JP2023525114A - 同種アデノウイルスベクターの投与 - Google Patents

Abstract

抗原をコードするポリヌクレオチドを含む組換えＡｄ２６型アデノウイルスを含む組成物、パーツキット及び対象において免疫応答を誘導するためにこれらの組成物を使用する方法が提供される。

Description

本発明は、医療微生物学、免疫学及びワクチンの分野に関する。特に、本発明は、組換えＡｄ２６型アデノウイルスのための投与レジメンにより、対象において免疫応答を誘導するための方法に関する。

生殖管粘膜は、ウイルス、細菌、真菌及び寄生虫を起源とする大部分の性感染症の主要な侵入口であり、１億を超えるＳＴＤの症例が毎年報告されており、重大な世界的な健康問題である。これらの感染症に対処するために、有効なワクチンは、長期の局所粘膜免疫応答を引き出さなければならないことが十分に認識されている。

子宮頸癌を引き起こすヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）感染症の場合、血液中で検出される自然発生するＴ細胞応答の大きさも広がりのいずれも、子宮頚部の前浸潤性ＨＰＶ疾患の退行のロバストな予測因子ではない。しかしながら、異形成子宮頚部粘膜におけるＣＤ８＋Ｔ細胞浸潤の大きさ及び分布の両方は、ＨＰＶ誘導病変の退行の機会を予測する。ＣＤ８＋Ｔ細胞が上皮コンパートメントに浸潤している子宮頚部病変は、そのような浸潤が発生しなかった病変よりもその後の退行を受ける可能性が極めて高かった。

しかしながら、生殖管は、一般に、免疫応答の不良な誘導部位であると考えられ、強力な応答の誘導は、多くの場合、生きた感染因子又は強力なアジュバントの使用及び粘膜内層の破壊を必要とする。粘膜破壊を必要としない、生殖管で強力な局所細胞免疫応答を誘導するための有効な方法は、ＨＰＶ感染症及び他の性感染症に対する治療用ワクチンの分野で魅力的なものであろう。

複製能欠損アデノウイルスベクターは、単回免疫化後又は繰り返し免疫化後のいずれかにおいて、強力な体液性及び細胞性免疫応答を誘導する能力を保有する。しかしながら、自然曝露又は免疫化のいずれかからの特定のアデノウイルス（例えば、Ａｄ５）に対する既存の免疫は、Ａｄベースのベクターによるその後の全身免疫化後に免疫応答を低下させることが示されている。異なるアデノウイルス型の骨格を有する２つのワクチン成分を使用すること（「異種プライムブースト」レジメンとして知られるアプローチ）は、初回免疫化によって誘導される、ベクター骨格に対する免疫の負の効果を回避する。このアプローチの欠点は、初回及びその後の投与のために異なる産物又はワクチン成分を必要とすることである。

筋肉内及び／又は膣内免疫化後のＨＰＶ１６ Ｅ６及びＥ７腫瘍性タンパク質の融合を発現するアデノウイルス２６型（Ａｄ２６）及び３５型（Ａｄ３５）ベクターの免疫原性は、マウスにおいて評価されている。Ａｄ２６及びＡｄ３５ベースのベクターは、破壊を必要とすることなく、無傷の頸膣部上皮に形質導入することが示された。膣内ブースト後の筋肉内プライムは、ＩＦＮ－γ及びＴＮＦ－αを産生するＨＰＶ特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞の誘導及び頸膣部管への移動を最大化した。異種の場所を標的化するこのプライムブースト戦略は、循環するＨＰＶ特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞応答も誘導した（Ｃｕｂｕｒｕ Ｎ，ｅｔ ａｌ，２０１８，Ｉｎｔ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ １４２，１４６７－１４７９）。しかしながら、Ｃｕｂｕｒｕらにおける異なる投与経路を介した免疫化時、Ａｄ２６及びＡｄ３５ベースのベクターによって誘導される免疫応答が、Ａｄ２６ベクターがプライム免疫化に使用される場合にはＡｄ３５がブーストに使用され、逆も同様であるように使用される場合（異種プライムブースト）、そのような方法で常に試験されたが、これも上記のような欠点を有する。更に、異なるアデノウイルス血清型を用いたプライムブーストレジメンは、他の血清型を用いたプライムブーストレジメンを必ずしも予測できるわけではなく、特定のアデノウイルス血清型の特定及び投与レジメンにおける投与経路は、免疫応答に対して予測不能な影響を有し得る（例えば、異なるアデノウイルス血清型の有効性間の予測不能な差のいくつかの例としては、国際公開第２０１３／１３９９１６号パンフレットを参照されたい）。更なる研究において、Ｃｕｂｕｒｕらは、投与の筋肉内及び膣内経路の組み合わせを用いた異種プライムブーストレジメン（異種ベクターとしてＡｄ５ベクター及びＨＰＶシュードウイルスを使用する）を使用し続けて、ワクチン抗原に対して、その「試験が、２つの無関係の非複製ウイルスベクターを使用する異種プライムブースト免疫化が、全身及び生殖器に存在するメモリＴ細胞応答を最大化する根拠を提供する」と結論付けている（Ｃｕｂｕｒｕ Ｎ，ｅｔ ａｌ，２０１９，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２０１９；２０２：１２５０－１２６４）。したがって、これらの試験は、同じベクターが様々な瞬間に異なる身体部位で投与される免疫化レジメンを示唆しない。

