JP2023534191A - 抗組織因子抗体を使用する炎症性疾患の治療法 - Google Patents

抗組織因子抗体を使用する炎症性疾患の治療法 Download PDF

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Abstract

本明細書では、炎症性疾患を治療するための、ヒト組織因子（ＴＦ）に特異的に結合する抗体、抗ＴＦ抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）、及び該抗体またはＡＤＣを含む組成物が提供される。本明細書では、該抗ＴＦ抗体またはＡＤＣを投与することによって、炎症性疾患を有する対象を治療する方法も提供される。【選択図】図１５

Description

関連出願の相互参照
本願は、２０２０年７月１０日出願の米国仮特許出願第６３／０５０，６２９号に基づく優先権及びその利益を主張するものであり、当該出願の内容は、その全体があらゆる目的のために参照によって本明細書に組み込まれる。
配列表
本願は、ＡＳＣＩＩ形式で電子的に提出された配列表を含み、当該配列表は、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる。当該ＡＳＣＩＩコピーは２０２１年７月８日に作成されたものであり、その名称はＩＴＩ－００５ＷＯ＿ＳＬ．ｔｘｔであり、そのサイズは４６６，２２３バイトである。
背景
血液凝固は、凝血をもたらす複合の一連の過程を伴う。組織因子（ＴＦ）は、これらの凝固過程において重要な役割を果たす。ＴＦは細胞表面受容体である。ＴＦ／ＦＶＩＩａ複合体は、不活性なプロテアーゼ第Ｘ因子（ＦＸ）から活性なプロテアーゼ第Ｘａ因子（ＦＸａ）への変換を触媒する。ＦＸａ及びその補因子ＦＶａは、プロトロンビナーゼ複合体を形成し、これがプロトロンビンからトロンビンを生成する。トロンビンは、可溶性のフィブリノゲンを不溶性のフィブリン鎖に変換するとともに、多くの他の凝固関連過程を触媒する。
炎症性疾患には、炎症（局所性または全身性のもの）によって特徴付けられる幅広い障害及び状態が含まれる。炎症中は血行動態が変化すると共に、自然免疫細胞及び適応免疫細胞が損傷部位または疾患部位に動員される。異物から体を保護する上でも創傷を修復する上でも炎症は必要なものであるが、自己免疫疾患及び／または炎症性疾患においては、攻撃対象の外来物質が存在しなくても免疫系が炎症反応を引き起こし、体の正常な保護性免疫系が誤って自身を攻撃することによって自身の組織に影響を及ぼす。炎症性疾患は生涯にわたる衰弱性疾病であり、死亡率を高め、治療及び管理にかかる費用が高いことから、継続的に患者に負担をかけるものである。
ＴＦは、局所性及び全身性に炎症が生じることによって特徴付けられる疾患において役割を果たすと考えられているが、これまでのところ、炎症性疾患の治療に適応された承認済の抗ＴＦ抗体は存在しない。国際ＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１９／０１２４２７（特許文献１）、米国実用特許出願第１６／９５９，６５２号（特許文献２）、ならびに米国特許仮出願第６２／７１３，７９７号（特許文献３）、同第６２／７１３，８０４号（特許文献４）、同第６２／６４６，７８８号（特許文献５）、同第６２／６１３，５４５号（特許文献６）、及び同第６２／６１３，５６４号（特許文献７）では、本開示の抗ＴＦ抗体、抗ＴＦ抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）、ならびに当該抗ＴＦ抗体及びＡＤＣの使用を含む方法の態様について記載されており、これらの文献は、それらの全体があらゆる目的のために参照によって本明細書に組み込まれる。
ＰＣＴ／ＵＳ２０１９／０１２４２７ 米国実用特許出願第１６／９５９，６５２号 米国特許仮出願第６２／７１３，７９７号 米国特許仮出願第６２／７１３，８０４号 米国特許仮出願第６２／６４６，７８８号 米国特許仮出願第６２／６１３，５４５号 米国特許仮出願第６２／６１３，５６４号
概要
本明細書では、ヒト組織因子（ＴＦ）に特異的に結合する抗体、抗ＴＦ抗体薬物コンジュゲート、及び関連する方法が提供される。本明細書では、本開示の抗体またはＡＤＣを投与することによって炎症性疾患を治療するための方法が提供される。
一態様では、本明細書において、炎症性疾患の治療を必要とする対象において炎症性疾患を治療する方法が提供され、この方法は、単離された抗体を対象に投与することを含み、該抗体は、ヒト組織因子（ＴＦ）の細胞外ドメインに結合し、該抗体は、ヒトＦＶＩＩａが結合するヒトＴＦ結合部位とは別個のヒトＴＦ結合部位でヒトＴＦに結合する。
一部の実施形態では、ウイルス感染症は、重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）である。一部の実施形態では、炎症性疾患は、大腸炎、炎症性腸疾患、関節炎、急性肺損傷、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、及び呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）から選択される。一部の実施形態では、炎症性疾患は、大腸炎である。一部の実施形態では、炎症性疾患は、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）である。一部の実施形態では、炎症性疾患は、関節炎である。一部の実施形態では、炎症性疾患は、急性肺損傷である。一部の実施形態では、炎症性疾患は、ＡＲＤＳである。一部の実施形態では、炎症性疾患は、ＲＳＶである。一部の実施形態では、炎症性疾患は、循環器疾患または循環器損傷である。一部の実施形態では、心疾患または心損傷は、心筋梗塞である。一部の実施形態では、炎症性疾患は、プロテアーゼ活性化受容体２（ＰＡＲ－２）の上方制御と関連する循環器疾患である。
一部の実施形態では、抗体は、トロンビン生成アッセイ（ＴＧＡ）によって判定される場合、ヒトトロンビン生成を阻害しない。一部の実施形態では、単離されたヒト抗体は、トロンビン生成アッセイ（ＴＧＡ）によって判定される場合、配列番号８２１のＶＨ配列及び配列番号８２２のＶＬ配列を含む参照抗体と比較して、ヒトトロンビン生成を阻害しないか、またはヒトトロンビン生成を阻害する程度が低い。一部の実施形態では、単離された抗体と、配列番号８１０に示される配列のアミノ酸残基１４９に変異を含むバリアントＴＦ細胞外ドメインとの間の結合は、生細胞染色アッセイにおいてアイソタイプ対照と比較した単離された抗体の蛍光強度中央値によって判定される場合、単離された抗体と配列番号８１０に示される配列のＴＦの細胞外ドメインとの間の結合の５０％未満である。一部の実施形態では、抗体は、表３５中の抗体群に由来する３つ全ての重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）及び３つ全ての軽鎖ＣＤＲを含み、３つ全ての重鎖ＣＤＲ及び３つ全ての軽鎖ＣＤＲは、同じ抗体群に由来する。
一部の実施形態では、抗体は、表１５～３４のいずれか１つにおける抗体に由来する３つ全ての重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）及び３つ全ての軽鎖ＣＤＲを含み、３つ全ての重鎖ＣＤＲ及び３つ全ての軽鎖ＣＤＲは、同じ抗体に由来する。一部の実施形態では、抗体は、２５Ａと表記される抗体、２５Ａ５と表記される抗体、２５Ａ５－Ｔと表記される抗体、２５Ｇと表記される抗体、２５Ｇ１と表記される抗体、２５Ｇ９と表記される抗体、４３Ｂと表記される抗体、４３Ｂ１と表記される抗体、４３Ｂ７と表記される抗体、４３Ｄと表記される抗体、４３Ｄ７と表記される抗体、４３Ｄ８と表記される抗体、４３Ｅと表記される抗体、または４３Ｅａと表記される抗体に由来する、３つ全ての重鎖ＣＤＲ及び３つ全ての軽鎖ＣＤＲを含む。一部の実施形態では、抗体は、４３Ｂと表記される抗体、４３Ｂ１と表記される抗体、４３Ｂ７と表記される抗体、４３Ｄと表記される抗体、４３Ｄ７と表記される抗体、４３Ｄ８と表記される抗体、４３Ｅと表記される抗体、または４３Ｅａと表記される抗体に由来する、３つ全ての重鎖ＣＤＲ及び３つ全ての軽鎖ＣＤＲを含む。一部の実施形態では、抗体は、２５Ａと表記される抗体、２５Ａ５と表記される抗体、２５Ａ５－Ｔと表記される抗体、２５Ｇと表記される抗体、２５Ｇ１と表記される抗体、または２５Ｇ９と表記される抗体に由来する、３つ全ての重鎖ＣＤＲ及び３つ全ての軽鎖ＣＤＲを含む。
一部の実施形態では、抗体は、表１４に由来するＶＨドメイン配列及びＶＬドメイン配列を含み、ＶＨドメイン配列及びＶＬドメイン配列は、表１４中の同じ群に由来する。一部の実施形態では、抗体は、表１３に由来するＶＨドメイン配列及びＶＬドメイン配列を含み、ＶＨドメイン配列及びＶＬドメイン配列は、表１３中の同じクローンに由来する。
一部の実施形態では、抗体は、配列番号７９７に記載の配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１、配列番号７９８に記載の配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２、配列番号７９９に記載の配列を含むＶＨ－ＣＤＲ３、配列番号８００に記載の配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１、配列番号８０１に記載の配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２、及び配列番号８０２に記載の配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３を含む。
一部の実施形態では、抗体は、配列番号５７１に記載の配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１、配列番号５７２に記載の配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２、配列番号５７３に記載の配列を含むＶＨ－ＣＤＲ３、配列番号５７４に記載の配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１、配列番号５７５に記載の配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２、及び配列番号５７６に記載の配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３を含む。
一部の実施形態では、抗体は、配列番号６０９に記載の配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１、配列番号６１０に記載の配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２、配列番号６１１に記載の配列を含むＶＨ－ＣＤＲ３、配列番号６１２に記載の配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１、配列番号６１３に記載の配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２、及び配列番号６１４に記載の配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３を含む。
一部の実施形態では、抗体は、配列番号７６９に記載の配列を含むＶＨ配列、及び配列番号７７０に記載の配列を含むＶＬ配列を含む。一部の実施形態では、抗体は、配列番号５６９に記載の配列を含むＶＨ配列、及び配列番号５７０に記載の配列を含むＶＬ配列を含む。一部の実施形態では、抗体は、配列番号６０７に記載の配列を含むＶＨ配列、及び配列番号６０８に記載の配列を含むＶＬ配列を含む。一部の実施形態では、抗体は、配列番号９２４に記載の配列を含む重鎖、及び配列番号９２５に記載の配列を含む軽鎖を含む。一部の実施形態では、抗体は、配列番号６４５に記載の配列を含むＶＨ配列、及び配列番号６４６に記載の配列を含むＶＬ配列を含む。一部の実施形態では、抗体は、配列番号９２６に記載の配列を含む重鎖、及び配列番号９２７に記載の配列を含む軽鎖を含む。
一部の実施形態では、抗体は、配列番号７７９に記載の配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１、配列番号７８０に記載の配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２、配列番号７８１に記載の配列を含むＶＨ－ＣＤＲ３、配列番号７８２に記載の配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１、配列番号７８３に記載の配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２、及び配列番号７８４に記載の配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３を含む。
一部の実施形態では、抗体は、配列番号８７２に記載の配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１、配列番号８７３に記載の配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２、配列番号８７４に記載の配列を含むＶＨ－ＣＤＲ３、配列番号８７５に記載の配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１、配列番号８７６に記載の配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２、及び配列番号８７７に記載の配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３を含む。
一部の実施形態では、抗体は、配列番号８８４に記載の配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１、配列番号８８５に記載の配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２、配列番号８８６に記載の配列を含むＶＨ－ＣＤＲ３、配列番号８８７に記載の配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１、配列番号８８８に記載の配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２、及び配列番号８８９に記載の配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３を含む。
一部の実施形態では、抗体は、配列番号８６８に記載の配列を含むＶＨ配列、及び配列番号８６９に記載の配列を含むＶＬ配列を含む。一部の実施形態では、抗体は、配列番号１８９に記載の配列を含むＶＨ配列、及び配列番号１９０に記載の配列を含むＶＬ配列を含む。一部の実施形態では、抗体は、配列番号８３６に記載の配列を含むＶＨ配列、及び配列番号８３７に記載の配列を含むＶＬ配列を含む。
一部の実施形態では、抗体は、配列番号９２０に記載の配列を含む重鎖、及び配列番号９２１に記載の配列を含む軽鎖を含む。
一部の実施形態では、抗体は、配列番号８７８に記載の配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１、配列番号８７９に記載の配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２、配列番号８８０に記載の配列を含むＶＨ－ＣＤＲ３、配列番号８８１に記載の配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１、配列番号８８２に記載の配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２、及び配列番号８８３に記載の配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３を含む。
一部の実施形態では、抗体は、配列番号２６７に記載の配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１、配列番号２６８に記載の配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２、配列番号２６９に記載の配列を含むＶＨ－ＣＤＲ３、配列番号２７０に記載の配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１、配列番号２７１に記載の配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２、及び配列番号２７２に記載の配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３を含む。
一部の実施形態では、抗体は、配列番号８７０に記載の配列を含むＶＨ配列、及び配列番号８７１に記載の配列を含むＶＬ配列を含む。一部の実施形態では、抗体は、配列番号３０３に記載の配列を含むＶＨ配列、及び配列番号３０４に記載の配列を含むＶＬ配列を含む。一部の実施形態では、抗体は、配列番号９２２に記載の配列を含む重鎖、及び配列番号９２３に記載の配列を含む軽鎖を含む。
一部の実施形態では、抗体は、２５Ａと表記される抗体、２５Ａ５と表記される抗体、２５Ａ５－Ｔと表記される抗体、２５Ｇと表記される抗体、２５Ｇ１と表記される抗体、２５Ｇ９と表記される抗体、４３Ｂと表記される抗体、４３Ｂ１と表記される抗体、４３Ｂ７と表記される抗体、４３Ｄと表記される抗体、４３Ｄ７と表記される抗体、４３Ｄ８と表記される抗体、４３Ｅと表記される抗体、または４３Ｅａと表記される抗体と、ヒトＴＦへの結合について競合する。
一部の実施形態では、抗体は、４３Ｂと表記される抗体、４３Ｂ１と表記される抗体、４３Ｂ７と表記される抗体、４３Ｄと表記される抗体、４３Ｄ７と表記される抗体、４３Ｄ８と表記される抗体、４３Ｅと表記される抗体、または４３Ｅａと表記される抗体と、ヒトＴＦへの結合について競合する。
一部の実施形態では、抗体は、２５Ａと表記される抗体、２５Ａ５と表記される抗体、２５Ａ５－Ｔと表記される抗体、２５Ｇと表記される抗体、２５Ｇ１と表記される抗体、または２５Ｇ９と表記される抗体と、ヒトＴＦへの結合について競合する。
一部の実施形態では、２５Ａと表記される抗体、２５Ａ５と表記される抗体、２５Ａ５－Ｔと表記される抗体、２５Ｇと表記される抗体、２５Ｇ１と表記される抗体、２５Ｇ９と表記される抗体、４３Ｂと表記される抗体、４３Ｂ１と表記される抗体、４３Ｂ７と表記される抗体、４３Ｄと表記される抗体、４３Ｄ７と表記される抗体、４３Ｄ８と表記される抗体、４３Ｅと表記される抗体、または４３Ｅａと表記される抗体が結合するヒトＴＦエピトープと同じヒトＴＦエピトープに、抗体は結合する。
一部の実施形態では、４３Ｂと表記される抗体、４３Ｂ１と表記される抗体、４３Ｂ７と表記される抗体、４３Ｄと表記される抗体、４３Ｄ７と表記される抗体、４３Ｄ８と表記される抗体、４３Ｅと表記される抗体、または４３Ｅａと表記される抗体が結合するヒトＴＦエピトープと同じヒトＴＦエピトープに、抗体は結合する。一部の実施形態では、２５Ａと表記される抗体、２５Ａ５と表記される抗体、２５Ａ５－Ｔと表記される抗体、２５Ｇと表記される抗体、２５Ｇ１と表記される抗体、または２５Ｇ９と表記される抗体が結合するヒトＴＦエピトープと同じヒトＴＦエピトープに、抗体は結合する。
一部の実施形態では、抗体は、トロンビン生成アッセイ（ＴＧＡ）によって判定される場合ヒトトロンビン生成を阻害せず、アイソタイプ対照と比較してトロンビン生成曲線上のトロンビンピーク（ピークＩＩａ）を低減せず、アイソタイプ対照と比較してアッセイ開始からトロンビン生成曲線上のトロンビンピークまでの時間（ｔｔピーク）を増加させず、トロンビン生成曲線下面積によって判定される場合アイソタイプ対照と比較して内因性トロンビン産生能（ＥＴＰ）を減少させず、トロンビン生成アッセイ（ＴＧＡ）によって判定される場合ヒトトロンビン生成を可能にし、アイソタイプ対照と比較してトロンビン生成曲線上のトロンビンピーク（ピークＩＩａ）を維持し、アイソタイプ対照と比較してアッセイ開始からトロンビン生成曲線上のトロンビンピークまでの時間（ｔｔピーク）を維持し、トロンビン生成曲線下面積によって判定される場合アイソタイプ対照と比較して内因性トロンビン産生能（ＥＴＰ）を保護し、ヒトＦＸが結合するヒトＴＦ結合部位とは別個のヒトＴＦ結合部位でヒトＴＦに結合し、ＦＸをＦＸａに変換するＴＦ：ＦＶＩＩａの能力に干渉せず、かつヒトＴＦへの結合をＦＶＩＩａと競合しない。
一部の実施形態では、３つの重鎖ＣＤＲ及び３つの軽鎖ＣＤＲは、例えば、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＡｂＭ、Ｃｏｎｔａｃｔ、またはＩＭＧＴ番号付けを使用して決定される。
一部の実施形態では、抗体は、カニクイザルＴＦに特異的に結合する。一部の実施形態では、抗体は、マウスＴＦに特異的に結合する。一部の実施形態では、抗体は、ウサギＴＦに特異的に結合する。一部の実施形態では、抗体は、ブタＴＦに特異的に結合する。
一部の実施形態では、疾患は、血管炎症を伴う。一部の実施形態では、疾患は、局所性炎症を伴う。一部の実施形態では、疾患は、全身性炎症を伴う。
一部の実施形態では、疾患は、単核細胞及び／または顆粒球の浸潤を伴う。一部の実施形態では、単核細胞は、マクロファージ及び／またはリンパ球を含む。一部の実施形態では、顆粒球は、好中球及び／または好酸球を含む。
一部の実施形態では、炎症性疾患は、大腸炎、炎症性腸疾患、関節炎、急性肺損傷、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）、心筋梗塞、及び重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）からなる群から選択される。
一部の実施形態では、対象に投与すると、抗体は総白血球数を低減する。一部の実施形態では、総白血球数は、光学顕微鏡法によって決定される。
一部の実施形態では、対象に投与すると、抗体は総顆粒球数を低減する。一部の実施形態では、顆粒球は、好中球を含む。一部の実施形態では、顆粒球は、好酸球を含む。一部の実施形態では、総顆粒球数は、免疫組織化学（ＩＨＣ）分析または気管支肺胞洗浄（ＢＡＬ）液細胞分画カウントによって決定される。一部の実施形態では、顆粒球は、肺胞中のものである。一部の実施形態では、顆粒球は、間質液中のものである。
一部の実施形態では、対象に投与すると、抗体は総単核細胞数を低減する。一部の実施形態では、単核細胞は、マクロファージを含む。一部の実施形態では、マクロファージは、Ｍ１マクロファージを含む。一部の実施形態では、単核細胞は、リンパ球を含む。一部の実施形態では、単核細胞は、単球を含む。一部の実施形態では、総単核細胞数は、免疫組織化学（ＩＨＣ）分析または気管支肺胞洗浄（ＢＡＬ）液細胞分画カウントによって決定される。一部の実施形態では、単核細胞は、肺胞中のものである。一部の実施形態では、単核細胞は、間質液中のものである。
一部の実施形態では、対象に投与すると、対象の体重は、ベースラインレベルと比較して維持されるかまたは増加する。一部の実施形態では、対象に投与すると、抗体は、異なる抗炎症治療剤と比較して体重を維持するかまたは増加させる。一部の実施形態では、対象に投与すると、抗体は、ベースラインレベルと比較して脾臓サイズを低減するかまたは脾臓肥大を好転させる。
一部の実施形態では、対象に投与すると、抗体は、異なる抗炎症治療剤と比較して、脾臓サイズを低減するか、または脾腫を好転させる。一部の実施形態では、脾臓サイズまたは脾腫は、触診、打診、超音波、コンピューター断層撮影（ＣＴ）または磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）を使用して判定される。
一部の実施形態では、炎症性疾患は、急性肺損傷またはＡＲＤＳである。一部の実施形態では、対象に投与すると、抗体は、ベースラインレベルと比較して正味の肺胞液クリアランスを増加させる。一部の実施形態では、対象に投与すると、抗体は、異なる抗炎症治療剤と比較して正味の肺胞液クリアランスを増加させる。一部の実施形態では、正味の肺胞液クリアランスは、一連の浮腫液タンパク質濃度を測定することによって決定される。一部の実施形態では、一連の浮腫液タンパク質濃度は、ＥＬＩＳＡを用いて測定される。
一部の実施形態では、炎症性疾患は、ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ－２である。一部の実施形態では、対象に投与すると、対象の体重は、ベースラインレベルと比較して維持されるかまたは増加する。一部の実施形態では、対象に投与すると、抗体は、異なる抗炎症治療剤と比較して体重を維持するかまたは増加させる。
一部の実施形態では、対象に投与すると、抗体は、ベースラインレベルと比較して、炎症性のサイトカイン及びケモカインの濃度を低減する。一部の実施形態では、対象に投与すると、抗体は、異なる抗炎症治療剤と比較して、炎症性のサイトカイン及びケモカインの濃度を低減する。一部の実施形態では、炎症性のサイトカイン及びケモカインは、気管支肺胞洗浄（ＢＡＬ）試料中のものである。一部の実施形態では、炎症性のサイトカイン及びケモカインは、肺ホモジネート試料中のものである。一部の実施形態では、炎症性のサイトカイン及びケモカインは、ＩＬ－１α、ＩＬ－１β、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－８、ＩＬ－１０、ＩＦＮγ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＴＮＦα、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４、ＣＣＬ５、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２０、ＣＣＬ２５、ＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ２、及びＣＸＣＬ１０のうちの１つ以上を含む。一部の実施形態では、炎症性のサイトカイン及びケモカインは、ＥＬＩＳＡまたはＬｕｍｉｎｅｘマルチプレックスアッセイを使用して測定される。一部の実施形態では、炎症性のサイトカイン及びケモカインは、ＶＥＧＦを含む。一部の実施形態では、炎症性のサイトカイン及びケモカインは、ＧＭＣＳＦ、ＶＥＧＦ、ＩＬ１７Ｆ、ＩＬ－１ベータ、ＩＬ－６、ＩＦＮγ、ＩＬ－８、及びＫＣのうちの１つ以上を含む。
一部の実施形態では、炎症性疾患は、ウイルス感染症である。一部の実施形態では、対象に投与すると、抗体は、ベースラインレベルと比較して、抗炎症性のサイトカイン及びケモカインを増加させる。一部の実施形態では、対象に投与すると、抗体は、異なる抗炎症治療剤と比較して、抗炎症性のサイトカイン及びケモカインを増加させる。一部の実施形態では、抗炎症性のサイトカイン及びケモカインは、ＩＬ－１０及びＩＬ２７ｐ２８のうちの１つ以上を含む。一部の実施形態では、抗炎症性のサイトカイン及びケモカインは、気管支肺胞洗浄（ＢＡＬ）試料中のものである。一部の実施形態では、炎症性のサイトカイン及びケモカインは、マルチプレックス電気化学発光ＭＳＤアッセイを使用して測定される。一部の実施形態では、炎症性のサイトカイン及びケモカインは、Ｌｕｍｉｎｅｘマルチプレックスアッセイを使用して測定される。
一部の実施形態では、炎症性疾患は、ＲＳＶである。一部の実施形態では、対象に投与すると、抗体は、ベースラインレベルと比較して肺の線維化を低減する。一部の実施形態では、対象に投与すると、抗体は、異なる抗炎症治療剤と比較して肺の線維化を低減する。一部の実施形態では、線維化は、ＩＨＣ分析または定量的高分解能コンピューター断層撮影法（ｑＨＲＣＴ）によって判定される。
一部の実施形態では、炎症性疾患は、関節炎である。一部の実施形態では、対象に投与すると、抗体は、ベースラインレベルと比較して、炎症性のサイトカイン及びケモカインの濃度を低減する。一部の実施形態では、対象に投与すると、抗体は、異なる抗炎症治療剤と比較して、炎症性のサイトカイン及びケモカインの濃度を低減する。一部の実施形態では、炎症性のサイトカイン及びケモカインは、ＩＬ－１α、ＩＬ－１β、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－８、ＩＬ－１０、ＩＦＮγ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＴＮＦα、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４、ＣＣＬ５ ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２０、ＣＣＬ２５、ＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ２、及びＣＸＣＬ１０のうちの１つ以上を含む。
一部の実施形態では、炎症性疾患は、大腸炎または炎症性腸疾患である。一部の実施形態では、対象に投与すると、抗体は、ベースラインレベルと比較して便の正常な硬さをもたらすかまたは対象の便の硬さを高める。一部の実施形態では、対象に投与すると、抗体は、異なる抗炎症治療剤と比較して便の正常な硬さをもたらすかまたは対象の便の硬さを高める。一部の実施形態では、便の硬さは、ブリストル便性状スケールを使用して決定される。一部の実施形態では、対象に投与すると、抗体は、ベースラインレベルと比較して対象の便中の血液を低減するかまたは前記便中の血液の不在をもたらす。一部の実施形態では、対象に投与すると、抗体は、異なる抗炎症治療剤と比較して対象の便中の血液を低減するかまたは前記便中の血液の不在をもたらす。一部の実施形態では、対象の便中の血液は、ヘモカルト検査を使用して測定される。一部の実施形態では、対象に投与すると、抗体は、ベースラインレベルと比較して、炎症性のサイトカイン及びケモカインの濃度を低減する。一部の実施形態では、対象に投与すると、抗体は、異なる抗炎症治療剤と比較して、炎症性のサイトカイン及びケモカインの濃度を低減する。一部の実施形態では、炎症性のサイトカイン及びケモカインは、ＩＬ－１α、ＩＬ－１β、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－８、ＩＬ－１０、ＩＦＮγ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＴＮＦα、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４、ＣＣＬ５、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２０、ＣＣＬ２５、ＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ２、及びＣＸＣＬ１０のうちの１つ以上を含む。
一部の実施形態では、炎症性疾患は、心筋梗塞である。
一部の実施形態では、対象に投与すると、抗体は、ベースラインレベルと比較して梗塞サイズを低減する。一部の実施形態では、対象に投与すると、抗体は、異なる抗炎症治療剤と比較して梗塞サイズを低減する。一部の実施形態では、対象に投与すると、抗体は、ベースラインレベルと比較して左室駆出率を増加させる。一部の実施形態では、対象に投与すると、抗体は、異なる抗炎症治療剤と比較して左室駆出率を増加させる。一部の実施形態では、対象に投与すると、抗体は、ベースラインレベルと比較して左室拡張末期容積を低減する。一部の実施形態では、対象に投与すると、抗体は、異なる抗炎症治療剤と比較して左室拡張末期容積を低減する。一部の実施形態では、対象に投与すると、抗体は、ベースラインレベルと比較して梗塞心筋中への炎症細胞の動員を低減する。一部の実施形態では、対象に投与すると、抗体は、異なる抗炎症治療剤と比較して梗塞心筋中への炎症細胞の動員を低減する。一部の実施形態では、炎症細胞は、ＣＤ４５＋、ＣＤ１１ｂ＋、Ｌｙ６Ｃｈｉ、ＣＤ４５＋／ＣＤ９０．２－／ＮＫ１．１－／ＣＤ１１ｂ＋、ＣＤ４５＋／ＣＤ９０．２－／ＮＫ１．１－／ＣＤ１１ｂ＋／Ｌｙ６Ｃｈｉ、及びＣＤ４５＋／ＣＤ９０．２－／ＮＫ１．１－／ＣＤ１１ｂ＋／Ｌｙ６Ｃｌｏから選択される。一部の実施形態では、炎症細胞の動員は、フローサイトメトリーを使用して測定される。
一部の実施形態では、対象に投与すると、抗体は、全身性ステロイドの必要性を低減する。一部の実施形態では、異なる抗炎症治療剤は、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、ステロイド性抗炎症薬、ベータ－アゴニスト、抗コリン剤、抗ヒスタミン剤、及びメチルキサンチンのうちの１つ以上を含む。一部の実施形態では、異なる抗炎症治療剤は、ＩＬ－６阻害物質、抗ＧＭ－ＣＳＦ、抗ＴＮＦａ、抗ＩＬ－１ａ、デキサメタゾン、ケモカイン及びケモカイン受容体アンタゴニスト、ならびにＪＡＫ阻害物質のいずれか１つを含む。
本開示の一部の実施形態では、ヒトＦＶＩＩａが結合するヒトＴＦ結合部位とは異なるヒトＴＦ結合部位でヒトＴＦに結合する本明細書で提供される抗体またはＡＤＣを用いて炎症性疾患が治療される。ヒトＦＶＩＩａが結合するヒトＴＦ結合部位とは異なるヒトＴＦ結合部位ではヒトＴＦに結合しない本明細書で提供される抗体またはＡＤＣが炎症性疾患の治療に有用であり得ることも企図される。例えば、そのような抗体は、血栓症によって特徴付けられる炎症性疾患の治療に有用であり得る。
一部の実施形態では、抗体は、１日１回投与される。一部の実施形態では、抗体は、１週間に１回投与される。一部の実施形態では、抗体は、２週間に１回投与される。一部の実施形態では、抗体は、１ヶ月に１回投与される。
本発明のこれら及び他の特徴、態様、及び利点は、以下の説明及び添付図面に関してより良く理解されるようになろう。
ヒトの急性肺損傷（ＡＬＩ）及び急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）の一般的な特徴をいくつか示す表を含む。 ボディコンディションのスコア付けに使用される定性的システムを示す図を含む（実施例を参照のこと）。 ＤＳＳ大腸炎モデル試験において、示される処理を実施したマウスの体重パーセントを示すプロットを含む。 ＤＳＳ大腸炎モデル試験において、示される処理を実施したマウスの疾患活動性スコアを示すプロットを含む。 ＤＳＳ大腸炎モデル試験において、示される処理を実施したマウスのボディコンディションスコアを試験過程にわたって示すプロットを含む。 ＤＳＳ大腸炎モデル試験において、示される処理を実施した後の試験終了時点のマウスの平均体重を示すプロットを含む。 ＡＬＩモデル試験において、示される処理を実施したマウスのベースラインレベルに対する体重の変化率を示すプロットを含む。 ＡＬＩモデル試験において、示される処理を実施した後の試験終了時点のマウスから得た気管支肺胞洗浄（ＢＡＬ）液試料中の総白血球数、総マクロファージ数、及び総リンパ球数を示すプロットを含む。 ＡＬＩモデル試験において、示される処理を実施した後の試験終了時点のマウスから得た気管支肺胞洗浄（ＢＡＬ）液試料中の総好中球数及び総好酸球数を示すプロットを含む。 ＡＬＩモデル試験において、示される処理を実施したマウスから得た間質ならびに肺胞及び細気管支への好中球の浸潤と、血管周囲組織及び細気管支周囲組織への単核細胞の浸潤とを組織病理学的な定性的スコア付けによって比較した結果を示すプロットを含む。 ＡＬＩモデル試験において、示される処理を実施したマウスから得たＢＡＬ液において測定した炎症性のサイトカイン及びケモカインの平均濃度（±ＳＥＭ）を示すプロットを含む。 ＡＬＩモデル試験において、示される処理を実施したマウスから得たＢＡＬ液において測定した炎症性のサイトカイン及びケモカインの平均濃度（±ＳＥＭ）を示すプロットを含む。 呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）モデル試験において、示される処理を実施したマウスにおいて測定した平均ＢＡＬ細胞分画カウント（総白血球数）を示すプロットを含む。 呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）モデル試験において、示される処理を実施したマウスのマクロファージ、好中球、及びリンパ球のＢＡＬ細胞数測定値を示すプロットを含む。 ＤＳＳ誘発大腸炎モデルの試験スケジュールを示す図を含む。 示される処理を実施したＤＳＳマウスの体重変化率を示すプロットを含む。 ＤＳＳモデルにおける疾患活動性指標（ＤＡＩ）スコアに対する示される処理の効果を示すプロットを含む。 ＤＳＳモデルにおける結腸密度（すなわち、結腸重量／結腸の長さ）に対する示される処理の効果を示すプロットを含む。 ＤＳＳモデルにおける脾臓重量に対する示される処理の効果を示すプロットを含む。 ポリＩ：Ｃモデルモデルにおける炎症性サイトカインのレベルに対する示される処理の効果を示すプロットを含む。 ポリＩ：Ｃモデルモデルにおける抗炎症性サイトカインのレベルに対する示される処理の効果を示すプロットを含む。 ポリＩ：Ｃモデルモデルにおける体重に対する示される処理の効果を示すプロットを含む。 心筋梗塞モデルにおける梗塞サイズに対する抗ＴＦ抗体処理及びアイソタイプ対照処理の効果を示す心エコー図を含む。 心筋梗塞モデルにおける左室駆出率及び左室拡張末期容積に対する抗ＴＦ処理及びアイソタイプ対照処理の効果を示すプロットを含む。 心筋梗塞モデルにおいて抗ＴＦ処理によって炎症細胞の動員が低減されることを示すプロットを含む。 心筋梗塞モデルにおいて抗ＴＦ処理によって炎症細胞の動員が低減されることを示すプロットを含む。
詳細な説明
１．定義
別途規定されない限り、本明細書で使用される全ての専門用語、表記、及び他の科学用語は、当業者に一般的に理解される意味を有することを意図する。一部の実例では、一般的に理解される意味を有する用語が明確にするため及び／または参照を容易にするために本明細書で定義され、かかる定義の本明細書への組み込みは、必ずしも当該技術分野で通常理解されているものに対する差異を表すものとして解釈されるべきではない。本明細書に記載されるかまたは参照される技法及び手順は、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ ４ｔｈ ｅｄ．（２０１２）Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹに記載される、広く利用される分子クローニング手法等の、当業者に通常よく理解されており、当業者によって従来の手法を用いて一般的に採用されるものである。必要に応じて、市販のキット及び試薬の使用を伴う手順は通常、別途注記のない限り、製造業者が規定するプロトコル及び条件に従って実施される。
本明細書で使用されるとき、単数形「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」、及び「その（ｔｈｅ）」は、文脈上そうでないとする明確な指示がない限り、複数の参照対象を含む。「～を含む」、「等の」という用語、及びそれらの同等物は、別途具体的に指示されない限り、限定のない組み込みを伝えることを意図する。
本明細書で使用されるとき、「～を含むこと」という用語はまた、別途具体的に指示されない限り、列挙される要素「からなる」及び列挙される要素「から本質的になる」実施形態を具体的に含む。
「約」という用語は、示される値、ならびにその値の前後の範囲を示し、かつ包含する。ある特定の実施形態では、「約」という用語は、指定される値±１０％、±５％、または±１％を示す。ある特定の実施形態では、適用可能な場合、「約」という用語は、指定される値（複数可）±その値（複数可）の１標準偏差を示す。
「組織因子」、「ＴＦ」、「血小板組織因子」、「第ＩＩＩ因子」、「トロンボプラスチン」、及び「ＣＤ１４２」という用語は、細胞によって天然に発現されるか、またはＴＦ遺伝子を形質移入された細胞によって発現されるＴＦ、またはＴＦの任意のバリアント（例えば、スプライスバリアント及びアレルバリアント）、アイソフォーム、及び種のホモログを指して本明細書で互換的に使用される。一部の態様では、ＴＦタンパク質は、霊長類（例えば、サルまたはヒト）、齧歯類（例えば、マウスまたはラット）、イヌ、ラクダ、ネコ、ウシ、ヤギ、ウマ、ブタ、またはヒツジによって天然に発現されるＴＦタンパク質である。一部の態様では、ＴＦタンパク質は、ヒトＴＦ（ｈＴＦ、配列番号８０９）である。一部の態様では、ＴＦタンパク質は、カニクイザルＴＦ（ｃＴＦ、配列番号８１３）である。一部の態様では、ＴＦタンパク質は、マウスＴＦ（ｍＴＦ、配列番号８１７）である。一部の態様では、ＴＦタンパク質は、ブタＴＦ（ｐＴＦ、配列番号８２４）である。ＴＦは、セリンプロテアーゼ第ＶＩＩａ因子の細胞表面受容体である。それは多くの場合、血管を取り囲むある特定の細胞によって、及び一部の疾患場面で構成的に発現される。
「抗体薬物コンジュゲート」または「ＡＤＣ」という用語は、任意選択で１つまたは複数のリンカーを通して、１つまたは複数の細胞傷害性薬剤にコンジュゲートされた抗体を含むコンジュゲートを指す。「抗ＴＦ抗体薬物コンジュゲート」または「抗ＴＦ ＡＤＣ」という用語は、任意選択で１つまたは複数のリンカーを通して、１つまたは複数の細胞傷害性薬剤にコンジュゲートされた抗ＴＦ抗体を含むコンジュゲートを指す。
本明細書で使用される「細胞傷害性薬剤」という用語は、細胞機能を阻害するかもしくは阻止する、及び／または細胞死もしくは細胞破壊を引き起こす物質を指す。細胞傷害性薬剤は、血管新生阻害剤、アポトーシス促進剤、有糸分裂阻害剤、キナーゼ阻害剤、アルキル化剤、ホルモン、ホルモンアゴニスト、ホルモンアンタゴニスト、ケモカイン、薬物、プロドラッグ、毒素、酵素、代謝拮抗物質、抗生物質、アルカロイド、または放射性同位体であり得る。代表的な細胞傷害性薬剤には、カリケアマイシン、カンプトテシン、カルボプラチン、イリノテカン、ＳＮ－３８、カルボプラチン、カンプトテカン（ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃａｎ）、シクロホスファミド、シタラビン、ダカルバジン、ドセタキセル、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、ドキソルビシン、エトポシド、イダルビシン、トポテカン、ビンカアルカロイド、マイタンシノイド、マイタンシノイド類似体、ピロロベンゾジアゼピン、タキソイド、デュオカルマイシン、ドラスタチン、アウリスタチン、及びそれらの誘導体が含まれる。
「リンカー」は、１つの組成物を別の組成物に接続する、例えば、抗体を薬剤に接続する分子を指す。本明細書に記載されるリンカーは、抗体を細胞傷害性薬剤にコンジュゲートすることができる。代表的なリンカーには、不安定リンカー、酸不安定リンカー、光不安定リンカー、荷電リンカー、ジスルフィド含有リンカー、ペプチダーゼ感受性リンカー、β－グルクロニド－リンカー、ジメチルリンカー、チオ－エーテルリンカー、及び親水性リンカーが含まれる。リンカーは、切断可能または切断不可能であり得る。
「免疫グロブリン」という用語は、１対の軽（Ｌ）鎖及び１対の重（Ｈ）鎖の２対のポリペプチド鎖を一般に含む、構造的に関連するタンパク質のクラスを指す。「無傷の免疫グロブリン」において、これらの鎖の４つ全ては、ジスルフィド結合によって相互接続されている。免疫グロブリンの構造は、特徴がよく解明されている。例えば、Ｐａｕｌ，Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ７ｔｈ ｅｄ．，Ｃｈ．５（２０１３）Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，ＰＡを参照されたい。簡潔に述べると、各重鎖は典型的に、重鎖可変領域（ＶＨ）及び重鎖定常領域（ＣＨ）を含む。重鎖定常領域は典型的に、ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３と略称される３つのドメインを含む。各軽鎖は典型的に、軽鎖可変領域（ＶＬ）及び軽鎖定常領域を含む。軽鎖定常領域は典型的に、ＣＬと略称される１つのドメインを含む。
「抗体」という用語は、本明細書で最も広義に使用され、抗原またはエピトープに特異的に結合する１つまたは複数の抗原結合ドメインを含む、ある特定の種類の免疫グロブリン分子を含む。抗体には、無傷の抗体（例えば、無傷の免疫グロブリン）、抗体断片、及び多重特異性抗体が具体的に含まれる。
「代替的足場（ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ ｓｃａｆｆｏｌｄ）」という用語は、１つまたは複数の領域が抗原またはエピトープに特異的に結合する１つまたは複数の抗原結合ドメインをもたらすように多様化され得る、分子を指す。一部の実施形態では、抗原結合ドメインは、抗体の特異性及び親和性と類似した特異性及び親和性をもって抗原またはエピトープに結合する。代表的な代替的足場には、フィブロネクチン（例えば、Ａｄｎｅｃｔｉｎｓ（商標））、βサンドイッチ（例えば、ｉＭａｂ）、リポカリン（例えば、Ａｎｔｉｃａｌｉｎｓ（登録商標））、ＥＥＴＩ－ＩＩ／ＡＧＲＰ、ＢＰＴＩ／ＬＡＣＩ－Ｄ１／ＩＴＩ－Ｄ２（例えば、Ｋｕｎｉｔｚドメイン）、チオレドキシンペプチドアプタマー、プロテインＡ（例えば、Ａｆｆｉｂｏｄｙ（登録商標））、アンキリンリピート（例えば、ＤＡＲＰｉｎ）、ガンマ－Ｂ－クリスタリン／ユビキチン（例えば、Ａｆｆｉｌｉｎｓ）、ＣＴＬＤ３（例えば、テトラネクチン）、フィノマー（Ｆｙｎｏｍｅｒｓ）、及び（ＬＤＬＲ－Ａモジュール）（例えば、アビマー（Ａｖｉｍｅｒｓ））に由来するものが含まれる。代替的足場に関する追加の情報は、Ｂｉｎｚ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，２００５ ２３：１２５７－１２６８、Ｓｋｅｒｒａ，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎ．ｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ．，２００７ １８：２９５－３０４、及びＳｉｌａｃｃｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２０１４，２８９：１４３９２－１４３９８に提供され、これらの各々は参照によりその全体が援用される。
「抗原結合ドメイン」という用語は、抗原またはエピトープに特異的に結合することができる抗体の部分を意味する。抗原結合ドメインの一例は、抗体のＶＨ－ＶＬ二量体によって形成される抗原結合ドメインである。抗原結合ドメインの別の例は、Ａｄｎｅｃｔｉｎの第１０フィブロネクチンＩＩＩ型ドメインからのある特定のループの多様化によって形成される抗原結合ドメインである。抗原結合ドメインは、抗体及びキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、例えば抗体またはｓｃＦｖ等の抗体断片に由来するＣＡＲを含めた、種々の関連で見出すことができる。
「完全長抗体」、「無傷の抗体」、及び「全抗体」という用語は、天然に存在する抗体構造と実質的に類似した構造を有し、かつＦｃ領域を含む重鎖を有する抗体を指して、本明細書で互換的に使用される。例えば、ＩｇＧ分子を指して使用されるとき、「完全長抗体」は、２本の重鎖及び２本の軽鎖を含む抗体である。
「Ｆｃ領域」という用語は、天然に存在する抗体においてＦｃ受容体及び補体系のある特定のタンパク質と相互作用する、免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を意味する。種々の免疫グロブリンのＦｃ領域、及びその中に含まれるグリコシル化部位の構造は、当該技術分野で既知である。参照によりその全体が援用される、Ｓｃｈｒｏｅｄｅｒ ａｎｄ Ｃａｖａｃｉｎｉ，Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２０１０，１２５：Ｓ４１－５２を参照されたい。Ｆｃ領域は、天然に存在するＦｃ領域であっても、または当該技術分野もしくは本開示の他の箇所に記載されるように修飾されたＦｃ領域であってもよい。
ＶＨ及びＶＬ領域は、より保存された領域が散在する、超可変性をもつ複数の領域（「超可変領域（ＨＶＲ）」、別名「相補性決定領域」（ＣＤＲ））にさらに細分されてもよい。より保存された領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる。各ＶＨ及びＶＬは通常、以下の順序（Ｎ末端からＣ末端へ）、すなわちＦＲ１－ＣＤＲ１－ＦＲ２－ＣＤＲ２－ＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４で配置された、３つのＣＤＲ及び４つのＦＲを含む。ＣＤＲは、抗原結合に関与し、抗体の抗原特異性及び結合親和性に影響を及ぼす。参照によりその全体が援用される、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ ５ｔｈ ｅｄ．（１９９１）Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤを参照されたい。
「相補性決定領域（ＣＤＲ）」は、免疫グロブリン（Ｉｇまたは抗体）ＶＨのβシートフレームワークの非フレームワーク領域内にある３つの超可変領域（Ｈ１、Ｈ２、またはＨ３）のうちの１つ、または抗体ＶＬのβシートフレームワークの非フレームワーク領域内にある３つの超可変領域（Ｌ１、Ｌ２、またはＬ３）のうちの１つを指す。ＣＤＲは、フレームワーク領域配列内に散在する可変領域配列である。ＣＤＲは、当該技術分野でよく認識されており、例えば、Ｋａｂａｔにより、抗体可変（Ｖ）ドメイン内で最大の超可変性をもつ領域として定義されている。Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ，１９７７，２５２：６６０９－６６１６及びＫａｂａｔ，Ａｄｖ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｃｈｅｍ，１９７８，３２：１－７５を参照されたく、これらの各々は参照によりその全体が援用される。ＣＤＲはまた、Ｃｈｏｔｈｉａにより、保存されたβシートフレームワークの一部ではなく、故に、様々な立体構造を適合させることができる残基として構造的に定義されている。参照によりその全体が援用される、Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ，Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ，１９８７，１９６：９０１－９１７を参照されたい。Ｋａｂａｔ及びＣｈｏｔｈｉａ命名法は両方とも、当該技術分野で周知である。ＡｂＭ、Ｃｏｎｔａｃｔ、及びＩＭＧＴもまたＣＤＲを定義した。古典的な抗体可変ドメイン内のＣＤＲの位置は、多数の構造の比較によって決定されている。Ｍｏｒｅａ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ，２０００，２０：２６７－２７９及びＡｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ，１９９７，２７３：９２７－４８を参照されたく、これらの各々は参照によりその全体が援用される。超可変領域内の残基の数は異なる抗体において様々であるため、古典的な位置に相対的な追加の残基は、古典的な可変ドメインの番号付けスキーム（Ａｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉら（上記参照））における残基番号の隣のａ、ｂ、ｃ等により慣習的に番号付けされる。かかる用語法は当業者に周知である。
いくつかの超可変領域の境界付けが用いられており、これらが本明細書に含まれる。ＫａｂａｔのＣＤＲは、配列の可変性に基づいており、最も一般的に使用される。参照によりその全体が援用される、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．（１９９２）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，ＤＩＡＮＥ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ：２７１９を参照されたい。Ｃｈｏｔｈｉａは、構造的ループの箇所を代わりに参照する（Ｃｈｏｔｈｉａ及びＬｅｓｋ（上記参照））。ＡｂＭの超可変領域は、ＫａｂａｔのＣＤＲとＣｈｏｔｈｉａの構造的ループとの間の折衷案を表し、Ｏｘｆｏｒｄ ＭｏｌｅｃｕｌａｒのＡｂＭ抗体モデリングソフトウェアによって使用される。Ｃｏｎｔａｃｔの超可変領域は、利用可能な複合体結晶構造の分析に基づく。これらの超可変領域の各々からの残基は、表１に記述される。
より最近では、普遍的な番号付けシステムであるＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ（ＩＭＧＴ）Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ（商標）が開発され、広く採用されている。参照によりその全体が援用される、Ｌｅｆｒａｎｃ ｅｔ ａｌ．，Ｄｅｖ Ｃｏｍｐ Ｉｍｍｕｎｏｌ，２００３，２７：５５－７７を参照されたい。ＩＭＧＴは、ヒト及び他の脊椎動物の免疫グロブリン（ＩＧ）、Ｔ細胞受容体（ＴＲ）、及び主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）に特化している、統合された情報システムである。ＩＭＧＴのＣＤＲは、アミノ酸配列及び軽鎖または重鎖内の箇所の両方の点から参照される。免疫グロブリン可変ドメインの構造内のＣＤＲの「箇所」は種の間で保存されており、ループと呼ばれる構造で存在するため、構造的特徴に従って可変ドメイン配列をアライメントする番号付けシステムを用いることにより、ＣＤＲ及びフレームワーク残基が容易に特定される。Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、及びＩＭＧＴ番号付けの間の対応関係もまた、当該技術分野で周知である（Ｌｅｆｒａｎｃら（上記参照））。本明細書に示される代表的なシステムは、Ｋａｂａｔ及びＣｈｏｔｈｉａのＣＤＲ定義を組み合わせたものである。
（表１）
Figure 2023534191000002
任意の脊椎動物種由来の軽鎖は、その定常ドメインの配列に基づいて、カッパ（κ）及びラムダ（λ）と呼ばれる２つの種類のうちの１つに割り当てることができる。
任意の脊椎動物種由来の重鎖は、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭの５つの異なるクラス（またはアイソタイプ）のうちの１つに割り当てることができる。これらのクラスはまた、それぞれα、δ、ε、γ、及びμとも表記される。ＩｇＧ及びＩｇＡクラスは、配列及び機能の差異に基づいてサブクラスにさらに分割される。ヒトは、以下のサブクラス、すなわちＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２を発現する。
「定常領域」または「定常ドメイン」という用語は、抗体の抗原への結合には直接関与しないが、Ｆｃ受容体との相互作用等の種々のエフェクター機能を示す、軽鎖及び重鎖のカルボキシ末端部分を指す。これらの用語は、免疫グロブリン分子における、抗原結合部位を含有する免疫グロブリンの他方の部分である可変ドメインと比べて、より保存されたアミノ酸配列を有する部分を指す。定常ドメインは、重鎖のＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３ドメインならびに軽鎖のＣＬドメインを含有する。
「ＥＵ番号付けスキーム」は一般に、抗体の重鎖定常領域における残基を指す際に使用される（例えば、Ｋａｂａｔら（上記参照）に報告される通り）。別途定めのない限り、ＥＵ番号付けスキームは、本明細書に記載される抗体の重鎖定常領域における残基を指して使用される。
「抗体断片」は、無傷の抗体の抗原結合領域または可変領域等の、無傷の抗体の一部分を含む。抗体断片には、例えば、Ｆｖ断片、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆａｂ’断片、ｓｃＦｖ（ｓＦｖ）断片、及びｓｃＦｖ－Ｆｃ断片が含まれる。
「Ｆｖ」断片は、１つの重鎖可変ドメイン及び１つの軽鎖可変ドメインが非共有結合性で連結された二量体を含む。
「Ｆａｂ」断片は、重鎖及び軽鎖可変ドメインに加えて、軽鎖及び重鎖の第１の定常ドメイン（ＣＨ１）の定常ドメインを含む。Ｆａｂ断片は、例えば、組換え法によって、または完全長抗体のパパイン消化によって、生成されてもよい。
「Ｆ（ａｂ’）２」断片は、ヒンジ領域の近くでジスルフィド結合によって接合された２つのＦａｂ’断片を含有する。Ｆ（ａｂ’）２断片は、例えば、組換え法によって、または無傷の抗体のペプシン消化によって、生成されてもよい。Ｆ（ａｂ’）断片は、例えば、β－メルカプトエタノールでの処置によって、解離され得る。
「１本鎖Ｆｖ」または「ｓＦｖ」または「ｓｃＦｖ」抗体断片は、１本のポリペプチド鎖にＶＨドメイン及びＶＬドメインを含む。ＶＨ及びＶＬは通常、ペプチドリンカーによって連結される。Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ Ａ．（１９９４）を参照されたい。任意の好適なリンカーが使用されてもよい。一部の実施形態では、リンカーは、（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号８２３）である。一部の実施形態では、ｎ＝１、２、３、４、５、または６である。参照によりその全体が援用される、Ｉｎ Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ Ｍ．＆ Ｍｏｏｒｅ Ｇ．Ｐ．（Ｅｄｓ．），Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｖｏｌ．１１３（ｐｐ．２６９－３１５）．Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋにおける、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ．）からの抗体を参照されたい。
「ｓｃＦｖ－Ｆｃ」断片は、Ｆｃドメインに結合させたｓｃＦｖを含む。例えば、Ｆｃドメインは、ｓｃＦｖのＣ末端に結合させてもよい。Ｆｃドメインは、ｓｃＦｖにおける可変ドメインの向き（すなわち、ＶＨ－ＶＬまたはＶＬ－ＶＨ）に応じて、ＶＨまたはＶＬに続いてもよい。当該技術分野で既知の、または本明細書に記載される任意の好適なＦｃドメインが使用されてもよい。
「単一ドメイン抗体」という用語は、抗体の一方の可変ドメインが他方の可変ドメインの存在なしに抗原に特異的に結合する、分子を指す。単一ドメイン抗体、及びその断片については、Ａｒａｂｉ Ｇｈａｈｒｏｕｄｉ ｅｔ ａｌ．，ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔｅｒｓ，１９９８，４１４：５２１－５２６及びＭｕｙｌｄｅｒｍａｎｓ ｅｔ ａｌ．，Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｃｉ．，２００１，２６：２３０－２４５に記載され、これらの各々は参照によりその全体が援用される。単一ドメイン抗体はまた、ｓｄＡｂまたはナノボディとしても知られる。
「多重特異性抗体」は、２つ以上の異なるエピトープに共同して特異的に結合する２つ以上の異なる抗原結合ドメインを含む抗体である。これらの２つ以上の異なるエピトープは、同じ抗原上（例えば、細胞によって発現される単一のＴＦ分子）または異なる抗原上（例えば、ＴＦ分子及び非ＴＦ分子）のエピトープであってもよい。一部の態様では、多重特異性抗体は、２つの異なるエピトープに結合する（すなわち、「二重特異性抗体」）。一部の態様では、多重特異性抗体は、３つの異なるエピトープに結合する（すなわち、「三重特異性抗体」）。一部の態様では、多重特異性抗体は、４つの異なるエピトープに結合する（すなわち、「四重特異性抗体」）。一部の態様では、多重特異性抗体は、５つの異なるエピトープに結合する（すなわち、「五重特異性抗体」）。一部の態様では、多重特異性抗体は、６つ、７つ、８つ、またはそれよりも多くの異なるエピトープに結合する。各結合特異性は、任意の好適な結合価で存在してもよい。多重特異性抗体の例は、本開示の他の箇所で提供される。
「単一特異性抗体」は、単一のエピトープに特異的に結合する１つまたは複数の結合部位を含む抗体である。単一特異性抗体の例は、二価（すなわち、２つの抗原結合ドメインを有する）でありながら、２つの抗原結合ドメインの各々で同じエピトープを認識する、天然に存在するＩｇＧ分子である。結合特異性は、任意の好適な結合価で存在してもよい。
「モノクローナル抗体」という用語は、実質的に同種の抗体の集団からの抗体を指す。実質的に同種の抗体の集団は、モノクローナル抗体の生産中に正常に発生し得るバリアントを除いて、実質的に類似しており、同じエピトープ（複数可）に結合する抗体を含む。かかるバリアントは通常、少量でのみ存在する。モノクローナル抗体は典型的に、複数の抗体からの単一の抗体の選択を含む過程によって得られる。例えば、選択過程は、ハイブリドーマクローン、ファージクローン、酵母クローン、細菌クローン、または他の組換えＤＮＡクローンのプール等の、複数のクローンからの固有のクローンの選択であり得る。選択された抗体は、例えば、標的に対する親和性を改善する（「親和性成熟」）、抗体をヒト化する、細胞培養物中でのその生産を改善する、及び／または対象におけるその免疫原性を低減するように、さらに改変され得る。
「キメラ抗体」という用語は、重鎖及び／または軽鎖の一部分が特定の供給源または種に由来する一方で、重鎖及び／または軽鎖の残りの部分が異なる供給源または種に由来する、抗体を指す。
非ヒト抗体の「ヒト化」型は、非ヒト抗体に由来する配列を最小限に含有するキメラ抗体である。ヒト化抗体は通常、ヒト抗体（レシピエント抗体）において、１つまたは複数のＣＤＲからの残基が、非ヒト抗体（ドナー抗体）の１つまたは複数のＣＤＲからの残基と置き換えられているものである。ドナー抗体は、所望の特異性、親和性、または生物学的効果を有する、マウス、ラット、ウサギ、ニワトリ、または非ヒト霊長類抗体等の任意の好適な非ヒト抗体であり得る。一部の事例では、レシピエント抗体の選択されたフレームワーク領域の残基が、ドナー抗体からの対応するフレームワーク領域の残基と置き換えられている。ヒト化抗体はまた、レシピエント抗体またはドナー抗体のいずれにも見出されない残基を含んでもよい。かかる修飾は、抗体機能をさらに改良するために行われ得る。さらなる詳細については、Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，１９８６，３２１：５２２－５２５、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，１９８８，３３２：３２３－３２９、及びＰｒｅｓｔａ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．，１９９２，２：５９３－５９６を参照されたく、これらの各々は参照によりその全体が援用される。
「ヒト抗体」は、ヒトもしくはヒト細胞によって産生される抗体のアミノ酸配列、または（例えば、ヒト供給源から得られたか、または新規に設計された）ヒト抗体のレパートリーもしくはヒト抗体コード配列を利用する非ヒト供給源に由来する抗体のアミノ酸配列に対応する、アミノ酸配列をもつものである。ヒト抗体は、ヒト化抗体を具体的に除外するものである。
「単離された抗体」または「単離された核酸」は、その天然環境の構成成分から分離された、及び／または回収された抗体または核酸である。天然環境の構成成分には、酵素、ホルモン、及び他のタンパク質性または非タンパク質性の材料が含まれ得る。一部の実施形態では、単離された抗体は、例えば、スピニングカップシークエネーターの使用によって、Ｎ末端アミノ酸配列または内部アミノ酸配列の少なくとも１５残基を得るのに十分な程度に精製される。一部の実施形態では、単離された抗体は、クーマシーブルーまたは銀染色による検出を用いた還元または非還元条件下でのゲル電気泳動（例えば、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）によって、均一になるまで精製される。一部の実施形態では、単離された抗体には、当該抗体の天然環境の少なくとも１つの構成成分が存在しないことから、組換え細胞内の本来の場所にある抗体が含まれてもよい。一部の態様では、単離された抗体または単離された核酸は、少なくとも１つの精製ステップによって調製される。一部の実施形態では、単離された抗体または単離された核酸は、少なくとも８０重量％、８５重量％、９０重量％、９５重量％、または９９重量％まで精製される。一部の実施形態では、単離された抗体または単離された核酸は、少なくとも８０体積％、８５体積％、９０体積％、９５体積％、または９９体積％まで精製される。一部の実施形態では、単離された抗体または単離された核酸は、少なくとも８５重量％、９０重量％、９５重量％、９８重量％、９９重量％～１００重量％の抗体または核酸を含む溶液として提供される。一部の実施形態では、単離された抗体または単離された核酸は、少なくとも８５体積％、９０体積％、９５体積％、９８体積％、９９体積％～１００体積％の抗体または核酸を含む溶液として提供される。
「親和性」は、分子（例えば、抗体）の単一の結合部位と、その結合パートナー（例えば、抗原またはエピトープ）との間の非共有結合性の相互作用の合計の強度を指す。別途指示されない限り、本明細書で使用されるとき、「親和性」は、結合対のメンバー（例えば、抗体と抗原またはエピトープとの）間の１：１相互作用を反映する、固有の結合親和性を指す。分子Ｘの、そのパートナーＹに対する親和性は、解離平衡定数（ＫＤ）によって表すことができる。解離平衡定数に寄与する動態学的成分は、下記にさらに詳述される。親和性は、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）技術（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標））またはバイオレイヤー干渉法（例えば、ＦＯＲＴＥＢＩＯ（登録商標））等の、本明細書に記載される方法を含めた、当該技術分野で既知の一般的な方法によって測定することができる。
抗体の標的分子への結合に関して、特定の抗原（例えば、ポリペプチド標的）または特定の抗原上のエピトープ「に結合する」、「特異的結合」、それ「に特異的に結合する」、それ「に特異的な」、それ「に選択的に結合する」、及びそれ「に選択的な」という用語は、（例えば、非標的分子との）非特異的または非選択的な相互作用とは測定できるほどに異なる結合を意味する。特異的結合は、例えば、標的分子への結合を測定し、それを非標的分子への結合と比較することによって、測定することができる。特異的結合はまた、標的分子上で認識されるエピトープを模倣する対照分子との競合によって決定することもできる。その実例では、抗体の標的分子への結合が対照分子によって競合的に阻害される場合、特異的結合が指示される。一部の態様では、非標的分子に対するＴＦ抗体の親和性は、ＴＦに対する親和性の約５０％未満である。一部の態様では、非標的分子に対するＴＦ抗体の親和性は、ＴＦに対する親和性の約４０％未満である。一部の態様では、非標的分子に対するＴＦ抗体の親和性は、ＴＦに対する親和性の約３０％未満である。一部の態様では、非標的分子に対するＴＦ抗体の親和性は、ＴＦに対する親和性の約２０％未満である。一部の態様では、非標的分子に対するＴＦ抗体の親和性は、ＴＦに対する親和性の約１０％未満である。一部の態様では、非標的分子に対するＴＦ抗体の親和性は、ＴＦに対する親和性の約１％未満である。一部の態様では、非標的分子に対するＴＦ抗体の親和性は、ＴＦに対する親和性の約０．１％未満である。
一部の実施形態では、特異的に結合することは、１ｎＭ未満の親和性を有する抗体結合を指す。一部の実施形態では、特異的に結合することは、１０ｎＭ未満の親和性を有する抗体結合を指す。一部の実施形態では、特異的に結合することは、５０ｎＭ未満の親和性を有する抗体結合を指す。一部の実施形態では、特異的に結合することは、１００ｎＭ未満の親和性を有する抗体結合を指す。一部の実施形態では、特異的に結合することは、２００ｎＭ未満の親和性を有する抗体結合を指す。一部の実施形態では、特異的に結合することは、３００ｎＭ未満の親和性を有する抗体結合を指す。一部の実施形態では、特異的に結合することは、２００ｎＭ未満、３００ｎＭ未満、４００ｎＭ未満、または５００ｎＭ未満の親和性を有する抗体結合を指す。一部の実施形態では、特異的に結合することは、０ｎＭ未満、１０ｎＭ未満、２０ｎＭ未満、３０ｎＭ未満、４０ｎＭ未満、５０ｎＭ未満、６０ｎＭ未満、７０ｎＭ未満、８０ｎＭ未満、９０ｎＭ未満、または１００ｎＭ未満の親和性を有する抗体結合を指す。
本明細書で使用される「ｋｄ」（秒－１）という用語は、特定の抗体－抗原間相互作用の解離速度定数を指す。この値はまた、ｋオフ値とも称される。
本明細書で使用される「ｋａ」（Ｍ－１×秒－１）という用語は、特定の抗体－抗原間相互作用の会合速度定数を指す。この値はまた、ｋオン値とも称される。
本明細書で使用される「ＫＤ」（Ｍ）という用語は、特定の抗体－抗原間相互作用の解離平衡定数を指す。ＫＤ＝ｋｄ／ｋａである。一部の実施形態では、抗体の親和性は、かかる抗体とその抗原との間の相互作用に関するＫＤの点から記述される。明確にするために、当該技術分野で既知であるように、より小さいＫＤ値はより大きい親和性相互作用を示す一方で、より大きいＫＤ値はより低い親和性相互作用を示す。
本明細書で使用される「ＫＡ」（Ｍ－１）という用語は、特定の抗体－抗原間相互作用の会合平衡定数を指す。ＫＡ＝ｋａ／ｋｄである。
「親和性成熟」抗体は、親抗体（すなわち、改変された抗体の由来となるか、またはその設計の元となる抗体）と比べて、（例えば、１つまたは複数のＣＤＲまたはＦＲにおいて）１つまたは複数の改変を有し、その結果、当該改変（複数可）をもたない親抗体と比較して、抗体のその抗原に対する親和性が改善される抗体である。一部の実施形態では、親和性成熟抗体は、標的抗原に対してナノモル濃度またはピコモル濃度の親和性を有する。親和性成熟抗体は、当該技術分野で既知の様々な方法を用いて生産されてもよい。例えば、Ｍａｒｋｓら（参照によりその全体が援用される、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１９９２，１０：７７９－７８３）は、ＶＨ及びＶＬドメインのシャフリングによる親和性成熟について記載している。ＣＤＲ及び／またはフレームワーク残基のランダム変異誘発が、例えば、Ｂａｒｂａｓ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，１９９４，９１：３８０９－３８１３、Ｓｃｈｉｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅ，１９９５，１６９：１４７－１５５、Ｙｅｌｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１９９５，１５５：１９９４－２００４、Ｊａｃｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１９９５，１５４：３３１０－３３１９９、及びＨａｗｋｉｎｓ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１９９２，２２６：８８９－８９６により記載され、これらの各々は参照によりその全体が援用される。
「Ｆｃエフェクター機能」は、抗体のＦｃ領域によって媒介される生物学的活性を指し、その活性は抗体のアイソタイプに応じて様々であり得る。抗体エフェクター機能の例としては、補体依存性細胞傷害作用（ＣＤＣ）を活性化するようなＣ１ｑ結合、抗体依存性細胞傷害作用（ＡＤＣＣ）、及び抗体依存性細胞貪食（ＡＤＣＰ）を活性化するようなＦｃ受容体結合が挙げられる。
２つ以上の抗体の関連において本明細書で使用されるとき、「～と競合する」または「～と交差競合する」という用語は、２つ以上の抗体が抗原（例えば、ＴＦ）への結合を競合することを示す。１つの代表的なアッセイでは、ＴＦが表面上にコーティングされて、第１のＴＦ抗体と接触させられ、その後、第２のＴＦ抗体が添加される。別の代表的なアッセイでは、第１のＴＦ抗体が表面上にコーティングされて、ＴＦと接触させられ、次いで、第２のＴＦ抗体が添加される。いずれのアッセイにおいても、第１のＴＦ抗体の存在が第２のＴＦ抗体の結合を低減する場合、それらの抗体は、互いに競合する。「～と競合する」という用語はまた、１つの抗体が別の抗体の結合を低減するが、これらの抗体を逆の順序で添加する場合は競合が何ら観察されない、抗体の組み合わせも含む。しかしながら、一部の実施形態では、第１及び第２の抗体は、それらが添加される順序を問わず、互いの結合を阻害する。一部の実施形態では、１つの抗体は、別の抗体のその抗原へ結合を、少なくとも２５％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％低減する。当業者は、ＴＦに対する抗体の親和性及び抗体の結合価に基づいて、競合アッセイに使用される抗体の濃度を選択することができる。この定義に記載されるアッセイは例示的なものであり、当業者は、任意の好適なアッセイを利用して、抗体が互いに競合するかどうかを決定することができる。好適なアッセイは、例えば、Ｃｏｘ ｅｔ ａｌ．，“Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ Ｍｅｔｈｏｄｓ，”ｉｎ Ａｓｓａｙ Ｇｕｉｄａｎｃｅ Ｍａｎｕａｌ［インターネット］、２０１４年１２月２４日更新（ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｂｏｏｋｓ／ＮＢＫ９２４３４／、２０１５年９月２９日にアクセス）、Ｓｉｌｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ，２００１，４４：３０－３７、及びＦｉｎｃｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ａｎａｌ．，２０１１，５４：３５１－３５８に記載され、これらの各々は参照によりその全体が援用される。実施例８に提供されるように、群２５の抗体及び群４３の抗体は、ヒトＴＦへの結合を互いに競合する一方で、群１、２９、３９、及び５４からの抗体は、ヒトＴＦへの結合を群２５及び４３の抗体と競合しない。
本明細書で使用されるとき、ヒト抗原に特異的に結合する抗体は、ＦｏｒｔｅＢｉｏ Ｏｃｔｅｔにおいてマウス抗原とのＫＤ値が測定され得る場合、マウス起源の同じ抗原に結合すると見なされる。ヒト抗原に特異的に結合する抗体は、マウス抗原に対するＫＤ値が、その対応するヒト抗原に対する対応するＫＤ値の２０倍以下である場合、マウス起源の同じ抗原と「交差反応性」であると見なされる。例えば、米国特許第８，７２２，０４４号、同第８，９５１，５２５号、及び同第８，９９９，３３３号（これらの各々は参照により全目的で本明細書に援用される）に記載される抗体Ｍ１５９３、参照によりその全体が援用される、Ｎｇｏ ｅｔ ａｌ．，２００７，Ｉｎｔ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ，１２０（６）：１２６１－１２６７に記載されるヒト化５Ｇ９抗体、ならびに参照によりその全体が援用される、Ｈｏｎｇ ｅｔ ａｌ，２０１２，Ｊ Ｎｕｃｌ Ｍｅｄ，５３（１１）：１７４８－１７５４に記載されるキメラＡＬＴ－８３６抗体は、マウスＴＦに結合しない。実施例１及び６に提供されるように、群２５及び４３からのＴＦ抗体は、マウスＴＦに結合し、例えば、ＴＦ抗体である２５Ｇ、２５Ｇ１、２５Ｇ９、及び４３Ｄ８は、マウスＴＦと交差反応性である。
本明細書で使用されるとき、ヒト抗原に特異的に結合する抗体は、カニクイザルサル抗原に対するＫＤ値が、その対応するヒト抗原に対する対応するＫＤ値の１５倍以下である場合、カニクイザルサル起源の同じ抗原と「交差反応性」であると見なされる。実施例１に提供されるように、群１、２５、２９、３９、４３、及び５４からの試験された全ての抗体は、カニクイザルサルＴＦと交差反応性である。
「エピトープ」という用語は、抗体が特異的に結合する抗原の一部分を意味する。エピトープは、表面上で接触可能なアミノ酸残基及び／または糖側鎖を含むことが多く、特定の３次元構造特性、ならびに特定の電荷特性を有してもよい。立体構造エピトープ及び非立体構造エピトープは、変性溶媒の存在下で前者への結合が失われ得るが、後者への結合が失われないであろう点で識別される。エピトープは、結合に直接関与するアミノ酸残基、及び結合に直接関与しない他のアミノ酸残基を含んでもよい。抗体が結合するエピトープは、例えば、異なる点変異を有するＴＦバリアント、またはキメラＴＦバリアントへの抗体結合に関する試験等の、エピトープ決定のための既知の技法を用いて決定することができる。
ポリペプチド配列と参照配列との間の「同一性」パーセントは、最大の配列同一性パーセントを達成するようにこれらの配列をアライメントし、必要であればギャップを導入した後に、参照配列におけるアミノ酸残基と同一である、ポリペプチド配列におけるアミノ酸残基の百分率として定義される。アミノ酸配列同一性パーセントを決定する目的でのアライメントは、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ－２、ＡＬＩＧＮ、ＭＥＧＡＬＩＧＮ（ＤＮＡＳＴＡＲ）、ＣＬＵＳＴＡＬＷ、ＣＬＵＳＴＡＬ ＯＭＥＧＡ、またはＭＵＳＣＬＥソフトウェア等の一般公開されているコンピュータソフトウェアを用いて、当業者の技能の範囲内にある種々の方式で達成することができる。当業者は、比較されている配列の全長にわたって最大のアライメントを達成するために必要とされる任意のアルゴリズムを含めて、配列をアライメントするための適切なパラメータを決定することができる。
「保存的置換」または「保存的アミノ酸置換」は、あるアミノ酸の、化学的または機能的に類似したアミノ酸との置換を指す。類似したアミノ酸を提供する保存的置換の表は、当該技術分野で周知である。例として、表２～４に提供されるアミノ酸の群は、一部の実施形態において、互いに保存的置換と見なされる。
（表２）ある特定の実施形態において互いに保存的置換と見なされる選択されたアミノ酸の群
Figure 2023534191000003
（表３）ある特定の実施形態において互いに保存的置換と見なされる追加の選択されたアミノ酸の群
Figure 2023534191000004
（表４）ある特定の実施形態において互いに保存的置換と見なされるさらなる選択されたアミノ酸の群
Figure 2023534191000005
追加の保存的置換は、例えば、Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ，Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ２ｎｄ ｅｄ．（１９９３）Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ ＆ Ｃｏ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹに見出され得る。親抗体においてアミノ酸残基の１つまたは複数の保存的置換を行うことによって生成された抗体は、「保存的修飾バリアント」と称される。
「アミノ酸」という用語は、天然に存在する２０個の一般的なアミノ酸を指す。天然に存在するアミノ酸には、アラニン（Ａｌａ、Ａ）、アルギニン（Ａｒｇ、Ｒ）、アスパラギン（Ａｓｎ、Ｎ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ、Ｄ）、システイン（Ｃｙｓ、Ｃ）、グルタミン酸（Ｇｌｕ、Ｅ）、グルタミン（Ｇｌｎ、Ｑ）、グリシン（Ｇｌｙ、Ｇ）、ヒスチジン（Ｈｉｓ、Ｈ）、イソロイシン（Ｉｌｅ、Ｉ）、ロイシン（Ｌｅｕ、Ｌ）、リジン（Ｌｙｓ、Ｋ）、メチオニン（Ｍｅｔ、Ｍ）、フェニルアラニン（Ｐｈｅ、Ｆ）、プロリン（Ｐｒｏ、Ｐ）、セリン（Ｓｅｒ、Ｓ）、トレオニン（Ｔｈｒ、Ｔ）、トリプトファン（Ｔｒｐ、Ｗ）、チロシン（Ｔｙｒ、Ｙ）、及びバリン（Ｖａｌ、Ｖ）が含まれる。
本明細書で使用される「ベクター」という用語は、それが連結されている別の核酸を伝播させることができる核酸分子を指す。この用語は、ベクターが導入された宿主細胞のゲノムに組み込まれたベクターのみならず、自己複製型核酸構造としてのベクターを含む。ある特定のベクターは、それらが作動的に連結されている核酸の発現を指示することが可能である。かかるベクターは、本明細書で「発現ベクター」と称される。
