JP2023537051A - 抗体薬物複合体 - Google Patents

抗体薬物複合体 Download PDF

Info

Publication number
JP2023537051A
JP2023537051A JP2023508466A JP2023508466A JP2023537051A JP 2023537051 A JP2023537051 A JP 2023537051A JP 2023508466 A JP2023508466 A JP 2023508466A JP 2023508466 A JP2023508466 A JP 2023508466A JP 2023537051 A JP2023537051 A JP 2023537051A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
antibody
heavy chain
light chain
her2
drug conjugate
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
JP2023508466A
Other languages
English (en)
Inventor
チャン，シカン
チェン，ティアンシ
フェン，ウェイウェイ
チャン，ビン
タン，シャオチー
シュ，トンジェ
ワン，シャオジン
シェン，ファツェ
チャン，チョンピン
ワン，ファ
ガオ，ヨン
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Chia Tai Tianqing Pharmaceutical Group Co Ltd
Original Assignee
Chia Tai Tianqing Pharmaceutical Group Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Chia Tai Tianqing Pharmaceutical Group Co Ltd filed Critical Chia Tai Tianqing Pharmaceutical Group Co Ltd
Publication of JP2023537051A publication Critical patent/JP2023537051A/ja
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/47—Quinolines; Isoquinolines
    • A61K31/4738—Quinolines; Isoquinolines ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
    • A61K31/4745—Quinolines; Isoquinolines ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems condensed with ring systems having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. phenantrolines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
    • A61K47/545—Heterocyclic compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/65—Peptidic linkers, binders or spacers, e.g. peptidic enzyme-labile linkers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/68037—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a camptothecin [CPT] or derivatives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6849—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a receptor, a cell surface antigen or a cell surface determinant
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A61K47/6855—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell the tumour determinant being from breast cancer cell
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6875—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody being a hybrid immunoglobulin
    • A61K47/6879—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody being a hybrid immunoglobulin the immunoglobulin having two or more different antigen-binding sites, e.g. bispecific or multispecific immunoglobulin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D491/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00
    • C07D491/22—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00 in which the condensed system contains four or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/32—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against translation products of oncogenes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/40—Immunoglobulins specific features characterized by post-translational modification
    • C07K2317/41—Glycosylation, sialylation, or fucosylation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
    • C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
    • C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

連結された治療用抗体部分と、中間リンカー部分と、細胞傷害性薬物部分とを含む抗体薬物複合体を提供し、治療用抗体部分はＨＥＲ２を標的とする抗体であり、細胞傷害性薬物部分はカンプトテシン類トポイソメラーゼＩ阻害剤であり、細胞傷害性薬物部分又はリンカー－細胞傷害性薬物部分に対して重水素置換修飾が行われている。前記抗体薬物複合体はがんの予防又は治療のために使用できる。TIFF2023537051000091.tif76170

Description

本願は、連結された治療用抗体部分と、中間リンカー部分と、細胞傷害性薬物部分とを含む抗体薬物複合体に関する。本願は、さらに、がんを予防及び治療するための薬物の製造における前記抗体薬物複合体の用途に関する。
抗体薬物複合体（Ａｎｔｉｂｏｄｙ－Ｄｒｕｇ Ｃｏｎｊｕｇａｔｅ、ＡＤＣ）は、治療用抗体の高い特異性と細胞傷害性薬物の高い殺傷活性を組み合わせた薬物であり、そのうち、治療用抗体部分と細胞傷害性薬物部分は中間のリンカー部分を介して連結される。現在、世界中で少なくとも８つのＡＤＣ薬が発売されており、そのうち、ブレンツキシマブ ベドチン（ｂｒｅｎｔｕｘｉｍａｂ ｖｅｄｏｔｉｎ）、ポラツズマブ ベドチン（ｐｏｌａｔｕｚｕｍａｂ ｖｅｄｏｔｉｎ）及びエンホルツマブ ベドチン（ｅｎｆｏｒｔｕｍａｂ ｖｅｄｏｔｉｎ）は、抗体部分が、それぞれ、ＣＤ３０、ＣＤ７９ｂ、ネクチン－４を標的とし、トラスツズマブ エムタンシン（ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ ｅｍｔａｎｓｉｎｅ）及びトラスツズマブ デルクステカン（ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ ｄｅｒｕｘｔｅｃａｎ）は、抗体部分がＨＥＲ２を標的とし、ゲムツズマブ オゾガマイシン（ｇｅｍｔｕｚｕｍａｂ ｏｚｏｇａｍｉｃｉｎ）及びイノツズマブ オゾガマイシン（ｉｎｏｔｕｚｕｍａｂ ｏｚｏｇａｍｉｃｉｎ）は、抗体部分が、それぞれ、ＣＤ３３、ＣＤ２２を標的とし、サシツズマブ ゴビテカン（ｓａｃｉｔｕｚｕｍａｂ ｇｏｖｉｔｅｃａｎ）は抗体部分がＴＲＯＰ２を標的とする。細胞傷害性薬物部分としては、ブレンツキシマブ ベドチン、ポラツズマブ ベドチン及びエンホルツマブ ベドチンは微小管に作用するアウリスタチン類（ａｕｒｉｓｔａｔｉｎｓ）毒素分子を採用し、トラスツズマブ エムタンシンは微小管に作用するメイタンシノイド類（ｍａｙｔａｎｓｉｎｏｉｄ）毒素分子を採用し、ゲムツズマブ オゾガマイシン及びイノツズマブ オゾガマイシンはＤＮＡに作用するカリケアミシン類（ｃａｌｉｃｈｅａｍｉｃｉｎｓ）毒素分子を採用し、新たに発売されるトラスツズマブ デルクステカン及びサシツズマブ ゴビテカンはいずれもカンプトテシン類毒素分子を採用している。中間リンカー部分としては、トラスツズマブ エムタンシンは非切断可能なリンカーを採用し、前記ＡＤＣ薬の他の７つはいずれも切断可能なリンカーを採用している。
カンプトテシン（Ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ、ＣＰＴ）類似体及び誘導体はトポイソメラーゼＩに結合することによって抗腫瘍活性を発揮し、多くのタイプの腫瘍に対して明らかな活性を示している。ＣＰＴの水溶性が悪い欠点を克服するために、様々なＣＰＴ誘導体を合成している研究者はいる。そのうち、塩酸イリノテカン（ＣＰＴ－１１）は水溶性プロドラッグで、転移性の結腸・直腸がんの治療のための使用が承認されている。しかし、ＣＰＴ－１１は生体内でその活性形態ＳＮ－３８（式Ｉ）に変換されるのにカルボキシルエステラーゼによって触媒されなければならず、当該変換は効率が極めて低く、ＳＮ３８自体は溶解性が悪いため、薬物になりにくい。エキサテカン（式ＩＩ）（英語一般名：ｅｘａｔｅｃａｎ）はもう１つの水溶性ＣＰＴ誘導体であり、抗腫瘍薬としての開発が行われていたが、開発は２００４年に終了した。これは酵素による活性化を必要とせず、イリノテカンの有効性の由来であるＳＮ－３８と比べて、エキサテカンの方がトポイソメラーゼＩへの阻害活性はより強い。
Figure 2023537051000002
ＡＤＣ薬は細胞傷害性低分子の高い効果と抗体の特定の腫瘍細胞に対する高い選択性という２つの利点を組み合わせている。当面、より多くの適応症に対する効果的で低毒性のＡＤＣ薬を開発することがなおも必要である。
本願の一態様において、重水素修飾を含む抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物を提供し、具体的には、リンカー又は細胞傷害性薬物部分の重水素修飾に関する。
本願の一態様において、一般式Ａｂ－（Ｌ－Ｕ）ｎを有する抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物を提供し、式中、Ａｂは抗体部分を表し、Ｌはリンカー部分を表し、Ｕは細胞傷害性薬物部分を表し、ｎは１～１０の整数又は小数から選ばれる。
本願の一態様において、一般式Ａｂ－（Ｌ－Ｕ）ｎを有する抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物を提供し、ここで、Ａｂ（抗体部分）は腫瘍抗原（腫瘍特異的抗原及び腫瘍関連抗原を含む）に特異的に結合することができ、腫瘍抗原は当分野で知られているいずれの腫瘍を予防又は治療する標的から選ばれてもよく、例えば、ＨＥＲ２、ＥＧＦＲ、ＣＤ２０、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ４７、ＣＤ７９ｂ、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦＲ、ＭＥＴ、ＲＥＴ、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１などから選ばれてもよい。
本願のいくつかの実施形態において、一般式Ａｂ－（Ｌ－Ｕ）ｎを有する抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物を提供し、ここで、Ａｂ（抗体部分）は修飾されたものであってもよく、例えば、１つ又は複数のアミノ酸の変更、増加又は減少を含む。
本願のいくつかの実施形態において、一般式Ａｂ－（Ｌ－Ｕ）ｎを有する抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物を提供し、ここで、抗体部分ＡｂはＨＥＲ２に特異的に結合できる抗体である。
いくつかの実施形態において、本願によって提供されるＡｂ－（Ｌ－Ｕ）ｎを一般式とする抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物の抗体部分Ａｂはトラスツズマブであり、下表Ｓ１に示される配列を有する。
Figure 2023537051000003
いくつかの実施形態において、本願によって提供されるＡｂ－（Ｌ－Ｕ）ｎを一般式とする抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物の抗体部分Ａｂはペルツズマブであり、下表Ｓ２に示される配列を有する。
Figure 2023537051000004
本願のいくつかの実施形態において、一般式Ａｂ－（Ｌ－Ｕ）ｎを有する抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物を提供し、ここで、抗体部分ＡｂはＨＥＲ２発現細胞上のＨＥＲ２のＥＣＤ４エピトープに特異的に結合する一価の第１抗原結合フラグメントを含み、前記第１抗原結合フラグメントはＶＨ及びＶＬを含むｓｃＦｖであり、前記ＶＨはＫ３０変異を有し、且つ／又は前記ＶＬはＦ５３変異を有する。いくつかの
実施形態において、前記ＶＨの配列中の３０位のアミノ酸はＫから酸性アミノ酸に、例えばＥに変異している。いくつかの実施形態において、前記ＶＬの配列中の５３位のアミノ酸はＦから中性アミノ酸又は塩基性アミノ酸に、例えば、Ｙ、Ａ、Ｒに変異している。例えば、ｓｃＦｖは配列番号１に示されるアミノ酸配列にＫ３０変異及び／又はＦ５３変異を有する配列を含んでもよく又はそれであってもよい。
本願の一態様において、一般式Ａｂ－（Ｌ－Ｕ）ｎを有する抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物を提供し、ここで、抗体部分ＡｂはＨＥＲ２発現細胞上のＨＥＲ２のＥＣＤ４エピトープに特異的に結合する一価の第１抗原結合フラグメントを含み、前記第１抗原結合フラグメントはｓｃＦｖであり、前記第１抗原結合フラグメントは重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２、重鎖ＣＤＲ３、軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２、軽鎖ＣＤＲ３を含み、前記重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２、重鎖ＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号２７、２８、２９に示されるアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２、軽鎖ＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号３０、３４、３２に示されるアミノ酸配列を含み、ここで、配列番号２７に示される配列はＧＦＮＩＸ２ＤＴＹＩＨで、Ｘ２はＫ又はＥであり、配列番号３４に示される配列はＳＡＳＸ１ＬＹＳで、Ｘ１はＦ又はＹである。
本願の一態様において、一般式Ａｂ－（Ｌ－Ｕ）ｎを有する抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物を提供し、ここで、抗体部分ＡｂはＨＥＲ２発現細胞上のＨＥＲ２のＥＣＤ４エピトープに特異的に結合する一価の第１抗原結合フラグメントを含み、前記第１抗原結合フラグメントはｓｃＦｖであり、前記第１抗原結合フラグメントは重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２、重鎖ＣＤＲ３、軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２、軽鎖ＣＤＲ３を含み、前記重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２、重鎖ＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号４３、２８、２９に示されるアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２、軽鎖ＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号３０、３１、３２に示されるアミノ酸配列を含む。
本願の一態様において、一般式Ａｂ－（Ｌ－Ｕ）ｎを有する抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物を提供し、ここで、抗体部分ＡｂはＨＥＲ２発現細胞上のＨＥＲ２のＥＣＤ４エピトープに特異的に結合する一価の第１抗原結合フラグメントを含み、前記第１抗原結合フラグメントはｓｃＦｖであり且つ以下から選ばれる。
ｉ．前記第１抗原結合フラグメントは重鎖可変領域、軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域、軽鎖可変領域は、それぞれ、配列番号４１、４２に示されるアミノ酸配列を含み、又は、
ｉｉ．前記第１抗原結合フラグメントは重鎖可変領域、軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域、軽鎖可変領域は、それぞれ、配列番号４１、４２に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、
ここで、配列番号４１に示される配列は、ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＮＩＸ２ＤＴＹＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＲＩＹＰＴＮＧＹＴＲＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＳＲＷＧＧＤＧＦＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳで、Ｘ２はＫ又はＥであり、
配列番号４２に示される配列は、ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＶＮＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＸ１ＬＹＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＲＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＨＹＴＴＰＰＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫで、Ｘ１はＦ又はＹである。
本願の一態様において、一般式Ａｂ－（Ｌ－Ｕ）ｎを有する抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物を提供し、ここで、抗体部分ＡｂはＨＥＲ２発現細胞上のＨＥＲ２のＥＣＤ４エピトープに特異的に結合する一価の第１抗原結合フラグメントを含み、前記第１抗原結合フラグメントはｓｃＦｖであり、前記第１抗原結合フラグメントは重鎖可変領域、軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域、軽鎖可変領域は、それぞれ、
配列番号３５、３６に示されるアミノ酸配列を含む。
本願の一態様において、一般式Ａｂ－（Ｌ－Ｕ）ｎを有する抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物を提供し、ここで、抗体部分ＡｂはＨＥＲ２発現細胞上のＨＥＲ２のＥＣＤ４エピトープに特異的に結合する一価の第１抗原結合フラグメントを含み、前記第１抗原結合フラグメントはｓｃＦｖであり、前記第１抗原結合フラグメントのＶＨ及びＶＬは、Ｎ末端からＣ末端まで、ＶＨ－リンカー－ＶＬの順に配置される。
本願の一態様において、一般式Ａｂ－（Ｌ－Ｕ）ｎを有する抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物を提供し、ここで、抗体部分ＡｂはＨＥＲ２発現細胞上のＨＥＲ２のＥＣＤ２エピトープに特異的に結合する一価の第２抗原結合フラグメントをさらに含み、前記第２抗原結合フラグメントはＦａｂである。
本願の一態様において、一般式Ａｂ－（Ｌ－Ｕ）ｎを有する抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物を提供し、ここで、抗体部分ＡｂはＨＥＲ２発現細胞上のＨＥＲ２のＥＣＤ２エピトープに特異的に結合する一価の第２抗原結合フラグメントをさらに含み、前記第２抗原結合フラグメントはＦａｂであり且つ重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２、重鎖ＣＤＲ３、軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２、軽鎖ＣＤＲ３を含み、前記重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２、重鎖ＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号４５、４６、４７に示されるアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２、軽鎖ＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号４８、４９、５０に示されるアミノ酸配列を含む。
本願の一態様において、一般式Ａｂ－（Ｌ－Ｕ）ｎを有する抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物を提供し、ここで、抗体部分ＡｂはＨＥＲ２発現細胞上のＨＥＲ２のＥＣＤ２エピトープに特異的に結合する一価の第２抗原結合フラグメントをさらに含み、前記第２抗原結合フラグメントはＦａｂであり且つ重鎖可変領域、軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域、軽鎖可変領域は、それぞれ、配列番号３７、３８に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの特定の実施形態において、本願によって提供されるＡｂ－（Ｌ－Ｕ）ｎを一般式とする抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物の抗体部分Ａｂは表Ｓ３に示されるとおりである。
Figure 2023537051000005
本願の一態様において、一般式Ａｂ－（Ｌ－Ｕ）ｎを有する抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物を提供し、ここで、抗体部分Ａｂは第１抗原結合フラグメント及び／又は第２抗原結合フラグメントに作動可能に連結される免疫グロブリン機能ドメインを含み、前記免疫グロブリン機能ドメインは、ｉ．ＣＬ、ＣＨ１、ＣＨ２、若しくはＣＨ３の１つ若しくは複数、又はｉｉ．Ｆｃを含む。
本願の一態様において、一般式Ａｂ－（Ｌ－Ｕ）ｎを有する抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物を提供し、ここで、抗体部分Ａｂは第１抗原結合フラグメント及び／又は第２抗原結合フラグメントに作動可能に連結される免疫グロブリン機能ドメインを含み、前記免疫グロブリン機能ドメインは、ｉ．ＣＬ、ＣＨ１、ＣＨ２、若しくはＣＨ３の１つ若しくは複数、又はｉｉ．Ｆｃを含み、ここで、前記ＣＬ、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、Ｆｃは、それぞれ、ヒトＩｇＧのＣＬ、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、Ｆｃから誘導される。
本願の一態様において、一般式Ａｂ－（Ｌ－Ｕ）ｎを有する抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物を提供し、ここで、抗体部分Ａｂは第１抗原結合フラグメント及び／又は第２抗原結合フラグメントに作動可能に連結される免疫グロブリン機能ドメインを含み、前記免疫グロブリン機能ドメインは、ｉ．ＣＬ、ＣＨ１、ＣＨ２、若しくはＣＨ３の１つ若しくは複数、又はｉｉ．Ｆｃを含み、ここで、前記ＣＬ、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３又はＦｃは修飾を有し又は修飾を有さず、好ましくは、前記ＣＨ３又はＦｃの有する修飾が、例えば、Ｋａｂａｔナンバリングに基づく４３５位及び／又は４３６位のアミノ酸の置換である。
本願の一態様において、一般式Ａｂ－（Ｌ－Ｕ）ｎを有する抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物を提供し、ここで、抗体部分Ａｂは第１抗原結合フラグメント及び／又は第２抗原結合フラグメントに作動可能に連結される免疫グロブリン機能ドメインを含み、前記免疫グロブリン機能ドメインは、ｉ．ＣＬ、ＣＨ１、ＣＨ２、若しくはＣＨ３の１つ若しくは複数、又はｉｉ．Ｆｃを含み、ここで、前記Ｆｃは第１Ｆｃポリペプチド及び第２Ｆｃポリペプチドを含む二量体Ｆｃであり、第１抗原結合フラグメントは第１Ｆｃポリペプチドに作動可能に連結され、第２抗原結合フラグメントは第２Ｆｃポリペプチドに作動可能に連結される。
本願の一態様において、一般式Ａｂ－（Ｌ－Ｕ）ｎを有する抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物を提供し、ここで、抗体部分Ａｂは第１抗原結合フラグメント及び／又は第２抗原結合フラグメントに作動可能に連結される定常領域を含み、前記定常領域は免疫グロブリンの天然配列の定常領域又は変異する定常領域であってもよく、例えば、天然の又は変異するＣＬ、ＣＨ１、ＣＨ２及び／又はＣＨ３機能ドメインの１つ又は複数であり、いくつかの例において、それらの機能ドメインは当分野の通常の方式によって作動可能に連結され、定常領域はヒト免疫グロブリンの定常領域に由来してもよく、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４に由来し、いくつかの例において、定常領域はエフェクター機能を媒介する能力を改善するための修飾を有してもよい。
本願の一態様において、一般式Ａｂ－（Ｌ－Ｕ）ｎを有する抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物を提供し、ここで、抗体部分Ａｂは、第１抗原結合フラグメント及び／又は第２抗原結合フラグメントに作動可能に連結される免疫グロブリン機能ドメイン又はフレームワークであって、例えば、Ｆｃを含み、当該用語Ｆｃには天然配列のＦｃ領域及び変異体Ｆｃ領域が含まれており、Ｆｃは、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４に由来するヒトＦｃであってもよく、Ｆｃはエフェクター機能を媒介する能力を改善するための修飾を有してもよく、例えば、いくつかの実施形態において、前記フレームワークは、ノブ・イントゥ・ホール（ｋｎｏｂ ｉｎｔｏ ｈｏｌｅ）
、Ｈ４３５Ｒ、Ｙ４３６Ｆ、脱フコース化などの修飾を有し、いくつかの実施形態において、前記フレームワークのノブ・イントゥ・ホールの変異部位は、例えば、Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗなどを含む。
本願の一態様において、一般式Ａｂ－（Ｌ－Ｕ）ｎを有する抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物を提供し、ここで、抗体部分Ａｂは第１抗原結合フラグメント及び／又は第２抗原結合フラグメントに作動可能に連結されるフレームワークを含み、いくつかの実施形態において、前記フレームワークは第１Ｆｃポリペプチド及び第２Ｆｃポリペプチドを含む二量体Ｆｃであり、いくつかの実施形態において、前記二量体Ｆｃは修飾を有し、いくつかの実施形態において、二量体ＦｃはＨ４３５Ｒ及び／又はＹ４３６Ｆを有し、当該修飾は第１Ｆｃポリペプチド、第２Ｆｃポリペプチドのいずれかのポリペプチド鎖に位置してもよく、いくつかの特定の実施形態において、二量体ＦｃはＨ４３５Ｒ及び／又はＹ４３６Ｆを有し、当該修飾は一方のＦｃポリペプチドだけに起こり、他方のＦｃポリペプチドには起こらず、いくつかの実施形態において、二量体Ｆｃはノブ・イントゥ・ホール変異部位であって、例えば、Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗなどを有し、いくつかの実施形態において、二量体Ｆｃの一方の鎖はＴ３６６Ｗ及び／又はＳ３５４Ｃを有し、且つ他方の鎖はＹ４０７Ｖ、Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ又は／及びＬ３６８Ａを有する。
本願の一態様において、一般式Ａｂ－（Ｌ－Ｕ）ｎを有する抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物を提供し、ここで、抗体部分Ａｂは二価二重特異性抗体であり、配列番号１１の配列を含む重鎖、配列番号１３の配列を含む重鎖、配列番号１５の配列を含む軽鎖を含む。
いくつかの特定の実施形態において、本願によって提供されるＡｂ－（Ｌ－Ｕ）ｎを一般式とする抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物の抗体部分Ａｂは表Ｓ４に示されるとおりである。
Figure 2023537051000006
Figure 2023537051000007
Figure 2023537051000008
Figure 2023537051000009
本願の一態様において、Ａｂ－（Ｌ－Ｕ）ｎを一般式とする抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物を提供し、ここで、細胞傷害性薬物部分Ｕと抗体部分Ａｂはリンカー部分Ｌによって複合される。本願でリンカー部分Ｌは当分野で知られているいずれの方法で抗体部分に連結させることができ、好ましくは、リンカー部分をメルカプト基及び／又はアミノ基によって抗体部分に連結させる。本願のいくつかのより好ましい実施形態において、リンカー部分はメルカプト基によって抗体部分に連結させる。
本願の一態様において、Ａｂ－（Ｌ－Ｕ）ｎを一般式とする抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物を提供し、ここで、細胞傷害性薬物部分Ｕと抗体部分Ａｂはリンカー部分Ｌによって複合されており、前記リンカー部分は切断可能なリンカー又は非切断可能なリンカーであってもよく、本願のいくつかの実施形態において、リンカー部分は切断可能なリンカーであり、例えば、低ｐＨ分解型（ヒドラゾン結合、カーボネート結合などを含む）、プロテアーゼ分解型（ペプチド結合を含む）又は高グルタチオン濃度分解型（ジスルフィド結合を含む）などであってもよく、また、本願のいくつかの実施形態において、リンカー部分は非切断可能なリンカーであり、例えば、マレイミドカプロイル基などであってもよい。
本願の一態様において、Ａｂ－（Ｌ－Ｕ）ｎを一般式とする抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物を提供し、ここで、抗体部分Ａｂは１つ又は複数の細胞傷害性薬物部分Ｕに複合されており、細胞傷害性薬物は、例えば、アルカロイド類、代謝拮抗剤、抗腫瘍性抗生物質、アルキル化剤類、白金類などから選ばれてもよく、細胞傷害性薬物として好ましいのは微小管阻害剤類細胞傷害性薬物（メイタンシノイド類、アウリスタチン類を含む）又はＤＮＡに作用する細胞傷害性薬物（カリケアミシン類、デュオカルマイシン（ｄｕｏｃａｒｍｙｃｉｎ）類、ＰＢＤ（ピロロベンゾジアゼピン、ｐｙｒｒｏｌｏｂｅｎｚｏｄｉａｚｅｐｉｎｅ）類、トポイソメラーゼＩ阻害剤類などを含む）である。
いくつかの特定の実施形態において、本願によって提供されるＡｂ－（Ｌ－Ｕ）ｎを一般式とする抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物の細胞傷害性薬物部分Ｕは、トポイソメラーゼＩ阻害剤である。
いくつかの特定の実施形態において、本願によって提供されるＡｂ－（Ｌ－Ｕ）ｎを一般式とする抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物の細胞傷害性薬物部分Ｕは、カンプトテシン類トポイソメラーゼＩ阻害剤である。
いくつかの特定の好ましい実施形態において、本願によって提供されるＡｂ－（Ｌ－Ｕ）ｎを一般式とする抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物の細胞傷害性薬物部分Ｕは、ＳＮ－３８、ＳＮ－３８誘導体、エキサテカン又はエキサテカン誘導体から選ばれる。
本願のいくつかの実施形態において、一般式Ａｂ－（Ｌ－Ｕ）ｎを有する抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物を提供し、式中、Ａｂは抗体部分を表し、Ｌはリンカー部分を表し、Ｕはカンプトテシン類トポイソメラーゼＩ阻害剤を表し、ｎは１～１０の整数又は小数から選ばれ、ここで、Ｌ部分及び／又はＵ部分には重水素修飾が存在する。いくつかの実施形態において、ｎは、２～１０の整数若しくは小数であって、例えば、２～９の整数若しくは小数、２～８の整数若しくは小数、３～９の整数若しくは小数、３～８の整数若しくは小数、４～９の整数若しくは小数、４～８の整数若しくは小数、５～９の整数若しくは小数又は５～８の整数若しくは小数から選ばれる。
本願のいくつかの実施形態において、一般式Ａｂ－（Ｌ－Ｕ）ｎを有する抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物を提供し、式中、Ａｂは抗体部分を表し、Ｌはリンカー部分を表し、Ｕはカンプトテシン類トポイソメラーゼＩ阻害剤を表し、ｎは１～１０の整数又は小数から選ばれ、ここで、Ｌ部分及び／又はＵ部分には重水素修飾が存在し、且つ細胞傷害性薬物部分ＵはＳＮ－３８、ＳＮ－３８誘導体、エキサテカン又はエキサテカン誘導体から選ばれる。
いくつかの実施形態において、本願によって提供されるＡｂ－（Ｌ－Ｕ）ｎを一般式とする抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物は、以下の式ＩＩＩに示される構造を含む。
Figure 2023537051000010
いくつかの実施形態において、本願によって提供されるＡｂ－（Ｌ－Ｕ）ｎを一般式とする抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物は、以下の式ＩＶに示される構造を含み、
Figure 2023537051000011
式中、Ｒ１は水素（Ｈ）又は重水素（Ｄ）から選ばれる。
いくつかの実施形態において、本願によって提供されるＡｂ－（Ｌ－Ｕ）ｎを一般式とする抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物は、以下の式ＩＶ－１又はＩＶ－２に示される構造を含む。
Figure 2023537051000012
いくつかの実施形態において、本願によって提供されるＡｂ－（Ｌ－Ｕ）ｎを一般式とする抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物は、以下の式Ｖに示される構造を含み、
Figure 2023537051000013
式中、Ｒ１、Ｒ２は、それぞれ独立して水素（Ｈ）又は重水素（Ｄ）から選ばれ、
且つ、当該構造の左側のスクシンイミド末端は抗体部分への連結部位であり、右側のカルボニル末端は細胞傷害性薬物部分への連結部位である。
いくつかの実施形態において、本願によって提供されるＡｂ－（Ｌ－Ｕ）ｎを一般式とする抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物は、以下の式Ｖ－１、Ｖ－２、Ｖ－３又はＶ－４に示される構造を含み、且つ式Ｖ－１～Ｖ－４に示される構造は、それぞれ、左側のスクシンイミド末端で抗体部分に連結され、右側のカルボニル末端で細胞傷害性薬物部分に連結される。
Figure 2023537051000014
いくつかの実施形態において、本願によって提供されるＡｂ－（Ｌ－Ｕ）ｎを一般式とする抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物は、以下の式ＶＩに示される構造を含み、
Figure 2023537051000015
式中、Ｒ１、Ｒ２は、それぞれ、独立して水素（Ｈ）又は重水素（Ｄ）から選ばれる。
いくつかの実施形態において、本願によって提供されるＡｂ－（Ｌ－Ｕ）ｎを一般式とする抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物は、以下の式ＶＩ－１、ＶＩ－２、ＶＩ－３又はＶＩ－４に示される構造を含む。
Figure 2023537051000016
Figure 2023537051000017
Figure 2023537051000018
Figure 2023537051000019
本願のいくつかの特定の実施形態において、式ＶＩＩに示される構造を有する抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物を提供し、
Figure 2023537051000020
ここで、
Ａｂは、抗体部分を表し、第１抗原結合フラグメント及び第２抗原結合フラグメントを含み、前記第１抗原結合フラグメントはｓｃＦｖであり且つ重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２、重鎖ＣＤＲ３、軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２、軽鎖ＣＤＲ３を含み、前記重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２、重鎖ＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号４３、２８、２９のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２、軽鎖ＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号３０、３１、３２のアミノ酸配列を含み、
前記第２抗原結合フラグメントはＦａｂであり且つ重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２、重鎖ＣＤＲ３、軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２、軽鎖ＣＤＲ３を含み、前記重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２、重鎖ＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号４５、４６、４７のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２、軽鎖ＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号４８、４９、５０のアミノ酸配列を含み、
ｎは１～１０の整数又は小数から選ばれ、
Ｒ１、Ｒ２は、それぞれ、独立して水素（Ｈ）又は重水素（Ｄ）から選ばれる。
本願のいくつかの特定の実施形態において、以下の式ＶＩＩ－１、ＶＩＩ－２、ＶＩＩ－３又はＶＩＩ－４に示される構造を有する抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物を提供し、
Figure 2023537051000021
Figure 2023537051000022
Figure 2023537051000023
Figure 2023537051000024
ここで、
Ａｂは、抗体部分を表し、第１抗原結合フラグメント及び第２抗原結合フラグメントを含み、前記第１抗原結合フラグメントはｓｃＦｖであり且つ重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２、重鎖ＣＤＲ３、軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２、軽鎖ＣＤＲ３を含み、前記重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２、重鎖ＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号４３、２８、２９のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２、軽鎖ＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号３０、３１、３２のアミノ酸配列を含み、
前記第２抗原結合フラグメントはＦａｂであり且つ重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２、重鎖ＣＤＲ３、軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２、軽鎖ＣＤＲ３を含み、前記重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２、重鎖ＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号４５、４６、４７のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２、軽鎖ＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号４８、４９、５０のアミノ酸配列を含み、
ｎは１～１０の整数又は小数から選ばれる。
本願の特定の一実施形態において、式ＶＩＩ－１に示される構造を有する抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物を提供し、
Figure 2023537051000025
ここで、
Ａｂは、抗体部分を表し、第１抗原結合フラグメント及び第２抗原結合フラグメントを含み、前記第１抗原結合フラグメントはｓｃＦｖであり且つ重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２、重鎖ＣＤＲ３、軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２、軽鎖ＣＤＲ３を含み、前記重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２、重鎖ＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号４３、２８、２９のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２、軽鎖ＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号３０、３１、３２のアミノ酸配列を含み、
前記第２抗原結合フラグメントはＦａｂであり且つ重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２、重鎖ＣＤＲ３、軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２、軽鎖ＣＤＲ３を含み、前記重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２、重鎖ＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号４５、４６、４７のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２、軽鎖ＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号４８、４９、５０のアミノ酸配列を含み、
ｎは１～１０の整数又は小数から選ばれる。
本願の特定の一実施形態において、式ＶＩＩに示される構造を有する抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物を提供し、
Figure 2023537051000026
ここで、
Ａｂはトラスツズマブであり、
ｎは１～１０の整数又は小数から選ばれ、
Ｒ１、Ｒ２は、それぞれ、独立して水素（Ｈ）又は重水素（Ｄ）から選ばれる。
本願の特定の一実施形態において、式ＶＩＩ－１に示される構造を有する抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物を提供し、
Figure 2023537051000027
ここで、
Ａｂはトラスツズマブであり、
ｎは１～１０の整数又は小数から選ばれる。
本願の一態様において、本願に係る抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物と、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物を提供する。
本願の一態様において、がんを予防又は治療するための薬物の製造における本願の抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物の用途を提供する。
本願の一態様において、がんを予防又は治療するための薬物の製造における本願の抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物と薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物の用途を提供する。
本願の一態様において、がんを予防又は治療するための抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物を提供する。
本願の一態様において、治療有効量の本願の抗体薬物複合体若しくは薬学的に許容されるその塩若しくは溶媒和物、又は本願の抗体薬物複合体若しくは薬学的に許容されるその塩若しくは溶媒和物と薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物を必要とする患者に投与することを含む、がんの治療又は予防方法を提供する。
いくつかの実施形態において、本願の抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物は、ＨＥＲ２陽性がん、ＨＥＲ２陰性がん（トリプルネガティブ乳がんを含む）及び免疫組織化学法で検出してＨＥＲ２発現はＩＨＣ２＋であると表示されるがんを予防又は治療するために使用することができる。
本願のいくつかの態様において、抗体と中間体化合物を連結させる抗体薬物複合体を得るためのものとして、以下の式ＶＩに示される構造を有するリンカー－薬物中間体化合物を提供し、
Figure 2023537051000028
式中、Ｒ１、Ｒ２は、それぞれ、独立して水素（Ｈ）又は重水素（Ｄ）から選ばれる。
本願のいくつかの態様において、抗体と中間体化合物を連結させる抗体薬物複合体を得るためのものとして、以下の式ＶＩ－１、ＶＩ－２、ＶＩ－３又はＶＩ－４に示される構造を有するリンカー－薬物中間体化合物を提供する。
Figure 2023537051000029
Figure 2023537051000030
Figure 2023537051000031
Figure 2023537051000032
本願のいくつかの態様において、リンカーを介して薬物と抗体を連結させる抗体薬物複合体を得るためのものとして、以下の式Ｖに示される構造を有するリンカー化合物を提供
し、
Figure 2023537051000033
ここで、Ｒ１、Ｒ２は、それぞれ独立して水素（Ｈ）又は重水素（Ｄ）から選ばれ、
且つ、当該構造の左側のスクシンイミド末端は抗体部分への連結部位であり、右側のカルボニル末端は細胞傷害性薬物部分への連結部位である。
本願のいくつかの態様において、リンカーを介して薬物と抗体を連結させる抗体薬物複合体を得るためのものとして、以下の式Ｖ－１、Ｖ－２、Ｖ－３又はＶ－４に示される構造を有するリンカー化合物を提供し、ここで、式Ｖ－１～Ｖ－４に示される構造は、それぞれ、左側のスクシンイミド末端で抗体部分に連結され、右側のカルボニル末端で細胞傷害性薬物部分に連結される。
Figure 2023537051000034
Figure 2023537051000035
Figure 2023537051000036
Figure 2023537051000037
本願のいくつかの態様において、以下の式ＩＶ（ａ）に示される構造を有する化合物を提供し、
Figure 2023537051000038

