JP2023550626A

JP2023550626A - ＴＧＦ－βポリペプチド

Info

Publication number: JP2023550626A
Application number: JP2023530765A
Authority: JP
Inventors: ディー．セイデルザサードロナルド; ジェイ．チャパルロロドルフォ; エフ．ロスジョン; メングローチー; スリアニッシュ; ジャコモレヴィセッティマテオ
Original assignee: キューバイオファーマ，インコーポレーテッド
Priority date: 2020-11-23
Filing date: 2021-11-22
Publication date: 2023-12-04
Also published as: WO2022109399A1; EP4247431A1; US20230416321A1; CA3174130A1

Abstract

本開示は、例えば、自己免疫疾患ならびに代謝疾患及び障害を含む疾患の治療処置で使用される、形質転換成長因子ベータ（ＴＧＦ－β）ポリペプチド構築物及び複合体を提供する。構築物及び複合体をコードする核酸、ならびに細胞ベースの発現系において構築物及び複合体を調製する方法も記載される。【選択図】図１Ｅ

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０２１年９月３０日に出願された米国仮特許出願第６３／２５０，９９０号、２０２１年６月１日に出願された米国仮特許出願第６３／１９５，６７３号、２０２１年４月２１日に出願された米国仮特許出願第６３／１７７，９３５号、及び２０２０年１１月２３日に出願された米国仮特許出願第６３／１１７，３０７号の利益を主張する。

参照による配列表の組み込み
本出願は、電子的に提出された配列リストを含み、これは、紙のコピー及びコンピュータ可読フォーム（ＣＲＦ）の両方として機能し、「２９１０－２５ＰＣＴ＿ｓｅｑｌｉｓｔ．ｔｘｔ」と題されたファイルからなり、それは２０２１年１１月２２日に作成され、そのサイズは３５１，１６９バイトであり、その全体は参照により本明細書に組み込まれる。

Ｉ．序論
Ａ．ＴＧＦ－β及びその作用
形質転換成長因子ベータ（ＴＧＦ－β）は、３つの哺乳動物（ヒト）アイソフォームＴＧＦ－β１、ＴＧＦ－β２及びＴＧＦ－β３を含む形質転換成長因子スーパーファミリーに属するサイトカインである。ＴＧＦ－βは、ＴＧＦ－βの活性型としてホモ二量体化するＴＧＦ－β配列と、それに加えたプロペプチド領域とを含有する前駆体分子として合成される。ＴＧＦ－βは、マクロファージ及び他の細胞種によって、２つの他のポリペプチド－潜在型ＴＧＦ－β結合タンパク質（ＬＴＢＰ）及び潜在型関連ペプチド（ＬＡＰ）と組み合わされた潜在型複合体として分泌される。潜在型ＴＧＦ－β複合体は、細胞外マトリックス（ＥＣＭ）中に貯蔵され、例えば、トロンボスポンジン－１（プラスミンによって活性化され得る）を介してＣＤ３６によって細胞の表面に、または潜在型形質転換成長因子ベータ結合タンパク質１、２、３、及び／もしくは４（ＬＴＢＰ１－４）に結合される。

ＴＧＦ－βの生物学的機能は、ＥＣＭ摂動（ｐｅｒｔｕｒｂａｔｉｏｎ）に応答して厳格に調節される潜在型ＴＧＦ－βの活性化の後に見られる。ＴＧＦ－βは、様々な細胞もしくは組織の特異的経路、または複数の細胞もしくは組織型で観察される経路によって活性化され得るが、そのような活性化経路の背後にある完全なメカニズムは完全には知られていない。活性化剤としては、限定されないが、プロテアーゼ、インテグリン、ｐＨ、及び活性酸素種（ＲＯＳ）が挙げられる。活性化において、細胞／組織に結合する潜在型ＴＧＦ－β複合体は、機能し、環境摂動に対して感知及び応答して、空間的及び／または時間的な様式で活性型ＴＧＦ－βを放出する。放出されたＴＧＦ－βは、その放出の状況に依存して細胞増殖を促進または阻害するように作用する。それはまた、幹細胞／前駆細胞を動員して、組織再生／リモデリングプロセスに参加する。ＴＧＦ－βリガンド発現、バイオアベイラビリティ、活性化、受容体機能、または転写後修飾の異常は、正常な機能を妨げ、過剰な前駆体の動員（例えば、変形性関節症またはカムラチ－エンゲルマン病における）、または好ましくない系統への常駐細胞のトランス分化（例えば、がん転移または組織／臓器線維症の間の上皮から間葉への移行における）など、多くの疾患と関連する病理学的結果をもたらし得る。ＸｕｅｔａｌＢｏｎｅＲｅｓｅａｒｃｈ，６（ＡｒｔｉｃｌｅＮｏ．２）（２０１８）．

１インテグリン非依存性及びインテグリン依存性の活性化
ａ．インテグリン非依存性の活性化
ＴＧＦ－β活性化のインテグリン非依存性の手段の中には、とりわけ、プロテアーゼ及び／またはメタロプロテアーゼ、活性酸素種（ＲＯＳ）、及びトロンボスポンジン－１（ＴＳＰ－１）の作用を通して作用するものが含まれる。

プラスミン及びいくつかのマトリックスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）は、ＥＣＭ成分のタンパク質分解により、腫瘍侵入及び組織リモデリングを促進する。ＴＧＦ－βは、マトリックスから潜在型複合体を放出するそのようなプロテアーゼの作用によって活性化され得、その後、ＬＡＰのタンパク質分解が行われ、ＴＧＦ－βがその受容体に放出される。ＭＭＰ－９及び－２の両方は、潜在型ＴＧＦ－βを切断することが知られている。

ＴＧＦ－βは、ＲＯＳ放出を誘導する放射線曝露後にインビボで迅速に活性化されることが示されている。ＲＯＳは、ＬＡＰとＴＧＦ－βとの間の相互作用を変化させ、その活性化をもたらすと考えられている。

健常個体の血漿中に見出される糖タンパク質であるＴＳＰ－１は、傷害に応答して増加することが知られている。ＴＳＰ－１は、潜在型ＴＧＦ－β複合体と直接相互作用を形成し、その成熟ＴＧＦ－βへの結合を防止することによって、潜在型ＴＧＦ－βを活性化すると考えられている。トロンボスポンジンの媒介による活性化は、創傷（例えば、皮膚創傷）治癒に関与すると考えられている。

ｂ．α（Ｖ）含有インテグリンによる活性化
インテグリン、特にβ６、αＶ、及びβ８含有インテグリンは、潜在型ＴＧＦ－β（例えば、ＴＧＦ－β１）活性化に寄与することが理解されている。活性化は、潜在型ＴＧＦ－β１複合体に構造変化を誘導し、したがって、活性型ＴＧＦ－β１を放出することによって、またはインテグリン－プロテアーゼ依存的なメカニズムによって、生じると考えられる。特に上皮細胞において、タンパク質分解を伴わないＴＧＦ－β１活性化につながる立体構造変化は、ＬＡＰ－β１またはＬＡＰ－β３に存在するアルギニル－グリシル－アスパラギン細胞接着モチーフ（ＲＧＤモチーフ）にインテグリンが結合することによって生じると理解されている。ＲＧＤモチーフを含むＬＡＰは、大部分のαＶ含有インテグリンによって認識される。例えば、αＶβ６インテグリンは、ＬＡＰ－β１及びＬＡＰ－β３に存在するＲＧＤモチーフに結合することにより、ＴＧＦ－β１を活性化／放出することができる。加えて、ＴＧＦ－βのインテグリン－プロテアーゼ依存的な活性化は、潜在型ＴＧＦ－β複合体とＭＭＰ－２及びＭＭＰ－９などのＭＭＰとの間の連結を形成することによって生じ得、それにより潜在型ＴＧＦ－β複合体のタンパク質分解によってＴＧＦ－βを活性化することができる。

２．ＴＧＦ－βのシグナル伝達及び作用
活性化されたＴＧＦ－βは、細胞分化及びＴ細胞調節において重要な役割を果たす。例えば、ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＰｅｒｓｐｅｃｔ．Ｂｉｏｌ．２０１７；９：ａ０２２２３６及びその引用を参照されたい。ＴＧＦ－βは、胸腺由来のＴｒｅｇ（ｔＴｒｅｇ）、インバリアントナチュラルキラーＴ（ｉＮＫＴ）、及びＣＤ８α＋Ｔ細胞前駆体の生存を支援することによって、いくつかのＴ細胞系統の胸腺における発達を促進し、それにより、強力なアゴニストリガンドによって誘導されるＴ細胞の発達を促進する。ＴＧＦ－βは、インターロイキン（ＩＬ）－７Ｒαの胸腺細胞発現を促進することによって、従来のＣＤ８＋Ｔ細胞を支持する。ＴＧＦ－βはまた、低親和性Ｔ細胞のＩＬ－７依存性の生存を促進することによって、胸腺細胞におけるＩＬ－７Ｒα発現を制御することによって、及びＴ細胞受容体（ＴＣＲ）駆動型の自己反応性または高親和性Ｔ細胞の活性化を阻害することによって、末梢Ｔ細胞の恒常性を調節する。初期のＣＤ８＋Ｔ細胞分化において、ＴＧＦ－βは、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）の形成を阻害し、短寿命エフェクター細胞（ＳＬＥＣ）のアポトーシスを促進する一方で、ＣＤ１０３を発現する組織常在メモリ（ＴＲＭ）細胞の分化を促進する。ＴＧＦ－βは、Ｔヘルパー１及び２（Ｔｈ１及びＴｈ２）細胞の分化を阻害するが、他の因子と作用するＴＧＦ－βは、様々なＴ細胞の発達を促進する。ＴＧＦ－βは、ＩＬ－２と共に、末梢Ｔｒｅｇ（ｐＴｒｅｇ）の産生を促進し、ＩＬ－６と共に、Ｔｈ－１７細胞の産生を促進し、ＩＬ－４と共に、Ｔｈ９細胞の産生を促進し、ＩＬ－２１及び／または－２３と共に、Ｔ濾胞ヘルパー（Ｔｆｈ）細胞の産生を促進する。

Ｔ細胞に対するその作用に加えて、Ｂリンパ球または「Ｂ細胞」、単球、及びマクロファージを含む様々な他の細胞が、ＴＧＦ－βによって調節される。ＴＧＦ－βは、概して、Ｂ細胞に対する阻害作用を有し（Ｌｉｅｔａｌ．，ＡｎｎｕａｌＲｅｖｉｅｗｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．２４（１）：９９－１４６（２００６）ａｎｄＲｏｅｓｅｔａｌ．，ＰＮＡＳＵＳＡ，１００（１２）：７２４１－７２４６（２００３））、Ｂ細胞の増殖を阻害し、未熟または静止しているＢ細胞のアポトーシスを誘導する（Ａｒｓｕｒａ，ｅｔａｌ．，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ５（１）：３１－４０（１９９６））。Ｂ細胞に対するＴＧＦ－βの作用の少なくとも一部は、ＩＬ－１、ＴＮＦ－ａ、及びディフェンシンを含むサイトカインの産生を調節するＮＦ－κＢの阻害剤であるＩＫＢａの誘導に起因し得る。例えば、ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＰｅｒｓｐｅｃｔ．Ｂｉｏｌ．２０１７；９：ａ０２２２３６及びその引用を参照されたい。

Ｂ細胞への作用に加えて、ＴＧＦ－βは休止した単球を刺激し、活性化されたマクロファージを阻害する。ＴＧＦ－βは、Ｔｏｌｌ様受容体（「ＴＬＲ」）リガンドによって刺激されたマクロファージの炎症誘発応答の阻害などの阻害効果を示す。ＴＧＦ－β刺激は、ＴＬＲリガンドまたは他のサイトカインの不在下で、骨髄系細胞によるいくつかの炎症性サイトカインの産生を促進する。ＴＧＦ－βは、末梢血の単球及びマクロファージを組織内に誘導し、単球の付着特性を増強することが示されている。ＴＧＦ－βは、化学走性を誘導し、肥満細胞の付着特性を増強することができる。例えば、ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＰｅｒｓｐｅｃｔ．Ｂｉｏｌ．２０１７；９：ａ０２２２３６及びその引用を参照されたい。

ＴＧＦ－βが活性化されると、細胞表面のシグナル伝達受容体を介して作用することが理解されている。シグナル伝達は、活性化されたＴＧＦ－βリガンドが細胞表面上の形質転換成長因子β受容体ＩＩ（「ＴβＲＩＩ」）に結合するときに開始される。この相互作用は、形質転換成長因子β受容体Ｉ（「ＴβＲＩ」）の動員をもたらし得る。ＴβＲＩＩは、ＴＧＦ－β１に単独で結合することができる一方で、ＴβＲＩは、ＴβＲＩＩと協働してのみリガンドに結合することができる。ＴβＲＩは、ＴβＲＩＩによってリン酸化されて活性化され、Ｒ－Ｓｍａｄタンパク質（Ｓｍａｄ２及びＳｍａｄ３）の動員及びリン酸化を介して、古典的シグナル伝達経路を介してシグナル伝達をもたらす。これらのＳｍａｄは次に、ｃｏ－Ｓｍａｄ（Ｓｍａｄ４）に結合し、複合体は一緒になって、いくつかの遺伝子の転写を駆動する。Ｓｍｉｔｈｅｔａｌ．，Ｃｌｉｎ．ＣａｎｃｅｒＲｅｓ．；１８（１７）：４５１４－２１（２０１２）を参照されたい。ＴＧＦ－βはまた、リガンドに占有された受容体によって活性化される、ＭＡＰキナーゼ経路、Ｒｈｏ様ＧＴＰａｓｅシグナル伝達経路、及びホスファチジルイノシトール－３－キナーゼ／ＡＫＴ経路の様々な分岐を含む非古典的（非Ｓｍａｄ）経路を通してシグナル伝達することができる。非古典的経路を通じるシグナル伝達は、下流の細胞応答を強化、減衰、または他の方法で調節し得る。ＺｈａｎｇＹｅ，ＣｅｌｌＲｅｓ．１９（１）：１２８－３９（２００９）を参照されたい。ＴβＲＩ及びＴβＲＩＩとは対照的に、形質転換成長因子ベータ受容体ＩＩＩ（「ＴβＲＩＩＩ」受容体または「ベータグリカン」）は、ＴＧＦ－βシグナル伝達に関与せず、むしろＴＧＦ－βのリザーバーとして機能する。

活性化因子の摂動、活性化ＴＧＦ－βの異常レベル、及び／またはＴＧＦ－βシグナル伝達の変化は、制御されざるＴＧＦ－βシグナル伝達レベルをもたらす可能性があり、それによりいくつかの疾患または複雑な疾患状態が生じ得る。実際、ＴＧＦ－βは、炎症、自己免疫疾患、線維症、がん及び白内障等の多様な症状に効果を有することが示されている。

ＴＧＦ－βは、耐性の誘導に関与する因子として、免疫系において止血を維持する極めて重要な役割を果たし、それによって自己免疫応答に影響を及ぼす。ＴＧＦ－βがそのような効果を発揮することができる１つのメカニズムは、Ｔ細胞（例えば、ＣＤ４^＋、ＣＤ８^＋、ＣＤ４^－ＣＤ８^＋及びＣＤ４^－ＣＤ８^－細胞）の、（例えば、ＩＬ－２の存在下での）制御性Ｔ細胞または「Ｔ－Ｒｅｇ」細胞への分化を駆動することによるものである。例えば、ＢｅｔｔｉｎｉａｎｄＶａｇｎａｌｉ，Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，１１８３：１－１２（２０１０）を参照されたい。Ｔ－Ｒｅｇ細胞は、免疫寛容性の維持に不可欠である。Ｊｏｓｅｆｏｗｉｃｚｅｔａｌ．ＡｎｎｕＲｅｖＩｍｍｕｎｏｌ，３０：５３１－５６４．（２０１２）．自己抗原などの抗原に対する耐性を誘導するＴＧＦ－βの役割は、関節炎（関節リウマチまたは「ＲＡ」）、１型糖尿病（「Ｔ１Ｄ」）、多発性硬化症（「ＭＳ」）、及び全身性エリテマトーデス（「ＳＬＥ」）などの疾患の発症を防御する上で重要な因子となる。例えば、ＴＧＦ－βの機能のうち主要なものとしては、自己免疫疾患及び関連する炎症プロセスの調節が挙げられる。これは腸において特に当てはまり、炎症性腸疾患または「ＩＢＤ」などの症状におけるマクロファージによるサイトカイン産生及び粘膜炎症を抑制すると考えられている。Ｓａｎｊａｂｅｔａｌ．ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＰｅｒｓｐｅｃｔ．Ｂｉｏｌ．２０１７；９：ａ０２２２３６．ＲＡは、ＩＢＤと同様に、関節に対する、炎症性コンポーネントによる自己免疫疾患である。ＲＡは、Ｔ細胞及び／またはＢ細胞における異常な応答から生じる。ＴＧＦ－βは全身において、ＲＡの発症からの保護を提供すると考えられる。Ｓｃｈｒａｍｍｅｔａｌ．，ＡｒｔｈｒｉｔｉｓＲｅｓ．Ｔｈｅｒ．６：Ｒ１１４－Ｒ１１９（２００４）ならびにＳａｎｊａｂｅｔａｌ．ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＰｅｒｓｐｅｃｔ．Ｂｉｏｌ．２０１７；９：ａ０２２２３６）、及びその中で引用される参考文献を参照されたい。

文献においては、タンパク質を捕捉し、その作用を効果的に中和することによって、タンパク質のレベルでＴＧＦ－β作用を調節するための多くのアプローチが報告されている。例えば、ＴＧＦ－β１に対するメテリムマブ（ＣＡＴ１９２）、及びＴＧＦ－βの複数のアイソフォームに対するフレソリムマブなどのモノクローナル抗体が、インビボでＴＧＦ－βに結合し、捕捉し、及び中和するよう開発されている。加えて、ＴＧＦ－βに強固に結合し、それを捕捉し、それによって、それを中和する受容体トラップも開発されている（例えば、Ｓｗａａｇｒｔｒａ，ｅｔａｌ．，ＭｏｌＣａｎｃｅｒＴｈｅｒ；１１（７）：１４７７－８７（２０１２）及び米国特許公開第２０１８／０３２７４７７号を参照されたい）。

ＴＧＦ－βに結合して捕捉し、ＴＧＦ－β作用のアンタゴニストとして機能するよう設計された上述の分子とは異なり、本明細書に記載のマスキングされたＴＧＦ－β複合体は、互いに相互作用してＴＧＦ－βポリペプチド配列を可逆的にマスキングする、活性ＴＧＦ－βポリペプチド（例えば、ＴＧＦ－βシグナル伝達経路アゴニスト）及びマスキングポリペプチド（例えば、ＴＧＦ－β受容体断片）を提供する。マスキングされたＴＧＦ－β複合体は、相互親和性を低減し、ＴＧＦ－βのマスキング解除に寄与し、ヘテロマー細胞表面受容体を通したその結合シグナル伝達を可能にする（例えば、ＴβＲＩＩへの結合、続いてＴβＲＩがヘテロマー受容体を形成する）、ＴＧＦ－β及び／またはマスキングポリペプチドにおける配列変動を含み得る。ＴＧＦ－βに対して高い親和性を有するヘテロマーＴβＲＩ－ＴβＲＩＩポリペプチド複合体は、形成されると、マスキングポリペプチドと効果的に競合することができる。ＴＧＦ－β及び／またはそのマスキングポリペプチドにおける配列変動はまた、マスキングされていないＴＧＦ－βポリペプチドと他の分子との間の望ましくない相互作用を回避させることもできる。そのような配列変異としては、ＴβＲＩへの結合を減弱させるＴβＲＩＩのＮ末端の部分の欠失、及び／またはその二量体化を防止するＴＧＦ－β配列変異（例えば、Ｃ７７Ｓ置換）であって、非シグナリングＴβＲＩＩＩ分子のリザーバーへの標的結合制限を解除するものが挙げられる。上記に加えて、マスキングされたＴＧＦ－β構築物及び複合体は、インビトロ効果及び治療効果等のインビボ効果など、標的細胞へのＴＧＦ－β結合の結果に実質的に影響を及ぼし得る、追加の野生型（ｗｔ）及び／または変異型の免疫調節ポリペプチド配列（ＭＯＤ）を含み得る。

ＩＩ．発明の概要
本開示は、ＴＧＦ－βが別のポリペプチドによってマスキングされている構築物（「マスキングされたＴＧＦ－β構築物」、例えば、単一のポリペプチド鎖を有する図１の構造Ａを参照）、及びＴＧＦ－βが別のポリペプチドによってマスキングされている複合体（「ＴＧＦ－βポリペプチド複合体」、例えば、２つのポリペプチド鎖を含む複合体を示す、図１の構造Ｂ～Ｆを参照）の調製物を記載する。追加のエレメントも含み得るＴＧＦ－β構築物及び複合体は、本明細書では「マスキングされたＴＧＦ－β構築物及び複合体」と総称される。マスキングされたＴＧＦ－β構築物及び複合体は、足場ポリペプチド（例えば、免疫グロブリンＦｃ領域）の周りに構築され、ＴＧＦ－βに結合するマスキングポリペプチド配列（「マスキングポリペプチド配列」、「マスキングポリペプチド」、または「マスキング配列」）を含有する。マスキングされたＴＧＦ－β構築物及び複合体はまた、野生型または変異型ＩＬ－２ポリペプチド配列などの１つ以上の独立して選択される免疫調節ポリペプチド配列（単数形「ＭＯＤ」、複数形「ＭＯＤｓ」）も含有し得る。

マスキングされた非標的ＴＧＦ－β活性が、マスキングされていないＴＧＦ－βで観察される程には細胞内で悪影響を及ぼさないため、マスキングされたＴＧＦ－β構築物及び複合体は、多数のタイプの哺乳動物細胞で発現され得る。

マスキングされたＴＧＦ－β構築物は、第１のポリペプチドとして、
ｉ）足場ポリペプチド配列と、
ｉｉ）ＴＧＦ－βポリペプチド配列と、
ｉｉｉ）ＴＧＦ－β受容体ポリペプチド配列または抗ＴＧＦ－βポリペプチド配列を任意に含むマスキングポリペプチド配列と、
ｉｖ）任意に、１つ以上の独立して選択されるＭＯＤポリペプチド配列と、
ｖ）任意に、１つ以上の独立して選択されるリンカーポリペプチド配列と、を含み、
これらのエレメントを含む構築物は、本発明では「マスキングされたＴＧＦ－β構築物」と総称され、マスキングポリペプチド配列及びＴＧＦ－βポリペプチド配列は、互いに結合する。そのマスキングされたＴＧＦ－β構築物は、（Ｎ末端からＣ末端まで）順番に、例えば、
ｉ）足場ポリペプチド配列、マスキングポリペプチド配列、及びＴＧＦ－βポリペプチド配列、または
ｉｉ）第１のＭＯＤポリペプチド配列、足場ポリペプチド配列、マスキングポリペプチド配列、及びＴＧＦ－βポリペプチド配列、または
ｉｉｉ）第１の独立して選択されるＭＯＤポリペプチド配列、第２の独立して選択されるＭＯＤポリペプチド配列、任意に１つ以上の追加のＭＯＤポリペプチド配列、足場ポリペプチド配列、マスキングポリペプチド配列、及びＴＧＦ－βポリペプチド配列、として編成され得、
マスキングされたＴＧＦ－β構築物は、任意に、１つ以上の独立して選択されるリンカーポリペプチド配列を含む。

上述のマスキングされたＴＧＦ－β構築物の足場ポリペプチドは、ホモ二量体の形成を引き起こす相互特異的（ｉｎｔｅｒｓｐｅｃｉｆｉｃ）または相互特異的でない二量体化配列を含み得、そこにおいて、足場ポリペプチド配列は、任意に１つ以上の互いに共有的な結合（ａｔｔａｃｈｍｅｎｔ）を有する。

上述のマスキングされたＴＧＦ－β構築物の足場ポリペプチドはまた、相互特異的二量体化配列を含んでもよく、さらに、相手方の相互特異的二量体化配列を介して（上述の）第１のポリペプチドと二量体化して、マスキングされたＴＧＦ－β複合体ヘテロ二量体を形成する、第２のポリペプチドを含んでもよい。第２のポリペプチドは、以下の構造のうちの１つ：（ｉ）相手側相互特異的二量体化配列を含む足場ポリペプチド配列、（ｉｉ）１つまたは２つ（もしくはそれ以上）の独立して選択されるＭＯＤ配列、及び相手側相互特異的二量体化配列を含む足場ポリペプチド配列、（ｉｉｉ）相手側相互特異的二量体化配列を含む足場ポリペプチド配列と、１の独立して選択されるＭＯＤ配列、または、（ｉｖ）１つまたは２つ（もしくはそれ以上）の独立して選択されるＭＯＤ配列、及び相手側相互特異的二量体化配列を含む足場ポリペプチド配列を含み得、第１及び／または第２のポリペプチドは、任意に、１つ以上の独立して選択されるリンカーポリペプチド配列を含む。したがって、第２のポリペプチドは、以下の構造のうちの１つ：（ｉ）相手側相互特異的二量体化配列を含む足場ポリペプチド配列、（ｉｉ）１つまたは２つ（もしくはそれ以上）の独立して選択されるＭＯＤ配列、及び相手側相互特異的二量体化配列を含む足場ポリペプチド配列、（ｉｉｉ）相手側相互特異的二量体化配列を含む足場ポリペプチド配列、及び１つまたは２つ（もしくはそれ以上）の独立して選択されるＭＯＤ配列、または（ｉｖ）１つまたは２つ（もしくはそれ以上）の独立して選択されるＭＯＤ配列、及び相手側相互特異的二量体化配列を含む足場ポリペプチド配列を含み得、第１及び／または第２のポリペプチドは、任意に、１つ以上の独立して選択されるリンカーポリペプチド配列を含む。代替的に、マスキングされたＴＧＦ－β複合体ヘテロ二量体は、Ｎ末端からＣ末端まで順番に、（ｉ）相手側相互特異的二量体化配列を含む足場ポリペプチド配列、マスキングポリペプチド配列、及びＴＧＦ－βポリペプチド配列、（ｉｉ）第１のＭＯＤポリペプチド配列、相手側相互特異的二量体化配列を含む足場ポリペプチド配列、マスキングポリペプチド配列、及びＴＧＦ－βポリペプチド配列、または（ｉｉｉ）第１の独立して選択されるＭＯＤポリペプチド配列、第２の独立して選択されるＭＯＤポリペプチド配列、相手側相互特異的二量体化配列を含む足場ポリペプチド配列、マスキングポリペプチド配列、及びＴＧＦ－βポリペプチド配列を含み得る。

マスキングされたＴＧＦ－β複合体はまた、マスキングされたＴＧＦ－β複合体ヘテロ二量体として第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドを含み得、
（ｉ）第１のポリペプチドは、
ａ）相互特異的二量体化配列を含む足場ポリペプチド配列と、
ｂ）ＴＧＦ－β受容体ポリペプチド配列または抗ＴＧＦ－βポリペプチド配列を任意に含むマスキングポリペプチド配列と、
ｃ）任意に、１つ以上の独立して選択されるＭＯＤポリペプチド配列と、
ｄ）任意に、１つ以上の独立して選択されるリンカーポリペプチド配列と、を含み、
（ｉｉ）第２のポリペプチドは、
ａ）第１のポリペプチド中の相互特異的二量体化配列に相手側となる相互特異的二量体化配列を含む、足場ポリペプチド配列と、
ｂ）ＴＧＦ－βポリペプチド配列と、
ｃ）任意に、１つ以上の独立して選択されるＭＯＤポリペプチド配列と、
ｄ）任意に、１つ以上の独立して選択されるリンカーポリペプチド配列と、を含み、
これらのエレメントを含む複合体は、「マスキングされたＴＧＦ－β複合体」と総称され、マスキングポリペプチド配列及びＴＧＦ－βポリペプチド配列は、異なるポリペプチド鎖上に提供され、互いに結合し、
相互特異的結合配列及び相手側相互特異的結合配列は、ヘテロ二量体において互いに相互作用し、
マスキングされたＴＧＦ－βの第１のポリペプチド及び／または第２のポリペプチドは、任意に、１つ以上の独立して選択されるリンカーポリペプチド配列を含む。

ＴＧＦ－βポリペプチド配列は、ＴＧＦ－βアイソフォームのうちのいずれかに由来し得、二量体化するＴＧＦ－β配列の能力を制限する置換を含み得る。マスキング配列は、例えば、抗ＴＧＦ－β抗体配列またはＴＧＦ－β受容体（ＴβＲ）エクトドメイン配列からの抗原結合アミノ酸配列であり得る。ＴβＲエクトドメインがＴＧＦ－β配列をマスクするために使用される場合、それらは、（例えば、ＴＧＦ－β配列との相互作用に必要でないエクトドメインの全部または一部の欠失による）マスキングされた分子による不慮のシグナル伝達を回避するために修飾され得る。

本開示はまた、マスキングされたＴＧＦ－β構築物及び複合体を産生する方法、ならびに、様々な細胞型をもたらし、自己免疫疾患及び炎症性疾患を含む様々な疾患／障害を治療するためのそれらの使用方法を記載し、提供する。本明細書に記載の治療方法は、マスキングされたＴＧＦ－β構築物及び複合体の、限定されないが、免疫調節物質（例えば、インターロイキン、サイトカイン、ケモカインなど）、抗体及び抗体断片（例えば、ｓｃＦｖ、ナノボディなど）、低分子治療薬（例えば、ビタミンＤまたはレチノイン酸）、ならびに所望の実験室的または治療的な結果を達成するのに有益であり得るそれらの組み合わせなどの、他の分子との共投与を包含し得る。

ＩＩＩ．図面の簡単な説明
ＴＧＦ－β受容体配列を使用してＴＧＦ－βポリペプチドをマスキングする、マスキングされたＴＧＦ－β構築物及び複合体のいくつかのフォーマットを示す。構造Ａは、１つ以上の独立して選択されるＭＯＤ（例えば、独立して選択されるタンデムＭＯＤのセット）を一か所に有する単量体構築物を示す。構造Ｂは、ポリペプチドがそれぞれのＩｇＦｃ配列を介して相互作用する対称性のホモ二量体を示し、そこでは、２つのポリペプチドを連結するジスルフィド結合が自発的に形成され得る。構造Ｃ～Ｆは、ＴＧＦ－β及びＴＧＦ－β受容体配列が、ヘテロ二量体で「シス」（同一のポリペプチド上）または「トランス」（異なるポリペプチド上）において存在するヘテロ二量体構造を示す。１つ以上の独立して選択されるＭＯＤが配置され得る位置を、対角線もしくは垂直線またはチェック柄で塗りつぶされた円によって示す。相互特異的な結合対を、ノブインホール配列によって表すが、以下で考察されるように、他の任意のものであってもよい。構築物は、ＭＯＤを含まなくてもよいか、または示される場所にＭＯＤが提供され得る、ＭＯＤ配列をタンデムに含む、１つ、２つ、もしくはそれ以上の独立して選択されるＭＯＤ配列を含んでもよい。例示的なＭＯＤは、例えば、野生型または変異体もしくは変異型（例えば、特定の受容体または複数の受容体に対する低減した親和性及び／または選択的親和性を有する）ＰＤ－Ｌ１、ＦＡＳ－Ｌ、４－１ＢＢＬ、ＩＬ－１、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－１０、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１、及びＩＬ－２３ＭＯＤ配列を含む。ＴＧＦ－β受容体配列がＴＧＦ－βポリペプチドをマスクするために使用される各事例において、受容体ポリペプチドは、ＴＧＦ－βポリペプチドに対する親和性を有する抗体ポリペプチド（例えば、ｓｃＦＶまたはナノボディ）などの別のマスキングポリペプチドに置き換えられ得る。足場配列は、（例えば、ジスルフィド結合によって）結合して、共有結合性のホモ二量体または共有結合ヘテロ二量体を形成し得る。図示される構築物のうちのいずれも、ＴＧＦ－βポリペプチド内に、その二量体化能を制限する配列変動（例えば、Ｃ７７Ｓ置換）を有し得る。

免疫グロブリンＦｃポリペプチドのアミノ酸配列（配列番号６８）を提供する。免疫グロブリンＦｃポリペプチドのアミノ酸配列（配列番号６９）を提供する。免疫グロブリンＦｃポリペプチドのアミノ酸配列（配列番号７０）を提供する。免疫グロブリンＦｃポリペプチドのアミノ酸配列（配列番号７１～７８）を提供する。免疫グロブリンＦｃポリペプチドのアミノ酸配列（配列番号７９）を提供する。免疫グロブリンＦｃポリペプチドのアミノ酸配列（配列番号８０）を提供する。免疫グロブリンＦｃポリペプチドのアミノ酸配列（配列番号８１及び８２）を提供する。免疫グロブリンＦｃポリペプチドのアミノ酸配列（配列番号８３）を提供する。

下線付きのシグナルペプチドａａｓ１～２２を有するヒトＪ鎖のアミノ酸配列（配列番号８４）を提供する。

ＩｇＧ１重鎖定常領域ＣＨ１ドメインの配列を提供する。７０位及び７２位のセリン残基は、ＭＤ１３様構築物の形成のために、それぞれ、グルタミン酸及びバリンによって置換され得る（Ｓ７０Ｅ及びＳ７２Ｖ）。

Ｉｇκ及びＩｇλ鎖由来の軽鎖定常領域「ＣＬ」ドメインの配列を提供する。６８位のセリン及び７０位のスレオニンは、ＭＤ１３様構築物の形成のために、それぞれ、ロイシン及びセリンによって置換され得る（Ｓ６８Ｌ及びＴ７０Ｓ）。

プレプロタンパク質としての３つの異なるＴＧＦ－βのアイソフォームの配列及びＴＧＦ－β３の成熟形態を、成熟タンパク質のＣ７７Ｓ変異体と共に提供する。

ＴＧＦ－βアイソフォーム１～３のアラインメントを提供し、図中、ＴＧＦ－β２のａａ残基Ｌｙｓ２５、Ｃｙｓ７７、Ｉｌｅ９２、及び／またはＬｙｓ９４を除く、ＴＧＦ－β２の成熟形態に対応する残基を太字で示し、ＴＧＦ－βアイソフォーム１及び３の他の形態におけるそれらの対応する残基を下線付きの太字なしで示す。

１型ＴＧＦ－β受容体（ＴβＲＩ）及びそのエクトドメインの配列を提供する。

２型ＴＧＦ－β受容体（ＴβＲＩＩ）、そのエクトドメイン、及びエクトドメインの断片の配列を提供する。アイソフォームＢ中、太字及び下線で示す位置は、成熟ポリペプチドのａａｓＦ３０、Ｄ３２、Ｓ５２、Ｅ５５、及びＤ１１８であり、これらのいずれも、天然に存在するａａ以外のａａで置換され得る。

３型ＴＧＦ－β受容体（ＴβＲＩＩＩ）の配列を提供する。

蛍光サイトメトリー分析に基づく、ナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞上のＦｏｘＰ３の発現を刺激する異なる濃度の様々なマスキングされたＴＧＦ－β構築物及び複合体の能力を示すプロットを示す。細胞培養中の５日後の５０Ｕ／ｍｌのＩＬ－２の添加の不在下及び存在下での、ＴＧＦ－β３またはマスキングされたＴＧＦ－β３_ＷＴ構築物（図１、構造Ａを参照）の示された濃度に基づく（ＣＤ４^＋細胞の割合としての）ＦｏｘＰ３の誘導を示す。蛍光サイトメトリー分析に基づく、ナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞上のＦｏｘＰ３の発現を刺激する異なる濃度の様々なマスキングされたＴＧＦ－β構築物及び複合体の能力を示すプロットを示す。様々な濃度のＴＧＦ－β３、または３つのマスキングされたＴＧＦ－β３構築物のうちの１つ、または少なくとも１つのＮ末端ｗｔもしくは変異型ＩＬ－２ＭＯＤを有するマスキングされたＴＧＦ－β３複合体で５日間処理されたナイーブＴ細胞の集団内の（ＣＤ４＋細胞の割合としての）ＦｏｘＰ３^＋細胞の分布を示す（構造については、図７Ｇ～７Ｉを参照）。蛍光サイトメトリー分析に基づく、ナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞上のＦｏｘＰ３の発現を刺激する異なる濃度の様々なマスキングされたＴＧＦ－β構築物及び複合体の能力を示すプロットを示す。０．１ｎＭまたは１０００ｎＭの濃度でのマスキングされたＴＧＦ－β３ポリペプチド（図６のパートＢの構造（ｉ））の存在下でのＦｏｘＰ３^＋ＣＤ４^＋細胞の誘導を示す。

図１の構造Ａの全体的な構造を有する、配列番号１４６である、代表的なマスキングされたＴＧＦ－β（構築物番号３４７０）のａａ配列を提供する。ポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端まで、ｗｔ．ヒトＩＬ－２（ｈＩＬ２）配列、Ｇ_４Ｓリンカーの３回の反復、ＬＡＬＡ置換を有するヒトモノＩｇＧＦｃ、Ｇ_４Ｓリンカーの３回の反復、Ｄ１１８Ａ置換を有するヒトＴβＲＩＩ（ｈＴβＲＩＩ）_Δ２５配列、Ｇ_４Ｓリンカーの５回の反復、及びＣ７７Ｓ置換を有するヒトＴＧＦ－β３（ｈＴＧＦ－β３）配列を含む。

図１の構造Ｂの全体的な構造を有する、代表的なマスキングされたＴＧＦ－β（構築物番号３３３４、配列番号１４７）のａａ配列を提供する。ホモ二量体を形成するポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端まで、Ｈ１６Ｔ及びＦ４２Ａ置換を有するｈＩＬ２、Ｇ_４Ｓの３回の反復、ＬＡＬＡ置換を有するヒトＩｇＧ１Ｆｃ、Ｇ_５Ｓ及びＧ_４Ｓリンカーの２回の反復、ｈＴβＲＩＩ_Δ２５、Ｄ１１８Ａ、Ｇ_４Ｓの５回の反復、ならびにｈＴＧＦ－β３配列を含む。

第１及び第２のポリペプチドを含む、図１の構造Ｄの全体的な構造を有する代表的なマスキングされたＴＧＦ－β構築物のａａ配列を提供する。第１のポリペプチド（構築物番号３６１８、配列番号１４８）は、Ｎ末端からＣ末端まで、ｗｔ．ｈＩＬ－２、Ｇ_４Ｓリンカーの３回の反復、ＬＡＬＡ置換を有するヒトＩｇＧ１Ｆｃノブインホール（ＫｉＨ）ポリペプチド鎖Ａ、Ｇ_４Ｓリンカー配列の５回の反復、及びＣ７７Ｓ置換を有するｈＴＧＦ－β３配列を含む。第２のポリペプチド（構築物番号３６１９、配列番号１４９）は、Ｎ末端からＣ末端まで、ｗｔ．ｈＩＬ２、Ｇ_４Ｓリンカーの３回の反復、ＬＡＬＡ置換を有するヒトＩｇＧ１ＦｃＫｉＨポリペプチド鎖Ｂ、Ｇ_５Ｓリンカー及びＧ_４Ｓリンカーの２回の反復、ならびにｈＴβＲＩＩ_Δ２５、Ｄ１１８Ａ配列を含む。

第１及び第２のポリペプチドを含む、図１の構造Ｅの全体的な構造を有する代表的なマスキングされたＴＧＦ－β構築物のａａ配列を提供する。上記に記載される第１のポリペプチド（構築物番号３６１８、配列番号１５０）は、Ｎ末端からＣ末端まで、ｗｔ．ｈＩＬ－２、Ｇ_４Ｓリンカーの３回の反復、ＬＡＬＡ置換を有するヒトＩｇＧ１Ｆｃノブインホール（ＫｉＨ）ポリペプチド鎖Ａ、Ｇ_４Ｓリンカー配列の５回の反復、及びＣ７７Ｓ置換を有するｈＴＧＦ－β３配列を含む。第２のポリペプチド（構築物番号３８５５、配列番号１５１）は、Ｎ末端からＣ末端まで、ＬＡＬＡ置換を有するヒトＩｇＧ１ＦｃＫｉＨポリペプチド鎖Ｂ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖ置換、Ｇ_４Ｓリンカーの３回の反復、ならびにｈＴβＲＩＩ_Δ２５、Ｄ１１８Ａ配列を含む。

第１及び第２のポリペプチドを含む、図１の構造Ｆの全体的な構造を有する代表的なマスキングされたＴＧＦ－β構築物のａａ配列を提供する。第１のポリペプチド（構築物番号３８９１）、配列番号１５２は、Ｎ末端からＣ末端まで、Ｈ１６Ａ、Ｆ４２Ａを有するｈＩＬ－２、Ｇ_４Ｓリンカー配列の３つの反復、ＬＡＬＡ及びＴ３６６Ｗ置換を有するヒトＩｇＧ１Ｆｃノブインホール（ＫｉＨ）ポリペプチド鎖Ａ、Ｇ_５Ｓ及びＧ_４Ｓリンカーの２回の反復、ｈＴβＲＩＩ_Δ２５、Ｄ１１８Ａ、Ｇ_４Ｓリンカーの５回の反復、ならびにＣ７７Ｓ置換を有するｈＴＧＦ－β３を含む。第２のポリペプチド（構築物番号３６６４）、配列番号１５３は、Ｎ末端からＣ末端まで、ＬＡＬＡ置換を有するヒトＩｇＧ１ＦｃＫｉＨポリペプチド鎖Ｂを含む。

第１及び第２のポリペプチドを含む、図１の構造Ｆの全体的な構造を有する代表的なマスキングされたＴＧＦ－β構築物のａａ配列を提供する。第１のポリペプチド（構築物番号３７１５、配列番号１５５）は、Ｎ末端からＣ末端まで、ＬＡＬＡ置換を有するヒトＩｇＧ１ＦｃＫｉＨポリペプチド鎖Ａ、Ｇ_４Ｓリンカーの３回の反復、及びヒトｗｔ．ＩＬ２配列を含む。第２のポリペプチド（構築物番号３７１４、配列番号１５６）は、Ｎ末端からＣ末端まで、ＬＡＬＡ置換を有するヒトＩｇＧ１ＦｃＫｉＨポリペプチド鎖Ｂ、Ｇ_４Ｓリンカーの３回の反復、Ｄ３２Ｎ及びＤ１１８Ａ置換を有するｈＴβＲＩＩ_Δ２５、Ｇ_４Ｓリンカー配列の５回の反復、ならびにＣ７７Ｓ置換を有するｈＴＧＦ－β３配列を含む。

図７Ａ～７ＦのＩＬ－２配列のうちのいずれかは、ｗｔ．ＩＬ－２によって置き換えられた、またはＮ８８、Ｈ１６及び／もしくはＦ４２における置換（例えば、Ｎ８８Ｒ、Ｈ１６ＡもしくはＨ１６Ｔから選択されるＨ１６における置換、ならびに／またはＦ４２Ａ及びＦ４２Ｔから選択されるＦ４２における置換）を有するＩＬ－２配列によって置き換えられた、ＩＬ－２以外のＭＯＤまたは変異型ＭＯＤで置換され得る。

図１の構造Ａの全体的な構造を有する代表的なマスキングされたＴＧＦ－β構築物（構築物番号３４７２、配列番号１５７）のａａ配列を提供する。ポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端まで、ｗｔ．ｈＩＬ２、Ｇ_４Ｓリンカーの３回の反復、ＬＡＬＡ置換を有するヒトモノＩｇＧＦｃ、Ｇ_４Ｓリンカーの３回の反復、Ｄ３２Ｎ及びＤ１１８Ａ置換を有するヒトＴβＲＩＩ（ｈＴβＲＩＩ）_Δ２５配列、Ｇ_４Ｓリンカーの５回の反復、ならびにＣ７７Ｓ置換を有するヒトＴＧＦ－β３（ｈＴＧＦ－β３）配列を含む。

図１の構造Ａの全体的な構造を有する代表的なマスキングされたＴＧＦ－β構築物（構築物番号３４６６、配列番号１５８）のａａ配列を提供する。ポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端まで、ｗｔ．ｈＩＬ２、Ｇ_４Ｓリンカーの３回の反復、ＬＡＬＡ置換を有するヒトモノＩｇＧＦｃ、Ｇ_４Ｓリンカーの３回の反復、Ｄ１１８Ａ置換を有するヒトＴβＲＩＩ（ｈＴβＲＩＩ）_Δ２５配列、Ｇ_４Ｓリンカーの５回の反復、及びＣ７７Ｓ置換を有するヒトＴＧＦ－β３（ｈＴＧＦ－β３）配列を含む。

図１の構造Ａの全体的な構造を有する代表的なマスキングされたＴＧＦ－β構築物（構築物番号３４６８、配列番号１５９）のａａ配列を提供する。ポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端まで、Ｈ１６ＴＦ４２Ａ置換を有するｈＩＬ２、Ｇ_４Ｓリンカーの３回の反復、ＬＡＬＡ置換を有するヒトモノＩｇＧＦｃ、Ｇ_４Ｓリンカーの３回の反復、Ｄ３２Ｎ及びＤ１１８Ａ置換を有するヒトＴβＲＩＩ（ｈＴβＲＩＩ）_Δ２５配列、Ｇ_４Ｓリンカーの５回の反復、ならびにＣ７７Ｓ置換を有するヒトＴＧＦ－β３（ｈＴＧＦ－β３）配列を含む。

第１及び第２のポリペプチドを含む、図１の構造Ｄの全体的な構造を有する代表的なマスキングされたＴＧＦ－β構築物のａａ配列を提供する。第１のポリペプチド（構築物番号３６１８、配列番号１４８）は、Ｎ末端からＣ末端まで、ｗｔ．ｈＩＬ－２、Ｇ_４Ｓリンカーの３回の反復、ＬＡＬＡ置換を有するヒトＩｇＧ１Ｆｃノブインホール（ＫｉＨ）ポリペプチド鎖Ａ、Ｇ_４Ｓリンカー配列の５回の反復、及びＣ７７Ｓ置換を有するｈＴＧＦ－β３配列を含む。第２のポリペプチド（構築物番号３６２１、配列番号１６０）は、Ｎ末端からＣ末端まで、ｗｔ．ｈＩＬ２、Ｇ_４Ｓリンカーの３回の繰り返し、ＬＡＬＡ置換を有するヒトＩｇＧ１ＦｃＫｉＨポリペプチド鎖Ｂ、Ｇ_４Ｓリンカーの３回の繰り返し、ならびにＤ３２Ｎ及びＤ１１８Ａ置換を有するｈＴβＲＩＩ_Δ２５配列を含む。

マスキングされたＴＧＦ－β構築物（左）及び２つのマスキングされたＴＧＦ－β複合体（中央及び右）を示す。複合体のサンプルは、ポリペプチドをコードする核酸ベクターを構築し、ＥｘｐｉＣＨＯ細胞にトランスフェクションし、ポリペプチドを発現させることによって調製した。プロテインＡクロマトグラフィー、続いてサイズ排除クロマトグラフィーによってポリペプチドを精製した。精製したタンパク質をＳＤＳ－ＰＡＧＥに供し、得られたゲルをクマシーブルーで染色した。ＮＲ＝還元されていないまたは非還元サンプル、Ｒ＝還元されたサンプル（ジスルフィド還元剤による還元）。

ＴＧＦ－β３またはＴＧＦ－β１への親和性に対するマスキングＴβＲＩＩポリペプチド配列（図５Ｂ参照）における様々な変異（ａａ置換）の効果を示す（表、左上）。図９はまた、固定化されたＴβＲＩＩ－Ｆｃ受容体構築物へのマスキングされたＴＧＦ－β構築物の親和性に反映される、マスキングＴβＲＩＩａａ配列とマスキングされたＴＧＦ－β（ＴＧＦ－β１またはＴＧＦ－β３）との間の結合相互作用に対するこれら３つの置換、すなわちＥ５５Ａ、Ｄ３２Ｎ、及びＳ５２Ｌの比較的大きな効果も実証する。図９の右側に、アッセイフォーマットが２つのマイクロタイターウェルに描写される。左のウェルでは、マスキングされたＴＧＦ－β構築物は、そのＴＧＦ－β及びＴβＲ－ＩＩ配列が固定化されたＴβＲＩＩ－ＦＣ融合物（アッセイウェルの底部に取り付けられた「ＴβＲＩＩ－ＦＣ」と標識された斜線付きのボックス）と係合された、または関連していない閉鎖構成である。右のマイクロタイターウェルでは、マスキングされたＴＧＦ－β構築物は、開放構成であり、上方にそのＴＧＦ－β３配列を有する捕捉アッセイフォーマットで示され、固定化されたＴβＲＩＩ－Ｆｃ受容体と相互作用する。採用されるマスキングされた構築物のＩｇ足場は、他の足場への相互特異的結合を形成せず、したがって、マスキングされた構築物は、単量体のままである。右のマイクロタイターウェルに示される特異的に固定化されたマスキングされたＴＧＦ－β構築物の検出は、検出のために抗体（「Ｂ」）として抗ＩＬ－２と標識されたビオチン、ならびにストレプトアビジン及び西洋ワサビペルオキシダーゼ（「Ｓｔｒｅｐ」及び「ＨＲＰ」）を使用して達成される。実施例３のように調製されるマスキングされた構築物の各々について作成された捕捉曲線を使用して、報告されたＫｄ値を決定した。

マスキングされたＴＧＦ－β３複合体ＰＳＭ－４０３３－４０３９を形成するポリペプチドの構造を示す。マスキングされたＴＧＦ－β３複合体ＰＳＭ－４０３３を形成するポリペプチドのアミノ酸配列を示す。マスキングされたＴＧＦ－β３複合体ＰＳＭ－４０３９を形成するポリペプチドのアミノ酸配列を示す。

ＰＳＭ－４０３３－４０３９が、ヒト末梢ナイーブＣＤ４^＋Ｔ細胞からＦｏｘｐ３^＋ｉＴｒｅｇを誘導するために使用される、実験の結果を示す。実施例４を参照されたい。

ＰＳＭ－４０３３－４０３９によって誘導されたＦｏｘｐ３^＋ｉＴｒｅｇが、Ｔ細胞増殖を抑制するために使用される、実験の結果を示す。実施例４を参照されたい。

ＰＳＭ－４０３３－４０３９が、ナイーブ及びメモリＣＤ４^＋Ｔ細胞を含むヒト末梢ＣＤ４^＋Ｔ細胞からのＦｏｘｐ３^＋ｉＴｒｅｇの発現を誘導するために使用される、実験の結果を示す。実施例４を参照されたい。

ＰＳＭ－４０３３－４０３９が、同種他家のリンパ球反応によって活性化されたＣＤ４^＋Ｔ細胞からＦｏｘｐ３^＋ｉＴｒｅｇを誘導するために使用される、実験の結果を示す。実施例４を参照されたい。ＰＳＭ－４０３３－４０３９が、同種他家のリンパ球反応によって活性化されたＣＤ４^＋Ｔ細胞からＦｏｘｐ３^＋ｉＴｒｅｇを誘導するために使用される、実験の結果を示す。実施例４を参照されたい。

ＰＳＭ－４０３３－４０３９を様々な濃度でマウスに静脈内投与し、マウスにおける血清中濃度を、注射後７２時間までの様々な間隔で決定した実験の結果を示す。実施例４を参照されたい。

Ａでは、ＰＢＳビヒクル対照による、組換えＴＧＦ－β３及び組換えＩＬ－２の併用治療による、またはＰＳＭ－４０３３－４０３９による（図１０Ａ参照）、ＣＤ４＋Ｔ細胞におけるＦｏｘＰ３発現の誘導を示す。Ｂでは、ＰＳＭ－４０３３－４０３９の用量応答曲線（ＥＣ５０測定値）は、約３０ｎＭのＥＣ５０値を示す。

ＰＳＭ－４０３３－４０３９を用いた治療によってＦｏｘＰ３を発現するように誘導されたＣＤ４＋Ｔ細胞との共培養による、Ｔエフェクター細胞増殖の阻害を示す。

対照培地、ＩＬ－２、組換えＩＬ－２と組み合わせた組換えＴＧＦ－β３、及びＰＳＭ－４０３３－４０３９を用いた治療時のＦｏｘＰ３＋Ｔ細胞の生存率を示す。

ＰＢＳ（Ａ）またはＰＳＭ－４０３３－４０３９（Ｂ）で治療されたＴｘＡ２３マウスの血液中のＦｏｘＰ３＋ＣＤ４＋細胞の誘導を示す。この図はまた、ＰＢＳ（Ｃ）またはＰＳＭ－４０３３－４０３９（Ｄ）で治療されたＴｘＡ２３マウスの胃リンパ節におけるＦｏｘＰ３＋ＣＤ４＋細胞の誘導も示す。図１９のパネルＥでは、ＰＢＳで治療された３匹のＴｘＡ２３マウス及びＰＳＭ－４０３３－４０３９で治療された３匹のＴｘＡ２３マウスの胃リンパ節におけるＦｏｘＰ３＋ＣＤ４＋細胞のレベルが比較される。パネルＡ及びＢにおけるデータの比較が、パネルＧにおけるヒストグラムで提供され、パネルＣ及びＤにおけるデータの比較が、パネルＨにおけるヒストグラムで提供される。ＰＢＳまたはＰＢＳ中のＰＳＭ－４０３３－４０３９で治療されたマウスにおける胃上皮細胞マーカーＫｉ６７に特異的なＴＣＲを有する胃リンパ節におけるＴエフェクター細胞及びＴｒｅｇ細胞の数が、パネルＨ及びＩで提供される。

Ａ～Ｇでは、従来のｉＴｒｅｇ及びＰＳＭ－４０３３－４０３９誘導ｉＴｒｅｇによる表現型マーカーＣＤ２５、ＣＴＬ４、ＰＤ１、ＧＩＴＲ、ＣＤ３８、ＣＤ７３及びＧＡＲＰの発現の比較を提供する。

遅延型過敏症（ＤＴＨ）応答を誘発するためにキーホールリンペットヘモシアニンを採用して、ＤＴＨのマウスモデルにおいてＰＳＭ－４０３３－４０３９の効果を試験するための概略タイムライン、ならびに注射ビヒクル対照及びシクロスポリン陽性対照と共にＰＳＭ－４０３３－４０３９の効果のプロットを提供する。

ＩＶ．詳細な説明
Ａ．定義
本明細書で使用されるとき、アミノ酸（文脈上複数であることができる場合を除き、単数形である場合は「ａａ」と略記し、複数形では「ａａｓ」とする）とは、哺乳動物細胞での翻訳においてポリペプチド及びタンパク質に組み込まれる天然に存在するタンパク質源性のαアミノ酸を意味する。特に明記しない限り、以下の略語が使用される：Ｌ（Ｌｅｕ、ロイシン）、Ａ（Ａｌａ、アラニン）、Ｇ（Ｇｌｙ、グリシン）、Ｓ（Ｓｅｒ、セリン）、Ｖ（Ｖａｌ、バリン）、Ｆ（Ｐｈｅ、フェニルアラニン）、Ｙ（Ｔｙｒ、チロシン）、Ｈ（Ｈｉｓ、ヒスチジン）、Ｒ（Ａｒｇ、アルギニン）、Ｎ（Ａｓｎ、アスパラギン）、Ｅ（Ｇｌｕ、グルタミン酸）、Ｄ（Ａｓｐ、アスパラギン）、Ｃ（Ｃｙｓ、システイン）、Ｑ（Ｇｌｎ、グルタミン）、Ｉ（Ｉｌｅ、イソロイシン）、Ｍ（Ｍｅｔ、メチオニン）、Ｐ（Ｐｒｏ、プロリン）、Ｔ（Ｔｈｒ、スレオニン）、Ｋ（Ｌｙｓ、リジン）、及びＷ（Ｔｒｐ、トリプトファン）。アミノ酸には、哺乳動物細胞に見出されるいくつかのタンパク質に現れる、アミノ酸ヒドロキシプロリン及びセレノシステインも含まれる。

本明細書で使用されるとき、用語「ポリペプチド」、「ポリペプチド配列」、及び「タンパク質」は、同義語であり、それらのＣ－１カルボキシル基とそれらのαアミンとの間のペプチド結合によって連結され、ポリペプチドの骨格を形成するａａｓの配列を意味する。したがって、ＭＯＤポリペプチド配列、足場ポリペプチド配列、ＴＧＦ－βポリペプチド配列、及び／またはマスキングポリペプチド配列（例えば、ＴＧＦ－β受容体ポリペプチド配列または抗ＴＧＦ－βポリペプチド配列）のうちのいずれか１つ以上を含む各ポリペプチド（例えば、第１のポリペプチド）は、単一の連続する骨格を有するポリペプチド鎖として、それらのポリペプチド配列のうちのいずれか１つ以上を含む。そのようなポリペプチド（例えば、第１のポリペプチド）は、共有結合（例えば、システイン残基の側鎖間のジスルフィド結合）によって他のポリペプチドに連結され得る。さらに、本明細書で使用されるとき、用語「ポリペプチド」、「ポリペプチド配列」、及び「タンパク質」は、タンパク質が所望の活性を維持する限り、天然配列に対する（一般的には、当業者に公知となるように、本質的に保存的な）欠失、付加、及び置換などの修飾を含む。これらの修飾は、部位特異的変異導入を通したような意図的なものであり得るか、またはタンパク質を産生する宿主の突然変異、またはＰＣＲ増幅もしくは他の組換えＤＮＡ法に起因するエラーを通したような偶発的なものであり得る。

実施形態、請求項、または態様が、具体的なタイプの哺乳動物（例えば、ヒトまたは非ヒト対象）を対象とする場合、核酸及びポリペプチド配列は、その哺乳類由来の配列に限定され得る。特に断りのない限り、タンパク質（例えば、ＴＧＦ－β、ＴβＲ、免疫グロブリン、及びＭＯＤ）のポリペプチド配列は、ヒト（ＨｏｍｏＳａｐｉｅｎｓ）の配列である。

本明細書で使用されるとき、「マスキングされた」とは、ある分子（例えば、マスキングされたポリペプチドまたはマスキングされたタンパク質）が、マスキング分子（例えば、ポリペプチド、タンパク質、またはタンパク質断片）に結合されるか、またはそうでなければ係合されていることを意味し、ここで、前者の分子に対してまた親和性を有する他のタンパク質（例えば、細胞表面受容体）による該マスキングされた分子の利用可能性が制限される。

本明細書で使用されるとき、マスキングされたＴＧＦ－β構築物という用語は、ＴＧＦ－β（例えば、ＴＧＦ－β１、ＴＧＦ－β２、またはＴＧＦ－β３）ポリペプチド配列と、ＴＧＦ－βポリペプチドに結合するか、または別様にＴＧＦ－βポリペプチドと相互作用するマスキングポリペプチド配列との両方を含む、単一のポリペプチドを指す。特に断りのない限り、マスキングされたＴＧＦ－β構築物は、足場ポリペプチド配列を含み、任意に、１つ以上の独立して選択される免疫調節（ＭＯＤ）ポリペプチド配列を含む。

本明細書で使用されるとき、マスキングされたＴＧＦ－β複合体という用語は、２つ以上のポリペプチド（典型的には、ホモ二量体またはヘテロ二量体として配置されるが、より高次の多量体でもあり得る、第１及び第２のポリペプチドとして指定される２つのポリペプチド）を指す。マスキングされたＴＧＦ－β複合体は、ＴＧＦ－β（例えば、ＴＧＦ－β１、ＴＧＦ－β２、またはＴＧＦ－β３）ポリペプチド配列と、ＴＧＦ－βポリペプチドに結合するか、または別様にＴＧＦ－βポリペプチドと相互作用するマスキングポリペプチド配列と、それを通してＴＧＦ－β複合体のポリペプチドが会合する二量体化または多量体化配列を含む足場ポリペプチドとを含む。ＴＧＦ－β複合体ポリペプチドのうちのいずれか１つ以上は、任意に、１つ以上の独立して選択されるＭＯＤポリペプチド配列を含む。

「マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体」という用語は、マスキングされたＴＧＦ－β構築物またはマスキングされたＴＧＦ－β複合体の略称である。略語は、その複数形「マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体」で使用され得る。

本明細書で使用されるときの二量体化及び多量体化配列は、二量体（例えば、ヘテロ二量体もしくはホモ二量体）、または多量体（３つ、４つ、５つ以上のポリペプチド配列のホモもしくはヘテロ多量体）としてのポリペプチド配列（例えば、別個のポリペプチド）の会合を可能にする、ポリペプチド配列である。二量体化及び多量体化配列は、非共有結合的な配列の会合を可能にし、いくつかの状況下では、それは共有結合による複合体（例えば、ポリペプチド間のジスルフィド結合形成）に変換され得る。

相互特異的結合配列は、ポリペプチドの非対称な対形成（ヘテロ二量体形成）を可能にする二量体化配列である。相互特異的結合配列は、（ホモ二量体を形成するのとは対照的に）それらの相手方の相互特異的結合配列（複数可）、すなわちそれらの同種（ｃｏｇｎａｔｅ）の結合相手とのヘテロ二量体の形成を有利にする。キーインホール（またはキーイントゥホール）Ｆｃポリペプチド対は、相互特異的結合配列及びその相手側相互特異的結合配列の一例を表す。

本明細書で使用されるときのナノボディ（ｎａｎｏｂｏｄｉｅｓまたはｎａｎｏｂｏｄｙ）は、全抗体と同様に、特定の抗原に選択的に結合することが可能である、単一の単量体抗体可変ドメインからなる抗体断片を指す。

ａａ配列に関して野生型（「ｗｔ」と略記される）とは、生体において天然に見出される配列と比較して変化していない（その中に任意の置換、欠失、または挿入を有さない）、天然に存在するａａ配列か、または文脈から理解される天然に存在するａａ配列の連続部分を意味する。特定の天然に存在する配列は、参照のためにｗｔ配列として標記されうる。

本明細書で使用されるとき、「Ｔ細胞」は、例えば、ヘルパーＴ細胞（ＣＤ４＋細胞）、細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＤ８＋細胞）、Ｔ制御性細胞（Ｔｒｅｇ）、及びＮＫ－Ｔ細胞などの、ＣＤ３を発現する全ての型の免疫細胞を包含する。

用語「結合」とは、本明細書で使用されるとき、２つの分子間の非共有結合性の相互作用、例えば、ＭＯＤとそのｃｏ－ＭＯＤとの間の非共有結合相互作用を指す。非共有結合とは、例えば、静電的、疎水的、イオン性及び／または水素結合性の相互作用による、２つの分子間の直接の会合を意味し、例えば塩橋や水橋による相互作用を含む。非共有結合相互作用は、一般に、１０^－６Ｍ未満、１０^－７Ｍ未満、１０^－８Ｍ未満、１０^－９Ｍ未満、１０^－１０Ｍ未満、１０^－１１Ｍ未満、１０^－１２Ｍ未満、１０^－１３Ｍ未満、１０^－１４Ｍ未満、また１０^－１５Ｍ未満の解離定数（Ｋ_Ｄ）を特徴とする。「特異的結合」は、一般に、少なくとも約１０^－７Ｍ以上、例えば、５×１０^－７Ｍ、１０^－８Ｍ、５×１０^－８Ｍ、１０^－９Ｍ、及びそれ以上の親和性を有する結合を指す。「非特異的結合」は、一般に、約１０^－７Ｍ未満の親和性での結合（例えば、その指定された結合部位または受容体以外の部分へのリガンドの結合）（例えば、１０^－６Ｍ、１０^－５Ｍ、１０^－４Ｍの親和性での結合）を指す。本明細書で使用されるときの「共有結合（ｃｏｖａｌｅｎｔｂｉｎｄｉｎｇまたはｃｏｖａｌｅｎｔｂｏｎｄ）」は、２つの異なる分子間の１つ以上の共有化学結合の形成を指す。

「親和性」は、非共有結合の強度を指し、増加した結合親和性は、より低いＫ_Ｄと相関する。本明細書で使用されるとき、用語「親和性」は、２つの作用物質（例えば、抗体及び抗原）の可逆的結合のための平衡定数を指し、解離定数（Ｋ_Ｄ）として表される。

本明細書で使用されるとき、用語「免疫調節ポリペプチド」またはＭＯＤとしては、Ｔ細胞上の同種の共免疫調節ポリペプチド（「ｃｏ－ＭＯＤ」）に特異的に結合し、それによりシグナルを生じさせる、抗原提示細胞（ＡＰＣ）（例えば、樹状細胞、Ｂ細胞など）上のポリペプチド、またはＡＰＣ上のポリペプチドの一部が挙げられる。例えば、ＩＬ－２などのインターロイキンまたはその断片（ＭＯＤ）の、細胞表面ＩＬ－２受容体（ｃｏ－ＭＯＤ）への結合は、細胞へのシグナルを提供する。ＭＯＤには、ＩＬ－１、ＩＬ－２、ＩＬ４、ＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－１０、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１、ＩＬ－２３、ＰＤ－Ｌ１、４－１ＢＢＬ、及びＦａｓリガンド（ＦＡＳ－Ｌ）が含まれるが、これらに限定されない。ＭＯＤは、とりわけ、Ｔ細胞上に存在するｃｏ－ＭＯＤ分子と特異的に結合して、ｃｏＭＯＤによるシグナル伝達をもたらす、抗体または抗体配列（例えば、ナノボディ）も包含する。本明細書で考察されるように、ＭＯＤはまた、例えば、ｃｏ－ＭＯＤに対する低減した結合親和性を有する変異型ＭＯＤを含む、ｗｔ．ＭＯＤの変異型も含む。このような親和性の低下は、複数の形態をとることができる。例えば、変異型ＩＬ－２ＭＯＤは、ＩＬ－２Ｒのα鎖、β鎖、及び／またはγ鎖のうちの１つ以上に対する親和性が低下し得る。本明細書で考察されるように、１６位及び４２位に変異を含む変異型ＩＬ－２ＭＯＤは、ＩＬ－２Ｒのα鎖への結合を実質的に示さず、ＩＬ－２Ｒのβ鎖に対する親和性を低下させることができる。加えて、２つ以上のｃｏ－ＭＯＤを有するＭＯＤ（例えば、ＣＤ８０がＣＤ２８及びＣＴＬＡ－４の両方に結合する）の場合、変異型ＭＯＤは、一方のｃｏ－ＭＯＤに対する親和性を低下させ、他方のｃｏ－ＭＯＤに優先的または選択的に結合することができる。本開示の目的においては、ＴＧＦ－β（例えば、ＴＧＦ－β１、ＴＧＦ－β２、またはＴＧＦ－β３）、及びその断片は、ＭＯＤとはみなされない。

特に示されない限り、用語「実質的に」とは、「完全に」及び「大部分であるが完全にではない」の両方を包含することが意図される。例えば、ＩＬ－２Ｒのα鎖に実質的に結合を示さない変異型ＩＬ－２ＭＯＤは、ＩＬ－２Ｒのα鎖に全く結合しないか、またはＩＬ－２Ｒのα鎖にほとんど結合しないＩＬ－２変異型ＭＯＤである。

本明細書で使用されるとき、用語「インビボ」とは、例えば自己免疫性患者の体内で生じる任意のプロセスまたは手順を指す。

本明細書で使用されるとき、「インビトロ」とは、エクスビボと称され得る手順を含む、体外で生じる任意のプロセスまたは手順を指す。

本明細書でＭＯＤポリペプチド配列の配置を説明するために使用されるときの「タンデム」は、最大でもリンカーによって分離された（例えば、足場、マスキングポリペプチド、またはＴＧＦ－β配列が介在しない）ポリペプチド上で互いに隣接して配置された２つ以上のＭＯＤを有することを意味する。

本明細書で使用されるとき、用語「エクトドメイン」は、細胞外空間内に延在し、膜貫通ドメインの十分な部分を含まず、それを細胞膜内に固定する膜タンパク質の部分（ドメイン）を意味する。

本明細書で使用されるとき、「配列同一性」とは、２つのポリヌクレオチド配列または２つのポリペプチド配列間の、ａａまたはヌクレオチド同一性の尺度である。あるポリヌクレオチドまたはポリペプチド配列が、別のポリヌクレオチドまたはポリペプチドに対して特定の「配列同一性」率を有すると記述することは、２つの配列を比較するときに、塩基またはアミノ酸の割合が同一であり、同一の相対位置にあることを意味する。配列同一性については多数の異なる方式を用いて決定することができる。配列同一性を測定するために、様々な簡便な方法、及び、ｗｏｒｌｄｗｉｄｅｗｅｂにおいて、ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｌｉ．ｇｏｖ／ＢＬＡＳＴ、ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／Ｔｏｏｌｓ／ｍｓａ／ｔｃｏｆｆｅｅ／、ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／Ｔｏｏｌｓ／ｍｓａ／ｍｕｓｃｌｅ／、ｍａｆｆｔ．ｃｂｒｃ．ｊｐ／ａｌｉｇｎｍｅｎｔ／ｓｏｆｔｗａｒｅ／を含むサイトで利用可能なコンピュータプログラム（例えば、ＢＬＡＳＴ、Ｔ－ＣＯＦＦＥＥ、ＭＵＳＣＬＥ、ＭＡＦＦＴなど）を使用して配列をアラインしてもよい。例えば、Ａｌｔｓｃｈｕｌｅｔａｌ．（１９９０），Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３－１０を参照されたい。特に明記しない限り、配列同一性は、２０１９年４月１日にリリースされたＮＣＢＩＢＬＡＳＴアルゴリズム、バージョンＢＬＡＳＴ＋２．９．０（タンパク質の場合ＢＬＡＳＴＰ２．９．０＋、及び核酸の場合ＢＬＡＳＴＮ２．９．０＋）で実行されたアラインメントを使用して決定される。

本明細書で使用されるときの「組換え」は、特定の核酸（ＤＮＡまたはＲＮＡ）が、天然系に存在する内在性核酸と区別可能な構造コードまたは非コード配列を有する構築物をもたらす、クローニング、制限、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）及び／またはライゲーションステップの様々な組み合わせの生成物であることを意味する。ポリペプチドをコードするＤＮＡ配列は、ｃＤＮＡ断片から、または一連の合成オリゴヌクレオチドから組み立てられて、細胞または無細胞転写及び翻訳系に含まれる組換え転写単位から発現されることが可能である合成核酸を提供することができる。ペプチド、ポリヌクレオチド、またはタンパク質に関して使用される組換えとは、それらが組換え核酸からの発現によって調製されたことを示す。

本明細書で使用されるとき、ある量に関連して使用される用語「約」とは、その量が記載の量の１０％変化し得ることを示す。例えば、「約１００」は、９０～１１０の量を意味する。「約」が範囲の文脈で使用される場合、範囲の下限量に関して使用される「約」は、下限量が範囲の下限量よりも１０％低い量を含むことを意味し、範囲の上限量に関して使用される「約」は、上限量が範囲の上限量よりも１０％高い量を含むことを意味する。例えば、約１００～約１０００は、範囲が９０～１１００に及ぶことを意味する。

本発明で使用する場合、用語「治療」、「治療すること」などは、広義には、所望の薬学的効果及び／または生理学的効果を得ることを意味する。その効果は、疾患またはその症状を完全にまたは部分的に予防するという観点において予防的であり得、及び／または、疾患及び／またはその疾患に起因する悪作用の部分的または完全な治癒という観点において治療的であり得る。本明細書で使用されるときの「治療」は、哺乳動物における疾患または症状の任意の治療を網羅し、（ａ）疾患もしくは症状にかかりやすい素因を有し得るが、まだそれを有すると診断されていない対象において疾患もしくは症状が生じることを予防すること、（ｂ）疾患もしくは症状を阻害すること、すなわち、その進行を阻止すること、及び／または（ｃ）疾患を軽減すること、すなわち、疾患の退行を引き起こすことを含む。治療剤（例えば、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体）は、疾患または傷害の発症の前、間、または後に投与され得る。進行中の疾患の治療（治療は患者の望ましくない臨床症状を安定化または抑制する）には特に利点がある。このような治療は、望ましくは、罹患組織の機能が完全に喪失される前に実施される。治療的処置は、疾患の症候期中に、及び一部の例では、疾患の症候期後に施される。

用語「個体」、「対象」、「宿主」及び「患者」は、本明細書では同義的に使用され、診断、治療または療法が望まれる任意の哺乳動物対象を指す。哺乳動物としては、例えば、ヒト、非ヒト霊長類、齧歯類（例えば、ラット、マウス）、ウサギ目（例えば、ウサギ）、有蹄類（例えば、ウシ、ラット、ヤギ、ヒツジ、ウマ、ブタなど）、イヌ科（例えば、イヌ）、ネコ科（例えば、ネコ）など（例えば、ヒト、ウシ、イヌ、ネコ、齧歯類、ネズミ、ヤギ類、サル類、ヒツジ、ウマ、ラッピン（ｌａｐｐｉｎｅ）、ブタなど）が挙げられる。

本明細書ならびに添付の態様及び特許請求の範囲で使用される単数形「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、文脈上明確に指示しない限り、複数の指示対象を含むことに留意すべきである。それゆえ、例えば、「ａＴｒｅｇ」というときは、複数のそのようなＴｒｅｇを包含し、「ＴＧＦ－βポリペプチド」というときは、１つ以上のＴＧＦ－βポリペプチド及び当業者に既知のその均等物などへの言及を包含する。さらに、特許請求の範囲は、いずれの任意の要素も含むかまたは除外するかのいずれかであるように作成され得るということに留意されたい。すなわち、このことは、（例えば、「単に」、「のみ」などの用語を用いて）特許請求の範囲でのそのような要素の使用（包含）、または特許請求の範囲からのそれらの削除、のいずれかである、前者の根拠として、もしくは特定の任意の要素を除外する「否定的な」限定のための根拠として、機能することを意図するものである。

明確さのために個々の態様または実施形態との関係において記載した本発明における特定の特徴はまた、従属請求項記載の発明を含む単一の態様または実施形態において、組み合わせて提供してもよいということを理解されたい。逆の言い方をすれば、簡潔にするため、単一の実施形態との関係において記載した本発明における様々な特徴を、さらに、別々に、または、任意の好適な副組み合わせで提供してもよい。本発明に属する実施形態の全ての組み合わせは、本発明により明示的に包含され、それぞれ及び全ての組み合わせが個別にかつ明確に開示されるかのように本明細書において開示される。加えて、様々な実施形態及びそれらの要素における全ての副組み合わせもまた、本発明により明示的に包含され、全てのこのような副組み合わせが個別にかつ明確に本明細書において開示されるかのように、本明細書において開示される。

本明細書で考察される刊行物は、単に本願の出願日前にそれらの開示を提供したに過ぎない。本明細書におけるいずれの内容も、本発明が、先行発明によりこのような刊行物に先行する権利を持たないことを認めるものとして解釈されるべきではない。さらに、提供した刊行物の日付は実際の刊行日とは異なる場合があり、個別に確認する必要が生じる場合がある。

Ｂ．説明
１．序論
ＴＧＦ－βスーパーファミリーは、成長阻害機能を有する内因性タンパク質を包含する。ＴＧＦ－βの発現の増加、またはＴＧＦ－βの作用を阻害する細胞メカニズムの欠陥は、とりわけ、ＴＧＦ－βの免疫抑制作用により、多くのがんの悪性腫瘍と相関している。ＴＧＦ－βの免疫抑制機能の調節不全は、自己免疫疾患にも関与する。ＴＧＦ－βは、免疫機能の主要な調節因子であるため、多数の研究の標的となり、ＴＧＦ－β及びそのシグナル伝達経路の両方は、炎症プロセス及び自己免疫障害を含む様々な疾患の治療のための治療標的と考えられている。

治療薬としてＴＧＦ－βを効果的に調製及び送達することは、分子の毒性及びＴＧＦ－βの受容体系の複雑さのため、容易ではない。哺乳動物細胞発現系におけるＴＧＦ－βの大量産生は、多くの哺乳動物細胞に対する該タンパク質の毒性によって制限される。ＴＧＦ－βの細胞傷害性が問題となる細胞としては、産業的なタンパク質産生のために最も強健でかつ一般的に用いられる細胞の１つである、チャイニーズハムスター卵巣細胞または「ＣＨＯ」細胞などの、生体分子の産生に使用される多くのものが挙げられる。治療薬としてのＴＧＦ－βの使用はまた、（ＴＧＦ－β３の約６．１の等電点（ｐＩ）とは対照的に）約８．５９のｐＩを有するＴＧＦ－β１の高いｐＩ、及び非酸性条件下でのその限られた安定性／溶解性（そのような酸性条件は、一般に、治療的使用に適していない）によって複雑化される。加えて、（例えば、ＴＧＦ－β２に対して５ｎＭ程度の）哺乳動物系内に存在する多量の高親和性ＴβＲＩＩＩ受容体は、ＴＧＦ－βに対するＴβＲＩＩの親和性と比較して（１～２μＭ程度の）顕著な薬力学的シンク（ｓｉｎｋ）を表し、ＴＧＦ－βベースの生物学的製剤の標的組織へのアクセスを制限する。同様に、ＴＧＦ－βをＴβＲＩＩ／ＴβＲＩ複合体に動員するＴβＲＩＩＩの役割は、ＴＧＦ－βの有意なオフターゲット送達をもたらし、意図しない、望ましくない、さらには毒性効果をもたらし得る。そのようなオフターゲット送達は、非特異的な活性化をもたらし得、また、特にＴＧＦ－βシグナル伝達がフィードフォワード制御下にある場合に、活性型ＴＧＦ－βのさらなる産生をもたらし、それによって、さらなる意図しないかつ望ましくない効果を生じさせ得る。例えば、Ｊｉａｎｇｅｔａｌ．，ＲｅｄｏｘＢｉｏｌ．２：２６７－２７２（２０１４）を参照されたい。

治療薬としてのＴＧＦ－βの効果的な使用は、ＴＧＦ－β刺激の結果を得るために細胞に対し追加の刺激を提供する必要性があるため、さらに困難となる。上記のように、ＩＬ－１、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－１０、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１、ＩＬ－２３、ＰＤ－Ｌ１、４－１ＢＢＬ、及びＦａｓリガンド（ＦＡＳ－Ｌ）などのサイトカインは、ＴＧＦ－βの作用に深刻な影響を及ぼし得る。したがって、ＴＧＦ－β及びサイトカインなどの形態での追加の刺激を送達する能力は、特定の治療的または細胞媒介性の（例えば、インビトロまたはインビボの）効果を達成するのに有利であり得る。

以下でより詳細に考察されるように、本開示は、ＴβＲＩ及びＴβＲＩＩタンパク質を有する細胞と相互作用し、シグナル伝達を刺激することができる、ＴＧＦ－βポリペプチドの使用を記載する。有利には、ＴＧＦ－βポリペプチドは、足場（例えば、免疫グロブリンＦｃポリペプチドなどの１つまたは２つのポリペプチド）の周りに構築されたＴＧＦ－βポリペプチド配列（例えば、マスキング配列として機能するＴβＲＩＩ配列）に結合してマスキングするポリペプチドも含有する融合タンパク質（単一のポリペプチド鎖）または融合タンパク質複合体（２つ以上のポリペプチド鎖）である、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体の一部である。そのような融合タンパク質または融合タンパク質複合体の例が、図１に描写される。融合タンパク質のＴＧＦ－βポリペプチドが、例えば、細胞のＴβＲＩＩＩと相互作用する場合、ＴＧＦ－βを結合及びマスキングする融合タンパク質の部分は、ＴβＲＩＩＩと競合し、ＴＧＦ－βがＴβＲＩＩＩリザーバー内で隔離されるのを防止する。加えて、ａａ置換を使用して最大３桁まで意図的に変化させることができる、ＴＧＦ－βポリペプチドに対するマスキングポリペプチドの親和性は、図９に示されるように、その標的受容体（例えば、ＴβＲＩＩ）に対するマスキングポリペプチドの全体的な効力を制御する。ＴＧＦ－βポリペプチドは、主にジスルフィド結合二量体としてＴβＲＩＩＩに結合するため、隔離につながるその受容体との相互作用は、以下で考察されるように、二量体化または二量体の安定性を制限するａａ置換（例えば、Ｃ７７Ｓ）を含むことによって減弱させることができる。ＴＧＦ－β融合タンパク質または融合タンパク質複合体とＴβＲＩＩとの相互作用は、マスキング配列に取って代わり、細胞表面結合型のＴＧＦ－β／ＴβＲＩＩ複合体を形成する。ヘテロ二量体ＴＧＦ－β受容体を形成するためのＴβＲＩのその後の動員は、マスキングポリペプチド配列の存在下でもＴＧＦ－βに強固に結合する高親和性複合体（例えば、ピコモル親和性）を提供する。したがって、マスキングされたＴＧＦ－βは、依然として、ヘテロ二量体ＴβＲＩ／ＴβＲＩＩ受容体複合体に結合し、古典的Ｓｍａｄタンパク質経路、非古典的Ｊｕｎキナーゼ経路、及びｐ３８シグナル伝達経路を通してシグナル伝達することができる。実際には、マスキングポリペプチドは、ＴＧＦ－βを細胞に送達し、その後ＴβＲＩタンパク質を動員する細胞表面ＴβＲＩＩ分子に引き渡し、ＴＧＦ－βポリペプチドを適切な位置に効果的に保持する機能的で活性なシグナル伝達複合体を形成する。

マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体は、ＴＧＦ－β結合タンパク質（例えば、そのＴＧＦ－β結合エクトドメインの全てまたは一部を含むＴＧＦ－β受容体の断片）によってマスキングされたＴＧＦ－βを、望ましくないオフターゲット相互作用を回避する形態で送達することに加えて、標的細胞に対するＴＧＦ－β作用の結果に影響を及ぼすことができる免疫調節物質（「ＭＯＤ」ポリペプチド）として機能する、１つ以上のポリペプチドを含んでもよい。ＴＧＦ－β及び免疫調節物質の両方を一緒に送達する能力は、ＴＧＦ－β活性化シグナルの作用が指向されることを可能にするだけでなく、免疫調節物質単独の投与と比較して標的細胞に同じ効果を生じさせるために必要とされる免疫調節物質の量を低減する。これは、同じ標的細胞上の受容体に対する親和性を有する２つのポリペプチド配列を有することによって得られる（アビディティ増強による）親和性の増加の結果である。１つ以上のＭＯＤを担持するマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体と、ＴＧＦ－βポリペプチド及び１つ以上のＭＯＤの両方に対する受容体を担持する標的細胞との間のアビディティの増加（それらの受容体とのＭＯＤ相互作用に起因する、結合の遊離エネルギーΔＧの増加から生じる）は、飽和未満の量でマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体が存在するという条件で、両方のタイプの受容体を有する標的細胞の活性化において向上した選択性を提供する。一例として、ＩＬ－２ＭＯＤを有する、図１の構造Ａまたは図７ＧのものなどのマスキングされたＴＧＦ－β構築物は、同等（等モル）量のＩＬ－２ＭＯＤポリペプチドの存在下でさえもＩＬ－２ＭＯＤを欠く、別様に同一のマスキングされたＴＧＦ－β構築物よりも強力なナイーブＣＤ４＋細胞のｉＴｒｅｇ分化の誘導物質である。加えて、飽和未満の用量において、かつ類似数の細胞型が存在する場合、例えば、図７Ｇに示されるＩＬ－２ＭＯＤを有する図１の構造Ａのもののような構築物は、ＩＬ－２ＭＯＤを欠く構築物と比較してＴＧＦ－β及びＩＬ－２受容体の両方を有する細胞に選択的に結合する。

マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体の作用は、個々のポリペプチド配列の作用を変化させる修飾の組み込みによってさらに特定することができる。一部の実施形態では、ＴＧＦ－βの二量体化能力を変化させるａａ置換（例えば、ＴＧＦ－β３におけるＣ７７Ｓ置換）を組み込み得る。ＴＧＦ－βの単量体形態は、ＴβＲＩＩＩに対する親和性をほとんど示さないが、ＴＧＦ－βの二量体化する能力を制限する変異の組み込みは、複合体をＴＧＦ－β「リザーバー」に引き込むことができるＴβＲＩＩＩへのオフターゲット結合を制限し、標的細胞を刺激する能力を制限する。

修飾（例えば、置換、欠失、挿入など）もまた、マスキングポリペプチド配列、及び免疫調節性ポリペプチド配列を含む、ＴＧＦ－βポリペプチド配列以外のポリペプチド配列に行われ得る。

ＴＧＦ－βに結合し、それをマスクするポリペプチドへの修飾は、ＴＧＦ－βに対するマスキングポリペプチドの親和性ならびにマスキングポリペプチド及びＴＧＦ－βポリペプチドの呼吸速度（オン及びオフレート）を変化させることによって、ＴＧＦ－βポリペプチド配列の可用性を変化させることができる。２つの異なるＴＧＦ－βポリペプチド／マスキングポリペプチド複合体は、同じ結合会合定数（ｋｏｎ対ｋｏｆｆの比）を有し得るが、より高いｋｏｎ及びｋｏｆｆを有する複合体は、速度定数に応じて、細胞表面ＴβＲＩＩ結合に対して効果的により利用可能であり得る。図９は、各々、ＴＧＦ－β３に結合するＴβＲＩＩに異なる影響を及ぼす、様々な置換の有無以外は同一のＴβＲＩＩマスキングされたＴＧＦ－β構築物の親和性を示す表とともに、ＴＧＦ－β１及びＴＧＦ－β３に対する親和性を変化させるＴβＲＩＩにおけるいくつかのａａ置換のリストを提供する。

様々なポリペプチドを利用して、一本鎖抗体配列（例えば、ヒト化一本鎖抗体配列）を含むＴＧＦ－βをマスキングすることが可能であるが、ＴＧＦ－βに結合する最小限のＴＧＦ－β受容体配列（例えば、ＴβＲＩ、ＴβＲＩＩ、またはＴβＲＩＩＩのエクトドメイン）が採用され得る。ＴβＲＩＩＩのエクトドメインは、二量体ＴＧＦ－βのマスキングポリペプチドとして利用され得るが、ＴＧＦ－βに対するその高い親和性は、ＴＧＦ－βポリペプチド配列のＴβＲＩＩへの結合をアンタゴナイズさせ得る。それにもかかわらず、ＴβＲＩＩＩマスキング配列は、ＴＧＦ－βポリペプチドに対してより高い親和性を有する細胞表面ＴβＲＩ／ＴβＲＩＩ複合体によって効果的に置き換えられ得、それによって、それらの細胞表面受容体の活性化を可能にする。

ＴβＲＩＩのエクトドメインは、マスキングポリペプチドとして利用され得る。ＴβＲＩＩのＮ末端アミノ酸の欠失（例えば、Δ１４またはΔ２５）は、Ｄ１１８Ａ置換の存在下または不在下で、約４．５～約５．０（例えば、約４．７～４．８５）と計算されるｐＩを有するＴＧＦ－βをマスキングするために好適なタンパク質（またはポリペプチド）を産生することができる。ＴＧＦ－β１ポリペプチド（高いｐＩ値を有する）とＴβＲＩＩマスキングポリペプチド（例えば、Ｎ末端欠失を有するものを含む）との組み合わせは、ＴＧＦ－β１ポリペプチド電荷を潜在的に中和することができる。ＴβＲＩＩ（Δ２５、Ｄ１１８Ａ）／ＴＧＦ－β１の計算されたｐＩは、６．２３程度であり、ＴＧＦ－β１は、約８．５９のｐＩを有する。対照的にΔ１４またはΔ２５ＴβＲＩＩ及びＴＧＦ－β３の複合体は（Ｄ１１８Ａ及び／またはＣ７７Ｓ置換の有無別に）、約４．９～約５．３のｐＩ値（約５．０６～５．１７のｐＩ）を有すると計算される。加えて、ＴβＲＩＩエクトドメインを活性ＴＧＦ－βポリペプチドと組み合わせることが、細胞表面のＴβＲＩと相互作用することが可能な複合体をもたらし、それによって、ＴＧＦ－βシグナル伝達に影響を及ぼし得る（例えば、ＴＧＦ－βのアゴニスト、部分的アゴニスト、アンタゴニスト、または部分的アンタゴニストとして作用する）が、ＴβＲＩとの相互作用を制限するａａ置換の組み込みは、活発なシグナル伝達に関与するマスキングされた複合体の能力を制限またはブロックする。したがって、以下に考察されるように、ＴβＲＩへの結合を低減または除去するＮ末端欠失（例えば、１４～２５ａａの欠失、Δ１４～Δ２５）または置換（例えば、Ｄ１１８Ａ、Ｄ１１８Ｒなどのアスパラギン酸以外のａａによるＤ１１８における置換）を有するＴβＲＩＩエクトドメイン配列を組み込むことを使用して、ＴＧＦ－βをマスクし、ＴβＲＩＩのＮ末端が無傷であるＴβＲＩＩエクトドメインマスキングされたＴＧＦ－βポリペプチドによる細胞の刺激を防止することができる。その結果として、ＴＧＦ－βがＴβＲＩＩのＮ末端欠失変異体によってマスキングされるものを含む、マスキングされたＴＧＦ－β複合体は、ＴＧＦ－βのマスキング解除（マスクペプチドからの解離または折り畳まれた分子の開放）、並びに標的細胞のＴβＲＩＩ及びＴβＲＩに結合して活性ヘテロ二量体ＴβＲＩ／ＴβＲＩＩシグナル伝達複合体を形成することによって、作用することができる。

ＴＧＦ－βのマスキングは、細胞の生存率を低下させることなく、哺乳動物細胞（例えば、ＣＨＯ細胞）において高レベルでのその発現を可能にする。これは特に、マスキングされたＴＧＦ－βポリペプチドが、Ｎ末端α欠失、置換、及び／または他の変異によってＴβＲＩとの結合をブロックされる場合に当てはまる。ＴβＲＩＩＩ相互作用のブロック（例えば、二量体化をブロックすることによって）は、細胞発現と関連する問題をさらに低減することができる。

