more preferably lipid III-3;
(ii) at least one neutral lipid, preferably 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphocholine (DSPC);
(iii) at least one steroid or steroid analog, preferably cholesterol; and
(iv) comprising at least one polymer-conjugated lipid, preferably a PEG-lipid derived from formula (IVa, n=49);
(i) to (iv) are in a molar ratio of about 20-60% cationic lipids, 5-25% neutral lipids, 25-55% sterols, and 0.5-15% PEG-lipids; 195. A composition according to any one of claims 187-194. LNPが、
(i)少なくとも1つのカチオン性脂質、好ましくは、式(III)の脂質、より好ましくは、脂質III-3;
(ii)少なくとも1つの中性脂質、好ましくは、1,2-ジステアロイル-sn-グリセロ-3-ホスホコリン(DSPC);
(iii)少なくとも1つのステロイド又はステロイドアナログ、好ましくは、コレステロール;及び
(iv)少なくとも1つのポリマーコンジュゲートされた脂質、好ましくは、式(IVa、n=45)から誘導されるPEG-脂質
を含み、
(i)～(iv)が、約20～60%のカチオン性脂質、5～25%の中性脂質、25～55%のステロール、及び0.5～15%のPEG-脂質のモル比にある、請求項187から194のいずれか一項に記載の組成物。 LNP is
(i) at least one cationic lipid, preferably a lipid of formula (III), more preferably lipid III-3;
(ii) at least one neutral lipid, preferably 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphocholine (DSPC);
(iii) at least one steroid or steroid analog, preferably cholesterol; and
(iv) comprising at least one polymer-conjugated lipid, preferably a PEG-lipid derived from formula (IVa, n=45);
(i) to (iv) are in a molar ratio of about 20-60% cationic lipids, 5-25% neutral lipids, 25-55% sterols, and 0.5-15% PEG-lipids; 195. A composition according to any one of claims 187-194. (i)～(iv)が、約50:10:38.5:1.5、好ましくは、47.4:10:40.9:1.7のモル比にある、請求項195又は196に記載の組成物。 197. A composition according to claim 195 or 196, wherein (i) to (iv) are in a molar ratio of about 50:10:38.5:1.5, preferably 47.4:10:40.9:1.7. 約20%未満の遊離(複合体化されていないか、又は封入されていない)RNA、好ましくは、約15%未満の遊離RNA、より好ましくは、約10%未満の遊離RNAを含む、請求項188から197のいずれか一項に記載の組成物。 Claims comprising less than about 20% free (uncomplexed or unencapsulated) RNA, preferably less than about 15% free RNA, more preferably less than about 10% free RNA. A composition according to any one of 188 to 197. 脂質とRNAとのwt/wt比が、約10:1～約60:1、好ましくは、約20:1～約30:1、例えば、約25:1である、請求項188から198のいずれか一項に記載の組成物。 Any of claims 188 to 198, wherein the wt/wt ratio of lipid to RNA is about 10:1 to about 60:1, preferably about 20:1 to about 30:1, such as about 25:1. The composition according to item 1. RNAを封入するLNPのn/p比が、約1～約10の範囲、好ましくは、約5～約7の範囲、より好ましくは、約6である、請求項188から199のいずれか一項に記載の組成物。 Any one of claims 188 to 199, wherein the n/p ratio of the LNPs encapsulating RNA is in the range of about 1 to about 10, preferably in the range of about 5 to about 7, more preferably in the range of about 6. The composition described in. 約0.4未満、好ましくは、約0.3未満、より好ましくは、約0.2未満、最も好ましくは、約0.1未満の多分散指数(PDI)値を有する、請求項188から200のいずれか一項に記載の組成物。 200 according to any one of claims 188 to 200, having a polydispersity index (PDI) value of less than about 0.4, preferably less than about 0.3, more preferably less than about 0.2, most preferably less than about 0.1. Composition. LNPが、
(a)約60nm～約120nmの範囲、好ましくは、約120nm未満、より好ましくは、約100nm未満、最も好ましくは、約80nm未満のZ-平均サイズを有し;
(b)約500nmを超える粒子サイズを有する約10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%、1%未満のLNPを含み;及び/又は
