JP2023528112A - Ｇ１２ｄ突然変異ｒａｓに対するｈｌａクラスｉ拘束性ｔ細胞受容体 - Google Patents

Ｇ１２ｄ突然変異ｒａｓに対するｈｌａクラスｉ拘束性ｔ細胞受容体 Download PDF

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Abstract

単離又は精製されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）であって、ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）クラスＩ分子によって提示される、１２位のグリシンのアスパラギン酸への置換を伴う突然変異ヒトＲＡＳアミノ酸配列に対して抗原特異性を有する、ＴＣＲが開示される。関連するポリペプチド及びタンパク質、並びに関連する核酸、組換え発現ベクター、宿主細胞、細胞集団、及び医薬組成物も提供される。哺乳動物におけるがんの存在を検出する方法、及び哺乳動物におけるがんを治療又は予防する方法も開示される。【選択図】図４Ａ

Description

関連出願の相互参照
本特許出願は、２０２０年２月１２日に出願された米国仮特許出願番号第６２／９７５，５４４号（参照によりその全体が本明細書に組込まれる）の利益を主張する。
連邦によって支援された研究開発に関する陳述
本発明は、連邦政府の支援を受け、プロジェクト番号ＺＩＡＢＣ０１０９８４の下、米国国立衛生研究所、米国国立がん研究所によりなされた。本発明において、連邦政府は一定の権利を有する。
電子的に提出された物件の参照による組込み
本明細書と同時に提出され、以下のとおり識別される、コンピューターで読み取り可能なヌクレオチド／アミノ酸の配列表は、参照により、その全体が本明細書に組込まれる：２０２１年１月２９日付の「７５１５０６＿ＳＴ２５．ｔｘｔ」という名前の１１４，９６１バイトのＡＳＣＩＩ（テキスト）ファイル１件。
発明の背景
ある種のがんは、特に、がんが転移性で切除不能になった場合、治療選択肢が非常に限られる場合がある。例えば、手術、化学療法、及び放射線療法等の治療における進歩にもかかわらず、例えば膵臓がん、結腸直腸がん、肺がん、子宮内膜がん、卵巣がん及び前立腺がん等の多くのがんの予後は、不良な場合がある。従って、がんに対する更なる治療について、満たされていないニーズが存在する。
本発明の一実施形態は、（ａ）配列番号１～３、（ｂ）配列番号４～６、又は（ｃ）配列番号１～６のアミノ酸配列を含む単離又は精製されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）であって、ＴＣＲが、ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）クラスＩ分子によって提示される１２位のグリシンからアスパラギン酸への置換を伴う突然変異ヒトＲＡＳアミノ酸配列に対して抗原特異性を有し、突然変異ヒトＲＡＳアミノ酸配列が、突然変異ヒトキルステンラット肉腫ウイルスがん遺伝子ホモログ（ＫＲＡＳ）、突然変異ヒトハーベイラット肉腫ウイルスがん遺伝子ホモログ（ＨＲＡＳ）、又は突然変異ヒト神経芽腫ラット肉腫ウイルスがん遺伝子ホモログ（ＮＲＡＳ）のアミノ酸配列であり、１２位は、それぞれ、野生型ヒトＫＲＡＳ、野生型ヒトＨＲＡＳ、又は野生型ヒトＮＲＡＳを参照して定義される、ＴＣＲを提供する。
本発明の別の実施形態は、本発明のＴＣＲの機能的部分を含む単離又は精製されたポリペプチドであって、機能的部分が、（ａ）配列番号１～３のすべて、（ｂ）配列番号４～６のすべて、又は（ｃ）配列番号１～６のすべてのアミノ酸配列を含む、ポリペプチドを提供する。
本発明の更に別の実施形態は、配列番号１～３のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド鎖と、配列番号４～６のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド鎖とを含む、単離又は精製されたタンパク質を提供する。
本発明の実施形態は、本発明のＴＣＲ、ポリペプチド及びタンパク質に関連する、核酸、組換え発現ベクター、宿主細胞、細胞集団及び医薬組成物を更に提供する。
本発明の実施形態は、５’から３’まで、第１の核酸配列及び第２の核酸配列を含む単離又は精製核酸を提供し、ここで、第１及び第２の核酸配列は、それぞれ、配列番号７及び８；５１及び８；７及び５２；５１及び５２；８及び７；８及び５１；５２及び７；５２及び５１；２１及び２２；５３及び２２；２１及び５４；５３及び５４；２２及び２１；２２及び５３；５４及び２１；５４及び５３；２３及び２４；５５及び２４；２３及び５６；５５及び５６；２４及び２３；２４及び５５；５６及び２３；５６及び５５；３２及び３３、３３及び３２、５９及び６０、６０及び５９、３４及び３５、３５及び３４、６１及び６２、６２及び６１、３６及び３７、３７及び３６、６３及び６４、６４及び６３、４０及び４１、５７及び４１、４０及び５８、５７及び５８、４１及び４０、４１及び５７、５８及び４０、５８及び５７、４２及び４３、４３及び４２、６５及び６６、又は６６及び６５のアミノ配列をコードしている。
本発明の実施形態により、哺乳動物におけるがんの存在を検出する方法、哺乳動物におけるがんを治療又は予防する方法、哺乳動物における癌に対する免疫応答を誘導する方法、
Figure 2023528112000002
（配列番号２９）のペプチドに対する抗原特異性を有するＴＣＲを発現する宿主細胞を製造する方法、ならびに本発明のＴＣＲ、ポリペプチド及びタンパク質を製造する方法が、更に提供される。
その他の実施形態は、本明細書で説明される。
ＫＲＡＳ Ｇ１２Ｄに対する反応性を調べるＴＩＬスクリーニング。図１Ａは、ＩＦＮ－γ分泌のＥＬＩＳＰＯＴ測定結果（３ｅ４（３×１０４）細胞あたりのスポット数）を示すグラフである。エフェクター細胞は、患者４３７３の腫瘍片Ｆ４、Ｆ５、Ｆ６、Ｆ８、Ｆ９、及びＦ１０からのＴＩＬであった。標的細胞（自己ＤＣ）は、１２個のＲＡＳ突然変異（Ｇ１２Ｄ－Ｇ１２Ｖ－Ｇ１２Ｃ－Ｇ１２Ａ－Ｇ１２Ｓ－Ｇ１３Ｄ－Ｇ１３Ｒ－Ｇ１３Ｖ－Ｑ６１Ｒ－Ｑ６１Ｌ－Ｑ６１Ｋ－Ｑ６１Ｈ）（配列番号４９）（白丸）、又は野生型（ＷＴ）ＲＡＳエピトープ（ＷＴ Ｇ１２＋Ｇ１３＋Ｑ６１）配列（配列番号４８）（灰色丸）をコードするタンデムミニ遺伝子（ＴＭＧ）のｍＲＮＡでエレクトロポレーションされた細胞；Ｇ１２ ＷＴロングペプチド（ＬＰ）（ＭＴＥＹＫＬＶＶＶＧＡＧＧＶＧＫＳＡＬＴＩＱＬＩ）（配列番号２７）（灰色四角）；Ｇ１２Ｄ Ｍｕｔ ＬＰ（ＭＴＥＹＫＬＶＶＶＧＡＤＧＶＧＫＳＡＬＴＩＱＬＩ）（配列番号２６）（白四角）；又は最小エピトープ（ＭＥ）Ａ１１／Ａ０２－３つのペプチド配列（ＫＬＶＶＶＧＡＤＧＶ（配列番号５０）、ＶＶＧＡＤＧＶＧＫ（配列番号２８）、ＶＶＶＧＡＤＧＶＧＫ（配列番号９）（灰色三角形））の等濃度の混合物をロードされた自己ＤＣであった。ネガティブコントロールとして、自己ＤＣ細胞を単独で（ＴＩＬのみ）（菱形）、又はジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）（白三角形）と共培養した。ポジティブコントロールとして、ＴＩＬは抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８ Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）材料の存在下で増殖する（星形）。 ＫＲＡＳ Ｇ１２Ｄに対する反応性を調べるＴＩＬスクリーニング。図１Ｂは、エフェクター細胞と標的細胞との共培養後に測定した４－１ＢＢ及びＯＸ４０（％４－１ＢＢ＋／ＯＸ４０＋）の発現のフローサイトメトリーアッセイの結果を示すグラフである。エフェクター細胞は、患者４３７３の腫瘍片Ｆ４、Ｆ５、Ｆ６、Ｆ８、Ｆ９、及びＦ１０からのＴＩＬであった。標的細胞（自己ＤＣ）は、１２個のＲＡＳ突然変異（Ｇ１２Ｄ－Ｇ１２Ｖ－Ｇ１２Ｃ－Ｇ１２Ａ－Ｇ１２Ｓ－Ｇ１３Ｄ－Ｇ１３Ｒ－Ｇ１３Ｖ－Ｑ６１Ｒ－Ｑ６１Ｌ－Ｑ６１Ｋ－Ｑ６１Ｈ）（配列番号４９）（白丸）、又は野生型（ＷＴ）ＲＡＳエピトープ（ＷＴ Ｇ１２＋Ｇ１３＋Ｑ６１）配列（配列番号４８）（灰色丸）をコードするタンデムミニ遺伝子（ＴＭＧ）のｍＲＮＡでエレクトロポレーションされた細胞；Ｇ１２ ＷＴロングペプチド（ＬＰ）（ＭＴＥＹＫＬＶＶＶＧＡＧＧＶＧＫＳＡＬＴＩＱＬＩ）（配列番号２７）（灰色四角）；Ｇ１２Ｄ Ｍｕｔ ＬＰ（ＭＴＥＹＫＬＶＶＶＧＡＤＧＶＧＫＳＡＬＴＩＱＬＩ）（配列番号２６）（白四角）；又は最小エピトープ（ＭＥ）Ａ１１／Ａ０２－３つのペプチド配列（ＫＬＶＶＶＧＡＤＧＶ（配列番号５０）、ＶＶＧＡＤＧＶＧＫ（配列番号２８）、ＶＶＶＧＡＤＧＶＧＫ（配列番号９）（灰色三角形））の等濃度の混合物をロードされた自己ＤＣであった。ネガティブコントロールとして、自己ＤＣ細胞を単独で（ＴＩＬのみ）（菱形）、又はジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）（白三角形）と共培養した。ポジティブコントロールとして、ＴＩＬは抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８ Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）材料の存在下で増殖する（星形）。 図２は、エフェクター細胞と標的細胞との共培養後の、４－１ＢＢ及びＯＸ４０を発現する細胞の割合を示すグラフである。エフェクター細胞は、（ｉ）Ｇ１２Ｄ ＲＡＳ反応性であると疑われる反応性ＴＩＬ（図１に示す）から単細胞配列決定法によって得られた２つのＴＣＲ配列（ＴＣＲ１又はＴＣＲ２）のうちの１つか、（ｉｉ）ＨＬＡ－Ａ１１拘束性マウス抗ＫＲＡＳ Ｇ１２Ｄ ＴＣＲ（陽性コントロール）（ｍＴＣＲ）か、（ｉｉｉ）導入していないＰＢＬ（－）で導入した患者４３７３の自己ＰＢＬかである。標的細胞は、ＣＯＳ ＨＬＡ－Ａ２細胞株（白丸）、ＣＯＳ ＨＬＡ－Ａ２－Ｇ１２Ｄ細胞株（黒丸）、ＣＯＳ ＨＬＡ－Ａ１１細胞株（白三角）、又はＣＯＳ ＨＬＡ－Ａ１１－Ｇ１２Ｄ細胞株（黒三角）、又はＴ細胞のみ（ターゲット細胞なし）（－）であった。 ＫＲＡＳ Ｇ１２Ｄに対する反応性について試験された４３７３個のＴＣＲ導入ＰＢＬを示す。図３Ａは、ＩＦＮ－γ分泌のＥＬＩＳＰＯＴ測定結果を示すグラフ（３ｅ４（３×１０４）細胞あたりのスポット数）である。エフェクター細胞は、（ｉ）Ｇ１２Ｄ ＲＡＳ反応性と疑われる４３７３ ＴＣＲ１及び２（ヒト可変領域を有する）；（ｉｉ）実施例１のＨＬＡ－Ａ１１拘束性マウス抗ＫＲＡＳ Ｇ１２Ｄ ＴＣＲ；又は（ｉｉｉ）グリーン蛍光タンパク質（ＧＦＰ）（コントロール）をコードするレトロウイルス発現ベクターを導入した患者４３７３の自己ＣＤ８＋ ＰＢＬであった。空ベクターで形質導入した細胞は、追加のコントロールとして機能した（モックＴｄ）。標的細胞は、ＷＴ ＫＲＡＳ遺伝子（白丸）又はＦＬ ＫＲＡＳ Ｇ１２Ｄ変異遺伝子（黒丸）の全長（ＦＬ）ｍＲＮＡをトランスフェクトした自己樹状細胞（ＤＣ）；ＷＴ ＫＲＡＳ ＬＰ（白三角）又は、Ｇ１２Ｄ Ｍｕｔ ＫＲＡＳ ＬＰ（黒三角）のペプチドで負荷した自己ＤＣ又はＫＲＡＳ最小エピトープ（ＭＥ）：ＭＥ Ａ０２ ＷＴ（白菱形）；ＭＥ Ａ０２ Ｇ１２Ｄ（黒菱形）；ＭＥ ＨＬＡ－Ａ１１ ＷＴ ｍｉｘ（白四角形）；又はＭＥ ＨＬＡ－Ａ１１ Ｇ１２Ｄ ｍｉｘ（黒四角形）を負荷した自己ＤＣであった。コントロールとして、前記導入した細胞が、単独（Ｔ細胞のみ）（アスタリスク）、又はＤＭＳＯ（星）もしくは抗ＣＤ２８／抗ＣＤ３ Ｄｙｎａｂｅａｄｓ材料（六角形）と共に培養された。 図３Ｂは、エフェクター細胞と標的細胞との共培養後に測定したＣＤ８ゲート細胞の４－１ＢＢ及びＯＸ４０（％４－１ＢＢ＋／ＯＸ４０＋）発現のフローサイトメトリーアッセイ結果を示すグラフである。エフェクター細胞は、（ｉ）Ｇ１２Ｄ ＲＡＳ反応性と疑われる４３７３ ＴＣＲ１及び２（ヒト可変領域を有する）；（ｉｉ）実施例１のＨＬＡ－Ａ１１拘束性マウス抗ＫＲＡＳ Ｇ１２Ｄ ＴＣＲ；又は（ｉｉｉ）グリーン蛍光タンパク質（ＧＦＰ）（コントロール）をコードするレトロウイルス発現ベクターを導入した患者４３７３の自己ＣＤ８＋ ＰＢＬであった。空ベクターで形質導入した細胞は、追加のコントロールとして機能した（モックＴｄ）。標的細胞は、ＷＴ ＫＲＡＳ遺伝子（白丸）又はＦＬ ＫＲＡＳ Ｇ１２Ｄ変異遺伝子（黒丸）の全長（ＦＬ）ｍＲＮＡをトランスフェクトした自己樹状細胞（ＤＣ）；ＷＴ ＫＲＡＳ ＬＰ（白三角）又は、Ｇ１２Ｄ Ｍｕｔ ＫＲＡＳ ＬＰ（黒三角）のペプチドで負荷した自己ＤＣ又はＫＲＡＳ最小エピトープ（ＭＥ）：ＭＥ Ａ０２ ＷＴ（白菱形）；ＭＥ Ａ０２ Ｇ１２Ｄ（黒菱形）；ＭＥ ＨＬＡ－Ａ１１ ＷＴ ｍｉｘ（白四角形）；又はＭＥ ＨＬＡ－Ａ１１ Ｇ１２Ｄ ｍｉｘ（黒四角形）を負荷した自己ＤＣであった。コントロールとして、前記導入した細胞が、単独（Ｔ細胞のみ）（アスタリスク）、又はＤＭＳＯ（星）もしくは抗ＣＤ２８／抗ＣＤ３ Ｄｙｎａｂｅａｄｓ材料（六角形）と共に培養された。 異なる量のＭＥを負荷した自己ＤＣに対するＴＣＲアビディティ試験である。図４Ａは、ＥＬＩＳＰＯＴによるＩＦＮ－γの分泌結果（３ｅ４（３×１０４）細胞あたりのスポット数）を示すグラフである。エフェクター細胞は、実施例２のＧ１２Ｄ ＲＡＳ反応性４３７３ ＴＣＲ（ヒト可変領域を有する）をコードするレトロウイルス発現ベクターで形質転換した患者４３７３の自己ＰＢＬであった。標的細胞は、以下のペプチド：１０アミノ酸残基を有する変異ミニマムエピトープペプチド（ＶＶＶＧＡＤＧＶＧＫ）（配列番号２９）（白丸）又は１０アミノ酸残基を有するＷＴミニマムエピトープペプチド（ＶＶＶＧＡＧＧＶＧＫ）（配列番号３１）（黒丸）を、表示した濃度で負荷した患者４３７３の自己ＤＣであった。 異なる量のＭＥを負荷した自己ＤＣに対するＴＣＲアビディティ試験である。図４Ｂは、ターゲット細胞とのエフェクター細胞の共同培養後に測定された、ＣＤ８ゲートのｍＴＣＲ陽性ＰＢＬについての４－１ＢＢ及びＯＸ４０（％４－１ＢＢ＋／ＯＸ４０＋）発現のフローサイトメトリーアッセイ結果である。エフェクター細胞は、実施例２のＧ１２Ｄ ＲＡＳ反応性４３７３ ＴＣＲ（ヒト可変領域を有する）をコードするレトロウイルス発現ベクターで形質転換した患者４３７３の自己ＰＢＬであった。標的細胞は、以下のペプチド：１０アミノ酸残基を有する変異ミニマムエピトープペプチド（ＶＶＶＧＡＤＧＶＧＫ）（配列番号２９）（白丸）又は１０アミノ酸残基を有するＷＴミニマムエピトープペプチド（ＶＶＶＧＡＧＧＶＧＫ）（配列番号３１）（黒丸）を、表示した濃度で負荷した患者４３７３の自己ＤＣであった。 異なる量のＭＥを負荷した自己ＤＣに対するＴＣＲアビディティ試験である。図４Ｃは、ターゲット細胞とのエフェクター細胞の共同培養後に測定された、ＣＤ４ゲートのｍＴＣＲ陽性ＰＢＬについての４－１ＢＢ及びＯＸ４０（％４－１ＢＢ＋／ＯＸ４０＋）発現のフローサイトメトリーアッセイ結果である。エフェクター細胞は、実施例２のＧ１２Ｄ ＲＡＳ反応性４３７３ ＴＣＲ（ヒト可変領域を有する）をコードするレトロウイルス発現ベクターで形質転換した患者４３７３の自己ＰＢＬであった。標的細胞は、以下のペプチド：１０アミノ酸残基を有する変異ミニマムエピトープペプチド（ＶＶＶＧＡＤＧＶＧＫ）（配列番号２９）（白丸）又は１０アミノ酸残基を有するＷＴミニマムエピトープペプチド（ＶＶＶＧＡＧＧＶＧＫ）（配列番号３１）（黒丸）を、表示した濃度で負荷した患者４３７３の自己ＤＣであった。 異なる量のＭＥを負荷した自己のＣＯＳ－Ａ１１細胞株に対するＴＣＲアビディティ試験である。図５Ａは、ＥＬＩＳＰＯＴによるＩＦＮ－γの分泌結果（３ｅ４（３×１０４）細胞あたりのスポット数）を示すグラフである。エフェクター細胞は、実施例２のＧ１２Ｄ ＲＡＳ反応性４３７３ ＴＣＲ（ヒト可変領域を有する）をコードするレトロウイルス発現ベクターで形質転換した患者４３７３の自己ＰＢＬであった。標的細胞は、以下のペプチド：１０アミノ酸残基を有する変異ミニマムエピトープペプチド（ＶＶＶＧＡＤＧＶＧＫ）（配列番号２９）（白丸）又は１０アミノ酸残基を有するＷＴミニマムエピトープペプチド（ＶＶＶＧＡＧＧＶＧＫ）（配列番号３１）（黒丸）を示した濃度で負荷した患者４３７３の自己ＤＣであった。 異なる量のＭＥを負荷した自己のＣＯＳ－Ａ１１細胞株に対するＴＣＲアビディティ試験である。図５Ｂは、エフェクター細胞と標的細胞との共培養後に測定した、ＣＤ８ゲーテッドｍＴＣＲ陽性ＰＢＬに対する４－１ＢＢ及びＯＸ４０（％４－１ＢＢ＋／ＯＸ４０＋）発現のフローサイトメトリーアッセイ結果である。エフェクター細胞は、実施例２のＧ１２Ｄ ＲＡＳ反応性４３７３ ＴＣＲ（ヒト可変領域を有する）をコードするレトロウイルス発現ベクターで形質転換した患者４３７３の自己ＰＢＬであった。標的細胞は、以下のペプチド：１０アミノ酸残基を有する変異ミニマムエピトープペプチド（ＶＶＶＧＡＤＧＶＧＫ）（配列番号２９）（白丸）又は１０アミノ酸残基を有するＷＴミニマムエピトープペプチド（ＶＶＶＧＡＧＧＶＧＫ）（配列番号３１）（黒丸）を示した濃度で負荷した患者４３７３の自己ＤＣであった。 異なる量のＭＥを負荷した自己のＣＯＳ－Ａ１１細胞株に対するＴＣＲアビディティ試験である。図５Ｃは、エフェクター細胞と標的細胞との共培養後に測定した、ＣＤ４ゲーテッドｍＴＣＲ陽性ＰＢＬに対する４－１ＢＢ及びＯＸ４０（％４－１ＢＢ＋／ＯＸ４０＋）発現のフローサイトメトリーアッセイ結果である。エフェクター細胞は、実施例２のＧ１２Ｄ ＲＡＳ反応性４３７３ ＴＣＲ（ヒト可変領域を有する）をコードするレトロウイルス発現ベクターで形質転換した患者４３７３の自己ＰＢＬであった。標的細胞は、以下のペプチド：１０アミノ酸残基を有する変異ミニマムエピトープペプチド（ＶＶＶＧＡＤＧＶＧＫ）（配列番号２９）（白丸）又は１０アミノ酸残基を有するＷＴミニマムエピトープペプチド（ＶＶＶＧＡＧＧＶＧＫ）（配列番号３１）（黒丸）を示した濃度で負荷した患者４３７３の自己ＤＣであった。
ＲＡＳファミリーのタンパク質は、低分子量ＧＴＰアーゼの大ファミリーに属する。特定の理論又はメカニズムには縛られないが、突然変異すると、ＲＡＳタンパク質は多くのヒトがんの発がんの初期において、シグナル伝達に関与し得ると考えられている。単一のアミノ酸置換がタンパク質を活性化し得る。突然変異ＲＡＳタンパク質産物は、構成的に活性化され得る。突然変異ＲＡＳタンパク質は、例えば、膵臓がん（例、膵臓がん（ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ ｃａｒｃｉｎｏｍａ））、結腸直腸がん、肺がん（例、肺腺がん）、子宮内膜がん、卵巣がん（例、上皮性卵巣がん）、及び前立腺がん等の種々のヒトのがんのいずれかで発現し得る。ヒトＲＡＳファミリーのタンパク質としては、ＫＲＡＳ、ＨＲＡＳ、及びＮＲＡＳが挙げられる。
ＫＲＡＳは、ＧＴＰアーゼＫＲａｓ、Ｖ－Ｋｉ－Ｒａｓ２キルステンラット肉腫ウイルスがん遺伝子、又はＫＲＡＳ２とも称される。２のＫＲＡＳ転写産物変異体：ＫＲＡＳ変異体Ａ及びＫＲＡＳ変異体Ｂがある。野生型（ＷＴ）ＫＲＡＳ変異体Ａは、配列番号９のアミノ酸配列を有する。ＷＴＫＲＡＳ変異体Ｂは配列番号１０のアミノ酸を有する。以下、「ＫＲＡＳ」（突然変異又は非突然変異（ＷＴ））への言及は、特に明記しない限り、変異体Ａ及び変異体Ｂの両方を指す。活性化されると、突然変異ＫＲＡＳはグアノシン５’－三リン酸（ＧＴＰ）に結合し、ＧＴＰをグアノシン５’－二リン酸（ＧＤＰ）に変換する。
ＨＲＡＳは、ＲＡＳタンパク質ファミリーの別のメンバーである。ＨＲＡＳは、ハーベイラット肉腫ウイルスがんタンパク質、Ｖ－Ｈａ－Ｒａｓハーベイラット肉腫ウイルスがん遺伝子ホモログ、又はＲａｓファミリー低分子量ＧＴＰ結合タンパク質Ｈ－Ｒａｓとも称される。ＷＴ ＨＲＡＳは、配列番号１１のアミノ酸配列を有する。
ＮＲＡＳは、ＲＡＳタンパク質ファミリーの更に別のメンバーである。ＮＲＡＳは、ＧＴＰａｓｅ ＮＲａｓ、Ｖ－Ｒａｓ神経芽細胞種ＲＡＳウイルスがん遺伝子ホモログ、又はＮＲＡＳ１とも称される。ＷＴ ＮＲＡＳは、配列番号１２のアミノ酸配列を有する。
本発明の一実施形態は、１２位のグリシンのアスパラギン酸への置換を伴う突然変異ヒトＲＡＳアミノ酸配列に対して抗原特異性を有する単離又は精製されたＴＣＲを提供し、突然変異ヒトＲＡＳアミノ酸配列は、突然変異ヒトＫＲＡＳ、突然変異ヒトＨＲＡＳ、又は突然変異ヒトＮＲＡＳのアミノ酸配列であり。１２位は、それぞれ、ＷＴヒトＫＲＡＳ、ＷＴヒトＨＲＡＳ、又はＷＴヒトＮＲＡＳタンパク質を参照して定義される。以下、「ＴＣＲ」への言及は、特に明記しない限り、ＴＣＲの機能的部分及び機能的変異体も指す。
突然変異ヒトＲＡＳアミノ酸配列は、突然変異ヒトＫＲＡＳアミノ酸配列、突然変異ヒトＨＲＡＳアミノ酸配列、又は突然変異ヒトＮＲＡＳアミノ酸配列であってもよい。ＷＴヒトＫＲＡＳ、ＮＲＡＳ、及びＨＲＡＳのタンパク質のアミノ酸配列は、それぞれ１８８又は１８９アミノ酸残基の長さを有し、互いに高度な同一性を有している。例えば、ＷＴヒトＮＲＡＳタンパク質のアミノ酸配列は、ＷＴヒトＫＲＡＳタンパク質のそれと８６．８％同一である。ＷＴヒトＮＲＡＳタンパク質及びＷＴヒトＫＲＡＳタンパク質のアミノ酸残基１～８６は、１００％同一である。ＷＴヒトＨＲＡＳタンパク質のアミノ酸配列は、ＷＴヒトＫＲＡＳタンパク質のそれと８６．３％同一である。ＷＴヒトＨＲＡＳタンパク質及びＷＴヒトＫＲＡＳタンパク質のアミノ酸残基１～９４は、１００％同一である。以下、「ＲＡＳ」（突然変異又は非突然変異（ＷＴ））への言及は、特に明記しない限り、集合的にＫＲＡＳ、ＨＲＡＳ、及びＮＲＡＳを指す。
本発明の一実施形態においては、突然変異ヒトＲＡＳアミノ酸配列は、１２位のグリシンのアスパラギン酸への置換を伴うヒトＲＡＳアミノ酸配列を含み、１２位は、対応するＷＴ ＲＡＳタンパク質を参照して定義される。上記説明のとおり、ＷＴヒトＮＲＡＳタンパク質及びＷＴヒトＫＲＡＳタンパク質のアミノ酸残基１～８６は１００％同一であり、ＷＴヒトＨＲＡＳタンパク質及びＷＴヒトＫＲＡＳタンパク質のアミノ酸残基１～９４は１００％同一であるため、ＷＴＲＡＳタンパク質は、ＷＴ ＫＲＡＳタンパク質（配列番号９又は１０）、ＷＴ ＨＲＡＳタンパク質（配列番号１１）、又はＷＴ ＮＲＡＳタンパク質（配列番号１２）のいずれか１つであってもよい。従って、ＷＴ ＫＲＡＳ、ＷＴ ＨＲＡＳ、及びＷＴ ＮＲＡＳタンパク質のそれぞれの１２位のアミノ酸残基は同一、即ちグリシンである。
突然変異ＲＡＳアミノ酸配列は、１２位のグリシンのアスパラギン酸への置換を有する。これに関して、本発明の実施形態は、Ｇ１２Ｄ突然変異を含む任意のＲＡＳタンパク質、ポリペプチド又はペプチドのアミノ酸配列に対して抗原特異性を有するＴＣＲを提供する。
ＲＡＳの突然変異及び置換は、本明細書において、対応するＷＴ ＲＡＳタンパク質のアミノ酸配列を参照して定義される。従って、ＲＡＳの突然変異及び置換は、ＷＴ ＲＡＳタンパク質中の特定の位置（すなわち、１２位）に存在するアミノ酸残基、次に位置番号、次に、その残基が、検討中の特定の突然変異又は置換において置換されたアミノ酸残基を基準にして、本明細書に記載される。ＲＡＳアミノ酸配列（例、ＲＡＳペプチド）は、全長のＷＴ ＲＡＳタンパク質の全部に満たない、アミノ酸残基を含み得る。従って、１２位は、本明細書において、ＲＡＳアミノ酸配列の特定の例における対応する残基の実際の位置が異なる場合があるという理解の下で、ＷＴ全長ＲＡＳタンパク質（即ち、配列番号９～１２のいずれか１つ）を参照して定義される。位置が配列番号９～１２のいずれか１つで定義されるとおりである場合、用語「Ｇ１２」は、配列番号９～１２のいずれか１つの１２位に通常存在するグリシンを指し、「Ｇ１２Ｄ」は、配列番号９～１２のいずれか１つの１２位に通常存在するグリシンはアスパラギン酸により置換されていることを示す。例えば、ＲＡＳアミノ酸配列の特定の例が、例、
Figure 2023528112000003
（配列番号３１）（配列番号９の連続するアミノ酸残基７～１６に対応する例示的なＷＴＫＲＡＳペプチド）である場合、「Ｇ１２Ｄ」は、たとえ配列番号３１の下線付きグリシンの実際の位置が６であるとしても、配列番号３１の下線付きグリシンのアスパラギン酸への置換を指す。Ｇ１２Ｄ突然変異を有するヒトＲＡＳアミノ酸配列を、以下、「Ｇ１２Ｄ ＲＡＳ」と称する。
Ｇ１２Ｖ突然変異を含む全長ＲＡＳタンパク質の例を、以下の表１に示す。
Figure 2023528112000004
本発明の一実施形態においては、ＴＣＲは、上記のＧ１２Ｄ突然変異を含むＲＡＳペプチドに対して抗原特異性を有し、Ｇ１２ＤＲＡＳペプチドは任意の長さを有する。本発明の一実施形態においては、Ｇ１２ＤＲＡＳペプチドは、本明細書に記載のＨＬＡクラスＩ分子のいずれかへの結合に好適な任意の長さを有する。例えば、ＴＣＲは、Ｇ１２Ｄ突然変異を含むＲＡＳペプチドに対して抗原特異性を有し得、ＲＡＳペプチドは、約９～約１０アミノ酸残基の長さを有する。Ｇ１２ＤＲＡＳペプチドは、Ｇ１２Ｄ突然変異を含む突然変異ＲＡＳタンパク質の任意の連続するアミノ酸残基を含み得る。本発明の一実施形態においては、ＴＣＲは、Ｇ１２Ｄ突然変異を含むＲＡＳペプチドに対して抗原特異性を有し得、突然変異ＲＡＳペプチドは、約９アミノ酸残基又は約１０アミノ酸残基の長さを有する。本発明のＧ１２Ｄ ＴＣＲによって認識され得る、それぞれＧ１２Ｄ突然変異を含む特定のペプチドの例は、９マーのＶＶＧＡＤＧＶＧＫ（配列番号２８）及び１０マーのＶＶＶＧＡＤＧＶＧＫ（配列番号２９）である。本発明の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号２９の変異ヒトＲＡＳアミノ酸配列に対して抗原特異性を有する。本発明の実施形態では、ＴＣＲは、ＶＶＧＡＧＧＶＧＫ（配列番号３０）又は１０マーのＶＶＧＡＧＧＶＧＫ（配列番号３１）の野生型ヒトＲＡＳアミノ酸配列に対して抗原特異性を有さない。
本発明の一実施形態においては、本発明のＴＣＲは、ＨＬＡクラスＩ分子によって提示されるＧ１２ＤＲＡＳを認識することができる。これに関して、ＴＣＲは、Ｇ１２ＤＲＡＳへの結合に際して、ＨＬＡクラスＩ分子の関連内で、免疫応答を誘発し得る。本発明のＴＣＲは、ＨＬＡクラスＩ分子によって提示されるＧ１２ＤＲＡＳを認識でき、Ｇ１２ＤＲＡＳに加え、ＨＬＡクラスＩ分子に結合し得る。
本発明の一実施形態においては、ＨＬＡクラスＩ分子は、ＨＬＡ－Ａ分子である。ＨＬＡ－Ａ分子は、α鎖とβ２マイクログロブリンのヘテロ二量体である。ＨＬＡ－Ａα鎖は、ＨＬＡ－Ａ遺伝子によってコードされ得る。β２マイクログロブリンは、α鎖のα１、α２、α３ドメインに非共有結合的に結合して、ＨＬＡ－Ａ複合体を構築する。ＨＬＡ－Ａ分子は、任意のＨＬＡ－Ａ分子であり得る。本発明の一実施形態においては、ＨＬＡクラスＩ分子は、ＨＬＡ－Ａ１１分子である。ＨＬＡ－Ａ１１分子は、任意のＨＬＡ－Ａ１１分子であり得る。ＨＬＡ－Ａ１１分子の例としては、ＨＬＡ－Ａ＊１１：０１、ＨＬＡ－Ａ＊１１：０２、ＨＬＡ－Ａ＊１１：０３、又はＨＬＡ－Ａ＊１１：０４の対立遺伝子座によってコード化されるものが挙げられ得るが、これらに限定されない。好ましくは、ＨＬＡクラスＩ分子は、ＨＬＡ－Ａ＊１１：０１分子の対立遺伝子座によってコード化されるものである。
