JP2023525910A

JP2023525910A - Ｃｄ９０およびｃｄ３２６を発現しているがんを処置するための組成物および方法

Info

Publication number: JP2023525910A
Application number: JP2022570520A
Authority: JP
Inventors: ヘルベル，クリストフ; エッカルト，ドミニク; ディタメール，ヴェラ; マルティネス－オスナ，マヌエル; コレット，ジュッタ; ハルト，オラフ，トルステン; ボーシオ，アンドレアス
Original assignee: ミルテニイビオテックベー．ファー．ウントコー．カーゲー
Priority date: 2020-05-20
Filing date: 2021-05-19
Publication date: 2023-06-19
Also published as: US20230183372A1; CN115916250A; KR20230013261A; WO2021234006A1; EP4153218A1

Abstract

本発明は、ａ）ＣＤ９０に特異的な抗原結合ドメインと、ｂ）ＣＤ３２６に特異的な抗原結合ドメインとを含み、ＣＤ９０とＣＤ３２６とを共発現するがん性細胞を含むヒトがんの処置に使用するための組み合わせを提供する。本発明の一実施形態では、組み合わせは、ａ）第１および第２のポリペプチドのタグに特異的な抗原結合ドメインを含むＣＡＲを含む免疫細胞と、ｂ）ＣＤ９０に特異的な抗原結合ドメインを有する、前記タグ付き第１のポリペプチドと、ｃ）ＣＤ３２６に特異的な抗原結合ドメインを有する、前記タグ付き第２のポリペプチドであって、第１のポリペプチドのタグと第２のポリペプチドのタグとが同一である、タグ付き第２のポリペプチドを含む。さらなる実施形態では、前記第１および第２のポリペプチドに使用される濃度は、それぞれ前記ＣＡＲの活性化閾値未満であるが、両方の濃度の和は、前記ＣＡＲの活性化閾値を上回る。

Description

本発明は、ＣＤ９０とＣＤ３２６とを共発現しているがん性細胞を含むヒトがん、特にヒト卵巣がんの処置の分野に関し、優先的には、処置は養子細胞療法によるものであり、この療法により、遺伝子操作免疫細胞が少なくとも１種のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現し、ＣＤ９０とＣＤ３２６とを共発現しているがん性細胞に対処することが可能になる。

がんは、調節されていない細胞増殖が関係する幅広い疾病の群である。がん性細胞は、制御されずに分裂および増殖して、悪性腫瘍を形成し、近傍の身体の部分に侵入する。がんはまた、リンパ系または血流を通じて身体のより離れた部分にも広がりうる。

いくつかのがんタイプについては良好な処置選択肢を利用可能であるが、医療上の必要性が依然として満たされていないものもある。特に、卵巣がんは、治療選択肢が限定されているため、悪性である。卵巣がんの最も危険な側面の１つは、疾病の診断の遅れであり、これは５年生存率の低さにも関係している（Ｍａｔｕｌｏｎｉｓ，ｅｔａｌ．、２０１６）。現在、卵巣がん患者の主な治療選択肢は、外科と、深刻な副作用を有し、しばしばプラチナ耐性を伴って高確率で再発する化学療法とであるが、プラチナ耐性によって治療選択肢が減少し、したがって患者の全生存期間が減少する。

したがって、がん、特に卵巣がんについての新たな分子標的を同定することが、緊急に必要とされている。そして（その結果）、新生物疾病における新たな標的を標的化することも、同じ重要性を有する。ＣＡＲＴ細胞は、様々ながん性標的を効率的に標的化する能力を有することが示されている。ＣＡＲを導入することによって、腫瘍細胞を「非自己細胞」として認識し、それゆえ、免疫系による腫瘍細胞の根絶を促進するように仕立てられたＴ細胞を産生することになる。例えば、ＣＡＲＴ細胞は、標的細胞の表面分子に接触しうるが、このとき、ＣＡＲＴ細胞の活性化が作動し、標的細胞を溶解させる。ＣＡＲは、例えば、次の要素から構成される：特定のエピトープ、すなわち、腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）に特異的な抗体に由来する一本鎖可変領域フラグメント（ｓｃＦｖ）。ｓｃＦｖは、Ｔ細胞の細胞質シグナル伝達ドメインに、ヒンジおよび膜貫通ドメインを介して連結する。これらの活性化部分は、Ｔ細胞共刺激ドメイン、続いてＴ細胞活性化部分を含む。ＣＡＲ媒介養子免疫療法では、ＣＡＲ移植細胞が、ＨＬＡ非依存的に腫瘍細胞におけるＴＡＡを認識する。しかしながら、非がん性細胞から腫瘍細胞を非常に特異的に区別するためには、単一の抗原では十分ではない。ＣＡＲＴ細胞の使用は、このように、ｏｎ－ｔａｒｇｅｔ，ｏｆｆ－ｔｕｍｏｒ毒性と関連する。

一方では、血液がんにおいてこの毒性が観察されることがあり、例えば、Ｂ細胞リンパ腫を処置するためにリツキシマブによってＣＤ２０を標的化すると、正常なＢ細胞コンパートメントが枯渇し、急性骨髄性白血病を処置するためにＣＤ３３を標的化すると、骨髄コンパートメントが減少する。

他方では、固形腫瘍が、同様の「ｏｎ－ｔａｒｇｅｔｏｆｆ－ｔｕｍｏｒ」毒性を示した。例えば、ＥＲＢＢ２陽性腫瘍を標的化すると、心臓および肺を含む複数の健康な組織におけるＥＲＢＢ２発現に起因して、患者が死亡した。さらに、腎細胞がん腫を処置するための、カルボキシ脱水酵素－ＩＸを標的化するＣＡＲ療法では、肝臓毒性が生じた。この知見は、胆管上皮細胞に対するＣＡＲＴ細胞の特異的攻撃に関連すると考えられる（Ｌａｍｅｒｓ，ｅｔａｌ．，２０１３）。

「ｏｎ－ｔａｒｇｅｔ，ｏｆｆ－ｔｕｍｏｒ」毒性という問題に対処するため、二重抗原標的化によって特異性を上昇させるためのＣＡＲＴ細胞が設計されている。二重標的化アプローチは、単一のがん細胞に２種以上の標的が検出されていることに基づく。ヒトがん細胞に発現するが非悪性細胞には発現しない、または発現のレベルが低い、別個の群の細胞表面抗原が同定された。これらの抗原（「マーカー」とも呼ばれる）を使用して、マーカーに特異的に結合するリガンドを介して、このようながん細胞の免疫逃避機構を同定、および／またはマーキング、および／または破壊、および／または無効化することができる。

特異性の改善は、２種の標的を同時に標的化する二重ＡＮＤＣＡＲＴ細胞を用いることによって達成することができる。両方の標的が、腫瘍に同時に発現しなければならない。一方のＣＡＲが活性化シグナル（シグナル１）を伝達するが、これは（それだけでは）ＣＡＲＴ細胞の活性化閾値を乗り越えるには不十分である。加えて、第２のＣＡＲは共刺激ドメイン（シグナル２）を保持しており、（第１のＣＡＲとの組み合わせにおいてのみ）第１のＣＡＲと協同して活性化閾値を乗り越え、Ｔ細胞を十分に活性化する（Ｚｈａｏ，Ｓｏｎｇ，＆Ｌｉｕ，２０１９）（Ｌａｎｉｔｉｓ，ｅｔａｌ．，２０１３）。

当技術分野において、例えば養子免疫細胞療法等の免疫療法によってヒト卵巣がんを処置する場合に、例えばｏｎ－ｔａｒｇｅｔ，ｏｆｆ－ｔｕｍｏｒ毒性を軽減する、腫瘍関連抗原（マーカー）の組み合わせが必要とされている。

原発ヒト卵巣がん細胞に対して、免疫療法を改善するために、新規な腫瘍関連抗原の組み合わせの同定を行った。

これによって、驚くべきことに、卵巣がん患者のサブセットにおいて共発現している、標的ペア（すなわち組み合わせ）ＣＤ９０／ＣＤ３２６を同定した。加えて、複数の健康なヒト組織におけるこれらのマーカーの共発現を評価し、同細胞においてこれらのマーカーが発現していないことが示された。これら２種のマーカーの特徴、すなわち、（１）腫瘍細胞における共発現、および（２）健康な／非悪性細胞では（共）発現がないこと、または少なくとも有意に低レベルであることは、本発明者らが発見したマーカーが、例えば二重ＡＮＤＣＡＲまたはアダプター表面活性化マトリックス（ＳＡＭ）ＣＡＲアプローチを使用した、抗体免疫療法または養子細胞免疫療法等の免疫療法の使用によって、これらのがんを処置するための良好な候補であることを示唆している。

ＳＡＭＣＡＲアプローチ、すなわち、Ｔ細胞等の免疫細胞中の１種の抗タグＣＡＲと、それぞれ異なる腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）、ここではＣＤ９０およびＣＤ３２６に特異的に結合する少なくとも２種のアダプター（２種のタグ付きポリペプチド）との組み合わせによって、低濃度のアダプターを、それを必要とする対象に適用することができ、それにもかかわらず、アダプターＣＡＲを有する免疫細胞を適切に活性化することができるという利益が生じる。これによって、以下の利益が生じる。

１．ＣＡＲ免疫細胞を使用する免疫療法において２種（以上）のＴＡＡを使用する場合、単一の標的抗原アプローチと比較して、より大きな特異性、すなわち、より安全なアプローチ。

２．免疫療法中の腫瘍細胞の逃避機構を妨害することによる、がんのより効果的な処置およびより長期的な効果。

３．両方のアダプターが存在するもののみが、アダプターＣＡＲを有する免疫細胞を活性化するための閾値を上回るため、処置する対象において、各アダプターをより低投与量にできること。これによって、細胞表面に両標的抗原の一方のみを有する、処置する対象の健康な細胞が温存される。特異的アダプターの投与量が少ないほど、これらの標的抗原の一方を発現しているが、両方は発現していない健康な細胞に対する副作用が少ない。

驚くべきことに、このＳＡＭＣＡＲアプローチについて、ＣＤ９０／ＣＤ３２６のマーカーの組み合わせは、非常に好適であることが見出された。ヒトの健康な細胞のわずかは両方のマーカーを発現するが、がん細胞と比較して低いレベルであるため、これら２種のマーカーの分布は、ＳＡＭＣＡＲまたはＡＮＤＣＡＲアプローチに使用するのに好適であると示すことができた。アダプター、すなわち、それぞれＣＤ９０およびＣＤ３２６に特異的なタグ付きポリペプチドの濃度を、個々では驚くほど低くすることができるが、両方の濃度の和でＣＡＲ免疫細胞を誘発させられることを、ｉｎｖｉｔｒｏで示すことができた（例えば、「単一ＣＡＲ／アダプターコンステレーション」：１０００ｎｇ／ｍｌの単一アダプターとしての抗ＣＤ９０抗体（図４）および１０ｎｇ／ｍｌの単一アダプターとしての抗ＣＤ３２６抗体（図４Ｂ））と比較した、ＳＡＭＣＡＲにおける、０．１ｎｇ／ｍｌのアダプターとしての抗ＣＤ９０抗体および０．１ｎｇ／ｍｌの抗ＣＤ３２６アダプター（図５Ｂ）。

そのため、本発明は、ＣＤ９０とＣＤ３２６とを共発現するがんの処置に使用するための、ＣＤ９０に特異的な抗原結合ドメインとＣＤ３２６に特異的な抗原結合ドメインとの組み合わせを提供する。ここでは、ＡＮＤＣＡＲコンステレーションにおいて、ＣＤ９０ＣＡＲとＣＤ３２６ＣＡＲとを発現している免疫細胞も提供するが、多様な組成物には、ＣＤ９０およびＣＤ３２６への特異性について、アダプターＣＡＲ／アダプターコンステレーションが関わる。