「宿主細胞」、「宿主細胞株」、及び「宿主細胞培養物」という用語は、互換的に使用され、外因性核酸が導入された細胞、及びかかる細胞の子孫を指す。宿主細胞には、「形質転換体」（または「形質転換細胞」）及び「形質移入体」（または「形質移入細胞」）が含まれ、これらは各々、形質転換または形質移入された初代細胞及びそれらに由来する子孫を含む。かかる子孫は、核酸の内容が親細胞と完全に同一でない場合があり、変異を含有し得る。
「処置すること」という用語（及び「処置する」または「処置」等のその変形）は、それを必要とする対象において疾患または病態の自然経過を変化させようとする臨床的介入を指す。処置は、予防のため、及び臨床病理経過中の両方で行うことができる。望ましい処置の効果には、疾患の発生または再発の予防、症状の緩和、疾患の任意の直接的または間接的な病理学的帰結の縮小、転移の予防、疾患進行速度の減少、病状の回復または一次的緩和、及び寛解または予後の改善が含まれる。
本明細書で使用されるとき、「治療的有効量」または「有効量」という用語は、本明細書に提供される抗体または薬学的組成物の、対象に投与されたときに疾患または障害を処置するのに有効である量を指す。有効量は、所望の結果または利益を対象にもたらす上で十分なものである。有効量は、１回以上の投与、適用、または投与量において投与され得るものであり、特定の製剤または投与経路への限定を意図するものではない。
本明細書で使用される「ベースラインレベル」及び「ベースライン」という用語は、治療直前または治療時点でのパラメータ（例えば、体重）のレベルを指す。
本明細書で使用されるとき、「対象」という用語は、哺乳類対象を意味する。代表的な対象には、ヒト、サル、イヌ、ネコ、マウス、ラット、ウシ、ウマ、ラクダ、ヤギ、ウサギ、ブタ、及びヒツジが含まれる。ある特定の実施形態では、対象は、ヒトである。一部の実施形態では、対象は、本明細書に提供される抗体で処置され得る疾患または病態を有する。一部の態様では、疾患または病態は、炎症性疾患である。一部の態様では、疾患または病態は、血管新生または血管炎症を伴う。
本明細書で使用される「それを必要とする対象」という語句は、本明細書に記載の炎症性疾患の症状または徴候を１つ以上示す及び／または有すると診断された対象を指す。
「添付文書」という用語は、治療製品または診断製品の適応症、用法、投薬量、投与、併用療法、禁忌症、及び／または使用に関する警告についての情報を含む、当該治療製品または診断製品の商業的パッケージ（例えば、キット）に通例含まれる説明書を指して使用される。
「化学療法剤」は、がんの処置において有用な化学物質を指す。化学療法剤には、がんの成長を促進し得るホルモンの効果を調節する、低減する、遮断する、または阻害するように作用する「抗ホルモン剤」または「内分泌療法薬」が含まれる。
「細胞分裂阻害剤」という用語は、インビトロまたはインビボのいずれかで細胞の成長を停止させる化合物または組成物を指す。一部の実施形態では、細胞分裂阻害剤は、Ｓ期で細胞の百分率を低減する薬剤である。一部の実施形態では、細胞分裂阻害剤は、Ｓ期で細胞の百分率を、少なくとも約２０％、少なくとも約４０％、少なくとも約６０％、または少なくとも約８０％低減する。
「薬学的組成物」という用語は、その中に含有される活性成分の生物学的活性が対象を処置する際に有効であることができるような形態であり、かつ薬学的組成物中に提供される量で対象にとって許容できないほどに有毒である追加の構成成分を何ら含有しない調製物を指す。
「調節する」及び「調節」という用語は、列挙される可変要素を低減するかもしくは阻害すること、または代替として、活性化するかもしくは増加させることを指す。
「増加する」及び「活性化する」という用語は、列挙される可変要素の１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％、２倍、３倍、４倍、５倍、１０倍、２０倍、５０倍、１００倍、またはそれを超える増加を指す。
「低減する」及び「阻害する」という用語は、列挙される可変要素の１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、２倍、３倍、４倍、５倍、１０倍、２０倍、５０倍、１００倍、またはそれを超える減少を指す。
「作動させる」という用語は、受容体の活性化に関連する生物学的応答を誘導するための、受容体のシグナル伝達の活性化を指す。「アゴニスト」は、受容体に結合して、それを作動させる実体である。
「拮抗する」という用語は、受容体の活性化に関連する生物学的応答を阻害するための、受容体のシグナル伝達の阻害を指す。「アンタゴニスト」は、受容体に結合して、それに拮抗する実体である。
２．ＴＦ抗体
２．１．ＴＦ結合
本明細書において、ＴＦに特異的に結合する単離された抗体が提供される。一部の態様では、ＴＦは、ｈＴＦ（配列番号８０９）である。一部の態様では、ＴＦは、ｃＴＦ（配列番号８１３）である。一部の態様では、ＴＦは、ｍＴＦ（配列番号８１７）である。一部の態様では、ＴＦは、ウサギＴＦ（配列番号８３２）である。一部の態様では、ＴＦは、ｐＴＦ（配列番号８２４）である。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ｈＴＦ（配列番号８０９）、ｃＴＦ（配列番号８１３）、ｍＴＦ（配列番号８１７）、ウサギＴＦ（配列番号８３２）、及びｐＴＦ（配列番号８２４）に特異的に結合する。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ｈＴＦ（配列番号８０９）、ｃＴＦ（配列番号８１３）、ｍＴＦ（配列番号８１７）、及びｐＴＦ（配列番号８２４）に特異的に結合する。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ｈＴＦ（配列番号８０９）、ｃＴＦ（配列番号８１３）、及びｍＴＦ（配列番号８１７）に特異的に結合する。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ｈＴＦ（配列番号８０９）及びｃＴＦ（配列番号８１３）に特異的に結合する。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ｍＴＦ（配列番号８１７）に結合しない。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ｐＴＦ（配列番号８２４）に結合しない。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ウサギＴＦ（配列番号８３２）に結合しない。
種々の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ヒトＴＦの細胞外ドメイン（配列番号８１０）に特異的に結合する。
一部の実施形態では、生細胞染色アッセイにおいてアイソタイプ対照と比べた該抗体の蛍光強度中央値によって判定される場合、本明細書に提供される抗体と、配列番号８１０に示される配列のアミノ酸残基１４９に変異を含むバリアントＴＦの細胞外ドメインとの間の結合は、本明細書に提供される抗体と、配列番号８１０に示される配列のＴＦの細胞外ドメインとの間の結合の５０％未満である。一部の実施形態では、配列番号８１０に示される配列のアミノ酸残基１４９における変異は、Ｋ１４９Ｎである。
一部の実施形態では、生細胞染色アッセイにおいてアイソタイプ対照と比べた該抗体の蛍光強度中央値によって判定される場合、本明細書に提供される抗体と、配列番号８１０に示される配列のアミノ酸残基６８に変異を含むバリアントＴＦの細胞外ドメインとの間の結合は、本明細書に提供される抗体と、配列番号８１０に示される配列のＴＦの細胞外ドメインとの間の結合の５０％超である。一部の実施形態では、配列番号８１０に示される配列のアミノ酸残基６８における変異は、Ｋ６８Ｎである。
一部の実施形態では、生細胞染色アッセイにおいてアイソタイプ対照と比べた該抗体の蛍光強度中央値によって判定される場合、本明細書に提供される抗体と、配列番号８１０に示される配列のアミノ酸残基１７１及び１９７に変異を含むバリアントＴＦの細胞外ドメインとの間の結合は、本明細書に提供される抗体と、配列番号８１０に示される配列のＴＦの細胞外ドメインとの間の結合の５０％未満である。一部の実施形態では、配列番号８１０に示される配列のアミノ酸残基１７１及び１９７における変異は、Ｎ１７１Ｈ及びＴ１９７Ｋである。
一部の実施形態では、生細胞染色アッセイにおいてアイソタイプ対照と比べた該抗体の蛍光強度中央値によって判定される場合、本明細書に提供される抗体と、配列番号８１０に示される配列のアミノ酸残基１～７７が配列番号８３８に示される配列のラットＴＦの細胞外ドメインにおけるアミノ酸残基１～７６と置き換えられたヒトＴＦの細胞外ドメインとの間の結合は、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のＴＦの細胞外ドメインとの間の結合の５０％超である。
一部の実施形態では、生細胞染色アッセイにおいてアイソタイプ対照と比べた該抗体の蛍光強度中央値によって判定される場合、本明細書に提供される抗体と、配列番号８１０に示される配列のアミノ酸残基３９～７７が配列番号８３８に示される配列のラットＴＦの細胞外ドメインにおけるアミノ酸残基３８～７６と置き換えられたヒトＴＦの細胞外ドメインとの間の結合は、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のＴＦの細胞外ドメインとの間の結合の５０％超である。
一部の実施形態では、生細胞染色アッセイにおいてアイソタイプ対照と比べた該抗体の蛍光強度中央値によって判定される場合、本明細書に提供される抗体と、配列番号８１０に示される配列のアミノ酸残基９４～１０７が配列番号８３８に示される配列のラットＴＦの細胞外ドメインにおけるアミノ酸残基９９～１１２と置き換えられたヒトＴＦの細胞外ドメインとの間の結合は、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のＴＦの細胞外ドメインとの間の結合の５０％超である。
一部の実施形態では、生細胞染色アッセイにおいてアイソタイプ対照と比べた該抗体の蛍光強度中央値によって判定される場合、本明細書に提供される抗体と、配列番号８１０に示される配列のアミノ酸残基１４６～１５８が配列番号８３８に示される配列のラットＴＦの細胞外ドメインにおけるアミノ酸残基１５１～１６３と置き換えられたヒトＴＦの細胞外ドメインとの間の結合は、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のＴＦの細胞外ドメインとの間の結合の５０％未満である。
一部の実施形態では、生細胞染色アッセイにおいてアイソタイプ対照と比べた該抗体の蛍光強度中央値によって判定される場合、本明細書に提供される抗体と、配列番号８１０に示される配列のアミノ酸残基１５９～２１９が配列番号８３８に示される配列のラットＴＦの細胞外ドメインにおけるアミノ酸残基１６４～２２４と置き換えられたヒトＴＦの細胞外ドメインとの間の結合は、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のＴＦの細胞外ドメインとの間の結合の５０％未満である。
一部の実施形態では、生細胞染色アッセイにおいてアイソタイプ対照と比べた該抗体の蛍光強度中央値によって判定される場合、本明細書に提供される抗体と、配列番号８１０に示される配列のアミノ酸残基１５９～１８９が配列番号８３８に示される配列のラットＴＦの細胞外ドメインにおけるアミノ酸残基１６４～１９４と置き換えられたヒトＴＦの細胞外ドメインとの間の結合は、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のＴＦの細胞外ドメインとの間の結合の５０％未満である。
一部の実施形態では、生細胞染色アッセイにおいてアイソタイプ対照と比べた該抗体の蛍光強度中央値によって判定される場合、本明細書に提供される抗体と、配列番号８１０に示される配列のアミノ酸残基１５９～１７４が配列番号８３８に示される配列のラットＴＦの細胞外ドメインにおけるアミノ酸残基１６４～１７９と置き換えられたヒトＴＦの細胞外ドメインとの間の結合は、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のＴＦの細胞外ドメインとの間の結合の５０％未満である。
一部の実施形態では、生細胞染色アッセイにおいてアイソタイプ対照と比べた該抗体の蛍光強度中央値によって判定される場合、本明細書に提供される抗体と、配列番号８１０に示される配列のアミノ酸残基１６７～１７４が配列番号８３８に示される配列のラットＴＦの細胞外ドメインにおけるアミノ酸残基１７２～１７９と置き換えられたヒトＴＦの細胞外ドメインとの間の結合は、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のＴＦの細胞外ドメインとの間の結合の５０％未満である。
一部の実施形態では、生細胞染色アッセイにおいてアイソタイプ対照と比べた該抗体の蛍光強度中央値によって判定される場合、本明細書に提供される抗体と、配列番号８３８に示される配列のアミノ酸残基１４１～１９４が配列番号８１０に示される配列のヒトＴＦの細胞外ドメインにおけるアミノ酸残基１３６～１８９と置き換えられたラットＴＦの細胞外ドメインとの間の結合は、本明細書に提供される抗体と、配列番号８１０に示される配列のＴＦの細胞外ドメインとの間の結合の５０％超である。
一部の実施形態では、生細胞染色アッセイにおいてアイソタイプ対照と比べた該抗体の蛍光強度中央値によって判定される場合、本明細書に提供される抗体と、配列番号８１０に示される配列のアミノ酸残基１４９に変異を含むバリアントＴＦの細胞外ドメインとの間の結合は、本明細書に提供される抗体と、配列番号８１０に示される配列のＴＦの細胞外ドメインとの間の結合の５０％未満であり、本明細書に提供される抗体と、配列番号８１０に示される配列のアミノ酸残基６８に変異を含むバリアントＴＦの細胞外ドメインとの間の結合は、本明細書に提供される抗体と、配列番号８１０に示される配列のＴＦの細胞外ドメインとの間の結合の５０％超であり、本明細書に提供される抗体と、配列番号８１０に示される配列のアミノ酸残基１～７７が配列番号８３８に示される配列のラットＴＦの細胞外ドメインにおけるアミノ酸残基１～７６と置き換えられたヒトＴＦの細胞外ドメインとの間の結合は、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のＴＦの細胞外ドメインとの間の結合の５０％超であり、本明細書に提供される抗体と、配列番号８１０に示される配列のアミノ酸残基３９～７７が配列番号８３８に示される配列のラットＴＦの細胞外ドメインにおけるアミノ酸残基３８～７６と置き換えられたヒトＴＦの細胞外ドメインとの間の結合は、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のＴＦの細胞外ドメインとの間の結合の５０％超であり、本明細書に提供される抗体と、配列番号８１０に示される配列のアミノ酸残基９４～１０７が配列番号８３８に示される配列のラットＴＦの細胞外ドメインにおけるアミノ酸残基９９～１１２と置き換えられたヒトＴＦの細胞外ドメインとの間の結合は、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のＴＦの細胞外ドメインとの間の結合の５０％超であり、本明細書に提供される抗体と、配列番号８１０に示される配列のアミノ酸残基１４６～１５８が配列番号８３８に示される配列のラットＴＦの細胞外ドメインにおけるアミノ酸残基１５１～１６３と置き換えられたヒトＴＦの細胞外ドメインとの間の結合は、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のＴＦの細胞外ドメインとの間の結合の５０％未満であり、かつ本明細書に提供される抗体と、配列番号８３８に示される配列のアミノ酸残基１４１～１９４が配列番号８１０に示される配列のヒトＴＦの細胞外ドメインにおけるアミノ酸残基１３６～１８９と置き換えられたラットＴＦの細胞外ドメインとの間の結合は、本明細書に提供される抗体と、配列番号８１０に示される配列のＴＦの細胞外ドメインとの間の結合の５０％超である。一部の実施形態では、配列番号８１０に示される配列のアミノ酸残基１４９における変異は、Ｋ１４９Ｎであり、かつ配列番号８１０に示される配列のアミノ酸残基６８における変異は、Ｋ６８Ｎである。
一部の実施形態では、生細胞染色アッセイにおいてアイソタイプ対照と比べた該抗体の蛍光強度中央値によって判定される場合、本明細書に提供される抗体と、配列番号８１０に示される配列のアミノ酸残基１４９に変異を含むバリアントＴＦの細胞外ドメインとの間の結合は、本明細書に提供される抗体と、配列番号８１０に示される配列のＴＦの細胞外ドメインとの間の結合の５０％未満であり、本明細書に提供される抗体と、配列番号８１０に示される配列のアミノ酸残基６８に変異を含むバリアントＴＦの細胞外ドメインとの間の結合は、本明細書に提供される抗体と、配列番号８１０に示される配列のＴＦの細胞外ドメインとの間の結合の５０％超であり、本明細書に提供される抗体と、配列番号８１０に示される配列のアミノ酸残基１７１及び１９７に変異を含むバリアントＴＦの細胞外ドメインとの間の結合は、本明細書に提供される抗体と、配列番号８１０に示される配列のＴＦの細胞外ドメインとの間の結合の５０％未満であり、本明細書に提供される抗体と、配列番号８１０に示される配列のアミノ酸残基１～７７が配列番号８３８に示される配列のラットＴＦの細胞外ドメインにおけるアミノ酸残基１～７６と置き換えられたヒトＴＦの細胞外ドメインとの間の結合は、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のＴＦの細胞外ドメインとの間の結合の５０％超であり、本明細書に提供される抗体と、配列番号８１０に示される配列のアミノ酸残基３９～７７が配列番号８３８に示される配列のラットＴＦの細胞外ドメインにおけるアミノ酸残基３８～７６と置き換えられたヒトＴＦの細胞外ドメインとの間の結合は、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のＴＦの細胞外ドメインとの間の結合の５０％超であり、本明細書に提供される抗体と、配列番号８１０に示される配列のアミノ酸残基９４～１０７が配列番号８３８に示される配列のラットＴＦの細胞外ドメインにおけるアミノ酸残基９９～１１２と置き換えられたヒトＴＦの細胞外ドメインとの間の結合は、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のＴＦの細胞外ドメインとの間の結合の５０％超であり、本明細書に提供される抗体と、配列番号８１０に示される配列のアミノ酸残基１４６～１５８が配列番号８３８に示される配列のラットＴＦの細胞外ドメインにおけるアミノ酸残基１５１～１６３と置き換えられたヒトＴＦの細胞外ドメインとの間の結合は、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のＴＦの細胞外ドメインとの間の結合の５０％未満であり、本明細書に提供される抗体と、配列番号８１０に示される配列のアミノ酸残基１５９～２１９が配列番号８３８に示される配列のラットＴＦの細胞外ドメインにおけるアミノ酸残基１６４～２２４と置き換えられたヒトＴＦの細胞外ドメインとの間の結合は、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のＴＦの細胞外ドメインとの間の結合の５０％未満であり、本明細書に提供される抗体と、配列番号８１０に示される配列のアミノ酸残基１５９～１８９が配列番号８３８に示される配列のラットＴＦの細胞外ドメインにおけるアミノ酸残基１６４～１９４と置き換えられたヒトＴＦの細胞外ドメインとの間の結合は、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のＴＦの細胞外ドメインとの間の結合の５０％未満であり、本明細書に提供される抗体と、配列番号８１０に示される配列のアミノ酸残基１５９～１７４が配列番号８３８に示される配列のラットＴＦの細胞外ドメインにおけるアミノ酸残基１６４～１７９と置き換えられたヒトＴＦの細胞外ドメインとの間の結合は、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のＴＦの細胞外ドメインとの間の結合の５０％未満であり、本明細書に提供される抗体と、配列番号８１０に示される配列のアミノ酸残基１６７～１７４が配列番号８３８に示される配列のラットＴＦの細胞外ドメインにおけるアミノ酸残基１７２～１７９と置き換えられたヒトＴＦの細胞外ドメインとの間の結合は、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のＴＦの細胞外ドメインとの間の結合の５０％未満であり、かつ本明細書に提供される抗体と、配列番号８３８に示される配列のアミノ酸残基１４１～１９４が配列番号８１０に示される配列のヒトＴＦの細胞外ドメインにおけるアミノ酸残基１３６～１８９と置き換えられたラットＴＦの細胞外ドメインとの間の結合は、本明細書に提供される抗体と、配列番号８１０に示される配列のＴＦの細胞外ドメインとの間の結合の５０％超である。一部の実施形態では、配列番号８１０に示される配列のアミノ酸残基１４９における変異は、Ｋ１４９Ｎであり、配列番号８１０に示される配列のアミノ酸残基６８における変異は、Ｋ６８Ｎであり、かつ配列番号８１０に示される配列のアミノ酸残基１７１及び１９７における変異は、Ｎ１７１Ｈ及びＴ１９７Ｋである。
一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、トロンビン生成アッセイ（ＴＧＡ）によって判定される場合、参照抗体Ｍ１５９３と比較して、ヒトトロンビン生成の阻害において不活性であり、該参照抗体Ｍ１５９３は、配列番号８２１のＶＨ配列及び配列番号８２２のＶＬ配列を含む。
一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、トロンビン生成アッセイ（ＴＧＡ）によって判定される場合、ヒトトロンビン生成を阻害しない。ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、トロンビン生成アッセイ（ＴＧＡ）によって判定される場合、ヒトトロンビン生成を可能にする。
一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ヒトＦＸが結合するヒトＴＦ結合部位とは別個のヒトＴＦ結合部位でヒトＴＦに結合する。ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＦＸをＦＸａに変換するＴＦ：ＦＶＩＩａの能力に干渉しない。
一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ヒトＦＶＩＩａが結合するヒトＴＦ結合部位とは別個のヒトＴＦ結合部位でヒトＴＦに結合する。ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ヒトＴＦへの結合をヒトＦＶＩＩａと競合しない。
一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ヒトＴＦの細胞外ドメインに結合し、ヒトＦＶＩＩａが結合するヒトＴＦ結合部位とは別個のヒトＴＦ結合部位でヒトＴＦに結合し、ヒトＦＸが結合するヒトＴＦ結合部位とは別個のヒトＴＦ結合部位でヒトＴＦに結合し、かつトロンビン生成アッセイ（ＴＧＡ）によって判定される場合ヒトトロンビン生成を可能にする。
一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ヒトＴＦの細胞外ドメインに結合し、トロンビン生成アッセイ（ＴＧＡ）によって判定される場合ヒトトロンビン生成を阻害せず、ＦＸをＦＸａに変換するＴＦ：ＦＶＩＩａの能力に干渉せず、かつヒトＴＦへの結合をヒトＦＶＩＩａと競合しない。
一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ヒトＦＶＩＩａが結合するヒトＴＦ結合部位とは別個のヒトＴＦ結合部位でヒトＴＦの細胞外ドメインに結合し、トロンビン生成アッセイ（ＴＧＡ）によって判定される場合ヒトトロンビン生成を阻害せず、トロンビン生成アッセイ（ＴＧＡ）によって判定される場合ヒトトロンビン生成を可能にし、ヒトＦＸが結合するヒトＴＦ結合部位とは別個のヒトＴＦ結合部位でヒトＴＦに結合し、ＦＸをＦＸａに変換するＴＦ：ＦＶＩＩａの能力に干渉せず、かつヒトＴＦへの結合をヒトＦＶＩＩａと競合しない。
一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＦＶＩＩａ依存性ＴＦシグナル伝達を阻害する。
一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ブタ脈絡膜血管新生（ＣＮＶ）モデルにおいて病変サイズを低減する。
一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ヒトＦＶＩＩａが結合するヒトＴＦ結合部位とは別個のヒトＴＦ結合部位でヒトＴＦの細胞外ドメインに結合し、トロンビン生成アッセイ（ＴＧＡ）によって判定される場合、ヒトトロンビン生成を阻害せず、トロンビン生成アッセイ（ＴＧＡ）によって判定される場合、ヒトトロンビン生成を可能にし、ヒトＦＸが結合するヒトＴＦ結合部位とは別個のヒトＴＦ結合部位でヒトＴＦに結合し、ＦＸをＦＸａに変換するＴＦ：ＦＶＩＩａの能力に干渉せず、ヒトＴＦへの結合をヒトＦＶＩＩａと競合せず、かつカニクイザル及びマウスＴＦに結合する。
一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ヒトＦＶＩＩａが結合するヒトＴＦ結合部位とは別個のヒトＴＦ結合部位でヒトＴＦの細胞外ドメインに結合し、トロンビン生成アッセイ（ＴＧＡ）によって判定される場合ヒトトロンビン生成を阻害せず、トロンビン生成アッセイ（ＴＧＡ）によって判定される場合ヒトトロンビン生成を可能にし、ヒトＦＸが結合するヒトＴＦ結合部位とは別個のヒトＴＦ結合部位でヒトＴＦに結合し、ＦＸをＦＸａに変換するＴＦ：ＦＶＩＩａの能力に干渉せず、ヒトＴＦへの結合をヒトＦＶＩＩａと競合せず、カニクイザル、マウス、及びブタＴＦに結合し、かつブタ脈絡膜血管新生（ＣＮＶ）モデルにおいて病変サイズを低減する。
一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ヒトＴＦの細胞外ドメインに結合し、ＦＶＩＩａ依存性ＴＦシグナル伝達を阻害し、かつカニクイザルＴＦに結合する。
２．２．ＴＦ抗体の配列
２．２．１．ＶＨドメイン
一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、配列番号３７、７５、１１３、１５１、１８９、２２７、２６５、３０３、３４１、３７９、４１７、４５５、４９３、５３１、５６９、６０７、６４５、６８３、７２１、及び７５９から選択されるＶＨ配列を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、配列番号３７のＶＨ配列を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、配列番号７５のＶＨ配列を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、配列番号１１３のＶＨ配列を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、配列番号１５１のＶＨ配列を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、配列番号１８９のＶＨ配列を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、配列番号８３６のＶＨ配列を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、配列番号２２７のＶＨ配列を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、配列番号２６５のＶＨ配列を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、配列番号３０３のＶＨ配列を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、配列番号３４１のＶＨ配列を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、配列番号３７９のＶＨ配列を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、配列番号４１７のＶＨ配列を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、配列番号４５５のＶＨ配列を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、配列番号４９３のＶＨ配列を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、配列番号５３１のＶＨ配列を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、配列番号５６９のＶＨ配列を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、配列番号６０７のＶＨ配列を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、配列番号６４５のＶＨ配列を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、配列番号６８３のＶＨ配列を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、配列番号７２１のＶＨ配列を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、配列番号７５９のＶＨ配列を含む。
一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、配列番号３７、７５、１１３、１５１、１８９、２２７、２６５、３０３、３４１、３７９、４１７、４５５、４９３、５３１、５６９、６０７、６４５、６８３、７２１、及び７５９に提供される例示的なＶＨ配列に対して少なくとも約５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または９９％の同一性を有する、ＶＨ配列を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、最大１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２１個、２２個、２３個、２４個、または２５個のアミノ酸置換を有する、配列番号３７、７５、１１３、１５１、１８９、２２７、２６５、３０３、３４１、３７９、４１７、４５５、４９３、５３１、５６９、６０７、６４５、６８３、７２１、及び７５９に提供されるＶＨ配列を含む。一部の態様では、アミノ酸置換は、保存的アミノ酸置換である。一部の実施形態では、この段落に記載される抗体は、本明細書で「バリアント」と称される。一部の実施形態では、かかるバリアントは、例えば、親和性成熟、部位特異的変異誘発、ランダム変異誘発、または当該技術分野で既知の、もしくは本明細書に記載される任意の他の方法によって、本明細書に提供される配列に由来する。一部の実施形態では、かかるバリアントは、本明細書に提供される配列には由来せず、例えば、抗体を得るための本明細書に提供される方法に従って新規に単離され得る。
２．２．２．ＶＬドメイン
一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、配列番号３８、７６、１１４、１５２、１９０、２２８、２６６、３０４、３４２、３８０、４１８、４５６、４９４、５３２、５７０、６０８、６４６、６８４、７２２、及び７６０から選択されるＶＬ配列を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、配列番号３８のＶＬ配列を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、配列番号７６のＶＬ配列を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、配列番号１１４のＶＬ配列を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、配列番号１５２のＶＬ配列を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、配列番号１９０のＶＬ配列を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、配列番号８３７のＶＬ配列を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、配列番号２２８のＶＬ配列を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、配列番号２６６のＶＬ配列を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、配列番号３０４のＶＬ配列を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、配列番号３４２のＶＬ配列を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、配列番号３８０のＶＬ配列を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、配列番号４１８のＶＬ配列を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、配列番号４５６のＶＬ配列を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、配列番号４９４のＶＬ配列を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、配列番号５３２のＶＬ配列を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、配列番号５７０のＶＬ配列を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、配列番号６０８のＶＬ配列を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、配列番号６４６のＶＬ配列を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、配列番号６８４のＶＬ配列を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、配列番号７２２のＶＬ配列を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、配列番号７６０のＶＬ配列を含む。
一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、配列番号３８、７６、１１４、１５２、１９０、２２８、２６６、３０４、３４２、３８０、４１８、４５６、４９４、５３２、５７０、６０８、６４６、６８４、７２２、及び７６０に提供される例示的なＶＬ配列に対して少なくとも約５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または９９％の同一性を有する、ＶＬ配列を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、最大１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２１個、２２個、２３個、２４個、または２５個のアミノ酸置換を有する、配列番号３８、７６、１１４、１５２、１９０、２２８、２６６、３０４、３４２、３８０、４１８、４５６、４９４、５３２、５７０、６０８、６４６、６８４、７２２、及び７６０に提供されるＶＬ配列を含む。一部の態様では、アミノ酸置換は、保存的アミノ酸置換である。一部の実施形態では、この段落に記載される抗体は、本明細書で「バリアント」と称される。一部の実施形態では、かかるバリアントは、例えば、親和性成熟、部位特異的変異誘発、ランダム変異誘発、または当該技術分野で既知の、もしくは本明細書に記載される任意の他の方法によって、本明細書に提供される配列に由来する。一部の実施形態では、かかるバリアントは、本明細書に提供される配列には由来せず、例えば、抗体を得るための本明細書に提供される方法に従って新規に単離され得る。
２．２．３．ＶＨ－ＶＬの組み合わせ
一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、配列番号３７、７５、１１３、１５１、１８９、２２７、２６５、３０３、３４１、３７９、４１７、４５５、４９３、５３１、５６９、６０７、６４５、６８３、７２１、及び７５９から選択されるＶＨ配列、ならびに配列番号３８、７６、１１４、１５２、１９０、２２８、２６６、３０４、３４２、３８０、４１８、４５６、４９４、５３２、５７０、６０８、６４６、６８４、７２２、及び７６０から選択されるＶＬ配列を含む。
一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、配列番号３７のＶＨ配列及び配列番号３８のＶＬ配列を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、配列番号７５のＶＨ配列及び配列番号７６のＶＬ配列を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、配列番号１１３のＶＨ配列及び配列番号１１４のＶＬ配列を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、配列番号１５１のＶＨ配列及び配列番号１５２のＶＬ配列を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、配列番号１８９のＶＨ配列及び配列番号１９０のＶＬ配列を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、配列番号８３６のＶＨ配列及び配列番号８３７のＶＬ配列を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、配列番号２２７のＶＨ配列及び配列番号２２８のＶＬ配列を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、配列番号２６５のＶＨ配列及び配列番号２６６のＶＬ配列を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、配列番号３０３のＶＨ配列及び配列番号３０４のＶＬ配列を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、配列番号３４１のＶＨ配列及び配列番号３４２のＶＬ配列を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、配列番号３７９のＶＨ配列及び配列番号３８０のＶＬ配列を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、配列番号４１７のＶＨ配列及び配列番号４１８のＶＬ配列を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、配列番号４５５のＶＨ配列及び配列番号４５６のＶＬ配列を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、配列番号４９３のＶＨ配列及び配列番号４９４のＶＬ配列を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、配列番号５３１のＶＨ配列及び配列番号５３２のＶＬ配列を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、配列番号５６９のＶＨ配列及び配列番号５７０のＶＬ配列を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、配列番号６０７のＶＨ配列及び配列番号６０８のＶＬ配列を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、配列番号６４５のＶＨ配列及び配列番号６４６のＶＬ配列を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、配列番号６８３のＶＨ配列及び配列番号６８４のＶＬ配列を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、配列番号７２１のＶＨ配列及び配列番号７２２のＶＬ配列を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、配列番号７５９のＶＨ配列及び配列番号７６０のＶＬ配列を含む。
一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、配列番号３７、７５、１１３、１５１、１８９、２２７、２６５、３０３、３４１、３７９、４１７、４５５、４９３、５３１、５６９、６０７、６４５、６８３、７２１、及び７５９に提供される例示的なＶＨ配列に対して少なくとも約５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または９９％の同一性を有するＶＨ配列、ならびに配列番号３８、７６、１１４、１５２、１９０、２２８、２６６、３０４、３４２、３８０、４１８、４５６、４９４、５３２、５７０、６０８、６４６、６８４、７２２、及び７６０に提供される例示的なＶＬ配列に対して少なくとも約５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または９９％の同一性を有するＶＬ配列を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、最大１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２１個、２２個、２３個、２４個、または２５個のアミノ酸置換を有する、配列番号３７、７５、１１３、１５１、１８９、２２７、２６５、３０３、３４１、３７９、４１７、４５５、４９３、５３１、５６９、６０７、６４５、６８３、７２１、及び７５９に提供されるＶＨ配列、ならびに最大１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２１個、２２個、２３個、２４個、または２５個のアミノ酸置換を有する、配列番号３８、７６、１１４、１５２、１９０、２２８、２６６、３０４、３４２、３８０、４１８、４５６、４９４、５３２、５７０、６０８、６４６、６８４、７２２、及び７６０に提供されるＶＬ配列を含む。一部の態様では、アミノ酸置換は、保存的アミノ酸置換である。一部の実施形態では、この段落に記載される抗体は、本明細書で「バリアント」と称される。一部の実施形態では、かかるバリアントは、例えば、親和性成熟、部位特異的変異誘発、ランダム変異誘発、または当該技術分野で既知の、もしくは本明細書に記載される任意の他の方法によって、本明細書に提供される配列に由来する。一部の実施形態では、かかるバリアントは、本明細書に提供される配列には由来せず、例えば、抗体を得るための本明細書に提供される方法に従って新規に単離され得る。
２．２．４．ＣＤＲ
一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、配列番号３７、７５、１１３、１５１、１８９、２２７、２６５、３０３、３４１、３７９、４１７、４５５、４９３、５３１、５６９、６０７、６４５、６８３、７２１、及び７５９から選択されるＶＨドメインの１～３つのＣＤＲを含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、配列番号３７、７５、１１３、１５１、１８９、２２７、２６５、３０３、３４１、３７９、４１７、４５５、４９３、５３１、５６９、６０７、６４５、６８３、７２１、及び７５９から選択されるＶＨドメインの２～３つのＣＤＲを含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、配列番号３７、７５、１１３、１５１、１８９、２２７、２６５、３０３、３４１、３７９、４１７、４５５、４９３、５３１、５６９、６０７、６４５、６８３、７２１、及び７５９から選択されるＶＨドメインの３つのＣＤＲを含む。一部の態様では、該ＣＤＲは、代表的なＣＤＲである。一部の態様では、該ＣＤＲは、ＫａｂａｔのＣＤＲである。一部の態様では、該ＣＤＲは、ＣｈｏｔｈｉａのＣＤＲである。一部の態様では、該ＣＤＲは、ＡｂＭのＣＤＲである。一部の態様では、該ＣＤＲは、ＣｏｎｔａｃｔのＣＤＲである。一部の態様では、該ＣＤＲは、ＩＭＧＴのＣＤＲである。
一部の実施形態では、該ＣＤＲは、配列番号３７、７５、１１３、１５１、１８９、２２７、２６５、３０３、３４１、３７９、４１７、４５５、４９３、５３１、５６９、６０７、６４５、６８３、７２１、及び７５９のＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、またはＣＤＲ－Ｈ３と少なくとも約５０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％の同一性を有するＣＤＲである。一部の実施形態では、ＣＤＲ－Ｈ１は、最大１個、２個、３個、４個、または５個のアミノ酸置換を有する、配列番号３７、７５、１１３、１５１、１８９、２２７、２６５、３０３、３４１、３７９、４１７、４５５、４９３、５３１、５６９、６０７、６４５、６８３、７２１、及び７５９から選択されるＶＨドメインのＣＤＲ－Ｈ１である。一部の実施形態では、ＣＤＲ－Ｈ２は、最大１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、または８個のアミノ酸置換を有する、配列番号３７、７５、１１３、１５１、１８９、２２７、２６５、３０３、３４１、３７９、４１７、４５５、４９３、５３１、５６９、６０７、６４５、６８３、７２１、及び７５９から選択されるＶＨドメインのＣＤＲ－Ｈ２である。一部の実施形態では、ＣＤＲ－Ｈ３は、最大１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、または８個のアミノ酸置換を有する、配列番号３７、７５、１１３、１５１、１８９、２２７、２６５、３０３、３４１、３７９、４１７、４５５、４９３、５３１、５６９、６０７、６４５、６８３、７２１、及び７５９から選択されるＶＨドメインのＣＤＲ－Ｈ３である。一部の態様では、アミノ酸置換は、保存的アミノ酸置換である。一部の実施形態では、この段落に記載される抗体は、本明細書で「バリアント」と称される。一部の実施形態では、かかるバリアントは、例えば、親和性成熟、部位特異的変異誘発、ランダム変異誘発、または当該技術分野で既知の、もしくは本明細書に記載される任意の他の方法によって、本明細書に提供される配列に由来する。一部の実施形態では、かかるバリアントは、本明細書に提供される配列には由来せず、例えば、抗体を得るための本明細書に提供される方法に従って新規に単離され得る。
一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、配列番号３８、７６、１１４、１５２、１９０、２２８、２６６、３０４、３４２、３８０、４１８、４５６、４９４、５３２、５７０、６０８、６４６、６８４、７２２、及び７６０から選択されるＶＬドメインの１～３つのＣＤＲを含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、配列番号３８、７６、１１４、１５２、１９０、２２８、２６６、３０４、３４２、３８０、４１８、４５６、４９４、５３２、５７０、６０８、６４６、６８４、７２２、及び７６０から選択されるＶＬドメインの２～３つのＣＤＲを含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、配列番号３８、７６、１１４、１５２、１９０、２２８、２６６、３０４、３４２、３８０、４１８、４５６、４９４、５３２、５７０、６０８、６４６、６８４、７２２、及び７６０から選択されるＶＬドメインの３つのＣＤＲを含む。一部の態様では、該ＣＤＲは、代表的なＣＤＲである。一部の態様では、該ＣＤＲは、ＫａｂａｔのＣＤＲである。一部の態様では、該ＣＤＲは、ＣｈｏｔｈｉａのＣＤＲである。一部の態様では、該ＣＤＲは、ＡｂＭのＣＤＲである。一部の態様では、該ＣＤＲは、ＣｏｎｔａｃｔのＣＤＲである。一部の態様では、該ＣＤＲは、ＩＭＧＴのＣＤＲである。
一部の実施形態では、該ＣＤＲは、配列番号３８、７６、１１４、１５２、１９０、２２８、２６６、３０４、３４２、３８０、４１８、４５６、４９４、５３２、５７０、６０８、６４６、６８４、７２２、及び７６０のＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、またはＣＤＲ－Ｌ３と少なくとも約５０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％の同一性を有するＣＤＲである。一部の実施形態では、ＣＤＲ－Ｌ１は、最大１個、２個、３個、４個、または５個のアミノ酸置換を有する、配列番号３８、７６、１１４、１５２、１９０、２２８、２６６、３０４、３４２、３８０、４１８、４５６、４９４、５３２、５７０、６０８、６４６、６８４、７２２、及び７６０から選択されるＶＬドメインのＣＤＲ－Ｌ１である。一部の実施形態では、ＣＤＲ－Ｌ２は、最大１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、または８個のアミノ酸置換を有する、配列番号３８、７６、１１４、１５２、１９０、２２８、２６６、３０４、３４２、３８０、４１８、４５６、４９４、５３２、５７０、６０８、６４６、６８４、７２２、及び７６０から選択されるＶＬドメインのＣＤＲ－Ｌ２である。一部の実施形態では、ＣＤＲ－Ｌ３は、最大１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、または８個のアミノ酸置換を有する、配列番号３８、７６、１１４、１５２、１９０、２２８、２６６、３０４、３４２、３８０、４１８、４５６、４９４、５３２、５７０、６０８、６４６、６８４、７２２、及び７６０から選択されるＶＬドメインのＣＤＲ－Ｌ３である。一部の態様では、アミノ酸置換は、保存的アミノ酸置換である。一部の実施形態では、この段落に記載される抗体は、本明細書で「バリアント」と称される。一部の実施形態では、かかるバリアントは、例えば、親和性成熟、部位特異的変異誘発、ランダム変異誘発、または当該技術分野で既知の、もしくは本明細書に記載される任意の他の方法によって、本明細書に提供される配列に由来する。一部の実施形態では、かかるバリアントは、本明細書に提供される配列には由来せず、例えば、抗体を得るための本明細書に提供される方法に従って新規に単離され得る。
一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、配列番号３７、７５、１１３、１５１、１８９、２２７、２６５、３０３、３４１、３７９、４１７、４５５、４９３、５３１、５６９、６０７、６４５、６８３、７２１、及び７５９から選択されるＶＨドメインの１～３つのＣＤＲ、ならびに配列番号３８、７６、１１４、１５２、１９０、２２８、２６６、３０４、３４２、３８０、４１８、４５６、４９４、５３２、５７０、６０８、６４６、６８４、７２２、及び７６０から選択されるＶＬドメインの１～３つのＣＤＲを含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、配列番号３７、７５、１１３、１５１、１８９、２２７、２６５、３０３、３４１、３７９、４１７、４５５、４９３、５３１、５６９、６０７、６４５、６８３、７２１、及び７５９から選択されるＶＨドメインの２～３つのＣＤＲ、ならびに配列番号３８、７６、１１４、１５２、１９０、２２８、２６６、３０４、３４２、３８０、４１８、４５６、４９４、５３２、５７０、６０８、６４６、６８４、７２２、及び７６０から選択されるＶＬドメインの２～３つのＣＤＲを含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、配列番号３７、７５、１１３、１５１、１８９、２２７、２６５、３０３、３４１、３７９、４１７、４５５、４９３、５３１、５６９、６０７、６４５、６８３、７２１、及び７５９から選択されるＶＨドメインの３つのＣＤＲ、ならびに配列番号３８、７６、１１４、１５２、１９０、２２８、２６６、３０４、３４２、３８０、４１８、４５６、４９４、５３２、５７０、６０８、６４６、６８４、７２２、及び７６０から選択されるＶＬドメインの３つのＣＤＲを含む。一部の態様では、該ＣＤＲは、代表的なＣＤＲである。一部の態様では、該ＣＤＲは、ＫａｂａｔのＣＤＲである。一部の態様では、該ＣＤＲは、ＣｈｏｔｈｉａのＣＤＲである。一部の態様では、該ＣＤＲは、ＡｂＭのＣＤＲである。一部の態様では、該ＣＤＲは、ＣｏｎｔａｃｔのＣＤＲである。一部の態様では、該ＣＤＲは、ＩＭＧＴのＣＤＲである。
一部の実施形態では、該ＣＤＲは、配列番号３７、７５、１１３、１５１、１８９、２２７、２６５、３０３、３４１、３７９、４１７、４５５、４９３、５３１、５６９、６０７、６４５、６８３、７２１、及び７５９のＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、またはＣＤＲ－Ｈ３と少なくとも約５０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％の同一性、ならびに配列番号３８、７６、１１４、１５２、１９０、２２８、２６６、３０４、３４２、３８０、４１８、４５６、４９４、５３２、５７０、６０８、６４６、６８４、７２２、及び７６０のＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、またはＣＤＲ－Ｌ３と少なくとも約５０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％の同一性を有するＣＤＲである。一部の実施形態では、ＣＤＲ－Ｈ１は、最大１個、２個、３個、４個、または５個のアミノ酸置換を有する、配列番号３７、７５、１１３、１５１、１８９、２２７、２６５、３０３、３４１、３７９、４１７、４５５、４９３、５３１、５６９、６０７、６４５、６８３、７２１、及び７５９から選択されるＶＨドメインのＣＤＲ－Ｈ１であり、ＣＤＲ－Ｈ２は、最大１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、または８個のアミノ酸置換を有する、配列番号３７、７５、１１３、１５１、１８９、２２７、２６５、３０３、３４１、３７９、４１７、４５５、４９３、５３１、５６９、６０７、６４５、６８３、７２１、及び７５９から選択されるＶＨドメインのＣＤＲ－Ｈ２であり、ＣＤＲ－Ｈ３は、最大１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、または８個のアミノ酸置換を有する、配列番号３７、７５、１１３、１５１、１８９、２２７、２６５、３０３、３４１、３７９、４１７、４５５、４９３、５３１、５６９、６０７、６４５、６８３、７２１、及び７５９から選択されるＶＨドメインのＣＤＲ－Ｈ３であり、ＣＤＲ－Ｌ１は、最大１個、２個、３個、４個、５個、または６個のアミノ酸置換を有する、配列番号３８、７６、１１４、１５２、１９０、２２８、２６６、３０４、３４２、３８０、４１８、４５６、４９４、５３２、５７０、６０８、６４６、６８４、７２２、及び７６０から選択されるＶＬドメインのＣＤＲ－Ｌ１であり、ＣＤＲ－Ｌ２は、最大１個、２個、３個、または４個のアミノ酸置換を有する、配列番号３８、７６、１１４、１５２、１９０、２２８、２６６、３０４、３４２、３８０、４１８、４５６、４９４、５３２、５７０、６０８、６４６、６８４、７２２、及び７６０から選択されるＶＬドメインのＣＤＲ－Ｌ２であり、かつＣＤＲ－Ｌ３は、最大１個、２個、３個、４個、または５個のアミノ酸置換を有する、配列番号３８、７６、１１４、１５２、１９０、２２８、２６６、３０４、３４２、３８０、４１８、４５６、４９４、５３２、５７０、６０８、６４６、６８４、７２２、及び７６０から選択されるＶＬドメインのＣＤＲ－Ｌ３である。一部の態様では、アミノ酸置換は、保存的アミノ酸置換である。一部の実施形態では、この段落に記載される抗体は、本明細書で「バリアント」と称される。一部の実施形態では、かかるバリアントは、例えば、親和性成熟、部位特異的変異誘発、ランダム変異誘発、または当該技術分野で既知の、もしくは本明細書に記載される任意の他の方法によって、本明細書に提供される配列に由来する。一部の実施形態では、かかるバリアントは、本明細書に提供される配列には由来せず、例えば、抗体を得るための本明細書に提供される方法に従って新規に単離され得る。
一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、代表的な番号付けシステムによって決定するとき、配列番号３、４１、７９、１１７、１５５、１９３、２３１、２６９、３０７、３４５、３８３、４２１、４５９、４９７、５３５、５７３、６１１、６４９、６８７、及び７２５から選択されるＣＤＲ－Ｈ３を含む。一部の態様では、ＣＤＲ－Ｈ３は、配列番号３、４１、７９、１１７、１５５、１９３、２３１、２６９、３０７、３４５、３８３、４２１、４５９、４９７、５３５、５７３、６１１、６４９、６８７、及び７２５のＣＤＲ－Ｈ３と少なくとも約５０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％の同一性を有する。一部の実施形態では、ＣＤＲ－Ｈ３は、最大１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、または８個のアミノ酸置換を有する、配列番号３、４１、７９、１１７、１５５、１９３、２３１、２６９、３０７、３４５、３８３、４２１、４５９、４９７、５３５、５７３、６１１、６４９、６８７、及び７２５から選択されるＣＤＲ－Ｈ３である。一部の態様では、アミノ酸置換は、保存的アミノ酸置換である。一部の実施形態では、この段落に記載される抗体は、本明細書で「バリアント」と称される。一部の実施形態では、かかるバリアントは、例えば、親和性成熟、部位特異的変異誘発、ランダム変異誘発、または当該技術分野で既知の、もしくは本明細書に記載される任意の他の方法によって、本明細書に提供される配列に由来する。一部の実施形態では、かかるバリアントは、本明細書に提供される配列には由来せず、例えば、抗体を得るための本明細書に提供される方法に従って新規に単離され得る。
一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、代表的な番号付けシステムによって決定するとき、配列番号２、４０、７８、１１６、１５４、１９２、２３０、２６８、３０６、３４４、３８２、４２０、４５８、４９６、５３４、５７２、６１０、６４８、６８６、及び７２４から選択されるＣＤＲ－Ｈ２を含む。一部の態様では、ＣＤＲ－Ｈ２は、配列番号２、４０、７８、１１６、１５４、１９２、２３０、２６８、３０６、３４４、３８２、４２０、４５８、４９６、５３４、５７２、６１０、６４８、６８６、及び７２４のＣＤＲ－Ｈ２と少なくとも約５０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％の同一性を有する。一部の実施形態では、ＣＤＲ－Ｈ２は、最大１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、または８個のアミノ酸置換を有する、配列番号２、４０、７８、１１６、１５４、１９２、２３０、２６８、３０６、３４４、３８２、４２０、４５８、４９６、５３４、５７２、６１０、６４８、６８６、及び７２４から選択されるＣＤＲ－Ｈ２である。一部の態様では、アミノ酸置換は、保存的アミノ酸置換である。一部の実施形態では、この段落に記載される抗体は、本明細書で「バリアント」と称される。一部の実施形態では、かかるバリアントは、例えば、親和性成熟、部位特異的変異誘発、ランダム変異誘発、または当該技術分野で既知の、もしくは本明細書に記載される任意の他の方法によって、本明細書に提供される配列に由来する。一部の実施形態では、かかるバリアントは、本明細書に提供される配列には由来せず、例えば、抗体を得るための本明細書に提供される方法に従って新規に単離され得る。
一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、代表的な番号付けシステムによって決定するとき、配列番号１、３９、７７、１１５、１５３、１９１、２２９、２６７、３０５、３４３、３８１、４１９、４５７、４９５、５３３、５７１、６０９、６４７、６８５、及び７２３から選択されるＣＤＲ－Ｈ１を含む。一部の態様では、ＣＤＲ－Ｈ１は、配列番号１、３９、７７、１１５、１５３、１９１、２２９、２６７、３０５、３４３、３８１、４１９、４５７、４９５、５３３、５７１、６０９、６４７、６８５、及び７２３のＣＤＲ－Ｈ１と少なくとも約５０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％の同一性を有する。一部の実施形態では、ＣＤＲ－Ｈ１は、最大１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、または８個のアミノ酸置換を有する、配列番号１、３９、７７、１１５、１５３、１９１、２２９、２６７、３０５、３４３、３８１、４１９、４５７、４９５、５３３、５７１、６０９、６４７、６８５、及び７２３から選択されるＣＤＲ－Ｈ１である。一部の態様では、アミノ酸置換は、保存的アミノ酸置換である。一部の実施形態では、この段落に記載される抗体は、本明細書で「バリアント」と称される。一部の実施形態では、かかるバリアントは、例えば、親和性成熟、部位特異的変異誘発、ランダム変異誘発、または当該技術分野で既知の、もしくは本明細書に記載される任意の他の方法によって、本明細書に提供される配列に由来する。一部の実施形態では、かかるバリアントは、本明細書に提供される配列には由来せず、例えば、抗体を得るための本明細書に提供される方法に従って新規に単離され得る。
一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、配列番号３、４１、７９、１１７、１５５、１９３、２３１、２６９、３０７、３４５、３８３、４２１、４５９、４９７、５３５、５７３、６１１、６４９、６８７、及び７２５から選択されるＣＤＲ－Ｈ３、ならびに配列番号２、４０、７８、１１６、１５４、１９２、２３０、２６８、３０６、３４４、３８２、４２０、４５８、４９６、５３４、５７２、６１０、６４８、６８６、及び７２４から選択されるＣＤＲ－Ｈ２を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、配列番号３、４１、７９、１１７、１５５、１９３、２３１、２６９、３０７、３４５、３８３、４２１、４５９、４９７、５３５、５７３、６１１、６４９、６８７、及び７２５から選択されるＣＤＲ－Ｈ３、配列番号２、４０、７８、１１６、１５４、１９２、２３０、２６８、３０６、３４４、３８２、４２０、４５８、４９６、５３４、５７２、６１０、６４８、６８６、及び７２４から選択されるＣＤＲ－Ｈ２、ならびに配列番号１、３９、７７、１１５、１５３、１９１、２２９、２６７、３０５、３４３、３８１、４１９、４５７、４９５、５３３、５７１、６０９、６４７、６８５、及び７２３から選択されるＣＤＲ－Ｈ１を含む。一部の実施形態では、ＣＤＲ－Ｈ３は、配列番号３、４１、７９、１１７、１５５、１９３、２３１、２６９、３０７、３４５、３８３、４２１、４５９、４９７、５３５、５７３、６１１、６４９、６８７、及び７２５のＣＤＲ－Ｈ３と少なくとも約５０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％の同一性を有し、ＣＤＲ－Ｈ２は、配列番号２、４０、７８、１１６、１５４、１９２、２３０、２６８、３０６、３４４、３８２、４２０、４５８、４９６、５３４、５７２、６１０、６４８、６８６、及び７２４のＣＤＲ－Ｈ２と少なくとも約５０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％の同一性を有し、かつＣＤＲ－Ｈ１は、配列番号１、３９、７７、１１５、１５３、１９１、２２９、２６７、３０５、３４３、３８１、４１９、４５７、４９５、５３３、５７１、６０９、６４７、６８５、及び７２３のＣＤＲ－Ｈ１と少なくとも約５０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％の同一性を有する。一部の実施形態では、ＣＤＲ－Ｈ３は、最大１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、または８個のアミノ酸置換を有する、配列番号３、４１、７９、１１７、１５５、１９３、２３１、２６９、３０７、３４５、３８３、４２１、４５９、４９７、５３５、５７３、６１１、６４９、６８７、及び７２５から選択されるＣＤＲ－Ｈ３であり、ＣＤＲ－Ｈ２は、最大１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、または８個のアミノ酸置換を有する、配列番号２、４０、７８、１１６、１５４、１９２、２３０、２６８、３０６、３４４、３８２、４２０、４５８、４９６、５３４、５７２、６１０、６４８、６８６、及び７２４から選択されるＣＤＲ－Ｈ２であり、かつＣＤＲ－Ｈ１は、最大１個、２個、３個、４個、または５個のアミノ酸置換を有する、配列番号１、３９、７７、１１５、１５３、１９１、２２９、２６７、３０５、３４３、３８１、４１９、４５７、４９５、５３３、５７１、６０９、６４７、６８５、及び７２３から選択されるＣＤＲ－Ｈ１である。一部の態様では、アミノ酸置換は、保存的アミノ酸置換である。一部の実施形態では、この段落に記載される抗体は、本明細書で「バリアント」と称される。一部の実施形態では、かかるバリアントは、例えば、親和性成熟、部位特異的変異誘発、ランダム変異誘発、または当該技術分野で既知の、もしくは本明細書に記載される任意の他の方法によって、本明細書に提供される配列に由来する。一部の実施形態では、かかるバリアントは、本明細書に提供される配列には由来せず、例えば、抗体を得るための本明細書に提供される方法に従って新規に単離され得る。
一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、代表的な番号付けシステムによって決定するとき、配列番号６、４４、８２、１２０、１５８、１９６、２３４、２７２、３１０、３４８、３８６、４２４、４６２、５００、５３８、５７６、６１４、６５２、６９０、及び７２８から選択されるＣＤＲ－Ｌ３を含む。一部の態様では、ＣＤＲ－Ｌ３は、配列番号６、４４、８２、１２０、１５８、１９６、２３４、２７２、３１０、３４８、３８６、４２４、４６２、５００、５３８、５７６、６１４、６５２、６９０、及び７２８のＣＤＲ－Ｌ３と少なくとも約５０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％の同一性を有する。一部の実施形態では、ＣＤＲ－Ｌ３は、最大１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、または８個のアミノ酸置換を有する、配列番号６、４４、８２、１２０、１５８、１９６、２３４、２７２、３１０、３４８、３８６、４２４、４６２、５００、５３８、５７６、６１４、６５２、６９０、及び７２８から選択されるＣＤＲ－Ｌ３である。一部の態様では、アミノ酸置換は、保存的アミノ酸置換である。一部の実施形態では、この段落に記載される抗体は、本明細書で「バリアント」と称される。一部の実施形態では、かかるバリアントは、例えば、親和性成熟、部位特異的変異誘発、ランダム変異誘発、または当該技術分野で既知の、もしくは本明細書に記載される任意の他の方法によって、本明細書に提供される配列に由来する。一部の実施形態では、かかるバリアントは、本明細書に提供される配列には由来せず、例えば、抗体を得るための本明細書に提供される方法に従って新規に単離され得る。
一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、代表的な番号付けシステムによって決定するとき、配列番号５、４３、８１、１１９、１５７、１９５、２３３、２７１、３０９、３４７、３８５、４２３、４６１、４９９、５３７、５７５、６１３、６５１、６８９、及び７２７から選択されるＣＤＲ－Ｌ２を含む。一部の態様では、ＣＤＲ－Ｌ２は、配列番号５、４３、８１、１１９、１５７、１９５、２３３、２７１、３０９、３４７、３８５、４２３、４６１、４９９、５３７、５７５、６１３、６５１、６８９、及び７２７のＣＤＲ－Ｌ２と少なくとも約５０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％の同一性を有する。一部の実施形態では、ＣＤＲ－Ｌ２は、最大１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、または８個のアミノ酸置換を有する、配列番号５、４３、８１、１１９、１５７、１９５、２３３、２７１、３０９、３４７、３８５、４２３、４６１、４９９、５３７、５７５、６１３、６５１、６８９、及び７２７から選択されるＣＤＲ－Ｌ２である。一部の態様では、アミノ酸置換は、保存的アミノ酸置換である。一部の実施形態では、この段落に記載される抗体は、本明細書で「バリアント」と称される。一部の実施形態では、かかるバリアントは、例えば、親和性成熟、部位特異的変異誘発、ランダム変異誘発、または当該技術分野で既知の、もしくは本明細書に記載される任意の他の方法によって、本明細書に提供される配列に由来する。一部の実施形態では、かかるバリアントは、本明細書に提供される配列には由来せず、例えば、抗体を得るための本明細書に提供される方法に従って新規に単離され得る。
一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、代表的な番号付けシステムによって決定するとき、配列番号４、４２、８０、１１８、１５６、１９４、２３２、２７０、３０８、３４６、３８４、４２２、４６０、４９８、５３６、５７４、６１２、６５０、６８８、及び７２６から選択されるＣＤＲ－Ｌ１を含む。一部の態様では、ＣＤＲ－Ｌ１は、配列番号４、４２、８０、１１８、１５６、１９４、２３２、２７０、３０８、３４６、３８４、４２２、４６０、４９８、５３６、５７４、６１２、６５０、６８８、及び７２６のＣＤＲ－Ｌ１と少なくとも約５０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％の同一性を有する。一部の実施形態では、ＣＤＲ－Ｌ１は、最大１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、または８個のアミノ酸置換を有する、配列番号４、４２、８０、１１８、１５６、１９４、２３２、２７０、３０８、３４６、３８４、４２２、４６０、４９８、５３６、５７４、６１２、６５０、６８８、及び７２６から選択されるＣＤＲ－Ｌ１である。一部の態様では、アミノ酸置換は、保存的アミノ酸置換である。一部の実施形態では、この段落に記載される抗体は、本明細書で「バリアント」と称される。一部の実施形態では、かかるバリアントは、例えば、親和性成熟、部位特異的変異誘発、ランダム変異誘発、または当該技術分野で既知の、もしくは本明細書に記載される任意の他の方法によって、本明細書に提供される配列に由来する。一部の実施形態では、かかるバリアントは、本明細書に提供される配列には由来せず、例えば、抗体を得るための本明細書に提供される方法に従って新規に単離され得る。
一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、配列番号６、４４、８２、１２０、１５８、１９６、２３４、２７２、３１０、３４８、３８６、４２４、４６２、５００、５３８、５７６、６１４、６５２、６９０、及び７２８から選択されるＣＤＲ－Ｌ３、ならびに配列番号５、４３、８１、１１９、１５７、１９５、２３３、２７１、３０９、３４７、３８５、４２３、４６１、４９９、５３７、５７５、６１３、６５１、６８９、及び７２７から選択されるＣＤＲ－Ｌ２を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、配列番号６、４４、８２、１２０、１５８、１９６、２３４、２７２、３１０、３４８、３８６、４２４、４６２、５００、５３８、５７６、６１４、６５２、６９０、及び７２８から選択されるＣＤＲ－Ｌ３、配列番号５、４３、８１、１１９、１５７、１９５、２３３、２７１、３０９、３４７、３８５、４２３、４６１、４９９、５３７、５７５、６１３、６５１、６８９、及び７２７から選択されるＣＤＲ－Ｌ２、ならびに配列番号４、４２、８０、１１８、１５６、１９４、２３２、２７０、３０８、３４６、３８４、４２２、４６０、４９８、５３６、５７４、６１２、６５０、６８８、及び７２６から選択されるＣＤＲ－Ｌ１を含む。一部の実施形態では、ＣＤＲ－Ｌ３は、配列番号６、４４、８２、１２０、１５８、１９６、２３４、２７２、３１０、３４８、３８６、４２４、４６２、５００、５３８、５７６、６１４、６５２、６９０、及び７２８のＣＤＲ－Ｌ３と少なくとも約５０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％の同一性を有し、ＣＤＲ－Ｌ２は、配列番号５、４３、８１、１１９、１５７、１９５、２３３、２７１、３０９、３４７、３８５、４２３、４６１、４９９、５３７、５７５、６１３、６５１、６８９、及び７２７のＣＤＲ－Ｌ２と少なくとも約５０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％の同一性を有し、かつＣＤＲ－Ｌ１は、配列番号４、４２、８０、１１８、１５６、１９４、２３２、２７０、３０８、３４６、３８４、４２２、４６０、４９８、５３６、５７４、６１２、６５０、６８８、及び７２６のＣＤＲ－Ｌ１と少なくとも約５０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％の同一性を有する。一部の実施形態では、ＣＤＲ－Ｌ３は、最大１個、２個、３個、４個、または５個のアミノ酸置換を有する、配列番号６、４４、８２、１２０、１５８、１９６、２３４、２７２、３１０、３４８、３８６、４２４、４６２、５００、５３８、５７６、６１４、６５２、６９０、及び７２８から選択されるＣＤＲ－Ｌ３であり、ＣＤＲ－Ｌ２は、最大１個、２個、３個、または４個のアミノ酸置換を有する、配列番号５、４３、８１、１１９、１５７、１９５、２３３、２７１、３０９、３４７、３８５、４２３、４６１、４９９、５３７、５７５、６１３、６５１、６８９、及び７２７から選択されるＣＤＲ－Ｌ２であり、かつＣＤＲ－Ｌ１は、最大１個、２個、３個、４個、５個、または６個のアミノ酸置換を有する、配列番号４、４２、８０、１１８、１５６、１９４、２３２、２７０、３０８、３４６、３８４、４２２、４６０、４９８、５３６、５７４、６１２、６５０、６８８、及び７２６から選択されるＣＤＲ－Ｌ１である。一部の態様では、アミノ酸置換は、保存的アミノ酸置換である。一部の実施形態では、この段落に記載される抗体は、本明細書で「バリアント」と称される。一部の実施形態では、かかるバリアントは、例えば、親和性成熟、部位特異的変異誘発、ランダム変異誘発、または当該技術分野で既知の、もしくは本明細書に記載される任意の他の方法によって、本明細書に提供される配列に由来する。一部の実施形態では、かかるバリアントは、本明細書に提供される配列には由来せず、例えば、抗体を得るための本明細書に提供される方法に従って新規に単離され得る。
一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、配列番号３、４１、７９、１１７、１５５、１９３、２３１、２６９、３０７、３４５、３８３、４２１、４５９、４９７、５３５、５７３、６１１、６４９、６８７、及び７２５から選択されるＣＤＲ－Ｈ３、配列番号２、４０、７８、１１６、１５４、１９２、２３０、２６８、３０６、３４４、３８２、４２０、４５８、４９６、５３４、５７２、６１０、６４８、６８６、及び７２４から選択されるＣＤＲ－Ｈ２、配列番号１、３９、７７、１１５、１５３、１９１、２２９、２６７、３０５、３４３、３８１、４１９、４５７、４９５、５３３、５７１、６０９、６４７、６８５、及び７２３から選択されるＣＤＲ－Ｈ１、配列番号６、４４、８２、１２０、１５８、１９６、２３４、２７２、３１０、３４８、３８６、４２４、４６２、５００、５３８、５７６、６１４、６５２、６９０、及び７２８から選択されるＣＤＲ－Ｌ３、配列番号５、４３、８１、１１９、１５７、１９５、２３３、２７１、３０９、３４７、３８５、４２３、４６１、４９９、５３７、５７５、６１３、６５１、６８９、及び７２７から選択されるＣＤＲ－Ｌ２、ならびに配列番号４、４２、８０、１１８、１５６、１９４、２３２、２７０、３０８、３４６、３８４、４２２、４６０、４９８、５３６、５７４、６１２、６５０、６８８、及び７２６から選択されるＣＤＲ－Ｌ１を含む。一部の実施形態では、ＣＤＲ－Ｈ３は、配列番号３、４１、７９、１１７、１５５、１９３、２３１、２６９、３０７、３４５、３８３、４２１、４５９、４９７、５３５、５７３、６１１、６４９、６８７、及び７２５のＣＤＲ－Ｈ３と少なくとも約５０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％の同一性を有し、ＣＤＲ－Ｈ２は、配列番号２、４０、７８、１１６、１５４、１９２、２３０、２６８、３０６、３４４、３８２、４２０、４５８、４９６、５３４、５７２、６１０、６４８、６８６、及び７２４のＣＤＲ－Ｈ２と少なくとも約５０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％の同一性を有し、ＣＤＲ－Ｈ１は、配列番号１、３９、７７、１１５、１５３、１９１、２２９、２６７、３０５、３４３、３８１、４１９、４５７、４９５、５３３、５７１、６０９、６４７、６８５、及び７２３のＣＤＲ－Ｈ１と少なくとも約５０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％の同一性を有し、ＣＤＲ－Ｌ３は、配列番号６、４４、８２、１２０、１５８、１９６、２３４、２７２、３１０、３４８、３８６、４２４、４６２、５００、５３８、５７６、６１４、６５２、６９０、及び７２８のＣＤＲ－Ｌ３と少なくとも約５０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％の同一性を有し、ＣＤＲ－Ｌ２は、配列番号５、４３、８１、１１９、１５７、１９５、２３３、２７１、３０９、３４７、３８５、４２３、４６１、４９９、５３７、５７５、６１３、６５１、６８９、及び７２７のＣＤＲ－Ｌ２と少なくとも約５０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％の同一性を有し、かつＣＤＲ－Ｌ１は、配列番号４、４２、８０、１１８、１５６、１９４、２３２、２７０、３０８、３４６、３８４、４２２、４６０、４９８、５３６、５７４、６１２、６５０、６８８、及び７２６のＣＤＲ－Ｌ１と少なくとも約５０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％の同一性を有する。一部の実施形態では、ＣＤＲ－Ｈ３は、最大１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、または８個のアミノ酸置換を有する、配列番号３、４１、７９、１１７、１５５、１９３、２３１、２６９、３０７、３４５、３８３、４２１、４５９、４９７、５３５、５７３、６１１、６４９、６８７、及び７２５から選択されるＣＤＲ－Ｈ３であり、ＣＤＲ－Ｈ２は、最大１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、または８個のアミノ酸置換を有する、配列番号２、４０、７８、１１６、１５４、１９２、２３０、２６８、３０６、３４４、３８２、４２０、４５８、４９６、５３４、５７２、６１０、６４８、６８６、及び７２４から選択されるＣＤＲ－Ｈ２であり、ＣＤＲ－Ｈ１は、最大１個、２個、３個、４個、または５個のアミノ酸置換を有する、配列番号１、３９、７７、１１５、１５３、１９１、２２９、２６７、３０５、３４３、３８１、４１９、４５７、４９５、５３３、５７１、６０９、６４７、６８５、及び７２３から選択されるＣＤＲ－Ｈ１であり、ＣＤＲ－Ｌ３は、最大１個、２個、３個、４個、または５個のアミノ酸置換を有する、配列番号６、４４、８２、１２０、１５８、１９６、２３４、２７２、３１０、３４８、３８６、４２４、４６２、５００、５３８、５７６、６１４、６５２、６９０、及び７２８から選択されるＣＤＲ－Ｌ３であり、ＣＤＲ－Ｌ２は、最大１個、２個、３個、または４個のアミノ酸置換を有する、配列番号５、４３、８１、１１９、１５７、１９５、２３３、２７１、３０９、３４７、３８５、４２３、４６１、４９９、５３７、５７５、６１３、６５１、６８９、及び７２７から選択されるＣＤＲ－Ｌ２であり、かつＣＤＲ－Ｌ１は、最大１個、２個、３個、４個、５個、または６個のアミノ酸置換を有する、配列番号４、４２、８０、１１８、１５６、１９４、２３２、２７０、３０８、３４６、３８４、４２２、４６０、４９８、５３６、５７４、６１２、６５０、６８８、及び７２６から選択されるＣＤＲ－Ｌ１である。一部の態様では、アミノ酸置換は、保存的アミノ酸置換である。一部の実施形態では、この段落に記載される抗体は、本明細書で「バリアント」と称される。一部の実施形態では、かかるバリアントは、例えば、親和性成熟、部位特異的変異誘発、ランダム変異誘発、または当該技術分野で既知の、もしくは本明細書に記載される任意の他の方法によって、本明細書に提供される配列に由来する。一部の実施形態では、かかるバリアントは、本明細書に提供される配列には由来せず、例えば、抗体を得るための本明細書に提供される方法に従って新規に単離され得る。
