KR20220143867A

KR20220143867A - G12d 돌연변이를 갖는 ras에 대한 hla 클래스 i-제한된 t 세포 수용체

Info

Publication number: KR20220143867A
Application number: KR1020227031175A
Authority: KR
Inventors: 노암 레빈; 라미 요셉; 비맨 씨 파리아; 스티븐 에이 로젠버그
Original assignee: 더 유나이티드 스테이츠 오브 어메리카, 애즈 리프리젠티드 바이 더 세크러테리, 디파트먼트 오브 헬쓰 앤드 휴먼 서비씨즈
Priority date: 2020-02-12
Filing date: 2021-02-12
Publication date: 2022-10-25
Also published as: JP2023528112A; WO2021163434A8; EP4103597A1; CO2022012922A2; WO2021163434A1; CL2022002208A1; TW202140536A; GB2609760A; US20230080742A1; BR112022015888A2; CU20220044A7; MX2022009654A; IL295252A; AU2021221138A1; CN115279784A; GB202211733D0; CA3168015A1

Abstract

단리 또는 정제된 T 세포 수용체(TCR)가 개시되며, 여기서 TCR은 위치 12의 글리신이 인간 백혈구 항원(HLA) 클래스 I 분자에 의해 제시된 아스파르트산으로 치환된 돌연변이된 인간 RAS 아미노산 서열에 대하여 항원 특이성을 갖는다. 관련된 폴리펩티드 및 단백질, 뿐만 아니라 관련 핵산, 재조합 발현 벡터, 숙주 세포, 세포의 집단 및 약학 조성물이 또한 제공된다. 또한 포유동물에서 암의 존재를 검출하는 방법 및 포유동물에서 암을 치료 또는 예방하는 방법이 개시된다.

Description

G12D 돌연변이를 갖는 RAS에 대한 HLA 클래스 I-제한된 T 세포 수용체

관련 출원에 대한 상호 참조

본 특허 출원은 2020년 2월 12일에 출원된 미국 가특허 출원 번호 제62/975,544호를 우선권 주장하며, 이는 그 전체가 본원에 참조로 포함된다.

연방 지원 연구 또는 개발에 관한 진술

본 발명은 국립 보건원(National Institutes of Health), 국립 암 연구소(National Cancer Institute)에 의해 프로젝트 번호 ZIABC010984 하에 정부 지원으로 이루어졌다. 정부는 본 발명에 대한 특정 권리를 갖는다.

전자 제출된 자료의 참조에 의한 포함

본원과 함께 제출되고 다음과 같이 식별되는 컴퓨터 판독 가능한 뉴클레오티드/아미노산 서열 목록은 본원에 그 전체가 참조로 포함된다: 2021년 1월 29일자의 "751506_ST25.txt"라는 명칭의 114,961 바이트 ASCII(텍스트) 파일.

일부 암은 특히 암이 전이되어 절제할 수 없는 경우 매우 제한된 치료 옵션을 가질 수 있다. 예를 들어, 수술, 화학요법 및 방사선 요법과 같은 치료법의 발전에도 불구하고, 췌장암, 결장직장암, 폐암, 자궁내막암, 난소암 및 전립선암과 같은 많은 암에 대한 예후는 좋지 않을 수 있다. 따라서, 암에 대한 추가 치료법에 대한 충족되지 않은 요구가 존재한다.

본 발명의 한 실시태양은 (a) 서열 번호 1 내지 3, (b) 서열 번호 4 내지 6, 또는 (c) 서열 번호 1 내지 6의 아미노산 서열을 포함하는 단리 또는 정제된 T 세포 수용체(TCR: T-cell receptor)를 제공하고, 여기서 TCR은 위치 12의 글리신이 인간 백혈구 항원(HLA: human leukocyte antigen) 클래스 I 분자에 의해 제시되는 아스파르트산으로 치환된 돌연변이된 인간 RAS 아미노산 서열에 대하여 항원 특이성을 가지며, 여기서 돌연변이된 인간 RAS 아미노산 서열은 돌연변이된 인간 커스틴(Kirsten) 래트 육종 바이러스 종양유전자 상동체(KRAS), 돌연변이된 인간 하비(Harvey) 래트 육종 바이러스 종양유전자 상동체(HRAS) 또는 돌연변이된 인간 신경모세포종 래트 육종 바이러스 종양유전자 상동체(NRAS) 아미노산 서열이고, 여기서 위치 12는 각각 야생형 인간 KRAS, 야생형 인간 HRAS 또는 야생형 인간 NRAS 단백질을 참조하여 정의된다.

본 발명의 또 다른 실시태양은 본 발명의 TCR의 기능적 부분을 포함하는 단리 또는 정제된 폴리펩티드를 제공하며, 여기서 기능적 부분은 (a) 서열 번호 1 내지 3 모두, (b) 서열 번호 4 내지 6 모두, 또는 (c) 서열 번호 1 내지 6 모두의 아미노산 서열을 포함한다.

본 발명의 또 다른 실시태양은 서열 번호 1 내지 3의 아미노산 서열을 포함하는 제1 폴리펩티드 쇄 및 서열 번호 4 내지 6의 아미노산 서열을 포함하는 제2 폴리펩티드 쇄를 포함하는 단리 또는 정제된 단백질을 제공한다.

본 발명의 실시태양은 본 발명의 TCR, 폴리펩티드 및 단백질과 관련된 핵산, 재조합 발현 벡터, 숙주 세포, 세포의 집단 및 약학 조성물을 추가로 제공한다.

본 발명의 한 실시태양은 5'에서 3'으로 제1 핵산 서열 및 제2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 단리 또는 정제된 핵산을 제공하며, 여기서 제1 및 제2 뉴클레오티드 서열은 각각 서열 번호 7 및 8; 51 및 8; 7 및 52; 51 및 52; 8 및 7; 8 및 51; 52 및 7; 52 및 51; 21 및 22; 53 및 22; 21 및 54; 53 및 54; 22 및 21; 22 및 53; 54 및 21; 54 및 53; 23 및 24; 55 및 24; 23 및 56; 55 및 56; 24 및 23; 24 및 55; 56 및 23; 56 및 55; 32 및 33; 33 및 32; 59 및 60; 60 및 59; 34 및 35; 35 및 34; 61 및 62; 62 및 61; 36 및 37; 37 및 36; 63 및 64; 64 및 63; 40 및 41; 57 및 41; 40 및 58; 57 및 58; 41 및 40; 41 및 57; 58 및 40; 58 및 57; 42 및 43; 43 및 42; 65 및 66; 또는 66 및 65의 아미노산 서열을 인코딩한다.

포유동물에서 암의 존재를 검출하는 방법, 포유동물에서 암을 치료 또는 예방하는 방법, 포유동물에서 암에 대한 면역 반응을 유도하는 방법, VVVGA D GVGK(서열 번호 29)의 펩티드에 대하여 항원 특이성을 갖는 TCR을 발현하는 숙주 세포를 생산하는 방법 및 본 발명의 TCR, 폴리펩티드 및 단백질을 생산하는 방법이 본 발명의 실시태양에 의해 추가로 제공된다.

추가의 실시태양은 본원에 기재된 바와 같다.

도 1a 및 1b: KRAS G12D에 대한 반응성에 관한 TIL 스크리닝. 도 1a는 IFN-γ 분비의 ELISPOT 측정(3e4 세포당 반점의 수)을 보여주는 그래프이다. 도 1b는 표적 세포와 효과기 세포의 공동 배양 후 측정된 4-1BB 및 0X40(% 4-1BB+/OX40+) 발현의 유세포 분석 결과를 보여주는 그래프이다. 효과기 세포는 환자 4373의 종양 단편 F4, F5, F6, F8, F9 및 F10의 TIL였다. 표적 세포(자가유래 DC)는 12개의 RAS 돌연변이(G12D-G12V-G12C-G12A-G12S-G13D-G13R-G13V-Q61R-Q61L-Q61K-Q61H)를 인코딩하는 탠덤 미니유전자(TMG: tandem minigene)(서열 번호 49)(빈 원)에 의해, 또는 야생형(WT) RAS 에피토프(WT G12+G13+Q61) 서열(서열 번호 48)(음영 처리된 원)로 mRNA 전기천공되었고; 자가유래 DC는 G12 WT 긴 펩티드(LP)(MTEYKLVVVGA G GVGKSALTIQLI)(서열 번호 27)(음영 처리된 사각형); G12D Mut LP(MTEYKLVVVGA D GVGKSALTIQLI)(서열 번호 26)(빈 사각형); 또는 최소 에피토프(ME) A11/A02 - KLVVVGADGV(서열 번호 50), VVGADGVGK(서열 번호 28), VVVGADGVGK(서열 번호 29)(음영 처리된 삼각형)의 동일한 농도의 3가지 펩티드 서열의 혼합물로 적재되었다. 음성 대조군으로서, 자가유래 DC 세포를 단독으로(TIL만) 배양하거나(다이아몬드) 디메틸 설폭사이드(DMSO)와 공동 배양하였다(빈 삼각형). 양성 대조군으로서, TIL은 항-CD3/항-CD28 다이나비즈(Dynabeads)[써모피셔(ThermoFisher)] 물질의 존재 하에서 성장한다(별).
도 2는 표적 세포와 효과기 세포의 공동 배양 후 4-1BB 및 0X40을 발현하는 세포의 백분율을 나타내는 그래프이다. 효과기 세포는 (i) G12D RAS 반응성으로 의심되는 반응성 TIL(도 1에 제시됨)로부터 단일 세포 서열분석 방법으로 수득한 두 개의 TCR 서열 중 하나(TCR1 또는 TCR2), 또는 (ii) HLA-A11 제한된, 뮤린 항-KRAS G12D TCR(양성 대조군)(mTCR)이 형질도입된 환자 4373의 자가유래 PBL, 또는 (iii) 형질도입되지 않은 PBL(-)였다. 표적 세포는 COS HLA-A2 세포주(빈 원), COS HLA-A2-G12D 세포주(채운 원), COS HLA-A11 세포주(빈 삼각형) 또는 COS HLA-A11-G12D 세포주(채운 삼각형) 또는 T 세포만(표적 세포 없음)(-)이었다.
도 3a 및 3b: KRAS G12D에 대한 반응성에 관하여 테스트된 4373 TCR 형질도입 PBL. 도 3a는 IFN-γ 분비의 ELISPOT 측정(3e4 세포당 반점의 수)을 나타내는 그래프이다. 도 3b는 표적 세포와 효과기 세포의 공동 배양 후 측정된 CD8 게이팅된 세포의 4-1BB 및 0X40(% 4-1BB+/OX40+) 발현의 유세포 분석 결과를 보여주는 그래프이다. 효과기 세포는 (i) G12D RAS 반응성인 것으로 의심되는 4373 TCR 1 및 2(인간 가변 영역 포함); (ii) 실시예 1의 HLA-A11 제한된 뮤린 항-KRAS G12D TCR; 또는 (iii) 녹색 형광 단백질(GFP)(대조군)을 인코딩하는 레트로바이러스 발현 벡터가 형질도입된 환자 4373의 자가유래 CD8+PBL이었다. 빈 벡터가 형질도입된 세포는 추가의 대조군으로 사용되었다(모의 Td). 표적 세포는 WT KRAS 유전자(빈 원) 또는 FL KRAS G12D 돌연변이 유전자(채운 원)를 갖는 전장(FL)으로 mRNA 형질감염된 자가유래 수지상 세포(DC); WT KRAS LP(빈 삼각형) 또는 G12D Mut KRAS LP(채운 삼각형)인 펩티드가 적재되거나, KRAS 최소 에피토프(ME)가 적재된 자가유래 DC: ME A02 WT(빈 다이아몬드); ME A02 G12D(채운 다이아몬드); ME HLA-A11 WT 믹스(빈 사각형); 또는 ME HLA-A11 G12D 믹스(채운 사각형)였다. 대조군으로서, 형질도입된 세포는 단독으로(T 세포만)(별표) 배양하거나 DMSO(별) 또는 항-CD28/항-CD3 다이나비즈 물질(육각형)과 함께 배양하였다.
도 4a 내지 4c: ME 적정으로 적재된 자가유래 DC에 대한 TCR 결합력 테스트: 도 4a는 ELISPOT IFN-γ 분비 결과(3e4 세포당 반점 수)를 보여주는 그래프이다. 도 4b 및 4c는 효과기 세포와 표적 세포의 공동 배양 후 측정되는, CD8 게이팅되고 CD4 게이팅된 mTCR 양성 PBL(도 4c)에 대한 4-1BB 및 0X40(% 4-1BB+/OX40+) 발현(도 4b)의 유세포 분석 결과를 보여주는 그래프이다. 효과기 세포는 실시예 2의 G12D RAS-반응성 4373 TCR(인간 가변 영역 포함)을 인코딩하는 레트로바이러스 발현 벡터가 형질도입된 환자 4373의 자가유래 PBL이었다. 표적 세포는 제시된 농도로 하기 펩티드가 적재된 환자 4373의 자가유래 DC였다: 10개의 아미노산 잔기를 갖는 돌연변이된 최소 에피토프 펩티드(VVVGA D GVGK)(서열 번호 29)(빈 원) 또는 10개의 아미노산 잔기를 갖는 WT 최소 에피토프 펩티드(VVVGA G GVGK)(서열 번호 31)(채운 원).
도 5a 내지 5c: ME의 적정으로 적재된 자가유래 COS-A11 세포주에 대한 TCR 결합력 테스트: 도 5a는 ELISPOT IFN-γ 분비 결과(3e4 세포당 반점의 수)를 보여주는 그래프이다. 도 5b 및 5c는 표적 세포와 효과기 세포의 공동 배양 후 측정된 CD8 게이팅되고(도 5b) CD4 게이팅된(도 5c) mTCR 양성 PBL에 대한 4-1BB 및 OX40(% 4-1BB+/OX40+) 발현의 유세포 분석 결과를 보여주는 그래프이다. 효과기 세포는 실시예 2의 G12D RAS-반응성 4373 TCR(인간 가변 영역 포함)을 인코딩하는 레트로바이러스 발현 벡터가 형질도입된 환자 4373의 자가유래 PBL이었다. 표적 세포는 제시된 농도로 하기 펩티드가 적재된 환자 4373의 자가유래 DC였다: 10개의 아미노산 잔기를 갖는 돌연변이된 최소 에피토프 펩티드(VVVGA D GVGK)(서열 번호 29)(빈 원) 또는 10개의 아미노산 잔기를 갖는 WT 최소 에피토프 펩티드 아미노산 잔기(VVVGA G GVGK)(서열 번호 31)(채운 원).

RAS 계열 단백질은 소형 GTP가수분해효소의 큰 계열에 속한다. 특정 이론이나 기전에 얽매이지 않고, 돌연변이되면 RAS 단백질은 많은 인간 암의 종양발생 초기에 신호 전달에 관여할 수 있다고 여겨진다. 단일 아미노산 치환은 단백질을 활성화시킬 수 있다. 돌연변이된 RAS 단백질 생성물은 구성적으로 활성화될 수 있다. 돌연변이된 RAS 단백질은 다양한 인간 암, 예를 들어 췌장암(예를 들어, 췌장 암종), 결장직장암, 폐암(예를 들어, 폐 선암종), 자궁내막암, 난소암(예를 들어, 상피 난소암) 및 전립선암에서 발현될 수 있다. 인간 RAS 계열 단백질에는 KRAS, HRAS 및 NRAS가 포함된다.

KRAS는 GTP가수분해효소 KRas, V-Ki-Ras2 커스틴 래트 육종 바이러스 종양유전자, 또는 KRAS2로도 지칭된다. KRAS에는 2개의 전사체 변이체, KRAS 변이체 A 및 KRAS 변이체 B가 존재한다. 야생형(WT) KRAS 변이체 A는 서열 번호 9의 아미노산 서열을 갖는다. WT KRAS 변이체 B는 서열 번호 10의 아미노산 서열을 갖는다. 이하 "KRAS"(돌연변이되거나 돌연변이되지 않음(WT))에 대한 언급은 달리 명시하지 않는 한 변이체 A와 변이체 B를 둘 다 지칭한다. 활성화되면, 돌연변이된 KRAS는 구아노신-5'-삼인산(GTP)에 결합하고 GTP를 구아노신 5'-이인산(GDP)으로 전환시킨다.

HRAS는 RAS 단백질 계열의 또 다른 구성원이다. HRAS는 하비 래트 육종 바이러스 종양단백질, V-Ha-Ras 하비 래트 육종 바이러스 종양유전자 상동체, 또는 Ras 계열 소형 GTP 결합 단백질 H-Ras로도 지칭된다. WT HRAS는 서열 번호 11의 아미노산 서열을 갖는다.

NRAS는 RAS 단백질 계열의 또 다른 구성원이다. NRAS는 또한 GTP가수분해효소 NRas, V-Ras 신경모세포종 RAS 바이러스 종양유전자 상동체, 또는 NRAS1로도 지칭된다. WT NRAS는 서열 번호 12의 아미노산 서열을 갖는다.

본 발명의 한 실시태양은 위치 12의 글리신이 아스파르트산으로 치환된 돌연변이된 인간 RAS 아미노산 서열에 대하여 항원 특이성을 갖는 단리 또는 정제된 TCR을 제공하고, 여기서 돌연변이된 인간 RAS 아미노산 서열은 돌연변이된 인간 KRAS, 돌연변이된 인간 HRAS, 또는 돌연변이된 인간 NRAS 아미노산 서열이고, 여기서 위치 12는 각각 WT 인간 KRAS, WT 인간 HRAS 또는 WT 인간 NRAS 단백질을 참조하여 정의된다. 이하, "TCR"에 대한 언급은 달리 명시되지 않는 한, TCR의 기능적 부분 및 기능적 변이체를 또한 지칭한다.

돌연변이된 인간 RAS 아미노산 서열은 돌연변이된 인간 KRAS 아미노산 서열, 돌연변이된 인간 HRAS 아미노산 서열, 또는 돌연변이된 인간 NRAS 아미노산 서열일 수 있다. WT 인간 KRAS, NRAS 및 HRAS 단백질의 아미노산 서열은 각각 188개 또는 189개 아미노산 잔기의 길이를 가지며 서로에 대해 높은 수준의 동일성을 갖는다. 예를 들어, WT 인간 NRAS 단백질의 아미노산 서열은 WT 인간 KRAS 단백질의 아미노산 서열과 86.8% 동일하다. WT 인간 NRAS 단백질 및 WT 인간 KRAS 단백질의 아미노산 잔기 1-86은 100% 동일하다. WT 인간 HRAS 단백질의 아미노산 서열은 WT 인간 KRAS 단백질의 아미노산 서열과 86.3% 동일하다. WT 인간 HRAS 단백질과 WT 인간 KRAS 단백질의 아미노산 잔기 1-94는 100% 동일하다. 이하, "RAS"(돌연변이되거나 돌연변이되지 않음(WT))는, 달리 명시되지 않는 한 KRAS, HRAS 및 NRAS를 통칭한다.

본 발명의 한 실시태양에서, 돌연변이된 인간 RAS 아미노산 서열은 위치 12의 글리신이 아스파르트산으로 치환된 인간 RAS 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 위치 12는 상응하는 WT RAS 단백질을 참조하여 정의된다. WT RAS 단백질은 WT KRAS 단백질(서열 번호 9 또는 10), WT HRAS 단백질(서열 번호 11), 또는 WT NRAS 단백질(서열 번호 12) 중 어느 하나일 수 있는데, 상기 설명된 바와 같이, WT 인간 NRAS 단백질 및 WT 인간 KRAS 단백질의 아미노산 잔기 1-86이 100% 동일하고, WT 인간 HRAS 단백질 및 WT 인간 KRAS 단백질의 아미노산 잔기 1-94가 100% 동일하기 때문이다. 따라서, WT KRAS, WT HRAS 및 WT NRAS 단백질 각각의 위치 12의 아미노산 잔기는 동일하며, 즉 글리신이다.

돌연변이된 인간 RAS 아미노산 서열은 위치 12의 글리신이 아스파르트산으로 치환되어 있다. 이와 관련하여, 본 발명의 실시태양은 G12D 돌연변이를 갖는 임의의 인간 RAS 단백질, 폴리펩티드 또는 펩티드 아미노산 서열에 대하여 항원 특이성을 갖는 TCR을 제공한다.

RAS의 돌연변이 및 치환은 상응하는 WT RAS 단백질의 아미노산 서열을 참조하여 본원에서 정의된다. 따라서, RAS의 돌연변이 및 치환은 WT RAS 단백질의 특정 위치(즉, 위치 12)에 존재하는 아미노산 잔기, 그 다음에 위치 번호, 그 다음에 그 잔기가 논의 중인 특정 돌연변이 또는 치환으로 대체되는 아미노산 잔기를 참조하여 기재된다. RAS 아미노산 서열(예를 들어, RAS 펩티드)은 전장 WT RAS 단백질의 모든 아미노산 잔기보다 적은 수를 포함할 수 있다. 따라서, 위치 12는 RAS 아미노산 서열의 특정 예에서 상응하는 잔기의 실제 위치가 상이할 수 있다는 이해하에, WT 전장 RAS 단백질을 참조하여 본원에서 정의된다(즉, 서열 번호 9 내지 12 중 임의의 하나). 위치가 서열 번호 9 내지 12 중 어느 하나로 정의되는 경우, 용어 "G12"는 서열 번호 9 내지 12 중 어느 하나의 위치 12에 정상적으로 존재하는 글리신을 지칭하고, "G12D"는 서열 번호 9 내지 12 중 어느 하나의 위치 12에 정상적으로 존재하는 글리신이 아스파르트산으로 대체됨을 지시한다. 예를 들어, RAS 아미노산 서열의 특정 예가, 예를 들어 VVVGA G GVGK(서열 번호 31)(서열 번호 9의 연속 아미노산 잔기 7 내지 16에 상응하는 예시적인 WT KRAS 펩티드)인 경우, "G12D"는 서열 번호 31에서 밑줄 친 글리신의 실제 위치가 6임에도 불구하고 서열 번호 31에서 밑줄 친 글리신이 아스파르트산으로 치환된 것을 지칭한다. G12D 돌연변이를 갖는 인간 RAS 아미노산 서열은 이하 "G12D RAS"로 지칭된다.

G12D 돌연변이를 갖는 전장 RAS 단백질의 예는 아래 표 1에 제시되어 있다.

본 발명의 한 실시태양에서, TCR은 상기 기재된 G12D 돌연변이를 갖는 RAS 펩티드에 대하여 항원 특이성을 가지며, 여기서 G12D RAS 펩티드는 임의의 길이를 갖는다. 본 발명의 한 실시태양에서, G12D RAS 펩티드는 본원에 기재된 임의의 HLA 클래스 I 분자에 결합하기에 적합한 임의의 길이를 갖는다. 예를 들어, TCR은 G12D 돌연변이를 갖는 RAS 펩티드에 대하여 항원 특이성을 가질 수 있으며, RAS 펩티드는 약 9 또는 약 10개 아미노산 잔기의 길이를 갖는다. G12D RAS 펩티드는 G12D 돌연변이를 포함하는 돌연변이된 RAS 단백질의 임의의 연속 아미노산 잔기를 포함할 수 있다. 본 발명의 한 실시태양에서, TCR은 G12D 돌연변이를 갖는 RAS 펩티드에 대하여 항원 특이성을 가질 수 있으며, 돌연변이된 RAS 펩티드는 약 9개 아미노산 잔기 또는 약 10개 아미노산 잔기의 길이를 갖는다. 본 발명의 TCR에 의해 인식될 수 있는, 각각 G12D 돌연변이를 갖는 특정 펩티드의 예는 9-량체 VVGA D GVGK(서열 번호 28) 및 10-량체 VVVGA D GVGK(서열 번호 29)이다. 본 발명의 한 실시태양에서, TCR은 서열 번호 29의 돌연변이된 인간 RAS 아미노산 서열에 대하여 항원 특이성을 갖는다. 본 발명의 한 실시태양에서, TCR은 VVGA G GVGK(서열 번호 30) 또는 10-량체 VVVGA G GVGK(서열 번호 31)의 야생형 인간 RAS 아미노산 서열에 대하여 항원 특이성을 갖지 않는다.

본 발명의 한 실시태양에서, 본 발명의 TCR은 HLA 클래스 I 분자에 의해 제시되는 G12D RAS를 인식할 수 있다. 이와 관련하여, TCR은 HLA 클래스 I 분자와 관련하여 G12D RAS에 결합할 때 면역 반응을 유발할 수 있다. 본 발명의 TCR은 HLA 클래스 I 분자에 의해 제시되는 G12D RAS를 인식할 수 있고 G12D RAS에 추가하여 HLA 클래스 I 분자에 결합할 수 있다.

본 발명의 한 실시태양에서, HLA 클래스 I 분자는 HLA-A 분자이다. HLA-A 분자는 α 쇄와 β2 마이크로글로불린의 이종이량체이다. HLA-A α 쇄는 HLA-A 유전자에 의해 인코딩될 수 있다. β2 마이크로글로불린은 HLA-A 복합체를 만들기 위해 α 쇄의 α1, α2 및 α3 도메인에 비공유적으로 결합한다. HLA-A 분자는 임의의 HLA-A 분자일 수 있다. 본 발명의 한 실시태양에서, HLA 클래스 I 분자는 HLA-A11 분자이다. HLA-A11 분자는 임의의 HLA-A11 분자일 수 있다. HLA-A11 분자의 예로는 HLA-A^*11:01, HLA-A^*11:02, HLA-A^*11:03 또는 HLA-A^*11:04 대립유전자에 의해 인코딩되는 분자들이 포함되나 이에 제한되지 않는다. 바람직하게는, HLA 클래스 I 분자는 HLA-A^*11:01 대립유전자에 의해 인코딩된다.

본 발명의 TCR은 입양 세포 전달에 사용되는 세포에 의해 발현되는 경우를 포함하여 다양한 이점 중 임의의 하나 이상을 제공할 수 있다. G12D RAS는 암 세포에서 발현되며 정상적인 비암성 세포에 의해서는 발현되지 않는다. 특정 이론 또는 기전에 얽매이지 않고, 본 발명의 TCR은 유리하게 암 세포의 파괴를 표적으로 하는 한편 정상적인 비암성 세포의 파괴를 최소화하거나 제거하여 독성을 감소시키는 것으로 여겨진다. 또한, G12D 돌연변이는 종양형성의 초기 단계에서 발생할 가능성이 높기 때문에, G12D RAS 돌연변이는 환자의 실질적으로 모든 암 세포에서 발현될 수 있다. 본 발명의 TCR은 유리하게, 예를 들어 화학요법, 수술 또는 방사선과 같은 다른 유형의 치료에 반응하지 않는 G12D RAS-양성 암을 성공적으로 치료하거나 예방할 수 있다. 추가로, 본 발명의 TCR은 G12D RAS에 대한 매우 강한 인식을 제공할 수 있으며, 이는 조작되지 않은 종양 세포(예를 들어, 인터페론(IFN)-γ로 처리되지 않거나, G12D RAS 및 HLA-A^*11:01중 하나 또는 둘 다를 인코딩하는 벡터로 형질감염되지 않거나, G12D RAS 펩티드로 펄스화되지 않거나, 이들이 조합되지 않은 종양 세포)를 인식하는 능력을 제공할 수 있다. KRAS 돌연변이는 췌장암의 약 70%, 대장암의 36%, 폐암의 20%에서 발견된다. 가장 흔하게, 돌연변이는 코돈 12(글리신, G를 인코딩함)에서 발생한다. KRAS G12D 돌연변이는 췌장암과 결장직장암 환자의 약 36%와 약 12%에서 각각 발견된다. 더욱이, HLA-A^*11:01 대립유전자는 백인 및 히스패닉 민족의 약 14% 및 약 9%에서 각각 발현된다. HLA-A^*11:01 대립유전자는 미국 내 아시아 민족의 약 45%까지 발현된다. 따라서, 본 발명의 TCR은 다른 MHC 분자에 의해 제시되는 RAS를 인식하는 TCR을 사용한 면역요법에 적합하지 않을 수 있는, HLA-A^*11:01 대립유전자를 발현하는 환자를 포함하도록 면역요법 적격 암 환자의 수를 증가시킬 수 있다. 또한, 본 발명의 TCR, 폴리펩티드 및 단백질은 인간 상보성 결정 영역(CDR) 및 가변 영역 아미노산 서열을 포함하며, 이는 예를 들어 마우스 CDR 및 가변 영역 아미노산 서열을 포함하는 TCR, 폴리펩티드 및 단백질과 비교하여 인간 면역계에 의한 거부 위험을 감소시킬 수 있다.

본원에서 사용되는 바와 같이, "항원 특이성"이라는 문구는 TCR이 G12D RAS에 특이적으로 결합하여 높은 결합력으로 면역학적으로 인식할 수 있음을 의미한다. 예를 들어, (a) 낮은 농도(예를 들어, 약 0.05 ng/㎖ 내지 약 10 ng/㎖, 1 ng/㎖, 2 ng/㎖, 5 ng/㎖, 8 ng/㎖, 10 ng/㎖, 또는 상기 값 중 임의의 두 가지에 의해 정의된 범위)의 G12D RAS 펩티드로 펄스화된 항원 음성, HLA 클래스 I 분자 양성 표적 세포, 또는 (b) 표적 세포가 G12D RAS를 발현하도록 G12D RAS를 인코딩하는 뉴클레오티드 서열이 도입된 항원 음성, HLA 클래스 I 분자 양성 표적 세포와의 공동 배양시, TCR을 발현하는 약 1 × 10⁴ 내지 약 1 × 10⁵개 T 세포가 적어도 약 200 pg/㎖ 이상(예를 들어, 200 pg/㎖ 이상, 300 pg/㎖ 이상, 400 pg/㎖ 이상, 500 pg/㎖ 이상, 600 pg/㎖ 이상, 700 pg/㎖ 이상, 1,000 pg/㎖ 이상, 5,000 pg/㎖ 이상, 7,000 pg/㎖ 이상, 10,000 pg/㎖ 이상, 20,000 pg/㎖ 이상, 또는 상기 값 중 임의의 두 가지에 의해 정의된 범위)의 IFN-γ를 발현한다면, TCR은 G12D RAS에 대하여 "항원 특이성"을 갖는 것으로 고려될 수 있다. 본 발명의 TCR을 발현하는 세포는 또한 더 높은 농도의 G12D RAS 펩티드로 펄스화된 항원-음성, HLA 클래스 I 분자 양성 표적 세포와의 공동 배양시 IFN-γ를 분비할 수 있다. HLA 클래스 I 분자는 본원에 기재된 임의의 HLA 클래스 I 분자(예를 들어, HLA-A^*11:01 분자)일 수 있다.

