JP2024016032A - 組み換え単純ヘルペスウイルス２（ｈｓｖ－２）ワクチンベクターを使用する免疫の受動伝達 - Google Patents
組み換え単純ヘルペスウイルス２（ｈｓｖ－２）ワクチンベクターを使用する免疫の受動伝達 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2024016032A JP2024016032A JP2023176398A JP2023176398A JP2024016032A JP 2024016032 A JP2024016032 A JP 2024016032A JP 2023176398 A JP2023176398 A JP 2023176398A JP 2023176398 A JP2023176398 A JP 2023176398A JP 2024016032 A JP2024016032 A JP 2024016032A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- hsv
- glycoprotein
- infection
- subject
- mice
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 241000701074 Human alphaherpesvirus 2 Species 0.000 title claims abstract description 524
- 238000012546 transfer Methods 0.000 title abstract description 6
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title description 68
- 230000036039 immunity Effects 0.000 title description 5
- 239000013598 vector Substances 0.000 title 1
- 241000700588 Human alphaherpesvirus 1 Species 0.000 claims abstract description 206
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 136
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 91
- 101000678879 Homo sapiens Atypical chemokine receptor 1 Proteins 0.000 claims abstract description 51
- 102100022717 Atypical chemokine receptor 1 Human genes 0.000 claims abstract description 47
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 claims abstract description 36
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 claims abstract description 36
- 230000028993 immune response Effects 0.000 claims abstract description 30
- 208000037952 HSV-1 infection Diseases 0.000 claims abstract description 26
- 210000003754 fetus Anatomy 0.000 claims abstract description 16
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims abstract description 15
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims description 84
- 238000012217 deletion Methods 0.000 claims description 62
- 230000037430 deletion Effects 0.000 claims description 62
- 101900228213 Human herpesvirus 2 Envelope glycoprotein D Proteins 0.000 claims description 49
- 230000003053 immunization Effects 0.000 claims description 39
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 36
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 claims description 21
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 claims description 13
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 claims description 12
- 230000012010 growth Effects 0.000 claims description 10
- 210000004251 human milk Anatomy 0.000 claims description 10
- 235000020256 human milk Nutrition 0.000 claims description 10
- 230000009984 peri-natal effect Effects 0.000 claims description 8
- 230000001571 immunoadjuvant effect Effects 0.000 claims description 5
- 239000000568 immunological adjuvant Substances 0.000 claims description 5
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 claims description 5
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims description 4
- 230000014599 transmission of virus Effects 0.000 claims description 2
- 230000001902 propagating effect Effects 0.000 abstract 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 169
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 135
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 106
- 210000002845 virion Anatomy 0.000 description 73
- 241000700584 Simplexvirus Species 0.000 description 54
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 47
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 45
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 44
- 208000003322 Coinfection Diseases 0.000 description 43
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 43
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 31
- 239000000232 Lipid Bilayer Substances 0.000 description 30
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 28
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 27
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 26
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 26
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 26
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 26
- 210000003501 vero cell Anatomy 0.000 description 26
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 24
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 24
- 230000010056 antibody-dependent cellular cytotoxicity Effects 0.000 description 22
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 21
- 108010090054 Membrane Glycoproteins Proteins 0.000 description 20
- 102000012750 Membrane Glycoproteins Human genes 0.000 description 20
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 20
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 20
- 239000000047 product Substances 0.000 description 20
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 20
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 20
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 18
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 18
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 18
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 18
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 17
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 16
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 16
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 15
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 15
- 210000003594 spinal ganglia Anatomy 0.000 description 15
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 14
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 14
- 238000011740 C57BL/6 mouse Methods 0.000 description 13
- 230000008774 maternal effect Effects 0.000 description 13
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 12
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 12
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 12
- 230000004044 response Effects 0.000 description 12
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 12
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 11
- 210000004392 genitalia Anatomy 0.000 description 11
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 11
- 108700019146 Transgenes Proteins 0.000 description 10
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 10
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 10
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 10
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 10
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 9
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 9
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 9
- 101150036031 gD gene Proteins 0.000 description 9
- 231100000518 lethal Toxicity 0.000 description 9
- 230000001665 lethal effect Effects 0.000 description 9
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 9
- 238000007390 skin biopsy Methods 0.000 description 9
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 9
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 8
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 8
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 7
- 102000004889 Interleukin-6 Human genes 0.000 description 7
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 7
- 108020005202 Viral DNA Proteins 0.000 description 7
- 230000003622 anti-hsv Effects 0.000 description 7
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 7
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 7
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 7
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 7
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 7
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 7
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 7
- 244000045947 parasite Species 0.000 description 7
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 7
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 7
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 6
- FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 4',6-Diamino-2-phenylindol Chemical compound C1=CC(C(=N)N)=CC=C1C1=CC2=CC=C(C(N)=N)C=C2N1 FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 102100025248 C-X-C motif chemokine 10 Human genes 0.000 description 6
- 102000019034 Chemokines Human genes 0.000 description 6
- 108010012236 Chemokines Proteins 0.000 description 6
- 108010043121 Green Fluorescent Proteins Proteins 0.000 description 6
- 102000004144 Green Fluorescent Proteins Human genes 0.000 description 6
- 230000005867 T cell response Effects 0.000 description 6
- 241000589886 Treponema Species 0.000 description 6
- 102100028785 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 14 Human genes 0.000 description 6
- 208000025865 Ulcer Diseases 0.000 description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 6
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 6
- 239000005090 green fluorescent protein Substances 0.000 description 6
- 238000003364 immunohistochemistry Methods 0.000 description 6
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 6
- 229940100601 interleukin-6 Drugs 0.000 description 6
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 6
- 230000037452 priming Effects 0.000 description 6
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 6
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 6
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 6
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 6
- 210000000427 trigeminal ganglion Anatomy 0.000 description 6
- 102100036170 C-X-C motif chemokine 9 Human genes 0.000 description 5
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 5
- 241000711950 Filoviridae Species 0.000 description 5
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 5
- 208000032420 Latent Infection Diseases 0.000 description 5
- 241000187479 Mycobacterium tuberculosis Species 0.000 description 5
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 5
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 5
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 5
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 5
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 5
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 5
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 5
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 5
- 208000037771 disease arising from reactivation of latent virus Diseases 0.000 description 5
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 5
- 201000004946 genital herpes Diseases 0.000 description 5
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 5
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 5
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 5
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 5
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 5
- 230000001296 transplacental effect Effects 0.000 description 5
- 101710094648 Coat protein Proteins 0.000 description 4
- WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N Haematoxylin Chemical compound C12=CC(O)=C(O)C=C2CC2(O)C1C1=CC=C(O)C(O)=C1OC2 WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 208000001688 Herpes Genitalis Diseases 0.000 description 4
- 101000858088 Homo sapiens C-X-C motif chemokine 10 Proteins 0.000 description 4
- 101000947172 Homo sapiens C-X-C motif chemokine 9 Proteins 0.000 description 4
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 4
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 4
- 241000712902 Lassa mammarenavirus Species 0.000 description 4
- 108010061593 Member 14 Tumor Necrosis Factor Receptors Proteins 0.000 description 4
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 4
- 241000186362 Mycobacterium leprae Species 0.000 description 4
- 241000187492 Mycobacterium marinum Species 0.000 description 4
- 241000187917 Mycobacterium ulcerans Species 0.000 description 4
- 208000012902 Nervous system disease Diseases 0.000 description 4
- 208000025966 Neurological disease Diseases 0.000 description 4
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 4
- 206010057249 Phagocytosis Diseases 0.000 description 4
- 238000011529 RT qPCR Methods 0.000 description 4
- 238000000692 Student's t-test Methods 0.000 description 4
- 241000589884 Treponema pallidum Species 0.000 description 4
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 4
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 4
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 4
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 4
- 230000006870 function Effects 0.000 description 4
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 4
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 4
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 4
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 4
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 4
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 4
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 4
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 4
- 230000008782 phagocytosis Effects 0.000 description 4
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 4
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 4
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 4
- 230000029812 viral genome replication Effects 0.000 description 4
- 101150053137 AIF1 gene Proteins 0.000 description 3
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 3
- 101710132601 Capsid protein Proteins 0.000 description 3
- 241000606161 Chlamydia Species 0.000 description 3
- 241000711573 Coronaviridae Species 0.000 description 3
- 241000709661 Enterovirus Species 0.000 description 3
- 206010015150 Erythema Diseases 0.000 description 3
- 102100021181 Golgi phosphoprotein 3 Human genes 0.000 description 3
- 208000009889 Herpes Simplex Diseases 0.000 description 3
- XQFRJNBWHJMXHO-RRKCRQDMSA-N IDUR Chemical compound C1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C(I)=C1 XQFRJNBWHJMXHO-RRKCRQDMSA-N 0.000 description 3
- 101710125418 Major capsid protein Proteins 0.000 description 3
- 241001508003 Mycobacterium abscessus Species 0.000 description 3
- 241000588652 Neisseria gonorrhoeae Species 0.000 description 3
- 208000020241 Neonatal disease Diseases 0.000 description 3
- 208000037129 Newborn Diseases Infant Diseases 0.000 description 3
- 101710141454 Nucleoprotein Proteins 0.000 description 3
- 206010030113 Oedema Diseases 0.000 description 3
- 241000713112 Orthobunyavirus Species 0.000 description 3
- 208000002606 Paramyxoviridae Infections Diseases 0.000 description 3
- 101710083689 Probable capsid protein Proteins 0.000 description 3
- 241000724205 Rice stripe tenuivirus Species 0.000 description 3
- 238000011579 SCID mouse model Methods 0.000 description 3
- 230000024932 T cell mediated immunity Effects 0.000 description 3
- 229940037003 alum Drugs 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 3
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 3
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 3
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 3