(c)約20nmより小さい粒子サイズを有する約10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%、1%未満のLNPを含む、請求項187から201のいずれか一項に記載の組成物。 LNP is
(a) has a Z-average size in the range of about 60 nm to about 120 nm, preferably less than about 120 nm, more preferably less than about 100 nm, most preferably less than about 80 nm;
(b) contains less than about 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1% LNPs having a particle size greater than about 500 nm; and/or
(c) comprising less than about 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1% LNPs having a particle size of less than about 20 nm. 202. The composition according to any one of 201 to 201. 脂質ベースの担体の少なくとも約80%、85%、90%、95%が、好ましくは固体のコア又は部分的に固体のコアを含む球状形態を有する、請求項187から202のいずれか一項に記載の組成物。 203, wherein at least about 80%, 85%, 90%, 95% of the lipid-based carrier has a spherical morphology, preferably comprising a solid or partially solid core. Compositions as described. 約150FNU～約0.0FNUの範囲、好ましくは、約50FNU以下、より好ましくは、約25FNU以下の濁度を有する、請求項187から203のいずれか一項に記載の組成物。 204. The composition of any one of claims 187-203, having a turbidity in the range of about 150 FNU to about 0.0 FNU, preferably about 50 FNU or less, more preferably about 25 FNU or less. (a)約50～約300mMの濃度の糖、好ましくは、約150mMの濃度のスクロース;
(b)約10mM～約200mMの濃度の塩、好ましくは、約75mMの濃度のNaCl;及び/又は
(c)濃度1mM～約100mMの緩衝剤、好ましくは、約10mMの濃度のNa3PO4
をさらに含む、請求項175から204のいずれか一項に記載の組成物。 (a) sugar at a concentration of about 50 to about 300 mM, preferably sucrose at a concentration of about 150 mM;
(b) salt at a concentration of about 10mM to about 200mM, preferably NaCl at a concentration of about 75mM; and/or
(c) a buffer at a concentration of 1mM to about 100mM, preferably Na 3 PO 4 at a concentration of about 10mM;
205. The composition of any one of claims 175-204, further comprising: 約pH7.0～約pH8.0の範囲、好ましくは、約pH7.4のpHを有する、請求項175から204のいずれか一項に記載の組成物。 205. A composition according to any one of claims 175 to 204, having a pH in the range of about pH 7.0 to about pH 8.0, preferably about pH 7.4. 凍結乾燥された組成物である、請求項175から200のいずれか一項に記載の組成物。 201. A composition according to any one of claims 175 to 200, which is a lyophilized composition. 凍結乾燥された組成物が、約10%未満の水含有量を有し、好ましくは、凍結乾燥された組成物が、約0.5%～5%の水含有量を有する、請求項206に記載の組成物。 207. The lyophilized composition has a water content of less than about 10%, preferably the lyophilized composition has a water content of about 0.5% to 5%. Composition. RNAの少なくとも70%、75%、80%、85%、90%又は95%が、約5℃の温度で液体として保存後少なくとも約2週間未変化である、請求項187から205のいずれか一項に記載の組成物。 Any one of claims 187-205, wherein at least 70%, 75%, 80%, 85%, 90% or 95% of the RNA is unchanged for at least about 2 weeks after storage as a liquid at a temperature of about 5°C. The composition described in Section. RNAの少なくとも70%、75%、80%、85%、90%又は95%が、約5℃の温度で液体として保存後約2週間～約1カ月間、2カ月間、3カ月間、4カ月間、5カ月間、6カ月間又は1年間未変化である、請求項208に記載の組成物。 At least 70%, 75%, 80%, 85%, 90% or 95% of the RNA remains stable for about 2 weeks to about 1 month, 2 months, 3 months, 4 209. The composition of claim 208, which remains unchanged for 1 month, 5 months, 6 months or 1 year. RNAの少なくとも80%が、約5℃の温度で液体として約2週間の保存後未変化である、請求項208に記載の組成物。 