一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、代表的な番号付けシステムによって決定するとき、配列番号１のＣＤＲ－Ｈ１、配列番号２のＣＤＲ－Ｈ２、配列番号３のＣＤＲ－Ｈ３、配列番号４のＣＤＲ－Ｌ１、配列番号５のＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号６のＣＤＲ－Ｌ１を含む。
一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、代表的な番号付けシステムによって決定するとき、配列番号３９のＣＤＲ－Ｈ１、配列番号４０のＣＤＲ－Ｈ２、配列番号４１のＣＤＲ－Ｈ３、配列番号４２のＣＤＲ－Ｌ１、配列番号４３のＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号４４のＣＤＲ－Ｌ１を含む。
一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、代表的な番号付けシステムによって決定するとき、配列番号７７のＣＤＲ－Ｈ１、配列番号７８のＣＤＲ－Ｈ２、配列番号７９のＣＤＲ－Ｈ３、配列番号８０のＣＤＲ－Ｌ１、配列番号８１のＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号８２のＣＤＲ－Ｌ１を含む。
一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、代表的な番号付けシステムによって決定するとき、配列番号１１５のＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１１６のＣＤＲ－Ｈ２、配列番号１１７のＣＤＲ－Ｈ３、配列番号１１８のＣＤＲ－Ｌ１、配列番号１１９のＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号１２０のＣＤＲ－Ｌ１を含む。
一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、代表的な番号付けシステムによって決定するとき、配列番号１５３のＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１５４のＣＤＲ－Ｈ２、配列番号１５５のＣＤＲ－Ｈ３、配列番号１５６のＣＤＲ－Ｌ１、配列番号１５７のＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号１５８のＣＤＲ－Ｌ１を含む。
一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、代表的な番号付けシステムによって決定するとき、配列番号８８４のＣＤＲ－Ｈ１、配列番号８８５のＣＤＲ－Ｈ２、配列番号８８６のＣＤＲ－Ｈ３、配列番号８８７のＣＤＲ－Ｌ１、配列番号８８８のＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号８８９のＣＤＲ－Ｌ１を含む。
一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、代表的な番号付けシステムによって決定するとき、配列番号１９１のＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１９２のＣＤＲ－Ｈ２、配列番号１９３のＣＤＲ－Ｈ３、配列番号１９４のＣＤＲ－Ｌ１、配列番号１９５のＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号１９６のＣＤＲ－Ｌ１を含む。
一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、代表的な番号付けシステムによって決定するとき、配列番号２２９のＣＤＲ－Ｈ１、配列番号２３０のＣＤＲ－Ｈ２、配列番号２３１のＣＤＲ－Ｈ３、配列番号２３２のＣＤＲ－Ｌ１、配列番号２３３のＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号２３４のＣＤＲ－Ｌ１を含む。
一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、代表的な番号付けシステムによって決定するとき、配列番号２６７のＣＤＲ－Ｈ１、配列番号２６８のＣＤＲ－Ｈ２、配列番号２６９のＣＤＲ－Ｈ３、配列番号２７０のＣＤＲ－Ｌ１、配列番号２７１のＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号２７２のＣＤＲ－Ｌ１を含む。
一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、代表的な番号付けシステムによって決定するとき、配列番号３０５のＣＤＲ－Ｈ１、配列番号３０６のＣＤＲ－Ｈ２、配列番号３０７のＣＤＲ－Ｈ３、配列番号３０８のＣＤＲ－Ｌ１、配列番号３０９のＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号３１０のＣＤＲ－Ｌ１を含む。
一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、代表的な番号付けシステムによって決定するとき、配列番号３４３のＣＤＲ－Ｈ１、配列番号３４４のＣＤＲ－Ｈ２、配列番号３４５のＣＤＲ－Ｈ３、配列番号３４６のＣＤＲ－Ｌ１、配列番号３４７のＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号３４８のＣＤＲ－Ｌ１を含む。
一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、代表的な番号付けシステムによって決定するとき、配列番号３８１のＣＤＲ－Ｈ１、配列番号３８２のＣＤＲ－Ｈ２、配列番号３８３のＣＤＲ－Ｈ３、配列番号３８４のＣＤＲ－Ｌ１、配列番号３８５のＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号３８６のＣＤＲ－Ｌ１を含む。
一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、代表的な番号付けシステムによって決定するとき、配列番号４１９のＣＤＲ－Ｈ１、配列番号４２０のＣＤＲ－Ｈ２、配列番号４２１のＣＤＲ－Ｈ３、配列番号４２２のＣＤＲ－Ｌ１、配列番号４２３のＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号４２４のＣＤＲ－Ｌ１を含む。
一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、代表的な番号付けシステムによって決定するとき、配列番号４５７のＣＤＲ－Ｈ１、配列番号４５８のＣＤＲ－Ｈ２、配列番号４５９のＣＤＲ－Ｈ３、配列番号４６０のＣＤＲ－Ｌ１、配列番号４６１のＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号４６２のＣＤＲ－Ｌ１を含む。
一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、代表的な番号付けシステムによって決定するとき、配列番号４９５のＣＤＲ－Ｈ１、配列番号４９６のＣＤＲ－Ｈ２、配列番号４９７のＣＤＲ－Ｈ３、配列番号４９８のＣＤＲ－Ｌ１、配列番号４９９のＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号５００のＣＤＲ－Ｌ１を含む。
一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、代表的な番号付けシステムによって決定するとき、配列番号５３３のＣＤＲ－Ｈ１、配列番号５３４のＣＤＲ－Ｈ２、配列番号５３５のＣＤＲ－Ｈ３、配列番号５３６のＣＤＲ－Ｌ１、配列番号５３７のＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号５３８のＣＤＲ－Ｌ１を含む。
一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、代表的な番号付けシステムによって決定するとき、配列番号５７１のＣＤＲ－Ｈ１、配列番号５７２のＣＤＲ－Ｈ２、配列番号５７３のＣＤＲ－Ｈ３、配列番号５７４のＣＤＲ－Ｌ１、配列番号５７５のＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号５７６のＣＤＲ－Ｌ１を含む。
一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、代表的な番号付けシステムによって決定するとき、配列番号６０９のＣＤＲ－Ｈ１、配列番号６１０のＣＤＲ－Ｈ２、配列番号６１１のＣＤＲ－Ｈ３、配列番号６１２のＣＤＲ－Ｌ１、配列番号６１３のＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号６１４のＣＤＲ－Ｌ１を含む。
一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、代表的な番号付けシステムによって決定するとき、配列番号６４７のＣＤＲ－Ｈ１、配列番号６４８のＣＤＲ－Ｈ２、配列番号６４９のＣＤＲ－Ｈ３、配列番号６５０のＣＤＲ－Ｌ１、配列番号６５１のＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号６５２のＣＤＲ－Ｌ１を含む。
一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、代表的な番号付けシステムによって決定するとき、配列番号６８５のＣＤＲ－Ｈ１、配列番号６８６のＣＤＲ－Ｈ２、配列番号６８７のＣＤＲ－Ｈ３、配列番号６８８のＣＤＲ－Ｌ１、配列番号６８９のＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号６９０のＣＤＲ－Ｌ１を含む。
一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、代表的な番号付けシステムによって決定するとき、配列番号７２３のＣＤＲ－Ｈ１、配列番号７２４のＣＤＲ－Ｈ２、配列番号７２５のＣＤＲ－Ｈ３、配列番号７２６のＣＤＲ－Ｌ１、配列番号７２７のＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号７２８のＣＤＲ－Ｌ１を含む。
２．２．５．コンセンサス配列
一部の実施形態では、本明細書において、第１のファミリーの抗体が提供され、かかるファミリーの抗体は、以下の６つのＣＤＲ配列、すなわち、（ａ）配列Ｇ－Ｆ－Ｔ－Ｆ－Ｓ－Ｘ１－Ｙ－Ａ－Ｍ－Ｘ２（ここで、Ｘ１は、ＤまたはＳであり、Ｘ２は、ＡまたはＧである）（配列番号７７３）を有するＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列Ｘ３－Ｉ－Ｓ－Ｇ－Ｓ－Ｇ－Ｇ－Ｌ－Ｔ－Ｙ－Ｙ－Ａ－Ｄ－Ｓ－Ｖ－Ｋ－Ｇ（ここで、Ｘ３は、ＡまたはＴである）（配列番号７７４）を有するＣＤＲ－Ｈ２、（ｃ）配列ＡＰＹＧＹＹＭＤＶ（配列番号７７５）を有するＣＤＲ－Ｈ３、（ｄ）配列ＲＡＳＱＳＩＳＳＷＬＡ（配列番号７７６）を有するＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列ＫＡＳＳＬＥＳ（配列番号７７７）を有するＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列ＱＱＹＫＳＹＩＴ（配列番号７７８）を有するＣＤＲ－Ｌ３を含む。一部の実施形態では、かかるファミリーの抗体は、配列番号７６１のＶＨ配列及び配列番号７６２のＶＬ配列を含む。一部の実施形態では、本明細書において、かかる第１のファミリー内にある抗体が提供される。
一部の実施形態では、本明細書において、第２のファミリーの抗体が提供され、かかるファミリーの抗体は、以下の６つのＣＤＲ配列、すなわち、（ａ）配列Ｇ－Ｙ－Ｔ－Ｆ－Ｘ１－Ｘ２－Ｙ－Ｇ－Ｉ－Ｓ（ここで、Ｘ１は、ＤまたはＲであり、Ｘ２は、ＳまたはＶである）（配列番号７７９）を有するＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列Ｗ－Ｘ３－Ａ－Ｐ－Ｙ－Ｘ４－Ｇ－Ｎ－Ｔ－Ｎ－Ｙ－Ａ－Ｑ－Ｋ－Ｌ－Ｑ－Ｇ（ここで、Ｘ３は、ＩまたはＶであり、Ｘ４は、ＳまたはＮである）（配列番号７８０）を有するＣＤＲ－Ｈ２、（ｃ）配列Ｄ－Ａ－Ｇ－Ｔ－Ｙ－Ｓ－Ｐ－Ｘ５－Ｇ－Ｙ－Ｇ－Ｍ－Ｄ－Ｖ（ここで、Ｘ５は、ＦまたはＹである）（配列番号７８１）を有するＣＤＲ－Ｈ３、（ｄ）配列Ｘ６－Ａ－Ｓ－Ｘ７－Ｓ－Ｉ－Ｘ８－Ｘ９－Ｗ－Ｌ－Ａ（ここで、Ｘ６は、ＲまたはＱであり、Ｘ７は、Ｑ、Ｅ、またはＨであり、Ｘ８は、Ｓ、Ｄ、またはＮであり、Ｘ９は、ＳまたはＮである）（配列番号７８２）を有するＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列Ｘ１０－Ａ－Ｘ１１－Ｘ１２－Ｌ－Ｅ－Ｘ１３（ここで、Ｘ１０は、ＫまたはＳであり、Ｘ１１は、ＳまたはＹであり、Ｘ１２は、Ｓ、Ｙ、またはＮであり、Ｘ１３は、ＳまたはＹである）（配列番号７８３）を有するＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列Ｑ－Ｘ１４－Ｆ－Ｑ－Ｘ１５－Ｌ－Ｐ－Ｐ－Ｆ－Ｔ（ここで、Ｘ１４は、Ｑ、Ｌ、またはＲであり、Ｘ１５は、ＳまたはＫである）（配列番号７８４）を有するＣＤＲ－Ｌ３を含む。一部の実施形態では、かかるファミリーの抗体は、配列番号７６３のＶＨ配列及び配列番号７６４のＶＬ配列を含む。一部の実施形態では、本明細書において、かかる第２のファミリー内にある抗体が提供される。
一部の実施形態では、本明細書において、第３のファミリーの抗体が提供され、かかるファミリーの抗体は、以下の６つのＣＤＲ配列、すなわち、（ａ）配列Ｇ－Ｆ－Ｔ－Ｆ－Ｘ１－Ｓ－Ｘ２－Ｇ－Ｍ－Ｈ（ここで、Ｘ１は、ＨまたはＲであり、Ｘ２は、ＲまたはＹである）（配列番号７８５）を有するＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列ＶＩＴＹＤＧＩＮＫＹＹＡＤＳＶＥＧ（配列番号７８６）を有するＣＤＲ－Ｈ２、（ｃ）配列ＤＧＶＹＹＧＶＹＤＹ（配列番号７８７）を有するＣＤＲ－Ｈ３、（ｄ）配列ＫＳＳＱＳＶＬＦＳＳＮＮＫＮＹＬＡ（配列番号７８８）を有するＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列ＷＡＳＴＲＥＳ（配列番号７８９）を有するＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列ＱＱＦＨＳＹＰＬＴ（配列番号７９０）を有するＣＤＲ－Ｌ３を含む。部の実施形態では、かかるファミリーの抗体は、配列番号７６５のＶＨ配列及び配列番号７６６のＶＬ配列を含む。一部の実施形態では、本明細書において、かかる第３のファミリー内にある抗体が提供される。
一部の実施形態では、本明細書において、第４のファミリーの抗体が提供され、かかるファミリーの抗体は、以下の６つのＣＤＲ配列、すなわち、（ａ）配列ＧＧＴＦＳＳＮＡＩＧ（配列番号７９１）を有するＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列ＳＩＩＰＩＩＧＦＡＮＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号７９２）を有するＣＤＲ－Ｈ２、（ｃ）配列ＤＳＧＹＹＹＧＡＳＳＦＧＭＤＶ（配列番号７９３）を有するＣＤＲ－Ｈ３、（ｄ）配列ＲＡＳＱＳＶＳＳＮＬＡ（配列番号７９４）を有するＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列ＧＡＳＴＲＡＴ（配列番号７９５）を有するＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列ＥＱＹＮＮＬＰＬＴ（配列番号７９６）を有するＣＤＲ－Ｌ３を含む。一部の実施形態では、かかるファミリーの抗体は、配列番号７６７のＶＨ配列及び配列番号７６８のＶＬ配列を含む。一部の実施形態では、本明細書において、かかる第４のファミリー内にある抗体が提供される。
一部の実施形態では、本明細書において、第５のファミリーの抗体が提供され、かかるファミリーの抗体は、以下の６つのＣＤＲ配列、すなわち、（ａ）配列Ｇ－Ｇ－Ｓ－Ｘ１－Ｓ－Ｓ－Ｇ－Ｘ２－Ｙ－Ｗ－Ｓ（ここで、Ｘ１は、ＩまたはＬであり、Ｘ２は、ＱまたはＹである）（配列番号７９７）を有するＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列Ｅ－Ｉ－Ｘ３－Ｘ４－Ｓ－Ｇ－Ｓ－Ｔ－Ｒ－Ｙ－Ｎ－Ｐ－Ｓ－Ｌ－Ｋ－Ｓ（ここで、Ｘ３は、ＹまたはＧであり、Ｘ４は、ＹまたはＡである）（配列番号７９８）を有するＣＤＲ－Ｈ２、（ｃ）配列Ｄ－Ｘ５－Ｐ－Ｙ－Ｙ－Ｙ－Ｘ６－Ｇ－Ｇ－Ｙ－Ｙ－Ｙ－Ｙ－Ｍ－Ｄ－Ｖ（ここで、Ｘ５は、ＴまたはＡであり、Ｘ６は、Ｅ、Ｇ、またはＤである）（配列番号７９９）を有するＣＤＲ－Ｈ３、（ｄ）配列Ｒ－Ａ－Ｓ－Ｘ７－Ｓ－Ｖ－Ｘ８－Ｓ－Ｓ－Ｘ９－Ｌ－Ａ（ここで、Ｘ７は、Ｑ、Ｅ、またはＤであり、Ｘ８は、ＳまたはＤであり、Ｘ９は、ＹまたはＦである）（配列番号８００）を有するＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列Ｇ－Ａ－Ｘ１０－Ｘ１１－Ｒ－Ｘ１２－Ｘ１３（ここで、Ｘ１０は、Ｓ、Ｄ、Ｆ、またはＹであり、Ｘ１１は、ＳまたはＴであり、Ｘ１２は、ＡまたはＱであり、Ｘ１３は、ＴまたはＮである）（配列番号８０１）を有するＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列Ｑ－Ｑ－Ｘ１４－Ｇ－Ｖ－Ｖ－Ｐ－Ｙ－Ｔ（ここで、Ｘ１４は、Ｖ、Ａ、またはＤである）（配列番号８０２）を有するＣＤＲ－Ｌ３を含む。一部の実施形態では、かかるファミリーの抗体は、配列番号７６９のＶＨ配列及び配列番号７７０のＶＬ配列を含む。一部の実施形態では、本明細書において、かかる第５のファミリー内にある抗体が提供される。
一部の実施形態では、本明細書において、第６のファミリーの抗体が提供され、かかるファミリーの抗体は、以下の６つのＣＤＲ配列、すなわち、（ａ）配列ＧＹＴＦＡＮＹＹＭＨ（配列番号８０３）を有するＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列ＩＩＮＰＳＧＧＩＴＶＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号８０４）を有するＣＤＲ－Ｈ２、（ｃ）配列ＧＧＳＫＶＡＡＬＡＦＤＩ（配列番号８０５）を有するＣＤＲ－Ｈ３、（ｄ）配列ＱＡＳＱＤＩＳＮＳＬＮ（配列番号８０６）を有するＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列ＤＡＳＮＬＥＴ（配列番号８０７）を有するＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列ＱＱＹＮＦＨＰＬＴ（配列番号８０８）を有するＣＤＲ－Ｌ３を含む。一部の実施形態では、かかるファミリーの抗体は、配列番号７７１のＶＨ配列及び配列番号７７２のＶＬ配列を含む。一部の実施形態では、本明細書において、かかる第６のファミリー内にある抗体が提供される。
一部の実施形態では、本明細書において、第７のファミリーの抗体が提供され、かかるファミリーの抗体は、以下の６つのＣＤＲ配列、すなわち、（ａ）配列Ｇ－Ｙ－Ｔ－Ｆ－Ｄ－Ｘ１－Ｙ－Ｇ－Ｉ－Ｓ（ここで、Ｘ１は、ＶまたはＡである）（配列番号８７２）を有するＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列Ｗ－Ｉ－Ａ－Ｐ－Ｙ－Ｘ２－Ｇ－Ｎ－Ｔ－Ｎ－Ｙ－Ａ－Ｑ－Ｋ－Ｌ－Ｑ－Ｇ（ここで、Ｘ２は、ＮまたはＳである）（配列番号８７３）を有するＣＤＲ－Ｈ２、（ｃ）配列Ｄ－Ａ－Ｇ－Ｔ－Ｙ－Ｓ－Ｐ－Ｆ－Ｇ－Ｙ－Ｇ－Ｍ－Ｄ－Ｖ（配列番号８７４）を有するＣＤＲ－Ｈ３、（ｄ）配列Ｘ３－Ａ－Ｓ－Ｘ４－Ｓ－Ｉ－Ｘ５－Ｘ６－Ｗ－Ｌ－Ａ（ここで、Ｘ３は、ＲまたはＱであり、Ｘ４は、ＱまたはＥであり、Ｘ５は、ＳまたはＮであり、Ｘ６は、ＳまたはＮである）（配列番号８７５）を有するＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列Ｋ－Ａ－Ｘ７－Ｘ８－Ｌ－Ｅ－Ｘ９（ここで、Ｘ７は、ＳまたはＹであり、Ｘ８は、ＳまたはＮであり、Ｘ９は、ＳまたはＹである）（配列番号８７６）を有するＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列Ｑ－Ｘ１０－Ｆ－Ｑ－Ｘ１１－Ｌ－Ｐ－Ｐ－Ｆ－Ｔ（ここで、Ｘ１０は、ＱまたはＬであり、Ｘ１１は、ＳまたはＫである）（配列番号８７７）を有するＣＤＲ－Ｌ３を含む。一部の実施形態では、かかるファミリーの抗体は、配列番号８６８のＶＨ配列及び配列番号８６９のＶＬ配列を含む。一部の実施形態では、本明細書において、かかる第７のファミリー内にある抗体が提供される。
一部の実施形態では、本明細書において、第８のファミリーの抗体が提供され、かかるファミリーの抗体は、以下の６つのＣＤＲ配列、すなわち、（ａ）配列Ｇ－Ｙ－Ｔ－Ｆ－Ｒ－Ｓ－Ｙ－Ｇ－Ｉ－Ｓ（配列番号８７８）を有するＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列Ｗ－Ｖ－Ａ－Ｐ－Ｙ－Ｘ１－Ｇ－Ｎ－Ｔ－Ｎ－Ｙ－Ａ－Ｑ－Ｋ－Ｌ－Ｑ－Ｇ（ここで、Ｘ１は、ＳまたはＮである）（配列番号８７９）を有するＣＤＲ－Ｈ２、（ｃ）配列Ｄ－Ａ－Ｇ－Ｔ－Ｙ－Ｓ－Ｐ－Ｙ－Ｇ－Ｙ－Ｇ－Ｍ－Ｄ－Ｖ（配列番号８８０）を有するＣＤＲ－Ｈ３、（ｄ）配列Ｘ２－Ａ－Ｓ－Ｘ３－Ｓ－Ｉ－Ｘ４－Ｓ－Ｗ－Ｌ－Ａ（ここで、Ｘ２は、ＲまたはＱであり、Ｘ３は、ＱまたはＨであり、Ｘ４は、ＳまたはＤである）（配列番号８８１）を有するＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列Ｘ５－Ａ－Ｓ－Ｘ６－Ｌ－Ｅ－Ｓ（ここで、Ｘ５は、ＫまたはＳであり、Ｘ６は、ＳまたはＹである）（配列番号８８２）を有するＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列Ｑ－Ｘ７－Ｆ－Ｑ－Ｓ－Ｌ－Ｐ－Ｐ－Ｆ－Ｔ（ここで、Ｘ７は、Ｑ、Ｌ、またはＲである）（配列番号８８３）を有するＣＤＲ－Ｌ３を含む。一部の実施形態では、かかるファミリーの抗体は、配列番号８７０のＶＨ配列及び配列番号８７１のＶＬ配列を含む。一部の実施形態では、本明細書において、かかる第８のファミリー内にある抗体が提供される。
２．２．６．抗体バリアントの機能的特性
上記及び本開示の他の箇所に記載されるように、本明細書において、本明細書に提供される例示的な抗体配列に対する同一性パーセント、または本明細書に提供される例示的な抗体配列と比較したアミノ酸残基の置換に基づいて定義される、抗体バリアントが提供される。
一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体のバリアントは、ｈＴＦに対して特異性を有する。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体のバリアントは、ｃＴＦに対して特異性を有する。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体のバリアントは、ｍＴＦに対して特異性を有する。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体のバリアントは、ｈＴＦ及びｃＴＦに対して特異性を有する。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体のバリアントは、ｈＴＦ及びｍＴＦに対して特異性を有する。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体のバリアントは、ｃＴＦ及びｍＴＦに対して特異性を有する。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体のバリアントは、ｈＴＦ、ｃＴＦ、及びｍＴＦに対して特異性を有する。
一部の実施形態では、本明細書に提供される例示的な抗体配列に由来する抗体のバリアントは、ＫＤによって測定するとき、ｈＴＦに対して、かかる例示的な抗体の親和性の約１．５倍、約２倍、約３倍、約４倍、約５倍、約６倍、約７倍、約８倍、約９倍、または約１０倍以内である親和性を保持する。一部の実施形態では、本明細書に提供される例示的な抗体配列に由来する抗体のバリアントは、ＫＤによって測定するとき、ｃＴＦに対して、かかる例示的な抗体の親和性の約１．５倍、約２倍、約３倍、約４倍、約５倍、約６倍、約７倍、約８倍、約９倍、または約１０倍以内である親和性を保持する。一部の実施形態では、本明細書に提供される例示的な抗体配列に由来する抗体のバリアントは、ＫＤによって測定するとき、ｍＴＦに対して、かかる例示的な抗体の親和性の約１．５倍、約２倍、約３倍、約４倍、約５倍、約６倍、約７倍、約８倍、約９倍、または約１０倍以内である親和性を保持する。一部の実施形態では、本明細書に提供される例示的な抗体配列に由来する抗体のバリアントは、ＫＤによって測定するとき、ｈＴＦ及びｃＴＦの両方に対して、かかる例示的な抗体の親和性の約１．５倍、約２倍、約３倍、約４倍、約５倍、約６倍、約７倍、約８倍、約９倍、または約１０倍以内である親和性を保持する。一部の実施形態では、本明細書に提供される例示的な抗体配列に由来する抗体のバリアントは、ＫＤによって測定するとき、ｈＴＦ及びｍＴＦの両方に対して、かかる例示的な抗体の親和性の約１．５倍、約２倍、約３倍、約４倍、約５倍、約６倍、約７倍、約８倍、約９倍、または約１０倍以内である親和性を保持する。一部の実施形態では、本明細書に提供される例示的な抗体配列に由来する抗体のバリアントは、ＫＤによって測定するとき、ｃＴＦ及びｍＴＦの両方に対して、かかる例示的な抗体の親和性の約１．５倍、約２倍、約３倍、約４倍、約５倍、約６倍、約７倍、約８倍、約９倍、または約１０倍以内である親和性を保持する。一部の実施形態では、本明細書に提供される例示的な抗体配列に由来する抗体のバリアントは、ＫＤによって測定するとき、ｈＴＦ、ｃＴＦ、及びｍＴＦの３つ全てに対して、かかる例示的な抗体の親和性の約１．５倍、約２倍、約３倍、約４倍、約５倍、約６倍、約７倍、約８倍、約９倍、または約１０倍以内である親和性を保持する。
一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体のバリアントは、本明細書に記載される１つまたは複数のアッセイまたは生物学的効果によって測定するとき、ＴＦシグナル伝達を阻害する能力を保持する。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体のバリアントは、血液凝固過程におけるＴＦの正常な機能を保持する。
一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体のバリアントは、ＴＦへの結合を、それぞれ本開示の表１３に提供されるような１Ｆ、１Ｇ、２５Ａ、２５Ａ３、２５Ａ５、２５Ａ５－Ｔ，２５Ｇ、２５Ｇ１、２５Ｇ９、２９Ｄ、２９Ｅ、３９Ａ、４３Ｂ、４３Ｂ１、４３Ｂ７、４３Ｄ、４３Ｄ７、４３Ｄ８、４３Ｅ、４３Ｅａ、及び５４Ｅから選択される抗体と競合する。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体のバリアントは、ＴＦへの結合を、２５Ａ、２５Ａ３、２５Ａ５、２５Ａ５－Ｔ、２５Ｇ、２５Ｇ１、及び２５Ｇ９から選択される抗体と競合する。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体のバリアントは、ＴＦへの結合を、４３Ｂ、４３Ｂ１、４３Ｂ７、４３Ｄ、４３Ｄ７、４３Ｄ８、４３Ｅ、及び４３Ｅａから選択される抗体と競合する。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体のバリアントは、ＴＦへの結合を、２５Ａ、２５Ａ３、２５Ａ５、２５Ａ５－Ｔ、２５Ｇ、２５Ｇ１、２５Ｇ９、４３Ｂ、４３Ｂ１、４３Ｂ７、４３Ｄ、４３Ｄ７、４３Ｄ８、４３Ｅ、及び４３Ｅａから選択される抗体と競合する。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体のバリアントは、ＴＦへの結合を、１Ｆ、１Ｇ、２９Ｄ、２９Ｅ、３９Ａ、または５４Ｅから選択される抗体と競合する。
一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体のバリアントは、トロンビン生成アッセイ（ＴＧＡ）によって判定される場合、ヒトトロンビン生成を可能にする。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体のバリアントは、トロンビン生成アッセイ（ＴＧＡ）によって判定される場合、ヒトトロンビン生成を阻害しない。
一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体のバリアントは、ヒトＦＸが結合するヒトＴＦ結合部位とは別個のヒトＴＦ結合部位でヒトＴＦに結合する。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体のバリアントは、ＦＸをＦＸａに変換するＴＦ：ＦＶＩＩａの能力に干渉しない。
一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体のバリアントは、ヒトＦＶＩＩａが結合するヒトＴＦ結合部位とは別個のヒトＴＦ結合部位でヒトＴＦに結合する。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体のバリアントは、ヒトＴＦへの結合をヒトＦＶＩＩａと競合しない。
一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体のバリアントは、ＦＶＩＩａ依存性ＴＦシグナル伝達を阻害する。
一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体のバリアントは、マウスＴＦ（配列番号８１７）に結合する。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体のバリアントは、該抗体のｈＴＦに対する親和性よりも低い親和性（より高いＫＤによって示される）でマウスＴＦに結合する。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体のバリアントは、ｍＴＦに結合しない。
一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体のバリアントは、ブタＴＦ（配列番号８２４）に結合する。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体のバリアントは、該抗体のｈＴＦに対する親和性よりも低い親和性（より高いＫＤによって示される）でブタＴＦに結合する。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体のバリアントは、ｐＴＦに結合しない。
一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体のバリアントは、かかる抗体と同じＴＦのエピトープに結合する。
２．２．７．抗体の他の機能的特性
一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、以下の（ａ）～（ｄｄ）に列挙される特性のうちの１つまたは複数を有する：（ａ）ヒトＦＶＩＩａが結合するヒトＴＦ結合部位とは別個のヒトＴＦ結合部位でヒトＴＦに結合する、（ｂ）トロンビン生成アッセイ（ＴＧＡ）によって判定される場合、ヒトトロンビン生成を阻害しない、（ｃ）アイソタイプ対照と比較してトロンビン生成曲線上のトロンビンピーク（ピークＩＩａ）を低減しない、（ｄ）アイソタイプ対照と比較してアッセイ開始からトロンビン生成曲線上のトロンビンピークまでの時間（ｔｔピーク）を増加させない、（ｅ）トロンビン生成曲線下面積によって判定される場合、アイソタイプ対照と比較して内因性トロンビン産生能（ＥＴＰ）を減少させない、（ｆ）トロンビン生成アッセイ（ＴＧＡ）によって判定される場合、ヒトトロンビン生成を可能にする、（ｇ）アイソタイプ対照と比較してトロンビン生成曲線上のトロンビンピーク（ピークＩＩａ）を維持する、（ｈ）アイソタイプ対照と比較してアッセイ開始からトロンビン生成曲線上のトロンビンピークまでの時間（ｔｔピーク）を維持する、（ｉ）トロンビン生成曲線下面積によって判定される場合、アイソタイプ対照と比較して内因性トロンビン産生能（ＥＴＰ）を保護する、（ｊ）ヒトＦＸが結合するヒトＴＦ結合部位とは別個のヒトＴＦ結合部位でヒトＴＦに結合する、（ｋ）ＦＸをＦＸａに変換するＴＦ：ＦＶＩＩａの能力に干渉しない、（ｌ）ヒトＴＦへの結合をヒトＦＶＩＩａと競合しない、（ｍ）ＦＶＩＩａ依存性ＴＦシグナル伝達を阻害する、（ｎ）カニクイザルＴＦに結合する、（ｏ）マウスＴＦに結合する、（ｐ）ウサギＴＦに結合する、（ｑ）ブタＴＦに結合する、（ｒ）ブタ脈絡膜血管新生（ＣＮＶ）モデルにおいて病変サイズを低減する、（ｓ）生細胞染色アッセイにおいてアイソタイプ対照と比べた該抗体の蛍光強度中央値によって判定される場合、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のアミノ酸残基１４９に変異を含むバリアントＴＦの細胞外ドメインとの間の結合が、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のＴＦの細胞外ドメインとの間の結合の５０％未満である、（ｔ）生細胞染色アッセイにおいてアイソタイプ対照と比べた該抗体の蛍光強度中央値によって判定される場合、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のアミノ酸残基６８に変異を含むバリアントＴＦの細胞外ドメインとの間の結合が、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のＴＦの細胞外ドメインとの間の結合の５０％超である、（ｕ）生細胞染色アッセイにおいてアイソタイプ対照と比べた該抗体の蛍光強度中央値によって判定される場合、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のアミノ酸残基１７１及び１９７に変異を含むバリアントＴＦの細胞外ドメインとの間の結合が、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のＴＦの細胞外ドメインとの間の結合の５０％未満である、（ｖ）生細胞染色アッセイにおいてアイソタイプ対照と比べた該抗体の蛍光強度中央値によって判定される場合、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のアミノ酸残基１～７７が配列番号８３８に示される配列のラットＴＦの細胞外ドメインにおけるアミノ酸残基１～７６と置き換えられたヒトＴＦの細胞外ドメインとの間の結合が、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のＴＦの細胞外ドメインとの間の結合の５０％超である、（ｗ）生細胞染色アッセイにおいてアイソタイプ対照と比べた該抗体の蛍光強度中央値によって判定される場合、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のアミノ酸残基３９～７７が配列番号８３８に示される配列のラットＴＦの細胞外ドメインにおけるアミノ酸残基３８～７６と置き換えられたヒトＴＦの細胞外ドメインとの間の結合が、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のＴＦの細胞外ドメインとの間の結合の５０％超である、（ｘ）生細胞染色アッセイにおいてアイソタイプ対照と比べた該抗体の蛍光強度中央値によって判定される場合、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のアミノ酸残基９４～１０７が配列番号８３８に示される配列のラットＴＦの細胞外ドメインにおけるアミノ酸残基９９～１１２と置き換えられたヒトＴＦの細胞外ドメインとの間の結合が、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のＴＦの細胞外ドメインとの間の結合の５０％超である、（ｙ）生細胞染色アッセイにおいてアイソタイプ対照と比べた該抗体の蛍光強度中央値によって判定される場合、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のアミノ酸残基１４６～１５８が配列番号８３８に示される配列のラットＴＦの細胞外ドメインにおけるアミノ酸残基１５１～１６３と置き換えられたヒトＴＦの細胞外ドメインとの間の結合が、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のＴＦの細胞外ドメインとの間の結合の５０％未満である、（ｚ）生細胞染色アッセイにおいてアイソタイプ対照と比べた該抗体の蛍光強度中央値によって判定される場合、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のアミノ酸残基１５９～２１９が配列番号８３８に示される配列のラットＴＦの細胞外ドメインにおけるアミノ酸残基１６４～２２４と置き換えられたヒトＴＦの細胞外ドメインとの間の結合が、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のＴＦの細胞外ドメインとの間の結合の５０％未満である、（ａａ）生細胞染色アッセイにおいてアイソタイプ対照と比べた該抗体の蛍光強度中央値によって判定される場合、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のアミノ酸残基１５９～１８９が配列番号８３８に示される配列のラットＴＦの細胞外ドメインにおけるアミノ酸残基１６４～１９４と置き換えられたヒトＴＦの細胞外ドメインとの間の結合が、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のＴＦの細胞外ドメインとの間の結合の５０％未満である、（ｂｂ）生細胞染色アッセイにおいてアイソタイプ対照と比べた該抗体の蛍光強度中央値によって判定される場合、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のアミノ酸残基１５９～１７４が配列番号８３８に示される配列のラットＴＦの細胞外ドメインにおけるアミノ酸残基１６４～１７９と置き換えられたヒトＴＦの細胞外ドメインとの間の結合が、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のＴＦの細胞外ドメインとの間の結合の５０％未満である、（ｃｃ）生細胞染色アッセイにおいてアイソタイプ対照と比べた該抗体の蛍光強度中央値によって判定される場合、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のアミノ酸残基１６７～１７４が配列番号８３８に示される配列のラットＴＦの細胞外ドメインにおけるアミノ酸残基１７２～１７９と置き換えられたヒトＴＦの細胞外ドメインとの間の結合が、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のＴＦの細胞外ドメインとの間の結合の５０％未満である、ならびに（ｄｄ）生細胞染色アッセイにおいてアイソタイプ対照と比べた該抗体の蛍光強度中央値によって判定される場合、該抗体と、配列番号８３８に示される配列のアミノ酸残基１４１～１９４が配列番号８１０に示される配列のヒトＴＦの細胞外ドメインにおけるアミノ酸残基１３６～１８９と置き換えられたラットＴＦの細胞外ドメインとの間の結合が、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のＴＦの細胞外ドメインとの間の結合の５０％超である。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、前述の（ａ）～（ｄｄ）に列挙される特性のうちの２個以上を有する。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、前述の（ａ）～（ｄｄ）に列挙される特性のうちの３個以上を有する。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、前述の（ａ）～（ｄｄ）に列挙される特性のうちの４個以上を有する。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、前述の（ａ）～（ｄｄ）に列挙される特性のうちの５個以上を有する。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、前述の（ａ）～（ｄｄ）に列挙される特性のうちの６個以上を有する。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、前述の（ａ）～（ｄｄ）に列挙される特性のうちの７個以上を有する。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、前述の（ａ）～（ｄｄ）に列挙される特性のうちの８個以上を有する。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、前述の（ａ）～（ｄｄ）に列挙される特性のうちの９個以上を有する。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、前述の（ａ）～（ｄｄ）に列挙される特性のうちの１０個以上を有する。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、前述の（ａ）～（ｄｄ）に列挙される特性のうちの１１個以上を有する。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、前述の（ａ）～（ｄｄ）に列挙される特性のうちの１２個以上を有する。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、前述の（ａ）～（ｄｄ）に列挙される特性のうちの１３個以上を有する。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、前述の（ａ）～（ｄｄ）に列挙される特性のうちの１４個以上を有する。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、前述の（ａ）～（ｄｄ）に列挙される特性のうちの１５個以上を有する。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、前述の（ａ）～（ｄｄ）に列挙される特性のうちの１６個以上を有する。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、前述の（ａ）～（ｄｄ）に列挙される特性のうちの１７個以上を有する。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、前述の（ａ）～（ｄｄ）に列挙される特性のうちの１８個以上を有する。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、前述の（ａ）～（ｄｄ）に列挙される特性のうちの１９個以上を有する。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、前述の（ａ）～（ｄｄ）に列挙される特性のうちの２０個以上を有する。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、前述の（ａ）～（ｄｄ）に列挙される特性のうちの２１個以上を有する。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、前述の（ａ）～（ｄｄ）に列挙される特性のうちの２２個以上を有する。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、前述の（ａ）～（ｄｄ）に列挙される特性のうちの２３個を有する。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、前述の（ａ）～（ｄｄ）に列挙される特性のうちの２４個を有する。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、前述の（ａ）～（ｄｄ）に列挙される特性のうちの２５個を有する。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、前述の（ａ）～（ｄｄ）に列挙される特性のうちの２６個を有する。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、前述の（ａ）～（ｄｄ）に列挙される特性のうちの２７個を有する。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、前述の（ａ）～（ｄｄ）に列挙される特性のうちの２８個を有する。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、前述の（ａ）～（ｄｄ）に列挙される特性のうちの２９個を有する。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、前述の（ａ）～（ｄｄ）に列挙される特性のうちの３０個全てを有する。
一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、以下の（ａ）～（ｄｄ）に列挙される特性のうちの１つまたは複数を有する：（ａ）ヒトＦＶＩＩａが結合するヒトＴＦ結合部位とは別個のヒトＴＦ結合部位でヒトＴＦに結合する、（ｂ）トロンビン生成アッセイ（ＴＧＡ）によって判定される場合、ヒトトロンビン生成を阻害しない、（ｃ）アイソタイプ対照と比較してトロンビン生成曲線上のトロンビンピーク（ピークＩＩａ）を低減しない、（ｄ）アイソタイプ対照と比較してアッセイ開始からトロンビン生成曲線上のトロンビンピークまでの時間（ｔｔピーク）を増加させない、（ｅ）トロンビン生成曲線下面積によって判定される場合、アイソタイプ対照と比較して内因性トロンビン産生能（ＥＴＰ）を減少させない、（ｆ）トロンビン生成アッセイ（ＴＧＡ）によって判定される場合、ヒトトロンビン生成を可能にする、（ｇ）アイソタイプ対照と比較してトロンビン生成曲線上のトロンビンピーク（ピークＩＩａ）を維持する、（ｈ）アイソタイプ対照と比較してアッセイ開始からトロンビン生成曲線上のトロンビンピークまでの時間（ｔｔピーク）を維持する、（ｉ）トロンビン生成曲線下面積によって判定される場合、アイソタイプ対照と比較して内因性トロンビン産生能（ＥＴＰ）を保護する、（ｊ）ヒトＦＸが結合するヒトＴＦ結合部位とは別個のヒトＴＦ結合部位でヒトＴＦに結合する、（ｋ）ＦＸをＦＸａに変換するＴＦ：ＦＶＩＩａの能力に干渉しない、（ｌ）ヒトＴＦへの結合をヒトＦＶＩＩａと競合しない、（ｍ）ＦＶＩＩａ依存性ＴＦシグナル伝達を阻害する、（ｎ）カニクイザルＴＦに結合する、（ｏ）マウスＴＦに結合する、（ｐ）ウサギＴＦに結合する、（ｑ）ブタＴＦに結合する、（ｒ）ブタ脈絡膜血管新生（ＣＮＶ）モデルにおいて病変サイズを低減する、（ｓ）生細胞染色アッセイにおいてアイソタイプ対照と比べた該抗体の蛍光強度中央値によって判定される場合、該抗体と、配列番号８１０に示される配列の変異Ｋ１４９Ｎを含むバリアントＴＦの細胞外ドメインとの間の結合が、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のＴＦの細胞外ドメインとの間の結合の５０％未満である、（ｔ）生細胞染色アッセイにおいてアイソタイプ対照と比べた該抗体の蛍光強度中央値によって判定される場合、該抗体と、配列番号８１０に示される配列の変異Ｋ６８Ｎを含むバリアントＴＦの細胞外ドメインとの間の結合が、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のＴＦの細胞外ドメインとの間の結合の５０％超である、（ｕ）生細胞染色アッセイにおいてアイソタイプ対照と比べた該抗体の蛍光強度中央値によって判定される場合、該抗体と、配列番号８１０に示される配列の変異Ｎ１７１Ｈ及びＴ１９７Ｋを含むバリアントＴＦの細胞外ドメインとの間の結合が、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のＴＦの細胞外ドメインとの間の結合の５０％未満である、（ｖ）生細胞染色アッセイにおいてアイソタイプ対照と比べた該抗体の蛍光強度中央値によって判定される場合、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のアミノ酸残基１～７７が配列番号８３８に示される配列のラットＴＦの細胞外ドメインにおけるアミノ酸残基１～７６と置き換えられたヒトＴＦの細胞外ドメインとの間の結合が、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のＴＦの細胞外ドメインとの間の結合の５０％超である、（ｗ）生細胞染色アッセイにおいてアイソタイプ対照と比べた該抗体の蛍光強度中央値によって判定される場合、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のアミノ酸残基３９～７７が配列番号８３８に示される配列のラットＴＦの細胞外ドメインにおけるアミノ酸残基３８～７６と置き換えられたヒトＴＦの細胞外ドメインとの間の結合が、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のＴＦの細胞外ドメインとの間の結合の５０％超である、（ｘ）生細胞染色アッセイにおいてアイソタイプ対照と比べた該抗体の蛍光強度中央値によって判定される場合、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のアミノ酸残基９４～１０７が配列番号８３８に示される配列のラットＴＦの細胞外ドメインにおけるアミノ酸残基９９～１１２と置き換えられたヒトＴＦの細胞外ドメインとの間の結合が、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のＴＦの細胞外ドメインとの間の結合の５０％超である、（ｙ）生細胞染色アッセイにおいてアイソタイプ対照と比べた該抗体の蛍光強度中央値によって判定される場合、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のアミノ酸残基１４６～１５８が配列番号８３８に示される配列のラットＴＦの細胞外ドメインにおけるアミノ酸残基１５１～１６３と置き換えられたヒトＴＦの細胞外ドメインとの間の結合が、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のＴＦの細胞外ドメインとの間の結合の５０％未満である、（ｚ）生細胞染色アッセイにおいてアイソタイプ対照と比べた該抗体の蛍光強度中央値によって判定される場合、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のアミノ酸残基１５９～２１９が配列番号８３８に示される配列のラットＴＦ細胞外ドメインにおけるアミノ酸残基１６４～２２４と置き換えられたヒトＴＦの細胞外ドメインとの間の結合が、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のＴＦの細胞外ドメインとの間の結合の５０％未満である、（ａａ）生細胞染色アッセイにおいてアイソタイプ対照と比べた該抗体の蛍光強度中央値によって判定される場合、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のアミノ酸残基１５９～１８９が配列番号８３８に示される配列のラットＴＦの細胞外ドメインにおけるアミノ酸残基１６４～１９４と置き換えられたヒトＴＦの細胞外ドメインとの間の結合が、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のＴＦの細胞外ドメインとの間の結合の５０％未満である、（ｂｂ）生細胞染色アッセイにおいてアイソタイプ対照と比べた該抗体の蛍光強度中央値によって判定される場合、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のアミノ酸残基１５９～１７４が配列番号８３８に示される配列のラットＴＦの細胞外ドメインにおけるアミノ酸残基１６４～１７９と置き換えられたヒトＴＦの細胞外ドメインとの間の結合が、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のＴＦの細胞外ドメインとの間の結合の５０％未満である、（ｃｃ）生細胞染色アッセイにおいてアイソタイプ対照と比べた該抗体の蛍光強度中央値によって判定される場合、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のアミノ酸残基１６７～１７４が配列番号８３８に示される配列のラットＴＦの細胞外ドメインにおけるアミノ酸残基１７２～１７９と置き換えられたヒトＴＦの細胞外ドメインとの間の結合が、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のＴＦの細胞外ドメインとの間の結合の５０％未満である、ならびに（ｄｄ）生細胞染色アッセイにおいてアイソタイプ対照と比べた該抗体の蛍光強度中央値によって判定される場合、該抗体と、配列番号８３８に示される配列のアミノ酸残基１４１～１９４が配列番号８１０に示される配列のヒトＴＦの細胞外ドメインにおけるアミノ酸残基１３６～１８９と置き換えられたラットＴＦの細胞外ドメインとの間の結合が、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のＴＦの細胞外ドメインとの間の結合の５０％超である。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、前述の（ａ）～（ｄｄ）に列挙される特性のうちの２個以上を有する。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、前述の（ａ）～（ｄｄ）に列挙される特性のうちの３個以上を有する。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、前述の（ａ）～（ｄｄ）に列挙される特性のうちの４個以上を有する。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、前述の（ａ）～（ｄｄ）に列挙される特性のうちの５個以上を有する。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、前述の（ａ）～（ｄｄ）に列挙される特性のうちの６個以上を有する。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、前述の（ａ）～（ｄｄ）に列挙される特性のうちの７個以上を有する。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、前述の（ａ）～（ｄｄ）に列挙される特性のうちの８個以上を有する。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、前述の（ａ）～（ｄｄ）に列挙される特性のうちの９個以上を有する。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、前述の（ａ）～（ｄｄ）に列挙される特性のうちの１０個以上を有する。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、前述の（ａ）～（ｄｄ）に列挙される特性のうちの１１個以上を有する。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、前述の（ａ）～（ｄｄ）に列挙される特性のうちの１２個以上を有する。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、前述の（ａ）～（ｄｄ）に列挙される特性のうちの１３個以上を有する。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、前述の（ａ）～（ｄｄ）に列挙される特性のうちの１４個以上を有する。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、前述の（ａ）～（ｄｄ）に列挙される特性のうちの１５個以上を有する。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、前述の（ａ）～（ｄｄ）に列挙される特性のうちの１６個以上を有する。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、前述の（ａ）～（ｄｄ）に列挙される特性のうちの１７個以上を有する。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、前述の（ａ）～（ｄｄ）に列挙される特性のうちの１８個以上を有する。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、前述の（ａ）～（ｄｄ）に列挙される特性のうちの１９個以上を有する。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、前述の（ａ）～（ｄｄ）に列挙される特性のうちの２０個以上を有する。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、前述の（ａ）～（ｄｄ）に列挙される特性のうちの２１個以上を有する。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、前述の（ａ）～（ｄｄ）に列挙される特性のうちの２２個以上を有する。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、前述の（ａ）～（ｄｄ）に列挙される特性のうちの２３個を有する。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、前述の（ａ）～（ｄｄ）に列挙される特性のうちの２４個を有する。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、前述の（ａ）～（ｄｄ）に列挙される特性のうちの２５個を有する。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、前述の（ａ）～（ｄｄ）に列挙される特性のうちの２６個を有する。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、前述の（ａ）～（ｄｄ）に列挙される特性のうちの２７個を有する。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、前述の（ａ）～（ｄｄ）に列挙される特性のうちの２８個を有する。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、前述の（ａ）～（ｄｄ）に列挙される特性のうちの２９個を有する。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、前述の（ａ）～（ｄｄ）に列挙される特性のうちの３０個全てを有する。
一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、以下の（ａ）～（ｄｄ）に列挙される特性のうちの２つ以上を含む特性の組み合わせを示す：（ａ）ヒトＦＶＩＩａが結合するヒトＴＦ結合部位とは別個のヒトＴＦ結合部位でヒトＴＦに結合する、（ｂ）トロンビン生成アッセイ（ＴＧＡ）によって判定される場合、ヒトトロンビン生成を阻害しない、（ｃ）アイソタイプ対照と比較してトロンビン生成曲線上のトロンビンピーク（ピークＩＩａ）を低減しない、（ｄ）アイソタイプ対照と比較してアッセイ開始からトロンビン生成曲線上のトロンビンピークまでの時間（ｔｔピーク）を増加させない、（ｅ）トロンビン生成曲線下面積によって判定される場合、アイソタイプ対照と比較して内因性トロンビン産生能（ＥＴＰ）を減少させない、（ｆ）トロンビン生成アッセイ（ＴＧＡ）によって判定される場合、ヒトトロンビン生成を可能にする、（ｇ）アイソタイプ対照と比較してトロンビン生成曲線上のトロンビンピーク（ピークＩＩａ）を維持する、（ｈ）アイソタイプ対照と比較してアッセイ開始からトロンビン生成曲線上のトロンビンピークまでの時間（ｔｔピーク）を維持する、（ｉ）トロンビン生成曲線下面積によって判定される場合、アイソタイプ対照と比較して内因性トロンビン産生能（ＥＴＰ）を保護する、（ｊ）ヒトＦＸが結合するヒトＴＦ結合部位とは別個のヒトＴＦ結合部位でヒトＴＦに結合する、（ｋ）ＦＸをＦＸａに変換するＴＦ：ＦＶＩＩａの能力に干渉しない、（ｌ）ヒトＴＦへの結合をヒトＦＶＩＩａと競合しない、（ｍ）ＦＶＩＩａ依存性ＴＦシグナル伝達を阻害する、（ｎ）カニクイザルＴＦに結合する、（ｏ）マウスＴＦに結合する、（ｐ）ウサギＴＦに結合する、（ｑ）ブタＴＦに結合する、（ｒ）ブタ脈絡膜血管新生（ＣＮＶ）モデルにおいて病変サイズを低減する、（ｓ）生細胞染色アッセイにおいてアイソタイプ対照と比べた該抗体の蛍光強度中央値によって判定される場合、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のアミノ酸残基１４９に変異を含むバリアントＴＦの細胞外ドメインとの間の結合が、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のＴＦの細胞外ドメインとの間の結合の５０％未満である、（ｔ）生細胞染色アッセイにおいてアイソタイプ対照と比べた該抗体の蛍光強度中央値によって判定される場合、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のアミノ酸残基６８に変異を含むバリアントＴＦの細胞外ドメインとの間の結合が、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のＴＦの細胞外ドメインとの間の結合の５０％超である、（ｕ）生細胞染色アッセイにおいてアイソタイプ対照と比べた該抗体の蛍光強度中央値によって判定される場合、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のアミノ酸残基１７１及び１９７に変異を含むバリアントＴＦの細胞外ドメインとの間の結合が、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のＴＦの細胞外ドメインとの間の結合の５０％未満である、（ｖ）生細胞染色アッセイにおいてアイソタイプ対照と比べた該抗体の蛍光強度中央値によって判定される場合、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のアミノ酸残基１～７７が配列番号８３８に示される配列のラットＴＦの細胞外ドメインにおけるアミノ酸残基１～７６と置き換えられたヒトＴＦの細胞外ドメインとの間の結合が、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のＴＦの細胞外ドメインとの間の結合の５０％超である、（ｗ）生細胞染色アッセイにおいてアイソタイプ対照と比べた該抗体の蛍光強度中央値によって判定される場合、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のアミノ酸残基３９～７７が配列番号８３８に示される配列のラットＴＦの細胞外ドメインにおけるアミノ酸残基３８～７６と置き換えられたヒトＴＦの細胞外ドメインとの間の結合が、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のＴＦの細胞外ドメインとの間の結合の５０％超である、（ｘ）生細胞染色アッセイにおいてアイソタイプ対照と比べた該抗体の蛍光強度中央値によって判定される場合、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のアミノ酸残基９４～１０７が配列番号８３８に示される配列のラットＴＦの細胞外ドメインにおけるアミノ酸残基９９～１１２と置き換えられたヒトＴＦの細胞外ドメインとの間の結合が、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のＴＦの細胞外ドメインとの間の結合の５０％超である、（ｙ）生細胞染色アッセイにおいてアイソタイプ対照と比べた該抗体の蛍光強度中央値によって判定される場合、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のアミノ酸残基１４６～１５８が配列番号８３８に示される配列のラットＴＦの細胞外ドメインにおけるアミノ酸残基１５１～１６３と置き換えられたヒトＴＦの細胞外ドメインとの間の結合が、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のＴＦの細胞外ドメインとの間の結合の５０％未満である、（ｚ）生細胞染色アッセイにおいてアイソタイプ対照と比べた該抗体の蛍光強度中央値によって判定される場合、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のアミノ酸残基１５９～２１９が配列番号８３８に示される配列のラットＴＦの細胞外ドメインにおけるアミノ酸残基１６４～２２４と置き換えられたヒトＴＦの細胞外ドメインとの間の結合が、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のＴＦの細胞外ドメインとの間の結合の５０％未満である、（ａａ）生細胞染色アッセイにおいてアイソタイプ対照と比べた該抗体の蛍光強度中央値によって判定される場合、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のアミノ酸残基１５９～１８９が配列番号８３８に示される配列のラットＴＦの細胞外ドメインにおけるアミノ酸残基１６４～１９４と置き換えられたヒトＴＦの細胞外ドメインとの間の結合が、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のＴＦの細胞外ドメインとの間の結合の５０％未満である、（ｂｂ）生細胞染色アッセイにおいてアイソタイプ対照と比べた該抗体の蛍光強度中央値によって判定される場合、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のアミノ酸残基１５９～１７４が配列番号８３８に示される配列のラットＴＦの細胞外ドメインにおけるアミノ酸残基１６４～１７９と置き換えられたヒトＴＦの細胞外ドメインとの間の結合が、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のＴＦの細胞外ドメインとの間の結合の５０％未満である、（ｃｃ）生細胞染色アッセイにおいてアイソタイプ対照と比べた該抗体の蛍光強度中央値によって判定される場合、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のアミノ酸残基１６７～１７４が配列番号８３８に示される配列のラットＴＦの細胞外ドメインにおけるアミノ酸残基１７２～１７９と置き換えられたヒトＴＦの細胞外ドメインとの間の結合が、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のＴＦの細胞外ドメインとの間の結合の５０％未満である、ならびに（ｄｄ）生細胞染色アッセイにおいてアイソタイプ対照と比べた該抗体の蛍光強度中央値によって判定される場合、該抗体と、配列番号８３８に示される配列のアミノ酸残基１４１～１９４が配列番号８１０に示される配列のヒトＴＦの細胞外ドメインにおけるアミノ酸残基１３６～１８９と置き換えられたラットＴＦの細胞外ドメインとの間の結合が、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のＴＦの細胞外ドメインとの間の結合の５０％超である。
一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、以下の（ａ）～（ｄｄ）に列挙される特性のうちの２つ以上を含む特性の組み合わせを示す：（ａ）ヒトＦＶＩＩａが結合するヒトＴＦ結合部位とは別個のヒトＴＦ結合部位でヒトＴＦに結合する、（ｂ）トロンビン生成アッセイ（ＴＧＡ）によって判定される場合、ヒトトロンビン生成を阻害しない、（ｃ）アイソタイプ対照と比較してトロンビン生成曲線上のトロンビンピーク（ピークＩＩａ）を低減しない、（ｄ）アイソタイプ対照と比較してアッセイ開始からトロンビン生成曲線上のトロンビンピークまでの時間（ｔｔピーク）を増加させない、（ｅ）トロンビン生成曲線下面積によって判定される場合、アイソタイプ対照と比較して内因性トロンビン産生能（ＥＴＰ）を減少させない、（ｆ）トロンビン生成アッセイ（ＴＧＡ）によって判定される場合、ヒトトロンビン生成を可能にする、（ｇ）アイソタイプ対照と比較してトロンビン生成曲線上のトロンビンピーク（ピークＩＩａ）を維持する、（ｈ）アイソタイプ対照と比較してアッセイ開始からトロンビン生成曲線上のトロンビンピークまでの時間（ｔｔピーク）を維持する、（ｉ）トロンビン生成曲線下面積によって判定される場合、アイソタイプ対照と比較して内因性トロンビン産生能（ＥＴＰ）を保護する、（ｊ）ヒトＦＸが結合するヒトＴＦ結合部位とは別個のヒトＴＦ結合部位でヒトＴＦに結合する、（ｋ）ＦＸをＦＸａに変換するＴＦ：ＦＶＩＩａの能力に干渉しない、（ｌ）ヒトＴＦへの結合をヒトＦＶＩＩａと競合しない、（ｍ）ＦＶＩＩａ依存性ＴＦシグナル伝達を阻害する、（ｎ）カニクイザルＴＦに結合する、（ｏ）マウスＴＦに結合する、（ｐ）ウサギＴＦに結合する、（ｑ）ブタＴＦに結合する、（ｒ）ブタ脈絡膜血管新生（ＣＮＶ）モデルにおいて病変サイズを低減する、（ｓ）生細胞染色アッセイにおいてアイソタイプ対照と比べた該抗体の蛍光強度中央値によって判定される場合、該抗体と、配列番号８１０に示される配列の変異Ｋ１４９Ｎを含むバリアントＴＦの細胞外ドメインとの間の結合が、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のＴＦの細胞外ドメインとの間の結合の５０％未満である、（ｔ）生細胞染色アッセイにおいてアイソタイプ対照と比べた該抗体の蛍光強度中央値によって判定される場合、該抗体と、配列番号８１０に示される配列の変異Ｋ６８Ｎを含むバリアントＴＦの細胞外ドメインとの間の結合が、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のＴＦの細胞外ドメインとの間の結合の５０％超である、（ｕ）生細胞染色アッセイにおいてアイソタイプ対照と比べた該抗体の蛍光強度中央値によって判定される場合、該抗体と、配列番号８１０に示される配列の変異Ｎ１７１Ｈ及びＴ１９７Ｋを含むバリアントＴＦの細胞外ドメインとの間の結合が、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のＴＦの細胞外ドメインとの間の結合の５０％未満である、（ｖ）生細胞染色アッセイにおいてアイソタイプ対照と比べた該抗体の蛍光強度中央値によって判定される場合、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のアミノ酸残基１～７７が配列番号８３８に示される配列のラットＴＦの細胞外ドメインにおけるアミノ酸残基１～７６と置き換えられたヒトＴＦの細胞外ドメインとの間の結合が、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のＴＦの細胞外ドメインとの間の結合の５０％超である、（ｗ）生細胞染色アッセイにおいてアイソタイプ対照と比べた該抗体の蛍光強度中央値によって判定される場合、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のアミノ酸残基３９～７７が配列番号８３８に示される配列のラットＴＦの細胞外ドメインにおけるアミノ酸残基３８～７６と置き換えられたヒトＴＦの細胞外ドメインとの間の結合が、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のＴＦの細胞外ドメインとの間の結合の５０％超である、（ｘ）生細胞染色アッセイにおいてアイソタイプ対照と比べた該抗体の蛍光強度中央値によって判定される場合、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のアミノ酸残基９４～１０７が配列番号８３８に示される配列のラットＴＦの細胞外ドメインにおけるアミノ酸残基９９～１１２と置き換えられたヒトＴＦの細胞外ドメインとの間の結合が、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のＴＦの細胞外ドメインとの間の結合の５０％超である、（ｙ）生細胞染色アッセイにおいてアイソタイプ対照と比べた該抗体の蛍光強度中央値によって判定される場合、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のアミノ酸残基１４６～１５８が配列番号８３８に示される配列のラットＴＦの細胞外ドメインにおけるアミノ酸残基１５１～１６３と置き換えられたヒトＴＦの細胞外ドメインとの間の結合が、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のＴＦの細胞外ドメインとの間の結合の５０％未満である、（ｚ）生細胞染色アッセイにおいてアイソタイプ対照と比べた該抗体の蛍光強度中央値によって判定される場合、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のアミノ酸残基１５９～２１９が配列番号８３８に示される配列のラットＴＦの細胞外ドメインにおけるアミノ酸残基１６４～２２４と置き換えられたヒトＴＦの細胞外ドメインとの間の結合が、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のＴＦの細胞外ドメインとの間の結合の５０％未満である、（ａａ）生細胞染色アッセイにおいてアイソタイプ対照と比べた該抗体の蛍光強度中央値によって判定される場合、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のアミノ酸残基１５９～１８９が配列番号８３８に示される配列のラットＴＦの細胞外ドメインにおけるアミノ酸残基１６４～１９４と置き換えられたヒトＴＦの細胞外ドメインとの間の結合が、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のＴＦの細胞外ドメインとの間の結合の５０％未満である、（ｂｂ）生細胞染色アッセイにおいてアイソタイプ対照と比べた該抗体の蛍光強度中央値によって判定される場合、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のアミノ酸残基１５９～１７４が配列番号８３８に示される配列のラットＴＦの細胞外ドメインにおけるアミノ酸残基１６４～１７９と置き換えられたヒトＴＦの細胞外ドメインとの間の結合が、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のＴＦの細胞外ドメインとの間の結合の５０％未満である、（ｃｃ）生細胞染色アッセイにおいてアイソタイプ対照と比べた該抗体の蛍光強度中央値によって判定される場合、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のアミノ酸残基１６７～１７４が配列番号８３８に示される配列のラットＴＦの細胞外ドメインにおけるアミノ酸残基１７２～１７９と置き換えられたヒトＴＦの細胞外ドメインとの間の結合が、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のＴＦの細胞外ドメインとの間の結合の５０％未満である、ならびに（ｄｄ）生細胞染色アッセイにおいてアイソタイプ対照と比べた該抗体の蛍光強度中央値によって判定される場合、該抗体と、配列番号８３８に示される配列のアミノ酸残基１４１～１９４が配列番号８１０に示される配列のヒトＴＦの細胞外ドメインにおけるアミノ酸残基１３６～１８９と置き換えられたラットＴＦの細胞外ドメインとの間の結合が、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のＴＦの細胞外ドメインとの間の結合の５０％超である。
一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、以下に列挙される特性の組み合わせを示す：ヒトＦＶＩＩａが結合するヒトＴＦ結合部位とは別個のヒトＴＦ結合部位でヒトＴＦに結合する、トロンビン生成アッセイ（ＴＧＡ）によって判定される場合、ヒトトロンビン生成を阻害しない、ならびに生細胞染色アッセイにおいてアイソタイプ対照と比べた該抗体の蛍光強度中央値によって判定される場合、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のアミノ酸残基１７１及び１９７に変異を含むバリアントＴＦの細胞外ドメインとの間の結合が、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のＴＦの細胞外ドメインとの間の結合の５０％未満である。
一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、以下に列挙される特性の組み合わせを示す：ヒトＦＶＩＩａが結合するヒトＴＦ結合部位とは別個のヒトＴＦ結合部位でヒトＴＦに結合する；トロンビン生成アッセイ（ＴＧＡ）によって判定される場合、ヒトトロンビン生成を阻害しない；ならびに生細胞染色アッセイにおいてアイソタイプ対照と比べた該抗体の蛍光強度中央値によって判定される場合、該抗体と、配列番号８１０に示される配列の変異Ｎ１７１Ｈ及びＴ１９７Ｋを含むバリアントＴＦの細胞外ドメインとの間の結合が、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のＴＦの細胞外ドメインとの間の結合の５０％未満である。
一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、以下に列挙される特性の組み合わせを示す：ヒトＦＶＩＩａが結合するヒトＴＦ結合部位とは別個のヒトＴＦ結合部位でヒトＴＦに結合する；トロンビン生成アッセイ（ＴＧＡ）によって判定される場合、ヒトトロンビン生成を可能にする；ならびに生細胞染色アッセイにおいてアイソタイプ対照と比べた該抗体の蛍光強度中央値によって判定される場合、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のアミノ酸残基１７１及び１９７に変異を含むバリアントＴＦの細胞外ドメインとの間の結合が、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のＴＦの細胞外ドメインとの間の結合の５０％未満である。
