JP2024056808A - 胆道癌の治療のための、ｈｅｒ２を標的とする二重特異性抗原結合構築物の使用方法 - Google Patents

胆道癌の治療のための、ｈｅｒ２を標的とする二重特異性抗原結合構築物の使用方法 Download PDF

Info

Publication number
JP2024056808A
JP2024056808A JP2024017719A JP2024017719A JP2024056808A JP 2024056808 A JP2024056808 A JP 2024056808A JP 2024017719 A JP2024017719 A JP 2024017719A JP 2024017719 A JP2024017719 A JP 2024017719A JP 2024056808 A JP2024056808 A JP 2024056808A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
ser
her2
val
thr
bispecific anti
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
JP2024017719A
Other languages
English (en)
Inventor
ダイアナ エフ． ハウスマン
F Hausman Diana
ニール シー． ジョセフソン
C Josephson Neil
ローズ カムイー レイ
Kamyee Lai Rose
ジェラルド ジェイムズ ロウズ
James Rowse Gerald
パトリック カミンカー
KAMINKER Patrick
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
ZYMEWORKS Inc
Original Assignee
ZYMEWORKS Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by ZYMEWORKS Inc filed Critical ZYMEWORKS Inc
Priority to JP2024017719A priority Critical patent/JP2024056808A/ja
Publication of JP2024056808A publication Critical patent/JP2024056808A/ja
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/32—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against translation products of oncogenes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7042—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
    • A61K31/7052—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides
    • A61K31/706—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom
    • A61K31/7064—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines
    • A61K31/7068—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines having oxo groups directly attached to the pyrimidine ring, e.g. cytidine, cytidylic acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K33/00—Medicinal preparations containing inorganic active ingredients
    • A61K33/24—Heavy metals; Compounds thereof
    • A61K33/243—Platinum; Compounds thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
    • A61K47/545—Heterocyclic compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/68031—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being an auristatin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/6811—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a protein or peptide, e.g. transferrin or bleomycin
    • A61K47/6817—Toxins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6875—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody being a hybrid immunoglobulin
    • A61K47/6879—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody being a hybrid immunoglobulin the immunoglobulin having two or more different antigen-binding sites, e.g. bispecific or multispecific immunoglobulin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/545—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the dose, timing or administration schedule
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2300/00—Mixtures or combinations of active ingredients, wherein at least one active ingredient is fully defined in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/34—Identification of a linear epitope shorter than 20 amino acid residues or of a conformational epitope defined by amino acid residues
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/51—Complete heavy chain or Fd fragment, i.e. VH + CH1
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/515—Complete light chain, i.e. VL + CL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
    • C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
    • C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
    • C07K2317/64—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising a combination of variable region and constant region components

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)

Abstract

【課題】胆道癌を有する対象を治療する方法を提供する。【解決手段】胆道癌（ＢＴＣ）を治療する方法であって、ＨＥＲ２を標的とする二重特異性抗原結合構築物またはアウリスタチン類似体（ＡＤＣ）に結合されたＨＥＲ２を標的とする二重特異性抗原結合構築物を対象に投与することを含む方法である。【選択図】図１

