JP2024500367A - Ｐｃｓｋ９を標的とするアンチセンスコンジュゲートの経口送達 - Google Patents

Ｐｃｓｋ９を標的とするアンチセンスコンジュゲートの経口送達 Download PDF

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Abstract

本開示は、アンチセンスオリゴヌクレオチド（例えば、ＣＩＶＩ００８）および経口送達剤（５-ＣＮＡＣなど）を含む経口送達のための医薬組成物を提供する。いくつかの局面においては、本開示は、ＣＩＶＩ００８と５-ＣＮＡＣ、および任意選択的にスタチンの乾式混合物を含むカプセルを提供する。【選択図】なし

Description

関連出願の相互参照および参照としての組み込み
本ＰＣＴ出願は、２０２０年１２月１１日付け出願の米国仮出願第６３／１２４，５８１号、２０２１年１月７日付け出願の米国仮出願第６３／１３４，８８４号、２０２１年４月２２日付け出願の米国仮出願第６３／１７８，３４０号、および２０２１年９月２２日付け出願の米国仮出願第６３／２６１，５０５号に基づく優先権を主張するものである。それら優先出願の開示内容全体が参照として本明細書に組み入れられる。
電子提出配列リストの参照
本願と共に提出する電子提出配列リストのＡＳＣＩＩテキストファイル（ファイル名：４００９－０２１ＰＣ０４＿Ｓｅｑｕｅｎｃｅ＿ｌｉｓｔｉｎｇ＿ＳＴ２５．ｔｘｔ；サイズ：２６，２３０バイト；および作成日：２０２１年１２月９日）の内容は、その全体が参照として本明細書に組み入れられる。
［技術分野］
本開示は、細胞内のプロ蛋白質変換酵素サブチリシン／ケキシン９型（ＰＣＳＫ９）ｍＲＮＡを標的とし、ＰＣＳＫ９発現を低下させるアンチセンスオリゴヌクレオチドコンジュゲートの経口製剤に関するものである。ＰＣＳＫ９発現の低下は、高コレステロール血症および関連する障害などの様々な医学的障害について有益である。
プロ蛋白質変換酵素サブチリシン／ケキシン９型（ＰＣＳＫ９）は、低密度リポ蛋白質コレステロール（ＬＤＬ－Ｃ）を減少させるための治療標的として注目されるようになっている。ＰＣＳＫ９はＬＤＬ受容体の分解を促進し、その結果、高いＰＣＳＫ９活性を有する個体において高ＬＤＬ－Ｃを引き起こす。Ｌｉｎｄｈｏｌｍら（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ（２０１２）；２０ ２、３７６－３８１）は、非ヒト霊長類においてＬＤＬ－Ｃを持続的に低下させるＰＣＳＫ９標的ＬＮＡアンチセンスオリゴヌクレオチドについて報告している。用いる化合物は１４マーのＳＰＣ５００１とよばれる化合物であり、これについても国際公開公報ＷＯ２０１１／００９６９７に開示されている。この化合物は、深刻な腎毒性および急性腎障害を引き起こし臨床試験中に中止されたものである。例えば、ｖａｎ ＰｏｅｌｇｅｅｓｔらのＡｍｅｒｉｃａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｋｉｄｎｅｙ Ｄｉｓｅａｓｅ ６２（４）：７９６－８００（２０１３）を参照のこと。
薬理学的活性物質の経口送達は、一般的に最適な送達経路である；その理由は、利便性が高く、比較的容易であり、また一般的に無痛であるため、他の送達法に比べて患者の薬剤服用順守が高い。しかし、消化管内で変動するｐＨ、強力な消化酵素、および活性物質非透過性消化管膜などの生物学的、化学的および物理的な障壁によって、一部の薬理学的活性物質では、哺乳動物への経口送達が問題となることもある、例えば、治療核酸（アンチセンスオリゴヌクレオチドなど）の経口送達。すなわち、治療核酸（アンチセンスオリゴヌクレオチドなど）の経口送達を可能にするシステムの開発が必要である。
本開示は、アンチセンスオリゴマー（例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチド、ＡＳＯ）、および経口送達剤（例えば、ＳＮＡＣ、Ｃ１０、５－ＣＮＡＣ、またはその塩、その水和物、またはその溶媒和物、あるいはそれらの組み合わせ）を含む医薬組成物を提供するが、ここで該アンチセンスオリゴマーは連続する長さ１６～２２のヌクレオチドであり、ここで該アンチセンスオリゴマーの配列は、配列番号：３１の配列に１００％相補的である連続する長さ１６ヌクレオチドの配列を含み、ここで該アンチセンスオリゴマーが少なくとも１つのＬＮＡユニットを含むギャップマーであり、およびここで該アンチセンスオリゴマーは、ＰＣＳＫ９をコードするＲＮＡを標的とする。いくつかの局面においては、該ＲＮＡは、プレｍＲＮＡ、プレｍＲＮＡのスプライスバリアント、成熟ｍＲＮＡ、あるいはその対立遺伝子バリアントまたはその変異体である。いくつかの局面においては、該アンチセンスオリゴマーはエクソン内の配列を標的とする。いくつかの局面においては、該アンチセンスオリゴマーはイントロン内の配列を標的とする。いくつかの局面においては、該アンチセンスオリゴマーは、エクソンとイントロンの間の境界部を含む配列を標的とする。いくつかの局面においては、該アンチセンスオリゴマーは、ＰＣＳＫ９をコードするオープンリーディングフレームの５’末端の上流配列（例えば、５’ＵＴＲ）を標的とする。いくつかの局面においては、該アンチセンスオリゴマーは、ＰＣＳＫ９をコードするオープンリーディングフレームの３’末端の下流配列（例えば、３’ＵＴＲ）を標的とする。
いくつかの局面においては、該ＬＮＡは、オキシ－ＬＮＡ、チオ－ＬＮＡ、アミノ－５ＬＮＡ、５’－メチル－ＬＮＡ、ＥＮＡ、ｃＥＴ、ｃＭＯＥまたはそれらの組み合わせである。いくつかの局面においては、該ＬＮＡは、β－Ｄ配位またがα－Ｌ配位の立体異性体である。いくつかの局面においては、該アンチセンスオリゴマーは、少なくとも１つのｃＥＴユニットを含む。いくつかの局面においては、該アンチセンスオリゴマーは、２つ、３つ、４つ、５つ、６つまたは７つのＬＮＡユニットを含む。いくつかの局面においては、該アンチセンスオリゴマー中のすべてのＬＮＡユニットが同一配位の立体異性体である。いくつかの局面においては、該アンチセンスオリゴマー内のすべてのＬＮＡユニットがβ－Ｄ－オキシＬＮＡユニットである。いくつかの局面においては、該アンチセンスオリゴマー内のすべてのＬＮＡユニットがα－Ｌ－オキシ－ＬＮＡユニットである。
いくつかの局面においては、該アンチセンスオリゴマーの配列は、少なくとも１種類のホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、メチルホスホン酸、ホスホロアミダート、またはボラノリン酸であるヌクレオシド間結合を含む。いくつかの局面においては、すべてのヌクレオシド間結合がホスホロチオエートである。いくつかの局面においては、該ヌクレオシド間結合のうちの１つ以上が、Ｒコンフォメーションのキラル中心および／またはＳコンフォメーションのキラル中心を含む。いくつかの局面においては、すべてのキラル中心がＲコンフォメーションである。いくつかの局面においては、すべてのキラル中心がＳコンフォメーションである。いくつかの局面においては、該アンチセンスオリゴマーおよび配列番号：３１のオリゴマーは、対応するＬＮＡ不含アンチセンスオリゴマーを含む対応する二本鎖に関して熱安定性が向上した二本鎖を形成し得る。
本開示はまた、アンチセンスオリゴヌクレオチドコンジュゲートおよび経口送達剤（例えば、ＳＮＡＣ、Ｃ１０、５－ＣＮＡＣ、またはその塩、その水和物、またはその溶媒和物、あるいはそれらの組み合わせ）を含む医薬組成物を提供するが、ここで該アンチセンスオリゴヌクレオチドコンジュゲートは以下の（ｉ）および（ｉｉ）を含む：
（ｉ）連続する１６～２２のヌクレオチドであるアンチセンスオリゴマー；
ここで該アンチセンスオリゴマーの配列が、配列番号：３１の配列に１００％相補的である連続する長さ１６ヌクレオチドの配列を含み；
およびここで該アンチセンスオリゴマーが、少なくとも１つのＬＮＡユニットを含むギャップマーであり；
および
（ｉｉ）該アンチセンスオリゴマーに共有結合している少なくとも１種類の非ヌクレオチド部分または非ポリヌクレオチド部分であって、直接的に、あるいは該連続するオリゴマー配列との間に配置されるリンカーを介して結合している非ヌクレオチド部分または非ポリヌクレオチド部分；
ここで該アンチセンスオリゴヌクレオチドコンジュゲートは、ＰＣＳＫ９をコードするＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）を標的とする。
いくつかの局面においては、該ＲＮＡは、上記で開示されるようなプレｍＲＮＡ、プレｍＲＮＡのスプライスバリアント、成熟ｍＲＮＡ、あるいはその対立遺伝子バリアントまたはその変異体である。
いくつかの局面においては、該非ヌクレオチド部分または非ポリヌクレオチド部分は、該アンチセンスオリゴマーの５’末端または３’末端に連結する肝臓標的化部分である。いくつかの局面においては、該肝臓標的化部分はリンカーを介して該アンチセンスオリゴマーに連結される。いくつかの局面においては、該肝臓標的化部分は、ガラクトース、乳糖、Ｎ－アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）、マンノース、マンノース－６－リン酸、およびそれらの組み合わせから成る群から選択される糖質を含む糖質コンジュゲート部分を含む。
いくつかの局面においては、該糖質コンジュゲート部分は直鎖状糖質ポリマーではない。いくつかの局面においては、該糖質コンジュゲート部分は、１つ、２つ、３つ、または４つの糖質部分を含む糖質基である。いくつかの局面においては、すべての糖質部分が同一である。いくつかの局面においては、少なくとも１つの糖質部分が、残りの糖質部分とは異なる（非同一である）。いくつかの局面においては、該糖質コンジュゲート部分は、アシアロ糖蛋白質受容体を標的とする少なくとも１つのコンジュゲート部分を含む。いくつかの局面においては、アシアロ糖蛋白質受容体を標的とするコンジュゲート部分は、一価、二価、三価、または四価のＧａｌＮＡｃクラスターを含む。いくつかの局面においては、ＧａｌＮＡｃクラスター中の各ＧａｌＮＡｃがスペーサーを介して分岐点基に連結する。いくつかの局面においては、該分岐点基は、ペプチド、例えば、ジリジンを含む。いくつかの局面においては、該スペーサーはＰＥＧスペーサーを含む。いくつかの局面においては、該リンカーは、Ｃ６～Ｃ１２アミノアルキル基を含む、あるいは１～６ヌクレオチドを含む生体内開裂可能リン酸ヌクレオチドリンカーを含む。いくつかの局面においては、該三価ＧａｌＮＡｃクラスターは、Ｃｏｎｊ１、Ｃｏｎｊ２、Ｃｏｎｊ１ａ、またはＣｏｎｊ２ａ ＧａｌＮＡｃコンジュゲート部分を含む。いくつかの局面においては、該非ヌクレオチド部分または非ポリヌクレオチド部分は、共有結合を介してアンチセンスオリゴマーに共有結合している。
本開示はまた、図１８Ａに示されるような配列番号：１８または配列番号：１９のアンチセンスオリゴヌクレオチドコンジュゲートおよび経口送達剤（例えば、ＳＮＡＣ、Ｃ１０、５－ＣＮＡＣ、またはその塩、その水和物、またはその溶媒和物、あるいはそれらの組み合わせ）を含む医薬組成物を提供するが、ここで該アンチセンスオリゴヌクレオチドコンジュゲートは、ＰＣＳＫ９をコードするＲＮＡを標的とする。いくつかの局面においては、該ＲＮＡは、プレｍＲＮＡ、プレｍＲＮＡのスプライスバリアント、成熟ｍＲＮＡ、あるいはその対立遺伝子バリアントまたはその変異体である。いくつかの局面においては、該アンチセンスオリゴマーはエクソン内の配列を標的とする。いくつかの局面においては、該アンチセンスオリゴマーはイントロン内の配列を標的とする。いくつかの局面においては、該アンチセンスオリゴマーは、エクソンとイントロンの間の境界部を含む配列を標的とする。いくつかの局面においては、該アンチセンスオリゴマーは、ＰＣＳＫ９をコードするオープンリーディングフレームの５’末端の上流配列を標的とする。いくつかの局面においては、該アンチセンスオリゴマーは、ＰＣＳＫ９をコードするオープンリーディングフレームの３’末端の下流配列を標的とする。
いくつかの局面においては、本明細書に開示の医薬組成物は、少なくとも１種類の薬学的に許容可能な添加剤またはそれらの組み合わせをさらに含む。いくつかの局面においては、該少なくとも１種類の薬学的に許容可能な添加剤またはそれらの組み合わせは、以下から成る群から選択される：
ｐＨ調節剤、防腐剤、香味料；味マスキング剤；香料；保湿剤；等張化剤；着色剤；界面活性剤；可塑剤；滑沢剤；流動化補助剤；圧縮補助剤；可溶化剤；賦形剤；希釈剤；リン酸緩衝液の塩；クエン酸、グリコール、分散剤、クロスポビドン、ポビドン、またはそれらの任意の組み合わせ。いくつかの局面においては、本明細書に開示の医薬組成物は、以下から成る群から選択される治療剤をさらに含む：
スタチン、胆汁吸着樹脂、ニコチン酸、フィブリン酸誘導体、プロブコール、ネオマイシン、デキストロチロキシン、植物スタノールエステル、コレステロール吸収阻害剤、インプリタピド、胆汁酸トランスポーターの阻害剤、肝ＣＹＰ７ａの制御因子、エストロゲン補充療法剤、抗炎症剤、またはそれらの組み合わせ。いくつかの局面においては、該スタチンは、以下から成る群から選択される：
ロバスタチン（ｌｏｖａｓｔａｔｉｎ）、セリバスタチン、プラバスタチン、アトルバスタチン、シンバスタチン、ロスバスタチン、フルバスタチン、およびそれらの組み合わせ。
本開示はまた、対象におけるＰＣＳＫ９の異常な発現レベルおよび／または活性に起因する疾患または病態を治療する方法を提供するが、ここで該方法は、有効量の本明細書に開示の医薬組成物、例えば、本開示のアンチセンスオリゴヌクレオチドコンジュゲート（例えば、ＣＩＶＩ００８）および経口送達剤（例えば、ＳＮＡＣ、Ｃ１０、５－ＣＮＡＣ、またはその塩、その水和物、またはその溶媒和物、あるいはそれらの組み合わせ）を含む組成物を、それを必要とする対象に投与することを含み、ここで該医薬組成物の投与によって、対象の血清ＰＣＳＫ９レベルを低下させ、および／または血清ＬＤＬコレステロールレベルを低下させる。いくつかの局面においては、該ＰＣＳＫ９は、（ｉ）ＰＣＳＫ９対立遺伝子バリアント；（ｉｉ）ＰＣＳＫ９変異体；または（ｉｉｉ）ＰＣＳＫ９スプライスバリアントである。いくつかの局面においては、該ＰＣＳＫ９変異体はＰＣＳＫ９の機能獲得変異体である。
いくつかの局面においては、該疾患または病態は、アテローム性動脈硬化症、高コレステロール血症、ＨＤＬ／ＬＤＬコレステロールの不均衡、脂質異常症、冠動脈疾患（ＣＡＤ）、および冠動脈性心疾患（ＣＨＤ）から成る群から選択される。いくつかの局面においては、脂質異常症は家族性高脂血症（ＦＣＨＬ）または後天性高脂血症である。いくつかの局面においては、高コレステロール血症は家族性高コレステロール血症またはスタチン耐性高コレステロール血症である。
いくつかの局面においては、本明細書に開示の治療法は、以下から成る群から選択される治療剤の投与をさらに含む：
スタチン、胆汁吸着樹脂、ニコチン酸、フィブリン酸誘導体、プロブコール、ネオマイシン、デキストロチロキシン、植物スタノールエステル、コレステロール吸収阻害剤、インプリタピド、胆汁酸トランスポーターの阻害剤、肝ＣＹＰ７ａの制御因子、エストロゲン補充療法剤、抗炎症剤、またはそれらの組み合わせ。いくつかの局面においては、該スタチンは、以下から成る群から選択される：
ロバスタチン（ｌｏｖａｓｔａｔｉｎ）、セリバスタチン、プラバスタチン、アトルバスタチン、シンバスタチン、ロスバスタチン、フルバスタチン、およびそれらの組み合わせ。
いくつかの局面においては、本明細書に開示の医薬組成物を経口投与する。いくつかの局面においては、該医薬組成物を単回投与する。いくつかの局面においては、該医薬組成物を複数回投与する。
本開示はまた、対象におけるアテローム性動脈硬化症、高脂血症、高コレステロール血症、ＨＤＬ／ＬＤＬコレステロールの不均衡、冠動脈疾患（ＣＡＤ）、または冠動脈性心疾患（ＣＨＤ）から成る群から選択される障害を治療する方法を提供するが、ここで該方法は、それを必要とする対象に、有効量の本明細書に開示の医薬組成物、例えば、本開示のアンチセンスオリゴヌクレオチドコンジュゲート（例えば、ＣＩＶＩ００８）および経口送達促進剤（例えば、ＳＮＡＣ、Ｃ１０、５－ＣＮＡＣ、またはその塩、その水和物、またはその溶媒和物、あるいはそれらの組み合わせ）を含む組成物を投与することを含む。
本開示はまた、細胞におけるＰＣＳＫ９の発現レベルおよび／またはＰＣＳＫ９の活性をインビトロまたはインビボで低下させる方法を提供するが、ここで該方法は、有効量の本明細書に開示の医薬組成物、例えば、本開示のアンチセンスオリゴヌクレオチドコンジュゲート（例えば、ＣＩＶＩ００８）および経口送達促進剤（例えば、ＳＮＡＣ、Ｃ１０、５－ＣＮＡＣ、またはその塩、その水和物、またはその溶媒和物、あるいはそれらの組み合わせ）を含む組成物を細胞に投与することを含む。
また、対象においてＰＣＳＫ９発現レベルおよび／またはＰＣＳＫ９活性を低下させる方法を提供するが、ここで該方法は、それを必要とする対象に、有効量の本明細書に開示の医薬組成物、例えば、本開示のアンチセンスオリゴヌクレオチドコンジュゲート（例えば、ＣＩＶＩ００８）および経口送達促進剤（例えば、ＳＮＡＣ、Ｃ１０、５－ＣＮＡＣ、またはその塩、その水和物、またはその溶媒和物、あるいはそれらの組み合わせ）を含む組成物を投与することを含む。
本開示はまた、対象においてコレステロールレベルを低下させる方法を提供するが、ここで該方法は、それを必要とする対象に、有効量の本明細書に開示の医薬組成物、例えば、本開示のアンチセンスオリゴヌクレオチドコンジュゲート（例えば、ＣＩＶＩ００８）および経口送達促進剤（例えば、ＳＮＡＣ、Ｃ１０、５－ＣＮＡＣ、またはその塩、その水和物、またはその溶媒和物、あるいはそれらの組み合わせ）を含む組成物を投与することを含む。
また、医薬組成物を製造する方法を提供するが、ここで該方法は、以下の（ｉ）および（ｉｉ）を混合することを含む：
（ｉ）連続する長さ１６～２２のヌクレオチドのアンチセンスオリゴマー；
ここで該アンチセンスオリゴマーの配列が、配列番号：３１の配列に１００％相補的である連続する長さ１６ヌクレオチドの配列を含み；
ここで該アンチセンスオリゴマーが、少なくとも１つのＬＮＡユニットを含むギャップマーであり；
およびここで該アンチセンスオリゴマーが、ＰＣＳＫ９をコードするＲＮＡを標的とし；
および
（ｉｉ）経口送達剤（例えば、ＳＮＡＣ、Ｃ１０、５－ＣＮＡＣ、またはその塩、その水和物、またはその溶媒和物、あるいはそれらの組み合わせ）。
本開示はまた、医薬組成物を製造する方法を提供するが、ここで該方法は、以下の（ｉ）および（ｉｉ）を混合することを含む：
（ｉ）以下の（ａ）および（ｂ）を含むコンジュゲート：
（ａ）連続する１６～２２のヌクレオチドであるアンチセンスオリゴマー；
ここで該アンチセンスオリゴマーの配列が、配列番号：３１の配列に１００％相補的である連続する長さ１６ヌクレオチドの配列を含み；
およびここで該アンチセンスオリゴマーが、少なくとも１つのＬＮＡユニットを含むギャップマーであり；
および
（ｂ）該アンチセンスオリゴマーに共有結合している少なくとも１種類の非ヌクレオチド部分または非ポリヌクレオチド部分であって、直接的に、あるいは該連続するオリゴマー配列との間に配置されるリンカーを介して結合している非ヌクレオチド部分または非ポリヌクレオチド部分；
ここで該アンチセンスオリゴヌクレオチドコンジュゲートは、ＰＣＳＫ９をコードするＲＮＡを標的とし；
ならびに
（ｉｉ）経口送達剤（例えば、ＳＮＡＣ、Ｃ１０、５－ＣＮＡＣ、またはその塩、その水和物、またはその溶媒和物、あるいはそれらの組み合わせ）。
いくつかの局面においては、該アンチセンスオリゴマーの配列は、配列番号：２６（すなわち、配列番号：３１と同一の長さを有する配列番号：３１に１００％相補的な配列）を含む、あるいは配列番号：２６から成る。いくつかの局面においては、該アンチセンスオリゴマーの配列は、配列番号：２または配列番号：３（すなわち、配列番号：２６の塩基配列を有する配列であるが、特定のパターンの塩基修飾およびバックボーン修飾を含む配列）を含む、あるいは配列番号：２または配列番号：３から成る。いくつかの局面においては、アンチセンスオリゴマーコンジュゲートは、配列番号：１８または配列番号：１９を含む、あるいは配列番号：１８または配列番号：１９から成る；すなわち、ＧａｌＮＡｃ２部分と複合体化（コンジュゲート）した配列番号：２または配列番号：３。
本開示の医薬組成物および方法のいくつかの局面においては、該経口送達剤は、例えば、カプリル酸（Ｃ８）、カプリン酸（Ｃ１０）、その誘導体、その薬学的に許容可能な水和物、溶媒和物、または塩、あるいはそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの局面においては、該薬学的に許容可能な塩は、ナトリウム塩、カリウム塩、およびそれらの組み合わせである。いくつかの局面においては、該医薬組成物は固体である。
いくつかの局面においては、該医薬組成物は錠剤またはカプセルの形態である。いくつかの局面においては、該カプセルは液体カプセルである。いくつかの局面においては、該医薬組成物は腸溶性コーティングされる。いくつかの局面においては、該錠剤またはカプセルは腸溶性コーティングされる。いくつかの局面においては、該錠剤またはカプセルは、その重量が５ｍｇ～１０００ｍｇ、１０ｍｇ～５００ｍｇ、１０ｍｇ～２５０ｍｇ、１００ｍｇ～２００ｍｇ、または２５０ｍｇ～５００ｍｇである。いくつかの局面においては、錠剤またはカプセル中のアンチセンスオリゴマーまたはアンチセンスオリゴヌクレオチドコンジュゲートの量は、１ｍｇ～１００ｍｇ、５ｍｇ～１００ｍｇ、１０ｍｇ～１００ｍｇ、２０ｍｇ～１００ｍｇ、２０ｍｇ～５０ｍｇの範囲である。
いくつかの局面においては、該経口送達剤は、Ｎ－（８－（２－ヒドロキシベンゾイル）アミノ）カプリル酸の塩、水和物、または溶媒和物、あるいはそれらの組み合わせである。いくつかの局面においては、Ｎ－（８－（２－ヒドロキシベンゾイル）アミノ）カプリル酸の塩は、Ｎ－（８－（２－ヒドロキシベンゾイル）アミノ）カプリル酸のナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、およびそれらの任意の組み合わせから成る群から選択される。いくつかの局面においては、Ｎ－（８－（２－ヒドロキシベンゾイル）アミノ）カプリル酸の塩は、ナトリウム塩である。いくつかの局面においては、Ｎ－（８－（２－ヒドロキシベンゾイル）アミノ）カプリル酸の塩は、一ナトリウム塩（サルカプロザートナトリウム２０３７８７－９１－１、ＳＮＡＣ、８－（２－ヒドロキシベンズアミド）オクタン酸ナトリウム）である。いくつかの局面においては、Ｎ－（８－（２－ヒドロキシベンゾイル）アミノ）カプリル酸の塩は、二ナトリウム塩である。
いくつかの局面においては、該経口送達剤は、Ｎ－（５－クロロサリシロイル）－８－アミノカプリル酸の塩、水和物、または溶媒和物、あるいはそれらの組み合わせである。いくつかの局面においては、Ｎ－（５－クロロサリシロイル）－８－アミノカプリル酸の塩は、Ｎ－（５－クロロサリシロイル）－８－アミノカプリル酸のナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、およびそれらの任意の組み合わせから成る群から選択される。いくつかの局面においては、Ｎ－（５－クロロサリシロイル）－８－アミノカプリル酸の塩は、ナトリウム塩である。いくつかの局面においては、Ｎ－（５－クロロサリシロイル）－８－アミノカプリル酸の塩は、一ナトリウム塩（５－ＳＮＡＣ）である。いくつかの局面においては、Ｎ－（５－クロロサリシロイル）－８－アミノカプリル酸の塩は、二ナトリウム塩である。
いくつかの局面においては、該経口送達剤は、カプリン酸（Ｃ１０）の塩、水和物または溶媒和物、あるいは組み合わせである。いくつかの局面においては、カプリン酸（Ｃ１０）の塩は、カプリン酸（Ｃ１０）のナトリウム塩、カリウム塩およびカルシウム塩、およびそれらの任意の組み合わせから成る群から選択される。いくつかの局面においては、カプリン酸（Ｃ１０）の塩は、カプリン酸ナトリウムである。
いくつかの局面においては、該医薬組成物を食事の約５分前～約６０分前に投与する。いくつかの局面においては、該医薬組成物を食事の少なくとも約５分前、少なくとも約１０分前、少なくとも約１５分前、少なくとも約２０分前、少なくとも約２５分前、少なくとも約３０分前、少なくとも約３５分前、少なくとも約４０分前、少なくとも約４５分前、少なくとも約５０分前、少なくとも約５５分前、または少なくとも約６０分前に投与する。
いくつかの局面においては、該医薬組成物はｐＨ感受性コーティング剤をさらに含む。いくつかの局面においては、該ｐＨ感受性コーティング剤はｐＨ感受性ポリマーである。いくつかの局面においては、該ｐＨ感受性ポリマーは、セルロース、アクリル酸、その誘導体、またはそれらの組み合わせを含む。いくつかの局面においては、該ｐＨ感受性コーティング剤は、ｐＨ感受性ヒドロゲル、ｐＨ活性化薬剤送達システム、ｐＨ感受性リポソーム、ミセルまたは脂質ナノ粒子、ｐＨ感受性ミクロスフェア、ｐＨ感受性ナノ粒子、またはそれらの任意の組み合わせを含む。
本開示はまた、（ＧａｌＮＡｃ）３－アミノ－ヘキサメチレン－５’ホスホロチオイル）－２’－Ｏ，４’－Ｃ－メチレンアデノシリル－（３’＞５’Ｏ，Ｏ－ホスホロチオイル）－２’－Ｏ，４’－Ｃ－メチレンアデノシリル－（３’＞５’Ｏ，Ｏ－ホスホロチオイル）－２’－Ｏ，４’－Ｃ－メチレンチミジリル－（３’＞５’Ｏ，Ｏ－ホスホロチオイル）－２’－デオキシグアノシリル－（３’＞５’Ｏ，Ｏ－ホスホロチオイル）－２’－デオキシシチジニリル－（３’＞５’Ｏ，Ｏ－ホスホロチオイル）－２’－デオキシチミジリル－（３’＞５’Ｏ，Ｏ－ホスホロチオイル）－２’－デオキシアデノシリル－（３’＞５’Ｏ，Ｏ－ホスホロチオイル）－２’－デオキシシチジニリル－（３’＞５’Ｏ，Ｏ－ホスホロチオイル）－２’－デオキシアデノシリル－（３’＞５’Ｏ，Ｏ－ホスホロチオイル）－２’－デオキシアデノシリル－（３’＞５’Ｏ，Ｏ－ホスホロチオイル）－２’－デオキシアデノシリル－（３’＞５’Ｏ，Ｏ－ホスホロチオイル）－２’－デオキシアデノシリル－（３’＞５’Ｏ，Ｏ－ホスホロチオイル）－２’－デオキシシチジニリル－（３’＞５’Ｏ，Ｏ－ホスホロチオイル）－２’－Ｏ，４’－Ｃ－メチレン（５－メチル－シチジニリル）－（３’＞５’Ｏ，Ｏ－ホスホロチオイル）－２’－Ｏ，４’－Ｃ－メチレン（５－メチル－シチジニリル）－（３’＞５’Ｏ，Ｏ－ホスホロチオイル）－２’－Ｏ，４’－Ｃ－メチレンアデノシリルヘキサデカナトリウム塩、ならびにＳＮＡＣ、Ｃ１０、５－ＣＮＡＣ、その水和物、その溶媒和物、またはその塩、およびそれらの組み合わせから成る群から選択される経口送達剤を含むピルまたはカプセルを提供する。
本開示はまた、図１８Ｂに示されるようなＣＩＶＩ００８を含むピルまたはカプセルであって、かつＳＮＡＣ、Ｃ１０、５－ＣＮＡＣ、その水和物、その溶媒和物、またはその塩、およびそれらの組み合わせから成る群から選択される経口送達剤を含むピルまたはカプセルを提供する。いくつかの局面においては、該ピルまたはカプセルは、ＣＩＶＩ００８およびＳＮＡＣを含む。いくつかの局面においては、該ピルまたはカプセルは、ＣＩＶＩ００８およびＣ１０を含む。いくつかの局面においては、該ピルまたはカプセルは、ＣＩＶＩ００８および５－ＣＮＡＣを含む。
本明細書に開示の組成物および方法のいくつかの局面においては、該経口送達剤は：
Figure 2024500367000001
 であり；
ここで
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４が、独立に水素、－ＯＨ、－ＮＲ６Ｒ７、ハロゲン、Ｃ１～Ｃ４アルキル、またはＣ１～Ｃ４アルコキシであり；
Ｒ５が、置換または非置換のＣ２～Ｃ１６アルキレン、置換または非置換のＣ２～Ｃ１６アルケニレン、置換または非置換のＣ１～Ｃ１２アルキル（アリーレン）、あるいは置換または非置換のアリール（Ｃ１～Ｃ４アルキレン）であり；
および
Ｒ６およびＲ７が、独立に水素、酸素、またはＣ１～Ｃ４アルキルである。
本明細書に開示の組成物および方法のいくつかの局面においては、該経口送達剤が、Ｎ－（８－［２－ヒドロキシベンゾイル］アミノ）カプリル酸（ＳＮＡＣ）、Ｎ－（５－クロロサリシロイル）－８－アミノカプリル酸（５－ＣＮＡＣ）、Ｎ－（１０－［２－ヒドロキシベンゾイル］アミノ）デカン酸（ＳＮＡＤ）、４－［（４－クロロ－２－ヒドロキシ－ベンゾイル）アミノ］ブタン酸（４－ＣＮＡＢ）、Ｎ－（８－［４－メトキシ－クロロ－２－ヒドロキシベンゾイル－アミノ）オクタン酸（４－ＭＯＡＣ）、８－（４－ヒドロキシフェノキシ）オクタン酸（４－ＨＰＯ）、４－ｍ－トシルオキシ酪酸（３－ＴＢＡ）、４－（３－ヒドロキシフェニルスルファニル）酪酸（３－ＨＰＳＢ）、５－フェニルペンタン酸（５－ＰＰＡ）、８－（２－ヒドロキシフェノキシ）オクチルジエタノールアミン（２－ＨＰＯＤ）、（４－イソプロピルベンジルオキシ）酢酸（４－ＩＢＯＡ）、２－（５－ペンタン酸）－５－（２－ヒドロキシフェニル）－１，３，４－オキサジアゾール（２－ＰＨＯＤ）、７－オキソ－７－フェニルヘプタン酸（７－ＯＰＨＡ）、４－（３－フルオロフェニルスルファニル）酪酸（３－ＦＰＳＢ）、またはそれらの任意の組み合わせから成る群から選択される。
いくつかの局面においては、該経口送達剤は、Ｎ－（８－（２－ヒドロキシベンゾイル）アミノ）カプリル酸の二ナトリウム塩である。
いくつかの局面においては、該経口送達剤は、Ｎ－（５－クロロサリシロイル）－８－アミノカプリル酸の塩、水和物、または溶媒和物、あるいはそれらの組み合わせである。いくつかの局面においては、Ｎ－（５－クロロサリシロイル）－８－アミノカプリル酸の塩は、Ｎ－（５－クロロサリシロイル）－８－アミノカプリル酸のナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、およびそれらの任意の組み合わせから成る群から選択される。いくつかの局面においては、Ｎ－（５－クロロサリシロイル）－８－アミノカプリル酸の塩はナトリウム塩である。いくつかの局面においては、Ｎ－（５－クロロサリシロイル）－８－アミノカプリル酸の塩は一ナトリウム塩である。いくつかの局面においては、Ｎ－（８－（２－ヒドロキシベンゾイル）アミノ）カプリル酸の塩は二ナトリウム塩である。
本開示はまた、（ｉ）ＣＩＶＩ００８を含む組成物および（ｉｉ）５－ＣＮＡＣを含む組成物、を含むカプセルを提供する。いくつかの局面においては、ＣＩＶＩ００８を含む組成物および５－ＣＮＡＣを含む組成物は乾式混合による混合物である。いくつかの局面においては、該カプセルはゼラチンカプセルである。いくつかの局面においては、該ゲルカプセルは硬質殻ゼラチンカプセルである。いくつかの局面においては、該カプセルは腸溶性コーティングされる。いくつかの局面においては、該カプセルは、５ｍｇ～３０ｍｇのＣＩＶＩ００８および１００ｍｇ～２００ｍｇの５－ＣＮＡＣを含む。いくつかの局面においては、該カプセルは約５ｍｇ、約１０ｍｇ、約２０ｍｇ、約２５ｍｇ、または約３０ｍｇのＣＩＶＩ００８を含む。いくつかの局面においては、該カプセルは、１０ｍｇのＣＩＶＩ００８および１００ｍｇの５－ＣＮＡＣ；２０ｍｇのＣＩＶＩ００８および２００ｍｇの５－ＣＮＡＣ；５ｍｇのＣＩＶＩ００８および２００ｍｇの５－ＣＮＡＣ；１０ｍｇのＣＩＶＩ００８および２００ｍｇの５－ＣＮＡＣ；２５ｍｇのＣＩＶＩ００８および２００ｍｇの５－ＣＮＡＣ；または３０ｍｇのＣＩＶＩ００８および２００ｍｇの５－ＣＮＡＣを含む。いくつかの局面においては、該カプセルはスタチンを含む。
いくつかの局面においては、本開示は、対象において、アテローム性動脈硬化症、高脂血症、高コレステロール血症、ＨＤＬ／ＬＤＬコレステロールの不均衡、冠動脈疾患（ＣＡＤ）、または冠動脈性心疾患（ＣＨＤ）から成る群から選択される障害を治療する方法を提供するが、ここで該方法は、それを必要とする対象に、（ｉ）ＣＩＶＩ００８を含む組成物および（ｉｉ）５－ＣＮＡＣを含む組成物を含むカプセルを投与することを含む。本開示はまた、対象においてＰＣＳＫ９の発現レベルおよび／またはＰＣＳＫ９の活性を低下させる方法を提供するが、ここで該方法は、（ｉ）ＣＩＶＩ００８を含む組成物および（ｉｉ）５－ＣＮＡＣを含む組成物を含むカプセルを、それを必要とする対象に投与することを含む。また、対象においてコレステロールレベルを低下させる方法を提供するが、ここで該方法は、（ｉ）ＣＩＶＩ００８を含む組成物および（ｉｉ）５－ＣＮＡＣを含む組成物を含むカプセルを、それを必要とする対象に投与することを含む。また、アテローム性動脈硬化症、高脂血症、高コレステロール血症、ＨＤＬ／ＬＤＬコレステロールの不均衡、冠動脈疾患（ＣＡＤ）、または冠動脈性心疾患（ＣＨＤ）から成る群から選択される障害の治療に用いる、（ｉ）ＣＩＶＩ００８を含む組成物および（ｉｉ）５－ＣＮＡＣを含む組成物を含むカプセルを提供する。また、対象において、ＰＣＳＫ９の発現レベルおよび／またはＰＣＳＫ９の活性を低下させる治療薬剤として用いる、（ｉ）ＣＩＶＩ００８を含む組成物および（ｉｉ）５－ＣＮＡＣを含む組成物を含むカプセルを提供する。本開示はまた、対象において、コレステロールレベルを低下させる治療薬剤として用いる、（ｉ）ＣＩＶＩ００８を含む組成物および（ｉｉ）５－ＣＮＡＣを含む組成物を含むカプセルを提供する。また、ＣＩＶＩ００８を含む組成物および５－ＣＮＡＣを含む組成物を含むカプセルを製造する方法であって、（ｉ）ＣＩＶＩ００８を含む第１の組成物および５－ＣＮＡＣを含む第２の組成物を乾式混合する工程；および（ｉｉ）工程（ｉ）で得られた乾式混合物をカプセルに封入する工程を含む方法を提供する。
図１Ａ、１Ｂ、および１Ｃ本明細書に開示の経口組成物に用いることのできるトリＧａｌＮＡｃコンジュゲートの例を示す。コンジュゲート１～４は４種類の好適なＧａｌＮＡｃコンジュゲート部分を表し、コンジュゲート１ａ～４ａは、付加的なリンカー部分（Ｙ）を有する同一コンジュゲートを意味している；付加的リンカー部分は、コンジュゲートをオリゴマー（領域Ａ）または生体内開裂可能リンカー（領域Ｂなど）に連結するために用いる。波線はオリゴマーに対する共有結合を表している。 本明細書に開示の経口組成物に用いることのできるコレステロールコンジュゲート部分およびトコフェロールコンジュゲート部分の例を示す。コンジュゲート５ａおよび６ａは、付加的なリンカー部分（Ｙ）を有する同一コンジュゲートを意味している；付加的リンカー部分は、コンジュゲートをオリゴマー（領域Ａ）または生体内開裂可能リンカー（領域Ｂなど）に連結するために用いる。波線はオリゴマーに対する共有結合を表している。 特定のＬＮＡ化合物を示す。ベータ－Ｄ－オキシＬＮＡはその文字の後に付けた上付き文字Ｌで識別し；下付き文字ｓはホスホロチオエート結合を表し；大文字のＣに先立つ上付き文字Ｍｅは５－メチルシトシンＬＮＡを示し；非ＬＮＡヌクレオチドはＤＮＡヌクレオチドである（上付き文字Ｌが付いていない）。 本明細書に開示の経口組成物に用いることのできるＬＮＡ化合物のコレステロールコンジュゲートの例を示す。ベータ－Ｄ－オキシＬＮＡはその文字の後に付けた上付き文字Ｌで識別し；下付き文字ｓはホスホロチオエート結合を表し；下付き文字ｏはホスホジエステル結合を表し；大文字のＣに先立つ上付き文字Ｍｅは５－メチルシトシンＬＮＡを示し；非ＬＮＡヌクレオチドはＤＮＡヌクレオチドである（上付き文字Ｌが付いていない）。 本明細書に開示の経口組成物に用いることのできるＬＮＡ化合物のＧａｌＮＡｃコンジュゲートの例を示す。このコンジュゲートは、本質的に図１のＣｏｎｊ２ａに対応する；図１ではＬＮＡオリゴマーが波線で置き換わっている。ベータ－Ｄ－オキシＬＮＡはその文字の後に付けた上付き文字Ｌで識別し；下付き文字ｓはホスホロチオエート結合を表し；大文字のＣに先立つ上付き文字Ｍｅは５－メチルシトシンＬＮＡを示し；非ＬＮＡヌクレオチドはＤＮＡヌクレオチドである（上付き文字Ｌが付いていない）。 配列番号：１８の詳細な構造を示す。 配列番号：１９の詳細な構造を示す。 ＦＡＭコンジュゲート基の一例を示している。 開裂可能ホスホジエステル結合を含む、および含まないＬＮＡ－ＦＡＭコンジュゲートを示す。ベータ－Ｄ－オキシＬＮＡはその文字の後に付けた上付き文字Ｌで識別し；下付き文字ｓはホスホロチオエート結合を表し；下付き文字ｏはホスホジエステル結合を表し；大文字のＣに先立つ上付き文字Ｍｅは５－メチルシトシンＬＮＡを示し；非ＬＮＡヌクレオチドはＤＮＡヌクレオチドである（上付き文字Ｌが付いていない）。 インビトロ効力に基づいてランク付けした抗ＰＣＳＫ９ギャップマーを示す。 インビトロ効力に基づいてランク付けした抗ＰＣＳＫ９ギャップマーから選択されたものを示す。 選択された抗ＰＣＳＫ９化合物のインビトロ効力およびＩＣ５０データを示す。 選択された抗ＰＣＳＫ９コンジュゲートに関するアラニンアミノ転移酵素（ＡＬＴ）のインビボレベルを示す。 ヌクレオシド間結合Ｌが、例えば、ホスホジエステル、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ボラノリン酸またはメチルホスホン酸（ホスホジエステルなど）であり得ることを示している。ＰＯはホスホジエステル結合である。化合物（ａ）は、単一ＤＮＡ（またはＲＮＡ）を含む領域Ｂを有しており、第２と第１の領域の間の結合がＰＯである。化合物（ｂ）は、ホスホジエステル結合で連結される２つのＤＮＡ／ＲＮＡ（ＤＮＡなど）ヌクレオシドを有している。化合物（ｃ）は、ホスホジエステル結合で連結される３つのＤＮＡ／ＲＮＡ（ＤＮＡなど）ヌクレオシドを有している。いくつかの局面においては、領域ＢはさらなるホスホジエステルＤＮＡ／ＲＮＡ（ＤＮＡヌクレオシドなど）によって、さらに伸長可能である。コンジュゲート基（Ｘと表示される部分、あるいは本明細書において領域Ｃとよばれる部分）は、各化合物（例えば、コレステロール、ＧａｌＮＡｃ、Ｃｏｎｊ１－４、１ａ－４ａ、および５または６）の左側に示されており、また任意選択的に、リンヌクレオシド結合基（ホスホジエステル、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ボラノリン酸、ホスホロアミダート、またはメチルホスホン酸など）を介して領域Ｂの末端ヌクレオシドに共有結合することも可能であり、あるいは別の代替的な結合を介して、例えば、トリアゾール結合を介して連結することもできる（化合物ｄ、ｅ、およびｆのＬを参照のこと）。 第３の（コンジュゲート）領域（Ｘ）と第２の領域（領域Ｂ）との間に任意選択的リンカー（Ｙ）を含む化合物を示す；ここでも、図１２に示される用語が用いられている。好適なリンカーは本明細書に開示されるが、例えば、アルキルリンカー（Ｃ６リンカーなど）が挙げられる。化合物ａ）、ｂ）およびｃ）においては、Ｘと領域Ｂとの間のリンカーは、リンヌクレオシド結合基（ホスホジエステル、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ボラノリン酸、ホスホロアミダート、またはメチルホスホン酸など）を介して領域Ｂに連結されるものであるが、あるいは別の代替的な結合、例えば、トリアゾール結合（Ｌｉ）を介して連結することもできる。これらの化合物においては、Ｌｉｉは第１の領域（Ａ）と第２の領域（Ｂ）との間のヌクレオシド間結合を表している。化合物ｄ）、ｅ）、およびｆ）は、領域Ｂとコンジュゲート基との間にリンカー（Ｙ）をさらに含み、領域Ｙは、例えば、リンヌクレオシド結合基（ホスホジエステル、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホロアミダート、ボラノリン酸またはメチルホスホン酸）を介して、あるいはいくつかの局面においては、トリアゾール結合を介して、領域Ｂに連結され得る。さらに、またはあるいは、Ｘは活性化基または反応基であり得る。Ｘは、リンヌクレオシド結合基（ホスホジエステル、ホスホロチオエート、ホスホロアミダート、ホスホロジチオエート、ボラノリン酸またはメチルホスホン酸）を介して領域Ｂに共有結合し得るが、あるいは別の代替的結合、例えば、トリアゾール結合を介して連結することもできる。 コレステロールコンジュゲート投与後のＰＣＳＫ９ ｍＲＮＡのインビボサイレンシングを示す。単回用量１０ｍｇ／ｋｇの非コンジュゲート型ＬＮＡ－アンチセンスオリゴヌクレオチド（＃４０）または異なるリンカーでコレステロールと複合体化（コンジュゲート）した等モル量のＬＮＡアンチセンスオリゴヌクレオチドをマウスに注射し、投与後１日目、３日目、７日目および１０日目に屠殺した。肝臓および腎臓からＲＮＡを単離し、ＰＣＳＫ９特異的ＲＴ－ｑＰＣＲに供した。パネルＡは、肝臓試料におけるＰＣＳＫ９ ｍＲＮＡの定量をＢＡＣＴに対して正規化し、同等の食塩水対照の平均に対する％として表したことを示している。パネルＢは、腎臓試料におけるＰＣＳＫ９ ｍＲＮＡの定量をＢＡＣＴに対して正規化し、同等の食塩水対照の平均の％として表したことを示している。 ラット安全性試験（実施例５を参照のこと）におけるＫｉｍ－１発現を示す。 配列番号：２または配列番号：１８を０．５ｍｇ／ｋｇ／週または１．５ｍｇ／ｋｇ／週で４回注射（１週当たり１回の注射）したカニクイザルの試料における、血清ＰＣＳＫ９およびＬＤＬコレステロールを示す。 配列番号：３および配列番号：１９を０．５または１．５ｍｇ／ｋｇ／週で４回注射（１週当たり１回の注射）したカニクイザルの試料における、血清ＰＣＳＫ９およびＬＤＬコレステロールを示す。 配列番号：１８および配列番号：１９のアンチセンスオリゴヌクレオチドコンジュゲートの模式的構造を示す。 アンチセンスオリゴヌクレオチドコンジュゲートＣＩＶＩ００８（セパダクルセン）の詳細な化学構造および正式名を示す。 例示的な経口送達剤の化学構造を示す。 実施例９に示される臨床試験の設計を示す。 ＳＮＡＣを含む、あるいは含まない投与後の、ＣＩＶＩ００８の血漿中濃度レベルを示す。 実施例９の試験における、皮下（ＳＱ）群（Ｐ０００１、Ｐ０００２、Ｐ０９０１、およびＰ０９０２）および経口（ＰＯ）群（Ｐ０３０１、Ｐ０３０２、Ｐ０３０３、Ｐ１２０１、Ｐ１２０２、Ｐ１２０３、Ｐ０４０１、Ｐ０４０２、Ｐ０４０３、Ｐ１３０１、Ｐ１３０２、Ｐ１３０３、Ｐ０５０１、およびＰ１４０１）の血漿ＡＵＣレベルを示す。 実施例９に示される試験のＳＱ群およびＰＯ群におけるＣＩＶＩ００８に関する肝臓内濃度レベルを示す。 ＣＩＶＩ００８経口投与後３５日目および４２日目のＰＣＳＫ９発現レベルのベースラインレベルに対する平均変化を示す。 １カプセルまたは２カプセルのＣＩＶＩ００８投与後（図２５Ａ）または対照条件下（図２５Ｂ）における、血漿ＬＤＬコレステロールレベルのベースラインに対する変化を示す。 実施例９に示す試験経過中の、血漿ＬＤＬコレステロールレベルのベースラインに対する変化を示す。 実施例１１に示す試験の模式的説明を示す。 ５－ＣＮＡＣを用いた投与後のＣＩＶＩ００８の血漿中濃度レベルを示す。 ＳＮＡＣまたは５－ＣＮＡＣのいずれかを含むＣＩＶＩ００８カプセルの投与に対応する薬物動態的パラメータ（平均ＡＵＣ０－５および平均Ｃｍａｘ）間の比較を示す。 ５－ＣＮＡＣを含むサイズ４のカプセル（Ａ群）またはサイズ０のカプセル（Ｂ群）でのＣＩＶＩ００８の投与に対応する、血漿中濃度レベルおよび薬物動態的パラメータ（平均ＡＵＣ０－５および平均Ｃｍａｘ）を示す。 ５－ＣＮＡＣと共に処方した５ｍｇ～３０ｍｇのＣＩＶＩ００８を投与したサルにおける、第１日目および第３日目の平均ＡＵＣおよび平均Ｃｍａｘを示す。 乾式混合（図３２Ａ）または凍結乾燥（図３２Ｂ）のいずれかにより調製したカプセルで、類似用量のＣＩＶＩ００８を投与したサルにおける、第１日目および第３日目の平均薬物動態パラメータの比較を示す。 ２２日間投与後に、ＰＣＳＫ９および血漿ＬＤＬがベースラインよりも低下したことを示している。 ＳＮＡＣまたは５－ＣＮＡＣのいずれかと共に処方したＣＩＶＩ００８を投与したサルにおけるベースラインからの％ＬＤＬ低下を示している。
本開示は、アンチセンスオリゴマー（例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチド）またはアンチセンスオリゴヌクレオチドコンジュゲート（例えば、ＣＩＶＩ００８）および経口送達剤（例えば、Ｃ１０、ＳＮＡＣまたは５－ＣＮＡＣ）を含む経口送達のための医薬組成物を提供する。いくつかの局面においては、該アンチセンスオリゴマーは連続する長さ１６～２２のヌクレオチドであり、その配列は配列番号：３１のＰＣＳＫ９標的配列に１００％相補的である連続する長さ１６ヌクレオチドの配列を含み；ここで該アンチセンスオリゴマーが、少なくとも１つのＬＮＡユニットを含むギャップマーであり；およびここで該アンチセンスオリゴマーが、ＰＣＳＫ９をコードするＲＮＡを標的とする。
いくつかの局面においては、該オリゴマーは、配列番号：１８または配列番号：１９の配列を含む。いくつかの局面においては、該アンチセンスオリゴヌクレオチドコンジュゲートは、以下の（ｉ）および（ｉｉ）を含む：
（ｉ）連続する長さ１６～２２のヌクレオチドのアンチセンスオリゴマー部分；
ここでその配列は、配列番号：３１のＰＣＳＫ９標的配列に１００％相補的である連続する長さ１６ヌクレオチドの配列を含み；
ここで該アンチセンスオリゴマーが、少なくとも１つのＬＮＡユニットを含むギャップマーであり；
およびここで該アンチセンスオリゴマーが、ＰＣＳＫ９をコードするＲＮＡを標的とする；
および
（ｉｉ）該オリゴマーの５’末端に結合しているＧａｌＮＡｃ部分。いくつかの局面においては、該アンチセンスオリゴヌクレオチドコンジュゲートは、図１８Ｂに示すようなＣＩＶＩ００８である。
本明細書に開示の経口医薬組成物、例えば、ＣＩＶＩ００８を含む組成物であって、例えば、ピルまたはカプセルの形態の組成物は、消化管通過時（例えば、胃および小腸上部の通過時）にペイロード（例えば、ＣＩＶＩ００８）を保護する少なくとも１種類の経口送達剤を含む。いくつかの局面においては、該経口送達剤は、カプリル酸（オクタン酸、Ｃ８）、カプリン酸（デカン酸またはデシリン酸、Ｃ１０）、その誘導体（例えば、８－［２－ヒドロキシベンゾイル］アミノ）カプリル酸、ＳＮＡＣまたは５－ＣＮＡＣ）、またはそれらの組み合わせなどの脂肪酸の塩（例えば、ナトリウム塩）である。特定の一局面においては、該経口送達剤は、塩、例えば、ＳＮＡＣのナトリウム塩または５－ＣＮＡＣのナトリウム塩である。
また、本明細書に開示の医薬組成物を製造する方法を提供する。本開示はまた、それを必要とする対象に、本明細書に開示の経口医薬組成物を投与することを含む、対象の治療法を提供する。
定義
本明細書の説明をより容易に理解可能とするため、まず特定用語を定義する。さらなる定義については、本明細書の「詳細な説明」を通じて成されるものである。
用語「１つの（ａ）」または「１つの（ａｎ）」物は、１つ以上のその物を指し、例えば、「１つの（ａ）ヌクレオチド配列」は、１つ以上のヌクレオチドの配列を表すものであると理解すべきことに留意されたい。したがって、用語「１つの（ａ）」（または「１つの（ａｎ）」）、「１つ以上」、および「少なくとも１つの」は、本明細書中で同義語として用いられ得る。
さらに、本明細書中の「および／または」は、特定の２種類の特質または成分であって、他方の存在下または非存在下における、それらそれぞれの特定開示とみなすべきである。したがって、本明細書中で、「Ａおよび／またはＢ」などの表現において用いられる用語「および／または」は、「ＡおよびＢ」、「ＡまたはＢ」、「Ａ」（単独）、および「Ｂ」（単独）を含むことを意図するものである。同様に、「Ａ、Ｂ、および／またはＣ」などの表現において用いられるような用語「および／または」は、以下の局面のそれぞれを含むことを意図するものである：Ａ、Ｂ、およびＣ；Ａ、Ｂ、またはＣ；ＡまたはＣ；ＡまたはＢ；ＢまたはＣ；ＡおよびＣ；ＡおよびＢ；ＢおよびＣ；Ａ（単独）；Ｂ（単独）；およびＣ（単独）。
本明細書において「を含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という表現で説明される局面においては、常に「から成る（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」および／または「本質的にから成る（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」で説明される類似の局面をも表すものと理解されたい。
他で特段に定義されるのでない限り、本明細書中で用いられるすべての技術的用語および科学的用語は、本開示に関連する技術分野の当業者によって通常理解される意味と同一の意味を有するものである。例えば、バイオ医学および分子生物学のコンサイス事典（ｔｈｅ Ｃｏｎｃｉｓｅ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｂｉｏｍｅｄｉｃｉｎｅ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ）第２版、Ｊｕｏ、Ｐｅｉ－Ｓｈｏｗ、２００２、ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ；細胞／分子生物学事典（Ｔｈｅ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ）第３版、１９９９、アカデミックプレス出版社；および改訂版生化学および分子生物学オックスフォード事典（ｔｈｅ Ｏｘｆｏｒｄ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ， Ｒｅｖｉｓｅｄ）、２０００、オックスフォード大学出版局；これらは、当業者にとって、本開示において用いられる用語の多くについての一般的辞書となるものである。
単位、接頭語、および記号は、国際単位系（ＳＩ）で認められる形式で表している。数値範囲は、範囲を画定する数値を含む。他で特段にそうでないことを明示するのでない限り、ヌクレオチド配列の５’から３’への方向は、左から右方向で表す。アミノ酸配列のアミノからカルボキシへの方向は、左から右方向で表す。本明細書中に示される見出しは、本明細書を全体として参照することによって得られる本開示の様々な局面を限定するものではない。したがって、これより直ぐ下で定義する用語は、本明細書全体を参照することによってより詳細に規定される。
本明細書中の用語「約（ａｂｏｕｔ）」は、「おおよそ」、「大雑把には」、「～程度」、または「～の範囲」を意味する。数値範囲と共に用語「約（ａｂｏｕｔ）」を用いる場合には、示される数値よりも上に、あるいは下に範囲を伸長することによる変更を加えるものである。一般的に、用語「約（ａｂｏｕｔ）」は、例えば、１０パーセントの分散によって、上下（大きくまたは小さく）させて、言及する数値をその値よりも大きくまたは小さく変更することができる。例えば、アンチセンスオリゴマーまたはアンチセンスオリゴヌクレオチドコンジュゲート（例えば、ＣＩＶＩ００８）が、該オリゴマーまたはコンジュゲート投与後の細胞において、ＰＣＳＫ９蛋白質発現を少なくとも約６０％低下させると表現する場合には、５０％～７０％の範囲でＰＣＳＫ９発現レベルが低下することを意味する。
本開示に関しては、用語「オリゴマー」と「オリゴヌクレオチド」は同義語として用いられ、２つ以上のヌクレオチドの共有結合によって形成される分子を指す。本明細書においては、単一ヌクレオチド（ユニット）は、単量体またはユニットと表現され得る。
本明細書中の用語「誘導体」は、本明細書に開示の化合物（例えば、Ｃ１０、ＳＮＡＣまたは５－ＣＮＡＣ）に構造的に関連する化合物を指すが、該開示の化合物とは、例えば、同一炭素骨格を有する化合物であって、例えば、１か所以上の位置の本明細書に開示の側鎖または基に化学的修飾が導入された化合物であり、ここで該誘導体は、該物質または分子の生物学的活性に実質的に類似する生物学的活性（経口送達剤として機能する能力など）を有する；それが誘導体である。
本明細書中の用語「ヌクレオチド」は、糖部分、塩基部分および、共有結合連結基（結合基）（リン酸またはホスホロチオエートヌクレオシド間結合基など）を含むグリコシドを指し、ＤＮＡまたはＲＮＡなどの天然ヌクレオチドおよび修飾糖および／または塩基部分を含む非天然ヌクレオチドの両方を含む。非天然ヌクレオチドは、本明細書において「ヌクレオチド類似体」とも表現される。本明細書では、単一ヌクレオチドを単量体またはユニットとよぶこともある。特定の局面においては、用語「ヌクレオチド類似体」は、修飾糖部分を有するヌクレオチドを指す。修飾糖部分を有するヌクレオチド（例えば、ＬＮＡ）の非限定的な例が、本明細書中に開示される。他の局面においては、用語「ヌクレオチド類似体」は、修飾核酸塩基部分を有するヌクレオチドを指す。飾核酸塩基部分を有するヌクレオチドとしては、５－メチル－シトシン、イソシトシン、プソイドイソシトシン、５－ブロモウラシル、５－プロピニルウラシル、６－アミノプリン、２－アミノプリン、イノシン、ジアミノプリン、および２－クロロ－６－アミノプリンが挙げられるが、これらのみに限定されるものではない。いくつかの局面においては、用語「ヌクレオチド」、「ユニット」および「単量体」は、同義語として用いられる。ヌクレオチドまたは単量体の配列を参照する場合に、参照がなされるものはＡ、Ｔ、Ｇ、ＣまたはＵなどの塩基、およびその類似体の配列であることを理解されたい。
本明細書中の用語「ヌクレオシド」は、糖部分および塩基部分を含むグリコシドを意味して用いられるので、本明細書に開示のオリゴマー（例えば、アンチセンスオリゴマー、ＡＳＯ）またはアンチセンスオリゴヌクレオチドコンジュゲート（例えば、ＣＩＶＩ００８）のヌクレオチドの間の、ヌクレオシド間結合によって共有結合しているヌクレオチドユニットを指すこともある。バイオテクノロジーの分野においては、用語「ヌクレオチド」は、核酸単量体またはユニットを意味するものとして用いられることも多い。本明細書に開示のオリゴマー（例えば、アンチセンスオリゴマー、ＡＳＯ）またはアンチセンスオリゴヌクレオチドコンジュゲート（例えば、ＣＩＶＩ００８）に関して、用語「ヌクレオチド」は、潜在的には糖バックボーンおよびヌクレオシド間結合が存在する塩基単独、すなわち、シトシン（ＤＮＡおよびＲＮＡ）、グアニン（ＤＮＡおよびＲＮＡ）、アデニン（ＤＮＡおよびＲＮＡ）、チミン（ＤＮＡ）およびウラシル（ＲＮＡ）を含む核酸塩基配列を意味し得る。同様に、特にヌクレオシド間結合基の１つ以上が修飾されているオリゴヌクレオチドの場合には、用語「ヌクレオチド」は「ヌクレオシド」を指す。例えば、用語「ヌクレオチド」は、ヌクレオシド間の結合の存在または性質を特定する場合でも用いることができる。
いくつかの局面においては、用語「ヌクレオシド」、「ヌクレオチド」、「ユニット」、および「単量体」は、同義語として用いられる。ヌクレオチドまたは単量体の配列を参照する場合に、参照がなされるものは、Ａ、Ｔ、Ｇ、ＣまたはＵなどの塩基の配列であることに留意されたい。
複数形の用語「核酸（複数）」または「ヌクレオチド（複数）」は、複数の核酸を含むことを意図する。いくつかの局面においては、用語「核酸（複数）」または「ヌクレオチド（複数）」は、インビボまたはインビトロの標的配列、例えば、プレｍＲＮＡ（複数）、ｍＲＮＡ（複数）、またはＤＮＡ（複数）を指す。この用語が標的配列中の核酸またはヌクレオチドを指す場合には、該核酸またはヌクレオチドは細胞内の天然配列であり得る。他の局面においては、「核酸（複数）」または「ヌクレオチド（複数）」は、開示のオリゴマーまたはコンジュゲート内の配列を指す。この用語が本明細書に開示のオリゴマー（例えば、アンチセンスオリゴマー、ＡＳＯ）またはアンチセンスオリゴヌクレオチドコンジュゲート（例えば、ＣＩＶＩ００８）中の配列を指す場合には、該核酸またはヌクレオチドは、非天然、すなわち、化学的に合成されるもの、酵素的に作成されるもの、組換え技術で作成されるもの、またはそれらの任意の組み合わせであり得る。いくつかの局面においては、本明細書に開示のオリゴマー（例えば、アンチセンスオリゴマー、ＡＳＯ）またはアンチセンスオリゴヌクレオチドコンジュゲート（例えば、ＣＩＶＩ００８）中の核酸またはヌクレオチドは、合成または組換え技術によって作られるが天然配列またはその断片ではない。いくつかの局面においては、本明細書に開示のオリゴマー（例えば、アンチセンスオリゴマー、ＡＳＯ）またはアンチセンスオリゴヌクレオチドコンジュゲート（例えば、ＣＩＶＩ００８）中の核酸またはヌクレオチドは天然ではない；その理由は、それが、事実上天然ではない少なくとも１種類のヌクレオシド類似体を含むからである。