209. The composition of claim 208, wherein at least 80% of the RNA is unchanged after storage as a liquid for about 2 weeks at a temperature of about 5<0>C. RNA及びRNAを封入する脂質ベースの担体が、少なくとも1つの精製工程により、好ましくは、TFFの少なくとも1つの工程及び/又は清澄化の少なくとも1つの工程及び/又は濾過の少なくとも1つの工程によって精製されている、請求項187から210のいずれか一項に記載の組成物。 The RNA and the lipid-based carrier encapsulating the RNA are purified by at least one purification step, preferably by at least one step of TFF and/or at least one step of clarification and/or at least one step of filtration. 211. The composition of any one of claims 187-210, wherein 請求項109から174のいずれか一項に記載のRNA及び/又は請求項165から200のいずれか一項に記載の組成物を含む、ワクチン。 A vaccine comprising an RNA according to any one of claims 109 to 174 and/or a composition according to any one of claims 165 to 200. コロナウイルスに対する、好ましくは、コロナウイルスSARS-CoV-2に対する、適応免疫応答、好ましくは、防御的適応免疫応答を誘発する、請求項212に記載のワクチン。 213. A vaccine according to claim 212, which induces an adaptive immune response, preferably a protective adaptive immune response, against a coronavirus, preferably against coronavirus SARS-CoV-2. 請求項109から181のいずれか一項に記載のRNAの複数若しくは少なくとも1つより多く、又は請求項182から104のいずれか一項に記載の組成物の複数若しくは少なくとも1つより多くを含む多価ワクチンである、請求項212又は213に記載のワクチン。 A composition comprising more than one or more of the RNAs according to any one of claims 109 to 181 or more than one or more of the compositions according to any one of claims 182 to 104. 214. The vaccine of claim 212 or 213, which is a valent vaccine. 請求項109から174のいずれか一項に記載のRNA及び/又は請求項182から104のいずれか一項に記載の組成物、及び/又は請求項105から107のいずれか一項に記載のワクチンを含み、場合により、溶解のための液体ビヒクルを含み、場合により、成分の投与及び投薬量についての情報を提供する技術指示書を含む、キット又はパーツのキット。 RNA according to any one of claims 109 to 174 and/or the composition according to any one of claims 182 to 104 and/or the vaccine according to any one of claims 105 to 107 and optionally a liquid vehicle for dissolution and optionally technical instructions providing information about the administration and dosage of the components. 医薬としての使用のための、請求項109から174のいずれか一項に記載のRNA、請求項175から211のいずれか一項に記載の組成物、請求項212から214のいずれか一項に記載のワクチン、請求項215に記載のキット又はパーツのキット。 RNA according to any one of claims 109 to 174, a composition according to any one of claims 175 to 211, a composition according to any one of claims 212 to 214, for use as a medicament. 216. A vaccine according to claim 215, a kit or kit of parts according to claim 215. コロナウイルス、好ましくは、SARS-CoV-2コロナウイルスの感染、又はこのような感染、好ましくは、COVID-19と関連する障害の処置又は予防における使用のための、請求項109から174のいずれか一項に記載のRNA、請求項175から211のいずれか一項に記載の組成物、請求項212から214のいずれか一項に記載のワクチン、請求項215に記載のキット又はパーツのキット。 Any of claims 109 to 174 for use in the treatment or prevention of infection with a coronavirus, preferably the SARS-CoV-2 coronavirus, or a disorder associated with such an infection, preferably COVID-19. An RNA according to claim 1, a composition according to any one of claims 175 to 211, a vaccine according to any one of claims 212 to 214, a kit or kit of parts according to claim 215. 