一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、以下に列挙される特性の組み合わせを示す：ヒトＦＶＩＩａが結合するヒトＴＦ結合部位とは別個のヒトＴＦ結合部位でヒトＴＦに結合する；トロンビン生成アッセイ（ＴＧＡ）によって判定される場合、ヒトトロンビン生成を可能にする；ならびに生細胞染色アッセイにおいてアイソタイプ対照と比べた該抗体の蛍光強度中央値によって判定される場合、該抗体と、配列番号８１０に示される配列の変異Ｎ１７１Ｈ及びＴ１９７Ｋを含むバリアントＴＦの細胞外ドメインとの間の結合が、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のＴＦの細胞外ドメインとの間の結合の５０％未満である。
一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、以下に列挙される特性の組み合わせを示す：ヒトＦＶＩＩａが結合するヒトＴＦ結合部位とは別個のヒトＴＦ結合部位でヒトＴＦに結合する；トロンビン生成アッセイ（ＴＧＡ）によって判定される場合、ヒトトロンビン生成を阻害しない；生細胞染色アッセイにおいてアイソタイプ対照と比べた該抗体の蛍光強度中央値によって判定される場合、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のアミノ酸残基１４９に変異を含むバリアントＴＦの細胞外ドメインとの間の結合が、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のＴＦの細胞外ドメインとの間の結合の５０％未満である；ならびに生細胞染色アッセイにおいてアイソタイプ対照と比べた該抗体の蛍光強度中央値によって判定される場合、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のアミノ酸残基１７１及び１９７に変異を含むバリアントＴＦの細胞外ドメインとの間の結合が、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のＴＦの細胞外ドメインとの間の結合の５０％未満である。
一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、以下に列挙される特性の組み合わせを示す：ヒトＦＶＩＩａが結合するヒトＴＦ結合部位とは別個のヒトＴＦ結合部位でヒトＴＦに結合する；トロンビン生成アッセイ（ＴＧＡ）によって判定される場合、ヒトトロンビン生成を阻害しない；生細胞染色アッセイにおいてアイソタイプ対照と比べた該抗体の蛍光強度中央値によって判定される場合、該抗体と、配列番号８１０に示される配列の変異Ｋ１４９Ｎを含むバリアントＴＦの細胞外ドメインとの間の結合が、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のＴＦの細胞外ドメインとの間の結合の５０％未満である；ならびに生細胞染色アッセイにおいてアイソタイプ対照と比べた該抗体の蛍光強度中央値によって判定される場合、該抗体と、配列番号８１０に示される配列の変異Ｎ１７１Ｈ及びＴ１９７Ｋを含むバリアントＴＦの細胞外ドメインとの間の結合が、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のＴＦの細胞外ドメインとの間の結合の５０％未満である。
一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、以下に列挙される特性の組み合わせを示す：ヒトＦＶＩＩａが結合するヒトＴＦ結合部位とは別個のヒトＴＦ結合部位でヒトＴＦに結合する；トロンビン生成アッセイ（ＴＧＡ）によって判定される場合、ヒトトロンビン生成を可能にする；生細胞染色アッセイにおいてアイソタイプ対照と比べた該抗体の蛍光強度中央値によって判定される場合、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のアミノ酸残基１４９に変異を含むバリアントＴＦの細胞外ドメインとの間の結合が、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のＴＦの細胞外ドメインとの間の結合の５０％未満である；ならびに生細胞染色アッセイにおいてアイソタイプ対照と比べた該抗体の蛍光強度中央値によって判定される場合、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のアミノ酸残基１７１及び１９７に変異を含むバリアントＴＦの細胞外ドメインとの間の結合が、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のＴＦの細胞外ドメインとの間の結合の５０％未満である。
一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、以下に列挙される特性の組み合わせを示す：ヒトＦＶＩＩａが結合するヒトＴＦ結合部位とは別個のヒトＴＦ結合部位でヒトＴＦに結合する；トロンビン生成アッセイ（ＴＧＡ）によって判定される場合、ヒトトロンビン生成を可能にする；生細胞染色アッセイにおいてアイソタイプ対照と比べた該抗体の蛍光強度中央値によって判定される場合、該抗体と、配列番号８１０に示される配列の変異Ｋ１４９Ｎを含むバリアントＴＦの細胞外ドメインとの間の結合が、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のＴＦの細胞外ドメインとの間の結合の５０％未満である；ならびに生細胞染色アッセイにおいてアイソタイプ対照と比べた該抗体の蛍光強度中央値によって判定される場合、該抗体と、配列番号８１０に示される配列の変異Ｎ１７１Ｈ及びＴ１９７Ｋを含むバリアントＴＦの細胞外ドメインとの間の結合が、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のＴＦの細胞外ドメインとの間の結合の５０％未満である。
一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、以下に列挙される特性の組み合わせを示す：ヒトＦＶＩＩａが結合するヒトＴＦ結合部位とは別個のヒトＴＦ結合部位でヒトＴＦに結合する；トロンビン生成アッセイ（ＴＧＡ）によって判定される場合、ヒトトロンビン生成を阻害しない；カニクイザルＴＦに結合する；生細胞染色アッセイにおいてアイソタイプ対照と比べた該抗体の蛍光強度中央値によって判定される場合、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のアミノ酸残基１４９に変異を含むバリアントＴＦの細胞外ドメインとの間の結合が、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のＴＦの細胞外ドメインとの間の結合の５０％未満である；ならびに生細胞染色アッセイにおいてアイソタイプ対照と比べた該抗体の蛍光強度中央値によって判定される場合、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のアミノ酸残基１７１及び１９７に変異を含むバリアントＴＦの細胞外ドメインとの間の結合が、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のＴＦの細胞外ドメインとの間の結合の５０％未満である。
一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、以下に列挙される特性の組み合わせを示す：ヒトＦＶＩＩａが結合するヒトＴＦ結合部位とは別個のヒトＴＦ結合部位でヒトＴＦに結合する；トロンビン生成アッセイ（ＴＧＡ）によって判定される場合、ヒトトロンビン生成を阻害しない；カニクイザルＴＦに結合する；生細胞染色アッセイにおいてアイソタイプ対照と比べた該抗体の蛍光強度中央値によって判定される場合、該抗体と、配列番号８１０に示される配列の変異Ｋ１４９Ｎを含むバリアントＴＦの細胞外ドメインとの間の結合が、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のＴＦの細胞外ドメインとの間の結合の５０％未満である；ならびに生細胞染色アッセイにおいてアイソタイプ対照と比べた該抗体の蛍光強度中央値によって判定される場合、該抗体と、配列番号８１０に示される配列の変異Ｎ１７１Ｈ及びＴ１９７Ｋを含むバリアントＴＦの細胞外ドメインとの間の結合が、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のＴＦの細胞外ドメインとの間の結合の５０％未満である。
一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、以下に列挙される特性の組み合わせを示す：ヒトＦＶＩＩａが結合するヒトＴＦ結合部位とは別個のヒトＴＦ結合部位でヒトＴＦに結合する；トロンビン生成アッセイ（ＴＧＡ）によって判定される場合、ヒトトロンビン生成を可能にする；カニクイザルＴＦに結合する；生細胞染色アッセイにおいてアイソタイプ対照と比べた該抗体の蛍光強度中央値によって判定される場合、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のアミノ酸残基１４９に変異を含むバリアントＴＦの細胞外ドメインとの間の結合が、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のＴＦの細胞外ドメインとの間の結合の５０％未満である；ならびに生細胞染色アッセイにおいてアイソタイプ対照と比べた該抗体の蛍光強度中央値によって判定される場合、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のアミノ酸残基１７１及び１９７に変異を含むバリアントＴＦの細胞外ドメインとの間の結合が、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のＴＦの細胞外ドメインとの間の結合の５０％未満である。
一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、以下に列挙される特性の組み合わせを示す：ヒトＦＶＩＩａが結合するヒトＴＦ結合部位とは別個のヒトＴＦ結合部位でヒトＴＦに結合する；トロンビン生成アッセイ（ＴＧＡ）によって判定される場合、ヒトトロンビン生成を可能にする；カニクイザルＴＦに結合する；生細胞染色アッセイにおいてアイソタイプ対照と比べた該抗体の蛍光強度中央値によって判定される場合、該抗体と、配列番号８１０に示される配列の変異Ｋ１４９Ｎを含むバリアントＴＦの細胞外ドメインとの間の結合が、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のＴＦの細胞外ドメインとの間の結合の５０％未満である；ならびに生細胞染色アッセイにおいてアイソタイプ対照と比べた該抗体の蛍光強度中央値によって判定される場合、該抗体と、配列番号８１０に示される配列の変異Ｎ１７１Ｈ及びＴ１９７Ｋを含むバリアントＴＦの細胞外ドメインとの間の結合が、該抗体と、配列番号８１０に示される配列のＴＦの細胞外ドメインとの間の結合の５０％未満である。
２．３．ＴＦ抗体の親和性及び他の特性
２．３．１．ＴＦ抗体の親和性
一部の実施形態では、本明細書で提供される抗体の、ＫＤによって示されるＴＦに対する親和性は、約１０－５Ｍ未満、約１０－６Ｍ未満、約１０－７Ｍ未満、約１０－８Ｍ未満、約１０－９Ｍ未満、約１０－１０Ｍ未満、約１０－１１Ｍ未満、または約１０－１２Ｍ未満である。一部の実施形態では、当該抗体の親和性は、１０－７Ｍ～１０－１２Ｍである。一部の実施形態では、当該抗体の親和性は、１０－７Ｍ～１０－１１Ｍである。一部の実施形態では、当該抗体の親和性は、１０－７Ｍ～１０－１０Ｍである。一部の実施形態では、当該抗体の親和性は、１０－７Ｍ～１０－９Ｍである。一部の実施形態では、当該抗体の親和性は、１０－７Ｍ～１０－８Ｍである。一部の実施形態では、当該抗体の親和性は、１０－８Ｍ～１０－１２Ｍである。一部の実施形態では、当該抗体の親和性は、１０－８Ｍ～１０－１１Ｍである。一部の実施形態では、当該抗体の親和性は、１０－９Ｍ～１０－１１Ｍである。一部の実施形態では、当該抗体の親和性は、１０－１０Ｍ～１０－１１Ｍである。
一部の実施形態では、本明細書で提供されるｃＴＦに対する抗体のＫＤ値は、ｈＴＦに対する抗体のＫＤ値の１５倍以下である。一部の実施形態では、本明細書で提供されるｃＴＦに対する抗体のＫＤ値は、ｈＴＦに対する抗体のＫＤ値の１０倍以下である。一部の実施形態では、本明細書で提供されるｃＴＦに対する抗体のＫＤ値は、ｈＴＦに対する抗体のＫＤ値の８倍以下である。一部の実施形態では、本明細書で提供されるｃＴＦに対する抗体のＫＤ値は、ｈＴＦに対する抗体のＫＤ値の５倍以下である。一部の実施形態では、本明細書で提供されるｃＴＦに対する抗体のＫＤ値は、ｈＴＦに対する抗体のＫＤ値の３倍以下である。一部の実施形態では、本明細書で提供されるｃＴＦに対する抗体のＫＤ値は、ｈＴＦに対する抗体のＫＤ値の２倍以下である。
一部の実施形態では、本明細書で提供されるｍＴＦに対する抗体のＫＤ値は、ｈＴＦに対する抗体のＫＤ値の２０倍以下である。一部の実施形態では、本明細書で提供されるｍＴＦに対する抗体のＫＤ値は、ｈＴＦに対する抗体のＫＤ値の１５倍以下である。一部の実施形態では、本明細書で提供されるｍＴＦに対する抗体のＫＤ値は、ｈＴＦに対する抗体のＫＤ値の１０倍以下である。一部の実施形態では、本明細書で提供されるｍＴＦに対する抗体のＫＤ値は、ｈＴＦに対する抗体のＫＤ値の５倍以下である。一部の実施形態では、本明細書で提供されるｍＴＦに対する抗体のＫＤ値は、ｈＴＦに対する抗体のＤ値の２倍以下である。
一部の実施形態では、表５に記載のように、本明細書で提供される抗体の、Ｂｉａｃｏｒｅによって測定されたＫＤによって示されるｈＴＦに対する親和性は、約０．３１ｎＭ、約６．２０ｎＭ、約０．３６ｎＭ、約０．０８ｎＭ、約２３．０ｎＭ、約０．９４ｎＭ、約１３．３ｎＭ、約０．４７ｎＭ、約０．０９ｎＭ、約１．７５ｎＭ、約０．０７ｎＭ、約０．１４ｎＭ、約２．０９ｎＭ、約０．０６ｎＭ、約０．１５ｎＭ、約１．４６ｎＭ、約１．６０ｎＭ、及び約０．４２ｎＭから選択される。一部の実施形態では、ＫＤによって示されるそのような親和性は、約２３．０ｎＭ～約０．０６ｎＭの範囲である。一部の実施形態では、そのようなものは、約２３．０ｎＭ以下である。
一部の実施形態では、表５に記載のように、本明細書で提供される抗体の、ＦｏｒｔｅＢｉｏによって測定されたＫＤによって示されるｈＴＦに対する親和性は、約１．２８ｎＭ、約２．２０ｎＭ、約８．４５ｎＭ、約１．６７ｎＭ、約０．６４ｎＭ、約２１．９ｎＭ、約３．９７ｎＭ、約３５．８ｎＭ、約３．３０ｎＭ、約２．３２ｎＭ、約０．８３ｎＭ、約２．４０ｎＭ、約０．９６ｎＭ、約０．８６ｎＭ、約３．８４ｎＭ、約１．０２ｎＭ、約１．６１ｎＭ、約２．５２ｎＭ、約２．２８ｎＭ、及び約１．５９ｎＭから選択される。一部の実施形態では、ＫＤによって示されるそのような親和性は、約３５．８ｎＭ～約０．６４ｎＭの範囲である。一部の実施形態では、そのようなＫＤは、約３５．８ｎＭ以下である。
一部の実施形態では、表５に記載のように、本明細書で提供される抗体の、Ｂｉａｃｏｒｅによって測定されたＫＤによって示されるｃＴＦに対する親和性は、約０．２６ｎＭ、約５．４２ｎＭ、約０．２１ｎＭ、約０．０４ｎＭ、約１８．０ｎＭ、約０．７８ｎＭ、約１６．４ｎＭ、約５．０６ｎＭ、約０．０８ｎＭ、約５．６４ｎＭ、約０．１２ｎＭ、約０．２４ｎＭ、約５．６６ｎＭ、約０．３９ｎＭ、約５．６９ｎＭ、約６．４２ｎＭ、及び約１．８３ｎＭから選択される。一部の実施形態では、ＫＤによって示されるそのような親和性は、約１８．０ｎＭ～約０．０４ｎＭの範囲である。一部の実施形態では、そのようなＫＤは、約１８．０ｎＭ以下である。
一部の実施形態では、表５に記載のように、本明細書で提供される抗体の、ＦｏｒｔｅＢｉｏによって測定されたＫＤによって示されるｈＴＦに対する親和性は、約１．４３ｎＭ、約２．７０ｎＭ、約７．６５ｎＭ、約１．３６ｎＭ、約０．７６ｎＭ、約１７．５ｎＭ、約４．９９ｎＭ、約４２．９ｎＭ、約１２．０ｎＭ、約１５．０ｎＭ、約０．５７ｎＭ、約３．４０ｎＭ、約１．０５ｎＭ、約０．９４ｎＭ、約４．１２ｎＭ、約１．１１ｎＭ、約１．９６ｎＭ、約４．０７ｎＭ、約２．７１ｎＭ、及び約４．１６ｎＭから選択される。一部の実施形態では、ＫＤによって示されるそのような親和性は、約４２．９ｎＭ～約０．５７ｎＭの範囲である。一部の実施形態では、そのようなＫＤは、約４２．９ｎＭ以下である。
一部の実施形態では、表５に記載のように、本明細書で提供される抗体の、Ｂｉａｃｏｒｅによって測定されたＫＤによって示されるｍＴＦに対する親和性は、約５．４ｎＭ、約２．９ｎＭ、約２１ｎＭ、及び約２．４ｎＭから選択される。一部の実施形態では、ＫＤによって示されるそのような親和性は、約２１ｎＭ～約２．４ｎＭの範囲である。一部の実施形態では、そのようなＫＤは、約２１ｎＭ以下である。
一部の実施形態では、表５に記載のように、本明細書で提供される抗体の、ＦｏｒｔｅＢｉｏによって測定されたＫＤによって示されるｍＴＦに対する親和性は、約２６３ｎＭ、約１３１ｎＭ、約１８８ｎＭ、約１１４ｎＭ、約３４．２ｎＭ、約９．１６ｎＭ、約１６１ｎＭ、約７２．１ｎＭ、約３６０ｎＭ、約２８１ｎＭ、約４１．４ｎＭ、約６．１２ｎＭ、約１２１ｎＭ、及び約１４０ｎＭから選択される。一部の実施形態では、ＫＤによって示されるそのような親和性は、約３６０ｎＭ～約６．１２ｎＭの範囲である。一部の実施形態では、そのようなＫＤは、約３６０ｎＭ以下である。
一部の実施形態では、本明細書で提供される抗体の、ヒトＴＦ陽性ＨＣＴ－１１６細胞（国際ＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１９／０１２４２７及び米国実用出願第１６／９５９，６５２号（それらの全体が参照によって本明細書に組み込まれる）に示される）によって測定されたＥＣ５０によって示されるｈＴＦに対する親和性は、約５０ｐＭ、約５８ｐＭ、約１６９ｐＭ、約７７ｐＭ、約８８ｐＭ、約１３４ｐＭ、約８５ｐＭ、約２３７ｐＭ、約１５２ｐＭ、約３９ｐＭ、約５５９ｐＭ、約２８０ｐＭ、約２５５ｐＭ、約１４７ｐＭ、約９４ｐＭ、約１１７ｐＭ、約６８７ｐＭ、約５３２ｐＭ、及び約２３９ｐＭから選択される。一部の実施形態では、そのような親和性は、約６８７ｐＭ～約３９ｐＭの範囲である。一部の実施形態では、そのようなＥＣ５０は、約６８７ｐＭ以下である。
一部の実施形態では、本明細書で提供される抗体の、マウスＴＦ陽性ＣＨＯ細胞（国際ＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１９／０１２４２７及び米国実用出願第１６／９５９，６５２号（それらの全体が参照によって本明細書に組み込まれる）に示される）によって測定されたＥＣ５０によって示されるｍＴＦに対する親和性は、約４５５ｎＭ、約８７ｎＭ、約１１ｎＭ、約３．９ｎＭ、約３．０ｎＭ、約３．４ｎＭ、約２５５ｎＭ、約２．９ｎＭ、約３．６ｎＭ、及び約４．０ｎＭから選択される。一部の実施形態では、そのような親和性は、約４５５ｎＭ～約２．９ｎＭの範囲である。一部の実施形態では、そのようなＥＣ５０は、約４５５ｐＭ以下である。
一部の実施形態では、本明細書で提供されるｐＴＦに対する抗体のＫＤ値は、ｈＴＦに対する抗体のＫＤ値の２０倍以下である。一部の実施形態では、本明細書で提供されるｐＴＦに対する抗体のＫＤ値は、ｈＴＦに対する抗体のＫＤ値の１５倍以下である。一部の実施形態では、本明細書で提供されるｐＴＦに対する抗体のＫＤ値は、ｈＴＦに対する抗体のＫＤ値の１０倍以下である。一部の実施形態では、本明細書で提供されるｐＴＦに対する抗体のＫＤ値は、ｈＴＦに対する抗体のＫＤ値の５倍以下である。一部の実施形態では、本明細書で提供されるｐＴＦに対する抗体のＫＤ値は、ｈＴＦに対する抗体のＫＤ値の２倍以下である。
一部の実施形態では、表４０に記載のように、本明細書で提供される抗体の、Ｂｉａｃｏｒｅによって測定されたＫＤによって示されるｐＴＦに対する親和性は、３．３１ｎＭまたは１２．９ｎＭである。
２．３．２．ＴＦ抗体の存在下でのトロンビンの生成
一部の実施形態では、本明細書で提供されるＴＦ抗体は、トロンビン生成アッセイ（ＴＧＡ）によって判定される場合、ヒトトロンビン生成を阻害しない。特定の実施形態では、本明細書で提供されるＴＦ抗体は、トロンビン生成アッセイ（ＴＧＡ）によって判定される場合、ヒトトロンビン生成を可能にする。
一部の実施形態では、トロンビン生成アッセイ（ＴＧＡ）によって決定される場合、抗体を含まない対照条件と比較して、１００ｎＭ以上のＴＦ抗体の存在下で、トロンビン生成ピークのパーセント（ピークＩＩａ％）は少なくとも４０％である。一部の実施形態では、トロンビン生成アッセイ（ＴＧＡ）によって決定される場合、抗体を含まない対照条件と比較して、１００ｎＭ以上のＴＦ抗体の存在下で、ピークＩＩａ％は少なくとも５０％である。一部の実施形態では、トロンビン生成アッセイ（ＴＧＡ）によって決定される場合、抗体を含まない対照条件と比較して、１００ｎＭ以上のＴＦ抗体の存在下で、ピークＩＩａ％は少なくとも６０％である。一部の実施形態では、トロンビン生成アッセイ（ＴＧＡ）によって決定される場合、抗体を含まない対照条件と比較して、１００ｎＭ以上のＴＦ抗体の存在下で、ピークＩＩａ％は少なくとも７０％である。一部の実施形態では、トロンビン生成アッセイ（ＴＧＡ）によって決定される場合、抗体を含まない対照条件と比較して、１００ｎＭ以上のＴＦ抗体の存在下で、ピークＩＩａ％は少なくとも８０％である。一部の実施形態では、トロンビン生成アッセイ（ＴＧＡ）によって決定される場合、抗体を含まない対照条件と比較して、１００ｎＭ以上のＴＦ抗体の存在下で、ピークＩＩａ％は少なくとも９０％である。一部の実施形態では、トロンビン生成アッセイ（ＴＧＡ）によって決定される場合、抗体を含まない対照条件と比較して、１００ｎＭ以上のＴＦ抗体の存在下で、ピークＩＩａ％は少なくとも９５％である。一部の実施形態では、トロンビン生成アッセイ（ＴＧＡ）によって決定される場合、抗体を含まない対照条件と比較して、１００ｎＭ以上のＴＦ抗体の存在下で、ピークＩＩａ％は少なくとも９９％である。
一部の実施形態では、トロンビン生成アッセイ（ＴＧＡ）によって決定される場合、抗体を含まない対照条件と比較して、５０ｎＭ以上のＴＦ抗体の存在下で、ピークＩＩａ％は少なくとも４０％である。一部の実施形態では、トロンビン生成アッセイ（ＴＧＡ）によって決定される場合、抗体を含まない対照条件と比較して、５０ｎＭ以上のＴＦ抗体の存在下で、ピークＩＩａ％は少なくとも５０％である。一部の実施形態では、トロンビン生成アッセイ（ＴＧＡ）によって決定される場合、抗体を含まない対照条件と比較して、５０ｎＭ以上のＴＦ抗体の存在下で、ピークＩＩａ％は少なくとも６０％である。一部の実施形態では、トロンビン生成アッセイ（ＴＧＡ）によって決定される場合、抗体を含まない対照条件と比較して、５０ｎＭ以上のＴＦ抗体の存在下で、ピークＩＩａ％は少なくとも７０％である。一部の実施形態では、トロンビン生成アッセイ（ＴＧＡ）によって決定される場合、抗体を含まない対照条件と比較して、５０ｎＭ以上のＴＦ抗体の存在下で、ピークＩＩａ％は少なくとも８０％である。一部の実施形態では、トロンビン生成アッセイ（ＴＧＡ）によって決定される場合、抗体を含まない対照条件と比較して、５０ｎＭ以上のＴＦ抗体の存在下で、ピークＩＩａ％は少なくとも９０％である。一部の実施形態では、トロンビン生成アッセイ（ＴＧＡ）によって決定される場合、抗体を含まない対照条件と比較して、５０ｎＭ以上のＴＦ抗体の存在下で、ピークＩＩａ％は少なくとも９５％である。一部の実施形態では、トロンビン生成アッセイ（ＴＧＡ）によって決定される場合、抗体を含まない対照条件と比較して、５０ｎＭ以上のＴＦ抗体の存在下で、ピークＩＩａ％は少なくとも９９％である。
一部の実施形態では、トロンビン生成アッセイ（ＴＧＡ）によって決定される場合、抗体を含まない対照条件と比較して、１０ｎＭ以上のＴＦ抗体の存在下で、ピークＩＩａ％は少なくとも６０％である。一部の実施形態では、トロンビン生成アッセイ（ＴＧＡ）によって決定される場合、抗体を含まない対照条件と比較して、１０ｎＭ以上のＴＦ抗体の存在下で、ピークＩＩａ％は少なくとも７０％である。一部の実施形態では、トロンビン生成アッセイ（ＴＧＡ）によって決定される場合、抗体を含まない対照条件と比較して、１０ｎＭ以上のＴＦ抗体の存在下で、ピークＩＩａ％は少なくとも８０％である。一部の実施形態では、トロンビン生成アッセイ（ＴＧＡ）によって決定される場合、抗体を含まない対照条件と比較して、１０ｎＭ以上のＴＦ抗体の存在下で、ピークＩＩａ％は少なくとも９０％である。一部の実施形態では、トロンビン生成アッセイ（ＴＧＡ）によって決定される場合、抗体を含まない対照条件と比較して、１０ｎＭ以上のＴＦ抗体の存在下で、ピークＩＩａ％は少なくとも９５％である。一部の実施形態では、トロンビン生成アッセイ（ＴＧＡ）によって決定される場合、抗体を含まない対照条件と比較して、１０ｎＭ以上のＴＦ抗体の存在下で、ピークＩＩａ％は少なくとも９９％である。
一部の実施形態では、表６及び表３７に記載のように、１００ｎＭのＴＦ抗体の存在下でのピークＩＩａ％は、抗体のプレインキュベーションを含まないトロンビン生成アッセイ（ＴＧＡ）によって決定される場合、抗体を含まない対照条件と比較して、約９９％、約１００％、約１０３％、約６４％、約５２％、約８７％、約９６％、約９８％、及び約５３％から選択される。一部の実施形態では、そのようなピークＩＩａ％は、約５２％～約１０３％の範囲である。一部の実施形態では、そのようなピークＩＩａ％は、約５２％以上である。
一部の実施形態では、表６及び表３７に記載のように、５０ｎＭのＴＦ抗体の存在下でのピークＩＩａ％は、抗体のプレインキュベーションを含まないトロンビン生成アッセイ（ＴＧＡ）によって決定される場合、抗体を含まない対照条件と比較して、約９９％、約１００％、約１０３％、約６７％、約５８％、約８９％、約９６％、約９８％、約６８％、約６２％、及び約８８％から選択される。一部の実施形態では、そのようなピークＩＩａ％は、約５８％～約１０３％の範囲である。一部の実施形態では、そのようなピークＩＩａ％は、約５８％以上である。
一部の実施形態では、表６及び表３７に記載のように、１００ｎＭのＴＦ抗体の存在下でのピークＩＩａ％は、抗体のプレインキュベーションを含まないトロンビン生成アッセイ（ＴＧＡ）によって決定される場合、抗体を含まない対照条件と比較して、約１００％、約９９％、約１０３％、約８７％、約８３％、約９５％、約９８％、約８６％、及び約９６％から選択される。一部の実施形態では、そのようなピークＩＩａ％は、約８３％～約１０３％の範囲である。一部の実施形態では、そのようなピークＩＩａ％は、約８３％以上である。
一部の実施形態では、表７及び表３８に記載のように、１００ｎＭのＴＦ抗体の存在下でのピークＩＩａ％は、抗体のプレインキュベーションを含まないトロンビン生成アッセイ（ＴＧＡ）によって決定される場合、抗体を含まない対照条件と比較して、約１０８％、約１０５％、約１１１％、約５８％、約４７％、約９１％、約１０３％、約１０９％、約１０７％、及び約４５％から選択される。一部の実施形態では、そのようなピークＩＩａ％は、約４５％～約１１１％の範囲である。一部の実施形態では、そのようなピークＩＩａ％は、約４５％以上である。
一部の実施形態では、表７及び表３８に記載のように、５０ｎＭのＴＦ抗体の存在下でのピークＩＩａ％は、抗体のプレインキュベーションを含まないトロンビン生成アッセイ（ＴＧＡ）によって決定される場合、抗体を含まない対照条件と比較して、約１０７％、約１０４％、約１１４％、約６２％、約４９％、約８７％、約１０５％、約１０９％、約５５％、及び約９２％から選択される。一部の実施形態では、そのようなピークＩＩａ％は、約４９％～約１１４％の範囲である。一部の実施形態では、そのようなピークＩＩａ％は、約４９％以上である。
一部の実施形態では、表７及び表３８に記載のように、５０ｎＭのＴＦ抗体の存在下でのピークＩＩａ％は、抗体のプレインキュベーションを含まないトロンビン生成アッセイ（ＴＧＡ）によって決定するされる場合、抗体を含まない対照条件と比較して、約１０５％、約１１４％、約７６％、約６８％、約９４％、約１０８％、約１０４％、約７４％、及び約９３％から選択される。一部の実施形態では、そのようなピークＩＩａ％は、約６８％～約１１４％の範囲である。一部の実施形態では、そのようなピークＩＩａ％は、約６８％以上である。
一部の実施形態では、トロンビン生成アッセイ（ＴＧＡ）によって決定される場合、抗体を含まない対照条件と比較して、１００ｎＭ以上のＴＦ抗体の存在下で、内因性トロンビンポテンシャルのパーセント（ＥＴＰ％）は少なくとも８０％である。一部の実施形態では、トロンビン生成アッセイ（ＴＧＡ）によって決定される場合、抗体を含まない対照条件と比較して、１００ｎＭ以上のＴＦ抗体の存在下で、ＥＴＰ％は少なくとも９０％である。一部の実施形態では、トロンビン生成アッセイ（ＴＧＡ）によって決定される場合、抗体を含まない対照条件と比較して、１００ｎＭ以上のＴＦ抗体の存在下で、ＥＴＰ％は少なくとも９５％である。一部の実施形態では、トロンビン生成アッセイ（ＴＧＡ）によって決定される場合、抗体を含まない対照条件と比較して、１００ｎＭ以上のＴＦ抗体の存在下で、ＥＴＰ％は少なくとも９９％である。
一部の実施形態では、トロンビン生成アッセイ（ＴＧＡ）によって決定される場合、抗体を含まない対照条件と比較して、５０ｎＭ以上のＴＦ抗体の存在下で、ＥＴＰ％は少なくとも８０％である。一部の実施形態では、トロンビン生成アッセイ（ＴＧＡ）によって決定される場合、抗体を含まない対照条件と比較して、５０ｎＭ以上のＴＦ抗体の存在下で、ＥＴＰ％は少なくとも９０％である。一部の実施形態では、トロンビン生成アッセイ（ＴＧＡ）によって決定される場合、抗体を含まない対照条件と比較して、５０ｎＭ以上のＴＦ抗体の存在下で、ＥＴＰ％は少なくとも９５％である。一部の実施形態では、トロンビン生成アッセイ（ＴＧＡ）によって決定される場合、抗体を含まない対照条件と比較して、５０ｎＭ以上のＴＦ抗体の存在下で、ＥＴＰ％は少なくとも９９％である。
一部の実施形態では、トロンビン生成アッセイ（ＴＧＡ）によって決定される場合、抗体を含まない対照条件と比較して、１０ｎＭ以上のＴＦ抗体の存在下で、ＥＴＰ％は少なくとも８０％である。一部の実施形態では、トロンビン生成アッセイ（ＴＧＡ）によって決定される場合、抗体を含まない対照条件と比較して、１０ｎＭ以上のＴＦ抗体の存在下で、ＥＴＰ％は少なくとも９０％である。一部の実施形態では、トロンビン生成アッセイ（ＴＧＡ）によって決定される場合、抗体を含まない対照条件と比較して、１０ｎＭ以上のＴＦ抗体の存在下で、ＥＴＰ％は少なくとも９５％である。一部の実施形態では、トロンビン生成アッセイ（ＴＧＡ）によって決定される場合、抗体を含まない対照条件と比較して、１０ｎＭ以上のＴＦ抗体の存在下で、ＥＴＰ％は少なくとも９９％である。
一部の実施形態では、表６及び表３７に記載のように、１００ｎＭのＴＦ抗体の存在下でのＥＴＰ％は、抗体のプレインキュベーションを含まないトロンビン生成アッセイ（ＴＧＡ）によって決定する場合、抗体を含まない対照条件と比較して、約１０８％、約１０３％、約１０９％、約１００％、約９６％、約１０２％、約１０５％、及び約９２％から選択される。一部の実施形態では、そのようなＥＴＰ％は、約９２％～約１０９％の範囲である。一部の実施形態では、そのようなＥＴＰ％は、約９２％以上である。
一部の実施形態では、表６及び表３７に記載のように、５０ｎＭのＴＦ抗体の存在下でのＥＴＰ％は、抗体のプレインキュベーションを含まないトロンビン生成アッセイ（ＴＧＡ）によって決定される場合、抗体を含まない対照条件と比較して、約１０８％、約１０３％、約１１１％、約１０１％、約９７％、約１０４％、約１０６％、約９３％、約９６％、及び約１０５％から選択される。一部の実施形態では、そのようなＥＴＰ％は、約９３％～約１１１％の範囲である。一部の実施形態では、そのようなＥＴＰ％は、約９３％以上である。
一部の実施形態では、表６及び表３７に記載のように、１０ｎＭのＴＦ抗体の存在下でのＥＴＰ％は、抗体のプレインキュベーションを含まないトロンビン生成アッセイ（ＴＧＡ）によって決定される場合、抗体を含まない対照条件と比較して、約１０６％、約１０９％、約１０５％、約１０４％、約１０７％、約９９％、約１０１％、及び約１０２％から選択される。一部の実施形態では、そのようなＥＴＰ％は、約９９％～約１０９％の範囲である。一部の実施形態では、そのようなＥＴＰ％は、約９９％以上である。
一部の実施形態では、表７及び表３８に記載のように、１００ｎＭのＴＦ抗体の存在下でのＥＴＰ％は、抗体のプレインキュベーションを含まないトロンビン生成アッセイ（ＴＧＡ）によって決定される場合、抗体を含まない対照条件と比較して、約１１０％、約１０４％、約１０６％、約９８％、約９５％、約１０８％、約１０７％、約９６％、約９２％、及び約１０３％から選択される。一部の実施形態では、そのようなＥＴＰ％は、約９２％～約１１０％の範囲である。一部の実施形態では、そのようなＥＴＰ％は、約９２％以上である。
一部の実施形態では、表７及び表３８に記載のように、５０ｎＭのＴＦ抗体の存在下でのＥＴＰ％は、抗体のプレインキュベーションを含まないトロンビン生成アッセイ（ＴＧＡ）によって決定される場合、抗体を含まない対照条件と比較して、約１１０％、約１０６％、約１０８％、約１０３％、約９６％、約１０９％、約１０２％、約１０４％、約９４％、及び約９８％から選択される。一部の実施形態では、そのようなＥＴＰ％は、約９４％～約１１０％の範囲である。一部の実施形態では、そのようなＥＴＰ％は、約９４％以上である。
一部の実施形態では、表７及び表３８に記載のように、１０ｎＭのＴＦ抗体の存在下でのＥＴＰ％は、抗体のプレインキュベーションを含まないトロンビン生成アッセイ（ＴＧＡ）によって決定される場合、抗体を含まない対照条件と比較して、約１０７％、約１０６％、約１１０％、約１０３％、約１００％、約１０５％、約１０２％、及び約１０１％から選択される。一部の実施形態では、そのようなＥＴＰ％は、約１００％～約１１０％の範囲である。一部の実施形態では、そのようなＥＴＰ％は、約１００％以上である。
２．３．３．ＴＦ抗体の存在下でのＦＸａの変換
一部の実施形態では、本明細書で提供される抗体は、ヒトＦＸが結合するヒトＴＦ結合部位とは異なるヒトＴＦ結合部位でヒトＴＦに結合する。ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体は、ＦＸをＦＸａに変換するＴＦ：ＦＶＩＩａの能力を妨害しない。
一部の実施形態では、抗体を含まない対照条件と比較して、１００ｎＭ以上のＴＦ抗体の存在下で、ＦＸａ変換の百分率（ＦＸａ％）は少なくとも７５％である。一部の実施形態では、抗体を含まない対照条件と比較して、１００ｎＭ以上のＴＦ抗体の存在下で、ＦＸａ％は少なくとも８０％である。一部の実施形態では、抗体を含まない対照条件と比較して、１００ｎＭ以上のＴＦ抗体の存在下で、ＦＸａ％は少なくとも８５％である。一部の実施形態では、抗体を含まない対照条件と比較して、１００ｎＭ以上のＴＦ抗体の存在下で、ＦＸａ％は少なくとも９０％である。一部の実施形態では、抗体を含まない対照条件と比較して、１００ｎＭ以上のＴＦ抗体の存在下で、ＦＸａ％は少なくとも９５％である。
一部の実施形態では、抗体を含まない対照条件と比較して、５０ｎＭ以上のＴＦ抗体の存在下で、ＦＸａ％は少なくとも７５％である。一部の実施形態では、抗体を含まない対照条件と比較して、５０ｎＭ以上のＴＦ抗体の存在下で、ＦＸａ％は少なくとも８０％である。一部の実施形態では、抗体を含まない対照条件と比較して、５０ｎＭ以上のＴＦ抗体の存在下で、ＦＸａ％は少なくとも８５％である。一部の実施形態では、抗体を含まない対照条件と比較して、５０ｎＭ以上のＴＦ抗体の存在下で、ＦＸａ％は少なくとも９０％である。一部の実施形態では、抗体を含まない対照条件と比較して、５０ｎＭ以上のＴＦ抗体の存在下で、ＦＸａ％は少なくとも９５％である。
一部の実施形態では、抗体を含まない対照条件と比較して、２５ｎＭ以上のＴＦ抗体の存在下で、ＦＸａ％は少なくとも７５％である。一部の実施形態では、抗体を含まない対照条件と比較して、２５ｎＭ以上のＴＦ抗体の存在下で、ＦＸａ％は少なくとも８０％である。一部の実施形態では、抗体を含まない対照条件と比較して、２５ｎＭ以上のＴＦ抗体の存在下で、ＦＸａ％は少なくとも８５％である。一部の実施形態では、抗体を含まない対照条件と比較して、２５ｎＭ以上のＴＦ抗体の存在下で、ＦＸａ％は少なくとも９０％である。一部の実施形態では、抗体を含まない対照条件と比較して、２５ｎＭ以上のＴＦ抗体の存在下で、ＦＸａ％は少なくとも９５％である。
一部の実施形態では、抗体を含まない対照条件と比較して、１２．５ｎＭ以上のＴＦ抗体の存在下で、ＦＸａ％は少なくとも７５％である。一部の実施形態では、抗体を含まない対照条件と比較して、１２．５ｎＭ以上のＴＦ抗体の存在下で、ＦＸａ％は少なくとも８０％である。一部の実施形態では、抗体を含まない対照条件と比較して、１２．５ｎＭ以上のＴＦ抗体の存在下で、ＦＸａ％は少なくとも８５％である。一部の実施形態では、抗体を含まない対照条件と比較して、１２．５ｎＭ以上のＴＦ抗体の存在下で、ＦＸａ％は少なくとも９０％である。一部の実施形態では、抗体を含まない対照条件と比較して、１２．５ｎＭ以上のＴＦ抗体の存在下で、ＦＸａ％は少なくとも９５％である。
一部の実施形態では、表８に記載のように、抗体を含まない対照条件と比較して、１００ｎＭのＴＦ抗体の存在下で、ＦＸａ％は、約８９％、約９６％、約１１６％、約１０８％、約１１７％、約１０５％、約１１２％、約１０６％、約１０３％、約１１１％、約９８％、及び約１０１％から選択される。一部の実施形態では、そのようなＦＸａ％は、約８９％～約１１７％の範囲である。一部の実施形態では、そのようなＦＸａ％は、約８９％以上である。
一部の実施形態では、表８に記載のように、抗体を含まない対照条件と比較して、５０ｎＭのＴＦ抗体の存在下で、ＦＸａ％は、約９４％、約９３％、約７８％、約１０２％、約９９％、約１０４％、約１０５％、約１０８％、約１０７％、約９７％、及び約１０６％から選択される。一部の実施形態では、そのようなＦＸａ％は、約７８％～約１０８％の範囲である。一部の実施形態では、そのようなＦＸａ％は、約７８％以上である。
一部の実施形態では、表８に記載のように、抗体を含まない対照条件と比較して、２５ｎＭのＴＦ抗体の存在下で、ＦＸａ％は、約８１％、約８９％、約８５％、約１０９％、約９６％、約９７％、約１０８％、約１０４％、約１０３％、約１１２％、及び約８９％から選択される。一部の実施形態では、そのようなＦＸａ％は、約８１％～約１１２％の範囲である。一部の実施形態では、そのようなＦＸａ％は、約８１％以上である。
一部の実施形態では、表８に記載のように、抗体を含まない対照条件と比較して、１２．５ｎＭのＴＦ抗体の存在下で、ＦＸａ％は、約８７％、約８９％、約８２％、約９９％、約１０１％、約９８％、約１１３％、約１０６％、約１１５％、約１１０％、約１２０％、約８５％、及び約１０８％から選択される。一部の実施形態では、そのようなＦＸａ％は、約８２％～約１２０％の範囲である。一部の実施形態では、そのようなＦＸａ％は、約８２％以上である。
２．３．４．ＴＦ抗体の存在下でのＦＶＩＩａの結合
一部の実施形態では、本明細書で提供される抗体は、ヒトＦＶＩＩａが結合するヒトＴＦ結合部位とは異なるヒトＴＦ結合部位でヒトＴＦに結合する。ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体は、ヒトＴＦへの結合に関してヒトＦＶＩＩａと競合しない。
一部の実施形態では、抗体を含まない対照条件と比較して、２５０ｎＭ以上のＴＦ抗体の存在下で、ＦＶＩＩａ結合の百分率（ＦＶＩＩａ％）は少なくとも７５％である。一部の実施形態では、抗体を含まない対照条件と比較して、２５０ｎＭ以上のＴＦ抗体の存在下で、ＦＶＩＩａ％は少なくとも８０％である。一部の実施形態では、抗体を含まない対照条件と比較して、２５０ｎＭ以上のＴＦ抗体の存在下で、ＦＶＩＩａ％は少なくとも８５％である。一部の実施形態では、抗体を含まない対照条件と比較して、２５０ｎＭ以上のＴＦ抗体の存在下で、ＦＶＩＩａ％は少なくとも９０％である。一部の実施形態では、抗体を含まない対照条件と比較して、２５０ｎＭ以上のＴＦ抗体の存在下で、ＦＶＩＩａ％は少なくとも９５％である。
一部の実施形態では、抗体を含まない対照条件と比較して、８３ｎＭ以上のＴＦ抗体の存在下で、ＦＸａ％は少なくとも７５％である。一部の実施形態では、抗体を含まない対照条件と比較して、８３ｎＭ以上のＴＦ抗体の存在下で、ＦＶＩＩａ％は少なくとも８０％である。一部の実施形態では、抗体を含まない対照条件と比較して、８３ｎＭ以上のＴＦ抗体の存在下で、ＦＶＩＩａ％は少なくとも８５％である。一部の実施形態では、抗体を含まない対照条件と比較して、８３ｎＭ以上のＴＦ抗体の存在下で、ＦＶＩＩａ％は少なくとも９０％である。一部の実施形態では、抗体を含まない対照条件と比較して、８３ｎＭ以上のＴＦ抗体の存在下で、ＦＶＩＩａ％は少なくとも９５％である。
一部の実施形態では、抗体を含まない対照条件と比較して、２８ｎＭ以上のＴＦ抗体の存在下で、ＦＸａ％は少なくとも７５％である。一部の実施形態では、抗体を含まない対照条件と比較して、２８ｎＭ以上のＴＦ抗体の存在下で、ＦＶＩＩａ％は少なくとも８０％である。一部の実施形態では、抗体を含まない対照条件と比較して、２８ｎＭ以上のＴＦ抗体の存在下で、ＦＶＩＩａ％は少なくとも８５％である。一部の実施形態では、抗体を含まない対照条件と比較して、２８ｎＭ以上のＴＦ抗体の存在下で、ＦＶＩＩａ％は少なくとも９０％である。一部の実施形態では、抗体を含まない対照条件と比較して、２８ｎＭ以上のＴＦ抗体の存在下で、ＦＶＩＩａ％は少なくとも９５％である。
一部の実施形態では、抗体を含まない対照条件と比較して、９．２５ｎＭ以上のＴＦ抗体の存在下で、ＦＸａ％は少なくとも７５％である。一部の実施形態では、抗体を含まない対照条件と比較して、９．２５ｎＭ以上のＴＦ抗体の存在下で、ＦＶＩＩａ％は少なくとも８０％である。一部の実施形態では、抗体を含まない対照条件と比較して、９．２５ｎＭ以上のＴＦ抗体の存在下で、ＦＶＩＩａ％は少なくとも８５％である。一部の実施形態では、抗体を含まない対照条件と比較して、９．２５ｎＭ以上のＴＦ抗体の存在下で、ＦＶＩＩａ％は少なくとも９０％である。一部の実施形態では、抗体を含まない対照条件と比較して、９．２５ｎＭ以上のＴＦ抗体の存在下で、ＦＶＩＩａ％は少なくとも９５％である。
一部の実施形態では、表９に記載のように、抗体を含まない対照条件と比較して、２５０ｎＭのＴＦ抗体の存在下で、ＦＶＩＩａ％は、約９８％、約８７％、約８０％、約９２％、約９５％、約８９％、約９１％、約９７％、約９４％、約１０１％、及び約９６％から選択される。一部の実施形態では、そのようなＦＶＩＩａ％は、約８０％～約１０１％の範囲である。一部の実施形態では、そのようなＦＶＩＩａ％は、約８０％以上である。
一部の実施形態では、表９に記載のように、抗体を含まない対照条件と比較して、８３ｎＭのＴＦ抗体の存在下で、ＦＶＩＩａ％は、約９７％、約８８％、約７７％、約９３％、約９４％、約９１％、約９８％、約１００％、及び約９２％から選択される。一部の実施形態では、そのようなＦＶＩＩａ％は、約７７％～約１００％の範囲である。一部の実施形態では、そのようなＦＶＩＩａ％は、約７７％以上である。
一部の実施形態では、表９に記載のように、抗体を含まない対照条件と比較して、２８ｎＭのＴＦ抗体の存在下で、ＦＶＩＩａ％は、約１０１％、約８７％、約７９％、約９６％、約９３％、約９５％、約９８％、約１００％、約１０２％、約９９％、約９２％、及び約９１％から選択される。一部の実施形態では、そのようなＦＶＩＩａ％は、約７９％～約１０２％の範囲である。一部の実施形態では、そのようなＦＶＩＩａ％は、約７９％以上である。
一部の実施形態では、表９に記載のように、抗体を含まない対照条件と比較して、９．２５ｎＭのＴＦ抗体の存在下で、ＦＶＩＩａ％は、約１００％、約９０％、約７６％、約９７％、約９３％、約９９％、約９８％、約１０２％、約１０１％、及び約９５％から選択される。一部の実施形態では、そのようなＦＶＩＩａ％は、約７６％～約１０２％の範囲である。一部の実施形態では、そのようなＦＶＩＩａ％は、約７６％以上である。
２．３．５．ＴＦ抗体の存在下でのＦＶＩＩａ依存性ＴＦシグナル伝達
一部の実施形態では、本明細書で提供される抗体は、ＦＶＩＩａ依存性ＴＦシグナル伝達を阻害する。一部の実施形態では、ＦＶＩＩａ依存性ＴＦシグナル伝達の阻害は、ＩＬ８の減少によって測定される。一部の実施形態では、ＦＶＩＩａ依存性ＴＦシグナル伝達の阻害は、ＧＭ－ＣＳＦの減少によって測定される。
一部の実施形態では、抗体を含まない対照条件と比較して、１００ｎＭ以上のＴＦ抗体の存在下で、インターロイキン８濃度（ＩＬ８ ｃｏｎｃ）は少なくとも７０％減少する。一部の実施形態では、抗体を含まない対照条件と比較して、１００ｎＭ以上のＴＦ抗体の存在下で、ＩＬ８ ｃｏｎｃは少なくとも８０％減少する。一部の実施形態では、抗体を含まない対照条件と比較して、１００ｎＭ以上のＴＦ抗体の存在下で、ＩＬ８ ｃｏｎｃは少なくとも９０％減少する。
一部の実施形態では、抗体を含まない対照条件と比較して、４０ｎＭ以上のＴＦ抗体の存在下で、ＩＬ８ ｃｏｎｃは少なくとも７０％減少する。一部の実施形態では、抗体を含まない対照条件と比較して、４０ｎＭ以上のＴＦ抗体の存在下で、ＩＬ８ ｃｏｎｃは少なくとも８０％減少する。一部の実施形態では、抗体を含まない対照条件と比較して、４０ｎＭ以上のＴＦ抗体の存在下で、ＩＬ８ ｃｏｎｃは少なくとも９０％減少する。
一部の実施形態では、抗体を含まない対照条件と比較して、１６ｎＭ以上のＴＦ抗体の存在下で、ＩＬ８ ｃｏｎｃは少なくとも６０％減少する。一部の実施形態では、抗体を含まない対照条件と比較して、１６ｎＭ以上のＴＦ抗体の存在下で、ＩＬ８ ｃｏｎｃは少なくとも７０％減少する。一部の実施形態では、抗体を含まない対照条件と比較して、１６ｎＭ以上のＴＦ抗体の存在下で、ＩＬ８ ｃｏｎｃは少なくとも８０％減少する。一部の実施形態では、抗体を含まない対照条件と比較して、１６ｎＭ以上のＴＦ抗体の存在下で、ＩＬ８ ｃｏｎｃは少なくとも９０％減少する。
一部の実施形態では、抗体を含まない対照条件と比較して、６．４ｎＭ以上のＴＦ抗体の存在下で、ＩＬ８ ｃｏｎｃは少なくとも５０％減少する。一部の実施形態では、抗体を含まない対照条件と比較して、６．４ｎＭ以上のＴＦ抗体の存在下で、ＩＬ８ ｃｏｎｃは少なくとも６０％減少する。一部の実施形態では、抗体を含まない対照条件と比較して、６．４ｎＭ以上のＴＦ抗体の存在下で、ＩＬ８ ｃｏｎｃは少なくとも７０％減少する。一部の実施形態では、抗体を含まない対照条件と比較して、６．４ｎＭ以上のＴＦ抗体の存在下で、ＩＬ８ ｃｏｎｃは少なくとも８０％減少する。一部の実施形態では、抗体を含まない対照条件と比較して、６．４ｎＭ以上のＴＦ抗体の存在下で、ＩＬ８ ｃｏｎｃは少なくとも９０％減少する。
一部の実施形態では、抗体を含まない対照条件と比較して、１００ｎＭ以上のＴＦ抗体の存在下で、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子濃度（ＧＭ－ＣＳＦ ｃｏｎｃ）は少なくとも７０％減少する。一部の実施形態では、抗体を含まない対照条件と比較して、１００ｎＭ以上のＴＦ抗体の存在下で、ＧＭ－ＣＳＦ ｃｏｎｃは少なくとも８０％減少する。一部の実施形態では、抗体を含まない対照条件と比較して、１００ｎＭ以上のＴＦ抗体の存在下で、ＧＭ－ＣＳＦ ｃｏｎｃは少なくとも９０％減少する。
一部の実施形態では、抗体を含まない対照条件と比較して、４０ｎＭ以上のＴＦ抗体の存在下で、ＧＭ－ＣＳＦ ｃｏｎｃは少なくとも７０％減少する。一部の実施形態では、抗体を含まない対照条件と比較して、４０ｎＭ以上のＴＦ抗体の存在下で、ＧＭ－ＣＳＦ ｃｏｎｃは少なくとも８０％減少する。一部の実施形態では、抗体を含まない対照条件と比較して、４０ｎＭ以上のＴＦ抗体の存在下で、ＧＭ－ＣＳＦ ｃｏｎｃは少なくとも９０％減少する。
一部の実施形態では、抗体を含まない対照条件と比較して、１６ｎＭ以上のＴＦ抗体の存在下で、ＧＭ－ＣＳＦ ｃｏｎｃは少なくとも６０％減少する。一部の実施形態では、抗体を含まない対照条件と比較して、１６ｎＭ以上のＴＦ抗体の存在下で、ＧＭ－ＣＳＦ ｃｏｎｃは少なくとも７０％減少する。一部の実施形態では、抗体を含まない対照条件と比較して、１６ｎＭ以上のＴＦ抗体の存在下で、ＧＭ－ＣＳＦ ｃｏｎｃは少なくとも８０％減少する。一部の実施形態では、抗体を含まない対照条件と比較して、１６ｎＭ以上のＴＦ抗体の存在下で、ＧＭ－ＣＳＦ ｃｏｎｃは少なくとも９０％減少する。
一部の実施形態では、抗体を含まない対照条件と比較して、６．４ｎＭ以上のＴＦ抗体の存在下で、ＧＭ－ＣＳＦ ｃｏｎｃは少なくとも５０％減少する。一部の実施形態では、抗体を含まない対照条件と比較して、６．４ｎＭ以上のＴＦ抗体の存在下で、ＧＭ－ＣＳＦ ｃｏｎｃは少なくとも６０％減少する。一部の実施形態では、抗体を含まない対照条件と比較して、６．４ｎＭ以上のＴＦ抗体の存在下で、ＧＭ－ＣＳＦ ｃｏｎｃは少なくとも７０％減少する。一部の実施形態では、抗体を含まない対照条件と比較して、６．４ｎＭ以上のＴＦ抗体の存在下で、ＧＭ－ＣＳＦ ｃｏｎｃは少なくとも８０％減少する。一部の実施形態では、抗体を含まない対照条件と比較して、６．４ｎＭ以上のＴＦ抗体の存在下で、ＧＭ－ＣＳＦ ｃｏｎｃは少なくとも９０％減少する。
一部の実施形態では、表１０に記載のように、抗体を含まない対照条件と比較して、１００ｎＭのＴＦ抗体の存在下で、インターロイキン８の百分率（ＩＬ８％）は、約２％、約９％、約８％、約６％、約１３％、約１％、約３％、約４％、及び約５％から選択される。一部の実施形態では、そのようなＩＬ８％は、約１％～約１３％の範囲である。一部の実施形態では、そのようなＩＬ８％は、約１３％以下である。
一部の実施形態では、表１０に記載のように、抗体を含まない対照条件と比較して、４０ｎＭのＴＦ抗体の存在下で、ＩＬ８％は、約２％、約８％、約７％、約１０％、約１４％、約４％、約５％、及び約６％から選択される。一部の実施形態では、そのようなＩＬ８％は、約２％～約１４％の範囲である。一部の実施形態では、そのようなＩＬ８％は、約１４％以下である。
一部の実施形態では、表１０に記載のように、抗体を含まない対照条件と比較して、１６ｎＭのＴＦ抗体の存在下で、ＩＬ８％は、約２％、約３％、約１０％、約８％、約７％、約１６％、約９％、約１５％、約５％、及び約６％から選択される。一部の実施形態では、そのようなＩＬ８％は、約２％～約１６％の範囲である。一部の実施形態では、そのようなＩＬ８％は、約１６％以下である。
一部の実施形態では、表１０に記載のように、抗体を含まない対照条件と比較して、６．４ｎＭのＴＦ抗体の存在下で、ＩＬ８％は、約３％、約４％、約１１％、約９％、約１４％、約２２％、約１２％、約６％、約５％、約１５％、約２１％、及び約８％から選択される。一部の実施形態では、そのようなＩＬ８％は、約３％～約２２％の範囲である。一部の実施形態では、そのようなＩＬ８％は、約２２％以下である。
一部の実施形態では、表１１に記載のように、抗体を含まない対照条件と比較して、１００ｎＭのＴＦ抗体の存在下で、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子の百分率（ＧＭ－ＣＳＦ％）は、約６％、約７％、約２２％、約２０％、約１２％、約１９％、約１７％、約２５％、約５％、約１４％、約１１％、及び約１０％から選択される。一部の実施形態では、そのようなＧＭ－ＣＳＦ％は、約５％～約２５％の範囲である。一部の実施形態では、そのようなＧＭ－ＣＳＦ％は、約２５％以下である。
一部の実施形態では、表１１に記載のように、抗体を含まない対照条件と比較して、４０ｎＭのＴＦ抗体の存在下で、ＧＭ－ＣＳＦ％は、約６％、約７％、約１９％、約１５％、約１８％、約１６％、約２６％、約５％、約１３％、約１１％、及び約１０％から選択される。一部の実施形態では、そのようなＧＭ－ＣＳＦ％は、約５％～約２６％の範囲である。一部の実施形態では、そのようなＧＭ－ＣＳＦ％は、約２６％以下である。
一部の実施形態では、表１１に記載のように、抗体を含まない対照条件と比較して、１６ｎＭのＴＦ抗体の存在下で、ＧＭ－ＣＳＦ％は、約６％、約７％、約２２％、約１９％、約１４％、約３２％、約１７％、約２６％、約５％、約１２％、約１３％、約９％、約１１％、及び約１５％から選択される。一部の実施形態では、そのようなＧＭ－ＣＳＦ％は、約５％～約３２％の範囲である。一部の実施形態では、そのようなＧＭ－ＣＳＦ％は、約３２％以下である。
一部の実施形態では、表１１に記載のように、抗体を含まない対照条件と比較して、６．４ｎＭのＴＦ抗体の存在下で、ＧＭ－ＣＳＦ％は、約８％、約９％、約２４％、約２０％、約１８％、約３９％、約３４％、約１５％、約２１％、約１６％、約１７％、及び約１０％から選択される。一部の実施形態では、そのようなＧＭ－ＣＳＦ％は、約８％～約３９％の範囲である。一部の実施形態では、そのようなＧＭ－ＣＳＦ％は、約３９％以下である。
２．３．６．ブタ脈絡膜血管新生（ＣＮＶ）モデルにおける病変サイズの減少
一部の実施形態では、本明細書で提供される抗体は、ブタ脈絡膜血管新生（ＣＮＶ）モデルにおいて病変サイズを減少させる。一部の実施形態では、病変サイズの減少はフルオレセイン血管造影法（ＦＡ）によって測定される。
一部の実施形態では、ブタＣＮＶモデルにおける病変サイズは、抗ＴＦ抗体投与の７日後に少なくとも５％減少する。一部の実施形態では、ブタＣＮＶモデルにおける病変サイズは、抗ＴＦ抗体投与の７日後に少なくとも１０％減少する。一部の実施形態では、ブタＣＮＶモデルにおける病変サイズは、抗ＴＦ抗体投与の７日後に少なくとも２０％減少する。一部の実施形態では、ブタＣＮＶモデルにおける病変サイズは、抗ＴＦ抗体投与の７日後に少なくとも４０％減少する。一部の実施形態では、ブタＣＮＶモデルにおける病変サイズは、抗ＴＦ抗体投与の７日後に少なくとも６０％減少する。
一部の実施形態では、ブタＣＮＶモデルにおける病変サイズは、抗ＴＦ抗体投与の２１日後に少なくとも１０％減少する。一部の実施形態では、ブタＣＮＶモデルにおける病変サイズは、抗ＴＦ抗体投与の２１日後に少なくとも２０％減少する。一部の実施形態では、ブタＣＮＶモデルにおける病変サイズは、抗ＴＦ抗体投与の２１日後に少なくとも４０％減少する。一部の実施形態では、ブタＣＮＶモデルにおける病変サイズは、抗ＴＦ抗体投与の２１日後に少なくとも６０％減少する。一部の実施形態では、ブタＣＮＶモデルにおける病変サイズは、抗ＴＦ抗体投与の２１日後に少なくとも８０％減少する。
２．４．生殖系列
本明細書で提供される抗体は、任意の適切なＶＨ及びＶＬの生殖系列配列を含み得る。
一部の実施形態では、本明細書で提供される抗体のＶＨ領域は、ＶＨ３生殖系列に由来する。一部の実施形態では、本明細書で提供される抗体のＶＨ領域は、ＶＨ１生殖系列に由来する。一部の実施形態では、本明細書で提供される抗体のＶＨ領域は、ＶＨ４生殖系列に由来する。
一部の実施形態では、本明細書で提供される抗体のＶＨ領域は、ＶＨ３－２３生殖系列に由来する。一部の実施形態では、本明細書で提供される抗体のＶＨ領域は、ＶＨ１－１８生殖系列に由来する。一部の実施形態では、本明細書で提供される抗体のＶＨ領域は、ＶＨ３－３０生殖系列に由来する。一部の実施形態では、本明細書で提供される抗体のＶＨ領域は、ＶＨ１－６９生殖系列に由来する。一部の実施形態では、本明細書で提供される抗体のＶＨ領域は、ＶＨ４－３１生殖系列に由来する。一部の実施形態では、本明細書で提供される抗体のＶＨ領域は、ＶＨ４－３４生殖系列に由来する。一部の実施形態では、本明細書で提供される抗体のＶＨ領域は、ＶＨ１－４６生殖系列に由来する。
一部の実施形態では、本明細書で提供される抗体のＶＬ領域は、ＶＫ１生殖系列に由来する。一部の実施形態では、本明細書で提供される抗体のＶＬ領域は、ＶＫ４生殖系列に由来する。一部の実施形態では、本明細書で提供される抗体のＶＬ領域は、ＶＫ３生殖系列に由来する。
一部の実施形態では、本明細書で提供される抗体のＶＬ領域は、ＶＫ１－０５生殖系列に由来する。一部の実施形態では、本明細書で提供される抗体のＶＬ領域は、ＶＫ４－０１生殖系列に由来する。一部の実施形態では、本明細書で提供される抗体のＶＬ領域は、ＶＫ３－１５生殖系列に由来する。一部の実施形態では、本明細書で提供される抗体のＶＬ領域は、ＶＫ３－２０生殖系列に由来する。一部の実施形態では、本明細書で提供される抗体のＶＬ領域は、ＶＫ１－３３生殖系列に由来する。
２．５．単一特異性及び多重特異性のＴＦ抗体
一部の実施形態では、本明細書で提供される抗体は単一特異性抗体である。
一部の実施形態では、本明細書で提供される抗体は多重特異性抗体である。
一部の実施形態では、本明細書で提供される多重特異性抗体は、１つを超える抗原に結合する。一部の実施形態では、多重特異性抗体は２つの抗原に結合する。一部の実施形態では、多重特異性抗体は３つの抗原に結合する。一部の実施形態では、多重特異性抗体は４つの抗原に結合する。一部の実施形態では、多重特異性抗体は５つの抗原に結合する。
一部の実施形態では、本明細書で提供される多重特異性抗体は、ＴＦ抗原上の１つを超えるエピトープに結合する。一部の実施形態では、多重特異性抗体はＴＦ抗原上の２つのエピトープに結合する。一部の実施形態では、多重特異性抗体はＴＦ抗原上の３つのエピトープに結合する。
当該技術分野では多くの多重特異性抗体構築物が知られており、本明細書で提供される抗体は、任意の適切な多重特異性の適切なコンストラクトの形態で提供することができる。
一部の実施形態では、多重特異性抗体は、それぞれが共通の軽鎖可変領域と対形成している少なくとも２つの異なる重鎖可変領域を含む免疫グロブリンを含む（すなわち、「共通軽鎖抗体」）。共通軽鎖可変領域は、２つの異なる重鎖可変領域のそれぞれと異なる抗原結合ドメインを形成する。参照によりその全体が援用される、Ｍｅｒｃｈａｎｔ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，１９９８，１６：６７７－６８１を参照されたい。
一部の実施形態では、多重特異性抗体は、そのような免疫グロブリンの重鎖または軽鎖の１つまたは複数のＮ末端またはＣ末端に結合した抗体またはそのフラグメントを含む免疫グロブリンを含む。参照によりその全体が援用される、Ｃｏｌｏｍａ ａｎｄ Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，１９９７，１５：１５９－１６３を参照されたい。一部の態様では、そのような抗体は四価の二重特異性抗体を含む。
一部の実施形態では、多重特異性抗体は、少なくとも２つの異なる重鎖可変領域及び少なくとも２つの異なる軽鎖可変領域を含むハイブリッド免疫グロブリンを含む。参照によりその各々の全体が援用される、Ｍｉｌｓｔｅｉｎ ａｎｄ Ｃｕｅｌｌｏ，Ｎａｔｕｒｅ，１９８３，３０５：５３７－５４０；及びＳｔａｅｒｚ ａｎｄ Ｂｅｖａｎ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１９８６，８３：１４５３－１４５７を参照されたい。
一部の実施形態では、多重特異性抗体は、多重特異性を有さない副産物の形成を低減するための改変を伴う免疫グロブリン鎖を含む。一部の態様では、抗体は、参照によりその全体が援用される、米国特許第５，７３１，１６８号に記載されるような、１つまたは複数の「ノブ－イントゥー－ホール」を含む。
一部の実施形態では、多重特異性抗体は、Ｆｃヘテロ多量体の組み立てを促進するための１つまたは複数の静電的改変を伴う免疫グロブリン鎖を含む。参照によりその全体が援用されるＷＯ２００９／０８９００４を参照されたい。
一部の実施形態では、多重特異性抗体は二重特異性一本鎖分子を含む。参照によりその各々の全体が援用される、Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒ ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｊ．，１９９１，１０：３６５５－３６５９；及びＧｒｕｂｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１９９４，１５２：５３６８－５３７４を参照されたい。
一部の実施形態では、多重特異性抗体は、ポリペプチドリンカーによって接続された重鎖可変ドメインと軽鎖可変ドメインを含み、ここで、リンカーの長さは、望ましい多重特異性を有する多重特異性抗体の組み立てを促進するように選択される。例えば、単一特異的ｓｃＦｖは、重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインが、１２個を超えるアミノ酸残基のポリペプチドリンカーによって接続されている場合に、一般的に形成される。参照によりその各々の全体が援用される米国特許第４，９４６，７７８号及び米国特許第５，１３２，４０５号を参照されたい。一部の実施形態では、ポリペプチドリンカー長を１２個未満のアミノ酸残基に減少させると、同じポリペプチド鎖上の重鎖及び軽鎖可変ドメインの対形成が妨げられ、１つの鎖由来の重鎖及び軽鎖可変ドメインと別の鎖の相補ドメインとの対形成が可能になる。したがって、得られる抗体は多重特異性を有し、各結合部位の特異性は複数のポリペプチド鎖によって寄与される。３～１２アミノ酸残基のリンカーによって結合された重鎖及び軽鎖可変ドメインを含むポリペプチド鎖は、主に二量体（ダイアボディと呼ばれる）を形成する。リンカーが０～２アミノ酸残基の場合、三量体（トリアボディと呼ばれる）及び四量体（テトラボディと呼ばれる）が優先される。しかしながら、オリゴマー化の正確なタイプは、リンカー長に加えて、アミノ酸残基の組成と各ポリペプチド鎖の可変ドメインの順序（例えば、ＶＨ－リンカー－ＶＬ対ＶＬ－リンカー－ＶＨ）に依存するようである。当業者は、所望の多重特異性に基づいて適切なリンカー長を選択することができる。
一部の実施形態では、多重特異性抗体はダイアボディを含む。参照によりその全体が援用される、Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１９９３，９０：６４４４－６４４８を参照されたい。一部の実施形態では、多重特異性抗体はトリアボディを含む。参照によりその全体が援用される、Ｔｏｄｏｒｏｖｓｋａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，２００１，２４８：４７－６６を参照されたい。一部の実施形態では、多重特異性抗体はテトラボディを含む。参照によりその全体が援用される同文献を参照されたい。
一部の実施形態では、多重特異性抗体は、三重特異性Ｆ（ａｂ’）３誘導体を含む。参照によりその全体が援用される、Ｔｕｔｔ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１９９１，１４７：６０－６９を参照されたい。
一部の実施形態では、多重特異性抗体は架橋抗体を含む。参照によりその各々の全体が援用される、米国特許第４，６７６，９８０号；Ｂｒｅｎｎａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９８５，２２９：８１－８３；Ｓｔａｅｒｚ，ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ，１９８５，３１４：６２８－６３１；及びＥＰ０４５３０８２を参照されたい。
一部の実施形態では、多重特異性抗体は、ロイシンジッパーによって組み立てられた抗原結合ドメインを含む。参照によりその全体が援用される、Ｋｏｓｔｅｌｎｙ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１９９２，１４８：１５４７－１５５３を参照されたい。
一部の実施形態では、多重特異性抗体は相補的タンパク質ドメインを含む。一部の態様では、相補的タンパク質ドメインは、アンカードメイン（ＡＤ）ならびに二量体化及びドッキングドメイン（ＤＤＤ）を含む。一部の実施形態では、ＡＤとＤＤＤは互いに結合するため、「ドックアンドロック」（ＤＮＬ）アプローチを介して多重特異性抗体構造の組み立てが可能になる。二重特異性抗体、三重特異性抗体、四重特異性抗体、五重特異性抗体、及び六重特異性抗体を含む、多くの特異性の抗体を組み立てることができる。相補的タンパク質ドメインを含む多重特異性抗体は、例えば、その各々の全体が参照により本明細書に援用される、米国特許第７，５２１，０５６号；同第７，５５０，１４３号；同第７，５３４，８６６号；及び同第７，５２７，７８７号に記載されている。
一部の実施形態では、多重特異性抗体は、参照によりその全体が援用される、米国特許出願公開第２００８／００６９８２０号に記載されているような二重作用Ｆａｂ（ＤＡＦ）抗体を含む。
一部の実施形態では、多重特異性抗体は、２つの親分子を還元した後、２つの親分子を混合し、再酸化してハイブリッド構造を組み立てることによって形成された抗体を含む。参照によりその全体が援用される、Ｃａｒｌｒｉｎｇ ｅｔ ａｌ．，ＰＬｏＳ Ｏｎｅ，２０１１，６：ｅ２２５３３を参照されたい。
一部の実施形態では、多重特異性抗体はＤＶＤ－Ｉｇ（商標）を含む。ＤＶＤ－Ｉｇ（商標）は、２つ以上の抗原に結合できる二重可変ドメイン免疫グロブリンである。ＤＶＤ－Ｉｇ（商標）は、参照によりその全体が援用される、米国特許第７，６１２，１８１号に記載されている。
一部の実施形態では、多重特異性抗体は、ＤＡＲＴ（商標）を含む。ＤＡＲＴ（商標）は、参照によりその全体が援用される、Ｍｏｏｒｅ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，２０１１，１１７：４５４－４５１に記載されている。
一部の実施形態では、多重特異性抗体は、ＤｕｏＢｏｄｙ（登録商標）を含む。ＤｕｏＢｏｄｉｅｓ（登録商標）は、参照によりその各々の全体が援用される、Ｌａｂｒｉｊｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，２０１３，１１０：５１４５－５１５０；Ｇｒａｍｅｒ ｅｔ ａｌ．，ｍＡｂｓ，２０１３，５：９６２－９７２；及びＬａｂｒｉｊｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，２０１４，９：２４５０－２４６３に記載されている。
一部の実施形態では、多重特異性抗体は、別の抗体またはフラグメントに結合した抗体フラグメントを含む。結合は、共有結合または非共有結合であり得る。結合が共有結合である場合、それは融合タンパク質の形態であっても、化学リンカーを介したものであってもよい。他の抗体に結合した抗体フラグメントを含む多重特異性抗体の例証的な例には、四価の二重特異性抗体が含まれ、ｓｃＦｖはＩｇＧ由来のＣＨ３のＣ末端に融合される。Ｃｏｌｏｍａ ａｎｄ Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，１９９７，１５：１５９－１６３を参照されたい。他の例には、Ｆａｂ分子が免疫グロブリンの定常領域に結合している抗体が含まれる。参照によりその全体が援用される、Ｍｉｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２００３，１７０：４８５４－４８６１を参照されたい。本明細書に記載されているかまたは当該技術分野で知られている任意のフラグメントを含む、任意の適切なフラグメントを使用することができる。
一部の実施形態では、多重特異性抗体は、ＣｏｖＸ－Ｂｏｄｙを含む。ＣｏｖＸ－Ｂｏｄｙは、例えば、参照によりその全体が援用される、Ｄｏｐｐａｌａｐｕｄｉ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，２０１０，１０７：２２６１１－２２６１６に記載されている。
一部の実施形態では、多重特異性抗体はＦｃａｂ抗体を含み、ここでは１つまたは複数の抗原結合ドメインがＦｃ領域に導入されている。Ｆｃａｂ抗体は、参照によりその全体が援用される、Ｗｏｚｎｉａｋ－Ｋｎｏｐｐ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．Ｄｅｓ．Ｓｅｌ．，２０１０，２３：２８９－２９７に記載されている。
一部の実施形態では、多重特異性抗体は、ＴａｎｄＡｂ（登録商標）抗体を含む。ＴａｎｄＡｂ（登録商標）抗体は、参照によりその各々の全体が援用される、Ｋｉｐｒｉｙａｎｏｖ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１９９９，２９３：４１－５６、及びＺｈｕｋｏｖｓｋｙ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，２０１３，１２２：５１１６に記載されている。
一部の実施形態では、多重特異性抗体はタンデムＦａｂを含む。タンデムＦａｂは、参照によりその全体が援用されるＷＯ２０１５／１０３０７２に記載されている。
一部の実施形態では、多重特異性抗体はＺｙｂｏｄｙ（商標）を含む。Ｚｙｂｏｄｉｅｓ（商標）は、参照によりその全体が援用される、ＬａＦｌｅｕｒ ｅｔ ａｌ．，ｍＡｂｓ，２０１３，５：２０８－２１８に記載されている。
２．６．グリコシル化バリアント
ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体は、グリコシル化の程度を増加、減少、または排除するように改変されてもよい。ポリペプチドのグリコシル化は、典型的には「Ｎ結合型」または「Ｏ結合型」のいずれかである。
「Ｎ結合型」グリコシル化は、アスパラギン残基の側鎖への炭水化物部分の結合を指す。トリペプチド配列アスパラギン－Ｘ－セリン及びアスパラギン－Ｘ－トレオニン（Ｘはプロリン以外の任意のアミノ酸）は、炭水化物部分がアスパラギン側鎖に酵素的に結合するための認識配列である。したがって、ポリペプチドにおけるこれらのトリペプチド配列のうちのいずれかの存在は、潜在的なグリコシル化部位を作り出す。
「Ｏ結合型」グリコシル化は、糖Ｎ－アセチルガラクトサミン、ガラクトース、またはキシロースのうちの１つがヒドロキシアミノ酸、最も一般的にはセリンまたはトレオニンに結合することを指すが、５－ヒドロキシプロリンまたは５－ヒドロキシリジンも使用され得る。
本明細書で提供される抗体へのまたはそこからのＮ結合型グリコシル化部位の付加または削除は、１つまたは複数の上述のトリペプチド配列が作製または除去されるようにアミノ酸配列を改変することによって達成できる。Ｏ結合型グリコシル化部位の付加または削除は、抗体の配列内または（場合によっては）抗体配列への１つまたは複数のセリンまたはトレオニン残基の付加、削除、または置換によって達成できる。
一部の実施形態では、本明細書で提供される抗体は、天然に存在する抗体とは異なるグリコシル化モチーフを含む。本明細書で提供される抗体において、任意の適切な天然に存在するグリコシル化モチーフを改変することができる。免疫グロブリンの構造及びグリコシル化特性は、例えば、当該技術分野で公知であり、そして例えば、参照によりその全体が援用される、Ｓｃｈｒｏｅｄｅｒ ａｎｄ Ｃａｖａｃｉｎｉ，Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２０１０，１２５：Ｓ４１－５２において要約されている。
一部の実施形態では、本明細書で提供される抗体は、アスパラギン２９７（Ａｓｎ２９７）に結合するオリゴ糖が改変されたＩｇＧ１ Ｆｃ領域を含む。哺乳動物細胞によって産生される天然に存在するＩｇＧ１抗体は、典型的には、Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインのＡｓｎ２９７へのＮ結合によって一般的に結合している分岐した二分岐オリゴ糖を含む。参照によりその全体が援用される、Ｗｒｉｇｈｔ ｅｔ ａｌ．，ＴＩＢＴＥＣＨ，１９９７，１５：２６－３２を参照されたい。Ａｓｎ２９７に結合したオリゴ糖には、マンノース、Ｎ－アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）、ガラクトース、及びシアル酸などの様々な炭水化物、ならびに二分岐オリゴ糖構造の「ステム」内のＧｌｃＮＡｃに結合したフコースが含まれる。
一部の実施形態では、Ａｓｎ２９７に結合したオリゴ糖が修飾されて、ＡＤＣＣが変更された抗体が作製される。一部の実施形態では、ＡＤＣＣを改善するためにオリゴ糖が改変されている。一部の実施形態では、ＡＤＣＣを低減するためにオリゴ糖が改変されている。
一部の態様では、本明細書で提供される抗体は、天然に存在するＩｇＧ１ドメインと比較して、Ａｓｎ２９７位でフコース含量が減少したＩｇＧ１ドメインを含む。そのようなＦｃドメインは改善されたＡＤＣＣを有することが知られている。参照によりその全体が援用される、Ｓｈｉｅｌｄｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２００２，２７７：２６７３３－２６７４０を参照されたい。一部の態様では、そのような抗体は、Ａｓｎ２９７位にフコースをいっさい含まない。フコースの量は、例えば、参照によりその全体が援用される、ＷＯ２００８／０７７５４６に記載されているような任意の適切な方法を使用して決定することができる。
一部の実施形態では、本明細書で提供される抗体は、ＧｌｃＮＡｃによって二分される抗体のＦｃ領域に結合した二分岐オリゴ糖などの二分されたオリゴ糖を含む。そのような抗体バリアントは、減少したフコシル化、及び／または改善されたＡＤＣＣ機能を有し得る。そのような抗体バリアントの例は、例えば、参照によりその各々の全体が援用される、ＷＯ２００３／０１１８７８、米国特許第６，６０２，６８４号、及び米国特許出願公開第２００５／０１２３５４６号に記載されている。
明細書で提供される抗体に組み込まれ得る他の例示的なグリコシル化バリアントは、例えば、参照によりその各々の全体が援用される、米国特許出願公開第２００３／０１５７１０８号、同第２００４／００９３６２１号、同第２００３／０１５７１０８号、同第２００３／０１１５６１４号、同第２００２／０１６４３２８号、同第２００４／００９３６２１号、同第２００４／０１３２１４０号、同第２００４／０１１０７０４号、同第２００４／０１１０２８２号、同第２００４／０１０９８６５；国際特許出願公開第２０００／６１７３９号、同第２００１／２９２４６号、同第２００３／０８５１１９号、同第２００３／０８４５７０号、同第２００５／０３５５８６号、同第２００５／０３５７７８号、同第２００５／０５３７４２号、同第２００２／０３１１４０号；Ｏｋａｚａｋｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２００４，３３６：１２３９－１２４９；及びＹａｍａｎｅ－Ｏｈｎｕｋｉ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．，２００４，８７：６１４－６２２に記載されている。
一部の実施形態では、本明細書で提供される抗体は、Ｆｃ領域に結合したオリゴ糖に少なくとも１つのガラクトース残基を有するＦｃ領域を含む。そのような抗体バリアントは、改善されたＣＤＣ機能を有し得る。そのような抗体バリアントの例は、例えば、参照によりその各々の全体が援用される、ＷＯ１９９７／３００８７；ＷＯ１９９８／５８９６４；及びＷＯ１９９９／２２７６４に記載されている。
脱フコシル化抗体を産生できる細胞株の例には、タンパク質のフコシル化が欠損しているＬｅｃ１３ ＣＨＯ細胞（参照によりその各々の全体が援用される、Ｒｉｐｋａ ｅｔ ａｌ．，Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．，１９８６，２４９：５３３－５４５；米国特許出願公開第２００３／０１５７１０８号；ＷＯ２００４／０５６３１２を参照されたい）、ならびにα－１，６－フコシルトランスフェラーゼ遺伝子またはＦＵＴ８ノックアウトＣＨＯ細胞などのノックアウト細胞株（参照によりその各々の全体が援用される、Ｙａｍａｎｅ－Ｏｈｎｕｋｉ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．，２００４，８７：６１４－６２２；Ｋａｎｄａ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．，２００６，９４：６８０－６８８；及びＷＯ２００３／０８５１０７を参照されたい）が含まれる。
一部の実施形態では、本明細書で提供される抗体は脱グリコシル化抗体である。脱グリコシル化抗体は、当該技術分野で公知の、または本明細書に記載されている任意の方法を使用して生成することができる。一部の態様では、抗体を改変して全てのグリコシル化部位を除去することにより、脱グリコシル化抗体が生成される。一部の態様では、グリコシル化部位は抗体のＦｃ領域からのみ削除される。一部の態様では、脱グリコシル化抗体は、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）などのグリコシル化ができない生物で抗体を発現させることによって、または無細胞反応混合物で抗体を発現させることによって生成される。
一部の実施形態では、本明細書で提供される抗体は、天然のＩｇＧ１抗体と比較して低減したエフェクター機能を有する定常領域を有する。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体のＦｃ領域の定常領域のＦｃ受容体に対する親和性は、そのようなＦｃ受容体に対する天然ＩｇＧ１定常領域の親和性よりも低い。
２．７．Ｆｃ領域のアミノ酸配列バリアント
ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体は、天然に存在するＦｃ領域と比較して、１つまたは複数のアミノ酸置換、挿入、または欠失を伴うＦｃ領域を含む。一部の態様では、そのような置換、挿入、または欠失により、安定性、グリコシル化、またはその他の特性が改変された抗体がもたらされる。一部の態様では、そのような置換、挿入、または欠失により、脱グリコシル化抗体がもたらされる。
一部の態様では、本明細書で提供される抗体のＦｃ領域は、Ｆｃ受容体に対する親和性が改変された抗体、またはより免疫学的に不活性な抗体をもたらすように改変される。一部の実施形態では、本明細書で提供される抗体バリアントは、全てではないが、一部のエフェクター機能を有する。そのような抗体は、例えば、抗体の半減期がインビボで重要であるが、特定のエフェクター機能（例えば、補体活性化及びＡＤＣＣ）が不必要または有害である場合に有用であり得る。
一部の実施形態では、本明細書で提供される抗体のＦｃ領域は、ヒンジ安定化変異Ｓ２２８Ｐ及びＬ２３５Ｅのうちの１つまたは複数を含むヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域である。参照によりその全体が援用される、Ａａｌｂｅｒｓｅ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，２００２，１０５：９－１９を参照されたい。一部の実施形態では、ＩｇＧ４ Ｆｃ領域は、以下の変異のうちの１つまたは複数を含む：Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、及びＬ２３５Ａ。参照によりその全体が援用される、Ａｒｍｏｕｒ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２００３，４０：５８５－５９３を参照されたい。一部の実施形態では、ＩｇＧ４ Ｆｃ領域はＧ２３６位に欠失を含む。
一部の実施形態では、本明細書で提供される抗体のＦｃ領域は、Ｆｃ受容体結合を減少させる１つまたは複数の変異を含むヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域である。一部の態様では、１つまたは複数の変異は、Ｓ２２８（例えば、Ｓ２２８Ａ）、Ｌ２３４（例えば、Ｌ２３４Ａ）、Ｌ２３５（例えば、Ｌ２３５Ａ）、Ｄ２６５（例えば、Ｄ２６５Ａ）、及びＮ２９７（例えば、Ｎ２９７Ａ）から選択される残基中に存在する。一部の態様では、抗体はＰＶＡ２３６変異を含む。ＰＶＡ２３６は、ＩｇＧ１のアミノ酸の２３３位から２３６位までのアミノ酸配列ＥＬＬＧ（配列番号９２８）またはＩｇＧ４のＥＦＬＧ（配列番号９２９）が、ＰＶＡによって置換されることを意味する。参照によりその全体が援用される米国特許第９，１５０，６４１号を参照されたい。
一部の実施形態では、本明細書で提供される抗体のＦｃ領域は、参照によりその各々の全体が援用される、Ａｒｍｏｕｒ ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１９９９，２９：２６１３－２６２４；ＷＯ１９９９／０５８５７２；及び／または英国特許出願第９８０９９５１８号に記載されている。
一部の実施形態では、本明細書で提供される抗体のＦｃ領域は、変異Ａ３３０Ｓ及びＰ３３１Ｓのうちの１つまたは複数を含むヒトＩｇＧ２ Ｆｃ領域である。