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 3
- 230000034994 death Effects 0.000 description 3
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 3
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 3
- 231100000321 erythema Toxicity 0.000 description 3
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 3
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 3
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 3
- 230000007420 reactivation Effects 0.000 description 3
- 230000003362 replicative effect Effects 0.000 description 3
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 description 3
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 3
- 210000004988 splenocyte Anatomy 0.000 description 3
- 229940031626 subunit vaccine Drugs 0.000 description 3
- 231100000397 ulcer Toxicity 0.000 description 3
- 230000036269 ulceration Effects 0.000 description 3
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 description 3
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 description 2
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 101710098275 C-X-C motif chemokine 10 Proteins 0.000 description 2
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 2
- 241000282552 Chlorocebus aethiops Species 0.000 description 2
- 241000867607 Chlorocebus sabaeus Species 0.000 description 2
- 241001115402 Ebolavirus Species 0.000 description 2
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010824 Kaplan-Meier survival analysis Methods 0.000 description 2
- 206010028851 Necrosis Diseases 0.000 description 2
- 206010033799 Paralysis Diseases 0.000 description 2
- 241000711798 Rabies lyssavirus Species 0.000 description 2
- 101710187780 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 14 Proteins 0.000 description 2
- 101150068034 UL30 gene Proteins 0.000 description 2
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 2
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 2
- MKUXAQIIEYXACX-UHFFFAOYSA-N aciclovir Chemical compound N1C(N)=NC(=O)C2=C1N(COCCO)C=N2 MKUXAQIIEYXACX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960004150 aciclovir Drugs 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 2
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 230000005888 antibody-dependent cellular phagocytosis Effects 0.000 description 2
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 2
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 2
- 239000013553 cell monolayer Substances 0.000 description 2
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 2
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 description 2
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 230000004727 humoral immunity Effects 0.000 description 2
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 2
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 2
- 229940088592 immunologic factor Drugs 0.000 description 2
- 239000000367 immunologic factor Substances 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 230000028709 inflammatory response Effects 0.000 description 2
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 2
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 2
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 2
- 231100000636 lethal dose Toxicity 0.000 description 2
- 230000021633 leukocyte mediated immunity Effects 0.000 description 2
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 2
- GZQKNULLWNGMCW-PWQABINMSA-N lipid A (E. coli) Chemical compound O1[C@H](CO)[C@@H](OP(O)(O)=O)[C@H](OC(=O)C[C@@H](CCCCCCCCCCC)OC(=O)CCCCCCCCCCCCC)[C@@H](NC(=O)C[C@@H](CCCCCCCCCCC)OC(=O)CCCCCCCCCCC)[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](OC(=O)C[C@H](O)CCCCCCCCCCC)[C@@H](NC(=O)C[C@H](O)CCCCCCCCCCC)[C@@H](OP(O)(O)=O)O1 GZQKNULLWNGMCW-PWQABINMSA-N 0.000 description 2
- 210000003141 lower extremity Anatomy 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- PSGAAPLEWMOORI-PEINSRQWSA-N medroxyprogesterone acetate Chemical compound C([C@@]12C)CC(=O)C=C1[C@@H](C)C[C@@H]1[C@@H]2CC[C@]2(C)[C@@](OC(C)=O)(C(C)=O)CC[C@H]21 PSGAAPLEWMOORI-PEINSRQWSA-N 0.000 description 2
- 210000004877 mucosa Anatomy 0.000 description 2
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 2
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 description 2
- 230000001537 neural effect Effects 0.000 description 2
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 2
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 2
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 230000007918 pathogenicity Effects 0.000 description 2
- 230000005551 perinatal transmission Effects 0.000 description 2
- 230000002688 persistence Effects 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 2
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 2
- 238000003762 quantitative reverse transcription PCR Methods 0.000 description 2
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 2
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 2
- 230000000306 recurrent effect Effects 0.000 description 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 2
- 230000001850 reproductive effect Effects 0.000 description 2
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 2
- 208000002491 severe combined immunodeficiency Diseases 0.000 description 2
- 206010040872 skin infection Diseases 0.000 description 2
- 210000003699 striated muscle Anatomy 0.000 description 2
- 238000007492 two-way ANOVA Methods 0.000 description 2
- 229940125575 vaccine candidate Drugs 0.000 description 2
- 210000001215 vagina Anatomy 0.000 description 2
- 230000009447 viral pathogenesis Effects 0.000 description 2
- 230000001018 virulence Effects 0.000 description 2
- 230000029663 wound healing Effects 0.000 description 2
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 1
- 102000007469 Actins Human genes 0.000 description 1
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 1
- 239000012117 Alexa Fluor 700 Substances 0.000 description 1
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 1
- 238000011725 BALB/c mouse Methods 0.000 description 1
- 201000004569 Blindness Diseases 0.000 description 1
- 101710085500 C-X-C motif chemokine 9 Proteins 0.000 description 1
- 241000606153 Chlamydia trachomatis Species 0.000 description 1
- 206010010099 Combined immunodeficiency Diseases 0.000 description 1
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 1
- 238000007399 DNA isolation Methods 0.000 description 1
- 201000004624 Dermatitis Diseases 0.000 description 1
- 101710121417 Envelope glycoprotein Proteins 0.000 description 1
- 102100027286 Fanconi anemia group C protein Human genes 0.000 description 1
- 206010017577 Gait disturbance Diseases 0.000 description 1
- 208000022555 Genital disease Diseases 0.000 description 1
- 206010048461 Genital infection Diseases 0.000 description 1
- 206010018180 Genital ulceration Diseases 0.000 description 1
- 208000031886 HIV Infections Diseases 0.000 description 1
- 102000011786 HLA-A Antigens Human genes 0.000 description 1
- 108010075704 HLA-A Antigens Proteins 0.000 description 1
- 208000000903 Herpes simplex encephalitis Diseases 0.000 description 1
- 208000037018 Herpes simplex virus encephalitis Diseases 0.000 description 1
- 208000007514 Herpes zoster Diseases 0.000 description 1
- 102100026120 IgG receptor FcRn large subunit p51 Human genes 0.000 description 1
- 101710177940 IgG receptor FcRn large subunit p51 Proteins 0.000 description 1
- 102100034349 Integrase Human genes 0.000 description 1
- 102000008070 Interferon-gamma Human genes 0.000 description 1
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 1
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 1
- PIWKPBJCKXDKJR-UHFFFAOYSA-N Isoflurane Chemical compound FC(F)OC(Cl)C(F)(F)F PIWKPBJCKXDKJR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000282560 Macaca mulatta Species 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 201000009906 Meningitis Diseases 0.000 description 1
- 206010027925 Monoparesis Diseases 0.000 description 1
- 206010065764 Mucosal infection Diseases 0.000 description 1
- 241000186359 Mycobacterium Species 0.000 description 1
- 102000002356 Nectin Human genes 0.000 description 1
- 108060005251 Nectin Proteins 0.000 description 1
- 241000588653 Neisseria Species 0.000 description 1
- 208000011644 Neurologic Gait disease Diseases 0.000 description 1
- 206010060860 Neurological symptom Diseases 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N O-Xylene Chemical compound CC1=CC=CC=C1C CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010067152 Oral herpes Diseases 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 102400000050 Oxytocin Human genes 0.000 description 1
- XNOPRXBHLZRZKH-UHFFFAOYSA-N Oxytocin Natural products N1C(=O)C(N)CSSCC(C(=O)N2C(CCC2)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C1CC1=CC=C(O)C=C1 XNOPRXBHLZRZKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101800000989 Oxytocin Proteins 0.000 description 1
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- 239000012979 RPMI medium Substances 0.000 description 1
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 1
- 206010038910 Retinitis Diseases 0.000 description 1
- 102000006382 Ribonucleases Human genes 0.000 description 1
- 108010083644 Ribonucleases Proteins 0.000 description 1
- 239000006146 Roswell Park Memorial Institute medium Substances 0.000 description 1
- 241000144282 Sigmodon Species 0.000 description 1
- 206010072170 Skin wound Diseases 0.000 description 1
- 230000006044 T cell activation Effects 0.000 description 1
- 206010044565 Tremor Diseases 0.000 description 1
- 102100040247 Tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 1
- 108010003533 Viral Envelope Proteins Proteins 0.000 description 1
- 108010067390 Viral Proteins Proteins 0.000 description 1
- SXEHKFHPFVVDIR-UHFFFAOYSA-N [4-(4-hydrazinylphenyl)phenyl]hydrazine Chemical compound C1=CC(NN)=CC=C1C1=CC=C(NN)C=C1 SXEHKFHPFVVDIR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PVNJLUVGTFULAE-UHFFFAOYSA-N [NH4+].[Cl-].[K] Chemical compound [NH4+].[Cl-].[K] PVNJLUVGTFULAE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003044 adaptive effect Effects 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 238000000540 analysis of variance Methods 0.000 description 1
- 208000010668 atopic eczema Diseases 0.000 description 1
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 1
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 230000003915 cell function Effects 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 210000003679 cervix uteri Anatomy 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 229940038705 chlamydia trachomatis Drugs 0.000 description 1
- 238000003501 co-culture Methods 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 1
- 230000001054 cortical effect Effects 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 230000016396 cytokine production Effects 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 230000036557 dermal exposure Effects 0.000 description 1
- 231100000823 dermal exposure Toxicity 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 229910003460 diamond Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010432 diamond Substances 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 238000007847 digital PCR Methods 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 238000011304 droplet digital PCR Methods 0.000 description 1
- 206010014599 encephalitis Diseases 0.000 description 1
- YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N eosin Chemical compound [Na+].OC(=O)C1=CC=CC=C1C1=C2C=C(Br)C(=O)C(Br)=C2OC2=C(Br)C(O)=C(Br)C=C21 YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 1
- 230000005182 global health Effects 0.000 description 1
- 210000002768 hair cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000003780 hair follicle Anatomy 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 201000010884 herpes simplex virus keratitis Diseases 0.000 description 1
- 125000005842 heteroatom Chemical group 0.000 description 1
- 230000028996 humoral immune response Effects 0.000 description 1
- 230000006450 immune cell response Effects 0.000 description 1
- 230000003832 immune regulation Effects 0.000 description 1
- 210000004201 immune sera Anatomy 0.000 description 1
- 229940042743 immune sera Drugs 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 230000017555 immunoglobulin mediated immune response Effects 0.000 description 1
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 1
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 1
- 210000004969 inflammatory cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000004964 innate lymphoid cell Anatomy 0.000 description 1
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 description 1
- 229960003130 interferon gamma Drugs 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 1
- 229960002725 isoflurane Drugs 0.000 description 1
- 229940021686 isothesia Drugs 0.000 description 1
- 210000002510 keratinocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000011813 knockout mouse model Methods 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 231100000225 lethality Toxicity 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 230000007108 local immune response Effects 0.000 description 1
- 238000001325 log-rank test Methods 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 230000002934 lysing effect Effects 0.000 description 1
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 229960002985 medroxyprogesterone acetate Drugs 0.000 description 1
- 210000003071 memory t lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 229920000609 methyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000001923 methylcellulose Substances 0.000 description 1
- 210000000110 microvilli Anatomy 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- 238000007479 molecular analysis Methods 0.000 description 1
- 238000003032 molecular docking Methods 0.000 description 1
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 230000007171 neuropathology Effects 0.000 description 1
- 108010087904 neutravidin Proteins 0.000 description 1
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 1
- 238000000424 optical density measurement Methods 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- XNOPRXBHLZRZKH-DSZYJQQASA-N oxytocin Chemical compound C([C@H]1C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](N)C(=O)N1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(N)=O)=O)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 XNOPRXBHLZRZKH-DSZYJQQASA-N 0.000 description 1
- 229960001723 oxytocin Drugs 0.000 description 1
- 230000003071 parasitic effect Effects 0.000 description 1
- 230000032696 parturition Effects 0.000 description 1
- 210000004197 pelvis Anatomy 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000002085 persistent effect Effects 0.000 description 1
- 210000002826 placenta Anatomy 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 208000037821 progressive disease Diseases 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 1