Description

配列表
本出願は、ＥＦＳ－Ｗｅｂを介して提出される配列表を含み、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。該ＡＳＣＩＩコピーは、２０１９年５月３１日に作成され、ＺＷＩ０６３ｓｅｑｕｅｎｃｅｌｉｓｔｉｎｇ．ｔｘｔと名付けられ、９９，０００バイトのサイズである。
背景
胆嚢癌及び胆管細胞癌を含む胆道癌（ＢＴＣ）は、予後不良のまれな悪性腫瘍である。推定年間発症率は、米国で１０，６５０件である（Ｓｉｅｇｅｌ Ｒ，Ｍａ Ｊ，Ｚｏｕ Ｚ，Ｊｅｍａｌ Ａ．Ｃａｎｃｅｒ ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ，２０１４．ＣＡ：Ａ Ｃａｎｃｅｒ Ｊｏｕｒｎａｌ ｆｏｒ Ｃｌｉｎｉｃｉａｎｓ．２０１４；６４（１）：９－２９（非特許文献１））。ほとんどのＢＴＣは進行段階で診断され、手術可能なのは約２５％である。５年間の全生存率は１０％未満である（Ａｎｄｅｒｓｏｎ ＣＤ，Ｐｉｎｓｏｎ ＣＷ，Ｂｅｒｌｉｎ Ｊ，Ｃｈａｒｉ ＲＳ．Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ａｎｄ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｃｈｏｌａｎｇｉｏｃａｒｃｉｎｏｍａ．Ｏｎｃｏｌｏｇｉｓｔ．２００４；９（１）：４３－５７（非特許文献２）；ｄｅ Ｇｒｏｅｎ ＰＣ，Ｇｏｒｅｓ ＧＪ，ＬａＲｕｓｓｏ ＮＦ，Ｇｕｎｄｅｒｓｏｎ ＬＬ，Ｎａｇｏｒｎｅｙ ＤＭ．Ｂｉｌｉａｒｙ Ｔｒａｃｔ Ｃａｎｃｅｒｓ．Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ．１９９９；３４１（１８）：１３６８－７８（非特許文献３））．ＨＥＲ２は、胆道癌の３～２５％に過剰発現する（Ｂｅｎａｖｉｄｅｓ Ｍ，Ａｎｔｏｎ Ａ，Ｇａｌｌｅｇｏ Ｊ，Ｇｏｍｅｚ ＭＡ，Ｊｉｍｅｎｅｚ－Ｇｏｒｄｏ Ａ，Ｌａ Ｃａｓｔａ Ａ，ｅｔ ａｌ．Ｂｉｌｉａｒｙ ｔｒａｃｔ ｃａｎｃｅｒｓ：ＳＥＯＭ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ．Ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｎｄ Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ．２０１５；１７（１２）：９８２－７（非特許文献４））。
手術不能なＢＴＣの第一選択治療は、全身化学療法（ゲムシタビン＋シスプラチン、ゲムシタビン単独と比較して全生存期間を改善する［それぞれ１１．７ヶ月対８．１ヶ月］）を含む。代替の第一選択治療は、ＭＳＩ－Ｈ／ｄＭＭＲ腫瘍のためのペムブロリズマブ、フルオロピリミジンベースの化学放射線、追加の化学療法を伴わない放射線療法、治験薬、または最良の支持療法を含む。ＢＴＣにおける第二選択化学療法の裏付けとなる証拠が不足しており、臨床試験が推奨されている（ＮＣＣＮ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｒａｃｔｉｃｅ Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ：Ｈｅｐａｔｏｂｉｌｉａｒｙ Ｃａｎｃｅｒｓ．Ｖｅｒｓｉｏｎ ２．２０１９（非特許文献５））。
胆道癌の治療の必要性が依然として存在する。
国際特許公開第ＷＯ２０１５／０７７８９１号（特許文献１）は、トラスツズマブ及びペルツズマブによって結合されるのと同じエピトープである、ＥＣＤ４及びＥＣＤ２内の２つの異なるＨＥＲ２エピトープに対する二重特異性抗ＨＥＲ２抗体を記載している。
国際特許公開第ＷＯ２０１５／０７７８９１号
Ｓｉｅｇｅｌ Ｒ，Ｍａ Ｊ，Ｚｏｕ Ｚ，Ｊｅｍａｌ Ａ．Ｃａｎｃｅｒ ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ，２０１４．ＣＡ：Ａ Ｃａｎｃｅｒ Ｊｏｕｒｎａｌ ｆｏｒ Ｃｌｉｎｉｃｉａｎｓ．２０１４；６４（１）：９－２９ Ａｎｄｅｒｓｏｎ ＣＤ，Ｐｉｎｓｏｎ ＣＷ，Ｂｅｒｌｉｎ Ｊ，Ｃｈａｒｉ ＲＳ．Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ａｎｄ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｃｈｏｌａｎｇｉｏｃａｒｃｉｎｏｍａ．Ｏｎｃｏｌｏｇｉｓｔ．２００４；９（１）：４３－５７ ｄｅ Ｇｒｏｅｎ ＰＣ，Ｇｏｒｅｓ ＧＪ，ＬａＲｕｓｓｏ ＮＦ，Ｇｕｎｄｅｒｓｏｎ ＬＬ，Ｎａｇｏｒｎｅｙ ＤＭ．Ｂｉｌｉａｒｙ Ｔｒａｃｔ Ｃａｎｃｅｒｓ．Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ．１９９９；３４１（１８）：１３６８－７８ Ｂｅｎａｖｉｄｅｓ Ｍ，Ａｎｔｏｎ Ａ，Ｇａｌｌｅｇｏ Ｊ，Ｇｏｍｅｚ ＭＡ，Ｊｉｍｅｎｅｚ－Ｇｏｒｄｏ Ａ，Ｌａ Ｃａｓｔａ Ａ，ｅｔ ａｌ．Ｂｉｌｉａｒｙ ｔｒａｃｔ ｃａｎｃｅｒｓ：ＳＥＯＭ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ．Ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｎｄ Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ．２０１５；１７（１２）：９８２－７ ＮＣＣＮ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｒａｃｔｉｃｅ Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ：Ｈｅｐａｔｏｂｉｌｉａｒｙ Ｃａｎｃｅｒｓ．Ｖｅｒｓｉｏｎ ２．２０１９
概要
胆道癌の治療のための、ＨＥＲ２を標的とする二重特異性抗原結合構築物の使用方法を本明細書に記載する。本開示の一態様において、胆道癌（ＢＴＣ）を有する対象を治療する方法であって、有効量の二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物または抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）を対象に投与することを含む方法が提供される。
いくつかの実施形態では、ＢＴＣは、切除可能、部分切除可能、または切除不能である。
いくつかの実施形態では、ＢＴＣは進行性である。
いくつかの実施形態では、ＢＴＣは、免疫組織化学（ＩＨＣ）及び遺伝子増幅により測定した場合、ＨＥＲ２ ３＋、ＨＥＲ２ ２＋、またはＨＥＲ２ １＋である。
いくつかの実施形態では、ＢＴＣは、ＨＥＲ２遺伝子増幅なしで、免疫組織化学（ＩＨＣ）により測定した場合、ＨＥＲ２ ３＋、ＨＥＲ２ ２＋、またはＨＥＲ２ １＋である。
いくつかの実施形態では、ＢＴＣは胆嚢癌である。
いくつかの実施形態では、ＢＴＣは胆管細胞癌（ＣＣＡ）である。
いくつかの実施形態では、二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物は、重鎖Ｈ１、重鎖Ｈ２、及び軽鎖Ｌ１を含み、ａ）重鎖Ｈ１が、配列番号３９、配列番号４０、及び配列番号４１に記載のＣＤＲ配列を含み、ｂ）重鎖Ｈ２が、配列番号６７、配列番号６８、配列番号６９、配列番号７０、配列番号７１、及び配列番号７２に記載のＣＤＲ配列を含み、ｃ）重鎖Ｌ１が、配列番号２７、配列番号２８、及び配列番号２９に記載のＣＤＲ配列を含む。
いくつかの実施形態では、二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物は、配列番号３６に記載のアミノ酸配列を含む重鎖Ｈ１、配列番号６３に記載のアミノ酸配列を含む重鎖Ｈ２、及び配列番号２４に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖Ｌ１を含む。
いくつかの実施形態では、二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物の有効量は、１０ｍｇ／ｋｇ／週である。
いくつかの実施形態では、二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物の有効量は、２週間毎に２０ｍｇ／ｋｇである。
いくつかの実施形態では、二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物の有効量は、３週間毎に３０ｍｇ／ｋｇである。
いくつかの実施形態では、二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物を対象に投与することは、対象において完全奏効（ＣＲ）、部分奏効（ＰＲ）、または安定（ＳＤ）をもたらす。
いくつかの実施形態では、二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物で治療した対象群における病勢制御率は、６０％、７０％、または８０％を超える。
いくつかの実施形態では、二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物で治療した対象群における全奏効率は、５０％、６０％、７０％、または８０％を超える。
いくつかの実施形態では、二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物は、少なくとも１つ、２つ、または３つの第一選択療法の後に投与される。
いくつかの実施形態では、二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物は、第一選択単剤療法として投与される。
いくつかの実施形態では、二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物は、アジュバント療法またはネオアジュバント療法として投与される。
いくつかの実施形態では、二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物は、１つ以上の化学療法剤とともに投与される。
いくつかの実施形態では、１つ以上の化学療法剤は、ゲムシタビン及び／またはシスプラチンである。
本開示の別の態様において、胆道癌（ＢＴＣ）の治療のための医薬の調製における二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物または抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）の使用が提供される。
本開示のさらに別の態様において、対象におけるＢＴＣの治療のための有効量の二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物またはＡＤＣの使用を提供する。
[本発明1001]
胆道癌（ＢＴＣ）を有する対象を治療する方法であって、有効量の二重特異性抗ＨＥＲ2抗原結合構築物または抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）を前記対象に投与することを含む、前記方法。
[本発明1002]
前記ＢＴＣが、切除可能、部分切除可能、または切除不能である、本発明1001の方法。
[本発明1003]
前記ＢＴＣが、進行性である、本発明1001の方法。
[本発明1004]
前記ＢＴＣが、免疫組織化学（ＩＨＣ）及び遺伝子増幅により測定した場合、ＨＥＲ2 3＋、ＨＥＲ2 2＋、またはＨＥＲ2 1＋である、本発明1001～1003のいずれかの方法。
[本発明1005]
前記ＢＴＣが、ＨＥＲ2遺伝子増幅なしで、免疫組織化学（ＩＨＣ）により測定した場合、ＨＥＲ2 3＋、ＨＥＲ2 2＋、またはＨＥＲ2 1＋である、本発明1001～1003のいずれかの方法。
[本発明1006]
前記ＢＴＣが、胆嚢癌である、本発明1001～1005のいずれかの方法。
[本発明1007]
前記ＢＴＣが、胆管細胞癌（ＣＣＡ）である、本発明1001～1005のいずれかの方法。
[本発明1008]
前記二重特異性抗ＨＥＲ2抗原結合構築物が、重鎖Ｈ1、重鎖Ｈ2、及び軽鎖Ｌ1を含み、
ａ）重鎖Ｈ1が、配列番号39、配列番号40、及び配列番号41に記載のＣＤＲ配列を含み、
ｂ）重鎖Ｈ2が、配列番号67、配列番号68、配列番号69、配列番号70、配列番号71、及び配列番号72に記載のＣＤＲ配列を含み、
ｃ）重鎖Ｌ1が、配列番号27、配列番号28、及び配列番号29に記載のＣＤＲ配列を含む、
本発明1001～1007のいずれかの方法。
[本発明1009]
前記二重特異性抗ＨＥＲ2抗原結合構築物が、配列番号36に記載のアミノ酸配列を含む重鎖Ｈ1、配列番号63に記載のアミノ酸配列を含む重鎖Ｈ2、及び配列番号24に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖Ｌ1を含む、本発明1001～1007のいずれかの方法。
[本発明1010]
前記二重特異性抗ＨＥＲ2抗原結合構築物の前記有効量が、10ｍｇ／ｋｇ／週である、本発明1008または1009の方法。
[本発明1011]
前記二重特異性抗ＨＥＲ2抗原結合構築物の前記有効量が、2週間毎に20ｍｇ／ｋｇである、本発明1008または1009の方法。
[本発明1012]
前記二重特異性抗ＨＥＲ2抗原結合構築物の前記有効量が、3週間毎に30ｍｇ／ｋｇである、本発明1008または1009の方法。
[本発明1013]
前記二重特異性抗ＨＥＲ2抗原結合構築物を前記対象に投与することが、前記対象において完全奏効（ＣＲ）、部分奏効（ＰＲ）、または安定（ＳＤ）をもたらす、本発明1001～1012のいずれかの方法。
[本発明1014]
前記二重特異性抗ＨＥＲ2抗原結合構築物で治療した対象群における病勢制御率が、60％、70％、または80％を超える、本発明1001～1012のいずれかの方法。
[本発明1015]
前記二重特異性抗ＨＥＲ2抗原結合構築物で治療した対象群における全奏効率が、50％、60％、70％、または80％を超える、本発明1001～1012のいずれかの方法。
[本発明1016]
前記二重特異性抗ＨＥＲ2抗原結合構築物が、少なくとも1つ、2つ、または3つの第一選択療法の後に投与される、本発明1001～1012のいずれかの方法。
[本発明1017]
前記二重特異性抗ＨＥＲ2抗原結合構築物が、第一選択単剤療法として投与される、本発明1001～1012のいずれかの方法。
[本発明1018]
前記二重特異性抗ＨＥＲ2抗原結合構築物が、アジュバント療法またはネオアジュバント療法として投与される、本発明1001～1017のいずれかの方法。
[本発明1019]
前記二重特異性抗ＨＥＲ2抗原結合構築物が、1つ以上の化学療法剤とともに投与される、本発明1001～1017のいずれかの方法。
[本発明1020]
前記1つ以上の化学療法剤が、ゲムシタビン及び／またはシスプラチンである、本発明1019の方法。
[本発明1021]
胆道癌（ＢＴＣ）の治療のための医薬の調製における、二重特異性抗ＨＥＲ2抗原結合構築物または抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）の使用。
[本発明1022]
前記ＢＴＣが、切除可能、部分切除可能、または切除不能である、本発明1021の使用。
[本発明1023]
前記ＢＴＣが、進行性である、本発明1021の使用。
[本発明1024]
前記ＢＴＣが、免疫組織化学（ＩＨＣ）及び遺伝子増幅により測定した場合、ＨＥＲ2 3＋、ＨＥＲ2 2＋、またはＨＥＲ2 1＋である、本発明1021～1023のいずれかの使用。
[本発明1025]
前記ＢＴＣが、ＨＥＲ2遺伝子増幅なしで、免疫組織化学（ＩＨＣ）により測定した場合、ＨＥＲ2 3＋、ＨＥＲ2 2＋、またはＨＥＲ2 1＋である、本発明1021～1023のいずれかの使用。
[本発明1026]
前記ＢＴＣが、胆嚢癌である、本発明1021～1025のいずれかの使用。
[本発明1027]
前記ＢＴＣが、胆管細胞癌（ＣＣＡ）である、本発明1021～1025のいずれかの使用。
[本発明1028]
前記二重特異性抗ＨＥＲ2抗原結合構築物が、重鎖Ｈ1、重鎖Ｈ2、及び軽鎖Ｌ1を含み、
ａ）重鎖Ｈ1が、配列番号39、配列番号40、及び配列番号41に記載のＣＤＲ配列を含み、
ｂ）重鎖Ｈ2が、配列番号67、配列番号68、配列番号69、配列番号70、配列番号71、及び配列番号72に記載のＣＤＲ配列を含み、
ｃ）重鎖Ｌ1が、配列番号27、配列番号28、及び配列番号29に記載のＣＤＲ配列を含む、
本発明1021～1027のいずれかの使用。
[本発明1029]
前記二重特異性抗ＨＥＲ2抗原結合構築物が、配列番号36に記載のアミノ酸配列を含む重鎖Ｈ1、配列番号63に記載のアミノ酸配列を含む重鎖Ｈ2、及び配列番号24に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖Ｌ1を含む、本発明1021～1027のいずれかの使用。
[本発明1030]
前記二重特異性抗ＨＥＲ2抗原結合構築物の前記有効量が、10ｍｇ／ｋｇ／週である、本発明1028または1029の使用。
[本発明1031]
前記二重特異性抗ＨＥＲ2抗原結合構築物の前記有効量が、2週間毎に20ｍｇ／ｋｇである、本発明1028または1029の使用。
[本発明1032]
前記二重特異性抗ＨＥＲ2抗原結合構築物の前記有効量が、3週間毎に30ｍｇ／ｋｇである、本発明1028または1029の使用。
[本発明1033]
前記二重特異性抗ＨＥＲ2抗原結合構築物を前記対象に投与することが、前記対象において完全奏効（ＣＲ）、部分奏効（ＰＲ）、または安定（ＳＤ）をもたらす、本発明1021～1032のいずれかの使用。
[本発明1034]
前記二重特異性抗ＨＥＲ2抗原結合構築物で治療した対象群における病勢制御率が、60％、70％、または80％を超える、本発明1021～1032のいずれかの使用。
[本発明1035]
前記二重特異性抗ＨＥＲ2抗原結合構築物で治療した対象群における全奏効率が、50％、60％、70％、または80％を超える、本発明1021～1032のいずれかの使用。
[本発明1036]
前記二重特異性抗ＨＥＲ2抗原結合構築物が、少なくとも1つ、2つ、または3つの第一選択療法の後に投与される、本発明1021～1032のいずれかの使用。
[本発明1037]
前記二重特異性抗ＨＥＲ2抗原結合構築物が、第一選択単剤療法として投与される、本発明1021～1032のいずれかの使用。
[本発明1038]
前記二重特異性抗ＨＥＲ2抗原結合構築物が、アジュバント療法またはネオアジュバント療法として投与される、本発明1021～1037のいずれかの使用。
[本発明1039]
前記二重特異性抗ＨＥＲ2抗原結合構築物が、1つ以上の化学療法剤とともに投与される、本発明1021～1037のいずれかの使用。
[本発明1040]
前記1つ以上の化学療法剤が、ゲムシタビン及び／またはシスプラチンである、本発明1039の使用。
Ｆａｂ／ｓｃＦｖ形式の例示的な二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物の表現を示す。 ＢＴＣを有し、ｖ１００００で治療された対象における治療期間及び径和（ＳＯＤ）の最大減少を示す。
詳細な説明
ＨＥＲ２を標的とする二重特異性抗原結合構築物を患者に投与することを含む、対象の胆道癌（ＢＴＣ）を治療する方法を本明細書に記載する。いくつかの実施形態では、ＨＥＲ２を標的とする二重特異性抗原結合構築物は、アウリスタチン類似体に結合される（本明細書において抗体－薬物コンジュゲートまたはＡＤＣと称される）。いくつかの実施形態では、ＨＥＲ２を標的とする二重特異性抗原結合構築物は、胆嚢癌または胆管細胞癌を治療する方法に使用され得る。他の実施形態では、ＨＥＲ２を標的とする二重特異性抗原結合構築物は、ＢＴＣを有する対象に投与されたとき、対象における腫瘍または病変のサイズの減少をもたらし得る。さらに他の実施形態では、ＨＥＲ２を標的とする二重特異性抗原結合構築物の投与は、ＲＥＣＩＳＴ １．１ガイドラインにより測定した場合、対象における完全奏効（ＣＲ）、部分奏効（ＰＲ）または安定（ＳＤ）をもたらし得る。
本明細書には、ＨＥＲ２を標的とする二重特異性抗原結合構築物を、１つ以上の化学療法剤とともに対象に投与することを含む、ＢＴＣを治療する方法も記載される。
定義
別段に定義されない限り、本明細書で使用されるすべての技術用語及び科学用語は、当業者によって一般に理解されるものと同じ意味を有する。
本明細書で使用される場合、「約」という用語は、別段の指示がない限り、所与の値からの約＋／－１０％の変動を指す。そのような変形は、具体的に言及されているかどうかにかかわらず、本明細書で提供される任意の所与の値に常に含まれることを理解されたい。
「含む」という用語と併せて本明細書で使用される場合の「１つの（ａ）」または「１つの（ａｎ）」という語の使用は、「１つ」を意味し得るが、それはまた特定の実施形態では、「１つ以上」、「少なくとも１つ」または「１つまたは１つより多く」の意味と一致する。
本明細書で使用される場合、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「有する（ｈａｖｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」及び「含有する（ｃｏｎｔａｉｎｇ）」という用語、ならびにそれらの文法的変形は、包括的または開放的であり、追加の、列挙されていない要素及び／または方法ステップを除外しない。「～から本質的になる」という用語は、組成物、使用、または方法に関連して本明細書で使用される場合、追加の要素及び／または方法ステップが存在し得るが、これらの追加は、列挙される組成物、方法、または使用が機能する様式に実質的に影響を与えないことを意味する。「～からなる」という用語は、組成物、使用、または方法に関連して本明細書で使用される場合、追加の要素及び／または方法ステップの存在を排除する。特定の要素及び／またはステップを含むものとして本明細書に記載される組成物、使用または方法は、特定の実施形態では、それらの要素及び／またはステップから本質的になってもよく、他の実施形態では、それらの実施形態が具体的に言及されているかどうかに関わらず、それらの要素及び／またはステップからなってもよい。
本明細書で論じられる任意の実施形態は、本明細書に開示される任意の方法、使用または組成物に関して実施され得ることが企図される。
本明細書に開示される実施形態に関連して記載される特定の特徴、構造及び／または特徴は、１つ以上のさらなる実施形態を提供するために、本明細書に開示される別の実施形態に関連して記載される特徴、構造及び／または特徴と任意の好適な方法で組み合わせられ得る。
また、一実施形態における特徴の明確な列挙は、代替の実施形態における特徴を除外するための基礎となることも理解されたい。例えば、選択肢のリストが所与の実施形態または特許請求の範囲に対して提示される場合、そのような代替の実施形態が具体的に言及されているかどうかにかかわらず、１つ以上の選択肢がそのリストから削除され得、短縮されたリストが代替の実施形態を形成し得ることを理解されたい。
ＨＥＲ２に結合する二重特異性抗原結合構築物
ＨＥＲ２に結合する二重特異性抗原結合構築物（二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物とも称される）を以下に記載する。
用語「抗原結合構築物」は、抗原に結合することができる物質、例えば、ポリペプチドまたはポリペプチド複合体を指す。いくつかの態様において、抗原結合構築物は、目的の抗原に特異的に結合するポリペプチドである。抗原結合構築物は、単量体、二量体、多量体、タンパク質、ペプチド、またはタンパク質もしくはペプチド複合体；抗体、抗体断片、またはその抗原結合断片；ｓｃＦｖ等であり得る。抗原結合構築物は、単一特異性、二重特異性、または多重特異性であるポリペプチド構築物であってもよい。いくつかの態様において、抗原結合構築物は、例えば、１つ以上のＦｃに結合した１つ以上の抗原結合成分（例えば、ＦａｂまたはｓｃＦｖ）を含むことができる。抗原結合構築物のさらなる例を、以下に記載し、実施例において提供する。
「二重特異性」という用語は、それぞれ固有の結合特異性を有する２つの抗原結合部分（例えば、抗原結合ポリペプチド構築物）を有する任意の物質、例えば、抗原結合構築物を含むことが意図される。例えば、第１の抗原結合部分は、第１の抗原上のエピトープに結合し、第２の抗原結合部分は、第２の抗原上のエピトープに結合する。「バイパラトピック」という用語は、本明細書で使用される場合、第１の抗原結合部分及び第２の抗原結合部分が、同じ抗原上の異なるエピトープに結合する二重特異性抗体を指す。バイパラトピック二重特異性抗体は、同じ抗原分子上の２つのエピトープに結合してもよいか、または２つの異なる抗原分子上のエピトープに結合してもよい。
単一特異性抗原結合構築物は、１つの結合特異性を有する抗原結合構築物を指す。換言すると、両方の抗原結合部位が、同じ抗原上の同じエピトープに結合する。単一特異性抗原結合構築物の例として、ＨＥＲ２に結合するトラスツズマブ及びペルツズマブが挙げられる。
抗原結合構築物は、抗体またはその抗原結合部分であり得る。本明細書で使用される場合、「抗体」または「免疫グロブリン」は、分析物（例えば、抗原）に特異的に結合してそれを認識する、単数の免疫グロブリン遺伝子もしくは複数の免疫グロブリン遺伝子によって実質的にコードされるポリペプチド、またはその断片を指す。認識されている免疫グロブリン遺伝子として、カッパ、ラムダ、アルファ、ガンマ、デルタ、イプシロン及びミュー定常領域遺伝子、ならびに無数の免疫グロブリン可変領域遺伝子が挙げられる。軽鎖は、カッパまたはラムダのいずれかとして分類される。抗体または免疫グロブリンの「クラス」は、その重鎖によって保有される定常ドメインまたは定常領域の種類を指す。抗体には、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭの５つの主要なクラスがあり、これらのうちのいくつかは、サブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２にさらに分割され得る。免疫グロブリンの異なるクラスに対応する重鎖定常ドメインは、それぞれ、α、δ、ε、γ、及びμと呼ばれる。
例示的な免疫グロブリン（抗体）構造単位は、２対のポリペプチド鎖対からなり、各対が、１本の「軽」鎖（約２５ｋＤ）と、１本の「重」鎖（約５０～７０ｋＤ）とを有する。各鎖のＮ末端ドメインが、抗原認識に主に関与する約１００～１１０またはそれ以上のアミノ酸の可変領域を定義する。「可変軽鎖（ＶＬ）」及び「可変重鎖（ＶＨ）」という用語は、それぞれこれらの軽鎖ドメイン及び重鎖ドメインを指す。ＩｇＧ１重鎖は、Ｎ末端からＣ末端へ、それぞれ、ＶＨ、ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３ドメインを含む。軽鎖は、Ｎ末端からＣ末端へ、ＶＬ及びＣＬドメインを含む。ＩｇＧ１重鎖は、ＣＨ１ドメインとＣＨ２ドメインとの間にヒンジを含む。特定の実施形態では、免疫グロブリン構築物は、治療用ポリペプチドに接続されたＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、またはＩｇＥからの少なくとも１つの免疫グロブリンドメインを含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗原結合構築物に見出される免疫グロブリンドメインは、ダイアボディまたはナノボディ等の免疫グロブリンベースの構築物に由来するか、またはそれから誘導される。特定の実施形態では、本明細書に記載される免疫グロブリン構築物は、ラクダ科抗体等の重鎖抗体からの少なくとも１つの免疫グロブリンドメインを含む。特定の実施形態では、本明細書で提供される免疫グロブリン構築物は、ウシ抗体、ヒト抗体、ラクダ科抗体、マウス抗体または任意のキメラ抗体等の、哺乳動物抗体からの少なくとも１つの免疫グロブリンドメインを含む。
「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」は、抗原結合特異性及び親和性に寄与するアミノ酸配列である。「フレームワーク」領域（ＦＲ）は、抗原結合領域と抗原との間の結合を促進するために、ＣＤＲの適切な立体配座の維持に役立ち得る。構造的に、フレームワーク領域は、ＣＤＲ間の抗体内に位置することができる。可変領域は、典型的には、ＣＤＲとしても知られる、３つの超可変領域によって結合された、比較的保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）の同じ一般的な構造を示す。重鎖及び軽鎖の可変ドメインからのＣＤＲは、典型的には、フレームワーク領域によって整列され、これにより特定のエピトープへの結合を可能にすることができる。Ｎ末端からＣ末端まで、軽鎖可変ドメイン及び重鎖可変ドメインの両方は、典型的には、ドメインＦＲ １、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、及びＦＲ４を含む。各ドメインへのアミノ酸の割り当ては、特に断りのない限り、典型的には、Ｋａｂａｔ Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９８７年及び１９９１年））に従う。典型的には、免疫グロブリンの可変部分には、３つの重鎖ＣＤＲ及び３つの軽鎖ＣＤＲ（またはＣＤＲ領域）がある。３つの重鎖ＣＤＲは、本明細書においてＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３と称され、３つの軽鎖ＣＤＲは、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３と称される。したがって、本明細書で使用される「ＣＤＲ」は、３つすべての重鎖ＣＤＲ、または３つすべての軽鎖ＣＤＲ（または必要に応じて、すべての重鎖ＣＤＲ及びすべての軽鎖ＣＤＲの両方）を指し得る。ＣＤＲは、抗体の抗原またはエピトープへの結合のための接触残基の大部分を提供する。多くの場合、３つの重鎖ＣＤＲ及び３つの軽鎖ＣＤＲは、抗原に結合するために必要とされる。しかしながら、いくつかの場合において、単一の可変ドメインであっても、抗原に対する結合特異性を与えることができる。さらに、当該技術分野で既知であるように、場合によっては、抗原結合はまた、ＶＨ及び／またはＶＬドメイン、例えばＣＤＲＨ３から選択される最低限の１つ以上のＣＤＲの組み合わせを介して生じ得る。
Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．によって記載されるもの（１９８３，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ Ｎｏ．３６９－８４７，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ）、Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．によって記載されるもの（１９８７，Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ，１９６：９０１－９１７）、ならびにＩＭＧＴ、ＡｂＭ（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｂａｔｈ）及びＣｏｎｔａｃｔ（ＭａｃＣａｌｌｕｍ Ｒ．Ｍ．及びＭａｒｔｉｎ Ａ．Ｃ．Ｒ．及びＴｈｏｒｎｔｏｎ Ｊ．Ｍ，（１９９６），Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，２６２（５），７３２－７４５）の定義を含む、ＣＤＲ配列のいくつかの異なる定義が一般的に用いられている。例として、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＩＭＧＴ、ＡｂＭ及びＣｏｎｔａｃｔによるＣＤＲ定義を、以下の表１に提供する。したがって、当業者には容易に明らかであるように、ＣＤＲの正確な番号付け及び配置は、使用される番号付けシステムに基づいて異なり得る。しかしながら、ＶＨの本明細書における開示は、既知の番号付けシステムのいずれかによって定義される、関連する（固有の）重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ）の開示を含むことを理解されたい。同様に、ＶＬの本明細書における開示は、既知の番号付けシステムのいずれかによって定義される、関連する（固有の）軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ）の開示を含む。
（表１）一般的なＣＤＲの定義１
Figure 2024056808000002
１Ｃｈｏｔｈｉａ番号付けを使用するＣｏｎｔａｃｔを除くすべての定義について、ＫａｂａｔまたはＣｈｏｔｈｉａ番号付けシステムのいずれかを、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、及び軽鎖ＣＤＲに使用することができる。
２Ｋａｂａｔ番号付けを使用する。ＫａｂａｔがこれらのＣＤＲ定義外の挿入を位置３５Ａ及び３５Ｂに配置するため、Ｃｈｏｔｈｉａ及びＩＭＧＴのＣＤＲ－Ｈ１ループの末端を区切るＫａｂａｔ番号付けスキームの位置は、ループの長さに応じて変化する。しかしながら、ＩＭＧＴ及びＣｈｏｔｈｉａのＣＤＲ－Ｈ１ループは、Ｃｈｏｔｈｉａ番号付けを使用して明確に定義することができる。Ｃｈｏｔｈｉａ番号付けを使用したＣＤＲ－Ｈ１定義：Ｋａｂａｔ Ｈ３１～Ｈ３５、Ｃｈｏｔｈｉａ Ｈ２６～Ｈ３２、ＡｂＭ Ｈ２６～Ｈ３５、ＩＭＧＴ Ｈ２６～Ｈ３３、Ｃｏｎｔａｃｔ Ｈ３０～Ｈ３５。
本明細書で使用される場合、「一本鎖」という用語は、ペプチド結合によって直鎖状に結合されたアミノ酸単量体を含む分子を指す。特定の実施形態では、抗原結合ポリペプチド構築物の１つは、一本鎖Ｆｖ分子（ｓｃＦｖ）である。本明細書でより詳細に記載されるように、ｓｃＦｖは、ポリペプチド鎖によって、そのＣ末端から重鎖の可変ドメイン（ＶＨ）のＮ末端に接続された軽鎖の可変ドメイン（ＶＬ）を有する。代替的に、ｓｃＦｖは、ＶＨのＣ末端がポリペプチド鎖によってＶＬのＮ末端に接続されているポリペプチド鎖であり得る。
抗原結合ポリペプチド構築物
二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物は、ＨＥＲ２の特定のドメインまたはエピトープにそれぞれ結合する２つの抗原結合ポリペプチド構築物を含む。一実施形態では、各抗原結合ポリペプチド構築物は、ＨＥＲ２の細胞外ドメイン、例えばＥＣＤ２またはＥＣＤ４に結合する。抗原結合ポリペプチド構築物は、用途に応じて、例えば、Ｆａｂ、またはｓｃＦｖであり得る。
二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物の形式は、二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物の機能的特徴を決定する。一実施形態では、二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物は、ｓｃＦｖ－Ｆａｂ形式を有する（すなわち、一方の抗原結合ポリペプチド構築物がｓｃＦｖであり、他法の抗原結合ポリペプチド構築物がＦａｂである、Ｆａｂ－ｓｃＦｖ形式とも称される）。別の実施形態では、二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物は、ｓｃＦｖ－ｓｃＦｖ形式を有する（すなわち、両方の抗原結合ポリペプチド構築物は、ｓｃＦｖである）。
「Ｆａｂ断片」（断片抗原結合とも称される）は、軽鎖の定常ドメイン（ＣＬ）及び重鎖の第１の定常ドメイン（ＣＨ１）を、それぞれ軽鎖及び重鎖上の可変ドメインＶＬ及びＶＨとともに含む。可変ドメインは、抗原結合に関与する相補性決定ループ（ＣＤＲ、超可変領域とも称される）を含む。Ｆａｂ’断片は、重鎖ＣＨ１ドメインのカルボキシ末端における、抗体ヒンジ領域からの１つ以上のシステインを含む数個の残基の付加によって、Ｆａｂ断片とは異なる。
「一本鎖Ｆｖ」または「ｓｃＦｖ」は、抗体のＶＨ及びＶＬドメインを含み、これらのドメインは単一のポリペプチド鎖内に存在する。一実施形態では、Ｆｖポリペプチドは、ＶＨドメインとＶＬドメインとの間にポリペプチドリンカーをさらに含み、これにより、ｓｃＦｖが抗原結合のための所望の構造を形成することが可能になる。ＳｃＦｖの概説については、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ ｉｎ Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ｖｏｌ．１１３，Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ ａｎｄ Ｍｏｏｒｅ ｅｄｓ．，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ｐｐ．２６９－３１５（１９９４）を参照されたい。ＨＥＲ２抗体ｓｃＦｖ断片は、ＷＯ９３／１６１８５、米国特許第５，５７１，８９４号、及び米国特許第５，５８７，４５８号に記載されている。
抗原結合構築物の形式及び機能
本明細書で提供されるのは、２つの抗原結合ポリペプチド構築物を有し、そのうちの第１の抗原結合ポリペプチド構築物がＨＥＲ２ ＥＣＤ２に特異的に結合し、そのうちの第２の抗原結合ポリペプチド構築物がＨＥＲ２ ＥＣＤ４に特異的に結合する、二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物である。二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物の形式は、第１または第２の抗原結合ポリペプチドのうちの少なくとも１つがｓｃＦｖであるようにする。二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物の形式は、ｓｃＦｖ－ｓｃＦｖ、またはＦａｂ－ｓｃＦｖ、またはｓｃＦｖ－Ｆａｂ（それぞれ、第１の抗原結合ポリペプチド構築物－第２の抗原結合ポリペプチド）であり得る。
特定の実施形態では、二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物は、（ｉ）上皮成長因子またはヘレグリンによる刺激の存在下または非存在下の両方でがん細胞増殖を阻害する能力、（ｉｉ）がん細胞内で内在化される能力（ＨＥＲ２抗原に結合して、それを内在化させることによる）、及び（ｉｉｉ）抗体指向性エフェクター細胞死滅（ＡＤＣＣ）を媒介する能力等の抗腫瘍活性をインビトロで示す。これらのインビトロ活性は、裸の二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物、及びアウリスタチン類似体にコンジュゲートされた二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物の両方に、様々なレベルのＨＥＲ２発現（１＋、２＋及び３＋）で観察される。
二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物の形式（ｓｃＦｖ／ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ／ＦａｂまたはＦａｂ／Ｆａｂ）は、国際特許公開第ＷＯ２０１５／０７７８９１号に記載されるように、その機能プロファイルの決定において重要である。特定の実施形態では、抗ＨＥＲ２結合構築物は、ＥＣＤ２結合ポリペプチド構築物及びＥＣＤ４結合ポリペプチド構築物の両方がＦａｂである参照抗原結合構築物と比較して、ＨＥＲ２発現腫瘍細胞によって内在化される能力の増加を示す。二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物の内部移行の程度は、ＥＣＤ２またはＥＣＤ４に対する一方または両方の抗原結合ポリペプチド構築物の親和性を増加させることによってさらに改善され得ることが企図される。ＥＣＤ２結合ポリペプチドがＦａｂであり、ＥＣＤ４結合ポリペプチドがｓｃＦｖである一実施形態では、構築物は、Ｆａｂ／Ｆａｂ形式を有する同等の親和性の構築物と比較して大幅に内在化され、高及び低ＨＥＲ２発現腫瘍細胞によって、ｓｃＦｖ／ｓｃＦｖ形式を有する同等の親和性の構築物と同様の程度まで内在化される。容易に内在化される実施形態は、死滅をもたらすために腫瘍細胞による内在化を必要とする、抗体－薬物コンジュゲートの良好な候補である。逆に、特定の実施形態では、容易に内部化されない二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物は、Ｆａｂ／Ｆａｂ形式を有する同等の親和性の構築物と比較して、低レベルのＨＥＲ２を発現する腫瘍細胞のＡＤＣＣ死滅において増大した効力を示す。一実施形態では、Ｆａｂ／ｓｃＦｖ形式を有する二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物は、低レベルのＨＥＲ２（ＨＥＲ２０－１＋または１＋）を発現する腫瘍細胞のＡＤＣＣ死滅において、Ｆａｂ／Ｆａｂ形式を有する抗ＨＥＲ２構築物（ｓｃＦｖ／ｓｃＦｖ形式を有する二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物よりも強力である）よりも強力である。いくつかの実施形態の増強されたＡＤＣＣ能力は、１）低ＨＥＲ２受容体密度の細胞に積極的に結合し、続いて標的細胞表面上のＨＥＲ２受容体をクラスター化し、下流の細胞媒介性死滅を媒介する能力の増加、及び／または２）（内在化を引き起こすのではなく）細胞表面上に留まる能力の増加に起因し得る；したがって、それらは、細胞媒介性エフェクター死滅により利用可能である。
ＨＥＲ２
本明細書に記載される二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物は、ＨＥＲ２のＥＣＤ２及びＥＣＤ４に結合する抗原結合ポリペプチド構築物を含む。
「ＥｒｂＢ２」及び「ＨＥＲ２」という表現は、本明細書において互換的に使用され、例えば、Ｓｅｍｂａ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ（ＵＳＡ）８２：６４９７－６５０１（１９８５）及びＹａｍａｍｏｔｏ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ ３１９：２３０－２３４（１９８６）（Ｇｅｎｅｂａｎｋ ａｃｃｅｓｓｉｏｎ ｎｕｍｂｅｒ Ｘ０３３６３）に記載されるヒトＨＥＲ２を指す。「ｅｒｂＢ２」及び「ｎｅｕ」という用語は、ヒトＥｒｂＢ ２タンパク質をコードする遺伝子を指す。ｐ１８５またはｐ１８５ｎｅｕは、ｎｅｕ遺伝子のタンパク質産物を指す。
ＨＥＲ２はＨＥＲ受容体である。「ＨＥＲ受容体」は、ヒト上皮成長因子受容体（ＨＥＲ）ファミリーに属する受容体タンパク質チロシンキナーゼであり、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３、及びＨＥＲ４受容体を含む。ＨＥＲ受容体は、一般に、ＨＥＲリガンドに結合し得る細胞外ドメイン、親油性膜貫通ドメイン、保存された細胞内チロシンキナーゼドメイン、及びリン酸化され得るいくつかのチロシン残基を保有するカルボキシル末端シグナル伝達ドメインを含む。「ＨＥＲリガンド」は、ＨＥＲ受容体に結合する、及び／またはそれを活性化するポリペプチドを意味する。
ＨＥＲ２の細胞外（エクト）ドメインは、ドメインＩ（ＥＣＤ１、約１～１９５のアミノ酸残基）、ドメインＩＩ（ＥＣＤ２、約１９６～３１９のアミノ酸残基）、ドメインＩＩＩ（ＥＣＤ３、約３２０～４８８のアミノ酸残基）、及びドメインＩＶ（ＥＣＤ４、約４８９～６３０のアミノ酸残基）（シグナルペプチドを除いた残基番号付け）の４つのドメインを含む。Ｇａｒｒｅｔｔ ｅｔ ａｌ．Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．１１：４９５－５０５（２００３），Ｃｈｏ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ ４２１：７５６－７６０（２００３）、Ｆｒａｎｋｌｉｎ ｅｔ ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ ５：３１７－３２８（２００４）、Ｔｓｅ ｅｔ ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｔｒｅａｔ Ｒｅｖ．２０１２ Ａｐｒ；３８（２）：１３３－４２（２０１２）、またはＰｌｏｗｍａｎ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．９０：１７４６－１７５０（１９９３）を参照されたい。
ＨＥＲ２の配列は以下の通りであり、ＥＣＤ境界はドメインＩ：１～１６５、ドメインＩＩ：１６６～３２２、ドメインＩＩＩ：３２３～４８８、ドメインＩＶ：４８９～６０７である。
Figure 2024056808000003
「エピトープ２Ｃ４」は、抗体２Ｃ４が結合するＨＥＲ２の細胞外ドメイン内の領域である。エピトープ２Ｃ４は、ＨＥＲ２の細胞外ドメイン内のドメインＩＩからの残基を含む。２Ｃ４及びペルツズマブは、ドメインＩ、ＩＩ及びＩＩＩの接合部でＨＥＲ２の細胞外ドメインに結合する。Ｆｒａｎｋｌｉｎ ｅｔ ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ ５：３１７－３２８（２００４）。２Ｃ４エピトープに結合する抗体をスクリーニングするために、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｅｄ Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｄａｖｉｄ Ｌａｎｅ（１９８８）に記載されるような日常的なクロスブロッキングアッセイを行うことができる。代替的に、当該技術分野で既知の方法を使用して、その抗体がＨＥＲ２の２Ｃ４エピトープに結合するかどうかを評価するために、エピトープマッピングを行うことができ、及び／または、ＨＥＲ２のどのドメイン（複数可）が抗体によって結合されているかを確認するために抗体－ＨＥＲ２構造を調べることができる（Ｆｒａｎｋｌｉｎ ｅｔ ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ ５：３１７－３２８（２００４））。
「エピトープ４Ｄ５」は、抗体４Ｄ５（ＡＴＣＣ ＣＲＬ １０４６３）及びトラスツズマブが結合するＨＥＲ２の細胞外ドメイン内の領域である。このエピトープは、ＨＥＲ２の膜貫通ドメインに近く、かつＨＥＲ２のドメインＩＶ内にある。４Ｄ５エピトープに結合する抗体をスクリーンするために、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｅｄ Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｄａｖｉｄ Ｌａｎｅ（１９８８）に記載されるような日常的なクロスブロッキングアッセイを実施することができる。代替的に、その抗体がＨＥＲ２の４Ｄ５エピトープ（例えば、両端を含めて、約残基５２９～約残基６２５の領域にある任意の１つ以上の残基、米国特許公開第２００６／００１８８９９号の図１を参照されたい）に結合するかどうかを評価するために、エピトープマッピングを行うことができる。
「特異的に結合する」、「特異的結合」または「選択的結合」は、結合がその抗原に対して選択的であり、望ましくないまたは非特異的な相互作用から区別され得ることを意味する。二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物が特異的抗原決定基に結合する能力は、酵素結合免疫吸着決定法（ＥＬＩＳＡ）、または当業者が精通している他の技術、例えば、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）技術（ＢＩＡｃｏｒｅ機器で分析）（Ｌｉｌｊｅｂｌａｄ ｅｔ ａｌ，Ｇｌｙｃｏ Ｊ １７，３２３－３２９（２０００））、及び従来の結合アッセイ（Ｈｅｅｌｅｙ，Ｅｎｄｏｃｒ Ｒｅｓ ２８，２１７－２２９（２００２））のいずれかによって測定することができる。一実施形態では、無関係なタンパク質への抗原結合部分の結合の程度は、例えば、ＳＰＲにより測定した場合、その抗原への二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物の結合の約１０％未満である。特定の実施形態では、抗原に結合する二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物、またはその抗原結合部分を含む抗原結合分子は、＜１μΜ、＜１００ｎＭ、＜１０ｎＭ、＜１ｎＭ、＜０．１ｎＭ、＜０．０１ｎＭ、または＜０．００１ｎＭ（例えば、１０～８Ｍ以下、例えば、１０～８Ｍ～１０”１３Ｍ、例えば、１０”９Ｍ～１０”１３Ｍ）の解離定数（ＫＤ）を有する。
「ヘレグリン」（ＨＲＧ）は、本明細書で使用される場合、米国特許第５，６４１，８６９号、またはＭａｒｃｈｉｏｎｎｉ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３６２：３１２－３１８（１９９３）に開示されるようなヘレグリン遺伝子産物によってコードされるポリペプチドを指す。ヘレグリンの例として、ヘレグリン－α、ヘレグリン－β１、ヘレグリン－β２、及びヘレグリン－β３（Ｈｏｌｍｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２５６：１２０５－１２１０（１９９２）；及び米国特許第５，６４１，８６９号）；ｎｅｕ分化因子（ＮＤＦ）（Ｐｅｌｅｓ ｅｔ ａｌ．Ｃｅｌｌ ６９：２０５－２１６（１９９２））；アセチルコリン受容体誘導活性（ＡＲＩＡ）（Ｆａｌｌｓ ｅｔ ａｌ．Ｃｅｌｌ ７２：８０１－８１５（１９９３））；グリア成長因子（ＧＧＦ）（Ｍａｒｃｈｉｏｎｎｉ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３６２：３１２－３１８（１９９３））；感覚及び運動ニューロン由来因子（ＳＭＤＦ）（Ｈｏ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７０：１４５２３－１４５３２（１９９５））；γ－ヘレグリン（Ｓｃｈａｅｆｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｏｎｃｏｇｅｎｅ １５：１３８５－１３９４（１９９７））が挙げられる。この用語は、天然配列ＨＲＧポリペプチドの生物学的に活性な断片及び／またはアミノ酸配列変異体、例えば、そのＥＧＦ様ドメイン断片（例えば、ＨＲＧβ１１７７－２４４）を含む。
「ＨＥＲ２活性化」または「ＨＥＲ２活性化」は、任意の１つ以上のＨＥＲ受容体、またはＨＥＲ２受容体の活性化またはリン酸化を指す。一般に、ＨＥＲ活性化は、シグナル伝達をもたらす（例えば、ＨＥＲ受容体または基質ポリペプチド内のチロシン残基をリン酸化するＨＥＲ受容体の細胞内キナーゼドメインによって引き起こされるもの）。ＨＥＲ活性化は、目的のＨＥＲ受容体を含むＨＥＲ二量体へのＨＥＲリガンド結合によって媒介され得る。ＨＥＲ二量体へのＨＥＲリガンド結合は、二量体内のＨＥＲ受容体のうちの１つ以上のキナーゼドメインを活性化し得、それによって、ＨＥＲ受容体のうちの１つ以上におけるチロシン残基のリン酸化、及び／またはＡｋｔもしくはＭＡＰＫ細胞内キナーゼ等の追加の基質ポリペプチド（複数可）におけるチロシン残基のリン酸化をもたらす。
非ヒト（例えば、げっ歯類）抗体の「ヒト化」形態は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小配列を含むキメラ抗体である。ほとんどの場合、ヒト化抗体は、レシピエントの超可変領域由来の残基が、所望の特異性、親和性、及び能力を有するマウス、ラット、ウサギ、または非ヒト霊長類等の非ヒト種（ドナー抗体）の超可変領域由来の残基によって置き換えられたヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）である。いくつかの場合において、ヒト免疫グロブリンのフレームワーク領域（ＦＲ）残基は、対応する非ヒト残基によって置き換えられる。さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体またはドナー抗体には見られない残基を含み得る。これらの修飾は、抗体性能をさらに洗練するために行われる。一般に、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的にすべてを含み、超可変ループのすべてまたは実質的にすべてが非ヒト免疫グロブリンのものに対応し、ＦＲのすべてまたは実質的にすべてがヒト免疫グロブリン配列のものである。ヒト化抗体はまた、任意選択的に、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部、典型的にはヒト免疫グロブリンの少なくとも一部分を含むであろう。さらなる詳細については、Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ，３２１：５２２－５２５（１９８６）、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３３２：３２３－３２９（１９８８）、及びＰｒｅｓｔａ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．２：５９３－５９６（１９９２）を参照されたい。
二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物のＦｃ
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物は、Ｆｃ、例えば、二量体Ｆｃを含む。
本明細書における「Ｆｃドメイン」または「Ｆｃ領域」という用語は、定常領域の少なくとも一部を含む免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義するために使用される。この用語は、天然配列Ｆｃ領域及び変異型Ｆｃ領域を含む。本明細書において別段の定めがない限り、Ｆｃ領域または定常領域におけるアミノ酸残基の番号付けは、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ，１９９１に記載されるように、ＥＵインデックスとも称されるＥＵ番号付けシステムに従う。本明細書で使用される二量体Ｆｃの「Ｆｃポリペプチド」は、二量体Ｆｃドメインを形成する２つのポリペプチドのうちの１つ、すなわち、安定した自己会合が可能な免疫グロブリン重鎖のＣ末端定常領域を含むポリペプチドを指す。例えば、二量体ＩｇＧ ＦｃのＦｃポリペプチドは、ＩｇＧ ＣＨ２及びＩｇＧ ＣＨ３定常ドメイン配列を含む。
Ｆｃドメインは、ＣＨ３ドメインまたはＣＨ３及びＣＨ２ドメインのいずれかを含む。ＣＨ３ドメインは、二量体Ｆｃの２つのＦｃポリペプチドのそれぞれから１つで、２つのＣＨ３配列を含む。ＣＨ２ドメインは、二量体Ｆｃの２つのＦｃポリペプチドのそれぞれから１つで、２つのＣＨ２配列を含む。
いくつかの態様において、Ｆｃは、少なくとも１つまたは２つのＣＨ３配列を含む。いくつかの態様において、Ｆｃは、１つ以上のリンカーを用いてまたは用いずに、第１の抗原結合ポリペプチド構築物及び／または第２の抗原結合ポリペプチド構築物にカップリングされる。いくつかの態様において、Ｆｃは、ヒトＦｃである。いくつかの態様において、Ｆｃは、ヒトＩｇＧまたはＩｇＧ１ Ｆｃである。いくつかの態様において、Ｆｃは、ヘテロ二量体Ｆｃである。いくつかの態様において、Ｆｃは、少なくとも１つまたは２つのＣＨ２配列を含む。
いくつかの態様において、Ｆｃは、ＣＨ３配列のうちの少なくとも１つに１つ以上の修飾を含む。いくつかの態様において、Ｆｃは、ＣＨ２配列のうちの少なくとも１つに１つ以上の修飾を含む。いくつかの態様において、Ｆｃは、単一のポリペプチドである。いくつかの態様において、Ｆｃは、複数のペプチド、例えば、２つのポリペプチドである。
いくつかの態様において、Ｆｃは、２０１１年１１月４日に出願された特許出願ＰＣＴ／ＣＡ２０１１／００１２３８または２０１２年１１月２日に出願されたＰＣＴ／ＣＡ２０１２／０５０７８０に記載されるＦｃであり、これらのそれぞれの開示全体は、あらゆる目的のために参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
修飾ＣＨ３ドメイン
いくつかの態様において、本明細書に記載される二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物は、非対称に修飾された修飾ＣＨ３ドメインを含むヘテロ二量体Ｆｃを含む。ヘテロ二量体Ｆｃは、２つの重鎖定常ドメインポリペプチドである第１のＦｃポリペプチド及び第２のＦｃポリペプチドを含むことができ、これらは、Ｆｃが１つの第１のＦｃポリペプチド及び１つの第２のＦｃポリペプチドを含むことを条件として、互換的に使用され得る。一般に、第１のＦｃポリペプチドは第１のＣＨ３配列を含み、第２のＦｃポリペプチドは第２のＣＨ３配列を含む。
非対称に導入された１つ以上のアミノ酸修飾を含む２つのＣＨ３配列は、２つのＣＨ３配列が二量体化するとき、概して、ホモ二量体ではなくヘテロ二量体Ｆｃをもたらす。本明細書で使用される場合、「非対称アミノ酸修飾」は、第１のＣＨ３配列上の特定の位置にあるアミノ酸が、同じ位置にある第２のＣＨ３配列上のアミノ酸とは異なり、第１及び第２のＣＨ３配列が、優先的に対合して、ホモ二量体ではなくヘテロ二量体を形成する任意の修飾を指す。このヘテロ二量体化は、各配列上の同じそれぞれのアミノ酸位置にある２つのアミノ酸のうちの一方のみの修飾、または第１及び第２のＣＨ３配列の各々の上の同じそれぞれの位置にある各配列上の両方のアミノ酸の修飾の結果であり得る。ヘテロ二量体Ｆｃの第１及び第２のＣＨ３配列は、１つ以上の非対称アミノ酸修飾を含むことができる。
表２は、完全長ヒトＩｇＧ１重鎖のアミノ酸２３１～４４７に対応する、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ配列のアミノ酸配列を提供する。ＣＨ３配列は、完全長ヒトＩｇＧ１重鎖のアミノ酸３４１～４４７を含む。
典型的には、Ｆｃは、二量体化可能な２つの連続した重鎖配列（Ａ及びＢ）を含むことができる。いくつかの態様において、Ｆｃの一方または両方の配列は、以下の位置に１つ以上の変異または修飾を含む：ＥＵ番号付けを使用した、Ｌ３５１、Ｆ４０５、Ｙ４０７、Ｔ３６６、Ｋ３９２、Ｔ３９４、Ｔ３５０、Ｓ４００、及び／またはＮ３９０。いくつかの態様において、Ｆｃは、表２に示される変異配列を含む。いくつかの態様において、Ｆｃは、変異体１Ａ～Ｂの変異を含む。いくつかの態様において、Ｆｃは、変異体２Ａ～Ｂの変異を含む。いくつかの態様において、Ｆｃは、変異体３Ａ～Ｂの変異を含む。いくつかの態様において、Ｆｃは、変異体４Ａ～Ｂの変異を含む。いくつかの態様において、Ｆｃは、変異体５Ａ～Ｂの変異を含む。
（表２）ＩｇＧ１ Ｆｃ配列
Figure 2024056808000004
第１及び第２のＣＨ３配列は、完全長ヒトＩｇＧ１重鎖のアミノ酸２３１～４４７を参照して、本明細書に記載されるアミノ酸変異を含むことができる。一実施形態では、ヘテロ二量体Ｆｃは、第１のＣＨ３配列が、Ｆ４０５及びＹ４０７位にアミノ酸修飾を有し、第２のＣＨ３配列が、Ｔ３９４位にアミノ酸修飾を有する、修飾ＣＨ３ドメインを含む。一実施形態では、ヘテロ二量体Ｆｃは、第１のＣＨ３配列が、Ｌ３５１Ｙ、Ｆ４０５Ａ、及びＹ４０７Ｖから選択される１つ以上のアミノ酸修飾を有し、第２のＣＨ３配列が、Ｔ３６６Ｌ、Ｔ３６６Ｉ、Ｋ３９２Ｌ、Ｋ３９２Ｍ、及びＴ３９４Ｗから選択される１つ以上のアミノ酸修飾を有する、修飾ＣＨ３ドメインを含む。
一実施形態では、ヘテロ二量体Ｆｃは、第１のＣＨ３配列が、Ｌ３５１、Ｆ４０５及びＹ４０７位にアミノ酸修飾を有し、第２のＣＨ３配列が、Ｔ３６６、Ｋ３９２、及びＴ３９４位にアミノ酸修飾を有し、第１または第２のＣＨ３配列の一方が、Ｑ３４７位にアミノ酸修飾をさらに含み、他方のＣＨ３配列が、Ｋ３６０位にアミノ酸修飾をさらに含む、修飾ＣＨ３ドメインを含む。別の実施形態では、ヘテロ二量体Ｆｃは、第１のＣＨ３配列が、Ｌ３５１、Ｆ４０５及びＹ４０７位にアミノ酸修飾を有し、第２のＣＨ３配列が、Ｔ３６６、Ｋ３９２、及びＴ３９４位にアミノ酸修飾を有し、第１または第２のＣＨ３配列の一方が、Ｑ３４７位にアミノ酸修飾をさらに含み、他方のＣＨ３配列が、Ｋ３６０位にアミノ酸修飾をさらに含み、上記ＣＨ３配列の一方または両方が、アミノ酸修飾Ｔ３５０Ｖをさらに含む、修飾ＣＨ３ドメインを含む。
一実施形態では、ヘテロ二量体Ｆｃは、第１のＣＨ３配列が、Ｌ３５１、Ｆ４０５、及びＹ４０７位にアミノ酸修飾を有し、第２のＣＨ３配列が、Ｔ３６６、Ｋ３９２、及びＴ３９４位にアミノ酸修飾を有し、上記第１または第２のＣＨ３配列の一方が、Ｄ３９９ＲまたはＤ３９９Ｋのアミノ酸修飾をさらに含み、他方のＣＨ３配列が、Ｔ４１１Ｅ、Ｔ４１１Ｄ、Ｋ４０９Ｅ、Ｋ４０９Ｄ、Ｋ３９２Ｅ、及びＫ３９２Ｄのうちの１つ以上を含む、修飾ＣＨ３ドメインを含む。別の実施形態では、ヘテロ二量体Ｆｃは、第１のＣＨ３配列が、Ｌ３５１、Ｆ４０５、及びＹ４０７位にアミノ酸修飾を有し、第２のＣＨ３配列が、Ｔ３６６、Ｋ３９２、及びＴ３９４位にアミノ酸修飾を有し、上記第１または第２のＣＨ３配列の一方が、Ｄ３９９ＲまたはＤ３９９Ｋのアミノ酸修飾をさらに含み、他方のＣＨ３配列が、Ｔ４１１Ｅ、Ｔ４１１Ｄ、Ｋ４０９Ｅ、Ｋ４０９Ｄ、Ｋ３９２Ｅ、及びＫ３９２Ｄのうちの１つ以上を含み、上記ＣＨ３配列の一方または両方が、アミノ酸修飾Ｔ３５０Ｖをさらに含む、修飾ＣＨ３ドメインを含む。
一実施形態では、ヘテロ二量体Ｆｃは、第１のＣＨ３配列が、Ｌ３５１、Ｆ４０５、及びＹ４０７位にアミノ酸修飾を有し、第２のＣＨ３配列が、Ｔ３６６、Ｋ３９２、及びＴ３９４位にアミノ酸修飾を有し、上記ＣＨ３配列の一方または両方が、Ｔ３５０Ｖのアミノ酸修飾をさらに含む修飾ＣＨ３ドメインを含む。
一実施形態では、ヘテロ二量体Ｆｃは、以下のアミノ酸修飾を含む修飾ＣＨ３ドメインを含み、「Ａ」は、第１のＣＨ３配列に対するアミノ酸修飾を表し、「Ｂ」は、第２のＣＨ３配列に対するアミノ酸修飾を表す：Ａ：Ｌ３５１Ｙ＿Ｆ４０５Ａ＿Ｙ４０７Ｖ、Ｂ：Ｔ３６６Ｌ＿Ｋ３９２Ｍ＿Ｔ３９４Ｗ、Ａ：Ｌ３５１Ｙ＿Ｆ４０５Ａ＿Ｙ４０７Ｖ、Ｂ：Ｔ３６６Ｌ＿Ｋ３９２Ｌ＿Ｔ３９４Ｗ、Ａ：Ｔ３５０Ｖ＿Ｌ３５１Ｙ＿Ｆ４０５Ａ＿Ｙ４０７Ｖ、Ｂ：Ｔ３５０Ｖ＿Ｔ３６６Ｌ＿Ｋ３９２Ｌ＿Ｔ３９４Ｗ、Ａ：Ｔ３５０Ｖ＿Ｌ３５１Ｙ＿Ｆ４０５Ａ＿Ｙ４０７Ｖ、Ｂ：Ｔ３５０Ｖ＿Ｔ３６６Ｌ＿Ｋ３９２Ｍ＿Ｔ３９４Ｗ、Ａ：Ｔ３５０Ｖ＿Ｌ３５１Ｙ＿Ｓ４００Ｅ＿Ｆ４０５Ａ＿Ｙ４０７Ｖ、及び／またはＢ：Ｔ３５０Ｖ＿Ｔ３６６Ｌ＿Ｎ３９０Ｒ＿Ｋ３９２Ｍ＿Ｔ３９４Ｗ。
１つ以上の非対称アミノ酸修飾は、ヘテロ二量体ＣＨ３ドメインが野生型ホモ二量体ＣＨ３ドメインに匹敵する安定性を有するヘテロ二量体Ｆｃの形成を促進することができる。一実施形態では、１つ以上の非対称アミノ酸修飾は、ヘテロ二量体Ｆｃドメインが、野生型ホモ二量体Ｆｃドメインに匹敵する安定性を有するヘテロ二量体Ｆｃドメインの形成を促進する。一実施形態では、１つ以上の非対称アミノ酸修飾は、ヘテロ二量体Ｆｃドメインが、示差走査熱量測定研究において融解温度（Ｔｍ）によって観察される安定性を有し、融解温度が、対応する対称な野生型ホモ二量体Ｆｃドメインで観察される融解温度の４℃以内である、ヘテロ二量体Ｆｃドメインの形成を促進する。いくつかの態様において、Ｆｃは、ＣＨ３配列の少なくとも１つに、野生型ホモ二量体Ｆｃに匹敵する安定性を有するヘテロ二量体Ｆｃの形成を促進する１つ以上の修飾を含む。
例示的な二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物
特定の実施形態では、二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物は、米国特許出願公開第２０１６／０２８９３３５号または国際特許公開第ＷＯ２０１５／０７７８９１号に記載されるバイパラトピック抗体のうちの１つである。いくつかの実施形態では、二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物は、ｖ５０１９、ｖ５０２０、ｖ７０９１、ｖ１００００、ｖ６９０２、ｖ６９０３またはｖ６７１７のうちの１つである（表３、４、５、及び配列表を参照のこと）。いくつかの実施形態では、二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物の抗原結合ポリペプチド構築物のうちの１つは、ｖ５０１９、ｖ５０２０、ｖ７０９１、ｖ１００００、ｖ６９０２、ｖ６９０３またはｖ６７１７のうちの１つのＥＣＤ２結合アームからのＶＨ配列及びＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物の抗原結合ポリペプチド構築物のうちの１つは、ｖ５０１９、ｖ５０２０、ｖ７０９１、ｖ１００００、ｖ６９０２、ｖ６９０３またはｖ６７１７のうちの１つのＥＣＤ２結合アームからのＶＨ配列及びＶＬ配列を含み、他の抗原結合ポリペプチド構築物は、ｖ５０１９、ｖ５０２０、ｖ７０９１、ｖ１００００、ｖ６９０２、ｖ６９０３またはｖ６７１７のうちの１つのＥＣＤ４結合アームからのＶＨ配列及びＶＬ配列を含む。
いくつかの実施形態では、二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物の抗原結合ポリペプチド構築物のうちの１つは、ｖ５０１９、ｖ５０２０、ｖ７０９１、ｖ１００００、ｖ６９０２、ｖ６９０３またはｖ６７１７のうちの１つのＥＣＤ２結合アームからのＣＤＲ配列を含む。いくつかの実施形態では、二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物の抗原結合ポリペプチド構築物のうちの１つは、ｖ５０１９、ｖ５０２０、ｖ７０９１、ｖ１００００、ｖ６９０２、ｖ６９０３またはｖ６７１７のうちの１つのＥＣＤ２結合アームからのＣＤＲ配列を含み、他の抗原結合ポリペプチド構築物は、ｖ５０１９、ｖ５０２０、ｖ７０９１、ｖ１００００、ｖ６９０２、ｖ６９０３またはｖ６７１７のうちの１つのＥＣＤ４結合アームからのＣＤＲ配列を含む。
当業者は、抗体がその標的に結合する能力を失うことなく、限定された数のアミノ酸置換を、既知の抗体のＣＤＲ配列またはＶＨもしくはＶＬ配列に導入できることを理解するであろう。候補のアミノ酸置換は、コンピュータモデリングによって、またはアラニンスキャン等の当該技術分野で既知の技術によって同定することができ、得られた変異体は、標準的な技術によって結合活性について試験される。したがって、特定の実施形態では、二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物の抗原結合ポリペプチド構築物のうちの１つは、ｖ５０１９、ｖ５０２０、ｖ７０９１、ｖ１００００、ｖ６９０２、ｖ６９０３またはｖ６７１７のうちの１つのＥＣＤ２結合アームからのＣＤＲのセットに対して、９０％以上、９５％以上、９８％以上、９９％以上、または１００％の配列同一性を有するＣＤＲのセット（すなわち、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、ならびに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３）を含み、抗原結合ポリペプチド構築物は、ＥＣＤ２に結合する能力を保持する。特定の実施形態では、二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物の抗原結合ポリペプチド構築物のうちの１つは、６つのＣＤＲにわたって１～１０個のアミノ酸置換、例えば、ＣＤＲにわたって、１～７個のアミノ酸置換、１～５個のアミノ酸置換、１～４個のアミノ酸置換、１～３個のアミノ酸置換、１～２個のアミノ酸置換、または１個のアミノ酸置換を含む、これらのＣＤＲ配列の変異体を含み（すなわち、ＣＤＲは、修飾されるＣＤＲの任意の組み合わせを有する最大１０個のアミノ酸置換を含めることによって修飾され得る）、変異体は、ＥＣＤ２に結合する能力を保持する。典型的には、そのようなアミノ酸置換は、保存的アミノ酸置換である。特定の実施形態では、二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物の抗原結合ポリペプチド構築物のうちの１つは、ｖ１００００のＥＣＤ２結合アームからのＣＤＲのセットに対して、９０％以上、９５％以上、９８％以上、９９％以上、または１００％の配列同一性を有するＣＤＲのセット（すなわち、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、ならびに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３）を含み、抗原結合ポリペプチド構築物は、ＥＣＤ２に結合する能力を保持する。