式中、Ｒ１は水素（Ｈ）又は重水素（Ｄ）から選ばれる。
本願のいくつかの態様において、以下の式ＩＶ（ａ）－１又はＩＶ（ａ）－２に示される構造を有する化合物を提供する。
Figure 2023537051000039
Figure 2023537051000040
本願のいくつかの態様において、以下の式ＩＩＩ（ａ）に示される構造を有する化合物を提供する。
Figure 2023537051000041
本願は、薬物動態特性が改善された抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物を提供する。薬物動態特性の改善は、目的化合物の毒性低減、安全性及び／又は忍容性の向上、有効性の向上をもたらし、そして最終的に治療可能時間域／治療濃度域の改善につながる。
図１は、抗ＨＥＲ２二重特異性抗体（Ｅｘｐｉ ＨＥＲ２－１、Ｅｘｐｉ ＨＥＲ２－２、２３Ｃ２ ＨＥＲ２－１及び２３Ｃ２ ＨＥＲ２－２）及びトラスツズマブ＋ペルツズマブ併用のＢＴ４７４腫瘍細胞に対する殺傷率である。 図２は、抗ＨＥＲ２二重特異性抗体、トラスツズマブ、Ｔ－ＤＭ１、及びトラスツズマブ＋ペルツズマブ併用のＮＣＩ－Ｎ８７腫瘍細胞に対する殺傷率である。 図３は、抗ＨＥＲ２二重特異性抗体、トラスツズマブ、Ｔ－ＤＭ１、及びトラスツズマブ＋ペルツズマブ併用のＪＩＭＴ－１腫瘍細胞に対する殺傷率である。 図４は、抗ＨＥＲ２二重特異性抗体、トラスツズマブ、及びトラスツズマブ＋ペルツズマブ併用のＢＴ４７４腫瘍細胞に対する増殖阻害の結果である。 図５は、抗ＨＥＲ２二重特異性抗体、ＰＢＳ溶媒対照、及びトラスツズマブ＋ペルツズマブ（Ｐｅｒ＋Ｔｒａ）併用の胃がんＮ８７マウス異種腫瘍移植モデルのマウス腫瘍の体積変化に対する影響である。 図６は、抗ＨＥＲ２二重特異性抗体、ＰＢＳ溶媒対照、及びトラスツズマブ＋ペルツズマブ併用の胃がんＮ８７マウス異種腫瘍への有効性におけるマウスの体重変化に対する影響である。 図７は、いくつかの例示的な抗ＨＥＲ２二重特異性抗体の構造であり、ここで、１つの黒い鎖（第１Ｆｃポリペプチド）及びもう１つの灰色の鎖（第２Ｆｃポリペプチド）で二量体Ｆｃを表し、１つの抗原結合ドメイン（第１抗原結合フラグメント）は斜線塗りつぶしで表示され、もう１つの抗原結合ドメイン（第２抗原結合フラグメント）は白く表示され、第１抗原結合フラグメントは第１Ｆｃポリペプチドに融合されるｓｃＦｖであり、第２抗原結合フラグメントは第２Ｆｃポリペプチドに融合されるＦａｂである。 図８は、異なる抗体による薬物複合体（モノクローナル抗体－ＤＤＤＸＤ及び二重特異性抗体－ＤＤＤＸＤ）のＮＣＩ－Ｎ８７腫瘍細胞におけるエンドサイトーシス活性である。 図９は、異なる抗体による薬物複合体（モノクローナル抗体－ＤＤＤＸＤ及び二重特異性抗体－ＤＤＤＸＤ）のＳＫ－ＢＲ－３腫瘍細胞におけるエンドサイトーシス活性である。
「解釈と定義」
特に説明がない限り、本願で使用される下記の用語は以下の意味を有する。特定の用語は、特に定義がなければ、確定しない又は不明瞭なものとしてではなく、当分野の通常の意味で理解される。例えば、Ｓｉｎｇｌｅｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ
ｏｆ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ２ｎｄ ｅｄ．，Ｊ．Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ（Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ １９９４）；Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇｓ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇｓ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ １９８９）；Ｄａｖｉｓ ｅｔ ａｌ．，Ｂａｓｉｃ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＵＳＡ（２０１２）；Ａｂｂａｓ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌｕｌａｒ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｃｉｅｎｃｅ ｄｉｖ（２００９）；何維ら，医学免疫学（第２版），人民衛生出版社，２０１０年 を参照する。本明細書で商品名が記載された場合、対応する商品又はその有効成分を指す。
用語「置換された」とは、特定の原子の原子価が正常であり、且つ置換後の化合物が安定的なものでさえあれば、当該原子上のいずれの又は複数の水素原子が置換基によって置換されることを指す。置換基が酸素置換（＝Ｏ）である場合は、２個の水素原子が置換される。酸素置換はアリール基には起こらない。
用語「任意の」又は「任意に」は、続いて記載される事項又は状況は生じる可能性はあるが、必ずしも生じるとは限らないことを指し、当該表現には事項又は状況が生じる場合及び当該事項又は状況が生じない場合が含まれる。ある基「任意に置換される」とは、当該基は置換されてもよいし又は置換されなくてもよいことを指す。例えば、エチル基が「任意に」ハロゲンによって置換されることは、エチル基は置換されなくてもよいし（ＣＨ２ＣＨ３）、単置換されてもよいし（例えば、ＣＨ２ＣＨ２Ｆ）、多置換されてもよいし（例えば、ＣＨＦＣＨ２Ｆ、ＣＨ２ＣＨＦ２など）又は完全に置換されてもよい（ＣＦ２ＣＦ３）。当業者が理解しているように、１個又は複数の置換基を含む基には、空間的には存在し得ない且つ／又は合成できない置換又は置換形態が認められない。
本明細書で「Ｃｍ～ｎ」とは、当該部分は指定した範囲の整数の炭素原子を有することである。例えば「Ｃ１～６」とは、対象基が１個の炭素原子、２個の炭素原子、３個の炭
素原子、４個の炭素原子、５個の炭素原子又は６個の炭素原子を有することを指す。
化合物の組成又は構造で特定の変数（例えば、Ｒ）が１回以上出現した場合には、出現するたびに独立して定義される。従って、例えば、対象基が２個のＲによって置換される場合に、各Ｒは独立して選択される。
特定の接続基の数が０であり、例えば、－（ＣＨ２）０－である場合は、当該接続基が共有結合であることを表す。
変数が共有結合から選ばれる場合には、それによって接続された２つの基が直接的に接続されることを表す。例えば、Ａ－Ｌ－ＺでＬが共有結合を表す場合には、当該構造は実際にＡ－Ｚであることを表す。
用語「ハロ」又は「ハロゲン」とは、フッ素、塩素、臭素及びヨウ素を指す。
用語「ヒドロキシ基」とは、－ＯＨ基を指す。
用語「シアノ基」とは、－ＣＮ基を指す。
用語「メルカプト基」とは、－ＳＨを指す。
用語「アミノ基」とは、－ＮＨ２基を指す。
用語「ニトロ基」とは、－ＮＯ２基を指す。
用語「アルキル基」とは、ＣｎＨ２ｎ＋１を一般式とする炭化水素基を指す。当該アルキル基は、直鎖のものでもよいし分岐鎖を含んでもよい。例えば、用語「Ｃ１～６アルキル基」とは、１～６個の炭素原子を含むアルキル基（例えば、メチル基、エチル基、ｎ－プロピル基、イソプロピル基、ｎ－ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ－ブチル基、ｔｅｒｔ－ブチル基、ｎ－ペンチル基、１－メチルブチル基、２－メチルブチル基、３－メチルブチル基、ネオペンチル基、ヘキシル基、２－メチルペンチル基など）を指す。同様に、アルコキシ基、アルキルアミノ基、ジアルキルアミノ基、アルキルスルホニル基及びアルキルチオ基のアルキル基（アルキル）部分には上記の定義が適用される。
用語「アルコキシ基」とは、－Ｏ－アルキル基を指す。
用語「アルキルアミノ基」とは、－ＮＨ－アルキル基を指す。
用語「ジアルキルアミノ基」とは、－Ｎ（アルキル）２基を指す。
用語「アルキルスルホニル基」とは、－ＳＯ２－アルキル基を指す。
用語「アルキルチオ基」とは、－Ｓ－アルキル基を指す。
用語「アルケニル基」とは、炭素原子及び水素原子からなる直鎖又は分岐鎖で少なくとも１つの二重結合を有する不飽和脂肪族炭化水素基を指す。アルケニル基の非限定的な例は、エテニル基、１－プロペニル基、２－プロペニル基、１－ブテニル基、イソブテニル基、１，３－ブタジエニル基を含み、ただしそれらに限定されない。
用語「アルキニル基」とは、炭素原子及び水素原子からなる直鎖又は分岐鎖で少なくと
も１つの三重結合を有する不飽和脂肪族炭化水素基を指す。アルキニル基の非限定的な例は、エチニル基（－Ｃ≡ＣＨ）、１－プロピニル基（－Ｃ≡Ｃ－ＣＨ３）、２－プロピニル基（－ＣＨ２－Ｃ≡ＣＨ）、１，３－ジアセチレニル基（－Ｃ≡Ｃ－Ｃ≡ＣＨ）などを含み、ただしそれらに限定されない。
用語「シクロアルキル基」とは、完全飽和で単環、架橋環又はスピロ環として存在し得る炭素環を指す。特に指定がない限り、当該炭素環は一般に３～１０員環である。シクロアルキル基の非限定的な例は、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基、シクロヘキシル基、ノルボルニル基（ビシクロ［２．２．１］ヘプチル基）、ビシクロ［２．２．２］オクチル基、アダマンタニル基などを含み、ただしそれらに限定されない。
用語「シクロアルケニル基」とは、非完全飽和で単環、架橋環又はスピロ環として存在し得る非芳香族炭素環を指す。特に指定がない限り、当該炭素環は一般に５～８員環である。シクロアルケニル基の非限定的な例は、シクロペンテニル基、シクロペンタジエニル基、シクロヘキセニル基、シクロヘキサジエニル基、シクロヘプテニル基、シクロヘプタジエニル基などを含み、ただしそれらに限定されない。
用語「ヘテロシクリル基」とは、完全飽和又は一部不飽和であり（ただし完全不飽和のヘテロアリール基ではない）且つ単環、架橋環又はスピロ環として存在し得る非芳香族環を指す。特に指定がない限り、当該複素環は一般に硫黄、酸素及び／又は窒素から独立して選ばれる１～３個（好ましくは１個又は２個）のヘテロ原子を含む３～７員環である。ヘテロシクリル基の非限定的な例は、オキシラニル基、テトラヒドロフリル基、ジヒドロフリル基、ピロリジニル基、Ｎ－メチルピロリジニル基、ジヒドロピロリル基、ピペリジニル基、ピペラジニル基、ピラゾリジニル基、４Ｈ－ピラニル基、モルホリニル基、チオモルホリニル基、テトラヒドロチエニル基などを含み、ただしそれらに限定されない。
用語「ヘテロシクロアルキル基」とは、単環、架橋環又はスピロ環として存在し得る完全飽和の環状基を指す。特に指定がない限り、当該複素環は一般に硫黄、酸素及び／又は窒素から独立して選ばれる１～３個（好ましくは１個又は２個）のヘテロ原子を含む３～７員環である。３員ヘテロシクロアルキル基の例は、オキシラニル基、チイラニル基、アジリジニル基を含み、ただしそれらに限定されず、４員ヘテロシクロアルキル基の非限定的な例は、アゼチジニル基、オキセタニル基、チエタニル基を含み、ただしそれらに限定されず、５員ヘテロシクロアルキル基の例は、テトラヒドロフリル基、テトラヒドロチエニル基、ピロリジニル基、イソオキサゾリジニル基、オキサゾリジニル基、イソチアゾリジニル基、チアゾリジニル基、イミダゾリジニル基、テトラヒドロピラゾリル基を含み、ただしそれらに限定されず、６員ヘテロシクロアルキル基の例は、ピペリジニル基、テトラヒドロピラニル基、テトラヒドロチオピラニル基、モルホリニル基、ピペラジニル基、１，４－チオキサニル基、１，４－ジオキサニル基、チオモルホリニル基、１，３－ジチアニル基、１，４－ジチアニル基を含み、ただしそれらに限定されず、７員ヘテロシクロアルキル基の例は、アゼパニル基、オキセパニル基、チエパニル基を含み、ただしそれらに限定されない。５個又は６個の環原子を有する単環式ヘテロシクロアルキル基であることが好ましい。
用語「アリール基」とは、共役のπ電子系を有する全炭素単環又は縮合多環の芳香族環状基を指す。例えば、アリール基は、６～２０個の炭素原子、６～１４個の炭素原子又は６～１２個の炭素原子を有する。アリール基の非限定的な例は、フェニル基、ナフチル基、アントリル基、１，２，３，４－テトラヒドロナフタレンなどを含み、ただしそれらに限定されない。
用語「ヘテロアリール基」とは、少なくとも１個の環原子がＮ、Ｏ、Ｓから選ばれ、残
りの環原子はＣであり、且つ少なくとも１つの芳香環を有する単環又は縮合多環の環系を指す。ヘテロアリール基は４～８員環、特に５～８員環を１つ、又は６～１４個、特に６～１０個の環原子を含む複数の縮合環を有することが好ましい。ヘテロアリール基の非限定的な例は、ピロリル基、フリル基、チエニル基、イミダゾリル基、オキサゾリル基、ピラゾリル基、ピリジル基、ピリミジニル基、ピラジニル基、キノリニル基、イソキノリニル基、テトラゾリル基、トリアゾリル基、トリアジニル基、ベンゾフリル基、ベンゾチエニル基、インドリル基、イソインドリル基などを含み、ただしそれらに限定されない。
「誘導体」とは、母体化合物分子の原子又は原子団が他の原子又は原子団によって置換されて形成される化合物であり、母体化合物の誘導体と呼ばれる。
本願で標識して合成される化合物のいずれの原子は特に指定がない限り、当該原子のいずれの安定的な同位体を表すことができる。構造のある位置をＨ、即ち水素（Ｈ－１）と定義するという特段の説明がない限り、当該位置は天然に存在する同位体だけを含む。同様に、構造のある位置をＤ、即ち重水素（Ｈ－２）と定義するという特段の説明がない限り、当該位置の同位体量は少なくとも天然に存在する同位体量（０．０１５％）より３３４０倍多く（即ち、少なくとも５０．１％の重水素同位体を含む）、標識して合成される化合物の構造である１つ又は複数の位置はＤ、即ち重水素（Ｈ－２）と定義される場合には、当該構造に示される化合物の含有量は少なくとも５２．５％、少なくとも６０％、少なくとも６７．５％、少なくとも７５％、少なくとも８２．５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８．５％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％であってもよい。本願で標識して合成される化合物の重水素化率とは、標識して合成されるものの同位体含有量と天然に存在する同位体量の比を指す。本願で標識して合成される化合物の各対象重水素原子の重水素化率は少なくとも３５００倍（５２．５％）、少なくとも４０００倍（６０％）、少なくとも４５００倍（６７．５％）、少なくとも５０００倍（７５％）、少なくとも５５００倍（８２．５％）、少なくとも６０００倍（９０％）、少なくとも６３３３．３倍（９５％）、少なくとも６４６６．７倍（９７％）、少なくとも６５６６．７倍（９８．５％）、少なくとも６６００倍（９９％）、少なくとも６６３３．３倍（９９．５％）であってもよい。本願では、同位体種（ｉｓｏｔｏｐｏｌｏｇｕｅｓ）とは、化学構造的には同位体構成だけが異なる化合物を指す。本願で標識して合成される化合物は同じ化学構造を有し、その分子の原子の同位体構成だけが異なる。従って、本願で標識して合成される特定の位置で重水素を含む化合物は、当該位置における水素同位体種をもわずかに含み、本願で標識して合成される化合物のある位置における水素同位体種の量は、重水素化試薬（Ｄ２Ｏ、Ｄ２、ＮａＢＤ４、ＬｉＡｌＤ４など）の重水素同位体の純度、重水素同位体導入の合成方法の有効性など多くの要因に左右される。しかし、そのようなある位置における水素同位体種の総量は４９．９％より少ない。本願で標識して合成される化合物のある位置における水素同位体種の総量は、４７．５％、４０％、３２．５％、２５％、１７．５％、１０％、５％、３％、１％又は０．５％より少ない。
本願では、重水素と指定されない各原子はその天然同位体の存在度で存在する。
用語「治療」とは、疾患又は前記疾患に関連する１つ又は複数の症状を予防、改善又は解消するために、本願に記載の化合物又は製剤を投与することを意味し、且つ、（ｉ）哺乳動物における疾患又は病状の出現を予防することであって、特に当該哺乳動物が当該病状になりやすいが、当該病状と診断されない時の予防、（ｉｉ）疾患又は病状を阻害し、即ちその進行を阻害すること、（ｉｉｉ）疾患又は病状を緩和し、即ち当該疾患又は病状を軽減させることを含む。
用語「治療有効量」とは、（ｉ）特定の疾患、病状若しくは障害を治療又は予防するこ
と、（ｉｉ）特定の疾患、病状又は障害の１つ若しくは複数の症状を軽減、改善若しくは解消すること、又は（ｉｉｉ）本明細書に記載の特定の疾患、病状若しくは障害の１つ若しくは複数の症状の発生を予防若しくは遅延させる、本願の化合物の用量を指す。本願の化合物に係る「治療有効量」は、当該化合物、病状とその重症度、投与方式及び被治療哺乳動物の年齢によって変わるものであるが、当業者はその知識と本開示の内容に基づいて決定することができる。
用語「薬学的に許容される」とは、人間又は動物の組織に接触して使用するのに適し、毒性又は刺激性はなく、アレルギー反応、その他の問題又は合併症を引き起こさないと医学的に判断され、利益対リスクが合理的である化合物、材料、組成物及び／又は剤形に対して使用される。
薬学的に許容される塩としては、例えば、金属塩、アンモニウム塩、有機塩基と形成した塩、無機酸と形成した塩、有機酸と形成した塩、塩基性又は酸性のアミノ酸と形成した塩などが挙げられる。
用語「溶媒和物」とは、化合物が溶媒分子と会合して形成される物質を指す。
用語「医薬組成物」とは、１つ又は複数の本願の化合物又はその塩と薬学的に許容される添加物からなる混合物を指す。医薬組成物は、本願の化合物を生体に投与しやすくするためのものである。
用語「薬学的に許容される添加物」とは、生体に明らかな刺激はなく、活性化合物の生物学的活性及び特性を損なわない添加物を指す。適切な添加物としての、例えば、炭水化物、ワックス、水溶性及び／又は水膨潤性ポリマー、親水性若しくは疎水性材料、ゼラチン、油、溶媒、水などは当業者に熟知される。
本願の化合物及び中間体は、異なる互変異性体の形態で存在してもよく、そのような形態が全て本願の範囲に含まれる。用語「互変異性体」又は「互変異性体形態」とは、低エネルギー障壁によって相互に変換できる、異なるエネルギーを持つ構造異性体を指す。例えば、プロトン互変異性体（プロトトロピック互変異性体とも呼ばれる）にはプロトン転移による相互変換が含まれており、例えば、ケトン－エノール異性化、イミン－エナミン異性化である。プロトン互変異性体の具体例は、プロトンが２個の環上窒素原子の間で転移できるイミダゾール部分である。原子価互変異性体には、いくつかの結合電子の組み替えによる相互変換が含まれる。
用語「抗体」は、所望の生物学的活性を備えさえすれば、完全なモノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、少なくとも２つの完全な抗体から形成される多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、多機能抗体、抗体フラグメントを含むよう、最も広い意味で使用される。
用語「ヒト化抗体」とは、非ヒト抗体に由来するＣＤＲ領域を含む抗体であって、抗体分子の他の部分は１つ又は複数のヒト抗体に由来する抗体を指す。
用語「変異体」とは、オリジナルのペプチドとは別のアミノ酸で１個又は２個又はそれ以上のアミノ酸を置き換え、１個又は２個又はそれ以上の野生型アミノ酸を欠失させ、野生型には存在しない１個又は２個又はそれ以上のアミノ酸を挿入し、且つ／又は野生型には存在しないアミノ酸を野生型のアミノ末端（Ｎ末端）及び／又はカルボキシ末端（Ｃ末端）に添加する（以下、まとめて「変異」という）ように、ペプチドのアミノ酸配列から誘導されるアミノ酸配列を含むペプチドを指す。本願では、「挿入」は「添加」に含まれ
ている。
用語「ＣＤＲ（相補性決定領域）」は、「超可変領域」とも呼ばれ、配列が高度に可変であり且つ／又は構造が限定されているループを形成する抗体可変ドメインの各領域を指す。天然のテトラボディは一般に、３つが重鎖可変領域に、３つが軽鎖可変領域に位置する６つのＣＤＲを含む。
用語「可変領域」については、抗体構造単位は２対のポリペプチド鎖によって構成され、各対は１つの重鎖及び１つの軽鎖を有し、各鎖のＮ末端ドメインにおいて限定されている約１００個から１１０個又はそれ以上のアミノ酸からなる主に抗原認識を担う領域は可変領域である。