Ｃ．マスキングされたＴＧＦ－Β構築物及びマスキングされたＴＧＦ－Β複合体
本開示は、マスキングされたＴＧＦ－β構築物（例えば、単一のポリペプチド鎖を有する、図１の構造Ａを参照）及びマスキングされたＴＧＦ－β複合体（例えば、２つのポリペプチド鎖の複合体を有する、図１の構造Ｂ～Ｆを参照）の調製を記載する。マスキングされたＴＧＦ－β構築物及びマスキングされたＴＧＦ－β複合体は、それらの構成要素として、少なくとも１つのＴＧＦ－βポリペプチド配列と、ＴＧＦ－βポリペプチド（複数可）に結合し、それをマスキングする少なくとも１つのポリペプチドと、任意に、１つ以上の（例えば、１つ、２つ、または３つの）ＭＯＤとを含み、これらの全ては、足場構造上に組み立てられる。マスキングされたＴＧＦ－β構築物及びマスキングされたＴＧＦ－β複合体は、膜結合タンパク質（例えば、ＴＧＦ－β受容体）の部分を含むが、特に明記しない限り、それらは、膜アンカードメイン（例えば、発現したタンパク質の大部分を細胞膜（例えば、発現したＣＨＯ細胞）内でアンカーさせるために十分な膜貫通ドメイン）の部分を含まない。

図１に示される形態のものを含む、ＴＧＦ－β構築物及び複合体の非限定的な例を以下に記載する。

ＭＯＤ、足場、リンカー、ＴＧＦ－βポリペプチド及びＴＧＦ－βマスキングポリペプチド（例えば、単鎖抗体またはＴＧＦ－β受容体エクトドメイン）を含む、マスキングされたＴＧＦ－β構築物及び複合体の構成要素について、各々以下のセクションに記載する。

Ｄ．免疫調節ポリペプチド配列（「ＭＯＤ」）
１．マスキングされたＴＧＦ－β構築物及び複合体へのＭＯＤの組み込み
上記に考察されるように、ＭＯＤは、マスキングされたＴＧＦ－βポリペプチドの送達、またはＴβＲＩ及びＴβＲＩＩヘテロ二量体受容体を通して細胞を活性化するその能力のために必要とはされないが、ＭＯＤは、ＴＧＦ－β受容体活性化の結果に実質的に影響を及ぼし得る。したがって、野生型（ｗｔ）または変異型ＭＯＤ（例えば、「ｃｏ－ＭＯＤ」、「共免疫調節ポリペプチド」または「同種共刺激受容体」もしくはそれらのサブタイプとも称される、特定の受容体に対する低減した親和性、増加した親和性または選択性を示す）を組み込むことが望ましくあり得る。ＴＧＦ－βも免疫調節ポリペプチドであるが、本明細書に記載のマスキングされたＴＧＦ－β構築物及び複合体における中心エレメントであるため、本明細書で使用されるとき、用語「ＭＯＤ（複数可）」は、ＴＧＦ－βまたはそのポリペプチドを含まない。

マスキングされたＴＧＦ－β構築物及び複合体（例えば、ホモ二量体またはヘテロ二量体複合体）のうちのいずれかへの包含に好適であるＭＯＤとしては、ＰＤ－Ｌ１、ＦＡＳ－Ｌ、４－１ＢＢＬ、ＩＬ－１、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－１０、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１及びＩＬ－２３が挙げられるが、これらに限定されない。一部の例では、ＭＯＤは、成熟ＰＤ－Ｌ１、ＦＡＳ－Ｌ、４－１ＢＢＬ、ＩＬ－１、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－１０、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１及びＩＬ－２３ポリペプチド、またはそれらのいずれかの断片から独立して選択される。マスキングされたＴＧＦ－β構築物及び複合体に組み込まれたＭＯＤポリペプチド配列（複数可）は、分泌ＭＯＤポリペプチドの部分のみを、または膜アンカー型である場合は全長成熟ＭＯＤタンパク質の細胞外部分を含むことができる。したがって、例えば、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体内のＭＯＤポリペプチド配列は、一部の例では、一部の天然のＭＯＤ内で通常見られるシグナルペプチド、膜貫通ドメイン、及び／または細胞内ドメインの１つ以上（例えば、各々）を除外することができる。

一部の例では、本開示のマスキングされたＴＧＦ－β構築物及び複合体に含めるのに好適なＭＯＤポリペプチド配列は、天然に存在するＭＯＤのアミノ酸配列の全部または一部分（例えば、細胞外部分）を含む。他の例では、本開示のマスキングされたＴＧＦ－β構築物及び複合体に含めるのに好適なＭＯＤとしては、天然に存在するＭＯＤのアミノ酸配列と比較して、少なくとも１つのアミノ酸の挿入、置換、及び／または欠失を含む、少なくとも１つの（例えば、１つ、２つ、または３つの独立して選択される）変異型ＭＯＤが挙げられる。

一部の例では、変異型ＭＯＤは、ｃｏ－ＭＯＤに対する対応する天然型ＭＯＤ（例えば、変異型内に存在するアミノ酸置換（複数可）を含まないＭＯＤ）の親和性よりも低い、ｃｏ－ＭＯＤに対する結合親和性を呈する。親和性の低下に応じて、それらのｃｏ－ＭＯＤに対する親和性が低下しているＭＯＤの使用は、ＴＧＦ－βポリペプチドが結合相互作用に対してより多くの影響を有する、またはそれを優勢にすることを可能にする。ＴＧＦ－βポリペプチドの結合親和性がＭＯＤのものよりも高い場合、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体を駆動して、ＴＧＦ－β受容体系を有する細胞（例えば、高親和性ＴＧＦ－β結合ヘテロ二量体を形成するＴＧＦ－βＲ１及びＴＧＦ－βＲ２）と会合させることができると同時に、所定量のｃｏ－ＭＯＤの存在下であっても、ＴＧＦ－β受容体を欠いているかまたはほとんど有していない細胞への標的結合を制限することができる。本質的に、その細胞受容体に対するＴＧＦ－βポリペプチドの親和性（例えば、結合のΔＧ）が、それらのｃｏ－ＭＯＤに対するＭＯＤの親和性（例えば、それらの結合のΔＧ）よりも大きい場合、ＴＧＦ－βは、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体の結合及び特異性を推進する。

一実施形態では、マスキングされたＴＧＦ－β構築物及び複合体に関連するいずれかの１つ以上のＭＯＤは、独立して、ｗｔ．または変異型ＰＤ－Ｌ１、ＦＡＳ－Ｌ、４－１ＢＢＬ、ＩＬ－１、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－１０、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１、ＩＬ－２３、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される。

一部の例では、Ｔｒｅｇ細胞の産生を刺激することが望ましい場合などでは、マスキングされたＴＧＦ－β構築物及び複合体に存在する少なくとも１つのＭＯＤポリペプチド（例えば、１つ、２つまたは３つの独立して選択されるＭＯＤ）は、ＩＬ－２ポリペプチドまたはＩＬ－２変異型ポリペプチドである。ＩＬ－２における配列変動は、ＩＬ－２ポリペプチド及びマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体の、ＩＬ－２Ｒ受容体サブユニットの異なる組み合わせを有する標的細胞への結合に偏らせるように選択され得る。ＩＬ－２受容体は、共通のＩＬ－２Ｒγならびに２つの追加のＩＬ－２Ｒα及び／またはＩＬ－２Ｒβサブユニットからなり、三量体（ＩＬ－２Ｒα）_２－ＩＬ－２Ｒγ、（ＩＬ－２Ｒβ）_２－ＩＬ－２Ｒγ、または高親和性（約１０ピコモルのＫｄ）ＩＬ－２Ｒα－ＩＬ－２Ｒβ－ＩＬ－２Ｒγ受容体を形成する。α鎖（ＣＤ２５）が、ＩＬ－２に特有である一方で、β鎖（ＣＤ１２２）は、ＩＬ－１５受容体と共有され、シグナル伝達に重要であるγ鎖（ＣＤ１３２）は、他のサイトカイン受容体鎖と提携することができる。Ｈ１６（例えば、Ｈ１６ＡもしくはＨ１６Ｔ）またはＦ４２（例えば、Ｆ４２ＡもしくはＦ４２Ｔ）での置換は、ＩＬ－２Ｒβサブユニットを有する受容体に有利な結合に偏らせることができ、したがって、それらの組み込みは、β－γ受容体（（ＩＬ－２Ｒβ）_２－ＩＬ－２Ｒγ）を示すメモリＴ細胞及びＮＫ細胞、または高親和性α－β－γ（ＩＬ－２Ｒα－ＩＬ－２Ｒβ－ＩＬ－２Ｒγ）受容体を示す活性化Ｔ細胞及びＴｒｅｇへの結合に偏らせる。対照的に、Ｎ８８（例えば、Ｎ８８Ｒ）での置換は、ＩＬ－２Ｒβへの結合を減少させ、ＩＬ－２Ｒαサブユニットを有する受容体に有利な結合をバイアスすることができ、したがって、Ｎ８８での置換は、α－γ（（ＩＬ－２Ｒα）_２－ＩＬ－２Ｒγ））及びα－β－γ（ＩＬ－２Ｒα－ＩＬ－２Ｒβ－ＩＬ－２Ｒγ）受容体を有する細胞への結合をバイアスしながら、β－γ受容体を有する細胞の活性化を回避する。例えば、ＳｋｒｏｍｂｏｌａｓａｎｄＦｒｅｌｉｎｇｅｒＥｘｐｅｒｔＲｅｖＣｌｉｎＩｍｍｕｎｏｌ．，１０（２）：２０７－２１７（２０１４）を参照されたい。置換されたＭＯＤ（ａａ置換を有するＩＬ－２ポリペプチドなど）をそのｃｏ－ＭＯＤまたはｃｏ－ＭＯＤを示す細胞に結合する文脈で使用されるときの偏らせることは、置換の存在が、ｗｔ．ＭＯＤとｃｏ－ＭＯＤとの間の相互作用と比較して置換されたＭＯＤと同じｃｏ－ＭＯＤとの相互作用の程度を変化させることを意味する。例えば、より低い副作用プロファイルを有し（例えば、より安全であり）、ヒト対象により良好に忍容される、Ｎ８８における置換を有するＩＬ－２配列（例えば、Ｎ８８Ｒ）は、Ｈ１６及び／またはＦ４２における上述の置換と共に含まれ得る。

ｉＴｒｅｇ細胞（ＣＤ４＋ＦｏｘＰ３＋細胞）の産生を刺激することが望ましい場合（例えば、エフェクターＴ細胞を能動的に抑制する、及び／または免疫媒介性組織損傷を阻害するために末梢寛容を誘導することが望ましい場合）などの、一部の例では、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体に存在する少なくとも１つのＭＯＤポリペプチド（例えば、１つ、２つまたは３つの独立して選択されるＭＯＤ）は、独立して選択されるｗｔまたは変異型ＰＤ－Ｌ１ＭＯＤポリペプチドである。例えば、Ｆｒａｎｃｉｓｃｏｅｔａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，２０６（１３）：３０１５－３０２９（２００９）を参照されたい。ｗｔまたは変異型ＰＤ－Ｌ１配列に加えて、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体は、１つ以上の独立して選択されるｗｔまたは変異型ＩＬ－２ポリペプチドを含むことができる。ＩＬ－２における配列変動は、ＩＬ－２Ｒ受容体サブユニットの異なる組み合わせを有する標的細胞へのＩＬ－２ポリペプチド及びマスキングされたＴＧＦ－β構築物の結合に偏らせるように選択され得る。上記で考察されるように、ＩＬ－２変異型は、ＩＬ－２Ｒβサブユニットを有する受容体に有利に結合を偏らせることができる、Ｈ１６（例えば、Ｈ１６ＡもしくはＨ１６Ｔ）及び／またはＦ４２（例えば、Ｆ４２ＡもしくはＦ４２Ｔ）での置換、ならびに／または、ヒト対象でより優れた忍容性を示す、ＩＬ－２Ｒβへの結合を減少させるＮ８８（例えば、Ｎ８８Ｒ）での置換を含む。一実施形態では、マスキングされたＴＧＦ－β構築物／－β複合体は、Ｈ１６Ｔ及びＦ４２Ａの両方、またはＨ１６Ａ及びＦ４２Ａの両方の置換を含み、そのいずれかの対は、Ｎ８８（例えば、Ｎ８８Ｒ）置換と組み合わせられ得る。

Ｔｈ１７細胞の産生を刺激することが望ましい場合などの一部の例では、マスキングされたＴＧＦ－β構築物及び複合体に存在する少なくとも１つのＭＯＤ（例えば、１つ、２つまたは３つの独立して選択されるＭＯＤ）は、ＩＬ－６ポリペプチドまたはＩＬ－６変異型ポリペプチドである。Ｔｈ９細胞の産生を刺激することが望ましい場合などの一部の例では、マスキングされたＴＧＦ－β構築物及び複合体に存在する少なくとも１つのＭＯＤ（例えば、１つ、２つまたは３つの独立して選択されるＭＯＤ）は、ＩＬ－４ポリペプチドまたはＩＬ－４変異型ポリペプチドである。例えば、ＥｌｙａｍａｎｅｔａｌＩｍｍｕｎｉｔｙ，３６（４）：６２３－６３４，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ．（２０１２）を参照されたい。胸腺細胞ＩＬ－７Ｒａ発現の制御によって、低親和性Ｔ細胞のＩＬ－７依存的な生存を促進することが望ましい場合などの一部の例では、マスキングされたＴＧＦ－β構築物及び複合体に存在する少なくとも１つのＭＯＤ（例えば、１つ、２つまたは３つの独立して選択されるＭＯＤ）は、ＩＬ－７ポリペプチドまたはＩＬ－７変異型ポリペプチドである。Ｔ濾胞ヘルパー（Ｔｆｈ）細胞の産生を刺激することが望ましい場合などの一部の例では、マスキングされたＴＧＦ－β構築物及び複合体に存在する少なくとも１つのＭＯＤ（例えば、１つ、２つまたは３つの独立して選択されるＭＯＤ）は、ＩＬ－２１もしくはＩＬ－２３ポリペプチド、またはＩＬ－２１もしくはＩＬ－２３ポリペプチドの変異型である。寛容を誘導することが望ましい場合などの一部の例では、マスキングされたＴＧＦ－β構築物及び複合体に存在する少なくとも１つのＭＯＤ（例えば、１つ、２つまたは３つの独立して選択されるＭＯＤ）は、Ｆａｓリガンド（ＦａｓＬ）ポリペプチドの変異型である。

（例えば、喘息及びアレルギー性炎症を抑制するために）ＩＩ型自然リンパ球系細胞（ＩＬＣ２細胞）を阻害することが望ましい場合などの一部の例では、マスキングされたＴＧＦ－β構築物及び複合体に存在する少なくとも１つのＭＯＤ（例えば、１つ、２つ、または３つの独立して選択されるＭＯＤ）は、ＩＬ－１０ポリペプチド、またはＩＬ－１０ポリペプチドの変異型である。例えば、Ｒａｊａｓｅｔａｌ．，ＪＡｌｌｅｒｇｙＣｌｉｎＩｍｍｕｎｏｌ，１３９（５）：１４６８（２０１７）、及びＯｇａｓａｗａｒａ，ｅｔａｌ．，ＪＡｌｌｅｒｇｙＣｌｉｎＩｍｍｕｎｏｌ，１４１（３）：１１４７－１１５１（２０１８）を参照されたい。ＩＬＣ２細胞の阻害は、インビボ（組織または体液中）またはインビトロ（培養培地中）での２型サイトカインＩＬ－５及びＩＬ－１３の産生の減少によって評価され得る。ＩＬ－１０ポリペプチドは、Ｊｏｓｅｐｈｓｏｎｅｔａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７５：１３５５２－１３５５７（２０００）によって記載されるＩＬ－１０Ｍ１分子などの単量体異性体、またはその変異型であり得、その両方が以下に考察される。生物学的に活性な形態が、２つのＩＬ－１０分子及び４つのＩＬ－１０Ｒａ受容体鎖からなる複合体を形成する、ＩＬ－１０ペプチドのintertwinedペアであるｗｔ．ＩＬ－１０とは対照的に、ＩＬ－１０Ｍ１は、可溶性ＩＬ－１０Ｒａと、細胞増殖アッセイにおいて生物学的に活性である３０ｎｍの解離定数を有する１：１の複合体を形成する。（同上）

２．親和性の低いＭＯＤ及び変異型ＭＯＤ
ｃｏ－ＭＯＤに対して低下した親和性を示す好適なＭＯＤは、野生型（ｗｔ）ＭＯＤ配列との１つのアミノ酸（ａａ）～２０個のａａ差異を有し得る。例えば、一部の例では、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体に存在する変異型ＭＯＤポリペプチド配列は、アミノ酸配列において、対応するｗｔ．ＭＯＤ配列とは１ａａ、２ａａ、３ａａ、４ａａ、５ａａ、６ａａ、７ａａ、８ａａ、９ａａ、または１０ａａ異なり得る。別の例として、一部の例では、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体に存在する変異型ＭＯＤポリペプチドは、アミノ酸配列において、対応するｗｔ．ＭＯＤ配列とは１１ａａ、１２ａａ、１３ａａ、１４ａａ、１５ａａ、１６ａａ、１７ａａ、１８ａａ、１９ａａ、または２０ａａ異なる。一例として、一部の例では、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体に存在する変異型ＭＯＤポリペプチドは、対応する参照（例えば、ｗｔ．）ＭＯＤ配列と比較して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０ａａ置換を含む。一部の例では、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体に存在する変異型ＭＯＤは、対応する参照（例えば、ｗｔ．）ＭＯＤ配列と比較して、単一ａａ置換を含む。一部の例では、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体に存在する変異型ＭＯＤは、対応する参照（例えば、ｗｔ．）ＭＯＤ配列と比較して、２ａａ置換（例えば、２ａａ以下の置換）を含む。一部の例では、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体に存在する変異型ＭＯＤは、対応する参照（例えば、ｗｔ．）ＭＯＤ配列と比較して、３ａａ置換（例えば、３ａａ以下の置換）を含む。一部の例では、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体に存在する変異型ＭＯＤは、対応する参照（例えば、ｗｔ．）ＭＯＤ配列と比較して、４ａａまたは５ａａ置換を含む。一部の例では、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体に存在する変異型ＭＯＤは、対応する参照（例えば、ｗｔ．）ＭＯＤ配列と比較して、６ａａまたは７ａａ置換を含む。一部の例では、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体に存在する変異型ＭＯＤは、対応する参照（例えば、ｗｔ．）ＭＯＤ配列と比較して、８ａａまたは９ａａ置換を含む。一部の例では、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体に存在する変異型ＭＯＤは、対応する参照（例えば、ｗｔ．）ＭＯＤ配列と比較して、１０ａａまたは１１ａａ置換（例えば、１０ａａ以下の置換）を含む。

一部の例では、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体に存在する変異型ＭＯＤは、対応する参照（例えば、ｗｔ．）ＭＯＤ配列と比較して、１１ａａまたは１２ａａ置換を含む。一部の例では、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体に存在する変異型ＭＯＤは、対応する参照（例えば、ｗｔ．）ＭＯＤ配列と比較して、１３ａａまたは１４ａａ置換を含む。一部の例では、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体に存在する変異型ＭＯＤは、対応する参照（例えば、ｗｔ．）ＭＯＤ配列と比較して、１５ａａまたは１６ａａ置換を含む。一部の例では、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体に存在する変異型ＭＯＤは、対応する参照（例えば、ｗｔ．）ＭＯＤ配列と比較して、１７ａａまたは１８ａａ置換を含む。一部の例では、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体に存在する変異型ＭＯＤは、対応する参照（例えば、ｗｔ．）ＭＯＤ配列と比較して、１９ａａまたは２０ａａ置換を含む。

上記で考察されたように、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体に含むために好適な変異型ＭＯＤは、同種ｃｏ－ＭＯＤに対する対応するｗｔ．ＭＯＤの親和性と比較して、それらの同種ｃｏ－ＭＯＤに対する低い親和性を示し得る。

一部の例では、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体内に存在する変異型ＭＯＤは、同種ｃｏ－ＭＯＤに対して、１ｎＭ～１００μＭの結合親和性を有する。例えば、一部の例では、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体内に存在する変異型ＭＯＤは、同種ｃｏ－ＭＯＤに対して、約１ｎＭ～約５ｎＭ、約５ｎＭ～約１０ｎＭ、約１０ｎＭ～約５０ｎＭ、約５０ｎＭ～約１００ｎＭ、約１００ｎＭ～約２００ｎＭ、約２００ｎＭ～約３００ｎＭ、約３００ｎＭ～約４００ｎＭ、約４００ｎＭ～約５００ｎＭ、約５００ｎＭ～約６００ｎＭ、約６００ｎＭ～約７００ｎＭ、約７００ｎＭ～約８００ｎＭ、約８００ｎＭ～約９００ｎＭ、約９００ｎＭ～約１μＭ、約１μＭ～約５μＭ、約５μＭ～約１０μＭ、約１０μＭ～約２０μＭ、約２０μＭ～約３０μＭ、約３０μＭ～約５０μＭ、約５０μＭ～約７５μＭ、または約７５μＭ～約１００μＭの結合親和性を有する。

３．結合親和性の決定
ＭＯＤ（例えば、ＭＯＤポリペプチド）とその同種ｃｏ－ＭＯＤとの間の結合親和性は、精製されたＭＯＤ及び精製された同種ｃｏ－ＭＯＤを使用して、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）によって決定することができる。ＭＯＤを含むマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体と、ＭＯＤの同種ｃｏ－ＭＯＤとの間の結合親和性もまた、精製されたマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体及びＭＯＤの同種ｃｏ－ＭＯＤを使用して、ＢＬＩによって測定することができる。ＢＬＩ法は、当業者に周知である。例えば、Ｌａｄｅｔａｌ．（２０１５）Ｊ．Ｂｉｏｍｏｌ．Ｓｃｒｅｅｎ．２０（４）：４９８－５０７、及びＳｈａｈａｎｄＤｕｎｃａｎ（２０１４）Ｊ．Ｖｉｓ．Ｅｘｐ．１８：ｅ５１３８３を参照されたい。ＭＯＤとその同種ｃｏ－ＭＯＤとの間、またはＭＯＤを有するマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体とその同種ｃｏ－ＭＯＤとの間の、本開示に記載される特異的及び相対的な結合親和性は、以下の手順を使用して決定することができる。

ＭＯＤを含むマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体とＭＯＤの同種ｃｏ－ＭＯＤとの間の結合親和性を決定するため、以下のように、ＯｃｔｅｔＲＥＤ９６（ＰａｌＦｏｒｔｅＢｉｏ）装置、または同様の装置を使用して、ＢＬＩアッセイを実施することができる。対照のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体（例えば、ｗｔ．ＭＯＤを含むマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体）を、不溶性支持体（「バイオセンサー」）上に固定化する。固定化されたマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体が「標的」である。固定化は、捕捉抗体を不溶性支持体上に固定することによって行うことができ、その捕捉抗体が、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体を固定化する。例えば、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体がＩｇＦｃ足場を含む場合、固定化は、抗ＩｇＦｃ（例えば、抗ヒトＩｇＧＦｃ）抗体を不溶性支持体上に固定化することによって実施され得、そこでは、固定化された抗ＩｇＦｃ抗体が、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体に結合し、それを固定化する。ｃｏ－ＭＯＤを、いくつかの異なる濃度で、固定化されたマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体に適用し、装置の応答を記録する。アッセイは、２５ｍＭのＨＥＰＥＳ（ｐＨ６．８）、５％ポリ（エチレングリコール）６０００、５０ｍＭのＫＣｌ、０．１％ウシ血清アルブミン、及び０．０２％Ｔｗｅｅｎ２０非イオン性界面活性剤を含む液体培地で行われる。固定化されたマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体へのｃｏ－ＭＯＤの結合を３０℃で行う。

結合及び結合親和性の陽性対照として、抗体（例えば、モノクローナル抗体）を使用することができる。抗体は、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体の特異的構造に基づいて選択され得る（例えば、図１を参照されたい）。例えば、ＴＧＦ－β、ＴＧＦ－β受容体、足場またはＭＯＤポリペプチド配列に対するモノクローナル抗体（ｍＡｂ）は、該抗体が、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体を支持体（バイオセンサー）から解離させないものであれば、陽性対照として使用することができる。抗ＭＨＣクラスＩまたはクラスＩＩモノクローナル抗体の段階希釈を使用して標準曲線を作成することができる。ｃｏ－ＭＯＤまたは抗ＭＨＣｍＡｂは、「分析物」である。ＢＬＩは、ｉ）固定化されたポリペプチド（「標的」）、及びｉｉ）内部参照層、からの２つの表面から反射される白色光の干渉パターンを分析する。バイオセンサー先端に結合した分子（「分析物」；例えば、ｃｏ－ＭＯＤ；抗ＨＬＡ抗体）の数の変化は干渉パターンのシフトを引き起こし、干渉パターンにおけるこのシフトを、リアルタイムで測定することができる。標的／分析物相互作用の親和性を説明する２つの動態用語は、会合定数（ｋ_ａ）及び解離定数（ｋ_ｄ）である。これらの２つの項（ｋ_ｄ／_ａ）の比は、親和性定数Ｋ_Ｄを生じる。

上述のように、ＭＯＤ（例えば、ＩＬ－２またはＩＬ－２変異型）とその同種ｃｏ－ＭＯＤ（例えば、ＩＬ－２Ｒ）との間の結合親和性の決定もまた、ＢＬＩによって決定することができる。このアッセイは、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体について上述したものと同様である。ＢＬＩアッセイは、以下のように、ＯｃｔｅｔＲＥＤ９６（ＰａｌＦｏｒｔｅＢｉｏ）装置、または同様の装置を使用して実行することができる。マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体の構成成分であるＭＯＤ（例えば、本開示の変異型ＩＬ－２ポリペプチド）、及び対照ＭＯＤ（対照ＭＯＤは、ｗｔ．ＭＯＤ、例えば、ｗｔ．ＩＬ－２を含む）を、不溶性支持体（「バイオセンサー」）上に別個に固定化する。各ＭＯＤが「標的」である。固定化は、捕捉抗体を不溶性支持体上に固定することによって行うことができ、そこでは、捕捉抗体がＭＯＤを固定化する。例えば、標的が免疫親和性タグ（例えば、ＦＬＡＧ、ヒトＩｇＧＦｃなど）に融合される場合、固定化は、適切な抗体を不溶性支持体上の免疫親和性タグに固定化することによって実行することができ、固定化された抗体は、ＭＯＤに結合し、それを固定化する（例えば、ＭＯＤがＩｇＦｃポリペプチドを含む場合、抗ヒトＩｇＧＦｃが固定化され得る）。ｃｏ－ＭＯＤを、いくつかの異なる濃度で、固定化されたＭＯＤに適用し、装置の応答を記録する。代替的に、（例えば、単量体サブユニット＋ヘテロ二量体のサブ複合体、または完全なヘテロ三量体としてのＩＬ－２受容体ヘテロ三量体について）ｃｏ－ＭＯＤをバイオセンサーに固定化し、ＭＯＤを、いくつかの異なる濃度で、固定化されたｃｏ－ＭＯＤ（複数可）に適用し、装置の応答を記録する。アッセイは、２５ｍＭのＨＥＰＥＳ（ｐＨ６．８）、５％ポリ（エチレングリコール）６０００、５０ｍＭのＫＣｌ、０．１％ウシ血清アルブミン、及び０．０２％Ｔｗｅｅｎ２０非イオン性界面活性剤を含む液体培地で行われる。固定化されたＭＯＤへのｃｏ－ＭＯＤの結合を、３０℃で実施する。ＢＬＩは、２つの表面：ｉ）固定化されたポリペプチド（「標的」）及びｉｉ）内部参照層から反射される白色光の干渉パターンを分析する。バイオセンサー先端に結合した分子（「分析物」；例えば、ｃｏ－ＭＯＤ）の数の変化は干渉パターンのシフトを引き起こし、干渉パターンにおけるこのシフトを、リアルタイムで測定することができる。標的／分析物相互作用の親和性を説明する２つの動態用語は、会合定数（ｋ_ａ）及び解離定数（ｋ_ｄ）である。これらの２つの項の比（ｋ_ｄ／_ａ）は、親和性定数Ｋ_Ｄを生じる。したがって、ｗｔ．ＭＯＤ（例えば、ＩＬ－２）のそのｃｏ－ＭＯＤ（例えば、その同種結合パートナーまたは受容体、ＩＬ－２の場合はＩＬ－２Ｒ）に対する結合親和性、ならびに変異型ＭＯＤ（例えば、本明細書に開示されるＩＬ－２変異型）のそのｃｏ－ＭＯＤ（例えば、ＩＬ－２変異型の場合はＩＬ－２Ｒ）に対する結合親和性の両方を決定することは、ＭＯＤに対する、ｗｔ．ｃｏ－ＭＯＤと比較した変異型ｃｏ－ＭＯＤの相対結合親和性を決定することを可能にする。すなわち、変異型ＭＯＤのそのｃｏ－ＭＯＤに対する結合親和性が、ｗｔ．ＭＯＤの同じ同種ｃｏ－ＭＯＤに対する結合親和性と比較して低減されるかどうかを決定し、低減される場合、ｗｔ．ｃｏ－ＭＯＤの結合親和性からの低減の割合がどのようであるかを決定することができる。

ＢＬＩアッセイは、マルチウェルプレートで実行される。アッセイを実行するには、プレートレイアウトを画定し、アッセイステップを定義し、バイオセンサーをＯｃｔｅｔＤａｔａＡｃｑｕｉｓｉｔｉｏｎソフトウェアにおいて割り当てる。バイオセンサアセンブリは水和されている。水和されたバイオセンサアセンブリ及びアッセイプレートは、Ｏｃｔｅｔ装置上で１０分間平衡化される。データが取得されると、取得されたデータがＯｃｔｅｔＤａｔａＡｎａｌｙｓｉｓソフトウェアにロードされる。データは、参照減算、ｙ軸アラインメント、ステップ間補正、及びＳａｖｉｔｚｋｙ－Ｇｏｌａｙフィルタリングの方法を指定して、処理ウィンドウで処理される。データは、分析ウィンドウにおいて、分析ステップ（会合及び解離）の特定、ならびに曲線適合モデル（１：１）、フィッティング法（グローバル）、及び目的ウィンドウ（秒単位）の選択により、分析される。適合の品質を評価する。各データトレース（分析物濃度）のＫ_Ｄ値は、３倍の範囲内であれば平均化することができる。Ｋ_Ｄ誤差値は、親和性定数値の１桁以内でなければならず、Ｒ^２値は、０．９５を超えなければならない。例えば、Ａｂｄｉｃｈｅｅｔａｌ．（２００８）Ｊ．Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．３７７：２０９を参照されたい。

一部の例では、ｉ）対照のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体（対照のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体がｗｔ．ＭＯＤを含む場合）の同種ｃｏ－ＭＯＤに対する結合親和性対ｉｉ）ｗｔ．ＭＯＤの変異型を含むマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体の同種ｃｏ－ＭＯＤに対する結合親和性の比は、（上記に記載されるように）ＢＬＩによって測定されると、少なくとも１．５：１、少なくとも２：１、少なくとも５：１、少なくとも１０：１、少なくとも１５：１、少なくとも２０：１、少なくとも２５：１、少なくとも５０：１、少なくとも１００：１、少なくとも５００：１、少なくとも１０^２：１、少なくとも５×１０^２：１、少なくとも１０^３：１、少なくとも５×１０^３：１、少なくとも１０^４：１、少なくとも１０^５：１、または少なくとも１０^６：１である。一部の例では、ｉ）対照のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体（対照のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体がｗｔ．ＭＯＤを含む場合）の同種ｃｏ－ＭＯＤに対する結合親和性対ｉｉ）ｗｔ．ＭＯＤの変異型を含むマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体の同種ｃｏ－ＭＯＤに対する結合親和性の比は、ＢＬＩによって測定されると、１．５：１～１０^６：１、例えば、１．５：１～１０：１、１０：１～５０：１、５０：１～１０^２：１、１０^２：１～１０^３：１、１０^３：１～１０^４：１、１０^４：１～１０^５：１、または１０^５：１～１０^６：１の範囲である。

一部の例では、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体内に存在する変異型ＭＯＤは、同種ｃｏ－ＭＯＤに対して、１ｎＭ～１００ｎＭまたは１００ｎＭ～１００μＭの結合親和性を有する。例えば、一部の例では、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体内に存在する変異型ＭＯＤは、同種ｃｏ－ＭＯＤに対して、約１００ｎＭ～約２００ｎＭ、約２００ｎＭ～約３００ｎＭ、約３００ｎＭ～約４００ｎＭ、約４００ｎＭ～約５００ｎＭ、約５００ｎＭ～約６００ｎＭ、約６００ｎＭ～約７００ｎＭ、約７００ｎＭ～約８００ｎＭ、約８００ｎＭ～約９００ｎＭ、約９００ｎＭ～約１μＭ、約１μＭ～約５μＭ、約５μＭ～約１０μＭ、約１０μＭ～約２０μＭ、約２０μＭ～約３０μＭ、約３０μＭ～約５０μＭ、約５０μＭ～約７５μＭ、または約７５μＭ～約１００μＭの結合親和性を有する。一部の例では、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体内に存在する変異型ＭＯＤは、１ｎＭ～５ｎＭ、５ｎＭ～１０ｎＭ、１０ｎＭ～５０ｎＭ、または５０ｎＭ～１００ｎＭである同種ｃｏ－ＭＯＤに対する結合親和性を有する。

４．ＰＤ－Ｌ１及びその変異型
１つの非限定的な例として、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体内に存在するＭＯＤまたは変異型ＭＯＤは、ＰＤ－Ｌ１または変異型ＰＤ－Ｌ１ポリペプチドである。野生型ＰＤ－Ｌ１はＰＤ１に結合する。

ｗｔ．ヒトＰＤ－Ｌ１ポリペプチドは、以下のａａ配列：ＭＲＩＦＡＶＦＩＦＭＴＹＷＨＬＬＮＡＦＴＶＴＶＰＫＤＬＹＶＶＥＹＧＳＮＭＴＩＥＣＫＦＰＶＥＫＱＬＤＬＡＡＬＩＶＹＷＥＭＥＤＫＮＩＩＱＦＶＨＧＥＥＤＬＫＶＱＨＳＳＹＲＱＲＡＲＬＬＫＤＱＬＳＬＧＮＡＡＬＱＩＴＤＶＫＬＱＤＡＧＶＹＲＣＭＩＳＹＧＧＡＤＹＫＲＩＴＶＫＶＮＡＰＹＮＫＩＮＱＲＩＬＶＶＤＰＶＴＳＥＨＥＬＴＣＱＡＥＧＹＰＫＡＥＶＩＷＴＳＳＤＨＱＶＬＳＧＫＴＴＴＴＮＳＫＲＥＥＫＬＦＮＶＴＳＴＬＲＩＮＴＴＴＮＥＩＦＹＣＴＦＲＲＬＤＰＥＥＮＨＴＡＥＬＶＩＰＧＮＩＬＮＶＳＩＫＩＣＬＴＬＳＰＳＴ（配列番号１）を含むことができ、配列中、ａａｓ１～１８は、シグナル配列を形成し、ａａｓ１９～１２７は、Ｉｇ様Ｖ型またはＩｇＶドメインを形成し、１３３～２２５は、Ｉｇ様Ｃ２型ドメインを形成する。

ｗｔ．ヒトＰＤ－Ｌ１エクトドメインは、以下のａａ配列：ＦＴＶＴＶＰＫＤＬＹＶＶＥＹＧＳＮＭＴＩＥＣＫＦＰＶＥＫＱＬＤＬＡＡＬＩＶＹＷＥＭＥＤＫＮＩＩＱＦＶＨＧＥＥＤＬＫＶＱＨＳＳＹＲＱＲＡＲＬＬＫＤＱＬＳＬＧＮＡＡＬＱＩＴＤＶＫＬＱＤＡＧＶＹＲＣＭＩＳＹＧＧＡＤＹＫＲＩＴＶＫＶＮＡＰＹＮＫＩＮＱＲＩＬＶＶＤＰＶＴＳＥＨＥＬＴＣＱＡＥＧＹＰＫＡＥＶＩＷＴＳＳＤＨＱＶＬＳＧＫＴＴＴＴＮＳＫＲＥＥＫＬＦＮＶＴＳＴＬＲＩＮＴＴＴＮＥＩＦＹＣＴＦＲＲＬＤＰＥＥＮＨＴＡＥＬＶＩＰＧＮＩＬＮＶＳＩＫＩ（配列番号２）を含むことができ、配列中、ａａｓ１～１０９は、Ｉｇ様Ｖ型またはＩｇＶドメインを形成し、ａａｓ１１５～２０７は、Ｉｇ様Ｃ２型ドメインを形成する。

ＭＯＤとしての使用に好適なｗｔ．ＰＤ－Ｌ１ＩｇＶドメインは、配列番号１のａａｓ１８～１２７または１９～１２７、及びカルボキシル末端安定化配列、例えば、配列の最後の７つのアミノ酸（太字及び斜体で示される）：ＡＦＴＶＴＶＰＫＤＬＹＶＶＥＹＧＳＮＭＴＩＥＣＫＦＰＶＥＫＱＬＤＬＡＡＬＩＶＹＷＥＭＥＤＫＮＩＩＱＦＶＨＧＥＥＤＬＫＴＱＨＳＳＹＲＱＲＡＲＬＬＫＤＱＬＳＬＧＮＡＡＬＱＩＴＤＶＫＬＱＤＡＧＶＹＲＣＭＩＳＹＧＧＡＤＹＫＲＩＴＶＫＶＮＡＰＹＡＡＡＬＨＥＨ（配列番号１３８）を含み得る。カルボキシル安定化配列が、約ａａ１２２でヒスチジン（例えば、配列番号１３８のａａ１１７として現れる、Ｔｙｒ（Ｙ）のＣ末端側への約５残基のヒスチジン）を含む場合、ヒスチジンは、ａａｓ８２及び８３で骨格アミドと安定化静電結合を形成し得る（配列番号１３８（配列番号１のＱ１０７及びＬ１０６）で太字及び斜体で示される）。代替として、安定化ジスルフィド結合が、ａａｓ８２または８３（配列番号１のＱ１０７及びＬ１０６）のうちの１つ、ならびにａａ残基１２１、１２２、または１２３のうちの１つ（配列番号１のａａ位置１３９～１４１と同等である）を置換することによって形成され得る。

ｗｔ．ＰＤ－１ポリペプチドは、以下のａａ配列：ＰＧＷＦＬＤＳＰＤＲＰＷＮＰＰＴＦＳＰＡＬＬＶＶＴＥＧＤＮＡＴＦＴＣＳＦＳＮＴＳＥＳＦＶＬＮＷＹＲＭＳＰＳＮＱＴＤＫＬＡＡＦＰＥＤＲＳＱＰＧＱＤＣＲＦＲＶＴＱＬＰＮＧＲＤＦＨＭＳＶＶＲＡＲＲＮＤＳＧＴＹＬＣＧＡＩＳＬＡＰＫＡＱＩＫＥＳＬＲＡＥＬＲＶＴＥＲＲＡＥＶＰＴＡＨＰＳＰＳＰＲＰＡＧＱＦＱＴＬＶＶＧＶＶＧＧＬＬＧＳＬＶＬＬＶＷＶＬＡＶＩＣＳＲＡＡＲＧＴＩＧＡＲＲＴＧＱＰＬＫＥＤＰＳＡＶＰＶＦＳＶＤＹＧＥＬＤＦＱＷＲＥＫＴＰＥＰＰＶＰＣＶＰＥＱＴＥＹＡＴＩＶＦＰＳＧＭＧＴＳＳＰＡＲＲＧＳＡＤＧＰＲＳＡＱＰＬＲＰＥＤＧＨＣＳＷＰＬ（配列番号３）を含むことができる。

一部の例では、変異型ＰＤ－Ｌ１ポリペプチド（例えば、配列番号２またはＰＤ－１のＩｇＶドメインの変異型）は、配列番号１または配列番号２に示されるａａ配列を含むＰＤ－Ｌ１ポリペプチドの結合親和性と比較して、ＰＤ－１（例えば、配列番号３に示されるアミノ酸配列を含むＰＤ－１ポリペプチド）に対する低減した結合親和性を示す。例えば、一部の例では、変異型ＰＤ－Ｌ１ポリペプチドは、配列番号１または配列番号２に示されるａａ配列を含むＰＤ－Ｌ１ポリペプチドの結合親和性よりも少なくとも１０％低い、少なくとも２０％低い、少なくとも３０％低い、少なくとも４０％低い、少なくとも５０％低い、少なくとも６０％低い、少なくとも７０％低い、少なくとも８０％低い、少なくとも９０％低い、少なくとも９５％低い、または９５％超低い結合親和性で、ＰＤ－１（例えば、配列番号３に示されるａａ配列を含むＰＤ－１ポリペプチド）に結合する。

一部の例では、変異型ＰＤ－Ｌ１ポリペプチド（例えば、配列番号２またはそのＩｇＶドメインの変異型）は、１ｎＭ～１ｍＭ（例えば、１ｎＭ～１０ｎＭ、１０ｎＭ～１００ｎＭ、１００ｎＭ～１μＭ、１μＭ～１０μＭ、１０μＭ～１００μＭ、または１００μＭ～１ｍＭ）である、（例えば、配列番号３の）ＰＤ－１に対する結合親和性を有する。別の例として、一部の例では、変異型ＰＤ－Ｌ１ポリペプチド（例えば、配列番号２の変異型）は、約１００ｎＭ～約２００ｎＭ、約２００ｎＭ～約３００ｎＭ、約３００ｎＭ～約４００ｎＭ、約４００ｎＭ～約５００ｎＭ、約５００ｎＭ～約６００ｎＭ、約６００ｎＭ～約７００ｎＭ、約７００ｎＭ～約８００ｎＭ、約８００ｎＭ～約９００ｎＭ、約９００ｎＭ～約１μＭ、約１μＭ～約５μＭ、約５μＭ～約１０μＭ、約１０μＭ～約２０μＭ、約２０μＭ～約３０μＭ、約３０μＭ～約５０μＭ、約５０μＭ～約７５μＭ、または約７５μＭ～約１００μＭである、ＰＤ－１（例えば、配列番号３に示されるａａ配列を含むＰＤ－１ポリペプチド）に対する結合親和性を有する。

ＭＯＤとして使用されるＰＤ－Ｌ１エクトドメイン配列に対して、配列番号１、配列番号２、配列番号１のａａｓ１９～１２７（ＩｇＶドメイン）、及び配列番号１３８のうちのいずれか１つの少なくとも８５個の連続するａａｓ（例えば、少なくとも９０、少なくとも９５、少なくとも１００、または少なくとも１０５個の連続するａａｓ）と９０％超（９５％、９８％、または９９％）の配列同一性を有する配列への置換を含む、いくつかのａａ置換を行い得る。置換は、（ａ）ジスルフィド結合置換対Ｄ１０３Ｃ及びＧ３３Ｃ、もしくはＶ１０４及びＳ３４Ｃ、（ｂ）塩橋形成置換対Ｑ１０７Ｄ及びＫ６２Ｒ、もしくはＱ１０７Ｄ及びＳ８０Ｒ、ならびに／または（ｃ）Ｐｉスタッキング置換Ｍ３６ＹもしくはＭ３６Ｆ（配列番号１に基づく）を含み得る。ＰＤ－Ｌ１ＭＯＤ配列は、配列番号２の少なくとも８５個の連続するａａｓ（例えば、少なくとも９０、少なくとも９５、少なくとも１００、または少なくとも１０５個の連続するａａｓ）を有する配列、及び少なくとも１つのジスルフィド、塩架橋、またはＰｉスタッキング置換を含み得る。ＰＤ－Ｌ１ＭＯＤ配列は、配列番号１のａａｓ１９～１２７（ＩｇＶドメイン）の少なくとも８５個の連続するａａｓ（例えば、少なくとも９０、少なくとも９５、少なくとも１００、または少なくとも１０５個の連続するａａｓ）を有する配列、及び少なくとも１つのジスルフィド、塩架橋、またはＰｉスタッキング置換を含み得る。ＰＤ－Ｌ１ＭＯＤ配列は、ａａｓ配列番号１３８の少なくとも８５個の連続するａａｓ（例えば、少なくとも９０、少なくとも９５、少なくとも１００、または少なくとも１０５の連続するａａｓ）を有する配列、及び少なくとも１つのジスルフィド、塩架橋、またはＰｉスタッキング置換を含み得る。

一部の例では、変異型ＰＤ－Ｌ１ポリペプチドは、配列番号１、配列番号２またはＰＤ－Ｌ１のＩｇＶドメインに示されるＰＤ－Ｌ１ａａ配列と比較して、単一ａａ置換を有する。一部の例では、変異型ＰＤ－Ｌ１ポリペプチドは、配列番号１、配列番号２またはＰＤ－Ｌ１のＩｇＶドメインに示されるＰＤ－Ｌ１ａａ配列と比較して、２ａａ～１０ａａ置換を有する。一部の例では、変異型ＰＤ－Ｌ１ポリペプチドは、配列番号１、配列番号２またはＰＤ－Ｌ１のＩｇＶドメインに示されるＰＤ－Ｌ１ａａ配列と比較して、２ａａ置換を有する。一部の例では、変異型ＰＤ－Ｌ１ポリペプチドは、配列番号１、配列番号２またはＰＤ－Ｌ１のＩｇＶドメインに示されるＰＤ－Ｌ１ａａ配列と比較して、３ａａまたは４ａａ置換を有する。一部の例では、変異型ＰＤ－Ｌ１ポリペプチドは、配列番号１、配列番号２またはＰＤ－Ｌ１のＩｇＶドメインに示されるＰＤ－Ｌ１ａａ配列と比較して、５ａａまたは６ａａ置換を有する。一部の例では、変異型ＰＤ－Ｌ１ポリペプチドは、配列番号１、配列番号２またはＰＤ－Ｌ１のＩｇＶドメインに示されるＰＤ－Ｌ１ａａ配列と比較して、７ａａまたは８ａａ置換を有する。一部の例では、変異型ＰＤ－Ｌ１ポリペプチドは、配列番号１、配列番号２またはＰＤ－Ｌ１のＩｇＶドメインに示されるＰＤ－Ｌ１ａａ配列と比較して、９ａａまたは１０ａａ置換を有する。

好適な変異型ＰＤ－Ｌ１ポリペプチド配列は、（例えば、少なくとも１つのａａ挿入、欠失、または置換を有する）配列番号２の少なくとも１７０個の連続するａａ（例えば、少なくとも１８０、１９０、または２００個の連続するａａ）に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のａａ配列同一性を有するポリペプチド配列を含む。好適な変異型ＰＤ－Ｌ１ＩｇＶポリペプチド配列は、（例えば、少なくとも１つのａａ挿入、欠失、または置換を有する）配列番号２のａａ１～１０９のうちの少なくとも７０個の連続するａａ（例えば、少なくとも８０、９０、１００、または１０５個の連続するａａ）に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のａａ配列同一性を有するポリペプチド配列を含む。

ある例では、変異型ＰＤ－Ｌ１ポリペプチド配列は、配列番号２に対して少なくとも９０％（例えば、少なくとも９５％、９８％、または９９％）、または１００％のａａ配列同一性を有するポリペプチド配列を含み、８位の残基は、Ｄ以外のａａであり、かかる一例では、該残基は、Ａであり、別の例では、Ｒである。変異型ＰＤ－Ｌ１ポリペプチド配列は、配列番号２に対して少なくとも９０％（例えば、少なくとも９５％、９８％、または９９％）、または１００％のａａ配列同一性を有するポリペプチド配列を含み、３６位の残基は、Ｉ以外のａａであり、かかる一例では、該残基は、Ａであり、別の例では、Ｄである。変異型ＰＤ－Ｌ１ポリペプチド配列はまた、配列番号２に対して少なくとも９０％（例えば、少なくとも９５％、９８％、または９９％）、または１００％のａａ配列同一性を有するポリペプチド配列を含み、５４位の残基は、Ｅ以外のａａであり、かかる一例では、該残基は、Ａであり、別の例では、Ｒである。

５．ＩＬ－１及びその変異体
１つの非限定的な例として、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体に存在するＭＯＤまたは変異型ＭＯＤは、ＩＬ－１または変異型ＩＬ－１ポリペプチドである。野生型ＩＬ－１は、ＩＬ－１α及びＩＬ－１βの２つのアイソフォームを有し、両方ともＩＬ－１受容体に結合する。

ｗｔ．ヒトＩＬ－１α前駆体ポリペプチドは、以下のａａ配列を含むことができる：ＭＡＫＶＰＤＭＦＥＤＬＫＮＣＹＳＥＮＥＥＤＳＳＳＩＤＨＬＳＬＮＱＫＳＦＹＨＶＳＹＧＰＬＨＥＧＣＭＤＱＳＶＳＬＳＩＳＥＴＳＫＴＳＫＬＴＦＫＥＳＭＶＶＶＡＴＮＧＫＶＬＫＫＲＲＬＳＬＳＱＳＩＴＤＤＤＬＥＡＩＡＮＤＳＥＥＥＩＩＫＰＲＳＡＰＦＳＦＬＳＮＶＫＹＮＦＭＲＩＩＫＹＥＦＩＬＮＤＡＬＮＱＳＩＩＲＡＮＤＱＹＬＴＡＡＡＬＨＮＬＤＥＡＶＫＦＤＭＧＡＹＫＳＳＫＤＤＡＫＩＴＶＩＬＲＩＳＫＴＱＬＹＶＴＡＱＤＥＤＱＰＶＬＬＫＥＭＰＥＩＰＫＴＩＴＧＳＥＴＮＬＬＦＦＷＥＴＨＧＴＫＮＹＦＴＳＶＡＨＰＮＬＦＩＡＴＫＱＤＹＷＶＣＬＡＧＧＰＰＳＩＴＤＦＱＩＬＥＮＱＡ（配列番号４）ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｐ０１５８３、ＮＣＢＩ参照配列ＮＰ＿０００５６６．３、これは、以下の天然に存在する変動、Ｒ８５Ｑ、Ａ１１４Ｓ、Ｎ１２５Ｄ、Ｄ１３８Ｎ、及びＤ１７６Ｈのうちの１つ以上を有し得る。

成熟ｗｔ．ヒトＩＬ－１αポリペプチドは、以下のａａ配列を含むことができる：ＰＲＳＡＰＦＳＦＬＳＮＶＫＹＮＦＭＲＩＩＫＹＥＦＩＬＮＤＡＬＮＱＳＩＩＲＡＮＤＱＹＬＴＡＡＡＬＨＮＬＤＥＡＶＫＦＤＭＧＡＹＫＳＳＫＤＤＡＫＩＴＶＩＬＲＩＳＫＴＱＬＹＶＴＡＱＤＥＤＱＰＶＬＬＫＥＭＰＥＩＰＫＴＩＴＧＳＥＴＮＬＬＦＦＷＥＴＨＧＴＫＮＹＦＴＳＶＡＨＰＮＬＦＩＡＴＫＱＤＹＷＶＣＬＡＧＧＰＰＳＩＴＤＦＱＩＬＥＮＱＡ（配列番号５）。

ｗｔ．ヒトＩＬ－１β前駆体ポリペプチドは、以下のａａ配列を含むことができる：ＭＡＥＶＰＥＬＡＳＥＭＭＡＹＹＳＧＮＥＤＤＬＦＦＥＡＤＧＰＫＱＭＫＣＳＦＱＤＬＤＬＣＰＬＤＧＧＩＱＬＲＩＳＤＨＨＹＳＫＧＦＲＱＡＡＳＶＶＶＡＭＤＫＬＲＫＭＬＶＰＣＰＱＴＦＱＥＮＤＬＳＴＦＦＰＦＩＦＥＥＥＰＩＦＦＤＴＷＤＮＥＡＹＶＨＤＡＰＶＲＳＬＮＣＴＬＲＤＳＱＱＫＳＬＶＭＳＧＰＹＥＬＫＡＬＨＬＱＧＱＤＭＥＱＱＶＶＦＳＭＳＦＶＱＧＥＥＳＮＤＫＩＰＶＡＬＧＬＫＥＫＮＬＹＬＳＣＶＬＫＤＤＫＰＴＬＱＬＥＳＶＤＰＫＮＹＰＫＫＫＭＥＫＲＦＶＦＮＫＩＥＩＮＮＫＬＥＦＥＳＡＱＦＰＮＷＹＩＳＴＳＱＡＥＮＭＰＶＦＬＧＧＴＫＧＧＱＤＩＴＤＦＴＭＱＦＶＳＳ（配列番号６）ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｐ０１５８、ＮＣＢＩ参照配列ＮＰ＿０００５６７．１。

成熟ｗｔ．ヒトＩＬ－１βポリペプチドは、以下のａａ配列、ＡＰＶＲＳＬＮＣＴＬＲＤＳＱＱＫＳＬＶＭＳＧＰＹＥＬＫＡＬＨＬＱＧＱＤＭＥＱＱＶＶＦＳＭＳＦＶＱＧＥＥＳＮＤＫＩＰＶＡＬＧＬＫＥＫＮＬＹＬＳＣＶＬＫＤＤＫＰＴＬＱＬＥＳＶＤＰＫＮＹＰＫＫＫＭＥＫＲＦＶＦＮＫＩＥＩＮＮＫＬＥＦＥＳＡＱＦＰＮＷＹＩＳＴＳＱＡＥＮＭＰＶＦＬＧＧＴＫＧＧＱＤＩＴＤＦＴＭＱＦＶＳＳ（配列番号７）を含むことができる。

ＩＬ－１α及びＩＬ－１βのいずれも、ＩＬ－１受容体に結合し、それは以下の配列：ＭＫＶＬＬＲＬＩＣＦＩＡＬＬＩＳＳＬＥＡＤＫＣＫＥＲＥＥＫＩＩＬＶＳＳＡＮＥＩＤＶＲＰＣＰＬＮＰＮＥＨＫＧＴＩＴＷＹＫＤＤＳＫＴＰＶＳＴＥＱＡＳＲＩＨＱＨＫＥＫＬＷＦＶＰＡＫＶＥＤＳＧＨＹＹＣＶＶＲＮＳＳＹＣＬＲＩＫＩＳＡＫＦＶＥＮＥＰＮＬＣＹＮＡＱＡＩＦＫＱＫＬＰＶＡＧＤＧＧＬＶＣＰＹＭＥＦＦＫＮＥＮＮＥＬＰＫＬＱＷＹＫＤＣＫＰＬＬＬＤＮＩＨＦＳＧＶＫＤＲＬＩＶＭＮＶＡＥＫＨＲＧＮＹＴＣＨＡＳＹＴＹＬＧＫＱＹＰＩＴＲＶＩＥＦＩＴＬＥＥＮＫＰＴＲＰＶＩＶＳＰＡＮＥＴＭＥＶＤＬＧＳＱＩＱＬＩＣＮＶＴＧＱＬＳＤＩＡＹＷＫＷＮＧＳＶＩＤＥＤＤＰＶＬＧＥＤＹＹＳＶＥＮＰＡＮＫＲＲＳＴＬＩＴＶＬＮＩＳＥＩＥＳＲＦＹＫＨＰＦＴＣＦＡＫＮＴＨＧＩＤＡＡＹＩＱＬＩＹＰＶＴＮＦＱＫＨＭＩＧＩＣＶＴＬＴＶＩＩＶＣＳＶＦＩＹＫＩＦＫＩＤＩＶＬＷＹＲＤＳＣＹＤＦＬＰＩＫＡＳＤＧＫＴＹＤＡＹＩＬＹＰＫＴＶＧＥＧＳＴＳＤＣＤＩＦＶＦＫＶＬＰＥＶＬＥＫＱＣＧＹＫＬＦＩＹＧＲＤＤＹＶＧＥＤＩＶＥＶＩＮＥＮＶＫＫＳＲＲＬＩＩＩＬＶＲＥＴＳＧＦＳＷＬＧＧＳＳＥＥＱＩＡＭＹＮＡＬＶＱＤＧＩＫＶＶＬＬＥＬＥＫＩＱＤＹＥＫＭＰＥＳＩＫＦＩＫＱＫＨＧＡＩＲＷＳＧＤＦＴＱＧＰＱＳＡＫＴＲＦＷＫＮＶＲＹＨＭＰＶＱＲＲＳＰＳＳＫＨＱＬＬＳＰＡＴＫＥＫＬＱＲＥＡＨＶＰＬＧ（配列番号８）、ＮＣＢＩ参照配列ＮＰ＿０００８６８．１有することができ、ａａｓ２１～５６９が成熟ポリペプチドを形成し、そのエクトドメインを使用して、ＩＬ－１α及びＩＬ－１βに対する結合親和性を決定することができる。

一部の例では、変異型ＩＬ－１αまたはＩＬ－１βポリペプチドは、配列番号５または配列番号７に示されるａａ配列を含むＩＬ－１ポリペプチドの結合親和性と比較して、配列番号８に示されるアミノ酸配列を有するＩＬ－１受容体またはそのエクトドメインに対する低減した結合親和性を示す。例えば、一部の例では、変異型ＩＬ－１α及びＩＬ－１βポリペプチドは、配列番号５または配列番号７に示されるａａ配列を含むＩＬ－１αまたはＩＬ－１βポリペプチドの結合親和性よりも少なくとも１０％低い、少なくとも２０％低い、少なくとも３０％低い、少なくとも４０％低い、少なくとも５０％低い、少なくとも６０％低い、少なくとも７０％低い、少なくとも８０％低い、少なくとも９０％低い、少なくとも９５％低い、または９５％超低い結合親和性で、配列番号８に示されるＩＬ－１受容体（または成熟タンパク質のエクトドメイン）に結合する。

一部の例では、変異型ＩＬ－１αまたはＩＬ－１βポリペプチド（例えば、配列番号５または７の変異型）は、１ｎＭ～１ｍＭ（例えば、１ｎＭ～１０ｎＭ、１０ｎＭ～１００ｎＭ、１００ｎＭ～１μＭ、１μＭ～１０μＭ、１０μＭ～１００μＭ、または１００μＭ～１ｍＭ）である、配列番号８に示される配列を有するＩＬ－１受容体またはそのエクトドメインに対する結合親和性を有する。別の例として、一部の例では、変異型ＩＬ－１αまたはＩＬ－１βポリペプチド（例えば、配列番号５または７の変異型）は、約１００ｎＭ～約２００ｎＭ、約２００ｎＭ～約３００ｎＭ、約３００ｎＭ～約４００ｎＭ、約４００ｎＭ～約５００ｎＭ、約５００ｎＭ～約６００ｎＭ、約６００ｎＭ～約７００ｎＭ、約７００ｎＭ～約８００ｎＭ、約８００ｎＭ～約９００ｎＭ、約９００ｎＭ～約１μＭ、約１μＭ～約５μＭ、約５μＭ～約１０μＭ、約１０μＭ～約２０μＭ、約２０μＭ～約３０μＭ、約３０μＭ～約５０μＭ、約５０μＭ～約７５μＭ、または約７５μＭ～約１００μＭである、配列番号８に示されるＩＬ－１受容体またはそのエクトドメインに対する結合親和性を有する。

一部の例では、変異型ＩＬ－１αまたはＩＬ－１βのポリペプチドは、配列番号５または配列番号７に示されるＩＬ－１αまたはＩＬ－１β ａａ配列と比較して、単一ａａ置換を有する。一部の例では、変異型ＩＬ－１αまたはＩＬ－１βのポリペプチドは、配列番号５または配列番号７に示されるＩＬ－１αまたはＩＬ－１β ａａ配列と比較して、２ａａ～１０ａａ置換を有する。一部の例では、変異型ＩＬ－１αまたはＩＬ－１βのポリペプチドは、配列番号５または配列番号７に示されるＩＬ－１αまたはＩＬ－１β ａａ配列と比較して、２ａａ置換を有する。一部の例では、変異型ＩＬ－１αまたはＩＬ－１βのポリペプチドは、配列番号５または配列番号７に示されるＩＬ－１αまたはＩＬ－１β ａａ配列と比較して、３ａａまたは４ａａ置換を有する。一部の例では、変異型ＩＬ－１αまたはＩＬ－１βのポリペプチドは、配列番号５または配列番号７に示されるＩＬ－１αまたはＩＬ－１β ａａ配列と比較して、５ａａまたは６ａａ置換を有する。一部の例では、変異型ＩＬ－１αまたはＩＬ－１βのポリペプチドは、配列番号５または配列番号７に示されるＩＬ－１αまたはＩＬ－１β ａａ配列と比較して、７ａａまたは８ａａ置換を有する。一部の例では、変異型ＩＬ－１αまたはＩＬ－１βのポリペプチドは、配列番号５または配列番号７に示されるＩＬ－１αまたはＩＬ－１β ａａ配列と比較して、９ａａまたは１０ａａ置換を有する。

好適な変異型ＩＬ－１αまたはＩＬ－１βポリペプチド配列は、（例えば、少なくとも１つのａａ置換、欠失、または挿入を有する）配列番号５または配列番号７に示されるアミノ酸配列のうちの少なくとも１００個の連続するａａに対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のａａ配列同一性を有するポリペプチド配列を含む。

６．ＩＬ－２及びその変異型
１つの非限定的な例として、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体に存在するＭＯＤまたは変異型ＭＯＤは、ＩＬ－２または変異型ＩＬ－２ポリペプチドである。一部の例では、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体内に存在する変異型ＭＯＤは、変異型ＩＬ－２ポリペプチドである。野生型ＩＬ－２は、ＩＬ－２受容体（ＩＬ－２Ｒ）に結合する。ｗｔ．ＩＬ－２ａａ配列は、以下の通りであり得る：ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＲＭＬＴＦＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＮＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＣＱＳＩＩＳＴＬＴ（ＵｎｉＰｒｏｔＰ６０５６８のａａ２１～１５３、配列番号９）。

野生型ＩＬ－２は、細胞の表面上のＩＬ－２受容体（ＩＬ－２Ｒ）に結合する。ＩＬ－２受容体は、一部の例では、α鎖（ＩＬ－２Ｒα；ＣＤ２５とも称される）、β鎖（ＩＬ－２Ｒβ；ＣＤ１２２とも称される）、及びγ鎖（ＩＬ－２Ｒγ；ＣＤ１３２とも称される）を含むヘテロ三量体ポリペプチドである。ヒトＩＬ－２Ｒα、ＩＬ－２Ｒβ、及びＩＬ－２Ｒγのアミノ酸配列は、以下のとおりであり得る。

ヒトＩＬ－２Ｒα：ＥＬＣＤＤＤＰＰＥＩＰＨＡＴＦＫＡＭＡＹＫＥＧＴＭＬＮＣＥＣＫＲＧＦＲＲＩＫＳＧＳＬＹＭＬＣＴＧＮＳＳＨＳＳＷＤＮＱＣＱＣＴＳＳＡＴＲＮＴＴＫＱＶＴＰＱＰＥＥＱＫＥＲＫＴＴＥＭＱＳＰＭＱＰＶＤＱＡＳＬＰＧＨＣＲＥＰＰＰＷＥＮＥＡＴＥＲＩＹＨＦＶＶＧＱＭＶＹＹＱＣＶＱＧＹＲＡＬＨＲＧＰＡＥＳＶＣＫＭＴＨＧＫＴＲＷＴＱＰＱＬＩＣＴＧＥＭＥＴＳＱＦＰＧＥＥＫＰＱＡＳＰＥＧＲＰＥＳＥＴＳＣＬＶＴＴＴＤＦＱＩＱＴＥＭＡＡＴＭＥＴＳＩＦＴＴＥＹＱＶＡＶＡＧＣＶＦＬＬＩＳＶＬＬＬＳＧＬＴＷＱＲＲＱＲＫＳＲＲＴＩ（配列番号１０）

ヒトＩＬ－２Ｒβ：ＶＮＧＴＳＱＦＴＣＦＹＮＳＲＡＮＩＳＣＶＷＳＱＤＧＡＬＱＤＴＳＣＱＶＨＡＷＰＤＲＲＲＷＮＱＴＣＥＬＬＰＶＳＱＡＳＷＡＣＮＬＩＬＧＡＰＤＳＱＫＬＴＴＶＤＩＶＴＬＲＶＬＣＲＥＧＶＲＷＲＶＭＡＩＱＤＦＫＰＦＥＮＬＲＬＭＡＰＩＳＬＱＶＶＨＶＥＴＨＲＣＮＩＳＷＥＩＳＱＡＳＨＹＦＥＲＨＬＥＦＥＡＲＴＬＳＰＧＨＴＷＥＥＡＰＬＬＴＬＫＱＫＱＥＷＩＣＬＥＴＬＴＰＤＴＱＹＥＦＱＶＲＶＫＰＬＱＧＥＦＴＴＷＳＰＷＳＱＰＬＡＦＲＴＫＰＡＡＬＧＫＤＴＩＰＷＬＧＨＬＬＶＧＬＳＧＡＦＧＦＩＩＬＶＹＬＬＩＮＣＲＮＴＧＰＷＬＫＫＶＬＫＣＮＴＰＤＰＳＫＦＦＳＱＬＳＳＥＨＧＧＤＶＱＫＷＬＳＳＰＦＰＳＳＳＦＳＰＧＧＬＡＰＥＩＳＰＬＥＶＬＥＲＤＫＶＴＱＬＬＬＱＱＤＫＶＰＥＰＡＳＬＳＳＮＨＳＬＴＳＣＦＴＮＱＧＹＦＦＦＨＬＰＤＡＬＥＩＥＡＣＱＶＹＦＴＹＤＰＹＳＥＥＤＰＤＥＧＶＡＧＡＰＴＧＳＳＰＱＰＬＱＰＬＳＧＥＤＤＡＹＣＴＦＰＳＲＤＤＬＬＬＦＳＰＳＬＬＧＧＰＳＰＰＳＴＡＰＧＧＳＧＡＧＥＥＲＭＰＰＳＬＱＥＲＶＰＲＤＷＤＰＱＰＬＧＰＰＴＰＧＶＰＤＬＶＤＦＱＰＰＰＥＬＶＬＲＥＡＧＥＥＶＰＤＡＧＰＲＥＧＶＳＦＰＷＳＲＰＰＧＱＧＥＦＲＡＬＮＡＲＬＰＬＮＴＤＡＹＬＳＬＱＥＬＱＧＱＤＰＴＨＬＶ（配列番号１１）

ヒトＩＬ－２Ｒγ：ＬＮＴＴＩＬＴＰＮＧＮＥＤＴＴＡＤＦＦＬＴＴＭＰＴＤＳＬＳＶＳＴＬＰＬＰＥＶＱＣＦＶＦＮＶＥＹＭＮＣＴＷＮＳＳＳＥＰＱＰＴＮＬＴＬＨＹＷＹＫＮＳＤＮＤＫＶＱＫＣＳＨＹＬＦＳＥＥＩＴＳＧＣＱＬＱＫＫＥＩＨＬＹＱＴＦＶＶＱＬＱＤＰＲＥＰＲＲＱＡＴＱＭＬＫＬＱＮＬＶＩＰＷＡＰＥＮＬＴＬＨＫＬＳＥＳＱＬＥＬＮＷＮＮＲＦＬＮＨＣＬＥＨＬＶＱＹＲＴＤＷＤＨＳＷＴＥＱＳＶＤＹＲＨＫＦＳＬＰＳＶＤＧＱＫＲＹＴＦＲＶＲＳＲＦＮＰＬＣＧＳＡＱＨＷＳＥＷＳＨＰＩＨＷＧＳＮＴＳＫＥＮＰＦＬＦＡＬＥＡＶＶＩＳＶＧＳＭＧＬＩＩＳＬＬＣＶＹＦＷＬＥＲＴＭＰＲＩＰＴＬＫＮＬＥＤＬＶＴＥＹＨＧＮＦＳＡＷＳＧＶＳＫＧＬＡＥＳＬＱＰＤＹＳＥＲＬＣＬＶＳＥＩＰＰＫＧＧＡＬＧＥＧＰＧＡＳＰＣＮＱＨＳＰＹＷＡＰＰＣＹＴＬＫＰＥＴ（配列番号１２）

一部の例では、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体が変異型ＩＬ－２ポリペプチドを含む場合、同種ｃｏ－ＭＯＤは、配列番号１０、配列番号１１、及び配列番号１２のうちのいずれか１つのａａ配列を含むポリペプチドを含む、ＩＬ－２Ｒである。

一部の例では、変異型ＩＬ－２ポリペプチドは、配列番号９に示されるａａ配列を含むＩＬ－２ポリペプチドの結合親和性と比較して、ＩＬ－２Ｒに対する低減した結合親和性を示す。例えば、一部の例では、変異型ＩＬ－２ポリペプチドは、同じ条件下でアッセイされると、ＩＬ－２Ｒ（例えば、配列番号１０～１２に示されるａａ配列を含むポリペプチドを含むＩＬ－２Ｒ）に対する配列番号９に示されるａａ配列を含むＩＬ－２ポリペプチドの結合親和性よりも少なくとも１０％低い、少なくとも２０％低い、少なくとも３０％低い、少なくとも４０％低い、少なくとも５０％低い、少なくとも６０％低い、少なくとも７０％低い、少なくとも８０％低い、少なくとも９０％低い、少なくとも９５％低い、または９５％超低い結合親和性で、ＩＬ－２Ｒに結合する。

一部の例では、変異型ＩＬ－２ポリペプチド（例えば、配列番号９の変異型）は、１００ｎＭ～１００μＭである（例えば、配列番号１０～１２の）ＩＬ－２Ｒに対する結合親和性を有する。別の例として、一部の例では、変異型ＩＬ－２ポリペプチド（例えば、配列番号９の変異型）は、約１００ｎＭ～約２００ｎＭ、約２００ｎＭ～約３００ｎＭ、約３００ｎＭ～約４００ｎＭ、約４００ｎＭ～約５００ｎＭ、約５００ｎＭ～約６００ｎＭ、約６００ｎＭ～約７００ｎＭ、約７００ｎＭ～約８００ｎＭ、約８００ｎＭ～約９００ｎＭ、約９００ｎＭ～約１μＭ、約１μＭ～約５μＭ、約５μＭ～約１０μＭ、約１０μＭ～約２０μＭ、約２０μＭ～約３０μＭ、約３０μＭ～約５０μＭ、約５０μＭ～約７５μＭ、または約７５μＭ～約１００μＭである、ＩＬ－２Ｒ（例えば、配列番号１０～１２に示されるａａ配列を含むポリペプチドを含むＩＬ－２Ｒ）に対する結合親和性を有する。

一部の例では、変異型ＩＬ－２ポリペプチドは、配列番号９に示されるＩＬ－２ａａ配列と比較して、単一ａａ置換を有する。一部の例では、変異型ＩＬ－２ポリペプチドは、配列番号９に示されるＩＬ－２ａａ配列と比較して、２～１０ａａ置換を有する。一部の例では、変異型ＩＬ－２ポリペプチドは、配列番号９に示されるＩＬ－２ａａ配列と比較して、２ａａ置換を有する。一部の例では、変異型ＩＬ－２ポリペプチドは、配列番号９に示されるＩＬ－２ａａ配列と比較して、３ａａ置換を有する。一部の例では、変異型ＩＬ－２ポリペプチドは、配列番号９に示されるＩＬ－２ａａ配列と比較して、４ａａ置換を有する。一部の例では、変異型ＩＬ－２ポリペプチドは、配列番号９に示されるＩＬ－２ａａ配列と比較して、５ａａ置換を有する。一部の例では、変異型ＩＬ－２ポリペプチドは、配列番号９に示されるＩＬ－２ａａ配列と比較して、６ａａ置換を有する。一部の例では、変異型ＩＬ－２ポリペプチドは、配列番号９に示されるＩＬ－２ａａ配列と比較して、７ａａ置換を有する。一部の例では、変異型ＩＬ－２ポリペプチドは、配列番号９に示されるＩＬ－２ａａ配列と比較して、８ａａ置換を有する。一部の例では、変異型ＩＬ－２ポリペプチドは、配列番号９に示されるＩＬ－２ａａ配列と比較して、９ａａ置換を有する。一部の例では、変異型ＩＬ－２ポリペプチドは、配列番号９に示されるＩＬ－２ａａ配列と比較して、１０ａａ置換を有する。

好適な変異型ＩＬ－２ポリペプチド配列としては、配列番号９の少なくとも８０（例えば、９０、１００、１１０、１２０、１３０、または１３３）の連続するａａに対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のａａ配列同一性を有するａａ配列を含むポリペプチド配列が挙げられる。加えて、ＩＬ－２変異型は、以下の変異型ＩＬ－２ａａ配列（配列番号１３～２７を参照のこと）のうちのいずれか１つの少なくとも８０（例えば、９０、１００、１１０、１２０、１３０または１３３）の連続するａａに対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のａａ配列同一性を有するａａ配列を含むポリペプチドを含む。

ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＸＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＲＭＬＴＦＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＮＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＣＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号１３）、式中、Ｘは、Ｇｌｕ以外の任意のａａである。一部の例では、ＸはＡｌａである。

ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＸＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＲＭＬＴＦＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＮＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＣＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号１４）、式中、Ｘは、Ａｓｐ以外の任意のａａである。一部の例では、ＸはＡｌａである。

ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＸＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＲＭＬＴＦＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＮＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＣＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号１５）、式中、Ｘ（Ｈ１６）は、Ｈｉｓ以外の任意のａａである。一部の例では、ＸはＡｌａ（Ｈ１６Ａ）である。一部の例では、ＸはＡｒｇである。一部の例では、ＸはＡｓｎである。一部の例では、ＸはＡｓｐである。一部の例では、ＸはＣｙｓである。一部の例では、ＸはＧｌｕである。一部の例では、ＸはＧｌｎである。一部の例では、ＸはＧｌｙである。一部の例では、ＸはＩｌｅである。一部の例では、ＸはＬｙｓである。一部の例では、ＸはＬｅｕである。一部の例では、ＸはＭｅｔである。一部の例では、ＸはＰｈｅである。一部の例では、ＸはＰｒｏである。一部の例では、ＸはＳｅｒである。一部の例では、ＸはＴｈｒ（Ｈ１６Ｔ）である。一部の例では、ＸはＴｙｒである。一部の例では、ＸはＴｒｐである。一部の例では、ＸはＶａｌである。

ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＲＭＬＴＸＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＮＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＣＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号１６）、式中、Ｘ（Ｆ４２）は、Ｐｈｅ以外の任意のａａである。一部の例では、ＸはＡｌａ（Ｆ４２Ａ）である。一部の例では、ＸはＴｈｒ（Ｆ４２Ｔ）である。

ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＲＭＬＴＦＫＦＸＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＮＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＣＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号１７）であり、式中、Ｘは、Ｔｙｒ以外の任意のａａである。一部の例では、ＸはＡｌａである。

ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＲＭＬＴＦＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＸＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＣＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号１８）、式中、Ｘ（Ｎ８８）は、Ａｓｎ以外の任意のａａである。一部の例では、ＸはＡｌａであり、一部の例では、ＸはＡｒｇである。

ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＲＭＬＴＦＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＮＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＣＸＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号１９）、式中、Ｘは、Ｇｌｎ以外の任意のａａである。一部の例では、ＸはＡｌａである。

ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＸ _１ＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＲＭＬＴＸ _２ＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＮＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＣＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号２０）、式中、Ｘ_１（Ｈ１６）は、Ｈｉｓ以外の任意のａａであり、Ｘ_２（Ｆ４２）は、Ｐｈｅ以外の任意のａａである。一部の例では、Ｘ_１はＡｌａである。一部の例では、Ｘ_２はＡｌａである。一部の例では、Ｘ_１はＡｌａであり、Ｘ_２はＡｌａ（Ｈ１６Ａ、Ｆ４２Ａ）である。一部の例では、Ｘ_１はＴｈｒであり、Ｘ_２はＡｌａ（Ｈ１６Ｔ、Ｆ４２Ａ）である。一部の例では、Ｘ_１はＡｌａであり、Ｘ_２はＴｈｒ（Ｈ１６Ａ、Ｆ４２Ｔ）である。一部の例では、Ｘ_１はＴｈｒであり、Ｘ_２はＴｈｒ（Ｈ１６Ｔ、Ｆ４２Ｔ）である。

Ｎ８８Ｒ置換を含む、ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＸ _１ＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＲＭＬＴＸ _２ＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＲＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＣＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号２１）、式中、Ｘ_１（Ｈ１６）は、Ｈｉｓ以外の任意のａａであり、Ｘ_２（Ｆ４２）は、Ｐｈｅ以外の任意のａａである。一部の例では、Ｘ_１はＡｌａである。一部の例では、Ｘ_２はＡｌａである。一部の例では、Ｘ_１はＡｌａであり、Ｘ_２はＡｌａである。一部の例では、Ｘ_１はＴｈｒであり、Ｘ_２はＡｌａである。一部の例では、Ｘ_１はＡｌａであり、Ｘ_２はＴｈｒである。一部の例では、Ｘ_１はＴｈｒであり、Ｘ_２はＴｈｒである。

ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＸ _１ＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＲＭＬＴＸ _２ＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＮＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＣＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号２２）、式中、Ｘ_１は、Ａｓｐ以外の任意のａａであり、Ｘ_２は、Ｐｈｅ以外の任意のａａである。一部の例では、Ｘ_１はＡｌａである。一部の例では、Ｘ_２はＡｌａである。一部の例では、Ｘ_１はＡｌａであり、Ｘ_２はＡｌａである。

ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＸ _１ＨＬＬＬＸ _２ＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＲＭＬＴＸ _３ＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＮＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＣＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号２３）、式中、Ｘ_１は、Ｇｌｕ以外の任意のａａであり、Ｘ_２は、Ａｓｐ以外の任意のａａであり、Ｘ_３は、Ｐｈｅ以外の任意のａａである。一部の例では、Ｘ_１はＡｌａである。一部の例では、Ｘ_２はＡｌａである。一部の例では、Ｘ_３はＡｌａである。一部の例では、Ｘ_１がＡｌａである、Ｘ_２がＡｌａである、Ｘ_３がＡｌａである、のうちのいずれか２つまたは３つ全てである。

ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＸ _１ＬＬＬＸ _２ＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＲＭＬＴＸ _３ＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＮＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＣＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号２４）、式中、Ｘ_１は、Ｈｉｓ以外の任意のａａであり、Ｘ_２は、Ａｓｐ以外の任意のａａであり、Ｘ_３は、Ｐｈｅ以外の任意のａａである。一部の例では、Ｘ_１はＡｌａである。一部の例では、Ｘ_２はＡｌａである。一部の例では、Ｘ_３はＡｌａである。一部の例では、Ｘ_１はＡｌａであり、Ｘ_２はＡｌａであり、Ｘ_３はＡｌａである。

ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＸ _１ＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＲＭＬＴＸ _２ＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＮＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＣＸ _３ＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号２５）、式中、Ｘ_１は、Ａｓｐ以外の任意のａａであり、Ｘ_２は、Ｐｈｅ以外の任意のａａであり、Ｘ_３は、Ｇｌｎ以外の任意のａａである。一部の例では、Ｘ_１はＡｌａである。一部の例では、Ｘ_２はＡｌａである。一部の例では、Ｘ_３はＡｌａである。一部の例では、Ｘ_１はＡｌａであり、Ｘ_２はＡｌａであり、Ｘ_３はＡｌａである。

ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＸ _１ＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＲＭＬＴＸ _２ＫＦＸ _３ＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＮＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＣＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号２６）、式中、Ｘ_１は、Ａｓｐ以外の任意のａａであり、Ｘ_２は、Ｐｈｅ以外の任意のａａであり、Ｘ_３は、Ｔｙｒ以外の任意のａａである。一部の例では、Ｘ_１はＡｌａである。一部の例では、Ｘ_２はＡｌａである。一部の例では、Ｘ_３はＡｌａである。一部の例では、Ｘ_１はＡｌａであり、Ｘ_２はＡｌａであり、Ｘ_３はＡｌａである。

ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＸ _１ＬＬＬＸ _２ＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＲＭＬＴＸ _３ＫＦＸ _４ＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＮＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＣＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号２７）、式中、Ｘ_１は、Ｈｉｓ以外の任意のａａであり、Ｘ_２は、Ａｓｐ以外の任意のａａであり、Ｘ_３は、Ｐｈｅ以外の任意のａａであり、Ｘ_４は、Ｔｙｒ以外の任意のａａである。一部の例では、Ｘ_１はＡｌａである。一部の例では、Ｘ_２はＡｌａである。一部の例では、Ｘ_３はＡｌａである。一部の例では、Ｘ_４はＡｌａである。一部の例では、Ｘ_１はＡｌａであり、Ｘ_２はＡｌａであり、Ｘ_３はＡｌａであり、Ｘ_４はＡｌａである。

ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＸ _１ＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＲＭＬＴＸ _２ＫＦＸ _３ＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＮＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＣＸ _４ＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号１３９）、式中、Ｘ_１は、Ａｓｐ以外の任意のａａであり、Ｘ_２は、Ｐｈｅ以外の任意のａａであり、Ｘ_３は、Ｔｙｒ以外の任意のａａであり、Ｘ_４は、Ｇｌｎ以外の任意のａａである。一部の例では、Ｘ_１はＡｌａである。一部の例では、Ｘ_２はＡｌａである。一部の例では、Ｘ_３はＡｌａである。一部の例では、Ｘ_４はＡｌａである。一部の例では、Ｘ_１はＡｌａであり、Ｘ_２はＡｌａであり、Ｘ_３はＡｌａであり、Ｘ_４はＡｌａである。

ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＸ _１ＬＬＬＸ _２ＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＲＭＬＴＸ _３ＫＦＸ _４ＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＮＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＣＸ _５ＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号１４０）、式中、Ｘ_１は、Ｈｉｓ以外の任意のａａであり、Ｘ_２は、Ａｓｐ以外の任意のａａであり、Ｘ_３は、Ｐｈｅ以外の任意のａａであり、Ｘ_４は、Ｔｙｒ以外の任意のａａであり、Ｘ_５は、Ｇｌｎ以外の任意のａａである。一部の例では、Ｘ_１はＡｌａである。一部の例では、Ｘ_２はＡｌａである。一部の例では、Ｘ_３はＡｌａである。一部の例では、Ｘ_４はＡｌａである。一部の例では、Ｘ_５はＡｌａである。一部の例では、Ｘ_１のいずれか２つ、３つ、４つ、または５つ全てがＡｌａであり、Ｘ_２がＡｌａであり、Ｘ_３がＡｌａであり、Ｘ_４がＡｌａであり、及び／またはＸ_５がＡｌａである。

ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＸ _１ＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＲＭＬＴＸ _２ＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＮＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＣＸ _３ＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号１４１）、式中、Ｘ_１は、Ｈｉｓ以外の任意のａａであり、Ｘ_２は、Ｐｈｅ以外の任意のａａであり、Ｘ_３は、Ｇｌｎ以外の任意のａａである。一部の例では、Ｘ_１はＡｌａである。一部の例では、Ｘ_２はＡｌａである。一部の例では、Ｘ_３はＡｌａである。一部の例では、Ｘ_１のいずれか２つまたは３つ全てがＡｌａであり、Ｘ_２がＡｌａであり、及び／またはＸ_３がＡｌａである。

７．ＩＬ－４及びその変異体
１つの非限定的な例として、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体に存在するＭＯＤまたは変異型ＭＯＤは、ＩＬ－４または変異型ＩＬ－４ポリペプチドである。野生型ＩＬ－４は、２つのアイソフォーム、ＩＬ－４α及びＩＬ－４βを有し、いずれも膜結合型ＩＬ－４受容体（アイソフォーム１）またはその可溶性対応物（アイソフォーム２）に結合する。

ｗｔ．ヒトＩＬ－４アイソフォーム１前駆体ポリペプチドは、以下のａａ配列を含むことができる：ＭＧＬＴＳＱＬＬＰＰＬＦＦＬＬＡＣＡＧＮＦＶＨＧＨＫＣＤＩＴＬＱＥＩＩＫＴＬＮＳＬＴＥＱＫＴＬＣＴＥＬＴＶＴＤＩＦＡＡＳＫＮＴＴＥＫＥＴＦＣＲＡＡＴＶＬＲＱＦＹＳＨＨＥＫＤＴＲＣＬＧＡＴＡＱＱＦＨＲＨＫＱＬＩＲＦＬＫＲＬＤＲＮＬＷＧＬＡＧＬＮＳＣＰＶＫＥＡＮＱＳＴＬＥＮＦＬＥＲＬＫＴＩＭＲＥＫＹＳＫＣＳＳ（配列番号２８）ＮＣＢＩ参照配列ＮＰ＿０００５８０．１。

成熟ｗｔ．ヒトＩＬ－４アイソフォーム１ポリペプチドは、以下のａａ配列を含むことができる：ＫＣＤＩＴＬＱＥＩＩＫＴＬＮＳＬＴＥＱＫＴＬＣＴＥＬＴＶＴＤＩＦＡＡＳＫＮＴＴＥＫＥＴＦＣＲＡＡＴＶＬＲＱＦＹＳＨＨＥＫＤＴＲＣＬＧＡＴＡＱＱＦＨＲＨＫＱＬＩＲＦＬＫＲＬＤＲＮＬＷＧＬＡＧＬＮＳＣＰＶＫＥＡＮＱＳＴＬＥＮＦＬＥＲＬＫＴＩＭＲＥＫＹＳＫＣＳＳ（配列番号２９）。

ｗｔ．ヒトＩＬ－４アイソフォーム２前駆体ポリペプチドは、以下のａａ配列を含むことができる：ＭＧＬＴＳＱＬＬＰＰＬＦＦＬＬＡＣＡＧＮＦＶＨＧＨＫＣＤＩＴＬＱＥＩＩＫＴＬＮＳＬＴＥＱＫＮＴＴＥＫＥＴＦＣＲＡＡＴＶＬＲＱＦＹＳＨＨＥＫＤＴＲＣＬＧＡＴＡＱＱＦＨＲＨＫＱＬＩＲＦＬＫＲＬＤＲＮＬＷＧＬＡＧＬＮＳＣＰＶＫＥＡＮＱＳＴＬＥＮＦＬＥＲＬＫＴＩＭＲＥＫＹＳＫＣＳＳ、ＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ＿７５８８５８．１（配列番号３０）。

成熟ｗｔ．ヒトＩＬ－４アイソフォーム２ポリペプチドは、以下のａａ配列、ＫＣＤＩＴＬＱＥＩＩＫＴＬＮＳＬＴＥＱＫＮＴＴＥＫＥＴＦＣＲＡＡＴＶＬＲＱＦＹＳＨＨＥＫＤＴＲＣＬＧＡＴＡＱＱＦＨＲＨＫＱＬＩＲＦＬＫＲＬＤＲＮＬＷＧＬＡＧＬＮＳＣＰＶＫＥＡＮＱＳＴＬＥＮＦＬＥＲＬＫＴＩＭＲＥＫＹＳＫＣＳＳ（配列番号３１）を含むことができる。

ＩＬ－４アイソフォーム１及びアイソフォーム２のいずれも、膜結合型ＩＬ－４受容体（ＩＬ－４Ｒ）及び／またはその可溶性アイソフォーム２に結合する。膜結合型ＩＬ－４は、配列ＭＧＷＬＣＳＧＬＬＦＰＶＳＣＬＶＬＬＱＶＡＳＳＧＮＭＫＶＬＱＥＰＴＣＶＳＤＹＭＳＩＳＴＣＥＷＫＭＮＧＰＴＮＣＳＴＥＬＲＬＬＹＱＬＶＦＬＬＳＥＡＨＴＣＩＰＥＮＮＧＧＡＧＣＶＣＨＬＬＭＤＤＶＶＳＡＤＮＹＴＬＤＬＷＡＧＱＱＬＬＷＫＧＳＦＫＰＳＥＨＶＫＰＲＡＰＧＮＬＴＶＨＴＮＶＳＤＴＬＬＬＴＷＳＮＰＹＰＰＤＮＹＬＹＮＨＬＴＹＡＶＮＩＷＳＥＮＤＰＡＤＦＲＩＹＮＶＴＹＬＥＰＳＬＲＩＡＡＳＴＬＫＳＧＩＳＹＲＡＲＶＲＡＷＡＱＣＹＮＴＴＷＳＥＷＳＰＳＴＫＷＨＮＳＹＲＥＰＦＥＱＨＬＬＬＧＶＳＶＳＣＩＶＩＬＡＶＣＬＬＣＹＶＳＩＴＫＩＫＫＥＷＷＤＱＩＰＮＰＡＲＳＲＬＶＡＩＩＩＱＤＡＱＧＳＱＷＥＫＲＳＲＧＱＥＰＡＫＣＰＨＷＫＮＣＬＴＫＬＬＰＣＦＬＥＨＮＭＫＲＤＥＤＰＨＫＡＡＫＥＭＰＦＱＧＳＧＫＳＡＷＣＰＶＥＩＳＫＴＶＬＷＰＥＳＩＳＶＶＲＣＶＥＬＦＥＡＰＶＥＣＥＥＥＥＥＶＥＥＥＫＧＳＦＣＡＳＰＥＳＳＲＤＤＦＱＥＧＲＥＧＩＶＡＲＬＴＥＳＬＦＬＤＬＬＧＥＥＮＧＧＦＣＱＱＤＭＧＥＳＣＬＬＰＰＳＧＳＴＳＡＨＭＰＷＤＥＦＰＳＡＧＰＫＥＡＰＰＷＧＫＥＱＰＬＨＬＥＰＳＰＰＡＳＰＴＱＳＰＤＮＬＴＣＴＥＴＰＬＶＩＡＧＮＰＡＹＲＳＦＳＮＳＬＳＱＳＰＣＰＲＥＬＧＰＤＰＬＬＡＲＨＬＥＥＶＥＰＥＭＰＣＶＰＱＬＳＥＰＴＴＶＰＱＰＥＰＥＴＷＥＱＩＬＲＲＮＶＬＱＨＧＡＡＡＡＰＶＳＡＰＴＳＧＹＱＥＦＶＨＡＶＥＱＧＧＴＱＡＳＡＶＶＧＬＧＰＰＧＥＡＧＹＫＡＦＳＳＬＬＡＳＳＡＶＳＰＥＫＣＧＦＧＡＳＳＧＥＥＧＹＫＰＦＱＤＬＩＰＧＣＰＧＤＰＡＰＶＰＶＰＬＦＴＧＦＬＤＲＥＰＰＲＳＰＱＳＳＨＬＰＳＳＳＰＥＨＬＧＬＥＰＧＥＫＶＥＤＭＰＫＰＰＬＰＱＥＱＡＴＤＰＬＶＤＳＬＧＳＧＩＶＹＳＡＬＴＣＨＬＣＧＨＬＫＱＣＨＧＱＥＤＧＧＱＴＰＶＭＡＳＰＣＣＧＣＣＣＧＤＲＳＳＰＰＴＴＰＬＲＡＰＤＰＳＰＧＧＶＰＬＥＡＳＬＣＰＡＳＬＡＰＳＧＩＳＥＫＳＫＳＳＳＳＦＨＰＡＰＧＮＡＱＳＳＳＱＴＰＫＩＶＮＦＶＳＶＧＰＴＹＭＲＶＳ（配列番号３２）、ＮＣＢＩ参照配列ＮＰ＿０００４０９．１を有することができ、ａａｓ２６～８２５が成熟ポリペプチドを形成し、ａａｓ２３３～２５６が膜貫通領域を形成し、タンパク質のエクトドメインを使用して、ＩＬ－４アイソフォーム１または２に対する結合親和性を決定することができる。