特定の実施形態では、二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物の抗原結合ポリペプチド構築物の１つは、ｖ５０１９、ｖ５０２０、ｖ７０９１、ｖ１００００、ｖ６９０２、ｖ６９０３またはｖ６７１７のうちの１つのＥＣＤ２結合アームからのＶＨ配列と、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一であるＶＨ配列を含み、抗原結合ポリペプチド構築物は、ＥＣＤ２に結合する能力を保持する。いくつかの実施形態では、二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物の抗原結合ポリペプチド構築物の１つは、ｖ５０１９、ｖ５０２０、ｖ７０９１、ｖ１００００、ｖ６９０２、ｖ６９０３またはｖ６７１７のうちの１つのＥＣＤ２結合アームからのＶＬ配列と、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一であるＶＬ配列を含み、抗原結合ポリペプチド構築物は、ＥＣＤ２に結合する能力を保持する。
特定の実施形態では、二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物の抗原結合ポリペプチド構築物の１つは、ｖ１００００のＥＣＤ２結合アームからのＶＨ配列と、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一であるＶＨ配列を含み、抗原結合ポリペプチド構築物は、ＥＣＤ２に結合する能力を保持する。いくつかの実施形態では、二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物の抗原結合ポリペプチド構築物の１つは、ｖ１００００のＥＣＤ２結合アームからのＶＬ配列と、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一であるＶＬ配列を含み、抗原結合ポリペプチド構築物は、ＥＣＤ２に結合する能力を保持する。
特定の実施形態では、二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物の抗原結合ポリペプチド構築物のうちの１つは、ｖ５０１９、ｖ５０２０、ｖ７０９１、ｖ１００００、ｖ６９０２、ｖ６９０３またはｖ６７１７のうちの１つのＥＣＤ４結合アームからのＣＤＲのセットに対して、９０％以上、９５％以上、９８％以上、９９％以上、または１００％の配列同一性を有するＣＤＲのセット（すなわち、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、ならびに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３）を含み、抗原結合ポリペプチド構築物は、ＥＣＤ４に結合する能力を保持する。特定の実施形態では、二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物の抗原結合ポリペプチド構築物のうちの１つは、６つのＣＤＲにわたって１～１０個のアミノ酸置換、例えば、ＣＤＲにわたって、１～７個のアミノ酸置換、１～５個のアミノ酸置換、１～４個のアミノ酸置換、１～３個のアミノ酸置換、１～２個のアミノ酸置換、または１個のアミノ酸置換を含む、これらのＣＤＲ配列の変異体を含み（すなわち、ＣＤＲは、修飾されるＣＤＲの任意の組み合わせを有する最大１０個のアミノ酸置換を含めることによって修飾され得る）、変異体は、ＥＣＤ４に結合する能力を保持する。典型的には、そのようなアミノ酸置換は、保存的アミノ酸置換である。特定の実施形態では、二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物の抗原結合ポリペプチド構築物のうちの１つは、ｖ１００００のＥＣＤ４結合アームからのＣＤＲのセットに対して、９０％以上、９５％以上、９８％以上、９９％以上、または１００％の配列同一性を有するＣＤＲのセット（すなわち、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、ならびに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３）を含み、抗原結合ポリペプチド構築物は、ＥＣＤ４に結合する能力を保持する。
特定の実施形態では、二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物の抗原結合ポリペプチド構築物の１つは、ｖ５０１９、ｖ５０２０、ｖ７０９１、ｖ１００００、ｖ６９０２、ｖ６９０３またはｖ６７１７のうちの１つのＥＣＤ４結合アームからのＶＨ配列と、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一であるＶＨ配列を含み、抗原結合ポリペプチド構築物は、ＥＣＤ４に結合する能力を保持する。いくつかの実施形態では、二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物の抗原結合ポリペプチド構築物の１つは、ｖ５０１９、ｖ５０２０、ｖ７０９１、ｖ１００００、ｖ６９０２、ｖ６９０３またはｖ６７１７のうちの１つのＥＣＤ４結合アームからのＶＬ配列と、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一であるＶＬ配列を含み、抗原結合ポリペプチド構築物は、ＥＣＤ４に結合する能力を保持する。
特定の実施形態では、二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物の抗原結合ポリペプチド構築物の１つは、ｖ１００００のＥＣＤ４結合アームからのＶＨ配列と、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一であるＶＨ配列を含み、抗原結合ポリペプチド構築物は、ＥＣＤ４に結合する能力を保持する。いくつかの実施形態では、二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物の抗原結合ポリペプチド構築物の１つは、ｖ１００００のＥＣＤ４結合アームからのＶＬ配列と、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一であるＶＬ配列を含み、抗原結合ポリペプチド構築物は、ＥＣＤ４に結合する能力を保持する。
（表３）例示的な二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物
Figure 2024056808000005
Figure 2024056808000006
＊Ｋａｂａｔ（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈＥｄｉｔｉｏｎ，ＵＳ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ Ｎｏ．９１－３２４２，ｐ．６４７，１９９１）によるＦａｂまたは可変ドメインの番号付け
§ＣＨ３の番号付けは、Ｋａｂａｔと同様にＥＵインデックスに従う（Ｅｄｅｌｍａｎ ｅｔ ａｌ．，１９６９，ＰＮＡＳ ＵＳＡ，６３：７８－８５）
（表４）変異体ｖ５０１９、ｖ５０２０、ｖ７０９１、ｖ１００００、ｖ６９０２、ｖ６９０３及びｖ６７１７のＥＣＤ２結合アームのＣＤＲ配列
Figure 2024056808000007
（表５）変異体ｖ５０１９、ｖ５０２０、ｖ７０９１、ｖ１００００、ｖ６９０２、ｖ６９０３及びｖ６７１７のＥＣＤ４結合アームのＣＤＲ配列
Figure 2024056808000008
二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物の調製
本明細書に記載される二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物は、例えば、米国特許第４，８１６，５６７号または国際特許公開第ＷＯ２０１５／０７７８９１号に記載されるような、組換え方法及び組成物を使用して生成することができる。
一実施形態では、本明細書に記載される二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物をコードする単離核酸が提供される。そのような核酸は、二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物のＶＬを含むアミノ酸配列及び／またはＶＨを含むアミノ酸配列（例えば、抗原結合構築物の軽鎖及び／または重鎖）をコードし得る。さらなる実施形態では、そのような核酸を含む１つ以上のベクター（例えば、発現ベクター）が提供される。当該技術分野で既知のように、多くのアミノ酸が１つより多くのコドンによってコードされているため、複数の核酸が単一のポリペプチド配列をコードし得る。二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物の各ポリペプチドについて、例示的な核酸が本明細書で提供される；しかしながら、本明細書に記載される二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物を調製するために、他の核酸が使用され得ることを理解されたい。
一実施形態では、核酸は、マルチシストロン性ベクターで提供される。さらなる実施形態では、そのような核酸を含む宿主細胞が提供される。そのような一実施形態では、宿主細胞は、（１）二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物のＶＬを含むアミノ酸配列及び抗原結合ポリペプチド構築物のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含むベクター、または（２）抗原結合ポリペプチド構築物のＶＬを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第１のベクター、及び抗原結合ポリペプチド構築物のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第２のベクターを含む（例えば、以下で形質転換されている）。一実施形態では、宿主細胞は、真核生物、例えば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、またはヒト胚性腎臓（ＨＥＫ）細胞、またはリンパ系細胞（例えば、Ｙ０、ＮＳ０、Ｓｐ２０細胞）である。一実施形態では、二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物の作製方法が提供され、該方法は、二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物の発現に好適な条件下で、上述のように、二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物をコードする核酸を含む宿主細胞を培養することと、任意選択的に、宿主細胞（または宿主細胞培養培地）から二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物を回収することと、を含む。
二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物の組換え産生のために、例えば上述のように、二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物をコードする核酸を単離し、宿主細胞におけるさらなるクローニング及び／または発現のために１つ以上のベクターに挿入する。そのような核酸は、従来の手順を使用して（例えば、二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することが可能なオリゴヌクレオチドプローブを使用することによって）容易に単離及び配列決定され得る。
「実質的に精製された」という用語は、その天然に存在する環境、すなわち、天然の細胞、または組換え的に産生される二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物の場合、宿主細胞中に見出されるような、通常はタンパク質を伴うかまたはそれと相互作用する成分を実質的にまたは本質的に含まなくてもよく、特定の実施形態では、（乾燥重量で）約３０％未満、約２５％未満、約２０％未満、約１５％未満、約１０％未満、約５％未満、約４％未満、約３％未満、約２％未満、または約１％未満の汚染タンパク質を有するタンパク質の調製物を含む細胞材料を実質的に含まない、本明細書に記載される構築物またはその変異体を指す。二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物が宿主細胞によって組換え的に産生される場合、特定の実施形態では、タンパク質は、細胞の乾燥重量の約３０％、約２５％、約２０％、約１５％、約１０％、約５％、約４％、約３％、約２％、または約１％以下で存在する。二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物が宿主細胞によって組換え的に産生される場合、特定の実施形態では、タンパク質は、細胞の乾燥重量の約５ｇ／Ｌ、約４ｇ／Ｌ、約３ｇ／Ｌ、約２ｇ／Ｌ、約１ｇ／Ｌ、約７５０ｍｇ／Ｌ、約５００ｍｇ／Ｌ、約２５０ｍｇ／Ｌ、約１００ｍｇ／Ｌ、約５０ｍｇ／Ｌ、約１０ｍｇ／Ｌ、または約１ｍｇ／Ｌ以下で培養培地中に存在する。特定の実施形態では、本明細書に記載される方法によって産生される「実質的に精製された」二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物は、ＳＤＳ／ＰＡＧＥ分析、ＲＰ－ＨＰＬＣ、ＳＥＣ、及びキャピラリー電気泳動等の適切な方法により測定した場合、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％の純度レベル、具体的には、少なくとも約７５％、８０％、８５％の純度レベル、より具体的には、少なくとも約９０％の純度レベル、少なくとも約９５％の純度レベル、少なくとも約９９％以上の純度レベルを有する。
二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物をコードするベクターのクローニングまたは発現に好適な宿主細胞は、本明細書に記載される原核細胞または真核細胞を含む。
「組換え宿主細胞」または「宿主細胞」は、挿入に用いられる方法、例えば、直接取り込み、形質導入、Ｆ交配、または組換え宿主細胞を作製するために当該技術分野で既知である他の方法にかかわらず、外因性ポリヌクレオチドを含む細胞を指す。外因性ポリヌクレオチドは、非組み込みベクター、例えば、プラスミドとして維持され得るか、または代替的に、宿主ゲノムに組み込まれ得る。
本明細書で使用される場合、「真核生物」という用語は、動物（限定されないが、哺乳動物、昆虫、爬虫類、鳥類等を含むが）、繊毛虫類、植物（限定されないが、単子葉類、双子葉類、藻類等を含む）、真菌、酵母、鞭毛虫、微胞子虫、原生動物等の、系統学的な真核生物ドメインに属する生物を指す。
本明細書で使用される場合、「原核生物」という用語は、原核生物を指す。例えば、非真核生物は、真正細菌（限定されないが、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）、サーマス・サーモフィラス（Ｔｈｅｒｍｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）、バチルス・ステアロサーモフィルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）、シュードモナス・フルオレッセンス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ）、緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、シュードモナス・プチダ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｐｕｔｉｄａ）等を含む）系統ドメイン、または古細菌（限定されないが、メタノコックス・ヤンナスキイ（Ｍｅｔｈａｎｏｃｏｃｃｕｓ ｊａｎｎａｓｃｈｉｉ）、メタノバクテリウム・サーモオートトロフィカム（Ｍｅｔｈａｎｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｈｅｒｍｏａｕｔｏｔｒｏｐｈｉｃｕｍ）、ハロバクテリウム（Ｈａｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、例えばハロフェラックス・ボルカニ（Ｈａｌｏｆｅｒａｘ ｖｏｌｃａｎｉｉ）及びハロバクテリウム属の種（Ｈａｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｐｅｃｉｅｓ） ＮＲＣ－１、アーケオグロブス・フルギダス（Ａｒｃｈａｅｏｇｌｏｂｕｓ ｆｕｌｇｉｄｕｓ）、パイロコッカス・フリオサス（Ｐｙｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆｕｒｉｏｓｕｓ）、パイロコッカス・ホリコシイ（Ｐｙｒｏｃｏｃｃｕｓ ｈｏｒｉｋｏｓｈｉｉ）、アエロパイラム・ペルニクス（Ａｅｕｒｏｐｙｒｕｍ ｐｅｒｎｉｘ）等を含む）系統ドメインに属することができる。
例えば、二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物は、特にグリコシル化及びＦｃエフェクター機能が必要とされない場合、細菌において産生され得る。細菌における二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物の断片及びポリペプチドの発現については、例えば、米国特許第５，６４８，２３７号、同第５，７８９，１９９号、及び同第５，８４０，５２３号を参照されたい。（Ｅ．Ｃｏｌｉにおける抗体断片の発現を記載するＣｈａｒｌｔｏｎ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．２４８（Ｂ．Ｋ．Ｃ．Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，Ｎ．Ｊ．，２００３），ｐｐ．２４５－２５４も参照のこと）。発現後、二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物を可溶性画分中の細菌細胞ペーストから単離することができ、さらに精製することができる。
原核生物に加えて、糸状菌または酵母等の真核微生物は、二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物をコードするベクターに好適なクローニング宿主または発現宿主であり、これには、グリコシル化経路が「ヒト化」され、部分的または完全にヒトグリコシル化パターンを有する二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物の産生をもたらす真菌及び酵母株が含まれる。Ｇｅｒｎｇｒｏｓｓ，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２２：１４０９－１４１４（２００４）、及びＬｉ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２４：２１０－２１５（２００６）を参照されたい。
グリコシル化された二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物の発現に好適な宿主細胞はまた、多細胞生物（無脊椎動物及び脊椎動物）に由来する。無脊椎動物細胞の例として、植物細胞及び昆虫細胞が挙げられる。特に、ヨトウガ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）細胞のトランスフェクションのために、昆虫細胞とともに使用され得る多数のバキュロウイルス株が同定されている。
植物細胞培養物は、宿主として利用することもできる。例えば、米国特許第５，９５９，１７７号、同第６，０４０，４９８号、同第６，４２０，５４８号、同第７，１２５，９７８号、及び同第６，４１７，４２９号（トランスジェニック植物において抗原結合構築物を産生するためのＰＬＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ（商標）技術について記載している）を参照されたい。
脊椎動物細胞も宿主として使用され得る。例えば、懸濁液中で成長するように適合された哺乳類細胞株が有用であり得る。有用な哺乳類宿主細胞株の他の例として、ＳＶ４０（ＣＯＳ－７）によって形質転換されたサル腎臓ＣＶ１株、ヒト胚性腎臓株（例えば、Ｇｒａｈａｍｅｔａｌ．，Ｊ．ＧｅｎＶｉｒｏｌ．３６：５９（１９７７）に記載されるような２９３または２９３細胞））、ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ）、マウスセルトリ細胞（例えば、Ｍａｔｈｅｒ，Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ．２３：２４３－２５１（１９８０）に記載されるようなＴＭ４細胞）、サル腎臓細胞（ＣＶ１）、アフリカミドリザル腎臓細胞（ＶＥＲＯ－７６）、ヒト子宮頸癌細胞（ＨＥＬＡ）、イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ）、バッファローラット肝臓細胞（ＢＲＬ３Ａ）、ヒト肺細胞（Ｗ１３８）、ヒト肝臓細胞（ＨｅｐＧ２）、マウス乳房腫瘍（ＭＭＴ０６０５６２）、（例えば、Ｍａｔｈｅｒｅｔａｌ．Ａｎｎａｌｓ，Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．３８３：４４－６８（１９８２）に記載されるようなＴＲＩ細胞、ＭＲＣ５細胞、及びＦＳ４細胞が挙げられる。チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）を含む他の有用な哺乳類宿主細胞株は、ＤＨＦＲ－ＣＨＯ細胞（Ｕｒｌａｕｂ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７７：４２１６（１９８０））、ならびにＹ０、ＮＳ０及びＳｐ２／０等の骨髄腫細胞株を含む。抗原結合構築物の産生に好適な特定の哺乳類宿主細胞株の概説については、例えばＹａｚａｋｉ ａｎｄ Ｗｕ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．２４８（Ｂ．Ｋ．Ｃ．Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，Ｎ．Ｊ．），ｐｐ．２５５－２６８（２００３）を参照されたい。
一実施形態では、本明細書に記載される二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物は、少なくとも１つの安定な哺乳動物細胞を、所定の比率で、二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物をコードする核酸でトランスフェクトすることと、少なくとも１つの哺乳動物細胞において核酸を発現させることと、を含む方法によって、安定な哺乳動物細胞において産生される。いくつかの実施形態では、核酸の所定の比率は、発現産物中の二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物の割合が最も高くなる入力核酸の相対比率を決定するための一過性トランスフェクション実験において決定される。
いくつかの実施形態では、二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物は、安定な哺乳動物細胞において産生され、少なくとも１つの安定な哺乳動物細胞の発現産物は、単量体重鎖もしくは軽鎖ポリペプチド、または他の抗体と比較して、所望のグリコシル化された二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物のより大きな割合を含む。いくつかの実施形態では、グリコシル化された二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物の同定は、液体クロマトグラフィー及び質量分析の一方または両方によって行われる。
必要に応じて、二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物は、発現後に精製または単離することができる。タンパク質は、当業者に既知の様々な方法で単離または精製され得る。標準的な精製方法は、ＦＰＬＣ及びＨＰＬＣ等のシステムを使用して、大気圧または高圧で実施される、イオン交換、疎水性相互作用、親和性、サイズ調整またはゲル濾過、及び逆相を含むクロマトグラフィー技術を含む。精製方法には、電気泳動、免疫学的、沈殿、透析、及びクロマトフォーカス技術も含まれる。タンパク質濃度と併せて、超濾過及び透過濾過技術も有用である。当該技術分野で周知であるように、様々な天然タンパク質がＦｃ及び抗体に結合し、これらのタンパク質は、本明細書に記載される二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物の精製に使用することができる。例えば、細菌タンパク質Ａ及びＧは、Ｆｃ領域に結合する。同様に、細菌タンパク質Ｌは、いくつかの抗体のＦａｂ領域に結合する。精製は、多くの場合、特定の融合パートナーによって可能にすることができる。例えば、抗体は、ＧＳＴ融合物を用いる場合はグルタチオン樹脂、Ｈｉｓタグを用いる場合はＮｉ＋２親和性クロマトグラフィー、またはフラグタグを用いる場合は固定化抗フラグ抗体を用いて精製してもよい。好適な精製技術における一般的なガイダンスについては、例えば、参照により全体が組み込まれるＰｒｏｔｅｉｎ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ，３ｒｄＥｄ．Ｓｃｏｐｅｓ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ，ＮＹ，１９９４を参照されたい。必要な精製の程度は、二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物の使用に応じて変動する。いくつかの場合において、精製は必要ない。
特定の実施形態では、二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物は、限定されないが、Ｑ－セファロース、ＤＥＡＥセファロース、ｐｏｒｏｓ ＨＱ、ｐｏｒｏｓ ＤＥＡＦ、Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ Ｑ、Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ ＱＡＥ、Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ ＤＥＡＥ、Ｒｅｓｏｕｒｃｅ／Ｓｏｕｒｃｅ Ｑ及びＤＥＡＥ、Ｆｒａｃｔｏｇｅｌ Ｑ及びＤＥＡＥカラム上のクロマトグラフィーを含む、アニオン交換クロマトグラフィーを使用して精製される。
具体的な実施形態では、本明細書に記載される二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物は、限定されないが、ＳＰ－セファロース、ＣＭセファロース、ｐｏｒｏｓ ＨＳ、ｐｏｒｏｓ ＣＭ、Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ ＳＰ、Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ ＣＭ、Ｒｅｓｏｕｒｃｅ／Ｓｏｕｒｃｅ Ｓ及びＣＭ、Ｆｒａｃｔｏｇｅｌ Ｓ及びＣＭカラム、ならびにそれらの等価物及び同等物を含む、カチオン交換クロマトグラフィーを使用して精製される。
加えて、本明細書に記載される二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物は、当該技術分野で既知の技法を使用して化学的に合成することができる（例えば、Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ，１９８３，Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ＆Ｃｏ．，Ｎ．Ｙ ａｎｄ Ｈｕｎｋａｐｉｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ，３１０：１０５－１１１（１９８４）を参照されたい）。例えば、ポリペプチドの断片に対応するポリペプチドを、ペプチドシンセサイザーを使用して合成することができる。さらに、所望の場合、非古典的アミノ酸または化学的アミノ酸類似体を、ポリペプチド配列への置換または付加として導入することができる。非古典的アミノ酸として、限定されないが、一般的なアミノ酸のＤ－異性体、２，４ジアミノ酪酸、α－アミノイソ酪酸、４アミノ酪酸、Ａｂｕ、２－アミノ酪酸、γ－Ａｂｕ、ε－Ａｈｘ、６アミノヘキサン酸、Ａｉｂ、２－アミノイソ酪酸、３－アミノプロピオン酸、オルニチン、ノルロイシン、ノルバリン、ヒドロキシプロリン、サルコシン、シトルリン、ホモシトルリン、システイン酸、ｔ－ブチルグリシン、ｔ－ブチルアラニン、フェニルグリシン、シクロヘキシルアラニン、β－アラニン、フルオロ－アミノ酸、デザイナーアミノ酸、例えば、β－メチルアミノ酸、Ｃα－メチルアミノ酸、Ｎα－メチルアミノ酸、及びアミノ酸類似体全般が挙げられる。さらに、アミノ酸は、Ｄ（右旋性）またはＬ（左旋性）であり得る。
翻訳後修飾：
特定の実施形態では、本明細書に記載される二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物は、翻訳中または翻訳後に差異的に修飾される。
「修飾された」という用語は、本明細書で使用される場合、所与のポリペプチドになされる任意の変更、例えば、ポリペプチドの長さ、ポリペプチドのアミノ酸配列、化学構造、翻訳時修飾、または翻訳後修飾に対する変更を指す。「（修飾された）」という用語の形態は、論じられているポリペプチドが任意選択的に修飾されていること、すなわち、二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物のポリペプチドが、修飾されていてもまたは修飾されていなくてもよいことを意味する。
「翻訳後修飾された」という用語は、そのようなアミノ酸がポリペプチド鎖に組み込まれた後に生じる、天然または非天然アミノ酸の任意の修飾を指す。この用語は、単なる例として、翻訳時インビボ修飾、翻訳時インビトロ修飾（例えば、無細胞翻訳系における）、翻訳後インビボ修飾、及び翻訳後インビトロ修飾を包含する。
いくつかの実施形態では、修飾は、グリコシル化、アセチル化、リン酸化、アミド化、既知の保護／遮断基による誘導体化、タンパク質切断、及び抗体分子または二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物または他の細胞リガンドへの結合のうちの少なくとも１つである。いくつかの実施形態では、二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物は、限定されないが、臭化シアン、トリプシン、キモトリプシン、パパイン、Ｖ８プロテアーゼ、ＮａＢＨ４による特異的化学切断；アセチル化、ホルミル化、酸化、還元；及びツニカマイシンの存在下での代謝合成を含む既知の技術によって化学修飾される。
二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物のさらなる翻訳後修飾として、例えば、Ｎ結合またはＯ結合糖鎖、Ｎ末端またはＣ末端のプロセシング）、アミノ酸骨格への化学部分の結合、Ｎ結合またはＯ結合糖鎖の化学修飾、及び原核宿主細胞発現の結果としてのＮ末端メチオニン残基の付加または欠失が挙げられる。本明細書に記載される二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物は、タンパク質の検出及び単離を可能にするために、酵素標識、蛍光標識、同位体標識、または親和性標識等の検出可能な標識で修飾される。特定の実施形態では、好適な酵素標識の例として、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、β－ガラクトシダーゼ、またはアセチルコリンエステラーゼが挙げられ、好適な補欠分子族複合体の例として、ストレプトアビジンビオチン及びアビジン／ビオチンが挙げられ、好適な蛍光物質の例として、ウンベリフェロン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、ジクロロトリアジニルアミンフルオレセイン、ダンシルクロリドまたはフィコエリスリンが挙げられ、発光物質の例としてルミノールが挙げられ、生物発光物質の例として、ルシフェラーゼ、ルシフェリン、及びエクオリンが挙げられ、好適な放射性物質の例として、ヨウ素、炭素、硫黄、トリチウム、インジウム、テクネチウム、タリウム、ガリウム、パラジウム、モリブデナム、キセノン、フッ素が挙げられる。
具体的な実施形態では、本明細書に記載される二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物は、放射性金属イオンと会合する大環状キレート剤に結合される。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物は、翻訳後プロセシング等の天然プロセス、または当該技術分野で周知の化学修飾技術のいずれかによって修飾される。特定の実施形態では、同じ種類の修飾が、所与のポリペプチド内のいくつかの部位において、同じ程度に、または異なる程度に存在してもよい。特定の実施形態では、本明細書に記載される二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物からのポリペプチドは、例えば、ユビキチン化の結果として分岐し、いくつかの実施形態では、分岐を伴うまたは伴わない環状である。環状、分枝状、及び分枝環状ポリペプチドは、翻訳後の天然のプロセスから生じるか、または合成方法によって作製される。修飾として、アセチル化、アシル化、ＡＤＰ－リボシル化、アミド化、フラビンの共有結合、ヘム部分の共有結合、ヌクレオチドまたはヌクレオチド誘導体の共有結合、脂質または脂質誘導体の共有結合、ホスホチジルイノシトールの共有結合、架橋、環化、ジスルフィド結合の形成、脱メチル化、共有結合架橋の形成、システインの形成、ピログルタミン酸の形成、ホルミル化、γ－カルボキシル化、グリコシル化、ＧＰＩアンカーの形成、ヒドロキシル化、ヨウ素化、メチル化、ミリスチル化、酸化、ペグ化、タンパク質分解プロセシング、リン酸化、プレニル化、ラセミ化、セレン化、硫酸化、転移ＲＮＡ媒介性のアミノ酸のタンパク質への付加、例えば、アルギニル化、及びユビキチン化が挙げられる。（例えば、ＰＲＯＴＥＩＮＳ－－ＳＴＲＵＣＴＵＲＥ ＡＮＤ ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ ＰＲＯＰＥＲＴＩＥＳ，２ｎｄ Ｅｄ．，Ｔ．Ｅ．Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９９３）、ＰＯＳＴ－ＴＲＡＮＳＬＡＴＩＯＮＡＬ ＣＯＶＡＬＥＮＴ ＭＯＤＩＦＩＣＡＴＩＯＮ ＯＦ ＰＲＯＴＥＩＮＳ，Ｂ．Ｃ．Ｊｏｈｎｓｏｎ，Ｅｄ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ｐｇｓ．１－１２（１９８３）、Ｓｅｉｆｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．１８２：６２６－６４６（１９９０）、Ｒａｔｔａｎ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．６６３：４８－６２（１９９２））を参照されたい。
抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）
特定の実施形態は、アウリスタチン類似体に低い平均薬物抗体比（ＤＡＲ）でコンジュゲートされた二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物を含む抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）を使用してＢＴＣを治療する方法に関する。本明細書で使用される場合、「低い平均ＤＡＲ」は、＜３．９の平均ＤＡＲを指す。記載される方法において特に使用されるのは、約１．８～２．５等の約２．５以下の平均ＤＡＲを有する、アウリスタチン類似体にコンジュゲートされた二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物を含むＡＤＣである。特定の実施形態では、ＡＤＣに含まれる二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物はｖ１００００である。
特定の実施形態では、本明細書に記載される方法において使用するためのＡＤＣによって含まれるアウリスタチン類似体は、国際特許出願公開第ＷＯ２０１６／０４１０８２号に記載されるようなアウリスタチン類似体であり得る。特定の実施形態では、本明細書に記載される方法において使用するためのＡＤＣによって含まれるアウリスタチン類似体は、一般式（Ｉ）の化合物であり、
Figure 2024056808000009
式中、Ｒ１は
Figure 2024056808000010
から選択される。
特定の実施形態では、式（Ｉ）の化合物において、Ｒ１は、
Figure 2024056808000011
である。
特定の実施形態では、式（Ｉ）の化合物において、Ｒ１は、
Figure 2024056808000012
である。
特定の実施形態では、式（Ｉ）の化合物において、Ｒ１は、
Figure 2024056808000013
である。
特定の実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、
Figure 2024056808000014
から選択される。
一般式（Ｉ）の化合物は、市販の出発物質から、標準的な合成有機化学プロトコルによって調製され得る。例示的な合成方法は、国際特許出願公開第ＷＯ２０１６／０４１０８２号に提供される。
特定の実施形態では、本明細書に記載される方法において使用するためのＡＤＣは、リンカー（Ｌ）を介してアウリスタチン類似体（毒素）にコンジュゲートされた二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物を含み、リンカー－毒素は、一般式（ＩＩ）を有し、
Figure 2024056808000015
式中、Ｒ１は、
Figure 2024056808000016
から選択され
Ｌは切断可能なリンカーであり、
Figure 2024056808000017
は、二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物へのリンカー－毒素の結合点を表す。
いくつかの実施形態では、一般式（ＩＩ）のリンカー－毒素において、Ｒ１は、
Figure 2024056808000018
である。
いくつかの実施形態では、一般式（ＩＩ）のリンカー－毒素において、Ｒ１は、
Figure 2024056808000019
である。
いくつかの実施形態では、一般式（ＩＩ）のリンカー－毒素において、Ｒ１は、
Figure 2024056808000020
である。
いくつかの実施形態では、一般式（ＩＩ）のリンカー－毒素において、Ｌは、ペプチド含有リンカーである。
いくつかの実施形態では、一般式（ＩＩ）のリンカー－毒素において、Ｌは、プロテアーゼ切断可能なリンカーである。
特定の実施形態では、本明細書に記載される方法において使用するためのＡＤＣは、リンカー（Ｌ）を介してアウリスタチン類似体（毒素）にコンジュゲートされた二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物を含み、一般式（ＩＩＩ）を有し、
Figure 2024056808000021
式中、
Ｒ１及びＬは、一般式（ＩＩ）について定義される通りであり、
ｎは、平均薬物抗体比（ＤＡＲ）であり、３．９未満であり、
Ａｂは、二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物である。
いくつかの実施形態では、一般式（ＩＩＩ）のＡＤＣにおいて、Ｒ１は、
Figure 2024056808000022
である。
いくつかの実施形態では、一般式（ＩＩＩ）のＡＤＣにおいて、Ｒ１は、
Figure 2024056808000023
である。
いくつかの実施形態では、一般式（ＩＩＩ）のＡＤＣにおいて、Ｒ１は、
Figure 2024056808000024
である。
いくつかの実施形態では、一般式（ＩＩＩ）のＡＤＣにおいて、Ｌは、ペプチド含有リンカーである。
いくつかの実施形態では、一般式（ＩＩＩ）のＡＤＣにおいて、Ｌは、プロテアーゼ切断可能なリンカーである。
いくつかの実施形態では、一般式（ＩＩＩ）のＡＤＣにおいて、ｎは０．５～３．８である。
いくつかの実施形態では、一般式（ＩＩＩ）のＡＤＣにおいて、ｎは、約１．０～３．８、約１．０～３．５、約１．０～３．０、または約１．０～２．５である。
いくつかの実施形態では、一般式（ＩＩＩ）のＡＤＣにおいて、ｎは、約１．５～３．８、約１．５～３．５、約１．５～３．０、または約１．５～２．５である。
いくつかの実施形態では、一般式（ＩＩＩ）のＡＤＣにおいて、ｎは、約１．８～２．８、または約１．８～２．５である。
いくつかの実施形態では、一般式（ＩＩＩ）のＡＤＣにおいて、Ａｂはｖ１００００である。
一般式（ＩＩＩ）のＡＤＣについての上述の実施形態のいずれかの組み合わせも企図され、各組み合わせが、本開示の目的のために別個の実施形態を形成する。
本明細書に記載されるＡＤＣにおいて、二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物は、リンカーによってアウリスタチン類似体（毒素）に結合される。リンカーは、１つ以上の毒素分子を抗体に結合することができる二官能性または多官能性部分である。二官能性（または一価）リンカーは、単一の薬物を抗体上の単一の部位に結合させる一方で、多官能性（または多価）リンカーは、１つより多くの毒素分子を抗体上の単一の部位に結合させる。１つの毒素分子を抗体上の２つ以上の部位に結合することができるリンカーもまた、多機能性であるとみなされ得る。
リンカーの抗体への結合は、抗体上の表面リジンを介して、抗体上の酸化された炭水化物への還元的カップリング、または鎖間ジスルフィド結合を還元することによって遊離された抗体上のシステイン残基を介して等の様々な方法で達成することができる。代替的に、リンカーの抗体への結合は、追加のシステイン残基（例えば、米国特許第７，５２１，５４１号、同第８，４５５，６２２号、及び同第９，０００，１３０号を参照のこと）、または反応性ハンドルを提供する非天然アミノ酸、例えば、セレノメチオニン、ｐ－アセチルフェニルアラニン、ホルミルグリシン、またはｐ－アジドメチル－Ｌ－フェニルアラニンを提供する非天然アミノ酸を含むように抗体を修飾することによって達成することができ（例えば、Ｈｏｆｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，４８：１２０４７－１２０５７（２００９）；Ａｘｕｐ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ，１０９：１６１０１－１６１０６（２０１２）；Ｗｕ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ，１０６：３０００－３００５（２００９）；Ｚｉｍｍｅｒｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｏｎｊ．Ｃｈｅｍ．，２５：３５１－３６１（２０１４））、部位特異的コンジュゲーションが可能となる。
リンカーは、抗体上の単数または複数の標的基と反応可能な官能基、及び毒素上の標的基と反応可能な１つ以上の官能基を含む。好適な官能基は当該技術分野で既知であり、例えば、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｔｅｃｈｎｉｃｓ（Ｇ．Ｔ．Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ，２０１３，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ）に記載されるものを含む。
遊離システインまたはチオールと反応させるための官能基の非限定的な例として、マレイミド、ハロアセトアミド、ハロアセチル、活性化エステル、例えば、スクシンイミドエステル、４－ニトロフェニルエステル、ペンタフルオロフェニルエステル、テトラフルオロフェニルエステル、無水物、酸塩化物、スルホニルクロリド、イソシアネート及びイソチオシアネートが挙げられる。この文脈においても有用なのは、Ｌｙｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，３２：１０５９－１０６２（２０１４）に記載される「自己安定化」マレイミドである。
抗体上の表面リジンまたは毒素上の遊離アミンと反応させるための官能基の非限定的な例として、活性化エステル、例えば、Ｎ－ヒドロキシスクシンアミド（ＮＨＳ）エステル、スルホ－ＮＨＳエステル、イミドエステル、例えば、Ｔｒａｕｔ試薬、イソチオシアネート、アルデヒド、及び酸無水物、例えば、ジエチレントリアミン五酢酸無水物（ＤＴＰＡ）が挙げられる。他の例として、スクシンイミド－１，１，３，３－テトラ－メチルウロニウムテトラフルオロホウ酸塩（ＴＳＴＵ）及びベンゾトリアゾール－１－イル－オキシトリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（ＰｙＢＯＰ）が挙げられる。
抗体または毒素上の求電子基（アルデヒドまたはケトンカルボニル基等）と反応可能な官能基の非限定的な例として、ヒドラジド、オキシム、アミノ、ヒドラジン、チオセミカルバゾン、ヒドラジンカルボキシレート及びアリールヒドラジドが挙げられる。
他のリンカーとしては、抗体上の２つの鎖間システインの架橋を可能にする官能基を有するもの、例えば、ＴｈｉｏＢｒｉｇｈ（商標）リンカー（（Ｂａｄｅｓｃｕ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ．Ｃｈｅｍ．，２５：１１２４－１１３６（２０１４））、ジチオマレイミド（ＤＴＭ）リンカー（Ｂｅｈｒｅｎｓ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｐｈａｒｍ．，１２：３９８６－３９９８（２０１５））、ジチオアリール（ＴＣＥＰ）ピリダジンジオン系リンカー（Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ．Ｃｈｅｍ．Ｓｃｉ．，７：７９９－８０２（２０１６））、ジブロモピリダジンジオン系リンカー（Ｍａｒｕａｎｉ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｃｏｍｍｕｎ．，６：６６４５（２０１５））、及び当該技術分野で既知である他のものが挙げられる。
リンカーは、様々なリンカー成分を含み得る。典型的には、リンカーは、２つ以上のリンカー成分を含む。例示的なリンカー成分として、抗体との反応のための官能基、毒素との反応のための官能基、ストレッチャー、ペプチド成分、自壊性基、自己脱離性基、親水性部分等が挙げられる。様々なリンカー成分が当該技術分野で既知であり、それらのいくつかを以下に記載する。
特定の有用なリンカー成分は、Ｐｉｅｒｃｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．（現Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ）及びＭｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｉｎｃ．（Ｂｏｌｕｄｅｒ，Ｃｏｌｏ．）等の様々な商業的供給源から入手することができるか、または当該技術分野に記載される手順に従って合成することができる（例えば、Ｔｏｋｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，６７：１８６６－１８７２（２００２）、Ｄｕｂｏｗｃｈｉｋ，ｅｔ ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔｅｒｓ，３８：５２５７－６０（１９９７）、Ｗａｌｋｅｒ，Ｍ．Ａ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，６０：５３５２－５３５５（１９９５）、Ｆｒｉｓｃｈ，ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．，７：１８０－１８６（１９９６）、米国特許第６，２１４，３４５号及び同第７，５５３，８１６号、ならびに国際特許出願公開第ＷＯ０２／０８８１７２号を参照されたい）。
本明細書に記載されるＡＤＣに用いられるリンカーは、切断可能なリンカーである。切断可能なリンカーは、典型的には、例えば、リソソームプロセスを介して、細胞内条件下で切断されやすい。例として、プロテアーゼ感受性、酸感受性、還元感受性または光不安定性であるリンカーが挙げられる。
好適な切断可能なリンカーとして、例えば、２つ以上のアミノ酸を含み、細胞内プロテアーゼ、例えば、リソソームプロテアーゼまたはエンドソームプロテアーゼによって切断可能なペプチド成分を含むリンカーが挙げられる。ペプチド成分は、天然に存在するアミノ酸残基及び／または微量のアミノ酸及び／またはシトルリン等の天然に存在しないアミノ酸類似体を含み得る。ペプチド成分は、特定の酵素、例えば、腫瘍関連プロテアーゼ、カテプシンＢ、Ｃ、もしくはＤ、またはプラスミンプロテアーゼによる酵素切断のために設計及び最適化され得る。
特定の実施形態では、ＡＤＣに含まれるリンカーは、バリン－シトルリン（Ｖａｌ－Ｃｉｔ）またはフェニルアラニン－リジン（Ｐｈｅ－Ｌｙｓ）を含有するリンカー等の、ジペプチド含有リンカーであってもよい。リンカーに含めるのに好適なジペプチドの他の例として、Ｖａｌ－Ｌｙｓ、Ａｌａ－Ｌｙｓ、Ｍｅ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ、Ｐｈｅ－ｈｏｍｏＬｙｓ、Ｐｈｅ－Ｃｉｔ、Ｌｅｕ－Ｃｉｔ、Ｉｌｅ－Ｃｉｔ、Ｔｒｐ－Ｃｉｔ、Ｐｈｅ－Ａｒｇ、Ａｌａ－Ｐｈｅ、Ｖａｌ－Ａｌａ、Ｍｅｔ－Ｌｙｓ、Ａｓｎ－Ｌｙｓ、Ｉｌｅ－Ｐｒｏ、Ｉｌｅ－Ｖａｌ、Ａｓｐ－Ｖａｌ、Ｈｉｓ－Ｖａｌ、Ｍｅｔ－（Ｄ）Ｌｙｓ、Ａｓｎ－（Ｄ）Ｌｙｓ、Ｖａｌ－（Ｄ）Ａｓｐ、ＮｏｒＶａｌ－（Ｄ）Ａｓｐ、Ａｌａ－（Ｄ）Ａｓｐ、Ｍｅ３Ｌｙｓ－Ｐｒｏ、ＰｈｅｎｙｌＧｌｙ－（Ｄ）Ｌｙｓ、Ｍｅｔ－（Ｄ）Ｌｙｓ、Ａｓｎ－（Ｄ）Ｌｙｓ、Ｐｒｏ－（Ｄ）Ｌｙｓ及びＭｅｔ－（Ｄ）Ｌｙｓが挙げられる。切断可能なリンカーは、トリペプチド、テトラペプチド、またはペンタペプチド等のより長いペプチド成分も含み得る。例としては、限定されないが、トリペプチドＭｅｔ－Ｃｉｔ－Ｖａｌ、Ｇｌｙ－Ｃｉｔ－Ｖａｌ、（Ｄ）Ｐｈｅ－Ｐｈｅ－Ｌｙｓ及び（Ｄ）Ａｌａ－Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、ならびにテトラペプチドＧｌｙ－Ｐｈｅ－Ｌｅｕ－Ｇｌｙ及びＡｌａ－Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ｌｅｕが挙げられる。
切断可能なリンカーのさらなる例として、例えば、Ｎ－スクシンイミジル－４－（２－ピリジルジチオ）ブタン酸（ＳＰＢＤ）及びＮ－スクシンイミジル－４－（２－ピリジルジチオ）－２－スルホブタン酸（スルホ－ＳＰＢＤ）等の、ジスルフィド含有リンカーが挙げられる。ジスルフィド含有リンカーは、任意選択的に、リンカーの細胞外安定性を向上させるために、ジスルフィド結合に隣接する立体障害を提供するための追加の基、例えば、ジェミナルジメチル基の包含を含み得る。他の好適なリンカーとして、特定のｐＨでまたはｐＨ範囲内で加水分解可能なリンカー、例えばヒドラゾンリンカーが挙げられる。これらの官能基の組み合わせを含むリンカーもまた有用であり得、例えば、ヒドラゾン及びジスルフィドの両方を含むリンカーが当該技術分野で既知である。
切断可能なリンカーのさらなる例は、リソソーム及び腫瘍間質に存在する酵素β－グルクロニダーゼによって切断可能なβ－グルクロニドを含むリンカーである（例えば、Ｄｅ Ｇｒａａｆ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｐｈａｒｍ．Ｄｅｓ．，８：１３９１－１４０３（２００２）を参照されたい）。
切断可能なリンカーは、任意選択的に、自壊性基及び自己脱離性基、ストレッチャー、または親水性部分等の１つ以上の追加の成分をさらに含み得る。
リンカーに使用される自壊性基及び自己脱離性基として、例えば、ｐ－アミノベンジルオキシカルボニル（ＰＡＢＣ）及びｐ－アミノベンジルエーテル（ＰＡＢＥ）基、ならびにメチル化エチレンジアミン（ＭＥＤ）が挙げられる。自壊性基の他の例として、限定されないが、複素環式誘導体、例えば、米国特許第７，３７５，０７８号に記載されるような２－アミノイミダゾール－５－メタノール誘導体等のＰＡＢＣ基またはＰＡＢＥ基と電子的に類似する芳香族化合物が挙げられる。他の例として、アミド結合加水分解時に環化を受ける基、例えば、置換及び非置換の４－アミノ酪酸アミド（Ｒｏｄｒｉｇｕｅｓ ｅｔ ａｌ．Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｂｉｏｌｏｇｙ，２：２２３－２２７（１９９５））及び２－アミノフェニルプロピオン酸アミド（Ａｍｓｂｅｒｒｙ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，５５：５８６７－５８７７（１９９０）が挙げられる）。
ＡＤＣのリンカーに使用されるストレッチャーとして、アルキレン基、及び脂肪族酸、二塩基酸、アミン、またはジアミンベースのストレッチャー、例えば、ジグリコレート、マロン酸、カプロン酸及びカプロアミドが挙げられる。他のストレッチャーとして、例えば、グリシンベースのストレッチャー、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）ストレッチャー、及びモノメトキシポリエチレングリコール（ｍＰＥＧ）ストレッチャーが挙げられる。ＰＥＧ及びｍＰＥＧストレッチャーは、親水性部分としても機能する。
特定の実施形態では、本明細書に記載されるメチドに使用するためのＡＤＣによって含まれるリンカーは、一般式（ＩＶ）を有するペプチドベースのリンカーであり、
Figure 2024056808000025
式中、
Ｚは、二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物上の標的基と反応可能な官能基であり、
Ｓｔｒは、ストレッチャーであり、
ＡＡ１及びＡＡ２は、それぞれ独立して、アミノ酸であり、ＡＡ１－［ＡＡ２］ｍは、プロテアーゼ切断部位を形成し、
Ｘは、自壊性基であり、
Ｄは、アウリスタチン類似体への結合点であり、
ｓは、０または１であり、
ｍは、１～４の整数であり、
ｏは、０、１または２である。
いくつかの実施形態では、一般式（ＩＶ）において、Ｚは、
Figure 2024056808000026
である。
いくつかの実施形態では、一般式（ＩＶ）において、Ｓｔｒは、
Figure 2024056808000027
から選択され、
式中、
Ｒは、ＨまたはＣ１～Ｃ６アルキルであり、
ｐは、２～１０の整数であり、
ｑは、１～１０の整数である。
いくつかの実施形態では、一般式（ＩＶ）において、Ｓｔｒは、
Figure 2024056808000028
であり、
式中、ｐ及びｑは上で定義される通りである。
いくつかの実施形態では、一般式（ＩＶ）において、Ｓｔｒは、
Figure 2024056808000029
であり、
式中、
ｐは、２～６の整数であり、
ｑは、２～８の整数である。
いくつかの実施形態では、一般式（ＩＶ）において、ＡＡ１－［ＡＡ２］ｍは、Ｖａｌ－Ｌｙｓ、Ａｌａ－Ｌｙｓ、Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｖａｌ－Ｃｉｔ、Ｐｈｅ－Ｃｉｔ、Ｌｅｕ－Ｃｉｔ、Ｉｌｅ－Ｃｉｔ、Ｔｒｐ－Ｃｉｔ、Ｐｈｅ－Ａｒｇ、Ａｌａ－Ｐｈｅ、Ｖａｌ－Ａｌａ、Ｍｅｔ－Ｌｙｓ、Ａｓｎ－Ｌｙｓ、Ｉｌｅ－Ｐｒｏ、Ｉｌｅ－Ｖａｌ、Ａｓｐ－Ｖａｌ、Ｈｉｓ－Ｖａｌ、Ｍｅｔ－（Ｄ）Ｌｙｓ、Ａｓｎ－（Ｄ）Ｌｙｓ、Ｖａｌ－（Ｄ）Ａｓｐ、ＮｏｒＶａｌ－（Ｄ）Ａｓｐ、Ａｌａ－（Ｄ）Ａｓｐ、Ｍｅ３Ｌｙｓ－Ｐｒｏ、ＰｈｅｎｙｌＧｌｙ－（Ｄ）Ｌｙｓ、Ｍｅｔ－（Ｄ）Ｌｙｓ、Ａｓｎ－（Ｄ）Ｌｙｓ、Ｐｒｏ－（Ｄ）Ｌｙｓ、Ｍｅｔ－（Ｄ）Ｌｙｓ、Ｍｅｔ－Ｃｉｔ－Ｖａｌ、Ｇｌｙ－Ｃｉｔ－Ｖａｌ、（Ｄ）Ｐｈｅ－Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、（Ｄ）Ａｌａ－Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｇｌｙ－Ｐｈｅ－Ｌｅｕ－Ｇｌｙ及びＡｌａ－Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ｌｅｕから選択される。
いくつかの実施形態では、一般式（ＩＶ）において、ｍは１である（すなわち、ＡＡ１－［ＡＡ２］ｍはジペプチドである）。
いくつかの実施形態では、一般式（ＩＶ）において、ＡＡ１－［ＡＡ２］ｍは、Ｖａｌ－Ｌｙｓ、Ａｌａ－Ｌｙｓ、Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｖａｌ－Ｃｉｔ、Ｐｈｅ－Ｃｉｔ、Ｌｅｕ－Ｃｉｔ、Ｉｌｅ－Ｃｉｔ及びＴｒｐ－Ｃｉｔから選択されるジペプチドである。
いくつかの実施形態では、一般式（ＩＶ）において、ｍは、１、２、または３である。
いくつかの実施形態では、一般式（ＩＶ）において、ｓは１である。
いくつかの実施形態では、一般式（ＩＶ）において、ｏは０である。
いくつかの実施形態では、一般式（ＩＶ）において、
Ｚは
Figure 2024056808000030
であり、
ＳＴＲは
Figure 2024056808000031
であり、
式中、ｐは、２～６の整数であり、ｑは、２～８の整数であり、
ｍは、１であり、ＡＡ１－［ＡＡ２］ｍは、Ｖａｌ－Ｌｙｓ、Ａｌａ－Ｌｙｓ、Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｖａｌ－Ｃｉｔ、Ｐｈｅ－Ｃｉｔ、Ｌｅｕ－Ｃｉｔ、Ｉｌｅ－Ｃｉｔ及びＴｒｐ－Ｃｉｔから選択されるジペプチドであり、
ｓは、１であり、
ｏは、０である。
特定の実施形態では、本明細書に記載される方法において使用するためのＡＤＣに含まれるリンカーは、一般式（Ｖ）を有し、
Figure 2024056808000032
式中、
Ａ－Ｓ－は、二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物への結合点であり、
Ｙは、１つ以上の追加のリンカー成分であるか、または存在せず、
Ｄは、アウリスタチン類似体への結合点である。
特定の実施形態では、本明細書に記載される方法において使用するためのＡＤＣに含まれるリンカーは、一般式（ＶＩ）を有し、
Figure 2024056808000033
式中、
Ａ－Ｓ－は、二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物への結合点であり、
Ｙは、１つ以上の追加のリンカー成分であるか、または存在せず、かつ
Ｄは、アウリスタチン類似体への結合点である。
特定の実施形態では、本明細書に記載される方法において使用するためのＡＤＣは、一般式（ＩＶ）、（Ｖ）、または（ＶＩ）を有するリンカーを介して低い平均ＤＡＲでｖ１００００にコンジュゲートされた一般式（Ｉ）のアウリスタチン類似体を含む。
特定の実施形態では、本明細書に記載される方法において使用するためのＡＤＣは、リンカー（Ｌ）が一般式（ＩＶ）、（Ｖ）または（ＶＩ）を有する一般式（ＩＩ）のリンカー－毒素に低い平均ＤＡＲでコンジュゲートされたｖ１００００を含む。
特定の実施形態では、本明細書に記載される方法において使用するためのＡＤＣは、ｖ１００００を含み、リンカー（Ｌ）が一般式（ＩＶ）、（Ｖ）または（ＶＩ）を有する上に示される一般式（ＩＩＩ）を有する。
特定の実施形態では、本明細書に記載される方法において使用するためのＡＤＣは、一般式（ＩＶ）、（Ｖ）、または（ＶＩ）を有するリンカーを介して低い平均ＤＡＲでｖ１００００にコンジュゲートされたアウリスタチン類似体を含み、式中、アウリスタチン類似体は、化合物１６、化合物１７、または化合物１８である。
特定の実施形態では、本明細書に記載される方法において使用するためのＡＤＣは、以下の構造を有するリンカー－毒素を含み、
Figure 2024056808000034
式中、Ａ－Ｓ－は、二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物への結合点である。
抗体薬物コンジュゲートの調製
本明細書に記載される方法において使用するためのＡＤＣは、当業者に既知の有機化学反応、条件、及び試薬を用いて、当該技術分野で既知のいくつかの経路のうちの１つによって調製され得る（例えば、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｔｅｃｈｎｉｃｓ（Ｇ．Ｔ．Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ，２０１３，Ａｃａｄｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，及び本明細書に提供される実施例）を参照されたい）。例えば、コンジュゲーションは、（１）抗体の求核基または求電子基を二官能性リンカーと反応させて、共有結合を介して抗体－リンカー中間体Ａｂ－Ｌを形成し、続いて、活性化アウリスタチン類似体（Ｄ）と反応させること、または（２）アウリスタチン類似体の求核基または求電子基をリンカーと反応させて、共有結合を介してリンカー－毒素Ｄ－Ｌを形成し、続いて、抗体の求核基または求電子基と反応させることによって達成することができる。
上述のように、アウリスタチン類似体を適切なリンカーを介して抗体上の様々な基にコンジュゲートしてＡＤＣを提供することができる。例えば、コンジュゲーションは、表面リジンを介して、酸化された炭水化物を介して、または１つ以上の鎖間ジスルフィド結合を還元することによって遊離されたシステイン残基を介して行われ得る。代替的に、抗体は、セレノメチオニン、ｐ－アセチルフェニルアラニン、ホルミルグリシン、またはｐ－アジドメチル－Ｌ－フェニルアラニン等の反応性ハンドルを提供する追加のシステイン残基または非自然的アミノ酸を含むように修飾されてもよい。そのような修飾は、当該技術分野において周知である（例えば、米国特許第７，５２１，５４１号、同第８，４５５，６２２号、及び同第９，０００，１３０号、Ｈｏｆｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，４８：１２０４７－１２０５７（２００９）、Ａｘｕｐ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ，１０９：１６１０１－１６１０６（２０１２）、Ｗｕ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ，１０６：３０００－３００５（２００９）、Ｚｉｍｍｅｒｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｏｎｊ．Ｃｈｅｍ．，２５：３５１－３６１（２０１４）を参照されたい）。
特定の実施形態では、本明細書に記載される方法において使用するためのＡＤＣは、１つ以上の鎖間ジスルフィド結合を還元することによって遊離された、二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物上のシステイン残基に適切なリンカーを介してコンジュゲートされたアウリスタチン類似体を含む。
本明細書に記載されるＡＤＣでは、二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物は、低い平均薬物抗体比（ＤＡＲ）で、具体的には３．９未満であるが０．５超、例えば、特定の実施形態では約１．５～約２．５の平均ＤＡＲで、リンカーを介して毒素にコンジュゲートされる。
低い平均ＤＡＲでＡＤＣを調製するための様々な方法が当該技術分野で既知である（例えば、ＭｃＣｏｍｂｓ ａｎｄ Ｏｗｅｎ，Ｔｈｅ ＡＡＰＳ Ｊｏｕｒｎａｌ，１７（２）：３３９－３５１（２０１５）によるレビュー及びその中の参考文献；Ｂｏｕｔｕｒｅｉｒａ＆Ｂｅｒｎａｒｄｅｓ，Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．，１１５：２１７４－２１９５（２０１５）を参照されたい）。
例えば、システイン残基へのコンジュゲーションのために、抗体鎖間ジスルフィド結合の部分的な還元、続いてリンカー－毒素へのコンジュゲーションが行われ得る。部分的な還元は、還元反応で使用される還元剤の量を制限することによって達成することができる（例えば、Ｌｙｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，５０２：１２３－１３８（２０１２）、及びその中の実施例、及び本明細書で提供される実施例を参照されたい）。好適な還元剤は、当該技術分野で既知であり、例えば、ジチオスレイトール（ＤＴＴ）、トリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン（ＴＣＥＰ）、２－メルカプトエタノール、システアミン、及びいくつかの水溶性ホスフィンを含む。代替的に、または加えて、低い平均ＤＡＲを得るために、より少ない当量のリンカー－毒素を用いてもよい。
代替的に、鎖間ジスルフィド結合を構成するシステイン残基のうちの１つ以上がセリン残基で置き換えられ、コンジュゲーションに利用可能なシステイン残基がより少なくなるように遺伝子操作された抗体が用いられ得る（ＭｃＤｏｎａｇｈ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．ＤＥＳ．Ｓｅｌ．ＰＥＤＳ，１９（７）：２９９－３０７を参照されたい）。次いで、遺伝子操作された抗体を還元剤で処理し、リンカー－毒素にコンジュゲートすることができる。