用語「Ｆａｂ」とは、軽鎖の定常ドメイン（ＣＬ）及び重鎖の第１定常ドメイン（ＣＨ１）と、それぞれ軽鎖と重鎖に位置する可変ドメインＶＬ（軽鎖可変領域）及びＶＨ（重鎖可変領域）を含むものを指す。可変ドメインは、抗原結合に関与する相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。
用語「ｓｃＦｖ」は、抗体のＶＨ及びＶＬドメインを含み、それらのドメインが１つのポリペプチド鎖に存在する。いくつかの実施形態において、ｓｃＦｖはＶＨとＶＬドメインの間にあるポリペプチドリンカーをさらに含み、これによってｓｃＦｖは抗原結合に必要な構造を形成できる。
用語「ＥＣＤ」とは、細胞外ドメインである。ＨＥＲ受容体はヒト上皮成長因子受容体（ＨＥＲ）ファミリーに属する受容体タンパク質チロシンキナーゼであり且つＥＧＦＲ、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３及びＨＥＲ４受容体を含み、ＨＥＲ２受容体は、一般に、ＨＥＲリガンドに結合できる細胞外ドメインと、親油性膜貫通ドメインと、保存的細胞内チロシンキナーゼドメインと、いくつかのリン酸化できるチロシン残基を備えるカルボキシ末端シグナル伝達ドメインを含み、ＨＥＲ２の細胞外ドメインは、ＥＣＤ１、ＥＣＤ２、ＥＣＤ３、ＥＣＤ４の４つのドメインを含む。
用語「抗体部分」とは、抗体薬物複合体の抗体の部分を指し、一部の特定の実施形態において、特定の官能基によって中間リンカー部分に連結されており、当該抗体部分は抗原に特異的に結合できる。
用語「リンカー部分」とは、抗体薬物複合体の抗体部分と細胞傷害性薬物部分を連結させる部分を指し、切断可能なもの又は非切断可能なものであり、切断可能なリンカーとは、標的細胞内で切断されて、細胞傷害性薬物を放出できるものを指す。
用語「細胞傷害性薬物部分」とは、抗体薬物複合体の細胞傷害性薬物の部分を指し、一部の特定の実施形態において、官能基によって中間リンカー部分に連結されており、腫瘍細胞内では、細胞傷害性薬物分子を遊離させて、抗腫瘍効果を発揮する。
「トラスツズマブ」（一般名Ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ）は、ヒト上皮成長因子受容体－４（ＨＥＲ４）の細胞外部位に選択的に作用する組換えヒト化モノクローナル抗体であり、ＨＥＲ２陽性がんの治療に使用できる。その一例は、商品名ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標）で販売される治療用モノクローナル抗体製品である。
「ペルツズマブ」（一般名Ｐｅｒｔｕｚｕｍａｂ）は、ヒト上皮成長因子受容体－２（ＨＥＲ２）の細胞外部位に選択的に作用する組換えヒト化モノクローナル抗体であり、ＨＥＲ２陽性がんの治療に使用できる。
用語「ＨＥＲ２」とは、ＥＧＦＲファミリーの２番目のメンバーであり、チロシンキナーゼ活性を有する。ＨＥＲ２の発現レベルは免疫組織化学法で検出することができ、ＨＥＲ２陽性とは、ＩＨＣ３＋を指し、ＨＥＲ２陰性とは、ＩＨＣ１＋／０を指し、ＩＨＣ２＋の場合はさらにＩＳＨ検出を行って判明する必要がある。
用語「がん」とは、一般には、制御できない細胞増殖を特徴とする哺乳動物の生理学的病状を指す。
用語「トリプルネガティブ乳がん」とは、エストロゲン受容体、プロゲステロン受容体及びヒト上皮成長因子受容体２がいずれも発現陰性である乳がんを指す。
本明細書では、特に説明がない限り、用語「含む、含有（ｃｏｍｐｒｉｓｅ、ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ、ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」又は同等な用語（ｃｏｎｔａｉｎ、ｃｏｎｔａｉｎｓ、ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ、ｉｎｃｌｕｄｅ、ｉｎｃｌｕｄｅｓ、ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）は開放的な表現で、列挙されている要素、成分又はステップの他に、明記していない要素、成分又はステップを含んでもよいということを意味する。
本明細書では、特に説明がない限り、成分の量、測定値又は反応条件を表すために本明細書で用いる数字が、全ての状況において用語「約」によって修飾されると理解される。パーセントと併記される場合に、用語「約」は、例えば、±０．１％、好ましくは±０．０５％、より好ましくは±０．０１％を表すことができる。
文脈で明確な指示がない限り、単数形の用語は複数の指示対象をカバーしており、逆の場合は同じである。同様に、文脈で明確な指示がない限り、用語「又は」には「及び」の場合が含まれる。
本明細書では、配列間の同一性パーセント（相同性の程度）は、例えば、ワールド・ワイド・ウェブ（例えば、ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ）から無料で利用可能な関連のコンピューター・プログラム（例えば、デフォルトの設定を搭載しているＢＬＡＳＴｐ又はＢＬＡＳＴｎ）を用いて２つの配列を比較することで決定することができる。
次に、実施例を用いて本願を一層説明し、ただし本願の範囲は実施例に限定されない。本願で使用される試薬は一般に市販品であり、精製しなくても使用できる。
本願の実施例において使用するトラスツズマブ（Ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ）及びペルツズマブ（Ｐｅｒｔｕｚｕｍａｂ）は、いずれも、最初にベクターを構築し、真核細胞をトランスフェクションした後に精製及び発現を行うという通常の方法で製造される抗体であり、トラスツズマブの配列はＷＨＯ ＤＲＵＧ ＩＮＦＯＲＭＡＴＩＯＮ ＩＮＮ ＲＬ７８を参照し、ペルツズマブの配列はＷＯ０１００２４５の実施例の部分を参照する。ＤＳ－８２０１は第一三共による市販製剤Ｅｎｈｅｒｔｕの有効成分であり、その構造は本願において製造されるトラスツズマブ（Ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ）－ＤＸＤと同じである（構造は実施例１５を参照する）。
実施例１：抗Ｈｅｒ２ ｓｃＦｖ－Ｆｃ及びその変異体の構築、発現及び精製
抗Ｈｅｒ２ ｓｃＦｖ－Ｆｃを構築する時は、Ｆｃ部分はヒトＩｇＧ１を採用し、抗Ｈｅｒ２アーム可変領域配列はＨｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）モノクローナル抗体に基づく配列であり、設計されたリンカー１（即ち、（ＧＧＧＧＳ）３）によってＨｅｒｃｅｐ
ｔｉｎ（登録商標）モノクローナル抗体の軽鎖・重鎖可変領域をつなげて抗Ｈｅｒ２ ｓｃＦｖ－Ｆｃ（配列番号１）を形成させた。そのアミノ酸配列は次のとおりである。
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＮＩＫＤＴＹＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＲＩＹＰＴＮＧＹＴＲＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＳＲＷＧＧＤＧＦＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＶＮＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＦＬＹＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＲＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＨＹＴＴＰＰＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＧＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ。
また、抗Ｈｅｒ２ ｓｃＦｖ－Ｆｃ配列に点変異を導入して、以下の変異体を構築した。
抗Ｈｅｒ２－ｓｃＦｖ－ＶＬ－Ｆ５３Ｙ－Ｆｃ（配列番号３）：野生型抗Ｈｅｒ２ ｓｃＦｖ－Ｆｃから誘導され、ＶＬ領域はＦ５３Ｙ変異を有している。そのアミノ酸配列は次のとおりである。
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＮＩＫＤＴＹＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＲＩＹＰＴＮＧＹＴＲＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＳＲＷＧＧＤＧＦＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＶＮＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＹＬＹＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＲＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＨＹＴＴＰＰＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＧＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ。
抗Ｈｅｒ２－ｓｃＦｖ－ＶＬ－Ｆ５３Ａ－Ｆｃ（配列番号５）：野生型抗Ｈｅｒ２ ｓｃＦｖ－Ｆｃから誘導され、ＶＬ領域はＦ５３Ａ変異を有している。そのアミノ酸配列は次のとおりである。
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＮＩＫＤＴＹＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＲＩＹＰＴＮＧＹＴＲＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＳＲＷＧＧＤＧＦＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＶＮＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＡＬＹＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＲＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＨＹＴＴＰＰＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＧＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ。
抗Ｈｅｒ２－ｓｃＦｖ－ＶＬ－Ｆ５３Ｒ－Ｆｃ（配列番号７）：野生型抗Ｈｅｒ２ ｓ
ｃＦｖ－Ｆｃから誘導され、ＶＬ領域はＦ５３Ｒ変異を有している。そのアミノ酸配列は次のとおりである。
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＮＩＫＤＴＹＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＲＩＹＰＴＮＧＹＴＲＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＳＲＷＧＧＤＧＦＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＶＮＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＲＬＹＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＲＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＨＹＴＴＰＰＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＧＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ。
抗Ｈｅｒ２－ｓｃＦｖ－ＶＨ－Ｋ３０Ｅ－Ｆｃ（配列番号９）：野生型抗Ｈｅｒ２ ｓｃＦｖ－Ｆｃから誘導され、ＶＨ領域はＫ３０Ｅ変異を有している。そのアミノ酸配列は次のとおりである。
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＮＩＥＤＴＹＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＲＩＹＰＴＮＧＹＴＲＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＳＲＷＧＧＤＧＦＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＶＮＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＦＬＹＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＲＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＨＹＴＴＰＰＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＧＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ。
抗Ｈｅｒ２ ｓｃＦｖ－Ｆｃ及びその変異体のＤＮＡ配列（配列番号２、４、６、８、１０）を合成し、それぞれ、ｐｃＤＮＡ３．１発現ベクターにクローニングした。ＥｘｐｉＣＨＯ（商標）発現キット（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ、カタログ番号：Ａ２９１３３）を用いて抗Ｈｅｒ２ ｓｃＦｖ－Ｆｃ又はその変異体の発現ベクターをＥｘｐｉＣＨＯ細胞（ＣＨＯ－Ｓ、Ｔｈｅｒｍｏ）にコトランスフェクションした。細胞をＥｘｐｉＣＨＯ発現培地に入れて、３７℃×８％ＣＯ２湿潤雰囲気のインキュベータで、１３０ｒｐｍ回転するオービタルシェーカープラットフォームにおいて培養した。培養上清を収集して、プロテインＡ磁気ビーズ（Ｇｅｎｓｃｒｉｐｔ、カタログ番号：Ｌ００２７３）を用いてタンパク質の精製を行った。ＵＶ－Ｖｉｓ分光光度計（ＮａｎｏＤｒｏｐ ｌｉｔｅ、Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）でタンパク質濃度を測定した。
Figure 2023537051000042
実施例２：抗Ｈｅｒ２ ｓｃＦｖ－Ｆｃ及びその変異体の凝集体の検証及びヒトＨｅｒ２抗原との結合の検出
発現及び精製された抗Ｈｅｒ２ ｓｃＦｖ－Ｆｃ及びその変異体に対して、Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００（ＧＥ）で被検分子のヒトＨｅｒ２タンパク質との親和性を測定した。実験手順は次のとおりである。
抗ｈＩｇＧを結合したチップで一定の量の抗Ｈｅｒ２ ｓｃＦｖ－Ｆｃ又はその変異体を捕捉し、その後、チップの表面に抗原ヒトＨＥＲ２タンパク質（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ、カタログ番号：１０００４－Ｈ０８Ｈ）を流し、Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００を用いて反応シグナルをリアルタイムに検出することにより、結合及び解離曲線を得た。実験で使用する緩衝液はＢｉａｃｏｒｅ汎用緩衝液（１３７ｍＭ ＮａＣｌ、２．７ｍＭ
ＫＣｌ、１０ｍＭ Ｎａ２ＨＰＯ４・１２Ｈ２Ｏ、１．８ｍＭ ＫＨ２ＰＯ４、０．０５％界面活性剤Ｐ２０（ＧＥ、カタログ番号：ＢＲ－１０００－５４）、ｐＨ７．４）であった。抗ｈＩｇＧ（ヒト抗体捕捉キットを用いて捕捉したもの、ＧＥ、カタログ番号：２９－２３４６－００）がＣＭ５チップの表面に結合し反応値が約９０００ＲＵになると、抗Ｈｅｒ２ ｓｃＦｖ－Ｆｃ又はその変異体を捕捉した後の反応値は約２００ＲＵであり、その後、異なる濃度のヒトＨＥＲ２タンパク質（１００ｎＭ、５０ｎＭ、２５ｎＭ、１２．５ｎＭ、６．２５ｎＭ、３．１２５ｎＭ）と抗Ｈｅｒ２ ｓｃＦｖ－Ｆｃ又はその変異体の相互作用のシグナル値を検出した。フローセルの流速は５０μＬ／ｍｉｎであり、結合時間は２４０秒であり、解離時間は１４００秒であり、３Ｍ ＭｇＣｌ２（ＧＥ）で６０秒間再生させると、ベースラインが安定していた。ｂｉａｃｏｒｅ ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｓｏｆｔｗａｒｅのａｆｆｉｎｉｔｙ ａｎｄ ｋｉｎｅｔｉｃｓ １：１結合モデルで計算して結果を得た。抗Ｈｅｒ２ ｓｃＦｖ－Ｆｃ又は変異体の抗原ヒトＨｅｒ２タンパク質との親和性は表２を参照する。抗Ｈｅｒ２ ｓｃＦｖ－Ｆｃ（ＫＤ＝０．７７ｎＭ）と比べて、Ｆ５３Ａ変異は変異体抗Ｈｅｒ２－ｓｃＦｖ－ＶＬ－Ｆ５３Ａ－Ｆｃ（ＫＤ＝１．２６ｎＭ）と抗原ヒトＨｅｒ２タンパク質の結合親和性に対する影響が大きかった。変異体抗Ｈｅｒ２－ｓｃＦｖ－ＶＬ－Ｆ５３Ｙ－Ｆｃ（ＫＤ＝０．８ｎＭ）の抗原ヒトＨｅｒ２タンパク質に対する結合親和性は抗Ｈｅｒ２ ｓｃＦｖ－Ｆｃ（ＫＤ＝０．７７ｎＭ）とほぼ同じで、変異体抗Ｈｅｒ２－ｓｃＦｖ－ＶＨ－Ｋ３０Ｅ－Ｆｃの抗原ヒトＨｅｒ２タンパク質に対する結合のＫＤは０．５４ｎＭであった。Ｆ５３Ｙ、Ｋ３０Ｅ変異の導入は抗原ヒトＨｅｒ２タンパク質との結合親和性を低減させないことが分かった。
ゲル濾過クロマトグラフィーカラムを用いて、抗Ｈｅｒ２ ｓｃＦｖ－Ｆｃ又はその変異体の各成分を分離し、各成分は分子量が小さくなる順に溶出された。クロマトグラフィーカラムはＡＣＱＵＩＴＹ ＵＰＬＣ Ｐｒｏｔｅｉｎ ＢＥＨ ＳＥＣ Ｃｏｌｕｍｎ
２００Åで、１．７μｍ、４．６×３００ｍｍのゲル濾過クロマトグラフィーカラムで
あり、カラム温度は２５℃であった。移動相は５０ｍｍｏｌ／Ｌのリン酸塩緩衝液－２００ｍｍｏｌ／Ｌの塩化ナトリウムで、ｐＨ＝７．０であった（２．３３ｇのリン酸二水素ナトリウム二水和物、１２．５３ｇのリン酸水素二ナトリウム十二水和物、１１．６９ｇの塩化ナトリウムを秤量して、約８００ｍＬの超純水を加え、撹拌して充分に溶解すると、超純水を加えて１０００ｍＬとし、均一に混合してから０．２２μｍ濾過膜で濾過した）。移動相でサンプルを１０ｍｇ／ｍＬに希釈して供試品溶液とし、正確に２μＬを計量して液体クロマトグラフに注入し（サンプル濃度が１０ｍｇ／ｍＬ未満である場合は、注入量を調整して２０μｇのタンパク質を注入する）、波長２８０ｎｍにおいて検出した。流速は０．３０ｍＬ／ｍｉｎで、１５分間アイソクラティック溶出した。データを処理し、面積百分率法で結果を定量的に分析した。凝集体、免疫グロブリン単量体及び低分子量不純物のピーク面積パーセンテージをそれぞれ計算し、そのうちメインピーク前は凝集体で、メインピークは免疫グロブリン単量体で、メインピーク後は低分子量不純物であった。抗Ｈｅｒ２ ｓｃＦｖ－Ｆｃ又はその変異体メインピークと凝集体の含有量の比は表２を参照する。変異体抗Ｈｅｒ２－ｓｃＦｖ－ＶＬ－Ｆ５３Ｙ－Ｆｃと抗Ｈｅｒ２－ｓｃＦｖ－ＶＨ－Ｋ３０Ｅ－Ｆｃは凝集体を明らかに低減していた。凝集体は抗Ｈｅｒ２ ｓｃＦｖ－Ｆｃの６．３１％からそれぞれ４．９４％、３．３９％に低減していた。
Figure 2023537051000043
実施例３：抗Ｈｅｒ２二重特異性抗体の構築、発現及び精製