配列ＭＧＷＬＣＳＧＬＬＦＰＶＳＣＬＶＬＬＱＶＡＳＳＧＮＭＫＶＬＱＥＰＴＣＶＳＤＹＭＳＩＳＴＣＥＷＫＭＮＧＰＴＮＣＳＴＥＬＲＬＬＹＱＬＶＦＬＬＳＥＡＨＴＣＩＰＥＮＮＧＧＡＧＣＶＣＨＬＬＭＤＤＶＶＳＡＤＮＹＴＬＤＬＷＡＧＱＱＬＬＷＫＧＳＦＫＰＳＥＨＶＫＰＲＡＰＧＮＬＴＶＨＴＮＶＳＤＴＬＬＬＴＷＳＮＰＹＰＰＤＮＹＬＹＮＨＬＴＹＡＶＮＩＷＳＥＮＤＰＡＤＦＲＩＹＮＶＴＹＬＥＰＳＬＲＩＡＡＳＴＬＫＳＧＩＳＹＲＡＲＶＲＡＷＡＱＣＹＮＴＴＷＳＥＷＳＰＳＴＫＷＨＮＳＮＩＣ（配列番号３３）、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｐ２４３９４を有する可溶性アイソフォーム２もまた、両方のＩＬ－４アイソフォームの結合親和性を測定するために使用することができる。

一部の例では、変異型ＩＬ－４アイソフォーム１または２ポリペプチド（例えば、配列番号２９または３１の変異型）は、配列番号２９または配列番号３１に示されるａａ配列を含むＩＬ－４ポリペプチドの結合親和性と比較して、配列番号３２に示される成熟ＩＬ－４受容体配列もしくはそのエクトドメイン、または配列番号３３に示される可溶性ＩＬ－４受容体に対する低減した結合親和性を示す。例えば、一部の例では、変異型ＩＬ－４アイソフォーム１または２ポリペプチドは、配列番号２９または３１に示されるａａ配列を含むＩＬ－４アイソフォーム１または２ポリペプチドの結合親和性よりも少なくとも１０％低い、少なくとも２０％低い、少なくとも３０％低い、少なくとも４０％低い、少なくとも５０％低い、少なくとも６０％低い、少なくとも７０％低い、少なくとも８０％低い、少なくとも９０％低い、少なくとも９５％低い、または９５％超低い結合親和性で、配列番号３２（もしくはそのエクトドメイン）または配列番号３３に示される成熟ＩＬ－４受容体に結合する。

一部の例では、変異型ＩＬ－４アイソフォーム１または２ポリペプチド（例えば、配列番号２９または３１の、変異型）は、配列番号３２（もしくはそのエクトドメイン）または配列番号３３に示される成熟ＩＬ－４受容体に対して、１ｎＭ～１ｍＭ（例えば、１ｎＭ～１０ｎＭ、１０ｎＭ～１００ｎＭ、１００ｎＭ～１μＭ、１μＭ～１０μＭ、１０μＭ～１００μＭまたは１００μＭ～１ｍＭ）である結合親和性を有する。別の例として、一部の例では、変異型ＩＬ－４アイソフォーム１または２ポリペプチド（例えば、配列番号２９または３１の変異型）は、約１００ｎＭ～約２００ｎＭ、約２００ｎＭ～約３００ｎＭ、約３００ｎＭ～約４００ｎＭ、約４００ｎＭ～約５００ｎＭ、約５００ｎＭ～約６００ｎＭ、約６００ｎＭ～約７００ｎＭ、約７００ｎＭ～約８００ｎＭ、約８００ｎＭ～約９００ｎＭ、約９００ｎＭ～約１μＭ、約１μＭ～約５μＭ、約５μＭ～約１０μＭ、約１０μＭ～約２０μＭ、約２０μＭ～約３０μＭ、約３０μＭ～約５０μＭ、約５０μＭ～約７５μＭ、または約７５μＭ～約１００μＭである、配列番号３２（もしくはそのエクトドメイン）または配列番号３３に示される成熟ＩＬ－４受容体に対する結合親和性を有する。

一部の例では、変異型ＩＬ－４アイソフォーム１または２ポリペプチドは、配列番号２９または配列番号３１に示されるＩＬ－４アイソフォーム１または２ａａ配列と比較して、単一ａａ置換を有する。一部の例では、変異型ＩＬ－４アイソフォーム１または２ポリペプチドは、配列番号２９または配列番号３１に示されるＩＬ－４アイソフォーム１または２ａａ配列と比較して、２ａａ～１０ａａ置換を有する。一部の例では、変異型ＩＬ－４アイソフォーム１または２ポリペプチドは、配列番号２９または配列番号３１に示されるＩＬ－４アイソフォーム１または２ａａ配列と比較して、２ａａ置換を有する。一部の例では、変異型ＩＬ－４アイソフォーム１または２ポリペプチドは、配列番号２９または配列番号３１に示されるＩＬ－４アイソフォーム１または２ａａ配列と比較して、３ａａまたは４ａａ置換を有する。一部の例では、変異型ＩＬ－４ポリペプチドは、配列番号２９または配列番号３１に示されるＩＬ－４アイソフォーム１または２ａａ配列と比較して、５ａａまたは６ａａ置換を有する。一部の例では、変異型ＩＬ－４アイソフォーム１または２ポリペプチドは、配列番号２９または配列番号３１に示されるＩＬ－４アイソフォーム１または２ａａ配列と比較して、７ａａまたは８ａａ置換を有する。一部の例では、変異型ＩＬ－４アイソフォーム１または２ポリペプチドは、配列番号２９または配列番号３１に示されるＩＬ－４アイソフォーム１または２ａａ配列と比較して、９ａａまたは１０ａａ置換を有する。

好適な変異型ＩＬ－４アイソフォーム１または２ポリペプチド配列は、（例えば、少なくとも１つのａａ置換、欠失または挿入を有する）配列番号２９または配列番号３１の少なくとも８０個の連続するａａ（例えば、少なくとも１００または１１０個の連続するａａ）に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のａａ配列同一性を有するポリペプチド配列を含む。

８．ＩＬ－６及びその変異型
１つの非限定的な例として、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体に存在するＭＯＤまたは変異型ＭＯＤは、ＩＬ－６または変異型ＩＬ－６ポリペプチドである。野生型ＩＬ－６は、α及びβ（ｇｐ１３０）サブユニットから構成されるＩＬ－６受容体に結合し、これは、ＩＬ－６分子及び各サブユニットを有する２つの三量体のシグナル伝達六量体を形成する。例えば、Ｌａｃｒｏｉｘｅｔａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２９０（４５）２６９４３－９５３（２０１５）を参照されたい。

ｗｔ．ヒトＩＬ－６前駆体ポリペプチドは、以下のａａ配列を含むことができる：ＭＮＳＦＳＴＳＡＦＧＰＶＡＦＳＬＧＬＬＬＶＬＰＡＡＦＰＡＰＶＰＰＧＥＤＳＫＤＶＡＡＰＨＲＱＰＬＴＳＳＥＲＩＤＫＱＩＲＹＩＬＤＧＩＳＡＬＲＫＥＴＣＮＫＳＮＭＣＥＳＳＫＥＡＬＡＥＮＮＬＮＬＰＫＭＡＥＫＤＧＣＦＱＳＧＦＮＥＥＴＣＬＶＫＩＩＴＧＬＬＥＦＥＶＹＬＥＹＬＱＮＲＦＥＳＳＥＥＱＡＲＡＶＱＭＳＴＫＶＬＩＱＦＬＱＫＫＡＫＮＬＤＡＩＴＴＰＤＰＴＴＮＡＳＬＬＴＫＬＱＡＱＮＱＷＬＱＤＭＴＴＨＬＩＬＲＳＦＫＥＦＬＱＳＳＬＲＡＬＲＱＭ（配列番号３４）ＮＣＢＩ参照配列ＮＰ＿０００５９１．１。

成熟ｗｔ．ヒトＩＬ－６ポリペプチドは、以下のａａ配列を含むことができる：ＶＰＰＧＥＤＳＫＤＶＡＡＰＨＲＱＰＬＴＳＳＥＲＩＤＫＱＩＲＹＩＬＤＧＩＳＡＬＲＫＥＴＣＮＫＳＮＭＣＥＳＳＫＥＡＬＡＥＮＮＬＮＬＰＫＭＡＥＫＤＧＣＦＱＳＧＦＮＥＥＴＣＬＶＫＩＩＴＧＬＬＥＦＥＶＹＬＥＹＬＱＮＲＦＥＳＳＥＥＱＡＲＡＶＱＭＳＴＫＶＬＩＱＦＬＱＫＫＡＫＮＬＤＡＩＴＴＰＤＰＴＴＮＡＳＬＬＴＫＬＱＡＱＮＱＷＬＱＤＭＴＴＨＬＩＬＲＳＦＫＥＦＬＱＳＳＬＲＡＬＲＱＭ（配列番号３５）。

ＩＬ－６は、α及びβサブユニットから構成される膜結合型ＩＬ－６受容体に結合する。ヒトＩＬ－６Ｒアルファサブユニットは、配列ＭＬＡＶＧＣＡＬＬＡＡＬＬＡＡＰＧＡＡＬＡＰＲＲＣＰＡＱＥＶＡＲＧＶＬＴＳＬＰＧＤＳＶＴＬＴＣＰＧＶＥＰＥＤＮＡＴＶＨＷＶＬＲＫＰＡＡＧＳＨＰＳＲＷＡＧＭＧＲＲＬＬＬＲＳＶＱＬＨＤＳＧＮＹＳＣＹＲＡＧＲＰＡＧＴＶＨＬＬＶＤＶＰＰＥＥＰＱＬＳＣＦＲＫＳＰＬＳＮＶＶＣＥＷＧＰＲＳＴＰＳＬＴＴＫＡＶＬＬＶＲＫＦＱＮＳＰＡＥＤＦＱＥＰＣＱＹＳＱＥＳＱＫＦＳＣＱＬＡＶＰＥＧＤＳＳＦＹＩＶＳＭＣＶＡＳＳＶＧＳＫＦＳＫＴＱＴＦＱＧＣＧＩＬＱＰＤＰＰＡＮＩＴＶＴＡＶＡＲＮＰＲＷＬＳＶＴＷＱＤＰＨＳＷＮＳＳＦＹＲＬＲＦＥＬＲＹＲＡＥＲＳＫＴＦＴＴＷＭＶＫＤＬＱＨＨＣＶＩＨＤＡＷＳＧＬＲＨＶＶＱＬＲＡＱＥＥＦＧＱＧＥＷＳＥＷＳＰＥＡＭＧＴＰＷＴＥＳＲＳＰＰＡＥＮＥＶＳＴＰＭＱＡＬＴＴＮＫＤＤＤＮＩＬＦＲＤＳＡＮＡＴＳＬＰＶＱＤＳＳＳＶＰＬＰＴＦＬＶＡＧＧＳＬＡＦＧＴＬＬＣＩＡＩＶＬＲＦＫＫＴＷＫＬＲＡＬＫＥＧＫＴＳＭＨＰＰＹＳＬＧＱＬＶＰＥＲＰＲＰＴＰＶＬＶＰＬＩＳＰＰＶＳＰＳＳＬＧＳＤＮＴＳＳＨＮＲＰＤＡＲＤＰＲＳＰＹＤＩＳＮＴＤＹＦＦＰＲ（配列番号３６）、ＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ＿０００５５６．１を有することができ、ａａｓ２６～８２５が成熟ポリペプチドを形成し、ａａｓ２３３～２５６が膜貫通領域を形成する。ＩＬ－６に結合した後、ＩＬ－６αサブユニットは、ＩＬ－６βサブユニットに結合する。

ヒトＩＬ－６Ｒβサブユニットは、配列ＭＬＴＬＱＴＷＬＶＱＡＬＦＩＦＬＴＴＥＳＴＧＥＬＬＤＰＣＧＹＩＳＰＥＳＰＶＶＱＬＨＳＮＦＴＡＶＣＶＬＫＥＫＣＭＤＹＦＨＶＮＡＮＹＩＶＷＫＴＮＨＦＴＩＰＫＥＱＹＴＩＩＮＲＴＡＳＳＶＴＦＴＤＩＡＳＬＮＩＱＬＴＣＮＩＬＴＧＦＱＬＥＱＮＶＹＧＩＴＩＩＳＧＬＰＰＥＫＰＫＮＬＳＣＩＶＮＥＧＫＫＭＲＣＥＷＤＧＧＲＥＴＨＬＥＴＮＦＴＬＫＳＥＷＡＴＨＫＦＡＤＣＫＡＫＲＤＴＰＴＳＣＴＶＤＹＳＴＶＹＦＶＮＩＥＶＷＶＥＡＥＮＡＬＧＫＶＴＳＤＨＩＮＦＤＰＶＹＫＶＫＰＮＰＰＨＮＬＳＶＩＮＳＥＥＬＳＳＩＬＫＬＴＷＴＮＰＳＩＫＳＶＩＩＬＫＹＮＩＱＹＲＴＫＤＡＳＴＷＳＱＩＰＰＥＤＴＡＳＴＲＳＳＦＴＶＱＤＬＫＰＦＴＥＹＶＦＲＩＲＣＭＫＥＤＧＫＧＹＷＳＤＷＳＥＥＡＳＧＩＴＹＥＤＲＰＳＫＡＰＳＦＷＹＫＩＤＰＳＨＴＱＧＹＲＴＶＱＬＶＷＫＴＬＰＰＦＥＡＮＧＫＩＬＤＹＥＶＴＬＴＲＷＫＳＨＬＱＮＹＴＶＮＡＴＫＬＴＶＮＬＴＮＤＲＹＬＡＴＬＴＶＲＮＬＶＧＫＳＤＡＡＶＬＴＩＰＡＣＤＦＱＡＴＨＰＶＭＤＬＫＡＦＰＫＤＮＭＬＷＶＥＷＴＴＰＲＥＳＶＫＫＹＩＬＥＷＣＶＬＳＤＫＡＰＣＩＴＤＷＱＱＥＤＧＴＶＨＲＴＹＬＲＧＮＬＡＥＳＫＣＹＬＩＴＶＴＰＶＹＡＤＧＰＧＳＰＥＳＩＫＡＹＬＫＱＡＰＰＳＫＧＰＴＶＲＴＫＫＶＧＫＮＥＡＶＬＥＷＤＱＬＰＶＤＶＱＮＧＦＩＲＮＹＴＩＦＹＲＴＩＩＧＮＥＴＡＶＮＶＤＳＳＨＴＥＹＴＬＳＳＬＴＳＤＴＬＹＭＶＲＭＡＡＹＴＤＥＧＧＫＤＧＰＥＦＴＦＴＴＰＫＦＡＱＧＥＩＥＡＩＶＶＰＶＣＬＡＦＬＬＴＴＬＬＧＶＬＦＣＦＮＫＲＤＬＩＫＫＨＩＷＰＮＶＰＤＰＳＫＳＨＩＡＱＷＳＰＨＴＰＰＲＨＮＦＮＳＫＤＱＭＹＳＤＧＮＦＴＤＶＳＶＶＥＩＥＡＮＤＫＫＰＦＰＥＤＬＫＳＬＤＬＦＫＫＥＫＩＮＴＥＧＨＳＳＧＩＧＧＳＳＣＭＳＳＳＲＰＳＩＳＳＳＤＥＮＥＳＳＱＮＴＳＳＴＶＱＹＳＴＶＶＨＳＧＹＲＨＱＶＰＳＶＱＶＦＳＲＳＥＳＴＱＰＬＬＤＳＥＥＲＰＥＤＬＱＬＶＤＨＶＤＧＧＤＧＩＬＰＲＱＱＹＦＫＱＮＣＳＱＨＥＳＳＰＤＩＳＨＦＥＲＳＫＱＶＳＳＶＮＥＥＤＦＶＲＬＫＱＱＩＳＤＨＩＳＱＳＣＧＳＧＱＭＫＭＦＱＥＶＳＡＡＤＡＦＧＰＧＴＥＧＱＶＥＲＦＥＴＶＧＭＥＡＡＴＤＥＧＭＰＫＳＹＬＰＱＴＶＲＱＧＧＹＭＰＱ（配列番号３７）、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｐ４０１８９を有することができ、ａａｓ２３～９１８が成熟ポリペプチドを形成し、ａａｓ６２０～６４１が膜貫通領域を形成する。

膜結合型ＩＬ－６ＲαサブユニットへのＩＬ－６の結合の代替として、それは、ａａｓ２０～４６８を含む成熟ポリペプチドを有する、配列ＭＬＡＶＧＣＡＬＬＡＡＬＬＡＡＰＧＡＡＬＡＰＲＲＣＰＡＱＥＶＡＲＧＶＬＴＳＬＰＧＤＳＶＴＬＴＣＰＧＶＥＰＥＤＮＡＴＶＨＷＶＬＲＫＰＡＡＧＳＨＰＳＲＷＡＧＭＧＲＲＬＬＬＲＳＶＱＬＨＤＳＧＮＹＳＣＹＲＡＧＲＰＡＧＴＶＨＬＬＶＤＶＰＰＥＥＰＱＬＳＣＦＲＫＳＰＬＳＮＶＶＣＥＷＧＰＲＳＴＰＳＬＴＴＫＡＶＬＬＶＲＫＦＱＮＳＰＡＥＤＦＱＥＰＣＱＹＳＱＥＳＱＫＦＳＣＱＬＡＶＰＥＧＤＳＳＦＹＩＶＳＭＣＶＡＳＳＶＧＳＫＦＳＫＴＱＴＦＱＧＣＧＩＬＱＰＤＰＰＡＮＩＴＶＴＡＶＡＲＮＰＲＷＬＳＶＴＷＱＤＰＨＳＷＮＳＳＦＹＲＬＲＦＥＬＲＹＲＡＥＲＳＫＴＦＴＴＷＭＶＫＤＬＱＨＨＣＶＩＨＤＡＷＳＧＬＲＨＶＶＱＬＲＡＱＥＥＦＧＱＧＥＷＳＥＷＳＰＥＡＭＧＴＰＷＴＥＳＲＳＰＰＡＥＮＥＶＳＴＰＭＱＡＬＴＴＮＫＤＤＤＮＩＬＦＲＤＳＡＮＡＴＳＬＰＶＱＤＳＳＳＶＰＬＰＴＦＬＶＡＧＧＳＬＡＦＧＴＬＬＣＩＡＩＶＬＲＦＫＫＴＷＫＬＲＡＬＫＥＧＫＴＳＭＨＰＰＹＳＬＧＱＬＶＰＥＲＰＲＰＴＰＶＬＶＰＬＩＳＰＰＶＳＰＳＳＬＧＳＤＮＴＳＳＨＮＲＰＤＡＲＤＰＲＳＰＹＤＩＳＮＴＤＹＦＦＰＲ（配列番号３８）、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｐ０８８８７．１を有する、ＩＬ－６Ｒαサブユニットの成熟可溶性形態に結合することができる。可溶性サブユニットは、膜結合型ＩＬ－６Ｒαサブユニットに取って代わることができ、かつ結合親和性アッセイで使用することができる。

一部の例では、変異型ＩＬ－６ポリペプチド（例えば、配列番号３５の変異型）は、配列番号３５に示されるアミノ酸配列を含むＩＬ－６ポリペプチドの結合親和性と比較して、配列番号３６及び３７、または配列番号３７及び３８に示される成熟ＩＬ－６受容体に対する低減した結合親和性を示す。例えば、一部の例では、変異型ＩＬ－６ポリペプチドは、配列番号３５に示されるａａ配列を含むＩＬ－６ポリペプチドの結合親和性よりも少なくとも１０％低い、少なくとも２０％低い、少なくとも３０％低い、少なくとも４０％低い、少なくとも５０％低い、少なくとも６０％低い、少なくとも７０％低い、少なくとも８０％低い、少なくとも９０％低い、少なくとも９５％低い、または９５％超低い結合親和性で、配列番号３６及び３７、または配列番号３７及び３８に示される成熟ＩＬ－６受容体に結合する。

一部の例では、変異型ＩＬ－６ポリペプチド（例えば、配列番号３５の変異型）は、１ｎＭ～１ｍＭ（例えば、１ｎＭ～１０ｎＭ、１０ｎＭ～１００ｎＭ、１００ｎＭ～１μＭ、１μＭ～１０μＭ、１０μＭ～１００μＭ、または１００μＭ～１ｍＭ）である、配列番号３６及び３７、または配列番号３７及び３８に示される成熟ＩＬ－６受容体に対する結合親和性を有する。一部の例では、変異型ＩＬ－６ポリペプチド（例えば、配列番号３５の変異型）は、１００ｎＭ～１００μＭ（例えば、１００ｎＭ～１μＭ、１μＭ～１０μＭまたは１０μＭ～１００μＭ）である、配列番号３６及び３７、または配列番号３７及び３８に示される成熟ＩＬ－６受容体に対する結合親和性を有する。別の例として、一部の例では、変異型ＩＬ－６ポリペプチド（例えば、配列番号３５の変異型）は、約１００ｎＭ～約２００ｎＭ、約２００ｎＭ～約３００ｎＭ、約３００ｎＭ～約４００ｎＭ、約４００ｎＭ～約５００ｎＭ、約５００ｎＭ～約６００ｎＭ、約６００ｎＭ～約７００ｎＭ、約７００ｎＭ～約８００ｎＭ、約８００ｎＭ～約９００ｎＭ、約９００ｎＭ～約１μＭ、約１μＭ～約５μＭ、約５μＭ～約１０μＭ、約１０μＭ～約２０μＭ、約２０μＭ～約３０μＭ、約３０μＭ～約５０μＭ、約５０μＭ～約７５μＭ、または約７５μＭ～約１００μＭである、配列番号３６及び３７、または配列番号３７及び３８に示される成熟ＩＬ－６受容体に対する結合親和性を有する。

一部の例では、変異型ＩＬ－６ポリペプチドは、配列番号３５に示されるＩＬ－６ａａ配列と比較して、単一ａａ置換を有する。一部の例では、変異型ＩＬ－６ポリペプチドは、配列番号３５に示されるＩＬ－６ａａ配列と比較して、２ａａ～１０ａａ置換を有する。一部の例では、変異型ＩＬ－６ポリペプチドは、配列番号３５に示されるＩＬ－６ａａ配列と比較して、２ａａ置換を有する。一部の例では、変異型ＩＬ－６ポリペプチドは、配列番号３５に示されるＩＬ－６ａａ配列と比較して、３ａａまたは４ａａ置換を有する。一部の例では、変異型ＩＬ－６ポリペプチドは、配列番号３５に示されるＩＬ－６ａａ配列と比較して、５ａａまたは６ａａ置換を有する。一部の例では、変異型ＩＬ－６ポリペプチドは、配列番号３５に示されるＩＬ－６ａａ配列と比較して、７ａａまたは８ａａ置換を有する。一部の例では、変異型ＩＬ－６ポリペプチドは、配列番号３５に示されるＩＬ－６ａａ配列と比較して、９ａａまたは１０ａａ置換を有する。

好適な変異型ＩＬ－６ポリペプチド配列は、（例えば、少なくとも１つのａａ置換、欠失または挿入を有する）配列番号３５の少なくとも８０個の連続するａａ（例えば、少なくとも１００、または１１０個の連続するａａ）に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のａａ配列同一性を有するポリペプチド配列を含む。

９．ＩＬ－７及びその変異型
１つの非限定的な例として、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体に存在するＭＯＤまたは変異型ＭＯＤは、ＩＬ－７または変異型ＩＬ－７ポリペプチドである。野生型ＩＬ－７は、４つのアイソフォームを有し、これらは全て、２つのサブユニット、アルファ（α）及び共通ガンマ（共通γ）鎖を有する膜結合型ＩＬ－７受容体に結合する。

ｗｔ．ヒトＩＬ－７アイソフォーム１前駆体ポリペプチドは、以下のａａ配列を含むことができる：ＭＦＨＶＳＦＲＹＩＦＧＬＰＰＬＩＬＶＬＬＰＶＡＳＳＤＣＤＩＥＧＫＤＧＫＱＹＥＳＶＬＭＶＳＩＤＱＬＬＤＳＭＫＥＩＧＳＮＣＬＮＮＥＦＮＦＦＫＲＨＩＣＤＡＮＫＥＧＭＦＬＦＲＡＡＲＫＬＲＱＦＬＫＭＮＳＴＧＤＦＤＬＨＬＬＫＶＳＥＧＴＴＩＬＬＮＣＴＧＱＶＫＧＲＫＰＡＡＬＧＥＡＱＰＴＫＳＬＥＥＮＫＳＬＫＥＱＫＫＬＮＤＬＣＦＬＫＲＬＬＱＥＩＫＴＣＷＮＫＩＬＭＧＴＫＥＨ（配列番号３９）、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｐ１３２３２、ＮＣＢＩ参照配列ＮＰ＿０００８７１．１。

成熟ｗｔ．ヒトＩＬ－７アイソフォーム１ポリペプチドは、以下のａａ配列を含むことができる：ＤＣＤＩＥＧＫＤＧＫＱＹＥＳＶＬＭＶＳＩＤＱＬＬＤＳＭＫＥＩＧＳＮＣＬＮＮＥＦＮＦＦＫＲＨＩＣＤＡＮＫＥＧＭＦＬＦＲＡＡＲＫＬＲＱＦＬＫＭＮＳＴＧＤＦＤＬＨＬＬＫＶＳＥＧＴＴＩＬＬＮＣＴＧＱＶＫＧＲＫＰＡＡＬＧＥＡＱＰＴＫＳＬＥＥＮＫＳＬＫＥＱＫＫＬＮＤＬＣＦＬＫＲＬＬＱＥＩＫＴＣＷＮＫＩＬＭＧＴＫＥＨ（配列番号４０）。

ｗｔ．ヒトＩＬ－７アイソフォーム２前駆体ポリペプチドは、以下のａａ配列を含むことができる：ＭＦＨＶＳＦＲＹＩＦＧＬＰＰＬＩＬＶＬＬＰＶＡＳＳＤＣＤＩＥＧＫＤＧＫＱＹＥＳＶＬＭＶＳＩＤＱＬＬＤＳＭＫＥＩＧＳＮＣＬＮＮＥＦＮＦＦＫＲＨＩＣＤＡＮＫＶＫＧＲＫＰＡＡＬＧＥＡＱＰＴＫＳＬＥＥＮＫＳＬＫＥＱＫＫＬＮＤＬＣＦＬＫＲＬＬＱＥＩＫＴＣＷＮＫＩＬＭＧＴＫＥＨ（配列番号４１）ＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ＿００１１８６８１５．１。

成熟ｗｔ．ヒトＩＬ－７アイソフォーム２ポリペプチドは、以下のａａ配列を含むことができる：ＳＤＣＤＩＥＧＫＤＧＫＱＹＥＳＶＬＭＶＳＩＤＱＬＬＤＳＭＫＥＩＧＳＮＣＬＮＮＥＦＮＦＦＫＲＨＩＣＤＡＮＫＶＫＧＲＫＰＡＡＬＧＥＡＱＰＴＫＳＬＥＥＮＫＳＬＫＥＱＫＫＬＮＤＬＣＦＬＫＲＬＬＱＥＩＫＴＣＷＮＫＩＬＭＧＴＫＥＨ（配列番号４２）。

ｗｔ．ヒトＩＬ－７アイソフォーム３前駆体ポリペプチドは、以下のａａ配列を含むことができる：ＭＦＨＶＳＦＲＹＩＦＧＬＰＰＬＩＬＶＬＬＰＶＡＳＳＤＣＤＩＥＧＫＤＧＫＱＹＥＳＶＬＭＶＳＩＤＱＬＬＤＳＭＫＥＩＧＳＮＣＬＮＮＥＦＮＦＦＫＲＨＩＣＤＡＮＫＥＧＭＦＬＦＲＡＡＲＫＬＲＱＦＬＫＭＮＳＴＧＤＦＤＬＨＬＬＫＶＳＥＧＴＴＩＬＬＮＣＴＧＱＥＥＮＫＳＬＫＥＱＫＫＬＮＤＬＣＦＬＫＲＬＬＱＥＩＫＴＣＷＮＫＩＬＭＧＴＫＥＨ（配列番号４３）、ＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ＿００１１８６８１６．１。

成熟ｗｔ．ヒトＩＬ－７アイソフォーム３ポリペプチドは、以下のａａ配列を含むことができる：ＣＤＩＥＧＫＤＧＫＱＹＥＳＶＬＭＶＳＩＤＱＬＬＤＳＭＫＥＩＧＳＮＣＬＮＮＥＦＮＦＦＫＲＨＩＣＤＡＮＫＥＧＭＦＬＦＲＡＡＲＫＬＲＱＦＬＫＭＮＳＴＧＤＦＤＬＨＬＬＫＶＳＥＧＴＴＩＬＬＮＣＴＧＱＥＥＮＫＳＬＫＥＱＫＫＬＮＤＬＣＦＬＫＲＬＬＱＥＩＫＴＣＷＮＫＩＬＭＧＴＫＥＨ（配列番号４４）。

ｗｔ．ヒトＩＬ－７アイソフォーム４前駆体ポリペプチドは、以下のａａ配列を含むことができる：ＭＦＨＶＳＦＲＹＩＦＧＬＰＰＬＩＬＶＬＬＰＶＡＳＳＤＣＤＩＥＧＫＤＧＫＱＹＥＳＶＬＭＶＳＩＤＱＬＬＤＳＭＫＥＩＧＳＮＣＬＮＮＥＦＮＦＦＫＲＨＩＣＤＡＮＫＥＥＮＫＳＬＫＥＱＫＫＬＮＤＬＣＦＬＫＲＬＬＱＥＩＫＴＣＷＮＫＩＬＭＧＴＫＥＨ、ＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ＿００１１８６８１７．１（配列番号４５）。

成熟ｗｔ．ヒトＩＬ－７アイソフォーム４ポリペプチドは、以下のａａ配列を含むことができる：ＳＤＣＤＩＥＧＫＤＧＫＱＹＥＳＶＬＭＶＳＩＤＱＬＬＤＳＭＫＥＩＧＳＮＣＬＮＮＥＦＮＦＦＫＲＨＩＣＤＡＮＫＥＥＮＫＳＬＫＥＱＫＫＬＮＤＬＣＦＬＫＲＬＬＱＥＩＫＴＣＷＮＫＩＬＭＧＴＫＥＨ（配列番号４６）。

ＩＬ－７受容体αサブユニットは、以下の配列：ＭＴＩＬＧＴＴＧＦＭＶＦＳＬＬＱＶＶＳＧＥＳＧＹＡＱＮＧＤＬＥＤＡＥＬＤＤＹＳＦＳＣＹＳＱＬＥＶＮＧＳＱＨＳＬＴＣＡＦＥＤＰＤＶＮＩＴＮＬＥＦＥＩＣＧＡＬＶＥＶＫＣＬＮＦＲＫＬＱＥＩＹＦＩＥＴＫＫＦＬＬＩＧＫＳＮＩＣＶＫＶＧＥＫＳＬＴＣＫＫＩＤＬＴＴＩＶＫＰＥＡＰＦＤＬＳＶＶＹＲＥＧＡＮＤＦＶＶＴＦＮＴＳＨＬＱＫＫＹＶＫＶＬＭＨＤＶＡＹＲＱＥＫＤＥＮＫＷＴＨＶＮＬＳＳＴＫＬＴＬＬＱＲＫＬＱＰＡＡＭＹＥＩＫＶＲＳＩＰＤＨＹＦＫＧＦＷＳＥＷＳＰＳＹＹＦＲＴＰＥＩＮＮＳＳＧＥＭＤＰＩＬＬＴＩＳＩＬＳＦＦＳＶＡＬＬＶＩＬＡＣＶＬＷＫＫＲＩＫＰＩＶＷＰＳＬＰＤＨＫＫＴＬＥＨＬＣＫＫＰＲＫＮＬＮＶＳＦＮＰＥＳＦＬＤＣＱＩＨＲＶＤＤＩＱＡＲＤＥＶＥＧＦＬＱＤＴＦＰＱＱＬＥＥＳＥＫＱＲＬＧＧＤＶＱＳＰＮＣＰＳＥＤＶＶＩＴＰＥＳＦＧＲＤＳＳＬＴＣＬＡＧＮＶＳＡＣＤＡＰＩＬＳＳＳＲＳＬＤＣＲＥＳＧＫＮＧＰＨＶＹＱＤＬＬＬＳＬＧＴＴＮＳＴＬＰＰＰＦＳＬＱＳＧＩＬＴＬＮＰＶＡＱＧＱＰＩＬＴＳＬＧＳＮＱＥＥＡＹＶＴＭＳＳＦＹＱＮＱ（配列番号４７、ＮＣＢＩ参照配列ＮＰ＿００２１７６．２）を有することができ、ａａｓ２１～４５９が成熟ポリペプチドを形成し、ａａｓ２４０～２６４が膜貫通領域を形成する。タンパク質の受容体サブユニットの全てまたは一部（例えば、エクトドメイン（ａａｓ２１～２３９））を使用して、ＩＬ－７受容体γサブユニットと共にＩＬ－７アイソフォームに対する結合親和性を決定することができる。

共通のγサブユニット（ＩＬ－７ＲＧまたはＩＬ－Ｒ７γ）は、配列ＭＬＫＰＳＬＰＦＴＳＬＬＦＬＱＬＰＬＬＧＶＧＬＮＴＴＩＬＴＰＮＧＮＥＤＴＴＡＤＦＦＬＴＴＭＰＴＤＳＬＳＶＳＴＬＰＬＰＥＶＱＣＦＶＦＮＶＥＹＭＮＣＴＷＮＳＳＳＥＰＱＰＴＮＬＴＬＨＹＷＹＫＮＳＤＮＤＫＶＱＫＣＳＨＹＬＦＳＥＥＩＴＳＧＣＱＬＱＫＫＥＩＨＬＹＱＴＦＶＶＱＬＱＤＰＲＥＰＲＲＱＡＴＱＭＬＫＬＱＮＬＶＩＰＷＡＰＥＮＬＴＬＨＫＬＳＥＳＱＬＥＬＮＷＮＮＲＦＬＮＨＣＬＥＨＬＶＱＹＲＴＤＷＤＨＳＷＴＥＱＳＶＤＹＲＨＫＦＳＬＰＳＶＤＧＱＫＲＹＴＦＲＶＲＳＲＦＮＰＬＣＧＳＡＱＨＷＳＥＷＳＨＰＩＨＷＧＳＮＴＳＫＥＮＰＦＬＦＡＬＥＡＶＶＩＳＶＧＳＭＧＬＩＩＳＬＬＣＶＹＦＷＬＥＲＴＭＰＲＩＰＴＬＫＮＬＥＤＬＶＴＥＹＨＧＮＦＳＡＷＳＧＶＳＫＧＬＡＥＳＬＱＰＤＹＳＥＲＬＣＬＶＳＥＩＰＰＫＧＧＡＬＧＥＧＰＧＡＳＰＣＮＱＨＳＰＹＷＡＰＰＣＹＴＬＫＰＥＴ（ＮＣＢＩ参照配列ＮＰ＿０００１９７．１、配列番号４８）を有することができ、ａａｓ２３～３６９が成熟ポリペプチドを形成し、ａａｓ２６３～２８３が膜貫通領域を形成する。タンパク質の受容体サブユニット（例えば、エクトドメイン（ａａｓ２３～２６２））の全部または一部を使用して、αサブユニットと共にＩＬ－７への結合親和性を決定することができる。

一部の例では、（例えば、配列番号４０、４２、４４、または４６の）変異型ＩＬ－７アイソフォーム１、２、３、または４ポリペプチドは、配列番号４０、４２、４４、または４６に示されるａａ配列を含むＩＬ－７ポリペプチドの結合親和性と比較して、成熟ＩＬ－７受容体配列（例えば、そのエクトドメインなどの配列番号４７及び４８に示されるポリペプチドの全てまたは一部を含むＩＬ－７受容体）に対する低減した結合親和性を示す。例えば、一部の例では、変異型ＩＬ－７アイソフォーム１、２、３、または４ポリペプチドは、配列番号４０、４２、４４、または４６に示されるａａ配列を含むＩＬ－７アイソフォーム１、２、３、または４ポリペプチドの結合親和性よりも少なくとも１０％低い、少なくとも２０％低い、少なくとも３０％低い、少なくとも４０％低い、少なくとも５０％低い、少なくとも６０％低い、少なくとも７０％低い、少なくとも８０％低い、少なくとも９０％低い、少なくとも９５％低い、または９５％超低い結合親和性で、そのエクトドメインなどの配列番号４７または配列番号４８に示されるポリペプチドの全てまたは一部を含むＩＬ－７受容体に結合する。

一部の例では、ＩＬ－７アイソフォーム１、２、３、または４ポリペプチドの変異型（例えば、配列番号４０、４２、４４、または４６の変異型）は、１ｎＭ～１ｍＭである、そのエクトドメインなどの配列番号４７及び４８に示されるポリペプチドの全てまたは一部を含むＩＬ－７受容体に対する結合親和性を有する。一部の例では、変異型ＩＬ－７アイソフォーム１、２、３、または４のポリペプチド（例えば、配列番号４０、４２、４４、または４６の変異型）は、１００ｎＭ～１００μＭ（例えば、１００ｎＭ～１μＭ、１μＭ～１０μＭ、または１０μＭ～１００μＭ）である、そのエクトドメインなどの配列番号４７及び４８に示されるポリペプチドの全てまたは一部を含む成熟ＩＬ－７受容体に対する結合親和性を有する。別の例として、一部の例では、変異型ＩＬ－７アイソフォーム１、２、３、または４ポリペプチドは、約１００ｎＭ～約２００ｎＭ、約２００ｎＭ～約３００ｎＭ、約３００ｎＭ～約４００ｎＭ、約４００ｎＭ～約５００ｎＭ、約５００ｎＭ～約６００ｎＭ、約６００ｎＭ～約７００ｎＭ、約７００ｎＭ～約８００ｎＭ、約８００ｎＭ～約９００ｎＭ、約９００ｎＭ～約１μＭ、約１μＭ～約５μＭ、約５μＭ～約１０μＭ、約１０μＭ～約２０μＭ、約２０μＭ～約３０μＭ、約３０μＭ～約５０μＭ、約５０μＭ～約７５μＭ、または約７５μＭ～約１００μＭである、そのエクトドメインなどの配列番号４７及び４８に示されるポリペプチドの全てまたは一部を含む成熟ＩＬ－７受容体に対する結合親和性を有する。

一部の例では、変異型ＩＬ－７アイソフォーム１、２、３、または４ポリペプチドは、配列番号４０、４２、４４、または４６に示されるＩＬ－７アイソフォーム１、２、３、または４アミノ酸配列と比較して、単一ａａ置換を有する。一部の例では、変異型ＩＬ－７アイソフォーム１、２、３、または４ポリペプチドは、配列番号４０、４２、４４、または４６に示されるＩＬ－７アイソフォーム１、２、３、または４アミノ酸配列と比較して、２ａａ～１０ａａ置換を有する。一部の例では、変異型ＩＬ－７アイソフォーム１、２、３、または４ポリペプチドは、配列番号４０、４２、４４、または４６に示されるＩＬ－７アイソフォーム１、２、３、または４アミノ酸配列と比較して、２ａａ置換を有する。一部の例では、変異型ＩＬ－７アイソフォーム１、２、３、または４ポリペプチドは、配列番号４０、４２、４４、または４６に示されるＩＬ－７アイソフォーム１、２、３、または４アミノ酸配列と比較して、３ａａまたは４ａａ置換を有する。一部の例では、変異型ＩＬ－７アイソフォーム１、２、３、または４ポリペプチドは、配列番号４０、４２、４４、または４６に示されるＩＬ－７アイソフォーム１、２、３、または４アミノ酸配列と比較して、５ａａまたは６ａａ置換を有する。一部の例では、変異型ＩＬ－７アイソフォーム１、２、３、または４ポリペプチドは、配列番号４０、４２、４４、または４６に示されるＩＬ－７アイソフォーム１、２、３、または４アミノ酸配列と比較して、７ａａまたは８ａａ置換を有する。一部の例では、変異型ＩＬ－７アイソフォーム１、２、３、または４ポリペプチドは、配列番号４０、４２、４４、または４６に示されるＩＬ－７アイソフォーム１、２、３、または４アミノ酸配列と比較して、９ａａまたは１０ａａ置換を有する。

好適な変異型ＩＬ－７アイソフォーム１、２、３、または４のポリペプチド配列は、配列番号４０、４２、４４、または４６の少なくとも５０個の連続するａａ（例えば、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、または少なくとも１１０個の連続するａａ）に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のａａ配列同一性を有する（例えば、少なくとも１つのａａ置換、欠失、または挿入を有する）ポリペプチド配列を含む。

１０．ＩＬ－１０及びその変異体
１つの非限定的な例として、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体に存在するＭＯＤまたは変異型ＭＯＤは、例えば、Ｊｏｓｅｐｈｓｏｎｅｔａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７５：１３５５２－１３５５７（２０００）に記載されたＤヘリックスとＥヘリックスとの間のヒンジ領域内の挿入を有する単量体ＩＬ－１０変異型などの、ＩＬ－１０または変異型ＩＬ－１０ポリペプチドである。野生型ＩＬ－１０はアイソフォームを有し、これらは全て、アルファ（α）ＩＬ－１０ＲＡ及びベータ（β）ＩＬ－１０ＲＢサブユニットの両方を有する膜結合型ＩＬ－１０受容体に結合する。受容体は、細胞（例えば、Ｂ細胞、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、肥満細胞、及び樹状細胞）の表面上に四量体として存在する。

ｗｔ．ヒトＩＬ－１０アイソフォーム１前駆体ポリペプチドは、以下のａａ配列を含むことができる：ＭＨＳＳＡＬＬＣＣＬＶＬＬＴＧＶＲＡＳＰＧＱＧＴＱＳＥＮＳＣＴＨＦＰＧＮＬＰＮＭＬＲＤＬＲＤＡＦＳＲＶＫＴＦＦＱＭＫＤＱＬＤＮＬＬＬＫＥＳＬＬＥＤＦＫＧＹＬＧＣＱＡＬＳＥＭＩＱＦＹＬＥＥＶＭＰＱＡＥＮＱＤＰＤＩＫＡＨＶＮＳＬＧＥＮＬＫＴＬＲＬＲＬＲＲＣＨＲＦＬＰＣＥＮＫＳＫＡＶＥＱＶＫＮＡＦＮＫＬＱＥＫＧＩＹＫＡＭＳＥＦＤＩＦＩＮＹＩＥＡＹＭＴＭＫＩＲＮ（配列番号４９、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｐ２２３０１、ＮＣＢＩ参照配列ＮＰ＿０００５６３．１）、これは、Ｈ２２７Ｌ配列変動を有し得る。

成熟ｗｔ．ヒトＩＬ－１０ポリペプチドは、以下のａａ配列、ＳＰＧＱＧＴＱＳＥＮＳＣＴＨＦＰＧＮＬＰＮＭＬＲＤＬＲＤＡＦＳＲＶＫＴＦＦＱＭＫＤＱＬＤＮＬＬＬＫＥＳＬＬＥＤＦＫＧＹＬＧＣＱＡＬＳＥＭＩＱＦＹＬＥＥＶＭＰＱＡＥＮＱＤＰＤＩＫＡＨＶＮＳＬＧＥＮＬＫＴＬＲＬＲＬＲＲＣＨＲＦＬＰＣＥＮＫＳＫＡＶＥＱＶＫＮＡＦＮＫＬＱＥＫＧＩＹＫＡＭＳＥＦＤＩＦＩＮＹＩＥＡＹＭＴＭＫＩＲＮ（配列番号５０）を含むことができる。

ヒトＩＬ－１０ポリペプチドは、以下のａａ配列、ＭＩＱＦＹＬＥＥＶＭＰＱＡＥＮＱＤＰＤＩＫＡＨＶＮＳＬＧＥＮＬＫＴＬＲＬＲＬＲＲＣＨＲＦＬＰＣＥＮＫＳＫＡＶＥＱＶＫＮＡＦＮＫＬＱＥＫＧＩＹＫＡＭＳ、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ａ０Ａ２８６ＹＥＸ３１（配列番号５１）を含むことができる。

ＩＬ－１０ポリペプチドは、ＩＬ－１０ポリペプチドのＤヘリックスとＥヘリックスとの間のヒンジ領域内に挿入（例えば、配列番号５１のＥ４８、Ｎ４９、Ｋ５０、もしくはＳ５１のいずれかに隣接する、または配列番号４９もしくは５０内の同等の場所における５～７ａａ挿入）を含むことができ、それにより単量体形態となる。単量体ＩＬ－１０ポリペプチドは、配列番号５１のＮ４９とＫ５０との間（または配列番号４９もしくは５０内の同等の場所）に５～７ａａ挿入を含むことができる。例では、５～７個のａａｓは、Ａｌａ、Ｇｌｙ、及び／またはＳｅｒを含む。ある例では、５～７個のａａｓは、ＡｌａまたはＳｅｒから選択される。ある例では、５～７個のａａｓは、Ｇｌｙ及びＳｅｒから選択される。一例では、挿入は、配列番号５１のＮ４９とＫ５０との間（または配列番号４９もしくは５０の同等の場所）にＩＬ－１０Ｍ１ａａ挿入（ＧＧＧＧＳＧＧＧ、配列番号１４２）を含む。一例では、ＩＬ－１０変異型は、ａａ４９と５０との間の配列番号５１に挿入されたＩＬ－１０Ｍ１（配列番号１８９）ＧＧＧＳＧＧからなる。例えば、Ｊｏｓｅｐｈｓｏｎｅｔａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７５：１３５５２－１３５５７（２０００）を参照されたい。

ＩＬ－１０受容体αサブユニットは、以下の配列：ＭＬＰＣＬＶＶＬＬＡＡＬＬＳＬＲＬＧＳＤＡＨＧＴＥＬＰＳＰＰＳＶＷＦＥＡＥＦＦＨＨＩＬＨＷＴＰＩＰＮＱＳＥＳＴＣＹＥＶＡＬＬＲＹＧＩＥＳＷＮＳＩＳＮＣＳＱＴＬＳＹＤＬＴＡＶＴＬＤＬＹＨＳＮＧＹＲＡＲＶＲＡＶＤＧＳＲＨＳＮＷＴＶＴＮＴＲＦＳＶＤＥＶＴＬＴＶＧＳＶＮＬＥＩＨＮＧＦＩＬＧＫＩＱＬＰＲＰＫＭＡＰＡＮＤＴＹＥＳＩＦＳＨＦＲＥＹＥＩＡＩＲＫＶＰＧＮＦＴＦＴＨＫＫＶＫＨＥＮＦＳＬＬＴＳＧＥＶＧＥＦＣＶＱＶＫＰＳＶＡＳＲＳＮＫＧＭＷＳＫＥＥＣＩＳＬＴＲＱＹＦＴＶＴＮＶＩＩＦＦＡＦＶＬＬＬＳＧＡＬＡＹＣＬＡＬＱＬＹＶＲＲＲＫＫＬＰＳＶＬＬＦＫＫＰＳＰＦＩＦＩＳＱＲＰＳＰＥＴＱＤＴＩＨＰＬＤＥＥＡＦＬＫＶＳＰＥＬＫＮＬＤＬＨＧＳＴＤＳＧＦＧＳＴＫＰＳＬＱＴＥＥＰＱＦＬＬＰＤＰＨＰＱＡＤＲＴＬＧＮＲＥＰＰＶＬＧＤＳＣＳＳＧＳＳＮＳＴＤＳＧＩＣＬＱＥＰＳＬＳＰＳＴＧＰＴＷＥＱＱＶＧＳＮＳＲＧＱＤＤＳＧＩＤＬＶＱＮＳＥＧＲＡＧＤＴＱＧＧＳＡＬＧＨＨＳＰＰＥＰＥＶＰＧＥＥＤＰＡＡＶＡＦＱＧＹＬＲＱＴＲＣＡＥＥＫＡＴＫＴＧＣＬＥＥＥＳＰＬＴＤＧＬＧＰＫＦＧＲＣＬＶＤＥＡＧＬＨＰＰＡＬＡＫＧＹＬＫＱＤＰＬＥＭＴＬＡＳＳＧＡＰＴＧＱＷＮＱＰＴＥＥＷＳＬＬＡＬＳＳＣＳＤＬＧＩＳＤＷＳＦＡＨＤＬＡＰＬＧＣＶＡＡＰＧＧＬＬＧＳＦＮＳＤＬＶＴＬＰＬＩＳＳＬＱＳＳＥ（配列番号５２、ＮＣＢＩ参照配列ＮＰ＿００１５４９．２）を有することができ、これは、ａａｓ２１～５８７が成熟ポリペプチドを形成し、ａａｓ２３６～２５６が膜貫通領域を形成する。タンパク質の受容体サブユニットの全てまたは一部（例えば、エクトドメイン（ａａｓ２１～２３５））を使用して、ＩＬ－１０受容体βサブユニットと共にＩＬ－１０アイソフォームへの結合親和性を決定することができる。

ＩＬ－１０受容体βサブユニットは、配列ＭＡＷＳＬＧＳＷＬＧＧＣＬＬＶＳＡＬＧＭＶＰＰＰＥＮＶＲＭＮＳＶＮＦＫＮＩＬＱＷＥＳＰＡＦＡＫＧＮＬＴＦＴＡＱＹＬＳＹＲＩＦＱＤＫＣＭＮＴＴＬＴＥＣＤＦＳＳＬＳＫＹＧＤＨＴＬＲＶＲＡＥＦＡＤＥＨＳＤＷＶＮＩＴＦＣＰＶＤＤＴＩＩＧＰＰＧＭＱＶＥＶＬＡＤＳＬＨＭＲＦＬＡＰＫＩＥＮＥＹＥＴＷＴＭＫＮＶＹＮＳＷＴＹＮＶＱＹＷＫＮＧＴＤＥＫＦＱＩＴＰＱＹＤＦＥＶＬＲＮＬＥＰＷＴＴＹＣＶＱＶＲＧＦＬＰＤＲＮＫＡＧＥＷＳＥＰＶＣＥＱＴＴＨＤＥＴＶＰＳＷＭＶＡＶＩＬＭＡＳＶＦＭＶＣＬＡＬＬＧＣＦＡＬＬＷＣＶＹＫＫＴＫＹＡＦＳＰＲＮＳＬＰＱＨＬＫＥＦＬＧＨＰＨＨＮＴＬＬＦＦＳＦＰＬＳＤＥＮＤＶＦＤＫＬＳＶＩＡＥＤＳＥＳＧＫＱＮＰＧＤＳＣＳＬＧＴＰＰＧＱＧＰＱＳ（配列番号５３、ＮＣＢＩ参照配列ＮＰ＿０００６１９．３）を有することができ、ａａｓ２０～３２５が成熟ポリペプチドを形成し、ａａｓ２２１～２４２が膜貫通領域を形成する。タンパク質の受容体サブユニットの全てまたは一部（例えば、エクトドメイン（ａａｓ２０～２２０））を使用して、αサブユニットと共にＩＬ－１０への結合親和性を決定することができる。

一部の例では、変異型ＩＬ－１０アイソフォームポリペプチド（例えば、配列番号５０、５１の変異型、または上記に示されるＤヘリックスとＥヘリックスとの間のヒンジへの５～７ａａ挿入を有するそれらの配列の単量体ＩＬ－１０変異型）は、配列番号５０または５１に示されるａａ配列を含むＩＬ－１０ポリペプチドの結合親和性と比較して、成熟ＩＬ－１０受容体配列（例えば、そのエクトドメインなどの配列番号５２または５３に示されるポリペプチドの全てまたは一部を含むＩＬ－１０受容体）に対する低減した結合親和性を示す。例えば、一部の例では、変異型ＩＬ－１０ポリペプチドの変異型（例えば、配列番号５０または５１の変異型）は、（そのエクトドメインなどの）配列番号５２または５３に示されるポリペプチドの全てまたは一部を含むＩＬ－１０受容体に対する（例えば、配列番号５０または５１の）ＩＬ－１０アイソフォームの結合親和性よりも少なくとも１０％低い、少なくとも２０％低い、少なくとも３０％低い、少なくとも４０％低い、少なくとも５０％低い、少なくとも６０％低い、少なくとも７０％低い、少なくとも８０％低い、少なくとも９０％低い、少なくとも９５％低い、または９５％超低い結合親和性で、配列番号５２または５３に示されるポリペプチドの全てまたは一部を含むＩＬ－１０受容体に結合する。

一部の例では、変異型ＩＬ－１０ポリペプチド（例えば、ＤヘリックスとＥヘリックスとの間のヒンジ領域内の上述の挿入のうちの１つを含み得る、配列番号５０または５１の変異型）は、１ｎＭ～１ｍＭ（例えば、１ｎＭ～１０ｎＭ、１０ｎＭ～１００ｎＭ、１００ｎＭ～１μＭ、１μＭ～１０μＭ、１０μＭ～１００μＭ、または１００μＭ～１ｍＭ）である、ＩＬ－１０受容体（例えば、そのエクトドメインなどの配列番号５２及び５３に示されるポリペプチドの全てまたは一部を含む）に対する結合親和性を有する。一部の例では、変異型ＩＬ－１０ポリペプチド（例えば、配列番号５０または５１の変異型）は、１００ｎＭ～１００μＭ（例えば、１００ｎＭ～１μＭ、１μＭ～１０μＭ、または１０μＭ～１００μＭ）である、そのエクトドメインなどの配列番号５２及び５３に示されるポリペプチドの全てまたは一部を含む成熟ＩＬ－１０受容体に対する結合親和性を有する。別の例として、一部の例では、変異型ＩＬ－１０ポリペプチド（例えば、配列番号５０または５１の変異型）は、約１００ｎＭ～約２００ｎＭ、約２００ｎＭ～約３００ｎＭ、約３００ｎＭ～約４００ｎＭ、約４００ｎＭ～約５００ｎＭ、約５００ｎＭ～約６００ｎＭ、約６００ｎＭ～約７００ｎＭ、約７００ｎＭ～約８００ｎＭ、約８００ｎＭ～約９００ｎＭ、約９００ｎＭ～約１μＭ、約１μＭ～約５μＭ、約５μＭ～約１０μＭ、約１０μＭ～約２０μＭ、約２０μＭ～約３０μＭ、約３０μＭ～約５０μＭ、約５０μＭ～約７５μＭ、または約７５μＭ～約１００μＭである、成熟ＩＬ－１０受容体（例えば、そのエクトドメインなどの配列番号５２及び５３に示されるポリペプチドの全てまたは一部を含む）に対する結合親和性を有する。

一部の例では、変異型ＩＬ－１０ポリペプチドは、配列番号５０または５１に示されるＩＬ－１０アミノ酸配列と比較して、単一ａａ置換を有する。一部の例では、変異型ＩＬ－１０ポリペプチドは、配列番号５０または５１に示されるＩＬ－１０アミノ酸配列と比較して、２ａａ～１０ａａ置換を有する。一部の例では、変異型ＩＬ－１０ポリペプチドは、配列番号５０または５１に示されるＩＬ－１０アミノ酸配列と比較して、２ａａ置換を有する。一部の例では、変異型ＩＬ－１０ポリペプチドは、配列番号５０または５１に示されるＩＬ－１０アミノ酸配列と比較して、３ａａまたは４ａａ置換を有する。一部の例では、変異型ＩＬ－１０ポリペプチドは、配列番号５０または５１に示されるＩＬ－１０アミノ酸配列と比較して、５ａａまたは６ａａアミノ酸置換を有する。一部の例では、変異型ＩＬ－１０ポリペプチドは、配列番号５０または５１に示されるＩＬ－１０アミノ酸配列と比較して、７ａａまたは８ａａアミノ酸置換を有する。一部の例では、変異型ＩＬ－１０ポリペプチドは、配列番号５０または５１に示されるＩＬ－１０アミノ酸配列と比較して、９ａａまたは１０ａａアミノ酸置換を有する。一部の例では、変異型ＩＬ－１０ポリペプチドは、配列番号５０または５１に示されるＩＬ－１０ポリペプチド配列と比較して、１～１０ａａ置換を有し、ＤヘリックスとＥヘリックスと（例えば、配列番号５０のＫ４９とＮ５０と）の間のヒンジ領域に５～７ａａ置換を含む。

好適な変異型ＩＬ－１０ポリペプチド配列は、（例えば、少なくとも１つのａａ置換、欠失、または挿入を有する）配列番号５０または５１の少なくとも５０個（例えば、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１１０、少なくとも１２０、少なくとも１３０、少なくとも１４０、少なくとも１５０、または少なくとも１６０個）の連続するａａに対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のａａ配列同一性を有するポリペプチド配列を含む。

１１．ＩＬ－１５及びその変異型
一部の例では、本開示のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体内に存在するＭＯＤは、ＩＬ－１５ポリペプチドである。異なる前駆体タンパク質を生じさせる代替的スプライシングによって形成される２つのアイソフォームを含むＩＬ－１５ポリペプチドの配列は、当該技術分野において既知である。一実施形態では、ｗｔ．ＩＬ－１５ポリペプチドは、以下の配列：ＭＲＩＳＫＰＨＬＲＳＩＳＩＱＣＹＬＣＬＬＬＮＳＨＦＬＴＥＡＧＩＨＶＦＩＬＧＣＦＳＡＧＬＰＫＴＥＡＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＤＴＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳ（配列番号５４、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｐ４０９３３、ＮＣＢＩ参照ＮＰ＿０００５７６．１）、シグナルペプチドとしてａａ１～２９、プロペプチドとしてａａ３０～４８を有するＩＬ－１５プレタンパク質を有する。

本開示の目的のためにアイソフォーム１として示される成熟ＩＬ－１５ポリペプチドは、形態ＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＤＴＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳ（配列番号５５）を有することができる。

ＩＬ－１５は、ＩＬ－２と構造的に類似しており、ＩＬ－２受容体と同じβ鎖及びγ鎖を有するが、明確に異なるＩＬ－１５受容体α（ＩＬ－１５Ｒα）サブユニットを有する細胞表面三量体受容体を通してシグナル伝達する。ヒトＩＬ－１５Ｒαアイソフォーム１前駆体タンパク質のａａ配列は、ＭＡＰＲＲＡＲＧＣＲＴＬＧＬＰＡＬＬＬＬＬＬＬＲＰＰＡＴＲＧＩＴＣＰＰＰＭＳＶＥＨＡＤＩＷＶＫＳＹＳＬＹＳＲＥＲＹＩＣＮＳＧＦＫＲＫＡＧＴＳＳＬＴＥＣＶＬＮＫＡＴＮＶＡＨＷＴＴＰＳＬＫＣＩＲＤＰＡＬＶＨＱＲＰＡＰＰＳＴＶＴＴＡＧＶＴＰＱＰＥＳＬＳＰＳＧＫＥＰＡＡＳＳＰＳＳＮＮＴＡＡＴＴＡＡＩＶＰＧＳＱＬＭＰＳＫＳＰＳＴＧＴＴＥＩＳＳＨＥＳＳＨＧＴＰＳＱＴＴＡＫＮＷＥＬＴＡＳＡＳＨＱＰＰＧＶＹＰＱＧＨＳＤＴＴＶＡＩＳＴＳＴＶＬＬＣＧＬＳＡＶＳＬＬＡＣＹＬＫＳＲＱＴＰＰＬＡＳＶＥＭＥＡＭＥＡＬＰＶＴＷＧＴＳＳＲＤＥＤＬＥＮＣＳＨＨＬ（配列番号５６、ＮＣＢＩ参照ＮＰ＿００２１８０）であり得、ａａｓ１～３０がシグナル配列を形成し、ａａｓ３１～２６７が成熟ポリペプチドを形成する。ＩＬ－２Ｒβ及びＩＬ－２Ｒγの配列は、配列番号１１及び１２として提供される。

一部の例では、変異型ＩＬ－１５アイソフォーム１ポリペプチド（例えば、配列番号５５の変異型）は、配列番号５５に示されるアミノ酸配列を含むＩＬ－１５ポリペプチドの結合親和性と比較して、成熟ＩＬ－１５受容体配列（例えば、そのエクトドメインなどの配列番号１１、１２、及び５６に示されるポリペプチドの全てまたは一部を含むＩＬ－１５受容体）に対する低減した結合親和性を示す。例えば、一部の例では、変異型ＩＬ－１５ポリペプチドの変異型（例えば、配列番号５５の変異型）は、配列番号５５に示されるａａ配列を含むＩＬ－１５ポリペプチドの結合親和性よりも少なくとも１０％低い、少なくとも２０％低い、少なくとも３０％低い、少なくとも４０％低い、少なくとも５０％低い、少なくとも６０％低い、少なくとも７０％低い、少なくとも８０％低い、少なくとも９０％低い、少なくとも９５％低い、または９５％超低い結合親和性で、そのエクトドメインなどの配列番号１１、１２、及び５６に示されるポリペプチドの全てまたは一部を含むＩＬ－１５受容体に結合する。

一部の例では、変異型ＩＬ－１５ポリペプチド（例えば、配列番号５５の変異型）は、配列番号１１、１２、及び５６に示されるポリペプチドの全てまたは一部、例えば、それらのエクトドメインを含むＩＬ－１５受容体に対して、１ｎＭ～１ｍＭ（例えば、１ｎＭ～１０ｎＭ、１０ｎＭ～１００ｎＭ、１００ｎＭ～１μＭ、１μＭ～１０μＭ、１０μＭ～１００μＭ、または１００μＭ～１ｍＭ）の結合親和性を有する。別の例として、一部の例では、変異型ＩＬ－１５ポリペプチド（例えば、配列番号５５の変異型）は、配列番号１１、１２、及び５６に示されるポリペプチドの全てまたは一部、例えば、それらのエクトドメインを含む成熟型ＩＬ－１５受容体に対して、約１００ｎＭ～約２００ｎＭ、約２００ｎＭ～約３００ｎＭ、約３００ｎＭ～約４００ｎＭ、約４００ｎＭ～約５００ｎＭ、約５００ｎＭ～約６００ｎＭ、約６００ｎＭ～約７００ｎＭ、約７００ｎＭ～約８００ｎＭ、約８００ｎＭ～約９００ｎＭ、約９００ｎＭ～約１μＭ、約１μＭ～約５μＭ、約５μＭ～約１０μＭ、約１０μＭ～約２０μＭ、約２０μＭ～約３０μＭ、約３０μＭ～約５０μＭ、約５０μＭ～約７５μＭ、または約７５μＭ～約１００μＭの結合親和性を有する。

一部の例では、変異型ＩＬ－１５ポリペプチド（例えば、配列番号５５の変異型）は、配列番号５５に示されるＩＬ－１５ポリペプチド配列と比較して、単一ａａ置換を有する。一部の例では、変異型ＩＬ－１５ポリペプチド（例えば、配列番号５５の変異型）は、配列番号５５に示されるＩＬ－１５ポリペプチド配列と比較して、２ａａ～１０ａａ置換を有する。一部の例では、変異型ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号５５に示されるＩＬ－１５アミノ酸配列と比較して、２ａａ置換を有する。一部の例では、変異型ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号５５に示されるＩＬ－１５アミノ酸配列と比較して、３ａａまたは４ａａ置換を有する。一部の例では、変異型ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号５５に示されるＩＬ－１５アミノ酸配列と比較して、５ａａまたは６ａａ置換を有する。一部の例では、変異型ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号５５に示されるＩＬ－１５アミノ酸配列と比較して、７ａａまたは８ａａ置換を有する。一部の例では、変異型ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号５５に示されるＩＬ－１５アミノ酸配列と比較して、９ａａまたは１０ａａ置換を有する。

好適な変異型ＩＬ－１５ポリペプチド配列は、配列番号５５の少なくとも５０個の連続するａａ（例えば、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、または少なくとも１１０個の連続するａａ）に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のａａ配列同一性を有し、少なくとも１つのａａ置換、欠失、または挿入を有する、ポリペプチド配列を含む。

１２．ＩＬ－２１及びその変異体
一部の例では、本開示のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体に存在するＭＯＤは、ＩＬ－２１ポリペプチドである。異なる前駆体タンパク質を生じさせる代替的スプライシングによって形成される２つのアイソフォームを含むＩＬ－２１ポリペプチドの配列は、当該技術分野において既知である。

一実施形態では、ｗｔ．ＩＬ－２１アイソフォーム１ポリペプチドは、配列ＭＲＳＳＰＧＮＭＥＲＩＶＩＣＬＭＶＩＦＬＧＴＬＶＨＫＳＳＳＱＧＱＤＲＨＭＩＲＭＲＱＬＩＤＩＶＤＱＬＫＮＹＶＮＤＬＶＰＥＦＬＰＡＰＥＤＶＥＴＮＣＥＷＳＡＦＳＣＦＱＫＡＱＬＫＳＡＮＴＧＮＮＥＲＩＩＮＶＳＩＫＫＬＫＲＫＰＰＳＴＮＡＧＲＲＱＫＨＲＬＴＣＰＳＣＤＳＹＥＫＫＰＰＫＥＦＬＥＲＦＫＳＬＬＱＫＭＩＨＱＨＬＳＳＲＴＨＧＳＥＤＳ（配列番号５７、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｑ９ＨＢＥ４、ＮＣＢＩ参照ＮＰ＿０６８５７５．１）、シグナルペプチドとしてａａ１～２９を有するＩＬ－２１タンパク質を有する。

成熟ＩＬ－２１アイソフォーム１ポリペプチドは、ａａ配列ＱＧＱＤＲＨＭＩＲＭＲＱＬＩＤＩＶＤＱＬＫＮＹＶＮＤＬＶＰＥＦＬＰＡＰＥＤＶＥＴＮＣＥＷＳＡＦＳＣＦＱＫＡＱＬＫＳＡＮＴＧＮＮＥＲＩＩＮＶＳＩＫＫＬＫＲＫＰＰＳＴＮＡＧＲＲＱＫＨＲＬＴＣＰＳＣＤＳＹＥＫＫＰＰＫＥＦＬＥＲＦＫＳＬＬＱＫＭＩＨＱＨＬＳＳＲＴＨＧＳＥＤＳ（配列番号５８）を有することができる。

一実施形態では、ｗｔ．ＩＬ－２１アイソフォーム２ポリペプチドは、配列ＭＲＳＳＰＧＮＭＥＲＩＶＩＣＬＭＶＩＦＬＧＴＬＶＨＫＳＳＳＱＧＱＤＲＨＭＩＲＭＲＱＬＩＤＩＶＤＱＬＫＮＹＶＮＤＬＶＰＥＦＬＰＡＰＥＤＶＥＴＮＣＥＷＳＡＦＳＣＦＱＫＡＱＬＫＳＡＮＴＧＮＮＥＲＩＩＮＶＳＩＫＫＬＫＲＫＰＰＳＴＮＡＧＲＲＱＫＨＲＬＴＣＰＳＣＤＳＹＥＫＫＰＰＫＥＦＬＥＲＦＫＳＬＬＱＫＭＩＨＱＨＬＳＳＲＴＨＧＳＥＤＳ（配列番号５９）、ＮＰ＿００１１９３９３５．１、シグナルペプチドとしてａａ１～２９を有するＩＬ－２１タンパク質を有する。

成熟ＩＬ－２１アイソフォーム２ポリペプチドは、ａａ配列ＭＲＳＳＰＧＮＭＥＲＩＶＩＣＬＭＶＩＦＬＧＴＬＶＨＫＳＳＳＱＧＱＤＲＨＭＩＲＭＲＱＬＩＤＩＶＤＱＬＫＮＹＶＮＤＬＶＰＥＦＬＰＡＰＥＤＶＥＴＮＣＥＷＳＡＦＳＣＦＱＫＡＱＬＫＳＡＮＴＧＮＮＥＲＩＩＮＶＳＩＫＫＬＫＲＫＰＰＳＴＮＡＧＲＲＱＫＨＲＬＴＣＰＳＣＤＳＹＥＫＫＰＰＫＥＦＬＥＲＦＫＳＬＬＱＫＶＳＴＬＳＦＩ（配列番号６０）を有することができる。

ＩＬ－２１は、ＩＬ－２受容体と同じγ鎖を有するが、明確に異なるＩＬ－２１Ｒ受容体サブユニットを有する二量体細胞表面受容体を通してシグナル伝達する。ヒトＩＬ－２１Ｒアイソフォーム１前駆体タンパク質のａａ配列は、
ＭＰＲＧＷＡＡＰＬＬＬＬＬＬＱＧＧＷＧＣＰＤＬＶＣＹＴＤＹＬＱＴＶＩＣＩＬＥＭＷＮＬＨＰＳＴＬＴＬＴＷＱＤＱＹＥＥＬＫＤＥＡＴＳＣＳＬＨＲＳＡＨＮＡＴＨＡＴＹＴＣＨＭＤＶＦＨＦＭＡＤＤＩＦＳＶＮＩＴＤＱＳＧＮＹＳＱＥＣＧＳＦＬＬＡＥＳＩＫＰＡＰＰＦＮＶＴＶＴＦＳＧＱＹＮＩＳＷＲＳＤＹＥＤＰＡＦＹＭＬＫＧＫＬＱＹＥＬＱＹＲＮＲＧＤＰＷＡＶＳＰＲＲＫＬＩＳＶＤＳＲＳＶＳＬＬＰＬＥＦＲＫＤＳＳＹＥＬＱＶＲＡＧＰＭＰＧＳＳＹＱＧＴＷＳＥＷＳＤＰＶＩＦＱＴＱＳＥＥＬＫＥＧＷＮＰＨＬＬＬＬＬＬＬＶＩＶＦＩＰＡＦＷＳＬＫＴＨＰＬＷＲＬＷＫＫＩＷＡＶＰＳＰＥＲＦＦＭＰＬＹＫＧＣＳＧＤＦＫＫＷＶＧＡＰＦＴＧＳＳＬＥＬＧＰＷＳＰＥＶＰＳＴＬＥＶＹＳＣＨＰＰＲＳＰＡＫＲＬＱＬＴＥＬＱＥＰＡＥＬＶＥＳＤＧＶＰＫＰＳＦＷＰＴＡＱＮＳＧＧＳＡＹＳＥＥＲＤＲＰＹＧＬＶＳＩＤＴＶＴＶＬＤＡＥＧＰＣＴＷＰＣＳＣＥＤＤＧＹＰＡＬＤＬＤＡＧＬＥＰＳＰＧＬＥＤＰＬＬＤＡＧＴＴＶＬＳＣＧＣＶＳＡＧＳＰＧＬＧＧＰＬＧＳＬＬＤＲＬＫＰＰＬＡＤＧＥＤＷＡＧＧＬＰＷＧＧＲＳＰＧＧＶＳＥＳＥＡＧＳＰＬＡＧＬＤＭＤＴＦＤＳＧＦＶＧＳＤＣＳＳＰＶＥＣＤＦＴＳＰＧＤＥＧＰＰＲＳＹＬＲＱＷＶＶＩＰＰＰＬＳＳＰＧＰＱＡＳ（配列番号６１、ＮＣＢＩ参照配列ＮＰ＿０６８５７０．１）であり得、ａａｓ１～１９がシグナル配列を形成し、ａａｓ２０～５３８が成熟ポリペプチドを形成し、ａａ２３３～２５３が膜貫通ドメインを形成し、ａａｓ２０～２３２がエクトドメインを形成する。

一部の例では、変異型ＩＬ－２１ポリペプチドは、配列番号５８または６０に示されるａａ配列を含むｗｔ．ＩＬ－２１ポリペプチドの結合親和性と比較して、成熟ＩＬ－２１受容体配列（例えば、そのエクトドメインなどの配列番号１２及び６１に示されるポリペプチドの全てまたは一部を含むＩＬ－２１受容体）に対する低減した結合親和性を示す。例えば、一部の例では、配列番号５８または６０を含むＩＬ－２１ポリペプチドの変異型は、配列番号５８または６０に示されるａａ配列を含むｗｔ．ＩＬ－２１ポリペプチドの結合親和性よりも少なくとも１０％低い、少なくとも２０％低い、少なくとも３０％低い、少なくとも４０％低い、少なくとも５０％低い、少なくとも６０％低い、少なくとも７０％低い、少なくとも８０％低い、少なくとも９０％低い、少なくとも９５％低い、または９５％超低い結合親和性で、そのエクトドメインなどの配列番号１２及び６１に示されるポリペプチドの全てまたは一部を含むＩＬ－２１受容体に結合する。

一部の例では、変異型ＩＬ－２１ポリペプチド（例えば、配列番号５８または６０の変異型）は、１ｎＭ～１ｍＭ（例えば、１ｎＭ～１０ｎＭ、１０ｎＭ～１００ｎＭ、１００ｎＭ～１μＭ、１μＭ～１０μＭ、１０μＭ～１００μＭ、または１００μＭ～１ｍＭ）である、ＩＬ－２１受容体（例えば、そのエクトドメインなどの配列番号１２及び６１に示されるポリペプチドの全てまたは一部を含む）に対する結合親和性を有する。一部の例では、変異型ＩＬ－２１ポリペプチド（例えば、配列番号５８または６０の変異型）は、１００ｎＭ～１００μＭ（例えば、１００ｎＭ～１μＭ、１μＭ～１０μＭ、または１０μＭ～１００μＭ）である、ＩＬ－２１受容体の全てまたは一部（そのエクトドメインなどの配列番号１２及び６１に示されるポリペプチドの全てまたは一部を含む）に対する結合親和性を有する。別の例として、一部の例では、変異型ＩＬ－２１ポリペプチド（例えば、配列番号５８または６０の変異型）は、約１００ｎＭ～約２００ｎＭ、約２００ｎＭ～約３００ｎＭ、約３００ｎＭ～約４００ｎＭ、約４００ｎＭ～約５００ｎＭ、約５００ｎＭ～約６００ｎＭ、約６００ｎＭ～約７００ｎＭ、約７００ｎＭ～約８００ｎＭ、約８００ｎＭ～約９００ｎＭ、約９００ｎＭ～約１μＭ、約１μＭ～約５μＭ、約５μＭ～約１０μＭ、約１０μＭ～約２０μＭ、約２０μＭ～約３０μＭ、約３０μＭ～約５０μＭ、約５０μＭ～約７５μＭ、または約７５μＭ～約１００μＭである、成熟ＩＬ－２１受容体の全てまたは一部（そのエクトドメインなどの配列番号１２及び６１に示されるポリペプチドの全てまたは一部を含む）に対する結合親和性を有する。

一部の例では、変異型ＩＬ－２１ポリペプチド（例えば、配列番号５８または６０の変異型）は、配列番号５８または６０に示されるＩＬ－２１ポリペプチド配列と比較して、単一ａａ置換を有する。一部の例では、変異型ＩＬ－２１ポリペプチド（例えば、配列番号５８または６０の変異型）は、配列番号５８または６０に示されるＩＬ－２１ポリペプチド配列と比較して、２ａａ～１０ａａ置換を有する。一部の例では、変異型ＩＬ－２１ポリペプチドは、配列番号５８または６０に示されるＩＬ－２１ポリペプチド配列と比較して、２ａａ置換を有する。一部の例では、変異型ＩＬ－２１ポリペプチドは、配列番号５８または６０に示されるＩＬ－２１ポリペプチド配列と比較して、３ａａまたは４ａａ置換を有する。一部の例では、変異型ＩＬ－２１ポリペプチドは、配列番号５８または６０に示されるＩＬ－２１ポリペプチド配列と比較して、５ａａまたは６ａａ置換を有する。一部の例では、変異型ＩＬ－２１ポリペプチドは、配列番号５８または６０に示されるＩＬ－２１ポリペプチド配列と比較して、７ａａまたは８ａａ置換を有する。一部の例では、変異型ＩＬ－２１ポリペプチドは、配列番号５８または６０に示されるＩＬ－２１ポリペプチド配列と比較して、９ａａまたは１０ａａ置換を有する。

好適なＩＬ－２１ポリペプチド配列は、配列番号５８または６０の少なくとも５０個の連続するａａ（例えば、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、または少なくとも１１０個の連続するａａ）に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のａａ配列同一性を有し、少なくとも１つのａａ置換、欠失、または挿入を有する、ポリペプチド配列を含む。

１３．ＩＬ－２３及びその変異体
一部の例では、本開示のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体に存在するＭＯＤは、ＩＬ－２３ポリペプチドである。ＩＬ－２３は、ＩＬ－２３Ａ（ＩＬ－２３ｐ１９）サブユニット及びＩＬ－１２Ｂ（ＩＬ－１２ｐ４０）サブユニット（ＩＬ－１２と共有される）から構成されるヘテロ二量体サイトカインである。

一実施形態では、ｗｔ．ＩＬ－２３Ａポリペプチドは、配列：ＭＬＧＳＲＡＶＭＬＬＬＬＬＰＷＴＡＱＧＲＡＶＰＧＧＳＳＰＡＷＴＱＣＱＱＬＳＱＫＬＣＴＬＡＷＳＡＨＰＬＶＧＨＭＤＬＲＥＥＧＤＥＥＴＴＮＤＶＰＨＩＱＣＧＤＧＣＤＰＱＧＬＲＤＮＳＱＦＣＬＱＲＩＨＱＧＬＩＦＹＥＫＬＬＧＳＤＩＦＴＧＥＰＳＬＬＰＤＳＰＶＧＱＬＨＡＳＬＬＧＬＳＱＬＬＱＰＥＧＨＨＷＥＴＱＱＩＰＳＬＳＰＳＱＰＷＱＲＬＬＬＲＦＫＩＬＲＳＬＱＡＦＶＡＶＡＡＲＶＦＡＨＧＡＡＴＬＳＰ（配列番号６２、ＮＣＢＩ参照配列ＮＰ＿０５７６６８．１）を有し、シグナルペプチドとしてａａ１～１９、成熟ペプチドとして２０～１８９を有する。

成熟型ＩＬ－２３Ａポリペプチドは、ａａ配列：ＲＡＶＰＧＧＳＳＰＡＷＴＱＣＱＱＬＳＱＫＬＣＴＬＡＷＳＡＨＰＬＶＧＨＭＤＬＲＥＥＧＤＥＥＴＴＮＤＶＰＨＩＱＣＧＤＧＣＤＰＱＧＬＲＤＮＳＱＦＣＬＱＲＩＨＱＧＬＩＦＹＥＫＬＬＧＳＤＩＦＴＧＥＰＳＬＬＰＤＳＰＶＧＱＬＨＡＳＬＬＧＬＳＱＬＬＱＰＥＧＨＨＷＥＴＱＱＩＰＳＬＳＰＳＱＰＷＱＲＬＬＬＲＦＫＩＬＲＳＬＱＡＦＶＡＶＡＡＲＶＦＡＨＧＡＡＴＬＳＰ（配列番号６３）を有することができる。

一実施形態では、ｗｔＩＬ－１２Ｂポリペプチドは、配列：ＭＣＨＱＱＬＶＩＳＷＦＳＬＶＦＬＡＳＰＬＶＡＩＷＥＬＫＫＤＶＹＶＶＥＬＤＷＹＰＤＡＰＧＥＭＶＶＬＴＣＤＴＰＥＥＤＧＩＴＷＴＬＤＱＳＳＥＶＬＧＳＧＫＴＬＴＩＱＶＫＥＦＧＤＡＧＱＹＴＣＨＫＧＧＥＶＬＳＨＳＬＬＬＬＨＫＫＥＤＧＩＷＳＴＤＩＬＫＤＱＫＥＰＫＮＫＴＦＬＲＣＥＡＫＮＹＳＧＲＦＴＣＷＷＬＴＴＩＳＴＤＬＴＦＳＶＫＳＳＲＧＳＳＤＰＱＧＶＴＣＧＡＡＴＬＳＡＥＲＶＲＧＤＮＫＥＹＥＹＳＶＥＣＱＥＤＳＡＣＰＡＡＥＥＳＬＰＩＥＶＭＶＤＡＶＨＫＬＫＹＥＮＹＴＳＳＦＦＩＲＤＩＩＫＰＤＰＰＫＮＬＱＬＫＰＬＫＮＳＲＱＶＥＶＳＷＥＹＰＤＴＷＳＴＰＨＳＹＦＳＬＴＦＣＶＱＶＱＧＫＳＫＲＥＫＫＤＲＶＦＴＤＫＴＳＡＴＶＩＣＲＫＮＡＳＩＳＶＲＡＱＤＲＹＹＳＳＳＷＳＥＷＡＳＶＰＣＳ（配列番号６４、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｐ２９４６０）を有し、シグナルペプチドとしてａａ１～２２、成熟ペプチドとして２３～３２８を有する。

成熟ＩＬ－１２Ｂポリペプチドは、ａａ配列：ＩＷＥＬＫＫＤＶＹＶＶＥＬＤＷＹＰＤＡＰＧＥＭＶＶＬＴＣＤＴＰＥＥＤＧＩＴＷＴＬＤＱＳＳＥＶＬＧＳＧＫＴＬＴＩＱＶＫＥＦＧＤＡＧＱＹＴＣＨＫＧＧＥＶＬＳＨＳＬＬＬＬＨＫＫＥＤＧＩＷＳＴＤＩＬＫＤＱＫＥＰＫＮＫＴＦＬＲＣＥＡＫＮＹＳＧＲＦＴＣＷＷＬＴＴＩＳＴＤＬＴＦＳＶＫＳＳＲＧＳＳＤＰＱＧＶＴＣＧＡＡＴＬＳＡＥＲＶＲＧＤＮＫＥＹＥＹＳＶＥＣＱＥＤＳＡＣＰＡＡＥＥＳＬＰＩＥＶＭＶＤＡＶＨＫＬＫＹＥＮＹＴＳＳＦＦＩＲＤＩＩＫＰＤＰＰＫＮＬＱＬＫＰＬＫＮＳＲＱＶＥＶＳＷＥＹＰＤＴＷＳＴＰＨＳＹＦＳＬＴＦＣＶＱＶＱＧＫＳＫＲＥＫＫＤＲＶＦＴＤＫＴＳＡＴＶＩＣＲＫＮＡＳＩＳＶＲＡＱＤＲＹＹＳＳＳＷＳＥＷＡＳＶＰＣＳ（配列番号６５）を有することができる。

ＩＬ－２３は、ＩＬ－２３受容体ポリペプチド（ＩＬ－２３Ｒ）と、ＩＬ－１２受容体と共通のサブユニット（１２ＲＢ１または１２Ｒβ１と示される）と、からなる二量体細胞表面受容体を介してシグナルを伝達する。

ＩＬ－２３Ｒアイソフォーム１前駆体タンパク質配列は、ＭＮＱＶＴＩＱＷＤＡＶＩＡＬＹＩＬＦＳＷＣＨＧＧＩＴＮＩＮＣＳＧＨＩＷＶＥＰＡＴＩＦＫＭＧＭＮＩＳＩＹＣＱＡＡＩＫＮＣＱＰＲＫＬＨＦＹＫＮＧＩＫＥＲＦＱＩＴＲＩＮＫＴＴＡＲＬＷＹＫＮＦＬＥＰＨＡＳＭＹＣＴＡＥＣＰＫＨＦＱＥＴＬＩＣＧＫＤＩＳＳＧＹＰＰＤＩＰＤＥＶＴＣＶＩＹＥＹＳＧＮＭＴＣＴＷＮＡＧＫＬＴＹＩＤＴＫＹＶＶＨＶＫＳＬＥＴＥＥＥＱＱＹＬＴＳＳＹＩＮＩＳＴＤＳＬＱＧＧＫＫＹＬＶＷＶＱＡＡＮＡＬＧＭＥＥＳＫＱＬＱＩＨＬＤＤＩＶＩＰＳＡＡＶＩＳＲＡＥＴＩＮＡＴＶＰＫＴＩＩＹＷＤＳＱＴＴＩＥＫＶＳＣＥＭＲＹＫＡＴＴＮＱＴＷＮＶＫＥＦＤＴＮＦＴＹＶＱＱＳＥＦＹＬＥＰＮＩＫＹＶＦＱＶＲＣＱＥＴＧＫＲＹＷＱＰＷＳＳＬＦＦＨＫＴＰＥＴＶＰＱＶＴＳＫＡＦＱＨＤＴＷＮＳＧＬＴＶＡＳＩＳＴＧＨＬＴＳＤＮＲＧＤＩＧＬＬＬＧＭＩＶＦＡＶＭＬＳＩＬＳＬＩＧＩＦＮＲＳＦＲＴＧＩＫＲＲＩＬＬＬＩＰＫＷＬＹＥＤＩＰＮＭＫＮＳＮＶＶＫＭＬＱＥＮＳＥＬＭＮＮＮＳＳＥＱＶＬＹＶＤＰＭＩＴＥＩＫＥＩＦＩＰＥＨＫＰＴＤＹＫＫＥＮＴＧＰＬＥＴＲＤＹＰＱＮＳＬＦＤＮＴＴＶＶＹＩＰＤＬＮＴＧＹＫＰＱＩＳＮＦＬＰＥＧＳＨＬＳＮＮＮＥＩＴＳＬＴＬＫＰＰＶＤＳＬＤＳＧＮＮＰＲＬＱＫＨＰＮＦＡＦＳＶＳＳＶＮＳＬＳＮＴＩＦＬＧＥＬＳＬＩＬＮＱＧＥＣＳＳＰＤＩＱＮＳＶＥＥＥＴＴＭＬＬＥＮＤＳＰＳＥＴＩＰＥＱＴＬＬＰＤＥＦＶＳＣＬＧＩＶＮＥＥＬＰＳＩＮＴＹＦＰＱＮＩＬＥＳＨＦＮＲＩＳＬＬＥＫ（配列番号６６、ＮＣＢＩ参照配列ＮＰ＿６５３３０２．２）であり得、ａａｓ１～２３がシグナル配列を形成し、ａａｓ２４～６２９が成熟ポリペプチドを形成し、ａａｓ３５６～３７６が膜貫通ドメインを形成し、ａａｓ２４～３５５がエクトドメインを形成する。

１２ＲＢ１アイソフォーム１前駆体タンパク質ａａ配列は、ＭＥＰＬＶＴＷＶＶＰＬＬＦＬＦＬＬＳＲＱＧＡＡＣＲＴＳＥＣＣＦＱＤＰＰＹＰＤＡＤＳＧＳＡＳＧＰＲＤＬＲＣＹＲＩＳＳＤＲＹＥＣＳＷＱＹＥＧＰＴＡＧＶＳＨＦＬＲＣＣＬＳＳＧＲＣＣＹＦＡＡＧＳＡＴＲＬＱＦＳＤＱＡＧＶＳＶＬＹＴＶＴＬＷＶＥＳＷＡＲＮＱＴＥＫＳＰＥＶＴＬＱＬＹＮＳＶＫＹＥＰＰＬＧＤＩＫＶＳＫＬＡＧＱＬＲＭＥＷＥＴＰＤＮＱＶＧＡＥＶＱＦＲＨＲＴＰＳＳＰＷＫＬＧＤＣＧＰＱＤＤＤＴＥＳＣＬＣＰＬＥＭＮＶＡＱＥＦＱＬＲＲＲＱＬＧＳＱＧＳＳＷＳＫＷＳＳＰＶＣＶＰＰＥＮＰＰＱＰＱＶＲＦＳＶＥＱＬＧＱＤＧＲＲＲＬＴＬＫＥＱＰＴＱＬＥＬＰＥＧＣＱＧＬＡＰＧＴＥＶＴＹＲＬＱＬＨＭＬＳＣＰＣＫＡＫＡＴＲＴＬＨＬＧＫＭＰＹＬＳＧＡＡＹＮＶＡＶＩＳＳＮＱＦＧＰＧＬＮＱＴＷＨＩＰＡＤＴＨＴＥＰＶＡＬＮＩＳＶＧＴＮＧＴＴＭＹＷＰＡＲＡＱＳＭＴＹＣＩＥＷＱＰＶＧＱＤＧＧＬＡＴＣＳＬＴＡＰＱＤＰＤＰＡＧＭＡＴＹＳＷＳＲＥＳＧＡＭＧＱＥＫＣＹＹＩＴＩＦＡＳＡＨＰＥＫＬＴＬＷＳＴＶＬＳＴＹＨＦＧＧＮＡＳＡＡＧＴＰＨＨＶＳＶＫＮＨＳＬＤＳＶＳＶＤＷＡＰＳＬＬＳＴＣＰＧＶＬＫＥＹＶＶＲＣＲＤＥＤＳＫＱＶＳＥＨＰＶＱＰＴＥＴＱＶＴＬＳＧＬＲＡＧＶＡＹＴＶＱＶＲＡＤＴＡＷＬＲＧＶＷＳＱＰＱＲＦＳＩＥＶＱＶＳＤＷＬＩＦＦＡＳＬＧＳＦＬＳＩＬＬＶＧＶＬＧＹＬＧＬＮＲＡＡＲＨＬＣＰＰＬＰＴＰＣＡＳＳＡＩＥＦＰＧＧＫＥＴＷＱＷＩＮＰＶＤＦＱＥＥＡＳＬＱＥＡＬＶＶＥＭＳＷＤＫＧＥＲＴＥＰＬＥＫＴＥＬＰＥＧＡＰＥＬＡＬＤＴＥＬＳＬＥＤＧＤＲＣＫＡＫＭ（配列番号６７、ＮＣＢＩ参照配列ＮＰ＿００５５２６．１）であり得、ａａｓ１～２３がシグナル配列を形成し、ａａｓ２４～６６２が成熟ポリペプチドを形成し、ａａｓ５４６～５７０が膜貫通ドメインを形成し、ａａｓ２４～５４５がエクトドメインを形成する。