一部の実施形態では、本明細書で提供される抗体のＦｃ領域は、２３８、２６５、２６９、２７０、２９７、３２７、及び３２９から選択される１つまたは複数の位置にアミノ酸置換を有する。参照によりその全体が援用される米国特許第６，７３７，０５６号を参照されたい。そのようなＦｃ変異体には、２６５位、２６９位、２７０位、２９７位、及び３２７位のアミノ酸のうちの２つ以上で置換されたＦｃ変異体が含まれ、２６５及び２９７残基がアラニンで置換されたいわゆる「ＤＡＮＡ」Ｆｃ変異体が含まれる。参照によりその全体が援用される米国特許第７，３３２，５８１号を参照されたい。一部の実施形態では、抗体は、アミノ酸２６５位にアラニンを含む。一部の実施形態では、抗体は、アミノ酸２９７位にアラニンを含む。
ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体は、Ｆｃ領域の２９８位、３３３位、及び３３４位のうちの１つまたは複数での置換など、ＡＤＣＣを改善する１つまたは複数のアミノ酸置換を有するＦｃ領域を含む。一部の実施形態では、本明細書で提供される抗体は、参照によりその全体が援用される、Ｌａｚａｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，２００６，１０３：４００５－４０１０に記載されるように、２３９位、３３２位、及び３３０位での１つまたは複数のアミノ酸置換を有するＦｃ領域を含み、これらのアミノ酸置換は、エフェクター機能を増強する。
一部の実施形態では、本明細書で提供される抗体は、Ｃ１ｑ結合及び／またはＣＤＣを改善または低下させる１つまたは複数の改変を含む。参照によりその各々の全体が援用される、米国特許第６，１９４，５５１号；ＷＯ９９／５１６４２；及びＩｄｕｓｏｇｉｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２０００，１６４：４１７８－４１８４を参照されたい。
一部の実施形態では、本明細書で提供される抗体は、半減期を増加させるために１つまたは複数の改変を含む。増加した半減期、及び新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）への改善された結合を有する抗体は、例えば、参照によりその各々の全体が援用される、Ｈｉｎｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２００６，１７６：３４６－３５６；及び米国特許出願公開第２００５／００１４９３４号に記載されている。このようなＦｃバリアントには、１つまたは複数の以下のＦｃ領域の残基に置換を有するものが含まれる：ＩｇＧの２３８、２５０、２５６、２６５、２７２、２８６、３０３、３０５、３０７、３１１、３１２、３１４、３１７、３４０、３５６、３６０、３６２、３７６、３７８、３８０、３８２、４１３、４２４、４２８、及び４３４。
一部の実施形態では、本明細書で提供される抗体は、参照によりその各々の全体が援用される、米国特許第７，３７１，８２６号、同第５，６４８，２６０号、及び同第５，６２４，８２１号；Ｄｕｎｃａｎ ａｎｄ Ｗｉｎｔｅｒ，Ｎａｔｕｒｅ，１９８８，３２２：７３８－７４０；ならびにＷＯ９４／２９３５１に記載されるように、１つまたは複数のＦｃ領域バリアントを含む。
２．８．ピログルタミン酸
当該技術分野で知られているように、組換えタンパク質のＮ末端にあるグルタミン酸（Ｅ）とグルタミン（Ｑ）の両方が自発的に環化して、インビトロ及びインビボでピログルタミン酸（ｐＥ）を形成することができる。参照によりその全体が援用される、Ｌｉｕ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２０１１，２８６：１１２１１－１１２１７を参照されたい。
一部の実施形態では、Ｎ末端位置にｐＥ残基を有するポリペプチド配列を含む抗体が本明細書で提供される。一部の実施形態では、本明細書で提供されるのは、Ｎ末端残基がＱからｐＥに変換されたポリペプチド配列を含む抗体である。一部の実施形態では、本明細書で提供されるのは、Ｎ末端残基がＥからｐＥに変換されたポリペプチド配列を含む抗体である。
２．９．システイン操作抗体バリアント
ある特定の実施形態では、本明細書で提供されるのは、抗体の１つまたは複数の残基がシステイン残基で置換されている「ｔｈｉｏＭＡｂ」としても知られるシステイン操作抗体である。特定の実施形態では、置換された残基は、抗体の溶媒がアクセス可能な部位に存在する。そのような残基をシステインで置換することにより、反応性チオール基が抗体の溶媒がアクセス可能な部位に導入され、抗体を他の部分、例えば薬物部分またはリンカー薬物部分にコンジュゲートさせて、例えばイムノコンジュゲートを作製することができる。
ある特定の実施形態では、以下の残基のうちの１つまたは複数がシステインで置換されていてもよい：軽鎖のＶ２０５；重鎖Ｆｃ領域のＡ１１８；及び重鎖Ｆｃ領域のＳ４００。システイン操作抗体は、例えば、参照によりその全体が援用される米国特許第７，５２１，５４１号に記載されているように生成できる。
３．抗ＴＦ抗体薬物コンジュゲート
本明細書で提供されるのは、ＴＦに特異的に結合する抗体と細胞傷害性薬剤とを含む抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）である。一部の実施形態では、細胞傷害性薬剤は抗ＴＦ抗体に直接的に連結している。一部の実施形態では、細胞傷害性薬剤は抗ＴＦ抗体に間接的に連結している。
一部の実施形態では、ＡＤＣはさらにリンカーを含む。一部の実施形態では、リンカーは抗ＴＦ抗体を細胞傷害性薬剤に連結している。
一部の実施形態では、本明細書で提供されるＡＤＣは、１の薬物抗体比（ＤＡＲ）を有する。一部の実施形態では、本明細書で提供されるＡＤＣは、２のＤＡＲを有する。本明細書で提供されるＡＤＣは、３のＤＡＲを有する。本明細書で提供されるＡＤＣは、４のＤＡＲを有する。一部の実施形態では、本明細書で提供されるＡＤＣは、５のＤＡＲを有する。一部の実施形態では、本明細書で提供されるＡＤＣは、１～２、１～３、１～４、１～５、２～３、２～４、２～５、３～４、３～５、４～５、１、２、３、４、または５のＤＡＲを有する。一部の実施形態では、本明細書で提供されるＡＤＣは、５を超えるＤＡＲを有する。一部の実施形態では、ＤＡＲは、ＵＶ／ｖｉｓ分光法、疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）、及び／または飛行時間検出と質量特性評価を伴う逆相液体クロマトグラフィー分離（ＲＰ－ＵＰＬＣ／質量分析）によって測定される。
４．ＴＦ抗体の作製方法
４．１．ＴＦ抗原調製
本明細書で提供される抗体の単離に使用されるＴＦ抗原は、インタクトなＴＦまたはＴＦのフラグメントであってよい。ＴＦ抗原は、例えば、単離されたタンパク質または細胞の表面で発現するタンパク質の形態であってよい。
一部の実施形態では、ＴＦ抗原は、天然に存在しないアミノ酸配列または翻訳後修飾を有するＴＦタンパク質などの、ＴＦの天然に存在しないバリアントである。
一部の実施形態では、ＴＦ抗原は、例えば、細胞内または膜貫通配列、またはシグナル配列の除去によって短縮されている。一部の実施形態では、ＴＦ抗原はそのＣ末端でヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインまたはポリヒスチジンタグに融合されている。
４．２．モノクローナル抗体を作製する方法
モノクローナル抗体は、例えば、Ｋｏｈｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，１９７５，２５６：４９５－４９７ （参照によりその全体が援用される）によって最初に記載された、ハイブリドーマ法を使用して、及び／または組換えＤＮＡによって（例えば、参照によりその全体が援用される米国特許第４，８１６，５６７号を参照されたい）、得ることができる。モノクローナル抗体はまた、例えば、ファージディスプレイライブラリーを使用して（例えば、参照によりその全体が援用される米国特許第８，２５８，０８２号を参照されたい）、または代替的に酵母ベースのライブラリーを使用して（例えば、参照によりその全体が援用される米国特許第８，６９１，７３０号を参照されたい）、得ることができる。
ハイブリドーマ法では、マウス、または他の適切な宿主動物は、免疫されて免疫に使用されたタンパク質に特異的に結合する抗体を産生するか、または産生することができるリンパ球を誘発する。代替的に、リンパ球をインビトロで免疫化できる。次いで、リンパ球を、ポリエチレングリコールなどの適切な融合剤を使用して骨髄腫細胞と融合させ、ハイブリドーマ細胞を形成する。参照によりその全体が援用される、Ｇｏｄｉｎｇ Ｊ．Ｗ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ３ｒｄ ｅｄ．（１９８６） Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡを参照されたい。
ハイブリドーマ細胞を、好ましくは、未融合の親の骨髄腫細胞の増殖または生存を阻害する１つまたは複数の物質を含む適切な培養培地中に播種し、増殖させる。例えば、親の骨髄腫細胞が、酵素ヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＧＰＲＴまたはＨＰＲＴ）を欠く場合、ハイブリドーマ用の培地は、典型的には、ＨＧＰＲＴ欠損細胞の増殖を防ぐ物質である、ヒポキサンチン、アミノプテリン、及びチミジンを含む（ＨＡＴ培地）。
有用な骨髄腫細胞は、効率的に融合し、選択された抗体産生細胞による抗体の安定した高レベルの産生をサポートし、ＨＡＴ培地の有無などの培地条件に感受性である。これらのうち、好ましい骨髄腫細胞株は、ＭＯＰ－２１及びＭＣ－１１マウス腫瘍（Ｓａｌｋ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ Ｃｅｌｌ Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ Ｃｅｎｔｅｒ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡから入手可能）に由来するもの、ならびにＳＰ－２またはＸ６３－Ａｇ８－６５３細胞（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤから入手可能）などのマウス骨髄腫株である。ヒト骨髄腫及びマウス－ヒトヘテロ骨髄腫細胞株もまた、ヒトモノクローナル抗体の産生について記載されている。参照によりその全体が援用される、Ｋｏｚｂｏｒ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１９８４，１３３：３００１を参照されたい。
所望の特異性、親和性、及び／または生物活性の抗体を産生するハイブリドーマ細胞の同定後、選択されたクローンは、限界希釈手順によってサブクローニングされ、標準的な方法によって増殖することができる。Ｇｏｄｉｎｇ、前出を参照されたい。この目的のために好適な培地として、例えば、Ｄ－ＭＥＭまたはＲＰＭＩ－１６４０培地が挙げられる。さらＲＰＭＩ－１６４０に、ハイブリドーマ細胞を動物中の腹水腫瘍としてインビボで増殖させることもできる。
モノクローナル抗体をコードするＤＮＡは、従来の手順を用いて（例えば、モノクローナル抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することのできるオリゴヌクレオチドプローブを使用することによって）容易に単離してシーケンシングすることができる。したがって、ハイブリドーマ細胞は、所望の特性を有する抗体をコードするＤＮＡの有用な供給源として役立ち得る。単離したら、ＤＮＡを発現ベクターに入れ、細菌（例えば、大腸菌）、酵母（例えば、サッカロミセス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）またはピチア属（Ｐｉｃｈｉａ）種）、ＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、または他の方法では抗体を産生しない骨髄腫細胞などの宿主細胞にトランスフェクトし、モノクローナル抗体を産生する。
４．３．キメラ抗体を作製する方法
キメラ抗体を作製する例示的な方法は、例えば、参照によりその各々の全体が援用される米国特許第４，８１６，５６７号、及びＭｏｒｒｉｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１９８４，８１：６８５１－６８５５に記載されている。一部の実施形態では、キメラ抗体は、非ヒト可変領域（例えば、マウス、ラット、ハムスター、ウサギ、またはサルなどの非ヒト霊長類に由来する可変領域）をヒト定常領域と組み合わせるために組換え技術を使用することによって作製される。
４．４．ヒト化抗体を作製する方法
ヒト化抗体は、非ヒトモノクローナル抗体の構造部分の大部分または全てを対応するヒト抗体配列で置き換えることにより生成できる。その結果、抗原特異的可変、またはＣＤＲのみが非ヒト配列からなるハイブリッド分子が生成される。ヒト化抗体を得る方法には、例えば、参照によりその各々の全体が援用されるＷｉｎｔｅｒ ａｎｄ Ｍｉｌｓｔｅｉｎ，Ｎａｔｕｒｅ，１９９１，３４９：２９３－２９９；Ｒａｄｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，１９９８，９５：８９１０－８９１５；Ｓｔｅｉｎｂｅｒｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２０００，２７５：３６０７３－３６０７８；Ｑｕｅｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，１９８９，８６：１００２９－１００３３；ならびに米国特許第５，５８５，０８９号、同第５，６９３，７６１号、同第５，６９３，７６２号、及び同第６，１８０，３７０号に記載されている。
４．５．ヒト抗体を作製する方法
ヒト抗体は、例えば、トランスジェニック動物（例えば、ヒト化マウス）を使用することにより、当該技術分野で知られている様々な技術によって生成することができる。例えば、参照によりその各々の全体が援用される、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，１９９３，９０：２５５１；Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，１９９３，３６２：２５５－２５８；Ｂｒｕｇｇｅｒｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｙｅａｒ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏ．，１９９３，７：３３；ならびに米国特許第５，５９１，６６９号、同第５，５８９，３６９号、及び同第５，５４５，８０７号を参照されたい。ヒト抗体はまた、ファージディスプレイライブラリーから誘導することもできる（例えば、参照によりその各々の全体が援用される、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１９９１，２２７：３８１－３８８；Ｍａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１９９１，２２２：５８１－５９７；ならびに米国特許第５，５６５，３３２号及び同第５，５７３，９０５号を参照されたい）。ヒト抗体はまた、インビトロで活性化されたＢ細胞によって生成することもできる（例えば、参照によりその各々の全体が援用される、米国特許第５，５６７，６１０号及び同第５，２２９，２７５号を参照されたい）。ヒト抗体は、酵母ベースのライブラリーに由来することもできる（例えば、参照によりその全体が援用される米国特許第８，６９１，７３０号を参照されたい。
４．６．抗体フラグメントを作製する方法
本明細書で提供される抗体フラグメントは、本明細書に記載される例示的な方法または当該技術分野で公知の方法を含む、任意の適切な方法によって作製され得る。適切な方法には、組換え技術及び抗体全体のタンパク質分解消化が含まれる。例示的な抗体フラグメントを作製する方法は、例えば、参照によりその全体が援用されるＨｕｄｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．，２００３，９：１２９－１３４に記載されている。ｓｃＦｖ抗体を作製する方法は、例えば、参照によりその各々の全体が援用される、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ，ｉｎ Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ｖｏｌ．１１３，Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ ａｎｄ Ｍｏｏｒｅ ｅｄｓ．，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ｐｐ．２６９－３１５（１９９４）；ＷＯ９３／１６１８５；ならびに米国特許第５，５７１，８９４号及び同第５，５８７，４５８号に記載されている。
４．７．代替足場の作製方法
本明細書で提供される代替足場は、本明細書に記載される例示的な方法または当該技術分野で公知の方法を含む、任意の適切な方法によって作製され得る。例えば、Ａｄｎｅｃｔｉｎｓ（商標）を調製する方法は、参照によりその全体が援用されるＥｍａｎｕｅｌ ｅｔ ａｌ．，ｍＡｂｓ，２０１１，３：３８－４８に記載されている。ｉＭａｂを調製する方法は、参照によりその全体が援用される、米国特許出願公開第２００３／０２１５９１４号に記載されている。Ａｎｔｉｃａｌｉｎｓ（登録商標）を調製する方法は、参照によりその全体が援用されるＶｏｇｔ ａｎｄ Ｓｋｅｒｒａ，Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，２００４，５：１９１－１９９に記載されている。Ｋｕｎｉｔｚドメインを調製する方法は、参照によりその全体が援用されるＷａｇｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．＆ Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．，１９９２，１８６：１１８－１１４５に記載されている。チオレドキシンペプチドアプタマーを調製する方法は、参照によりその全体が援用されるＧｅｙｅｒ ａｎｄ Ｂｒｅｎｔ，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．，２０００，３２８：１７１－２０８に提供されている。アフィボディを調製する方法は、参照によりその全体が援用されるＦｅｒｎａｎｄｅｚ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ．，２００４，１５：３６４－３７３に提供されている。ＤＡＲＰｉｎを調製する方法は、参照によりその全体が援用されるＺａｈｎｄ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２００７，３６９：１０１５－１０２８に提供されている。Ａｆｆｉｌｉｎを調製する方法は、参照によりその全体が援用されるＥｂｅｒｓｂａｃｈ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２００７，３７２：１７２－１８５に提供されている。Ｔｅｔｒａｎｅｃｔｉｎを調製する方法は、参照によりその全体が援用されるＧｒａｖｅｒｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２０００，２７５：３７３９０－３７３９６に提供されている。Ａｖｉｍｅｒを調製する方法は、参照によりその全体が援用されるＮａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ．，２００５，２３：１５５６－１５６１に提供されている。Ｆｙｎｏｍｅｒを調製する方法は、参照によりその全体が援用されるＳｉｌａｃｃｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２０１４，２８９：１４３９２－１４３９８に提供されている。
代替足場のさらなる情報については、参照によりその各々の全体が援用される、Ｂｉｎｚ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，２００５ ２３：１２５７－１２６８；及びＳｋｅｒｒａ，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎ．ｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ．，２００７ １８：２９５－３０４に提供されている。
４．８．多重特異性抗体を作製する方法
本明細書で提供される多重特異性抗体は、本明細書に記載される例示的な方法または当該技術分野で公知の方法を含む、任意の適切な方法によって作製され得る。共通軽鎖抗体を作製する方法は、参照によりその全体が援用される、Ｍｅｒｃｈａｎｔ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，１９９８，１６：６７７－６８１に記載されている。四価二重特異性抗体を作製する方法は、参照によりその全体が援用される、Ｃｏｌｏｍａ ａｎｄ Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，１９９７，１５：１５９－１６３に記載されている。ハイブリッド免疫グロブリンを作製する方法は、参照によりその各々の全体が援用される、Ｍｉｌｓｔｅｉｎ ａｎｄ Ｃｕｅｌｌｏ，Ｎａｔｕｒｅ，１９８３，３０５：５３７－５４０；及びＳｔａｅｒｚ ａｎｄ Ｂｅｖａｎ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１９８６，８３：１４５３－１４５７に記載されている。ノブ－イントゥー－ホールを有する免疫グロブリンを作製する方法は、参照によりその全体が援用される、米国特許第５，７３１，１６８号に記載されている。静電的改変を有する免疫グロブリンを作製する方法は、参照によりその全体が援用される、ＷＯ ２００９／０８９００４に提供されている。二重特異性一本鎖抗体を作製する方法は、参照によりその各々の全体が援用される、Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒ ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｊ．，１９９１，１０：３６５５－３６５９；及びＧｒｕｂｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１９９４，１５２：５３６８－５３７４に記載されている。そのリンカー長が変化し得る一本鎖抗体を作製する方法は、参照によりその各々の全体が援用される、米国特許第４，９４６，７７８号及び同第５，１３２，４０５号に記載されている。ディアボディを作製する方法は、参照によりその全体が援用されるＨｏｌｌｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１９９３，９０：６４４４－６４４８に記載されている。トリアボディを作製する方法は、参照によりその全体が援用されるＴｏｄｏｒｏｖｓｋａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，２００１，２４８：４７－６６に記載されている。三重特異性Ｆ（ａｂ’）３誘導体を作製する方法は、参照によりその全体が援用されるＴｕｔｔ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１９９１，１４７：６０－６９に記載されている。架橋抗体を作製する方法は、参照によりその各々の全体が援用される米国特許第４，６７６，９８０号；Ｂｒｅｎｎａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９８５，２２９：８１－８３；Ｓｔａｅｒｚ，ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ，１９８５，３１４：６２８－６３１；及びＥＰ０４５３０８２に記載されている。ロイシンジッパーによって組み立てられる抗原結合ドメインを作製する方法は、参照によりその全体が援用されるＫｏｓｔｅｌｎｙ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１９９２，１４８：１５４７－１５５３に記載されている。ＤＮＬアプローチによって抗体を作製する方法は、参照によりその各々の全体が援用される、米国特許第７，５２１，０５６号；同第７，５５０，１４３号；同第７，５３４，８６６号；及び同第７，５２７，７８７号に記載されている。抗体のハイブリッドを作製する方法は、例えばそのような抗体について、参照によりその全体が援用されるＷＯ９３／０８８２９に記載されている。ＤＡＦ抗体を作製する方法は、参照によりその全体が援用される、米国特許出願公開第２００８／００６９８２０号に記載されている。還元及び酸化を介して抗体を作製する方法は、参照によりその全体が援用されるＣａｒｌｒｉｎｇ ｅｔ ａｌ．，ＰＬｏＳ Ｏｎｅ，２０１１，６：ｅ２２５３３に記載されている。ＤＶＤ－Ｉｇ（商標）を作製する方法は、参照によりその全体が援用される、米国特許第７，６１２，１８１号に記載されている。ＤＡＲＴ（商標）を作製する方法は、参照によりその全体が援用される、Ｍｏｏｒｅ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，２０１１，１１７：４５４－４５１に記載されている。ＤｕｏＢｏｄｉｅｓ（登録商標）を作製する方法は、参照によりその各々の全体が援用される、Ｌａｂｒｉｊｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，２０１３，１１０：５１４５－５１５０；Ｇｒａｍｅｒ ｅｔ ａｌ．，ｍＡｂｓ，２０１３，５：９６２－９７２；及びＬａｂｒｉｊｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，２０１４，９：２４５０－２４６３に記載されている。ＩｇＧ由来のＣＨ３のＣ末端に融合されたｓｃＦｖを含む抗体を作製する方法は、参照によりその全体が援用される、Ｃｏｌｏｍａ ａｎｄ Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，１９９７，１５：１５９－１６３に記載されている。Ｆａｂ分子が免疫グロブリンの定常領域に結合している抗体を作製する方法は、参照によりその全体が援用される、Ｍｉｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２００３，１７０：４８５４－４８６１に記載されている。ＣｏｖＸ－Ｂｏｄｙを作製する方法は、参照によりその全体が援用されるＤｏｐｐａｌａｐｕｄｉ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，２０１０，１０７：２２６１１－２２６１６に記載されている。Ｆｃａｂ抗体を作製する方法は、参照によりその全体が援用される、Ｗｏｚｎｉａｋ－Ｋｎｏｐｐ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．Ｄｅｓ．Ｓｅｌ．，２０１０，２３：２８９－２９７に記載されている。ＴａｎｄＡｂ（登録商標）抗体を作製する方法は、参照によりその各々の全体が援用される、Ｋｉｐｒｉｙａｎｏｖ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１９９９，２９３：４１－５６、及びＺｈｕｋｏｖｓｋｙ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，２０１３，１２２：５１１６に記載されている。タンデムＦａｂを作製する方法は、参照によりその全体が援用されるＷＯ２０１５／１０３０７２に記載されている。Ｚｙｂｏｄｉｅｓ（商標）を作製する方法は、参照によりその全体が援用される、ＬａＦｌｅｕｒ ｅｔ ａｌ．，ｍＡｂｓ，２０１３，５：２０８－２１８に記載されている。
４．９．バリアントを作製する方法
一部の実施形態では、本明細書で提供される抗体は、例えば、ファージディスプレイに基づく親和性成熟技術を使用して生成され得る、親抗体の親和性成熟バリアントである。簡潔に述べると、１つまたは複数のＣＤＲ残基を変異させ、バリアント抗体またはその一部をファージ上に提示し、親和性についてスクリーニングすることができる。このような改変は、ＣＤＲ「ホットスポット」、または体細胞成熟プロセス中に高頻度で変異を受けるコドンによってコードされる残基（参照によりその全体が援用される、Ｃｈｏｗｄｈｕｒｙ，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２００８，２０７：１７９－１９６を参照されたい）、及び／もしくは抗原と接触する残基で行われ得る。
エラープローンＰＣＲ、鎖シャッフリング、及びトリヌクレオチド特異的変異導入（ＴＲＩＭ）などのオリゴヌクレオチド特異的変異導入を含む、抗体をコードするポリヌクレオチド配列（複数可）に可変性を導入するために、任意の適切な方法を使用できる。一部の態様では、一部のＣＤＲ残基（他えば、一度に４～６残基）が無作為化される。抗原結合に関与するＣＤＲ残基は、例えば、アラニンスキャニング変異導入またはモデリングを用いて特異的に同定され得る。ＣＤＲ Ｈ３及びＣＤＲ Ｌ３は、変異のために特に標的化されることが多い。
可変領域及び／またはＣＤＲへの多様性の導入を使用して、二次ライブラリーを生成することができる。次いで、二次ライブラリーをスクリーニングして、改善された親和性を有する抗体バリアントを同定する。二次ライブラリーを構築及び再選択することによる親和性成熟は、例えば、参照によりその全体が援用される、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，２００１，１７８：１－３７に記載されている。
４．１０．ベクター、宿主細胞、及び組換え方法
ＴＦ抗体をコードする単離された核酸、核酸を含むベクター、ならびにベクター及び核酸を含む宿主細胞、ならびに抗体を産生するための組換え技術も提供される。
抗体の組換え産生について、それをコードする核酸（複数可）は、さらなるクローニング（すなわち、ＤＮＡの増幅）、または発現のために単離して複製可能なベクターに挿入することができる。一部の態様では、核酸は、例えば、参照によりその全体が援用される、米国特許第５，２０４，２４４号に記載されているように、相同組換えによって生成されてもよい。
多くの種々のベクターが当該技術分野において公知である。ベクター成分は、例えば、参照によりその全体が援用される、米国特許第５，５３４，６１５号に記載されるように、一般に、以下のうちの１つまたは複数を含む：シグナル配列、複製起点、１つまたは複数のマーカー遺伝子、エンハンサーエレメント、プロモーター、及び転写終結配列。
適切な宿主細胞の例示的な例を以下に提供する。これらの宿主細胞は限定を意味するものではなく、任意の適切な宿主細胞を使用して、本明細書で提供される抗体を産生することができる。
適切な宿主細胞には、任意の原核細胞（例えば、細菌）、下等真核細胞（例えば、酵母）、または高等真核細胞（例えば、哺乳動物）が含まれる。適切な原核生物には、グラム陰性またはグラム陽性生物などの真正細菌、例えば、エシェリキア属（大腸菌）、エンテロバクター属、エルウィニア属、クレブシエラ属、プロテウス属、サルモネラ属（Ｓ．チフィリウム（Ｓ．ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ））、セラチア属（Ｓ．マルセセンス（Ｓ．ｍａｒｃｅｓｃａｎｓ））、シゲラ属、バシラス属（Ｂ．サブチリス（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）及びＢ．リケニフォルミス（Ｂ．ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ））、シュードモナス属（Ｐ．エルギノーサ（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ））、ならびにストレプトマイセス属が含まれる。１つの有用な大腸菌クローニング宿主は大腸菌 ２９４であるが、大腸菌Ｂ、大腸菌Ｘ１７７６、及び大腸菌Ｗ３１１０などの他の系統もまた適切である。
原核生物に加えて、糸状菌または酵母などの真核微生物も、ＴＦ抗体をコードするベクターの適切なクローニングまたは発現宿主である。サッカロミセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）、または一般的なパン酵母は、一般的に使用されている下等真核生物の宿主微生物である。しかしながら、サッカロミセス・ポンベ（Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｐｏｍｂｅ）、クリベロミセス属（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ）（Ｋ．ラクチス（Ｋ．ｌａｃｔｉｓ）、Ｋ．フラジリス（Ｋ．ｆｒａｇｉｌｉｓ）、Ｋ．ブルガリクス（Ｋ．ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ）、Ｋ．ウイッケルアミイ（Ｋ．ｗｉｃｋｅｒａｍｉｉ）、Ｋ．ワルティイ（Ｋ．ｗａｌｔｉｉ）、Ｋ．ドロソフィラム（Ｋ．ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａｒｕｍ）、Ｋ．サ－モトレランス（Ｋ．ｔｈｅｒｍｏｔｏｌｅｒａｎｓ）、及びＫ．マルキサアヌス（Ｋ．ｍａｒｘｉａｎｕｓ））、ヤロウイア属（Ｙａｒｒｏｗｉａ）、ピチア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ）、カンジダ属（Ｃａｎｄｉｄａ）（Ｃ．アルビカンス（Ｃ．ａｌｂｉｃａｎｓ））、トリコデルマ・リーゼイ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｉａ）、アカパンカビ（Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ ｃｒａｓｓａ）、シュワンニオミセス属（Ｓｃｈｗａｎｎｉｏｍｙｃｅｓ）（Ｓ．オクシデンタリス（Ｓ．ｏｃｃｉｄｅｎｔａｌｉｓ））、ならびに糸状菌、例えば、ペニシリウム属（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ）、トリポクラディウム属（Ｔｏｌｙｐｏｃｌａｄｉｕｍ）、ならびにアスペルギルス属（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）（Ａ．ニデュランス（Ａ．ｎｉｄｕｌａｎｓ）及びＡ．ニガー（Ａ．ｎｉｇｅｒ））などの他の多くの属、種、及び系統が利用可能であり、有用である。
有用な哺乳動物宿主細胞には、ＣＯＳ－７細胞、ＨＥＫ２９３細胞、ベビーハムスター腎臓（ＢＨＫ）細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）、マウスセルトリ細胞、アフリカミドリザル腎臓細胞（ＶＥＲＯ－７６）などが含まれる。
本発明のＴＦ抗体を産生するために使用される宿主細胞は、様々な培地で培養できる。例えば、Ｈａｍ’ｓ Ｆ１０、基礎培地（ＭＥＭ）、ＲＰＭＩ－１６４０、ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）などの市販の培地は、宿主細胞の培養に適している。さらに、Ｈａｍ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚ．，１９７９，５８：４４；Ｂａｒｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１９８０，１０２：２５５；、ならびに米国特許第４，７６７，７０４号、同第４，６５７，８６６号、同第４，９２７，７６２号、同第４，５６０，６５５号、及び同第５，１２２，４６９号；またはＷＯ９０／０３４３０及びＷＯ８７／００１９５に記載されている培地のうちの任意のものを使用できる。前述の参照文献の各々は、参照によりその全体を援用する。
これらの培地はいずれも、必要に応じて、ホルモン及び／または他の増殖因子（インスリン、トランスフェリン、もしくは上皮細胞増殖因子など）、塩類（塩化ナトリウム、カルシウム、マグネシウム、及びリン酸など）、緩衝液（ＨＥＰＥＳなど）、ヌクレオチド（アデノシン及びチミジンなど）、抗生物質、微量元素（通常、マイクロモル範囲の最終濃度で存在する無機化合物として定義される）、ならびにグルコースまたは同等のエネルギー源を補充できる。任意の他の必要なサプリメントも、当業者に知られているであろう適切な濃度で含まれ得る。
温度、ｐＨなどのような培養条件は、発現のために選択された宿主細胞で以前に使用されたものであり、当業者には明らかであろう。
組換え技術を使用する場合、抗体は細胞内、ペリプラズム空間で産生されるか、または培地に直接分泌される。抗体が細胞内で産生される場合、最初のステップとして、宿主細胞または溶解フラグメントのいずれかである粒子状残屑が、例えば遠心分離または限外濾過によって除去される。例えば、Ｃａｒｔｅｒ ｅｔ ａｌ．（参照によりその全体が援用される、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１９９２，１０：１６３－１６７）は、大腸菌のペリプラズム空間に分泌される抗体を単離するための手順を記載している。簡潔に述べると、細胞ペーストは、酢酸ナトリウム（ｐＨ３．５）、ＥＤＴＡ、及びフェニルメチルスルホニルフルオリド（ＰＭＳＦ）の存在下で約３０分かけて解凍される。細胞残屑は遠心分離により除去することができる。
一部の実施形態では、抗体は無細胞系において産生される。一部の態様では、無細胞系は、参照によりその全体が援用される、Ｙｉｎ ｅｔ ａｌ．，ｍＡｂｓ，２０１２，４：２１７－２２５に記載されているような、インビトロ転写及び翻訳系である。一部の態様では、無細胞系は、真核細胞由来または原核細胞由来の無細胞抽出物を利用する。一部の態様では、原核細胞は大腸菌である。抗体の無細胞発現は、例えば、抗体が細胞内に不溶性凝集物として蓄積する場合、またはペリプラズム発現からの収量が低い場合に有用であり得る。
抗体が培地に分泌される場合、そのような発現系からの上清は、通常、最初に市販のタンパク質濃縮フィルター、例えばＡｍｉｃｏｎ（登録商標）またはＭｉｌｌｉｐｏｒｅ（登録商標）Ｐｅｌｌｃｏｎ（登録商標）限外濾過ユニットを使用して濃縮される。ＰＭＳＦなどのプロテアーゼ阻害物質は、タンパク質分解を阻害するために前述のステップのいずれかに含まれてもよく、抗生物質は、外来性汚染物質の増殖を防ぐために含まれてもよい。
細胞から調製された抗体組成物は、例えば、ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析、及びアフィニティークロマトグラフィーを用いて精製でき、ここでアフィニティークロマトグラフィーが特に有用な精製技術である。親和性リガンドとしてのプロテインＡの適合性は、抗体中に存在する任意の免疫グロブリンＦｃドメインの種及びアイソタイプに依存する。プロテインＡは、ヒトγ１、γ２、またはγ４重鎖を含む抗体の精製に使用できる（参照によりその全体が援用される、Ｌｉｎｄｍａｒｋ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．，１９８３，６２：１－１３）。プロテインＧは、全てのマウスアイソタイプ及びヒトγ３に有用である（参照によりその全体が援用される、Ｇｕｓｓ ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｊ．，１９８６，５：１５６７－１５７５）。
親和性リガンドが付着するマトリックスは、ほとんどの場合はアガロースであるが、他のマトリックスも利用可能である。制御細孔ガラスまたはポリ（スチレンジビニル）ベンゼン等の機械的に安定なマトリックスは、アガロースで達成され得るよりも速い流速及び短い処理時間を可能にする。抗体がＣＨ３ドメインを含む場合、Ｂａｋｅｒｂｏｎｄ ＡＢＸ（登録商標）樹脂が精製に有用である。
イオン交換カラムでの分画、エタノール沈殿、逆相ＨＰＬＣ、シリカでのクロマトグラフィー、ヘパリンＳｅｐｈａｒｏｓｅ（登録商標）でのクロマトグラフィー、クロマトフォーカシング、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、及び硫酸アンモニウム沈殿など、タンパク質精製の他の技法も利用でき、当業者によって適用され得る。
任意の予備精製ステップ（複数可）に続いて、対象の抗体及び混入物を含む混合物を、約２．５～約４．５の間のｐＨで、一般に低塩濃度（例えば約０～約０．２５Ｍ塩）の溶離緩衝液を用いる低ｐＨ疎水性相互作用クロマトグラフィーに供することができる。
５．細胞傷害性薬剤
一部の実施形態では、本明細書において提供されるＡＤＣは細胞傷害性薬剤を含む。細胞傷害性薬剤は、炎症性疾患（例えば、自己免疫障害）を有する患者に対して検討され得る。本明細書で提供される細胞傷害性薬剤は、当該技術分野で公知の様々な免疫抑制性の抗腫瘍剤または抗がん剤を含む。一部の実施形態では、細胞傷害性薬剤は、がん細胞または免疫細胞の破壊を引き起こす。
適切な細胞傷害性薬剤には、抗血管新生剤、アポトーシス促進剤、抗有糸分裂剤、抗キナーゼ剤、アルキル化剤、ホルモン、ホルモンアゴニスト、ホルモンアンタゴニスト、ケモカイン、薬物、プロドラッグ、毒素、酵素、代謝拮抗剤、抗生物質、アルカロイド、及び放射性同位元素が含まれる。
一部の実施形態では、細胞傷害性薬剤は、カリケアマイシン、カンプトテシン、カルボプラチン、イリノテカン、ＳＮ－３８、カルボプラチン、カンプトテカン、シクロホスファミド、シタラビン、ダカルバジン、ドセタキセル、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、ドキソルビシン、エトポシド、イダルビシン、トポテカン、ビンカアルカロイド、メイタンシノイド、メイタンシノイド類似体、ピロロベンゾジアゼピン、タキソイド、デュオカルマイシン、ドラスタチン、オーリスタチン及びそれらの誘導体のうちの少なくとも１つを含む。ある特定の実施形態では、細胞傷害性薬剤は、モノメチルオーリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）である。
一部の実施形態では、細胞傷害性薬剤は、放射性同位元素、金属キレート剤、酵素、蛍光化合物、生物発光化合物、または化学発光化合物などの診断薬である。
一部の実施形態では、細胞傷害性薬剤は、例えば、ＸＭＴ－１２６７などの改善された安全性プロファイルの細胞傷害性ペイロード、及びＴｒａｉｌ ｅｔ ａｌ．，Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｔｈｅｒ，２０１８，１８１：１２６－１４２に記載されているような他の細胞傷害性ペイロードである。
６．リンカー
一部の実施形態では、本明細書において提供されるＡＤＣはリンカーを含む。一部の実施形態では、非結合リンカーは２つの反応性末端、抗体コンジュゲーション反応性末端及び細胞傷害性薬剤コンジュゲーション反応性末端を含む。リンカーの抗体コンジュゲーション反応性末端は、抗体のシステインチオールまたはリジンアミン基、通常は二重結合などのチオール反応基、クロロ、ブロモ、もしくはヨードなどの脱離基、Ｒ－スルファニル基もしくはスルホニル基、またはカルボキシル基などのアミン反応性基を介して抗体にコンジュゲートできる。リンカーの細胞傷害性薬剤コンジュゲーション反応性末端は、サイトトキシン上の塩基性アミンまたはカルボキシル基、通常はカルボキシル基または塩基性アミン基とのアミド結合の形成を通じて細胞傷害性薬剤にコンジュゲートできる。
一部の実施形態では、リンカーはカテプシン切断不可能なリンカーである。一部の実施形態では、リンカーは切断可能なリンカーである。一部の実施形態では、細胞傷害性薬剤がＡＤＣから細胞内に放出される。
ＡＤＣの適切なリンカーには、不安定なリンカー、酸に不安定なリンカー（例えば、ヒドラゾンリンカー）、光に不安定なリンカー、荷電リンカー、ジスルフィド含有リンカー、ペプチダーゼ感受性リンカー（例えば、シトルリン－バリンまたはフェニルアラニン－リジンなどのバリン及び／またはシトルリンなどのアミノ酸を含むペプチドリンカー）、β－グルクロニドリンカー（例えば、Ｇｒａａｆ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒ Ｐｈａｒｍ Ｄｅｓ，２００２，８：１３９１－１４０３を参照されたい）、ジメチルリンカー（例えば、Ｃｈａｒｉ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１９９２，５２：１２７－１３１；米国特許第５，２０８，０２０号を参照されたい）、チオ－エーテルリンカー、または親水性リンカー（例えば、Ｋｏｖｔｕｎ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，２０１０，７０：２５２８－２５３７を参照されたい）が含まれる。ある特定の実施形態では、細胞傷害性薬剤は、バリン－シトルリン（ｖｃ）リンカーを使用して抗体にコンジュゲートされる。
７．抗体薬物コンジュゲートを作製する方法
本明細書で提供される抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）は、ＢＭＰＳ、ＥＭＣＳ、ＧＭＢＳ、ＨＢＶＳ、ＬＣ－ＳＭＣＣ、ＭＢＳ、ＭＰＢＨ、ＳＢＡＰ、ＳＩＡ、ＳＩＡＢ、ＳＭＣＣ、ＳＭＢＰ、ＳＭＰＨ、スルホ－ＥＭＣＳ、スルホ－ＧＭＢＳ、スルホ－ＫＭＵＳ、スルホ－ＭＢＳ、スルホＳＩＡＢ、スルホ－ＳＭＣＣ、及びスルホ－ＳＭＰＢ、及びＳＶＳＢ（スクシンイミジル－（４－ビニルスルホン）ベンゾエート））などの様々な二機能性タンパク質カップリング剤を使用して作製できる。例えば、リシン免疫毒素は、Ｖｉｔｅｔｔａ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９８７，２３８：１０９８に記載されるように調製することができる。さらに、ＡＤＣは、当該技術分野、例えば、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，２ｎｄ Ｅｄ．，Ｇ．Ｔ．Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ，ｅｄ．，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，２００８に開示されているような任意の適切な方法を使用して調製することができる。
一部の実施形態では、ＡＤＣは部位特異的コンジュゲーション技法で作製され、均一な薬物ローディングをもたらし、抗原結合または薬物動態が変動したＡＤＣサブポピュレーションを回避する。一部の実施形態では、重鎖と軽鎖の位置にシステイン置換を含む「チオマブ」は、免疫グロブリンの折りたたみと組み立てを妨害せず、抗原結合を変更しない反応性チオール基を提供するように設計されている（Ｊｕｎｕｔｕｌａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．，２００８，３３２：４１－５２；Ｊｕｎｕｔｕｌａ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，２００８，２６：９２５－９３２）。一部の実施形態では、セレノシステインは、終止からセレノシステイン挿入までに停止コドンＵＧＡを再コード化することにより、抗体配列に共翻訳的に挿入され、他の天然アミノ酸の存在下でセレノシステインの求核セレノールグループでの部位特異的共有コンジュゲーションを可能にする（例えば、Ｈｏｆｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，２００８，１０５：１２４５１－１２４５６；Ｈｏｆｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００９，４８（５０）：１２０４７－１２０５７を参照されたい）。ある特定の実施形態では、ＡＤＣはＢｅｈｒｅｎｓ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ Ｐｈａｒｍ，２０１５，１２：３９８６－９８に記載されているように合成された。
８．アッセイ
当該技術分野で知られている様々なアッセイを使用して、本明細書で提供される抗ＴＦ抗体及び抗ＴＦ ＡＤＣを同定及び特徴付けることができる。
８．１．結合、競合、エピトープマッピングアッセイ
本明細書で提供される抗体の特異的抗原結合活性は、本開示のいずこかに記載するように、ＳＰＲ、ＢＬＩ、ＲＩＡ、及びＭＳＤ－ＳＥＴの使用を含む、任意の適切な方法によって評価することができる。さらに、抗原結合活性はＥＬＩＳＡアッセイ及びウエスタンブロットアッセイによって評価することができる。
２つの抗体、または抗体と別の分子（例えば、ＴＦの１つまたは複数のリガンド）の間の競合を測定するためのアッセイは、本開示のいずこか、及び、例えば、参照によりその全体が援用されるＨａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ ｃｈ．１４，１９８８，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙに記載されている。
本明細書で提供される抗体が結合するエピトープをマッピングするためのアッセイは、例えば、参照によりその全体が援用される、Ｍｏｒｒｉｓ “Ｅｐｉｔｏｐｅ Ｍａｐｐｉｎｇ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，” ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ｖｏｌ．６６，１９９６，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，Ｎ．Ｊ．に記載されている。一部の実施形態では、エピトープはペプチド競合によって決定される。一部の実施形態では、エピトープは質量分析によって決定される。一部の実施形態では、エピトープは結晶学によって決定される。
８．２．トロンビン生成、ＦＸａ変換、及びＴＦシグナル伝達アッセイ
本明細書で提供される抗体の存在下でのトロンビン生成は、本開示のいずこかに記載されているように、トロンビン生成アッセイ（ＴＧＡ）によって判定することができる。
本明細書で提供される抗体の存在下でＦＸａ変換を測定するためのアッセイは、本開示のいずこかに記載されている。
ＴＦシグナル伝達の阻害は、ＩＬ８及びＧＭ－ＣＳＦなどのＴＦシグナル伝達によって調節されるサイトカインの産生を測定することによって決定できる。ＩＬ８及び／またはＧＭ－ＣＳＦレベルを決定するためのアッセイは、本開示のいずこか、及び、例えば、Ｈｊｏｒｔｏｅ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，２００４，１０３：３０２９－３０３７に提供されている。
８．３．エフェクター機能のアッセイ
本明細書で提供される抗体による処理後のエフェクター機能は、参照によりその各々の全体が援用される、Ｒａｖｅｔｃｈ ａｎｄ Ｋｉｎｅｔ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１９９１，９：４５７－４９２；米国特許第５，５００，３６２，５，８２１，３３７号；Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１９８６，８３：７０５９－７０６３；Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１９８５，８２：１４９９－１５０２；Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１９８７，１６６：１３５１－１３６１；Ｃｌｙｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１９９８，９５：６５２－６５６；ＷＯ２００６／０２９８７９；ＷＯ２００５／１００４０２；Ｇａｚｚａｎｏ－Ｓａｎｔｏｒｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，１９９６，２０２：１６３－１７１；Ｃｒａｇｇ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，２００３，１０１：１０４５－１０５２；Ｃｒａｇｇ ｅｔ ａｌ．Ｂｌｏｏｄ，２００４，１０３：２７３８－２７４３；及びＰｅｔｋｏｖａ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ’ｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２００６，１８：１７５９－１７６９に記載されているものを含む、当該技術分野で公知の様々なインビトロ及びインビボアッセイを使用して評価することができる。
８．４．細胞傷害性アッセイ及びインビボ研究
本明細書で提供される抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）の細胞傷害性を評価するためのアッセイは、本開示のいずこかに記載されている。
本明細書で提供されるＡＤＣのインビボ効力を評価するための免疫不全マウスにおける異種移植片研究は、本開示のいずこかに記載されている。
ＡＤＣのインビボ効力を評価するための免疫適格マウスにおける同系研究は、本開示のいずこかに記載されている。
８．５．免疫組織化学（ＩＨＣ）アッセイ
患者試料におけるＴＦ発現を評価するための免疫組織化学（ＩＨＣ）アッセイは、本開示のいずこかに記載されている。
８．６．キメラコンストラクトマッピング及びエピトープビニングアッセイ
本明細書で提供される抗ヒトＴＦ抗体間のエピトープ結合の相違は、本開示のいずこかに記載されるように、キメラＴＦコンストラクトマッピング実験及びエピトープビニングアッセイによって決定され得る。
９．医薬組成物
本明細書で提供される抗体は、任意の適切な医薬組成物に製剤化され、任意の適切な投与経路によって投与され得る。医薬組成物の投与経路は既知の方法に従うことができ、こうした方法は、例えば、経口的なもの、静脈内経路、腹腔内経路、脳内（実質内）経路、脳室内経路、筋肉内経路、眼内経路、動脈内経路、門脈内経路、病巣内経路による注射を介するもの、持続放出系または植込みデバイスによる髄内、くも膜下腔内、心室内、経皮、皮下、腹腔内、鼻腔内、腸内、局所、舌下、尿道、腟、または直腸への手法である。望まれる場合、組成物は、ボーラス注射によって投与されるか、または注入もしくは植込みデバイスによって連続的に投与され得る。ある特定の実施形態では、適切な投与経路には、動脈内、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内、鼻腔内、非経口、局所、肺、及び皮下経路が含まれるが、これらに限定されない。
医薬組成物は、１つまたは複数の医薬賦形剤を含み得る。任意の適切な医薬賦形剤を使用することができ、当業者は適切な医薬賦形剤を選択することができる。したがって、以下に提供される医薬賦形剤は、例示的であり、限定的ではないことが意図されている。追加の医薬品添加剤には、例えば、参照によりその全体が援用される、Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ，Ｒｏｗｅ ｅｔ ａｌ．（Ｅｄｓ．） ６ｔｈ Ｅｄ．（２００９）に記載されているものが含まれる。
９．１．非経口剤形
ある特定の実施形態では、ここに提供される抗体は非経口剤形として製剤化される。非経口剤形は、皮下、静脈内（注入及びボーラス注射を含む）、筋肉内、及び動脈内を含むがこれらに限定されない様々な経路によって対象に投与することができる。それらの投与は通常、汚染物質に対する対象の自然な防御を回避するため、非経口剤形は、通常、無菌であるか、または対象への投与前に滅菌することができる。非経口剤形の例には、注射の準備ができている溶液、注射用の薬学的に許容される媒体に溶解または懸濁する準備ができている乾燥（例えば、凍結乾燥）製品、注射の準備ができている懸濁液、及び乳濁液が含まれるが、これらに限定されない。
１０．投与量及び単位剤形
ヒトの治療では、予防的または治療的な治療法、及び治療される対象に固有の年齢、体重、状態、その他の要因に応じて、医師が最も適切と考える薬量を決定する。
ある特定の実施形態では、本明細書で提供される組成物は、医薬組成物または単回単位剤形である。本明細書で提供される医薬組成物及び単回単位剤形は、予防的または治療的有効量の１つまたは複数の予防的または治療的抗体またはＡＤＣを含む。
障害またはその１つまたは複数の症状の予防または治療に効果的である抗体／ＡＤＣまたは組成物の量は、疾患または状態の性質及び重症度、ならびに抗体／ＡＤＣが投与される経路によって変動し得る。頻度及び投与量はまた、投与される特定の治療法（例えば、治療剤または予防剤）、障害、疾患、または状態の重症度、投与経路、ならびに対象の年齢、体重、応答性、過去の病歴に応じて、各対象に特有の要因によって異なり得る。有効量は、インビトロまたは動物モデル試験系から得られた用量反応曲線から推定することができる。
当業者には容易に分かるように、異なる治療的有効量は、異なる疾患及び状態に適用可能であり得る。同様に、そのような障害を予防、管理、治療、または改善するのに十分であるが、本明細書で提供される抗体またはＡＤＣに関連する副作用を引き起こすのに不十分、またはそれを軽減するのに十分な量も、本明細書で提供される投薬量及び投与頻度スケジュールに包含される。さらに、対象が本明細書で提供される組成物の複数回の投与量を投与される場合、投与量の全てが同じである必要はない。例えば、対象に投与される投与量は、組成物の予防効果または治療効果を改善するために増加され得るか、または特定の対象が経験している１つまたは複数の副作用を低減するために減少され得る。
本開示のいずこかでより詳細に論じられるように、本明細書で提供される抗体またはＡＤＣは、任意選択で、疾患または障害を予防または治療するのに有用な１つ以上または複数の追加の薬剤と共に投与され得る。そのような追加の薬剤の有効量は、製剤中に存在するＡＤＣの量、障害または治療の種類、及び当該技術分野で公知のまたは本明細書に記載の他の要因に依存し得る。
１１．治療用途
治療用途では、本発明の抗体は、当該技術分野で公知のもの及び上述したものなどの薬学的に許容される剤形で、対象、一般には哺乳動物、一般にはヒトに投与される。例えば、本発明の抗体は、ボーラスとして静脈内に、または一定期間にわたる連続注入によって、硝子体内、腹腔内、脳脊髄内、皮下、関節内、関節滑液嚢内、髄腔内、腫瘍内、または局所経路で対象に投与することができる。ある特定の実施形態では、投与は、抗体、またはそうした抗体をコードするｃＤＮＡを有する発現ベクターを静脈内、筋肉内、腫瘍内、皮下、関節滑液嚢内、眼内、プラーク内、または皮内に注射するものである。ベクターは、抗体をコードするｃＤＮＡを有する複製欠損アデノウイルスベクター、レトロウイルスベクター、または他のウイルスベクターであり得る。
一部の実施形態では、抗体をコードするｃＤＮＡを有する１つ以上の複製欠損アデノウイルスベクターまたは１つ以上のアデノ随伴ベクターを有効量で用いて患者が治療される。
本明細書で提供される抗体は、ＴＦが関与する炎症性疾患の治療に有用であり得る。使用される「炎症性疾患」という用語は、炎症（局所性または全身性の急性または慢性のもの）によって特徴付けられる任意の疾患、障害、損傷、または状態を広く指す。使用される「炎症性疾患」は、自己免疫疾患も包含する。さらに、使用される「炎症性疾患」という用語は、炎症の症状も包含する。
炎症の症状の例としては、限定されないが、炎症性のサイトカイン及びケモカイン（局所性または全身性のもの）の濃度または発現の増加、腫脹、疼痛、線維化、赤血球沈降速度（ＥＳＲ）の増加、罹患部位または損傷部位（例えば、肺の間質液、肺胞、急性損傷部位など）への単核細胞及び／または顆粒球の浸潤、脾臓の肥大、体重減少、パルスオキシメトリを使用して決定される低酸素血症（呼吸器系に影響を与える炎症性疾患を示す）、肺胞液クリアランスの低下、便の硬さの変化（例えば、対象の便の軟化）、下痢（例えば、慢性下痢）、血便、潜血、炎症部位または損傷部位での発赤（赤み）、炎症部位または損傷部位での熱（熱の上昇）、炎症部位もしくは損傷部位または疾患臓器での機能喪失（機能の喪失）、発疹、頭痛、発熱、嘔気、あるいは局所性の組織損傷または細胞損傷が挙げられる。
本開示の方法を使用する炎症性疾患の治療は、炎症性疾患の有害症状の１つ以上を低減もしくは改善するか、または炎症性疾患の罹患もしくは進行と関連する他の作用を低減もしくは改善する。
症例によっては、総白血球数の増加は、炎症性疾患（例えば、大腸炎、炎症性腸疾患、関節炎、急性肺損傷、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、及び呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ））の症状である。ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体またはＡＤＣを投与すると、抗体またはＡＤＣは、ベースラインレベル及び／または別の抗炎症剤と比較して総白血球数を、例えば、少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％低減する。総白血球数を測定するための方法は当該技術分野で知られている。ある特定の実施形態では、総白血球数は、光学顕微鏡法を使用して決定される。
症例によっては、総顆粒球数（例えば、総好中球数、総好酸球数、総好塩基球数）の増加は、炎症性疾患（例えば、大腸炎、炎症性腸疾患、関節炎、急性肺損傷、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、及び呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ））の症状である。ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体またはＡＤＣを投与すると、抗体またはＡＤＣは、ベースラインレベル及び／または別の抗炎症剤と比較して、総顆粒球数を、例えば、少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％低減する。総顆粒球数を測定するための方法は当該技術分野で知られている。ある特定の実施形態では、総顆粒球数は、組織試料または血清試料に対する免疫組織化学（ＩＨＣ）分析を使用して決定される。ある特定の実施形態では、総顆粒球数は、気管支肺胞洗浄（ＢＡＬ）液細胞分画カウントを使用して決定される。ＢＡＬ液の細胞分画カウント及び分析を実施するための方法は当該技術分野で知られている（例えば、Ｃｈｏｉ ＳＨ，ｅｔ ａｌ．ＰＬｏＳ Ｏｎｅ．２０１４；９（５）：ｅ９７３４６（その全体が参照によって組み込まれる）を参照のこと）。
症例によっては、総単核細胞数（例えば、総マクロファージ数、総リンパ球数）の増加は、炎症性疾患（例えば、大腸炎、炎症性腸疾患、関節炎、急性肺損傷、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、及び呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ））の症状である。ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体またはＡＤＣを投与すると、抗体またはＡＤＣは、ベースラインレベル及び／または別の抗炎症剤と比較して総単核細胞数を、例えば、少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％低減する。総単核細胞数を測定するための方法は当該技術分野で知られている。ある特定の実施形態では、総単核細胞数は、組織試料または血清試料に対する免疫組織化学（ＩＨＣ）分析を使用して決定される。ある特定の実施形態では、総単核細胞数は、気管支肺胞洗浄（ＢＡＬ）液細胞分画カウントを使用して決定される。ＢＡＬ液の細胞分画カウント及び分析を実施するための方法は当該技術分野で知られている（例えば、Ｃｈｏｉ ＳＨ，ｅｔ ａｌ．ＰＬｏＳ Ｏｎｅ．２０１４；９（５）：ｅ９７３４６（その全体が参照によって組み込まれる）を参照のこと）。
ある特定の実施形態では、本開示の抗体またはＡＤＣでの治療は、Ｍ１マクロファージを減少させ、及び／またはＭ２マクロファージを減少させる。ある特定の実施形態では、本開示の抗体またはＡＤＣでの治療は、Ｍ１マクロファージを減少させ、及び／またはＭ２マクロファージを増加させる。ある特定の炎症性疾患では、Ｍ２マクロファージの増加は、疾患の無症候状態または疾患の退行と関連している（Ｈｕ，Ｋｅｂｉｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２０１８（その全体が参照によって組み込まれる）を参照のこと）。
症例によっては、脾腫（脾臓の肥大）は、炎症性疾患の症状である。ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体またはＡＤＣを投与すると、抗体またはＡＤＣは、ベースラインレベルまたは異なる抗炎症剤と比較して脾臓の重量を低減するか、脾臓のサイズを低減するか、または脾腫を除去する／好転させる。臨床現場では、脾臓の重量を測定することは非現実的であり得る。そのような場合、脾腫の進行（または好転）は、当該技術分野で知られる方法（例えば、触診、打診、超音波、コンピューター断層撮影（ＣＴ）、または磁気共鳴画像法（ＭＲＩ））を使用して測定できる。超音波、コンピューター断層撮影（ＣＴ）、及び磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）は、脾臓を視覚化することを可能にする。超音波またはコンピューター断層撮影（ＣＴ）は、脾臓のサイズの決定及び脾臓が他の臓器を圧迫しているかどうかの決定に役立つ。磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）は、脾臓を通過する血流を医師が追跡することを可能にする。
症例によっては、線維化（例えば、肺組織の線維化または炎症部位の線維化）は、炎症性疾患の症状である。線維化は、慢性炎症を特徴付けるものであることが多い。ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体またはＡＤＣを投与すると、抗体またはＡＤＣは、ベースラインレベルまたは異なる抗炎症剤と比較して線維化（例えば、肺、皮膚、または肝臓の線維化）を低減する。線維化の変化は、組織のＩＨＣ分析を使用するか、または定量的高分解能コンピューター断層撮影法（ｑＨＲＣＴ）によって測定できる。
症例によっては、赤血球沈降速度（ＥＳＲ）の増加は、炎症性疾患の指標である。ＥＳＲは、抗凝固処理全血中の赤血球が規格化チューブ中で１時間にわたって沈む速度である。ＥＳＲは一般的な血液学的検査であり、非特異的な炎症尺度である。ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体またはＡＤＣを投与すると、抗体またはＡＤＣは、ベースラインレベル及び／または別の抗炎症剤と比較してＥＳＲを、例えば、少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％低減する。
症例によっては、便の硬さの変化、便の軟化、及び／または下痢は、炎症性疾患（例えば、大腸炎、炎症性腸疾患（ＩＢＤ））の症状（複数可）である。例えば、炎症性疾患を有する対象では、ブリストル便性状チャートで４超、５超、または６超として分類される軟便が生じ得る。ブリストル便形状スケール（ＢＳＦＳ）またはブリストル便性状チャートは、成人において腸通過時間を評価する方法として開発された（Ｌｅｗｉｓ Ｓ Ｊ，ｅｔ ａｌ．，Ｓｃａｎｄ Ｊ Ｇａｓｔｒｏｔｒｎｔｅｒｏｌ，３２：９２０－９２４（１９９７）（その全体が参照によって組み込まれる）を参照のこと）。ＢＳＦＳまたはブリストル便性状チャートは、縦に並んだ様々な便型の二次元描写から構成されるペーパーチャートスケールであり、各便型は、各便型についてのテキスト記述と共に描写されている。ＢＳＦＳは、臨床ケアにおいて機能性胃腸障害（ＦＧＩＤ）患者に広く使用されている。便の硬さを測定するための方法及びデバイスの一例は、ＵＳ出願第１３／５９２，９０６号において提供されており、当該文献は、その全体が参照によって組み込まれる。炎症性疾患（例えば、大腸炎、ＩＢＤ）を有する対象に軟便が生じている場合、本明細書で提供される抗体またはＡＤＣを投与すると、抗体またはＡＤＣは、ベースラインレベル及び／または異なる抗炎症剤と比較して便を硬化させる。ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体またはＡＤＣを投与すると、抗体またはＡＤＣは、ＢＳＦＳで３として分類される便の硬さを与える。本明細書で提供される抗体またはＡＤＣでの治療によって改善され得る他のエンドポイントまたは症状には、血便、排便回数、便意切迫感及び重症度、ならびに腹痛が含まれる。
症例によっては、血便及び／または潜血は、炎症性疾患（例えば、大腸炎またはＩＢＤ）の症状である。血便は、肛門から血液が（典型的には、便中にまたは便と共に）排出されることである。血便は、便を視覚的に調べることによって決定できる。対照的に、潜血は、視覚的に明らかでない便中血液であり、炎症性疾患を示すものでもあり得る。便中の血液（具体的には、潜血）の量の変化を決定するためのより正確な方法は、ヘモカルト検査、便潜血検査、または免疫化学的血球凝集検査を使用することによるものである。ヘモカルト検査を実施するための方法は当該技術分野で知られている（例えば、この検査は、ヘモカルトスライドキット（ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ，Ｉｎｃ．）及び製造者の説明を使用して実施できる）。当該技術分野では免疫化学的血球凝集検査を実施するための方法も知られており、この方法では、ヒトヘモグロビンに特異的な抗体が検出に利用される。
症例によっては、正味の肺胞液クリアランス（ＡＦＣ）の低下またはＡＦＣ機能障害は、炎症性疾患（例えば、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）及び急性肺損傷）の症状である。ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体またはＡＤＣを投与すると、抗体またはＡＤＣは、ベースラインレベルまたは異なる抗炎症剤と比較してＡＦＣを増加させる。ＡＦＣは、当該技術分野で知られる方法（例えば、一連の浮腫液タンパク質濃度を測定するもの）を使用して測定できる。一連の浮腫液タンパク質濃度の測定を使用するＡＦＣ変化を決定するための方法については、例えば、Ｗａｒｅ，Ｌ．Ｂ．ａｎｄ Ｍｉｃｈａｅｌ，Ｍ．Ａ．，Ａｍｅｒｉｃａｎ ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ａｎｄ ｃｒｉｔｉｃａｌ ｃａｒｅ ｍｅｄｉｃｉｎｅ，１６３．６（２００１）：１３７６－１３８３に示されており、当該文献は、その全体が参照によって組み込まれる。
炎症は、複数の細胞、組織、もしくは臓器、または単一細胞型、組織型、もしくは臓器型に対して細胞損傷、組織損傷、または臓器損傷を直接的または間接的に引き起こし得る。損傷を示し得る組織及び臓器の例は、炎症性疾患によるものであり、上皮組織もしくは粘膜組織、胃腸管、腸、膵臓、胸腺、肝臓、腎臓、脾臓、皮膚、または骨格関節（例えば、膝、足首、尻、肩、手首、指、つま先、または肘）が挙げられる。本開示による治療は、組織損傷を低減もしくは抑制し得るか、または損傷した臓器もしくは組織（例えば、皮膚、粘膜、肝臓、肺など）の再生をもたらし得る。
図１は、ヒトにおけるＡＬＩ及びＡＲＤＳの特徴／症状の例を示す（Ｍａｔｕｔｅ－Ｂｅｌｌｏ ２００８ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ（その全体が参照によって組み込まれる）を参照のこと）。
一部の実施形態では、本明細書で提供されるのは、本明細書で提供される抗体またはＡＤＣの有効量を対象に投与することにより、それを必要とする対象の炎症性疾患の発症を遅延する方法である。
一部の実施形態では、本明細書で提供されるのは、本明細書で提供される抗体またはＡＤＣの有効量を対象に投与することにより、それを必要とする対象の炎症性疾患の発症を予防する方法である。
一部の実施形態では、本明細書で提供されるのは、本明細書で提供される抗体またはＡＤＣの有効量を対象に投与することにより、それを必要とする対象の全生存期間、生存期間中央値、または無増悪生存期間を延長する方法である。
一部の実施形態では、本明細書で提供されるのは、本明細書で提供される抗体またはＡＤＣの有効量を対象に投与することにより、標準治療の治療に耐性になった対象を治療する方法である。
一部の実施形態では、抗ＴＦ抗体での治療が有利であり得る疾患または状態は、炎症を伴う疾患または状態である。ある特定の実施形態では、炎症性疾患は、大腸炎、炎症性腸疾患、関節炎、急性肺損傷、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、または呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）である。一部の実施形態では、抗ＴＦ抗体による治療から利益を得ることができる疾患または状態は、血管炎症を伴う疾患または状態である。
一部の実施形態では、本明細書で提供される抗ＴＦ抗体またはＡＤＣは、炎症を伴う疾患または状態の治療用医薬としての使用のために提供される。一部の実施形態では、本明細書で提供される抗ＴＦ抗体は、炎症性疾患の治療用医薬の製造または調製における使用のために提供される。ある特定の実施形態では、炎症性疾患は、大腸炎、炎症性腸疾患、関節炎、急性肺損傷、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、または呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）である。一部の実施形態では、本明細書で提供される抗ＴＦ抗体またはＡＤＣは、血管炎症を伴う疾患または状態の治療用医薬としての使用のために提供される。一部の実施形態では、本明細書で提供される抗ＴＦ抗体は、血管炎症を伴う疾患または状態の治療用医薬の製造または調製における使用のために提供される。
一部の実施形態では、本明細書で提供されるのは、本明細書で提供される抗ＴＦ抗体の有効量を対象に投与することにより、それを必要とする対象の炎症性疾患を治療する方法である。ある特定の実施形態では、炎症性疾患は、大腸炎、炎症性腸疾患、関節炎、急性肺損傷、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、または呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）である。一部の実施形態では、本明細書で提供されるのは、本明細書で提供される抗ＴＦ抗体またはＡＤＣの有効量を対象に投与することにより、それを必要とする対象の血管炎症を伴う疾患または状態を治療する方法である。
一部の実施形態では、本明細書で提供されるのは、本明細書で提供される抗体の有効量を対象に投与することにより、それを必要とする対象の炎症性疾患の発症を遅延する方法である。
一部の実施形態では、本明細書で提供されるのは、本明細書で提供される抗体の有効量を対象に投与することにより、それを必要とする対象の炎症性疾患の発症を予防する方法である。
一部の実施形態では、本明細書で提供されるのは、本明細書で提供される抗体の有効量を対象に投与することにより、それを必要とする対象の血管炎症を伴う疾患または状態の発生を遅延する方法である。
一部の実施形態では、本明細書で提供されるのは、本明細書で提供される抗体の有効量を対象に投与することにより、それを必要とする対象の血管炎症を伴う疾患または状態の発生を予防する方法である。
１２．炎症及び炎症性疾患
炎症は急性または慢性のいずれかとして分類され得る。急性炎症は有害刺激に対する体の初期応答であり、血液からの損傷組織への血漿及び白血球（例えば、白血球、例えば、単核細胞及び顆粒球）の移動が増加することによって達成される。これによって、局所血管系、免疫系、及び損傷組織のさまざまな細胞を含む、成熟炎症反応をもたらす生化学的事象のカスケードが開始される。対照的に、慢性炎症は、炎症部位に存在する細胞型の変化が進むものであり、炎症プロセスから組織の破壊と治癒とが同時発生することによって特徴付けられる。慢性炎症は宿主疾患（限定されないが、枯草熱、歯周炎、アテローム性動脈硬化症、関節リウマチ、及びがんを含む）も引き起こし得るものであり、このことは、体がそれ自体によって綿密に制御される必要があることを浮き彫りにしている。
本開示の方法において企図される炎症性疾患の例としては、大腸炎、炎症性腸疾患、関節炎、急性肺損傷（ＡＬＩ）、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、及び呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）が挙げられる。
炎症性疾患の非限定的な例としては、限定されないが、尋常性ざ瘡、急性肺損傷、急性呼吸窮迫症候群、喘息、自己免疫疾患（例えば、急性散在性脳脊髄炎（ＡＤＥＭ））、アジソン病、無ガンマグロブリン血症、円形脱毛症、筋萎縮性側索硬化症、強直性脊椎炎、抗リン脂質抗体症候群、抗合成酵素症候群、アトピー性アレルギー、アトピー性皮膚炎、自己免疫性再生不良性貧血、自己免疫性心筋症、自己免疫性腸疾患、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性肝炎、自己免疫性内耳疾患、自己免疫性リンパ増殖症候群、自己免疫性末梢神経障害、自己免疫性膵炎、多腺性自己免疫症候群、自己免疫性プロゲステロン皮膚炎、自己免疫性血小板減少性紫斑病、自己免疫性蕁麻疹、自己免疫性ぶどう膜炎、バロー同心円硬化症、ベーチェット病、ベルジェ病、ビッカースタッフ型脳炎、ブラウ症候群、水疱性類天疱瘡、キャッスルマン病、セリアック病、シャーガス病、慢性炎症性脱髄性多発神経炎、慢性再発性多発性骨髄炎、慢性閉塞性肺疾患、チャーグ・ストラウス症候群、瘢痕性類天疱瘡、コーガン症候群、大腸炎、寒冷凝集素症、補体第２成分欠損症、接触皮膚炎、頭部動脈炎、クレスト症候群、クローン病、クッシング症候群、皮膚白血球破砕性血管炎、デゴス病、ダーカム病、疱疹状皮膚炎、皮膚筋炎、１型糖尿病、びまん性皮膚硬化型全身性硬化症、ドレスラー症候群、薬剤誘発性ループス、円板状エリテマトーデス、湿疹、子宮内膜症、腱付着部炎関連関節炎、好酸球性筋膜炎、好酸球性胃腸炎、後天性表皮水疱症、結節性紅斑、胎児赤芽球症、本態性混合型クリオグロブリン血症、エヴァンス症候群、進行性骨化性線維異形成症、線維化性肺胞炎、胃炎、胃腸類天疱瘡（ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｐｅｍｐｈｉｇｏｉｄ）、巨細胞性動脈炎、糸球体腎炎、グッドパスチャー症候群、グレーブス病、ギラン・バレー症候群、橋本脳症、橋本甲状腺炎、ヘノッホ・シェーンライン紫斑病、妊娠性疱疹、化膿性汗腺炎、ヒューズ・ストーヴィン症候群、低ガンマグロブリン血症、特発性炎症性脱髄性疾患、特発性肺線維症、特発性血小板減少性紫斑病、ＩｇＡ腎症、封入体筋炎、慢性炎症性脱髄性多発神経炎、間質性膀胱炎、若年性特発性関節炎、川崎病、ランバート・イートン筋無力症症候群、白血球破砕性血管炎、扁平苔癬、硬化性苔癬、線状ＩｇＡ病、エリテマトーデス、マジード症候群、メニエール病、顕微鏡的多発血管炎、混合性結合組織病、限局性強皮症、ムッカ・ハーベルマン病、重症筋無力症、筋炎、ナルコレプシー、視神経脊髄炎、神経性筋強直症、眼型瘢痕性類天疱瘡、オプソクローヌス・ミオクローヌス症候群、オード甲状腺炎（Ｏｒｄ’ｓ ｔｈｙｒｏｉｄｉｔｉｓ）、回帰性リウマチ、ＰＡＮＤＡＳ、傍腫瘍性小脳変性症、発作性夜間ヘモグロビン尿症、パリーロンバーグ病、パーソネージ・ターナー症候群、扁平部炎、尋常性天疱瘡、悪性貧血、静脈周囲脳脊髄炎、ＰＯＥＭＳ症候群、結節性多発動脈炎、リウマチ性多発筋痛、多発性筋炎、原発性胆汁性肝硬変、原発性硬化性胆管炎、進行性炎症性神経障害、乾癬性関節炎、壊疽性膿皮症、赤芽球癆、ラスムッセン脳炎、レイノー現象、再発性多発性軟骨炎、ライター症候群、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）、レストレスレッグス症候群、後腹膜線維症、リウマチ熱、シュニッツラー症候群、強膜炎、強皮症、血清病、シェーグレン症候群、脊椎関節症、全身硬直症候群、亜急性細菌性心内膜炎、スザック症候群、スイート症候群、交感性眼炎、高安動脈炎、側頭動脈炎、血小板減少症、トロサ・ハント症候群、横断性脊髄炎、潰瘍性大腸炎、未分化結合組織病、未分化脊椎関節症、白斑、及びウェゲナー肉芽腫症）、セリアック病、慢性前立腺炎、糸球体腎炎、過敏症、炎症性腸疾患、骨盤内炎症性疾患、再灌流傷害、関節リウマチ、サルコイドーシス、移植片拒絶、血管炎、間質性膀胱炎、ならびに変形性関節症が挙げられる。