アデノウイルスベクターによる筋肉内免疫化によって誘発され得る強力な免疫応答にもかかわらず、単回注射又は複数回投与として与えられるそのような全身性免疫化が、既に存在する感染症に対して生殖管において有効である細胞免疫応答を誘導するかは、依然として不明である。生殖器粘膜において、よりロバストな免疫を誘導する新規なワクチン製剤及び送達戦略が検討及び試験される必要がある。

筋肉内注射によって複数回の免疫化を施さなければならない更なる欠点は、医師又は診療所を繰り返し訪問する必要があることである。状況により、特に低所得国では、保険医療への制限されたアクセスは、初回と後続の免疫化との間の間隔に大きい変動をもたらし得る。又は、女性は、２回目の免疫化に戻る可能性がほとんどない場合がある。

したがって、生殖器粘膜における病原体による感染症を予防又は治療するための治療選択肢が当技術分野において依然として必要とされている。更に、生殖器粘膜においてよりロバストな免疫を誘導するための治療選択肢に対する必要性が特に存在する。

第１の態様では、本発明は、対象において免疫応答を誘導する方法であって、対象に、抗原をコードするポリヌクレオチドを含む組換えＡｄ２６型アデノウイルス（ｒＡｄ２６）を筋肉内投与することと、その後、ｒＡｄ２６を対象に膣内投与することとを含む方法を提供する。特定の実施形態では、本方法は、ＨＩＶ感染症、ＨＰＶ感染症、ＨＳＶ感染症、クラミジア、淋病、梅毒又はトリコモナス症などの性感染症（ＳＴＤ）を引き起こす病原体に対して免疫応答を誘導するためのものである。

第２の態様では、本発明は、対象における免疫応答の誘導で使用するための、抗原をコードするポリヌクレオチドを含む組換えＡｄ２６型アデノウイルス（ｒＡｄ２６）を提供し、ｒＡｄ２６は、筋肉内投与、その後の膣内投与のためのものである。

第３の態様では、本発明は、対象においてウイルス感染症を治療及び／又は予防するための方法であって、対象に、ウイルス感染症を引き起こしたか、又はその予防が望ましいウイルスの抗原をコードするポリヌクレオチドを含む組換えＡｄ２６型アデノウイルス（ｒＡｄ２６）を投与することを含み、投与は、ｒＡｄ２６の筋肉内投与、その後のｒＡｄ２６の膣内投与を含む、方法を提供する。

第４の態様では、方法は、パーツキットであって、
－ 抗原をコードするポリヌクレオチドを含む組換えＡｄ２６型アデノウイルス（ｒＡｄ２６）を含む第１の組成物と、
－ ｒＡｄ２６を含む第２の組成物と
を含むパーツキットを提供し、第１の組成物は、筋肉内投与で使用するためのものであり、及び第２の組成物は、膣内投与で使用するためのものである。