本明細書中の用語「逆相補」、「逆相補的」および「逆相補性」は、用語「補体」、「相補的」および「相補性」と同義である。
用語「相補的」は、２種類の配列のうちの一方の配列が、逆平行で他方の配列に結合する場合に、これら２種類の配列が相補的であることを意味するが、ここで各配列の３’末端は他方の配列の５’末端に結合し、一方の配列の各Ａ、Ｔ（Ｕ）、Ｇ、およびＣがそれぞれ他方の配列のＴ（Ｕ）、Ａ、Ｃ、およびＧに並列する。通常、オリゴヌクレオチドの相補的配列は、規定の配列に対して少なくとも９０％、好ましくは９５％、最も好ましくは１００％の相補性を有する。
用語「対応するヌクレオチド類似体」および「対応するヌクレオチド」は、ヌクレオチド類似体および天然のヌクレオチドのヌクレオチドが同一であることを示す意図で用いられる。例えば、ヌクレオチドの２－デオキシリボースユニットがアデニンに連結される場合には、「対応するヌクレオチド類似体」はアデニンに連結される五炭糖ユニット（２－デオキシリボースとは異なる）を含む。核酸塩基の例としては、アデニン、グアニン、シトシン、チミジン、ウラシル、キサンチン、ヒポキサンチン、５－メチルシトシン、イソシトシン、プソイドイソシトシン、５－ブロモウラシル、５－プロピニルウラシル、６－アミノプリン、２－アミノプリン、イノシン、ジアミノプリン、および２－クロロ－６－アミノプリンが挙げられるが、これらのみに限定されるものではない。いくつかの局面においては、該核酸塩基は、アデニン、グアニン、シトシン、チミジン、ウラシル、５－メチルシトシンから成る群から独立に選択される。いくつかの局面においては、該核酸塩基は、アデニン、グアニン、シトシン、チミジン、および５－メチルシトシンから成る群から独立に選択される。いくつかの局面においては、本開示のオリゴマー中に存在する核酸塩基のうちの少なくとも１種類は、５－メチルシトシン、イソシトシン、プソイドイソシトシン、５－ブロモウラシル、５－プロピニルウラシル、６－アミノプリン、２－アミノプリン、イノシン、ジアミノプリン、および２－クロロ－６－アミノプリンから成る群から選択される修飾核酸塩基である。
「ヌクレオチド類似体」は、糖および／または塩基部分の修飾されたＤＮＡまたはＲＮＡヌクレオチドなどの、天然ヌクレオチドのバリアントである。類似体は原理的に、該オリゴヌクレオチドに関しては、その天然ヌクレオチドに対して単に「サイレント」または「同等」であり得る；すなわち、オリゴヌクレオチドが標的遺伝子発現を阻害する活性に何らの機能的影響も与えない。そのような「同等の」類似体は、そうであってもなお有用であり得る；それは、例えば、その類似体が製造に関してより簡便またはより安価である、あるいは保存条件または製造条件に対してより安定である、あるいはタグまたは標識となるなどの場合には、有用であり得る。
本明細書中の用語「ＰＣＳＫ９」は、プロ蛋白質変換酵素サブチリシン／ケキシン９型を指し、これはヒトの１番染色体に位置するＰＣＳＫ９遺伝子によってコードされる酵素である。ＰＣＳＫ９遺伝子は１番染色体バンド１ｐ３２．３に位置する。これは、他の蛋白質を活性化する蛋白質のプロ蛋白質転換酵素ファミリーにおいて、第９番目のメンバーである。類似する遺伝子（オルソログ）が多くの生物種に認められる。解明されたＰＣＳＫ９の構造から、プロセス前の蛋白質では４種類の主成分が明らかである：すなわち、シグナルペプチド（残基１～３０）；Ｎ末端プロドメイン（残基３１～１５２）；触媒ドメイン（残基１５３～４２５）；およびＣ末端ドメイン（残基４２６～６９２；このドメインはさらに３つのモジュールに分割される）。Ｎ末端プロドメインは柔軟結晶構造を有し、触媒ドメインと相互作用しそれを阻害するので、ＰＣＳＫ９機能の制御に重要である；阻害がなければ、触媒ドメインはＬＤＬＲの上皮増殖因子様反復Ａ（ＥＧＦ－Ａ）ドメインに結合する。以前の研究によって、Ｃ末端ドメインはＬＤＬＲとの結合には関与しないことが示されたが、最近の研究ではＣ末端ドメインがＬＤＬＲに結合することが実証されている。ＰＣＳＫ９の分泌はシグナルペプチドおよびＮ末端プロドメインの自己開裂に大きく依存するが、一方で、Ｎ末端プロドメインは切断後も触媒ドメインとの結合を保持する。特に、Ｎ末端プロドメイン中の残基６１～７０は、その自己プロセッシングに重要である。
用語「その天然のバリアント」は、哺乳動物（マウス、サル、および好ましくはヒトなど）など規定の分類群内で天然に存在する核酸配列のＰＣＳＫ９ポリペプチドバリアントを指す。典型的には、ポリヌクレオチドの「天然のバリアント」を指す場合には、この用語は、４番染色体のＰＣＳＫ９をコードするゲノムＤＮＡの任意の対立遺伝子バリアント、染色体転座または染色体複製による４Ｃ７部分における任意の対立遺伝子バリアント、およびＲＮＡ（それに由来するｍＲＮＡなど）の任意の対立遺伝子バリアントをも含み得る。「天然のバリアント」は、ＰＣＳＫ９ ｍＲＮＡの選択的スプライシングに由来するバリアントも含み得る。特定のポリペプチド配列を指す場合には、例えば、この用語は、例えば、翻訳と同時の修飾または翻訳後修飾、例えば、シグナルペプチド開裂、蛋白質分解性切断、またはグリコシル化によってプロセスされ得る該蛋白質の天然型をも含む。
本明細書中の「２’－Ｆ」は、２’位にフルオロ基を含む糖を指す。
本明細書中の「２’－ＯＭｅ」または「２’－ＯＣＨ３」または「２’－Ｏ－メチル」はそれぞれ、糖環の２’位に－ＯＣＨ３基を含む糖を含むヌクレオシドを指す。
本明細書中の用語「ヌクレオチド長」は、所定の配列のヌクレオチド（単量体）総数を意味する。当業者であれば理解することであるが、オリゴヌクレオチドの５’末端ヌクレオチドは５’末端基を含むが、５’のヌクレオシド間結合基は含まない。
本明細書に記載の化合物は、複数の不斉中心を含み得るものであり、光学的に純粋な光学異性体、光学異性体の混合物（例えば、ラセミ化合物、ジアステレオ異性体の混合物、ジアステレオ異性体ラセミ化合物またはジアステレオ異性体ラセミ化合物の混合物など）の形態で存在し得る。いくつかの局面においては、該不斉中心は不斉炭素原子であり得る。用語「不斉炭素原子」は、４つの異なる置換基を有する炭素原子を意味する。カーン＝インゴールド＝プレログ（Ｃａｈｎ－Ｉｎｇｏｌｄ－Ｐｒｅｌｏｇ）転換にしたがえば、不斉炭素原子は「Ｒ」配位または「Ｓ」配位であり得る。
本明細書中の用語「二環式糖」は、４～７員環の２つの原子を繋ぐ架橋を含み、それによって第２の環が形成されて、二環構造となった該４～７員環を含む修飾糖部分を指す。いくつかの局面においては、ＬＮＡヌクレオシドに見られるように、該架橋は、ヌクレオシドのリボース糖環のＣ２’とＣ４’を連結する（すなわち、２’－４’架橋）。
本明細書中の「コード領域」、「コード配列」、または「オープンリーディングフレーム」は、アミノ酸に翻訳可能なコドンから成るポリヌクレオチドの一部分である。「停止コドン」（ＴＡＧ、ＴＧＡ、またはＴＡＡ）は、典型的にはアミノ酸に翻訳されないが、コード領域の一部とみなすことができる；他方、いずれのフランキング配列、例えば、プロモーター、リボソーム結合部位、転写ターミネーター、イントロン、非翻訳領域（「ＵＴＲ」）などは、コード領域の一部ではない。コード領域の境界は典型的には、得られるポリペプチドのアミノ末端をコードする５’末端の開始コドンおよび得られるポリペプチドのカルボキシル末端をコードする３’末端翻訳停止コドンによって判定する。いくつかの局面においては、本明細書に開示のオリゴマー（例えば、アンチセンスオリゴマー、ＡＳＯ）またはアンチセンスオリゴヌクレオチドコンジュゲート（例えば、ＣＩＶＩ００８）は、ＰＣＳＫ９蛋白質をコードする核酸、例えば、ＲＮＡのＰＣＳＫ９コード領域を標的とし得る。
本明細書中の用語「非コード領域」は、コード領域ではないヌクレオチド配列を意味する。非コード領域の例としては、プロモーター、リボソーム結合部位、転写ターミネーター、イントロン、非翻訳領域（「ＵＴＲ」）、非コードエクソンなどが挙げられるが、これらのみに限定されるものではない。エクソンには、各転写物の５’非翻訳領域（５’ＵＴＲ）または３’非翻訳領域（３’ＵＴＲ）の全体または一部であり得るものもある。非翻訳領域は、転写物の効率的翻訳および翻訳速度および転写物の半減期の制御にとって重要である。いくつかの局面においては、本明細書に開示のオリゴマー（例えば、アンチセンスオリゴマー、ＡＳＯ）またはアンチセンスオリゴヌクレオチドコンジュゲート（例えば、ＣＩＶＩ００８）は、ＰＣＳＫ９蛋白質をコードする核酸（例えば、ＲＮＡ）のＰＣＳＫ９非コード領域を標的とし得る。
ヌクレオチド配列に関して用いる用語「領域」は、その配列の一部分を指す。例えば、表現「ヌクレオチド配列内の領域」または「ヌクレオチド配列の相補物内の領域」は、該ヌクレオチド配列よりも短い配列であるが該特定ヌクレオチド配列または該ヌクレオチド配列の相補物内に位置する、それぞれ少なくとも１０ヌクレオチドより長い配列を指す。用語「小配列（ｓｕｂ－ｓｅｑｕｅｎｃｅ）」または「小配列（ｓｕｂｓｅｑｕｅｎｃｅ）」はまた、ヌクレオチド配列の領域をも意味し得る。
ヌクレオチド配列を指す場合には、用語「下流」は、核酸またはヌクレオチド配列が参照ヌクレオチド配列に対して、その３’側に位置することを意味する。特定の局面においては、下流ヌクレオチド配列は、転写開始点に続く配列に関するものである。例えば、遺伝子の翻訳開始コドンは、転写開始部位の下流に位置する。いくつかの局面においては、本明細書に開示のオリゴマー（例えば、アンチセンスオリゴマー、ＡＳＯ）またはアンチセンスオリゴヌクレオチドコンジュゲート（例えば、ＣＩＶＩ００８）は、ＰＣＳＫ９蛋白質をコードする核酸、例えば、ＲＮＡの、ＰＣＳＫ９オープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）の下流の領域を標的とし得る。
用語「上流」は、参照ヌクレオチド配列の５’側に位置するヌクレオチド配列を指す。いくつかの局面においては、本明細書に開示のオリゴマー（例えば、アンチセンスオリゴマー、ＡＳＯ）またはアンチセンスオリゴヌクレオチドコンジュゲート（例えば、ＣＩＶＩ００８）は、ＰＣＳＫ９蛋白質をコードする核酸、例えば、ＲＮＡの、ＰＣＳＫ９オープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）の上流の領域を標的とし得る。
本明細書中の用語「制御領域」は、コード領域の上流（５’非コード配列）、その領域内、または下流（３’非コード配列）に位置するヌクレオチド配列を指し、これは関連するコード領域の転写、ＲＮＡプロセッシング、安定性、または翻訳に影響を与える。制御領域には、プロモーター、翻訳リーダー配列、イントロン、ポリアデニル化認識配列、ＲＮＡプロセッシング部位、エフェクター結合部位、ＵＴＲ、およびステムループ構造を含み得る。コード領域が真核細胞における発現を意図している場合には、通常、コード配列の３’側にポリＡシグナルおよび転写終了配列が配置される。いくつかの局面においては、本明細書に開示のオリゴマー（例えば、アンチセンスオリゴマー、ＡＳＯ）またはアンチセンスオリゴヌクレオチドコンジュゲート（例えば、ＣＩＶＩ００８）は制御領域を標的とし得る。
本明細書中の用語「転写物」は、ＤＮＡの転写によって合成され、プロセス後にメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）となる一次転写産物、すなわち、前駆体メッセンジャーＲＮＡ（プレｍＲＮＡ）およびプロセスされたｍＲＮＡ自体を指す。用語「転写物」は、「プレｍＲＮＡ」および「ｍＲＮＡ」の同義語として用い得る。ＤＮＡ鎖が一次転写産物として転写された後に、新規に合成された一次転写物は複数の様式で修飾を受けて成熟した機能的形態となり、異なる蛋白質およびＲＮＡ（ｍＲＮＡ、ｔＲＮＡ、ｒＲＮＡ、ｌｎｃＲＮＡ、ｍｉＲＮＡなど）を産生する。したがって、用語「転写物」は、エクソン、イントロン、５’ＵＴＲ、および３’ＵＴＲを含む。
本明細書中の用語「発現」は、ポリヌクレオチドから遺伝子産物、例えば、ＲＮＡまたはポリペプチドが産生されるプロセスを指す。これは、非限定的にポリヌクレオチドのメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）への転写およびｍＲＮＡのポリペプチドへの翻訳を含む。発現によって「遺伝子産物」が産生する。本明細書中の遺伝子産物は、核酸、例えば、遺伝子の転写によって産生されるメッセンジャーＲＮＡ、または転写物から翻訳されたポリペプチドのいずれかであり得る。本明細書に記載の遺伝子産物は、転写後修飾、例えば、ポリアデニル化またはスプライシングを受けた核酸、または翻訳後修飾、例えば、メチル化、グリコシル化、脂質付加、他の蛋白質サブユニットとの会合、または蛋白質分解性切断を受けたポリペプチドをさらに含む。
２種類以上の核酸に関する用語「同一」またはパーセント「同一性」は、比較し、配列同一性の一部として如何なる保存的アミノ酸置換も考慮に入れずに、最大対応させて整列化した（必要に応じてギャップを導入する）場合に、同一である、または特定比率（％）の同一ヌクレオチドまたは同一アミノ酸残基を有する２種類以上の配列を指す。同一性パーセントは、配列比較ソフトウェアまたはアルゴリズムまたは目視検査を用いて測定することができる。アミノ酸配列またはヌクレオチド配列のアラインメントを取得するために用いることのできる各種のアルゴリズムおよびソフトウェアが、当該技術分野で公知である。
２種類のポリヌクレオチドまたはポリペプチド配列間に用いる用語「パーセント配列同一性」または「同一性パーセント」は、２種類の配列の最適アラインメントを得るためには必ず導入しなければならない付加または欠失（すなわち、ギャップ）を考慮に入れた、比較部分の配列に共通する完全一致の位置数を指す。一致する位置とは、標的配列および参照配列の両方において同一のヌクレオチドまたはアミノ酸が存在する任意の位置である。標的配列に存在するギャップについてはカウントしない；その理由は、ギャップはヌクレオチドでもアミノ酸でもないからである。同様に、参照配列に存在するギャップについてもカウントしない；その理由は、標的配列のヌクレオチドまたはアミノ酸においてカウントするからであり、参照配列のヌクレオチドもアミノ酸もカウントはしない。
そのような配列整列化アルゴリズムの非限定的例の一つとしては、Ｋａｒｌｉｎら、１９９０、Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ．，８７：２２６４－２２６８に記載されるアルゴリズムが挙げられ、Ｋａｒｌｉｎら、１９９３、Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ．、９０：５８７３－５８７７に記載のような修正が加えられており、ＮＢＬＡＳＴおよびＸＢＬＡＳＴのプログラム （Ａｌｔｓｃｈｕｌら、１９９１、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．、２５：３３８９－３４０２）に取り入れられている。特定の局面においては、Ａｌｔｓｃｈｕｌら、１９９７、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ． ２５：３３８９－３４０２に記載されるように、ギャップありＢＬＡＳＴを用いることができる。ＢＬＡＳＴ－２、ＷＵ－ＢＬＡＳＴ－２（Ａｌｔｓｃｈｕｌら、１９９６、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、２６６：４６０－４８０）、ＡＬＩＧＮ、ＡＬＩＧＮ－２（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ、Ｓｏｕｔｈ Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）またはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）は、配列整列化に利用可能なさらなる公開ソフトウェアプログラムである。特定の局面においては、ＧＣＧソフトウェアパッケージのＧＡＰプログラムを用いて（例えば、ＮＷＳｇａｐｄｎａ．ＣＭＰマトリックスおよび４０、５０、６０、７０、または９０のギャップ荷重および１、２、３、４、５、または６の長さ荷重を用いて）、２種類のヌクレオチド配列間の同一性パーセントを判定する。別の特定局面においては、ＮｅｅｄｌｅｍａｎとＷｕｎｓｃｈのアルゴリズム（Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ．（４８）：４４４－４５３（１９７０））を組み込んだＧＣＧソフトウェアパッケージのＧＡＰプログラムを用いて、２種類のアミノ酸配列間の同一性パーセントを判定することができる（例えば、ＢＬＯＳＵＭ６２マトリックスまたはＰＡＭ２５０マトリックスのいずれかを用い、また１６、１４、１２、１０、８、６、または４のギャップ荷重および１、２、３、４、５の長さ荷重を用いて）。あるいは、特定の局面においては、ＭｙｅｒｓとＭｉｌｌｅｒ（ＣＡＢＩＯＳ、４：１１－１７（１９８９））のアルゴリズムを用いて、ヌクレオチド配列間またはアミノ酸配列間の同一性パーセントを判定する。例えば、ＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）を用い、また残基表付きＰＡＭ１２０、ギャップ長ペナルティー１２およびギャップペナルティ４を用いて、同一性パーセントを判定することができる。当業者であれば、特定整列化ソフトウェアによる最大整列化に適切なパラメータを決定することができる。特定の局面においては、整列化ソフトウェアのデフォルトパラメータを用いる。
当業者であれば、パーセント配列同一性の算出のための配列アラインメント生成が、一次配列データによって排他的に行われる配列／配列の一対比較のみに限定されるものではないことを理解するであろう。配列アラインメントは、複数の配列アラインメントによるものであり得る。複数の配列アラインメントを生成する好適なプログラムの一つは、ｗｗｗ．ｃｌｕｓｔａｌ．ｏｒｇにおいて利用可能なＣｌｕｓｔａｌＷ２である。別の好適なプログラムは、ｗｗｗ．ｄｒｉｖｅ５．ｃｏｍ／ｍｕｓｃｌｅ／で利用可能なＭＵＳＣＬＥである。ＣｌｕｓｔａｌＷ２およびＭＵＳＣＬＥは、例えば、ＥＢＩ（欧州バイオインフォマティクス研究所）においても、代替的に利用可能である。
配列データを構造データ（例えば、蛋白質結晶構造）、機能データ（例えば、変異位置）、または系統発生学的データなどの異なる種類のソースに由来するデータと統合することにより、配列アラインメントを生成可能であることは理解されるであろう。複数の配列アラインメントを生成するために異種のデータを統合する好適なプログラムとしては、ｗｗｗ．ｔｃｏｆｆｅｅ．ｏｒｇにおいて利用可能、あるいは代替的に、例えば、ＥＢＩにおいて利用可能なＴ－Ｃｏｆｆｅｅが挙げられる。パーセント配列同一性の算出に用いる最終アラインメントは、自動で、または用手的に、のいずれかで調整可能であることもまた理解されるであろう。
特定の局面においては、第１のヌクレオチド配列の第２のヌクレオチド配列に対する％同一性「Ｘ」は、１００×（Ｙ／Ｚ）によって算出されるが、ここでＹは、（目視検査または特定の配列整列プログラムによって整列化されるような）第１および第２の配列のアラインメントにおいて完全一致としてスコア付けしたアミノ酸残基の数であり；また、Ｚは、第２の配列の残基総数である。第１の配列の長さが第２の配列よりも長い場合には、第１配列の第２配列に対する同一性パーセントは、第２配列の第１配列に対する同一性パーセントよりも高くなるであろう。
ポリヌクレオチド参照配列と共に整列化する単一ポリヌクレオチド標的配列内の異なる領域は、それぞれ自体のパーセント配列同一性を有し得る。配列同一性％値は小数第１位に丸めることに留意されたい。例えば、８０．１１、８０．１２、８０．１３、および８０．１４は、切り捨てて８０．１とするが、他方、８０．１５、８０．１６、８０．１７、８０．１８、および８０．１９は切り上げて８０．２とする。長さの値は常に整数であることにも留意されたい。
本開示のオリゴマー（またはその領域）と標的領域（本明細書に開示の標的領域など）との間の「相補性」の程度を決定する場合には、「相補性」の程度（「相同性」または「同一性」とも表現される）を、それによって最も良好に整列する該オリゴマーの配列（またはその領域）と該標的領域の配列（または該標的領域の逆相補）との間の％同一性（または％相同性）と表現する。該百分率（％）は、整列化塩基のうち２種類の配列間で同一である塩基数を数え、該オリゴマー中で連続する単量体の総数で割り、１００を掛けることにより、算出される。そのような比較においては、ギャップが存在するのであれば、そのようなギャップは、ギャップ内の単量体の数が本開示のオリゴマーと該標的領域の間で異なる領域とするよりも、単なるミスマッチとするほうが好ましい。
本明細書中の用語「阻害する」および「低下させる」は、例えば、ＰＣＳＫ９遺伝子転写産物の発現および／またはＰＣＳＫ９蛋白質レベルまたはＰＣＳＫ９活性を「阻害する」および「低下させる」場合に、本明細書に開示のオリゴマー（例えば、アンチセンスオリゴマー、ＡＳＯ）またはアンチセンスオリゴヌクレオチドコンジュゲート（例えば、ＣＩＶＩ００８）が、細胞、組織、または対象においてＰＣＳＫ９遺伝子転写産物の発現および／またはＰＣＳＫ９蛋白質レベルおよび／または活性を低下させることを指す。
いくつかの局面においては、用語「阻害する」および「低下させる」は、ＰＣＳＫ９遺伝子転写産物またはＰＣＳＫ９蛋白質レベルおよび／またはＰＣＳＫ９の活性の完全阻害（１００％阻害または検出不能レベル）を指す。他の局面においては、用語「阻害する」および「低下させる」は、細胞、組織、または対象におけるＰＣＳＫ９遺伝子転写産物および／またはＰＣＳＫ９蛋白質発現および／またはＰＣＳＫ９の活性の、例えば、少なくとも約５％の阻害、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の阻害を意味する。
ポリヌクレオチドバリアントは、コード領域、非コード領域、またはその両方における変化であり得る。一局面においては、該ポリヌクレオチドバリアントは、サイレント置換、付加、または欠失によって生じる変化を含むが、該コードされるポリペプチドの特性または活性については変化をもたらさない。別の一局面においては、ヌクレオチドバリアントは、遺伝子暗号縮退に起因するサイレント置換によって生じるものである。他の局面においては、バリアント中の５～１０アミノ酸、１～５アミノ酸、または１～２アミノ酸が、任意の組み合わせで置換、欠失、または付加している。ポリヌクレオチドバリアントは、様々な目的で作成され得る；例えば、特定の宿主におけるコドン発現に最適化する（ヒトｍＲＮＡにおけるコドンを他のもの、例えば、大腸菌などの細菌宿主のコドンに変換する）目的で作成され得る。
天然バリアントは「対立遺伝子バリアント」とよばれ、生物の染色体状の所定の遺伝子座を占める複数の代替形態のうちの１つを指す（「遺伝子ＩＩ（Ｇｅｎｅｓ ＩＩ）」、Ｌｅｗｉｎ、Ｂ編集、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８５））。これらの対立遺伝子バリアントはポリヌクレオチドおよび／またはポリペプチドのレベルのいずれかで変化し得るものであり、本開示に含まれる。あるいは、非天然バリアントは突然変異誘発技術または直接合成によっても作成し得る。
本明細書中の用語「～に連結される」または「～と複合体化（コンジュゲート）される」は同義語として用いられ、第１の部分と第２の部分の間、例えば、本開示のオリゴマー（例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチド）とコンジュゲート部分（例えば、ＧａｌＮＡｃ）との間に形成される共有結合または非共有結合を指す。
用語「個体」、「対象」、「宿主」、および「患者」は、本明細書において同義語として用いられ、診断、治療、または療法が望まれるいずれかの哺乳動物対象、特にヒトを指す。本明細書に記載の組成物および方法は、ヒトの治療および獣医学的応用の両方に利用可能である。いくつかの局面においては、該対象は哺乳動物であり、また他の局面においては、該対象はヒトである。本明細書中の「哺乳動物対象」は全哺乳動物を含み、非限定的に、ヒト、ペット動物（例えば、イヌ、ネコなど）、家畜（例えば、ウシ、ヒツジ、ブタ、ウマなど）および実験動物（例えば、サル、ラット、マウス、ウサギ、モルモットなど）を含む。
用語「医薬組成物」は、有効成分の生物学的活性が有効であり得る形態の製剤であって、該組成物が投与された対象にとって非忍容性毒性を示す付加的成分を全く含まない製剤を指す。そのような組成物は無菌であり得る。用語「経口医薬組成物」は、経口投与が可能な医薬組成物を指す。経口投与は、物質が口を通じて摂取される投与経路である。経口（Ｐ．Ｏ．）の略称である「Ｐｅｒ ｏｓ」も、経口摂取の薬剤服用の指示に用いられることがある。多くの治療薬剤が経口摂取されるが、その理由は、例えば、血流を介して身体の異なる部位に到達して、それら薬剤が全身性効果をもたらすことを意図するためである。
本明細書中の用語「送達剤」は、本開示の治療剤の送達において有用な担体化合物または担体分子を指す。本明細書中の用語「経口送達剤」は、本開示の治療剤の経口送達において有用な担体化合物または担体分子を指す。
いくつかの局面においては、本開示の医薬組成物は経口投与する。本明細書中の用語「経口」、およびその文法的変形（例えば、経口による）は、いかなる種類の経口送達経路（口腔頬側、唇下、および舌下経路を含む）をも含む。経口投与薬剤は様々な形態であり得る；そのような形態としては、経口固形剤（ＯＳＤ）の形態（例えば、嚥下する、水または舌下でかみ砕く、または溶解する錠剤；カプセル剤および咀嚼型カプセル剤、例えば、胃または腸で溶解し、そこで薬剤を放出するコーティングを有するもの；徐々に薬剤を放出する徐放または持続放出錠剤およびカプセル；散剤；または顆粒）、および経口液状剤の形態（例えば、茶、ドロップ、液剤、懸濁液、またはシロップ）が挙げられる。
本明細書中の「投与する」は、組成物、例えば、本明細書に開示のオリゴマー（例えば、アンチセンスオリゴマー、ＡＳＯ）またはアンチセンスオリゴヌクレオチドコンジュゲート（例えば、ＣＩＶＩ００８）を含む経口医薬組成物を、薬学的に許容可能な経路、例えば、経口で対象に与えることを意味する。「有効量」の～は、例えば、本明細書に開示のオリゴマー（例えば、アンチセンスオリゴマー、ＡＳＯ）またはアンチセンスオリゴヌクレオチドコンジュゲート（例えば、ＣＩＶＩ００８）を含む経口医薬組成物が、具体的に表明される目的を達成するために充分な量である。「有効量」は、表明される目的に関連して、通常の方法で実験的に決定することができる。
本明細書中の「治療する（ｔｒｅａｔ）」、「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」または「治療する（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」は、例えば、必ずしも疾患または病態を治癒させることではなく、疾患または病態の重症度を低下させること；疾患経過の持続時間を短縮させること；疾患または病態に関連する１種類以上の症状を改善または取り除くこと；疾患または病態を有する対象に有益な効果を提供することを指す。この用語はまた、疾患または病態またはその症状の予防または防止をも含む。
本明細書中の「予防する（ｐｒｅｖｅｎｔ）」または「予防する（ｐｒｅｖｅｎｔｉｎｇ）」は、特定の転帰の発生または重症度を低下させることを指す。いくつかの局面においては、転帰を予防することは予防的処置によって達成される。いくつかの局面においては、本明細書に開示のオリゴマー（例えば、アンチセンスオリゴマー、ＡＳＯ）またはアンチセンスオリゴヌクレオチドコンジュゲート（例えば、ＣＩＶＩ００８）を含む経口医薬組成物を、予防的に対象に投与する。いくつかの局面においては、該対象は、例えば、高コレステロール血症または心臓疾患を発症するリスクを有する。
第１節：経口医薬組成物
本開示は、経口投与のための医薬組成物、すなわち、アンチセンスオリゴマーおよび経口送達剤を含む経口医薬組成物または経口製剤を提供する。いくつかの局面においては、アンチセンスオリゴマーが連続する長さ１６～２２のヌクレオチドであり；
ここで該アンチセンスオリゴマーの配列が、配列番号：３１の配列に１００％相補的である連続する長さ１６ヌクレオチドの配列を含み；
ここで該アンチセンスオリゴマーが、少なくとも１つのＬＮＡユニットを含むギャップマーであり；
およびここで該アンチセンスオリゴマーが、ＰＣＳＫ９をコードするＲＮＡを標的とする。いくつかの局面においては、該アンチセンスオリゴマーが、特定の組織、例えば、肝臓を標的とし得る部分と複合体化（コンジュゲート）することができる。したがって、いくつかの局面においては、本開示は、経口投与のための医薬組成物、すなわち、アンチセンスオリゴヌクレオチドコンジュゲートおよび経口送達剤を含む経口医薬組成物または経口製剤を提供するが；
ここで該アンチセンスオリゴヌクレオチドコンジュゲートは、例えば、以下の（ｉ）および（ｉｉ）を含む：
（ｉ）連続する１６～２２のヌクレオチドであるアンチセンスオリゴマー；
ここで該アンチセンスオリゴマーの配列が、配列番号：３１の配列に１００％相補的である連続する長さ１６ヌクレオチドの配列を含み；
またここで該アンチセンスオリゴマーは少なくとも１つのＬＮＡユニットを含むギャップマーであり；
および
（ｉｉ）該アンチセンスオリゴマーに共有結合している少なくとも１種類の非ヌクレオチド部分または非ポリヌクレオチド部分であって、直接的に、あるいは該連続するオリゴマー配列との間に配置されるリンカーを介して結合している非ヌクレオチド部分または非ポリヌクレオチド部分；
ここで該アンチセンスオリゴヌクレオチドコンジュゲートは、ＰＣＳＫ９をコードするＲＮＡを標的とする。いくつかの局面においては、該オリゴマーは本開示の第２節において開示するいずれかのオリゴマーであり得る。いくつかの局面においては、該アンチセンスオリゴヌクレオチドコンジュゲートは本開示の第３節において開示するいずれかのオリゴヌクレオチドコンジュゲートであり得る。
いくつかの局面においては、該アンチセンスオリゴヌクレオチドコンジュゲートは、図１８Ａに提示される配列番号：１８または配列番号：１９に示す分子である。いくつかの局面においては、該アンチセンスオリゴヌクレオチドコンジュゲートは、（ＧａｌＮＡｃ）３－アミノ－ヘキサメチレン－５’ホスホロチオイル）－２’－Ｏ，４’－Ｃ－メチレンアデノシリル－（３’＞５’Ｏ，Ｏ－ホスホロチオイル）－２’－Ｏ，４’－Ｃ－メチレンアデノシリル－（３’＞５’Ｏ，Ｏ－ホスホロチオイル）－２’－Ｏ，４’－Ｃ－メチレンチミジリル－（３’＞５’Ｏ，Ｏ－ホスホロチオイル）－２’－デオキシグアノシリル－（３’＞５’Ｏ，Ｏ－ホスホロチオイル）－２’－デオキシシチジニリル－（３’＞５’Ｏ，Ｏ－ホスホロチオイル）－２’－デオキシチミジリル－（３’＞５’Ｏ，Ｏ－ホスホロチオイル）－２’－デオキシアデノシリル－（３’＞５’Ｏ，Ｏ－ホスホロチオイル）－２’－デオキシシチジニリル－（３’＞５’Ｏ，Ｏ－ホスホロチオイル）－２’－デオキシアデノシリル－（３’＞５’Ｏ，Ｏ－ホスホロチオイル）－２’－デオキシアデノシリル－（３’＞５’Ｏ，Ｏ－ホスホロチオイル）－２’－デオキシアデノシリル－（３’＞５’Ｏ，Ｏ－ホスホロチオイル）－２’－デオキシアデノシリル－（３’＞５’Ｏ，Ｏ－ホスホロチオイル）－２’－デオキシシチジニリル－（３’＞５’Ｏ，Ｏ－ホスホロチオイル）－２’－Ｏ，４’Ｃメチレン（５－メチル－シチジニリル）－（３’＞５’Ｏ，Ｏ－ホスホロチオイル）－２’－Ｏ，４’－Ｃ－メチレン（５－メチル－シチジニリル）－（３’＞５’Ｏ，Ｏ－ホスホロチオイル）－２’－Ｏ，４’－Ｃ－メチレンアデノシリルヘキサデカナトリウム塩、すなわち、ＣＩＶＩ００８である。図１８ＢにおけるＣＩＶＩ００８の詳細な化学式についても参照のこと。
いくつかの局面においては、本開示の経口医薬組成物は、本明細書に開示のオリゴマーまたはオリゴヌクレオチドコンジュゲート（例えば、ＣＩＶＩ００８）ならびにＳＮＡＣ、Ｃ１０、５－ＣＮＡＣ、その水和物、その溶媒和物、またはその塩、およびそれらの組み合わせから成る群から選択される経口送達剤を含む。いくつかの局面においては、本開示において有用な経口送達剤は、例えば、米国特許第５，８６６，５３６号に開示される１２３種類の修飾アミノ酸のいずれか、または、例えば、米国特許第５，７７３，６４７号に開示される１９３種類の修飾アミノ酸のいずれか、あるいはそれらの任意の組み合わせである物質を含み得る。上記の米国特許第５，７７３，６４７号および第５，８６６，５３６号は、その内容全体が参照として本明細書に組み入れられる。
いくつかの局面においては、該経口送達剤は単一化合物（例えば、Ｃ８、Ｃ１０、ＳＮＡＣまたは５－ＣＮＡＣ）を含む。他の局面においては、該経口送達剤は、化合物の組み合わせ（例えば、Ｃ８、Ｃ１０、ＳＮＡＣまたは５－ＣＮＡＣの任意の組み合わせ）を含む。いくつかの局面においては、該経口送達剤は、Ｃ８、Ｃ１０、ＳＮＡＣ、５－ＣＮＡＣ、４－ＣＮＡＢ、４－ＭＯＡＣ、ＳＮＡＤ、４－ＨＰＯ（８－（４－ヒドロキシフェノキシオクタン酸）、５－ＰＰＡ（５－ペンタン酸フェニル）、２－ＰＨＯＤ（８－（２－ヒドロキシフェノキシ）オクチルジエタノールアミン）、３－ＴＢＡ（４－ｍ－トシルオキシ酪酸、２－ＨＰＯＤ（２－（５－ペンタン酸）－５－（２－ヒドロキシフェニル）－１，３，４－オキサジアゾール）、７－ＯＰＨＡ（７－オキソ－７－フェニルヘプタン酸）、３－ＨＰＳＢ（４－（３－ヒドロキシフェニルスルファニル）酪酸）、４－ＩＢＯＡ（（４－イソプロピルベンジルオキシ）酢酸）、３－ＦＰＳＢ（４－（３－フルオロフェニルスルファニル）酪酸）、またはそれらの任意の組み合わせを含む。例えば、図２２を参照のこと。
いくつかの局面においては、該ＳＮＡＣは、任意選択的に類似の化合物（ＳＮＡＤ（１０－Ｎ－（２－ヒドロキシベンゾイル）アミノデカン酸ナトリウム）など）で代替してもよい。ＳＮＡＤの構造は、脂肪酸部分の長さのみがＳＮＡＣの構造と異なる。本開示のいくつかの局面においては、該ＳＮＡＣは、任意選択的に類似の化合物で代替してもよく、ここでＳＮＡＣのカプリル酸部分が、少なくとも長さ６炭素原子、例えば、長さ６～２０炭素原子、任意選択的に長さ６～１８炭素原子、任意選択的に長さ６～１６炭素原子、任意選択的に長さ６～１４炭素原子、任意選択的に長さ６～１２炭素原子、および任意選択的に長さ６～１０炭素原子の別の脂肪酸部分で置換される。該脂肪酸部分は、（例えば、ＳＮＡＣのカプリル酸またはＳＮＡＤのデカン酸のように）飽和していてもよく、あるいは不飽和であってもよい（すなわち、少なくとも１つの不飽和炭素－炭素結合を含む）。
いくつかの局面においては、下に示すように、該経口送達剤は、Ｎ－（８－（２－ヒドロキシベンゾイル）アミノ）カプリル酸を含む。
Figure 2024500367000002
いくつかの局面においては、該経口送達剤は、Ｎ－（８－（２－ヒドロキシベンゾイル）アミノ）カプリル酸の塩を含む。いくつかの局面においては、該経口送達剤は、Ｎ－（８－（２－ヒドロキシベンゾイル）アミノ）カプリル酸の溶媒和物を含む。いくつかの局面においては、該経口送達剤は、Ｎ－（８－（２－ヒドロキシベンゾイル）アミノ）カプリル酸の水和物を含む。いくつかの局面においては、該経口送達剤は、Ｎ－（８－（２－ヒドロキシベンゾイル）アミノ）カプリル酸の塩、水和物、または溶媒和物、あるいはそれらの任意の組み合わせを含む。
いくつかの局面においては、Ｎ－（８－（２－ヒドロキシベンゾイル）アミノ）カプリル酸の塩は、Ｎ－（８－（２－ヒドロキシベンゾイル）アミノ）カプリル酸のナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、およびそれらの任意の組み合わせから成る群から選択される。いくつかの局面においては、Ｎ－（８－（２－ヒドロキシベンゾイル）アミノ）カプリル酸の塩はナトリウム塩である。いくつかの局面においては、Ｎ－（８－（２－ヒドロキシベンゾイル）アミノ）カプリル酸の塩は二ナトリウム塩である。いくつかの局面においては、Ｎ－（８－（２－ヒドロキシベンゾイル）アミノ）カプリル酸の塩は、下に示すような一ナトリウム塩（サルカプロザートナトリウム２０３７８７－９１－１、ＳＮＡＣ、８－（２－ヒドロキシベンズアミド）オクタン酸ナトリウム）である。
Figure 2024500367000003
いくつかの局面においては、該経口送達剤は、下に示すような５－ＣＮＡＣ（Ｎ－（５－クロロサリシロイル）－８－アミノカプリル酸）を含む。
Figure 2024500367000004
いくつかの局面においては、該経口送達剤は、Ｎ－（５－クロロサリシロイル）－８－アミノカプリル酸の塩を含む。いくつかの局面においては、該経口送達剤は、Ｎ－（５－クロロサリシロイル）－８－アミノカプリル酸の溶媒和物を含む。いくつかの局面においては、該経口送達剤は、Ｎ－（５－クロロサリシロイル）－８－アミノカプリル酸の水和物を含む。いくつかの局面においては、該経口送達剤は、Ｎ－（５－クロロサリシロイル）－８－アミノカプリル酸の塩、水和物、または溶媒和物、あるいはそれらの任意の組み合わせを含む。
いくつかの局面においては、Ｎ－（５－クロロサリシロイル）－８－アミノカプリル酸の塩は、Ｎ－（５－クロロサリシロイル）－８－アミノカプリル酸のナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、およびそれらの任意の組み合わせから成る群から選択される。いくつかの局面においては、Ｎ－（５－クロロサリシロイル）－８－アミノカプリル酸の塩はナトリウム塩である。いくつかの局面においては、Ｎ－（５－クロロサリシロイル）－８－アミノカプリル酸の塩は二ナトリウム塩である。いくつかの局面においては、Ｎ－（５－クロロサリシロイル）－８－アミノカプリル酸の塩は一ナトリウム塩である。
いくつかの局面においては、該経口送達剤は、下に示すような４－ＣＮＡＢ（４－［（４－クロロ－２－ヒドロキシ－ベンゾイル）アミノ］ブタン酸；サルクロブジン酸塩）を含む。
Figure 2024500367000005
いくつかの局面においては、該経口送達剤は、４－［（４－クロロ－２－ヒドロキシ－ベンゾイル）アミノ］ブタン酸の塩を含む。いくつかの局面においては、該経口送達剤は、４－［（４－クロロ－２－ヒドロキシ－ベンゾイル）アミノ］ブタン酸の溶媒和物を含む。いくつかの局面においては、該経口送達剤は、４－［（４－クロロ－２－ヒドロキシ－ベンゾイル）アミノ］ブタン酸の水和物を含む。いくつかの局面においては、該経口送達剤は、４－［（４－クロロ－２－ヒドロキシ－ベンゾイル）アミノ］ブタン酸の塩、水和物、または溶媒和物、あるいはそれらの任意の組み合わせを含む。
いくつかの局面においては、４－［（４－クロロ－２－ヒドロキシ－ベンゾイル）アミノ］ブタン酸の塩は、４－［（４－クロロ－２－ヒドロキシ－ベンゾイル）アミノ］ブタン酸のナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、およびそれらの任意の組み合わせから成る群から選択される。いくつかの局面においては、４－［（４－クロロ－２－ヒドロキシ－ベンゾイル）アミノ］ブタン酸の塩はナトリウム塩である。いくつかの局面においては、４－［（４－クロロ－２－ヒドロキシ－ベンゾイル）アミノ］ブタン酸の塩は二ナトリウム塩である。いくつかの局面においては、４－［（４－クロロ－２－ヒドロキシ－ベンゾイル）アミノ］ブタン酸の塩は一ナトリウム塩である。
いくつかの局面においては、該経口送達剤は、下に示すような４－ＭＯＡＣ（Ｎ－（８－［４－メトキシ－クロロ－２－ヒドロキシベンゾイル－アミノ）オクタン酸）を含む。
Figure 2024500367000006
いくつかの局面においては、該経口送達剤は、Ｎ－（８－［４－メトキシ－クロロ－２－ヒドロキシベンゾイル－アミノ）オクタン酸の塩を含む。いくつかの局面においては、該経口送達剤は、Ｎ－（８－［４－メトキシ－クロロ－２－ヒドロキシベンゾイル－アミノ）オクタン酸の溶媒和物を含む。いくつかの局面においては、該経口送達剤は、Ｎ－（８－［４－メトキシ－クロロ－２－ヒドロキシベンゾイル－アミノ）オクタン酸の水和物を含む。いくつかの局面においては、該経口送達剤は、Ｎ－（８－［４－メトキシ－クロロ－２－ヒドロキシベンゾイル－アミノ）オクタン酸の塩、水和物、または溶媒和物、あるいはそれらの任意の組み合わせを含む。
いくつかの局面においては、Ｎ－（８－［４－メトキシ－クロロ－２－ヒドロキシベンゾイル－アミノ）オクタン酸の塩は、Ｎ－（８－［４－メトキシ－クロロ－２－ヒドロキシベンゾイル－アミノ）オクタン酸のナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、およびそれらの任意の組み合わせから成る群から選択される。いくつかの局面においては、Ｎ－（８－［４－メトキシ－クロロ－２－ヒドロキシベンゾイル－アミノ）オクタン酸の塩はナトリウム塩である。いくつかの局面においては、Ｎ－（８－［４－メトキシ－クロロ－２－ヒドロキシベンゾイル－アミノ）オクタン酸の塩は二ナトリウム塩である。いくつかの局面においては、Ｎ－（８－［４－メトキシ－クロロ－２－ヒドロキシベンゾイル－アミノ）オクタン酸の塩は一ナトリウム塩である。
いくつかの局面においては、該経口送達剤は、下に示すようなＳＮＡＤ（Ｎ－（１０－［２－ヒドロキシベンゾイル］－アミノ）デカン酸）を含む。
Figure 2024500367000007
いくつかの局面においては、該経口送達剤は、Ｎ－（１０－［２－ヒドロキシベンゾイル］－アミノ）デカン酸の塩を含む。いくつかの局面においては、該経口送達剤は、Ｎ－（１０－［２－ヒドロキシベンゾイル］－アミノ）デカン酸の溶媒和物を含む。いくつかの局面においては、該経口送達剤は、Ｎ－（１０－［２－ヒドロキシベンゾイル］－アミノ）デカン酸の水和物を含む。いくつかの局面においては、該経口送達剤は、Ｎ－（１０－［２－ヒドロキシベンゾイル］－アミノ）デカン酸の塩、水和物、または溶媒和物、あるいはそれらの任意の組み合わせを含む。
いくつかの局面においては、Ｎ－（１０－［２－ヒドロキシベンゾイル］－アミノ）デカン酸の塩は、Ｎ－（１０－［２－ヒドロキシベンゾイル］－アミノ）デカン酸のナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、およびそれらの任意の組み合わせから成る群から選択される。いくつかの局面においては、Ｎ－（１０－［２－ヒドロキシベンゾイル］－アミノ）デカン酸の塩はナトリウム塩である。いくつかの局面においては、Ｎ－（１０－［２－ヒドロキシベンゾイル］－アミノ）デカン酸の塩は二ナトリウム塩である。いくつかの局面においては、Ｎ－（１０－［２－ヒドロキシベンゾイル］－アミノ）デカン酸の塩は一ナトリウム塩である。
いくつかの局面においては、該経口送達剤は、図２２に提示される化合物を含む。いくつかの局面においては、該経口送達剤は、図２２に提示される化合物の塩を含む。いくつかの局面においては、該経口送達剤は、図２２に提示される化合物の溶媒和物を含む。いくつかの局面においては、該経口送達剤は、図２２に提示される化合物の水和物を含む。いくつかの局面においては、該経口送達剤は、図２２に提示される化合物の塩、水和物、または溶媒和物、あるいはそれらの任意の組み合わせを含む。
いくつかの局面においては、図２２に提示される化合物の塩は、図２２に提示される化合物のナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、またはそれらの任意の組み合わせから成る群から選択される。いくつかの局面においては、図２２に提示される化合物の塩はナトリウム塩である。いくつかの局面においては、図２２に提示される化合物の塩は二ナトリウム塩である。いくつかの局面においては、図２２に提示される化合物の塩は一ナトリウム塩である。
米国特許公開公報第５６５０３８６号Ａ、米国特許公報第６３９９７９８号Ｂ２、米国特許公報第７３８４９８２号Ｂ２、米国特許公報第７６５９３１１号Ｂ２、米国特許公報第８００３６９７号Ｂ２、米国特許公報第８２０７２２７号Ｂ２、米国特許公報第８６５８６９５号Ｂ２、米国特許公報第７５４４８３３号Ｂ２、米国特許第７６５９３１１号、米国特許第８００３６９７号、米国特許第８２０７２２７号、米国特許第８６５８６９５号、米国特許第７３８４９８２号、米国特許公報第９２７８１２３号Ｂ２、米国特許公報第１００８６０４７号Ｂ２、米国特許公開公報第２０１８０３６０９１８号Ａ１、米国特許公開公報第２０１１００９２４２６号Ａ１、米国特許公開公報第２０１５０２８３２１２号Ａ１、米国特許公報第８４３５９４６号Ｂ２、米国特許公報第８７４８３８３号Ｂ２、米国特許公報第７５６９５３９号Ｂ２を参照のこと；これらの参考文献はいずれも、その内容全体が参照として本明細書に組み入れられる。
いくつかの局面においては、該経口送達剤は、以下に示す化学式の化合物を含む。
Figure 2024500367000008
 ここで、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４が、独立に水素、－ＯＨ、－ＮＲ６Ｒ７、ハロゲン、Ｃ１～Ｃ４アルキル、またはＣ１～Ｃ４アルコキシであり；
Ｒ５が、置換または非置換のＣ２～Ｃ１６アルキレン、置換または非置換のＣ２～Ｃ１６アルケニレン、置換または非置換のＣ１～Ｃ１２アルキル（アリーレン）、あるいは置換または非置換のアリール（Ｃ１～Ｃ４アルキレン）であり；
および
Ｒ６およびＲ７が、独立に水素、酸素、またはＣ１～Ｃ４アルキルである。
いくつかの局面においては、該経口送達剤は上記のような化学式：
Figure 2024500367000009
 の化合物を含むが；
ここで該化合物は遊離酸またはナトリウム塩（例えば、一ナトリウムまたは二ナトリウム塩）である。いくつかの局面においては、該化合物は水和物または溶媒和物である。いくつかの局面においては、該化合物はアルコール溶媒和物である。いくつかの局面においては、該アルコール溶媒和物はエタノール溶媒和物である。いくつかの局面においては、該エタノール溶媒和物は塩の溶媒和物である。いくつかの局面においては、該エタノール溶媒和物は一ナトリウム塩のエタノール溶媒和物である。いくつかの局面においては、該エタノール溶媒和物は二ナトリウム塩のエタノール溶媒和物である。いくつかの局面においては、該化合物は水和物である。いくつかの局面においては、該水和物は塩の水和物である。いくつかの局面においては、該水和物は一ナトリウム塩の水和物である。いくつかの局面においては、該水和物は二ナトリウム塩の水和物である。
いくつかの局面においては、本開示において有用な経口送達剤としては、中鎖脂肪酸（ＭＣＦＡ）（Ｃ８（カプリル酸）、Ｃ１０（カプリン酸）、またはＣ１２（ラウリン酸）など）、その誘導体、その薬学的に許容可能な塩、その水和物、またはその溶媒和物、あるいはそれらの任意の組み合わせを挙げることができる。
Figure 2024500367000010
いくつかの局面においては、該経口送達剤は、Ｃ８、Ｃ１０、ＳＮＡＣまたは５－ＣＮＡＣの塩の溶媒和物を含む。本明細書中の用語「溶媒和物」としては、溶媒の分子またはイオンと送達剤化合物の分子またはイオン、またはその塩、またはその水和物、またはその溶媒和物との間の分子複合体またはイオン結合型錯体が挙げられるが、これらのみに限定されるものではない。
いくつかの局面においては、該経口送達剤は、Ｃ８、Ｃ１０、ＳＮＡＣまたは５－ＣＮＡＣの塩の水和物を含む。本明細書中の用語「水和物」としては：
（ｉ）分子形態で組み合わせた水を含む物質；
および
（ｉｉ）結晶化の１つ以上の水分子を含む結晶質または自由水を含む結晶質、
が挙げられるが、これらのみに限定されるものではない。
いくつかの局面においては、該経口送達剤は、Ｃ８、Ｃ１０、ＳＮＡＣまたは５－ＣＮＡＣの塩の溶媒和物を含むが、ここで該塩は、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、またはそれらの組み合わせである。いくつかの局面においては、該経口送達剤は、Ｃ８、Ｃ１０、ＳＮＡＣまたは５－ＣＮＡＣの塩の溶媒和物を含むが、ここで該塩はナトリウム塩である。
いくつかの局面においては、該経口送達剤は、Ｃ８、Ｃ１０、ＳＮＡＣ、または５－ＣＡＮの塩の溶媒和物を含むが、ここで該塩は一ナトリウム塩である。いくつかの局面においては、該経口送達剤は、Ｃ８のナトリウム塩、例えば、カプリン酸一ナトリウムを含む。いくつかの局面においては、該経口送達剤は、Ｃ１０のナトリウム塩、例えば、カプリル酸一ナトリウムを含む。いくつかの局面においては、該経口送達剤は、ＳＮＡＣのナトリウム塩、例えば、ＳＮＡＣ一ナトリウムを含む。いくつかの局面においては、該経口送達剤は、５－ＣＮＡＣのナトリウム塩、例えば、５－ＣＮＡＣ一ナトリウムを含む。
いくつかの局面においては、該経口送達剤は、Ｃ８、Ｃ１０、ＳＮＡＣまたは５－ＣＮＡＣの塩のアルコール溶媒和物を含むが、ここで該塩はナトリウム塩である。いくつかの局面においては、該経口送達剤は、Ｃ８、Ｃ１０、ＳＮＡＣ、または５－０ＣＮＡＣの塩のアルコール溶媒和物を含むが、ここで該塩は一ナトリウム塩である。いくつかの局面においては、該経口送達剤は、Ｃ８、Ｃ１０、ＳＮＡＣまたは５－ＣＮＡＣの塩の水和物を含むが、ここで該塩はナトリウム塩である。いくつかの局面においては、該経口送達剤は、Ｃ８、Ｃ１０、ＳＮＡＣまたは５－ＣＮＡＣの塩の水和物を含むが、ここで該塩は一ナトリウム塩である。いくつかの局面においては、該経口送達剤は、Ｃ８、Ｃ１０、ＳＮＡＣまたは５－ＣＮＡＣの塩の水和物を含むが、ここで該塩はナトリウム塩であり、該水和物は一水和物である。
ナトリウム塩、アルコール溶媒和物、および水和物を調製する方法は、例えば、国際特許公開ＷＯ００／０５９８６３に記載される；この参考文献は、その内容全体が参照として本明細書に組み入れられる。例えば、無水ナトリウム塩を形成させる方法であって、当該技術分野において公知の方法により、エタノール溶媒和物を蒸発または乾燥させて、該エタノール溶媒和物からナトリウム塩を調製してもよい。乾燥は一般的に、約８０℃～約１２０℃、例えば、約８５℃～約９０℃の温度で実施される。いくつかの局面においては、乾燥は約８５℃で実施される。該乾燥工程は一般的に、約６６０ｍｍＨｇ（８．８ｋＰａ）以上の圧力で実施される。該無水ナトリウム塩は一般的に、無水ナトリウム塩の１００％総重量に基づいて、エタノールの重量で約５％未満、および好ましくはエタノールの重量で約２％未満を含む。
本明細書に開示の経口送達剤のナトリウム塩はまた、水中に送達剤を含むスラリーを作成し、水性水酸化ナトリウム、ナトリウムアルコキシドなどを添加することによっても調製される。好適なナトリウムアルコキシド類としては、ナトリウムメトキシド、ナトリウムエトキシド、およびそれらの組み合わせが挙げられるが、これらのみに限定されるものではない。ナトリウム塩を調製するさらなる方法は、該送達剤を水酸化ナトリウムと反応させてナトリウム塩を得ることである。
該ナトリウム塩は、該ナトリウム塩を含む溶液を真空蒸留で濃厚なペーストに濃縮することによって、固形物として単離することができる。このペーストを真空オーブンで乾燥させて、該送達剤のナトリウム塩を固形物として取得してもよい。二ナトリウム塩の水溶液を噴霧乾燥することによっても、該固形物を単離することができる。本明細書に開示の経口送達剤は、当該技術分野において公知の方法、例えば、上記のように、米国特許第５，７７３，６４７号および第５，８６６，５３６号に記載の方法によって調製してもよい；これらの参考文献は、その内容全体が参照として本明細書に組み入れられる。
本明細書に開示の経口送達剤分子（例えば、Ｃ８、Ｃ１０、ＳＮＡＣ、５－ＣＮＡＣ、またはそれらの任意の組み合わせ）のエタノール溶媒和物としては、エタノール溶媒の分子またはイオンの、該送達剤のナトリウム塩の分子またはイオンとの分子複合体またはイオン結合型錯体が挙げられるが、これらのみに限定されるものではない。典型的には、該エタノール溶媒和物は、該送達剤のナトリウム塩の各分子当たり約１エタノール分子またはイオンを含む。
該送達剤のナトリウム塩のエタノール溶媒和物は、エタノール中に該送達剤を溶解することによって調製することができる。次いで、該送達剤／エタノール溶液を、送達剤に対してモル過剰のナトリウム含有塩（一ナトリウム含有塩など）に反応させ（すなわち、送達剤の各モル毎に、１モルよりも多いナトリウム陽イオンが存在する）、該エタノール溶媒和物を取得する。好適な一ナトリウム塩としては、水酸化ナトリウム；ナトリウムアルコキシド類（ナトリウムメトキシドおよびナトリウムエトキシドなど）；および上記の任意の組み合わせが挙げられるが、これらのみに限定されるものではない。一般的には、該混合物の還流温度またはそれより低い温度（周囲温度など）で、該反応を実施する。次いで、得られたスラリーを常圧蒸留で濃縮し、濃縮スラリーを冷却して、固形物を濾過することなどにより当該技術分野において公知の方法で、該エタノール溶媒和物を回収する。次いで、回収した固形物を真空乾燥して、該エタノール溶媒和物を取得することができる。
該送達剤のナトリウム塩の水和物は、上記のように、該エタノール溶媒和物を乾燥させて無水二ナトリウム塩を形成させ、その無水ナトリウム塩を水和させることによって、調製してもよい。いくつかの局面においては、該ナトリウム塩の一水和物が形成される。無水ナトリウム塩類は非常に吸湿性であるため、空気中の水分に曝露することによって水和物の形成が起こる。一般的には、おおよそ周囲温度から約５０℃まで、好ましくは周囲温度から約３０℃まで、少なくとも５０％の相対湿度を有する環境において、該水和工程を実施する。あるいは、該無水ナトリウム塩を蒸気で水和してもよい。
本開示の経口医薬組成物は、典型的には、有効量の、本明細書に開示の１種類以上の送達剤（例えば、Ｃ８、Ｃ１０、ＳＮＡＣ、５－ＣＮＡＣ、またはそれらの任意の組み合わせ）を含む；すなわち、所望の効果を得るために活性物質（例えば、ＣＩＶＩ００８）を送達する充分な量。一般的に、該経口送達剤（例えば、Ｃ８、Ｃ１０、ＳＮＡＣ、５－ＣＮＡＣ、またはそれらの任意の組み合わせ）は、重量で約２．５％～約９９．４％の量で存在する。いくつかの局面においては、該経口送達剤（例えば、Ｃ８、Ｃ１０、ＳＮＡＣ、５－ＣＮＡＣ、またはそれらの任意の組み合わせ）は、重量で約１５％～約７５％の量で存在する。いくつかの局面においては、該経口送達剤（例えば、Ｃ８、Ｃ１０、ＳＮＡＣ、５－ＣＮＡＣ、またはそれらの任意の組み合わせ）は、重量で少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、または少なくとも約３５％の量であって、かつ約６０％または約７０％以下の量で存在する。したがって、いくつかの局面においては、該経口送達剤（例えば、Ｃ８、Ｃ１０、ＳＮＡＣ、５－ＣＮＡＣ、またはそれらの任意の組み合わせ）は、重量で少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、または少なくとも約７０％の量で存在する。いくつかの局面においては、該経口送達剤（例えば、Ｃ８、Ｃ１０、ＳＮＡＣ、５－ＣＮＡＣ、またはそれらの任意の組み合わせ）は、重量で約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、または約７０％の量で存在する。
いくつかの局面においては、本開示の経口医薬組成物は単回投与する。用語「単回投与」は、例えば、本明細書に開示のオリゴマーまたはオリゴヌクレオチドコンジュゲート（例えば、ＣＩＶＩ００８）、ならびにＳＮＡＣ、Ｃ１０、または５－ＣＮＡＣ、その水和物、その溶媒和物、またはその塩、およびそれらの組み合わせから成る群から選択される経口送達剤を含む、経口単位用量の形態である本発明にしたがう経口医薬組成物をヒト患者または患獣に単回用量で投与することを意味する。