- 239000002096 quantum dot Substances 0.000 description 1
- 208000017443 reproductive system disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 1
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 1
- 230000007781 signaling event Effects 0.000 description 1
- 206010040882 skin lesion Diseases 0.000 description 1
- 231100000444 skin lesion Toxicity 0.000 description 1
- 210000000813 small intestine Anatomy 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 230000002459 sustained effect Effects 0.000 description 1
- 238000007910 systemic administration Methods 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 230000026683 transduction Effects 0.000 description 1
- 238000010361 transduction Methods 0.000 description 1
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 1
- 210000002993 trophoblast Anatomy 0.000 description 1
- 201000008827 tuberculosis Diseases 0.000 description 1
- 238000012762 unpaired Student’s t-test Methods 0.000 description 1
- 230000005570 vertical transmission Effects 0.000 description 1
- 230000007502 viral entry Effects 0.000 description 1
- 244000052613 viral pathogen Species 0.000 description 1
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 1
- 230000004580 weight loss Effects 0.000 description 1
- 239000008096 xylene Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
- A61K39/245—Herpetoviridae, e.g. herpes simplex virus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
- A61P31/22—Antivirals for DNA viruses for herpes viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/525—Virus
- A61K2039/5254—Virus avirulent or attenuated
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/55—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the host/recipient, e.g. newborn with maternal antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/70—Multivalent vaccine
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/80—Vaccine for a specifically defined cancer
- A61K2039/844—Liver
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/80—Vaccine for a specifically defined cancer
- A61K2039/884—Vaccine for a specifically defined cancer prostate
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/80—Vaccine for a specifically defined cancer
- A61K2039/892—Reproductive system [uterus, ovaries, cervix, testes]
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Public Health (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Virology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Neurology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Oncology (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
【課題】ＨＳＶ－２および／またはＨＳＶ－１感染に対する免疫応答を誘導する方法を提供する。【解決手段】第一の対象においてＨＳＶ－２および／またはＨＳＶ－１感染に対する免疫応答を誘導する方法であって、ゲノムにＨＳＶ－２糖タンパク質Ｄコード遺伝子全体の欠失を有するＨＳＶ－２で免疫化した妊婦からの産物の一定量を第一の対象に受動伝達させることを含み、ここで、該ＨＳＶ－２は、単純ヘルペスウイルス－１(ＨＳＶ－１)糖タンパク質Ｄを発現する補完的細胞における該ＨＳＶ－２の増殖により該ＨＳＶ－１糖タンパク質Ｄで表現型的に補完され、ここで、該産物はそれにより誘導された抗体を含み、第一の対象におけるＨＳＶ－２および／またはＨＳＶ－１感染に対する免疫応答の誘導に有効であり、ここで、該第一の対象は胎児または新生児である、方法とする。【選択図】図２－２
Description
関連出願の相互参照
本ＰＣＴ国際出願は、２０１９年１月３日出願の米国出願番号１６／２３８,９３３に基づく優先権を主張しており、同出願は、２０１８年６月１日出願の米国出願番号１５／９９５,４７１の一部継続出願であり、後者は、２０１６年２月４日出願の米国特許出願番号１５／０１５,３２２であって、２０１８年６月１９日登録の米国特許９,９９９,６６５の継続出願であり、同出願は、２０１５年３月２日出願のＰＣＴ国際出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１５／０１８２７２の一部継続出願であり、後者は、２０１４年３月３日出願の米国仮出願番号６１／９４６,９６５および２０１４年１１月１７日出願の米国仮出願番号６２／０８０,６６３に基づく利益を主張しており、これらすべての出願の内容を、引用により本明細書に包含させる。
本ＰＣＴ国際出願は、２０１９年１月３日出願の米国出願番号１６／２３８,９３３に基づく優先権を主張しており、同出願は、２０１８年６月１日出願の米国出願番号１５／９９５,４７１の一部継続出願であり、後者は、２０１６年２月４日出願の米国特許出願番号１５／０１５,３２２であって、２０１８年６月１９日登録の米国特許９,９９９,６６５の継続出願であり、同出願は、２０１５年３月２日出願のＰＣＴ国際出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１５／０１８２７２の一部継続出願であり、後者は、２０１４年３月３日出願の米国仮出願番号６１／９４６,９６５および２０１４年１１月１７日出願の米国仮出願番号６２／０８０,６６３に基づく利益を主張しており、これらすべての出願の内容を、引用により本明細書に包含させる。
政府支援の記載
本発明は、アメリカ国立衛生研究所(ＮＩＨ)により認定された認可番号ＡＩ０６１６７９、ＡＩ５１５１９、ＡＩ０９７５４８、ＡＩ０２６１７０およびＡＩ０６５３０９に基づく政府支援を受けてなされた。政府は本発明に一定の権利を有する。
本発明は、アメリカ国立衛生研究所(ＮＩＨ)により認定された認可番号ＡＩ０６１６７９、ＡＩ５１５１９、ＡＩ０９７５４８、ＡＩ０２６１７０およびＡＩ０６５３０９に基づく政府支援を受けてなされた。政府は本発明に一定の権利を有する。
発明の背景
本明細書をとおして、種々の刊行物が、角括弧内の番号によるものを含めて引用されている。これらの文献の完全な引用は、本明細書の最後にまとめられている。これら刊行物ならびにここに引用する全ての特許、特許出願公報および書籍の開示は、本発明が関与する技術をより完全に記載するために、全体として引用により本明細書に包含させる。
本明細書をとおして、種々の刊行物が、角括弧内の番号によるものを含めて引用されている。これらの文献の完全な引用は、本明細書の最後にまとめられている。これら刊行物ならびにここに引用する全ての特許、特許出願公報および書籍の開示は、本発明が関与する技術をより完全に記載するために、全体として引用により本明細書に包含させる。
単純ヘルペスウイルス１型および２型(ＨＳＶ－１およびＨＳＶ－２)は世界的に重要な健康問題であり続けており、世界中の発展途上国および貧困地域に偏って影響しており、ＨＩＶ伝搬に拍車を掛けている。ＨＳＶ－１、ＨＳＶ－２またはＨＩＶに対する有効なワクチンが現在ないため、これら感染症に対するワクチンは喫緊に必要とされている。ＨＳＶ－１は感染性失明の主原因であり、一方ＨＳＶ－２は世界的に性器潰瘍の主原因であるが、先進国では現在ＨＳＶ－１が生殖器疾患と関連してより広く同定されている。性器ヘルペスは、罹患者が非難され、心理的に影響を受けることがある、再発性の、生涯続く疾患である。ＨＳＶ－２での感染は、ＨＩＶの罹患および伝搬の可能性を顕著に増大させ、一方いずれかの血清型の垂直感染は、しばしば乳幼児の重篤な罹病または死亡を招く。ウイルス糖タンパク質Ｄ単独または糖タンパク質Ｂ(ｇＤおよびｇＢ)と組み合わせたサブユニット製剤に基づくＨＳＶ－２ワクチンの最近の臨床治験は、全身性中和抗体の誘導にも関わらず、失敗した。驚くべきことに、ＨＳＶ－２ ｇＤサブユニット(ｇＤ－２)ワクチンは、ＨＳＶ－１に対する部分的保護を提供したが、ＨＳＶ－２に対して保護しなかった。数種の弱毒化ウイルスが前臨床で評価されているが、今日までの臨床試験は治療適用(再発頻度低減)に限定されており、有効性も示されていない。故に、新規ワクチン戦略を立て、評価しなければならない。
本発明は、新規かつ改善されたＨＳＶ－１およびＨＳＶ－２ワクチンに対するこの必要性に対処する。
発明の概要
第一の対象においてＨＳＶ－２および／またはＨＳＶ－１感染に対する免疫応答を誘導する方法であって、ゲノムにＨＳＶ－２糖タンパク質Ｄコード遺伝子全体の欠失を有するＨＳＶ－２で免疫化した妊婦からの産物の一定量を第一の対象に受動伝達させることを含み、ここで、該ＨＳＶ－２は、単純ヘルペスウイルス－１(ＨＳＶ－１)糖タンパク質Ｄを発現する補完的細胞における該ＨＳＶ－２の増殖により該ＨＳＶ－１糖タンパク質Ｄで表現型的に補完され、ここで、該産物はそれにより誘導された抗体を含み、第一の対象におけるＨＳＶ－２および／またはＨＳＶ－１感染に対する免疫応答の誘導に有効であり、ここで、該第一の対象は胎児または新生児である、方法が提供される。
第一の対象においてＨＳＶ－２および／またはＨＳＶ－１感染に対する免疫応答を誘導する方法であって、ゲノムにＨＳＶ－２糖タンパク質Ｄコード遺伝子全体の欠失を有するＨＳＶ－２で免疫化した妊婦からの産物の一定量を第一の対象に受動伝達させることを含み、ここで、該ＨＳＶ－２は、単純ヘルペスウイルス－１(ＨＳＶ－１)糖タンパク質Ｄを発現する補完的細胞における該ＨＳＶ－２の増殖により該ＨＳＶ－１糖タンパク質Ｄで表現型的に補完され、ここで、該産物はそれにより誘導された抗体を含み、第一の対象におけるＨＳＶ－２および／またはＨＳＶ－１感染に対する免疫応答の誘導に有効であり、ここで、該第一の対象は胎児または新生児である、方法が提供される。
新生児における周産期ＨＳＶ－１および／またはＨＳＶ－２感染を阻止する方法であって、ゲノムにＨＳＶ－２糖タンパク質Ｄコード遺伝子全体の欠失を有するＨＳＶ－２の一定量を該新生児になる胎児を妊娠している女性に投与することを含み、ここで、該ＨＳＶ－２は、単純ヘルペスウイルス－１(ＨＳＶ－１)糖タンパク質Ｄを発現する補完的細胞における該ＨＳＶ－２の増殖により該ＨＳＶ－１糖タンパク質Ｄで表現型的に補完され、新生児における周産期ＨＳＶ－１および／またはＨＳＶ－２感染の阻止に有効である、方法が提供される。
母体から新生児へのＨＳＶ－１および／またはＨＳＶ－２ウイルス伝播を阻止する方法であって、母体にゲノムにＨＳＶ－２糖タンパク質Ｄコード遺伝子全体の欠失を有するＨＳＶ－２の一定量を投与することを含み、ここで、該ＨＳＶ－２は、単純ヘルペスウイルス－１(ＨＳＶ－１)糖タンパク質Ｄを発現する補完的細胞における該ＨＳＶ－２の増殖により該ＨＳＶ－１糖タンパク質Ｄで表現型的に補完され、母体から新生児へのＨＳＶ－１および／またはＨＳＶ－２ウイルス伝播の阻止に有効である、方法が提供される。
そのゲノムにＨＳＶ－２糖タンパク質Ｄコード遺伝子(Ｕｓ６)の欠失を有する単離された、組み換え単純ヘルペスウイルス－２(ＨＳＶ－２)が提供される。
そのゲノムにＨＳＶ－２糖タンパク質Ｄコード遺伝子(Ｕｓ６)の欠失を有する単離された、組み換えＨＳＶ－２のビリオンもまた提供される。
ここに記載する組み換えＨＳＶ－２ゲノムまたはここに記載する組み換えＨＳＶ－１遺伝子を含む単離細胞が提供され、ここで、該細胞はヒトには存在しない。
ここに記載する組み換えＨＳＶ－２ウイルスまたはここに記載するビリオンを含むワクチン組成物もまた提供される。
ここに記載する組み換えＨＳＶ－２ウイルスまたはここに記載するビリオンを含む組成物もまた提供され、ここで、該ウイルスまたはビリオンのゲノムは少なくとも第二遺伝子の欠失を含み、ここで、該第二遺伝子はＨＳＶ－２ウイルス複製または病原性に必要である。
医薬組成物はここに記載する組み換えＨＳＶ－２ウイルスまたはここに記載するビリオンおよび薬学的に許容される担体を含む。
対象における免疫応答を誘導する方法であって、対象における免疫応答の誘導に有効な量で、対象に(ｉ)ここに記載する組み換えＨＳＶ－２ウイルス；(ii)ここに記載するそのビリオン；(iii)ここに記載するワクチン；(iv)ここに記載する組成物；または(ｖ)ここに記載する医薬組成物を投与することを含む、方法もまた提供される。
対象におけるＨＳＶ－１、ＨＳＶ－２もしくはＨＳＶ－１とＨＳＶ－２の同時感染を処置するまたは対象におけるＨＳＶ－１、ＨＳＶ－２もしくは同時感染が原因の疾患を処置する方法であって、対象におけるＨＳＶ－１、ＨＳＶ－２もしくは同時感染の処置またはＨＳＶ－１、ＨＳＶ－２もしくは同時感染が原因の疾患の処置に有効な量で、対象に(ｉ)ここに記載する組み換えＨＳＶ－２ウイルス；(ii)ここに記載するそのビリオン；(iii)ここに記載するワクチン；(iv)ここに記載する組成物；または(ｖ)ここに記載する医薬組成物を投与することを含む、方法もまた提供される。
対象にＨＳＶ－１、ＨＳＶ－２または同時感染に対するワクチン接種をする方法であって、対象にＨＳＶ－１、ＨＳＶ－２または同時感染に対するワクチン接種をするのに有効な量で、対象に(ｉ)ここに記載する組み換えＨＳＶ－２ウイルス；(ii)ここに記載するそのビリオン；(iii)ここに記載するワクチン；(iv)ここに記載する組成物；または(ｖ)ここに記載する医薬組成物を投与することを含む、方法もまた提供される。
対象をＨＳＶ－１、ＨＳＶ－２または同時感染に対して免疫化する方法であって、対象をＨＳＶ－１、ＨＳＶ－２または同時感染に対して免疫化するのに有効な量で、対象に(ｉ)ここに記載する組み換えＨＳＶ－２ウイルス；(ii)ここに記載するそのビリオン；(iii)ここに記載するワクチン；(iv)ここに記載する組成物；または(ｖ)ここに記載する医薬組成物を投与することを含む、方法もまた提供される。
ワクチン、組成物および医薬組成物ならびにその使用法の実施態様において、組み換えＨＳＶ－２の量は、記載する目的の達成に有効である組み換えＨＳＶ－２のpfuの量である。
ゲノムにＨＳＶ－２糖タンパク質Ｄコード遺伝子の欠失を有し、脂質二重層にＨＳＶ－１またはＨＳＶ－２糖タンパク質Ｄを含む組み換え単純ヘルペスウイルス－２(ＨＳＶ－２)のビリオンを産生する方法であって、ＨＳＶ－１またはＨＳＶ－２糖タンパク質Ｄをコードする異種核酸を含む細胞を、ゲノムにＨＳＶ－２糖タンパク質Ｄコード遺伝子の欠失を有する組み換え単純ヘルペスウイルス－２(ＨＳＶ－２)に、組み換え単純ヘルペスウイルス－２(ＨＳＶ－２)の複製を可能とする条件下で感染させ、該細胞により産生されたＨＳＶ－２ビリオンを回収することを含む、方法もまた提供される。
ＨＳＶ－２糖タンパク質Ｄをコードする配列を含まない以外、野生型ＨＳＶ－２のゲノムと同じ配列を有する組み換え核酸もまた提供される。
対象におけるＨＳＶ－１、ＨＳＶ－２または同時感染の処置または予防のための、ゲノムにＨＳＶ－２糖タンパク質Ｄコード遺伝子の欠失を有する単離された、組み換え単純ヘルペスウイルス－２(ＨＳＶ－２)もまた提供される。
対象におけるＨＳＶ－１、ＨＳＶ－２または同時感染の処置または予防のための、ゲノムにＨＳＶ－２糖タンパク質Ｄコード遺伝子の欠失を有する単離された、組み換えＨＳＶ－２のビリオンもまた提供される。
ゲノムにＨＳＶ－２糖タンパク質Ｄコード遺伝子の欠失を有する、単離された、組み換え単純ヘルペスウイルス－２(ＨＳＶ－２)が提供される。
ゲノムにＨＳＶ－２糖タンパク質Ｄコード遺伝子の欠失を有する、単離された、組み換えＨＳＶ－２のビリオンもまた提供される。
ここに記載するウイルスまたはここに記載するビリオンを含む単離細胞もまた提供され、ここで、該細胞はヒトには存在しない。
ワクチン組成物はここに記載するウイルスまたはここに記載するビリオンを含む。
ここに記載するウイルスまたはここに記載するビリオンを含む組成物もまた提供され、ここで、該ウイルスまたはビリオンのゲノムは少なくとも第二遺伝子の欠失を含み、ここで、該第二遺伝子はＨＳＶ－２ウイルス複製に必要である。
ここに記載するウイルスまたはここに記載するビリオンおよび薬学的に許容される担体を含む医薬組成物も提供される。
対象における免疫応答を誘導する方法であって、対象における免疫応答の誘導に有効な量で、対象に(ｉ)ここに記載するウイルス；(ii)ここに記載するビリオン；(iii)ここに記載するワクチン；(iv)ここに記載する組成物；または(ｖ)ここに記載する医薬組成物を投与することを含む、方法もまた提供される。
対象におけるＨＳＶ－２感染を処置するまたは対象におけるＨＳＶ－２感染が原因の疾患を処置する方法であって、対象におけるＨＳＶ－２感染の処置または対象におけるＨＳＶ－２感染が原因の疾患の処置に有効な量で、対象に(ｉ)ここに記載するウイルス；(ii)ここに記載するビリオン；(iii)ここに記載するワクチン；(iv)ここに記載する組成物；または(ｖ)ここに記載する医薬組成物を投与することを含む、方法もまた提供される。
対象にＨＳＶ－２感染に対するワクチン接種をする方法であって、対象にＨＳＶ－２感染に対するワクチン接種をするのに有効な量で、対象に(ｉ)ここに記載するウイルス；(ii)ここに記載するビリオン；(iii)ここに記載するワクチン；(iv)ここに記載する組成物；または(ｖ)ここに記載する医薬組成物を投与することを含む、方法もまた提供される。
対象をＨＳＶ－２感染に対して免疫化する方法であって、対象をＨＳＶ－２感染に対して免疫化するのに有効な量で、対象に(ｉ)ここに記載するウイルス；(ii)ここに記載するビリオン；(iii)ここに記載するワクチン；(iv)ここに記載する組成物；または(ｖ)ここに記載する医薬組成物を投与することを含む、方法もまた提供される。
ゲノムにＨＳＶ－２糖タンパク質Ｄコード遺伝子の欠失を有し、脂質二重層にＨＳＶ－１糖タンパク質Ｄを含む組み換え単純ヘルペスウイルス－２(ＨＳＶ－２)のビリオンを産生する方法であって、ＨＳＶ－１糖タンパク質Ｄをコードする異種核酸を含む細胞を、ゲノムにＨＳＶ－２糖タンパク質Ｄコード遺伝子の欠失を有する組み換え単純ヘルペスウイルス－２(ＨＳＶ－２)に、組み換え単純ヘルペスウイルス－２(ＨＳＶ－２)の複製を可能とする条件下で感染させ、該細胞により産生された脂質二重層のＨＳＶ－１糖タンパク質Ｄを含む組み換えＨＳＶ－２ビリオンを回収することを含む、方法もまた提供される。
ゲノムにＨＳＶ－２糖タンパク質Ｄコード遺伝子の欠失を有し、脂質二重層に非ＨＳＶ－２表面糖タンパク質を含む組み換え単純ヘルペスウイルス－２(ＨＳＶ－２)のビリオンを産生する方法であって、非ＨＳＶ－２表面糖タンパク質をコードする異種核酸を含む細胞を、ゲノムにＨＳＶ－２糖タンパク質Ｄコード遺伝子の欠失を有する組み換え単純ヘルペスウイルス－２(ＨＳＶ－２)に、組み換え単純ヘルペスウイルス－２(ＨＳＶ－２)の複製を可能とする条件下で感染させ、該細胞により産生された脂質二重層に非ＨＳＶ－２表面糖タンパク質を含む組み換えＨＳＶ－２ビリオンを回収することを含む、方法もまた提供される。
ＨＳＶ－２糖タンパク質Ｄをコードする配列を含まない以外、ＨＳＶ－２のゲノムと同じ配列を有する組み換え核酸もまた提供される。
対象におけるＨＳＶ－２感染の処置または予防のための、ゲノムにＨＳＶ－２糖タンパク質Ｄコード遺伝子の欠失を有する、単離された、組み換え単純ヘルペスウイルス－２(ＨＳＶ－２)もまた提供される。
対象におけるＨＳＶ－１感染の処置または予防のための、ゲノムにＨＳＶ－２糖タンパク質Ｄコード遺伝子の欠失を有する、単離された、組み換え単純ヘルペスウイルス－２(ＨＳＶ－２)もまた提供される。
対象におけるＨＳＶ－２感染の処置または予防のための、ゲノムにＨＳＶ－２糖タンパク質Ｄコード遺伝子の欠失を有する、単離された、組み換えＨＳＶ－２のビリオンもまた提供される。
対象におけるＨＳＶ－１感染もしくはＨＳＶ－１とＨＳＶ－２の同時感染を処置するまたは対象におけるＨＳＶ－２感染またはＨＳＶ－１とＨＳＶ－２の同時感染が原因の疾患を処置する方法であって、対象におけるＨＳＶ－２感染の処置または対象におけるＨＳＶ－２感染が原因の疾患の処置または対象におけるＨＳＶ－１とＨＳＶ－２の同時感染の処置またはＨＳＶ－１とＨＳＶ－２の同時感染が原因の疾患の処置に有効な量で、対象に(ｉ)ここに記載するウイルス；(ii)ここに記載するビリオン；(iii)ここに記載するワクチン；(iv)ここに記載する組成物；または(ｖ)ここに記載する医薬組成物を投与することを含む、方法もまた提供される。
対象にＨＳＶ－１感染またはＨＳＶ－１とＨＳＶ－２の同時感染に対するワクチン接種をする方法であって、対象にＨＳＶ－１感染またはＨＳＶ－１とＨＳＶ－２の同時感染に対するワクチン接種をするのに有効な量で、対象に(ｉ)ここに記載するウイルス；(ii)ここに記載するビリオン；(iii)ここに記載するワクチン；(iv)ここに記載する組成物；または(ｖ)ここに記載する医薬組成物を投与することを含む、方法もまた提供される。
対象をＨＳＶ－１感染またはＨＳＶ－１とＨＳＶ－２の同時感染に対して免疫化する方法であって、対象をＨＳＶ－１感染またはＨＳＶ－１とＨＳＶ－２の同時感染に対して免疫化するのに有効な量で、対象に(ｉ)ここに記載するウイルス；(ii)ここに記載するビリオン；(iii)ここに記載するワクチン；(iv)ここに記載する組成物；または(ｖ)ここに記載する医薬組成物を投与することを含む、方法もまた提供される。
ゲノムにＨＳＶ－２糖タンパク質Ｄコード遺伝子の欠失を有し、さらに病原体の異種性抗原を含む、単離された、組み換え単純ヘルペスウイルス－２(ＨＳＶ－２)もまた提供される。
対象における抗原性標的に対する抗体依存性細胞介在性細胞障害(ＡＤＣＣ)を誘導する方法であって、対象における抗原性標的に対する抗体依存性細胞介在性細胞障害(ＡＤＣＣ)を誘導するのに有効な量で、対象にゲノムにＨＳＶ－２糖タンパク質Ｄコード遺伝子の欠失を有し、さらに脂質二重層に異種性抗原を含む、単離された、組み換え単純ヘルペスウイルス－２(ＨＳＶ－２)を投与することを含む、方法もまた提供される。
発明の詳細な記載
第一の対象においてＨＳＶ－２および／またはＨＳＶ－１感染に対する免疫応答を誘導する方法であって、ゲノムにＨＳＶ－２糖タンパク質Ｄコード遺伝子全体の欠失を有するＨＳＶ－２で免疫化した妊婦からの産物の一定量を第一の対象に受動伝達させることを含み、ここで、該ＨＳＶ－２は、単純ヘルペスウイルス－１(ＨＳＶ－１)糖タンパク質Ｄを発現する補完的細胞における該ＨＳＶ－２の増殖により該ＨＳＶ－１糖タンパク質Ｄで表現型的に補完され、ここで、該産物はそれにより誘導された抗体を含み、第一の対象におけるＨＳＶ－２および／またはＨＳＶ－１感染に対する免疫応答の誘導に有効であり、ここで、該第一の対象は胎児または新生児である、方法が提供される。
第一の対象においてＨＳＶ－２および／またはＨＳＶ－１感染に対する免疫応答を誘導する方法であって、ゲノムにＨＳＶ－２糖タンパク質Ｄコード遺伝子全体の欠失を有するＨＳＶ－２で免疫化した妊婦からの産物の一定量を第一の対象に受動伝達させることを含み、ここで、該ＨＳＶ－２は、単純ヘルペスウイルス－１(ＨＳＶ－１)糖タンパク質Ｄを発現する補完的細胞における該ＨＳＶ－２の増殖により該ＨＳＶ－１糖タンパク質Ｄで表現型的に補完され、ここで、該産物はそれにより誘導された抗体を含み、第一の対象におけるＨＳＶ－２および／またはＨＳＶ－１感染に対する免疫応答の誘導に有効であり、ここで、該第一の対象は胎児または新生児である、方法が提供される。
ある実施態様において、産物は該妊婦の血清を含む。
ある実施態様において、産物は該妊婦の母乳を含む。
ある実施態様において、第一の対象は胎児である。
ある実施態様において、第一の対象は新生児である。
ある実施態様において、第一の対象は第二の対象から生まれる。
ある実施態様において、妊婦は該胎児を妊娠している。
ある実施態様において、第一の対象および妊婦はヒトである。
ある実施態様において、産物は、妊婦を欠失を有するＨＳＶ－２で免疫化することにより誘導した抗体を含む。ある実施態様において、産物は、ＦｃγＲIV活性化抗体を含む。ある実施態様において、産物は、ＩｇＧ１およびＩｇＧ２抗体を含む。ある実施態様において、産物は、抗ＨＳＶ－１ ＩｇＧまたは抗ＨＳＶ－２ ＩｇＧを含む。
ある実施態様において、方法は、該第一の対象におけるＨＳＶ－２に対する免疫応答を誘導する。
ある実施態様において、方法は、該第一の対象におけるＨＳＶ－１に対する免疫応答を誘導する。
ある実施態様において、産物は、免疫アジュバントをさらに含む。
ある実施態様において、産物は、ゲノムにＨＳＶ－２糖タンパク質Ｄコード遺伝子全体の欠失を有するＨＳＶ－２をさらに含み、ここで、該ＨＳＶ－２は、単純ヘルペスウイルス－１(ＨＳＶ－１)糖タンパク質Ｄを発現する補完的細胞における該ＨＳＶ－２の増殖により該ＨＳＶ－１糖タンパク質Ｄが表現型的に補完されている。
新生児における周産期ＨＳＶ－１および／またはＨＳＶ－２感染を阻止する方法であって、該新生児になる胎児を妊娠している女性にゲノムにＨＳＶ－２糖タンパク質Ｄコード遺伝子全体の欠失を有するＨＳＶ－２の一定量を投与することを含み、ここで、該ＨＳＶ－２は、単純ヘルペスウイルス－１(ＨＳＶ－１)糖タンパク質Ｄを発現する補完的細胞における該ＨＳＶ－２の増殖により該ＨＳＶ－１糖タンパク質Ｄで表現型的に補完され、新生児における周産期ＨＳＶ－１および／またはＨＳＶ－２感染の阻止に有効である、方法が提供される。
母体から新生児へのＨＳＶ－１および／またはＨＳＶ－２ウイルス伝播を阻止する方法であって、母体にゲノムにＨＳＶ－２糖タンパク質Ｄコード遺伝子全体の欠失を有するＨＳＶ－２の一定量を投与することを含み、ここで、該ＨＳＶ－２は単純ヘルペスウイルス－１(ＨＳＶ－１)糖タンパク質Ｄで表現型的に補完されており、母体から新生児へのＨＳＶ－１および／またはＨＳＶ－２ウイルス伝播の阻止に有効である、方法が提供される。
ある実施態様において、母親は、該新生児になる胎児を妊娠している。
ある実施態様において、ＨＳＶ－１感染および／またはＨＳＶ－１ウイルス伝播が阻止される。
ある実施態様において、ＨＳＶ－２感染および／またはＨＳＶ－２ウイルス伝播が阻止される。
ある実施態様において、免疫応答がＨＳＶ－１に対して誘導される。
ある実施態様において、免疫応答がＨＳＶ－２に対して誘導される。
ある実施態様において、補完的細胞はＶＤ６０細胞である。
ある実施態様において、妊婦、母親または第二の対象はＨＳＶ－１について血清陰性、ＨＳＶ－２について血清陰性またはＨＳＶ－１およびＨＳＶ－２両者について血清陰性である。
ある実施態様において、妊婦または母親は、ゲノムにＨＳＶ－２糖タンパク質Ｄコード遺伝子全体の欠失を有するＨＳＶ－２を皮下投与される。
ある実施態様において、妊婦または母親は、ＨＳＶ－２糖タンパク質Ｄコード遺伝子全体の欠失を有するＨＳＶ－２の初期皮下投与後、皮下ブースト用量のゲノムにＨＳＶ－２糖タンパク質Ｄコード遺伝子全体の欠失を有するＨＳＶ－２を投与される。
ゲノムにＨＳＶ－２糖タンパク質Ｄコード遺伝子の欠失を有する単離された、組み換え単純ヘルペスウイルス－２(ＨＳＶ－２)が提供される。
ある実施態様において、ＨＳＶ－２糖タンパク質Ｄは配列番号１に示すアミノ酸配列を含む。
MGRLTSGVGTAALLVVAVGLRVVCAKYALADPSLKMADPNRFRGKNLPVＬＤQLTDPPGVKRVYHIQPSLEDPFQPPSIPITVYYAVLERACRSVLLHAPSEAPQIVRGASDEARKHTYNLTIAWYRMGDNCAIPITVMEYTECPYNKSLGVCPIRTQPRWSYYDSFSAVSEDNLGFLMHAPAFETAGTYLRLVKINDWTEITQFILEHRARASCKYALPLRIPPAACLTSKAYQQGVTVDSIGMLPRFIPENQRTVALYSLKIAGWHGPKPPYTSTLLPPELSDTTNATQPELVPEDPEDSALLEDPAGTVSSQIPPNWHIPSIQDVAPHHAPAAPSNPGLIIGALAGSTLAVLVIGGIAFWVRRRAQMAPKRLRLPHIRDDDAPPSHQPLFY(ＨＳＶ－２対照株ＨＧ５２)
MGRLTSGVGTAALLVVAVGLRVVCAKYALADPSLKMADPNRFRGKNLPVＬＤQLTDPPGVKRVYHIQPSLEDPFQPPSIPITVYYAVLERACRSVLLHAPSEAPQIVRGASDEARKHTYNLTIAWYRMGDNCAIPITVMEYTECPYNKSLGVCPIRTQPRWSYYDSFSAVSEDNLGFLMHAPAFETAGTYLRLVKINDWTEITQFILEHRARASCKYALPLRIPPAACLTSKAYQQGVTVDSIGMLPRFIPENQRTVALYSLKIAGWHGPKPPYTSTLLPPELSDTTNATQPELVPEDPEDSALLEDPAGTVSSQIPPNWHIPSIQDVAPHHAPAAPSNPGLIIGALAGSTLAVLVIGGIAFWVRRRAQMAPKRLRLPHIRDDDAPPSHQPLFY(ＨＳＶ－２対照株ＨＧ５２)
ある実施態様において、単離された、組み換えＨＳＶ－２は、脂質二重層に単純ヘルペスウイルス－１(ＨＳＶ－１)糖タンパク質Ｄをさらに含む。
ある実施態様において、ＨＳＶ－１糖タンパク質Ｄは配列番号２に示すアミノ酸配列を含む。
MGGAAARLGAVILFVVIVGLHGVRGKYALADASLKMADPNRFRGKDLPVＬＤQLTDPPGVRRVYHIQAGLPDPFQPPSLPITVYYAVLERACRSVLLNAPSEAPQIVRGASEDVRKQPYNLTIAWFRMGGNCAIPITVMEYTECSYNKSLGACPIRTQPRWNYYDSFSAVSEDNLGFLMHAPAFETAGTYLRLVKINDWTEITQFILEHRAKGSCKYALPLRIPPSACLSPQAYQQGVTVDSIGMLPRFIPENQRTVAVYSLKIAGWHGPKAPYTSTLLPPELSETPNATQPELAPEDPEDSALLEDPVGTVAPQIPPNWHIPSIQDAATPYHPPATPNNMGLIAGAVGGSLLAALVICGIVYWMRRRTQKAPKRIRLPHIREDDQPSSHQPLFY(ＨＳＶ－１対照株Ｆ)
MGGAAARLGAVILFVVIVGLHGVRGKYALADASLKMADPNRFRGKDLPVＬＤQLTDPPGVRRVYHIQAGLPDPFQPPSLPITVYYAVLERACRSVLLNAPSEAPQIVRGASEDVRKQPYNLTIAWFRMGGNCAIPITVMEYTECSYNKSLGACPIRTQPRWNYYDSFSAVSEDNLGFLMHAPAFETAGTYLRLVKINDWTEITQFILEHRAKGSCKYALPLRIPPSACLSPQAYQQGVTVDSIGMLPRFIPENQRTVAVYSLKIAGWHGPKAPYTSTLLPPELSETPNATQPELAPEDPEDSALLEDPVGTVAPQIPPNWHIPSIQDAATPYHPPATPNNMGLIAGAVGGSLLAALVICGIVYWMRRRTQKAPKRIRLPHIREDDQPSSHQPLFY(ＨＳＶ－１対照株Ｆ)
