JP2023533911A - 上皮成長因子受容体阻害剤によって誘発される上皮細胞損傷を軽減し及び癌細胞を阻害する組成物の製造のための、β－１アドレナリン受容体アンタゴニストの使用 - Google Patents

Abstract

本発明は、上皮成長因子受容体阻害剤によって誘発される正常上皮細胞の損傷を軽減又は予防し及び癌細胞を阻害する組成物の製造のための、β－１アドレナリン受容体アンタゴニストの使用に関し、β－１アドレナリン受容体アンタゴニストを含む組成物を投与することで上皮成長因子受容体阻害剤によって誘発される正常上皮細胞の損傷を軽減し、且つ上皮成長因子受容体阻害剤と共に投与して癌細胞を相乗的に阻害できる。

Description

（関連出願の相互参照）
本出願は、２０２０年７月１０日に出願した米国仮出願番号６３／０５０，３９０の優先権の利益を主張するものである。上記出願の全ての内容が参照によって本文に組み込まれる。

本発明は、上皮成長因子受容体阻害剤によって誘発される正常上皮細胞の損傷を軽減又は予防し及び癌細胞を阻害する組成物の製造のための、β－１アドレナリン受容体アンタゴニストの使用に関する。

上皮成長因子受容体（Ｅｐｉｄｅｒｍａｌ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ，ＥＧＦＲ）は、抗腫瘍治療を発展させる有効な標的と見なされるものであり、ＥＧＦＲ標的治療は初登場以来、既に１５年以上の歴史を持っており、多数の癌患者の命を延ばすことに貢献していた。上皮成長因子受容体阻害剤（Ｅｐｉｄｅｒｍａｌ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ，ＥＧＦＲＩ）は、抗上皮成長因子受容体モノクローナル抗体（ｍＡｂ）及び上皮成長因子受容体チロシンキナーゼ阻害剤（ＥＧＦＲ－ＴＫＩ）を含む。

そのうち、抗上皮成長因子受容体モノクローナル抗体は、上皮成長因子受容体に特異的に結合し、上皮成長因子機能を競合的に阻害することで、癌細胞の増殖を抑えるという作用機序である。現在、臨床においてよく使用されるモノクローナル抗体医薬は、セツキシマブ（Ｃｅｔｕｘｉｍａｂ）、ザルツムマブ（Ｚａｌｕｔｕｍｕｍａｂ）、ニモツズマブ（Ｎｉｍｏｔｕｚｕｍａｂ）、マツズマブ（Ｍａｔｕｚｕｍａｂ）及びパニツムマブ（Ｐａｎｉｔｕｍｕｍａｂ）である。

ＥＧＦＲ－ＴＫＩは、チロシンキナーゼ活性を阻害する医薬であり、チロシンキナーゼは、細胞内で多くのシグナル伝達のスイッチを担当しているため、細胞成長、増殖及び分化において重要な役割を果たしており、その突然変異は癌を引き起こすことが多い。

したがって、チロシンキナーゼ阻害剤は癌医薬として使用可能であり、それは癌細胞の増殖を阻害できることに加えて、血管新生を阻止し、癌細胞への栄養及び酸素の供給を遮断することもできる。現在、臨床においてよく使用されるチロシンキナーゼ阻害剤は、エルロチニブ（Ｅｒｌｏｔｉｎｉｂ）、ゲフィチニブ（Ｇｅｆｉｔｉｎｉｂ）、ラパチニブ（Ｌａｐａｔｉｎｉｂ）、アファチニブ（Ａｆａｔｉｎｉｂ）、ダコミチニブ（ｄａｃｏｍｉｔｉｎｉｂ）、オシメルチニブ（ｏｓｉｍｅｒｔｉｎｉｂ）等を含む。