一部の例では、変異型ＩＬ－２３（例えば、配列番号６３及び／または６５の変異型を含む）ポリペプチドは、配列番号６３及び／または６５に示されるａａ配列を含むＩＬ－２３ポリペプチドの結合親和性と比較して、成熟ＩＬ－２３受容体配列（例えば、そのエクトドメインなどの配列番号６６及び６７に示されるポリペプチドの全てまたは一部を含むＩＬ－２３受容体）に対する低減した結合親和性を示す。例えば、一部の例では、変異型ＩＬ－２３ポリペプチドの変異型（例えば、配列番号６３及び／または６５の変異型）は、配列番号６３及び／または６５に示されるａａ配列を含むＩＬ－２３ポリペプチドの結合親和性よりも少なくとも１０％低い、少なくとも２０％低い、少なくとも３０％低い、少なくとも４０％低い、少なくとも５０％低い、少なくとも６０％低い、少なくとも７０％低い、少なくとも８０％低い、少なくとも９０％低い、少なくとも９５％低い、または９５％超低い結合親和性で、ＩＬ－２３受容体（例えば、そのエクトドメインなどの配列番号６６及び６７に示されるポリペプチドの全てまたは一部を含む）に結合する。

一部の例では、変異型ＩＬ－２３ポリペプチド（例えば、配列番号６３及び／または６５の変異型を含む）は、１ｎＭ～１ｍＭ（例えば、１ｎＭ～１０ｎＭ、１０ｎＭ～１００ｎＭ、１００ｎＭ～１μＭ、１μＭ～１０μＭ、１０μＭ～１００μＭ、または１００μＭ～１ｍＭ）である、ＩＬ－２３受容体（例えば、そのエクトドメインなどの配列番号６６及び６７に示されるポリペプチドの全てまたは一部を含む）に対する結合親和性を有する。別の例として、一部の例では、変異型ＩＬ－２３ポリペプチド（例えば、配列番号６３及び／または６５の変異型を含む）は、約１００ｎＭ～約２００ｎＭ、約２００ｎＭ～約３００ｎＭ、約３００ｎＭ～約４００ｎＭ、約４００ｎＭ～約５００ｎＭ、約５００ｎＭ～約６００ｎＭ、約６００ｎＭ～約７００ｎＭ、約７００ｎＭ～約８００ｎＭ、約８００ｎＭ～約９００ｎＭ、約９００ｎＭ～約１μＭ、約１μＭ～約５μＭ、約５μＭ～約１０μＭ、約１０μＭ～約２０μＭ、約２０μＭ～約３０μＭ、約３０μＭ～約５０μＭ、約５０μＭ～約７５μＭ、または約７５μＭ～約１００μＭである、成熟型ＩＬ－２３受容体（例えば、そのエクトドメインなどの配列番号６６及び６７に示されるポリペプチドの全てまたは一部を含む）に対する結合親和性を有する。

一部の例では、変異型ＩＬ－２３ポリペプチド（例えば、配列番号６３及び／または６５の変異型を含む）は、配列番号６３及び／または６５に示されるＩＬ－２３ポリペプチド配列と比較して、単一ａａ置換を有する。一部の例では、変異型ＩＬ－２３ポリペプチド（例えば、配列番号６３及び／または６５の変異型を含む）は、配列番号６３及び／または６５に示されるＩＬ－２３ポリペプチド配列と比較して、２ａａ～１０ａａ置換を有する。一部の例では、変異型ＩＬ－２３ポリペプチドは、配列番号６３及び／または６５に示されるＩＬ－２３ポリペプチド配列と比較して、２ａａ置換を有する。一部の例では、変異型ＩＬ－２３ポリペプチドは、配列番号６３及び／または６５に示されるＩＬ－２３ポリペプチド配列と比較して、３ａａまたは４ａａ置換を有する。一部の例では、変異型ＩＬ－２３ポリペプチドは、配列番号６３及び／または６５に示されるＩＬ－２３ポリペプチド配列と比較して、５ａａまたは６ａａ置換を有する。一部の例では、変異型ＩＬ－２３ポリペプチドは、配列番号６３及び／または６５に示されるＩＬ－２３ポリペプチド配列と比較して、７ａａまたは８ａａ置換を有する。一部の例では、変異型ＩＬ－２３ポリペプチドは、配列番号６３及び／または６５に示されるＩＬ－２３ポリペプチド配列と比較して、９ａａまたは１０ａａ置換を有する。

好適な変異型ＩＬ－２３ポリペプチド配列は、配列番号６３及び／または６５の少なくとも５０個の連続するａａ（例えば、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１１０、少なくとも１２０、少なくとも１４０、少なくとも１６０、少なくとも１８０、少なくとも２００、少なくとも２２０、少なくとも２４０、少なくとも２６０、少なくとも２８０、少なくとも３００、少なくとも３２０、または少なくとも３４０個の連続するａａｓ）に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のａａ配列同一性を有し、少なくとも１つのａａ置換、欠失、または挿入を有する、ポリペプチド配列を含む。

１４．Ｆａｓリガンド（ＦａｓＬ）及びその変異型
一部の例では、本開示のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体内に存在するＭＯＤは、Ｆａｓリガンド（ＦａｓＬ）である。ＦａｓＬは、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）ファミリーにおけるホモマー型ＩＩ型膜貫通タンパク質である。ＦａｓＬは、標的細胞内のＦａｓ受容体の三量体化によってシグナルを伝達し、これは、標的細胞のアポトーシスをもたらす細胞死誘発複合体を形成する。可溶性ＦａｓＬは、マトリックスメタロプロテイナーゼ－７（ＭＭＰ－７）による、膜結合ＦａｓＬの保存部位における切断から生じる。

一実施形態では、ｗｔ．ホモサピエンスＦａｓＬタンパク質は、配列ＭＱＱＰＦＮＹＰＹＰＱＩＹＷＶＤＳＳＡＳＳＰＷＡＰＰＧＴＶＬＰＣＰＴＳＶＰＲＲＰＧＱＲＲＰＰＰＰＰＰＰＰＰＬＰＰＰＰＰＰＰＰＬＰＰＬＰＬＰＰＬＫＫＲＧＮＨＳＴＧＬＣＬＬＶＭＦＦＭＶＬＶＡＬＶＧＬＧＬＧＭＦＱＬＦＨＬＱＫＥＬＡＥＬＲＥＳＴＳＱＭＨＴＡＳＳＬＥＫＱＩＧＨＰＳＰＰＰＥＫＫＥＬＲＫＶＡＨＬＴＧＫＳＮＳＲＳＭＰＬＥＷＥＤＴＹＧＩＶＬＬＳＧＶＫＹＫＫＧＧＬＶＩＮＥＴＧＬＹＦＶＹＳＫＶＹＦＲＧＱＳＣＮＮＬＰＬＳＨＫＶＹＭＲＮＳＫＹＰＱＤＬＶＭＭＥＧＫＭＭＳＹＣＴＴＧＱＭＷＡＲＳＳＹＬＧＡＶＦＮＬＴＳＡＤＨＬＹＶＮＶＳＥＬＳＬＶＮＦＥＥＳＱＴＦＦＧＬＹＫＬ（配列番号１４３、ＮＣＢＩ参照配列ＮＰ＿０００６３０．１、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｐ４８０２３）を有し、残基１～８０は、細胞質であり、ａａｓ８１～１０２は、膜貫通ドメインであり、ａａｓ１０３～２８１は、細胞外（エクトドメイン）である。

好適なＦａｓＬポリペプチドは、ＦａｓＬＱＬＦＨＬＱＫＥＬＡＥＬＲＥＳＴＳＱＭＨＴＡＳＳＬＥＫＱＩＧＨＰＳＰＰＰＥＫＫＥＬＲＫＶＡＨＬＴＧＫＳＮＳＲＳＭＰＬＥＷＥＤＴＹＧＩＶＬＬＳＧＶＫＹＫＫＧＧＬＶＩＮＥＴＧＬＹＦＶＹＳＫＶＹＦＲＧＱＳＣＮＮＬＰＬＳＨＫＶＹＭＲＮＳＫＹＰＱＤＬＶＭＭＥＧＫＭＭＳＹＣＴＴＧＱＭＷＡＲＳＳＹＬＧＡＶＦＮＬＴＳＡＤＨＬＹＶＮＶＳＥＬＳＬＶＮＦＥＥＳＱＴＦＦＧＬＹＫＬ（配列番号１４４）のエクトドメインの全てまたは一部を含む。

Ｆａｓ受容体は、配列ＭＬＧＩＷＴＬＬＰＬＶＬＴＳＶＡＲＬＳＳＫＳＶＮＡＱＶＴＤＩＮＳＫＧＬＥＬＲＫＴＶＴＴＶＥＴＱＮＬＥＧＬＨＨＤＧＱＦＣＨＫＰＣＰＰＧＥＲＫＡＲＤＣＴＶＮＧＤＥＰＤＣＶＰＣＱＥＧＫＥＹＴＤＫＡＨＦＳＳＫＣＲＲＣＲＬＣＤＥＧＨＧＬＥＶＥＩＮＣＴＲＴＱＮＴＫＣＲＣＫＰＮＦＦＣＮＳＴＶＣＥＨＣＤＰＣＴＫＣＥＨＧＩＩＫＥＣＴＬＴＳＮＴＫＣＫＥＥＧＳＲＳＮＬＧＷＬＣＬＬＬＬＰＩＰＬＩＶＷＶＫＲＫＥＶＱＫＴＣＲＫＨＲＫＥＮＱＧＳＨＥＳＰＴＬＮＰＥＴＶＡＩＮＬＳＤＶＤＬＳＫＹＩＴＴＩＡＧＶＭＴＬＳＱＶＫＧＦＶＲＫＮＧＶＮＥＡＫＩＤＥＩＫＮＤＮＶＱＤＴＡＥＱＫＶＱＬＬＲＮＷＨＱＬＨＧＫＫＥＡＹＤＴＬＩＫＤＬＫＫＡＮＬＣＴＬＡＥＫＩＱＴＩＩＬＫＤＩＴＳＤＳＥＮＳＮＦＲＮＥＩＱＳＬＶ（配列番号１４５、ＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ＿００００３４．１，ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｐ２５４４５）を有することができ、ａａｓ２６～１７３は、エクトドメイン（細胞外ドメイン）を形成し、ａａｓ１７４～１９０は、膜貫通ドメインを形成し、１９１～３３５は、細胞質ドメインを形成する。エクトドメインを使用して、ＦａｓＬとの結合親和性を決定し得る。

一部の例では、変異型ＦａｓＬポリペプチド（例えば、配列番号１４４の変異型を含む）は、配列番号１４４に示されるａａ配列を含むＦａｓＬポリペプチドの結合親和性と比較して、成熟Ｆａｓ受容体配列（例えば、そのエクトドメインなどの配列番号１４５に示されるポリペプチドの全てまたは一部を含むＦａｓＬ受容体）に対する低減した結合親和性を示す。例えば、一部の例では、変異型ＦａｓＬポリペプチド（例えば、配列番号１４４の変異型を含む）は、配列番号１４４に示されるａａ配列を含むＦａｓＬポリペプチドの結合親和性よりも少なくとも１０％低い、少なくとも２０％低い、少なくとも３０％低い、少なくとも４０％低い、少なくとも５０％低い、少なくとも６０％低い、少なくとも７０％低い、少なくとも８０％低い、少なくとも９０％低い、少なくとも９５％低い、または９５％超低い結合親和性で、Ｆａｓ受容体（例えば、そのエクトドメインなどの配列番号１４５に記載されるポリペプチドの全てまたは一部を含む）に結合する。

一部の例では、変異型ＦａｓＬポリペプチド（例えば、配列番号１４４の変異型を含む）は、１ｎＭ～１ｍＭ（例えば、１ｎＭ～１０ｎＭ、１０ｎＭ～１００ｎＭ、１００ｎＭ～１μＭ、１μＭ～１０μＭ、１０μＭ～１００μＭまたは１００μＭ～１ｍＭ）である、Ｆａｓ受容体（例えば、そのエクトドメインなどの配列番号１４５に示されるポリペプチドの全てまたは一部を含む）に対する結合親和性を有する。別の例として、一部の例では、変異型ＦａｓＬポリペプチド（例えば、配列番号１４４の変異型を含む）は、約１００ｎＭ～約２００ｎＭ、約２００ｎＭ～約３００ｎＭ、約３００ｎＭ～約４００ｎＭ、約４００ｎＭ～約５００ｎＭ、約５００ｎＭ～約６００ｎＭ、約６００ｎＭ～約７００ｎＭ、約７００ｎＭ～約８００ｎＭ、約８００ｎＭ～約９００ｎＭ、約９００ｎＭ～約１μＭ、約１μＭ～約５μＭ、約５μＭ～約１０μＭ、約１０μＭ～約２０μＭ、約２０μＭ～約３０μＭ、約３０μＭ～約５０μＭ、約５０μＭ～約７５μＭ、または約７５μＭ～約１００μＭである、成熟Ｆａｓ受容体（例えば、そのエクトドメインなどの配列番号１４５に示されるポリペプチドの全てまたは一部を含む）に対する結合親和性を有する。

一部の例では、変異型ＦａｓＬポリペプチド（例えば、配列番号１４４の変異型を含む）は、配列番号１４４に示されるＦａｓＬポリペプチド配列と比較して、単一ａａ置換を有する。一部の例では、変異型ＦａｓＬポリペプチド（例えば、配列番号１４４の変異型を含む）は、配列番号１４４に示されるＦａｓＬポリペプチド配列と比較して、２ａａ～１０ａａ置換を有する。一部の例では、変異型ＦａｓＬポリペプチドは、配列番号１４４に示されるＦａｓＬポリペプチド配列と比較して、２ａａ置換を有する。一部の例では、変異型ＦａｓＬポリペプチドは、配列番号１４４に示されるＦａｓＬポリペプチド配列と比較して、３ａａまたは４ａａ置換を有する。一部の例では、変異型ＦａｓＬポリペプチドは、配列番号１４４に示されるＦａｓＬポリペプチド配列と比較して、５ａａまたは６ａａ置換を有する。一部の例では、変異型ＦａｓＬポリペプチドは、配列番号１４４に示されるＦａｓＬポリペプチド配列と比較して、７ａａまたは８ａａ置換を有する。一部の例では、変異型ＦａｓＬポリペプチドは、配列番号１４４に示されるＦａｓＬポリペプチド配列と比較して、９ａａまたは１０ａａ置換を有する。

好適な変異型ＦａｓＬポリペプチド配列は、配列番号１４４の少なくとも５０の連続するａａ（例えば、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１１０、少なくとも１２０、少なくとも１４０、少なくとも１６０、または少なくとも１８０個の連続するａａ）に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のａａ配列同一性を有する（例えば、少なくとも１つのａａ置換、欠失、または挿入を有する）ポリペプチド配列を含む。

１５４－１ＢＢＬ及びその変異型
一部の例では、ｗｔ．及び／または変異型４－１ＢＢＬポリペプチド配列が、ＭＯＤとして存在する。野生型４－１ＢＢＬは、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）に結合する。

ｗｔ．４－１ＢＢＬａａ配列は、以下の通り：ＭＥＹＡＳＤＡＳＬＤＰＥＡＰＷＰＰＡＰＲＡＲＡＣＲＶＬＰＷＡＬＶＡＧＬＬＬＬＬＬＬＡＡＡＣＡＶＦＬＡＣＰＷＡＶＳＧＡＲＡＳＰＧＳＡＡＳＰＲＬＲＥＧＰＥＬＳＰＤＤＰＡＧＬＬＤＬＲＱＧＭＦＡＱＬＶＡＱＮＶＬＬＩＤＧＰＬＳＷＹＳＤＰＧＬＡＧＶＳＬＴＧＧＬＳＹＫＥＤＴＫＥＬＶＶＡＫＡＧＶＹＹＶＦＦＱＬＥＬＲＲＶＶＡＧＥＧＳＧＳＶＳＬＡＬＨＬＱＰＬＲＳＡＡＧＡＡＡＬＡＬＴＶＤＬＰＰＡＳＳＥＡＲＮＳＡＦＧＦＱＧＲＬＬＨＬＳＡＧＱＲＬＧＶＨＬＨＴＥＡＲＡＲＨＡＷＱＬＴＱＧＡＴＶＬＧＬＦＲＶＴＰＥＩＰＡＧＬＰＳＰＲＳＥ（配列番号１９３、ＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ＿００３８０２．１）であり得、ａａｓ２９～４９は、膜貫通領域である。

一部の例では、変異型４－１ＢＢＬポリペプチドは、ヒト４－１ＢＢＬの腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）相同性ドメイン（ＴＨＤ）の変異型である。ヒト４－１ＢＢＬのＴＨＤのｗｔ．ａａ配列は、例えば、以下のように、配列番号１９４～１９６のうちの１つを含むことができる：

ＰＡＧＬＬＤＬＲＱＧＭＦＡＱＬＶＡＱＮＶＬＬＩＤＧＰＬＳＷＹＳＤＰＧＬＡＧＶＳＬＴＧＧＬＳＹＫＥＤＴＫＥＬＶＶＡＫＡＧＶＹＹＶＦＦＱＬＥＬＲＲＶＶＡＧＥＧＳＧＳＶＳＬＡＬＨＬＱＰＬＲＳＡＡＧＡＡＡＬＡＬＴＶＤＬＰＰＡＳＳＥＡＲＮＳＡＦＧＦＱＧＲＬＬＨＬＳＡＧＱＲＬＧＶＨＬＨＴＥＡＲＡＲＨＡＷＱＬＴＱＧＡＴＶＬＧＬＦＲＶＴＰＥＩＰＡＧＬＰＳＰＲＳＥ（配列番号１９４）、

ＤＰＡＧＬＬＤＬＲＱＧＭＦＡＱＬＶＡＱＮＶＬＬＩＤＧＰＬＳＷＹＳＤＰＧＬＡＧＶＳＬＴＧＧＬＳＹＫＥＤＴＫＥＬＶＶＡＫＡＧＶＹＹＶＦＦＱＬＥＬＲＲＶＶＡＧＥＧＳＧＳＶＳＬＡＬＨＬＱＰＬＲＳＡＡＧＡＡＡＬＡＬＴＶＤＬＰＰＡＳＳＥＡＲＮＳＡＦＧＦＱＧＲＬＬＨＬＳＡＧＱＲＬＧＶＨＬＨＴＥＡＲＡＲＨＡＷＱＬＴＱＧＡＴＶＬＧＬＦＲＶＴＰＥＩＰＡＧＬＰＳＰＲＳＥ（配列番号１９５）、及び

ＤＰＡＧＬＬＤＬＲＱＧＭＦＡＱＬＶＡＱＮＶＬＬＩＤＧＰＬＳＷＹＳＤＰＧＬＡＧＶＳＬＴＧＧＬＳＹＫＥＤＴＫＥＬＶＶＡＫＡＧＶＹＹＶＦＦＱＬＥＬＲＲＶＶＡＧＥＧＳＧＳＶＳＬＡＬＨＬＱＰＬＲＳＡＡＧＡＡＡＬＡＬＴＶＤＬＰＰＡＳＳＥＡＲＮＳＡＦＧＦＱＧＲＬＬＨＬＳＡＧＱＲＬＧＶＨＬＨＴＥＡＲＡＲＨＡＷＱＬＴＱＧＡＴＶＬＧＬＦＲＶＴＰＥＩＰＡ（配列番号１９６）。

ｗｔ．４－１ＢＢａａ配列は、以下の通りであり得る：ＭＧＮＳＣＹＮＩＶＡＴＬＬＬＶＬＮＦＥＲＴＲＳＬＱＤＰＣＳＮＣＰＡＧＴＦＣＤＮＮＲＮＱＩＣＳＰＣＰＰＮＳＦＳＳＡＧＧＱＲＴＣＤＩＣＲＱＣＫＧＶＦＲＴＲＫＥＣＳＳＴＳＮＡＥＣＤＣＴＰＧＦＨＣＬＧＡＧＣＳＭＣＥＱＤＣＫＱＧＱＥＬＴＫＫＧＣＫＤＣＣＦＧＴＦＮＤＱＫＲＧＩＣＲＰＷＴＮＣＳＬＤＧＫＳＶＬＶＮＧＴＫＥＲＤＶＶＣＧＰＳＰＡＤＬＳＰＧＡＳＳＶＴＰＰＡＰＡＲＥＰＧＨＳＰＱＩＩＳＦＦＬＡＬＴＳＴＡＬＬＦＬＬＦＦＬＴＬＲＦＳＶＶＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬ（配列番号１９７）。

変異型４－１ＢＢＬポリペプチドは、配列番号１９４～１９６のうちの１つに記載のａａ配列を含む４－１ＢＢＬポリペプチドの結合親和性と比較して、４－１ＢＢに対する低減した結合親和性を示す。例えば、一部の例では、変異型４－１ＢＢＬポリペプチドは、同じ条件下でアッセイされると、４－１ＢＢポリペプチド（例えば、配列番号１９７に示されるａａ配列を含む４－１ＢＢポリペプチド）に対する配列番号１９４～１９６のうちの１つに示されるａａ配列を含む４－１ＢＢＬポリペプチドの結合親和性よりも少なくとも１０％低い、少なくとも２０％低い、少なくとも３０％低い、少なくとも４０％低い、少なくとも５０％低い、少なくとも６０％低い、少なくとも７０％低い、少なくとも８０％低い、少なくとも９０％低い、少なくとも９５％低い、または９５％超低い結合親和性で、４－１ＢＢに結合し得る。

ＭＯＤとしての使用に好適な４－１ＢＢＬ変異型には、配列番号１９４、１９５、または１９６のうちの１つに対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のａａ配列同一性を有する、少なくとも１つのａａ置換を有するポリペプチドが含まれる。

ＭＯＤとしての使用に好適な４－１ＢＢＬ変異型には、配列番号１９３の少なくとも１４０個（例えば、少なくとも１６０、１７５、１８０、または１８１個）の連続するａａに対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のａａ配列同一性を有するものが含まれる。

Ｅ．足場
足場は、とりわけ、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体の他の構築構成要素が組織化されるフレームワークを提供する構造的エレメントとして機能する（例えば、ＩｇＦｃ足場を有する、図１の構造Ａを参照）。ＴＧＦ－βポリペプチドをマスキングするポリペプチド配列及びＴＧＦ－βポリペプチドが、（複合体の異なるポリペプチド上の）トランスに位置する場合、相互特異的及び非相互特異的デュプレックス（または高次の構造）を形成する足場配列は、複合体が開放形態であり、ＴＧＦ－βポリペプチド配列が（マスキング配列と直接接触していない）他の分子と相互作用することができる期間の間でさえも、ＴＧＦ－βポリペプチドと会合した状態でマスキングポリペプチド配列を保つことができる。足場の性質に応じて、それはまた、タンパク質の折り畳み及び二量体化または多量体化（例えば、二量体化配列を通して達成されるホモ二量体化またはヘテロ二量体化）の観点から、高次の構造を提供する組織エレメントとして機能することもできる。足場はまた、特に、免疫グロブリン重鎖定常領域（例えば、ＩｇＦｃ）である場合、血清中での安定性に寄与することができる。好適な足場ポリペプチドは、一部の例では、半減期を延長するポリペプチドである。例えば、一部の例では、好適な足場ポリペプチドは、異なる、非免疫グロブリン配列を有する足場ポリペプチドを有する、対照のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体と比較して、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体のインビボ半減期（例えば、血清中半減期）を、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２５％、少なくとも約５０％、少なくとも約２倍、少なくとも約５倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約２５倍、少なくとも約５０倍、少なくとも約１００倍、または１００倍超増加させる。一例として、一部の例では、ＩｇＦｃポリペプチド配列（例えば、ノブインホール配列対などの相互特異的Ｉｇ配列を含む）は、リンカーによって置き換えられたＩｇＦｃポリペプチド配列（例えば、等しい配列長のＧＧＧＳａａ反復）を有する対照のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体と比較して、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体の安定性及び／またはインビボ半減期（例えば、血清半減期）を増加させる。インビボ半減期の増加は、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２５％、少なくとも約５０％、少なくとも約２倍、少なくとも約２．５倍、少なくとも約５倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約２５倍、少なくとも約５０倍、少なくとも約１００倍、または１００倍超であり得る。ＩｇＦｃポリペプチドがマスキングされたＴＧＦ－β構築物に採用される場合、ＩｇＦｃは、マスキングされたＴＧＦ－β構築物の二量体の自発的な形成を防止する変異を含むことができ（例えば、ＴｉａｎｌｅｉＹｉｎｇｅｔａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２８７（２３），ｐｐ１９３９９－１９４０８（Ｊｕｎｅ１，２０１２）を参照）、加えて、例えば、補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）及び／または抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）を通して、細胞溶解を誘導するＩｇポリペプチドの能力を実質的に低減または排除する変異（例えば、以下で考察されるＬＡＬＡ変異）を含み得る。

マスキングされたＴＧＦ－β構築物の足場ポリペプチド配列が、該足場が他の足場分子と相互作用（特異的に結合）することを可能にする１つ以上の配列を含む場合、マスキングされたＴＧＦ－β構築物は、ホモ二量体複合体（例えば、図１、構造Ｂを参照）またはヘテロ二量体複合体を形成することができる（例えば、図１、構造Ｃ～Ｆを参照）。マスキングされたＴＧＦ－β構築物はまた、足場が他の足場分子と相互作用（特異的に結合）して高次構造を形成することを可能にする１つ以上のａａ配列を含み得る。高次の多量体構造を形成する配列は、高次のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体（例えば、三量体、四量体、五量体など）の形成を可能にする。例として、ＩｇＭＦｃ領域（例えば、配列番号８３）を含む足場ポリペプチドは、五量体（特に、Ｊ鎖配列もまた発現される場合、例えば、配列番号８４）または六量体のマスキングされたＴＧＦ－β構築物もしくは複合体の形成を可能にする。Ｐｅｔｒｕｓｉｃｅｔａｌ．，ＭｅｄＨｙｐｏｔｈｅｓｅｓ．７７（６）：９５９－６１（２０１１）．ホモ及びヘテロの、二量体、三量体、四量体、五量体等の形態のマスキングされたＴＧＦ－β構築物は、マスキングされたＴＧＦ－β複合体と称される。

マスキングされたＴＧＦ－βを１つ以上の他のポリペプチド配列（１つ以上の特異的ＭＯＤまたはＭＯＤのコピーなど）と一緒にすることが望ましい場合、足場ポリペプチド配列は、それらの相手方の相互特異的結合（二量体化）配列と共にヘテロ二量体を形成する傾向がある相互特異的二量体化配列を含んでもよい。相互特異的結合配列は、いくつかの例では、ホモ二量体を形成し得るが、それらの相手側相互特異的結合配列と優先的に二量体化する（より強く結合する）。したがって、特異的ヘテロ二量体は、相互特異的二量体化配列及びその相手側相互特異的結合配列が一対のポリペプチドに組み込まれるときに形成され得る（形成される傾向がある）。例として、相互特異的二量体化配列及びその相手側相互特異的結合配列とが結びついて一対のポリペプチドとなり、選択的にヘテロ二量体を形成する場合、ペプチドの等モル混合物の６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％または９９％超が、ヘテロ二量体形成に関与し、残りのペプチドが単量体またはホモ二量体として存在する。

十分な親和性で相互にまたはそれら自体に特異的に結合する様々なａａ配列は、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体における二量体化配列として利用され得る（例えば、米国特許公開第２００３／０１３８４４０号を参照）。その配列は、比較的コンパクトなサイズ（例えば、約３００、２５０、２２５、２００、１７５、１５０、１２５、１００、７５、または５０ａａ未満など）であり得る。二量体化／多量体化配列としては、免疫グロブリン重鎖定常領域（ＩｇＦｃ）ポリペプチド配列（免疫グロブリンのＣＨ２～ＣＨ３領域を含む配列、例えば、図２Ａ～２Ｈ及び配列番号６８～８３を参照）、Ｆｃノブインホール配列（例えば、配列番号７７及び７８）、コラーゲン反復Ｇｌｙ－Ｘａａ－Ｙａａからなるコラーゲンドメインを含むコレクチンファミリーのポリペプチド（例えば、ＡＣＲＰ３０またはＡＣＲＰ３０様タンパク質）、コイルドコイルドメイン、ロイシンジッパードメイン、Ｆｏｓ／Ｊｕｎ結合対、ならびにＩｇ重鎖領域１（ＣＨ１）及び軽鎖定常領域ＣＬ配列（κまたはλＩｇ軽鎖定常領域配列と対合されたＣＨ１配列などのＣＨ１／ＣＬ対）が挙げられるが、これらに限定されない。

一部の実施形態では、足場ポリペプチド配列は、二量体化または多量体化配列として機能する免疫グロブリン重鎖定常領域（ＣＨ２－ＣＨ３）ポリペプチド配列を含む（例えば、図２Ａ～２Ｈ及び配列番号６８～８３を参照）。実施形態では、Ｉｇポリペプチドは、例えば、ＣＤＣ及び／またはＡＤＣＣの活性化を通して、実質的に細胞溶解を誘導せず、したがって、細胞溶解を誘導するＩｇポリペプチドの能力を実質的に低減または排除する変異を含み得る。一部の例では、Ｆｃ配列は、図２Ａ～２Ｈに示されるＦｃ領域のａａ配列に対して、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％のａａ配列同一性を有する。そのような免疫グロブリン配列は、１つまたは２つの鎖間ジスルフィド結合を形成することによって、マスキングされたＴＧＦ－β複合体のポリペプチドを共有結合することができる。以下で考察されるように、特に、ノブインホールでのポリペプチド対のような一対の相互特異的Ｉｇ配列が用いられる場合、二量体を安定化するために、追加のジスルフィド結合を導入することができる。

一実施形態では、マスキングされたＴＧＦ－β複合体の足場ポリペプチド配列は、図２Ａ（配列番号６８）に示されるＩｇＡＦｃ配列の少なくとも１５０個の連続するａａ（少なくとも１７５、少なくとも２００、少なくとも２２５、少なくとも２５０、少なくとも２７５、少なくとも３００、少なくとも３２５、もしくは少なくとも３５０個の連続するａａ）、または全てのａａに対して、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％のａａ配列同一性を有する配列を含む。一実施形態では、足場ポリペプチド配列は、図２Ｂ（配列番号６９）に示されるＩｇＤＦｃ配列の少なくとも１５０個の連続するａａ（少なくとも１７５、少なくとも２００、少なくとも２２５、少なくとも２５０、少なくとも２７５、少なくとも３００、少なくとも３２５、もしくは少なくとも３５０個の連続するａａ）、または全てのａａに対して、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％のａａ配列同一性を有する配列を含む。一実施形態では、足場ポリペプチド配列は、図２Ｃ（配列番号７０）に示されるＩｇＥＦｃ配列の少なくとも１２５個の連続するａａ（少なくとも１５０、少なくとも１７５、もしくは少なくとも２００個の連続するａａ）、または全てのａａに対して、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％のａａ配列同一性を有する配列を含む。一実施形態では、足場ポリペプチド配列は、図２Ｄ（配列番号７１～７８）に示されるＩｇＧ１Ｆｃ配列などのｗｔ．ＩｇＧＦｃポリペプチド配列の少なくとも１２５個の連続するａａ（少なくとも１５０、少なくとも１７５、もしくは少なくとも２００個の連続するａａ）、または全てのａａに対して、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％のａａ配列同一性を有する配列を含む。一実施形態では、足場ポリペプチド配列は、図２Ｅ（配列番号７９）に示されるＩｇＧ２ポリペプチド配列の少なくとも１２５個の連続するａａ（少なくとも１５０、少なくとも１７５、少なくとも２００、少なくとも２２５、少なくとも２５０、少なくとも２７５、もしくは少なくとも３００個）、または全てのａａに対して、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％のａａ配列同一性を有する配列を含む。一実施形態では、足場ポリペプチド配列は、図２Ｆ（配列番号８０）に示されるＩｇＧ３Ｆｃ配列の少なくとも１２５個の連続するａａ（少なくとも１５０、少なくとも１７５、少なくとも２００、もしくは少なくとも２２５個）、または全てのａａに対して、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％のａａ配列同一性を有する配列を含む。一実施形態では、足場ポリペプチド配列は、図２Ｇ（配列番号８１または８２）に示されるＩｇＧ４Ｆｃ配列の少なくとも１２５個の連続するａａ（少なくとも１５０、少なくとも１７５、少なくとも２００、少なくとも２２５、もしくは少なくとも２５０個）、または全てのａａに対して、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％のａａ配列同一性を有する配列を含む。一実施形態では、足場ポリペプチド配列は、図２Ｈ（配列番号８３）に示されるＩｇＭＦｃポリペプチド配列の少なくとも１２５個の連続するａａ（少なくとも１５０、少なくとも１７５、少なくとも２００、少なくとも２２５、もしくは少なくとも２５０個）、または全てのａａに対して、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％のａａ配列同一性を有する配列を含む。免疫グロブリン足場ポリペプチド配列（例えば、図２Ａ～２Ｈに示される）を含む、マスキングされたＴＧＦ－β複合体の上述のポリペプチドは、それらのヒンジ領域に隣接するシステイン間の１つまたは２つの鎖間ジスルフィド結合の形成によって、一緒に共有結合することができる。

一部の例では、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体に存在する足場ポリペプチドの二量体化配列は、図２Ｄに示されるヒトＩｇＧ１Ｆｃポリペプチドに対して、少なくとも約７０％（例えば、少なくとも約８０％、９０％、９５％、９８％、９９％、または１００％）のａａ配列同一性を有し、アラニンによるＮ２９７の置換（図２Ｄ、配列番号７４に付番されるようなＮ２９７Ａ置換、またはＮ７７）置換を含む。一部の例では、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体内に存在する足場ポリペプチドの二量体化配列は、アスパラギン以外のａａによるＮ２９７（図２Ｄに示されるａａ配列のＮ７７）置換を除いて、図２Ｄに示されるａａ配列（ヒトＩｇＧ１Ｆｃ）を含む。Ｎ２９７での置換は、炭化水素修飾の除去につながり、ｗｔ．タンパク質と比較して、補体成分１ｑ（「Ｃ１ｑ」）への結合が低下した抗体配列をもたらし、したがって、ＣＤＣの低減をもたらす。

一部の例では、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体内に存在する足場ポリペプチドの二量体化配列は、図２Ｄに示されるａａ配列（ヒトＩｇＧ１Ｆｃ）を含み、但し、Ｌ２３４の、ロイシン以外のａａによる置換（図２Ｄに示されるａａ配列のＬ１４）を除く。ＩｇＧの下部ヒンジ領域（例えば、配列番号７１のａａｓ１４～１９に対応するａａｓ２３４－ＬＬＧＧＰＳ－２３９）内のＬ２３４及び他のａａｓは、Ｆｃラムダ受容体（ＦｃλＲ）への結合に関与し、したがって、その位置での変異は、（ｗｔタンパク質と比較して）受容体への結合を低減させる。一部の例では、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体に存在する足場ポリペプチドの二量体化配列は、ロイシン以外のａａによるＬ２３５（図２Ｄに示されるａａ配列のＬ１５）の置換を除いて、図２Ｄに示されるａａ配列（ヒトＩｇＧ１Ｆｃ）を含む。一部の例では、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体に存在する足場ポリペプチドの二量体化配列は、Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ（「ＬＡＬＡ」）置換（図２Ｄに示されるｗｔ．ａａ配列の１４位及び１５位に対応する位置、例えば、配列番号７５を参照）を有する、図２Ｄに示されるａａ配列（例えば、ｗｔ．ヒトＩｇＧ１配列）を含む。

一部の例では、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体に存在する足場ポリペプチドの二量体化配列は、Ｐ３３１（図２Ｄに示されるアミノ酸配列のＰ１１１）のプロリン以外のアミノ酸による置換を含む、図２Ｄに示されるアミノ酸配列（ヒトＩｇＧ１Ｆｃ）を含み、一部の例では、該置換はＰ３３１Ｓ置換である。Ｐ３３１での置換は、Ｎ２９７での置換のように、ｗｔ．タンパク質に対するＣ１ｑへの結合の低減、したがって、ＣＤＣの低減につながる。例えば、Ｄ２７０、Ｋ３２２、及び／またはＰ３２９（図２Ｄの配列番号７１のＤ５０、Ｋ１２２、及びＰ１１９に対応）のアラニンによる置換は、Ｃ１ｑへの結合を低減するために、単独で、またはＰ３３１置換の代わりに利用し得る。一部の例では、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体に存在する足場ポリペプチドの二量体化配列は、Ｌ２３４Ａ及び／またはＬ２３５Ａ置換（図２Ｄに示されるａａ配列のＬ１４及び／またはＬ１５におけるロイシンのＡｌａによる置換）を含むＩｇＧ１Ｆｃポリペプチドである。一部の例では、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体に存在する足場ポリペプチドの二量体化配列は、図２Ｄに示されるａａ配列（ｗｔ．ヒトＩｇＧ１Ｆｃ）を含むが、但し、Ｌ２３４及び／またはＬ２３５（図２Ｄに示されるａａ配列のＬ１４及び／またはＬ１５）におけるロイシン以外のａａによる置換、ならびにＰ３３１（図２Ｄに示されるａａ配列のＰ１１１）におけるプロリン以外のａａによる置換を除く。一部の例では、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体に存在する足場ポリペプチドの二量体化配列は、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、及びＰ３３１Ｓ置換（図２Ｄに示されるａａ配列のａａ位置１４、１５、及び１１１に対応する）を含む、図２Ｄに示される「三重変異」ａａ（配列番号７３）（ヒトＩｇＧ１Ｆｃ）を含む。

マスキングされたＴＧＦ－β複合体の２つのポリペプチド間の非対称性の対合が所望される場合、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体に存在する足場ポリペプチドの二量体化配列は、相互特異的結合配列を含むか、本質的にそれからなるか、またはそれからなる。相互特異的結合配列は、それらの同種ポリペプチド配列（すなわち、相互特異的配列及びその相手側相互特異的配列）、特に免疫グロブリンＦｃ配列の変異型に基づくものと、優先的にヘテロ二量体を形成する。そのような相互特異的ポリペプチド配列には、安定化ジスルフィド結合を伴わないノブインホール（ＫｉＨ）または安定化ジスルフィド結合を有する（ＫｉＨｓ－ｓ）、ＨＡ－ＴＦ、ＺＷ－１、７．８．６０、ＤＤ－ＫＫ、ＥＷ－ＲＶＴ、ＥＷ－ＲＶＴｓ－ｓ、及びＡ１０７配列が含まれる。１つの相互特異的結合対は、ＩｇＧ１のＣＨ３ドメインのインターフェースにおけるＴ３６６Ｙ及びＹ４０７Ｔ変異体対、または他の免疫グロブリンの対応する残基を含む。Ｒｉｄｇｗａｙｅｔａｌ．，ＰｒｏｔｅｉｎＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ９：７，６１７－６２１（１９９６）を参照されたい（置換は、Ｋａｂａｔｅｔａｌ．（１９９１）のＥＵ付番スキームによって示される）。第２の相互特異的結合対は、Ｔ３６６Ｗ置換によるノブの形成、及び相補的Ｆｃ配列上の三重置換Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖによるホールの形成を伴う。Ｘｕｅｔａｌ．，ｍＡｂｓ７：１，２３１－２４２（２０１５）を参照されたい。別の相互特異的結合対は、Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖ置換を有する第１のＦｃポリペプチドと、Ｓ３５４Ｃ、及びＴ３６６Ｗ置換を有する第２のＦｃポリペプチドとを有する（ジスルフィド結合は、Ｙ３４９Ｃ置換とＳ３５４Ｃ置換との間に形成され得る）。ＢｒｉｎｋｍａｎｎａｎｄＫｏｎｔｈｅｒｍａｎｎ，ｍＡｂｓ９：２，１８２－２１２（２０１５）を参照されたい。Ｆｃポリペプチドは、ノブインホール修飾の有無にかかわらず、Ｆｃポリペプチド間のジスルフィド結合（例えば、ヒンジ領域ジスルフィド結合）の形成によって安定化することができる。いくつかの相互特異的ポリペプチド結合配列を表１に要約し、括弧「｛｝」内に示される、図２Ｄに記載されるｗｔ．ＩｇＧ１配列（配列番号７１）に現れるときのａａ位置の付番を相互参照する。

表１の配列の相互特異的対に加えて、配列の相互特異的対は、相互特異的配列のＩｇＧ１ＣＨ３ドメイン内のＩｇＡに由来する４５個の残基、及び相手側相互特異的配列上のＩｇＡＣＨ３内のＩｇＧ１に由来する５７個の残基を有する、「シード（ＳＥＥＤ）」配列を含む。Ｈａｅｔａｌ．，ＦｒｏｎｔｉｅｒｓｉｎＩｍｍｕｎｏｌ．７：１－１６（２０１６）を参照されたい。

一実施形態では、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体に見出される足場配列は、ノブインホール（ＫｉＨ）、安定化ジスルフィドを有するノブインホール（ＫｉＨｓ－ｓ）、ＨＡ－ＴＦ、ＺＷ－１、７．８．６０、ＤＤ－ＫＫ、ＥＷ－ＲＶＴ、ＥＷ－ＲＶＴｓ－ｓ、Ａ１０７、及びシード配列からなる群から選択される、相互特異的結合配列またはその相手側相互特異的結合配列を含む。

一実施形態では、マスキングされたＴＧＦ－β複合体は、Ｔ１４６ＷＫｉＨ配列置換を有するＩｇＧ１足場を含む第１のポリペプチドと、Ｔ１４６Ｗ、Ｌ１４８Ａ、及びＹ１８７ＶＫｉＨ配列置換を有するＩｇＧ１足場を含む第２のポリペプチドとを含み、足場は、配列番号７１のＩｇＧ１の少なくとも１７０、少なくとも１８０、少なくとも１９０、少なくとも２００、少なくとも２１０、少なくとも２２０、または２２７個全ての連続するａａに対して、少なくとも８０％、９０％、９５％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含む。一方または両方の足場ａａ配列は、任意に、Ｋａｂａｔ付番を使用して、Ｌ２３４及びＬ２３５（例えば、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ「ＬＡＬＡ」またはＬ２３４Ｆ／Ｌ２３５Ｅ）、Ｎ２９７（例えば、Ｎ２９７Ａ）、Ｐ３３１（例えば、Ｐ３３１Ｓ）、Ｌ３５１（例えば、Ｌ３５１Ｋ）、Ｔ３６６（例えば、Ｔ３６６Ｓ）、Ｐ３９５（例えば、Ｐ３９５Ｖ）、Ｆ４０５（例えば、Ｆ４０５Ｒ）、Ｙ４０７（例えば、Ｙ４０７Ａ）、ならびにＫ４０９（例えば、Ｋ４０９Ｙ）のうちの１つ以上に置換を含む。これらの置換は、配列番号７１のＩｇＧ１配列中のＬ１４及びＬ１５（例えば、Ｌ１４Ａ／Ｌ１５Ａ「ＬＡＬＡ」またはＬ１４Ｆ／Ｌ１５Ｅ）、Ｎ７７（例えば、Ｎ７７Ａ）、Ｐ１１１（例えば、Ｐ１１１Ｓ）、Ｌ１３１（例えば、Ｌ１３１Ｋ）、Ｔ１４６（例えば、Ｔ１４６Ｓ）、Ｐ１７５（例えば、Ｐ１７５Ｖ）、Ｆ１８５（例えば、Ｆ１８５Ｒ）、Ｙ１８７（例えば、Ｙ１８７Ａ）、及びＫ１８９（例えば、Ｋ１８９Ｙ）に現れる。

一実施形態では、マスキングされたＴＧＦ－β複合体は、Ｔ１４６ＷＫｉＨ配列置換を有するＩｇＧ１足場を含む第１のポリペプチドと、Ｔ１４６Ｓ、Ｌ１４８Ａ、及びＹ１８７ＶＫｉＨ配列置換を有するＩｇＧ１足場を含む第２のポリペプチドとを含み、足場は、配列番号７１のＩｇＧ１の少なくとも１７０、少なくとも１８０、少なくとも１９０、少なくとも２００、少なくとも２１０、少なくとも２２０、または２２７個全ての連続するａａｓに対して、少なくとも８０％、９０％、９５％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含み、足場ａａ配列のうちの０個、一方または両方が、Ｆｃγ受容体との相互作用をブロックすることによって、エフェクター機能を除去する、Ｌ１４及びＬ１５置換（例えば、Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ「ＬＡＬＡ」）、ならびに／またはＮ７７置換（Ｎ２９７、例えば、Ｋａｂａｔ付番におけるＮ２９７ＡもしくはＮ２９７Ｇ）を含む。例えば、図２Ｄ、配列番号７７及び７８を参照されたい。

一実施形態では、マスキングされたＴＧＦ－β複合体の第１及び第２のポリペプチドは、第１の足場配列に、Ｔ１４６Ｗ及びＳ１３４ＣＫｉＨｓ－ｓ置換と、第２の足場配列に、Ｔ１４６Ｓ、Ｌ１４８Ａ、Ｙ１８７Ｖ及びＹ１２９ＣＫｉＨｓ－ｓ置換とを含み、足場は、配列番号７１のＩｇＧ１の少なくとも１７０、少なくとも１８０、少なくとも１９０、少なくとも２００、少なくとも２１０、少なくとも２２０、または２２７個全ての連続するａａｓに対して、少なくとも８０％、９０％、９５％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含み、足場ａａ配列のうちの０個、一方または両方が、Ｆｃγ受容体との相互作用をブロックすることによって、エフェクター機能を除去する、Ｌ１４及びＬ１５置換（例えば、Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ「ＬＡＬＡ」）、ならびに／またはＮ７７置換（Ｎ２９７、例えば、Ｎ２９７ＡもしくはＮ２９７Ｇ）を含む。

一実施形態では、マスキングされたＴＧＦ－β複合体の第１及び第２のポリペプチドは、第１の足場配列に、Ｓ１４４Ｈ及びＦ１８５ＡＨＡ－ＴＦ置換と、第２の足場配列に、Ｙ１２９Ｔ及びＴ１７４ＦＨＡ－ＴＦ置換とを含み、足場は、配列番号７１のＩｇＧ１の少なくとも１７０、少なくとも１８０、少なくとも１９０、少なくとも２００、少なくとも２１０、少なくとも２２０、または２２７個全ての連続するａａｓに対して、少なくとも８０％、９０％、９５％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含み、足場ａａ配列のうちの０個、一方または両方が、Ｆｃγ受容体との相互作用をブロックすることによって、エフェクター機能を除去する、Ｌ１４及びＬ１５置換（例えば、Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ「ＬＡＬＡ」）、ならびに／またはＮ７７置換（Ｎ２９７、例えば、Ｎ２９７ＡもしくはＮ２９７Ｇ）を含む。

一実施形態では、マスキングされたＴＧＦ－β複合体の第１及び第２のポリペプチドは、第１の足場配列に、Ｔ１３０Ｖ、Ｌ１３１Ｙ、Ｆ１８５Ａ、及びＹ１８７ＶＺＷ１置換と、第２の足場配列に、Ｔ１３０Ｖ、Ｔ１４６Ｌ、Ｋ１７２Ｌ、及びＴ１７４ＷＺＷ１置換とを含み、足場は、配列番号７１のＩｇＧ１の少なくとも１７０、少なくとも１８０、少なくとも１９０、少なくとも２００、少なくとも２１０、少なくとも２２０、または２２７個全ての連続するａａｓに対して、少なくとも８０％、９０％、９５％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含み、足場ａａ配列のうちの０個、一方または両方が、Ｆｃγ受容体との相互作用をブロックすることによって、エフェクター機能を除去する、Ｌ１４及びＬ１５置換（例えば、Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ「ＬＡＬＡ」）、ならびに／またはＮ７７置換（Ｎ２９７、例えば、Ｎ２９７ＡもしくはＮ２９７Ｇ）を含む。

一実施形態では、マスキングされたＴＧＦ－β複合体の第１及び第２のポリペプチドは、第１の足場配列に、Ｋ１４０Ｄ、Ｄ１７９Ｍ、及びＹ１８７Ａ７．８．６０置換と、第２の足場配列に、Ｅ１２５Ｒ、Ｑ１２７Ｒ、Ｔ１４６Ｖ、及びＫ１８９Ｖ７．８．６０置換とを含み、足場は、配列番号７１のＩｇＧ１の少なくとも１７０、少なくとも１８０、少なくとも１９０、少なくとも２００、少なくとも２１０、少なくとも２２０、または２２７個全ての連続するａａｓに対して、少なくとも８０％、９０％、９５％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含み、足場ａａ配列のうちの０個、一方または両方が、Ｆｃγ受容体との相互作用をブロックすることによって、エフェクター機能を除去する、Ｌ１４及びＬ１５置換（例えば、Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ「ＬＡＬＡ」）、ならびに／またはＮ７７置換（Ｎ２９７、例えば、Ｎ２９７ＡもしくはＮ２９７Ｇ）を含む。

一実施形態では、マスキングされたＴＧＦ－β複合体の第１及び第２のβポリペプチドは、第１の足場配列に、Ｋ１８９Ｄ及びＫ１７２ＤＤＤ－ＫＫ置換と、第２の足場配列に、Ｄ１７９Ｋ及びＥ１３６ＫＤＤ－ＫＫ置換とを含み、足場は、配列番号７１のＩｇＧ１の少なくとも１７０、少なくとも１８０、少なくとも１９０、少なくとも２００、少なくとも２１０、少なくとも２２０、または２２７個全ての連続するａａｓに対して、少なくとも８０％、９０％、９５％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含み、足場ａａ配列のうちの０個、一方または両方が、Ｆｃγ受容体との相互作用をブロックすることによって、エフェクター機能を除去する、Ｌ１４及びＬ１５置換（例えば、Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ「ＬＡＬＡ」）、ならびに／またはＮ７７置換（Ｎ２９７、例えば、Ｎ２９７ＡもしくはＮ２９７Ｇ）を含む。

一実施形態では、マスキングされたＴＧＦ－β複合体の第１及び第２のポリペプチドは、第１の足場配列に、Ｋ１４０Ｅ及びＫ１８９ＷＥＷ－ＲＶＴ置換と、第２の足場配列に、Ｑ１２７Ｒ、Ｄ１７９Ｖ、及びＦ１８５ＴＥＷ－ＲＶＴ置換とを含み、足場は、配列番号７１のＩｇＧ１の少なくとも１７０、少なくとも１８０、少なくとも１９０、少なくとも２００、少なくとも２１０、少なくとも２２０、または２２７個全ての連続するａａｓに対して、少なくとも８０％、９０％、９５％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含み、足場ａａ配列のうちの０個、一方または両方が、Ｆｃγ受容体との相互作用をブロックすることによって、エフェクター機能を除去する、Ｌ１４及びＬ１５置換（例えば、Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ「ＬＡＬＡ」）、ならびに／またはＮ７７置換（Ｎ２９７、例えば、Ｎ２９７ＡもしくはＮ２９７Ｇ）を含む。

一実施形態では、マスキングされたＴＧＦ－β複合体の第１及び第２のポリペプチドは、第１の足場配列に、Ｋ１４０Ｅ、Ｋ１８９Ｗ、及びＹ１２９ＣＥＷ－ＲＶＴｓ－ｓ置換と、第２の足場配列に、Ｑ１２７Ｒ、Ｄ１７９Ｖ、Ｆ１８５Ｔ、及びＳ１３４ＣＥＷ－ＲＶＴｓ－ｓ置換とを含み、足場は、配列番号７１のＩｇＧ１の少なくとも１７０、少なくとも１８０、少なくとも１９０、少なくとも２００、少なくとも２１０、少なくとも２２０、または２２７個全ての連続するａａｓに対して、少なくとも８０％、９０％、９５％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含み、足場ａａ配列のうちの０個、一方または両方が、Ｆｃγ受容体との相互作用をブロックすることによって、エフェクター機能を除去する、Ｌ１４及びＬ１５置換（例えば、Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ「ＬＡＬＡ」）、ならびに／またはＮ７７置換（Ｎ２９７、例えば、Ｎ２９７ＡもしくはＮ２９７Ｇ）を含む。

一実施形態では、マスキングされたＴＧＦ－β複合体の第１及び第２のポリペプチドは、第１の足場配列に、Ｋ１５０Ｅ及びＫ１８９ＷＡ１０７置換と、第２の足場配列に、Ｅ１３７Ｎ、Ｄ１７９Ｖ、及びＦ１８５ＴＡ１０７置換とを含み、足場は、配列番号７１のＩｇＧ１の少なくとも１７０、少なくとも１８０、少なくとも１９０、少なくとも２００、少なくとも２１０、少なくとも２２０、または２２７個全ての連続するａａｓに対して、少なくとも８０％、９０％、９５％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含み、足場ａａ配列のうちの０個、一方または両方が、Ｆｃγ受容体との相互作用をブロックすることによって、エフェクター機能を除去する、Ｌ１４及びＬ１５置換（例えば、Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ「ＬＡＬＡ」）、ならびに／またはＮ７７置換（Ｎ２９７、例えば、Ｎ２９７ＡもしくはＮ２９７Ｇ）を含む。

足場としての免疫グロブリン重鎖定常領域の使用の代替として、免疫グロブリン軽鎖定常領域を用いて、足場ポリペプチド配列を形成するか、または足場ポリペプチド配列の一部である二量体化配列として重鎖ＣＨ１配列と対にすることができる。一実施形態では、マスキングされたＴＧＦ－β複合体の第１及び第２のポリペプチドは、第１の足場配列に、ＩｇＣＨ１ドメイン（例えば、配列番号８５のポリペプチド）と、第２の足場配列に、Ｉｇκ鎖定常領域配列（配列番号８６）とを含み、足場は各々、それぞれ、配列番号８５及び／または８６の少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、または少なくとも１１０個の連続するａａに対して、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含む。図２Ｊ及び２Ｋを参照されたい。ＣＨ１及びＩｇκ配列は、相互に対する親和性、したがって、それらを二量体化配列として利用して形成される任意のヘテロ二量体の安定性を増加させるように修飾され得る。ＣＨ１－Ｉｇκヘテロ二量体の安定性を増加させる置換としては、Ｃｈｅｎｅｔａｌ．，ＭＡｂｓ，８（４）：７６１－７７４（２０１６）でＭＤ１３組み合わせとして識別されるものが挙げられる。ＭＤ１３では、２つの置換がＣＨ１及びＩｇκ配列の各々に導入される。ＣＨ１配列は、Ｓ６４Ｅ及びＳ６６Ｖ置換（図２Ｊに示される配列番号８５におけるＳ７０Ｅ及びＳ７２Ｖ）を含むように修飾される。Ｉｇκ配列は、Ｓ６９Ｌ及びＴ７１Ｓ置換（図２Ｋに示される配列番号８６のＳ６８Ｌ及びＴ７０Ｓ）を含むように修飾される。

別の実施形態では、マスキングされたＴＧＦ－β複合体の第１及び第２のポリペプチドは、第１の足場配列に、ＩｇＣＨ１ドメイン（例えば、配列番号８５のポリペプチド）と、第２の足場配列に、Ｉｇκ鎖定常領域配列（配列番号８７）とを含み、足場は各々、それぞれ、配列番号８５及び／または８７の少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、または少なくとも１１０個の連続するａａに対して、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含む。図２Ｊ及び２Ｋを参照されたい。

一部の例では、マスキングされたＴＧＦ－β複合体の第１及び第２のポリペプチドの足場ポリペプチド配列は各々、二量体化配列としてロイシンジッパーポリペプチドを含む。ロイシンジッパーポリペプチドは、相互に結合して二量体（例えば、ホモ二量体）を形成する。ロイシンジッパーポリペプチドの非限定的な例としては、例えば、以下のａａ配列のうちのいずれか１つのペプチドが挙げられる：ＲＭＫＱＩＥＤＫＩＥＥＩＬＳＫＩＹＨＩＥＮＥＩＡＲＩＫＫＬＩＧＥＲ（配列番号８８）、ＬＳＳＩＥＫＫＱＥＥＱＴＳＷＬＩＷＩＳＮＥＬＴＬＩＲＮＥＬＡＱＳ（配列番号８９））、ＬＳＳＩＥＫＫＬＥＥＩＴＳＱＬＩＱＩＳＮＥＬＴＬＩＲＮＥＬＡＱ（配列番号９０）、ＬＳＳＩＥＫＫＬＥＥＩＴＳＱＬＩＱＩＲＮＥＬＴＬＩＲＮＥＬＡＱ（配列番号９１）、ＬＳＳＩＥＫＫＬＥＥＩＴＳＱＬＱＱＩＲＮＥＬＴＬＩＲＮＥＬＡＱ（配列番号９２）、ＬＳＳＬＥＫＫＬＥＥＬＴＳＱＬＩＱＬＲＮＥＬＴＬＬＲＮＥＬＡＱ（配列番号９３）、ＩＳＳＬＥＫＫＩＥＥＬＴＳＱＩＱＱＬＲＮＥＩＴＬＬＲＮＥＩＡＱ（配列番号９４）。一部の例では、ロイシンジッパーポリペプチドは、以下のａａ配列を含む：ＬＥＩＥＡＡＦＬＥＲＥＮＴＡＬＥＴＲＶＡＥＬＲＱＲＶＱＲＬＲＮＲＶＳＱＹＲＴＲＹＧＰＬＧＧＧＫ（配列番号９５）。追加のロイシン－ジッパーポリペプチドは、当該技術分野で既知であり、これは、足場としての使用または二量体化配列としての足場への組み込みに好適であり得る。

一部の例では、マスキングされたＴＧＦ－β複合体の第１及び第２のポリペプチドの足場ポリペプチド配列は各々、二量体（例えば、ホモ二量体）を形成するコイルドコイルペプチドを含む。コイルドコイルポリペプチドの非限定的な例としては、例えば、以下のａａ配列のうちのいずれか１つのペプチドが挙げられる：ＬＫＳＶＥＮＲＬＡＶＶＥＮＱＬＫＴＶＩＥＥＬＫＴＶＫＤＬＬＳＮ（配列番号９６）、ＬＡＲＩＥＥＫＬＫＴＩＫＡＱＬＳＥＩＡＳＴＬＮＭＩＲＥＱＬＡＱ（配列番号９７）、ＶＳＲＬＥＥＫＶＫＴＬＫＳＱＶＴＥＬＡＳＴＶＳＬＬＲＥＱＶＡＱ（配列番号９８）、ＩＱＳＥＫＫＩＥＤＩＳＳＬＩＧＱＩＱＳＥＩＴＬＩＲＮＥＩＡＱ（配列番号９９）、ＬＭＳＬＥＫＫＬＥＥＬＴＱＴＬＭＱＬＱＮＥＬＳＭＬＫＮＥＬＡＱ（配列番号１００）。

一部の例では、マスキングされたＴＧＦ－β複合体の第１及び第２のポリペプチドの二量体化（ホモ二量体化）を可能にする足場ポリペプチド配列は各々、ジスルフィド結合を形成することができる少なくとも１つのシステイン残基を有するポリペプチド配列を含む。そのようなポリペプチド配列の例としては、ヒトＦａｓＬポリペプチドＶＤＬＥＧＳＴＳＮＧＲＱＣＡＧＩＲＬ（配列番号１０１）、ＥＤＤＶＴＴＴＥＥＬＡＰＡＬＶＰＰＰＫＧＴＣＡＧＷＭＡ（配列番号１０２）、及びＧＨＤＱＥＴＴＴＱＧＰＧＶＬＬＰＬＰＫＧＡＣＴＧＱＭＡ（配列番号１０３）が挙げられる。

二量体よりも大きい（例えば、三量体、四量体、五量体、六量体などの）マスキングされたＴＧＦ－β複合体の形成を可能にする、多量体化（オリゴマー化）配列として好適なペプチドには、限定されないが、六量体、または五量体（特に、図２Ｉで提供されるものなどのシグナル配列を欠く成熟Ｊ鎖ペプチドと組み合わせた場合）を形成する、ＩｇＭ定常領域（例えば、図２Ｈ参照）が含まれる。三量体を形成するコラーゲンドメインも採用することができる。コラーゲンドメインは、Ｘａａ及びＹａａが、独立して、任意のａａである、１０～４０回反復され得る、配列Ｇｌｙ－Ｘａａ－Ｘａａを含み得る。Ｇｌｙ－Ｘａａ－Ｙａａ配列では、Ｘａａ及びＹａａは、Ｇｌｙ－Ｘａａ－Ｙａａの出現の２５％、５０％、７５％、８０％、９０％若しくは９５％超において、またはＧｌｙ－Ｘａａ－Ｙａａの出現の各々において、それぞれ、頻繁にプロリン及びヒドロキシプロリンである。一部の例では、コラーゲンドメインは、１０～４０回反復され得る、配列Ｇｌｙ－Ｘａａ－Ｐｒｏを含む。コラーゲンオリゴマー化ペプチドは、以下のａａ配列を含むことができる：ＶＴＡＦＳＮＭＤＤＭＬＱＫＡＨＬＶＩＥＧＴＦＩＹＬＲＤＳＴＥＦＦＩＲＶＲＤＧＷＫＫＬＱＬＧＥＬＩＰＩＰＡＤＳＰＰＰＰＡＬＳＳＮＰ（配列番号１０４）。

上記で考察される足場は、ポリペプチドとして記載されているが、本明細書に記載されるマスキングされたＴＧＦ－β構築物及び複合体は、様々な足場を用いてアゴニストとしてインビトロ及びインビボで作用することができる、活性ＴＧＦ－βの送達及び固定化に対する一般的な解決策を提供する。マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体は、足場が担体として作用する融合タンパク質（複数可）の形態であり得るが、足場は、本質的に不活性な担体である必要はなく、生物学的活性がほとんどまたは全くなく、最大でも分子の生物学的半減期を増加させ得る構造支持体として機能する。足場は、本質的にタンパク質／ポリペプチドまたは非タンパク質であり得、足場は、生物学的に活性（例えば、酵素活性を有する）または生物学的に不活性であり得る。

構築物が同じポリペプチドの一部としてマスク及びＴＧＦ－β ａａ配列（シスに配置される、図１のＡ～Ｃ及びＦを参照）を有する場合、酵素活性タンパク質（酵素）及び非酵素活性タンパク質（例えば、コラーゲン、抗体、抗体関連分子（例えば、Ｆａｂ、ナノボディ、ｓｃＦｖ）、タンパク質Ａ、またはクラスＩもしくはクラスＩＩＭＨＣ（例えば、ＨＬＡ）分子の全てもしくは一部などの構造タンパク質）を含むがこれらに限定されない、任意の好適な分子が、足場として機能することができる。足場はまた、有機及び／または無機ポリマー（例えば、核酸、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ペプチド核酸、アプタマー、炭水化物、シロキサンなど）を含むがこれらに限定されない、本質的に非タンパク質性であり得る。足場はまた、リポソーム、小胞、微粒子、及びナノ粒子（例えば、金ナノ粒子）を含むがこれらに限定されない、非ポリマー材料から選択され得る。

マスク及びＴＧＦ－β ａａ配列が別個のポリペプチドの一部としてトランスに配置される場合（図１のＤ及びＥを参照）、マスク及びＴＧＦ－β ａａ配列を、それらの相互作用を可能にする様式で近接させる任意の分子が、足場として機能し得る。相互特異的タンパク質／ポリペプチドに加えて、非タンパク質分子（例えば、互いに特異的に結合する相補的核酸または一対のアプタマー）もまた、マスク及びＴＧＦ－β ａａ配列がトランスに位置する足場として使用され得る。一例として、一対の相補的核酸配列は、例えば、その３’末端にＴＧＦ－β配列を有する第２の核酸とハイブリダイズする、その５’末端にマスキングａａ配列を含む第１の核酸を使用することによって、相互特異的非タンパク質足場として使用され得る。

Ｆ．ＴＧＦ－βポリペプチド
上記で考察されるように、マスキングされたＴＧＦ－β構築物及び複合体は、ＴＧＦ－βポリペプチドに結合するポリペプチド（「マスキングポリペプチド」）によって可逆的にマスキングされた少なくとも１つのＴＧＦ－βポリペプチドを含む。マスキングポリペプチドは、例えば、ＴＧＦ－β受容体ポリペプチド、またはマスキングされたＴＧＦ－β構築物もしくは複合体に存在するＴＧＦ－βポリペプチドを可逆的にマスキングするように機能する抗体であり得、ＴＧＦ－βポリペプチドは、別様に細胞ＴＧＦ受容体のアゴニストとして作用することが可能である。マスキングされたＴＧＦ－β ＭＯＤは、活性ＴＧＦ－βポリペプチド（例えば、ＴＧＦ－βシグナル伝達経路アゴニスト）を提供する。ＴＧＦ－βポリペプチド及びマスキングポリペプチド（例えば、ＴＧＦ－β受容体断片）は、互いに相互作用して、ＴＧＦ－βポリペプチドを可逆的にマスキングし、それによって、ＴＧＦ－βポリペプチドがその細胞受容体と相互作用することを可能にする。加えて、マスキング配列は、非シグナル伝達ＴβＲＩＩＩなどのＴＧＦ－βを捕捉することができる細胞受容体と競合し、それによって、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体が活性ＴＧＦ－βアゴニストを効果的に送達することを可能にする。

さらに、本開示のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体は、上記で考察されるように、１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－βポリペプチド配列及び１つ以上の追加のＭＯＤの両方を含み得るが、所望される場合、本開示のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体は、１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－βポリペプチド配列のみを含み得る。すなわち、１つ以上の追加のＭＯＤは、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体に含まれる必要はない。本開示のマスキングされたＴＧＦ－β構築物及び複合体は、ＴＧＦ－β駆動型Ｔ細胞応答を生じさせる手段として機能することができる。例えば、ＴＧＦ－β自体が、Ｔ細胞のエフェクター細胞機能の発達を阻害し、マクロファージを活性化し、ならびに／または局所免疫及び炎症作用が沈静化した後の組織修復を促進することができる。

マスキングされたＴＧＦ－β構築物及び複合体は、マスキングされているＴＧＦ－βポリペプチドを含むが、ＴＧＦ－βポリペプチドマスク複合体が可逆的であり、ＴＧＦ－βポリペプチドが細胞受容体に利用可能である開放状態と、マスクがＴＧＦ－βポリペプチドに係合する閉鎖状態との間で「呼吸する」ため、ＴＧＦ－βポリペプチドは、依然としてＴβＲアゴニストとして作用することができる。したがって、マスキングポリペプチドは、ＴＧＦ－βポリペプチドに結合し、それが、例えば、別様に遊離ＴＧＦ－βを捕捉することができるユビキタス非シグナル伝達ＴβＲ３分子と緊密な複合体を作ることを防止するように機能する。さらに、ＴＧＦ－βの活性形態が、ＴβＲ３に対してより高い親和性を有する二量体であるため、二量体化を制限する置換（例えば、セリンによる７７位のシステインのＣ７７Ｓ置換）は、その受容体による捕捉を回避するために、ＴＧＦ－β配列に組み込むことができる。

マスキング配列の１つの効果は、ＴβＲに対するＴＧＦ－β１、ＴＧＦ－β２、及びＴＧＦ－β３ポリペプチドの有効な親和性を低減することである。同時に、ＴＧＦ－βポリペプチドに対するマスキングポリペプチドの親和性は、ＴＧＦ－βポリペプチドからより容易に解離し、ＴＧＦ－βポリペプチドを細胞ＴβＲタンパク質により利用可能にすることができるように、改変され得る。すなわち、ＴＧＦ－βポリペプチドに対するマスキングポリペプチドの親和性が低減される場合、可逆的にマスキングされたＴＧＦ－βポリペプチド配列は、開放状態でより多くの時間を費やすであろう。細胞受容体への結合のために利用可能なＴＧＦ－βポリペプチドがある開放状態では、ＴβＲＩＩタンパク質が、一般的に、ＴＧＦ－βと相互作用する異種ＴβＲ１／ＴβＲ２シグナル伝達複合体の最初のペプチドであるため、ＴβＲＩＩに対するＴＧＦ－βポリペプチドの親和性の制御は、活性シグナル伝達複合体へのＴＧＦ－βの進入を効果的に制御する。例えば、ＴＧＦ－β２（またはＴＧＦ－β１、ＴＧＦ－β３の対応する位置）のＬｙｓ２５、Ｉｌｅ９２、及び／またはＬｙｓ９４のうちの１つ以上、２つ以上、または３つ全てでの置換の組み込みは、ＴβＲＩＩポリペプチドに対する親和性を低減する。低減した親和性は、マスキングされたＴＧＦ－βポリペプチド配列シグナル伝達に対する制御を可能にする。

ＴβＲＩを通したマスキングされたＴＧＦ－βポリペプチド配列によるシグナル伝達をブロック／制限すること、及び／またはＴＧＦ－βに対するマスキングＴβＲＩＩポリペプチドの親和性を修飾（例えば、低減）することが望ましい場合、Ｎ末端欠失及び／またはａａ置換をマスキングＴβＲＩＩポリペプチドに組み込むことが可能である。行うことができる修飾には、Ｌ２７、Ｆ３０、Ｄ３２、Ｓ４９、Ｉ５０、Ｔ５１、Ｓ５２、Ｉ５３、Ｅ５５、Ｖ７７、Ｄ１１８、及び／またはＥ１１９のうちの１つ以上でのＮ末端ａａの欠失（例えば、Ｎ末端Δ１４もしくはΔ２５欠失）及び／または置換が含まれる。ＴβＲＩＩとのＴβＲＩ会合の低減及びＴＧＦ－βに対する親和性の低減をもたらす、いくつかの特異的ＴβＲＩＩ修飾には、Ｌ２７Ａ、Ｆ３０Ａ、Ｄ３２Ａ、Ｄ３２Ｎ、Ｓ４９Ａ、Ｉ５０Ａ、Ｔ５１Ａ、Ｓ５２Ａ、Ｓ５２Ｌ、Ｉ５３Ａ、Ｅ５５Ａ、Ｖ７７Ａ、Ｄ１１８Ａ、Ｄ１１８Ｒ、Ｅ１１９Ａ、及び／またはＥ１１９Ｑのうちのいずれか１つ以上が含まれる。

マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体に存在するＴＧＦ－βポリペプチド配列は、一部の例では、ｗｔ．ＴＧＦ－βポリペプチドと比較して、少なくとも１つのクラスのＴＧＦ－β受容体に対してより低い親和性を有するか、または少なくとも１つのクラスのＴＧＦ－β受容体に対して選択的な変異型である、変異型ＴＧＦ－βポリペプチド配列である。

ＴＧＦ－β１ポリペプチド配列、ＴＧＦ－β２ポリペプチド配列、またはＴＧＦ－β３ポリペプチド配列を、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体に組み込むことができるが、様々な要因が、特定のＴＧＦ－βポリペプチドの選択、ならびに採用される特定の配列及びａａ置換に影響を及ぼし得る。例えば、ＴＧＦ－β１及びＴＧＦ－β３ポリペプチドは、ある特定の哺乳動物細胞系（例えば、ＣＨＯ細胞）において発現されると、それらのａａ配列の「クリッピング」を受ける。加えて、二量体化ＴＧＦ－β（例えば、ＴＧＦ－β２）は、ＴβＲ２受容体に対するよりもＴβＲ３（βグリカン受容体）に対して高い親和性を有し、これは、オフターゲット結合、及び非シグナル伝達ＴβＲ３分子の大きなインビボプールへの生物学的に活性なマスキングされたタンパク質の損失をもたらし得る。ＴβＲ３への高親和性オフターゲット結合を最小限に抑えるために、ジスルフィド結合によって継合される二量体ＴＧＦ－β分子につながる残基を置換することが望ましくあり得る。したがって、システイン７７（Ｃ７７）は、システイン以外のａａ（例えば、Ｃ７７Ｓ置換を形成するセリン）によって置換され得る。

好適なＴＧＦ－βポリペプチドは、約７０個のａａｓ～約１２５個のａａｓを有することができ、例えば、好適なＴＧＦ－βポリペプチドは、約７０個のａａｓ～約８０個のａａｓ、約８０個のａａｓ～約９０個のａａｓ、約９０個のａａｓ～約１００個のａａｓ、約１００個のａａｓ～約１０５個のａａｓ、約１０５個のａａｓ～約１１０個のａａｓ、約１１０個のａａｓ～約１１２個のａａｓ、約１１３個のａａｓ～約１２０個のａａｓ、または約１２０個のａａｓ～約１２５個のａａｓの長さを有することができる。好適なＴＧＦ－βポリペプチド配列は、ヒトＴＧＦ－β１ポリペプチド、ヒトＴＧＦ－β２ポリペプチド、またはヒトＴＧＦ－β３ポリペプチド（例えば、そのエクトドメイン部分）の成熟形態の少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、または少なくとも１１０個の連続するａａｓに対して、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のａａ配列同一性を有するａａ配列を含むことができる。

１．ＴＧＦ－β１ポリペプチド
好適なＴＧＦ－β１ポリペプチドは、以下のＴＧＦ－β１アミノ酸配列：ＡＬＤＴＮＹＣＦＳＳＴＥＫＮＣＣＶＲＱＬＹＩＤＦＲＫＤＬＧＷＫＷＩＨＥＰＫＧＹＨＡＮＦＣＬＧＰＣＰＹＩＷＳＬＤＴＱＹＳＫＶＬＡＬＹＮＱＨＮＰＧＡＳＡＡＰＣＣＶＰＱＡＬＥＰＬＰＩＶＹＹＶＧＲＫＰＫＶＥＱＬＳＮＭＩＶＲＳＣＫＣＳ（配列番号１０５、長さにおいて１１２個のａａ）の少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１１０、または１１２個のａａｓに対して、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のａａ配列同一性を有するａａ配列を含むことができ、ＴＧＦ－β１ポリペプチドは、約１１２個のａａｓの長さを有する。ＴＧＦ－β１前タンパク質が、配列番号１０６として図３で提供される。アミノ酸Ｒ２５、Ｃ７７、Ｖ９２、及びＲ９４を、太字及び斜体で示す（図４参照）。

一部の例では、好適なＴＧＦ－β１ポリペプチドは、Ｃ７７Ｓ置換を含む。したがって、一部の例では、好適なＴＧＦ－β１ポリペプチドは、以下のＴＧＦ－β１ａａアミノ酸配列：ＡＬＤＴＮＹＣＦＳＳＴＥＫＮＣＣＶＲＱＬＹＩＤＦＲＫＤＬＧＷＫＷＩＨＥＰＫＧＹＨＡＮＦＣＬＧＰＣＰＹＩＷＳＬＤＴＱＹＳＫＶＬＡＬＹＮＱＨＮＰＧＡＳＡＡＰＳＣＶＰＱＡＬＥＰＬＰＩＶＹＹＶＧＲＫＰＫＶＥＱＬＳＮＭＩＶＲＳＣＫＣＳ（配列番号１０７）の少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１１０、または１１２個のａａｓに対して、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のａａ配列同一性を有するａａ配列を含み、アミノ酸７７は、Ｓｅｒである。位置２５、７７、９２、及び９４を、太字及び斜体で示す。

２．ＴＧＦ－β２ポリペプチド
好適なＴＧＦ－β２ポリペプチドは、以下のＴＧＦ－β２アミノ酸配列：ＡＬＤＡＡＹＣＦＲＮＶＱＤＮＣＣＬＲＰＬＹＩＤＦＫＲＤＬＧＷＫＷＩＨＥＰＫＧＹＮＡＮＦＣＡＧＡＣＰＹＬＷＳＳＤＴＱＨＳＲＶＬＳＬＹＮＴＩＮＰＥＡＳＡＳＰＣＣＶＳＱＤＬＥＰＬＴＩＬＹＹＩＧＫＴＰＫＩＥＱＬＳＮＭＩＶＫＳＣＫＣＳ（配列番号１０８）の少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１１０、または１１２個のａａｓに対して、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のａａ配列同一性を有するａａ配列を含むことができ、ＴＧＦ－β２ポリペプチドは、約１１２個のａａｓの長さを有する。ＴＧＦ－β２前タンパク質が、配列番号１０９として図３で提供される。残基Ｌｙｓ２５、Ｉｌｅ９２、及び／またはＬｙｓ９４を、太字及び斜体で示す。

一部の例では、好適なＴＧＦ－β２ポリペプチドは、Ｃ７７Ｓ置換を含む。したがって、一部の例では、好適なＴＧＦ－β２ポリペプチドは、以下のＴＧＦ－β２アミノ酸配列：ＡＬＤＡＡＹＣＦＲＮＶＱＤＮＣＣＬＲＰＬＹＩＤＦＫＲＤＬＧＷＫＷＩＨＥＰＫＧＹＮＡＮＦＣＡＧＡＣＰＹＬＷＳＳＤＴＱＨＳＲＶＬＳＬＹＮＴＩＮＰＥＡＳＡＳＰＳＣＶＳＱＤＬＥＰＬＴＩＬＹＹＩＧＫＴＰＫＩＥＱＬＳＮＭＩＶＫＳＣＫＣＳ（配列番号１１０）の少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１１０、または１１２個のａａｓに対して、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のａａ配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸７７は、Ｓｅｒである。

３．ＴＧＦ－β３ポリペプチド
好適なＴＧＦ－β３ポリペプチドは、以下のＴＧＦ－β３アミノ酸配列：ＡＬＤＴＮＹＣＦＲＮＬＥＥＮＣＣＶＲＰＬＹＩＤＦＲＱＤＬＧＷＫＷＶＨＥＰＫＧＹＹＡＮＦＣＳＧＰＣＰＹＬＲＳＡＤＴＴＨＳＴＶＬＧＬＹＮＴＬＮＰＥＡＳＡＳＰＣＣＶＰＱＤＬＥＰＬＴＩＬＹＹＶＧＲＴＰＫＶＥＱＬＳＮＭＶＶＫＳＣＫＣＳ（配列番号１１１）の少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１１０、または１１２個のａａｓに対して、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のａａ配列同一性を有するアミノ酸配列を含むことができ、ＴＧＦ－β３ポリペプチドは、約１１２個のａａｓの長さを有する。ＴＧＦ－β３アイソフォーム１プレプロタンパク質が、配列番号１１２として図３で提供される。位置２５、９２、及び９４を太字及び斜体で示す。

一部の例では、好適なＴＧＦ－β３ポリペプチドは、Ｃ７７Ｓ置換を含む。一部の例では、好適なＴＧＦ－β３ポリペプチドは、以下のＴＧＦ－β３アミノ酸配列：ＡＬＤＴＮＹＣＦＲＮＬＥＥＮＣＣＶＲＰＬＹＩＤＦＲＱＤＬＧＷＫＷＶＨＥＰＫＧＹＹＡＮＦＣＳＧＰＣＰＹＬＲＳＡＤＴＴＨＳＴＶＬＧＬＹＮＴＬＮＰＥＡＳＡＳＰＳＣＶＰＱＤＬＥＰＬＴＩＬＹＹＶＧＲＴＰＫＶＥＱＬＳＮＭＶＶＫＳＣＫＣＳ（配列番号１１３）の少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１１０、または１１２個のａａｓに対して、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のａａ配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸７７は、Ｓｅｒである。位置２５、９２、及び９４を、太字及び斜体で示す。

４．追加のＴＧＦ－βポリペプチド配列変動
ＴＧＦ－β分子の二量体化を変化させる配列変異型（例えば、Ｃ７７Ｓなどのシステイン７７置換）に加えて、親和性及び他の特性に影響を及ぼす配列変異型を有するＴＧＦ－β１～３ポリペプチドを、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体に組み込み得る。マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体が、マスキングポリペプチド（例えば、ＴβＲＩＩポリペプチドなどのＴβＲポリペプチド）に対して低減した親和性を有するＴＧＦ－β変異型を含む場合、これらの構成要素は、より容易に解離し、マスキングされたＴＧＦ－βポリペプチドを細胞ＴβＲタンパク質により利用可能にする。ＴβＲＩＩタンパク質は、一般に、ＴＧＦ－βと相互作用するヘテロマーＴβＲシグナル伝達複合体の第１のペプチドであるため、ＴβＲＩＩとの相互作用は、ＴＧＦ－βの活性シグナル伝達複合体へのエントリーを効果的に制御する。したがって、ＴＧＦ－βのＴβＲＩＩに対する親和性を制御する変異型は、マスキングされたＴＧＦ－β構築物及び複合体の活性シグナル伝達複合体へのエントリーを効果的に制御する。

本開示は、（配列変動（複数可）がない以外は同一のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体と比較して）変化した（例えば、減少した）お互いへの親和性を有する、変異型マスキングＴβＲ（例えば、ＴβＲＩＩ）ポリペプチド配列及び／または変異型ＴＧＦ－βポリペプチドを含む、マスキングされたＴＧＦ－β構築物及び複合体を包含し、提供するものである。ＴＧＦ－βポリペプチドとＴβＲ（例えば、ＴβＲＩＩ）ポリペプチドとの間の親和性は、ＭＯＤ及びそれらのｃｏ－ＭＯＤについて上記に記載されるように（ＢＬＩ）を使用して決定され得る。

ａ．追加のＴＧＦ－β２配列変異型
本開示は、マスキングＴβＲ（例えば、ＴβＲＩＩ）ポリペプチド配列と、ｗｔ．または変異型ＴＧＦ－β２ポリペプチドのいずれかとを含む、マスキングされたＴＧＦ－β２構築物及び複合体を含み、かつ提供し、変異型ポリペプチドは、（配列変動がない以外は同一のｗｔ．ＴＧＦ－βポリペプチド配列と比較して）マスキングＴβＲに対する低減した親和性を有する。

本開示は、マスキングＴβＲＩＩ受容体配列と、配列番号１０８の少なくとも１００個の連続するａａに対する８５％超（例えば、９０％超、９５％超、９８％超、または９９％超）の配列同一性を有し、ＴβＲＩＩ受容体配列に対する変異型ＴＧＦ－β２ポリペプチドの親和性を低下させる置換を含む、変異型ＴβＲＩＩポリペプチドとを含む、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体を提供する。

一部の例では、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体は、マスキングＴβＲＩＩポリペプチドと、Ｌｙｓ２５、Ｉｌｅ９２、及び／またはＬｙｓ９４のうちの１つ以上、２つ以上、または３つ全てに置換を含む変異型ＴＧＦ－β（例えば、ＴＧＦ－β２）ポリペプチドとを含む（残基の位置については配列番号１０８、ＴＧＦ－β１及びＴＧＦ－β３における対応する残基については図４を参照）。これらのａａ残基は、ＴβＲＩＩポリペプチドに対するＴＧＦ－β２の親和性に影響を与えることが示されている（Ｃｒｅｓｃｅｎｚｏｅｔａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３５５：４７－６２（２００６）を参照）。マスキングされたＴＧＦ－βポリペプチドは、任意に、ＩＬ－２またはその変異型等の１つ以上の独立して選択されるＭＯＤを含む。一例では、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体は、マスキングＴβＲＩＩポリペプチドと、配列番号１０８の２５位にＬｙｓまたはＡｒｇ以外のａａを有するＴＧＦ－β２ポリペプチドとを含み、任意に、１つ以上の独立して選択されるＭＯＤ（例えば、１つ以上のＩＬ－２ＭＯＤポリペプチドまたはその親和性低減変異型）を含む。一例では、マスキングＴβＲＩＩポリペプチドを有するマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体は、配列番号１０８の９２位にＩｌｅもしくはＶａｌ以外のａａ（または９２位にＩｌｅ、Ｖａｌ、もしくはＬｅｕ以外のａａ）を有するＴＧＦ－β２ポリペプチドを含み得、任意に、１つ以上の独立して選択されるＭＯＤ（例えば、１つ以上のＩＬ－２ＭＯＤポリペプチドまたはその親和性低減変異型）を含む。一例では、マスキングＴβＲＩＩポリペプチドを有するマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体は、配列番号１０８の９４位にＬｙｓまたはＡｒｇ以外のａａを有するＴＧＦ－β２ポリペプチドを含み得、任意に、１つ以上の独立して選択されるＭＯＤ（例えば、１つ以上のＩＬ－２ＭＯＤポリペプチドまたはその親和性低減変異型）を含む。マスキングＴβＲＩＩポリペプチドを有するマスキングＴＧＦ－β構築物または複合体は、Ｌｙｓ２５、Ｉｌｅ９２、及び／またはＬｙｓ９４のうちの１つ以上、２つ以上、または３つ全ての置換を含むＴＧＦ－β２ポリペプチドを含み得、さらに１つ以上の独立して選択されるＭＯＤを含み得る。マスキングＴβＲＩＩポリペプチドを有するマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体は、Ｌｙｓ２５、Ｉｌｅ９２、及び／またはＬｙｓ９４のうちの１つ以上、２つ以上、または３つ全ての置換を含むＴＧＦ－β２ポリペプチドを含み得、さらに１つ以上の独立して選択されるＩＬ－２ＭＯＤまたはその親和性低減変異型を含み得る。

ｂ．追加のＴＧＦ－β１及びＴＧＦ－β３配列変異型
一部の例では、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体は、マスキングＴβＲＩＩポリペプチドと、ＴＧＦ－β２の配列番号１０８内のＬｙｓ２５、Ｉｌｅ９２、及び／またはＬｙｓ９４に対応する１つ以上、２つ以上、または３つ全てのａａ位置での置換を含む、変異型ＴＧＦ－β１またはＴＧＦ－β３ポリペプチドとを含む。ＴＧＦ－β１またはＴＧＦ－β３では、以下のように対応するａａは：Ｌｙｓ２５はＡｒｇ２５であり、Ｉｌｅ９２はＶａｌ９２であり、Ｌｙｓ９４はＡｒｇ９４であり、その各々は保存的置換である。例えば、ＴＧＦ－β１については配列番号１０６及び１０７、及びＴＧＦ－β３については配列番号１１２及び１１３を参照されたい。

上述のように、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体は、任意に、ＩＬ－２またはその変異型などの１つ以上の独立して選択されるＭＯＤを含む。一例では、マスキングＴβＲＩＩポリペプチドを有するマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体は、２５位にＡｒｇまたはＬｙｓ以外のａａを有するＴＧＦ－β１またはβ３ポリペプチドを含み、任意に、１つ以上の独立して選択されるＭＯＤ（例えば、１つ以上のＩＬ－２ＭＯＤポリペプチドまたはその親和性低減変異型）を含む。一例では、マスキングＴβＲＩＩポリペプチドを有するマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体は、９２位にＶａｌもしくはＩｌｅ以外のａａ（または９２位にＩｌｅ、Ｖａｌ、もしくはＬｅｕ以外のａａ）を有するＴＧＦ－β１またはβ３ポリペプチドを含み、任意に、１つ以上の独立して選択されるＭＯＤ（例えば、１つ以上のＩＬ－２ＭＯＤポリペプチドまたはその親和性低減変異型）を含む。別の事例では、マスキングＴβＲＩＩポリペプチドを有するマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体は、ＡｒｇまたはＬｙｓ以外のａａを有するＴＧＦ－β２ポリペプチドを含み、任意に、１つ以上の独立して選択されるＭＯＤ（例えば、１つ以上のＩＬ－２ＭＯＤポリペプチドまたはその親和性低減変異型）を含む。１つの特定の例では、マスキングＴβＲＩＩポリペプチドを有するマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体は、Ａｒｇ２５、Ｖａｌ９２、及び／またはＡｒｇ９４のうちの１つ以上、２つ以上、または３つ全ての置換を含むＴＧＦ－β１またはβ３ポリペプチドを含み、１つ以上の独立して選択されるＭＯＤをさらに含む。別の特定の例では、マスキングＴβＲＩＩポリペプチドを有するマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体は、Ａｒｇ２５、Ｖａｌ９２、及び／またはＡｒｇ９４のうちの１つ以上、２つ以上、または３つ全ての置換を含むＴＧＦ－β１またはβ３ポリペプチドを含み、１つ以上の独立して選択されるＩＬ－２ＭＯＤまたはその親和性低減変異型をさらに含む。

Ｇ．ＴＧＦ－β受容体ポリペプチド、及びＴＧＦ－βに結合しマスキングする他のポリペプチド
上述のＴＧＦ－βポリペプチドまたはポリペプチド複合体のうちのいずれかでは、ＴＧＦ－βポリペプチドに結合し、それをマスキングするポリペプチド（「マスキングポリペプチド」）は、ＴβＲＩ、ＴβＲＩＩ、ＴβＲＩＩＩ、及び抗ＴＧＦ－β抗体、またはそれらの断片（例えば、Ｆａｂ、一本鎖抗体など）を含む、様々な形態をとることができる。

１．ＴＧＦ－β受容体ポリペプチド
マスキングされたＴＧＦ－β構築物及び複合体におけるＴＧＦ－βのマスキングは、ＴＧＦ－βポリペプチド（例えば、ＴＧＦ－β１、ＴＧＦ－β２、またはＴＧＦ－β３）に結合するのに十分なポリペプチド配列を含むＴＧＦ－β受容体断片（例えば、ＴβＲＩ、ＴβＲＩＩ、またはＴβＲＩＩＩのエクトドメイン配列）を利用することによって達成し得る。一実施形態では、マスキング配列は、ＴβＲＩ、ＴβＲＩＩ、またはＴβＲＩＩＩエクトドメインの全部または一部を含む。

ａ．ＴＧＦ－β受容体Ｉ（ＴβＲＩ）
一実施形態では、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体内のＴＧＦ－βをマスキングするポリペプチド配列は、ＴβＲＩ（例えば、アイソフォーム１、配列番号１１４）に由来し得る、ＴβＲＩエクトドメイン（ａａｓ３４～１２６）の全てまたは一部を含み得る。一部の例では、ＴＧＦ－βをマスキングするための好適なＴβＲＩポリペプチドは、以下のＴβＲＩエクトドメインａａ配列の少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、または１０３個のａａｓに対して少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のａａ配列同一性を有するアミノ酸配列を含む：ＬＱＣＦＣＨＬＣＴＫＤＮＦＴＣＶＴＤＧＬＣＦＶＳＶＴＥＴＴＤＫＶＩＨＮＳＭＣＩＡＥＩＤＬＩＰＲＤＲＰＦＶＣＡＰＳＳＫＴＧＳＶＴＴＴＹＣＣＮＱＤＨＣＮＫＩＥＬＰＴＴＶＫＳＳＰＧＬＧＰＶＥＬ（配列番号１１５）。