ある実施態様において、ＨＳＶ－２糖タンパク質Ｄコード遺伝子はＨＳＶ－２ ＵＳ６遺伝子である。(例えば、ＨＳＶ－２ゲノムおよびＵＳ６遺伝子について、全体として引用により本明細書に包含させる、Dolan et al. J Virol. 1998 March; 72(3): 2010-2021. (PMCID: PMC109494) 「The Genome Sequence of Herpes Simplex Virus Type 2」参照)。
ある実施態様において、ＨＳＶ－２糖タンパク質Ｄコード遺伝子が欠失しているＨＳＶ－２は、次のGenbank表示の配列の一つのゲノムを有する(欠失前)ＨＳＶ－２である：ＨＳＶ－２(Ｇ)(KU310668)、ＨＳＶ－２(４６７４)(KU310667)、Ｂ３ｘ１.１(KU310657)、Ｂ３ｘ１.２(KU310658)、Ｂ３ｘ１.３(KU310659)、Ｂ３ｘ１.４(KU310660)、Ｂ３ｘ１.５(KU310661)、Ｂ３ｘ２.１(KU310662)、Ｂ３ｘ２.２(KU310663)、Ｂ３ｘ２.３(KU310664)、Ｂ３ｘ２.４(KU310665)、Ｂ３ｘ２.５(KU310666)。
ゲノムにＨＳＶ－２糖タンパク質Ｄコード遺伝子の欠失を有する、単離された、組み換えＨＳＶ－２のビリオンもまた提供される。
ある実施態様において、ビリオンは脂質二重層にＨＳＶ－１糖タンパク質Ｄをさらに含む。ある実施態様において、ＨＳＶ－２糖タンパク質Ｄコード遺伝子はＨＳＶ－２ ＵＳ６遺伝子である。
ある実施態様において、ウイルスは脂質二重層にＨＳＶ－１糖タンパク質Ｄをさらに含む。ある実施態様において、ＨＳＶ－２糖タンパク質Ｄコード遺伝子はＨＳＶ－２ ＵＳ６遺伝子である。
ＨＳＶ－２ ＵＳ６遺伝子を含まない組み換えＨＳＶ－２ゲノムを含む、単離細胞が提供される。
ある実施態様において、組み換えＨＳＶ－２ゲノムは、欠失されたＨＳＶ－２糖タンパク質Ｄ遺伝子を有していたことにより、組み換えである。
ある実施態様において、細胞は、組み換えＨＳＶ－２ゲノムによりコードされないＨＳＶ１または２糖タンパク質の発現物を提供する、補完的細胞である。ある実施態様において、補完的細胞は、ＨＳＶ－１糖タンパク質Ｄをコードする異種核酸を含む。ある実施態様において、細胞は、その膜上にＨＳＶ－１糖タンパク質Ｄを発現する。細胞のある実施態様において、ＨＳＶ－１糖タンパク質Ｄは異種核酸によりコードされ、その異種核酸はＨＳＶ－１糖タンパク質Ｄ遺伝子またはＨＳＶ－１糖タンパク質Ｄ遺伝子と同一の配列を有する核酸である。
ここに記載する組み換えＨＳＶ－２ウイルスまたはここに記載するビリオンを含むワクチン組成物もまた提供される。ある実施態様において、ワクチンは免疫アジュバントを含む。ある実施態様において、ワクチンは免疫アジュバントを含まない。組み換えＨＳＶ－２を含むここに記載するワクチン、組成物または医薬組成物の実施態様において、ＨＳＶ－２は生存している。
ここに記載する組み換えＨＳＶ－２ウイルスまたはここに記載するビリオンを含む組成物であって、ここで、該ウイルスまたはビリオンのゲノムは少なくとも第二遺伝子の欠失を含み、ここで、該第二遺伝子はＨＳＶ－２ウイルス複製または病原性に必要である、組成物も提供される。
医薬組成物はここに記載する組み換えＨＳＶ－２ウイルスまたはここに記載するビリオンおよび薬学的に許容される担体を含む。
ある実施態様において、組成物または医薬組成物またはワクチンは、ヒト対象への皮下投与に適するように製剤化される。ある実施態様において、組成物または医薬組成物またはワクチンは、ヒト対象への腟内投与に適するように製剤化される。ある実施態様において、組成物または医薬組成物またはワクチンは、ヒト対象への筋肉内、鼻腔内または粘膜投与に適するように製剤化される。
対象における免疫応答を誘導する方法であって、対象における免疫応答の誘導に有効な量で、対象に(ｉ)ここに記載する組み換えＨＳＶ－２ウイルス；(ii)ここに記載するそのビリオン；(iii)ここに記載するワクチン；(iv)ここに記載する組成物；または(ｖ)ここに記載する医薬組成物を投与することを含む、方法も提供される。
対象におけるＨＳＶ－２感染を処置するまたは対象におけるＨＳＶ－１、ＨＳＶ－２または同時感染が原因の疾患を処置する方法であって、対象におけるＨＳＶ－１、ＨＳＶ－２もしくは同時感染の処置またはＨＳＶ－１、ＨＳＶ－２もしくは同時感染が原因の疾患の処置に有効な量で、対象に(ｉ)ここに記載する組み換えＨＳＶ－２ウイルス；(ii)ここに記載するそのビリオン；(iii)ここに記載するワクチン；(iv)ここに記載する組成物；または(ｖ)ここに記載する医薬組成物を投与することを含む、方法も提供される。ある実施態様において、方法は、ＨＳＶ－１、ＨＳＶ－２または同時感染が原因のＨＳＶ－１またはＨＳＶ－２病態の処置を含む。方法の実施態様において、ＨＳＶ－１、ＨＳＶ－２または同時感染が原因の疾患は性器潰瘍である。方法の実施態様において、ＨＳＶ－１、ＨＳＶ－２または同時感染が原因の疾患は、ヘルペス、口腔ヘルペス、ヘルペス性ひょう疽、性器ヘルペス、ヘルペス性湿疹、闘技ヘルペス、ＨＳＶ角膜炎、ＨＳＶ網膜炎、ＨＳＶ脳炎またはＨＳＶ髄膜炎である。
ここでのＨＳＶ－１、ＨＳＶ－２または同時感染(すなわちＨＳＶ－１およびＨＳＶ－２両者の感染)の処置ワクチン接種に関する方法の実施態様において、ＨＳＶ－１感染の処置、ＨＳＶ－２感染の処置、同時感染の処置、ＨＳＶ－１感染に対するワクチン接種、ＨＳＶ－２感染に対するワクチン接種および同時感染に対するワクチン接種の別々の、個々の実施態様が、各々提供される。
対象にＨＳＶ－１、ＨＳＶ－２または同時感染に対するワクチン接種をする方法であって、対象にＨＳＶ－１、ＨＳＶ－２または同時感染に対するワクチン接種をするのに有効な量で、対象に(ｉ)ここに記載する組み換えＨＳＶ－２ウイルス；(ii)ここに記載するそのビリオン；(iii)ここに記載するワクチン；(iv)ここに記載する組成物；または(ｖ)ここに記載する医薬組成物を投与することを含む、方法もまた提供される。
対象をＨＳＶ－１、ＨＳＶ－２または同時感染に対して免疫化する方法であって、対象をＨＳＶ－１、ＨＳＶ－２または同時感染に対して免疫化するのに有効な量で、対象に(ｉ)ここに記載する組み換えＨＳＶ－２ウイルス；(ii)ここに記載するそのビリオン；(iii)ここに記載するワクチン；(iv)ここに記載する組成物；または(ｖ)ここに記載する医薬組成物を投与することを含む、方法もまた提供される。
方法の実施態様において、対象は皮下または腟内初回抗原刺激量を投与され、第二用量を皮下または腟内投与される。方法の実施態様において、対象は、抗ＨＳＶ抗体およびＴ細胞を誘導するために多くの皮下または腟内プライミング刺激量を多数回投与される
ゲノムにＨＳＶ－２糖タンパク質Ｄコード遺伝子の欠失を有し、脂質二重層にＨＳＶ－１またはＨＳＶ－２糖タンパク質Ｄを含む組み換え単純ヘルペスウイルス－２(ＨＳＶ－２)のビリオンを産生する方法であって、ＨＳＶ－１またはＨＳＶ－２糖タンパク質Ｄをコードする異種核酸を含む細胞を、ゲノムにＨＳＶ－２糖タンパク質Ｄコード遺伝子の欠失を有する組み換え単純ヘルペスウイルス－２(ＨＳＶ－２)に、組み換え単純ヘルペスウイルス－２(ＨＳＶ－２)の複製を可能とする条件下で感染させ、該細胞により産生されたＨＳＶ－２ビリオンを回収することを含む、方法もまた提供される。
ある実施態様において、細胞はその膜上にＨＳＶ－１またはＨＳＶ－２糖タンパク質Ｄを発現する。
ＨＳＶ－２糖タンパク質Ｄをコードする配列を含まない以外、野生型ＨＳＶ－２のゲノムと同じ配列を有する組み換え核酸もまた提供される。ある実施態様において、組み換え核酸はＤＮＡである。ある実施態様において、組み換え核酸はＲＮＡである。
対象におけるＨＳＶ－１、ＨＳＶ－２または同時感染の処置または予防のためのゲノムにＨＳＶ－２糖タンパク質Ｄコード遺伝子の欠失を有する単離された、組み換え単純ヘルペスウイルス－２(ＨＳＶ－２)もまた提供される。ある実施態様において、単離された、組み換えＨＳＶ－２は、その脂質二重層に単純ヘルペスウイルス－１(ＨＳＶ－１)または単純ヘルペスウイルス－２(ＨＳＶ－２)糖タンパク質Ｄをさらに含む。単離された、組み換えＨＳＶ－２の実施態様において、ＨＳＶ－２糖タンパク質Ｄコード遺伝子はＨＳＶ－２ ＵＳ６遺伝子である。
対象におけるＨＳＶ－１、ＨＳＶ－２または同時感染の処置または予防のためのゲノムにＨＳＶ－２糖タンパク質Ｄコード遺伝子の欠失を有する単離された、組み換えＨＳＶ－２のビリオンもまた提供される。ある実施態様において、ビリオンは、その脂質二重層にＨＳＶ－１またはＨＳＶ－２糖タンパク質Ｄをさらに含む。ある実施態様において、ＨＳＶ－２糖タンパク質Ｄコード遺伝子はＨＳＶ－２ ＵＳ６遺伝子である。
記載するウイルスまたはビリオンのある実施態様において、ＨＳＶ－１、ＨＳＶ－２または同時感染は性器潰瘍を引き起こす。
ゲノムにＨＳＶ－２糖タンパク質Ｄコード遺伝子の欠失を有する、単離された、組み換え単純ヘルペスウイルス－２(ＨＳＶ－２)が提供される。
ある実施態様において、単離された、組み換えＨＳＶ－２は、単純ヘルペスウイルス－１(ＨＳＶ－１)糖タンパク質Ｄである表面糖タンパク質をその脂質二重層にさらに含む。ある実施態様において、単離された、組み換えＨＳＶ－２は、その脂質二重層に非ＨＳＶ－２ウイルス表面糖タンパク質をさらに含む。ある実施態様において、単離された、組み換えＨＳＶ－２は、その脂質二重層に細菌表面糖タンパク質をさらに含む。ある実施態様において、単離された、組み換えＨＳＶ－２は、その脂質二重層に寄生虫表面糖タンパク質をさらに含み、ここで、該寄生虫は、哺乳動物の寄生虫である。
ある実施態様において、ＨＳＶ－２糖タンパク質Ｄコード遺伝子はＨＳＶ－２ ＵＳ６遺伝子である。ある実施態様において、表面糖タンパク質は、組み換えＨＳＶ－２のゲノムに挿入されている導入遺伝子によりコードされる。ある実施態様において、表面糖タンパク質は、その脂質二重層に細胞をＨＳＶ－２糖タンパク質Ｄコード遺伝子の欠失を有する組み換えＨＳＶ－２で感染させることにより存在し、ここで、該細胞は、その細胞膜上に該表面糖タンパク質を発現するようにトランスフェクトされるかまたはされており、ここで、脂質二重層に存在する該表面糖タンパク質を含む該組み換えＨＳＶ－２は、該細胞から産生される。ある実施態様において、ウイルス糖タンパク質は、ＨＩＶ、エンテロウイルス、ＲＳＶ、インフルエンザウイルス、パラインフルエンザウイルス、豚コロナ呼吸器ウイルス、狂犬病ウイルス、ラッサウイルス、ブニヤウイルス、ＣＭＶまたはフィロウイルスからである。ある実施態様において、糖タンパク質はＨＩＶ ｇｐ１２０である。ある実施態様において、フィロウイルスはエボラウイルスである。ある実施態様において、ウイルスは、ＨＩＶ、結核菌(M. tuberculosis)、クラミジア、マイコバクテリウム・ウルセランス(Mycobacterium ulcerans)、マイコバクテリウム・マリヌム(M. marinum)、ライ菌(M. leprae)、マイコバクテリウム・アブセサス(M. absenscens)、淋菌(Neisseria gonnorhea)またはトレポネーマである。ある実施態様において、トレポネーマは、梅毒トレポネーマ(Treponeme palidum)である。
ゲノムにＨＳＶ－２糖タンパク質Ｄコード遺伝子の欠失を有する、単離された、組み換えＨＳＶ－２のビリオンもまた提供される。
ある実施態様において、単離された、組み換えＨＳＶ－２のビリオンは、単純ヘルペスウイルス－１(ＨＳＶ－１)糖タンパク質Ｄである表面糖タンパク質をその脂質二重層にさらに含む。ある実施態様において、単離された、組み換えＨＳＶ－２のビリオンは、その脂質二重層に非ＨＳＶ－２ウイルス表面糖タンパク質をさらに含む。ある実施態様において、単離された、組み換えＨＳＶ－２のビリオンは、その脂質二重層に細菌表面糖タンパク質をさらに含む。ある実施態様において、単離された、組み換えＨＳＶ－２のビリオンは、その脂質二重層に寄生虫表面糖タンパク質をさらに含み、ここで、該寄生虫は、哺乳動物の寄生虫である。ある実施態様において、ＨＳＶ－２糖タンパク質Ｄコード遺伝子はＨＳＶ－２ ＵＳ６遺伝子である。ある実施態様において、表面糖タンパク質は、ビリオンの組み換えＨＳＶ－２のゲノムに挿入されている導入遺伝子によりコードされる。ある実施態様において、表面糖タンパク質は、その脂質二重層に細胞をＨＳＶ－２糖タンパク質Ｄコード遺伝子の欠失を有する組み換えＨＳＶ－２で感染させることにより形成され、ここで、該細胞は、その細胞膜上に該表面糖タンパク質を発現するようにトランスフェクトされるかまたはされており、ここで、脂質二重層に存在する該表面糖タンパク質を含む該組み換えＨＳＶ－２は、該細胞から産生される。ある実施態様において、ビリオンは、そのようなものから回収されている。ある実施態様において、ウイルス糖タンパク質は、ＨＩＶ、エンテロウイルス、ＲＳＶ、インフルエンザウイルス、パラインフルエンザウイルス、豚コロナ呼吸器ウイルス、狂犬病ウイルス、ラッサウイルス、ブニヤウイルス、ＣＭＶまたはフィロウイルスからである。ある実施態様において、糖タンパク質はＨＩＶ ｇｐ１２０である。ある実施態様において、フィロウイルスはエボラウイルスである。ある実施態様において、ウイルスは、ＨＩＶ、結核菌、クラミジア、マイコバクテリウム・ウルセランス、マイコバクテリウム・マリヌム、ライ菌、マイコバクテリウム・アブセサス、淋菌またはトレポネーマである。ある実施態様において、トレポネーマは梅毒トレポネーマである。
ここに記載するウイルスまたはここに記載するビリオンを含む単離細胞もまた提供され、ここで、該細胞はヒトには存在しない。細胞のある実施態様において、細胞は、ＨＳＶ－１糖タンパク質Ｄをコードする異種核酸を含む。細胞のある実施態様において、細胞は、その膜上にＨＳＶ－１糖タンパク質Ｄを発現する。
細胞のある実施態様において、ＨＳＶ－１糖タンパク質Ｄは異種核酸によりコードされ、その異種核酸はＨＳＶ－１糖タンパク質Ｄ遺伝子またはＨＳＶ－１糖タンパク質Ｄ遺伝子と同一の配列を有する核酸である。
ワクチン組成物はここに記載するウイルスまたはここに記載するビリオンを含む。ワクチンの実施態様において組成物、ワクチン組成物は免疫アジュバントを含む。
ここに記載するウイルスまたはここに記載するビリオンを含む組成物もまた提供され、ここで、該ウイルスまたはビリオンのゲノムは少なくとも第二遺伝子の欠失を含み、ここで、該第二遺伝子はＨＳＶ－２ウイルス複製に必要である。ある実施態様において、組成物は、免疫応答が誘導されるように、該ウイルスまたはビリオンが先に導入されている哺乳動物からの血清を含むかまたは当該血清由来である。
ここに記載するウイルスまたはここに記載するビリオンおよび薬学的に許容される担体を含む医薬組成物もまた提供される。
対象における免疫応答を誘導する方法であって、対象における免疫応答を誘導するのに有効な量で、対象に(ｉ)ここに記載するウイルス；(ii)ここに記載するビリオン；(iii)ここに記載するワクチン；(iv)ここに記載する組成物；または(ｖ)ここに記載する医薬組成物を投与することを含む、方法もまた提供される。
対象におけるＨＳＶ－２感染を処置するまたは対象におけるＨＳＶ－２感染が原因の疾患を処置する方法であって、対象におけるＨＳＶ－２感染の処置または対象におけるＨＳＶ－２感染が原因の疾患の処置に有効な量で、対象に(ｉ)ここに記載するウイルス；(ii)ここに記載するビリオン；(iii)ここに記載するワクチン；(iv)ここに記載する組成物；または(ｖ)ここに記載する医薬組成物を投与することを含む方法もまた提供される。
対象にＨＳＶ－２感染に対するワクチン接種をする方法であって、対象にＨＳＶ－２感染に対するワクチン接種をするのに有効な量で、対象に(ｉ)ここに記載するウイルス；(ii)ここに記載するビリオン；(iii)ここに記載するワクチン；(iv)ここに記載する組成物；または(ｖ)ここに記載する医薬組成物を投与することを含む方法もまた提供される。
対象をＨＳＶ－２感染に対して免疫化する方法であって、対象をＨＳＶ－２感染に対して免疫化するのに有効な量で、対象に(ｉ)ここに記載するウイルス；(ii)ここに記載するビリオン；(iii)ここに記載するワクチン；(iv)ここに記載する組成物；または(ｖ)ここに記載する医薬組成物を投与することを含む方法もまた提供される。
ＨＳＶ－２およびＨＳＶ－１疾患は当分野で知られ、ここにも記載される。ＨＳＶ－２およびＨＳＶ－１疾患の処置および予防の両者が各々別々に包含される。また、ＨＳＶ－２とＨＳＶ－１の同時感染の処置または予防が包含される。予防は、未処置対象と比較して、ここに記載するウイルス、ビリオン、ワクチンまたは組成物で処置された対象における関連する疾患または感染の発症の程度の改善を意味すると理解される。
ゲノムにＨＳＶ－２糖タンパク質Ｄコード遺伝子の欠失を有し、脂質二重層にＨＳＶ－１糖タンパク質Ｄを含む組み換え単純ヘルペスウイルス－２(ＨＳＶ－２)のビリオンを産生する方法であって、ＨＳＶ－１糖タンパク質Ｄをコードする異種核酸を含む細胞を、ゲノムにＨＳＶ－２糖タンパク質Ｄコード遺伝子の欠失を有する組み換え単純ヘルペスウイルス－２(ＨＳＶ－２)に、組み換え単純ヘルペスウイルス－２(ＨＳＶ－２)の複製を可能とする条件下で感染させ、該細胞により産生された脂質二重層のＨＳＶ－１糖タンパク質Ｄを含む組み換えＨＳＶ－２ビリオンを回収することを含む、方法もまた提供される。
ゲノムにＨＳＶ－２糖タンパク質Ｄコード遺伝子の欠失を有し、脂質二重層に非ＨＳＶ－２表面糖タンパク質を含む組み換え単純ヘルペスウイルス－２(ＨＳＶ－２)のビリオンを産生する方法であって、非ＨＳＶ－２表面糖タンパク質をコードする異種核酸を含む細胞を、ゲノムにＨＳＶ－２糖タンパク質Ｄコード遺伝子の欠失を有する組み換え単純ヘルペスウイルス－２(ＨＳＶ－２)に、組み換え単純ヘルペスウイルス－２(ＨＳＶ－２)の複製を可能とする条件下で感染させ、該細胞により産生された脂質二重層に非ＨＳＶ－２表面糖タンパク質を含む組み換えＨＳＶ－２ビリオンを回収することを含む、方法もまた提供される。
ＨＳＶ－２糖タンパク質Ｄをコードする配列を含まない以外、ＨＳＶ－２のゲノムと同じ配列を有する組み換え核酸もまた提供される。
対象におけるＨＳＶ－２感染の処置または予防のためのゲノムにＨＳＶ－２糖タンパク質Ｄコード遺伝子の欠失を有する単離された、組み換え単純ヘルペスウイルス－２(ＨＳＶ－２)もまた提供される。
対象におけるＨＳＶ－１感染の処置または予防のための、ゲノムにＨＳＶ－２糖タンパク質Ｄコード遺伝子の欠失を有する、単離された、組み換え単純ヘルペスウイルス－２(ＨＳＶ－２)もまた提供される。
対象におけるＨＳＶ－２感染の処置または予防のための、ゲノムにＨＳＶ－２糖タンパク質Ｄコード遺伝子の欠失を有する、単離された、組み換えＨＳＶ－２のビリオンもまた提供される。
対象におけるＨＳＶ－１感染もしくはＨＳＶ－１とＨＳＶ－２の同時感染を処置するまたは対象におけるＨＳＶ－２感染またはＨＳＶ－１とＨＳＶ－２の同時感染が原因の疾患を処置する方法であって、対象におけるＨＳＶ－２感染の処置または対象におけるＨＳＶ－２感染が原因の疾患の処置または対象におけるＨＳＶ－１とＨＳＶ－２の同時感染の処置またはＨＳＶ－１とＨＳＶ－２の同時感染が原因の疾患の処置に有効な量で、対象に(ｉ)ここに記載するウイルス；(ii)ここに記載するビリオン；(iii)ここに記載するワクチン；(iv)ここに記載する組成物；または(ｖ)ここに記載する医薬組成物を投与することを含む、方法もまた提供される。
対象にＨＳＶ－１感染またはＨＳＶ－１とＨＳＶ－２の同時感染に対するワクチン接種をする方法であって、対象にＨＳＶ－１感染またはＨＳＶ－１とＨＳＶ－２の同時感染に対するワクチン接種をするのに有効な量で、対象に(ｉ)ここに記載するウイルス；(ii)ここに記載するビリオン；(iii)ここに記載するワクチン；(iv)ここに記載する組成物；または(ｖ)ここに記載する医薬組成物を投与することを含む、方法もまた提供される。
対象をＨＳＶ－１感染またはＨＳＶ－１とＨＳＶ－２の同時感染に対して免疫化する方法であって、対象をＨＳＶ－１感染またはＨＳＶ－１とＨＳＶ－２の同時感染に対して免疫化するのに有効な量で、対象に(ｉ)ここに記載するウイルス；(ii)ここに記載するビリオン；(iii)ここに記載するワクチン；(iv)ここに記載する組成物；または(ｖ)ここに記載する医薬組成物を投与することを含む、方法もまた提供される。
免疫化、ワクチン接種または免疫応答誘導のためのここでの方法の実施態様において、ビリオンもしくはウイルスまたはそれにより誘導された抗体もしくは免疫因子の受動伝達は、ある対象から他の対象に影響を与え得る。関連産物を、ある対象から得た後、第二の対象への投与前に処理し得る。ここに記載する本発明の好ましい実施態様において、対象は哺乳動物対象である。ある実施態様において、哺乳動物対象はヒト対象である。
第一の対象においてＨＳＶ－２および／またはＨＳＶ－１感染に対する免疫応答を誘導する方法であって、対象に、ゲノムにＨＳＶ－２糖タンパク質Ｄコード遺伝子全体の欠失を有するＨＳＶ－２で免疫化した第二の対象からの産物の一定量を受動伝達することを含み、ここで、該ＨＳＶ－２は、単純ヘルペスウイルス－１(ＨＳＶ－１)糖タンパク質Ｄを発現する補完的細胞における該ＨＳＶ－２の増殖により該ＨＳＶ－１糖タンパク質Ｄで表現型的に補完され、ここで、該産物は、ＨＳＶ－２またはそれにより誘導された抗体もしくは免疫因子を含み、ＨＳＶ－２および／またはＨＳＶ－１感染に対する免疫応答の誘導に有効である、方法が提供される。
ある実施態様において、産物は、第二の対象の血清を含む。
ある実施態様において、第二の対象は妊婦である。
ある実施態様において、第一の対象は、胎児または新生児である。ある実施態様において、第二の対象は、第一の対象を妊娠している。
ある実施態様において、産物は、第二の対象のＨＳＶ－２での免疫化により誘導された抗体を含む。
ゲノムにＨＳＶ－２糖タンパク質Ｄコード遺伝子の欠失を有し、さらに病原体の異種性抗原を含む、単離された、組み換え単純ヘルペスウイルス－２(ＨＳＶ－２)もまた提供される。ある実施態様において、異種性抗原は、タンパク質、ペプチド、ポリペプチドまたは糖タンパク質である。ある実施態様において、異種性抗原は、ＨＳＶ－２に対して異種性抗原であるが、関連する「病原体」上または内に見られる抗原である。病原体、ウイルスおよび細菌は、ここに記載される。ある実施態様において、病原体は、哺乳動物の細菌病原体または哺乳動物のウイルス病原体である。ある実施態様において、抗原または病原体をコードする導入遺伝子は、病原体から実際に採取するかまたは物理的に取りだされないが、それにも関わらず、病原体抗原またはコード化核酸配列と同じ配列を有する。ある実施態様において、単離された、組み換えＨＳＶ－２は、その脂質二重層に病原体の異種性抗原を含む。単離された、組み換えＨＳＶ－２の実施態様において、病原体は、細菌またはウイルスである。ある実施態様において、病原体は、哺乳動物の寄生虫である。ある実施態様において、ＨＳＶ－２糖タンパク質Ｄコード遺伝子はＨＳＶ－２ ＵＳ６遺伝子である。ある実施態様において、単離された、組み換えＨＳＶ－２、異種性抗原は、組み換えＨＳＶ－２のゲノムに挿入されている導入遺伝子によりコードされる。
対象における抗原性標的に対する抗体依存性細胞介在性細胞障害(ＡＤＣＣ)を誘導する方法であって、対象における抗原性標的に対する抗体依存性細胞介在性細胞障害(ＡＤＣＣ)を誘導するのに有効な量で、対象にゲノムにＨＳＶ－２糖タンパク質Ｄコード遺伝子の欠失を有し、さらに脂質二重層に異種性抗原を含む、単離された、組み換え単純ヘルペスウイルス－２(ＨＳＶ－２)を投与することを含む、方法もまた提供される。
適切な導入遺伝子を発現する組み換えＨＳＶ－２ ΔｇＤ－／＋ ｇＤ－／＋は、病原体による皮膚または粘膜感染に対して保護する、抗体および細胞性免疫応答を選択的に誘導する。
ある実施態様において、異種性抗原は表面抗原である。
ある実施態様において、導入遺伝子は、ＨＩＶ、結核菌、クラミジア、マイコバクテリウム・ウルセランス、マイコバクテリウム・マリヌム、ライ菌、マイコバクテリウム・アブセサス、淋菌またはトレポネーマからの抗原をコードする。ある実施態様において、トレポネーマは梅毒トレポネーマである。ある実施態様において、導入遺伝子は、結核菌バイオフィルムコード遺伝子である。ある実施態様において、導入遺伝子は、ＨＩＶ ｇｐ１２０コード遺伝子である。
ある実施態様において、異種性抗原は、抗原性標的の表面抗原である。ある実施態様において、異種性抗原は、寄生虫抗原である。ある実施態様において、異種性抗原は、細菌抗原またはウイルス抗原である。
ある実施態様において、抗原性標的はウイルスであり、ラッサウイルス、ヒト免疫不全ウイルス、ＲＳＶ、エンテロウイルス、インフルエンザウイルス、パラインフルエンザウイルス、豚コロナ呼吸器ウイルス、ラッサウイルス、ブニヤウイルスまたはフィロウイルスである。
ある実施態様において、抗原性標的は細菌であり、結核菌、マイコバクテリウム・ウルセランス、マイコバクテリウム・マリヌム、ライ菌、マイコバクテリウム・アブセサス、クラミジア・トラコマチス、淋菌または梅毒トレポネーマである。
ある実施態様において、単離された、組み換えＨＳＶ－２導入遺伝子は結核菌バイオフィルムコード遺伝子であるか、または、該導入遺伝子はＨＩＶ ｇｐ１２０コード遺伝子である。
ここに記載する方法の好ましい実施態様において、対象はヒトである。ここに記載する方法の実施態様において、対象は、ＨＳＶ－１、ＨＳＶ－２または同時感染にまだ感染していない。ここに記載する方法の実施態様において、対象は、ＨＳＶ－１、ＨＳＶ－２または同時感染に感染している。
ここに記載する同時感染は、ＨＳＶ－１とＨＳＶ－２の同時感染を意味する。
ここに記載する種々の要素の組み合わせは、ここで特に断らない限りまたは文脈に明らかに反しない限り、本発明の範囲内である。
本発明は、下記実験の詳細からより良く理解される。しかしながら、当業者は、記載される具体的方法および結果が、その後の特許請求の範囲により十分に記載される本発明の単なる実例であることを容易に認識する。
実験の詳細
実施例１
ここで、ＨＳＶ－２のｇＤ(ＵＳ６)遺伝子の遺伝子操作した欠失変異体およびマウス感染モデルにおける腟内ＨＳＶ－２曝露に対して評価したその安全性、免疫原性およびワクチン有効性を開示する。ｇＤ遺伝子を緑色蛍光タンパク質(ｇｆｐ)をコードするＤＮＡフラグメントで置き換え、ＨＳＶ－１ ｇＤを発現するＶｅｒｏ細胞(ＶＤ６０細胞)をこの構築物でトランスフェクトし、緑色プラークを形成する相同組み換えウイルスについてスクリーニングした。分子分析は、補完的ＶＤ６０細胞において高力価まで複製するが、非補完的細胞で増殖させたとき、非感染性である、正確な組み換え体が構築されていることを確認した。野生型またはＳＣＩＤマウスの補完ｇＤ－ヌルウイルス(遺伝子型でｇＤ欠失しているが、ＶＤ６０細胞での増殖により表現型的に補完されているウイルスについて、ここで、ＨＳＶ－２ ΔｇＤ－／＋と命名する)への１０７pfu／マウスでの腟内曝露により病原性がないことが確認され、一方、親野生型ウイルスは、１０４pfu／マウスの低用量でも１００％致死性であった。さらにＨＳＶ－２ ΔｇＤ－／＋でのマウスの免疫化は、ＨＳＶ－２の臨床単離株への腟内曝露に対する完全保護をもたらした。ＨＳＶ－２ ΔｇＤ－／＋により誘導されたロバストな液性および細胞性免疫が測定され、ｇＤがインビボでの増殖性感染に必要であり、この必須糖タンパク質を欠く弱毒化株は、ＨＳＶ－２に対する保護免疫を誘導すると結論付けられる。故に、ＨＳＶ－２ ΔｇＤ－／＋は、性器ヘルペスの予防または処置のための有望なワクチンである。
実施例１
ここで、ＨＳＶ－２のｇＤ(ＵＳ６)遺伝子の遺伝子操作した欠失変異体およびマウス感染モデルにおける腟内ＨＳＶ－２曝露に対して評価したその安全性、免疫原性およびワクチン有効性を開示する。ｇＤ遺伝子を緑色蛍光タンパク質(ｇｆｐ)をコードするＤＮＡフラグメントで置き換え、ＨＳＶ－１ ｇＤを発現するＶｅｒｏ細胞(ＶＤ６０細胞)をこの構築物でトランスフェクトし、緑色プラークを形成する相同組み換えウイルスについてスクリーニングした。分子分析は、補完的ＶＤ６０細胞において高力価まで複製するが、非補完的細胞で増殖させたとき、非感染性である、正確な組み換え体が構築されていることを確認した。野生型またはＳＣＩＤマウスの補完ｇＤ－ヌルウイルス(遺伝子型でｇＤ欠失しているが、ＶＤ６０細胞での増殖により表現型的に補完されているウイルスについて、ここで、ＨＳＶ－２ ΔｇＤ－／＋と命名する)への１０７pfu／マウスでの腟内曝露により病原性がないことが確認され、一方、親野生型ウイルスは、１０４pfu／マウスの低用量でも１００％致死性であった。さらにＨＳＶ－２ ΔｇＤ－／＋でのマウスの免疫化は、ＨＳＶ－２の臨床単離株への腟内曝露に対する完全保護をもたらした。ＨＳＶ－２ ΔｇＤ－／＋により誘導されたロバストな液性および細胞性免疫が測定され、ｇＤがインビボでの増殖性感染に必要であり、この必須糖タンパク質を欠く弱毒化株は、ＨＳＶ－２に対する保護免疫を誘導すると結論付けられる。故に、ＨＳＶ－２ ΔｇＤ－／＋は、性器ヘルペスの予防または処置のための有望なワクチンである。
ＨＳＶ－２ ΔｇＤ－／＋により誘導される保護の機構および相関：ｇＤ－２ヌルウイルスを産生し、免疫応答性および免疫不全の両マウスで高度に弱毒化され、ワクチン候補として試験したとき、ＨＳＶ－２の腟内曝露に対する保護免疫応答を誘導することが示された。ＨＳＶ－２ ΔｇＤ－／＋での皮下免疫化は、両血清型のＨＳＶ(ＨＳＶ－２およびＨＳＶ－１)での腟内曝露に対する保護に必要な、液性および細胞性免疫応答を誘導する。
ＨＳＶ－２ ΔｇＤ－／＋は不稔感染を開始させる：ＵＳ６を欠失するＨＳＶ－２株を構築して、細胞感染中に生じる早期シグナル伝達事象への寄与を評価した[41]。このウイルスは、その制内因性プロモーター(例えば、ある実施態様において、ｇＤ－１プロモーター)の制御下にＵＳ６をコードするｇＤ－補完的細胞株(例えばＧＤ－１をコードするＶＤ６０細胞[40, 41])上で増殖されない限り、宿主細胞に感染できない。実際、非補完的細胞から単離されたＨＳＶ－２ ΔｇＤ粒子は、上皮細胞(図１)または神経細胞(ＳＫ－Ｎ－ＳＨ、示していない)に感染しない。しかしながら、ＶＤ６０細胞に伝達されたら、表現型的に補完されたウイルス(ΔｇＤ－／＋)が得られ、これは、野生型ＨＳＶ－２の一般的標的である細胞に十分感染できる。しかしながら、ΔｇＤ－／＋で感染後、感染性粒子またはウイルスプラーク(pfu)はこれら細胞から産生されず、ウイルスは非感染細胞に感染を広げることができず、これらの過程におけるｇＤの必要性が反映される；故に、それは不稔感染である。
ＨＳＶ－２ ΔｇＤ－／＋はマウス感染モデルで安全である：ΔｇＤ－／＋を、インビボで、野生型および重症複合免疫不全(ＳＣＩＤ)マウスにおいて、高用量の皮下または腟内接種により安全性について評価した。腟内に１０７pfuのΔｇＤ－／＋(補完的細胞上の力価)を接種されたマウスは、実験の間中ウイルス誘導病態の徴候を何ら示さず、一方、１,０００倍少ない野生型ウイルス(１０４pfu)を接種された動物はＨＳＶ－２疾患に屈し、接種後８日目に死亡し始めた(図２Ａ)。１０７pfuのΔｇＤ－／＋を腟内接種されたマウスは、実験の間中、ウイルス誘導上皮疾患または神経疾患の徴候を何ら示さなかった(図２Ｂおよび２Ｃ)。プラークアッセイまたはＤＲＧとＶｅｒｏ細胞の共培養で決定して、生殖器組織またはＤＲＧから、感染性ウイルスは回収されなかった(示していない)。
ＨＳＶ－２ ΔｇＤ－／＋は、ＨＳＶ－２に対する全身性および粘膜抗体を誘導する：ΔｇＤ－／＋を皮下に接種およびブーストされた(sc.-sc.)またはこの候補ワクチン株(１０６pfu／マウス)を皮下接種され、腟内ブーストされた(sc.-i.vag.)マウスは、血清および膣洗浄液抗ＨＳＶ－２抗体の増加により証明されるとおり、ＨＳＶ－２に対する液性免疫応答を誘導した(図３Ａおよび３Ｂ)。対照動物を非感染ＶＤ６０細胞ライセート(対照と称する)で免疫化した。抗体を、抗原として感染細胞ライセートを使用するＥＬＩＳＡにより測定した(非感染細胞ライセートに対する応答を背景として減じた)。顕著なことに、抗体応答の強度は免疫化の経路により異なった。実際、s.c.-s.c.免疫化は、s.c.-i.vag.免疫化より有意に多いＨＳＶ－２に対する血清および膣洗浄液抗体を誘導した。この発見は、膣洗浄液抗体が血液からのＩｇＧの漏出を表す可能性があることを示唆し、sc.-sc.がＨＳＶ－２に対する高レベルの全身性および局所性ＩｇＧ抗体の誘導により適切な経路であることを示唆する。さらに、ΔｇＤ－／＋(１０６pfu／マウス)で皮下接種およびブーストされた(sc.-sc.)マウスは、これらマウスからのウイルスおよび血清でのＶｅｒｏ細胞単層のインビトロ中和により証明されるとおり、中和抗体ＨＳＶ－２を誘導した(図３Ｃ)。
ＨＳＶ－２ ΔｇＤ－／＋はＨＳＶ－２特異的Ｔ細胞活性化を誘導する：ｇＢ４９８－５０５特異的トランスジェニックＣＤ８＋ Ｔ細胞(ｇＢＴ－Ｉ)を、Ｃ５７ＢＬ／６マウスに導入し、その後ワクチン接種した。ワクチン接種マウスに、１０６pfu ΔｇＤ－／＋またはＶＤ６０細胞ライセート(対照)を接種した。脾臓をブースト１４日目に摘出し、カウント用ビーズ(CountBrightTM、Lifetechnologies)を使用するフローサイトメトリーにより定量した(図４Ａ)。同じ日、脾臓を記憶表面マーカーで染色し、フローサイトメトリーにより分析した(図４Ｂ)。最後に、同じ日に採取した脾臓細胞を、インビトロで６時間アゴニストｇＢ４９８－５０５－ペプチドで再刺激し、細胞内サイトカイン染色を実施して、これらの細胞によるＩＦＮ－γ産生を測定した。ΔｇＤ－／＋での免疫化は、対照マウスと比較して、ワクチン接種におけるＩＦＮ－γ産生を増加させた(図４Ｃ)。対照マウスにおける応答は、導入後のナイーブマウスにおけるｇＢＴ－Ｉ Ｔ細胞の持続を反映すると推定される。類似の結果が、インビトロでｇＢ４９８－５０５－ペプチドで再刺激した脾臓細胞の上清で、マルチプレックスサイトカイン分析を使用して得られた(示していない)。これらの発見は、ワクチンがＴ細胞応答を誘導することを示す。