Ｋｎｏｂｓ－ｉｎｔｏ－ｈｏｌｅｓ（Ｒｉｄｇｗａｙ，ｅｔ ａｌ．，１９９６）Ｆｃプロセスでの改変によりヒトＩｇＧ１としての抗Ｈｅｒ２二重特異性抗体を生成させた。一方の重鎖のＦｃ領域配列には、ＦｃのプロテインＡに対する親和性を低減させるために、Ｈ４３５Ｒ、Ｙ４３６Ｆ変異（Ｊｅｎｄｅｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．，１９９７）が設計され、プロテインＡアフィニティー精製において二重特異性抗体を組み立てる間に形成されたホモ二量体を除去するために役立つ（特許ＵＳ５９４５３１１Ａ）。実施例２からは、抗Ｈｅｒ２－ｓｃＦｖ－ＶＬ－Ｆ５３Ｙ－Ｆｃ変異、抗Ｈｅｒ２－ｓｃＦｖ－ＶＨ－Ｋ３０Ｅ－Ｆｃ変異は、Ｈｅｒ２抗原に対する親和性を低減させることなく、抗Ｈｅｒ２－ｓｃＦｖ凝集体を明らかに低減できることが分かり、本実施例では抗Ｈｅｒ２二重特異性抗体の一方の抗Ｈｅｒ２アームの抗原結合ドメインはｓｃＦｖ（ＶＨ－リンカー－ＶＬ構造）形態で、可変領域配列は変異Ｋ３０Ｅ（ｂ－抗Ｈｅｒ２－ｓｃＦｖ－ＶＨ－Ｋ３０Ｅ－Ｆｃ、配列番号２１）、変異Ｆ５３Ｙ（ｂ－抗Ｈｅｒ２－ｓｃＦｖ－ＶＬ－Ｆ５３Ｙ－Ｆｃ、配列番号２３）を含み、又は当該２つの点変異を同時に含む抗Ｈｅｒ２－ｓｃＦｖ－ＶＨ－Ｋ３０Ｅ－ＶＬ－Ｆ５３Ｙ－Ｆｃ（配列番号１１）であった。本実施例では、抗Ｈｅｒ２二重特異性抗体の他方の抗Ｈｅｒ２アームの抗原結合ドメインは、抗Ｈｅｒ２－
ドメイン２－ＨＣ－Ｆｃ（配列番号１３）と抗Ｈｅｒ２－ドメイン２－ＬＣ（配列番号１５）とを含むＦａｂ形態である。さらに、変異を含まないｓｃＦｖ（ＶＨ－リンカー－ＶＬ構造又はＶＬ－リンカー－ＶＨ構造）で、対照としての抗Ｈｅｒ２二重特異性抗体を構築した。
Figure 2023537051000044
Figure 2023537051000045
Figure 2023537051000046
Figure 2023537051000047
Figure 2023537051000048
抗Ｈｅｒ２二重特異性抗体のＤＮＡ配列（配列番号１２、１４、１６）を合成し、それぞれ、ｐｃＤＮＡ３．１発現ベクターにクローニングした。ＣＨＯｇｒｏ（登録商標）Ｈｉｇｈ Ｙｉｅｌｄ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ（製品番号：ＭＩＲ ６２７０）を用いて抗Ｈｅｒ２－ｓｃＦｖ－ＶＨ－Ｋ３０Ｅ－ＶＬ－Ｆ５３Ｙ－Ｆｃ（配列番号１１）、抗Ｈｅｒ２－ドメイン２－ＨＣ－Ｆｃ（配列番号１３）及び抗Ｈｅｒ２－ドメイン２－ＬＣ（配列番号１５）の発現ベクターをトランスフェクション比１：１：１．５でＥｘｐｉＣＨＯ細胞に同時トランスフェクトした。トランスフェクション密度は６×１０６細胞／ｍＬであった。培地はＣＨＯｇｒｏ（登録商標）発現培地（製品番号：ＭＩＲ ６２００、メーカー：Ｍｉｒｕｓ）であった。トランスフェクション後１０日目まで連続培養し、遠心分離して細胞培養上清を収集した。プロテインＡ磁気ビーズ（Ｇｅｎｓｃｒｉｐｔ、カタログ番号：Ｌ００２７３）を用いてタンパク質の精製を行った。ＵＶ－Ｖｉｓ分光光度計（ＮａｎｏＤｒｏｐ ｌｉｔｅ、Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）でタンパク質濃度を測定した。当該サンプルをＥｘｐｉ Ｈｅｒ２－２と命名した。当該方法に従い、発現及び精製を行って他の二重特異性抗体Ｅｘｐｉ Ｈｅｒ２－１、Ｅｘｐｉ
Ｈｅｒ２－３、Ｅｘｐｉ Ｈｅｒ２－４、Ｅｘｐｉ Ｈｅｒ２－５を得た。
実施例４：フコースノックアウト二重特異性抗体の製造及び検証
フコース発現関連遺伝子ＦＵＴ８をノックアウトすることにより、ＩｇＧ１とＦｃｇＲＩＩＩａの相互作用を向上させ、抗体のＡＤＣＣ効果を増強させることができる（Ｓｈｉｅｌｄｓ ｅｔ ａｌ．，２００２、Ｙａｍａｎｅ－Ｏｈｎｕｋｉ ｅｔ ａｌ．，２００４）。本実施例では、ＦＵＴ８－ノックアウトＣＨＯ－Ｓ細胞（ＣＨＯ ＦＵＴ８－／－細胞と命名された）でフコースノックアウト抗Ｈｅｒ２二重特異性抗体を製造した。抗Ｈｅｒ２二重特異性抗体のＤＮＡ配列（配列番号１２、１４、１６）を合成し、それぞれ、ｐｃＤＮＡ３．１発現ベクターにクローニングした。ＣＨＯｇｒｏ（登録商標）Ｈｉｇｈ Ｙｉｅｌｄ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ（製品番号：ＭＩＲ ６２７０）で抗Ｈｅｒ２－ｓｃＦｖ－ＶＨ－Ｋ３０Ｅ－ＶＬ－Ｆ５３Ｙ－Ｆｃ、抗Ｈｅｒ２－ドメイン２－ＨＣ－Ｆｃ及び抗Ｈｅｒ２－ドメイン２－ＬＣの発現ベクターをトランスフェクション比１：１：１．５でＦＵＴ８－ノックアウトＣＨＯ－Ｓ細胞に同時トランスフェクトした。トランスフェクション密度は６×１０６細胞／ｍＬであった。培地はＣＨＯｇｒｏ（登録商標）発現培地（製品番号：ＭＩＲ ６２００、メーカー：Ｍｉｒｕｓ）であった。トランスフェクション後１０日目まで連続培養し、遠心分離して細胞培養上清を収集した。プロテインＡ磁気ビーズ（Ｇｅｎｓｃｒｉｐｔ、カタログ番号：Ｌ００２７３）を用いてタンパク質の精製を行った。ＵＶ－Ｖｉｓ分光光度計（ＮａｎｏＤｒｏｐ ｌｉｔｅ、Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）でタンパク質濃度を測定した。当該サンプルを２３Ｃ２ Ｈｅｒ２－２と命名した。当該方法に従って、ＣＨＯ ＦＵＴ８－／－細胞においてＥｘｐｉ Ｈｅｒ２－１、Ｅｘｐｉ Ｈｅｒ２－３、Ｅｘｐｉ Ｈｅｒ２－４、Ｅ
ｘｐｉ Ｈｅｒ２－５の配列を発現して、フコースノックアウト抗Ｈｅｒ２二重特異性抗体２３Ｃ２ Ｈｅｒ２－１、２３Ｃ２ Ｈｅｒ２－３、２３Ｃ２ Ｈｅｒ２－４、２３Ｃ２ Ｈｅｒ２－５を得た。
ＧｌｙｃｏＷｏｒｋｓ ＲａｐｉＦｌｕｏｒ－ＭＳ Ｎ－グリカンキット（Ｗａｔｅｒｓ、Ｍｉｌｆｏｒｄ、米ＭＡ）を用いてＣＨＯ ＦＵＴ８－／－細胞とＣＨＯ－Ｓ細胞によって発現された抗Ｈｅｒ２二重特異性抗体サンプルを処理し、タンパク質からＮ－グリカンを放出させて、Ｎ－グリカンを標識し、クロマトグラフィーカラムで分離し、ＦＬＲ検出器（Ｗａｔｅｒｓ、Ｍｉｌｆｏｒｄ、米ＭＡ）で分析すると、Ｎ－グリカンの構造及び含有量を得ることができ、グリカン含有量比は表４を参照し、通常の抗Ｈｅｒ２二重特異性抗体Ｅｘｐｉ ＨＥＲ２－２でフコースを含まない比は２１．８５％で、ＦＵＴ８－ノックアウトＣＨＯ－Ｓ細胞による抗Ｈｅｒ２二重特異性抗体２３Ｃ２ ＨＥＲ２－２の発現でフコースを含まない比は９９．４０％であった。
Figure 2023537051000049
Figure 2023537051000050
実施例５：二重特異性抗体の凝集体の検証
本実施例は、抗ｈｅｒ２二重特異性抗体２３Ｃ２ Ｈｅｒ２－１、２３Ｃ２ Ｈｅｒ２－２、２３Ｃ２ Ｈｅｒ２－３、２３Ｃ２ Ｈｅｒ２－４、２３Ｃ２ Ｈｅｒ２－５の凝集体の検証に関する。
ゲル濾過クロマトグラフィーカラムを用いて抗ｈｅｒ２二重特異性抗体を分離して、凝集体の含有量を検証し、各成分は分子量が小さくなる順に溶出された。クロマトグラフィーカラムはＡＣＱＵＩＴＹ ＵＰＬＣ Ｐｒｏｔｅｉｎ ＢＥＨ ＳＥＣ Ｃｏｌｕｍｎ
２００Åで、１．７μｍ、４．６×３００ｍｍのゲル濾過クロマトグラフィーカラムであり、カラム温度は２５℃であった。移動相は５０ｍｍｏｌ／Ｌのリン酸塩緩衝液－２００ｍｍｏｌ／Ｌの塩化ナトリウムで、ｐＨ＝７．０であった（２．３３ｇのリン酸二水素ナトリウム二水和物、１２．５３ｇのリン酸水素二ナトリウム十二水和物、１１．６９ｇの塩化ナトリウムを秤量して、約８００ｍＬの超純水を加え、撹拌して充分に溶解すると、超純水を加えて１０００ｍＬとし、均一に混合してから０．２２μｍ濾過膜で濾過した）。移動相でサンプルを１０ｍｇ／ｍＬに希釈して供試品溶液とし、正確に２μＬを計量して液体クロマトグラフに注入し（サンプル濃度が１０ｍｇ／ｍＬ未満である場合は、注入量を調整して２０μｇのタンパク質を注入する）、波長２８０ｎｍにおいて検出した。流速は０．３０ｍＬ／ｍｉｎで、１５分間アイソクラティック溶出した。データを処理し、面積百分率法で結果を定量的に分析した。凝集体、免疫グロブリン単量体及び低分子量不純物のピーク面積パーセンテージをそれぞれ計算し、そのうちメインピーク前は凝集体で、メインピークは免疫グロブリン単量体で、メインピーク後は低分子量不純物であった。
Figure 2023537051000051
結果から明らかなように、ｓｃＦＶから二重特異性抗体を組み立てると、その二重特異
性抗体は依然として凝集体を大量に生成するが、変異を導入すると二重特異性抗体の凝集体の含有量を低減でき、変異を含まない２３Ｃ２ Ｈｅｒ２－１と比べて、２３Ｃ２ Ｈｅｒ２－２の凝集体の含有量が８．５１％に低減していた（表５）。
実施例６：抗Ｈｅｒ２二重特異性抗体の抗原結合の検出
発現及び精製された抗Ｈｅｒ２二重特異性抗体に対して、Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００（ＧＥ）で被検分子のＨＥＲ２タンパク質との親和性を測定し、実験手順は次のとおりである。
抗ｈＩｇＧを結合したチップで一定の量の抗Ｈｅｒ２二重特異性抗体を捕捉し、その後、チップの表面にヒトＨｅｒ２（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ、カタログ番号：１０００４－Ｈ０８Ｈ）を流し、Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００を用いて反応シグナルをリアルタイムに検出することにより、結合及び解離曲線を得た。実験で使用する緩衝液はＢｉａｃｏｒｅ汎用緩衝液（１３７ｍＭ ＮａＣｌ、２．７ｍＭ ＫＣｌ、１０ｍＭ Ｎａ２ＨＰＯ４・１２Ｈ２Ｏ、１．８ｍＭ ＫＨ２ＰＯ４、０．０５％界面活性剤Ｐ２０、ｐＨ７．４）であった。抗ｈＩｇＧ（ヒト抗体捕捉キットを用いて捕捉したもの、ＧＥ、カタログ番号：２９－２３４６－００）がＣＭ５チップの表面に結合し反応値が約９０００ＲＵになると、抗Ｈｅｒ２二重特異性抗体を捕捉した後の反応値は約２００ＲＵであり、その後、異なる濃度のＨｅｒ２タンパク質（１００ｎＭ、５０ｎＭ、２５ｎＭ、１２．５ｎＭ、６．２５ｎＭ、３．１２５ｎＭ）と抗Ｈｅｒ２二重特異性抗体の相互作用のシグナル値をそれぞれ検出した。フローセルの流速は５０μＬ／ｍｉｎであり、結合時間は２４０秒であり、解離時間は１４００秒であり、３Ｍ ＭｇＣｌ２（ＧＥ）で６０秒間再生させると、ベースラインが安定していた。
ｂｉａｃｏｒｅ ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｓｏｆｔｗａｒｅで計算して結果を得た。抗Ｈｅｒ２二重特異性抗体２３Ｃ２ Ｈｅｒ２－２及びトラスツズマブとペルツズマブ対照の抗原Ｈｅｒ２との結合親和性は表６を参照し、抗Ｈｅｒ２二重特異性抗体２３Ｃ２ Ｈｅｒ２－２の抗原Ｈｅｒ２に対する結合のＫＤは６．１１Ｅ－１０Ｍで、トラスツズマブの抗原Ｈｅｒ２に対する結合のＫＤは１．２２Ｅ－０９Ｍで、ペルツズマブの抗原Ｈｅｒ２に対する結合のＫＤは２．３５Ｅ－０９Ｍであり、抗Ｈｅｒ２二重特異性抗体２３Ｃ２
Ｈｅｒ２－２はトラスツズマブとペルツズマブよりも抗原Ｈｅｒ２に対する親和性が高かった。
Figure 2023537051000052
実施例７：抗Ｈｅｒ２二重特異性抗体の抗原結合の検出
実施例６の実験手順に従って、Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００（ＧＥ）により、発現及び精製された抗Ｈｅｒ２二重特異性抗体２３Ｃ２ Ｈｅｒ２－１、２３Ｃ２ Ｈｅｒ２－２、２３Ｃ２ Ｈｅｒ２－３、２３Ｃ２ Ｈｅｒ２－４、２３Ｃ２ Ｈｅｒ２－５のＨＥＲ２タンパク質に対する親和性を測定することができる。
抗Ｈｅｒ２二重特異性抗体２３Ｃ２ Ｈｅｒ２－１の抗原ヒトＨｅｒ２タンパク質に対する親和性の測定結果は表７を参照する。表６と表７の結果からは、Ｆ５３Ｙ、Ｋ３０Ｅ変異を導入すると抗Ｈｅｒ２二重特異性抗体の抗原ヒトＨｅｒ２タンパク質に対する結合
親和性を向上できることが分かった。
Figure 2023537051000053
実施例８：抗Ｈｅｒ２二重特異性抗体のＨｅｒ２陽性標的細胞ＢＴ４７４に対する殺傷
ヒトＰＢＭＣ（末梢血単核細胞）からのＮＫ細胞の提供で、抗Ｈｅｒ２二重特異性抗体の標的細胞（ＢＴ４７４ Ｈｅｒ２＋＋＋、提供は中国科学院典型培養物保存委員会セルバンク）に対する殺傷効果を調べ、ＥＣ５０の大きさで抗Ｈｅｒ２二重特異性抗体のインビトロ活性を評価した。
実験手順の詳細は次のとおりである。ＢＴ４７４細胞に対し、２％ＦＢＳ（ウシ胎児血清）含有１６４０実験培地で細胞密度を３×１０５細胞／ｍＬに調整し、１ウェルあたり５０μＬで９６ウェル細胞培養プレート（ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ、製品番号：００３０７３０１９９）に接種した。１６４０実験培地を使用して異なる濃度（１０００ｎｇ／ｍＬ、３３３ｎｇ／ｍＬ、１１１ｎｇ／ｍＬ、３７ｎｇ／ｍＬ、１２．３ｎｇ／ｍＬ、４．１１ｎｇ／ｍＬ、１．３７ｎｇ／ｍＬ、０．４６ｎｇ／ｍＬ、０．１５ｎｇ／ｍＬ、０．０５ｎｇ／ｍＬ）の抗Ｈｅｒ２二重特異性抗体を調製し、異なる濃度の抗体を前記９６ウェル細胞培養プレートに、１ウェルあたり５０μＬ加えた。ヒトＰＢＭＣは１６４０実験培地を使用して細胞密度を１．５×１０６細胞／ｍＬに調整し、１ウェルあたり１００μＬとした。投与群（標的細胞＋エフェクター細胞＋抗体）、標的細胞群（ＢＴ４７４細胞）、エフェクター細胞群（ヒトＰＢＭＣ）、標的細胞＋エフェクター細胞群、ブランク対照群（培地）及びライセート対照群、標的細胞最大放出群（標的細胞＋ライセート）を設置し、エフェクター細胞－標的細胞比は１０：１であった。検出前４５分間に、標的細胞最大放出群、ライセート対照群には２０μＬ／ウェルでライセート（Ｐｒｏｍｅｇａ、製品番号：Ｇ１８２Ａ）を加えた。４５分間後に、ＣｙｔｏＴｏｘ９６（登録商標）非放射性細胞毒性検出キット（ｃｙｔｏｔｏｘ ９６ ｎｏｎｒａｄｉｏａｃｔｉｖｅ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ ａｓｓａｙ、Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｇ１７８０）を用いて細胞溶解率を検出した。
溶解率（％）＝（ＯＤ投与群－ＯＤ標的細胞＋エフェクター細胞群）／（ＯＤ標的細胞最大放出群－ＯＤ標的細胞群）×１００％。
図１には抗Ｈｅｒ２二重特異性抗体のＢＴ４７４ Ｈｅｒ２＋＋＋腫瘍細胞に対する死滅率が示されている。ＡＤＣＣが増強された抗Ｈｅｒ２二重特異性抗体（図１では、２３Ｃ２ ＨＥＲ２－１及び２３Ｃ２ ＨＥＲ２－２と表示される）のＢＴ４７４腫瘍細胞に対する殺傷はトラスツズマブ＋ペルツズマブの併用より優れ、ＣＨＯ－Ｓから発現される抗Ｈｅｒ２二重特異性抗体（Ｅｘｐｉ ＨＥＲ２－１及びＥｘｐｉ ＨＥＲ２－２）より優れていた。そのうちトラスツズマブ＋ペルツズマブ（１：１）併用のＥＣ５０は８．６２７ｎｇ／ｍＬで、Ｅｘｐｉ ＨＥＲ２－１のＥＣ５０は３８．０５ｎｇ／ｍＬであり、Ｅｘｐｉ ＨＥＲ２－２は、ＥＣ５０が３５．１７ｎｇ／ｍＬとＥｘｐｉ ＨＥＲ２－１より優れていた。ＡＤＣＣが増強された２３Ｃ２ ＨＥＲ２－１のＥＣ５０は４．７２８ｎｇ／ｍＬで、ＡＤＣＣが増強された２３Ｃ２ ＨＥＲ２－２は、ＥＣ５０が３．６５８ｎｇ／ｍＬとＡＤＣＣが増強された２３Ｃ２ ＨＥＲ２－１より優れていた。
実施例９：抗Ｈｅｒ２二重特異性抗体のＨｅｒ２陽性標的細胞ＮＣＩ－Ｎ８７に対する殺傷
ヒトＰＢＭＣ（末梢血単核細胞）からのＮＫ細胞の提供で、抗Ｈｅｒ２二重特異性抗体
の標的細胞（ＮＣＩ－Ｎ８７ Ｈｅｒ２＋＋、提供は中国科学院典型培養物保存委員会セルバンク）に対する殺傷効果を調べ、ＥＣ５０の大きさで抗Ｈｅｒ２二重特異性抗体のインビトロ活性を評価した。
実験手順の詳細は次のとおりである。ＮＣＩ－Ｎ８７細胞に対し、２％ＦＢＳ（ウシ胎児血清）含有１６４０実験培地で細胞密度を３×１０５細胞／ｍＬに調整し、１ウェルあたり５０μＬで９６ウェル細胞培養プレート（ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ、製品番号：００３０７３０１９９）に接種した。実験培地を使用して異なる濃度（８．１ｎＭ、２．７ｎＭ、０．９ｎＭ、０．３ｎＭ、０．１ｎＭ、０．０３ｎＭ、０．０１ｎＭ、０．００３ｎＭ、０．００１ｎＭ、０．０００４ｎＭ）の抗Ｈｅｒ２二重特異性抗体又は対照薬を調製し、異なる濃度の抗体又は対照薬を前記９６ウェル細胞培養プレートに、１ウェルあたり５０μＬ加えた。ヒトＰＢＭＣは実験培地を使用して細胞密度を１．５×１０６細胞／ｍＬに調整し、１ウェルあたり１００μＬとした。投与群（標的細胞＋エフェクター細胞＋抗体又は対照薬）、標的細胞群（ＮＣＩ－Ｎ８７細胞）、エフェクター細胞群（ヒトＰＢＭＣ）、標的細胞＋エフェクター細胞群、ブランク対照群（培地）及びライセート対照群、標的細胞最大放出群（標的細胞＋ライセート）を設置し、エフェクター細胞－標的細胞比は１０：１であった。検出前４５分間に、標的細胞最大放出群、ライセート対照群には２０μＬ／ウェルでライセート（Ｐｒｏｍｅｇａ、製品番号：Ｇ１８２Ａ）を加えた。４５分間後に、ＣｙｔｏＴｏｘ９６（登録商標）非放射性細胞毒性検出キット（ｃｙｔｏｔｏｘ
９６ ｎｏｎｒａｄｉｏａｃｔｉｖｅ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ ａｓｓａｙ、Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｇ１７８０）を用いて細胞溶解率を検出した。トラスツズマブ、Ｔ－ＤＭ１（トラスツズマブ－マイタンシン複合体、商品名Ｋａｄｃｙｌａ（登録商標））、トラスツズマブ＋ペルツズマブ（１：１）、Ｅｘｐｉ ＨＥＲ２－１を対照薬とした。
溶解率（％）＝（ＯＤ投与群－ＯＤ標的細胞＋エフェクター細胞群）／（ＯＤ標的細胞最大放出群－ＯＤ標的細胞群）×１００％。
図２には抗Ｈｅｒ２二重特異性抗体のＮＣＩ－Ｎ８７腫瘍細胞に対する殺傷率が示されている。ＡＤＣＣが増強された抗Ｈｅｒ２二重特異性抗体２３Ｃ２ ＨＥＲ２－２のＮＣＩ－Ｎ８７腫瘍細胞に対する殺傷はトラスツズマブ＋ペルツズマブ併用、トラスツズマブ、Ｔ－ＤＭ１及びＥｘｐｉ ＨＥＲ２－１より優れていた。そのうちＡＤＣＣが増強された２３Ｃ２ ＨＥＲ２－２のＥＣ５０は０．０２４４７ｎＭで、トラスツズマブ＋ペルツズマブ併用のＥＣ５０は０．０８２６７ｎＭで、Ｅｘｐｉ ＨＥＲ２－１のＥＣ５０は０．１０４８ｎＭで、Ｔ－ＤＭ１のＥＣ５０は０．０７３９２ｎＭで、トラスツズマブのＥＣ５０は０．０７４６８ｎＭであった。
実施例１０：抗Ｈｅｒ２二重特異性抗体のトラスツズマブ耐性細胞ＪＩＭＴ－１に対する殺傷
ヒトＰＢＭＣ（末梢血単核細胞）からのＮＫ細胞の提供で、抗Ｈｅｒ２二重特異性抗体の標的細胞（ＪＩＭＴ－１、提供ＡｄｄｅｘＢｉｏ、カタログ番号：Ｃ０００６００５）に対する殺傷効果を調べ、ＥＣ５０の大きさで抗Ｈｅｒ２二重特異性抗体のインビトロ活性を評価した。
実験手順の詳細は次のとおりである。ＪＩＭＴ－１細胞に対し、２％ＦＢＳ（ウシ胎児血清）含有１６４０実験培地で細胞密度を３×１０５細胞／ｍＬに調整し、１ウェルあたり５０μＬで９６ウェル細胞培養プレート（ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ、製品番号：００３０７３０１９９）に接種した。実験培地を使用して異なる濃度（８．１ｎＭ、２．７ｎＭ、０．９ｎＭ、０．３ｎＭ、０．１ｎＭ、０．０３ｎＭ、０．０１ｎＭ、０．００３ｎＭ、０．００１ｎＭ、０．０００４ｎＭ）の抗Ｈｅｒ２二重特異性抗体又は対照薬を調製し、異なる濃度の抗体又は対照薬を前記９６ウェル細胞培養プレートに、１ウェルあたり５０μＬ加えた。ヒトＰＢＭＣは実験培地を使用して細胞密度を１．５×１０６細胞／ｍＬに調
整し、１ウェルあたり１００μＬとした。投与群（標的細胞＋エフェクター細胞＋抗体又は対照薬）、標的細胞群（ＢＴ４７４細胞）、エフェクター細胞群（ヒトＰＢＭＣ）、標的細胞＋エフェクター細胞群、ブランク対照群（培地）及びライセート対照群、標的細胞最大放出群（標的細胞＋ライセート）を設置し、エフェクター細胞－標的細胞比は２０：１であった。検出前４５分間に、標的細胞最大放出群、ライセート対照群には２０μＬ／ウェルでライセート（Ｐｒｏｍｅｇａ、製品番号：Ｇ１８２Ａ）を加えた。４５分間後に、ＣｙｔｏＴｏｘ９６（登録商標）非放射性細胞毒性検出キット（ｃｙｔｏｔｏｘ ９６