障害を処置又は予防する方法であって、それを必要とする対象に、請求項109から174のいずれか一項に記載のRNA、請求項175から211のいずれか一項に記載の組成物、請求項212から214のいずれか一項に記載のワクチン、及び／又は請求項215に記載のキット若しくはパーツのキットを適用するか、又は投与することを含む、方法。 A method of treating or preventing a disorder, wherein the RNA of any one of claims 109 to 174, the composition of any one of claims 175 to 211 is administered to a subject in need thereof, 216. A method comprising applying or administering a vaccine according to any one of claims 212 to 214 and/or a kit or kit of parts according to claim 215. 障害が、コロナウイルス、好ましくは、SARS-CoV-2コロナウイルスの感染、又はこのような感染、好ましくは、COVID-19と関連する障害である、請求項218に記載の障害を処置又は予防する方法。 Treating or preventing a disorder according to claim 218, wherein the disorder is an infection of a coronavirus, preferably the SARS-CoV-2 coronavirus, or a disorder associated with such an infection, preferably COVID-19. Method. SARS-CoV-2コロナウイルス感染又はこのような感染、好ましくは、COVID-19と関連する障害を予防する方法としてさらに定義される、請求項218又は219に記載の障害を処置又は予防する方法。 220. A method of treating or preventing a disorder according to claim 218 or 219, further defined as a method of preventing a SARS-CoV-2 coronavirus infection or a disorder associated with such an infection, preferably COVID-19. SARS-CoV-2コロナウイルス感染又はこのような感染と関連する障害を予防する方法としてさらに定義され、感染が、B.1.1.529(オミクロン、南アフリカ)(BA.1_v1、BA.1_v0、B.1.1.529、BA.2、BA.1_v2、BA.1_v3、BA.1_v4、BA.1_v5を含む)、B.1.351(南アフリカ)、B.1.1.7(英国)、P.1(ブラジル)、B.1.429(カリフォルニア)、B.1.525(ナイジェリア)、B.1.258(チェコ共和国)、B.1.526(ニューヨーク)、A.23.1(ウガンダ)、B.1.617.1(インド)、B.1.617.2(インド)、B.1.617.3(インド)、P.2(ブラジル)、C37.1(ペルー)及びB.1.1.621から選択されるSARS-CoV-2分離株によるものである、請求項212に記載の障害を処置又は予防する方法。 Further defined as a method of preventing SARS-CoV-2 coronavirus infection or disorders associated with such infection, infection is caused by B.1.1.529 (Omicron, South Africa) (BA.1_v1, BA.1_v0, B. 1.1.529, BA.2, BA.1_v2, BA.1_v3, BA.1_v4, BA.1_v5), B.1.351 (South Africa), B.1.1.7 (UK), P.1 (Brazil), B.1.429 (California), B.1.525 (Nigeria), B.1.258 (Czech Republic), B.1.526 (New York), A.23.1 (Uganda), B.1.617.1 (India), B.1.617.2 (India), B.1.617.3 (India), P.2 (Brazil), C37.1 (Peru) and B.1.1.621. 212. A method of treating or preventing the disorder described in 212. SARS-CoV-2コロナウイルス感染又はこのような感染と関連する障害を予防する方法としてさらに定義され、感染が、請求項1から33のいずれか一項に記載のアミノ酸置換、欠失又は挿入を含むSARS-CoV-2分離株によるものである、請求項212に記載の障害を処置又は予防する方法。 Further defined as a method of preventing a SARS-CoV-2 coronavirus infection or a disorder associated with such infection, wherein the infection comprises an amino acid substitution, deletion or insertion according to any one of claims 1 to 33. 213. A method of treating or preventing a disorder according to claim 212, which is caused by a SARS-CoV-2 isolate comprising: 必要とする対象が、哺乳類対象、好ましくは、ヒト対象である、請求項218から219のいずれか一項に記載の障害を処置又は予防する方法。 220. A method of treating or preventing a disorder according to any one of claims 218 to 219, wherein the subject in need thereof is a mammalian subject, preferably a human subject. ヒト対象が、好ましくは、少なくとも50歳、60歳、65歳、又は70歳の年齢の、高齢ヒト対象である、請求項224に記載の障害を処置又は予防する方法。 