別のアプローチは、通常は鎖間ジスルフィド結合を構成する、２つのシステインを架橋するビス－チオールリンカーを用いることである。４つすべての鎖間ジスルフィド結合が還元され、ビス－チオールリンカーで置き換えられている場合、１つの毒素分子のみを担持するビス－チオールリンカーの使用により、フルサイズ抗体で最大ＤＡＲ４を有するＡＤＣが生成される。ＤＡＲをさらに低減させるために、鎖間ジスルフィド結合の部分的還元及び／またはより少ない当量のリンカーを、ビス－チオールリンカーとともに使用してもよい。様々なビス－チオールリンカーが当該技術分野で既知である（例えば、Ｂａｄｅｓｃｕ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ．Ｃｈｅｍ．，２５（６）：１１２４－１１３６（２０１４）、Ｂｅｈｒｅｎｓ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｐｈａｒｍ．，１２：３９８６－３９９８（２０１５）、Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ．Ｃｈｅｍ．Ｓｃｉ．，７：７９９－８０２（２０１６）、Ｍａｒｕａｎｉ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｃｏｍｍｕｎ．，６：６６４５（２０１５）を参照されたい）。
低い平均ＤＡＲを有するＡＤＣを生成するために、システイン操作アプローチを用いてもよい。そのようなアプローチは、コンジュゲーションのための部位特異的ハンドルを提供するために、溶媒アクセス可能なシステインを抗体に遺伝子操作により組み込むことを伴う。システイン残基の導入に適切ないくつかの部位が、ＩｇＧ構造によって同定されており、Ｊｕｎｕｔｕｌａ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ，３３２（１－２）：４１－５２（２００８）、Ｊｕｎｕｔｕｌａ，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，２６（８），９２５－９３２（２００８）、及び米国特許第９，３１５，５８１号、同第９，０００，１３０号、同第８，４５５，６２２号、同第８，５０７，６５４号、及び同第７，５２，５４１号に記載されるものを含む。
低い平均ＤＡＲのＡＤＣはまた、限られた量の活性化リンカー－毒素を用いたリジンコンジュゲーションによって調製してもよい。抗体のＮ末端アミノ酸における選択的反応も用いることができる。例えば、Ｎ末端セリンは、過ヨウ素酸塩でアルデヒドに酸化して、次いでリンカー－毒素と反応させてもよい（例えば、Ｔｈｏｍｐｓｏｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｏｎｇ．Ｃｈｅｍ．，２６（１０）：２０８５－２０９６（２０１５）を参照されたい）。同様に、Ｎ末端システイン残基をアルデヒドと選択的に反応させて、チアゾリジノンを得ることができる（例えば、Ｂｅｒｎａｒｄｅｓ，ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ，Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，８：２０７９－２０８９を参照されたい）。
さらなるアプローチは、１つ以上の非天然アミノ酸、例えば、ｐ－アセチルフェニルアラニン（ｐＡｃＰｈｅ）またはセレノシステイン（Ｓｅｃ）を含むように抗体を遺伝子操作することを含む。ＰＡｃＰｈｅ中のケト基を末端アルコキシアミンまたはヒドラジドを含むリンカー－毒素と反応させて、オキシムまたはヒドラゾン結合を形成することができる（例えば、Ａｘｕｐ，ｅｔ ａｌ．ＰＮＡＳ ＵＳＡ，１０９：１６１０１－１６１０６（２０１２）を参照されたい）。Ｓｅｃ含有抗体を、リンカー－毒素を含有するマレイミドまたはヨードアセトアミドと反応させて、セレノエーテルコンジュゲートを形成することができる（例えば、Ｈｏｆｅｒ，ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，４８：１２０４７－１２０５７（２００９）を参照されたい）。
抗体はまた、特定の酵素によって認識されるペプチドタグを含み、酵素－触媒コンジュゲーションを可能にするように遺伝子操作することもできる。例えば、ソルターゼＡ（ＳｏｒｔＡ）は、配列ＬＰＸＴＧを認識する。このペンタペプチドは、ＳｏｒｔＡ媒介性コンジュゲーションを可能にするように、抗体のＮ末端またはＣ末端に遺伝子操作により組み込むことができ得る（例えば、米国特許出願公開第２０１６／０１３６２９８；Ｋｏｒｎｂｅｒｇｅｒ ａｎｄ Ｓｋｅｒｒａ，ｍＡｂｓ，６（２）：３５４－３６６（２０１４）を参照されたい）。トランスグルタミナーゼはまた、Ｎ２９７位で脱グリコシル化された抗体（酵素コンジュゲーションのためにＱ２９５を露出させる）を使用することによって、または「グルタミンタグ」（ＬＬＱＧ）を含むように抗体を遺伝子操作することによって、ＤＡＲ２のＡＤＣを生成するために用いられている（Ｊｅｇｅｒ，ｅｔ ａｌ．，Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．，４９：９９９５－９９９７（２０１０）、Ｓｔｒｏｐ，ｅｔ ａｌ．Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．，２０（２）：１６１－１６７（２０１３）を参照されたい）。別のアプローチにおいて、ホルミルグリシン残基は、適切なコンセンサス配列を抗体に遺伝子操作により組み込み、遺伝子操作した抗体をホルミルグリシン生成酵素（ＦＧＥ）と共発現させることによって抗体に導入することができる。導入されたホルミルグリシンのアルデヒド官能基は、次いで、毒素のコンジュゲーションのためのハンドルとして使用され得る（例えば、Ｄｒａｋｅ，ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ．Ｃｈｅｍ．，２５（７）：１３３１－１３４１（２０１４））。
ＤＡＲ２のＡＤＣを生成するために使用される別のアプローチは、グリコシル化抗体上に見られる天然糖へのリンカー－毒素のコンジュゲーションによるものである。グリコシル化抗体へのコンジュゲーションは、例えば、末端糖残基の過ヨウ素酸酸化によりアルデヒドを生成し、次いで、適切なリンカー－毒素にコンジュゲートし得ることによって、または天然糖を末端シアル酸残基で修飾し、次いで、それを酸化してリンカー－毒素へのコンジュゲーションのためにアルデヒドを生成する糖鎖工学的アプローチによって、達成され得る（Ｚｈｏｕ，ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ．Ｃｈｅｍ．，２５（３）：５１０－５２０（２０１４））。
抗体に対する活性部分のコンジュゲーションのためのＵＶ架橋の使用も報告されている。この方法は、反応性チオール部分を有する抗体の部位特異的共有結合的官能化のためにヌクレオチド結合部位（ＮＢＳ）を使用する。インドール－３－酪酸（ＩＢＡ）コンジュゲート型のシステインを使用して、ＮＢＳで反応性チオール部分を抗体に部位特異的に光架橋した。次いで、チオール部分を使用して、チオール反応性基を有するリンカー－毒素をコンジュゲートすることができる（Ａｌｖｅｓ，ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ．Ｃｈｅｍ．，２５（７）：１１９８－１２０２（２０１４））。
代替的に、低い平均ＤＡＲを有するＡＤＣは、疎水性相互作用クロマトグラフィー等のクロマトグラフィー分離技術を使用してＤＡＲ種の混合物を含有するＡＤＣ調製物から単離してもよい（例えば、Ｈａｍｂｌｅｔｔ，ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，１０：７０６３－７０７０（２００４）、Ｓｕｎ，ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｃｏｎｊ Ｃｈｅｍ．，２８：１３７１－８１（２０１７）、米国特許出願公開第２０１４／０２８６９６８号を参照されたい）。
低い平均ＤＡＲを有するＡＤＣは、３．９以上の平均ＤＡＲを有するＡＤＣの調製物に非コンジュゲート（すなわち、ＤＡＲ０）抗体を添加することによって作製することもできる。当該技術分野で既知であるように、コンジュゲーション方法の大半は、様々なＤＡＲ種を含むＡＤＣ調製物をもたらし、報告されているＤＡＲは、個々のＤＡＲ種の平均である。特定の実施形態では、ある割合のＤＡＲ０種を含むＡＤＣが有利であり得る。いくつかの実施形態では、３．９未満の平均ＤＡＲを有する、本明細書に記載される方法において使用するためのＡＤＣは、少なくとも５％のＤＡＲ０種を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される方法において使用するためのＡＤＣは、少なくとも１０％のＤＡＲ０種、例えば、少なくとも１５％のＤＡＲ０種または少なくとも２０％のＤＡＲ０種を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される方法において使用するためのＡＤＣは、約５％～約５０％のＤＡＲ０種、例えば、約１０％～約５０％のＤＡＲ０種、約１０％～約４０％、または約１０％～約３０％のＤＡＲ０種を含む。
ＡＤＣの平均ＤＡＲは、ＵＶ／ＶＩＳ分光分析、ＥＬＩＳＡに基づく技術、クロマトグラフィー技術、例えば、疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）、ＵＶ－ＭＡＬＤＩ質量分析（ＭＳ）及びＭＡＬＤＩ－ＴＯＦＭＳ等の標準的な技術によって決定され得る。加えて、薬物結合形態（例えば、ＤＡＲ０、ＤＡＲ１、ＤＡＲ２種の画分等）の分布は、ＭＳ（付随するクロマトグラフィー分離ステップを伴う、または伴わない）、疎水性相互作用クロマトグラフィー、逆相ＨＰＬＣ、または等電点ゲル電気泳動（ＩＥＦ）を含む、当該技術分野で既知の様々な技術によって分析されてもよい（例えば、Ｓｕｎ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｃｏｎｊ Ｃｈｅｍ．，２８：１３７１－８１（２０１７）、Ｗａｋａｎｋａｒ ｅｔ ａｌ．，ｍＡｂｓ，３：１６１－１７２（２０１１）を参照されたい）。
特定の実施形態では、ＡＤＣの平均ＤＡＲは、疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）技術によって決定される。
コンジュゲーション後、ＡＤＣは、当該技術分野で既知の精製方法によって、非コンジュゲート反応物質及び／または任意のコンジュゲート凝集体から精製及び分離され得る。そのような方法として、限定されないが、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）、疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）、イオン交換クロマトグラフィー、クロマトフォーカシング、限外濾過、遠心分離型限外濾過、及びそれらの組み合わせが挙げられる。
薬学的組成物
本明細書に記載される二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物を含む薬学的組成物も本明細書で提供される。薬学的組成物は、二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物と、薬学的に許容される担体とを含む。
「薬学的に許容される」という用語は、動物、特にヒトに使用するために、連邦政府もしくは州政府の規制機関によって承認されているか、または米国薬局方もしくは他の一般的に認識されている薬局方に記載されていることを意味する。「担体」という用語は、治療剤がともに投与される希釈剤、アジュバント、賦形剤、またはビヒクルを指す。そのような薬学的担体は、滅菌済みの液体、例えば、水及び油であってもよく、石油、動物、植物または合成起源のもの、例えば、ピーナッツ油、大豆油、鉱油、ゴマ油等を含む。いくつかの態様において、担体は、天然には見られない人工の担体である。薬学的組成物を静脈内投与するときに担体として、水を使用することができる。生理食塩水及びデキストロース水溶液及びグリセロール水溶液も、液体担体として、特に注射用液に用いることができる。好適な薬学的賦形剤としては、デンプン、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、麦芽、米、小麦粉、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、モノステアリン酸ナトリウム、タルク、塩化ナトリウム、脱脂粉乳、グリセロール、プロピレン、グリコール、水、エタノール等が挙げられる。所望の場合、組成物は、少量の湿潤剤もしくは乳化剤、またはｐＨ緩衝剤を含有することもできる。これらの組成物は、液剤、懸濁剤、乳剤、錠剤、丸剤、カプセル剤、散剤、徐放性製剤等の形態をとることができる。組成物は、トリグリセリド等の従来の結合剤及び担体とともに、坐剤として製剤化することができる。経口製剤は、医薬品グレードのマンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、セルロース、炭酸マグネシウム等の標準的な担体を含むことができる。好適な薬学的担体の例は、Ｅ．Ｗ．Ｍａｒｔｉｎによる「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」に記載されている。そのような組成物は、患者に適切な投与のための形態を提供するために、好ましくは精製された形態の、治療有効量の二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物を、好適な量の担体とともに含有する。製剤は、投与様式に適合するべきである。
特定の実施形態では、二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物を含む組成物は、ヒトへの静脈内投与に適合された薬学的組成物として、日常的な手順に従って製剤化される。典型的には、静脈内投与のための組成物は、滅菌済みの等張水性緩衝液中の溶液である。必要に応じて、組成物はまた、可溶化剤、及び注射部位の疼痛を緩和するためのリグノカイン等の局所麻酔剤も含み得る。一般に、成分は、別々にまたは単位剤形中に一緒に混合されて、例えば、活性剤の量を示すアンプルまたはサシェ等の密封容器内に、凍結乾燥粉末または水を含まない濃縮物として供給される。組成物が注入によって投与される場合、滅菌済みの医薬品グレードの水または生理食塩水を含む注入ボトルを用いて分注することができる。組成物が注射によって投与される場合、投与前に成分を混合できるように、注射用の滅菌水または生理食塩水のアンプルが提供されてもよい。
特定の実施形態では、本明細書に記載される組成物は、中性または塩形態として製剤化される。薬学的に許容される塩として、塩酸、リン酸、酢酸、シュウ酸、酒石酸等から誘導されるもの等の陰イオンを用いて形成されるも塩、及び、ナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウム、水酸化第二鉄、イソプロピルアミン、トリエチルアミン、２－エチルアミノエタノール、ヒスチジン、プロカイン等から誘導されるもの等の陽イオンを用いて形成される塩が挙げられる。
胆道癌（ＢＴＣ）の治療方法
胆道癌（ＢＴＣ）を治療する方法であって、ＢＴＣを有する対象に、本明細書に記載される二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物またはＡＤＣを、この疾患または障害を治療、予防または改善するのに有効な量で投与することを含む方法を本明細書に記載する。本明細書に記載される方法の具体的な実施形態では、二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物はｖ１００００である。本明細書に記載される方法の他の具体的な実施形態では、ＡＤＣは、アウリスタチン類似体に結合されたｖ１００００である。
「障害」または「疾患」は、本明細書に記載される二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物または方法による治療の恩恵を受ける任意の状態を指す。これには、慢性及び急性の障害または疾患が含まれ、哺乳動物を当該障害に罹りやすくする病理学的状態が含まれる。本明細書に記載される実施形態では、障害または疾患は、以下により詳細に記載される胆道癌である。
「対象」または「患者」という用語は、動物を指し、いくつかの実施形態では、治療、観察または実験の対象である哺乳動物を指す。動物は、ヒト、非ヒト霊長類、伴侶動物（例えば、イヌ、ネコ等）、家畜（例えば、ウシ、ヒツジ、ブタ、ウマ等）、または実験動物（例えば、ラット、マウス、モルモット等）であってもよい。
本明細書で使用される「哺乳動物」という用語は、限定されないが、ヒト、非ヒト霊長類、イヌ、ネコ、マウス、ウシ、ウマ、及びブタを含む。
「治療」は、治療される個体または細胞の自然経過を変化させようとする臨床介入を指し、臨床病理学の仮定において実施することができる。治療の望ましい効果として、限定されないが、疾患の再発の予防、症状の緩和、疾患の任意の直接的または間接的な病理学的帰結の軽減、転移の予防、疾患の進行速度の低下、疾患状態の改善または緩和、ならびに寛解または予後の向上が挙げられる。いくつかの実施形態では、二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物またはＡＤＣは、疾患の発症を遅延させるか、または疾患の進行を遅延させるために使用され得る。いくつかの実施形態では、二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物またはＡＤＣは、ＢＴＣの発生を遅延させるために使用され得る。一実施形態では、本明細書に記載される二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物、ＡＤＣ、及び方法は、ＢＴＣ腫瘍／がん成長の阻害に影響を及ぼし得る。別の実施形態では、二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物またはＡＤＣは、ＢＴＣの進行を遅延させるために使用され得る。
「有効量」という用語は、本明細書で使用される場合、投与される二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物の量を指し、これは、列挙した方法の目標を達成し、例えば、治療される疾患、状態または障害の症状のうちの１つ以上をある程度軽減する。疾患または障害の治療または阻害に有効的な二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物の量は、標準的な臨床技術によって決定することができる。加えて、最適な投与量範囲を特定するのに役立つように、インビトロアッセイが任意選択的に用いられてもよい。製剤に用いられる正確な用量は、投与経路及びＢＴＣの重症度にも依存するため、医師の判断及び各患者の状況に従って決定されるべきである。有効用量は、インビトロまたは動物モデル試験系に由来する用量反応曲線から推定することができる。
「第一選択療法」、「第一選択治療」または「一次療法」という用語は、がんの種類及び病期を考慮に入れた、患者の初期治療として一般に受け入れられている治療レジメンである。用語「第二選択療法」または「第二選択治療」は、第一選択療法が所望の有効性を提供しない場合に典型的に投与される治療レジメンである。
「ネオアジュバント療法」という用語は、主な治療、通常は手術が行われる前に、腫瘍を縮小するための最初のステップとして行われる治療を指す。ネオアジュバント療法の例として、限定されないが、化学療法、放射線療法、及びホルモン療法が挙げられる。ネオアジュバント療法は、第一選択療法として考慮することができる。
「アジュバント療法」という用語は、がんが再発するリスクを低減するために、第一選択治療後に行われる追加のがん治療を指す。アジュバント療法として、限定されないが、化学療法、放射線療法、ホルモン療法、標的療法（典型的には、正常細胞ではなく特定の種類のがん細胞を標的とする低分子薬物または抗体）、または生物学的療法（例えば、ワクチン、サイトカイン、抗体、または遺伝子療法等）が挙げられる。
「進行がん」は、安全に除去することができないか、または治癒もしくは長期寛解の可能性が非常に低い程度にまで発症したがんである。がんは、がんの除去を妨げる構造まで隣接して成長することによって、あるいはそれらが発生した場所から、組織線を横切って、またはリンパ節もしくは他の器官等の他の身体部位に広がることによって進行する。進行したがんは局所的に進行し得る、すなわち、それらは原発部位の臓器外に広がっているが、遠隔部位にはまだ広がっていないことを意味する。進行がんは転移性であり得、すなわち、がんが発生した部位（原発部位）から体の他のより遠い部位（続発部位）にがん細胞が広がっていることを意味する。
「切除可能な」がんは、手術によって治療することができるがんである。「切除不能な」がんは、典型的には、がんが主腫瘍を取り巻く組織に広がっているために、手術によって治療することができないがんである。特定のがんは、周囲組織への拡散の程度に基づいて、医師によって「部分切除可能」と評価され得る。
二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物またはＡＤＣは、既知の方法に従って対象に投与され得る。例えば、リポソーム、微粒子、マイクロカプセルへの封入、化合物を発現することが可能な組換え細胞、受容体媒介性エンドサイトーシス（例えば、Ｗｕ ａｎｄ Ｗｕ，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６２：４４２９－４４３２（１９８７））、レトロウイルスまたは他のベクターの一部としての核酸の構築等の様々な送達系が既知であり、本明細書に記載される二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物製剤を投与するために用いることができる。導入方法は、限定されないが、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内、皮下、鼻腔内、硬膜外、及び経口経路を含む。二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物またはＡＤＣは、任意の都合のよい経路によって、例えば、注入またはボーラス注射によって、上皮または粘膜皮膚の裏層（例えば、口腔粘膜、直腸及び腸粘膜等）を介した吸収によって投与されてもよく、また他の生物活性剤と一緒に投与されてもよい。投与は、全身または局所であり得る。加えて、特定の実施形態では、本明細書に記載される二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物を、脳室内及び髄腔内注射を含む任意の好適な経路によって中枢神経系に導入することが望ましい場合があり、脳室内注射は、例えば、Ｏｍｍａｙａリザーバー等のリザーバーに取り付けられた脳室内カテーテルによって容易になり得る。例えば、吸入器またはネブライザーの使用、及びエアロゾル化剤を用いた製剤化によって、肺投与も用いることができる。具体的な実施形態では、二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物またはＡＤＣは、静脈内（ＩＶ）に投与され得る。
特定の実施形態では、本明細書に記載される二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物またはＡＤＣを、治療を必要とする領域に局所投与することが望ましい場合があり、これは、例えば、限定するものではないが、手術中の局所注入によって、例えば、術後の創傷被覆と併せて局所塗布によって、注射によって、カテーテルによって、坐剤によって、または移植片によって達成することができ、上記移植片は、シラスティック膜等の膜、または繊維を含む、多孔質、非多孔質、またはゲル状の材料である。好ましくは、二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物等のタンパク質を投与する場合、タンパク質が吸着しない材料を使用することに注意しなければならない。
別の実施形態では、二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物またはＡＤＣは、小胞、特にリポソーム中で送達することができる（Ｌａｎｇｅｒ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：１５２７－１５３３（１９９０）；Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ ｉｎ ｔｈｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ｏｆ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ，Ｌｏｐｅｚ－Ｂｅｒｅｓｔｅｉｎ ａｎｄ Ｆｉｄｌｅｒ（ｅｄｓ．），Ｌｉｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ｐｐ．３５３～３６５（１９８９）中のＴｒｅａｔら；Ｌｏｐｅｚ－Ｂｅｒｅｓｔｅｉｎ、同書のｐｐ．３１７～３２７；全体的に同書を参照されたい）。
さらに別の実施形態では、二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物またはＡＤＣは、制御放出システムで送達され得る。一実施形態では、ポンプが使用されてもよい（上記のＬａｎｇｅｒ；Ｓｅｆｔｏｎ，ＣＲＣ Ｃｒｉｔ．Ｒｅｆ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｅｎｇ．１４：２０１（１９８７）、Ｂｕｃｈｗａｌｄ ｅｔ ａｌ．Ｓｕｒｇｅｒｙ，８８：５０７（１９８０）、Ｓａｕｄｅｋ ｅｔ ａｌ．Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３２１：５７４（１９８９）を参照されたい）。別の実施形態では、ポリマー材料を使用することができる（Ｍｅｄｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ，Ｌａｎｇｅｒ ａｎｄ Ｗｉｓｅ（ｅｄｓ．），ＣＲＣ Ｐｒｅｓ．，Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ，Ｆｌａ．（１９７４）；Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｄｒｕｇ Ｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ，Ｄｒｕｇ Ｐｒｏｄｕｃｔ Ｄｅｓｉｇｎ ａｎｄ Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ，Ｓｍｏｌｅｎ ａｎｄ Ｂａｌｌ（ｅｄｓ．），Ｗｉｌｅｙ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８４）；Ｒａｎｇｅｒ ａｎｄ Ｐｅｐｐａｓ，Ｊ．，Ｍａｃｒｏｍｏｌ．Ｓｃｉ．Ｒｅｖ．Ｍａｃｒｏｍｏｌ．Ｃｈｅｍ．２３：６１（１９８３）を参照されたい。またＬｅｖｙ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２８：１９０（１９８５）；Ｄｕｒｉｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎ．Ｎｅｕｒｏｌ．２５：３５１（１９８９）；Ｈｏｗａｒｄ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ．７１：１０５（１９８９）も参照されたい）。さらに別の実施形態では、制御放出システムは、治療標的の近くに配置することができ、したがって、全身用量のわずか一部を必要とするだけである（例えば、Ｇｏｏｄｓｏｎ，ｉｎ Ｍｅｄｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ，ｖｏｌ．２，ｐｐ．１１５－１３８（１９８４）を参照されたい）。
二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物またはＡＤＣは、単独で、または他の種類の治療（例えば、放射線療法、化学療法、ホルモン療法、免疫療法、及び抗腫瘍剤）とともに投与されてもよい。一般に、患者の種と同じ種である種起源または種反応性（抗体の場合）の生成物の投与が好ましい。したがって、一実施形態では、ヒトまたはヒト化二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物、断片誘導体、類似体、または核酸は、治療または予防のためにヒト患者に投与される。
胆道癌（ＢＴＣ、「胆道癌（ｂｉｌｉａｒｙ ｃａｎｃｅｒ）」とも称される）は、胆嚢癌、膨大部癌、胆管細胞癌、及び胆嚢管腺癌を含む。胆管細胞癌（ＣＣＡ）はまた、肝内ＣＣＡまたは肝外ＣＣＡに分類され得る。一実施形態では、二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物またはＡＤＣは、ＢＴＣを治療する方法に使用され得る。一実施形態では、本明細書に記載される二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物またはＡＤＣは、進行性切除不能ＢＴＣを治療する方法に使用され得る。他の実施形態では、本明細書に記載される二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物またはＡＤＣは、胆嚢癌、膨大部癌、胆管細胞癌、または胆嚢管腺癌を治療する方法され得る。他の実施形態では、本明細書に記載される二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物またはＡＤＣは、肝内ＣＣＡまたは肝外ＣＣＡを治療する方法に使用され得る。
一実施形態では、二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物またはＡＤＣは、ＨＥＲ２の発現、増幅、または活性化を示すＢＴＣを有する対象を治療するために使用され得る。「ＨＥＲ２の発現、増幅、または活性化を示す」ＢＴＣは、診断試験において、ＨＥＲ２受容体を発現する（過剰発現を含む）、増幅されたＨＥＲ２遺伝子を有する、及び／または別様に、ＨＥＲ２受容体の活性化もしくはリン酸化を示すものである。
「ＨＥＲ２の活性化を示す」ＢＴＣは、診断試験において、ＨＥＲ２受容体の活性化またはリン酸化を示すものである。そのような活性化は、直接的に（例えば、ＥＬＩＳＡによるＨＥＲ２リン酸化を測定することによって）または間接的に（例えば、遺伝子発現プロファイリングによって）決定することができる。一実施形態では、二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物またはＡＤＣは、ＨＥＲ２の発現を示すＢＴＣを有する対象を治療するために使用され得る。
「ＨＥＲ２受容体の過剰発現または増幅」を伴うＢＴＣは、同じ組織型の非がん性細胞と比較して著しく高いレベルのＨＥＲ２受容体タンパク質または遺伝子を有するものである。そのような過剰発現は、遺伝子増幅によって、または転写もしくは翻訳の増加によって引き起こされ得る。ＨＥＲ２受容体の過剰発現または増幅は、細胞の表面上に存在するＨＥＲ２タンパク質のレベルの増加を（例えば、免疫組織化学アッセイ；ＩＨＣによって）評価することにより、診断または予後アッセイにおいて決定され得る。一実施形態では、ＨＥＲ２の過剰発現は、例えば、ＨＥＲＣＥＰＴＥＳＴ（登録商標）（Ｄａｋｏ）を使用して、ＩＨＣによって分析され得る。腫瘍生検からのパラフィン包埋組織切片をＩＨＣアッセイに供し、以下のようにＨＥＲ２タンパク質染色強度基準を一致させることができる。
スコア０：染色が観察されない、または腫瘍細胞の１０％未満に膜染色が観察される。
スコア１＋：腫瘍細胞の１０％超に、かすかな／ほとんど知覚できない膜染色が検出される。細胞は、それらの膜の一部においてのみ染色される。
スコア２＋：腫瘍細胞の１０％超に弱～中程度の完全な膜染色が観察される。
スコア３＋：腫瘍細胞の１０％超に、中程度～強度の完全な膜染色が観察される。
ＨＥＲ２過剰発現評価の０または１＋スコアを有する腫瘍は、ＨＥＲ２を過剰発現していないと特徴付けることができる一方で、２＋または３＋スコアを有する腫瘍は、ＨＥＲ２を過剰発現していると特徴付けることができる。一実施形態では、二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物またはＡＤＣは、ＨＥＲ２の過剰発現及び／または増幅を示すＢＴＣを有する対象を治療するために使用され得る。
代替的または追加的に、例えば、蛍光インサイツハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ；１９９８年１０月公開のＷＯ９８／４５４７９を参照されたい）及び発色インサイツハイブリダイゼーション（ＣＩＳＨ；例えば、Ｔａｎｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．１５７（５）：１４６７－１４７２（２０００）、Ｂｅｌｌａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．２６：（Ｍａｙ ２０ ｓｕｐｐｌ；ａｂｓｔｒ ２２１４７）（２００８）を参照のこと）を含むインサイツハイブリダイゼーション（ＩＳＨ）、サザンブロット法、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）技術、例えば、定量的リアルタイムＰＣＲ（ｑＲＴ－ＰＣＲ）、または次世代配列決定（ＮＧＳ）によって、細胞内のＨＥＲ２をコードする核酸のレベルを測定することができる。これらの方法を用いたＨＥＲ２遺伝子増幅の評価は、典型的には、陽性（＋）または陰性（－）として報告され、例えば、ＨＥＲ２遺伝子増幅癌のＦＩＳＨ＋またはＨＥＲ２遺伝子増幅ではないがんのＦＩＳＨ－がある。ＮＧＳによるＨＥＲ２遺伝子増幅の評価はまた、ＨＥＲ２遺伝子コピーの数に関しても報告され得る。正常細胞では、ＨＥＲ２遺伝子の２つのコピーが存在する。したがって、がんが、ＨＥＲ２遺伝子の２つを超えるコピーを有する場合、ＨＥＲ２遺伝子増幅癌とみなされ得る。
ＨＥＲ２の発現、増幅または活性化を示すＢＴＣを有する対象を治療する方法であって、有効量の本明細書に記載される二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物またはＡＤＣを対象に提供することを含む方法を本明細書に記載する。いくつかの実施形態では、二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物またはＡＤＣは、ＨＥＲ２ ３＋の遺伝子増幅ＢＴＣを有する対象の治療に使用され得る。他の実施形態では、二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物またはＡＤＣは、ＨＥＲ２ ２＋の遺伝子増幅ＢＴＣの治療に使用され得る。他の実施形態では、二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物またはＡＤＣは、ＨＥＲ２ １＋の遺伝子増幅ＢＴＣの治療に使用され得る。他の実施形態では、二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物またはＡＤＣは、ＨＥＲ２遺伝子の増幅なしで、ＨＥＲ２ ３＋と評価されたＢＴＣの治療に使用され得る。他の実施形態では、二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物またはＡＤＣは、ＨＥＲ２遺伝子の増幅なしで、ＨＥＲ２ ２＋と評価されたＢＴＣの治療に使用され得る。他の実施形態では、二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物またはＡＤＣは、ＨＥＲ２遺伝子増幅なしで、ＨＥＲ２ １＋と評価されたＢＴＣの治療に使用され得る。
いくつかの実施形態では、治療される対象は、ＢＴＣに対して以前に治療を受けていない可能性があり、二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物またはＡＤＣが第一選択治療として投与される。いくつかの実施形態では、二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物またはＡＤＣは、切除可能または部分切除可能ながんを有する対象を治療するためのアジュバントまたはネオアジュバント療法として使用され得る。他の実施形態では、治療される対象は、ＢＴＣに対して以前に１つ以上の治療を受けている可能性があり、二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物またはＡＤＣが第二選択治療として投与される。ＢＴＣのための１つ以上の以前の治療は、ゲムシタビン単独、または白金ベースの化学療法剤、フルオロピリミジンベースの化学放射線療法、追加の化学療法を伴わない放射線療法、抗体（限定されないが、抗ＨＥＲ２標的抗体を含む）、及び治験薬（すなわち、現在臨床試験が行われているが、ＦＤＡによってまだ承認されていないもの）等の全身化学療法から選択される治療を含むことができる。白金ベースの化学療法剤は、シスプラチンまたはオキサリプラチンを含み得る。一実施形態では、全身化学療法は、ゲムシタビン及びシスプラチン、またはゲムシタビン及びオキサリプラチンを含む。
ＢＴＣを有する対象に投与され得る二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物またはＡＤＣの例示的な有効量は、０．１ｍｇ／ｋｇ患者の体重～１００ｍｇ／ｋｇ患者の体重であり得る。いくつかの実施形態では、二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物またはＡＤＣは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、または１００ｍｇ／ｋｇ患者の体重で投与される。
いくつかの実施形態では、二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物は、毎週、隔週（Ｑ２Ｗ）、３週間毎（Ｑ３Ｗ）、または４週間毎（Ｑ４Ｗ）に投与される。二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物の毎週投与のための例示的な有効量は、約１ｍｇ／ｋｇ～約３０ｍｇ／ｋｇの範囲である。二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物の隔週投与のための例示的な有効量は、約１０ｍｇ／ｋｇ～約５０ｍｇ／ｋｇの範囲である。二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物の３週間毎の投与のための例示的な有効量は、約１５ｍｇ／ｋｇ～約５０ｍｇ／ｋｇの範囲である。二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物の４週間毎の投与のための例示的な有効量は、約４０ｍｇ／ｋｇ～約７０ｍｇ／ｋｇの範囲である。
いくつかの実施形態では、二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物の有効量は、毎週５、１０、または１５ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物の有効量は、毎週１０ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物の有効量は、２週間毎に２０、２５、または３０ｍｇ／ｋｇである。他の実施形態では、二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物の有効量は、２週間毎に２０ｍｇ／ｋｇである。代替の実施形態では、二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物の有効量は、３週間毎に２０ｍｇ／ｋｇである。さらに他の実施形態では、二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物の有効量は、３週間毎に３０ｍｇ／ｋｇである。さらなる実施形態では、二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物の有効量は、４週間毎に４０ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物の有効量は、２０、２５、または３０ｍｇ／ｋｇの初回用量、続いて、より低い用量の二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物である。
当該技術分野で既知であるように、ＡＤＣは、二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物に使用される用量よりも低い用量で対象に投与され得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＡＤＣ（すなわち、アウリスタチン類似体に結合された二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物）は、毎週、隔週（Ｑ２Ｗ）、３週毎（Ｑ３Ｗ）、または４週毎（Ｑ４Ｗ）に投与される。いくつかの実施形態では、ＢＴＣを有する対象に投与され得るＡＤＣの有効量は、毎週、２週間毎、または３週間毎に約１～約１５ｍｇ／ｋｇである。
上述のように、具体的な実施形態では、二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物またはＡＤＣは、静脈内に投与され得る。一実施形態では、二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物は、１２０～１５０分にわたって０．９％生理食塩水中のＩＶ注入によって投与され得る。一実施形態では、二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物は、９０分間にわたって０．９％生理食塩水中のＩＶ注入によって投与され得る。一実施形態では、二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物は、６０分間にわたって０．９％生理食塩水中のＩＶ注入によって投与され得る。関連する実施形態では、注入速度は、１時間当たり２５０ｍＬの生理食塩水を超えてはならない。
ＢＴＣを有する対象を治療する方法であって、有効量の二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物またはＡＤＣを、追加の抗腫瘍治療とともに投与することを含む方法も本明細書で提供される。追加の抗腫瘍処置は、ゲムシタビン単独、または白金ベースの化学療法剤、フルオロピリミジンベースの化学放射線療法、追加の化学療法を伴わない放射線療法、及び治験薬（すなわち、現在臨床試験が行われているが、ＦＤＡによってまだ承認されていないもの）等の全身化学療法を含む、ＢＴＣのための１つ以上の治療から選択され得る。一実施形態では、ＢＴＣを有する対象を治療する方法は、有効量の二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物またはＡＤＣを、ゲムシタビン及びシスプラチンとともに、またはゲムシタビン及びオキサリプラチンとともに投与することを含む。一実施形態では、二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物またはＡＤＣは、フルオロピリミジン薬及び白金ベースの薬物とともに投与されてもよい。フルオロピリミジン薬の例として、限定されないが、フルオロウラシル（５－ＦＵ）、カペシタビンまたはゲムシタビンが挙げられる。白金ベースの薬物の例として、限定されないが、シスプラチンまたはオキサリプラチンが挙げられる。他の実施形態では、二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物またはＡＤＣは、５－ＦＵ、オキサリプラチン、及びロイコボリンとともに投与され得る。さらに他の実施形態では、対象がＭＳＩ－Ｈ／ｄＭＭＲ（高レベルのマイクロサテライト不安定性／ミスマッチ修復の欠損）であるＢＴＣを有する場合、二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物またはＡＤＣは、抗ＰＤ１抗体ペムブロリズマブ（Ｋｅｙｔｒｕｄａ（商標））または抗ＰＤ－Ｌ１抗体アテゾリズマブ（ＴＥＣＥＮＴＲＩＱ（登録商標））等の免疫チェックポイント阻害剤とともに投与されてもよい。
Ｓｉｍｉｌｅ ｅｔ ａｌ．（２０１９）Ｍｅｄｉｃｉｎａ５５：４２の表２に記載されるような、ＢＴＣに対する追加の抗腫瘍治療薬は、当該技術分野で既知である。当業者であれば、これらの治療のうちのいずれかを、本明細書に記載される二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物またはＡＤＣとともに投与することができるかを特定することができるであろう。
前述の段落に記載の追加の抗腫瘍治療薬は、二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物またはＡＤＣと同時に投与されてもよいか、または連続的に投与されてもよい。
いくつかの実施形態では、ＢＴＣを有する対象に有効量の二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物を提供することの結果は、病変（複数可）を縮小すること、病変（複数可）の成長を阻害すること、病変（複数可）の無増悪期間を増加させること、対象の無病生存期間を延長すること、転移を減少させること、対象の無増悪生存期間を増加させること、または対象の全生存期間を増加させるもしくは治療を受ける対象群の全生存期間を増加させることである。関連する実施形態では、対象に有効量の二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物を提供することの結果は、改訂された固形腫瘍の応答評価基準（ＲＥＣＩＳＴ）ガイドライン（バージョン１．１）［Ｅｕｒ Ｊ Ｃａ ４５：２２８－２４７，２００９］により測定した場合、対象における部分奏効（ＰＲ）または安定（ＳＤ）である。転移性疾患を有し、ＣＲまたはＰＲのいずれかを有する対象では、奏効期間を測定してもよい。
本明細書で使用される場合、「進行」（ＰＤ）という用語は、１つ以上の新たな病変の出現及び／または既存の非標的病変の明白な進行を指す。ＰＤは、治療の変更を要するほど十分に著しく全体の腫瘍量が増加する場合に、「明白な進行」に基づいて宣言され得る；ほとんどの場合、１つ以上の非標的病変のサイズの若干の増大は、（特に標的疾患におけるＳＤまたはＰＲの存在下では）要件を満たすのに十分ではない。
本明細書で使用される場合、用語「部分奏効」（ＰＲ）は、ベースライン径和を基準として、標的病変の径和（任意の標的リンパ節の短軸を含む）が少なくとも３０％減少することを指す。
本明細書で使用される場合、「完全奏効」（ＣＲ）という用語は、すべての非標的病変の消失、腫瘍マーカーレベルの正常化を指す（腫瘍マーカーが測定され、最初に正常の上限を超えている場合、患者が臨床的な完全奏効であるとみなされるためにはそれらが正常化しなければならない）。すべてのリンパ節は＜１０ｍｍ（短軸）でなければならない。
本明細書で使用される場合、「安定」（ＳＤ）という用語は、治療を開始して以来の最小径和を基準として、ＰＲに相当するのに十分な縮小がなく、ＰＤに相当するのに十分な増大もないことを指す。
本明細書で使用される場合、「客観的奏効率」（ＯＲＲ）という用語は、治療の開始から疾患の進行／再発までの、ＲＥＣＩＳＴ ｖ１．１によるＰＲまたはＣＲを有する、任意の量の治験薬を投与されるすべての無作為化された患者の割合である（治療を開始して以来記録された最小測定値をＰＤの基準とする）。
本明細書で使用される場合、用語「全生存期間」（ＯＳ）は、無作為化日から任意の原因による死亡日までの時間を指す。
本明細書で使用される場合、用語「無増悪生存期間」（ＰＦＳ）は、がんが進行または悪化することなく、依然として生存している患者を指す。一実施形態では、試験における無作為化から、ＰＦＳは、ＲＥＣＩＳＴ（バージョン１．１）によって定義される客観的進行が最初にＸ線撮影によって実証されるまでの期間、または任意の原因による死亡までの時間として定義される。以前の進行が報告されずに死亡した患者は、死亡当日に進行があったとみなされる。進行がなかった、または追跡不能となった患者は、最後のＸ線撮影による腫瘍評価の日に打ち切られる。
本明細書で使用される場合、「無病生存期間」（ＤＦＳ）という用語は、がんに対する一次治療が終了した後、患者がそのがんの兆候または症状なしで生存する時間の長さを指す。ＤＦＳはまた、「無再発生存期間」（ＲＦＳ）と称されてもよい。
本明細書で使用される場合、「無増悪期間」（ＴＴＰ）という用語は、がんの診断日または治療開始日から、がんが悪化し始めるか、または身体の他の部分に広がるまでの時間の長さを指す。
本明細書で使用される場合、用語「病勢制御率」（ＤＣＲ）は、疾患の進行がないこと及びその割合を指す。これは、ＣＲ、ＰＲまたはＳＤ（具体的には、ＰＤを有する患者を除く）に分類される最良の全奏効を有する患者群を指し、最良の全奏効は、治療開始からＰＤまでに記録される最良の奏効である。
本明細書で使用される場合、「全奏効期間」（ＤＯＲ）という用語は、治療開始以降に記録された最小測定値を基準として、完全奏効または部分奏効（どちらか最初に記録された状態）の測定基準を満たした時点から、再発または疾患の進行が客観的に確認された最初の日までの期間を指す。
いくつかの実施形態では、ＢＴＣを有する対象に有効量の二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物またはＡＤＣを提供することの結果は、対象の群における病勢制御率（ＤＣＲ）を増加させることである。ＤＣＲは、殺腫瘍効果よりも腫瘍抑制効果を有する療法の有効性を測定するのに有用であり得る。ＤＣＲは、二重特異性抗ＨＥＲ２またはＡＤＣで処理した後に、ＣＲ、ＰＲまたはＳＤを示すＢＴＣを有する患者の割合として計算される。一実施形態では、有効量の二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物またはＡＤＣを対象に投与すると、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％を超えるＤＣＲがもたらされる。他の実施形態では、有効量の二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物またはＡＤＣを対象に投与すると、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％を超えるＤＣＲがもたらされる。
ＰＦＳ（無増悪生存期間）及びＯＲＲ（全奏効率）も、二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物またはＡＤＣの有効性を決定するために使用することができ、上記の改訂版ＲＥＣＩＳＴ １．１ガイドラインに従って測定される。ＰＦＳは、無作為化から客観的な腫瘍進行または死亡までの時間として定義される。ＯＲＲは、二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物またはＡＤＣを用いた療法に対して部分奏効または完全奏効を有する、ＢＴＣを有する対象の割合として定義される。ＯＲＲは、薬物の殺腫瘍活性の尺度として使用され得る。いくつかの実施形態では、ＢＴＣを有する対象に有効量の二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物またはＡＤＣを提供することの結果は、対象の群における無増悪生存期間（ＰＦＳ）を増加させることである。いくつかの実施形態では、ＢＴＣを有する対象に有効量の二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物またはＡＤＣを提供することの結果は、全奏効率（ＯＲＲ）の増加である。一実施形態では、有効量の二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物またはＡＤＣを対象に投与すると、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％を超えるＯＲＲがもたらされる。さらに別の実施形態では、有効量の二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物またはＡＤＣを対象に投与すると、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％を超えるＯＲＲがもたらされる。
全生存期間、無増悪期間、奏効期間（ＤＯＲ）は、二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物またはＡＤＣの有効性を決定するために使用することもできる。
二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物またはＡＤＣがアジュバントまたはネオアジュバント療法として投与される場合、療法の有効性を決定するために無病生存期間を測定してもよい。
キット及び製造品
本明細書には、１つ以上の二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物またはＡＤＣを含むキットも記載される。キットの個々の構成要素は、別の容器に包装され、そのような容器に関連して、医薬品または生物学的製剤の製造、使用または販売を規制する行政機関によって規定された形式の通知であってもよく、通知は、該機関による製造、使用または販売の承認を示す。キットは、二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物またはＡＤＣの使用方法または投与レジメンを概説する指示書または説明書を任意選択的に含んでもよい。
キットの１つ以上の構成要素が溶液、例えば水溶液、または滅菌水溶液として提供される場合、容器手段自体が、吸入器、注射器、ピペット、点眼器、または他の同様の装置であってもよく、そこから溶液が対象に投与され得るか、またはキットの他の構成要素に適用され、それらと混合され得る。
キットの構成要素はまた、乾燥または凍結乾燥形態で提供されてもよく、キットは、凍結乾燥成分の再構成に適した溶媒をさらに含み得る。容器の数または種類にかかわらず、本明細書に記載されるキットはまた、患者への組成物の投与を補助するための器具を含み得る。そのような器具は、吸入器、鼻内噴霧デバイス、シリンジ、ピペット、ピンセット、計量スプーン、点眼器、または同様の医学的に承認された送達媒体であり得る。
本明細書に記載される別の態様において、ＢＴＣの治療、予防、及び／または診断に有用な材料を収容する製造品が提供される。製造品は、容器と、容器上のまたは容器に関連付けられたラベルまたは添付文書とを含む。好適な容器として、例えば、ボトル、バイアル、注射器、ＩＶ溶液バッグ等が挙げられる。容器は、ガラスまたはプラスチック等の様々な材料から形成され得る。容器は、それ自体で、または別の組成物と組み合わされて、状態の治療、予防、及び／または診断に効果的な組成物を収容し、滅菌アクセスポートを有し得る（例えば、容器は、皮下注射針によって貫通可能なストッパーを有する静注溶液バッグまたはバイアルであり得る）。ラベルまたは添付文書は、選択された状態を治療するために組成物が使用されることを示す。さらに、製造品は、（ａ）本明細書に記載される二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物またはＡＤＣを含む組成物を収容する第１の容器と、（ｂ）さらなる細胞傷害性または他の治療剤を含む組成物を収容する第２の容器と、を含み得る。本明細書に記載される本実施形態における製造品は、ＢＴＣを治療するために組成物が使用され得ることを示す添付文書をさらに含んでよい。代替的に、または追加的に、製造品は、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝食塩水、リンゲル液及びデキストロース溶液等の薬学的に許容される緩衝液を収容する第２の（または第３の）容器をさらに含んでよい。他の緩衝液、希釈剤、フィルタ、針、及び注射器を含む、商業的な立場及び使用者の立場から望ましい他の材料が含まれる場合もある。
ポリペプチド及びポリヌクレオチド
本明細書に記載される二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物は、少なくとも１つのポリペプチドを含む。本明細書に記載されるポリペプチドをコードするポリヌクレオチドも記載される。二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物は、典型的には単離される。
本明細書で使用される場合、「単離された」とは、その天然の細胞培養環境の成分から同定及び分離された、及び／または回収された物質（例えば、ポリペプチドまたはポリヌクレオチド）を意味する。その天然環境の汚染成分は、二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物の診断または治療用途を妨げる物質であり、酵素、ホルモン、及び他のタンパク質性または非タンパク質性溶質を含み得る。単離されたとは、例えば、人的な介入によって、合成的に生成された物質も指す。
用語「ポリペプチド」、「ペプチド」及び「タンパク質」は、アミノ酸残基のポリマーを指すために本明細書において互換的に使用される。すなわち、ポリペプチドに関する説明は、ペプチドの説明及びタンパク質の説明にも等しく適用され、その逆も同様である。これらの用語は、天然に存在するアミノ酸ポリマー、ならびに１つ以上のアミノ酸残基が非天然のコードされたアミノ酸であるアミノ酸ポリマーに適用される。本明細書で使用される場合、これらの用語は、完全長タンパク質を含む任意の長さのアミノ酸鎖を包含し、アミノ酸残基は共有結合的なペプチド結合によって結合される。
「アミノ酸」という用語は、天然に存在するアミノ酸及び天然に存在しないアミノ酸、ならびに天然に存在するアミノ酸と同様の様式で機能するアミノ酸類似体及びアミノ酸模倣体を指す。天然にコードされたアミノ酸は、２０個の一般的なアミノ酸（アラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン、グルタミン酸、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リジン、メチオニン、フェニルアラニン、プラリン、セリン、スレオニン、トリプトファン、チロシン、及びバリン）、ならびにピロリシン及びセレノシステインである。アミノ酸類似体は、天然に存在するアミノ酸と同じ基本的な化学構造を有する化合物、すなわち、水素、カルボキシル基、アミノ基、及び、ホモセリン、ノルロイシン、メチオニンスルホキシド、メチオニンメチルスルホニウム等のＲ基に結合した炭素を指す。そのような類似体は、修飾されたＲ基（例えば、ノルロイシン）または修飾されたペプチド骨格を有するが、天然に存在するアミノ酸と同じ基本的な化学構造を保持する。アミノ酸への言及には、例えば、天然に存在するタンパク新生Ｌ－アミノ酸；Ｄ－アミノ酸、化学修飾アミノ酸、例えばアミノ酸変異体及び誘導体；天然に存在する非タンパク新生アミノ酸、例えばβ－アラニン、オルニチン等；ならびに当該技術分野でアミノ酸の特徴として既知である特性を有する化学合成化合物が含まれる。天然に存在しないアミノ酸の例として、限定されないが、α－メチルアミノ酸（例えば、α－メチルアラニン）、Ｄ－アミノ酸、ヒスチジン様アミノ酸（例えば、２－アミノ－ヒスチジン、β－ヒドロキシ－ヒスチジン、ホモヒスチジン）、側鎖に余分なメチレンを有するアミノ酸（「ホモ」アミノ酸）、及び側鎖のカルボン酸官能基がスルホン酸基（例えば、システイン酸）で置き換えられるアミノ酸が挙げられる。合成の非天然アミノ酸、置換されたアミノ酸、または１つ以上のＤ－アミノ酸を含む非天然アミノ酸を、本明細書に記載されるタンパク質に組み込むことは、いくつかの異なる点で有利であり得る。Ｄ－アミノ酸含有ペプチド等は、Ｌ－アミノ酸含有の等価物と比較してインビトロまたはインビボで増加した安定性を示す。したがって、Ｄ－アミノ酸を組み込んだペプチドの構築等は、より高い細胞内安定性が所望されるまたは必要とされる場合に特に有用であり得る。より具体的には、Ｄ－ペプチド等は、内因性ペプチダーゼ及びプロテアーゼに対して耐性を示し、それによって、そのような特性が望ましい場合に、分子の改善されたバイオアベイラビリティ及びインビボでの延長された寿命を提供する。加えて、Ｄ－ペプチド等は、主要組織適合複合体クラスＩＩ拘束性のＴヘルパー細胞への提示のために効率的にプロセシングされることができず、したがって、生物全体において体液性免疫応答を誘導する可能性が低い。
アミノ酸は、本明細書において、一般的に知られている３文字記号、またはＩＵＰＡＣ－ＩＵＢ生化学命名委員会によって推奨される１文字記号のいずれかによって言及され得る。同様に、ヌクレオチドも、一般的に受け入れられている文１字コードによって参照されてもよい。
本明細書には、二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドも記載される。「ポリヌクレオチド」または「ヌクレオチド配列」という用語は、２つ以上のヌクレオチド分子の連続的伸長を示すことを意図する。ヌクレオチド配列は、ゲノム、ｃＤＮＡ、ＲＮＡ、半合成もしくは合成起源のもの、またはそれらの任意の組み合わせであり得る。
「核酸」という用語は、デオキシリボヌクレオチド、デオキシリボヌクレオシド、リボヌクレオシド、またはリボヌクレオチド、及び一本鎖または二本鎖のいずれかの形態のそれらのポリマーを指す。具体的に限定されない限り、この用語は、参照核酸と同様の結合特性を有し、天然に存在するヌクレオチドと同様の方法で代謝される、天然ヌクレオチドの既知の類似体を含有する核酸を包含する。別途具体的に限定されない限り、この用語はまた、ＰＮＡ（ペプチド核酸）を含むオリゴヌクレオチド類似体、アンチセンス技術で使用されるＤＮＡの類似体（ホスホロチオエート、ホスホロアミデート等）も指す。別段の指示がない限り、特定の核酸配列はまた、それらの保存的に修飾された変異体（限定されないが、縮重コドン置換体を含む）及び相補的配列、ならびに明示的に指示される配列も暗黙的に包含する。具体的には、１つ以上の選択された（またはすべての）コドンの第３の位置が混合塩基及び／またはデオキシイノシン残基で置換された配列を生成することによって、縮重なコドン置換を達成することができる（Ｂａｔｚｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｒｅｓ．１９：５０８１（１９９１）；Ｏｈｔｓｕｋａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６０：２６０５－２６０８（１９８５）、Ｒｏｓｓｏｌｉｎｉ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｐｒｏｂｅｓ ８：９１－９８（１９９４））。
「保存的に修飾された変異体」は、アミノ酸及び核酸配列の両方に適用される。特定の核酸配列に関して、「保存的に修飾された変異体」は、同一もしくは本質的に同一のアミノ酸配列をコードする核酸を指すか、または核酸がアミノ酸配列をコードしない場合、本質的に同一の配列を指す。遺伝コードの縮重のために、多数の機能的に同一の核酸が任意の所与のタンパク質をコードする。例えば、コドンＧＣＡ、ＧＣＣ、ＧＣＧ及びＧＣＵはすべて、アミノ酸アラニンをコードする。したがって、アラニンがコドンによって特定されるあらゆる位置で、コードされるポリペプチドを変化させることなく、記載される対応するコドンのいずれかにコドンを変化させることができる。そのような核酸の変異は、「サイレント変異」であり、保存的に修飾された変異の１種である。ポリペプチドをコードする本明細書のあらゆる核酸配列は、核酸のすべての可能なサイレント変異も説明する。当業者であれば、核酸中の各コドン（通常、メチオニンの唯一のコドンであるＡＵＧ及び通常、トリプトファンの唯一のコドンであるＴＧＧを除く）は、機能的に同一の分子を得るように修飾され得ることを認識するであろう。したがって、ポリペプチドをコードする核酸の各サイレント変異は、記載される各配列に潜在している。
アミノ酸配列に関して、当業者は、コードされた配列中の単一のアミノ酸またはわずかな割合のアミノ酸を変更する、付加する、または欠失させる核酸、ペプチド、ポリペプチド、またはタンパク質配列に対する個々の置換、欠失または付加は、その変更がアミノ酸の欠失、アミノ酸の付加、またはアミノ酸の化学的に類似したアミノ酸による置換をもたらす「保存的に修飾された変異体」であることを認識するであろう。機能的に類似したアミノ酸を提供する保存的置換表は、当業者に既知である。そのような保存的に修飾された変異体は、本明細書に記載される多型変異体、種間相同体、及び対立遺伝子に加えられるものであり、それらを除外するものではない。
機能的に類似したアミノ酸を提供する保存的置換表は、当業者に既知である。以下の８つの群はそれぞれ、互いに保存的置換であるアミノ酸を含有する：１）アラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、２）アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）、３）アスパラギン（Ｎ）、グルタミン（Ｑ）、４）アルギニン（Ｒ）、リジン（Ｋ）、５）イソロイシン（Ｉ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、バリン（Ｖ）、６）フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）、トリプトファン（Ｗ）、７）セリン（Ｓ）、スレオニン（Ｔ）、及び［０１３９］８）システイン（Ｃ）、メチオニン（Ｍ）（例えば、Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ，Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ（Ｗ Ｈ Ｆｒｅｅｍａｎ＆Ｃｏ．；２ｎｄ ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｄｅｃｅｍｂｅｒ １９９３）を参照されたい。
２つ以上の核酸またはポリペプチド配列に関して、「同一の」またはパーセント「同一性」という用語は、同じである２つ以上の配列または部分配列を指す。配列は、以下の配列比較アルゴリズム（または当業者が利用できる他のアルゴリズム）のうちの１つを使用して、または手動によるアライメント及び目視検査によって測定されるように、比較ウィンドウまたは指定領域にわたって最大の一致となるよう比較及び整列させたときに、同じであるアミノ酸残基もしくはヌクレオチドの割合（すなわち、指定領域にわたって６０％の同一性、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、または９５％の同一性）を有する場合、「実質的に同一」である。この定義はまた、試験配列の相補体についても言及する。同一性は、少なくとも約５０アミノ酸もしくはヌクレオチド長の領域にわたって、または７５～１００アミノ酸もしくはヌクレオチド長の領域にわたって、または特定されていない場合、ポリヌクレオチドもしくはポリペプチドの配列全体にわたって存在することができる。ヒト以外の種からの相同体を含む、本明細書に記載されるポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、本明細書に記載されるポリヌクレオチド配列またはその断片を有する標識されたプローブを用いて、ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下でライブラリーをスクリーニングするステップと、該ポリヌクレオチド配列を含有する完全長ｃＤＮＡ及びゲノムクローンを単離するステップと、を含むプロセスによって得ることができる。そのようなハイブリダイゼーション技術は、当業者に周知である。