フローサイトメトリースクリーニングアッセイにより、高異型度漿液性卵巣がん腫のサブセットにおけるＣＤ９０とＣＤ３２６との共発現が明らかとなった。いくつかのヒトの高異型度漿液性卵巣がん腫を切り離し、続いて、フローサイトメトリーによって分析した。フローサイトメトリーアッセイでは、細胞表面分子を対象とするバイアスなしフローサイトメトリースクリーニングアッセイを用いた。いくつかのサンプルでは、別個の集団がＣＤ９０とＣＤ３２６とを共発現していることが明らかである（太字および下線によって強調）。顕微鏡免疫蛍光分析により、高異型度漿液性卵巣がん腫のサブセットにおけるＣＤ９０とＣＤ３２６との共発現が明らかとなった。新鮮凍結ヒト高異型度漿液性卵巣がん腫をスライスし、アセトンによって固定した。続いて、ＭＡＣＳｉｍａ（商標）ウルトラハイコンテントイメージングプラットフォームにおいて、抗体の連続染色法を用いることによって、スクリーニングを行った。ここで、目的の２種のマーカーであるＣＤ９０およびＣＤ３２６を示し、細胞共発現について分析する。Ａ）目的の領域である、ＣＤ９０とＣＤ３２６とを共発現している腫瘍１、Ｂ）目的の領域である、ＣＤ９０とＣＤ３２６とを共発現している腫瘍２、Ｃ）目的の領域である、ＣＤ９０とＣＤ３２６とを共発現している腫瘍３。Ｍｅｒｇｅ画像ではそれぞれ、ＣＤ３２６を赤色で示し、ＣＤ９０を緑色で示す。健康な組織はＣＤ９０とＣＤ３２６とを共発現しない。新鮮凍結ヒト健康組織をスライスし、アセトンによって固定した。続いて、ＭＡＣＳｉｍａ（商標）ウルトラハイコンテントイメージングプラットフォームにおいて、抗体の連続染色法を用いることによって、スクリーニングを行った。Ｍｅｒｇｅ画像ではそれぞれ、ＣＤ３２６を赤色で示し、ＣＤ９０を緑色で示す。ＣＤ９０およびＣＤ３２６を標的化したアダプターＣＡＲＴ細胞は、ＣＤ９０とＣＤ３２６とを共発現している卵巣がん細胞株に対して細胞溶解活性である。初代ヒトＴ細胞を単離し、ビオチンに対する指定のＣＡＲコンストラクトを形質導入した。抗ビオチンＣＡＲＴ細胞をＣＤ９０、ＣＤ３２６、およびＧＦＰを発現している標的細胞（卵巣がん細胞株Ａ２７８０）とともに、様々な投与量のビオチン化ＣＤ９０抗体（Ａ）またはビオチン化ＣＤ３２６抗体（Ｂ）の存在下で、それぞれ７２時間共培養した。非結合抗体は標的細胞の溶解を誘導せず、アダプターＣＡＲの存在は、標的細胞の溶解に不可欠である（Ｃ）。ＧＦＰ蛍光を経時的に測定した。ＣＡＲＴ細胞が媒介する標的細胞の溶解によって、ＧＦＰ蛍光が減少する。ＣＤ９０とＣＤ３２６とを共標的化したアダプターＣＡＲＴ細胞は、ＣＤ９０とＣＤ３２６とを共発現している卵巣がん細胞株に対して、より少ない投与量のアダプターにおいて細胞溶解活性である。初代ヒトＴ細胞を単離し、ビオチンに対する指定のＣＡＲコンストラクトを形質導入した。抗ビオチンＣＡＲＴ細胞をＣＤ９０、ＣＤ３２６、およびＧＦＰを発現している標的細胞（卵巣がん細胞株Ａ２７８０）とともに、ビオチン化ＣＤ９０抗体およびビオチン化ＣＤ３２６抗体（Ａ）の存在下で、それぞれ７２時間共培養した。（Ｂ）は（Ａ）と同じであるが、最も強い相乗作用のある投与量に減少させた。非結合抗体は標的細胞の溶解を誘導せず、アダプターＣＡＲの存在は、標的細胞の溶解に不可欠である（Ｃ）。ＧＦＰ蛍光を経時的に測定した。ＣＡＲＴ細胞が媒介する標的細胞の溶解によって、ＧＦＰ蛍光が減少する。遺伝子導入標的細胞株が、区別されるようにＣＤ９０およびＣＤ３２６を発現している。卵巣がん細胞株Ａ２７８０を、ＣＤ９０およびＣＤ３２６を欠くように（Ａ）、ＣＤ３２６およびＣＤ９０を発現するように（Ｂ）、ＣＤ９０にシングルポジティブとなるように（Ｃ）、またはＣＤ３２６にシングルポジティブとなるように（Ｄ）、遺伝子改変した。アダプターＣＡＲＴ細胞を用いたＣＤ９０とＣＤ３２６との共標的化は、ＣＤ３２６を発現しているがＣＤ９０を欠く卵巣がん細胞においては損なわれる。初代ヒトＴ細胞を単離し、ビオチンに対するＣＡＲコンストラクトを形質導入した。抗ビオチンＣＡＲＴ細胞を、ＣＤ３２６およびＧＦＰを発現している標的細胞（ＣＤ９０を欠く卵巣がん細胞株Ａ２７８０）とともに、ビオチン化ＣＤ９０抗体（Ａ）またはビオチン化ＣＤ３２６抗体（Ｂ）の存在下で、それぞれ７２時間共培養した。抗ビオチンＣＡＲＴ細胞を、ＣＤ３２６およびＧＦＰを発現している標的細胞（ＣＤ９０を欠く卵巣がん細胞株Ａ２７８０）とともに、ビオチン化ＣＤ９０抗体およびビオチン化ＣＤ３２６抗体（Ｃ）の存在下で７２時間共培養。ＧＦＰ蛍光を経時的に測定した。ＣＡＲＴ細胞が媒介する標的細胞の溶解によって、ＧＦＰ蛍光が減少する。アダプターＣＡＲＴ細胞を用いたＣＤ９０とＣＤ３２６との共標的化は、ＣＤ９０を発現しているがＣＤ３２６を欠く卵巣がん細胞においては損なわれる。初代ヒトＴ細胞を単離し、ビオチンに対するＣＡＲコンストラクトを形質導入した。抗ビオチンＣＡＲＴ細胞を、ＣＤ９０およびＧＦＰを発現している標的細胞（ＣＤ３２６を欠く卵巣がん細胞株Ａ２７８０）とともに、ビオチン化ＣＤ９０抗体（Ａ）またはビオチン化ＣＤ３２６抗体（Ｂ）の存在下で、それぞれ７２時間共培養した。抗ビオチンＣＡＲＴ細胞を、ＣＤ９０およびＧＦＰを発現している標的細胞（ＣＤ３２６を欠く卵巣がん細胞株Ａ２７８０）とともに、ビオチン化ＣＤ９０抗体およびビオチン化ＣＤ３２６抗体（Ｃ）の存在下で７２時間共培養。ＧＦＰ蛍光を経時的に測定した。ＣＡＲＴ細胞が媒介する標的細胞の溶解によって、ＧＦＰ蛍光が減少する。アダプターＣＡＲＴ細胞を用いたＣＤ９０とＣＤ３２６との共標的化は、ＣＤ９０とＣＤ３２６とを欠く卵巣がん細胞においては損なわれる。初代ヒトＴ細胞を単離し、ビオチンに対するＣＡＲコンストラクトを形質導入した。抗ビオチンＣＡＲＴ細胞を、ＧＦＰを発現している標的細胞（ＣＤ３２６およびＣＤ９０を欠く卵巣がん細胞株Ａ２７８０）とともに、ビオチン化ＣＤ９０抗体（Ａ）またはビオチン化ＣＤ３２６抗体（Ｂ）の存在下で、それぞれ７２時間共培養した。抗ビオチンＣＡＲＴ細胞を、ＧＦＰを発現している標的細胞（ＣＤ９０およびＣＤ３２６を欠く卵巣がん細胞株Ａ２７８０）とともに、ビオチン化ＣＤ９０抗体およびビオチン化ＣＤ３２６抗体（Ｃ）の存在下で７２時間共培養。ＧＦＰ蛍光を経時的に測定した。ＣＡＲＴ細胞が媒介する標的細胞の溶解によって、ＧＦＰ蛍光が減少する。顕微鏡免疫蛍光分析により、健康な組織ではＣＤ９０およびＣＤ３２６が別々に発現していること、および高異型度漿液性卵巣がん腫のサブセットではＣＤ９０とＣＤ３２６とが共発現していることが明らかとなった。新鮮凍結ヒト健康組織および新鮮凍結高異型度漿液性卵巣がん腫をスライスし、アセトンによって固定した。続いて、ＭＡＣＳｉｍａ（商標）ウルトラハイコンテントイメージングプラットフォームにおいて、抗体の連続染色法を用いることによって、スクリーニングを行った。ここで、目的の２種のマーカーであるＣＤ９０およびＣＤ３２６を示し、細胞共発現について分析する。Ｍｅｒｇｅ画像ではそれぞれ、ＣＤ３２６を赤色で示し、ＣＤ９０を緑色で示す。スケールバーは１００μｍを表す。ＣＤ９０およびＣＤ３２６の発現の定量によって、健康なヒト組織におけるＣＤ９０およびＣＤ３２６の発現、ならびに高異型度漿液性卵巣がん腫における共発現の増加が示される。各健康組織および腫瘍組織についての全画像（１６ビット）データセットを、ＱｉＴｉｓｓｕｅ（商標）ソフトウェアに取り込んだ。ソフトウェアは、核および細胞膜マーカーを使用して、個別の細胞を同定する画像のセグメント化を実行する。ＱｉＴｉｓｓｕｅ（商標）システムが記憶しているすべての細胞膜マーカーを並行して使用するため、サンプル中の細胞のほとんどのタイプをセグメント化できる。各組織について、同様のセグメント化パラメータを使用した。細胞が同定されると、バックグラウンドに対する各細胞の平均蛍光強度（ＭＦＩ）等の特徴が算出される。次いで、さらなる下流処理のためにこれらの強度が使用される。下流の分析中、算出されたすべてのＭＦＩが、視覚化および比較性のために０から１の間の範囲に倍率変更される（１６ビット画像の場合の当初のＭＦＩは、０から６５５３５の範囲にわたる）。次いで、箱ひげ図において示されるように、これらの値が互いに対して比較される。ＣＤ９０およびＣＤ３２６を標的化したアダプターＣＡＲＴ細胞は、５ｎｇ／ｍｌの濃度において、ＣＤ９０とＣＤ３２６とを共発現している卵巣がん細胞株に対して細胞溶解活性である。初代ヒトＴ細胞を単離し、ビオチンに対する指定のＣＡＲコンストラクトを形質導入した。抗ビオチンＣＡＲＴ細胞を、ＣＤ９０＋／ＣＤ３２６＋（Ａ）、ＣＤ９０－／ＣＤ３２６－（Ｂ）、ＣＤ９０－／ＣＤ３２６＋（Ｃ）、およびＣＤ９０＋／ＣＤ３２６－（Ｄ）を発現している、標的細胞の卵巣がん細胞株Ａ２７８０とともに、モノビオチン化抗ＣＤ９０ＦＡｂまたはモノビオチン化抗ＣＤ３２６ＦＡｂの存在下で、それぞれ４８時間共培養した。非結合ＦＡｂは標的細胞の溶解を誘導せず、アダプターＣＡＲの存在は、標的細胞の溶解に不可欠である。すべてのＡ２７８０卵巣がん細胞株は、ＧＦＰを発現する。ＧＦＰ蛍光を経時的に測定した。ＣＡＲＴ細胞が媒介する標的細胞の溶解によって、ＧＦＰ蛍光が減少する。統計分析は、独立スチューデントのｔ検定を含むものであった。ＣＤ９０およびＣＤ３２６を標的化したアダプターＣＡＲＴ細胞は、１ｎｇ／ｍｌの濃度において、ＣＤ９０とＣＤ３２６とを共発現している卵巣がん細胞株に対して細胞溶解活性を有する。初代ヒトＴ細胞を単離し、ビオチンに対する指定のＣＡＲコンストラクトを形質導入した。抗ビオチンＣＡＲＴ細胞を、ＣＤ９０＋／ＣＤ３２６＋（Ａ）、ＣＤ９０－／ＣＤ３２６－（Ｂ）、ＣＤ９０－／ＣＤ３２６＋（Ｃ）、およびＣＤ９０＋／ＣＤ３２６－（Ｄ）を発現している、標的細胞の卵巣がん細胞株Ａ２７８０とともに、モノビオチン化抗ＣＤ９０ＦＡｂまたはモノビオチン化抗ＣＤ３２６ＦＡｂの存在下で、それぞれ４８時間共培養した。すべてのＡ２７８０卵巣がん細胞株は、ＧＦＰを発現する。ＧＦＰ蛍光を経時的に測定した。ＣＡＲＴ細胞が媒介する標的細胞の溶解によって、ＧＦＰ蛍光が減少する。統計分析は、独立スチューデントのｔ検定を含むものであった。ＣＤ９０およびＣＤ３２６を標的化したアダプターＣＡＲＴ細胞は、０．７５ｎｇ／ｍｌの濃度において、ＣＤ９０とＣＤ３２６とを共発現している卵巣がん細胞株に対して細胞溶解活性を有する。初代ヒトＴ細胞を単離し、ビオチンに対する指定のＣＡＲコンストラクトを形質導入した。抗ビオチンＣＡＲＴ細胞を、ＣＤ９０＋／ＣＤ３２６＋（Ａ）、ＣＤ９０－／Ｄ３２６－（Ｂ）、ＣＤ９０－／ＣＤ３２６＋（Ｃ）、およびＣＤ９０＋／ＣＤ３２６－（Ｄ）を発現している、標的細胞の卵巣がん細胞株Ａ２７８０とともに、モノビオチン化抗ＣＤ９０ＦＡｂまたはモノビオチン化抗ＣＤ３２６ＦＡｂの存在下で、それぞれ４８時間共培養した。すべてのＡ２７８０卵巣がん細胞株は、ＧＦＰを発現する。ＧＦＰ蛍光を経時的に測定した。ＣＡＲＴ細胞が媒介する標的細胞の溶解によって、ＧＦＰ蛍光が減少する。統計分析は、独立スチューデントのｔ検定を含むものであった。ＣＤ９０およびＣＤ３２６を標的化したアダプターＣＡＲＴ細胞は、０．５ｎｇ／ｍｌの濃度において、ＣＤ９０とＣＤ３２６とを共発現している卵巣がん細胞株に対して細胞溶解活性を有する。初代ヒトＴ細胞を単離し、ビオチンに対する指定のＣＡＲコンストラクトを形質導入した。抗ビオチンＣＡＲＴ細胞を、ＣＤ９０＋／ＣＤ３２６＋（Ａ）、ＣＤ９０－／Ｄ３２６－（Ｂ）、ＣＤ９０－／ＣＤ３２６＋（Ｃ）、およびＣＤ９０＋／ＣＤ３２６－（Ｄ）を発現している、標的細胞の卵巣がん細胞株Ａ２７８０とともに、モノビオチン化抗ＣＤ９０ＦＡｂまたはモノビオチン化抗ＣＤ３２６ＦＡｂの存在下で、それぞれ４８時間共培養した。すべてのＡ２７８０卵巣がん細胞株は、ＧＦＰを発現する。ＧＦＰ蛍光を経時的に測定した。ＣＡＲＴ細胞が媒介する標的細胞の溶解によって、ＧＦＰ蛍光が減少する。統計分析は、独立スチューデントのｔ検定を含むものであった。ＣＤ９０およびＣＤ３２６を標的化したアダプターＣＡＲＴ細胞は、０．２５ｎｇ／ｍｌの濃度において、ＣＤ９０とＣＤ３２６とを共発現している卵巣がん細胞株に対して細胞溶解活性を有する。初代ヒトＴ細胞を単離し、ビオチンに対する指定のＣＡＲコンストラクトを形質導入した。抗ビオチンＣＡＲＴ細胞を、ＣＤ９０＋／ＣＤ３２６＋（Ａ）、ＣＤ９０－／Ｄ３２６－（Ｂ）、ＣＤ９０－／ＣＤ３２６＋（Ｃ）、およびＣＤ９０＋／ＣＤ３２６－（Ｄ）を発現している、標的細胞の卵巣がん細胞株Ａ２７８０とともに、モノビオチン化抗ＣＤ９０ＦＡｂまたはモノビオチン化抗ＣＤ３２６ＦＡｂの存在下で、それぞれ４８時間共培養した。すべてのＡ２７８０卵巣がん細胞株は、ＧＦＰを発現する。ＧＦＰ蛍光を経時的に測定した。ＣＡＲＴ細胞が媒介する標的細胞の溶解によって、ＧＦＰ蛍光が減少する。統計分析は、独立スチューデントのｔ検定を含むものであった。ＣＤ９０およびＣＤ３２６を標的化したアダプターＣＡＲＴ細胞は、０．１ｎｇ／ｍｌの濃度において、ＣＤ９０とＣＤ３２６とを共発現している卵巣がん細胞株に対して細胞溶解活性を有する。初代ヒトＴ細胞を単離し、ビオチンに対する指定のＣＡＲコンストラクトを形質導入した。抗ビオチンＣＡＲＴ細胞を、ＣＤ９０＋／ＣＤ３２６＋（Ａ）、ＣＤ９０－／Ｄ３２６－（Ｂ）、ＣＤ９０－／ＣＤ３２６＋（Ｃ）、およびＣＤ９０＋／ＣＤ３２６－（Ｄ）を発現している、標的細胞の卵巣がん細胞株Ａ２７８０とともに、モノビオチン化抗ＣＤ９０ＦＡｂまたはモノビオチン化抗ＣＤ３２６ＦＡｂの存在下で、それぞれ４８時間共培養した。すべてのＡ２７８０卵巣がん細胞株は、ＧＦＰを発現する。ＧＦＰ蛍光を経時的に測定した。ＣＡＲＴ細胞が媒介する標的細胞の溶解によって、ＧＦＰ蛍光が減少する。統計分析は、独立スチューデントのｔ検定を含むものであった。ＣＤ９０およびＣＤ３２６を標的化したアダプターＣＡＲＴ細胞は、０．０５ｎｇ／ｍｌの濃度において、ＣＤ９０とＣＤ３２６とを共発現している卵巣がん細胞株に対して細胞溶解活性を有する。初代ヒトＴ細胞を単離し、ビオチンに対する指定のＣＡＲコンストラクトを形質導入した。抗ビオチンＣＡＲＴ細胞を、ＣＤ９０＋／ＣＤ３２６＋（Ａ）、ＣＤ９０－／Ｄ３２６－（Ｂ）、ＣＤ９０＋／ＣＤ３２６－（Ｃ）、およびＣＤ９０－／ＣＤ３２６＋（Ｄ）を発現している、標的細胞の卵巣がん細胞株Ａ２７８０とともに、モノビオチン化抗ＣＤ９０ＦＡｂまたはモノビオチン化抗ＣＤ３２６ＦＡｂの存在下で、それぞれ４８時間共培養した。すべてのＡ２７８０卵巣がん細胞株は、ＧＦＰを発現する。ＧＦＰ蛍光を経時的に測定した。ＣＡＲＴ細胞が媒介する標的細胞の溶解によって、ＧＦＰ蛍光が減少する。統計分析は、独立スチューデントのｔ検定を含むものであった。ＣＤ９０およびＣＤ３２６を標的化したアダプターＣＡＲＴ細胞は、ＣＤ９０とＣＤ３２６とを共発現している卵巣がん細胞株に対して、０．０２５ｎｇ／ｍｌのアダプターという少ない投与量において、腫瘍増殖の抑制を示す。初代ヒトＴ細胞を単離し、ビオチンに対する指定のＣＡＲコンストラクトを形質導入した。抗ビオチンＣＡＲＴ細胞を、ＣＤ９０＋／ＣＤ３２６＋（Ａ）、ＣＤ９０－／Ｄ３２６－（Ｂ）、ＣＤ９０＋／ＣＤ３２６－（Ｃ）、およびＣＤ９０－／ＣＤ３２６＋（Ｄ）を発現している、標的細胞の卵巣がん細胞株Ａ２７８０とともに、モノビオチン化抗ＣＤ９０ＦＡｂまたはモノビオチン化抗ＣＤ３２６ＦＡｂの存在下で、それぞれ４８時間共培養した。すべてのＡ２７８０卵巣がん細胞株は、ＧＦＰを発現する。ＧＦＰ蛍光を経時的に測定した。ＣＡＲＴ細胞が媒介する標的細胞の溶解によって、ＧＦＰ蛍光が減少する。統計分析は、独立スチューデントのｔ検定を含むものであった。ＣＤ９０およびＣＤ３２６を標的化したアダプターＣＡＲＴ細胞は、ＣＤ９０とＣＤ３２６とを共発現している卵巣がん細胞株に対して、０．０１ｎｇ／ｍｌのアダプターという少ない投与量において、腫瘍増殖の抑制の低下を示す。初代ヒトＴ細胞を単離し、ビオチンに対する指定のＣＡＲコンストラクトを形質導入した。抗ビオチンＣＡＲＴ細胞を、ＣＤ９０＋／ＣＤ３２６＋（Ａ）、ＣＤ９０－／ＣＤ３２６－（Ｂ）、ＣＤ９０＋／ＣＤ３２６－（Ｃ）、およびＣＤ９０－／ＣＤ３２６＋（Ｄ）を発現している、標的細胞の卵巣がん細胞株Ａ２７８０とともに、モノビオチン化抗ＣＤ９０ＦＡｂまたはモノビオチン化抗ＣＤ３２６ＦＡｂの存在下で、それぞれ４８時間共培養した。すべてのＡ２７８０卵巣がん細胞株は、ＧＦＰを発現する。ＧＦＰ蛍光を経時的に測定した。ＣＡＲＴ細胞が媒介する標的細胞の溶解によって、ＧＦＰ蛍光が減少する。統計分析は、独立スチューデントのｔ検定を含むものであった。ＣＤ９０およびＣＤ３２６を標的化したアダプターＣＡＲＴ細胞は、一定濃度の抗ＣＤ９０Ｆａｂに対して抗ＣＤ３２６Ｆａｂを滴定する場合、ＣＤ９０とＣＤ３２６とを共発現している卵巣がん細胞株に対して細胞溶解活性を有する。初代ヒトＴ細胞を単離し、ビオチンに対する指定のＣＡＲコンストラクトを形質導入した。抗ビオチンＣＡＲＴ細胞を、ＣＤ９０＋／ＣＤ３２６＋（Ａ）、ＣＤ９０－／ＣＤ３２６－（Ｂ）、ＣＤ９０＋／ＣＤ３２６－（Ｃ）、およびＣＤ９０－／ＣＤ３２６＋（Ｄ）を発現している、標的細胞の卵巣がん細胞株Ａ２７８０とともに、モノビオチン化抗ＣＤ９０ＦＡｂまたはモノビオチン化抗ＣＤ３２６ＦＡｂの存在下で、それぞれ４８時間共培養した。すべてのＡ２７８０卵巣がん細胞株は、ＧＦＰを発現する。ＧＦＰ蛍光を経時的に測定した。ＣＡＲＴ細胞が媒介する標的細胞の溶解によって、ＧＦＰ蛍光が減少する。統計分析は、独立スチューデントのｔ検定を含むものであった。ＣＤ９０およびＣＤ３２６を標的化したアダプターＣＡＲＴ細胞は、一定濃度の抗ＣＤ３２６Ｆａｂに対して抗ＣＤ９０Ｆａｂを滴定する場合、ＣＤ９０とＣＤ３２６とを共発現している卵巣がん細胞株に対して細胞溶解活性を有する。初代ヒトＴ細胞を単離し、ビオチンに対する指定のＣＡＲコンストラクトを形質導入した。抗ビオチンＣＡＲＴ細胞を、ＣＤ９０＋／ＣＤ３２６＋（Ａ）、ＣＤ９０－／ＣＤ３２６－（Ｂ）、ＣＤ９０＋／ＣＤ３２６－（Ｃ）、およびＣＤ９０－／ＣＤ３２６＋（Ｄ）を発現している、標的細胞の卵巣がん細胞株Ａ２７８０とともに、モノビオチン化抗ＣＤ９０ＦＡｂまたはモノビオチン化抗ＣＤ３２６ＦＡｂの存在下で、それぞれ４８時間共培養した。すべてのＡ２７８０卵巣がん細胞株は、ＧＦＰを発現する。ＧＦＰ蛍光を経時的に測定した。ＣＡＲＴ細胞が媒介する標的細胞の溶解によって、ＧＦＰ蛍光が減少する。統計分析は、独立スチューデントのｔ検定を含むものであった。ＣＤ９０およびＣＤ３２６を標的化したアダプターＣＡＲＴ細胞は、ＣＤ９０とＣＤ３２６とを共発現している卵巣がん細胞株に対して、様々な濃度でサイトカインを分泌する（０．７５～０．１ｎｇ／ｍｌ）。初代ヒトＴ細胞を単離し、ビオチンに対する指定のＣＡＲコンストラクトを形質導入した。抗ビオチンＣＡＲＴ細胞を、ＣＤ９０＋／ＣＤ３２６＋（Ａ）０．７５ｎｇ／ｍｌ、Ｅ）０．５ｎｇ／ｍｌ、Ｉ）０．２５ｎｇ／ｍｌ、Ｍ）０．１ｎｇ／ｍｌ）、ＣＤ９０－／ＣＤ３２６－（Ｂ）０．７５ｎｇ／ｍｌ、Ｆ）０．５ｎｇ／ｍｌ、Ｊ）０．２５ｎｇ／ｍｌ、Ｎ）０．１ｎｇ／ｍｌ）、ＣＤ９０＋／ＣＤ３２６－（Ｃ）０．７５ｎｇ／ｍｌ、Ｇ）０．５ｎｇ／ｍｌ、Ｋ）０．２５ｎｇ／ｍｌ、Ｏ）０．１ｎｇ／ｍｌ）、およびＣＤ９０－／ＣＤ３２６＋（Ｄ）０．７５ｎｇ／ｍｌ、Ｈ）０．５ｎｇ／ｍｌ、Ｌ）０．２５ｎｇ／ｍｌ、Ｐ）０．１ｎｇ／ｍｌ）を発現している、標的細胞の卵巣がん細胞株Ａ２７８０とともに、モノビオチン化抗ＣＤ９０ＦＡｂまたはモノビオチン化抗ＣＤ３２６ＦＡｂの存在下で、それぞれ４８時間共培養した。統計分析は、独立スチューデントのｔ検定を含むものであった。ＣＤ９０およびＣＤ３２６を標的化したアダプターＣＡＲＴ細胞は、ＣＤ９０とＣＤ３２６とを共発現している卵巣がん細胞株に対して、様々な濃度でサイトカインを分泌する（０．１～０．０１ｎｇ／ｍｌ）。初代ヒトＴ細胞を単離し、ビオチンに対する指定のＣＡＲコンストラクトを形質導入した。抗ビオチンＣＡＲＴ細胞を、Ｄ９０＋／ＣＤ３２６＋（Ａ）０．１ｎｇ／ｍｌ、Ｅ）０．０５ｎｇ／ｍｌ、Ｉ）０．０２５ｎｇ／ｍｌ、Ｍ）０．０１ｎｇ／ｍｌ）、ＣＤ９０－／ＣＤ３２６－（Ｂ）０．１ｎｇ／ｍｌ、Ｆ）０．０５ｎｇ／ｍｌ、Ｊ）０．０２５ｎｇ／ｍｌ、Ｎ）０．０１ｎｇ／ｍｌ）、ＣＤ９０＋／ＣＤ３２６－（Ｃ）０．１ｎｇ／ｍｌ、Ｇ）０．０５ｎｇ／ｍｌ、Ｋ）０．０２５ｎｇ／ｍｌ、Ｏ）０．０１ｎｇ／ｍｌ）、およびＣＤ９０－／ＣＤ３２６＋（Ｄ）０．１ｎｇ／ｍｌ、Ｈ）０．０５ｎｇ／ｍｌ、Ｌ）０．０２５ｎｇ／ｍｌ、Ｐ）０．０１ｎｇ／ｍｌ）を発現している、標的細胞の卵巣がん細胞株Ａ２７８０とともに、モノビオチン化抗ＣＤ９０ＦＡｂまたはモノビオチン化抗ＣＤ３２６ＦＡｂの存在下で、それぞれ４８時間共培養した。統計分析は、独立スチューデントのｔ検定を含むものであった。ＣＤ９０およびＣＤ３２６を標的化したアダプターＣＡＲＴ細胞は、ＣＤ９０とＣＤ３２６とを共発現している卵巣がん細胞株に対して、様々な濃度でサイトカインを分泌する。初代ヒトＴ細胞を単離し、ビオチンに対する指定のＣＡＲコンストラクトを形質導入した。抗ビオチンＣＡＲＴ細胞を、ＣＤ９０＋／ＣＤ３２６＋（Ａ）一定の抗ＣＤ３２６Ｆａｂおよび抗ＣＤ９０滴定、Ｅ）一定の抗ＣＤ９０Ｆａｂおよび抗ＣＤ３２６滴定）、ＣＤ９０－／ＣＤ３２６－（Ｂ）一定の抗ＣＤ３２６Ｆａｂおよび抗ＣＤ９０滴定、Ｆ）一定の抗ＣＤ９０Ｆａｂおよび抗ＣＤ３２６滴定）、ＣＤ９０＋／ＣＤ３２６－（Ｃ）一定の抗ＣＤ３２６Ｆａｂおよび抗ＣＤ９０滴定、Ｇ）一定の抗ＣＤ９０Ｆａｂおよび抗ＣＤ３２６滴定）、ならびにＣＤ９０－／ＣＤ３２６＋（Ｄ）一定の抗ＣＤ３２６Ｆａｂおよび抗ＣＤ９０滴定、Ｈ）一定の抗ＣＤ９０Ｆａｂおよび抗ＣＤ３２６滴定）を発現している、標的細胞の卵巣がん細胞株Ａ２７８０とともに、モノビオチン化抗ＣＤ９０ＦＡｂまたはモノビオチン化抗ＣＤ３２６ＦＡｂの存在下で、それぞれ４８時間共培養した。統計分析は、独立スチューデントのｔ検定を含むものであった。ＣＤ９０およびＣＤ３２６を標的化したアダプターＣＡＲＴ細胞は、ＣＤ９０とＣＤ３２６とを共発現している卵巣がん細胞株との様々な濃度（１～０．１ｎｇ／ｍｌ）での共培養において、活性化マーカーおよび疲弊マーカーを発現する。初代ヒトＴ細胞を単離し、ビオチンに対する指定のＣＡＲコンストラクトを形質導入した。抗ビオチンＣＡＲＴ細胞を、ＣＤ９０＋／ＣＤ３２６＋（Ａ）１ｎｇ／ｍｌ、Ｅ）０．７５ｎｇ／ｍｌ、Ｉ）０．５ｎｇ／ｍｌ、Ｍ）０．２５ｎｇ／ｍｌ、Ｑ）０．１ｎｇ／ｍｌ）、ＣＤ９０－／ＣＤ３２６－（Ｂ）１ｎｇ／ｍｌ、Ｆ）０．７５ｎｇ／ｍｌ、Ｊ）０．５ｎｇ／ｍｌ、Ｎ）０．２５ｎｇ／ｍｌ、Ｒ）０．１ｎｇ／ｍｌ）、ＣＤ９０＋／ＣＤ３２６－（Ｃ）１ｎｇ／ｍｌ、Ｇ）０．７５ｎｇ／ｍｌ、Ｋ）０．５ｎｇ／ｍｌ、Ｏ）０．２５ｎｇ／ｍｌ、Ｓ）０．１ｎｇ／ｍｌ）、およびＣＤ９０－／ＣＤ３２６＋（Ｄ）１ｎｇ／ｍｌ、Ｈ）０．７５ｎｇ／ｍｌ、Ｌ）０．５ｎｇ／ｍｌ、Ｐ）０．２５ｎｇ／ｍｌ、Ｔ）０．１ｎｇ／ｍｌ）を発現している、標的細胞の卵巣がん細胞株Ａ２７８０とともに、モノビオチン化抗ＣＤ９０ＦＡｂまたはモノビオチン化抗ＣＤ３２６ＦＡｂの存在下で、それぞれ４８時間共培養した。統計分析は、独立スチューデントのｔ検定を含むものであった。ＣＤ９０およびＣＤ３２６を標的化したアダプターＣＡＲＴ細胞は、ＣＤ９０とＣＤ３２６とを共発現している卵巣がん細胞株との様々な濃度（０．１～０．０１ｎｇ／ｍｌ）での共培養において、活性化マーカーおよび疲弊マーカーを発現する。初代ヒトＴ細胞を単離し、ビオチンに対する指定のＣＡＲコンストラクトを形質導入した。抗ビオチンＣＡＲＴ細胞を、ＣＤ９０＋／ＣＤ３２６＋（ＣＤ９０＋／ＣＤ３２６＋（Ａ）０．１ｎｇ／ｍｌ、Ｅ）０．０５ｎｇ／ｍｌ、Ｉ）０．０２５ｎｇ／ｍｌ、Ｍ）０．０１ｎｇ／ｍｌ）、ＣＤ９０－／ＣＤ３２６－（Ｂ）０．１ｎｇ／ｍｌ、Ｆ）０．０５ｎｇ／ｍｌ、Ｊ）０．０２５ｎｇ／ｍｌ、Ｎ）０．０１ｎｇ／ｍｌ）、ＣＤ９０＋／ＣＤ３２６－（Ｃ）０．１ｎｇ／ｍｌ、Ｇ）０．０５ｎｇ／ｍｌ、Ｋ）０．０２５ｎｇ／ｍｌ、Ｏ）０．０１ｎｇ／ｍｌ）、およびＣＤ９０－／ＣＤ３２６＋（Ｄ）０．１ｎｇ／ｍｌ、Ｈ）０．０５ｎｇ／ｍｌ、Ｌ）０．０２５ｎｇ／ｍｌ、Ｐ）０．０１ｎｇ／ｍｌ）を発現している、標的細胞の卵巣がん細胞株Ａ２７８０とともに、ビオチン化ＣＤ９０ＦＡｂまたはビオチン化ＣＤ３２６ＦＡｂの存在下で、それぞれ４８時間共培養した。非結合ＦＡｂはＴ細胞を活性化せず、アダプターＣＡＲの存在は、アダプター特異的Ｔ細胞の活性化に不可欠である。統計分析は、独立スチューデントのｔ検定を含むものであった。ＣＤ９０およびＣＤ３２６を標的化したアダプターＣＡＲＴ細胞は、ＣＤ９０とＣＤ３２６とを共発現している卵巣がん細胞株との様々な濃度での共培養において、活性化マーカーを発現する。初代ヒトＴ細胞を単離し、ビオチンに対する指定のＣＡＲコンストラクトを形質導入した。抗ビオチンＣＡＲＴ細胞を、ＣＤ９０＋／ＣＤ３２６＋（Ａ）一定の抗ＣＤ３２６Ｆａｂおよび抗ＣＤ９０滴定、Ｄ）一定の抗ＣＤ９０Ｆａｂおよび抗ＣＤ３２６滴定）、ＣＤ９０＋／ＣＤ３２６－（Ｂ）一定の抗ＣＤ３２６Ｆａｂおよび抗ＣＤ９０滴定、Ｅ）一定の抗ＣＤ９０Ｆａｂおよび抗ＣＤ３２６滴定）、ならびにＣＤ９０－／ＣＤ３２６＋（Ｃ）一定の抗ＣＤ３２６Ｆａｂおよび抗ＣＤ９０滴定、Ｆ）一定の抗ＣＤ９０Ｆａｂおよび抗ＣＤ３２６滴定）を発現している、標的細胞の卵巣がん細胞株Ａ２７８０とともに、モノビオチン化抗ＣＤ９０ＦＡｂまたはモノビオチン化抗ＣＤ３２６ＦＡｂの存在下で、それぞれ４８時間共培養した。統計分析は、独立スチューデントのｔ検定を含むものであった。ＣＤ９０およびＣＤ３２６を標的化したアダプターＣＡＲＴ細胞は、ＣＤ９０とＣＤ３２６とを共発現している卵巣がん細胞株との様々な濃度での共培養において、疲弊マーカーを発現する。初代ヒトＴ細胞を単離し、ビオチンに対する指定のＣＡＲコンストラクトを形質導入した。抗ビオチンＣＡＲＴ細胞を、ＣＤ９０＋／ＣＤ３２６＋（Ａ）一定の抗ＣＤ３２６Ｆａｂおよび抗ＣＤ９０滴定、Ｅ）一定の抗ＣＤ９０Ｆａｂおよび抗ＣＤ３２６滴定）、ＣＤ９０－／ＣＤ３２６－（Ｂ）一定の抗ＣＤ３２６Ｆａｂおよび抗ＣＤ９０滴定、Ｆ）一定の抗ＣＤ９０Ｆａｂおよび抗ＣＤ３２６滴定）、ＣＤ９０＋／ＣＤ３２６－（Ｃ）一定の抗ＣＤ３２６Ｆａｂおよび抗ＣＤ９０滴定、Ｇ）一定の抗ＣＤ９０Ｆａｂおよび抗ＣＤ３２６滴定）、ならびにＣＤ９０－／ＣＤ３２６＋（Ｄ）一定の抗ＣＤ３２６Ｆａｂおよび抗ＣＤ９０滴定、Ｈ）一定の抗ＣＤ９０Ｆａｂおよび抗ＣＤ３２６滴定）を発現している、標的細胞の卵巣がん細胞株Ａ２７８０とともに、モノビオチン化抗ＣＤ９０ＦＡｂまたはモノビオチン化抗ＣＤ３２６ＦＡｂの存在下で、それぞれ４８時間共培養した。統計分析は、独立スチューデントのｔ検定を含むものであった。ＣＤ９０およびＣＤ３２６を標的化したアダプターＣＡＲＴ細胞は、ＣＤ９０とＣＤ３２６とを共発現している卵巣がん細胞株との様々な濃度での共培養において、活性化マーカーを発現する。初代ヒトＴ細胞を単離し、ビオチンに対する指定のＣＡＲコンストラクトを形質導入した。抗ビオチンＣＡＲＴ細胞を、ＣＤ９０＋／ＣＤ３２６＋（Ａ）一定の抗ＣＤ３２６Ｆａｂおよび抗ＣＤ９０滴定、Ｅ）一定の抗ＣＤ９０Ｆａｂおよび抗ＣＤ３２６滴定）、ＣＤ９０－／ＣＤ３２６－（Ｂ）一定の抗ＣＤ３２６Ｆａｂおよび抗ＣＤ９０滴定、Ｆ）一定の抗ＣＤ９０Ｆａｂおよび抗ＣＤ３２６滴定）、ＣＤ９０＋／ＣＤ３２６－（Ｃ）一定の抗ＣＤ３２６Ｆａｂおよび抗ＣＤ９０滴定、Ｇ）一定の抗ＣＤ９０Ｆａｂおよび抗ＣＤ３２６滴定）、ならびにＣＤ９０－／ＣＤ３２６＋（Ｄ）一定の抗ＣＤ３２６Ｆａｂおよび抗ＣＤ９０滴定、Ｈ）一定の抗ＣＤ９０Ｆａｂおよび抗ＣＤ３２６滴定）を発現している、標的細胞の卵巣がん細胞株Ａ２７８０とともに、モノビオチン化抗ＣＤ９０ＦＡｂまたはモノビオチン化抗ＣＤ３２６ＦＡｂの存在下で、それぞれ４８時間共培養し、疲弊マーカーを染色した。抗ビオチンＣＡＲＴ細胞を、ＣＤ９０＋／ＣＤ３２６＋（Ｉ）一定の抗ＣＤ３２６Ｆａｂおよび抗ＣＤ９０滴定、Ｍ）一定の抗ＣＤ９０Ｆａｂおよび抗ＣＤ３２６滴定）、ＣＤ９０－／ＣＤ３２６－（Ｊ）一定の抗ＣＤ３２６Ｆａｂおよび抗ＣＤ９０滴定、Ｎ）一定の抗ＣＤ９０Ｆａｂおよび抗ＣＤ３２６滴定）、ＣＤ９０－／ＣＤ３２６＋（Ｋ）一定の抗ＣＤ３２６Ｆａｂおよび抗ＣＤ９０滴定、Ｏ）一定の抗ＣＤ９０Ｆａｂおよび抗ＣＤ３２６滴定）、ならびにＣＤ９０＋／ＣＤ３２６－（Ｌ）一定の抗ＣＤ３２６Ｆａｂおよび抗ＣＤ９０滴定、Ｐ）一定の抗ＣＤ９０Ｆａｂおよび抗ＣＤ３２６滴定）を発現している、標的細胞の卵巣がん細胞株Ａ２７８０とともに、モノビオチン化抗ＣＤ９０ＦＡｂまたはモノビオチン化抗ＣＤ３２６ＦＡｂの存在下で、それぞれ４８時間共培養し、活性化マーカーを染色した。統計分析は、独立スチューデントのｔ検定を含むものであった。