225. A method of treating or preventing a disorder according to claim 224, wherein the human subject is an elderly human subject, preferably at least 50, 60, 65, or 70 years of age. ヒト対象が、好ましくは、3歳以下、2歳以下、1.5歳以下、1歳(12カ月)以下、9カ月以下、6カ月以下若しくは3カ月以下の年齢の、又は6カ月～2歳の年齢の、新生児又は幼児である、請求項224に記載の障害を処置又は予防する方法。 The human subject is preferably less than 3 years old, less than 2 years old, less than 1.5 years old, less than 1 year (12 months), less than 9 months, less than 6 months or less than 3 months old, or between 6 months and 2 years old. 225. A method of treating or preventing the disorder of claim 224 in a newborn or infant. ヒト対象が、18～60歳の年齢である、請求項224に記載の障害を処置又は予防する方法。 225. A method of treating or preventing a disorder according to claim 224, wherein the human subject is between the ages of 18 and 60 years. ヒト対象が、60歳未満、55歳未満、50歳未満、45歳未満又は40歳未満の年齢である、請求項224に記載の障害を処置又は予防する方法。 225. A method of treating or preventing a disorder according to claim 224, wherein the human subject is less than 60 years of age, less than 55 years of age, less than 50 years of age, less than 45 years of age, or less than 40 years of age. ヒト対象が、約12～60歳;12～55歳;12～50歳;12～45歳;又は12～40歳の年齢である、請求項228に記載の障害を処置又は予防する方法。 229. A method of treating or preventing a disorder according to claim 228, wherein the human subject is between about 12 and 60 years old; 12 and 55 years old; 12 and 50 years old; 12 and 45 years old; or 12 and 40 years old. ヒト対象が、約18～55歳;18～50歳;18～45歳;又は18～40歳の年齢である、請求項228に記載の障害を処置又は予防する方法。 229. A method of treating or preventing a disorder according to claim 228, wherein the human subject is between about 18 and 55 years old; 18 and 50 years old; 18 and 45 years old; or 18 and 40 years old. ヒト対象が、約12～60歳;12～55歳;12～50歳;12～45歳;又は12～40歳の年齢である、請求項224に記載の障害を処置又は予防する方法。 225. A method of treating or preventing a disorder according to claim 224, wherein the human subject is between about 12 and 60 years old; 12 and 55 years old; 12 and 50 years old; 12 and 45 years old; or 12 and 40 years old. ヒト対象が、約18～60歳;18～55歳;18～50歳;18～45歳;又は18～40歳の年齢である、請求項224に記載の障害を処置又は予防する方法。 225. A method of treating or preventing a disorder according to claim 224, wherein the human subject is between about 18 and 60 years old; 18 and 55 years old; 18 and 50 years old; 18 and 45 years old; or 18 and 40 years old. ヒト対象が、約18～50歳の年齢である、請求項224に記載の障害を処置又は予防する方法。 225. A method of treating or preventing a disorder according to claim 224, wherein the human subject is between the ages of about 18 and 50 years. COVID-19疾患のうちの1つ以上の症状の重症度を低減する、請求項225に記載の方法。 226. The method of claim 225, wherein the method reduces the severity of one or more symptoms of COVID-19 disease. 対象が、入院、集中治療室への入院、酸素の補給を用いた処置及び/又は人工呼吸器を用いた処置を必要とする可能性を低減する、請求項234に記載の方法。 235. The method of claim 234, which reduces the likelihood that the subject will require hospitalization, admission to an intensive care unit, treatment with supplemental oxygen, and/or treatment with a ventilator. 対象が、重篤又は中程度のCOVID-19疾患を発症する可能性を低減する、請求項234に記載の方法。 235. The method of claim 234, wherein the method reduces the likelihood that the subject will develop severe or moderate COVID-19 disease. 少なくとも約6カ月間、対象における重篤なCOVID-19疾患を予防する、請求項234に記載の方法。 