ｂ．ＴＧＦ－β受容体ＩＩ（ＴβＲＩＩ）
実施形態では、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体中のＴＧＦ－βをマスキングするポリペプチド配列は、ＴβＲＩＩ（例えば、アイソフォームＡの配列番号１１６）に由来してもよく、ＴβＲＩＩエクトドメイン配列（ａａ２４～１７７）の全部または一部を含み得る。一実施形態では、ＴＧＦ－βをマスキングするための好適なＴβＲＩＩアイソフォームＡのポリペプチドは、以下のＴβＲＩＩアイソフォームＡエクトドメインａａ配列の少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１１０、少なくとも１２０、少なくと１３０、少なくとも１４０、少なくとも１５０、または１５４個のａａｓに対して、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のａａ配列同一性を有するアミノ酸配列を含む：ＩＰＰＨＶＱＫＳＤＶＥＭＥＡＱＫＤＥＩＩＣＰＳＣＮＲＴＡＨＰＬＲＨＩＮＮＤＭＩＶＴＤＮＮＧＡＶＫＦＰＱＬＣＫＦＣＤＶＲＦＳＴＣＤＮＱＫＳＣＭＳＮＣＳＩＴＳＩＣＥＫＰＱＥＶＣＶＡＶＷＲＫＮＤＥＮＩＴＬＥＴＶＣＨＤＰＫＬＰＹＨＤＦＩＬＥＤＡＡＳＰＫＣＩＭＫＥＫＫＫＰＧＥＴＦＦＭＣＳＣＳＳＤＥＣＮＤＮＩＩＦＳＥＥ（配列番号１１７）。Ｂアイソフォーム中のＤ１１８に対応するアスパラギン酸残基の位置を、太字、下線、及び斜体で示す。

一実施形態では、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体中のＴＧＦ－βをマスキングするポリペプチド配列は、ＴβＲＩＩアイソフォームＢ（配列番号１１８）に由来し得、ＴβＲＩＩエクトドメイン配列（ａａ２４～１６６）の全部または一部を含み得る。一実施形態では、ＴＧＦ－βをマスキングするための好適なＴβＲＩＩアイソフォームＢのポリペプチドは、以下のＴβＲＩＩアイソフォームＢエクトドメインのａａ配列の少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、または１０３個のａａｓに対して、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のａａ配列同一性を有するアミノ酸配列を含む：ＩＰＰＨＶＱＫＳＶＮＮＤＭＩＶＴＤＮＮＧＡＶＫＦＰＱＬＣＫＦＣＤＶＲＦＳＴＣＤＮＱＫＳＣＭＳＮＣＳＩＴＳＩＣＥＫＰＱＥＶＣＶＡＶＷＲＫＮＤＥＮＩＴＬＥＴＶＣＨＤＰＫＬＰＹＨＤＦＩＬＥＤＡＡＳＰＫＣＩＭＫＥＫＫＫＰＧＥＴＦＦＭＣＳＣＳＳＤＥＣＮＤＮＩＩＦＳＥＥＹＮＴＳＮＰＤＬＬＬＶＩＦＱ（配列番号１１９）。以下で考察されるように、Ｆ３０、Ｄ３２、Ｓ５２、Ｅ５５、またはＤ１１８のうちのいずれか１つ以上（斜体及び太字）は、それらの位置で天然におけるａａ以外のアミノ酸（例えば、アラニン）によって置換され得る。ＴＧＦ－βをマスキングするポリペプチド配列は、Ｄ１１８ＡまたはＤ１１８Ｒ置換を有する配列番号１１９のポリペプチドを含み得る。ＴＧＦ－βをマスキングする配列は、Ｄ１１８ＡまたはＤ１１８Ｒ置換、ならびにＦ３０Ａ、Ｄ３２Ｎ、Ｓ５２Ｌ及び／またはＥ５５Ａ置換のうちの１つ以上を有する配列番号１１９のペプチドを含み得る。

ＴβＲＩＩのエクトドメインは、マスキングポリペプチドとして利用され得るが、そのタンパク質の領域は、荷電性パッチ及び疎水性のパッチを有し、それらのパッチが好ましくないｐＩをもたらして、ポリペプチドを発現する細胞に対して毒性であり得る。加えて、ＴβＲＩＩエクトドメインを活性ＴＧＦ－βポリペプチドと組み合わせることは、細胞表面ＴβＲＩと組み合わされ、そのシグナル伝達受容体の活性化（例えば、Ｓｍａｄ経路を通したシグナル伝達）を引き起こし得る複合体をもたらし得る。ＴβＲＩの会合に関与する配列を除去または改変して、ＴＧＦ－βをマスキングするために使用されるＴβＲＩＩエクトドメイン配列を修飾することによって、マスキングされたＴＧＦ－βによる、自らの細胞表面ヘテロ二量体ＴβＲＩ／ＴβＲＩＩ複合体を介する以外の、細胞内での意図しない刺激を回避することができる。またＴβＲＩＩの修飾により、ＴＧＦ－β（例えば、ＴＧＦ－β３）に対するＴβＲＩＩの親和性を変化させる（例えば、低下させる）ことができ、それによって、ＴＧＦ－βの脱マスキングの制御を可能にし、シグナル分子としてのＴＧＦ－βの利用可能性を高める。ＴＧＦ－β（例えば、ＴＧＦ－β３）に対して最も高い親和性を有するＴβＲ（例えば、ＴβＲＩＩ）ペプチドを含む、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体は、ＴＧＦ－β配列を最も強固にマスキングし、同じ効果を達成するためにより高い用量を必要とする。対照的に、ＴβＲＩＩにおける親和性を低下させるａａ置換は、ＴＧＦ－βポリペプチドを脱マスキングし、低用量で生物学的に有効である。例えば、実施例４を参照されたい。

したがって、ＴβＲＩを介したマスキングされたＴＧＦ－βポリペプチドによるシグナル伝達のブロック／制限、及び／またはＴＧＦ－βに対するマスキングＴβＲＩＩポリペプチドの親和性の修飾（例えば、低減）が望ましい場合、ＴβＲＩＩへの多くの改変を、ＴβＲＩＩポリペプチド配列に対して組み込み得る。行うことができる修飾には、上述の最大２５個のＮ末端アミノ酸の欠失（例えば、１４ａａ欠失（Δ１４）または２５ａａ欠失（Δ２５）などの長さが１～２５個のａａ）、ならびに／またはＬ２７、Ｆ３０、Ｄ３２、Ｓ４９、１５０、Ｔ５１、Ｓ５２、Ｉ５３、Ｅ５５、Ｖ７７、Ｄ１１８、及び／もしくはＥ１１９のうちの１つ以上での置換が含まれる。マスキングＴβＲＩＩとのＴβＲＩ会合の低減及びＴＧＦ－βに対する親和性の低減／変化をもたらすマスキングＴβＲＩＩ配列におけるいくつかの特異的修飾には、配列番号１１９に基づく、Ｌ２７Ａ、Ｆ３０Ａ、Ｄ３２Ａ、Ｄ３２Ｎ、Ｓ４９Ａ、Ｉ５０Ａ、Ｔ５１Ａ、Ｓ５２Ａ、Ｓ５２Ｌ、Ｉ５３Ａ、Ｅ５５Ａ、Ｖ７７Ａ、Ｄ１１８Ａ、Ｄ１１８Ｒ、Ｅ１１９Ａ、及び／またはＥ１１９Ｑのうちのいずれか１つ以上が含まれる。例えば、Ｊ．Ｇｒｏｐｐｅｅｔａｌ．ＭｏｌＣｅｌｌ２９，１５７－１６８，（２００８）及びＤｅＣｒｅｓｃｅｎｚｏｅｔａｌ．ＪＭＢ３５５，４７－６２（２００６）を参照されたい。これらの置換がＴＧＦ－β３－ＴβＲＩＩ及びＴβＲＩ－ＴβＲＩＩ複合体に及ぼす影響については、図９を参照されたい。Ｎ末端Δ２５の欠失及び／またはＦ２４での置換（例えば、Ｆ２４Ａの置換）を含む、ＴβＲＩＩの修飾は、古典的ＳＭＡＤシグナル伝達経路を通じたシグナルを実質的にまたは完全にブロックする。一態様では、成熟型ＴβＲＩＩＢアイソフォーム（配列番号１１９）の１１８位（Ｄ１１８）のアスパラギン酸は、ＡｌａなどのＡｓｐまたはＧｌｕ以外のアミノ酸によって置換され「Ｄ１１８Ａ」置換が生じるか、またはＡｒｇによるＤ１１８Ｒ置換が生じる。Ｄ１１８に対応するＡｓｐ残基が、配列番号１１７～１２３に（図５Ｂに太字及び下線付きで）示される。長さが１～２５ａａのＮ末端欠失（例えば、Δ２５の欠失）及び／またはＦ２４での置換（例えば、Ｆ２４Ａの置換）を、Ｄ１１８置換（例えば、Ｄ１１８ＡまたはＤ１１８Ｒ）と組み合わせ得る。また、長さが１～２５ａａのＮ末端欠失（例えば、Δ２５の欠失）及び／またはＦ２４での置換（例えば、Ｆ２４Ａの置換）を、Ｌ２７、Ｆ３０、Ｄ３２、Ｓ４９、１５０、Ｔ５１、Ｓ５２、Ｉ５３、Ｅ５５、Ｖ７７、Ｄ１１８、及び／またはＥ１１９置換のうちのいずれかでの置換（例えば、Ｄ１１８Ａ）、及び特に、上記の配列番号１１９のそれらの位置について列挙されている特定の置換、のうちのいずれかと組み合わせて、親和性を改変し得る。

ＴβＲＩＩポリペプチドのＮ末端の欠失はまた、ＴβＲＩとの相互作用の損失をもたらし得、ＴβＲＩＩポリペプチドを含むマスキングされたＴＧＦ－β構築物及び複合体が、ＴβＲＩシグナル伝達に関与し活性化する構成的活性複合体として作用することを防止し得る。ＴβＲＩＩポリペプチドの１４ａａ欠失（Δ１４）は、タンパク質とＴβＲＩとの相互作用を実質的に低減し、ＴβＲＩＩのΔ２５ａａ欠失は、ＴβＲＩとの相互作用を完全にブロックすると考えられる。Ｎ末端の欠失はまた、タンパク質のｐＩを実質的に変化させ、Δ１４ＴβＲＩＩエクトドメイン変異体は、約４．５～５．０（例えば、約４．７４）のｐＩを示す。したがって、ＴＧＦ－β構築物または複合体は、１４～２５ａａ（例えば、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、または２５ａａ）などのＮ末端欠失を有するＴβＲＩＩエクトドメインポリペプチド（例えば、配列番号１１７または１１８のポリペプチド）を含み得る。マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体中のＴＧＦ－βポリペプチドをマスキングするために利用され得る、ＴβＲＩとの相互作用を制限するものを含む修飾エクトドメイン配列を、以下の段落に記載する。

一実施形態では、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体中のＴＧＦ－βをマスキングする配列は、以下のＴβＲＩＩアイソフォームＢエクトドメイン配列の少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、または１０３のａａｓに対して、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のａａ配列同一性を有するアミノ酸配列を含む：ＩＰＰＨＶＱＫＳＶＮＮＤＭＩＶＴＤＮＮＧＡＶＫＦＰＱＬＣＫＦＣＤＶＲＦＳＴＣＤＮＱＫＳＣＭＳＮＣＳＩＴＳＩＣＥＫＰＱＥＶＣＶＡＶＷＲＫＮＤＥＮＩＴＬＥＴＶＣＨＤＰＫＬＰＹＨＤＦＩＬＥＤＡＡＳＰＫＣＩＭＫＥＫＫＫＰＧＥＴＦＦＭＣＳＣＳＳＤＥＣＮＤＮＩＩＦＳＥＥ（配列番号１２０）。Ｆ３０、Ｄ３２、Ｓ５２、Ｅ５５、またはＤ１１８のうちのいずれか１つ以上（斜体及び太字）は、それらの位置で天然に存在するａａ以外のアミノ酸（例えば、アラニン）によって置換され得る。一実施形態では、ＴＧＦ－βをマスキングする配列は、Ｄ１１８Ａ置換を有する配列番号１２０のペプチドを含む。一実施形態では、ＴＧＦ－βをマスキングする配列は、Ｄ１１８Ａ置換と、Ｆ３０Ａ、Ｄ３２Ｎ、Ｓ５２Ｌ、及び／またはＥ５５Ａ置換のうちの１つ以上とを有する配列番号１２０のポリペプチドを含む。

ＴβＲＩと相互作用するマスキングされたＴＧＦ－β／ＴβＲＩＩ複合体に起因する望ましくない細胞内のシグナル伝達をブロックする、ＴβＲＩＩのＮ末端欠失、例えば、１４～２５ａａ（例えば、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、または２５ａａ）の組み合わせは、Ｆ３０、Ｄ３２、Ｓ５２、Ｅ５５、及び／またはＤ１１８のいずれか１つ以上の位置でのＴβＲＩＩエクトドメイン置換を含む、他のＴβＲＩＩエクトドメイン置換との組み合わせとし得る。欠失及び置換の組み合わせは、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体が、細胞の膜結合型ＴβＲＩ及びＴβＲＩＩ受容体を介する以外の細胞シグナル伝達を引き起こさないことを確実にする。

一実施形態では、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体中のＴＧＦ－βをマスキングする配列は、以下のＴβＲＩＩアイソフォームＢエクトドメイン配列の少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、または１０３のａａｓに対して、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のａａ配列同一性を有するアミノ酸配列を含む：ａａｓ１～１４（Δ１４）が削除された、ＴＤＮＮＧＡＶＫＦＰＱＬＣＫＦＣＤＶＲＦＳＴＣＤＮＱＫＳＣＭＳＮＣＳＩＴＳＩＣＥＫＰＱＥＶＣＶＡＶＷＲＫＮＤＥＮＩＴＬＥＴＶＣＨＤＰＫＬＰＹＨＤＦＩＬＥＤＡＡＳＰＫＣＩＭＫＥＫＫＫＰＧＥＴＦＦＭＣＳＣＳＳＤＥＣＮＤＮＩＩＦＳＥＥ（配列番号１２１）。Ｆ３０、Ｄ３２、Ｓ５２、Ｅ５５、またはＤ１１８のうちのいずれか１つ以上（斜体及び太字）は、それらの位置で天然に存在するａａ以外のアミノ酸（例えば、アラニン）によって置換され得る。一実施形態では、ＴＧＦ－βをマスキングする配列は、Ｄ１１８Ａ置換を有する配列番号１２０のペプチドを含む。一実施形態では、ＴＧＦ－βをマスキングする配列は、Ｄ１１８Ａ置換と、Ｆ３０Ａ、Ｄ３２Ｎ、Ｓ５２Ｌ、及び／またはＥ５５Ａ置換のうちの１つ以上とを有する、配列番号１２１のポリペプチドを含む。

一実施形態では、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体中のＴＧＦ－βをマスキングする配列は、ａａ１～２５（Δ２５）が欠失する配列（配列番号１２２）の少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、または１０３ａａに対して、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のａａ配列同一性を有する配列を含む：ａａｓ１～２５（Δ２５）が削除された、ＱＬＣＫＦＣＤＶＲＦＳＴＣＤＮＱＫＳＣＭＳＮＣＳＩＴＳＩＣＥＫＰＱＥＶＣＶＡＶＷＲＫＮＤＥＮＩＴＬＥＴＶＣＨＤＰＫＬＰＹＨＤＦＩＬＥＤＡＡＳＰＫＣＩＭＫＥＫＫＫＰＧＥＴＦＦＭＣＳＣＳＳＤＥＣＮＤＮＩＩＦＳＥＥ（配列番号１２２）。Ｆ３０、Ｄ３２、Ｓ５２、Ｅ５５、またはＤ１１８のうちのいずれか１つ以上（斜体及び太字）は、それらの位置で天然に存在するａａ以外のアミノ酸（例えば、アラニン）によって置換され得る。一実施形態では、ＴＧＦ－βをマスキングする配列は、Ｄ１１８Ａ置換を有する配列番号１２２のポリペプチドを含む（図５Ｂの配列番号１２３として示す）。一実施形態では、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体中のＴＧＦ－βをマスキングする配列は、Ｄ１１８Ａ置換と、Ｆ３０Ａ、Ｄ３２Ｎ、Ｓ５２Ｌ、及び／またはＥ５５Ａ置換のうちの１つ以上とを有する、配列番号１２２のペプチドを含む。一実施形態では、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体中のＴＧＦ－βをマスキングする配列は、Ｄ１１８Ａ及びＦ３０Ａ置換を有する配列番号１２２のペプチドを含む（図５Ｂを参照されたい）。一実施形態では、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体中のＴＧＦ－βをマスキングする配列は、Ｄ１１８Ａ及びＤ３２Ｎ置換を有する配列番号１２２のペプチドを含む（図５Ｂを参照されたい）。一実施形態では、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体中のＴＧＦ－βをマスキングする配列は、Ｄ１１８Ａ及びＳ５２Ｌ置換を有する配列番号１２２のペプチドを含む（図５Ｂを参照されたい）。一実施形態では、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体中のＴＧＦ－βをマスキングする配列は、Ｄ１１８Ａ及びＥ５５Ａを有する配列番号１２２のペプチドを含む（図５Ｂを参照されたい）。

ｃ．ＴＧＦ－β受容体ＩＩＩ（ＴβＲＩＩＩ）
一実施形態では、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体中のＴＧＦ－βをマスキングするポリペプチド配列は、ＴβＲＩＩＩ（例えば、アイソフォームＡ、配列番号１２４及びアイソフォームＢ、１２５）に由来し得、ＴβＲＩＩＩエクトドメイン（Ａアイソフォームのａａｓ２７～７８７またはＢアイソフォームの２７～７８６）の全てまたは一部を含み得る。一部の例では、ＴＧＦ－βをマスキングするのに好適なＴβＲＩＩＩポリペプチドは、ＴβＲＩＩＩＡアイソフォームまたはＢアイソフォームのエクトドメイン配列（例えば、配列番号１２４または配列番号１２５として、図５Ｃで提供される）の少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、または１２０のａａｓに対して、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のａａ配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

２．抗体
ＴＧＦ－β受容体ポリペプチド（例えば、エクトドメイン配列）は、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体中のＴＧＦ－βポリペプチドに結合し、マスキングするように機能することもできるが、ＴＧＦ－β配列に結合する他のポリペプチド配列（タンパク質配列）もまた、マスキングポリペプチドとして用いることができる。ＴＧＦ－βをマスキングするために使用することができる好適なポリペプチドまたはタンパク質配列としては、ＴＧＦ－βに対する親和性を有する抗体（例えば、ＴＧＦ－β１、ＴＧＦ－β２、またはＴＧＦ－β３のうちの１つ以上に特異的な抗体）、またはそれらの断片、ＴＧＦ－βポリペプチドに対する親和性を有するナノボディ、及び特に一本鎖抗ＴＧＦ－β抗体（例えば、それらのいずれもヒト化し得る）が挙げられる。ＴＧＦ－βに結合し中和する、ｓｃＦＶ抗体を含むいくつかの抗体が報告されている。例えば、米国特許第９，０９０，６８５号を参照されたい。本開示に記載される本発明の実施形態及び／または態様を考慮すると、ＴＧＦ－βポリペプチドをマスキングするために使用されるＴβＲ（例えば、ＴβＲＩＩ）配列は、ＴＧＦ－βポリペプチドに対する親和性を有するマスキング抗体配列（例えば、ｓｃＦＶまたはナノボディ）で置き換えられ得る。例えば、ＴＧＦ－β受容体配列がＴＧＦ－βポリペプチドをマスキングするために使用される、図１のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体の各々において、受容体ポリペプチドは、ＴＧＦ－βポリペプチドに対する親和性を有するマスキング抗体ポリペプチド（例えば、ｓｃＦＶまたはナノボディ）で置き換えられ得る。

抗体（例えば、一本鎖抗体）をマスキングポリペプチドとして使用する潜在的な利点の１つは、それをマスキングされるＴＧＦ－βポリペプチド（複数可）のアイソフォームに限定する能力である。例として、ＴＧＦ－β１に対するメテリムマブ（ＣＡＴ１９２）に基づく一本鎖抗体配列（例えば、Ｌｏｒｄｅｔａｌ．，ｍＡｂｓ１０（３）：４４４－４５２（２０１８））を使用して、ＴＧＦ－β構築物または複合体中に存在するときに、そのＴＧＦ－βアイソフォームをマスキングすることができる。別の実施形態では、ＴＧＦ－β２に特異的な一本鎖抗体配列を使用して、ＴＧＦ－β構築物または複合体中に存在するとき、そのＴＧＦ－βアイソフォームをマスキングする。別の実施形態では、ＴＧＦ－β３に特異的な一本鎖抗体配列を使用して、ＴＧＦ－β構築物または複合体中に存在するとき、そのＴＧＦ－βアイソフォームをマスキングする。また、一本鎖抗体は、ＴＧＦ－βアイソフォームの組合せ（例えば、ＴＧＦ－β１＆ＴＧＦ－β２、ＴＧＦ－β１＆ＴＧＦ－β３、及びＴＧＦ－β２＆ＴＧＦ－β３からなる群から選択される、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体に現れるエクトドメイン配列）に対して特異的であり得る。一本鎖抗体はまた、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体に存在するＴＧＦ－β１、ＴＧＦ－β２、及びＴＧＦ－β３エクトドメイン配列に対して凡そ特異的であり得る。例えば、ＷＯ２０１４／１６４７０９を参照されたい。ＴＧＦ－βアイソフォームに対する所望の特異性及び親和性を有する抗体及び一本鎖抗体は、標的ＴＧＦ－βポリペプチド配列に対する親和性を有する抗体の可変領域配列に対するハイブリドーマ及び／または修飾（例えば、組み合わせ修飾）をスクリーニングすることを含む、様々な方法によって調製することができる。

一実施形態では、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体は、ＴＧＦ－β配列（例えば、ＴＧＦ－β３配列）をマスキングするための一本鎖抗体を含む。そのような一実施形態では、一本鎖アミノ酸配列は、Ｃ７７Ｓ置換（配列番号１１２参照）を含む配列番号１１１に示されるＴＧＦ－β３に特異的である。

Ｈ．リンカー
上述のように、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体は、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体の任意の２つのエレメントの間に介在するリンカーペプチド／ポリペプチド配列を含むことができる。用語「リンカー」とは言っても、例えば、タンパク質分解に対する保護として、以下のリンカーと同様の配列が、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体のポリペプチドのＮ末端及び／またはＣ末端に配置される場合もある。

好適なリンカー（「スペーサー」とも称される）は、容易に選択することができ、１ａａ～２５ａａ、３ａａ～２０ａａ、２ａａ～１５ａａ、３ａａ～１２ａａ、４ａａ～１０ａａ、５ａａ～９ａａ、６ａａ～８ａａ、または７ａａ～８ａａなどのいくつかの好適な長さのいずれかであり得る。好適なリンカーは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、または２５ａａの長さであり得る。好適なリンカーは、２５～３５ａａの長さであり得る。好適なリンカーは、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、または３５ａａの長さであり得る。好適なリンカーはまた、３５～４５ａａの長さであり得る。好適なリンカーは、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、または４５ａａの長さであり得る。好適なリンカーは、４５～５０ａａの長さであり得る。好適なリンカーは、４５、４６、４７、４８、４９、または５０ａａの長さであり得る。

例示的なリンカーには、グリシンを含むもの、または約２～約５０個（例えば、２～４、４～７、７～１０、１０～２０、２０～３５、または３５～５０個）の連続するグリシン残基のポリグリシン含有配列、グリシン－セリンポリマー（例えば、（ＧＳ）_ｎ、（ＧＳＧＧＳ）_ｎ（配列番号１２６）、及び（ＧＧＧＳ）_ｎ（配列番号１２７）を含み、ｎは、少なくとも１つの整数（例えば、１～１０、１０～２０、または２０～３０）である）、グリシン－アラニンポリマー、またはアラニン－セリンポリマー（例えば、１～１０、１０～２０、または２０～３０ａａの長さを有する）、ならびに当該技術分野で既知の他の可塑性リンカーが挙げられる。グリシンポリマーを使用することもグリシン－セリンポリマーを使用することもでき、Ｇｌｙ及びＳｅｒの両方は比較的構造不定であるため、成分間の中性のテザーとして機能することができる。グリシンポリマーを使用することができ、グリシンは、アラニンよりも有意にファイ－プサイ空間を認識評価し、長い側鎖を有する残基よりも大幅に制限が少なくなる（Ｓｃｈｅｒａｇａ，Ｒｅｖ．ＣｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌＣｈｅｍ．１１１７３－１４２（１９９２）を参照されたい）。例示的なリンカーは、ＧＧＳＧ（配列番号１２８）、ＧＧＳＧＧ（配列番号１２９）、ＧＳＧＳＧ（配列番号１３０）、ＧＳＧＧＧ（配列番号１３１）、ＧＧＧＳＧ（配列番号１３２）、ＧＳＳＳＧ（配列番号１３３）などを含むが、これらに限定されない、アミノ酸配列を含み得る。例示的なリンカーは、例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０回繰り返され得るＧＧＳＧ（配列番号１３４）を含むことができる。一部の例では、リンカーは、２回、３回、または４回繰り返され得るアミノ酸配列（ＧＳＳＳＳ）（配列番号１３５）を含む。一部の例では、リンカーは、４回または５回繰り返されるアミノ酸配列（ＧＳＳＳＳ）（配列番号１３５）を含む。例示的なリンカーとしては、例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０回繰り返され得る（ＧＧＧＧＳ）（配列番号１３６）が挙げられる。一部の例では、リンカーは、１回または２回繰り返されるアミノ酸配列（ＧＧＧＧＳ）（配列番号１３６）を含む。一部の例では、リンカーは、３回または４回繰り返されるアミノ酸配列（ＧＧＧＧＳ）（配列番号１３６）を含む。一部の例では、リンカーは、５、６または７回繰り返されるアミノ酸配列（ＧＧＧＧＳ）（配列番号１３６）を含む。一部の例では、リンカーは、８、９または１０回繰り返されるアミノ酸配列（ＧＧＧＧＳ）（配列番号１３６）を含む。

一部の例では、マスキングされたＴＧＦ－β複合体の第１のポリペプチドに存在するリンカーポリペプチドは、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体の第２のポリペプチドに存在するシステイン残基とジスルフィド結合を形成することができるシステイン残基を含む。一部の例では、例えば、好適なリンカーは、アミノ酸配列ＧＣＧＡＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１３７）を含む。

Ｉ．例示的なマスキングされたＴＧＦ－β構築物及び複合体
上で考察されたように、本開示に記載されるマスキングされたＴＧＦ－β構築物及び複合体のいずれにおいても、ＴＧＦ－βポリペプチド配列に結合してマスキングするマスキングポリペプチドは、様々な形態をとることができる。マスキングペプチドは、抗体、抗体の結合断片、ＴＧＦ－β（例えば、ｓｃＦｖ）に結合する一本鎖抗体またはその一部、またはナノボディであってもよく、そのいずれかはヒト化され得る。マスキングポリペプチドはまた、ＴＧＦ－βポリペプチド（例えば、ＴＧＦ－β１、ＴＧＦ－β２、またはＴＧＦ－β３）に結合するのに十分なポリペプチド配列を含むＴＧＦ－β受容体断片（例えば、ＴβＲＩ、ＴβＲＩＩ、またはＴβＲＩＩＩのエクトドメイン配列）であり得る。

上述のマスキングされたＴＧＦ－β構築物及び複合体のいずれにおいても、用いられるＴＧＦ－βポリペプチド配列は、ＴＧＦ－β１、ＴＧＦ－β２またはＴＧＦ－β３に基づき得る。一実施形態では、ＴＧＦ－βポリペプチドは、ＴＧＦ－β３配列を含む。完全長の成熟ＴＧＦ－βタンパク質配列は、マスキングされたＴＧＦ－β構築物及び複合体には必要ではなく、細胞表面ＴβＲＩＩと相互作用し、マスキングされたＴＧＦ－β複合体が細胞表面ＴβＲＩＩと共にＴβＲＩを動員し、それによってシグナル伝達を開始する（例えば、Ｓｍａｄ経路及び非Ｓｍａｄ経路を通したシグナル伝達）のに必要なＴＧＦ－βの部分のみが必要とされる。

上述のように、マスキングされたＴＧＦ－βの送達、またはＴβＲＩ及びＴβＲＩＩを有する細胞を活性化するその能力には、免疫調節ポリペプチド（ＭＯＤ）は必須ではないが、ＭＯＤの存在は、ＴＧＦ－β細胞活性化の結果に実質的に影響を及ぼし得る。したがって、上記のマスキングされたＴＧＦ－β構築物及び複合体のいずれかへのＭＯＤの組み込みは、本明細書に記載のマスキングされたＴＧＦ－β構築物及び複合体の使用からの治療的効果など、様々な効果を得るために使用することができる。一実施形態では、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体に存在するＭＯＤは、ＰＤ－Ｌ１、Ｆａｓ－Ｌ、４－１ＢＢＬ、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－２１、ＩＬ－２３、ならびにそれらのｃｏ－ＭＯＤに対する親和性が低減したものを含む、それらのいずれかの変異型からなる群から選択される。

マスキングされたＴＧＦ－β構築物及び複合体にＭＯＤを組み込むことが望ましい場合もあるが、その存在は全ての場合において必須ではなく、特に、マスキングされたＴＧＦ－β構築物及び複合体がサイトカイン（例えば、１つ以上の独立して選択されるインターロイキン、リンホカイン、インターフェロン、ケモカイン、及び／または腫瘍壊死因子）を含む他の材料と共に投与される場合には必須ではない。例えば、インターロイキン７受容体（例えば、ＩＬ－７Ｒａ）の胸腺細胞における発現を促進することによって、従来のＣＤ８＋Ｔ細胞（または低親和性ＣＤ８＋Ｔ細胞の生存）の発達を支持することが望ましい場合、ＭＯＤポリペプチドを含まない（「ＭＯＤ不含有の」）マスキングされたＴＧＦ－β構築物及び複合体を用い得る。同様に、強力なアゴニストリガンドによって誘導されるＴ細胞集団の発生を促進することが望ましい場合、胸腺由来Ｔｒｅｇ（ｔＴｒｅｇ）、インバリアントナチュラルキラーＴ（ｉＮＫＴ）、及びＣＤ８αα＋Ｔ細胞前駆体の生存をサポートするために、ＭＯＤ含有またはＭＯＤ不含有のマスキングされたＴＧＦ－β構築物及び複合体を用い得る。

以下は、マスキングされたＴＧＦ－β構築物及び複合体の非限定的な例である。

１．マスキングされたＴＧＦ－β構築物
マスキングされたＴＧＦ－β構築物の場合、構成要素（例えば、ＴＧＦ－β、足場、ＴβＲＩＩ配列等のマスキングポリペプチド、及び任意に１つ以上のＭＯＤ）の全ては、単一のポリペプチド鎖の一部である（例えば、図１、構造Ａを参照されたい）。そのような実施形態では、足場ポリペプチドは、他の足場ポリペプチドと二量体またはより高次の構造を形成せず、したがって、マスキングされたＴＧＦ－β構築物は、ホモ二量体、ヘテロ二量体、またはより高次の多量体構造（三量体など）の形態ではない。

図１のマスキングされたＴＧＦ－β構築物の場合、構造Ａでは、ポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端まで、任意に、１つ以上のＭＯＤと、（相互特異的結合配列を含まない）足場ポリペプチドと、ＴＧＦ－βポリペプチドに結合しマスキングするポリペプチドと、ＴＧＦ－βポリペプチド配列と、を含み得る。かかるマスキングされたＴＧＦ－β構築物としては、以下のものが挙げられる：
（ｉ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、任意に１つ以上の独立して選択されるｗｔまたは親和性低減変異型ＭＯＤと、（相互特異的結合配列を含まない）足場ポリペプチドと、ＴＧＦ－βポリペプチドに結合しＴＧＦ－βポリペプチドをマスキングするＴβＲポリペプチドと、ＴＧＦ－βポリペプチド配列と、を含むポリペプチド；
（ｉｉ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、任意に１つ以上の独立して選択されるｗｔまたは親和性低減変異型ＭＯＤと、（相互特異的結合配列を含まない）足場ポリペプチドと、ＴＧＦ－βポリペプチドに結合しＴＧＦ－βポリペプチドをマスキングするＴβＲＩＩポリペプチドと、ＴＧＦ－βポリペプチド配列と、を含むポリペプチド；
（ｉｉｉ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、１つ以上の独立して選択されるｗｔまたは親和性低減変異型ＭＯＤと、（相互特異的結合配列を含まない）足場ポリペプチドと、ＴＧＦ－βポリペプチドに結合しＴＧＦ－βポリペプチドをマスキングするＴβＲポリペプチドと、ＴＧＦ－βポリペプチド配列と、を含むポリペプチド；
（ｉｖ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、１つ以上の独立して選択されるｗｔまたは親和性低減変異型ＩＬ－２ＭＯＤと、（相互特異的結合配列を含まない）足場ポリペプチドと、ＴＧＦ－βポリペプチドに結合しＴＧＦ－βポリペプチドをマスキングするＴβＲポリペプチドと、ＴＧＦ－βポリペプチド配列と、を含むポリペプチド；
（ｖ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、１つ以上の独立して選択されるｗｔまたは親和性低減変異型ＭＯＤと、（相互特異的結合配列を含まない）足場ポリペプチドと、ＴＧＦ－β３ポリペプチドに結合しＴＧＦ－β３ポリペプチドをマスキングするＴβＲポリペプチドと、ＴＧＦ－β３ポリペプチド配列と、を含むポリペプチド；
（ｖｉ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、１つ以上の独立して選択されるｗｔまたは親和性低減変異型ＭＯＤと、（相互特異的結合配列を含まない）足場ポリペプチドと、ＴＧＦ－β３ポリペプチドに結合しＴＧＦ－β３ポリペプチドをマスキングするＴβＲＩＩポリペプチドと、ＴＧＦ－β３ポリペプチド配列と、を含むポリペプチド；及び
（ｖｉｉ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、１つ以上の独立して選択されるｗｔまたは親和性低減変異型ＩＬ－２ＭＯＤと、（相互特異的結合配列を含まない）足場ポリペプチドと、ＴＧＦ－β３ポリペプチドに結合しＴＧＦ－β３ポリペプチドをマスキングするＴβＲＩＩポリペプチドと、ＴＧＦ－β３ポリペプチド配列と、を含むポリペプチド。

本明細書に記載のマスキングされたＴＧＦ－β構築物のいずれかの例では、ＴＧＦ－βポリペプチド配列のＣ７７は、二量体化を防止するために置換され得（例えば、Ｃ７７Ｓ置換）、ＴＧＦ－βポリペプチドは、ＭＯＤ及びＴβＲポリペプチド配列の修飾と共に、マスキングＴβＲポリペプチドに対する親和性を低下させるための変動（例えば、ａａｓ２５、９２、及び／または９４のうちの１つ、２つ、または３つ全て）をさらに含み得る。マスキングされたＴＧＦ－β構築物に組み込まれ得る例示的なＴβＲポリペプチド配列としては、ＴβＲＩ会合（ｅｎｇａｇｅｍｅｎｔ）を減弱させるためのＤ１１８ＡまたはＤ１１８Ｒ置換を任意に有するΔ１４またはΔ２５ＴβＲＩＩポリペプチドが挙げられる。ＭＯＤ変異型について、そのポリペプチド配列と共に記載し、またＴβＲＩ、ＴβＲＩＩ、及びＴβＲＩＩＩの追加の修飾については上述したとおりである。

一実施形態では、マスキングされたＴＧＦ－β構築物は、配列番号１４６に示される配列を有する（図７Ａを参照されたい）。一実施形態では、マスキングされたＴＧＦ－β構築物は、配列番号１４７に示される配列を有する（図７Ｂを参照）。一実施形態では、マスキングされたＴＧＦ－β構築物は、配列番号１５７に示される配列を有する（図７Ｇを参照）。一実施形態では、マスキングされたＴＧＦ－β構築物は、配列番号１５８に示される配列を有する（図７Ｈを参照）。一実施形態では、マスキングされたＴＧＦ－β構築物は、配列番号１５９に示される配列を有する（図７Ｉを参照）。

２．マスキングされたＴＧＦ－β複合体
マスキングされたＴＧＦ－β複合体は、少なくとも２つのポリペプチド、すなわち第１及び第２のポリペプチドを含み、各ポリペプチドは、別の足場ポリペプチドと会合して、第１及び第２のポリペプチドを一緒にして、複合体とする足場ポリペプチドを含む。したがって、ＴＧＦ－βポリペプチド複合体は、ホモ二量体、ヘテロ二量体、またはより高次の多量体構造を形成する。
（ｉ）第１の例では、マスキングされたＴＧＦ－β複合体は、図１の構造Ｂのように二量体化してホモ二量体（例えば、対称性二量体）を形成することができる足場構造上に組み立てられた、少なくとも１つのＴＧＦ－βポリペプチド配列と、１つ以上のＴＧＦ－βポリペプチドに結合しマスキングする少なくとも１つのポリペプチド（例えば、各ＴＧＦ－βポリペプチド配列のマスキング配列）と、任意に、１つ以上の免疫調節ポリペプチド（ＭＯＤ）と、を含む。かかるホモ二量体において、ＩｇＦｃポリペプチドは、各構築物の足場内のＩｇＦｃポリペプチド間のジスルフィド結合の自発的な形成を可能にすることができ、例えば、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）及び抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を通して細胞溶解を誘導するＩｇポリペプチドの能力を実質的に低減または排除する変異（例えば、本明細書で考察されるＬＡＬＡ変異）を含み得る。
（ｉｉ）第２の例では、マスキングされたＴＧＦ－β複合体は、
（ａ）相互特異的二量体化配列を含む足場構造上に組み立てられた、少なくとも１つのＴＧＦ－βポリペプチド配列と、１つ以上のＴＧＦ－βポリペプチドに結合しマスキングする少なくとも１つのポリペプチド（例えば、各ＴＧＦ－βポリペプチド配列のマスキング配列）と、任意に、１つ以上の免疫調節ポリペプチド（ＭＯＤ）とを含む、第１のポリペプチド、ならびに
（ｂ）第１のポリペプチドの相互特異的二量体化配列の相手側となる配列を含む足場構造上に組み立てられた、少なくとも１つのＴＧＦ－βポリペプチド配列と、少なくとも１つのＴＧＦ－βポリペプチドに結合しマスキングする少なくとも１つのポリペプチドと、任意に、１つ以上の免疫調節ポリペプチド（ＭＯＤ）とを含む、第２のポリペプチド、を含み、
ここで、第１及び第２のポリペプチドは、図１の構造Ｃのような相互特異的二量体化配列の相互作用を通してヘテロ二量体を形成する。
（ｉｉｉ）第３の例では、マスキングされたＴＧＦ－β複合体は、
（ａ）相互特異的二量体化配列を含む足場構造上に組み立てられた、少なくとも１つのＴＧＦ－βポリペプチド配列と、少なくとも１つ以上のＴＧＦ－βポリペプチド（例えば、各ＴＧＦ－βポリペプチド配列のマスキング配列）に結合しマスキングする少なくとも１つのポリペプチドと、任意に、１つ以上の免疫調節ポリペプチド（ＭＯＤ）とを含む、第１のポリペプチド、ならびに
（ｂ）第１のポリペプチドの相互特異的二量体化配列の相手側となる配列と、任意に、１つ以上の免疫調節ポリペプチド（ＭＯＤ）とを含む足場構造を含む第２のポリペプチド、を含み、
ここで、第１及び第２のポリペプチドは、図１の構造Ｆのような相互特異的二量体化配列の相互作用を通じてヘテロ二量体を形成する。
（ｉｖ）第４の例では、マスキングされたＴＧＦ－β複合体は、
（ａ）相互特異的二量体化配列を含む足場構造上に組み立てられた、少なくとも１つのＴＧＦ－βポリペプチド配列と、任意に、１つ以上の免疫調節ポリペプチド（ＭＯＤ）とを含む、第１のポリペプチド、ならびに
（ｂ）第１のポリペプチドの相互特異的二量体化配列の相手側となる配列を含む足場構造上に組み立てられた、少なくとも１つ以上のＴＧＦ－βポリペプチドに結合しマスキングする少なくとも１つのポリペプチドと、任意に、１つ以上の免疫調節ポリペプチド（ＭＯＤ）とを含む、第２のポリペプチド、を含み、
ここで、第１及び第２のポリペプチドは、図１の構造Ｄ及びＥのような相互特異的二量体化配列を介してヘテロ二量体を形成する。

一部の例では、マスキングされたＴＧＦ－β複合体において（図１、構造Ｂ、Ｃ及びＦ）、ＴＧＦ－βポリペプチド（第１のポリペプチド）を含む配列は、Ｎ末端からＣ末端にかけて、任意に、１つ以上のＭＯＤと、（相互特異的結合配列を有するかまたは有さない）足場ポリペプチドと、ＴＧＦ－βポリペプチドに結合しマスキングするポリペプチドと、ＴＧＦ－βポリペプチド配列と、を含み得る。図１のＴＧＦ－β配列を含まないポリペプチド、構造Ｆ（第２のポリペプチド）は、相互特異的結合配列を有する足場ポリペプチドを含み、任意に、Ｎ末端、Ｃ末端、またはＮ末端及びＣ末端の両方にＭＯＤを含む。

一部の例では、図１の構造Ｄ及びＥのマスキングされたＴＧＦ－β複合体において、ＴＧＦ－βポリペプチド含有ポリペプチド（第１のポリペプチド）は、Ｎ末端からＣ末端にかけて、１つ以上の任意のＭＯＤと、（相互特異的結合配列を有する）足場ポリペプチドと、ＴＧＦ－βポリペプチド配列と、を含み得る。図１の構造Ｄ及びＥのＴＧＦ－β配列を含まないポリペプチド（第２のポリペプチド）は、Ｎ末端からＣ末端にかけて、任意に、１つ以上のＭＯＤと、相互特異的結合配列を有する足場ポリペプチドと、ＴＧＦ－βポリペプチドに結合しそれをマスキングするポリペプチドと、を含み得る。図１には示されていないが、ＴＧＦ－βポリペプチド配列を含む第１のポリペプチドは１つ以上のＭＯＤを含まなくてもよく、マスキング配列を含む第２のポリペプチドは１つ以上のＭＯＤを含んでもよい。

上述のマスキングされたＴＧＦ－β複合体の例としては、第１のポリペプチドが、Ｎ末端からＣ末端にかけて、以下を含むものが挙げられる：
（ｉ）任意に、１つ以上のＭＯＤと、（相互特異的結合配列を有する）足場ポリペプチドと、ＴＧＦ－βポリペプチド配列；
（ｉｉ）任意に、１つ以上の独立して選択されるｗｔまたは親和性低減変異型ＭＯＤと、（相互特異的結合配列を有する）足場ポリペプチドと、ＴＧＦ－βポリペプチド配列；
（ｉｉｉ）１つ以上の独立して選択されるｗｔまたは親和性低減変異型ＭＯＤと、（相互特異的結合配列を有する）足場ポリペプチドと、ＴＧＦ－β１または２ポリペプチド配列；
（ｉｖ）１つ以上の独立して選択されるｗｔまたは親和性低減変異型ＩＬ－２ＭＯＤと、（相互特異的結合配列を含まない）足場ポリペプチドと、ＴＧＦ－βポリペプチド配列；
（ｖ）１つ以上の独立して選択されるｗｔまたは親和性低減変異型ＭＯＤと、（相互特異的結合配列を有する）足場ポリペプチドと、ＴＧＦ－β３ポリペプチド配列；
（ｖｉ）１つ以上の独立して選択されるｗｔまたは親和性低減変異型ＭＯＤと、（相互特異的結合配列を有する）足場ポリペプチドと、ＴＧＦ－β３ポリペプチド配列；
（ｖｉｉ）１つ以上の独立して選択されるｗｔまたは親和性低減変異型ＩＬ－２ＭＯＤと、（相互特異的結合配列を有する）足場ポリペプチドと、ＴＧＦ－β３ポリペプチド配列。各例では、第２のポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端にかけて、第１のポリペプチドの相互特異的結合（二量体化配列）の相手方を含む足場ポリペプチドと、それに続く、第１のポリペプチドのＴＧＦ－βポリペプチドに結合しそれをマスキングするＴβＲ（例えば、ＴβＲＩＩ）ポリペプチドと、を含む。図１、構造ＦのようなマスキングされたＴＧＦ－β複合体の場合、ＴβＲ（例えば、ＴβＲＩＩ）ポリペプチドは、Ｎ末端ＭＯＤ（存在する場合）と第１のポリペプチドの足場との間に配置され得、第２のポリペプチドは、第１のポリペプチドの相互特異的結合（二量体化配列）の相手方を含み、そこにおいて、Ｎ末端またはＣ末端に、１つ以上の独立して選択されるｗｔまたは親和性低減変異型ＭＯＤ（例えば、ｗｔまたは変異形ＩＬ－２ＭＯＤ）が結合し得る。

本明細書に記載のマスキングされたＴＧＦ－β複合体のいずれかの例では、ＴＧＦ－βポリペプチド配列のＣ７７は、二量体化（例えば、Ｃ７７Ｓ置換）を防止するために置換され得、ＴＧＦ－βポリペプチドは、ＭＯＤ及びＴβＲポリペプチド配列の修飾と共に、マスキングＴβＲポリペプチドに対する親和性を低下させるための変動（例えば、ａａｓ２５、９２、及び／または９４のうちの１つ、２つ、または３つ全て）をさらに含み得る。マスキングされたＴＧＦ－β構築物に組み込まれ得る例示的なＴβＲポリペプチド配列としては、任意に、Ｄ１１８Ａ置換を有するΔ１４またはΔ２５ＴβＲＩＩポリペプチドが挙げられる。ＭＯＤ変異型について、そのポリペプチド配列と共に記載し、またＴβＲＩ、ＴβＲＩＩ、及びＴβＲＩＩＩの追加の修飾については上述したとおりである。

一実施形態では、マスキングされたＴＧＦ－β複合体は、配列番号１４８及び１４９に示される配列を有するポリペプチドを含む（図７Ｃを参照）。一実施形態では、マスキングされたＴＧＦ－β複合体は、配列番号１５０及び１５１に示される配列を有するポリペプチドを含む（図７Ｄを参照）。一実施形態では、マスキングされたＴＧＦ－β複合体は、配列番号１５２及び１５３に示される配列を有するポリペプチドを含む（図７Ｅを参照）。一実施形態では、マスキングされたＴＧＦ－β複合体は、配列番号１５５及び１５６に示される配列を有するポリペプチドを含む（図７Ｆを参照）。一実施形態では、マスキングされたＴＧＦ－β複合体は、配列番号１４８及び１６０に示される配列を有するポリペプチドを含む（図７Ｊを参照）。

Ｊ．組織特異的標的部分
本明細書に開示される構築物及び複合体は、構築物及び複合体を体内の特定の組織に標的化することができる部分をさらに含むことができる。そのような標的化部分は、例えば、抗体または抗原結合断片／その一部（例えば、ｓｃＦｖ、重鎖ナノボディもしくは軽鎖ナノボディなどのナノボディ、Ｆａｂ、ダイアボディ、または多量体ｓｃＦｖ）を含むことができる。標的化部分は、ＭＯＤポリペプチド配列と同じ様式及び同じ位置で、本明細書に記載されるマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体に直接組み込まれ得る。例えば、ナノボディ配列は、ＭＯＤが図１に現れる構造内に現れる場所のうちの１つを占める位置に位置し得る。代替的に、標的組織に特異的な分子及びマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体の両方を認識する二価分子を使用して、組織特異的標的化を達成することができる。例えば、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体（例えば、６ＸＨｉｓタグなどの足場、リンカー、または付加されたアミノ酸配列）及び標的組織に特異的な分子に特異的であるダイアボディなどの二価及び二重特異性抗体構築物（例えば、Ｈｏｌｌｉｇｅｒｅｔａｌ．ＰＮＡＳ９０：６４４４－４８（１９９３）を参照）は、組織特異的な標的化を達成することができる。

標的化に使用され得る自己免疫疾患／障害に関与する組織に特異的な分子は、個々の自己免疫疾患／状態に特異的である。例えば、関節リウマチにおける関節特異的標的化は、炎症を起こした関節組織で発現される細胞外マトリックス成分を使用して達成され得る。これらのＲＡ関連細胞外マトリックス成分には、標的化抗体断片（Ｆ８）が既に同定されているフィブロネクチン（ＥＤ－Ａ）のエクストラドメイン－Ａが含まれる。例えば、Ｂｒｕｉｊｎｅｎｅｔａｌ．，Ｍｏｌ．Ｐｈａｒｍ，６（１）：２７３－２８１（２０１９）を参照されたい。テナシンは、別のＲＡ関連標的分子を表す。

粘膜アドレシン細胞接着分子１（ＭＡｄＣＡＭ－１）は、主に腸粘膜組織において発現され、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）及び／またはクローン病の治療に使用するためのマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体の局在化のための組織特異的標的を表す。同様に、血液脳関門（ＢＢＢ）特異的タンパク質及び神経組織特異的タンパク質は、ＭＳの治療のための組織特異的標的タンパク質を表す。膵島β細胞特異的タンパク質は、１型糖尿病（Ｔ１Ｄ）の治療のための組織特異的標的を表す。様々な自己免疫疾患に関連する追加の組織特異的標的タンパク質が、当該技術分野において既知である。

Ｋ．核酸
本開示は、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体をコードするヌクレオチド配列を含む核酸を提供する。一部の例では、核酸は組換え発現ベクターであり、したがって、本開示は、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体をコードするヌクレオチド配列を含む組換え発現ベクターを提供する。一部の例では、核酸は組換え発現ベクターであり、したがって、本開示は、マスキングされたＴＧＦ－β構築物及び複合体をコードするヌクレオチド配列を含む組換え発現ベクターを提供する。以下の核酸の考察では、本開示のマスキングされたＴＧＦ－β構築物及び複合体をコードする核酸を扱う。

一本鎖抗原提示ポリペプチドをコードする核酸
上述のように、マスキングされたＴＧＦ－β構築物は、一本鎖ポリペプチドを含む。したがって、本開示は、一本鎖のマスキングされたＴＧＦ－β構築物をコードするヌクレオチド配列を含む核酸を提供する。一本鎖のマスキングされたＴＧＦ－β構築物をコードするヌクレオチド配列を含む核酸は、転写制御エレメント（複数可）、例えばプロモーター、に作動可能に連結することができる。

マスキングされたＴＧＦ－β複合体をコードする核酸（複数可）
上記のように、一部の例では、マスキングされたＴＧＦ－β複合体は、少なくとも２つの別個のポリペプチド鎖（第１のポリペプチド鎖及び第２のポリペプチド鎖）を含む。本開示は、マスキングされたＴＧＦ－β複合体をコードするヌクレオチド配列を含む核酸を提供する。一部の例では、マスキングされたＴＧＦ－β複合体の個々のポリペプチド鎖は、個々の核酸内でコードされる。一部の例では、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体の全てのポリペプチド鎖は、単一の核酸内でコードされる。一部の例では、第１の核酸は、マスキングされたＴＧＦ－β複合体の第１のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含み、第２の核酸は、マスキングされたＴＧＦ－β複合体の第２のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む。一部の例では、単一の核酸は、マスキングされたＴＧＦ－β複合体の第１及び第２のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含み、これは、単一のプロモーターまたは２つの独立して選択されるプロモーターの転写制御下で作用可能に連結され得る。

マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体の個々のポリペプチド鎖をコードする個々の核酸
上記のように、一部の例では、マスキングされたＴＧＦ－β複合体の個々のポリペプチド鎖は、個々の核酸内でコードされる。一部の例では、マスキングされたＴＧＦ－β複合体の個々のポリペプチド鎖をコードするヌクレオチド配列は、転写制御エレメント、例えばプロモーター、例えば真核細胞において機能的であるプロモーター、などに作動可能に連結し、該プロモーターは、構成的プロモーターまたは誘導性プロモーターとすることができる。

例えば、本開示は、第１の核酸及び第２の核酸を提供し、第１の核酸は、マスキングされたＴＧＦ－β複合体の第１のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含み、第２の核酸は、マスキングされたＴＧＦ－β複合体の第２のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む。一部の例では、第１のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列及び第２のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列は、転写制御エレメントに機能的に連結する。一部の例では、転写制御エレメントは、真核細胞において機能的であるプロモーターである。一部の例では、核酸は、個々の発現ベクター内に存在する。

一部の例では、第１のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列及び第２のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列は、転写制御エレメントに機能的に連結する。一部の例では、転写制御エレメントは、真核細胞において機能的であるプロモーターである。一部の例では、核酸は、個々の発現ベクター内に存在する。

マスキングされたＴＧＦ－β複合体内に存在する２つ以上のポリペプチドをコードする核酸
本開示は、マスキングされたＴＧＦ－β複合体の第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドを少なくともコードするヌクレオチド配列を含む核酸を提供する。一部の例では、マスキングされたＴＧＦ－β複合体は、第１、第２及び第３のポリペプチドを含み、核酸は、第１、第２及び第３のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む。一部の例では、マスキングされたＴＧＦ－β複合体の第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列は、コードされた第１のポリペプチドと第２のポリペプチドとの間に配置されたタンパク質分解性の切断可能な部位またはリンカーをコードする。一部の例では、マスキングされたＴＧＦ－β複合体の、第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列は、コードされた第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドの間に配置された内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）をコードするヌクレオチドを含む。一部の例では、マスキングされたＴＧＦ－β複合体の、第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列は、第１のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列と第２のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列との間に配置されたリボソームスキッピングシグナル（またはシス作用性加水分解酵素エレメント、ＣＨＹＳＥＬ）をコードする配列を含む。

一部の例では、第１の核酸（例えば、組換え発現ベクター、ｍＲＮＡ、ウイルスＲＮＡなど）は、マスキングされたＴＧＦ－β複合体の第１のポリペプチド鎖をコードするヌクレオチド配列を含み、第２の核酸（例えば、組換え発現ベクター、ｍＲＮＡ、ウイルスＲＮＡなど）は、マスキングされたＴＧＦ－β複合体の第２のポリペプチド鎖をコードするヌクレオチド配列を含む。一部の例では、第１のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列と第２のポリペプチドをコードする第２のヌクレオチド配列は各々、独立して選択される転写制御エレメント、例えば、真核細胞において機能的であるプロモーターなどのプロモーターなどに作動可能に連結し、プロモーターは、構成的プロモーターまたは誘導性プロモーターであり得る。

組換え発現ベクター
本開示は、核酸を含む組換え発現ベクターを提供する。一部の例では、組換え発現ベクターは非ウイルスベクターである。一部の例では、組換え発現ベクターは、ウイルス性構築物、例えば、組換えアデノ随伴ウイルス性構築物（例えば、米国特許第７，０７８，３８７号を参照されたい）、組換えアデノウイルス性構築物、組換えレンチウイルス性構築物、組換えレトロウイルス性構築物、非一体型ウイルスベクターなどである。

好適な発現ベクターとしては、ウイルスベクター（例えば、ワクシニアウイルス、ポリオウイルス、アデノウイルス（例えば、Ｌｉｅｔａｌ．，ＩｎｖｅｓｔＯｐｔｈａｌｍｏｌＶｉｓＳｃｉ３５：２５４３２５４９，１９９４、Ｂｏｒｒａｓｅｔａｌ．，ＧｅｎｅＴｈｅｒ６：５１５５２４，１９９９、ＬｉａｎｄＤａｖｉｄｓｏｎ，ＰＮＡＳ９２：７７００７７０４，１９９５、Ｓａｋａｍｏｔｏｅｔａｌ．，ＨＧｅｎｅＴｈｅｒ５：１０８８１０９７，１９９９、ＷＯ９４／１２６４９、ＷＯ９３／０３７６９、ＷＯ９３／１９１９１、ＷＯ９４／２８９３８、ＷＯ９５／１１９８４、及びＷＯ９５／００６５５を参照されたい）、アデノ関連ウイルス（例えば、Ａｌｉｅｔａｌ．，ＨｕｍＧｅｎｅＴｈｅｒ９：８１８６，１９９８、Ｆｌａｎｎｅｒｙｅｔａｌ．，ＰＮＡＳ９４：６９１６６９２１，１９９７、Ｂｅｎｎｅｔｔｅｔａｌ．，ＩｎｖｅｓｔＯｐｔｈａｌｍｏｌＶｉｓＳｃｉ３８：２８５７２８６３，１９９７、Ｊｏｍａｒｙｅｔａｌ．，ＧｅｎｅＴｈｅｒ４：６８３６９０，１９９７、Ｒｏｌｌｉｎｇｅｔａｌ．，ＨｕｍＧｅｎｅＴｈｅｒ１０：６４１６４８，１９９９、Ａｌｉｅｔａｌ．，ＨｕｍＭｏｌＧｅｎｅｔ５：５９１５９４，１９９６、ＳｒｉｖａｓｔａｖａｉｎＷＯ９３／０９２３９、Ｓａｍｕｌｓｋｉｅｔａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒ．（１９８９）６３：３８２２－３８２８、Ｍｅｎｄｅｌｓｏｎｅｔａｌ．，Ｖｉｒｏｌ．（１９８８）１６６：１５４－１６５、及びＦｌｏｔｔｅｅｔａｌ．，ＰＮＡＳ（１９９３）９０：１０６１３－１０６１７を参照されたい）、ＳＶ４０、単純ヘルペスウイルス、ヒト免疫不全ウイルス（例えば、Ｍｉｙｏｓｈｉｅｔａｌ．，ＰＮＡＳ９４：１０３１９２３，１９９７、Ｔａｋａｈａｓｈｉｅｔａｌ．，ＪＶｉｒｏｌ７３：７８１２７８１６，１９９９を参照されたい）に基づくウイルスベクター、レトロウイルスベクター（例えば、マウス白血病ウイルス、脾臓壊死ウイルス、及びラウス肉腫ウイルス、ハーベイ肉腫ウイルス、鳥類白血病ウイルス、レンチウイルス、ヒト免疫不全ウイルス、骨髄増殖性肉腫ウイルス、及び乳房腫瘍ウイルスなどのレトロウイルスに由来するベクター）などが挙げられ得るが、これらに限定されない。多数の好適な発現ベクターが当業者に既知であり、その多くは市販されている。

利用される宿主／ベクター系に応じて、構成的及び誘導性プロモーター、転写エンハンサーエレメント、転写ターミネーターなどを含む、いくつかの好適な転写及び翻訳制御エレメントのうちのいずれかが、発現ベクターにおいて使用され得る（例えば、Ｂｉｔｔｅｒｅｔａｌ（１９８７）ＭｅｔｈｏｄｓｉｎＥｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，１５３：５１６－５４４を参照されたい）。

一部の例では、マスキングされたＴＧＦ－β構築物及び複合体のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列は、制御エレメント、例えばプロモーターなど、の転写制御エレメントに作動可能に連結する。転写制御エレメントは、真核細胞（例えば、哺乳動物細胞）または原核細胞（例えば、細菌細胞または古細菌細胞）のいずれかにおいて機能的であってもよい。一部の例では、ＤＮＡ標的化ＲＮＡ及び／または部位特異的修飾ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列は、原核細胞と真核細胞の両方においてＤＮＡ標的化ＲＮＡ及び／または部位特異的修飾ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列の発現を可能とする複数の制御エレメントに機能的に連結する。

好適な真核細胞プロモーター（真核細胞において機能的なプロモーター）の非限定例としては、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）前初期、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）チミジンキナーゼ、初期及び後期ＳＶ４０、レトロウイルス由来長末端反復配列（ＬＴＲ）、及びマウスメタロチオネイン－Ｉからのものが挙げられる。適切なベクター及びプロモーターの選択については、十分に当業者のレベルの範囲内である。発現ベクターはまた、翻訳開始用のリボソーム結合部位及び転写ターミネーターを含有していてもよい。発現ベクターはまた、発現を増幅させるための適切な配列を含んでいてもよい。

マスキングされたＴＧＦ－β構築物及び複合体を発現する遺伝子改変宿主細胞の調製及びマスキングされたＴＧＦ－β構築物及び複合体の精製
本開示は、遺伝子組換え宿主細胞を提供し、その宿主細胞はマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体をコードする１つ以上の核酸（複数可）で遺伝子組換えされている。

好適な宿主細胞としては、イースト菌細胞、昆虫細胞、及び哺乳動物細胞などの真核細胞が挙げられる。一部の例では、宿主細胞は哺乳動物細胞株の細胞である。好適な哺乳動物細胞株としては、ヒト細胞株、非ヒト霊長類細胞株、齧歯類（例えば、マウス、ラット）細胞株などが挙げられる。好適な哺乳動物細胞株としては、ＨｅＬａ細胞（例えば、ＡｍｅｒｉｃａｎＴｙｐｅＣｕｌｔｕｒｅＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）番号ＣＣＬ－２）、ＣＨＯ細胞（例えば、ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ９６１８、ＣＣＬ６１、ＣＲＬ９０９６）、２９３細胞（例えば、ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ－１５７３）、Ｖｅｒｏ細胞、ＮＩＨ３Ｔ３細胞（例えば、ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ－１６５８）、Ｈｕｈ－７細胞、ＢＨＫ細胞（例えば、ＡＴＣＣ番号ＣＣＬ１０）、ＰＣ１２細胞（ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ１７２１）、ＣＯＳ細胞、ＣＯＳ－７細胞（ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ１６５１）、ＲＡＴ１細胞、マウスＬ細胞（ＡＴＣＣ番号ＣＣＬＩ．３）、ヒト胎児腎臓（ＨＥＫ）細胞（ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ１５７３）、ＨＬＨｅｐＧ２細胞などが挙げられるがこれらに限定されない。

遺伝子組み換え宿主細胞を使用して、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体を作製することができる。例えば、遺伝子組換え宿主細胞は、ポリペプチド（複数可）をコードするヌクレオチド配列を含む上記のような発現ベクター（複数可）を宿主細胞に導入し、それによって遺伝子組換え宿主細胞を作製することによって、マスキングされたＴＧＦ－β複合体、または一本鎖のマスキングされたＴＧＦ－β構築物を作製するために使用することができる。宿主細胞において、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体を構成的に発現させることも、または発現を駆動するプロモーター（例えば、ＣＭＶプロモーター及びテトラサイクリンへの曝露によって誘導されるテトラサイクリン耐性オペロン）を用いて誘導可能な誘導物質への曝露に応答してそれを発現させることも、なし得る。

マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体は細胞から得られ、または、ポリペプチド（複数可）がシグナル配列の組み込みによって分泌経路を経過するよう設計されている場合には、細胞培養培地から得られる。タンパク質は、例えば、（硫酸アンモニウムまたはエタノールによる）沈殿、等電点泳動、及び１つ以上の種類のクロマトグラフィー、のうちの１つ以上を含む、当該技術分野で既知の任意の手段によって精製され得る。好適なクロマトグラフィー法としては、サイズベースのクロマトグラフィー分離（例えば、サイズ排除またはゲル浸透）、疎水性相互作用クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、及び親和性クロマトグラフィーが挙げられるが、これらに限定されない。マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体が、（例えば、足場としての）免疫グロブリンポリペプチド配列を含む場合、プロテインＡまたはプロテインＧを使用して、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体をアフィニティ精製し得る。免疫グロブリンポリペプチドが存在しない場合、複合体は、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体に存在するポリペプチドを認識する抗体を使用して、または代替的に、ｍｙｃエピトープ（ＣＥＱＫＬＩＳＥＥＤＬ配列番号１５４）などの親和性タグ、「ＨＩＳ」タグ（二価金属イオン樹脂結合用）、もしくは「ＦＬＡＧ」タグを組み込むことによって、アフィニティ精製され得る。前述の方法のいずれかと組み合わせ得る精製及び／または濃縮ステップでは、実質的に異なる分子量を有する混入物質を除去するために、及び／または精製されたタンパク質を濃縮するために、使用され得る、サイズ限定の半透過性膜（例えば、透析膜または圧力セル）が用いられる。

一実施形態では、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体は、哺乳動物細胞（例えば、ＣＨＯ細胞）に導入された核酸配列から発現し、細胞からその培養培地（例えば、無血清培地）に分泌されるよう、分泌経路を標的とするものである。マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体は、親和性クロマトグラフィーを単独で使用して、またはサイズベースの分離（例えば、サイズベースのクロマトグラフィーまたは膜分離）と組み合わせて使用して、細胞培養培地から精製される。かかる実施形態の特定の例では、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体は、免疫グロブリン足場（例えば、ＩｇＧポリペプチド配列）を含み、その精製は、親和性クロマトグラフィー（例えば、プロテインＡまたはＧ）単独で、またはサイズベースの分離（サイズベースのクロマトグラフィー）と組み合わせて、実施される。

Ｌ．組成物
本開示は、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体を含む組成物（医薬組成物を含む）を提供する。本開示はまた、本開示の核酸または組換え発現ベクターを含む組成物（医薬組成物を含む）を提供する。

１．マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体を含む組成物
本開示の組成物は、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体に加えて、塩、例えば、ＮａＣｌ、ＭｇＣｌ_２、ＫＣｌ、ＭｇＳＯ_４など；緩衝剤、例えば、トリス緩衝剤、Ｎ－（２－ヒドロキシエチル）ピペラジン－Ｎ’－（２－エタンスルホン酸）（ＨＥＰＥＳ）、２－（Ｎ－モルホリノ）エタンスルホン酸（ＭＥＳ）、２－（Ｎ－モルホリノ）エタンスルホン酸ナトリウム塩（ＭＥＳ）、３－（Ｎ－モルホリノ）プロパンスルホン酸（ＭＯＰＳ）、Ｎ－トリス［ヒドロキシメチル］メチル－３－アミノプロパンスルホン酸（ＴＡＰＳ）など；可溶化剤；界面活性剤、例えば、Ｔｗｅｅｎ－２０などの非イオン性界面活性剤など；プロテアーゼ阻害剤；グリセロールなどのうちの１つ以上を含み得る。

組成物は薬学的に許容される賦形剤を含んでいてもよく、その種類は当該技術分野において周知であり、本明細書で詳細に考察する必要はない。薬学的に許容される賦形剤は、例えば、“Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：ＴｈｅＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＰｒａｃｔｉｃｅｏｆＰｈａｒｍａｃｙ”，１９^ｔｈＥｄ．（１９９５）または最新版、ＭａｃｋＰｕｂｌｉｓｈｉｎｇＣｏ、Ａ．Ｇｅｎｎａｒｏ（２０００）”Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：ＴｈｅＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＰｒａｃｔｉｃｅｏｆＰｈａｒｍａｃｙ”，２０ｔｈｅｄｉｔｉｏｎ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ，＆Ｗｉｌｋｉｎｓ、ＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＤｏｓａｇｅＦｏｒｍｓａｎｄＤｒｕｇＤｅｌｉｖｅｒｙＳｙｓｔｅｍｓ（１９９９）Ｈ．Ｃ．Ａｎｓｅｌｅｔａｌ．，ｅｄｓ７^ｔｈｅｄ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ，＆Ｗｉｌｋｉｎｓ、及びＨａｎｄｂｏｏｋｏｆＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＥｘｃｉｐｉｅｎｔｓ（２０００）Ａ．Ｈ．Ｋｉｂｂｅｅｔａｌ．，ｅｄｓ．，３^ｒｄｅｄ．Ａｍｅｒ．ＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＡｓｓｏｃ．

医薬組成物は、ｉ）マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体と、ｉｉ）薬学的に許容される賦形剤と、を含むことができる。一部の例では、本医薬組成物は対象への投与に好適であり、例えば、滅菌されている。例えば、一部の実施形態では、本医薬組成物は、ヒト対象への投与に好適であり、例えば、組成物は滅菌されており、検出可能な発熱物質及び／またはその他の毒素を実質的に含まないか、またはかかる検出可能な発熱物質及び／またはその他の毒素が、適用可能な規制機関、例えばＵＳＦ＆ＤＡによって設定された許容限界内のレベルで存在する。

タンパク質組成物は、その他の成分、例えば、医薬品グレードのマンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、タルカム、セルロース、グルコース、スクロース、マグネシウム、カーボネート、などを含んでいてもよい。組成物は、生理学的条件に近づけるのに必要な薬学的に許容される補助剤、例えば、ｐＨ調整剤及びｐＨ緩衝剤、毒性調整剤など、例えば、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、乳酸ナトリウム、塩酸塩、硫酸塩、溶媒和物（例えば、混合イオン性塩、水、有機物質）、水和物（例えば、水）など、を含有していてもよい。

例えば、組成物としては、水性液剤、粉末形状剤、顆粒剤、錠剤、丸剤、坐剤、カプセル剤、懸濁剤、噴霧剤など、を挙げてもよい。組成物は、以下に記載する様々な投与経路に応じて製剤化されてもよい。

マスキングされたＴＧＦ－β構築物もしくは複合体が利用される（例えば、細胞培養系へ導入される）、または注射剤として組織へと直接（例えば、皮下、腹腔内、筋肉内、リンパ管内、及び／または静脈内）投与される場合、製剤は、即時使用可能な剤形で、または、非水性形態（例えば、再構成可能な保存安定性のある粉末）もしくは水性形態（例えば、薬学的に許容される担体及び賦形剤からなる液体など）として提供され得る。タンパク質含有製剤はまた、投与後における対象タンパク質の血清中半減期を延長する形態で提供され得る。例えば、タンパク質は、コロイド状に調製されるリポソーム製剤として提供され得、あるいは、血清中半減期を延長するためのその他の従来技術を用いて提供され得る。例えば、Ｓｚｏｋａｅｔａｌ．１９８０Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｂｉｏｅｎｇ．９：４６７、米国特許第４，２３５，８７１号、同第４，５０１，７２８号、及び同第４，８３７，０２８号を参照されたい。製剤はまた、制御放出形態または徐放形態で提供されてもよい。

一部の例では、組成物は、ａ）マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体と、ｂ）生理食塩水（例えば、０．９％ＮａＣｌ）と、を含む。一部の例では、組成物は滅菌されている。一部の例では、組成物はヒト対象への投与に好適であり、例えば、組成物は滅菌されており、検出可能な発熱物質及び／またはその他の毒素を実質的に含まないか、またはかかる検出可能な発熱物質及び／またはその他の毒素が許容可能な限度内の量で存在する。それゆえ、本開示は、ａ）マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体と、ｂ）生理食塩水（例えば、０．９％ＮａＣｌ）と、を含む組成物を提供し、該組成物は滅菌されており、検出可能な発熱物質及び／もしくはその他の毒素を実質的に含まないか、またはそのような検出可能な発熱物質及び／もしくはその他の毒素が許容範囲内の量で存在する。

非経口投与に好適な製剤のその他の例としては、等張性滅菌注射用液剤、酸化防止剤、静菌剤、製剤を目的のレシピエントの血液と等張とする溶質、懸濁化剤、可溶化剤、増粘剤、安定化剤、及び、防腐剤、が挙げられる。例えば、本医薬組成物は、容器、例えば、注射器などの滅菌容器で提供されてもよい。製剤は、単回用量または複数回用量の密閉容器、例えば、アンプル及びバイアルなどで提供されてもよく、使用の直前において、注射用の滅菌液体賦形剤（例えば、水）の添加のみを必要とするフリーズドライ（凍結乾燥）状態で保存されてもよい。即時注射用液剤及び即時注射用懸濁剤は、滅菌した散剤、顆粒剤及び錠剤から調製してもよい。

製剤中のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体の濃度は、重量比で、約０．１％未満（通常は、または少なくとも約２％）から、２０％～５０％以上（例えば、０．１％～１％、１％～５％、５％～１０％、１０％～２０％、または２０％～５０％）であり、通常は、主に、液量、粘度、ならびに、選択した特定の投与方法及び患者のニーズに従った患者本位の要因に基づいて選択される。

本開示は、組成物（例えば、液体組成物）を含む容器を提供する。容器は、例えば、注射器、アンプルなどであってもよい。一部の例では、容器は滅菌されている。一部の例では、容器と組成物の両方は滅菌されている。

２．核酸または組換え発現ベクターを含む組成物
本開示は、組成物、例えば、本開示の核酸または組換え発現ベクターを含む医薬組成物を提供する。多種多様な薬学的に許容される賦形剤は当該技術分野において周知であり、本明細書において詳細に考察される必要はない。薬学的に許容される賦形剤については、例えば、Ａ．Ｇｅｎｎａｒｏ（２０００）”Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：ＴｈｅＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＰｒａｃｔｉｃｅｏｆＰｈａｒｍａｃｙ”，２０ｔｈｅｄｉｔｉｏｎ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ，＆Ｗｉｌｋｉｎｓ、ＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＤｏｓａｇｅＦｏｒｍｓａｎｄＤｒｕｇＤｅｌｉｖｅｒｙＳｙｓｔｅｍｓ（１９９９）Ｈ．Ｃ．Ａｎｓｅｌｅｔａｌ．，ｅｄｓ７ｔｈｅｄ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ，＆Ｗｉｌｋｉｎｓ、及びＨａｎｄｂｏｏｋｏｆＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＥｘｃｉｐｉｅｎｔｓ（２０００）Ａ．Ｈ．Ｋｉｂｂｅｅｔａｌ．，ｅｄｓ．，３ｒｄｅｄ．Ａｍｅｒ．ＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＡｓｓｏｃ．を含む、様々な刊行物に十分に記載されている。

本開示の組成物は、ａ）マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体をコードするヌクレオチド配列を含む１つ以上の核酸または１つ以上の組換え発現ベクターと、ｂ）緩衝剤、界面活性剤、酸化防止剤、親水性ポリマー、デキストリン、キレート化剤、懸濁化剤、可溶化剤、増粘剤、安定化剤、静菌剤、湿潤剤、及び、防腐剤のうちの１つ以上と、を含み得る。好適な緩衝剤としては、例えば、Ｎ，Ｎ－ビス（２－ヒドロキシエチル）－２－アミノエタンスルホン酸（ＢＥＳ）、ビス（２－ヒドロキシエチル）アミノ－トリス（ヒドロキシメチル）メタン（ビス－トリス）、Ｎ－（２－ヒドロキシエチル）ピペラジン－Ｎ’３－プロパンスルホン酸（ＥＰＰＳまたはＨＥＰＰＳ）、グリシルグリシン、Ｎ－２－ヒドロキシエチルピペラジン－Ｎ’－２－エタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）、３－（Ｎ－モルホリノ）プロパンスルホン酸（ＭＯＰＳ）、ピペラジン－Ｎ，Ｎ’－ビス（２－エタン－スルホン酸）（ＰＩＰＥＳ）、重炭酸ナトリウム、３－（Ｎ－トリス（ヒドロキシメチル）－メチル－アミノ）－２－ヒドロキシ－プロパンスルホン酸（ＴＡＰＳＯ）、Ｎ－トリス（ヒドロキシメチル）メチル－２－アミノエタンスルホン酸（ＴＥＳ）、Ｎ－トリス（ヒドロキシメチル）メチル－グリシン（トリシン）、トリス（ヒドロキシメチル）－アミノメタン（トリス）などが挙げられるがこれらに限定されない。好適な塩としては、例えば、ＮａＣｌ、ＭｇＣｌ２、ＫＣｌ、ＭｇＳＯ４などが挙げられる。

医薬製剤は、約０．００１％～約９９％（重量／重量）（例えば、０．００１～０．１、０．１～１．０、１．０～１０、１０～２０、２０～４０、４０～８０、または８０～１００重量／重量パーセント）の量で、核酸または組換え発現ベクターを含み得る。以下の製剤の記述において、「本核酸または組換え発現ベクター」は、核酸または組換え発現ベクターを含むものと理解するものとする。例えば、一部の例では、本製剤は、核酸または組換え発現ベクターを含む。

本核酸または組換え発現ベクターは、その他の化合物または化合物の混合物と混合してもよく、それらに封入してもよく、それらにコンジュゲートするかまたは別の方法で結合させてもよく、このような化合物としては、例えば、リポソームまたは受容体標的化分子が挙げられる。本核酸または組換え発現ベクターは、取り込み、分散及び／または吸収を補助する１種以上の成分と製剤内で混合してもよい。

本核酸または組換え発現ベクター組成物は、限定するわけではないが例えば、錠剤、カプセル剤、ゲルカプセル剤、液体シロップ剤、ソフトゲル剤、坐剤、及び浣腸剤などの多くの可能な剤形のいずれかへと製剤化してもよい。本核酸または組換え発現ベクター組成物はまた、水性媒体、非水性媒体、または混合媒体中の懸濁剤として製剤化してもよい。水性懸濁剤は、懸濁剤の粘度を上昇させる物質をさらに含有していてもよく、それらとしては、例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ソルビトール及び／またはデキストランが挙げられる。懸濁剤はまた安定化剤を含有していてもよい。

本核酸または組換え発現ベクターを含む製剤はリポソーム製剤であってもよい。本明細書で使用する場合、用語「リポソーム」とは、１つの球状二重層または複数の球状二重層で配列された両親媒性脂質からなるベシクルのことを意味する。リポソームは、親油性物質と、送達する組成物を含有する水性の内側部とで形成された膜を有するユニラメラまたはマルチラメラベシクルである。カチオン性リポソームは、負に荷電したＤＮＡ分子と相互作用して安定した複合体を形成することができる、正に荷電したリポソームである。ｐＨ感受性または負に荷電したリポソームは、ＤＮＡと複合体を形成するのではなくＤＮＡを取り込むと考えられている。カチオン性リポソームと非カチオン性リポソームの両方は、本核酸または組換え発現ベクターを送達するのに使用することができる。

リポソームとしてはまた「立体安定化」リポソームが挙げられ、本明細書で使用する場合、この用語は、１種以上の特殊な脂質を含むリポソームのことを意味し、それら特殊な脂質をリポソームに組み込むと、このような特殊な脂質を欠くリポソームと比較して向上した循環寿命がもたらされる。立体安定化リポソームの例は、リポソームのベシクル形成脂質部分の一部が、１種以上の糖脂質を含むか、または、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）部分などの１種以上の親水性ポリマーで誘導体化された、立体安定化リポソームである。リポソーム及びその使用については、米国特許第６，２８７，８６０号においてさらに記載されており、その全体は参照により本明細書に組み込まれる。

製剤及び組成物はまた、界面活性剤を含み得る。医薬品製品、製剤及びエマルション剤における界面活性剤の使用については、当該技術分野において周知である。界面活性剤及びその使用については、米国特許第６，２８７，８６０号においてさらに記載されている。

一実施形態では、核酸の効率的な送達を達成するために、様々な浸透促進剤が含まれている。細胞膜間の非親油性薬物の拡散補助に加え、浸透促進剤はまた、親油性薬物の浸透性を向上させる。浸透促進剤は、５つの広範なカテゴリー、すなわち、界面活性剤、脂肪酸、胆汁酸塩、キレート化剤、及び非キレート非界面活性剤、のうちの１つに属するように分類され得る。浸透促進剤及びその使用については、米国特許第６，２８７，８６０号においてさらに記載されており、その全体は参照により本明細書に組み込まれる。

経口投与用の組成物及び製剤としては、散剤もしくは顆粒剤、マイクロ微粒子剤、ナノ微粒子剤、水もしくは水性媒体中の懸濁剤もしくは液剤、カプセル剤、ゲルカプセル剤、サッシェ剤、錠剤、または、ミニ錠剤、が挙げられる。増粘剤、風味剤、希釈剤、乳化剤、分散助剤、または結合剤が望ましい場合がある。好適な経口製剤としては、１種以上の浸透促進界面活性剤及びキレート化剤と共に本アンチセンス核酸を投与する経口製剤が挙げられる。好適な界面活性剤としては、脂肪酸及び／またはエステルまたはその塩、胆汁酸及び／またはその塩が挙げられるがこれらに限定されない。好適な胆汁酸／塩及び脂肪酸ならびにその使用については、米国特許第６，２８７，８６０号においてさらに記載されている。浸透促進剤の組み合わせ、例えば、胆汁酸／塩と組み合わせた脂肪酸／塩も好適である。例示的な好適な組み合わせは、ラウリン酸、カプリン酸、及び、ＵＤＣＡ、のナトリウム塩のものである。更なる浸透促進剤としては、ポリオキシエチレン－９－ラウリルエーテル及びポリオキシエチレン－２０－セチルエーテルが挙げられるがこれらに限定されない。好適な浸透促進剤としてはまた、プロピレングリコール、ジメチルスルホキシド、トリエタノールアミン、Ｎ，Ｎ－ジメチルアセトアミド、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド、２－ピロリドン及びその誘導体、テトラヒドロフルフリルアルコール、ならびにＡＺＯＮＥ（商標）も挙げられる。

Ｍ．製剤
好適な製剤については上述したとおりであるが、ここでは組成物は薬学的に許容される等級である（例えば、組成物は薬学的に許容される賦形剤（複数可）及び活性分子を含む）。一部の例では、好適な製剤は、ａ）マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体と、ｂ）薬学的に許容される賦形剤と、を含む。一部の例では、好適な製剤は、ａ）マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体をコードするヌクレオチド配列を含む核酸と、ｂ）薬学的に許容される賦形剤と、を含み、一部の例では、該核酸はｍＲＮＡである。一部の例では、好適な製剤は、ａ）マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体の第１のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む第１の核酸と、ｂ）マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体の第２のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む第２の核酸と、ｃ）薬学的に許容される賦形剤と、を含む。一部の例では、好適な製剤は、ａ）マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体をコードするヌクレオチド配列を含む組換え発現ベクターと、ｂ）薬学的に許容される賦形剤と、を含む。一部の例では、好適な製剤は、ａ）マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体の第１のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む第１の組換え発現ベクターと、ｂ）マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体の第２のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む第２の組換え発現ベクターと、ｃ）薬学的に許容される賦形剤と、を含む。

好適な薬学的に許容される賦形剤については上述したとおりである。

Ｎ．方法
マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体は、Ｔ細胞の活性を調節するのに有用である。それゆえ、本開示は、Ｔ細胞の活性化を調節する方法を提供し、該方法は、広義には、標的Ｔ細胞をマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体と接触させることを含む。

１．特定の免疫細胞型の生成、刺激、または阻害を含む、免疫細胞活性の調節方法。
本開示は、ＴβＲＩ及びＴβＲＩＩを発現する細胞の活性を選択的に調節するための方法を提供し、該方法は、細胞（例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、マクロファージ、樹状細胞、及び顆粒球を含む先天性細胞）を、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体と接触させることを含み、Ｔ細胞をマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体と接触させることにより、エピトープ特異的Ｔ細胞の活性が選択的に調節される。一部の例では、接触させることはインビトロで生じる。一部の例では、接触させることはインビボで生じる。マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体を作用させる細胞の活性（例えば、古典的経路、非古典的経路、及び／または下流の遺伝子発現を通じたシグナル伝達）は、ＴＧＦ－βまたはマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体に曝露されていない処置群（例えば、細胞の対象）と比較して評価され得る。

本開示は、Ｔ細胞またはＢ細胞（例えば、病原性自己反応性Ｔ細胞及び／または病原性自己反応性Ｂ細胞）の数及び／または活性を低下させる方法を提供し、該方法は、１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体を（例えば、それを必要とする対象に）投与することを含む。一部の例では、該方法は、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）の数及び／または活性を増加させ、Ｔ細胞またはＢ細胞（例えば、１つ以上の自己反応性Ｔ細胞及び／または１つ以上の自己反応性Ｂ細胞）の数及び／または活性を減少させるものであり、１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体を作用させたＴ細胞またはＢ細胞の数及び／または活性の減少は、ＴＧＦ－βまたは１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体に曝露されていない処置群（例えば、細胞対象）と比較して評価される。

１つ以上（例えば、１つ、２つ以上、もしくは３つ以上）の独立して選択される野生型または変異型ＭＯＤを任意に含む、１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体の投与は、様々な細胞集団に直接的または間接的に影響を及ぼし得る。例として、任意に１つ以上の野生型または変異型ＩＬ－２ＭＯＤを含む、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体の投与は、ＦｏｘＰ３＋Ｔｒｅｇ細胞の発達及び／または生存を（インビボまたはインビトロにおいて）直接刺激し得る。ＴＧＦ－β／ＩＬ－２複合体が様々な免疫細胞に与える任意の直接作用に加えて、得られるＴｒｅｇ細胞は、例えば、Ｔ細胞活性化の誘導及び／またはＴ細胞応答のエフェクター段階をブロックし、Ｂ細胞活性化を抑制し、及び／またはナチュラルキラー細胞の分化及び／または増殖を阻害することによって、免疫応答を抑制することができる。

ａ．Ｔｒｅｇ
（ｉ）ｔＴｒｅｇ、ｐＴｒｅｇ、ｉＴｒｅｇ、及びＩＬ－２を含むＴＧＦ－β構築物または複合体
本開示は、胸腺由来Ｔｒｅｇ（ｔＴｒｅｇ）及び／または末梢Ｔｒｅｇ（ｐＴｒｅｇ）（Ｔｒｅｇは、自己反応性Ｔ細胞及びＢ細胞を抑制することができるＣＤ４^＋、ＦｏｘＰ３^＋、及びＣＤ２５^＋細胞である）の発達（例えば、増殖）及び／または生存を促進する方法を提供し、該方法は、１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体を、(例えば、それを必要とする対象に)投与すること、またはＣＤ４＋Ｔ細胞（例えば、ナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞）と（例えば、組織培養、血液中、または創傷などの特定の組織位置において）接触させることを含む。該方法で投与または接触される１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体は、１つ以上（例えば、１つ、２つ、または３つ）の独立して選択されるＩＬ－２ＭＯＤポリペプチド配列及び／または変異型ＩＬ－２ＭＯＤポリペプチド配列を含み得る。投与または接触は、ビタミンＤ（例えば、ビタミンＤ３またはその類似体）、レチノイン酸（例えば、オールトランスレチノイン酸）、及び／またはラパマイシン（例えば、ラパマイシンまたはその機能的類似体、例えば、シロリムス、エベロリムスまたはテムシロリムス）の哺乳動物標的（ｍＴＯＲ）の阻害剤の、共投与または細胞との接触と併せて行い得る。したがって、本開示は、ＦｏｘｐＰ３＋、ＦｏｘＰ３＋胸腺由来Ｔｒｅｇ（ｔＴｒｅｇ）及び／またはＦｏｘＰ３＋末梢Ｔｒｅｇ（ｐＴｒｅｇ）である、誘導された調節Ｔ細胞（ｉＴｒｅｇ）の発達及び／または生存を促進するための方法を提供し、該方法は、任意に、ビタミンＤまたはその類似体、レチノイン酸（例えば、オールトランスレチノイン酸）またはその類似体、及び／またはラパマイシンまたはその類似体の存在下で、１つ以上のＩＬ－２ＭＯＤポリペプチド配列及び／または変異型ＩＬ－２ＭＯＤポリペプチド配列を含む１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体を、（例えば、それを必要とする対象に）投与すること、または、ＣＤ４＋Ｔ細胞（例えば、ナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞）と接触させることを含む。１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体を用いた投与または処置の効果は、ベースライン値（例えば、処置前の細胞数）に対して、または、例えばＴＧＦ－βまたは１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体に曝露されていないこと以外は同一である試験群などの、処置群（例えば、細胞または対象）と比較して評価され得る。

本開示は、Ｔｒｅｇの誘導／増殖を増加させ、Ｔｒｅｇを維持し、及び／またはその機能を維持する方法を提供し、該方法は、Ｔ細胞（例えば、インビボまたはインビトロのＣＤ４＋Ｔ細胞）を、独立して選択される１つ以上（例えば、１つ、２つまたは３つ）のＩＬ－２ＭＯＤポリペプチド配列及び／または変異型ＩＬ－２ＭＯＤポリペプチド配列を含む１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体と接触させることを含む。該接触は、接触の前に決定されたベースライン値と比較して、または１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体と接触していない以外は同一の対照群の細胞と比較して、Ｔｒｅｇの誘導／増殖を増加させ、Ｔｒｅｇを維持し、及び／またはそれらの機能を維持する。本開示は、該方法で使用するための、１つ以上（例えば、１つ、２つまたは３つ）の独立して選択されるＩＬ－２ＭＯＤポリペプチド配列及び／または変異型ＩＬ－２ＭＯＤポリペプチド配列を含む、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体を包含し、提供する。一実施形態では、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体は、１つ以上の（例えば、１つ、２つまたは３つ）独立して選択されるＩＬ－２ＭＯＤポリペプチド配列及び／または変異型ＩＬ－２ＭＯＤポリペプチド配列を含む、図１の構造Ａ、ＢまたはＣに記載される構造を有する。一実施形態では、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体は、１つ以上の（例えば、１つ、２つまたは３つ）独立して選択されるＩＬ－２ＭＯＤポリペプチド配列及び／または変異型ＩＬ－２ＭＯＤポリペプチド配列を含む、図１の構造ＤまたはＥに記載される構造を有する。一実施形態では、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体は、１つ以上の（例えば、１つ、２つまたは３つ）独立して選択されるＩＬ－２ＭＯＤポリペプチド配列及び／または変異型ＩＬ－２ＭＯＤポリペプチド配列を含む、図１の構造Ｆに記載される構造を有する。