本発明のＴＣＲは、養子細胞移入のために用いられる細胞によって発現される場合を含め、種々の利点のいずれか１以上を提供し得る。Ｇ１２ＤＲＡＳはがん細胞によって発現され、健常な非がん細胞によっては発現されない。特定の理論又はメカニズムには縛られないが、本発明のＴＣＲは、健常な非がん細胞の破壊を最小化又は排除し、それにより毒性を低減しながら、がん細胞の破壊を好都合に目的とすると考えられる。更に、Ｇ１２Ｄ変異は腫瘍形成の初期段階で起こりやすいため、Ｇ１２Ｄ ＲＡＳ変異は患者の癌細胞の実質的に全てに発現している可能性がある。本発明のＴＣＲは、例えば、化学療法、手術又は放射線療法等の他のタイプの治療に応答しないＧ１２ＤＲＡＳ陽性がんを、首尾よく好都合に治療又は予防し得る。追加的に、本発明のＴＣＲは、親和性の高いＧ１２ＤＲＡＳの認識を提供し、これは、操作されていない腫瘍細胞（例、インターフェロン（ＩＦＮ）γで処理されていない、Ｇ１２ＤＲＡＳ及びＨＬＡ－Ａ＊１１：０１の一方若しくは両方をコードするベクターでトランスフェクションされていない、Ｇ１２ＤＲＡＳペプチドでパルスされていない、又はそれらの組合せの腫瘍細胞）を認識する能力を提供し得る。ＫＲＡＳの変異は、膵臓癌の約７０％、大腸癌の３６％、肺癌の２０％に見られる。最も一般的には、コドン１２（グリシン、Ｇをコードする）に変異が生じる。ＫＲＡＳのＧ１２Ｄ変異は、膵臓がん患者の約３６％、大腸がん患者の約１２％に認められている。更に、ＨＬＡ－Ａ＊１１：０１アレルは、コーカサス及びヒスパニックの民族の概ね１４％及び概ね９％でそれぞれ発現する。ＨＬＡ－Ａ＊１１：０１アレルは、合衆国におけるアジア系民族の最大約４５％で発現する。従って、本発明のＴＣＲは、他のＭＨＣ分子によって提示されたＲＡＳを認識するＴＣＲを用いた免疫療法に適していない場合があるＨＬＡ－Ａ＊１１：０１アレルを発現する患者を含む、免疫療法に適格ながん患者数を増加させ得る。更に、本発明のＴＣＲ、ポリペプチド及びタンパク質は、ヒト相補性決定領域（ＣＤＲ）及び可変領域アミノ酸配列を含み、これは、例、マウスＣＤＲ及び可変領域アミノ酸配列を含むＴＣＲ、ポリペプチド及びタンパク質と比較して、ヒト免疫系による拒絶のリスクを低減し得る。
本明細書で用いられる場合、語句「抗原特異性」は、ＴＣＲが高いアビディティでＧ１２ＤＲＡＳに特異的に結合し得、免疫学的に認識し得ることを意味する。例えば、（ａ）低濃度のＧ１２ＤＲＡＳペプチド（例、約０．０５ｎｇ／ｍＬ～約１０ｎｇ／ｍＬ、１ｎｇ／ｍＬ、２ｎｇ／ｍＬ、５ｎｇ／ｍＬ、８ｎｇ／ｍＬ、１０ｎｇ／ｍＬ、又は前記値の任意の２つによって定義される範囲）でパルスした抗原陰性ＨＬＡクラスＩ分子陽性標的細胞、又は（ｂ）標的細胞が突然変異ＲＡＳを発現するよう、Ｇ１２ＤＲＡＳをコードするヌクレオチド配列が導入されている抗原陰性ＨＬＡクラスＩ分子陽性標的細胞、との共培養に際して、ＴＣＲを発現する約１×１０４～約１×１０５のＴ細胞が、少なくとも約２００ｐｇ／ｍＬ以上（例、２００ｐｇ／ｍＬ以上、３００ｐｇ／ｍＬ以上、４００ｐｇ／ｍＬ以上、５００ｐｇ／ｍＬ以上、６００ｐｇ／ｍＬ以上、７００ｐｇ／ｍＬ以上、１０００ｐｇ／ｍＬ以上、５，０００ｐｇ／ｍＬ以上、７，０００ｐｇ／ｍＬ以上、１０，０００ｐｇ／ｍＬ以上、２０，０００ｐｇ／ｍＬ以上、又は前記値の任意の２つによって定義される範囲）のＩＦＮ－γを分泌する場合、ＴＣＲは突然変異ＲＡＳに対して「抗原特異性」を有すると考えられ得る。本発明のＴＣＲを発現する細胞はまた、より高濃度のＧ１２ＤＲＡＳペプチドでパルスした抗原陰性ＨＬＡクラスＩ分子陽性標的細胞との共培養に際しても、ＩＦＮ－γを分泌し得る。ＨＬＡクラスＩ分子は、本明細書に記載のＨＬＡクラスＩ分子のいずれであってもよい（例、ＨＬＡ－Ａ＊１１：０１分子）。
代替的に又は追加的に、（ａ）低濃度のＧ１２ＤＲＡＳペプチドでパルスした抗原陰性ＨＬＡ－クラスＩ分子陽性標的細胞、又は（ｂ）標的細胞が、Ｇ１２ＤＲＡＳを発現するよう、Ｇ１２ＤＲＡＳをコードするヌクレオチド配列が導入されている抗原陰性ＨＬＡクラスＩ分子陽性標的細胞、との共培養に際して、ＴＣＲを発現するＴ細胞が、ネガティブコントロールによって発現されるＩＦＮ－γの量と比べて少なくとも２倍（例えば、５倍）の多さのＩＦＮ－γを分泌する場合、ＴＣＲはＧ１２ＤＲＡＳに対して「抗原特異性」を有すると考えられ得る。ネガティブコントロールは、例えば、（ｉ）（ａ）同じ濃度の関係性のないペプチド（例、Ｇ１２ＤＲＡＳペプチドとは異なる配列を含む幾つかの他のペプチド）でパルスした抗原陰性ＨＬＡクラスＩ分子陽性標的細胞、若しくは（ｂ）標的細胞が関係性のないペプチドを発現するよう、関係性のないペプチドをコードするヌクレオチド配列が導入されている抗原陰性ＨＬＡクラスＩ分子陽性標的細胞、と共培養された、ＴＣＲを発現するＴ細胞、又は（ｉｉ）（ａ）同じ濃度のＧ１２ＤＲＡＳペプチドでパルスされた抗原陰性ＨＬＡクラスＩ分子陽性標的細胞、若しくは（ｂ）標的細胞がＧ１２ＤＲＡＳを発現するよう、Ｇ１２ＤＲＡＳをコードするヌクレオチド配列が導入されている抗原陰性ＨＬＡクラスＩ分子陽性標的細胞、と共培養された、非形質導入Ｔ細胞（例、ＴＣＲを発現しないＰＢＭＣ由来）であり得る。ネガティブコントロールの標的細胞によって発現されるＨＬＡクラスＩ分子は、試験されるＴ細胞と共培養される標的細胞によって発現されるＨＬＡクラスＩ分子と同じである。ＨＬＡクラスＩ分子は、本明細書に記載のＨＬＡクラスＩ分子のいずれであってもよい（例、ＨＬＡ－Ａ＊１１：０１分子）。ＩＦＮ－γ分泌は、例えば、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）等の当該技術分野において公知の方法によって測定され得る。
代替的に又は追加的に、（ａ）低濃度のＧ１２ＤＲＡＳペプチドでパルスされた抗原陰性ＨＬＡクラスＩ分子陽性標的細胞、又は（ｂ）標的細胞がＧ１２ＤＲＡＳを発現するよう、Ｇ１２ＤＲＡＳをコードするヌクレオチド配列が導入されている抗原陰性ＨＬＡクラスＩ分子陽性標的細胞、との共培養に際して、ＩＦＮ－γを分泌するネガティブコントロールＴ細胞の数と比べて、少なくとも２倍（例えば、５倍）の多さの数の、ＴＣＲを発現するＴ細胞がＩＦＮ－γを分泌する場合、ＴＣＲはＧ１２ＤＲＡＳに対して「抗原特異性」を有すると考えられ得る。ＨＬＡクラスＩ分子、ペプチドの濃度及びネガティブコントロールは、本発明の他の態様に関して明細書に記載されるとおりであり得る。ＩＦＮ－γを分泌する細胞の数は、例えば、例、ＥＬＩＳＰＯＴ等の当該技術分野において公知の方法によって測定され得る。
代替的に又は追加的に、ＴＣＲを発現するＴ細胞が、例えば、Ｇ１２ＤＲＡＳを発現する標的細胞で刺激後にフローサイトメトリーによって測定された、１以上のＴ細胞活性化マーカーの発現を上方制御する場合、ＴＣＲはＧ１２ＤＲＡＳに対して「抗原特異性」を有すると考えられ得る。Ｔ細胞活性化マーカーの例としては、４－１ＢＢ、ＯＸ４０、ＣＤ１０７ａ、ＣＤ６９、及び抗原刺激に際して上方制御されるサイトカイン（例、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、インターロイキン（ＩＬ）－２等）が挙げられる。
本発明の一実施形態は、ＴＣＲのアルファ（α）鎖、ＴＣＲのベータ（β）鎖、ＴＣＲのガンマ（γ）鎖、ＴＣＲのデルタ（δ）鎖又はそれらの組合せ等の、２のポリペプチド（即ち、ポリペプチド鎖）を含むＴＣＲを提供する。本発明のＴＣＲのポリペプチドは、ＴＣＲがＧ１２ＤＲＡＳに対して抗原特異性を有するという条件で、任意のアミノ酸配列を含み得る。一部の実施態様では、ＴＣＲは天然には発生しない。
本発明の一実施形態においては、ＴＣＲは２のポリペプチド鎖を含み、そのそれぞれが、ＴＣＲの相補性決定領域（ＣＤＲ）１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む可変領域を含む。本発明の一実施形態においては、ＴＣＲは、配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１（４３７３ＴＣＲのα鎖のＣＤＲ１）、配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２（４３７３ＴＣＲのα鎖のＣＤＲ２）、及び配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３（４３７３ＴＣＲのα鎖のＣＤＲ３）を含む第一のポリペプチド鎖、並びに配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１（４３７３ＴＣＲのβ鎖のＣＤＲ１）、配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２（４３７３ＴＣＲのβ鎖のＣＤＲ２）、及び配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３（４３７３ＴＣＲのβ鎖のＣＤＲ３）を含む第二のポリペプチド鎖を含む。
これに関して、本発明のＴＣＲは、配列番号１～６のいずれかから選択されるアミノ酸配列のいずれか１以上を含み得る。本発明の一実施形態においては、ＴＣＲは、（ａ）配列番号１～３のすべて、（ｂ）配列番号４～６のすべて、又は（ｃ）配列番号１～６のすべて、のアミノ酸配列を含む。特に好ましい実施形態においては、ＴＣＲは、配列番号１～６のすべてのアミノ酸配列を含む。
配列番号３又は６のＣＤＲ３、すなわちα鎖もしくはβ鎖又はその両方のＣＤＲは、ＣＤＲの最初のアミノ酸のすぐＮ末端側のシステイン又は最終アミノ酸のすぐＣ末端側のフェニルアラニン又はその両方を更に含んでもよい。
本発明の一実施形態においては、ＴＣＲは、上記のＣＤＲを含むＴＣＲの可変領域のアミノ酸配列を含む。これに関して例えば、ＴＣＲは：配列番号７（野生型シグナルペプチドを有する４３７３ＴＣＲのα鎖の可変領域）；配列番号５１（変異体Ｎ末端シグナルペプチドを有する４３７３ＴＣＲのα鎖の可変領域）；配列番号８（野生型シグナルペプチドを有する４３７３ＴＣＲのβ鎖の可変領域）；配列番号５２（野生型Ｎ末端シグナルペプチドを有する４３７３ＴＣＲのβ鎖の可変領域）；配列番号３２（ＩＭＧＴで予測されるＮ末端シグナルペプチドを有しない４３７３ＴＣＲのα鎖の可変領域）；配列番号３３（ＩＭＧＴで予測されるＮ末端シグナルペプチドを有さない４３７３ＴＣＲのβ鎖の可変領域）；配列番号５９（ＳｉｇｎａｌＰで予測されるＮ末端シグナルペプチドを有さない４３７３ＴＣＲのα鎖の可変領域）；配列番号６０（ＳｉｇｎａｌＰで予測されるＮ末端シグナルペプチドを含まない４３７３ＴＣＲのβ鎖の可変領域）；配列番号７及び８の両方；配列番号７及び５２の両方；配列番号５１及び８の両方；配列番号５１及び５２の両方；配列番号３２及び３３の両方又は配列番号５９及び６０の両方、のアミノ酸配列を含み得る。好ましくは、ＴＣＲは、（ｉ）配列番号７及び８の両方のアミノ酸配列、（ｉｉ配列番号５１及び５２の両方、又は（ｉｉｉ）配列番号３２及び３３の両方を含む。
本発明のＴＣＲは、α鎖定常領域及びβ鎖定常領域を更に含み得る。定常領域は、例、ヒト又はマウス等の任意の好適な種に由来し得る。本発明の一実施形態においては、ＴＣＲは、マウスα鎖及びβ鎖定常領域又はヒトα鎖及びβ鎖定常領域を更に含む。本明細書で用いられる場合、用語「マウス」又は「ヒト」は、本明細書に記載のＴＣＲ又はＴＣＲの任意の構成要素（例、ＣＤＲ、可変領域、定常領域、α鎖、及び／又はβ鎖）に言及する場合は、それぞれマウス又はヒトに由来するＴＣＲ（又はその構成要素）、即ち、それぞれマウスＴ細胞又はヒトＴ細胞起源であるか、又はかつてそれに発現したＴＣＲ（又はその構成要素）を意味する。
本発明の一実施形態は、ヒト可変領域及びマウス定常領域を含むキメラＴＣＲであって、ＨＬＡクラスＩ分子によって提示される、１２位のグリシンのアスパラギン酸への置換を伴う突然変異ヒトＲＡＳアミノ酸配列に対して抗原特異性を有する、ＴＣＲを提供する。マウス定常領域は、任意の１以上の利点を提供し得る。例えば、マウス定常領域は、本発明のＴＣＲの、本発明のＴＣＲが導入される宿主細胞の内因性ＴＣＲとの誤対合を減少させ得る。代替的に又は追加的に、マウス定常領域は、ヒト定常領域を含む同じＴＣＲと比較して、本発明のＴＣＲの発現を増大させ得る。キメラＴＣＲは、配列番号１９（ＷＴマウスα鎖定常領域）、配列番号２０（ＷＴマウスβ鎖定常領域）、又は配列番号１９及び２０の両方、のアミノ酸配列を含み得る。好ましくは、本発明のＴＣＲは、配列番号１９及び２０の両方のアミノ酸配列を含む。キメラＴＣＲは、本発明の他の態様に関して本明細書に記載されるとおりのＣＤＲ領域のいずれかと組合せて、本明細書に記載のマウス定常領域のいずれかを含み得る。これに関して、ＴＣＲは例えば：（ａ）配列番号１～３及び１９のすべて；（ｂ）配列番号４～６及び２０のすべて；又は（ｃ）配列番号１～６及び１９～２０のすべて、のアミノ酸配列を含み得る。本発明の別の実施形態においては、キメラＴＣＲは、本発明の他の態様に関して本明細書に記載される可変領域のいずれかと組合せて、本明細書に記載のマウス定常領域のいずれかを含み得る。これに関して、ＴＣＲは例えば：（ｉ）配列番号７及び１９の両方；（ｉｉ）配列番号５１及び１９の両方；（ｉｉｉ）配列番号８及び２０の両方；又は（ｉｖ）配列番号５２及び２０の両方；（ｖ）配列番号７～８及び１９～２０のすべて、又は（ｖｉ）配列番号５１～５２及び１９～２０のすべてのアミノ酸配列を含み得る。
本発明の一実施形態では、ＴＣＲは、可変領域及び定常領域からなるα鎖と、可可変領域及び定常領域からなるβ鎖を含む。この点に関して、ＴＣＲは例えば、（ａ）配列番号２１（野生型Ｎ末端シグナルペプチドを有する４３７３ＴＣＲのα鎖）のアミノ酸配列からなるα鎖、ここで、（ｉ）配列番号２１の１９３位のＸはＴｈｒ又はＣｙｓであり；（ｉｉ）配列番号２１の２５７位のＸはＳｅｒ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ又はＴｒｐであり；（ｉｉｉ）配列番号２１の２５９位のＸはＭｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ又はＴｒｐであり；（ｉｖ）配列番号２１の２６０位のＸは、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ又はＴｒｐであり；（ｂ）配列番号５３（変異体Ｎ末端シグナルペプチドを有する４３７３ＴＣＲのα鎖）のアミノ酸配列を含むα鎖、ここで（ｉ）配列番号５３の１９３位のＸはＴｈｒ又はＣｙｓであり；（ｉｉ）配列番号５３の２５７位のＸはＳｅｒ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ又はＴｒｐであり；（ｉｉｉ）配列番号５３の２５９位のＸはＭｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ又はＴｒｐであり；（ｉｖ）配列番号の２６０位のＸは、Ｓｅｒ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ又はＴｒｐであり；（ｃ）配列番号２２（変異体Ｎ末端シグナルペプチドを有する４３７３ＴＣＲのβ鎖）のアミノ酸配列を含むβ鎖、ここで配列番号の１９１位のＸはＳｅｒ又はＣｙｓである；（ｄ）配列番号２２の１９１位でのＸはＧｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ又はＭｒｐである；。２２はＳｅｒ又はＣｙｓである；（ｄ）配列番号５４（野生型Ｎ末端シグナルペプチドを有する４３７３ＴＣＲのβ鎖）のアミノ酸配列を含むβ鎖、ここで配列番号の１９１位のＸはＳｅｒ又はＣｙｓである；（ｅ）（ａ）及び（ｃ）、（ａ）及び（ｄ）、（ｂ）及び（ｃ）、又は（ｂ）及び（ｄ）の両方；（ｆ）配列番号３４のアミノ酸配列（ＩＭＧＴで予測されるＮ末端シグナルペプチドなしの４３７３ＴＣＲのα鎖）を含むα鎖、ここで、（ｉ）配列番号３４の１６５位のＸはＴｈｒ又はＣｙｓであり；（ｉｉ）配列番号３４の２２９位のＸはＳｅｒ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、又はＴｒｐであり；（ｉｉｉ）配列番号３４の２３１位のＸはＭｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｍｅｔ、又はＴｒｐであり；（ｉｖ）配列番号３４はＭｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、又はＴｒｐであり；及び（ｉｖ）配列番号３４の２３２位のＸはＧｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、又はＴｒｐであり；（ｇ）配列番号３５（ＩＭＧＴで予測されるＮ末端シグナルペプチドを有さない４３７３ＴＣＲのβ鎖）のアミノ酸配列を含むβ鎖、ここで配列番号３５の１７２位のＸはＳｅｒ又はＣｙｓ；（ｈ）配列番号６１（ＳｉｇｎａｌＰで予測されるＮ末端シグナルペプチドを有さない４３７３ＴＣＲのα鎖）のアミノ酸配列からなるα鎖、ここで（ｉ）配列番号６１の１７２位のＸはＴｈｒ又はＣｙｓであり；（ｉｉ）配列番号６１の２３６位のＸはＳｅｒ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ又はＴｒｐであり；（ｉｉｉ）配列番号６１の２３８位のＸはＭｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ又はＴｒｐであり；（ｉｖ）配列番号６１の２３９位のＸはＧｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、又はＴｒｐである；（ｉ）配列番号６２（ＳｉｇｎａｌＰで予測されるＮ末端シグナルペプチドを含まない４３７３ＴＣＲのβ鎖）のアミノ酸配列を含むβ鎖、ここで配列番号６２の１７０位のＸはＳｅｒ又はＣｙｓ；又は（ｊ）（ｆ）及び（ｇ）又は（ｈ）及び（ｉ）両方を含み得る。
本発明の別の実施形態では、ＴＣＲは、配列番号２３（ＷＴマウス定常領域及びＷＴ Ｎ末端シグナルペプチドを有する４３７３ＴＣＲα鎖）、配列番号５５（４３７３ＴＣＲα鎖野生型マウス定常領域及び変異体Ｎ末端シグナルペプチド）、配列番号２４（４３７３ＴＣＲβ鎖野生型マウス定常領域及び変異体Ｎ末端シグナルペプチド）、配列番号５６（ＷＴマウス定常領域及び野生型Ｎ末端シグナルペプチドを有する４３７３ＴＣＲ β鎖）、配列番号３６（ＷＴマウス定常領域及びＩＭＧＴで予測されるＮ末端シグナルペプチドを有しない４３７３ＴＣＲα鎖）、配列番号３７（ＷＴマウス定常領域を有し、ＩＭＧＴで予測されるＮ末端シグナルペプチドを有しない４３７３ＴＣＲ β鎖）、配列番号６３（ＷＴマウス定常領域を有し、ＳｉｇｎａｌＰで予測されるＮ末端シグナルペプチドを有しない４３７３ＴＣＲα鎖）、配列番号６４（ＷＴマウス定常領域を有し、ＳｉｇｎａｌＰで予測されるＮ末端シグナルペプチドを有しない４３７３ＴＣＲ β鎖）、配列番号２３及び２４の両方、配列番号５５及び２４の両方、配列番号２３及び５６の両方、配列番号５５及び５６の両方、配列番号３６及び３７の両方又は配列番号６３及び６４の両方を含む。
本発明の一実施形態においては、ＴＣＲは置換定常領域を含む。これに関して、ＴＣＲは例えば、α鎖及びβ鎖の一方又は両方の定常領域に１、２、３、又は４アミノ酸の置換を含む、本明細書に記載のＴＣＲのいずれかのアミノ酸配列を含み得る。好ましくは、ＴＣＲは、α鎖及びβ鎖の一方又は両方のマウス定常領域において１、２、３、又は４アミノ酸の置換を含むマウス定常領域を含む。特に好ましい実施形態においては、ＴＣＲは、α鎖のマウス定常領域に１、２、３、又は４アミノ酸の置換及びβ鎖のマウス定常領域に１のアミノ酸置換を含むマウス定常領域を含む。いくつかの実施形態においては、置換定常領域を含むＴＣＲは、非置換（野生型）定常領域を含む親ＴＣＲと比較して、好都合に、Ｇ１２ＤＲＡＳ＋標的の認識の増大、宿主細胞による発現の増大、内因性ＴＣＲとの誤対合の減少、及び抗腫瘍活性の増大のうちの１以上を提供する。一般に、ＴＣＲα鎖及びβ鎖のマウス定常領域の置換アミノ酸配列、それぞれ配列番号１７及び１８は、非置換マウス定常領域アミノ酸配列のすべて又は一部に対応し、配列番号１７は、配列番号１９と比較した場合に、１、２、３、又は４アミノ酸の置換を有し、配列番号１８は、配列番号２０と比較した場合に、１のアミノ酸置換を有する。これに関して、本発明の一実施形態は、（ａ）配列番号１７（α鎖の定常領域）であって；（ｉ）４８位のＸが、Ｔｈｒ又はＣｙｓであり；（ｉｉ）１１２位のＸが、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、又はＴｒｐであり；（ｉｉｉ）１１４位のＸが、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、又はＴｒｐであり；及び（ｉｖ）１１５位のＸが、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、又はＴｒｐである、配列番号１７；（ｂ）配列番号１８（β鎖の定常領域）であって、５７位のＸが、Ｓｅｒ又はＣｙｓである、配列番号１８；又は（ｃ）配列番号１７及び１８の両方、のアミノ酸配列を含む、ＴＣＲを提供する。本発明の一実施形態においては、配列番号１７を含むＴＣＲは、配列番号１９（α鎖の非置換マウス定常領域）を含まない。本発明の一実施形態においては、配列番号１８を含むＴＣＲは、配列番号２０（β鎖の非置換マウス定常領域）を含まない。
本明細書に記載されるマウスα定常領域のいずれかの第１アミノ酸は、配列番号１７及び１９に提供されるようなＮとは異なっていてもよい。例えば、本明細書に記載の任意のＴＣＲ構築物、ポリペプチド、タンパク質等において、この第１アミノ酸は、マウスα定常領域のいずれかがその位置に異なるアミノ酸を有することができるように、分割コドン（可変領域と定常領域の両方からのヌクレオチドを有する）によってコードされ得る。同様に、本明細書に記載されるマウスβ定常領域のいずれかの第１アミノ酸は、配列番号１８及び２０に提供されるＥと異なっていてもよく、例えば、この第１アミノ酸は、分割コドンによりコードされ得る。
本発明の一実施形態においては、置換定常領域は、α鎖及びβ鎖の一方又は両方の定常領域におけるシステイン置換を含み、システイン置換ＴＣＲを提供する。α鎖とβ鎖の対向するシステインは、非置換マウス定常領域を含むＴＣＲには存在しない、置換ＴＣＲのα鎖及びβ鎖の定常領域を相互に連結するジスルフィド結合を提供する。これに関して、ＴＣＲは例えば、配列番号１９の４８位のネイティブのＴｈｒ（Ｔｈｒ４８）及び配列番号２０の５７位のネイティブのＳｅｒ（Ｓｅｒ５７）の一方又は両方がＣｙｓで置換されてもよいシステイン置換ＴＣＲであり得る。好ましくは、配列番号１９のネイティブのＴｈｒ４８及び配列番号２０のネイティブのＳｅｒ５７の両方がＣｙｓで置換される。システイン置換ＴＣＲ定常領域配列の例を表２に示す。本発明の一実施形態においては、システイン置換ＴＣＲは、（ｉ）配列番号１７、（ｉｉ）配列番号１８、又は（ｉｉｉ）配列番号１７及び１８の両方を含み、配列番号１７及び１８の両方は、表２に定義されるとおりである。本発明のシステイン置換ＴＣＲは、本明細書に記載のＣＤＲのいずれか又は可変領域に加えて置換定常領域を含み得る。
本発明の一実施形態においては、システイン置換キメラＴＣＲは、全長α鎖及び全長β鎖を含む。システイン置換キメラＴＣＲのα鎖及びβ鎖の配列の例を表２に示す。本発明の一実施形態においては、ＴＣＲは、（ｉ）配列番号２１、（ｉｉ）配列番号５３、（ｉｉｉ）（ｉｉｉ）配列番号２２、（ｉｖ）配列番号５４、（ｖ）配列番号３４、（ｖｉ）配列番号３５、（ｖｉｉ）配列番号６１、（ｖｉｉｉ）配列番号６２、（ｉｘ）配列番号２１及び２２の両方、（ｘ）配列番号５３及び２２の両方、（ｘｉ）配列番号２１及び５４の両方、（ｘｉｉ）配列番号５３及び５４の両方、（ｘｉｉｉ）配列番号３４及び３５の両方、又は（ｘｉｖ）配列番号６１及び６２の両方、ここで配列番号２１～２２、３４～３５、５３、５４、６１及び６２は全て表２に定義されているとおりである。
Figure 2023528112000005
発明の一実施形態では、置換アミノ酸配列は、α鎖の定常領域の膜貫通（ＴＭ）ドメインにおける１、２、又は３個のアミノ酸を疎水性アミノ酸で置換して、疎水性アミノ酸置換ＴＣＲ（本明細書では「ＬＶＬ修飾ＴＣＲ」とも称する）を提供することを含んでいる。ＴＣＲのＴＭドメインにおける疎水性アミノ酸置換は、ＴＭドメインにおける疎水性アミノ酸置換を欠くＴＣＲと比較して、ＴＣＲのＴＭドメインの疎水性を増大させることができる。この点に関して、ＴＣＲは、配列番号１９のネイティブＳｅｒ１１２、Ｍｅｔ１１４、及びＧｌｙ１１５の１つ、２つ、又は３つが、独立して、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、又はＴｒｐで置換されてよく、好ましくはＬｅｕ、Ｉｌｅ又はＶａｌで、及び配列番号２０のネイティブＳｅｒ５７がＣｙｓで置換されてよく、ＬＶＬ修飾されたＴＣＲである。好ましくは、配列番号１９のネイティブＳｅｒ１１２、Ｍｅｔ１１４、及びＧｌｙ１１５の３つはすべて、独立して、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、又はＴｒｐで置換されていてもよく；好ましくは、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、又はＶａｌで置換されていてもよい。本発明の実施形態では、ＬＶＬ修飾ＴＣＲは、（ｉ）配列番号１７、（ｉｉ）配列番号１８、又は（ｉｉｉ）配列番号１７及び１８の両方を含み、配列番号１７及び１８の両方は表３に定義されるとおりである。本発明のＬＶＬ修飾ＴＣＲは、本明細書に記載のＣＤＲ又は可変領域のいずれかに加えて、置換された定常領域を含んでもよい。
本発明の実施形態において、ＬＶＬ修飾ＴＣＲは、全長α鎖及び全長β鎖を含む。ＬＶＬ修飾ＴＣＲのα鎖及びβ鎖の配列の例は、表３に記載される。本発明の実施形態において、ＬＶＬ修飾ＴＣＲは、（ｉ）配列番号２１、（ｉｉ）配列番号５３、（ｉｉｉ）配列番号２２、（ｉｖ）配列番号５４、（ｖ）配列番号３４、（ｖｉ）配列番号３５、（ｖｉｉ）配列番号６１、（ｖｉｉｉ）配列番号６２、（ｉｘ）配列番号２１及び２２の両方、（ｘ）配列番号５３及び２２の両方、（ｘｉ）配列番号２１及び５４の両方、（ｘｉｉ）配列番号５３及び５４の両方、（ｘｉｉｉ）配列番号３４及び３５の両方、又は（ｘｉｖ）配列番号６１及び６２の両方を含み、ここで配列番号２１～２２、３４～３５、５３、５４、６１及び６２は全て表３において定義されるとおりである。
Figure 2023528112000006
Figure 2023528112000007