第１の態様では、本発明は、
ＣＤ９０とＣＤ３２６とを共発現するがん性細胞を含むヒトがんの処置に使用するための、
ａ）ＣＤ９０に特異的な抗原結合ドメイン
ｂ）ＣＤ３２６に特異的な抗原結合ドメイン
を含む、組み合わせを提供する。

ＣＤ９０とＣＤ３２６とを共発現するがん性細胞を含む前記ヒトがんは、ＣＤ９０とＣＤ３２６とを共発現しているがん性細胞を含むヒト卵巣がんであってもよい。

前記組み合わせであって、第１のＣＡＲと第２のＣＡＲとを含む免疫細胞を含んでもよく、
第１のＣＡＲが、
ｉ）ＣＤ９０またはＣＤ３２６に特異的な第１の抗原結合ドメイン
ｉｉ）膜貫通ドメイン
ｉｉｉ）第１の細胞内シグナル伝達ドメイン
を含んでもよく、
前記第１の細胞内シグナル伝達ドメインが、免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を含む１次シグナル伝達ドメインであり、前記第１の細胞内シグナル伝達ドメインが共刺激ドメインを含まず、
第２のＣＡＲが、
ｉ）第１のＣＡＲの第１の抗原結合ドメインがＣＤ９０に特異的である場合には、ＣＤ３２６に特異的な第２の抗原結合ドメイン、または第１のＣＡＲの第１の抗原結合ドメインがＣＤ３２６に特異的である場合には、ＣＤ９０に特異的な第２の抗原結合ドメイン
ｉｉ）膜貫通ドメイン
ｉｉｉ）第２の細胞内シグナル伝達ドメイン
を含み、
前記第２の細胞内シグナル伝達ドメインが、１つまたは複数の共刺激シグナル伝達ドメインを含む、組み合わせ。

前記組み合わせであって、第１のＣＡＲと第２のＣＡＲとを含む免疫細胞を含んでもよく、前記第１のシグナル伝達ドメインと前記第２のシグナル伝達ドメインとの両方が、前記ＣＤ９０およびＣＤ３２６によってそれぞれ活性化される場合にのみ、前記免疫細胞が最大細胞毒性となる、組み合わせ。

前記ＩＴＡＭは、好ましくは、ＣＤ３ζシグナル伝達ドメインであってもよい。

前記ＣＡＲの前記１次細胞質シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζであってもよい。

前記第１のＣＡＲの前記膜貫通ドメインと前記第２のＣＡＲの前記膜貫通ドメインとは、互いに同一であっても異なっていてもよい。

前記第１のＣＡＲは、前記第１の抗原結合ドメインと前記膜貫通ドメインとの間に、スペーサーを含んでいてもよい。

前記第２のＣＡＲは、前記第２の抗原結合ドメインと前記膜貫通ドメインとの間に、スペーサーを含んでいてもよい。

前記第１のＣＡＲの前記スペーサーと前記第２のＣＡＲの前記スペーサーとは、互いに同一であっても異なっていてもよい。

前記第２のＣＡＲは、本明細書において、キメラ共刺激受容体（ＣＣＲ）とも呼ばれる。

前記第２の細胞内シグナル伝達ドメインを含んでもよい前記ＣＣＲであって、前記第２の細胞内シグナル伝達ドメインが、１つまたは複数の共刺激シグナル伝達ドメインを含んでもよいが、ＣＤ３ゼータ等の免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を含んではならない、ＣＣＲ。

前記ＣＣＲであって、前記第２の細胞内シグナル伝達ドメインが、１つまたは複数の共刺激シグナル伝達ドメインからなってもよい、ＣＣＲ。

前記１つまたは複数の（すなわち少なくとも１つの）共刺激シグナル伝達ドメインは、ＩＣＯＳ、ＣＤ１５４、ＣＤ５、ＣＤ２、ＣＤ４６、ＨＶＥＭ、ＣＤ８、ＣＤ９７、ＴＮＦＲＳＦ１８、ＣＤ３０、ＳＬＡＭ、ＤＡＰ１０、ＣＤ６４、ＣＤ１６、ＣＤ８９、ＭｙＤ８８、ＫＩＲ－２ＤＳ、ＫＩＲ－３ＤＳ、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ４６、ＮＫＧ２Ｄ、ＩＣＡＭ、ＣＤ２７、ＯＸ４０、４－１ＢＢ、およびＣＤ２８からなる群から選択されうる。

前記ＣＣＲの前記細胞内シグナル伝達ドメインは、１つの４－１ＢＢ共刺激シグナル伝達ドメインと、１つのＣＤ２８共刺激シグナル伝達ドメインとを含んでもよく、これらからなっていてもよい。

前記免疫細胞は、Ｔ細胞であっても、ＮＫ細胞であってもよい。

ＣＤ９０に特異的なＣＡＲの前記抗原結合ドメインは、配列番号１および配列番号２を含んでいてもよい。

ＣＤ３２６に特異的なＣＡＲの前記抗原結合ドメインは、配列番号３および配列番号４を含んでいてもよい。

前記組み合わせであって、第１のＣＡＲと第２のＣＡＲとを含む免疫細胞を含み、
第１のＣＡＲが、
ｉ）タグ付きポリペプチドのタグに特異的な第１の抗原結合ドメインであって、前記ポリペプチドが、ＣＤ９０またはＣＤ３２６に特異的な抗原結合ドメインを有する、第１の抗原結合ドメイン
ｉｉ）膜貫通ドメイン
ｉｉｉ）第１の細胞内シグナル伝達ドメイン
を含み、
前記第１の細胞内シグナル伝達ドメインが、免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を含む１次シグナル伝達ドメインであり、前記第１の細胞内シグナル伝達ドメインが共刺激ドメインを含まず、
第２のＣＡＲが、
ｉ）前記タグ付きポリペプチドがＣＤ９０に特異的に結合する場合には、ＣＤ３２６に特異的な第２の抗原結合ドメイン、または前記タグ付きポリペプチドがＣＤ３２６に特異的に結合する場合には、ＣＤ９０に特異的な第２の抗原結合ドメイン
ｉｉ）膜貫通ドメイン
ｉｉｉ）第２の細胞内シグナル伝達ドメイン
を含み、
前記第２の細胞内シグナル伝達ドメインが、１つまたは複数の共刺激シグナル伝達ドメインを含み、
前記組み合わせが、前記タグ付きポリペプチドを含む、組み合わせ。

前記組み合わせであって、第１のＣＡＲと第２のＣＡＲとを含む免疫細胞を含み、前記第１のシグナル伝達ドメインが前記タグによって活性化され、前記第２のシグナル伝達ドメインが前記ＣＤ９０またはＣＤ３２６によって活性化される場合にのみ、前記免疫細胞が最大細胞毒性となる、組み合わせ。

前記タグ付きポリペプチドのポリペプチドは、抗体またはその抗原結合フラグメントであってもよく、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、前記ＣＤ９０または前記ＣＤ３２６に結合しうる。

ＣＤ９０に特異的なタグ付きポリペプチドの前記抗原結合ドメインは、配列番号１および配列番号２を含んでいてもよい。

ＣＤ３２６に特異的なタグ付きポリペプチドの前記抗原結合ドメインは、配列番号３および配列番号４を含んでいてもよい。

前記タグ付きポリペプチドのタグは、例えばハプテンであってもよい。前記ハプテンは、例えば、ＦＩＴＣ、ビオチン、ＰＥ、チアミン、またはストレプトアビジンであってもよい。

前記組み合わせであって、第１のＣＡＲと第２のＣＡＲとを含む免疫細胞を含み、
第１のＣＡＲが、
ｉ）ＣＤ９０またはＣＤ３２６に特異的な第１の抗原結合ドメイン
ｉｉ）膜貫通ドメイン
ｉｉｉ）第１の細胞内シグナル伝達ドメイン
を含み、
前記第１の細胞内シグナル伝達ドメインが、免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を含む１次シグナル伝達ドメインであり、前記第１の細胞内シグナル伝達ドメインが共刺激ドメインを含まず、
第２のＣＡＲが、
ｉ）タグ付きポリペプチドのタグに特異的な第２の抗原結合ドメインであって、第１のＣＡＲの第１の抗原結合ドメインがＣＤ９０に特異的である場合には、前記ポリペプチドがＣＤ３２６に特異的な抗原結合ドメインを有する、第２の抗原結合ドメイン、またはタグ付きポリペプチドに特異的な第２の抗原結合ドメインであって、第１のＣＡＲの第１の抗原結合ドメインがＣＤ３２６に特異的である場合には、前記ポリペプチドがＣＤ９０に特異的な抗原結合ドメインを有する、第２の抗原結合ドメイン
ｉｉ）膜貫通ドメイン
ｉｉｉ）第２の細胞内シグナル伝達ドメイン
を含み、
前記第２の細胞内シグナル伝達ドメインが、１つまたは複数の共刺激シグナル伝達ドメインを含み、
前記組み合わせが、前記タグ付きポリペプチドを含む、組み合わせ。

前記組み合わせであって、第１のＣＡＲと第２のＣＡＲとを含む免疫細胞を含み、前記第１のシグナル伝達ドメインが前記ＣＤ９０またはＣＤ３２６によって活性化され、前記第２のシグナル伝達ドメインが前記タグによって活性化される場合にのみ、前記免疫細胞が最大細胞毒性となる、組み合わせ。

前記組み合わせであって、第１のＣＡＲと第２のＣＡＲとを含む免疫細胞を含み、
第１のＣＡＲが、
ｉ）第１のタグ付きポリペプチドの第１のタグに特異的な第１の抗原結合ドメインであって、前記第１のポリペプチドが、ＣＤ９０またはＣＤ３２６に特異的な抗原結合ドメインを有する、第１の抗原結合ドメイン
ｉｉ）膜貫通ドメイン
ｉｉｉ）第１の細胞内シグナル伝達ドメイン
を含み、
前記第１の細胞内シグナル伝達ドメインが、免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を含む１次シグナル伝達ドメインであり、前記第１の細胞内シグナル伝達ドメインが共刺激ドメインを含まず、
第２のＣＡＲが、
ｉ）第２のタグ付きポリペプチドの第２のタグに特異的な第２の抗原結合ドメインであって、前記第１のタグ付きポリペプチドがＣＤ９０に特異的に結合する場合には、前記第２のポリペプチドがＣＤ３２６に特異的な抗原結合ドメインを有する、第２の抗原結合ドメイン、または第２のタグ付きポリペプチドに特異的な第２の抗原結合ドメインであって、前記第１のタグ付きポリペプチドがＣＤ３２６に特異的に結合する場合には、前記第２のポリペプチドがＣＤ９０に特異的な抗原結合ドメインを有する、第２の抗原結合ドメイン
ｉｉ）膜貫通ドメイン
ｉｉｉ）第２の細胞内シグナル伝達ドメイン
を含み、
前記第２の細胞内シグナル伝達ドメインが、１つまたは複数の共刺激シグナル伝達ドメインを含み、
前記組み合わせが、前記第１のタグ付きポリペプチドと前記第２のタグ付きポリペプチドとを含む、組み合わせ。