いくつかの局面においては、本開示の経口医薬組成物を複数回投与する。用語「複数回投与」は、例えば、本明細書に開示のオリゴマーまたはオリゴヌクレオチドコンジュゲート（例えば、ＣＩＶＩ００８）、ならびにＳＮＡＣ、Ｃ１０、または５－ＣＮＡＣ、その水和物、その溶媒和物、またはその塩、およびそれらの組み合わせから成る群から選択される経口送達剤を含む、経口単位用量の形態である本発明にしたがう経口医薬組成物を、ヒト患者または患獣に少なくとも２用量をその組成物に適切な投与間隔にしたがって投与することを意味する。
本明細書中の用語「経口単位用量」は、当該技術分野において公知のように、ヒトおよび動物における摂取に好適であり、個別的梱包した、物理的に不連続なユニットを指す。本開示の目的において、治療有効量の、本明細書に開示のオリゴマーまたはオリゴヌクレオチドコンジュゲート（例えば、ＣＩＶＩ００８）および経口送達剤を含む剤形は、治療効果を得るために１つ以上の単位用量（例えば、錠剤、カプセル）を含んでいてもよいことが理解される。
本開示の経口医薬組成物（例えば、ＳＮＡＣ、Ｃ１０、または５－ＣＮＡＣなどの経口送達剤と組み合わせたＣＩＶＩ００８などのアンチセンスオリゴヌクレオチドコンジュゲート）の経口剤形（例えば、錠剤またはカプセル）は、食事の約５分～約６０分前に投与することができる。本開示の経口医薬組成物（例えば、ＳＮＡＣ、Ｃ１０、または５－ＣＮＡＣなどの経口送達剤と組み合わせたＣＩＶＩ００８などのアンチセンスオリゴヌクレオチドコンジュゲート）の経口剤形は、食事の約３０分～約６０分前に投与することができる。本開示の経口医薬組成物（例えば、ＳＮＡＣ、Ｃ１０、または５－ＣＮＡＣなどの経口送達剤と組み合わせたＣＩＶＩ００８などのアンチセンスオリゴヌクレオチドコンジュゲート）の経口剤形（例えば、錠剤またはカプセル）は、食事の約４５分～約９０分前に投与することができる。本開示の経口医薬組成物（例えば、ＳＮＡＣ、Ｃ１０、または５－ＣＮＡＣなどの経口送達剤と組み合わせたＣＩＶＩ００８などのアンチセンスオリゴヌクレオチドコンジュゲート）の経口剤形（例えば、錠剤またはカプセル）は、食事の約６０分（１時間）～約１２０分（２時間）前に投与することができる。
いくつかの局面においては、本開示の経口医薬組成物（例えば、ＳＮＡＣ、Ｃ１０、または５－ＣＮＡＣなどの経口送達剤と組み合わせたＣＩＶＩ００８などのアンチセンスオリゴヌクレオチドコンジュゲート）は、食事の少なくとも約５分前、少なくとも約１０分前、少なくとも約１５分前、少なくとも約２０分前、少なくとも約２５分前、少なくとも約３０分前、少なくとも約３５分前、少なくとも約４０分前、少なくとも約４５分前、少なくとも約５０分前、少なくとも約５５分前、少なくとも約６０分前、少なくとも約６５分前、少なくとも約７０分前、少なくとも約７５分前、少なくとも約８０分前、少なくとも約８５分前、少なくとも約９０分前、少なくとも約９５分前、少なくとも約１００分前、少なくとも約１０５分前、少なくとも約１１０分前、少なくとも約１１５分前、または少なくとも約１２０分前に投与することができる。
いくつかの局面においては、本開示の経口医薬組成物（例えば、ＳＮＡＣ、Ｃ１０、または５－ＣＮＡＣなどの経口送達剤と組み合わせたＣＩＶＩ００８などのアンチセンスオリゴヌクレオチドコンジュゲート）を、食事の約５分前、約１０分前、約１５分前、約２０分前、約２５分前、約３０分前、約３５分前、約４０分前、約４５分前、約５０分前、約５５分前、約６０分前、約６５分前、約７０分前、約７５分前、約８０分前、約８５分前、約９０分前、約９５分前、約１００分前、約１０５分前、約１１０分前、約１１５分前、または約１２０分前に投与する。
いくつかの局面においては、本開示の経口医薬組成物（例えば、ＳＮＡＣ、Ｃ１０、または５－ＣＮＡＣなどの経口送達剤と組み合わせたＣＩＶＩ００８などのアンチセンスオリゴヌクレオチドコンジュゲート）を、少なくとも食物摂取の約３０分前に投与する。いくつかの局面においては、本開示の経口医薬組成物（例えば、ＳＮＡＣ、Ｃ１０、または５－ＣＮＡＣなどの経口送達剤と組み合わせたＣＩＶＩ００８などのアンチセンスオリゴヌクレオチドコンジュゲート）を、少なくとも食物摂取の約４５分前に投与する。いくつかの局面においては、本開示の経口医薬組成物（例えば、ＳＮＡＣ、Ｃ１０、または５－ＣＮＡＣなどの経口送達剤と組み合わせたＣＩＶＩ００８などのアンチセンスオリゴヌクレオチドコンジュゲート）を、少なくとも食物摂取の約６０分前に投与する。いくつかの局面においては、本開示の経口医薬組成物（例えば、ＳＮＡＣ、Ｃ１０、または５－ＣＮＡＣなどの経口送達剤と組み合わせたＣＩＶＩ００８などのアンチセンスオリゴヌクレオチドコンジュゲート）を、少なくとも食物摂取の約２時間前に投与する。
本開示の経口医薬組成物（例えば、ＳＮＡＣ、Ｃ１０、または５－ＣＮＡＣなどの経口送達剤と組み合わせたＣＩＶＩ００８などのアンチセンスオリゴヌクレオチドコンジュゲート）は、固形形態で提供することができる。いくつかの局面においては、該固形形態は、カプセル、例えば、軟質ゲルカプセルまたは液体充填カプセル（液体カプセル）である。本開示の経口医薬組成物はまた、錠剤、カプレット剤またはその他の固形経口剤形（いずれも当該技術分野において公知の方法で調製することができる）として提供することもできる。
いくつかの局面においては、該経口剤形（例えば、錠剤またはカプセル）は、約５ｍｇ～約１０００ｍｇ、約１０ｍｇ～約５００ｍｇ、約１０ｍｇ～約２５０ｍｇ、約１００ｍｇ～約２００ｍｇ、または約２５０ｍｇ～約５００ｍｇの重量を有し得る。いくつかの局面においては、経口剤形（例えば、錠剤またはカプセル）の重量は、約５ｍｇ、約１０ｍｇ、約２０ｍｇ、約２５ｍｇ、約５０ｍｇ、約１００ｍｇ、約２００ｍｇ、約２５０ｍｇ、約３７５ｍｇ、約５００ｍｇ、約７５０ｍｇ、または約１０００ｍｇである。
いくつかの局面においては、経口剤形（例えば、錠剤またはカプセル）であるアンチセンスオリゴマーまたはアンチセンスオリゴヌクレオチドコンジュゲート（例えば、ＣＩＶＩ００８）の量は、約１ｍｇ～約１００ｍｇ、約５ｍｇ～約１００ｍｇ、約１０ｍｇ～約１００ｍｇ、約２０ｍｇ～約１００ｍｇ、または約２０ｍｇ～約５０ｍｇの範囲である。
本開示のいくつかの局面においては、ＣＩＶＩ００８はカプセル形態で製剤化されるが、ここで該カプセルは硬質殻ゼラチンカプセルである。いくつかの局面においては、該カプセルはサイズ０カプセル（密閉状態の長さ：２１．７ｍｍ ｘ 外径：７．６ｍｍ）である。いくつかの局面においては、該カプセルはサイズ４カプセル（密閉状態の長さ：１４．３ｍｍ ｘ 外径：５．０５ｍｍ）である。いくつかの局面においては、該カプセルは、約５ｍｇ～約３０ｍｇのＣＩＶＩ００８（セパダクルセンナトリウム）、例えば、約５ｍｇ、約１０ｍｇ、約１５ｍｇ、約２０ｍｇ、約２５ｍｇ、または約３０ｍｇのＣＩＶＩ００８を含む。いくつかの局面においては、該カプセルは、約１００ｍｇまたは約２００ｍｇの５－ＣＮＡＣ、例えば、約１００ｍｇ、約１２５ｍｇ、約１５０ｍｇ、約１７５ｍｇ、または約２００ｍｇの５－ＣＮＡＣを含む。いくつかの局面においては、該カプセルの充填物は成分（すなわち、乾燥ＣＩＶＩ００８および乾燥５－ＣＮＡＣ）を乾式混合することにより製造される。いくつかの局面においては、該カプセルの充填物は成分（すなわち、ＣＩＶＩ００８および５－ＣＮＡＣ）の共溶解混合物を凍結乾燥することにより製造される。いくつかの局面においては、該カプセルは、約１０ｍｇのＣＩＶＩ００８および約１００ｍｇの５－ＣＮＡＣを含む。いくつかの局面においては、該カプセルは、約２０ｍｇのＣＩＶＩ００８および約２００ｍｇの５－ＣＮＡＣを含む。いくつかの局面においては、該カプセルは、約５ｍｇのＣＩＶＩ００８および約２００ｍｇの５－ＣＮＡＣを含む。いくつかの局面においては、該カプセルは、約２５ｍｇのＣＩＶＩ００８および約２００ｍｇの５－ＣＮＡＣを含む。いくつかの局面においては、該カプセルは、約３０ｍｇのＣＩＶＩ００８および約２００ｍｇの５－ＣＮＡＣを含む。
いくつかにおいては、本開示は、医薬組成物、例えば、カプセル形態の医薬組成物を提供するが、ここで該医薬組成物は、例えば、約１０ｍｇのＣＩＶＩ００８および約１００ｍｇの５－ＣＮＡＣ、約２０ｍｇのＣＩＶＩ００８および約２００ｍｇの５－ＣＮＡＣ、約５ｍｇのＣＩＶＩ００８および約２００ｍｇの５－ＣＮＡＣ、約２５ｍｇのＣＩＶＩ００８および約２００ｍｇの５－ＣＮＡＣ、または約３０ｍｇのＣＩＶＩ００８および約２００ｍｇの５－ＣＮＡＣを含むが、ここで該医薬組成物の対象への投与によって、５－ＣＮＡＣの代替としてＳＮＡＣを含む、対応する医薬組成物を対象に投与した場合に測定した平均ＡＵＣ０－５０と比較して、平均ＡＵＣ０－５０が少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、または少なくとも約１００％増加する。特定の一局面においては、５－ＣＮＡＣの代替としてＳＮＡＣを含む対応する医薬組成物を対象に投与した場合に測定した平均ＡＵＣ０－５０と比較して、平均ＡＵＣ０－５０の増加は約８０％である。
本明細書中の用語「５－ＣＮＡＣの代替としてＳＮＡＣを含む対応する医薬組成物」は、被検医薬組成物と同一の成分を含む参照医薬組成物を指すが、ここで該参照医薬組成物と該被検組成物との間の唯一の相違は、参照医薬組成物においては５－ＣＮＡＣの代わりにＳＮＡＣが存在することである。例えば、該被検医薬組成物が１０ｍｇのＣＩＶＩ００８および１００ｍｇの５－ＣＮＡＣを含むサイズ４のカプセルに含まれる場合には、該対応する参照医薬組成物もサイズ４のカプセルに充填され、１０ｍｇのＣＩＶＩ００８および１００ｍｇのＳＮＡＣを含むことになる。
いくつかの局面においては、本開示は、例えば、カプセル形態の医薬組成物であって、例えば、約１０ｍｇのＣＩＶＩ００８および約１００ｍｇの５－ＣＮＡＣ、約２０ｍｇのＣＩＶＩ００８および約２００ｍｇの５－ＣＮＡＣ、約５ｍｇのＣＩＶＩ００８および約２００ｍｇの５－ＣＮＡＣ、約２５ｍｇのＣＩＶＩ００８および約２００ｍｇの５－ＣＮＡＣ、または約３０ｍｇのＣＩＶＩ００８および約２００ｍｇの５－ＣＮＡＣを含む医薬組成物を提供するが、ここで該医薬組成物の対象への投与によって、５－ＣＮＡＣの代替としてＳＮＡＣを含む、対応する医薬組成物を対象に投与した場合に測定した平均Ｃｍａｘと比較して、平均Ｃｍａｘが少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約１００％、少なくとも約１１０％、少なくとも約１２０％、少なくとも約１３０％、少なくとも約１４０％、または少なくとも約１５０％増加する。特定の一局面においては、５－ＣＮＡＣの代替としてＳＮＡＣを含む対応する医薬組成物を対象に投与した場合に測定した平均Ｃｍａｘと比較して、平均Ｃｍａｘの増加は約１１０％である。
いくつかの局面においては、経口剤形（例えば、錠剤またはカプセル）中のアンチセンスオリゴマーまたはアンチセンスオリゴヌクレオチドコンジュゲート（例えば、ＣＩＶＩ００８）の量は、約１ｍｇ、約２ｍｇ、約３ｍｇ、約４ｍｇ、約５ｍｇ、約６ｍｇ、約７ｍｇ、約８ｍｇ、約９ｍｇ、約１０ｍｇ、約１１ｍｇ、約１２ｍｇ、約１３ｍｇ、約１４ｍｇ、約１５ｍｇ、約１６ｍｇ、約１７ｍｇ、約１８ｍｇ、約１９ｍｇ、約２０ｍｇ、約２１ｍｇ、約２２ｍｇ、約２３ｍｇ、約２４ｍｇ、約２５ｍｇ、約２６ｍｇ、約２７ｍｇ、約２８ｍｇ、約２９ｍｇ、約３０ｍｇ、約３１ｍｇ、約３２ｍｇ、約３３ｍｇ、約３４ｍｇ、約３５ｍｇ、約３６ｍｇ、約３７ｍｇ、約３８ｍｇ、約３９ｍｇ、約４０ｍｇ、約４１ｍｇ、約４２ｍｇ、約４３ｍｇ、約４４ｍｇ、約４５ｍｇ、約４６ｍｇ、約４７ｍｇ、約４８ｍｇ、約４９ｍｇ、約５０ｍｇ、約５１ｍｇ、約５２ｍｇ、約５３ｍｇ、約５４ｍｇ、約５５ｍｇ、約５６ｍｇ、約５７ｍｇ、約５８ｍｇ、約５９ｍｇ、約６０ｍｇ、約６１ｍｇ、約６２ｍｇ、約６３ｍｇ、約６４ｍｇ、約６５ｍｇ、約６６ｍｇ、約６７ｍｇ、約６８ｍｇ、約６９ｍｇ、約７０ｍｇ、約７１ｍｇ、約７２ｍｇ、約７３ｍｇ、約７３ｍｇ、約７５ｍｇ、約７６ｍｇ、約７７ｍｇ、約７８ｍｇ、約７９ｍｇ、約８０ｍｇ、約８１ｍｇ、約８２ｍｇ、約８３ｍｇ、約８４ｍｇ、約８５ｍｇ、約８６ｍｇ、約８７ｍｇ、約８８ｍｇ、約８９ｍｇ、約９０ｍｇ、約９１ｍｇ、約９２ｍｇ、約９３ｍｇ、約９４ｍｇ、約９５ｍｇ、約９６ｍｇ、約９７ｍｇ、約９８ｍｇ、約９９、または約１００ｍｇである。
いくつかの局面においては、本開示の経口医薬組成物は、本明細書に開示のアンチセンスオリゴヌクレオチドコンジュゲート（例えば、ＣＩＶＩ００８）、および経口送達剤（例えば、ＳＮＡＣ、Ｃ１０、または５－ＣＮＡＣ）に加えて、少なくとも１種類の薬学的に許容可能な賦形剤またはそれらの組み合わせを含み得る。いくつかの局面においては、例えば、通常用いられる量の、該少なくとも１種類の薬学的に許容可能な添加剤またはそれらの組み合わせは、ｐＨ調節剤、防腐剤、香味料、味マスキング剤、香料、保湿剤、等張化剤、着色剤、界面活性剤、可塑剤、滑沢剤（ステアリン酸マグネシウムなど）、流動化補助剤、圧縮補助剤、可溶化剤、賦形剤、希釈剤（微小結晶セルロース（例えば、アビセルＰＨ１０２）など）、またはそれらの任意の組み合わせから成る群から選択されるが、これらにのみに限定されるものではない。いくつかの局面においては、本開示の経口医薬組成物（例えば、ＳＮＡＣ、Ｃ１０、または５－ＣＮＡＣなどの経口送達剤と組み合わせたＣＩＶＩ００８などのアンチセンスオリゴヌクレオチドコンジュゲート）は、微晶質セルロースを含む。いくつかの局面においては、本開示の経口医薬組成物（例えば、ＳＮＡＣ、Ｃ１０、または５－ＣＮＡＣなどの経口送達剤と組み合わせたＣＩＶＩ００８などのアンチセンスオリゴヌクレオチドコンジュゲート）は、リン酸緩衝液塩、クエン酸、グリコール類、他の分散剤、またはそれらの任意の組み合わせを含む。
いくつかの局面においては、本開示の経口医薬組成物（例えば、ＳＮＡＣ、Ｃ１０、または５－ＣＮＡＣなどの経口送達剤と組み合わせたＣＩＶＩ００８などのアンチセンスオリゴヌクレオチドコンジュゲート）は、希釈剤（例えば、微小結晶セルロース（例えば、アビセル）として）および滑沢剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム）を含み得る。いくつかの局面においては、本開示の経口医薬組成物（例えば、ＳＮＡＣ、Ｃ１０、または５－ＣＮＡＣなどの経口送達剤と組み合わせたＣＩＶＩ００８などのアンチセンスオリゴヌクレオチドコンジュゲート）は、ポビドンおよび／またはクロスポビドンを含み得る。該クロスポビドンは任意のクロスポビドンであり得る。クロスポビドンはＮ－ビニル－２－ピロリドンの合成架橋ホモポリマーであり、１－エテニル－２－ピロリジノンともよばれ、１，０００，０００以上の分子量を有する。市販のクロスポビドン類としては、ポリプラスドンＸＬ、ポリプラスドンＸＬ－１０、ＩＳＰから入手可能なポリプラスドンＩＮＦ－１０、ＢＡＳＦ社から入手可能なコリドンＣＬが挙げられる。いくつかの局面においては、該クロスポビドンはポリプラスドンＸＬである。ポビドンは、一般的に２，５００～３，０００，０００の分子量を有する直鎖状１－ビニル－２－ピロリドン基から成る合成ポリマーである。市販のポビドン類としては、コリドンＫ－３０、ＢＡＳＦ社から入手可能なコリドンＫ－９０Ｆ、およびＩＳＰから入手可能なプラスドンＫ－３０およびプラスドンＫ－２９／３２が挙げられる。上記のように、クロスポビドン類およびポビドン類は市販されている。あるいは、公知の処理法でそれらを合成してもよい。該クロスポビドン、ポビドンまたはそれらの組み合わせは、経口医薬組成物全体の総重量に対して、重量で０．５～５０パーセント量（例えば、経口医薬組成物全体の総重量に対して、重量で約２～約２５パーセント、または約５～約２０パーセントの量）で本開示の経口医薬組成物中に存在し得る。
いくつかの局面においては、本開示の経口医薬組成物（例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチドコンジュゲート（ＣＩＶＩ００８など）および経口送達剤（ＮＡＰまたはＣ１０など）、および任意選択的にスタチン）を含む経口剤形（例えば、錠剤またはカプセル）は、コーティング、例えば、腸溶性コーティング剤および／またはｐＨ感受性コーティング剤を含むことができ、また任意選択的に酵素阻害剤を含むことができる。したがって、いくつかの局面においては、該固形経口剤形は、胃では実質的に崩壊も溶解もしないが、腸では実質的に崩壊または溶解する。いくつかの局面においては、本開示の経口医薬組成物（例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチドコンジュゲート（ＣＩＶＩ００８など）および経口送達剤（ＳＮＡＣ、Ｃ１０、または５－ＣＮＡＣなど）、および任意選択的にスタチン）は、胃または上部腸管において、医薬製剤（例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチドコンジュゲート（例えば、ＣＩＶＩ００８）および／または任意選択的治療剤（スタチンなど）中の活性物質の酵素的分解を防ぐ１種類以上の酵素阻害剤をさらに含み得る。
いくつかの局面においては、本開示の経口医薬組成物または本明細書に開示の経口剤形（例えば、錠剤またはカプセル）は、胃における崩壊を遅延する目的で、腸溶性コーティングされる。腸溶性コーティング剤としては、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートサクシネート、ポリビニルアセタートフタレート、セルロースアセタートトリメリテート、セルロースアセタートフタレート、ポリ（メタクリル酸－エチルアクリル酸）、ポリ（メタクリル酸－メチルメタクリル酸）、およびそれらの組み合わせが挙げられるが、これらのみに限定されるものではない。さらに別の一局面においては、該経口医薬製剤は、崩壊するよりも経口剤形表面に侵食が起こるように製剤化してもよい。
いくつかの局面においては、本開示の経口医薬組成物または本明細書に開示の経口剤形（例えば、錠剤またはカプセル）は、経口医薬組成物またはその経口剤形を胃内の酸性環境から保護するｐＨ感受性コーティング剤、例えば、ｐＨ感受性ポリマーをさらに含む。いくつかの局面においては、該ｐＨ感受性ポリマーとしては、セルロース、アクリル酸、またはその誘導体が挙げられる。いくつかの局面においては、該ｐＨ感受性コーティング剤としては、ｐＨ感受性ヒドロゲル、ｐＨ活性化薬剤送達システム、ｐＨ感受性リポソーム、ミセルまたは脂質ナノ粒子、ｐＨ感受性ミクロスフェア、ｐＨ感受性ナノ粒子、もしくはそれらの任意の組み合わせが挙げられる。
例えば、液体カプセルまたはゲルカプセルに用いる腸溶性（胃中難溶解性）コーティング剤、ｐＨ感受性コーティング剤、酵素阻害剤、およびゼラチンベースの製剤については、下でより詳細に説明する。
いくつかの局面においては、本開示の経口医薬組成物は、本明細書に開示のアンチセンスオリゴヌクレオチドコンジュゲート（例えば、ＣＩＶＩ００８）および経口送達剤（例えば、ＳＮＡＣ、Ｃ１０、または５－ＣＮＡＣ）に加えて、スタチン（例えば、ロバスタチン（ｌｏｖａｓｔａｔｉｎ）、セリバスタチン、プラバスタチン、アトルバスタチン、シンバスタチン、ロスバスタチン、フルバスタチン、またはそれらの組み合わせ）、エゼチミブ、胆汁吸着樹脂、ニコチン酸、フィブリン酸誘導体、プロブコール、ネオマイシン、デキストロチロキシン、植物スタノールエステル、コレステロール吸収阻害剤、インプリタピド、胆汁酸トランスポーターの阻害剤、肝ＣＹＰ７ａの制御因子、エストロゲン補充療法剤、および抗炎症剤から成る群から選択される第２の治療活性化合物（治療剤）を含み得る。一般に、本開示の経口医薬組成物は、本明細書に開示のアンチセンスオリゴヌクレオチドコンジュゲート（例えば、ＣＩＶＩ００８）および経口送達剤（例えば、ＳＮＡＣ、Ｃ１０、または５－ＣＮＡＣ）に加えて、ＰＣＳＫ９発現および／またはＰＣＳＫ９活性の増加に関連する疾患または病態を治療するために、当該分野において用いられる第２の治療活性化合物を含み得る。
いくつかの局面においては、本開示は、細胞においてＰＣＳＫ９の発現レベルおよび／またはＰＣＳＫ９の活性を低下させるインビトロ法を提供するが、ここで該方法は、例えば、本明細書に開示のアンチセンスオリゴヌクレオチドコンジュゲート（例えば、ＣＩＶＩ００８）、経口送達剤（例えば、ＳＮＡＣ、Ｃ１０、または５－ＣＮＡＣ）、および任意選択的にスタチンなどの第２の治療剤を含む本開示の、有効量の経口医薬組成物を投与することを含む。
本開示はまた、それを必要とする対象においてＰＣＳＫ９発現レベルおよび／またはＰＣＳＫ９活性レベルを低下させる方法を提供するが、ここで該方法は、有効量の本開示の経口医薬組成物の医薬組成物（例えば、本明細書に開示のアンチセンスオリゴヌクレオチドコンジュゲート（例えば、ＣＩＶＩ００８）、経口送達剤（例えば、ＳＮＡＣ、Ｃ１０、または５－ＣＮＡＣ）、および任意選択的にスタチンなどの第２の治療剤）を投与することを含む。また、それを必要とする対象において、コレステロールレベルを低下させる方法が提供されるが、ここで該方法は、例えば、本明細書に開示のアンチセンスオリゴヌクレオチドコンジュゲート（例えば、ＣＩＶＩ００８）、経口送達剤（例えば、ＳＮＡＣ、Ｃ１０、または５－ＣＮＡＣ）、および任意選択的にスタチンなどの第２の治療剤を含む、有効量の本開示の経口医薬組成物を該対象に投与することを含む。
本開示の経口医薬組成物は、従来法によって、例えば、活性物質の混合物または活性物質、該経口送達剤、および他の成分を混合し、混練してカプセルに充填する、あるいはカプセルに充填する代わりに成形し、その後にさらに錠剤化または圧迫成形して錠剤を得ることにより、調製することができる。さらに、公知の方法で固体分散体を形成した後、さらに加工して錠剤またはカプセルを形成させるのであってもよい。いくつかの局面においては、本開示の経口医薬組成物の成分は、固形剤形全体を通じて均一にまたは一様に混合される。
本明細書中の用語「カプセル」は、典型的には、単回用量の活性物質（例えば、ＣＩＶＩ００８）を含む硬質殻または軟質殻（例えば、ゼラチン殻）を含む医薬調製物を意味することが意図される。一局面においては、該カプセルは経口投与が意図される。いくつかの局面においては、該カプセル殻（カプセル体としても知られる）は、摂取（例えば、嚥下）後に胃において崩壊し、カプセル内容物（例えば、ＣＩＶＩ００８および５－ＣＮＡＣを含む、例えば、本明細書に開示の乾式混合物）を放出する。
本明細書中の用語「乾式混合」は、液状媒体の非存在下で複数の成分（例えば、ＣＩＶＩ８００および５－ＣＮＡＣ）を一緒にして、完全に混合することを意味する。いくつかの局面においては、乾式混合の成分（例えば、ＣＩＶＩ８００、５－ＣＮＡＣ、または両方）は粉末形態であり得る。いくつかの局面においては、乾式混合の成分（例えば、ＣＩＶＩ８００および５－ＣＮＡＣ）は微粒子形態、例えば、顆粒状であり得る。
いくつかの局面においては、本開示は１０ｍｇのＣＩＶＩ００８（セパダクルセン）および１００ｍｇの５－ＣＮＡＣを含む医薬組成物を提供するが、ここで両成分は乾式混合である。いくつかの局面においては、本開示は２０ｍｇのＣＩＶＩ００８（セパダクルセン）および２００ｍｇの５－ＣＮＡＣを含む医薬組成物を提供するが、ここで両成分は乾式混合である。いくつかの局面においては、本開示は５ｍｇのＣＩＶＩ００８（セパダクルセン）および２００ｍｇの５－ＣＮＡＣを含む医薬組成物を提供するが、ここで両成分は乾式混合である。いくつかの局面においては、本開示は１０ｍｇのＣＩＶＩ００８（セパダクルセン）および２００ｍｇの５－ＣＮＡＣを含む医薬組成物を提供するが、ここで両成分は乾式混合である。いくつかの局面においては、本開示は２５ｍｇのＣＩＶＩ００８（セパダクルセン）および２００ｍｇの５－ＣＮＡＣを含む医薬組成物を提供するが、ここで両成分は乾式混合である。いくつかの局面においては、本開示は３０ｍｇのＣＩＶＩ００８（セパダクルセン）および２００ｍｇの５－ＣＮＡＣを含む医薬組成物を提供するが、ここで両成分は乾式混合である。
いくつかの局面においては、本開示は１０ｍｇのＣＩＶＩ００８（セパダクルセン）および１００ｍｇの５－ＣＮＡＣを含むカプセル（例えば、腸溶性コーティングした硬質殻ゼラチンカプセル）を提供するが、ここで両成分は乾式混合である。いくつかの局面においては、本開示は２０ｍｇのＣＩＶＩ００８（セパダクルセン）および２００ｍｇの５－ＣＮＡＣを含むカプセルを提供するが、ここで両成分は乾式混合である。いくつかの局面においては、本開示は、５ｍｇのＣＩＶＩ００８（セパダクルセン）および２００ｍｇの５－ＣＮＡＣを含むカプセルを提供するが、ここで両成分は乾式混合である。いくつかの局面においては、本開示は１０ｍｇのＣＩＶＩ００８（セパダクルセン）および２００ｍｇの５－ＣＮＡＣを含むカプセルを提供するが、ここで両成分は乾式混合である。いくつかの局面においては、本開示は２５ｍｇのＣＩＶＩ００８（セパダクルセン）および２００ｍｇの５－ＣＮＡＣを含むカプセルを提供するが、ここで両成分は乾式混合である。いくつかの局面においては、本開示は３０ｍｇのＣＩＶＩ００８（セパダクルセン）および２００ｍｇの５－ＣＮＡＣを含むカプセルを提供するが、ここで両成分は乾式混合である。
いくつかの局面においては、本開示は、それを必要とする対象において高いＰＣＳＫ９発現レベルおよび／またはＰＣＳＫ９活性に起因する疾患または病態を治療する方法を提供するが、ここで該方法は、１０ｍｇのＣＩＶＩ００８（セパダクルセン）および１００ｍｇの５－ＣＮＡＣを含む医薬組成物であって、有効量の医薬組成物を投与することを含み、ここで両成分は乾式混合であり、任意選択的に該成分がカプセル（例えば、腸溶性コーティングした硬質殻ゼラチンカプセル）に含まれる。いくつかの局面においては、本開示は、それを必要とする対象において高いＰＣＳＫ９発現レベルおよび／またはＰＣＳＫ９活性に起因する疾患または病態を治療する方法を提供するが、ここで該方法は、２０ｍｇのＣＩＶＩ００８（セパダクルセン）および２００ｍｇの５－ＣＮＡＣを含む医薬組成物であって、有効量の医薬組成物を投与することを含み、ここで両成分は乾式混合であり、任意選択的に該成分がカプセルに含まれる。いくつかの局面においては、本開示は、それを必要とする対象において高いＰＣＳＫ９発現レベルおよび／またはＰＣＳＫ９活性に起因する疾患または病態を治療する方法を提供するが、ここで該方法は、５ｍｇのＣＩＶＩ００８（セパダクルセン）および２００ｍｇの５－ＣＮＡＣを含む医薬組成物であって、有効量の医薬組成物を投与することを含み、ここで両成分は乾式混合であり、任意選択的に該成分がカプセルに含まれる。いくつかの局面においては、本開示は、それを必要とする対象において高いＰＣＳＫ９発現レベルおよび／またはＰＣＳＫ９活性に起因する疾患または病態を治療する方法を提供するが、ここで該方法は、１０ｍｇのＣＩＶＩ００８（セパダクルセン）および２００ｍｇの５－ＣＮＡＣを含む医薬組成物であって、有効量の医薬組成物を投与することを含み、ここで両成分は乾式混合であり、任意選択的に該成分がカプセルに含まれる。いくつかの局面においては、本開示は、それを必要とする対象において高いＰＣＳＫ９発現レベルおよび／またはＰＣＳＫ９活性に起因する疾患または病態を治療する方法を提供するが、ここで該方法は、２５ｍｇのＣＩＶＩ００８（セパダクルセン）および２００ｍｇの５－ＣＮＡＣを含む医薬組成物であって、有効量の医薬組成物を投与することを含み、ここで両成分は乾式混合であり、任意選択的に該成分がカプセルに含まれる。いくつかの局面においては、本開示は、それを必要とする対象において高いＰＣＳＫ９発現レベルおよび／またはＰＣＳＫ９活性に起因する疾患または病態を治療する方法を提供するが、ここで該方法は、３０ｍｇのＣＩＶＩ００８（セパダクルセン）および２００ｍｇの５－ＣＮＡＣを含む医薬組成物であって、有効量の医薬組成物を投与することを含み、ここで両成分は乾式混合であり、任意選択的に該成分がカプセルに含まれる。
いくつかの局面においては、本開示は、１：５、１：６、１：７、１：８、１：９、１：１０、１：１５、１：２０、１：３０、１：４０、または１：５０の比でＣＩＶＩ００８（セパダクルセン）および５－ＣＮＡＣを含む医薬組成物を提供するが、ここで両成分は乾式混合である。いくつかの局面においては、本開示は、１：５の比でＣＩＶＩ００８（セパダクルセン）および５－ＣＮＡＣを含む医薬組成物を提供するが、ここで両成分は乾式混合である。いくつかの局面においては、本開示は、１：１０の比でＣＩＶＩ００８（セパダクルセン）および５－ＣＮＡＣを含む医薬組成物を提供するが、ここで両成分は乾式混合である。いくつかの局面においては、本開示は、１：２０の比でＣＩＶＩ００８（セパダクルセン）および５－ＣＮＡＣを含む医薬組成物を提供するが、ここで両成分は乾式混合である。いくつかの局面においては、本開示は、１：４０の比でＣＩＶＩ００８（セパダクルセン）および５－ＣＮＡＣを含む医薬組成物を提供するが、ここで両成分は乾式混合である。
いくつかの局面においては、本開示は、１：５、１：６、１：７、１：８、１：９、１：１０、１：１５、１：２０、１：３０、１：４０、または１：５０の比でＣＩＶＩ００８（セパダクルセン）および５－ＣＮＡＣを含むカプセルを提供するが、ここで両成分は乾式混合である。いくつかの局面においては、本開示は、１：５の比でＣＩＶＩ００８（セパダクルセン）および５－ＣＮＡＣを含むカプセルを提供するが、ここで両成分は乾式混合である。いくつかの局面においては、本開示は、１：１０の比でＣＩＶＩ００８（セパダクルセン）および５－ＣＮＡＣを含むカプセルを提供するが、ここで両成分は乾式混合である。いくつかの局面においては、本開示は、１：２０の比でＣＩＶＩ００８（セパダクルセン）および５－ＣＮＡＣを含むカプセルを提供するが、ここで両成分は乾式混合である。いくつかの局面においては、本開示は、１：４０の比でＣＩＶＩ００８（セパダクルセン）および５－ＣＮＡＣを含むカプセルを提供するが、ここで両成分は乾式混合である。
いくつかの局面においては、本開示は、それを必要とする対象において、高いＰＣＳＫ９発現レベルおよび／またはＰＣＳＫ９活性に起因する疾患または病態を治療する方法を提供するが、ここで該方法は、１：５、１：６、１：７、１：８、１：９、１：１０、１：１５、１：２０、１：３０、１：４０、または１：５０の比でＣＩＶＩ００８（セパダクルセン）および５－ＣＮＡＣを含む医薬組成物を有効量で投与することを含み、ここで両成分は乾式混合であり、任意選択的に該成分がカプセルに含まれる。いくつかの局面においては、本開示は、それを必要とする対象において、高いＰＣＳＫ９発現レベルおよび／またはＰＣＳＫ９活性に起因する疾患または病態を治療する方法を提供するが、ここで該方法は、１：５の比でＣＩＶＩ００８（セパダクルセン）および５－ＣＮＡＣを含む医薬組成物を有効量で投与することを含み、ここで両成分は乾式混合であり、任意選択的に該成分がカプセルに含まれる。いくつかの局面においては、本開示は、それを必要とする対象において、高いＰＣＳＫ９発現レベルおよび／またはＰＣＳＫ９活性に起因する疾患または病態を治療する方法を提供するが、ここで該方法は、１：１０の比でＣＩＶＩ００８（セパダクルセン）および５－ＣＮＡＣを含む医薬組成物を有効量で投与することを含み、ここで両成分は乾式混合であり、任意選択的に該成分がカプセルに含まれる。いくつかの局面においては、本開示は、それを必要とする対象において、高いＰＣＳＫ９発現レベルおよび／またはＰＣＳＫ９活性に起因する疾患または病態を治療する方法を提供するが、ここで該方法は、１：２０の比でＣＩＶＩ００８（セパダクルセン）および５－ＣＮＡＣを含む医薬組成物を有効量で投与することを含み、ここで両成分は乾式混合であり、任意選択的に該成分がカプセルに含まれる。いくつかの局面においては、本開示は、それを必要とする対象において、高いＰＣＳＫ９発現レベルおよび／またはＰＣＳＫ９活性に起因する疾患または病態を治療する方法を提供するが、ここで該方法は、１：４０の比でＣＩＶＩ００８（セパダクルセン）および５－ＣＮＡＣを含む医薬組成物を有効量で投与することを含み、ここで両成分は乾式混合であり、任意選択的に該成分がカプセルに含まれる。
本開示はまた、本開示の経口医薬組成物（例えば、ＣＩＶＩ００８およびＳＮＡＣまたは５－ＣＮＡＣなどの経口送達剤を含む）および、例えば、食物摂取前に該経口医薬組成物を服用してもよいことを示す指示書を含むキットを提供する。
いくつかの局面においては、本開示の経口医薬組成物は、連続する１６～２２のヌクレオチドであるアンチセンスオリゴマーを含むアンチセンスオリゴヌクレオチドコンジュゲートを含むが、ここで該アンチセンスオリゴマーの配列が、配列番号：３１の配列（または本明細書に開示の別の好適なＰＣＳＫ９標的領域）に１００％相補的である連続する長さ１６ヌクレオチドの配列を含み；
およびここで該アンチセンスオリゴマーは、ギャップマー（例えば、３－１０－３ギャップマー）であり、該ギャップマーは少なくとも１つのＬＮＡユニットおよび少なくとも１種類の非ヌクレオチド部分または非ポリヌクレオチド部分（例えば、ＧａｌＮＡｃなどの肝臓標的化部分）を含み、該少なくとも１種類の非ヌクレオチド部分または非ポリヌクレオチド部分が、該連続オリゴマー配列と該非ヌクレオチド部分または非ポリヌクレオチド部分との間に配置するリンカーを介して、または直接的に該アンチセンスオリゴマーに共有結合しており；
ここで該アンチセンスオリゴヌクレオチドコンジュゲートは、ＰＣＳＫ９をコードするＲＮＡを標的とする。
いくつかの局面においては、該アンチセンスオリゴヌクレオチドコンジュゲートは、配列番号：１８または配列番号：１９を含む、あるいは配列番号：１８または配列番号：１９から成る。いくつかの局面においては、該アンチセンスオリゴヌクレオチドコンジュゲートは、本明細書に開示のアンチセンスオリゴヌクレオチドコンジュゲート、例えば、配列番号：１８または配列番号：１９のアンチセンスオリゴヌクレオチドコンジュゲートの、薬学的に許容可能な塩である。いくつかの局面においては、該塩はナトリウム塩である。いくつかの局面においては、該アンチセンスオリゴヌクレオチドコンジュゲートは、ヌクレオチド単位当たりに１つのナトリウムイオンを含む。したがって、特定の一局面においては、本開示のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、ＣＩＶＩ００８とよばれる配列番号：１９のナトリウム塩であり、これは図１８Ｂに示すような配列番号：１９のアンチセンスオリゴヌクレオチドコンジュゲートのヘキサデカナトリウム塩である。
ＰＣＳＫ９蛋白質をコードする核酸、例えば、ＲＮＡを標的とする際に用いることのできる、本開示の経口医薬組成物におけるオリゴヌクレオチドコンジュゲートの種類は、アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）のみに限定されるものではない。いくつかの局面においては、下記でより詳細に説明されるように、本開示のオリゴヌクレオチドコンジュゲート中のオリゴマーは、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、アプタマー、あるいはＰＣＳＫ９の発現および／またはＰＣＳＫ９の活性を調節可能ないずれかの核酸であり得る。いくつかの局面においては、本開示のオリゴヌクレオチドコンジュゲート中のオリゴマーは、単量体または多量体、例えば、本開示のオリゴマー（例えば、配列番号：２６に由来するオリゴマー、例えば、配列番号：２または配列番号：３）の複数の鎖状連結ユニットであり得る。したがって、いくつかの局面においては、該オリゴマーは、配列番号：２または配列番号：３の複数の鎖状連結コピーを含み、それらは多量体オリゴマー中の各ＡＳＯユニット間に挿入した開裂可能リンカーである。いくつかの局面においては、本開示のオリゴマーは一本鎖または二本鎖であり得る。
いくつかの局面においては、本明細書に開示のオリゴマーまたはオリゴヌクレオチドコンジュゲートは、ＲＮＡ、例えば、プレｍＲＮＡ、プレｍＲＮＡのスプライスバリアント、または成熟ｍＲＮＡを標的とすることができる。いくつかの局面においては、該ＲＮＡ、例えば、プレｍＲＮＡ、プレｍＲＮＡのスプライスバリアント、または成熟ｍＲＮＡは、正常ＰＣＳＫ９遺伝子の対立遺伝子バリアントに対応する。いくつかの局面においては、該ＲＮＡ、例えば、プレｍＲＮＡ、プレｍＲＮＡのスプライスバリアント、または成熟ｍＲＮＡは、正常ＰＣＳＫ９遺伝子の変異体に対応する。いくつかの局面においては、該変異体は機能獲得変異体である。いくつかの局面においては、ＰＣＳＫ９活性を低下させるために機能獲得変異体の発現および／または活性を阻害することが望ましい場合もある。しかし、いくつかの局面においては、機能消失変異体の発現が有害である、または該変異体ＰＣＳＫ９蛋白質または不活性ＰＣＳＫ９蛋白質の沈着物蓄積を引き起こすことがあり得る場合には、該変異体の発現を阻害することが望ましいこともある。
いくつかの局面においては、本明細書に開示のオリゴマーまたはオリゴヌクレオチドコンジュゲートは、ＰＣＳＫ９エクソン内部の配列を標的とすることができる。いくつかの局面においては、本明細書に開示のオリゴマーまたはオリゴヌクレオチドコンジュゲートは、ＰＣＳＫ９イントロン内部の配列を標的とすることができる。いくつかの局面においては、本明細書に開示のオリゴマーまたはオリゴヌクレオチドコンジュゲートは、エクソンとイントロンの間の境界部を含む配列を標的とすることができる。いくつかの局面においては、本明細書に開示のオリゴマーまたはオリゴヌクレオチドコンジュゲートは、ＰＣＳＫ９をコードするオープンリーディングフレームの５’末端の上流配列を標的とすることができる。いくつかの局面においては、本明細書に開示のオリゴマーまたはオリゴヌクレオチドコンジュゲートは、ＰＣＳＫ９をコードするオープンリーディングフレームの３’末端の下流配列を標的とすることができる。
第２節（アンチセンスオリゴマー）および第３節（オリゴヌクレオチドコンジュゲート）では、本開示の経口医薬組成物に用いることのできるオリゴマー（例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチド、ＡＳＯ）およびオリゴヌクレオチドコンジュゲート（例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチドコンジュゲート）について説明する。したがって、本開示の経口医薬組成物（例えば、ＣＩＶＩ００８およびＳＮＡＣまたは５－ＣＮＡＣを含む、例えば、ピルまたはカプセル）を生産するために、アンチセンスオリゴマー（例えば、配列番号：２または３のオリゴマー）および／またはアンチセンスオリゴヌクレオチドコンジュゲート（例えば、配列番号：１８または１９のオリゴヌクレオチドコンジュゲート）のいずれかを、本明細書に開示の少なくとも１つの経口送達剤、例えば、ＳＮＡＣ、Ｃ１０、または５－ＣＮＡＣと組み合わせ得ることが理解される。そのような経口医薬組成物はまた、本明細書に開示される、あるいは当該技術分野において公知である薬学的に許容可能な希釈剤、担体、塩、またはアジュバントをも含み得る。例えば、ＷＯ２００７／０３１０９１は、本開示の経口医薬組成物に用いることのできる好適な薬学的に許容可能な希釈剤、担体およびアジュバント、好適用量、製剤、投与経路、組成物、剤形、他の治療薬との組み合わせ、およびプロドラッグ製剤を提供する。
本明細書に開示の経口アンチセンス医薬組成物は、ＰＣＳＫ９の異常な発現レベルおよび／または活性によって引き起こされる疾患または病態を治療するために用いることができる。したがって、本開示は、それを必要とする対象においてＰＣＳＫ９の異常な発現レベルおよび／または活性に起因する疾患または病態を治療する方法を提供するが、ここで該方法は、有効量の本明細書に開示の経口医薬組成物（例えば、ＣＩＶＩ００８などのアンチセンスオリゴヌクレオチドコンジュゲートおよびＳＮＡＣ、Ｃ１０、または５－ＣＮＡＣなどの経口送達剤を含む経口医薬組成物）を該対象に投与することを含み、ここで該医薬組成物の投与によって、該対象における血清ＰＣＳＫ９レベルが低下する、および／または血清ＬＤＬコレステロールレベルが低下する。
いくつかの局面においては、該疾患または病態は、アテローム性動脈硬化症、高コレステロール血症（例えば、家族性高コレステロール血症またはスタチン耐性高コレステロール血症）、ＨＤＬ／ＬＤＬコレステロールの不均衡、脂質異常症（例えば、家族性高脂血症（ＦＣＨＬ）または後天性高脂血症）、冠動脈疾患（ＣＡＤ）、および冠動脈性心疾患（ＣＨＤ）から成る群から選択される。したがって、本開示は、それを必要とする対象において、アテローム性動脈硬化症、高コレステロール血症（例えば、家族性高コレステロール血症またはスタチン耐性高コレステロール血症）、ＨＤＬ／ＬＤＬコレステロールの不均衡、脂質異常症（例えば、家族性高脂血症（ＦＣＨＬ）または後天性高脂血症）、冠動脈疾患（ＣＡＤ）、および冠動脈性心疾患（ＣＨＤ）から成る群から選択される疾患または病態を治療する方法を提供するが、ここで該方法は、有効量の本明細書に開示の経口医薬組成物（例えば、ＣＩＶＩ００８などのアンチセンスオリゴヌクレオチドコンジュゲートおよびＳＮＡＣ、Ｃ１０、または５－ＣＮＡＣなどの経口送達剤を含む経口医薬組成物）を投与することを含む。
本開示はまた、経口医薬組成物を製造する方法を提供するが、ここで該方法は、以下の（ｉ）と（ｉｉ）を混合することを含む：
（ｉ）本明細書に開示のアンチセンスオリゴマーまたはアンチセンスオリゴヌクレオチドコンジュゲート（例えば、ＣＩＶＩ００８）；
および
（ｉｉ）経口送達剤（例えば、ＳＮＡＣ、Ｃ１０、または５－ＣＮＡＣ）。
いくつかの局面においては、該経口送達剤（例えば、ＳＮＡＣ、Ｃ１０、または５－ＣＮＡＣ）は、直接的に、あるいはリンカーまたはリンカーの組み合わせを介して、のいずれかで、本明細書に開示のアンチセンスオリゴマーまたはアンチセンスオリゴヌクレオチドコンジュゲート（例えば、ＣＩＶＩ００８）に共有結合するが、ここで該リンカーまたはリンカーの組み合わせは、開裂可能リンカーを含み得る。いくつかの局面においては、該経口送達剤（例えば、ＳＮＡＣ、Ｃ１０、または５－ＣＮＡＣ）は、直接的に、もしくはスペーサーを介して、オリゴマー部分に共有結合する。いくつかの局面においては、該経口送達剤（例えば、ＳＮＡＣ、Ｃ１０、または５－ＣＮＡＣ）は、直接的に、あるいはリンカー、スペーサー、またはそれらの組み合わせを介して、本明細書に開示のアンチセンスオリゴヌクレオチドコンジュゲート（例えば、該ＧａｌＮＡｃ部分、ＣＩＶＩ００８）の非ヌクレオチド部分または非ポリヌクレオチド部分に共有結合する。したがって、いくつかの局面においては、該経口送達剤（例えば、ＳＮＡＣ、Ｃ１０、または５－ＣＮＡＣ）またはそれらの組み合わせは、例えば、開裂可能リンカーを含むＧａｌＮＡｃコンジュゲート部分に連結している。開裂可能リンカーまたはそれらの組み合わせの開裂によって、ＧａｌＮＡｃおよび経口送達剤（例えば、ＳＮＡＣ、Ｃ１０、または５－ＣＮＡＣ）の両方が該コンジュゲートから放出され得る。他の局面においては、該ＧａｌＮＡｃ部分および該経口送達剤は、個別の２つの開裂可能リンカーを介して連結する、それらのリンカーは同一タイプでも、あるいは異なるタイプでもあり得る。いくつかの局面においては、該開裂可能リンカーの両方が同一機序にしたがって切断されるのであってもよい（例えば、２つのｐＨ感受性リンカー）。他の局面においては、異なる機序にしたがって各開裂可能リンカーが切断されるのであってもよい（例えば、一方のリンカーがｐＨ感受性リンカーであって、第２のリンカーは酵素的に（例えば、エステラーゼ類によって）切断され得る）。
いくつかの局面においては、該経口送達剤（例えば、ＳＮＡＣ、Ｃ１０、または５－ＣＮＡＣ）は、本明細書に開示のオリゴマー部分の５’末端に共有結合し得る。いくつかの局面においては、該経口送達剤（例えば、ＳＮＡＣ、Ｃ１０、または５－ＣＮＡＣ）は、本明細書に開示のオリゴマー部分の３’末端に共有結合し得る。いくつかの局面においては、該経口送達剤（例えば、ＳＮＡＣ、Ｃ１０、または５－ＣＮＡＣ）は、本明細書に開示のオリゴマー部分の５’末端または３’末端に、直接的に（例えば、その５’ヌクレオチドまたは３’ヌクレオチド）共有結合し得る。いくつかの局面においては、該経口送達剤（例えば、ＳＮＡＣ、Ｃ１０、または５－ＣＮＡＣ）は、リンカー、スペーサー、またはそれらの組み合わせを介して間接的に本明細書に開示のオリゴマー部分の５’末端または３’末端の５’ヌクレオチドまたは３’ヌクレオチドに共有結合し得る。
いくつかの局面においては、該経口送達剤（例えば、ＳＮＡＣ、Ｃ１０、または５－ＣＮＡＣ）は、本明細書に開示のアンチセンスオリゴヌクレオチドコンジュゲートに共有結合し得る。いくつかの局面においては、該経口送達剤（例えば、ＳＮＡＣ、Ｃ１０、または５－ＣＮＡＣ）は、本明細書に開示のアンチセンスオリゴヌクレオチドコンジュゲートのオリゴマー部分に共有結合し得る。いくつかの局面においては、該経口送達剤（例えば、ＳＮＡＣ、Ｃ１０、または５－ＣＮＡＣ）は、本明細書に開示のアンチセンスオリゴヌクレオチドコンジュゲートの非ヌクレオチド部分または非ポリヌクレオチド部分（例えば、ＧａｌＮＡｃ部分）に共有結合し得る。
いくつかの局面においては、該経口送達剤（例えば、ＳＮＡＣ、Ｃ１０、または５－ＣＮＡＣ）は、リンカー、スペーサー、またはそれらの組み合わせを介して、本明細書に開示のアンチセンスオリゴヌクレオチドコンジュゲートに共有結合し得る。いくつかの局面においては、該経口送達剤（例えば、ＳＮＡＣ、Ｃ１０、または５－ＣＮＡＣ）は、リンカー、スペーサー、またはそれらの組み合わせを介して、本明細書に開示のアンチセンスオリゴヌクレオチドコンジュゲートのオリゴマー部分に共有結合し得る。いくつかの局面においては、該経口送達剤（例えば、ＳＮＡＣ、Ｃ１０、または５－ＣＮＡＣ）は、リンカー、スペーサー、またはそれらの組み合わせを介して、本明細書に開示のアンチセンスオリゴヌクレオチドコンジュゲートの非ヌクレオチド部分または非ポリヌクレオチド部分（例えば、ＧａｌＮＡｃ部分）に共有結合し得る。
いくつかの局面においては、本明細書に開示のオリゴマー部分または本明細書に開示のアンチセンスオリゴヌクレオチドコンジュゲートは、２つ以上の本明細書に開示の経口送達剤（例えば、ＳＮＡＣ、Ｃ１０、または５－ＣＮＡＣ）に、共有結合し得る。いくつかの局面においては、本明細書に開示のオリゴマー部分または本明細書に開示のアンチセンスオリゴヌクレオチドコンジュゲートは、異なる位置で共有結合した２つ以上の本明細書に開示の経口送達剤（例えば、ＳＮＡＣ、Ｃ１０、または５－ＣＮＡＣ）を有し得る（例えば、該オリゴマーに結合した経口送達剤およびＧａｌＮＡｃ部分に結合した経口送達剤）。
第２節：オリゴマー
いくつかの局面においては、本開示のオリゴマーは、長さ１６～２０ヌクレオチドのＬＮＡギャップマーであり、配列番号：３１の対応する長さに相補的である連続する１６ヌクレオチドの配列を含む。また、配列番号：２６、２７、２８、２９および４４から成る群から選択される連続配列を含むオリゴマーについても開示する。本開示のアンチセンスオリゴマーまたはコンジュゲートはＰＣＳＫ９を標的とするので、ヒトまたはＰＣＳＫ９を発現する細胞のＰＣＳＫ９など、ＰＣＳＫ９の発現を下方制御する、および／またはＰＣＳＫ９を阻害することが可能である。いくつかの局面においては、本開示のオリゴマーは、その長さが１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、または２２ヌクレオチドであり得る。いくつかの局面においては、本開示のオリゴマーは、その長さが１４ヌクレオチド超である。いくつかの局面においては、配列番号：３３または３４または４５の対応する長さに相補的である１０～１６ヌクレオチドの連続する配列のヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエート結合であり得る。
いくつかの局面においては、本開示のオリゴマー（例えば、配列番号：３１に相補的なオリゴマー）は、配列番号：２および配列番号：３から成る群から選択される連続配列を含む、同連続配列から成る、または本質的に同連続配列から成る。
いくつかの局面においては、本開示のオリゴマー（例えば、配列番号：３１に相補的なオリゴマー）は、ホスホロチオエートにより連結される１０～１６ヌクレオシドを含む。いくつかの局面においては、本開示のオリゴマー（例えば、配列番号：３１に相補的なオリゴマー）は、ホスホロチオエートにより連結される１４ヌクレオシド超を含む。いくつかの局面においては、該オリゴマー（例えば、配列番号：３１に相補的なオリゴマー）は、その長さが１５、１６、１７、１８、１８、１９、２０、２１、または２２ヌクレオチドである。
いくつかの局面においては、本開示のオリゴマー（例えば、配列番号：３１に相補的なオリゴマー）は、１４ヌクレオチド超、例えば、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１または２２ヌクレオチドの連続する配列を含むＬＮＡギャップマーであり、ここで該連続する配列は、配列番号：３１の対応する長さに対して相補的であり、ここで該連続配列はヌクレオチド類似体を含む。特定の一局面においては、該オリゴマーは、その長さが１６ヌクレオチドである。一局面においては、本開示のオリゴマーは、親和性増強性ヌクレオチド類似体を含む。いくつかの局面においては、該ヌクレオチド類似体は、２’－Ｏ－アルキル－ＲＮＡユニット、２’－ＯＭｅ－ＲＮＡユニット、２’－アミノ－ＤＮＡユニット、および２’－フルオロ－ＤＮＡユニットから成る群から独立にまたは依存的に選択される糖修飾ヌクレオチドなどの、糖修飾ヌクレオチドである。
いくつかの局面においては、本開示のオリゴマー（例えば、配列番号：３１に相補的なオリゴマー）は、ＬＮＡギャップマーオリゴヌクレオチドである。いくつかの局面においては、該ＬＮＡギャップマーは、２～４ヌクレオチド類似体、好ましくはＬＮＡ類似体の両側（５’および３’）にそれぞれにウイングを含む。いくつかの局面においては、本開示のオリゴマー（例えば、配列番号：３１に相補的なオリゴマー）は任意選択的に、さらなる１～６ヌクレオチド（例えば、１、２、３、４、５または６ヌクレオチド）を含み得るが、ここで該さらなる１～６ヌクレオチドは、リン酸ヌクレオチドリンカーなどの生体内開裂可能ヌクレオチド領域を形成または包含し得る。いくつかの局面においては、該生体内開裂可能ヌクレオチド領域は、生理学的に不安定なヌクレオチドの短い部分（例えば、１、２、３、４、５または６ヌクレオチド）によって構成される。これはＤＮＡ／ＲＮＡヌクレオシドにホスホジエステル結合を用いることによって達成可能であるが、あるいは生理的不安定性の維持が可能であれば、他のヌクレオシドを利用することもできる。生理的不安定性は、例えば、実施例６に示されるように、肝臓抽出物を用いて測定することが可能である。
いくつかの局面においては、本開示のオリゴマーは、配列番号：３１の対応する長さ（第１の領域、または領域Ａ）に対して相補的である連続する１６ヌクレオチド配列を含む。本開示のオリゴマーは、さらなるヌクレオチド領域を含み得る。いくつかの局面においては、該さらなるヌクレオチド領域は、連結領域Ａをコンジュゲート基（第３の領域、または領域Ｃ）などの非ヌクレオチド部分に共有結合し得るリン酸ヌクレオチド配列（第２の領域、領域Ｂ）などの生体内開裂可能ヌクレオチド領域を含む。いくつかの局面においては、本開示のオリゴマー（領域Ａ）の連続ヌクレオチド配列は、直接的に共有結合によって領域Ｃに連結される。いくつかの局面においては、領域Ｃは生体内で切断可能である。
いくつかの局面においては、該オリゴマーは、長さ１６、１７、１８、１９、２０、２１、または２２ヌクレオチド（長さ１６ヌクレオチドなど）などの連続する１６～２２ヌクレオチドの配列から成る、あるいは同配列を含む。したがって、いくつかの局面においては、該オリゴマーは、領域Ａと領域Ｂの組み合わせた長さ、例えば、領域Ａの１６～２２ヌクレオチド（１６ヌクレオチドなど）および、例えば、領域Ｂの１～６ヌクレオチドを意味し得る。
いくつかの局面においては、本開示のオリゴマーはＲＮＡ（ユニット）を含まない；例えば、いくつかの局面においては、該オリゴマーはＤＮＡユニットのみを含み得る。いくつかの局面においては、本開示のオリゴマーはＤＮＡおよびＲＮＡユニットを含む。いくつかの局面においては、本開示にしたがうオリゴマー、該オリゴマーの第１の領域、または該オリゴマーの第１および第２の領域は共に（例えば、単一連続配列として）、直鎖状分子である。いくつかの局面においては、該オリゴマーの第１の領域、または該オリゴマーの第１および第２の領域は共に（例えば、単一連続配列として）、直鎖状分子として合成される。したがって、いくつかの局面においては、該オリゴマーは一本鎖分子であり得る。いくつかの局面においては、該オリゴマーは、例えば、連続する少なくとも３、４または５ヌクレオチドの短い領域であって、同一オリゴマー内の相当領域に相補的である領域（すなわち、二本鎖）を含まない。
いくつかの局面においては、該オリゴマーは二本鎖核酸ではない。いくつかの局面においては、本開示のオリゴマーはｓｉＲＮＡではない。いくつかの局面においては、本開示のオリゴマーはｓｈＲＮＡではない。いくつかの局面においては、該オリゴマーは二本鎖核酸である。いくつかの局面においては、本開示のオリゴマーはｓｉＲＮＡである。いくつかの局面においては、本開示のオリゴマーはｓｈＲＮＡである。
いくつかの局面においては、本開示のオリゴマーはアンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）である。いくつかの局面においては、本開示のオリゴマーは多量体である。いくつかの局面においては、本開示のオリゴマーは多量体ＡＳＯであり、例えば、複数の本開示の鎖状連結オリゴマーを含むことができる。いくつかの局面においては、本開示のオリゴマーは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０以上の鎖状連結オリゴマーを含む。いくつかの局面においては、該鎖状連結オリゴマーは、ＡＳＯマルチマーの各ＡＳＯユニット間に挿入した開裂可能リンカーを介して連結される。
本明細書に開示の２種類のオリゴヌクレオチドを対比して用いられる用語「に対応する（ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ ｔｏ）」および「に対応する（ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｓ ｔｏ）」は本開示のオリゴマーのヌクレオチド配列（すなわち、核酸塩基または塩基配列）と該核酸標的またはその小領域（例えば、配列番号：３１、３２、３３、３４または４５）の逆相補との間の比較を指す。ヌクレオチド類似体をそれらの同等ヌクレオチドまたは対応するヌクレオチドに対して直接的に比較する。いくつかの局面では、該オリゴマー（またはその第１の領域）は、該標的領域またはその小領域（例えば、配列番号：３１、３２、３３、３４または４５）に対して相補的である（完全相補的など）。
第２節ａ：オリゴマー配列