本発明の一実施形態においては、置換されたアミノ酸配列は、α鎖及びβ鎖の一方又は両方の定常領域の膜貫通（ＴＭ）ドメインにおける１、２、又は３アミノ酸の、疎水性アミノ酸による置換と組合せて、α鎖の定常領域に、システイン置換を含む（本明細書では「システイン置換、ＬＶＬ改変ＴＣＲ」とも呼ばれる）。これに関して、ＴＣＲは、配列番号１９のネイティブのＴｈｒ４８がＣｙｓで置換される、システイン置換、ＬＶＬ改変、キメラＴＣＲである。配列番号１９のネイティブのＳｅｒ１１２、Ｍｅｔ１１４、及びＧｌｙ１１５のうちの１つ、２つ、又は３つが、独立して、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、又はＴｒｐで；好ましくは、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、又はＶａｌで；置換され；配列番号２０のネイティブのＳｅｒ５７が、Ｃｙｓで置換される。好ましくは、配列番号１９のネイティブのＳｅｒ１１２、Ｍｅｔ１１４、及びＧｌｙ１１５の３つすべてが、独立して、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、又はＴｒｐで；好ましくは、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、又はＶａｌで；置換され得る。本発明の一実施形態においては、システイン置換、ＬＶＬ改変ＴＣＲは、（ｉ）配列番号１７、（ｉｉ）配列番号１８、又は（ｉｉｉ）配列番号１７及び１８の両方を含み、配列番号１７及び１８の両方は、表４に定義されるとおりである。本発明のシステイン置換、ＬＶＬ改変ＴＣＲは、本明細書に記載のＣＤＲ又は可変領域のいずれかに加えて、置換定常領域を含み得る。
一実施形態において、システイン置換された、ＬＶＬ修飾ＴＣＲは、全長α鎖及び全長β鎖からなる。本発明の実施形態において、システイン置換されたＬＶＬ修飾ＴＣＲは、（ｉ）配列番号２１、（ｉｉ）配列番号５３、（ｉｉｉ）配列番号２２、（ｉｖ）配列番号５４、（ｖ）配列番号３４、（ｖｉ）配列番号３５、（ｖｉｉ）配列番号６１、（ｖｉｉｉ）配列番号６２、（ｉｘ）配列番号２１及び２２の両方、（ｘ）配列番号５３及び２２の両方、（ｘｉ）配列番号２１及び５４の両方、（ｘｉｉ）配列番号５３及び５４の両方、（ｘｉｉｉ）配列番号３４及び３５の両方、又は（ｘｉｖ）配列番号６１及び６２の両方を含み、ここで配列番号２１～２２、３４～３５、５３、５４、６１及び６２は全て表４に定義されるとおりである。
Figure 2023528112000008
Figure 2023528112000009
本発明の実施形態において、システイン置換、ＬＶＬ修飾ＴＣＲは、（ａ）配列番号３８（システイン置換、ＬＶＬ修飾ＴＣＲのα鎖定常領域）；（ｂ）配列番号３９（システイン置換、ＬＶＬ修飾ＴＣＲのβ鎖定常領域）；（ｃ）配列番号４０（野生型Ｎ末端シグナル配列を有するシステイン置換、ＬＶＬ修飾４３７３ＴＣＲのα鎖）；（ｄ）配列番号４１（変異体Ｎ末端シグナル配列を有するシステイン置換、ＬＶＬ修飾４３７３ＴＣＲのβ鎖）；（ｅ）配列番号４２（ＩＭＧＴによって予測されたＮ末端シグナル配列を有しないシステイン置換、ＬＶＬ修飾４３７３ＴＣＲのα鎖）；（ｆ）配列番号４３（ＩＭＧＴによって予測されるＮ末端シグナル配列のないシステイン置換されたＬＶＬ改変４３７３ＴＣＲのβ鎖）；（ｇ）配列番号６５（ＳｉｇｎａｌＰによって予測されるＮ末端シグナル配列のないシステイン置換されたＬＶＬ改変４３７３ＴＣＲのα鎖）；（ｈ）配列番号６６（システイン置換された、ＬＶＬ修飾４３７３ＴＣＲのβ鎖、ＳｉｇｎａｌＰにより予測されるＮ末端シグナル配列なし）；（ｉ）配列番号５７（システイン置換されたＬＶＬ修飾４３７３ＴＣＲのα鎖、Ｎ末端シグナル配列は変異体）；（ｊ）配列番号５８（野生型Ｎ末端シグナル配列を有するシステイン置換ＬＶＬ修飾４３７３ＴＣＲのβ鎖）；（ｋ）（ａ）及び（ｂ）の両方；（ｌ）（ｃ）及び（ｄ）の両方；（ｍ）（ｅ）及び（ｆ）の両方；（ｎ）（ｇ）及び（ｈ）の両方；又は、（ｏ）（ｉ）及び（ｊ）の両方を含む。
本発明によって、本明細書に記載のＴＣＲのいずれかの機能的部分を含むポリペプチドも提供される。本明細書で用いられる場合、用語「ポリペプチド」は、オリゴペプチドを含み、１以上のペプチド結合によって連結した一本のアミノ酸鎖を指す。
本発明のポリペプチドに関して、機能的部分がＧ１２ＤＲＡＳに特異的に結合するという条件で、機能的部分はＴＣＲの一部である連続するアミノ酸を含む任意の部分であり得る。ＴＣＲに関連して用いられる場合、用語「機能的部分」は、本発明のＴＣＲの任意の部分又はフラグメントを指し、そしてその部分又はフラグメントは、それが一部であるところのＴＣＲ（親ＴＣＲ）の生物学的活性を保持する。機能的部分は、例えば、Ｇ１２ＤＲＡＳに特異的に結合する能力（例、ＨＬＡ－Ａ＊１１：０１分子の関連内で）、又は親ＴＣＲと類似する程度、同じ程度、又はより高い程度にがんを検出、治療若しくは予防する能力、を保持するＴＣＲの部分を包含する。親ＴＣＲに関連して、機能的部分は、例えば、親ＴＣＲの約１０％、約２５％、約３０％、約５０％、約６８％、約８０％、約９０％、約９５％以上を含み得る。
機能的部分は、該部分のアミノ末端若しくはカルボキシ末端、又は両方の末端に、追加的なアミノ酸を含み得る。該追加的なアミノ酸は、親ＴＣＲのアミノ酸配列中には見られない。望ましくは、追加のアミノ酸は、機能的部分の生物学的機能、例、Ｇ１２ＤＲＡＳに特異的に結合すること；及び／又はがんを検出し、がんを治療し若しくは予防する能力を有すること等と干渉しない。より望ましくは、追加のアミノ酸は、親ＴＣＲの生物学的活性と比較して、その生物学的活性を増強する。
ポリペプチドは、本発明のＴＣＲのα鎖及び／又はβ鎖の可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３の１以上を含む機能的部分等の、本発明のＴＣＲのα鎖及びβ鎖のいずれか又は両方の機能的部分を含み得る。本発明の一実施形態においては、ポリペプチドは配列番号１（α鎖のＣＤＲ１）、配列番号２（α鎖のＣＤＲ２）、配列番号３（α鎖のＣＤＲ３）、配列番号４（β鎖のＣＤＲ１）、配列番号５（β鎖のＣＤＲ２）、配列番号６（β鎖のＣＤＲ３）又はそれらの組合せのアミノ酸配列を含み得る。
これに関して、本発明のポリペプチドは、配列番号１～６のいずれかから選択される任意の１つ以上のアミノ酸配列を含み得る。本発明の一実施形態においては、ＴＣＲは、（ａ）配列番号１～３のすべて、（ｂ）配列番号４～６のすべて、又は（ｃ）配列番号１～６のすべてのアミノ酸配列を含む。好ましい実施形態においては、ポリペプチドは、配列番号１～６のすべてのアミノ酸配列を含む。配列番号３もしくは６のＣＤＲ３、すなわちα鎖もしくはβ鎖又はその両方のＣＤＲは、ＣＤＲの最初のアミノ酸のすぐＮ末端側のシステイン又は最終アミノ酸のすぐＣ末端側のフェニルアラニン又はその両方を更に含んでもよい。
本発明の一実施形態においては、本発明のポリペプチドは、例えば、上記のＣＤＲ領域の組合せを含む本発明のＴＣＲの可変領域を含み得る。これに関して、ポリペプチドは、（ｉ）配列番号７（野生型Ｎ末端シグナル配列を有するα鎖の可変領域）、（ｉｉ）配列番号５１（変異体Ｎ末端シグナル配列を有する４３７３ＴＣＲのα鎖の可変領域）、（ｉｉｉ）配列番号８（変異体Ｎ末端シグナル配列を有するβ鎖の可変領域）、（ｉｖ）配列番号５２（野生型Ｎ末端シグナル配列を有するβ鎖の可変領域）、（ｖ）配列番号７及び８の両方、（ｖｉ）配列番号５１及び８の両方、（ｖｉｉ）配列番号７及び５２の両方、又は（ｖｉｉｉ）配列番号５１及び５２の両方、（ｉｘ）配列番号３２（ＩＭＧＴで予測されるＮ末端シグナル配列のないα鎖の可変領域）、（ｘ）配列番号３３（ＩＭＧＴで予測されるＮ末端シグナル配列のないβ鎖の可変領域）、（ｘｉ）配列番号５９（ＳｉｇｎａｌＰで予測されるＮ末端シグナルペプチドを有さない４３７３ＴＣＲのα鎖の可変領域）；（ｘｉｉ）配列番号６０（ＳｉｇｎａｌＰで予測されるＮ末端シグナルペプチドを有さない４３７３ＴＣＲのβ鎖の可変領域）；（ｘｉｉｉ）配列番号３２及び３３の両方又は配列番号５９及び６０の両方を含むことができる。ポリペプチドは、（ｉ）配列番号７及び８の両方、（ｉｉ）配列番号５１及び５２の両方、（ｉｉｉ）配列番号３２及び３３の両方又は（ｉｖ）配列番号５９及び６０の両方のアミノ酸配列を含むことが好ましい。
本発明の一実施形態においては、本発明のポリペプチドは、上記の本発明のＴＣＲの定常領域を更に含み得る。これに関して、ポリペプチドは、配列番号１９（α鎖ＷＴマウス定常領域）、配列番号２０（β鎖ＷＴマウス定常領域）、配列番号１７（α鎖置換マウス定常領域）、配列番号１８（β鎖置換マウス定常領域）、配列番号３８（システイン置換、ＬＶＬ修飾ＴＣＲのα鎖定常領域）；配列番号３９（システイン置換、ＬＶＬ修飾ＴＣＲのβ鎖定常領域）；配列番号１９及び２０の両方、配列番号１７及び１８の両方、又は配列番号３８及び３９の両方を更に含むことができる。好ましくは、ポリペプチドは、本発明の他の態様に関して本明細書に記載されるＣＤＲ領域又は可変領域のいずれかとの組合せで、配列番号１７及び１８の両方、配列番号１９及び２０の両方、又は配列番号３８及び３９の両方のアミノ酸配列を更に含む。本発明の実施形態では、ポリペプチドの配列番号１７及び１８の一方又は両方は、表２～４のいずれか１つに定義されるとおりである。本明細書で提供されるα鎖定常領域は、Ｎ末端アスパラギンとともに示される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるα鎖定常領域のＮ末端アミノ酸は、アスパラギン酸である。
本発明の実施形態において、本発明ポリペプチドは、本明細書に記載のＴＣＲのα鎖又はβ鎖の全長を含むことができる。この点に関して、本発明のポリペプチドは、配列番号２１、配列番号５３、配列番号２２、配列番号５４、配列番号２３、配列番号５５、配列番号２４、配列番号５６、配列番号３４、配列番号６１、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３５、配列番号６２、配列番号３６、配列番号６３、配列番号３７、配列番号６４、配列番号４０、配列番号５７、配列番号４１、配列番号５８、配列番号４２、配列番号６５、配列番号４３、配列番号６６、配列番号２１－２２の双方、配列番号２１及び５４の両方、配列番号５３及び２２の両方、配列番号５３及び５４の両方、配列番号２３～２４の両方、配列番号５５及び２４の両方、配列番号２３及び５４の両方、配列番号５５及び５４の両方、配列番号３４～３５、配列番号３６～３７の両方、配列番号４０～４１の両方、配列番号５７及び４１の両方、配列番号４０～５８の両方、配列番号５７～５８の両方、配列番号４２～４３の両方、配列番号６１及び６２の両方、配列番号６３及び６４の両方又は配列番号６５及び６６の両方を含むことができる。あるいは、本発明のポリペプチドは、本明細書に記載されるＴＣＲの両鎖を含むことができる。
例えば本発明のポリペプチドは、（ａ）配列番号２１のアミノ酸配列、ここで、（ｉ）配列番号２１の１９３位のＸはＴｈｒ又はＣｙｓであり；（ｉｉ）配列番号２１の２５７位のＸはＳｅｒ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、又はＴｒｐであり；（ｉｉｉ）配列番号２１の２５９位のＸはＭｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、又はＴｒｐである。２１はＭｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、又はＴｒｐであり；及び（ｉｖ）配列番号２１の２６０位のＸはＧｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、又はＴｒｐである；（ｂ）配列番号５３のアミノ酸配列、ここで、（ｉ）配列番号５３の１９３位のＸはＴｈｒ又はＣｙｓである；（ｉｉ）配列番号５３の２５７位のＸはＳｅｒ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、又はＴｒｐである；（ｉｉｉ）配列番号５３の２５９位のＸはＭｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、又はＴｒｐであり；及び（ｉｖ）配列番号５３の２６０位のＸはＧｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、又はＴｒｐである；（ｃ）配列番号のアミノ酸配列２２であり、ここで配列番号２２の１９１位のＸはＳｅｒ又はＣｙｓである；（ｄ）配列番号５４のアミノ酸配列であり、ここで配列番号５４の１９１位のＸはＳｅｒ又はＣｙｓである；（ｅ）（ａ）及び（ｃ）、（ａ）及び（ｄ）、（ｂ）及び（ｃ）又は（ｂ）及び（ｄ）の両方であり；（ｆ）配列番号３４のアミノ酸配列であり、ここで（ｉ）配列番号３４の１６５位のＸはＴｈｒ又はＣｙｓであり；（ｉｉ）配列番号３４の２２９位のＸは、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、又はＴｒｐであり；（ｉｉｉ）配列番号３４の２３１位のＸは、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ又はＴｒｐであり；及び（ｉｖ）配列番号３４の２３２位のＸは、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、又はＴｒｐである；（ｇ）配列番号３５のアミノ酸配列であって、ここで配列番号３５の１７２位のＸは、Ｓｅｒ又はＣｙｓである；（ｈ）配列番号６１のアミノ酸配列であって、（ｉ）配列番号６１の１７２位のＸは、Ｔｈｒ又はＣｙｓであり；（ｉｉ）配列番号６１の２３６位のＸは、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、又はＴｒｐであり；（ｉｉｉ）配列番号６１の２３８位のＸは、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、又はＴｒｐであり；及び（ｉｖ）配列番号６１の２３９位のＸは、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、又はＴｒｐであり；（ｉ）配列番号６２のアミノ酸配列であって、ここで配列番号６２の１７０位のＸはＳｅｒ又はＣｙｓであり；（ｊ）（ｆ）及び（ｇ）の両方又は（ｈ）及び（ｉ）の両方であり；（ｋ）配列番号４０；（ｌ）配列番号５７；（ｍ）配列番号４１；（ｎ）配列番号５８；（ｏ）配列番号４２；（ｐ）配列番号４２；（ｐ）配列番号４３；（ｑ）配列番号６５；（ｒ）配列番号６６；（ｓ）（ｋ）及び（ｍ）の両方；（ｔ）（ｌ）及び（ｍ）の両方；（ｕ）（ｋ）及び（ｎ）の両方；（ｖ）（ｌ）及び（ｎ）の両方であり；（ｗ）（ｏ）及び（ｐ）の両方；又は（ｘ）（ｑ）及び（ｒ）の両方を含むことができる。本発明の実施形態において、ポリペプチドの配列番号２１～２２、３４～３５、５３、５４、６１及び６２のいずれか１つ以上は、表２～４のいずれか１つに定義されるとおりである。
本発明は、本明細書に記載の少なくとも１のポリペプチドを含むタンパク質を更に提供する。「タンパク質」は、１以上のポリペプチド鎖を含む分子を意味する。
一実施形態においては、本発明のタンパク質は、配列番号１～３のアミノ酸配列を含む第一のポリペプチド鎖及び配列番号４～６のアミノ酸配列を含む第二のポリペプチド鎖を含み得る。配列番号３もしくは６のＣＤＲ３、すなわちα鎖もしくはβ鎖又はその両方のＣＤＲは、ＣＤＲの最初のアミノ酸のすぐＮ末端側のシステイン又は最終アミノ酸のすぐＣ末端側のフェニルアラニン又はその両方を更に含んでもよい。
本発明の別の実施形態では、（ｉ）タンパク質の第１のポリペプチド鎖は、配列番号７のアミノ酸配列を含んでもよく、第２のポリペプチド鎖は、配列番号８のアミノ酸配列を含んでもよい；（ｉｉ）タンパク質の第１のポリペプチド鎖は、配列番号５１のアミノ酸配列を含んでもよく、第２のポリペプチド鎖は配列番号８のアミノ酸配列を含んでもよい；（ｉｉｉ）タンパク質の第１のポリペプチド鎖は配列番号７のアミノ酸配列を含んでもよく、第２のポリペプチド鎖は配列番号５２のアミノ酸配列を含んでもよい；（ｉｖ）タンパク質の第１のポリペプチド鎖は、配列番号５１のアミノ酸配列を含んでもよく、第２のポリペプチド鎖は、配列番号５２のアミノ酸配列を含んでもよい；（ｖ）タンパク質の第１のポリペプチド鎖は、配列番号３２のアミノ酸配列を含んでもよく、第２のポリペプチド鎖は配列番号３３のアミノ酸配列を含んでもよい、又は（ｖｉ）タンパク質の第１のポリペプチド鎖は配列番号５９のアミノ酸配列を含んでもよく、第２のポリペプチド鎖は配列番号６０のアミノ酸配列を含んでもよい。
本発明のタンパク質は、本発明の他の態様に関して本明細書に記載される定常領域のいずれかを更に含み得る。これに関して、本発明の一実施形態においては、（ｉ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号１７のアミノ酸配列を更に含み得、第２のポリペプチド鎖は、配列番号１８のアミノ酸配列を更に含み得る；（ｉｉ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号１９のアミノ酸配列を更に含み得、第２のポリペプチド鎖は、配列番号２０のアミノ酸配列を更に含み得る；又は（ｉｉ）第１のポリペプチド鎖は配列番号３８のアミノ酸配列を含み得、第２のポリペプチド鎖は配列番号３９のアミノ酸配列を含み得る。本発明の実施形態において、タンパク質の配列番号１７及び１８の一方又は両方は、表２～４のいずれか１つに定義されるとおりである。
代替的に又は追加的に、本発明の一実施形態のタンパク質は： （ａ）第１のポリペプチド鎖が配列番号２１のアミノ酸配列を含み、ここで、（ｉ）配列番号２１の１９３位のＸはＴｈｒ又はＣｙｓであり；（ｉｉ）配列番号２１の２５７位のＸはＳｅｒ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、又はＴｒｐであり；（ｉｉｉ）配列番号２１の２５９位のＸはＭｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、又はＴｒｐであり；及び（ｉｖ）配列番号２１の２６０位のＸはＧｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、又はＴｒｐであり；（ｂ）第１のポリペプチド鎖は配列番号５３のアミノ酸配列を含み、ここで、（ｉ）配列番号５３の１９３位のＸはＴｈｒ又はＣｙｓであり；（ｉｉ）配列番号５３の２５７位のＸはＳｅｒ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、又はＴｒｐであり；（ｉｉｉ）配列番号の２５９位のＸはＭｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、又はＴｒｐであり；及び（ｉｖ）配列番号５３の２６０位のＸはＧｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、又はＴｒｐであり；（ｃ）第２のポリペプチド鎖は配列番号のアミノ酸配列を含み；（ｄ）第２のポリペプチド鎖は、配列番号２２のアミノ酸配列からなり、（ｉ）第２のポリペプチド鎖は、配列番号２３のアミノ酸配列を含む。２２であり、ここで配列番号２２の１９１位のＸはＳｅｒ又はＣｙｓである；（ｄ）第２のポリペプチド鎖は配列番号５４のアミノ酸配列を含み、ここで配列番号５４の１９１位のＸはＳｅｒ又はＣｙｓである；（ｅ）（ａ）及び（ｃ）、（ａ）及び（ｄ）、（ｂ）及び（ｃ）又は（ｂ）及び（ｄ）の両方；（ｆ）第１のポリペプチド鎖は配列番号３４のアミノ酸配列を含み、ここで。（ｉ）配列番号３４の１６５位のＸはＴｈｒ又はＣｙｓであり；（ｉｉ）配列番号３４の２２９位のＸはＳｅｒ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ又はＴｒｐであり；（ｉｉｉ）配列番号３４の２３１位のＸはＭｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ又はＴｒｐであり；（ｉｖ）配列番号３４の２３２位のＸはＧｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、又はＴｒｐである；（ｇ）第２のポリペプチド鎖は配列番号３５のアミノ酸配列を含み、ここで配列番号３５の１７２位のＸはＳｅｒ又はＣｙｓである；（ｈ）第１のポリペプチド鎖は配列番号６１のアミノ酸配列を含み、ここで（ｉ）配列番号６１の１７２位のＸはＴｈｒ又はＣｙｓであり；（ｉｉ）配列番号６１の２３６位のＸはＳｅｒ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、又はＴｒｐであり；（ｉｉｉ）配列番号６１の２３８位のＸはＭｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、又はＴｒｐであり；（ｉｖ）配列番号３４の２３２位のＸはＧｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、又はＴｒｐであり；（ｇ）第２のポリペプチド鎖は、配列番号３５のアミノ酸配列を含み、ここで配列番号３５の１７２位のＸはＳｅｒ又はＣｙｓであり；（ｈ）第１のポリペプチドは配列番号６１のアミノ酸配列を含み、ここで（ｉ）配列番号６１の１７２位のＸはＴｈｒ又はＣｙｓであり、（ｉｉ）配列番号６１の２３６位のＸはＳｅｒ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ又はＴｒｐであり；（ｉｉｉ）配列番号６１の２３８位のＸはＭｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ又はＴｒｐであり；（ｉｖ）配列番号６１の２３９位のＸはＧｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ又はＴｒｐであり；（ｉ）第２のポリペプチド鎖は配列番号６２（ＳｉｇｎａｌＰで予測されるＮ末端シグナルペプチドなしの４３７４ＴＣＲのβ鎖）を含み、ここで、配列番号６２の１７０位のＸはＳｅｒ又はＣｙｓであり、あるいは（ｊ）（ｆ）の両方又は（ｈ）及び（ｉ）の両方、及び；（ｋ）第１のポリペプチド鎖は配列番号４０のアミノ酸配列からなり、ここで、（ｉ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号のアミノ酸配列を含み、（ｋ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号５７のアミノ酸配列を含み；（ｍ）第２のポリペプチド鎖は、配列番号４１のアミノ酸配列を含み；（ｎ）第２のポリペプチド鎖は、配列番号５８のアミノ酸配列を含み；（ｏ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号４０のアミノ酸配列を含み；（ｐ）第２のポリペプチド鎖は配列番号４３のアミノ酸配列を含み；（ｐ）第１のポリペプチド鎖は配列番号６５のアミノ酸配列を含み；（ｑ）第２のポリペプチド鎖は配列番号６６のアミノ酸配列を含み；（ｓ）（ｋ）及び（ｍ）の両方；（ｔ）（ｌ）及び（ｍ）の両方；（ｕ）（ｋ）及び（ｎ）の両方；（ｖ）（ｍ）及び（ｎ）の両方；（ｗ）（ｏ）及び（ｐ）両方又は（ｑ）及び（ｒ）両方を含むことができる。本発明の実施形態において、配列番号２１～２２、３４～３５、５３、５４、６１及び６２の１つ以上は、表２～４のいずれか１つに定義されているとおりである。
本発明のタンパク質はＴＣＲであり得る。代替的には、例えば、タンパク質が、配列番号２３及び２４の両方、配列番号５５及び２４の両方、配列番号２３及び５６の両方、配列番号５５及び５６の両方、配列番号５３及び２２の両方、配列番号２１及び５４の両方、配列番号５３及び５４の両方アミノ酸配列を含む単一のポリペプチド鎖を含む場合、又はタンパク質の第１及び／若しくは第２のポリペプチド鎖が他のアミノ酸配列、例えば、免疫グロブリン又はその部分をコードするアミノ酸配列を更に含む場合、本発明のタンパク質は融合タンパク質であり得る。これに関して、本発明は、少なくとも１の他のポリペプチドと共に、本明細書に記載の本発明のポリペプチドの少なくとも１を含む融合タンパク質も提供する。他のポリペプチドは、融合タンパク質の別のポリペプチドとして存在し得、又は本明細書に記載の本発明のポリペプチドの１つとインフレームで（ｉｎ ｆｒａｍｅ）（タンデムで）発現されるポリペプチドとして存在し得る。他のポリペプチドは、免疫グロブリン、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＭＨＣ分子、ＣＤ１分子、例、ＣＤ１ａ、ＣＤ１ｂ、ＣＤ１ｃ、ＣＤ１ｄ等を含むがそれらに限定されない、任意のペプチド性若しくはタンパク質性の分子、又はそれらの部分をコードし得る。
融合タンパク質は、本発明のポリペプチドの１以上のコピー及び／又は他のポリペプチドの１以上のコピーを含み得る。例えば、融合タンパク質は、本発明のポリペプチド及び／又は他のポリペプチドの１、２、３、４、５以上のコピーを含み得る。融合タンパク質を作製する好適な方法は、当該技術分野において公知であり、例えば、組換え法が挙げられる。
本発明の幾つかの実施形態においては、本発明のＴＣＲ、ポリペプチド及びタンパク質は、α鎖及びβ鎖を連結するリンカーペプチドを含む単一のタンパク質として発現され得る。これに関して、本発明のＴＣＲ、ポリペプチド及びタンパク質はリンカーペプチドを更に含み得る。リンカーペプチドは、宿主細胞内で、組換えＴＣＲ、ポリペプチド及び／又はタンパク質の発現を好都合に容易にし得る。リンカーペプチドは、任意の好適なアミノ酸配列を含み得る。リンカーペプチド切断可能なリンカーペプチドであってもよい。例えば、リンカーペプチドは、ＲＡＫＲＳＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧＰのアミノ酸配列（配列番号２５）を含むフューリン－ＳＧＳＧ－Ｐ２Ａリンカーであり得る。宿主細胞によるリンカーペプチドを含むコンストラクトの発現に際して、リンカーペプチドは切断され得、結果として分離したα鎖及びβ鎖となる。本発明の一実施形態においては、ＴＣＲ、ポリペプチド又はタンパク質は、全長α鎖、全長β鎖、並びにα鎖とβ鎖との間に位置するリンカーペプチドを含むアミノ酸配列、例えば、α鎖－リンカー－β鎖又はβ鎖－リンカー－α鎖を含み得る。
本発明の実施形態において、ＴＣＲ、ポリペプチド、又はタンパク質は、Ｎ末端からＣ末端まで、β鎖、リンカー（配列番号２５）、及びα鎖を含む配列番号４７に記載のアミノ酸配列を含んでもよい。変異体は、配列番号８に記載のβ鎖可変領域（変異体シグナルペプチドを有する）及び配列番号３９に記載の改変β定常ドメインを含む。変異体の全長β鎖は、配列番号４１に記載される。変異体はまた、配列番号７に記載のα鎖可変領域（野生型シグナルペプチドを有する）及び配列番号３８に記載の改変型α定常ドメインからなる。変異体の全長α鎖は、配列番号４０に記載される。