대안적으로 또는 추가적으로, 음성 대조군에 의해 발현된 IFN-γ의 양과 비교하여, (a) 낮은 농도의 G12D RAS 펩티드로 펄스화된 항원-음성, HLA 클래스 I 분자 양성 표적 세포 또는 (b) 표적 세포가 G12D를 발현하도록 G12D RAS를 인코딩하는 뉴클레오티드 서열이 도입된 항원 음성, HLA 클래스 I 분자 양성 표적 세포와의 공동 배양시, TCR을 발현하는 T 세포가 IFN-γ의 적어도 2배(예를 들어 5배)를 분비한다면, TCR은 G12D RAS에 대하여 "항원 특이성"을 갖는 것으로 고려될 수 있다. 음성 대조군은 예를 들어, (i) (a) 동일한 농도의 무관한 펩티드(G12D RAS 펩티드와 다른 서열을 갖는 일부 다른 펩티드)로 펄스화된 항원 음성, HLA 클래스 I 분자 양성 표적 세포, 또는 (b) 표적 세포가 무관한 펩티드를 발현하도록 무관한 펩티드를 인코딩하는 뉴클레오티드 서열이 도입된 항원 음성, HLA 클래스 I 분자 양성 표적 세포와의 공동 배양시 TCR을 발현하는 T 세포, 또는 (ii) (a) 동일한 농도의 G12D RAS 펩티드로 펄스화된 항원 음성, HLA 클래스 I 분자 양성 표적 세포, 또는 (b) 표적 세포가 G12D RAS를 발현하도록 G12D RAS를 인코딩하는 뉴클레오티드 서열이 도입된 항원 음성, HLA 클래스 I 분자 양성 표적 세포와 공동 배양된 형질도입되지 않은 T 세포(예를 들어, PBMC에서 유래되고, 이는 TCR을 발현하지 않음)일 수 있다. 음성 대조군의 표적 세포에 의해 발현되는 HLA 클래스 I 분자는 테스트되는 T 세포와 공동 배양되는 표적 세포에 의해 발현되는 동일한 HLA 클래스 I 분자일 것이다. HLA 클래스 I 분자는 본원에 기재된 임의의 HLA 클래스 I 분자일 수 있다(예를 들어, HLA-A^*11:01 분자). IFN-γ 분비는, 예를 들어 효소 결합 면역흡착 분석(ELISA)과 같은 당업계에 공지된 방법에 의해 측정될 수 있다.

대안적으로 또는 추가적으로, IFN-γ를 분비하는 음성 대조군 T 세포의 수와 비교하여, (a) 낮은 농도의 G12D RAS 펩티드로 펄스화된 항원 음성, HLA 클래스 I 분자 양성 표적 세포 또는 (b) 표적 세포가 G12D RAS를 발현하도록 G12D RAS를 인코딩하는 뉴클레오티드 서열이 도입된 항원 음성, HLA 클래스 I 분자 양성 표적 세포와의 공동 배양시, TCR을 발현하는 T 세포 수의 적어도 2배(예를 들어, 5배)가 IFN-γ를 분비한다면, TCR은 G12D RAS에 대하여 "항원 특이성"을 갖는 것으로 고려될 수 있다. HLA 클래스 I 분자, 펩티드의 농도 및 음성 대조군은 본 발명의 다른 양태와 관련하여 본원에 기재된 바와 같을 수 있다. IFN-γ를 분비하는 세포의 수는 예를 들어 ELISPOT과 같은 당업계에 공지된 방법에 의해 측정될 수 있다.

대안적으로 또는 추가적으로, TCR을 발현하는 T 세포가 예를 들어 G12D RAS를 발현하는 표적 세포로 자극한 후 유세포 분석에 의해 측정된 하나 이상의 T 세포 활성화 마커의 발현을 상향 조절한다면, TCR은 G12D RAS에 대한 "항원 특이성"을 갖는 것으로 고려될 수 있다. T 세포 활성화 마커의 예에는 4-1BB, 0X40, CD107α, CD69 및 항원 자극 시 상향조절되는 사이토카인(예를 들어, 종양 괴사 인자(TNF), 인터류킨(IL)-2 등)이 포함된다.

본 발명의 한 실시태양은 2개의 폴리펩티드(예를 들어, 폴리펩티드 쇄), 예컨대 TCR의 알파(α) 쇄, TCR의 베타(β) 쇄, TCR의 감마(γ) 쇄, TCR의 델타(δ) 쇄, 또는 이들의 조합을 포함하는 TCR을 제공한다. TCR이 G12D RAS에 대하여 항원 특이성을 갖는 한, 본 발명의 TCR의 폴리펩티드는 임의의 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 일부 실시태양에서, TCR은 비자연 발생이다.

본 발명의 한 실시태양에서, TCR은 2개의 폴리펩티드 쇄를 포함하고, 이들 각각은 TCR의 상보성 결정 영역(CDR)1, CDR2 및 CDR3을 포함하는 가변 영역을 포함한다. 본 발명의 한 실시태양에서, TCR은 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 CDR1(4373 TCR의 α 쇄의 CDR1), 서열 번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 CDR2(4373 TCR의 α 쇄의 CDR2) 및 서열 번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 CDR3(4373 TCR의 α 쇄의 CDR3)을 포함하는 제1 폴리펩티드 쇄 및 서열 번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 CDR1(4373 TCR의 β 쇄의 CDR1), 서열 번호 5의 아미노산 서열을 포함하는 CDR2(4373 TCR의 β 쇄의 CDR2) 및 서열 번호 6의 아미노산 서열을 포함하는 CDR3(4373 TCR의 β 쇄의 CDR3)을 포함하는 제2 폴리펩티드 쇄를 포함한다.

이와 관련하여, 본 발명의 TCR은 서열 번호 1 내지 6 중 어느 하나로부터 선택된 임의의 하나 이상의 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 본 발명의 한 실시태양에서, TCR은 (a) 서열 번호 1 내지 3 모두, (b) 서열 번호 4 내지 6 모두, 또는 (c) 서열 번호 1 내지 6 모두의 아미노산 서열을 포함한다. 특히 바람직한 실시태양에서, TCR은 서열 번호 1 내지 6 모두의 아미노산 서열을 포함한다.

서열 번호 3 또는 6, 즉 α 쇄 또는 β 쇄 또는 둘 다의 CDR3은 CDR의 첫 번째 아미노산에 바로 N-말단에 시스테인을 추가로 포함하거나, 최종 아미노산에 바로 C-말단에 페닐알라닌을 포함하거나, 이들 둘 다를 포함할 수 있다.

본 발명의 한 실시태양에서, TCR은 상기 제시된 CDR을 포함하는 TCR의 가변 영역의 아미노산 서열을 포함한다. 이와 관련하여, TCR은, 예를 들어 서열 번호 7(야생형 N-말단 신호 펩티드를 갖는 4373 TCR의 α 쇄의 가변 영역); 서열 번호 51(변이체 N-말단 신호 펩티드를 갖는 4373 TCR의 α 쇄의 가변 영역); 서열 번호 8(변이체 N-말단 신호 펩티드를 갖는 4373 TCR의 β 쇄의 가변 영역); 서열 번호 52(야생형 N-말단 신호 펩티드를 갖는 4373 TCR의 β 쇄의 가변 영역); 서열 번호 32(IMGT로 예측된 N-말단 신호 펩티드가 없는 4373 TCR의 α 쇄의 가변 영역); 서열 번호 33(IMGT로 예측된 N-말단 신호 펩티드가 없는 4373 TCR의 β 쇄의 가변 영역); 서열 번호 59(SignalP로 예측된 N-말단 신호 펩티드가 없는 4373 TCR의 α 쇄의 가변 영역); 서열 번호 60(SignalP로 예측된 N-말단 신호 펩티드가 없는 4373 TCR의 β 쇄의 가변 영역); 서열 번호 7 및 8 둘 다; 서열 번호 7 및 52 둘 다; 서열 번호 51 및 8 둘 다; 서열 번호 51 및 52 둘 다; 서열 번호 32 및 33 둘 다; 서열 번호 59 및 60 둘 다의 아미노산 서열을 포함할 수 있고; 바람직하게는, TCR은 (i) 서열 번호 7 및 8 둘 다, (ii) 서열 번호 51 및 52 둘 다, 또는 (iii) 서열 번호 32 및 33 둘 다의 아미노산 서열을 포함할 수 있다.

본 발명의 TCR은 α 쇄 불변 영역 및 β 쇄 불변 영역을 추가로 포함할 수 있다. 불변 영역은 예를 들어 인간 또는 마우스와 같은 임의의 적합한 종으로부터 유래될 수 있다. 본 발명의 한 실시태양에서, TCR은 뮤린 α 및 β 쇄 불변 영역 또는 인간 α 및 β 쇄 불변 영역을 추가로 포함한다. 본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "뮤린" 또는 "인간"은, TCR 또는 본원에 기재된 TCR의 임의의 성분(예를 들어, CDR, 가변 영역, 불변 영역, α 쇄 및/또는 β 쇄)을 언급할 때, 각각 마우스 또는 인간으로부터 유래된 TCR(또는 그의 성분), 즉, 각각 마우스 T 세포 또는 인간 T 세포에서 기원하거나 한 번에 이에 의해 발현되는 TCR(또는 그의 성분)을 의미한다.

본 발명의 한 실시태양은 인간 가변 영역 및 뮤린 불변 영역을 포함하는 키메라 TCR을 제공하며, 여기서 TCR은 위치 12의 글리신이 HLA 클래스 I 분자에 의해 제시되는 아스파르트산으로 치환된 돌연변이된 인간 RAS 아미노산 서열에 대하여 항원 특이성을 갖는다. 뮤린 불변 영역은 하나 이상의 이점을 제공할 수 있다. 예를 들어, 뮤린 불변 영역은 본 발명의 TCR이 도입되는 숙주 세포의 내인성 TCR과 본 발명의 TCR의 염기쌍오류(mispairing)를 감소시킬 수 있다. 대안적으로 또는 추가적으로, 뮤린 불변 영역은 인간 불변 영역을 갖는 동일한 TCR과 비교하여 본 발명의 TCR의 발현을 증가시킬 수 있다. 키메라 TCR은 서열 번호 19(WT 뮤린 α 쇄 불변 영역), 서열 번호 20(WT 뮤린 β 쇄 불변 영역), 또는 서열 번호 19 및 20 둘 다의 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 바람직하게는, 본 발명의 TCR은 서열 번호 19 및 20 둘 다의 아미노산 서열을 포함한다. 키메라 TCR은 본 발명의 다른 양태와 관련하여 본원에 기재된 임의의 CDR 영역과 조합하여 본원에 기재된 임의의 뮤린 불변 영역을 포함할 수 있다. 이와 관련하여, TCR은, 예를 들어, (a) 서열 번호 1 내지 3 및 19 모두; (b) 서열 번호 4 내지 6 및 20 모두; 또는 (c) 서열 번호 1 내지 6 및 19 및 20 모두의 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 본 발명의 또 다른 실시태양에서, 키메라 TCR은 본 발명의 다른 양태와 관련하여 본원에 기재된 임의의 가변 영역과 조합하여 본원에 기재된 임의의 뮤린 불변 영역을 포함할 수 있다. 이와 관련하여, TCR은, 예를 들어, (i) 서열 번호 7 및 19 둘 다: (ii) 서열 번호 51 및 19 둘 다; (iii) 서열 번호 8 및 20 둘 다; (iv) 서열 번호 52 및 20 둘 다; (v) 서열 번호 7 및 8 및 19 및 20 모두, 또는 (iv) 서열 번호 51 및 52 및 19 및 20 모두의 아미노산 서열을 포함할 수 있다.

본 발명의 한 실시태양에서, TCR은 가변 영역 및 불변 영역을 포함하는 α 쇄 및 가변 영역 및 불변 영역을 포함하는 β 쇄를 포함한다. 이와 관련하여, TCR은, 예를 들어 (a) 서열 번호 21의 아미노산 서열을 포함하는 α 쇄(야생형 N-말단 신호 펩티드를 갖는 4373 TCR의 α 쇄)[여기서, (i) 서열 번호 21의 위치 193에서의 X는 Thr 또는 Cys이고; (ii) 서열 번호 21의 위치 257에서의 X는 Ser, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Met 또는 Trp이고; (iii) 서열 번호 21의 위치 259에서의 X는 Met, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe 또는 Trp이고; (iv) 서열 번호 21의 위치 260에서의 X는 Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Met 또는 Trp임]; (b) 서열 번호 53의 아미노산 서열을 포함하는 α 쇄(변이체 N-말단 신호 펩티드를 갖는 4373 TCR의 α 쇄)[여기서, (i) 서열 번호 53의 위치 193에서의 X는 Thr 또는 Cys이고; (ii) 서열 번호 53의 위치 257에서의 X는 Ser, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Met 또는 Trp이고; (iii) 서열 번호 53의 위치 259에서의 X는 Met, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe 또는 Trp이고; (iv) 서열 번호 53의 위치 260에서의 X는 Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Met 또는 Trp임]; (c) 서열 번호 22의 아미노산 서열을 포함하는 β 쇄(변이체 N-말단 신호 펩티드를 갖는 4373 TCR의 β 쇄)[여기서, 서열 번호 22의 위치 191에서의 X는 Ser 또는 Cys임]; (d) 서열 번호 54의 아미노산 서열을 포함하는 β 쇄(야생형 N-말단 신호 펩티드를 갖는 4373 TCR의 β 쇄[여기서, 서열 번호 54의 위치 191에서의 X는 Ser 또는 Cys임]; (e) (a) 및 (c), (a) 및 (d), (b) 및 (c), 또는 (b) 및 (d) 둘 다, (f) 서열 번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 α 쇄(IMGT로 예측된 N-말단 신호 펩티드가 없는 4373 TCR의 α 쇄)[여기서, (i) 서열 번호 34의 위치 165에서의 X는 Thr 또는 Cys이고; (ii) 서열 번호 34의 위치 229에서의 X는 Ser, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Met 또는 Trp이고; (iii) 서열 번호 34의 위치 231에서의 X는 Met, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe 또는 Trp이고; (iv) 서열 번호 34의 위치 232에서의 X는 Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Met 또는 Trp임]; (g) 서열 번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 β 쇄(IMGT로 예측된 N-말단 신호 펩티드가 없는 4373 TCR의 β 쇄)[여기서, 서열 번호 35의 위치 172에서의 X는 Ser 또는 Cys임]; (h) 서열 번호 61의 아미노산 서열을 포함하는 α 쇄(SignalP로 예측된 N-말단 신호 펩티드가 없는 4373 TCR의 α 쇄)[여기서, (i) 서열 번호 61의 위치 172에서의 X는 Thr 또는 Cys이고; (ii) 서열 번호 61의 위치 236에서의 X는 Ser, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Met 또는 Trp이고; (iii) 서열 번호 61의 위치 238에서의 X는 Met, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe 또는 Trp이고; (iv) 서열 번호 61의 위치 239에서의 X는 Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Met 또는 Trp임]; (i) 서열 번호 62의 아미노산 서열을 포함하는 β 쇄(SignalP로 예측된 N-말단 신호 펩티드가 없는 4373 TCR의 β 쇄)[여기서, 서열 번호 62의 위치 170에서의 X는 Ser 또는 Cys임], 또는 (j) (f) 및 (g) 둘 다, 또는 (h) 및 (i) 둘 다를 포함할 수 있다.

본 발명의 또 다른 실시태양에서, TCR은 서열 번호 23(WT 뮤린 불변 영역 및 WT N-말단 신호 펩티드를 갖는 4373 TCR α 쇄), 서열 번호 55(야생형 뮤린 불변 영역 및 변이체 N-말단 신호 펩티드를 갖는 4373 TCR α 쇄), 서열 번호 24(야생형 뮤린 불변 영역 및 변이체 N-말단 신호 펩티드를 갖는 4373 TCR β 쇄), 서열 번호 56(WT 뮤린 불변 영역 및 야생형 N-말단 신호 펩티드를 갖는 4373 TCR β 쇄), 서열 번호 36(WT 뮤린 불변 영역을 갖고 IMGT로 예측된 N-말단 신호 펩티드가 없는 4373 TCR α 쇄), 서열 번호 37(WT 뮤린 불변 영역을 갖고 IMGT로 예측된 N-말단 신호 펩티드가 없는 4373 TCR β 쇄), 서열 번호 63(WT 뮤린 불변 영역을 갖고 SignalP로 예측된 N-말단 신호 펩티드가 없는 4373 TCR α 쇄), 서열 번호 64(WT 뮤린 불변 영역을 갖고 SignalP로 예측된 N-말단 신호 펩티드가 없는 4373 TCR β 쇄), 서열 번호 23 및 24 둘 다, 서열 번호 55 및 24 둘 다, 서열 번호 23 및 56 둘 다, 서열 번호 55 및 56 둘 다, 서열 번호 36 및 37 둘 다, 또는 서열 번호 63 및 64 둘 다의 아미노산 서열(들)을 포함한다.

본 발명의 한 실시태양에서, TCR은 치환된 불변 영역을 포함한다. 이와 관련하여, TCR은, 예를 들어, α 및 β 쇄 중 하나 또는 둘 다의 불변 영역에서 1, 2, 3, 또는 4개의 아미노산 치환(들)을 갖는 본원에 기재된 임의의 TCR의 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 바람직하게는, TCR은 α 및 β 쇄 중 하나 또는 둘 다의 뮤린 불변 영역에서 1, 2, 3, 또는 4개의 아미노산 치환(들)을 갖는 뮤린 불변 영역을 포함한다. 특히 바람직한 실시태양에서, TCR은 α 쇄의 뮤린 불변 영역에서 1, 2, 3 또는 4개의 아미노산 치환(들)을 갖고 β 쇄의 뮤린 불변 영역에서 1개의 아미노산 치환을 갖는 뮤린 불변 영역을 포함한다. 일부 실시태양에서, 치환된 불변 영역을 포함하는 TCR은 유리하게는 비치환된(야생형) 불변 영역을 포함하는 모 TCR과 비교하여 G12D RAS⁺ 표적의 증가된 인식, 숙주 세포에 의한 증가된 발현, 내인성 TCR과의 감소된 염기쌍오류 및 증가된 항-종양 활성 중 하나 이상을 제공한다. 일반적으로, TCR α 및 β 쇄의 뮤린 불변 영역의 치환된 아미노산 서열, 서열 번호 17 및 18은 각각 비치환된 뮤린 불변 영역 아미노산 서열 서열 번호 19 및 20의 전부 또는 일부에 각각 상응하고, 이때 서열 번호 17은 서열 번호 19와 비교할 때 1, 2, 3 또는 4개의 아미노산 치환을 갖고 서열 번호 18은 서열 번호 20과 비교할 때 1개의 아미노산 치환을 갖는다. 이와 관련하여, 본 발명의 실시태양은 (a) 서열 번호 17(α 쇄의 불변 영역)[여기서, (i) 위치 48에서의 X는 Thr 또는 Cys이고; (ii) 위치 112에서의 X는 Ser, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Met 또는 Trp이고; (iii) 위치 114에서의 X는 Met, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe 또는 Trp이고; (iv) 위치 115에서의 X는 Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Met 또는 Trp임]; (b) 서열 번호 18(β 쇄의 불변 영역)[여기서, 위치 57에서의 X는 Ser 또는 Cys임]; 또는 (c) 서열 번호 17 및 18 둘 다의 아미노산 서열을 포함하는 TCR을 제공한다. 본 발명의 한 실시태양에서, 서열 번호 17을 포함하는 TCR은 서열 번호 19(α 쇄의 비치환된 뮤린 불변 영역)를 포함하지 않는다. 본 발명의 한 실시태양에서, 서열 번호 18을 포함하는 TCR은 서열 번호 20(β 쇄의 비치환된 뮤린 불변 영역)을 포함하지 않는다.

본원에 기재된 임의의 마우스 알파 불변 영역의 첫 번째 아미노산은 서열 번호 17 및 19에 제공된 바와 같은 N과 상이할 수 있다. 예를 들어, 본원에 기재된 바와 같은 임의의 TCR 작성물, 폴리펩티드, 단백질 등에서, 이러한 첫 번째 아미노산은 임의의 뮤린 알파 불변 영역이 그 위치에서 상이한 아미노산을 가질 수 있도록 분할 코돈(가변 영역 및 불변 영역 둘 다로부터의 뉴클레오티드를 가짐)에 의해 인코딩될 수 있다. 유사하게, 본원에 기재된 임의의 마우스 베타 불변 영역의 첫 번째 아미노산은 서열 번호 18 및 20에 제공된 바와 같은 E와 상이할 수 있으며, 예를 들어, 이러한 첫 번째 아미노산은 분할 코돈에 의해 인코딩될 수 있다.

본 발명의 한 실시태양에서, 치환된 불변 영역은 α 및 β 쇄 중 하나 또는 둘 다의 불변 영역에서 시스테인 치환을 포함하여 시스테인-치환된 TCR을 제공한다. α 및 β 쇄에서 맞은편 시스테인은 치환된 TCR의 α 및 β 쇄의 불변 영역을 서로 연결하고 이황화 결합을 제공하고, 이는 비치환된 뮤린 불변 영역을 포함하는 TCR에는 존재하지 않는다. 이와 관련하여, TCR은 예를 들어, 서열 번호 19의 위치 48에서의 천연 Thr(Thr48) 및 서열 번호 20의 위치 57에서의 천연 Ser(Ser57) 중 하나 또는 둘 다가 시스테인으로 치환되는 시스테인-치환된 TCR일 수 있다. 바람직하게는, 서열 번호 19의 천연 Thr48 및 서열 번호 20의 천연 Ser57 둘 다가 Cys로 치환된다. 시스테인-치환된 TCR 불변 영역 서열의 예는 표 2에 제시되어 있다. 본 발명의 한 실시태양에서, 시스테인-치환된 TCR은 (i) 서열 번호 17, (ii) 서열 번호 18, 또는 (iii) 서열 번호 17 및 18 둘 다를 포함하고, 여기서 서열 번호 17 및 18 둘 다는 표 2에서 정의된 바와 같다. 본 발명의 시스테인-치환된 TCR은 본원에 기재된 임의의 CDR 또는 가변 영역에 더하여 치환된 불변 영역을 포함할 수 있다.

본 발명의 한 실시태양에서, 시스테인-치환된 키메라 TCR은 전장 α 쇄 및 전장 β 쇄를 포함한다. 시스테인-치환된 키메라 TCR α 쇄 및 β 쇄 서열의 예가 표 2에 제시되어 있다. 본 발명의 한 실시태양에서, TCR은 (i) 서열 번호 21, (ii) 서열 번호 53, (iii) 서열 번호 22, (iv) 서열 번호 54, (v) 서열 번호 34, (vi) 서열 번호 35, (vii) 서열 번호 61, (viii) 서열 번호 62, (ix) 서열 번호 21 및 22 둘 다, (x) 서열 번호 53 및 22 둘 다, (xi) 서열 번호 21 및 54 둘 다, (xii) 서열 번호 53 및 54 둘 다, (xiii) 서열 번호 34 및 35 둘 다, 또는 (xiv) 서열 번호 61 및 62 둘 다를 포함하고, 여기서 서열 번호 21, 22, 34, 35, 53, 54, 61 및 62 모두는 표 2에서 정의된 바와 같다.

본 발명의 한 실시태양에서, 치환된 아미노산 서열은 α 쇄의 불변 영역의 막횡단(TM) 도메인에서 1, 2 또는 3개의 아미노산의 소수성 아미노산에 의한 치환을 포함하여 소수성 아미노산 치환된 TCR(본원에서 "LVL-변형된 TCR"로도 지칭됨)을 제공하는 것을 포함한다. TCR의 TM 도메인에서 소수성 아미노산 치환(들)은 TM 도메인에서 소수성 아미노산 치환(들)이 결여된 TCR과 비교하여 TCR의 TM 도메인의 소수성을 증가시킬 수 있다. 이와 관련하여, TCR은 서열 번호 19의 천연 Ser112, Met114 및 Gly115 중 1개, 2개 또는 3개가 독립적으로 Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Met 또는 Trp; 바람직하게는 Leu, Ile 또는 Val로 치환될 수 있는 LVL-변형된 TCR이고; 서열 번호 20의 천연 Ser57은 Cys로 치환될 수 있다. 바람직하게는, 서열 번호 19의 천연 Ser112, Met114 및 Gly115 중 3개 모두는 독립적으로 Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Met 또는 Trp; 바람직하게는 Leu, Ile 또는 Val로 치환될 수 있다. 본 발명의 한 실시태양에서, LVL-변형된 TCR은 (i) 서열 번호 17, (ii) 서열 번호 18, 또는 (iii) 서열 번호 17 및 18 둘 다를 포함하며, 여기서 서열 번호 17 및 18 둘 다는 표 3에서 정의된 바와 같다. 본 발명의 LVL-변형된 TCR은 본원에 기재된 임의의 CDR 또는 가변 영역 이외에 치환된 불변 영역을 포함할 수 있다.

본 발명의 한 실시태양에서, LVL-변형된 TCR은 전장 α 쇄 및 전장 β 쇄를 포함한다. LVL-변형된 TCR α 쇄 및 β 쇄 서열의 예는 표 3에 제시되어 있다. 본 발명의 한 실시태양에서, LVL-변형된 TCR은 (i) 서열 번호 21, (ii) 서열 번호 53, (iii) 서열 번호 22, (iv) 서열 번호 54, (v) 서열 번호 34, (vi) 서열 번호 35, (vii) 서열 번호 61, (viii) 서열 번호 62, (ix) 서열 번호 21 및 22 둘 다, (x) 서열 번호 53 및 22 둘 다, (xi) 서열 번호 21 및 54 둘 다, (xii) 서열 번호 53 및 54 둘 다, (xiii) 서열 번호 34 및 35 둘 다, 또는 (xiv) 서열 번호 61 및 62 둘 다를 포함하고, 여기서 서열 번호 21, 22, 34, 35, 53, 54, 61 및 62 모두는 표 3에서 정의된 바와 같다.

본 발명의 한 실시태양에서, 치환된 아미노산 서열은 소수성 아미노산을 갖는 α 쇄의 불변 영역의 막횡단(TM) 도메인에서 1, 2 또는 3개의 아미노산의 치환(들)과 조합하여 α 및 β 쇄 중 하나 또는 둘 다의 불변 영역에서 시스테인 치환을 포함한다(본원에서 "시스테인-치환된, LVL-변형된 TCR"로도 지칭됨). 이와 관련하여, TCR은 서열 번호 19의 천연 Thr48이 Cys로 치환되고; 서열 번호 19의 천연 Ser112, Met114 및 Gly115 중 1, 2 또는 3개는 독립적으로 Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Met 또는 Trp; 바람직하게는 Leu, Ile 또는 Val로 치환되고; 서열 번호 20의 천연 Ser57은 Cys로 치환되는, 시스테인-치환된, LVL-변형된 키메라 TCR이다. 바람직하게는, 서열 번호 19의 천연 Ser112, Met114 및 Gly115 중 3개 모두는 독립적으로 Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Met 또는 Trp; 바람직하게는 Leu, Ile 또는 Val로 치환될 수 있다. 본 발명의 한 실시태양에서, 시스테인-치환된, LVL-변형된 TCR은 (i) 서열 번호 17, (ii) 서열 번호 18, 또는 (iii) 서열 번호 17 및 18 둘 다를 포함하며, 여기서 서열 번호 17 및 18 둘 다는 표 4에서 정의된 바와 같다. 본 발명의 시스테인-치환된, LVL-변형된 TCR은 본원에 기재된 임의의 CDR 또는 가변 영역 이외에 치환된 불변 영역을 포함할 수 있다.

실시태양에서, 시스테인-치환된, LVL-변형된 TCR은 전장 α 쇄 및 전장 β 쇄를 포함한다. 본 발명의 한 실시태양에서, 시스테인-치환된, LVL-변형된 TCR은 (i) 서열 번호 21, (ii) 서열 번호 53, (iii) 서열 번호 22, (iv) 서열 번호 54, (v) 서열 번호 34, (vi) 서열 번호 35, (vii) 서열 번호 61, (viii) 서열 번호 62, (ix) 서열 번호 21 및 22 둘 다, (x) 서열 번호 53 및 22 둘 다, (xi) 서열 번호 21 및 54 둘 다, (xii) 서열 번호 53 및 54 둘 다, (xiii) 서열 번호 34 및 35 둘 다, 또는 (xiv) 서열 번호 61 및 62 둘 다를 포함하고, 여기서 서열 번호 21, 22, 34, 35, 53, 54, 61 및 62는 모두 표 4에서 정의된 바와 같다.