配列比較の場合、典型的には、１つの配列が、試験配列が比較される参照配列として機能する。配列比較アルゴリズムを使用する場合、試験配列及び参照配列をコンピュータに入力し、必要に応じて、部分配列座標を指定し、配列アルゴリズムプログラムのパラメータを指定する。デフォルトのプログラムパラメータを使用されてもよく、または代替のパラメータを指定することもできる。次いで、配列比較アルゴリズムが、プログラムパラメータに基づいて、参照配列に対する試験配列のパーセント配列同一性を計算する。
「比較ウィンドウ」は、本明細書で使用される場合、２０～６００、通常は約５０～約２００、より通常は約１００～約１５０からなる群から選択される連続する位置の数のうちのいずれか１つのセグメントへの言及を含み、配列は、２つの配列が最適に整列された後に、同じ数の連続する位置の参照配列と比較され得る。比較のための配列のアライメント方法は、当業者に既知である。比較のための最適な配列のアライメントは、限定されるものではないが、Ｓｍｉｔｈ ａｎｄ Ｗａｔｅｒｍａｎ（１９７０）Ａｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．２：４８２ｃによる局所相同性アルゴリズムによって、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ ａｎｄ Ｗｕｎｓｃｈ（１９７０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３の相同性アライメントアルゴリズムによって、Ｐｅａｒｓｏｎ ａｎｄ Ｌｉｐｍａｎ（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５：２４４４の類似性の検索によって、これらのアルゴリズムのコンピュータによる実装（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｐａｃｋａｇｅ中のＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡ、及びＴＦＡＳＴＡ、Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ、５７５ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｄｒ．，Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓ．）によって、または手動によるアライメント及び目視検査（例えば、Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（１９９５ ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ）を参照のこと）によって実施することができる。
パーセント配列同一性及び配列類似性を決定するのに好適なアルゴリズムの一例は、ＢＬＡＳＴ及びＢＬＡＳＴ ２．０アルゴリズムであり、これらは、Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．（１９９７）Ｎｕｃ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２５：３３８９－３４０２、及びＡｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．（１９９０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３－４１０にそれぞれ記載されている。ＢＬＡＳＴ分析を実行するためのソフトウェアは、ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖで利用可能なＮａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎを通して公的に入手可能である。ＢＬＡＳＴアルゴリズムパラメータＷ、Ｔ、及びＸは、アライメントの感度及び速度を決定する。ＢＬＡＳＴＮプログラム（ヌクレオチド配列の場合）は、デフォルトとして、１１のワード長（Ｗ）、１０の期待値（Ｅ）、Ｍ＝５、Ｎ＝－４、及び両鎖の比較を使用する。アミノ酸配列の場合、ＢＬＡＳＴＰプログラムは、デフォルトとして、３のワード長、及び１０の期待値（Ｅ）、及びＢＬＯＳＵＭ６２スコアリングマトリクス（Ｈｅｎｉｋｏｆｆ ａｎｄ Ｈｅｎｉｋｏｆｆ（１９９２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：１０９１５）を参照のこと）の５０のアライメント（Ｂ）、１０の期待値（Ｅ）、Ｍ＝５、Ｎ＝－４、及び両鎖の比較を使用する。ＢＬＡＳＴアルゴリズムは、典型的には、「低複雑性」フィルタをオフにして実行される。
ＢＬＡＳＴアルゴリズムはまた、２つの配列間の類似性の統計分析も実行する（例えば、Ｋａｒｌｉｎ ａｎｄ Ａｌｔｓｃｈｕｌ（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：５８７３－５７８７を参照されたい）。ＢＬＡＳＴアルゴリズムによって提供される類似性の１つの尺度は、最小合計確率（Ｐ（Ｎ））であり、これは、２つのヌクレオチドまたはアミノ酸配列間の一致が偶然発生する確率の指標を提供する。例えば、試験核酸と参照核酸との比較における最小合計確率が約０．２未満、または約０．０１未満、または約０．００１未満である場合、核酸は参照配列に類似しているとみなされる。
「選択的に（または特異的に）ハイブリダイズする」という語句は、特定のヌクレオチド配列が複合体混合物（限定されないが、全細胞またはライブラリーＤＮＡもしくはＲＮＡを含む）中に存在する場合、ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下での該配列のみとの分子の結合、二本鎖形成、またはハイブリダイゼーションを指す。
「ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件」という語句は、当該技術分野で知られているような低イオン強度及び高温の条件下での、ＤＮＡ、ＲＮＡ、もしくは他の核酸、またはそれらの組み合わせの配列のハイブリダイゼーションを指す。典型的には、ストリンジェントな条件下で、プローブは、核酸の複合体混合物（限定されないが、全細胞またはライブラリーＤＮＡもしくはＲＮＡを含む）中でその標的配列とハイブリダイズするが、複合体混合物中の他の配列とはハイブリダイズしない。ストリンジェントな条件は、配列依存性であり、異なる状況において異なるであろう。より長い配列は、より高い温度で特異的にハイブリダイズする。核酸のハイブリダイゼーションの広範な指針は、Ｔｉｊｓｓｅｎ，Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ｉｎ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ－－Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ｐｒｏｂｅｓ，”Ｏｖｅｒｖｉｅｗ ｏｆ ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ ａｎｄ ｔｈｅ ｓｔｒａｔｅｇｙ ｏｆ ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄ ａｓｓａｙｓ”（１９９３）に見出される。
本明細書で使用される場合、用語「遺伝子操作する、遺伝子操作された、遺伝子操作すること」は、ペプチド骨格の任意の操作、あるいは天然に存在するまたは組換えポリペプチドもしくはその断片の翻訳後修飾を含むと考えられる。遺伝子操作することは、アミノ酸配列、グリコシル化パターン、または個々のアミノ酸の側鎖基の修飾、及びこれらのアプローチの組み合わせを含む。遺伝子操作されたタンパク質は、標準的な分子生物学的手法によって発現及び産生される。
「単離された核酸分子またはポリヌクレオチド」とは、その天然環境から取り出された核酸分子、ＤＮＡまたはＲＮＡを意図する。例えば、ベクターに含まれるポリペプチドをコードする組換えポリヌクレオチドは、単離されているとみなされる。単離されたポリヌクレオチドのさらなる例として、異種宿主細胞中に維持された組換えポリヌクレオチド、または（部分的または実質的に）精製された溶液中のポリヌクレオチドが挙げられる。単離されたポリヌクレオチドは、ポリヌクレオチド分子を通常含む細胞に含まれるポリヌクレオチド分子を含むが、ポリヌクレオチド分子は、染色体外に、またはその天然の染色体位置とは異なる染色体位置に存在する。単離されたＲＮＡ分子は、インビボまたはインビトロＲＮＡ転写物、ならびにプラス鎖及びマイナス鎖の形態、ならびに二本鎖形態を含む。本明細書に記載される単離されたポリヌクレオチドまたは核酸は、例えば、ＰＣＲまたは化学合成を介して、合成的に生成されるそのような分子をさらに含む。加えて、特定の実施形態では、ポリヌクレオチドまたは核酸は、プロモーター、リボソーム結合部位、または転写ターミネーター等の調節エレメントを含む。
「ポリメラーゼ連鎖反応」または「ＰＣＲ」という用語は、概して、例えば、米国特許第４，６８３，１９５号に記載されるように、所望のヌクレオチド配列をインビトロで増幅するための方法を指す。一般に、ＰＣＲ法は、鋳型核酸と優先的にハイブリダイズすることができるオリゴヌクレオチドプライマーを使用して、プライマー伸長合成の繰り返しサイクルを伴う。
本発明の参照ヌクレオチド配列と、少なくとも、例えば９５％「同一」のヌクレオチド配列を有する核酸またはポリヌクレオチドとは、ポリヌクレオチド配列が参照ヌクレオチド配列の各１００ヌクレオチド当たり最大５つの点変異を含み得ることを除いて、ポリヌクレオチドのヌクレオチド配列が参照配列と同一であることを意図する。換言すると、参照ヌクレオチド配列と少なくとも９５％同一のヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチドを得るためには、参照配列中の最大５％のヌクレオチドを欠失させるもしくは別のヌクレオチドで置換するか、または参照配列中の全ヌクレオチドの最大５％のいくらかのヌクレオチドを参照配列に挿入してもよい。参照配列のこれらの変更は、参照ヌクレオチド配列の５’もしくは３’末端位置で、またはそれらの末端位置間のいずれの場所で行われてもよく、参照配列の残基の間に個別に、または参照配列内の１つ以上の連続した基の間に散在させてもよい。実際の問題として、任意の特定のポリヌクレオチド配列が、本発明のヌクレオチド配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一であるかどうかは、ポリペプチドについて上述したもの（例えば、ＡＬＩＧＮ－２）等の既知のコンピュータプログラムを使用して慣例的に決定することができる。
ポリペプチドの誘導体または変異体は、その誘導体または変異体のアミノ酸配列が元のペプチドからの１００個のアミノ酸配列と少なくとも５０％の同一性を有する場合、そのペプチドと「相同性」を共有する、または「相同」であると言われる。特定の実施形態では、誘導体または変異体は、該誘導体と同じ数のアミノ酸残基を有するペプチドまたはペプチドの断片のいずれかのものと少なくとも７５％同一である。特定の実施形態では、誘導体または変異体は、該誘導体と同じ数のアミノ酸残基を有するペプチドまたはペプチドの断片のいずれかのものと少なくとも８５％同一である。特定の実施形態では、誘導体のアミノ酸配列は、該誘導体と同じ数のアミノ酸残基を有するペプチドまたはペプチドの断片のいずれかと少なくとも９０％同一である。特定の実施形態では、誘導体のアミノ酸配列は、該誘導体と同じ数のアミノ酸残基を有するペプチドまたはペプチドの断片のいずれかと少なくとも９５％同一である。特定の実施形態では、誘導体または変異体は、該誘導体と同じ数のアミノ酸残基を有するペプチドまたはペプチドの断片のいずれかのものと少なくとも９９％同一である。
「修飾された」という用語は、本明細書で使用される場合、所与のポリペプチドになされる任意の変更、例えば、ポリペプチドの長さ、ポリペプチドのアミノ酸配列、化学構造、翻訳時修飾、または翻訳後修飾に対する変更を指す。「（修飾された）」という用語の形態は、論じられているポリペプチドが任意選択的に修飾されていること、すなわち、議論されているポリペプチドが、修飾されていてもまたは修飾されていなくてもよいことを意味する。
いくつかの態様において、二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物は、本明細書に開示される表（複数可）または受託番号（複数可）に記載される関連アミノ酸配列またはその断片と少なくとも８０、８５、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、単離された二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物は、本明細書に開示される表（複数可）または受託番号（複数可）に記載される関連するヌクレオチド配列またはその断片と少なくとも８０、８５、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、または１００％同一であるポリヌクレオチドによってコードされるアミノ酸配列を含む。
本開示は、特定のプロトコルに限定されず、本明細書に記載される細胞株、構築物、及び試薬は、したがって変化し得ることを理解されたい。また、本明細書で使用される専門用語は、特定の実施形態を説明することのみを目的としており、本開示の範囲を限定することを意図するものではないことも理解されたい。
本明細書で言及されるすべての刊行物及び特許は、例えば、本明細書に記載される構築物と関連して使用され得る、刊行物に記載される構築物及び方法論を説明及び開示することを目的として、参照により本明細書に組み込まれる。本明細書において論じられる刊行物は、本出願の出願日より前のそれらの開示についてのみ提供される。本明細書中のいかなるものも、本発明者らが、先行発明によってまたは他の何らかの理由で、そのような開示に先行する権利がないことを認めるものと解釈されるべきではない。
配列表
配列表
（表６）変異体ｖ５０１９、ｖ５０２０、ｖ７０９１、ｖ１００００、ｖ６９０３、ｖ６９０２及びｖ６７１７のクローン番号
Figure 2024056808000035
（表７）クローン番号による変異体ｖ５０１９、ｖ５０２０、ｖ７０９１、ｖ１０００、ｖ６９０３、ｖ６９０２及びｖ６７１７の配列
Figure 2024056808000036
Figure 2024056808000037
Figure 2024056808000038
Figure 2024056808000039
Figure 2024056808000040
Figure 2024056808000041
Figure 2024056808000042
Figure 2024056808000043
Figure 2024056808000044
Figure 2024056808000045
Figure 2024056808000046
Figure 2024056808000047
Figure 2024056808000048
Figure 2024056808000049
Figure 2024056808000050
Figure 2024056808000051
Figure 2024056808000052
Figure 2024056808000053
Figure 2024056808000054
Figure 2024056808000055
本明細書に記載される二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物及びＡＤＣを作製及び使用するための具体的な実施形態の例を以下に示す。実施例は、例示の目的のためにのみ提供され、決して本開示の範囲を限定するものではない。使用される数値（例えば、量、温度等）に関して精度を保証するように努力がなされてはいるが、当然のことながら、いくらかの実験誤差及び偏差が許容されるべきである。
本明細書に記載される構築物及び方法は、別段の指示がない限り、当該技術分野の技能の範囲内で、タンパク質化学、生化学、組換えＤＮＡ技術及び薬理学の従来の方法を用いて調製及び実施することができる。そのような技術は、文献中に十分に説明されている。例えば、Ｔ．Ｅ．Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ，Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ（Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ，１９９３）；Ａ．Ｌ．Ｌｅｈｎｉｎｇｅｒ，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（Ｗｏｒｔｈ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｉｎｃ．，ｃｕｒｒｅｎｔ ａｄｄｉｔｉｏｎ）；Ｓａｍｂｒｏｏｋ，ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，１９８９）；Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ（Ｓ．Ｃｏｌｏｗｉｃｋ ａｎｄ Ｎ．Ｋａｐｌａｎ ｅｄｓ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．）；Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１８ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｅａｓｔｏｎ，Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ：Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，１９９０）；Ｃａｒｅｙ ａｎｄ Ｓｕｎｄｂｅｒｇ Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３ｒｄＥｄ．（Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ）Ｖｏｌｓ Ａ ａｎｄ Ｂ（１９９２）を参照されたい。
実施例１：変異体１００００（ｖ１００００）の説明及び調製
ｖ１００００は、ヒトＨＥＲ２抗原のＥＣＤの２つの非重複エピトープを認識するヒト化二重特異性抗体である。ｖ１００００のＩｇＧ１様Ｆｃ領域は、ヘテロ二量体分子を生成し、それに応じてホモ二量体の形成に不利となるように選択対合を与える相補的変異を各ＣＨ３ドメインに含有する。図１は、重鎖Ａ及び軽鎖Ａ’が抗体のＥＣＤ２結合部分を形成し、重鎖Ｂが抗体のＥＣＤ４結合部分を形成するｓｃＦｖを含む、ｖ１００００の形式の表現を示す。変異体１００００は、配列番号３６に記載の配列を含む重鎖Ｈ１（図１の重鎖Ａに対応する）、配列番号６３に記載の配列を含む重鎖Ｈ２（図１の重鎖Ｂに対応する）、及び配列番号２４に記載の配列を含む軽鎖Ｌ１（軽鎖Ａ’に対応する）を含む。ｖ１００００の調製方法は、国際特許公開第ＷＯ２０１５／０７７８９１号に詳細に記載されている。
ｖ１００００を、ヒト臨床試験のための関連規制要件に従って製造し、周囲温度でＩＶ注入するために生体適合性の水性緩衝液中に１５ｍｇ／ｍＬで配合した。ｖ１００００は、２０ｍＬの緩衝液中に３００ｍｇのｖ１００００を含有するバイアル中に供給された。ｖ１００００のバイアルを凍結した状態で発送し、使用準備ができるまで－２０℃（＋／－５℃）で保存した。使用前にバイアルを周囲温度で解凍した。バイアル中の解凍溶液を、周囲温度で最大２４時間、または冷蔵条件（２℃～８℃）で最大７２時間保存し、ラベル付けされた有効期限前に使用した。
実施例２：局所進行性（切除不能）及び／または転移性ＨＥＲ２発現がんを有する患者におけるｖ１００００の第Ｉ相臨床試験
これは、局所進行性（切除不能）及び／または転移性ヒト上皮成長因子受容体２（ＨＥＲ２）発現がんを有する患者において、ｖ１００００単剤療法の安全性、忍容性、薬物動態（ＰＫ）、及び予備的な抗腫瘍活性を調査するための継続的なファースト・イン・ヒューマン試験である。
試験の第１部は、３＋３用量漸増であり、２０ｍｇ／ｋｇのＱ２Ｗ単剤を推奨用量（ＲＤ）として同定した。第２部は、継続中であり、ＨＥＲ２高発現ＢＴＣ患者を含む追加の患者において、ｖ１００００のＲＤを評価している。第１部及び第２部に適格な患者は、臨床的利益をもたらすことが知られているすべての療法の後に疾患が進行していなければならない。腫瘍応答は、ＲＥＣＩＳＴ ｖ１．１ Ｑ８Ｗに従って治験責任医師のレビューにより評価した。
目的
臨床試験の第１部の主要目的は、ｖ１００００単剤療法のＭＴＤ（最大耐量）、ＯＢＤ（最適な生物学的用量）、またはＲＤを決定することであった。臨床試験の第１部の副次目的は、ＨＥＲ２発現がんを有する適格な患者において、（１）ｖ１００００の安全性及び忍容性を特徴付けること、（２）ｖ１００００の血清ＰＫプロファイルを特徴付けること、ならびに（３）ｖ１００００の潜在的な抗腫瘍効果を探索することであった。
治験の第２部の主要目的は、特定の腫瘍型におけるｖ１００００単剤療法の安全性及び忍容性を特徴付けることであった。臨床試験の第２部の副次目的は、選択されたＨＥＲ２発現局所進行性（切除不能）及び／または転移性がんを有する適格な患者において、（１）ｖ１００００単剤療法の血清ＰＫプロファイルを特徴付けること、及び（２）ＭＴＤ、ＯＢＤ、またはＲＤでのｖ１００００の潜在的な抗腫瘍効果を探索することであった。
患者
ＥＣＯＧ（Ｅａｓｔｅｒｎ Ｃｏｏｐｅｒａｔｉｖｅ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ Ｇｒｏｕｐ）のパフォーマンスステータスが０または１であり、臨床治験責任医師の意見において寿命が少なくとも３ヶ月である、１８歳以上の男性または女性の患者を治験に含めた。
第１部では、コホート１～３には、臨床的利益をもたらすことが知られているすべての療法を受けた後に進行した、局所進行性（切除不能）及び／または転移性ＨＥＲ２発現（ＩＨＣによるＨＥＲ２ １＋、２＋、または３＋）がん（限定されないが、乳房、胃、卵巣、結腸直腸及び非小細胞肺を含む）を有する患者が含まれた。コホート４～６には、ＨＥＲ２ ＩＨＣ ２＋／ＦＩＳＨ－乳癌または胃食道腺癌（ＧＥＡ）を有する患者；ＨＥＲ２ ＩＨＣ ３＋またはＨＥＲ２ ＩＨＣ ２＋／ＦＩＳＨ＋乳癌またはＧＥＡを有する患者が含まれた。コホート４～６には、任意の他のＨＥＲ２ ＩＨＣ ３＋またはＦＩＳＨ＋がんを有する患者も含まれ、がんは、ＨＥＲ２過剰発現（ＩＨＣによる３＋）もしくはＨＥＲ２－２＋であり、ＦＩＳＨ＋乳癌は、トラスツズマブ、ペルツズマブ、及びＴ－ＤＭ１による以前の治療後に進行していなければならない；がんは、ＨＥＲ２過剰発現（ＩＨＣによる３＋）もしくはＨＥＲ２－２＋であり、ＦＩＳＨ＋ＧＥＡは、トラスツズマブによる以前の治療後に進行していなければならない；結腸直腸癌患者は、ＫＲＡＳ野生型である；またはＮＳＣＬＣを有する患者は、標準的な方法により測定した場合、ＡＬＫ野生型、ＥＧＦＲ野生型及びＲＯＳ１融合陰性であった。コホート７には、選択された部位で登録され、ＨＥＲ２ ＩＨＣ ３＋、ＨＥＲ２ ＩＨＣ ２＋／ＦＩＳＨ＋、またはＨＥＲ２ ＩＨＣ ２＋／ＦＩＳＨ－乳癌を有する患者が含まれた。
第２部では、本試験の第１部からのＭＴＤ、ＯＢＤ、またはＲＤで投与されたｖ１００００を使用したコホート拡大には、以下のような、臨床的利益をもたらすことが知られているすべての療法（特定の療法を受けるのに不適格である場合を除く）を受けた後に進行した局所進行性（切除不能）及び／または転移性がんが含まれた。
コホート１：ＨＥＲ２ ＩＨＣ ２＋／ＦＩＳＨ－乳癌
コホート２：ＨＥＲ２ ＩＨＣ ３＋またはＨＥＲ２ ＩＨＣ ２＋／ＦＩＳＨ＋乳癌
コホート３：ＨＥＲ２ ＩＨＣ ２＋／ＦＩＳＨ－ＧＥＡ
コホート４：ＨＥＲ２ ＩＨＣ ３＋またはＨＥＲ２ ＩＨＣ ２＋／ＦＩＳＨ＋ＧＥＡ
コホート５：以下を含む、任意の他のＨＥＲ２ ＩＨＣ ３＋またはＩＨＣ ２＋／ＦＩＳＨ＋がん：
コホート５ａ：ＧＥＡ以外のＨＥＲ２ ＩＨＣ ３＋またはＩＨＣ ２＋／ＦＩＳＨ＋ＧＩ（消化管）癌であり、結腸直腸癌患者はＫＲＡＳ野生型である。
コホート５ｂ：乳癌またはＧＩ癌ではない任意の他のＨＥＲ２ ＩＨＣ ３＋またはＩＨＣ ２＋／ＦＩＳＨ＋固形腫瘍型であり、ＮＳＣＬＣ患者は、標準的な方法により測定した場合、ＡＬＫ野生型、ＥＧＦＲ野生型、及びＲＯＳ１融合陰性を有しなければならない、卵巣癌患者はＫＲＡＳ野生型でなければならない。
第１部及び第２部の患者の追加基準には以下が含まれていた：（１）ＨＥＲ２ ＩＨＣ ３＋またはＩＨＣ ２＋／ＦＩＳＨ＋乳癌は、トラスツズマブ、ペルツズマブ、及びＴ－ＤＭ１による以前の治療後に進行していなければならない；（２）ＨＥＲ２ ＩＨＣ ３＋またはＩＨＣ ２＋／ＦＩＳＨ＋ＧＥＡは、トラスツズマブによる以前の治療後に進行していなければならない；（３）結腸直腸癌患者は、キルステンラット肉腫（ＫＲＡＳ）野生型でなければならない；ならびに（４）ＮＳＣＬＣ患者は、標準的な方法により測定した場合、未分化リンパ腫キナーゼ（ＡＬＫ）野生型、ＥＧＦＲ野生型、及び受容体チロシンキナーゼ（ＲＯＳ１）融合陰性でなければならない。
以下の基準のうち１つ以上に当てはまる場合、患者は治験から除外された。
１．ｖ１００００の初回投与前４週間以内に実験的療法による治療を受けている。
２．Ｖ１００００の投与前４週間以内に、他に特定されない、他のがん療法による治療を受けている。
３．ｖ１００００の初回投与前９０日以内に、アントラサイクリンによる治療、または総生涯用量で３００ｍｇ／ｍ２を超えるアドリアマイシンもしくは同等の薬剤による治療を受けている。
４．ｖ１００００の初回投与前３週間以内に、トラスツズマブ、ペルツズマブ、ラパチニブ、またはＴ－ＤＭ１による治療を受けている。
５．未治療の脳転移（治療された脳転移を有し、ステロイドを服用しておらず、スクリーニング時点で少なくとも１ヶ月安定している患者は適格とする）。すべての乳癌患者は、治療を開始する前にスクリーニングを受けるべきである。未治療の脳転移を有することが認められた患者は、適切な療法後に再スクリーニングを受けることができる。
６．臨床的に評価された軟膜疾患（ＬＭＤ）。ベースラインのＭＲＩでＸ線検査によりＬＭＤが報告されているが、治験責任医師によって臨床的に疑われない場合、患者に治験責任医師によって確認されるようなＬＭＤの神経学的症状が見られない場合、その患者は適格である。
７．ｖ１００００の初回投与前３週間以内の大手術または放射線療法
８．妊娠中または授乳中の女性
９．モノクローナル抗体、または製剤中の組換えタンパク質もしくは賦形剤に対する生命を脅かす過敏症の既往歴
１０．ｖ１００００の初回投与前３年以内に任意の他のがんを有する。但し、対側乳癌、インサイツで適切に治療された子宮頚部上皮内癌、または適切に治療された皮膚の基底細胞癌もしくは扁平上皮癌、または治験依頼者のメディカルモニターによって承認された、根治的治療を受けた任意の他のがんを除くものとする。
１１．急性または慢性の制御不能な腎疾患、膵炎または肝疾患（治験責任医師の評価に従って、ジルベール症候群、無症候性胆石、肝転移、または安定した慢性肝疾患を有する患者を除く）
１２．末梢性ニューロパチー：ＮＣＩ－ＣＴＣＡＥバージョン４．０３（２０１０年７月１４日）でグレード２超
１３．臨床的に有意な間質性肺疾患
１４．医療レジメンへのコンプライアンス違反歴
１５．プロトコルを遵守しない、または遵守できない
１６．既知の活動性Ｂ型肝炎もしくはＣ型肝炎、またはヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）による既知の感染症
１７．試験のメディカルモニターによって別途承認されていない限り、ｖ１００００の初回投与２週間以内に、プレドニゾン／１５ｍｇ／日超に相当する用量で投与されたコルチコステロイドの使用。
１８．ＱＴｃ Ｆｒｉｄｅｒｉｃｉａ（ＱＴｃＦ）＞４５０ｍｓ
１９．グレード１以下に回復していない以前のがん療法に関連した毒性を有する。但し、以下の例外を除く：脱毛症、ニューロパチー（グレード２以下に回復していなければならない）、及びうっ血性心不全（ＣＨＦ）。これらは、発生時にグレード１以下の重症度であり、完全に回復していなければならない。
２０．治療を必要とする心室性不整脈、制御不能な高血圧、または症候性ＣＨＦの任意の既往等の、臨床的に有意な心疾患を有する。
２１．ｖ１００００の初回投与前６ヶ月以内に、既知の心筋梗塞または不安定狭心症を有する。
治療
単剤（単剤療法）としてのｖ１００００を、第１部及び第２部で静脈内注入（ＩＶ）として投与した。ｖ１００００を、１２０～１５０分間にわたって０．９％生理食塩水中のＩＶ注入により投与した。最初に投与された２回の用量に良好な忍容性を示した特定の患者の場合、その患者の注入期間を９０分に短縮した場合があった。次の２回の用量に良好な忍容性を示した場合、注入期間を６０分に短縮してもよい。注入速度は、０．９％生理食塩水２５０ｍＬ／時間を超えなかった。（例：Ｖ１００００の用量を２５０ｍＬバッグの生理食塩水に希釈する場合、少なくとも６０分間かけて輸液を投与するべきである。Ｖ１００００の用量を５００ｍＬバッグに希釈した場合、少なくとも１２０分間かけて輸液を投与するべきである。）治験薬の投与量は、サイクル１の１日目の患者の体重に基づいて計算した。サイクル１の１日目の評価から１０％の体重変化がある場合にのみ、用量を再計算した。
第１部では、用量漸増のための用量レベルは、週１回（ＱＷ）投与された５、１０、及び１５ｍｇ／ｋｇであった。隔週（Ｑ２Ｗ）の投与も評価した。Ｑ２Ｗ投与の用量レベルは、２０、２５、または３０ｍｇ／ｋｇであった。Ｑ２Ｗ投与では、初回負荷用量（２０、２５、または３０ｍｇ／ｋｇを超えない）を使用した後に、ＳＭＣによって推奨されるより低い用量レベルでｖ１００００を投与した場合があった。さらに、３週毎（Ｑ３Ｗ）に３０ｍｇ／ｋｇを用いる投与を調べた。
第２部の用量レベルは、第１部で決定したＭＴＤ、ＯＢＤ、またはＲＤであった。ＭＴＤは、治療の最初の４週間の間に、６人の患者のうち１人以下がＤＬＴを経験した最高用量レベルとして定義される。ＯＢＤは、ＨＥＲ２～３＋腫瘍組織像を示す細胞株上でのｖ１００００の最大結合能を少なくとも１０倍上回る、トラフ（投与後７日）でのｖ１００００の血清濃度をもたらすｖ１００００の用量として定義される。ＲＤは、ＭＴＤを超えない任意の他の投与量である。第１部の結果に基づいて、第２部の患者の大部分を、Ｑ２Ｗで２０ｍｇ／ｋｇのＲＤを使用して治療した。一部の患者は毎週１０ｍｇ／ｋｇで治療した。
患者が登録された部、コホート、またはＴＧに応じて、患者は、各々３週間または４週間の最低２サイクルに参加した。ＲＥＣＩＳＴバージョン１．１によって定義される臨床的進行、許容できない毒性、または進行の証拠がない限り、さらなるサイクルの間治療を継続した場合があった。臨床的進行は、基礎疾患であるがんに関連する既存の症状の悪化もしくは再発、または治験薬の毒性もしくは代替的な原因に起因し得ない新たな症状の出現として定義される。臨床治験責任医師の意見において、放射線学的進行にもかかわらず継続的な臨床的利益を示した患者は、治験依頼者のメディカルモニターとの協議及び同者からの承認の後、治療を受け続けた場合があった。第３部では、ｖ１００００とは無関係の毒性のために化学療法が中止された場合、患者はｖ１００００による治療を受け続けた場合があった。何らかの理由でｖ１００００による治療を中断した患者は、本臨床試験を中止させた。
有効性評価
抗腫瘍活性の測定は、改訂された固形腫瘍における応答評価基準（ＲＥＣＩＳＴ）ガイドライン（バージョン１．１）［ＥｕｒＪＣａ４５：２２８－２４７，２００９］によって提案される新たな国際基準を用いることによって行われる応答評価に基づいて評価した。腫瘍病変の最大径（一次元測定）及び悪性リンパ節の場合の最短径の変化が、ＲＥＣＩＳＴバージョン１．１の基準に用いられる。ＣＲ、ＰＲ、ＳＤ、または進行（ＰＤ）の臨床応答は、治験責任医師によって各評価で決定された。ＰＤには、ＲＥＣＩＳＴバージョン１．１に従って進行が含まれ、治験責任医師に従って臨床的な疾患の進行が含まれた。臨床的進行は、基礎疾患であるがんに関連する既存の症状の悪化もしくは再発、または治験薬の毒性または代替的な原因に起因し得ない新たな症状の出現として定義される。
客観的奏効率（ＯＲＲ）は、ＲＥＣＩＳＴバージョン１．１によって定義されているように、任意の進行の証拠の前にＣＲまたはＰＲのいずれかの全体的な腫瘍応答が少なくとも１つあった患者の割合として定義される。患者がＲＥＣＩＳＴバージョン１．１の基準に従ってＣＲ、ＰＲ、またはＳＤの腫瘍応答を有する場合、その患者は病勢制御を達成したと言われる。病勢制御率は、ｖ１００００療法の開始後、８週毎に評価される。ＰＦＳ時間は、ｖ１００００の最初の投与からＲＥＣＩＳＴバージョン１．１による疾患の進行、臨床的進行、またはいずれかの原因による死亡が確認されるまでの期間として定義される。分析時に生存しており、進行していない患者は、最後の腫瘍評価でＣＲ、ＰＲ、またはＳＤであった時点で打ち切られる。
腫瘍応答は、胸部、腹部、及び骨盤（同じ患者の各スキャンについて同じ方法論を使用）に加えて、既知のまたは腫瘍病変が疑われる追加の領域（例えば、脳、四肢）のＣＴ及び／またはＭＲＩスキャンに基づいて評価した。
客観的奏効及び腫瘍進行を局所的に評価した。治験依頼者の裁量により実施された集中レビューのために、すべての対象についてスキャンを収集した。局所的評価は、すべての治療に関連する決定に用いられた。
一部の患者の場合、腫瘍体積を中心的に計算してもよい。
有害作用
ＡＥ（有害作用）とは、必ずしもこの治療と因果関係を有しない、医薬品を投与された臨床試験患者におけるあらゆる好ましくない医学的事象として定義される。従って、ＡＥは、医薬品（治験薬）と関連があるかどうかにかかわらず、医薬品（治験薬）の使用に一時的に関連する好ましくない、かつ意図しない兆候（異常な検査所見を含む）、症状、または疾患であり得る。これには、既存の状態または事象の増悪、併発疾患、薬物相互作用、または特定の有効性評価の下でＣＲＦの他の箇所に記録されていない、治験中の適応症の著しい悪化が含まれる。安全性評価は、２０１０年７月１４日のＮＣＩ－ＣＴＣＡＥバージョン４．０３に基づいて行われた。
早期結果：
２０１８年６月の時点で、胆嚢癌患者１名において、ｖ１００００による治療が、標的病変における最長径（ＳＬＤ）の和を約４０％減少させた。この患者は、その後、ＳＯＤ（径和）により測定した場合、標的病変の約５０％の減少を示した。
２０１８年１１月の時点で、ＣＣＡ患者１名において、ＳＯＤにより測定した場合、ｖ１００００による治療後に標的病変の約４０％の減少が観察された。
中間結果：
２０１９年４月２２日の時点で、ｖ１００００の第１部及び第２部（第１部２３名、第２部６６名）において、全適応症にわたる８９名の患者が登録され、単剤ｖ１００００で治療されていた（表Ｃ）。評価した腫瘍型には、乳房（ｎ＝４２）、胃食道（ｎ＝２０）、結腸直腸（ｎ＝１１）、胆道（ｎ＝６）、及び他のがん（ｎ＝１０）が含まれた。ＢＴＣ患者のうち、１人の患者のトラスツズマブを含めて、以前の全身レジメンの中央値は４（範囲１～８）であった。
本試験の第１部及び２において、ＡＥの大部分はグレード１または２の重症度であった（表Ｄ）。ｖ１００００に関連するグレード３のＡＥには、疲労（ｎ＝３、ＳＡＥとして報告された１件の事象を含む）、下痢（ｎ＝２）、関節痛（ｎ＝１）、及び低リン血症（ｎ＝１）が含まれていた。
ＢＴＣ患者の予備有効性データを、表Ｅ、表Ｆ、及び図２に示す。
（表Ｃ）第１部及び第２部におけるがんの種類別の主要な人口統計学的及びベースラインの特徴
Figure 2024056808000056
（表Ｄ）第１部及び第２部におけるがんの種類別のｖ１００００に関連する有害事象の概要
Figure 2024056808000057
（表Ｅ）第１部及び第２部の測定可能疾患分析セットにおける最良奏効の概要
Figure 2024056808000058
ａ測定可能疾患分析セット－ＲＥＣＩＳＴ １．１による測定可能疾患を有する安全性分析セット内のすべての患者；
ｂ安全性分析セット－少なくとも１回の治験薬投与を受けたすべての患者。
ＣＩ＝信頼区間、ＤＣＲ＝病勢制御率、ＮＥ＝評価不能、ＯＲＲ＝全奏効率、ＰＦＳ＝無増悪生存期間、ＰＲ＝部分奏効、ＳＤ＝安定
（表Ｆ）ＢＴＣ患者の以前のレジメン及び疾患反応
Figure 2024056808000059
ａ全ＢＴＣ患者はＨＥＲ２＋（３＋またはＦＩＳＨ＋）であった；
ｂ８回の全身レジメンのうちの６回と同時にトラスツズマブを患者に投与した；
ｃ追加の疾患評価が保留中である最終ＤＯＲ。
ＮＡ＝該当なし ＮＥ＝評価不能、経過観察による疾患評価が保留中
ＧＢＣ＝胆嚢癌；ＣＣ＝胆管細胞癌
これらのデータにより、ｖ１００００がＨＥＲ２ ３＋またはＦＩＳＨ＋ ＢＴＣを有する患者において８３．３％の病勢制御率、及び６６．７％のＯＲＲを示したことが示唆される。
実施例３：リンカー－毒素００１の調製
リンカー－毒素００１を以下に記載するように調製した。リンカー－毒素００１は、国際特許出願公開第ＷＯ２０１６／０４１０８２号に記載されるように調製してもよい。
Figure 2024056808000060
Ａ． エチル（２Ｒ，３Ｒ）－３－メトキシ－２－メチル－３－（（Ｓ）－ピロリジン－２－イル）プロパノエート（化合物１）
Figure 2024056808000061
無水エタノール（２７．０ｍＬ）中の（２Ｒ，３Ｒ）－３－（（Ｓ）－１－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）ピロリジン－２－イル）－３－メトキシ－２－メチルプロパン酸（Ｂｏｃ－Ｄａｐ－ＯＨ、４．３１ｇ、１５．０ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、塩化チオニル（３．０ｍＬ）を０℃で滴加した。得られた溶液を室温まで加温し、ＨＰＬＣ－ＭＳにより進行を監視した。１８時間後、残存する出発物質は検出されず、溶液を減圧下で濃縮乾固した。得られた油をトルエン（１０ｍＬ）中に懸濁し、減圧下で２回濃縮した後、ジエチルエーテル（５ｍＬ）中に懸濁し、減圧下で２回濃縮して白色の固体泡状物（３．７８ｇ、定量的収量％）を得た。ＭＳ ｍ／ｚ実測値＝２１６．５（Ｍ＋１）。
Ｂ． （３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）－４－（（Ｓ）－２－（（（ベンジルオキシ）カルボニル）アミノ）－Ｎ，３－ジメチルブタンアミド）－３－メトキシ－５－メチルヘプタン酸（化合物３）
Figure 2024056808000062
化合物２を、国際特許出願公開第ＷＯ２０１６／０４１０８２号に記載されるように調製した。
ジクロロメタン（２０ｍＬ）中の化合物２（６．９６５ｇ、１４．１４ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、トリフルオロ酢酸（５．０ｍＬ）を添加した。ＨＰＬＣ－ＭＳにより反応の完了を監視したところ、４０時間後、出発物質は残存していなかった。反応物を減圧下で濃縮し、トルエン（２×１０ｍＬ）及びジクロロメタン（２×１０ｍＬ）と共蒸発させて、泡状の白色固体（６．２ｇ、残留ＴＦＡを含む定量的収量）を得た。この物質を２００ｍＬの１：３の高温ＥｔＯＡｃ：ヘキサンに溶解し、室温まで冷却した。冷却中に、いくつかの小さな結晶とともに沈殿物が形成した。５ｍＬのＥｔＯＡｃを添加し、懸濁液を再び加熱して沈殿物を完全に溶解させた。室温まで冷却するとさらに多くの結晶が形成し、フラスコを－３０℃で一晩置いた。翌朝、母液をデカントし、結晶を２×５０ｍＬのヘキサンですすぎ、高真空下で乾燥させた。５．６７ｇの結晶生成物を回収した。ＭＳ ｍ／ｚ実測値＝４０５．７（Ｍ＋１）。
Ｃ． エチル（２Ｒ，３Ｒ）－３－（（Ｓ）－１－（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）－４－（（Ｓ）－２－（（（ベンジルオキシ）カルボニル）アミノ）－Ｎ，３－ジメチルブタンアミド）－３－メトキシ－５－メチルヘプタノイル）ピロリジン－２－イル）－３－メトキシ－２－メチルプロパノエート（化合物４）
Figure 2024056808000063
ジクロロメタン（５．０ｍＬ）及びＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（５．０ｍＬ）の混合物中の化合物３（６．７１１ｇ、１５．３７ｍｍｏｌ、１．０２５当量）の撹拌溶液に、ＨＡＴＵ（５．７３２ｇ、１５．０７ｍｍｏｌ、１．００５当量）及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（７．８４ｍＬ、３当量）を室温で加えた。室温で３０分間撹拌した後、ジクロロメタン（１．０ｍＬ）及びＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（１．０ｍＬ）の混合物中の化合物１（３．７７６ｇ、１５．００ｍｍｏｌ、１．０当量）の溶液を滴加し、残留する化合物１中で、さらに３ｍＬの１：１のジクロロメタン：Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミドですすいだ。ＨＰＬＣ－ＭＳにより反応を監視したところ、１５分後、残存する化合物１は観察されなかった。反応物を減圧下で濃縮し、酢酸エチル（約１２５ｍＬ）で希釈し、有機相を１Ｍ ＨＣｌ（２×５０ｍＬ）、１×ｄＨ２Ｏ（１×５０ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ３（３×５０ｍＬ）、ブライン（２５ｍＬ）で抽出した。酸性及び塩基性の水層の両方を、２５ｍＬのＥｔＯＡｃで洗浄した。次いで、すべての有機物をプールし、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、濃縮して、赤色の油を得た。残渣を最小量のジクロロメタン（約１０ｍＬ）に溶解し、精製のためにＢｉｏｔａｇｅ（登録商標）ＳＮＡＰ Ｕｌｔｒａ ３６０ｇシリカゲルカラム（Ｉｓｏｌｅｒａ（商標）ＦｌａｓｈＳｙｓｔｅｍ；ＢｉｏｔａｇｅＡＢ，Ｓｗｅｄｅｎ）にロードした（１０カラム体積にわたってヘキサン中２０～１００％ＥｔＯＡｃ）。純粋な生成物を含有する画分をプールして、７．９ｇの泡状の白色固体を回収した。不純物画分を、Ｂｉｏｔａｇｅ（登録商標）ＳＮＡＰ Ｕｌｔｒａ １００ｇシリカゲルカラムで第２の精製に供し、純粋な生成物とともにプールして、白色の泡状固体（８．３９０ｇ、８８．３％）を回収した。ＭＳ ｍ／ｚ実測値＝６３４．７（Ｍ＋１）。
Ｄ． （２Ｒ，３Ｒ）－３－（（Ｓ）－１－（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）－４－（（Ｓ）－２－（（（ベンジルオキシ）カルボニル）アミノ）－Ｎ，３－ジメチルブタンアミド）－３－メトキシ－５－メチルヘプタノイル）ピロリジン－２－イル）－３－メトキシ－２－メチルプロパン酸（化合物５）
Figure 2024056808000064
１，４－ジオキサン（１５８ｍＬ）中の化合物４（８．３９０ｇ、１３．２４ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、ｄＨ２Ｏ（３９．７ｍＬ）及び水酸化リチウム一水和物（Ｈ２Ｏ中に１Ｍ、３９．７ｍＬ、３当量）を添加した。反応物を４℃で撹拌し、ＨＰＬＣ－ＭＳにより出発物質の消費を監視したところ、微量の化合物４のみが残るまで３日を要した。反応の過程で、所望の物質に加えて、メタノールの損失（β消失、＜２％）に対応する新たな生成物がわずかな割合で形成された。１Ｍ ＨＣｌ水溶液（５０ｍＬ）を添加して反応物を酸性化し、減圧下で濃縮してジオキサンを除去した。残存する反応混合物を酢酸エチル（４×５０ｍＬ）で抽出し、有機相をプールし、ブライン（１５ｍＬ＋２ｍＬの２Ｍ ＨＣｌ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、淡色の油を得た。その油をジエチルエーテル（約５０ｍＬ）に再溶解し、減圧下で濃縮して（３回）残留ジオキサンの除去を促進し、表題生成物を硬い油として得た（７．８１ｇ、９７％、いくらかの残留ジオキサン及び化合物４を含む収量）。ＭＳ ｍ／ｚ実測値＝６０６．７（Ｍ＋１）。
Ｅ． ベンジル（（Ｓ）－１－（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）－３－メトキシ－１－（（Ｓ）－２－（（１Ｒ，２Ｒ）－１－メトキシ－２－メチル－３－オキソ－３－（（４－（２，２，２－トリフルオロアセトアミド）フェニル）スルホンアミド）プロピル）ピロリジン－１－イル）－５－メチル－１－オキソヘプタン－４－イル）（メチル）アミノ）－３－メチル－１－オキソブタン－２－イル）カルバメート（化合物７）
Figure 2024056808000065
化合物６を、国際特許出願公開第ＷＯ２０１６／０４１０８２号）に記載されるように調製した。
ジクロロメタン（２０ｍＬ）中の化合物５（７．１２ｇ、１１．７５４ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、２，２，２－トリフルオロ－Ｎ－（４－スルファモイルフェニル）アセトアミド（化合物６、４．０９５ｇ、１．３当量、３ｍＬのＤＭＦに溶解）、Ｎ，Ｎ－ジメチルピリジン（１．８６７ｇ、１．３当量）及びＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（１．５ｍＬ）を添加し、淡黄色の懸濁液を生成した。５ｍＬのＤＭＦをさらに添加しても溶液は透明にならなかった。Ｎ－（３－ジメチルアミノプロピル）－Ｎ’－エチルカルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣＩ）（２．８１７ｇ、１．２５当量）を一度に添加し、ＨＰＬＣ－ＭＳにより反応を監視した。４８時間後、反応はそれ以上進行しなくなり、さらに４００ｍｇのＥＤＣＩを添加した。１８時間後、残存する出発物質は観察されず、反応物を減圧下で濃縮して黄色の油を得た。その油を酢酸エチル（約１５０ｍＬ）及び１Ｍ ＨＣｌ（２０ｍＬ）に溶解し、有機相を冷２Ｍ ＨＣｌ（２×１０ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ３（１×１０ｍＬ）、ブライン（２０ｍＬ＋５ｍＬの２Ｍ ＨＣｌ）で洗浄した。酸性及び塩基性の水性画分をＥｔＯＡｃ（１×２０ｍＬ）で抽出し、すべての有機画分をプールし、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で濃縮して油性の粗固体（１３ｇ）を得た。残渣をジクロロメタン（約１０ｍＬ）に溶解し、Ｂｉｏｔａｇｅ（登録商標）ＳＮＡＰ Ｕｌｔｒａ ３６０ｇシリカゲルカラムにロードし、１２カラム体積にわたるヘキサン中の１０～１００％ＥｔＯＡｃ（２％ＡｃＯＨ）の勾配、及び５０％ＥｔＯＡｃでの３カラム体積プラトーで精製した。純粋な生成物を含有する画分をプールし、減圧下で濃縮し、溶解し、トルエン（２×１０ｍＬ）及びジエチルエーテル（２×１０ｍＬ）から濃縮して、所望の生成物である白色の泡状固体７．１ｇを得た。Ｉｓｏｌｅｒａ（商標）機器上のＢｉｏｔａｇｅ（登録商標）ＳＮＡＰ Ｕｌｔｒａ １００ｇシリカゲルカラムを使用して、より浅い勾配条件下で不純物画分を繰り返し精製に供した。すべての純粋な画分をプールして、純粋な生成物を白色の泡状固体として回収した（８．６０ｇ、８６％）。ＭＳ ｍ／ｚ実測値＝８５６．７（Ｍ＋１）。
Ｆ． （Ｓ）－２－アミノ－Ｎ－（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）－３－メトキシ－１－（（Ｓ）－２－（（１Ｒ，２Ｒ）－１－メトキシ－２－メチル－３－オキソ－３－（（４－（２，２，２－トリフルオロアセトアミド）フェニル）スルホンアミド）プロピル）ピロリジン－１－イル）－５－メチル－１－オキソヘプタン－４－イル）－Ｎ，３－ジメチルブタンアミド（化合物７ａ）
Figure 2024056808000066
マグネチックスターラーを備え、３方向ガス管アダプタを取り付けた丸底フラスコ内で、酢酸エチル（３０ｍＬ）中の１０％Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミドに化合物７（３．７１ｇ、４．３３ｍｍｏｌ）を溶解した。容器を減圧下で２回排気し、窒素ガスを充填した。１０％パラジウム炭素（０．４６１ｇ、０．１当量）を一度に添加し、３方向アダプタをフラスコに取り付け、水素バルーンをアダプタに取り付け、容器を減圧下で２回排気し、水素を充填した。反応物を２日間撹拌し、その間、水素バルーンを時々再充填した。約４８時間後、ＨＰＬＣ－ＭＳ分析により出発物質が残存していないことが示された。反応物をメタノール（２０ｍＬ）で希釈し、セライトのプラグを通して濾過した。セライトをメタノール（２×５０ｍＬ）で洗浄した。すべての濾液をプールし、減圧下で濃縮し、得られた油を溶解し、ジクロロメタンから濃縮した。減圧下で乾燥させた後、表題化合物を無色の粉末として単離した（３．１０ｇ、９９％）。ＭＳ ｍ／ｚ実測値＝７２２．６（Ｍ＋１）。
Ｇ． （Ｓ）－２－（（Ｓ）－２－（ジメチルアミノ）－３－メチルブタンアミド）－Ｎ－（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）－３－メトキシ－１－（（Ｓ）－２－（（１Ｒ，２Ｒ）－１－メトキシ－２－メチル－３－オキソ－３－（（４－（２，２，２－トリフルオロアセトアミド）フェニル）スルホンアミド）プロピル）ピロリジン－１－イル）－５－メチル－１－オキソヘプタン－４－イル）－Ｎ，３－ジメチルブタンアミド（化合物８）
Figure 2024056808000067
Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（１０ｍＬ）中のＮ，Ｎ－（Ｌ）－ジメチルバリン（１．６９６ｇ、９．３５ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、ＨＡＴＵ（３．２１６ｇ、８．４６ｍｍｏｌ）及びジ－イソプロピルエチルアミン（３．１０ｍＬ、１７．８ｍｍｏｌ）を添加した。５分後に透明な黄色溶液を得た。さらに１０分間撹拌を続け、次いで化合物７ａ（３．２１３ｇ、４．４５ｍｍｏｌ）を一度に添加した。さらに１時間撹拌した後、ＨＰＬＣ－ＭＳにより、微量の化合物７ａが残存していたことが示され、反応は１６時間であった。次いで、反応物を減圧下で濃縮し、酢酸エチル（１２０ｍＬ）及び４０ｍＬの１：１のＮａＨＣＯ３（飽和）：５％ＬｉＣｌで希釈し、分離漏斗に移した。水層を除去し、有機相をＬｉＣｌ（１×２０ｍＬ）、ＮａＨＣＯ３（飽和、２×２０ｍＬ）で洗浄した。水層をプールし、ＥｔＯＡｃ（３×５０ｍＬ）で抽出した。有機層をプールし、ブライン（１×２０ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、濃縮して、ＤＭＦ含有油を得、ロータリーエバポレータを介して濃縮して残留ＤＭＦを除去し、麦わら色の粗油７ｇを得た。その油をジクロロメタン（約１１ｍＬ）中の最小量の１０％メタノールに溶解し、精製のためにＢｉｏｔａｇｅ（登録商標）ＳＮＡＰ Ｕｌｔｒａ ３６０ｇシリカゲルカラムにロードした（１５カラム体積にわたってＣＨ２Ｃｌ２中２～２０％ＭｅＯＨ、約１０～１３％の溶出生成物）。所望の生成物を含有する画分をプールし、減圧下で濃縮して、表題化合物を無色の泡状物として得た。不純物画分を合わせ、蒸発させ、Ｉｓｏｌｅａ（商標）機器上のＢｉｏｔａｇｅ（登録商標）ＳＮＡＰ Ｕｌｔｒａ １００ｇシリカゲルカラムで繰り返し精製に供し、第１のカラムからの純粋な生成物と合わせて、無色の泡状固体（３．７８ｇ）を得た。ＭＳ ｍ／ｚ実測値＝８５０．６（Ｍ＋１）。
Ｈ． （Ｓ）－Ｎ－（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ）－１－（（Ｓ）－２－（（１Ｒ，２Ｒ）－３－（（４－アミノフェニル）スルホンアミド）－１－メトキシ－２－メチル－３－オキソプロピル）ピロリジン－１－イル）－３－メトキシ－５－メチル－１－オキソヘプタン－４－イル）－２－（（Ｓ）－２－（ジメチルアミノ）－３－メチルブタンアミド）－Ｎ，３－ジメチルブタンアミド（化合物９）
Figure 2024056808000068
１，４－ジオキサン（１５ｍＬ）中の化合物８（０．９８０ｇ、１．１５４ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、水（３．５ｍＬ）及び１Ｍ水酸化リチウム一水和物（３当量、３．４６ｍＬ）を添加した。得られた軽質懸濁液を４℃で撹拌し、ＨＰＬＣ－ＭＳにより出発物質の消費を監視した。変換の完了時（約５日）に、３．４６ｍＬの１Ｍ ＨＣｌで反応物を中和し、減圧下で濃縮してジオキサンを除去した。得られた水相を６０ｍＬのＥｔＯＡｃ及び５ｍＬのブラインで希釈し、次いで酢酸エチル（２×３０ｍＬ）で抽出した。有機画分をプールし、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、蒸発させて、表題化合物を淡褐色の固体（０．９３０ｇ）として得た。Ｒｆ＝０．５（ＣＨ２Ｃｌ２中８％のＭｅＯＨ）。ＭＳ ｍ／ｚ実測値＝７５３．７（Ｍ＋１）。
Ｉ． ２，３，５，６－テトラフルオロフェニル３－（２－（２－（２－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）エトキシ）エトキシ）エトキシ）プロパノエート（化合物１５）
Figure 2024056808000069
乾燥した５０ｍＬ円錐形フラスコ中で、３－（２－（２－（２－アミノエトキシ）エトキシ）エトキシ）プロパン酸（化合物１４、１．０００ｇ、４．５２ｍｍｏｌ）及び無水マレイン酸（０．４４３ｇ、４．５２ｍｍｏｌ）を無水Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（５ｍＬ）に溶解した。反応物をＮ２下、室温で６時間撹拌し、その時点で０℃まで冷却し、シン－コリジン（１．２６３ｍＬ、２．１当量）を滴加した。別の乾燥した５０ｍＬ円錐形フラスコ中で、テトラフルオロフェノール（３．００２ｇ、４当量）を無水Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（１０ｍＬ）に溶解した。フラスコを氷浴中で０℃まで冷却し、トリフルオロ酢酸無水物（２．５４８ｍＬ、４当量）を滴加した。このフラスコを１５分間撹拌し、その時点でシン－コリジン（２．４０７ｍＬ、４当量）を滴加した。フラスコをさらに１５分間撹拌し、次いで、シリンジを介して内容物を第１のフラスコに滴加した。反応物を室温まで加温し、Ｎ２下で撹拌を続けた。出発物質の消費についてＨＰＬＣ－ＭＳにより反応を監視した。６日後、化合物１４が完全に消費されて反応が完了し、化合物１５及び少量（約５％）のビス－ＴＦＰマレイン酸アミド中間体のみが残った。反応物を分離漏斗に移し、ジエチルエーテル（７５ｍＬ）で希釈し、５％ＬｉＣｌ（１×２０ｍＬ）、１ＭＨＣｌ（２×２０ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ３（５×２０ｍＬ）及びブライン（１×２０ｍＬ）で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、蒸発させて、残留ＤＭＦを含む褐色の粗油を得た。粗油を８ｍＬの１：１のＤＭＦ：Ｈ２Ｏ＋０．１％ＴＦＡに溶解し、６０ｇのＢｉｏｔａｇｅ（登録商標）ＳＮＡＰ Ｕｌｔｒａ Ｃ１８カラム（Ｂｉｏｔａｇｅ ＡＢ，Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）にロードし、８カラム体積にわたって、ＡＣＮ／Ｈ２Ｏ＋０．１％ ＴＦＡの直線勾配３０～１００％で精製した。純粋な画分をプールし、ブライン（２０ｍＬ）で希釈し、次いで３×５０ｍＬのＥｔ２Ｏで抽出した。プールした有機物をＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、蒸発させて淡黄色の油を回収した（収量１．３４ｇ、６６％）。
Ｊ． ｔｅｒｔ－ブチル（（Ｓ）－１－（（（Ｓ）－１－（（４－（Ｎ－（（２Ｒ，３Ｒ）－３－（（Ｓ）－１－（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）－４－（（Ｓ）－２－（（ジメチルアミノ）－３－メチルブタンアミド）－Ｎ，３－ジメチルブタンアミド）－３－メトキシ－５－メチルヘプタノイル）ピロリジン－２－イル）－３－メトキシ－２－メチルプロパノイル）スルファモイル）フェニル）アミノ）－１－オキソ－５－ウレイドペンタン－２－イル）アミノ）－３－メチル－１－オキソブタン－２－イル）カルバメート（化合物１２）
Figure 2024056808000070
化合物１１を、国際特許出願公開第ＷＯ２０１６／０４１０８２号に記載されるように調製した。
空の２５ｍＬナシ型フラスコに、化合物１１（１．３４２ｇ、３．５８ｍｍｏｌ、３．０当量）、１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（０．６６４ｇ、３．４６ｍｍｏｌ、２．９当量）及び７－ヒドロキシ－アザベンゾトリアゾール（ＨＯＡＴ）（０．４７２ｇ、３．４６ｍｍｏｌ、２．９当量）を添加した。これらの固体を、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（０．５ｍＬ）及びジクロロメタン（４．５ｍＬ）の混合物に、３０分かけて室温で撹拌しながら溶解させた。別個に、化合物９（０．９００ｇ、１．２０ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（０．２ｍＬ）及びジクロロメタン（１．８ｍＬ）の混合物に溶解し、ナシ型フラスコに添加し、ジクロロメタン（１．０ｍＬ）ですすいだ。撹拌速度を１０００ｒｐｍまで上げ、渦を生成した。化合物９を添加して２分以内に、塩化銅（ＩＩ）（０．５１４ｇ、３．８３ｍｍｏｌ、３．２当量）を、細い粉末漏斗を通して渦の中心に直接一度に添加した。最初に、淡黄色の溶液が暗褐色の懸濁液になり、１０分かけて暗緑色の懸濁液に変化した。ＨＰＬＣ－ＭＳにより反応の完了を監視し、３０分で採取した試料と１時間で採取した試料との間で反応の進行に変化は観察されなかった（約９５％完了）。反応物を室温で一晩撹拌し、次いで２－（２－アミノエチルアミノ）エタノール（０．４８３ｍＬ、４．７８１ｍｍｏｌ、４当量）、ＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ）及びｄＨ２Ｏ（５ｍＬ）を撹拌懸濁液に添加すると、濃青色に色が変化した。懸濁した固体が徐々に溶解して二相混合物になるため、懸濁液を４時間激しく撹拌した。この混合物を分離漏斗に移し、ＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）及びブライン（１０ｍＬ）で希釈し、水層を１０％ＩｐＯＨ／ＥｔＯＡｃ（４×５０ｍＬ）で抽出した。有機層をプールし、ブライン（１０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、蒸発させて、かすかに青色の粗固体を得た。この粗固体をメタノール（０．５ｍＬ）及びジクロロメタン（６ｍＬ）の混合物に溶解し、Ｂｉｏｔａｇｅ（登録商標）ＳＮＡＰ Ｕｌｔｒａ １００ｇシリカゲルカラム（１０カラム体積にわたるＣＨ２Ｃｌ２中の２～２０％ＭｅＯＨ、続いて８カラム体積プラトーの２０％ＭｅＯＨ）で精製した。生成物は、ＣＨ２Ｃｌ２中の約２０％ＭｅＯＨで、１～２カラム体積後に広いピークとして溶出した。所望の材料を含有する画分をプールし、減圧下で濃縮して、表題化合物を白色固体として得た（１．１０５ｇ、８３％）。ＭＳ ｍ／ｚ実測値＝５５５．９（（Ｍ＋２）／２），１１０９．８（Ｍ＋１）。
Ｋ． （Ｓ）－２－（（Ｓ）－２－アミノ－３－メチルブタンアミド）－Ｎ－（４－（Ｎ－（（２Ｒ，３Ｒ）－３－（（Ｓ）－１－（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ）－４－（（Ｓ）－２－（ジメチルアミノ）－３－メチルブタンアミド）－Ｎ，３－ジメチルブタンアミド）－３－メトキシ－５－メチルヘプタノイル）ピロリジン－２－イル）－３－メトキシ－２－メチルプロパノイル）スルファモイル）フェニル）－５－ウレイドペンタンアミド（化合物１３）
Figure 2024056808000071
化合物１２（０．９２６ｇ、０．８３４ｍｍｏｌ）の溶液に、ジクロロメタン（１０ｍＬ）及びトリフルオロ酢酸（２．０ｍＬ）の混合物を添加した。出発物質の消費についてＨＰＬＣ－ＭＳにより反応を監視した（約４５分）。反応物を減圧下でアセトニトリル（２×１０ｍＬ）及びジクロロメタン（２×１０ｍＬ）と共蒸発させ、過剰なトリフルオロ酢酸を除去した。得られた残渣を最小量のジクロロメタン及びメタノール（３：１、ｖ／ｖ、約２ｍＬ）に溶解し、ジエチルエーテル（２００ｍＬ）及びヘキサン（１００ｍＬ）の撹拌溶液にピペットで滴加し、淡白色固体の懸濁液を生成した。固体を濾過し、真空下で乾燥させて、白色粉末の形態の表題化合物をトリフルオロ酢酸塩として得た（１．０４ｇ、いくらかの残留溶媒を含む定量的収量）。ＭＳ ｍ／ｚ実測値＝５０５．８（（Ｍ＋２）／２）。
Ｌ． （Ｓ）－Ｎ－（４－（Ｎ－（（２Ｒ，３Ｒ）－３－（（Ｓ）－１－（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ）－４－（（Ｓ）－２－（（Ｓ）－（ジメチルアミノ）－３－メチルブタンアミド）－Ｎ，３－ジメチルブタンアミド）－３－メトキシ－５－メチルヘプタノイル）ピロリジン－２－イル）－３－メトキシ－２－メチルプロパノイル）スルファモイル）フェニル）－２－（（Ｓ）－１－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）－１４－イソプロピル－１２－オキソ－３，６，９－トリオキサ－１３－アザペンタデカンアミド）－５－ウレイドペンタンアミド（リンカー－毒素００１）
Figure 2024056808000072
Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（４ｍＬ）中の化合物１３（０．７２２ｇ、０．５８４ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、化合物１５（０．３１４ｇ、１．２当量）及びジイソプロピルエチルアミン（０．３０５ｍＬ、３．０当量）を添加した。２時間のＨＰＬＣ－ＭＳ分析により、残存する出発物質がないことが示された。反応物をＴＦＡ（３００μＬ）で酸性化し、次いでｄｉＨ２Ｏ＋０．１％ＴＦＡ（９ｍＬ）で希釈した。得られた溶液を、１２０ｇのＢｉｏｔａｇｅ（登録商標）ＳＮＡＰ Ｕｌｔｒａ Ｃ１８カラム（Ｂｉｏｔａｇｅ，Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｗｅｎｄ）にロードし、ＡＣＮ／Ｈ２Ｏ＋０．１％ＴＦＡ勾配：１０カラム体積にわたって２０～６０％ＡＣＮ、５カラム体積にわたって６０～１００％ＡＣＮで精製した。生成物は４０％ＡＣＮ付近で溶出した。ＬＣＭＳによって同定された純粋な画分をプールし、凍結乾燥した。凍結乾燥機から白色の粉末固体を回収した。バイアル中により高い濃度（２：１Ｈ２Ｏ／ＡＣＮ中で約５０ｍｇ／ｍＬ）で凍結乾燥を繰り返し、より密度が高く、凝集性の低い凍結乾燥固体（７５４．２ｍｇ、９１％）を生成した。ＭＳ ｍ／ｚ実測値＝６４７．４（（Ｍ＋２）／２），１２９２．８（Ｍ＋１）。
実施例４：リンカー－毒素００１にコンジュゲートされたｖ１００００の調製
１０ｍＭ酢酸ナトリウム、９％（ｗ／ｖ）スクロース、ｐＨ４．５中の抗体ｖ１００００（２．０ｇ）の溶液（１３８．９ｍＬ）を、２００ｍＭ Ｎａ２ＨＰＯ４、ｐＨ８．９（１５．４ｍＬ）を添加することによりｐＨ調整した。ＤＴＰＡ溶液（ＰＢＳ中４４ｍＬ、ｐＨ７．４、最終濃度１．０ｍＭ）を添加した後、１０ｍＭ ＴＣＥＰ水溶液（１．６８ｍＬ、１．０５当量）を添加することにより鎖間ジスルフィドの還元を開始した。３７℃で９０分後、反応物を氷上で冷却した後、２０ｍＭ ＤＭＳＯ原液からの過剰なリンカー－毒素００１（４．８１ｍＬ；６当量）を添加した。過剰な２０ｍＭ Ｎ－アセチルシステイン溶液（４．８１ｍＬ、６当量）を添加することにより、９０分後にコンジュゲーション反応をクエンチした。
クエンチされた抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）溶液を、Ｐｅｌｌｉｃｏｎ（登録商標）ＸＬ Ｕｌｔｒａｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ Ｍｏｄｕｌｅ（Ｕｌｔｒａｃｅｌ（登録商標）３０ｋＤａ ０．００５ｍ２；Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｓｉｇｍａ）を使用して、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｌａｂｓｃａｌｅ（商標）Ｔａｎｇｅｎｔｉａｌ Ｆｌｏｗ Ｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ機器上で、９～１５ダイアボリュームの１０ｍＭ酢酸ナトリウム、９％（ｗ／ｖ）スクロース、ｐＨ４．５で精製した。溶出したＡＤＣを滅菌濾過した（０．２２ｕｍ）。小規模に生成したＡＤＣを、ＰＢＳまたは１０ｍＭ酢酸ナトリウム、９％（ｗ／ｖ）のスクロース、ｐＨ４．５のいずれかで前処理した４０ＫＤａＭＷＣＯ ＺＥＢＡ（商標）カラム（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ）で精製した。
精製後、ｖ１００００から生成された標準曲線を参照して、ＢＣＡアッセイによりＡＤＣの濃度を決定した。代替的に、２８０ｎｍ（ε＝１９５０６５Ｍ－１ｃｍ－１）での吸収を測定することにより濃度を推定した。
ＡＤＣの試料を、非還元及び還元ＳＤＳ－ＰＡＧＥによって評価した。余分なバンドは観察されなかった。
抗体及びＡＤＣを疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）により分析して薬物抗体比（ＤＡＲ）を推定した。クロマトグラフィーは、１ｍＬ／分の流速（ＭＰＡ＝１．５Ｍ（ＮＨ４）２ＳＯ４、２５ｍＭ ＮａｘＰＯ４、及びＭＰＢ＝７５％ ２５ｍＭ ＮａｘＰＯ４、２５％イソプロパノール）で、１３．５分間にわたる８０ＭＰＡ／２０％ＭＰＢ～３５％ＭＰＡ／６５％ＭＰＢの勾配を用いて、Ｐｒｏｔｅｏｍｉｘ（登録商標）ＨＩＣエチルカラム（７．８×５０ｍｍ、５μｍ）（Ｓｅｐａｘ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｉｎｃ．，Ｎｅｗａｒｋ，ＤＥ）で行った。
ＡＤＣの平均薬物抗体比（ＤＡＲ）は、抗体の還元中に遊離したジスルフィド結合の数に応じて変化し得る。特定の平均ＤＡＲを有するＡＤＣがもたらされる単一のコンジュゲーション反応は、種の混合物を含む。リンカー－毒素００１にコンジュゲートされたｖ１００００では、非コンジュゲート抗体、２のＤＡＲを有するＡＤＣ、４のＤＡＲを有するＡＤＣ、及び６のＤＡＲを有するＡＤＣの４つの種の混合物が生成された。
ＨＩＣの結果は、リンカー－毒素００１にコンジュゲートされたｖ１００００を含むＡＤＣが、２．０７の平均ＤＡＲを有していたことを示した。精製されたＡＤＣの平均ＤＡＲに対するＤＡＲ０、ＤＡＲ２、ＤＡＲ４及びＤＡＲ６種の個々の寄与を、ＨＰＬＣ－ＨＩＣクロマトグラムの積分によって評価した。ＨＩＣクロマトグラムの各ピークを分取クロマトグラフィーにより単離し、ピークの同一性をＬＣ－ＭＳにより検証した。各変異体の個々のＤＡＲ種の含有率％（ＨＩＣによって決定される）を表Ｇに示す。
（表Ｇ）Ｖ１００００及びリンカー－毒素００１を含むＡＤＣのＤＡＲ分布
Figure 2024056808000073
配列情報
SEQUENCE LISTING
<110> ZYMEWORKS BC INC.
<120> METHODS OF USING A BISPECIFIC ANTIGEN-BINDING CONSTRUCT TARGETING
HER2 FOR THE TREATMENT OF BILIARY TRACT CANCERS
<160> 72
<170> PatentIn version 3.5