本開示は、Ｔｒｅｇの誘導／増殖を増加させ、Ｔｒｅｇを維持し、及び／またはその機能を維持する方法を提供し、該方法は、Ｔ細胞（例えば、インビボまたはインビトロのＣＤ４＋Ｔ細胞）を、１つ以上（例えば、１つ、２つ、３つ）の独立して選択されるＰＤ－Ｌ１もしくはＰＤ－Ｌ２ＭＯＤポリペプチド配列及び／または変異型ＰＤ－Ｌ１もしくはＰＤ－Ｌ２ＭＯＤポリペプチド配列を含む１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体と接触させることを含む。該接触は、接触の前に決定されたベースライン値と比較して、または１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体と接触していない以外は同一の対照群の細胞と比較して、Ｔｒｅｇの誘導／増殖を増加させ、Ｔｒｅｇを維持し、及び／またはそれらの機能を維持する。本開示は、該方法で使用するための、１つ以上の（例えば、１つ、２つ、または３つ）独立して選択されるＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－Ｌ２ＭＯＤポリペプチド配列及び／または変異型ＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－Ｌ２ＭＯＤポリペプチド配列を含む、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体を包含し、提供する。一実施形態では、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体は、独立して選択される１つ以上（例えば、１つ、２つまたは３つ）のＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－Ｌ２ＭＯＤポリペプチド配列及び／または変異型ＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－Ｌ２ＭＯＤポリペプチド配列を含む、図１の構造Ａ、Ｂ、またはＣに記載される構造を有する。一実施形態では、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体は、独立して選択される１つ以上（例えば、１つ、２つまたは３つ）のＰＤ－Ｌ１ＭＯＤポリペプチド配列及び／または変異型ＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－Ｌ２ＭＯＤポリペプチド配列を含む、図１の構造ＤまたはＥに記載の構造を有する。一実施形態では、独立して選択される１つ以上（例えば、１つ、２つまたは３つ）のＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－Ｌ２ＭＯＤポリペプチド配列及び／または変異型ＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－Ｌ２ＭＯＤポリペプチド配列を含むマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体は、図１の構造Ｆに記載の構造を有する。独立して選択される１つ以上（例えば、１つ、２つまたは３つ）のＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－Ｌ２ＭＯＤポリペプチド配列及び／または変異型ＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－Ｌ２ＭＯＤポリペプチド配列を含むマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体は、Ｔｒｅｇ（例えば、Ｔｂｅｔ＋ＦｏｘＰ３＋ｉＴｒｅｇ細胞）の誘導／増殖、Ｔｒｅｇの維持、及び／またはその機能の維持のために、ＩＬ－２（例えば、プロロイキン（アルデスロイキン）等の組み換えＩＬ－２など）と共に投与され得る。

本開示は、Ｔｒｅｇの誘導／増殖を増加させ、Ｔｒｅｇ（例えば、Ｔｒｅｇ数）を維持し、及び／またはその機能を維持するための方法を提供し、該方法は、Ｔ細胞（例えば、インビボまたはインビトロのＣＤ４＋細胞）を、１つ以上（例えば、１つ、２つまたは３つ）の独立して選択されるＩＬ－２及び／または変異型ＩＬ－２ＭＯＤポリペプチド配列、ならびに１つ以上の独立して選択されるｗｔまたは変異型ＰＤ－Ｌ１及び／またはＰＤ－Ｌ２ＭＯＤポリペプチド配列を含む１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体と接触させることを含む。該接触は、接触の前に決定されたベースライン値と比較して、または１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体と接触していない以外は同一の対照群の細胞と比較して、Ｔｒｅｇの誘導／増殖を増加させ、Ｔｒｅｇを維持し、及び／またはそれらの機能を維持する。本開示は、該方法で使用するための、１つ以上（例えば、１つ、２つまたは３つ）の独立して選択されるＩＬ－２ＭＯＤ及び／または変異型ＩＬ－２ＭＯＤポリペプチド配列と、１つ以上の独立して選択されるｗｔまたは変異型ＰＤ－Ｌ１及び／またはＰＤ－Ｌ２ポリペプチド配列とを含む、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体を包含し、提供する。一実施形態では、マスキングされたＴＧＦ－β構築物は、独立して選択される１つ以上（例えば、１つ、２つまたは３つ）のＩＬ－２ＭＯＤ及び／または変異型ＩＬ－２ＭＯＤポリペプチド配列と、１つ以上の独立して選択されるｗｔまたは変異型ＰＤ－Ｌ１及び／またはＰＤ－Ｌ２ポリペプチド配列と、を含む、図１の構造Ａ、ＢまたはＣに記載される構造を有する。一実施形態では、マスキングされたＴＧＦ－β構築物は、独立して選択される１つ以上（例えば、１つ、２つまたは３つ）のＩＬ－２ＭＯＤ及び／または変異型ＩＬ－２ＭＯＤポリペプチド配列と、１つ以上の独立して選択されるｗｔまたは変異型ＰＤ－Ｌ１及び／またはＰＤ－Ｌ２ポリペプチド配列と、を含む、図１の構造ＤまたはＥに記載される構造を有する。一実施形態では、マスキングされたＴＧＦ－β構築物は、独立して選択される１つ以上（例えば、１つ、２つまたは３つ）のＩＬ－２ＭＯＤ及び／または変異型ＩＬ－２ＭＯＤポリペプチド配列と、１つ以上の独立して選択されるｗｔまたは変異型ＰＤ－Ｌ１及び／またはＰＤ－Ｌ２ポリペプチド配列と、を含む、図１の構造Ｆに記載される構造を有する。

Ｔ細胞（例えば、ナイーブＣＤ４＋細胞）を、１つ以上の独立して選択されるＩＬ－２ＭＯＤ及び／または変異型ＩＬ－２ＭＯＤポリペプチド配列を単独で、または１つ以上（例えば、１つ、２つ、もしくは３つ）の独立して選択されるｗｔまたは変異型ＰＤ－Ｌ１及び／またはＰＤ－Ｌ２ＭＯＤポリペプチド配列との組み合わせで含む、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体（例えば、インビボまたはインビトロ）と接触させることにより、ＦｏｘＰ３及びＴｒｅｇ細胞誘導（例えば、Ｔｂｅｔ＋ＦｏｘＰ３＋ｉＴｒｅｇ細胞）の発現を増加させることができる。同様に、Ｔ細胞（例えば、ナイーブＣＤ４＋細胞）を、１つ以上（例えば、１つ、２つまたは３つ）の独立して選択されるＰＤ－Ｌ１またはＰＤＬ２及び／または変異型ＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－Ｌ２ＭＯＤポリペプチド配列を単独でまたはＩＬ－２（例えば、組換えヒトＩＬ－２）との組み合わせで含む、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体と接触（例えば、インビトロまたはインビボ）させることにより、ＦｏｘＰ３及びＴｒｅｇ細胞の誘導（例えば、Ｔｂｅｔ＋ＦｏｘＰ３＋ｉＴｒｅｇ細胞）の発現を増加させることができる。ＩＬ－２と、ＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－Ｌ２のいずれかとの両方が細胞に提供される場合、それとの接触により、Ｔｒｅｇエンドリソソームアスパラギニルエンドペプチダーゼを低減し得る。ＴｒｅｇにおけるＦｏｘｐ３の不安定化の原因となるエンドリソソームアスパラギニルエンドペプチダーゼの低減は、Ｔｒｅｇ（例えば、ｉＴｒｅｇ）の維持をもたらし、それらの機能を維持する。例えば、Ｆｒａｎｃｓｉｓｃｏｅｔａｌ．，ＪＥｘｐ．Ｍｅｄ．，２０６（１３）３０１５－３０２９（２０１８）ａｎｄＳｔａｔｈｏｐｏｕｌｏｕｅｔａｌ．Ｉｍｍｕｎｉｔｙ４９（２）：２４７－２６３（２０１８）を参照されたい。したがって、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体がＩＬ－２と、ＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－Ｌ２と、の両方を含む場合、Ｔ細胞との接触により、Ｔｒｅｇ数の増加のみならず、それらの細胞の安定性及び機能の増加をもたらし得る。

ＩＬ－２ＭＯＤ（ｗｔ及び／または変異体）及び／またはＰＤ－Ｌ１及び／またはＰＤ－Ｌ２（ｗｔ及び／または変異体）ポリペプチド配列を含むマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体の接触が、インビボで生じる（またはインビトロで細胞を処理してそれを患者に投与する）場合、該接触は処置を構成するといえる。そのような処置は、個体または個体集団におけるＴｒｅｇ細胞レベルの増加（例えば、ｉＴｒｅｇの総数、または組織内でのそれらの分画、または血液中での循環）をもたらす。処置はまた、ＴｒｅｇにおけるＦｏｘＰ３のレベルの上昇をもたらし得る。

マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体が、ｗｔまたは変異型ＰＤ－Ｌ１及び／またはＰＤ－Ｌ２ＭＯＤポリペプチド配列（複数可）との組み合わせでｗｔ及び／または変異型ＩＬ－２ＭＯＤポリペプチド配列（複数可）を含む場合、ＰＤ－Ｌ１配列（複数可）を欠く別様に同一のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体を用いて、個体または個体集団（例えば、年齢、性別、体重、及び／または疾患状態についてマッチングした）を処置したときに観察されるよりも長い期間、個体または個体集団における増加したＴｒｅｇ細胞レベル（例えば、組織内または血中を循環するｉＴｒｅｇの総数またはその画分）が維持される。ｗｔもしくは変異型ＰＤ－Ｌ１及び／またはＰＤ－Ｌ２ＭＯＤポリペプチド配列と組み合わせて、ｗｔ及び／または変異型ＩＬ－２ＭＯＤポリペプチド配列を含む、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体を用いた処置によっても、ＰＤ－Ｌ１ポリペプチド配列を欠く、別様に同一のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体を用いて処置を行ったときに観察されるレベルと比較して、ＴｒｅｇにおけるＦｏｘＰ３のレベルの持続的な上昇をもたらし得る。ｗｔもしくは変異型ＰＤ－Ｌ１及び／またはＰＤ－Ｌ２ＭＯＤポリペプチド配列と組み合わせて、ｗｔ及び／または変異型ＩＬ－２ＭＯＤポリペプチド配列を含む、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体での処置により、ＰＤ－Ｌ１ＭＯＤポリペプチド配列を欠く別様に同一のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体で処置した個体（または個体群の平均）のＴ細胞におけるその酵素の活性と比較して、Ｔｒｅｇ細胞におけるエンドリソソームアスパラギニルエンドペプチドアーゼの活性の低下をもたらし得る。

Ｔ細胞を、ｗｔ及び／または変異型ＩＬ－２ＭＯＤポリペプチド配列を単独で、またはｗｔまたは変異型ＰＤ－Ｌ１及び／またはＰＤ－Ｌ２ＭＯＤポリペプチド配列との組み合わせで含むマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体と（例えば、インビトロ、エクスビボ、または個体を処置するプロセスなどのインビボで）接触させるプロセスは、ビタミンＤまたはその類似体、レチノイン酸（例えば、オールトランスレチノイン酸）またはその類似体、及び／またはラパマイシンまたはその類似体などのｍＴＯＲ阻害剤の存在下で、Ｔ細胞と接触させることをさらに含み得る。これらの薬剤の存在下での接触は、接触前に決定されたベースライン値と比較して、または１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体と接触していない対照群（例えば、個体群）で測定された値と比較して、Ｔｒｅｇのレベル（例えば、Ｔｒｅｇ表現型を有する細胞の増殖または維持に起因する個体または組織中のＴｒｅｇの数または相対数）を増加させ得る。個体の対照群が用いられる場合、個体は、年齢、性別、及び体重のうちの１つ以上についてマッチングされ得る。個体はまた、民族、アルコール摂取、及び／または喫煙状態についてもマッチングされ得る。

本開示は、１つ以上の対象（例えば、個人または患者）におけるＴｒｅｇの数を増加させるための方法を提供し、該方法は、１つ以上の対象に、１つ以上（例えば、１つ、２つまたは３つ）の独立して選択されるＩＬ－２ＭＯＤポリペプチド配列及び／または変異型ＩＬ－２ＭＯＤポリペプチド配列を含み、かつ任意に、１つ以上の独立して選択されるｗｔまたは変異型ＰＤ－Ｌ１もしくはＰＤ－Ｌ２ＭＯＤポリペプチド配列を含む、１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体を投与することを含み、その投与により、１つ以上の対象におけるＴｒｅｇの数の増加がもたらされる。例えば、（例えば、血液もしくは組織中、または創傷などの位置における）Ｔｒｅｇの平均数を、１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体を投与する前の個体におけるＴｒｅｇの数と比較して、または１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体を受けなかった対照群と比較して、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも２倍、少なくとも２．５倍、少なくとも５倍、少なくとも１０倍、または１０倍超増加させることができる。

本開示は、１つ以上の対象（例えば、個人または患者）におけるＴｒｅｇの数を増加させるための方法を提供し、該方法は、１つ以上の対象に、任意でＩＬ－２（例えば、プロロイキン（アルデスロイキン）などの組み換えＩＬ－２）とに組み合わされる、１つ以上（例えば、１つ、２つまたは３つ）の独立して選択されるｗｔもしくは変異型ＰＤ－Ｌ１及び／またはＰＤ－Ｌ２ポリペプチド配列を含む、１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体を投与することを含み、その投与により、１つ以上の対象におけるＴｒｅｇの数の増加がもたらされる。例えば、（例えば、血液もしくは組織中、または創傷などの位置における）Ｔｒｅｇの平均数は、１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体を投与する前の個体におけるＴｒｅｇの数と比較して、または１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体を投与しなかった対照群と比較して、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも２倍、少なくとも２．５倍、少なくとも５倍、少なくとも１０倍、または１０倍超増加させることができる。

ｂ．ヘルパーＴ細胞
（ｉ）Ｔｈ９細胞、及びＩＬ－４を含むマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体
本開示は、胸腺由来Ｔｈ９細胞（ＣＤ４及びＣＣＲ６の発現及びＣＣＲ４の欠如を特徴とする、ＣＤ４＋細胞）の発達及び／または生存を促進するための方法を提供し、該方法は、１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体を、（例えば、それを必要とする対象に）投与すること、またはＣＤ４＋Ｔ細胞（例えば、ナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞またはＴｈ２細胞）と接触させることを含む。該方法で投与するかまたは接触させる１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体は、１つ以上（例えば、１つ、２つ、または３つ）の独立して選択されるＩＬ－４ＭＯＤポリペプチド配列及び／または変異型ＩＬ－４ＭＯＤポリペプチド配列を含み得る。したがって、本開示は、Ｔｈ９細胞の発達及び／または生存を促進するための方法を提供し、該方法は、１つ以上のＩＬ－４ＭＯＤポリペプチド配列及び／または変異型ＩＬ－４ＭＯＤポリペプチド配列を含む１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体を、（例えば、それを必要とする対象に）投与すること、またはナイーブＴ細胞と接触させることを含み、その投与により個体におけるＴｈ９細胞の数が増加する。例えば、Ｔｈ９細胞の数（例えば、組織培養、血液、または特定の組織位置における）を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも２倍、少なくとも２．５倍、少なくとも５倍、少なくとも１０倍、または１０倍超増加させることができる。

（ｉｉ）Ｔｈ１７細胞、及びＩＬ－１７を含むＴＧＦ－β構築物または複合体
本開示は、Ｔｈ１７細胞（ＩＬ－１７の産生によって定義されるＴ細胞）の産生を刺激する方法を提供し、該方法は、少なくとも１つのＩＬ－６または変異型ＩＬ－６ＭＯＤポリペプチド（例えば、１つ、２つまたは３つのＩＬ－６及び／または変異型ＩＬ－６ＭＯＤポリペプチド）を含む１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体を、（例えば、それを必要とする対象に）投与すること、またはＣＤ４＋Ｔ細胞（例えば、ナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞）と接触させることを含む。例えば、（例えば、組織培養、血液、または特定の組織位置における）Ｔｈ１７細胞の数を、１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体の投与前に存在する数と比較して、または１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体を受けなかった対照群と比較して、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも２倍、少なくとも２．５倍、少なくとも５倍、少なくとも１０倍、または１０倍を超えて増加させることができる。該方法は、腸粘膜バリア機能の維持に有用であり得、病原性細菌に対する保護（例えば、シトロバクターに対する）、及び好中球及び単球ならびに好中球を動員して細胞外真菌（例えば、粘膜皮膚カンジダ）を攻撃及び破壊するために必要となり得る。

（ｉｉｉ）Ｔｆｈ細胞、及びＩＬ－２１及びＩＬ－２３を含むマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体
本開示は、Ｔ濾胞ヘルパー（Ｔｆｈ）細胞（ＣＸＣＲ５発現によって定義されるＴ細胞）の産生を刺激するための方法を提供し、該方法は、ＩＬ－２１ＭＯＤポリペプチド、ＩＬ－２３ＭＯＤポリペプチド、ＩＬ－２１の変異型またはＩＬ－２３ＭＯＤポリペプチドの変異型から独立して選択される少なくとも１つのＭＯＤポリペプチド（例えば、１つ、２つまたは３つ）を含む１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体を（例えば、それを必要とする対象に）投与すること、またはマクロファージに接触させることを含む。例えば、（例えば、組織培養、血液、またはリンパ濾胞などの特定の組織位置における）Ｔｆｈ細胞の数を、１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体を投与する前に存在する数と比較して、または１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体を受けなかった対照群と比較して、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも２倍、少なくとも２．５倍、少なくとも５倍、少なくとも１０倍、または１０倍を超えて増加させることができる。該方法は、抗原特異的抗体応答の発達を支持するのに有用であり得る。

ｃ．Ｔエフェクター細胞、及びＩＬ－７を含むマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体
（ｉ）ＩＬ－７及びＣＤ８＋Ｔ細胞
本開示は、（例えば、ＩＬ－７Ｒ（例えば、ＩＬ－７Ｒα）の胸腺細胞における発現を促進することによって）ＣＤ４＋及び／またはＣＤ８＋Ｔ細胞の発達（系譜的コミットメント）及び／または生存を促進する方法を提供し、該方法は、１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体を、（例えば、それを必要とする対象に）投与すること、または前駆体ＣＤ４＋ＣＤ８＋Ｔ細胞と接触させることを含む。該方法で投与するかまたは接触させる１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体は、１つ以上（例えば、１つ、２つ、または３つ）の独立して選択されるＩＬ－７ＭＯＤポリペプチド配列及び／または変異型ＩＬ－７ＭＯＤポリペプチド配列を含み得る。したがって、本開示は、（例えば、インターロイキン（ＩＬ）－７Ｒαの胸腺細胞における発現を促進することによって）ＣＤ４＋またはＣＤ８＋系譜にコミットメントされた細胞の発生を促進するための方法を提供し、該方法は、１つ以上（例えば、１つ、２つまたは３つ）の独立して選択されるＩＬ－７ＭＯＤポリペプチド配列及び／または変異型ＩＬ－７ＭＯＤポリペプチド配列を含む１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体を（例えば、それを必要とする対象に）投与すること、またはＣＤ４＋及び／またはＣＤ８＋細胞前駆体（例えば、ＣＤ４＋８＋Ｔ細胞）と接触させることを含み、ＣＤ４＋及び／またはＣＤ８＋細胞の発達及び／または生存は、末梢血液または特定の組織（例えば、胸腺）におけるＣＤ４＋及び／またはＣＤ８＋細胞数をモニターすることによって評価される。

（ｉ）ＩＬ－７及び低親和性Ｔ細胞
本開示は、ＭＨＣタンパク質によって提示されるペプチドに対して低い親和性を有するＴ細胞受容体を有するＣＤ４＋Ｔ細胞及びＣＤ８＋Ｔ細胞のＩＬ－７依存的生存を促進することによって、末梢Ｔ細胞の恒常性を調節する方法を提供する。例えば、ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＰｅｒｓｐｅｃｔ．Ｂｉｏｌ．２０１７；９：ａ０２２２３６及びその引用を参照されたい。該方法は、胸腺細胞のＩＬ－７Ｒα発現を制御することによって操作し得る。ＩＬ－７依存的生存を促進する方法は、１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体を（例えば、それを必要とする対象に）投与することを含む。投与される１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体は、１つ以上（例えば、１つ、２つ、または３つ）の独立して選択されるＩＬ－７ＭＯＤポリペプチド配列及び／または変異型ＩＬ－７ＭＯＤポリペプチド配列を含み得る。したがって、本開示は、末梢Ｔ細胞恒常性を調節するための方法を提供し、該方法は、１つ以上（例えば、１つ、２つまたは３つ）の独立して選択されるＩＬ－７ＭＯＤポリペプチド配列及び／または変異型ＩＬ－７ＭＯＤポリペプチド配列を含む１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体を（例えば、それを必要とする対象に）投与することを含み、ＴＧＦ－β構築物または複合体の投与は、投与前のそれらの細胞の数と比較して、対象または対象群における末梢ＣＤ４＋Ｔ細胞及びＣＤ８＋Ｔ細胞の数を増加させる。

ｄ．マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体、及びＩＬ－１０
本開示は、少なくとも１つ（例えば、少なくとも２つ）の独立して選択される野生型または変異型ＩＬ－１０ＭＯＤポリペプチド（例えば、１つ、２つまたは３つの独立して選択されるＭＯＤ）を含む、１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体を使用して、２型先天性リンパ細胞（ＩＬＣ２細胞）を阻害する（例えば、喘息及びアレルギー性炎症を抑制するために、例えば、Ｒａｊａｓｅｔａｌ．，ＪＡｌｌｅｒｇｙＣｌｉｎＩｍｍｕｎｏｌ，１３９（５）：１４６８（２０１７）、及びＯｇａｓａｗａｒａ，ｅｔａｌ．，ＪＡｌｌｅｒｇｙＣｌｉｎＩｍｍｕｎｏｌ，１４１（３）：１１４７－１１５１（２０１８）を参照されたい）方法を提供する。変異型ＩＬ－１０ＭＯＤポリペプチドは、単量体ＩＬ－１０ポリペプチドの全部または一部（例えば、上記のヘリックスＤとＥとの間のヒンジ領域内への５～７ａａ挿入で置換された配列番号５０または５１の全部または一部）を含み得る。例えば、Ｊｏｓｅｐｈｓｏｎｅｔａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７５：１３５５２－１３５５７（２０００）を参照されたい。ＩＩ型先天性リンパ系細胞の阻害方法であって、独立して選択される野生型または変異型ＩＬ－１０ＭＯＤのうちの１つ以上（例えば、１つ、２つ以上、もしくは３つ以上）を任意に含む、１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体を、（例えば、それを必要とする対象に）投与すること、またはＩＩ型先天性リンパ系細胞に接触させることを含む、方法である。ＩＬＣ２細胞の阻害は、１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体の投与前の２型サイトカインの量と比較して、またはＴＧＦ－βまたは１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体に曝露されていない対照群（例えば、対象からの細胞、組織、または体液中）の２型サイトカインの量のいずれかと比較して、ＩＬＣ２細胞による２型サイトカイン（例えば、ＩＬ－３及び／またはＩＬ－１３）発現の抑制によって評価される。

ＴＧＦ－β及びＩＬ－１０は、消化管の恒常性を維持する上で重要な役割を果たし、ＩＬ－１０はＴＧＦ－βの上流及び下流の両方で機能する。例えば、ＩＬ－１０は、粘膜固有層Ｔ細胞によるＴＧＦ－βの発現及び分泌を誘導することができ、またそれはＴＧＦ－ｂと協働して作用しＴｒｅｇ細胞の分化を促進する。したがって、本開示は、対象における腸内の恒常性及びＴｒｅｇ細胞の分化を維持するための方法を提供し、該方法は、ｗｔまたは変異型ＩＬ－１０配列、またはＩＬ－２及びＩＬ－１０ａａ配列の両方を含む、１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体を投与することを含み、そのいずれかまたは両方は、独立して選択されるｗｔまたは変異型配列であり得る。例えば、ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＰｅｒｓｐｅｃｔ．Ｂｉｏｌ．２０１７；９：ａ０２２２３６及びその引用を参照されたい。

一部の例では、寛容を誘導することが望ましい場合などでは、１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体に存在する、少なくとも１つのＭＯＤポリペプチド（例えば、１つ、２つ、または３つの独立して選択されるＭＯＤ）は、少なくとも１つ（例えば、少なくとも２つ）の独立して選択される野生型または変異型ＩＬ－１０ＭＯＤポリペプチドを含む。例えば、ＡｍＪＰｈｙｓｉｏｌＧａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔＬｉｖｅｒＰｈｙｓｉｏｌ３０６：Ｇ５７５－Ｇ５８１（２０１４）、及びＬｅｖｉｎｇｓｅｔａｌ．ＩｎｔＡｒｃｈＡｌｌｅｒｇｙＩｍｍｕｎｏｌ．１２９（４）：２６３－７６（２００２）を参照されたい。変異型ＩＬ－１０ＭＯＤポリペプチドは、単量体ＩＬ－１０ポリペプチドの全部または一部（例えば、ヘリックスＤとＥとの間のヒンジ領域内への５～７ａａ挿入で置換された配列番号５０または５１の全部または一部）を含むことで、上述のように活性な単量体ＩＬ－１０を形成し得る。それゆえ、本開示は、ｗｔまたは変異型ＩＬ－１０配列、またはＩＬ－２及びＩＬ－１０ポリペプチド配列の両方を含む、１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体を投与することを含む、対象における寛容を誘導する方法を提供する。代替的に、ｗｔまたは変異型ＩＬ－１０（例えば、単量体ＩＬ－１０）配列を含む１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体は、ｗｔまたは変異型ＩＬ－２ポリペプチド配列を含む１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体と共に（同時にまたは組み合わせて）投与されてもよい。

ｅ．マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体、及びＦａｓＬ
一部の例では、寛容を誘導するか、またはＴエフェクター細胞を抑制することが望ましい場合などでは、１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体に存在する少なくとも１つのＭＯＤポリペプチド（例えば、１つ、２つまたは３つの独立して選択されるＭＯＤ）は、Ｆａｓリガンド（ＦａｓＬ）ポリペプチド、またはＦａｓリガンドポリペプチドの変異型を含み得る。（例えば、Ｑｉｕｅｔ．ａｌ．ＪＳｕｒｇＲｅｓ．２１８：１８０－１９３（２０１７）を参照されたい）。上で考察されたように、ＩＬ－１０または変異型ＩＬ－１０ポリペプチドはまた、寛容を誘導するために利用され得る。

したがって、本開示は、ｗｔまたは変異型ＦａｓＬポリペプチド配列を、またはＩＬ－２及びＦａｓＬポリペプチド配列の両方を、含む、１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体を投与することを含む、対象における寛容誘導またはＴエフェクター細胞の抑制方法を提供する。本開示はまた、寛容の誘導を提供する。代替的に、ｗｔまたは変異型ＦａｓＬ配列を含む１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体は、ｗｔまたは変異型ＩＬ－２ポリペプチド配列を含む１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体と（同時にまたは組み合わせて）投与され得る。

ｆ．他の細胞を調節するための方法
本開示は、インバリアントナチュラルキラーＴ（ｉＮＫＴ）細胞の発達及び／または生存を支持する方法を提供し、該方法は、独立して選択される１つ以上（例えば、１つ、２つ以上、もしくは３つ以上）の野生型または変異型ＭＯＤを含むマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体を、（例えば、それを必要とする対象に）投与するか、またはｉＮＫＴ細胞前駆細胞と接触させることを含む。その場合、発達及び／または生存は、ＴＧＦ－βまたはマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体に曝露されていない処置群（例えば、細胞または対象）と比較して評価される。

本開示は、マクロファージ（例えば、Ｔｏｌｌ様受容体リガンドまたはサイトカイン刺激によって活性化されたマクロファージ）を阻害する方法を提供し、該方法は、独立して選択される１つ以上（例えば、１つ、２つ以上、もしくは３つ以上）の野生型または変異型ＭＯＤを任意に含む、１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体を、（例えば、それを必要とする対象に）投与すること、またはマクロファージと接触させることを含み、その阻害は、ＴＧＦ－β及び／または１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体に曝露されていない処置群（例えば、細胞または対象）と比較して評価される。マクロファージ活性化の活性化及び阻害は、活性化マクロファージによる一酸化窒素産生等の当該技術分野で既知の方法によって評価される。

ＴＧＦ－βは単球によるＨ_２Ｏ_２産生を阻害し、フィブロネクチン付着を阻害する単球の化学誘引剤である。例えば、ＷａｒｗｉｃｋＤａｖｉｅｓａｎｄＣｏｌｅ，ＪＩｍｍｕｎｏｌ．１５５（６）：３１８６－３１９３（１９９５）を参照されたい。したがって、本開示は、単球（例えば、休止した単球）を刺激して遊走を行なわせるための方法を提供し、該方法は、独立して選択される１つ以上（例えば、１つ、２つ以上、もしくは３つ以上）の野生型または変異型ＭＯＤを任意に含む、１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体を、（例えば、それを必要とする対象に）投与すること、または単球と接触させることを含み、その刺激は、ＴＧＦ－β及び／または１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体に曝露されていない処置群（例えば、細胞または対象）と比較して評価される。単球活性化の活性化及び阻害は、Ｈ_２Ｏ_２産生及びフィブロネクチン付着の測定を含む、当該技術分野において既知の方法によって評価される。（例えば、単球刺激に応答した）Ｈ_２Ｏ_２産生は、少なくとも５％（例えば、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、１０倍、２０倍、３０倍、またはそれ超）減少し得る。

本開示は、（例えば、タイムラプス顕微鏡法またはボイデンチャンバアッセイによって評価される）、組織（例えば、傷害または炎症を起こした組織）内への末梢血単球及び／またはマクロファージ遊走を変化させる、及び／またはマクロファージ及び／または単球付着特性を向上させるための方法を提供し、該方法は、１つ以上（例えば、１つ、２つ以上、もしくは３つ以上）の独立して選択される野生型または変異型ＭＯＤを任意に含む、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体を（例えば、それを必要とする対象に）投与すること、または骨髄系細胞と接触させることを含み、ＴＧＦ－βまたはマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体に曝露されていない処置群（例えば、細胞または対象）と比較して、遊走及び／または付着特性が評価される。例えば、一部の例では、ＴＧＦ－β（例えば、ＴＧＦ－β１）との細胞または組織の短期的な相互作用は、マクロファージまたは単球の遊走を刺激したが、長期的な曝露はそれらの遊走を低下させている。例えば、Ｋｉｍｅｔａｌ．Ｂｌｏｏｄ，１０８：１８２１－１８２９（２００６）、及びＸｕｅｔａｌ．ＢｏｎｅＲｅｓｅａｒｃｈ，６（論文２）（２０１８）を参照されたい。

本開示は、（例えば、タイムラプス顕微鏡法またはボイデンチャンバアッセイによって評価される）化学誘導及び／または肥満細胞の接着特性を増強する方法を提供し、該方法は、独立して選択される１つ以上（例えば、１つ、２つ以上、もしくは３つ以上）の野生型または変異型ＭＯＤを任意に含む、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体を（例えば、それを必要とする対象に）投与するか、または肥満細胞と接触させることを含み、化学誘導及び／または接着特性は、ＴＧＦ－βまたはマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体に曝露されていない処置群（例えば、細胞または対象）と比較して評価される。

本開示は、自己反応性及び／または炎症性Ｔ細胞（例えば、Ｔｈ１、Ｔｈ２、Ｔｈ１７及び／またはＴｈ２２細胞）を調節する方法を包含し、提供する。該方法は、独立して選択される１つ以上（例えば、１つ、２つ以上、もしくは３つ以上）の野生型及び／または変異型ＭＯＤを任意に含む、１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体と（例えば、それを必要とする対象に）投与すること、または（例えば、インビボまたはインビトロで）Ｔ細胞と接触させることを含む。任意に１つ以上の野生型及び／または変異型ＭＯＤを含むＴＧＦ－β構築物または複合体は、かかる炎症性Ｔ細胞と直接相互作用し得、及び／または、放出された分子（例えば、サイトカイン／インターロイキン）を介して、または他の細胞集団を介して、かかる細胞に間接的に影響を与え得る。例として、１つ以上の野生型及び／または変異型ＩＬ－２ＭＯＤ（ＴＧＦ－β／ＩＬ－２複合体）を任意に含むマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体の投与は、ＦｏｘＰ３＋Ｔｒｅｇ細胞の発達及び／または生存を（インビトロまたはインビボで）直接的に刺激し得る。ＴＧＦ－β／ＩＬ－２複合体とＦｏｘＰ３^＋Ｔｒｅｇ細胞をもたらす細胞との直接的な相互作用に加えて、得られるＴｒｅｇは、例えば、Ｔ細胞活性化の誘導及び／またはＴ細胞応答のエフェクター段階をブロックし、Ｂ細胞活性化を抑制し、ナチュラルキラー細胞の分化及び／または増殖を阻害することによって、他の細胞に影響を与え得る。Ｔｒｅｇによるそのような作用は、限定されないが、ＩＬ－１０、ＴＧＦ－βの生産、及び／またはＴｒｅｇ上のＣＴＬＡ－４の、抗原提示細胞上のＢ７（Ｂ７－１またはＣＤ８０／Ｂ７－２またはＣＤ８６）への結合などを行わせ、それにより、これらの細胞のＣＤ２８共刺激と競合させるなど、様々な手段を通じて行われ得る。したがって、本開示は、Ｔｈ１、Ｔｈ２、Ｔｈ１７、Ｔｈ２２などの系統に属する自己反応性Ｔ細胞及び炎症性Ｔ細胞を調節する方法を包含し、提供する。自己反応性細胞は、バイスタンダーＴ細胞（例えば、バイスタンダーＴｈ１、Ｔｈ２、及び／またはＴｈ１７細胞）の集団であり得る。例えば、セリアック病では、調節されるＴ細胞として、ＩＬ－１７Ａ、ＩＬ－１７Ｆ、ＩＬ－２１、及び／またはＩＬ－２２の発現、分泌、及び／または粘膜組織レベルの低下をもたらす、腸粘膜内で見出されるＴｈ１７細胞が挙げられる。

本開示は、ＣＤ４＋Ｔｈ１細胞の作用を阻害し（例えば、インターフェロンγ及び／またはＴＮＦの分泌を低下させ）、それによってマクロファージを活性化する（例えば、肉芽腫性炎症を含む炎症性疾患の要素である遅延型過敏症または「ＤＴＨ」における食作用及びマクロファージの関与）方法を包含し、提供する。該方法は、独立して選択される１つ以上（例えば、１つ、２つ以上、もしくは３つ以上）の野生型または変異型ＭＯＤを任意に含む、１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体を（例えば、それを必要とする対象に）投与すること、またはＣＤ４＋Ｔｈ１細胞と接触させることを含み、Ｔｈ１細胞作用の阻害は、ＴＧＦ－β及び／または１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体に曝露されていない処置群（例えば、細胞または対象）と比較した、インターフェロンγ及び／またはＴＮＦの産生によって評価される。

本開示は、ＣＤ４＋Ｔｈ２細胞（例えば、低下したＩｇＥ、肥満細胞、及び好酸球媒介反応）の作用（活性化）を阻害する方法を包含し、提供するものであり、該方法は、独立して選択される１つ以上（例えば、１つ、２つ以上、もしくは３つ以上）の野生型または変異型ＭＯＤを任意に含む、１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体を（例えば、それを必要とする対象に）投与すること、またはＣＤ４＋Ｔｈ２細胞と接触させることを含み、Ｔｈ２細胞作用の阻害（Ｔｈ２細胞活性化の程度）は、ＴＧＦ－β及び／またはＴＧＦ－βの１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体に曝露されていない処置群（例えば、細胞または対象）と比較した、ＩＬ－４、ＩＬ－５、及び／またはＩＬ－１３の産生によって評価される。

２．共刺激ポリペプチドを選択的に送達するための方法
本開示は、１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体を使用して、１つ以上（例えば、１つ、２つ以上、３つ以上、または４つ以上）の独立して選択されるＭＯＤ及び／または変異型ＭＯＤと共に、マスキングされた形態でＴＧＦ－βを送達する方法を提供する。ＴβＲを含む細胞へのＭＯＤの送達は、ＴβＲを含有するかまたは含有しない細胞におけるＭＯＤとその受容体（ｃｏ－ＭＯＤ）との相互作用のために複雑であり得る。マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体は、ＴβＲに対するマスキングされたＴＧＦ－βポリペプチドの有効な親和性と比較して、ＭＯＤの数及びそれらの対応するｃｏ－ＭＯＤに対する親和性を変化させることによって、細胞を標的とするものとし得る。親和性が低下した変異型ＭＯＤをマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体に組み込むことにより、ＴＧＦ－βポリペプチドが結合相互作用に対して、より強く影響を及ぼすか、またはそれを支配することが可能になる。ＴβＲに対して、減少した親和性を有する変異型ＭＯＤ（それらは依然としてそれらのｃｏ－ＭＯＤを刺激することができる）、及び比較的強い親和性を有するＴＧＦ－βポリペプチド、の組み合わせを組み込むことにより、１つ以上のＭＯＤ（複数可）を含むマスキングされたＴＧＦ－β構築物及び複合体は、ＴβＲ及び対応するｃｏ－ＭＯＤ（複数可）の両方を有する細胞への結合に偏らせる（または選択させる）ことが可能となる。このような組み合わせはまた、ＴβＲを含まないｃｏ－ＭＯＤを担持する細胞のオフターゲット刺激を回避する。

本開示は、ＴＧＦ－βポリペプチドと、少なくとも１つの変異型ＭＯＤとの両方を、ＴβＲ（例えば、ＴβＲＩＩ及び／またはＴβＲＩ）と、少なくとも１つの変異型ＭＯＤに対応するｃｏ－ＭＯＤとをそれらの表面膜上に発現する標的細胞（例えば、インビトロまたはインビボ）に選択的に送達することを提供する。この文脈で使用される場合、「選択的送達」とは、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体のＭＯＤが、ＴβＲを含まない細胞、すなわち「非標的細胞」よりも、ＴβＲ（例えば、ＴβＲＩＩ及び／またはＴβＲＩ）を発現する細胞、すなわち、「標的細胞」に対して数多く、ｃｏ－ＭＯＤに送達されることを意味する。

前述に鑑みて、本開示は、ＴＧＦ－βポリペプチド及び少なくとも１つの変異型ＭＯＤの両方を、その表面膜上にＴβＲ（例えば、ＴβＲＩＩ及び／またはＴβＲＩ）及び少なくとも１つの変異型ＭＯＤに対応する補助ＭＯＤを発現する標的細胞に選択的に（例えば、インビトロまたはインビボ）送達することを提供し、該方法は、細胞集団を、細胞上に存在するＴβＲを飽和させるのに不十分な（例えば、細胞上に存在するＴβＲの７０％、６０％、５０％、４０％または３０％未満を占める）、少なくとも１つの親和性低減変異型ＭＯＤを含む一定量のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体と接触させ、（例えば、結合するのに十分な時間）少なくとも１つの親和性低減変異型ＭＯＤを含むマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体を、該細胞と相互作用させることを含む。そのような方法では、（ｉ）少なくとも１つの親和性低減変異型ＭＯＤを含むマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体によって結合された、ＴβＲ及びｃｏ－ＭＯＤの両方を発現する細胞の数を、少なくとも１つの親和性低減変異型ＭＯＤを含むマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体によって結合されたｃｏ－ＭＯＤを発現する細胞の数で割った比率は、（ｉｉ）ｗｔ．ＭＯＤを含むマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体によって結合された、ＴβＲ及びｃｏ－ＭＯＤの両方を発現する細胞の数を、ｗｔ．ＭＯＤを含むマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体によって結合されたｃｏ－ＭＯＤを発現する細胞の数で割った比率よりも大きい。

本開示は、標的細胞を、ビタミンＤ、レチノイン酸（例えば、オールトランスレチノイン酸）、及び／またはラパマイシンの存在下で、任意に、少なくとも１つのｗｔ及び／または変異型ＩＬ－２ＭＯＤポリペプチドを含むマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体と接触させることを含む、マスキングされたＴＧＦ－βポリペプチド及び少なくとも１つのｗｔ及び／または変異型ＩＬ－２ＭＯＤポリペプチドの両方の、標的細胞への（例えば、インビトロまたはインビボ）送達を提供する。一例では、少なくとも１つのｗｔまたは変異型ＩＬ－２ＭＯＤポリペプチドを含むマスキングされたＴＧＦ－βポリペプチドは、ビタミンＤ、レチノイン酸（例えば、オールトランスレチノイン酸）、及び／またはラパマイシンのうちのいずれか１つ、任意の２つ、または３つ全ての存在下で送達される。

本開示は、少なくとも１つの野生型及び／または変異型ＩＬ－６ＭＯＤポリペプチドを含むマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体の、標的細胞への送達、及び、任意で選択的な（例えば、インビトロまたはインビボでの）選択的送達を提供する。

本開示は、少なくとも１つの野生型及び／または変異型ＩＬ－７ＭＯＤポリペプチドを含むマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体の両方の標的細胞への送達、及び、任意で選択的な（例えば、インビトロまたはインビボでの）選択的送達を提供する。

本開示は、少なくとも１つの野生型及び／または変異型ＩＬ－１０ＭＯＤポリペプチドを含むマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体の両方の標的細胞への送達、及び、任意で選択的な（例えば、インビトロまたはインビボでの）選択的送達を提供する。

本開示は、少なくとも１つの野生型及び／または変異型ＩＬ－１５ＭＯＤポリペプチドを含むマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体の両方の標的細胞への送達、及び、任意で選択的な（例えば、インビトロまたはインビボでの）選択的送達を提供する。

本開示は、少なくとも１つの野生型及び／または変異型ＩＬ－２１ＭＯＤポリペプチドを含むマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体の両方の標的細胞への送達、及び、任意で選択的な（例えば、インビトロまたはインビボでの）選択的送達を提供する。

本開示は、少なくとも１つの野生型及び／または変異型ＩＬ－２３ＭＯＤポリペプチドを含むマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体の両方の標的細胞への送達、及び、任意で選択的な（例えば、インビトロまたはインビボでの）選択的送達を提供する。

本開示は、少なくとも１つの野生型及び／または変異型ＰＤ－Ｌ１ＭＯＤポリペプチドを含むマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体の両方の標的細胞への送達、及び、任意で選択的な（例えば、インビトロまたはインビボでの）選択的送達を提供する。

本開示は、少なくとも１つの野生型及び／または変異型ＦａｓＬＭＯＤポリペプチドを含むマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体の両方の標的細胞への送達、及び、任意で選択的な（例えば、インビトロまたはインビボでの）選択的送達を提供する。

３．治療または予防方法
本開示は治療及び予防方法を提供し、該方法は、細胞の標的細胞集団の活性を選択的に調節すること及び／または個体を治療することに有効な、有効量のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体（例えば、ＰＳＭ－４０３３－４０３９）、またはマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体をコードする１つ以上の核酸もしくは発現ベクターを、個体由来の標的細胞集団に（例えば、インビトロまたはインビボ）接触させること、及び／または、個体に投与することを含み得る。標的細胞を個体から分離して（すなわち、インビトロで）処置する場合、細胞またはその子孫の全部または一部を個体に投与し得る。一部の例では、本開示の治療または予防方法は、有効量の、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体をコードするヌクレオチド配列を含む１つ以上の組換え発現ベクターを、それを必要とする個体に投与することを含む。一部の例では、本開示の治療または予防方法は、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体をコードするヌクレオチド配列を含む１つ以上のｍＲＮＡ分子を、それを必要とする個体に投与することを含む。一部の例では、治療または予防方法は、それを必要とする個体からの標的集団の細胞を、有効量の、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体（例えば、ＰＳＭ－４０３３－４０３９）と（すなわち、インビトロ）接触させ、それによって接触させた標的集団の細胞を形成することを含み、該方法は、接触させた標的集団の細胞（及び／またはその子孫）の全部または一部を個体に投与することをさらに含む。一部の例では、治療または予防方法は、有効量の、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体（例えば、ＰＳＭ－４０３３－４０３９）を、または有効量の、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体（例えば、ＰＳＭ－４０３３－４０３９）を含む薬学的に許容される組成物を、それを必要とする個体に投与することを含む。有効量の、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体（例えば、ＰＳＭ－４０３３－４０３９）を含む組成物で治療する（例えば、症状を治癒及び／または改善するために）ことができる症状としては、不十分な数のＴｒｅｇ細胞、または不十分な活性のＴｒｅｇ細胞と関連する症状、自己免疫疾患または障害、アレルギー反応（複数可）、創傷（例えば、皮膚及び／または粘膜創傷）、及び／または火傷が挙げられる。加えて、臓器移植を受ける個体もまた、治療の恩恵を受け得る。

ＦｏｘＰ３＋Ｔｒｅｇ細胞の数が不十分な、またはＦｏｘＰ３＋Ｔｒｅｇ細胞の活性が不十分な個体に、有効量の、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体（例えば、ＰＳＭ－４０３３－４０３９）及び／またはマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体をコードする１つ以上の核酸（例えば、組換え発現ベクター）を投与することを含む、治療または予防方法。一例では、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体は、ＰＳＭ－４０３３－４０３９を含む。一例では、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体は、１つ以上（例えば、１つ、２つ、または３つ）の独立して選択されるＩＬ－２または変異型ＩＬ－２ＭＯＤポリペプチド配列を含む。ＩＬ－２または変異型ＩＬ－２ＭＯＤの有無に拘わらず、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体、及び／またはマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体をコードする１つ以上の核酸（例えば、組換え発現ベクター）を、ビタミンＤ（例えば、１α、２５－ジヒドロキシビタミンＤ３または１α、２５－ジヒドロキシコレカルシフェロール）またはビタミンＤ類似体、ラパマイシン、及び／またはレチノイン酸（例えば、オールトランスレチノイン酸）のうちのいずれか１つ以上の投与前に、投与中（同時または組み合わせ投与中）に、または投与後に、投与し得る。

治療または予防方法は、それを必要とする自己免疫疾患または障害を有する個体に、有効量の、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体を、及び／またはマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体をコードするヌクレオチド配列を含む１つ以上の核酸（例えば、組換え発現ベクター）を投与することを含み得る。一例では、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体は、１つ以上（例えば、１つ、２つまたは３つ）の独立して選択されるＩＬ－２または変異型ＩＬ－２ＭＯＤポリペプチド配列（例えば、ＰＳＭ－４０３３－４０３９）を含む。第２の例では、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体は、独立して選択される１つ以上（例えば、１つ、２つ、または３つ）のＩＬ－１０または変異型ＩＬ－１０ＭＯＤポリペプチド配列を含む。１つの例では、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体は、少なくとも１つの独立して選択されるＩＬ－２または変異型ＩＬ－２ＭＯＤポリペプチド配列と、少なくとも１つの独立して選択されるＩＬ－１０または変異型ＩＬ－１０ＭＯＤポリペプチド配列とを含む。第２の例では、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体は、独立して選択される１つ以上（例えば、１つ、２つ、または３つ）のＩＬ－１０または変異型ＩＬ－１０ＭＯＤポリペプチド配列を含む。本開示の方法で治療することができる自己免疫疾患としては、限定されないが、アジソン病、円形脱毛症、強直性脊椎炎、自己免疫脳脊髄炎、自己免疫溶血性貧血、自己免疫性肝炎、自己免疫に関連する不妊性、自己免疫性血小板減少性紫斑病、水疱性類天疱瘡、クローン病、グッドパスチュア症候群、糸球体腎炎（例えば、半月状の糸球体腎炎、増殖性糸球体腎炎）、甲状腺機能亢進症、橋本甲状腺炎、混合結合織疾患、多発性硬化症、重症筋無力症（ＭＧ）、天疱瘡（例えば、尋常性天疱瘡）、悪性貧血、多発性筋炎、乾癬、乾癬性関節炎、慢性関節リウマチ、硬皮症、シェーグレン症候群、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、脈管炎及び白斑が挙げられる。一実施形態では、本開示の方法で治療することができる自己免疫疾患は、Ｔ１Ｄである。一実施形態では、本開示の方法で治療することができる自己免疫疾患は、セリアック病である。Ｔ１Ｄ及び／またはセリアック病はまた、本開示の方法による治療の対象となる自己免疫疾患からも除外され得る。

Ｔｈ１７細胞の欠損を有する個体（例えば、腸内の細菌及び／または真菌感染症に十分に応答することができない個体）に、有効量の、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体を、及び／またはマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体をコードする１つ以上の核酸（例えば、組み換え発現ベクター）を投与することを含む、治療または予防方法。一例では、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体は、１つ以上（例えば、１つ、２つ、または３つ）の独立して選択されるＩＬ－６または変異型ＩＬ－６ＭＯＤポリペプチド配列を含む。治療または予防方法は、腸内の細菌及び／または真菌感染症に十分に応答することができない個体に、有効量の、１つ以上の独立して選択されるＩＬ－６及び／または変異型ＩＬ－６ポリペプチドを含むマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体を、または１つ以上の独立して選択されるＩＬ－６及び／または変異型ＩＬ－６ポリペプチドを含むマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体をコードする１つ以上の核酸（例えば、組換え発現ベクター）を投与することを含み得る。

Ｔｈ９細胞の欠損を有する個体（例えば、蠕虫感染症に十分に応答することができない個体）に、有効量の、蠕虫感染症に応答するのに十分なマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体を、及び／またはマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体をコードする１つ以上の核酸（例えば、組換え発現ベクター）を投与することを含む、治療または予防方法。一例では、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体は、独立して選択される１つ以上（例えば、１つ、２つ、または３つ）のＩＬ－４または変異型ＩＬ－４ＭＯＤポリペプチド配列を含む。治療または予防方法は、蠕虫感染症に十分に応答することができない個体に、有効量の、１つ以上の独立して選択されるＩＬ－４及び／または変異型ＩＬ－４ポリペプチドを含むマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体を、または１つ以上の独立して選択されるＩＬ－４及び／または変異型ＩＬ－４ポリペプチドを含むマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体をコードする１つ以上の核酸（例えば、組換え発現ベクター）を投与することを含み得る。

Ｔｆｈ細胞の欠損を有する個体（例えば、高親和性抗体を、または十分な量の高親和性抗体を産生することができない個体）に、有効量の、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体を、及び／または高親和性抗体の産生を増加させるのに十分なマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体をコードする１つ以上の核酸（例えば、組換え発現ベクター）を投与することを含む、治療または予防方法。一例では、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体は、独立して選択される１つ以上（例えば、１つ、２つ、または３つ）のＩＬ－２１、ＩＬ－２３、変異型ＩＬ－２１、または変異型ＩＬ－２３ＭＯＤポリペプチド配列を含む。治療または予防方法は、高親和性抗体を産生することができないか、または高親和性抗体の量が不十分な個体に、有効量の、１つ以上の独立して選択されるＩＬ－２１、ＩＬ－２３、変異型ＩＬ－２１もしくは変異型ＩＬ－２３ＭＯＤポリペプチド配列を含むマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体を、または１つ以上の独立して選択されるＩＬ－２１、ＩＬ－２３、変異型ＩＬ－２１もしくは変異型ＩＬ－２３ＭＯＤポリペプチド配列を含むマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体をコードする１つ以上の核酸（例えば、組換え発現ベクター）を投与することを含み得る。

対照群と比較して過剰なＴｈ１細胞活性を有する個体（例えば、標的組織または循環中の活性化マクロファージのレベルの上昇及び／またはインターフェロンγ「ＩＦＮ－γ」のレベルの上昇を有する個体）に、有効量の、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体を、及び／またはマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体をコードする１つ以上の核酸（例えば、組換え発現ベクター）を投与することを含む、治療または予防方法。治療または予防方法は、活性化されたマクロファージのレベルの上昇及び／またはインターフェロンガンマ「ＩＦＮ－γ」のレベルの上昇（例えば、循環中または標的組織内で）を有する個体に、有効量の、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体を、またはマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体をコードする１つ以上の核酸（例えば、組換え発現ベクター）を投与することを含みうる。

対照群と比較して過剰なＴｈ２細胞活性を有する個体（例えば、活性化された肥満細胞のレベルの上昇、及び／または循環もしくは組織局在化するＩｇＥのレベルの上昇を有する個体）に、有効量の、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体を、及び／またはマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体をコードする１つ以上の核酸（例えば、組換え発現ベクター）を投与することを含む、治療または予防方法。治療または予防方法は、活性化された肥満細胞のレベルが上昇した、及び／またはＩｇＥ（循環もしくは組織局在化）のレベルが上昇した個体に、有効量の、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体を、またはマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体をコードする１つ以上の核酸（例えば、組換え発現ベクター）を投与することを含み得る。

自己反応性Ｔ細胞（または高親和性Ｔ細胞）のＴ細胞受容体駆動活性化を有する個体に、有効量の、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体（例えば、ＰＳＭ－４０３３－４０３９）を、及び／またはマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体をコードする１つ以上の核酸（例えば、組換え発現ベクター）を投与することを含む、治療または予防方法。治療または予防方法は、自己反応性Ｔ細胞を有する個体に、有効量の、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体（例えば、ＰＳＭ－４０３３－４０３９）を、またはマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体をコードする１つ以上の核酸（例えば、組換え発現ベクター）を投与することを含み得る。

有効量の、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体を、及び／またはマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体をコードする１つ以上の核酸（例えば、組換え発現ベクター）を、（例えば、胸腺細胞ＩＬ－７Ｒａ発現の制御による）低親和性ＣＤ４＋及び／またはＣＤ８＋Ｔ細胞のＩＬ－７依存性の生存を促進することが望ましい個体に投与することを含む、治療または予防方法。一例では、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体は、独立して選択される１つ以上（例えば、１つ、２つ、または３つ）のＩＬ－７または変異型ＩＬ－７ＭＯＤポリペプチド配列を含む。治療または予防方法は、低親和性ＣＤ４＋及び／またはＣＤ８＋Ｔ細胞のレベルを十分に維持することができない個体に、有効量の、１つ以上の独立して選択されるＩＬ－７及び／または変異型ＩＬ－７ポリペプチドを含む、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体を、または１つ以上の独立して選択されるＩＬ－７及び／または変異型ＩＬ－７ポリペプチドを含むマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体をコードする１つ以上の核酸（例えば、組換え発現ベクター）を、投与することを含み得る。

有効量の、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体を、及び／またはマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体（例えば、ＰＳＭ－４０３３－４０３９）をコードする１つ以上の核酸（例えば、組換え発現ベクター）を、特定の細胞（例えば、がん細胞、またはがん抗原１５－３、２７－２９、１２５、がん胚抗原、α－フェトプロテイン及び／またはβ２－マイクログロブリンなどの特定のマーカーを有するがん細胞）のアポトーシスを促進することが望ましい個体に投与することを含む、治療または予防方法。一例では、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体は、独立して選択される１つ以上（例えば、１つ、２つ、または３つ）のｗｔ．Ｆａｓリガンドまたは変異型ＦａｓリガンドＭＯＤポリペプチド配列を含む。

ｉＴｒｅｇ（ＣＤ４＋ＦｏｘＰ３＋）細胞を誘導することが望ましい個体（例えば、エフェクターＴ（Ｔｅｆｆ）細胞を能動的に抑制するために末梢寛容を誘導することが望ましい、及び／または免疫媒介性組織損傷を阻害することが望ましい個体）に、有効量の、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体（例えば、ＰＳＭ－４０３３－４０３９）を、及び／またはマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体をコードする１つ以上の核酸（例えば、組換え発現ベクター）を投与することを含む、治療または予防方法。一例では、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体は、独立して選択される１つ以上（例えば、１つ、２つ、または３つ）のｗｔまたは変異型ＰＤ－Ｌ１ＭＯＤポリペプチド配列を含む。別の例では、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体は、独立して選択される１つ以上（例えば、１つ、２つ、または３つ）のｗｔ及び／または変異型ＰＤ－Ｌ１ＭＯＤポリペプチド配列と、１つ以上のｗｔ及び／または変異型ＩＬ－２ＭＯＤポリペプチド配列とを含む。一実施形態において、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体は、（ｉ）１つの独立して選択されるｗｔまたは変異型ＰＤ－Ｌ１ＭＯＤポリペプチド配列、及び（ｉｉ）１つのｗｔまたは変異型ＩＬ－２ＭＯＤ配列を含む。例えば、Ｆｒａｎｃｉｓｃｏｅｔａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，２０６（１３）：３０１５－３０２９（２００９）を参照されたい。

ＩＩ型先天性リンパ球（ＩＬＣ２細胞）を阻害する（例えば、喘息、アレルギー反応、及び／またはアレルギー性炎症を抑制する）ことが望ましい個体に、有効量の、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体（例えば、ＰＳＭ－４０３３－４０３９）を、及び／またはマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体をコードする１つ以上の核酸（例えば、組換え発現ベクター）を投与することを含む、治療または予防方法。一例では、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体は、独立して選択される１つ以上（例えば、１つ、２つ、または３つ）のＩＬ－１０または変異型ＩＬ－１０ＭＯＤポリペプチド配列を含む。ＩＬ－１０または変異型ＩＬ－１０ＭＯＤの有無に拘わらず、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体、及び／またはマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体をコードする１つ以上の核酸（例えば、組換え発現ベクター）は、グルコココルチコイド（例えば、デキサメタゾン、プレドニゾンなど）、抗ヒスタミン剤（例えば、ジフェンヒドラミン、クロルフェニラミンなど）、及び／またはエピネフリンの投与前、投与中（同時または組み合わせ投与中）、または投与後に投与され得る。

アレルギー、アレルギー性炎症、及び／またはＩｇＥレベルの上昇（循環または組織局在化）を有する個体に、有効量の、独立して選択される少なくとも１つ（例えば、１つ、２つまたは３つ）のＩＬ－１０または変異型ＩＬ－１０ＭＯＤポリペプチドを含むマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体を、及び／またはマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体をコードする１つ以上の核酸（例えば、組換え発現ベクター）を投与することを含む、治療または予防方法。治療または予防方法は、有効量の、独立して選択されるＩＬ－１０または変異型ＩＬ－１０ＭＯＤポリペプチドを少なくとも１つ（例えば、１つ、２つ、または３つ）を含む、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体を、及び／またはマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体をコードする１つ以上の核酸（例えば、組換え発現ベクター）を、ＩｇＥレベルの上昇（循環または組織局在化）を有する個体に投与することを含み得る。ＩＬ－１０または変異型ＩＬ－１０ＭＯＤの有無に拘わらず、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体、及び／またはマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体をコードする１つ以上の核酸（例えば、組換え発現ベクター）は、グルコココルチコイド（例えば、デキサメタゾン、プレドニゾンなど）、抗ヒスタミン剤（例えば、ジフェンヒドラミン、クロルフェニラミンなど）、及び／またはエピネフリンの投与前、投与中（同時または組み合わせ投与中）、または投与後に投与され得る。ＴＧＦ－β及びＩＬ－１０は、肥満細胞を活性化する高親和性ＩｇＥ受容体（Ｆｃ１ＲＩ）の発現を抑制する働きをし、ＩＬ－１０はさらに、過剰な肥満細胞活性化及び慢性炎症の発生を防止する働きをする。例えば、Ｋｅｎｎｅｄｙｅｔａｌ．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１８０（５）２８４８－２８５４（２００８）を参照されたい。

多発性硬化症と診断されるか、または多発性硬化症を有する個体に、有効量の、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体（例えば、ＰＳＭ－４０３３－４０３９）を、及び／またはマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体をコードする１つ以上の核酸（例えば、組換え発現ベクター）を投与することを含む、治療または予防方法。一例では、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体は、独立して選択される１つ以上（例えば、１つ、２つ、または３つ）のＩＬ－１０または変異型ＩＬ－１０ＭＯＤポリペプチド配列を含む。

少なくとも１つの皮膚または粘膜熱傷を有する個体を治療する方法であって、有効量の、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体（例えば、ＰＳＭ－４０３３－４０３９）を、及び／またはマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体をコードする１つ以上の核酸（例えば、組換え発現ベクター）を個体に投与することを含む方法。一例では、該方法は、独立して選択される少なくとも１つ（例えば、１つ、２つまたは３つ）のＩＬ－１０または変異型ＩＬ－１０ＭＯＤポリペプチドを含む、有効量のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体を、及び／またはマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体をコードする１つ以上の核酸（例えば、組換え発現ベクター）を投与することを含み得る。火傷は、第Ｉ度、第ＩＩ度、または第ＩＩＩ度の火傷であり得る。

少なくとも１つの皮膚または粘膜の創傷（表皮または粘膜の摩耗、回避、切開、裂傷、または穿刺）を有する個体を治療する方法であって、有効量の、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体（例えば、ＰＳＭ－４０３３－４０３９）を、及び／またはマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体をコードする１つ以上の核酸（例えば、組換え発現ベクター）を個体に投与して、創傷閉鎖を加速する（閉鎖までの時間を短縮する）、治癒時間を短縮する、または未治療の創傷と比較して瘢痕形成を低減することを含む方法。一例では、該方法は、有効量の、独立して選択される少なくとも１つ（例えば、１つ、２つまたは３つ）のＩＬ－１０または変異型ＩＬ－１０ＭＯＤポリペプチドを含む、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体を、及び／またはマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体をコードする１つ以上の核酸（例えば、組換え発現ベクター）を投与することを含み得る。マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体が、ＩＬ－１０ＭＯＤポリペプチドの有無にかかわらず、ＴＧＦ－β１ポリペプチドを含む場合、該方法は、以下のうちの１つ以上をさらに含み得る：損傷部位への炎症性細胞の動員；フィブロネクチン、コラーゲン（例えば、Ｉ型及び／またはＩＩＩ型）、及び／またはＶＥＧＦなどの細胞外マトリックスタンパク質の発現；創傷閉鎖を可能にするための線維芽細胞の収縮刺激；β１、α５、αｖ、及びβ５などのインテグリンの創傷部位での発現；ならびに角質細胞の遊走。マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体が、ＩＬ－１０ＭＯＤポリペプチドの有無にかかわらず、ＴＧＦ－β２ポリペプチドを含む場合、該方法は、以下のうちの１つ以上をさらに含み得る：循環及び創傷縁からの線維芽細胞及び免疫細胞の両方の創傷部位への動員；コラーゲン（例えば、Ｉ型及び／またはＩＩＩ型）の発現；及びフィブロネクチンの発現。例えば、ＰａｋｙａｒｉｅｔａｌＡｄｖＷｏｕｎｄＣａｒｅ，２（５）：２１５－２２４（２０１３）を参照されたい。このような方法では、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体は、創傷に直接適用されるか、または創傷に注入され得る。

少なくとも１つの皮膚または粘膜の創傷（表皮または粘膜の摩耗、回避、切開、裂傷、または穿刺）を有する個体を治療する方法であって、有効量の、マスキングされたＴＧＦ－β（例えば、ＴＧＦ－β３）構築物または複合体（例えば、ＰＳＭ－４０３３－４０３９）を、及び／またはマスキングされたＴＧＦ－β３構築物または複合体をコードする１つ以上の核酸（例えば、組み換え発現ベクター）を個体に投与して、未治療の創傷と比較して瘢痕形成を低減することを含む方法。一例では、該方法は、有効量の、独立して選択される少なくとも１つ（例えば、１つ、２つ、または３つ）のＩＬ－１０または変異型ＩＬ－１０ＭＯＤポリペプチドを含む、マスキングされたＴＧＦ－β（例えば、ＴＧＦ－β３）構築物または複合体を、及び／またはマスキングされたＴＧＦ－β（例えば、ＴＧＦ－β３）構築物または複合体をコードする１つ以上の核酸（例えば、組換え発現ベクター）を投与することを含み得る。このような方法では、マスキングされたＴＧＦ－β（例えば、ＴＧＦ－β３）構築物または複合体を、創傷に直接適用するか、または創傷に注入し得る。理論に拘束されないが、ＴＧＦ－β３は、ＭＭＰ－９によるコラーゲン分解を促進しながら、１型コラーゲン沈着を低減し、瘢痕形成の低下をもたらすものと理解され得る。例えば、ＰａｋｙａｒｉｅｔａｌＡｄｖＷｏｕｎｄＣａｒｅ，２（５）：２１５－２２４（２０１３）を参照されたい。

個体における臓器移植を容易にするための方法であって、有効量の、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体（例えば、ＰＳＭ－４０３３－４０３９）を、及び／またはマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体をコードする１つ以上の核酸（例えば、組み換え発現ベクター）を個体に投与して、臓器移植の種類、年齢、性別、喫煙習慣、及び／または体重指数に関して一致した未処置個体における、閉鎖までの平均時間、回復時間または瘢痕形成と比較して、切開閉鎖を高速化する（閉鎖までの時間を短縮する）、回復時間を短縮する、または瘢痕形成を低減するためことを含む方法。一例では、該方法は、有効量の、独立して選択される少なくとも１つ（例えば、１つ、２つまたは３つ）のＩＬ－１０または変異型ＩＬ－１０ＭＯＤポリペプチドを含む、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体を、及び／またはマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体をコードする１つ以上の核酸（例えば、組換え発現ベクター）を投与することを含み得る。

移植片対宿主病（急性ＧＶＨＤを含むＧＶＨＤ）を有する個体を治療する方法であって、有効量の、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体（例えば、ＰＳＭ－４０３３－４０３９）を、及び／またはマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体をコードする１つ以上の核酸（例えば、組換え発現ベクター）を個体に投与することを含む方法。

４．代謝疾患及び障害を治療する方法
本明細書に記載されるマスキングされたＴＧＦ－β構築物及び複合体（例えば、ＰＳＭ－４０３３－４０３９）、ならびに／またはマスキングされたＴＧＦ－β構築物もしくは複合体をコードする１つ以上の核酸（例えば、組換え発現ベクター）が、代謝疾患及び傷害を治療するために使用され得る。

代謝は、身体が食物を生きた状態で身体を保つ燃料に変換するために使用する、化学プロセスである。栄養（食品）は、タンパク質、炭水化物、及び脂肪からなる。これらの物質は、消化器系内の酵素によって分解され、次いで、それらを燃料として使用することができる細胞に運ばれる。身体は、これらの物質を即時に使用するか、または後で使用するために肝臓、体脂肪、及び筋肉組織に貯蔵するかのいずれかである。遺伝性または後天性のいずれかであり得る代謝障害は、身体の代謝を妨げる障害であり、タンパク質、脂肪、及び炭水化物などの主要栄養素の身体の処理及び分布をマイナスに変化させ得る。代謝障害は、体内の異常な化学反応が正常な代謝プロセスを変化させるときに起こり得る。

遺伝的欠陥によって引き起こされる数百もの遺伝性代謝障害が存在する。例としては、家族性高コレステロール血症、ゴーシェ病、ハンター症候群、クラッベ病、メープルシロップ尿症、異染性白質ジストロフィー、嚢胞性線維症、ミトコンドリア脳症、乳酸アシドーシス、脳卒中様発作（ＭＥＬＡＳ）、ニーマン・ピック病、フェニルケトン尿症（ＰＫＵ）、ポルフィリン症、鎌状赤血球貧血症、テイ・サックス病及びウィルソン病が挙げられる。

後天的である、すなわち、人の一生の間に発症する代謝障害である、後天性代謝障害は、様々な要因から生じ得る。そのような障害としては、例えば、インスリン抵抗性及び／またはインスリン分泌不全から生じ得る２型糖尿病（Ｔ２Ｄ）及び前Ｔ２Ｄ、ならびに肥満、前Ｔ２Ｄ及びＴ２Ｄに密接に関連するＮＡＦＬＤの重症型である非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）を含む非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）が挙げられる。本明細書に記載されるマスキングされたＴＧＦ－β構築物及び複合体（例えば、ＰＳＭ－４０３３－４０３９）、ならびに／またはマスキングされたＴＧＦ－β構築物もしくは複合体をコードする１つ以上の核酸（例えば、組換え発現ベクター）が、インスリン抵抗性及び／またはインスリン分泌不全に起因し得る２型糖尿病（Ｔ２Ｄ）、ならびに非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）を含む非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＦＬＤ）などの代謝疾患及び障害を治療するために使用され得る。

前述の方法のいずれにおいても、別段の定めがない限り、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体のＴＧＦ－βポリペプチドは、前節で考察されたＴＧＦ－β１、ＴＧＦ－β２、またはＴＧＦ－β３ポリペプチド、またはその変異型（例えば、ＴＧＦ－β３Ｃ７７Ｓ変異型、またはＴＧＦ－β１もしくはＴＧＦ－β２変異型であって、対応する変異制限ＴＧＦ－βポリペプチド二量体化を有する変異型）であり得る。同様に、ＴＧＦ－βポリペプチドをマスキングするポリペプチドは、上記のもの（例えば、ＴＧＦ－βに結合する抗体もしくはその断片、一本鎖抗体、またはＴβＲＩもしくはＴβＲＩＩエクトドメイン断片）から選択することができる。

上記のように、一部の例では、本治療または予防方法の実施において、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体が、それを必要とする個体にそれ自体として投与される。他の例では、本治療または予防方法の実施において、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体をコードするヌクレオチド配列を含む１つ以上の核酸が、それを必要とする個体に投与される。したがって、その他の例では、本開示の１つ以上の核酸、例えば、本開示の１つ以上の組換え発現ベクターが、それを必要とする個体に投与される。

Ｏ．用量
好適な用量については、様々な臨床学的因子に基づき、主治医またはその他の資格のある医療関係者が決定することができる。医学技術分野においては周知のことではあるが、任意の１名の患者の用量は、患者の大きさ、体表面積、年齢、投与する特定のポリペプチドまたは核酸、患者の性別、投与期間及び投与経路、全身健康、ならびに、同時に投与するその他の薬物、を含む多くの因子によって決まる。マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体は、用量当たり１ｎｇ／ｋｇ体重～２０ｍｇ／ｋｇ体重、例えば、０．１ｍｇ／ｋｇ体重～１０ｍｇ／ｋｇ体重、例えば、０．５ｍｇ／ｋｇ体重～５ｍｇ／ｋｇ体重の量で投与され得るが、この例示的な範囲未満またはこの例示的な範囲超の用量も、特に上記の因子を考慮して想定される。レジメンが持続注入である場合、これは、１分当たり体重１キログラム当たり１μｇ～１０ｍｇの範囲であり得る。マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体は、約１ｍｇ／ｋｇ体重～５０ｍｇ／ｋｇ体重、例えば、約１ｍｇ／ｋｇ体重～約５ｍｇ／ｋｇ体重、約１ｍｇ／ｋｇ体重～約１０ｍｇ／ｋｇ体重、約５ｍｇ／ｋｇ体重～約１０ｍｇ／ｋｇ体重、約１０ｍｇ／ｋｇ体重～約１５ｍｇ／ｋｇ体重、約１０ｍｇ／ｋｇ体重～約２０ｍｇ／ｋｇ体重、約１５ｍｇ／ｋｇ体重～約２０ｍｇ／ｋｇ体重、約２０ｍｇ／ｋｇ体重～約２５ｍｇ／ｋｇ体重、約２５ｍｇ／ｋｇ体重～約３０ｍｇ／ｋｇ体重、約３０ｍｇ／ｋｇ体重～約３５ｍｇ／ｋｇ体重、約３５ｍｇ／ｋｇ体重～約４０ｍｇ／ｋｇ体重、または約４０ｍｇ／ｋｇ体重～約５０ｍｇ／ｋｇ体重の量で投与することができる。

一部の例では、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体の好適な用量は、体重１ｋｇ当たり０．０１μｇ～１００ｇ、体重１ｋｇ当たり０．１μｇ～１０ｇ、体重１ｋｇ当たり１μｇ～１ｇ、体重１ｋｇ当たり１０μｇ～１００ｍｇ、体重１ｋｇ当たり１００μｇ～１０ｍｇ、または、体重１ｋｇ当たり１００μｇ～１ｍｇである。当業者は、体液または組織中における投与薬剤の測定滞留時間及び濃度に基づき、投与の反復速度を容易に概算することができる。奏効した治療に続き、患者に維持療法を受けさせて疾患状態の再発を予防することが望ましい場合があり、その場合、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体は、体重１ｋｇ当たり０．０１μｇ～１００ｇ、体重１ｋｇ当たり０．１μｇ～１０ｇ、体重１ｋｇ当たり１μｇ～１ｇ、体重１ｋｇ当たり１０μｇ～１００ｍｇ、体重１ｋｇ当たり１００μｇ～１０ｍｇ、または、体重１ｋｇ当たり１００μｇ～１ｍｇの範囲の維持量で投与される。

症状の重症度、及び、対象の副作用の受けやすさに応じて、特定のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体の用量レベルが変化し得るということを、当業者は容易に理解するであろう。任意の化合物の好ましい用量は、当業者が様々な手段を用いて容易に決定することができる。予防的使用のために、用量は、疾患、障害、症状、状態、または後遺症を予防する、その発症を遅延させる、またはその重症度を軽減するために十分となるべきである。「治療的有効量」または「有効量」は、それを必要とし、かつそれが投与される対象（例えば、哺乳動物）において、記述される疾患、障害、または状態を治療する（すなわち、効果的に管理する）か、または予防する（すなわち、その発症の可能性を減少もしくは低減する）ために十分である、マスキングされたＴＧＦ－β構築物またはＴＧＦ－β複合体の量を意味する。有効量は、上記で考察されるように１つ以上の用量で投与され得る。

一部の例では、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体、核酸、または組換え発現ベクターの複数回用量が、投与される。マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体、本開示の核酸、または本開示の組換え発現ベクターの投与頻度は、様々な因子、例えば、症状の重症度などのいずれかに応じて変化し得る。例えば、一部の例では、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体、本開示の核酸、または、本開示の組換え発現ベクターは、月に１回、月に２回、月に３回、１週おき（ｑｏｗ）、週に１回（ｑｗ）、週に２回（ｂｉｗ）、週に３回（ｔｉｗ）、週に４回、週に５回、週に６回、１日おき（ｑｏｄ）、毎日（ｑｄ）、１日２回（ｑｉｄ）、または１日３回（ｔｉｄ）投与される。

マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体、本開示の核酸、または本開示の組換え発現ベクターの投与の持続期間、例えば、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体、本開示の核酸、または、本開示の組換え発現ベクターを投与する期間は、様々な因子、例えば、患者の応答などのいずれかに応じて変化し得る。例えば、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体、本開示の核酸、または、本開示の組換え発現ベクターを、約１日間～約１週間、約２週間～約４週間、約１ヶ月間～約２ヶ月間、約２ヶ月間～約４ヶ月間、約４ヶ月間～約６ヶ月間、約６ヶ月間～約８ヶ月間、約８ヶ月間～約１年間、約１年間～約２年間、もしくは、約２年間～約４年間以上の範囲の期間にわたり投与することができる。

Ｐ．投与経路
活性成分（マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体、本開示の核酸、または、本開示の組換え発現ベクター）は、全身及び局所投与経路に加えて、インビボ法及びエクスビボ法などの、任意の利用可能な方法及び薬物送達に好適な経路を使用して、個体に投与される。

慣習的かつ薬学的に許容される投与経路としては、腫瘍内、腫瘍周囲、筋肉内、気管内、リンパ管内、頭蓋内、皮膚、皮膚内、局所適用、静脈内、動脈内、経直腸、経鼻、経口、ならびに、その他の経腸及び非経口投与経路が挙げられる。必要に応じて、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体及び／または所望の効果に応じて、投与経路を組み合わせ、または、投与経路を調整し得る。マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体、または、本開示の核酸または組換え発現ベクターを、単回用量または複数回用量で投与し得る。

一部の例では、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体、核酸、または組換え発現ベクターは、静脈内に投与される。一部の例では、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体、核酸、または組換え発現ベクターは、筋肉内に投与される。一部の例では、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体、核酸、または組換え発現ベクターは、リンパ管内に投与される。一部の例では、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体、核酸、または組換え発現ベクターは、局所的に投与される。一部の例では、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体、核酸、または組換え発現ベクターは、腫瘍内に投与される。一部の例では、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体、核酸、または組換え発現ベクターは、腫瘍周辺に投与される。一部の例では、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体、核酸、または組換え発現ベクターは、頭蓋内に投与される。一部の例では、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体、核酸、または組換え発現ベクターは、皮膚に投与される。一部の例では、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体、核酸、または組換え発現ベクターは、皮下に投与される。一部の例では、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体、核酸、または組換え発現ベクターは、創傷（例えば、皮膚または粘膜の創傷）に投与される。一部の例では、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体、核酸、または組換え発現ベクターは、熱傷組織（例えば、皮膚熱傷）に投与される。

一部の例では、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体は、静脈内に投与される。一部の例では、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体は、筋肉内に投与される。一部の例では、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体は、局所的に投与される。一部の例では、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体は、腫瘍内に投与される。一部の例では、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体は、腫瘍周辺に投与される。一部の例では、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体は、頭蓋内に投与される。一部の例では、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体は、皮膚に投与される。一部の例では、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体は、皮下に投与される。一部の例では、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体は、リンパ管内に投与される。一部の例では、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体は、創傷（例えば、皮膚または粘膜の創傷）に投与される。一部の例では、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体は、燃焼した組織（例えば、皮膚の火傷）に投与される。

マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体、本開示の核酸、または、本開示の組換え発現ベクターは、任意の利用可能な一般的な方法、及び、全身または局所経路を含む一般的な薬物の送達に好適な経路を使用して、宿主に投与され得る。一般的に、本開示の方法における使用を検討する投与経路としては、経腸経路、非経口経路、及び、吸入経路が挙げられるが、必ずしもこれらに限定されるものではない。

吸入投与以外の非経口投与経路としては、局所経路、経皮経路、皮下経路、筋肉内経路、眼窩内経路、嚢内経路、脊髄内経路、胸骨内経路、腫瘍内経路、リンパ管内経路、腫瘍周囲経路、及び、静脈内経路、すなわち、消化管を通る以外の任意の投与経路、が挙げられるが必ずしもこれらに限定されるものではない。非経口投与を実施して、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体、核酸、または組換え発現ベクターの全身または局所送達を実施し得る。全身送達が望まれる場合、投与は通常、浸潤性または全身吸収性の、医薬品製剤の局所または粘膜投与を含む。

Ｑ．治療に好適な対象
本明細書に記載の方法などによる、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体（例えば、ＰＳＭ－４０３３－４０３９）による治療に好適な対象としては、自己免疫疾患、アレルギー反応（複数可）、創傷（例えば、皮膚及び／または粘膜創傷）、及び／または火傷を有する個体（例えば、ヒト）が挙げられる。対象には、さらに、臓器移植を受ける個体が含まれる。ヒトに加えて、対象としては、非ヒト哺乳動物が挙げられ、ウシ、イヌ、ヤギ、オナガザル、ネコ、ラパイン、ラパイン、ネズミ、ヒツジ、ブタ、またはサルの対象または治療を必要とする患者を含むが、これらに限定されない。

自己免疫疾患または状態を有し、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体（例えば、ＰＳＭ－４０３３－４０３９）での治療に適している対象（個体）であって、自己免疫疾患または状態を有すると診断された個体、及び自己免疫疾患または状態の治療を受けたが、治療に応答しなかった個体を含む対象（個体）。本開示の方法で治療することができる自己免疫疾患及び症状としては、限定されないが、アジソン病、円形脱毛症、強直性脊椎炎（自己免疫脳脊髄炎）、自己免疫大腸炎、自己免疫胃炎、自己免疫溶血性貧血、自己免疫性肝炎、自己免疫に関連する不妊性、自己免疫膵臓炎、自己免疫網膜症、自己免疫性血小板減少性紫斑病、自己免疫じんま疹、水疱性類天疱瘡、セリアック病、クローン病、グッドパスチュア症候群、糸球体腎炎（例えば、半月状の糸球体腎炎、増殖性糸球体腎炎）、グラフトｖｓ．ｈｏｓｔ疾患（ＧＶＨＤ（急性ＧＶＨＤを含む））、甲状腺機能亢進症、橋本甲状腺炎、炎症性腸疾患、混合結合織疾患、多発性硬化症、重症筋無力症（ＭＧ）、天疱瘡（例えば、尋常性天疱瘡）、悪性貧血、多発性筋炎、乾癬、乾癬性関節炎、慢性関節リウマチ、硬皮症、シェーグレン症候群、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、移植拒否、タイプ－１糖尿病（Ｔ１Ｄ）、脈管炎及び白斑が挙げられる。一実施形態では、自己免疫疾患は、Ｔ１Ｄである。一実施形態では、自己免疫疾患は、セリアック病である。Ｔ１Ｄ及び／またはセリアック病を有する個体は、治療に好適な対象から除外され得る。同様に、Ｔ１Ｄ及び／またはセリアック病は、治療の対象となる自己免疫疾患から除外され得る。

一実施形態において、本開示の方法で治療することができる自己免疫疾患及び症状としては、リウマチ性関節炎（ＲＡ）、乾癬／乾癬性関節炎、多発性硬化症、炎症性腸疾患、アジソン病、グレイブス病、シェーグレン症候群、橋本甲状腺炎、重症筋無力症、自己免疫性血管炎、及び有害貧血が挙げられるが、これらに限定されない。

アレルギー反応を有する対象は、アレルゲンの数が多すぎて言い尽くすことができないため、アレルゲンによって容易に分類することができない。しかしながら、例として、アレルギー反応（複数可）を有する対象（例えば、以前にそのアレルギーで治療されたことがあるか、または治療されたことがない個体）としては、ピーナッツ及び木の実、植物の花粉、ラテックスなどに対する反応を有する対象が含まれる。例えば、ピーナッツアレルゲンへのアレルギー反応を有する対象としては、７つのタンパク質ファミリーに由来するＡｒａｈ１～１３タンパク質への反応を有する対象が挙げられ、Ａｒａｈ１（例えば、ＰＧＱＦＥＤＦＦ（配列番号１６１）、ＹＬＱＧＦＳＲＮ（配列番号１６２）、ＦＮＡＥＦＮＥＩＲＲ（配列番号１６３）、ＱＥＥＲＧＱＲＲ（配列番号１６４）、ＤＩＴＮＰＩＮＬＲＥ（配列番号１６５）、ＮＮＦＧＫＬＦＥＶＫ（配列番号１６６）、ＧＮＬＥＬＶ（配列番号１６７）、ＲＲＹＴＡＲＬＫＥＧ（配列番号１６８）、ＥＬＨＬＬＧＦＧＩＮ（配列番号１６９）、ＨＲＩＦＬＡＧＤＫＤ（配列番号１７０）、ＩＤＱＩＥＫＱＡＫＤ（配列番号１７１）、ＫＤＬＡＦＰＧＳＧＥ（配列番号１７２）、ＫＥＳＨＦＶＳＡＲＰ（配列番号１７３）、ＮＥＧＶＩＶＫＶＳＫＥＨＶＥＥＬＴＫＨＡＫＳＶＳＫ（配列番号１７４）、Ａｒａｈ２（例えば、ＨＡＳＡＲＱＱＷＥＬ（配列番号１７５）、ＱＷＥＬＱＧＤＲＲＣ（配列番号１７６）、ＤＲＲＣＱＳＱＬＥＲ（配列番号１７７）、ＬＲＰＣＥＱＨＬＭＱ（配列番号１７８）、ＫＩＱＲＤＥＤＳＹＥ（配列番号１７９）、ＹＥＲＤＰＹＳＰＳＱ（配列番号１８０）、ＳＱＤＰＹＳＰＳＰＹ（配列番号１８１）、ＤＲＬＱＧＲＱＱＥＱ（配列番号１８２）、ＫＲＥＬＲＮＬＰＱＱ（配列番号１８３）、ＱＲＣＤＬＤＶＥＳＧ（配列番号１８４）、及びＡｒａｈ３（例えば、ＩＥＴＷＮＰＮＮＱＥＦＥＣＡＧ（配列番号１８５）、ＧＮＩＦＳＧＦＴＰＥＦＬＡＱＡ（配列番号１８６）、ＶＴＶＲＧＧＬＲＩＬＳＰＤＲＫ（配列番号１８７）、ＤＥＤＥＹＥＹＤＥＥＤＲＲＲＧ（配列番号１８８）が挙げられる。例えば、Ｚｈｏｕｅｔａｌ，（２０１３）Ｉｎｔｌ．Ｊ．ｏｆＦｏｏｄＳｃｉ．２０１３：８ｐａｇｅｓａｒｔｉｃｌｅＩＤ９０９１４０を参照されたい。アレルギー反応を有する対象には、ハイメノプテラタンパク質（例えば、ホスホリパーゼＡ２、メリチン、ワスプ毒に見られる「抗原５」、及びヒアルロニダーゼなどのミツバチ及びワスプ毒のアレルゲン）に対する反応を有する対象も含まれる。

創傷を有する対象には、皮膚または粘膜の擦過、剥離、切開、裂傷、及び穿刺を有する個体が含まれる。臓器移植を有する対象は、その性質上、それらの創傷タイプのうちの１つ以上を有することが理解され得る。