ＨＳＶ－２ ΔｇＤ－／＋で免疫化したマウスは、腟内ＨＳＶ－２致死的曝露に対して保護される：sc.-sc.またはsc.-i.vag.でＨＳＶ－２ ΔｇＤ－／＋をワクチン接種された動物は、ＬＤ９０(５×１０４pfu／マウス)に等価の腟内致死量曝露後、体重への影響が少なく、曝露で生存し、一方ＶＤ６０対照ライセートで免疫化したマウスは、１０日目までに疾患に屈した(図５Ａおよび５Ｂ)。ワクチンはまたＬＤ９０の１０倍に対して完全保護も提供した(５×１０５pfu／マウス、データは示していない)。この保護は、上皮疾患スコアの有意な減少(図５Ｃ)および神経症状の完全な喪失(図５Ｄ)をもたらした。スコア付けは、先に記載されたとおり実施した[44]。さらに、膣曝露２日後、対照マウスと比較してΔｇＤ－／＋免疫化マウスにおける膣洗浄液から回収されるウイルスは有意に少なく、迅速なクリアランスが示唆された(図５Ｅ)。さらに、４日目膣洗浄液(図５Ｅ)または曝露後５日目に単離された膣組織またはＤＲＧ(図５Ｆ)で、感染性ウイルスは回収されなかった。後者は、ワクチンがウイルスのＤＲＧへの到達および／またはＤＲＧで複製することを阻止することを示唆する。
ＨＳＶ－２ ΔｇＤ－／＋での免疫化は、病原性ＨＳＶ－２の曝露後感染部位での炎症を予防する：ＨＳＶ－２ ΔｇＤ－／＋をワクチン接種し、病原性ＨＳＶ－２を腟内曝露されたマウスは、ＶＤ６０ライセート(対照)を接種された動物と比較して、感染部位の炎症性サイトカインが有意に少ない。実際、ワクチン接種マウスは、対照マウスとの比較において、感染２日後および７日後の膣洗浄液に分泌されたＴＮＦ－α(図６Ａ)、ＩＬ－６(図６Ｂ)およびＩＬ－１β(図６Ｃ)が有意に少ない。顕著なことに、炎症性サイトカインレベルの増加はＨＳＶ－２およびＨＩＶ共感染における性器でのＨＩＶ複製および排出と関連する[45, 46]。類似の現象がインビトロでも観察される[47]。
ＨＳＶ－２ ΔｇＤ－／＋での免疫化は、感染部位および関連ＬＮにＴ細胞を動員する。ΔｇＤ－／＋でsc.-sc.免疫化したマウスは、病原性ＨＳＶ－２の曝露後、仙骨リンパ節(ＬＮ)における活性化抗ＨＳＶ－２ ｇＢＴ－Ｉ ＣＤ８＋(図７Ａ)およびＣＤ４＋ Ｔ細胞(図７Ｂ)のパーセンテージが増加した。ΔｇＤ－／＋でsc.-i.vag.で免疫化したマウスは、病原性ＨＳＶ－２の曝露後、膣における抗ＨＳＶ－２ ｇＢＴ－Ｉ ＣＤ８＋(図７Ｃ)およびＣＤ４＋ Ｔ細胞(図７Ｄ)の数が増加し、ΔｇＤ－／＋のワクチン接種が抗ＨＳＶ－２ ＣＤ８＋ Ｔ細胞および活性化ＣＤ４＋ Ｔ細胞(おそらく抗ＨＳＶ－２)を感染部位および関連リンパ節に動員することが示唆される。
さらなる実験において、ＨＳＶ－２－ΔｇＤ－／＋ｇＤ－１での免疫化は、病原性ＨＳＶ－２の膣曝露に対するＣ５７ＢＬ／６およびＢａｌｂ／Ｃの保護に寄与することが判明した。さらに、腟内ＨＳＶ－２曝露されたΔｇＤ－／＋ｇＤ－１免疫化マウスでは、曝露５日後、膣または神経組織に検出可能なＨＳＶ－２はなかった。ＨＳＶ－２ ΔｇＤ－／＋ｇＤ－１ sc.sc.抗体は、ＨＳＶ－２疾患罹患マウスと異なり、多数のＨＳＶ－２タンパク質(ｇＤおよびｇＢ両者)を認識することが判明した。ワクチン接種動物からの血清抗体は、インビトロでＨＳＶ－１およびＨＳＶ－２の中和を示した。さらに、ΔｇＤ－／＋ｇＤ－１ワクチン接種マウスからの血清は、インビトロでＨＳＶ－２感染細胞の抗体依存性細胞傷害(ＡＤＣＣ)を誘導した。
まとめると、ＨＳＶ－２ ΔｇＤ－／＋ｇＤ－１は弱毒化され、ｗｔおよびＳＣＩＤマウスで完全に安全である。組み換えＨＳＶ－２ ΔｇＤ－／＋ｇＤ－１は、致死的ＨＳＶ－２腟内およびＨＳＶ－２／ＨＳＶ－１皮膚感染に対して保護した。保護は、２種の異なるマウス系統で観察された。検出可能な感染および殺菌免疫はなかった。ＨＳＶ－２特異的ＣＤ８＋ Ｔ細胞および全身性および粘膜ＨＳＶＡｂの誘導もまた観察された。ＩｇＧ２ａおよびＩｇＧ２ｂは、優勢な抗ＨＳＶアイソタイプであった。ＦｃｙＲIII／II依存性ＡＤＣＣも観察された。驚くべきことに、免疫血清の受動伝達はナイーブマウスを保護し、ＦｃＲｎおよびＦｃｙＲノックアウトマウスは、免疫血清で保護された。
考察
世界保健機関は、世界で５億を超える人々が単純ヘルペスウイルス２型(ＨＳＶ－２)に感染し、年間約２０００万の新規症例があると推定した[1]。感染リスクは年齢と共に増加し、ウイルスが頻繁な無症候性または臨床的再活性化を伴う潜伏感染を確立するため、感染の影響は一生である。注意が必要なことには、ＨＳＶ－２はＨＩＶを獲得および伝播するリスクを有意に増加させる[2-4]。ＨＳＶ－２の有病率は世界の地域間で変わり、日本の８.４％から、ＨＩＶ有病率が卓越しているサブサハラアフリカで７０％まで変わる[5, 6]。米国で、ＨＳＶ－２の有病率は約１６％であり、ＨＳＶ－１は約５４％に減少している。米国(および他の欧州各国)におけるＨＳＶ－１の有病率の減少は、性器ヘルペス疾患の大部分の症例がＨＳＶ－１が原因であったとの糖タンパク質Ｄ(ｇＤ)サブユニットワクチン治験の最近の残念な結果により証明されるとおり、性器ＨＳＶ－１の増加と関連する[7-9]。ＨＳＶ－１は、ＨＳＶ－２と比較して再発が少なく、生殖器ウイルス排出が少ないが、両血清型は周産期に伝達され、新生児疾患を引き起こす；新生児疾患は、アシクロビル処置をしても、高い罹病率および死亡率と関連する[10-12]。性器ヘルペスに関連する罹病率、ＨＩＶ流行との相乗性および米国単独で５億ドルを超える直接医療費は、安全かつ有効なワクチンの開発が急務であることを強調する[13]。
世界保健機関は、世界で５億を超える人々が単純ヘルペスウイルス２型(ＨＳＶ－２)に感染し、年間約２０００万の新規症例があると推定した[1]。感染リスクは年齢と共に増加し、ウイルスが頻繁な無症候性または臨床的再活性化を伴う潜伏感染を確立するため、感染の影響は一生である。注意が必要なことには、ＨＳＶ－２はＨＩＶを獲得および伝播するリスクを有意に増加させる[2-4]。ＨＳＶ－２の有病率は世界の地域間で変わり、日本の８.４％から、ＨＩＶ有病率が卓越しているサブサハラアフリカで７０％まで変わる[5, 6]。米国で、ＨＳＶ－２の有病率は約１６％であり、ＨＳＶ－１は約５４％に減少している。米国(および他の欧州各国)におけるＨＳＶ－１の有病率の減少は、性器ヘルペス疾患の大部分の症例がＨＳＶ－１が原因であったとの糖タンパク質Ｄ(ｇＤ)サブユニットワクチン治験の最近の残念な結果により証明されるとおり、性器ＨＳＶ－１の増加と関連する[7-9]。ＨＳＶ－１は、ＨＳＶ－２と比較して再発が少なく、生殖器ウイルス排出が少ないが、両血清型は周産期に伝達され、新生児疾患を引き起こす；新生児疾患は、アシクロビル処置をしても、高い罹病率および死亡率と関連する[10-12]。性器ヘルペスに関連する罹病率、ＨＩＶ流行との相乗性および米国単独で５億ドルを超える直接医療費は、安全かつ有効なワクチンの開発が急務であることを強調する[13]。
アジュバントと組み合わせたウイルスエンベロープ糖タンパク質からなるサブユニット製剤が、約２０年間ＨＳＶ－２ワクチン分野で主流であり、臨床治験の大部分はこの戦略に焦点を当てている[8, 14-19]。サブユニット製剤は安全であり、中和抗体を誘導するが、これらの製剤の臨床治験におけるＨＳＶ－２感染または疾患に対する有効性はわずかである[8, 14]。驚くべきことに、ＨＳＶ－２ ｇＤサブユニットワクチンは、性器ＨＳＶ－１に対する保護を提供したが、ＨＳＶ－２にはしていない[8, 20]。その後の試験により、血清ＨＳＶ－２ ｇＤ抗体レベルがＨＳＶ－１に対する保護と相関していることが判明し、ＨＳＶ－２保護に必要な抗体力価がＨＳＶ－１に対する保護に必要であるより高い可能性が示唆された[21]。対照的に、細胞介在免疫(重複ｇＤペプチドに対する細胞内サイトカイン応答)は、いずれの血清型に対する保護とも相関しなかった[21]。ワクチンは、ＣＤ８＋ Ｔ細胞応答ではなく、ＣＤ４＋ Ｔ細胞応答を誘導するが、ワクチン接種感染女性と非感染女性の間のＣＤ４＋ Ｔ細胞応答に差はなかった[21]。生殖器または他の粘膜抗体応答は測定しなかった。ゲノムからｇＨ欠失させたＨＳＶ－２ワクチン候補は、血清陽性対象で実施した臨床治験におけるウイルス再発頻度を減少できなかったが、該ワクチンは一次感染に対する有効性について評価されていなかった[29]。
ＨＩＶ感染患者のＨＳＶ－２再活性化率増加ことを示す臨床試験と、ｇＤサブユニットワクチンが中和血清抗体の誘導にも関わらず何らＣＤ８＋ Ｔ細胞応答を誘導できなかったことを組み合わせて、有効なワクチンは保護Ｔ細胞応答も誘導しなければならないことが示唆される[28, 30-32]。Ｔ細胞の重要性は、ヒト三叉神経節におけるＨＳＶ－１反応性Ｔ細胞の選択的保持を示す試験によってさらに強調される。ＣＤ４＋およびＣＤ８＋ Ｔ細胞は周辺神経細胞を特定し、標的とされるウイルスタンパク質に異種性があるものの、多様なＨＬＡ－Ａおよび－Ｂアレルの状況下で外被タンパク質、ビリオンタンパク質１６(ＶＰ１６)が複数三叉神経節Ｔ細胞により認識された；これらの発見は、外被タンパク質が重要な免疫原である可能性を示唆する[33]。同様に、外被タンパク質に向けた細胞毒性Ｔ細胞が、ＨＳＶ－２に潜伏感染したヒトの試験でも同定された[34]。ＣＤ８＋ Ｔ細胞(ＣＤ８αα＋ Ｔ細胞を含む)は、ＨＳＶ再活性化後、真皮・上皮接合部で性器の皮膚および粘膜に持続し、免疫制御においてＣＤ８＋ Ｔ細胞が役割を有することが示唆される[35]。
天然ＨＳＶ－２ ｇＤが遺伝的に欠失した遺伝子改変ＨＳＶ－２ウイルスもここに開示される。ＨＳＶ－２ ｇＤ遺伝子は、ウイルス侵入および細胞間伝播に必須のエンベロープ糖タンパク質をコードする。糖タンパク質Ｄは、ヘルペスウイルス侵入メディエーター(ＨＶＥＭ)としても知られる免疫制御スイッチである腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー１４(ＴＮＦＲＳＦ１４)にも結合する。ＨＶＥＭが１を超えるリガンドに対するドッキング部位を担持し、シグナル伝達がこれらの分子がＨＶＥＭにシスまたはヘテロで結合するかにより異なるため、ｇＤは、免疫細胞に調節性作用を有し得る[36, 37]。実際、最近の試験により、ｇＤはこの受容体の天然リガンドと競合し、ウイルスに対するサイトカイン応答を調節することが示唆される[38, 39]。ｇＤ遺伝子を緑色蛍光タンパク質(ｇｆｐ)をコードするＤＮＡフラグメントで置き換え、この構築物で形質転換した補完的ＨＳＶ－１ ｇＤを発現するＶｅｒｏ細胞(ＶＤ６０細胞[40])(例えばｇＤ－１プロモーター下のｇＤ－１)を、緑色プラークを形成する相同組み換えウイルスについてスクリーニングした。変異体ウイルスは、補完的Ｖｅｒｏ細胞株(補完的細胞で継代したとき、ＨＳＶ－２ ΔｇＤ－／＋と命名)で高力価まで複製するが、非補完的細胞(非補完的細胞から単離されたとき、ＨＳＶ－２ ΔｇＤ－／－と命名)では非感染性である。このウイルスを精製し、インビトロで特徴づけした[41]。免疫応答性または免疫不全(ＳＣＩＤ)マウスの腟内または皮下接種は、親野生型ウイルスにより引き起こされる致死的感染に比して、病原性がないことを確認した。免疫化(皮下初回刺激、続いて皮下または腟内いずれかの単回ブースト投与)は、腟内病原性ＨＳＶ－２の曝露に対して１００％保護的であった。ロバストな液性および細胞性免疫がＨＳＶ－２ ΔｇＤ－／＋により誘導され、ＵＳ６(ｇＤ－２)がインビボ増殖性感染に必要であると結論付けられた。この生存弱毒化ウイルス株は、ＨＳＶに対する殺菌免疫を提供する。また受動的血清または血清産物導入も用いられ得る。
実施例２
ワクチンが臨床的ＨＳＶ－１およびＨＳＶ－２単離株に対して保護する能力を、感染部位の局所免疫応答としてさらに確認した。古典的に、ＨＳＶは、ヒトにおける皮膚または皮膚粘膜層の裂け目のため、主として性器または口腔有核上皮細胞に感染するとされている(75)。ヒトＨＳＶ感染をより密接にモデル化するために、ヒトに類似するウイルス動態および病理組織を模倣する皮膚乱刺モデルを、これら試験に使用した(76)。
ワクチンが臨床的ＨＳＶ－１およびＨＳＶ－２単離株に対して保護する能力を、感染部位の局所免疫応答としてさらに確認した。古典的に、ＨＳＶは、ヒトにおける皮膚または皮膚粘膜層の裂け目のため、主として性器または口腔有核上皮細胞に感染するとされている(75)。ヒトＨＳＶ感染をより密接にモデル化するために、ヒトに類似するウイルス動態および病理組織を模倣する皮膚乱刺モデルを、これら試験に使用した(76)。
結果
低用量のΔｇＤ－２での免疫化は、致死的腟内および皮膚曝露に対して保護的である。先の試験は、ワクチン接種材料として、５×１０６PFU(補完的ＶＤ６０細胞で決定された力価)のΔｇＤ－２を用いて実施された。用量漸減試験を実施して、低用量のワクチン接種での保護を検討した。Ｃ５７ＢＬ／６マウス(５マウス／群)に、５×１０６PFU、５×１０５PFUまたは５×１０４PFUのΔｇＤ－２を皮下(ｓｃ)初回刺激し、２１日後ブーストした。３週間後、マウスを、先に記載された臨床単離株のＨＳＶ－２(４６７４)のＬＤ９０(５×１０５PFU)に、腟内または皮膚乱刺により曝露させた(77)。全ＨＳＶ－２ ΔｇＤ－２免疫化マウスは生存し(５／５／群)、一方対照ワクチン接種マウス(ＶＤ６０細胞ライセートで免疫化)は全て疾患に屈した(図８Ａ、８Ｂ)。最低用量(５×１０４)をワクチン接種したマウスは軽度上皮疾患を示したが、神経疾患の徴候は観察されず、膣および皮膚曝露モデル両者で、全ての動物は１４日目までに完全に回復した。ＨＳＶ抗体(ＥＬＩＳＡにより測定)は、ブースト１週間後、全ワクチン接種マウスの血清で検出されたが、初回刺激後はされず、抗体力価は、投与するワクチン用量が高いほど、増加した(図８Ｃ)。
低用量のΔｇＤ－２での免疫化は、致死的腟内および皮膚曝露に対して保護的である。先の試験は、ワクチン接種材料として、５×１０６PFU(補完的ＶＤ６０細胞で決定された力価)のΔｇＤ－２を用いて実施された。用量漸減試験を実施して、低用量のワクチン接種での保護を検討した。Ｃ５７ＢＬ／６マウス(５マウス／群)に、５×１０６PFU、５×１０５PFUまたは５×１０４PFUのΔｇＤ－２を皮下(ｓｃ)初回刺激し、２１日後ブーストした。３週間後、マウスを、先に記載された臨床単離株のＨＳＶ－２(４６７４)のＬＤ９０(５×１０５PFU)に、腟内または皮膚乱刺により曝露させた(77)。全ＨＳＶ－２ ΔｇＤ－２免疫化マウスは生存し(５／５／群)、一方対照ワクチン接種マウス(ＶＤ６０細胞ライセートで免疫化)は全て疾患に屈した(図８Ａ、８Ｂ)。最低用量(５×１０４)をワクチン接種したマウスは軽度上皮疾患を示したが、神経疾患の徴候は観察されず、膣および皮膚曝露モデル両者で、全ての動物は１４日目までに完全に回復した。ＨＳＶ抗体(ＥＬＩＳＡにより測定)は、ブースト１週間後、全ワクチン接種マウスの血清で検出されたが、初回刺激後はされず、抗体力価は、投与するワクチン用量が高いほど、増加した(図８Ｃ)。
ΔｇＤ－２で免疫化したマウスは、病原性ＨＳＶ－１およびＨＳＶ－２臨床単離株の高ウイルス曝露から保護される。ΔｇＤ－２ワクチンが多様なＨＳＶ－１およびＨＳＶ－２株に対して保護的であるかを評価するために、ニューヨーク州、ブロンクス区にあるClinical Virology Lab at Montefioreから５種のＨＳＶ－１臨床単離株(Ｂ３ｘ１.１～Ｂ３ｘ１.５と命名)および５種のＨＳＶ－２臨床単離株(Ｂ３ｘ２.１～Ｂ３ｘ２.５と命名)ならびに南アフリカＨＳＶ－２臨床単離株(ＳＤ９０)を得た。単離株をＶｅｒｏ細胞で増殖させ、シークエンシングおよびフェノタイピング前に３回を超えない継代をした。Illuminaシークエンシングは、これら株が相当な遺伝的多様性を示し、ペアワイズ距離はＢ３ｘ１.５と他のＢ３ｘ１単離株で６.３％およびＢ３ｘ２.２と他のＢ３ｘ２単離株で５.０％ほど高いことを示した。各臨床株のインビボ病原性を、皮膚乱刺モデルを使用し、Ｂａｌｂ／Ｃマウスを１×１０５PFUのＨＳＶ－１株または５×１０４PFUのＨＳＶ－２株で攻撃することにより、実験室株と比較した。臨床単離株は、Ｂ３ｘ１.１、Ｂ３ｘ１.３、Ｂ３ｘ２.３およびＳＤ９０で一定範囲の病原性を示し、ナイーブマウスで最高罹病率でより迅速な疾患を誘導した。類似の結果が、最も病原性の疾患を示す同じ４単離株を用いる膣曝露モデルで観察された(示していない)。興味深いことに、Ｖｅｒｏ細胞のインビトロ一段階および多段階増殖曲線で、単離株間の差異は観察されなかった。
ΔｇＤ－２が異なる単離株に対して保護的であるかを評価するために、Ｃ５７ＢＬ／６またはＢａｌｂ／Ｃマウスを、５×１０６PFU／マウスのΔｇＤ－２(または対照免疫原としてＶＤ６０ライセート)で初回刺激およびブーストし、次いでＬＤ９０用量の４種のより病原性の臨床単離株(表１)に、皮膚乱刺モデルを使用して曝露した。全ΔｇＤ－２ワクチン接種マウスは、曝露から生存した(ｎ＝７ Ｃ５７ＢＬ／６マウス／群；図３Ａおよびｎ＝５ Ｂａｌｂ／Ｃマウス／群、図９Ｂ)。一部マウスが、４日目がピークである軽度上皮疾患を示したが、大部分の動物は曝露後８日までに完全に回復した。如何なる時点でも、マウスの何れにも神経疾患の徴候は検出されなかった。
注：＊Ｂａｌｂ／Ｃマウス皮膚曝露モデルで９０％罹病率を引き起こすプラーク形成単位
注：＊Ｂａｌｂ／Ｃマウス皮膚曝露モデルで９０％罹病率を引き起こすプラーク形成単位
免疫応答のロバスト性をさらに評価するために、Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおける曝露用量を、ＳＤ９０でＬＤ９０用量の１０倍および１００倍ならびにＢ３ｘ１.１でＬＤ９０の１０倍に増加させた。ΔｇＤ－２ワクチン接種マウス全てが、神経疾患の徴候なく、生存した(図９Ｄ)。ΔｇＤ－２ワクチン接種マウスは、曝露５日後までに皮膚生検サンプルで検出されるウイルスが有意に減少し、大部分はウイルスプラークが検出されなかった(図１０Ａ、ｎ＝３マウス／群)。ウイルスの迅速なクリアランスに一致し、皮膚生検サンプルの病理組織学は、対照ワクチン接種マウスおける潰瘍形成および壊死が上皮の７５～９５％を占め、比較して、ΔｇＤ－２ワクチン接種マウスおよび模擬(非ワクチン接種、非感染)処置マウスの両者で上皮性壊死および潰瘍形成は＜１０％であることを確認した。さらに、ΔｇＤ－２ワクチン接種マウス(各暴露量および株あたりｎ＝５マウス)から曝露１４日後単離されたＤＲＧにおいて、プラークアッセイ(図１０Ｂ)またはｑＰＣＲ(図１０Ｃ)で複製または潜伏ウイルスは検出されなかった。同様に、ΔｇＤ－２ワクチン接種マウスからのＤＲＧ(ＬＤ９０のＳＤ９０の曝露５日後単離)と、Ｖｅｒｏ細胞と３週間共培養したとき、再活性化ウイルスは検出されなかった。対照的に、ウイルスＤＮＡおよび再活性化可能ウイルスは全ての対照(ＶＤ６０細胞ライセート)ワクチン接種マウス(ＤＲＧは屠殺時単離)から回収された(図１０Ｄ、ｎ＝５マウス／群)。
ＨＳＶ－２ ΔｇＤ－２は、曝露後ＨＳＶ－２特異的ＩｇＧ２抗体および免疫細胞を皮膚に動員する：皮膚におけるワクチンおよびウイルス曝露への免疫応答を特徴づけするために、生検サンプルをブースト２１日後および曝露２日または５日後得て、組織試験のための処理および／または均質化し、次いで抗原としてＨＳＶ－２(４６７４)またはＨＳＶ－１(17)感染細胞ライセートを使用するＥＬＩＳＡにより、ＨＳＶ特異的Ａｂの存在を評価した。ΔｇＤ－２免疫化マウスは、ブースト後皮膚で検出されるＨＳＶ特異的Ａｂは低レベルであり、これは、早ければ曝露２日後のように迅速に増加した(図１１Ａ)。Ｂ３ｘ１.１は、ＳＤ９０と比較して高い力価のＡｂ応答を誘導した。期待通り、ＨＳＶ特異的Ａｂは、曝露２日または５日後の対照ワクチン接種マウスの皮膚で検出されなかった(図１１Ａおよび１１Ｂ)。皮膚から回収したＡｂは、主にＩｇＧ[１：２４,０００力価、(図１１Ｂ)]であり、検出可能な抗ＨＳＶＩｇＡまたはＩｇＭはなく(データは示していない)、ＩｇＧ２(ＩｇＧ２ａおよびＩｇＧ２ｂの誘導に等しい)ＨＳＶ特異的抗体(全ＨＳＶＩｇＧの約８０％)に富んだ(図１１Ｃ)。
マウスＩｇＧ２抗体はＦｃγＲに結合する(78)。ΔｇＤ－２ワクチンにより誘導されたＡｂはＡＤＣＣに介在し、ＨＳＶ被覆ビーズに対する抗体依存性細胞貪食(ＡＤＣＰ)の測定により、試験を広げた。ブースト１週間後得たΔｇＤ－２ワクチン接種マウスからの血清は、対照免疫化マウスからの血清または細胞ライセートで被覆したビーズと比較して、高いＨＳＶ特異的食作用を誘導し、多くのＩＦＮ－γ分泌を誘導した(図１１Ｄ)。
曝露５日後に得たΔｇＤ－２免疫化および対照ワクチン接種マウスまたは非免疫化、非感染マウス(模擬)からの皮膚生検サンプルも、免疫細胞応答について免疫組織化学および／または免疫蛍光により評価した。ΔｇＤ－２免疫化マウスは、対照免疫化マウスと比較して、ＣＤ３＋ Ｔ細胞(平均±ＳＤ ８.０％±２.１対２.５％±０.７、ｐ＜０.００１；図１２Ａ、１２Ｄ)およびＢ２２０＋ Ｂ細胞(３.８％±１.１対；２.４％±１.１、ｐ＝０.０９；図１２Ｂ、１２Ｅ)の顕著な増加があった。Ｔ細胞を、ＣＤ４またはＣＤ８に対する染色によりさらに特徴づけした；対照免疫化マウスと比較して、ΔｇＤ－２においてＣＤ４＋集団の有意な増加があったが、ＣＤ８＋集団はなかった(ｐ＜０.０５)(図１２Ｆおよび１２Ｇ)。逆に、対照免疫化マウスと比較して、ΔｇＤ－２において、Ｉｂａ１＋単球／マクロファージ細胞(図１２Ｃおよび１２Ｈ)およびＬｙ６Ｇ＋好中球(図１３)の減少があった。
炎症細胞の減少およびウイルスの迅速なクリアランスに一致して、曝露５日後、対照免疫化マウスと比較して、ΔｇＤ－２の皮膚ホモジネートで検出される炎症性サイトカイン／ケモカインは減少した(図１４)。ＨＳＶ－１およびＨＳＶ－２感染マウスは、免疫化と無関係に、２日目に、模擬感染マウスと比較して、ＴＮＦα(図１４Ａ)、ＩＬ－１β(図１４Ｂ)およびＩＬ－６(図１４Ｃ)レベルが高かった。しかしながら、該レベルはΔｇＤ－２において５日目までに減少したが、対照免疫化マウスではしなかった。類似の結果がケモカインＣＸＣＬ９(図１４Ｄ)およびＣＸＣＬ１０(図１４Ｅ)についても得られた。興味深いことに、ＩＬ－３３レベルは両時点で対照免疫化マウスと比較してΔｇＤ－２免疫化で一貫して高かった(図１４Ｆ)。
考察
この試験は、ＨＳＶ－２ ΔｇＤ－２でのワクチン接種が一団の遺伝的に多様なＨＳＶ－１およびＨＳＶ－２臨床単離株に対する完全保護を提供し、潜伏感染の確立を防止することをさらに確認する。ワクチン有効性は、ヒト一次疾患を反映する最適化皮膚モデルで確認された。ΔｇＤ－２は高力価抗体を誘導し、これは迅速に皮膚に動員され、最も病原性の株であるＳＤ９０のＬＤ９０の１００倍暴露後でさえ、５日目までのウイルスのクリアランスをもたらした。広範囲のＨＳＶ－１およびＨＳＶ－２臨床単離株に対するΔｇＤ－２の保護効果により、臨床単離株Ｄ９０に対する十分な保護に失敗したＨＳＶ－２ ΔＵＬ５／ΔＵＬ２９などの他の候補ワクチンまたはｇＤサブユニットワクチンおよび１種または２種の実験室ウイルス株に対してしか試験されていないその他のものと区別される。
この試験は、ＨＳＶ－２ ΔｇＤ－２でのワクチン接種が一団の遺伝的に多様なＨＳＶ－１およびＨＳＶ－２臨床単離株に対する完全保護を提供し、潜伏感染の確立を防止することをさらに確認する。ワクチン有効性は、ヒト一次疾患を反映する最適化皮膚モデルで確認された。ΔｇＤ－２は高力価抗体を誘導し、これは迅速に皮膚に動員され、最も病原性の株であるＳＤ９０のＬＤ９０の１００倍暴露後でさえ、５日目までのウイルスのクリアランスをもたらした。広範囲のＨＳＶ－１およびＨＳＶ－２臨床単離株に対するΔｇＤ－２の保護効果により、臨床単離株Ｄ９０に対する十分な保護に失敗したＨＳＶ－２ ΔＵＬ５／ΔＵＬ２９などの他の候補ワクチンまたはｇＤサブユニットワクチンおよび１種または２種の実験室ウイルス株に対してしか試験されていないその他のものと区別される。
ΔｇＤ－２により提供される広範な保護は、誘導される免疫応答の独特の性質を反映する可能性がある。誘導されるＡｂはＩｇＧ２サブタイプ(全ＨＳＶ特異的ＩｇＧの約８０％)に富み、中和活性が低レベルであり(示していない)、曝露２日後までに皮膚生検サンプルで１：２４,０００に達する力価で皮膚に迅速に動因され、ＡＤＣＰ(ここに示す)およびＡＤＣＣを含むＦｃエフェクター機能(78)に介在した。ΔｇＤ－２に対する抗体応答は用量依存的であり、疾患スコアにより証明されるとおり、ウイルスクリアランスの迅速性と相関し、潜伏感染の確立を完全に防止するワクチンの能力に寄与した可能性があった。免疫化に用いるΔｇＤ－２の用量が低いほど、血清におけるＨＳＶ特異的抗体の力価は低かったが、マウス全てが致死的曝露から保護された。これらの発見は、低レベルの抗体が、ＦｃγＲエフェクター機能に十分であり得ることを示す。ｇＤのネクチン－１結合ドメインが改変されている(ｇＤ２７)別のＨＳＶ－２ウイルス株も、組み換えアジュバント添加ｇＤと比較して、低力価の血清中和Ａｂを誘導したが、逆に、マウスにおける膣曝露に対して、組み換えｇＤタンパク質よりも保護的であった(59)。ＡＤＣＣまたはＡＤＣＰなどの他の抗体機能は評価しなかった。しかしながら、これらの発見は、中和Ａｂ力価がマウス、コットンラット(80)またはヒトにおける保護の予測相関ではないとの考えをさらに支持する。
サイトカインおよびケモカインの増加により特徴づけられる迅速な炎症性応答が曝露２日後対照ワクチン接種およびΔｇＤ－２ワクチン接種マウス両者で観察されたが、炎症性応答はワクチン接種マウスで５日目までに解消し、これはウイルスの迅速なクリアランスに一致する。対照的に、対照ワクチン接種マウスにおいて炎症は持続し、進行性疾患に一致する。後者は、サイトカイン／ケモカイン(ＩＬ－１β、ＩＬ６、ＣＸＣＬ９およびＣＸＣＬ１０)の持続的上昇ならびに対照ワクチン接種マウスにおける上皮をとおしておよび皮層内で観察された単球／マクロファージおよび好中球の持続により特徴づけられた。対照的に、高いパーセンテージのＣＤ４＋ Ｔ細胞およびＢ２２０＋ Ｂ細胞がΔｇＤ－２ワクチン接種マウスの皮膚で、細胞記憶応答を反映すると推定される５日目に観察される。
興味深いことに、ＩＬ－３３が、対照と比較してΔｇＤ－２免疫化マウスからの皮膚で高傾向のある唯一のサイトカインであった。ＩＬ－３３の厳密な役割は未知である。先の試験で、ｒＩＬ－３３投与がマウスにおける皮膚創傷治癒を増強し、自然リンパ系細胞の活性化および単球の２型マクロファージへの分化と関連することが示されている(81, 82)。マウスへのＩＬ－３３の全身性投与は、炎症の低減につながるＦｃｇＲ２ｂの増加と関連した(88)。おそらく、ΔｇＤ－２ワクチン接種マウスの皮膚で観察されたＩＬ－３３増加は、創傷治癒および炎症の解消を促進した。
臨床単離株は、類似のインビトロ増殖動態にも関わらず、マウス皮膚(および膣)モデルで異なる病原性を示した(76, 84)。興味深いことに、いずれにしても、先の試験で記載したのに類似するレベルの遺伝的多様性がＨＳＶ－１単離株でみられたが、先の報告に記載したのよりはるかに大きい遺伝的多様性が、ブロンクス区で採取したＨＳＶ－２単離株でみられた。ここで観察された大きな差異は、ブロンクス区地域の多様な地理的起源を反映し得る。この不均一性にも関わらず、試験した単離株全てがΔｇＤ－２ワクチンにより完全に保護され、おそらく多抗原性応答が反映される。さらに、ＨＳＶ－１およびＨＳＶ－２両者で完全保護が観察され、これは、ＨＳＶ－１が先進国世界における性器疾患のより一般的原因として出現しているため、臨床的に意義がある。ここで観察される普遍的保護は、潜伏ウイルスの非存在により証明される「殺菌免疫」と組み合わさって、このΔｇＤ－２ワクチンの有効性を支持する。
材料および方法
細胞およびウイルス：Ｖｅｒｏ(アフリカミドリザル腎臓細胞株；ＣＣＬ－８１；American Type Culture Collection (ATCC), Manassas, VA, USA)細胞、ＶＤ６０細胞[内因性プロモーター下にｇＤ－１をコードするＶｅｒｏ細胞(85)]およびＣａＳｋｉ(ヒト子宮頸部上皮性細胞株；ＣＲＬ－１５５０；ＡＴＣＣ)を、１０％ウシ胎児血清(ＦＢＳ、Gemini Bio-Products, West Sacramento, CA)添加ＤＭＥＭで継代させた。ＴＨＰ－１(ヒト単球細胞株；ＴＩＢ－２０２；ＡＴＣＣ)細胞を、１０％ＦＢＳ添加ＲＰＭＩ－１６４０(Life Technologies)で継代し、ＡＴＣＣガイドラインに従い継代培養した。ＨＳＶ－２(Ｇ)ΔｇＤ－２の構築およびＶＤ６０細胞でのその増殖は、先に記載されている(95, 94)。５種の異なるウイルス調製物を比較して、ワクチン有効性の変動は観察されていない。ＨＳＶ－２(４６７４)(86)をＣａＳｋｉ細胞で増殖させた。実験室株ＨＳＶ－２(Ｇ)(87)、ＨＳＶ－２(３３３－ＺＡＧ)(86)、ＨＳＶ－１(１７)(89)およびＨＳＶ－１(Ｆ)(87)をＶｅｒｏ細胞で増殖させた。南アフリカ単離株ＨＳＶ－２(ＳＤ９０)(97)は、David Knipeにより恵与され、Ｖｅｒｏ細胞で増殖させた。非特定化した５種のＨＳＶ－１(Ｂ３ｘ１.１～Ｂ３ｘ１.５)および５種のＨＳＶ－２(Ｂ３ｘ２.１～Ｂ３ｘ２.５)臨床単離株はClinical Virology Lab at Montefioreにより提供され、低継代作業ストックのためにＶｅｒｏ細胞で３回継代した。
細胞およびウイルス：Ｖｅｒｏ(アフリカミドリザル腎臓細胞株；ＣＣＬ－８１；American Type Culture Collection (ATCC), Manassas, VA, USA)細胞、ＶＤ６０細胞[内因性プロモーター下にｇＤ－１をコードするＶｅｒｏ細胞(85)]およびＣａＳｋｉ(ヒト子宮頸部上皮性細胞株；ＣＲＬ－１５５０；ＡＴＣＣ)を、１０％ウシ胎児血清(ＦＢＳ、Gemini Bio-Products, West Sacramento, CA)添加ＤＭＥＭで継代させた。ＴＨＰ－１(ヒト単球細胞株；ＴＩＢ－２０２；ＡＴＣＣ)細胞を、１０％ＦＢＳ添加ＲＰＭＩ－１６４０(Life Technologies)で継代し、ＡＴＣＣガイドラインに従い継代培養した。ＨＳＶ－２(Ｇ)ΔｇＤ－２の構築およびＶＤ６０細胞でのその増殖は、先に記載されている(95, 94)。５種の異なるウイルス調製物を比較して、ワクチン有効性の変動は観察されていない。ＨＳＶ－２(４６７４)(86)をＣａＳｋｉ細胞で増殖させた。実験室株ＨＳＶ－２(Ｇ)(87)、ＨＳＶ－２(３３３－ＺＡＧ)(86)、ＨＳＶ－１(１７)(89)およびＨＳＶ－１(Ｆ)(87)をＶｅｒｏ細胞で増殖させた。南アフリカ単離株ＨＳＶ－２(ＳＤ９０)(97)は、David Knipeにより恵与され、Ｖｅｒｏ細胞で増殖させた。非特定化した５種のＨＳＶ－１(Ｂ３ｘ１.１～Ｂ３ｘ１.５)および５種のＨＳＶ－２(Ｂ３ｘ２.１～Ｂ３ｘ２.５)臨床単離株はClinical Virology Lab at Montefioreにより提供され、低継代作業ストックのためにＶｅｒｏ細胞で３回継代した。
インビトロ増殖曲線：一段階および多段階増殖曲線の作成を、先行文献記載に従って実施した(86)。各ウイルスの一段階増殖のために、Ｖｅｒｏ細胞を、５PFU／細胞の感染効率(moi)でウイルスに感染させ、上清および細胞を感染後(pi)４時間、８時間、１６時間および２４時間毎に集め、－８０℃で保存した。各ウイルスの多段階増殖のために、Ｖｅｒｏ細胞を０.０１PFU／細胞のmoiで感染させ、上清および細胞を７２時間まで感染後１２時間毎に採取した。感染性ウイルスを、上清および溶解細胞でのプラークアッセイ実施により測定した。
臨床単離株のウイルスＤＮＡ単離およびシークエンシング：ＨＳＶＤＮＡを、Ｔ１５０フラスコ中のコンフルエントＶｅｒｏ細胞を、１０のMOIでＢ３ｘ臨床単離株の各々に感染させることにより調製した。細胞を感染後１６時間に採取し、ＰＢＳで２回洗浄した。ＤＮＡを、製造業者の推奨に従い、DNeasy(登録商標) Blood and Tissue(Qiagen)を使用して抽出した。ＤＮＡをQubit dsDNAアッセイ(Life Technologies)により定量した。製造業者の指示に従うNextera XT DNAライブラリー製造キット(Illumina)により、ペアエンドライブラリーを調製した。ライブラリーをIllumina MiSeq Desktopシークエンサーで配列決定した。ウイルスゲノム配列をVirAmpパイプライン(89)で集め、続いて不完全ミドリザル(Ｖｅｒｏ細胞の供給源)ゲノムの代用として、アカゲザルゲノムとアラインメントして、宿主配列を除去した。ＨＳＶ－１およびＨＳＶ－２ゲノムを、ＨＳＶ－１(９６)(GenBank accession no. JN555585.1)およびＨＳＶ－２(ＨＧ５２)(JN561323)との比較により、Genome Annotation Transfer Utility on ViPRでアノテートし、その後GenBankに提供した。先に配列決定されたＨＳＶ－２(ＳＤ９０ｅ)(KF781518)、ＨＳＶ－２(３３３)(KP192856)、ＣｈＨＶ １０５６４０(NC_023677.１)およびＨＳＶ－１(Ｆ)(GU734771.1)を含む全ゲノムアライメントを、ClustalW(90)を使用して実施し、ＭＥＧＡ６における１０００ブートストラップ反復のＵＰＧＭＡ法を使用して、系統樹を構築した(91)。ギャップまたは欠測データを含む全位置を除いた。ゲノム配列のGenBank番号は次のとおりである。ＨＳＶ－２(Ｇ)(KU310668)、ＨＳＶ－２(４６７４)(KU310667)、Ｂ３ｘ１.１(KU310657)、Ｂ３ｘ１.２(KU310658)、Ｂ３ｘ１.３(KU310659)、Ｂ３ｘ１.４(KU310660)、Ｂ３ｘ１.５(KU310661)、Ｂ３ｘ２.１(KU310662)、Ｂ３ｘ２.２(KU310663)、Ｂ３ｘ２.３(KU310664)、Ｂ３ｘ２.４(KU310665)、Ｂ３ｘ２.５(KU310666)。