<210> 1
<211> 607
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> HER2
<400> 1
Thr Gln Val Cys Thr Gly Thr Asp Met Lys Leu Arg Leu Pro Ala Ser
1 5 10 15
Pro Glu Thr His Leu Asp Met Leu Arg His Leu Tyr Gln Gly Cys Gln
20 25 30
Val Val Gln Gly Asn Leu Glu Leu Thr Tyr Leu Pro Thr Asn Ala Ser
35 40 45
Leu Ser Phe Leu Gln Asp Ile Gln Glu Val Gln Gly Tyr Val Leu Ile
50 55 60
Ala His Asn Gln Val Arg Gln Val Pro Leu Gln Arg Leu Arg Ile Val
65 70 75 80
Arg Gly Thr Gln Leu Phe Glu Asp Asn Tyr Ala Leu Ala Val Leu Asp
85 90 95
Asn Gly Asp Pro Leu Asn Asn Thr Thr Pro Val Thr Gly Ala Ser Pro
100 105 110
Gly Gly Leu Arg Glu Leu Gln Leu Arg Ser Leu Thr Glu Ile Leu Lys
115 120 125
Gly Gly Val Leu Ile Gln Arg Asn Pro Gln Leu Cys Tyr Gln Asp Thr
130 135 140
Ile Leu Trp Lys Asp Ile Phe His Lys Asn Asn Gln Leu Ala Leu Thr
145 150 155 160
Leu Ile Asp Thr Asn Arg Ser Arg Ala Cys His Pro Cys Ser Pro Met
165 170 175
Cys Lys Gly Ser Arg Cys Trp Gly Glu Ser Ser Glu Asp Cys Gln Ser
180 185 190
Leu Thr Arg Thr Val Cys Ala Gly Gly Cys Ala Arg Cys Lys Gly Pro
195 200 205
Leu Pro Thr Asp Cys Cys His Glu Gln Cys Ala Ala Gly Cys Thr Gly
210 215 220
Pro Lys His Ser Asp Cys Leu Ala Cys Leu His Phe Asn His Ser Gly
225 230 235 240
Ile Cys Glu Leu His Cys Pro Ala Leu Val Thr Tyr Asn Thr Asp Thr
245 250 255
Phe Glu Ser Met Pro Asn Pro Glu Gly Arg Tyr Thr Phe Gly Ala Ser
260 265 270
Cys Val Thr Ala Cys Pro Tyr Asn Tyr Leu Ser Thr Asp Val Gly Ser
275 280 285
Cys Thr Leu Val Cys Pro Leu His Asn Gln Glu Val Thr Ala Glu Asp
290 295 300
Gly Thr Gln Arg Cys Glu Lys Cys Ser Lys Pro Cys Ala Arg Val Cys
305 310 315 320
Tyr Gly Leu Gly Met Glu His Leu Arg Glu Val Arg Ala Val Thr Ser
325 330 335
Ala Asn Ile Gln Glu Phe Ala Gly Cys Lys Lys Ile Phe Gly Ser Leu
340 345 350
Ala Phe Leu Pro Glu Ser Phe Asp Gly Asp Pro Ala Ser Asn Thr Ala
355 360 365
Pro Leu Gln Pro Glu Gln Leu Gln Val Phe Glu Thr Leu Glu Glu Ile
370 375 380
Thr Gly Tyr Leu Tyr Ile Ser Ala Trp Pro Asp Ser Leu Pro Asp Leu
385 390 395 400
Ser Val Phe Gln Asn Leu Gln Val Ile Arg Gly Arg Ile Leu His Asn
405 410 415
Gly Ala Tyr Ser Leu Thr Leu Gln Gly Leu Gly Ile Ser Trp Leu Gly
420 425 430
Leu Arg Ser Leu Arg Glu Leu Gly Ser Gly Leu Ala Leu Ile His His
435 440 445
Asn Thr His Leu Cys Phe Val His Thr Val Pro Trp Asp Gln Leu Phe
450 455 460
Arg Asn Pro His Gln Ala Leu Leu His Thr Ala Asn Arg Pro Glu Asp
465 470 475 480
Glu Cys Val Gly Glu Gly Leu Ala Cys His Gln Leu Cys Ala Arg Gly
485 490 495
His Cys Trp Gly Pro Gly Pro Thr Gln Cys Val Asn Cys Ser Gln Phe
500 505 510
Leu Arg Gly Gln Glu Cys Val Glu Glu Cys Arg Val Leu Gln Gly Leu
515 520 525
Pro Arg Glu Tyr Val Asn Ala Arg His Cys Leu Pro Cys His Pro Glu
530 535 540
Cys Gln Pro Gln Asn Gly Ser Val Thr Cys Phe Gly Pro Glu Ala Asp
545 550 555 560
Gln Cys Val Ala Cys Ala His Tyr Lys Asp Pro Pro Phe Cys Val Ala
565 570 575
Arg Cys Pro Ser Gly Val Lys Pro Asp Leu Ser Tyr Met Pro Ile Trp
580 585 590
Lys Phe Pro Asp Glu Glu Gly Ala Cys Gln Pro Cys Pro Ile Asn
595 600 605