본 발명의 한 실시태양에서, 시스테인-치환된, LVL-변형된 TCR은 (a) 서열 번호 38(시스테인-치환된, LVL-변형된 TCR의 α 쇄 불변 영역); (b) 서열 번호 39(시스테인-치환된, LVL-변형된 TCR의 β 쇄 불변 영역); (c) 서열 번호 40(야생형 N-말단 신호 서열을 갖는 시스테인-치환된, LVL-변형된 4373 TCR의 α 쇄); (d) 서열 번호 41(변이체 N-말단 신호 서열을 갖는 시스테인-치환된, LVL-변형된 4373 TCR의 β 쇄); (e) 서열 번호 42(IMGT에 의해 예측된 N-말단 신호 서열이 없는 시스테인-치환된, LVL-변형된 4373 TCR의 α 쇄); (f) 서열 번호 43(IMGT에 의해 예측된 N-말단 신호 서열이 없는 시스테인-치환된, LVL-변형된 4373 TCR의 β 쇄); (g) 서열 번호 65(SignalP에 의해 예측된 N-말단 신호 서열이 없는 시스테인-치환된, LVL-변형된 4373 TCR의 α 쇄); (h) 서열 번호 66(SignalP에 의해 예측된 N-말단 신호 서열이 없는 시스테인-치환된, LVL-변형된 4373 TCR의 β 쇄); (i) 서열 번호 57(변이체 N-말단 신호 서열을 갖는 시스테인-치환된, LVL-변형된 4373 TCR의 α 쇄); (j) 서열 번호 58(야생형 N-말단 신호 서열을 갖는 시스테인-치환된, LVL-변형된 4373 TCR의 β 쇄); (k) (a) 및 (b) 둘 다; (l) (c) 및 (d) 둘 다; (m) (e) 및 (f) 둘 다; (n) (g) 및 (h) 둘 다; 또는 (o) (i) 및 (j) 둘 다를 포함한다.

또한, 본 발명은 본원에 기재된 임의의 TCR의 기능적 부분을 포함하는 폴리펩티드를 제공한다. 본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "폴리펩티드"는 올리고펩티드를 포함하고 하나 이상의 펩티드 결합에 의해 연결된 아미노산의 단일 쇄를 지칭한다.

본 발명의 폴리펩티드와 관련하여, 기능적 부분이 G12D RAS에 특이적으로 결합하는 한, 기능적 부분은 그의 모체인 TCR의 연속 아미노산을 포함하는 임의의 부분일 수 있다. TCR과 관련하여 사용될 때 용어 "기능적 부분"은 본 발명의 TCR의 임의의 부분 또는 단편을 지칭하며, 이 부분 또는 단편은 그의 모체인 TCR(모 TCR)의 생물학적 활성을 보유한다. 기능적 부분은 예를 들어, G12D RAS에 특이적으로 결합하는 능력(예를 들어, HLA-A^*11:01 분자와 관련하여)을 유지하거나 암을 검출, 치료 또는 예방하는 능력을 모 TCR과 비슷한 정도, 같은 정도 또는 더 높은 정도로 보유하는 TCR의 부분을 포괄한다. 모 TCR과 관련하여, 기능적 부분은 예를 들어 모 TCR의 약 10%, 약 25%, 약 30%, 약 50%, 약 68%, 약 80%, 약 90%, 약 95%, 또는 그 이상을 포함할 수 있다.

기능적 부분은 그 부분의 아미노 또는 카르복시 말단, 또는 말단 양쪽에 추가의 아미노산을 포함할 수 있으며, 이러한 추가의 아미노산은 모 TCR의 아미노산 서열에서 발견되지 않는다. 바람직하게는, 추가의 아미노산은 기능적 부분의 생물학적 기능, 예를 들어 G12D RAS에 대한 특이적인 결합; 및/또는 암을 검출하는 능력, 암을 치료 또는 예방하는 능력 등을 방해하지 않는다. 보다 바람직하게는, 추가의 아미노산은 모 TCR의 생물학적 활성과 비교하여 생물학적 활성을 향상시킨다.

폴리펩티드는 본 발명의 TCR의 α 및 β 쇄 중 하나 또는 둘 다의 기능적 부분, 예컨대 본 발명의 TCR의 α 쇄 및/또는 β 쇄의 가변 영역(들)의 CDR1, CDR2 및 CDR3 중 하나 이상을 포함하는 기능적 부분을 포함할 수 있다. 본 발명의 한 실시태양에서, 폴리펩티드는 서열 번호 1(α 쇄의 CDR1), 서열 번호 2(α 쇄의 CDR2), 서열 번호 3(α 쇄의 CDR3), 서열 번호 4(β 쇄의 CDR1), 서열 번호 5(β 쇄의 CDR2), 서열 번호 6(β 쇄의 CDR3), 또는 이들의 조합의 아미노산 서열을 포함할 수 있다.

이와 관련하여, 본 발명의 폴리펩티드는 서열 번호 1 내지 6 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열 중 임의의 하나 이상을 포함할 수 있다. 본 발명의 한 실시태양에서, TCR은 (a) 서열 번호 1 내지 3 모두, (b) 서열 번호 4 내지 6 모두, 또는 (c) 서열 번호 1 내지 6 모두의 아미노산 서열을 포함한다. 바람직한 실시태양에서, 폴리펩티드는 서열 번호 1 내지 6 모두의 아미노산 서열을 포함한다. 서열 번호 3 또는 6, 즉, α 쇄 또는 β 쇄 또는 둘 다의 CDR3은 CDR의 첫 번째 아미노산에 바로 N-말단에 시스테인을, 또는 최종 아미노산에 바로 C-말단에 페닐알라닌을, 또는 둘 다를 추가로 포함할 수 있다.

본 발명의 한 실시태양에서, 본 발명의 폴리펩티드는 예를 들어 상기 제시된 CDR 영역의 조합을 포함하는 본 발명의 TCR의 가변 영역을 포함할 수 있다. 이와 관련하여, 폴리펩티드는 (i) 서열 번호 7(야생형 N-말단 신호 서열을 갖는 α 쇄의 가변 영역), (ii) 서열 번호 51(변이체 N-말단 신호 서열을 갖는 4373 TCR의 α 쇄의 가변 영역), (iii) 서열 번호 8(변이체 N-말단 신호 서열을 갖는 β 쇄의 가변 영역), (iv) 서열 번호 52(야생형 N-말단 신호 서열을 갖는 β 쇄의 가변 영역), (v) 서열 번호 7 및 8 둘 다; (vi) 서열 번호 51 및 8 둘 다, (vii) 서열 번호 7 및 52 둘 다, (viii) 서열 번호 51 및 52 둘 다, (ix) 서열 번호 32(IMGT로 예측된 N-말단 신호 서열이 없는 α 쇄의 가변 영역), (x) 서열 번호 33(IMGT로 예측된 N-말단 신호 서열이 없는 β 쇄의 가변 영역), (xi) 서열 번호 59(SignalP로 예측된 N-말단 신호 펩티드가 없는 4373 TCR의 α 쇄의 가변 영역); (xii) 서열 번호 60(SignalP로 예측된 N-말단 신호 펩티드가 없는 4373 TCR의 β 쇄의 가변 영역); (xiii) 서열 번호 32 및 33 둘 다, 또는 서열 번호 59 및 60 둘 다의 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 바람직하게는, 폴리펩티드는 (i) 서열 번호 7 및 8 둘 다, (ii) 서열 번호 51 및 52 둘 다, (iii) 서열 번호 32 및 33 둘 다, 또는 (iv) 서열 번호 59 및 60 둘 다의 아미노산 서열을 포함한다.

본 발명의 한 실시태양에서, 본 발명의 폴리펩티드는 상기 제시된 본 발명의 TCR의 불변 영역을 추가로 포함할 수 있다. 이와 관련하여, 폴리펩티드는 서열 번호 19(α 쇄의 WT 뮤린 불변 영역), 서열 번호 20(β 쇄의 WT 뮤린 불변 영역), 서열 번호 17(α 쇄의 치환된 뮤린 불변 영역), 서열 번호 18(β 쇄의 치환된 뮤린 불변 영역), 서열 번호 38(시스테인-치환된, LVL-변형된 TCR의 α 쇄 불변 영역); 서열 번호 39(시스테인 치환, LVL 변형 TCR의 β 쇄 불변 영역); 서열 번호 19 및 20 둘 다, 서열 번호 17 및 18 둘 다, 또는 서열 번호 38 및 39 둘 다의 아미노산 서열을 추가로 포함할 수 있다. 바람직하게는, 폴리펩티드는 본 발명의 다른 양태와 관련하여 본원에 기재된 임의의 CDR 영역 또는 가변 영역과 조합하여 서열 번호 17 및 18 둘 다, 서열 번호 19 및 20, 또는 서열 번호 38 및 39 둘 다의 아미노산 서열을 추가로 포함한다. 본 발명의 한 실시태양에서, 폴리펩티드의 서열 번호 17 및 18 중 하나 또는 둘 다는 표 2 내지 4 중 어느 하나에서 정의된 바와 같다. 본원에 제공된 α 쇄 불변 영역은 N-말단 아스파라긴과 함께 제시된다. 일부 실시태양에서, 본원에 기재된 α 쇄 불변 영역의 N-말단 아미노산은 아스파르트산이다.

본 발명의 한 실시태양에서, 본 발명의 폴리펩티드는 본원에 기재된 TCR의 α 또는 β 쇄의 전장을 포함할 수 있다. 이와 관련하여, 본 발명의 폴리펩티드는 서열 번호 21, 서열 번호 53, 서열 번호 22, 서열 번호 54, 서열 번호 23, 서열 번호 55, 서열 번호 24, 서열 번호 56, 서열 번호 34, 서열 번호 61, 서열 번호 35, 서열 번호 62, 서열 번호 36, 서열 번호 63, 서열 번호 37, 서열 번호 64, 서열 번호 40, 서열 번호 57, 서열 번호 41, 서열 번호 58, 서열 번호 42, 서열 번호 65, 서열 번호 43, 서열 번호 66, 서열 번호 21 및 22 둘 다, 서열 번호 21 및 54 둘 다, 서열 번호 53 및 22 둘 다, 서열 번호 53 및 54 둘 다, 서열 번호 23 및 24 둘 다, 서열 번호 55 및 24 둘 다, 서열 번호 23 및 54 둘 다, 서열 번호 55 및 54 둘 다, 서열 번호 34 및 35 둘 다, 서열 번호 36 및 37 둘 다, 서열 번호 40 및 41 둘 다, 서열 번호 57 및 41 둘 다, 서열 번호 40 및 58 둘 다, 서열 번호 57 및 58 둘 다, 서열 번호 42 및 43 둘 다, 서열 번호 61 및 62 둘 다, 서열 번호 63 및 64 둘 다 또는 서열 번호 65 및 66 둘 다를 포함할 수 있다. 대안적으로, 본 발명의 폴리펩티드는 본원에 기재된 TCR의 2개의 쇄를 모두 포함할 수 있다.

예를 들어, 본 발명의 폴리펩티드는 (a) 서열 번호 21의 아미노산 서열[여기서, (i) 서열 번호 21의 위치 193에서의 X는 Thr 또는 Cys이고; (ii) 서열 번호 21의 위치 257에서의 X는 Ser, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Met 또는 Trp이고; (iii) 서열 번호 21의 위치 259에서의 X는 Met, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe 또는 Trp이고; (iv) 서열 번호 21의 위치 260에서의 X는 Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Met 또는 Trp임]; (b) 서열 번호 53의 아미노산 서열[여기서, (i) 서열 번호 53의 위치 193에서의 X는 Thr 또는 Cys이고; (ii) 서열 번호 53의 위치 257에서의 X는 Ser, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Met 또는 Trp이고; (iii) 서열 번호 53의 위치 259에서의 X는 Met, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe 또는 Trp이고; (iv) 서열 번호 53의 위치 260에서의 X는 Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Met 또는 Trp임]; (c) 서열 번호 22의 아미노산 서열[여기서, 서열 번호 22의 위치 191에서의 X는 Ser 또는 Cys임]; (d) 서열 번호 54의 아미노산 서열[여기서, 서열 번호 54의 위치 191에서의 X는 Ser 또는 Cys임]; (e) (a) 및 (c), (a) 및 (d), (b) 및 (c), 또는 (b) 및 (d) 둘 다, (f) 서열 번호 34의 아미노산 서열[여기서, (i) 서열 번호 34의 위치 165에서의 X는 Thr 또는 Cys이고; (ii) 서열 번호 34의 위치 229에서의 X는 Ser, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Met 또는 Trp이고; (iii) 서열 번호 34의 위치 231에서의 X는 Met, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe 또는 Trp이고; (iv) 서열 번호 34의 위치 232에서의 X는 Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Met 또는 Trp임]; (g) 서열 번호 35의 아미노산 서열[여기서, 서열 번호 35의 위치 172에서의 X는 Ser 또는 Cys임]; (h) 서열 번호 61의 아미노산 서열[여기서, (i) 서열 번호 61의 위치 172에서의 X는 Thr 또는 Cys이고; (ii) 서열 번호 61의 위치 236에서의 X는 Ser, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Met 또는 Trp이고; (iii) 서열 번호 61의 위치 238에서의 X는 Met, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe 또는 Trp이고; (iv) 서열 번호 61의 위치 239에서의 X는 Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Met 또는 Trp이고; (i) 서열 번호 62의 아미노산 서열[여기서, 서열 번호 62의 위치 170에서의 X는 Ser 또는 Cys임]; (j) (f) 및 (g) 둘 다 또는 (h) 및 (i) 둘 다; (k) 서열 번호 40; (l) 서열 번호 57; (m) 서열 번호 41; (n) 서열 번호 58; (o) 서열 번호 42; (p) 서열 번호 43; (q) 서열 번호 65; (r) 서열 번호 66; (s) (k) 및 (m) 둘 다; (t) (l) 및 (m) 둘 다; (u) (k) 및 (n) 둘 다; (v) (l) 및 (n) 둘 다; (w) (o) 및 (p) 둘 다; 또는 (x) (q) 및 (r) 둘 다를 포함할 수 있다. 본 발명의 한 실시태양에서, 폴리펩티드의 서열 번호 21, 22, 34, 35, 53, 54, 61 및 62 중 임의의 하나 이상은 표 2 내지 4 중 어느 하나에서 정의된 바와 같다.

본 발명은 본원에 기재된 폴리펩티드 중 적어도 하나를 포함하는 단백질을 추가로 제공한다. "단백질"은 하나 이상의 폴리펩티드 쇄를 포함하는 분자를 의미한다.

한 실시태양에서, 본 발명의 단백질은 서열 번호 1 내지 3의 아미노산 서열을 포함하는 제1 폴리펩티드 쇄 및 서열 번호 4 내지 6의 아미노산 서열을 포함하는 제2 폴리펩티드 쇄를 포함할 수 있다. 서열 번호 3 또는 6, 즉, α 쇄 또는 β 쇄 또는 둘 다의 CDR3은 CDR의 첫 번째 아미노산에 바로 N-말단에 시스테인을, 또는 최종 아미노산에 바로 C-말단에 페닐알라닌을, 또는 둘 다를 추가로 포함할 수 있다.

본 발명의 또 다른 실시태양에서, (i) 단백질의 제1 폴리펩티드 쇄는 서열 번호 7의 아미노산 서열을 포함할 수 있고, 제2 폴리펩티드 쇄는 서열 번호 8의 아미노산 서열을 포함할 수 있거나; (ii) 단백질의 제1 폴리펩티드 쇄는 서열 번호 51의 아미노산 서열을 포함할 수 있고, 제2 폴리펩티드 쇄는 서열 번호 8의 아미노산 서열을 포함할 수 있거나; (iii) 단백질의 제1 폴리펩티드 쇄는 서열 번호 7의 아미노산 서열을 포함할 수 있고, 제2 폴리펩티드 쇄는 서열 번호 52의 아미노산 서열을 포함할 수 있거나; (iv) 단백질의 제1 폴리펩티드 쇄는 서열 번호 51의 아미노산 서열을 포함할 수 있고, 제2 폴리펩티드 쇄는 서열 번호 52의 아미노산 서열을 포함할 수 있거나; (v) 단백질의 제1 폴리펩티드 쇄는 서열 번호 32의 아미노산 서열을 포함할 수 있고, 제2 폴리펩티드 쇄는 서열 번호 33의 아미노산 서열을 포함할 수 있거나; 또는 (vi) 단백질의 제1 폴리펩티드 쇄는 서열 번호 59의 아미노산 서열을 포함할 수 있고, 제2 폴리펩티드 쇄는 서열 번호 60의 아미노산 서열을 포함할 수 있다.

본 발명의 단백질은 본 발명의 다른 양태와 관련하여 본원에 기재된 임의의 불변 영역을 추가로 포함할 수 있다. 이와 관련하여, 본 발명의 한 실시태양에서, (i) 제1 폴리펩티드 쇄는 서열 번호 17의 아미노산 서열을 추가로 포함할 수 있고, 제2 폴리펩티드 쇄는 서열 번호 18의 아미노산 서열을 추가로 포함할 수 있거나; (ii) 제1 폴리펩티드 쇄는 서열 번호 19의 아미노산 서열을 추가로 포함할 수 있고, 제2 폴리펩티드 쇄는 서열 번호 20의 아미노산 서열을 추가로 포함할 수 있거나; 또는 (iii) 제1 폴리펩티드 쇄는 서열 번호 38의 아미노산 서열을 포함할 수 있고, 제2 폴리펩티드 쇄는 서열 번호 39의 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 단백질의 서열 번호 17 및 18중 하나 또는 둘 다는 표 2 내지 4 중 어느 하나에서 정의된 바와 같다.

대안적으로 또는 추가적으로, 본 발명의 한 실시태양의 단백질은 다음과 같다: (a) 제1 폴리펩티드 쇄는 서열 번호 21의 아미노산 서열을 포함하거나[여기서, (i) 서열 번호 21의 위치 193에서의 X는 Thr 또는 Cys이고; (ii) 서열 번호 21의 위치 257에서의 X는 Ser, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Met 또는 Trp이고; (iii) 서열 번호 21의 위치 259에서의 X는 Met, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe 또는 Trp이고; (iv) 서열 번호 21의 위치 260에서의 X는 Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Met 또는 Trp임]; (b) 제1 폴리펩티드 쇄는 서열 번호 53의 아미노산 서열을 포함하거나[여기서, (i) 서열 번호 53의 위치 193에서의 X는 Thr 또는 Cys이고; (ii) 서열 번호 53의 위치 257에서의 X는 Ser, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Met 또는 Trp이고; (iii) 서열 번호 53의 위치 259에서의 X는 Met, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe 또는 Trp이고; (iv) 서열 번호 53의 위치 260에서의 X는 Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Met 또는 Trp임]; (c) 제2 폴리펩티드 쇄는 서열 번호 22의 아미노산 서열을 포함하거나[여기서, 서열 번호 22의 위치 191에서의 X는 Ser 또는 Cys임]; (d) 제2 폴리펩티드 쇄는 서열 번호 54의 아미노산 서열을 포함하거나[여기서, 서열 번호 54의 위치 191에서의 X는 Ser 또는 Cys임]; (e) (a) 및 (c), (a) 및 (d), (b) 및 (c), 또는 (b) 및 (d) 둘 다이거나, (f) 제1 폴리펩티드 쇄는 서열 번호 34의 아미노산 서열을 포함하거나[여기서, (i) 서열 번호 34의 위치 165에서의 X는 Thr 또는 Cys이고; (ii) 서열 번호 34의 위치 229에서의 X는 Ser, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Met 또는 Trp이고; (iii) 서열 번호 34의 위치 231에서의 X는 Met, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe 또는 Trp이고; (iv) 서열 번호 34의 위치 232에서의 X는 Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Met 또는 Trp임]; (g) 제2 폴리펩티드 쇄는 서열 번호 35의 아미노산 서열을 포함하거나[여기서, 서열 번호 35의 위치 172에서의 X는 Ser 또는 Cys임]; (h) 제1 폴리펩티드 쇄는 서열 번호 61의 아미노산 서열을 포함하거나[여기서, (i) 서열 번호 61의 위치 172에서의 X는 Thr 또는 Cys이고; (ii) 서열 번호 61의 위치 236에서의 X는 Ser, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Met 또는 Trp이고; (iii) 서열 번호 61의 위치 238에서의 X는 Met, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe 또는 Trp이고; (iv) 서열 번호 61의 위치 239에서의 X는 Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Met 또는 Trp임]; (i) 제2 폴리펩티드 쇄는 서열 번호 62의 아미노산 서열(SignalP로 예측된 N-말단 신호 펩티드가 없는 4373 TCR의 β 쇄)을 포함하거나[여기서, 서열 번호 62의 위치 170에서의 X는 Ser 또는 Cys임]; (j) (f) 또는 (h) 및 (i) 둘 다이거나; (k) 제1 폴리펩티드 쇄는 서열 번호 40의 아미노산 서열을 포함하거나; (k) 제1 폴리펩티드 쇄는 서열 번호 57의 아미노산 서열을 포함하거나; (m) 제2 폴리펩티드 쇄는 서열 번호 41의 아미노산 서열을 포함하거나; (n) 제2 폴리펩티드 쇄는 서열 번호 58의 아미노산 서열을 포함하거나; (o) 제1 폴리펩티드 쇄는 서열 번호 42의 아미노산 서열을 포함하거나; (p) 제2 폴리펩티드 쇄는 서열 번호 43의 아미노산 서열을 포함하거나; (p) 제1 폴리펩티드 쇄는 서열 번호 65의 아미노산 서열을 포함하거나; (q) 제2 폴리펩티드 쇄는 서열 번호 66의 아미노산 서열을 포함하거나; (s) (k) 및 (m) 둘 다이거나; (t) (l) 및 (m) 둘 다이거나; (u) (k) 및 (n) 둘 다이거나; (v) (m) 및 (n) 둘 다이거나; (w) (o) 및 (p) 둘 다이거나; 또는 (q) 및 (r) 둘 다이다. 본 발명의 한 실시태양에서, 서열 번호 21, 22, 34, 35, 53, 54, 61 및 62 중 하나 이상은 표 2 내지 4 중 어느 하나에서 정의된 바와 같다.

본 발명의 단백질은 TCR일 수 있다. 대안적으로, 예를 들어 단백질이 서열 번호 23 및 24 둘 다, 서열 번호 55 및 24 둘 다, 서열 번호 23 및 56 둘 다, 서열 번호 55 및 56 둘 다, 서열 번호 21 및 22 둘 다, 서열 번호 53 및 22 둘 다, 서열 번호 21 및 54 둘 다, 서열 번호 53 및 54 둘 다의 아미노산 서열을 포함하는 단일 폴리펩티드 쇄를 포함하는 경우, 또는 단백질의 제1 및/또는 제2 폴리펩티드 쇄(들)가 다른 아미노산 서열, 예를 들어 면역글로불린 또는 그의 일부를 인코딩하는 아미노산 서열을 추가로 포함하는 경우, 본 발명의 단백질은 융합 단백질일 수 있다. 이와 관련하여, 본 발명은 또한 적어도 하나의 다른 폴리펩티드와 함께 본원에 기재된 본 발명의 폴리펩티드 중 적어도 하나를 포함하는 융합 단백질을 제공한다. 다른 폴리펩티드는 융합 단백질의 별도의 폴리펩티드로 존재할 수 있거나, 본원에 기재된 본 발명의 폴리펩티드 중 하나와 프레임 내(일렬로) 발현되는 폴리펩티드로 존재할 수 있다. 다른 폴리펩티드는 면역글로불린, CD3, CD4, CD8, MHC 분자, CD1 분자, 예를 들어, CD1a, CD1b, CD1c, CD1d 등을 포함하나 이에 제한되지 않는 임의의 펩티드 또는 단백질성 분자, 또는 그의 일부를 인코딩할 수 있다.

융합 단백질은 본 발명의 폴리펩티드의 하나 이상의 복사물 및/또는 다른 폴리펩티드의 하나 이상의 복사물을 포함할 수 있다. 예를 들어, 융합 단백질은 본 발명의 폴리펩티드 및/또는 다른 폴리펩티드의 1, 2, 3, 4, 5개 이상의 복사물을 포함할 수 있다. 융합 단백질을 제조하는 적합한 방법은 당업계에 공지되어 있으며, 예를 들어 재조합 방법을 포함한다.

본 발명의 일부 실시태양에서, 본 발명의 TCR, 폴리펩티드 및 단백질은 α 쇄와 β 쇄를 연결하는 연결기 펩티드를 포함하는 단일 단백질로서 발현될 수 있다. 이와 관련하여, 본 발명의 TCR, 폴리펩티드 및 단백질은 연결기 펩티드를 추가로 포함할 수 있다. 연결기 펩티드는 유리하게는 숙주 세포에서 재조합 TCR, 폴리펩티드 및/또는 단백질의 발현을 촉진할 수 있다. 연결기 펩티드는 임의의 적합한 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 연결기 펩티드는 절단가능한 연결기 펩티드일 수 있다. 예를 들어, 연결기 펩티드는 RAKRSGSGATNFSLLKQAGDVEENPGP(서열 번호 25)의 아미노산 서열을 포함하는 푸린-SGSG-P2A 연결기일 수 있다. 연결기 펩티드를 포함하는 작성물이 숙주 세포에 의해 발현되면 연결기 펩티드가 절단되어 분리된 α 및 β 쇄를 생성할 수 있다. 본 발명의 한 실시태양에서, TCR, 폴리펩티드 또는 단백질은 전장 α 쇄, 전장 β 쇄 및 α 및 β 쇄 사이에 위치하는 연결기 펩티드, 예를 들어 α 쇄-연결기-β 쇄 또는 β 쇄-연결기-α 쇄를 포함하는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.

본 발명의 한 실시태양에서, TCR, 폴리펩티드 또는 단백질은 N-말단에서 C-말단까지, β 쇄, 연결기(서열 번호 25) 및 α 쇄를 포함하는 서열 번호 47에 제시된 바와 같은 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 변이체는 서열 번호 8에 제시된 바와 같은 β 쇄 가변 영역(변이체 신호 펩티드 포함) 및 서열 번호 39에 제시된 바와 같은 변형된 β 불변 도메인을 포함한다. 변이체의 전장 β 쇄는 서열 번호 41에 제시되어 있다. 변이체는 또한 서열 번호 7에 제시된 바와 같은 α 쇄 가변 영역(야생형 신호 펩티드 포함) 및 서열 번호 38에 제시된 바와 같은 변형된 α 불변 도메인을 포함한다. 변이체의 전장 α 쇄는 서열 번호 40에 제시되어 있다.

본 발명의 또 다른 실시태양에서, TCR, 폴리펩티드 또는 단백질은 N-말단에서 C-말단까지, α 쇄, 연결기(서열 번호 25) 및 β 쇄를 포함하는 서열 번호 67에 제시된 바와 같은 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 변이체는 서열 번호 51에 제시된 바와 같은 α 쇄 가변 영역(변이체 신호 펩티드 포함) 및 서열 번호 38에 제시된 바와 같은 변형된 α 불변 도메인을 포함한다. 변이체의 전장 α 쇄는 서열 번호 57에 제시되어 있다. 변이체는 또한 서열 번호 52에 제시된 바와 같은 β 쇄 가변 영역(야생형 신호 펩티드 포함) 및 서열 번호 39에 제시된 바와 같은 변형된 β 불변 도메인을 포함한다. 변이체의 전장 β 쇄는 서열 번호 58에 제시되어 있다.

일부 실시태양에서, 본원에 개시된 TCR, 폴리펩티드 또는 단백질은 신호 펩티드를 포함하는, 본원에 기재된 바와 같은 α 쇄 및/또는 β 쇄를 포함한다. 일부 실시태양에서, 본원에 개시된 임의의 α 쇄 및/또는 β 쇄의 신호 펩티드의 서열은 위치 2에서 야생형 잔기에 대해 치환된 알라닌 또는 히스티딘 잔기를 포함한다.

일부 실시태양에서, 본원에 개시된 TCR, 폴리펩티드 또는 단백질은 신호 펩티드가 결여된 본원에 개시된 바와 같은 성숙한 형태의 α 쇄 및/또는 β 쇄를 포함한다. 신호 펩티드의 서열 또는 α 쇄 및/또는 β 쇄의 성숙한 형태는 IMGT 및 SignalP를 비롯한 당업계에 공지된 임의의 방법에 따라 수행될 수 있다.

본 발명의 단백질은 본원에 기재된 본 발명의 폴리펩티드 중 적어도 하나를 포함하는 재조합 항체 또는 그의 항원 결합 부분일 수 있다. 본원에서 사용되는 바와 같이, "재조합 항체"는 본 발명의 폴리펩티드 중 적어도 하나 및 항체의 폴리펩티드 쇄, 또는 그의 항원 결합 부분을 포함하는 재조합(예를 들어, 유전적으로 조작된) 단백질을 지칭한다. 항체 또는 그의 항원 결합 부분의 폴리펩티드는 중쇄, 경쇄, 중쇄 또는 경쇄의 가변 또는 불변 영역, 단일쇄 가변 단편(scFv), 또는 항체의 Fc, Fab, 또는 F(ab)2' 단편 등일 수 있다. 항체 또는 그의 항원 결합 부분의 폴리펩티드 쇄는 재조합 항체의 별도의 폴리펩티드로 존재할 수 있다. 대안적으로, 항체, 또는 그의 항원 결합 부분의 폴리펩티드 쇄는 본 발명의 폴리펩티드와 프레임 내에서(일렬로) 발현되는 폴리펩티드로서 존재할 수 있다. 항체, 또는 그의 항원 결합 부분의 폴리펩티드는 본원에 기재된 임의의 항체 및 항체 단편을 포함하는 임의의 항체 또는 임의의 항체 단편의 폴리펩티드일 수 있다.