前記組み合わせであって、第１のＣＡＲと第２のＣＡＲとを含む免疫細胞を含み、前記第１のシグナル伝達ドメインと前記第２のシグナル伝達ドメインとの両方が、前記第１のタグおよび第２のタグによってそれぞれ活性化される場合にのみ、前記免疫細胞が最大細胞毒性となる、組み合わせ。

前記第１のタグ付きポリペプチドの前記第１のタグは、前記第２のタグ付きポリペプチドの前記第２のタグとは異なってもよい。

前記組み合わせであって、ａ）ＣＤ９０に特異的な抗原結合ドメインを有する、タグ付き第１のポリペプチド、
ｂ）ＣＤ３２６に特異的な抗原結合ドメインを有する、タグ付き第２のポリペプチドであって、第１のポリペプチドのタグと第２のポリペプチドのタグとが同一である、タグ付き第２のポリペプチド、
ｃ）ＣＡＲを含み、ＣＡＲが、
ｉ）第１のポリペプチドおよび第２のポリペプチドの前記タグに特異的な抗原結合ドメイン、
ｉｉ）膜貫通ドメイン
ｉｉｉ）１次シグナル伝達ドメインと少なくとも１つの共刺激ドメインとを含む、細胞内シグナル伝達ドメイン
を含む、免疫細胞
を含む、組み合わせ。

前記組み合わせであって、前記タグ付き第１のポリペプチドの濃度（それを必要とする対象における）が、前記免疫細胞に発現した前記ＣＡＲの活性化閾値未満であり、前記タグ付き第２のポリペプチドの濃度（それを必要とする前記対象における）が、前記免疫細胞に発現した前記ＣＡＲの活性化閾値未満であり、タグ付き第１のポリペプチドとタグ付き第２のポリペプチドとを組み合わせた濃度（それを必要とする前記対象における）が、前記免疫細胞に発現した前記ＣＡＲの活性化閾値を上回る（前記組み合わせが、それを必要とする前記対象に適用された場合）、組み合わせ。

前記組み合わせであって、前記タグ付き第１のポリペプチドの濃度（それを必要とする対象における）が、前記免疫細胞に発現した前記ＣＡＲの活性化閾値未満であり、前記タグ付き第２のポリペプチドの濃度（それを必要とする前記対象における）が、前記免疫細胞に発現した前記ＣＡＲの活性化閾値未満であり、タグ付き第１のポリペプチドとタグ付き第２のポリペプチドとを組み合わせた濃度（それを必要とする前記対象における）が、前記免疫細胞に発現した前記ＣＡＲの活性化閾値を上回り（前記組み合わせが、前記対象に適用された場合）、前記タグ付き第１のポリペプチドの濃度が、前記タグ付き第１のポリペプチドによってＣＡＲを単独で活性化する、すなわち、前記タグ付き第２のポリペプチドが存在しない場合に必要な濃度を、少なくとも１０％下回り、前記タグ付き第２のポリペプチドの濃度が、前記タグ付き第２のポリペプチドによってＣＡＲを単独で活性化する、すなわち、前記タグ付き第１のポリペプチドが存在しない場合に必要な濃度を、少なくとも１０％下回る、組み合わせ。

前記組み合わせであって、前記タグ付き第１のポリペプチドの濃度（前記組み合わせ中の）がｘ（１）μｇ／ｍｌであり、前記タグ付き第２のポリペプチドの濃度（前記組み合わせ中の）がｘ（２）μｇ／ｍｌであり、ｘ（１）がｘ（合計）μｇ／ｍｌ未満であり、ｘ（２）がｘ（合計）μｇ／ｍｌ未満であり、ｘ（１）μｇ／ｍｌ＋ｘ（２）μｇ／ｍｌが、ｘ（合計）μｇ／ｍｌ以上であり、ｘ（合計）μｇ／ｍｌが、前記免疫細胞の活性化を作動させる濃度（前記組み合わせ中の）である、組み合わせ。

前記組み合わせであって、前記タグ付き第１のポリペプチドの濃度が、前記免疫細胞に発現した前記ＣＡＲを活性化するのに十分ではなく、前記タグ付き第２のポリペプチドの濃度が、前記免疫細胞に発現した前記ＣＡＲを活性化するのに十分ではなく、タグ付き第１のポリペプチドとタグ付き第２のポリペプチドとを組み合わせた濃度が、前記免疫細胞に発現した前記ＣＡＲを活性化するのに十分である、組み合わせ。

前記組み合わせであって、前記タグ付き第１のポリペプチドの濃度が、前記免疫細胞に発現した前記ＣＡＲの活性化閾値未満であり、前記タグ付き第２のポリペプチドの濃度が、前記免疫細胞に発現した前記ＣＡＲの活性化閾値未満であり、タグ付き第１のポリペプチドとタグ付き第２のポリペプチドとを組み合わせた濃度が、前記免疫細胞に発現した前記ＣＡＲの活性化閾値を上回り、前記免疫細胞に発現した前記ＣＡＲの活性化閾値の値を、両方のタグ付きポリペプチドをそれぞれ個々に使用して滴定曲線によって決定することができ、前記免疫細胞の活性化が起こる場合、ＣＤ９０とＣＤ３２６を発現している標的細胞が、これによって前記免疫細胞を活性化させ、閾値が決定する、組み合わせ。

アダプターＣＡＲと、少なくとも２種の異なる抗原への特異性を有する少なくとも２種のタグ付きポリペプチドとを含み、少なくとも２種のポリペプチドが同一のタグを有し、前記ＣＡＲの活性化が、前記少なくとも２種のポリペプチドの濃度によって調節されるＣＡＲ系は、表面活性化マトリックス（ＳＡＭ）ＣＡＲアプローチとも呼ばれる。標的細胞の複雑な表面表現型に起因して、アダプター（タグ付きポリペプチド）ミックスは、標的抗原の特定の組み合わせに対して活性閾値を特異的に達成するように調整することができる。

「前記免疫細胞に発現した前記ＣＡＲの活性化閾値未満」および「前記免疫細胞に発現した前記ＣＡＲの活性化閾値を上回る」とは、タグ付きポリペプチドが免疫細胞のそれぞれのＣＡＲに結合することによって、本明細書に開示される前記免疫エフェクター細胞の免疫応答を活性化および刺激するための能力を指す。タグ付きポリペプチドまたはタグ付きポリペプチドの和の濃度が、ＣＡＲを活性化するためには低すぎるならば、このとき、前記濃度は、前記免疫細胞に発現した前記ＣＡＲの活性化閾値未満である。本明細書に開示されるタグ付きポリペプチドの濃度、またはタグ付き第１のポリペプチドとタグ付き第２のポリペプチドとの濃度の和（組み合わせた濃度）が、ＣＡＲを活性化するのに十分であるならば、このとき、濃度または組み合わせた濃度は、前記免疫細胞に発現した前記ＣＡＲの活性化閾値を上回る。

本明細書に開示されるタグ付きポリペプチドの濃度、またはタグ付き第１のポリペプチドとタグ付き第２のポリペプチドとの濃度の和（組み合わせた濃度）が、少なくとも１ｆｇ／ｍｌ、少なくとも１ｐｇ／ｍｌ、少なくとも１ｎｇ／ｍｌ、または少なくとも１μｇ／ｍｌであってもよい場合、開示されるタグ付きポリペプチドの濃度、またはタグ付き第１のポリペプチドとタグ付き第２のポリペプチドとの濃度の和（組み合わせた濃度）は、ＣＡＲを活性化するのに十分であってもよく、すなわち、濃度または組み合わせた濃度は、前記免疫細胞に発現した前記ＣＡＲの活性化閾値を上回りうる。

前記組み合わせであって、ＣＤ９０とＣＤ３２６とを共発現するがん性細胞を含むヒトがんの処置に使用するための組み合わせであって、
ａ）ＣＤ９０に特異的な抗原結合ドメインを有する、タグ付き第１のポリペプチド、
ｂ）ＣＤ３２６に特異的な抗原結合ドメインを有する、タグ付き第２のポリペプチドであって、第１のポリペプチドのタグと第２のポリペプチドのタグとが同一である、タグ付き第２のポリペプチド、
ｃ）ＣＡＲを含み、ＣＡＲが、
ｉ）第１のポリペプチドおよび第２のポリペプチドの前記タグに特異的な抗原結合ドメイン、
ｉｉ）膜貫通ドメイン
ｉｉｉ）１次シグナル伝達ドメインと少なくとも１つの共刺激ドメインとを含む、細胞内シグナル伝達ドメイン
を含む、免疫細胞
を含む、組み合わせ。

ヒトがんの処置に使用するための前記組み合わせであって、前記タグ付き第１のポリペプチドの濃度が、それを必要とする対象（ヒト）に適用する場合、前記免疫細胞に発現した前記ＣＡＲの活性化閾値未満であり、前記タグ付き第２のポリペプチドの濃度が、それを必要とする前記対象（ヒト）に適用する場合、前記免疫細胞に発現した前記ＣＡＲの活性化閾値未満であり、前記対象におけるタグ付き第１のポリペプチドとタグ付き第２のポリペプチドとを組み合わせた濃度が、前記免疫細胞に発現した前記ＣＡＲの活性化閾値を上回る、組み合わせ。

別の態様では、本発明は、抗体薬物複合体（ＡＤＣ）であって、ＣＤ９０および前記ＣＤ３２６に特異的な二重特異性抗体またはその抗原結合フラグメントを含み、前記二重特異性抗体またはその抗原結合フラグメントが、薬物に結合されている、ＡＤＣを提供する。ＣＤ９０抗原結合フラグメントとＣＤ３２６抗原結合フラグメントとの両方の結合親和性の組み合わせのみが、ＣＤ９０とＣＤ３２６とを共発現している細胞に結合するのに十分に強い、ＡＤＣを提供する。

前記ＡＤＣであって、前記二重特異性抗体またはその抗原結合フラグメントが、エフェクター免疫細胞によって、抗体依存性細胞媒介細胞傷害を媒介する、ＡＤＣ。

抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性は、抗体Ｆｃフラグメントと、（限定するものではないが）Ｂリンパ球、小胞樹状突起細胞、ナチュラルキラー細胞、マクロファージ、好中球、好酸球、好塩基球、ヒト血小板、および肥満細胞によって発現される、Ｆｃ受容体との相互作用によって媒介される。

前記ＡＤＣであって、前記二重特異性抗体またはその抗原結合フラグメントが、受容体架橋の際にアポトーシスを媒介する、ＡＤＣ。

前記ＡＤＣであって、前記二重特異性抗体またはその抗原結合フラグメントが、補体依存性細胞傷害を媒介する、ＡＤＣ。

補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）は、抗体Ｆｃフラグメントと、Ｃ１ｑおよびＣ５等の補体カスケードタンパク質との相互作用によって媒介される。

別の態様では、本発明は、第１のＣＡＲと第２のＣＡＲとを含む免疫細胞であって、
第１のＣＡＲが、
ｉ）ＣＤ９０またはＣＤ３２６に特異的な第１の抗原結合ドメイン
ｉｉ）膜貫通ドメイン
ｉｉｉ）第１の細胞内シグナル伝達ドメイン
を含み、
前記第１の細胞内シグナル伝達ドメインが、免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を含む１次シグナル伝達ドメインであり、前記第１の細胞内シグナル伝達ドメインが共刺激ドメインを含まず、
第２のＣＡＲが、
ｉ）第１のＣＡＲの第１の抗原結合ドメインがＣＤ９０に特異的である場合には、ＣＤ３２６に特異的な第２の抗原結合ドメイン、または第１のＣＡＲの第１の抗原結合ドメインがＣＤ２３６に特異的である場合には、ＣＤ９０に特異的な第２の抗原結合ドメイン
ｉｉ）膜貫通ドメイン
ｉｉｉ）第２の細胞内シグナル伝達ドメイン
を含み、
前記第２の細胞内シグナル伝達ドメインが、１つまたは複数の共刺激シグナル伝達ドメインを含む、免疫細胞を提供する。

前記免疫細胞であって、第１のＣＡＲと第２のＣＡＲとを含み、前記第１のシグナル伝達ドメインと前記第２のシグナル伝達ドメインとの両方が、前記ＣＤ９０およびＣＤ３２６によってそれぞれ活性化される場合にのみ、前記免疫細胞が最大細胞毒性となる、免疫細胞。

ＣＤ９０とＣＤ３２６とを共発現しているがん性細胞を含むヒトがんの処置に使用するための、前記免疫細胞。

ＣＤ９０とＣＤ３２６とを共発現しているがん性細胞を含むヒト卵巣がんの処置に使用するための、前記免疫細胞。

前記免疫細胞を含み、医薬として許容されるキャリアを任意選択的に含む、医薬組成物。

生理学的に許容されるキャリア（希釈剤または賦形剤）は、中性緩衝生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水等の緩衝液；グルコース、マンノース、スクロースまたはデキストラン、マンニトール等の炭水化物；タンパク質；ポリペプチドまたはグリシン等のアミノ酸；酸化防止剤；ＥＤＴＡまたはグルタチオン等のキレート剤；アジュバント（例えば水酸化アルミニウム）；および保存剤を含んでもよい。

別の態様では、本発明は、
ａ）第１のＣＡＲと第２のＣＡＲとを含む免疫細胞であって、
第１のＣＡＲが、
ｉ）タグ付きポリペプチドのタグに特異的な第１の抗原結合ドメインであって、前記ポリペプチドが、ＣＤ９０またはＣＤ３２６に特異的な抗原結合ドメインを有する、第１の抗原結合ドメイン
ｉｉ）膜貫通ドメイン
ｉｉｉ）第１の細胞内シグナル伝達ドメイン
を含み、
前記第１の細胞内シグナル伝達ドメインが、免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を含む１次シグナル伝達ドメインであり、前記第１の細胞内シグナル伝達ドメインが共刺激ドメインを含まず、
第２のＣＡＲが、
ｉ）前記タグ付きポリペプチドがＣＤ９０に特異的に結合する場合には、ＣＤ３２６に特異的な第２の抗原結合ドメイン、または前記タグ付きポリペプチドがＣＤ３２６に特異的に結合する場合には、ＣＤ９０に特異的な第２の抗原結合ドメイン
ｉｉ）膜貫通ドメイン
ｉｉｉ）第２の細胞内シグナル伝達ドメイン
を含み、
前記第２の細胞内シグナル伝達ドメインが、１つまたは複数の共刺激シグナル伝達ドメインを含む、免疫細胞、
ｂ）前記タグ付きポリペプチド
を含む組成物を提供する。

前記組成物であって、前記第１のシグナル伝達ドメインが前記タグによって活性化され、前記第２のシグナル伝達ドメインが前記ＣＤ９０またはＣＤ３２６によって活性化される場合にのみ、前記免疫細胞が最大細胞毒性となる、組成物。

ＣＤ９０とＣＤ３２６とを共発現しているがん性細胞を含むヒトがんの処置に使用するための、前記組成物。

ＣＤ９０とＣＤ３２６とを共発現しているがん性細胞を含むヒト卵巣がんの処置に使用するための、前記組成物。

医薬として許容されるキャリアを任意選択的に含む医薬組成物である、前記組成物。

別の態様では、本発明は、
ａ）第１のＣＡＲと第２のＣＡＲとを含む免疫細胞であって、
第１のＣＡＲが、
ｉ）ＣＤ９０またはＣＤ３２６に特異的な第１の抗原結合ドメイン
ｉｉ）膜貫通ドメイン
ｉｉｉ）第１の細胞内シグナル伝達ドメイン
を含み、
前記第１の細胞内シグナル伝達ドメインが、免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を含む１次シグナル伝達ドメインであり、前記第１の細胞内シグナル伝達ドメインが共刺激ドメインを含まず、
第２のＣＡＲが、
ｉ）タグ付きポリペプチドのタグ（ｔａｇｇｅｄ）に特異的な第２の抗原結合ドメインであって、第１のＣＡＲの第１の抗原結合ドメインがＣＤ９０に特異的である場合には、前記ポリペプチドがＣＤ３２６に特異的な抗原結合ドメインを有する、第２の抗原結合ドメイン、またはタグ付きポリペプチドに特異的な第２の抗原結合ドメインであって、第１のＣＡＲの第１の抗原結合ドメインがＣＤ３２６に特異的である場合には、前記ポリペプチドがＣＤ９０に特異的な抗原結合ドメインを有する、第２の抗原結合ドメイン
ｉｉ）膜貫通ドメイン
ｉｉｉ）第２の細胞内シグナル伝達ドメイン
を含み、
前記第２の細胞内シグナル伝達ドメインが、１つまたは複数の共刺激シグナル伝達ドメインを含む、免疫細胞、
ｂ）前記タグ付きポリペプチド
を含む組成物を提供する。

前記組成物であって、前記第１のシグナル伝達ドメインが前記ＣＤ９０またはＣＤ３２６によって活性化され、前記第２のシグナル伝達ドメインが前記タグによって活性化される場合にのみ、前記免疫細胞が最大細胞毒性となる、組成物。

別の態様では、本発明は、
ａ）第１のＣＡＲと第２のＣＡＲとを含む免疫細胞であって、
第１のＣＡＲが、
ｉ）第１のタグ付きポリペプチドの第１のタグに特異的な第１の抗原結合ドメインであって、前記第１のポリペプチドが、ＣＤ９０またはＣＤ３２６に特異的な抗原結合ドメインを有する、第１の抗原結合ドメイン
ｉｉ）膜貫通ドメイン
ｉｉｉ）第１の細胞内シグナル伝達ドメイン
を含み、
前記第１の細胞内シグナル伝達ドメインが、免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を含む１次シグナル伝達ドメインであり、前記第１の細胞内シグナル伝達ドメインが共刺激ドメインを含まず、
第２のＣＡＲが、
ｉ）第２のタグ付きポリペプチドの第２のタグに特異的な第２の抗原結合ドメインであって、前記第１のタグ付きポリペプチドがＣＤ９０に特異的に結合する場合には、前記第２のポリペプチドがＣＤ３２６に特異的な抗原結合ドメインを有する、第２の抗原結合ドメイン、または第２のタグ付きポリペプチドに特異的な第２の抗原結合ドメインであって、前記第１のタグ付きポリペプチドがＣＤ３２６に特異的に結合する場合には、前記第２のポリペプチドがＣＤ９０に特異的な抗原結合ドメインを有する、第２の抗原結合ドメイン
ｉｉ）膜貫通ドメイン
ｉｉｉ）第２の細胞内シグナル伝達ドメイン
を含み、
前記第２の細胞内シグナル伝達ドメインが、１つまたは複数の共刺激シグナル伝達ドメインを含む、免疫細胞、
ｂ）前記第１のタグ付きポリペプチドおよび
ｃ）前記第２のタグ付きポリペプチド
を含む組成物を提供する。

前記組成物は、前記第１のシグナル伝達ドメインと前記第２のシグナル伝達ドメインとの両方が、前記第１のタグおよび前記第２のタグによってそれぞれ活性化される場合にのみ、前記免疫細胞が最大細胞毒性となる、組成物。

別の態様では、本発明は、
ａ）ＣＤ９０に特異的な抗原結合ドメインを有する、タグ付き第１のポリペプチド、
ｂ）ＣＤ３２６に特異的な抗原結合ドメインを有する、タグ付き第２のポリペプチドであって、第１のポリペプチドのタグと第２のポリペプチドのタグとが同一である、タグ付き第２のポリペプチド、
ｃ）ＣＡＲを含み、ＣＡＲが、
ｉ）第１のポリペプチドおよび第２のポリペプチドの前記タグに特異的な抗原結合ドメイン、
ｉｉ）膜貫通ドメイン
ｉｉｉ）１次シグナル伝達ドメインと少なくとも１つの共刺激ドメインとを含む、細胞内シグナル伝達ドメイン
を含む、免疫細胞
を含む組成物を提供する。

ＣＤ９０に特異的なタグ付きポリペプチドの前記抗原結合ドメインは、配列番号１および配列番号２を含んでもよい。

ＣＤ３２６に特異的なタグ付きポリペプチドの前記抗原結合ドメインは、配列番号３および配列番号４を含んでもよい。

前記組成物であって、前記タグ付き第１のポリペプチドの濃度が、前記免疫細胞に発現した前記ＣＡＲの活性化閾値未満であり、前記タグ付き第２のポリペプチドの濃度が、前記免疫細胞に発現した前記ＣＡＲの活性化閾値未満であり、タグ付き第１のポリペプチドとタグ付き第２のポリペプチドとを組み合わせた濃度が、前記免疫細胞に発現した前記ＣＡＲの活性化閾値を上回る、組成物。

別の態様では、本発明は、ＣＤ９０とＣＤ３２６とを共発現しているがん性細胞を含むヒトがんを患う対象を処置するための方法であって、
ａ）前記対象に抗体薬物複合体（ＡＤＣ）を投与するステップであって、前記ＡＤＣが、ＣＤ９０および前記ＣＤ３２６に特異的な二重特異性抗体またはその抗原結合フラグメントを含み、前記二重特異性抗体またはその抗原結合フラグメントが、薬物に結合されている、ステップ
を含む、方法を提供する。