いくつかの局面においては、本開示のオリゴマーは、表１Ａに開示される領域を標的とすることができる。表１Ａは、ＰＣＳＫ９ ｍＲＮＡ中の標的領域の配列ならびにその部位を示している。いくつかの局面においては、本開示のオリゴマーは、表１Ａの標的配列のうちの１配列の少なくとも５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、または１６ヌクレオチドに対して相補的である相補性領域を含む。いくつかの局面においては、本開示のオリゴマーは、表１Ａの標的配列のうちの１配列の少なくとも５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、または１６ヌクレオチドに対して相補的である相補性領域を含み、ここで該相補的領域は該オリゴマーの５’末端に位置する。いくつかの局面においては、本開示のオリゴマーは、表１Ａの標的配列のうちの１配列の少なくとも５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、または１６ヌクレオチドに対して相補的である相補性領域を含み、ここで該相補的領域は該オリゴマーの３’末端に位置する。いくつかの局面においては、本開示のオリゴマーは、表１Ａの標的配列のうちの１配列の少なくとも５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、または１６ヌクレオチドに対して相補的である相補性領域を含み、ここで該相補的領域は該オリゴマーの５’末端に位置し、およびここで該オリゴマーはその長さが１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９または３０ヌクレオチドである。いくつかの局面においては、本開示のオリゴマーは、表１Ａの標的配列のうちの１配列の少なくとも５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、または１６ヌクレオチドに対して相補的である相補性領域を含み、ここで該相補的領域は該オリゴマーの３’末端に位置し、およびここで該オリゴマーはその長さが１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９または３０ヌクレオチドである。
Figure 2024500367000011
表１Ｂには、塩基配列または核酸塩基モチーフ配列である配列番号：２５～２９および４４を示す。例えば、配列番号：２６は配列番号：３１を標的とする１６マーである。いくつかの局面においては、該核酸塩基モチーフ配列は、表１Ｂに提示されるモチーフ配列の５’末端、３’末端、またはその両方から伸長させたものに相補的である１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０以上のヌクレオチドを含み得る。本開示のオリゴマー配列は、特定パターンの核酸塩基類似体および／またはヌクレオシド間結合を含む本明細書に開示のモチーフ配列に由来する。
Figure 2024500367000012
表１Ｃには、異なるオリゴマー配列、そのコンジュゲート型、およびＰＣＫＳ９遺伝子上の標的領域に対応する標的を示す。
Figure 2024500367000013
配列番号：１はＳＰＣ５００１であり、これはＷＯ２０１１／００９６９７に開示されるアンチセンスオリゴマーで、ヒト対象に投与した際に、深刻な腎毒性を引き起こすことが知られている。配列番号：１～２４および４０～４３は、ＬＮＡギャップマーオリゴマーなどの、ヌクレオチド類似体を含むオリゴマーである；ここで、小文字はＤＮＡユニット（ヌクレオシド／ヌクレオチド）を表し、大文字はＬＮＡユニットを表す。いくつかの局面においては、ＬＮＡ Ｃはすべて５－メチルシトシンである。いくつかの局面においては、すべてのＬＮＡユニットがβ－Ｄ－オキシＬＮＡである。いくつかの局面においては、配列番号：１～２４および４０～４３のヌクレオシドのヌクレオシド間結合は、すべてホスホロチオエート結合である。いくつかの局面においては、ホスホロチオエート結合が、第１および／または第２の５’ホスホロチオエート結合のみに存在する。いくつかの局面においては、ホスホロチオエート結合が、第１および／または第２の３’ホスホロチオエート結合のみに存在する。いくつかの局面においては、ホスホロチオエート結合が、第１および／または第２の５’ホスホロチオエート結合、および第１および／または第２の３’ホスホロチオエート結合に存在する。
配列番号：１～２４および４０～４３はギャップマーであり、各ウイングが２、３、または４個のＬＮＡユニットを含む。いくつかの局面においては、本開示のオリゴマーは、配列番号：１～２４および４０～４３のバリアントに対応し、ここで該バリアントは、ギャップマーの５’ウイングに１、２、３、または４つの付加的なＬＮＡユニットを含む。いくつかの局面においては、本開示のオリゴマーは、配列番号：１～２４および４０～４３のバリアントに対応し、ここで該バリアントは、ギャップマーの３’ウイングに１、２、３、または４つの付加的なＬＮＡユニットを含む。いくつかの局面においては、本開示のオリゴマーは、配列番号：１～２４および４０～４３のバリアントに対応し、ここで該バリアントは、ギャップマーの５’ウイングに１、２、３、または４つの付加的なＬＮＡユニットを含み、またギャップマーの３’ウイングに１、２、３、または４つの付加的なＬＮＡユニットを含む。いくつかの局面においては、本明細書に開示のギャップマーのＬＮＡユニット、例えば、表１Ｃのギャップマーまたはそのバリアントは、オキシ－ＬＮＡ、チオ－ＬＮＡ、アミノ－５ＬＮＡ、５’－メチル－ＬＮＡ、ＥＮＡ、ｃＥＴ、またはｃＭＯＥであり得る。
配列番号：９～１６および４１～４３は、該オリゴマー（該配列番号によって示されるようなオリゴマー）ならびにコレステロールコンジュゲートを含むが、ここで該コレステロールコンジュゲートは、該オリゴマーの５’または３’末端で該オリゴマーに、任意選択的に、生体内開裂可能リンカー（リン酸ヌクレオシドリンカーなど）を介して共有結合し得る。いくつかの局面においては、該コレステロールコンジュゲートは、オリゴマーの５’末端で連結される。配列番号：１７～２４は、該オリゴマー（該配列番号によって示されるようなオリゴマー）ならびにＧａｌＮＡｃコンジュゲートを含み、ここで該ＧａｌＮＡｃコンジュゲートは、該オリゴマーの５’末端または３’末端で該オリゴマーに、任意選択的に生体内開裂可能リンカー（リン酸ヌクレオシドリンカーまたは開裂可能ペプチドリンカーなど）を介して共有結合し得る。いくつかの局面においては、該ＧａｌＮＡｃコンジュゲートは該オリゴマーの５’末端に連結される。本明細書に記載される、用いた特異的オリゴマーおよびコンジュゲートを、図３（非コンジュゲート型オリゴマー）、図４（コレステロールコンジュゲート）、ならびに図５Ａ、５Ｂおよび５Ｃ（ＧａｌＮＡｃコンジュゲート）に具体的に示す。本開示のオリゴマーに用いることのできるコンジュゲート部分について、他の例を図１Ａ、１Ｃ、および１Ｃならびに図２に示し、また以下の節「ＧａｌＮＡｃコンジュゲート部分」に記載する。
表２には、オリゴマーおよびコンジュゲートの特定組み合わせを示す。
Figure 2024500367000014
表２に示されるオリゴマーコンジュゲートは、図１Ａ、図１Ｂ、図１Ｃまたは図２に提示されるコンジュゲート部分と複合体化（コンジュゲート）した配列番号：１～８のオリゴマーに対応する；コンジュゲート部分との複合体化は配列番号：１～８の各５’末端を介するものである。該オリゴマーは、図１Ａ、図１Ｂ、図１Ｃまたは図２において波線で示される部位に、共有結合している。いくつかの局面においては、該コンジュゲート部分は、該オリゴマーの３’末端に連結される。
図５Ａ、５Ｂ、および５Ｃは、上記の配列番号とＣｏｎｊ２ａの組み合わせを示している。図５Ｂおよび５Ｃは、図５Ａの化合物の詳細な２つの例であり、それぞれ、配列番号：１８および配列番号：１９のコンジュゲートに対応する。
いくつかの局面においては、該コンジュゲート部分（Ｃ）および該オリゴマー（Ａ）との間に任意選択的な生体内開裂可能リンカー（Ｂ）存在する。Ｃｏｎｊ１～４および１ａ～４ａに関しては、該ＧａｌＮＡｃクラスター内のペプチドリンカーを利用することによって、該ＧａｌＮＡｃコンジュゲートそれ自体が生体内開裂可能となっているが、そのようなさらなる生体内開裂可能リンカー（Ｂ）をさらに用いるのであってもよく、あるいは用いなくてもよい。いくつかの局面においては、本明細書に開示のリン酸ヌクレオチドリンカーなどの生体内開裂可能リンカー（Ｂ）を含めることによって、ＧａｌＮＡｃクラスターオリゴマーコンジュゲートの活性が増強される。図４は、上記の配列番号とＣｏｎｊ５ａ（コレステロール－Ｃ６）との組み合わせを示している。
第２節ｂ：ＰＣＳＫ９標的領域
本開示は、ＰＣＳＫ９ ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ中の一領域を特異的に標的とすることによって、ＰＣＳＫ９遺伝子発現の調節が可能な本開示のオリゴマー（例えば、ＡＳＯ）を含む経口投与の医薬組成物を対象とする。いくつかの局面においては、該オリゴマーは、そのような標的領域に結合することによって、ＰＣＳＫ９遺伝子発現の下方制御が可能である。したがって、いくつかの局面においては、本開示のオリゴマーは、ＰＣＳＫ９ ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ内の特異的標的領域に結合することによって、例えば、ヒトなどの哺乳動物対象においてＰＣＳＫ９の発現に影響を与えることができる。いくつかの局面においては、本開示のオリゴマーは、ＰＣＳＫ９ ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ内の特異的標的領域に結合することによって、ヒト細胞、例えば、肝細胞におけるＰＣＳＫ９の発現に影響を与えることができる。
本明細書中の用語「標的核酸」または「標的領域」は、核酸の小配列、例えば、哺乳動物ＰＣＳＫ９または天然のバリアントまたはその変異体、例えば、ヒトＰＣＳＫ９をコードするｍＲＮＡなどのＲＮＡを指す。いくつかの局面においては、哺乳動物ＰＣＳＫ９または天然のバリアントあるいはその変異体をコードする核酸はＲＮＡである。いくつかの局面においては、該ＲＮＡは、プレｍＲＮＡなどのｍＲＮＡである。いくつかの局面においては、該ＲＮＡは成熟ｍＲＮＡである。本開示にしたがうオリゴマーは、好ましくは該標的核酸にハイブリダイズ可能である。配列番号：４６はｃＤＮＡ配列であり、したがって、ｃＤＮＡ配列中においてはウラシルがチミジンで置換されているが、成熟ｍＲＮＡ標的配列に対応することは、理解されるであろう。
いくつかの局面においては、該標的配列は、配列番号：４６に示される、ＰＣＳＫ９をコードする配列の小配列に対応する。特異的標的配列は上記の表１Ａに示される；例えば、配列番号：４６の３６４３～３６５６位に対応する配列番号：３０；配列番号：４６の３６４３～３６５８位に対応する配列番号：３１；配列番号：４６の３２５１～３２６５位に対応する配列番号：３２；配列番号：４６の３２５１～３２６６位に対応する配列番号：３３；配列番号：４６の３３７３～３３８８位に対応する配列番号：３４；および配列番号：４６の１００５～１０１７位に対応する配列番号：４５。
いくつかの局面においては、該標的配列は、配列番号：３０、３１、３２、３３、３４、または４５の標的領域の５’末端を越えて１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０ヌクレオチド伸長することができる。いくつかの局面においては、該標的配列は、配列番号：３０、３１、３２、３３、３４、または４５の標的領域の３’末端を越えて１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０ヌクレオチド伸長することができる。
いくつかの局面においては、該標的配列は、配列番号：３０、３１、３２、３３、３４、または４５の標的領域の５’末端を越えて１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０ヌクレオチドおよび／または３’末端を越えて１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０ヌクレオチド伸長することができる。いくつかの局面においては、該伸長標的領域は、配列番号：３０、３１、３２、３３、３４、または４５の標的領域の５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、または１６ヌクレオチドと重複する。
いくつかの局面においては、該標的領域は、配列番号：４６のｍＲＮＡをコードするＰＣＳＫ９遺伝子の変異体または対立遺伝子バリアントの配列に由来する対応する標的配列領域を含む、もしくは同配列から成る。他の局面においては、該標的領域は、ＰＣＳＫ９をコードする別のｍＲＮＡ転写物バリアントに存在する小配列であり得る。いくつかの局面においては、該標的領域は、配列番号：４６のｍＲＮＡをコードするＰＣＳＫ９遺伝子のパラローグまたはオルソログの配列に由来する対応する標的配列領域を含む、あるいは同配列から成る。
いくつかの局面においては、該標的領域は、ＮＣＢＩ参照配列アクセッション番号：ＮＭ＿１７４９３６、すなわち、ヒト（Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ）のプロ蛋白質変換酵素サブチリシン／ケキシン９型をコードするｍＲＮＡ（ＰＣＳＫ９）転写物バリアント１の配列のうちの小配列に対応する。このＮＣＢＩ参照配列データベースエントリーについては、ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｎｕｃｃｏｒｅ／ＮＭ＿１７４９３６においてアクセス可能である；このエントリーは、その内容全体が参照として本明細書に組み入れられる。
ＮＭ＿１７４９３６ ｍＲＮＡ転写物中のＰＣＳＫ９コード配列は、２９１…２３６９位に位置する。したがって、いくつかの局面においては、該標的領域は、該ＮＭ＿１７４９３６ ｍＲＮＡ転写物の２９１位と２３６９位の間に位置する。いくつかの局面においては、該標的領域は、５’非コード領域内に位置する。いくつかの局面においては、該標的領域は、３’非コード領域内に位置する。該ＮＭ＿１７４９３６ ｍＲＮＡ転写物は、１…４９７位（エクソン１）、４９８…６８９位（エクソン２）、６９０…８１３位（エクソン３）、８１４…９４７位（エクソン４）、９４８…１０８９位（エクソン５）、１０９０…１２８６位（エクソン６）、１２８７…１４７０位（エクソン７）、１４７１…１６４４位（エクソン８）、１６４５…１７９３位（エクソン９）、１７９４…１９７１位（エクソン１０）、１９７２…２１５３位（エクソン１１）、および２１５４…３６３７位（エクソン１２）に位置するエクソンを含む。エクソン１～１２はイントロン１～１１によって分離している；例えば、イントロン１はエクソン１とエクソン２の間に位置し、イントロン２はエクソン２とエクソン３の間に位置し、等々。
いくつかの局面においては、該標的領域はエクソン１内に存在する。いくつかの局面においては、該標的領域はエクソン２内に存在する。いくつかの局面においては、該標的領域はエクソン３内に存在する。いくつかの局面においては、該標的領域はエクソン４内に存在する。いくつかの局面においては、該標的領域はエクソン５内に存在する。いくつかの局面においては、該標的領域はエクソン６内に存在する。いくつかの局面においては、該標的領域はエクソン７内に存在する。いくつかの局面においては、該標的領域はエクソン８内に存在する。いくつかの局面においては、該標的領域はエクソン９内に存在する。いくつかの局面においては、該標的領域はエクソン１０内に存在する。いくつかの局面においては、該標的領域はエクソン１１内に存在する。いくつかの局面においては、該標的領域はエクソン１２内に存在する。
いくつかの局面においては、該標的領域は、該ＰＣＳＫ９プレｍＲＮＡのイントロン内に存在する。いくつかの局面においては、該該標的領域はイントロン１内に存在する。いくつかの局面においては、該該標的領域はイントロン２内に存在する。いくつかの局面においては、該該標的領域はイントロン３内に存在する。いくつかの局面においては、該該標的領域はイントロン４内に存在する。いくつかの局面においては、該該標的領域はイントロン５内に存在する。いくつかの局面においては、該該標的領域はイントロン６内に存在する。いくつかの局面においては、該該標的領域はイントロン７内に存在する。いくつかの局面においては、該該標的領域はイントロン８内に存在する。いくつかの局面においては、該該標的領域はイントロン９内に存在する。いくつかの局面においては、該該標的領域はイントロン１０内に存在する。いくつかの局面においては、該該標的領域はイントロン１１内に存在する。いくつかの局面においては、該標的領域は、エクソン１とイントロン１との間の境界部を含む。いくつかの局面においては、該標的領域は、イントロン１とエクソン２との間の境界部を含む。いくつかの局面においては、該標的領域は、エクソン２とイントロン２との間の境界部を含む。いくつかの局面においては、該標的領域は、イントロン２とエクソン３との間の境界部を含む。いくつかの局面においては、該標的領域は、エクソン３とイントロン３との間の境界部を含む。いくつかの局面においては、該標的領域は、エクソン４とイントロン４との間の境界部を含む。いくつかの局面においては、該標的領域は、イントロン４とエクソン５との間の境界部を含む。いくつかの局面においては、該標的領域は、エクソン５とイントロン５との間の境界部を含む。いくつかの局面においては、該標的領域は、イントロン５とエクソン６との間の境界部を含む。いくつかの局面においては、該標的領域は、エクソン６とイントロン６との間の境界部を含む。いくつかの局面においては、該標的領域は、イントロン６とエクソン７との間の境界部を含む。いくつかの局面においては、該標的領域は、エクソン７とイントロン７との間の境界部を含む。いくつかの局面においては、該標的領域は、イントロン７とエクソン８との間の境界部を含む。いくつかの局面においては、該標的領域は、エクソン８とイントロン８との間の境界部を含む。いくつかの局面においては、該標的領域は、イントロン８とエクソン９との間の境界部を含む。いくつかの局面においては、該標的領域は、エクソン９とイントロン９との間の境界部を含む。いくつかの局面においては、該標的領域は、イントロン９とエクソン１０との間の境界部を含む。いくつかの局面においては、該標的領域は、エクソン１０とイントロン１０との間の境界部を含む。いくつかの局面においては、該標的領域は、イントロン１０とエクソン１１との間の境界部を含む。いくつかの局面においては、該標的領域は、エクソン１１とイントロン１１との間の境界部を含む。いくつかの局面においては、該標的領域は、イントロン１１とエクソン１２との間の境界部を含む。
いくつかの局面においては、本開示のオリゴマーは該標的核酸（例えば、配列番号：３１）に結合し、ＰＣＳＫ９発現レベルおよび／またはＰＣＳＫ９活性レベルに対するその効果は、正常ＰＣＳＫ９発現レベル（例えば、食塩水で処置した細胞、動物またはヒトにおけるＰＣＳＫ９発現レベル）および／または正常活性レベル（例えば、食塩水で処置した細胞、動物またはヒトにおける発現レベル）と比較した場合のＰＣＳＫ９発現レベルおよび／またはＰＣＳＫ９活性レベルの少なくとも約１０％～約２０％の低下である。いくつかの局面においては、ＰＣＳＫ９の発現および／または活性の低下は、正常の発現および／または活性レベルと比較して、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％である。いくつかの局面においては、発現および／または活性の低下は、正常の発現および／または活性レベルと比較して、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、または約１００％である。
いくつかの局面においては、本開示のオリゴマーを０．８ｎＭ～２０ｎＭなど、０．０４ｎＭ～２５ｎＭの濃度で用いた場合に、そのような調節（例えば、発現レベルおよび／または活性の低下）が認められる。いくつかの局面においては、少なくとも約０．０４ｎＭ、少なくとも約０．０５ｎＭ、少なくとも約０．０６ｎＭ、少なくとも約０．０７ｎＭ、少なくとも約０．０８ｎＭ、少なくとも約０．０９ｎＭ、少なくとも約０．１ｎＭ、少なくとも約０．２ｎＭ、少なくとも約０．３ｎＭ、少なくとも約０．４ｎＭ、少なくとも約０．５ｎＭ、少なくとも約０．６ｎＭ、少なくとも約０．７ｎＭ、少なくとも約０．８ｎＭ、少なくとも約０．９ｎＭ、少なくとも約１ｎＭ、少なくとも約２ｎＭ、少なくとも約３ｎＭ、少なくとも約４ｎＭ、少なくとも約５ｎＭ、少なくとも約６ｎＭ、少なくとも約７ｎＭ、少なくとも約８ｎＭ、少なくとも約９ｎＭ、少なくとも約１０ｎＭ、少なくとも約１１ｎＭ、少なくとも約１２ｎＭ、少なくとも約１３ｎＭ、少なくとも約１４ｎＭ、少なくとも約１５ｎＭ、少なくとも約１６ｎＭ、少なくとも約１７ｎＭ、少なくとも約１８ｎＭ、少なくとも約１９ｎＭ、少なくとも約２０ｎＭ、少なくとも約２１ｎＭ、少なくとも約２２ｎＭ、少なくとも約２３ｎＭ、少なくとも約２４ｎＭ、少なくとも約２５ｎＭの濃度で本開示のオリゴマーを用いた場合に、そのような調節（例えば、発現レベルおよび／または活性の低下）が認められる。いくつかの局面においては、約０．０４ｎＭ、約０．０５ｎＭ、約０．０６ｎＭ、約０．０７ｎＭ、約０．０８ｎＭ、約０．０９ｎＭ、約０．１ｎＭ、約０．２ｎＭ、約０．３ｎＭ、約０．４ｎＭ、約０．５ｎＭ、約０．６ｎＭ、約０．７ｎＭ、約０．８ｎＭ、約０．９ｎＭ、約１ｎＭ、約２ｎＭ、約３ｎＭ、約４ｎＭ、約５ｎＭ、約６ｎＭ、約７ｎＭ、約８ｎＭ、約９ｎＭ、約１０ｎＭ、約１１ｎＭ、約１２ｎＭ、約１３ｎＭ、約１４ｎＭ、約１５ｎＭ、約１６ｎＭ、約１７ｎＭ、約１８ｎＭ、約１９ｎＭ、約２０ｎＭ、約２１ｎＭ、約２２ｎＭ、約２３ｎＭ、約２４ｎＭ、約２５ｎＭの濃度で本開示のオリゴマーを用いた場合に、そのような調節（例えば、発現レベルおよび／または活性の低下）が認められる。
いくつかの局面においては、０．０１～１５ｍｇ／ｋｇ（０．０５～１０ｍｇ／ｋｇなど、０．１～７．５ｍｇ／ｋｇなど、０．２５～５ｍｇ／ｋｇなど０．５～２．５ｍｇ／ｋｇなど）の濃度で本開示の化合物を用いた場合に、そのような調節（例えば、発現レベルおよび／または活性の低下）が認められる。いくつかの局面においては、少なくとも約０．０１ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約０．０２ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約０．０３ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約０．０４ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約０．０５ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約０．０６ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約０．０７ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約０．０８ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約０．０９ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約０．１ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約０．２ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約０．３ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約０．４ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約０．５ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約０．６ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約０．７ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約０．８ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約０．９ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約１ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約１．５ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約２ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約２．５ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約３ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約４ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約４．５ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約５ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約６ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約６．５ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約７ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約７．５ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約８ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約８．５ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約９ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約９．５ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約１０ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約１０．５ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約１１ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約１１．５ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約１２ｍｇ／ｋｇ、１２．５ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約１３ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約１３．５ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約１４ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約１４．５ｍｇ／ｋｇ、または少なくとも約１５ｍｇ／ｋｇの濃度で本開示の化合物を用いた場合に、そのような調節（例えば、発現レベルおよび／または活性の低下）が認められる。いくつかの局面においては、約０．０１ｍｇ／ｋｇ、約０．０２ｍｇ／ｋｇ、約０．０３ｍｇ／ｋｇ、約０．０４ｍｇ／ｋｇ、約０．０５ｍｇ／ｋｇ、約０．０６ｍｇ／ｋｇ、約０．０７ｍｇ／ｋｇ、約０．０８ｍｇ／ｋｇ、約０．０９ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ、約０．２ｍｇ／ｋｇ、約０．３ｍｇ／ｋｇ、約０．４ｍｇ／ｋｇ、約０．５ｍｇ／ｋｇ、約０．６ｍｇ／ｋｇ、約０．７ｍｇ／ｋｇ、約０．８ｍｇ／ｋｇ、約０．９ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、約１．５ｍｇ／ｋｇ、約２ｍｇ／ｋｇ、約２．５ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ、約４ｍｇ／ｋｇ、約４．５ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ、約６ｍｇ／ｋｇ、約６．５ｍｇ／ｋｇ、約７ｍｇ／ｋｇ、約７．５ｍｇ／ｋｇ、約８ｍｇ／ｋｇ、約８．５ｍｇ／ｋｇ、約９ｍｇ／ｋｇ、約９．５ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ、約１０．５ｍｇ／ｋｇ、約１１ｍｇ／ｋｇ、約１１．５ｍｇ／ｋｇ、約１２ｍｇ／ｋｇ、１２．５ｍｇ／ｋｇ、約１３ｍｇ／ｋｇ、約１３．５ｍｇ／ｋｇ、約１４ｍｇ／ｋｇ、約１４．５ｍｇ／ｋｇ、または約１５ｍｇ／ｋｇの濃度で本開示の化合物を用いた場合に、そのような調節（例えば、発現レベルおよび／または活性の低下）が認められる。
いくつかの局面においては、本開示の化合物を投与した後のＰＣＳＫ９の発現レベルおよび／またはＰＣＳＫ９の活性レベルは、本開示の化合物を投与する前のＰＣＳＫ９の発現レベルおよび／またはＰＣＳＫ９の活性レベルの約２％未満、約５％未満、約１０％未満、約１５％未満、約２０％未満、約２５％未満、約３０％未満、約３５％未満、約４０％未満、約４５％未満、約５０％未満、約５５％未満、約６０％未満、約６５％未満、約７０％未満、約７５％未満、または約８０％未満である。
いくつかの局面においては、本開示の化合物を投与した後のＰＣＳＫ９の発現レベルおよび／またはＰＣＳＫ９の活性レベルは、本開示の化合物を投与する前のＰＣＳＫ９の発現レベルおよび／またはＰＣＳＫ９の活性レベルの約２％～約５％、約５％～約１０％、約１０％～約１５％、約１５％～約２０％、約２０％～約２５％、約２５％～約３０％、約３０％～約３５％、約３５％～約４０％、約４０％～約４５％、約４５％～約５０％、約５０％～約５５％、約５５％～約６０％、約６０％～約６５％、約６５％～約７０％、約７０％～約７５％、または約７５％～約８０％である。
発現レベルの調節は、蛋白質レベルを測定することにより、例えば、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ後に該標的蛋白質に対する好適な抗体を用いたウエスタンブロッティングを実施するなどの方法により、判定することができる。あるいは、発現レベルの調節は、ｍＲＮＡレベルの測定によって、例えば、ノーザンブロッティングまたは定量ＲＴ－ＰＣＲによって判定することができる。ｍＲＮＡレベルで測定する場合であれば、適切な剤形を、０．０４ｎＭ～２５ｎＭなど、０．８～２０ｎＭなどの濃度で用いたときの下方制御レベルは、いくつかの局面において、典型的には本開示の化合物の非存在下における正常レベルの１０～２０％のレベルとなる。
したがって、本開示は、ＰＣＳＫ９の蛋白質および／またはｍＲＮＡを発現する細胞におけるＰＣＳＫ９の蛋白質および／またはｍＲＮＡの発現を下方制御または阻害するインビトロ法またはインビボ法を提供するが、ここで該方法は、該細胞におけるＰＣＳＫ９の蛋白質および／またはｍＲＮＡの発現を下方制御または阻害する目的で、本開示にしたがうオリゴマーまたはコンジュゲート、例えば、本開示の医薬組成物（例えば、経口製剤（例えば、ＣＩＶＩ００８および経口送達剤（ＳＮＡＣ、Ｃ１０、または５－ＣＮＡＣ、その誘導体、その薬学的に許容可能な水和物、溶媒和物、または塩；あるいはそれらの任意の組み合わせなど）を含む経口製剤）として、該細胞に投与することを含む。好適には、該細胞はヒト細胞などの哺乳動物細胞である。
第２節ｃ：鎖長
本開示のオリゴマーは、連続する全長１６、１７、１８、１９、２０、２１、または２２ヌクレオチドである連続ヌクレオチド配列を含み得る、あるいは同配列から成ることが可能である。いくつかの局面においては、該オリゴマーは連続する長さ２２ヌクレオチドよりも長い。鎖長は、領域Ａ、または領域Ａおよび領域Ｂを含む。いくつかの局面においては、本開示のオリゴマーは例えば、２、３、４、５、６以上の本明細書に開示の鎖状連結ＡＳＯを含む多量体であり得るが、該鎖状連結ＡＳＯは、任意選択的に該多量体において各ＡＳＯ間に位置するヌクレオチドまたは非ヌクレオチドユニットを含むスペーサーまたはリンカーによって連結することもできることを、理解されたい。したがって、いくつかの局面においては、本開示のオリゴマーは、全体として連続する長さが少なくとも約２０、少なくとも約２５、少なくとも約３０、少なくとも約３５、少なくとも約４０、少なくとも約４５、少なくとも約５０、少なくとも約５５、少なくとも約６０、少なくとも約６５、少なくとも約７０、少なくとも約７５、少なくとも約８０、少なくとも約８５、少なくとも約９０、少なくとも約９５、少なくとも約１００、少なくとも約１１０、少なくとも約１２０、少なくとも約１３０、少なくとも約１４０、少なくとも約１５０、少なくとも約１６０、少なくとも約１７０、少なくとも約１８０、少なくとも約１９０、または少なくとも約２００ヌクレオチドの配列を含み得る、あるいは同配列から成ることが可能である。
いくつかの局面においては、該オリゴマーは全体として連続する長さが１６～２２ヌクレオチド（連続する長さ１６、１７、１８、１８、２０、２１、または２２ヌクレオチドなど）の配列を含む、あるいは同配列から成る。いくつかの特定局面においては、領域Ａのオリゴマーは、連続する１６ヌクレオチドの配列を含む、あるいは同配列から成る。
いくつかの局面においては、本開示にしたがうオリゴマーは、連続する長さ１６、１７、１８、１９、２０、２１または２２超のヌクレオチドから成る。いくつかの局面においては、本開示のオリゴマーは、連続する長さ２２未満、２１未満、２０未満、１９未満、１８未満、または１７未満のヌクレオチドを含む。いくつかの局面においては、本開示にしたがうオリゴマーは、連続する長さ１６または１７、１６～１８、１６～１９、１６～２０、１６～２１、または１６～２２のヌクレオチドから成る。
第２節ｄ：ヌクレオチド類似体
いくつかの局面においては、本開示のオリゴマーは、非天然ヌクレオチド類似体、例えば、二環式ヌクレオチドまたは２’修飾ヌクレオチド（２’置換ヌクレオチドなど）などの修飾糖部分を有するヌクレオチドを含む。天然ヌクレオチドの非天然類似体による置換は、望ましい性質または特性、例えば、分解に対する耐性の増加または安定性を該オリゴマーに付与し得る。いくつかの局面においては、該オリゴマーが、例えば、該標的への結合親和性増強（親和性増強）、および／または細胞内ヌクレアーゼに対する耐性の増加、および／または細胞内への輸送性の増加により、発現を阻害する作用に対して、該ヌクレオチド類似体が機能的効果を果たす。ヌクレオシド類似体の具体的な例は、例えば、Ｆｒｅｉｅｒ ＆ Ａｌｔｍａｎｎ（１９９７）Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄ Ｒｅｓ．２５：４４２９－４４４３およびＵｈｌｍａｎｎ（２０００）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｄｒｕｇ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ３：２９３－２１３に記載があり、また以下のスキーム１にも示されている。
Figure 2024500367000015
本開示は、天然ヌクレオチド、好ましくは２’－デオキシヌクレオチド（本明細書中では一般的に「ＤＮＡ」とよぶ）であるが、リボヌクレオチド（本明細書中では一般的に「ＲＮＡ」とよぶ）であってもよく、あるいはそのような天然のヌクレオチドおよび１種類以上の非天然ヌクレオチド、すなわち、ヌクレオチド類似体の組み合わせの単純な配列を含む、あるいは同配列から成るオリゴマーを提供する。そのようなヌクレオチド類似体は、該標的配列に対する該オリゴマーの親和性を好適に増強し得る。好適なヌクレオチド類似体の例が、ＷＯ２００７／０３１０９１に記載されている；本参考文献は、その内容全体が参照として本明細書に組み入れられる。
該オリゴマーに親和性増強ヌクレオチド類似体を含めること（ＬＮＡまたは２’－置換糖類など）によって、該特異的に結合するオリゴマーのサイズを縮小することが可能となり、非特異的または異常な結合が起こる前に該オリゴマーのサイズに対する上限を下げることもできる。いくつかの局面においては、本開示のオリゴマーは、少なくとも１つのヌクレオチド類似体を含む。いくつかの局面においては、本開示のオリゴマーは、少なくとも２つのヌクレオチド類似体を含む。いくつかの局面においては、本開示のオリゴマーは、３、４、５、６、７、または８つのヌクレオチド類似体、例えば、６または７つのヌクレオチド類似体を含む。いくつかの局面においては、すべてのヌクレオチド類似体が同一である。いくつかの局面においては、いくつかのヌクレオチド類似体が異なる。いくつかの局面においては、該オリゴマー中のすべてのヌクレオチドがヌクレオチド類似体である。いくつかの局面においては、該オリゴマー中のすべてのヌクレオチドがヌクレオチド類似体である場合には、すべてのヌクレオチド類似体が同一である。いくつかの局面においては、該オリゴマー中のすべてのヌクレオチドがヌクレオチド類似体である場合には該ヌクレオチド類似体のいくつかが異なる。いくつかの局面においては、本開示のオリゴマーは、ヌクレオチド類似体を含む；例えば、類似体Ａおよび類似体Ｂを、特定のパターン、例えば、ＡＢＡＢＡＢＡＢＡＢＡＢＡＢＡＢＡＢＡＢＡのパターンで含む。
ヌクレオチド類似体の例としては、２’－置換基を導入するため、または結合親和性を増強し、またヌクレアーゼ耐性を増強し得る二環構造を形成させるために糖部分を修飾することを含む。
いくつかの局面においては、本開示のアンチセンスオリゴマー内に存在するヌクレオチド類似体（「ギャップマー設計」の節において言及されている領域Ｘ’およびＹ’など）は、例えば：２’－Ｏ－アルキル－ＲＮＡユニット、２’－ＯＭｅ－ＲＮＡユニット、２’－Ｏ－アルキル－ＤＮＡ、２’－アミノ－ＤＮＡユニット、２’－フルオロ－ＤＮＡユニット、ＬＮＡユニット、アラビノ核酸（ＡＮＡ）ユニット、２’－フルオロ－ＡＮＡユニット、ＨＮＡユニット、ＩＮＡ（挿入性核酸；Ｃｈｒｉｓｔｅｎｓｅｎ（２００２）Ｎｕｃｌ． Ａｃｉｄｓ．Ｒｅｓ．３０：４９１８－４９２５）ユニットおよび２’ＭＯＥユニットから独立に選択される。
いくつかの局面においては、ヌクレオチド類似体は、２’－Ｏ－メトキシエチル－ＲＮＡ（２’ＭＯＥ）、２’－フルオロ－ＤＮＡ単量体、またはＬＮＡヌクレオチド類似体であり、したがって、本開示のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、これら３種類の類似体から独立に選択されるヌクレオチド類似体を含むことができる、あるいは該３種類から選択される類似体のうちの１種類のみを含むことができる。いくつかの局面においては、該ヌクレオチド類似体の少なくとも１つは、２’－ＭＯＥ－ＲＮＡ（２、３、４、５、６、７、８、９または１０ユニットの２’－ＭＯＥ－ＲＮＡヌクレオチドユニット）である。いくつかの局面においては、該ヌクレオチド類似体の少なくとも１つは、２’－フルオロＤＮＡ（２、３、４、５、６、７、８、９または１０ユニットの２’－フルオロ－ＤＮＡヌクレオチドユニット）である。
いくつかの局面においては、該オリゴマーは、センス鎖およびアンチセンス鎖を含む二本鎖ＲＮＡであり得るが、ここで該センス鎖は、パターン：３’ＡＢＡＢＡＢＡＢＡＡＡＢＡＢＢＢＡＢＡＢＡ５’にしたがい、一方、該アンチセンス鎖は、パターン：５’ＢＡＢＡＢＡＢＡＢＡＢＢＢＡＢＡＡＡＢＡＢＡＢ３’にしたがい、ここでＡは２’－フルオロ類似体であり、Ｂは２－ＯＭｅ類似体であり、またここで該アンチセンス鎖は該センス鎖と比較して２塩基突出を有する。いくつかの局面においては、該センス鎖の５’末端はＧａｌＮＡｃ部分に連結（コンジュゲート）している。いくつかの局面においては、該アンチセンス鎖の５’末端の最後の２つの結合はＰＳである。
いくつかの局面においては、該オリゴマーは、センス鎖およびアンチセンス鎖を含む二本鎖ＲＮＡであり得るが、ここで該センス鎖は、パターン：３’ＢＢＢＢＢＢＡＢＡＡＡＢＢＢＢＢＢＢＢＢＢ５’にしたがい、該アンチセンス鎖は、パターン：５’ＢＢＢＢＢＢＢＡＢＡＢＢＢＢＡＢＢＡＢＢＢＡＢ３’にしたがい、ここでＡは２’－フルオロ類似体であり、他方、Ｂは２－ＯＭｅ類似体であり、およびここで該アンチセンス鎖は該センス鎖と比較して２塩基突出を有する。いくつかの局面においては、該センス鎖の５’末端はＧａｌＮＡｃ部分に連結（コンジュゲート）している。いくつかの局面においては、該アンチセンス鎖の５’末端および３’末端の最後の２つの結合はＰＳであり、該センス鎖の３’末端の最後の２つの結合はＰＳである。
いくつかの局面においては、該オリゴマーは、センス鎖およびアンチセンス鎖を含む二本鎖ＲＮＡであり得るが、ここで該センス鎖は５’末端に、キラリティに関して修飾されたヌクレオチド間結合であって、１つ以上の末端ヌクレオチド間結合を含み；該アンチセンス鎖は５’末端に、キラリティに関して修飾されたヌクレオチド間結合であって、１つ以上の末端ヌクレオチド間結合、および３’末端に、キラリティに関して修飾されたヌクレオチド間結合であって、１つ以上の末端ヌクレオチド間結合を含む。
いくつかの局面においては、該オリゴマーは、センス鎖およびアンチセンス鎖を含む二本鎖ＲＮＡであり得るが、ここで該センス鎖配列は、４～１２個の不斉２’－Ｏ－アルキル修飾を有し、そのうちの少なくとも４つは、５’末端の４つの末端ヌクレオチドとして存在し、また該アンチセンス配列は少なくとも４つの不斉ホスホロチオエート修飾を有する。
いくつかの局面においては、該オリゴマーは、３’末端または５’末端のいずれかの最初の３つ、４つ、５つ、または６つの位置内において、第１の配列内に第１の単量体を有し、第２の配列内に第２の単量体を有する第１および第２の配列を含む二本鎖ＲＮＡであり得るが、ここで該第１および第２の単量体は、以下の（ｉ）および（ｉｉ）となるように選択される：
（ｉ）該第１および第２の単量体が天然リボヌクレオチドまたは天然塩基を有する修飾リボヌクレオチドとなり、ここで第１の単量体のリボヌクレオチドおよび第２の単量体のリボヌクレオチドが、対合を形成しないため実質的なレベルの水素結合を有していない相補部位を占有する場合には、非標準ワトソン・クリック対を形成する；
および
（ｉｉ）第１と第２の配列の間での二本鎖形成に寄与する単量体の対合の安定性が、第１の配列と標的配列との間、または第２の配列と標的配列との間の対合の安定性とは異なり、ここで該二本鎖ＲＮＡがＴＴ突出配列を含む。
いくつかの局面においては、該オリゴマーは以下を含む二本鎖ＲＮＡであり得る：
４～１２個の不斉２’－Ｏ－アルキル修飾を有し、そのうちの少なくとも４つが５’末端の６つの末端ヌクレオチド内に存在する、センス鎖配列；
および
少なくとも４つの不斉ホスホロチオエート修飾を有するアンチセンス配列。
いくつかの局面においては、該オリゴマーは以下を含む二本鎖ＲＮＡであり得る：
４～１２個の不斉２’－Ｏ－アルキル修飾を有し、そのうちの少なくとも４つが５’末端の６つの末端ヌクレオチド内に存在する、センス鎖配列；
および
少なくとも４つの不斉ホスホロチオエート修飾を有するアンチセンス配列；
ここで該二本鎖ＲＮＡは多価ガラクトースまたは多価Ｎ－アセチル－ガラクトサミンを含み；、
およびここで該アンチセンス配列はＰＣＳＫ９標的配列を標的とする。
いくつかの局面においては、該オリゴマーは細胞におけるＰＣＳＫ９の発現を阻害するための二本鎖ＲＮＡであり得るが；
ここで該オリゴマーはセンス配列およびアンチセンス配列を含み；
ここで該センス配列は、１つ以上の不斉２’－Ｏアルキル修飾を有し、該アンチセンス配列は、４～２０個のホスホロチオエート修飾を有し；
ここで該二本鎖ＲＮＡは、多価ガラクトースまたは多価Ｎ－アセチル－ガラクトサミンを含み；
およびここで該アンチセンス配列はヒトＰＣＳＫ９配列を標的とする。
いくつかの局面においては、該オリゴマーは細胞におけるＰＣＳＫ９の発現を阻害するための二本鎖ＲＮＡであり得るが、ここで該オリゴマーはセンス配列およびアンチセンス配列を含み；
ここで該センス配列は１つ以上の不斉２’－Ｏアルキル修飾を有し、該アンチセンス配列は、４～２０個のホスホロチオエート修飾を有し；
ここで該アンチセンス配列は該センス配列よりも少ない数の不斉２’－Ｏアルキル修飾を含み；
ここで該センス配列はコンジュゲート基を含み；
およびここで該アンチセンス配列はＰＣＳＫ９配列を標的とする。
いくつかの局面においては、該オリゴマーは、標的外ＲＮＡ阻害活性が低下した二本鎖ＲＮＡであり得るが、ここで該オリゴマーは以下の（ａ）および（ｂ）を含み：
（ａ）標的遺伝子に相補的であるアンチセンス鎖；
および
（ｂ）該アンチセンス鎖に対して相補的であり、該標的切断部位に対応する領域において、少なくとも１種類の修飾ヌクレオチドを含むセンス鎖；
ここで該修飾ヌクレオチドが脱塩基であり；
ここで該低下した標的外ＲＮＡ阻害活性が対応する非修飾二本鎖ＲＮＡ薬剤に対して相対的なものである。
いくつかの局面においては、該オリゴマーはインビボでＰＣＳｋ９発現を阻害可能な二本鎖ＲＮＡであり得るが；
ここで該オリゴマーは以下の（ａ）および（ｂ）を含み：
（ａ）センス鎖；
ここで該センス鎖は以下の（ｉ）および（ｉｉ）を含む：
（ｉ）少なくとも２種類の異なる化学的修飾を施したヌクレオチドの交互モチーフ；
および
（ｉｉ）１つ以上の糖質リガンド；
および
（ｂ）アンチセンス鎖；
ここで該アンチセンス鎖は（ｉ）を含む：
（ｉ）少なくとも２種類の異なる化学的修飾を施したヌクレオチドの交互モチーフ、
ここで該交互モチーフは該二本鎖領域内に存在し、該組成物は任意選択的に１つ以上の突出および／またはキャッピング基をさらに含む。
いくつかの局面においては、該オリゴマーはＰＣＳＫ９発現を阻害可能な二本鎖ＲＮＡであり得るが；
ここで該オリゴマーはセンス鎖およびアンチセンス鎖を含み、それぞれの鎖が１４～３０ヌクレオチドを有し；
ここで該二本鎖が下の化学式で表され：
センス： ５’ ｎｐ －Ｎａ -（Ｘ Ｘ Ｘ） ｉ-Ｎｂ -Ｙ Ｙ Ｙ -Ｎｂ -（Ｚ Ｚ Ｚ）ｊ -Ｎａ - ｎｑ ３’
アンチセンス： ３’ ｎｐ’-Ｎａ’-（Ｘ’Ｘ’Ｘ’）ｋ-Ｎｂ’-Ｙ’Ｙ’Ｙ’-Ｎｂ’-（Ｚ’Ｚ’Ｚ’）ｌ-Ｎａ’- ｎｑ’ ５’ （ＩＩＩ）

ここでｉ、ｊ、ｋ、およびｌのうちの少なくとも１つが１である場合には、ｉ、ｊ、ｋ、およびｌがそれぞれ独立に０または１であり；
ｐおよびｑはそれぞれ独立に０～６であり；
ＮａおよびＮａ’はそれぞれ独立に、修飾された、また非修飾の、あるいはそれらの組み合わせのいずれかである２～２０ヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチド配列を表し、各配列が少なくとも２種類の修飾の異なるヌクレオチドを含み、ＮｂおよびＮｂ’がそれぞれ独立に１～１０個の修飾ヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチド配列を表し；
ｎｐ、ｎｐ’、ｎｑ およびｎｑ’は、それぞれ独立に０～６ヌクレオチドを含む突出ヌクレオチド配列を表し；
および
ＸＸＸ、ＹＹＹ、ＺＺＺ、Ｘ’Ｘ’Ｘ’、Ｙ’Ｙ’Ｙ’、およびＺ’Ｚ’Ｚ’はそれぞれ独立に、連続する３つのヌクレオチド上の３つの同一修飾の単一モチ-フを表し；
および
ここでＮｂ上の修飾は、Ｙ上の修飾とは異なり、Ｎｂ’上の修飾は、Ｙ’上の修飾とは異なる。
いくつかの局面においては、該オリゴマ-は、ＰＣＳＫ９の発現を阻害可能な二本鎖ＲＮＡであり得るが、ここで該オリゴマ-は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含み、それぞれが１４～４０ヌクレオチドを有する鎖を含み、ここで該ｄｓＲＮＡ剤が下の化学式で表され：
Figure 2024500367000016
 ここでＢ１、Ｂ２、Ｂ３、Ｂ１’、Ｂ２’、Ｂ３’、およびＢ４’がそれぞれ独立に、２’-Ｏアルキル、２’-置換アルコキシ、２’-置換アルキル、２’-ハロ、ＥＮＡ、およびＢＮＡ／ＬＮＡから成る群から選択される修飾を含むヌクレオチドを表し；
Ｃ１は以下のｉ）、ｉｉ）、およびｉｉｉ）から成る群から選択される熱不安定化ヌクレオチドであり：
ｉ）該アンチセンス鎖において対向するヌクレオチドとの間にミスマッチ対を形成するヌクレオチド；
ｉｉ）脱塩基修飾を有するヌクレオチド；
および
ｉｉｉ）糖修飾を有するヌクレオチド、
ここで該Ｃ１は、該アンチセンス鎖のシ-ド領域（２～８位）に対向する部位に配置される；
Ｔ１、Ｔ１’、Ｔ２’、およびＴ３’はそれぞれ独立に、２’-ＯＭｅ修飾の立体容積よりも少ない立体容積を該ヌクレオチドに付与する修飾を含むヌクレオチドを表し；
ここで該修飾が該ヌクレオチドのリボ-ス糖の２’位、またはリボ-ス糖の２’位に類似の非リボ-スヌクレオチドの位置に存在し；
およびここでＴ１’とＴ３’が長さ１１ヌクレオチド離れており；
ｎ１、ｎ３、およびｑ１ がそれぞれ独立に長さ４～１５ヌクレオチドであり；
ｎ５、ｑ３、およびｑ７ がそれぞれ独立に長さ１～６ヌクレオチドであり；
ｎ２、ｎ４、およびｑ６ がそれぞれ独立に長さ１～３ヌクレオチドであり；
ｑ５ が独立に長さ０～１０ヌクレオチドであり；
および
ｎ２、ｎ４、およびｑ４ がそれぞれ独立に長さ０～３ヌクレオチドであり；
およびここで該ｄｓＲＮＡ剤がｄｓＲＮＡ二本鎖の両末端において２つの平滑末端を有する。
いくつかの局面においては、該オリゴマ-はＰＣＳＫ９の発現を阻害可能な二本鎖ＲＮＡであり得るが；
ここで該オリゴマ-はセンス鎖およびアンチセンス鎖を含み、各鎖が１４～４０ヌクレオチドを有し；
ここで該アンチセンス鎖がＲＮＡ干渉を媒介するために該標的配列に対し充分な相補性を有し；
ここで該アンチセンス鎖は、５’領域またはその前駆体の最初の９ヌクレオチド以内の位置において該二本鎖に少なくとも１種類の熱不安定化修飾を含み；
ここで該センス鎖はＡＳＧＰＲリガンドを含む。
いくつかの局面においては、該オリゴマ-は、米国特許第８，１１０，６７４号、第８，４２０，７９９号、第８，８０９，５１６号、第９，２２２，０９１号、第９，７０８，６１５号、第１０，２７３，４７７号、第９，２９０，７６０号、第１０，２３３，４４８号、または第９，７９６，９７４号；米国特許公開公報第２０１８-０２５８４２７号Ａ１；または国際特許公開ＷＯ２０１８０９８３２８Ａ１に開示される修飾モチ-フ（例えば、センス配列およびアンチセンス配列、ヌクレオシド間結合、コンジュゲ-ト部分などにおけるヌクレオチド類似体の分布パタ-ン）を含む；これらの参考文献はいずれもその内容全体が参照として本明細書に組み入れられる。
いくつかの局面においては、該ヌクレオチド類似体は、オキシ-ＬＮＡ（ベ-タ-Ｄ-オキシ-ＬＮＡ、およびアルファ-Ｌ-オキシ-ＬＮＡなど）、および／またはアミノ-ＬＮＡ（ベ-タ-Ｄ-アミノ-ＬＮＡおよびアルファ-Ｌ-アミノ-ＬＮＡなど）および／またはチオ-ＬＮＡ（ベ-タ-Ｄ-チオ-ＬＮＡおよびアルファ-Ｌ-チオ-ＬＮＡなど）および／またはＥＮＡ（ベ-タ-Ｄ-ＥＮＡおよびアルファ-Ｌ-ＥＮＡなど）などのＬＮＡである。いくつかの局面においては、該ＬＮＡはベ-タ-Ｄ-オキシ-ＬＮＡである。いくつかの局面においては、上記の種類のヌクレオチド類似体のうちの１種類のみが存在する；例えば、本開示のアンチセンスオリゴヌクレオチド、またはその連続ヌクレオチド配列中に存在するＬＮＡ。
本開示のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、１、２、３、４、５、６、７、または８個のＬＮＡユニットなど（３～７個、または４～８個のＬＮＡユニットなど）の少なくとも１種類のロック型核酸（ＬＮＡ）ユニットを含む。いくつかの局面においては、該ヌクレオチド類似体の少なくとも１つがロック型核酸（ＬＮＡ）である；例えば、該ヌクレオチド類似体の少なくとも３つまたは少なくとも４つ、または少なくとも５つ、または少なくとも６つ、または少なくとも７つ、または８つがＬＮＡであり得る。いくつかの局面においては、該ヌクレオチド類似体は全てＬＮＡであり得る。
いくつかの局面においては、本開示のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、ヌクレオチド類似体（例えば、ＬＮＡ）およびＤＮＡユニットの両方を含み得る。いくつかの局面においては、ヌクレオチド類似体（好ましくはＬＮＡ）とＤＮＡユニットを合わせた総数は、５～２２、例えば、１６～１８、または１６～２０、または１６～２２である。いくつかの局面においては、ヌクレオチド類似体（例えば、ＬＮＡ）とＤＮＡユニットを合わせた総数は、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１または２２である。
いくつかの局面においては、本開示のアンチセンスオリゴヌクレオチドのヌクレオチド配列（該連続ヌクレオチド配列など）は、少なくとも１種類のヌクレオチド類似体（ＬＮＡ）から成り、残りのヌクレオチドユニットはＤＮＡユニットである。いくつかの局面においては、本開示のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、ＬＮＡヌクレオチド類似体および天然ヌクレオチド（ＲＮＡまたはＤＮＡ、最も好ましくはＤＮＡヌクレオチドなど）のみを含み、任意選択的にホスホロチオエ-トなどの修飾ヌクレオシド間結合を有する。
ヌクレオチドのみから成る特定のヌクレオチド配列モチ-フまたはヌクレオチド配列を参照する場合には、その配列によって規定される本開示のオリゴマ-は、該配列に存在する１つ以上のヌクレオチドの代わりに、該オリゴマ-／標的二本鎖の二本鎖安定性を増強する／Ｔｍを高める対応するヌクレオチド類似体（ＬＮＡユニットまたは他のヌクレオチド類似体など）（すなわち、親和性増強ヌクレオチド類似体）を含み得ることは、理解されるであろう。
Ｔｍアッセイ
オリゴヌクレオチドおよびＲＮＡ標的（ＰＯ）の二本鎖を５００ｍｌのＲＮａｓｅ不含水で３ｍＭに希釈し、５００ｍｌの２ｘ Ｔｍ-緩衝液（２００ｍＭ ＮａＣｌ、０．２ｍＭ ＥＤＴＡ、２０ｍＭリン酸ナトリウム、ｐＨ７．０）と混合する。この溶液を９５℃で３分間加熱した後、室温で３０分間アニ-リングする。ペルチェ温度プログラム装置ＰＴＰ６（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）を備えたＬａｍｂｄａ４０ＵＶ／ＶＩＳ分光光度計で、ＰＥ Ｔｅｍｐｌａｂソフトウェアを用いて二本鎖融解温度（Ｔｍ）を測定する。温度を約２０℃から約９５℃に上昇させた後、約２５℃に下げ、２６０ｎｍの吸光度を記録する。一次導関数、ならびに融解およびアニ-リングの両方の局所最大値を用いて、二本鎖のＴｍを評価する。
いくつかの局面においては、該オリゴマ-のヌクレオチド配列と該標的配列の間のいずれかのミスマッチが、ギャップマ-設計」の節において領域Ｙ’とよばれるような、親和性増強ヌクレオチド類似体の外側の領域に、および／または該オリゴヌクレオチド中のＤＮＡヌクレオチドなどの非修飾の位置に、および／または該連続ヌクレオチド配列に対して５’または３’である領域に見いだされる。
第２節ｅ：ＬＮＡ
いくつかの局面においては、本開示のオリゴマ-（例えば、ＡＳＯ）は少なくとも１つのＬＮＡユニットを含む。用語「ロック型核酸」および「ＬＮＡ」は、リボ-ス環、すなわち、２’から４への二環式ヌクレオチド類似体の２’位と４’位との間に架橋を含む任意の二環式ヌクレオシド類似体を指す。ＬＮＡは文献ではＢＮＡ（架橋核酸または二環式核酸）とよばれることもある；この２つの用語は同義語として用い得る。用語ＬＮＡは一般的に、ＬＮＡ単量体を指す。用語「ＬＮＡオリゴヌクレオチド」は、１種類以上のそのような二環式ヌクレオチド類似体を含むオリゴヌクレオチド（例えば、ギャップマ-などのＡＳＯ）を指す。いくつかの局面においては、二環式ヌクレオシド類似体はＬＮＡヌクレオチドであり、したがってこれらの用語は同義語として用い得る。そのような局面においては、両方が、リボ-ス糖環のＣ２’およびＣ４’の間にリンカ-基（架橋など）が存在することを特徴とする。
いくつかの局面においては、本開示のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、ベ-タ-Ｄ-オキシ-ＬＮＡを含むことができ、ベ-タ-Ｄ配位またはアルファ-Ｌ配位またはそれらの組み合わせのいずれかである以下のＬＮＡユニットの１種類以上を含み得る：チオ-ＬＮＡ、アミノ-ＬＮＡ、オキシ-ＬＮＡ、５’-メチル-ＬＮＡおよび／またはＥＮＡ。