本発明の別の実施形態では、ＴＣＲ、ポリペプチド、又はタンパク質は、Ｎ末端からＣ末端まで、α鎖、リンカー（配列番号２５）、及びβ鎖を含む配列番号６７に記載のアミノ酸配列を含んでもよい。変異体は、配列番号５１に記載のα鎖可変領域（変異体シグナルペプチドを有する）及び配列番号３８に記載の改変α定常ドメインを含む。変異体の全長α鎖は、配列番号５７に記載される。変異体はまた、配列番号５２に規定されるβ鎖可変領域（野生型シグナルペプチドを有する）及び配列番号３９に規定される改変型β定常ドメインを含む。変異体の全長β鎖は、配列番号５８に記載される。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＴＣＲ、ポリペプチド又はタンパク質は、本明細書に開示されるように、シグナルペプチドを含むα鎖及び／又はβ鎖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるα鎖及び／又はβ鎖のいずれかのシグナルペプチドの配列は、２位で野生型残基に置換されたアラニン又はヒスチジン残基を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＴＣＲ、ポリペプチド又はタンパク質は、本明細書に開示されるように、シグナルペプチドを欠くα鎖及び／又はβ鎖の成熟型を含む。シグナルペプチド又はα鎖及び／もしくはβ鎖の成熟型の配列は、ＩＭＧＴ及びＳｉｇｎａｌＰを含む当技術分野で既知の任意の方法に従って実施することができる。
本発明のタンパク質は、本明細書に記載の本発明のポリペプチドの少なくとも１を含む組換え抗体又はその抗原結合部分であり得る。本明細書で用いられる場合、「組換え抗体」は、本発明のポリペプチド、抗体のポリペプチド鎖又はその抗原結合部分の少なくとも１を含む組換え（例、遺伝学的に操作された）タンパク質を指す。抗体のポリペプチド又はその抗原結合部分は、抗体の重鎖、軽鎖、重鎖若しくは軽鎖の可変領域若しくは定常領域、一本鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）、又はＦｃ、Ｆａｂ若しくはＦ（ａｂ）２’フラグメント等であり得る。抗体のポリペプチド鎖又はその抗原結合部分は、組換え抗体の別のポリペプチドとして存在し得る。代替的には、抗体のポリペプチド鎖又はその抗原結合部分は、本発明のポリペプチドとインフレームで（タンデムで）で発現されるポリペプチドとして存在し得る。抗体のポリペプチド又はその抗原結合部分は、本明細書に記載の抗体及び抗体フラグメントのいずれかを含む、任意の抗体又は任意の抗体フラグメントのポリペプチドであり得る。
本発明の範囲内には、本明細書に記載の本発明のＴＣＲ、ポリペプチド又はタンパク質の機能的変異体が含まれる。本明細書で用いられる場合、用語「機能的変異体」は、機能的変異体が、それが変異体であるところのＴＣＲ、ポリペプチド又はタンパク質の生物学的活性を保持している、親ＴＣＲ、ポリペプチド又はタンパク質に対する実質的又は有意な配列同一性又は類似性を有するＴＣＲ、ポリペプチド又はタンパク質を指す。機能的変異体は、例えば、親ＴＣＲが抗原特異性を有するか、又は親ポリペプチド若しくはタンパク質が、特異的に結合するＧ１２ＤＲＡＳに、親ＴＣＲ、ポリペプチド又はタンパク質と類似する程度、同じ程度若しくはより高い程度に特異的に結合する能力を保持する、本明細書に記載のＴＣＲ、ポリペプチド又はタンパク質（親ＴＣＲ、ポリペプチド又はタンパク質）の変異体を包含する。親ＴＣＲ、ポリペプチド又はタンパク質に関連して、例えば、機能的変異体は、親ＴＣＲ、ポリペプチド又はタンパク質のそれぞれに対して、アミノ酸配列で、少なくとも、約３０％、約５０％、約７５％、約８０％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％以上同一であり得る。
例えば、機能的変異体は、少なくとも１の保存的アミノ酸置換を含む親ＴＣＲ、ポリペプチド又はタンパク質のアミノ酸配列を含み得る。保存的アミノ酸置換は当該技術分野において公知であり、特定の物理的及び／又は化学的特性を有する１のアミノ酸が、同じ化学的又は物理的特性を有する別のアミノ酸に置き換えられるアミノ酸置換が挙げられる。例えば、保存的アミノ酸置換は、酸性アミノ酸の別の酸性アミノ酸（例、Ａｓｐ又はＧｌｕ）への置換、非極性側鎖を含むアミノ酸の非極性側鎖を含む別のアミノ酸（例、Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｐｒｏ、Ｔｒｐ、Ｖａｌ等）への置換、塩基性アミノ酸の別の塩基性アミノ酸（Ｌｙｓ、Ａｒｇ等）への置換、極性側鎖を含むアミノ酸の極性側鎖を含む別のアミノ酸（Ａｓｎ、Ｃｙｓ、Ｇｌｎ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｔｙｒ等）への置換等であり得る。
代替的に又は追加的に、機能的変異体は、少なくとも１の非保存的アミノ酸置換を含む親ＴＣＲ、ポリペプチド又はタンパク質のアミノ酸配列を含み得る。この場合においては、非保存的アミノ酸置換が、機能的変異体の生物学的活性と干渉しないか又は阻害しないことが好ましい。好ましくは、非保存的アミノ酸置換は、機能的変異体の生物学的活性が、親ＴＣＲ、ポリペプチド又はタンパク質と比較して増大するよう、機能的変異体の生物学的活性を増強する。
本明細書に記載のＴＣＲ、ポリペプチド、タンパク質、機能的変異体、及び機能的部分の各シグナルペプチドは、存在する場合、ＴＣＲ、ポリペプチド、タンパク質、又は機能的変異体が発現し、ＨＬＡクラスＩ分子が提示する１２位のグリシンをアスパラギン酸で置換した変異ヒトＲＡＳアミノ酸配列に対して抗原特異性を有する限り、任意の適切なＴＣＲシグナルペプチドでありえる。
ＴＣＲ、ポリペプチド又はタンパク質の他の構成要素、例、他のアミノ酸が、ＴＣＲ、ポリペプチド又はタンパク質の生物学的活性を実質的に変化させないよう、ＴＣＲ、ポリペプチド又はタンパク質は、本明細書に記載の特定のアミノ酸配列の一つ又は複数（ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｏｒ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ）から実質的になり得る。これに関して、例えば、本発明のＴＣＲ、ポリペプチド又はタンパク質は、配列番号２１、配列番号５３、配列番号２２、配列番号５４、配列番号２３、配列番号５５、配列番号２４、配列番号５６、配列番号３４、配列番号６１、配列番号３５、配列番号６２、配列番号３６、配列番号６３、配列番号３７、配列番号６４、配列番号４０、配列番号５７、配列番号４１、配列番号５８、配列番号４２、配列番号６５、配列番号４３、配列番号６６、配列番号２１～２２の両方、配列番号５３及び２２の両方、配列番号２１及び５４の両方、配列番号５３及び５４の両方、配列番号２３～２４の両方、配列番号５５及び２４の両方、配列番号２３及び５４の両方、配列番号５５及び５６の両方、配列番号３４～３５の両方、配列番号６１～６２の両方、配列番号３６～３７の両方、配列番号６３～６４の両方、配列番号４０～４１の両方、配列番号５７及び４１の両方、配列番号４０及び５８の両方、配列番号５７及び５８の両方、配列番号４２～４３又は配列番号６５～６６の両方のアミノ酸配列から実質的になり得る。また、例えば、本発明のＴＣＲ、ポリペプチド又はタンパク質は、（ｉ）配列番号７、（ｉｉ）配列番号５１、（ｉｉｉ）配列番号８、（ｉｖ）配列番号５２、（ｖ）配列番号３２、（ｖｉ）配列番号３３、（ｖｉｉ）配列番号５９又は（ｖｉｉｉ）配列番号６０のアミノ酸配列から実質的になり得る。更に、本発明のＴＣＲ、ポリペプチド又はタンパク質は、（ａ）配列番号１～６のいずれか１以上；（ｂ）配列番号１～３のすべて；（ｃ）配列番号４～６のすべて；又は（ｄ）配列番号１～６のすべてのアミノ酸配列から実質的になり得る。
本発明のＴＣＲ、ポリペプチド及びタンパク質は、ＴＣＲ、ポリペプチド又はタンパク質が、それらの生物学的活性、例えば、Ｇ１２ＤＲＡＳに特異的に結合し；哺乳動物におけるがんを検出し；又は哺乳動物におけるがんを治療若しくは予防する能力等を保持するという条件で、任意の長さであり得、即ち、任意の数のアミノ酸を含み得る。例えば、ポリペプチドは、約５０、約７０、約７５、約１００、約１２５、約１５０、約１７５、約２００、約３００、約４００、約５００、約６００、約７００、約８００、約９００、約１０００以上のアミノ酸長等の約５０～約５０００アミノ酸長の範囲であり得る。これに関して、本発明のポリペプチドはオリゴペプチドも含む。
本発明のＴＣＲ、ポリペプチド及びタンパク質は、天然で生じた１以上のアミノ酸の代わりに合成アミノ酸を含み得る。かかる合成アミノ酸は、当該技術分野において公知であり、例えば、アミノシクロヘキサンカルボン酸（ａｍｉｎｏｃｙｃｌｏｈｅｘａｎｅ ｃａｒｂｏｘｙｌｉｃ ａｃｉｄ）、ノルロイシン（ｎｏｒｌｅｕｃｉｎｅ）、α－アミノ－ｎ－デカン酸（α－ａｍｉｎｏ ｎ－ｄｅｃａｎｏｉｃ ａｃｉｄ）、ホモセリン（ｈｏｍｏｓｅｒｉｎｅ）、Ｓ－アセチルアミノメチル－システイン（Ｓ－ａｃｅｔｙｌａｍｉｎｏｍｅｔｈｙｌ－ｃｙｓｔｅｉｎｅ）、トランス－３－及びトランス－４－ヒドロキシプロリン（ｔｒａｎｓ－３－ ａｎｄ ｔｒａｎｓ－４－ｈｙｄｒｏｘｙｐｒｏｌｉｎｅ）、４－アミノフェニルアラニン（４－ａｍｉｎｏｐｈｅｎｙｌａｌａｎｉｎｅ）、４－ニトロフェニルアラニン（４－ｎｉｔｒｏｐｈｅｎｙｌａｌａｎｉｎｅ）、４－クロロフェニルアラニン（４－ｃｈｌｏｒｏｐｈｅｎｙｌａｌａｎｉｎｅ）、４－カルボキシフェニルアラニン（４－ｃａｒｂｏｘｙｐｈｅｎｙｌａｌａｎｉｎｅ）、β－フェニルセリン（β－ｐｈｅｎｙｌｓｅｒｉｎｅ））β－ヒドロキシフェニルアラニン（β－ｈｙｄｒｏｘｙｐｈｅｎｙｌａｌａｎｉｎｅ）、フェニルグリシン（ｐｈｅｎｙｌｇｌｙｃｉｎｅ）、α－ナフチルアラニン（α－ｎａｐｈｔｈｙｌａｌａｎｉｎｅ）、シクロヘキシルアラニン（ｃｙｃｌｏｈｅｘｙｌａｌａｎｉｎｅ）、シクロヘキシルグリシン（ｃｙｃｌｏｈｅｘｙｌｇｌｙｃｉｎｅ）、インドリン－２－カルボン酸（ｉｎｄｏｌｉｎｅ－２－ｃａｒｂｏｘｙｌｉｃ ａｃｉｄ）、１，２，３，４－テトラヒドロイソキノリン－３－カルボン酸（１，２，３，４－ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｉｓｏｑｕｉｎｏｌｉｎｅ－３－ｃａｒｂｏｘｙｌｉｃ ａｃｉｄ）、アミノマロン酸（ａｍｉｎｏｍａｌｏｎｉｃ ａｃｉｄ）、アミノマロン酸モノアミド（ａｍｉｎｏｍａｌｏｎｉｃ ａｃｉｄ ｍｏｎｏａｍｉｄｅ）、Ｎ’－ベンジル－Ｎ’－メチル－リジン（Ｎ’－ｂｅｎｚｙｌ－Ｎ’－ｍｅｔｈｙｌ－ｌｙｓｉｎｅ）、Ｎ’，－ジベンジルリジン（Ｎ’，Ｎ’－ｄｉｂｅｎｚｙｌ－ｌｙｓｉｎｅ）、６－ヒドロキシリジン（６－ｈｙｄｒｏｘｙｌｙｓｉｎｅ）、オルニチン（ｏｒｎｉｔｈｉｎｅ）、α－アミノシクロペンタンカルボン酸（α－ａｍｉｎｏｃｙｃｌｏｐｅｎｔａｎｅ ｃａｒｂｏｘｙｌｉｃ ａｃｉｄ）、α－アミノシクロヘキサンカルボン酸（α－ａｍｉｎｏｃｙｃｌｏｈｅｘａｎｅ ｃａｒｂｏｘｙｌｉｃ ａｃｉｄ）、α－アミノシクロヘプタンカルボン酸（α－ａｍｉｎｏｃｙｃｌｏｈｅｐｔａｎｅ
ｃａｒｂｏｘｙｌｉｃ ａｃｉｄ）、α－（２－アミノ－２－ノルボルナン）－カルボン酸（α－（２－ａｍｉｎｏ－２－ｎｏｒｂｏｒｎａｎｅ）－ｃａｒｂｏｘｙｌｉｃ ａｃｉｄ）、α，γ－ジアミノ酪酸（α，γ－ｄｉａｍｉｎｏｂｕｔｙｒｉｃ ａｃｉｄ）、α，β－ジアミノプロピオン酸（α，β－ｄｉａｍｉｎｏｐｒｏｐｉｏｎｉｃ ａｃｉｄ）、ホモフェニルアラニン（ｈｏｍｏｐｈｅｎｙｌａｌａｎｉｎｅ）及びα－ｔｅｒｔ－ブチルグリシン（α－ｔｅｒｔ－ｂｕｔｙｌｇｌｙｃｉｎｅ）が挙げられる。
本発明のＴＣＲ、ポリペプチド及びタンパク質は例えば、グリコシル化、アミド化、カルボキシル化、リン酸化、エステル化、Ｎ－アシル化、（例、ジスルフィド架橋を介した）環化、若しくは酸付加塩への変換、及び／或いは必要に応じて二量体化若しくは重合化、又はコンジュゲート化され得る。
本発明のＴＣＲ、ポリペプチド及び／又はタンパク質は、例えば、例、デノボ合成等の当該技術分野で公知の方法によって得られ得る。また、ポリペプチド及びタンパク質は、標準的な組換え法を用い、本明細書に記載の核酸を用いて、組換えにより作製され得る。例えば、Ｇｒｅｅｎ ａｎｄ Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（第４版）Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ（２０１２）を参照。代替的には、本明細書に記載のＴＣＲ、ポリペプチド及び／又はタンパク質は、さまざまな営利団体のいずれかによって商業的に合成され得る。これに関して、本発明のＴＣＲ、ポリペプチド及びタンパク質は、合成、組換え、単離及び／又は精製され得る。本発明の実施形態は、本発明の他の側面に関して本明細書に記載される核酸又はベクターのいずれかによってコードされる単離又は精製されたＴＣＲ、ポリペプチド、又はタンパク質を提供する。本発明の別の実施形態は、本発明の他の側面に関して本明細書に記載された核酸又はベクターのいずれかの細胞における発現から生じる、単離又は精製されたＴＣＲ、ポリペプチド、又はタンパク質を提供する。本発明の更に別の実施形態は、本明細書に記載のＴＣＲ、ポリペプチド、又はタンパク質のいずれかを生産する方法を提供し、この方法は、ＴＣＲ、ポリペプチド、又はタンパク質が生産されるように本明細書に記載の宿主細胞又は宿主細胞の集団のいずれかを培養することを含む。
本発明の範囲には、本発明のＴＣＲ、ポリペプチド又はタンパク質（それらの機能的部分又は変異体のいずれかを含む）、核酸、組換え発現ベクター、宿主細胞、宿主細胞集団、又は抗体若しくはその抗原結合部分のいずれかを含む、コンジュゲート、例、バイオコンジュゲートが含まれる。コンジュゲート及びコンジュゲートを合成する方法は、一般的に、当該技術分野において公知である。
本発明の一実施形態は、本明細書に記載のＴＣＲ、ポリペプチド又はタンパク質のいずれかをコードするヌクレオチド配列を含む核酸を提供する。本明細書で用いられる場合、「核酸」は「ポリヌクレオチド」、「オリゴヌクレオチド」及び「核酸分子」を含み、一般にＤＮＡ又はＲＮＡの重合体を意味し、一本鎖又は二本鎖であり得、天然、非天然又は改変されたヌクレオチドを含有し得、天然、非天然又は改変されたヌクレオチド間結合、例えば、未修飾オリゴヌクレオチドのヌクレオチド間にみられるホスホジエステルの代わりに、ホスホロアミデート結合又はホスホロチオエート結合等を含有し得る。一実施形態においては、核酸は相補的ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）を含む。一般的には、核酸が、挿入、欠失、逆位及び／又は置換を何ら含まないことが好ましい。しかし、本明細書で検討されるとおり、幾つかの例においては核酸が１以上の挿入、欠失、逆位、及び／又は置換を含むことが、好適であり得る。
好ましくは、本発明の核酸は組換え体である。本明細書で用いられる場合、用語「組換え体」は、（ｉ）天然又は合成の核酸セグメントを、生細胞内で複製できる核酸分子に接合することによって、生細胞外で構築される分子、又は（ｉｉ）上記（ｉ）に記載されたものの複製から生じる分子を指す。本明細書における目的のためには、複製はｉｎ ｖｉｔｒｏ複製、又はｉｎ ｖｉｖｏ複製であり得る。
本発明の実施形態では、核酸は、（ｉ）配列番号４４（４３７３ＴＣＲのα鎖の可変領域をコードするヌクレオチド配列）、（ｉｉ）４３７３ＴＣＲのβ鎖の可変領域をコードする配列番号４５のヌクレオチド配列、又は（ｉｉｉ）配列番号４４～４５の両方、のヌクレオチド配列を含む。
核酸は、当該技術分野で公知の手順を用いて、化学合成及び／又は酵素的ライゲーション反応に基づいて構築され得る。例えば、上記のＧｒｅｅｎ ａｎｄ Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．を参照。例えば、核酸は、天然で生じたヌクレオチド、又は分子の生物学的安定性を増大させるよう、若しくはハイブリダイゼーション時に形成される二本鎖の物理的安定性を増大させるよう設計された、様々に修飾されたヌクレオチド（例、ホスホロチオエート誘導体及びアクリジン置換ヌクレオチド）を用いて化学的に合成され得る。核酸を生成するために用いられ得る修飾ヌクレオチドの例としては、５－フルオロウラシル（５－ｆｌｕｏｒｏｕｒａｃｉｌ）、５－ブロモウラシル（５－ｂｒｏｍｏｕｒａｃｉｌ）、５－クロロウラシル（５－ｃｈｌｏｒｏｕｒａｃｉｌ）、５－ヨードウラシウル（５－ｉｏｄｏｕｒａｃｉｌ）、ヒポキサンチン（ｈｙｐｏｘａｎｔｈｉｎｅ）、キサンチン（ｘａｎｔｈｉｎｅ）、４－アセチルシトシン（４－ａｃｅｔｙｌｃｙｔｏｓｉｎｅ）、５－（カルボキシヒドロキシメチル）ウラシル（５－（ｃａｒｂｏｘｙｈｙｄｒｏｘｙｍｅｔｈｙｌ）ｕｒａｃｉｌ）、５－カルボキシメチルアミノメチル－２－チオウリジン（５－ｃａｒｂｏｘｙｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏｍｅｔｈｙｌ－２－ｔｈｉｏｕｒｉｄｉｎｅ）、５－カルボキシメチルアミノメチルウラシル（５－ｃａｒｂｏｘｙｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏｍｅｔｈｙｌｕｒａｃｉｌ）、ジヒドロウラシル（ｄｉｈｙｄｒｏｕｒａｃｉｌ）、β－Ｄ－ガラクトシルキューオシン（ｂｅｔａ－Ｄ－ｇａｌａｃｔｏｓｙｌｑｕｅｏｓｉｎｅ）、イノシン（ｉｎｏｓｉｎｅ）、Ｎ６－イソペンテニルアデニン（Ｎ６－ｉｓｏｐｅｎｔｅｎｙｌａｄｅｎｉｎｅ）、１－メチルグアニン（１－ｍｅｔｈｙｌｇｕａｎｉｎｅ）、１－メチルイノシン（１－ｍｅｔｈｙｌｉｎｏｓｉｎｅ）、２，２－ジメチルグアニン（２，２－ｄｉｍｅｔｈｙｌｇｕａｎｉｎｅ）、２－メチルアデニン（２－ｍｅｔｈｙｌａｄｅｎｉｎｅ）、２－メチルグアニン（２－ｍｅｔｈｙｌｇｕａｎｉｎｅ）、３－メチルシトシン（３－ｍｅｔｈｙｌｃｙｔｏｓｉｎｅ）、５－メチルシトシン（５－ｍｅｔｈｙｌｃｙｔｏｓｉｎｅ）、Ｎ６－置換アデニン（Ｎ６－ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｅｄ ａｄｅｎｉｎｅ）、７－メチルグアニン（７－ｍｅｔｈｙｌｇｕａｎｉｎｅ）、５－メチルアミノメチルウラシル（５－ｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏｍｅｔｈｙｌｕｒａｃｉｌ）、５－メトキシアミノメチル－２－チオウラシル（５－ｍｅｔｈｏｘｙａｍｉｎｏｍｅｔｈｙｌ－２－ｔｈｉｏｕｒａｃｉｌ）、β－Ｄ－マンノシルキューオシン（ｂｅｔａ－Ｄ－ｍａｎｎｏｓｙｌｑｕｅｏｓｉｎｅ）、５’－メトキシカルボキシメチルウラシル（５’－ｍｅｔｈｏｘｙｃａｒｂｏｘｙｍｅｔｈｙｌｕｒａｃｉｌ）、５－メトキシウラシル（５－ｍｅｔｈｏｘｙｕｒａｃｉｌ）、２－メチルチオ－Ｎ６－イソペンテニルアデニン（２－ｍｅｔｈｙｌｔｈｉｏ－Ｎ６－ｉｓｏｐｅｎｔｅｎｙｌａｄｅｎｉｎｅ）、ウラシル－５－オキシ酢酸（ｖ）（ｕｒａｃｉｌ－５－ｏｘｙａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄ（ｖ））、ワイブトキソシン（ｗｙｂｕｔｏｘｏｓｉｎｅ）、シュードウラシル（ｐｓｅｕｄｏｕｒａｃｉｌ）、キューオシン（ｑｕｅｏｓｉｎｅ）、２－チオシトシン（２－ｔｈｉｏｃｙｔｏｓｉｎｅ）、５－メチル－２－チオウラシル（５－ｍｅｔｈｙｌ－２－ｔｈｉｏｕｒａｃｉｌ）、２－チオウラシル（２－ｔｈｉｏｕｒａｃｉｌ）、４－チオウラシル（４－ｔｈｉｏｕｒａｃｉｌ）、５－メチルウラシル（５－ｍｅｔｈｙｌｕｒａｃｉｌ）、ウラシル－５－オキシ酢酸メチルエステル（ｕｒａｃｉｌ－５－ｏｘｙａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄ ｍｅｔｈｙｌｅｓｔｅｒ）、３－（３－アミノ－３－Ｎ－２－カルボキシプロピル）ウラシル（３－（３－ａｍｉｎｏ－３－Ｎ－２－ｃａｒｂｏｘｙｐｒｏｐｙｌ）ｕｒａｃｉｌ）及び２，６－ジアミノプリン（２，６－ｄｉａｍｉｎｏｐｕｒｉｎｅ）が挙げられるが、これらに限定されない。代替的には、本発明の核酸の１以上は、さまざまな営利団体のいずれかから購入され得る。
核酸は、本明細書に記載のＴＣＲ、ポリペプチド又はタンパク質のいずれかをコードする、任意のヌクレオチド配列を含み得る。
本発明の一実施形態においては、核酸は、本明細書に記載のＴＣＲ、ポリペプチド又はタンパク質のいずれかをコードする、コドンを最適化したヌクレオチド配列を含む。如何なる特定の理論又はメカニズムにも縛られないが、ヌクレオチド配列のコドンの最適化は、ｍＲＮＡ転写産物の翻訳効率を増大させると考えられる。ヌクレオチド配列のコドンの最適化は、ネイティブのコドンを、同じアミノ酸をコードするが、細胞内でより容易に利用できるｔＲＮＡによって翻訳され得る、別のコドンに置換することを含み得、従って、翻訳効率が上昇する。ヌクレオチド配列の最適化は、翻訳に干渉するｍＲＮＡの二次構造も減少させ得、従って、翻訳効率が上昇する。
本発明は、本明細書に記載の核酸のいずれかのヌクレオチド配列に対して相補的なヌクレオチド配列、又は本明細書に記載の核酸のいずれかのヌクレオチド配列に対し、ストリンジェントな条件下でハイブリダイズするヌクレオチド配列を含む、核酸も提供する。
ストリンジェントな条件下でハイブリダイズするヌクレオチド配列は、好ましくは、高ストリンジェンシー条件下でハイブリダイズする。「高ストリンジェンシー条件」とは、ヌクレオチド配列が、非特異的ハイブリダイゼーションよりも検出可能に強い量で標的配列（本明細書に記載の核酸のいずれかのヌクレオチド配列）に特異的にハイブリダイズすることを意味する。高ストリンジェンシー条件としては、正確に相補的な配列を有するポリヌクレオチド、又は散らばったミスマッチを少しだけ含有するポリヌクレオチドを、ヌクレオチド配列にマッチしたいくつかの小領域（例、３～１０塩基）を偶然有するランダム配列から識別する条件が挙げられる。かかる相補的な小領域は、１４～１７又はそれ以上の塩基の全長相補体よりも容易に融解され、高ストリンジェンシーのハイブリダイゼーションにより、それらが容易に識別可能となる。比較的高ストリンジェンシーの条件としては、例えば、低塩及び／又は高温条件（約０．０２～０．１ＭのＮａＣｌ又は当量によって、約５０～７０℃の温度で提供される等）が挙げられる。かかる高ストリンジェンシー条件は、許容したとしても、ヌクレオチド配列とテンプレート鎖若しくは標的鎖との間のミスマッチをほとんど許容せず、本発明のＴＣＲのいずれかの発現を検出するのに特に好適である。条件は、漸増量のホルムアミドの添加によって、よりストリンジェントになり得ることが、一般的に理解される。
本発明の実施態様は、本明細書に記載の核酸のいずれかと、少なくとも約７０％以上、例えば、約８０％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％又は約９９％同一であるヌクレオチド配列を含む核酸も提供する。これに関して、核酸は、本明細書に記載のヌクレオチド配列のいずれかから実質的になり得る。
本発明の実施形態は、５’から３’まで、第１の核酸配列及び第２の核酸配列を含む単離又は精製核酸を提供し、ここで、第１及び第２の核酸配列は、それぞれ、配列番号７及び８；５１及び８；７及び５２；５１及び５２；８及び７；８及び５１；５２及び７；５２及び５１；２１及び２２；２１及び５４；５３及び２２；５３及び５４；２２及び２１；５４及び２１；２２及び５３；５４及び５３；２３及び２４；５５及び２４；２３及び５６；５５及び５６；２４及び２３；２４及び５５；５６及び５５；５６及び２３；３２及び３３．３３及び３２、５９及び６０、６０及び５９、３４及び３５、３５及び３４、６１及び６２、６２及び６１、３６及び３７、３７及び３６、６３及び６４、６４及び６３、４０及び４１、５７及び４１、４０及び５８、５７及び５８、４１及び４０、４１及び５７、５８及び４０、５８及び５７、４２及び４３、４３及び４２、６５及び６６、又は６６及び６５のアミノ配列をコードする。
本発明の実施形態では、単離又は精製核酸は、第１及び第２のヌクレオチド配列の間に介在する第３のヌクレオチド配列を更に含み、第３のヌクレオチド配列は、切断可能なリンカーペプチドをコードしている。本発明の実施形態では、切断可能なリンカーペプチドは、ＲＡＫＲＳＧＳＧＡＴＮＦＳＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧＰ（配列番号２５）のアミノ酸配列を含む。
本発明の核酸は、組換え発現ベクターに組込まれ得る。これに関して、本発明は、本発明の核酸のいずれかを含む組換え発現ベクターを提供する。本発明の一実施形態においては、組換え発現ベクターは、α鎖、β鎖及びリンカーペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む。
本明細書における目的のためには、用語「組換え発現ベクター」とは、宿主細胞によるｍＲＮＡ、タンパク質、ポリペプチド、又はペプチドの発現を可能にする、遺伝学的に改変されたオリゴヌクレオチド又はポリヌクレオチドコンストラクトを意味し、この場合、コンストラクトは、ｍＲＮＡ、タンパク質、ポリペプチド、又はペプチドをコードするヌクレオチド配列を含み、ベクターは、細胞内でｍＲＮＡ、タンパク質、ポリペプチド、又はペプチドを発現させるのに十分な条件下で細胞と接触させられる。本発明のベクターは、全体としては天然には存在しない。しかし、該ベクターの一部は天然に存在し得る。本発明の組換え発現ベクターは、ＤＮＡ及びＲＮＡ（一本鎖又は二本鎖であり得、合成され得るか、又は一部が天然のソースから得られ得、天然、非天然又は改変されたヌクレオチドを含有し得る）を含む（がこれらに限定されない）、任意のタイプのヌクレオチドを含み得る。組換え発現ベクターは、天然に存在するヌクレオチド間結合、天然に存在しないヌクレオチド間結合、又は両方のタイプの結合を含み得る。好ましくは、天然に存在しない又は改変されたヌクレオチド又はヌクレオチド間結合は、ベクターの転写や複製を妨害しない。