別の態様では、本発明は、ＣＤ９０とＣＤ３２６とを共発現しているがん性細胞を含むヒトがんを患う対象を処置するための方法であって、
ａ）前記対象に、第１のＣＡＲと第２のＣＡＲとを含む免疫細胞を投与するステップであって、
第１のＣＡＲが、
ｉ）ＣＤ９０またはＣＤ３２６に特異的な第１の抗原結合ドメイン
ｉｉ）膜貫通ドメイン
ｉｉｉ）第１の細胞内シグナル伝達ドメイン
を含み、
前記第１の細胞内シグナル伝達ドメインが、免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を含む１次シグナル伝達ドメインであり、前記第１の細胞内シグナル伝達ドメインが共刺激ドメインを含まず、
第２のＣＡＲが、
ｉ）第１のＣＡＲの第１の抗原結合ドメインがＣＤ９０に特異的である場合には、ＣＤ３２６に特異的な第２の抗原結合ドメイン、または第１のＣＡＲの第１の抗原結合ドメインがＣＤ２３６に特異的である場合には、ＣＤ９０に特異的な第２の抗原結合ドメイン
ｉｉ）膜貫通ドメイン
ｉｉｉ）第２の細胞内シグナル伝達ドメイン
を含み、
前記第２の細胞内シグナル伝達ドメインが、１つまたは複数の共刺激シグナル伝達ドメインを含む、ステップ
を含む、方法を提供する。

前記方法は、前記第１のシグナル伝達ドメインと前記第２のシグナル伝達ドメインとの両方が、前記ＣＤ９０およびＣＤ３２６によってそれぞれ活性化される場合にのみ、前記免疫細胞が最大細胞毒性となる。

別の態様では、本発明は、ＣＤ９０とＣＤ３２６とを共発現しているがん性細胞を含むヒトがんを患う対象を処置するための方法であって、
ａ）前記対象に、第１のＣＡＲと第２のＣＡＲとを含む免疫細胞を投与するステップであって、
第１のＣＡＲが、
ｉ）タグ付きポリペプチドのタグに特異的な第１の抗原結合ドメインであって、前記ポリペプチドが、ＣＤ９０またはＣＤ３２６に特異的な抗原結合ドメインを有する、第１の抗原結合ドメイン
ｉｉ）膜貫通ドメイン
ｉｉｉ）第１の細胞内シグナル伝達ドメイン
を含み、
前記第１の細胞内シグナル伝達ドメインが、免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を含む１次シグナル伝達ドメインであり、前記第１の細胞内シグナル伝達ドメインが共刺激ドメインを含まず、
第２のＣＡＲが、
ｉ）前記タグ付きポリペプチドがＣＤ９０に特異的に結合する場合には、ＣＤ３２６に特異的な第２の抗原結合ドメイン、または前記タグ付きポリペプチドがＣＤ３２６に特異的に結合する場合には、ＣＤ９０に特異的な第２の抗原結合ドメイン
ｉｉ）膜貫通ドメイン
ｉｉｉ）第２の細胞内シグナル伝達ドメイン
を含み、
前記第２の細胞内シグナル伝達ドメインが、１つまたは複数の共刺激シグナル伝達ドメインを含む、ステップ
ｂ）前記対象に前記タグ付きポリペプチドを投与するステップ
を含む、方法を提供する。

前記方法であって、前記第１のシグナル伝達ドメインが前記タグによって活性化され、前記第２のシグナル伝達ドメインが前記ＣＤ９０またはＣＤ３２６によって活性化される場合にのみ、前記免疫細胞が最大細胞毒性となる、方法。

前記方法のステップａ）とステップｂ）とが同時に行われてもよく、ステップａ）の後にステップｂ）、またはステップａ）の前にステップｂ）が行われてもよい。

別の態様では、本発明は、ＣＤ９０とＣＤ３２６とを共発現しているがん性細胞を含むヒトがんを患う対象を処置するための方法であって、
ａ）前記対象に、第１のＣＡＲと第２のＣＡＲとを含む免疫細胞を投与するステップであって、
第１のＣＡＲが、
ｉ）ＣＤ９０またはＣＤ３２６に特異的な第１の抗原結合ドメイン
ｉｉ）膜貫通ドメイン
ｉｉｉ）第１の細胞内シグナル伝達ドメイン
を含み、
前記第１の細胞内シグナル伝達ドメインが、免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を含む１次シグナル伝達ドメインであり、前記第１の細胞内シグナル伝達ドメインが共刺激ドメインを含まず、
第２のＣＡＲが、
ｉ）タグ付きポリペプチドのタグに特異的な第２の抗原結合ドメインであって、第１のＣＡＲの第１の抗原結合ドメインがＣＤ９０に特異的である場合には、前記ポリペプチドがＣＤ３２６に特異的な抗原結合ドメインを有する、第２の抗原結合ドメイン、またはタグ付きポリペプチドに特異的な第２の抗原結合ドメインであって、第１のＣＡＲの第１の抗原結合ドメインがＣＤ３２６に特異的である場合には、前記ポリペプチドがＣＤ９０に特異的な抗原結合ドメインを有する、第２の抗原結合ドメイン
ｉｉ）膜貫通ドメイン
ｉｉｉ）第２の細胞内シグナル伝達ドメイン
を含み、
前記第２の細胞内シグナル伝達ドメインが、１つまたは複数の共刺激シグナル伝達ドメインを含む、ステップ
ｂ）前記対象に前記タグ付きポリペプチドを投与するステップ
を含む、方法を提供する。

前記方法であって、前記第１のシグナル伝達ドメインが前記ＣＤ９０またはＣＤ３２６によって活性化され、前記第２のシグナル伝達ドメインが前記タグによって活性化される場合にのみ、前記免疫細胞が最大細胞毒性となる、方法。

別の態様では、本発明は、ＣＤ９０とＣＤ３２６とを共発現しているがん性細胞を含むヒトがんを患う対象を処置するための方法であって、
ａ）前記対象に、第１のＣＡＲと第２のＣＡＲとを含む免疫細胞を投与するステップであって、
第１のＣＡＲが、
ｉ）第１のタグ付きポリペプチドの第１のタグに特異的な第１の抗原結合ドメインであって、前記第１のポリペプチドが、ＣＤ９０またはＣＤ３２６に特異的な抗原結合ドメインを有する、第１の抗原結合ドメイン
ｉｉ）膜貫通ドメイン
ｉｉｉ）第１の細胞内シグナル伝達ドメイン
を含み、
前記第１の細胞内シグナル伝達ドメインが、免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を含む１次シグナル伝達ドメインであり、前記第１の細胞内シグナル伝達ドメインが共刺激ドメインを含まず、
第２のＣＡＲが、
ｉ）第２のタグ付きポリペプチドの第２のタグに特異的な第２の抗原結合ドメインであって、前記第１のタグ付きポリペプチドがＣＤ９０に特異的に結合する場合には、前記第２のポリペプチドがＣＤ３２６に特異的な抗原結合ドメインを有する、第２の抗原結合ドメイン、または第２のタグ付きポリペプチドに特異的な第２の抗原結合ドメインであって、前記第１のタグ付きポリペプチドがＣＤ３２６に特異的に結合する場合には、前記第２のポリペプチドがＣＤ９０に特異的な抗原結合ドメインを有する、第２の抗原結合ドメイン
ｉｉ）膜貫通ドメイン
ｉｉｉ）第２の細胞内シグナル伝達ドメイン
を含み、
前記第２の細胞内シグナル伝達ドメインが、１つまたは複数の共刺激シグナル伝達ドメインを含む、ステップ
ｂ）前記対象に前記第１のタグ付きポリペプチドを投与するステップ、および
ｃ）前記対象に前記第２のタグ付きポリペプチドを投与するステップ
を含む、方法を提供する。

前記方法であって、前記第１のシグナル伝達ドメインと前記第２のシグナル伝達ドメインとの両方が、前記第１のタグおよび前記第２のタグによってそれぞれ活性化される場合にのみ、前記免疫細胞が最大細胞毒性となる、方法。

前記方法のステップａ）、ｂ）、およびｃ）は、任意の順序で行うことができる。

別の態様では、本発明は、ＣＤ９０とＣＤ３２６とを共発現しているがん性細胞を含むヒトがんを患う対象を処置するための方法であって、
ａ）前記対象に、ＣＤ９０に特異的な抗原結合ドメインを有する、タグ付き第１のポリペプチドを投与するステップ、および
ｂ）前記対象に、ＣＤ３２６に特異的な抗原結合ドメインを有する、タグ付き第２のポリペプチドを投与するステップであって、第１のポリペプチドのタグと第２のポリペプチドのタグとが同一である、ステップ、および
ｃ）前記対象に、ＣＡＲを含み、ＣＡＲが、
ｉ）第１のポリペプチドおよび第２のポリペプチドの前記タグに特異的な抗原結合ドメイン、
ｉｉ）膜貫通ドメイン
ｉｉｉ）１次シグナル伝達ドメインと少なくとも１つの共刺激ドメインとを含む、細胞内シグナル伝達ドメイン
を含む、免疫細胞を投与するステップ
を含む、方法を提供する。

前記方法であって、前記タグ付き第１のポリペプチドの濃度が、前記免疫細胞に発現した前記ＣＡＲの活性化閾値未満であり、前記タグ付き第２のポリペプチドの濃度が、前記免疫細胞に発現した前記ＣＡＲの活性化閾値未満であり、タグ付き第１のポリペプチドとタグ付き第２のポリペプチドとを組み合わせた濃度が、前記免疫細胞に発現した前記ＣＡＲの活性化閾値を上回る、方法。

本発明の一実施形態では、本明細書に開示されるそれぞれＣＤ９０およびＣＤ３２６に特異的な第１および第２のＣＡＲを発現している免疫細胞は、ＣＤ９０とＣＤ３２６とを共発現しているがん性細胞を含むがん、例えばヒト卵巣がんを患う対象において、がんの処置に使用するためのものである。対象の免疫細胞、例えばＴ細胞またはＮＫ細胞が単離される。対象は、前記がんを患っていてもよく、健康な対象であってもよい。これらの細胞を、ｉｎｖｉｔｒｏまたはｉｎｖｉｖｏにおいて遺伝子改変して、前記ＣＡＲを発現させる。これらの操作された細胞は、ｉｎｖｉｔｒｏまたはｉｎｖｉｖｏにおいて、活性化および増殖させることができる。細胞療法では、これらの操作された細胞が、それを必要とするレシピエントに注入される。これらの細胞は、医薬組成物（前記細胞＋医薬として許容されるキャリア）でありうる。注入される細胞は、レシピエント中のＣＤ９０とＣＤ３２６とを発現しているがん性細胞を死滅（または少なくともその増殖を停止）させることができる。レシピエントは、細胞を入手した対象と同じであってもよく（自家細胞療法）、同じ種の別の対象由来であってもよい。

免疫細胞、優先的には前記ＣＡＲを発現するように操作されたＴ細胞またはＮＫ細胞は、単独で、または希釈剤および／または他の成分、例えばＩＬ－２もしくは他のサイトカインもしくは細胞集団と組み合わせた医薬組成物としてのいずれかで投与されうる。簡潔に述べれば、本発明の医薬組成物は、本明細書に記載する遺伝子改変細胞の細胞集団を、１種または複数の医薬としてまたは生理学的に許容されるキャリア、希釈剤、または賦形剤と組み合わせて含んでもよい。このような組成物は、緩衝液、例えば、中性緩衝生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水等の緩衝液；グルコース、マンノース、スクロースまたはデキストラン、マンニトール等の炭水化物；タンパク質；ポリペプチドまたはグリシン等のアミノ酸；酸化防止剤；ＥＤＴＡまたはグルタチオン等のキレート剤；アジュバント（例えば水酸化アルミニウム）；および保存剤を含んでもよい。

優先的には、本発明の組成物は、静脈内投与のために配合される。細胞組成物の対象への投与は、任意の都合のよい、当技術分野において公知の方法で行うことができる。

本発明の医薬組成物は、処置する疾病に適当な方法で投与することができる。適当な投与量は、臨床試験によって決定することができる。しかしながら、投与の量および頻度はまた、患者の状態、ならびに患者の疾病のタイプおよび重症度等の要因によって決定され、これらの影響を受けることになる。

本明細書に開示される免疫細胞、優先的にはＴ細胞またはＮＫ細胞を含む医薬組成物は、１０^４～１０^９細胞／ｋｇ体重、好ましくは１０^５～１０^６細胞／ｋｇ体重の投与量において投与されうる。細胞組成物はまた、これらの投与量において複数回投与してもよい。細胞の組成物は、腫瘍、リンパ節、または感染症の箇所に直接注射してもよい。

細胞は、当技術分野において公知の方法を使用して、活性化および治療有効量に増殖させることができる。

本発明の細胞は、例えば、化学療法、放射線、免疫抑制剤、抗体、または抗体療法と組み合わせて使用してもよい。

別の実施形態では、ａ）本明細書に開示されるＣＤ９０またはＣＤ３２６に特異的な第１のＣＡＲと、本明細書に開示されるタグ付きポリペプチドのタグに特異的な第２のＣＡＲ（「抗タグＣＡＲ」）とを共発現している免疫細胞、およびｂ）本明細書に開示されるＣＤ９０またはＣＤ３２６に特異的に結合している前記ポリペプチドを含む組成物は、がんを患う対象における処置に使用するためのものであってもよく、前記がんは、ＣＤ９０とＣＤ３２６とを共発現しているがん性細胞を含む。対象の免疫細胞、例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞等の細胞は、単離してもよく、樹立された免疫細胞株を使用してもよい。対象は、前記がんを患っていてもよく（患者）、健康な対象であってもよい。これらの免疫細胞をｉｎｖｉｔｒｏで遺伝子改変して、本明細書に開示されるＣＡＲを発現させる。これらの操作された細胞をｉｎｖｉｔｒｏで活性化および増殖させて、治療上有効な発現細胞の集団にしてもよい。細胞療法では、第２の医薬組成物、本明細書に開示されるタグ付きポリペプチドの配合物に加えて、これらの操作された細胞を、医薬組成物（または前記ＣＡＲ発現細胞の治療有効集団の配合物）として、それを必要とするレシピエントに注入することができる。レシピエントに注入された細胞は、本明細書に開示されるＣＡＲによって認識される抗原を発現しているがん性細胞を、死滅（または少なくともその増殖を停止）させることができうる。レシピエントは、細胞を入手した対象と同じであってもよく（自家細胞療法）、同じ種の別の対象由来であってもよい（同種細胞療法）。

前記ＣＡＲ発現細胞の治療有効集団は、タグ付きポリペプチドの配合物を対象に投与する前に、患者に投与してもよい。あるいは、タグ付きポリペプチドの配合物を、前記ＣＡＲ発現細胞の治療有効集団を対象に投与する前、または同時に、対象に投与してもよい。さらなるバリエーションとしては、対象に投与する前に、タグ付きポリペプチドの配合物のタグ付きポリペプチドとともに、前記ＣＡＲ発現細胞の治療有効集団をｉｎｖｉｔｒｏで培養することが挙げられる。

前記ＣＡＲ発現（免疫）細胞の集団は、当業者に公知の技法を使用して、対象に投与するために製剤されていてもよい。

前記ＣＡＲ発現細胞の治療有効集団を含む配合物は、医薬として許容される賦形剤（キャリアまたは希釈剤）を含んでもよい。配合物に含まれる賦形剤は、例えば、抗タグＣＡＲのタグ結合ドメインの性質、使用する免疫細胞の（分）集団、および投与の様式に応じて、異なる目的を有することになる。一般に使用される賦形剤の例としては、限定するものではないが、生理食塩水、緩衝生理食塩水、デキストロース、注射用水、グリセロール、エタノール、およびこれらの組み合わせ、安定剤、可溶化剤、および界面活性剤、緩衝液、および保存剤、等張化剤、増量剤、および潤滑剤が挙げられる。

前記ＣＡＲ発現細胞の治療有効集団の配合物は、前記ＣＡＲ発現（免疫）細胞の１つの集団を含んでもよく、前記ＣＡＲ発現（免疫）細胞の２つ以上の集団を含んでもよい。前記ＣＡＲ発現（免疫）細胞の異なる集団は、タグ結合ドメインの同一性、活性化ドメインの同一性、免疫細胞の（分）集団の同一性、またはこれらの組み合わせに基づいて、多様でありうる。

前記ＣＡＲ発現細胞の治療有効集団を含む配合物は、当業者に公知の様式および技法を使用して、対象に投与することができる。例示的な様式としては、限定するものではないが、静脈内注射が挙げられる。他の様式としては、限定するものではないが、腫瘍内、皮内、皮下（ｓ．ｃ、ｓ．ｑ．、ｓｕｂ－Ｑ、Ｈｙｐｏ）、筋肉内（ｉ．ｍ．）、腹腔内（ｉ．ｐ．）、動脈内、髄内、心臓内、関節（ａｒｔｉｃｕｌａｒ、ｊｏｉｎｔ）内、滑液内（関節液領域）、頭蓋内、脊髄内、およびくも膜下（脊髄液）が挙げられる。

対象に投与する、前記ＣＡＲ発現細胞の治療有効集団を含む配合物は、特定の適応症または障害を処置するのに有効な免疫細胞等、複数の前記ＣＡＲ発現細胞を含む。

一般に、約１×１０^４個から約１×１０^１０個の間のＣＡＲ発現細胞、例えば免疫細胞を含む配合物が投与されうる。ほとんどの場合、配合物は、約１×１０^５個から約１×１０^９個の間のＣＡＲ発現細胞、例えば免疫細胞、約５×１０^５個～約５×１０^８個のＣＡＲ発現細胞、例えば免疫細胞、または約１×１０^６個～約１×１０^７個のＣＡＲ発現細胞、例えば免疫細胞を含みうる。しかしながら、対象に投与するＣＡＲ発現細胞、例えば免疫細胞の数は、障害の位置、発生源、同一性、範囲および重症度、処置する個体の年齢および状態等に応じて、広い区域の間で多様であってよい。医師が、最終的に、使用する適当な投与量を決定しうる。

本明細書に開示されるタグ付きポリペプチドを、当業者に公知の技法を使用して、対象に投与するために配合してもよい。タグ付きポリペプチドの配合物は、医薬として許容される賦形剤（キャリアまたは希釈剤）を含んでもよい。配合物に含まれる賦形剤は、例えば、タグの性質、タグ付きポリペプチドの抗原結合ドメイン、および投与の様式に応じて、異なる目的を有することになる。一般に使用される賦形剤の例としては、限定するものではないが、生理食塩水、緩衝生理食塩水、デキストロース、注射用水、グリセロール、エタノール、およびこれらの組み合わせ、安定剤、可溶化剤、および界面活性剤、緩衝液、および保存剤、等張化剤、増量剤、および潤滑剤が挙げられる。

タグ付きポリペプチドの配合物は、１つのタイプのタグ付きポリペプチドを含んでもよく、２つ以上のタイプのタグ付きポリペプチドを含んでもよい。異なるタイプのタグ付きポリペプチドは、タグの同一性、タグ付きポリペプチドの抗原結合部分、またはこれらの組み合わせに基づいて、多様でありうる。

タグ付きポリペプチドは、当業者に公知の様式および技法を使用して、対象に投与することができる。例示的な様式としては、限定するものではないが、静脈内、腹腔内、および腫瘍内注射が挙げられる。他の様式としては、限定するものではないが、皮内、皮下（ｓ．ｃ、ｓ．ｑ．、ｓｕｂ－Ｑ、Ｈｙｐｏ）、筋肉内（ｉ．ｍ．）、動脈内、髄内、心臓内、関節（ａｒｔｉｃｕｌａｒ、ｊｏｉｎｔ）内、滑液内（関節液領域）、頭蓋内、脊髄内、およびくも膜下（脊髄液）が挙げられる。

ポリペプチドを含む配合物は、特定の適応症または障害を処置するのに有効な量で、対象に投与される。一般に、少なくとも約１μｇ／ｋｇ体重～約１００ｍｇ／ｋｇ体重のタグ付きポリペプチドを含む配合物が、処置を必要とする対象に投与されうる。ほとんどの場合、投与量は、投与の経路、症状等を考慮して、１日当たり約１００μｇ／ｋｇ体重～約１０ｍｇ／ｋｇ体重のタグ付きポリペプチドでありうる。対象に投与する配合物中のタグ付きポリペプチドの量は、障害の位置、発生源、同一性、範囲および重症度、処置する個体の年齢および状態等に応じて、広い区域の間で多様であってよい。医師が、最終的に、使用する適当な投与量を決定しうる。

ＣＡＲ発現細胞配合物とタグポリペプチド配合物との投与間のタイミングは、使用する（免疫）細胞のタイプ、ＣＡＲの結合特異性、タグの同一性、タグ付きポリペプチドの抗原結合部分、標的細胞、例えば処置するがん細胞の同一性、対象における標的細胞の位置、配合物を対象に投与するのに使用する手段、ならびに処置する対象の健康状態、年齢および体重を含む要因に応じて、広範囲にわたってもよい。実際に、タグ付きポリペプチド配合物は、遺伝子操作（免疫）細胞配合物の前に、同時に、または後に投与してもよい。

処置する障害に応じて、ＣＡＲ発現細胞配合物を投与するステップ、もしくはタグ付きポリペプチド配合物を投与するステップ、または両方を、２回以上繰り返すことができる。タグ付きポリペプチドの配合物が２種以上対象に適用されうる場合、適用する配合物は、同じタグ付きポリペプチドを含んでも、異なるタグ付きポリペプチドを含んでもよい。本発明のＣＡＲを発現している免疫細胞等の操作された細胞の配合物が２種以上対象に適用される場合、操作された細胞は、同じ細胞タイプのものであっても、異なる細胞タイプのものであってもよく、例えばＴ細胞および／またはＮＫ細胞のものであってもよい。免疫細胞等の細胞の配合物はまた、それぞれが本発明のＣＡＲを発現している、２種以上の細胞タイプを含んでもよい。