ｎｏｎｒａｄｉｏａｃｔｉｖｅ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ ａｓｓａｙ、Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｇ１７８０）を用いて細胞溶解率を検出した。トラスツズマブ、Ｔ－ＤＭ１、トラスツズマブ＋ペルツズマブ（１：１）、Ｅｘｐｉ ＨＥＲ２－１を対照薬とした。
溶解率（％）＝（ＯＤ投与群－ＯＤ標的細胞＋エフェクター細胞群）／（ＯＤ標的細胞最大放出群－ＯＤ標的細胞群）×１００％。
図３には抗Ｈｅｒ２二重特異性抗体のＪＩＭＴ－１腫瘍細胞に対する殺傷率が示されている。ＡＤＣＣが増強された抗Ｈｅｒ２二重特異性抗体２３Ｃ２ ＨＥＲ２－２のＪＩＭＴ－１腫瘍細胞に対する殺傷はラスツズマブ＋ペルツズマブ併用、トラスツズマブ、Ｔ－ＤＭ１、Ｅｘｐｉ ＨＥＲ２－１より優れていた。そのうちＡＤＣＣが増強された２３Ｃ２ ＨＥＲ２－２のＥＣ５０は０．０１００６ｎＭで、トラスツズマブ＋ペルツズマブ併用のＥＣ５０は０．０６７２７ｎＭで、Ｅｘｐｉ ＨＥＲ２－１のＥＣ５０は０．０８０６６ｎＭで、Ｔ－ＤＭ１のＥＣ５０は０．０８３５７ｎＭで、トラスツズマブのＥＣ５０は０．０７４４３ｎＭであった。また、抗Ｈｅｒ２二重特異性抗体２３Ｃ２ ＨＥＲ２－２はより高い細胞溶解率を有していた。
実施例１１：抗Ｈｅｒ２二重特異性抗体のＢＴ４７４ Ｈｅｒ２＋＋＋腫瘍細胞に対する増殖阻害
２３Ｃ２ Ｈｅｒ２－２、トラスツズマブ、ペルツズマブを、２％ＦＢＳ（ウシ胎児血清、ＧＩＢＣＯ、製品番号：１００９９－１４１）含有ＤＭＥＭ／Ｆ１２培地（ＧＩＢＣＯ、製品番号：１１３３０－０３２）を使用して最終濃度が３．２μｇ／ｍＬになるまで希釈し、その後、１：１の比率で勾配希釈して９つの濃度とした（１．６μｇ／ｍＬ、０．８μｇ／ｍＬ、０．４μｇ／ｍＬ、０．２μｇ／ｍＬ、０．１μｇ／ｍＬ、０．０５μｇ／ｍＬ、０．０２５μｇ／ｍＬ、０．０１２５μｇ／ｍＬ、０．００６２５μｇ／ｍＬ）。対数増殖期のＢＴ４７４ Ｈｅｒ２＋＋＋細胞に対して、密度を１×１０５細胞／ｍＬに調整してプレーティングし、１ウェルあたり１００μＬを加え、対照として無細胞ブランクウェルを設置した。前記勾配希釈したサンプルを、１ウェルあたり５０μＬ加えた。３７℃×５％ＣＯ２インキュベータにおいて５日間培養した。培養液を捨て、ＣＣＫ－８（同仁化学、製品番号：ＣＫ０４）作業溶液を１ウェルあたり１００μＬ加え、インキュベートして４～５時間発色させてからマイクロプレートリーダー（Ｔｈｅｒｍｏ、型番：ＶａｒｉｏｓｋａｎＦｌａｓｈ）に置いて、参照波長６３０ｎｍで、波長４５０ｎｍにおける吸光度値を読み取り、記録した。腫瘍細胞の増殖阻害率を計算した。
図４の結果に示されるように、ＡＤＣＣが増強された抗Ｈｅｒ２二重特異性抗体２３Ｃ２ Ｈｅｒ２－２のＢＴ４７４腫瘍細胞に対する増殖阻害率は７８．３８％で、トラスツズマブの増殖阻害率（５４．１２％）及びトラスツズマブ＋ペルツズマブ併用の増殖阻害率（５３．７％）より優れていた。
実施例１２：抗Ｈｅｒ２二重特異性抗体のＮＣＩ－Ｎ８７ Ｈｅｒ２＋＋胃がんヌードマウスの異種移植腫瘍に対する阻害効果
ＮＣＩ－Ｎ８７ Ｈｅｒ２＋＋胃がん細胞（中国科学院典型培養物保存委員会セルバンク）を使用するマウス異種腫瘍移植モデルにおいて、抗Ｈｅｒ２二重特異性抗体のインビボ有効性を評価した。ＮＣＩ－Ｎ８７ Ｈｅｒ２＋＋胃がん細胞を用意し、濃度は５×１
０７個／ｍＬ、０．１ｍＬ／匹であった。無菌条件で、ヌードマウス（常州▼カ▲文斯実験動物有限会社提供、ヌードマウス、１４～１７ｇ、雄、飼育環境：ＳＰＦ）へ右脇の下に接種した。ヌードマウスに移植された腫瘍に対しノギスで移植腫瘍の直径を測定し、腫瘍が１００～２５０ｍｍ３に成長したら動物を５群に分けた。
群１：対照（Ｃｏｎｔｒｏｌ）
群２：Ｅｘｐｉ Ｈｅｒ２－１、１０ｍｇ／ｋｇ
群３：２３Ｃ２ Ｈｅｒ２－２、５ｍｇ／ｋｇ
群４：２３Ｃ２ Ｈｅｒ２－２、１０ｍｇ／ｋｇ
群５：Ｐｅｒ＋Ｔｒａ（トラスツズマブ＋ペルツズマブ）、５ｍｇ／ｋｇ＋５ｍｇ／ｋｇ。
各投与群は、所定の用量で静脈注射投与し、週２回で連続３週間（６回）投与した。群５の併用群の２つの薬物の投与量はそれぞれ５ｍＬ／ｋｇで、他の各群の投与量はいずれも１０ｍＬ／ｋｇであった。群１は同時にＰＢＳ（Ｈｙｃｌｏｎｅ、製品番号：ｓｈ３０２５６．０１）の１０ｍＬ／ｋｇ ｉ．ｖ．投与を行った。併用群の投与では、ペルツズマブ投与後に少なくとも３０分してからトラスツズマブを投与した。
腫瘍径測定の方法で、被験物質の抗腫瘍効果を動的に観察した。週に２～３回で腫瘍の体積を測定し、同時にマウスの体重を量り、データを記録した。毎日にマウスの一般的な挙動を観察した。
検出指標：
腫瘍体積（ｔｕｍｏｒ ｖｏｌｕｍｅ、ＴＶ）であり、計算式はＴＶ＝１／２×ａ×ｂ２で、ここで、ａ、ｂは、それぞれ、腫瘍の長さ、幅であった。
本実験では、ｄ０日から投与を開始し、合計で６回（ｄ０、ｄ３、ｄ７、ｄ１０、ｄ１４、ｄ１７）投与した。実験ｄ２１日目までに、動物の死亡はなかった。各群マウスの平均体重は増加する傾向にあった（図６）。薬物には明らかな毒性作用がなかった。
ｄ２１日までの群２（１０ｍｇ／ｋｇ）、群３（５ｍｇ／ｋｇ）、群４（１０ｍｇ／ｋｇ）、Ｐｅｒ＋Ｔｒａ併用群（５ｍｇ／ｋｇ＋５ｍｇ／ｋｇ）の各試験サンプルのＮＣＩ－Ｎ８７胃がんヌードマウスの異種移植腫瘍の体積に対する影響は表８及び図５を参照し、２３Ｃ２ Ｈｅｒ２－２群（１０ｍｇ／ｋｇ）のＮＣＩ－Ｎ８７胃がんヌードマウスの異種移植腫瘍に対する阻害はＥｘｐｉ Ｈｅｒ２－１（１０ｍｇ／ｋｇ）、Ｐｅｒ＋Ｔｒａ併用群（５ｍｇ／ｋｇ＋５ｍｇ／ｋｇ）より優れていた。
Figure 2023537051000054
実施例１３：ＭＣ－ＧＧＦＧ－ＤＸＤの合成
ステップ１：Ａ５（（｛Ｎ－［（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシ）カルボニル］グリシル｝アミノ）酢酸メチル）の合成
２０ｇのＳＭ５（Ｎ－［（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシ）カルボニル］グリシルグリシン）を秤量して１Ｌの三つ口フラスコに加え、３００ｍＬのテトラヒドロフラン、１００ｍＬのトルエンを加えて、撹拌して均一にし、３０ｇの四酢酸鉛、５．４ｇのピリジンを加えた。温度を６５℃に上げて４時間反応させた。室温に冷却して、濾過して固体を除去した。４０℃で、有機相を濃縮乾固した。３００ｍＬの酢酸エチル、３００ｍＬの水を濃縮乾固した有機相に加えた。２０分間撹拌した。酢酸エチル相を分離した。１００ｍＬの飽和塩化ナトリウム溶液を酢酸エチル相に加えて、２０分間撹拌した。酢酸エチル相を分離して濃縮乾固した。シリカゲルカラムクロマトグラフィー（石油エーテル：酢酸エチル＝１：１）を行って１３ｇのＡ５を得た。収率は６３％であった。ＥＳＩ－ＭＳ：ｍ／ｚ＝３９１．１［Ｍ＋Ｎａ］＋。
ステップ２：Ｂ５（［（｛Ｎ－［（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシ）カルボニル］グリシル｝アミノ）メトキシ］酢酸ベンジル）の合成
１．０ｇのＡ５を秤量して２５０ｍＬの一口フラスコに加え、１５ｍＬのＤＭＥ（エチレングリコールジメチルエーテル）、そして０．８９７ｇのグリコール酸ベンジルを加えて、氷水浴に入れて０℃に冷却した。０．２７ｍＬの水及び０．１０８ｇのＮａＯＨで溶液を調製した。調製したＮａＯＨ溶液を反応液に加えた。０℃で１時間反応させ、反応液に０．０７８ｇの氷酢酸を加えた。１００ｍＬの水及び１００ｍＬの酢酸エチルを加え、室温で２０分間撹拌し、有機相を分離して濃縮乾固した。シリカゲルカラムクロマトグラフィー（石油エーテル：酢酸エチル＝１：１）を行って０．６８ｇのＢ５を得た。収率は５３％であった。ＥＳＩ－ＭＳ：ｍ／ｚ＝４９７．１［Ｍ＋Ｎａ］＋。
ステップ３：Ｃ５（［（｛Ｎ－［（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシ）カルボニル］グリシル｝アミノ）メトキシ］酢酸）の合成
０．６８ｇのＢ５を秤量して２５０ｍＬの水素化反応ボトルに加え、２０ｍＬのエタノール、１０ｍＬの酢酸エチル、そして０．３４ｇのパラジウム／炭素水湿潤品（パラジウムの含有量は１０％）を加えた。水素バルーンで水素ガスを入れた。室温で１時間反応させた。珪藻土で濾過してパラジウム／炭素を除去した。４０℃で濾液を濃縮乾固した。４２５ｍｇのＣ５を得た。収率は７７％であった。ＥＳＩ－ＭＳ：ｍ／ｚ＝４０７．１［Ｍ＋Ｎａ］＋。
ステップ４：Ｄ５（［（｛Ｎ－［（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシ）カルボニル］グリシル｝アミノ）メトキシ］アセチル－Ｎ－［（２－｛［（１Ｓ，９Ｓ）－９－エチル－５－フルオロ－９－ヒドロキシ－４－メチル－１０，１３－ジオキソ－２，３，９，１０，１３，１５－ヘキサヒドロ－１Ｈ，１２Ｈ－ベンゾ［ｄｅ］ピラノ［３’，４’：６’７’］インダジノ［１，２－ｂ］キノリン－１－イル］アミノ｝－２－オキソエトキシ）メチル］グリシンアミド）の合成
５０ｍｇのＳＭ４（エキサテカンメシル酸塩）及び５０ｍｇのＣ５を秤量して１００ｍＬの一口フラスコに加え、２ｍＬのＤＭＦ（Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド）を加えて、０℃に冷却し、５４ｍｇのＨＡＴＵ（Ｏ－（７－アザベンゾトリアゾール－１－イル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスファート）、３０ｍｇのＤＩＥＡ（Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン）を加えた。室温に戻した。室温で３時間反応させた。１００ｍＬのジクロロメタン、１００ｍＬの水を加えた。２０分間撹拌した。有機相を分離して濃縮乾固した。シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン：メタノール＝１０：１）を行って８８ｍｇのＤ５を得た。収率は８４％であった。ＥＳＩ－ＭＳ：ｍ／ｚ＝８０２．４［Ｍ＋Ｈ］＋。
ステップ５：Ｅ５（｛［（グリシル）アミノ］メトキシ｝アセチル－Ｎ－［（２－｛［（１Ｓ，９Ｓ）－９－エチル－５－フルオロ－９－ヒドロキシ－４－メチル－１０，１３－ジオキソ－２，３，９，１０，１３，１５－ヘキサヒドロ－１Ｈ，１２Ｈ－ベンゾ［ｄｅ］ピラノ［３’，４’：６’７’］インダジノ［１，２－ｂ］キノリン－１－イル］アミノ｝－２－オキソエトキシ）メチル］グリシンアミド）の合成
７８ｍｇのＤ５を秤量して１００ｍＬの一口フラスコに加え、４ｍＬのテトラヒドロフランを加えて、０℃に冷却し、７８ｍｇのエチレンジアミンを加えた。室温に戻した。５時間反応させた。４０℃で反応液を濃縮乾固した。５５ｍｇのＥ５を得た。収率は９８％であった。ＥＳＩ－ＭＳ：ｍ／ｚ＝５８０．３［Ｍ＋Ｈ］＋。
ステップ６：ＭＣ－ＧＧＦＧ－ＤＸＤ合成
５５ｍｇのＥ５を秤量して１００ｍＬの一口フラスコに加え、２ｍＬのＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド、そして４８ｍｇのＭＣ－ＧＧＦ－ＯＨ（マレイミドカプロイルグリシルグリシルフェニルアラニン）を加えて、０℃に冷却した。５４ｍｇのＨＡＴＵ、そして３０ｍｇのＤＩＥＡを加えた。室温に戻した。１時間反応させた。１００ｍＬの酢酸エチル、１００ｍＬの水を加えて、２０分間撹拌した。有機相を分離した。４０℃で濃縮乾固し
た。シリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル：メタノール＝１０：１）を行って２６ｍｇのＭＣ－ＧＧＦＧ－ＤＸＤを得た。収率は２７％であった。ＥＳＩ－ＭＳ：ｍ／ｚ＝１０３４．５１（［Ｍ＋Ｈ］＋）。１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）８．６２（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．５Ｈｚ），８．５０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ），８．２９（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ），８．１２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），８．０６（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ），８．００（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ），７．７６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１Ｈｚ），７．３０（１Ｈ，ｓ），７．２５～７．１５（５Ｈ，ｍ），６．９０（２Ｈ，ｓ），６．５２（１Ｈ，ｂｒｓ），５．６１～５．５７（１Ｈ，ｍ），５．４２～５．４０（２Ｈ，ｍ），５．１９～５．１６（２Ｈ，ｍ），４．６４（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ），４．４９～４．４４（１Ｈ，ｍ），４．０５～４．０１（２Ｈ，ｍ），３．７６～３．５１（６Ｈ，ｍ），３．３７～３．３２（２Ｈ，ｍ），３．２１～３．１１（２Ｈ，ｍ），３．０２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝４．５，１４．０），２．７７（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９．５，１３．５），２．３７（３Ｈ，ｓ），２．２１～２．１５（２Ｈ，ｍ），２．０９（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ），１．９１～１．８１（２Ｈ，ｍ），１．４９～１．４２（４Ｈ，ｍ），１．２０～１．１４（２Ｈ，ｍ），０．８７（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．５Ｈｚ）。
実施例１４：重水素化ＭＣ－ＧＧＦＧ－ＤＸＤ（ＭＣ－ＧＧＦＧ－ＤＤＤＸＤ）、重水素化ＤＸＤ（ＤＤＤＸＤ）及びＤＸＤの合成
ステップ１：中間体Ａの合成
窒素保護下、８０ｇのジアゾ酢酸エチルを３Ｌの一口フラスコに加え、８００ｍＬのジクロロメタン、８００ｍＬの１％重水素酢酸溶液（８ｇの重水素酢酸を８００ｍＬの重水素水に溶解したもの）を加えた。反応液を遮光下、室温で７５時間撹拌した。分液して有機相を回収し、水相をジクロロメタンで２回抽出し（２００ｍＬ×２）、有機相を合わせた。２００ｍＬの重水素水で有機相を洗浄して、得られた有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過して硫酸ナトリウムを除去し、濾液を２０℃で減圧下濃縮乾固して、４９．２５ｇの中間体Ａを得た。収率は６６％であった。１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ ４．２７（ｑ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，１Ｈ），１．３１（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，２Ｈ）。
ステップ２：中間体Ｂの合成
５０ｇのＮ－フルオレニルメチルオキシカルボニル－グリシル－グリシンを秤量して２
Ｌの丸底フラスコに加え、７５０ｍＬのテトラヒドロフラン、１５０ｍＬの氷酢酸を加えて、４０℃で２０分間撹拌し、１００ｇの四酢酸鉛を加え、温度を８０℃に上げて引き続き３時間反応させた。室温に冷却して、吸引濾過し、フィルターケーキを２５０ｍＬの酢酸エチルで洗浄した。濾液を濃縮乾固した。３３０ｍＬのジクロロメタン、６７０ｍＬの酢酸エチルを加えて溶解して有機相を得た。有機相を３０％炭酸水素カリウム水溶液で３回洗浄した（５００ｍＬ×３）。有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥して、濾過した。濾液を減圧下濃縮乾固し、１００ｍＬのジクロロメタンを加えて溶解し、さらに１００ｍＬのｎ－ヘキサンを加えて、室温で固体が析出するまで撹拌し、その後、３００ｍＬのｎ－ヘキサンとジクロロメタンの混合溶液（ｎ－ヘキサン：ジクロロメタン＝１：１）を加えて、一晩撹拌した。濾過し、フィルターケーキを４０℃の真空オーブンで４時間乾燥して、３７．３ｇの中間体Ｂを得た。収率は７２％であった。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：３９１．０９［Ｍ＋Ｎａ］＋。
ステップ３：中間体Ｃの合成
７８ｇの中間体Ｂを秤量して３０００ｍＬの一口フラスコに加え、８００ｍＬのジクロロメタン、そして４５ｇの化合物Ａを加えた。３０００ｍＬの一口フラスコを氷水浴に入れて０℃に冷却した。１６ｇのリチウムｔｅｒｔ－ブトキシドを４００ｍＬのジクロロメタンに溶解してリチウムｔｅｒｔ－ブトキシド溶液を調製した。リチウムｔｅｒｔ－ブトキシド溶液を３０００ｍＬの丸底フラスコに加えた。０℃で３時間反応させた。室温に移して、８００ｍＬの水を加えて撹拌した。分液して、有機相を回収した。水相を４００ｍＬのジクロロメタンで抽出した。有機相を合わせた。有機相を８００ｍＬの飽和食塩水で１回洗浄して、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、吸引濾過し、濾液を減圧下濃縮した。シリカゲルカラムクロマトグラフィー（石油エーテル：酢酸エチル＝３：１）を行って６１ｇの中間体Ｃ得た。収率は７０％であった。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：４３７．３４［Ｍ＋Ｎａ］＋。
ステップ４：化合物Ｄの合成
３１．２ｇの化合物Ｃを２７０ｍＬの重メタノールと７０ｍＬの重水に加え、氷浴で撹拌し、続いて５．５ｇのＮａＯＨを加えて、室温に移して一晩撹拌した。反応液に３００ｍＬの酢酸エチル及び３００ｍＬの水を加えて抽出し、水層に２０ｍＬの氷酢酸を加えてｐＨを２～３に調整し、固体が析出したら、吸引濾過して２０．３ｇの化合物Ｄを得た。収率は６９．８％であった。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：４０９．０８［Ｍ＋Ｎａ］＋。
ステップ５：化合物Ｅの合成
２．０ｇのエキサテカンメシル酸塩二水和物、１．６３ｇの化合物Ｄを秤量して、１００ｍＬの丸底フラスコに加えた。４０ｍＬのＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミドを加えて、撹拌した。０℃に冷却した。２．０ｇのＯ－（７－アザベンゾトリアゾール－１－イル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスファート、１．８２ｇのＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンをこの順に加えた。０℃で３時間反応させた。反応液を１２０ｍＬの氷水に注いだ。１時間撹拌し、濾過した。フィルターケーキをジクロロメタンで溶解した。カラムクロマトグラフィー（１００～２００メッシュのシリカゲル１００ｇ、ジクロロメタン：メタノール＝３０：１、２Ｌ）を行って、２．６ｇの化合物Ｅを得た。収率は９２％であった。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：８０４．８４［Ｍ＋Ｈ］＋。
ステップ６：化合物Ｆの合成
０．３８ｇの１，８－ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ－７－エンを秤量して１００ｍＬの丸底フラスコに加えた。２０ｍＬのテトラヒドロフランを丸底フラスコに加えて、撹拌した。０℃に冷却した。２．０ｇの化合物Ｅを秤量して、２０ｍＬのテトラヒドロフランで溶液を調製した。調製した化合物Ｅの溶液をゆっくりと１００ｍＬの丸底フラ
スコに加えた。反応液は自然に室温に上がると、３時間反応させた。窒素保護下、濾過した。１．４５ｇの化合物Ｆを得た。収率は９８％であった。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：５８２．３９［Ｍ＋Ｈ］＋。