235. The method of claim 234, wherein the method prevents severe COVID-19 disease in the subject for at least about 6 months. 対象が、発熱、呼吸困難;嗅覚の喪失及び/又は味覚の喪失を発症する可能性を低減する、請求項234に記載の方法。 235. The method of claim 234, wherein the subject reduces the likelihood of developing fever, difficulty breathing; loss of smell and/or loss of taste. 対象における抗体、CD4+T細胞応答又はCD8+T細胞応答を刺激する方法としてさらに定義される、請求項218から238のいずれか一項に記載の方法。 239. The method of any one of claims 218-238, further defined as a method of stimulating an antibody, CD4+ T cell response or CD8+ T cell response in a subject. 対象における中和抗体応答を刺激する方法としてさらに定義される、請求項218から238のいずれか一項に記載の方法。 239. The method of any one of claims 218-238, further defined as a method of stimulating a neutralizing antibody response in a subject. 対象が、約1μg～約50μgのRNA;約2μg～約50μgのRNA;約2μg～約25μgのRNA;約5μg～約50μgのRNA;約5μg～約25μgのRNA;約10μg～約50μgのRNA;約10μg～約30μgのRNA;又は約12μgのRNAを含む組成物を投与される、請求項218から240のいずれか一項に記載の方法。 The target is about 1μg to about 50μg RNA; about 2μg to about 50μg RNA; about 2μg to about 25μg RNA; about 5μg to about 50μg RNA; about 5μg to about 25μg RNA; about 10μg to about 50μg RNA 241. The method of any one of claims 218-240, wherein a composition comprising: about 10 μg to about 30 μg of RNA; or about 12 μg of RNA is administered. 投与が、組成物が投与される対象の100%においてセロコンバージョンをもたらす、請求項241に記載の方法。 242. The method of claim 241, wherein administering results in seroconversion in 100% of subjects to whom the composition is administered. 対象が、SARS CoV-2に以前に感染した、請求項218から240のいずれか一項に記載の方法。 241. The method of any one of claims 218-240, wherein the subject was previously infected with SARS CoV-2. 対象が、少なくとも第一のSARS CoV-2ワクチン組成物で以前に処置された、請求項218から240のいずれか一項に記載の方法。 241. The method of any one of claims 218-240, wherein the subject has been previously treated with at least a first SARS CoV-2 vaccine composition. 第一のSARS CoV-2ワクチン組成物が、mRNAワクチンであった、請求項244に記載の方法。 245. The method of claim 244, wherein the first SARS CoV-2 vaccine composition was an mRNA vaccine. 第一のSARS CoV-2ワクチン組成物が、CVnCoV;BNT162;及び/又はmRNA-1273であった、請求項245に記載の方法。 246. The method of claim 245, wherein the first SARS CoV-2 vaccine composition was CVnCoV; BNT162; and/or mRNA-1273. 第一のSARS CoV-2ワクチン組成物が、タンパク質サブユニットワクチンであった、請求項244に記載の方法。 245. The method of claim 244, wherein the first SARS CoV-2 vaccine composition was a protein subunit vaccine. 第一のSARS CoV-2ワクチン組成物が、NVX-CoV2373又はCOVAXであった、請求項247に記載の方法。 248. The method of claim 247, wherein the first SARS CoV-2 vaccine composition was NVX-CoV2373 or COVAX. 第一のSARS CoV-2ワクチン組成物が、アデノウイルスベクターワクチンであった、請求項244に記載の方法。 245. The method of claim 244, wherein the first SARS CoV-2 vaccine composition was an adenovirus vector vaccine. 第一のSARS CoV-2ワクチン組成物が、ADZ1222又はAd26.COV-2.Sであった、請求項249に記載の方法。 250. The method of claim 249, wherein the first SARS CoV-2 vaccine composition was ADZ1222 or Ad26.COV-2.S. 対象が、検出可能なSARS CoV-2 Sタンパク質結合抗体を有する、請求項218から240のいずれか一項に記載の方法。 241. The method of any one of claims 218-240, wherein the subject has detectable SARS CoV-2 S protein binding antibodies.
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