Ｖ．特定の態様
上記に記載されるＴＧＦ－β構築物または複合体を対象とした主題の態様を含む、特定の態様は、単独で、またはＴＧＦ－β構築物及び複合体を対象とした以下に列挙される態様などの１つ以上の他の態様、それらの製造方法、及び（例えば、治療薬としての）それらの使用方法と組み合わせて、有益であり得る。
１．第１のポリペプチドとして、
ｉ）足場ポリペプチド配列と、
ｉｉ）ＴＧＦ－βポリペプチド配列と、
ｉｉｉ）マスキングポリペプチド配列（例えば、ＴＧＦ－β受容体ポリペプチド配列または抗ＴＧＦ－βポリペプチド配列）と、
ｉｖ）任意に、１つ以上（例えば、１つ、２つ以上）の独立して選択されるＭＯＤポリペプチド配列と、
ｖ）任意に、（例えば、前述のポリペプチド配列のいずれかの間の）１つ以上の独立して選択されるリンカーポリペプチド配列と、を含む、構築物であって、
これらのエレメントを含む構築物が、「マスキングされたＴＧＦ－β構築物」と総称され、マスキングポリペプチド配列（例えばＴＧＦ－β受容体ポリペプチド配列または抗ＴＧＦ－βポリペプチド配列）及びＴＧＦ－βポリペプチド配列が、互いに結合する（互いに相互作用してＴＧＦ－βポリペプチド配列をマスキングする）、構築物。例えば、図１の構造Ａを参照されたい。
２．第１のポリペプチドが、Ｎ末端からＣ末端まで順番に、
ｉ）足場ポリペプチド配列、マスキングポリペプチド配列（例えば、ＴＧＦ－β受容体ポリペプチド配列）、及びＴＧＦ－βポリペプチド配列、または
ｉｉ）第１のＭＯＤポリペプチド配列、足場ポリペプチド配列、マスキングポリペプチド配列（例えば、ＴＧＦ－β受容体ポリペプチド配列）、及びＴＧＦ－βポリペプチド配列、または
ｉｉｉ）第１の独立して選択されるＭＯＤポリペプチド配列、第２の独立して選択されるＭＯＤポリペプチド配列（タンデムでのＭＯＤ）、足場ポリペプチド配列、マスキングポリペプチド配列（例えば、ＴＧＦ－β受容体ポリペプチド配列）、及びＴＧＦ－βポリペプチド配列、を含み、
マスキングされたＴＧＦ－β構築物が、任意に、１つ以上の独立して選択されるリンカーポリペプチド配列を（例えば、前述のポリペプチド配列のいずれかの間に）含む、態様１のマスキングされたＴＧＦ－β構築物。
３．足場ポリペプチドが、二量体化（または多量体化）配列を含む、態様１または態様２のマスクＴＧＦ－β構築物。
４．足場ポリペプチド配列が、任意に、１つ以上（例えば、１つ、２つ以上）の共有結合（例えば、ジスルフィド結合）を互いに有し（例えば、第１のポリペプチドとしてのマスキングされたＴＧＦ－β構築物の第１の分子が、それらの足場ポリペプチド配列の共有または非共有相互作用を通して第２のポリペプチドとしてマスキングされたＴＧＦ－β構築物の第２の分子と二量体化されて、ホモ二量体を形成し）、任意に、足場が、補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）及び／または抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）を通して、細胞溶解を誘導するＩｇポリペプチドの能力を実質的に低減または除去する変異（例えば、ＬＡＬＡ変異）を含むＩｇＦｃポリペプチドを含む、マスキングされたＴＧＦ－β複合体ホモ二量体の形態における、態様３のマスキングされたＴＧＦ－β構築物。例えば、図１の構造Ｂを参照されたい。
５．足場ポリペプチドが、相互特異的二量体化配列（例えば、ホモ二量体化とは対照的に、その対応する相互特異的結合配列と優先的に二量体化する二量体化配列）を含む、態様１～３のいずれかのマスキングされたＴＧＦ－β構築物。例えば、図１の構造Ｃ及びＦを参照されたい。
６．第１のポリペプチドと二量体化されて、マスキングされたＴＧＦ－β複合体ヘテロ二量体を形成する、第２のポリペプチドをさらに含み、
第２のポリペプチドが、第１のポリペプチドの相互特異的結合配列に対応する相互特異的二量体化配列を含む足場ポリペプチド配列を含み、相互特異的結合配列及び対応する相互特異的結合配列が、ヘテロ二量体において互いに相互作用する、態様５のマスキングされたＴＧＦ－β構築物。
７．第２のポリペプチドが、
（ｉ）対応する相互特異的二量体化配列を含む足場ポリペプチド配列、
（ｉｉ）１つまたは２つ（もしくはそれ以上）の独立して選択されるＭＯＤ配列（例えば、タンデム）、及び対応する相互特異的二量体化配列を含む足場ポリペプチド配列、
（ｉｉｉ）対応する相互特異的二量体化配列を含む足場ポリペプチド配列、及び１つまたは２つ（もしくはそれ以上）の独立して選択されるＭＯＤ配列、または
（ｉｖ）２つ以上の独立して選択されるＭＯＤ配列（例えば、タンデム）、対応する相互特異的二量体化配列を含む足場ポリペプチド配列、を含み、
第１及び／または第２のポリペプチドが、任意に、１つ以上の独立して選択されるリンカーポリペプチド配列を（例えば、前述のポリペプチド配列のいずれかの間に）含む、態様６のマスキングされたＴＧＦ－β複合体。例えば、図１の構造Ｆを参照されたい。
８．第２のポリペプチドが、Ｎ末端からＣ末端まで、
（ｉ）対応する相互特異的二量体化配列を含む足場ポリペプチド配列、
（ｉｉ）１つまたは２つ（もしくはそれ以上）の独立して選択されるＭＯＤ配列（例えばタンデム）、及び対応する相互特異的二量体化配列を含む足場ポリペプチド配列、
（ｉｉｉ）対応する相互特異的二量体化配列を含む足場ポリペプチド配列、及び１つまたは２つ（もしくはそれ以上）の独立して選択されるＭＯＤ配列、または
（ｉｖ）１つまたは２つ（もしくはそれ以上）の独立して選択されるＭＯＤ配列、対応する相互特異的二量体化配列を含む足場ポリペプチド配列、及び１つまたは２つ（もしくはそれ以上）の独立して選択されるＭＯＤ配列、を含み、
第１及び／または第２のポリペプチドが、任意に１つ以上の独立して選択されるリンカーポリペプチド配列を（例えば、前述のポリペプチド配列のいずれかの間に）含む、態様６または７のマスキングされたＴＧＦ－β複合体。例えば、図１の構造Ｆを参照されたい。
９．第２のポリペプチドが、
（ｉ）任意に、１つ以上の（例えば、１つ、２つ以上の）独立して選択されるＭＯＤポリペプチド配列と、
（ｉｉ）対応する相互特異的二量体化配列を含む足場ポリペプチド配列と、
（ｉｉｉ）ＴＧＦ－βポリペプチド配列と、
（ｉｖ）マスキングポリペプチド配列（例えば、ＴＧＦ－β受容体ポリペプチド配列または抗ＴＧＦ－βポリペプチド配列）と、
（ｖ）任意に、（例えば、第２のポリペプチドの前述のポリペプチド配列のいずれかの間の）１つ以上の独立して選択されるリンカーポリペプチド配列と、を含み、
マスキングポリペプチド配列（例えば、ＴＧＦ－β受容体ポリペプチド配列または抗ＴＧＦ－βポリペプチド配列）及びＴＧＦ－βポリペプチド配列が、互いに結合する（互いに相互作用してＴＧＦ－βポリペプチド配列をマスキングする）、態様６のマスキングされたＴＧＦ－β複合体。例えば、図１の構造Ｃを参照されたい。
１０．第２のポリペプチドが、Ｎ末端からＣ末端まで順番に、
（ｉ）対応する相互特異的二量体化配列を含む足場ポリペプチド配列、マスキングポリペプチド配列（例えば、ＴＧＦ－β受容体ポリペプチド配列）、及びＴＧＦ－βポリペプチド配列、
（ｉｉ）第１のＭＯＤポリペプチド配列、対応する相互特異的二量体化配列を含む足場ポリペプチド配列、マスキングポリペプチド配列（例えば、ＴＧＦ－β受容体ポリペプチド配列）、及びＴＧＦ－βポリペプチド配列、または
（ｉｉｉ）第１の独立して選択されるＭＯＤポリペプチド配列、第２の独立して選択されるＭＯＤポリペプチド配列、対応する相互特異的二量体化配列を含む足場ポリペプチド配列、マスキングポリペプチド配列（例えば、ＴＧＦ－β受容体ポリペプチド配列）、及びＴＧＦ－βポリペプチド配列、を含む、態様９のマスキングされたＴＧＦ－β複合体ヘテロ二量体。例えば、図１の構造Ｃを参照されたい。
１１．ヘテロ二量体（または多量体）としての、第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドを含む複合体であって、
（ｉ）第１のポリペプチドが、
ａ）相互特異的二量体化配列を含む足場ポリペプチド配列と、
ｂ）マスキングポリペプチド配列（例えば、ＴＧＦ－β受容体ポリペプチド配列または抗ＴＧＦ－βポリペプチド配列）と、
ｃ）任意に、１つ以上（例えば１つ、２つ以上）の独立して選択されるＭＯＤポリペプチド配列と、
ｄ）任意に、（例えば、第１のポリペプチドの前述のポリペプチド配列のいずれかの間の）１つ以上の独立して選択されるリンカーポリペプチド配列と、を含み、
（ｉｉ）第２のポリペプチドが、
ａ）第１のポリペプチド中の相互特異的二量体化配列に対応する相互特異的二量体化配列を含む、足場ポリペプチド配列と、
ｂ）ＴＧＦ－βポリペプチド配列と、
ｃ）任意に、１つ以上（例えば１つ、２つ以上）の独立して選択されるＭＯＤポリペプチド配列と、
ｄ）任意に、（例えば、第２のポリペプチドの前述のポリペプチド配列のいずれかの間の）１つ以上の独立して選択されるリンカーポリペプチド配列と、を含み、
これらのエレメントを含む複合体が、「マスキングされたＴＧＦ－β複合体」と総称され、マスキングポリペプチド配列（例えばＴＧＦ－β受容体ポリペプチド配列または抗ＴＧＦ－βポリペプチド配列）及びＴＧＦ－βポリペプチド配列が互いに結合し（互いに相互作用してＴＧＦ－βポリペプチド配列をマスキングし）、
相互特異的結合配列及び対応する相互特異的結合配列が、ヘテロ二量体において互いに相互作用（例えば、非共有結合）し、
マスキングされたＴＧＦ－βの第１のポリペプチド及び／または第２のポリペプチドが、任意に、１つ以上の独立して選択されるリンカーポリペプチド配列を（例えば、それらのポリペプチド配列のいずれかの間に）含む、複合体。例えば、図１の構造Ｄ及びＥを参照されたい。
１２．第１のポリペプチドが、Ｎ末端からＣ末端まで、
ａ）１つまたは２つ（もしくはそれ以上）の独立して選択されるＭＯＤ配列、相互特異的二量体化配列を含む足場ポリペプチド配列、及びマスキングポリペプチド配列（例えば、ＴＧＦ－β受容体ポリペプチド配列）、または
ｂ）相互特異的二量体化配列を含む足場ポリペプチド配列、マスキングポリペプチド配列（例えば、ＴＧＦ－β受容体ポリペプチド配列）、を含み、
第２のポリペプチドが、Ｎ末端からＣ末端まで、１つまたは２つ（もしくはそれ以上）の独立して選択されるＭＯＤ配列、対応する相互特異的二量体化配列を含む足場ポリペプチド配列、及びＴＧＦ－βポリペプチド配列を含む、態様１１のマスキングされたＴＧＦ－β複合体二量体。
１３．足場ポリペプチド配列（複数可）が、ＩｇＦｃポリペプチド配列（例えば、ＣＨ２－ＣＨ３領域配列）、Ｉｇ重鎖領域１（ＣＨ１）ドメイン、軽鎖定常領域（「ＣＬ」）（例えば、Ｉｇκ鎖（カッパ鎖）定常領域またはＩｇλ鎖（ラムダ鎖））、ロイシンジッパーポリペプチド配列、ＦｏｓまたはＪｕｎ結合対配列、コレクチンポリペプチド（例えば、ＡＣＲＰ３０またはＡＣＲＰ３０様タンパク質）、コイルドコイルドドドメイン、及び前述のいずれかの変異型（例えば、表１のノブインホール及び他の相互特異的配列）からなる群から選択される、態様１～１２のいずれかのマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体。
１４．足場ポリペプチド配列（複数可）が、ＩｇＦｃポリペプチド配列（免疫グロブリン配列）、Ｉｇ重鎖配列（例えば、ＣＨ２－ＣＨ３領域配列）、Ｉｇ重鎖領域１（ＣＨ１）ドメイン、軽鎖定常領域（「ＣＬ」）（例えば、Ｉｇκ鎖（カッパ鎖）、及び前述のいずれかの変異型からなる群から選択される、態様１～１３のいずれかのマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体。一実施形態では、足場ポリペプチドは、ＭＤ１３置換を有するＩｇＣＨ１ドメインまたはＭＤ１３置換を有するＩｇκ鎖配列から選択される。
１５．免疫グロブリン配列が、配列番号６８～８３または８５～８７のうちのいずれかに対して、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％のａａ配列同一性を有する配列を含む、態様１４のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体。例えば、図２Ａ～２Ｈ及び２Ｊ～２Ｋを参照されたい。（免疫ブロブリン配列は、二量体を、また図２ＨのようなＩｇＭ配列の場合、多量体を形成することができる）。
１６．免疫グロブリン配列が、配列番号６８～８３のうちのいずれかに対して少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％のａａ配列同一性を有する免疫グロブリン重鎖配列を含む、態様１５のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体。例えば、図２Ａ～２Ｈを参照されたい。（免疫ブロブリン配列は、二量体を、また図２ＨのようなＩｇＭ配列の場合、多量体を形成することができる）。
１７．足場ポリペプチド配列が、相互に１つ以上（例えば、１つ、２つ以上）の共有結合を有する、態様４及び６～１６のいずれか１つのマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体。
１８．１つ以上の共有結合のうちの少なくとも１つ（例えば、１つ、２つ以上）が、第１のポリペプチドの足場ポリペプチド配列と第２のポリペプチドの足場ポリペプチド配列との間のジスルフィド結合である、態様１７のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体。
１９．足場配列が、１つ以上（例えば、１つ、２つ以上）のジスルフィド結合によって任意に共有結合した、ＣＨ２－ＣＨ３免疫グロブリン領域を含む免疫グロブリン重鎖定常領域（ＩｇＦｃ）ポリペプチド配列である、態様１４～１８のいずれかのマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体。
２０．足場ポリペプチドが、ｉ）相互特異的免疫グロブリン（Ｉｇ）重鎖配列、ｉｉ）ＩｇＣＨ１ドメイン、ｉｉｉ）Ｉｇ軽鎖定常領域（「ＣＬ」）（例えば、Ｉｇκ鎖（カッパ鎖）またはＩｇλ鎖（ラムダ鎖）定常領域）、及び（ｉｖ）Ｆｏｓ／Ｊｕｎ結合対のポリペプチドからなる群から選択される、相互特異的二量体化配列を含む、態様５のマスキングされたＴＧＦ－β構築物。一実施形態では、足場ポリペプチドは、ＭＤ１３置換を有するＩｇＣＨ１ドメインまたはＭＤ１３置換を有するＩｇκ鎖配列から選択される相互特異的二量体化配列を含む。
２１．相互特異的結合配列が、配列番号６８～８２または８５～８７のうちのいずれかに対して、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％のａａ配列同一性を有する配列を含む、態様２０のマスキングされたＴＧＦ－β構築物。例えば、図２Ａ～２Ｇ及び２Ｊ～２Ｋを参照されたい。
２２．第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドの足場ポリペプチドが、（ｉ）相互特異的免疫グロブリン（Ｉｇ）重鎖配列（例えば、重鎖ＣＨ１～ＣＨ２領域）、（ｉｉ）ＩｇＣＨ１ドメイン及びその対応する相互特異的軽鎖定常領域（「ＣＬ」）のうちの１つ（例えば、Ｉｇκ鎖（カッパ鎖）定常領域）、（ｉｉｉ）Ｆｏｓ／Ｊｕｎ結合対、ならびに（ｉｖ）Ｉｇ重鎖領域１（ＣＨ１）及びλ Ｉｇ軽鎖定常配列からなる群から選択される一対の配列を含む、相互特異的二量化配列及び対応する相互特異的二量化配列を含む、態様６～１２のいずれかのマスキングされたＴＧＦ－β複合体。足場の一実施形態では、第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドの足場ポリペプチドは、ＭＤ１３置換を有するＩｇＣＨ１ドメイン及びＭＤ１３置換を有するＩｇκ鎖配列を含む、相互特異的二量体化配列及び対応する相互特異的二量体化配列対を含む。
２３．足場ポリペプチド配列が、相互に１つ以上（例えば、１つ、２つ以上）の共有結合を有する、態様２２のマスキングされたＴＧＦ－β複合体。
２４．１つ以上の共有結合のうちの少なくとも１つ（例えば、１つ、２つ以上）が、第１のポリペプチドの足場配列と第２のポリペプチドの足場配列との間のジスルフィド結合である、態様２２のマスキングされたＴＧＦ－β複合体。
２５．足場配列が、（第１のポリペプチドと第２のポリペプチドとの間の）１つ以上（例えば、１つ、２つ以上）のジスルフィド結合によって任意に共有結合されるＣＨ２－ＣＨ３免疫グロブリン領域を含む免疫グロブリン重鎖定常領域（ＩｇＦｃ）ポリペプチド配列である、態様２２～２４のいずれかのマスキングされたＴＧＦ－β複合体。
２６．相互特異的結合配列及び／または対応する相互特異的結合配列が、配列番号６８～８２、または８５～８７のいずれかに対して、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％のａａ配列同一性を有する配列を含む、態様２２～２５のいずれかのマスキングされたＴＧＦ－β複合体。例えば、図２Ａ～２Ｇ及び２Ｊ～２Ｋを参照されたい。
２７．免疫グロブリン配列が、配列番号６８～８３のいずれかに対して少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％のａａ配列同一性を有する免疫グロブリン重鎖配列を含む、態様２６のマスキングされたＴＧＦ－β複合体。例えば、図２Ａ～２Ｈを参照されたい。（免疫ブロブリン配列は、二量体を、また図２ＨのようなＩｇＭ配列の場合、多量体を形成することができる）。
２８．任意に、相互特異的二量体化配列及び／または対応する相互特異的二量体化配列を含む足場ポリペプチド配列を含み、足場ポリペプチド配列が、図２Ａ（配列番号６８）に示されるＩｇＡＦｃ配列の少なくとも１５０個の連続するａａｓ（少なくとも１７５、少なくとも２００、少なくとも２２５、少なくとも２５０、少なくとも２７５、少なくとも３００、少なくとも３２５、もしくは少なくとも３５０個の連続するａａｓ）、または全てのａａｓに対して、少なくとも約７０％（例えば、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％）のａａ配列同一性を有する、態様１～２７のいずれかのマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体。
２９．任意に、相互特異的二量体化配列及び／または対応する相互特異的二量体化配列を含む足場ポリペプチド配列を含み、（ｉ）足場ポリペプチド配列が、図２Ｂ（配列番号６９）に示されるＩｇＤＦｃ配列の少なくとも１５０個の連続するａａｓ（少なくとも１７５、少なくとも２００、少なくとも２２５、少なくとも２５０、少なくとも２７５、少なくとも３００、少なくとも３２５、または少なくとも３５０個の連続するａａｓ）、または全てのａａｓに対して、少なくとも約７０％（例えば、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％）のａａ配列同一性を有するか、
（ｉｉ）足場ポリペプチド配列が、図２Ｃ（配列番号７０）に示されるＩｇＥＦｃ配列の少なくとも１２５個の連続するａａｓ（少なくとも１５０、少なくとも１７５、もしくは少なくとも２００個の連続するａａｓ）、または全てのａａｓに対して、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％のａａ配列同一性を有する配列を含む、態様１～２７のいずれかのマスクＴＧＦ－β構築物または複合体。
３０．任意に、相互特異的二量体化配列及び／または対応する相互特異的二量体化配列を含む足場ポリペプチド配列を含み、足場ポリペプチド配列が、図２Ｄに示されるＩｇＧ１Ｆｃ配列（配列番号７１～７８）などのＩｇＧＦｃポリペプチド配列の少なくとも１２５個の連続するａａｓ（少なくとも１５０、少なくとも１７５、もしくは少なくとも２００個の連続するａａｓ）、または全てのａａｓに対して、少なくとも約７０％（例えば、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％）のａａ配列同一性を有する、態様１～２７のいずれかのマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体。
３１．任意に、相互特異的二量体化配列及び／または対応する相互特異的二量体化配列を含む足場ポリペプチド配列を含み、足場ポリペプチド配列が、図２Ｅ（配列番号７９）に示されるＩｇＧ２Ｆｃポリペプチド配列の少なくとも１２５個の連続するａａｓ（少なくとも１５０、少なくとも１７５、少なくとも２００、少なくとも２２５、少なくとも２５０、少なくとも２７５、もしくは少なくとも３００個）、または全てのａａｓに対して、少なくとも約７０％（例えば、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％）のａａ配列同一性を有する、態様１～２７のいずれかのマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体。
３２．任意に、相互特異的二量体化配列及び／または対応する相互特異的二量体化配列を含む足場ポリペプチド配列を含み、足場ポリペプチド配列が、図２Ｆ（配列番号８０）に示されるＩｇＧ３Ｆｃ配列の少なくとも１２５個の連続するａａｓ（少なくとも１５０、少なくとも１７５、少なくとも２００、もしくは少なくとも２２５個）、または全てのａａｓに対して、少なくとも約７０％（例えば、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％）のａａ配列同一性を有する、態様１～２７のいずれかのマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体。
３３．任意に、相互特異的二量体化配列及び／または対応する相互特異的二量体化配列を含む足場ポリペプチド配列を含み、足場ポリペプチド配列が、図２Ｇ（配列番号８１または８２）に示されるＩｇＧ４Ｆｃ配列の少なくとも１２５個の連続するａａｓ（少なくとも１５０、少なくとも１７５、少なくとも２００、少なくとも２２５、もしくは少なくとも２５０個）、または全てのａａｓに対して、少なくとも約７０％（例えば、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％）のａａ配列同一性を有する、態様１～２７のいずれかのマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体。
３４．第１のポリペプチドと第２のポリペプチドとの間の１つまたは２つの鎖間ジスルフィド結合を（例えば、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４配列のそれらのヒンジ領域に隣接するシステイン間に）含む、態様２７～３３のいずれかのマスキングされたＴＧＦ－β複合体。
３５．１つ以上の足場ポリペプチドが、補体成分１ｑ（Ｃ１ｑ）及び／またはＦｃラムダ受容体（ＦｃλＲ）へのポリペプチドの結合を制限（例えば、低減）し、及び／または補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）及び／もしくは抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）を通して細胞溶解を誘導するＩｇポリペプチドの能力を実質的に低減または排除する、１つ以上の置換を有する免疫グロブリン（Ｉｇ）ポリペプチド配列を含む、態様１～３４のいずれかのマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体。
３６．各足場ポリペプチドが、ｗｔ．ＩｇＧ１Ｆｃ配列（配列番号７１）の１２５個の連続するａａｓ（少なくとも１５０、少なくとも１７５、少なくとも２００、または少なくとも２２０個の連続するａａｓ）のａａ配列に対して、少なくとも約７０％（例えば、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％）のａａ配列同一性を有するポリペプチドを含む免疫グロブリン（Ｉｇ）ポリペプチド配列を含む、態様３５のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体。
３７．Ｉｇポリペプチド配列が、ａａｓ２３４、２３５、２３６、２３７、２３８、及び２３９（２３４－ＬＬＧＧＰＳ－２３９）のうちのいずれか１つ、２つ、またはそれ以上の置換を含む、態様３６のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体。
３８．Ｉｇポリペプチド配列が、Ｎ２９７、Ｐ３３１、Ｄ２７０、Ｋ３２２、及び／またはＰ３２９のうちのいずれか１つ、２つ、またはそれ以上の置換を含む、態様３６または３７のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体。
３９．Ｉｇポリペプチド配列が、アスパラギン以外のａａ（例えば、配列番号７４のようなＮ２９７Ａを生じるためのアラニン）によるＮ２９７置換（配列番号７１のＮ７７）を含む、態様３６～３８のいずれかのマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体。
４０．Ｉｇポリペプチド配列が、ロイシン以外のａａ（例えば、アラニンＬ２３４Ａ及び／またはＬ２３５Ａ）によるＬ２３４及び／またはＬ２３５（配列番号７１のＬ１４及びＬ１５）置換を含む、態様３６～３８のいずれかのマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体。
４１．Ｉｇポリペプチド配列が、Ｌ２３４Ａ及び／またはＬ２３５Ａ置換を含む（例えば、配列番号７５を参照）、態様３９のマスクＴＧＦ－β構築物または複合体。
４２．Ｉｇポリペプチド配列が、プロリン以外のａａ（例えば、Ｐ３３１Ｓ置換のためのセリン）で置換されたＰ３３１（配列番号７１のＰ１１１）を含む、態様３６～４１のいずれかのマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体。
４３．Ｉｇポリペプチド配列が、Ｌ２３４及び／またはＬ２３５での置換、ならびにＰ３３１の置換を含む、態様３６～３８のいずれかのマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体。
４４．Ｉｇポリペプチド配列が、（ｉ）Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、及びＰ３３１Ｓ、または（ｉｉ）Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＰ３３１Ｓ置換を含む、態様４３のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体。
４５．ＫｉＨ、ＫｉＨｓ－ｓ、ＨＡ－ＴＦ、ＺＷ－１、７．８．６０、ＤＤ－ＫＫ、ＥＷ－ＲＶＴ、ＥＷ－ＲＶＴｓ－ｓ、及びＡ１０７配列（例えば、表１参照）からなる群から選択される、相互特異的二量体化ペアの相互特異的二量体化配列を含む、態様２０～４４のいずれかのマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体。
４６．相互特異的二量体化配列及び対応する相互特異的二量体化配列が、ＫｉＨ、ＫｉＨｓ－ｓ、ＨＡ－ＴＦ、ＺＷ－１、７．８．６０、ＤＤ－ＫＫ、ＥＷ－ＲＶＴ、ＥＷ－ＲＶＴｓ－ｓ、及びＡ１０７配列対（例えば、表１参照）からなる群から選択される一対の配列である、態様６及び２２～４４のいずれかのマスキングされたＴＧＦ－β複合体。
４７．第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドのうちの一方が、Ｔ３６６Ｙ置換を含む相互特異的ＩｇＧ１ポリペプチド配列（例えば、配列番号７１の配列）を含み、第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドのうちの他方が、Ｙ４０７Ｔ置換を含む相互特異的ＩｇＧ１ポリペプチド配列、または他の相互特異的Ｉｇ重鎖配列（例えば、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４重鎖配列を含む相互特異的配列）における対応する置換を含む、態様４６のマスキングされたＴＧＦ－β複合体。
４８．第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドのうちの一方が、Ｔ３６６Ｗ置換を含む相互特異的ＩｇＧ１ポリペプチド配列（例えば、配列番号７１の配列）を含み、第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドのうちの他方が、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖ置換を含む相互特異的ＩｇＧ１ポリペプチド配列、または他の相互特異的Ｉｇ重鎖配列（例えば、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４重鎖配列を含む相互特異的配列）における対応する置換を含む、態様４６のマスキングされたＴＧＦ－β複合体。
４９．第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドのうちの一方が、Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖ置換を含む相互特異的ＩｇＧ１ポリペプチド配列（例えば、配列番号７１の配列）を含み、第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドの他方が、Ｓ３５４Ｃ及びＴ３６６Ｗ置換を含む相互特異的ＩｇＧ１ポリペプチド配列、または他の相互特異的Ｉｇ重鎖配列（例えば、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４重鎖配列を含む相互特異的配列）における対応する置換を含む、態様４６のマスキングされたＴＧＦ－β複合体。
５０．第１のポリペプチドが、Ｔ１４６ＷＫｉＨ配列置換を有するＩｇＧ１足場を含み、第２のポリペプチドが、Ｔ１４６Ｗ、Ｌ１４８Ａ、及びＹ１８７ＶＫｉＨ配列置換を有するＩｇＧ１足場を含み、足場が、配列番号７１のＩｇＧ１の少なくとも１７０個（例えば、少なくとも１８０、少なくとも１９０、少なくとも２００、少なくとも２１０、少なくとも２２０、または２２７個全て）の連続するａａｓに対して少なくとも８０％、９０％、９５％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含み、任意に、配列番号７１に付番される、Ｌ１４及びＬ１５（例えば、Ｌ１４Ａ／Ｌ１５Ａ「ＬＡＬＡ」またはＬ１４Ｆ／Ｌ１５Ｅ）、Ｎ７７（例えば、Ｎ７７Ａ）、Ｐ１１１（例えば、Ｐ１１１Ｓ）、Ｌ１３１（例えば、Ｌ１３１Ｋ）、Ｔ１４６（例えば、Ｔ１４６Ｓ）、Ｐ１７５（例えば、Ｐ１７５Ｖ）、Ｆ１８５（例えば、Ｆ１８５Ｒ）、Ｙ１８７（例えば、Ｙ１８７Ａ）、及びＫ１８９（例えば、Ｋ１８９Ｙ）の１つ以上での置換を含む、態様４６のマスキングされたＴＧＦ－β複合体。
５１．第１のポリペプチドが、Ｔ１４６ＷＫｉＨ配列置換を有するＩｇＧ１足場を含み、第２のポリペプチドが、Ｔ１４６Ｓ、Ｌ１４８Ａ、及びＹ１８７ＶＫｉＨ配列置換を有するＩｇＧ１足場を含み、足場が、配列番号７１のＩｇＧ１の少なくとも１７０個（例えば、少なくとも１８０、少なくとも１９０、少なくとも２００、少なくとも２１０、少なくとも２２０、または２２７個全て）の連続するａａｓに対して、少なくとも８０％、９０％、９５％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含み、第１及び第２のポリペプチドの足場ａａ配列のうちの０個、一方、または両方が、Ｆｃγ受容体との相互作用をブロック／制限することによって、エフェクター機能を除去する、Ｌ１４及びＬ１５置換（例えば、Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ「ＬＡＬＡ」）、ならびに／またはＮ７７置換（Ｎ２９７、例えば、Ｎ２９７ＡもしくはＮ２９７Ｇ）を含む、態様４６のマスキングされたＴＧＦ－β複合体。例えば、図２Ｄ、配列番号７７及び７８を参照されたい。
５２．第１のポリペプチドが、Ｔ１４６Ｗ及びＳ１３４ＣＫｉＨｓ－ｓ置換を有するＩｇＧ１足場を含み、第２のポリペプチドが、Ｔ１４６Ｓ、Ｌ１４８Ａ、Ｙ１８７Ｖ及びＹ１２９ＣＫｉＨｓ－ｓ置換を有するＩｇＧ１足場を含み、足場が、各々、配列番号７１のＩｇＧ１の少なくとも１７０個（例えば、少なくとも１８０、少なくとも１９０、少なくとも２００、少なくとも２１０、少なくとも２２０、または２２７個全て）の連続するａａｓに対して、少なくとも８０％、９０％、９５％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含み、第１及び第２のポリペプチドの足場ａａ配列のうちの０個、一方、または両方が、Ｆｃγ受容体との相互作用をブロック／制限することによって、エフェクター機能を除去する、Ｌ１４及びＬ１５置換（例えば、Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ「ＬＡＬＡ」）、ならびに／またはＮ７７（Ｎ２９７）置換（例えば、Ｎ２９７ＡもしくはＮ２９７Ｇ）を含む、態様４６のマスキングされたＴＧＦ－β複合体。
５３．第１及び第２のポリペプチドが、
Ｓ１４４Ｈ及びＦ１８５Ａ置換を有するＩｇＧ１足場を含む第１のポリペプチド、ならびにＹ１２９Ｔ及びＴ１７４Ｆ置換を有するＩｇＧ１足場を含む第２のポリペプチド、
Ｔ１３０Ｖ、Ｌ１３１Ｙ、Ｆ１８５Ａ及びＹ１８７Ｖ置換を有するＩｇＧ１足場を含む第１のポリペプチド、ならびに１３０Ｖ、Ｔ１４６Ｌ、Ｋ１７２Ｌ及びＴ１７４Ｗ置換を有するＩｇＧ１足場を含む第２のポリペプチド、
Ｋ１４０Ｄ、Ｄ１７９Ｍ、及びＹ１８７Ａ置換を有するＩｇＧ１足場を含む第１のポリペプチド、ならびにＥ１２５Ｒ、Ｑ１２７Ｒ、Ｔ１４６Ｖ、及びＫ１８９Ｖ置換を有するＩｇＧ１足場を含む第２のポリペプチド、
Ｋ１８９Ｄ及びＫ１７２Ｄ置換を有するＩｇＧ１足場を含む第１のポリペプチド、ならびにＤ１７９Ｋ及びＥ１３６Ｋ置換を有するＩｇＧ１足場を含む第２のポリペプチド、
Ｋ１４０Ｅ及びＫ１８９Ｗ置換を有するＩｇＧ１足場を含む第１のポリペプチド、ならびにＱ１２７Ｒ、Ｄ１７９Ｖ及びＦ１８５Ｔ置換を有するＩｇＧ１足場を含む第２のポリペプチド、
Ｋ１４０Ｅ、Ｋ１８９Ｗ、及びＹ１２９Ｃ置換を有するＩｇＧ１足場を含む第１のポリペプチド、ならびにＱ１２７Ｒ、Ｄ１７９Ｖ、Ｆ１８５Ｔ、及びＳ１３４Ｃ置換を有するＩｇＧ１足場を含む第２のポリペプチド、ならびに、
Ｋ１５０Ｅ及びＫ１８９Ｗ置換を有するＩｇＧ１足場を含む第１のポリペプチド、ならびにＥ１３７Ｎ、Ｄ１７９Ｖ及びＦ１８５Ｔ置換を有するＩｇＧ１足場を含む第２のポリペプチド、から選択され、
足場が、各々、配列番号７１のＩｇＧ１の少なくとも１７０個（例えば、少なくとも１８０、少なくとも１９０、少なくとも２００、少なくとも２１０、少なくとも２２０、または２２７個全て）の連続するａａｓに対して、少なくとも８０％、９０％、９５％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含み、
第１及び第２のポリペプチドの足場ａａ配列のうちの０個、一方、または両方が、Ｆｃγ受容体との相互作用をブロックすることによってエフェクター機能を除去する、Ｌ１４及びＬ１５置換（例えば、Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ「ＬＡＬＡ」）、ならびに／またはＮ７７（Ｎ２９７）置換（例えば、Ｎ２９７ＡもしくはＮ２９７Ｇ置換）を含む、態様４６のマスキングされたＴＧＦ－β複合体。
５４．足場ポリペプチドが、
（ｉ）Ｉｇ重鎖ＣＨ１ドメイン（例えば、配列番号８５のポリペプチド）、
（ｉｉ）Ｉｇκ鎖定常領域配列（例えば、配列番号８６）、及び
（ｉｉｉ）Ｉｇλ鎖定常領域配列（例えば、配列番号８７）、からなる群から選択される相互特異的二量体化配列を含み、
足場が、それぞれ、配列番号８５、８６、または８７の少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、または少なくとも１００個の連続するａａｓに対して、少なくとも８０％（８５％、９０％、９５％、９８％、９９％、または１００％）の配列同一性を有する配列を含む、態様２０のマスキングされたＴＧＦ－β複合体。図２Ｊ及び２Ｋを参照されたい。ＩｇＣＨ１ドメイン及び／またはＩｇκ鎖配列は、任意に、それらのそれぞれのＭＤ１３置換を含む。
５５．第１及び第２のポリペプチドのうちの一方の足場ポリペプチドが、Ｉｇ重鎖ＣＨ１ドメイン（例えば、配列番号８５のポリペプチド）を含み、第１及び第２のポリペプチドのうちの他方のポリペプチドが、Ｉｇκ鎖定常領域配列（例えば、任意にＭＤ１３置換を含む配列番号８６）またはＩｇλ鎖定常領域配列（例えば、配列番号８７）のいずれかを含み、
足場が、各々、それぞれ、配列番号８５、８６、または８７の少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、または少なくとも１００個の連続するａａｓに対して、少なくとも８０％（８５％、９０％、９５％、９８％、９９％、または１００％）の配列同一性を有する配列を含む、態様２２のマスキングされたＴＧＦ－β複合体。図２Ｊ及び２Ｋを参照されたい。
５６．マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体が、少なくとも１つ（例えば、少なくとも２つ、または少なくとも３つ）の独立して選択されるリンカーポリペプチド配列を含む、態様１～５５のいずれかのマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体。
５７．独立して選択されるリンカーが、約１ａａ～約２５ａａの長さ（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、または２５ａａの長さ）を有する、態様５６のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体。
５８．独立して選択されるリンカーが、約２５～約３５ａａの長さ（例えば、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、または３５ａａの長さ）である、態様５６のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体。
５９．独立して選択されるリンカーが、約３５～約５０ａａの長さ（例えば、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、または５０ａａの長さ）である、態様５６のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体。
６０．独立して選択されるリンカーのうちの少なくとも１つ（例えば、少なくとも２つ、または少なくとも３つ）が、
（ｉ）グリシンまたは約２～約５０の連続するグリシン残基を有するポリグリシン含有配列、
（ｉｉ）グリシン－セリンポリマー（例えば、（ＧＳ）ｎ、（ＧＳＧＧＳ）ｎ（配列番号１２６）、（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号１３６）、及び（ＧＧＧＳ）ｎ（配列番号１２７）、ｎは、少なくとも１（例えば、１～１０、１０～２０、または２０～３０）の整数である）、または
（ｉｉｉ）グリシン－アラニンポリマーまたはアラニン－セリンポリマー（例えば１～１０、１０～２０、または２０～３０ａａの長さを有する）を含む、態様５６～５９のいずれかのマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体。
６１．独立して選択されるリンカーの少なくとも１つ（例えば、少なくとも２つ、または少なくとも３つ）が、ＧＧＳＧ（配列番号１２８）、ＧＧＳＧＧ（配列番号１２９）、ＧＳＧＳＧ（配列番号１３０）、ＧＳＧＧＧ（配列番号１３１）、ＧＧＧＳＧ（配列番号１３２）、ＧＳＳＳＧ（配列番号１３３）、ＧＳＧＳ（配列番号１３４）、ＧＳＳＳＳＳ（配列番号１３５）、ＧＧＧＧＳ（配列番号１３６）などからなる群から選択されるａａ配列を含む、態様５６～５９のいずれかのマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体。
６２．独立して選択されるリンカーのうちの少なくとも１つが、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体の第２のポリペプチドに（例えば、第２のポリペプチドのリンカーに）存在するシステイン残基とジスルフィド結合を形成することができるか、または形成する、システイン残基（例えば、ＧＣＧＡＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳリンカーａａ配列、配列番号１３７）を含む、態様５６～５９のいずれかのマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体。
６３．１つ以上（例えば、１つ、２つ以上）の独立して選択されるＭＯＤポリペプチド配列が、ＰＤ－Ｌ１、ＦＡＳ－Ｌ、４－１ＢＢＬ、ＩＬ－１、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－１０、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１、ＩＬ－２３ＭＯＤポリペプチド配列、及びそれらのいずれかの変異型（例えば、対応するｗｔ．ＭＯＤポリペプチド配列と比較して、それらの受容体に対する親和性が低減している変異型）からなる群から選択される、態様１～６２のいずれかのマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体。
６４．１つ以上（例えば、１つ、２つ以上）の独立して選択されるＭＯＤポリペプチド配列が、ＰＤ－Ｌ１、ＦＡＳ－Ｌ、４－１ＢＢＬ、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－１０、ＩＬ－２１、ＩＬ－２３ＭＯＤポリペプチド配列、及びそれらのいずれかの変異型（例えば、対応するｗｔ．ＭＯＤポリペプチド配列と比較して、それらの受容体に対する親和性が低減している変異型）からなる群から選択される、態様１～６２のいずれかのマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体。
６５．１つ以上（例えば、１つ、２つ以上）の独立して選択されるＭＯＤポリペプチド配列が、ＰＤ－Ｌ１、ＦＡＳ－Ｌ、４－１ＢＢＬ、ＩＬ－２、ＩＬ－１０ＭＯＤポリペプチド配列、及びそれらのいずれかの変異型（例えば、対応するｗｔ．ＭＯＤポリペプチド配列と比較して、それらの受容体に対する親和性が低減している変異型）からなる群から選択される、態様１～６２のいずれかのマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体。
６６．ＭＯＤポリペプチド配列のうちの少なくとも１つ（例えば、少なくとも２つ）が、ＩＬ－２ＭＯＤポリペプチド配列、または、
（ｉ）配列番号９の少なくとも８０個（例えば、９０、１００、１１０、１２０、１３０、または１３３個）の連続するａａｓに対して、少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％）のａａ配列同一性を有するか、もしくは
（ｉｉ）配列番号１３～２７の少なくとも８０個（例えば、９０、１００、１１０、１２０、１３０、または１３３個）の連続するａａｓに対して、少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％）のａａ配列同一性を有する、変異型ＩＬ－２ＭＯＤポリペプチド配列である、態様１～６２のいずれかのマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体。
６７．１つ以上の（例えば、１つ、２つ以上）独立して選択されるＭＯＤポリペプチド配列が、
（ｉ）少なくとも１つ（例えば、少なくとも２つ）のＩＬ－２ＭＯＤポリペプチド配列（例えば、配列番号９の配列を含む）または変異型ＩＬ－２ＭＯＤポリペプチド配列（例えば、態様６６の変異型ＩＬ－２ＭＯＤポリペプチド配列）と、
（ｉｉ）ＰＤ－Ｌ１、ＦＡＳ－Ｌ、４－１ＢＢＬ、ＩＬ－１、ＩＬ－４、ＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－１０、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１、ＩＬ－２３ＭＯＤポリペプチド配列、及びそれらのいずれかの変異型（例えば、対応するｗｔ．ＭＯＤポリペプチド配列と比較して、それらの受容体に対する親和性が低減している変異型）からなる群から選択される少なくとも１つ（例えば、少なくとも２つ）のＭＯＤポリペプチド配列）とを含む、態様１～６２のいずれかのマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体。
６８．１つ以上の（例えば、１つ、２つ以上）独立して選択されるＭＯＤポリペプチド配列が、
（ｉ）少なくとも１つ（例えば、少なくとも２つ）のｗｔ．ＩＬ－２ＭＯＤポリペプチド配列（例えば、配列番号９の配列を含む）または変異型ＩＬ－２ＭＯＤポリペプチド配列（例えば、態様６６の変異型ＩＬ－２ＭＯＤポリペプチド配列）と、
（ｉｉ）少なくとも１つ（例えば、少なくとも２つ）のＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－Ｌ２ＭＯＤポリペプチド配列、または（例えば、対応するｗｔ配列と比較して、ＰＤ１受容体に対する親和性が低下している）変異型ＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－Ｌ２ＭＯＤポリペプチド配列と、を含む、態様１～６２のいずれかのマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体。
６９．１つ以上の（例えば、１つ、２つ以上）独立して選択されるＭＯＤポリペプチド配列が、
（ｉ）少なくとも１つ（例えば、少なくとも２つ）のｗｔ．ＩＬ－２ＭＯＤポリペプチド配列（例えば、配列番号９の配列を含む）または変異型ＩＬ－２ＭＯＤポリペプチド配列（例えば、態様６６の変異型ＩＬ－２ＭＯＤポリペプチド配列）と、
（ｉｉ）少なくとも１つ（例えば、少なくとも２つ）のＦＡＳ－ＬＭＯＤポリペプチド配列または変異型ＦＡＳ－ＬＭＯＤポリペプチド配列（例えば、対応するｗｔ配列と比較して、Ｆａｓ受容体に対する親和性が低下している）と、を含む、態様１～６２のいずれかのマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体。
７０．１つ以上の（例えば、１つ、２つ以上）独立して選択されるＭＯＤポリペプチド配列が、
（ｉ）少なくとも１つ（例えば、少なくとも２つ）のｗｔ．ＩＬ－２ＭＯＤポリペプチド配列（例えば、配列番号９の配列を含む）または変異型ＩＬ－２ＭＯＤポリペプチド配列（例えば、態様６６の変異型ＩＬ－２ＭＯＤポリペプチド配列）と、
（ｉｉ）少なくとも１つ（例えば、少なくとも２つ）のＩＬ－１ＭＯＤポリペプチド配列または変異型ＩＬ－１ＭＯＤポリペプチド配列（例えば、対応するｗｔ配列と比較して、ＩＬ－１受容体に対する親和性が低下している）と、を含む、態様１～６２のいずれかのマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体。
７１．１つ以上の（例えば、１つ、２つ以上）独立して選択されるＭＯＤポリペプチド配列が、
（ｉ）少なくとも１つ（例えば、少なくとも２つ）のＩＬ－２ＭＯＤポリペプチド配列（例えば、配列番号９の配列を含む）または変異型ＩＬ－２ＭＯＤポリペプチド配列（例えば、態様６６の変異型ＩＬ－２ＭＯＤポリペプチド配列）と、
（ｉｉ）少なくとも１つ（例えば、少なくとも２つ）のＩＬ－４ＭＯＤポリペプチド配列または変異型ＩＬ－４ＭＯＤポリペプチド配列（例えば、対応するｗｔ配列と比較して、ＩＬ－４受容体に対する親和性が低下している）と、を含む、態様１～６２のいずれかのマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体。
７２．１つ以上の（例えば、１つ、２つ以上）独立して選択されるＭＯＤポリペプチド配列が、
（ｉ）少なくとも１つ（例えば、少なくとも２つ）のＩＬ－２ＭＯＤポリペプチド配列（例えば、配列番号９の配列を含む）または変異型ＩＬ－２ＭＯＤポリペプチド配列（例えば、態様６６の変異型ＩＬ－２ＭＯＤポリペプチド配列）と、
（ｉｉ）少なくとも１つ（例えば、少なくとも２つ）のＩＬ－６ＭＯＤポリペプチド配列または変異型ＩＬ－６ＭＯＤポリペプチド配列（例えば、対応するｗｔ配列と比較して、ＩＬ－６受容体に対する親和性が低下している）と、を含む、態様１～６２のいずれかのマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体。
７３．１つ以上の（例えば、１つ、２つ以上）独立して選択されるＭＯＤポリペプチド配列が、
（ｉ）少なくとも１つ（例えば、少なくとも２つ）のＩＬ－２ＭＯＤポリペプチド配列（例えば、配列番号９の配列を含む）または変異型ＩＬ－２ＭＯＤポリペプチド配列（例えば、態様６６の変異型ＩＬ－２ＭＯＤポリペプチド配列）と、
（ｉｉ）少なくとも１つ（例えば、少なくとも２つ）のＩＬ－７ＭＯＤポリペプチド配列または変異型ＩＬ－７ＭＯＤポリペプチド配列（例えば、対応するｗｔ配列と比較して、ＩＬ－７受容体に対する親和性が低下している）と、を含む、態様１～６２のいずれかのマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体。
７４．１つ以上の（例えば、１つ、２つ以上）独立して選択されるＭＯＤポリペプチド配列が、
（ｉ）少なくとも１つ（例えば、少なくとも２つ）のＩＬ－２ＭＯＤポリペプチド配列（例えば、配列番号９の配列を含む）または変異型ＩＬ－２ＭＯＤポリペプチド配列（例えば、態様６６の変異型ＩＬ－２ＭＯＤポリペプチド配列）と、
（ｉｉ）少なくとも１つ（例えば、少なくとも２つ）のＩＬ－１０ＭＯＤポリペプチド配列または変異型ＩＬ－１０ＭＯＤポリペプチド配列（例えば、対応するｗｔ配列と比較して、ＩＬ－１０受容体に対する親和性が低下している）と、を含む、態様１～６２のいずれかのマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体。
７５．１つ以上の（例えば、１つ、２つ以上）独立して選択されるＭＯＤポリペプチド配列が、
（ｉ）少なくとも１つ（例えば、少なくとも２つ）のＩＬ－２ＭＯＤポリペプチド配列（例えば、配列番号９の配列を含む）または変異型ＩＬ－２ＭＯＤポリペプチド配列（例えば、態様６６の変異型ＩＬ－２ＭＯＤポリペプチド配列）と、
（ｉｉ）少なくとも１つ（例えば、少なくとも２つ）のＩＬ－１５ＭＯＤポリペプチド配列または変異型ＩＬ－１５ＭＯＤポリペプチド配列（例えば、対応するｗｔ配列と比較して、ＩＬ－１５受容体に対する親和性が低下している）と、を含む、態様１～６２のいずれかのマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体。
７６．１つ以上の（例えば、１つ、２つ以上）独立して選択されるＭＯＤポリペプチド配列が、
（ｉ）少なくとも１つ（例えば、少なくとも２つ）のＩＬ－２ＭＯＤポリペプチド配列（例えば、配列番号９の配列を含む）または変異型ＩＬ－２ＭＯＤポリペプチド配列（例えば、態様６６の変異型ＩＬ－２ＭＯＤポリペプチド配列）と、
（ｉｉ）少なくとも１つ（例えば、少なくとも２つ）のＩＬ－２１ＭＯＤポリペプチド配列（例えば、配列番号５８もしくは６０の配列）または変異型ＩＬ－２１（例えば、対応するｗｔ配列と比較してＩＬ－２１受容体に対する親和性が低下している）ＭＯＤポリペプチド配列と、を含む、態様１～６２のいずれかのマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体。
７７．１つ以上の（例えば、１つ、２つ以上）独立して選択されるＭＯＤポリペプチド配列が、
（ｉ）少なくとも１つ（例えば、少なくとも２つ）のｗｔ．ＩＬ－２ＭＯＤポリペプチド配列（例えば、配列番号９の配列を含む）または変異型ＩＬ－２ＭＯＤポリペプチド配列（例えば、態様６６の変異型ＩＬ－２ＭＯＤポリペプチド配列）と、
（ｉｉ）少なくとも１つ（例えば、少なくとも２つ）のＩＬ－２３ＭＯＤポリペプチド配列（例えば、配列番号６３もしくは６５の配列）または変異型ＩＬ－２３（例えば、対応するｗｔ配列と比較してＩＬ－２３受容体に対する親和性が低下している）ＭＯＤポリペプチド配列と、を含む、態様１～６２のいずれかのマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体。
７８．マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体が、変異型ＩＬ－２ＭＯＤポリペプチド配列を含むとき、変異型ＩＬ－２ＭＯＤポリペプチド（例えば、配列番号９の変異型）が、Ｎ８８、Ｆ４２、及び／またはＨ１６のうちのいずれか１つ、２つ、または全てでの置換を含む、態様６３～７７のいずれか１つのマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体。
７９．少なくとも１つの変異型ＩＬ－２ＭＯＤポリペプチド配列が、Ｆ４２Ａ、Ｆ４２Ｔ、Ｈ１６Ａ、またはＨ１６Ｔ置換を含む、態様７８のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体。
８０．少なくとも１つの変異型ＩＬ－２ＭＯＤポリペプチド配列が、（ｉ）Ｆ４２Ａ及びＨ１６Ａ、（ｉｉ）Ｆ４２Ｔ及びＨ１６Ａ、（ｉｉｉ）Ｆ４２Ａ及びＨ１６Ｔ、または（ｉｖ）Ｆ４２Ｔ及びＨ１６Ｔ置換を含む、態様７８のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体。
８１．少なくとも１つの変異型ＩＬ－２ＭＯＤポリペプチド配列が、（ｉ）Ｎ８８Ｒ、Ｆ４２Ａ、及びＨ１６Ａ、（ｉｉ）Ｎ８８Ｒ、Ｆ４２Ｔ、及びＨ１６Ａ、（ｉｉｉ）Ｎ８８Ｒ、Ｆ４２Ａ、及びＨ１６Ｔ、または（ｉｖ）Ｎ８８Ｒ、Ｆ４２Ｔ、及びＨ１６Ｔ置換を含む、態様７８のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体。
８２．マスキングポリペプチド配列が、Ｉ型（ＴβＲＩ）、ＩＩ型（ＴβＲＩＩ）またはＩＩＩ型（ＴβＲＩＩＩ）ＴβＲのエクトドメイン断片を含むＴＧＦ－β受容体（「ＴβＲ」）ポリペプチド配列である、態様１～８１のいずれかのマスキングＴＧＦ－β構築物または複合体。
８３．ＴβＲＩＩエクトドメイン配列が、配列番号１１７に示されるＴβＲＩＩアイソフォームＡエクトドメインの少なくとも９０個（例えば、少なくとも１００、少なくとも１１０、少なくとも１２０、少なくとも１３０、少なくとも１４０、少なくとも１５０、または１５４個）の連続するａａｓに対して、少なくとも６０％（例えば、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）のａａ配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、態様８２のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体。
８４．ＴβＲＩＩエクトドメイン配列が、配列番号１１９に示されるＴβＲＩＩアイソフォームＢエクトドメインの少なくとも９０個（例えば、少なくとも１００、少なくとも１１０、少なくとも１２０、少なくとも１３０、少なくとも１４０、または１４３個）の隣接するａａｓに対して、少なくとも６０％（例えば、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）のａａ配列同一性を有するａａ配列を含む、態様８２のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体。
８５．ＴβＲＩＩエクトドメイン配列が、配列番号１２０に示されるＴβＲＩＩアイソフォームＢエクトドメインの少なくとも９０個（例えば、少なくとも１００個、少なくとも１１０個、少なくとも１２０個、少なくとも１３０個、少なくとも１４０個、または１４３個）の連続するａａｓに対して、少なくとも６０％（例えば、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）のａａ配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、態様８２のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体。
８６．ＴβＲＩＩエクトドメイン配列が、配列番号１２０のエクトドメイン断片、配列番号１２１のＴβＲＩＩエクトドメインＮ末端Δ１４（デルタ１４）ａａ欠失配列、配列番号１２２に示されるＮ末端Δ２５（デルタ２５）ａａ欠失配列、またはこれらのＴβＲＩＩアイソフォームＢポリペプチド配列のいずれかの少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１１０、または１１８個）の連続するａａｓに対して、少なくとも６０％（例えば、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）のａａ配列同一性を有する配列を含む、ＴβＲＩＩアイソフォームＢポリペプチド配列から選択されるａａ配列を含む、態様８２のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体。
８７．ＴβＲＩＩエクトドメイン配列が、Ｆ３０、Ｄ３２、Ｓ５２、Ｅ５５、及び／またはＤ１１８のうちのいずれか１つ、２つ、３つ、４つ、または５つ全ての置換を含む、態様８３～８６のいずれかのマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体。
８８．Ｄ１１８ＡまたはＤ１１８Ｒ置換（例えば、Ｎ末端Δ２５欠失及びＤ１１８置換を有するＴβＲＩＩエクトドメインについては、配列番号１２３を参照）、または
Ｄ１１８ＡまたはＤ１１８Ｒ置換、及びＦ３０Ａ、Ｄ３２Ｎ、Ｓ５２Ｌ、及び／またはＥ５５Ａ置換のうちの１つ、２つ、３つ、または４つ全て、を含む、態様８３～８７のいずれかのマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体。
８９．ＴβＲＩＩエクトドメイン配列が、配列番号１１９もしくは配列番号１２０の最大１４ａａｓまでのＮ末端欠失（Δ１４ａａ欠失）（例えば、配列番号１２１の配列を参照）、及びＤ１１８置換（例えば、Ｄ１１８ＡもしくはＤ１１８Ｒ）、またはこれらのＴβＲＩＩポリペプチド配列のいずれかの少なくとも７０個（例えば、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１１０、または１１８個）の連続するａａｓに対して、少なくとも６０％（例えば、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）のａａ配列同一性を有する配列を含む、態様８７のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体。
９０．Ｆ３０Ａ、Ｄ３２Ｎ、Ｓ５２Ｌ、及び／またはＥ５５Ａ置換のうちの１つ、２つ、３つ、または４つ全てをさらに含む、態様８９のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体。
９１．ＴβＲＩＩエクトドメイン配列が、配列番号１１９もしくは配列番号１２０の最大２５ａａｓまでのＮ末端欠失（Δ２５ａａ欠失）、及びＤ１１８置換（例えば、Ｄ１１８ＡまたはＤ１１８Ｒ、配列番号１２３を参照）、またはこれらのＴβＲＩＩポリペプチド配列のうちのいずれかの少なくとも７０個（例えば、少なくとも８０、少なくとも９０、または１００個）の連続するａａｓに対して、少なくとも６０％（例えば、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）のａａ配列同一性を有する配列を含む、態様８７のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体。
９２．Ｆ３０Ａ、Ｄ３２Ｎ、Ｓ５２Ｌ、及び／またはＥ５５Ａ置換のうちの１つ、２つ、３つ、または４つ全てをさらに含む、態様９１のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体。
９３．ＴβＲポリペプチド配列が、ＴβＲＩエクトドメイン配列を含む、態様８２のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体。
９４．ＴβＲＩエクトドメイン配列が、配列番号１１５の少なくとも７０個（例えば、少なくとも８０、少なくとも９０、または９３個）の連続するａａｓに対して、少なくとも６０％（例えば、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）のａａ配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、態様９３のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体。
９５．ＴβＲポリペプチド配列が、ＴβＲＩＩＩエクトドメイン配列を含む、態様８２のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体。
９６．ＴβＲＩＩＩエクトドメイン配列が、Ａアイソフォーム（配列番号１２４）のａａｓ２７～７８７、またはＢアイソフォーム（配列番号１２５）のａａｓ２７～７８６のうちの少なくとも７０個（例えば、少なくとも８０、９０、１００、１５０、２００、２５０、３００、４００、５００、または６００個）の連続するａａｓに対して、少なくとも６０％（例えば、少なくとも７０％、少なくとも８０％少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）のａａ配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、態様９５のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体。
９７．ＴＧＦ－βポリペプチド配列が、ヒトＴＧＦ－β１ポリペプチド、ヒトＴＧＦ－β２ポリペプチド、またはヒトＴＧＦ－β３ポリペプチドの成熟形態の少なくとも７０個（例えば、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、または少なくとも１１０個）の連続するａａｓを含むポリペプチドに対して、少なくとも６０％（例えば、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）のａａ配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、態様１～９６のいずれかのマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体。
９８．ＴＧＦ－βポリペプチド配列が、配列番号１０５（例えば、配列番号１０６のａａｓ２７９～３９０）の少なくとも７０個（例えば、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１１０、または１１２個）の連続するａａｓに対して、少なくとも６０％（少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）のａａ配列同一性を有するａａ配列を含むＴＧＦ－β１ポリペプチドである、態様１～９６のいずれかのマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体。
９９．ＴＧＦ－βポリペプチド配列が、配列番号１０７の少なくとも７０個（例えば、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１１０、または１１２個）のａａに対して、少なくとも６０％（少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）の連続するａａ配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、Ｃ７７Ｓ置換を有するＴＧＦ－β１ポリペプチドである、態様１～９６のいずれかのマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体。
１００．ＴＧＦ－βポリペプチド配列が、配列番号１０８（例えば、配列番号１０９のａａｓ３０２～４１３）の少なくとも７０個（例えば、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１１０、または１１２個）の連続するａａｓに対して、少なくとも６０％（少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）のａａ配列同一性を有するａａ配列を含むＴＧＦ－β２ポリペプチドである、態様１～９６のいずれかのマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体。
１０１．ＴＧＦ－βポリペプチド配列が、配列番号１１０の少なくとも７０個（例えば、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１１０、または１１２個）のａａｓに対して、少なくとも６０％（少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）の連続するａａｓ配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、Ｃ７７Ｓ置換を有するＴＧＦ－β２ポリペプチドである、態様１～９６のいずれかのマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体。
１０２．ＴＧＦ－βポリペプチド配列が、配列番号１１１（例えば、配列番号１１２のａａｓ３０１～４１２）の少なくとも７０個（例えば、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１１０、または１１２個）の連続するａａｓに対して、少なくとも６０％（少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）のａａ配列同一性を有するａａ配列を含むＴＧＦ－β３ポリペプチドである、態様１～９６のいずれかのマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体。
１０３．ＴＧＦ－βポリペプチド配列が、配列番号１１３の少なくとも７０個（例えば、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１１０、または１１２個）の連続するａａｓに対して少なくとも６０％（少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）のａａ配列同一性を有するａａ配列を含む、Ｃ７７Ｓ置換を有するＴＧＦ－β３ポリペプチドである、態様１～９６のいずれかのマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体。
１０４．ＴＧＦ－βポリペプチド配列が、成熟ＴＧＦ－βポリペプチド配列の２５位、９２位、及び／または９４位のうちの１つ以上での置換を含む（例えば、図３及び図４の配列番号１１２を参照）、態様９７～１０３のいずれかのマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体。
１０５．ＴＧＦ－βポリペプチド配列が、成熟ＴＧＦ－βポリペプチド配列の２５位、９２位、及び／または９４位のうちの１つ以上での置換を含む（例えば、図３及び図４の配列番号１１２を参照）、態様１００～１０１のいずれかのマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体。
１０６．ＴＧＦ－βポリペプチド配列が、
（ｉ）２５位のＬｙｓまたはＡｒｇ以外のａａ、
（ｉｉ）９２位のＩｌｅまたはＶａｌ以外のａａ、及び／または
（ｉｉｉ）９４位のＬｙｓまたはＡｒｇ以外のａａ（例えば、配列番号１０８または配列番号１１０に基づく）を含む、態様９７～１０５のいずれかのマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体。
１０７．マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体が、図１の構造Ａ～Ｆのいずれか１つの形態を有する、態様１～１０６のいずれかのマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体。
１０８．マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体が、図１の構造Ａの形態を有するマスキングされたＴＧＦ－βポリペプチドである、態様１０７のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体。
１０９．少なくとも１つ（例えば、１つ、２つ以上）のｗｔまたは変異型ＩＬ－２ＭＯＤポリペプチド配列を含む、態様１０８のマスキングされたＴＧＦ－βポリペプチド。
１１０．マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体が、図１の構造Ｂの形態を有するマスキングされたＴＧＦ－β複合体である、態様１０７のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体。
１１１．少なくとも１つ（例えば、１つ、２つ以上）のｗｔまたは変異型ＩＬ－２ＭＯＤポリペプチド配列を含む、態様１１０のマスキングされたＴＧＦ－βポリペプチド。
１１２．マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体が、図１の構造Ｃの形態を有する相互特異的なマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体である、態様１０７のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体。
１１３．少なくとも１つ（例えば、１つ、２つ以上）のｗｔまたは変異型ＩＬ－２ＭＯＤポリペプチド配列を含む、態様１１２のマスキングされたＴＧＦ－βポリペプチド。
１１４．マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体が、図１の構造ＤまたはＥの形態を有する相互特異的なマスキングされたＴＧＦ－β複合体である、態様１０７のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体。
１１５．少なくとも１つ（例えば、１つ、２つ以上）のｗｔまたは変異型ＩＬ－２ＭＯＤポリペプチド配列を含む、態様１１４のマスキングされたＴＧＦ－βポリペプチド。
１１６．マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体が、図１の構造Ｆの形態を有する相互特異的なマスキングされたＴＧＦ－β複合体である、態様１０７のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体。
１１７．少なくとも１つ（例えば、１つ、２つ以上）のｗｔまたは変異型ＩＬ－２ＭＯＤポリペプチド配列を含む、態様１１６のマスキングされたＴＧＦ－βポリペプチド。
１１８．ＴＧＦ－βポリペプチド配列が、ｗｔ．ＴＧＦ－β３ポリペプチド配列（例えば、配列番号１１１の配列を含む）、または配列番号１１１に示されるＴＧＦ－β３配列の少なくとも７０個（例えば、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１１０、または１１２個）の連続するａａｓに対して、少なくとも６０％（例えば、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）のａａ配列同一性を有するａａ配列を含み、
マスキングポリペプチド配列が、ｗｔ．ＴβＲＩＩポリペプチド配列（例えば、配列番号１１７の配列を含む）、または配列番号１１７に示されるＴβＲＩＩアイソフォームＡエクトドメインの少なくとも９０個（例えば、少なくとも１００、少なくとも１１０、少なくとも１２０、少なくとも１３０、少なくとも１４０、少なくとも１５０、または１５４個）の連続するａａｓに対して、少なくとも６０％（例えば、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）のａａ配列同一性を有するａａ配列を含み、
マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体が、ｗｔ．ＩＬ－２ＭＯＤポリペプチド配列（例えば、配列番号９の配列を含む）を含む、態様１０７～１１７のいずれかのマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体。
１１９．ＴＧＦ－βポリペプチド配列が、ｗｔ．ＴＧＦ－β３ポリペプチド配列（例えば、配列番号１１１の配列を含む）、または配列番号１１１に示されるＴＧＦ－β３配列の少なくとも７０個（例えば、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１１０、または１１２個）の連続するａａｓに対して、少なくとも６０％（例えば、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）のａａ配列同一性を有するａａ配列を含み、
マスキングポリペプチド配列が、ｗｔ．ＴβＲＩＩポリペプチド配列（例えば、配列番号１１９の配列を含む）、または配列番号１１９に示されるＴβＲＩＩアイソフォームＢエクトドメインの少なくとも９０個（例えば、少なくとも１００、少なくとも１１０、少なくとも１２０、少なくとも１３０、少なくとも１４０、または少なくとも１４３個）の連続するａａｓに対して、少なくとも６０％（例えば、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）のａａ配列同一性を有するａａ配列を含み、
マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体が、ｗｔ．ＩＬ－２ＭＯＤポリペプチド配列（例えば、配列番号９の配列を含む）を含む、態様１０７～１１７のいずれかのマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体。
１２０．ＴＧＦ－βポリペプチド配列が、ｗｔ．ＴＧＦ－β３ポリペプチド配列（例えば、配列番号１１１の配列を含む）、または配列番号１１１に示されるＴＧＦ－β３配列の少なくとも７０個（例えば、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１１０、または１１２個）の連続するａａｓに対して、少なくとも６０％（例えば、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）のａａ配列同一性を有するａａ配列を含み、
マスキングポリペプチド配列が、ｗｔ．ＴβＲＩＩポリペプチド配列（例えば、配列番号１２０の配列を含む）、または配列番号１２０に示されるＴβＲＩＩアイソフォームＢエクトドメインの少なくとも９０個（例えば、少なくとも１００、少なくとも１１０、少なくとも１２０、または少なくとも１２９個）の連続するａａｓに対して、少なくとも６０％（例えば、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）のａａ配列同一性を有するａａ配列を含み、
マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体が、ｗｔ．ＩＬ－２ＭＯＤポリペプチド配列（例えば、配列番号９の配列を含む）を含む、態様１０７～１１７のいずれかのマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体。
１２１．ＴＧＦ－βポリペプチド配列が、ｗｔ．ＴＧＦ－β３ポリペプチド配列（例えば、配列番号１１１の配列を含む）、または配列番号１１１に示されるＴＧＦ－β３配列の少なくとも７０個（例えば、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１１０、または１１２個）の連続するａａｓに対して、少なくとも６０％（例えば、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）のａａ配列同一性を有するａａ配列を含み、
マスキングポリペプチド配列が、ｗｔ．ＴβＲＩＩポリペプチド配列（例えば、配列番号１１７の配列を含む）、または配列番号１１７に示されるＴβＲＩＩアイソフォームＡエクトドメインの少なくとも９０個（例えば、少なくとも１００、少なくとも１１０、少なくとも１２０、少なくとも１３０、少なくとも１４０、少なくとも１５０、または１５４個）の連続するａａｓに対して、少なくとも６０％（例えば、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）のａａ配列同一性を有するａａ配列を含み、
マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体が、配列番号９の少なくとも８０個（例えば、９０、１００、１１０、１２０、１３０、または１３３個）の連続するａａｓに対して、少なくとも８０％（少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）のａａ配列同一性を有するａａ配列を含む変異型ＩＬ－２ＭＯＤポリペプチド配列を含む、態様１０７～１１７のいずれかのマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体。
１２２．ＴＧＦ－βポリペプチド配列が、ｗｔ．ＴＧＦ－β３ポリペプチド配列（例えば、配列番号１１１の配列を含む）、または配列番号１１１に示されるＴＧＦ－β３配列の少なくとも７０個（例えば、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１１０、または１１２個）の連続するａａｓに対して、少なくとも６０％（例えば、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）のａａ配列同一性を有するａａ配列を含み、
マスキングポリペプチド配列が、ｗｔ．ＴβＲＩＩポリペプチド配列（例えば、配列番号１１９の配列を含む）、または配列番号１１９に示されるＴβＲＩＩアイソフォームＢエクトドメインの少なくとも９０個（例えば、少なくとも１００、少なくとも１１０、少なくとも１２０、少なくとも１３０、少なくとも１４０、少なくとも１４３個）の連続するａａｓに対して、少なくとも６０％（例えば、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）のａａ配列同一性を有するａａ配列を含み、
マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体が、配列番号９の少なくとも８０個（例えば、９０、１００、１１０、１２０、１３０、または１３３個）の連続するａａｓに対して、少なくとも８０％（少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）のａａ配列同一性を有するａａ配列を含む変異型ＩＬ－２ＭＯＤポリペプチド配列を含む、態様１０７～１１７のいずれかのマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体。
１２３．ＴＧＦ－βポリペプチド配列が、ｗｔ．ＴＧＦ－β３ポリペプチド配列（例えば、配列番号１１１の配列を含む）、または配列番号１１１に示されるＴＧＦ－β３配列の少なくとも７０個（例えば、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１１０、または１１２個）の連続するａａｓに対して、少なくとも６０％（例えば、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）のａａ配列同一性を有するａａ配列を含み、
マスキングポリペプチド配列が、ｗｔ．ＴβＲＩＩポリペプチド配列（例えば、配列番号１２０の配列を含む）、または配列番号１２０に示されるＴβＲＩＩアイソフォームＢエクトドメインの少なくとも９０個（例えば、少なくとも１００、少なくとも１１０、少なくとも１２０、または少なくとも１２９個）の連続するａａにｓ対して、少なくとも６０％（例えば、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）のａａ配列同一性を有するａａ配列を含み、
マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体が、配列番号９の少なくとも８０個（例えば、９０、１００、１１０、１２０、１３０、または１３３個）の連続するａａｓに対して、少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）のａａ配列同一性を有するａａ配列を含む変異型ＩＬ－２ＭＯＤポリペプチド配列を含む、態様１０７～１１７のいずれかのマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体。
１２４．ＴＧＦ－β３ポリペプチド配列が、Ｃ７７Ｓ置換を含む、態様１２１～１２３のいずれかのマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体。
１２５．ＴβＲＩＩポリペプチド配列が、Ｎ末端Δ１４及びＤ１１８ＡもしくはＤ１１８Ｒ配列修飾のいずれか、またはＮ末端Δ２５及びＤ１１８ＡもしくはＤ１１８Ｒ配列修飾のいずれかを含む、態様１２１～１２４のいずれかのマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体。
１２６．ＩＬ－２ＭＯＤポリペプチド配列が、Ｈ１６におけるａａ置換またはＦ４２におけるａａ置換を含む、態様１２１～１２５のいずれかのマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体。
１２７．Ｈ１６及びＦ４２における置換が、Ｈ１６Ａ、Ｈ１６Ｔ、Ｆ４２Ａ、及びＦ４２Ｔからなる群から選択される（例えば、Ｈ１６Ａ及びＦ４２Ａ、またはＨ１６Ｔ及びＦ４２Ａである）、態様１２５～１２６のいずれかのマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体。
１２８．ＩＬ－２ＭＯＤポリペプチド配列が、Ｎ８８Ｒａａ置換をさらに含む、態様１２１～１２７のいずれかのマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体。
１２９．ＴＧＦ－β３ポリペプチド配列が、Ｃ７７Ｓ置換を含み、
ＴβＲＩＩポリペプチド配列が、Ｎ末端Δ１４及びＤ１１８ＡもしくはＤ１１８Ｒの配列修飾、またはＮ末端Δ２５及びＤ１１８ＡもしくはＤ１１８Ｒの配列修飾のいずれかを含み、
ＩＬ－２ＭＯＤポリペプチド配列が、Ｈ１６及びＦ４２におけるａａ置換を含む、態様１２１～１２８のいずれかのマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体。
１３０．Ｈ１６及びＦ４２における置換が、Ｈ１６Ａ及びＦ４２Ａ置換、またはＨ１６Ｔ及びＦ４２Ａ置換のいずれかである、態様１２９のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体。
１３１．ＰＤ－Ｌ１、ＦＡＳ－Ｌ、４－１ＢＢＬ、ＩＬ－１、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－１０、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１及びＩＬ－２３からなる群から選択されるｗｔまたは変異型ＭＯＤポリペプチド配列を含む、態様１～１３０のいずれかのマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体。
１３２．ＰＤ－Ｌ１、ＦＡＳ－Ｌ、４－１ＢＢＬ、及びＩＬ－１０からなる群から選択されるｗｔまたは変異型ＭＯＤポリペプチド配列を含む、態様１～１３０のいずれかのマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体
１３３．マスキングされたＴＧＦ－βポリペプチド／複合体が、配列変動がない以外は同一のｗｔ．ＴＧＦ－βポリペプチドと比較して、マスキングポリペプチド（例えば、ＴＧＦ－β受容体ポリペプチド）配列に対する親和性が少なくとも１０％低減（例えば、少なくとも２０％低減、少なくとも３０％低減、少なくとも４０％低減、少なくとも５０％低減、少なくとも６０％低減、少なくとも７０％低減、少なくとも８０％低減、少なくとも９０％低減、少なくとも９５％低減、または９５％超低減）している変異型ＴＧＦ－βポリペプチドを含む、態様１～１３２のいずれかのマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体。
１３４．ＴＧＦ－β構築物または複合体が、配列変動がない対応するｗｔ．ＴβＲポリペプチド配列と比較して、ＴＧＦ－βポリペプチドに対する親和性が低減（例えば、少なくとも１０％低減、少なくとも２０％低減、少なくとも３０％低減、少なくとも４０％低減、少なくとも５０％低減、少なくとも６０％低減、少なくとも７０％低減、少なくとも８０％低減、少なくとも９０％低減、少なくとも９５％低減、または９５％超低減）している１つ以上の配列変動（例えば、１つ以上のａａ欠失、挿入、または置換）を有するＴβＲポリペプチド配列を含む、態様１～１３３のいずれかのマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体。
１３５．それぞれ、ポリペプチド４０３３及び４０３９をコードする配列番号１９１または１９２に対して少なくとも９０％または９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、マスキングされたＴＧＦ－β複合体ＰＳＭ－４０３３－４０３９またはマスキングされたＴＧＦ－β複合体。
１３６．態様１～１３５のいずれかのマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体をコードするか、または態様４及び６～１３５のいずれかのマスキングされたＴＧＦ－β複合体をコードする１つ以上の核酸（例えば、発現ベクター（複数可））。
１３７．哺乳動物（例えば、ヒト）対象、またはその細胞、組織、もしくは体液中のＴｒｅｇ細胞を誘導する方法であって、態様１～１３５のいずれかの１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体を対象に投与することを含む、方法。
１３８．１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体のうちの少なくとも１つが、ｗｔまたは変異型ＩＬ－２ＭＯＤポリペプチド配列を含む（例えば、図１０ＡのＰＳＭ－４０３３－４０３９を参照）、態様１３７の方法。
１３９．１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体のうちの少なくとも１つが、（ｉ）ｗｔまたは変異型ＩＬ－２ＭＯＤポリペプチド配列と、（ｉｉ）ｗｔまたは変異型ＰＤＬ－Ｌ１ポリペプチド配列とを含む、態様１３７の方法。
１４０．１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体が、ビタミンＤ（例えば、１α、２５－ジヒドロキシビタミンＤ３またはビタミンＤ類似体（例えば、ビタミンＤ３）、ｍＴＯＲ阻害剤（例えば、ラパマイシン）、及び／またはレチノイン酸（例えば、オールトランスレチノイン酸）のうちのいずれか１つ以上の投与前、投与中（同時もしくは併用投与）、または投与後に投与される、態様１３７～１３９のいずれかの方法。
１４１．投与が、
（ｉ）１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体の投与前もしくは無投与の場合、または
（ｉｉ）（例えば、疾患状態、年齢、性別、身長、体重、及び／または喫煙習慣のうちの１つ以上）については対象と一致するが、ＴＧＦ－β、またはマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体を投与されていない対照処置群（例えば、１人の対象、または２人以上の対象からの平均）の組織または体液中のＴｒｅｇ細胞の量に関する場合
のいずれかの場合の細胞の数と比較して、対象からの所定の体積の組織または体液（例えば、血液もしくはリンパ）中のＦｏｘＰ３＋Ｔｒｅｇ細胞（例えば、誘導された調節Ｔ細胞（ｉＴｒｅｇ）、胸腺由来Ｔｒｅｇ細胞（ｔＴｒｅｇ）、及び／または末梢Ｔｒｅｇ細胞（ｐＴｒｅｇ）のうちのいずれか１つ以上）の数の増加をもたらす、態様１３７～１４０のいずれかの方法。
１４２．所定の体積の組織または体液におけるＴｒｅｇ細胞（例えば、ＦｏｘＰ３＋細胞、ｉＴｒｅｇ、ｔＴｒｅｇ、及び／またはｐＴｒｅｇ）の数が、１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体を投与する前所定の体積の組織または体液におけるＴｒｅｇの数と比較して、または、１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体を受容しなかった以外は一致する対照群の平均値と比較して、少なくとも５％（例えば、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも２倍、少なくとも５倍、少なくとも１０倍以上）増加する、態様１４１の方法。
１４３．哺乳動物（例えば、ヒト）対象、またはその組織もしくは体液においてＴｈ９細胞を誘導する方法であって、態様１～１３４のいずれかの１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体を対象に投与することを含む、方法。
１４４．１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体のうちの少なくとも１つが、ｗｔまたは変異型ＩＬ－４ＭＯＤポリペプチド配列を含む、態様１４３の方法。
１４５．投与が、
（ｉ）１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体の投与前もしくは無投与の場合、または
（ｉｉ）（例えば、疾患状態、年齢、性別、身長、体重、及び／または喫煙習慣のうちの１つ以上については）対象と一致するが、ＴＧＦ－βまたはマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体を投与されていない対照処置（例えば、個体群からの平均）群の組織または体液中のＴｈ９細胞の量に関する場合
のいずれかの場合の細胞の数と比較して、対象からの所定の体積の組織または体液（例えば、血液もしくはリンパ液）中のＴｈ９細胞の数の増加をもたらす、態様１４３～１４４のいずれかの方法。
１４６．Ｔｈ９細胞の数が、１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体を投与する前のＴｈ９細胞の数と比較して、または１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体を受容しなかった以外は一致する対照群の平均値と比較して、組織または体液の体積において、少なくとも５％（例えば、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも２倍、少なくとも５倍、少なくとも１０倍以上）増加する、態様１４５の方法。
１４７．哺乳動物（例えば、ヒト）対象、またはその組織もしくは体液においてＴｈ１７細胞を誘導する方法であって、態様１～１３４のいずれかの１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体を対象に投与することを含む、方法。
１４８．１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体のうちの少なくとも１つが、ｗｔまたは変異型ＩＬ－６ＭＯＤポリペプチド配列を含む、態様１４７の方法。
１４９．投与が、
（ｉ）１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体の投与前もしくは無投与の場合、または
（ｉｉ）（例えば、疾患状態、年齢、性別、身長、体重、及び／または喫煙習慣のうちの１つ以上については）対象と一致するが、ＴＧＦ－βまたはマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体を投与されていない対照処置（例えば、個体群からの平均）群の組織または体液中のＴｈ１７細胞の量に関する場合
のいずれかの場合の細胞の数と比較して、対象からの所定の体積の組織または体液（例えば、血液もしくはリンパ液）中のＴｈ１７細胞の数の増加をもたらす、態様１４７～１４８のいずれかの方法。
１５０．Ｔｈ１７細胞の数が、１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体を投与する前のＴｈ１７細胞の数と比較して、または１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体を受容しなかった以外は一致する対照群の平均値と比較して、組織または体液の体積において、少なくとも５％（例えば、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも２倍、少なくとも５倍、少なくとも１０倍以上）増加する、態様１４９の方法。
１５１．哺乳動物（例えば、ヒト）対象、またはその組織もしくは体液においてＴｈｆ細胞を誘導する方法であって、態様１～１３４のいずれかの１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体を対象に投与することを含む、方法。
１５２．１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体のうちの少なくとも１つが、少なくとも１つのｗｔまたは変異型ＩＬ－２１及び／またはＩＬ－２３ＭＯＤポリペプチド配列を含む、態様１５１の方法。
１５３．１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体のうちの少なくとも１つが、少なくとも１つのｗｔまたは変異型ＩＬ－２１と、少なくとも１つのｗｔまたは変異型ＩＬ－２３ＭＯＤポリペプチド配列とを含む、態様１５２の方法。
１５４．投与が、
（ｉ）１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体の投与前もしくは無投与の場合、または
（ｉｉ）（例えば、疾患状態、年齢、性別、身長、体重、及び／または喫煙習慣のうちの１つ以上については）対象と一致するが、ＴＧＦ－βまたはマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体を投与されていない対照処置（例えば、個体群からの平均）群の組織または体液中のＴｈｆの数に関する場合
のいずれかの場合の細胞の数と比較して、対象からの所定の体積の組織または体液（例えば、血液もしくはリンパ液）中のＴｈｆ細胞の数の増加をもたらす、態様１５１～１５３のいずれかの方法。
１５５．Ｔｈｆ細胞の数が、１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体を投与する前の所定の体積の組織または体液におけるＴｈｆ細胞の数と比較して、または１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体を受容しなかった以外は一致する対照群の平均値と比較して、組織または体液の体積において、少なくとも５％（例えば、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも２倍、少なくとも５倍、少なくとも１０倍以上）増加する、態様１５４の方法。
１５６．哺乳動物対象（またはその組織もしくは体液）におけるＴｈ１細胞の作用を阻害する方法であって、態様１～１３４のいずれかの１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体を対象に投与することを含む、方法。
１５７．１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体のうちの少なくとも１つが、ｗｔまたは変異型ＩＬ－４ＭＯＤポリペプチド配列を含む、態様１５６の方法。
１５８．投与が、
（ｉ）１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体の投与前もしくは無投与の場合の量、
（ｉｉ）（例えば、疾患状態、年齢、性別、身長、体重、及び／または喫煙習慣のうちの１つ以上については）対象と一致するが、ＴＧＦ－βまたはマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体を投与されていない対照処置（例えば、個体群からの平均）群の組織または体液中のインターフェロンγ及び／またはＴＮＦの量と比較して、対象からの所定の体積の組織または体液（例えば、血液もしくはリンパ液）内へのインターフェロンγ及び／またはＴＮＦのＴｈ１媒介性放出（もしくはその中での結果として生じる濃度）の阻害をもたらす、態様１５６～１５７のいずれかの方法。
１５９．所定の体積の組織または体液におけるインターフェロンγ及び／またはＴＮＦの量が、１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体を投与する前の所定の体積の組織または体液におけるインターフェロンγ及び／またはＴＮＦの量と比較して、または１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体を受容しなかった以外は一致する対照群の平均値と比較して、少なくとも５％（例えば、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも２倍、少なくとも５倍、少なくとも１０倍以上）減少する、態様１５８の方法。
１６０．哺乳動物（例えば、ヒト）対象、またはその組織もしくは体液におけるＴｈ２細胞の作用及び／または増殖を阻害する方法であって、態様１～１３４のいずれかの１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体を対象に投与することを含む、方法。
１６１．投与が、
（ｉ）１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体の投与前もしくは無投与の場合の量、
（ｉｉ）（例えば、疾患状態、年齢、性別、身長、体重、及び／または喫煙習慣のうちの１つ以上については）対象と一致するが、ＴＧＦ－βまたはマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体を投与されていない対照処置（例えば、個体群からの平均）群の組織または体液中の量と比較して、対象からの所定の体積の組織または体液（例えば、血液もしくはリンパ液）内へのＩＬ－４、ＩＬ－５、及び／またはＩＬ－１３のＴｈ２媒介性放出（もしくはその中での結果として生じる濃度）の阻害をもたらす、態様１６０の方法。
１６２．所定の体積の組織または体液におけるＩＬ－４、ＩＬ－５、及び／またはＩＬ－１３の量が、１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体を投与する前の所定の体積の組織または体液におけるＩＬ－４、ＩＬ－５、及び／またはＩＬ－１３の量と比較して、または、１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体を受容しなかった以外は一致する対照群からの組織または体液におけるＩＬ－４、ＩＬ－５、及び／またはＩＬ－１３の量と比較して、少なくとも５％（例えば、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、または、少なくとも９０％）減少する、態様１６１の方法。
１６３．哺乳動物（例えば、ヒト）対象、またはその組織もしくは体液におけるＩＩ型先天性リンパ系細胞（ＩＬＣ２細胞）の作用を阻害する方法であって、態様１～１３４のいずれかの１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体を対象に投与することを含み、１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体のうちの少なくとも１つが、任意に１つ以上の独立して選択されるｗｔまたは変異型ＩＬ－１０ポリペプチド配列（例えば、ＩＬ－１０Ｍ１などの単量体形態）を含む、方法。
１６４．投与が、
（ｉ）１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体を用いた治療の投与前もしくは無投与の場合の量、または
（ｉｉ）（例えば、疾患状態、年齢、性別、身長、体重、及び／または喫煙習慣のうちの１つ以上については）対象と一致するが、ＴＧＦ－βまたはマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体を投与されていない対照処置（例えば、個体群からの平均）群の組織または体液中の量に関する場合
と比較して、対象からの所定の体積の組織または体液（例えば、血液もしくはリンパ液）内へＩＬ－５及び／またはＩＬ－１３のＩＬＣ２細胞媒介性放出（もしくはその結果として生じる濃度）の阻害をもたらす、態様１６の方法。
１６５．所定の体積の組織または体液における、ＩＬ－５、及び／またはＩＬ－１３の量が、１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体を投与する前の所定の体積の組織または体液におけるＩＬ－５、及び／またはＩＬ－１３の量と比較して、または、１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体を受容しなかった以外は一致する対照群からの所定の体積の組織または体液におけるＩＬ－５、及び／またはＩＬ－１３の量と比較して、少なくとも５％（例えば、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、または、少なくとも９０％）減少する、態様１６４の方法。
１６６．所定の体積の組織または体液におけるＩＬ－５及び／またはＩＬ－１３の量が、１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体を投与する前の所定の体積の組織または体液におけるＩＬ－５及び／またはＩＬ－１３の量と比較して、または、１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体を受容しなかった以外は一致する対照群からの所定の体積の組織または体液におけるＩＬ－５、及び／またはＩＬ－１３の量と比較して、少なくとも２５％減少する、態様１６４の方法。
１６７．哺乳動物（例えば、ヒト）対象、またはその組織もしくは体液におけるインバリアントナチュラルキラーＴ（ｉＮＫＴ）細胞の発達及び／または生存を支援する方法であって、態様１～１３４のいずれかの１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体を対象に投与することを含む、方法。
１６８．１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体のうちの少なくとも１つが、少なくとも１つのｗｔまたは変異型ＭＯＤポリペプチド配列を含む、態様１６７の方法。
１６９．投与が、
（ｉ）１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体の投与前もしくは無投与の場合、または
（ｉｉ）（例えば、疾患状態、年齢、性別、身長、体重、及び／または喫煙習慣のうちの１つ以上については）対象と一致するが、ＴＧＦ－βまたはマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体を投与されていない対照処置（例えば、個体群からの平均）群の組織または体液中のｉＮＫＴ細胞の数に関する場合
のいずれかの場合の細胞の数と比較して、対象からの所定の体積の組織または体液（例えば、血液もしくはリンパ液）中のｉＮＫＴ細胞の数の増加をもたらす、態様１６７～１６８のいずれかの方法。
１７０．ｉＮＫＴ細胞の数が、１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体を投与する前の所定の体積の組織または体液におけるｉＮＫＴ細胞の数と比較して、または１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体を受容しなかった以外は一致する対照群の平均値と比較して、組織または体液の体積において、少なくとも５％（例えば、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、または少なくとも９０％）増加する、態様１６９の方法。
１７１．ｉＮＫＴ細胞の数が、１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体を投与する前の所定の体積の組織または体液におけるｉＮＫＴ細胞の数と比較して、または１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体を受容しなかった以外は一致する対照群の平均値と比較して、組織または体液の体積において、少なくとも２５％増加する、態様１６９の方法。
１７２．哺乳動物（例えば、ヒト）対象、またはその組織もしくは体液中のＣＤ４＋Ｔ細胞の数の増加をブロックするか、またはＣＤ４＋Ｔ細胞の数を減少させる方法であって、態様１～１３４のいずれかの１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体を対象に投与することを含む、方法。
１７３．１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体のうちの少なくとも１つが、ＴＧＦ－βポリペプチド配列に加えて、少なくとも１つのｗｔまたは変異型ＭＯＤポリペプチド配列を含む、態様１７２の方法。
１７４．投与が、
（ｉ）１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体の投与前もしくは無投与の場合、または
（ｉｉ）（例えば、疾患状態、年齢、性別、身長、体重、及び／または喫煙習慣のうちの１つ以上については）対象と一致するが、ＴＧＦ－βまたはマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体を投与されていない対照処置（例えば、個体群からの平均）群の組織または体液中のＣＤ４＋Ｔ細胞の数に関する場合
のいずれかの場合の細胞の数と比較して、対象からの所定の体積の組織または体液（例えば、血液もしくはリンパ）中のＣＤ４＋Ｔ細胞の数の減少をもたらす、態様１７２～１７３のいずれかの方法。
１７５．ＣＤ４＋細胞の数が、１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体を投与する前の所定の体積の組織または体液におけるＣＤ４＋細胞の数と比較して、または１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体を受容しなかった以外は一致する対照群の平均値と比較して、組織または体液の体積において、少なくとも５％（例えば、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも２倍、少なくとも５倍、少なくとも１０倍以上）減少する、態様１７４の方法。
１７６．ＣＤ４＋細胞の数が、１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体を投与する前の所定の体積の組織または体液におけるＣＤ４＋細胞の数と比較して、または１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体を受容しなかった以外は一致する対照群の平均値と比較して、組織または体液の体積において少なくとも２５％減少する、態様１７４の方法。
１７７．哺乳動物（例えば、ヒト）対象、またはその組織もしくは体液中のＣＤ８＋Ｔ細胞の数の増加をブロックするか、またはＣＤ４＋Ｔ細胞の数を減少させる方法であって、態様１～１３４のいずれかの１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体を対象に投与することを含む、方法。
１７８．１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体のうちの少なくとも１つが、ＴＧＦ－βポリペプチド配列に加えて、少なくとも１つのｗｔまたは変異型ＭＯＤポリペプチド配列を含む、態様１７７の方法。
１７９．投与が、
（ｉ）１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体の投与前もしくは無投与の場合、または
（ｉｉ）（例えば、疾患状態、年齢、性別、身長、体重、及び／または喫煙習慣のうちの１つ以上については）対象と一致するが、ＴＧＦ－βまたはマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体を投与されていない対照処置（例えば、個体群からの平均）群の組織または体液中のＣＤ８＋Ｔ細胞の数に関する場合
のいずれかの場合の細胞の数と比較して、対象からの所定の体積の組織または体液（例えば、血液もしくはリンパ）中のＣＤ８＋Ｔ細胞の数の減少をもたらす、態様１７７～１７８のいずれかの方法。
１８０．ＣＤ８＋細胞の数が、１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体を投与する前の所定の体積の組織または体液におけるＣＤ８＋細胞の数と比較して、または１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体を受容しなかった以外は一致する対照群の平均値と比較して、組織または体液の体積において、少なくとも５％（例えば、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも２倍、少なくとも５倍、少なくとも１０倍以上）減少する、態様１７９の方法。
１８１．創傷、アレルギー反応、疾患もしくは障害、自己免疫疾患もしくは障害、または代謝疾患もしくは障害の治療または予防を提供する方法であって、治療または予防を必要とする対象（例えば、ヒト）に、（ｉ）態様１～１３４のいずれかの１つ以上の独立して選択されたマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体、及び／または（ｉｉ）態様１～１３４のいずれかの１つ以上の独立して選択されたマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体をコードする１つ以上の核酸のいずれかを投与することを含む、方法。
１８２．１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体のうちの少なくとも１つが、独立して選択される少なくとも１つ（例えば、少なくとも２つ、または少なくとも３つ）のｗｔまたは変異型ＩＬ－２ＭＯＤポリペプチド配列を含む、態様１８１の方法。
１８３．独立して選択されるｗｔまたは変異型ＩＬ－２ＭＯＤポリペプチドが、配列番号９のＩＬ－２ポリペプチドまたはその変異型を含む、態様１８２の方法。
１８４．独立して選択される変異型ＩＬ－２ＭＯＤポリペプチド配列が、
（ｉ）配列番号９の少なくとも８０個（例えば、少なくとも９０、１００、１１０、１２０、１３０、または１３３個）の連続するａａに対する、少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％）のａａ配列同一性、または
（ｉｉ）配列番号１５～２７のいずれかの少なくとも８０個（例えば、少なくとも９０、１００、１１０、１２０、１３０、または１３３個）の連続するａａｓに対する、少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％）のａａ配列同一性、を有する配列を含む、態様１８３の方法。
１８５．独立して選択される変異型ＩＬ－２ＭＯＤポリペプチド配列が、Ｎ８８、Ｆ４２、及び／またはＨ１６のうちのいずれか１つ、２つ、または３つ全ての置換を含む、態様１８２～１８４のいずれか１つの方法。
１８６．独立して選択される変異型ＩＬ－２ＭＯＤポリペプチド配列が、（ｉ）Ｆ４２Ａ、（ｉｉ）Ｆ４２Ｔ、（ｉｉｉ）Ｈ１６Ａ、（ｉｖ）Ｈ１６Ｔ、（ｖ）Ｆ４２Ａ及びＨ１６Ａ、（ｖｉ）Ｆ４２Ｔ及びＨ１６Ａ、（ｖｉｉ）Ｆ４２Ａ及びＨ１６Ｔ、または（ｖｉｉｉ）Ｆ４２Ｔ及びＨ１６Ｔ置換からなる群から選択される置換または置換の対を含む、態様１８２～１８５のいずれか１つの方法。
１８７．マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体が、独立して選択される少なくとも１つ（例えば、少なくとも２つ）のｗｔまたは変異型ＰＤ－Ｌ１ポリペプチド配列を含む、態様１８１～１８６のいずれか１つの方法。
１８８．独立して選択される変異型ＰＤ－Ｌ１ポリペプチド配列が、配列番号２の少なくとも１７０個の連続するａａ（例えば、少なくとも１８０、１９０、または２００個の連続するａａ）に対して、少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％）のａａ配列同一性を有するポリペプチド配列を含む、態様１８７の方法。
１８９．１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－βポリペプチドのうちの少なくとも１つが、独立して選択されるｗｔまたは変異型ＩＬ－１０ポリペプチド配列（例えば、ＩＬ－１０Ｍ１などの単量体異性体）を含む、態様１８１～１８８のいずれか１つの方法。
１９０．独立して選択されるｗｔまたは変異型ＩＬ－１０ポリペプチド配列が、配列番号５０または５１の少なくとも５０個の連続するａａ（例えば、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１１０、少なくとも１２０、少なくとも１３０、少なくとも１４０、少なくとも１５０、または少なくとも１６０個）の連続するａａに対して少なくとも８０％（少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％）のａａ配列同一性を有する（例えば、配列が変異型ＩＬ－１０配列である場合、少なくとも１つのａａ置換、欠失または挿入を有する）ポリペプチド配列を含み、変異型ＩＬ－１０ポリペプチド配列が、任意に、配列番号５１のＮ４９とＫ５０との間に、または配列番号４９または５０の相当する位置に、５～７ａａ挿入（例えば、ａａ４９とａａ５０との間で配列番号５１に挿入されたＩＬ－１０Ｍ１ＧＧＧＳＧＧ（配列番号１８９））を含む、態様１８９の方法。
１９１．独立して選択されるマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体のうちの少なくとも１つが、独立して選択されるｗｔまたは変異型ＦａｓＬポリペプチド配列を含む、態様１８１～１９０のいずれか１つの方法。
１９２．独立して選択されるｗｔまたは変異型のＦａｓＬポリペプチド配列が、配列番号１４４（例えば、少なくとも１つのａａ置換、欠失または挿入を有する）の少なくとも５０個（例えば、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１１０、少なくとも１２０、少なくとも１４０、少なくとも１６０、または少なくとも１８０個）の連続するａａに対して、少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％）のａａ配列同一性を有するポリペプチド配列を含む、態様１９１の方法。
１９３．１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体が、ビタミンＤ（例えば、１α，２５－ジヒドロキシビタミンＤ３）、レチノイン酸（例えば、オールトランスレチノイン酸）、及び／またはラパマイシンのいずれか１つ、２つ、または３つ全ての投与の前に、同時に、組み合わせて、または後に投与される、態様１８１～１９２のいずれか１つの方法。
１９４．自己免疫疾患が、アジソン病、円形脱毛症、強直性脊椎炎、自己免疫脳脊髄炎、自己免疫溶血性貧血、自己免疫性肝炎、自己免疫に関連する不妊性、自己免疫性血小板減少性紫斑病、水疱性類天疱瘡、セリアック病、クローン病、グッドパスチュア症候群、糸球体腎炎（例えば、半月状の糸球体腎炎、増殖性糸球体腎炎）、甲状腺機能亢進症、橋本甲状腺炎、混合結合織疾患、多発性硬化症、重症筋無力症（ＭＧ）、天疱瘡（例えば、尋常性天疱瘡）、悪性貧血、多発性筋炎、乾癬、乾癬性関節炎、慢性関節リウマチ、硬皮症、シェーグレン症候群、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、１型糖尿病（Ｔ１Ｄ）、脈管炎及び白斑からなる群から選択される、態様１８１～１９３のいずれか１つの方法。
１９５．自己免疫疾患が、Ｔ１Ｄまたはセリアック病である、態様１８１～１９３のいずれかの方法。
１９６．自己免疫疾患が、Ｔ１Ｄまたはセリアック病以外である、態様１８１～１９３のいずれかの方法。
１９７．方法が、アレルギー反応の治療または予防の方法であり、任意に、アレルギー反応が、ピーナッツ、木の実、植物花粉、ラテックス、ハチ毒またはスズメバチ毒アレルゲンに対する反応である、態様１８１～１９３のいずれかの方法。
１９８．代謝性疾患または代謝性障害が、２型糖尿病（Ｔ２Ｄ）または前Ｔ２Ｄであり、任意に、Ｔ２Ｄまたは前Ｔ２Ｄが、インスリン抵抗性及び／またはインスリン分泌不全から生じる、態様１８１～１９３のいずれか１つの方法。
１９９．代謝性疾患または代謝性障害が、非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）であり、任意に、ＮＡＦＬＤが、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）である、態様１８１～１９３のいずれか１つの方法。
２００．方法が、火傷または創傷の治療または予防を提供する方法であり、創傷は、任意に、創傷が、表皮または粘膜の擦傷、剥離、切開、裂傷、または穿刺である、態様１８１～１９０のいずれか１つの方法。
２０１．ｉ）態様１～１３４のいずれかの１つ以上の独立して選択されるマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体、及び／または（ｉｉ）態様１～１３４のいずれかの１つ以上の独立して選択されるマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体をコードする１つ以上の核酸が、創傷の形成の前、間、及び／または後に投与される、態様２００の方法。
２０２．火傷及び／または傷が、外科的もしくは他の医療的処置中に生じるか、またはその結果である、態様２００～２０１のいずれかの方法。
２０３．１つ以上の独立して選択されるマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体が、創傷または火傷の部位に投与される、態様２００～２０２のいずれかの方法。
２０４．マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体（有効量）、及び／またはマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体をコードする１つ以上の核酸（例えば、組換え発現ベクター）の投与が、創傷の閉鎖を促進する（閉鎖までの時間を短縮する）か、治癒時間を短縮するか、または未処置の対象もしくは創傷と比較して瘢痕形成を低減する、態様２００～２０３のいずれかの方法。
２０５．マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体のうちの少なくとも１つが、少なくとも１つ（例えば、少なくとも２つ、または少なくとも３つ）の独立して選択されるｗｔ（例えば、配列番号２９もしくは配列番号３１）または変異型ＩＬ－４ポリペプチド配列を含む、態様１８１の方法。
２０６．変異型ＩＬ－４ポリペプチド配列が、（例えば、少なくとも１つのａａ置換、欠失または挿入を有する）配列番号２９または配列番号３１の少なくとも８０個の連続するａａ（例えば、少なくとも１００、または１１０個の連続するａａ）に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のａａ配列同一性を有するポリペプチド配列を含む、態様２０５の方法。
２０７．疾患または障害が、蠕虫感染症である、態様２０５～２０６のいずれか１つの方法。
２０８．少なくとも１つのマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体が、少なくとも１つ（例えば、少なくとも２つ、または少なくとも３つ）の独立して選択されるｗｔ（例えば、配列番号３５のポリペプチド）または変異型ＩＬ－６ポリペプチド配列を含む、態様１８１の方法。
２０９．変異型ＩＬ－６ポリペプチド配列が、（例えば、少なくとも１つのａａ置換、欠失または挿入を有する）配列番号３５の少なくとも８０個の連続するａａ（例えば、少なくとも１００、または１１０個の連続するａａ）に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のａａ配列同一性を有するポリペプチド配列を含む、態様２０８の方法。
２１０．疾患または障害が、（例えば、腸内の）細菌及び／または真菌感染症である、態様２０５～２０９のいずれかの方法。
２１１．少なくとも１つマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体が、少なくとも１つ（例えば、少なくとも２つ、または少なくとも３つ）の独立して選択されるｗｔまたは変異型ＩＬ－２１及び／またはＩＬ－２３ポリペプチド配列を含む、態様１８１の方法。
２１２．少なくとも１つの（例えば、少なくとも２つの）ＩＬ－２１ＭＯＤポリペプチド配列が、（ｉ）配列番号５８もしくは６０のポリペプチド配列、または（ｉｉ）配列番号５８もしくは６０の少なくとも５０個（例えば、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、または少なくとも１１０個）の連続するａａに対して、少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％）のａａ配列同一性を有し、少なくとも１つのａａ置換、欠失、または挿入を有するポリペプチド配列を含む、態様２１１の方法。
２１３．少なくとも１つの（例えば、少なくとも２つの）ＩＬ－２３ＭＯＤポリペプチド配列が、（ｉ）配列番号６３及び／または６５のポリペプチド配列、または（ｉｉ）配列番号６３及び／または６５の少なくとも５０個（例えば、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１１０、少なくとも１２０、少なくとも１４０、少なくとも１６０、少なくとも１８０、少なくとも２００、少なくとも２２０、少なくとも２４０、少なくとも２６０、少なくとも２８０、少なくとも３００、少なくとも３２０、または少なくとも３４０個）の連続するａａｓに対して、少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％）のａａ配列同一性を有し、少なくとも１つのａａ置換、欠失、または挿入を有するポリペプチド配列を含む、態様２１１または２１２の方法。
２１４．疾患または障害が、高親和性抗体または十分な量の高親和性抗体を産生することができないことである、態様２１１～２１３のいずれかの方法。
２１５．哺乳動物対象において耐性を誘導する方法であって、
（ｉ）態様１～１３６のいずれかの、１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体、またはマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体をコードする１つ以上の核酸（例えば、発現ベクター（複数可））、
（ｉｉ）１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体のうちの少なくとも１つが、ｗｔまたは変異型ＩＬ－２ポリペプチド配列を含む、態様１～１３６のいずれかの１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体、またはマスキングされたＴＧＦ－β構築物もしくは複合体をコードする１つ以上の核酸（例えば、発現ベクター（複数可））、
（ｉｉｉ）１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体のうちの少なくとも１つが、ｗｔまたは変異型ＦａｓＬポリペプチド配列を含む、態様１～１３６のいずれかの１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体、またはマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体をコードする１つ以上の核酸（例えば、発現ベクター（複数可））、または
（ｉｖ）１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体のうちの少なくとも１つが、ｗｔまたは変異型ＩＬ－２ポリペプチド配列を含み、１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体のうちの少なくとも１つが、ｗｔまたは変異型ＦａｓＬポリペプチド配列またはｗｔまたは変異型ＩＬ－１０ポリペプチド配列を含む、態様１～１３６のいずれかの１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体、またはマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体をコードする１つ以上の核酸（例えば、発現ベクター（複数可））、を対象に投与することを含む、方法。
２１６．１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体の１つ以上の用量が投与され、１つ以上の用量が、約１ｍｇ／ｋｇ体重～約５０ｍｇ／ｋｇ（例えば、約１ｍｇ／ｋｇ体重～約１０ｍｇ／ｋｇ体重、または約１０ｍｇ／ｋｇ体重～約２０ｍｇ／ｋｇ体重）の範囲で独立して選択される量のＴＧＦ－β構築物または複合体を含む、態様１３７～２１５のいずれかの方法。
２１７．（ｉ）１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体の投与前、投与中（同時もしくは併用投与）、または投与後に、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）（例えば、Ｃｏｘ－１及び／またはＣｏｘ－２阻害剤、例えば、セレコキシブ、ジクロフェナク、ジフルニサル、エトドラク、イブプロフェン、インドメタシン、ケトプロフェン、及びナプロキセン）、及び／または
（ｉｉ）１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体の投与前、投与中（同時もしくは併用投与）、または投与後に、コルチコステロイド（例えば、コルチゾン、デキサメタゾン、ヒドロコルチゾン、エタメタゾネブ（Ｅｔｈａｍｅｔｈａｓｏｎｅｂ）、フルドロコルチゾン、メチルプレドニゾロン、プレドニゾン、プレドニゾロン、及びトリアムシノロン）を投与することをさらに含む、態様１３７～２１６のいずれかの方法。
２１８．腫瘍壊死因子α（例えば、ゴリムマブ、インフリキシマブ、セルトリズマブ、アダリムマブなどの抗ＴＮＦα、またはエタネルセプトなどのＴＮＦαデコイ受容体）の１つ以上の作用をブロックする薬剤を、１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体の投与前、投与中（同時または併用投与）、または投与後に投与することをさらに含む、態様１３７～２１７のいずれかの方法。
２１９．１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体の投与前、投与中（同時または併用投与）、または投与後に、ＩＬ－１と競合的にＩＬ－１受容体に結合する薬剤（例えば、アナキンラ）を投与することをさらに含む、態様１３７～２１８のいずれかの方法。但しこの態様では、対象に投与される１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体のいずれかがＩＬ－１ポリペプチドを含む場合、ＩＬ－１と競合的にＩＬ－１受容体に結合する薬剤は投与されないことに留意されたい。
２２０．１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体の投与前、投与中（同時または併用投与）、または投与後に、ＩＬ－６受容体に結合してＩＬ－６による受容体を介したシグナル伝達を阻害する薬剤（例えば、トシリズマブ）を投与することをさらに含む、態様１３７～２１９のいずれかの方法。但しこの態様では、対象に投与される１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体のいずれかがＩＬ－６ポリペプチドを含む場合、ＩＬ－６受容体に結合する薬剤は投与されないことに留意されたい。
２２１．１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体の投与前、投与中（同時または併用投与）、または投与後に、ＣＤ８０またはＣＤ８６受容体に結合してＴ細胞増殖及び／またはＢ細胞免疫応答を阻害する薬剤（例えば、アバタセプト）を投与することをさらに含む、態様１３７～２２０のいずれかの方法。
２２２．１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体の投与前、投与中（同時または併用投与）、または投与後に、Ｂ細胞死をもたらすＣＤ２０に結合する薬剤（例えば、リツキシマブ）を投与することをさらに含む、態様１３７～２２１のいずれかの方法。
２２３．哺乳動物対象が、ヒト、ウシ、イヌ、ネコ、齧歯類、ネズミ、ヤギ、サル、ヒツジ、ウマ、ラッピン、ブタ等の対象から選択される、態様１３７～２２２のいずれかの方法。
２２４．対象が、ヒト（例えば、ヒト患者または治療もしくは予防を必要とするヒト対象）である、態様１３７～２２３のいずれかの方法。
２２５．ＴＧＦ－βポリペプチドまたはＴＧＦ－βポリペプチド及び免疫調節ポリペプチド（ＭＯＤ）を細胞に送達する方法であって、細胞を、（ｉ）態様１～１３４のいずれか１つの１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体、（ｉｉ）態様１～１３４のいずれか１つの１つ以上の独立して選択される、ｗｔ．または変異型ＭＯＤ配列を含む１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体、または（ｉｉｉ）任意に１つ以上の独立して選択されるｗｔもしくは変異型ＭＯＤをコードする、態様１３５～１３６のいずれか１つの１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体をコードする１つ以上の核酸と接触させることを含む、方法。
２２６．マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体を発現する細胞を産生する方法であって、態様１～１３４のいずれかのマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体をコードする１つ以上の核酸（例えば、発現ベクター（複数可））を細胞（例えば、インビトロの哺乳動物細胞）に導入することと、任意で、少なくとも１つの細胞染色体に組み込まれていない、及び／または組み込まれた、１つ以上の核酸の全てまたは一部を含む細胞を選抜（例えば、抗生物質による選抜、続いて、１つ以上の核酸のいずれかが細胞染色体に組み込まれたか否かを決定する分析）を行うことと、を含む、方法。
２２７．細胞が、ＨｅＬａ細胞、ＣＨＯ細胞、２９３細胞、Ｖｅｒｏ細胞、ＮＩＨ３Ｔ３細胞、Ｈｕｈ－７細胞、ＢＨＫ細胞、ＰＣ１２、ＣＯＳ細胞、ＣＯＳ－７細胞、ＲＡＴ１細胞、マウスＬ細胞、ヒト胚性腎臓（ＨＥＫ）細胞、及びＨＬＨｅｐＧ２細胞から選択される哺乳動物細胞株の細胞である、態様２２６の方法。
２２８．態様２２６または２２７の方法によって調製されるマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体を一過性または安定的に発現する１つ以上の細胞。
２２９．細胞が、マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体を発現しない以外は同一の細胞と比較して、生存率が実質的に低下（５％、１０％、または１５％未満の低下）することなく、約２５～約３５０ｍｇ／リットル以上（例えば、約２５～約１００、約１００～約２００、約２００～約３００、約３００～約３５０ｍｇ／リットル、または３５０ｍｇ／リットル超）のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体を発現する、態様２２８の細胞。
２３０．ｗｔまたは変異型ＩＬ－２ＭＯＤポリペプチド配列を含むマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体の投与が、対象、細胞、組織、または体液中の１つ以上のＴ細胞（例えば、Ｔｈ１、Ｔｈ２、Ｔｈ１７、及び／またはＴｈ２２細胞などの炎症性Ｔ細胞）の調節をもたらす、態様１３８～１４２のいずれかの方法。
２３１．１つ以上のＴ細胞が、Ｔｈ１細胞であり、調節が、
（ｉ）１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体の投与前もしくは無投与の場合、または
（ｉｉ）（例えば、疾患状態、年齢、性別、身長、体重、及び／または喫煙習慣のうちの１つ以上については）対象と一致するが、ＴＧＦ－β、またはマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体を投与されていない処置群（例えば、１人の対象、または２人以上の対象からの平均）の対象、細胞、組織、または体液中のインターフェロンγの量と比較して、Ｔｈ１細胞の数の減少、Ｔｈ１細胞によるインターフェロンγの発現もしくは分泌の減少、または対象、細胞、組織、もしくは体液中のインターフェロンγのレベルの減少によって評価される、態様２３０の方法。
２３２．１つ以上のＴ細胞が、Ｔｈ２細胞であり、調節が、
（ｉ）１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体の投与前もしくは無投与の場合、または
（ｉｉ）（例えば、疾患状態、年齢、性別、身長、体重、及び／または喫煙習慣のうちの１つ以上については）対象と一致するが、ＴＧＦ－β、またはマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体を投与されていない処置群（例えば、１人の対象、または２人以上の対象からの平均）の対象、細胞、組織、または体液中のＬ－４、ＩＬ－５、及び／またはＩＬ－１３の量と比較して、Ｔｈ２細胞の数の減少、Ｔｈ２細胞によるＩＬ－４、ＩＬ－５、及び／またはＩＬ－１３の発現もしくは分泌の減少、または対象、細胞、組織、または体液中のＬ－４、ＩＬ－５、及び／またはＩＬ－１３のレベルの減少によって評価される、態様２３０の方法。
２３３．１つ以上のＴ細胞が、Ｔｈ１７細胞であり、調節が、
（ｉ）１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体の投与前もしくは無投与の場合、または
（ｉｉ）（例えば、疾患状態、年齢、性別、身長、体重、及び／または喫煙習慣のうちの１つ以上については）対象と一致するが、ＴＧＦ－β、またはマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体を投与されていない処置群（例えば、１人の対象、または２人以上の対象からの平均）の対象、細胞、組織、または体液中のＩＬ－１７及び／またはＩＬ－２２の量と比較して、対象の細胞、組織、または体液中のＴｈ１７細胞の数の減少、Ｔｈ１７細胞によるＩＬ－１７及び／またはＩＬ－２２の発現もしくは分泌の減少、またはＩＬ－１７及び／またはＩＬ－２２のレベルの減少によって評価される、態様２３０の方法。
２３４．１つ以上のＴ細胞が、Ｔｈ２２細胞であり、調節が、
（ｉ）１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体の投与前もしくは無投与の場合、または
（ｉｉ）（例えば、疾患状態、年齢、性別、身長、体重、及び／または喫煙習慣のうちの１つ以上については）対象と一致するが、ＴＧＦ－β、またはマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体を投与されていない処置群（例えば、１人の対象、または２人以上の対象からの平均）の対象、細胞、組織、または体液中のＩＬ－２２、ＩＬ－１３及び／またはＴＮＦ－αの量と比較して、対象の細胞、組織、または体液中のＴｈ２２細胞の数の減少、Ｔｈ２２細胞によるＩＬ－２２、ＩＬ－１３及び／またはＴＮＦ－αのうちの少なくとも２つの発現もしくは分泌の減少、またはＩＬ－２２、ＩＬ－１３及び／またはＴＮＦ－αのレベルの減少によって評価される、態様２３０の方法。
２３５．方法が、対象、または対象の細胞、組織、もしくは体液中のＩＬ－４、ＩＬ－１７、及び／もしくはインターフェロンγのうちの１つ以上の発現、分泌、またはＩＬ－４、ＩＬ－１７、及び／もしくはインターフェロンγのうちの１つ以上のレベルを評価することをさらに含む、態様２３４の方法。
２３６．Ｔ細胞が、バイスタンダーＴ細胞である、態様２３０～２３５のいずれかの方法。
２３７．１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体が、ビタミンＤ（例えば、１α、２５－ジヒドロキシビタミンＤ３またはビタミンＤ類似体（例えば、ビタミンＤ３）、ｍＴＯＲ阻害剤（例えば、ラパマイシン）、及び／またはレチノイン酸（例えば、オールトランスレチノイン酸）のうちのいずれか１つ以上の投与前、投与中（同時もしくは併用投与）、または投与後に投与される、態様２３０～２３６のいずれかの方法。
２３８．マスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体が、ｗｔまたは変異型ＩＬ－２ＭＯＤを含み、図１に示される構造を有する（構造Ａ～Ｆを参照）、態様２３０～２３７のいずれかの方法。
２３９．Ｆｃ領域が、免疫グロブリンエフェクター配列を欠く（すなわち、ｗｔタンパク質と比較して、補体成分１ｑ（「Ｃ１ｑ」）結合が減少し、したがって、補体依存性細胞傷害性に関与する能力が減少している）、態様２３８の方法。
２４０．投与が、Ｔ細胞媒介性炎症の低減をもたらす、態様１３７～１４２のいずれかの方法。
２４１．Ｔ細胞媒介性炎症が、遅延型過敏症反応である、態様２４０の方法。
２４２．哺乳動物（例えば、ヒト）対象またはその組織もしくは体液におけるＴ細胞媒介性炎症または疾患を治療する方法であって、態様１～１３５のいずれかの１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物もしくは複合体、または態様１３６の核酸を投与することを含む、方法。
２４３．１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体のうちの少なくとも１つが、ｗｔまたは変異型ＩＬ－２ＭＯＤポリペプチド配列を含む（例えば、図１０ＡのＰＳＭ－４０３３－４０３９を参照）、態様２４２の方法。
２４４．１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体のうちの少なくとも１つが、（ｉ）ｗｔまたは変異型ＩＬ－２ＭＯＤポリペプチド配列と、（ｉｉ）ｗｔまたは変異型ＰＤＬ－Ｌ１ポリペプチド配列とを含む、態様２４２の方法。
２４５．１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体が、ビタミンＤ（例えば、１α，２５－ジヒドロキシビタミンＤ３またはビタミンＤ類似体（例えば、ビタミンＤ３）、ｍＴＯＲ阻害剤（例えば、ラパマイシン）、及び／またはレチノイン酸（例えば、オールトランスレチノイン酸）のうちのいずれか１つ以上の投与前、投与中（同時もしくは併用投与）、または投与後に投与される、態様２４２～２４４のいずれかの方法。
２４６．投与が、
（ｉ）１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体の投与前もしくは無投与の場合のいずれかの細胞の数、または
（ｉｉ）（例えば、疾患状態、年齢、性別、身長、体重、及び／または喫煙習慣のうちの１つ以上については）対象と一致するが、ＴＧＦ－β、またはマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体を投与されていない対照処置群（例えば、１人の対象、または２人以上の対象からの平均）の組織または体液中のＴｒｅｇ細胞の量と比較して、対象からの所定の体積の組織または体液（例えば、血液もしくはリンパ）中のＦｏｘＰ３＋Ｔｒｅｇ細胞（例えば、誘導された調節Ｔ細胞（ｉＴｒｅｇ）、胸腺由来Ｔｒｅｇ細胞（ｔＴｒｅｇ）、及び／または末梢Ｔｒｅｇ細胞（ｐＴｒｅｇ）のうちのいずれか１つ以上）の数の増加をもたらす、態様２４２～２４５のいずれかの方法。
２４７．所定の体積の組織または体液におけるＴｒｅｇ細胞（例えば、ＦｏｘＰ３＋細胞、ｉＴｒｅｇ、ｔＴｒｅｇ、及び／またはｐＴｒｅｇ）の数が、１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体を投与する前所定の体積の組織または体液におけるＴｒｅｇの数と比較して、または、１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体を受容しなかった以外は一致する対照群の平均値と比較して、少なくとも５％（例えば、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも２倍、少なくとも５倍、少なくとも１０倍以上）増加する、態様２４６の方法。
２４８．Ｔ細胞媒介性炎症または疾患が、ＤＴＨ応答である、態様２４２～２４７のいずれかの方法。
２４９．Ｔ細胞媒介性炎症または疾患が、変形性関節症、Ｔ細胞媒介性大腸炎、または多発性硬化症である、態様２４２～２４７のいずれかの方法。