一部の実施形態では、「炎症性疾患」という用語はウイルス感染症を含む。一部の実施形態では、炎症性疾患は、重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載の抗ＴＦ抗体は、病原性ウイルス（呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）、ポリオウイルス、単純ヘルペスウイルス、Ａ型肝炎ウイルス、ロタウイルス、アデノウイルス、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２、及びＡ型インフルエンザウイルスなど）の治療に使用される。一部の実施形態では、病原性ウイルスは、ヘルペスウイルス科、ポックスウイルス科、ヘパドナウイルス科、コロナウイルス科、フラビウイルス科、トガウイルス科、レトロウイルス科、オルトミクソウイルス科、アレナウイルス科、ブニヤウイルス科、フィロウイルス科、パラミクソウイルス科、及びラブドウイルス科から選択される。一実施形態では、当該ウイルスは、単純ヘルペス１型、単純ヘルペス２型、水痘帯状疱疹ウイルス、エプスタイン・バーウイルス、ヒトサイトメガロウイルス、ヒトヘルペスウイルス、天然痘ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、重症急性呼吸器症候群ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、黄熱ウイルス、デングウイルス、ウエストナイルウイルス、ＴＢＥウイルス、ジカウイルス、風疹ウイルス、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、インフルエンザウイルス、ラッサウイルス、クリミア・コンゴ出血熱ウイルス、出血熱ウイルス、ハンターンウイルス、エボラウイルス、マールブルグウイルス、麻疹ウイルス、ムンプスウイルス、パラインフルエンザウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、狂犬病ウイルス、及びＤ型肝炎ウイルス（ＨＤＶ）からなる群から選択される。
いくつかの自己免疫疾患は炎症性疾患と見なされ、及び／または様々な機構を介して炎症を引き起こす。本開示では、本明細書で提供される抗体またはＡＤＣを使用する自己免疫疾患の治療も企図される。炎症性疾患の例としては、限定されないが、下記のものが挙げられる：自己免疫疾患または自己免疫障害の例としては、関節炎（関節リウマチ、急性関節炎、関節リウマチ、痛風性関節炎、急性痛風性関節炎、急性免疫学的関節炎、慢性炎症性関節炎、変形性関節症、ＩＩ型コラーゲン誘発性関節炎、感染性関節炎、ライム関節炎、増殖性関節炎、乾癬性関節炎、スティル病、脊椎関節炎、若年発症関節リウマチ、変形性関節症、慢性進行性関節炎（ａｒｔｈｒｉｔｉｓ ｃｈｒｏｎｉｃａ ｐｒｏｇｒｅｄｉｅｎｔｅ）、変形性関節症、慢性原発性多発性関節炎（ｃｈｒｏｎｉｃ ｐｒｉｍａｒｙ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｐｏｌｙａｒｔｈｒｉｔｉｓ ｃｈｒｏｎｉｃａ ｐｒｉｍａｒｉａ）、反応性関節炎、及び強直性脊椎炎など）；炎症性過剰増殖性皮膚疾患；乾癬（尋常性乾癬、滴状乾癬、膿疱性乾癬、爪乾癬など）；アトピー（例えば、アトピー性疾患、例えば、枯草熱及びＪｏｂ症候群）；皮膚炎（例えば、接触皮膚炎、慢性接触皮膚炎、紅皮症、アレルギー性皮膚炎、アレルギー性接触皮膚炎、疱疹性皮膚炎、貨幣状皮膚炎（ｍｏｎｅｔａｒｙ ｄｅｒｍａｔｉｔｉｓ）、脂漏性皮膚炎、非特異的皮膚炎、一次刺激性接触皮膚炎、及びアトピー性皮膚炎）；Ｘ連鎖高ＩｇＭ症候群；アレルギー性眼内炎症性疾患；蕁麻疹（例えば、慢性アレルギー性蕁麻疹、慢性特発性蕁麻疹、及び慢性自己免疫性蕁麻疹）；筋炎；多発性筋炎／皮膚筋炎；若年性皮膚筋炎；中毒性表皮壊死症；強皮症（例えば、全身性強皮症）；硬化症（例えば、全身硬化症、多発性硬化症（ＭＳ）、脊髄・視覚型（ｓｐｉｎｏ－ｏｐｔｉｃａｌ）ＭＳ、一次進行型ＭＳ（ＰＰＭＳ）、再発寛解型ＭＳ（ＲＲＭＳ）、進行性全身性硬化症、アテローム性動脈硬化症、動脈硬化症、多発性硬化症（ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ ｄｉｓｓｅｍｉｎａｔａ）、及び失調性強膜視神経脊髄炎（ａｔａｘｉｃ ｓｃｌｅｒ ｏｐｔｉｃ ｎｅｕｒｏｍｙｅｌｉｔｉｓ（ＮＭＯ）））；炎症性腸疾患（ＩＢＤ）（例えば、クローン病、自己免疫介在性胃腸疾患、大腸炎、潰瘍性大腸炎、潰瘍性大腸炎、顕微鏡的大腸炎、コラーゲン形成大腸炎、ポリープ性大腸炎（ｃｏｌｉｔｉｓ ｐｏｌｙｐｏｓａ）、壊死性腸炎、全層性大腸炎、及び自己免疫性炎症性腸疾患）；腸炎；壊疽性強皮症；結節性紅斑；原発性硬化性胆管炎呼吸困難症候群（例えば、成人性または急性呼吸困難症候群（ＡＲＤＳ））；髄膜炎；ぶどう膜の全てまたは一部の炎症；虹彩炎；脈絡膜炎；自己免疫性血液疾患；リウマチ性脊椎炎；滑膜炎；遺伝性血管性浮腫；脳神経障害（髄膜炎など）；妊娠性ヘルペス；妊娠性類天疱瘡；陰嚢そう痒；自己免疫性卵巣機能不全；自己免疫症状（ＩｇＥ介在性疾患（アナフィキ脳炎（Ａｎａｐｈｙｋｉ Ｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｉｓ）（例えば、ラスムッセン脳症ならびに辺縁及び／または脳幹脳炎）など）に起因する突発性難聴）；ぶどう膜炎（例えば、前部ぶどう膜炎、急性前部ぶどう膜炎、肉芽腫性ぶどう膜炎、非肉芽腫性ぶどう膜炎、水晶体抗原性ぶどう膜炎、後部ぶどう膜炎、または自己免疫性ぶどう膜炎）；ネフローゼ症候群を伴うまたは伴わない糸球体腎炎（ＧＮ）（例えば、慢性または急性のスレッドグローブ腎炎（ｔｈｒｅａｄ Ｇｌｏｂｅ ｎｅｐｈｒｉｔｉｓ）、原発性ＧＮ、免疫介在性ＧＮ、膜性ＧＮ（膜性腎症）、特発性膜性ＧＮまたは特発性膜性腎症、膜性または膜性増殖性ＧＮ（ＭＰＧＮ）（例えば、Ｉ型及びＩＩ型）、ならびに急速進行性ＧＮ）；増殖性腎炎；自己免疫性多発性内分泌不全；亀頭炎（例えば、形質細胞局在化尿道球炎）；亀頭包皮炎；遠心性環状紅斑；多形性紅斑；環状肉芽腫；光沢苔癬；萎縮性苔癬；ビダール苔癬；棘状苔癬；扁平苔癬；葉状魚鱗癬；剥脱性角化症；前がん性角化症；壊疽性強皮症；アレルギー性の症状及び応答；反応；湿疹（アレルギー性及びアトピー性湿疹、皮脂欠乏性湿疹、小水疱性湿疹、ならびに水疱性掌蹠湿疹（ｖｅｓｉｃｕｌａｒ ｐａｌｍｏｐｌａｎｔａｒ ｅｃｚｅｍａ）など）；喘息（気管支喘息、気管支喘息、及び自己免疫性喘息など）；Ｔ細胞浸潤及び症状（慢性炎症反応を含む）；外来抗原（妊娠中の胎児ＡＢＯ血液型など）に対する免疫応答；慢性肺炎症性疾患；自己免疫性心筋炎；白血球粘着不全症；ループス（ループス腎炎、ループス脳炎、小児ループス、非腎性ループス、腎外ループス、円板状ループス及び円板状エリテマトーデス、脱毛ループス（ａｌｏｐｅｃｉａ ｌｕｐｕｓ）、全身性ループステマトＳＬＥ（ｓｙｓｔｅｍｉｃ ｌｕｐｕｓ Ｔｅｍａｔｏ ＳＬＥ）、皮膚ＳＬＥ、亜急性皮膚ＳＬＥ、新生児ループス症候群（ＮＬＥ）、及び播種性ループス、エリテマトーデス（播種性紅斑性狼瘡）など）；若年発症型（Ｉ型）糖尿病（例えば、小児インスリン依存性糖尿病（ＩＤＤＭ））、成人発症型糖尿病（ＩＩ型糖尿病）、自己免疫性糖尿病、特発性尿崩症、糖尿病性網膜症、糖尿病性腎症、及び糖尿病性大動脈疾患）；サイトカイン及びＴリンパ球が介在する急性過敏症及び遅延型過敏症を伴う免疫応答；結核；サルコイドーシス；肉芽腫症（例えば、リンパ腫様肉芽腫症）；ウェゲナー肉芽腫症；肉芽腫症；血管炎（例えば、血管炎、大血管性血管炎、リウマチ性多発筋痛、及び巨細胞性（高安）動脈炎、中型血管炎、川崎病、結節性多発性動脈炎／結節性動脈周囲炎、顕微鏡的多発血管炎、免疫血管炎、ＣＮＳ血管炎、皮膚血管炎、過敏性血管炎、壊死性血管炎、全身性壊死性血管炎、ＡＮＣＡ関連血管炎、チャーグ・ストラウス血管炎または症候群（ＣＳＳ）、及びＡＮＣＡ関連小型血管炎）；側頭動脈炎；再生不良性貧血；自己免疫性再生不良性貧血；クームス陽性貧血；ダイアモンド・ブラックファン貧血；溶血性貧血または免疫性溶血性貧血（例えば、自己免疫性溶血性貧血（ＡＩＨＡ））、悪性貧血（ｐｅｒｎｉｃｉｏｓｅｍｉａ）（悪性貧血（ａｎｅｍｉａ ｐｅｒｎｉｃｉｏｓａ）））；アジソン病；真赤血球貧血（ｔｒｕｅ ｒｅｄ ｃｅｌｌ ａｎｅｍｉａ）または赤芽球癆（ＰＲＣＡ）；第ＶＩＩＩ因子欠乏症；血友病Ａ、自己免疫性好中球減少症；汎血球減少症；白血球減少症；白血球漏出を伴う疾患；ＣＮＳ炎症性疾患；多臓器損傷症候群（例えば、敗血症、外傷、または出血に二次的に生じるもの）；抗原抗体複合体介在性疾患；抗糸球体基底膜抗体病；抗リン脂質抗体症候群；アレルギー性ｇｏｄ（ａｌｌｅｒｇｉｃ ｇｏｄ）ベーチェット病／症候群；キャッスルマン症候群；グッドパスチャー症候群；レイノー症候群；シェーグレン症候群；スティーブンス・ジョンソン症候群；水疱性類天疱瘡及び皮膚類天疱瘡、天疱瘡、尋常性天疱瘡、脱落性天疱瘡、天疱瘡粘膜類天疱瘡、及び紅斑性天疱瘡；自己免疫性多発性内分泌障害ライター病またはライター症候群；熱傷；妊娠高血圧腎症；免疫複合体障害（免疫複合体腎炎及び抗体介在性腎炎など）；多発性神経障害；慢性腎症（ＩｇＭ多発性神経障害及びＩｇＭ介在性神経症など）；血小板減少症（例えば、心筋梗塞患者に生じるもの）（例えば、血栓性血小板減少性紫斑病（ＴＴＰ）、輸血後紫斑病（ＰＴＰ）、ヘパリン起因性血小板減少症、自己免疫性血小板減少症または免疫介在性血小板減少症、特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、及び慢性または急性ＩＴＰ）；強膜炎（例えば、特発性角膜強膜炎、及び強膜炎（ｅｐｉｓｃｌｅｒｏｓｉｓ））；精巣及び卵巣自己免疫疾患（自己免疫性精巣炎など）；原発性甲状腺機能低下症；副甲状腺機能低下症；自己免疫性内分泌疾患（甲状腺炎、自己免疫性甲状腺炎、橋本病、慢性甲状腺炎（橋本甲状腺炎）、または亜急性甲状腺炎、自己免疫性甲状腺疾患、特発性甲状腺機能低下症、グレーブス病、多腺性症候群、自己免疫性多腺性症候群、及び多腺性内分泌障害症候群など）；腫瘍随伴症候群（神経学的腫瘍随伴症候群など）；ランバート・イートン筋無力症症候群またはイートン・ランバート症候群；スティッフマン症候群または全身性硬直性器症候群（ｓｙｓｔｅｍｉｃ ｓｔｉｆｆｎｅｓｓ Ｇｅｎｉｔａｌ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）；脳脊髄炎（例えば、アレルギー性機能脊髄炎（ａｌｌｅｒｇｉｃ ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｍｙｅｌｉｔｉｓ）、アレルギー性脳脊髄炎、及び実験的アレルギー性脳脊髄炎（ＥＡＥ））；重症筋無力症（例えば、胸腺腫小脳変性症を伴う重症筋無力症）；神経筋緊張；眼球間代性運動痙攣または眼球間代性運動痙攣ミオクローヌス症候群（ＯＭＳ）；感覚神経障害；多巣性運動神経障害；シーハン症候群；肝炎（自己免疫性肝炎、慢性肝炎、ルポイド肝炎、巨細胞性肝炎、慢性活動性肝炎、及び自己免疫性慢性活動性肝炎など）；リンパ球様間質性肺炎（ＬＩＰ）；閉塞性細気管支炎（非移植性）対ＮＳＩＰ；ギラン・バレー症候群；ベルジェ病（ＩｇＡ腎症）；特発性ＩｇＡ腎症；線状ＩｇＡ皮膚症；急性好中球性皮膚症；硬質性膿疱性皮膚症（ｓｕｂｈｏｒｎｙ ｐｕｓｔｕｌａｒ ｄｅｒｍａｔｏｓｉｓ）；例えば、原発性胆汁性肝硬変及び肺線維症；自己免疫性腸疾患症候群；セリアック病（Ｃｅｌｉａｃ ｄｉｓｅａｓｅ）またはセリアック病（Ｃｏｅｌｉａｃ ｄｉｓｅａｓｅ）；脂肪便（ｌｉｐｏｓｔｏｏｌ）（グルテン腸症）；セリアックスプルー；特発性スプルー；グロブリン血症；筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ；ルー・ゲーリック病）；環状動脈疾患（ｒｉｎｇ ａｒｔｅｒｉａｌ ｄｉｓｅａｓｅ）；自己免疫性耳疾患（自己免疫性内耳疾患（ＡＩＥＤ）など）；自己免疫性難聴；軟骨炎（例えば、難治性または再発または再発性の多発性軟骨炎）；細胞質タンパク症（ｃｙｔｏｐｒｏｔｅｉｎｏｓｉｓ）；コーガン症候群／非梅毒性実質性角膜炎；ベル麻痺；スウィート病／症候群；自己免疫性酒さ自己免疫性；帯状疱疹を伴う疼痛；アミロイドーシス；非がん性リンパ球増加症；原発性リンパ浮腫、例えば、単クローン性Ｂ細胞リンパ球細胞巨大化（ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ｂ ｃｅｌｌ ｌｙｍｐｈ Ｃｙｔｏｍｅｇａｌｙ）（例えば、良性の単クローン性免疫グロブリン血症及び意義不明の単クローン性ガンマグロブリン血症（ＭＧＵＳ）；末梢神経障害；チャネル疾患（例えば、てんかん、片頭痛、不整脈、筋能力障害、痔核、失明、周期性四肢麻痺、及びＣＮＳチャネル疾患）；自閉症；炎症性ミオパチー；巣状分節性糸球体硬化症（ＦＳＧＳ）；内分泌性眼症；自己免疫性肝臓疾患；線維筋痛症；多発性内分泌不全；シュミット症候群；副腎炎；胃の萎縮症；初老期認知症；脱髄疾患（自己免疫性脱髄及び慢性炎症性脱髄性多発神経炎など）；ドレスラー症候群；円形脱毛症；全頭脱毛症；クレスト症候群（石灰沈着、レイノー現象、食道蠕動低下、指硬化、及び毛細血管拡張症）；男性及び女性の自己免疫性不妊症（例えば、抗精子抗体）；混合性結合組織病；シャーガス病；リウマチ熱；反復流産；農夫肺；紅斑紅斑；心術後症候群；クッシング症候群；鳥類疾患；アレルギー性肉芽腫性血管炎；良性皮膚リンパ球性血管炎；アルポート症候群；肺胞炎（例えば、アレルギー性肺胞炎及び線維化性間質性肺炎（ｆｉｂｒｏａｌｖｅｏｌａｒｉｔｉｓ Ｉｎｔｅｒｓｔｉｔｉａｌ ｐｎｅｕｍｏｎｉａ））；輸血反応；ハンセン病；マラリア；サムター症候群；カプラン症候群；心内膜炎；心内膜心筋線維症；びまん性間質性肺線維症；間質性肺線維症；肺線維症；特発性肺線維症；嚢胞性線維症；眼内炎；持久性隆起性紅斑；胎児赤芽球症；好酸球性筋膜炎；シュールマン症候群、フェルティ症候群；フラレシス（ｆｌａｒｅｓｉｓ）；毛様体炎症、慢性大腸炎、異時性大腸炎、ｉｒｉｓ大腸炎（急性もしくは慢性）、またはフック大腸炎（Ｆｕｃｈ ｃｏｌｉｔｉｓ）；ヘノッホ・シェーンライン紫斑病；敗血症；内部毒素血症；膵炎；甲状腺中毒症；エバン症候群（Ｅｖａｎ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）；自己免疫性腺機能不全；シデナム舞踏病；連鎖球菌感染後腎炎；閉塞性血栓血管炎；甲状腺中毒症；脊髄癆）；脈絡膜炎；巨細胞性多発筋痛；慢性過敏性肺炎；乾性角結膜炎；流行性角結膜炎；特発性ネフローゼ症候群；微小変化型ネフローゼ；
良性家族性虚血性血流障害；血流；網膜自己免疫性；関節炎；気管支炎；慢性閉塞性気道／肺疾患；珪肺症；アフタ；アフタ性口内炎；動脈硬化性疾患；無精子形成（Ａｓｐｅｒｍｉｏｇｅｎｅｓｅ）；自己免疫性溶血）、Ｃｒｏｇｌｏｂ Ｎｃｈｉｓｈｏ；Ｄｕｐｕｉｓ Ｔｒａｎｇ（デュピュイトラン）拘縮；水晶体過敏性眼内炎（ｌｅｎｓ ｈｙｐｅｒｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ ｅｎｄｏｐｈｔｈａｌｍｉｔｉｓ）（水晶体過敏性眼内炎（ｅｎｄｏｐｈｔｈａｌｍｉａ ｐｈａｃｏａｎａｐｈｙｌａｃｔｉｃａ））；アレルギー性腸炎；癩性結節性紅斑；特発性顔面神経麻痺；リウマチ熱；ハンマン・リッチ病；感覚神経障害性難聴；発作性ヘモグロビン尿症（ｐａｒｏｘｙｓｍａｌ ｈｅｍｏｇｌｏｂｉｎｕｒｉａ）（発作性ヘモグロビン尿症（ｈａｅｍｏｇｌｏｂｉｎｕｒｉａ ｐａｒｏｘｙｓｍａｔｉｃａ））；性腺機能不全；限局性回腸炎；白血球減少症；感染性単核球症；原発性特発性粘液水腫；ネフローゼ；交感性眼炎；肉芽腫性精巣炎肉芽腫；膵炎；急性多発神経炎；壊疽性膿皮症；ケルバン甲状腺炎；後天性脾萎縮；非悪性胸腺腫；白斑；毒素性ショック症候群；食中毒；Ｔ細胞浸潤を伴う症状；白血球粘着不全症；サイトカイン及びＴリンパ球が介在する急性過敏症及び遅延型過敏症を伴う免疫応答；白血球漏出を伴う症状；多臓器損傷症候群；抗原抗体複合体疾患が介在する抗糸球体基底膜抗体病；アレルギー性神経炎；自己免疫性多腺性内分泌不全；滑膜炎（ｏｖｉｔｉｓ）；原発性粘液水腫；自己免疫性萎縮性胃炎；交換性眼炎；ネフローゼ症候群；膵島炎；多腺性内分泌機能低下；多腺性自己免疫症候群１型（成人発症型特発性副甲状腺機能低下症：ＡＯＩＨ）心筋症（拡張型心筋症など）；後天性表皮水疱症（ＥＢＡ）；ヘモクロマトーシス；心筋炎；ネフローゼ症候群；原発性硬化性胆管炎；化膿性または非化膿性の副鼻腔炎；鼻副鼻腔炎；篩骨洞炎、前頭洞炎、上顎洞炎、または蝶形骨洞炎；好酸球と関連する疾患（好酸球増多症、肺好酸球増多症、好酸球増加筋痛症候群、レフラー症候群、慢性好酸球肺炎局在化肺好酸球増多症、気管支肺アスペルギルス症、アスペルギルス腫、または好酸球を含む肉芽腫など）；アナフィラキシー；血清反応陰性脊椎関節炎；多腺性内分泌自己免疫疾患；硬化性慢性皮膚粘膜腺症（ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ ｃｈｒｏｎｉｃ ｍｕｃｏｃｕｔａｎｅｏｕｓ ｇｌａｎｄｏｓｉｓ）；ブルトン症候群；幼年期における一過性の低ガンマグロブリン血症；ウィスコット・アルドリッチ症候群；失調性末梢血管拡張症候群；血管拡張；膠原病と関連する自己免疫疾患、リウマチ、神経疾患、リンパ節炎、血圧反応の低下、血管機能不全、組織損傷、虚血性心疾患、痛覚過敏、腎虚血、脳虚血、及び血管新生関連疾患；アレルギー性過敏性疾患；糸球体腎炎；再灌流傷害；虚血再かん流障害；心筋または他の組織の再灌流傷害、リンパ腫気管支炎；炎症性皮膚疾患；急性炎症性要素に起因する皮膚症；多臓器不全；水疱性疾患；腎皮質壊死；急性化膿性髄膜炎または他の中枢神経系炎症性疾患；眼球及び眼窩内の炎症性疾患；顆粒球輸血関連症候群；サイトカイン誘発性の毒性；ナルコレプシー；急性重度炎症；慢性難治性炎症；腎盂腎炎；動脈過形成；消化性潰瘍；外陰炎；ならびに子宮内膜症が挙げられる。
一部の実施形態では、本明細書で提供される抗体は、プロテアーゼ活性化受容体２（ＰＡＲ－２）の上方制御と関連する疾患または損傷の治療に使用され得る。一部の実施形態では、本明細書で提供される抗体は、ＰＡＲ－２の上方制御と関連する循環器疾患または循環器損傷の治療に使用され得る。一部の実施形態では、循環器疾患または循環器損傷は、心筋梗塞である。一部の実施形態では、循環器疾患または循環器損傷は、アテローム性動脈硬化症である。ＰＡＲ２の上方制御と関連する疾患の例は、例えば、Ｈｅｕｂｅｒｇｅｒ，Ｄｏｒｏｔｈｅａ Ｍ．，ａｎｄ Ｒｅｔｏ Ａ．Ｓｃｈｕｅｐｂａｃｈ．Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ ｊｏｕｒｎａｌ １７．１（２０１９）：１－２４及びＫａｇｏｔａ，Ｓａｔｏｍｉ ｅｔ ａｌ．ＢｉｏＭｅｄ ｒｅｓｅａｒｃｈ ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ｖｏｌ．２０１６（２０１６）：３１３０４９６に示されており、これらの文献のそれぞれの関連開示は、参照によって本明細書に組み込まれる。
ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体は、炎症と関連するがんの治療に使用され得る。例えば、本明細書で提供される抗体は、Ｃａｒ－Ｔ療法後のＣＲＳ（サイトカイン放出症候群）の治療のために投与され得る。例えば、慢性炎症と関連するいくつかのがんには、結腸直腸癌、肺癌、中皮腫、肝癌、食道癌、胃癌、膵癌、胆嚢癌、卵巣／子宮癌、前立腺癌、膀胱癌、甲状腺癌、唾液腺癌、口腔（扁平上皮）癌、及び皮膚癌、ホジキン病／非ホジキンリンパ腫、ならびにＭＡＬＴ（粘膜関連リンパ組織）が含まれる。炎症関連癌の追加の例は、Ｃｏｕｓｓｅｎｓ ＬＭ ａｎｄ Ｗｅｒｂ Ｚ．Ｎａｔｕｒｅ．２００２；４２０（６９１７）：８６０－８６７に示されており、当該文献は、その全体が参照によって組み込まれる。
１３．炎症及び凝固障害
炎症は凝固を引き起こし、天然の抗凝固機構の活性を低下させ、線溶系を損なう。炎症性サイトカインは、凝固活性化に関与する主要なメディエーターである。急性炎症は、凝固を全身性に活性化することが示されている。全身性炎症は、ＴＦ介在性のトロンビン生成に起因して凝固を活性化する。抗凝固カスケードのメディエーター（例えば、トロンボモジュリン）は、炎症性メディエーターに対する細胞応答性を低下させ、いくつかの炎症性メディエーターの中和を促進する。炎症と凝固との間の相互作用については、Ｅｓｍｏｎ，Ｃ．Ｔ．Ｂｒｉｔｉｓｈ ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｙ １３１．４（２００５）：４１７－４３０に詳述されており、当該文献は、その全体が参照によって組み込まれる。
凝固障害は、体が凝血塊を形成する能力が損なわれている状態である。患者においては、出血制御困難、慢性出血、及び／または過度の出血、特に負荷（損傷、手術、または出産など）後のこのような状態として、凝固障害が顕在化する。肝臓での凝固因子合成が低下すると共に、播種性血管内凝固障害（ＤＩＣ）（凝固因子及び血小板の消費が進むプロセス）が存在することで凝固障害が生じる。ＤＩＣでは、トロンビンが無制御に過剰生成されており、結果的に凝固因子（例えば、フィブリノゲン及び第ＶＩＩＩ因子）が消費される。炎症性の活性化が微小血管血栓症と協奏的に生じることが、重度感染症及びＤＩＣを有する患者に多臓器不全が生じる一因となることが研究によって示されている（Ｌｅｖｉ，Ｍ．，ｅｔ ａｌ．，Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ ｒｅｓｅａｒｃｈ ６０．１（２００３）：２６－３９（その全体が参照によって組み込まれる）を参照のこと）。
本明細書で使用される「凝固障害」という用語は、正常な凝固カスケードの凝固促進要素のいずれかの任意の定性的もしくは定量的な欠乏、または線維素溶解の任意の上方制御に起因し得る出血傾向の増加を指す。凝固障害は、後天性、先天性、または医原性として分類され得る。凝固障害は、プロトロンビン時間（ＰＴ）及び部分トロンボプラスチン時間（ＰＴＴ）の測定を使用して診断及び追跡できる。ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体は凝固障害（例えば、後天性凝固障害、先天性凝固障害）の治療に有用である。本明細書で提供される抗体またはＡＤＣを使用して治療可能な凝固障害の例としては、限定されないが、播種性血管内凝固障害（ＤＩＣ；消費性凝固障害）、血友病Ａ、血友病Ｂ、フォン・ヴィレブランド病、特発性血小板減少症、１つ以上の接触因子（第ＸＩ因子、第ＸＩＩ因子、プレカリクレイン、及び高分子量キニノゲン（ＨＭＭＫ）など）の欠乏、顕著な臨床的出血と関連する１つ以上の因子（第Ｖ因子、第ＶＩＩ因子、第ＶＩＩＩ因子、第ＩＸ因子、第Ｘ因子、第ＸＩＩＩ因子、第ＩＩ因子（低プロトロンビン血症）、及びフォン・ヴィレブランド因子など）の欠乏、ビタミンＫ欠乏症、フィブリノゲンと関連する障害（無フィブリノゲン血症、低フィブリノゲン血症、及び異常フィブリノゲン血症を含む）、アルファ２アンチプラスミン欠乏症、ならびに大量出血（肝疾患、腎疾患、血小板減少症、血小板機能異常症、血腫、血腫、血腫、血腫外傷、低体温症によって引き起こされる出血、月経及び妊娠中の出血など）が挙げられる。一部の実施形態では、ＮＡＳＰは、先天性出血性障害（血友病Ａ、血友病Ｂ、及びフォン・ヴィレブランド病を含む）の治療に使用される。後天性凝固障害の例としては、第ＶＩＩＩ因子欠乏症、フォン・ヴィレブランド因子欠乏症、第ＩＸ因子欠乏症、第Ｖ因子欠乏症、第ＸＩ因子欠乏症、第ＸＩＩ因子欠乏症、及び第ＸＩＩＩ因子欠乏症、具体的には、血液凝固因子に対する阻害物質もしくは自己免疫反応によって引き起こされる障害、または凝固因子の合成の低下を招く疾患もしくは状態によって引き起こされる止血障害が挙げられる。凝固障害の追加の例、及び凝固障害の変化（例えば、抗体での治療に起因するもの）を評価するための方法については、ＵＳ出願第１３／７２１，８０２号に示されており、当該文献は、その全体が参照によって組み込まれる。
ある特定の実施形態では、対象は凝固障害に罹患しており、そうした凝固障害の症状の１つ以上が、本明細書で提供される抗体またはＡＤＣでの治療によって低減または改善される。
１４．炎症性のサイトカイン及びケモカイン
ある特定の実施形態では、対象に投与すると、本明細書で提供される抗体またはＡＤＣは、炎症性のサイトカインまたはケモカインの濃度を低減する。炎症性サイトカインまたは炎症促進性サイトカインは、免疫細胞（例えば、ヘルパーＴ細胞（Ｔｈ）、マクロファージ）から分泌される型のシグナル伝達分子（サイトカイン）であり、炎症を促進する。炎症性ケモカインは、白血球の走化性因子として主に機能して、単球、好中球、及び他のエフェクター細胞を血液から感染部位または組織損傷部位に動員する小さなサイトカインまたはシグナル伝達タンパク質である。炎症性ケモカインは、ＣＸＣ、ＣＣ、ＣＸ３Ｃ、及びＸＣという４つの主要なサブファミリーに分類することができ、これらのサブファミリーは全て、標的細胞の表面に位置するケモカイン受容体に選択的に結合することによって生理活性を示す。
ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体またはＡＤＣを投与すると、抗体またはＡＤＣは、ベースラインレベルまたは異なる抗炎症剤と比較して炎症性のサイトカイン及びケモカインを低減し、炎症性のサイトカイン及びケモカインは、ＩＬ－１α、ＩＬ－１β、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－８、ＩＬ－１０、ＩＦＮγ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＴＮＦα、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４、ＣＣＬ５、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２０、ＣＣＬ２５、ＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ２、及びＣＸＣＬ１０のうちの１つ以上である。
ＩＬ－１α（インターロイキン１アルファ）は、インターロイキン１サイトカインファミリーのメンバーである。ＩＬ－１αは、様々な免疫応答、炎症プロセス、及び造血に関与する多面的サイトカインである。ＩＬ－１αは単球及びマクロファージによって前駆タンパク質として産生され、この前駆タンパク質は、タンパク質分解によるプロセシングを受け、細胞損傷に応じて放出され、それによってアポトーシスを誘導する。
ＩＬ－１β（インターロイキン１ベータ）は、インターロイキン１サイトカインファミリーのメンバーであり、活性化マクロファージによって前駆タンパク質として産生され、この前駆タンパク質は、カスパーゼ１（ＣＡＳＰ１／ＩＣＥ）によってタンパク質分解によるプロセシングを受けることでその活性形態となる。ＩＬ－１βは、炎症反応の重要なメディエーターであり、細胞の増殖、分化、及びアポトーシスを含めて、様々な細胞活性に関与する。中枢神経系（ＣＮＳ）においてこのサイトカインによってシクロオキシゲナーゼ－２（ＰＴＧＳ２／ＣＯＸ２）が誘導されることは炎症性痛覚過敏の一因となることが明らかになっている。
ＩＬ－２（インターロイキン２）は、Ｔリンパ球及びＢリンパ球の増殖に重要なサイトカインである。ＩＬ－２は微生物感染に対する免疫応答の一部であり、この免疫反応によって異物（「非自己」）と「自己」とが区別される。胸腺はＴ細胞が成熟する場所であり、胸腺では、ＩＬ－２は、ある特定の未熟Ｔ細胞が制御性Ｔ細胞へと分化することを促進することによって自己免疫疾患を阻止することで、Ｔ細胞による健康な細胞の破壊を阻止する。マウスにおいて同様の遺伝子を標的として破壊すると潰瘍性大腸炎様疾患が誘発され、このことは、この遺伝子が、抗原性刺激に対する免疫応答において必要不可欠な役割を果たすことを示唆している。
ＩＬ－４（インターロイキン４）は、活性化Ｔ細胞によって産生される多面的サイトカインである。このサイトカインの役割の１つは、活性化したＢ細胞及びＴ細胞の増殖を刺激すると共に、Ｂ細胞を形質細胞に分化させることである。血管外組織にＩＬ－４が存在すると、Ｍ２細胞へのマクロファージの代替的な活性化が促進され、Ｍ１細胞へのマクロファージの古典的活性化が抑制される。
ＩＬ－５（インターロイキン５）は、Ｂ細胞及び好酸球の両方に対する増殖分化因子として働くサイトカインであり、好酸球の形成、成熟、動員、及び生存の制御において主要な役割を果たす。ＩＬ－５の上昇は好酸球依存性炎症性疾患の発病と関連している（Ｔａｋａｔｓｕ Ｋ．，Ｐｒｏｃ Ｊｐｎ Ａｃａｄ Ｓｅｒ Ｂ Ｐｈｙｓ Ｂｉｏｌ Ｓｃｉ．２０１１；８７（８）：４６３－４８５（その全体が参照によって組み込まれる）を参照のこと）。
ＩＬ－６（インターロイキン６）は、炎症及びＢ細胞成熟において重要な役割を果たすサイトカインである。ＩＬ－６は、自己免疫疾患または感染に罹患している人において発熱を誘導する能力を有する内在性パイロジェンである。このタンパク質は主に急性炎症部位及び慢性炎症部位で産生されるものであり、血清中に分泌され、インターロイキン６受容体アルファを介して転写炎症反応を誘導する。
ＩＬ－８（インターロイキン８、ＣＸＣＬ８、またはＣ－Ｘ－Ｃモチーフケモカインリガンド８）は、ケモカイン（ＣＸＣケモカインファミリーのメンバー）であり、炎症反応の主要なメディエーターであり、強力な血管新生因子である。ＩＬ－８は主に好中球によって分泌され、好中球を感染部位へと導くことによって走化性因子として働く。
ＩＬ－１０（インターロイキン１０）は、主に単球によって産生されるサイトカインである。ＩＬ－１０は免疫制御及び炎症において多面的な作用を有している。ＩＬ－１０は、Ｔｈ１サイトカイン、ＭＨＣクラスＩＩ Ａｇ、及びマクロファージ上の共刺激分子の発現を下方制御する。ＩＬ－１０はＢ細胞の生存、増殖、及び抗体産生も増強する。ＩＬ－１０はＮＦ－カッパＢ活性の遮断も行い、ＪＡＫ－ＳＴＡＴシグナル伝達経路の制御に関与する。マウスでのノックアウト研究から、このサイトカインが腸管中で必要不可欠な免疫制御因子として機能することが示唆された（Ｓｃｈｒｅｉｂｅｒ，Ｓ．，ｅｔ ａｌ．，Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ １０８．５（１９９５）：１４３４－１４４４（その全体が参照によって組み込まれる）を参照のこと）。
ＩＦＮγ（インターフェロンガンマ）は、ＩＩ型インターフェロンクラスのメンバーである可溶性サイトカインである。ＩＦＮγは、ウイルス感染及び微生物感染に対する細胞応答を引き起こすインターフェロンガンマ受容体に結合するホモ二量体である。ＩＦＮγをコードする遺伝子中の変異は病原性感染症及びいくつかの自己免疫疾患への易罹患性の増加と関連している。
ＧＭ－ＣＳＦ（顆粒球－マクロファージコロニー刺激因子）は、マクロファージ、Ｔ細胞、マスト細胞、ナチュラルキラー細胞、内皮細胞、及び線維芽細胞によって分泌されるサイトカインである。ＧＭ－ＣＳＦは、幹細胞からの顆粒球（好中球、好酸球、及び好塩基球）ならびに単球の生成を刺激する単量体糖タンパク質である。ＧＭ－ＣＳＦは好中球の遊走も増強する。ＧＭ－ＣＳＦは、その遮断または抑制時に炎症を低減する標的として認識されている。
ＴＮＦα（腫瘍壊死因子）は、主にマクロファージによって分泌される多機能性の炎症促進性サイトカインであり、このサイトカインは腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）スーパーファミリーに属する。ＴＮＦαは、その受容体であるＴＮＦＲＳＦ１Ａ／ＴＮＦＲ１及びＴＮＦＲＳＦ１Ｂ／ＴＮＦＢＲに結合し、それによって当該受容体を介して機能し得る。ＴＮＦαは、細胞の増殖、分化、アポトーシス、脂質代謝、及び凝固を含めて、広範囲の生物学的プロセスの制御に関与する。
ＣＣＬ２（Ｃ－Ｃモチーフケモカインリガンド２）は、２つの隣接システイン残基によって特徴付けられるＣＣケモカインファミリーのメンバーである。ＣＣＬ２は、単球及び好塩基球には走化活性を示すが、好中球または好酸球には走化活性を示さない。ＣＣＬ２は、乾癬、関節リウマチ、及びアテローム性動脈硬化症のような、単球の浸潤によって特徴付けられる疾患の発病に関与している。
ＣＣＬ３（Ｃ－Ｃモチーフケモカインリガンド３またはマクロファージ炎症性タンパク質１－アルファ）は、ＣＣケモカインファミリーのメンバーである。ＣＣＬ３は、受容体ＣＣＲ１、ＣＣＲ４、及びＣＣＲ５への結合を介して、炎症反応において役割を果たす。ＣＣＬ３は、マクロファージ、単球、及び好中球の走化性因子である。
ＣＣＬ４（Ｃ－Ｃモチーフケモカインリガンド４）は、好中球、単球、Ｂ細胞、Ｔ細胞、線維芽細胞、内皮細胞、及び上皮細胞によって分泌されるマイトジェン誘導性モノカインであり、ＣＤ８＋Ｔ細胞によって産生される主要なＨＩＶ抑制因子の１つである。コードされるタンパク質は分泌され、ケモキネシス機能及び炎症機能を有する。
ＣＣＬ５（Ｃ－Ｃモチーフケモカインリガンド５）は、２つの隣接システイン残基によって特徴付けられるＣＣケモカインファミリーのメンバーである。このケモカインは、血中単球、メモリーヘルパーＴ細胞、及び好酸球の走化性因子として機能する。ＣＣＬ５は、好塩基球からのヒスタミンの放出を引き起こし、好酸球を活性化する。このサイトカインは、ＣＤ８＋細胞によって産生される主要なＨＩＶ抑制因子の１つである。
ＣＣＬ１９（Ｃ－Ｃモチーフケモカインリガンド１９）は、２つの隣接システイン残基によって特徴付けられるＣＣケモカインファミリーのメンバーである。ＣＣＬ１９は、正常なリンパ球の再循環及びホーミングにおいて役割を果たす。ＣＣＬ１９は、胸腺におけるＴ細胞の輸送、ならびに二次リンパ器官へのＴ細胞及びＢ細胞の遊走においても重要な役割を果たす。
ＣＣＬ２０（Ｃ－Ｃモチーフケモカインリガンド２０）は、２つの隣接システイン残基によって特徴付けられるＣＣケモカインファミリーのメンバーである。ＣＣＬ２０はリンパ球に走化活性を示し、骨髄系前駆細胞の増殖を抑制し得る。
ＣＣＬ２５（Ｃ－Ｃモチーフケモカインリガンド２５）は、樹状細胞、胸腺細胞、及び活性化マクロファージには走化活性を示すが、末梢血リンパ球及び好中球には不活性なサイトカインである。
ＣＸＣＬ１（Ｃ－Ｘ－Ｃモチーフケモカインリガンド１）は、Ｇタンパク質共役型受容体であるＣＸＣ受容体２を介してシグナルを伝達するケモカインのＣＸＣサブファミリーのメンバーである。ＣＸＣＬ１は、マクロファージ、好中球、及び上皮細胞によって発現され、好中球走化性因子活性を有する。このタンパク質の発現異常は、ある特定の腫瘍の増殖及び進行と関連している。
ＣＸＣＬ２（Ｃ－Ｘ－Ｃモチーフケモカインリガンド２またはマクロファージ炎症性タンパク質２－アルファ）は、炎症部位で発現するＣＸＣサブファミリーのケモカインである。ＣＸＣＬ２は単球及びマクロファージによって分泌され、多形核白血球及び造血幹細胞に走化性を示す。
ＣＸＣＬ１０（Ｃ－Ｘ－Ｃモチーフケモカインリガンド１０）はＣＸＣサブファミリーのケモカインである。ＣＸＣＬ１０は受容体ＣＸＣＲ３のリガンドである。このタンパク質がＣＸＣＲ３に結合すると、単球、ナチュラルキラー、及びＴ細胞の遊走の刺激、ならびに接着分子発現の調節を含めて、多面的な作用が生じる。
炎症性のサイトカイン及びケモカインの例は、限定されないが、Ｔｕｒｎｅｒ，Ｍ．Ｄ．，ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃａ ｅｔ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ Ａｃｔａ（ＢＢＡ）－Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｅｌｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ １８４３．１１（２０１４）：２５６３－２５８２に示されており、当該文献は、その全体が参照によって組み込まれる。
本明細書に記載の炎症性のサイトカイン及びケモカインは、例えば、免疫組織化学、ＥＬＩＳＡ、ＭＳＤ－ＥＣＬＡ、Ｏｌｉｎｋパネル（例えば、カスタムＯｌｉｎｋパネル；Ｏｌｉｎｋ Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ，Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）、またはＬｕｍｉｎｅｘマルチプレックスアッセイを使用して測定できる。代替的には、血液試料中の炎症性サイトカインの発現レベルはＲＴ－ＰＣＲを使用して測定できる。
１５．炎症性疾患の治療のための比較治療
本開示の抗体及びＡＤＣは炎症性疾患の治療に有用である。ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体及びＡＤＣは比較治療、他の抗炎症治療剤（抗炎症剤とも称される）よりも高い程度に炎症性疾患の症状または指標を緩和または低減する。こうした抗炎症剤は、本明細書で企図される炎症性疾患の治療として知られるまたは適応された代替治療である。例えば、ある特定の実施形態では、比較抗炎症剤は、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、ステロイド性抗炎症薬、ベータ－アゴニスト、抗コリン剤、抗ヒスタミン剤、及びメチルキサンチンのいずれか１つから選択される。ある特定の実施形態では、比較抗炎症剤は、ＩＬ－６阻害物質（可溶性ＩＬ－６及びＩＬ－６Ｒ）、ＧＭ－ＣＳＦ阻害物質、ＴＮＦα阻害物質、抗ＩＬ－１α、デキサメタゾン、ケモカイン及びケモカイン受容体アンタゴニスト、またはＪＡＫ阻害物質である。ある特定の実施形態では、比較抗炎症剤は、シクロスポリンである。
ＩＬ－６は炎症及び自己免疫疾患（上で論じたもの）において役割を果たすことから、ＩＬ－６は自己免疫疾患の有望な標的として認識されている。ＩＬ－６阻害物質の例としては、限定されないが、抗ＩＬ－６抗体、抗ＩＬ－６受容体抗体、抗ｇｐ１３０抗体、ＩＬ－６バリアント、ＩＬ－６受容体バリアント、ＩＬ－６またはＩＬ－６受容体の可溶性部分ペプチド、ならびに同様の活性を示す低分子量化合物及びプロトン（例えば、Ｃ３２６ Ａｖｉｍｅｒ（Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（２００５）２３：１５５６－６１（その全体が参照によって組み込まれる）））が挙げられる。関節リウマチ（ＲＡ）患者の滑膜及び血清ではＩＬ－６が高レベルで存在する。ＩＬ－６阻害物質でのＲＡ治療が顕著な効力を有することが最近の研究によって示されている（Ｈｅｎｎｉｇａｎ Ｓ．，ａｎｄ Ｋａｖａｎａｕｇｈ Ａ．Ｔｈｅｒ Ｃｌｉｎ Ｒｉｓｋ Ｍａｎａｇ．２００８；４（４）：７６７－７７５（その全体が参照によって組み込まれる）を参照のこと）。利用可能なＩＬ－６阻害物質の例としては、トシリズマブ（ＲｏＡｃｔｅｍｒａ，Ｒｏｃｈｅ）及びサリルマブ（Ｋｅｖｚａｒａ，Ｓａｎｏｆｉ）が挙げられる。
トシリズマブは、下記の軽鎖配列及び重鎖配列を有する組換えヒト化モノクローナル抗体ＩＬ－６受容体阻害物質である。
トシリズマブ軽鎖：
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＩＳＳＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＹＴＳＲＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣＱＱＧＮＴＬＰＹＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号９３０）
トシリズマブ重鎖：
ＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＲＰＳＱＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＹＳＩＴＳＤＨＡＷＳＷＶＲＱＰＰＧＲＧＬＥＷＩＧＹＩＳＹＳＧＩＴＴＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＭＬＲＤＴＳＫＮＱＦＳＬＲＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＬＡＲＴＴＡＭＤＹＷＧＱＧＳＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号９３１）
サリルマブは、インターロイキン６（ＩＬ－６）受容体の膜結合型形態及び可溶性形態の両方に結合する完全ヒト抗ＩＬ－６ＲモノクローナルＩｇＧ１抗体である。サリルマブは、下記の軽鎖配列及び重鎖配列を有する。
サリルマブ軽鎖：
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＶＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＳＳＷＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＧＡＳＳＬＥＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＳＹＹＣＱＱＡＮＳＦＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号９３２）
サリルマブ重鎖：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＲＦＴＦＤＤＹＡＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＧＩＳＷＮＳＧＲＩＧＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＥＮＳＬＦＬＱＭＮＧＬＲＡＥＤＴＡＬＹＹＣＡＫＧＲＤＳＦＤＩＷＧＱＧＴＭＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号９３３）
ＧＭ－ＣＳＦは炎症促進性機能を有することから、このサイトカインを標的とし、それを抑制するために治療が開発されている。ＧＭ－ＣＳＦを標的とする抗体及び抗体断片ならびに他のＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストの例は、限定されないが、ＵＳ出願第１６／４４２，７７９号及び同第１１／９４４，１６２号に示されており、これらの文献はそれぞれ、その全体が参照によって組み込まれる。
ＴＮＦα阻害物質は、ＴＮＦαの活性（上述のもの）を妨害する薬剤である。ＴＮＦα阻害物質には、限定されないが、本明細書に記載ならびに米国特許第６，０９０，３８２号、同第６，２５８，５６２号、同第６，５０９，０１５号、ならびに米国特許出願第０９／８０１，１８５号（現在は米国特許第７，２２３，３９４号）及び同第１０／３０２，３５６号に記載の抗ＴＮＦαヒト抗体及び抗体部分のそれぞれが含まれ、これらの文献はそれぞれ、その全体が参照によって組み込まれる。一実施形態では、本発明において使用されるＴＮＦα阻害物質は、抗ＴＮＦα抗体またはその断片であり、こうした抗ＴＮＦα抗体またはその断片には、インフリキシマブ（Ｒｅｍｉｃａｄｅ（登録商標），Ｊｏｈｎｓｏｎ ａｎｄ Ｊｏｈｎｓｏｎ（米国特許第５，６５６，２７２号（参照によって本明細書に組み込まれる））に記載のもの）、ＣＤＰ５７１（ヒト化モノクローナル抗ＴＮＦ－アルファＩｇＧ４抗体）、ＣＤＰ８７０（ヒト化モノクローナル抗ＴＮＦ－アルファ抗体断片）、抗ＴＮＦ ｄＡｂ（Ｐｅｐｔｅｃｈ）、ＣＮＴＯ１４８（ゴリムマブまたはＳｉｍｐｏｎｉ；Ｍｅｄａｒｅｘ及びＣｅｎｔｏｃｏｒ（国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ２００１／０２４７８５号（その全体が参照によって組み込まれる）を参照のこと））、ならびにアダリムマブ（Ｈｕｍｉｒａ（登録商標）Ａｂｂｏｔｔ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（米国特許第６，０９０，３８２号（その全体が参照によって組み込まれる）にＤ２Ｅ７として記載のヒト抗ＴＮＦｍＡｂ））が含まれる。本発明において使用可能な追加のＴＮＦ抗体については、米国特許第６，５９３，４５８号、同第６，４９８，２３７号、同第６，４５１，９８３号、及び同第６，４４８，３８０号に記載されており、これらの文献はそれぞれ、その全体が参照によって組み込まれる。別の実施形態では、ＴＮＦα阻害物質はＴＮＦ融合タンパク質であり、例えば、エタネルセプト（Ｅｎｂｒｅｌ（登録商標），Ａｍｇｅｎ（国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ１９９０／００４００１号（その全体が参照によって組み込まれる）に記載のもの））である。別の実施形態では、ＴＮＦα阻害物質は、組換えＴＮＦ結合タンパク質（ｒ－ＴＢＰ－Ｉ）（Ｓｅｒｏｎｏ）である。ＴＮＦα阻害物質の別の例は、セルトリズマブペゴル（Ｃｉｍｚｉａ）である。
セルトリズマブペゴは、腫瘍壊死因子－アルファ（ＴＮＦ－アルファ）に対するペグ化モノクローナル抗体である。以下には、重鎖及び軽鎖の配列例が示される。
セルトリズマブペゴル軽鎖：
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＫＡＳＱＮＶＧＴＮＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＡＬＩＹＳＡＳＦＬＹＳＧＶＰＹＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＮＩＹＰＬＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号９３４）
セルトリズマブペゴル重鎖：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＹＶＦＴＤＹＧＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＭＧＷＩＮＴＹＩＧＥＰＩＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＦＳＬＤＴＳＫＳＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＧＹＲＳＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＡＡ（配列番号９３５）
ＩＬ－１α阻害物質は、ＩＬ－１αの活性（上述のもの）を妨害する。ＩＬ－１α阻害物質の例としては、限定されないが、ベルメキマブ（ＭＡＢｐ１またはＸｉｌｏｎｉｘ）及びリロナセプトが挙げられる。
ベルメキマブ（ＭＡＢｐ１またはＸｉｌｏｎｉｘ）は、インターロイキン１アルファを標的とするＩｇＧ１ｋアイソタイプのヒトモノクローナル抗体である。以下には、ベルメキマブの重鎖及び軽鎖の配列例が示される。
ベルメキマブ重鎖：
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＴＡＳＧＦＴＦＳＭＦＧＶＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＡＶＳＹＤＧＳＮＫＹＹＡＥＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＩＬＦＬＱＭＤＳＬＲＬＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＧＲＰＫＶＶＩＰＡＰＬＡＨＷＧＱＧＴＬＶＴＦＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号９３６）
ベルメキマブ軽鎖：
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＶＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＳＳＷＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＥＡＳＮＬＥＴＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＳＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＴＳＳＦＬＬＳＦＧＧＧＴＫＶＥＨＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号９３７）
リロナセプトは、インターロイキン１阻害物質として機能する二量体融合タンパク質であり、家族性寒冷自己炎症性症候群（ＦＣＡＳ）及びマックル・ウェルズ症候群（ＭＷＳ）を含む、ＣＡＰＳ（クリオピリン関連周期熱症候群としても知られる）の治療に使用される。ＩＬ－１αは、その標的の１つである。以下には、リロナセプトの配列例が示される。
ＳＥＲＣＤＤＷＧＬＤＴＭＲＱＩＱＶＦＥＤＥＰＡＲＩＫＣＰＬＦＥＨＦＬＫＦＮＹＳＴＡＨＳＡＧＬＴＬＩＷＹＷＴＲＱＤＲＤＬＥＥＰＩＮＦＲＬＰＥＮＲＩＳＫＥＫＤＶＬＷＦＲＰＴＬＬＮＤＴＧＮＹＴＣＭＬＲＮＴＴＹＣＳＫＶＡＦＰＬＥＶＶＱＫＤＳＣＦＮＳＰＭＫＬＰＶＨＫＬＹＩＥＹＧＩＱＲＩＴＣＰＮＶＤＧＹＦＰＳＳＶＫＰＴＩＴＷＹＭＧＣＹＫＩＱＮＦＮＮＶＩＰＥＧＭＮＬＳＦＬＩＡＬＩＳＮＮＧＮＹＴＣＶＶＴＹＰＥＮＧＲＴＦＨＬＴＲＴＬＴＶＫＶＶＧＳＰＫＮＡＶＰＰＶＩＨＳＰＮＤＨＶＶＹＥＫＥＰＧＥＥＬＬＩＰＣＴＶＹＦＳＦＬＭＤＳＲＮＥＶＷＷＴＩＤＧＫＫＰＤＤＩＴＩＤＶＴＩＮＥＳＩＳＨＳＲＴＥＤＥＴＲＴＱＩＬＳＩＫＫＶＴＳＥＤＬＫＲＳＹＶＣＨＡＲＳＡＫＧＥＶＡＫＡＡＫＶＫＱＫＶＰＡＰＲＹＴＶＥＫＣＫＥＲＥＥＫＩＩＬＶＳＳＡＮＥＩＤＶＲＰＣＰＬＮＰＮＥＨＫＧＴＩＴＷＹＫＤＤＳＫＴＰＶＳＴＥＱＡＳＲＩＨＱＨＫＥＫＬＷＦＶＰＡＫＶＥＤＳＧＨＹＹＣＶＶＲＮＳＳＹＣＬＲＩＫＩＳＡＫＦＶＥＮＥＰＮＬＣＹＮＡＱＡＩＦＫＱＫＬＰＶＡＧＤＧＧＬＶＣＰＹＭＥＦＦＫＮＥＮＮＥＬＰＫＬＱＷＹＫＤＣＫＰＬＬＬＤＮＩＨＦＳＧＶＫＤＲＬＩＶＭＮＶＡＥＫＨＲＧＮＹＴＣＨＡＳＹＴＹＬＧＫＱＹＰＩＴＲＶＩＥＦＩＴＬＥＥＮＫＰＴＲＰＶＩＶＳＰＡＮＥＴＭＥＶＤＬＧＳＱＩＱＬＩＣＮＶＴＧＱＬＳＤＩＡＹＷＫＷＮＧＳＶＩＤＥＤＤＰＶＬＧＥＤＹＹＳＶＥＮＰＡＮＫＲＲＳＴＬＩＴＶＬＮＩＳＥＩＥＳＲＦＹＫＨＰＦＴＣＦＡＫＮＴＨＧＩＤＡＡＹＩＱＬＩＹＰＶＴＮＳＧＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号９３８）
デキサメタゾンまたはＭＫ－１２５は、内分泌性、リウマチ性、膠原性、皮膚科学性、アレルギー性、眼性、胃腸性、呼吸性、血液系、新生物性、浮腫性、及び他の状態の治療に使用される９位フッ素化副腎皮質ステロイドである。以下には、デキサメタゾンの構造例が示される。
Figure 2023534191000006
本明細書で使用される「ケモカインアンタゴニスト」及び「ケモカイン受容体アンタゴニスト」という用語は、ケモカインがその対応受容体のうちの１つ以上に結合することを阻害、低減、抑止、または遮断する薬物または分子を指す。ケモカインアンタゴニスト及びケモカイン受容体アンタゴニストの例は、限定されないが、ＵＳ出願第１５／７５９，８８６号及び同第１０／９９６，３５３号に示されており、これらの文献はそれぞれ、その全体が参照によって組み込まれる。
ＪＡＫ阻害物質は、ヤヌスキナーゼファミリーの酵素（ＪＡＫ１、ＪＡＫ２、ＪＡＫ３、ＴＹＫ２）のうちの１つ以上の活性を阻害し、それによってＪＡＫ－ＳＴＡＴシグナル伝達経路を妨害することによって機能する。ヤヌスキナーゼ（ＪＡＫ）ファミリーは、免疫応答に関与する細胞の増殖及び活動をサイトカイン依存性に制御する上で重要な役割を果たす。ＪＡＫ阻害物質の例は、限定されないが、ＵＳ出願第１２／４０１，３４８号及び国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１７／０２５１１７号に示されており、これらの文献はそれぞれ、その全体が参照によって組み込まれる。
ＡＺＤ１４８０は、ＪＡＫ２キナーゼの強力なアデノシン三リン酸競合的小分子阻害物質である。ＡＺＤ１４８０は、固形悪性腫瘍、真性多血症後原発性骨髄線維症（ＰＭＦ）、及び本態性血小板血症後骨髄線維症の治療について試験する治験において使用されている。ＡＺＤ１４８０は、増殖、生存、ならびにＦＧＦＲ３シグナル伝達及びＳＴＡＴ３シグナル伝達、ならびにヒト多発性骨髄腫細胞のサイクリンＤ２を含む下流標的を抑制することが示されている（Ｓｃｕｔｏ，Ａｎｎａ，ｅｔ ａｌ．Ｌｅｕｋｅｍｉａ ２５．３（２０１１）：５３８－５５０（その全体が参照によって組み込まれる）を参照のこと）。以下には、ＡＺＤ１４８０の構造例が示される。
Figure 2023534191000007
シクロスポリン（ＣｓＡ）は、臓器移植片拒絶を阻止し、様々な炎症状態及び自己免疫状態を治療する免疫調節性特性を有することが知られるカルシニューリン阻害物質である。以下には、シクロスポリンの構造例が示される。
Figure 2023534191000008
抗炎症剤の例としては、限定されないが、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、ステロイド性抗炎症薬、ベータ－アゴニスト、抗コリン剤、抗ヒスタミン剤（例えば、エタノールアミン、エチレンジアミン、ピペラジン、及びフェノチアジン）、ならびにメチルキサンチンが挙げられる。ＮＳＡＩＤの例としては、限定されないが、アスピリン、イブプロフェン、サリチル酸塩、アセトアミノフェン、セレコキシブ、ジクロフェナク、エトドラク、フェノプロフェン、インドメタシン、ケトロラク、オキサプロジン、ナブメトン、スリンダク、トルメチン、ロフェコキシブ、ナプロキセン、ケトプロフェン、及びナブメトンが挙げられる。そのようなＮＳＡＩＤは、シクロオキシゲナーゼ酵素（例えば、ＣＯＸ－１及び／またはＣＯＸ－２）を阻害することによって機能する。ステロイド性抗炎症薬の例としては、限定されないが、糖質コルチコイド、デキサメタゾン、コルチゾン、ヒドロコルチゾン、プレドニゾン、プレドニゾロン、トリアムシノロン、アザルフィジン、ならびにエイコサノイド（プロスタグランジン、トロンボキサン、及びロイコトリエンなど）が挙げられる。
１６．組み合わせ療法
一部の実施形態では、本明細書で提供される抗体またはＡＤＣは、少なくとも１つの追加の治療剤と共に投与される。本明細書で提供される抗体またはＡＤＣと共に、任意の適切な追加の治療剤を投与することができる。一部の態様では、追加の治療剤は、放射線、細胞傷害性薬剤、化学療法剤、細胞増殖抑制剤、抗ホルモン剤、免疫刺激剤、免疫抑制剤、抗炎症剤、抗血管新生剤、及びそれらの組み合わせから選択される。
追加の治療剤は、任意の適切な手段によって投与され得る。一部の実施形態では、本明細書で提供される抗体またはＡＤＣ及び追加の治療剤は同じ医薬組成物に含まれる。一部の実施形態では、本明細書で提供される抗体またはＡＤＣ及び追加の治療剤は異なる医薬組成物に含まれる。
本明細書で提供される抗体またはＡＤＣ及び追加の治療剤が異なる医薬組成物に含まれる実施形態では、抗体またはＡＤＣの投与は、追加の治療剤の投与の前、同時、及び／または後に起こり得る。
１７．診断方法
対象からの細胞上のＴＦの存在を検出するための方法も提供される。そのような方法は、例えば、本明細書に提供される抗体またはＡＤＣによる治療に対する応答性を予測及び評価するために使用され得る。
一部の実施形態では、この方法を使用して、炎症性疾患を有するか、またはその疑いがある対象のＴＦを検出することができる。一部の実施形態では、方法は（ａ）対照から試料を受け取ることと、（ｂ）試料を本明細書で提供される抗体と接触させることにより、試料中のＴＦの存在またはレベルを検出することと、を含む。一部の実施形態では、方法は（ａ）本明細書で提供される抗体を対象に投与することと、（ｂ）対象におけるＴＦの存在またはレベルを検出することと、を含む。一部の実施形態では、炎症性疾患は、大腸炎、炎症性腸疾患、関節炎、急性肺損傷（ＡＬＩ）、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、及び呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）のいずれか１つである。一部の実施形態では、炎症性疾患は、血管炎症を伴う。
一部の実施形態では、方法は（ａ）本明細書で提供されるＡＤＣを対象に投与することと、（ｂ）対象におけるＴＦの存在またはレベルを検出することと、を含む。一部の実施形態では、炎症性疾患は、大腸炎、炎症性腸疾患、関節炎、急性肺損傷（ＡＬＩ）、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、及び呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）のいずれか１つである。
一部の実施形態では、本明細書で提供される抗体は蛍光標識とコンジュゲートされている。一部の実施形態では、本明細書で提供される抗体は放射性標識とコンジュゲートされている。一部の実施形態では、本明細書で提供される抗体は酵素標識とコンジュゲートされている。
一部の実施形態では、本明細書で提供されるＡＤＣは蛍光標識を含む。一部の実施形態では、本明細書で提供されるＡＤＣは放射性標識を含む。一部の実施形態では、本明細書で提供されるＡＤＣは酵素標識を含む。
一部の実施形態では、そのような細胞によって発現されるＴＦの相対量が決定される。ＴＦを発現する細胞の割合及びそのような細胞によって発現されるＴＦの相対量は、任意の適切な方法によって決定することができる。一部の実施形態では、このような測定を行うためにフローサイトメトリーが使用される。一部の実施形態では、このような測定を行うために蛍光支援細胞選別（ＦＡＣＳ）が使用される。
１８．キット
本明細書で提供される抗体またはＡＤＣを含むキットも提供される。本明細書に記載されるように、キットは、疾患または障害の治療、予防、及び／または診断に使用され得る。
一部の実施形態では、キットは、容器と、容器上または容器に付着されたラベルまたは添付文書を含む。好適な容器は、例えば、瓶、バイアル、注射器、及びＩＶ溶液バッグを含む。容器は、ガラスまたはプラスチック等の様々な材料から形成することができる。容器は、それ自体で、または別の組成物と組み合わされたときに、疾患または障害を治療、予防及び／または診断するのに有効な組成物を保持する。容器は無菌のアクセスポートを有していてもよい。例えば、容器が静脈内溶液バッグまたはバイアルである場合、それは針によって穴を開けることができるポートを有することができる。組成物中の少なくとも１つの活性剤は、本明細書で提供される抗体またはＡＤＣである。ラベルまたは添付文書は、組成物が、選択された状態を治療するために使用されることを表示する。
一部の実施形態では、キットは（ａ）本明細書で提供される抗体またはＡＤＣを含む第１の組成物が含まれる第１の容器と、（ｂ）さらなる治療剤を含む第２の組成物が中に含まれる第２の容器と、を含む。本発明のこの実施形態におけるキットは、組成物が特定の状態を治療するために使用できることを示す添付文書をさらに含み得る。
代替的に、またはさらに、キットは、薬学的に許容される賦形剤を含む第２（または第３）の容器をさらに含み得る。一部の態様では、賦形剤は緩衝剤である。キットは、フィルター、針、及び注射器を含む、商業的及び使用者の観点から望ましい他の物質をさらに含み得る。
以下は、本発明の方法及び組成物の実施例である。本明細書で提供される一般的な説明を前提として、様々な他の実施形態が実施されてもよいことが理解されよう。
以下は、本発明を実施するための特定の実施形態の例である。実施例は、例示の目的のためにのみ提供され、本発明の範囲を限定することを意図するものでは決してない。使用される数字（例えば、量、温度等）に関して正確さを確実にするための努力がなされてきたが、いくらかの実験誤差及び偏差が当然に考慮されるべきである。
本発明の実施は、別途示されない限り、当該技術分野の技術水準の範囲内のタンパク質化学、生化学、組換えＤＮＡ技術、及び薬理学の従来の方法を使用する。そのような技術は、文献で完全に説明されている。例えば、Ｔ．Ｅ．Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ，Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ（Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ，１９９３）；Ａ．Ｌ．Ｌｅｈｎｉｎｇｅｒ，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（Ｗｏｒｔｈ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｉｎｃ．，ｃｕｒｒｅｎｔ ａｄｄｉｔｉｏｎ）；Ｓａｍｂｒｏｏｋ，ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，１９８９）；Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ（Ｓ．Ｃｏｌｏｗｉｃｋ ａｎｄ Ｎ．Ｋａｐｌａｎ ｅｄｓ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．）；Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１８ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｅａｓｔｏｎ，Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ：Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，１９９０）；Ｃａｒｅｙ ａｎｄ Ｓｕｎｄｂｅｒｇ Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３ｒｄ Ｅｄ．（Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ） Ｖｏｌｓ Ａ ａｎｄ Ｂ（１９９２）を参照されたい。
実施例１：ＴＦ抗体の生成
ヒト、カニクイザル、及びマウスのＴＦ細胞外ドメイン（ＥＣＤ）フラグメントは、Ｃ末端のＨｉｓまたはＦｃγフラグメントの融合体として発現した。Ｅｘｐｉ２９３細胞（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ，ＵＳＡ）に、製造元の推奨に従って、ヒト、カニクイザル、またはマウスのＴＦ ＥＣＤ－Ｈｉｓ６（ＴＦ－Ｈｉｓ；それぞれ、配列番号８１１、８１５、及び８１９）をコードするｐｃＤＮＡ３．１Ｖ５－ＨｉｓＡ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）、またはヒト、カニクイザル、またはマウスのＴＦ ＥＣＤ－Ｆｃ（ＴＦ－Ｆｃ；それぞれ、配列番号：８１２、８１６、及び８２０）をコードするｐＦＵＳＥ－ｈＩｇＧ１－Ｆｃ（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ，ＵＳＡ）を一過性にトランスフェクトした。Ｈｉｓタグ付きタンパク質の場合、遠心分離によって細胞を除去した細胞培養上清は、３３０ｍＭ塩化ナトリウム及び１３．３ｍＭイミダゾールで前処理された。推奨手順を使用して、ＴＦ－Ｈｉｓ６及びＴＦ－Ｆｃタンパク質を、それぞれ、ＨｉｓＴｒａｐ ＨＰ及びＭａｂＳｅｌｅｃｔ ＳｕＲｅカラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｂｉｏ－Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｍａｒｌｂｏｒｏｕｇｈ，ＭＡ，ＵＳＡ）によるアフィニティークロマトグラフィーによって精製した。Ｅｘｐｉ２９３で発現したＦＶＩＩ－Ｆｃは、ＭａｂＳｅｌｅｃｔ ＳｕＲｅカラムによるアフィニティークロマトグラフィー、続いてサイズ排除クロマトグラフィーによって精製された。ＴＦ－Ｈｉｓ６及びＴＦ－Ｆｃタンパク質は、推奨されているように１５倍モル過剰のＳｕｌｆｏ－ＮＨＳ－ＳＳ－ｂｉｏｔｉｎによりビオチン化された（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）。非標識及びビオチン化タンパク質は、Ｓｕｐｅｒｄｅｘ ２００ Ｉｎｃｒｅａｓｅ １０／３００ ｃｏｌｕｍｎ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｂｉｏ－Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用したサイズ排除クロマトグラフィーによってさらに精製された。
ヒトＴＦに対するヒト抗体は、以下に記載するように、スクリーニング抗原としてビオチン化組換えＴＦタンパク質を使用して、Ａｄｉｍａｂ（商標）酵母ベースの抗体提示によって生成された。ヒトＴＦに対する全ての抗体を、カニクイザル、及びマウスＴＦとの交差反応性について評価した。ヒト、カニクイザル、及びマウスのＴＦに対する抗体の結合活性を表５に示す。
Ｉ．抗ＴＦ抗体を単離するためのライブラリー調査及び選択手法
ナイーブライブラリーの選択
以前に述べられたように、それぞれ約１０９個の多様性の８つのナイーブなヒト合成酵母ライブラリーが設計、生成、及び増殖された（例えば、ＷＯ２００９０３６３７９；ＷＯ２０１０１０５２５６；ＷＯ２０１２００９５６８；Ｘｕ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ Ｄｅｓ Ｓｅｌ．，２０１３，２６（１０）：６６３－７０を参照されたい）。単量体のヒトＴＦ選択のための８つのナイーブライブラリーを使用して、８つの並列した選択を実行した。
最初の２ラウンドの選別では、本質的に説明されている（Ｓｉｅｇｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ，２００４，２８６（１－２）：１４１－５３）ように、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ ＭＡＣＳシステムを利用した磁気ビーズ選別技法が実行された。簡単に言うと、酵母細胞（約１０１０細胞／ライブラリー）を、０．１％ＢＳＡを含むＦＡＣＳ洗浄緩衝液ＰＢＳ中、室温で１５分間、１０ｎＭのビオチン化ヒトＴＦ Ｆｃ融合抗原と共にインキュベートした。５０ｍＬの氷冷洗浄緩衝液で１回洗浄した後、細胞ペレットを４０ｍＬの洗浄緩衝液に再懸濁し、５００μｌのストレプトアビジンＭｉｃｒｏＢｅａｄｓ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ，Ｂｅｒｇｉｓｃｈ Ｇｌａｄｂａｃｈ，Ｇｅｒｍａｎｙ；カタログ番号１３０－０４８－１０１）を酵母に添加し、４℃で１５分間インキュベートした。次に、酵母をペレット化し、５ｍＬの洗浄緩衝液に再懸濁し、ＭＡＣＳ ＬＳカラム（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ，Ｂｅｒｇｉｓｃｈ Ｇｌａｄｂａｃｈ，Ｇｅｒｍａｎｙ；カタログ番号１３０－０４２－４０１）にロードした。５ｍＬをロードした後、カラムを３ｍＬのＦＡＣＳ洗浄緩衝液で３回洗浄した。次いで、カラムを磁場から取り出し、酵母を５ｍＬの増殖培地で溶離し、一晩増殖させた。
ＭＡＣＳの２ラウンドに続いて、フローサイトメトリー（ＦＡＣＳ）を使用して、次の４ラウンドの選別を実行した。ＦＡＣＳの最初のラウンドでは、約５×１０７の酵母をペレット化し、洗浄緩衝液で３回洗浄し、マウス及び／またはカニクイザルのＴＦ抗原のビオチン化Ｆｃ融合タンパク質それぞれ１０ｎＭと共に、室温で１０～１５分間インキュベートした。次いで、酵母を２回洗浄し、１：１００に希釈したＬＣ－ＦＩＴＣＳｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ，Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ，Ａｌａｂａｍａ；カタログ番号２０６２－０２）と、１：５００に希釈したＳＡ－６３３（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｇｒａｎｄ Ｉｓｌａｎｄ，ＮＹ；カタログ番号Ｓ２１３７５）、または１：５０に希釈したＥＡ－ＰＥ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ Ｌｏｕｉｓ；カタログ番号Ｅ４０１１）と、二次試薬とで、４℃で１５分間染色した。氷冷洗浄緩衝液で２回洗浄した後、細胞ペレットを０．４ｍＬの洗浄緩衝液に再懸濁し、ストレーナーでキャップした選別チューブに移した。ＦＡＣＳ ＡＲＩＡソーター（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用してソーティングを行い、ＴＦ結合について選択するためのソートゲートを決定した。ＦＡＣＳの最初のラウンドから選択されたマウスとカニクイザルの集団を増殖させ、選択培地での継代培養により増殖した。ＦＡＣＳの２ラウンド、３ラウンド、及び４ラウンドは、陽性選別でＴＦ結合物を濃縮し、陰性選別でＣＨＯ細胞の可溶性膜タンパク質を使用して非特異的結合物の数を減らした（例えば、ＷＯ２０１４１７９３６３及びＸｕｅｔ ａｌ．，ＰＥＤＳ，２０１３，２６（１０）：６６３－７０を参照されたい）。選別の最後のラウンドの後、酵母を播種し、シーケンスした。
ナイーブセレクションで同定されたクローンの親和性成熟
ナイーブの結果（上述）由来の重鎖を使用して、軽鎖多様化ライブラリーを調製し、それを追加の選択ラウンドに使用した。特に、重鎖可変領域は４番目のナイーブ選択ラウンドの結果から抽出され、１×１０６の多様性の軽鎖ライブラリーに形質変換された。
最初の選択ラウンドでは、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ ＭＡＣＳビーズと抗原としての１０ｎＭビオチン化ヒトＴＦ Ｆｃ－ｆｕｓｉｏｎを使用した。ＭＡＣＳビーズの選択に続いて、１０ｎＭのカニクイザルとマウスＦｃ融合ＴＦ、またはビオチン化Ｆｃ融合ＴＦ抗原もしくはビオチン化モノマーＨＩＳフォームのヒト、マウス、もしくはカニクイザルＴＦを使用して、上述のように３ラウンドのＦＡＣＳ選別を実行した。各ＦＡＣＳ選択ラウンドからの個々のコロニーをシーケンシングした。
ナイーブまたは軽鎖の多様化の選択から同定されたリードの最適化
リードクローンの最適化は、３つの成熟戦略を利用して実行された：ＣＤＲ－Ｈ１とＣＤＲ－Ｈ２の多様化；ＣＤＲ－Ｈ１とＣＤＲ－Ｈ２多様性プール最適化後のＣＤＲ－Ｈ３の多様化；選択したＣＤＲ－Ｌ１とＣＤＲ－Ｌ２多様性プール内でのＣＤＲ－Ｌ３の多様化。
ＣＤＲ－Ｈ１及びＣＤＲ－Ｈ２の選択：ナイーブまたは軽鎖多様化手順のいずれかから選択されたクローンのＣＤＲ－Ｈ３は、１×１０８の多様性のＣＤＲ－Ｈ１及びＣＤＲ－Ｈ２バリアントを含む既製のライブラリーに再混合され、ビオチン化Ｆｃ融合カニクイザルＴＦ抗原、ビオチン化カニクイザルＨＩＳ－ＴＦ抗原、及び／またはビオチン化ヒトＨＩＳ－ＴＦを使用して選択が実行された。親和性圧力は、室温での平衡条件下でビオチン化ＨＩＳ－ＴＦ抗原の濃度を下げること（１ｎＭまで）を使用して適用した。
ＣＤＲ－Ｈ３／ＣＤＲ－Ｈ１／ＣＤＲ－Ｈ２の選択：ＣＤＲ－Ｈ３と、ＣＤＲ－Ｈ３のいずれかの側にある相同隣接領域を含むオリゴは、ＩＤＴに注文された。ＣＤＲ－Ｈ３のアミノ酸位置は、ＣＤＲ－Ｈ３全体のオリゴごとに２つの位置でＮＮＫ多様性を介して多様化した。ＣＤＲ－Ｈ３オリゴは、ＣＤＲ－Ｈ３の隣接領域にアニールするプライマーを使用して二本鎖にされた。重鎖可変領域の残りのＦＲ１からＦＲ３は、上で選択したＣＤＲ－Ｈ１とＣＤＲ－Ｈ２の多様性から単離された、改善された親和性を有する抗体のプールから増幅された。次いで、二本鎖ＣＤＲ－Ｈ３オリゴ、ＦＲ１からＦＲ３のプールされたフラグメント、及び重鎖発現ベクターを、親の軽鎖をすでに含む酵母に形質転換することにより、ライブラリーを作成した。選択は、ＦＡＣＳ選別を使用して、前のサイクルと同様に実行された。ＦＡＣＳラウンドは、非特異的結合、種の交差反応性、及び親和性圧力を評価し、選別を実行して、目的の特性を持つ集団を得た。これらの選択の親和性圧力は、ＣＤＲ－Ｈ１及びＣＤＲ－Ｈ２の選択で上述したように実行された。
ＣＤＲ－Ｌ３／ＣＤＲ－Ｌ１／ＣＤＲ－Ｌ２の選択：ＣＤＲ－Ｌ３と、ＣＤＲ－Ｌ３のいずれかの側にある相同隣接領域を含むオリゴは、ＩＤＴに注文された。ＣＤＲ－Ｌ３のアミノ酸位置は、ＣＤＲ－Ｌ３全体のオリゴごとに１つの位置でＮＮＫ多様性を介して多様化した。ＣＤＲ－Ｌ３オリゴは、ＣＤＲ－Ｌ３の隣接領域にアニールするプライマーを使用して二本鎖にされた。軽鎖可変領域の残りのＦＲ１からＦＲ３は、上で選択したＣＤＲ－Ｌ１とＣＤＲ－Ｌ２の多様性から単離された、改善された親和性を有する抗体のプールから増幅された。次いで、二本鎖ＣＤＲ－Ｌ３オリゴ、ＦＲ１からＦＲ３のプールされたフラグメント、及び軽鎖発現ベクターを、親の重鎖をすでに含む酵母に形質転換することにより、ライブラリーを作成した。選択は、ＦＡＣＳ選別を使用して、前のサイクルと同様に実行された。ＦＡＣＳラウンドは、非特異的結合、種の交差反応性、及び親和性圧力を評価し、選別を実行して、目的の特性を持つ集団を得た。親和性圧力には、濃度調整、及び抗原のプレ複合化における親のＦａｂの組み込みが含まれていた。
ＩＩ．ＩｇＧ及びＦａｂの生成と精製
さらなる特性評価のために十分な量の選択された抗体を生成するために、酵母クローンを飽和状態まで成長させ、次いで、３０℃で４８時間振盪しながら誘導した。誘導後、酵母細胞をペレット化し、上清を精製のために回収した。プロテインＡカラムを使用してＩｇＧを精製し、ｐＨ２．０の酢酸で溶離した。Ｆａｂフラグメントはパパイン消化によって生成され、ＣａｐｔｕｒｅＳｅｌｅｃｔ ＩｇＧ－ＣＨ１アフィニティーマトリックス（ＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、カタログ番号１９４３２００２５０）で精製された。
実施例２：ＤＳＳ大腸炎モデルにおける抗ＴＦ抗体の影響
インビボ試験を実施することで、大腸炎モデルの炎症性エンドポイントに対する抗ＴＦ抗体（例えば、４３Ｄ８）の作用を決定した。４３Ｄ８クローンはマウスＴＦとの交差反応性を有し、マウスＴＦに高親和性で結合することから、この実施例及び以下の実施例では４３Ｄ８クローンを、本明細書に記載のその他の抗ＴＦ抗体の代理物として使用した。例えば、表５を参照のこと。
大腸炎モデルでは、デキストラン硫酸ナトリウム（ＤＳＳ）を投与することで、結腸上皮細胞への毒性に起因して大腸炎様の病態が引き起こされ、これによって粘膜機能が損なわれ、好中球、マクロファージ、及びリンパ球の浸潤が生じる。その結果、上皮バリア機能が失われ、炎症促進性のサイトカイン及びケモカインが分泌され、細胞傷害能を有する細胞（好中球及び炎症性マクロファージなど）が流入する。これは、当該技術分野ではＴ細胞介在性のプロセスとは見なされない。
試験の０日目に、滅菌水（群１、ｎ＝５）または２．５％（ｗ／ｖ）になるようにＤＳＳを溶解した滅菌水（群２～５、群当たりのマウスｎ＝１０）のいずれかを８～１２週齢の雄性Ｃ５７ＢＬ／６マウスに自由摂取させた。０日目及び４日目に、下記の用量を群２、群４、及び群５のマウスに投与した（静脈内経路）。
・群２：媒体（ＰＢＳ）
・群４：３ｍｇ／ｋｇの被験物
・群５：１０ｍｇ／ｋｇの被験物
被験物は抗ＴＦ抗体４３Ｄ８とした。
０日目から１０日目にかけて、８０ｍｇ／ｋｇの陽性対照シクロスポリン（ＣｓＡ）（Ｎｅｏｒａｌ）を強制経口投与することによって群３のマウスを１日１回処理することも行った。８日目に、残りの実験については全ての動物に滅菌水を投与し、１０日目にそれらの動物を安楽死させた。
試験を通じて、臨床観察を１日１回実施した。体重を１日１回測定し、記録した（０日目～１０日目）。図２に示されるスコア付けシステムを使用してボディコンディションを１日１回視覚的に評価することも行った。便の硬さを定性的に決定し、ヘモカルト潜血検査を使用して便中の血液を１日１回測定した。表５０、表６０、及び表６１は、便の硬さ、便血液（潜血）、及びベースラインレベル（０日目）に対する体重変化の評価に使用したスコア付けシステムを示す。便の硬さスコア、便血液スコア、及び体重スコアを統合することで、測定時点の各対象の疾患活動性指標を得た。表６２は、疾患活動性指標を決定した統合スコア付けシステムを示す。
（表５０）便の硬さスコア
Figure 2023534191000009
（表６０）便血液スコア
Figure 2023534191000010
（表６１）体重スコア
Figure 2023534191000011
（表６２）疾患活動性指標（ＤＡＩ）スコア（便の硬さスコア＋便血液スコア＋体重スコアの統合）
Figure 2023534191000012
安楽死後、動物の測定（体長の決定）及び体重測定を実施した。動物ごとに体重／体長比を計算した。動物を解剖し、その脾臓の重量を決定した。動物ごとに結腸を「スイスロール状」にし、１０％の中性緩衝ホルマリン（ＮＢＦ）中に２４時間浸漬した後、７０％のエタノール中に浸漬した。固定化結腸試料を社内で処理した。試料をパラフィン中に包埋し、５ミクロンの切片とし、ヘマトキシリン及びエオシン（Ｈ＆Ｅ）でスライドを染色して組織学的分析用とした。
ＣｓＡで処理した群３の動物については、４日目までに顕著かつ早期の体重減少（ベースラインに対して約２０％の体重減少）が生じることが結果から示された。最初の５日間は、媒体対照群（群２）ならびに群４及び群５については、体重減少は同等であった。その後、５日目～１０日目の間は、群４及び群５の動物と比較して媒体対照動物の体重減少が顕著に大きくなった。この結果は、抗ＴＦ抗体４３Ｄ８で処理することで、比較薬物と比較してベースラインレベルに対する体重減少が少なくなることを示している。この結果は、抗ＴＦ抗体で処理することで、処理を行わなければ生じることになる体重減少よりも体重減少が少なくなることも示している（図３）。
上記の評価指標を使用して疾患活動性も分析した。群５の動物（１０ｍｇ／ｋｇの４３Ｄ８を投与した）では、媒体対照の動物と比較して疾患活動性スコアが低かった（正常に近かった）（図４）。媒体対照群または３ｍｇ／ｋｇの４３Ｄ８を投与した群では、疾患活動性に対する効果は観察されなかった。全体として、こうした結果は、抗ＴＦ抗体で処理することで、処理を行わなければ観察されることになるものと比較して、便の硬さが正常に向かい、検出可能な血液が少なくなり、体重減少が少なくなることを示すものであった。
ボディコンディショニングの結果から、７日目までは被験マウスのボディコンディションに変化は生じないが、その後、群２のＣｓＡマウスではボディコンディションが最も顕著に悪化することが明らかになった。試験を通じて、ナイーブ群のみが３のボディコンディション（正常かつ良好なコンディション状態）を維持した。ボディコンディションスコアの低下幅は群５が最小であり、次いで群４となった（図５）。この結果は、抗ＴＦ抗体で処理することで、比較処理及び処理を行わなければ生じることになるボディコンディションと比較してボディコンディションが改善されることを示している。
脾臓重量の測定から得られた結果からは、媒体対照と比較して４３Ｄ８処理群では脾臓重量が用量依存的に減少することが示された（図６）。そうした結果は、炎症性疾患で見られることの多い脾臓肥大が抗ＴＦ抗体での処理によって好転または減少し得ることを示唆している。結果は、抗ＴＦ抗体が全身性の抗炎症作用を有することも示している。
実施例３：ＤＳＳ大腸炎モデルにおける抗ＴＦ抗体の影響
別のインビボ試験を実施することで、大腸炎モデルの炎症性エンドポイントに対する抗ＴＦ抗体（例えば、４３Ｄ８）の作用を決定した。試験方法は、実施例２に概説したものと同じとしたが、大腸炎の誘発に使用するＤＳＳの濃度ならびに試験終了日及び対照を変更した。
簡潔に記載すると、試験０日目に、滅菌水（群１、ｎ＝５）または３％になるようにＤＳＳを溶解した滅菌水（群２～５、群当たりのマウスｎ＝１０）のいずれかを８～１２週齢の雄性Ｃ５７ＢＬ／６マウスに自由摂取させた。０日目及び４日目に、アイソタイプ、４３Ｄ８ ｍＡｂ、または抗マウスＩｌ－６ ｍＡｂを群４、群５、及び群６のマウスに２回投与した。０日目から１０日目にかけて、媒体または８０ｍｇ／ｋｇの陽性対照シクロスポリン（ＣｓＡ）（Ｎｅｏｒａｌ、ｎ＝１０）を強制経口投与することによって群２及び群３のマウスを１日１回処理することも行った。８日目に、全ての動物を安楽死させた。実験設計は表６７に示され、時点及びスケジュールは図１３に示される。試験のエンドポイントは、体重、ＤＡＩスコア、結腸密度（幅／長さ）、脾臓重量、及び病理組織診断とした。
（表６７）ＤＳＳモデルの実験設計
Figure 2023534191000013
体重測定、ＤＡＩスコア、結腸密度（結腸重量／長さ比）、及び脾臓重量測定の結果は、それぞれ図１４、図１５、図１６、及び図１７に示される。