본 발명의 범주에는 본원에 기재된 본 발명의 TCR, 폴리펩티드 또는 단백질의 기능적 변이체가 포함된다. 본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "기능적 변이체"는 모 TCR, 폴리펩티드 또는 단백질과 실질적인 또는 상당한 서열 동일성 또는 유사성을 갖는 TCR, 폴리펩티드 또는 단백질을 지칭하며, 이러한 기능적 변이체는 그의 모체인 TCR, 폴리펩티드, 또는 단백질의 생물학적 활성을 보유한다. 기능적 변이체는 예를 들어, 모 TCR이 항원 특이성을 갖는, 또는 모 폴리펩티드 또는 단백질이 특이적으로 결합하는 G12D RAS에 모 TCR, 폴리펩티드 또는 단백질과 유사한 정도로, 동일한 정도로 또는 더 높은 정도로 특이적으로 결합하는 능력을 보유하는 본원에 기재된 TCR, 폴리펩티드 또는 단백질(모 TCR, 폴리펩티드 또는 단백질)의 변이체를 포함한다. 모 TCR, 폴리펩티드 또는 단백질과 관련하여, 기능적 변이체는 각각 모 TCR, 폴리펩티드 또는 단백질과 아미노산 서열에서 예를 들어 약 30%, 약 50%, 약 75%, 약 80%, 약 90%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99% 또는 그 이상 동일할 수 있다.

기능적 변이체는 예를 들어, 적어도 하나의 보존적 아미노산 치환을 갖는 모 TCR, 폴리펩티드 또는 단백질의 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 보존적 아미노산 치환은 당업계에 공지되어 있고, 특정 물리적 및/또는 화학적 특성을 갖는 하나의 아미노산이 동일한 화학적 또는 물리적 특성을 갖는 또 다른 아미노산으로 교환되는 아미노산 치환을 포함한다. 예를 들어, 보존적 아미노산 치환은 또 다른 산성 아미노산으로 치환되는 산성 아미노산(예를 들어, Asp 또는 Glu), 비극성 측쇄가 있는 또 다른 아미노산으로 치환되는 비극성 측쇄가 있는 아미노산(예를 들어, Ala, Gly, Val, Ile, Leu, Met, Phe, Pro, Trp, Val 등), 또 다른 염기성 아미노산으로 치환되는 염기성 아미노산(Lys, Arg 등), 극성 측쇄를 갖는 또 다른 아미노산으로 치환되는 극성 측쇄를 갖는 아미노산(Asn, Cys, Gln, Ser, Thr, Tyr 등) 등일 수 있다.

대안적으로 또는 추가적으로, 기능적 변이체는 적어도 하나의 비보존적 아미노산 치환을 갖는 모 TCR, 폴리펩티드 또는 단백질의 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 이 경우, 비보존적 아미노산 치환이 기능적 변이체의 생물학적 활성을 방해하거나 저해하지 않는 것이 바람직하다. 바람직하게는, 비보존적 아미노산 치환은 기능적 변이체의 생물학적 활성을 향상시켜, 기능적 변이체의 생물학적 활성이 모 TCR, 폴리펩티드 또는 단백질과 비교하여 증가되도록 한다.

본원에 기재된 TCR, 폴리펩티드, 단백질, 기능적 변이체 및 기능적 부분의 각 신호 펩티드는, 존재하는 경우, TCR, 폴리펩티드, 단백질 또는 기능적 변이체가 발현되고 위치 12의 글리신이 HLA 클래스 I 분자에 의해 제시되는 아스파르트산으로 치환된 돌연변이된 인간 RAS 아미노산 서열에 대하여 항원 특이성을 갖는 한, 임의의 적합한 TCR 신호 펩티드일 수 있다.

TCR, 폴리펩티드 또는 단백질은 TCR, 폴리펩티드 또는 단백질의 다른 성분, 예를 들어, 다른 아미노산이 TCR, 폴리펩티드 또는 단백질의 생물학적 활성을 실질적으로 변화시키지 않도록 본원에 기재된 특정 아미노산 서열 또는 서열들로 본질적으로 구성될 수 있다. 이와 관련하여, 본 발명의 TCR, 폴리펩티드, 또는 단백질은 예를 들어 서열 번호 21, 서열 번호 53, 서열 번호 22, 서열 번호 54, 서열 번호 23, 서열 번호 55, 서열 번호 24, 서열 번호 56, 서열 번호 34, 서열 번호 61, 서열 번호 35, 서열 번호 62, 서열 번호 36, 서열 번호 63, 서열 번호 37, 서열 번호 64, 서열 번호 40, 서열 번호 57, 서열 번호 41, 서열 번호 58, 서열 번호 42, 서열 번호 65, 서열 번호 43, 서열 번호 66, 서열 번호 21 및 22 둘 다, 서열 번호 53 및 22 둘 다, 서열 번호 21 및 54 둘 다, 서열 번호 53 및 54 둘 다, 서열 번호 23 및 24 둘 다, 서열 번호 55 및 24 둘 다, 서열 번호 23 및 54 둘 다, 서열 번호 55 및 56 둘 다, 서열 번호 34 및 35 둘 다, 서열 번호 61 및 62 둘 다, 서열 번호 36 및 37 둘 다, 서열 번호 63 및 64 둘 다, 서열 번호 40 및 41 둘 다, 둘 다 서열 번호 57 및 41 둘 다, 서열 번호 40 및 58 둘 다, 서열 번호 57 및 58 둘 다, 서열 번호 42 및 43 둘 다, 또는 서열 번호 65 및 66 둘 다의 아미노산 서열로 본질적으로 구성될 수 있다. 또한, 예를 들어, 본 발명의 TCR, 폴리펩티드 또는 단백질은 (i) 서열 번호 7, (ii) 서열 번호 51, (iii) 서열 번호 8, (iv) 서열 번호 52, (v) 서열 번호 32, (vi) 서열 번호 33, (vii) 서열 번호 59 또는 (viii) 서열 번호 60의 아미노산 서열(들)로 본질적으로 구성될 수 있다. 본 발명의 TCR, 폴리펩티드 또는 단백질은 (a) 서열 번호 1 내지 6 중 임의의 하나 이상; (b) 서열 번호 1 내지 3 모두; (c) 서열 번호 4 내지 6 모두; 또는 (d) 서열 번호 1 내지 6 모두의 아미노산 서열로 본질적으로 구성될 수 있다.

본 발명의 TCR, 폴리펩티드 및 단백질은 임의의 길이일 수 있으며, 즉, TCR, 폴리펩티드 또는 단백질이 생물학적 활성, 예를 들어 G12D RAS에 특이적으로 결합하는 능력을 보유하거나; 포유동물에서 암을 검출하거나; 또는 포유동물에서 암을 치료 또는 예방할 수 있다면, 임의의 수의 아미노산을 포함할 수 있다. 예를 들어, 폴리펩티드는 약 50 내지 약 5,000개의 아미노산 길이의 범위, 예컨대 약 50개, 약 70개, 약 75개, 약 100개, 약 125개, 150개, 약 175개, 약 200개, 약 300개, 약 400개, 약 500개, 약 600개, 약 700개, 약 800개, 약 900개, 약 1,000개 이상의 아미노산 길이일 수 있다. 이와 관련하여, 본 발명의 폴리펩티드는 또한 올리고펩티드를 포함한다.

본 발명의 TCR, 폴리펩티드 및 단백질은 하나 이상의 자연 발생 아미노산 대신 합성 아미노산을 포함할 수 있다. 이러한 합성 아미노산은 당업계에 공지되어 있으며, 예를 들어 아미노사이클로헥산 카르복실산, 노르류신, α-아미노 n-데칸산, 호모세린, S-아세틸아미노메틸-시스테인, 트랜스-3- 및 트랜스-4-하이드록시프롤린, 4-아미노페닐알라닌, 4-니트로페닐알라닌, 4-클로로페닐알라닌, 4-카르복시페닐알라닌, β-페닐세린 β-하이드록시페닐알라닌, 페닐글리신, α-나프틸알라닌, 사이클로헥실알라닌, 사이클로헥실글리신, 인돌린-2-카르복실산, 1,2,3,4-테트라하이드로이소퀴놀린-3-카르복실산, 아미노말론산, 아미노말론산 모노아미드, N'-벤질-N'-메틸-리신, N',N'-디벤질-리신, 6-하이드록시리신, 오르니틴, α-아미노사이클로펜탄 카르복실산, α-아미노사이클로헥산 카르복실산, α-아미노사이클로헵탄 카르복실산, α-(2-아미노-2-노르보난)-카르복실산, α,γ-디아미노부티르산, α,β-디아미노프로피온산, 호모페닐알라닌 및 α-3급-부틸글리신을 포함한다.

본 발명의 TCR, 폴리펩티드 및 단백질은 예를 들어, 글리코실화, 아미드화, 카르복실화, 인산화, 에스테르화, N-아실화되거나, 예를 들어 이황화 가교를 통해 고리화되거나, 또는 산 부가염으로 전환될 수 있고/있거나 임의적으로 이량체화 또는 중합되거나 접합될 수 있다.

본 발명의 TCR, 폴리펩티드 및/또는 단백질은 예를 들어 드 노보(de novo) 합성과 같은 당업계에 공지된 방법에 의해 수득될 수 있다. 또한, 폴리펩티드 및 단백질은 표준 재조합 방법에 의해 본원에 기재된 핵산을 사용하여 재조합적으로 생성될 수 있다. 예를 들어, 그린(Green) 및 샘브룩(Sambrook)의 문헌[Molecular Cloning: A Laboratory Manual 4^th ed, Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, NY(2012)]을 참조한다. 대안적으로, 본원에 기재된 TCR, 폴리펩티드 및/또는 단백질은 임의의 다양한 판매업체에 의해 상업적으로 합성될 수 있다. 이와 관련하여, 본 발명의 TCR, 폴리펩티드 및 단백질은 합성, 재조합, 단리 및/또는 정제될 수 있다. 본 발명의 한 실시태양은 본 발명의 다른 양태와 관련하여 본원에 기재된 임의의 핵산 또는 벡터에 의해 인코딩되는 단리 또는 정제된 TCR, 폴리펩티드, 또는 단백질을 제공한다. 본 발명의 또 다른 실시태양은 세포에서 본 발명의 다른 양태와 관련하여 본원에 기재된 임의의 핵산 또는 벡터의 발현으로부터 생성되는 단리 또는 정제된 TCR, 폴리펩티드 또는 단백질을 제공한다. 본 발명의 또 다른 실시태양은 TCR, 폴리펩티드 또는 단백질이 생산되도록 본원에 기재된 임의의 숙주 세포 또는 숙주 세포의 집단을 배양함을 포함하는, 본원에 기재된 임의의 TCR, 폴리펩티드 또는 단백질을 생산하는 방법을 제공한다.

본 발명의 범주에는 본 발명의 임의의 TCR, 폴리펩티드 또는 단백질(이의 임의의 기능적 부분 또는 변이체 포함), 핵산, 재조합 발현 벡터, 숙주 세포, 숙주 세포의 집단, 또는 항체, 또는 그의 항원 결합 부분을 포함하는 접합체, 예를 들어 생물접합체가 포함된다. 접합체 뿐만 아니라 일반적으로 접합체를 합성하는 방법은 당업계에 공지되어 있다.

본 발명의 한 실시태양은 본원에 기재된 임의의 TCR, 폴리펩티드 또는 단백질을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산을 제공한다. 본원에서 사용되는 바와 같이, "핵산"은 "폴리뉴클레오티드", "올리고뉴클레오티드" 및 "핵산 분자"를 포함하고, 일반적으로 단일 가닥 또는 이중 가닥일 수 있는 DNA 또는 RNA의 중합체를 의미하며, 이는 비변형된 올리고뉴클레오티드의 뉴클레오티드 사이에서 발견되는 포스포디에스테르 대신에 포스포로아미데이트 연결 또는 포스포로티오에이트 연결과 같은 자연, 비자연 또는 변경된 뉴클레오티드간 연결을 포함할 수 있다. 실시태양에서, 핵산은 상보성 DNA(cDNA)를 포함한다. 핵산이 임의의 삽입, 결실, 역위 및/또는 치환을 포함하지 않는 것이 일반적으로 바람직하다. 그러나, 본원에 논의된 바와 같이, 핵산이 하나 이상의 삽입, 결실, 역위 및/또는 치환을 포함하는 것이 일부 경우에 적합할 수 있다.

바람직하게는, 본 발명의 핵산은 재조합체이다. 본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "재조합체"는 (i) 자연 또는 합성 핵산 분절을 살아있는 세포에서 복제할 수 있는 핵산 분자에 연결함으로써 살아있는 세포 외부에서 작성된 분자, 또는 (ii) 상기 (i)에 기재된 분자의 복제로부터 생성된 분자를 지칭한다. 본원의 목적을 위해, 복제는 시험관내 복제 또는 생체내 복제일 수 있다.

본 발명의 한 실시태양에서, 핵산은 (i) 서열 번호 44의 뉴클레오티드 서열(4373 TCR의 α 쇄의 가변 영역을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열), (ii) 4373 TCR의 β 쇄의 가변 영역을 인코딩하는 서열 번호 45의 뉴클레오티드 서열, 또는 (iii) 서열 번호 44 및 45 둘 다를 포함한다.

핵산은 당업계에 공지된 절차를 사용하여 화학적 합성 및/또는 효소적 결찰 반응을 기반으로 작성될 수 있다. 예를 들어, 상기 그린(Green) 및 샘브룩(Sambrook) 등의 문헌을 참조한다. 예를 들어, 핵산은 자연 발생 뉴클레오티드, 또는 분자의 생물학적 안정성을 증가시키거나 혼성화 시 형성된 이중체의 물리적 안정성을 증가시키도록 설계된 다양하게 변형된 뉴클레오티드(예를 들어, 포스포로티오에이트 유도체 및 아크리딘 치환된 뉴클레오티드)를 사용하여 화학적으로 합성될 수 있다. 핵산을 생성하는 데 사용할 수 있는 변형된 뉴클레오티드의 예에는 5-플루오로우라실, 5-브로모우라실, 5-클로로우라실, 5-요오도우라실, 하이포크산틴, 크산틴, 4-아세틸시토신, 5-(카르복시하이드록시메틸)우라실, 5-카르복시메틸아미노메틸-2-티오우리딘, 5-카르복시메틸아미노메틸우라실, 디하이드로우라실, β-D-갈락토실퀘오신, 이노신, N⁶-이소펜테닐아데닌, 1-메틸구아닌, 1-메틸이노신, 2,2-디메틸구아닌, 2-메틸아데닌, 2-메틸구아닌, 3-메틸시토신, 5-메틸시토신, N⁶-치환된 아데닌, 7-메틸구아닌, 5-메틸아미노메틸우라실, 5-메톡시아미노메틸-2-티오우라실, β-D-만노실퀘오신, 5'-메톡시카르복시메틸우라실, 5-메톡시우라실, 2-메틸티오-N⁶-이소펜테닐아데닌, 우라실-5-옥시아세트산(v), 와이부톡소신(wybutoxosine), 슈도우라실, 퀘오신, 2-티오시토신, 5-메틸-2-티오우라실, 2-티오우라실, 4-티오우라실, 5-메틸우라실, 우라실-5-옥시아세트산 메틸에스테르, 3-(3-아미노-3-N-2-카르복시프로필)우라실 및 2,6-디아미노퓨린이 포함되나 이에 제한되지는 않는다. 대안적으로, 본 발명의 핵산 중 하나 이상은 임의의 다양한 판매업체로부터 구입할 수 있다.

핵산은 본원에 기재된 임의의 TCR, 폴리펩티드 또는 단백질을 인코딩하는 임의의 뉴클레오티드 서열을 포함할 수 있다. 본 발명의 실시태양에서, 핵산은 본원에 기재된 임의의 TCR, 폴리펩티드 또는 단백질을 인코딩하는 코돈-최적화된 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 이론이나 기전에 얽매이지 않고, 뉴클레오티드 서열의 코돈 최적화는 mRNA 전사체의 번역 효율을 증가시키는 것으로 여겨진다. 뉴클레오티드 서열의 코돈 최적화는 동일한 아미노산을 인코딩하지만, 세포 내에서 보다 쉽게 이용 가능한 tRNA에 의해 번역될 수 있어 번역 효율을 증가시키는 또 다른 코돈으로 천연 코돈을 치환함을 포함할 수 있다. 뉴클레오티드 서열의 최적화는 또한 번역을 방해하는 2차 mRNA 구조를 감소시켜 번역 효율을 증가시킬 수 있다.

본 발명은 또한 본원에 기재된 임의의 핵산의 뉴클레오티드 서열에 상보성인 뉴클레오티드 서열 또는 엄격한 조건 하에서 본원에 기재된 임의의 핵산의 뉴클레오티드 서열에 혼성화하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산을 제공한다.

엄격한 조건 하에서 혼성화하는 뉴클레오티드 서열은 바람직하게는 높은 엄격한 조건 하에서 혼성화한다. "높은 엄격한 조건"은 뉴클레오티드 서열이 비특이적 혼성화보다 검출가능하게 더 많은 양으로 표적 서열(본원에 기재된 임의의 핵산의 뉴클레오티드 서열)에 특이적으로 혼성화함을 의미한다. 높은 엄격한 조건은, 폴리뉴클레오티드를 정확한 상보성 서열, 또는 뉴클레오티드 서열과 일치하는 소수의 작은 영역(예를 들어, 3-10개 염기)을 갖게된 무작위 서열로부터 단지 소수의 산재된 염기쌍오류를 포함하는 서열과 구별하는 조건을 포함한다. 이러한 작은 상보성 영역은 14-17개 이상의 염기로 구성된 전장 보체보다 더 쉽게 용융되고 높은 엄격한 혼성화로 인해 쉽게 구별될 수 있다. 비교적 높은 엄격한 조건은 예를 들어 약 50-70℃의 온도에서 약 0.02-0.1M NaCl 또는 등가물에 의해 제공되는 것과 같은 저염 및/또는 고온 조건을 포함할 것이다. 이러한 높은 엄격한 조건은 뉴클레오티드 서열과 주형 또는 표적 가닥 사이의 불일치가 있더라도 거의 허용하지 않으며, 본 발명의 임의의 TCR의 발현을 검출하는 데 특히 적합하다. 증가하는 양의 포름아미드를 첨가함으로써 조건을 더욱 엄격하게 할 수 있는 것으로 일반적으로 이해된다.

본 발명의 한 실시태양은 또한 본원에 기재된 임의의 핵산과 적어도 약 70% 이상, 예를 들어, 약 80%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 또는 약 99% 이상 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산을 제공한다. 이와 관련하여, 핵산은 본질적으로 본원에 기재된 임의의 뉴클레오티드 서열로 구성될 수 있다.

본 발명의 한 실시태양은 5'에서 3'으로의 제1 핵산 서열 및 제2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 단리 또는 정제된 핵산을 제공하며, 여기서 제1 및 제2 뉴클레오티드 서열은 각각 서열 번호 7 및 8; 51 및 8; 7 및 52; 51 및 52; 8 및 7; 8 및 51; 52 및 7; 52 및 51; 21 및 22; 21 및 54; 53 및 22; 53 및 54; 22 및 21; 54 및 21; 22 및 53; 54 및 53; 23 및 24; 55 및 24; 23 및 56; 55 및 56; 24 및 23; 24 및 55; 56 및 55; 56 및 23; 32 및 33; 33 및 32; 59 및 60; 60 및 59; 34 및 35; 35 및 34; 61 및 62; 62 및 61; 36 및 37; 37 및 36; 63 및 64; 64 및 63; 40 및 41; 57 및 41; 40 및 58; 57 및 58; 41 및 40; 41 및 57; 58 및 40; 58 및 57; 42 및 43; 43 및 42; 65 및 66; 또는 66 및 65의 아미노산 서열을 인코딩한다.

본 발명의 한 실시태양에서, 단리 또는 정제된 핵산은 제1 및 제2 뉴클레오티드 서열 사이에 개재된 제3 뉴클레오티드 서열을 추가로 포함하며, 여기서 제3 뉴클레오티드 서열은 절단가능한 연결기 펩티드를 인코딩한다. 본 발명의 한 실시태양에서, 절단가능한 연결기 펩티드는 RAKRSGSGATNFSLLKQAGDVEENPGP(서열 번호 25)의 아미노산 서열을 포함한다.

본 발명의 핵산은 재조합 발현 벡터 내로 혼입될 수 있다. 이와 관련하여, 본 발명은 본 발명의 임의의 핵산을 포함하는 재조합 발현 벡터를 제공한다. 본 발명의 실시태양에서, 재조합 발현 벡터는 α 쇄, β 쇄 및 연결기 펩티드를 인코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함한다.

본원의 목적을 위해, 용어 "재조합 발현 벡터"는 작성물이 mRNA, 단백질, 폴리펩티드 또는 펩티드를 인코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 경우 숙주 세포에 의한 mRNA, 단백질, 폴리펩티드 또는 펩티드의 발현을 허용하는 유전적으로 변형된 올리고뉴클레오티드 또는 폴리뉴클레오티드 작성물을 의미하고, 벡터는 세포 내에서 발현된 mRNA, 단백질, 폴리펩티드 또는 펩티드를 갖기에 충분한 조건 하에 세포와 접촉된다. 본 발명의 벡터는 전체적으로 자연적으로 발생하지 않는다. 그러나 벡터의 일부는 자연적으로 발생할 수 있다. 본 발명의 재조합 발현 벡터는 단일 가닥 또는 이중 가닥일 수 있고, 합성되거나 천연 공급원으로부터 부분적으로 수득될 수 있으며, 자연, 비자연 또는 변경된 뉴클레오티드를 함유할 수 있는 DNA 및 RNA를 포함하나 이에 제한되지 않는 임의의 유형의 뉴클레오티드를 포함할 수 있다. 재조합 발현 벡터는 자연 발생, 비자연 발생 뉴클레오티드간 연결, 또는 두 가지 유형의 연결을 포함할 수 있다. 바람직하게는, 비자연 발생 또는 변경된 뉴클레오티드 또는 뉴클레오티드간 연결은 벡터의 전사 또는 복제를 방해하지 않는다.

본 발명의 재조합 발현 벡터는 임의의 적합한 재조합 발현 벡터일 수 있고, 임의의 적합한 숙주 세포를 형질전환 또는 형질감염시키는데 사용될 수 있다. 적합한 벡터는 플라스미드 및 바이러스와 같이 증식 및 확장 또는 발현 또는 둘 다를 위해 설계된 것을 포함한다. 벡터는 pUC 시리즈[퍼멘타스 라이프 사이언시즈(Fermentas Life Sciences)], pBluescript 시리즈[스트라타겐(Stratagene), 캘리포니아주 라호야 소재], pET 시리즈[노바겐(Novagen), 위스콘신주 매디슨 소재], pGEX 시리즈[파마시아 바이오텍(Pharmacia Biotech), 스웨덴 웁살라 소재] 및 pEX 시리즈[클론테크(Clontech), 캘리포니아주 팔로 알토 소재]로부터 선택될 수 있다. λGT10, λGT11, λZapII(스트라타겐), λEMBL4 및 λNM1149와 같은 박테리오파지 벡터도 사용할 수 있다. 식물 발현 벡터의 예에는 pBI01, pBI101.2, pBI101.3, pBI121 및 pBIN19(클론테크)가 포함된다. 동물 발현 벡터의 예에는 pEUK-Cl, pMAM 및 pMAMneo(클론테크)가 포함된다. 바람직하게는, 재조합 발현 벡터는 바이러스 벡터, 예를 들어 레트로바이러스 벡터이다. 특히 바람직한 실시태양에서, 재조합 발현 벡터는 MSGV1 벡터이다. 본 발명의 한 실시태양에서, 재조합 발현 벡터는 트랜스포존(transposon) 또는 렌티바이러스 벡터이다.

본 발명의 재조합 발현 벡터는 예를 들어, 상기 그린(Green) 및 샘브룩(Sambrook) 등의 문헌에 기재된 표준 재조합 DNA 기술을 사용하여 제조할 수 있다. 원형 또는 선형인 발현 벡터의 작성물은 원핵 또는 진핵 숙주 세포에서 기능하는 복제 시스템을 함유하도록 제조될 수 있다. 복제 시스템은 예를 들어 ColE1, 2μ 플라스미드, λ, SV40, 소 유두종바이러스 등으로부터 유래될 수 있다.

바람직하게는, 재조합 발현 벡터는, 적절할 경우 벡터가 DNA 기반인지 RNA 기반인지 고려하여, 벡터가 도입될 숙주 세포의 유형(예를 들어, 박테리아, 진균류, 식물 또는 동물)에 특이적인 전사 및 번역 개시 및 종결 코돈과 같은 조절 서열을 포함한다.

재조합 발현 벡터는 형질전환 또는 형질감염된 숙주 세포의 선택을 허용하는 하나 이상의 마커 유전자를 포함할 수 있다. 마커 유전자는 살생물제 내성, 예를 들어, 항생제, 중금속 등에 대한 내성, 영양요구성 숙주 세포에서 원영양을 제공하기 위한 보완 등을 포함한다. 본 발명의 발현 벡터에 적합한 마커 유전자는 예를 들어 네오마이신/G418 내성 유전자, 하이그로마이신 내성 유전자, 히스티디놀 내성 유전자, 테트라사이클린 내성 유전자 및 암피실린 내성 유전자를 포함한다.

재조합 발현 벡터는 TCR, 폴리펩티드 또는 단백질을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열, 또는 TCR, 폴리펩티드 또는 단백질을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열에 상보성이거나 혼성화하는 뉴클레오티드 서열에 작동가능하게 연결된 천연 또는 비천연 프로모터를 포함할 수 있다. 프로모터의 선택, 예를 들어 강한, 약한, 유도성, 조직 특이적 및 발달 특이적 프로모터의 선택은 당업자의 통상의 기술 범위 내에 있다. 유사하게, 뉴클레오티드 서열과 프로모터의 조합도 당업자의 기술 범위 내에 있다. 프로모터는 비-바이러스 프로모터 또는 바이러스 프로모터, 예를 들어 사이토메갈로바이러스(CMV) 프로모터, SV40 프로모터, RSV 프로모터 및 뮤린 줄기 세포 바이러스의 긴 말단 반복부에서 발견되는 프로모터일 수 있다.

본 발명의 재조합 발현 벡터는 일시적 발현, 안정한 발현, 또는 둘 다를 위해 설계될 수 있다. 또한, 재조합 발현 벡터는 구성적 발현 또는 유도성 발현을 위해 만들어질 수 있다.

추가로, 재조합 발현 벡터는 자살 유전자를 포함하도록 만들어질 수 있다. 본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "자살 유전자"는 자살 유전자를 발현하는 세포를 사멸시키는 유전자를 의미한다. 자살 유전자는 유전자가 발현되는 세포에 대해 작용제, 예를 들어 약물에 대한 감수성을 부여하고, 세포가 작용제와 접촉되거나 노출될 때 세포를 사멸시키는 유전자일 수 있다. 자살 유전자는 당업계에 공지되어 있으며, 예를 들어 단순 포진 바이러스(HSV) 티미딘 키나제(TK) 유전자, 시토신 탈아미노효소, 퓨린 뉴클레오시드 포스포릴라제, 니트로환원제 및 유도성 카스파제(caspase) 9 유전자 시스템을 포함한다.

본 발명의 또 다른 실시태양은 본원에 기재된 임의의 재조합 발현 벡터를 포함하는 숙주 세포를 추가로 제공한다. 본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "숙주 세포"는 본 발명의 재조합 발현 벡터를 함유할 수 있는 임의의 유형의 세포를 지칭한다. 숙주 세포는 진핵 세포, 예를 들어, 식물, 동물, 진균류 또는 조류일 수 있거나, 또는 원핵 세포, 예를 들어 박테리아 또는 원생동물일 수 있다. 숙주 세포는 배양된 세포 또는 1차 세포, 즉 유기체, 예를 들어 인간 또는 마우스로부터 직접 단리된 세포일 수 있다. 숙주 세포는 부착 세포 또는 현탁 세포, 즉 현탁액에서 성장하는 세포일 수 있다. 적합한 숙주 세포는 당업계에 공지되어 있으며, 예를 들어 DH5α 이. 콜라이(E. coli) 세포, 차이니즈 햄스터 난소 세포, 원숭이 VERO 세포, COS 세포, HEK293 세포 등을 포함한다. 재조합 발현 벡터를 증폭 또는 복제하기 위해, 숙주 세포는 바람직하게는 원핵 세포, 예를 들어 DH5α 세포이다. 재조합 TCR, 폴리펩티드 또는 단백질을 생산하기 위해, 숙주 세포는 바람직하게는 포유동물 세포이다. 가장 바람직하게는, 숙주 세포는 인간 세포이다. 숙주 세포는 임의의 세포 유형일 수 있고, 임의의 유형의 조직으로부터 기원할 수 있고, 임의의 발달 단계일 수 있지만, 숙주 세포는 바람직하게는 말초 혈액 림프구(PBL) 또는 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)이다. 보다 바람직하게는, 숙주 세포는 T 세포이다. 본 발명의 한 실시태양에서, 숙주 세포는 인간 림프구이다. 본 발명의 또 다른 실시태양에서, 숙주 세포는 T 세포, 자연 살해 T(NKT: natural killer T) 세포, 불변성 자연 살해 T(iNKT: invariant natural killer T) 세포 및 자연 살해(NK: natural killer) 세포로부터 선택된다. 본 발명의 또 다른 실시태양은 VVVGA D GVGK(서열 번호 29)의 펩티드에 대하여 항원 특이성을 갖는 TCR을 발현하는 숙주 세포를 생산하는 방법을 제공하며, 이 방법은 벡터를 세포에 도입함을 허용하는 조건 하에 본원에 기재된 임의의 벡터와 세포를 접촉시킴을 포함한다.