いくつかの局面においては、すべてのＬＮＡシトシンユニットが５’-メチル-シトシンである。いくつかの局面においては、該第１の領域（Ｘ’）に存在する少なくとも１種類のヌクレオシド類似体は二環式ヌクレオシド類似体である。いくつかの局面においては、該第１の領域（Ｘ’）に存在する少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、少なくとも６つ、少なくとも７つ、少なくとも８つのヌクレオシド類似体が二環式ヌクレオシド類似体である。したがって、いくつかの局面においては、領域Ｙ’のＤＮＡヌクレオシドおよび／またはＲＮＡヌクレオシドを除く、本開示のオリゴヌクレオチド中の全ヌクレオシドが、糖修飾ヌクレオシド類似体であり、例えば、ＬＮＡ（例えば、ベ-タ-Ｄ-Ｘ-ＬＮＡまたはアルファ-Ｌ-Ｘ-ＬＮＡ、ここでＸはオキシ、アミノまたはチオ）などの二環式ヌクレオシド類似体、本明細書に開示の他のＬＮＡ（（Ｒ／Ｓ）ｃＥＴ、ｃＭＯＥ、または５’-Ｍｅ-ＬＮＡ、またはそれらの任意の組み合わせが挙げられるが、これらにのみに限定されるものではない）である。
いくつかの局面においては、本開示のオリゴヌクレオチドに用いるＬＮＡは、以下の一般化学式ＩＩの構造を有している：
Figure 2024500367000017
 ここでＹは、-Ｏ-、-ＣＨ２Ｏ-、-Ｓ-、-ＮＨ-、Ｎ（Ｒｅ）および／または-ＣＨ２-から成る群から選択され；ＺおよびＺ＊は、ヌクレオシド間結合、ＲＨ、末端基または保護基から独立に選択され；Ｂは天然または非天然のヌクレオチド塩基部分（核酸塩基）を構成し、ＲＨは水素およびＣ１～４-アルキルから選択され；
Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、およびＲｅは任意選択的に独立に：
水素、任意選択的に置換されてもよいＣ１～１２-アルキル、任意選択的に置換されてもよいＣ２～１２-アルケニル、任意選択的に置換されてもよいＣ２～１２-アルキニル、ヒドロキシ、Ｃ１～１２-アルコキシ、Ｃ２～１２-アルコキシアルキル、Ｃ２～１２-アルケニルオキシ、カルボキシ、Ｃ１～１２-アルコキシカルボニル、Ｃ１～１２-アルキルカルボニル、ホルミル、アリ-ル、アリ-ルオキシ-カルボニル、アリ-ルオキシ、アリ-ルカルボニル、ヘテロアリ-ル、ヘテロアリ-ルオキシ-カルボニル、ヘテロアリ-ルオキシ、ヘテロアリ-ルカルボニル、アミノ、モノ-およびジ（Ｃ１～６-アルキル）アミノ、カルバモイル、モノ-およびジ（Ｃ１～６-アルキル）-アミノ-カルボニル、アミノ-Ｃ１～６-アルキル-アミノカルボニル、モノ-およびジ（Ｃ１～６-アルキル）アミノ-Ｃ１～６-アルキル-アミノカルボニル、Ｃ１～６-アルキル-カルボニルアミノ、カルバミド、Ｃ１～６-アルカノイルオキシ、スルホノ、Ｃ１～６-アルキルスルホニルオキシ、ニトロ、アジド、スルファニル、Ｃ１～６-アルキルチオ、ハロゲン、ＤＮＡインタ-カレ-タ-、光化学活性基、熱化学的に活性な基、キレ-ト基、レポ-タ-基、およびリガンドから成る群から選択され；
ここでアリ-ルおよびヘテロアリ-ルは任意選択的に置換されてもよく、またここで２つのジェミナル置換基ＲａおよびＲｂは共に任意選択的に置換されてもよいメチレンを指す（＝ＣＨ２）；
および
ＲＨは、水素およびＣ１～４-アルキルから選択される。
いくつかの局面においては、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、およびＲｅは任意選択的に、水素およびＣ１～６アルキル（メチルなど）から成る群から独立に選択される。すべてのキラル中心について、不斉基はＲ配位またはＳ配位のいずれかであり得るが、例えば、２種類の立体化学異性体の例としては、ベ-タ-Ｄイソ型およびアルファ-Ｌイソ型が挙げられ、これを具体的に示せば以下のようになる：
Figure 2024500367000018
ＬＮＡユニットの具体的な例を下に示す：
Figure 2024500367000019
用語「チオ-ＬＮＡ」は、上記の一般化学式中のＹがＳまたは-ＣＨ２-Ｓ-から選択されるロック型ヌクレオチドを含む。チオ-ＬＮＡは、ベ-タ-Ｄ配位およびアルファ-Ｌ配位の両方であり得る。
用語「アミノ-ＬＮＡ」は、上記の一般化学式中のＹが-Ｎ（Ｈ）-、Ｎ（Ｒ）-、ＣＨ２-Ｎ（Ｈ）-、および-ＣＨ２-Ｎ（Ｒ）-から選択されるロック型ヌクレオチドを含み、ここでＲは水素およびＣ１～４-アルキルから選択される。アミノ-ＬＮＡは、ベ-タ-Ｄ配位およびアルファ-Ｌ配位の両方であり得る。
用語「オキシ-ＬＮＡ」は、上記の一般化学式中のＹが-Ｏを示すロック型ヌクレオチドを含む。オキシ-ＬＮＡは、ベ-タ-Ｄ配位およびアルファ-Ｌ配位の両方であり得る。
用語「ＥＮＡ」は、上記の一般化学式中のＹが-ＣＨ２-Ｏ-（ここで-ＣＨ２-Ｏ-の酸素原子は塩基Ｂの２’位に連結する）であるロック型ヌクレオチドを含む。Ｒｅは水素またはメチルである。
いくつかの例示的な局面においては、ＬＮＡはベ-タ-Ｄ-オキシ-ＬＮＡ、アルファ-Ｌ-オキシ-ＬＮＡ、ベ-タ-Ｄ-アミノ-ＬＮＡおよびベ-タ-Ｄ-チオ-ＬＮＡ、特にベ-タ-Ｄ-オキシ-ＬＮＡから選択される。
本明細書中の、「二環式ヌクレオシド」は二環式糖部分を含む修飾ヌクレオシドを指す。二環式ヌクレオシドの例としては、４’位と２’位のリボシル環原子間に架橋を含むヌクレオシドが挙げられるが、これのみに限定されるものではない。いくつかの局面においては、本明細書において提供される化合物は、１種類以上の二環式ヌクレオシドを含み、ここで該架橋は４’位から２’位への二環式ヌクレオシドを含む。そのような４’位から２’位への二環式ヌクレオシドとしては、以下の化学式のうちの１つが挙げられるが、これらのみに限定されるものではない：
４’-（ＣＨ２）-Ｏ-２’（ＬＮＡ）；４’-（ＣＨ２）-Ｓ-２’；４’-（ＣＨ２）２-Ｏ-２’（ＥＮＡ）；４’-ＣＨ（ＣＨ３）-Ｏ-２’および４’-ＣＨ（ＣＨ２ＯＣＨ３）-Ｏ-２＊、およびその類似体（米国特許第７，３９９，８４５号を参照のこと；本文献は参照としてその内容全体が本明細書に組み入れられる）；
４’-Ｃ（ＣＨ３）（ＣＨ３）-Ｏ-２’、およびその類似体（国際特許公開ＷＯ２００９／００６４７８を参照のこと；本文献は参照としてその内容全体が本明細書に組み入れられる）；
４’-ＣＨ２-Ｎ（ＯＣＨ３）-２’、およびその類似体（国際特許公開ＷＯ２００８／１５０７２９を参照のこと；本文献は参照としてその内容全体が本明細書に組み入れられる）；
４’-ＣＨ２-Ｏ-Ｎ（ＣＨ３）-２’（米国特許出願第２００４／０１７１５７０号を参照のこと；本文献は参照としてその内容全体が本明細書に組み入れられる）；
４’-ＣＨ２-Ｎ（Ｒ）-Ｏ-２’、ここでＲはＨ、Ｃ１～Ｃ１０アルキル、または保護基である（米国特許第７，４２７，６７２号を参照のこと；本文献は参照としてその内容全体が本明細書に組み入れられる）；
４’-ＣＨ２-Ｃ（Ｈ）、 Ｊ． Ｏｒｇ． Ｃｈｅｍ．２００９、７４：１１８-１３４を参照のこと；本文献は参照としてその内容全体が本明細書に組み入れられる）；
および
４’-ＣＨ２-Ｃ（＝ＣＨ２）-２’、およびその類似体（国際特許公開ＷＯ２００８／１５４４０１を参照のこと；本文献は参照としてその内容全体が本明細書に組み入れられる）。また例えば、以下を参照のこと：
Ｓｉｎｇｈら、Ｃｈｅｍ． Ｃｏｍｍｕｎ．、１９９８、４：４５５-４５６； Ｋｏｓｈｋｉｎら、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ、１９９８、５４：３６０７-３６３０； Ｗａｈｌｅｓｔｅｄｔら、Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． Ｕ． Ｓ． Ａ．、２０００、９７：５６３３-５６３８；Ｋｕｍａｒら、Ｂｉｏｏｒｇ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ． Ｌｅｔｔ．、１９９８、８：２２１９-２２２２； Ｓｉｎｇｈら、Ｊ． Ｏｒｇ． Ｃｈｅｍ．、１９９８、６３：１００３５-１００３９；Ｓｒｉｖａｓｔａｖａら、Ｊ． Ａｍ． Ｃｈｅｍ． Ｓｏｃ， ２００７、１２９：８３６２-８３７９；Ｅｌａｙａｄｉら、Ｃｕｒｒ． Ｏｐｉｎｉｏｎ Ｉｎｖｅｎｓ． Ｄｒｕｇｓ、２００１、２：５５８-５６１； Ｂｒａａｓｃｈら、Ｃｈｅｍ． Ｂｉｏｌ、 ２００１、８：１-７； Ｏｒａｍら、Ｃｕｒｒ． Ｏｐｉｎｉｏｎ Ｍｏｌ． Ｔｈｅｒ．、２００１、 ３：２３９-２４３；米国特許第６，６７０，４６１号、第７，０５３，２０７号、第６，２６８，４９０号、第６，７７０，７４８号、第６，７９４，４９９号、第７，０３４，１３３号、第６，５２５，１９１号、第７，３９９，８４５号；国際特許公開ＷＯ２００４／１０６３５６、ＷＯ９４／１４２２６、ＷＯ２００５／０２１５７０、およびＷＯ２００７／１３４１８１；米国特許出願第２００４／０１７１５７０号、第２００７／０２８７８３１号、および第２００８／００３９６１８号；および米国特許出願第１２／１２９，１５４号、第６０／９８９，５７４号、第６１／０２６，９９５号、第６１／０２６，９９８号、第６１／０５６，５６４号、第６１／０８６，２３１号、第６１／０９７，７８７号、および第６１／０９９，８４４号；およびＰＣＴ国際特許出願ＰＣＴ／ＵＳ２００８／０６４５９１、ＰＣＴ／ＵＳ２００８／０６６１５４、およびＰＣＴ／ＵＳ２００８／０６８９２２；これらの文献はいずれも参照としてその内容全体が本明細書に組み入れられる。
上記の二環式ヌクレオシドはそれぞれ、例えば、α-Ｌ-リボフラノ-スおよびβ-Ｄ-リボフラノ-ス（例えば、国際特許出願ＷＯ９９／１４２２６を参照のこと）を含む１つ以上の立体化学的糖配位を有するように調製され得る。いくつかの局面においては、ＬＮＡヌクレオシドの二環式糖部分としては、該ペントフラノシル糖部分の４’位と２’位の間に少なくとも１つの架橋を有する化合物が挙げられるが、これらのみに限定されるものではない；ここでそのような架橋は独立に、-［ＣｉＲａ ＸＲｂ）］-、-Ｃ（Ｒａ）＝Ｃ（Ｒｂ）-、-Ｃ（Ｒａ）＝Ｎ-、-Ｃ（＝ＮＲａ）-、-Ｃ（＝Ｏ）-、-Ｃ（＝Ｓ）-、-Ｏ-、-Ｓｉ（Ｒａ）２-、-Ｓ（＝Ｏ）ｘ-、および-Ｎ（Ｒａ）-から独立に選択される１つまたは２～４つの連結基を含み；ここでｘは０、１、または２であり；ｎは１、２、３、または４である；ＲａおよびＲｂはそれぞれ独立に、Ｈ、保護基、ヒドロキシル、Ｃ１～Ｃ１２アルキル、置換Ｃ１～Ｃ１２アルキル、Ｃ２～Ｃ１２アルケニル、置換Ｃ２～Ｃ１２アルケニル、Ｃ２～Ｃ１２アルキニル、置換Ｃ２～Ｃ１２アルキニル、Ｃ５～Ｃ２０アリ-ル、置換Ｃ５～Ｃ２０アリ-ル、複素環ラジカル、置換ヘテロサイクルラジカル、ヘテロアリ-ル、置換ヘテロアリ-ル、Ｃ５～Ｃ７脂環式ラジカル、置換Ｃ５～Ｃ７脂環式ラジカル、ハロゲン、ＯＪ１、ＮＪ１Ｊ２、ＳＪ１、Ｎ３、ＣＯＯＪ１、アシル（Ｃ（＝Ｏ）-Ｈ）、置換アシル、ＣＮ、スルホニル（Ｓ（＝Ｏ）２-Ｊ１）、またはスルホキシル（Ｓ（＝Ｏ）-Ｊ１）であり、ここでＪ１およびＪ２はそれぞれ独立に、Ｈ、Ｃ１～Ｃ６アルキル、置換Ｃ１～Ｃ１２アルキル、Ｃ２～Ｃ１２アルケニル、置換Ｃ２～Ｃ１２アルケニル、Ｃ２～Ｃ１２アルキニル、置換Ｃ２～Ｃ１２アルキニル、Ｃ５～Ｃ２０アリ-ル、置換Ｃ５～Ｃ２ ｏ アリ-ル、アシル（Ｃ（＝Ｏ）-Ｈ）、置換アシル、複素環ラジカル、置換ヘテロサイクルラジカル、Ｃ１～Ｃ１２アミノアルキル、置換Ｃ１～Ｃ１２アミノアルキル、または保護基である。
いくつかの局面においては、二環式糖部分の架橋は、-［Ｃ（Ｒａ）（Ｒｂ）］ｎ-、-［Ｃ（Ｒａ）（Ｒｂ）］ｎ-Ｏ-、-Ｃ（ＲａＲｂ）-Ｎ（Ｒ）-Ｏ-または-Ｃ（ＲａＲｂ）-Ｏ-Ｎ（Ｒ）-である。いくつかの局面においては、該架橋は、４’-ＣＨ２-２’、４’-（ＣＨ２）２-２’、４’-（ＣＨ２）３-２’、４’-ＣＨ２-Ｏ-２’、４＊-（ＣＨ２）２-Ｏ-２’、４’-ＣＨ２-Ｏ-Ｎ（Ｒ）-２’、および４’-ＣＨ２-Ｎ（Ｒ）-Ｏ-２’-であり、ここで各Ｒは独立に、Ｈ、保護基、またはＣ１～Ｃ１２アルキルである。
いくつかの局面においては、二環式ヌクレオシドはさらに異性体配位によって規定される。例えば、４’-２’メチレン-オキシ架橋を含むヌクレオシドはα‐Ｌ配位またはβ-Ｄ配位であり得る。以前にα‐Ｌ‐メチレンオキシ（４’-ＣＨ２-Ｏ-２’）ＢＮＡがアンチセンスオリゴヌクレオチドに組み込まれ、アンチセンス活性を示した。Ｆｒｉｅｄｅｎら、（２００３）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ２１：６３６５-６３７２）を参照のこと。
いくつかの局面においては、二環式ヌクレオシドとしては、以下が挙げられるが、これらのみに限定されるものではない、：
（Ａ）α‐Ｌ‐メチレンオキシ（４’-ＣＨ２-Ｏ-２’）ＢＮＡ、
（Ｂ）β‐Ｄ‐メチレンオキシ（４’-ＣＨ２-Ｏ-２’）ＢＮＡ、
（Ｃ）エチレンオキシ（４’-（ＣＨ２）２-Ｏ-２’）ＢＮＡ、
（Ｄ）アミノオキシ（４’-ＣＨ２-Ｏ-Ｎ（Ｒ）-２’）ＢＮＡ、
（Ｅ）オキシアミノ（４’-ＣＨ２-Ｎ（Ｒ）-Ｏ-２’）ＢＮＡ、
（Ｆ）メチル（メチレンオキシ）（４’-ＣＨ（ＣＨ３）-Ｏ-２’）ＢＮＡ、
（Ｇ）メチレン-チオ（４’-ＣＨ２-Ｓ-２’）ＢＮＡ、
（Ｈ）メチレン-アミノ（４’-ＣＨ２-Ｎ（Ｒ）-２’）ＢＮＡ、
（Ｉ）メチル炭素環式（４’-ＣＨ２-ＣＨ（ＣＨ３）-２’）ＢＮＡ、および
（Ｊ）下に示す様なプロピレン炭素環式（４’-（ＣＨ２）３-２’）ＢＮＡ：
Figure 2024500367000020
 ここでＢｘは該塩基部分であり、Ｒは独立に、Ｈ、保護基またはＣ１～Ｃ２アルキルである。
Figure 2024500367000021
いくつかの局面においては、二環式ヌクレオシドは下の化学式によって規定される：
Figure 2024500367000022
 ここで：
Ｂｘはヘテロ環状塩基部分であり；
-Ｑａ-Ｑｂ-Ｑｃは、-ＣＨ２-Ｎ（Ｒｃ）-ＣＨ２-、-Ｃ（＝Ｏ）-Ｎ（Ｒｃ）-ＣＨ２-、-ＣＨ２-Ｏ-Ｎ（Ｒｃ）-、-ＣＨ２-Ｎ（Ｒｃ）-Ｏ-、または-Ｎ（Ｒｃ）-Ｏ-ＣＨ２であり；
Ｒｃは、Ｃ１～Ｃ１２アルキルまたはアミノ保護基であり；
および
ＴａおよびＴｂはそれぞれ独立に、Ｈ、ヒドロキシル保護基、コンジュゲ-ト基、反応性リン基、リン部分、または支持媒体への共有結合による連結である。
いくつかの局面においては、二環式ヌクレオシドは下の化学式によって規定される：
Figure 2024500367000023
 ここで：
Ｂｘはヘテロ環状塩基部分であり；
ＴａおよびＴｂはそれぞれ独立に、Ｈ、ヒドロキシル保護基、コンジュゲ-ト基、反応性リン基、リン部分、または支持媒体への共有結合による連結であり；
および
Ｚａは、Ｃ１～Ｃ６アルキル、Ｃ２～Ｃ６アルケニル、Ｃ２～Ｃ６アルキニル、置換Ｃ１～Ｃ６アルキル、置換Ｃ２～Ｃ６アルケニル、置換Ｃ２～Ｃ６アルキニル、アシル、置換アシル、置換アミド、チオ-ル、または置換チオである。
いくつかの局面においては、置換されるそれぞれの基は、ハロゲン、オキソ、ヒドロキシル、ＯＪｃ、ＮＪ ｄ、ＳＪｃ、Ｎ３、ＯＣ（＝Ｘ）Ｊｃ、およびＮＪｅＣ（＝Ｘ）ＮＪｃＪｄから独立に選択される置換基で、独立にモノまたはポリ置換され；、
ここでＪｃ、Ｊｄ、およびＪｅはそれぞれ独立に、Ｈ、Ｃ１～Ｃ６アルキル、または置換Ｃ１～Ｃ６アルキルであり、
またＸはＯまたはＮＪｃである。
いくつかの局面においては、二環式ヌクレオシドは以下の式によって規定される：
Figure 2024500367000024
 ここで：
Ｂｘはヘテロ環状塩基部分であり；
ＴａおよびＴｂはそれぞれ独立に、Ｈ、ヒドロキシル保護基、コンジュゲ-ト基、反応性リン基、リン部分、または支持媒体への共有結合による連結であり；
および
Ｒｄは、Ｃ１～Ｃ６アルキル、Ｃ２～Ｃ６アルケニル、Ｃ２～Ｃ６アルキニル、置換Ｃ１～Ｃ６アルキル、置換Ｃ２～Ｃ６アルケニル、置換Ｃ２～Ｃ６アルキニル、または置換アシル（Ｃ（＝Ｏ）-）である。
いくつかの局面においては、二環式ヌクレオシドは以下の式によって規定される：
Figure 2024500367000025
 ここで：
Ｂｘはヘテロ環状塩基部分であり；
ＴａおよびＴｂはそれぞれ独立に、Ｈ、ヒドロキシル保護基、コンジュゲ-ト基、反応性リン基、リン部分、または支持媒体への共有結合による連結であり；
Ｒｄは、Ｃ１～Ｃ６アルキル、置換Ｃ１～Ｃ６アルキル、Ｃ２～Ｃ６アルケニル、置換Ｃ２～Ｃ６アルケニル、Ｃ２～Ｃ６アルキニル、置換Ｃ２～Ｃ６アルキニルであり；
ｑｂ、ｑｃ、およびｑｄはそれぞれ独立に、Ｈ、ハロゲン、Ｃ～Ｃ６アルキル、置換Ｃ１～Ｃ６アルキル、Ｃ２～Ｃｅアルケニル、置換Ｃ２～Ｃ６アルケニル、Ｃ２～Ｃ６アルキニル、または置換Ｃ２～Ｃ６アルキニル、Ｃ１～Ｃ６アルコキシル、置換Ｃ１～Ｃ６アルコキシル、アシル、置換アシル、Ｃ１～Ｃ６アミノアルキル、または置換Ｃ１～Ｃ６アミノアルキルである。
いくつかの局面においては、二環式ヌクレオシドは以下の式によって規定される：
Figure 2024500367000026
 ここで：
Ｂｘはヘテロ環状塩基部分であり；
ＴａおよびＴｂはそれぞれ独立に、Ｈ、ヒドロキシル保護基、コンジュゲ-ト基、反応性リン基、リン部分、または支持媒体への共有結合による連結であり；
ｑａ、ｑｂ、ｑｃ、およびｑｆはそれぞれ独立に、水素、ハロゲン、Ｃ１～Ｃ１２アルキル、置換Ｃ１～Ｃ１２アルキル、Ｃ２～Ｃ１２アルケニル、置換Ｃ２～Ｃ１２アルケニル、Ｃ２～Ｃ１２アルキニル、置換Ｃ２～Ｃ１２アルキニル、Ｃ１～Ｃ１２アルコキシ、置換Ｃ１～Ｃ１２アルコキシ、ＯＪｊ、ＳＪｊ、ＳＯＪｊ、ＳＯ２Ｊｊ、ＮＪｊＪｋ、Ｎ３、ＣＮ、Ｃ（＝Ｏ）ＯＪｊ、Ｃ（＝Ｏ）ＮＪｊ Ｊｋ、Ｃ（＝Ｏ）Ｊｊ、Ｏ-Ｃ（＝Ｏ）ＮＪｊ Ｊｋ、Ｎ（Ｈ）Ｃ（＝ＮＨ）ＮＪｊ Ｊｋ、Ｎ（Ｈ）Ｃ（＝Ｏ）ＮＪｊ Ｊｋ、またはＮ（Ｈ）Ｃ（＝Ｓ）ＮＪｊＪｋであり；
あるいは、
ｑｅおよびｑｆは共に＝Ｃ（ｑｇ）（ｑｈ）であり、
ここでｑｇおよびｑｈはそれぞれ独立に、Ｈ、ハロゲン、Ｃ１～Ｃ１２アルキル、または置換Ｃ１～Ｃ１２アルキルである。
いくつかの局面においては、該二環式ヌクレオシドは以下の式によって規定される：
Figure 2024500367000027
 ここで：
Ｂｘはヘテロ環状塩基部分であり；
ＴａおよびＴｂはそれぞれ独立に、Ｈ、ヒドロキシル保護基、コンジュゲ-ト基、反応性リン基、リン部分、または支持媒体への共有結合による連結であり；
ｑｊ、ｑｊ、ｑｋおよびｑｌはそれぞれ独立に、Ｈ、ハロゲン、Ｃ１～Ｃ１２アルキル、置換Ｃ１～Ｃ１２アルキル、Ｃ２～Ｃ１２アルケニル、置換Ｃ２～Ｃ１２アルケニル、Ｃ２～Ｃ１２アルキニル、置換Ｃ２～Ｃ１２アルキニル、Ｃ１～Ｃ１２アルコキシル、置換Ｃ２～Ｃ１２アルコキシル、ＯＪｊ、ＳＪｊ、ＳＯＪｊ、ＳＯ２Ｊｊ、ＮＪｊＪｋ、Ｎ３、ＣＮ、Ｃ（＝Ｏ）ＯＪｊ、Ｃ（＝Ｏ）ＮＪｊＪｋ、Ｃ（＝Ｏ）Ｊｊ、Ｏ-Ｃ（＝Ｏ）ＮＪｊＪｋ、Ｎ（Ｈ）Ｃ（＝ＮＨ）ＮＪｊＪｋ、Ｎ（Ｈ）Ｃ（＝Ｏ）ＮＪｊＪｋ、または（Ｈ）Ｃ（＝Ｓ）ＮＪｊＪｋであり；
および
ｑｉおよびｑｊまたはｑｌおよびｑｋは共に＝Ｃ（ｑｇ）（ｑｈ）であり；
ここでｑｇおよびｑｈはそれぞれ独立に、Ｈ、ハロゲン、Ｃ１～Ｃ１２アルキル、または置換Ｃ１～Ｃ６アルキルである。
４’-（ＣＨ２）３-２’架橋を有する炭素環式二環式ヌクレオシドおよび架橋４’-ＣＨ＝ＣＨ-ＣＨ２-２’を有するアルケニル類似体については、以下の参考文献に記載がある：Ｆｒｅｉｅｒら、（１９９７）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ２５：４４２９-４４４３；およびＡｌｂａｅｋら、（２００６） Ｊ． Ｏｒｇ． Ｃｈｅｍ． ７１：７７３１-７７’４０。
本明細書中の、「４’-２’二環式ヌクレオシド」または「４’位から２’位への二環式ヌクレオシド」は、２’位の炭素原子および４’位の炭素原子を連結する架橋を含むフラノ-ス環を含む二環式ヌクレオシドを指す。本明細書中の、「モノ環状ヌクレオシド」は、二環式糖部分ではない修飾糖部分を含むヌクレオシドを指す。いくつかの局面においては、ヌクレオシドの糖部分、または糖部分類似体は、任意の位置において修飾または置換され得る。本明細書中の、「２’-修飾糖」は２’位において修飾されたフラノシル糖を意味する。いくつかの局面においては、そのような修飾は、ハロゲン化物から選択される置換基を含むが、ここでハロゲン化物としては、置換および非置換のアルコキシ、置換および非置換のチオアルキル、置換および非置換のアミノアルキル、置換および非置換のアルキル、置換および非置換のアリル、ならびに置換および非置換のアルキニルが挙げられるが、これらにのみに限定されるものではない。いくつかの局面においては、２’修飾は、以下に挙げるような置換基から選択されるが、そのような置換基はこれらにのみに限定されるものではない：Ｏ［（ＣＨ２）ｎＯ］ｍＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）ｎＮＨ２、Ｏ（ＣＨ２）ｎＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）ｎＯＮＨ２、ＯＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｈ）ＣＨ３、およびＯ（ＣＨ２）ｎＯＮ［（ＣＨ２）ｎＣＨ３］２、ここでｎおよびｍは１～約１０である。
その他の２’-置換基として、以下から選択することもできる：
Ｃ１～Ｃ１２アルキル；置換アルキル；アルケニル；アルキニル；アルカリル；アラルキル；Ｏ-アルカリルまたはＯ-アラルキル；ＳＨ；ＳＣＨ３；ＯＣＮ；Ｃｌ；Ｂｒ；ＣＮ；ＣＦ３；ＯＣＦ３；ＳＯＣＨ３；ＳＯ２ＣＨ３；ＯＮＯ２；ＮＯ２；Ｎ３；ＮＨ２；ヘテロシクロアルキル；ヘテロシクロアルカリル；アミノアルキルアミノ；ポリアルキルアミノ；置換シリル；Ｒ；開裂基；レポ-タ-基；インタ-カレ-タ-；薬物動態特性を改善する基；およびアンチセンス化合物の薬物動態学的特性を改善する基、ならびに類似の特性を有する他の置換基。
いくつかの局面においては、修飾ヌクレオシドは２’-ＭＯＥ側鎖を含む。そのような２’-ＭＯＥ置換は、非修飾ヌクレオシドと比較して、また２’-Ｏ-メチル、Ｏ-プロピル、およびＯ-アミノプロピルなどの他の修飾ヌクレオシドと比較して、結合親和性が改善されているという記載がある。該２’-ＭＯＥ置換基を有するオリゴヌクレオチドは、インビボ用途においては、遺伝子発現の強力なアンチセンス阻害剤である。
本明細書中の、「修飾テトラヒドロピランヌクレオシド」または「修飾ＴＨＰヌクレオシド」は、通常のヌクレオシドのペントフラノシル残基が置換された６員テトラヒドロピラン「糖」（糖代替物）を有するヌクレオシドを意味する。修飾ＴＨＰヌクレオシドとしては、当該技術分野においてヘキシト-ル核酸（ＨＮＡ）、アルトリト-ル核酸（ＡＮＡ）、マンニト-ル核酸（ＭＮＡ）、フルオロＨＮＡ（Ｆ-ＨＮＡ）とよばれるもの、または下の化学式によって規定される化合物が挙げられるが、これらのみに限定されるものではない。
Figure 2024500367000028
 ここで：
Ｂｘはヘテロ環状塩基部分であり；
Ｔ３およびＴ４はそれぞれ独立に、テトラヒドロピランヌクレオシド類似体を該アンチセンス化合物に連結するヌクレオシド間連結基であり、あるいはＴ３およびＴ４のいずれかが該テトラヒドロピランヌクレオシド類似体を該アンチセンス化合物に連結するヌクレオシド間連結基であり、かつＴ３およびＴ４のうちの他方が、Ｈ、ヒドロキシル保護基、連結コンジュゲ-ト基、あるいは５’末端基または３’末端基であり；
ｑ１、ｑ２、ｑ３、ｑ４、ｑ５、ｑ６、およびｑ７がそれぞれ独立に、Ｈ、Ｃ１～Ｃ６アルキル、置換Ｃ１～Ｃ６アルキル、Ｃ２～Ｃ６アルケニル、置換Ｃ２～Ｃ６アルケニル、Ｃ２～Ｃ６アルキニル、または置換Ｃ２～Ｃ６アルキニルであり；およびＲ１およびＲ２の一方が、水素であり、他方がハロゲン、置換または非置換のアルコキシ、ＮＪ、Ｊ２、ＳＪ、Ｎ３、ＯＣ（＝Ｘ）Ｊ１、ＯＣ（＝Ｘ）ＮＪ１Ｊ２、ＮＪ３Ｃ（＝Ｘ）ＮＪ１Ｊ２、およびＣＮから選択され、ここでＸは、Ｏ、Ｓ、またはＮＪ１であり、およびＪ１、Ｊ２、およびＪ３のそれぞれが独立に、ＨまたはＣ１～Ｃ６アルキルである。いくつかの局面においては、上の化学式の修飾ＴＨＰヌクレオシドが提供されるが、ここでｑｍ、ｑｎ、ｑｐ、ｑｒ、ｑｓ、ｑｔ、およびｑｕはそれぞれＨである。いくつかの局面においては、ｑｍ、ｑｎ、ｑｐ、ｑｒ、ｑｓ、ｑｔ、およびｑｕのうち少なくとも一つがＨ以外である。いくつかの局面においては、ｑｍ、ｑｎ、ｑｐ、ｑｒ、ｑｓ、ｑｔ、およびｑｕの少なくとも一つがメチルである。いくつかの局面においては、上の化学式のＴＨＰヌクレオシドが提供されるが、ここでＲ１およびＲ２の一方がＦである。いくつかの局面においては、Ｒ１がフルオロであり、Ｒ２がＨであり；Ｒ１がメトキシであり、Ｒ２がＨであり；あるいは、Ｒ１がメトキシエトキシであり、Ｒ２がＨである。
本明細書中の「２’-修飾される」または「２’-置換された」は、２’位にＨおよびＯＨ以外の置換基を含む糖を含むヌクレオシドを指す。２’-修飾ヌクレオシドとしては、アリル、アミノ、アジド、チオ、Ｏ-アリル、Ｏ-Ｃ１～Ｃ１０アルキル、-ＯＣＦ３、Ｏ-（ＣＨ２）２-Ｏ-ＣＨ３、２’-Ｏ（ＣＨ２）２ＳＣＨ３、Ｏ-（ＣＨ２）２-Ｏ-Ｎ（Ｒｍ）（Ｒｎ）、またはＯ-ＣＨ２-Ｃ（＝Ｏ）-Ｎ（Ｒｍ）（Ｒｎ）などの非架橋２’置換基を有するヌクレオシドが挙げられるが、これらのみに限定されるものではない；なおここで、ＲｍおよびＲはそれぞれ独立に、Ｈあるいは置換または非置換のＣ１～Ｃ１０アルキルである。２’-修飾ヌクレオシドは、例えば、糖の他の部位および／または核酸塩基の部位に他の修飾をさらに含み得る。
いくつかの局面においては、該ＬＮＡユニットは以下の基から選択される構造を有する：
Figure 2024500367000029
該オリゴマ-に親和性増強ヌクレオチド類似体を含めること（ＬＮＡまたは２’-置換糖類など）によって、該特異的に結合するオリゴマ-のサイズを縮小することが可能となり、非特異的または異常な結合が起こる前に該オリゴマ-のサイズに対する上限を下げることもできる。
第２節ｆ：ＲＮＡｓｅの動員
本開示のオリゴマ-化合物は、標的ｍＲＮＡの非ＲＮａｓｅ媒介性分解を介して機能し得る（翻訳の立体障害、または他の方法などによって）。いくつかの局面においては、本開示のオリゴマ-はＲＮａｓｅ Ｈなどのエンドリボヌクレア-ゼ（ＲＮａｓｅ）を動員することが可能である。いくつかのオリゴマ-においては、領域Ａなど、または連続ヌクレオチド配列は、連続する少なくとも４ヌクレオチドユニット（残基）、連続する少なくとも５など、連続する少なくとの６など、連続する少なくとも７ヌクレオチドユニットなど、連続する少なくとも８または少なくとも９ヌクレオチドユニット（残基）など（連続する７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５または１６ヌクレオチドを含む）の領域から成り、相補的標的ＲＮＡと共に二本鎖を形成する場合にはＲＮａｓｅ動員が可能である（ＤＮＡユニットなど）。該ＲＮａｓｅ動員が可能である連続する配列が、本明細書に記載のようなギャップマ-に関連して言及される場合には、領域Ｙ’であり得る。いくつかの局面においては、領域Ｙ’などの該ＲＮａｓｅ動員が可能である連続する配列は、そのサイズが１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０ヌクレオチドユニットなど、より大きくなり得る。
オリゴマ-と共に該相補的ＲＮＡ標的が存在する場合には、例えば、ＥＰ１２２２３０９において提供される方法論を用いて、ｐｍｏｌ／ｌ／分で測定した初期速度が、同一塩基配列を有するが、ＤＮＡ単量体のみを含む（２’置換を含まず、該オリゴヌクレオチド中のすべての単量体間にホスホロチオエ-ト結合基を含む）ＤＮＡのみのオリゴヌクレオチドを用いて決定した初期速度の少なくとも１％、少なくとも５％など、少なくとも１０％または２０％超などであれば、該オリゴマ-はＲＮａｓｅ動員が可能であると見なされる。
いくつかの局面において、オリゴマ-と共に該相補的ＲＮＡ標的およびＲＮａｓｅＨが存在する場合には、例えば、ＥＰ１２２２３０９において提供される方法論を用いてｐｍｏｌ／ｌ／分で測定したＲＮａｓｅＨの初期速度が、（２’置換を含まず、オリゴヌクレオチド中のすべてのヌクレオチド間にホスホロチオエ-ト結合基を含む）オリゴヌクレオチドのみの同等のＤＮＡを用いて決定した初期速度の１％未満、５％未満など、１０％未満など、または２０％未満などであれば、該オリゴマ-はＲＮａｓｅＨを動員することが本質的に不可能であると見なされる。
他の局面において、オリゴマ-と共に該相補的ＲＮＡ標的およびＲＮａｓｅＨが存在する場合には、例えば、ＥＰ１２２２３０９において提供される方法論を用いてｐｍｏｌ／ｌ／分で測定したＲＮａｓｅＨの初期速度が、（２’置換を含まず、該オリゴヌクレオチド中のすべてのヌクレオチド間にホスホロチオエ-ト結合基を含む）オリゴヌクレオチドのみの同等のＤＮＡを用いて決定した初期速度の少なくとも２０％、少なくとも４０％など、少なくとも６０％など、少なくとも８０％などであれば、該オリゴマ-はＲＮａｓｅＨ動員が可能であると見なされる。
典型的には、該相補的標的ＲＮＡと共に二本鎖を形成する場合には、ＲＮａｓｅ動員が可能である連続するヌクレオチドユニットを形成する該オリゴマ-の領域は、ＲＮＡ標的と共にＤＮＡ／ＲＮＡ様二本鎖を形成するヌクレオチドユニットから成る。該第１の領域などの本開示のオリゴマ-は、ヌクレオチドおよびヌクレオチド類似体の両方を含むヌクレオチド配列を含み得るものであり、ＬＮＡギャップマ-の形態である。
第２節ｇ：ギャップマ-の設計
いくつかの局面においては、本開示のオリゴマ-はＬＮＡギャップマ-である。ギャップマ-オリゴマ-は、本明細書中で領域Ｙ’（Ｙ’）とよばれる、ＲＮＡｓｅ（ＲＮＡｓｅＨなど）を動員可能な連続する一並びのヌクレオチド（少なくとも６つまたは７つのＤＮＡヌクレオチドの領域としてなど）を含むオリゴマ-であるが、ここで領域Ｙ’はその５’および３’側の両方で親和性増強ヌクレオチド類似体の領域（ＲＮＡｓｅを動員可能な連続する一並びのヌクレオチドに対して５’および３’の１つ～６つのヌクレオチド類似体など）に挟まれる；Ｙ’を挟むこれらの領域は、それぞれ、領域Ｘ’（Ｘ’）およびＺ’（Ｚ’）とよばれる。Ｘ’領域およびＺ’領域は、該ギャップマ-のウイングともよばれ得る。ギャップマ-の例は、例えば、ＷＯ２００４／０４６１６０、ＷＯ２００８／１１３８３２、およびＷＯ２００７／１４６５１１に開示されている。
いくつかの局面においては、ＲＮＡｓｅを動員可能な単量体は、ＤＮＡ単量体、アルファ-Ｌ-ＬＮＡ単量体、Ｃ４’アルキル化ＤＮＡ単量体、およびＵＮＡ（非連結核酸）ヌクレオチドから成る群から選択される。ＵＮＡは、典型的には、該リボ-スのＣ２～Ｃ３のＣ-Ｃ結合が除去されており、非ロック「糖」残基を形成する非ロック型核酸である。いくつかの局面においては、該ＬＮＡギャップマ-は、（５’から３’方向の）化学式、Ｘ’-Ｙ’-Ｚ’の（ポリ）ヌクレオチド配列を含むが、ここで領域Ｘ’（Ｘ’）（５’領域）は、少なくとも１つのヌクレオチド類似体、少なくとも１つのＬＮＡユニットなど、１つ～６つのヌクレオチド類似体など、ＬＮＡユニットなどから成り、あるいは同上を含み；また、領域Ｙ’（Ｙ’）は、（相補的ＲＮＡ分子（ｍＲＮＡ標的など）と共に二本鎖を形成した場合に）ＲＮＡｓｅを動員可能な、少なくとも４つまたは少なくとも５つの連続するヌクレオチド（ＤＮＡヌクレオチドなど）から成り、あるいは同上を含み；また、領域Ｚ’（Ｚ’）（３’領域）は、少なくとも１つのヌクレオチド類似体、少なくとも１つのＬＮＡユニットなど、１つ～６つのヌクレオチド類似体など、ＬＮＡユニットなどから成る、あるいは同上を含む。
いくつかの局面においては、領域Ｘ’は、１つ、２つ、３つ、４つ、５つまたは６つのヌクレオチド類似体、ＬＮＡユニットなど、２つ～５つのヌクレオチド類似体など、２～５ＬＮＡユニットなど、３つまたは４つのヌクレオチド類似体など、３または４ＬＮＡユニットなどから成り；および／または、領域Ｚは、１つ、２つ、３つ、４つ、５つまたは６つのヌクレオチド類似体、ＬＮＡユニットなど、２つ～５つのヌクレオチド類似体など、２～５ＬＮＡユニットなど、３つまたは４つのヌクレオチド類似体など、３または４ＬＮＡユニットなどから成る。
いくつかの局面においては、Ｙ’は、ＲＮＡｓｅを動員可能な連続する４、５、６、７、８、９、１０、１１または１２ヌクレオチド、またはＲＮＡｓｅを動員可能な連続する４～１２または６～１０、または７～９ヌクレオチド、連続する８ヌクレオチドなどから成る、あるいは同ヌクレオチドを含む。いくつかの局面においては、領域Ｙ’は、少なくとも１つのＤＮＡヌクレオチドユニット（１～１２ＤＮＡユニットなど）、好ましくは４～１２ＤＮＡユニット、より好ましくは６～１０ＤＮＡユニット、７～１０ＤＮＡユニットなど、最も好ましくは８、９または１０ＤＮＡユニットから成る、あるいは同ユニットを含む。いくつかの局面においては、領域Ｘ’は、３つまたは４つのヌクレオチド類似体（ＬＮＡなど）から成り；領域Ｘ’は、７、８、９または１０ＤＮＡユニットから成り；および領域Ｚ’は、３つまたは４つのヌクレオチド類似体（ＬＮＡなど）から成る。そのような設計物としては、（Ｘ’-Ｙ’-Ｚ’）３-１０-３、３-１０-４、４-１０-３、３-９-３、３-９-４、４-９-３、３-８-３、３-８-４、４-８-３、３-７-３、３-７-４、４-７-３が挙げられる。いくつかの局面においては、該ギャップマ-は３-９-４ギャップマ-である。いくつかの局面においては、該ギャップマ-は３-１０-３ギャップマ-である。
いくつかの局面においては、該オリゴマ-（例えば、領域Ｘ’）は、総数１０、１１、１２、１３または１４ヌクレオチドユニットの連続ヌクレオチド配列から成るが、ここで該連続ヌクレオチド配列は、化学式（５’-３’）、Ｘ’-Ｙ’-Ｚ’を含む、あるいは同化学式で表される；ここでＸ’は、１、２または３ヌクレオチド類似体ユニット（ＬＮＡユニットなど）から成り；Ｙ’は、相補的ＲＮＡ分子（ｍＲＮＡ標的など）と共に二本鎖を形成した場合にＲＮＡｓｅ動員が可能な連続する７、８または９ヌクレオチドユニットから成り；およびＺ’は、１、２または３ヌクレオチド類似体ユニット（ＬＮＡユニットなど）から成る。
いくつかの局面においては、Ｘ’は１ＬＮＡユニットから成る。いくつかの局面においては、Ｘ’は２ＬＮＡユニットから成る。いくつかの局面においては、Ｘ’は３ＬＮＡユニットから成る。いくつかの局面においては、Ｚ’は１ＬＮＡユニットから成る。いくつかの局面においては、Ｚ’は２ＬＮＡユニットから成る。いくつかの局面においては、Ｚ’は３ＬＮＡユニットから成る。いくつかの局面においては、Ｙ’は７ヌクレオチドユニットから成る。いくつかの局面においては、Ｙ’は８ヌクレオチドユニットから成る。いくつかの局面においては、Ｙ’は９ヌクレオチドユニットから成る。特定の局面においては、領域Ｙ’は１０ヌクレオシド単量体から成る。いくつかの局面においては、領域Ｙ’は１～１０ＤＮＡ単量体から成、あるいは同上を含む。いくつかの局面においては、Ｙ’は１～９ＤＮＡユニット（２、３、４、５、６、７、８または９ＤＮＡユニットなど）を含む。いくつかの局面においては、Ｙ’はＤＮＡユニットから成る。いくつかの局面においては、Ｙ’はα-Ｌ配位の少なくとも１つのＬＮＡユニット（α-Ｌ配位の２、３、４、５、６、７、８または９ＬＮＡユニットなど）を含む。いくつかの局面においては、Ｙ’は少なくとも１つのα-Ｌ-オキシＬＮＡユニットを含み、あるいはその場合にα-Ｌ-配位の全てのＬＮＡユニットがα-Ｌ-オキシＬＮＡユニットである。いくつかの局面においては、Ｘ’-Ｙ’-Ｚ’中のヌクレオチドの数は、（ヌクレオチド類似体ユニット-領域Ｙ’-ヌクレオチド類似体ユニット）：１-８-１、１-８-２、２-８-１、２-８-２、３-８-３、２-８-３、３-８-２、４-８-１、４-８-２、１-８-４、２-８-４、１-９-１、１-９-２、２-９-１、２-９-２、２-９-３、３-９-２、１-９-３、３-９-１、４-９-１、１-９-４；または、１-１０-１、１-１０-２、２-１０-１、２-１０-２、１-１０-３、３-１０-１、２-１０-３、または３-１０-２から成る群から選択される。いくつかの局面においては、Ｘ’-Ｙ’-Ｚ’中のヌクレオチドの数は：２-７-１、１-７-２、２-７-２、３-７-３、２-７-３、３-７-２、３-７-４、および４-７-３から成る群から選択される。
特定の局面においては、領域Ｘ’およびＹ’はそれぞれ、３つのＬＮＡ単量体から成り、領域Ｙ’は、８つまたは９つまたは１０のヌクレオシド単量体、好ましくはＤＮＡ単量体から成る。いくつかの局面においては、Ｘ’およびＺ’は両方ともそれぞれ２つのＬＮＡユニットから成り、またはＹ’は８つまたは９つのヌクレオチドユニット、好ましくはＤＮＡユニットから成る。いくつかの局面においては、他のギャップマ-設計物としては、領域Ｘ’および／またはＺ’が、３つ、４つ、５つまたは６つのヌクレオシド類似体（２’-Ｏ-メトキシエチル-リボ-ス糖（２’-ＭＯＥ）を含む単量体または２’-フルオロ-デオキシリボ-ス糖を含む単量体など）から成り、また領域Ｙ’が、８つ、９つ、１０、１１または１２のヌクレオシド（ＤＮＡ単量体など）から成り、ここで領域Ｘ’-Ｙ’-Ｚ’は、３-９-３、３-１０-３、５-１０-５または４-１２-４単量体を有する設計物が挙げられる。さらなるギャップマ-設計物は、例えば、ＷＯ２００７／１４６５１１Ａ２に開示されている：本参考文献はその内容全体が参照として本明細書に組み入れられる。
いくつかの局面においては、本開示のギャップマ-オリゴマ-は配列番号：１、２、３、４、５、６、７、８、または４０の配列を含む。いくつかの局面においては、本開示のギャップマ-オリゴマ-は配列番号：１、２、３、４、５、６、７、８、または４０の配列から成る。
第２節ｈ：ヌクレオシド間結合
いくつかの局面においては、本開示のオリゴヌクレオチドのヌクレオシド単量体は、ヌクレオシド間結合基を介して互いに連結している。各単量体は、結合基を介して３’隣接単量体に連結している。各ヌクレオチドもまた、結合基を介して３’隣接ヌクレオチドに連結している。本開示に関しては、オリゴマ-の末端に位置する５’単量体は５’結合基を含まないが、５’末端基、または複合体化のための結合基については、含んでいてもよく、あるいは含まなくてもよい。
用語「結合基」または「ヌクレオシド間結合」は、２つのヌクレオチドを共有結合することによって連結可能な基を意味することを意図する。具体的な例としては、リン酸基およびホスホロチオエ-ト基が挙げられる。ヌクレオシド間結合は、ヌクレオシド間結合の同義語として用いられる。
好適なヌクレオシド間結合としては、例えば、ＷＯ２００７／０３１０９１に記載のものが挙げられる；本参考文献はその内容全体が参照として本明細書に組み入れられる。いくつかの局面においては、領域Ｂ（存在する場合）のホスホジエステル結合以外では、ヌクレア-ゼ攻撃に対してより耐性な結合に改良するために、ヌクレオシド間結合を修飾して正常ホスホジエステルからより耐性な結合に変更しうる（ホスホロチオエ-トまたはボラノリン酸など）。ＲＮａｓｅ Ｈによる切断が可能なこれら２種もまた、該標的遺伝子の発現を低下させるアンチセンス阻害経路を可能にする。
いくつかの局面においては、本開示のオリゴマ-は、ホスホロチオエ-ト、ホスホロジチオエ-ト、ボラノリン酸、メチルホスホン酸、ホスホロアミダ-ト、またはそれらの任意の組み合わせから成る群から選択される１種類以上のヌクレオシド結合を含む。本明細書において提供されるような好適な含硫（Ｓ）ヌクレオシド間結合は、例えば、ホスホロチオエ-ト、ホスホジチオエ-ト、またはそれらの組み合わせを用いることができる。ホスホロチオエ-トヌクレオシド間結合もまた好ましく、特に第１の領域について好ましい（ギャップマ-、ミクスマ-、アンチミア（ａｎｔｉｍｉｒ）スプライススイッチングオリゴマ-、およびト-タルマ-などに含まれるものなど）。
用語「ミクスマ-」は、天然ヌクレオチドおよび非天然ヌクレオチドの両方を含むオリゴマ-を指すが、ここでギャップマ-、テ-ルマ-、およびヘッドマ-とは異なり、連続する５つ超の配列が存在せず、またいくつかの局面においては、連続する４つ超、連続する３つ超などの天然ヌクレオチド（ＤＮＡユニットなど）が存在しない。
用語「ト-タルマ-」は、非天然ヌクレオシド（糖修飾ヌクレオシド類似体など）のみを含む一本鎖オリゴマ-を指す。
ギャップマ-に関しては、該オリゴマ-中のヌクレオシド間結合は、例えば、ＲＮａｓｅ Ｈによる標的ＲＮＡの切断が可能となるホスホロチオエ-トまたはボラノリン酸であり得る。ホスホロチオエ-トは、ヌクレア-ゼ耐性の改善およびその他の理由（製造が容易など）で好ましい。
いくつかの局面においては、第１と第２の領域の間のホスホジエステル結合、および任意選択的に領域Ｂ内のホスホジエステル結合を例外として、本開示のオリゴマ-の残りのヌクレオシド間結合については、該ヌクレオチドおよび／またはヌクレオチド類似体が、ホスホロチオエ-ト基によって相互に連結される。
いくつかの局面においては、第１の領域内のヌクレオシドの全ヌクレオシド間結合のうち、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または約１１０％が、ホスホロチオエ-ト、ホスホロジチオエ-ト、またはボラノリン酸から成る群から選択される。いくつかの局面においては、第１の領域内のヌクレオシドの全ヌクレオシド間結合のうち、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、または約１００％が、ホスホロチオエ-ト、ホスホロジチオエ-ト、またはボラノリン酸から成る群から選択される。
いくつかの局面においては、第１の領域内のヌクレオシドの全ヌクレオシド間結合のうち、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または約１１０％が、ホスホロチオエ-トである。いくつかの局面においては、第１の領域内のヌクレオシドの全ヌクレオシド間結合のうち、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、または約１００％が、ホスホロチオエ-トである。
いくつかの局面においては、本開示のオリゴヌクレオチドは、１か所のホスホロチオエ-ト結合のみを含む。いくつかの局面においては、本開示のオリゴヌクレオチドは、２か所のホスホロチオエ-ト結合を含む。いくつかの局面においては、本開示のオリゴヌクレオチドは、３か所のホスホロチオエ-ト結合を含む。いくつかの局面においては、本開示のオリゴヌクレオチドは、４か所のホスホロチオエ-ト結合を含む。いくつかの局面においては、本開示のオリゴヌクレオチドは、５か所のホスホロチオエ-ト結合を含む。いくつかの局面においては、本開示のオリゴヌクレオチドは、６か所のホスホロチオエ-ト結合を含む。いくつかの局面においては、本開示のオリゴヌクレオチドは、７か所のホスホロチオエ-ト結合を含む。いくつかの局面においては、本開示のオリゴヌクレオチドは、８か所のホスホロチオエ-ト結合を含む。いくつかの局面においては、本開示のオリゴヌクレオチドは、９か所のホスホロチオエ-ト結合を含む。いくつかの局面においては、本開示のオリゴヌクレオチドは、１０か所のホスホロチオエ-ト結合を含む。いくつかの局面においては、本開示のオリゴヌクレオチドは、１１か所のホスホロチオエ-ト結合を含む。いくつかの局面においては、本開示のオリゴヌクレオチドは、１２か所のホスホロチオエ-ト結合を含む。いくつかの局面においては、本開示のオリゴヌクレオチドは、１３か所のホスホロチオエ-ト結合を含む。いくつかの局面においては、本開示のオリゴヌクレオチドは、１４か所のホスホロチオエ-ト結合を含む。いくつかの局面においては、本開示のオリゴヌクレオチドは、１５か所のホスホロチオエ-ト結合を含む。いくつかの局面においては、本開示のオリゴヌクレオチドは、１６か所のホスホロチオエ-ト結合を含む。いくつかの局面においては、本開示のオリゴヌクレオチドは、１７か所のホスホロチオエ-ト結合を含む。いくつかの局面においては、本開示のオリゴヌクレオチドは、１８か所のホスホロチオエ-ト結合を含む。いくつかの局面においては、本開示のオリゴヌクレオチドは、１９か所のホスホロチオエ-ト結合を含む。いくつかの局面においては、本開示のオリゴヌクレオチドは、２０か所のホスホロチオエ-ト結合を含む。いくつかの局面においては、本開示のオリゴヌクレオチドは、２１か所のホスホロチオエ-ト結合を含む。
ＷＯ０９１２４２３８は、中性のヌクレオシド間結合を介して３’または５’末端に連結した少なくとも１種類の二環式ヌクレオシドを有するオリゴマ-化合物について言及している。それゆえ、本開示のオリゴマ-は、中性のヌクレオシド間結合（１つ以上のホスホトリエステル、メチルホスホン酸、ＭＭＩ、アミド-３、ホルムアセタ-ル、またはチオホルムアセタ-ルなど）を介して３’または５’末端に連結する少なくとも１つ以上の二環式ヌクレオシドを有し得る。残りの結合はホスホロチオエ-トであり得る。
第３節：オリゴヌクレオチドコンジュゲ-ト
いくつかの局面においては、任意選択的に、該オリゴマ-の連続する配列とコンジュゲ-ト部分（Ｂおよび／またはＹ）との間に配置されるリンカ-領域を介して、該オリゴマ-（Ａ）に共有結合している少なくとも１種類の非ヌクレオチド部分または非ポリヌクレオチド部分（Ｃ）を含む本開示のアンチセンスオリゴヌクレオチドコンジュゲ-ト。
オリゴヌクレオチドと共に用いられている代表的なコンジュゲ-ト部分としては、ステロイド分子を含む脂溶性分子（芳香族および非芳香族）；蛋白質（例えば、抗体、酵素、血清蛋白質）；ペプチド；ビタミン（水溶性または脂溶性）；ポリマ-（水溶性または脂溶性）；薬剤、毒素、レポ-タ-分子、および受容体リガンドを含む低分子；糖質複合体；核酸切断複合体；金属キレ-ト剤（例えば、ポルフィリン類、テキサフィリン類、クラウンエ-テル類など）；フォトヌクレア-ゼ／インタ-カレ-タ-のハイブリッドを含むインタ-カレ-タ-；架橋剤（例えば、光反応性、酸化還元活性のある）、およびその組み合わせならびにその誘導体を挙げることができる。
いくつかの局面においては、本開示は、以下の（ａ）および（ｂ）を含むアンチセンスオリゴヌクレオチドコンジュゲ-トを提供する：
（ａ）配列番号：３１の対応する長さに相補的である連続する１６ヌクレオチドの配列を含む長さ１６～２２ヌクレオチドのアンチセンスオリゴマ-（Ａ）；
ここで該アンチセンスオリゴマ-がＬＮＡギャップマ-であり；
および
（ｂ）該オリゴマ-（Ａ）に共有結合している少なくとも１つのコンジュゲ-ト部分（Ｃ）であって、アシアロ糖蛋白質受容体を標的とするコンジュゲ-ト部分（Ｃ）。
いくつかの局面においては、本開示のオリゴマ-は、肝臓を標的とする；すなわち、全身投与後に、該化合物が肝臓の細胞（肝細胞など）に蓄積する。肝臓標的化は、コンジュゲ-ト部分（Ｃ）を付加することによって大幅に増強され得る。しかし、該オリゴマ-の効力を最大化するためには、生体内開裂可能リンカ-（Ｂ）（ヌクレオチドリン酸リンカ-など）を介して該コンジュゲ-ト（または標的化部分）を該オリゴマ-に連結することが望ましいことが多い。したがって、肝細胞における取り込みおよび活性を増強するコンジュゲ-ト部分を利用することが望ましい。活性の増強は、肝細胞における該化合物の取り込み増強または効力増強によるものであり得る。したがって、本開示はまた、ＬＮＡオリゴマ-形態（ギャップマ-など）、または、例えば、アンチセンスオリゴマ-、任意選択的に生体内開裂可能リンカ-（領域Ｂなど）、および糖質コンジュゲ-ト（領域Ｃともよばれ得る）を含むＬＮＡアンチセンスオリゴマ-形態（本明細書中では領域Ａともよばれ得る）のオリゴマ-化合物を提供する。該ＬＮＡアンチセンスオリゴマ-は、少なくとも１つのＬＮＡユニット（ヌクレオシド）を含む長さ７～３０ヌクレオシド、例えば、長さ８～２６ヌクレオシドであり得る。
いくつかの局面においては、該コンジュゲ-トは糖質である、あるいは糖質を含み得る、あるいは糖質基を含むことが可能である。いくつかの局面においては、該糖質は、ガラクト-ス、乳糖、ｎ-アセチルガラクトサミン、マンノ-ス、およびマンノ-ス-６-リン酸から成る群から選択される。いくつかの局面においては、該コンジュゲ-ト基は、マンノ-スまたはマンノ-ス-６-リン酸である、またはマンノ-スまたはマンノ-ス-６-リン酸を含み得る。糖質コンジュゲ-トは、様々な組織（肝臓および／または筋肉など）において送達または活性を促進するために利用し得る。いくつかの局面においては、本開示のコンジュゲ-トは、アシアロ糖蛋白質受容体を標的とする部分、糖質部分の形態（ＧａｌＮＡｃ部分など）（領域Ｃともよばれ得る）のコンジュゲ-ト部分を含む。該糖質部分は多価であり得る（例えば、２、３、４または４つの同一または非同一の糖質部分）；また、任意選択的に単一のリンカ-または複数のリンカ-（領域Ｙなど）を介して、該オリゴマ-に共有結合によって連結され得る。
いくつかの局面においては、該糖質部分は直鎖状糖質ポリマ-ではない。しかし、該糖質部分は多価であり得る；例えば、２つ、３つ、４つまたは４つの同一または非同一の糖質部分が、任意選択的に単一リンカ-または複数のリンカ-を介して、該オリゴマ-共有結合によって連結され得る、など。
第３節ａ：ＧａｌＮＡｃコンジュゲ-ト部分
本開示は、本開示のオリゴマ-およびアシアロ糖蛋白質受容体を標的とする部分のコンジュゲ-ト部分（ＧａｌＮＡｃ部分など）であって、さらなる領域（領域Ｃとよばれる）の一部を形成し得るコンジュゲ-ト部分を含むコンジュゲ-トを提供する。本開示はまた以下の（ａ）および（ｂ）を含むアンチセンスオリゴヌクレオチドコンジュゲ-ト、を提供する：
（ａ）配列番号：３１の対応する長さに相補的である連続する１６ヌクレオチドの配列を含む長さ１６～２２ヌクレオチドのアンチセンスオリゴマ-（Ａ）；
ここで該アンチセンスオリゴマ-が少なくとも１つのＬＮＡユニットを含むＬＮＡギャップマ-であり；
および
（ｂ）該オリゴマ-（Ａ）に共有結合している少なくとも１つのコンジュゲ-ト部分（Ｃ）であって、アシアロ糖蛋白質受容体を標的とするコンジュゲ-ト部分（Ｃ）。
いくつかの局面においては、該コンジュゲ-ト部分（第３の領域または領域Ｃなど）は、ガラクト-ス、ガラクトサミン、Ｎ-ホルミル-ガラクトサミン、Ｎ-アセチルガラクトサミン、Ｎ-プロピオニル-ガラクトサミン、Ｎ-ｎ-ブタノイル-ガラクトサミン、およびＮ-イソブタノイルガラクトサミンなどから成る群から選択される、アシアロ糖蛋白質受容体標的化部分を含む。いくつかの局面においては、該コンジュゲ-トは、ガラクト-スクラスタ-（Ｎ-アセチルガラクトサミン三量体など）を含む。いくつかの局面においては、該コンジュゲ-ト部分は、ＧａｌＮＡｃ（Ｎ-アセチルガラクトサミン）（一価、二価、三価または四価のＧａｌＮＡｃなど）を含む。
三価ＧａｌＮＡｃコンジュゲ-トは、該化合物の肝臓標的化に用いることができる。ＧａｌＮＡｃコンジュゲ-トは、メチルホスホン酸およびＰＮＡアンチセンスオリゴヌクレオチドおよびｓｉＲＮＡと共に用いられている。ＷＯ２０１２／０８３０４６には、本開示の用途に好適な、切断可能薬物動態調節剤を含むＧａｌＮＡｃコンジュゲ-ト部分を含むｓｉＲＮＡが開示されている；好ましい薬物動態調節剤は、パルミトイル、ヘキサデカ-８-エノイル、オレイル、（９Ｅ、１２Ｅ）-オクタデカ-９，１２-ジエノイル、ジオクタノイル、およびＣ１６～Ｃ２０アシルなどのＣ１６疎水性基である。ＷＯ２０１２／０８３０４６に開示の切断可能薬物動態調節剤はまた、コレステロ-ルでもあり得る。
該「標的化部分」（コンジュゲ-ト部分）は、ガラクト-ス、ガラクトサミン、Ｎ-ホルミル-ガラクトサミン、Ｎ-アセチルガラクトサミン、Ｎ-プロピオニル-ガラクトサミン、Ｎ-ｎ-ブタノイル-ガラクトサミン、Ｎ-イソブタノイルガラクトサミン、ガラクト-スクラスタ-、およびＮ-アセチルガラクトサミン三量体から成る群から選択され得る；また、該「標的化部分」は、１６個以上の炭素原子を有する疎水性基、１６～２０炭素原子を有する疎水性基、パルミトイル、ヘキサデカ-８-エノイル、オレイル、（９Ｅ，１２Ｅ）-オクタデカ-９，１２ジエノイル、ジオクタノイル、およびＣ１６～Ｃ２０アシル、およびコレステロ-ルから成る群から選択される薬物動態調節剤を有し得る。ＷＯ２０１２／０８３０４６に開示の特定ＧａｌＮＡｃクラスタ-としては、（Ｅ）-ヘキサデカ-８-エノイル（Ｃ１６）、オレイル（Ｃ１８）、（９，Ｅ，１２Ｅ）-オクタデカ-９，１２-ジエノイル（Ｃ１８）、オクタノイル（Ｃ８）、ドデセカノイル（Ｃ１２）、Ｃ２０アシル、Ｃ２４アシル、ジオクタノイル（２ｘＣ８）が挙げられる。該標的化部分／薬物動態調節剤の標的化部分は、生理学的に不安定な結合または、例えば、ジスルフィド結合、またはＰＥＧリンカ-を介して、該ポリヌクレオチドに連結され得る。本開示はまた、該オリゴマ-および該コンジュゲ-ト基との間におけるホスホジエステルリンカ-の利用に関する（本明細書においては、これらは領域Ｂとよばれ、好適には、該ＬＮＡオリゴマ-と該糖質コンジュゲ-ト基の間に配置される）。
肝臓における肝細胞標的化に好ましい標的リガンドはガラクト-スクラスタ-である。ガラクト-スクラスタ-は、２～４つの末端ガラクト-ス誘導体を有する（例えば、含む）分子を含む。いくつかの局面においては、該ガラクト-ス誘導体はＮ-アセチル-ガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）である。アシアロ糖蛋白質受容体に親和性を有する他の糖類は：ガラクトサミン、Ｎ-ｎ-ブタノイルガラクトサミン、およびＮ-イソブタノイルガラクトサミンを含むリストから選択し得る。本明細書中の用語「ガラクト-ス誘導体」は、ガラクト-スおよびガラクト-ス誘導体の両方を含み、ここでガラクト-ス誘導体は、ガラクト-スが有するアシアロ糖蛋白質受容体親和性と同程度またはそれよりも強い親和性を有する。末端ガラクト-ス誘導体はＣ-Ｉ炭素を通じて分子に連結する。該アシアロ糖蛋白質受容体（ＡＳＧＰｒ）は、主に肝細胞に発現し、分岐ガラクト-ス末端糖蛋白質に結合する。ガラクト-スクラスタ-は、それぞれがアシアロ糖蛋白質受容体に親和性を有する３つの末端ガラクトサミンまたはガラクトサミン誘導体を有する。別のガラクト-スクラスタ-は、３つの末端Ｎ-アセチル-ガラクトサミンを有する。当該技術分野においてよく用いられる他の用語としては、三頭型ガラクト-ス、三価ガラクト-スおよびガラクト-ス三量体が挙げられる。三頭型ガラクト-ス誘導体クラスタ-は、二分岐型または単頭型ガラクト-ス誘導体構よりも高い親和性でＡＳＧＰｒに結合することが知られている。ｎＭ親和性を達成するためには、多価であることが必要である。
ガラクト-スクラスタ-は、それぞれが中央分岐点に連結される２つまたは好ましくは３つのガラクト-ス誘導体を含み得る。該ガラクト-ス誘導体は、糖類のＣ-Ｉ炭素を介して中央分岐点に連結する。該ガラクト-ス誘導体は、好ましくはリンカ-またはスペ-サ-を介して該分岐点に連結される。いくつかの局面においては、該スペ-サ-は、柔軟親水性スペ-サ-、例えば、ＰＥＧスペ-サ-（ＰＥＧ３スペ-サ-など））である。該分岐点は、３つのガラクト-ス誘導体ヘの連結が可能となる、およびさらに該オリゴマ-への分岐点の連結が可能となる任意の低分子であり得る。分岐点基の例としてはジリジンが挙げられる。ジリジン分子は、３つのアミン基および１つのカルボキシル反応基を含み、それらアミン基を介して３つのガラクト-ス誘導体の連結が可能であり、またカルボキシル基を介してジリジンが該オリゴマ-に連結可能である。リンカ-またはスペ-サ-を介して、該分岐点はオリゴマ-ヘ連結可能である。いくつかの局面においては、該スペ-サ-は柔軟親水性スペ-サ-、例えば、ＰＥＧスペ-サ-（ＰＥＧ３スペ-サ-（３つのエチレンユニットなど）である。該ガラクト-スクラスタ-は、当該技術分野において公知の方法を用いて該オリゴマ-の３’または５’末端に連結することが可能である。
本開示のいくつかの局面においては、該アンチセンスオリゴヌクレオチドコンジュゲ-トのコンジュゲ-ト部分は、Ｃｏｎｊ１、２、３、４およびＣｏｎｊ１ａ、２ａ、３ａおよび４ａを含む、あるいはそれらから成る。いくつかの局面においては、該コンジュゲ-ト部分は、Ｃｏｎｊ２ａを含む、あるいはＣｏｎｊ２ａから成る。いくつかの局面においては、該アンチセンスオリゴヌクレオチドコンジュゲ-トは、配列番号：１８および１９から成る群から選択される。