ステップ７：化合物Ｈの合成
１．００ｇの化合物Ｆ、０．９７ｇの化合物Ｇを秤量して１００ｍＬの丸底フラスコに加え、１０ｍＬのＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミドを加えた。－２０℃に冷却して、０．３４ｇの１－ヒドロキシベンゾトリアゾール、０．４９ｇの１－（３－ジメチルアミノプロピル）－３－エチルカルボジイミド塩酸塩を加えた。－２０℃で３時間反応させた。反応液に２０ｍＬのＤＣＭ及び２０ｍＬの水を加えて３０分間撹拌して、静置し、分液して、有機相を回収した。有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥して、濾過した。濾液を減圧下濃縮乾固した。シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン：メタノール＝１５：１）を行って４００ｍｇの化合物Ｈを得た。収率は約２２％であった。ＭＳ ｍ／ｓ：１０３７．０８［Ｍ＋Ｈ］＋。Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）８．６２（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．５），８．４９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．５），８．２９（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．５），８．１２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．０），８．０６（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．５），８．００（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．５），７．７４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１０．５），７．３０（１Ｈ，ｓ），７．２７～７．１２（５Ｈ，ｍ），６．９８（２Ｈ，ｓ），６．５１（１Ｈ，ｂｒｓ），５．６１～５．５８（１Ｈ，ｍ），５．４５～５．３７（２Ｈ，ｍ），５．２２～５．１３（２Ｈ，ｍ），４．６４（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．５），４．４９～４．４５（１Ｈ，ｍ），３．７６～３．５７（６Ｈ，ｍ），３．３７～３．３２（２Ｈ，ｍ），３．２４～３．０９（２Ｈ，ｍ），３．０２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝４．５，１４．０），２．７７（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９．５，１３．５），２．３６（３Ｈ，ｓ），２．２３～２．１４（２Ｈ，ｍ）２．０９（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．５），１．９１～１．７９（２Ｈ，ｍ），１．４９～１．４２（４Ｈ，ｍ），１．２０～１．１４（２Ｈ，ｍ），０．８７（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．５）。
Figure 2023537051000057
ステップ１：中間体Ｉの合成
０．８５ｇの化合物Ａを９ｍＬの重メタノールと１ｍＬの重水に加え、氷浴で撹拌し、続いて０．３２ｇの水酸化ナトリウムを加えて、室温で一晩撹拌した。反応液を４０℃で減圧下濃縮して化合物Ｉを得て、精製せずに直接次のステップに使用した。
ステップ２：化合物Ｊ（ＤＤＤＸＤ）の合成
０．３０ｇのエキサテカンメシル酸塩二水和物、０．０５６ｇの中間体Ｉを３ｍＬのＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミドに加えた。氷浴で撹拌し、続いて０．３２ｇの１Ｈ－ベンゾトリアゾール－１－イルオキシトリピロリジニルヘキサフルオロホスフェート、０．２２ｇのＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンを加えて、室温で４時間撹拌した。反応液を液体クロマトグラフィーにかけて０．１８ｇの化合物Ｊを得た。収率は６４．３％であった。ＬＣ－ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：４９６．３７［Ｍ＋Ｈ］＋。１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）８．３９（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，１Ｈ），７．７０（ｄ，Ｊ＝１０．９Ｈｚ，１Ｈ），７．２９（ｓ，１Ｈ），６．５２（ｓ，１Ｈ），５．５８～５．５４（ｍ，１Ｈ），５．４７（ｓ，１Ｈ），５．４０（ｓ，２Ｈ），５．１７～５．０２（ｍ，２Ｈ），３．２４～３．０３（ｍ，２Ｈ），２．３４（ｓ，３Ｈ），２．２５～２．０９（ｍ，２Ｈ），１．９２～１．８０（ｍ，２Ｈ），０．８７（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，３Ｈ）。
また、特許ＷＯ２０１４０５７６８７の明細書の実施例７６に記載の方法に従ってＤＸＤを製造した。
Figure 2023537051000059
実施例１５：抗体薬物複合体の製造
試薬：
溶液Ａ：ｐＨ ７．４のＰＢＳ緩衝液
溶液Ｂ：１０ｍＭ ＴＣＥＰ（トリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン塩酸塩）水溶液
溶液Ｃ：ＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）
溶液Ｄ：ヒスチジン緩衝液（０．８９ｍｇ／ｍＬのＬ－ヒスチジン及び４．０４ｍｇ／ｍＬの塩酸Ｌ－ヒスチジン一水和物を含む）
溶液Ｅ：７００ｍｇ／ｍＬのスクロース溶液（溶液Ｄで調製）
溶液Ｆ：２０ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０（溶液Ｄで調製）
抗体：トラスツズマブ、２３Ｃ２ Ｈｅｒ２－２
リンカー－ペイロード（リンカー－細胞傷害性薬物部分）：ＭＣ－ＧＧＦＧ－ＤＸＤ、ＭＣ－ＧＧＦＧ－ＤＤＤＸＤ
Figure 2023537051000060
実験手順：
１．抗体の置換
ａ．３０ｋＤの限外濾過遠心管を溶液Ａで十分に濡らした。
ｂ．抗体を溶液Ａに置換させた。
ｃ．適切な量の溶液Ａを加えて抗体濃度を５ｍｇ／ｍＬ（２３Ｃ２ Ｈｅｒ２－２）及び７．５ｍｇ／ｍＬ（トラスツズマブ）に調整した。
２．抗体の還元
ａ．抗体のモル量を計算し、Ｎ１と記した。
ｂ．抗体溶液に適切な量の溶液Ｂを加えて、反応系のＴＣＥＰのモル量をＮ２とした。
ｃ．アルミ箔で包んで、ロータリーインキュベーターに置いて低速（２０ｒｐｍ）で振盪し、３７℃で暗所１時間反応させた。
３．複合
ａ．適切な量のリンカー－ペイロードをＤＭＳＯで溶解し、最終濃度は１０ｍｇ／ｍＬであった。
ｂ．抗体溶液にＤＭＳＯを加えて、抗体濃度を５ｗｔ％とし、さらに適切な量のリンカー－ペイロード溶液を加えて、モル濃度をＮ３とした。
ｃ．アルミ箔で包んで、ロータリーインキュベーターに置いて低速（２０ｒｐｍ）で振盪し、２０℃で暗所２時間反応させた。
４．複合の停止
ａ．溶液Ｄで限外濾過遠心管を濡らした。
ｂ．抗体を溶液Ｄに置換させて、適切な量の溶液Ｅ、Ｆを加え、スクロース及びポリソルベート８０の濃度を、それぞれ、９０ｍｇ／ｍＬ、０．３ｍｇ／ｍＬに調整して、－８
０℃で冷凍保存した。
抗体薬物複合体のＤＡＲ値（１抗体分子あたりの平均薬物連結数）の測定：
ＬＣ－ＭＳ法を用いてＤＡＲ値を測定した。製造した５０μｇのＡＤＣサンプルに、１μＬのグリコシダーゼＰＮＧａｓｅ Ｆ（中国瑞安生物）を加えて、３７℃で２０時間インキュベートした。実験で質量分析計は高解像度Ｘｅｖｏ Ｇ２－ＸＳ（米国Ｗａｔｅｒｓ）であった。サンプルの濃度を５μＭに調整し、直接注入法を用いて、正イオンモードにおける質量分析データを収集した。収集した非変性質量分析データはソフトウェアＵＮＩＦＩ １．８．２．１６９（米国Ｗａｔｅｒｓ）を用いて分析処理を行った。
抗体薬物複合体のタンパク質濃度の測定：
ローリー法を用いてタンパク質濃度を検出した。トラスツズマブ、２３Ｃ２ Ｈｅｒ２－２を標準物質として用いた。マイクロプレートリーダーで標準物質及び製造したＡＤＣサンプルの波長６５０の吸光度値ＯＤを測定し、標準曲線を当てはめし、サンプルの吸光度値を標準曲線に代入して、タンパク質濃度を計算した。
上記の方法で以下の抗体薬物複合体を製造し、測定した。
Figure 2023537051000061
トラスツズマブ－ＤＸＤ、抗体濃度：４．２５ｍｇ／ｍＬ、ＤＡＲ：７．６。
Figure 2023537051000062
トラスツズマブ－ＤＤＤＸＤ、抗体濃度：４．２９ｍｇ／ｍＬ、ＤＡＲ：７．７。
Figure 2023537051000063
２３Ｃ２ Ｈｅｒ２－２－ＤＸＤ、抗体濃度：４．３５ｍｇ／ｍＬ、ＤＡＲ：５．７。
Figure 2023537051000064
 ２３Ｃ２ Ｈｅｒ２－２－ＤＤＤＸＤ、抗体濃度：４．１６ｍｇ／ｍＬ、ＤＡＲ：５．８。
実施例１６：重水素化ＤＸＤ（ＤＤＤＸＤ）のインビトロ酵素活性
１．試薬の準備
ａ．１％アガロース電気泳動ゲルを調製した。
ｂ．ｇｅｌｒｅｄ染色液を調製し、暗所で保管した。
ｃ．トポイソメラーゼＩ作業溶液の調製：超純水及び緩衝液で調製した。
２．サンプルの調製
ａ．ＤＭＳＯで再構成し化合物（ＤＤＤＸＤ）を希釈し、化合物の濃度は２００μＭから１０倍希釈し、５つの勾配を設定した。
３．反応系
ａ．陽性対照：１５μＬの超純水＋２μＬの１０×ＤＮＡトポイソメラーゼ（Ｔｏｐｏｉｓｍｅｒａｓｅ）Ｉ緩衝液＋２μＬの０．１％ＢＳＡ＋１μＬのｐＢＲ３２２ＤＮＡ、
ｂ．陰性対照：１４μＬの超純水＋２μＬの１０×ＤＮＡトポイソメラーゼＩ緩衝液＋２μＬの０．１％ＢＳＡ＋１μＬのｐＢＲ３２２ＤＮＡ＋１μＬのトポイソメラーゼＩ作業溶液、
ｃ．サンプル群：１２μＬの超純水＋２μＬの１０×ＤＮＡトポイソメラーゼＩ緩衝液＋２μＬの０．１％ＢＳＡ＋１μＬのｐＢＲ３２２ＤＮＡ＋１μＬのトポイソメラーゼＩ作業溶液＋２μＬの化合物。
４．実験手順
ａ．前記反応系を３７℃で３０分間水浴した。
ｂ．各チューブの反応系に２μＬのローディング緩衝液を加えて反応を停止させた。
ｃ．電圧２～２．５Ｖ／ｃｍで１．５時間アガロースゲル電気泳動を行った。
ｄ．電気泳動後のゲルをｇｅｌｒｅｄで暗所１．５時間染色し、ゲルイメージャーで撮影した。
実施例１７：抗体薬物複合体の抗原結合の検出
実施例６の方法に従って、トラスツズマブ、２３Ｃ２ ＨＥＲ２－２、トラスツズマブ（Ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ）－ＤＤＤＸＤ及び２３Ｃ２ ＨＥＲ２－２－ＤＤＤＸＤのＨＥＲ２タンパク質との親和性を測定し、下記の表１０に示すとおりである。
Figure 2023537051000065
結果は、抗Ｈｅｒ２二重特異性抗体はトラスツズマブよりも強い抗原結合活性を有し、抗Ｈｅｒ２二重特異性抗体ＡＤＣはトラスツズマブＡＤＣよりも強い抗原結合活性を有することを示している。
実施例１８：抗体薬物複合体のエンドサイトーシス実験
実験方法：１ボトル分の対数増殖期の細胞（ＮＣＩ－Ｎ８７細胞及びＳＫ－ＢＲ－３細胞）に対し、それぞれ、細胞密度を２．５×１０６細胞／ｍＬに調整し、２０μＬ／ウェルで９６ウェルプレートに加えた。実施例１５で製造したＡＤＣサンプルトラスツズマブ－ＤＤＤＸＤ及び２３Ｃ２ ＨＥＲ２－２－ＤＤＤＸＤを、それぞれ、予め濃度４０μｇ／ｍＬに希釈し、Ｓ１と標識し、続いて３倍勾配希釈を行って、対応するサンプルＳ１～Ｓ９を得た。また、ＤＳ－８２０１、及び対照ＩｇＧ１（非ＨＥＲ２標的特異性ＩｇＧ１、義翹神州、製品番号：ＨＧ１Ｋ）とＤＤＤＸＤの複合体ＩｇＧ１－ＤＤＤＸＤを対照とした。勾配希釈したサンプル溶液及び標識したエンドサイトーシス試薬（ｓａｒｔｏｒｉｕｓ、９０５６４）を細胞培養プレートに加え、１ウェルあたり２０μＬとし、３７℃で１５分間インキュベートした。９６ウェル細胞培養プレートを取り出し、２０μＬ／ウェルでそれぞれ前記２つの細胞を加え、細胞培養プレートを３７℃で静置して、引き続き２時間インキュベートした。９６ウェル細胞培養プレートを取り出し、フローサイトメーターにセットして、シグナル強度を測定した。
ＮＣＩ－Ｎ８７及びＳＫ－ＢＲ－３の２つのＨＥＲ２陽性細胞に対するエンドサイトーシス実験結果は、図８及び図９を参照する。結果は、抗Ｈｅｒ２二重特異性抗体ＡＤＣのエンドサイトーシスはいずれもトラスツズマブＡＤＣより強いことを示している。
実施例１９：重水素化ＤＸＤ及び抗体薬物複合体の細胞活性
ＤＸＤ、ＤＤＤＸＤを、それぞれ、培地を使用して予め１４００００ｎｇ／ｍＬに希釈し、Ｓ１と標識し、続いて５倍勾配希釈を行って、それぞれに対応する参照サンプルＳ１～Ｓ９を得て、薬物最終濃度の範囲は３５０００～０．０８９６ｎｇ／ｍＬで、合計で９つの濃度であった。対数増殖期のＨＥＲ２陽性腫瘍細胞ＮＣＩ－Ｎ８７に対して、密度を１×１０５細胞／ｍＬに調整してプレーティングし、１ウェルあたり１００μＬ加え、対照として無細胞ブランクウェルを設置した。勾配希釈した前記２つのサンプルを、１ウェルあたり５０μＬ加えた。３７℃×５％ＣＯ２インキュベータにおいて５日間培養した。培養液を捨て、ＣＣＫ－８（同仁化学、製品番号：ＣＫ０４）作業溶液を１ウェルあたり１００μＬ加え、インキュベートして４～５時間発色させてからマイクロプレートリーダー（メーカー：Ｔｈｅｒｍｏ、型番：ＶａｒｉｏｓｋａｎＦｌａｓｈ）に置いて、参照波長６３０ｎｍで、波長４５０ｎｍにおけるマイクロプレートの吸光度値を読み取り、記録した。腫瘍細胞の増殖阻害率を計算した。
ＮＣＩ－Ｎ８７細胞実験についての結果は、下記の表１１を参照する。
Figure 2023537051000066
ＤＤＤＸＤは、ＤＸＤよりも強い腫瘍細胞の増殖阻害活性を示している。
被検抗体及び実施例１５で製造した抗体薬物複合体を、それぞれ、培地を使用して予め２０μｇ／ｍＬに希釈し、Ｓ１と標識し、続いて５倍勾配希釈を行って、それぞれに対応するサンプルＳ１～Ｓ９を得た。薬物最終濃度の範囲は５０００～０．０１２８ｎｇ／ｍＬで、合計で９つの濃度であった。対数増殖期のＨＥＲ２陽性腫瘍細胞（ＮＣＩ－Ｎ８７、ＢＴ４７４及びＳＫ－ＢＲ－３）に対して、それぞれ、密度を２×１０４細胞／ｍＬに調整してプレーティングし、１ウェルあたり１００μＬ加え、対照として無細胞ブランクウェルを設置した。勾配希釈したサンプルを、１ウェルあたり５０μＬ加えた。３７℃×
５％ＣＯ２インキュベータにおいて培養した。培養液を捨て、ＣＴＧ検出液（Ｐｒｏｍｅｇａ、製品番号：Ｇ７５７２）を１ウェルあたり１００μＬ加え、インキュベートして１０分間発色させてから多機能プレートリーダー（メーカー：Ｔｈｅｒｍｏ、型番：ＶａｒｉｏｓｋａｎＦｌａｓｈ）に置いて、化学発光値を読み取った。腫瘍細胞の増殖阻害率を計算した。
ＮＣＩ－Ｎ８７細胞についての実験結果は、下記の表１２を参照する。
Figure 2023537051000067
ＢＴ４７４細胞についての実験結果は、下記の表１３を参照する。
Figure 2023537051000068
ＳＫ－ＢＲ－３細胞についての実験結果は、下記の表１４を参照する。
Figure 2023537051000069
上記の結果から、抗Ｈｅｒ２二重特異性抗体ＡＤＣの細胞殺傷能力はトラスツズマブＡＤＣより優れることが分かった。
実施例２０：インビトロ肝ミクロソーム安定性評価
各インキュベーションシステムはリン酸緩衝液（ＰＢＳ、ｐＨ ７．４）、肝ミクロソームタンパク質、基質（被検サンプルのアセトニトリル溶液）及びＮＡＤＰＨを含み、３７℃水浴でインキュベートし、それぞれ、反応後０分、５分、１５分、３０分及び６０分で等体積の冷アセトニトリルを加えて反応を停止させた。陰性対照は対応する種の熱不活
化肝ミクロソームでインキュベートした。ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ法で基質の残った含有量を検出した。
実施例２１：抗体薬物複合体のインビボ薬物動態実験
Ｙｏｋｏ Ｎａｇａｉ，ｅｔ ａｌ．，Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ Ｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ Ｄｅｒｕｘｔｅｃａｎ（ＤＳ－８２０１ａ），ａ ＨＥＲ２－ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ａｎｔｉｂｏｄｙ－ｄｒｕｇ ｃｏｎｊｕｇａｔｅ，ｉｎ Ｃｙｎｏｍｏｌｇｕｓ Ｍｏｎｋｅｙｓ，Ｘｅｎｏｂｉｏｔｉｃａ，２０１９，４９（９），１０８６－１０９６に記載の方法に従って、本願の抗体薬物複合体のインビボ代謝経路及び薬物動態パラメータを測定した。
実施例２２：抗体薬物複合体のＪＩＭＴ－１ Ｈｅｒ２陽性乳がんヌードマウスの異種移植腫瘍に対する阻害効果
ＪＩＭＴ－１乳がん細胞を用意し、濃度は２×１０７／ｍＬ、０．１ｍＬ／匹であった。無菌条件で、ヌードマウスへ右脇の下に接種した。皮下移植腫瘍を接種した後、腫瘍体積が１００～３００ｍｍ３程度になったら動物をランダムに３群に分けた。モデル群：溶媒（０．８９ｍｇ／ｍＬのＬ－ヒスチジン、４．０４ｍｇ／ｍＬのＬ－ヒスチジン塩酸塩、０．３ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０、９０ｍｇ／ｍＬのスクロースを含む）、６匹と、２３Ｃ２ Ｈｅｒ２－２－ＤＸＤ群：１．６８ ｍｇ／ｋｇ、ｑｗ、ｉ．ｖ． ６匹と、２３Ｃ２ Ｈｅｒ２－２－ＤＤＤＸＤ群：１．５９ ｍｇ／ｋｇ、ｑｗ、ｉ．ｖ． ６匹であった。週に２～３回で腫瘍の体積を測定し、同時にマウスの体重を量り、データを記録した。毎日に動物の挙動を観察した。
相対体重（ｒｅｌａｔｉｖｅ ｗｅｉｇｈｔ、ＲＷｔ）の計算式は、以下のとおりである。
ＲＷＣ（％）＝（Ｗｔ／Ｗｔ０）×１００％－１００％
式中、Ｗｔ０はケージ毎投与時（即ち、ｄ０）の動物体重であり、Ｗｔは各測定時の動物体重であった。
腫瘍の増殖阻害率（ｔｕｍｏｒ ｇｒｏｗｔｈ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ、ＴＧＩ）の計算式は、以下のとおりである。
ＴＧＩ（％）＝（１－ＴＷ／ＴＷ０）×１００％
式中、ＴＷは投与群の腫瘍重量であり、ＴＷ０はモデル群の腫瘍重量であった。
体重は、下記の表１５を参照する。
Figure 2023537051000070
有効性は、下記の表１６を参照する。
Figure 2023537051000071
結果は、２３Ｃ２ Ｈｅｒ２－２－ＤＸＤ及び２３Ｃ２ Ｈｅｒ２－２－ＤＤＤＸＤはヒト乳がん細胞ＪＩＭＴ－１マウス異種移植腫瘍モデルにおいていずれも明らかな有効性を有し、且つ２３Ｃ２ Ｈｅｒ２－２－ＤＤＤＸＤは２３Ｃ２ Ｈｅｒ２－２－ＤＸＤよりも抗腫瘍効果が強いことを示している。
本願で開示される内容によれば、好ましい実施形態に基づいて本願の方法を説明しているものの、当業者は、本願の概念、趣旨及び範囲から逸脱することなく、ここに記載の製品、要素、方法及び前記方法のステップ又はステップの順番を変更し又は新たに組み合わせることができる。
本明細書では説明と開示のために、全ての特許、特許出願及び他の刊行物を援用して明確に組み込む。それらの刊行物は本願の出願日前に発表されているため提供できる。それらの書類の開示日に関する声明又はその内容の記載は出願人の知り得た情報に基づくもので、それらの書類の開示日又はその内容が正しいと承諾するものではない。しかも全ての対象国において、本明細書へのそれらの刊行物の援用で当該刊行物は当分野で周知される常識になると認めるものではない。本明細書において言及される全ての文献の開示内容を援用してここに組み込み、例示的な、手順上の及び他の詳細を提供して本明細書の記載内容を補足するように援用している。