本発明の組換え発現ベクターは、任意の好適な組換え発現ベクターであり得、任意の好適な宿主細胞を形質転換又はトランスフェクションするために用いられ得る。好適なベクターとしては、プラスミド及びウイルス等の増殖及び増幅のため、若しくは発現のため、又は両方のために設計されたベクターが挙げられる。ベクターは、ｐＵＣシリーズ（Ｆｅｒｍｅｎｔａｓ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）、ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔシリーズ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ，ＬａＪｏｌｌａ，ＣＡ）、ｐＥＴシリーズ（Ｎｏｖａｇｅｎ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）、ｐＧＥＸシリーズ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ，Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）、及びｐＥＸシリーズ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ，Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ，ＣＡ）から選択され得る。λＧＴ１０、λＧＴ１１、λＺａｐＩＩ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）、λＥＭＢＬ４及びλＮＭ１１４９等のバクテリオファージベクターも用いられ得る。植物発現ベクターの例としては、ｐＢＩ０１、ｐＢＩ１０１．２、ｐＢＩ１０１．３、ｐＢＩ１２１及びｐＢＩＮ１９（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）が挙げられる。動物発現ベクターの例としては、ｐＥＵＫ－Ｃｌ、ｐＭＡＭ及びｐＭＡＭｎｅｏ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）が挙げられる。好ましくは、組換え発現ベクターは、ウイルスベクター、例、レトロウイルスベクターである。特に好ましい実施形態においては、組換え発現ベクターはＭＳＧＶ１ベクターである。本発明の実施形態では、組換え発現ベクターは、トランスポゾン又はレンチウイルスベクターである。
本発明の組換え発現ベクターは、例えば、Ｇｒｅｅｎ ａｎｄ Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．（上記）に記載の標準的な組換えＤＮＡ技術を用いて調製され得る。環状又は線状の発現ベクターのコンストラクトは、原核又は真核の宿主細胞において機能する複製系を含有するように調製され得る。複製系は、例、ＣｏｌＥｌ、２μプラスミド、λ、ＳＶ４０、ウシ乳頭腫ウイルス等に由来し得る。
望ましくは、組換え発現ベクターは、適宜、ベクターがＤＮＡベースであるかＲＮＡベースであるかを考慮して、ベクターが導入される宿主細胞の種類（例、細菌、真菌、植物、又は動物）に特異的な、転写、並びに翻訳の開始及び終止コドン等の調節配列を含む。
組換え発現ベクターは、形質転換又はトランスフェクションされた宿主細胞の選択を可能にする、１以上のマーカー遺伝子を含み得る。マーカー遺伝子は、殺生物剤耐性、例、抗生物質、重金属などに対する耐性、原栄養性を提供するための栄養要求性宿主細胞における補完等を含む。本発明の発現ベクターに好適なマーカー遺伝子としては、例えば、ネオマイシン／Ｇ４１８耐性遺伝子、ハイグロマイシン耐性遺伝子、ヒスチジノール耐性遺伝子、テトラサイクリン耐性遺伝子及びアンピシリン耐性遺伝子が挙げられる。
組換え発現ベクターは、ＴＣＲ、ポリペプチド、若しくはタンパク質をコードするヌクレオチド配列に、又は、ＴＣＲ、ポリペプチド、若しくはタンパク質をコードするヌクレオチド配列に相補的であるか、又はハイブリダイズするヌクレオチド配列に作動可能に結合したネイティブの、又は非ネイティブのプロモーターを含み得る。プロモーター、例、強力なプロモーター、弱いプロモーター、誘導性プロモーター、組織特異的プロモーター及び発生特異的（ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ）プロモーターの選択は、当業者の通常の技術の範囲内である。同様に、ヌクレオチド配列をプロモーターと組合せることも、当業者の技術の範囲内である。プロモーターは、非ウイルスプロモーター、又はウイルスプロモーター、例、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター、ＳＶ４０プロモーター、ＲＳＶプロモーター、及びマウス幹細胞ウイルス長鎖末端反復配列（ｌｏｎｇ－ｔｅｒｍｉｎａｌ ｒｅｐｅａｔ）において見受けられるプロモーターであり得る。
本発明の組換え発現ベクターは、一過性の発現のため、安定した発現のためのいずれか、又はその両方のために設計され得る。また、組換え発現ベクターは、構成的発現のため、又は誘導性発現のために作製され得る。
更に、組換え発現ベクターは、自殺遺伝子を含むように作製され得る。用語「自殺遺伝子」は、本明細書で用いられる場合、自殺遺伝子を発現する細胞を死に至らしめる遺伝子を指す。自殺遺伝子は、その遺伝子を発現する細胞に対し物質、例、薬物に対する感受性を付与し、細胞が該物質と接触するとき又は該物質に曝露されるときに細胞を死に至らしめる遺伝子であり得る。自殺遺伝子は、当該技術分野において公知であり、例えば、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）チミジンキナーゼ（ＴＫ）遺伝子、シトシンデアミナーゼ、プリンヌクレオシドホスホリラーゼ、ニトロレダクターゼ及び誘導性カスパーゼ９遺伝子の系が挙げられる。
本発明の別の実施形態は、本明細書に記載の組換え発現ベクターのいずれかを含む宿主細胞を更に提供する。用語「宿主細胞」は、本明細書で用いられる場合、本発明の組換え発現ベクターを含有し得る任意の種類の細胞を指す。宿主細胞は、真核細胞、例、植物、動物、真菌又は藻類であり得、又は、原核細胞、例えば、細菌若しくは原生動物であり得る。宿主細胞は、培養細胞、又は、初代細胞であり得、即ち、生物、例えば、ヒト又はマウスから直接単離され得る。宿主細胞は、接着細胞、又は、浮遊細胞、即ち、懸濁物中で増殖する細胞であり得る。好適な宿主細胞は、当該技術分野において公知であり、例えば、ＤＨ５α Ｅ．ｃｏｌｉ細胞、チャイニーズハムスター卵巣細胞、サルＶＥＲＯ細胞、ＣＯＳ細胞、ＨＥＫ２９３細胞等が挙げられる。組換え発現ベクターを増幅又は複製する目的のためには、宿主細胞は、好ましくは、原核細胞、例、ＤＨ５α細胞である。組換えＴＣＲ、ポリペプチド又はタンパク質を産生する目的のためには、宿主細胞は、好ましくは、哺乳動物細胞である。最も好ましくは、宿主細胞はヒト細胞である。宿主細胞は任意の種類の細胞であり得、任意の種類の組織由来であり得、任意の発生段階のものであり得るが、宿主細胞は、好ましくは、末梢血リンパ球（ＰＢＬ）又は末梢血単核球（ＰＢＭＣ）である。より好ましくは、宿主細胞は、Ｔ細胞である。本発明の一実施形態では、宿主細胞は、ヒトリンパ球である。本発明の別の実施形態では、宿主細胞は、Ｔ細胞、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞、インバリアントナチュラルキラーＴ（ｉＮＫＴ）細胞、及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞から選択される。本発明の更に別の実施形態は、ＶＶＶＧＡＤＧＶＧＫ（配列番号２９）のペプチドに対して抗原特異性を有するＴＣＲを発現する宿主細胞を製造する方法を提供し、該方法は、細胞にベクターを導入することができる条件下で、細胞を、本明細書に記載のベクターのうちのいずれかと接触させることを含む。
本明細書における目的のためには、Ｔ細胞は、任意のＴ細胞（培養Ｔ細胞（例、初代Ｔ細胞）、若しくは培養Ｔ細胞株（例、Ｊｕｒｋａｔ、ＳｕｐＴ１など）由来のＴ細胞、又は哺乳動物から得られたＴ細胞等）であり得る。哺乳動物から得られる場合、Ｔ細胞は、多数のソース（血液、骨髄、リンパ節、胸腺又は他の組織若しくは体液が含まれるが、これらに限定されない）から得られ得る。Ｔ細胞は、濃縮又は精製もされ得る。好ましくは、Ｔ細胞はヒトＴ細胞である。Ｔ細胞は、任意の種類のＴ細胞であり得、任意の発生段階のものであり得る（ＣＤ４＋／ＣＤ８＋二重陽性Ｔ細胞、ＣＤ４＋ヘルパーＴ細胞、例、Ｔｈ１及びＴｈ２細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞（例、細胞傷害性Ｔ細胞）、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、メモリーＴ細胞（例、セントラルメモリーＴ細胞及びエフェクターメモリーＴ細胞）、ナイーブＴ細胞等が挙げられるが、これらに限定されない）。
本明細書に記載の、少なくとも１の宿主細胞を含む細胞集団も本発明により提供される。細胞集団は、記載された組換え発現ベクターのいずれかを含む宿主細胞を、いずれの組換え発現ベクターも含まない、少なくとも１の他の細胞、例、宿主細胞（例、Ｔ細胞）、又はＴ細胞以外の細胞、例、Ｂ細胞、マクロファージ、好中球、赤血球、肝細胞、内皮細胞、上皮細胞、筋肉細胞、脳細胞等に加えて含む不均一集団であり得る。代替的には、細胞集団は、実質的に均一な集団であって、組換え発現ベクターを含む宿主細胞を主に含む（例、実質的にそれからなる）集団であり得る。集団はまた、集団のすべての細胞が組換え発現ベクターを含むように、集団のすべての細胞が、組換え発現ベクターを含む単一の宿主細胞のクローンである、細胞のクローン集団でもあり得る。本発明の一実施形態においては、細胞集団は、本明細書に記載のとおりの組換え発現ベクターを含む宿主細胞を含むクローン集団である。
本発明の一実施形態においては、集団中の細胞数が急速に増幅され得る。Ｔ細胞数の増幅は、例えば、米国特許第８，０３４，３３４号；米国特許第８，３８３，０９９号；米国特許出願公開番号第２０１２／０２４４１３３号；Ｄｕｄｌｅｙ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．，２６：３３２－４２（２００３）；及びＲｉｄｄｅｌｌ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，１２８：１８９－２０１（１９９０）に記載のとおりの、当該技術分野で公知の多くの方法のいずれかによって達成され得る。一実施形態においては、Ｔ細胞数の増幅は、Ｔ細胞をＯＫＴ３抗体、ＩＬ－２、及びフィーダーＰＢＭＣ（例、放射線照射された同種異系ＰＢＭＣ）と共に培養することによって行われる。
本発明のＴＣＲ、ポリペプチド、タンパク質、核酸、組換え発現ベクター、及び宿主細胞（その集団を含む）は、単離及び／又は精製され得る。用語「単離された」は、本明細書で用いられる場合、その自然環境から取り出されたことを意味する。用語「精製された」は、本明細書で用いられる場合、純度が増したことを意味するが、「純度」は、相対的な用語であって、必ずしも絶対的純度として解釈されるべきでない。例えば、純度は、少なくとも約５０％であり得、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％を超え得、又は約１００％であり得る。
本発明のＴＣＲ、ポリペプチド、タンパク質、核酸、組換え発現ベクター、及び宿主細胞（その集団を含む）は、これらすべてが、以降、「本発明のＴＣＲ材料」と総称されるものであるが、医薬組成物等の、組成物へと製剤化され得る。これに関して、本発明は、本明細書に記載のＴＣＲ、ポリペプチド、タンパク質、核酸、発現ベクター、及び宿主細胞（その集団を含む）のいずれか、並びに医薬的に許容可能な担体を含む医薬組成物を提供する。本発明のＴＣＲ材料のいずれかを含有する本発明の医薬組成物は、１超の本発明のＴＣＲ材料、例、ポリペプチド及び核酸、又は２以上の異なるＴＣＲを含み得る。代替的には、医薬組成物は、化学療法剤等、別の医薬的に活性な物質又は薬物、例、アスパラギナーゼ（ａｓｐａｒａｇｉｎａｓｅ）、ブスルファン（ｂｕｓｕｌｆａｎ）、カルボプラチン（ｃａｒｂｏｐｌａｔｉｎ）、シスプラチン（ｃｉｓｐｌａｔｉｎ）、ダウノルビシン（ｄａｕｎｏｒｕｂｉｃｉｎ）、ドキソルビシン（ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ）、フルオロウラシル（ｆｌｕｏｒｏｕｒａｃｉｌ）、ゲムシタビン（ｇｅｍｃｉｔａｂｉｎｅ）、ヒドロキシウレア（ｈｙｄｒｏｘｙｕｒｅａ）、メトトレキサート（ｍｅｔｈｏｔｒｅｘａｔｅ）、パクリタキセル（ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ）、リツキシマブ（ｒｉｔｕｘｉｍａｂ）、ビンブラスチン（ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ）、ビンクリスチン（ｖｉｎｃｒｉｓｔｉｎｅ）など）と組合せて、本発明のＴＣＲ材料を含み得る。
好ましくは、担体は医薬的に許容可能な担体である。医薬組成物に関して、担体は、考慮中の特定の本発明のＴＣＲ材料のために従来用いられているもののいずれかであり得る。投与できる組成物を調製するための方法は、当業者に公知又は明らかであり、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，第２２版，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｓｓ（２０１２）においてより詳細に記載されている。医薬的に許容可能な担体は、使用条件下で有害な副作用又は毒性を有さないものであることが好ましい。
担体の選択は、特定の本発明のＴＣＲ材料によって、及び本発明のＴＣＲ材料を投与するために用いられる特定の方法によってある程度決定される。従って、多様な、本発明の医薬組成物の好適な製剤がある。好適な製剤としては、非経口、皮下、静脈内、筋肉内、動脈内、髄腔内、腫瘍内及び腹腔内投与のための、いずれかの製剤が挙げられ得る。本発明のＴＣＲ材料を投与するために、１超の経路が用いられ得、特定の例においては、特定の経路が、別の経路よりも迅速且つ効果的な反応をもたらし得る。
好ましくは、本発明のＴＣＲ材料は、注射により、例、静脈内に投与される。本発明のＴＣＲ材料が、本発明のＴＣＲを発現する宿主細胞（その集団を含む）である場合には、注射用の細胞のための医薬的に許容可能な担体としては、任意の等張性の担体、例えば、通常の生理食塩水（水中約０．９０％ ｗ／ｖのＮａＣｌ、水中約３００ｍＯｓｍ／ＬのＮａＣｌ、又は水１リットル当たり約９．０ｇのＮａＣｌ）、ＮＯＲＭＯＳＯＬ Ｒ電解質溶液（Ａｂｂｏｔｔ，Ｃｈｉｃａｇｏ，ＩＬ）、ＰＬＡＳＭＡ－ＬＹＴＥ Ａ（Ｂａｘｔｅｒ，Ｄｅｅｒｆｉｅｌｄ，ＩＬ）、水中約５％のデキストロース、又は乳酸リンゲル液等が挙げられ得る。一実施形態においては、医薬的に許容可能な担体には、ヒト血清アルブミンが補充される。
本発明の目的のためには、投与される本発明のＴＣＲ材料の量又は用量（例、本発明のＴＣＲ材料が１以上の細胞の場合、細胞数）は、被験者又は動物において、適切な期間にわたって、例、治療的又は予防的応答をもたらすのに十分でなければならない。例えば、本発明のＴＣＲ材料の用量は、がん抗原（例えば、Ｇ１２ＤＲＡＳ）と結合するのに、又は、投与時から約２時間以上、例、１２～２４時間以上という期間でがんを検出、治療若しくは予防するのに十分でなければならない。特定の実施形態においては、期間は、もっと長くなり得る。用量は、特定の本発明のＴＣＲ材料の有効性、及び動物（例、ヒト）の状態と、治療する動物（例、ヒト）の体重とによって決定される。
投与される用量を決定するための多くのアッセイが当該技術分野において公知である。本発明の目的のためには、それぞれが異なる用量のＴ細胞を与えられる１組の哺乳動物のうち、１匹の哺乳動物への、ある特定の用量のかかるＴ細胞の投与の際の、本発明のＴＣＲ、ポリペプチド、又はタンパク質を発現するＴ細胞によって標的細胞が溶解される程度、又は、ＩＦＮ－γが分泌される程度を比較することを含むアッセイが、哺乳動物に投与する開始用量を決定するために用いられ得る。一定用量の投与の際の、標的細胞が溶解する程度、又はＩＦＮ－γが分泌される程度は、当該技術分野において公知の方法によってアッセイされ得る。
本発明のＴＣＲ材料の用量は、特定の本発明のＴＣＲ材料の投与に伴い得る任意の有害な副作用の存在、性質及び程度によっても決定される。典型的には、主治医が、年齢、体重、全般的健康、食習慣、性別、投与する本発明のＴＣＲ材料、投与経路、及び治療されるがんの重篤度等、様々な要因を考慮に入れて、各個々の患者を治療するための本発明のＴＣＲ材料の用量を決定する。本発明のＴＣＲ材料が細胞集団である実施形態においては、注入あたりで投与される細胞の数は、例、約１×１０６から約１×１０１２細胞又はより多くまで変動し得る。特定の実施形態においては、１×１０６未満の細胞が投与され得る。
当業者は、本発明のＴＣＲ材料の治療効力又は予防効力が修飾によって増大するよう、本発明のＴＣＲ材料（ｉｎｖｅｎｔｉｖｅ ＴＣＲ ｍａｔｅｒｉａｌｓ ｏｆ ｔｈｅ ｉｎｖｅｎｔｉｏｎ）が、いくつもの形に修飾され得ることを、容易に理解する。例えば、本発明のＴＣＲ材料は、直接的又は化学療法剤への架橋物（ｂｒｉｄｇｅ）を介する間接的のいずれかでコンジュゲート化され得る。化合物を化学療法剤にコンジュゲート化する実務は、当該技術分野において公知である。当業者は、本発明のＴＣＲ材料の機能には必要でない、本発明のＴＣＲ材料における部位が、架橋物及び／又は化学療法剤を結合させるのに好適な部位であると認識する（但し、架橋物及び／又は化学療法剤は、本発明のＴＣＲ材料に結合して、本発明のＴＣＲ材料の機能（即ち、Ｇ１２ＤＲＡＳに結合する能力、又はがんを検出、治療若しくは予防する能力）を妨害しないものとする）。
本発明の医薬組成物、ＴＣＲ、ポリペプチド、タンパク質、核酸、組換え発現ベクター、宿主細胞及び細胞集団が、がんを治療又は予防する方法において用いられ得ることが企図される。特定の理論には縛られないが、本発明のＴＣＲは、Ｇ１２ＤＲＡＳに特異的に結合すると考えられ、その結果、ＴＣＲ（又は関連する本発明のポリペプチド又はタンパク質）が、細胞に発現すると、Ｇ１２ＤＲＡＳを発現する標的細胞に対する免疫反応を調節することができる。これに関して、本発明の実施態様は、哺乳動物におけるがんを治療又は予防する方法であって、本明細書に記載の医薬組成物、ＴＣＲ、ポリペプチド、若しくはタンパク質のいずれか、本明細書に記載のＴＣＲ、ポリペプチド、タンパク質のいずれかをコードするヌクレオチド配列を含む、任意の核酸又は組換え発現ベクター、又は本明細書に記載のＴＣＲ、ポリペプチド若しくはタンパク質のいずれかをコードする組換えベクターを含む、任意の宿主細胞又は細胞集団を、哺乳動物におけるがんを治療又は予防するのに有効な量で、哺乳動物に投与することを含む、方法を提供する。
本発明の実施形態は、哺乳動物において癌に対する免疫応答を誘導する方法であって、本明細書に記載の医薬組成物、ＴＣＲ、ポリペプチド、又はタンパク質のいずれか、本明細書に記載のＴＣＲ、ポリペプチド、又はタンパク質のいずれかをコードするヌクレオチド配列を含む核酸又は組み換え発現ベクターのいずれか、を哺乳動物において癌に対する免疫応答を誘導するのに有効な量で哺乳動物に投与することを含む、方法を提供する。
本発明の一実施形態は、哺乳動物におけるがんの治療又は予防において用いるための、本明細書に記載の医薬組成物、ＴＣＲ、ポリペプチド、若しくはタンパク質のいずれか、本明細書に記載のＴＣＲ、ポリペプチド、タンパク質のいずれかをコードするヌクレオチド配列を含む、任意の核酸若しくは組換え発現ベクター、又は本明細書に記載のＴＣＲ、ポリペプチド、若しくはタンパク質のいずれかをコードする組換えベクターを含む、任意の宿主細胞又は細胞集団を提供する。
本発明の実施形態は、哺乳動物における癌に対する免疫応答の誘導における使用のために、本明細書に記載の医薬組成物、ＴＣＲ、ポリペプチド、又はタンパク質のいずれか、本明細書に記載のＴＣＲ、ポリペプチド、又はタンパク質のいずれかをコードするヌクレオチド配列を含む核酸又は組換え発現ベクターのいずれか、又は本明細書に記載のＴＣＲ、ポリペプチド、又はタンパク質のいずれかをコードする組換えベクターを含む宿主細胞又は細胞の集団のいずれかを提供する。
用語「治療する」及び「予防する」並びにそれらの派生語は、本明細書で用いられる場合、１００％の、又は完全な治療若しくは予防を必ずしも意味しない。むしろ、当業者が潜在的な利益又は治療効果を有すると認識する、様々な程度の治療又は予防が存在する。これに関して、本発明の方法は、任意のレベルの任意の量の、哺乳動物におけるがんの治療又は予防を提供し得る。更に、本発明の方法により提供される治療又は予防は、治療又は予防される１以上の、がんの状態又は症状の治療又は予防を含み得る。例えば、治療又は予防は、腫瘍の退行を促進することを含み得る。また、本明細書における目的のためには、「予防」は、がん、又はその症状若しくは状態の発症を遅延させることを包含し得る。代替的に又は追加的に、「予防」は、がん、又はその症状若しくは状態の再発を予防又は遅延させることを包含し得る。
哺乳動物におけるがんの存在を検出する方法も提供される。該方法は、（ｉ）哺乳動物由来の１以上の細胞を含む試料と、本明細書に記載の、本発明のＴＣＲ、ポリペプチド、タンパク質、核酸、組換え発現ベクター、宿主細胞、細胞集団、又は医薬組成物のいずれかとを接触させ、それにより複合体を形成すること、及び（ｉｉ）該複合体を検出することを含み、該複合体の検出が哺乳動物におけるがんの存在を示す。
本発明の、哺乳動物におけるがんを検出する方法に関して、細胞の試料は、全細胞、その溶解物、又は全細胞溶解物の画分、例、核若しくは細胞質画分、全タンパク質画分、又は核酸画分を含む試料であり得る。
本発明のがんを検出する方法の目的のためには、接触は、哺乳動物に関してインビトロ又はインビボで行い得る。好ましくは、接触はインビトロである。
また、複合体の検出は、当該技術分野で公知の、任意の数の方法によって行われ得る。例えば、本明細書に記載の本発明のＴＣＲ、ポリペプチド、タンパク質、核酸、組換え発現ベクター、宿主細胞、又は細胞集団は、例えば、放射性同位体、蛍光色素（例、フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）、フィコエリトリン（ＰＥ））、酵素（例、アルカリホスファターゼ、セイヨウワサビペルオキシダーゼ）、及び元素粒子（例、金粒子）等の検出可能な標識で標識され得る。
宿主細胞又は細胞集団が投与される、本発明の方法の目的のためには、細胞は、哺乳動物に対して同種異系又は自己の細胞であり得る。好ましくは、細胞は哺乳動物に対して自己である。
本発明の方法に関して、がんは例えば、急性リンパ球性がん、急性骨髄性白血病、肺胞横紋筋肉腫、骨がん、脳がん、乳がん、肛門、肛門管又は肛門直腸のがん、眼のがん、肝内胆管のがん、関節のがん、頸部、胆嚢又は胸膜のがん、鼻、鼻腔、又は中耳のがん、口腔のがん、膣のがん、外陰のがん、慢性リンパ球性白血病、慢性骨髄性がん、結腸がん、結腸直腸がん、子宮内膜がん、食道がん、子宮頸がん、胃腸カルチノイド腫瘍、神経膠腫、ホジキンリンパ腫、下咽頭がん、腎臓がん、喉頭がん、肝臓がん、肺がん、悪性中皮腫、黒色腫、多発性骨髄腫、鼻咽頭がん、非ホジキンリンパ腫、中咽頭のがん、卵巣がん、陰茎のがん、膵臓がん、腹膜がん、大網がん及び腸間膜がん、咽頭がん、前立腺がん、直腸がん、腎臓がん、皮膚がん、小腸がん、軟部組織がん、胃がん、精巣がん、甲状腺がん、子宮のがん、尿管がん及び膀胱がんのいずれかを含む、任意のがんであり得る。好ましいがんは、膵臓がん、結腸直腸がん、肺がん、子宮内膜がん、卵巣がん、又は前立腺がんである。好ましくは、肺がんは肺腺がんであり、卵巣がんは上皮性卵巣がんであり、膵臓がんは膵臓腺がんである。本発明の一実施形態においては、がんは、１２位のグリシンのアスパラギン酸への置換を伴う突然変異ヒトＲＡＳアミノ酸配列であって、突然変異ヒトＫＲＡＳ、突然変異ヒトＨＲＡＳ、又は突然変異ヒトＮＲＡＳのアミノ酸配列であり、１２位は、それぞれ、ＷＴヒトＫＲＡＳ、ＷＴヒトＨＲＡＳ又はＷＴヒトＮＲＡＳタンパク質を参照して定義される、突然変異ヒトＲＡＳアミノ酸配列を発現する。がんによって発現される突然変異ヒトＫＲＡＳ、突然変異ヒトＨＲＡＳ、及び突然変異ヒトＮＲＡＳは、本発明の他の態様に関して本明細書に記載されるとおりであり得る。
本発明の方法において言及される哺乳動物は、任意の哺乳動物であり得る。用語「哺乳動物」は、本明細書で用いられる場合、マウス及びハムスター等、ネズミ目の哺乳動物、及びウサギ等、ウサギ目の哺乳動物を含むが、これらに限定されない、任意の哺乳動物を指す。哺乳動物が、ネコ科の動物（ネコ）及びイヌ科の動物（イヌ）を含むネコ目由来であることが好ましい。哺乳動物が、ウシ科の動物（ウシ）及びイノシシ科の動物（ブタ）を含むウシ目、又はウマ科の動物（ウマ）を含むウマ目（Ｐｅｒｓｓｏｄａｃｔｙｌａ）由来であることが、より好ましい。哺乳動物が、霊長目、セボイド（Ｃｅｂｏｉｄｓ）目若しくはシモイド（Ｓｉｍｏｉｄｓ）目（サル）又は、類人（Ａｎｔｈｒｏｐｏｉｄｓ）目（ヒト及び類人猿）であることが、最も好ましい。特に好ましい哺乳動物は、ヒトである。
以上は、単に実施形態の例示であることに留意されたい。他の例示的な実施形態は、本明細書の説明の全体から明らかである。また、これらの実施形態の各々は、本明細書で提供される他の実施形態と様々に組み合わせて使用することができることも、当業者は理解するであろう。
以下の実施例は、本発明を更に説明するが、もちろん、決してその範囲を限定するものとして解釈すべきではない。
実施例１
本実施例は、Ｇ１２Ｄ突然変異を伴うヒトＫＲＡＳに対して抗原特異性を有するＴＣＲの単離を実証する。
患者４３７３の子宮内膜がんは、ＨＬＡ－Ａ１１拘束性ヒトＫＲＡＳ Ｇ１２Ｄに対する抗原特異性を有するマウスＴＣＲを導入した自家製ＰＢＬによる治療後に進行した。この患者のＴＩＬは、ＫＲＡＳ Ｇ１２Ｄに対する反応性について、以下のようにスクリーニングされた。腫瘍断片番号Ｆ４、Ｆ５、Ｆ６、Ｆ８、Ｆ９、及びＦ１０からのＴＩＬは、以下の標的細胞：
・４３７３野生型（ＷＴ）ＫＲＡＳ ＴＭＧペプチドＭＴＥＹＫＬＶＶＧＡＧＧＶＫＳＡＬＴＩＱＬＩＭＴＥＹＫＬＶＶＧＡＧＧＶＫＳＡＬＴＩＱＬＩＱＥＴＣＬＬＤＩＬＤＴＡＧＱＥＥＹＳＡＭＲＤＱＹＭＲ（配列番号４８）をコードするタンデムミニ遺伝子（ＴＭＧ）でトランスフェクトした自己のＤＣ ｍＲＮＡを有すること。
・４３７３ 変異体（Ｍｕｔ）ＫＲＡＳペプチド：ＭＴＥＹＫＬＶＶＶＧＡＤＧＶＫＳＡＬＴＩＱＬＩＭＴＥＹＫＬＶＶＧＡＶＧＶＫＳＡＬＴＩＱＬＩＭＴＥＹＫＬＶＶＧＡＣＧＶＧＳＡＬＴＩＱＬＩＭＴＥＹＫＬＶＶＧＡＡＧＶＧＳＡＬＴＩＱＬＩＭＴＥＹＫＬＶＶＶＧＳＧＶＧＳＡＬＴＩＱＬＩＭＴＥＹＫＬＶＶＧＡＧＤＶＧＫＳＡＬＴＩＱＬＩＫＭＴＥＹＣＬＶＶＧＡＧＲＶＧＫＳＡＬＴＩＱＬＩＫＭＴＹＣＬＶＧＧＳＡＬＴＩＱＵＥＴＣＬＩＬＤＴＡＧＲＩＹＳＡＭＲＤＩＵＭＴＫＥＹＳＤＩＬＤＳＴＡＧＬＥＹＳＡＭＲＤＱＭＥＴＣＬＩＬＤＴＥＧＥＹＳＤＡＬＤＩＵＭＲＩＣＳＨＹＳＤＡＭＲＱＭＲ（配列番号４９）をコードするＴＭＧをトランスフェクションした自家ＤＣ ｍＲＮＡ；
・Ｇ１２ ＷＴ ＫＲＡＳロングペプチド（ＬＰ）
Figure 2023528112000010
（配列番号２７）；
・Ｇ１２Ｄ Ｍｕｔ ＫＲＡＳ ＬＰ
Figure 2023528112000011
（配列番号２６）；又は
・最小限のＫＲＡＳエピトープ（ＭＥ）Ａ１１（Ｇ１２Ｄ ９マー ＋ １０マー）