マウス免疫化およびウイルス曝露試験：実験を、Albert Einstein College of Medicine Institutional Animal Care and Use Committee、プロトコール番号20130913および番号20150805の承認を受けて実施した。雌性Ｃ５７ＢＬ／６およびＢＡＬＢ／ｃマウスをJackson Laboratory(JAX, Bar Harbor, ME)から、４～６週齢で購入した。マウスを、１００μl／マウスで、５×１０４～５×１０６PFUのΔｇＤ－２または等量のＶＤ６０細胞ライセート(対照)皮下(ｓｃ、後肢内側および骨盤)で初回刺激および３週間後ブーストした。力価を、補完的細胞(ＶＤ６０)でのプラークアッセイにより測定した。
腟内ＨＳＶ感染症に対して、マウスを、曝露５日前２.５mgのメドロキシプロゲステロン酢酸エステル(ＭＰＡ; Sicor Pharmaceuticals, Irvine, CA)のｓｃで処置した。次いで、マウスにＬＤ９０(５×１０５pfu／マウス)のＨＳＶ－２(４６７４)を３０μl／マウスで接種腟内し、先に記載のとおり１４日間疾患を採点し、生存をモニターした(21)。ＨＳＶ皮膚感染症について、マウスの右側腹部をNairで脱毛し、２４時間休ませた。脱毛したマウスをイソフルラン(Isothesia, Henry-Schein)で麻酔し、次いで、露出した皮膚を、使い捨て爪やすりで２０～２５回擦り剥き、続いてインビボ病原性試験のために１×１０５PFU ＨＳＶ－１または５×１０４PFU ＨＳＶ－２株に暴露させ、ワクチン有効性試験のために、選択ＨＳＶ株のＬＤ９０、１０×ＬＤ９０または１００×ＬＤ９０に暴露させた(表１参照)。マウスを１４日間モニターし、次のとおり採点した。１：一次損傷または紅斑、２：遠位部位帯状疱疹様損傷、軽度浮腫／紅斑、３：重度潰瘍形成および浮腫、上皮伝播増加、４：後肢不全麻痺／完全麻痺および５：死亡。４のスコアで屠殺したマウスを、統計分析のためにその後の全ての日で５の値に割り当てた。
ＨＳＶＲＴ－ｑＰＣＲ：ＤＮＡを、重量測定した組織サンプルから、製造業者の推奨に従い、DNeasy(登録商標)Blood and Tissue(Qiagen)を使用して抽出した。次いで、抽出ＤＮＡを反応あたり１０ngのＤＮＡに正規化し、ABsolute qPCR ROX Mix(Thermo Scientific)を使用する、リアルタイム定量的ＰＣＲ(ＲＴ－ｑＰＣＲ、ｑＰＣＲ)を使用して、ウイルスＤＮＡを定量した。ＨＳＶポリメラーゼ(ＵＬ３０)のプライマーをIntegrated DNA Technologies(Cat#: 1179200494)から購入し、ウイルスゲノムＤＮＡの検出に使用した。単離ＨＳＶ－２ウイルスＤＮＡを、QuantStudio(登録商標) 3D Digital PCR(dPCR, ThermoFisher Scientific)を使用して絶対コピー量についてキャリブレーションし、続いてＨＳＶウイルスゲノムコピーを決定するための標準曲線として使用した。４以下のコピー数が読まれたサンプルを陰性と判断した。データを、ＤＲＧ(後根神経節)組織１グラムあたりｌｏｇ１０ ＨＳＶゲノムとしてあらわす。
皮膚生検サンプルにおける抗体およびサイトカインの検出：皮膚生検サンプルを、ブースト２１日後またはウイルス皮膚曝露２日および５日後、ＨＳＶ－２ ΔｇＤ－２またはＶＤ６０ライセート(対照)免疫化マウス(機械的切除により直径約５～１０mm)から得た。組織を重量測定し、ＲＮａｓｅ／ＤＮａｓｅフリーLysing Matrix Aチューブ(MP Biomedicals, Santa Ana, CA)中、無血清ＤＭＥＭで、FastPrep-24TM 5G(MP Biomedicals)における３回３０秒サイクルで６.０ｍ／秒で均質化した。サンプルを５０００rpmで１０分間、４℃で回転させ、得られた上清を抗ＨＳＶ抗体、サイトカインおよびケモカインについて評価した。抗ＨＳＶ抗体を、コーティング抗原として非感染、ＨＳＶ－１(９６)またはＨＳＶ－２(４６７４)感染Ｖｅｒｏ細胞ライセートを使用して先に記載されたとおり、ＥＬＩＳＡにより検出した(94)。１μg／ml(Becton Dickenson, San Diego)のビオチン抗マウスＩｇκまたはビオチン抗マウスＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ、ＩｇＧ２ｂまたはＩｇＧ３を二次検出抗体として使用した。ウェルをSpectraMax(M5 series)ＥＬＩＳＡプレートリーダーで、４５０nmの吸光度で読んだ。得られた吸光度を、感染細胞ライセートで得られた値から非感染細胞ライセートで得られた値を減ずることにより決定した。総抗ＨＳＶＩｇは、１：１０００希釈の組織ホモジネートで関連組織重量について正規化した４５０nmでの光学密度(ＯＤ)として報告する。抗ＨＳＶＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭまたはＩｇＧ１－３は、１：１００希釈の皮膚ホモジネートのみ報告するＩｇＧ１－３以外、全希釈で４５０nmでの光学密度(ＯＤ)として報告する。
皮膚ホモジネート上清を、Milliplexマウスサイトカイン／ケモカインイムノアッセイ(Millipore, Danvers, MA)およびLuminex Magpix systemを使用してインターロイキン－６(ＩＬ－６)、ＩＬ－１ベータ(ＩＬ－１β)、ＩＬ－３３、腫瘍壊死因子アルファ(ＴＮＦα)、インターフェロン－ガンマにより誘導されたモノカイン(ＭＩＧ、ＣＸＣＬ９)、インターフェロン誘導性サイトカイン(ＩＰ－１０、ＣＸＣＬ１０)についてアッセイし、Milliplex Analyst(Version 3.5.5.0; VigeneTech Inc.)で分析した。
皮膚組織の病理組織学、免疫組織化学および免疫蛍光：マウスを曝露５日後屠殺し、ウイルス(または模擬)感染部位の皮膚を切除し、ＲＴで４８時間ホルマリン固定した。サンプルをパラフィン包埋であるように規定どおり処理し、薄片にした。病理組織用のスライドをヘマトキシリンおよびエオジン(Ｈ＆Ｅ)で染色した。サンプルは、サンプルの出所を知らせていない委員会認定の獣医病理担当者により組織学的に評価された。免疫組織試験(ＩＨＣ)のために、サンプルを５μmに薄片にし、キシレン、続いて段階的アルコールで脱パラフィン処理した。ｐＨ６.０の１０mMクエン酸ナトリウム緩衝液中で９６℃で３０分間加熱して、抗原修復を実施した。内因性ペルオキシダーゼ活性を、３％過酸化水素水溶液を使用して遮断した。切片を日常的ＩＨＣ法により、抗ＣＤ３(すぐに使用できる形態、ThermoFisher Scientific, Cat: RM-9107-R7)、抗Ｂ２２０(BD Biosciences Cat: 550286)または抗Ｉｂａ１(１：３０００希釈、Wako Pure Chemical Industries, Richmond, VA)へのウサギ一次抗体に対するSuperPicTureTM(ThermoFisher Scientific, Cat:87-9673)を使用して染色し、次いで最終色原体としてジアミノベンジジンで染色した。全ての免疫染色した切片をヘマトキシリンで軽く対比染色した。染色断面を、Zeiss Axio Observer倒立光学顕微鏡で、２０倍倍率で、上部層(上皮)から基底層(横紋筋)方向で、サンプルあたり３つの異なる位置を撮像した。染色陽性細胞を、Bologna-Molina et al., 2011 (92)に記載のとおり数え上げた。データを、サンプルあたり３撮像切片の％陽性細胞＝(陽性有核細胞／総有核細胞)の平均として表す。
免疫蛍光試験のために、皮膚組織をＨＳＶまたは模擬皮膚曝露５日後切除し、次いでＯＣＴ媒体に凍結した。サンプルを５μm切片に切断し、－８０℃で保存した。次いで、凍結スライドを－２０℃でアセトン中、１５分間固定し、洗浄緩衝液(ＷＢ、０.０５％Ｔｗｅｅｎ ２０のＰＢＳ溶液)で洗浄し、次いでＲＴで２時間、遮断緩衝液(２％ＢＳＡ、５％熱不活性化ヤギ血清のＰＢＳ溶液)で遮断した。スライドを２回洗浄し、抗ＣＤ４(ＧＫ１.５、１：２００)、抗ＣＤ８(ＹＴＳ１６９.４、１：２５０)、抗Ｌｙ６Ｇ(１Ａ８、１：５００)と、遮断緩衝液中、１時間、ＲＴでインキュベートした。スライドを徹底的に洗浄し、Alexa flour 555またはAlexa flour 488(それぞれ１：５００または１：２００)とコンジュゲートしたヤギ抗ラット二次抗体と、３０分間、ＲＴでインキュベートした。スライドを洗浄し、ＤＡＰＩ(ProLong(登録商標) Diamond Antifade Mountant with DAPI, ThermoFisher Scientific)含有媒体でマウントした。スライドを、Nikon Eclipse Ti-U倒立光学顕微鏡で、２０倍倍率で、上部層(上皮)から基底層(横紋筋)方向に、サンプルあたり２つの別の位置で撮像した。％ＣＤ４＋および％ＣＤ８＋定量のために、総有核細胞を、Velocity(version 6.3, Perkin Elmer)からのソフトウェアアルゴリズムにより、≧５μmのＤＡＰＩ陽性物体により計算した。ＣＤ４またはＣＤ８陽性細胞を蛍光およびＤＡＰＩ＋核の取り込みについて手動で計数し、皮膚切片における毛包および細胞破壊片の非特異的染色を除外した。データをサンプルあたり２画像の％陽性細胞＝(陽性細胞／総ＤＡＰＩ細胞)の平均としてあらわす。
抗体依存性細胞貪食(ＡＤＣＰ)アッセイ。ＨＳＶ特異的ＡＤＣＰを測定するために、Ackerman et al., 2011(93)から改変したプロトコールを使用した。２×１０８ １μm ニュートラアビジン・レッド蛍光ビーズ(Invitrogen, F-8775)を、０.３mgのビオチニル化ＨＳＶ－２感染または非感染(対照)Ｖｅｒｏ細胞で、一夜、４℃で、５００μlのBlockAidTM(ThermoFisher Scientific, B-10710)中、被覆した。ビーズを１％ＢＳＡのＰＢＳ溶液で２回洗浄し、次いで１×１０６ビーズ／ウェルを９６丸底プレートに加えた。ブースト１週間後の免疫化マウスからの血清を、５６℃で３０分間熱不活性化し、無血清ＲＰＭＩで１：５希釈した。５０μlの希釈血清を、ＨＳＶライセートまたは対照細胞ライセート被覆ビーズを含むウェルに加え、２時間、３７℃でインキュベートした。２×１０４細胞／ウェルＴＨＰ－１細胞を、２００μl／ウェルの最終体積でそれぞれに加え、８時間、３７℃で５％ＣＯ２でインキュベートした。その後、１００μlの上清を除去し、－２０℃で保存し、１００μl ４％パラホルムアルデヒドで再懸濁した。次いで、サンプルをEinstein Flow Cytometry Core Facilityで５レーザーLSRIIフローサイトメーター(Becton Dickenson, San Diego)で読んだ。食作用スコアを、ＴＨＰ－１細胞を表す事象をゲーティングし、続いて、FlowJoソフトウェア(version 10, Tree Star Inc.)を使用して、次の式：[(ビーズ陽性細胞％×ビーズ陽性細胞ＭＦＩ)／１０６]を適用することにより報告する。抗体食作用を介する活性化ＴＨＰ－１細胞からのＩＦＮ－γ分泌は、先に記載のとおり、Milliplex human custom immunoassay(Millipore, Danvers, MA)およびLuminex Magpix systemを使用する、保存培養上清の分析により測定した。
組織におけるウイルス検出。皮膚および後根神経節(ＤＲＧ)を、上記のとおり重量測定し、均質化した。次いで、均質化組織の上清をコンフルエントＶｅｒｏ細胞単層(４８ウェルプレートで２×１０５細胞／ウェル)に１時間重層した。ウェルをＰＢＳで洗浄し、次いで１％熱不活性化ＦＢＳ含有１９９培地(Gibco(登録商標))で洗浄し、０.５％メチルセルロースで重層し、３７℃で４８時間インキュベートした。細胞を２％パラホルムアルデヒドで固定し、クリスタルバイオレット溶液で染色し、PFU数を定量した。神経エキソビボ共培養アッセイを、先に記載のとおり実施した(94)。
統計分析。結果を、GraphPad Prism version 6(San Diego, CA)を使用する複数比較の二元配置分散分析(二元配置ＡＮＯＶＡ)または対応のないスチューデントのｔ検定で比較した。マンテル・コックス生存曲線をログ・ランク検定により比較した。Ｐ値＜０.０５(＊)、＜０.０１(＊＊)、＜０.００１(＊＊＊)を有意とした。
実施例３
新生児ＨＳＶ感染は、世界中で、約１４,０００症例／年である。一次母体性器ＨＳＶが新生児症例の５０～８０％を占める。周産期伝播は、有効な治療があっても、深刻な死亡および罹病をもたらす。再発性母体ＨＳＶ疾患では周産期ＨＳＶ伝播のリスクが１～３％減少するため、母体に既に存在する抗体がある程度の保護を提供できることは明らかである。しかしながら、ＨＳＶ１／２両者に血清陰性である妊婦が増えている。
新生児ＨＳＶ感染は、世界中で、約１４,０００症例／年である。一次母体性器ＨＳＶが新生児症例の５０～８０％を占める。周産期伝播は、有効な治療があっても、深刻な死亡および罹病をもたらす。再発性母体ＨＳＶ疾患では周産期ＨＳＶ伝播のリスクが１～３％減少するため、母体に既に存在する抗体がある程度の保護を提供できることは明らかである。しかしながら、ＨＳＶ１／２両者に血清陰性である妊婦が増えている。
マウスおよび倫理規則：マウス試験は、Institutional Animal Care and Use Committee at Albert Einstein College of Medicine、プロトコール＃2016-1205により承認された。Ｃ５７ＢＬ／６マウスはJackson Laboratory(JAX, Bar Harbor, ME)から購入した。
細胞およびウイルス：Ｖｅｒｏ(アフリカミドリザル腎臓細胞株；CCL-82; ATCC)、ＨａＣＡＴ(ヒトケラチン生成細胞、ATTC CLS 300493)およびＶＤ６０細胞(内因性プロモーター下ｇＤ－１をコードするＶｅｒｏ細胞)を、１０％ウシ胎児血清(ＦＢＳ、Gemini Bio-Products, West Sacramento, CA)および１％ペニシリン－ストレプトマイシン(Invitrogen)添加ＤＭＥＭで継代させた。臨床単離株、ＨＳＶ－２(４６７４)およびＨＳＶ－１(Ｂ３ｘ１.１)およびウイルス内の遺伝子間部位に挿入されたＣＭＶプロモーターの制御下緑色蛍光タンパク質(ＧＦＰ)を発現する実験室株、ＨＳＶ－２(３３３)ＺＡＧを、Ｖｅｒｏ細胞で増殖させた。ＨＳＶ－２(Ｇ) ΔｇＤ－２を、補完的ｇＤ－１発現ＶＤ６０細胞で増殖させ、ウイルス力価を並行してＶＤ６０およびＶｅｒｏ細胞のプラークアッセイで測定した；非補完的Ｖｅｒｏ対照細胞でプラークは検出されなかった。
免疫化およびウイルス曝露試験：雌性マウスに、１５０μgのアルミニウム(Ａｌｕｍ)(Imject Alum; Pierce Biotechnology, Rockland, IL)および１２.５μgのノホスホリルリピドＡ(ＭＰＬ)(Invivogen, San Diego, CA)(ｒｇＤ－２／Ａｌｕｍ－ＭＰＬ)と組み合わせた５×１０６pfuのΔｇＤ－２(ＶＤ６０細胞で増殖)、非感染対照ＶＤ６０細胞ライセートまたは５μgの組み換えｇＤ－２タンパク質をワクチン接種した。ワクチンを、１００μl／マウスの最終体積で４週齢(初回刺激)および７週間(ブースト)に皮下投与した。ブースト１週間後、免疫化雌を雄(２：１)と飼育し、膣栓についてモニターした。続いて雄性マウスを取り出し、妊娠雌を出産まで連日モニターした。仔に非ワクチン接種７日齢新生児マウス(ＬＤ９０)(一般に約１０５pfu／マウスのＨＳＶ－１(Ｂ３ｘ１.１)または１０３～１０４pfu／マウスＨＳＶ－２(４６７４))で９０％致死(ＬＤ９０)をもたらす用量である５μlのウイルスを、両外鼻孔に、マイクロピペットにより、生後１日、７日または１４日目に鼻腔内接種した。仔を、疾患の徴候について連日モニターし、脳炎の徴候(例えば完全麻痺、振戦、歩行不安定性、猫背の姿勢)が発生したら、すぐに屠殺した。
定量的ポリメラーゼ連鎖反応(ｑＰＣＲ)によるＨＳＶＤＮＡの検出：屠殺時(マウスが疾患に屈したがまたは曝露１４日後)、三叉神経節を摘出し、ＤＮＡをDNeasy Blood and Tissue(Qiagen)を使用して抽出し、サンプルあたり１０ng ＤＮＡを、ＨＳＶポリメラーゼ(ＵＬ３０)を標的とするプライマー(フォワードプライマー配列、5’-GGCCAGGCGCTTGTTGGTGTA-3’(配列番号３)；リバースプライマー配列、5’-ATCACCGACCCGGAGAGGGA-3’(配列番号４)；プローブ配列、5’-CCGCCGAACTGAGCAGACACCCGC-3’(配列番号５))(Integrated DNA Technologies)を使用するリアルタイムｑＰＣＲ(Absolute qPCR ROX Mix(Thermo Scientific)により、ＨＳＶの存在についてアッセイした。マウスβ－アクチン(Applied Biosystems, Foster City, CA)をローディング・コントロールとして使用し、ｑＰＣＲをApplied Biosystems QuantStudio 7 Flexで行った。４コピー未満のサンプルを陰性とした。
抗体応答、中和力価およびＦｃγＲ活性化の定量：ＨＳＶ特異的総またはアイソタイプ特異的ＩｇＧを、先に記載された酵素結合免疫吸着検定法(ＥＬＩＳＡ)により、血清または母乳で測定した。母乳を、分娩８～１２日後の妊娠雌性マウスから、出生仔から少なくとも２時間離し、搾乳５分前の２ＩＵ／kgのオキシトシンの腹腔内単回注射による投与により集めた。母乳滴を手動で出させ、次いで無菌エッペンドルフ管にピペットで集め、使用するまで－２０℃で凍結させた。簡潔には、ＥＬＩＳＡプレートを、０.１pfu／細胞の感染効率(MOI)でのＨＳＶ－１(Ｂ３ｘ１.１)またはＨＳＶ－２(４６７４)で感染後２４時間に集めたＶｅｒｏ細胞ライセートまたは非感染対照ライセートで被覆した。血清の連続希釈物を、被覆プレートで一夜、４℃でインキュベートし、結合したＩｇＧ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２またはＩｇＧ３を特異的ビオチン標識二次Ａｂｓ(BD Biosciences, San Jose, CA)を使用して定量した。抗ＨＳＶＩｇＧレベルを、非感染細胞ライセートで得た光学デンシトメトリー(ＯＤ)値を減算後、決定した。中和力価は、免疫血清非存在下で形成されたプラーク(約１００プラーク／ウェル)に関連するプラーク数の５０％減少をもたらす最高熱不活性化血清希釈として定義した。ＦｃγＲIV活性化を、mFcγIV ADCC Reporter Bioassay(Promega, Madison, WI)と、標的としてのＨＳＶ－２(４６７４)またはＨＳＶ－１(Ｂ３ｘ１.１)感染Ｖｅｒｏ細胞を使用して決定した。
抗体依存性細胞介在殺作用(ＡＤＣＫ)アッセイ：、５～１０匹のナイーブ新生仔または３～５匹のナイーブ成熟マウスから、エフェクター免疫細胞を、脾臓および肝臓から単離し、プールした。赤血球をアンモニウム－クロライド－カリウム(ＡＣＫ)溶解緩衝液(Gibco, Grand Island, NY)での溶解により除去した。プールした細胞を計数し、完全ＲＰＭＩ培地に再懸濁した。標的細胞は、１pfu／細胞のMOIのＨＳＶ－２(３３３)ＺＡＧで４時間、３７℃で感染させたＨａＣａＴ細胞または対照として、非感染ＨａＣａＴ細胞であった。標的をCellStripper(Corning)で解離させ、１０７細胞／mlでＤＭＥＭに再懸濁し、２×１０５細胞(１００μl中)を、９６ウェルＵ底プレートの各ウェルに加えた。標的を、ΔｇＤ－２またはＶＤ６０対照ワクチン接種成熟マウスから単離したプールした熱不活性化血清(ＤＭＥＭで１：５希釈)と、１５分間、室温でインキュベートした。次いで、プールしたエフェクター細胞を、エフェクター対標的細胞比１０：１で１時間加えた。培養物を、Live/Dead Red fixable dye(Invitrogen)で３０分間染色し、リン酸緩衝化食塩水(ＰＢＳ)中５％パラホルムアルデヒドで固定し、ＦＡＣｓ緩衝液(ＰＢＳ中２％熱不活性化ＦＢＳ)で再懸濁した。細胞を、LSRII(Becton Dickinson)でフローサイトメトリーにより分析し、ＧＦＰ陽性(ＨＳＶ－２感染)死亡細胞のパーセンテージを、FlowJo分析ソフトウェアを使用して、決定した。
ＦｃγＲ発現：成熟または新生仔マウスの脾臓および肝臓から、ＡＤＣＫアッセイの通りに単離した免疫細胞を、ＦＡＣＳ緩衝液中で１×１０７細胞／mLに調節し、１００μlの細胞懸濁液を、９６ウェル丸底マイクロタイタープレートに加えた。細胞を、３０分間、４℃で、暗所で、CD11b-APC-Cy7、Ly6G-AlexaFluor700、Ly6C-PE、F4/80-APC、CD3-PE-Cy7、Live/dead Red fixable dye(BD Biosciences, Invitrogen)および適切な抗ｍＦｃγ－ＦＩＴＣ(Ｉ、II、III、IV; BioLegend)で染色し、次いでＰＢＳ中４％パラホルムアルデヒドで１５分間固定した。分析について、前方および側方光散乱面積(ＦＳＣ－Ａ、ＳＳＣ－Ａ)対幅(ＦＳＣ－Ｗ、ＳＳＣ－Ｗ)に基づき、ダブレットを除外した。細胞集団を次のとおり定義した：マクロファージ、CD11bintF4/80hi；好中球、CD11bhiF4/80loLy6GhiLy6Cint；単球、CD11bhiF4/80loLy6GintLy6Chi。サンプルを、LSRIIフローサイトメーター(BD Biosciences)で読み、データをFlowJo分析ソフトウェアを使用して分析した。ＦｃγＲ陽性細胞パーセントを、％ＦＭＯ ＦＩＴＣ陽性－％ＦＩＴＣ陽性に基づき計算した。
統計分析：統計分析を、GraphPad Prism version 7.0ソフトウェア(GraphPad Software Inc., San Diego, CA)。０.０５以下のｐ値を統計的有意とした。生存曲線を、マンテル・コックス検定を使用して比較した；他の結果を、記載する複数検定を用いる分散分析を使用して比較した。
結果
ΔｇＤ－２をワクチン接種した母体は、ＨＳＶ－１またはＨＳＶ－２曝露から７～１４日齢仔を保護する：母体ワクチン接種が出生後仔をＨＳＶから保護できるかを決定するために、成熟雌性マウスに、２用量のΔｇＤ－２、ｒｇＤ－２／Ａｌｕｍ－ＭＰＬまたは対照として、非感染ＶＤ６０細胞ライセートを、交尾前にワクチン接種し、仔を、ほぼＬＤ９０用量で、ＨＳＶ－１またはＨＳＶ－２の臨床単離株に鼻腔内曝露させた。仔は、正期産ヒト乳児と免疫学的に対応する、生後７日目に最初に曝露された。致死的ＨＳＶ－１およびＨＳＶ－２疾患に対する有意な保護が、対照ワクチン接種した母体から生まれた仔と比較して、ΔｇＤ－２免疫化母体から生まれた仔で観察された(ｐ＜０.００１)(図１５Ａ)。対照的に、母体ｒｇＤ－２／Ａｌｕｍ－ＭＰＬは、７日齢仔において、ＨＳＶ－１(１／５(２０％)生存)またはＨＳＶ－２(３／１８(１６.７％生存)に対してほとんど保護を提供しなかった。仔が、生後１４日目に曝露されたとき保護は持続したが(図１５Ｂ、ｐ＜０.００１)、仔が生後１日目に曝露されたとき、減少した(ＨＳＶ－１でＨＳＶ－２よりも減少)(図１５Ｃ)。
ΔｇＤ－２をワクチン接種した母体は、ＨＳＶ－１またはＨＳＶ－２曝露から７～１４日齢仔を保護する：母体ワクチン接種が出生後仔をＨＳＶから保護できるかを決定するために、成熟雌性マウスに、２用量のΔｇＤ－２、ｒｇＤ－２／Ａｌｕｍ－ＭＰＬまたは対照として、非感染ＶＤ６０細胞ライセートを、交尾前にワクチン接種し、仔を、ほぼＬＤ９０用量で、ＨＳＶ－１またはＨＳＶ－２の臨床単離株に鼻腔内曝露させた。仔は、正期産ヒト乳児と免疫学的に対応する、生後７日目に最初に曝露された。致死的ＨＳＶ－１およびＨＳＶ－２疾患に対する有意な保護が、対照ワクチン接種した母体から生まれた仔と比較して、ΔｇＤ－２免疫化母体から生まれた仔で観察された(ｐ＜０.００１)(図１５Ａ)。対照的に、母体ｒｇＤ－２／Ａｌｕｍ－ＭＰＬは、７日齢仔において、ＨＳＶ－１(１／５(２０％)生存)またはＨＳＶ－２(３／１８(１６.７％生存)に対してほとんど保護を提供しなかった。仔が、生後１４日目に曝露されたとき保護は持続したが(図１５Ｂ、ｐ＜０.００１)、仔が生後１日目に曝露されたとき、減少した(ＨＳＶ－１でＨＳＶ－２よりも減少)(図１５Ｃ)。
７日または１４日齢仔で観察された致死的疾患に対する保護が、潜伏感染の場(latent reservoir)の確立に対する保護と関連するかを決定するために、三叉神経節を、死亡時、または、生存マウスで、ウイルス曝露１４日後ｑＰＣＲによりＨＳＶＤＮＡについてアッセイした。ｒｇＤ２－Ａｌｕｍ／ＭＰＬまたはＶＤ６０対照ライセートをワクチン接種されたマウスと比較して、ΔｇＤ－２をワクチン接種された母体から生まれた仔で、ウイルスＤＮＡの有意な減少が観察され、母性由来Ａｂによる迅速なウイルスクリアランスが示唆された(図１７参照)。
ＦｃγＲIV活性化抗体と相関する保護：ＨＳＶ結合(ＥＬＩＳＡ)、中和およびＦｃγＲIV活性化Ａｂレベルを、生後７日目にＨＳＶ－１またはＨＳＶ－２を感染させた仔から、疾患のための屠殺時(平均曝露後６日)または曝露で生存した仔は実験終了時(曝露１４日後)に得た血液で定量した。ｇＤ－２／Ａｌｕｍ－ＭＰＬおよびΔｇＤ－２のワクチン接種は、類似の力価のＨＳＶ－１またはＨＳＶ－２結合ＩｇＧ Ａｂを誘導し、一方、期待通り、ＶＤ６０免疫化マウスから生まれたＨＳＶ感染仔でＨＳＶ特異的ＩｇＧはほとんどまたは全く検出されなかった(図１６Ａ、１６Ｂ)。しかしながら、Ａｂの機能性は異なった。ｇＤ－２／Ａｌｕｍ－ＭＰＬで免疫化した母体から生まれた仔の血清におけるＡｂは主に中和(平均ＮＴ １：２５)(図１６Ｃ)であったが、マウスＦｃγＲIVを活性化させなかった(図１６Ｄ)。逆に、ΔｇＤ－２免疫化母体から生まれたマウスの血清Ａｂは、ＡＤＣＣ活性の指標である顕著なＦｃγＲIV活性化を示したが、中和活性はほとんどまたは全くなかった。
最適保護は、母乳から獲得した抗体を必要とする：生後１日で曝露した仔の、７日または１４日と比較して観察される保護の差は、経胎盤より獲得された抗体単独では不十分であるおよび／またはＦｃγＲエフェクター細胞機能に年齢依存的差異があることを示唆する。これらの可能性を探索するために、ΔｇＤ－２免疫化母親から生まれた仔を出生時入れ替え、ＶＤ６０細胞ライセートで免疫化された母親に授乳させ(経胎盤により獲得されたＡｂのみ)、逆に、ＶＤ６０対照免疫化母親から生まれたマウスを、ΔｇＤ－２免疫化母親に授乳させた(母乳獲得Ａｂのみ)。陽性対照は、ΔｇＤ－２免疫化母親から生まれ、かつ授乳されたマウスであり、陰性対照は、ＶＤ６０対照ライセート免疫化母親から生まれ、かつ授乳されたマウスであった。その後、仔を生後７日または１４日目に鼻腔内曝露し、２週間モニターした。対照(ＶＤ６０免疫化母体から生まれ、かつ授乳された仔)と比較して、ΔｇＤ－２免疫化母体から生まれた仔は、ΔｇＤ－２免疫化母体により授乳もされたならば、７日または１４日目に曝露されたとき、ＬＤ９０のＨＳＶ－１から有意に保護されるが、仔を出生時入れ替え、対照免疫化母体により授乳されたとき、保護されなかった(ｐ＜０.００１、複数比較について補正したカプラン・マイヤー)。逆に、ＶＤ６０免疫化母体から生まれたが、ΔｇＤ－２免疫化マウスにより授乳された仔は、１４日目に曝露されたとき有意に保護されたが、７日目はされなかった(ｐ＜０.００１)。仔をＨＳＶ－２に曝露したとき、類似の結果が得られた(図１９Ａ～Ｃ)。潜伏に対する保護も、経胎盤および母乳Ａｂ両者を受けた新生仔で最適であった(図２０)。
結果を、曝露時の仔の血清に存在した新生仔Ａｂレベルの量で補正した(図２１Ａ～２１Ｂ)。これらの試験について、血液を、ウイルスに曝露されていない「入れ替えた」マウスから、３日、７日または１４日目に得た(１日目の採血は実行不可能であった)。ＨＳＶ－２特異的ＩｇＧの新生仔レベルは、マウスがΔｇＤ－２免疫化母親から生まれたが、授乳されなければ急速に減少し、これは、マウスＩｇＧの短半減期に一致する。逆に、ＨＳＶ特異的ＩｇＧは、ΔｇＤ－２免疫化母親から授乳のみされたマウスで急速に増加した。母乳におけるＨＳＶ特異的抗体の存在は、８～１２日に集めたサンプルで確認した。
１日目に曝露されたマウスにおける保護の減少は、抗体依存性殺細胞活性と結びつく：生後１日目にＨＳＶ特異的Ａｂが十分なレベル存在するにも関わらず(ΔｇＤ－２免疫化母親から生まれたがが、授乳されていない仔の３日目に測定されたレベルに基づく)、保護は統計的に有意ではなく、ＦｃγＲIV発現および／または抗体依存性殺細胞(ＡＤＣＫ)の欠損が示唆される。成熟マウスと比較して、１～３日齢の肝臓および脾臓から単離した免疫細胞サブ集団において、ＦｃγＲの何れの発現も有意な差は観察されなかった。しかしながら、１～３日齢仔から単離した免疫細胞のＡＤＣＫエフェクター機能は、７日目または成熟細胞と比較して、有意に減少した。これらの試験について、種々の齢のマウスから単離した免疫細胞のプールした単細胞懸濁液(エフェクター細胞)を、ＨＳＶ－２(ＺＡＧ)(ＧＦＰを発現)感染ＨａＣＡＴ標的細胞と、ΔｇＤ－２またはＶＤ６０免疫化成熟マウスから採取した血清の存在下でインキュベートし、エフェクター細胞が標的細胞を殺す能力を定量した(データは示していない)。
致死未満量のＨＳＶ－２を感染させたマウスからの回復期血清は、仔をその後のウイルス曝露から保護できない。成熟雌性マウス(Ｃ５６７ＢＬ／６)を、１０５pfu用量のＨＳＶ－２(４６７４)またはＰＢＳ(対照)で鼻腔内感染させた。感染２週間後、血清をマウスから集め、ＨＳＶ－２特異的抗体について試験した。致死未満量の感染はＩｇＧ応答(図２２Ａ、ＥＬＩＳＡ力価)を誘導し、これは、主に中和であり(図２２Ｂ)、ΔｇＤ－２ワクチン接種マウスと比較してＦｃγＲIV活性化が少なかった(図２２Ｃ)。血清陽性または対照マウスを続いて交尾させ、得られた仔を、７日目にＨＳＶ－２で鼻腔内曝露させた。有意な保護は観察されなかった(図２２Ｄ)。
考察
世界的に、ＨＳＶは、１００,０００名の新生児あたり１０名に感染すると推定され、大部分の症例は、母体ＨＳＶ－２の高発生率を暗影するアフリカで生じる。しかしながら、全体的有病率が最高であるのは、生殖可能年齢に達するＨＳＶ－１およびＨＳＶ－２血清陰性、故に、いずれかの血清型での一次性器感染を獲得するリスクがより大きい、女性の数が増えているアメリカであり得る。頻繁な再発の病歴のある女性の抑制的アシクロビル処置および／または出産時に活動性損傷が検出されるときの帝王切開は、ＨＳＶのリスクを減少し得るが、大部分の周産期伝播は、一次母体ＨＳＶの状況でかつ臨床的病変非存在下で生じる。故に、最適予防には、ＨＳＶ－１およびＨＳＶ－２両者の臨床単離株に対し有効であり、胎盤を効率的に通過するＩｇＧ応答を産生するワクチンが必要とされる。
世界的に、ＨＳＶは、１００,０００名の新生児あたり１０名に感染すると推定され、大部分の症例は、母体ＨＳＶ－２の高発生率を暗影するアフリカで生じる。しかしながら、全体的有病率が最高であるのは、生殖可能年齢に達するＨＳＶ－１およびＨＳＶ－２血清陰性、故に、いずれかの血清型での一次性器感染を獲得するリスクがより大きい、女性の数が増えているアメリカであり得る。頻繁な再発の病歴のある女性の抑制的アシクロビル処置および／または出産時に活動性損傷が検出されるときの帝王切開は、ＨＳＶのリスクを減少し得るが、大部分の周産期伝播は、一次母体ＨＳＶの状況でかつ臨床的病変非存在下で生じる。故に、最適予防には、ＨＳＶ－１およびＨＳＶ－２両者の臨床単離株に対し有効であり、胎盤を効率的に通過するＩｇＧ応答を産生するワクチンが必要とされる。
現在のマウス試験の結果は、ΔｇＤ－２での雌性成熟マウス(受胎前)の免疫化が、ＨＳＶ－１またはＨＳＶ－２の臨床単離株での鼻腔内ウイルス曝露から新生仔マウス(生後７～１４日)を保護するＡｂ応答を誘導することを示す。保護は、ＡｂがＡＤＣＫを誘導するためにマウスＦｃγＲIVを活性化する能力と相関する。新生仔マウスの血清で類似レベルの総ＨＳＶ特異的Ａｂが産生されるにも関わらず、アジュバント組み換えｇＤ－２タンパク質で免疫化した母体は、７日目に限定的保護しか提供しないが、母乳から獲得されたＨＳＶ特異的抗体の増加と平行して、１４日目に有意な保護が得られた。これらの発見は、自然感染で優勢な応答である中和Ａｂが、新生仔の疾患に対して部分的保護を提供するとの臨床的観察により支持される。
ある程度の保護(統計的に有意ではない)が、新生仔の誕生当日に見られた(図１５Ｃ参照)。しかしながら、新生仔マウスが、ΔｇＤ－２免疫化母体をから生まれ、出生時入れ替え、対照ワクチン接種マウスに授乳させた仔で保護が喪失することにより示されるとおり、経胎盤および母乳獲得Ａｂ両者を受けたとき、保護が最適であった。これは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ／ｃおよびＩｇＧ３について約６～８日およびＩｇＧ２ｂについて４～６日であるマウスＩｇＧの比較的短い半減期ならびにマウスにおける近位小腸の刷子縁での高レベルのＦｃ新生仔受容体発現を反映する。対照的に、ヒトＩｇＧの半減期は遥かに長く、乳児は、合胞体栄養芽細胞における新生仔ＦｃＲの比較的高レベルの発現により、胎児として、母体ＩｇＧの大部分を経胎盤により受ける。従って、マウスにおける胎児保護(経胎盤)は、ヒト胎児および新生児において本技術で得られ得る保護を過小評価する。
周産期感染症の予防が、母体免疫化戦略を介して提供でき、抗体の受動伝達がナイーブ動物を保護することは明らかである。
参考文献
1. Looker, K.J., G.P. Garnett, and G.P. Schmid, An estimate of the global prevalence and incidence of herpes simplex virus type 2 infection. Bull World Health Organ, 2008. 86(10): p. 805-12, A.