それゆえ、ＧａｌＮＡｃクラスタ-の各糖質部分（例えば、ＧａｌＮＡｃ）は、（ポリ）エチレングリコ-ルリンカ-（ＰＥＧ）（ジ、トリ、テトラ、ペンタ、ヘキサ-エチレングリコ-ルリンカ-など）などのスペ-サ-を介して該オリゴマ-に連結することが可能である。上記に示されるように、ＰＥＧ部分は、ガラクト-ス糖部分とペプチド（トリリジンが示されている）リンカ-との間にスペ-サ-を形成する。
いくつかの局面においては、該ＧａｌＮＡｃクラスタ-は、ビラジカルリンカ-を介して該オリゴマ-（または領域Ｙまたは領域Ｂ）に連結するペプチドリンカ-、例えば、Ｔｙｒ-Ａｓｐ（Ａｓｐ）トリペプチドまたはＡｓｐ（Ａｓｐ）ジペプチドを含む；例えば、該ＧａｌＮＡｃクラスタ-は、以下のビラジカルリンカ-を含む：
Figure 2024500367000030
Ｒ１は、好ましくは、以下から選択されるビラジカルである：
-Ｃ２Ｈ４-、-Ｃ３Ｈ６-、-Ｃ４Ｈ８-、-Ｃ５Ｈ１０-、-Ｃ６Ｈ１２-、１，４-シクロヘキシル（-Ｃ６Ｈ１０-）、１，４-フェニル（-Ｃ６Ｈ４-）、-Ｃ２Ｈ４ＯＣ２Ｈ４-、-Ｃ２Ｈ４（ＯＣ２Ｈ４）２-または-Ｃ２Ｈ４（ＯＣ２Ｈ４）３-、-Ｃ（Ｏ）ＣＨ２-、-Ｃ（Ｏ）Ｃ２Ｈ４-、-Ｃ（Ｏ）Ｃ３Ｈ６-、-Ｃ（Ｏ）Ｃ４Ｈ８-、-Ｃ（Ｏ）Ｃ５Ｈ１０-、-Ｃ（Ｏ）Ｃ６Ｈ１２-、１，４-シクロヘキシル（-Ｃ（Ｏ）Ｃ６Ｈ１０-）、１，４-フェニル（-Ｃ（Ｏ）Ｃ６Ｈ４-）、-Ｃ（Ｏ）Ｃ２Ｈ４ＯＣ２Ｈ４-、-Ｃ（Ｏ）Ｃ２Ｈ４（ＯＣ２Ｈ４）２-または-Ｃ（Ｏ）Ｃ２Ｈ４（ＯＣ２Ｈ４）３-。
いくつかの局面においては、Ｒ１は、好ましくは、以下から選択されるビラジカルである：
-Ｃ２Ｈ４-、-Ｃ３Ｈ６-、-Ｃ４Ｈ８-、-Ｃ５Ｈ１０-、-Ｃ６Ｈ１２-、１，４-シクロヘキシル（-Ｃ６Ｈ１０-）、１，４-フェニル（-Ｃ６Ｈ４-）、-Ｃ２Ｈ４ＯＣ２Ｈ４-、-Ｃ２Ｈ４（ＯＣ２Ｈ４）２-または-Ｃ２Ｈ４（ＯＣ２Ｈ４）３-。
該糖質コンジュゲ-ト（例えば、ＧａｌＮＡｃ）、または糖質／リンカ-部分（例えば、糖質／ＰＥＧ部分）は、好適には、２つ以上のアミノ基（３、４、または５など）（リジン、ジリジンまたはトリリジンまたはテトラリジンなど）を含む分岐点基（アミノ酸、またはペプチドなど）を介して、共有結合によって該オリゴマ-に結合され（連結され）得る。トリリジン分子は、４つのアミン基および１つのカルボキシル反応基を含み、それらのアミン基を介して、３種類の糖質コンジュゲ-ト基（ガラクト-スおよび誘導体（例えば、ＧａｌＮＡｃ）など）およびさらなるコンジュゲ-ト（疎水性または脂溶性部分／基など）の連結が可能であり、またカルボキシル反応基を介して、トリリジンが該オリゴマ-に連結可能である。脂溶性／疎水性部分などのさらなるコンジュゲ-トが、該オリゴマ-に付加されたリジン残基に連結され得る。
本開示のＬＮＡオリゴマ-と共に用いられるＧａｌＮＡｃコンジュゲ-トは、薬物動態調節剤（例えば、下に開示される脂溶性部分）を必要としない。したがって、いくつかの局面においては、該ＧａｌＮＡｃコンジュゲ-トは、脂溶性または疎水性の部分（本明細書に記載される部分）に共有結合によって連結されていない；例えば、Ｃ８～Ｃ３６脂肪酸を含まず、またステロ-ルも含まない。したがって、本開示は、脂溶性または疎水性の薬物動態調節剤との複合体化を含まないＬＮＡオリゴマ-ＧａｌＮＡｃコンジュゲ-トを提供する。
第３節ｂ：脂溶性部分
本開示のオリゴヌクレオチドは、１つ以上の付加的コンジュゲ-ト部分（例えば、ＧａｌＮＡｃ部分の代わりとして、またはＧａｌＮＡｃ部分に加えて）をさらに含み得るが、該コンジュゲ-ト基が糖質部分である場合などでは、該付加的コンジュゲ-ト部分の脂溶性または疎水性の部分は特に興味深い。そのような脂溶性または疎水性の部分は、薬物動態調節剤として作用し得るものであり、また該糖質コンジュゲ-ト、該糖質コンジュゲ-トを該オリゴマ-に連結するリンカ-、または複数の糖質コンジュゲ-ト（多価コンジュゲ-ト）を該オリゴマ-に連結するリンカ-のいずれかに、任意選択的にリンカ-（生体内開裂可能リンカ-など）を介して共有結合によって連結され得る。
したがって、該オリゴマ-またはコンジュゲ-ト部分は、薬物動態調節剤（脂溶性または疎水性の部分など）を含み得る。そのような部分は、ＷＯ２０１２／０８２０４６において、ｓｉＲＮＡコンジュゲ-トに関連して開示されている；本参考文献はその内容全体が参照として本明細書に組み入れられる。該疎水性部分は、飽和または不飽和であり得るＣ８～Ｃ３６脂肪酸を含み得る。いくつかの局面においては、Ｃ１０、Ｃ１２、Ｃ１４、Ｃ１６、Ｃ１８、Ｃ２０、Ｃ２２、Ｃ２４、Ｃ２６、Ｃ２８、Ｃ３０、Ｃ３２、およびＣ３４脂肪酸を用いることができる。該疎水性基は、１６以上の炭素原子を有し得る。
好適な疎水性基の例は、ステロ-ル、コレステロ-ル、パルミトイル、ヘキサデカ-８-エノイル、オレイル、（９Ｅ、１２Ｅ）-オクタデカ-９，１２-ジエノイル、ジオクタノイル、およびＣ１６～Ｃ２０アシルを含む群から選択され得る。１６炭素原子よりも少ない炭素原子を有する疎水性基は、ポリヌクレオチド標的化の増強にはさほど効果的ではないが、それらは効力増強のために複数コピ-（例えば、２ｘ（２ｘ Ｃ８またはＣ１０、Ｃ１２またはＣ１４など））で用いることができる。ポリヌクレオチド標的化部分として有用な薬物動態調節剤は、コレステロ-ル、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アリ-ル基、アラルキル基、アラルケニル基、およびアラルキニル基から成る群から選択され得るが、それらのおのおのが直鎖状、分岐状、または環状であり得る。薬物動態調節剤は、好ましくは炭素および水素原子のみを含む炭化水素である。しかし、疎水性を維持する置換またはヘテロ原子（例えば、フッ素）は許容され得る。
第３節ｃ：脂溶性コンジュゲ-ト
いくつかの局面においては、該コンジュゲ-ト部分は、ステロ-ル（例えば、コレステロ-ル、コレステリル、コレスタノ-ル、スチグマステロ-ル、コラン酸およびエルゴステロ-ル）などの脂溶性部分である、あるいはステロ-ルを含み得る。いくつかの局面においては、該コンジュゲ-ト部分は、トコフェロ-ルである、あるいはトコフェロ-ルを含み得る（例としては、図２のＣｏｎｊ６およびＣｏｎｊ６ａ）。いくつかの局面においては、該コンジュゲ-ト部分は、コレステロ-ルである、あるいはコレステロ-ルを含み得る（例としては、図２のＣｏｎｊ５およびＣｏｎｊ５ａ）。
いくつかの局面においては、該コンジュゲ-ト部分は、脂質、リン脂質または脂溶性アルコ-ル（陽イオン性脂質、中性脂質、スフィンゴ脂質、および脂肪酸（ステアリン酸、オレイン酸、エライジン酸、リノ-ル酸、リノレライジン酸、リノレン酸、およびミリスチン酸など）など）である、あるいは同上を含み得る。いくつかの局面においては、該脂肪酸は、Ｃ４～Ｃ３０飽和または不飽和アルキル鎖を含む。該アルキル鎖は直鎖状または分岐状であり得る。
脂溶性コンジュゲ-ト部分は、例えば、オリゴマ-化合物の親水性を無効にする目的、および細胞内浸透を促進する目的に利用することができる。
脂溶性部分としては、例えば、ステロ-ル類、スタノ-ル類、およびステロイドおよび関連する化合物（コレステロ-ル、チオコレステロ-ル、ラノステロ-ル、コプロスタノ-ル、スチグマステロ-ル、エルゴステロ-ル、カルシフェロ-ル、コ-ル酸、デオキシコ-ル酸、エストロン、エストラジオ-ル、エストラトリオ-ル、プロゲステロン、スチルベストロ-ル、テストステロン、アンドロステロン、デオキシコルチコステロン、コルチゾン、１７-ヒドロキシコルチコステロン、それらの誘導体など）が挙げられる。いくつかの局面においては、該コンジュゲ-トは、コレステロ-ル、チオコレステロ-ル、ラノステロ-ル、コプロスタノ-ル、スチグマステロ-ル、エルゴステロ-ル、カルシフェロ-ル、コ-ル酸、デオキシコ-ル酸、エストロン、エストラジオ-ル、エストラトリオ-ル、プロゲステロン、スチルベストロ-ル、テストステロン、アンドロステロン、デオキシコルチコステロン、コルチゾン、および１７-ヒドロキシコルチコステロンから成る群から選択され得る。他の脂溶性コンジュゲ-ト部分としては、例えば、直鎖状、分岐状、および環状のアルキル類、アルケニル類、およびアルキニル類などの脂肪族基が挙げられる。該脂肪族基は、例えば、５～約５０炭素原子、６～約５０炭素原子、８～約５０炭素原子、または１０～約５０炭素原子を有し得る。脂肪族基としては、例えば、ウンデシル、ドデシル、ヘキサデシル、ヘプタデシル、オクタデシル、ノナデシル、テルペン類、ボルニル、アダマンチル、その誘導体などが挙げられる。いくつかの局面においては、該脂肪族基中の１つ以上の炭素原子を、ヘテロ原子（Ｏ、Ｓ、またはＮ（例えば、ゲラニルオキシヘキシル））で置換することができる。さらなる好適な脂溶性コンジュゲ-ト部分としては、アルキルグリセロ-ル類、ビス（アルキル）グリセロ-ル類、トリス（アルキル）グリセロ-ル類、モノグリセリド類、ジグリセリド、およびトリグリセリド類などのグリセロ-ル類の脂肪族誘導体が挙げられる。いくつかの局面においては、該脂溶性コンジュゲ-トは、ジ-ヘキシルデシル-ｒａｃ-グリセロ-ルまたは１，２-ジ-Ｏ-ヘキシルデシル-ｒａｃ-グリセロ-ルまたはそのホスホン酸塩である。例えば、脂肪酸、脂肪アルコ-ル類、脂肪酸エステル類、および脂肪族アミン類などの飽和および不飽和脂肪官能性基は、脂溶性コンジュゲ-ト部分としても作用し得る。いくつかの局面においては、該脂肪官能性基は、約６炭素～約３０炭素または約８炭素～約２２炭素を含み得る。脂肪酸としては、例えば、カプリン酸、カプリル酸、ラウリン酸、パルミチン酸、ミリスチン酸、ステアリン酸、オレイン酸、リノ-ル酸、リノレン酸、アラキドン酸、エイコセン酸類などが挙げられる。
さらなる局面においては、脂溶性コンジュゲ-ト基は、６～約５０炭素原子、１０～約５０炭素原子、または１４～約４０炭素原子を有するポリ環状芳香族基であり得る。ポリ環状芳香族基としては、例えば、ピレン類、プリン類、アクリジン類、キサンテン類、フルオレン類、フェナントレン類、アントラセン類、キノリン類、イソキノリン類、ナフタレン類、その誘導体などが挙げられる。他の好適な脂溶性コンジュゲ-ト部分としては、トリチル類（例えば、ジメトキシトリチル（ＤＭＴ））、フェノキサジン類、リポ酸、リン脂質類、エ-テル類、チオエ-テル類（例えば、ヘキシル-Ｓ-トリチルチオ-ル）、その誘導体などが挙げられる。
低密度リポ蛋白質（ＬＤＬ）に対して親和性を有するコンジュゲ-ト部分を含むオリゴマ-化合物は、有効な標的送達システムを提供する助けとなり得る。腫瘍細胞上でＬＤＬ受容体が高レベルで発現する場合には、ＬＤＬがこれらの細胞に薬剤を選択的に送達するための誘引性担体となる。ＬＤＬに親和性を有する部分は、ステロイド（例えば、コレステロ-ル）、脂肪酸、その誘導体およびそれらの組み合わせなどの脂溶性基を多く含む。いくつかの局面においては、ＬＤＬ親和性を有するコンジュゲ-ト部分は、コ-ル酸のジオレイルエステル類（ケノデオキシコ-ル酸およびリトコ-ル酸など）であり得る。いくつかの局面においては、該脂溶性コンジュゲ-トは、ビオチンであり得る、あるいはビオチンを含み得る。いくつかの局面においては、該脂溶性コンジュゲ-ト部分は、グリセリドまたはグリセリドエステルであり得る、あるいはグリセリドまたはグリセリドエステルを含み得る。
ステロ-ル類、スタノ-ル類、およびステイン類（ｓｔａｉｎｓ）（コレステロ-ルまたは本明細書に開示のような物質など）などの脂溶性コンジュゲ-ト部分は、例えば、肝臓への（典型的には、肝細胞への）該オリゴヌクレオチドの送達を促進する目的で用いることができる。本開示のいくつかの局面においては、アンチセンスオリゴヌクレオチドコンジュゲ-トのコンジュゲ-ト部分は、Ｃｏｎｊ５、５ａ、６または６ａを含む、または同上から成る。いくつかの局面においては、該コンジュゲ-ト部分は、Ｃｏｎｊ５ａを含む、あるいはＣｏｎｊ５ａから成る。いくつかの局面においては、該アンチセンスオリゴヌクレオチドコンジュゲ-トは、配列番号：１０および配列番号：１１から成る群から選択される。
第３節ｄ：リンカ-
結合またはリンカ-は、目的の一化学基またはセグメントを別の目的の一化学基またはセグメントに、１つ以上の共有結合を介して連結する２原子間の連結である。コンジュゲ-ト部分（または標的化部分またはブロッキング部分）は、直接的あるいは連結部分（リンカ-またはテザ-）、すなわちリンカ-を介して、にオリゴマ-化合物に連結し得る。リンカ-は、第３の領域、例えば、コンジュゲ-ト部分を、オリゴマ-化合物（領域Ａなど）に共有結合によって連結する働きのある二官能性部分である。いくつかの局面においては、該リンカ-は、反復ユニット（エチレングリコ-ルまたはアミノ酸ユニットなど）の鎖状構造またはオリゴマ-を含む。該リンカ-は、少なくとも２種類の官能基性を有し得るが、その１つは、該オリゴマ-化合物への結合であり、他方は、該コンジュゲ-ト部分への結合である。リンカ-の官能基性の例としては、オリゴマ-またはコンジュゲ-ト部分の求核性基と反応する求電子性、または求電子性基と反応する求核性であり得る。いくつかの局面においては、リンカ-の官能基は、アミノ、ヒドロキシル、カルボン酸、チオ-ル、ホスホロアミダ-ト、ホスホロチオエ-ト、リン酸、亜リン酸塩、不飽和（例えば、二重結合または三重結合）などを含む。いくつかのリンカ-の例としては、８-アミノ-３，６-ジオキサオクタン酸（ＡＤＯ）、スクシンイミジル４-（Ｎ-マレイミドメチル）シクロヘキサン-Ｉ-カルボン酸塩（ＳＭＣＣ）、６-アミノヘキサン酸（ＡＨＥＸまたはＡＨＡ）、６-アミノヘキシルオキシ、４-アミノ酪酸、４-アミノシクロヘキシルカルボン酸、スクシンイミジル４-（Ｎ-マレイミドメチル）シクロヘキサン-Ｉ-カルボキシ-（６-アミド-カプロエ-ト）（ＬＣＳＭＣＣ）、スクシンイミジルｍ-マレイミド-ベンゾイレ-ト（ＭＢＳ）、スクシンイミジルＮ-ｅ-マレイミド-カプロイレ-ト（ＥＭＣＳ）、スクシンイミジル６-（ベ-タ-マレイミド-プロピオンアミド）ヘキサン酸塩（ＳＭＰＨ）、スクシンイミジルＮ-（ａ-酢酸マレイミド）（ＡＭＡＳ）、スクシンイミジル４-（ｐ-マレイミドフェニル）酪酸塩（ＳＭＰＢ）、ベ-タ-アラニン（ベ-タ-ＡＬＡ）、フェニルグリシン（ＰＨＧ）、４-アミノシクロヘキサン酸（ＡＣＨＣ）、ベ-タ-（シクロプロピル）アラニン（ベ-タ-ＣＹＰＲ）、アミノドデカン酸（ＡＤＣ）、アリレンジオ-ル類、ポリエチレングリコ-ル類、アミノ酸などが挙げられる。
オリゴマ-化合物のコンジュゲ-ト部分への連結に有用であり得る様々なリンカ-基が当該技術分野においてさらに公知である。それら有用なリンカ-基の多くに関する総説が、例えば、以下の文献に掲載されている：
アンチセンスの研究と応用（Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ）、Ｓ． Ｔ． Ｃｒｏｏｋｅ ａｎｄ Ｂ． Ｌｅｂｌｅｕ編集、ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ、Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ、Ｆｌａ．、１９９３、３０３～３５０ペ-ジ。
オリゴマ-化合物のコンジュゲ-ト調製におけるリンカ-とその利用については、当該技術分野において様々なものがあり、そのような文献の例としては、以下が挙げられる：
国際特許公開ＷＯ９６／１１２０５およびＷＯ９８／５２６１４；および米国特許第４，９４８，８８２号；第５，５２５，４６５号；第５，５４１，３１３号；第５，５４５，７３０号；第５，５５２，５３８号；第５，５８０，７３１号；第５，４８６，６０３号；第５，６０８，０４６号；第４，５８７，０４４号；第４，６６７，０２５号；第５，２５４，４６９号；第５，２４５，０２２号；第５，１１２，９６３号；第５，３９１，７２３号；第５，５１０４７５号；第５，５１２，６６７号；第５，５７４，１４２号；第５，６８４，１４２号；第５，７７０，７１６号；第６，０９６，８７５号；第６，３３５，４３２号；および第６，３３５，４３７号；ならびに国際特許公開ＷＯ２０１２／０８３０４６；これらの参考文献は参照としてその内容全体が本明細書に組み入れられる。
本明細書中の「生理学的に不安定な結合」は、哺乳動物身体内の通常条件下、または類似の条件下で開裂可能な不安定結合である（図１２および図１３において領域Ｂとして示されている開裂可能リンカ-ともよばれる）。生理学的に不安定な結合基は、特定の生理的条件下に存在する場合には化学変換（例えば、開裂）が起こるように選択される。哺乳動物細胞内の条件としては、哺乳動物細胞内のｐＨ、温度、酸化条件または還元条件あるいは酸化剤または還元剤、および塩濃度、あるいはこれらに類似の条件などの化学的条件が挙げられる。哺乳動物細胞内の条件としてはまた、哺乳動物細胞内に通常存在する酵素活性の存在（蛋白質分解性酵素または加水分解酵素など）が挙げられる。いくつかの局面においては、該開裂可能リンカ-は、
例えば、該標的細胞に発現し得るヌクレア-ゼに感受性である；したがって、本明細書において詳細に説明されるように、該リンカ-は、ホスホジエステルで連結される短い（例えば、１～１０）ヌクレオシド領域（ＤＮＡヌクレオシドなど）であり得る。
化学的変換（不安定結合の開裂）は、細胞への薬学的に許容可能な薬剤の添加によって開始し得る、あるいは不安定結合を含む分子が適切な細胞内および／または細胞外の環境に到達した場合に自然に起こり得る。例えば、ｐＨ不安定結合は、該分子が酸性エンドソ-ム内に進入した場合に、切断され得る。したがって、ｐＨ不安定結合は、エンドソ-ム内開裂可能結合であると見なすことができる。酵素的開裂可能結合は、細胞質内のエンドソ-ムまたはリソソ-ムに存在する酵素などの酵素に曝露された場合に、切断され得る。ジスルフィド結合は、該分子が細胞質のより還元的な環境に進入した場合に、切断され得る。したがって、ジスルフィドは、細胞質内開裂可能結合であると見なすことができる。本明細書中の「ｐＨ不安定結合」は、酸性条件下（ｐＨ＜７）で選択的に分解する不安定結合である。細胞エンドソ-ムおよびリソソ-ムのｐＨは７未満であるので、そのような結合はエンドソ-ム内不安定結合とよぶこともできる。
第３節ｅ：生体内開裂可能コンジュゲ-トに連結されたオリゴマ-
該オリゴマ-化合物は、任意選択的に、該オリゴマ-（領域Ａとよばれる）と該コンジュゲ-ト（領域Ｃとよばれる）との間に配置される第２の領域（領域Ｂ）を含むことができる。具体的な図としては、図１２および図１３を参照のこと。領域Ｂは、開裂可能リンカ-（生理学的に不安定な結合ともよばれる）などのリンカ-であり得る。ヌクレア-ゼ感受性の生理学的に不安定な結合：いくつかの局面においては、本開示のオリゴマ-（オリゴマ-化合物ともよばれる）（またはコンジュゲ-ト）は、３つの領域を含む：
（ｉ）第１の領域（領域Ａ）（例えば、連続する１６～１８ヌクレオチドを含む）；
（ｉｉ）第２の領域（領域Ｂ）（生体内開裂可能リンカ-を含む）；
および
（ｉｉｉ）第３の領域（Ｃ）（コンジュゲ-ト部分、標的化部分、活性化部分を含み、ここで該第３の領域は、該第２の領域に共有結合する）。
いくつかの局面においては、領域Ｂはリン酸ヌクレオチドリンカ-であり得る。例えば、該コンジュゲ-トが脂質、脂肪酸、ステロ-ル（コレステロ-ルまたはトコフェロ-ルなど）などの脂溶性コンジュゲ-トである場合には、そのようなリンカ-を用いることができる。他のコンジュゲ-ト、例えば、糖質コンジュゲ-ト（ＧａｌＮＡｃなど）には、リン酸ヌクレオチドリンカ-も利用することができる。
第３節ｅ．１：ペプチドリンカ-
いくつかの局面においては、該生体内開裂可能リンカ-（領域Ｂ）は、ポリＧａｌＮＡｃコンジュゲ-ト（トリＧａｌＮＡｃコンジュゲ-トなど）において用いることのできるトリリジンペプチドリンカ-などのペプチドである。本明細書に記載のペプチドビラジカルについても参照のこと。
利用可能な、当該技術分野において公知の他のリンカ-としてはジスルフィドリンカ-が挙げられる。
第３節ｅ．２：リン酸ヌクレオチドリンカ-
いくつかの局面においては、領域Ｂは、第１の領域（領域Ａ）の５’または３’ヌクレオチドに、ヌクレオシド間結合基（ホスホジエステル結合など）を介してなど、共有結合によって連結される１～６ヌクレオチドを含むが；
ここで、
（ａ）第１と第２の領域の間のヌクレオシド間結合がホスホジエステル結合であり、また第１の領域に隣接する（直に隣接するなど）第２の領域のヌクレオシドがＤＮＡまたはＲＮＡのいずれかであり；
および／または
（ｂ）第２の領域の少なくとも１ヌクレオシドが、ホスホジエステルで連結されるＤＮＡまたはＲＮＡヌクレオシドである。
いくつかの局面においては、領域Ａおよび領域Ｂが、長さ１６～２２ヌクレオチドの単一連続ヌクレオチド配列を形成する。
いくつかの局面においては、第１の領域と第２の領域との間のヌクレオシド間結合を、第２の領域の一部と見なすことができる。
いくつかの局面においては、第２の領域と第３の領域の間にリン含有結合基が存在する。該リン結合基は、例えば、リン酸（ホスホジエステル）、ホスホロチオエ-ト、ホスホロジチオエ-ト、またはボラノリン酸基であり得る。いくつかの局面においては、このリン含有結合基は、第２の領域と（第３の領域に連結する）リンカ-領域との間に存在する。いくつかの局面においては、該リン酸基はホスホジエステルである。
したがって、いくつかの局面においては、該オリゴマ-化合物は、少なくとも２つのホスホジエステル基を含むが、ここで少なくとも一方が上記の説明にしたがうようなものであり、他方が第２の領域と第３の領域との間、任意選択的に、リンカ-基と第２の領域との間に配置される。
いくつかの局面においては、第３の領域は、複合体化に利用する活性化基などの活性化基である。この点に関して、本開示はまた、領域Ａおよび領域Ｂおよび活性化基（例えば、その後の第３の領域への連結に好適な、複合体化に好適であるような、中間体）を含む活性化オリゴマ-を提供する。
いくつかの局面においては、該第３の領域は反応基（複合体化に用いる反応基など）である。この点に関して、本開示はまた、領域Ａおよび領域Ｂおよび反応基（例えば、その後の第３の領域への連結に好適な、複合体化に好適であるような、中間体）を含むオリゴマ-を提供する。該反応基は、いくつかの局面においては、アルコ-ル基のアミン（アミン基など）を含む。
いくつかの局面においては、領域Ａは、ホスホジエステル以外の、少なくとも１つ（２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、または２１など）のヌクレオシド間結合を含むが、該ヌクレオシド間結合は（任意選択的に独立に）、ホスホロチオエ-ト、ホスホロジチオエ-ト、およびボラノリン酸、およびメチルホスホン酸から成る群から選択される（ホスホロチオエ-トなど）。いくつかの局面においては、領域Ａは少なくとも１つのホスホロチオエ-ト結合を含む。いくつかの局面においては、該ヌクレオシド間結合の少なくとも５０％（少なくとも７５％など、少なくとも９０％など、領域Ａ内の全ヌクレオシド間結合など）がホスホジエステル以外の結合である（例えば、ホスホロチオエ-ト結合である）。いくつかの局面においては、領域Ａ内の全ヌクレオシド間結合がホスホジエステル以外の結合である。
いくつかの局面においては、該オリゴマ-化合物は、アンチセンスオリゴヌクレオチド（アンチセンスオリゴヌクレオチドコンジュゲ-トなど）を含む。該アンチセンスオリゴヌクレオチドは、該第１の領域、および任意選択的に、該第２の領域であり得る、あるいは同上を含み得る。この点に関して、いくつかの局面においては、領域Ｂは、該（核酸）標的に相補的である連続核酸塩基配列の一部を形成し得る。他の局面においては、領域Ｂは該標的に対する相補性を欠いている。
言い換えれば、いくつかの局面においては、本開示は、非ホスホジエステルで連結される（ホスホロチオエ-トで連結されるなど）オリゴヌクレオチド（例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチド）であって、該オリゴヌクレオチドの隣接ヌクレオシドに、ホスホジエステル結合を介して連結される少なくとも一方の末端（５’および／または３’）ＤＮＡヌクレオシドまたは末端ＲＮＡヌクレオシドを有するオリゴヌクレオチド（例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチド）を提供するが、ここで該末端ＤＮＡヌクレオシドまたはＲＮＡヌクレオシドは、任意選択的に、リンカ-部分を介して、コンジュゲ-ト部分、標的化部分またはブロッキング部分に、さらに共有結合によって連結される。
いくつかの局面においては、該オリゴマ-化合物は、アンチセンスオリゴヌクレオチド（アンチセンスオリゴヌクレオチドコンジュゲ-トなど）を含む。該アンチセンスオリゴヌクレオチドは、該第１の領域、および任意選択的に該第２の領域であり得る、あるいは同領域を含み得る。この点に関して、いくつかの局面においては、領域Ｂは、該（核酸）標的に相補的である連続核酸塩基配列の一部を形成し得る。他の局面においては、領域Ｂは該標的に対する相補性を欠いている。
いくつかの局面においては、該第２の領域の少なくとも２つの連続するヌクレオシドは、ＤＮＡヌクレオシド（連続する少なくとも３または４または５ＤＮＡヌクレオチドなど）である。
そのような一局面においては、本開示のオリゴヌクレオチドは、次の式にしたがうものであると説明することができる：
５’-Ａ-ＰＯ-Ｂ［Ｙ］Ｘ-３’または３’-Ａ-ＰＯ-Ｂ［Ｙ］Ｘ-５’；
ここでＡは領域Ａであり、ＰＯはホスホジエステル結合であり、Ｂは領域Ｂであり、Ｙは任意選択的結合基であり、およびＸはコンジュゲ-ト、標的化基、ブロッキング基、または反応基または活性化基である。
いくつかの局面においては、領域Ｂは、３’-５’方向または５’-３’方向の：
（ｉ）領域Ａの５’ヌクレオシドまたは３’ヌクレオシドへのホスホジエステル結合；
（ｉｉ）ＤＮＡヌクレオシドまたはＲＮＡヌクレオシド（ＤＮＡヌクレオシドなど）；
および
（ｉｉｉ）さらなるホスホジエステル結合、５’-Ａ-ＰＯ-Ｂ-ＰＯ-３’または３’-Ａ-ＰＯ-Ｂ-ＰＯ-５’、
を含む。
さらなるホスホジエステル結合が、領域Ｂヌクレオシドを、さらに１つ以上のヌクレオシド（１つ以上のＤＮＡヌクレオシドまたはＲＮＡヌクレオシドなど）と連結する、あるいは、任意選択的に、結合基（Ｙ）を介して、Ｘに連結することができる（Ｘは、コンジュゲ-ト、標的化基またはブロッキング基または反応基または活性化基である）。
いくつかの局面においては、領域Ｂは、３’-５’方向または５’-３’方向の：
（ｉ）領域Ａの５’または３’ヌクレオシドへのホスホジエステル結合；
（ｉｉ）ＤＮＡヌクレオシドなまたはＲＮＡホスホジエステルで連結された２～１０ヌクレオシド（ＤＮＡヌクレオシドなど）；
および任意選択的に、
（ｉｉｉ）さらなるホスホジエステル結合、
を含む
５’-Ａ-［ＰＯ-Ｂ］ｎ - ［Ｙ］-Ｘ ３’または３’-Ａ-［ＰＯ-Ｂ］ｎ -［Ｙ］-Ｘ ５’
５’-Ａ-［ＰＯ-Ｂ］ｎ - ＰＯ-［Ｙ］-Ｘ ３’または３’-Ａ-［ＰＯ-Ｂ］ｎ - ＰＯ-［Ｙ］-Ｘ ５’、
ここでＡは領域Ａを表し、［ＰＯ-Ｂ］ｎは領域Ｂを表し、ここでｎは１～１０（１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０など）であり、ＰＯは領域ＢとＸ（または、存在するのであればＹ）との間の任意選択的ホスホジエステル結合基である。
いくつかの局面においては、本開示は、以下の式のうちの一つにしたがう（または、その式を含む）化合物を提供する：
５’ ［領域Ａ］ - ＰＯ - ［領域Ｂ］ ３’ -Ｙ - Ｘ
５’ ［領域Ａ］ - ＰＯ - ［領域Ｂ］ -ＰＯ ３’ -Ｙ - Ｘ
５’ ［領域Ａ］ - ＰＯ - ［領域Ｂ］ ３’ - Ｘ
５’ ［領域Ａ］ - ＰＯ - ［領域Ｂ］ -ＰＯ ３’ - Ｘ
３’ ［領域Ａ］ - ＰＯ - ［領域Ｂ］ ５’ -Ｙ - Ｘ
３’ ［領域Ａ］ - ＰＯ - ［領域Ｂ］ -ＰＯ ５’ -Ｙ - Ｘ
３’ ［領域Ａ］ - ＰＯ - ［領域Ｂ］ ５’ - Ｘ
３’ ［領域Ａ］ - ＰＯ - ［領域Ｂ］ -ＰＯ ５’ - Ｘ
領域Ｂは、例えば：
５’ ＤＮＡ３’
３’ ＤＮＡ ５’
５’ ＤＮＡ-ＰＯ-ＤＮＡ-３’
３’ ＤＮＡ-ＰＯ-ＤＮＡ-５’
５’ ＤＮＡ-ＰＯ-ＤＮＡ-ＰＯ-ＤＮＡ ３’
３’ ＤＮＡ-ＰＯ-ＤＮＡ-ＰＯ-ＤＮＡ ５’
５’ ＤＮＡ-ＰＯ-ＤＮＡ-ＰＯ-ＤＮＡ-ＰＯ-ＤＮＡ ３’
３’ ＤＮＡ-ＰＯ-ＤＮＡ-ＰＯ-ＤＮＡ-ＰＯ-ＤＮＡ ５’
５’ ＤＮＡ-ＰＯ-ＤＮＡ-ＰＯ-ＤＮＡ-ＰＯ-ＤＮＡ-ＰＯ-ＤＮＡ ３’
３’ ＤＮＡ-ＰＯ-ＤＮＡ-ＰＯ-ＤＮＡ-ＰＯ-ＤＮＡ-ＰＯ-ＤＮＡ ５’、
を含み得る、あるいは同上から成ることが可能である。
リン酸連結生体内開裂可能リンカ-にはＤＮＡおよびＲＮＡ以外のヌクレオシドを用いることが可能であることを理解されたい。生体内開裂可能ヌクレオチドリンカ-は、実施例６のアッセイを用いて同定することができる。
いくつかの局面においては、本開示の化合物は該オリゴマ-（または連続ヌクレオチド配列または領域Ａ）をコンジュゲ-ト部分（または領域Ｃ）に連結する生体内開裂可能リンカ-（生理学的に不安定なリンカ-、ヌクレア-ゼ感受性の生理学的に不安定な結合、またはヌクレア-ゼ感受性リンカ-ともよばれる）を含む（例えば、リン酸ヌクレオチドリンカ-（領域Ｂなど）またはペプチドリンカ-）。
実施例６に示されるアッセイにおける開裂に対する感受性は、リンカ-が生体内開裂可能または生理学的に不安定であるか否かの判定に利用することができる。
本開示にしたがう生体内開裂可能リンカ-は、標的組織（例えば、肝臓および／または腎臓）内で開裂に感受性である（すなわち、生理学的に不安定である）リンカ-を含む。標的組織内の開裂速度は、血清での速度よりも速いことが好ましい。組織（例えば、肝臓または腎臓）内および血清中の開裂レベル（％）を決定する好適な方法は、実施例６に記載されている。いくつかの局面においては、本開示の化合物中の領域Ｂなどの生体内開裂可能リンカ-（生理学的に不安定なリンカ-、またはヌクレア-ゼ感受性リンカ-ともよばれる）は、実施例６の肝臓または腎臓のホモジネ-トアッセイにおいて、少なくとも約２０％切断される（少なくとも約３０％切断されるなど、少なくとも約４０％切断されるなど、少なくとも約５０％切断されるなど、少なくとも約６０％切断されるなど、少なくとも約７０％切断されるなど、少なくとも約７５％切断されるなど）。いくつかの局面においては、実施例６のアッセイにおけるような、血清中の開裂（％）は、約３０％未満である（約２０％未満など、約１０％未満など、５％未満など、約１％未満などである）。
同一または異なるものであり得るいくつかの局面においては、本開示の化合物中の領域Ｂなどの生体内開裂可能リンカ-（生理学的に不安定なリンカ-、またはヌクレア-ゼ感受性リンカ-ともよばれる）は、Ｓ１ヌクレア-ゼによる切断に感受性である。Ｓ１による切断に対する感受性は、実施例６に示されるＳ１ヌクレア-ゼアッセイを用いて評価することができる。いくつかの局面においては、本開示の化合物中の領域Ｂなどの生体内開裂可能リンカ-（生理学的に不安定なリンカ-、またはヌクレア-ゼ感受性リンカ-ともよばれる）は、実施例６で用いたアッセイにしたがって、Ｓ１ヌクレア-ゼと共に１２０分間のインキュベ-ションを行った後に、少なくとも約３０％切断される（少なくとも約４０％切断されるなど、少なくとも約５０％切断されるなど、少なくとも約６０％切断されるなど、少なくとも約７０％切断されるなど、少なくとも約８０％切断されるなど、少なくとも約９０％切断されるなど、少なくとも９５％切断されるなど）。
領域Ｂの配列選択
いくつかの局面においては、本開示のオリゴマ-は、該標的配列に相補的ではない領域（領域Ｂ）を含む。他の局面においては、領域Ｂは該標的配列に相補的な配列を形成する。いくつかの局面においては、領域Ａおよび領域Ｂは共に、該標的配列に相補的な単一連続配列を形成することができる。
いくつかの局面においては、領域Ｂの塩基の配列は、標的組織または細胞内または細胞内区画内に存在する主たるエンドヌクレア-ゼ切断酵素に基づいて、最適エンドヌクレア-ゼ切断部位を提供するように選択される。この点に関しては、標的組織および非標的組織から細胞抽出物を単離することにより、非標的細胞（例えば、腎臓）と比較して、所望の標的細胞（例えば、肝臓／肝細胞）において優先的である切断活性に基づいて、領域Ｂに用いるエンドヌクレア-ゼ切断配列を選択することができる。この点については、該化合物による下方制御を標的とする効力を、所望の組織／細胞に関して最適化することができる。
いくつかの局面においては、領域Ｂは、配列ＡＡ、ＡＴ、ＡＣ、ＡＧ、ＴＡ、ＴＴ、ＴＣ、ＴＧ、ＣＡ、ＣＴ、ＣＣ、ＣＧ、ＧＡ、ＧＴ、ＧＣ、またはＧＧのジヌクレオチドを含むが、ここでＣは５-メチルシトシンであり得る、および／またはＴはＵで置換し得る。いくつかの局面においては、領域Ｂは、ＡＡＡ、ＡＡＴ、ＡＡＣ、ＡＡＧ、ＡＴＡ、ＡＴＴ、ＡＴＣ、ＡＴＧ、ＡＣＡ、ＡＣＴ、ＡＣＣ、ＡＣＧ、ＡＧＡ、ＡＧＴ、ＡＧＣ、ＡＧＧ、ＴＡＡ、ＴＡＴ、ＴＡＣ、ＴＡＧ、ＴＴＡ、ＴＴＴ、ＴＴＣ、ＴＡＧ、ＴＣＡ、ＴＣＴ、ＴＣＣ、ＴＣＧ、ＴＧＡ、ＴＧＴ、ＴＧＣ、ＴＧＧ、ＣＡＡ、ＣＡＴ、ＣＡＣ、ＣＡＧ、ＣＴＡ、ＣＴＧ、ＣＴＣ、ＣＴＴ、ＣＣＡ、ＣＣＴ、ＣＣＣ、ＣＣＧ、ＣＧＡ、ＣＧＴ、ＣＧＣ、ＣＧＧ、ＧＡＡ、ＧＡＴ、ＧＡＣ、ＣＡＧ、ＧＴＡ、ＧＴＴ、ＧＴＣ、ＧＴＧ、ＧＣＡ、ＧＣＴ、ＧＣＣ、ＧＣＧ、ＧＧＡ、ＧＧＴ、ＧＧＣ、およびＧＧＧのトリヌクレオチド配列を含むが、ここでＣは５-メチルシトシンであり得る、および／またはＴはＵで置換し得る。
いくつかの局面においては、領域Ｂは、ＡＡＡＸ、ＡＡＴＸ、ＡＡＣＸ、ＡＡＧＸ、ＡＴＡＸ、ＡＴＴＸ、ＡＴＣＸ、ＡＴＧＸ、ＡＣＡＸ、ＡＣＴＸ、ＡＣＣＸ、ＡＣＧＸ、ＡＧＡＸ、ＡＧＴＸ、ＡＧＣＸ、ＡＧＧＸ、ＴＡＡＸ、ＴＡＴＸ、ＴＡＣＸ、ＴＡＧＸ、ＴＴＡＸ、ＴＴＴＸ、ＴＴＣＸ、ＴＡＧＸ、ＴＣＡＸ、ＴＣＴＸ、ＴＣＣＸ、ＴＣＧＸ、ＴＧＡＸ、ＴＧＴＸ、ＴＧＣＸ、ＴＧＧＸ、ＣＡＡＸ、ＣＡＴＸ、ＣＡＣＸ、ＣＡＧＸ、ＣＴＡＸ、ＣＴＧＸ、ＣＴＣＸ、ＣＴＴＸ、ＣＣＡＸ、ＣＣＴＸ、ＣＣＣＸ、ＣＣＧＸ、ＣＧＡＸ、ＣＧＴＸ、ＣＧＣＸ、ＣＧＧＸ、ＧＡＡＸ、ＧＡＴＸ、ＧＡＣＸ、ＣＡＧＸ、ＧＴＡＸ、ＧＴＴＸ、ＧＴＣＸ、ＧＴＧＸ、ＧＣＡＸ、ＧＣＴＸ、ＧＣＣＸ、ＧＣＧＸ、ＧＧＡＸ、ＧＧＴＸ、ＧＧＣＸ、およびＧＧＧＸのテトラヌクレオチド配列を含むが、ここでＸはＡ、Ｔ、Ｕ、Ｇ、Ｃおよびその類似体から成る群から選択することができ、ここでＣは５-メチルシトシンであり得る、および／またはＴはＵで置換し得る。（天然の）核酸塩基Ａ、Ｔ、Ｕ、Ｇ、Ｃについて言及する場合に、これらは天然核酸塩基と同等に機能する核酸塩基類似体で置き換え可能である（例えば、相補的ヌクレオシドを有する塩基対）ことは、理解されるであろう。いくつかの局面においては、領域ＢはＴもＵも含まない。
第４節：医学的適応
いくつかの局面においては、本開示の医薬組成物（例えば、経口製剤（例えば、ＣＩＶＩ００８および経口送達剤（ＳＮＡＣ、Ｃ１０、または５-ＣＮＡＣ、その誘導体、その薬学的に許容可能な水和物、溶媒和物、または塩；あるいはそれらの任意の組み合わせなど）を含む経口製剤）は、ＰＣＳＫ９遺伝子の通常型、変異体、対立遺伝子バリアント、またはスプライスバリアントの過剰発現または発現に関連する病態の治療に用いることができる。本開示はさらに、本明細書で言及されるような疾患、障害または病態の治療のための治療薬剤の製造に用いる本開示の医薬組成物（例えば、経口製剤（例えば、ＣＩＶＩ００８および経口送達剤（ＳＮＡＣ、Ｃ１０、または５-ＣＮＡＣ、その誘導体、その薬学的に許容可能な水和物、溶媒和物、または塩；あるいはそれらの任意の組み合わせなど）を含む経口製剤）を提供する。
本開示は、ＰＣＳＫ９の異常なレベルおよび／または活性に関連する病態に罹患している、または感受性のある哺乳動物、例えば、ヒトを治療する方法であって、該哺乳動物に、治療有効量の本開示の医薬組成物（例えば、経口製剤（例えば、ＣＩＶＩ００８および経口送達剤（ＳＮＡＣ、Ｃ１０、または５-ＣＮＡＣ、その誘導体、その薬学的に許容可能な水和物、溶媒和物、または塩；あるいはそれらの任意の組み合わせなど）を含む経口製剤）を投与することを含む治療法を提供する。
いくつかの局面において、本明細書で言及されるような疾患または障害は、ＰＣＳＫ９遺伝子の突然変異、あるいはＰＣＳＫ９と結合または相互作用する蛋白質産物の遺伝子の変異に関連し得る。したがって、いくつかの局面においては、該標的はＲＮＡである。いくつかの局面においては、該ｍＲＮＡはプレｍＲＮＡである。いくつかの局面においては、該ＲＮＡはｍＲＮＡのイントロンである。いくつかの局面においては、該ＲＮＡはＲＮＡのエクソンである。いくつかの局面においては、該ＲＮＡは、イントロンとエクソンとの境界部である。いくつかの局面においては、該ＲＮＡは、例えば、欠損プロモ-タ-によって、またはＰＣＳＫ９を含む代謝経路またはシグナル伝達経路の他の成分によって、上方制御される正常ＰＣＳＫ９のｍＲＮＡである。いくつかの局面においては、該ｍＲＮＡは、ＰＣＳＫ９遺伝子の対立遺伝子バリアントに由来する。いくつかの局面においては、該ｍＲＮＡは、正常または変異体ＰＣＳＫ９遺伝子のスプライスバリアントに由来する。いくつかの局面においては、該ｍＲＮＡは、ＰＣＳＫ９遺伝子が変異した形態（例えば、機能獲得変異体）に由来する。
ＰＣＳＫ９は、主に、細胞膜上のＬＤＬＲレベルを低下させることによって、コレステロ-ル恒常性に主要な制御的役割を果たしている。ＬＤＬＲレベルの低下によって、ＬＤＬ粒子の代謝低下が起こるので、高コレステロ-ル血症になり得る。ＬＤＬがＬＤＬＲに結合することにより、ＬＤＬＲ／ＬＤＬ複合体のエンドソ-ムへの内在化が誘導される。ＰＣＳＫ９が（ＥＧＦ-Ａドメインを介して）ＬＤＬＲに結合すると、ＰＣＳＫ９は受容体／リガンド複合体のコンフォメ-ション変化を阻害する。この阻害によって、ＬＤＬＲは代わりにリソソ-ムへ向かうように方向変換される。
ＰＣＳＫ９は、小腸および食後脂質異常症におけるトリグリセリドに富んだ腸内ａｐｏＢリポ蛋白質の産生にも重要な役割を担っている。ＰＣＳＫ９のバリアントは、循環コレステロ-ルを低下または増加させ得る。他のバリアントは、希な常染色体優性型家族性高コレステロ-ル血症（ＨＣＨＯＬＡ３）に関連している。これらの変異によって、そのプロテア-ゼ活性が増加するので、ＬＤＬＲレベルは低下し細胞内へのコレステロ-ル取り込み阻害が起こる。ＰＣＳＫ９は、内皮、平滑筋細胞、およびマクロファ-ジなど、動脈壁に高発現し、脈管恒常性およびアテロ-ム性動脈硬化症を制御し得る局所的効果を有している。つまり、ＰＣＳＫ９はアテロ-ム性動脈硬化促進作用を有し、リポ蛋白質合成を制御する。
ＰＣＳＫ９は、グルコ-ス代謝および肥満、高血圧症に関連する腎臓のナトリウム再吸収の制御に関与する。さらに、ＰＣＳＫ９は細菌感染またはウイルス感染および敗血症に関与することもある。
いくつかの局面においては、ＰＣＳＫ９遺伝子は、Ｐｒｏ１７４Ｓｅｒ ＰＣＳＫ０、Ｓｅｒ１２７Ａｒｇ ＰＣＳＫ９、Ｐｈｅ２１６Ｌｅｕ ＰＣＳＫ９、およびＡｓｐ３７４Ｔｙｒ ＰＣＳＫ９から選択される対立遺伝子バリアントである。
本明細書に開示の方法は、好ましくは、ＰＣＳＫ９の異常なレベルおよび／または活性に起因する疾患に対する治療および予防に用いられる。本開示は、それを必要とする対象において、ＰＣＳＫ９の異常なレベルおよび／または活性を治療する方法を提供するが、ここで該方法は、治療有効量の本開示の医薬組成物（例えば、経口製剤（例えば、ＣＩＶＩ００８および経口送達剤（ＳＮＡＣ、Ｃ１０、または５-ＣＮＡＣ、その誘導体、その薬学的に許容可能な水和物、溶媒和物、または塩；あるいはそれらの任意の組み合わせなど）を含む経口製剤）を該対象に投与することを含む。
本開示はまた、治療薬剤として用いる本開示の医薬組成物（例えば、経口製剤（例えば、ＣＩＶＩ００８および経口送達剤（ＳＮＡＣ、Ｃ１０、または５-ＣＮＡＣ、その誘導体、その薬学的に許容可能な水和物、溶媒和物、または塩；あるいはそれらの任意の組み合わせなど）を含む経口製剤）に関する。
本開示はさらに、ＰＣＳＫ９の異常なレベルおよび／またはＰＣＳＫ９の異常な活性および／またはＰＣＳＫ９の変異体（例えば、機能獲得変異体）、ＰＣＳＫ９の対立遺伝子バリアント、またはＰＣＳＫ９のスプライスバリアントの発現に関する治療のための治療薬剤の製造における、治療有効量の本開示の医薬組成物（例えば、経口製剤（例えば、ＣＩＶＩ００８および経口送達剤（ＳＮＡＣ、Ｃ１０、または５-ＣＮＡＣ、その誘導体、その薬学的に許容可能な水和物、溶媒和物、または塩；あるいはそれらの任意の組み合わせなど）を含む経口製剤）の利用に関する。
本開示は、それを必要とする対象において、ＰＣＳＫ９の異常な発現レベルおよび／または活性に起因する疾患または病態を治療する方法を提供するが、ここで該方法は、有効量の本開示の医薬組成物（例えば、経口製剤（例えば、ＣＩＶＩ００８および経口送達剤（ＳＮＡＣ、Ｃ１０、または５-ＣＮＡＣ、その誘導体、その薬学的に許容可能な水和物、溶媒和物、または塩；あるいはそれらの任意の組み合わせなど）を含む経口製剤）を、該対象に投与することを含み、ここで該医薬組成物の投与によって、該対象の血清ＰＣＳＫ９レベルを低下させ、および／または血清ＬＤＬコレステロ-ルレベルを低下させる。いくつかの局面においては、該疾患または病態は、アテロ-ム性動脈硬化症、高コレステロ-ル血症、ＨＤＬ／ＬＤＬコレステロ-ルの不均衡、脂質異常症、冠動脈疾患（ＣＡＤ）、および冠動脈性心疾患（ＣＨＤ）から成る群から選択される。いくつかの局面においては、該脂質異常症は、家族性高脂血症（ＦＣＨＬ）または後天性高脂血症である。いくつかの局面においては、該高コレステロ-ル血症は、家族性高コレステロ-ル血症またはスタチン耐性高コレステロ-ル血症である。いくつかの局面においては、治療の必要がある対象または患者は、本明細書に開示の疾患または障害に罹患している、あるいは罹患している可能性がある対象または患者である。
いくつかの例においては、本明細書中の用語「治療」は、すでに罹患している疾患（例えば、本明細書に開示の疾患または障害）の治療および予防（すなわち、疾患を防ぐこと）の両方を指す。したがって、いくつかの局面においては、本明細書において言及される治療は予防的であり得る。
いくつかの局面においては、本開示の医薬組成物（例えば、経口製剤（例えば、ＣＩＶＩ００８および経口送達剤（ＳＮＡＣ、Ｃ１０、または５-ＣＮＡＣ、その誘導体、その薬学的に許容可能な水和物、溶媒和物、または塩；あるいはそれらの任意の組み合わせなど）を含む経口製剤）を用いた治療によって、本明細書に開示の疾患の症状を治療、改善、または防ぐことができる。いくつかの局面においては、本開示の医薬組成物（例えば、経口製剤（例えば、ＣＩＶＩ００８および経口送達剤（ＳＮＡＣ、Ｃ１０、または５-ＣＮＡＣ、その誘導体、その薬学的に許容可能な水和物、溶媒和物、または塩；あるいはそれらの任意の組み合わせなど）を含む経口製剤）を用いた治療によって、本明細書に開示の疾患に関連する続発症を予防する、遅延させる、または軽減することができる。
例えば、いくつかの局面においては、本開示の医薬組成物（例えば、経口製剤（例えば、ＣＩＶＩ００８および経口送達剤（ＳＮＡＣ、Ｃ１０、または５-ＣＮＡＣ、その誘導体、その薬学的に許容可能な水和物、溶媒和物、または塩；あるいはそれらの任意の組み合わせなど）を含む経口製剤）を投与することによって、対象における高コレステロ-ル血症を治療することができる。いくつかの局面においては、本開示の医薬組成物（例えば、経口製剤（例えば、ＣＩＶＩ００８および経口送達剤（ＳＮＡＣ、Ｃ１０、または５-ＣＮＡＣ、その誘導体、その薬学的に許容可能な水和物、溶媒和物、または塩；あるいはそれらの任意の組み合わせなど）を含む経口製剤）を投与することによって、高コレステロ-ル血症のリスクのある対象において、高コレステロ-ル血症の発症を防ぐことができる。いくつかの局面においては、本開示の医薬組成物（例えば、経口製剤（例えば、ＣＩＶＩ００８および経口送達剤（ＳＮＡＣ、Ｃ１０、または５-ＣＮＡＣ、その誘導体、その薬学的に許容可能な水和物、溶媒和物、または塩；あるいはそれらの任意の組み合わせなど）を含む経口製剤）を投与することによって、高コレステロ-ル血症のリスクのある対象において、高コレステロ-ル血症の発症を遅延させることができる。いくつかの局面においては、本開示の医薬組成物（例えば、経口製剤（例えば、ＣＩＶＩ００８および経口送達剤（ＳＮＡＣ、Ｃ１０、または５-ＣＮＡＣ、その誘導体、その薬学的に許容可能な水和物、溶媒和物、または塩；あるいはそれらの任意の組み合わせなど）を含む経口製剤）を投与することによって、高コレステロ-ル血症のリスクのある対象において、高コレステロ-ル血症の発症を防ぐことができる。いくつかの局面においては、本開示の医薬組成物（例えば、経口製剤（例えば、ＣＩＶＩ００８および経口送達剤（ＳＮＡＣ、Ｃ１０、または５-ＣＮＡＣ、その誘導体、その薬学的に許容可能な水和物、溶媒和物、または塩；あるいはそれらの任意の組み合わせなど）を含む経口製剤）を投与することによって、対象において高コレステロ-ル血症の症状（例えば、活動時胸痛、黄色腫（腱ならびに肘、臀部、および膝に高頻度に認められる脂肪沈着）、黄色板腫（眼瞼の周りのコレステロ-ル沈着）、角膜老人環（角膜の周りの灰白色コレステロ-沈着）など）の惹起または発生を防ぐ、または遅延させることができる。いくつかの局面においては、本開示の医薬組成物（例えば、経口製剤（例えば、ＣＩＶＩ００８および経口送達剤（ＳＮＡＣ、Ｃ１０、または５-ＣＮＡＣ、その誘導体、その薬学的に許容可能な水和物、溶媒和物、または塩；あるいはそれらの任意の組み合わせなど）を含む経口製剤）を投与することによって、対象において高コレステロ-ル血症の続発症または合併症（例えば、心臓疾患、循環器系疾患、心臓発作、長期アテロ-ム性動脈硬化症、脳卒中など）の惹起または発生を防ぐ、または遅延させることができる。
いくつかの局面においては、本開示は、それを必要とする対象において、ＰＣＳＫ９の異常な発現レベルおよび／または活性に起因する疾患または病態（例えば、高コレステロ-ル血症）を治療する方法を提供するが、ここで該方法は、ＣＩＶＩ００８および経口送達剤（ＳＮＡＣ、Ｃ１０、または５-ＣＮＡＣ、その誘導体、その薬学的に許容可能な水和物、溶媒和物、または塩；あるいはそれらの任意の組み合わせなどを含む経口製剤）を含む有効量の経口製剤（例えば、ピルまたはカプセルの形態）を、該対象に投与することを含み、ここで該医薬組成物の投与によって、該対象の血清ＰＣＳＫ９レベルを低下させ、それによって血清ＬＤＬコレステロ-ルレベルを低下させる。いくつかの局面においては、本開示は、それを必要とする対象において、高コレステロ-ル血症を治療する方法を提供するが、ここで該方法は、ＣＩＶＩ００８および経口送達剤（ＳＮＡＣ、Ｃ１０、または５-ＣＮＡＣなど）を含む有効量の経口製剤（例えば、ピルまたはカプセルの形態）を、該対象に投与することを含み、ここで該医薬組成物の投与によって、該対象の血清ＰＣＳＫ９レベルを低下させ、それによって血清ＬＤＬコレステロ-ルレベルを低下させる。いくつかの局面においては、本開示は、それを必要とする対象において、高コレステロ-ル血症を治療する方法を提供するが、ここで該方法は、ＣＩＶＩ００８およびＳＮＡＣを含む有効量の経口製剤（例えば、ピルまたはカプセルの形態）を、該対象に投与することを含み、ここで該医薬組成物の投与によって、該対象の血清ＰＣＳＫ９レベルを低下させ、それによって血清ＬＤＬコレステロ-ルレベルを低下させる。いくつかの局面においては、本開示は、それを必要とする対象において、高コレステロ-ル血症を治療する方法を提供するが、ここで該方法は、ＣＩＶＩ００８およびＣ１０を含む有効量の経口製剤（例えば、ピルまたはカプセルの形態）を、該対象に投与することを含み、ここで該医薬組成物の投与によって、該対象の血清ＰＣＳＫ９レベルを低下させ、それによって血清ＬＤＬコレステロ-ルレベルを低下させる。
いくつかの局面においては、本開示は、それを必要とする対象において、高コレステロ-ル血症を治療する方法を提供するが、ここで該方法は、ＣＩＶ００８および５-ＣＮＡＣＩを含む有効量の経口製剤（例えば、ピルまたはカプセルの形態）を、該対象に投与することを含み、ここで該医薬組成物の投与によって、該対象の血清ＰＣＳＫ９レベルを低下させ、それによって血清ＬＤＬコレステロ-ルレベルを低下させる。
第５節：併用治療
いくつかの局面においては、本開示の医薬組成物（例えば、経口製剤、（例えば、ＣＩＶＩ００８および経口送達剤（ＳＮＡＣ、Ｃ１０、または５-ＣＮＡＣ、その誘導体、その薬学的に許容可能な水和物、溶媒和物、または塩；あるいはそれらの任意の組み合わせなどを含む経口製剤）を含む経口製剤））は、別の治療剤との併用療法に用いることができる。いくつかの局面においては、該付加的な治療剤は、同一医薬組成物の一部として、例えば、同一のピルまたはカプセルの付加的成分として同時投与することができる。いくつかの局面においては、該付加的な治療剤は個別に併用投与することができる；すなわち、本開示の医薬組成物を、例えば、ピルまたはカプセルとして投与し、また該付加的成分を、例えば、別のピルまたはカプセルとして投与することができる。
本開示の医薬組成物と共に併用投与することのできる付加的な治療剤としては、例えば、スタチン類などのＨＭＧ ＣｏＡ還元酵素の阻害剤が挙げられるが、これらは、例えば、代謝性疾患の治療に広く用いられる（ＷＯ２００９／０４３３５４を参照のこと；本参考文献はその内容全体が、例えば、併用療法の参照として本明細書に組み入れられる）。
本開示の医薬組成物と共に併用投与することのできる治療薬剤は、以下から成る群から選択されるようなその他のコレステロ-ル低下化合物であり得る：
（ｉ）胆汁塩吸着樹脂（例えば、コレスチラミン、コレスチポ-ル、およびコレセベラム塩酸塩）；
（ｉｉ）ＨＭＧＣｏＡ-還元酵素阻害剤（例えば、ロバスタチン（ｌｏｖａｓｔａｔｉｎ）、セリバスタチン、プラバスタチン、アトルバスタチン、シンバスタチン、ロスバスタチン、およびフルバスタチン）；
（ｉｉｉ）ニコチン酸；
（ｉｖ）フィブリン酸誘導体（例えば、クロフィブラ-ト、ゲムフィブロジル、フェノフィブラ-ト、ベザフィブラ-ト、およびシプロフィブラ-ト）；
（ｖ）プロブコ-ル；
（ｖｉ）ネオマイシン；
（ｖｉｉ）デキストロチロキシン；
（ｖｉｉｉ）植物スタノ-ルエステル類、
（ｉｘ）コレステロ-ル吸収阻害剤（例えば、エゼチミブ）；
（ｘ）インプリタピド；
（ｘｉ）胆汁酸トランスポ-タ-の阻害剤（例えば、頂端部ナトリウム依存胆汁酸トランスポ-タ-）；
（ｘｉｉ）肝ＣＹＰ７ａの制御因子；
（ｘｉｉｉ）エストロゲン補充治薬（例えば、タモキシフェン）；
（ｘｉｖ）抗炎症剤（例えば、グルココルチコイド類）；
および
（ｘｖ）それらの任意の組み合わせ。
一局面においては、該併用療法は、本開示の経口医薬組成物（例えば、経口製剤）およびスタチンを含む経口送達のためのピルまたはカプセルであって、該経口医薬組成物が、例えば、ＣＩＶＩ００８および経口送達剤（ＳＮＡＣ、Ｃ１０、または５-ＣＮＡＣ、その誘導体、その薬学的に許容可能な水和物、溶媒和物、または塩；あるいはそれらの任意の組み合わせなど）を含む、経口送達のためのピルまたはカプセルを含む。一局面においては、該併用療法は、（ｉ）ＣＩＶＩ００８、（ｉｉ）経口送達剤（ＳＮＡＣ、Ｃ１０、または５-ＣＮＡＣ、その誘導体、その薬学的に許容可能な水和物、溶媒和物、または塩；あるいはそれらの任意の組み合わせなど）、および（ｉｉｉ）スタチンを含む経口送達のためのピルまたはカプセルを含む。一局面においては、該併用療法は、（ｉ）ＣＩＶＩ００８、（ｉｉ）ＳＮＡＣ、および（ｉｉｉ）スタチンを含む経口送達のためのピルまたはカプセルを含む。一局面においては、該併用療法は、（ｉ）ＣＩＶＩ００８、（ｉｉ）Ｃ１０、および（ｉｉｉ）スタチンを含む経口送達のためのピルまたはカプセルを含む。一局面においては、該併用療法は、（ｉ）ＣＩＶＩ００８、（ｉｉ）５-ＣＮＡＣ、および（ｉｉｉ）スタチンを含む経口送達のためのピルまたはカプセルを含む。
第６節：制御放出製剤
いくつかの局面においては、本開示の経口医薬組成物は、胃および上部腸管を通過する輸送を容易にする成分（例えば、腸溶性コ-ティング剤、ｐＨ感受性材料、および酵素阻害剤）を含む。いくつかの局面においては、本開示の経口医薬組成物は、例えば、コ-ティング剤または増粘剤としてゼラチンも含み得る。
腸溶性（胃中難溶解性）コ-ティング材料、例えば、ポリマ-は、胃のｐＨよりも高いｐＨレベル（例えば、４．５よりも高いｐＨ）で腸液（小腸内など）に溶解し得るので、小腸のその領域で該活性物質の放出が可能であるが、消化管上部では実質的に放出が起こらない。一局面においては、該腸溶性材料は、約４．５～約５．５のｐＨにおいて水溶液に溶解し始める。別の一局面においては、該腸溶性材料は、ｐＨ約５で水溶液に迅速に溶解する。別の一局面においては、該腸溶性材料は、ｐＨ約５．５で水溶液に迅速に溶解する。
好適な腸溶性（胃中難溶解性）材料としては、以下が挙げられるが、これらのみに限定されるものではない：
架橋ポリビニルピロリドン；非架橋ポリビニルピロリドン；ヒドロキシプロピルメチルセルロ-スフタレ-ト、ヒドロキシプロピルメチルセルロ-スアセテ-トサクシネ-ト、セルロ-スアセタ-トサクシネ-ト；セルロ-スアセタ-トフタレ-ト、ヒドロキシプロピルメチルセルロ-スアセテ-トサクシネ-ト、セルロ-スアセタ-トトリメリテ-ト；でんぷんアセタ-トフタレ-ト；ポリビニルアセタ-トフタレ-ト；カルボキシメチルセルロ-ス；メチルセルロ-スフタレ-ト；メチルセルロ-スサクシネ-ト；メチルセルロ-スフタレ-トサクシネ-ト；メチルセルロ-スフタル酸半エステル；エチルセルロ-スサクシネ-ト；カルボキシメチルアミド；メタクリル酸カリウム／ジビニルベンゼン共重合体；ポリビニルアルコ-ル類；ポリオキシエチレングリコ-ル類；ポリエチレングリコ-ル；アルギン酸ナトリウム；ガラクトマンナン；カルボキシポリメチレン；カルボキシメチルナトリウムでんぷん；アクリル酸および／またはメタクリル酸以下から選択される単量体との共重合体；メチルメタクリル酸、メタクリル酸エチル、アクリル酸エチル、メタクリル酸ブチル、メタクリル酸ヘキシル、メタクリル酸デシル、ラウリルメタクリル酸、メタクリル酸フェニル、メチルアクリル酸、アクリル酸イソプロピル、アクリル酸イソブチル、またはアクリル酸オクタデシル、例えば、Ｅｖｏｎｉｋ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓから入手可能なＥＵＤＲＡＧＩＴ（商標）-Ｌシリ-ズおよび-Ｓシリ-ズ（Ｌ１００-５５、Ｌ３０ Ｄ-５５、Ｌ１００、Ｓ１００、Ｌ１２．５、およびＳ１２．５が挙げられる）；酢酸ポリビニル；脂肪；油脂類；ワックス類；脂肪アルコ-ル類；シェラック；ゼイン；グルテン；エチルアクリル酸／マレイン酸無水物共重合体；マレイン酸無水物／ビニルメチルエ-テル共重合体；スチロ-ル／マレイン酸共重合体；２-エチル-ヘキシル-アクリル酸マレイン酸無水物；クロトン酸／酢酸ビニル共重合体；グルタミニン酸／グルタミン酸エステル共重合体；カルボキシメチルエチルセルロ-スグリセロ-ルモノオクタン酸塩；ポリアルギニン；ポリエチレン；ポリプロピレン；ポリエチレンオキシド；ポリ（エチレンテレフタル酸）；ポリ（ビニルイソブチルエ-テル）；ポリ（塩化ビニル）；およびポリウレタン。
また、腸溶性材料の組み合わせを用いるのであってもよい。いくつかの局面においては、該腸溶性材料はｐＨ５．５以上で迅速に溶解し、上部腸管における速溶性を提供する。例えば、該腸溶性材料は、メタクリル酸とメチルメタクリル酸の共重合体、およびメタクリル酸とアクリル酸エチルの共重合体から選択され得る。例えば、腸溶性ポリマ-は、ポリ（メタクリル酸共エチルアクリル酸）１：１（ＥＵＤＲＡＧＩＴ（商標）Ｌ３０Ｄ-５５およびＥＵＤＲＡＧＩＴ（商標）Ｌ１００-５５）である。