Figure 2023528112000012
（配列番号２８）
＋
Figure 2023528112000013
（配列番号２９）
と共培養された。
コントロールとして、導入細胞は、単独で（ＴＩＬのみ）培養するか、又はジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）もしくは抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８ Ｄｙｎａｂｅａｄｓ材料と共培養した。
共培養後のインターフェロンγ（ＩＦＮ－γ）分泌量は、酵素結合免疫吸着スポット（ＥＬＩＳｐｏｔ）法により測定した。その結果を図１Ａに示す。４－１ＢＢ及びＯＸ４０を発現している細胞の割合は、フローサイトメトリーアッセイによって測定された。その結果を図１Ｂに示す。図１Ａ～１Ｂに示すように、抗Ｇ１２Ｄ反応性を有するＴＩＬは、腫瘍断片Ｆ８において検出された。
腫瘍片Ｆ８からのＴＩＬを単一細胞サンプルに分離した。ＨＬＡ－Ａ１１によって提示されるＧ１２Ｄ変異を伴うヒトＫＲＡＳに対する抗原特異性があるＴＣＲがＴＩＬから分離された。反応性４３７３ＴＣＲの配列を決定するために、反応性ＴＩＬは、Ｔ細胞活性化マーカーである４－１ＢＢのアップレギュレーションに基づいて蛍光活性化セルソーティング（ＦＡＣＳ）により選別された。その後、細胞を溶解し、ＴＣＲ転写物をサンガー配列決定した。４３７３ＴＣＲのα鎖及びβ鎖可変領域のアミノ酸配列を表５に示す。ＣＤＲには下線を引いた。
Figure 2023528112000014
実施例２
本実施例は、実施例１のヒト抗Ｇ１２Ｄ ＴＣＲをコードするヌクレオチド配列と、改変されたマウス定常領域とを含むレトロウイルスベクターを調製する方法を示す。
実施例１のヒトＧ１２Ｄ ＲＡＳ反応性４３７３ＴＣＲをコードし、システイン置換されたＬＶＬ修飾マウス定常領域を含む核酸配列を、レトロウイルス発現ベクターにクローニングした。このα鎖マウス定常領域は、４８位のＸがＣｙｓ、１１２位のＸがＬｅｕ、１１４位のＸがＩｌｅ、１１５位のＸがＶａｌである配列番号１７のアミノ酸配列を含む（配列番号３８）。得られた全長α鎖は、配列番号４０のアミノ酸配列を含む。β鎖定常領域は、配列番号１８のアミノ酸配列を含み、５７位のＸはＣｙｓである（配列番号３９）。得られた全長β鎖は、配列番号４１のアミノ酸配列を含む。ＲＡＫＲＳＧＳＧＡＴＮＦＳＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧＰ（配列番号２５）のアミノ酸配列を含むリンカーがα鎖定常領域とβ鎖可変領域との間に配置された。ベクターは、配列番号４７のアミノ酸配列（アミノ末端からカルボキシル末端までＴＣＲβ鎖、リンカー、ＴＣＲα鎖を含むアミノ酸配列）をコードしている、配列番号４６のヌクレオチド配列（５’末端から３’末端まで、ＴＣＲβ鎖、リンカー、ＴＣＲα鎖をコードするコドン最適化ヌクレオチド配列）を含む発現カセットを含んでいた。
実施例３
本実施例は、実施例２の抗Ｇ１２Ｄ ＴＣＲ（ヒト可変領域を有する）が、実施例１のマウス抗Ｇ１２Ｄ ＴＣＲと同じかそれ以上の反応性を提供することことを実証する。
患者４３７３のＣＤ８＋自己ＰＢＬを、（ｉ）実施例２のＧ１２Ｄ ＲＡＳ反応性４３７３ＴＣＲ（ヒト可変領域を有する）（本明細書では「ＴＣＲ２」とも称する）、（ｉｉ）図１に示す反応性ＴＩＬの単細胞配列決定によっても得られた第２のＴＣＲ（本明細書では「ＴＣＲ１」と称する）、又は（ｉｉｉ）実施例１のＨＬＡ－Ａ１１拘束性マウス抗ＫＲＡＳ Ｇ１２Ｄ ＴＣＲ（コントロール）をコードするレトロウイルス発現ベクターで形質転換した。ＣＤ８＋形質転換細胞の反応性は、以下の標的細胞：
・ＣＯＳ ＨＬＡ－Ａ２導入細胞、
・ＣＯＳ ＨＬＡ－Ａ２－Ｇ１２ ＷＴ ＫＲＡＳ細胞株、
・ＣＯＳ ＨＬＡ－Ａ１１導入細胞、
・ＣＯＳ ＨＬＡ－Ａ１１－Ｇ１２Ｄ細胞株、又は
・Ｔ細胞のみ（標的細胞なし）（－）
との共培養後に試験した。
標的細胞との共培養後、４－１ＢＢ及びＯＸ４０を発現している細胞の割合を測定した。その結果を図２に示す。また、形質導入された細胞は、ＨＬＡ－Ａ１１最小エピトープ滴定実験を行った。
別の実験において、患者４３７３の自己ＣＤ８＋ＰＢＬを、（ｉ）実施例２のＧ１２Ｄ ＲＡＳ反応性４３７３ＴＣＲ（ヒト可変領域を有する）、（ｉｉ）ＴＣＲ１、（ｉｉｉ）実施例１のＨＬＡ－Ａ１１拘束性マウス抗ＫＲＡＳ Ｇ１２Ｄ ＴＣＲ、又は（ｉｖ）ＧＦＰをコードするレトロウイルス発現ベクターでトランスフェクトさせた。空ベクターで形質導入した細胞（「モックＴｄ」（Ｔｄ＝Ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ））は、追加のコントロールとして機能した。ＣＤ８＋形質導入細胞の反応性は、以下の標的細胞：
・完全長（ＦＬ）ＷＴ ＫＲＡＳ遺伝子で形質転換した自己樹状細胞（ＤＣ）；
・Ｇ１２Ｄ変異を有するＦＬ ＫＲＡＳ遺伝子を導入した自家ＤＣ；
・ＷＴ ＫＲＡＳ ＬＰ
Figure 2023528112000015
（配列番号２７）で形質転換した自己のＤＣ；
・Ｇ１２Ｄ Ｍｕｔ ＫＲＡＳ ＬＰ
Figure 2023528112000016
（配列番号２６）で形質転換した自己のＤＣ；
・最小ＫＲＡＳエピトープ（ＭＥ）Ａ０２ ＷＴ；
・Ｍｅ Ａ０２ Ｇ１２Ｄ
Figure 2023528112000017
（配列番号５０）；
・ＭＥ ＨＬＡ－Ａ１１ ＷＴミックス（ＷＴ ９マーの配列番号３０及びＷＴ １０マーの配列番号３１のペプチドの混合物）；又は
・ＭＥ ＨＬＡ－Ａ１１ Ｇ１２Ｄ ｍｉｘ（Ｇ１２Ｄ ９マーの配列番号２８及びＧ１２Ｄ１０マーの配列番号２９のペプチドの混合物）
との共培養の後に試験した。
コントロールとして、導入した細胞を単独培養（Ｔ細胞のみ）、又はＤＭＳＯ又は抗ＣＤ２８／抗ＣＤ３ ＤＹＮＡＢＥＡＤＳ物質と共培養した。ＩＦＮ－γの分泌量は、ＥＬＩＳｐｏｔで測定した。結果を図３Ａ及び表６に示す。４－１ＢＢ及びＯＸ４０を発現している細胞の割合を測定した。その結果を図３Ｂに示す。
Figure 2023528112000018
別の実験において、患者４３７３の自己ＰＢＬを、（ｉ）実施例２の（ヒト可変領域を有する）Ｇ１２Ｄ ＲＡＳ反応性４３７３ＴＣＲ又は（ｉｉ）実施例１のＨＬＡ－Ａ１１拘束性マウス抗ＫＲＡＳ Ｇ１２Ｄ ＴＣＲをコードするレトロウイルス発現ベクターでトランスフェクトさせた。
自己ＤＣに、表７に示す濃度で以下のペプチド：
９アミノ酸残基を有する変異ミニマル・エピトープ（ＭＥ）ペプチド
Figure 2023528112000019
（配列番号２８）、
１０アミノ酸残基
Figure 2023528112000020
（配列番号２９）を有する変異ミニマルエピトープペプチド、
９アミノ酸残基
Figure 2023528112000021
（配列番号３０）を有するＷＴミニマルエピトープペプチド、又は
１０アミノ酸残基
Figure 2023528112000022
（配列番号３１）を有するＷＴミニマルエピトープペプチド
を負荷した。ＩＦＮ－γの分泌量はＥＬＩＳｐｏｔで測定した。その結果を表７に示す。
Figure 2023528112000023
図２～３Ｂ及び表６～７に示すように、実施例２の（ヒト可変領域を有する）抗Ｇ１２Ｄ ＴＣＲは、実施例１のマウス抗Ｇ１２Ｄ ＴＣＲと同じかそれ以上の反応性を提供した。
実施例４
本実施例は、実施例２の（ヒト可変領域を有する）抗Ｇ１２Ｄ ＴＣＲを導入したＰＢＬが、ＨＬＡ－Ａ１１拘束性Ｇ１２Ｄを高いアビディティで特異的に認識することを実証する。
患者４３７３の自己ＰＢＬを、実施例２の（ヒト可変領域を有する）Ｇ１２Ｄ ＲＡＳ反応性４３７３ＴＣＲをコードするレトロウイルス発現ベクターで形質転換した。
自己ＤＣに、図４Ａに示す濃度の以下のペプチド：１０アミノ酸残基を有する変異最小エピトープペプチド
Figure 2023528112000024
（配列番号２９）又は
１０アミノ酸残基を有するＷＴ最小エピトープペプチド
Figure 2023528112000025
（配列番号３１）を負荷した。ＩＦＮ－γの分泌はＥＬＩＳｐｏｔで測定した。その結果を図４Ａに示す。
実施例５
本実施例は、実施例２の（ヒト可変領域を有する）抗Ｇ１２Ｄ ＴＣＲを導入したＣＤ８＋ ＰＢＬが、ＨＬＡ－Ａ１１拘束性Ｇ１２Ｄを高いアビディティで特異的に認識することを実証する。
患者４３７３の自己ＣＤ８＋ＰＢＬを、実施例２の（ヒト可変領域を有する）Ｇ１２Ｄ ＲＡＳ反応性４３７３ＴＣＲをコードするレトロウイルス発現ベクターで形質転換した。
自己ＤＣに、図４Ｂに示す濃度の以下のペプチド：１０アミノ酸残基を有する変異最小エピトープペプチド
Figure 2023528112000026
（配列番号２９）又は
１０アミノ酸残基を有するＷＴ最小エピトープペプチド
Figure 2023528112000027
（配列番号３１）
を負荷した。４－１ＢＢ及びＯＸ４０の発現を、ＦＡＣＳによって測定した。その結果を図４Ｂに示す。
実施例６
本実施例は、実施例２の（ヒト可変領域を有する）抗Ｇ１２Ｄ ＴＣＲで形質転換されたＣＤ４＋ ＰＢＬが、ＨＬＡ－Ａ１１拘束性Ｇ１２Ｄを高いアビディティで特異的に認識することを実証している。
患者４３７３の自己ＣＤ４＋ ＰＢＬを、実施例２の（ヒト可変領域を有する）Ｇ１２Ｄ ＲＡＳ反応性４３７３ＴＣＲをコードするレトロウイルス発現ベクターで形質転換した。
自己ＤＣに、図４Ｃに示す濃度の以下のペプチド：１０アミノ酸残基を有する変異最小エピトープペプチド
Figure 2023528112000028
（配列番号２９）又は
１０アミノ酸残基を有するＷＴ最小エピトープペプチド
Figure 2023528112000029
（配列番号３１）を負荷した。４－１ＢＢ及びＯＸ４０の発現を、ＦＡＣＳによって測定した。その結果を図４Ｃに示す。
実施例７
本実施例は、実施例２の（ヒト可変領域を有する）抗Ｇ１２Ｄ ＴＣＲを導入したＣＤ８＋ ＰＢＬが、ＨＬＡ－Ａ１１拘束性Ｇ１２Ｄを高いアビディティで特異的に認識することを実証する。
患者４３７３の自己ＣＤ８＋ＰＢＬを、実施例２の（ヒト可変領域を有する）Ｇ１２Ｄ ＲＡＳ反応性４３７３ＴＣＲをコードするレトロウイルス発現ベクターで形質転換した。
ＣＯＳ細胞に、図５Ａに示す濃度の以下のペプチド：１０アミノ酸残基を有する変異最小エピトープペプチド
Figure 2023528112000030
（配列番号２９）又は１０アミノ酸残基を有するＷＴ最小エピトープペプチド
Figure 2023528112000031
（配列番号３１）を負荷した。ＩＦＮ－γの分泌をＥＬＩＳｐｏｔで測定した。その結果を図５Ａに示す。
実施例８
本実施例は、実施例２の（ヒト可変領域を有する）抗Ｇ１２Ｄ ＴＣＲを導入したＣＤ８＋ ＰＢＬが、ＨＬＡ－Ａ１１拘束性のＧ１２Ｄを高いアビディティで特異的に認識することを実証する。
患者４３７３の自己ＣＤ８＋ＰＢＬを、実施例２の（ヒト可変領域を有する）Ｇ１２Ｄ ＲＡＳ反応性４３７３ＴＣＲをコードするレトロウイルス発現ベクターで形質転換した。
ＣＯＳ細胞をＨＬＡ－Ａ１１で形質転換し、図５Ｂに示す濃度で以下のペプチド：１０アミノ酸残基を有する変異最小エピトープペプチド
Figure 2023528112000032
（配列番号２９）又は
１０アミノ酸残基を有するＷＴ最小エピトープペプチド
Figure 2023528112000033
（配列番号３１）を負荷した。４－１ＢＢ及びＯＸ４０の発現を、ＦＡＣＳによって測定した。その結果を図５Ｂに示す。
実施例９
本実施例は、実施例２の（ヒト可変領域を有する）抗Ｇ１２Ｄ ＴＣＲで形質転換されたＣＤ４＋ ＰＢＬが、ＨＬＡ－Ａ１１拘束性のＧ１２Ｄを高いアビディティで特異的に認識することを実証する。
患者４３７３の自己ＣＤ４＋ ＰＢＬを、実施例２の（ヒト可変領域を有する）Ｇ１２Ｄ ＲＡＳ反応性４３７３ＴＣＲをコードするレトロウイルス発現ベクターで形質転換した。
ＣＯＳ細胞に、図５Ｃに示す濃度の以下のペプチド：１０アミノ酸残基を有する変異最小エピトープペプチド
Figure 2023528112000034
（配列番号２９）又は
１０アミノ酸残基を有するＷＴ最小エピトープペプチド
Figure 2023528112000035
（配列番号３１）を負荷した。４－１ＢＢ及びＯＸ４０の発現を、ＦＡＣＳによって測定した。その結果を図５Ｃに示す。
刊行物、特許出願及び特許を含む、本明細書に引用したすべての参考文献は、それぞれの参考文献が参照によって組込まれることが個々に且つ具体的に示されているのと同程度及びその全体が本明細書に記載されているのと同程度まで、参照によって本明細書に組込まれる。
本発明の説明に関して（特に、以下の特許請求の範囲に関して）、用語「ａ」及び「ａｎ」及び「ｔｈｅ」及び「少なくとも１」並びに同様の指示対象の使用は、本明細書に特記しないか文脈と明らかに矛盾しない限り、単数形及び複数形の両方をカバーすると解釈すべきである。１以上の事項の列挙の後での用語「少なくとも１」の使用（例えば、「Ａ及びＢのうち少なくとも１」）は、本明細書に特記しないか又は文脈と明らかに矛盾しない限り、列挙した事項から選択された１の事項（Ａ若しくはＢ）又は列挙した事項のうち２以上の任意の組合せ（Ａ及びＢ）を意味すると解釈すべきである。用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「有する（ｈａｖｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」及び「含有する（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」は、特記しない限り、オープンエンドの用語（即ち、「～を含むがそれらに限定されない」を意味する）と解釈すべきである。本明細書の値の範囲の記述は、本明細書に特記しない限り、その範囲内に入る各個別の値に個々に言及する省略方法として働くことのみを意図しており、各個別の値は、それが本明細書に個々に記述されているかのように本明細書に組込まれる。本明細書に記載のすべての方法は、本明細書に特記しないか又は文脈と特に明らかに矛盾しない限り、任意の好適な順序で実施できる。本明細書に提供される任意の及びすべての例又は例示的語句（例、「等（ｓｕｃｈ ａｓ）」）の使用は、本発明をよりよく説明することのみを意図しており、特段特許請求されない限り、本発明の範囲に限定を課すものではない。本明細書のすべての語句は、特許請求されていない任意の要素を本発明の実施に必須のものとして示していると解釈すべきではない。
発明を実施するための、発明者が知る最良の形態を含む、本発明の好ましい実施形態が本明細書に記載される。これらの好ましい実施形態のバリエーションは、上述の説明を読めば当業者に明らかとなり得る。本発明者らは、当業者がかかるバリエーションを適宜使用することを予期しており、本発明者らは、本明細書に具体的に記載されたのとは異なる方法で本発明が実施されることを意図している。従って、本発明は、適用法によって許容されるとおり、本明細書に添付した特許請求の範囲に記載の主題のすべての改変及び均等物を含む。更に、そのすべての可能なバリエーションでの上記要素の任意の組合せが、本明細書に特記しないか又は文脈と特に明らかに矛盾しない限り、本発明によって包含される。

Claims (50)

  1. 配列番号１～３のすべて、配列番号４～６のすべて、又は配列番号１～６のすべてのアミノ酸配列を含む単離又は精製されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）であって、
    ＴＣＲが、１２位のグリシンのアスパラギン酸への置換を伴う突然変異ヒトＲＡＳアミノ酸配列に対して抗原特異性を有し、
    突然変異ヒトＲＡＳアミノ酸配列が、突然変異ヒトキルステンラット肉腫ウイルスがん遺伝子ホモログ（ＫＲＡＳ）、突然変異ヒトハーベイラット肉腫ウイルスがん遺伝子ホモログ（ＨＲＡＳ）、又は突然変異ヒト神経芽腫ラット肉腫ウイルスがん遺伝子ホモログ（ＮＲＡＳ）のアミノ酸配列であり、
    １２位は、それぞれ、野生型ヒトＫＲＡＳ、野生型ヒトＨＲＡＳ、又は野生型ヒトＮＲＡＳタンパク質を基準にして定義される、ＴＣＲ。
  2. 前記突然変異ヒトＲＡＳアミノ酸配列はＶＶＶＧＡＤＧＶＧＫ（配列番号２９）である、請求項１に記載の単離又は精製されたＴＣＲ。
  3. 前記ＴＣＲは、ＶＶＶＧＡＧＧＶＧＫ（配列番号３１）の野生型ヒトＲＡＳアミノ酸配列に対する抗原特異性がない、請求項１又は２に記載の単離又は精製されたＴＣＲ。
  4. 前記突然変異ヒトＲＡＳアミノ酸配列はヒト白血球抗原（ＨＬＡ）クラスＩ分子によって提示される、請求項１～３のいずれか１項に記載の単離又は精製されたＴＣＲ。
  5. 前記ＨＬＡクラスＩ分子はＨＬＡ－Ａ分子である、請求項４に記載の単離又は精製されたＴＣＲ。
  6. 前記ＨＬＡクラスＩ分子はＨＬＡ－Ａ１１分子である、請求項４に記載の単離又は精製されたＴＣＲ。
  7. 前記ＨＬＡクラスＩ分子はＨＬＡ－Ａ＊１１：０１遺伝子座にコードされる、請求項４に記載の単離又は精製されたＴＣＲ。
  8. （ｉ）配列番号７のアミノ酸配列との同一性が少なくとも９９％あるアミノ酸配列；
    （ｉｉ）配列番号８のアミノ酸配列との同一性が少なくとも９９％あるアミノ酸配列；
    （ｉｉｉ）配列番号５１のアミノ酸配列との同一性が少なくとも９９％あるアミノ酸配列；
    （ｉｖ）配列番号５２のアミノ酸配列との同一性が少なくとも９９％あるアミノ酸配列；
    （ｖ）配列番号３２のアミノ酸配列との同一性が少なくとも９９％あるアミノ酸配列；
    （ｖｉ）配列番号３３のアミノ酸配列との同一性が少なくとも９９％あるアミノ酸配列；
    （ｖｉｉ）配列番号５９のアミノ酸配列との同一性が少なくとも９９％あるアミノ酸配列、
    （ｖｉｉｉ）配列番号６０のアミノ酸配列との同一性が少なくとも９９％あるアミノ酸配列；
    （ｉｘ）（ｉ）及び（ｉｉ）の両方、（ｉ）及び（ｉｖ）の両方、（ｉｉ）及び（ｉｉｉ）の両方、（ｉｉｉ）及び（ｉｖ）の両方、（ｖ）及び（ｖｉ）の両方、（ｖ）及び（ｖｉｉｉ）の両方、（ｖｉ）及び（ｖｉｉ）の両方、又は（ｖｉｉ）及び（ｖｉｉｉ）の両方
    含む、請求項１～７のいずれか１項に記載の単離又は精製されたＴＣＲ。

  9. （ｉ）配列番号７のアミノ酸配列；（ｉｉ）配列番号９のアミノ酸配列；（ｉｉｉ）配列番号５１のアミノ酸配列；（ｉｖ）配列番号５２のアミノ酸配列；
    （ｖ）配列番号３２のアミノ酸配列；
    （ｖｉ）配列番号３３のアミノ酸配列；
    （ｖｉｉ）配列番号５９のアミノ酸配列；
    （ｖｉｉｉ）配列番号６０のアミノ酸配列；
    （ｉｘ）（ｉ）及び（ｉｉ）の両方、（ｉ）及び（ｉｖ）の両方、（ｉｉ）及び（ｉｉｉ）の両方、（ｉｉｉ）及び（ｉｖ）の両方、（ｖ）及び（ｖｉ）の両方、（ｖ）及び（ｖｉｉｉ）の両方、（ｖｉ）及び（ｖｉｉ）の両方、又は（ｖｉｉ）及び（ｖｉｉｉ）の両方
    を含む、請求項１～８のいずれか１項に記載の単離又は精製されたＴＣＲ。
  10. （ａ）配列番号１７のアミノ酸配列との同一性が少なくとも９９％のアミノ酸配列を含むα鎖定常領域であって：
    （ｉ）配列番号１７の４８位のＸがＴｈｒ又はＣｙｓであり；
    （ｉｉ）配列番号１７の１１２位のＸが、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、又はＴｒｐであり；
    （ｉｉｉ）配列番号１７の１１４位のＸが、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、又はＴｒｐであり；及び
    （ｉｖ）配列番号１７の１１５位のＸが、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、又はＴｒｐである、α鎖定常領域；
    （ｂ）配列番号１８のアミノ酸配列との同一性が少なくとも９９％のアミノ酸配列を含むβ鎖定常領域であって、配列番号１８の５７位のＸが、Ｓｅｒ又はＣｙｓである、β鎖定常領域；又は
    （ｃ）（ａ）及び（ｂ）の両方
    を含む、請求項１～９のいずれか１項に記載の単離又は精製されたＴＣＲ。
  11. 請求項１～１０のいずれか１項に記載の単離又は精製されたＴＣＲであって、
    （ａ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むα鎖定常領域であって：
    （ｉ）配列番号１７の４８位のＸが、Ｔｈｒ又はＣｙｓであり；
    （ｉｉ）配列番号１７の１１２位のＸが、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、又はＴｒｐであり；
    （ｉｉｉ）配列番号１７の１１４位のＸが、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、又はＴｒｐであり５１のアミノ酸配列；及び
    （ｉｖ）配列番号１７の１１５位のＸが、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、又はＴｒｐである、α鎖定常領域５２のアミノ酸配列
    である、α鎖定常領域；
    （ｂ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むβ鎖定常領域であって、配列番号１８の５７位のＸが、Ｓｅｒ又はＣｙｓである、β鎖定常領域；又は
    （ｃ）（ａ）及び（ｂ）の両方
    を含む、単離又は精製されたＴＣＲ。
  12. 請求項１～１１のいずれか１項に記載の単離又は精製されたＴＣＲであって、
    （ａ）配列番号２１のアミノ酸配列との同一性が少なくとも９９％のアミノ酸配列を含むα鎖であって、ここで
    （ｉ）配列番号２１の１９３位のＸは、Ｔｈｒ又はＣｙｓであり；
    （ｉｉ）配列番号２１の２５７位のＸは、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、又はＴｒｐであり；
    （ｉｉｉ）配列番号２１の２５９位のＸは、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、又はＴｒｐであり；及び
    （ｉｖ）配列番号２１の２６０位のＸは、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、又はＴｒｐであり；
    （ｂ）配列番号２２のアミノ酸配列との同一性が少なくとも９９％のアミノ酸配列を含むβ鎖であって、配列番号 ２２の１９１位のＸがＳｅｒ又はＣｙｓであり；
    （ｃ）配列番号５３のアミノ酸配列との同一性が少なくとも９９％のアミノ酸配列を含むα鎖であって、ここで
    （ｉ）配列番号５３の１９３位のＸは、Ｔｈｒ又はＣｙｓであり；
    （ｉｉ）配列番号５３の２５７位のＸは、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、又はＴｒｐであり；
    （ｉｉｉ）配列番号５３の２５９位のＸは、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、又はＴｒｐであり；及び
    （ｉｖ）配列番号５３の２６０位のＸは、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、又はＴｒｐであり；
    （ｄ）配列番号５４のアミノ酸配列との同一性が少なくとも９９％のアミノ酸配列を含むβ鎖であって、配列番号 ５４の１９１位のＸがＳｅｒ又はＣｙｓであり；
    （ｅ）（ａ）及び（ｂ）の両方、（ａ）及び（ｄ）の両方、（ｂ）及び（ｃ）の両方、又は（ｃ）及び（ｄ）の両方；
    （ｆ）配列番号３４のアミノ酸配列との同一性が少なくとも９９％のアミノ酸配列を含むα鎖であり、ここで、
    （ｉ）配列番号３４の１６５位のＸは、Ｔｈｒ又はＣｙｓであり；
    （ｉｉ）配列番号３４の２２９位のＸは、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、又はＴｒｐであり；
    （ｉｉｉ）配列番号３４の２３１位のＸは、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、又はＴｒｐであり；及び
    （ｉｖ）配列番号３４の２３２位のＸは、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、又はＴｒｐであり；
    （ｇ）配列番号３５のアミノ酸配列との同一性が少なくとも９９％のアミノ酸配列を含むβ鎖であって、配列番号 ３５の１７２位のＸがＳｅｒ又はＣｙｓであり；
    （ｈ）配列番号６１のアミノ酸配列との同一性が少なくとも９９％のアミノ酸配列を含むα鎖であって、ここで、
    （ｉ）配列番号６１の１７２位のＸは、Ｔｈｒ又はＣｙｓであり；
    （ｉｉ）配列番号６１の２３６位のＸは、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、又はＴｒｐであり；
    （ｉｉｉ）配列番号６１の２３８位のＸは、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、又はＴｒｐであり；及び
    （ｉｖ）配列番号６１の２３９位のＸは、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、又はＴｒｐであり；
    （ｉ）配列番号６２のアミノ酸配列との同一性が少なくとも９９％のアミノ酸配列を含むβ鎖であって、配列番号６２の１７０位のＸがＳｅｒ又はＣｙｓである、β鎖；
    （ｊ）（ｆ）及び（ｇ）の両方、又は（ｈ）及び（ｉ）の両方；
    （ｋ）配列番号３６のアミノ酸配列との同一性が少なくとも９９％のアミノ酸配列を含むα鎖；
    （ｌ）配列番号３７のアミノ酸配列との同一性が少なくとも９９％のアミノ酸配列を含むβ鎖；
    （ｍ）配列番号６３のアミノ酸配列との同一性が少なくとも９９％のアミノ酸配列を含むα鎖；
    （ｎ）配列番号６４のアミノ酸配列との同一性が少なくとも９９％のアミノ酸配列を含むβ鎖；
    （ｏ）配列番号４２のアミノ酸配列との同一性が少なくとも９９％のアミノ酸配列を含むα鎖；
    （ｐ）配列番号４３のアミノ酸配列との同一性が少なくとも９９％のアミノ酸配列を含むβ鎖；
    （ｑ）配列番号６５のアミノ酸配列との同一性が少なくとも９９％のアミノ酸配列を含むα鎖；
    （ｒ）配列番号６６のアミノ酸配列との同一性が少なくとも９９％のアミノ酸配列を含むβ鎖；
    （ｓ）（ｋ）及び（ｌ）の両方、（ｍ）及び（ｎ）の両方、（ｏ）及び（ｐ）の両方、又は（ｑ）及び（ｒ）の両方；
    （ｔ）配列番号２３のアミノ酸配列との同一性が少なくとも９９％のアミノ酸配列を含むα鎖；
    （ｕ）配列番号２４のアミノ酸配列との同一性が少なくとも９９％のアミノ酸配列を含むβ鎖；
    （ｖ）配列番号５５のアミノ酸配列との同一性が少なくとも９９％のアミノ酸配列を含むα鎖；