ＶＩ．実施例
以下の実施例は、本発明の作成方法及び使用方法の開示及び説明についてより完全性を期すために当業者に提供するために提示するものであって、本発明について本発明者らが想定する範囲を限定することを意図するものではなく、また、以下の実験が実施される全てまたは唯一の実験であることを表すことを意図するものでもない。使用される数値（例えば、量、温度など）に関して正確性を確保するように努めてきたが、いくらかの実験誤差及び偏差が考慮されるべきである。特に明記されていない限り、部は重量部であり、分子量は重量平均分子量であり、温度は摂氏であり、圧力は大気圧またはその付近である。標準的な略語、例えば、ｂｐ：塩基対（複数可）、ｋｂ：キロベース（複数可）、μｌ：マイクロリットル（複数可）、ｐｌ：ピコリットル（複数可）、ｓまたはｓｅｃ：秒（複数可）、ｍｉｎ：分（複数可）、ｈまたはｈｒ：時間（複数可）、ａａ：アミノ酸（複数可）、ｋｂ：キロベース（複数可）、ｂｐ：塩基対（複数可）、ｎｔ：ヌクレオチド（複数可）、ｉ．ｍ．：筋肉内（に）、ｉ．ｐ．：腹腔内（に）、ｓ．ｃ．：皮下（に）、ｗｔ．：野生型などが使用され得る。

Ａ．実施例１
１一本鎖ポリペプチドのマスキングされたＴＧＦ－β構築物
マスキングされたＴＧＦ－βタンパク質を提示する完全な一本鎖ポリペプチドの安定した発現を、所望の成分をコードする核酸を調製し、哺乳動物細胞の発現ベクターを使用して発現させることによって実証した。核酸は、Ｎ末端からＣ末端まで、ＭＯＤポリペプチド配列（例えば、配列番号２０などのｗｔ．ＩＬ－２ポリペプチド配列、またはＨ１６及び／もしくはＦ４２での置換を有するそのＩＬ－２ポリペプチドの変異型、Ｆｃ二量体化を防止する置換と共にＬ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ置換を有するＩｇＧ１Ｆｃ足場ポリペプチド配列、ＩＩ型ＴＧＦ－β受容体（例えば、Ｄ３２Ｎ及び／またはＤ１１８Ａ配列変動を有するＴＧＦ－βＲＩＩＢアイソフォームポリペプチド配列）、及びＴＧＦ－βポリペプチド配列（例えば、ｗｔ．ＴＧＦ－β３またはＣ７７Ｓ配列変異型）を含む、ポリペプチドをコードする。発現したタンパク質の全体的な構造を有する概略図を、構造Ａとして図１に示し、その一例を、構築物３４７０（配列番号１４６）として図７Ａに示し、かかるポリペプチドのａａ配列の別の例は、標識したエレメントと整列させた構築物番号３４７２であり、配列番号１５７として図７Ｇに示す。哺乳動物系の（例えば、チャイニーズハムスター卵巣またはＣＨＯ細胞における）タンパク質発現に好適なプラスミド中で核酸を構築した後、タンパク質を発現させ、プロテインＡ及びサイズ分離クロマトグラフィーを使用して精製した。

構築物３４７０及び３４７２の構築及び単離に加えて、２つの追加の一本鎖ポリペプチドのマスキングされたＴＧＦ－β構築物、３４６６及び３４６８を調製した。構築物３４７０は、構築物３４７２、３４６６、及び３４６８（以下、（ｉ）～（ｉｉｉ）として付番される）と共に、特に古典的なＦｃ会合を通じて、実質的に二量体化しない一本鎖マスキングされたＴＧＦ－βタンパク質を調製することの実現可能性を実証する。ポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端まで、以下のポリペプチド配列を含む：
（ｉ）ｗｔ．ＩＬ－２－ＩｇＧＦｃ－ＴβＲＩＩ_Δ２５（Ｄ３２Ｎ、Ｄ１１８Ａ）置換－ＴＧＦ－β３（Ｃ７７Ｓ）（図７Ｇ、構築物番号３４７２）配列番号１５７、
（ｉｉ）ＩＬ－２（Ｈ１６Ｔ、Ｆ４２Ａ）－ＩｇＧＦｃ－ＴβＲＩＩ_Δ２５（Ｄ１１８）－ＴＧＦ－β３（Ｃ７７Ｓ）（図７Ｈ、構築物番号３４６６）配列番号１５８、及び
（ｉｉｉ）ＩＬ－２（Ｈ１６Ｔ、Ｆ４２Ａ）－ＩｇＧＦｃ－ＴβＲＩＩ_Δ２５（Ｄ３２Ｎ、Ｄ１１８）－ＴＧＦ－β３（Ｃ７７Ｓ）（図７Ｉ、構築物番号３４６８）配列番号１５９。
上記に示されるように、一本鎖ポリペプチドのマスキングされたＴＧＦ－β構築物は、Ｆｃ領域の二量体化を防止する、例えば、配列番号７１のＩｇＧ１配列で付番されるＬ１３１（例えば、Ｌ１３１Ｋ）、Ｔ１４６（例えば、Ｔ１４６Ｓ）、Ｐ１７５（例えば、Ｐ１７５Ｖ）、Ｆ１８５（例えば、Ｆ１８５Ｒ）、Ｙ１８７（例えば、Ｙ１８７Ａ）、及びＫ１８９（例えば、Ｋ１８９Ｙ）での置換を含み得る。（ｉ）～（ｉｉｉ）の上記構築物は、配列番号７１のＩｇＧ１配列に番号を付したＬ１３１Ｋ、Ｔ１４６Ｓ、Ｐ１７５Ｖ、Ｆ１８５Ｒ、Ｙ１８７Ａ、及びＫ１８９Ｙを含む。

２ヘテロ二量体ポリペプチド鎖
２つのポリペプチドからなるマスキングされたＴＧＦ－β複合体の安定的な発現を、ＴＧＦ－βポリペプチド配列を含む第１のポリペプチドをコードする核酸と、ＴＧＦ－β受容体ポリペプチド配列をコードする第２の核酸とを調製し、哺乳動物発現ベクター（例えば、ＣＨＯ細胞内のプラスミド発現系）を用いてポリペプチドを発現させることにより、マスキングされたＴＧＦ－β構築物を実証した。第１のポリペプチドは、例えば、ＭＯＤポリペプチド配列（例えば、ｗｔまたは変異型ＩＬ－２ポリペプチド配列）、ＩｇＧＦｃ足場ポリペプチド配列（例えば、ＫｉＨＦｃ）、及びＴＧＦ－βポリペプチド配列（例えば、ＴＧＦ－β１またはｗｔ．ＴＧＦ－β３を有するｗｔ．または配列変異型）を含む（例えば、図７Ｊの構築物３６１８を参照）。第２のポリペプチドは、例えば、ＭＯＤポリペプチド配列（例えば、ｗｔまたは変異型ＩＬ－２ポリペプチド配列）、ＩｇＧＦｃ足場ポリペプチド配列（例えば、第１のポリペプチドのＫｉＨ配列の相手側）、及びＩＩ型ＴＧＦ－β受容体（ＴＧＦ－βＲＩＩ）ポリペプチド配列（ｗｔまたは配列変動を有する）を含む（例えば、図７Ｊの構築物３６２１を参照）。発現したタンパク質の概略構造を、構造Ｄとして図１に示す。１つのかかるポリペプチド対（ｉｖ．ａ）及び（ｉｖ．ｂ）の発現及び精製（プロテインＡ及びクロマトグラフィーによるサイズ分離）は、Ｎ末端からＣ末端まで、以下のポリペプチド配列を含む：
（ｉｖ．ａ）ＩＬ－２（ｗｔ．ＭＯＤ）－ノブインホールＦｃ（例えば、ノブＦｃ）－ＴＧＦ－β３（ｗｔ．）、図７Ｊの構築物３６１８を参照、（配列番号１４８）、及び
（ｉｖ．ｂ）ＩＬ－２（ｗｔ．ＭＯＤ）－ノブインホールＦｃ（例えば、ノブＦｃ）－ＴβＲＩＩ（Ｄ３２Ｎ）、図７Ｊの構築物３６２１を参照、（配列番号１６０）。
構築物（ｉｖ．ａ）または（ｉｖ．ｂ）において、ＩＬ－２ポリペプチドは、Ｈ１６及び／またはＨ４２における置換、例えば、Ｈ１６Ｔ及びＦ４２Ａ置換、またはＨ１６Ａ及びＦ４２Ａ置換を含み得る。

３マスキングされたＴＧＦ－β構築物の活性
様々な濃度の精製されたマスキングされたＴＧＦ－βポリペプチド複合体及び構築物（例えば、本実施例のパート１及び２で調製された構築物（ｉ）～（ｉｉｉ）及びポリペプチド（ｖｉ．ａ）及び（ｖｉ．ｂ）の複合体）を用い、ナイーブＣＤ４細胞を誘導してＦｏｘＰ３を産生する能力について試験した。アッセイについて、１０^５個のナイーブＣＤ４細胞を、５μｇ／ｍｌの結合した抗ＣＤ３を含有するウェルに、１μｇ／ｍｌの抗ＣＤ２８、及びマスキングされたＴＧＦ－βポリペプチド複合体または構築物と共に示されるように播種した。培養開始から５日後、蛍光標識抗ＣＤ４及び抗ＦｏｘＰ３を使用して、フローサイトメトリーにより培養物中のＦｏｘＰ３ＣＤ４＋二重陽性細胞の数を評価した。ＴＧＦ－β３またはＴＧＦ－β３のいずれか、及び組換えヒトＩＬ－２１００Ｕ／ｍによる刺激を提供する対照実験も、並行して行った。

図６のＡでは、ｗｔ．ＩＬ－２－ＩｇＧＦｃ（ｍＦｃ）－ＴβＲＩＩを含む、図１のＡに示される全体構造尾を有するマスキングされたＴＧＦ－βと、Ｄ３２Ｎ置換－ＴＧＦ－β３との比較を、ＦｏｘＰ３発現について、ＩＬ－２の存在下または不在下でのｗｔ．ＴＧＦ－β３の効果と比較して試験した。図６のＡに示される結果は、ｗｔ．ＴＧＦ－β３が、試験条件下ではＦｏｘＰ３を効果的に刺激しないが、ｗｔ．ＩＬ－２補充がＦｏｘＰ３発現につながり得ることを示す。

図６のＢでは、本実施例のパート１及び２に由来するマスキングされたＴＧＦ－β構築物（ｉ）、（ｉｉ）及び（ｉｉｉ）と、ポリペプチド（ｉｖ．ａ）及び（ｉｖ．ｂ）を含むマスキングされたＴＧＦ－β複合体との比較を、ＦｏｘＰ３発現について、ＩＬ－２の存在下でのｗｔ．ＴＧＦ－β３の効果と比較して試験した。図６のＢに示される結果は、ｗｔ．ＩＬ－２を有するマスキングされたＴＧＦ－β構築物及び複合体が、Ｈ１６Ｔ及びＦ４２ＡのＩＬ－２置換を有するものよりも強力であることを示す。Ｈ１６Ｔ及びＦ４２Ａにおける置換は、ＦｏｘＰ３を発現する細胞数に基づく最大有効性の実質的な変化なしに、マスキングされた複合体の効力を約５ナノモルから約５０ナノモルへ一桁大きくシフトさせる。図６のＡに示される結果と同様に、マスキングされたＴＧＦ－β構築物及び複合体は、Ｔ細胞を誘導してＦｏｘＰ３を産生することにおいてＩＬ－２及びＴＧＦ－β３よりも効果的であった

ＣＤ４＋及びＦｏｘＰ３に基づく細胞のゲーティング及び分離の例を図６のＣに示す。この結果は、１，０００ｎＭのマスキングされたＴＧＦ－β構築物で曝露された細胞におけるＦｏｘＰ３の誘導により、同じ構築物０．１ｎＭで曝露された細胞よりもＦｏｘＰ３発現が約３０倍増加することを示す。

Ｂ．実施例２
１相互特異的でないものでの足場
このセクションでは、相互特異的足場を使用せず、したがって単量体であるか、または二量体化する場合であっても相手型の配列と優先的にヘテロ二量体を形成しない、マスキングされたＴＧＦβ配列について説明する。

ａ．単一ポリペプチド鎖のマスキングされたＴＧＦ－β構築物
Ｎ末端からＣ末端まで、ＭＯＤポリペプチド配列：ｗｔ．ＩＬ－２ポリペプチド配列（配列番号２０）、ＩｇＧ１Ｆｃ足場ポリペプチド配列、Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ（「ＬＡＬＡ」）、Ｌ３５１Ｋ、Ｔ３６６Ｓ、Ｐ３９５Ｖ、Ｆ４０５Ｒ、Ｙ４０７Ａ、ならびにＫ４０９Ｙ置換を有するｗｔ．ＩｇＧ１ａａｓ１１～２１５（Δ１０）、Ｄ１１８Ａ置換を有する成熟タンパク質のａａ２６～１３６ａａｓのＴＧＦ－β ＲＩＩアイソフォームＢポリペプチド配列（＊Ｄ１１９Ａ、図５Ｂの注記を参照）、及びＣ７７Ｓ置換を有するヒト３型ＴＧＦ－βアイソフォーム１ポリペプチド配列を含む、ポリペプチドをコードする核酸。発現したタンパク質の概略構造を、構造Ａ（配列番号１４６）として図１に示す。タンパク質をプロテインＡ及びサイズクロマトグラフィーによって精製した。

ｂ．ホモ二量体ポリペプチド複合体
Ｎ末端からＣ末端まで、ＭＯＤポリペプチド配列（Ｈ１６Ｔ及びＦ４２Ａ置換を有するＩＬ－２、配列番号２０）、ＩｇＧ１Ｆｃ足場ポリペプチド配列（例えば、Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ（「ＬＡＬＡ」）置換を有するｗｔ．ＩｇＧ１）、Ｄ１１８Ａ置換を有する成熟タンパク質のａａ２６～１３６ａａｓのＴＧＦ－β ＲＩＩアイソフォームＢポリペプチド配列（＊Ｄ１１９Ａ、図５Ｂの注記を参照）、及びＣ７７Ｓ置換を有するヒト３型ＴＧＦ－βアイソフォーム１ポリペプチド配列を含む、ポリペプチドをコードする核酸。発現したタンパク質の概略構造を構造Ｂとして図１に示す。標識されたエレメントと整列させた対応するａａ酸配列を図７Ｂに示す（配列番号１４７）。タンパク質をプロテインＡ及びサイズクロマトグラフィーによって精製した。

２相互特異的足場ポリペプチドを有する、ヘテロ二量体の、マスキングされたＴＧＦ－β複合体
ａ．各々ＩＬ－２ＭＯＤポリペプチドを有する相互特異的足場を有するヘテロ二量体のマスキングされたＴＧＦ－β複合体
２つのポリペプチドからなるマスキングされたＴＧＦ－β複合体の安定的な発現を、ＴＧＦ－βポリペプチド配列を含む第１のポリペプチドをコードする核酸と、ＴＧＦ－β受容体ポリペプチド配列をコードする第２の核酸とを調製し、哺乳動物発現ベクター（例えば、ＣＨＯ細胞内のプラスミド発現系）を用いてポリペプチドを発現させることにより、マスキングされたＴＧＦ－β構築物を実証した。

第１のポリペプチドは、ｗｔ．ＩＬ－２ポリペプチド（配列番号２０）、ＩｇＧ１Ｆｃ足場ポリペプチド配列（例えば、Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ（「ＬＡＬＡ」）置換を有するｗｔ．ＩｇＧ１残基１～２２５）、及びＴ３６６ＷＫｉＨ「ノブ」置換、ならびにＣ７７Ｓ置換を有するヒト３型ＴＧＦ－βアイソフォーム１ポリペプチド配列を含む。

第２のポリペプチドは、ｗｔ．ＩＬ－２ポリペプチド（配列番号２０）、ＩｇＧ１Ｆｃ足場ポリペプチド配列（例えば、Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ（「ＬＡＬＡ」）置換を有するｗｔ．ＩｇＧ１残基１～２２５）、ならびにＴ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ及びＹ４０７ＶＫｉＨ「ホール」置換、ならびにＤ１１８Ａ置換を有する成熟タンパク質のａａ２６～１３６ａａｓのＴＧＦ－βＲＩＩアイソフォームＢポリペプチド配列を含む。発現したタンパク質の概略構造を、構造Ｄとして図１に示す。対応するａａ酸配列を、標識されたエレメントと整列させ、図７Ｃに示す。発現及び精製（プロテインＡ、続いてサイズ排除クロマトグラフィー）により、ヘテロ二量体複合体を得る。

ｂ．ＭＯＤポリペプチドを担持する一本鎖の相互特異的足場を有するヘテロ二量体のマスキングされたＴＧＦ－β複合体
２つのポリペプチドからなるマスキングされたＴＧＦ－β複合体の安定的な発現を、ＴＧＦ－βポリペプチド配列を含む第１のポリペプチドをコードする核酸と、ＴＧＦ－β受容体ポリペプチド配列をコードする第２の核酸とを調製し、哺乳動物発現ベクター（例えば、ＣＨＯ細胞内のプラスミド発現系）を用いてポリペプチドを発現させることにより、マスキングされたＴＧＦ－β構築物を実証した。第１のポリペプチドは、ｗｔ．ＩＬ－２ポリペプチド（配列番号２０）、ＩｇＧ１Ｆｃ足場ポリペプチド配列（例えば、Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ（「ＬＡＬＡ」）置換を有するｗｔ．ＩｇＧ１残基１～２２５）、及びＴ３６６Ｗ（ノブ）置換、ならびにＣ７７Ｓ置換を有するヒト３型ＴＧＦ－βアイソフォーム１ポリペプチド配列を含む。第２のポリペプチドは、ＩｇＧ１Ｆｃ足場ポリペプチド配列（例えば、Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ（「ＬＡＬＡ」）置換を有するｗｔ．ＩｇＧ１残基１～２２５）、ならびにＴ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ及びＹ４０７Ｖ「ホール」置換、ならびにＤ１１８Ａ置換を有する成熟タンパク質のａａ２６～１３６ａａｓのＴＧＦ－βＲＩＩアイソフォームＢポリペプチド配列を含む。

発現したタンパク質の概略構造を図１に構造Ｅとして示す。標識されたエレメントと整列させた対応するａａ酸配列を、図７Ｄに示す。発現及び精製（プロテインＡ、続いてサイズ排除クロマトグラフィー）により、ヘテロ二量体複合体を得る。

ｃ．一本鎖担持ＭＯＤポリペプチドを有する、相互特異的足場ポリペプチド安定化を有するヘテロ二量体のマスキングされたＴＧＦ－β複合体
２つのポリペプチドからなるマスキングされたＴＧＦ－β複合体の安定的な発現を、ＴＧＦ－βポリペプチド配列を含む第１のポリペプチドをコードする核酸と、ＴＧＦ－β受容体ポリペプチド配列をコードする第２の核酸とを調製し、哺乳動物発現ベクター（例えば、ＣＨＯ細胞内のプラスミド発現系）を用いてポリペプチドを発現させることにより、マスキングされたＴＧＦ－β構築物を実証した。

第１のポリペプチドは、ＩＬ－２ポリペプチド配列（Ｈ１６Ｔ及びＦ４２Ａ置換を有する配列番号２０）、ＩｇＧ１Ｆｃ足場ポリペプチド配列（例えば、Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ（「ＬＡＬＡ」）置換を有するｗｔ．ＩｇＧ１残基１～２２５）、及びＴ３６６Ｗ（ノブ）置換、Ｄ１１８Ａ置換を有する成熟タンパク質のａａ２６～１３６ａａｓのＴＧＦ－βＲＩＩアイソフォームＢポリペプチド配列、ならびにＣ７７Ｓ置換を有するヒトＴＧＦ－β３型アイソフォーム１ポリペプチド配列を含む。

第２のポリペプチドは、ＩｇＧ１Ｆｃ足場ポリペプチド配列（例えば、Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ（「ＬＡＬＡ」）置換を有するｗｔ．ＩｇＧ１残基１～２２５）、ならびにＴ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ及びＹ４０７Ｖ「ホール」置換を含む。

発現したタンパク質の概略構造を、図１の構造Ｆとして構造の変形を示すが、第２のポリペプチド上の任意の免疫調節ポリペプチド配列を欠くものである。標識されたエレメントと整列させた対応するａａ酸配列を図７Ｅに示す。発現及び精製（プロテインＡ、続いてサイズ排除クロマトグラフィー）により、ヘテロ二量体複合体を得る。

Ｃ．実施例３発現及び精製
１つのマスキングされたＴＧＦ－β構築物をコードする核酸、２つのマスキングされたＴＧＦ－β複合体をコードする核酸、を調製した（図８を参照）。ＥｘｐｉＣＨＯ細胞に核酸構築物をトランスフェクトし、細胞にポリペプチドを発現させることによって、複合体のサンプルを調製した。プロテインＡクロマトグラフィー、続いてサイズ排除クロマトグラフィーによってポリペプチドを精製した。精製したタンパク質をＳＤＳ－ＰＡＧＥし、得られたゲルをクマシーブルーで染色した。ＮＲ＝還元されていないまたは非還元サンプル、Ｒ＝還元されたサンプル（ジスルフィド還元剤による還元）。

Ｄ．実施例４生物学的活性及びマスキングポリペプチドとＴＧＦ－βとの間の親和性
一連のマスキングされたＴＧＦ－β構築物を調製して、マスキングされた構築物におけるＴＧＦ－βの生物学的利用能を実証し、ＴβＲＩＩと相互作用するその能力が、ＴＧＦ－βポリペプチド配列に対するマスキングポリペプチドの親和性に反比例することを実証した。マスキングされたＴＧＦ－β構築物は、図１の形態構造Ａであった。ＴＧＦ－β１構築物（図９の表の中央行）は、Ｎ末端からＣ末端まで、ＩＬ－２ポリペプチド、ＩｇＧ足場ポリペプチド、ＴβＲＩＩマスキングポリペプチド、及びＴＧＦ－β１ポリペプチド配列を含む。ＴＧＦ－β３構築物（図９の表の最右行）は、Ｎ末端からＣ末端まで、ＩＬ－２ポリペプチド、ＩｇＧ足場ポリペプチド、ＴβＲＩＩマスキングポリペプチド、及びＴＧＦ－β３ポリペプチド配列を含む。各構築物のマスキングポリペプチドは、配列番号１１９のＮ末端１～１４（Δ１４）欠失（図９の表の行１を参照）、または表９の行によって示されるａａｓ１～２５（Δ２５）のＮ末端欠失のいずれか、及び追加の置換（変異）（例えば、Ｅ５５Ａ、Ｄ３２Ｎ、Ｓ５２Ｌなど）を含む。

ＴβＲＩＩ－ＩｇＧ融合タンパク質が抗ＩｇＧＦｃ抗体（図９の図中の斜線付きボックス内の「ＴβＲＩＩ－ＦＣ」によって示される）を介して固定化されたマイクロタイタープレートのウェルに、マスキングされたＴＧＦ－β構築物の各々を様々な濃度で適用したキャプチャアッセイを使用して、上述のマスキングされたＴＧＦ－β１及びＴＧＦ－β３構築物とＴβＲＩＩとの相互作用を評価した。非結合構築物を洗い流した後、結合した構築物を検出し、ビオチン標識抗ＩＬ－２、続いて、４５０ｎｍでのストレプトアビジン－西洋ワサビペルオキシダーゼ比色検出（３，３’，５，５’－テトラメチルベンジジン）を使用して測定した。

図９に示される結果は、Δ２５～Ｄ１１８Ａ構築物中のＴβＲＩＩマスクが、試験された構築物中のマスキングされたＴＧＦ－β１配列またはマスキングされたＴＧＦ－β３配列に対する最も低い親和性レベルを有していたことを示し、これは、マスキングされたＴＧＦ－β配列に対する親和性と反比例して変化する。固定化されたＴβＲＩＩ－Ｉｇ融合タンパク質（図９の「ＴβＲＩＩ－ＦＣ」）に対するマスキングされた構築物の親和性に反映される。マスキング配列中のＥ５５Ａ、Ｄ３２Ｎ、またはＳ５２Ｌ置換の添加は、マスキングＴβＲＩＩ配列及びマスキングされたＴＧＦ－β１またはＴＧＦ－β３の解離定数にますます大きな影響を及ぼし、これは、外因性ＴβＲＩＩ（この場合はＴβＲＩＩ－Ｉｇ融合物）に対するそれらのより低い親和性によって反映される。結果は、マスキングされたＴＧＦ－β複合体及びＴＧＦ－β受容体に対する構築物の親和性を、少なくとも２（例えば、２．５または３）桁超に特異的に制御することが可能であることを実証する。

Ｅ．実施例５変異型ＩＬ－２ＭＯＤポリペプチドを有する一本鎖担持変異型ＩＬ－２ＭＯＤポリペプチドを有する相互特異的足場ポリペプチド安定化を有するヘテロ二量体のマスキングされたＴＧＦ－β複合体（ＰＳＭ－４０３３－４０３９）の生物学的活性
図１０Ａに示すマスキングされたＴＧＦ－β複合体、ＰＳＭ－４０３３－４０３９を調製した。複合体は、それぞれ、図１０Ｂ及び１０Ｃに示す第１のポリペプチド４０３３及び第２のポリペプチド４０３９を含む。次いで、ＰＳＭ－４０３３－４０３９で一連の実験を行った。

実験１：ヒト末梢ナイーブＣＤ４^＋Ｔ細胞からのＦｏｘｐ３^＋ｉＴｒｅｇの誘導
ナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞をヒト血液から選別し、抗ヒトＣＤ３（５ｕｇ／ｍＬ）、抗ヒトＣＤ２８（１ｕｇ／ｍＬ）、及び増加するいくつかの用量のＰＳＭ－４０３３－４０３９、または陽性対照としての単一用量の組換えＴＧＦｂ３及びＩＬ－２を播種した。培養開始の５日後、フローサイトメトリーにより、転写因子Ｆｏｘｐ３の発現について細胞を評価した。ｎ＝２、ｓｔｄｅｖ。図１１に提供される結果は、最大１，０００ｎＭの濃度でＰＳＭ－４０３３－４０３９で曝露された細胞におけるＦｏｘＰ３の有意な誘導を示す。これらの結果は、他のマスキングされたＴＧＦ－β構築物及び複合体を用いて図６Ｂに示されるものと同様であり、本明細書に開示されるマスキングされたＴＧＦ－β３構築物及び複合体が、天然及び誘導体Ｔｒｅｇの両方を含めたＴｒｅｇにおける、遺伝子発現の主な調節因子であり、Ｔｒｅｇ独自性及び機能の中心であるＦｏｘＰ３の顕著な誘導に影響を及ぼし得ることをさらに実証する。

実験２：ＰＳＭ－４０３３－４０３９誘導Ｆｏｘｐ３^＋ｉＴｒｅｇによるＴ細胞増殖の抑制
ＰＳＭ－４０３３－４０３９で誘導されたＦｏｘｐ３＋制御性Ｔ細胞（ｉＴｒｅｇ）を、通常のＴ細胞（Ｔレスポンダー）に対して異なる比率で培養し、抗ヒトＣＤ３（１ｕｇ／ｍＬ）及びマイトマイシンＣで処理した末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）で刺激した。４日後のフローサイトメトリーにより、Ｔレスポンダー細胞中のセルトレースバイオレット（ＣＴＶ）色素の希釈により増殖を評価した。図１２に示されるデータは、３人のドナーの平均を表し、各々２回試験した。ＴＧＦ－β３及びＩＬ－２誘導された制御性Ｔ細胞または全末梢ＣＤ４＋Ｔ細胞を、対照として、ｉＴｒｅｇの代わりに使用した。無添加のｉＴｒｅｇ対照と比較した、ＣＴＶの希釈％の減少を、抑制と定義する（平均７８％のＣＴＶ希釈）。この実験の結果は、本明細書に開示されるマスキングされたＴＧＦ－β３構築物及び複合体、例えば、ＰＳＭ－４０３３－４０３９によって誘導されるＦｏｘｐ３＋制御性Ｔ細胞が、ＰＢＭＣ内の抗原提示細胞によって提供される、ＣＤ３架橋及び共刺激によって活性化されるＴ細胞の増殖を抑制することができることを実証する。

転写因子であるＦｏｘｐ３の発現を超えたＴｒｅｇの決定的な特徴は、他の白血球の活性化及び機能を抑制する能力である。この実験は、本明細書に開示されるマスキングされたＴＧＦ－β３構築物及び複合体によって誘導されるｉＴｒｅｇが、ＰＢＭＣ内の抗原提示細胞によって提供される、ＣＤ３架橋及び共刺激によって活性化されるＴ細胞の増殖を、確実に抑制することができることを実証する。

実験３：ＰＳＭ－４０３３－４０３９による、ヒト末梢ＣＤ４^＋Ｔ細胞からのＦｏｘｐ３^＋発現の誘導
総ＣＤ４＋Ｔ細胞をヒト血液から選別し、抗ヒトＣＤ３（５ｕｇ／ｍＬ）、抗ヒトＣＤ２８（１ｕｇ／ｍＬ）、及びＰＳＭ－４０３３－４０３９の増加用量を播種した。培養開始の５日後、フローサイトメトリーにより、転写因子Ｆｏｘｐ３の発現について細胞を評価した。ｎ＝２。図１３Ａにデータを示す。

ＣＤ４＋Ｔ細胞型の混合物中のどの細胞型がＦｏｘｐ３発現細胞に分化し得るかを決定するために、異なる集団を選別し、ＰＳＭ－４０３３－４０３９で個別に処理した。したがって、図１３Ａのドナーとは異なるドナーとなるナイーブ、トータル、及びメモリＣＤ４＋Ｔ細胞を、上記と同じ方式で選別し、ＰＳＭ－４０３３－４０３９（３００ｎＭ）の有無において培養し、５日目にフローサイトメトリーによりＦｏｘｐ３を評価した。図１３Ｂにデータを示す。

この実験でＦｏｘｐ３発現細胞に分化した総ＣＤ４＋Ｔ細胞は、ナイーブ及びメモリ末梢Ｔ細胞の両方を表し、これらは、本明細書に開示されるマスキングされたＴＧＦ－β３構築物及び複合体、例えばＰＳＭ－４０３３－４０３９が、インビボで投与されるときに遭遇する細胞型の混合物であると考えられる。このデータは、混合されたＴ細胞集団においても、本明細書に開示されるマスキングされたＴＧＦ－β３構築物及び複合体、例えばＰＳＭ－４０３３－４０３９が、制御性Ｔを規定する遺伝子発現の主なレギュレーターであるＦｏｘｐ３を発現する細胞の頻度を増加させることができることを示す。図１３Ｂに示される結果は、ＰＳＭ－４０３３－４０３９が、ナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞よりも低い頻度ではあってもメモリＣＤ４＋Ｔ細胞を誘導してＦｏｘｐ３＋細胞に分化させることができることを示す。

実験４：同種他家リンパ球反応によって活性化されたＣＤ４^＋Ｔ細胞からのＰＳＭ－４０３３－４０３９によるＦｏｘｐ３^＋ｉＴｒｅｇの誘導
総末梢ＣＤ４＋Ｔ細胞をヒト血液から選別し、同種他家単球由来ＤＣ（ｍｏＤＣ）で播種して、Ｔ細胞増殖を誘導した。Ｔ細胞を対照としての自家ｍｏＤＣと混合し、同種他家または自家ドナーによる組み合わせの両方を、追加の対照としての可溶性抗ＣＤ３（１ｕｇ／ｍＬ）で処理した。Ｔ細胞をセルトレースバイオレット（ＣＴＶ）色素で標識して、同種他家による活性化に応答した細胞をトレースした。Ｆｏｘｐ３の増殖及び発現を５日目にフローサイトメトリーにより解析し、Ｆｏｘｐ３を発現する増殖細胞の頻度を図１４Ａ及びＢにプロットした。２つのドナーの組み合わせを示す。ｎ＝２、ｓｔｄｅｖ。とりわけ、この結果は、骨髄または幹細胞を移植された患者で生じる移植片対宿主病の治療のための、本明細書に開示されるマスキングされたＴＧＦ－β３構築物及び複合体、例えば、ＰＳＭ－４０３３－４０３９の利用有用性を実証する。

実験５：ＰＳＭ－４０３３－４０３９を使用したマウスにおけるＰＫ実験
ＰＳＭ－４０３３－４０３９を、０．１、１、または１０ｍｇ／ｋｇでＢａｌｂ／ｃマウスに単回用量として静脈内投与した。次いで、末梢血清サンプルを、投与から５分、２、８、２４、及び７２時間後に採取した。次に、抗ＩＬ２抗体を用いて分子を捕捉するリガンド結合アッセイを用いてＰＳＭ－４０３３－４０３９の血清濃度を測定し、抗ＴＧＦＢ３抗体を用いて分子を検出した。図１５に示す結果は、本明細書に開示されるマスキングされたＴＧＦ－β３構築物及び複合体、例えば、ＰＳＭ－４０３３－４０３９が、投与後７２時間を超えて生物学的に適切な濃度で血清中に存在し続け得ることを示す。構築物４０３３の配列を図１０Ｂ（配列番号１９１）に示し、構築物４０３９の配列を図１０Ｃ（配列番号１９２）に示す。

実験６：ＰＳＭ－４０３３－４０３９によるＦｏｘＰ３の誘導
ＦｏｘＰ３＋緑色蛍光タンパク質融合タンパク質（Ｆｏｘｐ３－ｅＧＦＰ）を発現するＦｏｘＰ３＋レポーターマウスに由来する選別されたＣＤ４＋単一陽性Ｆｏｘｐ３－ｅＧＦＰ陰性胸腺細胞を、抗ＣＤ３（１μｇ／ｍＬ、プレート結合）及び抗ＣＤ２８（２μｇ／ｍＬ、可溶性）抗体で刺激し、培地（対照）、組換えヒトＴＧＦ－β３（５ｎｇ／ｍＬ）及びＩＬ－２（１００Ｕ／ｍＬ）の組合わせ、またはＰＳＭ－４０３３－４０３９（３０ｎＭ）のいずれかで処置した。７日後、Ｆｏｘｐ３－ｅＧＦＰ陽性細胞をフローサイトメトリーによって評価した。図１６のパネルＡに示されるように、ＴＧＦ－β３及びＩＬ－２を用いた併用処置（１９０万個の細胞）、ならびにＰＳＭ－４０３３－４０３９を用いた処置（２００，０００個の細胞）の両方が、対照処置（１００，０００個を超える細胞）と比較して、ＦｏｘＰ３発現を誘導した。選別されたＣＤ４＋Ｆｏｘｐ３－ｅＧＦＰ陰性胸腺細胞上のＦｏｘＰ３のＰＳＭ－４０３３－４０３９誘導の用量曲線を、図１６のパネルＢに提供する。

実験７：ＰＳＭ－４０３３－４０３９誘導ＴレッグによるＴエフェクター細胞増殖の抑制
マウスＣＤ４＋Ｔ細胞（２５，０００個）を、抗ＣＤ３（０．５μｇ／ｍＬ、可溶性）抗体及び脾細胞（ウェル当たり５０Ｋ）でシミュレートし、実験６で調製されたＦｏｘＰ３を発現する様々な量のＰＳＭ－４０３３－４０３９誘導Ｔｒｅｇの存在下でＴエフェクター細胞増殖を誘導した。Ｔ細胞の増殖を、培養の５日後の細胞増殖染料であるカルボキシフルオレセインスクシンイミジルエステル（ＣＦＳＥ）の希釈によって評価し、増殖指数として記述される、応答細胞が受けた分裂の平均数として表した。図１７に示される結果は、ＰＳＭ－４０３３－４０３９誘導ＴｒｅｇがＴエフェクター細胞増殖を低減することを示した。

実験８：ＰＳＭ－４０３３－４０３９処置がＦｏｘｐ３＋制御性Ｔ細胞の生存につながる
Ｆｏｘｐ３－ｅＧＦＰを発現するＦｏｘＰ３＋レポーターマウス（実験６を参照）の末梢に由来する選別されたＣＤ４＋Ｆｏｘｐ３－ｅＧＦＰ＋制御性Ｔ細胞（＞９８％純粋）を、抗ＣＤ３（１ｕｇ／ｍＬ、プレート結合）及び抗ＣＤ２８（２ｕｇ／ｍＬ、可溶性）抗体で刺激し、対照培地、組換えＩＬ－２（１００Ｕ／ｍｌ）、組換えヒトＴＧＦ－β３（５ｎｇ／ｍＬ）及びＩＬ－２（１００Ｕ／ｍＬ）の組み合わせ、またはＰＳＭ－４０３３－４０３９（２００ｎＭ）で処置した。Ｆｏｘｐ３＋細胞の頻度を、６日目にフローサイトメトリーによって評価した。全ての処置は、図１８に示されるように、未処置の対照と比較して、ＦｏｘＰ３＋制御性Ｔ細胞の維持につながる。

実験９：ＰＳＭ－４０３３－４０３９処置が、進行中の自己免疫性胃炎を有するマウスにおけるＣＤ４＋Ｆｏｘｐ３＋Ｔ細胞の割合を増加させる
ＴｘＡ２３Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）トランスジェニックマウスが、４週齢までに１００％の疾患浸透率で自己免疫性胃炎を自発的に発症する。ＴｘＡ２３マウスで発現されたＣＤ４^＋Ｔ細胞の大部分は、胃の壁細胞で発現されたプロトンポンプ（Ｈ^＋／Ｋ^＋ＡＴＰａｓｅ）に由来する自己抗原に特異的なＴＣＲを有する。

４週齢を超えるＴｘＡ２３マウスを、ＰＳＭ－４０３３－４０３９（１ｍｇ／ｋｇ）で処置し、図１９に示されるように、ＣＤ４＋Ｆｏｘｐ３＋Ｔ細胞の割合を、７日目にフローサイトメトリーによって評価した。対照リン酸緩衝生理食塩水（「ＰＢＳ」）で処置されたマウスの血液からの結果をパネルＡに示し、ＰＳＭ－４０３３－４０３９で処置されたマウスの結果をパネルＢに示す。ＰＢＳで処置されたマウスの胃リンパ節のＣＤ４^＋Ｆｏｘｐ３^＋Ｔ細胞評価をパネルＣに提供し、ＰＭＳ－４０３３－４０３９で処置されたマウスの結果をパネルＤに提供する。図１９のパネルＥは、ＰＢＳで処置された３匹のＴｘＡ２３マウス及びＰＳＭ－４０３３－４０３９で処置された３匹のＴｘＡ２３マウスの胃リンパ節におけるＦｏｘｐ３^＋ＣＤ４^＋細胞のレベルを比較する。ＰＢＳまたはＰＳＭ－４０３３－４０３９で処置されたＴｘＡ２３マウスにおけるＦｏｘｐ３^＋ＣＤ４^＋Ｔ細胞の画分を、血液についてはパネルＦ（パネルＡ及びＢの比較）に、胃リンパ節についてはパネルＧ（パネルＣ及びＤの比較）に示す。ＰＢＳで処置された対照マウスと比較して、ＰＳＭ－４０３３－４０３９処置マウスは、血液及び胃リンパ節におけるＣＤ４^＋Ｆｏｘｐ３^＋Ｔ細胞の割合が有意に増加した。結果は、ＰＳＭ－４０３３－４０３９処置が、活動性自己免疫疾患を有するマウスにおいて、制御性Ｔ細胞を全身的に及び疾患関連リンパ節内で増加させ得ることを示す。

１ｍｇ／ｋｇにおけるＰＳＭ－４０３３－４０３９を用いた７日間の処置コースを与えられたＴｘＡ２３マウスも、胃上皮細胞マーカーＫｉ６７に対するＴエフェクター細胞の低減を示す。ＰＳＭ－４０３３－４０３９処置後、マウスは、ＰＢＳを受けたマウスと比較して、胃リンパ節（パネルＩ）におけるＫｉ６７^＋ＦｏｘＰ３^－ＣＤ４^＋細胞の数の減少に反映される、Ｋｉ６７（パネルＨ）に特異的なＴＣＲを有するエフェクターＴ細胞の数の低減及びＴｒｅｇの増加を示した。上皮細胞マーカーＫｉ６７に特異的なＴエフェクターの低減及びＴｒｅｇの増加は、自己免疫性胃炎を有するマウスの疾患組織における自己反応性Ｔ細胞増殖の低減と一致する。

実験１０：従来のｉＴｒｅｇ及びＰＳＭ－４０３３－４０３９誘導ｉＴｒｅｇによって発現される表現型マーカーの比較
従来のｉＴｒｅｇ及びＰＳＭ－４０３３－４０３９誘導ｉＴｒｅｇによって発現される表現型マーカーを比較した。図２０に示されるように、従来のｉＴｒｅｇ及びＰＳＭ－４０３３－４０３９誘導ｉＴｒｅｇによる表現型マーカーＣＤ２５、ＣＴＬ４、ＰＤ１、ＧＩＴＲ、ＣＤ３８、ＣＤ７３、及びＧＡＲＰの発現は、実質的に類似していた。

実施例６ヘテロ二量体のマスキングされたＴＧＦ－β複合体ＰＳＭ－４０３３－４０３９が、Ｔ細胞媒介性炎症を抑制する
マウス遅延型過敏症（ＤＴＨ）モデルを使用して、マスキングされたＴＧＦ－β／ＩＬ－２複合体がＴ細胞駆動型炎症を抑制し得ることを実証した。実験では、１日目に、マウスにキーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）を後脇腹に注射した。次いで、マウスを４つの群に分けた。第１の群（ビヒクル対照）は、１日目にＰＢＳ－生理食塩水の注射のみを受けた。第２及び第３の群は、０．３ｍｇ／ｋｇまたは１．０ｍｇ／ｋｇのいずれかで、１日目にＰＳＭ－４０３３－４０３９の単回用量（図１０Ａ～１０Ｃを参照）を受けた。マウスの第４群（陽性対照）には、研究の全体を通して１日１回（ｑ．ｄ．）シクロスポリンＡが与えられた。７日目に、マウスに、ＫＬＨを左耳介において投与し、７日目から１０日目まで毎日、耳介の厚さの変化を測定した。図２１に示される結果は、単回用量のＰＳＭ－４０３３－４０３９がＤＴＨ応答の阻害をもたらしたことを示す。加えて、データは、応答が用量依存的であることを示す。

本発明における特定の実施形態を参照して本開示を説明してきたが、本開示の真の趣旨及び範囲を逸脱することなく、様々な変更を行うことが可能であること、また均等物で置き換え可能であることを当業者は理解するであろう。加えて、多くの修正を行って、特定の状態、材料、物質の組成物、プロセス、プロセスステップ（単数または複数）を、本開示の目的、趣旨、及び範囲に適合させてもよい。全てのこのような修正は、本明細書に添付する特許請求の範囲の範囲内であることを意図している。

Claims

代謝疾患または代謝障害の治療または予防を提供する方法であって、代謝疾患または代謝障害の治療または予防を必要とする個体に、（ｉ）１つ以上の独立して選択されるマスキングされたＴＧＦ－β構築物、（ｉｉ）１つ以上の独立して選択されるマスキングされたＴＧＦ－β複合体、及び／または（ｉｉｉ）前記１つ以上の独立して選択されるマスキングされたＴＧＦ－β構築物もしくは複合体をコードする１つ以上の核酸のいずれかを投与することを含む、前記方法。
前記代謝障害が、遺伝性代謝疾患または障害である、請求項１に記載の方法。
前記代謝障害が、後天性代謝疾患または障害である、請求項１に記載の方法。
前記代謝疾患または前記代謝障害が、家族性高コレステロール血症、ゴーシェ病、ハンター症候群、クラッベ病、メープルシロップ尿症、異染性白質ジストロフィー、嚢胞性線維症、ミトコンドリア脳症、乳酸アシドーシス、脳卒中様発作（ＭＥＬＡＳ）、ニーマン・ピック病、フェニルケトン尿症（ＰＫＵ）、ポルフィリン症、鎌状赤血球貧血症、テイ・サックス病及びウィルソン病からなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
前記代謝疾患または前記代謝障害が、２型糖尿病（Ｔ２Ｄ）、前Ｔ２Ｄ、非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、及び非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）からなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
前記代謝疾患または前記代謝障害が、Ｔ２Ｄまたは前Ｔ２Ｄである、請求項５に記載の方法。
前記代謝疾患または前記代謝障害が、ＮＡＦＬＤである、請求項５に記載の方法。
前記代謝疾患または前記代謝障害が、ＮＡＳＨを含むＮＡＦＬＤである、請求項５に記載の方法。
Ａ）前記マスキングされたＴＧＦ－β構築物が、
ｉ）足場ポリペプチド配列と、
ｉｉ）ＴＧＦ－βポリペプチド配列と、
ｉｉｉ）ＴＧＦ－β受容体ポリペプチド配列または抗ＴＧＦ－βポリペプチド配列から任意に選択されるマスキングポリペプチド配列と、
ｉｖ）任意に、１つ以上の独立して選択されるＭＯＤポリペプチド配列と、
ｖ）任意に、１つ以上の独立して選択されるリンカーポリペプチド配列と、を含む、第１のポリペプチドを含み、
前記マスキングポリペプチド配列及び前記ＴＧＦ－βポリペプチド配列が、互いに結合し、
Ｂ）前記マスキングされたＴＧＦ－β複合体が、ヘテロ二量体として互いに結合された第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドを含み、
（ｉ）前記第１のポリペプチドが、
ａ）相互特異的二量体化配列を含む足場ポリペプチド配列と、
ｂ）ＴＧＦ－β受容体ポリペプチド配列または抗ＴＧＦ－βポリペプチド配列から任意に選択されるマスキングポリペプチド配列と、
ｃ）任意に、１つ以上の独立して選択されるＭＯＤポリペプチド配列と、
ｄ）任意に、１つ以上の独立して選択されるリンカーポリペプチド配列と、を含み、
（ｉｉ）前記第２のポリペプチドが、
ａ）前記第１のポリペプチド中の前記相互特異的二量体化配列に対応する相互特異的二量体化配列を含む、足場ポリペプチド配列と、
ｂ）ＴＧＦ－βポリペプチド配列と、
ｃ）任意に、１つ以上（例えば１つ、２つ以上）の独立して選択されるＭＯＤポリペプチド配列と、
ｄ）任意に、（例えば、前記第２のポリペプチドの前述のポリペプチド配列のいずれかの間の）１つ以上の独立して選択されるリンカーポリペプチド配列と、を含み、
前記マスキングポリペプチド配列及び前記ＴＧＦ－βポリペプチド配列が、互いに結合し、
相互特異的結合配列及び対応する相互特異的結合配列が、前記ヘテロ二量体において互いに相互作用し、
前記マスキングされたＴＧＦ－βの第１のポリペプチド及び／または前記第２のポリペプチドが、任意に、１つ以上の独立して選択されるリンカーポリペプチド配列を含む、請求項１～８のいずれか１項に記載の方法。
前記１つ以上の独立して選択されるマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体の１つ以上の用量が投与され、前記１つ以上の用量が、約１ｍｇ／ｋｇ体重～約５０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲で独立して選択される量の前記ＴＧＦ－β構築物または複合体を含む、請求項９に記載の方法。
前記１つ以上の独立して選択されるマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体の１つ以上の用量が投与され、前記１つ以上の用量が、約１ｍｇ／ｋｇ体重～約１０ｍｇ／ｋｇ体重、または約１０ｍｇ／ｋｇ体重～約２０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲で独立して選択される量の前記ＴＧＦ－β構築物または複合体を含む、請求項９に記載の方法。
１つ以上の独立して選択されるマスキングされたＴＧＦ－β複合体を、それを必要とする個体に投与することを含み、
（ｉ）前記第１のポリペプチドが、Ｎ末端からＣ末端まで、
ａ）１つまたは２つ（もしくはそれ以上）の独立して選択されるＭＯＤ配列、前記相互特異的二量体化配列を含む前記足場ポリペプチド配列、及び前記マスキングポリペプチド配列、または
ｂ）前記相互特異的二量体化配列を含む前記足場ポリペプチド配列、及び前記マスキングポリペプチド配列を含み、
（ｉｉ）前記第２のポリペプチドが、Ｎ末端からＣ末端まで、１つまたは２つの独立して選択されるＭＯＤ配列と、前記対応する相互特異的二量体化配列を含む前記足場ポリペプチド配列と、前記ＴＧＦ－βポリペプチド配列とを含む、請求項９に記載の方法。
（ｉ）前記第１及び前記第２のポリペプチドの前記足場ポリペプチド配列が、補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）及び／または抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）を通して細胞溶解を誘導するＩｇポリペプチドの能力を実質的に低減または排除する変異を含む、ＩｇＦｃポリペプチド配列を含み、
（ｉｉ）前記マスキングポリペプチド配列が、Ｉ型（ＴβＲＩ）、ＩＩ型（ＴβＲＩＩ）またはＩＩＩ型（ＴβＲＩＩＩ）ＴβＲのエクトドメイン断片を含む、ＴＧＦ－β受容体（「ＴβＲ」）ポリペプチド配列であり、前記ＭＯＤポリペプチド配列が、独立して、ＰＤ－Ｌ１、ＦＡＳ－Ｌ、４－１ＢＢＬ、ＩＬ－２、ＩＬ－１０ＭＯＤポリペプチド配列、及びそれらの変異型からなる群から選択される、請求項１２に記載の方法。
（ｉ）前記第１及び前記第２のポリペプチドの前記足場ポリペプチド配列が、ＫｉＨ、ＫｉＨｓ－ｓ、ＨＡ－ＴＦ、ＺＷ－１、７．８．６０、ＤＤ－ＫＫ、ＥＷ－ＲＶＴ、ＥＷ－ＲＶＴｓ－ｓ、及びＡ１０７配列ペアからなる群から選択される、相互特異的二量体化配列及び対応する相互特異的二量体化配列のペアを含み、
（ｉｉ）前記マスキングポリペプチド配列が、配列番号１１７または１１９～１２３に提供されるＴβＲＩＩポリペプチド配列の少なくとも１００個の連続するａａに対して少なくとも９０％または少なくとも９５％のａａ配列同一性を有するＴβＲＩＩポリペプチドを含み、
（ｉｉｉ）前記ＴＧＦ－βポリペプチド配列が、配列番号１１２または１１３の少なくとも９０個の連続するａａに対して少なくとも９０％または少なくとも９５％のａａ配列同一性を有するＴＧＦ－β３ポリペプチド配列を含み、前記ＭＯＤポリペプチド配列が、独立して、ＩＬ－２ＭＯＤポリペプチド配列及びそれらの変異型からなる群から選択される、請求項１３に記載の方法。
（ｉ）前記第１及び前記第２のポリペプチドの前記足場ポリペプチド配列が、ＫＩＨまたはＫＩＨｓ－ｓ相互特異的二量体化配列及び対応する相互特異的二量体化配列ペアを含み、
（ｉｉ）前記マスキングポリペプチド配列が、配列番号１２１～１２３に提供されるＴβＲＩＩポリペプチド配列の少なくとも１００個の連続するａａに対して少なくとも９０％または少なくとも９５％のａａ配列同一性を有するＴβＲＩＩポリペプチドを含み、
（ｉｉｉ）前記ＴＧＦ－βポリペプチド配列が、配列番号１１３の少なくとも９０個の連続するａａに対して少なくとも９０％または少なくとも９５％のａａ配列同一性を有するＴＧＦ－β３ポリペプチド配列を含み、かつＣ７７Ｓ置換を含み、前記ＭＯＤポリペプチド配列が、独立して、Ｈ１６Ａ及び／またはＦ４２Ａ配列決定置換を含む、ＩＬ－２ＭＯＤポリペプチド配列及びＩＬ－２変異型ＭＯＤポリペプチド配列からなる群から選択される、請求項１４に記載の方法。
１つ以上の独立して選択されるマスキングされたＴＧＦ－β複合体を、それを必要とする個体に投与することを含み、
前記マスキングされたＴＧＦ－β複合体が、配列番号１９１のポリペプチド（構築物４０３３）及び／もしくは配列番号１０３のポリペプチド（構築物４０３９）を含むか、または
前記マスキングされたＴＧＦ－β複合体が、配列番号１９１もしくは１９２に対して少なくとも９０％もしくは９５％のａａ配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項９に記載の方法。
前記マスキングされたＴＧＦ－β複合体が、構築物４０３３及び４０３９（配列番号１９１及び１９２）からなる、請求項９に記載の方法。
前記１つ以上の独立して選択されるマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体の１つ以上の用量が投与され、前記１つ以上の用量が、約１ｍｇ／ｋｇ体重～約５０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲で独立して選択される量の前記ＴＧＦ－β構築物または複合体を含む、請求項１２に記載の方法。
前記１つ以上の独立して選択されるマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体の１つ以上の用量が投与され、前記１つ以上の用量が、約１ｍｇ／ｋｇ体重～約１０ｍｇ／ｋｇ体重、または約１０ｍｇ／ｋｇ体重～約２０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲で独立して選択される量の前記ＴＧＦ－β構築物または複合体を含む、請求項１２に記載の方法。
前記１つ以上の独立して選択されるマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体の１つ以上の用量が投与され、前記１つ以上の用量が、約１ｍｇ／ｋｇ体重～約５０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲で独立して選択される量の前記ＴＧＦ－β構築物または複合体を含む、請求項１５に記載の方法。
前記１つ以上の独立して選択されるマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体の１つ以上の用量が投与され、前記１つ以上の用量が、約１ｍｇ／ｋｇ体重～約１０ｍｇ／ｋｇ体重、または約１０ｍｇ／ｋｇ体重～約２０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲で独立して選択される量の前記ＴＧＦ－β構築物または複合体を含む、請求項１５に記載の方法。
１つ以上の独立して選択されるマスキングされたＴＧＦ－β構築物を、それを必要とする個体に投与することを含み、前記第１のポリペプチドが、Ｎ末端からＣ末端まで順番に、
ｉ）前記足場ポリペプチド配列、前記マスキングポリペプチド配列、及び前記ＴＧＦ－βポリペプチド配列、
ｉｉ）第１のＭＯＤポリペプチド配列、前記足場ポリペプチド配列、前記マスキングポリペプチド配列、及び前記ＴＧＦ－βポリペプチド配列、または
ｉｉｉ）第１の独立して選択されるＭＯＤポリペプチド配列、第２の独立して選択されるＭＯＤポリペプチド配列、前記足場ポリペプチド配列、前記マスキングポリペプチド配列、及び前記ＴＧＦ－βポリペプチド配列、を含み、
前記マスキングされたＴＧＦ－β構築物が、任意に、１つ以上の独立して選択されるリンカーポリペプチド配列を含む、請求項９に記載の方法。
（ｉ）前記足場ポリペプチド配列が、補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）及び／または抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）を通して細胞溶解を誘導する前記Ｉｇポリペプチドの能力を実質的に低減または排除する変異を含む、ＩｇＦｃポリペプチド配列を含み、
（ｉｉ）前記マスキングポリペプチド配列が、Ｉ型（ＴβＲＩ）、ＩＩ型（ＴβＲＩＩ）またはＩＩＩ型（ＴβＲＩＩＩ）ＴβＲのエクトドメイン断片を含む、ＴＧＦ－β受容体（「ＴβＲ」）ポリペプチド配列であり、
前記ＴＧＦ－β構築物が、任意に、ホモ二量体を形成する、請求項２２に記載の方法。
（ｉ）前記足場ポリペプチド配列が、ＣＤＣ及び／またはＡＤＣＣを実質的に低減または排除する変異を含み、配列番号７１～７８に示されるＩｇＧ１Ｆｃポリペプチド配列の少なくとも２００個の連続するａａに対して少なくとも約９０％または少なくとも約９５％のａａ配列同一性を有するＩｇＧ１Ｆｃポリペプチド配列を含み、
（ｉｉ）前記マスキングポリペプチド配列が、配列番号１１７または１１９～１２３に提供されるＴβＲＩＩポリペプチド配列の少なくとも１００個の連続するａａに対して少なくとも９０％または少なくとも９５％のａａ配列同一性を有するＴβＲＩＩポリペプチド配列を含み、
（ｉｉｉ）前記ＴＧＦ－βポリペプチド配列が、配列番号１１２または１１３の少なくとも９０個の連続するａａに対して少なくとも９０％または少なくとも９５％のａａ配列同一性を有するＴＧＦ－β３ポリペプチド配列を含み、
前記ＴＧＦ－β構築物が、任意に、ホモ二量体を形成する、請求項２３に記載の方法。
（ｉ）前記足場ポリペプチド配列が、ＬＡＬＡ（Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ）変異を含むＩｇＧ１Ｆｃ配列を含み、
（ｉｉ）前記マスキングポリペプチド配列が、配列番号１２１～１２３に提供されるＴβＲＩＩポリペプチド配列の少なくとも１００個の連続するａａに対して少なくとも９０％または少なくとも９５％のａａ配列同一性を有するＴβＲＩＩポリペプチドを含み、
（ｉｉｉ）前記ＴＧＦ－βポリペプチド配列が、配列番号１１３の少なくとも９０個の連続するａａに対して少なくとも９０％または少なくとも９５％のａａ配列同一性を有するＴＧＦ－β３ポリペプチド配列を含み、かつＣ７７Ｓ置換を含み、
前記ＴＧＦ－β構築物が、任意に、ホモ二量体を形成する、請求項２４に記載の方法。
前記足場ポリペプチドが、二量体化配列を含む、請求項２３に記載の方法。
前記マスキングされたＴＧＦ－β構築物が、２つのマスキングされたＴＧＦ－β構築物を含むマスキングされたＴＧＦ－βホモ二量体を形成し、前記２つのマスキングされたＴＧＦ－β構築物の前記足場ポリペプチド配列が、任意に、互いに１つ以上の共有結合を有し、任意に、前記足場が、ＣＤＣ及び／またはＡＤＣＣを通して細胞溶解を誘導する前記Ｉｇポリペプチドの能力を実質的に低減または排除する変異を含むＩｇＦｃポリペプチドを含む、請求項２６に記載の方法。
前記マスキングされたＴＧＦ－β構築物の前記足場ポリペプチドが、相互特異的二量体化配列を含む、請求項２６に記載の方法。
前記マスキングされたＴＧＦ－β構築物が、マスキングされたＴＧＦ－β複合体ヘテロ二量体を形成するように前記第１のポリペプチドと二量体化された第２のポリペプチドをさらに含み、前記第２のポリペプチドが、前記第１のポリペプチドの前記相互特異的結合配列の対応する相互特異的二量体化配列を含む足場ポリペプチド配列を含み、前記相互特異的結合配列及び前記対応する相互特異的結合配列が、前記ヘテロ二量体において互いに相互作用し、
任意に、前記足場配列が、ＣＤＣ及び／またはＡＤＣＣを通して細胞溶解を誘導する前記Ｉｇポリペプチドの能力を実質的に低減または排除する変異を含むＩｇＦｃポリペプチドを含む、請求項２８に記載の方法。
前記第２のポリペプチドが、Ｎ末端からＣ末端まで、
（ｉ）前記対応する相互特異的二量体化配列を含む足場ポリペプチド配列、
（ｉｉ）１つまたは２つの独立して選択されるＭＯＤ配列、及び前記対応する相互特異的二量体化配列を含む足場ポリペプチド配列、
（ｉｉｉ）前記対応する相互特異的二量体化配列を含む足場ポリペプチド配列、及び１つまたは２つの独立して選択されるＭＯＤ配列、あるいは
（ｉｖ）１つまたは２つの独立して選択されるＭＯＤ配列、前記対応する相互特異的二量体化配列を含む足場ポリペプチド配列、及び１つまたは２つの独立して選択されるＭＯＤ配列を含み、
前記第１及び／または前記第２のポリペプチドが、任意に、１つ以上の独立して選択されるリンカーポリペプチド配列を含む、請求項２９に記載の方法。
（ｉ）前記第１及び前記第２のポリペプチドの前記足場ポリペプチド配列が、ＣＤＣ及び／またはＡＤＣＣを通して細胞溶解を誘導する前記Ｉｇポリペプチドの能力を実質的に低減または排除する変異を含むＩｇＦｃポリペプチド配列を含み、
（ｉｉ）前記マスキングポリペプチド配列が、Ｉ型（ＴβＲＩ）、ＩＩ型（ＴβＲＩＩ）またはＩＩＩ型（ＴβＲＩＩＩ）ＴβＲのエクトドメイン断片を含む、ＴＧＦ－β受容体（「ＴβＲ」）ポリペプチド配列である、請求項３０に記載の方法。
（ｉ）前記第１及び前記第２のポリペプチドの前記足場ポリペプチド配列が、ＣＤＣ及び／またはＡＤＣＣを実質的に低減または排除する変異を含み、配列番号７１～７８に示されるＩｇＧ１Ｆｃポリペプチド配列の少なくとも２００個の連続するａａに対して少なくとも約９０％または少なくとも約９５％のａａ配列同一性を有する、ＩｇＧ１Ｆｃポリペプチド配列を含み、
（ｉｉ）前記マスキングポリペプチド配列が、配列番号１１７または１１９～１２３に提供されるＴβＲＩＩポリペプチド配列の少なくとも１００個の連続するａａに対して少なくとも９０％または少なくとも９５％のａａ配列同一性を有するＴβＲＩＩポリペプチド配列を含み、
（ｉｉｉ）前記ＴＧＦ－βポリペプチド配列が、配列番号１１２または１１３の少なくとも９０個の連続するａａに対して少なくとも９０％または少なくとも９５％のａａ配列同一性を有するＴＧＦ－β３ポリペプチド配列を含む、請求項３１に記載の方法。
（ｉ）前記第１及び前記第２のポリペプチドの前記足場ポリペプチド配列が、ＬＡＬＡ変異を含むＩｇＧ１Ｆｃ配列を含み、
（ｉｉ）前記マスキングポリペプチド配列が、配列番号１２１～１２３に提供されるＴβＲＩＩポリペプチド配列の少なくとも１００個の連続するａａに対して少なくとも９０％または少なくとも９５％のａａ配列同一性を有するＴβＲＩＩポリペプチドを含み、
（ｉｉｉ）前記ＴＧＦ－βポリペプチド配列が、配列番号１１３の少なくとも９０個の連続するａａに対して少なくとも９０％または少なくとも９５％のａａ配列同一性を有するＴＧＦ－β３ポリペプチド配列を含み、かつＣ７７Ｓ置換を含む、請求項３２に記載の方法。
前記第２のポリペプチドが、Ｎ末端からＣ末端まで、
（ｉ）前記対応する相互特異的二量体化配列を含む前記足場ポリペプチド配列、前記マスキングポリペプチド配列、及び前記ＴＧＦ－βポリペプチド配列、
（ｉｉ）第１のＭＯＤポリペプチド配列、前記対応する相互特異的二量体化配列を含む前記足場ポリペプチド配列、任意にＴＧＦ－β受容体ポリペプチド配列である前記マスキングポリペプチド配列、及び前記ＴＧＦ－βポリペプチド配列、または
（ｉｉｉ）第１の独立して選択されるＭＯＤポリペプチド配列、第２の独立して選択されるＭＯＤポリペプチド配列、前記対応する相互特異的二量体化配列を含む前記足場ポリペプチド配列、任意にＴＧＦ－β受容体ポリペプチド配列である前記マスキングポリペプチド配列、及び前記ＴＧＦ－βポリペプチド配列を含む、請求項２９に記載の方法。
（ｉ）前記第１及び前記第２のポリペプチドの前記足場ポリペプチド配列が、ＣＤＣ及び／またはＡＤＣＣ）を通して細胞溶解を誘導する前記Ｉｇポリペプチドの能力を実質的に低減または排除する変異を含むＩｇＦｃポリペプチド配列を含み、
（ｉｉ）前記マスキングポリペプチド配列が、Ｉ型（ＴβＲＩ）、ＩＩ型（ＴβＲＩＩ）またはＩＩＩ型（ＴβＲＩＩＩ）ＴβＲのエクトドメイン断片を含む、ＴＧＦ－β受容体（「ＴβＲ」）ポリペプチド配列である、請求項３４に記載の方法。
（ｉ）前記第１及び前記第２のポリペプチドの前記足場ポリペプチド配列が、ＣＤＣ及び／またはＡＤＣＣを実質的に低減または排除する変異を含み、配列番号７１～７８に示されるＩｇＧ１Ｆｃポリペプチド配列の少なくとも２００個の連続するａａに対して少なくとも約９０％または少なくとも約９５％のａａ配列同一性を有する、ＩｇＧ１Ｆｃポリペプチド配列を含み、
（ｉｉ）前記マスキングポリペプチド配列が、配列番号１１７または１１９～１２３に提供されるＴβＲＩＩポリペプチド配列の少なくとも１００個の連続するａａに対して少なくとも９０％または少なくとも９５％のａａ配列同一性を有するＴβＲＩＩポリペプチド配列を含み、
（ｉｉｉ）前記ＴＧＦ－βポリペプチド配列が、配列番号１１２または１１３の少なくとも９０個の連続するａａに対して少なくとも９０％または少なくとも９５％のａａ配列同一性を有するＴＧＦ－β３ポリペプチド配列を含む、請求項３５に記載の方法。
（ｉ）前記第１及び前記第２のポリペプチドの前記足場ポリペプチド配列が、ＬＡＬＡ変異を含むＩｇＧ１Ｆｃ配列を含み、
（ｉｉ）前記マスキングポリペプチド配列が、配列番号１２１～１２３に提供されるＴβＲＩＩポリペプチド配列の少なくとも１００個の連続するａａに対して少なくとも９０％または少なくとも９５％のａａ配列同一性を有するＴβＲＩＩポリペプチドを含み、
（ｉｉｉ）前記ＴＧＦ－βポリペプチド配列が、配列番号１１３の少なくとも９０個の連続するａａに対して少なくとも９０％または少なくとも９５％のａａ配列同一性を有するＴＧＦ－β３ポリペプチド配列を含み、かつＣ７７Ｓ置換を含む、請求項３６に記載の方法。
前記１つ以上の独立して選択されるマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体の１つ以上の用量が投与され、前記１つ以上の用量が、約１ｍｇ／ｋｇ体重～約５０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲で独立して選択される量の前記ＴＧＦ－β構築物または複合体を含む、請求項２３～３７のいずれか１項に記載の方法。
前記１つ以上の独立して選択されるマスキングされたＴＧＦ－β構築物または複合体の１つ以上の用量が投与され、前記１つ以上の用量が、約１ｍｇ／ｋｇ体重～約１０ｍｇ／ｋｇ体重、または約１０ｍｇ／ｋｇ体重～約２０ｍｇ／ｋｇ体重）の範囲で独立して選択される量の前記ＴＧＦ－β構築物または複合体を含む、請求項３８に記載の方法。