上皮成長因子受容体阻害剤は、種々の癌の治療に応用可能であるが、臨床的には、、腸上皮毒性、肺毒性、肝毒性及び皮膚上皮細胞損傷を含む上皮細胞（ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌ）損傷という副作用がしばしば見られている。皮膚上皮細胞損傷は、丘疹膿疱性発疹、紫斑性薬疹、皮膚薄化、皮膚炎、酒さ、乾燥症、薄毛、巻き毛又は皮膚バリア損傷等を含む。表皮の基底に高発現量のＥＧＦＲが存在するため、上皮成長因子受容体阻害剤を使用すると、しばしば皮膚の薬物副作用が発生し、正常な又は損傷を受けていない上皮細胞に損傷をもたらす。正常皮膚に比べて、上皮成長因子受容体阻害剤を投与した皮膚は、炎症細胞浸潤が発生することがあり、特に毛包内で、皮膚の角質層が明らかに薄くなり、正常なバスケット織り（ｂａｓｋｅｔ－ｗｅａｖｅ）の構造を失い、より緻密、好酸性及び不全角化になる（Ｈｅｒｂｓｔ， Ｒ．Ｓ．， ｅｔ ａｌ．， Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｉｃ ｓｉｄｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｇｅｆｉｔｉｎｉｂ ｔｈｅｒａｐｙ：ｃｌｉｎｉｃａｌ ｅｘｐｅｒｉｅｎｃｅ ａｎｄ ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ． Ｃｌｉｎ Ｌｕｎｇ Ｃａｎｃｅｒ， ２００３． ４（６）： ｐ． ３６６－９から抜粋した図１４を参照）。現在、皮膚成長因子受容体阻害剤による皮膚の薬物副作用に対しては、用量を減少するか又は上皮成長因子受容体阻害剤による治療を停止する処置を取っている。そのため、上皮成長因子受容体阻害剤による上皮細胞損傷を軽減又は予防する需要が依然として存在している。本発明はこの需要及びその他の需要を解決するものである。

上記問題に鑑みて、本発明の目的は、上皮成長因子受容体阻害剤によって誘発される正常上皮細胞の損傷を軽減又は予防する組成物の製造のための、β－１アドレナリン受容体アンタゴニストの使用を提供することにある。

癌治療における上皮成長因子受容体阻害剤（ＥＧＦＲＩ）による正常な（又は損傷を受けていない）上皮細胞の損傷を解決するために、β－１アドレナリン受容体アンタゴニストを含む組成物を需要のある個体又は患者に投与することで、癌治療におけるＥＧＦＲＩ投与による正常上皮細胞の損傷を軽減又は予防する。

一実施例において、前記正常上皮細胞は、上皮成長因子受容体阻害剤による損傷又は毒性をまだ受けていない上皮細胞である。

一実施例において、前記β－１アドレナリン受容体アンタゴニストは、上皮成長因子受容体阻害剤の前、後又はそれと同時に投与してもよい。一実施例において、前記β－１アドレナリン受容体アンタゴニストは上皮成長因子受容体阻害剤の前に投与してもよい。

本発明のいくつかの具体例は、個体の癌治療における上皮成長因子受容体阻害剤（ＥＧＦＲＩ）による正常な（又は損傷を受けていない）上皮細胞の損傷を抑制する方法であり、需要のある個体に有効量の少なくと１種のβ－１アドレナリン受容体アンタゴニストを投与することで、該個体の上皮細胞損傷の症状及び／又は徴候を軽減又は予防することを含む。

本発明のいくつかの具体例は、癌細胞を阻害する組成物の製造のための、β－１アドレナリン受容体アンタゴニストの使用を提供するものである。該組成物は、少なくとも１種のβ－１アドレナリン受容体アンタゴニストと少なくとも１種の皮膚成長因子受容体阻害剤との組合せを含む。β－１アドレナリン受容体アンタゴニストと少なくとも１種の皮膚成長因子受容体阻害剤は、相加又は相乗効果を奏することができる。

本発明のいくつかの具体例は、個体における癌の成長を阻害する方法であり、需要のある個体に有効量の少なくとも１種のβ－１アドレナリン受容体アンタゴニストと少なくとも１種の皮膚成長因子受容体阻害剤との組合せを投与することで、該個体の癌の症状及び／又は徴候を軽減することを含む。

本発明の組成物及び方法は、あらゆるタイプの癌の成長を治療又は阻害するために利用可能である。いくつかの具体例において、治療すべき癌又は阻害すべき癌は、例えば肝臓癌、胆管癌、乳癌、肺癌、胃癌、膵臓癌、結腸直腸癌、子宮癌、子宮頚癌、白血病及びリンパ腫等のような、固形腫瘍又は血液腫瘍に成長する癌である。

一実施例において、前記上皮成長因子受容体阻害剤は、上皮成長因子受容体チロシンキナーゼ阻害剤（ＥＧＦＲ－Ｔｙｒｏｓｉｎｅ Ｋｉｎａｓｅ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ，ＥＧＦＲ－ＴＫＩ）である。上皮成長因子受容体チロシンキナーゼ阻害剤の非限定的な例は、ゲフィチニブ、エルロチニブ、アファチニブ、ダコミチニブ、オシメルチニブ、ラパチニブ又はその組合せを含む。