本明細書に開示される本発明の第１の態様について本明細書に規定するすべての定義、特徴、および実施形態は、本明細書に開示される本発明の他の態様の文脈においても、必要な変更を加えて適用される。

本発明の上記応用および実施形態に加えて、本発明のさらなる実施形態を以下に記載するが、これらの実施形態に限定することは意図されない。

実施形態
本発明の一実施形態では、Ｔ細胞は、ＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメインを有するＣＤ９０－ＣＡＲ（本明細書に開示される第１のＣＡＲ）と、４－１ＢＢ共刺激ドメインを有するＣＤ３２６－ＣＡＲ（本明細書に開示される第２のＣＡＲ）とを発現する。Ｔ細胞は、ＣＤ９０とＣＤ３２６とを共発現する卵巣がんを患うヒト患者によって提供され、前記ＣＡＲを発現するように遺伝子改変されている。

前記遺伝子改変Ｔ細胞を治療有効量にｉｎ－ｖｉｔｒｏ増殖させた後、ＣＤ９０ＣＡＲとＣＤ３２６ＣＡＲとの両方を発現しているＴ細胞は、前記患者に適用されうるが、これらの遺伝子改変Ｔ細胞は、ＣＤ９０とＣＤ３２６とを共発現するがん性細胞によって活性化し、続いて前記がん性細胞を排除することになる。

本発明の一実施形態では、組成物は、ＣＤ９０に特異的に結合するビオチン化抗体またはその抗原結合フラグメント、ＣＤ３２６に特異的に結合するビオチン化抗体またはその抗原結合フラグメント、およびビオチンに特異的なＣＡＲを発現するＴ細胞を含む。Ｔ細胞は、ＣＤ９０とＣＤ３２６とを共発現する卵巣がんを患うヒト患者によって提供され、ビオチンに特異的な前記ＣＡＲを発現するように遺伝子改変されている。

前記組成物は前記患者に適用されうるが、ＣＤ９０に特異的に結合するビオチン化抗体またはその抗原結合フラグメントの単独濃度、およびＣＤ３２６に特異的に結合するビオチン化抗体またはその抗原結合フラグメントの単独濃度は、抗ビオチンＣＡＲを発現している前記Ｔ細胞を活性化するには低すぎ、しかし前記濃度の和は遺伝子改変Ｔ細胞を活性化するのに十分であり、これによって、前記がん性細胞が排除される。

本発明の一実施形態では、組成物は、ＣＤ９０に特異的に結合するビオチン化抗体またはその抗原結合フラグメント、ＣＤ３２６に特異的に結合するビオチン化抗体またはその抗原結合フラグメント、およびビオチンに特異的なＣＡＲを発現するＮＫ細胞を含む。ＮＫ細胞は、ＣＤ９０とＣＤ３２６とを共発現する卵巣がんを患うヒト患者によって提供され、ビオチンに特異的な前記ＣＡＲを発現するように遺伝子改変されている。

前記組成物は前記患者に適用されうるが、ＣＤ９０に特異的に結合するビオチン化抗体またはその抗原結合フラグメントの単独濃度、およびＣＤ３２６に特異的に結合するビオチン化抗体またはその抗原結合フラグメントの単独濃度は、抗ビオチンＣＡＲを発現している前記ＮＫ細胞を活性化するには低すぎ、しかし前記濃度の和は遺伝子改変ＮＫ細胞を活性化するのに十分であり、これによって、前記がん性細胞が排除される。

定義
別段の定義がない限り、本明細書において使用される技術用語および科学用語は、この発明が属する技術分野における当業者によって通例理解されるものと同じ意味を有する。

本明細書において使用される場合、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」または「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」という用語は、組成物、方法、およびその各成分への言及に使用され、これらは方法または組成物に不可欠であるが、不特定の要素を含むことには、不可欠であろうとなかろうと制限はない。

抗体薬物複合体（ＡＤＣ）：細胞毒性剤等の薬物に結合されている抗体（または抗体の抗原結合フラグメント）を含む分子。ＡＤＣは、細胞表面に発現した腫瘍抗原に対する抗体の特異的結合を通じて、薬物をがん細胞に特異的に標的化するために使用することができる。ＡＤＣによって使用するための例示的な薬物としては、微小管阻害剤（メイタンシノイド、アウリスタチンＥ、およびアウリスタチンＦ等）、ならびにストランド間架橋剤（例えばピロロベンゾジアゼピン；ＰＤＢ）が挙げられる。

微小管阻害剤：有糸分裂を停止させることによって、細胞増殖を阻止する薬剤のタイプ。微小管阻害剤は、「有糸分裂阻害剤」とも呼ばれ、がんを処置するために使用される。

二重特異性モノクローナル抗体（ＢｓＭＡｂ、ＢｓＡｂ）は、２つの異なるタイプの抗原に同時に結合することができる、人工タンパク質である。ＢｓＭａｂは、複数の構造フォーマットにおいて製造することができ、現在の用途は、がんの免疫療法および薬物送達のために探究されている。多くのｂｓＭａｂのフォーマットがあるが、２つの主なカテゴリはＩｇＧ様および非ＩｇＧ様である。主な製造方法のタイプはクアドローマ、化学的結合、および遺伝子組み換えであり、各方法は特有のフォーマットをもたらす。

一般に、ＣＡＲは、抗原結合ドメインを含む細胞外ドメイン（細胞外部分）、膜貫通ドメイン、および細胞質シグナル伝達ドメイン（細胞内シグナル伝達ドメイン）を含みうる。細胞外ドメインは、リンカーまたはスペーサーによって、膜貫通ドメインに連結されうる。細胞外ドメインはまた、シグナルペプチドを含んでもよい。本発明のいくつかの実施形態では、ＣＡＲの抗原結合ドメインは、ポリペプチドに連結されたタグまたはハプテン（「ハプテン化」または「タグ付き」ポリペプチド）に結合し、ポリペプチドは、疾病関連抗原、例えばがん細胞の表面に発現しうる腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）、ここではＣＤ９０またはＣＤ３２６に結合しうる。

このようなＣＡＲは、例えば米国特許第９２３３１２５（Ｂ２）号に開示されるように、「抗タグ」ＣＡＲまたは「アダプターＣＡＲ」または「ユニバーサルＣＡＲ」とも呼ばれうる。

ハプテンまたはタグは、ポリペプチドに直接連結されても間接的に連結されてもよく（タグ付きポリペプチド）、ポリペプチドは、標的、例えば、ＣＤ９０とＣＤ３２６とを共発現するがん性細胞の（細胞）表面に発現した前記疾病関連抗原に結合しうる。タグは、例えばデキストランまたはハプテン、例えば、ビオチン、またはフルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）、またはフィコエリスリン（ＰＥ）、またはチアミンであってもよいが、タグはまた、タグ付きポリペプチドのポリペプチド部分に、例えば化学的または組み換えによって連結される、ペプチド配列であってもよい。タグはまた、ストレプトアビジンであってもよい。タグ付きポリペプチドのタグ部位は、もっぱら、ＣＡＲのタグに特異的な抗原結合ドメインが認識でき、特異的に結合できる分子であることによって制約される。例えば、タグがＦＩＴＣ（フルオレセインイソチオシアネート）である場合、タグ結合ドメインは抗ＦＩＴＣｓｃＦｖを構成しうる。あるいは、タグがビオチンまたはＰＥ（フィコエリスリン）である場合、タグ結合ドメインはそれぞれ、抗ビオチンｓｃＦｖまたは抗ＰＥｓｃＦｖを構成しうる。

「シグナルペプチド」とは、細胞内のタンパク質の、例えば、ある特定の細胞オルガネラ（小胞体等）および／または細胞表面への輸送および局在化を指示するペプチド配列を指す。

一般に、「抗原結合ドメイン」とは、抗原、例えば、腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）または腫瘍特異抗原（ＴＳＡ）に特異的に結合するＣＡＲの領域を指す。本発明のＣＡＲは、１つまたは複数の抗原結合ドメインを含んでもよい（例えばタンデムＣＡＲ）。一般に、ＣＡＲにおける標的化領域は、細胞外である。抗原結合ドメインは、抗体またはその抗原結合フラグメントを含んでもよい。抗原結合ドメインは、例えば、完全長重鎖、Ｆａｂフラグメント、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）フラグメント、二価一本鎖抗体、またはダイアボディを含んでもよい。所与の抗原に特異的に結合する任意の分子、例えば、アフィボディ、または自然に発生する受容体由来のリガンド結合ドメインを、抗原結合ドメインとして使用してもよい。多くの場合、抗原結合ドメインはｓｃＦｖである。通常、ｓｃＦｖでは、免疫グロブリン重鎖および軽鎖の可変領域は、可動性リンカーによって融合して、ｓｃＦｖを形成している。このようなリンカーは、例えば「（Ｇ_４／Ｓ）_３リンカー」でありうる。

いくつかの例では、抗原結合ドメインが、ＣＡＲを使用する種と同じ種に由来することは有益である。例えば、ヒトに治療的に使用する計画である場合、ＣＡＲの抗原結合ドメインは、ヒト抗体もしくはヒト化抗体、またはその抗原結合フラグメントを含むことが有益でありうる。ヒト抗体もしくはヒト化抗体、またはその抗原結合フラグメントは、当技術分野において周知の多様な方法によって作製することができる。

「スペーサー」または「ヒンジ」とは、本明細書において使用される場合、抗原結合ドメインと膜貫通ドメインとの間にある親水性領域を指す。本発明のＣＡＲは、細胞外スペーサードメインを含んでもよいが、このようなスペーサーを省くこともできる。スペーサーは、例えば、抗体のＦｃフラグメントもしくはその断片、抗体のヒンジ領域もしくはその断片、抗体のＣＨ２もしくはＣＨ３領域、アクセサリータンパク質、人工スペーサー配列、またはこれらの組み合わせを含んでもよい。スペーサーの傑出した例は、ＣＤ８アルファヒンジである。

ＣＡＲの膜貫通ドメインは、このようなドメインのための任意の望ましい天然または合成供給源に由来しうる。供給源が天然である場合、ドメインは、任意の膜結合または膜貫通タンパク質に由来しうる。膜貫通ドメインは、例えば、ＣＤ８アルファまたはＣＤ２８に由来しうる。重要なシグナル伝達モジュールおよび抗原認識モジュール（ドメイン）が２つ（さらにはより多く）のポリペプチド上にあるならば、ＣＡＲは、２つ（以上）の膜貫通ドメインを有してもよい。重要なシグナル伝達モジュールおよび抗原認識モジュールの分割によって、ＣＡＲの各ポリペプチドにおける小分子依存性ヘテロ二量体化ドメインに起因して、ＣＡＲ細胞発現を小分子依存、滴定可能、および可逆的に制御することができる（例えば、ＷＯ２０１４１２７２６１Ａ１）。

ＣＡＲの細胞質シグナル伝達ドメイン（細胞内シグナル伝達ドメインまたは活性化エンドドメイン）は、ＣＡＲを発現した免疫細胞の正常なエフェクター機能の少なくとも１つの活性化を司る。「エフェクター機能」とは細胞の特化した機能を意味し、例えば、Ｔ細胞では、エフェクター機能は、細胞溶解活性、またはサイトカインの分泌を含むヘルパー活性でありうる。細胞内シグナル伝達ドメインとは、エフェクター機能シグナルを伝達し、ＣＡＲを発現している細胞が特化機能を行うように指示する、タンパク質の部分を指す。細胞内シグナル伝達ドメインは、免疫細胞のエフェクター機能を惹起または阻止するシグナルを伝達するのに十分な、所与のタンパク質の細胞内シグナル伝達ドメインの完全、変異、または切断部分のいずれかを含んでもよい。

ＣＡＲに使用するための細胞内シグナル伝達ドメインの傑出した例としては、抗原受容体の関与に続いてシグナル伝達を惹起する、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）および共受容体の細胞質シグナル伝達配列が挙げられる。

一般に、Ｔ細胞の活性化は、２つの別個のクラスの細胞質シグナル伝達配列によって媒介することができ、第１に、ＴＣＲを通じて抗原依存性１次活性化を惹起する配列（１次細胞質シグナル伝達配列、１次細胞質シグナル伝達ドメイン）であり、第２に、抗原非依存的方法で作用して２次または共刺激シグナルを提供する配列（２次細胞質シグナル伝達配列、共刺激シグナル伝達ドメイン）である。そのため、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、１つもしくは複数の１次細胞質シグナル伝達ドメイン、および／または１つもしくは複数の２次細胞質シグナル伝達ドメインを含みうる。

刺激による方法で作用する１次細胞質シグナル伝達ドメイン（１次（細胞内）シグナル伝達ドメイン）は、ＩＴＡＭ（免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ）を含有しうる。

ＣＡＲにしばしば使用されるＩＴＡＭ含有１次細胞質シグナル伝達ドメインの例は、ＴＣＲζ（ＣＤ３ζ）、ＦｃＲガンマ、ＦｃＲベータ、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ５、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、およびＣＤ６６ｄに由来するものである。ＣＤ３ζに由来する配列が、最も傑出している。

ＣＡＲの細胞質ドメインは、単独で、または任意の他の所望の細胞質ドメインと組み合わせて、ＣＤ３ζシグナル伝達ドメインを含むように設計されうる。ＣＡＲの細胞質ドメインは、ＣＤ３ζ鎖部位と、共刺激シグナル伝達領域（ドメイン）とを含むことができる。共刺激シグナル伝達領域とは、共刺激分子の細胞内ドメインを含む、ＣＡＲの部分を指す。共刺激分子は、リンパ球が抗原に対して効率的に応答するのに必要な、抗原受容体またはそのリガンド以外の細胞表面分子である。共刺激分子の例は、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＰＤ－１、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原－１（ＬＦＡ－１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７－Ｈ３である。

ＣＡＲの細胞質シグナル伝達部分内の細胞質シグナル伝達配列同士は、リンカーありまたはなしで、ランダムのまたは特定の順序で、互いに連結されていてもよい。好ましくは２から１０個の間の長さのアミノ酸である、短いオリゴまたはポリペプチドリンカーが連結を形成しうる。傑出したリンカーは、グリシン－セリンのダブレットである。

例として、細胞質ドメインは、ＣＤ３ζのシグナル伝達ドメインおよびＣＤ２８のシグナル伝達ドメインを含んでもよい。別の例では、細胞質ドメインは、ＣＤ３ζのシグナル伝達ドメインおよびＣＤ１３７のシグナル伝達ドメインを含んでもよい。さらなる例として、細胞質ドメインは、ＣＤ３ζのシグナル伝達ドメイン、ＣＤ２８のシグナル伝達ドメイン、およびＣＤ１３７のシグナル伝達ドメインを含んでもよい。

前述の通り、ＣＡＲの細胞外部分または膜貫通ドメインまたは細胞質ドメインのいずれかは、ＣＡＲの重要なシグナル伝達モジュールおよび抗原認識モジュールを分割することを目的として、ヘテロ二量体化ドメインも含んでもよい。

ＣＡＲをさらに改変して、ＣＡＲをコードする核酸のレベルで、自殺スイッチによってＣＡＲ発現免疫細胞を排除するための１つまたは複数の操作要素を含ませてもよい。自殺スイッチとしては、例えば、アポトーシスを誘導するシグナル伝達カスケード、または細胞死を誘導する薬物を挙げることができる。一実施形態では、ＣＡＲを発現およびコードする核酸をさらに改変して、チミジンキナーゼ（ＴＫ）またはシトシンデアミナーゼ（ＣＤ）等の酵素を発現させることができる。ＣＡＲはまた、免疫細胞にＣＡＲを制御発現させる、遺伝子発現系の部分であってもよい。このような遺伝子発現系は、誘導性遺伝子発現系であってもよく、前記誘導性遺伝子発現系を形質導入されている細胞に誘導剤が投与される場合、遺伝子発現系が誘導され、前記ＣＡＲが前記伝達細胞の表面に発現する。

本発明のいくつかの実施形態では、ＣＡＲは、「ＳＵＰＲＡ」（分割、ユニバーサル、およびプログラム可能）ＣＡＲであってもよく、「ｚｉｐＣＡＲ」ドメインが、細胞内共刺激ドメインおよび細胞外ロイシンジッパーを連結してもよい（ＷＯ２０１７／０９１５４６）。このジッパーは、例えばｓｃＦｖ領域と融合した相補的ジッパーによって標的化されて、ＳＵＰＲＡＣＡＲＴ細胞を腫瘍特異的にしうる。このアプローチは、様々な腫瘍のためのユニバーサルＣＡＲＴ細胞を産生するために、特に有用であろう。アダプター分子を腫瘍特異性のために設計することができ、選択圧および抗原逃避の状況で重要となる、養子移入後に特異性を変更するための選択肢が提供されることになる。

キメラ共刺激受容体（ＣＣＲ）は、本明細書に開示される第２の抗原結合受容体であり、特別な種類のＣＡＲ（本明細書では正式に、免疫細胞中の第２のＣＡＲはＣＣＲである）として考えることができる。

「最大細胞毒性」という用語は、本明細書において使用される場合、第１のＣＡＲに加えて第２のＣＡＲが同時に活性化される場合にのみ、本明細書に開示される第１のＣＡＲと第２のＣＡＲとを発現している免疫細胞を、完全に活性化できることを意味する。前記免疫細胞は、両方の前記ＣＡＲのうちの一方のみの活性化では、十分に活性化できない。最大細胞毒性という用語は、本明細書において使用される場合、細胞傷害の可能な最大値または最大レベルに常に達しなければならないことを意味せず、例えば、最大値の５０％、６０％、７０％、８０％、または９０％に達すれば十分であるが、この値は、前記免疫細胞中の両方の前記ＣＡＲうちの一方のみの活性化によって達する値よりも、常に大きい。

あるいは、ＣＣＲが、第１のＣＡＲとＣＣＲ（第２のＣＡＲ）との両方を発現している免疫細胞のエフェクター応答の大きさを増強してもよく、生存期間の延長を促進してもよい。第１のＣＡＲとＣＣＲ（第２のＣＡＲ）との両方を発現している免疫細胞のエフェクター応答の増強の大きさは、第１のＣＡＲによって単独で活性化および刺激され、ＣＣＲによって増大していない免疫細胞のエフェクター応答と比較して、少なくとも１．５倍、少なくとも２倍、少なくとも５倍、少なくとも１０倍、少なくとも２０倍、少なくとも３０倍、少なくとも４０倍、または少なくとも５０倍でありうる。免疫細胞のエフェクター応答の大きさの増加は、例えば、ＩＬ－２、ＩＦＮ－γ、ＴＮＦ－α等のエフェクターサイトカインの分泌によって測定または判定することができる。

例えば、前記第１のＣＡＲとＣＣＲとの両方を発現している免疫細胞によるＩＬ－２、ＩＦＮ－γ、ＴＮＦ－α等のエフェクターサイトカインの分泌量は、前記第１のＣＡＲによって単独で活性化および刺激され、ＣＣＲによって増大していない免疫細胞のＩＬ－２、ＩＦＮ－γ、ＴＮＦ－α等のエフェクターサイトカインの分泌量と比較して、少なくとも１．５倍、少なくとも２倍、少なくとも５倍、少なくとも１０倍、少なくとも２０倍、少なくとも３０倍、少なくとも４０倍、または少なくとも５０倍の大きさでありうる。

例えば、前記第１のＣＡＲとＣＣＲとの両方を発現している免疫細胞によって死滅した標的細胞の数は、第１のＣＡＲによって単独で活性化および刺激され、ＣＣＲによって増大していない免疫細胞によって死滅した標的細胞の数と比較して、少なくとも１．５倍、少なくとも２倍、少なくとも５倍、少なくとも１０倍、少なくとも２０倍、少なくとも３０倍、少なくとも４０倍、または少なくとも５０倍の大きさでありうる。

ＣＣＲは、免疫細胞の前記免疫応答をそれだけで媒介できてはならず、すなわち、前記免疫応答を作動させるために、免疫細胞が第１のＣＡＲを発現しうること、ＣＣＲが前記免疫細胞の前記免疫応答を増大（支援）しうるにすぎないことが必要でありうる。

前記第１のＣＡＲとは対照的に、ＣＣＲは、ＣＤ３ζまたはＦｃεＲＩγ等のＩＴＡＭ含有領域を含有してはならず、そのため、ＣＣＲ作動時に、シスおよび／またはトランス活性化を含む一般に知られたＴＣＲ媒介シグナル伝達イベントが誘導されてはならない。

ＣＣＲは抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、および本明細書に記載する少なくとも１つの共刺激シグナル伝達ドメインを含む細胞質部分を含んでもよい。前記ＣＣＲの前記少なくとも１つの共刺激シグナル伝達ドメインは、ＩＣＯＳ、ＣＤ１５４、ＣＤ５、ＣＤ２、ＣＤ４６、ＨＶＥＭ、ＣＤ８、ＣＤ９７、ＴＮＦＲＳＦ１８、ＣＤ３０、ＳＬＡＭ、ＤＡＰ１０、ＣＤ６４、ＣＤ１６、ＣＤ８９、ＭｙＤ８８、ＫＩＲ－２ＤＳ、ＫＩＲ－３ＤＳ、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ４６、ＮＫＧ２Ｄ、ＩＣＡＭ、ＣＤ２７、ＯＸ４０、４－１ＢＢ、およびＣＤ２８からなる群から選択されうる。