Claims (25)

  1. 一般式Ａｂ－（Ｌ－Ｕ）ｎを有する抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物であって、Ａｂは抗体部分を表し、Ｌはリンカー部分を表し、Ｕは細胞傷害性薬物部分を表し、ｎは１～１０の整数又は小数から選ばれ、ただし、Ｕはカンプトテシン類トポイソメラーゼＩ阻害剤であり、且つＬ部分及び／又はＵ部分は重水素修飾を有する、抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物。
  2. Ｕは、ＳＮ－３８、ＳＮ－３８誘導体、エキサテカン又はエキサテカン誘導体から選ばれる、請求項１に記載の抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物。
  3. 前記抗体薬物複合体は、以下の式ＩＩＩ又は式ＩＶに示される構造を含み、
    Figure 2023537051000072
    又は、
    Figure 2023537051000073
    式ＩＶで、Ｒ１は水素（Ｈ）又は重水素（Ｄ）から選ばれる、請求項１又は２に記載の抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物。
  4. 前記抗体薬物複合体は、以下の式ＶＩに示される構造を含み、
    Figure 2023537051000074
    式中、Ｒ１、Ｒ２は、それぞれ、独立して水素（Ｈ）又は重水素（Ｄ）から選ばれる、請求項１～３のいずれか１項に記載の抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物。
  5. 前記式ＶＩは、以下のＶＩ－１、ＶＩ－２、ＶＩ－３又はＶＩ－４に示される構造である、請求項４に記載の抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物。
    Figure 2023537051000075
    Figure 2023537051000076
    Figure 2023537051000077
    又は、
    Figure 2023537051000078
  6. Ａｂは、ＨＥＲ２に特異的に結合できる抗体である、請求項１～５のいずれか１項に記
    載の抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物。
  7. 前記Ａｂは、ＨＥＲ２発現細胞上のＨＥＲ２のＥＣＤ４エピトープに特異的に結合する一価の第１抗原結合フラグメントを含み、前記第１抗原結合フラグメントは、ｓｃＦｖであり且つ重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２、重鎖ＣＤＲ３、軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２、及び軽鎖ＣＤＲ３を含み、前記重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２、及び重鎖ＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号２７、２８、及び２９に示されるアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２、及び軽鎖ＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号３０、３４、及び３２に示されるアミノ酸配列を含む、請求項６に記載の抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物。
  8. 前記第１抗原結合フラグメントは、重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２、重鎖ＣＤＲ３、軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２、及び軽鎖ＣＤＲ３を含み、前記重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２、及び重鎖ＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号４３、２８、及び２９に示されるアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２、及び軽鎖ＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号３０、３１、及び３２に示されるアミノ酸配列を含む、請求項７に記載の抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物。
  9. 前記第１抗原結合フラグメントは、
    ｉ．重鎖可変領域、及び軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域、及び軽鎖可変領域は、それぞれ、配列番号４１、及び４２に示されるアミノ酸配列を含む前記第１抗原結合フラグメント、又は、
    ｉｉ．重鎖可変領域、及び軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域、及び軽鎖可変領域は、それぞれ、配列番号４１、及び４２に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む前記第１抗原結合フラグメントから選ばれる、請求項７に記載の抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物。
  10. 前記第１抗原結合フラグメントは、重鎖可変領域、及び軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域は、配列番号３５に示されるアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域は、配列番号３６に示されるアミノ酸配列を含む、請求項７～９のいずれか１項に記載の抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物。
  11. 前記第１抗原結合フラグメントのＶＨ及びＶＬは、Ｎ末端からＣ末端まで、ＶＨ－リンカー－ＶＬの順に配置される、請求項９又は１０に記載の抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物。
  12. 前記抗体部分Ａｂは、ＨＥＲ２発現細胞上のＨＥＲ２のＥＣＤ２エピトープに特異的に結合する一価の第２抗原結合フラグメントをさらに含み、前記第２抗原結合フラグメントはＦａｂである、請求項６～１１のいずれか１項に記載の抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物。
  13. 前記第２抗原結合フラグメントは、重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２、重鎖ＣＤＲ３、軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２、及び軽鎖ＣＤＲ３を含み、前記重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２、及び重鎖ＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号４５、４６、及び４７に示されるアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２、及び軽鎖ＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号４８、４９、及び５０に示されるアミノ酸配列を含む、請求項１２に記載の抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物。
  14. 前記第２抗原結合フラグメントは、重鎖可変領域、及び軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域、及び軽鎖可変領域は、それぞれ、配列番号３７、及び３８のアミノ酸配列を含
    む、請求項１２又は１３に記載の抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物。
  15. 前記抗体部分Ａｂは、第１抗原結合フラグメント及び／又は第２抗原結合フラグメントに作動可能に連結される免疫グロブリン機能ドメインを含み、前記免疫グロブリン機能ドメインは、ｉ．ＣＬ、ＣＨ１、ＣＨ２、若しくはＣＨ３の１つ若しくは複数、又はｉｉ．Ｆｃを含む、請求項６～１４のいずれか１項に記載の抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物。
  16. 前記ＣＬ、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、Ｆｃは、それぞれ、ヒトＩｇＧのＣＬ、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、Ｆｃから誘導される、請求項１５に記載の抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物。
  17. 前記ＣＬ、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３又はＦｃは、修飾を有し又は修飾を有さず、好ましくは、前記ＣＨ３又はＦｃの有する修飾がＫａｂａｔナンバリングに基づく４３５位及び／又は４３６位のアミノ酸の置換である、請求項１６に記載の抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物。
  18. 前記Ｆｃは、第１Ｆｃポリペプチド及び第２Ｆｃポリペプチドを含む二量体Ｆｃであり、前記第１抗原結合フラグメントは第１Ｆｃポリペプチドに作動可能に連結され、前記第２抗原結合フラグメントは第２Ｆｃポリペプチドに作動可能に連結される、請求項１５～１７のいずれか１項に記載の抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物。
  19. 抗体部分Ａｂは、配列番号１１に示される配列の重鎖、配列番号１３に示される配列の重鎖、及び配列番号１５に示される配列の軽鎖を含む二価二重特異性抗体である、請求項６～１８のいずれか１項に記載の抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物。
  20. 前記抗体薬物複合体は、以下の式ＶＩＩに示される構造を有し、
    Figure 2023537051000079
    ただし、Ａｂは、抗体部分を表し、第１抗原結合フラグメント及び第２抗原結合フラグメントを含み、前記第１抗原結合フラグメントは、ｓｃＦｖであり且つ重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２、重鎖ＣＤＲ３、軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２、及び軽鎖ＣＤＲ３を含み、前
    記重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２、及び重鎖ＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号４３、２８、及び２９に示されるアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２、及び軽鎖ＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号３０、３１、及び３２に示されるアミノ酸配列を含み、前記第２抗原結合フラグメントは、Ｆａｂであり且つ重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２、重鎖ＣＤＲ３、軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２、及び軽鎖ＣＤＲ３を含み、前記重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２、及び重鎖ＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号４５、４６、及び４７に示されるアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２、及び軽鎖ＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号４８、４９、及び５０に示されるアミノ酸配列を含み、
    ｎは１～１０の整数又は小数から選ばれ、
    Ｒ１、Ｒ２は、それぞれ、独立して水素（Ｈ）又は重水素（Ｄ）から選ばれる、請求項１～５のいずれか１項に記載の抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物。
  21. 式ＶＩＩは、以下のＶＩＩ－１、ＶＩＩ－２、ＶＩＩ－３又はＶＩＩ－４に示される構造である、請求項２０に記載の抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物。
    Figure 2023537051000080
    Figure 2023537051000081
    Figure 2023537051000082
    又は、
    Figure 2023537051000083
  22. がんを予防又は治療するための薬物の製造における請求項１～２１のいずれか１項に記載の抗体薬物複合体又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物の用途であって、好ましくは、前記がんがＨＥＲ２陽性がん、ＨＥＲ２陰性がん及び免疫組織化学法で検出してＨＥＲ２発現がＩＨＣ２＋であると表示されるがんである、用途。
  23. 式ＶＩに示される構造を有するリンカー－薬物中間体化合物。
    Figure 2023537051000084
    （式中、Ｒ１、Ｒ２は、それぞれ、独立して水素（Ｈ）又は重水素（Ｄ）から選ばれる。）
  24. 式ＶＩは、以下のＶＩ－１、ＶＩ－２、ＶＩ－３又はＶＩ－４に示される構造である、請求項２３に記載のリンカー－薬物中間体化合物。
    Figure 2023537051000085
    Figure 2023537051000086
    Figure 2023537051000087
    又は、
    Figure 2023537051000088
  25. 以下の式ＩＶ（ａ）又は式ＩＩＩ（ａ）に示される構造を有する化合物。
    Figure 2023537051000089
    （式中、Ｒ１は水素（Ｈ）又は重水素（Ｄ）から選ばれる。）
    Figure 2023537051000090
JP2023508466A 2020-08-13 2021-08-13 抗体薬物複合体 Pending JP2023537051A (ja)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010814877.X 2020-08-13
CN202010814877 2020-08-13
PCT/CN2021/112462 WO2022033578A1 (zh) 2020-08-13 2021-08-13 抗体药物偶联物