본원의 목적을 위해, T 세포는 임의의 T 세포, 예컨대 배양된 T 세포, 예를 들어 1차 T 세포, 또는 배양된 T 세포주, 예를 들어 Jurkat, SupT1 등으로부터의 T 세포, 또는 포유동물로부터 수득된 T 세포일 수 있다. 포유동물로부터 수득되는 경우, T 세포는 혈액, 골수, 림프절, 흉선, 또는 기타 조직 또는 체액을 포함하나 이에 제한되지 않는 수많은 공급원으로부터 수득될 수 있다. T 세포는 또한 농축되거나 정제될 수 있다. 바람직하게는, T 세포는 인간 T 세포이다. T 세포는 임의의 유형의 T 세포일 수 있고 임의의 발달 단계일 수 있으며, CD4⁺/CD8⁺ 이중 양성 T 세포, CD4⁺ 헬퍼 T 세포, 예를 들어 Th₁ 및 Th₂ 세포, CD4⁺ T 세포, CD8⁺ T 세포(예를 들어, 세포독성 T 세포), 종양 침윤 림프구(TIL), 기억 T 세포(예를 들어, 중추 기억 T 세포 및 효과기 기억 T 세포), 나이브(naive) T 세포 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.

또한 본 발명은 본원에 기재된 적어도 하나의 숙주 세포를 포함하는 세포의 집단을 제공한다. 세포의 집단은, 임의의 재조합 발현 벡터를 포함하지 않는 적어도 하나의 다른 세포, 예를 들어 숙수 제포(예를 들어 T 세포), 또는 T 세포 이외의 세포, 예를 들어, B 세포, 대식세포, 호중구, 적혈구, 간세포, 내피 세포, 상피 세포, 근육 세포, 뇌 세포 등에 더하여, 기재된 임의의 재조합 발현 벡터를 포함하는 숙주 세포를 포함하는 이종 집단일 수 있다. 대안적으로, 세포의 집단은 실질적으로 동종의 집단일 수 있으며, 여기서 집단은 주로 재조합 발현 벡터를 포함하는 숙주 세포를 포함한다(예를 들어, 이로 본질적으로 구성된다). 집단은 또한 집단의 모든 세포가 재조합 발현 벡터를 포함하도록 집단의 모든 세포가 재조합 발현 벡터를 포함하는 단일 숙주 세포의 클론인 세포의 클론 집단일 수 있다. 본 발명의 한 실시태양에서, 세포의 집단은 본원에 기재된 바와 같은 재조합 발현 벡터를 포함하는 숙주 세포를 포함하는 클론 집단이다.

본 발명의 실시태양에서, 집단의 세포 수는 빠르게 확장될 수 있다. T 세포의 수의 확장은 예를 들어 미국 특허 제8,034,334호; 미국 특허 제8,383,099호; 미국 특허 출원 공개 번호 제2012/0244133호; 두들리(Dudley) 등의 문헌[J. Immunother., 26:332-42 (2003)]; 및 리델(Riddell) 등의 문헌[J. Immunol. Methods, 128:189-201(1990)]에 기재된 바와 같이 당분야에 공지된 바와 같은 다수의 임의의 방법에 의해 달성될 수 있다. 실시태양에서, T 세포의 수의 확장은 T 세포를 OKT3 항체, IL-2 및 피더(feeder) PBMC(예를 들어, 조사된 동종이계 PBMC)와 함께 배양함으로써 수행된다.

본 발명의 TCR, 폴리펩티드, 단백질, 핵산, 재조합 발현 벡터 및 숙주 세포(이의 집단 포함)는 단리 및/또는 정제될 수 있다. 본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "단리된"은 그의 자연 환경으로부터 제거됨을 의미한다. 본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "정제된"은 순도가 증가됨을 의미하며, 여기서 "순도"는 상대적인 용어이며 절대적인 순도로 반드시 해석될 필요는 없다. 예를 들어, 순도는 약 50% 이상일 수 있거나, 약 60%, 약 70%, 약 80%, 약 90%, 약 95% 초과일 수 있거나, 약 100%일 수 있다.

본 발명의 TCR, 폴리펩티드, 단백질, 핵산, 재조합 발현 벡터 및 숙주 세포(이의 집단 포함)는 이후 모두 "본 발명의 TCR 물질"로 통칭되며, 조성물, 예컨대 약학 조성물로 제형화될 수 있다. 이와 관련하여, 본 발명은 본원에 기재된 임의의 TCR, 폴리펩티드, 단백질, 핵산, 발현 벡터 및 숙주 세포(이의 집단 포함) 및 약학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약학 조성물을 제공한다. 임의의 본 발명의 TCR 물질을 함유하는 본 발명의 약학 조성물은 1종 보다 많은 본 발명의 TCR 물질, 예를 들어 폴리펩티드 및 핵산, 또는 2종 이상의 상이한 TCR을 포함할 수 있다. 대안적으로, 약학 조성물은 또 다른 약학 활성제(들) 또는 약물(들), 예컨대 화학요법제, 예를 들어 아스파라기나제(asparaginase), 부설판(busulfan), 카르보플라틴(carboplatin), 시스플라틴(cisplatin), 다우노루비신(daunorubicin), 독소루비신(doxorubicin), 플루오로우라실(fluorouracil), 젬시타빈(gemcitabine), 하이드록시우레아(hydroxyurea), 메토트렉세이트(methotrexate), 파클리탁셀(paclitaxel), 리툭시맙(rituximab), 빈블라스틴(vinblastine), 빈크리스틴(vincristine) 등과 조합된 본 발명의 TCR 물질을 포함할 수 있다.

바람직하게는, 담체는 약학적으로 허용되는 담체이다. 약학 조성물과 관련하여, 담체는 고려 중인 본 발명의 특정 TCR 물질에 대해 통상적으로 사용되는 임의의 것일 수 있다. 투여 가능한 조성물을 제조하는 방법은 당업자에게 알려져 있거나 명백하며, 예를 들어 문헌[Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 22^nd Ed., Pharmaceutical Press(2012)]에 더 자세히 설명되어 있다. 약학적으로 허용가능한 담체는 사용 조건 하에서 유해한 부작용이나 독성이 없는 것이 바람직하다.

담체의 선택은 본 발명의 특정 TCR 물질 뿐만 아니라 본 발명의 TCR 물질을 투여하는 데 사용되는 특정 방법에 의해 부분적으로 결정될 것이다. 따라서, 본 발명의 약학 조성물의 다양한 적합한 제형이 존재한다. 적합한 제형은 비경구, 피하, 정맥내, 근육내, 동맥내, 척추강내, 종양내 또는 복강내 투여를 위한 임의의 제형을 포함할 수 있다. 하나 보다 많은 경로를 사용하여 본 발명의 TCR 물질을 투여할 수 있으며, 특정 경우에 특정 경로는 다른 경로보다 더 즉각적이고 효과적인 반응을 제공할 수 있다.

바람직하게는, 본 발명의 TCR 물질은 주사에 의해, 예를 들어 정맥내로 투여된다. 본 발명의 TCR 물질이 본 발명의 TCR을 발현하는 숙주 세포(또는 그의 집단)인 경우, 주사용 세포에 대한 약학적으로 허용되는 담체는 등장성 담체, 예를 들어 생리 식염수(물 중 약 0.90% w/v의 NaCl, 물 중 약 300 mOsm/ℓ NaCl, 또는 물 1 리터당 약 9.0 g의 NaCl), NORMOSOL R 전해액[애봇(Abbott), 일리노이주 시카고 소재], PLASMA-LYTE A[박스터(Baxter), 일리노이주 디어필드], 물 중 약 5% 덱스트로스, 또는 링거(Ringer)의 락트산염을 포함할 수 있다. 한 실시태양에서, 약학적으로 허용되는 담체는 인간 혈청 알부민으로 보충된다.

본 발명의 목적을 위해, 투여된 본 발명의 TCR 물질의 양 또는 용량(예를 들어, 본 발명의 TCR 물질이 하나 이상의 세포인 경우 세포의 수)은 예를 들어, 합리적인 기간 동안 피험체 또는 동물에서 치료학적 또는 예방학적 반응에 영향을 미치기에 충분해야 한다. 예를 들어, 본 발명의 TCR 물질의 용량은 암 항원(예를 들어, G12D RAS)에 결합하거나, 약 2시간 이상, 예를 들어 12 내지 24시간 이상의 기간에 암을 검출, 치료 또는 예방하기에 충분해야 한다. 특정 실시태양에서, 기간은 훨씬 더 길 수 있다. 용량은 본 발명의 특정 TCR 물질의 효능 및 동물(예를 들어, 인간)의 증상, 뿐만 아니라 치료할 동물(예를 들어, 인간)의 체중에 의해 결정될 것이다.

투여 용량을 결정하기 위한 많은 분석이 당업계에 공지되어 있다. 본 발명의 목적을 위해, 각각 상이한 투여량의 T 세포가 제공되는 일련의 포유동물들 중에서 한 포유동물에게 소정의 용량의 이러한 T 세포를 투여할 경우 표적 세포가 용해되거나 본 발명의 TCR, 폴리펩티드 또는 단백질을 발현하는 T 세포에 의해 IFN-γ가 분비되는 정도를 비교하는 것을 포함하는 분석은 포유동물에게 투여될 시작 용량을 결정하는 데 사용될 수 있다. 특정 용량의 투여 시 표적 세포가 용해되거나 IFN-γ가 분비되는 정도는 당업계에 공지된 방법에 의해 분석될 수 있다.

본 발명의 TCR 물질의 용량은 또한 특정한 본 발명의 TCR 물질의 투여에 수반될지도 모르는 부작용의 존재, 성질 및 정도에 따라 결정될 것이다. 전형적으로 담당의사는 연령, 체중, 일반적인 건강, 식이, 성별, 투여할 본 발명의 TCR 물질, 투여 경로 및 치료 중인 암의 위중성과 같은 다양한 요인을 고려하여 각 개별 환자를 치료할 본 발명의 TCR 물질의 투여량을 결정할 것이다. 본 발명의 TCR 물질이 세포의 집단인 실시태양에서, 주입당 투여되는 세포의 수는 예를 들어, 약 1 × 10⁶ 내지 약 1 × 10¹²개 세포 또는 그 이상으로 다양할 수 있다. 특정 실시태양에서, 1 × 10⁶개 미만의 더 적은 세포가 투여될 수 있다.

당업자는 본 발명의 TCR 물질이 변형을 통해 본 발명의 TCR 물질의 치료 또는 예방 효능이 증가되도록 임의의 수의 방식으로 변형될 수 있음을 쉽게 이해할 것이다. 예를 들어, 본 발명의 TCR 물질은 가교를 통해 화학요법제로 직접 또는 간접적으로 접합될 수 있다. 화합물을 화학요법제에 접합시키는 실행은 당업계에 공지되어 있다. 가교 및/또는 화학요법제가 본 발명의 TCR 물질에 일단 부착되면 본 발명의 TCR 물질의 기능, 즉 G12D RAS에 결합하거나 암을 검출, 치료 또는 예방하는 능력을 방해하지 않는 한, 당업자는 본 발명의 TCR 물질의 기능에 필요하지 않은 본 발명의 TCR 물질 상의 부위가 가교 및/또는 화학요법제를 부착하기에 적합한 부위임을 인식한다.

본 발명의 약학 조성물, TCR, 폴리펩티드, 단백질, 핵산, 재조합 발현 벡터, 숙주 세포 및 세포의 집단은 암을 치료 또는 예방하는 방법에 사용될 수 있는 것으로 고려된다. 특정 이론에 얽매이지 않고, 본 발명의 TCR은 G12D RAS에 특이적으로 결합하여 TCR(또는 관련된 본 발명의 폴리펩티드 또는 단백질)이 세포에 의해 발현될 때, G12D RAS를 발현하는 표적 세포에 대한 면역 반응을 중재할 수 있는 것으로 여겨진다. 이와 관련하여, 본 발명의 한 실시태양은 포유동물에서 암을 치료 또는 예방하기에 효과적인 양으로 본원에 기재된 임의의 약학 조성물, TCR, 폴리펩티드 또는 단백질, 본원에 기재된 임의의 TCR, 폴리펩티드, 또는 단백질을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 임의의 핵산 또는 재조합 발현 벡터, 또는 본원에 기재된 임의의 TCR, 폴리펩티드 또는 단백질을 인코딩하는 재조합 벡터를 포함하는 임의의 숙주 세포 또는 세포의 집단을 포유동물에게 투여함을 포함하는, 포유동물에서 암을 치료 또는 예방하는 방법을 제공한다.

본 발명의 한 실시태양은 포유동물에서 암에 대하여 면역 반응을 유도하기에 효과적인 양으로 본원에 기재된 임의의 약학 조성물, TCR, 폴리펩티드 또는 단백질, 본원에 기재된 임의의 TCR, 폴리펩티드, 또는 단백질을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 임의의 핵산 또는 재조합 발현 벡터, 또는 본원에 기재된 임의의 TCR, 폴리펩티드 또는 단백질을 인코딩하는 재조합 벡터를 포함하는 임의의 숙주 세포 또는 세포의 집단을 포유동물에게 투여함을 포함하는, 포유동물에서 암에 대하여 면역 반응을 유도하는 방법을 제공한다.

본 발명의 한 실시태양은 포유동물에서 암의 치료 또는 예방에 사용하기 위한, 본원에 기재된 임의의 약학 조성물, TCR, 폴리펩티드 또는 단백질, 본원에 기재된 임의의 TCR, 폴리펩티드, 또는 단백질을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 임의의 핵산 또는 재조합 발현 벡터, 또는 본원에 기재된 임의의 TCR, 폴리펩티드 또는 단백질을 인코딩하는 재조합 벡터를 포함하는 임의의 숙주 세포 또는 세포의 집단을 제공한다.

본 발명의 한 실시태양은 포유동물에서 암에 대한 면역 반응을 유도하는데 사용하기 위한, 본원에 기재된 임의의 약학 조성물, TCR, 폴리펩티드 또는 단백질, 본원에 기재된 임의의 TCR, 폴리펩티드, 또는 단백질을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 임의의 핵산 또는 재조합 발현 벡터, 또는 본원에 기재된 임의의 TCR, 폴리펩티드 또는 단백질을 인코딩하는 재조합 벡터를 포함하는 임의의 숙주 세포 또는 세포의 집단을 제공한다.

본원에서 사용되는 바와 같이, "치료하다" 및 "예방하다"라는 용어와 이로부터 파생된 단어는 반드시 100% 또는 완전한 치료 또는 예방을 의미하는 것은 아니다. 오히려, 당업자가 잠재적인 이점 또는 치료 효과를 갖는 것으로 인식하는 다양한 정도의 치료 또는 예방이 존재한다. 이와 관련하여, 본 발명의 방법은 포유동물에서 암의 임의의 수준의 치료 또는 예방에 대한 임의의 양을 제공할 수 있다. 또한, 본 발명의 방법에 의해 제공되는 치료 또는 예방은 치료 또는 예방되는 암의 하나 이상의 증상 또는 증후의 치료 또는 예방을 포괄할 수 있다. 예를 들어, 치료 또는 예방에는 종양의 퇴행 촉진이 포함될 수 있다. 또한, 본원의 목적을 위해, "예방"은 암의 발병, 또는 그의 증후 또는 증상을 지연시킴을 포함할 수 있다. 대안적으로 또는 추가적으로, "예방"은 암, 또는 그의 증후 또는 증상의 재발을 예방하거나 지연시킴을 포함할 수 있다.

포유동물에서 암의 존재를 검출하는 방법이 또한 제공된다. 상기 방법은 (i) 포유동물로부터의 하나 이상의 세포를 포함하는 샘플을 본원에 기재된 본 발명의 임의의 TCR, 폴리펩티드, 단백질, 핵산, 재조합 발현 벡터, 숙주 세포, 세포의 집단 또는 약학 조성물과 접촉시켜 복합체를 형성하는 단계 및 (ii) 복합체를 검출하는 단계(여기서 복합체의 검출은 포유동물에서 암의 존재를 나타냄)를 포함한다.

포유동물에서 암을 검출하는 본 발명의 방법과 관련하여, 세포의 샘플은 전체 세포, 그의 용해물, 또는 전체 세포 용해물의 분별물, 예를 들어 핵 또는 세포질 분별물, 전체 단백질 분별물, 또는 핵산 분별물을 포함하는 샘플일 수 있다.

암을 검출하는 본 발명의 방법의 목적을 위해, 접촉은 포유동물에 대해 시험관내 또는 생체내에서 일어날 수 있다. 바람직하게는, 접촉은 시험관내이다.

또한, 복합체의 검출은 당업계에 공지된 임의의 수의 방식을 통해 발생할 수 있다. 예를 들어, 본원에 기재된 본 발명의 TCR, 폴리펩티드, 단백질, 핵산, 재조합 발현 벡터, 숙주 세포, 또는 세포의 집단은 예를 들어 방사성 동위원소, 형광단(예를 들어, 플루오레세인 이소티오시아네이트(FITC), 피코에리트린(PE)), 효소(예를 들어, 알칼리성 포스파타제, 양고추냉이 과산화효소) 및 원소 입자(예를 들어, 금 입자)와 같은 검출가능한 표지로 표지화될 수 있다.

숙주 세포 또는 세포의 집단이 투여되는 본 발명의 방법의 목적을 위해, 세포는 포유동물에 대해 동종이계 또는 자가유래 세포일 수 있다. 바람직하게는, 세포는 포유동물에 대해 자가유래 세포이다.

본 발명의 방법과 관련하여, 암은 임의의 암, 예를 들어 급성 림프구성 암, 급성 골수성 백혈병, 폐포 횡문근 육종, 골암, 뇌암, 유방암, 항문, 항문관, 또는 항문 직장의 암, 눈의 암, 간내 담관의 암, 관절의 암, 목, 담낭 또는 흉막의 암, 코, 비강 또는 중이의 암, 구강암, 질암, 외음부암, 만성 림프구성 백혈병, 만성 골수성암, 결장암, 결장직장암, 자궁내막암, 식도암, 자궁경부암, 위장관 유암종, 신경교종, 호지킨 림프종, 하인두암, 콩팥암, 후두암, 간암, 폐암, 악성 중피종, 흑색종, 다발성 골수종, 비인두암, 비호지킨 림프종, 구인두암, 난소암, 음경암, 췌장암, 복막, 대망막, 장간막의 암, 인두암, 전립선암, 직장암, 신장암, 피부암, 소장암, 연조직암, 위암, 고환암, 갑상선암, 자궁암, 요관암 및 방광암일 수 있다. 바람직한 암은 췌장암, 결장직장암, 폐암, 자궁내막암, 난소암 또는 전립선암이다. 바람직하게는, 폐암은 폐선암이고, 난소암은 상피 난소암이며, 췌장암은 췌장선암이다. 본 발명의 실시태양에서, 암은 위치 12에서의 글리신이 아스파르트산으로 치환된 돌연변이된 인간 RAS 아미노산 서열을 발현하며, 여기서 돌연변이된 인간 RAS 아미노산 서열은 돌연변이된 인간 KRAS, 돌연변이된 인간 HRAS, 또는 돌연변이된 인간 NRAS 아미노산 서열이고, 여기서 위치 12는 각각 WT 인간 KRAS, WT 인간 HRAS 또는 WT 인간 NRAS 단백질을 참조하여 정의된다. 암에 의해 발현되는 돌연변이된 인간 KRAS, 돌연변이된 인간 HRAS 및 돌연변이된 인간 NRAS는 본 발명의 다른 양태와 관련하여 본원에 기재된 바와 같을 수 있다.

본 발명의 방법에서 언급된 포유동물은 임의의 포유동물일 수 있다. 본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "포유동물"은 마우스 및 햄스터와 같은 쥐목(Rodentia)의 포유동물 및 토끼와 같은 로고모르파목(Logomorpha)의 포유동물을 포함하나 이에 제한되지 않는 임의의 포유동물을 지칭한다. 포유동물은 고양이과(고양이) 및 개과(개)를 포함하는 육식 동물목에서 유래하는 것이 바람직한다. 포유동물은 소류(소) 및 돼지류(돼지)를 포함하는 우제목 또는 말류(말)를 포함하는 기제목에서 유래하는 것이 더 바람직하다. 포유동물은 영장류, 세보이드(Ceboid) 또는 시모이드(Simoid)(원숭이)목 또는 유인원목(인간 및 유인원)이 가장 바람직한다. 특히 바람직한 포유동물은 인간이다.

전술된 내용은 단지 실시태양의 예임을 주지해야 한다. 다른 예시적인 실시태양은 본원의 전체 기재내용으로부터 명백하다. 또한, 이들 실시태양의 각각이 본원에 제공된 다른 실시태양와 다양하게 조합되어 사용될 수 있음이 당업자에 의해 이해될 것이다.

하기 실시예는 본 발명을 추가로 예시하지만, 물론 그 범주를 어떤 식으로든 제한하는 것으로 해석되어서는 안 된다.

실시예 1

본 실시예는 G12D 돌연변이를 갖는 인간 KRAS에 대하여 항원 특이성을 갖는 TCR의 단리를 보여준다.

환자 4373의 자궁내막암은 HLA-A11 제한된, 인간 KRAS G12D에 대하여 항원 특이성을 갖는 뮤린 TCR이 형질도입된 자가유래 PBL로 치료한 후 진행되었다. 환자의 TIL을 다음과 같이 KRAS G12D에 대한 반응성에 대해 선별하였다. 종양 단편 번호 F4, F5, F6, F8, F9 및 F10으로부터의 TIL을 아래의 표적 세포와 공동 배양하였다:

⊙ 4373 야생형(WT) KRAS TMG 펩티드를 인코딩하는 탠덤 미니유전자(TMG)로 mRNA 형질감염된 자가유래 DC;

MTEYKLVVVGAGGVGKSALTIQLIMTEYKLVVVGAGGVGKSALTIQLIQETCLLDILDTAGQEEYSAMRDQYMR(서열 번호 48);

⊙ 돌연변이된(Mut) KRAS 펩티드를 인코딩하는 TMG로 mRNA 형질감염된 4373 자가유래 DC:

MTEYKLVVVGADGVGKSALTIQLIMTEYKLVVVGAVGVGKSALTIQLIMTEYKLVVVGACGVGKSALTIQLIMTEYKLVVVGAAGVGKSALTIQLIMTEYKLVVVGASGVGKSALTIQLIMTEYKLVVVGAGDVGKSALTIQLIQMTEYKLVVVGAGRVGKSALTIQLIQMTEYKLVVVGAGVVGKSALTIQLIQETCLLDILDTAGREEYSAMRDQYMRETCLLDILDTAGLEEYSAMRDQYMRETCLLDILDTAGKEEYSAMRDQYMRETCLLDILDTAGHEEYSAMRDQYMR(서열 번호 49);

⊙ G12 WT KRAS 긴 펩티드(LP)(MTEYKLVVVGA G GVGKSALTIQLI)(서열 번호 27);

⊙ G12D Mut KRAS LP(MTEYKLVVVGA D GVGKSALTIQLI)(서열 번호 26); 또는

⊙ 최소 KRAS 에피토프(ME) A11(G12D 9-량체 + 10-량체) VVGA D GVGK + VVVGA D GVGK(서열 번호 28 및 29).

대조군으로서, 형질도입된 세포를 단독으로(TIL만) 배양하거나 디메틸 설폭사이드(DMSO) 또는 항-CD3/항-CD28 다이나비즈 물질과 공동 배양하였다.

공동 배양 후 인터페론-감마(IFN-γ) 분비를 효소 결합 면역 흡수 반점(ELISpot: enzyme-linked immune absorbent spot)으로 측정하였다. 결과는 도 1a에 제시되어 있다. 4-1BB 및 0X40을 발현하는 세포의 백분율을 유세포 분석으로 측정하였다. 결과는 도 1b에 제시되어 있다. 도 1a 및 1b에 제시된 바와 같이, 항-G12D 반응성을 갖는 TIL이 종양 단편 F8에서 검출되었다.

종양 단편 F8로부터의 TIL을 단일 세포 샘플로 분리하였다. HLA-A11에 의해 제시된 G12D 돌연변이를 갖는 인간 KRAS에 대하여 항원 특이성을 갖는 TCR을 TIL로부터 단리하였다. 반응성 4373 TCR을 서열분석하기 위해, 반응성 TIL을 T 세포 활성화 마커인 4-1BB의 상향조절에 기초한 형광 활성화 세포 분류(FACS: fluorescence-activated cell sorting)에 의해 분류하였다. 그 후, 세포를 용해시키고 TCR 전사체를 생어(Sanger) 서열분석하였다. 4373 TCR α 및 β 쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 표 5에 제시되어 있다. CDR에 밑줄이 그어져 있다.

실시예 2

본 실시예는 변형된 뮤린 불변 영역을 갖는 실시예 1의 인간 항-G12D TCR을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 레트로바이러스 벡터를 제조하는 방법을 보여준다.

실시예 1의 인간 G12D RAS-반응성 4373 TCR을 인코딩하고 시스테인 치환된, LVL-변형된 뮤린 불변 영역을 포함하는 핵산 서열을 레트로바이러스 발현 벡터 내로 클로닝하였다. α쇄 뮤린 불변 영역은 서열 번호 17의 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 위치 48에서의 X는 Cys이고, 위치 112에서의 X는 Leu이고, 위치 114에서의 X는 Ile이고, 위치 115에서의 X는 Val이다(서열 번호 38). 생성된 전장 α 쇄는 서열 번호 40의 아미노산 서열을 포함하였다. β 쇄 불변 영역은 서열 번호 18의 아미노산 서열을 포함하고, 여기서 위치 57에서의 X는 Cys이다(서열 번호 39). 생성된 전장 β 쇄는 서열 번호 41의 아미노산 서열을 포함하였다. RAKRSGSGATNFSLLKQAGDVEENPGP(서열 번호 25)의 아미노산 서열을 포함하는 연결기는 α 쇄 불변 영역과 β 쇄 가변 영역 사이에 위치한다. 벡터는 서열 번호 47의 아미노산 서열(아미노 말단에서 카르복실 말단까지, TCR β 쇄, 연결기, TCR α 쇄를 포함하는 아미노산 서열)을 인코딩하는 서열 번호 46의 뉴클레오티드 서열(5' 말단에서 3' 말단으로: TCR β 쇄, 연결기, TCR α 쇄를 인코딩하는 코돈 최적화된 뉴클레오티드 서열)을 포함하는 발현 카세트를 포함하였다.

실시예 3

본 실시예는 실시예 2의 항-G12D TCR(인간 가변 영역 포함)이 실시예 1의 뮤린 항-G12D TCR과 동일하거나 더 우수한 반응성을 제공함을 보여준다.

환자 4373의 CD8+ 자가유래 PBL에 (i) 실시예 2의 G12D RAS-반응성 4373 TCR(인간 가변 영역 포함)(본원에서 "TCR2"로도 지칭됨), (ii) 두 번째 TCR(본원에서 "TCR1"로 지칭되며, 이는 또한 도 1에 도시된 반응성 TIL을 단일-세포 서열분석에 의해 수득됨) 또는 (iii) 실시예 1의 HLA-A11 제한된 뮤린 항-KRAS G12D TCR(대조군)을 인코딩하는 레트로바이러스 발현 벡터를 형질도입하였다. CD8+ 형질도입된 세포의 반응성을 아래의 표적 세포와의 공동 배양 후 테스트하였다:

⊙ COS HLA-A2 형질도입 세포,

⊙ COS HLA-A2-G12 WT KRAS 세포주,

⊙ COS HLA-A11 형질도입 세포,

⊙ COS HLA-A11-G12D 세포주, 또는

⊙ T 세포만(표적 세포 없음)(-).

표적 세포와의 공동 배양 후 4-1BB 및 0X40을 발현하는 세포의 백분율을 측정하였다. 결과는 도 2에 제시되어 있다. 형질도입된 세포는 또한 HLA-A11 최소 에피토프 적정 실험을 거쳤다.

별도의 실험에서, 환자 4373의 자가유래 CD8+ PBL에 (i) 실시예 2의 G12D RAS-반응성 4373 TCR(인간 가변 영역 포함), (ii) TCR1, (iii) 실시예 1의 HLA-A11 제한된, 뮤린 항-KRAS G12D TCR, 또는 (iv) GFP를 인코딩하는 레트로바이러스 발현 벡터를 형질도입하였다. 빈 벡터("모의 Td"(Td=형질전환))가 형질도입된 세포를 추가의 대조군으로 사용하였다. CD8+ 형질도입된 세포의 반응성을 아래의 표적 세포와의 공동 배양 후 테스트하였다:

⊙ 전장(FL) WT KRAS 유전자가 형질도입된 자가유래 수지상 세포(DC);

⊙ G12D 돌연변이를 갖는 FL KRAS 유전자가 형질도입된 자가유래 DC;

⊙ WT KRAS LP(MTEYKLVVVGA G GVGKSALTIQLI)(서열 번호 27)가 형질도입된 자가유래 DC;

⊙ G12D Mut KRAS LP(MTEYKLVVVGA D GVGKSALTIQLI)(서열 번호 26)가 형질도입된 자가유래 DC;

⊙ 최소 KRAS 에피토프(ME) A02 WT;

⊙ ME A02 G12D KLVVVGA D GV(서열 번호 50);

⊙ ME HLA-A11 WT 믹스(WT 9-량체 서열 번호 30 및 WT 10-량체 서열 번호 31의 펩티드 혼합물); 또는

⊙ ME HLA-A11 G12D 믹스(G12D 9-량체 서열 번호 28 및 G12D 10-량체 서열 번호 29의 펩티드 혼합물).