2. Freeman, E.E., et al., Herpes simplex virus 2 infection increases HIV acquisition in men and women: systematic review and meta-analysis of longitudinal studies. AIDS, 2006. 20(1): p. 73-83.
3. Gray, R.H., et al., Probability of HIV-1 transmission per coital act in monogamous, heterosexual, HIV-1-discordant couples in Rakai, Uganda. Lancet, 2001. 357(9263): p. 1149-53.
4. Wald, A. and K. Link, Risk of human immunodeficiency virus infection in herpes simplex virus type 2-seropositive persons: a meta-analysis. J Infect Dis, 2002. 185(1): p. 45-52.
5. Paz-Bailey, G., et al., Herpes simplex virus type 2: epidemiology and management options in developing countries. Sex Transm Infect, 2007. 83(1): p. 16-22.
6. Doi, Y., et al., Seroprevalence of herpes simplex virus 1 and 2 in a population-based cohort in Japan. J. Epidemiol, 2009. 19(2): p. 56-62.
7. Bradley, H., et al., Seroprevalence of herpes simplex virus types 1 and 2--United States, 1999-2010. J Infect Dis, 2014. 209(3): p. 325-33.
8. Belshe, R.B., et al., Efficacy results of a trial of a herpes simplex vaccine. N Engl J Med, 2012. 366(1): p. 34-43.
9. Bernstein, D.I., et al., Epidemiology, clinical presentation, and antibody response to primary infection with herpes simplex virus type 1 and type 2 in young women. Clin Infect Dis, 2013. 56(3): p. 344-51.
10. Kimberlin, D., Herpes simplex virus, meningitis and encephalitis in neonates. Herpes, 2004. 11 Suppl 2: p. 65A-76A.
11. Ward, K.N., et al., Herpes simplex serious neurological disease in young children: incidence and long-term outcome. Arch Dis Child, 2012. 97(2): p. 162-5.
12. Lafferty, W.E., et al., Recurrences after oral and genital herpes simplex virus infection. Influence of site of infection and viral type. N Engl J Med, 1987. 316(23): p. 1444-9.
13. Owusu-Edusei, K., Jr., et al., The estimated direct medical cost of selected sexually transmitted infections in the United States, 2008. Sex Transm Dis, 2013. 40(3): p. 197-201.
14. Mertz, G.J., et al., Double-blind, placebo-controlled trial of a herpes simplex virus type 2 glycoprotein vaccine in persons at high risk for genital herpes infection. J Infect Dis, 1990. 161(4): p. 653-60.
15. Group, H.S.V.S., et al., Safety and immunogenicity of a glycoprotein D genital herpes vaccine in healthy girls 10-17 years of age: results from a randomised, controlled, double-blind trial. Vaccine, 2013. 31(51): p. 6136-43.
16. Leroux-Roels, G., et al., Immunogenicity and safety of different formulations of an adjuvanted glycoprotein D genital herpes vaccine in healthy adults: a double-blind randomized trial. Hum Vaccin Immunother, 2013. 9(6): p. 1254-62.
17. Bernstein, D.I., et al., Safety and immunogenicity of glycoprotein D-adjuvant genital herpes vaccine. Clin Infect Dis, 2005. 40(9): p. 1271-81.
18. Stanberry, L.R., et al., Glycoprotein-D-adjuvant vaccine to prevent genital herpes. N Engl J Med, 2002. 347(21): p. 1652-61.
19. Corey, L., et al., Recombinant glycoprotein vaccine for the prevention of genital HSV-2 infection: two randomized controlled trials. Chiron HSV Vaccine Study Group. JAMA, 1999. 282(4): p. 331-40.
20. jh.richardus@rotterdam.nl, Safety and immunogenicity of a glycoprotein D genital herpes vaccine in healthy girls 10-17 years of age: Results from a randomised, controlled, double-blind trial. Vaccine, 2013. 31(51): p. 6136-43.
21. Belshe, R.B., et al., Correlate of Immune Protection Against HSV-1 Genital Disease in Vaccinated Women. J Infect Dis, 2013.
22. Gerber, S.I., B.J. Belval, and B.C. Herold, Differences in the role of glycoprotein C of HSV-1 and HSV-2 in viral binding may contribute to serotype differences in cell tropism. Virology, 1995. 214(1): p. 29-39.
23. Lubinski, J.M., et al., The herpes simplex virus 1 IgG fc receptor blocks antibody-mediated complement activation and antibody-dependent cellular cytotoxicity in vivo. J Virol, 2011. 85(7): p. 3239-49.
24. Para, M.F., L. Goldstein, and P.G. Spear, Similarities and differences in the Fc-binding glycoprotein (gE) of herpes simplex virus types 1 and 2 and tentative mapping of the viral gene for this glycoprotein. J Virol, 1982. 41(1): p. 137-44.
25. Hook, L.M., et al., Herpes simplex virus type 1 and 2 glycoprotein C prevents complement-mediated neutralization induced by natural immunoglobulin M antibody. J Virol, 2006. 80(8): p. 4038-46.
26. Lubinski, J.M., et al., Herpes simplex virus type 1 evades the effects of antibody and complement in vivo. J Virol, 2002. 76(18): p. 9232-41.
27. Awasthi, S., et al., Immunization with a vaccine combining herpes simplex virus 2 (HSV-2) glycoprotein C (gC) and gD subunits improves the protection of dorsal root ganglia in mice and reduces the frequency of recurrent vaginal shedding of HSV-2 DNA in guinea pigs compared to immunization with gD alone. J Virol, 2011. 85(20): p. 10472-86.
28. Manservigi, R., et al., Immunotherapeutic activity of a recombinant combined gB-gD-gE vaccine against recurrent HSV-2 infections in a guinea pig model. Vaccine, 2005. 23(7): p. 865-72.
29. de Bruyn, G., et al., A randomized controlled trial of a replication defective (gH deletion) herpes simplex virus vaccine for the treatment of recurrent genital herpes among immunocompetent subjects. Vaccine, 2006. 24(7): p. 914-20.
30. Ouwendijk, W.J., et al., T-cell immunity to human alphaherpesviruses. Curr Opin Virol, 2013. 3(4): p. 452-60.
31. Parr, M.B. and E.L. Parr, Mucosal immunity to herpes simplex virus type 2 infection in the mouse vagina is impaired by in vivo depletion of T lymphocytes. J Virol, 1998. 72(4): p. 2677-85.
32. Noisakran, S. and D.J. Carr, Lymphocytes delay kinetics of HSV-1 reactivation from in vitro explants of latent infected trigeminal ganglia. J Neuroimmunol, 1999. 95(1-2): p. 126-35.
33. van Velzen, M., et al., Local CD4 and CD8 T-cell reactivity to HSV-1 antigens documents broad viral protein expression and immune competence in latently infected human trigeminal ganglia. PLoS Pathog, 2013. 9(8): p. e1003547.
34. Muller, W.J., et al., Herpes simplex virus type 2 tegument proteins contain subdominant T-cell epitopes detectable in BALB/c mice after DNA immunization and infection. J Gen Virol, 2009. 90(Pt 5): p. 1153-63.
35. Zhu, J., et al., Immune surveillance by CD8alphaalpha+ skin-resident T cells in human herpes virus infection. Nature, 2013. 497(7450): p. 494-7.
36. Steinberg, M.W., et al., Regulating the mucosal immune system: the contrasting roles of LIGHT, HVEM, and their various partners. Semin Immunopathol, 2009. 31(2): p. 207-21.
37. Steinberg, M.W., T.C. Cheung, and C.F. Ware, The signaling networks of the herpesvirus entry mediator (TNFRSF14) in immune regulation. Immunol Rev, 2011. 244(1): p. 169-87.
38. Kopp, S.J., C.S. Storti, and W.J. Muller, Herpes simplex virus-2 glycoprotein interaction with HVEM influences virus-specific recall cellular responses at the mucosa. Clin Dev Immunol, 2012. 2012: p. 284104.
39. Yoon, M., et al., Functional interaction between herpes simplex virus type 2 gD and HVEM transiently dampens local chemokine production after murine mucosal infection. PLoS One, 2011. 6(1): p. e16122.
40. Ligas, M.W. and D.C. Johnson, A herpes simplex virus mutant in which glycoprotein D sequences are replaced by beta-galactosidase sequences binds to but is unable to penetrate into cells. J Virol, 1988. 62(5): p. 1486-94.
41. Cheshenko, N., et al., HSV activates Akt to trigger calcium release and promote viral entry: novel candidate target for treatment and suppression. FASEB J, 2013. 27(7): p. 2584-99.
42. Parr, E.L. and M.B. Parr, Immunoglobulin G is the main protective antibody in mouse vaginal secretions after vaginal immunization with attenuated herpes simplex virus type 2. J Virol, 1997. 71(11): p. 8109-15.
43. Mbopi-Keou, F.X., et al., Cervicovaginal neutralizing antibodies to herpes simplex virus (HSV) in women seropositive for HSV Types 1 and 2. Clin Diagn Lab Immunol, 2003. 10(3): p. 388-93.
44. Hendrickson, B.A., et al., Decreased vaginal disease in J-chain-deficient mice following herpes simplex type 2 genital infection. Virology, 2000. 271(1): p. 155-62.
45. Nixon, B., et al., Genital Herpes Simplex Virus Type 2 Infection in Humanized HIV-Transgenic Mice Triggers HIV Shedding and Is Associated With Greater Neurological Disease. J Infect Dis, 2013.
46. Carr, D.J. and L. Tomanek, Herpes simplex virus and the chemokines that mediate the inflammation. Curr Top Microbiol Immunol, 2006. 303: p. 47-65.
47. Stefanidou, M., et al., Herpes simplex virus 2 (HSV-2) prevents dendritic cell maturation, induces apoptosis, and triggers release of proinflammatory cytokines: potential links to HSV-HIV synergy. J Virol, 2013. 87(3): p. 1443-53.
48. Bourne, N., et al., Herpes simplex virus (HSV) type 2 glycoprotein D subunit vaccines and protection against genital HSV-1 or HSV-2 disease in guinea pigs. J Infect Dis, 2003. 187(4): p. 542-9.
49. Bourne, N., et al., Impact of immunization with glycoprotein D2/AS04 on herpes simplex virus type 2 shedding into the genital tract in guinea pigs that become infected. J Infect Dis, 2005. 192(12): p. 2117-23.
50. Bernstein, D.I., et al., The adjuvant CLDC increases protection of a herpes simplex type 2 glycoprotein D vaccine in guinea pigs. Vaccine, 2010. 28(21): p. 3748-53.
51. Bernstein, D.I., et al., Potent adjuvant activity of cationic liposome-DNA complexes for genital herpes vaccines. Clin Vaccine Immunol, 2009. 16(5): p. 699-705.
52. Sweeney, K.A., et al., A recombinant Mycobacterium smegmatis induces potent bactericidal immunity against Mycobacterium tuberculosis. Nat Med, 2011. 17(10): p. 1261-8.
53. Kohl, S., et al., Limited antibody-dependent cellular cytotoxicity antibody response induced by a herpes simplex virus type 2 subunit vaccine. J Infect Dis, 2000. 181(1): p. 335-9.
54. John, M., et al., Cervicovaginal secretions contribute to innate resistance to herpes simplex virus infection. J Infect Dis, 2005. 192(10): p. 1731-40.
55. Nugent, C.T., et al., Analysis of the cytolytic T-lymphocyte response to herpes simplex virus type 1 glycoprotein B during primary and secondary infection. J Virol, 1994. 68(11): p. 7644-8.
56. Mueller, S.N., et al., Characterization of two TCR transgenic mouse lines specific for herpes simplex virus. Immunol Cell Biol, 2002. 80(2): p. 156-63.
57. Wallace, M.E., et al., The cytotoxic T-cell response to herpes simplex virus type 1 infection of C57BL/6 mice is almost entirely directed against a single immunodominant determinant. J Virol, 1999. 73(9): p. 7619-26.
58. Milligan, G.N., et al., T-cell-mediated mechanisms involved in resolution of genital herpes simplex virus type 2 (HSV-2) infection of mice. J Reprod Immunol, 2004. 61(2): p. 115-27.
59. Wang, K., et al., A herpes simplex virus 2 glycoprotein D mutant generated by bacterial artificial chromosome mutagenesis is severely impaired for infecting neuronal cells and infects only Vero cells expressing exogenous HVEM. J Virol, 2012. 86(23): p. 12891-902.
60. Barletta, R.G., et al., Identification of expression signals of the mycobacteriophages Bxb1, L1 and TM4 using the Escherichia-Mycobacterium shuttle plasmids pYUB75 and pYUB76 designed to create translational fusions to the lacZ gene. J Gen Microbiol, 1992. 138(1): p. 23-30.
61. Yamaguchi, S., et al., A method for producing transgenic cells using a multi-integrase system on a human artificial chromosome vector. PLoS One, 2011. 6(2): p. e17267.
62. Xu, Z., et al., Accuracy and efficiency define Bxb1 integrase as the best of fifteen candidate serine recombinases for the integration of DNA into the human genome. BMC Biotechnol, 2013. 13: p. 87.
63. Hill, A., et al., Herpes simplex virus turns off the TAP to evade host immunity. Nature, 1995. 375(6530): p. 411-5.
64. Shu, M., et al., Selective degradation of mRNAs by the HSV host shutoff RNase is regulated by the UL47 tegument protein. Proc Natl Acad Sci U S A, 2013. 110(18): p. E1669-75.
65. Umbach, J.L., et al., MicroRNAs expressed by herpes simplex virus 1 during latent infection regulate viral mRNAs. Nature, 2008. 454(7205): p. 780-3.
66. Cheshenko, N., et al., Herpes simplex virus triggers activation of calcium-signaling pathways. J Cell Biol, 2003. 163(2): p. 283-93.
67. Cheshenko, N. and B.C. Herold, Glycoprotein B plays a predominant role in mediating herpes simplex virus type 2 attachment and is required for entry and cell-to-cell spread. J Gen Virol, 2002. 83(Pt 9): p. 2247-55.
68. Cheshenko, N., et al., Multiple receptor interactions trigger release of membrane and intracellular calcium stores critical for herpes simplex virus entry. Mol Biol Cell, 2007. 18(8): p. 3119-30.
69. Immergluck, L.C., et al., Viral and cellular requirements for entry of herpes simplex virus type 1 into primary neuronal cells. J Gen Virol, 1998. 79 ( Pt 3): p. 549-59.
70. Nixon, B., et al., Genital Herpes Simplex Virus Type 2 Infection in Humanized HIV-Transgenic Mice Triggers HIV Shedding and Is Associated With Greater Neurological Disease. J Infect Dis, 2014. 209(4): p. 510-22.
71. Cheshenko, N., et al., HSV usurps eukaryotic initiation factor 3 subunit M for viral protein translation: novel prevention target. PLoS One, 2010. 5(7): p. e11829.
72. Carbonetti, S., et al., Soluble HIV-1 Envelope Immunogens Derived from an Elite Neutralizer Elicit Cross-Reactive V1V2 Antibodies and Low Potency Neutralizing Antibodies. PLoS One, 2014. 9(1): p. e86905.
73. Janes, H., et al., Vaccine-induced gag-specific T cells are associated with reduced viremia after HIV-1 infection. J Infect Dis, 2013. 208(8): p. 1231-9.
74. Ferre, A.L., et al., Immunodominant HIV-specific CD8+ T-cell responses are common to blood and gastrointestinal mucosa, and Gag-specific responses dominate in rectal mucosa of HIV controllers. J Virol, 2010. 84(19): p. 10354-65.
75. Schiffer JT, Corey L (2013) Rapid host immune response and viral dynamics in herpes simplex virus-2 infection. Nat Med 19:280-90.
76. Sydiskis, Schultz (1965) Herpes simplex skin infection in mice. J Infect Dis 115:237-46.
77. Nixon B et al. (2013) Griffithsin protects mice from genital herpes by preventing cell-to-cell spread. J Virol 87:6257-69.
78. Nimmerjahn F, Bruhns P, Horiuchi K, Ravetch JV (2005) FcgammaRIV: a novel FcR with distinct IgG subclass specificity. Immunity 23:41-51.
79. Wang K et al. (2015) A Herpes Simplex Virus 2 (HSV-2) gD Mutant Impaired for Neural Tropism Is Superior to an HSV-2 gD Subunit Vaccine To Protect Animals from Challenge with HSV-2. J Virol 90:562-74.
80. Boukhvalova M et al. (2015) Efficacy of the Herpes Simplex Virus 2 (HSV-2) Glycoprotein D/AS04 Vaccine against Genital HSV-2 and HSV-1 Infection and Disease in the Cotton Rat Sigmodon hispidus Model. J Virol 89:9825-40.
81. Yin H et al. (2013) IL-33 accelerates cutaneous wound healing involved in upregulation of alternatively activated macrophages. Mol Immunol 56:347-53.
82. Rak GD et al. (2015) IL-33-Dependent Group 2 Innate Lymphoid Cells Promote Cutaneous Wound Healing. J Invest Dermatol.
83. Anthony RM, Kobayashi T, Wermeling F, Ravetch JV (2011) Intravenous gammaglobulin suppresses inflammation through a novel T(H)2 pathway. Nature 475:110-3.
84. Simmons, Nash (1984) Zosteriform spread of herpes simplex virus as a model of recrudescence and its use to investigate the role of immune cells in prevention of recurrent disease.
85. Ligas, Johnson (1988) A herpes simplex virus mutant in which glycoprotein D sequences are replaced by beta-galactosidase sequences binds to but is unable to penetrate into cells.
86. Nixon B et al. (2013) Griffithsin protects mice from genital herpes by preventing cell-to-cell spread. Journal of virology 87:6257-69.
87. Ejercito, Kieff, Roizman (1968) Characterization of herpes simplex virus strains differing in their effects on social behaviour of infected cells. J Gen Virology 2:357-64.
88. Brown, Ritchie, Subak-Sharpe (1973) Genetic studies with herpes simplex virus type 1. The isolation of temperature-sensitive mutants, their arrangement into complementation groups and recombination analysis leading to a linkage map. The Journal of general virology 18:329-46.
89. Wan Y, Renner DW, Albert I, Szpara ML (2015) VirAmp: a galaxy-based viral genome assembly pipeline. Gigascience 4:19.
90. Larkin MA et al. (2007) Clustal W and Clustal X version 2.0. Bioinformatics 23:2947-8.
91. Tamura K, Stecher G, Peterson D, Filipski A, Kumar S (2013) MEGA6: Molecular Evolutionary Genetics Analysis version 6.0. Mol Biol Evol 30:2725-9.
92. Bologna-Molina R, Damian-Matsumura P, Molina-Frechero N (2011) An easy cell counting method for immunohistochemistry that does not use an image analysis program. Histopathology 59:801-3.
93. Ackerman M et al. (2011) A robust, high-throughput assay to determine the phagocytic activity of clinical antibody samples. Journal of Immunological Methods 366:8-19.
94. Petro C et al. (2015) Herpes simplex type 2 virus deleted in glycoprotein D protects against vaginal, skin and neural disease. Elife 4.
95. Cheshenko N et al. (2013) HSV activates Akt to trigger calcium release and promote viral entry: novel candidate target for treatment and suppression. FASEB J 27:2584-99.
96. Kolb AW, Larsen IV, Cuellar JA, Brandt CR (2015) Genomic, phylogenetic, and recombinational characterization of herpes simplex virus 2 strains. J Virol 89:6427-34.
97. Dudek TE, Torres-Lopez E, Crumpacker C, Knipe DM (2011) Evidence for differences in immunologic and pathogenesis properties of herpes simplex virus 2 strains from the United States and South Africa. J Infect Dis 203:1434-41.
1. Looker, K.J., G.P. Garnett, and G.P. Schmid, An estimate of the global prevalence and incidence of herpes simplex virus type 2 infection. Bull World Health Organ, 2008. 86(10): p. 805-12, A.
2. Freeman, E.E., et al., Herpes simplex virus 2 infection increases HIV acquisition in men and women: systematic review and meta-analysis of longitudinal studies. AIDS, 2006. 20(1): p. 73-83.
3. Gray, R.H., et al., Probability of HIV-1 transmission per coital act in monogamous, heterosexual, HIV-1-discordant couples in Rakai, Uganda. Lancet, 2001. 357(9263): p. 1149-53.
4. Wald, A. and K. Link, Risk of human immunodeficiency virus infection in herpes simplex virus type 2-seropositive persons: a meta-analysis. J Infect Dis, 2002. 185(1): p. 45-52.
5. Paz-Bailey, G., et al., Herpes simplex virus type 2: epidemiology and management options in developing countries. Sex Transm Infect, 2007. 83(1): p. 16-22.
6. Doi, Y., et al., Seroprevalence of herpes simplex virus 1 and 2 in a population-based cohort in Japan. J. Epidemiol, 2009. 19(2): p. 56-62.
7. Bradley, H., et al., Seroprevalence of herpes simplex virus types 1 and 2--United States, 1999-2010. J Infect Dis, 2014. 209(3): p. 325-33.
8. Belshe, R.B., et al., Efficacy results of a trial of a herpes simplex vaccine. N Engl J Med, 2012. 366(1): p. 34-43.
9. Bernstein, D.I., et al., Epidemiology, clinical presentation, and antibody response to primary infection with herpes simplex virus type 1 and type 2 in young women. Clin Infect Dis, 2013. 56(3): p. 344-51.
10. Kimberlin, D., Herpes simplex virus, meningitis and encephalitis in neonates. Herpes, 2004. 11 Suppl 2: p. 65A-76A.
11. Ward, K.N., et al., Herpes simplex serious neurological disease in young children: incidence and long-term outcome. Arch Dis Child, 2012. 97(2): p. 162-5.
12. Lafferty, W.E., et al., Recurrences after oral and genital herpes simplex virus infection. Influence of site of infection and viral type. N Engl J Med, 1987. 316(23): p. 1444-9.
13. Owusu-Edusei, K., Jr., et al., The estimated direct medical cost of selected sexually transmitted infections in the United States, 2008. Sex Transm Dis, 2013. 40(3): p. 197-201.
14. Mertz, G.J., et al., Double-blind, placebo-controlled trial of a herpes simplex virus type 2 glycoprotein vaccine in persons at high risk for genital herpes infection. J Infect Dis, 1990. 161(4): p. 653-60.
15. Group, H.S.V.S., et al., Safety and immunogenicity of a glycoprotein D genital herpes vaccine in healthy girls 10-17 years of age: results from a randomised, controlled, double-blind trial. Vaccine, 2013. 31(51): p. 6136-43.