媒体及びアイソタイプ対照ならびに抗ＩＬ－６ ｍＡｂマウスと比較して、群５のマウス（４３Ｄ８ ｍＡｂで処理したもの）では、５日目までに、さらにはその後の時点で体重減少が遅延することが結果から示された。この体重減少遅延は、媒体対照マウスと比較して６日目までに高度に有意であった（図１４）。
媒体対照マウスと比較してＤＡＩスコアが３日目までに有意に改善することが結果から示された。群５のマウスのＤＡＩスコアは、群６のマウス（抗ＩＬ－６ ｍＡＢ）と比較しても、４日目までに低下していた（図１５）。
媒体対照マウスと比較して群５のマウスの結腸密度が有意に改善することが結果から示された。群５のマウスでは、群６のマウスと比較しても、試験終了までに結腸密度が低下していた（図１６）。
脾臓重量については、試験終了時点で群間に有意差は見られなかった（図１７）。
実施例４：ＴＮＢＳ大腸炎モデルにおける抗ＴＦ抗体の影響
インビボ試験を実施することで、ＴＮＢＳ大腸炎モデルの炎症性エンドポイントに対する抗ＴＦ抗体（例えば、４３Ｄ８）の作用を決定した。
この大腸炎モデルでは、２，４，６－トリニトロベンゼンスルホン酸（ＴＮＢＳ）を投与することで、大腸炎様の病態が引き起こされる。一般に、ＴＮＢＳモデルは、ＤＳＳ大腸炎モデルと比較して結腸の損傷が限局されることによって特徴付けられる。このＴＮＢＳモデルではＴＨ１介在性の免疫応答によって主に誘発され、
Figure 2023534191000014
、好中球、及びマクロファージが粘膜固有層に浸潤することによって特徴付けられる全層性大腸炎が生じる。抗ＩＦＮｇ、抗ＩＬ－１２ｐ４０は、ＴＮＢＳモデルにおいて治療作用を有することが示されている。
ＴＮＢＳ誘発性の大腸炎モデルの作製方法は当業者に知られている。例えば、Ａｎｔｏｎｉｏｕ，Ｅｆｓｔａｔｈｉｏｓ，ｅｔ ａｌ．Ａｎｎａｌｓ ｏｆ ｍｅｄｉｃｉｎｅ ａｎｄ ｓｕｒｇｅｒｙ １１（２０１６）：９－１５を参照のこと。当該文献の関連開示は、参照によって本明細書に組み込まれる。
２％のＴＮＢＳを動物に結腸内注射して大腸炎を誘発させたＴＮＢＳ大腸炎モデル（マウスｎ＝１０／群）において抗ＴＦの作用を評価した。臨床観察、体重、及びＤＡＩスコア付けを１日１回実施した。抗ＴＦ抗体（例えば、４３Ｄ８）、媒体対照、またはアイソタイプ対照で動物を処理した。追加の群にはメサラミンを陽性対照として投与した。抗ＴＦ抗体（例えば、４３Ｄ８）を投与しても、対照と比較して効果は生じなかった。ＴＮＢＳモデルはＴ細胞が優位なモデルであることから、抗ＴＦ抗体をＴＮＢＳモデルに投与しても、いずれの効果ももたらさなかったことはあり得ることである。ＴＦは活性化骨髄系細胞上には発現するが、Ｔ細胞上には発現しないことが当該技術分野で知られている。
実施例５：急性肺損傷モデルにおける抗ＴＦ抗体の影響
インビボ試験を実施することで、リポ多糖（ＬＰＳ）誘発性の急性肺損傷モデルの炎症性エンドポイントに対する抗ＴＦ抗体（例えば、４３Ｄ８）の作用を評価した。急性肺損傷（ＡＬＩ）及びその最も重篤な徴候である急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）は、急性低酸素血症性呼吸不全、浮腫と所見が一致する両側性肺浸潤、及び正常心充満圧によって定義される臨床症候群である。
この試験については、４８匹の雄性ＢＡＬＢ／ｃマウスを下記の５つの群に予め無作為に割り付けた：動物６匹の群１つ（ｎ＝６）、動物１２匹の群１つ（ｎ＝１２）、及びそれぞれ動物１０匹の群３つ（群当たりｎ＝１０）。０日目に、表６３に従ってＬＰＳ投与の６０分前に群２～５の動物への投与を実施した。群３の動物（陽性対照）には、１日目（ＬＰＳ投与後２４時間）にデキサメタゾン（３ｍｇ／ｋｇ）を再投与した。イソフルランを使用して全ての動物に麻酔をかけ、足先をつまんでも各動物が無反応になった時点で、２５μｌ中１０μｇのＬＰＳ（群２～５のみ）または対照としての生理食塩水（群１）を鼻腔内（ＩＮ）に投与して動物に接種した。その後、動物が目を覚ますまで回復ケージ内に動物を放した。
（表６３）ＡＬＩ試験の実験設計。ＴＡは被験物（４３Ｄ８抗体）を示す
Figure 2023534191000015
全ての動物の体重を測定し、全ての動物の呼吸窮迫（呼吸数及び／または明らかな呼吸努力の増加と定義した）を１日１回評価した。重度の呼吸窮迫を有する動物、または開始時点の全体重の２０％超が失われた動物は、観察から２時間以内に安楽死させた。
ＬＰＳの接種から４８時間の時点で、キシラジンの過剰投与によって全ての動物を屠殺し、気管支肺胞洗浄（ＢＡＬ）を（左肺の結紮によって）右肺のみ実施して、総細胞数の計数及び細胞分画カウントならびにＬｕｍｉｎｅｘによる総タンパク質定量化及びサイトカイン定量化用とした。その後、肺の重量（総肺重量及び右肺重量）を測定した。右肺は液体窒素中で凍結させ、－８０℃で保存した。肺の左葉に１０％のＮＢＦを吹き込み、この左葉を１０％のＮＢＦ中で２４時間固定化した後、ＰＢＳに切り替え、その後に処理して組織診断用とした。このホルマリン固定化肺をパラフィン中に包埋し、５ミクロンの切片とし、ヘマトキシリン及びエオシン（Ｈ＆Ｅ）でスライドを染色した。有資格の獣医病理学者がスコア付けシステムを使用して肺損傷及び炎症の程度を評価することによって全てのスライドの評価を実施した。表６４及び表６５は、白血球浸潤のスコア付けシステムを示す。
（表６４）ＡＬＩモデルにおける間質または肺胞への好中球浸潤の組織病理学的スコア付け
Figure 2023534191000016
（表６５）血管周囲／細気管支周囲ゾーンにおける単核細胞浸潤／凝集体形成の組織病理学的スコア付け
Figure 2023534191000017
体重の結果から、１ｍｇ／ｋｇの４３Ｄ８を投与した群の体重減少が最も大きいことが示された。媒体対照群及び群４（１ｍｇ／ｋｇの４３Ｄ８）の体重減少率は試験終了時点までには同等であった（ベースラインに対して約６％の体重減少）。対照的に、試験終了時点でベースラインに対する体重減少率が約２％となったのは陽性対照群（デキサメタゾン）のみであった。群５（１０ｍｇ／ｋｇを投与）では媒体対照と比較して体重減少が少なくなったが、陽性対照との比較では体重減少は大きかった（図７）。こうした結果は、ＡＬＩ対象において、処理を行わなければ生じることになる体重減少と比較して抗ＴＦ抗体（４３Ｄ８）処理が体重減少を減らし得ること（体重減少に対する保護効果）を示している。こうした結果は、抗ＴＦ抗体が用量依存的様式で体重減少を打ち消すことも示している。
ＢＡＬ細胞分画カウントから得られた結果からは、陽性対照及び媒体対照と比較して抗ＴＦ抗体（４３Ｄ８）処理を行うと総白血球数が低下することが明らかになった。群４（１ｍｇ／ｋｇの４３Ｄ８）の総マクロファージ数は媒体対照と比較して有意に少なくはなかったが、群５（１０ｍｇ／ｋｇの４３Ｄ８）の総マクロファージ数は媒体対照（ならびに陽性対照）と比較して少なかった。群４及び群５の総リンパ球数及び総好中球数は、それらのそれぞれの媒体対照のものと比較して少なく、それらの数の減少は用量依存的であった。対照的に、群４及び群５の総好酸球数は媒体対照と比較して有意に多かった。全体として、４３Ｄ８で処理した群のＢＡＬ液中のリンパ球、マクロファージ、及び好中球の浸潤は減少することが結果から明らかになり、こうした減少は陽性対照（デキサメタゾン）と同等またはそれよりも良好なものであった（図８Ａ及び図８Ｂ）。
組織病理学的分析については、群５（１０ｍｇ／ｋｇの４３Ｄ８）では、間質、肺胞、及び細気管支への好中球の浸潤、ならびに血管周囲／細気管支周囲組織への単核細胞の浸潤が媒体対照と比較して若干減少した。間質、肺胞、及び細気管支への好中球の浸潤における群４（１ｍｇ／ｋｇの４３Ｄ８）と媒体対照との差は有意なものではなかった。間質、肺胞、及び細気管支への好中球の浸潤、ならびに血管周囲／細気管支周囲組織への単核細胞の浸潤を低減する上で、被験物群のいずれにおいても、陽性対照（デキサメタゾン）ほどの有効性は得られなかった（図９）。
図１０Ａ及び図１０Ｂには、炎症性サイトカインの結果が示される。１０ｍｇ／ｋｇ ４３Ｄ８群では、媒体対照と比較してサイトカイン濃度が有意に低下した。ＩＬ－６及びＴＮＦαを除く全ての場合において、１０ｍｇ／ｋｇ ４３Ｄ８群では、陽性対照（デキサメタゾン）と比較して炎症性サイトカインレベルが有意に低下した。こうした結果は、抗ＴＦ抗体での処理の結果として局所性炎症が低減されることも示している。
実施例６：ＲＳＶモデルにおける抗ＴＦ抗体の影響
インビボ試験を実施することで、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）モデルのＢＡＬ細胞百分率に対する抗ＴＦ抗体（例えば、４３Ｄ８）の作用を評価した。
試験開始時点で、８．５×１０５力価のＲＳＶ－Ａ２ストック（元はＡＴＣＣから入手したもの（ＶＲ－１５４０））を鼻腔内接種によって約６～８週齢の雌性ＢＡＬＢ／ｃマウスに５０μＬ投与した。群１には、モック対照としてＨｅｐ－２上清を投与した。接種は全て、動物を吸入麻酔の影響下に置きながら実施した。
ＲＳＶ－Ａ２感染から２時間の時点で、静脈内（ＩＶ）経路または経口（ＰＯ）経路を介して、表６６中の量が送達されるように製剤化した体積で分子を投与した（群当たりｎ＝１０）。ＡＺＤ１４８０（陽性対照としたＪＡＫ阻害物質）。感染から５日の時点で、各動物から肺を回収し、その重量を測定した。その後、ハンクス緩衝液で肺を洗い、各動物由来の気管支肺胞洗浄液（ＢＡＬＦ）を回収し、総ＢＡＬ白血球数を測定した。ＢＡＬＦを３つの分量に分け、－８０℃で保存した。右肺及び左肺を二分し、重量測定し、個別に瞬間凍結してから－８０℃で保存した。右肺はウイルス定量化用として保存した。
（表６６）ＲＳＶモデル試験の実験設計
Figure 2023534191000018
残りのＢＡＬ白血球からスライドを調製し、固定化し、メイ・ギムザ染色で染色し、細胞百分率を手動で記録した。Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（ＭＳＤ，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，Ｍａｒｙｌａｎｄ）から入手したマウスサイトカインパネルを使用して一定分量のＢＡＬ液を評価した。
媒体対照及び陽性対照（ＡＺＤ１４８０）と比較して群４（１０ｍｇ／ｋｇの４３Ｄ８）では平均白血球数が有意に減少することが結果から示された（図１１）。図１２に示されるように、群４では、平均マクロファージＢＡＬ数、平均好中球ＢＡＬ数、及び平均リンパ球ＢＡＬ数が有意に減少した。抗ＴＦ抗体での処理に対する応答が用量依存的であることも結果から明らかである。単球及び好酸球の観測数には変化はなかった（データ非掲載）。全体として、こうした結果は、ＴＦが走化性に介在することと一致するものである。
実施例７：ポリＩ：Ｃモデルにおける抗ＴＦ抗体の影響
インビボ試験を実施することで、ポリイノシン－ポリシチジル酸（ポリ（Ｉ：Ｃ））モデルの炎症性エンドポイントに対する抗ＴＦ抗体（例えば、４３Ｄ８）の作用を評価した。ポリＩ：Ｃモデルは、ウイルス感染に対する肺のインビボ応答を模倣するものである。このモデルでは、ポリＩ：Ｃがマウスに投与される。ポリＩ：Ｃは、二本鎖（ｄｓ）ＲＮＡの合成類似体であり、ＴＬ３リガンドである。ポリＩ：Ｃは、宿主細胞自然免疫系によるウイルス認識ならびにその後のサイトカインストーム及び炎症を試験するためにインビボで使用されることが多い。
簡潔に記載すると、１日目、２日目、及び３日目にイソフルラン吸入によって全てのマウスに麻酔をかけた。マウスを直立に保持し、ピペットを使用してポリ（Ｉ：Ｃ）含有ＰＢＳを動物の鼻孔に５０μＬ投与した。２日目に、２回目の鼻腔内接種から３時間の時点で、選択群の１０匹のマウスを深い麻酔下に置き、血液採取及び３回連続の気管支肺胞洗浄（ＢＡＬ）液採取を実施した。４日目に、最後の鼻腔内接種から２４時間の時点で、残りのマウスを深い麻酔下に置き、血液採取及び３回連続の気管支肺胞洗浄（ＢＡＬ）液採取を実施した。ＢＡＬ測定は、マルチプレックス電気化学発光ＭＳＤアッセイによって評価した。
被験物の投与：１日目に、ポリ：ＩＣ投与の２時間前の時点で媒体、アイソタイプ対照、及び抗体（例えば、４３Ｄ８）を腹腔内（ＩＰ）注射した。
表６８及び表６９には、用量及び群が示される。
（表６８）群１～４の試験設計例
Figure 2023534191000019
（表６９）４３Ｄ８抗体ｍｇ／ｋｇの用量
Figure 2023534191000020
図１８Ａは、試験の３日目の炎症促進性サイトカインのレベルを示す。こうした結果から、群５（媒体＋ポリＩ：Ｃ対照）及び群７（アイソタイプ＋ポリＩ：Ｃ対照）と比較して、群７（４３Ｄ８＋ポリＩ：Ｃ処理群）では３日目に症促進マーカー（ＧＭＣＳＦ、ＶＥＧＦ、ＩＬ１７Ｆ、ＩＬ－１ベータ、ＩＬ－６、ＩＦＮガンマ、及びＫＣ）のレベルが顕著に低下することが示された。
図１８Ｂは、試験３日目の抗炎症マーカー（ＩＬ－１０及びＩＬ２８ｐ２８）のレベルを示す。これら両方のマーカーは、群５（媒体＋ポリＩ：Ｃ対照）及び群７（アイソタイプ＋ポリＩ：Ｃ対照）と比較して群７（４３Ｄ８＋ポリＩ：Ｃ処理群）において３日目に実質的に上昇した。
一方、２日目時点では応答度は低かった。
実施例８：ＣＯＶＩＤモデルにおけるにおける抗ＴＦ抗体の影響
インビボ試験を実施することで、ＣＯＶＩＤモデルにおける抗ＴＦ抗体（例えば、４３Ｄ８）の作用を評価した。このモデルを使用することで、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を鼻腔内接種した後の４～８週齢のＢ６．Ｃｇ－Ｔｇ（Ｋ１８－ＡＣＥ２）マウス（ヒトＡＣＥ２を発現する）（Ｔｈｅ Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）の血漿及び肺における抗ＴＦｍＡｂ ４３Ｄ８の治療作用を評価した。
簡潔に記載すると、表７０に従って試験１日目に鼻腔内接種によってＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の無希釈無添加ストックを群１～４のマウスに接種した。群１～４のマウスには、接種の約２時間（±１５分）前に単回用量の被験物または対照物を投与した。群１及び群２のマウスは試験４日目に試料採取のために安楽死させた。試験８日目に生き残っている群３及び群４のマウスは試料採取のために安楽死させた。人道的に試験を終了させて観察実施回数が１回のみとなった日を除き、試験期間中は少なくとも１日に２回はマウスを観察し、観察記録を取った。これらの観察は互いに少なくとも６つの時間空くようにした。試験前に体重を記録し、試験中は１日１回体重を記録した。
（表７０）抗ＴＦ－ＣＯＶＩＤモデル試験の実験詳細
Figure 2023534191000021
図１９は、試験過程にわたる体重測定の結果を示す。表７１は、生理食塩水処理群及び４３Ｄ８処理群の臨床観察の結果を示す。
（表７１）ＣＯＶＩＤモデルでの臨床所見
Figure 2023534191000022
全体として、４３Ｄ８処理群では体重減少が遅延することが結果から示された。４３Ｄ８処理群では死亡は観察されなかったが、対照群では２匹の動物が試験で死亡した。対照群の動物のほとんどにおいて顕著な臨床所見が見られたが、４３Ｄ８処理群では疾患徴候を示した動物は１匹のみであった。
肺の病理組織診断
肺の病理組織診断に対する抗ＴＦ抗体（例えば、４３Ｄ８）の作用を評価するために、試験終了時点で動物を安楽死させる。安楽死後、肺から得た組織試料を１０％の中性緩衝ホルマリン（ＮＢＦ）に４８時間以上浸漬した後、７０％のエタノール中に移して７２時間以上浸漬する。試料をパラフィン中に包埋し、切片化し、ヘマトキシリン及びエオシン（Ｈ＆Ｅ）で染色して組織病理学的分析用とする。
ウイルス力価測定
簡潔に記載すると、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルス力価レベルに対する抗ＴＦ抗体（例えば、４３Ｄ８）の影響を評価するために、安楽死後に約４～５ｍｍ３の試料を右肺から無菌的に採取し、ＲＮＡｌａｔｅｒ中で保存する。定量的リアルタイムＰＣＲ（ｑＲＴ－ＰＣＲ）アッセイを使用して試料中のウイルス量を測定する。試験過程にわたってｑＲＴ－ＰＣＲを使用して一定間隔で鼻試料、咽頭試料、及び直腸試料も分析する。ウイルス力価データの測定方法及び分析方法は当業者に知られている。例えば、Ｒｏｂｅｒｔｓ，Ａｎｊｅａｎｅｔｔｅ，ｅｔ ａｌ．ＰＬｏＳ ｐａｔｈｏｇｅｎｓ ３．１（２００７）：ｅ５を参照のこと。当該文献の関連開示は、参照によって本明細書に組み込まれる。
ＢＡＬサイトカイン／ケモカイン測定
サイトカイン及びケモカインのレベルに対する抗ＴＦ抗体（例えば、４３Ｄ８）の作用を評価するために、試験中に深い麻酔下に置いたマウスから血液及び気管支肺胞洗浄（ＢＡＬ）液を採取する。炎症促進性サイトカイン（例えば、ＧＭＣＳＦ、ＶＥＧＦ、ＩＬ１７Ｆ、ＩＬ－１ベータ、ＩＬ－６、ＩＦＮガンマ、ＴＮＦ、及びＫＣ）を測定する。抗炎症性サイトカイン（例えば、ＩＬ－１０及びＩＬ２７ｐ２８を測定する）。
Ｄダイマーの測定
Ｄダイマーレベルに対する抗ＴＦ抗体（例えば、４３Ｄ８）の作用を評価するために、採血することで、処理（４３Ｄ８）群及び対照（生理食塩水）群から血漿試料及び血清試料を取得する。ＥＬＩＳＡを使用して血漿試料及び血清試料のＤダイマーを分析する。マウスモデルにおけるＤダイマーレベルの測定方法及び分析方法の例は、例えば、Ｗｅｉｌｅｒ，Ｈａｒｔｍｕｔ，ｅｔ ａｌ．“Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｍｏｕｓｅ ｍｏｄｅｌ ｆｏｒ ｔｈｒｏｍｂｏｍｏｄｕｌｉｎ ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ．”Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ，ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ ａｎｄ ｖａｓｃｕｌａｒ ｂｉｏｌｏｇｙ ２１．９（２００１）：１５３１－１５３７に示されており、当該文献の関連開示は、参照によって本明細書に組み込まれる。
実施例９：心筋梗塞（ＭＩ）からの回復に対する抗ＴＦ抗体の影響
ＰＡＲ２（マクロファージが発現する）ならびにＴＦ細胞質ドメインは、マウスの心筋梗塞（ＭＩ）からの虚血後回復に有害な影響を及ぼす。インビボ試験を実施することで、心筋梗塞（ＭＩ）からの回復に対する抗ＴＦ抗体（例えば、４３Ｄ８）及びＴＦシグナル伝達遮断の効果を評価した。ＭＩモデルでのエンドポイントの作製方法及び試験方法は当業者に知られている。例えば、Ｍｏｌｉｔｏｒ，Ｍｉｃｈａｅｌ，ｅｔ ａｌ．Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ ｒｅｓｅａｒｃｈ １１７．１（２０２１）：１６２－１７７を参照のこと。当該文献の関連開示は、参照によって本明細書に組み込まれる。
簡潔に記載すると、ＭＩを誘発させるために、マウスの左冠動脈前下行枝を結紮した。高周波数超音波イメージングによって心機能を監視した。ＭＩの誘発後、４３Ｄ８抗体１０ｍｇ／ｋｇまたはそのバックボーンのアイソタイプ対照をマウス（マウス８匹／群）に投与した。抗体及び対照の投与はＭＩから１日目及び４日目に実施し、７日目に高周波数超音波イメージングによって心機能の評価を実施した。高周波数超音波イメージングを使用することで、壁運動スコア指数（梗塞サイズ）、左室駆出率、及び左室拡張末期容積を決定した。７日目にマウスを安楽死させ、虚血心臓組織の梗塞心筋中への炎症細胞の動員を評価した。心筋梗塞組織において、炎症細胞の動員の分析は、蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）を使用して行った。
結果は図２０～２３に示される。抗ＴＦ抗体で処理した群ではアイソタイプ対照と比較して梗塞サイズが減少することが結果から明らかになった（図２０）。ＭＩは左室駆出率を低下させるが、抗ＴＦ抗体で処理すると、アイソタイプ対照を上回って左室駆出率が回復することが結果から示された。ＭＩは左室拡張末期容積を顕著に増加させるが、抗ＴＦ抗体で処理すると、アイソタイプ対照よりも左室拡張末期容積が減少することが結果から明らかになった（図２１）。梗塞心筋への炎症細胞の浸潤も減少することが結果から示された（図２２及び図２３）。
サイトカイン発現及びＰＡＲ２シグナル伝達
上記の結果は、抗ＴＦ抗体がＴＦ－Ｐａｒ２シグナル伝達を妨害することを示し得る。ＴＦ－Ｐａｒ２シグナル伝達に対する抗ＴＦ抗体の作用を評価するために、ＲＴ－ＰＣＲを使用して炎症性サイトカインの発現を測定し、ＥＲＫ１／２のリン酸化をＰＡＲ２シグナル伝達のマーカーとして使用した。７日目及び２８日目に炎症性エンドポイントを測定する。
実施例１０：コラーゲン抗体誘発関節炎（ＣＡＩＡ）モデルにおける抗ＴＦ抗体の影響
インビボ試験を実施することで、ＣＡＩＡモデルの炎症性エンドポイントに対する抗ＴＦ抗体（例えば、４３Ｄ８）の作用を評価する。ＣＡＩＡモデルでは、ＩＩ型コラーゲンに対するモノクローナル抗体を使用することで関節炎が誘発される。
簡潔に記載すると、試験開始時点で約２１日齢の性別が同じマウスを予め無作為に下記の５つの群（群当たりｎ＝１０）に割り付ける。
・群１：ナイーブ
・群２：媒体対照（ＰＢＳ）
・群３：被験物（１０ｍｇ／ｋｇの４３Ｄ８）
・群４：陽性対照（デキサメタゾン）
・群５：抗ＴＮＦα
０日目に、抗ＩＩ型コラーゲン抗体カクテルを投与することによって群２～５に疾患を誘発させる。同日に、媒体、陽性対照、または被験物を群２～５の動物に投与する。３日目に、動物にＬＰＳを腹腔内（ＩＰ）投与する。その後、動物を１日１回調べることで、関節炎を示すと想定される可動性の変化、体重測定、及び（図２）に示されるボディコンディションのスコア付けを評価する。
試験終了時点（１２日目）で動物を安楽死させる。安楽死後、動物の測定（体長の決定）及び体重測定を実施する。動物ごとに体重／体長比を計算する。動物を解剖し、その脾臓重量を決定する。滑液の試料を採取し、ＩＨＣを使用して単核細胞の浸潤について調べる。関節炎誘発部位から得た組織試料を１０％の中性緩衝ホルマリン（ＮＢＦ）中に２４時間浸漬した後、７０％のエタノール中に浸漬する。試料をパラフィン中に包埋し、切片化し、ヘマトキシリン及びエオシン（Ｈ＆Ｅ）で染色して組織病理学的分析用とする。関節炎誘発部位の骨の骨びらんも観察する。動物において測定する追加のエンドポイントには、臨床関節炎スコア、肉球の厚み（例えば、関節炎が足で誘発される場合）、及び一般的な臨床観察が含まれる。（例えば、ＭａｃＫｅｎｚｉｅ ＪＤ ｅｔ ａｌ．Ｒａｄｉｏｌｏｇｙ．２０１１；２５９（２）：４１４－４２０及びＪｕｎｇ，ＥＧ．，ｅｔ ａｌ．ＢＭＣ ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｙ ａｎｄ ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ ｍｅｄｉｃｉｎｅ １５．１（２０１５）：１－１１を参照のこと。これらの文献はそれぞれ、その全体が参照によって組み込まれる）。抗ＴＦ抗体（１０ｍｇ／ｋｇの４３Ｄ８）についての測定評価指標（複数可）が対照と比較して顕著に改善することを結果は示す。
実施例１１：結合親和性アッセイ
抗ＴＦ抗体の反応速度測定は、Ｏｃｔｅｔ ＱＫ３８４（Ｐａｌｌ ＦｏｒｔｅＢｉｏ，Ｆｒｅｍｏｎｔ，ＣＡ，ＵＳＡ）またはＢｉａｃｏｒｅ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｂｉｏ－Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）で実行された。
ＦｏｒｔｅＢｉｏ親和性測定は、概して以前に説明されている（Ｅｓｔｅｐ ｅｔ ａｌ．，ＭＡｂｓ．２０１３ Ｍａｒ－Ａｐｒ；５（２）：２７０－８）ように実行された。簡潔に述べると、ＦｏｒｔｅＢｉｏ親和性測定は、ＡＨＣセンサーにＩｇＧをオンラインでロードすることにより実行された。センサーは、アッセイ緩衝液で、３０分間オフラインで平衡化され、次いでベースラインの確立のために６０秒間オンラインでモニターされた。ＩｇＧがロードされたセンサーを１００ｎＭ抗原（ヒト、カニクイザル、またはマウスＴＦ）に３分間曝露し、その後オフレート測定のためにアッセイ緩衝液に３分間移した。代替的に、ビオチン化ＴＦモノマーをＳＡセンサーにロードした後、溶液中で１００ｎＭの抗体Ｆａｂに曝露することで、結合測定値が得られた。速度論的データは、１：１ラングミュア結合モデルを使用して分析及び適合され、ＫＤは、ｋオフをｋオンで割ることによって計算された。Ｏｃｔｅｔベースの実験で測定されたＴＦ抗体のＫＤ値を表５に示す。
Ｂｉａｃｏｒｅベースの測定では、アミンカップリングキット（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｂｉｏ－Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して、抗体をＣＭ５またはＣ１チップに共有結合させた。抗ＴＦ抗体と２５ｎＭで開始する５００ｎＭまでのＴＦ－Ｈｉｓの５点３倍濃度調整物との結合を３００秒間測定した。その後、抗ＴＦ抗体とＴＦ－Ｈｉｓの間の解離を１８００秒まで測定した。速度論的データを分析し、１：１結合モデルを使用してグローバルに適合させた。Ｂｉａｃｏｒｅベースの実験で測定されたＴＦ抗体のＫＤ値を表５に示す。
表５に示すように、ＫＤで示されるｈＴＦに対する抗体の親和性は１０－７Ｍ～１０－１１Ｍである。全ての抗ｈＴＦ抗体はｃＴＦと交差反応する。さらに、群２５及び４３の全ての抗ｈＴＦ抗体は、ｍＴＦへの結合活性を示す。抗ｈＴＦ抗体２５Ｇ、２５Ｇ１、２５Ｇ９、及び４３Ｄ８は、ｍＴＦと交差反応する。マウスＴＦに対して結合活性と交差反応性を示す他の既知のヒトまたはヒト化抗ｈＴＦモノクローナル抗体は存在しない。これは、群２５及び４３の抗体が新規ＴＦエピトープに結合することを示す。
（表５）抗体反応速度
Figure 2023534191000023
実施例１２：細胞ベースの結合アッセイ
ヒトＴＦの内因性発現を有するＨＣＴ１１６細胞は、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ，ＵＳＡ）から入手し、推奨どおりに維持した。マウスＴＦを発現するＦｌｐ－Ｉｎ－ＣＨＯ細胞は、Ｃ末端ＦＬＡＧタグを有する全長マウスＴＦをコードするｐｃＤＮＡ５／ＦＲＴベクター（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）によって、推奨されるようにＦｌｐ－Ｉｎ－ＣＨＯ細胞のトランスフェクションによって生成された。マウスＴＦ陽性ＣＨＯクローンは、組織培養処理した９６ウェルプレートで限界希釈することにより単離した。
細胞ベースの抗体結合は、参照によりその全体が援用される、Ｌｉａｏ－Ｃｈａｎ ｅｔ ａｌ．，ＰＬｏＳ Ｏｎｅ，２０１５，１０：ｅ０１２４７０８に以前に記載されるように評価された。Ｃｅｌｌｓｔｒｉｐｐｅｒ（Ｍｅｄｉａｔｅｃｈ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ，ＵＳＡ）によって収集した１．２×１０５細胞を、氷上で２時間、２５０ｎＭまたは１００ｎＭで開始する抗ヒトＴＦ ＩｇＧ１またはＦａｂ抗体の１２点の１：３希釈濃度調整物と共にインキュベートした。２回洗浄した後、ＩｇＧ１またはＦａｂで標識された細胞を、それぞれ、１５０ｎＭのヤギフィコエリトリン（ＰＥ）Ｆ（ａｂ’）２フラグメントヤギ抗ヒトＩｇＧ、Ｆｃγフラグメント特異的（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ，Ｗｅｓｔ Ｇｒｏｖｅ，ＰＡ，ＵＳＡ）またはＦＩＴＣ標識Ｆ（ａｂ’）２フラグメントヤギ抗ヒトカッパ（ＳｏｕｔｈｅｒｎＢｉｏｔｅｃｈ，Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ，ＡＬ，ＵＳＡ）と共に氷上で３０分間インキュベートした。２回洗浄した後、死細胞をＴＯ－ＰＲＯ－３ヨージド（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）で標識し、試料をＣｙｔｏＦＬＥＸフローサイトメーター（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ，Ｂｒｅａ，ＣＡ，ＵＳＡ）またはＮｏｖｏｃｙｔｅフローサイトメーター（ＡＣＥＡ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ，ＵＳＡ）で分析した。各希釈での蛍光強度中央値（ＭＦＩ）をプロットし、Ｐｒｉｓｍ（ＧｒａｐｈＰａｄ，Ｌａ Ｊｏｌｌａ，ＣＡ，ＵＳＡ）の４パラメータ結合モデルを使用して細胞のＥＣ５０を導出した。ヒトＴＦ陽性ＨＣＴ－１１６細胞に対する抗ＴＦ抗体の結合の結果は、国際ＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１９／０１２４２７及び米国実用出願第１６／９５９，６５２号（それらの全体が参照によって本明細書に組み込まれる）に示される。マウスＴＦを発現するＣＨＯ細胞に対する抗ＴＦ抗体の結合の結果は、国際ＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１９／０１２４２７及び米国実用出願第１６／９５９，６５２号（それらの全体が参照によって本明細書に組み込まれる）に示される。
抗ｈＴＦ抗体は全て、国際ＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１９／０１２４２７及び米国実用出願第１６／９５９，６５２号に示されており、ヒトＴＦ陽性ＨＣＴ－１１６細胞に対して高い親和性を示し、ＥＣ５０は約６８７ｐＭ～約３９ｐＭの範囲である。群２５及び４３の抗体は、約４５５ｎＭ～約２．９ｎＭの範囲のＥＣ５０でマウスＴＦを発現するＣＨＯ細胞に対する結合を示し、これらの抗体は、国際ＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１９／０１２４２７及び米国実用出願第１６／９５９，６５２号（それらの全体が参照によって本明細書に組み込まれる）に示される。マウスＴＦに対する結合活性は、（例えば、群２５及び４３の）抗ｈＴＦ抗体に特有の特性である。これは、マウスモデルによるこれらの抗体の前臨床試験に有利である。ある特定の実施形態では、マウスＴＦに対する結合親和性は、炎症性疾患、炎症、及び線維化に対する抗体を選択する上で重要な特性である。
実施例１３：トロンビン生成アッセイ（ＴＧＡ）
ＴＧＡアッセイは、ＳＴＡＧＯが製造及び販売する校正済み自動トロンボグラム（ＣＡＴ）装置を使用して実行された。試験方法の設計は、血漿源がクエン酸塩／ＣＴＩ中のＮＰＰであることを除いて、標準のＣＡＴアッセイ測定と同等であった。抗ＴＦ抗体を０、１０、５０、及び１００ｎＭに濃度調整し、トウモロコシトリプシン阻害物質（クエン酸／ＣＴＩ）１００マイクログラム／ｍＬを補充した１１ｍＭクエン酸で収集した通常のプール血漿（ＮＰＰ）と混合した。再脂質化したＴＦを９６ウェルアッセイプレートに加え、続いて抗体／ＮＰＰ混合物を添加した。１０分間のインキュベーション後、または再脂質化ＴＦと抗体／ＮＰＰを混合した直後に、カルシウムとトロンビン基質の添加によりトロンビン生成が開始された。ＳＴＡＧＯソフトウェアは、次のパラメータを報告するために使用された：ピークＩＩａ（生成された最高のトロンビン濃度［ｎＭ］）；ラグタイム（ＩＩａ生成までの時間［分］）；ＥＴＰ（内因性トロンビンポテンシャル、曲線下面積［ｎＭ×分］）；ｔｔピーク（ピークＩＩａまでの時間［分］）。同じプレート上の抗体なしの血漿対照と比較した、各抗体の存在下でのトロンビン生成ピークのパーセント（ピークＩＩａ％）及び内因性トロンビンポテンシャルのパーセント（ＥＴＰ％）も報告された。
カルシウム及びトロンビン基質の添加前に抗体インキュベーションなしでの、１Ｆ、２５Ａ、２５Ａ３、２５Ｇ１、２９Ｅ、３９Ａ、４３Ｂ１、４３Ｄ７、４３Ｅａ、及び５４Ｅから選択された各抗体の存在下でのピークＩＩａ、ラグタイム、ＥＴＰ、ｔｔピーク、ピークＩＩａ％、及びＥＴＰ％を表６に示す。カルシウム及びトロンビン基質の添加前に１０分間の抗体インキュベーションを伴った、１Ｆ、２５Ａ、２５Ａ３、２５Ｇ１、２９Ｅ、３９Ａ、４３Ｂ１、４３Ｄ７、４３Ｅａ、及び５４Ｅから選択された各抗体の存在下でのピークＩＩａ、ラグタイム、ＥＴＰ、ｔｔピーク、ピークＩＩａ％、及びＥＴＰ％を表７に示す。カルシウム及びトロンビン基質の添加前の抗体インキュベーションなしの抗ＴＦ抗体の濃度調整の存在下でのピークＩＩａ％は、国際ＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１９／０１２４２７及び米国実用出願第１６／９５９，６５２号（それらの全体が参照によって本明細書に組み込まれる）に示される。カルシウム及びトロンビン基質の添加前の１０分間の抗体インキュベーションを伴う抗ＴＦ抗体の濃度調整の存在下でのピークＩＩａ％は、国際ＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１９／０１２４２７及び米国実用出願第１６／９５９，６５２号（それらの全体が参照によって本明細書に組み込まれる）に示される。
ピークＩＩａ％は、２５Ａ、２５Ａ３、及び２５Ｇ１を含む群２５の抗体の存在下で９０％を超えている。ＥＴＰ％は、２５Ａ、２５Ａ３、及び２５Ｇ１を含む群２５の抗体の存在下で１００％を超えている。ピークＩＩａ％は、４３Ｂ１、４３Ｄ７、及び４３Ｅａを含む群４３の抗体の存在下で４０％を超えている。ＥＴＰ％は、４３Ｂ１、４３Ｄ７、及び４３Ｅａを含む群４３の抗体の存在下で９０％を超えている。
このデータは、群２５及び４３の抗体が正常なトロンビン生成を可能にするため、トロンビン生成の阻害物質ではないことを示している。
（表６）抗体プレインキュベーションなしのトロンビン生成アッセイ
Figure 2023534191000024
Figure 2023534191000025
（表７）１０分間の抗体プレインキュベーションを伴うトロンビン生成アッセイ
Figure 2023534191000026
Figure 2023534191000027
実施例１４：ＦＸａ変換アッセイ
ＴＦに対するヒト抗体の存在下でＦＸをＦＸａに変換するＴＦ：ＦＶＩＩａの能力を評価するために、５×１０４のＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞（ＡＴＣＣ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ，ＵＳＡ）を組織培養処理した黒色９６ウェルプレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ Ｂｉｏ－Ｏｎｅ，Ｍｏｎｒｏｅ，ＮＣ，ＵＳＡ）に播種した。細胞培養培地を除去し、１．５ｍＭ ＣａＣｌ２を含むＨＥＰＥＳ緩衝液に２００ｎＭの最終濃度のＦＸを添加した後、細胞を３７℃で１５分間、濃度調整物と共にインキュベートした。最終濃度が２０ｎＭのＦＶＩＩａを含むＴＦ：ＦＶＩＩａバイナリー複合体を再構成し、細胞を３７℃で５分間インキュベートした。エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）で反応をクエンチした後、生成されたＦＸａを、Ｕｍｂｅｌｌｉｆｅｒｏｎｅ ３５５励起フィルター、Ｕｍｂｅｌｌｉｆｅｒｏｎｅ ４６０吸収フィルター、ＬＡＮＣＥ／ＤＥＬＦＩＡトップミラーを備えたＥｎｖｉｓｉｏｎプレートリーダー（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ，ＵＳＡ）で、５０μＭのＳＮ－７ ６－アミノ－１－ナフタレンスルホンアミドベースの蛍光基質（Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｉｃ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｅｓｓｅｘ Ｊｕｎｃｔｉｏｎ，ＶＴ，ＵＳＡ）によって測定した。抗体なし対照と比較した抗ＴＦ抗体の濃度調整物の存在下でのＦＸａ変換百分率（ＦＸａ％）は、表８にまとめが示され、国際ＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１９／０１２４２７及び米国実用出願第１６／９５９，６５２号（それらの全体が参照によって本明細書に組み込まれる）にプロットされる。
ＦＸａ変換百分率は、２５Ａ、２５Ａ３、２５Ｇ、２５Ｇ１、２５Ｇ５、２５Ｇ９、４３Ｂ、４３Ｂ１、４３Ｂ７、４３Ｄ、４３Ｄ７、４３Ｄ８、４３Ｅ、及び４３Ｅａを含む、群２５及び４３の異なる濃度の抗体の存在下で約７８％～約１２０％の範囲である。
このデータは、群２５及び４３の抗ＴＦ抗体が、ＴＦ：ＦＶＩＩａを介したＦＸからのＦＸａへの変換を阻害しないことを示している。このデータは、群２５及び４３の抗ＴＦ抗体が、ＦＸが結合するヒトＴＦ結合部位とは異なるヒトＴＦ結合部位を有していることも示している。
（表８）ＦＸａ変換％
Figure 2023534191000028
実施例１５：ＦＶＩＩａ競合アッセイ
ＦＶＩＩ－Ｆｃコンジュゲートは、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ４８８ ５－スルホ－ジクロロフェノールエステル（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して生成された。ゲルろ過（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）により、コンジュゲート調製物から過剰なＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ色素を除去した。
ＦＶＩＩａとＴＦに対するヒト抗体との競合を評価するために、ＴＦ陽性ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞（ＡＴＣＣ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ，ＵＳＡ）を最初に、ＴＦに対するヒト抗体の濃度調整物と共に氷上で１時間インキュベートした。続いて、Ａｌｅｘａ４８８にコンジュゲートした最終濃度２０ｎＭのＦＶＩＩ－Ｆｃを抗体細胞混合物に添加した。氷上でさらに１時間インキュベートした後、細胞を洗浄し、生細胞識別色素で染色し、フローサイトメトリーで分析した。生細胞からのＡｌｅｘａ４８８蛍光データは、蛍光強度中央値を使用して要約された。ＦＶＩＩ－Ｆｃ結合は、ＦＶＩＩ－Ｆｃ結合％＝［ＭＦＩ抗体標識細胞－ＭＦＩ未染色細胞］／［ＭＦＩＩｇＧ１対照標識細胞－ＭＦＩ未染色細胞］で要約された。抗体なし対照と比較した抗ＴＦ抗体濃度調整物の存在下でのＦＶＩＩａ結合の百分率（ＦＶＩＩａ％）は表９に要約され、国際ＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１９／０１２４２７及び米国実用出願第１６／９５９，６５２号（それらの全体が参照によって本明細書に組み込まれる）に示される。
ＦＶＩＩａ結合百分率は、２５Ａ、２５Ａ３、２５Ｇ、２５Ｇ１、２５Ｇ５、２５Ｇ９、４３Ｂ、４３Ｂ１、４３Ｂ７、４３Ｄ、４３Ｄ７、４３Ｄ８、４３Ｅ、及び４３Ｅａを含む、群２５及び４３の異なる濃度の抗体の存在下で約７６％～約１０２％の範囲である。
このデータは、群２５及び４３の抗ＴＦ抗体が、ヒトＴＦへの結合に関してＦＶＩＩａと競合しないことを示している。このデータは、群２５及び４３の抗ＴＦ抗体が、ＦＶＩＩａが結合するヒトＴＦ結合部位とは異なるヒトＴＦ結合部位を有していることも示している。
（表９）抗ＴＦ抗体のＦＶＩＩａとの競合
Figure 2023534191000029
実施例１６：ＴＦシグナル伝達アッセイ
ＩＬ－８及びＧＭ－ＣＳＦタンパク質レベルは、Ｈｊｏｒｔｏｅ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，２００４，１０３：３０２９－３０３７に以前に記載されているように測定された。ＬｅｉｂｏｖｉｔｚのＬ－１５培地で２時間血清飢餓状態にしたＴＦ陽性ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞（ＡＴＣＣ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ，ＵＳＡ）を、１００ｎＭの抗ＴＦ抗体で開始する８点の１：２．５の濃度調整と共にインキュベートした。３７℃で３０分後、ＦＶＩＩａ（ＮｏｖｏＳｅｖｅｎ ＲＴ，Ｎｏｖｏ Ｎｏｒｄｉｓｋ，Ｂａｇｓｖａｅｒｄ，Ｄｅｎｍａｒｋ）を最終濃度２０ｎＭで細胞に添加した。５時間後、細胞培養上清を回収し、ＩＬ８またはＧＭ－ＣＳＦに対するＥＬＩＳＡで推奨通りに分析した（Ｒ＆Ｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ，ＵＳＡ）。組換えＩＬ８またはＧＭ－ＣＳＦ（Ｒ＆Ｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ，ＵＳＡ）を使用した標準曲線をＰｒｉｓｍで使用し、細胞培養上清のサイトカイン濃度を計算した。報告された抗体濃度でのＩＬ８パーセント及びＧＭ－ＣＳＦパーセント（ＩＬ８％及びＧＭ－ＣＳＦ％）は、抗体なし対照と比較して計算された。抗ＴＦ抗体濃度調整物を伴うＩＬ８の濃度は、国際ＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１９／０１２４２７及び米国実用出願第１６／９５９，６５２号（それらの全体が参照によって本明細書に組み込まれる）に示され、異なる抗体濃度でのＩＬ８％は表１０に示される。抗ＴＦ抗体濃度調整物を伴うＧＭ－ＣＳＦの濃度は、国際ＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１９／０１２４２７及び米国実用出願第１６／９５９，６５２号（それらの全体が参照によって本明細書に組み込まれる）に示され、異なる抗体濃度でのＩＬ８％は表１１に示される。
ＩＬ８濃度は、６．４ｎＭ以上の濃度の抗ＴＦ抗体の存在下で７５％を超えて減少した。ＧＭ－ＣＳＦ濃度は、６．４ｎＭ以上の濃度の抗ＴＦ抗体の存在下で６０％を超えて減少した。
このデータは、試験された全ての抗ＴＦ抗体がＦＶＩＩａ依存性ＴＦシグナル伝達を阻害することを示している。
（表１０）ＩＬ８の阻害
Figure 2023534191000030
（表１１）ＧＭ－ＣＳＦの阻害
Figure 2023534191000031
実施例１７：抗体競合アッセイ
Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ抗体は、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ４８８ ５－スルホ－ジクロロフェノールエステル（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して生成された。ゲルろ過（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）により、抗体色素コンジュゲート調製物から過剰なＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ色素を除去した。
最初のＴＦに対するヒト抗体と２５Ａとの競合を評価するために、ＴＦ陽性Ａ４３１細胞（ＡＴＣＣ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ，ＵＳＡ）を最初に、ＴＦに対する最初のヒト抗体の濃度調整物と共に氷上で１時間インキュベートした。続いて、Ａｌｅｘａ４８８にコンジュゲートした最終濃度２０ｎＭの２５Ａを抗体細胞混合物に添加した。氷上でさらに１時間インキュベートした後、細胞を洗浄し、生細胞識別色素で染色し、フローサイトメトリーで分析した。生細胞からのＡｌｅｘａ４８８蛍光データは、蛍光強度中央値を使用して要約された。２５Ａ結合は、２５Ａ結合％＝［ＭＦＩ抗体標識細胞－ＭＦＩ未染色細胞］／［ＭＦＩＩｇＧ１対照標識細胞－ＭＦＩ未染色細胞］で要約された。
最初のＴＦに対するヒト抗体と４３Ｅａとの競合を評価するために、ＴＦ陽性Ａ４３１細胞（ＡＴＣＣ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ，ＵＳＡ）を最初に、ＴＦに対する最初のヒト抗体の濃度調整物と共に氷上で１時間インキュベートした。続いて、Ａｌｅｘａ４８８にコンジュゲートした最終濃度２０ｎＭの４３Ｅａを抗体細胞混合物に添加した。氷上でさらに１時間インキュベートした後、細胞を洗浄し、生細胞識別色素で染色し、フローサイトメトリーで分析した。生細胞からのＡｌｅｘａ４８８蛍光データは、蛍光強度中央値を使用して要約された。４３Ｅａ結合は、４３Ｅａ結合％＝［ＭＦＩ抗体標識細胞－ＭＦＩ未染色細胞］／［ＭＦＩＩｇＧ１対照標識細胞－ＭＦＩ未染色細胞］で要約された。
２５Ａ結合％及び４３Ｅａ結合％を表１２に示す。群２５及び群４３の抗体は、２５Ａ結合％及び４３Ｅａ結合％を１０％未満に減少させた。
このデータは、群２５の抗体と群４３の抗体がヒトＴＦへの結合について互いに競合し、ヒトＴＦの同じまたは重複するエピトープに結合する可能性があることを示している。
（表１２）抗ＴＦ抗体と抗体クローン２５Ａまたは４３Ｅａとの競合
Figure 2023534191000032
実施例１８：細胞生存率アッセイ
抗ＴＦ抗体の細胞内移行を評価するために、細胞傷害性アッセイを実施した。簡潔に述べると、細胞を３８４ウェルプレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ Ｂｉｏ－Ｏｎｅ，Ｍｏｎｒｏｅ，ＮＣ，ＵＳＡ）に、４０μｌの培地中で１ウェルあたり４×１０３細胞で播種した。抗体とチューブリン阻害物質モノメチルオーリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）（Ｍｏｒａｄｅｃ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ，ＵＳＡ）にコンジュゲートした二次抗ヒトＦｃ抗体を、それぞれ５及び３０ｎＭから開始して段階的に希釈した。プレートを３日間インキュベートした後、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（ＣＴＧ）アッセイ試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ，ＵＳＡ）で溶解した。ＣＴＧの発光をＥｎｖｉｓｉｏｎプレートリーダーで測定し、４回の反復の平均と標準偏差をＰｒｉｓｍでグラフ化した。各抗ＴＦ抗体について、ＩＣ５０とそれに関連する９５％信頼区間は、４パラメータ結合モデルを使用してＰｒｉｓｍで計算された。
発光のレベル及び計算されたＩＣ５０によって示されるような細胞生存率は、国際ＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１９／０１２４２７及び米国実用出願第１６／９５９，６５２号（それらの全体が参照によって本明細書に組み込まれる）に示される。
このデータは、群１、２５、２９、３９、４３、及び５４からの試験された全ての抗ＴＦ抗体が、ＴＦ陽性Ａ４３１細胞の生存率を低下させるのに効果的であったことを示している。
実施例１９：トロンビン生成アッセイ（ＴＧＡ）
ＴＧＡアッセイは、ＳＴＡＧＯが製造及び販売する校正済み自動トロンボグラム（ＣＡＴ）装置を使用して実行された。試験方法の設計は、血漿源がトウモロコシトリプシン阻害物質（クエン酸塩／ＣＴＩ）を補充したクエン酸塩中の正常プール血漿（ＮＰＰ）であることを除いて、標準のＣＡＴアッセイ測定と同等であった。抗ＴＦ抗体を０、１０、５０、及び１００ｎＭに濃度調整し、トウモロコシトリプシン阻害物質（クエン酸／ＣＴＩ）１００マイクログラム／ｍＬを補充した１１ｍＭクエン酸で収集した通常のプール血漿（ＮＰＰ）と混合した。再脂質化したＴＦを９６ウェルアッセイプレートに加え、続いて抗体／ＮＰＰ混合物を添加した。１０分間のインキュベーション後、または再脂質化ＴＦと抗体／ＮＰＰを混合した直後に、カルシウムとトロンビン基質の添加によりトロンビン生成が開始された。ＳＴＡＧＯソフトウェアは、次のパラメータを報告するために使用された：ピークＩＩａ（生成された最高のトロンビン濃度［ｎＭ］）；ラグタイム（ＩＩａ生成までの時間［分］）；ＥＴＰ（内因性トロンビンポテンシャル、曲線下面積［ｎＭ×分］）；ｔｔピーク（ピークＩＩａまでの時間［分］）。同じプレート上の抗体なしの血漿対照と比較した、各抗体の存在下でのトロンビン生成ピークのパーセント（ピークＩＩａ％）及び内因性トロンビンポテンシャルのパーセント（ＥＴＰ％）も報告された。
カルシウム及びトロンビン基質の添加前に抗体インキュベーションなしでの、２５Ａ、２５Ａ３、２５Ａ５、３９Ａ、４３Ｂ１、４３Ｄ７、４３Ｅａ、及びＭ１５９３から選択された各抗体の存在下でのピークＩＩａ、ラグタイム、ＥＴＰ、ｔｔピーク、ピークＩＩａ％、及びＥＴＰ％を表３７に示す。カルシウム及びトロンビン基質の添加前に１０分間の抗体インキュベーションを伴った、２５Ａ、２５Ａ３、２５Ａ５、３９Ａ、４３Ｂ１、４３Ｄ７、４３Ｅａ、及びＭ１５９３から選択された各抗体の存在下でのピークＩＩａ、ラグタイム、ＥＴＰ、ｔｔピーク、ピークＩＩａ％、及びＥＴＰ％を表３８に示す。カルシウム及びトロンビン基質の添加前の抗体インキュベーションなしの抗ＴＦ抗体の濃度調整の存在下でのピークＩＩａ％は、国際ＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１９／０１２４２７及び米国実用出願第１６／９５９，６５２号（それらの全体が参照によって本明細書に組み込まれる）に示される。カルシウム及びトロンビン基質の添加前の１０分間の抗体インキュベーションを伴う抗ＴＦ抗体の濃度調整の存在下でのピークＩＩａ％は、国際ＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１９／０１２４２７及び米国実用出願第１６／９５９，６５２号（それらの全体が参照によって本明細書に組み込まれる）に示される。Ｍ１５９３抗体は、配列番号８２１のＶＨ配列と配列番号８２２のＶＬ配列を有する。
抗体のプレインキュベーションなしで、ピークＩＩａ％は、２５Ａ、２５Ａ３、及び２５Ａ５を含む群２５の抗体の存在下で９５％以上である。１０分間の抗体のプレインキュベーションを伴って、ピークＩＩａ％は、２５Ａ、２５Ａ３、及び２５Ａ５を含む群２５の抗体の存在下で１００％以上である。群２５からの試験された抗体の存在下では、ＥＴＰ％は９９％以上である。
抗体のプレインキュベーションなしで、ピークＩＩａ％は、４３Ｂ１、４３Ｄ７、及び４３Ｅａを含む群４３の抗体と、抗ＴＦ抗体Ｍ１５９３の存在下で、５０％を超えているが、９６％以下である。１０分間の抗体のプレインキュベーションを伴って、ピークＩＩａ％は、４３Ｂ１、４３Ｄ７、及び４３Ｅａを含む群４３の抗体と、抗ＴＦ抗体Ｍ１５９３の存在下で、４０％を超えているが、９３％以下である。群４３からの試験された抗体とＭ１５９３抗体の存在下では、ＥＴＰ％は９２％以上である。
このデータは、群２５及び４３の抗体が正常なトロンビン生成を可能にするため、トロンビン生成の阻害物質ではないことを示している。トロンビン生成ピークのパーセント（ピークＩＩａ％）は、群４３の抗体及びＭ１５９３抗体と比較して、群２５の抗体の存在下でより大きい。
（表３７）抗体プレインキュベーションなしのトロンビン生成アッセイ
Figure 2023534191000033
Figure 2023534191000034
（表３８）１０分間の抗体プレインキュベーションを伴うトロンビン生成アッセイ
Figure 2023534191000035
実施例２０：抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）の合成
抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）はＢｅｈｒｅｎｓ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ Ｐｈａｒｍ，２０１５，１２：３９８６－９８に記載されているように合成された。リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）、ｐＨ７．４中の５ｍｇ／ｍＬの抗体は、２．５モル当量のトリス（２－カルボキシエチル）ホスフィンで還元された。３７℃で２時間後、部分的に還元された抗体を室温まで冷却し、１時間３～５モル当量のＭＣ－ｖｃ－ＰＡＢ－ＭＭＡＥ（マレイミドカプロイル－バリン－シトルリン－ｐ－アミノベンゾイルオキシカルボニル－モノメチルオーリスタチンＥ）にコンジュゲートした。反応物をＰＢＳに緩衝液交換して、小分子量試薬を除去した。得られたＡＤＣの薬物抗体比（ＤＡＲ）は３～４であった。ＤＡＲは次の式で決定された。吸光度（２４８ｎｍ）／吸光度（２８０ｎｍ）＝（ｎ×ＥｘＰＡＢ［２４８ｎｍ］＋Ｅｘ抗体［２４８ｎｍ］）／（ｎ×ＥｘＰＡＢ［２８０ｎｍ］＋Ｅｘ抗体［２８０ｎｍ］）。ここでｎはＤＡＲの変数であり、ＥｘはＰＡＢと抗体の消衰係数である。疎水性相互作用クロマトグラフィーとサイズ排除クロマトグラフィーを使用して、それぞれ、吸光度ベースのＤＡＲ推定を確証し、ＡＤＣ調製物が少なくとも９５％単量体であることを確認した。
実施例２１：抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）の細胞傷害性アッセイ
ＡＤＣの細胞傷害性を評価するために、ＴＦ陽性Ａ４３１及びＨＰＡＦ－ＩＩ細胞を３８４ウェルプレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ Ｂｉｏ－Ｏｎｅ，Ｍｏｎｒｏｅ，ＮＣ，ＵＳＡ）に、４０μｌの培地中で１ウェルあたり４×１０３細胞で播種した。ＭＣ－ｖｃ－ＰＡＢ－ＭＭＡＥにコンジュゲートした抗ＴＦ抗体を５ｎＭから開始して段階的に希釈した。プレートを３～４日間インキュベートした後、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（ＣＴＧ）アッセイ試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ，ＵＳＡ）で溶解した。ＣＴＧの発光をＥｎｖｉｓｉｏｎプレートリーダーで測定し、４回の反復の平均と標準偏差をＰｒｉｓｍでグラフ化した。各ＡＤＣについて、ＩＣ５０とそれに関連する９５％信頼区間は、４パラメータ結合モデルを使用してＰｒｉｓｍで計算された。
ＴＦ陽性Ａ４３１及びＨＰＡＦ－ＩＩ細胞におけるＣＴＧ発光及び計算されたＩＣ５０によって示される細胞生存率は、国際ＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１９／０１２４２７及び米国実用出願第１６／９５９，６５２号（それらの全体が参照によって本明細書に組み込まれる）に示される。ＭＣ－ｖｃ－ＰＡＢ－ＭＭＡＥにコンジュゲートした群２５、４３、及び３９の抗ＴＦ抗体を含むＡＤＣは、ＴＦ陽性Ａ４３１及びＨＰＡＦ－ＩＩ細胞に細胞傷害性をもたらした。
このデータは、抗ＴＦ抗体薬物コンジュゲートがインビトロでＴＦ陽性細胞の生存率を低下させたことを示している。
実施例２２：ブタＴＦに対する結合親和性アッセイ
特定の抗体の能力をブタＴＦに対する結合について試験した。ブタＴＦのＢｉａｃｏｒｅベースの測定では、所定の抗ＴＦ抗体が、ＣＭ５チップ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｂｉｏ－Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）に共有結合された抗ヒトＩｇＧ抗体によって捕捉された。抗ＴＦ抗体と１００ｎＭで開始するブタＴＦ－Ｈｉｓの５点の３倍濃度調整物との結合を１８０～２４０秒間測定した。その後、抗ＴＦ抗体とＴＦ－Ｈｉｓの間の解離を１８００秒間測定した。速度論的データを分析し、１：１結合モデルを使用してグローバルに適合させた。Ｂｉａｃｏｒｅベースの実験で測定された、示されたＴＦ抗体のＫＤ値を表４０に示す。
表４０に示すように、群２５と４３の抗ｈＴＦ抗体、２５Ｇ９と４３Ｄ８は、ブタＴＦに対して結合活性と交差反応性を示す。
（表４０）ブタＴＦに対する抗体の動態
Figure 2023534191000036
実施例２３：細胞ベースの結合アッセイ
ヒトＴＦ陽性がん細胞株Ａ４３１とＭＤＡ－ＭＢ－２３１及びアカゲザル（Ｍａｃａｃａ ｍｕｌａｔｔａ）のＴＦ陽性細胞株ＲＦ／６Ａは、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ，ＵＳＡ）から入手し、推奨どおりに維持した。
細胞ベースの抗体結合は、参照によりその全体が援用される、Ｌｉａｏ－Ｃｈａｎ ｅｔ ａｌ．，ＰＬｏＳ Ｏｎｅ，２０１５，１０：ｅ０１２４７０８に以前に記載されるように評価された。Ｃｅｌｌｓｔｒｉｐｐｅｒ（Ｍｅｄｉａｔｅｃｈ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ，ＵＳＡ）によって収集した１．２×１０５細胞を、氷上で２時間、２５０ｎＭまたは１００ｎＭで開始する抗ヒトＴＦ ＩｇＧ１抗体の１２点の１：３希釈濃度調整物と共にインキュベートした。２回洗浄した後、ＩｇＧ１抗体で標識された細胞を、それぞれ、１５０ｎＭのヤギフィコエリトリン（ＰＥ）Ｆ（ａｂ’）２フラグメントヤギ抗ヒトＩｇＧ、Ｆｃγフラグメント特異的（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ，Ｗｅｓｔ Ｇｒｏｖｅ，ＰＡ，ＵＳＡ）またはＦＩＴＣ標識Ｆ（ａｂ’）２フラグメントヤギ抗ヒトカッパ（ＳｏｕｔｈｅｒｎＢｉｏｔｅｃｈ，Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ，ＡＬ，ＵＳＡ）と共に氷上で３０分間インキュベートした。２回洗浄した後、死細胞をＴＯ－ＰＲＯ－３ヨージド（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）で標識し、試料をＣｙｔｏＦＬＥＸフローサイトメーター（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ，Ｂｒｅａ，ＣＡ，ＵＳＡ）またはＮｏｖｏｃｙｔｅフローサイトメーター（ＡＣＥＡ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ，ＵＳＡ）で分析した。各希釈での蛍光強度中央値（ＭＦＩ）をプロットし、Ｐｒｉｓｍ（ＧｒａｐｈＰａｄ，Ｌａ Ｊｏｌｌａ，ＣＡ，ＵＳＡ）の４パラメータ結合モデルを使用して細胞のＥＣ５０を導出した。ＦＸ変換に実質的に影響を及ぼさない抗体（すなわち、２５Ａ、２５Ａ３、２５Ｇ１、４３Ｂ１、４３Ｄ７、及び４３Ｅａ）及びＦＸ変換を、５０％を超えて阻害した抗体（すなわち、１Ｆ、２９Ｅ、３９Ａ、及び５４Ｅ）をアッセイに含めた。ヒトＴＦ陽性Ａ４３１細胞に対する抗ＴＦ抗体の結合の結果は、国際ＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１９／０１２４２７及び米国実用出願第１６／９５９，６５２号（それらの全体が参照によって本明細書に組み込まれる）に示される。ヒトＴＦ陽性ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞に対する抗ＴＦ抗体の結合の結果は、国際ＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１９／０１２４２７及び米国実用出願第１６／９５９，６５２号（それらの全体が参照によって本明細書に組み込まれる）に示される。
ＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１９／０１２４２７及び米国実用出願第１６／９５９，６５２号の図１２Ａの全ての試験された抗ｈＴＦ抗体は、ヒトＴＦ陽性Ａ４３１細胞に対して高い親和性を示し、ＥＣ５０は約１．５０ｎＭ～約０．３４ｎＭの範囲である。ＩｇＧ１アイソタイプ対照はＡ４３１細胞に結合しなかった（結合なし、ｎｂ）。国際ＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１９／０１２４２７及び米国実用出願第１６／９５９，６５２号の図１２Ｂの全ての試験された抗ｈＴＦ抗体は、ヒトＴＦ陽性ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞に対して高い親和性を示し、ＥＣ５０は約１．５０ｎＭ～約０．０６ｎＭの範囲である。ＩｇＧ１アイソタイプ対照はＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞に結合しなかった（結合なし、ｎｂ）。
実施例１１に記載され、表５に示されるように、抗ｈＴＦ抗体の結合親和性は、カニクイザル（マカク・ファシキュラリス（Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ））由来のＴＦで評価された。マカク・ファシキュラリスのＴＦとアカゲザルのＴＦのタンパク質配列は同一である。カニクイザルに対するＴＦ特異的抗体の結合は、表４２に示すように、アカゲザルＲＦ／６Ａ細胞株を使用して確認された。試験された全ての抗ｈＴＦ抗体は、ＴＦ陽性のアカゲザルＲＦ／６Ａ細胞に対して高い親和性を示し、ＥＣ５０は約１．２８ｎＭ～約０．１７ｎＭの範囲である。カニクイザルに結合する抗ＴＦ抗体の能力は、非ヒト霊長類モデルを用いたこれらの抗体の毒物学研究に有利である。
（表４２）アカゲザル ＲＦ／６Ａ細胞に対する抗ＴＦ抗体の結合
Figure 2023534191000037
実施例２４：大腸菌由来のＴＦに対する結合アッセイ
大腸菌由来のＴＦは、ＯｍｐＡシグナル配列とＴＦ ＥＣＤ－Ｈｉｓ６の間の融合物として発現され、アフィニティー及び陰イオン交換クロマトグラフィーにより精製された。抗ＴＦ抗体１Ｆ、２５Ａ、２５Ａ３、２５Ｇ１、２９Ｅ、３９Ａ、４３Ｂ１、４３Ｄ７、４３Ｅａ、及び５４ＥのＥｘｐｉ２９３または大腸菌由来のＴＦに対する結合は、タンパク質ＥＬＩＳＡ研究によって決定された。Ｅｘｐｉ２９３または大腸菌由来のＴＦ－Ｈｉｓでコーティングされたプレートを、増加する濃度の抗体と共にインキュベートした。ＨＲＰコンジュゲート二次抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ）とのインキュベーション後、発光データが得られ、Ｐｒｉｓｍを使用して９５％信頼区間でＥＣ５０を計算するために使用された。抗体のＥＣ５０及び９５％信頼区間を表４３に列挙する。
（表４３）Ｅｘｐｉ２９３または大腸菌由来のＴＦに対する抗ＴＦ抗体の結合
Figure 2023534191000038
試験された全ての抗ｈＴＦ抗体は、大腸菌由来のＴＦに対して高い親和性を示し、ＥＣ５０は約０．６８ｎＭ～約０．３１ｎＭの範囲であり、これはＥｘｐｉ２９３由来のＴＦに対する抗体の結合親和性（約０．９８ｎＭ～０．４１ｎＭ）に匹敵する。これらの結果は、ヒト細胞株からのグリコシル化ＴＦに対して抗ＴＦ抗体を選択したが、タンパク質ＥＬＩＳＡで測定すると、抗体は同様の親和性で大腸菌由来のＴＦに結合できることを示している。
実施例２５：トロンビン生成アッセイ（ＴＧＡ）
ＴＧＡアッセイは、ＳＴＡＧＯが製造及び販売する校正済み自動トロンボグラム（ＣＡＴ）装置（Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃａ Ｓｔａｇｏ ＳＡＳ，Ａｓｎｉｅｒｅｓ ｓｕｒ Ｓｅｉｎｅ，Ｆｒａｎｃｅ）を使用して実行された。参照によりその全体が援用される、Ｓａｍａｍａ ｅｔ ａｌ．，Ｔｈｒｏｍｂ Ｒｅｓ，２０１２，１２９：ｅ７７－８２を参照されたい。試験方法の設計は、血漿源が１００μｇ／ｍＬのトウモロコシトリプシン阻害物質（クエン酸塩／ＣＴＩ）を補充した１１ｍＭクエン酸塩中で採取された正常プール血漿（ＮＰＰ）であることを除いて、標準のＣＡＴアッセイ測定と同等であった。抗ＴＦ抗体を０、１０、５０及び１００ｎＭで濃度調整し、クエン酸／ＣＴＩ中でＮＰＰと混合した。再脂質化したＴＦを９６ウェルアッセイプレートに加え、続いて抗体／ＮＰＰ混合物を添加した。１０分間のインキュベーション後、または再脂質化ＴＦと抗体／ＮＰＰを混合した直後に、カルシウムとトロンビン基質の添加によりトロンビン生成が開始された。ＳＴＡＧＯソフトウェアは、次のパラメータを報告するために使用された：ピークＩＩａ（ロンビン生成曲線上の生成された最高のトロンビン濃度［ｎＭ］）；ラグタイム（アッセイ開始から１０ｎＭのトロンビンが形成されるまでの時間［分］）；ＥＴＰ（内因性トロンビンポテンシャル、曲線下面積［ｎＭ×分］）；ｔｔピーク（アッセイ開始からピークＩＩａまでの時間［分］）。同じプレート上の抗体なしの血漿対照と比較した、各抗体の存在下でのトロンビン生成ピークのパーセント（ピークＩＩａ％）、内因性トロンビンポテンシャルのパーセント（ＥＴＰ％）、及びｔｔピークパーセント（ｔｔピーク％）も報告された。本明細書で使用されるとき、「トロンビン生成アッセイ」（ＴＧＡ）という用語は、この実施例で使用されるＴＧＡを指す。
カルシウム及びトロンビン基質の添加前に抗体インキュベーションなしでの、１Ｆ、２５Ａ、２５Ａ３、２５Ｇ１、２９Ｅ、３９Ａ、４３Ｂ１、４３Ｄ７、４３Ｅａ、５４Ｅ、ＴＦ－０１１、５Ｇ９、及び１０Ｈ１０から選択された各抗体の存在下でのピークＩＩａ、ラグタイム、ＥＴＰ、ｔｔピーク、ピークＩＩａ％、ＥＴＰ％、及びｔｔピーク％を表４４に示す。カルシウム及びトロンビン基質の添加前に１０分間の抗体インキュベーションを伴った、１Ｆ、２５Ａ、２５Ａ３、２５Ｇ１、２９Ｅ、３９Ａ、４３Ｂ１、４３Ｄ７、４３Ｅａ、５４Ｅ、ＴＦ－０１１、５Ｇ９、及び１０Ｈ１０から選択された各抗体の存在下でのピークＩＩａ、ラグタイム、ＥＴＰ、ｔｔピーク、ピークＩＩａ％、ＥＴＰ％、及びｔｔピーク％を表４５に示す。抗体プレインキュベーションなしの１００ｎＭ抗ＴＦ抗体の存在下でのトロンビン生成曲線は、国際ＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１９／０１２４２７及び米国実用出願第１６／９５９，６５２号（それらの全体が参照によって本明細書に組み込まれる）に示される。抗体プレインキュベーションなしの抗ＴＦ抗体の濃度調整物の存在下でのトロンビン濃度のピークは、国際ＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１９／０１２４２７及び米国実用出願第１６／９５９，６５２号（それらの全体が参照によって本明細書に組み込まれる）に示される。
国際ＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１９／０１２４２７及び米国実用出願第１６／９５９，６５２号（それらの全体が参照によって本明細書に組み込まれる）に示すように、抗体のプレインキュベーションなしの条件下で、１００ｎＭの抗体濃度での、１Ｆ、２９Ｅ、３９Ａ、５４Ｅが、ピークＩＩａ濃度を、それぞれ９２、７６、９１、及び７０％減少させた。同様に、１００ｎＭの５Ｇ９及びＴＦ－０１１は、ピークＩＩａ濃度をそれぞれ９２％及び９１％阻害した。２つの最高濃度の１Ｆ、３９Ａ、５Ｇ９、及びＴＦ－０１１の存在下でトロンビン生成が大幅に減少し、内因性トロンビン生成（ＥＴＰ）の計算が妨げられ、ピークＩＩａ／トロンビン生成（ｔｔピーク）までの時間が５０ｎＭ及び１００ｎＭでそれぞれ少なくとも２８４％及び３５３％増加した。対照的に、群２５の抗体は、ピークＩＩａ濃度またはｔｔピークに９％以上影響を与えなかった。グループ４３の抗体と１０Ｈ１０は、ピークＩＩａ濃度に対して穏やかな干渉を示した。１００ｎＭの４３Ｂ１、４３Ｄ７、４３Ｅａ、及び１０Ｈ１０は、ピークＩＩａ濃度をそれぞれ３３、４４、１３、及び３４％低減した。さらに、１００ｎＭの４３Ｂ１、４３Ｄ７、及び１０Ｈ１０は、ｔｔピークで少なくとも２９％の増加を示した。しかしながら、群４３抗体及び１０Ｈ１０に対する、ピークＩＩａ濃度の観察された低下とｔｔピークの遅延は、ＥＴＰの１０％以上の低下をもたらさなかった。
同様の結果が、１０分間の抗体プレインキュベーションを伴う条件下で表４５に示されている。１００ｎＭの抗体濃度では、１Ｆ、２９Ｅ、３９Ａ、５４ＥはピークＩＩａ濃度をそれぞれ９３、７２、９３、及び８７％減少させた。同様に、１００ｎＭの５Ｇ９及びＴＦ－０１１は、ピークＩＩａ濃度をそれぞれ９２％及び９１％阻害した。２つの最高濃度の１Ｆ、３９Ａ、５４Ｅ、及びＴＦ－０１１、ならびに、全ての試験された濃度の５Ｇ９の存在下でトロンビン生成が大幅に減少し、内因性トロンビン生成（ＥＴＰ）の計算が妨げられ、ピークＩＩａ／トロンビン生成（ｔｔピーク）までの時間が５０ｎＭ及び１００ｎＭでそれぞれ少なくとも３０３％及び３７１％増加した。対照的に、群２５の抗体は、ピークＩＩａ濃度を減少させず、ｔｔピークを増加させなかった。グループ４３の抗体と１０Ｈ１０は、ピークＩＩａ濃度に対して穏やかな干渉を示した。１００ｎＭの４３Ｂ１、４３Ｄ７、４３Ｅａ、及び１０Ｈ１０は、ピークＩＩａ濃度をそれぞれ４１、５６、１３、及び４８％低減した。さらに、１００ｎＭの４３Ｂ１、４３Ｄ７、及び１０Ｈ１０は、ｔｔピークで少なくとも３３％の増加を示した。しかしながら、群４３抗体及び１０Ｈ１０に対する、ピークＩＩａ濃度の観察された低下とｔｔピークの遅延は、ＥＴＰの１１％以上の低下をもたらさなかった。
全体として、これらの結果は、３つ全てのＴＧＡパラメータ（ＥＴＰ、ピークＩＩａ濃度、及びｔｔピーク）を考慮に入れると、群２５の抗体が凝固カスケードの最後から２番目のステップで完全に不活性であることを示している。
（表４４）抗体プレインキュベーションなしのトロンビン生成アッセイ
Figure 2023534191000039
Figure 2023534191000040
（表４５）１０分間の抗体プレインキュベーションを伴うトロンビン生成アッセイ
Figure 2023534191000041
Figure 2023534191000042
実施例２６：前述の抗ＴＦ抗体によるＦＸａ変換アッセイ及びＦＶＩＩａ競合アッセイ
以前に記載されたＴＦ特異的抗体ＴＦ－０１１、５Ｇ９、及び１０Ｈ１０（参照によりその各々の全体が援用される、Ｂｒｅｉｊ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ，２０１４，７４：１２１４－１２２６；Ｖｅｒｓｔｅｅｇ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，２００８，１１１：１９０－１９９）は、ＦＸａ変換アッセイ及びＦＶＩＩａ競合アッセイで試験された。
ＴＦに対するヒト抗体の存在下でＦＸをＦＸａに変換するＴＦ：ＦＶＩＩａの能力を評価するために、参照によりその全体が援用される、Ｌａｒｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ，２０１０，２８５：１９９５９－１９９６６に記載されているように、細胞ベースのＦＸ変換アッセイを実行した。簡潔に述べると、５×１０４のＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞（ＡＴＣＣ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ，ＵＳＡ）を組織培養処理した黒色の９６ウェルプレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ Ｂｉｏ－Ｏｎｅ，Ｍｏｎｒｏｅ，ＮＣ，ＵＳＡ）に播種し、一晩培養した。細胞培養培地を除去し、１．５ｍＭ ＣａＣｌ２を含むＨＥＰＥＳ緩衝液に２００ｎＭの最終濃度のＦＸを添加した後、細胞を３７℃で１５分間、濃度調整物と共にインキュベートした。最終濃度が２０ｎＭのＦＶＩＩａを含むＴＦ：ＦＶＩＩａバイナリー複合体を再構成し、細胞を３７℃で５分間インキュベートした。黒色９４ウェルプレート中で、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）で反応をクエンチした後、生成されたＦＸａを、Ｕｍｂｅｌｌｉｆｅｒｏｎｅ ３５５励起フィルター、Ｕｍｂｅｌｌｉｆｅｒｏｎｅ ４６０吸収フィルター、ＬＡＮＣＥ／ＤＥＬＦＩＡトップミラーを備えたＥｎｖｉｓｉｏｎプレートリーダー（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ，ＵＳＡ）で、５０μＭのＳＮ－７ ６－アミノ－１－ナフタレンスルホンアミドベースの蛍光基質（Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｉｃ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｅｓｓｅｘ Ｊｕｎｃｔｉｏｎ，ＶＴ，ＵＳＡ）によって測定した。抗体なし対照と比較した抗ＴＦ抗体の濃度調整物の存在下でのＦＸａ変換百分率（ＦＸａ％）は、国際ＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１９／０１２４２７及び米国実用出願第１６／９５９，６５２号（それらの全体が参照によって本明細書に組み込まれる）に示される。
ＦＶＩＩａとＴＦに対するヒト抗体との競合を評価するために、ＴＦ陽性ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞（ＡＴＣＣ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ，ＵＳＡ）を最初に、ＴＦに対するヒト抗体の濃度調整物またはアイソタイプ対照と共に氷上で１時間インキュベートした。続いて、Ａｌｅｘａ４８８にコンジュゲートしたＦＶＩＩ－Ｆｃを２０ｎＭの最終濃度で抗体細胞混合物に添加した。氷上でさらに１時間インキュベートした後、細胞を洗浄し、生細胞識別色素で染色し、フローサイトメトリーで分析した。生細胞からのＡｌｅｘａ４８８蛍光データは、蛍光強度中央値（ＭＦＩ）を使用して要約された。ＦＶＩＩ－Ｆｃ結合は、ＦＶＩＩ－Ｆｃ結合％＝［ＭＦＩ抗体標識細胞－ＭＦＩ未染色細胞］／［ＭＦＩＩｇＧ１対照標識細胞－ＭＦＩ未染色細胞］で要約された。アイソタイプ対照と比較した抗ＴＦ抗体濃度調整物の存在下でのＦＶＩＩａ結合の百分率（ＦＶＩＩａ％）は、国際ＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１９／０１２４２７及び米国実用出願第１６／９５９，６５２号（それらの全体が参照によって本明細書に組み込まれる）に示される。
国際ＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１９／０１２４２７及び米国実用出願第１６／９５９，６５２号（それらの全体が参照によって本明細書に組み込まれる）に示すように、ＴＦ－０１１及び５Ｇ９は、２５、５０、及び１００ｎＭの濃度でＦＸ変換を５７～５９％及び６７～７０％阻害した。１０Ｈ１０は、これら３つの濃度でＦＸ変換を有意に阻害しなかった。
国際ＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１９／０１２４２７及び米国実用出願第１６／９５９，６５２号（それらの全体が参照によって本明細書に組み込まれる）に示すように、ＴＦ－０１１はＦＶＩＩと効果的に競合したが、５Ｇ９と１０Ｈ１０は、最高濃度の抗体でそれぞれ２５％と１０％未満の競合を示した。
これらの結果は、５Ｇ９が主に基質ＦＸ結合と競合し、ＦＸ変換とトロンビン生成の阻害をもたらすことを示している。ＴＦ－０１１は、ＴＦに対する結合についてＦＶＩＩａと競合することにより、トロンビンの生成を阻害する。しかしながら、１０Ｈ１０は、ＴＦに対するＦＶＩＩａの結合に実質的に影響を与えることなく、ＴＦ－ＦＶＩＩａ媒介シグナル伝達を阻害する。これらの発見は、参照によりその全体の各々が援用される、Ｈｕａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ，１９９８，２７５：８７３－８９４；Ｒｕｆ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｊ，１９９１，２７８：７２９－７３３；及びＴｅｐｌｙａｋｏｖ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌ，２０１７，３６：１３９－１４４に記載されている以前の観察と一致する。
実施例２７：抗体競合アッセイ
Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ抗体は、製造元のプロトコルに従って、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ４８８ ５－スルホ－ジクロロフェノールエステル（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して生成された。ゲルろ過（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）により、抗体色素コンジュゲート調製物から過剰なＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ色素を除去した。
最初のＴＦに対するヒト抗体と２５Ａ３との競合を評価するために、ＴＦ陽性ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞（ＡＴＣＣ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ，ＵＳＡ）を最初に、ＴＦに対する最初のヒト抗体の濃度調整物と共に氷上で１時間インキュベートした。続いて、Ａｌｅｘａ４８８にコンジュゲートした最終濃度２０ｎＭの２５Ａ３を抗体細胞混合物に添加した。氷上でさらに１時間インキュベートした後、細胞を洗浄し、生細胞識別色素で染色し、フローサイトメトリーで分析した。生細胞からのＡｌｅｘａ４８８蛍光データは、蛍光強度中央値を使用して要約された。２５Ａ３結合は、２５Ａ３結合％＝［ＭＦＩ抗体標識細胞－ＭＦＩ未染色細胞］／［ＭＦＩＩｇＧ１対照標識細胞－ＭＦＩ未染色細胞］で要約された。
最初のＴＦに対するヒト抗体と４３Ｄ７との競合を評価するために、ＴＦ陽性ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞（ＡＴＣＣ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ，ＵＳＡ）を最初に、ＴＦに対する最初のヒト抗体の濃度調整物と共に氷上で１時間インキュベートした。続いて、Ａｌｅｘａ４８８にコンジュゲートした最終濃度２０ｎＭの４３Ｄ７を抗体細胞混合物に添加した。氷上でさらに１時間インキュベートした後、細胞を洗浄し、生細胞識別色素で染色し、フローサイトメトリーで分析した。生細胞からのＡｌｅｘａ４８８蛍光データは、蛍光強度中央値を使用して要約された。４３Ｄ７結合は、４３Ｄ７結合％＝［ＭＦＩ抗体標識細胞－ＭＦＩ未染色細胞］／［ＭＦＩＩｇＧ１対照標識細胞－ＭＦＩ未染色細胞］で要約された。
最初のＴＦに対するヒト抗体と３９Ａとの競合を評価するために、ＴＦ陽性ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞（ＡＴＣＣ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ，ＵＳＡ）を最初に、ＴＦに対する最初のヒト抗体の濃度調整物と共に氷上で１時間インキュベートした。続いて、Ａｌｅｘａ４８８にコンジュゲートした最終濃度２０ｎＭの３９Ａを抗体細胞混合物に添加した。氷上でさらに１時間インキュベートした後、細胞を洗浄し、生細胞識別色素で染色し、フローサイトメトリーで分析した。生細胞からのＡｌｅｘａ４８８蛍光データは、蛍光強度中央値を使用して要約された。３９Ａ結合は、３９Ａ結合％＝［ＭＦＩ抗体標識細胞－ＭＦＩ未染色細胞］／［ＭＦＩＩｇＧ１対照標識細胞－ＭＦＩ未染色細胞］で要約された。
２５Ａ３結合％、４３Ｄ７結合％、及び３９Ａ結合％は、国際ＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１９／０１２４２７及び米国実用出願第１６／９５９，６５２号（それらの全体が参照によって本明細書に組み込まれる）に示される。群２５及び４３の抗体、５Ｇ９、ならびに１０Ｈ１０は、２５Ａ３結合％及び４３Ｄ７結合％を低減し、３９Ａ結合％を低減しなかった。群１、２９、３９、及び５４の抗体、ならびにＴＦ－０１１は、３９Ａ結合％を低減し、２５Ａ３結合％及び４３Ｄ７結合％を低減しなかった。
抗体競合アッセイの結果は、群２５及び４３の抗体、５Ｇ９、ならびに１０Ｈ１０が、ヒトＴＦの同じまたは重複するエピトープに結合する可能性があるか、アロステリックメカニズムを介して相互のＴＦ結合に影響を与える可能性があることを示しているが、この開示のいずこかに記載されているように、キメラＴＦコンストラクトマッピング実験は、群２５の抗体、群４３の抗体、５Ｇ９、及び１０Ｈ１０が異なるエピトープに結合することを示している。さらに、抗体競合アッセイの結果は、群１、２９、３９、及び５４の抗体、ならびにＴＦ－０１１が、ヒトＴＦの同じまたは重複するエピトープに結合する可能性があるか、アロステリックメカニズムを介して相互のＴＦ結合に影響を与える可能性があることを示しているが、この開示のいずこかに記載されているように、キメラＴＦコンストラクトマッピング実験は、群２９、３９、及び５４の抗体がＴＦ－０１１のエピトープとは異なるエピトープに結合することを示している。