대조군으로서, 형질도입된 세포를 단독으로(T 세포만) 배양하거나 DMSO 또는 항-CD28/항-CD3 다이나비즈 물질과 함께 공동 배양하였다. IFN-γ 분비를 ELISpot으로 측정하였다. 결과는 도 3a 및 표 6에 제시되어 있다. 4-1BB 및 0X40을 발현하는 세포의 백분율을 측정하였다. 결과는 도 3b에 제시되어 있다.

별도의 실험에서, 환자 4373의 자가유래 PBL에 (i) 실시예 2의 G12D RAS-반응성 4373 TCR(인간 가변 영역 포함) 또는 (ii) 실시예 1의 HLA-A11 제한된, 뮤린 항-KRAS G12D TCR을 인코딩하는 레트로바이러스 발현 벡터를 형질도입하였다.

자가유래 DC에 표 7에 제시된 농도로 하기 펩티드를 적재하였다: 9개의 아미노산 잔기를 갖는 돌연변이된 최소 에피토프(ME) 펩티드(VVGA D GVGK)(서열 번호 28), 10개의 아미노산 잔기를 갖는 돌연변이된 최소 에피토프 펩티드(VVVGA D GVGK)(서열 번호 29), 9개의 아미노산 잔기를 갖는 WT 최소 에피토프 펩티드(VVGA G GVGK)(서열 번호 30), 또는 10개의 아미노산 잔기를 갖는 WT 최소 에피토프 펩티드(VVVGA G GVGK)(서열 번호 31). IFN-γ 분비는 ELISpot으로 측정하였다. 결과는 표 7에 제시되어 있다.

도 2 및 3b 및 표 6 및 7에 제시된 바와 같이, 실시예 2의 항-G12D TCR(인간 가변 영역 포함)은 실시예 1의 뮤린 항-G12D TCR과 동일하거나 더 우수한 반응성을 제공하였다.

실시예 4

본 실시예는 실시예 2의 항-G12D TCR(인간 가변 영역 포함)이 형질도입된 PBL이 높은 결합력으로 HLA-A11-제한된 G12D를 특이적으로 인식함을 보여준다.

환자 4373의 자가유래 PBL에 실시예 2의 G12D RAS-반응성 4373 TCR(인간 가변 영역 포함)을 인코딩하는 레트로바이러스 발현 벡터를 형질도입하였다.

자가유래 DC에 도 4a에 제시된 농도로 하기 펩티드를 적재하였다: 10개 아미노산 잔기를 갖는 돌연변이된 최소 에피토프 펩티드(VVVGA D GVGK)(서열 번호 29) 또는 10개 아미노산 잔기를 갖는 WT 최소 에피토프 펩티드(VVVGA G GVGK)(서열 번호 31). IFN-γ 분비는 ELISpot으로 측정하였다. 결과는 도 4a에 제시되어 있다.

실시예 5

본 실시예는 실시예 2의 항-G12D TCR(인간 가변 영역 포함)이 형질도입된 CD8+ PBL이 높은 결합력으로 HLA-A11-제한된 G12D를 특이적으로 인식함을 보여준다.

환자 4373의 자가유래 CD8+ PBL에 실시예 2의 G12D RAS-반응성 4373 TCR(인간 가변 영역 포함)을 인코딩하는 레트로바이러스 발현 벡터를 형질도입하였다.

자가유래 DC에 도 4b에 제시된 농도로 하기 펩티드를 적재하였다: 10개 아미노산 잔기를 갖는 돌연변이된 최소 에피토프 펩티드(VVVGA D GVGK)(서열 번호 29) 또는 10개 아미노산 잔기를 갖는 WT 최소 에피토프 펩티드(VVVGA G GVGK)(서열 번호 31). 4-1BB 및 0X40의 발현은 FACS로 측정하였다. 결과는 도 4b에 제시되어 있다.

실시예 6

본 실시예는 실시예 2의 항-G12D TCR(인간 가변 영역 포함)이 형질도입된 CD4+ PBL이 높은 결합력으로 HLA-A11-제한된 G12D를 특이적으로 인식함을 보여준다.

환자 4373의 자가유래 CD4+ PBL에 실시예 2의 G12D RAS-반응성 4373 TCR(인간 가변 영역 포함)을 인코딩하는 레트로바이러스 발현 벡터를 형질도입하였다.

자가유래 DC에 도 4c에 제시된 농도로 하기 펩티드를 적재하였다: 10개 아미노산 잔기를 갖는 돌연변이된 최소 에피토프 펩티드(VVVGA D GVGK)(서열 번호 29) 또는 10개 아미노산 잔기를 갖는 WT 최소 에피토프 펩티드(VVVGA G GVGK)(서열 번호 31). 4-1BB 및 0X40의 발현은 FACS로 측정하였다. 결과는 도 4c에 제시되어 있다.

실시예 7

COS 세포에 도 5a에 제시된 농도로 하기 펩티드를 적재하였다: 10개 아미노산 잔기를 갖는 돌연변이된 최소 에피토프 펩티드(VVVGA D GVGK)(서열 번호 29) 또는 10개 아미노산 잔기를 갖는 WT 최소 에피토프 펩티드(VVVGA G GVGK)(서열 번호 31). IFN-γ 분비는 ELISpot으로 측정하였다. 결과는 도 5a에 제시되어 있다.

실시예 8

COS 세포에 HLA-A11을 형질도입하고 도 5b에 제시된 농도로 하기 펩티드를 적재하였다: 10개의 아미노산 잔기를 갖는 돌연변이된 최소 에피토프 펩티드(VVVGA D GVGK)(서열 번호 29) 또는 10개의 아미노산 잔기를 갖는 WT 최소 에피토프 펩티드 아미노산 잔기(VVVGA G GVGK)(서열 번호 31). 4-1BB 및 0X40의 발현은 FACS로 측정하였다. 결과는 도 5b에 제시되어 있다.

실시예 9

COS 세포에 도 5c에 제시된 농도로 하기 펩티드를 적재하였다: 10개 아미노산 잔기를 갖는 돌연변이된 최소 에피토프 펩티드(VVVGA D GVGK)(서열 번호 29) 또는 10개 아미노산 잔기를 갖는 WT 최소 에피토프 펩티드(VVVGA G GVGK)(서열 번호 31). 4-1BB 및 0X40의 발현은 FACS로 측정하였다. 결과는 도 5c에 제시되어 있다.

본원에 인용된 간행물, 특허 출원 및 특허를 포함한 모든 참고문헌은, 각 참고문헌이 개별적으로 및 구체적으로 참고로 포함되는 것으로 지시되고 그 전체가 본원에 제시된 것과 동일한 정도로 참고로 본원에 포함된다.

용어 "하나" 및 "한개" 및 "그" 및 "적어도 하나"의 사용 및 본 발명을 설명하는 데 있어서(특히 하기 청구범위와 관련하여) 유사한 지시 대상은, 본원에 달리 지시되거나 문맥상 명백하게 모순되지 않는 한, 단수 및 복수 둘 다를 포함하는 것으로 해석되어야 한다. 하나 이상의 항목의 목록이 수반되는 "적어도 하나"라는 용어(예를 들어, "A 및 B 중 적어도 하나")의 사용은, 본원에 달리 지시되거나 문맥상 명백하게 모순되지 않는 한, 나열된 항목들로부터 선택된 하나의 항목(A 또는 B) 또는 나열된 항목 중 둘 이상의 임의의 조합(A 및 B)을 의미하는 것으로 해석되어야 한다. "포함하는", "갖는", "포함되는" 및 "함유하는"이라는 용어는, 달리 언급되지 않는 한, 개방형 용어(즉, "포함하지만 이에 제한되지 않는"을 의미함)로 해석되어야 한다. 본원에서 값의 범위에 대한 언급은, 본원에 달리 지시되지 않는 한 범위 내에 속하는 각각의 개별 값을 개별적으로 지칭하는 약식 방법으로서 역할을 하기 위한 것일 뿐이며, 각각의 개별 값은 본원에 개별적으로 인용된 것처럼 명세서에 포함된다. 본원에 기재된 모든 방법은, 본원에 달리 지시되거나 문맥상 명백히 모순되지 않는 한, 임의의 적합한 순서로 수행될 수 있다. 본원에 제공된 모든 예 또는 예시적인 언어(예를 들어, "~와 같은")의 사용은 단지 본 발명을 더 잘 설명하기 위한 것이며 달리 청구되지 않는 한 본 발명의 범주를 제한하지 않는다. 명세서의 어떤 언어도 본 발명의 실행에 필수적인 것으로 청구되지 않은 요소를 나타내는 것으로 해석되어서는 안 된다.

본 발명을 수행하기 위해 본 발명자들에게 알려진 최상의 방식을 포함하여 본 발명의 바람직한 실시태양이 본원에 기재된다. 이러한 바람직한 실시태양의 변형은 전술한 기재내용을 읽을 때 당업자에게 명백해질 수 있다. 본 발명자들은 적절하다면 당업자가 그러한 변형을 사용하기를 기대하고, 본 발명자들은 본원에 구체적으로 기재된 것과는 다르게 본 발명이 실시되기를 의도한다. 따라서, 본 발명은 적용 가능한 법률이 허용하는 바에 따라 본원에 첨부된 청구범위에 인용된 대상의 모든 변형 및 등가물을 포함한다. 더욱이, 본원에 달리 지시되거나 문맥상 명백히 모순되지 않는 한, 본 발명의 모든 가능한 변형에서의 상기-기재된 요소의 임의의 조합은 본 발명에 포괄된다.

SEQUENCE LISTING <110> THE UNITED STATES OF AMERICA, AS REPRESENTED BY THE SECRETARY, DEPARTMENT OF HEALTH AND HUMAN SERVICES <120> HLA CLASS I-RESTRICTED T CELL RECEPTORS AGAINST RAS WITH G12D MUTATION <130> 751506 <140> PCT/US2021/017794 <141> 2021-02-12 <150> US 62/975,544 <151> 2020-02-12 <160> 67 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 6 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Asn Thr Ala Phe Asp Tyr 1 5 <210> 2 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 2 Ile Arg Pro Asp Val Ser Glu 1 5 <210> 3 <211> 16 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 3 Ala Ala Glu Ala Gly Asn His Arg Gly Ser Thr Leu Gly Arg Leu Tyr 1 5 10 15 <210> 4 <211> 5 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 4 Ser Gly His Arg Ser 1 5 <210> 5 <211> 6 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 5 Tyr Phe Ser Glu Thr Gln 1 5 <210> 6 <211> 14 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 6 Ala Ser Ser Leu Ala Ala Gly Gly Tyr Phe Asn Glu Gln Phe 1 5 10 <210> 7 <211> 145 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 7 Met Asp Lys Ile Leu Gly Ala Ser Phe Leu Val 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Tyr Thr Leu Val 145 150 155 160 Arg Glu Ile Arg Gln His Lys Leu Arg Lys Leu Asn Pro Pro Asp Glu 165 170 175 Ser Gly Pro Gly Cys Met Ser Cys Lys Cys Val Leu Ser 180 185 <210> 12 <211> 189 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 12 Met Thr Glu Tyr Lys Leu Val Val Val Gly Ala Gly Gly Val Gly Lys 1 5 10 15 Ser Ala Leu Thr Ile Gln Leu Ile Gln Asn His Phe Val Asp Glu Tyr 20 25 30 Asp Pro Thr Ile Glu Asp Ser Tyr Arg Lys Gln Val Val Ile Asp Gly 35 40 45 Glu Thr Cys Leu Leu Asp Ile Leu Asp Thr Ala Gly Gln Glu Glu Tyr 50 55 60 Ser Ala Met Arg Asp Gln Tyr Met Arg Thr Gly Glu Gly Phe Leu Cys 65 70 75 80 Val Phe Ala Ile Asn Asn Ser Lys Ser Phe Ala Asp Ile Asn Leu Tyr 85 90 95 Arg Glu Gln Ile Lys Arg Val Lys Asp Ser Asp Asp Val Pro Met Val 100 105 110 Leu Val Gly Asn Lys Cys Asp Leu Pro Thr Arg Thr Val Asp Thr Lys 115 120 125 Gln Ala His Glu Leu Ala Lys Ser Tyr Gly Ile Pro Phe Ile Glu Thr 130 135 140 Ser Ala Lys Thr Arg Gln Gly Val Glu Asp Ala Phe Tyr Thr Leu Val 145 150 155 160 Arg Glu Ile Arg Gln Tyr 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Leu Cys Leu Leu Gly Ala 1 5 10 15 Gly Pro Val Lys Ala Gly Val Thr Gln Thr Pro Arg Tyr Leu Ile Lys 20 25 30 Thr Arg Gly Gln Gln Val Thr Leu Ser Cys Ser Pro Ile Ser Gly His 35 40 45 Arg Ser Val Ser Trp Tyr Gln Gln Thr Pro Gly Gln Gly Leu Gln Phe 50 55 60 Leu Phe Glu Tyr Phe Ser Glu Thr Gln Arg Asn Lys Gly Asn Phe Pro 65 70 75 80 Gly Arg Phe Ser Gly Arg Gln Phe Ser Asn Ser Arg Ser Glu Met Asn 85 90 95 Val Ser Thr Leu Glu Leu Gly Asp Ser Ala Leu Tyr Leu Cys Ala Ser 100 105 110 Ser Leu Ala Ala Gly Gly Tyr Phe Asn Glu Gln Phe Phe Gly Pro Gly 115 120 125 Thr Arg Leu Thr Val Leu Glu Asp Leu Arg Asn Val Thr Pro Pro Lys 130 135 140 Val Ser Leu Phe Glu Pro Ser Lys Ala Glu Ile Ala Asn Lys Gln Lys 145 150 155 160 Ala Thr Leu Val Cys Leu Ala Arg Gly Phe Phe Pro Asp His Val Glu 165 170 175 Leu Ser Trp Trp Val Asn Gly Lys Glu Val His Ser Gly Val Cys Thr 180 185 190 Asp Pro Gln Ala Tyr Lys Glu Ser Asn Tyr Ser Tyr Cys Leu Ser Ser 195 200 205 Arg Leu Arg Val Ser Ala Thr Phe Trp His Asn Pro Arg Asn His Phe 210 215 220 Arg Cys Gln Val Gln Phe His Gly Leu Ser Glu Glu Asp Lys Trp Pro 225 230 235 240 Glu Gly Ser Pro Lys Pro Val Thr Gln Asn Ile Ser Ala Glu Ala Trp 245 250 255 Gly Arg Ala Asp Cys Gly Ile Thr Ser Ala Ser Tyr Gln Gln Gly Val 260 265 270 Leu Ser Ala Thr Ile Leu Tyr Glu Ile Leu Leu Gly Lys Ala Thr Leu 275 280 285 Tyr Ala Val Leu Val Ser Thr Leu Val Val Met Ala Met Val Lys Arg 290 295 300 Lys Asn Ser 305 <210> 59 <211> 124 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 59 Gln Gln Lys Glu Lys Ser Asp Gln Gln Gln Val Lys Gln Ser Pro Gln 1 5 10 15 Ser Leu Ile Val Gln Lys Gly Gly Ile Ser Ile Ile Asn Cys Ala Tyr 20 25 30 Glu Asn Thr Ala Phe Asp Tyr Phe Pro Trp Tyr Gln Gln Phe Pro Gly 35 40 45 Lys Gly Pro Ala Leu Leu Ile Ala Ile Arg Pro Asp Val Ser Glu Lys 50 55 60 Lys Glu Gly Arg Phe Thr Ile Ser Phe Asn Lys Ser Ala Lys Gln Phe 65 70 75 80 Ser Leu His Ile Met Asp Ser Gln Pro Gly Asp Ser Ala Thr Tyr Phe 85 90 95 Cys Ala Ala Glu Ala Gly Asn His Arg Gly Ser Thr Leu Gly Arg Leu 100 105 110 Tyr Phe Gly Arg Gly Thr Gln Leu Thr Val Trp Pro 115 120 <210> 60 <211> 113 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 60 Gly Val Thr Gln Thr Pro Arg Tyr Leu Ile Lys Thr Arg Gly Gln Gln 1 5 10 15 Val Thr Leu Ser Cys Ser Pro Ile Ser Gly His Arg Ser Val Ser Trp 20 25 30 Tyr Gln Gln Thr Pro Gly Gln Gly Leu Gln Phe Leu Phe Glu Tyr Phe 35 40 45 Ser Glu Thr Gln Arg Asn Lys Gly Asn Phe Pro Gly Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Arg Gln Phe Ser Asn Ser Arg Ser Glu Met Asn Val Ser Thr Leu Glu 65 70 75 80 Leu Gly Asp Ser Ala Leu Tyr Leu Cys Ala Ser Ser Leu Ala Ala Gly 85 90 95 Gly Tyr Phe Asn Glu Gln Phe Phe Gly Pro Gly Thr Arg Leu Thr Val 100 105 110 Leu <210> 61 <211> 261 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <220> <221> MISC_FEATURE <222> (172)..(172) <223> Xaa is Thr or Cys <220> <221> MISC_FEATURE <222> (236)..(236) <223> Xaa is Ser, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Met, or Trp <220> <221> MISC_FEATURE <222> (238)..(238) <223> Xaa is Met, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, or Trp <220> <221> MISC_FEATURE <222> (239)..(239) <223> Xaa is Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Met, or Trp <400> 61 Gln Gln Lys Glu Lys Ser Asp Gln Gln Gln Val Lys Gln Ser Pro Gln 1 5 10 15 Ser Leu Ile Val Gln Lys Gly Gly Ile Ser Ile Ile Asn Cys Ala Tyr 20 25 30 Glu Asn Thr Ala Phe Asp Tyr Phe Pro Trp Tyr Gln Gln Phe Pro Gly 35 40 45 Lys Gly Pro Ala Leu Leu Ile Ala Ile Arg Pro Asp Val Ser Glu Lys 50 55 60 Lys Glu Gly Arg Phe Thr Ile Ser Phe Asn Lys Ser Ala Lys Gln Phe 65 70 75 80 Ser Leu His Ile Met Asp Ser Gln Pro Gly Asp Ser Ala Thr Tyr Phe 85 90 95 Cys Ala Ala Glu Ala Gly Asn His Arg Gly Ser Thr Leu Gly Arg Leu 100 105 110 Tyr Phe Gly Arg Gly Thr Gln Leu Thr Val Trp Pro Asn Ile Gln Asn 115 120 125 Pro Glu Pro Ala Val Tyr Gln Leu Lys Asp Pro Arg Ser Gln Asp Ser 130 135 140 Thr Leu Cys Leu Phe Thr Asp Phe Asp Ser Gln Ile Asn Val Pro Lys 145 150 155 160 Thr Met Glu Ser Gly Thr Phe Ile Thr Asp Lys Xaa Val Leu Asp Met 165 170 175 Lys Ala Met Asp Ser Lys Ser Asn Gly Ala Ile Ala Trp Ser Asn Gln 180 185 190 Thr Ser Phe Thr Cys Gln Asp Ile Phe Lys Glu Thr Asn Ala Thr Tyr 195 200 205 Pro Ser Ser Asp Val Pro Cys Asp Ala Thr Leu Thr Glu Lys Ser Phe 210 215 220 Glu Thr Asp Met Asn Leu Asn Phe Gln Asn Leu Xaa Val Xaa Xaa Leu 225 230 235 240 Arg Ile Leu Leu Leu Lys Val Ala Gly Phe Asn Leu Leu Met Thr Leu 245 250 255 Arg Leu Trp Ser Ser 260 <210> 62 <211> 286 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <220> <221> MISC_FEATURE <222> (170)..(170) <223> Xaa is Ser or Cys <400> 62 Gly Val Thr Gln Thr Pro Arg Tyr Leu Ile Lys Thr Arg Gly Gln Gln 1 5 10 15 Val Thr Leu Ser Cys Ser Pro Ile Ser Gly His Arg Ser Val Ser Trp 20 25 30 Tyr Gln Gln Thr Pro Gly Gln Gly Leu Gln Phe Leu Phe Glu Tyr Phe 35 40 45 Ser Glu Thr Gln Arg Asn Lys Gly Asn Phe Pro Gly Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Arg Gln Phe Ser Asn Ser Arg Ser Glu Met Asn Val Ser Thr Leu Glu 65 70 75 80 Leu Gly Asp Ser Ala Leu Tyr Leu Cys Ala Ser Ser Leu Ala Ala Gly 85 90 95 Gly Tyr Phe Asn Glu Gln Phe Phe Gly Pro Gly Thr Arg Leu Thr Val 100 105 110 Leu Glu Asp Leu Arg Asn Val Thr Pro Pro Lys Val Ser Leu Phe Glu 115 120 125 Pro Ser Lys Ala Glu Ile Ala Asn Lys Gln Lys Ala Thr Leu Val Cys 130 135 140 Leu Ala Arg Gly Phe Phe Pro Asp His Val Glu Leu Ser Trp Trp Val 145 150 155 160 Asn Gly Lys Glu Val His Ser Gly Val Xaa Thr Asp Pro Gln Ala Tyr 165 170 175 Lys Glu Ser Asn Tyr Ser Tyr Cys Leu Ser Ser Arg Leu Arg Val Ser 180 185 190 Ala Thr Phe Trp His Asn Pro Arg Asn His Phe Arg Cys Gln Val Gln 195 200 205 Phe His Gly Leu Ser Glu Glu Asp Lys Trp Pro Glu Gly Ser Pro Lys 210 215 220 Pro Val Thr Gln Asn Ile Ser Ala Glu Ala Trp Gly Arg Ala Asp Cys 225 230 235 240 Gly Ile Thr Ser Ala Ser Tyr Gln Gln Gly Val Leu Ser Ala Thr Ile 245 250 255 Leu Tyr Glu Ile Leu Leu Gly Lys Ala Thr Leu Tyr Ala Val Leu Val 260 265 270 Ser Thr Leu Val Val Met Ala Met Val Lys Arg Lys Asn Ser 275 280 285 <210> 63 <211> 261 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 63 Gln Gln Lys Glu Lys Ser Asp Gln Gln Gln Val Lys Gln Ser Pro Gln 1 5 10 15 Ser Leu Ile Val Gln Lys Gly Gly Ile Ser Ile Ile Asn Cys Ala Tyr 20 25 30 Glu Asn Thr Ala Phe Asp Tyr Phe Pro Trp Tyr Gln Gln Phe Pro Gly 35 40 45 Lys Gly Pro Ala Leu Leu Ile Ala Ile Arg Pro Asp Val Ser Glu Lys 50 55 60 Lys Glu Gly Arg Phe Thr Ile Ser Phe Asn Lys Ser Ala Lys Gln Phe 65 70 75 80 Ser Leu His Ile Met Asp Ser Gln Pro Gly Asp Ser Ala Thr Tyr Phe 85 90 95 Cys Ala Ala Glu Ala Gly Asn His Arg Gly Ser Thr Leu Gly Arg Leu 100 105 110 Tyr Phe Gly Arg Gly Thr Gln Leu Thr Val Trp Pro Asn Ile Gln Asn 115 120 125 Pro Glu Pro Ala Val Tyr Gln Leu Lys Asp Pro Arg Ser Gln Asp Ser 130 135 140 Thr Leu Cys Leu Phe Thr Asp Phe Asp Ser Gln Ile Asn Val Pro Lys 145 150 155 160 Thr Met Glu Ser Gly Thr Phe Ile Thr Asp Lys Thr Val Leu Asp Met 165 170 175 Lys Ala Met Asp Ser Lys Ser Asn Gly Ala Ile Ala Trp Ser Asn Gln 180 185 190 Thr Ser Phe Thr Cys Gln Asp Ile Phe Lys Glu Thr Asn Ala Thr Tyr 195 200 205 Pro Ser Ser Asp Val Pro Cys Asp Ala Thr Leu Thr Glu Lys Ser Phe 210 215 220 Glu Thr Asp Met Asn Leu Asn Phe Gln Asn Leu Ser Val Met Gly Leu 225 230 235 240 Arg Ile Leu Leu Leu Lys Val Ala Gly Phe Asn Leu Leu Met Thr Leu 245 250 255 Arg Leu Trp Ser Ser 260 <210> 64 <211> 286 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 64 Gly Val Thr Gln Thr Pro Arg Tyr Leu Ile Lys Thr Arg Gly Gln Gln 1 5 10 15 Val Thr Leu Ser Cys Ser Pro Ile Ser Gly His Arg Ser Val Ser Trp 20 25 30 Tyr Gln Gln Thr Pro Gly Gln Gly Leu Gln Phe Leu Phe Glu Tyr Phe 35 40 45 Ser Glu Thr Gln Arg Asn Lys Gly Asn Phe Pro Gly Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Arg Gln Phe Ser Asn Ser Arg Ser Glu Met Asn Val Ser Thr Leu Glu 65 70 75 80 Leu Gly Asp Ser Ala Leu Tyr Leu Cys Ala Ser Ser Leu Ala Ala Gly 85 90 95 Gly Tyr Phe Asn Glu Gln Phe Phe Gly Pro Gly Thr Arg Leu Thr Val 100 105 110 Leu Glu Asp Leu Arg Asn Val Thr Pro Pro Lys Val Ser Leu Phe Glu 115 120 125 Pro Ser Lys Ala Glu Ile Ala Asn Lys Gln Lys Ala Thr Leu Val Cys 130 135 140 Leu Ala Arg Gly Phe Phe Pro Asp His Val Glu Leu Ser Trp Trp Val 145 150 155 160 Asn Gly Lys Glu Val His Ser Gly Val Ser Thr Asp Pro Gln Ala Tyr 165 170 175 Lys Glu Ser Asn Tyr Ser Tyr Cys Leu Ser Ser Arg Leu Arg Val Ser 180 185 190 Ala Thr Phe Trp His Asn Pro Arg Asn His Phe Arg Cys Gln Val Gln 195 200 205 Phe His Gly Leu Ser Glu Glu Asp Lys Trp Pro Glu Gly Ser Pro Lys 210 215 220 Pro Val Thr Gln Asn Ile Ser Ala Glu Ala Trp Gly Arg Ala Asp Cys 225 230 235 240 Gly Ile Thr Ser Ala Ser Tyr Gln Gln Gly Val Leu Ser Ala Thr Ile 245 250 255 Leu Tyr Glu Ile Leu Leu Gly Lys Ala Thr Leu Tyr Ala Val Leu Val 260 265 270 Ser Thr Leu Val Val Met Ala Met Val Lys Arg Lys Asn Ser 275 280 285 <210> 65 <211> 261 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 65 Gln Gln Lys Glu Lys Ser Asp Gln Gln Gln Val Lys Gln Ser Pro Gln 1 5 10 15 Ser Leu Ile Val Gln Lys Gly Gly Ile Ser Ile Ile Asn Cys Ala Tyr 20 25 30 Glu Asn Thr Ala Phe Asp Tyr Phe Pro Trp Tyr Gln Gln Phe Pro Gly 35 40 45 Lys Gly Pro Ala Leu Leu Ile Ala Ile Arg Pro Asp Val Ser Glu Lys 50 55 60 Lys Glu Gly Arg Phe Thr Ile Ser Phe Asn Lys Ser Ala Lys Gln Phe 65 70 75 80 Ser Leu His Ile Met Asp Ser Gln Pro Gly Asp Ser Ala Thr Tyr Phe 85 90 95 Cys Ala Ala Glu Ala Gly Asn His Arg Gly Ser Thr Leu Gly Arg Leu 100 105 110 Tyr Phe Gly Arg Gly Thr Gln Leu Thr Val Trp Pro Asn Ile Gln Asn 115 120 125 Pro Glu Pro Ala Val Tyr Gln Leu Lys Asp Pro Arg Ser Gln Asp Ser 130 135 140 Thr Leu Cys Leu Phe Thr Asp Phe Asp Ser Gln Ile Asn Val Pro Lys 145 150 155 160 Thr Met Glu Ser Gly Thr Phe Ile Thr Asp Lys Cys Val Leu Asp Met 165 170 175 Lys Ala Met Asp Ser Lys Ser Asn Gly Ala Ile Ala Trp Ser Asn Gln 180 185 190 Thr Ser Phe Thr Cys Gln Asp Ile Phe Lys Glu Thr Asn Ala Thr Tyr 195 200 205 Pro Ser Ser Asp Val Pro Cys Asp Ala Thr Leu Thr Glu Lys Ser Phe 210 215 220 Glu Thr Asp Met Asn Leu Asn Phe Gln Asn Leu Leu Val Ile Val Leu 225 230 235 240 Arg Ile Leu Leu Leu Lys Val Ala Gly Phe Asn Leu Leu Met Thr Leu 245 250 255 Arg Leu Trp Ser Ser 260 <210> 66 <211> 286 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 66 Gly Val Thr Gln Thr Pro Arg Tyr Leu Ile Lys Thr Arg Gly Gln Gln 1 5 10 15 Val Thr Leu Ser Cys Ser Pro Ile Ser Gly His Arg Ser Val Ser Trp 20 25 30 Tyr Gln Gln Thr Pro Gly Gln Gly Leu Gln Phe Leu Phe Glu Tyr Phe 35 40 45 Ser Glu Thr Gln Arg Asn Lys Gly Asn Phe Pro Gly Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Arg Gln Phe Ser Asn Ser Arg Ser Glu Met Asn Val Ser Thr Leu Glu 65 70 75 80 Leu Gly Asp Ser Ala Leu Tyr Leu Cys Ala Ser Ser Leu Ala Ala Gly 85 90 95 Gly Tyr Phe Asn Glu Gln Phe Phe Gly Pro Gly Thr Arg Leu Thr Val 100 105 110 Leu Glu Asp Leu Arg Asn Val Thr Pro Pro Lys Val Ser Leu Phe Glu 115 120 125 Pro Ser Lys Ala Glu Ile Ala Asn Lys Gln Lys Ala Thr Leu Val Cys 130 135 140 Leu Ala Arg Gly Phe Phe Pro Asp His Val Glu Leu Ser Trp Trp Val 145 150 155 160 Asn Gly Lys Glu Val His Ser Gly Val Cys Thr Asp Pro Gln Ala Tyr 165 170 175 Lys Glu Ser Asn Tyr Ser Tyr Cys Leu Ser Ser Arg Leu Arg Val Ser 180 185 190 Ala Thr Phe Trp His Asn Pro Arg Asn His Phe Arg Cys Gln Val Gln 195 200 205 Phe His Gly Leu Ser Glu Glu Asp Lys Trp Pro Glu Gly Ser Pro Lys 210 215 220 Pro Val Thr Gln Asn Ile Ser Ala Glu Ala Trp Gly Arg Ala Asp Cys 225 230 235 240 Gly Ile Thr Ser Ala Ser Tyr Gln Gln Gly Val Leu Ser Ala Thr Ile 245 250 255 Leu Tyr Glu Ile Leu Leu Gly Lys Ala Thr Leu Tyr Ala Val Leu Val 260 265 270 Ser Thr Leu Val Val Met Ala Met Val Lys Arg Lys Asn Ser 275 280 285 <210> 67 <211> 616 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 67 Met Ala Lys Ile Leu Gly Ala Ser Phe Leu Val Leu Trp Leu Gln Leu 1 5 10 15 Cys Trp Val Ser Gly Gln Gln Lys Glu Lys Ser Asp Gln Gln Gln Val 20 25 30 Lys Gln Ser Pro Gln Ser Leu Ile Val Gln Lys Gly Gly Ile Ser Ile 35 40 45 Ile Asn Cys Ala Tyr Glu Asn Thr Ala Phe Asp Tyr Phe Pro Trp Tyr 50 55 60 Gln Gln Phe Pro Gly Lys Gly Pro Ala Leu Leu Ile Ala Ile Arg Pro 65 70 75 80 Asp Val Ser Glu Lys Lys Glu Gly Arg Phe Thr Ile Ser Phe Asn Lys 85 90 95 Ser Ala Lys Gln Phe Ser Leu His Ile Met Asp Ser Gln Pro Gly Asp 100 105 110 Ser Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Ala Glu Ala Gly Asn His Arg Gly Ser 115 120 125 Thr Leu Gly Arg Leu Tyr Phe Gly Arg Gly Thr Gln Leu Thr Val Trp 130 135 140 Pro Asn Ile Gln Asn Pro Glu Pro Ala Val Tyr Gln Leu Lys Asp Pro 145 150 155 160 Arg Ser Gln Asp Ser Thr Leu Cys Leu Phe Thr Asp Phe Asp Ser Gln 165 170 175 Ile Asn Val Pro Lys Thr Met Glu Ser Gly Thr Phe Ile Thr Asp Lys 180 185 190 Cys Val Leu Asp Met Lys Ala Met Asp Ser Lys Ser Asn Gly Ala Ile 195 200 205 Ala Trp Ser Asn Gln Thr Ser Phe Thr Cys Gln Asp Ile Phe Lys Glu 210 215 220 Thr Asn Ala Thr Tyr Pro Ser Ser Asp Val Pro Cys Asp Ala Thr Leu 225 230 235 240 Thr Glu Lys Ser Phe Glu Thr Asp Met Asn Leu Asn Phe Gln Asn Leu 245 250 255 Leu Val Ile Val Leu Arg Ile Leu Leu Leu Lys Val Ala Gly Phe Asn 260 265 270 Leu Leu Met Thr Leu Arg Leu Trp Ser Ser Arg Ala Lys Arg Ser Gly 275 280 285 Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val Glu 290 295 300 Glu Asn Pro Gly Pro Met Gly Ser Arg Leu Leu Cys Trp Val Leu Leu 305 310 315 320 Cys Leu Leu Gly Ala Gly Pro Val Lys Ala Gly Val Thr Gln Thr Pro 325 330 335 Arg Tyr Leu Ile Lys Thr Arg Gly Gln Gln Val Thr Leu Ser Cys Ser 340 345 350 Pro Ile Ser Gly His Arg Ser Val Ser Trp Tyr Gln Gln Thr Pro Gly 355 360 365 Gln Gly Leu Gln Phe Leu Phe Glu Tyr Phe Ser Glu Thr Gln Arg Asn 370 375 380 Lys Gly Asn Phe Pro Gly Arg Phe Ser Gly Arg Gln Phe Ser Asn Ser 385 390 395 400 Arg Ser Glu Met Asn Val Ser Thr Leu Glu Leu Gly Asp Ser Ala Leu 405 410 415 Tyr Leu Cys Ala Ser Ser Leu Ala Ala Gly Gly Tyr Phe Asn Glu Gln 420 425 430 Phe Phe Gly Pro Gly Thr Arg Leu Thr Val Leu Glu Asp Leu Arg Asn 435 440 445 Val Thr Pro Pro Lys Val Ser Leu Phe Glu Pro Ser Lys Ala Glu Ile 450 455 460 Ala Asn Lys Gln Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ala Arg Gly Phe Phe 465 470 475 480 Pro Asp His Val Glu Leu Ser Trp Trp Val Asn Gly Lys Glu Val His 485 490 495 Ser Gly Val Cys Thr Asp Pro Gln Ala Tyr Lys Glu Ser Asn Tyr Ser 500 505 510 Tyr Cys Leu Ser Ser Arg Leu Arg Val Ser Ala Thr Phe Trp His Asn 515 520 525 Pro Arg Asn His Phe Arg Cys Gln Val Gln Phe His Gly Leu Ser Glu 530 535 540 Glu Asp Lys Trp Pro Glu Gly Ser Pro Lys Pro Val Thr Gln Asn Ile 545 550 555 560 Ser Ala Glu Ala Trp Gly Arg Ala Asp Cys Gly Ile Thr Ser Ala Ser 565 570 575 Tyr Gln Gln Gly Val Leu Ser Ala Thr Ile Leu Tyr Glu Ile Leu Leu 580 585 590 Gly Lys Ala Thr Leu Tyr Ala Val Leu Val Ser Thr Leu Val Val Met 595 600 605 Ala Met Val Lys Arg Lys Asn Ser 610 615