    （ｗ）配列番号５６のアミノ酸配列との同一性が少なくとも９９％のアミノ酸配列を含むβ鎖；
    （ｘ）配列番号４０のアミノ酸配列との同一性が少なくとも９９％のアミノ酸配列を含むα鎖；
    （ｙ）配列番号４１のアミノ酸配列との同一性が少なくとも９９％のアミノ酸配列を含むβ鎖；
    （ｚ）配列番号５７のアミノ酸配列との同一性が少なくとも９９％のアミノ酸配列を含むα鎖；
    （ａａ）配列番号５８のアミノ酸配列との同一性が少なくとも９９％であるアミノ酸配列を含むβ鎖；又は
    （ａｂ）（ｔ）及び（ｕ）の両方、（ｔ）及び（ｗ）の両方、（ｕ）及び（ｖ）の両方、（ｖ）及び（ｗ）の両方、（ｘ）及び（ｙ）の両方、（ｘ）及び（ａａ）の両方、（ｙ）及び（ｚ）の両方、又は（ｚ）及び（ａａ）の両方；
    を含む、単離又は精製されたＴＣＲ。
  13. 請求項１～１２のいずれか１項に記載の単離又は精製ＴＣＲであって、
    （ａ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むα鎖であって、ここで、
    （ｉ）配列番号２１の１９３位のＸは、Ｔｈｒ又はＣｙｓであり；
    （ｉｉ）配列番号２１の２５７位のＸは、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、又はＴｒｐであり；
    （ｉｉｉ）配列番号２１の２５９位のＸは、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、又はＴｒｐであり；及び
    （ｉｖ）配列番号２１の２６０位のＸは、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、又はＴｒｐであり；
    （ｂ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むβ鎖であって、配列番号２２の１９１位のＸがＳｅｒ又はＣｙｓである、β鎖；
    （ｃ）配列番号５３のアミノ酸配列を含むα鎖であって、ここで
    （ｉ）配列番号２１の１９３位のＸはＴｈｒ又はＣｙｓであり；
    （ｉｉ）配列番号２１の２５７位のＸは、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、又はＴｒｐであり；
    （ｉｉｉ）配列番号２１の２５９位のＸは、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、又はＴｒｐであり；及び
    （ｉｖ）配列番号２１の２６０位のＸは、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、又はＴｒｐであり；
    （ｄ）配列番号５４のアミノ酸配列を含むβ鎖であって、配列番号５４の１９１位のＸがＳｅｒ又はＣｙｓである、β鎖；
    （ｅ）（ａ）及び（ｂ）の両方、（ａ）及び（ｄ）の両方、（ｂ）及び（ｃ）の両方、又は（ｃ）及び（ｄ）の両方；
    （ｆ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むα鎖であって、ここで、
    （ｉ）配列番号３４の１６５位のＸは、Ｔｈｒ又はＣｙｓであり；
    （ｉｉ）配列番号３４の２２９位のＸは、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、又はＴｒｐであり；
    （ｉｉｉ）配列番号３４の２３１位のＸは、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、又はＴｒｐであり；及び
    （ｉｖ）配列番号３４の２３２位のＸは、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、又はＴｒｐであり；
    （ｇ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むβ鎖であって、配列番号３５の１７２位のＸがＳｅｒ又はＣｙｓであり；
    （ｈ）配列番号６１のアミノ酸配列を含むα鎖であって、ここで、
    （ｉ）配列番号６１の１７２位のＸは、Ｔｈｒ又はＣｙｓであり；
    （ｉｉ）配列番号６１の２３６位のＸは、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、又はＴｒｐであり；
    （ｉｉｉ）配列番号６１の２３８位のＸは、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、又はＴｒｐであり；及び
    （ｉｖ）配列番号６１の２３９位のＸは、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、又はＴｒｐであり；
    （ｉ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むβ鎖であって、配列番号６２の１７０位のＸがＳｅｒ又はＣｙｓである、β鎖；
    （ｊ）（ｆ）及び（ｇ）の両方、又は（ｈ）及び（ｉ）の両方；
    （ｋ）配列番号３６のアミノ酸配列を含むα鎖；
    （ｌ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むβ鎖；
    （ｍ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むα鎖；
    （ｎ）配列番号６４のアミノ酸配列を含むβ鎖；
    （ｏ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むα鎖；
    （ｐ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むβ鎖；
    （ｑ）配列番号６５のアミノ酸配列を含むα鎖；
    （ｒ）配列番号６６のアミノ酸配列を含むβ鎖；
    （ｓ）（ｋ）及び（ｌ）の両方、（ｍ）及び（ｎ）の両方、（ｏ）及び（ｐ）の両方、又は（ｑ）及び（ｒ）の両方；
    （ｔ）配列番号２３のアミノ酸配列を含むα鎖；
    （ｕ）配列番号２４のアミノ酸配列を含むβ鎖；
    （ｖ）配列番号５５のアミノ酸配列を含むα鎖；
    （ｗ）配列番号５６のアミノ酸配列を含むβ鎖；
    （ｘ）配列番号４０のアミノ酸配列を含むα鎖；
    （ｙ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むβ鎖；
    （ｚ）配列番号５７のアミノ酸配列を含むα鎖；
    （ａａ）配列番号５８のアミノ酸配列を含むβ鎖；又は
    （ａｂ）（ｔ）及び（ｕ）の両方、（ｔ）及び（ｗ）の両方、（ｕ）及び（ｖ）の両方、（ｖ）及び（ｗ）の両方、（ｘ）及び（ｙ）の両方、（ｘ）及び（ａａ）の両方、（ｙ）及び（ｚ）の両方、又は、（ｚ）及び（ａａ）の両方
    を含む、単離又は精製ＴＣＲ。
  14. 請求項１～１３のいずれか１項に記載のＴＣＲの機能的部分を含む、単離又は精製ポリペプチドであって、
    該機能的部分が：
    （ａ）配列番号１～３のすべて、
    （ｂ）配列番号４～６のすべて、又は
    （ｃ）配列番号１～６のすべて
    のアミノ酸配列を含む、単離又は精製ポリペプチド。
  15. 請求項１４に記載の単離又は精製ポリペプチドであって、前記機能的部分が、
    （ｉ）配列番号７のアミノ酸配列との同一性が少なくとも９９％のアミノ酸配列；
    （ｉｉ）配列番号８のアミノ酸配列との同一性が少なくとも９９％のアミノ酸配列；
    （ｉｉｉ）配列番号５１のアミノ酸配列との同一性が少なくとも９９％のアミノ酸配列；
    （ｉｖ）配列番号５２のアミノ酸配列との同一性が少なくとも９９％のアミノ酸配列；
    （ｖ）配列番号３２のアミノ酸配列との同一性が少なくとも９９％のアミノ酸配列；
    （ｖｉ）配列番号３３のアミノ酸配列との同一性が少なくとも９９％のアミノ酸配列；
    （ｖｉｉ）配列番号５９のアミノ酸配列との同一性が少なくとも９９％のアミノ酸配列；
    （ｖｉｉｉ）配列番号６０のアミノ酸配列との同一性が少なくとも９９％のアミノ酸配列；又は
    （ｉｘ）（ｉ）及び（ｉｉ）の両方、（ｉ）及び（ｉｖ）の両方、（ｉｉ）及び（ｉｉｉ）の両方、（ｉｉｉ）及び（ｉｖ）の両方、（ｖ）及び（ｖｉ）の両方、（ｖ）及び（ｖｉｉ）の両方、（ｖｉ）及び（ｖｉｉｉ）の両方または（ｖｉｉ）及び（ｖｉｉｉ）の両方
    を含む、単離又は精製ポリペプチド。
  16. 請求項１４又は１５に記載の単離又は精製ポリペプチドであって、前記機能的部分が：
    （ｉ）配列番号７；
    （ｉｉ）配列番号８；
    （ｉｉｉ）配列番号５１；
    （ｉｖ）配列番号５２；
    （ｖ）配列番号３２；
    （ｖｉ）配列番号３３；
    （ｖｉｉ）配列番号５９；
    （ｖｉｉｉ）配列番号６０；又は
    （ｉｘ）（ｉ）及び（ｉｉ）の両方、（ｉ）及び（ｉｖ）の両方、（ｉｉ）及び（ｉｉｉ）の両方、（ｉｉｉ）及び（ｉｖ）の両方、（ｖ）及び（ｖｉ）の両方、（ｖ）及び（ｖｉｉ）の両方、又は（ｖｉｉ）及び（ｖｉｉｉ）の両方；
    のアミノ酸配列を含む、単離又は精製ポリペプチド。
  17. 請求項１４～１６のいずれか１項に記載の単離又は精製ポリペプチドであって、
    更に：
    （ａ）配列番号１７のアミノ酸配列との同一性が少なくとも９９％のアミノ酸配列、ここで；
    （ｉ）配列番号１７の４８位のＸは、Ｔｈｒ又はＣｙｓであり；
    （ｉｉ）配列番号１７の１１２位のＸは、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、又はＴｒｐであり；
    （ｉｉｉ）配列番号１７の１１４位のＸは、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、又はＴｒｐであり；及び
    （ｉｖ）配列番号１７の１１５位のＸは、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、又はＴｒｐであり；
    （ｂ）配列番号１８のアミノ酸配列との同一性が少なくとも９９％のアミノ酸配列であって、配列番号１８の５７位のＸがＳｅｒ又はＣｙｓであるアミノ酸配列；又は
    （ｃ）（ａ）及び（ｂ）の両方；
    を含む、単離又は精製ポリペプチド。
  18. （ａ）配列番号１７のアミノ酸配列であって、以下：
    （ｉ）配列番号１７の４８位のＸは、Ｔｈｒ又はＣｙｓであり；
    （ｉｉ）配列番号１７の１１２位のＸは、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、又はＴｒｐであり；
    （ｉｉｉ）配列番号１７の１１４位のＸは、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、又はＴｒｐであり；及び
    （ｉｖ）配列番号１７の１１５位のＸは、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、又はＴｒｐであり；
    （ｂ）配列番号１８のアミノ酸配列であって、配列番号１８の５７位のＸがＳｅｒ又はＣｙｓである、アミノ酸配列；又は
    （ｃ）（ａ）及び（ｂ）の両方；
    を更に含む、請求項１４～１７のいずれか１項に記載の単離又は精製ポリペプチド。
  19. 請求項１４～１８のいずれか１項に記載の単離又は精製ポリペプチドであって：
    （ａ）配列番号２１のアミノ酸配列との同一性が少なくとも９９％のアミノ酸配列を含むα鎖、ここで、：
    （ｉ）配列番号２１の１９３位のＸは、Ｔｈｒ又はＣｙｓであり；
    （ｉｉ）配列番号２１の２５７位のＸは、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、又はＴｒｐであり；
    （ｉｉｉ）配列番号２１の２５９位のＸは、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、又はＴｒｐであり；及び
    （ｉｖ）配列番号２１の２６０位のＸは、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、又はＴｒｐであり；
    （ｂ）配列番号２２のアミノ酸配列との同一性が少なくとも９９％のアミノ酸配列を含むβ鎖であって、配列番号２２の１９１位のＸがＳｅｒ又はＣｙｓであり；
    （ｃ）配列番号５３のアミノ酸配列との同一性が少なくとも９９％のアミノ酸配列を含むα鎖であって、ここで、
    （ｉ）配列番号５３の１９３位のＸは、Ｔｈｒ又はＣｙｓであり；
    （ｉｉ）配列番号５３の２５７位のＸは、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、又はＴｒｐであり；
    （ｉｉｉ）配列番号５３の２５９位のＸは、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、又はＴｒｐであり；及び
    （ｉｖ）配列番号５３の２６０位のＸは、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、又はＴｒｐであり；
    （ｄ）配列番号５４のアミノ酸配列との同一性が少なくとも９９％のアミノ酸配列を含むβ鎖であって、配列番号５４の１９１位のＸがＳｅｒ又はＣｙｓであり；
    （ｅ）（ａ）及び（ｂ）の両方、（ａ）及び（ｄ）の両方、（ｂ）及び（ｃ）の両方、又は（ｃ）及び（ｄ）の両方；
    （ｆ）配列番号３４のアミノ酸配列との同一性が少なくとも９９％のアミノ酸配列を含むα鎖、であり、ここで、
    （ｉ）配列番号３４の１６５位のＸは、Ｔｈｒ又はＣｙｓであり；
    （ｉｉ）配列番号３４の２２９位のＸは、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、又はＴｒｐであり；
    （ｉｉｉ）配列番号３４の２３１位のＸは、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、又はＴｒｐであり；及び
    （ｉｖ）配列番号３４の２３２位のＸは、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、又はＴｒｐであり；
    （ｇ）配列番号３５のアミノ酸配列との同一性が少なくとも９９％のアミノ酸配列を含むβ鎖であって、配列番号３５の１７２位のＸがＳｅｒ又はＣｙｓであり；
    （ｈ）配列番号６１のアミノ酸配列との同一性が少なくとも９９％のアミノ酸配列を含むα鎖であって、ここで、
    （ｉ）配列番号６１の１７２位のＸは、Ｔｈｒ又はＣｙｓであり；
    （ｉｉ）配列番号６１の２３６位のＸは、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、又はＴｒｐであり；
    （ｉｉｉ）配列番号６１の２３８位のＸは、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、又はＴｒｐであり；及び
    （ｉｖ）配列番号６１の２３９位のＸは、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、又はＴｒｐであり；
    （ｉ）配列番号６２のアミノ酸配列との同一性が少なくとも９９％のアミノ酸配列を含むβ鎖であって、配列番号６２の１７０位のＸがＳｅｒ又はＣｙｓである、β鎖；
    （ｊ）（ｆ）及び（ｇ）の両方、又は（ｈ）及び（ｉ）の両方；
    （ｋ）配列番号３６のアミノ酸配列との同一性が少なくとも９９％のアミノ酸配列を含むα鎖；
    （ｌ）配列番号３７のアミノ酸配列との同一性が少なくとも９９％のアミノ酸配列を含むβ鎖；
    （ｍ）配列番号６３のアミノ酸配列との同一性が少なくとも９９％のアミノ酸配列を含むα鎖；
    （ｎ）配列番号６４のアミノ酸配列との同一性が少なくとも９９％のアミノ酸配列を含むβ鎖；
    （ｏ）配列番号４２のアミノ酸配列との同一性が少なくとも９９％のアミノ酸配列を含むα鎖；
    （ｐ）配列番号４３のアミノ酸配列との同一性が少なくとも９９％のアミノ酸配列を含むβ鎖；
    （ｑ）配列番号６５のアミノ酸配列との同一性が少なくとも９９％のアミノ酸配列を含むα鎖；
    （ｒ）配列番号６６のアミノ酸配列との同一性が少なくとも９９％のｎ個のアミノ酸配列を含むβ鎖；
    （ｓ）（ｋ）及び（ｌ）の両方、（ｍ）及び（ｎ）の両方、（ｏ）及び（ｐ）の両方、又は（ｑ）及び（ｒ）の両方；
    （ｔ）配列番号２３のアミノ酸配列との同一性が少なくとも９９％のアミノ酸配列を含むα鎖；
    （ｕ）配列番号２４のアミノ酸配列との同一性が少なくとも９９％のアミノ酸配列を含むβ鎖；
    （ｖ）配列番号５５のアミノ酸配列との同一性が少なくとも９９％のアミノ酸配列を含むα鎖；
    （ｗ）配列番号５６のアミノ酸配列との同一性が少なくとも９９％のアミノ酸配列を含むβ鎖；
    （ｘ）配列番号４０のアミノ酸配列との同一性が少なくとも９９％のｎ個のアミノ酸配列を含むα鎖；
    （ｙ）配列番号４１のアミノ酸配列との同一性が少なくとも９９％のアミノ酸配列を含むβ鎖；
    （ｚ）配列番号５７のアミノ酸配列との同一性が少なくとも９９％のアミノ酸配列を含むα鎖；
    （ａａ）ＳＥＱＩＤ ＮＯ：５８のアミノ酸配列との同一性が少なくとも９９％のアミノ酸配列を含むβ鎖；又は
    （ａｂ）（ｔ）及び（ｕ）の両方、（ｔ）及び（ｗ）の両方、（ｕ）及び（ｖ）の両方、（ｖ）及び（ｗ）の両方、（ｘ）及び（ｙ）の両方、（ｘ）及び（ａａ）の両方、（ｙ）及び（ｚ）の両方、又は（ｚ）及び（ａａ）の両方；
    を含む、単離又は精製ポリペプチド。
  20. 請求項１４～１９のいずれか１項に記載の単離又は精製ポリペプチドであって、
    （ａ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むα鎖であって、ここで、
    （ｉ）配列番号２１の１９３位のＸは、Ｔｈｒ又はＣｙｓであり；
    （ｉｉ）配列番号２１の２５７位のＸは、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、又はＴｒｐであり；
    （ｉｉｉ）配列番号２１の２５９位のＸは、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、又はＴｒｐであり；及び
    （ｉｖ）配列番号２１の２６０位のＸは、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、又はＴｒｐであり；
    （ｂ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むβ鎖であって、配列番号２２の１９１位のＸがＳｅｒ又はＣｙｓである、β鎖；
    （ｃ）配列番号５３のアミノ酸配列を含むα鎖であって、ここで、
    （ｉ）配列番号５３の１９３位のＸは、Ｔｈｒ又はＣｙｓであり；
    （ｉｉ）配列番号５３の２５７位のＸは、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、又はＴｒｐであり；
    （ｉｉｉ）配列番号５３の２５９位のＸは、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、又はＴｒｐである；及び
    （ｉｖ）配列番号５３の２６０位のＸは、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、又はＴｒｐである。
    （ｄ）配列番号５４のアミノ酸配列を含むβ鎖であって、配列番号５４の１９１位のＸがＳｅｒ又はＣｙｓである、β鎖；
    （ｅ）（ａ）及び（ｂ）の両方、（ａ）及び（ｄ）の両方、（ｂ）及び（ｃ）の両方、又は（ｃ）及び（ｄ）の両方；
    （ｆ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むα鎖であって、ここで、
    （ｉ）配列番号３４の１６５位のＸは、Ｔｈｒ又はＣｙｓであり；
    （ｉｉ）配列番号３４の２２９位のＸは、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、又はＴｒｐであり；
    （ｉｉｉ）配列番号３４の２３１位のＸは、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、又はＴｒｐであり；及び
    （ｉｖ）配列番号３４の２３２位のＸは、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、又はＴｒｐであり；
    （ｇ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むβ鎖であって、配列番号３５の１７２位のＸがＳｅｒ又はＣｙｓであり；
    （ｈ）配列番号６１のアミノ酸配列を含むα鎖であって、ここで、
    （ｉ）配列番号６１の１７２位のＸは、Ｔｈｒ又はＣｙｓであり；
    （ｉｉ）配列番号６１の２３６位のＸは、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、又はＴｒｐであり；
    （ｉｉｉ）配列番号６１の２３８位のＸは、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、又はＴｒｐであり；及び
    （ｉｖ）配列番号６１の２３９位のＸは、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、又はＴｒｐであり；
    （ｉ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むβ鎖であって、配列番号６２の１７０位のＸがＳｅｒ又はＣｙｓである、β鎖；
    （ｊ）（ｆ）及び（ｇ）の両方、又は（ｈ）及び（ｉ）の両方；
    （ｋ）配列番号３６のアミノ酸配列を含むα鎖；
    （ｌ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むβ鎖；
    （ｍ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むα鎖；
    （ｎ）配列番号６４のアミノ酸配列を含むβ鎖；
    （ｏ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むα鎖；
    （ｐ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むβ鎖；
    （ｑ）配列番号６５のアミノ酸配列を含むα鎖；
    （ｒ）配列番号６６のアミノ酸配列を含むβ鎖；
    （ｓ）（ｋ）及び（ｌ）の両方、（ｍ）及び（ｎ）の両方、（ｏ）及び（ｐ）の両方、又は（ｑ）及び（ｒ）の両方；
    （ｔ）配列番号２３のアミノ酸配列を含むα鎖；
    （ｕ）配列番号２４のアミノ酸配列を含むβ鎖；
    （ｖ）配列番号５５のアミノ酸配列を含むα鎖；
    （ｗ）配列番号５６のアミノ酸配列を含むβ鎖；
    （ｘ）配列番号４０のアミノ酸配列を含むα鎖；
    （ｙ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むβ鎖；
    （ｚ）配列番号５７のアミノ酸配列を含むα鎖；
    （ａａ）配列番号５８のアミノ酸配列を含むβ鎖；又は
    （ａｂ）（ｔ）及び（ｕ）の両方、（ｔ）及び（ｗ）の両方、（ｕ）及び（ｖ）の両方、（ｖ）及び（ｗ）の両方、（ｘ）及び（ｙ）の両方、（ｘ）及び（ａａ）の両方、（ｙ）及び（ｚ）の両方、及び、（ｚ）及び（ａａ）の両方
    を、単離又は精製ポリペプチド。
  21. 配列番号１～３のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド鎖と、
    配列番号４～６のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド鎖とを含む、単離又は精製タンパク質。
  22. 請求項２１に記載の単離又は精製タンパク質であって、
    （ｉ）第１のポリペプチド鎖は配列番号７のアミノ酸配列との同一性が少なくとも９９％のアミノ酸配列を含み；
    （ｉｉ）第２のポリペプチド鎖は配列番号８のアミノ酸配列との同一性が少なくとも９９％のアミノ酸配列を含み；
    （ｉｉｉ）第１のポリペプチド鎖が、配列番号５１のアミノ酸配列との同一性が少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含み；
    （ｉｖ）第２のポリペプチド鎖は、配列番号５２のアミノ酸配列と少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含み；
    （ｖ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号３２のアミノ酸配列との同一性が少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含み；
    （ｖｉ）第２のポリペプチド鎖は、配列番号３３のアミノ酸配列との同一性が少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含み；
    （ｖｉｉ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号５９のアミノ酸配列との同一性が少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含み；
    （ｖｉｉｉ）第２のポリペプチド鎖が、配列番号６０のアミノ酸配列との同一性が少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含み；又は
    （ｉｘ）（ｉ）及び（ｉｉ）の両方、（ｉ）及び（ｉｖ）の両方、（ｉｉ）及び（ｉｉｉ）の両方、（ｉｉｉ）及び（ｉｖ）の両方、（ｖ）及び（ｖｉ）の両方、（ｖ）及び（ｖｉｉ）の両方、（ｖｉ）及び（ｖｉｉ）の両方、又は（ｖｉｉ）及び（ｖｉｉｉ）の両方である、
    単離又は精製タンパク質。
  23. 請求項２１又は２２に記載の単離又は精製タンパク質であって、
    （ｉ）第１のポリペプチド鎖が、配列番号７のアミノ酸配列を含み；
    （ｉｉ）第２のポリペプチド鎖は、配列番号８のアミノ酸配列を含み；
    （ｉｉｉ）第１のポリペプチド鎖が、配列番号５１のアミノ酸配列を含み；
    （ｉｖ）第２のポリペプチド鎖が、配列番号５２のアミノ酸配列を含み；
    （ｖ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号３２のアミノ酸配列を含み；