図１：Ａ）ＨＰＶ免疫原性試験のための実験設計である。Ｂ）頸膣部粘膜組織における抗原特異的組織常在性メモリＣＤ８Ｔ細胞のテトラマー染色法である。Ｃ）膣管における抗原特異的ＣＤ８Ｔ細胞のテトラマー染色法である。 （上記の通り。） （上記の通り。） 図２：Ａ）短期レジメントを長期レジメントと比較する免疫原性試験の実験設計である。Ｂ）頸膣部粘膜組織における抗原特異的組織常在性メモリＣＤ８Ｔ細胞のテトラマー染色法である。Ｃ）Ａｄ２６中和抗体の血清レベルである。Ｄ）脾臓における抗原特異的ＣＤ８Ｔ細胞のテトラマー染色法である。 （上記の通り。） （上記の通り。） （上記の通り。） ＨＩＶ特異的ＣＤ８Ｔ細胞免疫原性試験の実験設計である。

ここで、驚くべきことに、Ａｄ２６が最初に筋肉内投与される場合、その後、膣内投与される、抗原を含むＡｄ２６型アデノウイルスの同種投与（homologous administration）により、生殖器粘膜における強力な免疫応答が達成され得ることを見出した。Ａｄ２６型アデノウイルスの同種投与は、本明細書では同じベクターの投与として定義される。すなわち、第１の組成物中の抗原をコードするポリヌクレオチドを含むＡｄ２６型アデノウイルスは、第２の組成物中の抗原をコードするポリヌクレオチドを含むＡｄ２６型アデノウイルスと同じである。これは、単一のベクターのみが必要であり、それが投与をより容易にしてエラーを発生しにくくし、より安価である。更に、２つのベクターに代えて１つのベクターのみを使用することは、製造のための複雑さ、時間及びコストを削減する。その上、後続投与のための膣内投与の経路は、自己投与の可能性を提供し、医療従事者によって投与される必要がある筋肉内注射の繰り返しを無効にすると思われる。

したがって、第１の態様では、本発明は、対象において免疫応答を誘導するための方法であって、対象に、抗原をコードするポリヌクレオチドを含む組換えＡｄ２６型アデノウイルス（ｒＡｄ２６）を筋肉内投与することと、その後、同じ組換えアデノウイルス（ｒＡｄ２６）を対象に膣内投与することとを含む方法を提供する。

別途定義しない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、本発明が関係する技術分野の当業者に一般に理解されているのと同じ意味を有する。そうでない場合、本明細書で引用される特定の用語は、本明細書で規定されている意味を有する。

本明細書で引用される全ての特許、公開された特許出願及び刊行物は、本明細書に完全に記載されているかのように参照により組み込まれる。

本明細書で使用される場合及び添付した特許請求の範囲において、単数形「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」及び「その」は、別途文脈が明確に指示しない限り、複数の言及を含むことに留意しなければならない。

本明細書及びそれに続く特許請求の範囲の全体を通して、別途文脈が必要としない限り、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」という語句並びに「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」及び「含んでいる」等の変形形態は、規定の整数若しくは工程又は整数若しくは工程の群を包含するが、任意の他の整数若しくは工程又は整数若しくは工程の群を除外するものではないことを意味することが理解されるであろう。本明細書で使用される場合、「含む」という用語は、「含有する」若しくは「包含する」という用語に置き換えられ得るか、又は本明細書で使用される場合に「有する」という用語に置き換えられ得ることもある。

本明細書で使用される場合、「からなる」は、特許請求の範囲の要素において規定されていない任意の要素、工程又は成分を除外する。本明細書で使用される場合、「本質的に～からなる」は、特許請求の範囲の基本的な特徴及び新規な特徴に実質的に影響を及ぼさない材料又は工程を除外するものではない。上記の「含む」、「含有する」、「包含する」及び「有する」という用語のいずれも、本発明の態様又は実施形態に関連して本明細書で使用される場合には常に、「～からなる」又は「本質的に～からなる」という用語に置き換えられて、本開示の範囲を変更し得る。

本明細書で使用される場合、複数の列挙された要素間を接続する「及び／又は」という用語は、個々の選択肢及び組み合わされた選択肢の両方を包含するものと理解される。例えば、２つの要素が「及び／又は」により接続されている場合、第１の選択肢は、第２の要素を含まない第１の要素を適用することを指す。第２の選択肢は、第１の要素を含まない第２の要素を適用することを指す。第３の選択肢は、第１の要素及び第２の要素を共に適用することを指す。これらの選択肢のいずれか１つは、本明細書で使用される場合、「及び／又は」という用語の意味の範囲内に含まれ、したがって「及び／又は」という用語の要件を満たすものと理解される。複数の選択肢を同時に適用することは、「及び／又は」という用語の意味の範囲内に含まれ、したがって「及び／又は」という用語の要件を満たすものとも理解される。