一実施例において、前記上皮成長因子受容体阻害剤は、抗上皮成長因子受容体モノクローナル抗体である。抗上皮成長因子受容体モノクローナル抗体の非限定的な例は、エルロチニブ（Ｅｒｌｏｔｉｎｉｂ）、ゲフィチニブ（Ｇｅｆｉｔｉｎｉｂ）、ラパチニブ（Ｌａｐａｔｉｎｉｂ）、アファチニブ（Ａｆａｔｉｎｉｂ）、ダコミチニブ（ｄａｃｏｍｉｔｉｎｉｂ）、オシメルチニブ（ｏｓｉｍｅｒｔｉｎｉｂ）又はその組合せを含む。

一実施例において、前記上皮細胞は皮膚上皮細胞、腸上皮細胞又は角膜上皮細胞を意味する。

一実施例において、前記β－１アドレナリン受容体アンタゴニストの非限定的な例は、アテノロール（ａｔｅｎｏｌｏｌ）、ベタキソロール（ｂｅｔｘａｏｌｏｌ）、ビソプロロール（ｂｉｓｏｐｒｏｌｏｌ）、エスモロール（ｅｓｍｏｌｏｌ）、アセブトロール（ａｃｅｂｕｔｏｌｏｌ）、メトプロロール（ｍｅｔｏｐｒｏｌｏｌ）、ネビボロール（ｎｅｂｉｖｏｌｏｌ）又はその組合せを含む。

一実施例において、前記上皮成長因子受容体阻害剤（ＥＧＦＲＩ）による皮膚上皮細胞毒性は、丘疹膿疱性発疹、紫斑性薬疹、皮膚薄化、皮膚炎、酒さ、乾燥症、薄毛、巻き毛又は皮膚バリア損傷のうちの少なくとも１つを含む。

一実施例において、前記上皮成長因子受容体阻害剤（ＥＧＦＲＩ）による腸上皮細胞毒性は、口腔粘膜炎、性器粘膜炎又は下痢のうちの少なくとも１つを含む。

一実施例において、β－１アドレナリン受容体アンタゴニストを含む前記組成物は、上記に記載の上皮成長因子受容体阻害剤（ＥＧＦＲＩ）をさらに含んでもよく、該組成物は癌細胞の成長を阻害する場合にＥＧＦＲＩによる上皮細胞損傷を軽減するためのものである。

本出願において使用される用語「発明」、「該発明」、「この発明」及び「本発明」は、本出願の発明対象及び下記特許請求の範囲の全てを幅広く示すように意図している。これらの用語を含む表現は、本文に記載の発明対象又は下記特許請求の範囲の意味又はその包含する範囲を限定するものではないと理解すべきである。本出願が包含する発明の実施例は、本発明の内容ではなく下記特許請求の範囲によって定義される。本発明の内容は本発明の各態様の大まかな概要であり、以下の実施形態においてさらに記載される一部の概念を説明するものである。本発明の内容は特許請求される発明対象の重要な又は必要な特徴を識別するためのものではなく、単独で、特許請求される発明対象を判定するためのものでもない。発明対象は明細書全体、任意の又はあらゆる図面及び各請求項の適切な部分を参照した上で理解すべきである。