他の腸溶性コ-ティング剤の好適な例としては、蜜ろうおよびモノステアリン酸グリセリン；蜜ろう、シェラックおよびセルロ-ス；ならびにセチルアルコ-ル、マスチック樹脂およびシェラック；ならびにシェラックおよびステアリン酸；酢酸ポリビニルおよびエチルセルロ-ス；ならびにポリメタクリル酸エステル類（ＥＵＤＲＡＧＩＴ（商標）Ｌ３０Ｄ）の中性共重合体；メタクリル酸とメタクリル酸メチルエステルの共重合体、またはステアリン酸金属塩を含むポリメタクリル酸エステル類の中性共重合体が挙げられる。そのようなコ-ティング剤は、脂肪および脂肪酸、シェラックおよびシェラック誘導体ならびにセルロ-ス酸フタレ-ト類の混合物を含む；例えば、遊離カルボキシルを有するもの。
当該技術分野において公知であるように、腸溶性ポリマ-の柔軟性を増加させる、および脆性を改善する目的で、腸溶性ポリマ-に１種類以上の可塑剤を添加することができる。好適な可塑剤としては、例えば、クエン酸ブチル、クエン酸トリエチル、フタル酸ジエチル、セバシン酸ジブチル、ポリエチレングリコ-ル類（ＰＥＧ６０００などのＰＥＧ類）、クエン酸アセチルトリエチル、およびトリアセチンが挙げられる。一局面においては、該可塑剤はクエン酸トリエチルである。一部の腸溶性材料では柔軟であるため可塑剤を必要としないが、より脆性のポリマ-（例えば、ＥＵＤＲＡＧＩＴ（商標）Ｌ／Ｓシリ-ズ、ＥＵＤＲＡＧＩＴ（商標）ＲＬ／ＲＳ、およびＥＵＤＲＡＧＩＴ（商標）ＦＳ３０Ｄ）では可塑剤が効果的である；例えば、ポリ（メタクリル酸共エチルアクリル酸）１：１に対し、乾燥ポリマ-重量に基づいて、５重量％～３０重量％の範囲、および約８重量％～約１２重量％の範囲のクエン酸トリエチル。
特定の局面においては、当該技術分野において公知であるように、フィルムの粘着性を減少させ、凝集を防ぐ目的で、該腸溶性コ-ティング剤が、１種類以上の固着防止剤（抗接着剤）を含む。好適な固着防止剤としては、タルク、モノステアリン酸グリセリン、ヒュ-ムドシリカ（例えば、ＡＥＲＯＳＩＬ（商標）２００）、沈降シリカ（例えば、ＳＩＰＥＲＮＡＴ（商標）ＰＱ）、およびステアリン酸マグネシウムが挙げられるが、これらのみに限定されるものではない。固着防止剤は任意の好適な量で用いることができる；例えば、乾燥ポリマ-重量に基づいて、約１０重量％～１００重量％、約１０重量％～約５０重量％、約１０重量％～約３０重量％、または約１５重量％～約３０重量％の範囲で用いることができる。例えば、一局面においては、乾燥ポリマ-重量に基づいて、１５重量％～約３０重量％の範囲。
当該技術分野において公知であるように、基質湿潤性を増加させる目的、および／または懸濁液を安定化させる目的で、腸溶性コ-ティング混合物に１種類以上の界面活性剤を添加することもできる。界面活性剤としては、ポリソルベ-ト８０、ソルビタンオレイン酸モノエステル、およびドデシル硫酸ナトリウム、ならびに本明細書に記載の他の界面活性剤が挙げられる。
該腸溶性コ-ティングは、任意の好適な処理によって実施可能である。コ-ティング処理としては、例えば、パンコ-ティング、流動床コ-ティング、および乾式コ-ティング（例えば、加熱乾燥コ-ティングおよび静電乾燥コ-ティング）が挙げられる。溶媒を用いたパンコ-ティングおよび流体床コ-ティングは確立された処理法である。液体コ-ティングにおいては、腸溶性材料および任意選択的な添加剤（例えば、着色剤、可塑剤、固着防止剤）を、有機溶媒または水に混合して溶液または分散液を作成する。パンコ-タ-または流動床乾燥装置内で、該コ-ティング溶液またはコ-ティング分散液を噴霧して固形剤形としてから、熱風乾燥する。例えば、Ｗｕｒｓｔｅｒ流動床コ-ティングプロセスでは、流動床機器の底部からコ-ティング液を噴霧する。あるいは、を頂部噴霧で該コ-ティング液を用いる。特定の局面においては、接線方向噴霧を用いる。
用いる腸溶性材料の量は、所望の酸耐性および放出特性を達成するのに充分な量である。例えば、一局面においては、腸溶性コ-ティング剤の量は、米国薬局方第７１１節の遅延放出剤形に関する要件（ＵＳＰ３６-ＮＦ３１）を満たすので、０．１Ｎ ＨＣｌ中で２時間後に薬剤の１０．０重量％が放出されることはない。特定の局面においては、例えば、米国薬局方第７１１節（ＵＳＰ３６-ＮＦ３１）の溶解法を用いた場合には、該製剤は、ｐＨ６．８の緩衝液中において、２０分で少なくとも８０％の活性成分を放出する。
一局面においては、非コ-ティング粒子コアと比較した重量増加で測定した場合には、該腸溶性コ-ティング剤は、約１０％～４０％、または２５％～約３５％の範囲の量で存在する；あるいは、非コ-ティング粒子コアの重量に基づいて、約２５％～約３１％の範囲の重量増加、約２７％～約３１％の範囲の重量増加、または約２８．５％～約３１％の範囲の重量増加である。
該製剤はカプセル殻を含み得る。軟質および硬質のカプセル殻が公知である。一局面においては、該カプセル殻は硬質カプセル殻であり、例えば、ゼラチンカプセル殻または野菜ベ-スの硬質カプセル殻である。特定の局面においては、該カプセル殻は、１種類以上の本明細書に記載の腸溶性コ-ティング剤を含む。加速条件での保存中に、ゼラチンカプセルが崩壊することもある。したがって、特定の局面においては、該製剤は、ヒドロキシプロピルメチルセルロ-スのカプセル殻を含み得る。
胃における分解を防ぐ、あるいは遅延させるように、本発明の固形剤形を処方してもよい。本発明の用途に好適な制御放出製剤は、例えば、腸溶性コ-ティング剤を含むのであってもよく、あるいは表面に侵食が起こるように製剤化してもよい。
一局面にしたがえば、該固形経口剤形は、治療有効量の本開示の経口医薬組成物を含むが、ここで該固形経口剤形は、経口投与の場合に、約２５０秒～約６５０秒の崩壊時間を有している。別の一局面においては、経口投与の場合に、該崩壊時間は、約３５０秒～約５５０秒である。一局面においては、経口投与の場合に、該崩壊時間は６０秒超である。別の一局面においては、経口投与の場合に、該崩壊時間は４００秒超である。崩壊時間は、米国薬局方第７０１節に記載の方法を用いて水中で３７±２℃において測定することができる。
本開示の固形剤形（例えば、錠剤またはカプセル）は、腸溶性コ-ティング剤で被覆されていてもよい。該腸溶性コ-ティング剤が、該薬剤組成物または固形剤形の組成物の放出を遅延させるための主制御として働くのであってもよい。胃において、該腸溶性コ-ティング剤は無損傷のままであるため、固形剤から胃への放出が防止または遅延される。活性物質の放出は、該固形剤が腸に到達するまで遅延する。腸内に入れば、より高いｐＨで該活性物質の放出が起こる。腸溶コ-ティング剤としては、ヒドロキシプロピルメチルセルロ-スフタレ-ト、ヒドロキシプロピルメチルセルロ-スアセテ-トサクシネ-ト、ポリビニルアセタ-トフタレ-ト、セルロ-スアセタ-トトリメリテ-ト、セルロ-スアセタ-トフタレ-ト、ポリ（メタクリル酸-エチルアクリル酸）、およびポリ（メタクリル酸-メチルメタクリル酸）が挙げられるが、これらのみに限定されるものではない。本発明に準拠して利用し得るその他の腸溶性コ-ティング剤は、米国特許第５，８５１，５７９号に記載がある；本参考文献は、その内容全体が参照として本明細書に組み入れられる。
本開示の一局面においては、該腸溶性コ-ティングを、錠剤または他の剤形の全体に用いる。一局面においては、該腸溶性コ-ティングを、多粒子システム（マイクロ粒子および／またはナノ粒子を含むシステムなど）に用いる。
本開示の固形剤は、錠剤（または他の剤形）表面から侵食が起こるように製剤化するのであってもよく、あるいは該多粒子システム（例えば、マイクロ粒子を含むシステム）の表面において侵食が起こるように製剤化してもよい。これら表面侵食性製剤は、崩壊よりもその表面から緩徐に溶解が起こる。表面侵食の速度を制御することによって、該固形剤の活性物質および薬剤成分の放出を遅延させることができる。該表面侵食性製剤は、固形経口剤が腸に到達するまでは、活性物質および薬剤成分の実質的放出が起こらないように、製剤化することができる。
いくつかの局面においては、本開示の固形剤はまた、ヌクレア-ゼ阻害剤のような保護剤を含むことができる。いくつかの局面においては、該ヌクレア-ゼ阻害剤はアウリントリカルボン酸を含む。いくつかの局面においては、該ヌクレア-ゼ阻害剤はＲＮＡｓｉｎなどの広域特異性ヌクレア-ゼ阻害剤を含む。いくつかの局面においては、該ヌクレア-ゼ阻害剤は、ＧＳ-６６２０、ＩＤＸ１８４、ＰＳＩ-７７７７、ＰＳＩ-９３８、ＲＧ７１２８、ＴＭＣ６４９１２８、またはＡＢＴ-０７２を含む。
いくつかの局面においては、本開示の固形剤はまた、ＧａｌＮＡｃコンジュゲ-ト部分の分解を防ぐ、あるいは減少させる保護剤を含み得る。いくつかの局面においては、該保護剤は、該オリゴマ-からＧａｌＮＡｃコンジュゲ-ト部分が切断されるのを防止する、あるいは減少させる。いくつかの局面においては、該保護剤は、該ＧａｌＮＡｃ部分におけるＮ-アセチルガラクトサミンユニットのうちの１つ以上の切断または分解を防止する、あるいは減少させる。
いくつかの局面においては、本開示の固形剤はまた、制酸化合物を含み得る。用語「制酸化合物」は、胃酸（例えば、水溶液中のＨＣｌ）を中和可能な薬学的に許容可能な任意の化合物を指すが、好ましくはここで１モルの制酸化合物は、少なくとも０．５モルのＨＣｌを中和可能であり、またより好ましくは少なくとも１モルのＨＣｌを中和可能である。本明細書に記載される、治療活性物質（例えば、ＣＩＶＩ００８単独、またはスタチンなどの第２の薬剤と併用する）、経口送達剤（例えば、ＳＮＡＣまたは５-ＣＮＡＣ）およびプロテア-ゼ阻害剤は、本発明のいくつかの実施態様においては、胃酸を中和するある程度の能力を示すこともあるが、「制酸化合物」という表現の範疇からは除外される。
１種類以上の制酸化合物（本明細書に記載される開示の局面のいずれかに準拠する）に関連して本明細書に記載される局面のうちのいずれか１つにおいて利用されてもよい制酸化合物の例としては、炭酸カルシウム、グルコン酸カルシウム、クエン酸カルシウム、炭酸ナトリウム、重炭酸ナトリウム、グルコン酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、水酸化ナトリウム、炭酸カリウム、重炭酸カリウム、グルコン酸カリウム、クエン酸カリウム、水酸化カリウム、炭酸マグネシウム、グルコン酸マグネシウム、クエン酸マグネシウム、水酸化マグネシウム、酸化マグネシウム、炭酸アルミニウム、グルコン酸アルミニウム、クエン酸アルミニウム、および水酸化アルミニウムが挙げられるが、これらのみに限定されるものではない。
いくつかの局面においては、本開示の固形剤はまた、胃酸分泌阻害剤を含むのであってもよい。用語「胃酸分泌阻害剤」は、胃内への酸分泌を低下させる任意の薬剤を指すが、すでに分泌されている酸に対しては必ずしも効果を発揮するものではない。制酸薬成分に関連して本明細書に記載する局面のいずれかにおいて用いるのであってもよい胃酸分泌阻害剤の例としては、Ｈ２受容体拮抗薬（シメチジン、ファモチジン、ニザチジンおよびラニチジンなど）；およびプロトンポンプ阻害剤（オメプラゾ-ル、ランソプラゾ-ル、デクスランソプラゾ-ル、エソメプラゾ-ル、ラベプラゾ-ルおよびイラプラゾ-ルなどが挙げられるが、これらのみに限定されるものではない。
本開示の固形剤はまた酵素阻害剤を含んでいてもよい。固形剤の単位用量剤形に配合する酵素阻害剤は、酵素的分解に感受性であり得る該オリゴマ-または他の活性物質の分解を防ぎ得る。酵素阻害剤については、米国特許第６，４５８，３８３号に記載がある；本参考文献は、その内容全体が参照として本明細書に組み入れられる。酵素阻害剤の選択とレベルは毒性および阻害効力に基づくものであり、当業者には理解されるであろう。理論によって制約されることを意図するものではないが、阻害剤は単独で、あるいは組み合わせて下記のものとして機能し得るものと考えられる：
酵素の基質結合部位に結合し、それによって基質へのアクセスを妨害する競争的阻害剤；
基質と共に酵素部位に同時に結合し得るが、それらの結合部位は同一ではない、非競争的阻害剤；
および／または
必須金属イオンを酵素構造から欠落させる錯化剤であって、それによって酵素活性を消失させる、錯化剤。
いくつかの局面においては、本明細書に記載の組成物（組成物単位剤形を含む）のいずれかに含まれるプロテア-ゼ阻害剤は、少なくとも１種類のトリプシン阻害剤を含む。いくつかの局面においては、該プロテア-ゼ阻害剤は、本質的に１種類以上のトリプシン阻害剤から成る。
トリプシン阻害剤の例としては、ライ豆トリプシン阻害剤、アプロチニン、大豆トリプシン阻害剤、オボムコイドトリプシン阻害剤およびそれらの任意の組み合わせが挙げられるが、これらのみに限定されるものではない。いくつかの局面においては、該トリプシン阻害剤は、大豆トリプシン阻害剤を含む（ＳＢＴＩ）。いくつかの局面においては、該トリプシン阻害剤（および任意選択的には、該少なくとも１種類のプロテア-ゼ阻害剤）は、本質的にＳＢＴＩから成る。
いくつかの局面においては、該プロテア-ゼ阻害剤は、少なくとも１種類のセルピンを含む。いくつかの局面においては、該プロテア-ゼ阻害剤は、本質的に１種類以上のセルピンから成る。本明細書に記載の局面のいずれか一つにおいて用いてもよいセルピンの例としては、アルファ１-抗トリプシン、アンチトリプシン関連蛋白質、アルファ１-抗キモトリプシン、カリスタチン、蛋白質Ｃ阻害剤、コルチゾ-ル結合グロブリン、チロキシン結合グロブリン、アンジオテンシノ-ゲン、センテリン（ｃｅｎｔｅｒｉｎ）、蛋白質Ｚ関連プロテア-ゼ阻害剤、バスピン、単球／好中球エラスタ-ゼ阻害剤、プラスミノゲン活性化因子阻害剤-２、扁平上皮癌抗原-１（ＳＣＣＡ-１）、扁平上皮癌抗原-２（ＳＣＣＡ-２）、マスピン（ｍａｓｐｉｎ）、プロテア-ゼ阻害剤６（ＰＩ-６）、メグシン、セルピンＢ８（ＰＩ-８）、セルピンＢ９（ＰＩ-９）、ボマピン（ｂｏｍａｐｉｎ）、ユコピン、ハ-ピン／ヘッドピン（ｈｕｒｐｉｎ／ｈｅａｄｐｉｎ）、抗トロンビン、ヘパリン補助因子ＩＩ、プラスミノゲン活性化因子阻害剤１、神経膠由来ネキシン、色素上皮由来因子、アルファ２-抗プラスミン、補体１-阻害剤、４７ｋＤａ熱ショック蛋白質（ＨＳＰ４７）、ニュ-ロセルピンおよびパンクピン（ｐａｎｃｐｉｎ）が挙げられるが、これらのみに限定されるものではない。
いくつかの局面においては、該プロテア-ゼ阻害剤は、少なくとも１種類のシステインプロテア-ゼ阻害剤を含む。いくつかの局面においては、該プロテア-ゼ阻害剤は、本質的に１種類以上のシステインプロテア-ゼ阻害剤から成る。本明細書に記載の局面のいずれか一つにおいて用いてもよいシステインプロテア-ゼ阻害剤の例としては、１型シスタチン類、２型シスタチン類、ヒトシスタチンＣ、Ｄ、Ｓ、ＳＮ、およびＳＡ、シスタチンＥ／Ｍ、シスタチンＦ、および３型シスタチン類（キニノゲン類を含む）が挙げられるが、これらのみに限定されるものではない。
いくつかの局面においては、該プロテア-ゼ阻害剤は、少なくとも１種類のトレオニンプロテア-ゼ阻害剤を含む。いくつかの局面においては、該プロテア-ゼ阻害剤は、本質的に１種類以上のトレオニンプロテア-ゼ阻害剤から成る。本明細書に記載の局面のいずれか一つにおいて用いてもよいトレオニンプロテア-ゼ阻害剤の例としては、ボルテゾミブ、ＭＬＮ-５１９、ＥＲ-８０７４４６およびＴＭＣ-９５Ａが挙げられるが、これらのみに限定されるものではない。
いくつかの局面においては、該プロテア-ゼ阻害剤は、少なくとも１種類のアスパラギン酸プロテア-ゼ阻害剤を含む。いくつかの局面においては、該プロテア-ゼ阻害剤は、本質的に１種類以上のアスパラギン酸プロテア-ゼ阻害剤から成る。本明細書に記載の局面のいずれか一つにおいて用いてもよいアスパラギン酸プロテア-ゼ阻害剤の例としては、α２-マクログロブリン、ペプスタチンＡ、アスパラギン酸プロテア-ゼ阻害剤１１、アスパラギン酸プロテア-ゼ阻害剤１、アスパラギン酸プロテア-ゼ阻害剤２、アスパラギン酸プロテア-ゼ阻害剤３、アスパラギン酸プロテア-ゼ阻害剤４、アスパラギン酸プロテア-ゼ阻害剤５、アスパラギン酸プロテア-ゼ阻害剤６、アスパラギン酸プロテア-ゼ阻害剤７、アスパラギン酸プロテア-ゼ阻害剤８、アスパラギン酸プロテア-ゼ阻害剤９、ペプシン阻害剤Ｄｉｔ３３、およびプロテア-ゼＡ阻害剤３が挙げられるが、これらのみに限定されるものではない。
いくつかの局面においては、該プロテア-ゼ阻害剤は、少なくとも１種類のプロテア-ゼ阻害剤を含む。いくつかの局面においては、該プロテア-ゼ阻害剤は、本質的に１種類以上のメタロプロテア-ゼ阻害剤から成る。本明細書に記載の局面のいずれか一つにおいて用いてもよいメタロプロテア-ゼ阻害剤の例としては、アンジオテンシン-１変換酵素阻害ペプチド、抗出血因子ＢＪ４６ａ、ベ-タ-カゼイン、プロテア-ゼ阻害剤ＣｅＫＩ、毒メタロプロテイナ-ゼ阻害剤ＤＭ４３、カルボキシペプチダ-ゼＡ阻害剤、ｓｍｐｌ、ＩＭＰＩ、アルカリ性プロテア-ゼ、ラテキシン、カルボキシペプチダ-ゼ阻害剤、抗出血因子ＨＳＦ、テスティカン-３、ＳＰＯＣＫ３、ＴＩＭＰ１、メタロプロテイナ-ゼ阻害剤１、メタロプロテイナ-ゼ阻害剤２、ＴＩＭＰ２、メタロプロテイナ-ゼ阻害剤３、ＴＩＭＰ３、メタロプロテイナ-ゼ阻害剤４、ＴＩＭＰ４、推定メタロプロテイナ-ゼ阻害剤ｔａｇ-２２５、メタロプロテア-ゼの組織阻害剤、ＷＡＰ、ｋａｚａｌ阻害剤、免疫グロブリン、ならびにｋｕｎｉｔｚおよびＮＴＲドメイン含有蛋白質１が挙げられるが、これらのみに限定されるものではない。
また本明細書に記載の局面のいずれか一つにおいて用いてもよいプロテア-ゼ阻害剤の例としては、ＡＥＢＳＦ-ＨＣｌ、ε-アミノカプロン酸、α１-抗キモトリプシン、アンチパイン、アンチトロンビンＩＩＩ、α１-抗トリプシン、ＡＰＭＳＦ（４-アミジノフェニル-メタンスルホニル-フルオリド）、スプロチニン（ｓｐｒｏｔｉｎｉｎ）、ベンズアミジン、キモスタチン、ＤＦＰ（ジイソプロピルフルオロ-リン酸）、ロイペプチン、４-（２-アミノエチル）-ベンゼンスルホニルフルオリド塩酸塩、ＰＭＳＦ（フェニルメチルスルホニルフッ化物）、ＴＬＣＫ（１-クロロ-３-トシルアミド-７-アミノ-２-ヘプタノン）、ＴＰＣＫ（１-クロロ-３-トシルアミド-４-フェニル-２-ブタノン）、イソチオン酸ペンタミジン、ペプスタチン、グアニジウム、α２-マクログロブリン、亜鉛のキレ-ト剤、およびヨ-ド酢酸が挙げられるが、これらのみに限定されるものではない。
特定の局面においては、該錠剤またはカプセルは、胃の低ｐＨで溶解しないように、ｐＨ感受性コ-ティング剤でコ-ティングし得る。例えば、該薬剤が胃から排出されるまでは、ｐＨ感受性材料はさほど溶解しない。小腸のｐＨは次第に上昇して、十二指腸球部では約４．５から約６．５、小腸遠位部（回腸）では約７．２となる。小腸移動に要する時間である約３時間（例えば、２～３時間）に対応する予測可能溶解を提供し、そこで再現性のある放出が可能となるように、該コ-ティング剤が十二指腸のｐＨ範囲内で溶解する必要があり、また小腸内のｐＨ範囲で引き続き溶解する必要がある。したがって、腸溶性コ-ティング剤の量（厚さ）は、小腸内（例えば、小腸の近位部および中央部）での約３時間の移動時間経過中に実質的に溶解するに充分な厚さであることが必要となる。
いくつかの局面においては、ｐＨ感受性コ-ティング剤の特異的設計によって、本発明の医薬剤形は、対象、例えば、ヒト対象の空腸、例えば、空腸末端部において、その活性化合物を放出する。約５．５～約７．５、好ましくは約７．２～約７．３のｐＨ値で実質的に分解および／または溶解するｐＨ感受性ポリマ-から、好ましくは選択される腸溶性コ-ティング剤の特異的選択により、コ-ティング剤は、実質的に空腸で分解および／または溶解する。そのようなｐＨ感受性ポリマ-は、好ましくは、ヒドロキシプロピルメチルセルロ-ス（以降「ヒプロメロ-ス類」ともよぶ）およびメタクリル酸およびメタクリルメタクリル酸の陰イオン性共重合体から選択される。いくつかの局面においては、ヒドロキシプロピルメチルセルロ-スを含む、あるいはヒドロキシプロピルメチルセルロ-スから作成されるｐＨ感受性腸溶性コ-ティング剤は、ヒドロキシプロピルメチルセルロ-スアセテ-トサクシネ-トである。このタイプの市販製品は、ＡＱＯＡＴ（登録商標）、例えば、ＡＱＯＡＴ（登録商標）-ＨＦ（信越化学工業、千代田、日本）である。メタクリル酸およびメタクリルメタクリル酸の陰イオン性共重合体のタイプの他の局面においては、様々な種類のＥＵＤＲＡＧＩＴ（登録商標）ポリマ-もまた用いられる。ＥＵＤＲＡＧＩＴ（登録商標）は、Ｅｖｏｎｉｋ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ ＆ Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ ＧｍｂＨ（エッセン、ドイツ）の市販品である。いくつかの局面においては、ＥＵＤＲＡＧＩＴ（登録商標）ＦＳ３０Ｄが、該コ-ティング剤のｐＨ感受性ポリマ-として、あるいは少なくともその一部として利用される。
本開示のさらなる局面においては、異なるコ-ティング剤を組み合わせて用いることができる。一局面にしたがえば、該コ-ティング剤は、ヒドロキシプロピルメチルセルロ-スおよびメタクリル酸とメタクリルメタクリル酸との陰イオン性共重合体の組み合わせを含む、あるいはその組み合わせから該コ-ティング剤を作成する。いくつかの局面において、典型的には１種類のｐＨ感受性ポリマ-の副コ-ティング剤を第１層として用い、第２のｐＨ感受性ポリマ-のコ-ティング剤を第２層として該副コ-ティングの上に塗布する方法で、コ-ティング剤の組み合わせを用いる。例えば、該ｐＨ感受性コ-ティング剤は副コ-ティング剤を含むことができるが、ここで該副コ-ティング剤は、以下のものであるか、あるいは以下を含む：それぞれ、第１層としてヒドロキシプロピルメチルセルロ-ス、および該副コ-ティング上の第２層として、メタクリル酸とメタクリルメタクリル酸との陰イオン性共重合体を含む、あるいは同上から作成される第２のコ-ティング剤。さらなる局面においては、本発明の医薬経口剤形のコ-ティング剤は、メタクリル酸とメタクリルメタクリル酸との陰イオン性共重合体（ＥＵＤＲＡＧＩＴ（登録商標）など、例えば、ＥＵＤＲＡＧＩＴ（登録商標）ＦＳ３０Ｄ）を含む、あるいは同上から作成される第１層（副コ-ティング剤）を含むコ-ティング剤、およびヒドロキシプロピルメチルセルロ-ス（ＡＱＯＡＴ（登録商標）、より好ましくはＡＱＯＡＴ（登録商標）-ＨＦなど）を含む、あるいは同上から作成される第２層を含む。より好ましくは、メタクリル酸とメタクリルメタクリル酸との陰イオン性共重合体、例えば、ＥＵＤＲＡＧＩＴ（登録商標）（ＥＵＲＤＲＡＧＩＴ（登録商標）ＦＳ３０Ｄなど）が、ヒドロキシプロピルメチルセルロ-ス（ＡＱＯＡＴ（登録商標）、例えば、ＡＱＯＡＴ（登録商標）-ＨＦなど）よりも少ない量で存在する。換言すれば、このタイプの組み合わせの第１層の厚さは、この組み合わせの第２層の厚さよりも薄い。より具体的には、第１層と第２層との間の、量または厚さの比は、それぞれ典型的には、約１：１０～約１：５０、例えば、約１：２０～約１：３０の範囲である。
一局面においては、上記に概説されるように、本開示は、小型の、好ましくは最大寸法が３ｍｍ未満、より好ましくは最大寸法が約０．６ｍｍ～約１．７ｍｍの特定医薬品剤形を提供する。そのような小型剤形は、便宜的に顆粒またはペレットの形態を取るのであってもよい。本発明の小型剤形は、対象の胃の中で液体のような挙動を示す利点があり、本発明の医薬経口剤が腸管内への速やかな定常的進入を引き起こすので、対象の空腸、好ましくは、対象の空腸末端部（すなわち、遠位部）の標的バ-スト放出領域へより一定した輸送を達成する。
本開示の他の局面においてはまた、該医薬経口剤形はより大型であり、すなわち、剤形の最大寸法が約３ｍｍ以上である形態であって、該対象が良好に嚥下し得る剤形となるように、当業者が容易に選択できる上限サイズである点が、好都合であろう。本発明の医薬経口剤形の典型的な範囲は、約３～約１０ｍｍの最大寸法を有する剤形である。この範囲は、ｍｍ単位の全ての整数、すなわち、３、４、５、６、７、８、９および１０ｍｍ、ならびにその小数点以下を含む数をも含むものと理解されたい。
ゼラチンは、酸またはアルカリによる動物コラ-ゲンの部分的加水分解で取得することもできる精製蛋白質画分の混合物である。酸加水分解処理はＡ型とよばれ、他方、アルカリ加水分解はＢ型とよばれる。ゼラチンは、分子量１５，０００～２５０，０００の範囲となり得るアミノ酸で構成される直鎖状ポリマ-である。本明細書中の用語「ゼラチン」は、動物コラ-ゲンの酸加水分解物およびアルカリ加水分解物を含む。
コ-ティング剤、懸濁化剤、錠剤の結合剤、および／または増粘剤など、様々な機能を発揮する目的で、ゼラチンを本発明の製剤に利用してもよい。水中では、ゼラチンは膨潤して軟化するが、それ自体の重量の５～１０倍の水を吸収することができる。特定の局面においてゼラチンに代替として用いてもよい親水性の天然ポリマ-および合成ポリマ-が複数存在する。例えば、（ａ）アルギン酸、硫酸デキストラン、またはペクチンなどの陰イオン性ポリマ-；（ｂ）キトサンまたはポリリジンなどの陽イオン酸；（ｃ）カルボキシルメチルキチンまたはフィブリンなどの両親媒性ポリマ-；または（ｄ）デキストラン、アガロ-ス、またはプルランなどの中性ポリマ-。
本明細書中の用語「ゼラチン」は、ゼラチンおよびゼラチン代替物を含むが、そのようなゼラチン代替物については、レミントンの製薬科学第１６版（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ， １６ｔｈ ｅｄ．）」（Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ， Ｅａｓｔｏｎ， Ｐａ． （１９８０））の１２４５ペ-ジおよび１５７６～１５８２ペ-ジに開示されている；本参考文献は、その内容全体が参照として本明細書に組み入れられる。用語「ゼラチン」はまた、以下に開示の組成物をも含む：
米国特許第６，０９０，９１５号、米国特許第４，０４３，９９６号、米国特許第４，０６４，００８号、米国特許第４，１７６，１１７号、米国特許第４，８８９，９２０号、米国特許第４，３７４，０６３号、米国特許第５，２１０，１８２号、米国特許第４，２３２，４２５号、米国特許第４，４０２，８７３号、米国特許第４，４２７，５８３号、米国特許第５，０９３，４７４号、米国特許第５，２８８，４０８号、および米国特許第５，４５９，２４１号；これらの参考文献はそれぞれ、その内容全体が参照として本明細書に組み入れられる。
本明細書中の用語「ゼラチン」は、ゼラチン代替物およびゼラチン代用物をも含む。一般的に、そのようなゼラチン代用物は、ゼラチンの均一組成および本質的な特性すべてを有する材料（例えば、野菜材料）であって、容易に取得可能な材料から調製することができる。軟質ゲルフィルムおよび軟質ゲルカプセルの製造においては、該軟質ゲル組成物は、好ましくは、湿潤フィルム強度および乾燥フィルム強度が良好であること、冷水、油、およびアルコ-ルに不溶性、温水に溶解性、温度および圧力についての密閉性、フィルム透明度、フィルム柔軟性、可食性、封入する薬剤または他の材料に対して不活性であること、および温液からゲルに迅速硬化することなどの特性を含む。
一ゼラチン代替物は、加工でんぷんおよびワキシ-でんぷん；ガム；および米国特許第６，３７５，９８１号に開示されるような可塑剤から選択されるでんぷん材料を含むフィルム形成組成物である；本参考文献は、その内容全体が参照として本明細書に組み入れられる。加工でんぷんまたはワキシ-でんぷん、好ましくは約１未満のデキストロ-ス当量（ＤＥ）を有するものであり、およびより好ましくは測定可能なＤＥを有していないものである。この組成物は、１００％ゼラチン不含であり得るが、必ずしも１００％ゼラチン不含である必要はない。したがって、該組成物は、ゼラチン代替物として、またはゼラチン製剤の増量剤として用いることができる。
他のゼラチン代替物は、米国特許第６，４４０，４８０号に開示されるような小麦繊維ゲルである；本参考文献は、その内容全体が参照として本明細書に組み入れられる。小麦繊維ゲルは、小麦繊維の熱処理／物理的処理によって調製される。超微粒子を高比率で含む産物を得る小麦原料処理に、特殊粉体化技術を用いる。該産物をマルトデキストリンと混合することによって、特段の改良が得られる。このようにして取得される産物は、ＦＭＣ Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒ（フィラデルフィア、ペンシルベニア州）によってＶＩＴＡＣＥＬ（登録商標）の商品名で販売されている。この産物は水に容易に分散する乾燥粉末である。その分散液を撹拌することによって、せん断力によってゲルが形成される。小麦繊維ゲルは、ヨ-グルトまたはアイスクリ-ムにおけるゼラチン代替物として用い得ることが報告されている（Ｉ． Ｉ． Ｂｏｌｌｉｎｇｅｒ、Ｆｏｏｄ Ｍａｒｋｅｔｉｎｇ ＆ Ｔｅｃｈｎ． Ｏｃｔｏｂｅｒ １９９５、４-６）。
カラギ-ナンはさらに別のゼラチン代替物である。カラギ-ナンは、天然の親水コロイド、すなわち海藻に由来する多糖親水コロイドである。カラギ-ナンは、大幅な数の枝または置換を含まない反復糖ユニットの直鎖状糖質ポリマ-を含む。
実施例
オリゴヌクレオチドは、ホスホロアミダイトによるアプロ-チを用い、ＥＸＰＥＤＩＴＥ（商標）８９００／ＭＯＳＳ合成機（複数オリゴヌクレオチド合成システム）またはＯＬＩＧＯＭＡＫＥＲ（商標）４８で、ウリジンユニバ-サル支持体により、それぞれ４μモルまたは１μモルスケ-ルで合成した。合成終了時に、水性アンモニアを用いた固体支持体からのオリゴヌクレオチド切断処理を、６０℃で５～１６時間行った。逆相ＨＰＬＣ（ＲＰ-ＨＰＬＣ）または固相抽出で、そのオリゴヌクレオチドを精製し、ＵＰＬＣで特徴付けを行い、さらにＥＳＩ-ＭＳで分子量の確認を行った。さらなる詳細については以下を参照のこと。
オリゴヌクレオチドの伸長
β-シアノエチルホスホロアミダイト類、（ＤＮＡ-Ａ（Ｂｚ）、ＤＮＡ-Ｇ（ｉｂｕ）、ＤＮＡ-Ｃ（Ｂｚ）、ＤＮＡ-Ｔ、ＬＮＡ-５-メチル-Ｃ（Ｂｚ）、ＬＮＡ-Ａ（Ｂｚ）、ＬＮＡ-Ｇ（ｄｍｆ）、ＬＮＡ-ＴまたはＣ６-Ｓ-Ｓ-Ｃ６リンカ-）のカップリングは、０．１Ｍの５’-Ｏ-ＤＭＴ保護アミダイトのアセトニトリル溶液、および活性化因子としてＤＣＩ（４，５-ジシアノイミダゾ-ル）のアセトニトリル溶液（０．２５Ｍ）を用いて実施した。最終サイクルとして、ＤＣＭ中で市販のＣ６結合コレステロ-ルホスホロアミダイト０．１Ｍを用いた。ホスホロチオエ-ト結合導入のためのチオ-ル化をキサンタンヒドリド（アセトニトリル／ピリジン９：１中で０．０１Ｍ）を用いて実施した。ＴＨＦ／ピリジン／水７：２：１中で０．０２Ｍのヨウ素を用いてホスホジエステル結合を導入した。残りの試薬は、オリゴヌクレオチド合成に用いられる典型的な試薬であった。固相合成後の複合体化では、固相合成の最後のサイクルにおいて市販のＣ６アミノリンカ-ホスホロアミダイトを用いた；脱保護を行い固体支持体から切断した後に、アミノ連結された脱保護オリゴヌクレオチドを単離した。標準合成法を用いた官能基の活性化により、該コンジュゲ-トを導入した。
ＲＰ-ＨＰＬＣによる精製
調製用ＲＰ-ＨＰＬＣにより、ＰＨＥＮＯＭＥＮＥＸ（商標）ＪＵＰＩＴＥＲ（登録商標）Ｃ１８ １０μ １５０ｘ１０ｍｍカラムで粗化合物を精製した。５ｍＬ／分の流速で、０．１Ｍ酢酸アンモニウム（ｐＨ８）およびアセトニトリルを緩衝液として用いた。回収した画分を凍結乾燥して、典型的には白色固体として精製化合物を得た。
略号
ＤＣＩ（４，５-ジシアノイミダゾ-ル）、ＤＣＭ（ジクロロメタン）、ＤＭＦ（ジメチルホルムアミド）、ＤＭＴ（４，４’-ジメトキシトリチル）、ＴＨＦ（テトラヒドロフラン）、Ｂｚ（ベンゾイル）、Ｉｂｕ（イソブチリル）、ＲＰ-ＨＰＬＣ（逆相高速液体クロマトグラフィ-）
合成した化合物は、本開示の図および表に示されている。
実施例１：新規ＰＣＳＫ９標的モチ-フの発見
ヒトおよび霊長類のＰＣＳＫ９に特異的な５２１種類の抗ＰＣＳＫ９アンチセンスオリゴヌクレオチド（いずれの場合にも、１０のＤＮＡを挟む３つのロック型核酸、すなわち、１６マ-のＬＮＡギャップマ-の設計となっている）を設計し合成した。ヒト細胞株１５ＰＣ３を、０．３μＭ濃度のモックまたはヒトＰＣＳＫ９を標的とするロック型核酸修飾オリゴヌクレオチドのいずれかと共に３日間インキュベ-トした。各抗ＰＣＳＫ９オリゴヌクレオチドについて独立した３回の実験で試験を行った。記載のような方法で、リアルタイムＰＣＲを用い、抽出ＲＮＡのＰＣＳＫ９ ｍＲＮＡレベルを定量化し、β-アクチンｍＲＮＡおよび図８の１２種類の模擬（モック）処置試料の平均レベルに対して正規化して表した（最も強力な分子のサブセットについての拡大図を図９に示す）。
実施例２：インビトロｍＲＮＡノックダウン
ヒト細胞株１５ＰＣ３を、０．００１２μＭ、０．０６μＭ、０．３μＭ、および１．５μＭ濃度のモックまたはヒトＰＣＳＫ９を標的とする配列番号：１～８のロック型核酸で修飾したオリゴヌクレオチドのいずれかと共に３日間インキュベ-トした。記載のような方法で、リアルタイムＰＣＲを用い、抽出ＲＮＡのＰＣＳＫ９ ｍＲＮＡレベルを定量化し、図１０の４種類の模擬（モック）処置試料の平均レベルに対して相対的に示した。各オリゴヌクレオチドについて、最大半量有効濃度（ＥＣ５０）として定量した効力を、２パラメ-タ-ロジスティック型のＨｉｌｌ方程式への最小二乗法によるフィッティングにより、ＥＣ５０＝推定値±標準偏差として決定した（下限を０％に固定、上限を１００％に固定している）。
実施例３：インビボでのアラニンアミノ転移酵素ＡＬＴのレベル
到着時体重がおおよそである２０ｇである４週齢の雌ＮＭＲＩマウス（Ｔａｃｏｎｉｃ、デンマ-ク）に、食塩水または、ヒトＰＣＳＫ９を標的とする配列番号：９～１６のロック型核酸修飾コレステロ-ル複合体化オリゴヌクレオチドを、７．５ｍｇ／ｋｇおよび１５ｍｇ／ｋｇの用量で静注した。投与から７日後にこれらのマウスを屠殺し、酵素アッセイ（Ｈｏｒｉｂａ ＡＢＸ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）を用いてアラニンアミノ転移酵素（ＡＬＴ）の血清レベルを決定した。５個体のマウスの各処置群に関して、平均値および標準偏差を算出し、食塩水処置マウスに対する相対的な平均レベルとして図１１に示した。コレステロ-ルと複合体化した分子の一部では、両方の濃度でＡＬＴ上昇が認められたが、全ての分子でそれが認められたのではなかった。肝臓における化合物の取り込みを増強するコンジュゲ-トとしてコレステロ-ルを用いた場合であっても、化合物のいくつか（配列番号：９および１０など）は、マウスにおいて臨床的に意味のあるようなＡＬＴの増加をもたらさなかった。
実施例４：非ヒト霊長類試験
この試験の主要な目的は、抗ＰＣＳＫ９ ＬＮＡ化合物のカニクイザルへの緩徐な単回ボ-ラス注射後から７週間にわたって選択脂質マ-カ-を調べ、サルにおける化合物の潜在的毒性を評価することであった。この試験に用いた化合物は、配列番号：１０、１３、１８、１９、２０、および２１であり、滅菌生理食塩水（０．９％）により初期濃度を０．６２５ｍｇ／ｍｌおよび２．５ｍｇ／ｍｌに調整した。
少なくとも２４か月齢の雄のサルを用い、水道水を自由摂取させ、動物当たり毎日１８０ｇのＭＷＭ（Ｅ）ＳＱＣ ＳＨＯＲＴ ｅｘｐａｎｄｅｄ ｄｉｅｔ（Ｄｉｅｔｅｘ Ｆｒａｎｃｅ、ＳＤＳ、サン＝グラティアン、フランス）を与えた。各ケ-ジにおいて給餌される食物の総量は、当日ケ-ジ内にいた動物の数に基づいて算出した。さらに、各動物に果物または野菜を毎日与えた。処置期間開始前の少なくとも１４日間の期間、試験条件に動物を順応させた。この期間に、処置前検査を実施した。これらの動物に配列番号：１０、１３、１８、および２１を単回用量０．２５ｍｇ／ｋｇ、１．０ｍｇ／ｋｇ、または２．５ｍｇ／ｋｇで、または配列番号：１９および２０を単回用量１．０ｍｇ／ｋｇまたは２．５ｍｇ／ｋｇで、それぞれ静脈内投与（静注）した。投与容量は０．４ｍＬ／ｋｇであった。群当たり２個体の動物を用いた。
投与製剤を第１日目に単回投与した。処置後から７週間の期間、動物を観察し、第５１日目に動物を試験から解放した。第１日目は処置期間の第１日目に対応する。臨床観察および体重および（群当たりの）食物摂取について、試験前および試験経過中に記録を行った。
以下の時点で、採血を行い、分析を実施した：
Figure 2024500367000031
ＲＣＰは、通常の臨床病理学を意味し；ＳＢは肝臓安全性の生化学を意味し；ＰＫは薬物動態を意味し；ＯＡは他の分析を意味し；およびＬは脂質類を意味する。示される時点においてすべての生存動物に関して決定されたパラメ-タは、以下である：
完全生化学パネル（下の完全リスト）-第８日目、１５日目および５０日目；
肝臓安全性（ＡＳＡＴ、ＡＬＰ、ＡＬＡＴ、ＴＢＩＬおよびＧＧＴ単独）-第４日目、８日目、２２日目および３６日目；
および
脂質プロファイル（総コレステロ-ル、ＨＤＬ-Ｃ、ＬＤＬ-Ｃおよびトリグリセリド類）およびＡｐｏ-Ｂ単独-第１日目、４日目、８日目、２２日目、２９日目、３６日目、および４３日目。血液（おおよそ、１．０ｍＬ）を（ＡＤＶＩＡ１６５０血液生化学分析器を用いて）リチウムヘパリンチュ-ブに採取した：Ａｐｏ-Ｂ、ナトリウム、カリウム、塩素、カルシウム、無機リン、グルコ-ス、ＨＤＬ-Ｃ、ＬＤＬ-Ｃ、尿素、クレアチニン、総ビリルビン（ＴＢＩＬ）、総コレステロ-ル、トリグリセリド類、アルカリホスファタ-ゼ（ＡＬＰ）、アラニンアミノ転移酵素（ＡＬＡＴ）、アスパラギン酸アミノ転移酵素（ＡＳＡＴ）、クレアチンキナ-ゼ、γ-グルタミルトランスフェラ-ゼ（ＧＧＴ）、乳酸脱水素酵素、総蛋白質、アルブミン、アルブミン／グロブリン比。
血液中のＰＣＳＫ９の分析
ＰＣＳＫ９分析のために、-８日目、-１日目、４日目、８日目、１５日目、２２日目、２９日目、３６日目、４３日目および５０日目に血液試料を採取した。各動物において、適切な静脈から静脈血（おおよそ、２ｍＬ）を採取して、血清分離チュ-ブ（ＳＳＴ）に入れ、室温で少なくとも６０±３０分間凝固させた。冷蔵条件下（＋４℃を維持するように設定された）、１０００ｇで１０分間、血液を遠心分離した。この血清を３本の個別チュ-ブに移し、ＣｉｔｏｘＬＡＢ（フランス）にてＥＬＩＳＡ法（Ｃｉｒｃｕｌｅｘ Ｈｕｍａｎ ＰＣＳＫ９ ＥＬＩＳＡキット、ＣＹ-８０７９、カニクイザルの試料について検証済み）を用いた分析を行うまで-８０℃で保存した。
その他の分析
ＷＯ２０１１００９６９７には、ｑＰＣＲおよびＰＣＳＫ９ ｍＲＮＡ分析の方法が記載されている。その他の分析には、ＰＣＳＫ９蛋白質ＥＬＩＳＡ、血清Ｌｐ（ａ）ＥＬＩＳＡ分析（Ｍｅｒｃｏｄｉａ１０-１１０６-０１番）、組織および血漿のオリゴヌクレオチド分析（薬剤含量）、試料抽出（標準試料およびＱＣ試料）、およびＥＬＩＳＡによるオリゴヌクレオチド含量決定が含まれる。
配列番号：１０、１３、１８、１９、２０および２１の化合物について、投与前に観察した値と比較したＰＣＳＫ９発現の値を、以下の表に示す：
Figure 2024500367000032
ＰＣＳＫ９を標的とする化合物は、肝毒性の徴候も腎毒性の徴候も示さなかった。とりわけ、ＰＣＳＫ９-ＧａｌＮＡｃ化合物は、急速かつ非常に有効なＰＣＳＫ９下方制御をもたらし、それが長時間にわたって（本試験経過全体を通じて）維持され、該ＧａｌＮＡｃコンジュゲ-ト型化合物が迅速な初期ノックダウン、および長期間のノックダウンの両方に関してより有効であることが例証され、また非コンジュゲ-ト型親化合物および別の複合体化技術を用いた化合物（コレステロ-ル複合体化など）の両方と比べて、比較的低頻度で、かつより低用量で投与可能であることを示した。しかしながら、非コンジュゲ-ト型オリゴマ-を投与した場合にもノックダウンは観察された。したがって、両タイプの化合物は異なる治療用途を有し得る。例えば、一過性効果が所望の場合には、あるいは、例えば、負荷投与量の一部としての場合には、非コンジュゲ-ト型化合物を用いることができる。逆に、長時間効果を必要とする場合には、複合体化オリゴマ-を投与することができる。
配列番号：１８は、試験経過全体を通じて、ＰＣＳＫ９およびＬＤＬ-Ｃの急速かつ定常的な下方制御を与えた（２．５ｍｇ／ｋｇ用量の場合の３４日目を参照のこと；２．５ｍｇ／ｋｇの単回用量投与後から４８日間顕著なＰＣＳＫ９下方制御が観察され、その時点での血漿ＰＣＳＫ９蛋白質レベルは投与前の７１％であった）。
実施例５：ラットにおける肝毒性および腎毒性の評価
齧歯類において、本開示の化合物の毒性プロファイルを評価した。おおよそ８週齢のＷｉｓｔａｒ Ｈａｎ Ｃｒｌ：ＷＩ（Ｈａｎ）を用いた。この週齢では、雄はおおよその体重が２５０ｇであった。全動物に、ＳＳＮＩＦＦ Ｒ／Ｍ-Ｈペレット状維持食（ＳＳＮＩＦＦ Ｓｐｅｚｉａｌｄｉａｔｅｎ ＧｍｂＨ、ゾ-スト、ドイツ）およびボトル中の水道水（０．２２μｍフィルタ-で濾過したもの）を自由摂取させた。用いた（皮下投与）用量レベルは、１０ｍｇ／ｋｇ／用量および４０ｍｇ／ｋｇ／用量であり、第１日目および第８日目に投与を行った。第１５日目に動物を安楽死させた。尿試料および血液試料を第７日目および第１４日目に採取した。第１４日目に臨床病理学的評価を実施した。試験前、投与の第１日目、および剖検の１週間前に、体重を測定した。群当たりの食物摂取を毎日評価した。６時間の絶食後に、尾静脈から血液試料を採取した。以下の血清分析を実施した：赤血球数、平均細胞容積、血中血球容積、ヘモグロビン、平均赤血球ヘモグロビン濃度、血小板数、白血球数、細胞形態に基づく白血球数百分率、網状赤血球数、ナトリウム、カリウム、塩素、カルシウム、無機リン、グルコ-ス、尿素、クレアチニン、総ビリルビン、総コレステロ-ル、トリグリセリド類、アルカリホスファタ-ゼ、アラニンアミノ転移酵素、アスパラギン酸アミノ転移酵素、総蛋白質、アルブミン、およびアルブミン／グロブリン比。
尿検査も実施した。以下のパラメ-タについて測定した：
α-ＧＳＴ、β-２ミクログロブリン、カルビンジン、クラステリン、シスタチンＣ、ＫＩＭ-１、オステオポンチン、ＴＩＭＰ-１、ＶＥＧＦ、およびＮＧＡＬの発現。７種類の被検物質（カルビンジン、クラステリン、ＧＳＴ-α、ＫＩＭ-１、オステオポンチン、ＴＩＭＰ-１、およびＶＥＧＦ）を、パネル１（ＭＩＬＬＩＰＬＥＸ（登録商標）ＭＡＰラット腎毒性磁気ビ-ズパネル１、ＲＫＴＸ１ＭＡＧ-３７Ｋ）で定量した。３種類の被検物質（β-２ミクログロブリン、シスタチンＣ、リポカリン-２／ＮＧＡＬ）を、パネル２（ＭＩＬＬＩＰＬＥＸ（登録商標）ＭＡＰラット腎毒性磁気ビ-ズパネル２、ＲＫＴＸ２ＭＡＧ-３７Ｋ）で定量した。ラット尿中におけるこれらバイオマ-カ-の濃度決定のアッセイは、Ｌｕｍｉｎｅｘ ｘＭＡＰ（登録商標）技術に基づくものであった。抗α-ＧＳＴ／β-２ミクログロブリン／カルビンジン／クラステリン／シスタチンＣ／ＫＩＭ-１／オステオポンチン／ＴＩＭＰ-１／ＶＥＧＦ／ＮＧＡＬ抗体でコ-ティングしたミクロスフェアを、２種類の異なる蛍光色素で色分けした。ＡＤＶＩＡ１６５０を用いて、尿中の尿蛋白質および尿クレアチニンについても測定した。定量パラメ-タについても測定した；すなわち、容積、（１０-Ｍｕｌｔｉｓｔｉｘ ＳＧ ｔｅｓｔ ｓｔｒｉｐｓ／Ｃｌｉｎｉｔｅｋ５００尿分析装置を用いて）ｐＨ、（屈折計を用いて）比重。半定量的パラメ-タ（１０-Ｍｕｌｔｉｓｔｉｘ ＳＧ ｔｅｓｔ ｓｔｒｉｐｓ／Ｃｌｉｎｉｔｅｋ ５００尿分析装置を用いて）：蛋白質、グルコ-ス、ケトン類、ビリルビン、亜硝酸塩類、血液、ウロビリノ-ゲン、沈降物の細胞学（顕微鏡検査による）。形態および色などの定性的パラメ-タについても判定した。
屠殺後に、体重、ならびに腎臓、肝臓、および脾臓の重量を測定し、体重に対する臓器の重量比を算出した。腎臓および肝臓の試料を採取して、凍結するか、あるいはホルマリンで保存した。顕微鏡分析を実施した。
ＫＩＭ-１（腎組織損傷バイオマ-カ-）の発現デ-タを図１５に示す。このデ-タは、配列番号：４を除く全ての分子で、配列番号：１（ＳＰＣ５００１）の場合よりも低い尿ＫＩＭ-１シグナルを与えることを示しており、このことは以前に特徴付けが成されている元々の非コンジュゲ-ト型分子よりも腎臓安全性が改善されることを実証している。配列番号：２および配列番号：３の非コンジュゲ-ト型オリゴマ-の両方、ならびにそれらに対応するＧａｌＮＡｃコンジュゲ-ト型、配列番号：１８および配列番号：１９にも腎毒性がないことが示され、このことは、腎毒性の欠如がＧａｌＮＡｃの存在に起因するものではないことを示している。したがって、このデ-タは、予想外ではあるが、配列番号：１（ＳＰＣ５００１）の長さを２核酸塩基増やすことによって腎毒性が消失したことを示している。余分な２塩基の付加が該オリゴマ-と該標的部位との間の相互作用強度を増加させたので、実際のところ、当業者であれば逆の効果を予想するであろう。
実施例６：開裂可能リンカ-の分析
異なるＤＮＡ／ＰＯ-リンカ-を有するＦＡＭ（フルオレセインアミダイト）標識アンチセンスオリゴマ-（ＡＳＯ）を、Ｓ１ヌクレア-ゼ抽出物（下の表）、腎臓または腎臓のホモジネ-トまたは血清のいずれかにおけるインビトロ切断に供した。
Figure 2024500367000033
大文字はＬＮＡヌクレオシド（ベ-タ-Ｄ-オキシＬＮＡなど）であり、小文字はＤＮＡヌクレオシドである。下付文字ｓは、ホスホロチオエ-トによるヌクレオシド間結合を表す。ＬＮＡシトシンは、任意選択的に５-メチルシトシンであってもよい。ＦＡＭコンジュゲ-ト部分を図６に示し、複合体化分子を図７に示す。
１００μＭの異なるＤＮＡ／ＰＯ-リンカ-を有するＦＡＭ標識ＡＳＯをヌクレア-ゼ緩衝液のＳ１ヌクレア-ゼ（６０Ｕ／１００μＬ）による２０分間および１２０分間のインビトロ切断に供した（Ａ）。緩衝液にＥＤＴＡを添加することによって、酵素活性を停止させた。次いで、この溶液を、Ｄｉｏｎｅｘ ＤＮＡｐａｃ ｐ-１００カラムを用いたＤｉｏｎｅｘ Ｕｌｔｉｍａｔｅ ３０００によるＡＩＥ ＨＰＬＣ分析（ｐＨ７．５で１０ｍＭ～１Ｍの範囲の過塩素酸ナトリウムの勾配）に供した。切断オリゴヌクレオチドおよび非切断オリゴヌクレオチドの含量を、６１５ｎｍの蛍光検出器および２６０ｎｍのＵＶ検出器の両方を用いて標準に対して決定した。
Figure 2024500367000034
ＰＯリンカ-（または、本明細書において領域Ｂとよばれる）によって、コンジュゲ-ト部分（またはグル-プＣ）の切断が起こった。このリンカ-の長さおよび／または配列組成の両方を、領域Ｂの核酸分解切断に対する感受性の調節に利用することが可能であった。ヌクレア-ゼＳ１抽出物を用いた領域Ｂ（例えば、ＤＮＡ／ＰＯ-リンカ-）の配列選択で２０分後に観察されるように、ＤＮＡ／ＰＯ-リンカ-の配列を選択することによって開裂速度調節が可能であった。したがって、ＤＮＡ／ＰＯ-リンカ-の特定配列選択は、血清および標的組織の細胞における開裂レベルを調節するためにも利用することができる。
肝臓および腎臓のホモジネ-トならびに血清は、配列番号：３５のオリゴマ-の場合に、２００μｇ／ｇ組織の濃度のスパイクを呈した。ＮＭＲＩマウスから採取した肝臓および腎臓の試料を、均一化緩衝液（０．５％イゲパ-ルＣＡ-６３０、２５ｍＭ Ｔｒｉｓ（ｐＨ８．０）、１００ｍＭ ＮａＣｌ（１Ｎ ＮａＯＨでｐＨ８．０に調整））中でホモジナイズした。このホモジネ-トを３７℃で２４時間インキュベ-トし、その後にホモジネ-トのフェノ-ル-クロロホルム抽出を行った。肝臓および腎臓の抽出物における、ならびに血清における切断および非切断オリゴマ-コンジュゲ-トの含量を、上記に開示のＨＰＬＣ法を用いて標準に対して決定した。
Figure 2024500367000035
ＰＯリンカ-（または、本明細書において領域Ｂとよばれる）の存在によって、肝臓または腎臓のホモジネ-ト中では、コンジュゲ-ト部分（またはグル-プＣ）が切断されたが、血清中ではそのような切断は起こらなかった。実施例６に示されるアッセイでの切断感受性は、リンカ-が生体内開裂可能であるか否か、または生理学的に不安定であるか否かの判定に用いることができる。上記のアッセイにおける切断は、開裂可能リンカ-のみの切断を指す；すなわち、該オリゴマ-または領域Ａは機能的に無損傷のままであることが必要である（すなわち、分解が起こってはならない）。
実施例７：コレステロ-ルコンジュゲ-トによるインビボでのＰＣＳＫ９ ｍＲＮＡノックダウン
単回用量の食塩水または１０ｍｇ／ｋｇの非コンジュゲ-ト型ＬＮＡ-アンチセンスオリゴヌクレオチド（配列番号：４０）または異なるリンカ-によってコレステロ-ルと複合体化したＬＮＡアンチセンスオリゴヌクレオチドを上記と等モル量でＮＭＲＩマウスに注射し、以下の表にしたがい第１日目～第１０日目に屠殺した：
Figure 2024500367000036
肝臓および腎臓からＲＮＡを単離し、ＰＣＳＫ９ ｍＲＮＡノックダウンを分析するためにＰＣＳＫ９特異的プライマ-およびプロ-ブを用いたｑＰＣＲに供した。その結果を図１４に示す。
ＰＣＳＫ９ ＬＮＡアンチセンスオリゴヌクレオチドと複合体化した（コンジュゲ-ト型）コレステロ-ルであって、ホスホジエステル-バックボ-ンを有する２種類のＤＮＡ（配列番号：４２および配列番号：４３）で構成されるリンカ-を有するコンジュゲ-ト型コレステロ-ルは、非コンジュゲ-ト型化合物（配列番号：４０）と比較して、ならびに安定リンカ-（配列番号：４１）を有するコレステロ-ルコンジュゲ-トと比較して、肝臓におけるＰＣＳＫ９ノックダウンの増強を示した（図１４）。
材料と方法
実験設計
Figure 2024500367000037
Figure 2024500367000038
薬剤投与
上の表にしたがって、到着時おおよそ２０グラムのＮＭＲＩ雌動物に、食塩水に処方した本開示の化合物または食塩水単独を１０ｍｌ／ｋｇ体重（第０日目の体重に基づく）で静注投与した。
肝臓および腎臓の組織試料採取
７０％ＣＯ２／３０％Ｏ２で動物に麻酔を行った後、頸椎脱臼により屠殺した。大きな肝葉の半分および１つの腎臓を細かく刻み、ＲＮＡｌａｔｅｒに浸漬した。
ＭａｇＮａ Ｐｕｒｅ ９６細胞ＲＮＡ大容量キット（Ｒｏｃｈｅカタログ番号：５４６７５３５００１）を用いて、製造元の指示にしたがい、ＭａｇＮＡ Ｐｕｒｅ ＬＣ ＲＮＡ単離組織緩衝液（Ｒｏｃｈｅカタログ番号：０３６０４７２１００１）の存在下でビ-ズ式ホモジナイズを用いてホモジナイズした組織の最大１０ｍｇから、全ＲＮＡを抽出した。
第１鎖合成はＡｍｂｉｏｎの逆転写酵素試薬を用いて製造元の指示にしたがい実施した。
各試料について、ＲＮａｓｅ不含Ｈ２Ｏを用いて０．５μｇの全ＲＮＡを１０．８μｌに調整し、２μｌのランダムデカマ-（５０μＭ）および４μｌのｄＮＴＰミックス（各２．５ｍＭのｄＮＴＰ）と混合した；これを７０℃で３分間加熱した後、氷上で試料の急冷を行った。
２μｌの１０ｘ緩衝液ＲＴ、１μｌのＭＭＬＶ逆転写酵素（１００Ｕ／μｌ）および０．２５μｌのＲＮａｓｅ阻害剤（１０Ｕ／μｌ）を各試料に添加した後、４２℃で６０分間インキュベ-ションを行い、９５℃で１０分間加熱して酵素の不活性化を行った。次いで、この試料を４℃に冷却した。ｃＤＮＡ試料を１：５に希釈して、Ｔａｑｍａｎ Ｆａｓｔ Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ ＰＣＲ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ ２ｘ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓカタログ番号：４３６４１０３）およびＴａｑｍａｎ遺伝子発現アッセイ（ｍＰＣＳＫ９、Ｍｎ００４６３７３８＿ｍ１およびｍＡｃｔｉｎ ＃４３５２３４１Ｅ）を用いて製造元のプロトコルにしたがいＲＴ-ＱＰＣＲに供した；その処理は、Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ ＲＴ-ｑＰＣＲ機器（７５００／７９００またはＶｉｉＡ７）の高速モ-ドで行った。
実施例８：非ヒト霊長類による試験：複数回皮下（ｓ．ｃ．）注射
この非ヒト霊長類試験の目的は、化合物を皮下注射（ｓ．ｃ．）で投与した場合の反復投与による本明細書に開示の抗ＰＣＳＫ９化合物の効力と安全性を評価することであった。この試験に用いた化合物は、滅菌生理食塩水（０．９％）を用いて初期濃度０．６２５ｍｇ／ｍｌおよび２．５ｍｇ／ｍｌで調製した配列番号：２、３、１８、および１９である。
少なくとも２４か月齢の雌のカニクイザルを用い、水道水を自由摂取させ、動物当たり毎日１８０ｇのＯＷＭ（Ｅ） ＳＱＣ ＳＨＯＲＴ ｅｘｐａｎｄｅｄ ｄｉｅｔ（Ｄｉｅｔｅｘ Ｆｒａｎｃｅ、ＳＤＳ、サン＝グラティアン、フランス）を与えた。さらに、各動物に果物または野菜を毎日与えた。処置期間開始前の少なくとも１４日間の期間、動物を試験条件に順応させた。この期間に、処置前検査を実施した。
これらの動物に１週当たり１回で４週間にわたり０．５ｍｇ／ｋｇの用量（配列番号：２、３、１８、および１９）を皮下投与した；あるいは、４週間の期間にわたり全部で４回の注射を１．５ｍｇ／ｋｇ／注射（配列番号：１８および１９）で行った。投与容量は、０．４ｍＬ／ｋｇ／注射であった。群当たり６個体の動物を用いた。４回目でかつ最終回の投与後に動物を１週間観察した後、肝臓におけるａｐｏＢ転写物の制御、脂質パラメ-タ、肝臓および腎臓の組織学、ならびに肝臓および腎臓の組織分布を調べる目的で、半分の動物を屠殺した。第１日目は、処置期間の第１日目に対応する。臨床観察および体重および（群当たりの）食物摂取について、試験前および試験経過中に記録を行った。
下の表に示される時点で、血液および組織の採取を行い、分析を実施した：
Figure 2024500367000039
ＲＣＰは、通常の臨床病理学を意味し；ＳＢは肝臓安全性の生化学を意味し；ＰＫは薬物動態を意味し；ＯＡは他の分析を意味し；およびＬは脂質類を意味する。血液（おおよそ、１．０ｍＬ）は、（ＡＤＶＩＡ１６５０血液生化学分析器を用いて）リチウムヘパリンチュ-ブに採取した；ＡＤＶＩＡ１６５０血液生化学分析器を用いて、以下について分析を行った：ナトリウム、カリウム、塩素、カルシウム、無機リン、グルコ-ス、ＨＤＬ-Ｃ、ＬＤＬ-Ｃ、尿素、クレアチニン、総ビリルビン（ＴＢＩＬ）、総コレステロ-ル、トリグリセリド類、アルカリホスファタ-ゼ（ＡＬＰ）、アラニンアミノ転移酵素（ＡＬＡＴ）、アスパラギン酸アミノ転移酵素（ＡＳＡＴ）、クレアチンキナ-ゼ、γ-グルタミルトランスフェラ-ゼ（ＧＧＴ）、乳酸脱水素酵素、総蛋白質、アルブミン、およびアルブミン／グロブリン比。
血液の分析
ＡｐｏＢ分析のために、-８日目、-１日目、４日目、８日目、１５日目、２２日目、２９日目、３６日目、４３日目および５０日目に、群１～１６の動物のみ（すなわち、抗ＡｐｏＢ化合物で処置した動物）から血液試料を採取した。各動物において、適切な静脈から静脈血（おおよそ、２ｍＬ）を採取して、血清分離チュ-ブ（ＳＳＴ）に入れ、室温で少なくとも６０±３０分間凝固させた。冷蔵条件下（＋４℃を維持するように設定された）、１０００ｇで１０分間、血液を遠心分離した。この血清を３本の個別チュ-ブに移し、ＥＬＩＳＡによるＡｐｏＢ蛋白質分析まで-８０℃で保存した。
その他の分析
ＷＯ２０１０１４２８０５には、ｑＰＣＲおよびＡｐｏＢ ｍＲＮＡ分析の方法が記載されている。他の分析としては、血清Ｌｐ（ａ）ＥＬＩＳＡ分析（Ｍｅｒｃｏｄｉａ１０-１１０６-０１番）、組織および血漿のオリゴヌクレオチド分析（薬剤含量）、試料抽出（標準試料およびＱＣ試料）、およびＥＬＩＳＡによるオリゴヌクレオチド含量決定が挙げられる。
抗ＰＣＳＫ９オリゴヌクレオチドについて意図する薬理学は、循環におけるＰＣＳＫ９蛋白質（「血清ＰＣＳＫ９」）を低下させることによるＬＤＬコレステロ-ルの低下である。非コンジュゲ-ト型およびコンジュゲ-ト型はいずれも薬理学的効果を示したが、血清ＰＣＳＫ９およびＬＤＬコレステロ-ルの両方を試験した場合に（図１６および図１７）、該ＧａｌＮＡｃコンジュゲ-ト型分子は、非コンジュゲ-ト型分子に比較して効力の増強を示した。
図１６は、０．５ｍｇ／ｋｇ／注射で週４回の注射を行った非コンジュゲ-ト型の配列番号：２は、血清ＰＣＳＫ９およびＬＤＬコレステロ-ルに対して一過性効果を有するが、他方、同一ＬＮＡギャップマ-（配列番号：１８）のＧａｌＮＡｃコンジュゲ-トは、血清ＰＣＳＫ９およびＬＤＬコレステロ-ルの両方に長時間持続する強力な低下効果を発揮することを示している。配列番号：３および配列番号：１９の複数回の注射（図１７）について、デ-タを比較した場合にも上記と同様の関係が認められる；すなわち、非コンジュゲ-ト型分子の投与後に、一過性効果が観察され、また対応するＧａｌＮＡｃコンジュゲ-ト（配列番号：１９）を投与した場合に、血清ＰＣＳＫ９およびＬＤＬコレステロ-ルについて長時間持続する強力な下方制御が観察された。