<210> 2
<211> 217
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Human IgG1 Fc
<400> 2
Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
1 5 10 15
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
20 25 30
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
35 40 45
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
50 55 60
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
65 70 75 80
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
85 90 95
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
100 105 110
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu
115 120 125
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
130 135 140
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
145 150 155 160
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
165 170 175
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
180 185 190
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
195 200 205
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
210 215

<210> 3
<211> 448
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> H2 clone 3468 Full
<400> 3
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Thr Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Asp Val Asn Pro Asn Ser Gly Gly Ser Ile Tyr Asn Gln Arg Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Leu Ser Val Asp Arg Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asn Leu Gly Pro Ser Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Lys Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys
210 215 220
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
225 230 235 240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
245 250 255
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
260 265 270
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
275 280 285
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
290 295 300
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
305 310 315 320
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
325 330 335
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Val
340 345 350
Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Leu
355 360 365
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
370 375 380
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Leu Thr Trp Pro Pro Val Leu
385 390 395 400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
405 410 415
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
420 425 430
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445

<210> 4
<211> 1344
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> H2 clone 3468 Full
<400> 4
gaagtgcagc tggtcgaatc tggaggagga ctggtgcagc caggagggtc cctgcgcctg 60
tcttgcgccg ctagtggctt cacttttacc gactacacca tggattgggt gcgacaggca 120
cctggaaagg gcctggagtg ggtcgccgat gtgaacccaa atagcggagg ctccatctac 180
aaccagcggt tcaagggccg gttcaccctg tcagtggacc ggagcaaaaa caccctgtat 240
ctgcagatga atagcctgcg agccgaagat actgctgtgt actattgcgc ccggaatctg 300
gggccctcct tctactttga ctattggggg cagggaactc tggtcaccgt gagctccgcc 360
tccaccaagg gaccttctgt gttcccactg gctccctcta gtaaatccac atctggggga 420
actgcagccc tgggctgtct ggtgaagggc tacttcccag agcccgtcac agtgtcttgg 480
aacagtggcg ctctgacttc tggggtccac acctttcctg cagtgctgaa gtcaagcggg 540
ctgtacagcc tgtcctctgt ggtcaccgtg ccaagttcaa gcctgggaac acagacttat 600
atctgcaacg tgaatcacaa gccatccaat acaaaagtcg acaagaaagt ggaacccaag 660
tcttgtgata aaacccatac atgcccccct tgtcctgcac cagagctgct gggaggacca 720
agcgtgttcc tgtttccacc caagcctaaa gatacactga tgattagtag gaccccagaa 780
gtcacatgcg tggtcgtgga cgtgagccac gaggaccccg aagtcaagtt taactggtac 840
gtggacggcg tcgaggtgca taatgccaag actaaaccca gggaggaaca gtacaacagt 900
acctatcgcg tcgtgtcagt cctgacagtg ctgcatcagg attggctgaa cgggaaagag 960
tataagtgca aagtgagcaa taaggctctg cccgcaccta tcgagaaaac aatttccaag 1020
gcaaaaggac agcctagaga accacaggtg tacgtgctgc ctccatcaag ggatgagctg 1080
acaaagaacc aggtcagcct gctgtgtctg gtgaaaggat tctatccctc tgacattgct 1140
gtggagtggg aaagtaatgg ccagcctgag aacaattacc tgacctggcc ccctgtgctg 1200
gactcagatg gcagcttctt tctgtatagc aagctgaccg tcgacaaatc ccggtggcag 1260
caggggaatg tgtttagttg ttcagtcatg cacgaggcac tgcacaacca ttacacccag 1320
aagtcactgt cactgtcacc aggg 1344

<210> 5
<211> 119
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> H2 clone 3468 VH
<400> 5
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Thr Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Asp Val Asn Pro Asn Ser Gly Gly Ser Ile Tyr Asn Gln Arg Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Leu Ser Val Asp Arg Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asn Leu Gly Pro Ser Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115

<210> 6
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> H1 clone 3057,3317 CDRH1, H2 clone 3468,3041 CDRH1
<400> 6
Gly Phe Thr Phe Thr Asp Tyr Thr
1 5

<210> 7
<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> H1 clone 3057,3317 CDRH3, H2 clone 3468,3041 CDRH3
<400> 7
Ala Arg Asn Leu Gly Pro Ser Phe Tyr Phe Asp Tyr
1 5 10

<210> 8
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> H1 clone 3057,3317 CDRH2, H2 clone 3468,3041 CDRH2
<400> 8
Val Asn Pro Asn Ser Gly Gly Ser
1 5

<210> 9
<211> 214
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> L2 clone 1811 Full
<400> 9
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Ile Gly
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Ile Tyr Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210

<210> 10
<211> 642
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> L2 clone 1811 Full
<400> 10
gatattcaga tgacccagtc cccaagctcc ctgagtgcct cagtgggcga ccgagtcacc 60
atcacatgca aggcttccca ggatgtgtct attggagtcg catggtacca gcagaagcca 120
ggcaaagcac ccaagctgct gatctatagc gcctcctacc ggtataccgg cgtgccctct 180
agattctctg gcagtgggtc aggaacagac tttactctga ccatctctag tctgcagcct 240
gaggatttcg ctacctacta ttgccagcag tactatatct acccatatac ctttggccag 300
gggacaaaag tggagatcaa gaggactgtg gccgctccct ccgtcttcat ttttccccct 360
tctgacgaac agctgaaaag tggcacagcc agcgtggtct gtctgctgaa caatttctac 420
cctcgcgaag ccaaagtgca gtggaaggtc gataacgctc tgcagagcgg caacagccag 480
gagtctgtga ctgaacagga cagtaaagat tcaacctata gcctgtcaag cacactgact 540
ctgagcaagg cagactacga gaagcacaaa gtgtatgcct gcgaagtcac acatcagggg 600
ctgtcctctc ctgtgactaa gagctttaac agaggagagt gt 642

<210> 11
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> L2 clone 1811 VL
<400> 11
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Ile Gly
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Ile Tyr Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105

<210> 12
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> L2 clones 1811, 3904 CDRL1 and H1 clone 3317 CDRL1
<400> 12
Gln Asp Val Ser Ile Gly
1 5

<210> 13
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> L3 clones 1811, 3904 CDRL3 and H1 clone 3317 CDRL3
<400> 13
Gln Gln Tyr Tyr Ile Tyr Pro Tyr Thr
1 5

<210> 14
<211> 3
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> L2 clones 1811, 3904 CDRL2 and H1 clone 3317 CDRL2
<400> 14
Ser Ala Ser
1

<210> 15
<211> 222
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> L1 clone 5034 Full
<400> 15
Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp Lys Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro
1 5 10 15
Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg
20 25 30
Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro
35 40 45
Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser
50 55 60
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr
65 70 75 80
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys
85 90 95
Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val
100 105 110
Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro
115 120 125
Ser Asp Glu Arg Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu
130 135 140
Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn
145 150 155 160
Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser
165 170 175
Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala
180 185 190
Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly
195 200 205
Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215 220

<210> 16
<211> 666
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> L1 clone 5034 Full
<400> 16
gactacaaag acgacgatga caaagatatc cagatgaccc agtcccctag ctccctgtcc 60
gcttctgtgg gcgatagggt cactattacc tgccgcgcat ctcaggacgt gaacaccgca 120
gtcgcctggt accagcagaa gcctgggaaa gctccaaagc tgctgatcta cagtgcatca 180
ttcctgtatt caggagtgcc cagccggttt agcggcagca gatctggcac cgatttcaca 240
ctgactattt ctagtctgca gcctgaggac tttgccacat actattgcca gcagcactat 300
accacacccc ctactttcgg ccaggggacc aaagtggaga tcaagcgaac tgtggccgct 360
ccaagtgtct tcatttttcc acccagcgat gaaagactga agtccggcac agcttctgtg 420
gtctgtctgc tgaacaattt ttaccccaga gaggccaaag tgcagtggaa ggtcgacaac 480
gctctgcaga gtggcaacag ccaggagagc gtgacagaac aggattccaa agactctact 540
tatagtctgt caagcaccct gacactgagc aaggcagact acgaaaagca taaagtgtat 600
gcctgtgagg tcacacatca ggggctgtca tcaccagtca ccaaatcatt caatcggggg 660
gagtgc 666

<210> 17
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> L1 clone 5034 VL
<400> 17
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105

<210> 18
<211> 222
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> L1 cone 5037 Full
<400> 18
Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp Lys Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro
1 5 10 15
Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg
20 25 30
Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro
35 40 45
Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser
50 55 60
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr
65 70 75 80
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys
85 90 95
Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val
100 105 110
Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro
115 120 125
Ser Asp Glu Arg Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu
130 135 140
Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn
145 150 155 160
Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Lys Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser
165 170 175
Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Arg Leu Thr Leu Ser Lys Ala
180 185 190
Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly
195 200 205
Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215 220

<210> 19
<211> 666
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> L1 clone 5037 Full
<400> 19
gactacaaag acgacgatga caaagatatc cagatgaccc agtcccctag ctccctgtcc 60
gcttctgtgg gcgatagggt cactattacc tgccgcgcat ctcaggacgt gaacaccgca 120
gtcgcctggt accagcagaa gcctgggaaa gctccaaagc tgctgatcta cagtgcatca 180
ttcctgtatt caggagtgcc cagccggttt agcggcagca gatctggcac cgatttcaca 240
ctgactattt ctagtctgca gcctgaggac tttgccacat actattgcca gcagcactat 300
accacacccc ctactttcgg ccaggggacc aaagtggaga tcaagcgaac tgtggccgct 360
ccaagtgtct tcatttttcc acccagcgat gaaagactga agtccggcac agcttctgtg 420
gtctgtctgc tgaacaattt ttaccccaga gaggccaaag tgcagtggaa ggtcgacaac 480
gctctgcaga gtggcaacag caaggagagc gtgacagaac aggattccaa agactctact 540
tatagtctgt caagcagact gacactgagc aaggcagact acgaaaagca taaagtgtat 600
gcctgtgagg tcacacatca ggggctgtca tcaccagtca ccaaatcatt caatcggggg 660
gagtgc 666

<210> 20
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> L1 clone 5037 VL
<400> 20
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105

<210> 21
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> L1 clone 5037 CDRL1
<400> 21
Gln Asp Val Asn Thr Ala
1 5

<210> 22
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> L1 clone 5037 CDRL3
<400> 22
Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Pro Thr
1 5

<210> 23
<211> 3
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> L1 clone 5037 CDRL2
<400> 23
Ser Ala Ser
1

<210> 24
<211> 214
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> L1 clone 3382 Full
<400> 24
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Ile Gly
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Ile Tyr Pro Ala
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210

<210> 25
<211> 642
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> L1 clone 3382 Full
<400> 25
gatattcaga tgacccagtc cccaagctcc ctgagtgcct cagtgggcga ccgagtcacc 60
atcacatgca aggcttccca ggatgtgtct attggagtcg catggtacca gcagaagcca 120
ggcaaagcac ccaagctgct gatctatagc gcctcctacc ggtataccgg cgtgccctct 180
agattctctg gcagtgggtc aggaacagac tttactctga ccatctctag tctgcagcct 240
gaggatttcg ctacctacta ttgccagcag tactatatct acccagccac ctttggccag 300
gggacaaaag tggagatcaa gaggactgtg gccgctccct ccgtcttcat ttttccccct 360
tctgacgaac agctgaaaag tggcacagcc agcgtggtct gtctgctgaa caatttctac 420
cctcgcgaag ccaaagtgca gtggaaggtc gataacgctc tgcagagcgg caacagccag 480
gagtctgtga ctgaacagga cagtaaagat tcaacctata gcctgtcaag cacactgact 540
ctgagcaagg cagactacga gaagcacaaa gtgtatgcct gcgaagtcac acatcagggg 600
ctgtcctctc ctgtgactaa gagctttaac agaggagagt gt 642

<210> 26
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> L1 clone 3382 VL
<400> 26
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Ile Gly
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Ile Tyr Pro Ala
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105

<210> 27
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> L1 clone 3382 CDRL1
<400> 27
Gln Asp Val Ser Ile Gly
1 5

<210> 28
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> L1 clone 3382 CDRL3
<400> 28
Gln Gln Tyr Tyr Ile Tyr Pro Ala Thr
1 5

<210> 29
<211> 3
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> L1 clone 3382 CDRL2
<400> 29
Ser Ala Ser
1

<210> 30
<211> 449
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> H1 clone 5065 Full
<400> 30
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Tyr Pro Thr Asn Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ser Arg Trp Gly Gly Asp Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Glu Val Thr Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp
210 215 220
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly
225 230 235 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
245 250 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
260 265 270
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
275 280 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
290 295 300
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
305 310 315 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
325 330 335
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
340 345 350
Val Tyr Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
355 360 365
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
370 375 380
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
385 390 395 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Ala Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp
405 410 415
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
420 425 430
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
435 440 445
Gly

<210> 31
<211> 1347
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> H1 clone 5065 Full
<400> 31
gaggtgcagc tggtcgaaag cggaggagga ctggtgcagc caggagggtc actgcgactg 60
agctgcgcag cttccggctt caacatcaag gacacctaca ttcactgggt ccgccaggct 120
cctggaaaag gcctggagtg ggtggcacga atctatccaa ctaatggata cacccggtat 180
gccgactccg tgaagggccg gttcaccatt tctgcagata caagtaaaaa cactgcctac 240
ctgcagatga acagcctgcg agccgaagat acagccgtgt actattgcag ccgatgggga 300
ggcgacggct tctacgctat ggattattgg gggcagggaa ccctggtcac agtgagctcc 360
gcatcaacaa aggggcctag cgtgtttcca ctggccccct ctagtaaatc cacctctggg 420
ggaacagcag ccctgggatg tgaggtgacc gactacttcc cagagcccgt cactgtgagc 480
tggaactccg gcgccctgac atctggggtc catacttttc ctgctgtgct gcagtcaagc 540
ggcctgtaca gcctgtcctc tgtggtcact gtgccaagtt caagcctggg gactcagacc 600
tatatctgca acgtgaatca caagccatcc aataccaaag tcgacaagaa agtggaaccc 660
aagtcttgtg ataaaacaca tacttgcccc ccttgtcctg caccagagct gctgggagga 720
ccaagcgtgt tcctgtttcc acccaagcct aaagacaccc tgatgattag taggactcca 780
gaagtcacct gcgtggtcgt ggacgtgagc cacgaggacc ccgaagtcaa gttcaactgg 840
tacgtggatg gcgtcgaggt gcataatgcc aagacaaaac ccagggagga acagtacaac 900
tccacttatc gcgtcgtgtc tgtcctgacc gtgctgcacc aggactggct gaacggcaag 960
gagtataagt gcaaagtgag caataaggct ctgcccgcac ctatcgagaa aacaatttcc 1020
aaggctaaag ggcagcctag agaaccacag gtgtacgtgt accctccatc tagggacgag 1080
ctgaccaaga accaggtcag tctgacatgt ctggtgaaag ggttctatcc cagcgatatc 1140
gcagtggagt gggaatccaa tggacagcct gagaacaatt acaagaccac accccctgtg 1200
ctggactctg atggaagttt cgccctggtg agtaagctga ccgtcgataa atcacggtgg 1260
cagcagggca acgtgttcag ctgttcagtg atgcacgaag cactgcacaa ccactacacc 1320
cagaaaagcc tgtccctgtc ccccggc 1347

<210> 32
<211> 120
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> H1 clone 5065 VH
<400> 32
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Tyr Pro Thr Asn Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ser Arg Trp Gly Gly Asp Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120

<210> 33
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> H1 clones 5065, 719 CDRH1 and H2 clone 720 CDRH1
<400> 33
Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr Tyr
1 5

<210> 34
<211> 13
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> H1 clones 5065, 719 CDRH3 and H2 clone 720 CDRH3
<400> 34
Ser Arg Trp Gly Gly Asp Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr
1 5 10