本発明の第１のＣＡＲは、本明細書に記載する上述のドメインの任意の部位または部分を、機能的ＣＡＲ、すなわち、ＣＡＲを発現する免疫エフェクター細胞の免疫エフェクター応答を媒介するＣＡＲを生じる、任意の順序および／または組み合わせで含むように設計されうる。

本発明のＣＣＲは、本明細書に記載する上述のドメインの任意の部位または部分を、機能的ＣＣＲ、すなわち、ＣＡＲおよびＣＣＲを発現する免疫エフェクター細胞の免疫エフェクター応答を増大するＣＣＲを生じる、任意の順序および／または組み合わせで含むように設計されうる。

「タグ付きポリペプチド」という用語は、本明細書において使用される場合、直接または間接的に結合している少なくとも１種の追加成分、すなわちタグを有するポリペプチドを指す。タグ付きポリペプチドは、本明細書において使用される場合、標的細胞に発現した抗原に結合することができる。ポリペプチドは、抗体、またはがん細胞上の腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）などの標的細胞の表面に発現した抗原に結合する、その抗原結合フラグメントでありうる。あるいは、タグ付きポリペプチドのポリペプチドは、サイトカインもしくは増殖因子、または標的細胞の抗原に結合することができる別の可溶性ポリペプチドでありうる。

「アダプター」または「アダプター分子」または「タグ付きポリペプチド」という用語は、本明細書において使用される場合、互換的に使用することができる。

タグは、例えばハプテンまたはデキストランであってもよく、ハプテンまたはデキストランに抗原結合ドメインが結合しており、ＣＡＲがタグに特異的な抗原結合ドメインを含んでもよい。

ハプテン、例えば、ＦＩＴＣ、ビオチン、ＰＥ、チアミン、ストレプトアビジン、またはデキストラン等は、タンパク質等の大きなキャリアに付着した場合にのみ免疫応答を引き出す小分子であり、キャリアもまた、それ自体では免疫応答を引き出さないものであってもよい。身体がハプテン－キャリア付加体に対する抗体を産生した後は、小分子ハプテンも抗体に結合することができるが、通常は、免疫応答を惹起せず、通常は、ハプテン－キャリア付加体のみがこれを行うことができる。

しかしながら、タグはまた、例えば、タグ付きポリペプチドのポリペプチド部分に化学的にまたは組み換えによって連結される、ペプチド配列であってもよい。ペプチドは、ｃ－Ｍｙｃタグ、Ｓｔｒｅｐタグ、Ｆｌａｇタグ、およびポリヒスチジンタグからなる群から選択されてもよい。タグはまた、ストレプトアビジンであってもよい。タグ付きポリペプチドのタグ部位は、もっぱら、ＣＡＲのタグに特異的な抗原結合ドメインが認識でき、特異的に結合できる分子であることによって制約される。例えば、タグがＦＩＴＣ（フルオレセインイソチオシアネート）である場合、タグ結合ドメインは抗ＦＩＴＣｓｃＦｖを構成しうる。あるいは、タグがビオチンまたはＰＥ（フィコエリスリン）である場合、タグ結合ドメインは抗ビオチンｓｃＦｖまたは抗ＰＥｓｃＦｖを構成しうる。

「免疫細胞」または「免疫エフェクター細胞」という用語は、互換的に使用することができ、免疫系の部分であってもよく、特定のエフェクター機能を実行する細胞、例えば、アルファ－ベータＴ細胞、ＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞、Ｂ細胞、自然リンパ球（ＩＬＣ）、サイトカイン誘導キラー（ＣＩＫ）細胞、リンホカイン活性化キラー（ＬＡＫ）細胞、ガンマ－デルタＴ細胞、間葉系幹細胞もしくは間葉系ストローマ細胞（ＭＳＣ）、単球、またはマクロファージを指しうる。

好ましい免疫細胞は、細胞毒性エフェクター機能を有する細胞、例えば、アルファ－ベータＴ細胞、ＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞、ＩＬＣ、ＣＩＫ細胞、ＬＡＫ細胞、またはガンマ－デルタＴ細胞である。最も好ましい免疫エフェクター細胞は、Ｔ細胞および／またはＮＫ細胞である。「エフェクター機能」とは細胞の特化した機能を意味し、例えば、Ｔ細胞では、エフェクター機能は、細胞溶解活性、またはサイトカインの分泌を含むヘルパー活性でありうる。あるいは、前記免疫細胞またはエフェクター免疫細胞は、ヒト免疫系に関連する特定のエフェクター機能を実行することができる、ヒト起源の免疫様細胞であってもよい。

「前記免疫エフェクター細胞の免疫応答を活性化および刺激する」という用語は、抗原結合受容体、例えばＣＡＲの活性化の文脈では、増殖、分化、サイトカイン放出、細胞溶解性エフェクター機能等を含むがこれらに限定されない免疫応答を惹起する、免疫エフェクター細胞における、変化した遺伝子発現状態に関連するシグナル伝達カスケードの１次誘導を意味する。例えば、ＭＨＣ依存的ＴＣＲ結合によってＴＣＲクラスタ化をもたらし、免疫シナプスが形成され、これは特に、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８を含む。続いて、ＺＡＰ７０がＣＤ３ζに結合し、活性化することができる。その結果、複数の経路によって、例えばＩＬ－２産生を増加させるのに必要な、ＡＰ－１、ＮＦＡＴ、およびＮＦ－κＢ等の最終的にＴ細胞を活性化する転写因子が発現し、これによって、増殖およびＴ細胞媒介免疫応答が可能になる。しかしながら、持続的な免疫応答を誘導するためには、ＣＤ２８、ＣＤ２７、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）、またはＩＣＯＳ等の共刺激受容体が、付随して活性化しなければならない。共刺激シグナル（シグナル２）を伴わないＴＣＲ結合（シグナル１）はいずれも、Ｔ細胞エフェクター機能の阻害に関連し、これは、Ｔ細胞がアネルギー性になることを意味する。「前記免疫エフェクター細胞の免疫応答を媒介する」という用語は、「前記免疫エフェクター細胞の免疫応答を活性化および刺激する」と同じ意味を有し、互換的に使用することができる。

「前記免疫細胞に発現した前記ＣＡＲの活性化閾値未満」および「前記免疫細胞に発現した前記ＣＡＲの活性化閾値を上回る」という用語は、本明細書において使用される場合、タグ付きポリペプチドが免疫細胞のそれぞれのＣＡＲに結合することによって、本明細書に開示される前記免疫エフェクター細胞の免疫応答を活性化および刺激するための能力を指す。タグ付きポリペプチドまたはタグ付きポリペプチドの和の濃度が、ＣＡＲを活性化するためには低すぎるならば、このとき、前記濃度は、前記免疫細胞に発現した前記ＣＡＲの活性化閾値未満である。本明細書に開示されるタグ付きポリペプチドの濃度、またはタグ付き第１のポリペプチドとタグ付き第２のポリペプチドとの濃度の和（組み合わせた濃度）が、ＣＡＲを活性化するのに十分であるならば、このとき、濃度または組み合わせた濃度は、前記免疫細胞に発現した前記ＣＡＲの活性化閾値を上回る。

「前記免疫エフェクター細胞の前記免疫応答を増大する、および／または前記免疫エフェクター細胞の生存を確保する」という用語は、ＣＣＲの活性化の文脈では、免疫エフェクター細胞におけるシグナル１非依存共刺激シグナル伝達カスケードが活性化し、生存を促進し、シグナル１依存免疫応答の増強を可能にする細胞内状態が提供されることを意味する。例えば、第１のＣＡＲとＣＣＲとの両方を共発現している免疫エフェクター細胞は、例えば活性化ドメインＣＤ３ζを含むＣＡＲによってのみ活性化することができるが、しかしながら、ＣＣＲを介して共刺激経路（例えば４－１ＢＢまたはＣＤ２８）がさらに作動することによって、細胞溶解能を増大させることができる。

本明細書で使用される「抗体」という用語は、様々な形態の抗体構造を含む最も広い意味で使用され、標的抗原を特異的に認識する（すなわち結合する）、モノクローナルおよびポリクローナル抗体（完全長抗体を含む）、多重特異性抗体（例えば二重特異性抗体）、抗体フラグメント、すなわち抗体の抗原結合フラグメント、イムノアドヘシンおよび抗体－イムノアドヘシンキメラを含むが、これらに限定されない。「抗原フラグメント」は、完全長抗体の一部位、好ましくはその可変ドメイン、または少なくともその抗原結合サイト（「抗体の抗原結合フラグメント」）を含む。抗体フラグメントの例としては、Ｆａｂ（抗原結合フラグメント）、ｓｃＦｖ（一本鎖可変領域フラグメント）、単一ドメイン抗体、ダイアボディ、ｄｓＦｖ、Ｆａｂ’、ダイアボディ、一本鎖抗体分子、および抗体フラグメントから形成された多重特異性抗体が挙げられる。

本明細書において使用される場合、「抗原」という用語は、１種または複数の抗体に結合する、またはその産生を引き起こす物質を含むことが意図され、限定するものではないが、タンパク質、ペプチド、ポリペプチド、オリゴペプチド、脂質、デキストラン等の炭水化物、ハプテン、およびこれらの組み合わせ、例えば、糖修飾タンパク質または糖脂質を含んでもよい。「抗原」という用語は、本明細書において使用される場合、標的細胞の表面に発現しうる、養子免疫系によって認識することができる分子性物質を指し、抗体もしくはＴＣＲ、または内在性もしくは遺伝子導入されたＴＣＲ、ＣＡＲ、ｓｃＦｖもしくはその多量体、Ｆａｂフラグメントもしくはその多量体、抗体もしくはその多量体、一本鎖抗体もしくはその多量体、もしくは高い親和性を有する構造に結合することができる任意の他の分子を含むがこれらに限定されない、操作された分子が挙げられるがこれらに限定されない。

分化抗原群（ＣＤと略記される）は、細胞の免疫表現型についての標的を提供する、細胞表面分子、通常はポリペプチドの同定および調査のために使用されるプロトコルである。

ＣＤ９０（またはＴｈｒ－１）は、当初は胸腺抗原として発見され、２５～３７ｋＤａの多量にＮ－糖修飾されており、グリコホスファチジルイノシトール（ＧＰＩ）アンカー型であり、単一のＶ様免疫グロブリンドメインを有する、保存された細胞表面タンパク質である。

ＣＤ３２６（または上皮細胞接着分子（ＥｐＣＡＭ））は、上皮におけるＣａ２＋非依存型同型細胞－細胞接着を媒介する、膜貫通糖タンパク質である。ＣＤ３２６はまた、細胞のシグナル伝達、遊走、増殖、および分化にも関与する。加えて、ＣＤ３２６は、ｃ－ｍｙｃ、ｅ－ｆａｂｐ、ならびにサイクリンＡおよびＥを上方制御する能力を通じて、発がん能を有する。

「標的細胞」という用語は、本明細書において使用される場合、本明細書に開示される抗原結合受容体によって、および／または本明細書に開示されるＣＣＲによって、および／または本明細書に開示されるタグ付きポリペプチドによって認識（結合）されるべき、細胞表面に抗原を発現する細胞を指す。通常、本明細書では、標的細胞は、ＣＤ９０とＣＤ３２６とを共発現する（がん性）細胞である。

「組み合わせ」という用語は、ＣＤ９０およびＣＤ３２６に特異的な抗原結合ドメインの文脈では、例えば、ＣＤ９０およびＣＤ３２６に特異的な抗原結合ドメインを含む「キット」、またはＣＤ９０およびＣＤ３２６に特異的な抗原結合ドメインを含む「組成物の組み合わせ」、またはＤ９０およびＣＤ３２６に特異的な抗原結合ドメインを含む「系」であってもよい。

本明細書において使用される場合、「対象」という用語は、哺乳動物、例えば、マウス、ラット、ウシ、ブタ、ヤギ、ニワトリ、イヌ、サル、またはヒトを指す。優先的には、対象はヒトである。対象は、がんなどの障害を患う対象（患者）であってもよいが、対象はまた、健康な対象であってもよい。

「自家」という用語は、本明細書において使用される場合、後に材料が再導入される対象と同じ対象に由来する、任意の材料を指す。

「同種」という用語は、本明細書において使用される場合、材料が再導入される対象と同じ種の異なる対象に由来する、任意の材料を指す。

「治療有効量」または「治療有効集団」という用語は、対象における治療上の利益を提供する細胞集団の量を意味する。

抗体の抗原結合ドメイン、その抗原結合フラグメントの抗原結合ドメインに関する「特異的に結合する」または「に特異的な」という用語は、例えば、本明細書に開示されるＣＡＲおよびＣＣＲにおいて、またはタグ付きポリペプチドにおいて使用される場合、特定の抗原を認識し、それに結合するが、サンプル中の他の分子を実質的に認識しない、または他の分子に実質的に結合しない抗原結合ドメインを指す。ある種由来の抗原に特異的に結合する抗原結合ドメインは、別の種のその抗原にも結合しうる。この種交差反応性は多くの抗体に典型的であり、そのため、その特異的とする抗原結合ドメインの定義に反するものではない。抗原に特異的に結合する抗原結合ドメインは、抗原の異なる対立遺伝子形態（対立遺伝子バリアント、スプライスバリアント、アイソフォーム等）またはこの抗原の同じ遺伝子ファミリーの相同バリアントにも結合しうる。この交差反応性は多くの抗体に典型的であり、そのため、その特異的とする抗原結合ドメインの定義に反するものではない。

「操作された細胞」および「遺伝子改変細胞」という用語は、本明細書において使用される場合、互換的に使用することができる。この用語は、外来遺伝子または核酸配列を含有および／または発現しており、その結果、細胞またはその後代の遺伝子型および／または表現型が改変されることを意味する。とりわけ、この用語は、細胞、優先的には免疫細胞を、当技術分野において周知の組み換え法によって処理して、自然状態のこれらの細胞には発現しないペプチドまたはタンパク質を、安定にまたは過渡的に発現させることができるという事実を指す。例えば、細胞表面にキメラ抗原受容体等の人工的コンストラクトを発現するように、免疫細胞が操作される。

障害（例えばがん）「を処置する」（の処置）という用語は、本明細書において使用される場合、対象が経験する疾病または障害の少なくとも１種の徴候または症状の頻度または重症度を減少させることを意味する。

「発現」という用語は、本明細書において使用される場合、細胞内の特定のヌクレオチド配列のプロモーターによって駆動される、その配列の転写および／または翻訳として定義される。

配列列挙プロトコルに与える配列番号１～配列番号４のアミノ酸配列は、本明細書において開示されるＣＡＲの一部をなす配列である。配列番号１～配列番号４の前記配列はまた、それぞれ、いくつかのアミノ酸配列が欠失、追加、または置換され、それでも本明細書に記載する意図される機能を保持している、これらの配列のバリアントを含んでもよい。そのため、アミノ酸配列１～アミノ酸配列４におけるアミノ酸配列のそれぞれのバリアント、例えば、アミノ酸配列１～アミノ酸配列４とそれぞれ本質的に同等の、アミノ酸配列レベルにおいて少なくとも７０％、または少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％もしくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列は、この定義に含まれる。一般に、配列番号１～配列番号４のそれぞれの配列の意図される機能の意図的な変化を生じないアミノ酸のバリエーションはすべて、この定義に含まれる。本発明の文脈では、「配列同一性」は、当技術分野において周知のアミノ酸配列用アライメントプログラムを使用し、ペアワイズアライメントを使用して判定することができる。

「がん」という用語は、悪性新生物として医療上公知である。がんは、調節されていない細胞増殖が関係する幅広い疾病の群であり、すべての種類の白血病を含む。がんにおいて、細胞（がん性細胞）は制御されずに分裂および増殖して、悪性腫瘍を形成し、近傍の身体の部分に侵入する。がんはまた、リンパ系または血流を通じて身体のより離れた部分にも広がりうる。ヒトに影響を及ぼす、２００種を超える異なる公知のがんがある。

「ＣＤ９０とＣＤ３２６とを共発現するがん性細胞を含むヒトがん」という用語は、本明細書において使用される場合、がんの少なくとも分集団が、同じ細胞にＣＤ９０とＣＤ３２６との両方を発現するがんを指す。

「ＣＤ９０とＣＤ３２６とを共発現しているがん性細胞を含むヒト卵巣がん」という用語は、ヒト卵巣がんの少なくとも分集団が、同じ細胞にＣＤ９０とＣＤ３２６との両方を発現するヒト卵巣がんを指す。

卵巣がんとは、卵巣内または卵巣上に形成されるがんである。卵巣がんは、身体の他の部分に侵入する、または広がる能力を有する異常な細胞を生じる。このプロセスが開始した時点では、症状がない、または漠然とした症状にすぎないこともある。がんが進行するにつれて、症状はより目立つものになる。これらの症状としては、特に、肥大、骨盤痛、腹部膨満、および食欲の減少を挙げることができる。がんが広がることがある一般的な領域としては、腹膜（ｔｈｅｌｉｎｉｎｇｏｆｔｈｅａｂｄｏｍｅｎ）、リンパ節、肺、および肝臓が挙げられる。

以下の実施例によって本発明をさらに説明するが、決してその範囲に限定を課すものとして解釈されるべきではない。

実施例
以下の実施例は、本発明のより詳細な説明を意図しているが、本発明をこれらの実施例に限定するものではない。

組み合わせて卵巣がん腫（ＯｖＣａ）細胞と非ＯｖＣａ細胞との間の区別を可能にする、蛍光部分と抗原認識部分とを含む複合体の組み合わせの同定
高異型度漿液性卵巣がん腫切除物を切り離し、フローサイトメトリーによって単細胞懸濁液を分析した（図１）。バイアスなし表面マーカースクリーニングライブラリを用いることによって、高異型度卵巣がん腫患者のサブセットにおける、ＣＤ９０とＣＤ３２６との共発現が明らかとなった（図２）。続いて、この別個の標的の組み合わせを、サイクリック免疫蛍光顕微鏡法によって検証した。新鮮凍結高異型度漿液性卵巣がん腫切除物をスライスし、アセトンによって固定した。個々の生物学的サンプルの完全自動サイクリック蛍光イメージングを可能にする新規なハイコンテントイメージングプラットフォームを使用して、スクリーニングを行った。蛍光部分に結合した複数の抗原認識部分を用いてＯｖＣａ検体を連続染色することで、複数の抗原の発現が明らかとなった。ＣＤ９０との組み合わせにおける、ヒト上皮細胞組織およびがん腫についての周知のマーカーであるＥｐＣＡＭ（ＣＤ３２６）の共発現が、患者のサブセットにおいて確認された（図３）。データ分析およびさらなる共染色によって、ＯｖＣａサンプルのサブセットにおいて、ＣＤ３２６とＣＤ９０とが共発現していることが裏付けられた。

ＣＡＲＴ細胞療法のｏｎ－ｔａｒｇｅｔ，ｏｆｆ－ｔｕｍｏｒ毒性、すなわち、生理学的条件下でＣＡＲの標的を発現する非腫瘍細胞にＣＡＲＴ細胞が結合し、溶解させることが、複数のＣＡＲＴ細胞生成物について記載されているため、健康な組織における標的の発現を分析しなければならない。しかしながら、健康な組織における発現は、少なくとも部分的な区別、すなわち、２種のマーカーを組み合わせて細胞を選択的に標識し、健康な細胞からＯｖＣａを区別する可能性を開くものであることが見出された（図３）。

したがって、ＣＤ３２６とＣＤ９０との組み合わせは、ＯｖＣａの二重標的化ＣＡＲＴ細胞処置の可能性を開くものである。ＣＤ３２６とＣＤ９０とはＯｖＣａ細胞のサブセットに共発現するが、健康な組織には共発現しない、または共発現がより少ない。そのため、ＣＤ３２６とＣＤ９０との共検出によって活性化するが、２種のマーカーのうちの一方がないと活性化しないＣＡＲＴ細胞を使用すると、同じ（健康な）細胞にはＣＤ３２６またはＣＤ９０のいずれかが発現しないため、すなわち、ＣＤ９０とＣＤ３２６とが共発現しないため、ＯｖＣａ細胞を効率的に死滅させ、健康な細胞が影響を受けずに残るはずである。

組み合わせて卵巣がん腫（ＯｖＣａ）細胞と非ＯｖＣａ細胞との間の区別を可能にする、抗原認識部分の組み合わせの使用
ＣＡＲＴ細胞療法のｏｎ－ｔａｒｇｅｔ，ｏｆｆ－ｔｕｍｏｒ毒性を防止するために、複数の技術的解決策を用いて、ＣＡＲＴ細胞の特異性を上昇させてもよい。１つの選択肢は、二重標的ＣＡＲの使用、すなわち、ＣＡＲＴ細胞が複数のマーカーを認識することで判定される閾値を乗り超えることによって、Ｔ細胞の活性化が達成されることである。ＡＮＤＣＡＲでは、ＣＡＲＴ細胞は、抗原結合部分、ヒンジ、膜貫通ドメイン、および１つまたは複数の細胞内シグナル伝達ドメインから構成される、２種の独立したＣＡＲコンストラクトを共発現する。ここで、別個のエピトープを認識する一方のＣＡＲが活性化シグナル（シグナル１）を伝達するが、これは（それだけでは）ＣＡＲＴ細胞の活性化閾値を乗り越えるには不十分である。加えて、別のエピトープを認識する第２のＣＡＲは共刺激ドメイン（シグナル２）を保持しており、（第１のＣＡＲとの組み合わせにおいてのみ）第１のＣＡＲと協同して活性化閾値を乗り越え、Ｔ細胞を十分に活性化する。