Publications (1)

Publication Number Publication Date
JP2023537051A true JP2023537051A (ja) 2023-08-30

Family

ID=80247729

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2023508466A Pending JP2023537051A (ja) 2020-08-13 2021-08-13 抗体薬物複合体

Country Status (11)

Country Link
US (1) US20230405141A1 (ja)
EP (1) EP4183421A1 (ja)
JP (1) JP2023537051A (ja)
KR (1) KR20230051214A (ja)
CN (1) CN115702008A (ja)
AU (1) AU2021323863A1 (ja)
BR (1) BR112023002417A2 (ja)
CA (1) CA3188508A1 (ja)
IL (1) IL300446A (ja)
MX (1) MX2023001648A (ja)
WO (1) WO2022033578A1 (ja)

Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
BR112022022036A2 (pt) * 2020-04-30 2022-12-13 Chia Tai Tianqing Pharmaceutical Group Co Ltd Construtos de ligação ao antígeno que têm como alvo her2 e usos dos mesmos
KR20240056587A (ko) 2021-09-16 2024-04-30 치아타이 티안큉 파마수티컬 그룹 주식회사 항-her3 항체 약물 접합체, 이의 조성물, 및 이의 용도
WO2024026323A1 (en) * 2022-07-26 2024-02-01 Zeno Management, Inc. Immunoconjugates and methods
CN117257977A (zh) * 2023-11-07 2023-12-22 正大天晴药业集团南京顺欣制药有限公司 用于制备抗体药物偶联物的方法

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5945311A (en) 1994-06-03 1999-08-31 GSF--Forschungszentrumfur Umweltund Gesundheit Method for producing heterologous bi-specific antibodies
BR122021014365B1 (pt) * 2012-10-11 2022-07-05 Daiichi Sankyo Company, Limited Conjugado de anticorpo-fármaco, fármacos e composição farmacêutica compreendendo os mesmos, e uso
CN112062853B (zh) * 2013-12-20 2024-01-09 豪夫迈·罗氏有限公司 双特异性her2抗体及使用方法
CA2928794C (en) * 2014-01-31 2019-08-13 Daiichi Sankyo Company, Limited Anti-her2 antibody-drug conjugate
CN109106951A (zh) * 2017-08-18 2019-01-01 四川百利药业有限责任公司 一种喜树碱-抗体偶联物
CA3114137A1 (en) * 2018-09-26 2020-04-02 Jiangsu Hengrui Medicine Co., Ltd. Ligand-drug conjugate of exatecan analogue, preparation method therefor and application thereof
AU2019351427A1 (en) * 2018-09-30 2021-04-15 Changzhou Hansoh Pharmaceutical Co., Ltd. Anti-B7H3 antibody-exatecan analog conjugate and medicinal use thereof
WO2020156555A1 (zh) * 2019-02-03 2020-08-06 苏州康聚生物科技有限公司 抗her2的双特异性抗体及其应用

Also Published As

Publication number Publication date
KR20230051214A (ko) 2023-04-17
CA3188508A1 (en) 2022-02-17
MX2023001648A (es) 2023-03-09
EP4183421A1 (en) 2023-05-24
CN115702008A (zh) 2023-02-14
WO2022033578A1 (zh) 2022-02-17
BR112023002417A2 (pt) 2023-03-21
US20230405141A1 (en) 2023-12-21
AU2021323863A1 (en) 2023-03-23
IL300446A (en) 2023-04-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
AU2021203889B2 (en) Novel method for producing antibody-drug conjugate
TWI731856B (zh) 抗c-Met抗體和抗c-Met抗體-細胞毒性藥物偶聯物及其醫藥用途
JP2023537051A (ja) 抗体薬物複合体
KR20200041993A (ko) 항체-약물 콘주게이트의 개량 제조 방법
WO2020196712A1 (ja) 抗体－ピロロベンゾジアゼピン誘導体コンジュゲートとｐａｒｐ阻害剤の組み合わせ
TW202102228A (zh) 抗體-吡咯并苯二氮呯衍生物結合物
JP2021524852A (ja) 抗ｍｕｃ１抗体−薬物コンジュゲート
JP2019521975A (ja) 抗ｅｇｆｒ抗体薬物コンジュゲート
TW202102225A (zh) 抗her2抗體-吡咯并苯二氮呯衍生物結合物
JP2024520674A (ja) 薬物コンジュゲート及びその使用
JP2021505676A (ja) 抗ｃｄ２２抗体−メイタンシンコンジュゲートおよびその使用方法
CA3005294A1 (en) Anti-5t4 antibodies and antibody-drug conjugates
WO2023041006A1 (zh) 抗her3抗体药物偶联物及其组合物和用途
TW201813670A (zh) 靶向gcc之抗體－藥物結合物
TW201813671A (zh) 抗ｃ－Ｍｅｔ抗體－細胞毒性藥物偶聯物的醫藥用途
TW202304929A (zh) 抗c-Met抗體藥物結合物
CN114569739A (zh) 抗体药物偶联物
TW202233251A (zh) 抗體藥物綴合物
CN111655733A (zh) 共价多特异性抗体
TW202216207A (zh) 抗體-藥物結合物及cdk9抑制劑之組合
KR101746152B1 (ko) ＥｒｂＢ3에 특이적으로 결합하는 항체 및 그의 용도
WO2023143263A1 (zh) 一种针对Her3的抗体，偶联物及其用途
WO2024061305A1 (zh) Gpc3抗体药物偶联物及其应用
WO2023046003A1 (zh) 抗体药物偶联物及其制备方法和医药用途
WO2024114667A1 (zh) 抗cldn18.2抗体药物偶联物及其药物组合物和用途