添付の図面及び以下の詳細な説明を参照しながら閲覧することで、本発明はより明確で分かりやすくなる。

異なる濃度の上皮成長因子受容体チロシンキナーゼ阻害剤を正常上皮細胞に投与した上皮細胞生存率の模式図である。 異なる濃度のβ－１アドレナリン受容体アンタゴニストであるベタキソロール（ｂｅｔａｘｏｌｏｌ）を正常上皮細胞に投与した上皮細胞生存率の模式図である。 まずβ－１アドレナリン受容体アンタゴニストであるベタキソロール（ｂｅｔａｘｏｌｏｌ）を正常上皮細胞に投与し、１時間後にさらに上皮成長因子受容体チロシンキナーゼ阻害剤を投与した上皮細胞生存率の模式図である。 上皮成長因子受容体チロシンキナーゼ阻害剤とβ－１アドレナリン受容体アンタゴニストを正常上皮細胞に同時に投与した上皮細胞生存率の模式図である。 上皮成長因子受容体チロシンキナーゼ阻害剤をＡ５４９癌細胞に投与した癌細胞生存率の模式図である。 上皮成長因子受容体チロシンキナーゼ阻害剤を単独でＡ５４９癌細胞に投与し、及び上皮成長因子受容体チロシンキナーゼ阻害剤とβ－１アドレナリン受容体アンタゴニストをＡ５４９癌細胞に同時に投与した癌細胞生存率の模式図である。 上皮成長因子受容体チロシンキナーゼ阻害剤を単独でＰＣ９癌細胞に投与し、及び上皮成長因子受容体チロシンキナーゼ阻害剤とβ－１アドレナリン受容体アンタゴニストをＰＣ９癌細胞に同時に投与した癌細胞生存率の模式図である。 まず非選択的βアドレナリン受容体アンタゴニストを正常上皮細胞に投与し、１時間後にさらに上皮成長因子受容体チロシンキナーゼ阻害剤を投与した上皮細胞生存率の模式図である。 上皮成長因子受容体チロシンキナーゼ阻害剤と非選択的βアドレナリン受容体アンタゴニストをＡ５４９癌細胞に同時に投与した癌細胞生存率の模式図である。 図１０から図１２上皮成長因子受容体チロシンキナーゼ阻害剤によって誘発される酒さに対するβ－１アドレナリン受容体アンタゴニストの影響の模式図である。 図１０から図１２上皮成長因子受容体チロシンキナーゼ阻害剤によって誘発される酒さに対するβ－１アドレナリン受容体アンタゴニストの影響の模式図である。 図１０から図１２上皮成長因子受容体チロシンキナーゼ阻害剤によって誘発される酒さに対するβ－１アドレナリン受容体アンタゴニストの影響の模式図である。 抗上皮成長因子受容体モノクローナル抗体によって誘発される丘疹膿疱性発疹に対するβ－１アドレナリン受容体アンタゴニストの影響の模式図である。 正常皮膚細胞（Ａ）と上皮成長因子受容体阻害剤治療後の皮膚細胞（Ｂ）のエオジン染色像（Ｈｅｒｂｓｔ， Ｒ．Ｓ．， ｅｔ ａｌ．， Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｉｃ ｓｉｄｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｇｅｆｉｔｉｎｉｂ ｔｈｅｒａｐｙ：ｃｌｉｎｉｃａｌ ｅｘｐｅｒｉｅｎｃｅ ａｎｄ ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ． Ｃｌｉｎ Ｌｕｎｇ Ｃａｎｃｅｒ， ２００３． ４（６）： ｐ． ３６６－９から抜粋したもの）である。 まずβ－１アドレナリン受容体アンタゴニストであるビソプロロール（Ｂｉｓｏｐｒｏｌｏｌ）を正常上皮細胞に投与し、１時間後にさらに上皮成長因子受容体チロシンキナーゼ阻害剤を投与した上皮細胞生存率の模式図である。 まずβ－１アドレナリン受容体アンタゴニストであるアセブトロール（ａｃｅｂｕｔｏｌｏｌ）を正常上皮細胞に投与し、１時間後にさらに上皮成長因子受容体チロシンキナーゼ阻害剤を投与した上皮細胞生存率の模式図である。

以下の内容では、図面を参照しながら、特定の具体例により本発明の技術内容を説明し、当業者であれば、本明細書に開示される内容から本発明の他の利点と効能を容易に認識できる。本発明は他の様々な具体例により実行又は応用してもよい。本明細書における各詳細も、様々な観点と応用に基づき、本発明の精神から逸脱することなく、様々な修飾と変更が可能である。

用語「個体（ｓｕｂｊｅｃｔ）」と「患者（ｐａｔｉｅｎｔ）」は交換可能に使用されるものであり、且つＥＧＦＲＩによる上皮細胞損傷及び／又は癌が診断された哺乳動物、又はＥＧＦＲＩによる上皮細胞損傷及び／又は癌の疑いがある哺乳動物を意味する。個体は霊長類を含み、ヒトが好ましい。

「有効量」のアンタゴニストとは、所要の効果を生じ得る一定量の阻害剤であり、例えば治療されていない個体に比べ、上皮細胞損傷の軽減率及び／又は癌細胞の阻害率は少なくとも約１％、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％である。

本文に用いる専門用語「治療」は、予防的（例えば予防治療的）、緩和的及び治癒的使用又は結果を含む。治療又は予防を必要とする個体又は患者とは、ＥＧＦＲＩによる上皮細胞損傷が既に発生している又はその疑いがあるもの、既に癌に罹患している又はその疑いがある個体又は患者、又はＥＧＦＲＩによる正常上皮細胞の損傷がまだ発生していない患者を含むものを意味する。

本文における数値の全ては「約」で修飾されるものと解してもよい。本文に用いる場合、用語「約」とは、±１０％の変化を含む意味である。

なお、当業者であれば、例えば上皮細胞損傷の重症度とタイプ、患者の年齢、体重、性別、合併症及び患者に投与した他の薬物に基づき、特定のタイプの上皮細胞損傷に対して投与するβ－１アドレナリン受容体アンタゴニストの適当な用量及び用量数を速やかに判定できる。当業者であれば、好ましい用量は、需要のある患者に、例えば上皮細胞の修復を加速するような治療効果をもたらす用量であることが理解される。