本発明の方法による第１及び第２の投与は、同じ組換えアデノウイルスＡｄ２６（組換えアデノウイルスベクター、ｒＡｄ２６とも称される）を投与することを含む。組換えアデノウイルスベクターの調製は、当技術分野においてよく知られている。例えば、ｒＡｄ２６ベクターの調製は、国際公開第２００７／１０４７９２号パンフレット及びＡｂｂｉｎｋ ｅｔ ａｌ．，２００７ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ８１：４６５４－６３に記載されている。Ａｄ２６の例示的なゲノム配列は、ＧｅｎＢａｎｋ受入番号ＥＦ １５３４７４及び国際公開第２００７／１０４７９２号パンフレットの配列番号１に見られる。

「アデノウイルスＡｄ２６」という用語は、「血清型Ａｄ２６のアデノウイルス」又は「Ａｄ２６型アデノウイルス」と同義である。本明細書で使用される組換えアデノウイルスＡｄ２６（「ｒＡｄ２６」）は、抗原をコードするポリヌクレオチドを含むアデノウイルスＡｄ２６である。そのようなポリヌクレオチドは、当業者に既知である標準的な遺伝子操作方法によって導入することができる。抗原をコードするポリヌクレオチドは、好ましくは、ヒトなど、ｒＡｄ２６が投与される目標の生物の細胞中で抗原の発現を促進するプロモータと操作可能に連結されている。抗原は、免疫応答が所望される目的の任意の抗原であり得、好ましくは生殖器粘膜を介してヒトなどの生物に感染する病原体によって発現される抗原である。

本発明のアデノウイルスベクターを十分な量で生成するため、パッケージング細胞株が典型的には使用される。パッケージング細胞は、複製欠損ベクター内に欠失又は不活性化されているこれらの遺伝子を含む細胞であり、したがって細胞内でのウイルスの複製を可能にする。好適な細胞株としては、例えば、ＰＥＲ．Ｃ６、９１１、２９３及びＥ１－Ａ５４９が挙げられる。Ａｄ２６は、例えば、単一の相同組換えによってＰＥＲ．Ｃ６細胞中で生成され（Ｆａｌｌａｕｘ ｅｔ ａｌ．，１９９８，Ｈｕｍ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ ９：１９０９－１７）、以前に記載されたように産生することができる（国際公開第２００７／１０４７９２号パンフレット；Ａｂｂｉｎｋ ｅｔ ａｌ．，２００７，Ｊ Ｖｉｒｏｌ ８１：４６５４－６３）。好ましい実施形態では、そのゲノム中のｒＡｄ２６は、例えば、国際公開第０３／１０４４６７号パンフレット及びＡｂｂｉｎｋら（上記）に記載されるように、Ａｄ２６ Ｅ４ ｏｒｆ６のＡｄ５ Ｅ４ ｏｒｆ６による置換を有する。

特定の実施形態では、本発明による組換えアデノウイルスは、ウイルス複製に必要なアデノウイルスゲノムのＥ１領域、例えばＥ１ａ領域及び／又はＥ１ｂ領域の少なくとも１つの必須遺伝子機能が欠損している。特定の実施形態では、本発明によるアデノウイルスベクターは、非必須Ｅ３領域の少なくとも一部が欠損している。特定の実施形態では、ベクターは、Ｅ１領域の少なくとも１つの必須遺伝子機能と、非必須Ｅ３領域の少なくとも一部とが欠損している。アデノウイルスベクターは、「多重欠損」であり得、これは、アデノウイルスベクターが、アデノウイルスゲノムの２つ以上の領域のそれぞれに１つ又は複数の必須遺伝子機能が欠損していることを意味する。例えば、前述のＥｌ欠損又はＥ１、Ｅ３欠損のアデノウイルスベクターは、Ｅ４領域の少なくとも１つの必須遺伝子及び／又はＥ２領域（例えば、Ｅ２Ａ領域及び／又はＥ２Ｂ領域）の少なくとも１つの必須遺伝子が更に欠損していることがある。