実施例２８：抗ＴＦ抗体の細胞内移行
抗ＴＦ抗体の細胞内移行を評価するために、細胞傷害性アッセイが、参照によりその全体が援用される、Ｌｉａｏ－Ｃｈａｎ ｅｔ ａｌ．，ＰＬｏＳ Ｏｎｅ，２０１５，１０：ｅ０１２４７０８に記載されるように実行された。簡潔に述べると、細胞を３８４ウェルプレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ Ｂｉｏ－Ｏｎｅ，Ｍｏｎｒｏｅ，ＮＣ，ＵＳＡ）に、４０μｌの培地中で１ウェルあたり４×１０３細胞で播種した。抗体とチューブリン阻害物質モノメチルオーリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）（Ｍｏｒａｄｅｃ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ，ＵＳＡ）にコンジュゲートした抗ヒトＦｃ Ｆａｂを、それぞれ５及び３０ｎＭから開始して段階的に希釈した。ＭＭＡＦにコンジュゲートした抗ヒトＦｃ Ｆａｂは、ＤＡＲが１．２～１．５のヒトＩｇＧのＦｃ領域に特異的なポリクローナル抗体からなった。プレートを３日間インキュベートした後、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（ＣＴＧ）アッセイ試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ，ＵＳＡ）で溶解した。ＣＴＧの発光をＥｎｖｉｓｉｏｎプレートリーダーで測定し、４回の反復の平均と標準偏差をＰｒｉｓｍ（ＧｒａｐｈＰａｄ，Ｌａ Ｊｏｌｌａ，ＣＡ，ＵＳＡ）でグラフ化した。各抗ＴＦ抗体について、ＩＣ５０とそれに関連する９５％信頼区間は、４パラメータ結合モデルを使用してＰｒｉｓｍで計算された。抗ＴＦ抗体及び抗ＴＦ抗体Ｆａｂ：ＭＭＡＦ複合体とのインキュベーション後の細胞生存率の結果は、国際ＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１９／０１２４２７及び米国実用出願第１６／９５９，６５２号（それらの全体が参照によって本明細書に組み込まれる）に示される。ＩＣ５０値の９５％信頼区間を表４６に示す。
抗ＴＦ抗体の細胞内移行はまた、細胞内移行した蛍光及びクエンチされた表面蛍光に基づく定量アッセイによって評価された。細胞表面の蛍光消光を、Ｌｉａｏ－Ｃｈａｎ ｅｔ ａｌ．，ＰＬｏＳ Ｏｎｅ，２０１５，１０：ｅ０１２４７０８に記載されるように評価した。簡潔に述べると、１．２×１０５のＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞を、氷上で２時間、培地中で１００ｎＭのＡ４８８コンジュゲート抗体と共にプレインキュベートした。２回洗浄した後、細胞を冷培地に再懸濁し、３７℃で４時間までパルスした。細胞を急速に冷却し、３００ｎＭの抗Ａ４８８抗体（クローン１９Ａ）と共に、またはそれを伴わずに、氷上で３０分間インキュベートした。２回洗浄した後、死細胞をＤＡＰＩで標識し、試料をＮｏｖｏｃｙｔｅフローサイトメーター（ＡＣＥＡ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で分析した。各抗Ａ４８８ ｍＡｂ濃度での蛍光強度中央値（ＭＦＩ）をアイソタイプ対照に対して正規化して、正規化されたＭＦＩ百分率を取得した。細胞内移行した蛍光は、不完全な表面クエンチングを補正することにより、クエンチされた試料データとクエンチされていない試料データから計算された：１－（Ｎ１－Ｑ１）／（Ｎ１－（Ｎ１Ｑ０／Ｎ０））、ここでＮ１＝各時点（ｔ１）でのクエンチされていないＭＦＩ；Ｑ１＝ｔ１でのクエンチされたＭＦＩ；Ｑ０＝氷上で保持されている（ｔ０）試料についてのクエンチされたＭＦＩ；Ｎ０＝ｔ０でのクエンチされていないＭＦＩ。Ａ４８８にコンジュゲートした抗ＴＦ抗体の細胞内移行％は、国際ＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１９／０１２４２７及び米国実用出願第１６／９５９，６５２号（それらの全体が参照によって本明細書に組み込まれる）に示される。
Ｆａｂ：ＭＭＡＦはＴＦ特異的抗体のＦｃ領域に結合するため、これらの複合体の細胞取り込みが細胞死を引き起こす可能性がある。ＴＦ特異的抗体のみでは、ＴＦ陽性Ａ４３１細胞の３日間培養における細胞生存率に影響がなかったが、Ｆａｂ：ＭＭＡＦと複合体を形成したＴＦ特異的抗体は、０．０７～０．１４ｎＭのＩＣ５０値の範囲で用量依存的な細胞殺傷を示した（国際ＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１９／０１２４２７及び米国実用出願第１６／９５９，６５２号（それらの全体が参照によって本明細書に組み込まれる）を参照のこと）。
細胞取り込みは、蛍光標識されたＴＦ特異的抗体で確認された。細胞内移行した蛍光とクエンチされた表面蛍光に基づく定量アッセイでは、ＴＦ特異的抗体は、４時間のインキュベーション後に２８～３７％の細胞内移行を示した（国際ＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１９／０１２４２７及び米国実用出願第１６／９５９，６５２号（それらの全体が参照によって本明細書に組み込まれる）を参照のこと）。
これらの結果は、試験された抗ＴＦ抗体がＴＦ陽性細胞への細胞内移行と毒素送達を薬用化できることを示している。
（表４６）ランキング付きＡＤＣデータ（連続インキュベーション）。＊参照図は、国際ＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１９／０１２４２７及び米国実用出願第１６／９５９，６５２号（それらの全体が参照によって本明細書に組み込まれる）に示される。
Figure 2023534191000043
（表４７）ランキング付きＡＤＣデータ（４時間インキュベーション）。＊参照図は、国際ＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１９／０１２４２７及び米国実用出願第１６／９５９，６５２号（それらの全体が参照によって本明細書に組み込まれる）に示される。
Figure 2023534191000044
実施例２９：抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）の細胞ベースの結合アッセイ
ＡＤＣの細胞結合特性を評価するために、内因性ヒトＴＦ発現ＨＣＴ１１６細胞に対する抗ＴＦ抗体と抗ＴＦ ＡＤＣの結合を、参照によりその全体が援用される、Ｌｉａｏ－Ｃｈａｎ ｅｔ ａｌ．，ＰＬｏＳ Ｏｎｅ，２０１５，１０：ｅ０１２４７０８に以前に記載されているように評価した。簡潔に述べると、Ｃｅｌｌｓｔｒｉｐｐｅｒ（Ｍｅｄｉａｔｅｃｈ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ，ＵＳＡ）によって収集した１．２×１０５細胞を、氷上で２時間、１００ｎＭで開始する抗ヒトＴＦ 抗体またはＡＤＣの１２点の１：３希釈濃度調整物と共にインキュベートした。２回洗浄した後、抗体またはＡＤＣで標識された細胞を、それぞれ、１５０ｎＭのヤギフィコエリトリン（ＰＥ）Ｆ（ａｂ’）２フラグメントヤギ抗ヒトＩｇＧ、Ｆｃγフラグメント特異的（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ，Ｗｅｓｔ Ｇｒｏｖｅ，ＰＡ，ＵＳＡ）またはＦＩＴＣ標識Ｆ（ａｂ’）２フラグメントヤギ抗ヒトカッパ（ＳｏｕｔｈｅｒｎＢｉｏｔｅｃｈ，Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ，ＡＬ，ＵＳＡ）と共に氷上で３０分間インキュベートした。２回洗浄した後、死細胞をＴＯ－ＰＲＯ－３ヨージド（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）で標識し、試料をＣｙｔｏＦＬＥＸフローサイトメーター（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ，Ｂｒｅａ，ＣＡ，ＵＳＡ）またはＮｏｖｏｃｙｔｅフローサイトメーター（ＡＣＥＡ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ，ＵＳＡ）で分析した。各希釈での蛍光強度中央値（ＭＦＩ）をプロットし、Ｐｒｉｓｍ（ＧｒａｐｈＰａｄ，Ｌａ Ｊｏｌｌａ，ＣＡ，ＵＳＡ）の４パラメータ結合モデルを使用して細胞のＥＣ５０を導出した。抗ＴＦ抗体及び抗ＴＦ ＡＤＣの結合曲線は、国際ＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１９／０１２４２７及び米国実用出願第１６／９５９，６５２号（それらの全体が参照によって本明細書に組み込まれる）に示される。報告可能な細胞のＥＣ５０と、抗ＴＦ抗体及びＡＤＣの９５％信頼区間は、国際ＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１９／０１２４２７及び米国実用出願第１６／９５９，６５２号（それらの全体が参照によって本明細書に組み込まれる）に示される。
国際ＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１９／０１２４２７及び米国実用出願第１６／９５９，６５２号（それらの全体が参照によって本明細書に組み込まれる）に示すように、ＴＦ特異的ＡＤＣの細胞結合特性は、ＴＦ特異的抗体の細胞結合特性に匹敵する。これは、ＡＤＣのコンジュゲーションプロセスがＡＤＣのＴＦ特異的抗体部分の細胞結合特性を変化させなかったことを示している。
実施例３０：抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）の細胞傷害性アッセイ
ＡＤＣの細胞傷害性を評価するために、Ａ４３１細胞を３８４ウェルプレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ Ｂｉｏ－Ｏｎｅ）に播種した。ＭＣ－ｖｃ－ＰＡＢ－ＭＭＡＥにコンジュゲートした抗ＴＦ抗体を示すように段階的に希釈した。ＴＦ特異的ＡＤＣをＡ４３１細胞に添加し、７２時間または４時間のいずれかのインキュベーションを行った後、過剰なＡＤＣを除去し、さらに６８時間培養した。Ａ４３１細胞は、処理後にＣＴＧアッセイ試薬で溶解された。ＣＴＧの発光を測定し、４回の反復の平均と標準偏差をＰｒｉｓｍでグラフ化した。各ＡＤＣについて、ＩＣ５０とそれに関連する９５％信頼区間は、４パラメータ結合モデルを使用してＰｒｉｓｍで計算された。
７２時間の連続インキュベーション後の抗ＴＦ ＡＤＣの調製物での細胞生存率は、国際ＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１９／０１２４２７及び米国実用出願第１６／９５９，６５２号（それらの全体が参照によって本明細書に組み込まれる）に示される。４時間のインキュベーション、その後の過剰なＡＤＣの除去及びさらなる６８時間の培養後の抗ＴＦ ＡＤＣの調製物での細胞生存率は、国際ＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１９／０１２４２７及び米国実用出願第１６／９５９，６５２号（それらの全体が参照によって本明細書に組み込まれる）に示される。連続処理とパルス処理の両方でのＡＤＣの報告可能なＩＣ５０値は、国際ＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１９／０１２４２７及び米国実用出願第１６／９５９，６５２号（それらの全体が参照によって本明細書に組み込まれる）に示される。連続処理及びパルス処理のＩＣ５０の９５％信頼区間をそれぞれ表４６及び表４７に示す。
どちらの処理も効果的な細胞殺傷をもたらし、７２時間のインキュベーションと比較して４時間のインキュベーション後に過剰なＡＤＣが培養物から除去された場合、ＩＣ５０は２．４～４．７倍増加した。過剰な２５Ａ３及び３９Ａ ＡＤＣの除去がＩＣ５０に与える影響は最も小さく、それぞれ０．０７及び０．０５ｎＭから２．７及び２．４倍に増加した。
これらの結果は、ＴＦ特異的抗体と同様に、ＴＦ特異的ＡＤＣが実質的な細胞内移行を受けることを示している。
実施例３１：ＦＶＩＩａの存在下での細胞傷害性アッセイ
ＦＶＩＩａがＴＦ特異的ＡＤＣの活動を妨害するかどうかを理解するために、ＦＶＩＩａの非存在下または存在下で、Ａ４３１細胞をＴＦ特異的ＡＤＣ（ＭＣ－ｖｃ－ＰＡＢ－ＭＭＡＥにコンジュゲートした抗ＴＦ抗体）で４時間処理し、６８時間後に細胞生存率を測定した。Ａ４３１細胞は、抗ＴＦ ＡＤＣ濃度調整物を添加する前に、５０ｎＭのＦＶＩＩａと共に、または伴わずに３０分間プレインキュベートした。細胞生存率は、ＣＴＧアッセイによって決定された。４回の反復の平均と標準偏差をＰｒｉｓｍでグラフ化した。各ＡＤＣについて、ＩＣ５０は、４パラメータ結合モデルを使用してＰｒｉｓｍで計算された。
ＦＶＩＩａの非存在下または存在下での抗ＴＦ ＡＤＣの濃度調整物後の細胞生存率は、国際ＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１９／０１２４２７及び米国実用出願第１６／９５９，６５２号（それらの全体が参照によって本明細書に組み込まれる）に示される。ＦＶＩＩａの非存在下または存在下でのＡＤＣの報告可能なＩＣ５０値は、国際ＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１９／０１２４２７及び米国実用出願第１６／９５９，６５２号（それらの全体が参照によって本明細書に組み込まれる）に示される。
ＦＶＩＩａと競合したＡＤＣ（２９Ｅ、３９Ａ、５４Ｅ、及びＴＦ－０１１）は、ＦＶＩＩａの存在によって少なくとも２．３倍の悪影響を受けたが、ＦＶＩＩａと競合しなかったＡＤＣ（群２５及び４３の抗体）は、ＦＶＩＩａの非存在または存在下で同等に有効であった。
これらの結果は、ＦＶＩＩａが群２５及び４３の抗ＴＦ ＡＤＣの活性を妨害しないことを示している。
実施例３２：抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）の存在下での細胞内微小管ネットワーク
ＡＤＣの作用機序を説明するために、細胞の細胞内微小管ネットワークの免疫蛍光が実行された。Ｔｈｅｕｎｉｓｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ，２００６，４０９：２５１－２８４を参照されたい。簡潔に述べると、Ａ４３１またはＨＰＡＦ－ＩＩ細胞を８ウェルポリ－Ｄ－リジン処理スライド（Ｃｏｒｎｉｎｇ Ｉｎｃ，Ｃｏｒｎｉｎｇ，ＮＹ，ＵＳＡ）に播種した。１日後、培養培地を５ｎＭのＡＤＣを含む培地と交換した。２０時間のＡＤＣ曝露後、細胞を４％パラホルムアルデヒド（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）によって室温で１５分間固定した。ＰＢＳで３回洗浄した後、細胞を０．３％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００及び５％正常ヤギ血清を含むＰＢＳで１時間透過処理した。次に、微小管ネットワークを、１％ＢＳＡ及び０．３％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００を含むＰＢＳ中の抗チューブリン（１１Ｈ１０）ウサギｍＡｂ（Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ４８８コンジュゲート）（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｄａｎｖｅｒｓ，ＭＡ，ＵＳＡ）で３時間染色した。３回洗浄した後、ＤＡＰＩ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を含むＰｒｏＬｏｎｇ Ｇｏｌｄ Ａｎｔｉｆａｄｅ試薬を細胞に添加し、０．１７ｍｍカバースリップを使用してスライドを顕微鏡用にマウントした。画像の取得は、ｓＣＭＯＳカメラを備えたＤＭｉ８蛍光顕微鏡（Ｌｅｉｃａ Ｍｉｃｒｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｂｕｆｆａｌｏ Ｇｒｏｖｅ，ＩＬ，ＵＳＡ）で実行した。Ｌｅｉｃａ ＬＡＳ Ｘソフトウェアを使用して、システムに最適化された６～７ミクロンのＺスタックを取得した。このＺスタックからの鮮明な２次元画像は、拡張被写界深度（ＥＤＦ）画像機能を使用して自動的に作成された。Ａ４３１またはＨＰＡＦ－ＩＩ細胞のチューブリン染色の代表的な画像は、国際ＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１９／０１２４２７及び米国実用出願第１６／９５９，６５２号（それらの全体が参照によって本明細書に組み込まれる）に示される。
アイソタイプ対照ＡＤＣは微小管ネットワークに影響を与えなかったが、２５Ａ３ ＡＤＣはＡ４３１とＨＰＡＦ－ＩＩの両方の細胞で微小管ネットワークを効果的に破壊した。
これらの結果は、ＭＭＡＥベースの抗ＴＦ ＡＤＣが細胞内微小管ネットワークの破壊を介してＴＦ陽性がん細胞に細胞傷害性を誘導することを示している。
実施例３３：ＨＵＶＥＣにおける細胞傷害性アッセイ及びＧ２／Ｍ停止
ヒト臍帯静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）の細胞表面のＴＦコピー数を評価するために、１．２×１０５のＨＵＶＥＣを採取し、１３３ｎＭのマウスＩｇＧ２ａバックボーンの抗ヒトＴＦ抗体５Ｇ９と氷上で２時間インキュベートした。２回洗浄した後、ＱＩＦＩＫＩＴビーズ（Ａｇｉｌｅｎｔ）及び抗ＴＦ抗体で標識された細胞を１５０ｎＭのヤギフィコエリトリン（ＰＥ）Ｆ（ａｂ’）２フラグメントヤギ抗マウスＩｇＧ、Ｆｃ－ガンマフラグメント特異的（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）と共に氷上で３０分間インキュベートした。２回洗浄した後、死細胞をＴＯ－ＰＲＯ－３ヨウ化物（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）で標識し、試料をＣｙｔｏＦＬＥＸフローサイトメーター（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ）で分析した。単一の生細胞をゲートした後、ＭＦＩはＦｌｏｗＪｏ（Ｆｌｏｗｊｏ，Ａｓｈｌａｎｄ，ＯＲ，ＵＳＡ）を使用して決定された。ＱＩＦＩＫＩＴビーズを使用した標準曲線は、コピー数を決定するために５パラメータ結合モデルを使用してＰｒｉｓｍで生成された。定量の下限は１．９×１０３の抗体結合部位（コピー数とも呼ばれる）であり、定量の上限は８．０×１０５の抗体結合部位であった。
傷害に応答して、炎症性及び血管新生因子は、血管系における表面ＴＦの発現を一時的に増加させる。参照によりその全体が援用される、Ｈｏｌｙ ｅｔ ａｌ．，Ａｄｖ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ，２０１０，５９：２５９－５９２を参照されたい。細胞培養におけるＴＦの一時的な上方制御は、炎症性サイトカインの組み合わせ（５ｎｇ／ｍＬのＩＬ１－ベータ、２５ｎｇ／ｍＬのＴＮＦ－アルファ、及び５０ｎｇ／ｍＬのＶＥＧＦ）によってＨＵＶＥＣを処理することによって模倣された。国際ＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１９／０１２４２７及び米国実用出願第１６／９５９，６５２号（それらの全体が参照によって本明細書に組み込まれる）に示すように、表面ＴＦレベルは、炎症性サイトカインの非存在下での２．４×１０３コピーから６時間のサイトカイン処理後の１．２×１０４コピーに増加した。表面ＴＦは６時間の処理と比較して２０時間のサイトカイン処理後約３倍低くなり、これはサイトカイン誘導ＴＦ上方制御が一過性であったことを示している。
ＡＤＣ細胞傷害性アッセイでは、ＨＵＶＥＣ培養物を半分の面積の９６ウェルプレートに播種した。翌日、炎症性サイトカインとＡＤＣの濃度調整物の組み合わせを培養物に添加した。４日後、培養物の生存率をＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（ＣＴＧ）アッセイ試薬での溶解により評価した。国際ＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１９／０１２４２７及び米国実用出願第１６／９５９，６５２号（それらの全体が参照によって本明細書に組み込まれる）に示すように、炎症性サイトカイン処理ＨＵＶＥＣ培養の細胞生存率は、抗ＴＦ ＡＤＣ、２５Ａ－ｖｃ－ＭＭＡＥ、及び４３Ｅａ－ｖｃ－ＭＭＡＥの影響を受けなかった。結果は、炎症性サイトカイン処理内皮細胞が抗ＴＦ ＡＤＣに耐性があることを示している。
内皮細胞の抗ＴＦ ＡＤＣに対する耐性をさらに理解するために、サイトカインとＴＦ特異的ＡＤＣの添加後２４時間で細胞周期の進行を評価した。細胞周期のＧ２／Ｍ期での停止は、Ｔｈｅｕｎｉｓｓｅｎ ｅｔ ａｌ，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ，２００６，４０９：２５１－２８４に以前に記載されているように分析された。簡潔に述べると、低継代ＨＵＶＥＣ（Ｌｉｆｅｌｉｎｅ Ｃｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｆｒｅｄｅｒｉｃｋ，ＭＤ，ＵＳＡ）はＶａｓｃｕＬｉｆｅ ＶＥＧＦ－Ｍｖ内皮培地（Ｌｉｆｅｌｉｎｅ Ｃｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）で増殖し、ＨＣＴ－１１６細胞を１２ウェルプレートに播種した。翌日、培地を取り除き、新鮮な培地（サイトカインなし）または５ｎｇ／ｍＬのＩＬ１－ベータ、２５ｎｇ／ｍＬのＴＮＦ－アルファ、及び５０ｎｇ／ｍＬのＶＥＧＦを含む培地（サイトカインあり）と交換した。ＭＭＡＥに連結したＡＤＣまたは遊離ＭＭＡＥの濃度調整物を細胞に添加した。２４時間の処理後、細胞を氷冷７０％エタノールで固定した。続いて、細胞をフローサイトメトリー緩衝液（ＰＢＳ、１％ＦＢＳ、０．１％Ｔｒｉｔｏｎ）で洗浄し、１：１００希釈のリン酸化ヒストンＨ３（Ｓｅｒ１０）（Ｄ２Ｃ８ ＰＥコンジュゲート、Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）で１時間染色した。２回洗浄した後、細胞を１００μｇ／ｍＬのＰｕｒｅＬｉｎｋ ＲＮＡｓｅ Ａ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）で２０分間処理した後、生細胞識別色素ＴＯ－ＰＲＯ－３ヨージド（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を添加した。４０，０００のイベントがＮｏｖｏｃｙｔｅフローサイトメーター（Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）で収集された。Ｆｌｏｗｊｏデータ分析ソフトウェアでは、細胞ダブレットと異数性細胞は除外された。ｐＨ３シグナルをＤＮＡ含量に対してプロットし、ｐＨ３陽性細胞の百分率を決定した。
炎症性サイトカインの非存在下または存在下でのＨＵＶＥＣに対する抗ＴＦ ＡＤＣの濃度調整物によるｐＨ３陽性細胞の百分率（ｐＨ３％）は、国際ＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１９／０１２４２７及び米国実用出願第１６／９５９，６５２号（それらの全体が参照によって本明細書に組み込まれる）に示される。ＨＣＴ－１１６細胞に対する抗ＴＦ ＡＤＣの濃度調整物によるｐＨ３陽性細胞の百分率（ｐＨ３％）は、国際ＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１９／０１２４２７及び米国実用出願第１６／９５９，６５２号（それらの全体が参照によって本明細書に組み込まれる）に示される。
ＴＦ特異的ＡＤＣはＨＣＴ－１１６細胞における細胞周期のＧ２／Ｍ期での停止を誘発したが、ＡＤＣは炎症性サイトカイン処理を有しても有していなくても、ＨＵＶＥＣの細胞周期の進行に影響を与えなかった。国際ＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１９／０１２４２７及び米国実用出願第１６／９５９，６５２号（それらの全体が参照によって本明細書に組み込まれる）に示すように、ｐＨ３陽性ＨＣＴ－１１６細胞の百分率は、アイソタイプ－ｖｃ－ＭＭＡＥの処理と比較して、２５Ａ－ｖｃ－ＭＭＡＥの処理後に５倍増加した。
国際ＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１９／０１２４２７及び米国実用出願第１６／９５９，６５２号（それらの全体が参照によって本明細書に組み込まれる）に示されるように、非コンジュゲートＭＭＡＥは、ＨＣＴ－１１６細胞とＨＵＶＥＣの両方でヒストンＨ３のリン酸化を同程度に増加させ、内皮細胞における耐性がＭＭＡＥベースのＡＤＣに特異的であることを示している。
まとめると、これらの結果は、抗ＴＦ ＡＤＣが炎症性サイトカインの非存在下または存在下でのＨＵＶＥＣの生存率に影響を与えないことを示している。
実施例３４：Ｅｒｋリン酸化アッセイ
Ｅｒｋリン酸化の評価のために、Ａ４３１細胞を培地中で６ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）に一晩播種した。翌日、細胞を一度洗浄し、無血清培地で一晩血清飢餓状態にした。飢餓状態にした後、細胞を１００ｎＭの抗ＴＦ抗体と共に３７℃で３０分間プレインキュベートした。ＦＶＩＩａをウェルに５０ｎＭでスパイクし、ｐ－ＥＲＫ誘導のために３７℃で２０分間インキュベートした。誘導後、細胞をＨａｌｔ（商標）プロテアーゼとホスファターゼ阻害物質カクテル（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を含むＲＩＰＡ溶解抽出緩衝液で溶解した。ウエスタンブロットは、一次抗体としてのＰｈｏｓｐｈｏ－ｐ４４／４２ ＭＡＰＫ（Ｅｒｋ１／２）（Ｔｈｒ２０２／Ｔｙｒ２０４）及びｐ４４／４２ ＭＡＰＫ（Ｅｒｋ１／２）（１３７Ｆ５）（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）と、二次抗体としての、ペルオキシダーゼＡｆｆｉｎｉＰｕｒｅ Ｄｏｎｋｅｙ抗ウサギＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）を使用して、２０μｇの細胞ライセートで実行した。ｐＥｒｋ及びＥｒｋの非飽和バンド強度は、Ａｍｅｒｓｈａｍ ＡＩ６００（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）で測定された。各ｐＥｒｋ強度は、それぞれのＥｒｋ強度及び非抗体非ＦＶＩＩａ試料強度に対して正規化された。
ｐＥｒｋとＥｒｋのウエスタンブロットの結果は、国際ＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１９／０１２４２７及び米国実用出願第１６／９５９，６５２号（それらの全体が参照によって本明細書に組み込まれる）に示される。ＦＶＩＩａによる処理は、抗ＴＦ抗体の前処理なしの細胞培養でＥｒｋリン酸化を５．２倍誘導した。Ｅｒｋリン酸化の誘導は、１Ｆ、３９Ａ、及び５４Ｅによる前処理によって除去され（０．８～１．２の誘導倍数）、２９Ｅと群２５及び４３のメンバーによって減衰した（２．０～３．４の誘導倍数）。
このデータは、Ｅｒｋリン酸化を評価すると、抗ＴＦ抗体がＦＶＩＩａ依存性ＴＦシグナル伝達を阻害することを示している。
実施例３５：抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）アッセイ
ＡＤＣＣ活性を評価するために、ＡＤＣＣ Ｒｅｐｏｒｔｅｒ Ｂｉｏａｓｓａｙ Ｃｏｒｅ Ｋｉｔ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を製造元のプロトコルに従って使用した。簡潔に述べると、Ａ４３１細胞をマイクロタイタープレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）に播種した。翌日、細胞を抗ＴＦ抗体またはＡＤＣの５０ｎＭで開始する１０点の１：３希釈の濃度調整物と共にインキュベートした。８：１のＡＤＣＣエフェクター対標的細胞の比率を各ウェルに添加し、３７℃で６時間インキュベートした。Ｂｉｏ－Ｇｌｏ（商標）ルシフェラーゼアッセイ試薬を各ウェルに添加して、Ｅｎｖｉｓｉｏｎプレートリーダー（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ，ＵＳＡ）で発光を測定した。４回の反復の平均と標準偏差をＰｒｉｓｍでグラフ化した。各抗体及びＡＤＣについて、ＥＣ５０とそれに関連する９５％信頼区間は、４パラメータ結合モデルを使用してＰｒｉｓｍで計算された。
抗ＴＦ抗体または抗ＴＦ ＡＤＣのレプレセス濃度調整におけるレポータージャーカット細胞株とのインキュベーション後のＡＤＣＣレポーター発光は、国際ＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１９／０１２４２７及び米国実用出願第１６／９５９，６５２号（それらの全体が参照によって本明細書に組み込まれる）に示される。各抗ＴＦ抗体またはＡＤＣのＡＤＣＣレポーター発光ＥＣ５０値は、国際ＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１９／０１２４２７及び米国実用出願第１６／９５９，６５２号（それらの全体が参照によって本明細書に組み込まれる）に示される。
試験された全てのＴＦ特異的抗体とＡＤＣは、ルシフェラーゼ依存性の発光を引き起こし、ＥＣ５０値は０．１８ｎＭ～０．４３ｎＭの範囲であった。
これらのデータは、ＴＦ特異的抗体とＡＤＣの両方が、抗体のＩｇＧ１ Ｆｃドメインを介して抗体依存性細胞傷害作用（ＡＤＣＣ）を誘発できることを示している。
実施例３６：ブタＴＦ及びウサギＴＦに対する結合親和性アッセイ
特定の抗体の能力をブタＴＦに対する結合について試験した。ブタＴＦのＢｉａｃｏｒｅベースの測定では、所定の抗ＴＦ抗体が、ＣＭ５チップ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｂｉｏ－Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）に共有結合された抗ヒトＩｇＧ抗体によって捕捉された。抗ＴＦ抗体と１００ｎＭで開始するブタＴＦ－Ｈｉｓの５点の３倍濃度調整物との結合を１８０～２４０秒間測定した。その後、抗ＴＦ抗体とＴＦ－Ｈｉｓの間の解離を１８００秒間測定した。速度論的データを分析し、１：１結合モデルを使用してグローバルに適合させた。Ｂｉａｃｏｒｅベースの実験で測定された、示されたＴＦ抗体のＫＤ値を表４８に示す。
特定の抗体の能力をウサギＴＦに対する結合について試験した。ウサギＴＦのＢｉａｃｏｒｅベースの測定では、所定の抗ＴＦ抗体が、ＣＭ５チップ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｂｉｏ－Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）に共有結合された抗ヒトＩｇＧ抗体によって捕捉された。抗ＴＦ抗体と１００ｎＭで開始するウサギＴＦ－Ｈｉｓの５点の３倍濃度調整物との結合を１８０～２４０秒間測定した。その後、抗ＴＦ抗体とＴＦ－Ｈｉｓの間の解離を１８００秒間測定した。速度論的データを分析し、１：１結合モデルを使用してグローバルに適合させた。Ｂｉａｃｏｒｅベースの実験で測定された、示されたＴＦ抗体のＫＤ値を表４８に示す。
表４８に示すように、群２５と４３の抗ｈＴＦ抗体は、ブタＴＦ及びウサギＴＦに対して結合活性と交差反応性を示す。対照的に、群１及び２９の抗体は、ブタＴＦまたはウサギＴＦに対して結合活性を示さない。
（表４８）ブタＴＦ及びウサギＴＦに対する抗体の動態
Figure 2023534191000045
実施例３７：抗ＴＦ抗体のエピトープビニング
抗ヒトＴＦ抗体間のエピトープ結合の相違を確認するために、キメラＴＦコンストラクトマッピング実験を行った。このマッピング技法は、抗体エピトープの識別を可能にする。
評価された全ての抗ヒトＴＦ抗体はラットＴＦに結合しないため、ラットＴＦ配列をキメラヒト－ラットＴＦコンストラクトの構築に使用した。キメラヒト－ラットコンストラクトの設計は、ＴＦ細胞外ドメインのＮ末端ドメインとＣ末端ドメイン（それぞれ細胞外ドメインのアミノ酸１～１０７と１０８～２１９）にガイドされ、整列は、国際ＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１９／０１２４２７及び米国実用出願第１６／９５９，６５２号（それらの全体が参照によって本明細書に組み込まれる）に示される。国際ＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１９／０１２４２７及び米国実用出願第１６／９５９，６５２号の図３６のコンストラクトを使用したキメラマッピングの結果に基づいて、ラットのアミノ酸セグメント１４１～１９４をヒトの配列（ｈＴＦ細胞外ドメインのアミノ酸１３６～１８９）に置き換え、整列は、国際ＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１９／０１２４２７及び米国実用出願第１６／９５９，６５２号（それらの全体が参照によって本明細書に組み込まれる）に示される。１つまたは２つのヒト－ラット置換を備えた３つのヒトＴＦコンストラクト（ｈＴＦ＿Ｋ６８Ｎ、ｈＴＦ＿Ｋ１４９Ｎ、及びｈＴＦ＿Ｎ１７１Ｈ＿Ｔ１９７Ｋ）の設計は、１０Ｈ１０抗体について報告された接触残基Ｋ６８、Ｋ１４９、及びＮ１７１及びＴ１９７（Ｔｅｐｌｙａｋｏｖ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌ．，２０１７，３６：１３９－１４４）に基づいており、整列は、国際ＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１９／０１２４２７及び米国実用出願第１６／９５９，６５２号（それらの全体が参照によって本明細書に組み込まれる）に示される。
抗ヒトＴＦ抗体の様々なＴＦコンストラクトに対する結合を確立するために、ＴＦコンストラクトと緑色蛍光タンパク質マーカーを共発現するＤＮＡプラスミドをＨＥＫ２９３細胞にトランスフェクトした。抗体のサブセットについて、選択したＴＦコンストラクトで抗体濃度調整（２５０ｎＭから開始する１２点の１：３希釈系列）を評価した（国際ＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１９／０１２４２７及び米国実用出願第１６／９５９，６５２号（それらの全体が参照によって本明細書に組み込まれる）を参照のこと）。これらの抗体濃度調整は、表５１及び５２で使用されている１５μｇ／ｍｌ（１００ｎＭ）の抗体濃度が、「ｈＴＦと比較したＴＦコンストラクトに対する抗体結合の百分率」を確立するのに適切であることを示した。トランスフェクションの２日後、細胞を組織培養プレートから回収し、１５μｇ／ｍｌの示された抗ＴＦ抗体で染色し、洗浄し、抗ヒトＩｇＧ－Ｆｃ Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７ポリクローナル抗体で染色し、洗浄して、生細胞識別色素４’，６－ジアミジノ－２－フェニルインドール、二塩酸塩で染色した。フローサイトメーターで８０，０００のライブイベントを取得し、蛍光マーカーでマークされた生細胞の抗ＴＦ抗体による染色の程度を分析した。各ＴＦ発現コンストラクトについてのアイソタイプ対照と比較した蛍光強度中央値を、ｈＴＦ発現コンストラクトについてのアイソタイプ対照と比較した蛍光強度の中央値で割り、結果の百分率を「ｈＴＦと比較したＴＦコンストラクトに対する抗体の結合の百分率」として表５１及び５２に列挙する。本明細書で使用されるとき、「生細胞染色アッセイ」という用語は、この実施例で使用される抗体結合アッセイを指す。
全てのキメラＴＦコンストラクトがｈＴＦ対照コンストラクトの５０％～１５０％のレベルで細胞表面に発現したという仮定は、抗体集合体の少なくとも１つの抗ヒトＴＦ抗体についての全てのＴＦコンストラクトについて満たされたが、ｈ１－１０７＿ｒコンストラクト（ヒトのアミノ酸セグメント１～１０７がラットの配列に置き換えられている）は、例外であった。抗ヒトＴＦ抗体が細胞表面に発現したラットＴＦに結合しないことが予想された。表５１及び５２の「ｈＴＦと比較したＴＦコンストラクトに対する抗体結合の百分率」が５０％未満の場合、その抗体は表５３及び５４で結合物でない（０）とみなされた。表５１及び５２の「ｈＴＦと比較したＴＦコンストラクトに対する抗体結合の百分率」が５０％～１５０％の場合、その抗体は表５３及び５４で結合物（１）とみなされた。
各抗体は、表５３の非結合コンストラクトの組み合わせに基づいて、表５５のエピトープビンに割り当てられた。系列２５の抗体（２５Ａ、２５Ａ３、２５Ａ５－Ｔ、２５Ｇ１、及び２５Ｇ９）は、表５５でエピトープビン６と呼ばれる特有のエピトープに結合する。系列４３の抗体（４３Ｂ１、４３Ｄ７、４３Ｄ８、及び４３Ｅａ）もまた、表５５でエピトープビン７と呼ばれる特有のエピトープに結合する。系列２９の抗体（２９Ｅ）は、表５５でエピトープビン２と呼ばれる特有のエピトープに結合する。系列３９及び５４の抗体（３９Ａ及び５４Ｅ）は、表５５でエピトープビン３と呼ばれる特有のエピトープに結合する。
系列２５及び４３の抗体は、ラットのアミノ酸１４１～１９４がヒトの配列で置き換えられたキメラ構コンストラクトであるｒ１４１－１９４＿ｈに結合する抗体パネルの唯一の抗体である（表５４）。さらに、Ｍ１５９３はｈＴＦ＿Ｋ６８Ｎに結合できないが、抗体パネルの他の全ての抗体はｈＴＦ＿Ｋ６８Ｎに結合する（表５４）。系列２５及び４３の抗体のみがｈＴＦ＿Ｋ１４９Ｎに結合できない（表５４）。系列２５の抗体のみがｈＴＦ＿Ｎ１７１Ｈ＿Ｔ１９７Ｋに結合できない（表５４）。（国際ＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１９／０１２４２７及び米国実用出願第１６／９５９，６５２号（それらの全体が参照によって本明細書に組み込まれる）を参照のこと）。
要約すると、これらの結果は、系統２５の抗体が、試験した他の全ての抗体と比較して、ヒトＴＦの特有のエピトープに結合することを示している。系統４３の抗体は、試験した他の全ての抗体と比較して、ヒトＴＦの特有のエピトープに結合する。系列２５と系統４３の抗体は、Ｍ１５９３とは異なるヒトＴＦのエピトープに結合する。
（表５１）ｈＴＦと比較したＴＦコンストラクトに対する抗体結合パーセント
Figure 2023534191000046
（表５２）ｈＴＦと比較したＴＦコンストラクトに対する抗体結合パーセント
Figure 2023534191000047
（表５３）ＴＦコンストラクトに対する抗体結合
Figure 2023534191000048
（表５４）ＴＦコンストラクトに対する抗体結合
Figure 2023534191000049
（表５５）非結合キメラコンストラクトに基づくエピトープビン割り当て
Figure 2023534191000050
本発明を特に好ましい実施形態及び様々な代替的な実施形態を参照して示し説明したが、本発明の趣旨及び範囲から逸脱することなく形態及び詳細に様々な変更を加えることができることは当業者には理解されよう。
本明細書の本文内で引用された全ての参考文献、発行された特許及び特許出願は、あらゆる目的のためにその全体が参照により本明細書に組み込まれる。
配列
（表１３）可変領域配列
Figure 2023534191000051
Figure 2023534191000052
Figure 2023534191000053
（表１４）可変領域配列コンセンサス
Figure 2023534191000054
（表１５）抗体１Ｆ－ＣＤＲ配列
Figure 2023534191000055
（表１６）抗体１Ｇ－ＣＤＲ配列
Figure 2023534191000056
（表１７）抗体２５Ａ－ＣＤＲ配列
Figure 2023534191000057
（表１８）抗体２５Ａ３－ＣＤＲ配列
Figure 2023534191000058
（表１９ａ）抗体２５Ａ５－ＣＤＲ配列
Figure 2023534191000059
（表１９ｂ）抗体２５Ａ５－Ｔ－ＣＤＲ配列
Figure 2023534191000060
（表２０）抗体２５Ｇ－ＣＤＲ配列
Figure 2023534191000061
（表２１）抗体２５Ｇ１－ＣＤＲ配列
Figure 2023534191000062
（表２２）抗体２５Ｇ９－ＣＤＲ配列
Figure 2023534191000063
（表２３）抗体２９Ｄ－ＣＤＲ配列
Figure 2023534191000064
（表２４）抗体２９Ｅ－ＣＤＲ配列
Figure 2023534191000065
（表２５）抗体３９Ａ－ＣＤＲ配列
Figure 2023534191000066
（表２６）抗体４３Ｂ－ＣＤＲ配列
Figure 2023534191000067
（表２７）抗体４３Ｂ１－ＣＤＲ配列
Figure 2023534191000068
（表２８）抗体４３Ｂ７－ＣＤＲ配列
Figure 2023534191000069
（表２９）抗体４３Ｄ－ＣＤＲ配列
Figure 2023534191000070
（表３０）抗体４３Ｄ７－ＣＤＲ配列
Figure 2023534191000071
（表３１）抗体４３Ｄ８－ＣＤＲ配列
Figure 2023534191000072
（表３２）抗体４３Ｅ－ＣＤＲ配列
Figure 2023534191000073
（表３３）抗体４３Ｅａ－ＣＤＲ配列
Figure 2023534191000074
（表３４）抗体５４Ｅ－ＣＤＲ配列
Figure 2023534191000075
（表３５）コンセンサスＣＤＲ
Figure 2023534191000076
（表３６）ヒト、カニクイザル、及びマウスのＴＦ配列
Figure 2023534191000077
Figure 2023534191000078
Figure 2023534191000079
（表３９）抗ＴＦ抗体の配列
Figure 2023534191000080
（表４１）ブタＴＦ配列
Figure 2023534191000081
（表４９）ウサギＴＦ配列
Figure 2023534191000082
（表５６）ラットＴＦ ＥＣＤ及びキメラコンストラクトＥＣＤ配列
Figure 2023534191000083
Figure 2023534191000084
Figure 2023534191000085
Figure 2023534191000086
Figure 2023534191000087
Figure 2023534191000088
（表５７）可変領域配列コンセンサス
Figure 2023534191000089
（表５８）コンセンサスＣＤＲ
Figure 2023534191000090
（表５９）ＴＦ抗体の抗体配列
可変領域は太字で示される。薬物の複合体化に関与するシステインは下線付きで示される。表１３中のクローンは、同じ重鎖定常領域を有する。表１３中のクローンは、同じ軽鎖定常領域を有する。
Figure 2023534191000091
Figure 2023534191000092
Figure 2023534191000093
Figure 2023534191000094
Figure 2023534191000095

Claims (144)

  1. 炎症性疾患の治療を必要とする対象において炎症性疾患を治療する方法であって、前記方法が、単離された抗体を前記対象に投与することを含み、前記抗体が、ヒト組織因子（ＴＦ）の細胞外ドメインに結合し、前記抗体が、ヒトＦＶＩＩａが結合するヒトＴＦ結合部位とは別個のヒトＴＦ結合部位でヒトＴＦに結合する、前記方法。
  2. ウイルス感染症が、重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）である、請求項１に記載の方法。
  3. 前記炎症性疾患が、大腸炎、炎症性腸疾患、関節炎、急性肺損傷、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、及び呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）から選択される、請求項１に記載の方法。
  4. 前記炎症性疾患が大腸炎である、請求項３に記載の方法。
  5. 前記炎症性疾患が炎症性腸疾患（ＩＢＤ）である、請求項３に記載の方法。
  6. 前記炎症性疾患が関節炎である、請求項３に記載の方法。
  7. 前記炎症性疾患が急性肺損傷である、請求項３に記載の方法。
  8. 前記炎症性疾患がＡＲＤＳである、請求項３に記載の方法。
  9. 前記炎症性疾患がＲＳＶである、請求項３に記載の方法。
  10. 前記炎症性疾患が循環器疾患または循環器損傷である、請求項１に記載の方法。
  11. 心疾患または心損傷が心筋梗塞である、請求項１０に記載の方法。
  12. 前記炎症性疾患が、プロテアーゼ活性化受容体２（ＰＡＲ－２）の上方制御と関連する循環器疾患である、請求項１に記載の方法。
  13. 前記抗体が、トロンビン生成アッセイ（ＴＧＡ）によって判定される場合、ヒトトロンビン生成を阻害しない、請求項１～１２のいずれか１項に記載の方法。
  14. 単離されたヒト抗体が、トロンビン生成アッセイ（ＴＧＡ）によって判定される場合、配列番号８２１のＶＨ配列及び配列番号８２２のＶＬ配列を含む参照抗体と比較して、ヒトトロンビン生成を阻害しないか、またはヒトトロンビン生成を阻害する程度が低い、請求項１～１３のいずれか１項に記載の方法。
  15. 前記単離された抗体と、配列番号８１０に示される配列のアミノ酸残基１４９に変異を含むバリアントＴＦ細胞外ドメインとの間の結合が、生細胞染色アッセイにおいてアイソタイプ対照と比較した前記単離された抗体の蛍光強度中央値によって判定される場合、前記単離された抗体と配列番号８１０に示される配列のＴＦの細胞外ドメインとの間の結合の５０％未満である、請求項１４に記載の方法。
  16. 前記抗体が、表３５中の抗体群に由来する３つ全ての重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）及び３つ全ての軽鎖ＣＤＲを含み、前記３つ全ての重鎖ＣＤＲ及び前記３つ全ての軽鎖ＣＤＲが同じ抗体群に由来する、請求項１～１５のいずれか１項に記載の方法。
  17. 前記抗体が、表１５～３４のいずれか１つにおける抗体に由来する３つ全ての重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）及び３つ全ての軽鎖ＣＤＲを含み、前記３つ全ての重鎖ＣＤＲ及び前記３つ全ての軽鎖ＣＤＲが同じ抗体に由来する、請求項１～１５のいずれか１項に記載の方法。
  18. ２５Ａと表記される抗体、２５Ａ５と表記される抗体、２５Ａ５－Ｔと表記される抗体、２５Ｇと表記される抗体、２５Ｇ１と表記される抗体、２５Ｇ９と表記される抗体、４３Ｂと表記される抗体、４３Ｂ１と表記される抗体、４３Ｂ７と表記される抗体、４３Ｄと表記される抗体、４３Ｄ７と表記される抗体、４３Ｄ８と表記される抗体、４３Ｅと表記される抗体、または４３Ｅａと表記される抗体
    に由来する３つ全ての重鎖ＣＤＲ及び３つ全ての軽鎖ＣＤＲを含む、請求項１７に記載の方法。
  19. ４３Ｂと表記される抗体、４３Ｂ１と表記される抗体、４３Ｂ７と表記される抗体、４３Ｄと表記される抗体、４３Ｄ７と表記される抗体、４３Ｄ８と表記される抗体、４３Ｅと表記される抗体、または４３Ｅａと表記される抗体
    に由来する３つ全ての重鎖ＣＤＲ及び３つ全ての軽鎖ＣＤＲを含む、請求項１８に記載の方法。
  20. ２５Ａと表記される抗体、２５Ａ５と表記される抗体、２５Ａ５－Ｔと表記される抗体、２５Ｇと表記される抗体、２５Ｇ１と表記される抗体、または２５Ｇ９と表記される抗体
    に由来する３つ全ての重鎖ＣＤＲ及び３つ全ての軽鎖ＣＤＲを含む、請求項１８に記載の方法。
  21. 前記抗体が、表１４のＶＨドメイン配列及びＶＬドメイン配列を含み、前記ＶＨドメイン配列及び前記ＶＬドメイン配列が、表１４中の同じ群に由来する、請求項１～１５のいずれか１項に記載の方法。
  22. 前記抗体が、表１３のＶＨドメイン配列及びＶＬドメイン配列を含み、前記ＶＨドメイン配列及び前記ＶＬドメイン配列が、表１３中の同じクローンに由来する、請求項１～１５のいずれか１項に記載の方法。
  23. 前記抗体が、配列番号７９７に記載の配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１、配列番号７９８に記載の配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２、配列番号７９９に記載の配列を含むＶＨ－ＣＤＲ３、配列番号８００に記載の配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１、配列番号８０１に記載の配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２、及び配列番号８０２に記載の配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３を含む、請求項１または請求項１３に記載の方法。
  24. 前記抗体が、配列番号５７１に記載の配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１、配列番号５７２に記載の配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２、配列番号５７３に記載の配列を含むＶＨ－ＣＤＲ３、配列番号５７４に記載の配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１、配列番号５７５に記載の配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２、及び配列番号５７６に記載の配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３を含む、請求項２３に記載の方法。
  25. 前記抗体が、配列番号６０９に記載の配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１、配列番号６１０に記載の配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２、配列番号６１１に記載の配列を含むＶＨ－ＣＤＲ３、配列番号６１２に記載の配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１、配列番号６１３に記載の配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２、及び配列番号６１４に記載の配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３を含む、請求項２３に記載の方法。
  26. 前記抗体が、配列番号７６９に記載の配列を含むＶＨ配列、及び配列番号７７０に記載の配列を含むＶＬ配列を含む、請求項１～１３及び請求項２３のいずれか１項に記載の方法。
  27. 前記抗体が、配列番号５６９に記載の配列を含むＶＨ配列、及び配列番号５７０に記載の配列を含むＶＬ配列を含む、請求項２６に記載の方法。
  28. 前記抗体が、配列番号６０７に記載の配列を含むＶＨ配列、及び配列番号６０８に記載の配列を含むＶＬ配列を含む、請求項２６に記載の方法。
  29. 前記抗体が、配列番号９２４に記載の配列を含む重鎖、及び配列番号９２５に記載の配列を含む軽鎖を含む、請求項２４または請求項２８に記載の方法。
  30. 前記抗体が、配列番号６４５に記載の配列を含むＶＨ配列、及び配列番号６４６に記載の配列を含むＶＬ配列を含む、請求項２６に記載の方法。
  31. 前記抗体が、配列番号９２６に記載の配列を含む重鎖、及び配列番号９２７に記載の配列を含む軽鎖を含む、請求項２５または請求項３０に記載の方法。
  32. 前記抗体が、配列番号７７９に記載の配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１、配列番号７８０に記載の配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２、配列番号７８１に記載の配列を含むＶＨ－ＣＤＲ３、配列番号７８２に記載の配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１、配列番号７８３に記載の配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２、及び配列番号７８４に記載の配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３を含む、請求項１～１５のいずれか１項に記載の方法。
  33. 前記抗体が、配列番号８７２に記載の配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１、配列番号８７３に記載の配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２、配列番号８７４に記載の配列を含むＶＨ－ＣＤＲ３、配列番号８７５に記載の配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１、配列番号８７６に記載の配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２、及び配列番号８７７に記載の配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３を含む、請求項１～１６のいずれか１項に記載の方法。
  34. 前記抗体が、配列番号８８４に記載の配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１、配列番号８８５に記載の配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２、配列番号８８６に記載の配列を含むＶＨ－ＣＤＲ３、配列番号８８７に記載の配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１、配列番号８８８に記載の配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２、及び配列番号８８９に記載の配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３を含む、請求項３３に記載の方法。
  35. 前記抗体が、配列番号８６８に記載の配列を含むＶＨ配列、及び配列番号８６９に記載の配列を含むＶＬ配列を含む、請求項１～１６及び請求項３３のいずれか１項に記載の方法。
  36. 前記抗体が、配列番号１８９に記載の配列を含むＶＨ配列、及び配列番号１９０に記載の配列を含むＶＬ配列を含む、請求項３５に記載の方法。
  37. 前記抗体が、配列番号８３６に記載の配列を含むＶＨ配列、及び配列番号８３７に記載の配列を含むＶＬ配列を含む、請求項３５に記載の方法。
  38. 前記抗体が、配列番号９２０に記載の配列を含む重鎖、及び配列番号９２１に記載の配列を含む軽鎖を含む、請求項３４または請求項３７に記載の方法。
  39. 前記抗体が、配列番号８７８に記載の配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１、配列番号８７９に記載の配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２、配列番号８８０に記載の配列を含むＶＨ－ＣＤＲ３、配列番号８８１に記載の配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１、配列番号８８２に記載の配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２、及び配列番号８８３に記載の配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３を含む、請求項１～１６のいずれか１項に記載の方法。
  40. 前記抗体が、配列番号２６７に記載の配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１、配列番号２６８に記載の配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２、配列番号２６９に記載の配列を含むＶＨ－ＣＤＲ３、配列番号２７０に記載の配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１、配列番号２７１に記載の配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２、及び配列番号２７２に記載の配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３を含む、請求項３９に記載の方法。
  41. 前記抗体が、配列番号８７０に記載の配列を含むＶＨ配列、及び配列番号８７１に記載の配列を含むＶＬ配列を含む、請求項１～１６及び請求項３９のいずれか１項に記載の方法。
  42. 前記抗体が、配列番号３０３に記載の配列を含むＶＨ配列、及び配列番号３０４に記載の配列を含むＶＬ配列を含む、請求項４１に記載の方法。
  43. 前記抗体が、配列番号９２２に記載の配列を含む重鎖、及び配列番号９２３に記載の配列を含む軽鎖を含む、請求項４０または請求項４２に記載の方法。
  44. 前記抗体が、２５Ａと表記される抗体、２５Ａ５と表記される抗体、２５Ａ５－Ｔと表記される抗体、２５Ｇと表記される抗体、２５Ｇ１と表記される抗体、２５Ｇ９と表記される抗体、４３Ｂと表記される抗体、４３Ｂ１と表記される抗体、４３Ｂ７と表記される抗体、４３Ｄと表記される抗体、４３Ｄ７と表記される抗体、４３Ｄ８と表記される抗体、４３Ｅと表記される抗体、または４３Ｅａと表記される抗体と、ヒトＴＦへの結合について競合する、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
  45. 前記抗体が、４３Ｂと表記される抗体、４３Ｂ１と表記される抗体、４３Ｂ７と表記される抗体、４３Ｄと表記される抗体、４３Ｄ７と表記される抗体、４３Ｄ８と表記される抗体、４３Ｅと表記される抗体、または４３Ｅａと表記される抗体と、ヒトＴＦへの結合について競合する、請求項４４に記載の方法。
  46. 前記抗体が、２５Ａと表記される抗体、２５Ａ５と表記される抗体、２５Ａ５－Ｔと表記される抗体、２５Ｇと表記される抗体、２５Ｇ１と表記される抗体、または２５Ｇ９と表記される抗体と、ヒトＴＦへの結合について競合する、請求項４４に記載の方法。
  47. 前記抗体が、２５Ａと表記される抗体、２５Ａ５と表記される抗体、２５Ａ５－Ｔと表記される抗体、２５Ｇと表記される抗体、２５Ｇ１と表記される抗体、２５Ｇ９と表記される抗体、４３Ｂと表記される抗体、４３Ｂ１と表記される抗体、４３Ｂ７と表記される抗体、４３Ｄと表記される抗体、４３Ｄ７と表記される抗体、４３Ｄ８と表記される抗体、４３Ｅと表記される抗体、または４３Ｅａと表記される抗体が結合するヒトＴＦエピトープと同じヒトＴＦエピトープに結合する、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
  48. 前記抗体が、４３Ｂと表記される抗体、４３Ｂ１と表記される抗体、４３Ｂ７と表記される抗体、４３Ｄと表記される抗体、４３Ｄ７と表記される抗体、４３Ｄ８と表記される抗体、４３Ｅと表記される抗体、または４３Ｅａと表記される抗体が結合するヒトＴＦエピトープと同じヒトＴＦエピトープに結合する、請求項４７に記載の方法。
  49. 前記抗体が、２５Ａと表記される抗体、２５Ａ５と表記される抗体、２５Ａ５－Ｔと表記される抗体、２５Ｇと表記される抗体、２５Ｇ１と表記される抗体、または２５Ｇ９と表記される抗体が結合するヒトＴＦエピトープと同じヒトＴＦエピトープに結合する、請求項４７に記載の方法。
  50. 前記抗体が、トロンビン生成アッセイ（ＴＧＡ）によって判定される場合ヒトトロンビン生成を阻害せず、アイソタイプ対照と比較してトロンビン生成曲線上のトロンビンピーク（ピークＩＩａ）を減少させず、アイソタイプ対照と比較してアッセイ開始からトロンビン生成曲線上のトロンビンピークまでの時間（ｔｔピーク）を増加させず、トロンビン生成曲線下面積によって判定される場合アイソタイプ対照と比較して内因性トロンビン産生能（ＥＴＰ）を減少させず、トロンビン生成アッセイ（ＴＧＡ）によって判定される場合ヒトトロンビン生成を可能にし、アイソタイプ対照と比較してトロンビン生成曲線上のトロンビンピーク（ピークＩＩａ）を維持し、アイソタイプ対照と比較してアッセイ開始からトロンビン生成曲線上のトロンビンピークまでの時間（ｔｔピーク）を維持し、トロンビン生成曲線下面積によって判定される場合アイソタイプ対照と比較して内因性トロンビン産生能（ＥＴＰ）を保ち、ヒトＦＸが結合するヒトＴＦ結合部位とは別個のヒトＴＦ結合部位でヒトＴＦに結合し、ＦＸをＦＸａに変換するＴＦ：ＦＶＩＩａの能力に干渉せず、かつヒトＴＦへの結合についてＦＶＩＩａと競合しない、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
  51. 前記３つの重鎖ＣＤＲ及び前記３つの軽鎖ＣＤＲが、例えば、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＡｂＭ、Ｃｏｎｔａｃｔ、またはＩＭＧＴ番号付けを使用して決定される、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
  52. 前記抗体がカニクイザルＴＦに特異的に結合する、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
  53. 前記抗体がマウスＴＦに特異的に結合する、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
  54. 前記抗体がウサギＴＦに特異的に結合する、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
  55. 前記抗体がブタＴＦに特異的に結合する、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
  56. 前記疾患が血管炎症を伴う、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
  57. 前記疾患が局所性炎症を伴う、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
  58. 前記疾患が全身性炎症を伴う、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
  59. 前記疾患が単核細胞及び／または顆粒球の浸潤を伴う、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
  60. 前記単核細胞がマクロファージ及び／またはリンパ球を含む、請求項５９に記載の方法。
  61. 前記顆粒球が好中球及び／または好酸球を含む、請求項５９または請求項６０に記載の方法。
  62. 前記炎症性疾患が、大腸炎、炎症性腸疾患、関節炎、急性肺損傷、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）、心筋梗塞、及び重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）からなる群から選択される、請求項１及び請求項１３～６１のいずれか１項に記載の方法。
  63. 対象に投与すると、前記抗体が総白血球数を低減する、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
  64. 前記総白血球数が光学顕微鏡法によって決定される、請求項６３に記載の方法。
  65. 対象に投与すると、前記抗体が総顆粒球数を低減する、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
  66. 前記顆粒球が好中球を含む、請求項６５に記載の方法。
  67. 前記顆粒球が好酸球を含む、請求項６５または請求項６６に記載の方法。
  68. 前記総顆粒球数が、免疫組織化学（ＩＨＣ）分析または気管支肺胞洗浄（ＢＡＬ）液細胞分画カウントによって決定される、請求項６５～６７のいずれか１項に記載の方法。
  69. 前記顆粒球が肺胞中のものである、請求項６５～６８のいずれか１項に記載の方法。
  70. 前記顆粒球が間質液中のものである、請求項６５～６８のいずれか１項に記載の方法。
  71. 対象に投与すると、前記抗体が総単核細胞数を低減する、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
  72. 前記単核細胞がマクロファージを含む、請求項７１に記載の方法。
  73. 前記マクロファージがＭ１マクロファージを含む、請求項７１または請求項７２に記載の方法。
  74. 前記単核細胞がリンパ球を含む、請求項７１～７３のいずれか１項に記載の方法。
  75. 前記単核細胞が単球を含む、請求項７１～７４のいずれか１項に記載の方法。
  76. 前記総単核細胞数が、免疫組織化学（ＩＨＣ）分析または気管支肺胞洗浄（ＢＡＬ）液細胞分画カウントによって決定される、請求項７１～７４のいずれか１項に記載の方法。
  77. 前記単核細胞が肺胞中のものである、請求項７１～７６のいずれか１項に記載の方法。
  78. 前記単核細胞が間質液中のものである、請求項７１～７６のいずれか１項に記載の方法。
  79. 対象に投与すると、前記対象の体重が、ベースラインレベルと比較して維持されるかまたは増加する、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
  80. 対象に投与すると、前記抗体が、異なる抗炎症治療剤と比較して体重を維持するかまたは増加させる、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
  81. 対象に投与すると、前記抗体が、ベースラインレベルと比較して脾臓サイズを低減するかまたは脾臓肥大を好転させる、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
  82. 対象に投与すると、前記抗体が、異なる抗炎症治療剤と比較して脾臓サイズを低減するかまたは脾腫を好転させる、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
  83. 前記脾臓サイズまたは脾腫が、触診、打診、超音波、コンピューター断層撮影（ＣＴ）、または磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）を使用して判定される、請求項８１または請求項８２に記載の方法。
  84. 前記炎症性疾患が急性肺損傷である、請求項１及び請求項１３～８３のいずれか１項に記載の方法。
  85. 前記炎症性疾患が急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）である、請求項１及び請求項１３～８３のいずれか１項に記載の方法。
  86. 対象に投与すると、前記抗体が、ベースラインレベルと比較して正味の肺胞液クリアランスを増加させる、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
  87. 対象に投与すると、前記抗体が、異なる抗炎症治療剤と比較して正味の肺胞液クリアランスを増加させる、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
  88. 正味の肺胞液クリアランスが、一連の浮腫液タンパク質濃度を測定することによって決定される、請求項８６または請求項８７に記載の方法。
  89. 前記一連の浮腫液タンパク質濃度がＥＬＩＳＡを用いて測定される、請求項８８に記載の方法。
  90. 前記炎症性疾患がＳＡＲＳ－Ｃｏｖ－２である、請求項１及び請求項１３～８３のいずれか１項に記載の方法。
  91. 対象に投与すると、前記対象の体重が、ベースラインレベルと比較して維持されるかまたは増加する、請求項９０に記載の方法。
  92. 対象に投与すると、前記抗体が、異なる抗炎症治療剤と比較して体重を維持するかまたは増加させる、請求項９０または請求項９１に記載の方法。
  93. 対象に投与すると、前記抗体が、ベースラインレベルと比較して炎症性のサイトカイン及びケモカインの濃度を低減する、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
  94. 対象に投与すると、前記抗体が、異なる抗炎症治療剤と比較して炎症性のサイトカイン及びケモカインの濃度を低減する、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
  95. 前記炎症性のサイトカイン及びケモカインが気管支肺胞洗浄（ＢＡＬ）試料中のものである、請求項９３または請求項９４に記載の方法。
  96. 前記炎症性のサイトカイン及びケモカインが肺ホモジネート試料中のものである、請求項９３～９５のいずれか１項に記載の方法。
  97. 前記炎症性のサイトカイン及びケモカインが、ＩＬ－１α、ＩＬ－１β、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－８、ＩＬ－１０、ＩＦＮγ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＴＮＦα、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４、ＣＣＬ５、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２０、ＣＣＬ２５、ＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ２、及びＣＸＣＬ１０のうちの１つ以上を含む、請求項９３～９６のいずれか１項に記載の方法。
  98. 前記炎症性のサイトカイン及びケモカインがＶＥＧＦを含む、請求項９３～９６のいずれか１項に記載の方法。
  99. 前記炎症性のサイトカイン及びケモカインが、ＧＭＣＳＦ、ＶＥＧＦ、ＩＬ１７Ｆ、ＩＬ－１ベータ、ＩＬ－６、ＩＦＮγ、ＩＬ－８、及びＫＣのうちの１つ以上を含む、請求項９３～９６のいずれか１項に記載の方法。
  100. 前記炎症性のサイトカイン及びケモカインがＥＬＩＳＡを使用して測定される、請求項９３～９８のいずれか１項に記載の方法。
  101. 前記炎症性のサイトカイン及びケモカインが、Ｌｕｍｉｎｅｘマルチプレックスアッセイを使用して測定される、請求項９３～９８のいずれか１項に記載の方法。
  102. 前記炎症性疾患がウイルス感染症である、請求項１及び請求項１３～８３のいずれか１項に記載の方法。
  103. 対象に投与すると、前記抗体が、ベースラインレベルと比較して抗炎症性のサイトカイン及びケモカインを増加させる、請求項１０２に記載の方法。
  104. 対象に投与すると、前記抗体が、異なる抗炎症治療剤と比較して抗炎症性のサイトカイン及びケモカインを増加させる、請求項１０２または請求項１０３に記載の方法。
  105. 前記抗炎症性のサイトカイン及びケモカインが、ＩＬ－１０及びＩＬ２７ｐ２８のうちの１つ以上を含む、請求項１０２～１０４のいずれか１項に記載の方法。
  106. 前記抗炎症性のサイトカイン及びケモカインが、気管支肺胞洗浄（ＢＡＬ）試料中のものである、請求項１０２～１０５のいずれか１項に記載の方法。
  107. 前記炎症性のサイトカイン及びケモカインが、マルチプレックス電気化学発光ＭＳＤアッセイを使用して測定される、請求項１０２～１０６のいずれか１項に記載の方法。
  108. 前記炎症性のサイトカイン及びケモカインが、Ｌｕｍｉｎｅｘマルチプレックスアッセイを使用して測定される、請求項１０２～１０６のいずれか１項に記載の方法。
  109. 前記炎症性疾患がＲＳＶである、請求項１～８３及び請求項８６～１０１のいずれか１項に記載の方法。
  110. 対象に投与すると、前記抗体が、ベースラインレベルと比較して肺の線維化を低減する、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
  111. 対象に投与すると、前記抗体が、異なる抗炎症治療剤と比較して肺の線維化を低減する、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
  112. 前記線維化がＩＨＣ分析によって判定される、請求項１１０または請求項１１１に記載の方法。
  113. 前記線維化が、定量的高分解能コンピューター断層撮影法（ｑＨＲＣＴ）によって判定される、請求項１１０または請求項１１１に記載の方法。
  114. 前記炎症性疾患が関節炎である、請求項１及び請求項１３～８３のいずれか１項に記載の方法。
  115. 対象に投与すると、前記抗体が、ベースラインレベルと比較して炎症性のサイトカイン及びケモカインの濃度を低減する、１１４に記載の方法。
  116. 対象に投与すると、前記抗体が、異なる抗炎症治療剤と比較して炎症性のサイトカイン及びケモカインの濃度を低減する、１１４または１１５に記載の方法。
  117. 前記炎症性のサイトカイン及びケモカインが、ＩＬ－１α、ＩＬ－１β、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－８、ＩＬ－１０、ＩＦＮγ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＴＮＦα、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４、ＣＣＬ５ ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２０、ＣＣＬ２５、ＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ２、及びＣＸＣＬ１０のうちの１つ以上を含む、請求項１１５または請求項１１６に記載の方法。
  118. 前記炎症性疾患が大腸炎である、請求項１及び請求項１３～８３のいずれか１項に記載の方法。
  119. 前記炎症性疾患が炎症性腸疾患である、請求項１及び請求項１３～８３のいずれか１項に記載の方法。
  120. 対象に投与すると、前記抗体が、ベースラインレベルと比較して便の正常な硬さをもたらすかまたは前記対象の便の硬さを高める、請求項１１８または請求項１１９に記載の方法。
  121. 対象に投与すると、前記抗体が、異なる抗炎症治療剤と比較して便の正常な硬さをもたらすかまたは前記対象の便の硬さを高める、請求項１１８～１２０のいずれか１項に記載の方法。
  122. 前記便の硬さがブリストル便性状スケールを使用して決定される、請求項１２０または請求項１２１に記載の方法。
  123. 対象に投与すると、前記抗体が、ベースラインレベルと比較して前記対象の便中の血液を低減するかまたは前記便中の血液の不在をもたらす、請求項１１８～１２２のいずれか１項に記載の方法。
  124. 対象に投与すると、前記抗体が、異なる抗炎症治療剤と比較して前記対象の便中の血液を低減するかまたは前記便中の血液の不在をもたらす、請求項１１８～１２３のいずれか１項に記載の方法。
  125. 前記対象の便中の前記血液がヘモカルト検査を使用して測定される、請求項１２３または請求項１２４に記載の方法。
  126. 対象に投与すると、前記抗体が、ベースラインレベルと比較して炎症性のサイトカイン及びケモカインの濃度を低減する、請求項１１８～１２５のいずれか１項に記載の方法。
  127. 対象に投与すると、前記抗体が、異なる抗炎症治療剤と比較して炎症性のサイトカイン及びケモカインの濃度を低減する、１１８または１２６に記載の方法。
  128. 前記炎症性のサイトカイン及びケモカインが、ＩＬ－１α、ＩＬ－１β、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－８、ＩＬ－１０、ＩＦＮγ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＴＮＦα、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４、ＣＣＬ５、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２０、ＣＣＬ２５、ＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ２、及びＣＸＣＬ１０のうちの１つ以上を含む、請求項１２６または請求項１２７に記載の方法。
  129. 前記炎症性疾患が心筋梗塞である、請求項１及び請求項１３～８３のいずれか１項に記載の方法。
  130. 対象に投与すると、前記抗体が、ベースラインレベルと比較して梗塞サイズを低減する、請求項１２９に記載の方法。
  131. 対象に投与すると、前記抗体が、異なる抗炎症治療剤と比較して梗塞サイズを低減する、請求項１２９または請求項１３０に記載の方法。
  132. 対象に投与すると、前記抗体が、ベースラインレベルと比較して左室駆出率を増加させる、請求項１２９～１３１に記載の方法。
  133. 対象に投与すると、前記抗体が、異なる抗炎症治療剤と比較して左室駆出率を増加させる、請求項１２９～１３２に記載の方法。
  134. 対象に投与すると、前記抗体が、ベースラインレベルと比較して左室拡張末期容積を低減する、請求項１２９～１３３に記載の方法。
  135. 対象に投与すると、前記抗体が、異なる抗炎症治療剤と比較して左室拡張末期容積を低減する、請求項１２９～１３４に記載の方法。
  136. 対象に投与すると、前記抗体が、ベースラインレベルと比較して梗塞心筋中への炎症細胞の動員を低減する、請求項１２９～１３５に記載の方法。
  137. 対象に投与すると、前記抗体が、異なる抗炎症治療剤と比較して梗塞心筋中への炎症細胞の動員を低減する、請求項１２９～１３６に記載の方法。
  138. 前記炎症細胞が、ＣＤ４５＋、ＣＤ１１ｂ＋、Ｌｙ６Ｃｈｉ、ＣＤ４５＋／ＣＤ９０．２－／ＮＫ１．１－／ＣＤ１１ｂ＋、ＣＤ４５＋／ＣＤ９０．２－／ＮＫ１．１－／ＣＤ１１ｂ＋／Ｌｙ６Ｃｈｉ、及びＣＤ４５＋／ＣＤ９０．２－／ＮＫ１．１－／ＣＤ１１ｂ＋／Ｌｙ６Ｃｌｏから選択される、請求項１３６または請求項１３７に記載の方法。
  139. 前記炎症細胞の動員がフローサイトメトリーを使用して測定される、請求項１３６～１３８のいずれか１項に記載の方法。
  140. 対象に投与すると、前記抗体が全身性ステロイドの必要性を低減する、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
  141. 前記異なる抗炎症治療剤が、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、ステロイド性抗炎症薬、ベータ－アゴニスト、抗コリン剤、抗ヒスタミン剤、及びメチルキサンチンのうちの１つ以上を含む、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
  142. 前記異なる抗炎症治療剤が、ＩＬ－６阻害物質、抗ＧＭ－ＣＳＦ、抗ＴＮＦａ、抗ＩＬ－１ａ、デキサメタゾン、ケモカイン及びケモカイン受容体アンタゴニスト、ならびにＪＡＫ阻害物質のいずれか１つを含む、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
  143. 前記抗体が２週間に１回投与される、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
  144. 前記抗体が１週間に１回投与される、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
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