Claims

위치 12에서의 글리신이 아스파르트산으로 치환된 돌연변이된 인간 RAS 아미노산 서열에 대하여 항원 특이성을 갖고, 서열 번호 1 내지 3, 4 내지 6 또는 1 내지 6의 모든 아미노산 서열을 포함하는, 단리 또는 정제된 T 세포 수용체(TCR: T-cell receptor)로서,
상기 돌연변이된 인간 RAS 아미노산 서열이 돌연변이된 인간 커스틴(Kirsten) 래트 육종 바이러스 종양유전자 상동체(KRAS), 돌연변이된 인간 하비(Harvey) 래트 육종 바이러스 종양유전자 상동체(HRAS) 또는 돌연변이된 인간 신경모세포종 래트 육종 바이러스 종양유전자 상동체(NRAS) 아미노산 서열이고,
상기 위치 12가 야생형 인간 KRAS, 야생형 인간 HRAS 또는 야생형 인간 NRAS 단백질을 각각 참조하여 정의되는, 단리 또는 정제된 T 세포 수용체.
제1항에 있어서,
돌연변이된 인간 RAS 아미노산 서열이 VVVGADGVGK(서열 번호 29)인, 단리 또는 정제된 T 세포 수용체.
제1항 또는 제2항에 있어서,
T 세포 수용체가 VVVGAGGVGK(서열 번호 31)의 야생형 인간 RAS 아미노산 서열에 대하여 항원 특이성을 갖지 않는, 단리 또는 정제된 T 세포 수용체.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,
돌연변이된 인간 RAS 아미노산 서열이 인간 백혈구 항원(HLA: human leukocyte antigen) 클래스 I 분자에 의해 제시되는, 단리 또는 정제된 T 세포 수용체.
제4항에 있어서,
HLA 클래스 I 분자가 HLA-A 분자인, 단리 또는 정제된 T 세포 수용체.
제4항에 있어서,
HLA 클래스 I 분자가 HLA-A11 분자인, 단리 또는 정제된 T 세포 수용체.
제4항에 있어서,
HLA 클래스 I 분자가 HLA-A^*11:01 대립유전자에 의해 인코딩되는, 단리 또는 정제된 T 세포 수용체.
제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서,
(i) 서열 번호 7의 아미노산 서열과 99% 이상 동일한 아미노산 서열;
(ii) 서열 번호 8의 아미노산 서열과 99% 이상 동일한 아미노산 서열;
(iii) 서열 번호 51의 아미노산 서열과 99% 이상 동일한 아미노산 서열;
(iv) 서열 번호 52의 아미노산 서열과 99% 이상 동일한 아미노산 서열;
(v) 서열 번호 32의 아미노산 서열과 99% 이상 동일한 아미노산 서열;
(vi) 서열 번호 33의 아미노산 서열과 99% 이상 동일한 아미노산 서열;
(vii) 서열 번호 59의 아미노산 서열과 99% 이상 동일한 아미노산 서열;
(viii) 서열 번호 60의 아미노산 서열과 99% 이상 동일한 아미노산 서열; 또는
(ix) (i) 및 (ii) 둘 다, (i) 및 (iv) 둘 다, (ii) 및 (iii) 둘 다, (iii) 및 (iv) 둘 다, (v) 및 (vi) 둘 다, (v) 및 (viii) 둘 다, (vi) 및 (vii) 둘 다, 또는 (vii) 및 (viii) 둘 다
를 포함하는, 단리 또는 정제된 T 세포 수용체.
제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서,
(i) 서열 번호 7의 아미노산 서열;
(ii) 서열 번호 8의 아미노산 서열;
(iii) 서열 번호 51의 아미노산 서열;
(iv) 서열 번호 52의 아미노산 서열;
(v) 서열 번호 32의 아미노산 서열;
(vi) 서열 번호 33의 아미노산 서열;
(vii) 서열 번호 59의 아미노산 서열;
(viii) 서열 번호 60의 아미노산 서열; 또는
(ix) (i) 및 (ii) 둘 다, (i) 및 (iv) 둘 다, (ii) 및 (iii) 둘 다, (iii) 및 (iv) 둘 다, (v) 및 (vi) 둘 다, (v) 및 (viii) 둘 다, (vi) 및 (vii) 둘 다, 또는 (vii) 및 (viii) 둘 다
를 포함하는, 단리 또는 정제된 T 세포 수용체.
제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서,
(a) 서열 번호 17의 아미노산 서열과 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 α 쇄 불변 영역[여기서,
(i) 서열 번호 17의 위치 48에서의 X는 Thr 또는 Cys이고;
(ii) 서열 번호 17의 위치 112에서의 X는 Ser, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Met 또는 Trp이고;
(iii) 서열 번호 17의 위치 114에서의 X는 Met, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe 또는 Trp이고;
(iv) 서열 번호 17의 위치 115에서의 X는 Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Met 또는 Trp임];
(b) 서열 번호 18의 아미노산 서열과 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 β 쇄 불변 영역[여기서, 서열 번호 18의 위치 57에서의 X는 Ser 또는 Cys임]; 또는
(c) (a) 및 (b) 둘 다
를 추가로 포함하는, 단리 또는 정제된 T 세포 수용체.
제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서,
(a) 서열 번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 α 쇄 불변 영역[여기서,
(i) 서열 번호 17의 위치 48에서의 X는 Thr 또는 Cys이고;
(ii) 서열 번호 17의 위치 112에서의 X는 Ser, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Met 또는 Trp이고;
(iii) 서열 번호 17의 위치 114에서의 X는 Met, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe 또는 Trp이고;
(iv) 서열 번호 17의 위치 115에서의 X는 Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Met 또는 Trp임];
(b) 서열 번호 18의 아미노산 서열을 포함하는 β 쇄 불변 영역[여기서, 서열 번호 18의 위치 57에서의 X는 Ser 또는 Cys임]; 또는
(c) (a) 및 (b) 둘 다
를 추가로 포함하는, 단리 또는 정제된 T 세포 수용체.
제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서,
(a) 서열 번호 21의 아미노산 서열과 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 α 쇄[여기서,
(i) 서열 번호 21의 위치 193에서의 X는 Thr 또는 Cys이고;
(ii) 서열 번호 21의 위치 257에서의 X는 Ser, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Met 또는 Trp이고;
(iii) 서열 번호 21의 위치 259에서의 X는 Met, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe 또는 Trp이고;
(iv) 서열 번호 21의 위치 260에서의 X는 Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Met 또는 Trp임];
(b) 서열 번호 22의 아미노산 서열과 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 β 쇄[여기서, 서열 번호 22의 위치 191에서의 X는 Ser 또는 Cys임];
(c) 서열 번호 53의 아미노산 서열과 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 α 쇄[여기서,
(i) 서열 번호 53의 위치 193에서의 X는 Thr 또는 Cys이고;
(ii) 서열 번호 53의 위치 257에서의 X는 Ser, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Met 또는 Trp이고;
(iii) 서열 번호 53의 위치 259에서의 X는 Met, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe 또는 Trp이고;
(iv) 서열 번호 53의 위치 260에서의 X는 Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Met 또는 Trp임];
(d) 서열 번호 54의 아미노산 서열과 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 β 쇄[여기서, 서열 번호 54의 위치 191에서의 X는 Ser 또는 Cys임];
(e) (a) 및 (b) 둘 다, (a) 및 (d) 둘 다, (b) 및 (c) 둘 다, 또는 (c) 및 (d) 둘 다;
(f) 서열 번호 34의 아미노산 서열과 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 α 쇄[여기서,
(i) 서열 번호 34의 위치 165에서의 X는 Thr 또는 Cys이고;
(ii) 서열 번호 34의 위치 229에서의 X는 Ser, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Met 또는 Trp이고;
(iii) 서열 번호 34의 위치 231에서의 X는 Met, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe 또는 Trp이고;
(iv) 서열 번호 34의 위치 232에서의 X는 Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Met 또는 Trp임];
(g) 서열 번호 35의 아미노산 서열과 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 β 쇄[여기서, 서열 번호 35의 위치 172에서의 X는 Ser 또는 Cys임];
(h) 서열 번호 61의 아미노산 서열과 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 α 쇄[여기서,
(i) 서열 번호 61의 위치 172에서의 X는 Thr 또는 Cys이고;
(ii) 서열 번호 61의 위치 236에서의 X는 Ser, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Met 또는 Trp이고;
(iii) 서열 번호 61의 위치 238에서의 X는 Met, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe 또는 Trp이고;
(iv) 서열 번호 61의 위치 239에서의 X는 Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Met 또는 Trp임];
(i) 서열 번호 62의 아미노산 서열과 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 β 쇄[여기서, 서열 번호 62의 위치 170에서의 X는 Ser 또는 Cys임];
(j) (f) 및 (g) 둘 다, 또는 (h) 및 (i) 둘 다;
(k) 서열 번호 36의 아미노산 서열과 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 α 쇄;
(l) 서열 번호 37의 아미노산 서열과 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 β 쇄;
(m) 서열 번호 63의 아미노산 서열과 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 α 쇄;
(n) 서열 번호 64의 아미노산 서열과 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 β 쇄;
(o) 서열 번호 42의 아미노산 서열과 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 α 쇄;
(p) 서열 번호 43의 아미노산 서열과 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 β 쇄;
(q) 서열 번호 65의 아미노산 서열과 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 α 쇄;
(r) 서열 번호 66의 아미노산 서열과 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 β 쇄;
(s) (k) 및 (l) 둘 다, (m) 및 (n) 둘 다, (o) 및 (p) 둘 다, 또는 (q) 및 (r) 둘 다;
(t) 서열 번호 23의 아미노산 서열과 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 α 쇄;
(u) 서열 번호 24의 아미노산 서열과 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 β 쇄;
(v) 서열 번호 55의 아미노산 서열과 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 α 쇄;
(w) 서열 번호 56의 아미노산 서열과 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 β 쇄;
(x) 서열 번호 40의 아미노산 서열과 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 α 쇄;
(y) 서열 번호 41의 아미노산 서열과 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 β 쇄;
(z) 서열 번호 57의 아미노산 서열과 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 α 쇄;
(aa) 서열 번호 58의 아미노산 서열과 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 β 쇄; 또는
(ab) (t) 및 (u) 둘 다, (t) 및 (w) 둘 다, (u) 및 (v) 둘 다, (v) 및 (w) 둘 다, (x) 및 (y) 둘 다, (x) 및 (aa) 둘 다, (y) 및 (z) 둘 다, 또는 (z) 및 (aa) 둘 다
를 포함하는, 단리 또는 정제된 T 세포 수용체.
제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서,
(a) 서열 번호 21의 아미노산 서열을 포함하는 α 쇄[여기서,
(i) 서열 번호 21의 위치 193에서의 X는 Thr 또는 Cys이고;
(ii) 서열 번호 21의 위치 257에서의 X는 Ser, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Met 또는 Trp이고;
(iii) 서열 번호 21의 위치 259에서의 X는 Met, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe 또는 Trp이고;
(iv) 서열 번호 21의 위치 260에서의 X는 Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Met 또는 Trp임];
(b) 서열 번호 22의 아미노산 서열을 포함하는 β 쇄[여기서, 서열 번호 22의 위치 191에서의 X는 Ser 또는 Cys임];
(c) 서열 번호 53의 아미노산 서열을 포함하는 α 쇄[여기서,
(i) 서열 번호 21의 위치 193에서의 X는 Thr 또는 Cys이고;
(ii) 서열 번호 21의 위치 257에서의 X는 Ser, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Met 또는 Trp이고;
(iii) 서열 번호 21의 위치 259에서의 X는 Met, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe 또는 Trp이고;
(iv) 서열 번호 21의 위치 260에서의 X는 Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Met 또는 Trp임];
(d) 서열 번호 54의 아미노산 서열을 포함하는 β 쇄[여기서, 서열 번호 54의 위치 191에서의 X는 Ser 또는 Cys임];
(e) (a) 및 (b) 둘 다, (a) 및 (d) 둘 다, (b) 및 (c) 둘 다, 또는 (c) 및 (d) 둘 다;
(f) 서열 번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 α 쇄[여기서,
(i) 서열 번호 34의 위치 165에서의 X는 Thr 또는 Cys이고;
(ii) 서열 번호 34의 위치 229에서의 X는 Ser, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Met 또는 Trp이고;
(iii) 서열 번호 34의 위치 231에서의 X는 Met, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe 또는 Trp이고;
(iv) 서열 번호 34의 위치 232에서의 X는 Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Met 또는 Trp임];
(g) 서열 번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 β 쇄[여기서, 서열 번호 35의 위치 172에서의 X는 Ser 또는 Cys임];
(h) 서열 번호 61의 아미노산 서열을 포함하는 α 쇄[여기서,
(i) 서열 번호 61의 위치 172에서의 X는 Thr 또는 Cys이고;
(ii) 서열 번호 61의 위치 236에서의 X는 Ser, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Met 또는 Trp이고;
(iii) 서열 번호 61의 위치 238에서의 X는 Met, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe 또는 Trp이고;
(iv) 서열 번호 61의 위치 239에서의 X는 Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Met 또는 Trp임];
(i) 서열 번호 62의 아미노산 서열을 포함하는 β 쇄[여기서, 서열 번호 62의 위치 170에서의 X는 Ser 또는 Cys임];
(j) (f) 및 (g) 둘 다, 또는 (h) 및 (i) 둘 다;
(k) 서열 번호 36의 아미노산 서열을 포함하는 α 쇄;
(l) 서열 번호 37의 아미노산 서열을 포함하는 β 쇄;
(m) 서열 번호 63의 아미노산 서열을 포함하는 α 쇄;
(n) 서열 번호 64의 아미노산 서열을 포함하는 β 쇄;
(o) 서열 번호 42의 아미노산 서열을 포함하는 α 쇄;
(p) 서열 번호 43의 아미노산 서열을 포함하는 β 쇄;
(q) 서열 번호 65의 아미노산 서열을 포함하는 α 쇄;
(r) 서열 번호 66의 아미노산 서열을 포함하는 β 쇄;
(s) (k) 및 (l) 둘 다, (m) 및 (n) 둘 다, (o) 및 (p) 둘 다, 또는 (q) 및 (r) 둘 다;
(t) 서열 번호 23의 아미노산 서열을 포함하는 α 쇄;
(u) 서열 번호 24의 아미노산 서열을 포함하는 β 쇄;
(v) 서열 번호 55의 아미노산 서열을 포함하는 α 쇄;
(w) 서열 번호 56의 아미노산 서열을 포함하는 β 쇄;
(x) 서열 번호 40의 아미노산 서열을 포함하는 α 쇄;
(y) 서열 번호 41의 아미노산 서열을 포함하는 β 쇄;
(z) 서열 번호 57의 아미노산 서열을 포함하는 α 쇄;
(aa) 서열 번호 58의 아미노산 서열을 포함하는 β 쇄; 또는
(ab) (t) 및 (u) 둘 다, (t) 및 (w) 둘 다, (u) 및 (v) 둘 다, (v) 및 (w) 둘 다, (x) 및 (y) 둘 다, (x) 및 (aa) 둘 다, (y) 및 (z) 둘 다, 또는 (z) 및 (aa) 둘 다
를 포함하는, 단리 또는 정제된 T 세포 수용체.
제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 따른 T 세포 수용체의 기능적 부분을 포함하고, 상기 기능적 부분이
(a) 서열 번호 1 내지 3 모두,
(b) 서열 번호 4 내지 6 모두, 또는
(c) 서열 번호 1 내지 6 모두
의 아미노산 서열을 포함하는, 단리 또는 정제된 폴리펩티드.
제14항에 있어서,
기능적 부분이
(i) 서열 번호 7의 아미노산 서열과 99% 이상 동일한 아미노산 서열;
(ii) 서열 번호 8의 아미노산 서열과 99% 이상 동일한 아미노산 서열;
(iii) 서열 번호 51의 아미노산 서열과 99% 이상 동일한 아미노산 서열;
(iv) 서열 번호 52의 아미노산 서열과 99% 이상 동일한 아미노산 서열;
(v) 서열 번호 32의 아미노산 서열과 99% 이상 동일한 아미노산 서열;
(vi) 서열 번호 33의 아미노산 서열과 99% 이상 동일한 아미노산 서열;
(vii) 서열 번호 59의 아미노산 서열과 99% 이상 동일한 아미노산 서열;
(viii) 서열 번호 60의 아미노산 서열과 99% 이상 동일한 아미노산 서열; 또는
(ix) (i) 및 (ii) 둘 다, (i) 및 (iv) 둘 다, (ii) 및 (iii) 둘 다, (iii) 및 (iv) 둘 다, (v) 및 (vi) 둘 다, (v) 및 (viii) 둘 다, (vi) 및 (vii) 둘 다, 또는 (vii) 및 (viii) 둘 다
를 포함하는, 단리 또는 정제된 폴리펩티드.
제14항 또는 제15항에 있어서,
기능적 부분이
(i) 서열 번호 7;
(ii) 서열 번호 8;
(iii) 서열 번호 51;
(iv) 서열 번호 52;
(v) 서열 번호 32;
(vi) 서열 번호 33;
(vii) 서열 번호 59;
(viii) 서열 번호 60; 또는
(ix) (i) 및 (ii) 둘 다, (i) 및 (iv) 둘 다, (ii) 및 (iii) 둘 다, (iii) 및 (iv) 둘 다, (v) 및 (vi) 둘 다, (v) 및 (viii) 둘 다, (vi) 및 (vii) 둘 다, 또는 (vii) 및 (viii) 둘 다
의 아미노산 서열을 포함하는, 단리 또는 정제된 폴리펩티드.
제14항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서,
(a) 서열 번호 17의 아미노산 서열과 99% 이상 동일한 아미노산 서열[여기서,
(i) 서열 번호 17의 위치 48에서의 X는 Thr 또는 Cys이고;
(ii) 서열 번호 17의 위치 112에서의 X는 Ser, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Met 또는 Trp이고;
(iii) 서열 번호 17의 위치 114에서의 X는 Met, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe 또는 Trp이고;
(iv) 서열 번호 17의 위치 115에서의 X는 Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Met 또는 Trp임];
(b) 서열 번호 18의 아미노산 서열과 99% 이상 동일한 아미노산 서열[여기서, 서열 번호 18의 위치 57에서의 X는 Ser 또는 Cys임]; 또는
(c) (a) 및 (b) 둘 다
를 추가로 포함하는, 단리 또는 정제된 폴리펩티드.
제14항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서,
(a) 서열 번호 17의 아미노산 서열[여기서,
(i) 서열 번호 17의 위치 48에서의 X는 Thr 또는 Cys이고;
(ii) 서열 번호 17의 위치 112에서의 X는 Ser, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Met 또는 Trp이고;
(iii) 서열 번호 17의 위치 114에서의 X는 Met, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe 또는 Trp이고;
(iv) 서열 번호 17의 위치 115에서의 X는 Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Met 또는 Trp임];
(b) 서열 번호 18의 아미노산 서열[여기서, 서열 번호 18의 위치 57에서의 X는 Ser 또는 Cys임]; 또는
(c) (a) 및 (b) 둘 다
를 추가로 포함하는, 단리 또는 정제된 폴리펩티드.
제14항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서,
(a) 서열 번호 21의 아미노산 서열과 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 α 쇄[여기서,
(i) 서열 번호 21의 위치 193에서의 X는 Thr 또는 Cys이고;
(ii) 서열 번호 21의 위치 257에서의 X는 Ser, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Met 또는 Trp이고;
(iii) 서열 번호 21의 위치 259에서의 X는 Met, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe 또는 Trp이고;
(iv) 서열 번호 21의 위치 260에서의 X는 Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Met 또는 Trp임];
(b) 서열 번호 22의 아미노산 서열과 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 β 쇄[여기서, 서열 번호 22의 위치 191에서의 X는 Ser 또는 Cys임];
(c) 서열 번호 53의 아미노산 서열과 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 α 쇄[여기서,
(i) 서열 번호 53의 위치 193에서의 X는 Thr 또는 Cys이고;
(ii) 서열 번호 53의 위치 257에서의 X는 Ser, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Met 또는 Trp이고;
(iii) 서열 번호 53의 위치 259에서의 X는 Met, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe 또는 Trp이고;
(iv) 서열 번호 53의 위치 260에서의 X는 Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Met 또는 Trp임];
(d) 서열 번호 54의 아미노산 서열과 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 β 쇄[여기서, 서열 번호 54의 위치 191에서의 X는 Ser 또는 Cys임];
(e) (a) 및 (b) 둘 다, (a) 및 (d) 둘 다, (b) 및 (c) 둘 다, 또는 (c) 및 (d) 둘 다;
(f) 서열 번호 34의 아미노산 서열과 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 α 쇄[여기서,
(i) 서열 번호 34의 위치 165에서의 X는 Thr 또는 Cys이고;
(ii) 서열 번호 34의 위치 229에서의 X는 Ser, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Met 또는 Trp이고;
(iii) 서열 번호 34의 위치 231에서의 X는 Met, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe 또는 Trp이고;
(iv) 서열 번호 34의 위치 232에서의 X는 Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Met 또는 Trp임];
(g) 서열 번호 35의 아미노산 서열과 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 β 쇄[여기서, 서열 번호 35의 위치 172에서의 X는 Ser 또는 Cys임];
(h) 서열 번호 61의 아미노산 서열과 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 α 쇄[여기서,
(i) 서열 번호 61의 위치 172에서의 X는 Thr 또는 Cys이고;
(ii) 서열 번호 61의 위치 236에서의 X는 Ser, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Met 또는 Trp이고;
(iii) 서열 번호 61의 위치 238에서의 X는 Met, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe 또는 Trp이고;
(iv) 서열 번호 61의 위치 239에서의 X는 Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Met 또는 Trp임];
(i) 서열 번호 62의 아미노산 서열과 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 β 쇄[여기서, 서열 번호 62의 위치 170에서의 X는 Ser 또는 Cys임];
(j) (f) 및 (g) 둘 다, 또는 (h) 및 (i) 둘 다;
(k) 서열 번호 36의 아미노산 서열과 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 α 쇄;
(l) 서열 번호 37의 아미노산 서열과 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 β 쇄;
(m) 서열 번호 63의 아미노산 서열과 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 α 쇄;
(n) 서열 번호 64의 아미노산 서열과 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 β 쇄;
(o) 서열 번호 42의 아미노산 서열과 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 α 쇄;
(p) 서열 번호 43의 아미노산 서열과 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 β 쇄;
(q) 서열 번호 65의 아미노산 서열과 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 α 쇄;
(r) 서열 번호 66의 아미노산 서열과 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 β 쇄;
(s) (k) 및 (l) 둘 다, (m) 및 (n) 둘 다, (o) 및 (p) 둘 다, 또는 (q) 및 (r) 둘 다;
(t) 서열 번호 23의 아미노산 서열과 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 α 쇄;
(u) 서열 번호 24의 아미노산 서열과 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 β 쇄;
(v) 서열 번호 55의 아미노산 서열과 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 α 쇄;
(w) 서열 번호 56의 아미노산 서열과 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 β 쇄;
(x) 서열 번호 40의 아미노산 서열과 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 α 쇄;
(y) 서열 번호 41의 아미노산 서열과 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 β 쇄;
(z) 서열 번호 57의 아미노산 서열과 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 α 쇄;
(aa) 서열 번호 58의 아미노산 서열과 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 β 쇄; 또는
(ab) (t) 및 (u) 둘 다, (t) 및 (w) 둘 다, (u) 및 (v) 둘 다, (v) 및 (w) 둘 다, (x) 및 (y) 둘 다, (x) 및 (aa) 둘 다, (y) 및 (z) 둘 다, 또는 (z) 및 (aa) 둘 다
를 포함하는, 단리 또는 정제된 폴리펩티드.
제14항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서,
(a) 서열 번호 21의 아미노산 서열을 포함하는 α 쇄[여기서,
(i) 서열 번호 21의 위치 193에서의 X는 Thr 또는 Cys이고;
(ii) 서열 번호 21의 위치 257에서의 X는 Ser, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Met 또는 Trp이고;
(iii) 서열 번호 21의 위치 259에서의 X는 Met, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe 또는 Trp이고;
(iv) 서열 번호 21의 위치 260에서의 X는 Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Met 또는 Trp임];
(b) 서열 번호 22의 아미노산 서열을 포함하는 β 쇄[여기서, 서열 번호 22의 위치 191에서의 X는 Ser 또는 Cys임];