    （ｖｉ）第２のポリペプチド鎖は、配列番号３３のアミノ酸配列を含み；
    （ｖｉｉ）第１のポリペプチド鎖が、配列番号５９のアミノ酸配列を含み；
    （ｖｉｉｉ）第２のポリペプチド鎖が、配列番号６０のアミノ酸配列を含み；又は
    （ｉｘ）（ｉ）及び（ｉｉ）の両方、（ｉ）及び（ｉｖ）の両方、（ｉｉ）及び（ｉｉｉ）の両方、（ｉｉｉ）及び（ｉｖ）の両方、（ｖ）及び（ｖｉ）の両方、（ｖ）及び（ｖｉｉ）の両方、（ｖｉ）及び（ｖｉｉ）の両方、又は（ｖｉｉ）及び（ｖｉｉｉ）の両方である、
    単離又は精製タンパク質。
  24. 請求項２１～２３のいずれか１項に記載の単離又は精製タンパク質であって、
    （ａ）第１のポリペプチド鎖が、配列番号１７のアミノ酸配列との同一性が少なくとも９９％のアミノ酸配列を更に含み、ここで、
    （ｉ）配列番号１７の４８位のＸは、Ｔｈｒ又はＣｙｓであり；
    （ｉｉ）配列番号１７の１１２位のＸは、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、又はＴｒｐであり；
    （ｉｉｉ）配列番号１７の１１４位のＸは、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、又はＴｒｐであり；及び
    （ｉｖ）配列番号１７の１１５位のＸは、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、又はＴｒｐであり；
    （ｂ）第２のポリペプチド鎖が、配列番号１８のアミノ酸配列と少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を更に含み、ここで、配列番号１８の５７位のＸはＳｅｒ又はＣｙｓであり；又は
    （ｃ）（ａ）及び（ｂ）の両方である、
    単離又は精製タンパク質。
  25. 請求項２１～２４のいずれか１項に記載の単離又は精製タンパク質であって、
    （ａ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号１７のアミノ酸配列を更に含み、ここで：
    （ｉ）配列番号１７の４８位のＸは、Ｔｈｒ又はＣｙｓであり；
    （ｉｉ）配列番号１７の１１２位のＸは、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、又はＴｒｐであり；
    （ｉｉｉ）配列番号１７の１１４位のＸは、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、又はＴｒｐであり；及び
    （ｉｖ）配列番号１７の１１５位のＸは、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、又はＴｒｐであり；
    （ｂ）第２のポリペプチド鎖は、配列番号１８のアミノ酸配列を更に含み、ここで、配列番号１８の５７位のＸは、Ｓｅｒ又はＣｙｓであり；又は
    （ｃ）（ａ）及び（ｂ）の両方である、
    単離又は精製タンパク質。
  26. 請求項２１～２５のいずれか１項に記載の単離又は精製タンパク質であって、
    （ａ）第１のポリペプチド鎖が、配列番号２１のアミノ酸配列との同一性が少なくとも９９％のアミノ酸配列を含み、ここで：
    （ｉ）配列番号２１の１９３位のＸは、Ｔｈｒ又はＣｙｓであり；
    （ｉｉ）配列番号２１の２５７位のＸは、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、又はＴｒｐであり；
    （ｉｉｉ）配列番号２１の２５９位のＸは、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、又はＴｒｐであり；及び
    （ｉｖ）配列番号２１の２６０位のＸは、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、又はＴｒｐであり；
    （ｂ）第２のポリペプチド鎖は、配列番号２２のアミノ酸配列と少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含み、ここで、配列番号２２の１９１位のＸはＳｅｒ又はＣｙｓであり；
    （ｃ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号５３のアミノ酸配列との同一性が少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含み、ここで：
    （ｉ）配列番号５３の１９３位のＸは、Ｔｈｒ又はＣｙｓであり；
    （ｉｉ）配列番号５３の２５７位のＸは、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、又はＴｒｐであり；
    （ｉｉｉ）配列番号５３の２５９位のＸは、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、又はＴｒｐであり；及び
    （ｉｖ）配列番号５３の２６０位のＸは、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、又はＴｒｐであり；
    （ｄ）第２のポリペプチド鎖は、配列番号５４のアミノ酸配列と少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含み、ここで、配列番号５４の１９１位のＸは、Ｓｅｒ又はＣｙｓであり；
    （ｅ）（ａ）及び（ｂ）の両方、（ａ）及び（ｄ）の両方、（ｂ）及び（ｃ）の両方、又は（ｃ）及び（ｄ）の両方であり；
    （ｆ）第１のポリペプチド鎖が、配列番号３４のアミノ酸配列との同一性が少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含み、ここで：
    （ｉ）配列番号３４の１６５位のＸは、Ｔｈｒ又はＣｙｓであり；
    （ｉｉ）配列番号３４の２２９位のＸは、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、又はＴｒｐであり；
    （ｉｉｉ）配列番号３４の２３１位のＸは、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、又はＴｒｐであり；及び
    （ｉｖ）配列番号３４の２３２位のＸは、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、又はＴｒｐであり；
    （ｇ）第２のポリペプチド鎖は、配列番号３５のアミノ酸配列と少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含み、ここで、配列番号３５の１７２位のＸはＳｅｒ又はＣｙｓであり；
    （ｈ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号６１のアミノ酸配列との同一性が少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含み、ここで、配列番号３５の１７２位のＸはＳｅｒ又はＣｙｓであり；
    （ｉ）配列番号６１の１７２位のＸは、Ｔｈｒ又はＣｙｓであり；
    （ｉｉ）配列番号６１の２３６位のＸは、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、又はＴｒｐであり；
    （ｉｉｉ）配列番号６１の２３８位のＸは、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、又はＴｒｐであり；及び
    （ｉｖ）配列番号６１の２３９位のＸは、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、又はＴｒｐであり；
    （ｉ）第２のポリペプチド鎖が、配列番号６２のアミノ酸配列と少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含み、ここで、配列番号６２の１７０位のＸは、Ｓｅｒ又はＣｙｓであり；
    （ｊ）（ｆ）及び（ｇ）の両方、又は（ｈ）及び（ｉ）の両方であり；
    （ｋ）第１のポリペプチド鎖が、配列番号３６のアミノ酸配列との同一性が少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含み；
    （ｌ）第２のポリペプチド鎖が、配列番号３７のアミノ酸配列との同一性が少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含み；
    （ｍ）第１のポリペプチド鎖が、配列番号６３のアミノ酸配列との同一性が少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含み；
    （ｎ）第２のポリペプチド鎖は、配列番号６４のアミノ酸配列との同一性が少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含み；
    （ｏ）第１のポリペプチド鎖が、配列番号４２のアミノ酸配列との同一性が少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含み；
    （ｐ）第２のポリペプチド鎖は、配列番号４３のアミノ酸配列との同一性が少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含み；
    （ｑ）第１のポリペプチド鎖が、配列番号６５のアミノ酸配列との同一性が少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含み；
    （ｒ）第２のポリペプチド鎖は、配列番号６６のアミノ酸配列との同一性が少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含み；
    （ｓ）（ｋ）及び（ｌ）の両方、（ｍ）及び（ｎ）の両方、（ｏ）及び（ｐ）の両方、又は（ｑ）及び（ｒ）の両方であり；
    （ｔ）第１のポリペプチド鎖が、配列番号２３のアミノ酸配列との同一性が少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含み；
    （ｕ）第２のポリペプチド鎖は、配列番号２４のアミノ酸配列との同一性が少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含む。
    （ｖ）第１のポリペプチド鎖が、配列番号５５のアミノ酸配列との同一性が少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含み；
    （ｗ）第２のポリペプチド鎖は、配列番号５６のアミノ酸配列との同一性が少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含み；
    （ｘ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号４０のアミノ酸配列との同一性が少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含み；
    （ｙ）第２のポリペプチド鎖は、配列番号４１のアミノ酸配列との同一性が少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含み；
    （ｚ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号５７のアミノ酸配列との同一性が少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含み；
    （ａａ）第２のポリペプチド鎖が、配列番号５８のアミノ酸配列との同一性が少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含み；又は
    （ａｂ）（ｔ）及び（ｕ）の両方、（ｔ）及び（ｗ）の両方、（ｕ）及び（ｖ）の両方、（ｖ）及び（ｗ）の両方、（ｘ）及び（ｙ）の両方、（ｘ）及び（ａａ）の両方、（ｙ）及び（ｚ）の両方、又は（ｚ）及び（ａａ）の両方である、
    単離又は精製タンパク質。
  27. 請求項２１～２６のいずれか１項に記載の単離又は精製タンパク質であって、
    （ａ）第１のポリペプチド鎖が配列番号２１のアミノ酸配列を含み、ここで：
    （ｉ）配列番号２１の１９３位のＸは、Ｔｈｒ又はＣｙｓであり；
    （ｉｉ）配列番号２１の２５７位のＸは、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、又はＴｒｐであり；
    （ｉｉｉ）配列番号２１の２５９位のＸは、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、又はＴｒｐであり；及び
    （ｉｖ）配列番号２１の２６０位のＸは、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、又はＴｒｐであり；
    （ｂ）第２のポリペプチド鎖は、配列番号２２のアミノ酸配列を含み、ここで、配列番号２２の１９１位のＸは、Ｓｅｒ又はＣｙｓであり；
    （ｃ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号５３のアミノ酸配列を含み、ここで：
    （ｉ）配列番号５３の１９３位のＸは、Ｔｈｒ又はＣｙｓであり；
    （ｉｉ）配列番号５３の２５７位のＸは、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、又はＴｒｐであり；
    （ｉｉｉ）配列番号５３の２５９位のＸは、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、又はＴｒｐであり；及び
    （ｉｖ）配列番号５３の２６０位のＸは、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、又はＴｒｐであり；
    （ｄ）第２のポリペプチド鎖は、配列番号４５のアミノ酸配列を含み、ここで、配列番号５４の１９１位のＸは、Ｓｅｒ又はＣｙｓであり；
    （ｅ）（ａ）及び（ｂ）の両方、（ａ）及び（ｄ）の両方、（ｂ）及び（ｃ）の両方、又は（ｃ）及び（ｄ）の両方であり；
    （ｆ）第１のポリペプチド鎖が、配列番号３４のアミノ酸配列を含み、ここで：
    （ｉ）配列番号３４の１６５位のＸは、Ｔｈｒ又はＣｙｓであり；
    （ｉｉ）配列番号３４の２２９位のＸは、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、又はＴｒｐであり；
    （ｉｉｉ）配列番号３４の２３１位のＸは、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、又はＴｒｐであり；及び
    （ｉｖ）配列番号３４の２３２位のＸは、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、又はＴｒｐであり；
    （ｇ）第２のポリペプチド鎖は、配列番号３５のアミノ酸配列を含み、ここで、配列番号３５の１７２位のＸは、Ｓｅｒ又はＣｙｓであり；
    （ｈ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号６１のアミノ酸配列を含み、ここで：
    （ｉ）配列番号６１の１７２位のＸは、Ｔｈｒ又はＣｙｓであり；
    （ｉｉ）配列番号６１の２３６位のＸは、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、又はＴｒｐであり；
    （ｉｉｉ）配列番号６１の２３８位のＸは、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、又はＴｒｐであり；及び
    （ｉｖ）配列番号６１の２３９位のＸは、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、又はＴｒｐであり；
    （ｉ）第２のポリペプチド鎖が、配列番号６２のアミノ酸配列を含み、ここで、配列番号６２の１７０位のＸがＳｅｒ又はＣｙｓであり；
    （ｊ）（ｆ）及び（ｇ）の両方、又は（ｈ）及び（ｉ）の両方であり；
    （ｋ）第１のポリペプチド鎖が、配列番号３６のアミノ酸配列を含み；
    （ｌ）第２のポリペプチド鎖は、配列番号３７のアミノ酸配列を含み；
    （ｍ）第１のポリペプチド鎖が、配列番号６３のアミノ酸配列を含み；
    （ｎ）第２のポリペプチド鎖は、配列番号６４のアミノ酸配列を含み；
    （ｏ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号４２のアミノ酸配列を含み；
    （ｐ）第２のポリペプチド鎖が、配列番号４３のアミノ酸配列を含み；
    （ｑ）第１のポリペプチド鎖が、配列番号６５のアミノ酸配列を含み；
    （ｒ）第２のポリペプチド鎖が、配列番号６６のアミノ酸配列を含み；
    （ｓ）（ｋ）及び（ｌ）の両方、（ｍ）及び（ｎ）の両方、（ｏ）及び（ｐ）の両方、又は（ｑ）及び（ｒ）の両方であり；
    （ｔ）第１のポリペプチド鎖が、配列番号２３のアミノ酸配列を含み；
    （ｕ）第２のポリペプチド鎖が配列番号２４のアミノ酸配列を含み；
    （ｖ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号５５のアミノ酸配列を含み；
    （ｗ）第２のポリペプチド鎖は、配列番号５６のアミノ酸配列を含み；
    （ｘ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号４０のアミノ酸配列を含み；
    （ｙ）第２のポリペプチド鎖は、配列番号４１のアミノ酸配列を含み；
    （ｚ）第１のポリペプチド鎖が配列番号５７のアミノ酸配列を含み；
    （ａａ）第２のポリペプチド鎖が配列番号５８のアミノ酸配列を含み；又は
    （ａｂ）（ｔ）及び（ｕ）の両方、（ｔ）及び（ｗ）の両方、（ｕ）及び（ｖ）の両方、（ｖ）及び（ｗ）の両方、（ｘ）及び（ｙ）の両方、（ｘ）及び（ａａ）の両方、（ｙ）及び（ｚ）の両方、又は（ｚ）及び（ａａ）の両方である、
    単離又は精製タンパク質。
  28. 請求項１～１３のいずれか１項に記載のＴＣＲ、請求項１４～２０のいずれか１項に記載のポリペプチド、又は請求項２１～２７のいずれか１項に記載のタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む単離又は精製核酸。
  29. ５’から３’まで、第１の核酸配列及び第２の核酸配列を含む、単離又は精製核酸であって、
    第１及び第２の核酸配列が、それぞれ、配列番号７及び８；５１及び８；７及び５２；５１及び５２；８及び７；８及び５１；５２及び７；５２及び５１；２１及び２２；５３及び２２；２１及び５４；５３及び５４；２２及び２１；２２及び５３；５４及び２１；５４及び５３；２３及び２４；５５及び２４；２３及び５６；５５及び５６；２４及び２３；２４及び５５；５６及び２３；５６及び５５；３２及び３３；３３及び３２；５９及び６０；６０及び５９；３４及び３５；３５及び３４；６１及び６２；６２及び６１；３６及び３７；３７及び３６；６３及び６４；６４及び６３；４０及び４１；５７及び４１；４０及び５８；５７及び５８；４１及び４０；４１及び５７；５８及び４０；５８及び５７；４２及び４３；４３及び４２；６５及び６６；又は６６及び６５をコードする、単離又は精製核酸。
  30. 第１及び第２ヌクレオチド配列の間に介在する第３ヌクレオチド配列を更に含み、第３ヌクレオチド配列が切断可能なリンカーペプチドをコードする、請求項２９に記載の単離又は精製核酸。
  31. 切断可能なリンカーペプチドが、ＲＡＫＲＳＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧＰ（配列番号２５）のアミノ酸配列を含む、請求項３０に記載の単離又は精製核酸。
  32. 請求項２８～３１のいずれか１項に記載の核酸を含む、組換え発現ベクター。
  33. トランスポゾン又はレンチウイルスベクターである、請求項３２に記載の組換え発現ベクター。
  34. 請求項２８～３１のいずれか１項に記載の核酸、又は請求項３２又は３３に記載のベクターにコードされる、単離又は精製ＴＣＲ、ポリペプチド又はタンパク質。
  35. 請求項２８～３１のいずれか１項に記載の核酸、又は請求項３２又は３３に記載のベクターの細胞内での発現からもたらされる単離又は精製ＴＣＲ、ポリペプチド、又はタンパク質。
  36. ＶＶＶＧＡＤＧＶＧＫ（配列番号２９）のペプチドに対して抗原特異性を有するＴＣＲを発現する宿主細胞を製造する方法であって、細胞にベクターを導入可能な条件下で請求項３２又は３３に記載のベクターを前記細胞に接触させることを含む、方法。
  37. 請求項２８～３１のいずれか１項に記載の核酸か、請求項３２又は３３に記載の組換え発現ベクターかを含む、単離又は精製宿主細胞。
  38. 細胞がヒトリンパ球である、請求項３７に記載の宿主細胞。
  39. 細胞が、Ｔ細胞、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞、インバリアントナチュラルキラーＴ（ｉＮＫＴ）細胞、及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞から選択される、請求項３７又は３８に記載の宿主細胞。
  40. 請求項３７～３９のいずれか１項に記載の宿主細胞を含む、単離又は精製細胞集団。
  41. 請求項１～１３、３４、又は３５のいずれか１項に記載のＴＣＲ、請求項１４～２０、３４、又は３５のいずれか１項に記載のポリペプチド、又は請求項２１～２７、３４、又は３５のいずれか１項に記載のタンパク質の製造方法であって、
    ＴＣＲ、ポリペプチド又はタンパク質が生産されるように請求項３７～３９のいずれか１項に記載の宿主細胞又は請求項４０に記載の宿主細胞の集団を培養することを含む、製造方法。
  42. （ａ）請求項１～１３、３４又は３５のいずれか１項に記載のＴＣＲ、請求項１４～２０、３４又は３５のいずれか１項に記載のポリペプチド、請求項２１～２７、３４又は３５のいずれか１項に記載のタンパク質、請求項２８～３１のいずれか１項に記載の核酸、請求項３２又は３３に記載の組み換え発現ベクター、請求項３７～３９のいずれか１項に記載の宿主細胞、又は請求項４０に記載の細胞集団と、
    （ｂ）医薬的に許容できる担体とを含む、
    医薬組成物。
  43. 哺乳動物における癌の存在を検出する方法であって、
    （ａ）癌の細胞を含む試料を、請求項１～１３、３４、又は３５のいずれか１項に記載のＴＣＲ、請求項１４～２０、３４、又は３５のいずれか１項に記載のポリペプチド、請求項２１～２７、３４、又は３５のいずれか１項に記載のタンパク質、請求項２８～３１のいずれか１項に記載の核酸、請求項３２又は３３記載の組換え発現ベクター、請求項３７～３９のいずれか１項に記載の宿主細胞、請求項４０記載の細胞集団又は請求項４２記載の医薬組成物と接触させてそれによって複合体を形成すること；及び
    （ｂ）該複合体を検出すること
    を含み、
    ここで、該複合体の検出は、該哺乳動物における癌の存在を示す、方法。
  44. 哺乳動物における癌に対する免疫応答の誘導における使用のための、請求項１～１３、３４、又は３５のいずれか１項に記載のＴＣＲ、請求項１４～２０、３４、又は３５のいずれか１項に記載のポリペプチド、請求項２１～２７、３４、又は３５のいずれか１項に記載のタンパク質、請求項２８～３１のいずれか１項に記載の核酸、請求項３２又は３３記載の組み換え発現ベクター、請求項３７～３９のいずれか１項に記載の宿主細胞、請求項４０記載の細胞集団、もしくは請求項４２記載の薬学的組成物。
  45. 哺乳動物における癌の治療又は予防における使用のための、請求項１～１３、３４、又は３５のいずれか１項に記載のＴＣＲ、請求項１４～２０、３４、又は３５のいずれか１項に記載のポリペプチド、請求項２１～２７、３４、又は３５のいずれか１項に記載のタンパク質、請求項２８～３１のいずれか１項に記載の核酸、請求項３２又は３３に記載の組み換え発現ベクター、請求項３７～３９のいずれか１項に記載の宿主細胞、請求項４０に記載の細胞集団、あるいは、請求項４２に記載の医薬組成物。
  46. 請求項４３に記載の方法、又は請求項４４もしくは４５に記載の使用のためのＴＣＲ、ポリペプチド、タンパク質、核酸、組換え発現ベクター、宿主細胞、細胞集団、もしくは医薬組成物であって、
    癌が１２位のグリシンをアスパラギン酸で置換した変異したヒトＲＡＳアミノ酸配列を発現し、
    変異ヒトＲＡＳアミノ酸配列が、変異したヒトＫｉｒｓｔｅｎラット肉腫ウイルス癌遺伝子ホモログ（ＫＲＡＳ）、変異したヒトＨａｒｖｅｙラット肉腫ウイルス癌遺伝子ホモログ（ＨＲＡＳ）、又は変異したヒト神経芽細胞腫ラット肉腫ウイルス癌遺伝子ホモログ（ＮＲＡＳ）アミノ酸配列であり、かつ
    ここで、１２位は、それぞれ野生型ヒトＫＲＡＳ、野生型ヒトＨＲＡＳ、又は野生型ヒトＮＲＡＳタンパク質を参照して定義される、
    ＴＣＲ、ポリペプチド、タンパク質、核酸、組換え発現ベクター、宿主細胞、細胞集団、もしくは医薬組成物。
  47. 前記変異ヒトＲＡＳアミノ酸配列が、変異したヒトＫｉｒｓｔｅｎラット肉腫ウイルス腫瘍遺伝子ホモログ（ＫＲＡＳ）アミノ酸配列である、請求項４６に記載の方法又は使用のためのＴＣＲ、ポリペプチド、タンパク質、核酸、組み換え発現ベクター、宿主細胞、細胞集団、もしくは薬学的組成物。
  48. 前記変異ヒトＲＡＳアミノ酸配列が、変異したヒト神経芽腫ラット肉腫ウイルス腫瘍遺伝子ホモログ（ＮＲＡＳ）アミノ酸配列である、請求項４６に記載の方法又は使用のためのＴＣＲ、ポリペプチド、タンパク質、核酸、組み換え発現ベクター、宿主細胞、細胞集団、もしくは薬学的組成物。
  49. 前記変異ヒトＲＡＳアミノ酸配列が、変異したヒトハービーラット肉腫ウイルス癌遺伝子ホモログ（ＨＲＡＳ）アミノ酸配列である、請求項４６に記載の方法又は使用のためのＴＣＲ、ポリペプチド、タンパク質、核酸、組み換え発現ベクター、宿主細胞、細胞集団、もしくは薬学的組成物。
  50. 癌が膵臓癌、大腸癌、肺癌、子宮内膜癌、卵巣癌、もしくは前立腺癌である、請求項４３もしくは４６～４９のいずれか１項に記載の方法、又は請求項４４～４９のいずれか１項に記載の使用のためのＴＣＲ、ポリペプチド、タンパク質、核酸、組換え発現ベクター、宿主細胞、細胞集団、もしくは医薬組成物。
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