β－１アドレナリン受容体アンタゴニストは任意の有効量で投与可能である。いくつかの具体例において、それは約０．０１％ ｗ／ｗから約１０％ ｗ／ｗ、約０．０５％ ｗ／ｗから約５％ ｗ／ｗ、約０．１％ ｗ／ｗから約１％ ｗ／ｗの範囲内の用量で投与可能である。

本文で提供される組成物のインビトロ活性と動物モデルにおけるインビボ活性とを比較することで、本文で提供される組成物の有用な用量を測定する。この技術では、マウス及び他の動物における有効な用量からヒトに有効な用量を推定する方法が知られており、例えば、参照によって本文に組み込まれる米国特許第４，９３８，９４９号を参照されたい。

組成物は上皮細胞損傷の抑制又は癌細胞成長の阻害に有効な量で投与する。投与される医薬組成物の用量は治療される病状の重症度、特定の配合物及び他の臨床要因（例えば被施療者の体重及び一般状態並びに投与経路）によって決定される。一実施例において、与えられた日数（即ち１日、７日、１４日、２１日、１カ月等）内に１日１回で単一用量を投与する。

別の実施例において、１日内に（２時間、４時間、６時間又は１２時間毎等）複数用量を投与し、毎日数回の用量で数日投与してもよい。

本文で提供される方法によれば、組成物は、注射（例えば皮下、筋肉内、静脈内、動脈内、腹腔内、皮内）、皮膚、真皮、経皮、経口（例えば錠剤、丸薬、液体薬剤、可食性フィルムテープ）、埋め込み型浸透圧ポンプ、坐剤、エアロゾルスプレー、局所、関節内、眼、鼻腔内吸入、肺吸入、皮膚及び膣への押し込みを含む（それらに限定されない）複数の経路のいずれかによって送達される。

一実施例において、組成物は、局所送達のために、軟膏、クリーム、溶液、ゲル、懸濁液、スプレー又はローション剤という形態の１つで製剤化され、別の実施例において、組成物は、徐放又は持続放出のためのものとして製剤化される。

実施例１
上皮細胞に対する上皮成長因子受容体チロシンキナーゼ阻害剤の影響についてＭＴＴ試験（即ち細胞生存率分析）を行い、実験手順は以下のとおりである。

ウェルディッシュ（２４ウェル）における各ウェルに固定数（７×１０^４ ｃｅｌｌ／ｄｉｓｈ）のＨａＣａＴ細胞（ヒト皮膚角化細胞）を播種し、２４時間培養した後、異なる濃度のアファチニブ（０、１、２．５、５、１０、２０、５０μＭ）と０．１％のＤＭＳＯを細胞に加えて２４時間培養する。ＭＴＴ（３－（４，５－ｄｉｍｅｔｈｙｌｔｈｉａｚｏｌ－２－ｙｌ）－２，５－ｄｉｐｈｅｎｙｌｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍ ｂｒｏｍｉｄｅ，３－（４，５－ジメチル－２－チアゾリル）－２，５－ジフェニルテトラゾリウムブロミド）を３００λ加え、１時間後に上清を除去して再びＤＭＳＯを加えて振盪し、２００λ／ウェルの液体を抽出して別のウェルディッシュ（９６ウェル）に加え、ＥＬＩＳＡで吸光度（ＯＤ_５７０，ｏｐｔｉｃａｌ ｄｅｎｓｉｔｙ ５７０ｎｍ）を測定し、細胞生存率を算出し、実験は計３回行い、吸光度と細胞生存率のデータは下記表１に示すとおりである。

図１を参照し、図１は異なる濃度の上皮成長因子受容体チロシンキナーゼ阻害剤を正常上皮細胞に投与した上皮細胞生存率の模式図である。図から分かるように、アファチニブの濃度の向上に伴い、ＨａＣａＴ細胞の生存率は徐々に低下し、濃度が５μＭに向上した時、細胞生存率は僅か３４．８％となる。このことから分かるように、上皮成長因子受容体チロシンキナーゼ阻害剤は正常上皮細胞のアポトーシスを増加させる。

実施例２
上皮細胞に対するβ－１アドレナリン受容体アンタゴニストの影響についてＭＴＴ試験を行い、実験手順は、アファチニブをベタキソロールに置き換えた以外、実施例１に類似し、ここでは詳細な説明を省略する。実験は計４回行い、吸光度と細胞生存率のデータは下記表２に示すとおりである。