ＡＮＤＣＡＲＴ細胞は、１種の腫瘍関連抗原Ａを認識する第１のＣＡＲから構成される。第１のＣＡＲは、活性化細胞内ドメイン、例えばＣＤ３ゼータを使用する。ＣＡＲＴ細胞が細胞上の抗原Ａに結合したとき、ＣＡＲＴ細胞は活性化閾値を乗り越えることができない。活性化閾値を乗り越えるためには、Ｔ細胞に第２のＣＡＲが共発現しており、抗原Ａ発現腫瘍細胞に共発現した抗原Ｂに結合する。抗原Ｂを認識するＣＡＲは、１種または複数の共刺激ドメイン、例えばＣＤ２８または４－１ＢＢを含有する。同じ細胞上の抗原ＡとＢとを認識することによってのみ、ＣＡＲＴ細胞は活性化閾値を乗り越えて十分に活性化され、すなわち、サイトカインを分泌し、増殖し、抗原ＡとＢとを発現している細胞を溶解させる。

あるいは、腫瘍細胞の二重標的化のための別の技術は、アダプターＣＡＲＴ細胞に基づいて、２種以上のアダプターの特異性を使用してもよい（すなわち、表面活性化マトリックス、ＳＡＭ）。ここで、単一のアダプター分子の各々は、それだけではアダプターＣＡＲＴ細胞を活性化させず、２種以上の抗体を組み合わせて使用するときのみ、アダプターＣＡＲＴ細胞を活性化することができる。詳細には、アダプターＣＡＲＴ細胞は、タグ付きアダプター分子、例えば、ビオチン化抗体またはＦＬＡＧタグ付きＦａｂ分子を認識する。加えて、アダプターＣＡＲは、活性化シグナル伝達ドメイン、例えばＣＤ３ゼータ、および１種または複数の共刺激ドメイン、例えばＣＤ２８または４－１ＢＢを損なう（ｃｏｍｐｒｏｍｉｓｅ）。ビオチンを認識するアダプターＣＡＲＴ細胞が、ＣＤ３２６を対象とし、ＣＤ３２６発現がん細胞に連絡しているビオチン化抗体に結合すると、アダプターＣＡＲＴ細胞が活性化され、ＣＤ３２６発現腫瘍細胞を溶解させる。アダプターＣＡＲＴ細胞の活性化および標的細胞の溶解は、存在するアダプター分子の投与量に依存する。したがって、アダプターＣＡＲＴ細胞の活性は投与量依存的であり、活性は、アダプター分子滴定に相関がある（図４）。アダプターＣＡＲＴ細胞は、十分な活性化および細胞溶解活性に達するためには、活性化閾値を乗り越えなければならない。表面活性マトリックスの概念では、両方の原理（投与量依存性および活性化閾値）が組み合わせられる。がん細胞上の異なるマーカーを標的化している２種以上のアダプター分子は、（それだけでは）最適以下であり、ＣＡＲＴ細胞の活性化閾値を乗り越えることができない投与量で使用される（図５）。しかしながら、複数の最適以下の投与量のアダプター分子を組み合わせると、加法的効果を有し、活性化閾値を乗り越えることができ、完全なＣＡＲＴ細胞の機能性を生じる。すなわち、サイトカインを分泌し、増殖し、それぞれのマーカーを発現しているがん細胞を溶解させる。

その結果、二重標的化ＣＡＲＴ細胞では、前述の機構の１つまたは複数を、ＣＤ３２６抗原とＣＤ９０抗原とを同時に標的化することと組み合わせて用い、ＣＡＲＴ細胞の特異性が向上し、ｏｎｔａｒｇｅｔ／ｏｆｆ－ｔｕｍｏｒ毒性が減少する。区別されるＣＤ９０およびＣＤ３２６を発現した標的細胞を用いると（図６）、このアプローチの特異性を評価し、検証することができる。前述の、アダプターＣＡＲＴ細胞の存在下で、ＣＤ９０とＣＤ３２６とを共発現しているがん細胞を、２種のアダプター分子によって共標的化することの相乗効果（図５）は、標的細胞が標的のいずれか一方のみを発現している場合（ＣＤ９０発現の欠如：図７；ＣＤ３２６発現の欠如：図８）、または標的がない場合（図９）には失われる。

組み合わせて卵巣がん腫（ＯｖＣａ）細胞と非ＯｖＣａ細胞との間の区別を可能にする、蛍光部分と抗原認識部分とを含む複合体の組み合わせの同定および検証
健康な組織におけるＣＤ９０およびＣＤ３２６の発現を検証するために、サイクリック免疫蛍光顕微鏡法を行った。新鮮凍結健康組織（乳房、小脳、結腸、心臓、腎臓、肝臓、肺、髄質、延髄、卵巣、膵臓、下垂体、骨格筋、皮膚、平滑筋、精巣、および甲状腺）ならびに高異型度漿液性卵巣がん腫をスライスし、アセトンによって固定した。

個々の生物学的サンプルの完全自動サイクリック蛍光イメージングを可能にする新規なハイコンテントイメージングプラットフォームを使用して、スクリーニングを行った。蛍光部分に結合した複数の抗原認識部分を用いた、健康な組織と、ＣＤ９０との組み合わせにおける、ヒト上皮細胞組織およびがん腫についての周知のマーカーであるＥｐＣＡＭ（ＣＤ３２６）の共発現が明らかとなっている、ＯｖＣａ検体との連続染色が、患者のサブセットにおいて確認された（図１０）。

ＣＡＲＴ細胞療法のｏｎ－ｔａｒｇｅｔ，ｏｆｆ－ｔｕｍｏｒ毒性、すなわち、生理学的条件下でＣＡＲの標的を発現する非腫瘍細胞にＣＡＲＴ細胞が結合し、溶解させることが、複数のＣＡＲＴ細胞生成物について記載されているため、健康な組織における標的の発現を分析しなければならない。画像を細胞のセグメント化に基づいてセグメント化し、ＣＤ９０およびＣＤ３２６の発現を定量した（図１１）。健康な組織におけるＣＤ９０およびＣＤ３２６の発現を分析し（図１１Ａ）、ＣＤ９０およびＣＤ３２６の発現の増加は、もっぱら卵巣がんサンプルにおいて検出された（図１１Ｂ）。

あるいは、腫瘍細胞の二重標的化のための別の技術は、アダプターＣＡＲＴ細胞に基づいて、２種以上のアダプターの特異性を使用してもよい（すなわち、表面活性化マトリックス、ＳＡＭ）。ここで、単一のアダプター分子の各々は、それ自体ではアダプターＣＡＲＴ細胞を活性化させず、２種以上のアダプター分子を組み合わせて使用するときのみ、アダプターＣＡＲＴ細胞を活性化することができる。詳細には、アダプターＣＡＲＴ細胞は、タグ付きアダプター分子、例えば、ビオチン化抗体またはＦＬＡＧタグ付きＦａｂ分子を認識する。加えて、アダプターＣＡＲは、活性化シグナル伝達ドメイン、例えばＣＤ３ゼータ、および１種または複数の共刺激ドメイン、例えばＣＤ２８または４－１ＢＢを損なう（ｃｏｍｐｒｏｍｉｓｅ）。ビオチンを認識するアダプターＣＡＲＴ細胞が、ＣＤ３２６を対象とし、ＣＤ３２６発現がん細胞に連絡しているビオチン化抗体に結合すると、アダプターＣＡＲＴ細胞が活性化され、ＣＤ３２６発現腫瘍細胞を溶解させる。アダプターＣＡＲＴ細胞の活性化および標的細胞の溶解は、存在するアダプター分子の投与量に依存する。

したがって、アダプターＣＡＲＴ細胞の活性は投与量依存的であり、活性は、アダプター分子滴定、すなわち、モノビオチン化Ｆａｂ分子に相関がある（図１２～２０）。アダプターＣＡＲＴ細胞は、十分な活性化および細胞溶解活性に達するためには、活性化閾値を乗り越えなければならない。表面活性マトリックスの概念では、両方の原理（投与量依存性および活性化閾値）が組み合わせられる。がん細胞上の異なるマーカーを標的化している２種以上のアダプター分子は、（それだけでは）最適以下であり、ＣＡＲＴ細胞の活性化閾値を乗り越えることができない投与量で使用される（図１２～２０）。しかしながら、複数の最適以下の投与量のアダプター分子を組み合わせると、加法的効果を有し、活性化閾値を乗り越えることができ、完全なＣＡＲＴ細胞の機能性を生じる。すなわち、サイトカインを分泌し、増殖し、それぞれのマーカーを発現しているがん細胞を溶解させる。

その結果、二重標的化ＣＡＲＴ細胞では、前述の機構の１つまたは複数を、ＣＤ３２６抗原とＣＤ９０抗原とを同時に標的化することと組み合わせて用い、ＣＡＲＴ細胞の特異性が向上し、ｏｎｔａｒｇｅｔ／ｏｆｆ－ｔｕｍｏｒ毒性が減少する。

区別されるＣＤ９０およびＣＤ３２６を発現した標的細胞に対する、モノビオチン化抗ＣＤ９０Ｆａｂ、抗ＣＤ３２６Ｆａｂ、および両Ｆａｂの組み合わせの濃度（５ｎｇ／ｍｌ（図１２）、１ｎｇ／ｍｌ（図１３）、０．７５ｎｇ／ｍｌ（図１４）、０．５ｎｇ／ｍｌ（図１５）、０．２５ｎｇ／ｍｌ（図１６）、０．１ｎｇ／ｍｌ（図１７）、０．０５ｎｇ／ｍｌ（図１８）、０．０２５ｎｇ／ｍｌ（図１９）、０．０１ｎｇ／ｍｌ（図２０））を滴定すると、このアプローチの特異性および活性化閾値を評価し、検証することができる。０．２５ｎｇ／ｍｌ（図１６）～０．０２５ｎｇ／ｍｌ（図１９）の範囲内の濃度を用いて、がん細胞の死滅に対する相乗効果を検出する。

前述の、アダプターＣＡＲＴ細胞の存在下で、ＣＤ９０とＣＤ３２６とを共発現しているがん細胞を、２種のアダプター分子によって共標的化することの相乗効果は、標的細胞が標的のいずれか一方のみを発現している場合（図１２～２０）には失われる。

がん細胞の死滅に対する相乗効果を、サイトカイン分泌（ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＦＮ－ガンマ；図１４、図１５）、ならびにＣＡＲＴ細胞が発現する活性化（ＣＤ２５、ＰＤ－１）および疲弊（ＣＤ２２３）マーカー（図１７、図１８）によって補完する。

さらに、一定濃度の抗ＣＤ９０Ｆａｂに対する抗ＣＤ３２６Ｆａｂの滴定（図２１）、または一定濃度の抗ＣＤ３２６Ｆａｂに対する抗ＣＤ９０Ｆａｂの滴定（図２２）によって、総合的ながん細胞死滅有効性に対する抗ＣＤ９０Ｆａｂ濃度の影響を示す。サイトカイン分泌（図２５）、ならびにＣＡＲＴ細胞が発現する活性化（図２８、図３０Ｉ～Ｐ）および疲弊（図２９、図３０Ａ～Ｈ）マーカーによって、この抗ＣＤ９０Ｆａｂの効果が裏付けられた。

参考文献
Lamers, C., Sleijfer, S., van Steenbergen, S., van Elzakker, P., van Krimpen, B., Groot, C., Vulto A., den Bakker M., Oosterwijk E. Debets R., Gratama, J. (2013). Treatment of metastatic renal cell carcinoma with CAIX CAR-engineered T cells: clinical evaluation and management of on-target toxicity. Mol Ther., 21(4), S. 904-912. doi:10.1038/mt.2013.17
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Matulonis, U., Sood, A., Fallowfield, L., Howitt, B., Sehouli, J., & Karlan, B. (2016). Ovarian Cancer. Nat Rev Disease Primers. doi:10.1038/nrdp.2016.61
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Claims

ＣＤ９０とＣＤ３２６とを共発現するがん性細胞を含むヒトがんの処置に使用するための、
ａ）ＣＤ９０に特異的な抗原結合ドメイン
ｂ）ＣＤ３２６に特異的な抗原結合ドメイン
を含む、組み合わせ。
ＣＤ９０とＣＤ３２６とを共発現するがん性細胞を含む前記ヒトがんが、ヒト卵巣がんである、請求項１に記載の組み合わせ。
以下を含む、請求項１または２に記載の組み合わせ。
ａ）ＣＤ９０に特異的な抗原結合ドメインを有する、タグ付き第１のポリペプチド、
ｂ）ＣＤ３２６に特異的な抗原結合ドメインを有する、タグ付き第２のポリペプチドであって、第１のポリペプチドのタグと第２のポリペプチドのタグとが同一である、タグ付き第２のポリペプチド、
ｃ）ＣＡＲを含み、ＣＡＲが、
ｉ）第１のポリペプチドおよび第２のポリペプチドの前記タグに特異的な抗原結合ドメイン、
ｉｉ）膜貫通ドメイン
ｉｉｉ）１次シグナル伝達ドメインと少なくとも１つの共刺激ドメインとを含む、細胞内シグナル伝達ドメイン
を含む、免疫細胞。
前記タグ付き第１のポリペプチドの濃度が、前記免疫細胞に発現した前記ＣＡＲの活性化閾値未満であり、前記タグ付き第２のポリペプチドの濃度が、前記免疫細胞に発現した前記ＣＡＲの活性化閾値未満であり、タグ付き第１のポリペプチドとタグ付き第２のポリペプチドとを組み合わせた濃度が、前記免疫細胞に発現した前記ＣＡＲの活性化閾値を上回る、請求項３に記載の組み合わせ。
前記タグ付き第１のポリペプチドの濃度が、前記タグ付き第１のポリペプチドによってＣＡＲを単独で活性化する場合、すなわち、前記タグ付き第２のポリペプチドが存在しない場合に必要な濃度を、少なくとも１０％下回り、かつ、前記タグ付き第２のポリペプチドの濃度が、前記タグ付き第２のポリペプチドによってＣＡＲを単独で活性化する場合、すなわち、前記タグ付き第１のポリペプチドが存在しない場合に必要な濃度を、少なくとも１０％下回る、請求項４に記載の組み合わせ。
第１のＣＡＲと第２のＣＡＲとを含む免疫細胞を含む、請求項１または２に記載の組み合わせであって、
第１のＣＡＲが、
ｉ）ＣＤ９０またはＣＤ３２６に特異的な第１の抗原結合ドメイン
ｉｉ）膜貫通ドメイン
ｉｉｉ）第１の細胞内シグナル伝達ドメイン
を含み、
前記第１の細胞内シグナル伝達ドメインが、免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を含む１次シグナル伝達ドメインであり、前記第１の細胞内シグナル伝達ドメインが共刺激ドメインを含まず、
第２のＣＡＲが、
ｉ）第１のＣＡＲの第１の抗原結合ドメインがＣＤ９０に特異的である場合には、ＣＤ３２６に特異的な第２の抗原結合ドメイン、または第１のＣＡＲの第１の抗原結合ドメインがＣＤ３２６に特異的である場合には、ＣＤ９０に特異的な第２の抗原結合ドメイン
ｉｉ）膜貫通ドメイン
ｉｉｉ）第２の細胞内シグナル伝達ドメイン
を含み、
前記第２の細胞内シグナル伝達ドメインが、１つまたは複数の共刺激シグナル伝達ドメインを含み、
前記第１のシグナル伝達ドメインと前記第２のシグナル伝達ドメインとの両方が、前記ＣＤ９０およびＣＤ３２６によってそれぞれ活性化される場合にのみ、前記免疫細胞が最大細胞毒性となる、組み合わせ。
第１のＣＡＲと第２のＣＡＲとを含む免疫細胞を含む、請求項１または２に記載の組み合わせであって、
第１のＣＡＲが、
ｉ）タグ付きポリペプチドのタグに特異的な第１の抗原結合ドメインであって、前記ポリペプチドが、ＣＤ９０またはＣＤ３２６に特異的な抗原結合ドメインを有する、第１の抗原結合ドメイン
ｉｉ）膜貫通ドメイン
ｉｉｉ）第１の細胞内シグナル伝達ドメイン
を含み、
前記第１の細胞内シグナル伝達ドメインが、免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を含む１次シグナル伝達ドメインであり、前記第１の細胞内シグナル伝達ドメインが共刺激ドメインを含まず、
第２のＣＡＲが、
ｉ）前記タグ付きポリペプチドがＣＤ９０に特異的に結合する場合には、ＣＤ３２６に特異的な第２の抗原結合ドメイン、または前記タグ付きポリペプチドがＣＤ３２６に特異的に結合する場合には、ＣＤ９０に特異的な第２の抗原結合ドメイン
ｉｉ）膜貫通ドメイン
ｉｉｉ）第２の細胞内シグナル伝達ドメイン
を含み、
前記第２の細胞内シグナル伝達ドメインが、１つまたは複数の共刺激シグナル伝達ドメインを含み、
前記第１のシグナル伝達ドメインが前記タグによって活性化され、前記第２のシグナル伝達ドメインが前記ＣＤ９０またはＣＤ３２６によって活性化される場合にのみ、前記免疫細胞が最大細胞毒性となり、
前記組み合わせが、前記タグ付きポリペプチドを含む、組み合わせ。
第１のＣＡＲと第２のＣＡＲとを含む免疫細胞を含む、請求項１または２に記載の組み合わせであって、
第１のＣＡＲが、
ｉ）ＣＤ９０またはＣＤ３２６に特異的な第１の抗原結合ドメイン
ｉｉ）膜貫通ドメイン
ｉｉｉ）第１の細胞内シグナル伝達ドメイン
を含み、
前記第１の細胞内シグナル伝達ドメインが、免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を含む１次シグナル伝達ドメインであり、前記第１の細胞内シグナル伝達ドメインが共刺激ドメインを含まず、
第２のＣＡＲが、
ｉ）タグ付きポリペプチドのタグに特異的な第２の抗原結合ドメインであって、第１のＣＡＲの第１の抗原結合ドメインがＣＤ９０に特異的である場合には、前記ポリペプチドがＣＤ３２６に特異的な抗原結合ドメインを有する、第２の抗原結合ドメイン、またはタグ付きポリペプチドに特異的な第２の抗原結合ドメインであって、第１のＣＡＲの第１の抗原結合ドメインがＣＤ３２６に特異的である場合には、前記ポリペプチドがＣＤ９０に特異的な抗原結合ドメインを有する、第２の抗原結合ドメイン
ｉｉ）膜貫通ドメイン
ｉｉｉ）第２の細胞内シグナル伝達ドメイン
を含み、
前記第２の細胞内シグナル伝達ドメインが、１つまたは複数の共刺激シグナル伝達ドメインを含み、
前記第１のシグナル伝達ドメインが前記ＣＤ９０またはＣＤ３２６によって活性化され、前記第２のシグナル伝達ドメインが前記タグによって活性化される場合にのみ、前記免疫細胞が最大細胞毒性となり、
前記組み合わせが、前記タグ付きポリペプチドを含む、組み合わせ。
第１のＣＡＲと第２のＣＡＲとを含む免疫細胞を含む、請求項１または２に記載の組み合わせ、
第１のＣＡＲが、
ｉ）第１のタグ付きポリペプチドの第１のタグに特異的な第１の抗原結合ドメインであって、前記第１のポリペプチドが、ＣＤ９０またはＣＤ３２６に特異的な抗原結合ドメインを有する、第１の抗原結合ドメイン
ｉｉ）膜貫通ドメイン
ｉｉｉ）第１の細胞内シグナル伝達ドメイン
を含み、
前記第１の細胞内シグナル伝達ドメインが、免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を含む１次シグナル伝達ドメインであり、前記第１の細胞内シグナル伝達ドメインが共刺激ドメインを含まず、
第２のＣＡＲが、
ｉ）第２のタグ付きポリペプチドの第２のタグに特異的な第２の抗原結合ドメインであって、前記第１のタグ付きポリペプチドがＣＤ９０に特異的に結合する場合には、前記第２のポリペプチドがＣＤ３２６に特異的な抗原結合ドメインを有する、第２の抗原結合ドメイン、または第２のタグ付きポリペプチドに特異的な第２の抗原結合ドメインであって、前記第１のタグ付きポリペプチドがＣＤ３２６に特異的に結合する場合には、前記第２のポリペプチドがＣＤ９０に特異的な抗原結合ドメインを有する、第２の抗原結合ドメイン
ｉｉ）膜貫通ドメイン
ｉｉｉ）第２の細胞内シグナル伝達ドメイン
を含み、
前記第２の細胞内シグナル伝達ドメインが、１つまたは複数の共刺激シグナル伝達ドメインを含み、
前記第１のシグナル伝達ドメインと前記第２のシグナル伝達ドメインとの両方が、前記第１のタグおよび前記第２のタグによってそれぞれ活性化される場合にのみ、前記免疫細胞が最大細胞毒性となり、
前記組み合わせが、前記第１のタグ付きポリペプチドと前記第２のタグ付きポリペプチドとを含む、組み合わせ。