<210> 35
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> H1 clones 5065, 719 CDRH2 and H2 clone 720 CDRH2
<400> 35
Ile Tyr Pro Thr Asn Gly Tyr Thr
1 5

<210> 36
<211> 448
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> H1 clone 6586 Full
<400> 36
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ala Asp Tyr
20 25 30
Thr Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Asp Val Asn Pro Asn Ser Gly Gly Ser Ile Tyr Asn Gln Arg Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Phe Ser Val Asp Arg Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asn Leu Gly Pro Ser Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys
210 215 220
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
225 230 235 240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
245 250 255
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
260 265 270
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
275 280 285
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
290 295 300
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
305 310 315 320
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
325 330 335
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Val
340 345 350
Tyr Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
355 360 365
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
370 375 380
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
385 390 395 400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Ala Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
405 410 415
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
420 425 430
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445

<210> 37
<211> 1344
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> H1 clone 6586 Full
<400> 37
gaggtgcagc tggtggaatc aggagggggc ctggtgcagc ccggagggtc tctgcgactg 60
tcatgtgccg cttctgggtt cactttcgca gactacacaa tggattgggt gcgacaggcc 120
cccggaaagg gactggagtg ggtgggcgat gtcaacccta attctggcgg gagtatctac 180
aaccagcggt tcaaggggag attcactttt tcagtggaca gaagcaaaaa caccctgtat 240
ctgcagatga acagcctgag ggccgaagat accgctgtct actattgcgc tcgcaatctg 300
ggccccagtt tctactttga ctattggggg cagggaaccc tggtgacagt cagctccgct 360
agcactaagg ggccttccgt gtttccactg gctccctcta gtaaatccac ctctggaggc 420
acagctgcac tgggatgtct ggtgaaggat tacttccctg aaccagtcac agtgagttgg 480
aactcagggg ctctgacaag tggagtccat acttttcccg cagtgctgca gtcaagcgga 540
ctgtactccc tgtcctctgt ggtcaccgtg cctagttcaa gcctgggcac ccagacatat 600
atctgcaacg tgaatcacaa gccatcaaat acaaaagtcg acaagaaagt ggagcccaag 660
agctgtgata aaactcatac ctgcccacct tgtccggcgc cagaactgct gggaggacca 720
agcgtgttcc tgtttccacc caagcctaaa gacaccctga tgatttcccg gactcctgag 780
gtcacctgcg tggtcgtgga cgtgtctcac gaggaccccg aagtcaagtt caactggtac 840
gtggatggcg tcgaagtgca taatgccaag accaaacccc gggaggaaca gtacaactct 900
acctatagag tcgtgagtgt cctgacagtg ctgcaccagg actggctgaa tgggaaggag 960
tataagtgta aagtgagcaa caaagccctg cccgccccaa tcgaaaaaac aatctctaaa 1020
gcaaaaggac agcctcgcga accacaggtc tacgtctacc ccccatcaag agatgaactg 1080
acaaaaaatc aggtctctct gacatgcctg gtcaaaggat tctacccttc cgacatcgcc 1140
gtggagtggg aaagtaacgg ccagcccgag aacaattaca agaccacacc ccctgtcctg 1200
gactctgatg ggagtttcgc tctggtgtca aagctgaccg tcgataaaag ccggtggcag 1260
cagggcaatg tgtttagctg ctccgtcatg cacgaagccc tgcacaatca ctacacacag 1320
aagtccctga gcctgagccc tggc 1344

<210> 38
<211> 119
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> H1 clone 6586 VH
<400> 38
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ala Asp Tyr
20 25 30
Thr Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Asp Val Asn Pro Asn Ser Gly Gly Ser Ile Tyr Asn Gln Arg Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Phe Ser Val Asp Arg Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asn Leu Gly Pro Ser Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115

<210> 39
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> H1 clone 6586 CDRH1
<400> 39
Gly Phe Thr Phe Ala Asp Tyr Thr
1 5

<210> 40
<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> H1 clone 6586 CDRH3
<400> 40
Ala Arg Asn Leu Gly Pro Ser Phe Tyr Phe Asp Tyr
1 5 10

<210> 41
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> H1 clone 6586 CDRH2
<400> 41
Val Asn Pro Asn Ser Gly Gly Ser
1 5

<210> 42
<211> 226
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> L2 clone 3904 Full
<400> 42
Tyr Pro Tyr Asp Val Pro Asp Tyr Ala Thr Gly Ser Asp Ile Gln Met
1 5 10 15
Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr
20 25 30
Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Ile Gly Val Ala Trp Tyr
35 40 45
Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ser Ala Ser
50 55 60
Tyr Arg Tyr Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly
65 70 75 80
Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala
85 90 95
Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Ile Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe
115 120 125
Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Glu Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val
130 135 140
Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp
145 150 155 160
Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Glu Glu Ser Val Thr
165 170 175
Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Glu
180 185 190
Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val
195 200 205
Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly
210 215 220
Glu Cys
225

<210> 43
<211> 678
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> L2 clone 3904 Full
<400> 43
tatccctacg atgtgcctga ctacgctact ggctccgata tccagatgac ccagtctcca 60
agctccctga gtgcatcagt gggggaccga gtcaccatca catgcaaggc ttcccaggat 120
gtgtctattg gagtcgcatg gtaccagcag aagccaggca aagcacccaa gctgctgatc 180
tacagcgcct cctaccggta tactggggtg ccttccagat tctctggcag tgggtcagga 240
accgacttta ctctgaccat ctctagtctg cagcccgagg atttcgccac ctactattgc 300
cagcagtact atatctaccc ttataccttt ggccagggga caaaagtgga gatcaagagg 360
acagtggccg ctccaagtgt cttcattttt cccccttccg acgaagagct gaaaagtgga 420
actgcttcag tggtctgtct gctgaacaat ttctaccccc gcgaagccaa agtgcagtgg 480
aaggtcgata acgctctgca gagcggcaat tccgaggagt ctgtgacaga acaggacagt 540
aaagattcaa cttatagcct gtcaagcaca ctggagctgt ctaaggcaga ctacgagaag 600
cacaaagtgt atgcctgcga agtcacccat caggggctgt cctctcccgt gacaaagagc 660
tttaacagag gagagtgt 678

<210> 44
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> L2 clone 3904 VL
<400> 44
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Ile Gly
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Ile Tyr Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105

<210> 45
<211> 481
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> H1 clone 719 Full
<400> 45
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Gly Gly Ser Gly Gly
100 105 110
Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Glu
115 120 125
Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser
130 135 140
Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr Tyr
145 150 155 160
Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala
165 170 175
Arg Ile Tyr Pro Thr Asn Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val Lys
180 185 190
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr Leu
195 200 205
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ser
210 215 220
Arg Trp Gly Gly Asp Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
225 230 235 240
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ala Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys
245 250 255
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
260 265 270
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
275 280 285
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
290 295 300
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
305 310 315 320
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
325 330 335
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
340 345 350
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
355 360 365
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
370 375 380
Tyr Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
385 390 395 400
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
405 410 415
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
420 425 430
Asp Glu Asp Gly Ser Phe Ala Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
435 440 445
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
450 455 460
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
465 470 475 480
Lys

<210> 46
<211> 1443
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> H1 clone 719 Full
<400> 46
gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgcc gggcaagtca ggacgttaac accgctgtag cttggtatca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaagctcct gatctattct gcatcctttt tgtacagtgg ggtcccatca 180
aggttcagtg gcagtcgatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 240
gaagattttg caacttacta ctgtcaacag cattacacta ccccacccac tttcggccaa 300
gggaccaaag tggagatcaa aggtggttct ggtggtggtt ctggtggtgg ttctggtggt 360
ggttctggtg gtggttctgg tgaagtgcag ctggtggagt ctgggggagg cttggtacag 420
cctggcgggt ccctgagact ctcctgtgca gcctctggat tcaacattaa agatacttat 480
atccactggg tccggcaagc tccagggaag ggcctggagt gggtcgcacg tatttatccc 540
acaaatggtt acacacggta tgcggactct gtgaagggcc gattcaccat ctccgcagac 600
acttccaaga acaccgcgta tctgcaaatg aacagtctga gagctgagga cacggccgtt 660
tattactgtt caagatgggg cggagacggt ttctacgcta tggactactg gggccaaggg 720
accctggtca ccgtctcctc agccgccgag cccaagagca gcgataagac ccacacctgc 780
cctccctgtc cagctccaga actgctggga ggacctagcg tgttcctgtt tccccctaag 840
ccaaaagaca ctctgatgat ttccaggact cccgaggtga cctgcgtggt ggtggacgtg 900
tctcacgagg accccgaagt gaagttcaac tggtacgtgg atggcgtgga agtgcataat 960
gctaagacaa aaccaagaga ggaacagtac aactccactt atcgcgtcgt gagcgtgctg 1020
accgtgctgc accaggactg gctgaacggg aaggagtata agtgcaaagt cagtaataag 1080
gccctgcctg ctccaatcga aaaaaccatc tctaaggcca aaggccagcc aagggagccc 1140
caggtgtaca catacccacc cagcagagac gaactgacca agaaccaggt gtccctgaca 1200
tgtctggtga aaggcttcta tcctagtgat attgctgtgg agtgggaatc aaatggacag 1260
ccagagaaca attacaagac cacacctcca gtgctggacg aggatggcag cttcgccctg 1320
gtgtccaagc tgacagtgga taaatctcga tggcagcagg ggaacgtgtt tagttgttca 1380
gtgatgcatg aagccctgca caatcattac actcagaaga gcctgtccct gtctcccggc 1440
aaa 1443

<210> 47
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> H1 clone 719 VL
<400> 47
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105

<210> 48
<211> 120
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> H1 clone 719 VH
<400> 48
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Tyr Pro Thr Asn Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ser Arg Trp Gly Gly Asp Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120

<210> 49
<211> 481
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> H2 clone 720 Full
<400> 49
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Gly Gly Ser Gly Gly
100 105 110
Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Glu
115 120 125
Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser
130 135 140
Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr Tyr
145 150 155 160
Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala
165 170 175
Arg Ile Tyr Pro Thr Asn Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val Lys
180 185 190
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr Leu
195 200 205
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ser
210 215 220
Arg Trp Gly Gly Asp Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
225 230 235 240
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ala Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys
245 250 255
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
260 265 270
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
275 280 285
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
290 295 300
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
305 310 315 320
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
325 330 335
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
340 345 350
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
355 360 365
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
370 375 380
Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ile
385 390 395 400
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
405 410 415
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Arg Tyr Met Thr Trp Pro Pro Val Leu
420 425 430
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
435 440 445
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
450 455 460
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
465 470 475 480
Lys

<210> 50
<211> 1443
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> H2 clone 720 Full
<400> 50
gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgcc gggcaagtca ggacgttaac accgctgtag cttggtatca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaagctcct gatctattct gcatcctttt tgtacagtgg ggtcccatca 180
aggttcagtg gcagtcgatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 240
gaagattttg caacttacta ctgtcaacag cattacacta ccccacccac tttcggccaa 300
gggaccaaag tggagatcaa aggtggttct ggtggtggtt ctggtggtgg ttctggtggt 360
ggttctggtg gtggttctgg tgaagtgcag ctggtggagt ctgggggagg cttggtacag 420
cctggcgggt ccctgagact ctcctgtgca gcctctggat tcaacattaa agatacttat 480
atccactggg tccggcaagc tccagggaag ggcctggagt gggtcgcacg tatttatccc 540
acaaatggtt acacacggta tgcggactct gtgaagggcc gattcaccat ctccgcagac 600
acttccaaga acaccgcgta tctgcaaatg aacagtctga gagctgagga cacggccgtt 660
tattactgtt caagatgggg cggagacggt ttctacgcta tggactactg gggccaaggg 720
accctggtca ccgtctcctc agccgccgag cccaagagca gcgataagac ccacacctgc 780
cctccctgtc cagctccaga actgctggga ggacctagcg tgttcctgtt tccccctaag 840
ccaaaagaca ctctgatgat ttccaggact cccgaggtga cctgcgtggt ggtggacgtg 900
tctcacgagg accccgaagt gaagttcaac tggtacgtgg atggcgtgga agtgcataat 960
gctaagacaa aaccaagaga ggaacagtac aactccactt atcgcgtcgt gagcgtgctg 1020
accgtgctgc accaggactg gctgaacggg aaggagtata agtgcaaagt cagtaataag 1080
gccctgcctg ctccaatcga aaaaaccatc tctaaggcca aaggccagcc aagggagccc 1140
caggtgtaca cactgccacc cagcagagac gaactgacca agaaccaggt gtccctgatc 1200
tgtctggtga aaggcttcta tcctagtgat attgctgtgg agtgggaatc aaatggacag 1260
ccagagaaca gatacatgac ctggcctcca gtgctggaca gcgatggcag cttcttcctg 1320
tattccaagc tgacagtgga taaatctcga tggcagcagg ggaacgtgtt tagttgttca 1380
gtgatgcatg aagccctgca caatcattac actcagaaga gcctgtccct gtctcccggc 1440
aaa 1443

<210> 51
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> H2 clone 720 VL
<400> 51
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105

<210> 52
<211> 120
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> H2 clone 720 VH
<400> 52
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Tyr Pro Thr Asn Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ser Arg Trp Gly Gly Asp Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120

<210> 53
<211> 448
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> H2 clone 3041 Full
<400> 53
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Thr Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Asp Val Asn Pro Asn Ser Gly Gly Ser Ile Tyr Asn Gln Arg Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Leu Ser Val Asp Arg Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asn Leu Gly Pro Ser Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys
210 215 220
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
225 230 235 240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
245 250 255
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
260 265 270
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
275 280 285
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
290 295 300
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
305 310 315 320
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
325 330 335
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Val
340 345 350
Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Leu
355 360 365
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
370 375 380
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Leu Thr Trp Pro Pro Val Leu
385 390 395 400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
405 410 415
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
420 425 430
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445

<210> 54
<211> 1344
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> H2 clone 3041 Full
<400> 54
gaagtgcagc tggtcgaatc tggaggagga ctggtgcagc caggagggtc cctgcgcctg 60
tcttgcgccg ctagtggctt cacttttacc gactacacca tggattgggt gcgacaggca 120
cctggaaagg gcctggagtg ggtcgccgat gtgaacccaa atagcggagg ctccatctac 180
aaccagcggt tcaagggccg gttcaccctg tcagtggacc ggagcaaaaa caccctgtat 240
ctgcagatga atagcctgcg agccgaagat actgctgtgt actattgcgc ccggaatctg 300
gggccctcct tctactttga ctattggggg cagggaactc tggtcaccgt gagctccgcc 360
tccaccaagg gaccttctgt gttcccactg gctccctcta gtaaatccac atctggggga 420
actgcagccc tgggctgtct ggtgaaggac tacttcccag agcccgtcac agtgtcttgg 480
aacagtggcg ctctgacttc tggggtccac acctttcctg cagtgctgca gtcaagcggg 540
ctgtacagcc tgtcctctgt ggtcaccgtg ccaagttcaa gcctgggaac acagacttat 600
atctgcaacg tgaatcacaa gccatccaat acaaaagtcg acaagaaagt ggaacccaag 660
tcttgtgata aaacccatac atgcccccct tgtcctgcac cagagctgct gggaggacca 720
agcgtgttcc tgtttccacc caagcctaaa gatacactga tgattagtag gaccccagaa 780
gtcacatgcg tggtcgtgga cgtgagccac gaggaccccg aagtcaagtt taactggtac 840
gtggacggcg tcgaggtgca taatgccaag actaaaccca gggaggaaca gtacaacagt 900
acctatcgcg tcgtgtcagt cctgacagtg ctgcatcagg attggctgaa cgggaaagag 960
tataagtgca aagtgagcaa taaggctctg cccgcaccta tcgagaaaac aatttccaag 1020
gcaaaaggac agcctagaga accacaggtg tacgtgctgc ctccatcaag ggatgagctg 1080
acaaagaacc aggtcagcct gctgtgtctg gtgaaaggat tctatccctc tgacattgct 1140
gtggagtggg aaagtaatgg ccagcctgag aacaattacc tgacctggcc ccctgtgctg 1200
gactcagatg gcagcttctt tctgtatagc aagctgaccg tcgacaaatc ccggtggcag 1260
caggggaatg tgtttagttg ttcagtcatg cacgaggcac tgcacaacca ttacacccag 1320
aagtcactgt cactgtcacc aggg 1344

<210> 55
<211> 119
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> H2 clone 3041 VH
<400> 55
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Thr Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Asp Val Asn Pro Asn Ser Gly Gly Ser Ile Tyr Asn Gln Arg Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Leu Ser Val Asp Arg Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asn Leu Gly Pro Ser Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115

<210> 56
<211> 448
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> H1 clone 3057 Full
<400> 56
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Thr Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Asp Val Asn Pro Asn Ser Gly Gly Ser Ile Tyr Asn Gln Arg Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Leu Ser Val Asp Arg Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asn Leu Gly Pro Ser Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys
210 215 220
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
225 230 235 240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
245 250 255
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
260 265 270
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
275 280 285
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
290 295 300
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
305 310 315 320
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
325 330 335
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Val
340 345 350
Tyr Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
355 360 365
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
370 375 380
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
385 390 395 400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Ala Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
405 410 415
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
420 425 430
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445

<210> 57
<211> 1344
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> H1 clone 3057 Full
<400> 57
gaagtgcagc tggtcgaatc tggaggagga ctggtgcagc caggagggtc cctgcgcctg 60
tcttgcgccg ctagtggctt cacttttacc gactacacca tggattgggt gcgacaggca 120
cctggaaagg gcctggagtg ggtcgccgat gtgaacccaa atagcggagg ctccatctac 180
aaccagcggt tcaagggccg gttcaccctg tcagtggacc ggagcaaaaa caccctgtat 240
ctgcagatga atagcctgcg agccgaagat actgctgtgt actattgcgc ccggaatctg 300
gggccctcct tctactttga ctattggggg cagggaactc tggtcaccgt gagctccgcc 360
tccaccaagg gaccttctgt gttcccactg gctccctcta gtaaatccac atctggggga 420
actgcagccc tgggctgtct ggtgaaggac tacttcccag agcccgtcac agtgtcttgg 480
aacagtggcg ctctgacttc tggggtccac acctttcctg cagtgctgca gtcaagcggg 540
ctgtacagcc tgtcctctgt ggtcaccgtg ccaagttcaa gcctgggaac acagacttat 600
atctgcaacg tgaatcacaa gccatccaat acaaaagtcg acaagaaagt ggaacccaag 660
tcttgtgata aaacccatac atgcccccct tgtcctgcac cagagctgct gggaggacca 720
agcgtgttcc tgtttccacc caagcctaaa gatacactga tgattagtag gaccccagaa 780
gtcacatgcg tggtcgtgga cgtgagccac gaggaccccg aagtcaagtt taactggtac 840
gtggacggcg tcgaggtgca taatgccaag actaaaccca gggaggaaca gtacaacagt 900
acctatcgcg tcgtgtcagt cctgacagtg ctgcatcagg attggctgaa cgggaaagag 960
tataagtgca aagtgagcaa taaggctctg cccgcaccta tcgagaaaac aatttccaag 1020
gcaaaaggac agcctagaga accacaggtg tacgtgtatc ctccatcaag ggatgagctg 1080
acaaagaacc aggtcagcct gacttgtctg gtgaaaggat tctatccctc tgacattgct 1140
gtggagtggg aaagtaatgg ccagcctgag aacaattaca agaccacacc ccctgtgctg 1200
gactcagatg gcagcttcgc gctggtgagc aagctgaccg tcgacaaatc ccggtggcag 1260
caggggaatg tgtttagttg ttcagtcatg cacgaggcac tgcacaacca ttacacccag 1320
aagtcactgt cactgtcacc aggg 1344

<210> 58
<211> 119
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> H1 clone 3057 VH
<400> 58
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Thr Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Asp Val Asn Pro Asn Ser Gly Gly Ser Ile Tyr Asn Gln Arg Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Leu Ser Val Asp Arg Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asn Leu Gly Pro Ser Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115

<210> 59
<211> 475
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> H1 clone 3317 Full
<400> 59
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Ile Gly
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Ile Tyr Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Gly Gly Gly Gly Ser
100 105 110
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu
115 120 125
Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys
130 135 140
Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp Tyr Thr Met Asp Trp Val Arg
145 150 155 160
Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Asp Val Asn Pro Asn
165 170 175
Ser Gly Gly Ser Ile Tyr Asn Gln Arg Phe Lys Gly Arg Phe Thr Leu
180 185 190
Ser Val Asp Arg Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu
195 200 205
Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Asn Leu Gly Pro
210 215 220
Ser Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser
225 230 235 240
Ser Ala Ala Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro
245 250 255
Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro
260 265 270
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr
275 280 285
Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn
290 295 300
Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg
305 310 315 320
Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val
325 330 335
Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser
340 345 350
Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys
355 360 365
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Val Tyr Pro Pro Ser Arg Asp
370 375 380
Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe
385 390 395 400
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu
405 410 415
Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe
420 425 430
Ala Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly
435 440 445
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr
450 455 460
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
465 470 475

<210> 60
<211> 1425
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> H1 clone 3317 Full
<400> 60
gacattcaga tgacccagag ccctagctcc ctgagtgcct cagtcgggga cagggtgact 60
atcacctgca aggcttcaca ggatgtcagc attggcgtgg catggtacca gcagaagcca 120
gggaaagcac ccaagctgct gatctatagc gcctcctaca ggtatacagg cgtgccatcc 180
cgcttctctg gcagtgggtc aggaactgac tttacactga ctatttctag tctgcagccc 240
gaagatttcg ccacatacta ttgccagcag tactatatct acccttatac ttttggccag 300
gggaccaaag tggagattaa gggcggagga ggctccggag gaggagggtc tggaggagga 360
ggaagtgagg tccagctggt ggaatctgga ggaggactgg tgcagccagg agggtccctg 420
aggctgtctt gtgccgctag tggcttcacc tttacagact acacaatgga ttgggtgcgc 480
caggcaccag gaaagggact ggaatgggtc gctgatgtga accctaatag cggaggctcc 540
atctacaacc agcggttcaa aggacggttc accctgtcag tggaccggag caagaacacc 600
ctgtatctgc agatgaacag cctgagagcc gaggatactg ctgtgtacta ttgcgccagg 660
aatctgggcc caagcttcta ctttgactat tgggggcagg gaacactggt cactgtgtca 720
agcgcagccg aacccaaatc ctctgataag actcacacct gcccaccttg tccagctcca 780
gagctgctgg gaggacctag cgtgttcctg tttccaccca agccaaaaga cactctgatg 840
atttctagaa cccctgaagt gacatgtgtg gtcgtggacg tcagtcacga ggaccccgaa 900
gtcaaattca actggtacgt ggatggcgtc gaggtgcata atgccaagac caaaccccga 960
gaggaacagt acaactcaac ctatcgggtc gtgagcgtcc tgacagtgct gcatcaggac 1020
tggctgaacg gcaaggagta taagtgcaaa gtgagcaaca aggctctgcc tgcaccaatc 1080
gagaagacca tttccaaggc taaagggcag ccccgcgaac ctcaggtcta cgtgtatcct 1140
ccaagccgag atgagctgac aaaaaaccag gtctccctga cttgtctggt gaagggattt 1200
tacccaagtg acatcgcagt ggagtgggaa tcaaatggcc agcccgaaaa caattataag 1260
accacacccc ctgtgctgga ctctgatggg agtttcgcac tggtctccaa actgaccgtg 1320
gacaagtctc ggtggcagca gggaaacgtc tttagctgtt ccgtgatgca cgaggccctg 1380
cacaatcatt acacacagaa atctctgagt ctgtcacctg gcaag 1425

<210> 61
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> H1 clone 3317 VL
<400> 61
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Ile Gly
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Ile Tyr Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105

<210> 62
<211> 119
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> H1 clone 3317 VH
<400> 62
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Thr Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Asp Val Asn Pro Asn Ser Gly Gly Ser Ile Tyr Asn Gln Arg Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Leu Ser Val Asp Arg Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asn Leu Gly Pro Ser Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115

<210> 63
<211> 480
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> H2 clone 5244 Full
<400> 63
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Gly Gly Ser Gly Gly
100 105 110
Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Glu
115 120 125
Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser
130 135 140
Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr Tyr
145 150 155 160
Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala
165 170 175
Arg Ile Tyr Pro Thr Asn Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val Lys
180 185 190
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr Leu
195 200 205
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ser
210 215 220
Arg Trp Gly Gly Asp Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
225 230 235 240
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ala Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys
245 250 255
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
260 265 270
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
275 280 285
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
290 295 300
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
305 310 315 320
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
325 330 335
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
340 345 350
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
355 360 365
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Val
370 375 380
Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Leu
385 390 395 400
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
405 410 415
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Leu Thr Trp Pro Pro Val Leu
420 425 430
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
435 440 445
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
450 455 460
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
465 470 475 480

<210> 64
<211> 1440
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> H2 clone 5244 Full
<400> 64
gacattcaga tgacacagag ccccagctcc ctgagtgctt cagtcggcga cagggtgact 60
atcacctgcc gcgcatccca ggatgtcaac accgctgtgg catggtacca gcagaagcct 120
ggaaaagccc caaagctgct gatctacagc gcttccttcc tgtattctgg cgtgccaagt 180
cggttttctg gaagtagatc aggcactgac ttcacactga ctatctctag tctgcagccc 240
gaagattttg ccacctacta ttgccagcag cactatacca caccccctac attcggacag 300
ggcactaaag tggagattaa gggcgggtca ggcggaggga gcggaggagg gtccggagga 360
gggtctggag gagggagtgg agaggtccag ctggtggaat ctggaggagg actggtgcag 420
cctggaggct cactgcgact gagctgtgcc gcttccggct ttaacatcaa agacacatac 480
attcattggg tcaggcaggc accagggaag ggactggaat gggtggcccg catctatccc 540
acaaatgggt acactcgata tgccgacagc gtgaaaggac ggtttaccat ttctgctgat 600
accagtaaga acacagcata cctgcagatg aacagcctgc gcgcagagga tacagccgtg 660
tactattgca gtcgatgggg gggagacggc ttctacgcca tggattattg gggccagggg 720
actctggtca ccgtgtcaag cgcagccgaa cctaaatcct ctgacaagac ccacacatgc 780
ccaccctgtc ctgctccaga gctgctggga ggaccatccg tgttcctgtt tcctccaaag 840
cctaaagata cactgatgat tagccgcact cccgaagtca cctgtgtggt cgtggacgtg 900
tcccacgagg accccgaagt caagttcaac tggtacgtgg acggcgtcga ggtgcataat 960
gccaagacta aaccaagaga ggaacagtac aattcaacct atagggtcgt gagcgtcctg 1020
acagtgctgc atcaggattg gctgaacggc aaggagtata agtgcaaagt gtctaacaag 1080
gccctgcccg ctcctatcga gaagactatt agcaaggcaa aagggcagcc acgggaaccc 1140
caggtctacg tgctgccccc tagcagagac gagctgacca aaaaccaggt ctccctgctg 1200
tgtctggtga agggctttta tcctagtgat atcgctgtgg agtgggaatc aaatgggcag 1260
ccagaaaaca attacctgac atggccaccc gtgctggaca gcgatgggtc cttctttctg 1320
tattccaaac tgactgtgga caagtctaga tggcagcagg gaaacgtctt cagctgttcc 1380
gtgatgcacg aggccctgca caatcattac acccagaagt ctctgagtct gtcacccggc 1440

<210> 65
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> H2 clone 5244 VL
<400> 65
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105

<210> 66
<211> 120
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> H2 clone 5244 VH
<400> 66
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Tyr Pro Thr Asn Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ser Arg Trp Gly Gly Asp Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120

<210> 67
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> H2 clones 5244,720 CDRL1 and L1 clone 5034 CDRL1 and H1 clone 719
CDRL1
<400> 67
Gln Asp Val Asn Thr Ala
1 5

<210> 68
<211> 3
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> H2 clones 5244,720 CDRL2 and L1 clone 5034 CDRL2 and H1 clone 719
CDRL2
<400> 68
Ser Ala Ser
1

<210> 69
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> H2 clones 5244,720 CDRL3 and L1 clone 5034 CDRL3 and H1 clone 719
CDRL3
<400> 69
Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Pro Thr
1 5

<210> 70
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> H1 clone 5244 CDRH1
<400> 70
Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr Tyr
1 5

<210> 71
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> H2 clone 5244 CDRH2
<400> 71
Ile Tyr Pro Thr Asn Gly Tyr Thr
1 5

<210> 72
<211> 13
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> H3 clone 5244 CDRH3
<400> 72
Ser Arg Trp Gly Gly Asp Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr
1 5 10

Claims (22)

  1. 胆道癌（ＢＴＣ）の治療のための医薬の調製における、二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物の使用であって、前記二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物が、重鎖Ｈ１及び軽鎖Ｌ１を含む第１の結合部分、並びに重鎖Ｈ２を含む第２の結合部分を含み、
    ａ）重鎖Ｈ１が、配列番号３９に記載の配列を含むＣＤＲ Ｈ１、配列番号４０に記載の配列を含むＣＤＲ Ｈ３、及び配列番号４１に記載の配列を含むＣＤＲ Ｈ２を含み、
    ｂ）重鎖Ｈ２が、配列番号６７に記載の配列を含むＣＤＲ Ｌ１、配列番号６８に記載の配列を含むＣＤＲ Ｌ２、配列番号６９に記載の配列を含むＣＤＲ Ｌ３、配列番号７０に記載の配列を含むＣＤＲ Ｈ１、配列番号７１に記載の配列を含むＣＤＲ Ｈ２、及び配列番号７２に記載の配列を含むＣＤＲ Ｈ３を含み、
    ｃ）軽鎖Ｌ１が、配列番号２７に記載の配列を含むＣＤＲ Ｌ１、配列番号２８に記載の配列を含むＣＤＲ Ｌ３、及び配列番号２９に記載の配列を含むＣＤＲ Ｌ２を含む、使用。
  2. 前記ＢＴＣが、切除可能、部分切除可能、または切除不能である、請求項１に記載の使用。
  3. 前記ＢＴＣが、局所的に進行性である、請求項１に記載の使用。
  4. ＢＴＣが、転移性ＢＴＣである、請求項１～３のいずれか１項に記載の使用。
  5. 前記ＢＴＣが、ＨＥＲ２遺伝子増幅され、免疫組織化学（ＩＨＣ）により測定した場合、ＨＥＲ２ ３＋、ＨＥＲ２ ２＋、またはＨＥＲ２ １＋である、請求項１～４のいずれか１項に記載の使用。
  6. 前記ＢＴＣが、ＨＥＲ２遺伝子増幅なしで、免疫組織化学（ＩＨＣ）により測定した場合、ＨＥＲ２ ３＋、ＨＥＲ２ ２＋、またはＨＥＲ２ １＋である、請求項１～４のいずれか１項に記載の使用。
  7. 前記ＢＴＣが、胆嚢癌である、請求項１～６のいずれか１項に記載の使用。
  8. 前記ＢＴＣが、胆管細胞癌（ＣＣＡ）である、請求項１～６のいずれか１項に記載の使用。
  9. 前記二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物が、配列番号３６に記載のアミノ酸配列を含む重鎖Ｈ１、配列番号６３に記載のアミノ酸配列を含む重鎖Ｈ２、及び配列番号２４に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖Ｌ１を含む、請求項１～８のいずれか１項に記載の使用。
  10. 前記二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物の有効量が、１０ｍｇ／ｋｇ／週である、請求項１～９のいずれか１項に記載の使用。
  11. 前記二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物の有効量が、２週間毎に２０ｍｇ／ｋｇである、請求項１～９のいずれか１項に記載の使用。
  12. 前記二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物の有効量が、３週間毎に３０ｍｇ／ｋｇである、請求項１～９のいずれか１項に記載の使用。
  13. 前記二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物を対象に投与することが、前記対象において完全奏効（ＣＲ）、部分奏効（ＰＲ）、または安定（ＳＤ）をもたらす、請求項１～１２のいずれか１項に記載の使用。
  14. 前記二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物で治療した対象群における病勢制御率が、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％を超える、請求項１～１２のいずれか１項に記載の使用。
  15. 前記二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物で治療した対象群における全奏効率が、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％を超える、請求項１～１２のいずれか１項に記載の使用。
  16. 前記二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物が、少なくとも１つ、２つ、または３つの第一選択療法の後に投与される、請求項１～１２のいずれか１項に記載の使用。
  17. 前記二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物が、第一選択単剤療法として投与される、請求項１～１２のいずれか１項に記載の使用。
  18. 前記二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物が、アジュバント療法またはネオアジュバント療法として投与される、請求項１～１２のいずれか１項に記載の使用。
  19. 前記二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物が、１つ以上の化学療法剤とともに投与される、請求項１～１７のいずれか１項に記載の使用。
  20. 前記１つ以上の化学療法剤が、ゲムシタビン及び／またはシスプラチンである、請求項１９に記載の使用。
  21. 前記二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物、およびそれらの使用のための指示書を含む、請求項１～２０のいずれか１項に記載の使用のためのキット。
  22. 前記二重特異性抗ＨＥＲ２抗原結合構築物が、抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）に含まれる、請求項１～２０のいずれか一項に記載の使用。
JP2024017719A 2019-05-31 2024-02-08 胆道癌の治療のための、ｈｅｒ２を標的とする二重特異性抗原結合構築物の使用方法 Pending JP2024056808A (ja)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2024017719A JP2024056808A (ja) 2019-05-31 2024-02-08 胆道癌の治療のための、ｈｅｒ２を標的とする二重特異性抗原結合構築物の使用方法

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2021570770A JP7436520B2 (ja) 2019-05-31 2019-05-31 胆道癌の治療のための、ｈｅｒ２を標的とする二重特異性抗原結合構築物の使用方法
PCT/US2019/035042 WO2020242503A1 (en) 2019-05-31 2019-05-31 Methods of using a bispecific antigen-binding construct targeting her2 for the treatment of biliary tract cancers
JP2024017719A JP2024056808A (ja) 2019-05-31 2024-02-08 胆道癌の治療のための、ｈｅｒ２を標的とする二重特異性抗原結合構築物の使用方法

Related Parent Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2021570770A Division JP7436520B2 (ja) 2019-05-31 2019-05-31 胆道癌の治療のための、ｈｅｒ２を標的とする二重特異性抗原結合構築物の使用方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
JP2024056808A true JP2024056808A (ja) 2024-04-23

Family

ID=73552028

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2021570770A Active JP7436520B2 (ja) 2019-05-31 2019-05-31 胆道癌の治療のための、ｈｅｒ２を標的とする二重特異性抗原結合構築物の使用方法
JP2024017719A Pending JP2024056808A (ja) 2019-05-31 2024-02-08 胆道癌の治療のための、ｈｅｒ２を標的とする二重特異性抗原結合構築物の使用方法

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2021570770A Active JP7436520B2 (ja) 2019-05-31 2019-05-31 胆道癌の治療のための、ｈｅｒ２を標的とする二重特異性抗原結合構築物の使用方法

Country Status (11)

Country Link
US (1) US20220133903A1 (ja)
EP (1) EP3976098A4 (ja)
JP (2) JP7436520B2 (ja)
KR (1) KR20220016482A (ja)
CN (1) CN114025795A (ja)
AU (1) AU2019448168A1 (ja)
BR (1) BR112021023988A2 (ja)
CA (1) CA3137516A1 (ja)
CO (1) CO2021016982A2 (ja)
MX (1) MX2021014522A (ja)
WO (1) WO2020242503A1 (ja)

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2023141714A1 (en) * 2022-01-26 2023-08-03 Zymeworks Bc Inc. Methods of using anti-her2 biparatopic antibody-drug conjugates in the treatment of cancer
WO2024183622A1 (zh) * 2023-03-03 2024-09-12 盛禾(中国)生物制药有限公司 一种抗her2抗体在制备治疗癌症的药物中的用途

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2873111A1 (en) * 2012-05-11 2013-11-14 Merrimack Pharmaceuticals, Inc. Dosage and administration of bispecific scfv conjugates in combination with anti-cancer therapeutics
RU2737882C2 (ru) * 2013-11-27 2020-12-04 Займворкс Инк. Биспецифические антигенсвязывающие конструкции против her2
BR112016022910A2 (pt) 2014-04-11 2017-10-17 Medimmune Llc anticorpos contra her2 biespecíficos
WO2017185177A1 (en) * 2016-04-25 2017-11-02 Zymeworks Inc. Methods of using bispecific antigen-binding constructs targeting her2

Also Published As

Publication number Publication date
JP2022540975A (ja) 2022-09-21
BR112021023988A2 (pt) 2022-04-19
CO2021016982A2 (es) 2022-01-17
EP3976098A1 (en) 2022-04-06
MX2021014522A (es) 2022-03-17
KR20220016482A (ko) 2022-02-09
CA3137516A1 (en) 2020-12-03
CN114025795A (zh) 2022-02-08
JP7436520B2 (ja) 2024-02-21
EP3976098A4 (en) 2023-01-18
US20220133903A1 (en) 2022-05-05
WO2020242503A1 (en) 2020-12-03
AU2019448168A1 (en) 2022-01-27

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR102626525B1 (ko) 면역접합체의 제조를 위한 항체의 변형에 사용되는 특정 부위
JP2020180152A (ja) 抗Ａｘｌ抗体、抗体断片およびそれらの免疫コンジュゲートならびにそれらの使用
KR20220144753A (ko) 글리신 기반 링커를 사용한 트랜스글루타미나제 컨쥬게이션 방법
JP7432253B2 (ja) 抗Ｒｏｒ２抗体、抗体断片、それらの免疫コンジュゲートおよびそれらの使用
JP2024056808A (ja) 胆道癌の治療のための、ｈｅｒ２を標的とする二重特異性抗原結合構築物の使用方法
US10112999B2 (en) Anti-PRLR antibody-drug conjugates (ADC) and uses thereof
US20210346508A1 (en) Anti-her2 biparatopic antibody-drug conjugates and methods of use
JP2020532523A (ja) 抗ｅｇｆｒ抗体薬物コンジュゲート（ａｄｃ）及びその使用
JP2020532543A (ja) 抗ｅｇｆｒ抗体薬物コンジュゲート（ａｄｃ）及びその使用
RU2819802C2 (ru) Способы применения биспецифической антигенсвязывающей конструкции, нацеленной на her2, для лечения онкологического заболевания желчных протоков
US12076400B2 (en) Methods of using a bispecific antigen-binding construct targeting HER2 in combination with CDK4/6 inhibitors for the treatment of breast cancer
RU2806049C2 (ru) Конъюгаты анти-her2 бипаратопных антител-лекарственных веществ и способы их применения
RU2806049C9 (ru) Конъюгаты анти-her2 бипаратопных антител-лекарственных веществ и способы их применения

Legal Events

Date Code Title Description
A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20240227

A621 Written request for application examination

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621

Effective date: 20240227