本発明の方法で使用されるアデノウイルスは、ヒトアデノウイルスである（ＨＡｄＶ又はＡｄＨｕ；本発明では、ヒトアデノウイルスは、種の表示なしにＡｄを指すことを意味し、例えば、簡単な表記「Ａｄ２６」は、ヒトアデノウイルス血清型２６又は２６型であるＨＡｄＶ２６と同じものを意味する）。

強力な免疫応答をもたらすために、プライムブーストレジメンが一般的に好ましい。したがって、本発明の一実施形態では、アデノウイルスの第１の筋肉内投与は、免疫応答をプライミングするためのプライマーとして見ることができ、その後のアデノウイルスの膣内投与は、免疫化を促進するためのブースターとして見ることができる。本発明では、同じ組み換えＡｄ２６アデノウイルスが使用され、したがって、投与方法は、同種プライムブースト投与レジメンと見ることができる。

したがって、本発明は、同種ベクターの組み合わせを用いて、プライミングにより対象において免疫応答を誘導し、且つその後、免疫応答を促進する方法にも関する。

本発明による方法では、膣内投与されるｒＡｄ２６（すなわち「ブースター」）は、少なくとも１回投与されるが、任意選択で複数回投与することができる。初回膣内投与前及び／又はそれに続いてのいずれかで筋肉内投与を繰り返すことも可能である。しかしながら、好ましくは、ｒＡｄ２６は、筋肉内投与を介して１回のみ投与される。膣内経路を介してｒＡｄ２６を１回のみ投与することも好ましい。場合により、膣内経路を介したｒＡｄ２６の後期ブースター投与（例えば、初回膣内投与（筋肉内投与に続いて行われた）の少なくとも２、３、４又は５年後、好ましくは少なくとも６、７、８、９又は１０年後）は、ｒＡｄ２６でコードされた抗原に対して長期免疫原性を維持するために有益であり得る。

本発明による抗原をコードするポリヌクレオチドは、異種ポリヌクレオチド、すなわちＡｄ２６型アデノウイルス中に天然に存在しないポリヌクレオチドである。ポリヌクレオチドは、標準的な分子生物学技法によってｒＡｄ２６中に導入され得る。

本発明による抗原をコードするポリヌクレオチドは、好ましくは、その抗原に対する防御免疫応答を宿主において引き起こすことができ、例えばその抗原に対する免疫応答を誘導し、且つ／又は対象を、その抗原と関連する疾患又は感染症に対して防御する免疫を対象において生じる（すなわちワクチン接種する）。抗原は、任意の外来物質のもの、例えば病原体のものであり得る。例えば、抗原は、ウイルス抗原、寄生虫抗原、真菌抗原、細菌抗原、原虫抗原又は腫瘍抗原である。

本発明の実施形態によれば、本明細書で使用される「免疫応答を誘導する」は、予防的な目的で感染症に対して対象に防御免疫を提供し、且つ／若しくはワクチン接種すること又は治療的目的で感染症に対して免疫応答を引き起こす必要がある対象において、所望の免疫応答若しくは効果を引き起こすこと、すなわち治療的ワクチン接種を包含する。「免疫応答を誘導する」は、病原性因子に対する治療のための治療的免疫を提供することも包含する。典型的には、予防的ワクチン接種について、組成物及びワクチンは、標的病原体によって依然として感染されていない対象に投与される一方、治療的ワクチン接種について、組成物及びワクチンは、標的病原体によって既に感染された対象に投与され得る。本発明の好ましい方法では、治療的免疫応答は、本明細書に定義されるように、ｒＡｄ２６の筋肉内投与及びその後の膣内投与によって誘導される。当業者は、本発明の免疫応答が、病原体（本明細書では「標的病原体」と称されることもある）又は本明細書に記載される疾患の抗原に対して誘導され、その抗原がｒＡｄ２６中のポリヌクレオチドによってコードされることを認識する。

本発明に関連して使用される場合、「予防する」、「予防すること」及び「予防」という用語は、疾患又は感染症、好ましくは本明細書に定義されるような性感染症の再発、発病、発症若しくは進行の予防若しくは低減を指すか、又は性感染症若しくはその１つ以上の症状の重症度及び／若しくは持続期間の予防若しくは軽減を指す。