血清ＰＣＳＫ９およびＬＤＬコレステロ-ルに対する配列番号：１８および１９の効果は、用量依存性の長期持続作用であり、最後の注射後から少なくとも７週間、平均ベ-スラインレベルよりも血清ＰＣＳＫ９およびＬＤＬコレステロ-ルが低下する（最終注射日は第２２日目であり、デ-タは第７１日目までの回復期間について示されている）。
最後の注射から１週間後に（すなわち、本試験の第２９日目）、肝臓および腎臓のオリゴヌクレオチド含量を分析した。標準曲線の作成に（複合体化した）配列番号：１８を用いた場合において、結果に何らの変化もないことを調べ、その後、配列番号：２および配列番号：１８（すなわち、ＧａｌＮＡｃに複合体化（コンジュゲ-ト）した配列番号：２）で処置した動物から得た試料についての標準曲線を作成する目的で、配列番号：２を用いたハイブリダイゼ-ションＥＬＩＳＡ（Ｌｉｎｄｈｏｌｍら、Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ． ２０１２ Ｆｅｂ；２０（２）：３７６-８１に記載されるような方法）により、オリゴヌクレオチドの含量を分析した。同様に、それらの試料のＥＬＩＳＡ分析に関する標準曲線の作成に（複合体化した）配列番号：１９を用いた場合において、結果に何らの変化もないことを調べ、その後、配列番号：３および配列番号：１９（すなわち、ＧａｌＮＡｃに複合体化（コンジュゲ-ト）した配列番号：２）の関する標準曲線を作成する目的で配列番号：３を用いた。
Figure 2024500367000040
上の表に示されるように、配列番号：２および配列番号：３の複合体化では、動物に１回／週で４週間皮下注射した場合の最後の注射から１週間後に、複合体化分子（配列番号：１８および配列番号：１９）に関して、対応する非コンジュゲ-ト型分子に比べてより高い肝臓／腎臓比になるという結果が得られた。
尿細管毒性の兆候が他の非コンジュゲ-ト型抗ＰＣＳＫ９分子で実証されており（図１５に示されるように、配列番号：１など）、また肝臓が抗ＰＣＳＫ９治療の標的臓器であるならば、肝臓／腎臓比がより高くなる場合には、非コンジュゲ-ト型の配列番号：２および３に比較して、配列番号：１８および１９のコンジュゲ-トでは安全性が向上することが予想される。しかしながら、図１５に示されるように、上の表のデ-タは、配列番号：１８および１９のコンジュゲ-トによる安全性強化を示しており、配列番号：２および配列番号：３のいずれもＫＩＭ-１増加を惹起せず、したがってこれらは腎臓に対する毒性を示さなかった。
図１６および図１８に示されるように、配列番号：１８および配列番号：１９を薬理学的に妥当なレベルで投与した。処置期間および回復期間の経過中の同一動物についての臨床化学的プロファイルは、肝臓の安全性パラメ-タにおいても腎臓の安全性パラメ-タにおいても臨床的に意味のある増加を示さなかった。
実施例９：ＣＩＶＩ００８：カニクイザルにおける、担体としてＳＮＡＣを用いたＣＩＶＩ００８の皮下または経口（カプセル）反復投与毒性および毒物動態学的試験
この試験の目的は、モ-リシャス由来のカニクイザルにおいて、ＣＩＶＩ００８の毒性および可逆性を評価すること、ならびに皮下経路で２週間毎に１回投与した場合（以前に試験を行っている）と比較した、経口カプセルで４２日間毎日投与した場合のＣＩＶＩ００８の薬理学、血漿曝露および標的内臓内蓄積を判定することであった。被験物質であるＣＩＶＩ００８は、動物およびヒトにおいて、ペプチドの経口生体可用性を増強可能であることが以前に示されているサルカプロザ-トナトリウム［ＳＮＡＣ、８-［（２-ヒドロキシベンゾイル）アミノ］オクタン酸ナトリウム］（製造元：ａｂｃｒ ＧｍｂＨ、Ｉｍ Ｓｃｈｌｅｈｅｒｔ １０、７６１８７カ-ルスル-エ、ドイツ；カタログ番号：ＡＢ３０４４０９）と共に処方された、ＰＣＳＫ９を標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチドである。この試験の目的は、ヒトのさらなる臨床試験のために、ＣＩＶＩ００８のカプセル投与に関する情報を提供することであった。この試験の模式的な説明が図２０に示されている。
群への帰属、試験設計および投与レベル
皮下および経口カプセル
Figure 2024500367000041
経口カプセル
ＣＩＶＩ００８（１０ｍｇ）／ＳＮＡＣ（１００ｍｇ）をサイズ４の硬質殻ゼラチンカプセルに充填し、均一乾式混合製剤として、これらを含むカプセルを製造した；充填後にカプセルを腸溶性コ-ティングした。薬剤物質ＣＩＶＩ００８は酸性分解に対して感受性であることが知られているので、腸溶性カプセルとして処方したＣＩＶＩ００８薬剤製品の妥当性を示す。無損傷カプセルがサルの幽門括約筋を容易に通過できるように、サイズ４のカプセル（密閉時の長さ１４．３ｍｍｘ外径５．０５ｍｍ）に封入することを選択した。
薬物動態および生体分布に関する結果
図２１に示されるように、それぞれ１０ｍｇのＣＩＶＩ００８と１００ｍｇのＳＮＡＣを含む２カプセルを動物に投与した結果、血漿中でのＣＩＶＩ００８濃度は測定可能なレベルであり、投与から３０分以内に平均Ｔｍａｘが達成された。ＳＮＡＣ担体不含で、２０ｍｇのＣＩＶＩ００８を含む単一カプセルを投与した対照動物の血漿中にはごく僅かのＣＩＶＩ００８しか認められないことから、ＳＮＡＣがＣＩＶＩ００８の取り込みに必要であることが分かる。
ＣＩＶＩ００８は、ＧａｌＮａｃ複合体化（コンジュゲ-ト）ＬＮＡ-ギャップマ-である。投与後１．５時間まで、ＨＬＰＣ分析で血漿試料にＣＩＶＩ００８が検出されたことから、これは親化合物の滞留時間を示し、該薬剤が消化管から無損傷で吸収されたことを実証している。それ以降の時点での試料は、親化合物および代謝産物（すなわち、不完全糖部分を含むオリゴヌクレオチド）の混合物の存在を示唆するより幅の広いピ-クを示した。
経口投与の場合には、ＣＩＶＩ００８は、対象において肝臓で初回通過効果を受けるので、肝臓での迅速吸収が起こるはずである（肝臓標的化ＧａｌＮＡｃ部分が存在することによる）。したがって、肝臓の吸収能よりも低用量では、吸収した薬剤の多くが肝臓に蓄積され、全身循環する薬剤はごく僅かであることが予想される。この予想は、ＳＱ（皮下）群およびＰＯ（経口）群における（投与期間の終わりに測定した）血漿ＡＵＣと肝臓内濃度の比較によって支持された。具体的には、ＳＱ（皮下）群の血漿ＡＵＣは、経口投与群（図２２）の血漿ＡＵＣよりも２～３桁高いことが認められたが、肝臓内濃度はＳＱ群とＰＯ群との間でおおよそ１桁異なるに過ぎなかった（図２３）。したがって、肝臓において標的を阻害するＲＮＡ治療薬を用いる場合には、経口投与と皮下投与または静注投与との間で血漿／肝臓曝露比が異なり、そのため非肝臓組織／血漿区画への曝露を大幅に低下させる手段が得られた；したがって、非標的組織における潜在的な安全性の問題が改善される。
薬物動態学的結果
１カプセルまたは２カプセルのＣＩＶＩ００８／ＳＮＡＣを４２日間毎日、経口投与することによって、主要標的ＰＣＳＫ９において、典型的には、２週間の投与後に認められる測定可能な減少が起こった。第３５／４２日目におけるＰＣＳＫ９の低下％の平均は、動物によって異なるものであったが、最大応答者ではベ-スラインと比較して６０％超のＰＣＳＫ９低下を達成した（図２４）。対照動物（ＣＩＶＩ００８単独、ＳＮＡＣ単独、および空のカプセル）における平均のＰＣＳＫ９低下は比較的小さかったが、このことは、活性群における大幅な減少がＣＩＶＩ００８のＳＮＡＣ媒介性吸収に起因するものであることを支持する。
ＰＣＳＫ９は、肝臓へのコレステロ-ル輸入を引き起こす細胞表面ＬＤＬ受容体を負に制御する。したがって、ＰＣＳＫ９を低下させることは、薬理学的にはＬＤＬ受容体の量を増加させるのであり、肝臓内への輸入の増加を引き起こし、血漿ＬＤＬ-コレステロ-ルの減少をもたらす。ＰＣＳＫ９のこの機能と矛盾なく、ＣＩＶＩ００８／ＳＮＡＣ媒介性のＰＣＳＫ９低下は、ＬＤＬ-ｃの測定可能な減少を引き起こしたが、これは投与から約３週間後に始まり第４週目から安定化した（図２５Ａ）。対照動物（ＣＩＶＩ００８単独、ＳＮＡＣ単独および空のカプセル）における、ＬＤＬ-ｃの低下は、試験全体を通じてベ-スライン値付近を変動するものであった（図２５Ｂ）。
図２３に示されるように、肝臓におけるＣＩＶＩ００８の濃度は回復期間中に低下したが、第３週の時点でも依然として測定可能量が存在していた。回復期間全体を通じて肝臓に薬剤が存在することと符合して、投与終了時のＬＤＬレベルは、投与から２週間後も維持されたが、回復期の終了時点で完全にベ-スラインに戻ることが予想された（図２６）。
毒性に関する結果
本試験は「試験検査の業務管理」基準で実施し、本試験全体を通じて（投与前、第１４日目、２９日目、４２日目、および回復期終了時）、下記の毒性パラメ-タのモニタ-を行った：
血液学
赤血球数、ヘモグロビン、ヘマトクリット、平均赤血球容積、平均赤血球ヘモグロビン、平均赤血球ヘモグロビン、濃度、赤血球分布幅、網状赤血球絶対数、血小板数、白血球数、好中球絶対数、リンパ球絶対数、単球絶対数、好酸球絶対数、好塩基球絶対数、大型非染色細胞の絶対数、血液塗抹。
臨床化学、ＰＣＳＫ９および脂質類
尿素窒素、クレアチニン、総蛋白質、アルブミン、グロブリン、［アルブミン：グロブリン］比、総ビリルビン、アスパラギン酸アミノ転移酵素、アラニンアミノ転移酵素、アルカリホスファタ-ゼ、γ-グルタミルトランスフェラ-ゼ、クレアチンキナ-ゼ、カルシウム、無機リン、ナトリウム、カリウム、塩素、高密度リポ蛋白質、低密度リポ蛋白質、超低密度リポ蛋白質、総コレステロ-ル、トリグリセリド類。
ＳＮＡＣと共に製剤化したＣＩＶＩ００８は、毒性学的に重要な臨床的観察の投与後兆候を示さず、充分忍容性であった。投与期間または回復期間において、動物のいずれにも臨床化学パラメ-タおよび血液学的マ-カ-の顕著な変化は認められなかった。
経口カプセル投与後の薬剤の影響を示唆するような臓器重量の変化はなかった。また、投与期間終了時および回復期間の終了時に局所的影響または全身性の影響を示唆するような肉眼解剖学的知見または顕微鏡的知見も全くなかった。特に、４２日間のＱＤ経口投与後の腸管（十二指腸、空腸、回腸および結腸）の全セグメントが測定可能濃度のＣＩＶＩ００８を含んでいたにもかかわらず、腸管のどのセグメントにも局所的組織病理学的変化は存在しなかった。
実施例１０：Ｎ-（５-クロロサリシロイル）-８-アミノカプリル酸ジナトリウムの調製
Figure 2024500367000042
Figure 2024500367000043
工程１
５-クロロ-２-ヒドロキシ-ベンズアミド（３０．０ｇ、９９．９％、１．０当量）、アセトニトリル（９０ｍＬ、３容）、ピリジン（１９．４ｇ、１．４０３当量）を反応槽に加え、その混合物を８～１６℃で１０～３０分間撹拌した。クロロギ酸エチル（２０．３ｇ、１．０７当量）を８～１６℃で反応槽に加え、その反応混合物を１０～１８℃で３０～６０分間撹拌した。次いで、混合物を加熱して還流し、８０～９０℃で４時間撹拌した。８０～９０℃未満の温度、減圧下（１バ-ル未満）で蒸溜し、この混合物を３．５容に濃縮した。次いで、反応槽にアセトニトリル（４５ｍＬ、１．５容）を加え、再び３．５容に濃縮してから、１８～２８℃に冷却した。水（６０ｍＬ、２容）を加えて、この混合物を１８～２８℃で１～３時間撹拌した。混合物を４～８℃に冷却し、沈殿を濾過によって回収し、その固形物を水（３０ｍＬ、１容）で洗浄した。湿潤な固形物を５８℃で６時間乾燥させて、６-クロロ-２Ｈ-１，３-ベンゾオキサジン-２，４（３Ｈ）-ジオン（３１．５ｇ、純度９２．６％）を９２．６％の粗収量で得た。
工程２
乾燥ジメチルアセトアミド（１５０ｍＬ、３容）、粒状炭酸ナトリウム（２５．１ｇ、１．０当量）、６-クロロ-２Ｈ-１，３-ベンゾオキサジン-２，４（３Ｈ）-ジオン（アッセイで補正後に５０．０ｇ、９３．４ｗ％、１当量）および８-ブロモオクタン酸エチル（アッセイで補正後に５６．８ｇ、９９．２ｗ％、０．９５当量）、および-０．３ＭＰａに減圧した。次いで、撹拌した混合物を７０℃で１４時間加熱した。次に、この混合物を３５～４５℃に冷却し、沈殿を濾過により回収した。湿潤な固形物を反応槽に加えた（これを反応槽１（Ｒ１）とよぶ）；他方、濾液は第２の反応槽に加えた（これを反応槽２（Ｒ２）とよぶ）。エタノ-ル（６０ｍＬ）をＲ１に加えて、湿潤固形物／エタノ-ルの混合物を３５～４５℃で１０～３０分間撹拌した。この混合物を濾過し、その濾液を既にＲ２に入っている濾液と合わせた。Ｒ２の溶液内容物を撹拌して２５～３０℃に冷却し、その溶液に水（１００ｍＬ、２容）を直接ゆっくりと添加した。この混合物を５～１０℃に冷却し、それを９．５時間保持した後に形成した沈殿を回収して、８-（６-クロロ-２Ｈ-１，３-ベンゾオキサジン-２．４（３Ｈ）-ジオニル）オクタン酸エチル（１００ｇ、純度９７．５％）を湿潤な固形物として得た。
工程３
水（２４０ｍＬ、３容）、水酸化ナトリウム（３０ｇ、３．３当量）および８-（６-クロロ-２Ｈ-１，３-ベンゾオキサジン-２．４（３Ｈ）-ジオニル）オクタン酸エチル（８３ｇ、１．０当量）を反応槽（反応槽１（Ｒ１））に添加し、２５℃で１０分間撹拌した。この撹拌した混合物を蒸溜により９８℃で３時間加熱した；この時点で、出発材料は既に消費されていた。次いで、反応混合物を２７℃に冷却した。隣の反応槽（反応槽２（Ｒ２））に、水（２４０ｍＬ）およびＨＣｌ（６６ｍＬ、３．５当量）を撹拌しながら加え、２０～２５℃に冷却した。上記の鹸化反応混合物（Ｒ１）を、５時間かけてゆっくりとＲ２に添加した；このプロセスは、二酸化炭素の放出と産物の沈殿物を伴うものであった。５０％水酸化ナトリウム溶液で、上記の混合物をｐＨ２～３に調整し、８℃で３時間撹拌した。濾過により産物を回収し水で洗浄した後、真空下で乾燥して、Ｎ-（５-クロロサリシロイル）-８-アミノカプリル酸（５-ＣＮＡＣ、６３ｇ、純度９５．７％）を８８．９％の粗収量で得た。
工程４
Ｎ-（５-クロロサリシロイル）-８-アミノカプリル酸（５-ＣＮＡＣ）（１．０ｇ、１．０当量）、水酸化ナトリウム（０．２６ｇ、２当量）および水（５ｍＬ、５容）を反応槽で混合し、５５℃で２時間撹拌した。その混合物を２０℃に冷却して、溶液を濾過して不溶性固形物を除去した。５０℃より低い温度で減圧下にて、濾液を濃縮し、その湿潤固形物を５０℃で１２時間乾燥させて、Ｎ-（５-クロロサリシロイル）-８-アミノカプリル酸ジナトリウム（１．１ｇ、純度９７．９％）を９６．５％の粗収量で得た。
実施例１１：ＣＩＶＩ００８：担体として５-ＣＮＡＣを用いたＣＩＶＩ００８の、カニクイザルにおける経口（カプセル）毒物動態学的試験
この試験の目的は、５-ＣＮＡＣ［Ｎ-（５-クロロサリシロイル）-８-アミノカプリル酸ジナトリウム］がＣＩＶＩ００８経口摂取を促進する能力を判定すること、およびモ-リシャス由来のカニクイザルに投与した場合に、最も効率的なＣＩＶＩ００８の経口摂取を提供するＣＩＶＩ００８／５-ＣＮＡＣカプセルの製造方法および投与パラダイムを判定することであった。この試験の目的は、ヒトにおけるさらなる臨床試験のために、ＣＩＶＩ００８カプセル投与に関する情報を提供することにあった。本試験の模式的概要を図２７に示す。
経口カプセル
下に概説するように、複数の異なるカプセル剤を製造した。
Figure 2024500367000044
試験の概要：総数１０個体のカニクイザル（雄５個体および雌５個体）それぞれに対して、第１週目の月曜日および水曜日に、グル-プＡカプセルを２カプセル投与した後、４日間の投与休止日とした。この月曜日と水曜日に投与するスキ-ムを、第２週目、３週目、５週目、６週目、７週目、８週目、１３週目、１４週目、１５週目および１７週目に継続したが、第２週目では投与時当たりグル-プＢカプセルを２カプセル用い、その他の各週で、投与時当たりグル-プＣ～グル-プＫを１カプセル用いた。投与期間中に、薬物動態学的解析のために、月曜日と水曜日の投与前、および投与から０．５時間後、１．５時間後、３時間後および５時間後に血液試料を採取した。臨床化学および血液学の試料（実施例１を参照のこと）を、試験前および試験の終わりに採取した。
薬物動態学的結果
図２８に示されるように、動物へのグル-プＡカプセル投与によって、血漿中でＣＩＶＩ００８が測定可能濃度に達し、投与後３０分以内に平均Ｔｍａｘに到達した。
担体としてＳＮＡＣを用いた同等用量のＣＩＶＩ００８と比較して（実施例９、図２１）、５-ＣＮＡＣ担体の利用では、ＡＵＣ０-５ならびにＣｍａｘの両方が増加した（図２９）；このことは、５-ＣＮＡＣが、ＣＩＶＩ００８の経口摂取を促進することにおいて、該２種類の担体のうちでより有効であることを示している。
本試験に用いたカプセルは、腸においてＣＩＶＩ００８／５-ＣＮＡＣのｐＨ依存性放出を促進する腸溶性コ-ティングが成されたものである。カプセルサイズをサイズ４（グル-プＡ）からサイズ０（グル-プＢ）に大きくしても、ＣＩＶＩ００８の平均血漿ＰＫプロファイルも平均Ｔｍａｘも変化しなかった；このことは、より大型の０のカプセルは、小型のサイズ４のカプセルと同一の速度論で胃から移動することができることを示している。
カプセルで送達した場合に、共処方製剤は、腸の送達部位において各構成成分の局所濃度を高めるが、これは共配合薬剤の取り込みを促進する担体の能力にとって重要である。したがって、１カプセルまたは２カプセルのいずれかで同等量の薬剤／担体を送達することは、薬剤吸収効率に影響を与え得る。図３０に示されるように、この事例がそれに該当する。血漿ＰＫプロファイルの速度論は非常に類似していたが、２０ｍｇのＣＩＶＩ００８／２００ｍｇの５-ＣＮＡＣを含む単一カプセル（グル-プＣカプセル）では、それぞれ半量の薬剤／担体を含む２つのカプセルで投与した同一量の薬剤／担体よりも、ＣｍａｘおよびＡＵＣ０-５がより高くなった。
５-ＣＮＡＣを一定用量に保ったままＣＩＶＩ００８の用量を増加させることによって、用量比例的にＡＵＣが増加し、最高血漿中濃度（Ｃｍａｘ）が２５ｍｇまで増加した。用量をさらに増加させると、ＡＵＣおよびＣｍａｘが用量比例増加以上になり、このことは、肝臓取り込みが飽和に達したことを示している（図３１）。
製造方法を、ＣＩＶＩ００８と５-ＣＮＡＣの乾式混合（図３２Ａ）からＣＩＶＩ００８と５-ＣＮＡＣの共溶解に変更し、これを凍結乾燥したが、この変更によってＣＩＶＩ００８薬剤の腸管吸収に影響は認められなかった（図３２Ｂ）。すなわち、カプセルを上記のいずれかの方法で製造した場合には、５ｍｇ～３０ｍｇの用量範囲にわたって、ＣＩＶＩ００８に関して非常に類似したＡＵＣおよびＣｍａｘのプロファイルが観察された。
実施例１２：ＣＩＶＩ００８：担体として５-ＣＮＡＣを用いた、カニクイザルにおけるＣＩＶＩ００８の経口（カプセル）薬理学的試験
この試験の目的は、毎日１回７週間投与した場合に、５-ＣＮＡＣ［Ｎ-（５-クロロサリシロイル）-８-アミノカプリル酸ジナトリウム］が血漿ＰＣＳＫ９を低下させる能力を判定することであった。非ヒト霊長類の肝臓におけるＣＩＶＩ００８の半減期は２～３週間なので、７週間の投与後には、肝臓内濃度がその定常状態レベルの８０％超に達すると予想される。
試験の概要
均一乾式混合製剤から乾式混合カプセル（２０ｍｇのＣＩＶＩ００８／２００ｍｇの５‐ＣＮＡＣ）を製造した；腸溶性コ-ティングしたサイズ０の硬質殻ゼラチンカプセルに充填を行った。総数１０個体のカニクイザル（雄５個体および雌５個体）それぞれに対して、４９日間の期間に、強制経口投与で毎日１回単一カプセルを投与した。本試験では、参照動物として非処置の２個体の動物（雄１個体および雌１個体）を含めた。投与期間の試験開始日と第４９日目に、薬物動態学的解析を目的として、投与前、および投与から０．５時間後、１．５時間後、３時間後および５時間後に血液試料を採取した。ＰＣＳＫ９および脂質の分析を目的として、試験前の-２週目および-１週目、第１日目の投与前、および本試験経過中はそれ以降毎週血液試料を採取した。臨床化学、凝固および血液学に関して、試験前の-２週目および-１週目、および第２２日目および第４９日目に試料採取を行った。
薬物動態学的結果
図３３は、４９日間の定期的投与の第２２日目において、ＰＣＳＫ９およびＬＤＬが低下したことを示している。このような早期の時点であっても、動物におけるＰＣＳＫ９およびＬＤＬの大幅な低下が明らかであり、最も高い応答者では、血漿ＬＤＬについておおよそ６０％の低下を達成した。ＰＣＳＫ９は早くも第８日目には低下し始め、第１５日目には大部分の動物においてＰＣＳＫ９およびＬＤＬの両方が明らかな低下を示した。第２２日目では、すべてのサルでＡｐｏＢ-１００が大幅に低下し（２５～４５％）、１０個体のうち５個体のサルにおいて、検出限界未満のレベルであった。
ＣＩＶＩ００８の担体としてＳＮＡＣを用いた前の実験（実施例９、図２５Ａ）と比較して、５-ＣＮＡＣ配合ＣＩＶＩ００８の投与では、ＬＤＬのより迅速で大幅な低下が起こった（図３４）；これは、ＣＩＶＩ００８の経口摂取を促進することにおいて、５-ＣＮＡＣがＳＮＡＣよりも実質的に効率的であることを示している。
参考文献の組み入れ
本願全体を通じて、引用するすべての引用文献（参考文献、特許、特許出願、およびウェブサイトを含む）の内容は、その全体が参照として明確に本明細書に組み入れられるものである；また、２０２０年１２月１１日に公開された版の明細書において引用されている参考文献も同様である。アクセッション番号で識別される蛋白質配列および核酸配列、ならびに対象とするデ-タベ-スエントリ-に含まれる他の情報（例えば、特定のＧｅｎｂａｎｋアクセッション番号に対応するデ-タベ-スエントリ-において、関連する配列以外の内容）は、参照として本明細書に組み入れられる；また、２０２０年１２月１１日に公開された対応するデ-タ-ベ-スリリ-スに対応する。
同等物
様々な特定局面が例示および説明されているが、本明細書の記載は限定を目的とするものではない。本発明の趣旨および範囲から逸脱することなく、様々な変形が可能であることは理解されるであろう。当業者であれば、本明細書の説明に基づいて多くの変形を思いつくであろう。

Claims (123)

  1. アンチセンスオリゴマ-および経口送達剤を含む医薬組成物であって；
    ここで該アンチセンスオリゴマ-が連続する長さ１６～２２のヌクレオチドであり；
    ここで該アンチセンスオリゴマ-の配列が、ＰＣＳＫ９標的配列に１００％相補的である連続する長さ１６ヌクレオチドの配列を含み；
    ここで該アンチセンスオリゴマ-が、少なくとも１つのＬＮＡユニットを含むギャップマ-であり；
    およびここで該アンチセンスオリゴマ-が、ＰＣＳＫ９をコ-ドするＲＮＡを標的とし；
    および
    ここで該経口送達剤が該アンチセンスオリゴマ-に共有結合または非共有結合する、
    医薬組成物。
  2. 請求項１の医薬組成物であって、ここで該ＲＮＡがプレｍＲＮＡ、プレｍＲＮＡのスプライスバリアント、成熟ｍＲＮＡ、あるいはその対立遺伝子バリアントまたはその変異体である、医薬組成物。
  3. 請求項１の医薬組成物であって、ここで該ＰＣＳＫ９標的配列がエクソン内またはイントロン内に存在する、医薬組成物。
  4. 請求項１の医薬組成物であって、ここで該ＰＣＳＫ９標的配列が配列番号：３１で表される、医薬組成物。
  5. 請求項１の医薬組成物であって、ここで該ＰＣＳＫ９標的配列が、エクソンとイントロンの間の境界部を含む、医薬組成物。
  6. 請求項１の医薬組成物であって、ここで該ＰＣＳＫ９標的配列がＰＣＳＫ９をコ-ドするオ-プンリ-ディングフレ-ムの５’末端の上流に存在する、医薬組成物。
  7. 請求項１の医薬組成物であって、ここで該ＰＣＳＫ９標的配列がＰＣＳＫ９をコ-ドするオ-プンリ-ディングフレ-ムの３’末端の下流に存在する、医薬組成物。
  8. 請求項１の医薬組成物であって、ここで該ＬＮＡが、オキシ-ＬＮＡ、チオ-ＬＮＡ、アミノ-５ＬＮＡ、５’-メチル-ＬＮＡ、ＥＮＡ、ｃＥＴ、ｃＭＯＥ、またはそれらの組み合わせである、医薬組成物。
  9. 請求項１の医薬組成物であって、ここで該ＬＮＡがβ－Ｄ－配位またはα－Ｌ配位の立体異性体である、医薬組成物。
  10. 請求項１の医薬組成物であって、ここで該アンチセンスオリゴマ-が少なくとも１つのｃＥＴユニットを含む、医薬組成物。
  11. 請求項１の医薬組成物であって、ここで該アンチセンスオリゴマ-が、２つ、３つ、４つ、５つ、６つまたは７つのＬＮＡユニットを含む、医薬組成物。
  12. 請求項１１の医薬組成物であって、ここで該アンチセンスオリゴマ-のすべてのＬＮＡユニットが同一配位の立体異性体である、医薬組成物。
  13. 請求項１１の医薬組成物であって、ここで該アンチセンスオリゴマ-のすべてのＬＮＡユニットがβ-Ｄ-オキシＬＮＡユニットである、医薬組成物。
  14. 請求項１１の医薬組成物であって、ここで該アンチセンスオリゴマ-のすべてのＬＮＡユニットがα-Ｌ-オキシ-ＬＮＡユニットである、医薬組成物。
  15. 請求項１の医薬組成物であって、ここで該アンチセンスオリゴマ-の配列が少なくとも１つのホスホロチオエ-ト、ホスホロジチオエ-ト、メチルホスホン酸、ホスホロアミダ-ト、またはボラノリン酸ヌクレオシド間結合を含む、医薬組成物。
  16. 請求項１５の医薬組成物であって、ここで全てのヌクレオシド間結合がホスホロチオエ-トである、医薬組成物。
  17. 請求項１５の医薬組成物であって、ここで該ヌクレオシド間結合のうちの１つ以上が、Ｒコンフォメ-ションおよび／またはＳコンフォメ-ションのキラル中心を含む、医薬組成物。
  18. 請求項１７の医薬組成物であって、ここですべてのキラル中心がＲコンフォメ-ションである、医薬組成物。
  19. 請求項１７の医薬組成物であって、ここですべてのキラル中心がＳコンフォメ-ションである、医薬組成物。
  20. 請求項１の医薬組成物であって、ここで該アンチセンスオリゴマ-および配列番号：３１のオリゴマ-が、ＬＮＡ不含の対応するアンチセンスオリゴマ-を含む対応する二本鎖に関して、熱安定性が向上した二本鎖を形成することが可能である、医薬組成物。
  21. アンチセンスオリゴヌクレオチドコンジュゲ-トおよび経口送達剤を含む医薬組成物であって、ここで該アンチセンスオリゴヌクレオチドコンジュゲ-トが：
    （ｉ）連続する１６～２２のヌクレオチドであるアンチセンスオリゴマ-；
    ここで該アンチセンスオリゴマ-の配列が、ＰＣＳＫ９標的配列に１００％相補的である連続する長さ１６ヌクレオチドの配列を含み；
    およびここで該アンチセンスオリゴマ-が、少なくとも１つのＬＮＡユニットを含むギャップマ-であり；
    および
    （ｉｉ）該アンチセンスオリゴマ-に共有結合している少なくとも１種類の非ヌクレオチド部分または非ポリヌクレオチド部分であって、直接的に、あるいは該連続するオリゴマ-配列との間に配置されるリンカ-を介して結合している非ヌクレオチド部分または非ポリヌクレオチド部分、
    の両方を含み；
    ここで該アンチセンスオリゴヌクレオチドコンジュゲ-トがＰＣＳＫ９コ-ドｍＲＮＡを標的とし；
    および
    ここで該経口送達剤が該アンチセンスオリゴヌクレオチドコンジュゲ-トに共有結合または非共有結合する、
    医薬組成物。
  22. 請求項１の医薬組成物であって、ここで該ＲＮＡがプレｍＲＮＡ、プレｍＲＮＡのスプライスバリアント、成熟ｍＲＮＡ、あるいはその対立遺伝子バリアントまたはその変異体である、医薬組成物。
  23. 請求項１の医薬組成物であって、ここで該ＰＣＳＫ９標的配列がエクソン内またはイントロン内に存在する、医薬組成物。
  24. 請求項１の医薬組成物であって、ここで該ＰＣＳＫ９標的配列が配列番号：３１で表される、医薬組成物。
  25. 請求項１の医薬組成物であって、ここで該ＰＣＳＫ９標的配列が、エクソンとイントロンの間の境界部を含む、医薬組成物。
  26. 請求項１の医薬組成物であって、ここで該ＰＣＳＫ９標的配列がＰＣＳＫ９をコ-ドするオ-プンリ-ディングフレ-ムの５’末端の上流に存在する、医薬組成物。
  27. 請求項１の医薬組成物であって、ここで該ＰＣＳＫ９標的配列がＰＣＳＫ９をコ-ドするオ-プンリ-ディングフレ-ムの３’末端の下流に存在する、医薬組成物。
  28. 請求項２１～２７の医薬組成物であって、ここで該非ヌクレオチド部分または非ポリヌクレオチド部分が、該アンチセンスオリゴマ-の５’末端または３’末端に連結する肝臓標的化部分である、医薬組成物。
  29. 請求項２１～２８の医薬組成物であって、ここで該肝臓標的化部分がリンカ-を介して該アンチセンスオリゴマ-に連結される、医薬組成物。
  30. 請求項２１～２９の医薬組成物であって、ここで該肝臓標的化部分が、ガラクト-ス、乳糖、Ｎ-アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）、マンノ-ス、マンノ-ス-６-リン酸、およびそれらの組み合わせから成る群から選択される糖質を含む糖質コンジュゲ-ト部分を含む、医薬組成物。
  31. 請求項３０の医薬組成物であって、ここで該糖質コンジュゲ-ト部分が直鎖状糖質ポリマ-ではない、医薬組成物。
  32. 請求項３０の医薬組成物であって、ここで該糖質コンジュゲ-ト部分が、１つ、２つ、３つ、または４つの糖質部分を含む糖質基である、医薬組成物。
  33. 請求項３２の医薬組成物であって、ここですべての糖質部分が同一である、医薬組成物。
  34. 請求項３２の医薬組成物であって、ここで少なくとも１つの糖質部分が、残りの糖質部分とは異なる（非同一である）、医薬組成物。
  35. 請求項３２の医薬組成物であって、ここで該糖質コンジュゲ-ト部分が、アシアロ糖蛋白質受容体を標的とする少なくとも１つのコンジュゲ-ト部分を含む、医薬組成物。
  36. 請求項３０の医薬組成物であって、ここでアシアロ糖蛋白質受容体を標的とする該コンジュゲ-ト部分が、一価、二価、三価、または四価のＧａｌＮＡｃクラスタ-を含む、医薬組成物。
  37. 請求項３６の医薬組成物であって、ここで該ＧａｌＮＡｃクラスタ-中の各ＧａｌＮＡｃがスペ-サ-を介して分岐点基に連結する、医薬組成物。
  38. 請求項３７の医薬組成物であって、ここで該分岐点基がジリジンを含む、医薬組成物。
  39. 請求項３７の医薬組成物であって、ここで該スペ-サ-がＰＥＧスペ-サ-を含む、医薬組成物。
  40. 請求項３０の医薬組成物であって、ここで該リンカ-が、Ｃ６～Ｃ１２アミノアルキル基を含む、あるいは１～６ヌクレオチドを含む生体内開裂可能リン酸ヌクレオチドリンカ-を含む、医薬組成物。
  41. 請求項３６の医薬組成物であって、ここで該三価ＧａｌＮＡｃクラスタ-が、Ｃｏｎｊ１、Ｃｏｎｊ２、Ｃｏｎｊ１ａ、またはＣｏｎｊ２ａを含む、医薬組成物。
  42. 請求項２１～４１の医薬組成物であって、ここで該非ヌクレオチド部分または非ポリヌクレオチド部分が、共有結合を介して該アンチセンスオリゴマ-に共有結合する、医薬組成物。
  43. 配列番号：１８または配列番号：１９のアンチセンスオリゴヌクレオチドコンジュゲ-ト：
    Figure 2024500367000045
    Figure 2024500367000046
     および
    経口送達剤、を含む医薬組成物であって、
    ここで
    上付き文字Ｌがベ-タ-Ｄ-オキシＬＮＡユニットを表し；
    ＭｅＣが５-メチルシトシンユニットを表し；
    下付き文字ｓがホスホロチオエ-トによるヌクレオシド間結合を表し；
    ここで
    Figure 2024500367000047
     がＣｏｎｊ２ａアシアロ糖蛋白質受容体を標的とする：
    Figure 2024500367000048
     コンジュゲ-ト部分であり；
    およびここで該アンチセンスオリゴヌクレオチドコンジュゲ-トがＰＣＳＫ９をコ-ドするＲＮＡを標的とする、
    医薬組成物。
  44. 請求項１～４３のいずれか１項に記載の医薬組成物であって、少なくとも１種類の薬学的に許容可能な添加剤またはそれらの組み合わせをさらに含む、医薬組成物。
  45. 請求項４４の医薬組成物であって、ここで該少なくとも１種類の薬学的に許容可能な添加剤またはそれらの組み合わせが；
    ｐＨ調節剤、防腐剤、香味料；味マスキング剤；香料；保湿剤；等張化剤；着色剤；界面活性剤；可塑剤；滑沢剤；流動化補助剤；圧縮補助剤；可溶化剤；賦形剤；希釈剤；リン酸緩衝液の塩；クエン酸、グリコ-ル、分散剤、クロスポビドン、ポビドン、またはそれらの任意の組み合わせ、
    から成る群から選択される、医薬組成物。
  46. 請求項１～４３のいずれか１項に記載の医薬組成物であって、ここで該医薬組成物が：
    スタチン、エゼチミブ、胆汁吸着樹脂、ニコチン酸、フィブリン酸誘導体、プロブコ-ル、ネオマイシン、デキストロチロキシン、植物スタノ-ルエステル、コレステロ-ル吸収阻害剤、インプリタピド、胆汁酸トランスポ-タ-の阻害剤、肝ＣＹＰ７ａの制御因子、エストロゲン補充療法剤、および抗炎症剤、
    から成る群から選択される１種類以上の治療薬をさらに含む、医薬組成物。
  47. 請求項４６の医薬組成物であって、ここで該スタチンが、ロバスタチン（ｌｏｖａｓｔａｔｉｎ）、セリバスタチン、プラバスタチン、アトルバスタチン、シンバスタチン、ロスバスタチン、およびフルバスタチンから成る群から選択される、医薬組成物。
  48. それを必要とする対象において、ＰＣＳＫ９の異常な発現レベルおよび／または活性に起因する疾患または病態を治療する方法であって、ここで該方法が、請求項１～４７のいずれか１項に記載される有効量の医薬組成物を該対象に投与することを含み、ここで該医薬組成物の投与によって、該対象の血清ＰＣＳＫ９レベルが低下し、および／または血清ＬＤＬコレステロ-ルレベルが低下する、方法。
  49. 請求項４８の方法であって、ここでＰＣＳＫ９が：
    （ｉ）ＰＣＳＫ９対立遺伝子バリアント；
    （ｉｉ）ＰＣＳＫ９変異体；
    または
    （ｉｉｉ）ＰＣＳＫ９スプライスバリアント、
    である、方法。
  50. 請求項４９の方法であって、ここで該ＰＣＳＫ９変異体がＰＣＳＫ９の機能獲得変異体である、方法。
  51. 請求項４８の方法であって、ここで該疾患または病態が：
    アテロ-ム性動脈硬化症、高コレステロ-ル血症、ＨＤＬ／ＬＤＬコレステロ-ルの不均衡、脂質異常症、冠動脈疾患（ＣＡＤ）、および冠動脈性心疾患（ＣＨＤ）、
    から成る群から選択される、方法。
  52. 請求項５１の方法であって、ここで該脂質異常症が家族性高脂血症（ＦＣＨＬ）または後天性高脂血症である、方法。
  53. 請求項５１の方法であって、ここで該高コレステロ-ル血症が家族性高コレステロ-ル血症またはスタチン耐性高コレステロ-ル血症である、方法。
  54. 請求項４８の方法であって、ここで該方法が：
    スタチン、エゼチミブ、胆汁吸着樹脂、ニコチン酸、フィブリン酸誘導体、プロブコ-ル、ネオマイシン、デキストロチロキシン、植物スタノ-ルエステル、コレステロ-ル吸収阻害剤、インプリタピド、胆汁酸トランスポ-タ-の阻害剤、肝ＣＹＰ７ａの制御因子、エストロゲン補充療法剤、抗炎症剤、またはそれらの任意の組み合わせ、
    から成る群から選択される治療剤の投与をさらに含む、方法。
  55. 請求項５４の方法であって、ここで該スタチンが、ロバスタチン（ｌｏｖａｓｔａｔｉｎ）、セリバスタチン、プラバスタチン、アトルバスタチン、シンバスタチン、ロスバスタチン、およびフルバスタチンから成る群から選択される、方法。
  56. 請求項５５の方法であって、ここで該医薬組成物が経口投与される、方法。
  57. 請求項４８の方法であって、ここで該医薬組成物が単回投与される、方法。
  58. 請求項４８の方法であって、ここで該医薬組成物が複数回投与される、方法。
  59. それを必要とする対象において、アテロ-ム性動脈硬化症、高脂血症、高コレステロ-ル血症、ＨＤＬ／ＬＤＬコレステロ-ルの不均衡、冠動脈疾患（ＣＡＤ）、または冠動脈性心疾患（ＣＨＤ）から成る群から選択される障害を治療する方法であって、請求項１～４７のいずれか１項に記載される有効量の医薬組成物を、該対象に投与することを含む、方法。
  60. 細胞においてＰＣＳＫ９の発現レベルおよび／またはＰＣＳＫ９の活性を低下させるインビトロ法であって、有効量の請求項１～４７のいずれか１項に記載される医薬組成物を、該細胞に投与することを含む、方法。
  61. それを必要とする対象において、ＰＣＳＫ９の発現レベルおよび／またはＰＣＳＫ９の活性を低下させる方法であって、有効量の請求項１～４７のいずれか１項に記載される医薬組成物を、該対象に投与することを含む、方法。
  62. それを必要とする対象において、コレステロ-ルレベルを低下させる方法であって、有効量の請求項１～請求項４７のいずれか１項に記載される医薬組成物を、該対象に投与することを含む、方法。
  63. 医薬組成物を製造する方法であって、該方法が：
    （ｉ）連続する長さ１６～２２のヌクレオチドのアンチセンスオリゴマ-：
    ここで該アンチセンスオリゴマ-の配列が、配列番号：３１の配列に１００％相補的である連続する長さ１６ヌクレオチドの配列を含み；
    ここで該アンチセンスオリゴマ-が、少なくとも１つのＬＮＡユニットを含むギャップマ-であり；
    およびここで該アンチセンスオリゴマ-が、ＰＣＳＫ９をコ-ドするＲＮＡを標的とする；
    および
    （ｉｉ）経口送達剤、
    を混合することを含む、方法。
  64. 医薬組成物を製造する方法であって、該方法が：
    （ｉ）（ａ）および（ｂ）を含むコンジュゲ-ト：
    （ａ）連続する１６～２２のヌクレオチドであるアンチセンスオリゴマ-；
    ここで該アンチセンスオリゴマ-の配列が、配列番号：３１の配列に１００％相補的である連続する長さ１６ヌクレオチドの配列を含み；
    およびここで該アンチセンスオリゴマ-が、少なくとも１つのＬＮＡユニットを含むギャップマ-であり；
    および
    （ｂ）該アンチセンスオリゴマ-に共有結合している少なくとも１種類の非ヌクレオチド部分または非ポリヌクレオチド部分であって、直接的に、あるいは該連続するオリゴマ-配列との間に配置されるリンカ-を介して結合している非ヌクレオチド部分または非ポリヌクレオチド部分；
    ここで該アンチセンスオリゴヌクレオチドコンジュゲ-トは、ＰＣＳＫ９をコ-ドするＲＮＡを標的とし；
    および
    （ｉｉ）経口送達剤、
    を混合することを含む、方法。
  65. 請求項１～４７のいずれか１項に記載の医薬組成物または請求項４８～６４のいずれか１項に記載の方法であって、ここで該アンチセンスオリゴマ-の配列が配列番号：２６を含む、あるいは配列番号：２６から成る、医薬組成物または方法。
  66. 請求項１～４７のいずれか１項に記載の医薬組成物または請求項４８～６４のいずれか１項に記載の方法であって、ここで該アンチセンスオリゴマ-の配列が配列番号：２または配列番号：３を含む、あるいは配列番号：２または配列番号：３から成る、医薬組成物または方法。
  67. 請求項２１～４７のいずれか１項に記載の医薬組成物または請求項４８～６４のいずれか１項に記載の方法であって、ここで該アンチセンスオリゴマ-コンジュゲ-トの配列が配列番号：１８または配列番号：１９を含む、または配列番号：１８または配列番号：１９から成る、医薬組成物または方法。
  68. 請求項１～４７または６５～６７のいずれか１項に記載の医薬組成物または請求項４８～６７のいずれか１項に記載の方法であって、ここで該経口送達剤が、カプリル酸（Ｃ８）、カプリン酸（Ｃ１０）、その誘導体、薬学的に許容可能なその塩、またはそれらの任意の組み合わせを含む、医薬組成物または方法。
  69. 請求項１～４７または６５～６８のいずれか１項に記載の医薬組成物または請求項４８～６８のいずれか１項に記載の方法であって、ここで該薬学的に許容可能な塩がナトリウム塩である、医薬組成物または方法。
  70. 請求項１～４７または６５～６９のいずれか１項に記載の医薬組成物または請求項４８～６９のいずれか１項に記載の方法であって、ここで該医薬組成物が固体である、医薬組成物または方法。
  71. 請求項１～４７または６５～７０のいずれか１項に記載の医薬組成物または請求項４８～７０のいずれか１項に記載の方法であって、ここで該医薬組成物が錠剤またはカプセルの形態である、医薬組成物または方法。
  72. 請求項７１の医薬組成物または方法であって、ここで該カプセルが液体カプセルである、医薬組成物または方法。
  73. 請求項１～４７または６５～７２のいずれか１項に記載の医薬組成物または請求項４８～７２のいずれか１項に記載の方法であって、ここで該医薬組成物が腸溶性コ-ティングされる、医薬組成物または方法。
  74. 請求項７１の医薬組成物または方法であって、ここで該錠剤またはカプセルが腸溶性コ-ティングされる、医薬組成物または方法。
  75. 請求項７１～７４の医薬組成物または方法であって、ここで該錠剤またはカプセルの重量が、５ｍｇ～１０００ｍｇ、１０ｍｇ～５００ｍｇ、１０ｍｇ～２５０ｍｇ、１００ｍｇ～２００ｍｇ、または２５０ｍｇ～５００ｍｇである、医薬組成物または方法。
  76. 請求項７１～７５の医薬組成物または方法であって、ここで該錠剤またはカプセルのアンチセンスオリゴマ-またはアンチセンスオリゴヌクレオチドコンジュゲ-トの量が、１ｍｇ～１００ｍｇ、５ｍｇ～１００ｍｇ、１０ｍｇ～１００ｍｇ、２０ｍｇ～１００ｍｇ、２０ｍｇ～５０ｍｇの範囲である、医薬組成物または方法。
  77. 請求項１～４７または６５～７６のいずれか１項に記載の医薬組成物または請求項４８～７６のいずれか１項に記載の方法であって、ここで該経口送達剤が：
    Figure 2024500367000049
     であり；
    ここで
    Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４が、独立に水素、－ＯＨ、－ＮＲ６Ｒ７、ハロゲン、Ｃ１～Ｃ４アルキル、またはＣ１～Ｃ４アルコキシであり；
    Ｒ５が、置換または非置換のＣ２～Ｃ１６アルキレン、置換または非置換のＣ２～Ｃ１６アルケニレン、置換または非置換のＣ１～Ｃ１２アルキル（アリ-レン）、あるいは置換または非置換のアリ-ル（Ｃ１～Ｃ４アルキレン）であり；
    および
    Ｒ６およびＲ７が、独立に水素、酸素、またはＣ１～Ｃ４アルキルである、
    医薬組成物または方法。
  78. 請求項１～４７または６５～７７のいずれか１項に記載の医薬組成物または請求項４８～７７のいずれか１項に記載の方法であって、ここで該送達剤が、Ｎ-（８-［２-ヒドロキシベンゾイル］アミノ）カプリル酸（ＳＮＡＣ）、Ｎ-（５-クロロサリシロイル）-８-アミノカプリル酸（５-ＣＮＡＣ）、Ｎ-（１０-［２-ヒドロキシベンゾイル］アミノ）デカン酸（ＳＮＡＤ）、４-［（４-クロロ-２-ヒドロキシ-ベンゾイル）アミノ］ブタン酸（４-ＣＮＡＢ）、Ｎ-（８-［４-メトキシ-クロロ-２-ヒドロキシベンゾイル-アミノ）オクタン酸（４-ＭＯＡＣ）、８-（４-ヒドロキシフェノキシ）オクタン酸（４-ＨＰＯ）、４-ｍ-トシルオキシ酪酸（３-ＴＢＡ）、４-（３-ヒドロキシフェニルスルファニル）酪酸（３-ＨＰＳＢ）、５-ペンタン酸フェニル（５-ＰＰＡ）、８-（２-ヒドロキシフェノキシ）オクチルジエタノ-ルアミン（２-ＨＰＯＤ）、（４-イソプロピルベンジルオキシ）酢酸（４-ＩＢＯＡ）、２-（５-ペンタン酸）-５-（２-ヒドロキシフェニル）-１，３，４-オキサジアゾ-ル（２-ＰＨＯＤ）、７-オキソ-７-フェニルヘプタン酸（７-ＯＰＨＡ）、４-（３-フルオロフェニルスルファニル）酪酸（３-ＦＰＳＢ）、またはそれらの任意の組み合わせから成る群から選択される、医薬組成物または方法。
  79. 請求項１～４７または６５～７８のいずれか１項に記載の医薬組成物または請求項４８～７８のいずれか１項に記載の方法であって、ここで該経口送達剤が、Ｎ-（８-（２-ヒドロキシベンゾイル）アミノ）カプリル酸の塩、水和物、または溶媒和物、あるいはそれらの組み合わせである、医薬組成物または方法。
  80. 請求項７９の医薬組成物または方法であって、ここでＮ-（８-（２-ヒドロキシベンゾイル）アミノ）カプリル酸の塩が、Ｎ-（８-（２-ヒドロキシベンゾイル）アミノ）カプリル酸のナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、およびそれらの任意の組み合わせから成る群から選択される、医薬組成物または方法。
  81. 請求項８０の医薬組成物または方法であって、ここで該Ｎ-（８-（２-ヒドロキシベンゾイル）アミノ）カプリル酸の塩がナトリウム塩である、医薬組成物または方法。
  82. 請求項８０の医薬組成物または方法であって、ここで該Ｎ-（８-（２-ヒドロキシベンゾイル）アミノ）カプリル酸の塩が、一ナトリウム塩（サルカプロザ-トナトリウム２０３７８７-９１-１、ＳＮＡＣ、８-（２-ヒドロキシベンズアミド）オクタン酸ナトリウム）である、医薬組成物または方法。
  83. 請求項８０の医薬組成物または方法であって、ここで該Ｎ-（８-（２-ヒドロキシベンゾイル）アミノ）カプリル酸の塩が二ナトリウム塩である、医薬組成物または方法。
  84. 請求項１～４７または６５～７８のいずれか１項に記載の医薬組成物または請求項４８～７８のいずれか１項に記載の方法であって、ここで該経口送達剤が、Ｎ-（５-クロロサリシロイル）-８-アミノカプリル酸の塩、水和物、または溶媒和物、あるいはそれらの組み合わせである、医薬組成物または方法。
  85. 請求項８４の医薬組成物または方法であって、ここで該Ｎ-（５-クロロサリシロイル）-８-アミノカプリル酸の塩が、Ｎ-（５-クロロサリシロイル）-８-アミノカプリル酸のナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、およびそれらの任意の組み合わせから成る群から選択される、医薬組成物または方法。
  86. 請求項８５の医薬組成物または方法であって、ここで該Ｎ-（５-クロロサリシロイル）-８-アミノカプリル酸の塩がナトリウム塩である、医薬組成物または方法。
  87. 請求項８５の医薬組成物または方法であって、ここで該Ｎ-（５-クロロサリシロイル）-８-アミノカプリル酸の塩が一ナトリウム塩である、医薬組成物または方法。
  88. 請求項８５の医薬組成物または方法であって、ここで該Ｎ-（５-クロロサリシロイル）-８-アミノカプリル酸の塩が二ナトリウム塩である、医薬組成物または方法。
  89. 請求項１～４７または６５～８８のいずれか１項に記載の医薬組成物または請求項４８～８８のいずれか１項に記載の方法であって、ここで該経口送達剤が、カプリン酸（Ｃ１０）の塩、水和物または溶媒和物、あるいはそれらの組み合わせである、医薬組成物または方法。
  90. 請求項８９の医薬組成物または方法であって、ここで該カプリン酸（Ｃ１０）の塩が、カプリン酸（Ｃ１０）のナトリウム塩、カリウム塩およびカルシウム塩、ならびにそれらの任意の組み合わせから成る群から選択される、医薬組成物または方法。
  91. 請求項９０の医薬組成物または方法であって、ここで該カプリン酸（Ｃ１０）の塩がカプリン酸ナトリウムである、医薬組成物または方法。
  92. 請求項１～４７または６５～９１のいずれか１項に記載の医薬組成物または請求項４８～９１のいずれか１項に記載の方法であって、ここで該医薬組成物が食事の５～６０分前に投与される、医薬組成物または方法。
  93. 請求項１～４７または６５～９２のいずれか１項に記載の医薬組成物または請求項４８～９１のいずれか１項に記載の方法であって、ここで該医薬組成物が、食事の少なくとも５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５または６０分前に投与される、医薬組成物または方法。
  94. 請求項１～４７または６５～９３のいずれか１項に記載の医薬組成物または請求項４８～９３のいずれか１項に記載の方法であって、ここで該医薬組成物が、ｐＨ感受性コ-ティング剤をさらに含む、医薬組成物または方法。
  95. 請求項９４の医薬組成物または方法であって、ここで該ｐＨ感受性コ-ティング剤がｐＨ感受性ポリマ-である、医薬組成物または方法。
  96. 請求項９４の医薬組成物または方法であって、ここで該ｐＨ感受性ポリマ-が、セルロ-ス、アクリル酸、またはその誘導体を含む、医薬組成物または方法。
  97. 請求項９４～９６の医薬組成物または方法であって、ここで該ｐＨ感受性コ-ティング剤が、ｐＨ感受性ヒドロゲル、ｐＨ活性化薬剤送達システム、ｐＨ感受性リポソ-ム、ミセルまたは脂質ナノ粒子、ｐＨ感受性ミクロスフェア、ｐＨ感受性ナノ粒子、またはそれらの任意の組み合わせを含む、医薬組成物または方法。
  98. 錠剤またはカプセルであって：
    （ｉ）（ＧａｌＮＡｃ）３-アミノ-ヘキサメチレン-５’ホスホロチオイル）-２’-Ｏ，４’-Ｃ-メチレンアデノシリル-（３’＞５’Ｏ，Ｏ-ホスホロチオイル）-２’-Ｏ，４’-Ｃ-メチレンアデノシリル-（３’＞５’Ｏ，Ｏホスホロチオイル）-２’-Ｏ，４’-Ｃ-メチレンチミジリル-（３’＞５’Ｏ，Ｏ-ホスホロチオイル）-２’-デオキシグアノシリル-（３’＞５’Ｏ，Ｏ-ホスホロチオイル）-２’-デオキシシチジニリル-（３’＞５’Ｏ，Ｏホスホロチオイル）-２’-デオキシチミジリル-（３’＞５’Ｏ，Ｏ-ホスホロチオイル）-２’-デオキシアデノシリル-（３’＞５’Ｏ，Ｏ-ホスホロチオイル）-２’-デオキシシチジニリル-（３’＞５’Ｏ，Ｏ-ホスホロチオイル）-２’-デオキシアデノシリル-（３’＞５’Ｏ，Ｏ-ホスホロチオイル）-２’-デオキシアデノシリル-（３’＞５’Ｏ，Ｏホスホロチオイル）-２’-デオキシアデノシリル-（３’＞５’Ｏ，Ｏ-ホスホロチオイル）-２’-デオキシアデノシリル-（３’＞５’Ｏ，Ｏ-ホスホロチオイル）-２’-デオキシシチジニリル-（３’＞５’Ｏ，Ｏ-ホスホロチオイル）-２’-Ｏ，４’Ｃメチレン（５-メチル-シチジニリル）-（３’＞５’Ｏ，Ｏ-ホスホロチオイル）-２’-Ｏ，４’-Ｃ-メチレン（５-メチル-シチジニリル）-（３’＞５’Ｏ，Ｏ-ホスホロチオイル）-２’-Ｏ，４’-Ｃ-メチレンアデノシリルヘキサデカナトリウム塩；
    （ｉｉ）ＳＮＡＣ、５-ＣＮＡＣ、Ｃ１０、その水和物、その溶媒和物、またはその塩、およびそれらの組み合わせから成る群から選択される経口送達剤；
    および
    （ｉｉｉ）任意選択的に、スタチン、
    を含む、錠剤またはカプセル。
  99. 錠剤またはカプセルであって：
    （ｉ）ＣＩＶＩ００８
    Figure 2024500367000050
     （ｉｉ）ＳＮＡＣ、５-ＣＮＡＣ、Ｃ１０、その水和物、その溶媒和物、またはその塩、およびそれらの組み合わせから成る群から選択される経口送達剤；
    および
    （ｉｉｉ）任意選択的に、スタチン、
    を含む、錠剤またはカプセル。
  100. 請求項９８または９９の錠剤またはカプセルであって、ここで該経口送達剤がＳＮＡＣである、錠剤またはカプセル。
  101. 請求項１００の錠剤またはカプセルであって、ここで該ＳＮＡＣが一ナトリウム塩である、錠剤またはカプセル。
  102. 請求項１００の錠剤またはカプセルであって、ここで該ＳＮＡＣが二ナトリウム塩である、錠剤またはカプセル。
  103. 請求項９８または９９の錠剤またはカプセルであって、ここで該経口送達剤が５-ＣＮＡＣである、錠剤またはカプセル。
  104. 請求項１０３の錠剤またはカプセルであって、ここで該５-ＣＮＡＣが一ナトリウム塩である、錠剤またはカプセル。
  105. 請求項１０３の錠剤またはカプセルであって、ここで５-ＣＮＡＣが二ナトリウム塩である、錠剤またはカプセル。
  106. 請求項９８または９９の錠剤またはカプセルであって、ここで該経口送達剤がＣ１０である、錠剤またはカプセル。
  107. 請求項９８または９９の錠剤またはカプセルであって、ここで該経口送達剤がＣ８またはＣ１２である、錠剤またはカプセル。
  108. カプセルであって：
    （ｉ）ＣＩＶＩ００８
    Figure 2024500367000051
     および
    （ｉｉ）５-ＣＮＡＣ、
    を含むカプセル。
  109. 請求項１０８のカプセルであって、ここでＣＩＶＩ００８および５-ＣＮＡＣが乾式混合物である、カプセル。
  110. 請求項１０８または１０９のカプセルであって、ここで該カプセルがゼラチンカプセルである、カプセル。
  111. 請求項１１０のカプセルであって、ここで該ゲルカプセルが硬質殻ゼラチンカプセルである、カプセル。
  112. 請求項１０８～１１１のいずれか１項に記載のカプセルであって、ここで該カプセルが腸溶性コ-ティングされる、カプセル。
  113. 請求項１０８～１１２のいずれか１項に記載のカプセルであって、ここで該カプセルが、５～３０ｍｇのＣＩＶＩ００８および１００～２００ｍｇの５-ＣＮＡＣを含む、カプセル。
  114. 請求項１１３のカプセルであって、ここで該カプセルが、約５ｍｇ、約１０ｍｇ、約２０ｍｇ、約２５ｍｇ、または約３０ｍｇのＣＩＶＩ００８を含む、カプセル。
  115. 請求項１０８～１１４のいずれか１項に記載のカプセルであって、ここで該カプセルが：
    ・ １０ｍｇのＣＩＶＩ００８および１００ｍｇの５-ＣＮＡＣ；
    ・ ２０ｍｇのＣＩＶＩ００８および２００ｍｇの５-ＣＮＡＣ；
    ・ ５ｍｇのＣＩＶＩ００８および２００ｍｇの５-ＣＮＡＣ；
    ・ １０ｍｇのＣＩＶＩ００８および２００ｍｇの５-ＣＮＡＣ；
    ・ ２５ｍｇのＣＩＶＩ００８および２００ｍｇの５-ＣＮＡＣ；
    または
    ・ ３０ｍｇのＣＩＶＩ００８および２００ｍｇの５-ＣＮＡＣ、
    を含む、カプセル。
  116. 請求項１０８～１１５のいずれか１項に記載のカプセルであって、スタチンをさらに含む、カプセル。
  117. それを必要とする対象において、アテロ-ム性動脈硬化症、高脂血症、高コレステロ-ル血症、ＨＤＬ／ＬＤＬコレステロ-ルの不均衡、冠動脈疾患（ＣＡＤ）、または冠動脈性心疾患（ＣＨＤ）から成る群から選択される障害を治療する方法であって、請求項１０８～１１６のいずれか１項に記載のカプセルを該対象に投与することを含む、方法。
  118. それを必要とする対象において、ＰＣＳＫ９の発現レベルおよび／またはＰＣＳＫ９の活性を低下させる方法であって、請求項１０８～１１６のいずれか１項に記載のカプセルを該対象に投与することを含む、方法。
  119. それを必要とする対象において、コレステロ-ルレベルを低下させる方法であって、請求項１０８～１１６のいずれか１項に記載のカプセルを該対象に投与することを含む、方法。
  120. 請求項１０８～１１６のいずれか１項に記載のカプセルであって、アテロ-ム性動脈硬化症、高脂血症、高コレステロ-ル血症、ＨＤＬ／ＬＤＬコレステロ-ルの不均衡、冠動脈疾患（ＣＡＤ）、または冠動脈性心疾患（ＣＨＤ）から成る群から選択される障害の治療に用いる、カプセル。
  121. 請求項１０８～１１６のいずれか１項に記載のカプセルであって、対象において、ＰＣＳＫ９の発現レベルおよび／またはＰＣＳＫ９の活性を低下させる治療薬剤として用いる、カプセル。
  122. 請求項１０８～１１６のいずれか１項に記載のカプセルであって、対象において、コレステロ-ルレベルを低下させる治療薬剤として用いる、カプセル。
  123. 請求項１０８～１１６のいずれか１項に記載のカプセルを製造する方法であって、該方法が：
    （ｉ）ＣＩＶＩ００８を含む第１の組成物および５-ＣＮＡＣを含む第２の組成物を乾式混合する工程；
    および
    （ｉｉ）工程（ｉ）で得られた乾式混合物をカプセルに封入する工程、
    を含む、方法。
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