16. Leroux-Roels, G., et al., Immunogenicity and safety of different formulations of an adjuvanted glycoprotein D genital herpes vaccine in healthy adults: a double-blind randomized trial. Hum Vaccin Immunother, 2013. 9(6): p. 1254-62.
17. Bernstein, D.I., et al., Safety and immunogenicity of glycoprotein D-adjuvant genital herpes vaccine. Clin Infect Dis, 2005. 40(9): p. 1271-81.
18. Stanberry, L.R., et al., Glycoprotein-D-adjuvant vaccine to prevent genital herpes. N Engl J Med, 2002. 347(21): p. 1652-61.
19. Corey, L., et al., Recombinant glycoprotein vaccine for the prevention of genital HSV-2 infection: two randomized controlled trials. Chiron HSV Vaccine Study Group. JAMA, 1999. 282(4): p. 331-40.
20. jh.richardus@rotterdam.nl, Safety and immunogenicity of a glycoprotein D genital herpes vaccine in healthy girls 10-17 years of age: Results from a randomised, controlled, double-blind trial. Vaccine, 2013. 31(51): p. 6136-43.
21. Belshe, R.B., et al., Correlate of Immune Protection Against HSV-1 Genital Disease in Vaccinated Women. J Infect Dis, 2013.
22. Gerber, S.I., B.J. Belval, and B.C. Herold, Differences in the role of glycoprotein C of HSV-1 and HSV-2 in viral binding may contribute to serotype differences in cell tropism. Virology, 1995. 214(1): p. 29-39.
23. Lubinski, J.M., et al., The herpes simplex virus 1 IgG fc receptor blocks antibody-mediated complement activation and antibody-dependent cellular cytotoxicity in vivo. J Virol, 2011. 85(7): p. 3239-49.
24. Para, M.F., L. Goldstein, and P.G. Spear, Similarities and differences in the Fc-binding glycoprotein (gE) of herpes simplex virus types 1 and 2 and tentative mapping of the viral gene for this glycoprotein. J Virol, 1982. 41(1): p. 137-44.
25. Hook, L.M., et al., Herpes simplex virus type 1 and 2 glycoprotein C prevents complement-mediated neutralization induced by natural immunoglobulin M antibody. J Virol, 2006. 80(8): p. 4038-46.
26. Lubinski, J.M., et al., Herpes simplex virus type 1 evades the effects of antibody and complement in vivo. J Virol, 2002. 76(18): p. 9232-41.
27. Awasthi, S., et al., Immunization with a vaccine combining herpes simplex virus 2 (HSV-2) glycoprotein C (gC) and gD subunits improves the protection of dorsal root ganglia in mice and reduces the frequency of recurrent vaginal shedding of HSV-2 DNA in guinea pigs compared to immunization with gD alone. J Virol, 2011. 85(20): p. 10472-86.
28. Manservigi, R., et al., Immunotherapeutic activity of a recombinant combined gB-gD-gE vaccine against recurrent HSV-2 infections in a guinea pig model. Vaccine, 2005. 23(7): p. 865-72.
29. de Bruyn, G., et al., A randomized controlled trial of a replication defective (gH deletion) herpes simplex virus vaccine for the treatment of recurrent genital herpes among immunocompetent subjects. Vaccine, 2006. 24(7): p. 914-20.
30. Ouwendijk, W.J., et al., T-cell immunity to human alphaherpesviruses. Curr Opin Virol, 2013. 3(4): p. 452-60.
31. Parr, M.B. and E.L. Parr, Mucosal immunity to herpes simplex virus type 2 infection in the mouse vagina is impaired by in vivo depletion of T lymphocytes. J Virol, 1998. 72(4): p. 2677-85.
32. Noisakran, S. and D.J. Carr, Lymphocytes delay kinetics of HSV-1 reactivation from in vitro explants of latent infected trigeminal ganglia. J Neuroimmunol, 1999. 95(1-2): p. 126-35.
33. van Velzen, M., et al., Local CD4 and CD8 T-cell reactivity to HSV-1 antigens documents broad viral protein expression and immune competence in latently infected human trigeminal ganglia. PLoS Pathog, 2013. 9(8): p. e1003547.
34. Muller, W.J., et al., Herpes simplex virus type 2 tegument proteins contain subdominant T-cell epitopes detectable in BALB/c mice after DNA immunization and infection. J Gen Virol, 2009. 90(Pt 5): p. 1153-63.
35. Zhu, J., et al., Immune surveillance by CD8alphaalpha+ skin-resident T cells in human herpes virus infection. Nature, 2013. 497(7450): p. 494-7.
36. Steinberg, M.W., et al., Regulating the mucosal immune system: the contrasting roles of LIGHT, HVEM, and their various partners. Semin Immunopathol, 2009. 31(2): p. 207-21.
37. Steinberg, M.W., T.C. Cheung, and C.F. Ware, The signaling networks of the herpesvirus entry mediator (TNFRSF14) in immune regulation. Immunol Rev, 2011. 244(1): p. 169-87.
38. Kopp, S.J., C.S. Storti, and W.J. Muller, Herpes simplex virus-2 glycoprotein interaction with HVEM influences virus-specific recall cellular responses at the mucosa. Clin Dev Immunol, 2012. 2012: p. 284104.
39. Yoon, M., et al., Functional interaction between herpes simplex virus type 2 gD and HVEM transiently dampens local chemokine production after murine mucosal infection. PLoS One, 2011. 6(1): p. e16122.
40. Ligas, M.W. and D.C. Johnson, A herpes simplex virus mutant in which glycoprotein D sequences are replaced by beta-galactosidase sequences binds to but is unable to penetrate into cells. J Virol, 1988. 62(5): p. 1486-94.
41. Cheshenko, N., et al., HSV activates Akt to trigger calcium release and promote viral entry: novel candidate target for treatment and suppression. FASEB J, 2013. 27(7): p. 2584-99.
42. Parr, E.L. and M.B. Parr, Immunoglobulin G is the main protective antibody in mouse vaginal secretions after vaginal immunization with attenuated herpes simplex virus type 2. J Virol, 1997. 71(11): p. 8109-15.
43. Mbopi-Keou, F.X., et al., Cervicovaginal neutralizing antibodies to herpes simplex virus (HSV) in women seropositive for HSV Types 1 and 2. Clin Diagn Lab Immunol, 2003. 10(3): p. 388-93.
44. Hendrickson, B.A., et al., Decreased vaginal disease in J-chain-deficient mice following herpes simplex type 2 genital infection. Virology, 2000. 271(1): p. 155-62.
45. Nixon, B., et al., Genital Herpes Simplex Virus Type 2 Infection in Humanized HIV-Transgenic Mice Triggers HIV Shedding and Is Associated With Greater Neurological Disease. J Infect Dis, 2013.
46. Carr, D.J. and L. Tomanek, Herpes simplex virus and the chemokines that mediate the inflammation. Curr Top Microbiol Immunol, 2006. 303: p. 47-65.
47. Stefanidou, M., et al., Herpes simplex virus 2 (HSV-2) prevents dendritic cell maturation, induces apoptosis, and triggers release of proinflammatory cytokines: potential links to HSV-HIV synergy. J Virol, 2013. 87(3): p. 1443-53.
48. Bourne, N., et al., Herpes simplex virus (HSV) type 2 glycoprotein D subunit vaccines and protection against genital HSV-1 or HSV-2 disease in guinea pigs. J Infect Dis, 2003. 187(4): p. 542-9.
49. Bourne, N., et al., Impact of immunization with glycoprotein D2/AS04 on herpes simplex virus type 2 shedding into the genital tract in guinea pigs that become infected. J Infect Dis, 2005. 192(12): p. 2117-23.
50. Bernstein, D.I., et al., The adjuvant CLDC increases protection of a herpes simplex type 2 glycoprotein D vaccine in guinea pigs. Vaccine, 2010. 28(21): p. 3748-53.
51. Bernstein, D.I., et al., Potent adjuvant activity of cationic liposome-DNA complexes for genital herpes vaccines. Clin Vaccine Immunol, 2009. 16(5): p. 699-705.
52. Sweeney, K.A., et al., A recombinant Mycobacterium smegmatis induces potent bactericidal immunity against Mycobacterium tuberculosis. Nat Med, 2011. 17(10): p. 1261-8.
53. Kohl, S., et al., Limited antibody-dependent cellular cytotoxicity antibody response induced by a herpes simplex virus type 2 subunit vaccine. J Infect Dis, 2000. 181(1): p. 335-9.
54. John, M., et al., Cervicovaginal secretions contribute to innate resistance to herpes simplex virus infection. J Infect Dis, 2005. 192(10): p. 1731-40.
55. Nugent, C.T., et al., Analysis of the cytolytic T-lymphocyte response to herpes simplex virus type 1 glycoprotein B during primary and secondary infection. J Virol, 1994. 68(11): p. 7644-8.
56. Mueller, S.N., et al., Characterization of two TCR transgenic mouse lines specific for herpes simplex virus. Immunol Cell Biol, 2002. 80(2): p. 156-63.
57. Wallace, M.E., et al., The cytotoxic T-cell response to herpes simplex virus type 1 infection of C57BL/6 mice is almost entirely directed against a single immunodominant determinant. J Virol, 1999. 73(9): p. 7619-26.
58. Milligan, G.N., et al., T-cell-mediated mechanisms involved in resolution of genital herpes simplex virus type 2 (HSV-2) infection of mice. J Reprod Immunol, 2004. 61(2): p. 115-27.
59. Wang, K., et al., A herpes simplex virus 2 glycoprotein D mutant generated by bacterial artificial chromosome mutagenesis is severely impaired for infecting neuronal cells and infects only Vero cells expressing exogenous HVEM. J Virol, 2012. 86(23): p. 12891-902.
60. Barletta, R.G., et al., Identification of expression signals of the mycobacteriophages Bxb1, L1 and TM4 using the Escherichia-Mycobacterium shuttle plasmids pYUB75 and pYUB76 designed to create translational fusions to the lacZ gene. J Gen Microbiol, 1992. 138(1): p. 23-30.
61. Yamaguchi, S., et al., A method for producing transgenic cells using a multi-integrase system on a human artificial chromosome vector. PLoS One, 2011. 6(2): p. e17267.
62. Xu, Z., et al., Accuracy and efficiency define Bxb1 integrase as the best of fifteen candidate serine recombinases for the integration of DNA into the human genome. BMC Biotechnol, 2013. 13: p. 87.
63. Hill, A., et al., Herpes simplex virus turns off the TAP to evade host immunity. Nature, 1995. 375(6530): p. 411-5.
64. Shu, M., et al., Selective degradation of mRNAs by the HSV host shutoff RNase is regulated by the UL47 tegument protein. Proc Natl Acad Sci U S A, 2013. 110(18): p. E1669-75.
65. Umbach, J.L., et al., MicroRNAs expressed by herpes simplex virus 1 during latent infection regulate viral mRNAs. Nature, 2008. 454(7205): p. 780-3.
66. Cheshenko, N., et al., Herpes simplex virus triggers activation of calcium-signaling pathways. J Cell Biol, 2003. 163(2): p. 283-93.
67. Cheshenko, N. and B.C. Herold, Glycoprotein B plays a predominant role in mediating herpes simplex virus type 2 attachment and is required for entry and cell-to-cell spread. J Gen Virol, 2002. 83(Pt 9): p. 2247-55.
68. Cheshenko, N., et al., Multiple receptor interactions trigger release of membrane and intracellular calcium stores critical for herpes simplex virus entry. Mol Biol Cell, 2007. 18(8): p. 3119-30.
69. Immergluck, L.C., et al., Viral and cellular requirements for entry of herpes simplex virus type 1 into primary neuronal cells. J Gen Virol, 1998. 79 ( Pt 3): p. 549-59.
70. Nixon, B., et al., Genital Herpes Simplex Virus Type 2 Infection in Humanized HIV-Transgenic Mice Triggers HIV Shedding and Is Associated With Greater Neurological Disease. J Infect Dis, 2014. 209(4): p. 510-22.
71. Cheshenko, N., et al., HSV usurps eukaryotic initiation factor 3 subunit M for viral protein translation: novel prevention target. PLoS One, 2010. 5(7): p. e11829.
72. Carbonetti, S., et al., Soluble HIV-1 Envelope Immunogens Derived from an Elite Neutralizer Elicit Cross-Reactive V1V2 Antibodies and Low Potency Neutralizing Antibodies. PLoS One, 2014. 9(1): p. e86905.
73. Janes, H., et al., Vaccine-induced gag-specific T cells are associated with reduced viremia after HIV-1 infection. J Infect Dis, 2013. 208(8): p. 1231-9.
74. Ferre, A.L., et al., Immunodominant HIV-specific CD8+ T-cell responses are common to blood and gastrointestinal mucosa, and Gag-specific responses dominate in rectal mucosa of HIV controllers. J Virol, 2010. 84(19): p. 10354-65.
75. Schiffer JT, Corey L (2013) Rapid host immune response and viral dynamics in herpes simplex virus-2 infection. Nat Med 19:280-90.
76. Sydiskis, Schultz (1965) Herpes simplex skin infection in mice. J Infect Dis 115:237-46.
77. Nixon B et al. (2013) Griffithsin protects mice from genital herpes by preventing cell-to-cell spread. J Virol 87:6257-69.
78. Nimmerjahn F, Bruhns P, Horiuchi K, Ravetch JV (2005) FcgammaRIV: a novel FcR with distinct IgG subclass specificity. Immunity 23:41-51.
79. Wang K et al. (2015) A Herpes Simplex Virus 2 (HSV-2) gD Mutant Impaired for Neural Tropism Is Superior to an HSV-2 gD Subunit Vaccine To Protect Animals from Challenge with HSV-2. J Virol 90:562-74.
80. Boukhvalova M et al. (2015) Efficacy of the Herpes Simplex Virus 2 (HSV-2) Glycoprotein D/AS04 Vaccine against Genital HSV-2 and HSV-1 Infection and Disease in the Cotton Rat Sigmodon hispidus Model. J Virol 89:9825-40.
81. Yin H et al. (2013) IL-33 accelerates cutaneous wound healing involved in upregulation of alternatively activated macrophages. Mol Immunol 56:347-53.
82. Rak GD et al. (2015) IL-33-Dependent Group 2 Innate Lymphoid Cells Promote Cutaneous Wound Healing. J Invest Dermatol.
83. Anthony RM, Kobayashi T, Wermeling F, Ravetch JV (2011) Intravenous gammaglobulin suppresses inflammation through a novel T(H)2 pathway. Nature 475:110-3.
84. Simmons, Nash (1984) Zosteriform spread of herpes simplex virus as a model of recrudescence and its use to investigate the role of immune cells in prevention of recurrent disease.
85. Ligas, Johnson (1988) A herpes simplex virus mutant in which glycoprotein D sequences are replaced by beta-galactosidase sequences binds to but is unable to penetrate into cells.
86. Nixon B et al. (2013) Griffithsin protects mice from genital herpes by preventing cell-to-cell spread. Journal of virology 87:6257-69.
87. Ejercito, Kieff, Roizman (1968) Characterization of herpes simplex virus strains differing in their effects on social behaviour of infected cells. J Gen Virology 2:357-64.
88. Brown, Ritchie, Subak-Sharpe (1973) Genetic studies with herpes simplex virus type 1. The isolation of temperature-sensitive mutants, their arrangement into complementation groups and recombination analysis leading to a linkage map. The Journal of general virology 18:329-46.
89. Wan Y, Renner DW, Albert I, Szpara ML (2015) VirAmp: a galaxy-based viral genome assembly pipeline. Gigascience 4:19.
90. Larkin MA et al. (2007) Clustal W and Clustal X version 2.0. Bioinformatics 23:2947-8.
91. Tamura K, Stecher G, Peterson D, Filipski A, Kumar S (2013) MEGA6: Molecular Evolutionary Genetics Analysis version 6.0. Mol Biol Evol 30:2725-9.
92. Bologna-Molina R, Damian-Matsumura P, Molina-Frechero N (2011) An easy cell counting method for immunohistochemistry that does not use an image analysis program. Histopathology 59:801-3.
93. Ackerman M et al. (2011) A robust, high-throughput assay to determine the phagocytic activity of clinical antibody samples. Journal of Immunological Methods 366:8-19.
94. Petro C et al. (2015) Herpes simplex type 2 virus deleted in glycoprotein D protects against vaginal, skin and neural disease. Elife 4.
95. Cheshenko N et al. (2013) HSV activates Akt to trigger calcium release and promote viral entry: novel candidate target for treatment and suppression. FASEB J 27:2584-99.
96. Kolb AW, Larsen IV, Cuellar JA, Brandt CR (2015) Genomic, phylogenetic, and recombinational characterization of herpes simplex virus 2 strains. J Virol 89:6427-34.
97. Dudek TE, Torres-Lopez E, Crumpacker C, Knipe DM (2011) Evidence for differences in immunologic and pathogenesis properties of herpes simplex virus 2 strains from the United States and South Africa. J Infect Dis 203:1434-41.
Claims (25)
- 第一の対象においてＨＳＶ－２および／またはＨＳＶ－１感染に対する免疫応答を誘導する方法であって、ゲノムにＨＳＶ－２糖タンパク質Ｄコード遺伝子全体の欠失を有するＨＳＶ－２で免疫化した妊婦からの産物の一定量を第一の対象に受動伝達させることを含み、ここで、該ＨＳＶ－２は、単純ヘルペスウイルス－１(ＨＳＶ－１)糖タンパク質Ｄを発現する補完的細胞における該ＨＳＶ－２の増殖により該ＨＳＶ－１糖タンパク質Ｄで表現型的に補完され、ここで、該産物はそれにより誘導された抗体を含み、第一の対象におけるＨＳＶ－２および／またはＨＳＶ－１感染に対する免疫応答の誘導に有効であり、ここで、該第一の対象は胎児または新生児である、方法。
- 該産物が該妊婦の血清を含む、請求項１の方法。
- 該産物が該妊婦の母乳を含む、請求項１または請求項２の方法。
- 該第一の対象が胎児である、請求項１～３の何れかの方法。
- 該第一の対象が新生児である、請求項１～４の何れかの方法。
- (原文に記載なし)
- 該第一の対象が第二の対象から生まれる、請求項５の方法。
- 該妊婦が該胎児を妊娠している、請求項４の方法。
- 該第一の対象および妊婦がヒトである、請求項１～８の何れかの方法。
- 該産物が、妊婦を欠失を有するＨＳＶ－２で免疫化することにより誘導した抗体を含む、請求項１～９の何れかの方法。
- 該方法が、第一の対象におけるＨＳＶ－２に対する免疫応答を誘導する、請求項１～１０の何れかの方法。
- 該方法が、第一の対象におけるＨＳＶ－１に対する免疫応答を誘導する、請求項１～１１の何れかの方法。
- 該産物が、免疫アジュバントをさらに含む、請求項１～１２の何れかの方法。
- 該産物が、ゲノムにＨＳＶ－２糖タンパク質Ｄコード遺伝子全体の欠失を有するＨＳＶ－２をさらに含み、ここで、該ＨＳＶ－２が、単純ヘルペスウイルス－１(ＨＳＶ－１)糖タンパク質Ｄを発現する補完的細胞における該ＨＳＶ－２の増殖により該ＨＳＶ－１糖タンパク質Ｄが表現型的に補完されている、請求項１３の方法。
- 新生児における周産期ＨＳＶ－１および／またはＨＳＶ－２感染を阻止する方法であって、該新生児になる胎児を妊娠している女性にゲノムにＨＳＶ－２糖タンパク質Ｄコード遺伝子全体の欠失を有するＨＳＶ－２の一定量を投与することを含み、ここで、該ＨＳＶ－２が、単純ヘルペスウイルス－１(ＨＳＶ－１)糖タンパク質Ｄを発現する補完的細胞における該ＨＳＶ－２の増殖により該ＨＳＶ－１糖タンパク質Ｄで表現型的に補完され、新生児における周産期ＨＳＶ－１および／またはＨＳＶ－２感染の阻止に有効である、方法。
- 母体から新生児へのＨＳＶ－１および／またはＨＳＶ－２ウイルス伝播を阻止する方法であって、母体にゲノムにＨＳＶ－２糖タンパク質Ｄコード遺伝子全体の欠失を有するＨＳＶ－２の一定量を投与することを含み、ここで、該ＨＳＶ－２が、単純ヘルペスウイルス－１(ＨＳＶ－１)糖タンパク質Ｄを発現する補完的細胞における該ＨＳＶ－２の増殖により該ＨＳＶ－１糖タンパク質Ｄで表現型的に補完され、母体から新生児へのＨＳＶ－１および／またはＨＳＶ－２ウイルス伝播の阻止に有効である、方法。
- 該母親が、該新生児になる胎児を妊娠している、請求項１６の方法。
- 該ＨＳＶ－１感染またはＨＳＶ－１ウイルス伝播が阻止される、請求項１５または請求項１６の方法。
- 該ＨＳＶ－２感染またはＨＳＶ－２ウイルス伝播が阻止される、請求項１５または請求項１６の方法。
- 免疫応答がＨＳＶ－１に対して誘導される、請求項１の方法。
- 免疫応答がＨＳＶ－２に対して誘導される、請求項１の方法。
- 該補完的細胞がＶＤ６０細胞である、請求項１、請求項１５または請求項１６の方法。
- 該妊婦、母親または第二の対象がＨＳＶ－１について血清陰性、ＨＳＶ－２について血清陰性またはＨＳＶ－１およびＨＳＶ－２両者について血清陰性である、請求項１～２２の何れかの方法。
- 該妊婦または母親が、ゲノムにＨＳＶ－２糖タンパク質Ｄコード遺伝子全体の欠失を有するＨＳＶ－２を皮下投与される、請求項１～２３の何れかの方法。
- 該妊婦または母親が、ＨＳＶ－２糖タンパク質Ｄコード遺伝子全体の欠失を有するＨＳＶ－２の初期皮下投与後、皮下ブースト用量のゲノムにＨＳＶ－２糖タンパク質Ｄコード遺伝子全体の欠失を有するＨＳＶ－２を投与される、請求項２４の方法。
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US16/238,933 US10918712B2 (en) | 2014-03-03 | 2019-01-03 | Passive transfer of immunity using recombinant herpes simplex virus 2 (HSV-2) vaccine vectors |
| US16/238,933 | 2019-01-03 | ||
| JP2021539019A JP2022517322A (ja) | 2019-01-03 | 2020-01-03 | 組み換え単純ヘルペスウイルス２（ｈｓｖ－２）ワクチンベクターを使用する免疫の受動伝達 |
| PCT/US2020/012170 WO2020142677A1 (en) | 2019-01-03 | 2020-01-03 | Passive transfer of immunity using recombinant herpes simplex virus 2 (hsv-2) vaccine vectors |
Related Parent Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2021539019A Division JP2022517322A (ja) | 2019-01-03 | 2020-01-03 | 組み換え単純ヘルペスウイルス２（ｈｓｖ－２）ワクチンベクターを使用する免疫の受動伝達 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2024016032A true JP2024016032A (ja) | 2024-02-06 |
Family
ID=69400650
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2021539019A Pending JP2022517322A (ja) | 2019-01-03 | 2020-01-03 | 組み換え単純ヘルペスウイルス２（ｈｓｖ－２）ワクチンベクターを使用する免疫の受動伝達 |
| JP2023176398A Pending JP2024016032A (ja) | 2019-01-03 | 2023-10-12 | 組み換え単純ヘルペスウイルス２（ｈｓｖ－２）ワクチンベクターを使用する免疫の受動伝達 |
Family Applications Before (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2021539019A Pending JP2022517322A (ja) | 2019-01-03 | 2020-01-03 | 組み換え単純ヘルペスウイルス２（ｈｓｖ－２）ワクチンベクターを使用する免疫の受動伝達 |
Country Status (7)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP3906052A1 (ja) |
| JP (2) | JP2022517322A (ja) |
| CN (1) | CN113727728A (ja) |
| AU (1) | AU2020204688A1 (ja) |
| CA (1) | CA3124523A1 (ja) |
| IL (1) | IL284448B2 (ja) |
| WO (1) | WO2020142677A1 (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2023245159A1 (en) * | 2022-06-16 | 2023-12-21 | Albert Einstein College Of Medicine | Recombinant herpes simplex virus 2 (hsv-2) vectors and engineered transgenic vero cell lines |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN110938604B (zh) * | 2014-03-03 | 2024-04-05 | 阿尔伯特爱因斯坦医学院 | 重组单纯疱疹病毒2(hsv-2)疫苗载体 |
| US10918712B2 (en) * | 2014-03-03 | 2021-02-16 | Albert Einstein College Of Medicine | Passive transfer of immunity using recombinant herpes simplex virus 2 (HSV-2) vaccine vectors |
| DE102014117280A1 (de) * | 2014-11-25 | 2016-05-25 | Pilz Gmbh & Co. Kg | Sicherheitsschaltgerät zum Ein- und sicheren Ausschalten eines elektrischen Verbrauchers |
-
2020
- 2020-01-03 IL IL284448A patent/IL284448B2/en unknown
- 2020-01-03 EP EP20702946.3A patent/EP3906052A1/en active Pending
- 2020-01-03 CA CA3124523A patent/CA3124523A1/en active Pending
- 2020-01-03 CN CN202080018414.0A patent/CN113727728A/zh active Pending
- 2020-01-03 AU AU2020204688A patent/AU2020204688A1/en active Pending
- 2020-01-03 WO PCT/US2020/012170 patent/WO2020142677A1/en unknown
- 2020-01-03 JP JP2021539019A patent/JP2022517322A/ja active Pending
-
2023
- 2023-10-12 JP JP2023176398A patent/JP2024016032A/ja active Pending
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CA3124523A1 (en) | 2020-07-09 |
| CN113727728A (zh) | 2021-11-30 |
| AU2020204688A1 (en) | 2021-07-15 |
| IL284448B1 (en) | 2023-08-01 |
| EP3906052A1 (en) | 2021-11-10 |
| KR20210112343A (ko) | 2021-09-14 |
| IL284448A (en) | 2021-08-31 |
| IL284448B2 (en) | 2023-12-01 |
| WO2020142677A1 (en) | 2020-07-09 |
| JP2022517322A (ja) | 2022-03-08 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US10980874B2 (en) | Recombinant herpes simplex virus 2 (HSV-2) vaccine vectors | |
| Petro et al. | Herpes simplex type 2 virus deleted in glycoprotein D protects against vaginal, skin and neural disease | |
| Iijima et al. | Dendritic cells and B cells maximize mucosal Th1 memory response to herpes simplex virus | |
| US10918712B2 (en) | Passive transfer of immunity using recombinant herpes simplex virus 2 (HSV-2) vaccine vectors | |
| Kao et al. | Murine model of maternal immunization demonstrates protective role for antibodies that mediate antibody-dependent cellular cytotoxicity in protecting neonates from herpes simplex virus type 1 and type 2 | |
| JP2024016032A (ja) | 組み換え単純ヘルペスウイルス２（ｈｓｖ－２）ワクチンベクターを使用する免疫の受動伝達 | |
| Iyer et al. | Single dose of glycoprotein K (gK)-deleted HSV-1 live-attenuated virus protects mice against lethal vaginal challenge with HSV-1 and HSV-2 and induces lasting T cell memory immune responses | |
| Chung et al. | The ongoing pursuit of a prophylactic HSV vaccine | |
| US20220088185A1 (en) | Passive transfer of immunity using recombinant herpes simplex virus 2 (hsv-2) vaccine vectors | |
| KR102686042B1 (ko) | 재조합 단순 헤르페스 바이러스 2 (hsv-2) 백신 벡터를 사용한 면역의 수동 전달 | |
| WO2023245159A1 (en) | Recombinant herpes simplex virus 2 (hsv-2) vectors and engineered transgenic vero cell lines | |
| Nelson | Understanding the characteristics of the CD8+ T cell response that generate optimal immune responses in the genital tract |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20231110 |
|
| A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20231110 |
|
| RD04 | Notification of resignation of power of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7424 Effective date: 20240502 |