図２を参照し、図２は異なる濃度のβ－１アドレナリン受容体アンタゴニストであるベタキソロールを正常上皮細胞に投与した上皮細胞生存率の模式図である。図から分かるように、ベタキソロールの濃度の向上に伴い、ＨａＣａＴ細胞の生存率は少なくとも９０％以上となり、濃度が１００μＭの高い濃度に向上した時、細胞生存率は８８．１％に低下したに過ぎなかった。このことから分かるように、ベタキソロールは実質的に正常上皮細胞の生存率に影響しない。

実施例３
上皮細胞に対するβ－１アドレナリン受容体アンタゴニストと上皮成長因子受容体チロシンキナーゼ阻害剤の順次投与の影響についてＭＴＴ試験を行い、実験手順は実施例１に類似し、ＨａＣａＴ細胞にまずベタキソロールを投与し、１時間後にさらにアファチニブを投与して２４時間培養し、ＨａＣａＴ細胞の生存率を観察する。

図３、１５及び１６は、まずβ－１アドレナリン受容体アンタゴニストを正常上皮細胞に投与し、１時間後にさらに上皮成長因子受容体チロシンキナーゼ阻害剤を投与した上皮細胞生存率の模式図である。図３、１５及び１６から分かるように、β－１アドレナリン受容体アンタゴニストのみを投与した場合、ＨａＣａＴ細胞の生存率は１００％であり、アファチニブのみを投与した場合、濃度の向上に伴い、ＨａＣａＴ細胞の生存率は徐々に低下する。しかし、先にβ－１アドレナリン受容体アンタゴニストを投与してからアファチニブを投与した場合、ＨａＣａＴ細胞の生存率はアファチニブのみを投与した場合よりかなり向上し、且つアファチニブ濃度が高いほど、ＨａＣａＴ細胞のアポトーシスの低減が著しいことが見られる。これらのことから分かるように、β－１アドレナリン受容体アンタゴニストは実際に上皮成長因子受容体チロシンキナーゼ阻害剤による上皮細胞損傷を軽減できる。

実施例４
上皮細胞に対するβ－１アドレナリン受容体アンタゴニストと上皮成長因子受容体チロシンキナーゼ阻害剤の同時投与の影響についてＭＴＴ試験を行い、実験手順は実施例１に類似し、ＨａＣａＴ細胞にベタキソロールとアファチニブを同時に投与して２４時間培養し、ＨａＣａＴ細胞の生存率を観察する。

図４は、上皮成長因子受容体チロシンキナーゼ阻害剤とβ－１アドレナリン受容体アンタゴニストを正常上皮細胞に同時に投与した上皮細胞生存率の模式図である。図から分かるように、ベタキソロールのみを投与した場合、ＨａＣａＴ細胞の生存率は１００％であり、アファチニブのみを投与した場合、濃度の向上に伴い、ＨａＣａＴ細胞の生存率は徐々に低下する。しかし、ベタキソロールとアファチニブを同時に投与した場合、ＨａＣａＴ細胞の生存率はアファチニブのみを投与した場合よりかなり向上する。これらのことから分かるように、β－１アドレナリン受容体アンタゴニストは実際に上皮成長因子受容体チロシンキナーゼ阻害剤による上皮細胞損傷を軽減できる。

実施例５
前述した実施例から分かるように、β－１アドレナリン受容体アンタゴニストと上皮成長因子受容体チロシンキナーゼ阻害剤を正常上皮細胞に同時に投与した場合、正常上皮細胞の生存率を向上させることができる。次いで、癌細胞について、上皮成長因子受容体チロシンキナーゼ阻害剤のみを投与した場合及びβ－１アドレナリン受容体アンタゴニストと上皮成長因子受容体チロシンキナーゼ阻害剤を同時に投与した場合の癌細胞阻害効果をそれぞれ試験し、実験手順は実施例１に類似し、ここでは詳細な説明を省略する。

図５から図７を参照し、図５は上皮成長因子受容体チロシンキナーゼ阻害剤をＡ５４９癌細胞に投与した癌細胞生存率の模式図である。図６は上皮成長因子受容体チロシンキナーゼ阻害剤を単独でＡ５４９癌細胞に投与し、及び上皮成長因子受容体チロシンキナーゼ阻害剤とβ－１アドレナリン受容体アンタゴニストをＡ５４９癌細胞に同時に投与した癌細胞生存率の模式図である。及び図７は上皮成長因子受容体チロシンキナーゼ阻害剤を単独でＰＣ９癌細胞に投与し、及び上皮成長因子受容体チロシンキナーゼ阻害剤とβ－１アドレナリン受容体アンタゴニストをＰＣ９癌細胞に同時に投与した癌細胞の生存率模式図である。