(c) 서열 번호 53의 아미노산 서열을 포함하는 α 쇄[여기서,
(i) 서열 번호 53의 위치 193에서의 X는 Thr 또는 Cys이고;
(ii) 서열 번호 53의 위치 257에서의 X는 Ser, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Met 또는 Trp이고;
(iii) 서열 번호 53의 위치 259에서의 X는 Met, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe 또는 Trp이고;
(iv) 서열 번호 53의 위치 260에서의 X는 Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Met 또는 Trp임];
(d) 서열 번호 54의 아미노산 서열을 포함하는 β 쇄[여기서, 서열 번호 54의 위치 191에서의 X는 Ser 또는 Cys임];
(e) (a) 및 (b) 둘 다, (a) 및 (d) 둘 다, (b) 및 (c) 둘 다, 또는 (c) 및 (d) 둘 다;
(f) 서열 번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 α 쇄[여기서,
(i) 서열 번호 34의 위치 165에서의 X는 Thr 또는 Cys이고;
(ii) 서열 번호 34의 위치 229에서의 X는 Ser, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Met 또는 Trp이고;
(iii) 서열 번호 34의 위치 231에서의 X는 Met, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe 또는 Trp이고;
(iv) 서열 번호 34의 위치 232에서의 X는 Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Met 또는 Trp임];
(g) 서열 번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 β 쇄[여기서, 서열 번호 35의 위치 172에서의 X는 Ser 또는 Cys임];
(h) 서열 번호 61의 아미노산 서열을 포함하는 α 쇄[여기서,
(i) 서열 번호 61의 위치 172에서의 X는 Thr 또는 Cys이고;
(ii) 서열 번호 61의 위치 236에서의 X는 Ser, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Met 또는 Trp이고;
(iii) 서열 번호 61의 위치 238에서의 X는 Met, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe 또는 Trp이고;
(iv) 서열 번호 61의 위치 239에서의 X는 Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Met 또는 Trp임];
(i) 서열 번호 62의 아미노산 서열을 포함하는 β 쇄[여기서, 서열 번호 62의 위치 170에서의 X는 Ser 또는 Cys임];
(j) (f) 및 (g) 둘 다, 또는 (h) 및 (i) 둘 다;
(k) 서열 번호 36의 아미노산 서열을 포함하는 α 쇄;
(l) 서열 번호 37의 아미노산 서열을 포함하는 β 쇄;
(m) 서열 번호 63의 아미노산 서열을 포함하는 α 쇄;
(n) 서열 번호 64의 아미노산 서열을 포함하는 β 쇄;
(o) 서열 번호 42의 아미노산 서열을 포함하는 α 쇄;
(p) 서열 번호 43의 아미노산 서열을 포함하는 β 쇄;
(q) 서열 번호 65의 아미노산 서열을 포함하는 α 쇄;
(r) 서열 번호 66의 아미노산 서열을 포함하는 β 쇄;
(s) (k) 및 (l) 둘 다, (m) 및 (n) 둘 다, (o) 및 (p) 둘 다, 또는 (q) 및 (r) 둘 다;
(t) 서열 번호 23의 아미노산 서열을 포함하는 α 쇄;
(u) 서열 번호 24의 아미노산 서열을 포함하는 β 쇄;
(v) 서열 번호 55의 아미노산 서열을 포함하는 α 쇄;
(w) 서열 번호 56의 아미노산 서열을 포함하는 β 쇄;
(x) 서열 번호 40의 아미노산 서열을 포함하는 α 쇄;
(y) 서열 번호 41의 아미노산 서열을 포함하는 β 쇄;
(z) 서열 번호 57의 아미노산 서열을 포함하는 α 쇄;
(aa) 서열 번호 58의 아미노산 서열을 포함하는 β 쇄; 또는
(ab) (t) 및 (u) 둘 다, (t) 및 (w) 둘 다, (u) 및 (v) 둘 다, (v) 및 (w) 둘 다, (x) 및 (y) 둘 다, (x) 및 (aa) 둘 다, (y) 및 (z) 둘 다, 또는 (z) 및 (aa) 둘 다
를 포함하는, 단리 또는 정제된 폴리펩티드.
서열 번호 1 내지 3의 아미노산 서열을 포함하는 제1 폴리펩티드 쇄; 및
서열 번호 4 내지 6의 아미노산 서열을 포함하는 제2 폴리펩티드 쇄
를 포함하는, 단리 또는 정제된 단백질.
제21항에 있어서,
(i) 제1 폴리펩티드 쇄가 서열 번호 7의 아미노산 서열과 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하거나;
(ii) 제2 폴리펩티드 쇄가 서열 번호 8의 아미노산 서열과 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하거나;
(iii) 제1 폴리펩티드 쇄가 서열 번호 51의 아미노산 서열과 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하거나;
(iv) 제2 폴리펩티드 쇄가 서열 번호 52의 아미노산 서열과 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하거나;
(v) 제1 폴리펩티드 쇄가 서열 번호 32의 아미노산 서열과 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하거나;
(vi) 제2 폴리펩티드 쇄가 서열 번호 33의 아미노산 서열과 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하거나;
(vii) 제1 폴리펩티드 쇄가 서열 번호 59의 아미노산 서열과 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하거나;
(viii) 제2 폴리펩티드 쇄가 서열 번호 60의 아미노산 서열과 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
(ix) (i) 및 (ii) 둘 다, (i) 및 (iv) 둘 다, (ii) 및 (iii) 둘 다, (iii) 및 (iv) 둘 다, (v) 및 (vi) 둘 다, (v) 및 (viii) 둘 다, (vi) 및 (vii) 둘 다, 또는 (vii) 및 (viii) 둘 다인, 단리 또는 정제된 단백질.
제21항 또는 제22항에 있어서,
(i) 제1 폴리펩티드 쇄가 서열 번호 7의 아미노산 서열을 포함하거나;
(ii) 제2 폴리펩티드 쇄가 서열 번호 8의 아미노산 서열을 포함하거나;
(iii) 제1 폴리펩티드 쇄가 서열 번호 51의 아미노산 서열을 포함하거나;
(iv) 제2 폴리펩티드 쇄가 서열 번호 52의 아미노산 서열을 포함하거나;
(v) 제1 폴리펩티드 쇄가 서열 번호 32의 아미노산 서열을 포함하거나;
(vi) 제2 폴리펩티드 쇄가 서열 번호 33의 아미노산 서열을 포함하거나;
(vii) 제1 폴리펩티드 쇄가 서열 번호 59의 아미노산 서열을 포함하거나;
(viii) 제2 폴리펩티드 쇄가 서열 번호 60의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
(ix) (i) 및 (ii) 둘 다, (i) 및 (iv) 둘 다, (ii) 및 (iii) 둘 다, (iii) 및 (iv) 둘 다, (v) 및 (vi) 둘 다, (v) 및 (viii) 둘 다, (vi) 및 (vii) 둘 다, 또는 (vii) 및 (viii) 둘 다인, 단리 또는 정제된 단백질.
제21항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서,
(a) 제1 폴리펩티드 쇄가 서열 번호 17의 아미노산 서열과 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 추가로 포함하거나[여기서,
(i) 서열 번호 17의 위치 48에서의 X는 Thr 또는 Cys이고;
(ii) 서열 번호 17의 위치 112에서의 X는 Ser, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Met 또는 Trp이고;
(iii) 서열 번호 17의 위치 114에서의 X는 Met, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe 또는 Trp이고;
(iv) 서열 번호 17의 위치 115에서의 X는 Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Met 또는 Trp임];
(b) 제2 폴리펩티드 쇄가 서열 번호 18의 아미노산 서열과 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 추가로 포함하거나[여기서, 서열 번호 18의 위치 57에서의 X는 Ser 또는 Cys임]; 또는
(c) (a) 및 (b) 둘 다인, 단리 또는 정제된 단백질.
제21항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서,
(a) 제1 폴리펩티드 쇄가 서열 번호 17의 아미노산 서열을 추가로 포함하거나[여기서,
(i) 서열 번호 17의 위치 48에서의 X는 Thr 또는 Cys이고;
(ii) 서열 번호 17의 위치 112에서의 X는 Ser, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Met 또는 Trp이고;
(iii) 서열 번호 17의 위치 114에서의 X는 Met, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe 또는 Trp이고;
(iv) 서열 번호 17의 위치 115에서의 X는 Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Met 또는 Trp임];
(b) 제2 폴리펩티드 쇄가 서열 번호 18의 아미노산 서열을 추가로 포함하거나[여기서, 서열 번호 18의 위치 57에서의 X는 Ser 또는 Cys임]; 또는
(c) (a) 및 (b) 둘 다인, 단리 또는 정제된 단백질.
제21항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서,
(a) 제1 폴리펩티드 쇄가 서열 번호 21의 아미노산 서열과 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하거나[여기서,
(i) 서열 번호 21의 위치 193에서의 X는 Thr 또는 Cys이고;
(ii) 서열 번호 21의 위치 257에서의 X는 Ser, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Met 또는 Trp이고;
(iii) 서열 번호 21의 위치 259에서의 X는 Met, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe 또는 Trp이고;
(iv) 서열 번호 21의 위치 260에서의 X는 Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Met 또는 Trp임];
(b) 제2 폴리펩티드 쇄가 서열 번호 22의 아미노산 서열과 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하거나[여기서, 서열 번호 22의 위치 191에서의 X는 Ser 또는 Cys임];
(c) 제1 폴리펩티드 쇄가 서열 번호 53의 아미노산 서열과 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하거나[여기서,
(i) 서열 번호 53의 위치 193에서의 X는 Thr 또는 Cys이고;
(ii) 서열 번호 53의 위치 257에서의 X는 Ser, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Met 또는 Trp이고;
(iii) 서열 번호 53의 위치 259에서의 X는 Met, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe 또는 Trp이고;
(iv) 서열 번호 53의 위치 260에서의 X는 Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Met 또는 Trp임];
(d) 제2 폴리펩티드 쇄가 서열 번호 54의 아미노산 서열과 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하거나[여기서, 서열 번호 54의 위치 191에서의 X는 Ser 또는 Cys임];
(e) (a) 및 (b) 둘 다, (a) 및 (d) 둘 다, (b) 및 (c) 둘 다, 또는 (c) 및 (d) 둘 다이거나;
(f) 제1 폴리펩티드 쇄가 서열 번호 34의 아미노산 서열과 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하거나[여기서,
(i) 서열 번호 34의 위치 165에서의 X는 Thr 또는 Cys이고;
(ii) 서열 번호 34의 위치 229에서의 X는 Ser, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Met 또는 Trp이고;
(iii) 서열 번호 34의 위치 231에서의 X는 Met, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe 또는 Trp이고;
(iv) 서열 번호 34의 위치 232에서의 X는 Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Met 또는 Trp임];
(g) 제2 폴리펩티드 쇄가 서열 번호 35의 아미노산 서열과 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하거나[여기서, 서열 번호 35의 위치 172에서의 X는 Ser 또는 Cys임];
(h) 제1 폴리펩티드 쇄가 서열 번호 61의 아미노산 서열과 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하거나[여기서,
(i) 서열 번호 61의 위치 172에서의 X는 Thr 또는 Cys이고;
(ii) 서열 번호 61의 위치 236에서의 X는 Ser, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Met 또는 Trp이고;
(iii) 서열 번호 61의 위치 238에서의 X는 Met, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe 또는 Trp이고;
(iv) 서열 번호 61의 위치 239에서의 X는 Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Met 또는 Trp임];
(i) 제2 폴리펩티드 쇄가 서열 번호 62의 아미노산 서열과 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하거나[여기서, 서열 번호 62의 위치 170에서의 X는 Ser 또는 Cys임];
(j) (f) 및 (g) 둘 다, 또는 (h) 및 (i) 둘 다이거나;
(k) 제1 폴리펩티드 쇄가 서열 번호 36의 아미노산 서열과 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하거나;
(l) 제2 폴리펩티드 쇄가 서열 번호 37의 아미노산 서열과 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하거나;
(m) 제1 폴리펩티드 쇄가 서열 번호 63의 아미노산 서열과 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하거나;
(n) 제2 폴리펩티드 쇄가 서열 번호 64의 아미노산 서열과 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하거나;
(o) 제1 폴리펩티드 쇄가 서열 번호 42의 아미노산 서열과 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하거나;
(p) 제2 폴리펩티드 쇄가 서열 번호 43의 아미노산 서열과 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하거나;
(q) 제1 폴리펩티드 쇄가 서열 번호 65의 아미노산 서열과 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하거나;
(r) 제2 폴리펩티드 쇄가 서열 번호 66의 아미노산 서열과 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하거나;
(s) (k) 및 (l) 둘 다, (m) 및 (n) 둘 다, (o) 및 (p) 둘 다, 또는 (q) 및 (r) 둘 다이거나;
(t) 제1 폴리펩티드 쇄가 서열 번호 23의 아미노산 서열과 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하거나;
(u) 제2 폴리펩티드 쇄가 서열 번호 24의 아미노산 서열과 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하거나;
(v) 제1 폴리펩티드 쇄가 서열 번호 55의 아미노산 서열과 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하거나;
(w) 제2 폴리펩티드 쇄가 서열 번호 56의 아미노산 서열과 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하거나;
(x) 제1 폴리펩티드 쇄가 서열 번호 40의 아미노산 서열과 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하거나;
(y) 제2 폴리펩티드 쇄가 서열 번호 41의 아미노산 서열과 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하거나;
(z) 제1 폴리펩티드 쇄가 서열 번호 57의 아미노산 서열과 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하거나;
(aa) 제2 폴리펩티드 쇄가 서열 번호 58의 아미노산 서열과 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
(ab) (t) 및 (u) 둘 다, (t) 및 (w) 둘 다, (u) 및 (v) 둘 다, (v) 및 (w) 둘 다, (x) 및 (y) 둘 다, (x) 및 (aa) 둘 다, (y) 및 (z) 둘 다, 또는 (z) 및 (aa) 둘 다인, 단리 또는 정제된 단백질.
제21항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서,
(a) 제1 폴리펩티드 쇄가 서열 번호 21의 아미노산 서열을 포함하거나[여기서,
(i) 서열 번호 21의 위치 193에서의 X는 Thr 또는 Cys이고;
(ii) 서열 번호 21의 위치 257에서의 X는 Ser, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Met 또는 Trp이고;
(iii) 서열 번호 21의 위치 259에서의 X는 Met, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe 또는 Trp이고;
(iv) 서열 번호 21의 위치 260에서의 X는 Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Met 또는 Trp임];
(b) 제2 폴리펩티드 쇄가 서열 번호 22의 아미노산 서열을 포함하거나[여기서, 서열 번호 22의 위치 191에서의 X는 Ser 또는 Cys임];
(c) 제1 폴리펩티드 쇄가 서열 번호 53의 아미노산 서열을 포함하거나[여기서,
(i) 서열 번호 53의 위치 193에서의 X는 Thr 또는 Cys이고;
(ii) 서열 번호 53의 위치 257에서의 X는 Ser, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Met 또는 Trp이고;
(iii) 서열 번호 53의 위치 259에서의 X는 Met, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe 또는 Trp이고;
(iv) 서열 번호 53의 위치 260에서의 X는 Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Met 또는 Trp임];
(d) 제2 폴리펩티드 쇄가 서열 번호 45의 아미노산 서열을 포함하거나[여기서, 서열 번호 54의 위치 191에서의 X는 Ser 또는 Cys임];
(e) (a) 및 (b) 둘 다, (a) 및 (d) 둘 다, (b) 및 (c) 둘 다, 또는 (c) 및 (d) 둘 다이거나;
(f) 제1 폴리펩티드 쇄가 서열 번호 34의 아미노산 서열을 포함하거나[여기서,
(i) 서열 번호 34의 위치 165에서의 X는 Thr 또는 Cys이고;
(ii) 서열 번호 34의 위치 229에서의 X는 Ser, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Met 또는 Trp이고;
(iii) 서열 번호 34의 위치 231에서의 X는 Met, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe 또는 Trp이고;
(iv) 서열 번호 34의 위치 232에서의 X는 Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Met 또는 Trp임];
(g) 제2 폴리펩티드 쇄가 서열 번호 35의 아미노산 서열을 포함하거나[여기서, 서열 번호 35의 위치 172에서의 X는 Ser 또는 Cys임];
(h) 제1 폴리펩티드 쇄가 서열 번호 61의 아미노산 서열을 포함하거나[여기서,
(i) 서열 번호 61의 위치 172에서의 X는 Thr 또는 Cys이고;
(ii) 서열 번호 61의 위치 236에서의 X는 Ser, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Met 또는 Trp이고;
(iii) 서열 번호 61의 위치 238에서의 X는 Met, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe 또는 Trp이고;
(iv) 서열 번호 61의 위치 239에서의 X는 Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Met 또는 Trp임];
(i) 제2 폴리펩티드 쇄가 서열 번호 62의 아미노산 서열을 포함하거나[여기서, 서열 번호 62의 위치 170에서의 X는 Ser 또는 Cys임];
(j) (f) 및 (g) 둘 다, 또는 (h) 및 (i) 둘 다이거나;
(k) 제1 폴리펩티드 쇄가 서열 번호 36의 아미노산 서열을 포함하거나;
(l) 제2 폴리펩티드 쇄가 서열 번호 37의 아미노산 서열을 포함하거나;
(m) 제1 폴리펩티드 쇄가 서열 번호 63의 아미노산 서열을 포함하거나;
(n) 제2 폴리펩티드 쇄가 서열 번호 64의 아미노산 서열을 포함하거나;
(o) 제1 폴리펩티드 쇄가 서열 번호 42의 아미노산 서열을 포함하거나;
(p) 제2 폴리펩티드 쇄가 서열 번호 43의 아미노산 서열을 포함하거나;
(q) 제1 폴리펩티드 쇄가 서열 번호 65의 아미노산 서열을 포함하거나;
(r) 제2 폴리펩티드 쇄가 서열 번호 66의 아미노산 서열을 포함하거나;
(s) (k) 및 (l) 둘 다, (m) 및 (n) 둘 다, (o) 및 (p) 둘 다, 또는 (q) 및 (r) 둘 다이거나;
(t) 제1 폴리펩티드 쇄가 서열 번호 23의 아미노산 서열을 포함하거나;
(u) 제2 폴리펩티드 쇄가 서열 번호 24의 아미노산 서열을 포함하거나;
(v) 제1 폴리펩티드 쇄가 서열 번호 55의 아미노산 서열을 포함하거나;
(w) 제2 폴리펩티드 쇄가 서열 번호 56의 아미노산 서열을 포함하거나;
(x) 제1 폴리펩티드 쇄가 서열 번호 40의 아미노산 서열을 포함하거나;
(y) 제2 폴리펩티드 쇄가 서열 번호 41의 아미노산 서열을 포함하거나;
(z) 제1 폴리펩티드 쇄가 서열 번호 57의 아미노산 서열을 포함하거나;
(aa) 제2 폴리펩티드 쇄가 서열 번호 58의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
(ab) (t) 및 (u) 둘 다, (t) 및 (w) 둘 다, (u) 및 (v) 둘 다, (v) 및 (w) 둘 다, (x) 및 (y) 둘 다, (x) 및 (aa) 둘 다, (y) 및 (z) 둘 다, 또는 (z) 및 (aa) 둘 다인, 단리 또는 정제된 단백질.
제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 따른 T 세포 수용체, 제14항 내지 제20항 중 어느 한 항에 따른 폴리펩티드, 또는 제21항 내지 제27항 중 어느 한 항에 따른 단백질을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는, 단리 또는 정제된 핵산.
5'에서 3'으로 제1 핵산 서열 및 제2 뉴클레오티드 서열을 포함하고, 상기 제1 및 제2 뉴클레오티드 서열이 각각 서열 번호 7 및 8; 51 및 8; 7 및 52; 51 및 52; 8 및 7; 8 및 51; 52 및 7; 52 및 51; 21 및 22; 53 및 22; 21 및 54; 53 및 54; 22 및 21; 22 및 53; 54 및 21; 54 및 53; 23 및 24; 55 및 24; 23 및 56; 55 및 56; 24 및 23; 24 및 55; 56 및 23; 56 및 55; 32 및 33; 33 및 32; 59 및 60; 60 및 59; 34 및 35; 35 및 34; 61 및 62; 62 및 61; 36 및 37; 37 및 36; 63 및 64; 64 및 63; 40 및 41; 57 및 41; 40 및 58; 57 및 58; 41 및 40; 41 및 57; 58 및 40; 58 및 57; 42 및 43; 43 및 42; 65 및 66; 또는 66 및 65의 아미노산 서열을 인코딩하는, 단리 또는 정제된 핵산.
제29항에 있어서,
제1 및 제2 뉴클레오티드 서열 사이에 개재된 제3 뉴클레오티드 서열을 추가로 포함하고, 상기 제3 뉴클레오티드 서열이 절단 가능한 연결기 펩티드를 인코딩하는, 단리 또는 정제된 핵산.
제30항에 있어서,
절단 가능한 연결기 펩티드가 RAKRSGSGATNFSLLKQAGDVEENPGP(서열 번호 25)의 아미노산 서열을 포함하는, 단리 또는 정제된 핵산.
제28항 내지 제31항 중 어느 한 항에 따른 핵산을 포함하는, 재조합 발현 벡터.
제32항에 있어서,
트랜스포존(transposon) 또는 렌티바이러스 벡터인, 재조합 발현 벡터.
제28항 내지 제31항 중 어느 한 항에 따른 핵산, 또는 제32항 또는 제33항에 따른 벡터에 의해 인코딩되는, 단리 또는 정제된 T 세포 수용체, 폴리펩티드 또는 단백질.
세포에서 제28항 내지 제31항 중 어느 한 항에 따른 핵산, 또는 제32항 또는 제33항에 따른 벡터의 발현으로부터 생성된, 단리 또는 정제된 T 세포 수용체, 폴리펩티드 또는 단백질.
제32항 또는 제33항에 따른 벡터를 세포 내로 도입함을 허용하는 조건하에 상기 벡터와 상기 세포를 접촉시킴을 포함하는, VVVGADGVGK(서열 번호 29)의 펩티드에 대하여 항원 특이성을 갖는 T 세포 수용체를 발현하는 숙주 세포를 생산하는 방법.
제28항 내지 제31항 중 어느 한 항에 따른 핵산, 또는 제32항 또는 제33항에 따른 재조합 발현 벡터를 포함하는, 단리 또는 정제된 숙주 세포.
제37항에 있어서,
세포가 인간 림프구인, 숙주 세포.
제37항 또는 제38항에 있어서,
세포가 T 세포, 자연 살해 T(NKT: natural killer T) 세포, 불변성 자연 살해 T(iNKT: invariant natural killer T) 세포 및 자연 살해(NK: natural killer) 세포로 구성된 군에서 선택되는 숙주 세포.
제37항 내지 제39항 중 어느 한 항에 따른 숙주 세포를 포함하는, 단리 또는 정제된 세포의 집단.
제1항 내지 제13항, 제34항 및 제35항 중 어느 한 항에 따른 T 세포 수용체, 제14항 내지 제20항, 제34항 및 제35항 중 어느 한 항에 따른 폴리펩티드, 또는 제21항 내지 제27항, 제34항 및 제35항 중 어느 한 항에 따른 단백질을 생산하는 방법으로서,
상기 T 세포 수용체, 폴리펩티드 또는 단백질이 생산되도록 제37항 내지 제39항 중 어느 한 항에 따른 숙주 세포, 또는 제40항에 따른 숙주 세포의 집단을 배양함을 포함하는 방법
(a) 제1항 내지 제13항, 제34항 및 제35항 중 어느 한 항에 따른 T 세포 수용체, 제14항 내지 제20항, 제34항 및 제35항 중 어느 한 항에 따른 폴리펩티드, 제21항 내지 제27항, 제34항 및 제35항 중 어느 한 항에 따른 단백질, 제28항 내지 제31항 중 어느 한 항에 따른 핵산, 제32항 또는 제33항에 따른 재조합 발현 벡터, 제37항 내지 제39항 중 어느 한 항에 따른 숙주 세포, 또는 제40항에 따른 세포의 집단; 및
(b) 약학적으로 허용되는 담체
를 포함하는 약학 조성물.
(a) 암의 세포를 포함하는 샘플을 제1항 내지 제13항, 제34항 및 제35항 중 어느 한 항에 따른 T 세포 수용체, 제14항 내지 제20항, 제34항 및 제35항 중 어느 한 항에 따른 폴리펩티드, 제21항 내지 제27항, 제34항 및 제35항 중 어느 한 항에 따른 단백질, 제28항 내지 제31항 중 어느 한 항에 따른 핵산, 제32항 또는 제33항에 따른 재조합 발현 벡터, 제37항 내지 제39항 중 어느 한 항에 따른 숙주 세포, 제40항에 따른 세포의 집단, 또는 제42항에 따른 약학 조성물과 접촉시킴으로써 복합체를 형성하는 단계; 및
(b) 복합체를 검출하는 단계
를 포함하고, 복합체의 검출이 포유동물에서 암의 존재를 나타내는,
포유동물에서 암의 존재를 검출하는 방법.
포유동물에서 암에 대한 면역 반응을 유도하는 데 사용하기 위한, 제1항 내지 제13항, 제34항 및 제35항 중 어느 한 항에 따른 T 세포 수용체, 제14항 내지 제20항, 제34항 및 제35항 중 어느 한 항에 따른 폴리펩티드, 제21항 내지 제27항, 제34항 및 제35항 중 어느 한 항에 따른 단백질, 제28항 내지 제31항 중 어느 한 항에 따른 핵산, 제32항 또는 제33항에 따른 재조합 발현 벡터, 제37항 내지 제39항 중 어느 한 항에 따른 숙주 세포, 제40항에 따른 세포의 집단, 또는 제42항에 따른 약학 조성물.
포유동물에서 암을 치료 또는 예방하는 데 사용하기 위한, 제1항 내지 제13항, 제34항 및 제35항 중 어느 한 항에 따른 T 세포 수용체, 제14항 내지 제20항, 제34항 및 제35항 중 어느 한 항에 따른 폴리펩티드, 제21항 내지 제27항, 제34항 및 제35항 중 어느 한 항에 따른 단백질, 제28항 내지 제31항 중 어느 한 항에 따른 핵산, 제32항 또는 제33항에 따른 재조합 발현 벡터, 제37항 내지 제39항 중 어느 한 항에 따른 숙주 세포, 제40항에 따른 세포의 집단, 또는 제42항에 따른 약학 조성물.
암이, 위치 12에서의 글리신이 아스파르트산으로 치환된 돌연변이된 인간 RAS 아미노산 서열을 발현하고, 상기 돌연변이된 인간 RAS 아미노산 서열이 돌연변이된 인간 커스틴 래트 육종 바이러스 종양유전자 상동체(KRAS), 돌연변이된 인간 하비 래트 육종 바이러스 종양유전자 상동체(HRAS) 또는 돌연변이된 인간 신경모세포종 래트 육종 바이러스 종양유전자 상동체(NRAS) 아미노산 서열이고, 상기 위치 12가 야생형 인간 KRAS, 야생형 인간 HRAS 또는 야생형 인간 NRAS 단백질을 각각 참조하여 정의되는, 제43항에 따른 방법, 또는 제44항 또는 제45항에 따른 T 세포 수용체, 폴리펩티드, 단백질, 핵산, 재조합 발현 벡터, 숙주 세포, 세포의 집단 또는 약학 조성물.
제46항에 있어서,
돌연변이된 인간 RAS 아미노산 서열이 돌연변이된 인간 커스틴 래트 육종 바이러스 종양유전자 상동체(KRAS) 아미노산 서열인, 방법, 또는 T 세포 수용체, 폴리펩티드, 단백질, 핵산, 재조합 발현 벡터, 숙주 세포, 세포의 집단 또는 약학 조성물.
제46항에 있어서,
돌연변이된 인간 RAS 아미노산 서열이 돌연변이된 인간 신경모세포종 래트 육종 바이러스 종양유전자 상동체(NRAS) 아미노산 서열인, 방법, 또는 T 세포 수용체, 폴리펩티드, 단백질, 핵산, 재조합 발현 벡터, 숙주 세포, 세포의 집단 또는 약학 조성물.
제46항에 있어서,
돌연변이된 인간 RAS 아미노산 서열이 돌연변이된 인간 하비 래트 육종 바이러스 종양유전자 상동체(HRAS) 아미노산 서열인, 방법, 또는 T 세포 수용체, 폴리펩티드, 단백질, 핵산, 재조합 발현 벡터, 숙주 세포, 세포의 집단 또는 약학 조성물.
암이 췌장암, 결장직장암, 폐암, 자궁내막암, 난소암 또는 전립선암인, 제43항 및 제46항 내지 제49항 중 어느 한 항에 따른 방법, 또는 제44항 내지 제49항 중 어느 한 항에 따른 T 세포 수용체, 폴리펩티드, 단백질, 핵산, 재조합 발현 벡터, 숙주 세포, 세포의 집단 또는 약학 조성물.