図５から分かるように、アファチニブをＡ５４９癌細胞（ＥＧＦＲ突然変異を有する肺癌細胞）に投与した場合、濃度の向上に伴い、Ａ５４９癌細胞の生存率は徐々に低下し、濃度が５０μＭになった時、Ａ５４９癌細胞の生存率は２６．４％に低下する。このことから分かるように、上皮成長因子受容体チロシンキナーゼ阻害剤は癌細胞のアポトーシスを著しく増加させることができる。実験は計３回行い、吸光度と細胞生存率のデータは下記表３に示すとおりである。

図６から分かるように、ベタキソロールのみを投与した場合、Ａ５４９癌細胞の生存率は１００％であり、アファチニブとベタキソロールを同時に投与した場合、Ａ５４９癌細胞への阻害効果については、アファチニブを単独で投与した場合に比べ、細胞毒性効果を増強させることができる。このことから分かるように、β－１アドレナリン受容体アンタゴニストは上皮成長因子受容体チロシンキナーゼ阻害剤の抗癌効果を高めることができる。

図７から分かるように、別にアファチニブとベタキソロールをＰＣ９癌細胞（ＥＧＦＲ突然変異を有する癌細胞）に同時に投与した場合、ＰＣ９癌細胞への阻害効果については、アファチニブを単独で投与した場合に比べ、細胞毒性効果を増強させることができる。このことから分かるように、ＥＧＦＲによって誘発される関連癌細胞に対して、β－１アドレナリン受容体アンタゴニストと上皮成長因子受容体チロシンキナーゼ阻害剤を同時に投与すると、抗癌効果を高めることができる。

実施例６
β－１アドレナリン受容体アンタゴニストのみが、上皮成長因子受容体チロシンキナーゼ阻害剤による上皮細胞損傷を軽減でき、且つ癌細胞阻害を増強する効果を有するものであるかを検証するために、別に非選択的βアドレナリン受容体アンタゴニスト、例えばチモロール（Ｔｉｍｏｌｏｌ）を使用したが、これに限定されない。それを上皮成長因子受容体チロシンキナーゼ阻害剤と共に投与し、ＨａＣａＴ細胞及びＡ５４９癌細胞に対する効果を観察し、実験手順は実施例１に類似し、ここでは詳細な説明を省略する。

図８及び図９を参照し、図８はまず非選択的βアドレナリン受容体アンタゴニストを正常上皮細胞に投与し、１時間後にさらに上皮成長因子受容体チロシンキナーゼ阻害剤を投与した上皮細胞生存率の模式図である。図９は上皮成長因子受容体チロシンキナーゼ阻害剤と非選択的βアドレナリン受容体アンタゴニストをＡ５４９癌細胞に同時に投与した癌細胞生存率の模式図である。

図８から分かるように、アファチニブの濃度を一定にし、投与されるチモロールの濃度を変更した場合、ＨａＣａＴ細胞の生存率はアファチニブを単独で投与した場合に比べて著しく低下し、且つ濃度１０μＭのチモロールを同時に投与した場合、３７％以下に低下する。このことから分かるように、非選択的βアドレナリン受容体アンタゴニストとアファチニブは明らかにＨａＣａＴ細胞の生存率を低下させるものであり、非選択的βアドレナリン受容体アンタゴニストは癌治療における上皮成長因子受容体阻害剤（ＥＧＦＲＩ）による正常な（又は損傷を受けていない）上皮細胞の損傷を予防又は軽減できない。

図９から分かるように、チモロールとアファチニブをＡ５４９癌細胞に同時に投与した場合、Ａ５４９癌細胞の生存率に顕著な変化がない一方、チモロールの濃度が５０μＭに向上した時、逆に、Ａ５４９癌細胞の生存率は相対的に向上する。このことから分かるように、非選択的βアドレナリン受容体アンタゴニストと上皮成長因子受容体チロシンキナーゼ阻害剤を同時に投与しても、抗癌効果を高めることができない。

実施例７
上皮成長因子受容体チロシンキナーゼ阻害剤又は抗上皮成長因子受容体モノクローナル抗体による上皮細胞損傷の患者、例えば、酒さ又は丘疹膿疱性発疹に罹患している患者を募集し、β－１アドレナリン受容体アンタゴニストを含む組成物を局所投与の外用薬として製剤化し、患者に投与して治療効果を観察する。

図１０から図１２を参照し、図１０から図１２は上皮成長因子受容体阻害剤によって誘発される酒さに対するβ－１アドレナリン受容体アンタゴニストの影響の模式図である。そのうち、図１０は０．２５％（ｗ／ｗ）ベタキソロールを使用してアファチニブによって誘発される酒さを治療し、治療１４日目に、酒さが１日目に比べて明らかに改善されている。図１１は０．２５％（ｗ／ｗ）ベタキソロールを使用してオシメルチニブによって誘発される酒さを治療し、治療４日目に、酒さが明らかに改善されている。図１２は０．２５％（ｗ／ｗ）ベタキソロールを使用して酒さを治療し、治療７日目に、酒さが明らかに改善されている。

図１３を参照し、図１３は抗上皮成長因子受容体モノクローナル抗体によって誘発される丘疹膿疱性発疹に対するβ－１アドレナリン受容体アンタゴニストの影響の模式図である。０．２５％（ｗ／ｗ）ベタキソロールを使用してセツキシマブによって誘発される丘疹膿疱性発疹を治療し、治療３０日目に、丘疹膿疱（矢印部）が明らかに改善されている。

以上をまとめると、β－１アドレナリン受容体アンタゴニストは実際に上皮成長因子受容体チロシンキナーゼ阻害剤（ＥＧＦＲ－ＴＫＩ）及び抗上皮成長因子受容体モノクローナル抗体（ｍＡｂ）によって誘発される正常上皮細胞の損傷を軽減又は予防し、上皮成長因子受容体チロシンキナーゼ阻害剤（ＥＧＦＲ－ＴＫＩ）及び抗上皮成長因子受容体モノクローナル抗体（ｍＡｂ）によって誘発される上皮細胞の損傷を軽減することができ、ＥＧＦＲ－ＴＫＩの癌細胞への阻害効果を高めることができる。別に非選択的βアドレナリン受容体アンタゴニストを対照として使用すると、非選択的βアドレナリン受容体アンタゴニストはＥＧＦＲ－ＴＫＩによって誘発される正常上皮細胞の損傷を軽減又は予防できず、ＥＧＦＲ－ＴＫＩの癌細胞への阻害効果を高めることもできない。

したがって、β－１アドレナリン受容体アンタゴニストを使用することで、ＥＧＦＲ－ＴＫＩによって誘発される上皮細胞の損傷を軽減するとともに、ＥＧＦＲ－ＴＫＩの癌細胞への阻害効果を高めることは、当業者が先行技術を参照して知り得るものではなく、よって、予期せぬ効能を有する。

上記実施例は本発明の原理及び効能を例示的に説明するものに過ぎず、本発明を限定するものではない。当業者であれば、だれでも本発明の精神及び範疇から逸脱することなく上記実施例を修飾及び変更することができる。したがって、本発明の権利保護範囲は、本発明の特許請求の範囲に示すものとする。

Claims (9)

1. 需要のある患者に有効量のβ－１アドレナリン受容体アンタゴニストを含む組成物を投与するステップを含む、患者の上皮成長因子受容体阻害剤（ＥＧＦＲＩ）によって誘発される正常上皮細胞の損傷を軽減又は予防する組成物の製造のための、β－１アドレナリン受容体アンタゴニストの使用。
2. 該正常上皮細胞が皮膚である、請求項１に記載の使用。
3. 該ＥＧＦＲＩによって誘発される正常皮膚上皮細胞の損傷が、丘疹膿疱性発疹、紫斑性薬疹、皮膚薄化、皮膚炎、酒さ、乾燥症、薄毛、巻き毛又は皮膚バリア損傷のうちの少なくとも１つを含む、請求項２に記載の使用。
4. 該正常上皮細胞が腸細胞である、請求項１に記載の使用。
5. 該ＥＧＦＲＩによって誘発される正常腸上皮の損傷が、口腔粘膜炎、性器粘膜炎又は下痢のうちの少なくとも１つを含む、請求項４に記載の使用。
6. 該正常上皮細胞が角膜細胞である、請求項１に記載の使用。
7. 該β－１アドレナリン受容体アンタゴニストが、アテノロール、ベタキソロール、ビソプロロール、エスモロール、アセブトロール、メトプロロール、ネビレット及びその組合せからなる群から選ばれる、請求項１に記載の使用。
8. 該ＥＧＦＲＩが上皮成長因子受容体チロシンキナーゼ阻害剤（ＥＧＦＲ－ＴＫＩ）である、請求項１に記載の使用。
9. 個体に有効量の上皮成長因子受容体阻害剤（ＥＧＦＲＩ）及びβ－１アドレナリン受容体アンタゴニストを含む組成物を投与するステップを含む、個体の癌細胞を阻害する医薬の製造のための、上皮成長因子受容体チロシンキナーゼ阻害剤（ＥＧＦＲ－ＴＫＩ）及びβ－１アドレナリン受容体アンタゴニストを含む組成物の使用。