本明細書で使用される場合、「治療する」、「治療すること」及び「治療」という用語は、疾患又は感染症、好ましくは本明細書で定義されるような性感染症の進行、重症度及び／若しくは持続期間の軽減若しくは改善並びに／又は疾患の１つ以上の症状を軽減若しくは改善することを指す。

免疫応答は、細胞性免疫応答及び／又は体液性免疫応答であり得る。本発明の好ましい実施形態では、免疫応答は、細胞性免疫応答、より好ましくはＣＤ８＋Ｔ細胞応答を含む。

筋肉内投与の例は、腕の三角筋又は大腿の外側広筋への注射を含む。

本発明による方法では、本発明によるｒＡｄ２６の後続の、例えば第２の投与は、膣内投与である。膣内投与の例は、局所投与を含み、例えばゲルなどの粘性組成物による局所投与を含む。ゲルは、例えば、カルボキシメチルセルロース、ポリマー又は任意の他のゲル形成若しくは粘性物質を含み、例えば国際公開第２０１７０６９７９３号パンフレットを参照されたい。特定の実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、送達ビヒクル、例えばカプセル剤又は坐剤によって膣内投与される。本明細書に定義される組成物の膣投与のための坐剤は、室温で固体であるが、体温で液体であり、したがって膣管内で溶解し、組成物を放出するココアバター及びポリエチレングリコールなどの好適な非刺激性賦形剤と混合することによって調製することができる。

本明細書で使用される対象は、哺乳動物、又は非ヒト霊長類、又はヒトである。好ましくは、対象は、ヒト対象である。

本明細書で使用されるｒＡｄ２６は、組成物中、例えば筋肉内投与のための第１の組成物及び膣内投与のための第２の組成物中に存在し得る。第１及び第２の組成物は、同じであるか又は異なり得、例えば、それらは、任意選択で、意図された投与経路に向けて調整された異なる賦形剤を含み得る。本発明に従って使用される組成物、例えば第１及び第２の組成物は、好ましくは、担体、充填剤、防腐剤、可溶化剤及び／又は希釈剤を含む任意の薬学的に許容される賦形剤を含み得る医薬組成物である。本発明に従って使用するための本明細書に記載される医薬組成物は、例えば、溶液、懸濁液、エマルジョン又はゲルを含む、投与の意図された方法に好適な任意の形態であり得る。好ましい実施形態では、本明細書に定義される組成物は、固体形態又は液体形態で投与される。これに関連して、「薬学的に許容される」という用語は、担体又は賦形剤が、使用される投与量及び濃度において、それらを投与する対象にいかなる望ましくない又は有害な効果も引き起こさないことを意味する。そのような薬学的に許容される賦形剤は、当技術分野において周知であり、本分野における標準教科書に詳細に説明されている。生理食塩水並びに水性デキストロース溶液及びグリセロール溶液も液体担体として利用され得、特に注射液のための液体担体として利用され得る。好適な賦形剤として、下記が挙げられる：デンプン、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、麦芽、米、小麦粉、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、モノステアリン酸グリセロール、タルク、塩化ナトリウム、脱脂粉乳、グリセロール、プロピレン、グリコール、水、カルボキシメチルセルロース、エタノール及び同類のもの。

いくつかの実施形態では、本発明の第１及び／又は第２の組成物は、免疫応答を向上させるためのアジュバントを任意選択で更に含み得る。「アジュバント」及び「免疫刺激剤」という用語は、本明細書では同義的に使用され、免疫系の刺激を引き起こす１つ以上の物質と定義される。特定の実施形態では、本組成物は、アジュバントを含まない。

特定の実施形態では、ｒＡｄ２６の後続の膣内投与は、対象へのｒＡｄ２６の第１の筋肉内投与後、約１～１０週間、例えば２～８週間行われる。特定の実施形態では、第２の組成物は、第１の組成物の投与に続いて約１、２、３、４、５、６、８、９又は１０週間投与される。典型的には、より短い時間間隔、例えば１、２、３、４、５、６、７又は８週間が、レジメンに対する改善されたコンプライアンスを期待するために実際には好ましい。

特定の実施形態では、筋肉内投与と膣内投与との間の時間間隔は、少なくとも１週間、２週間、３週間又は少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２ヶ月以上である。

本発明によるポリヌクレオチドをコードする抗原は、好ましくは、ウイルス、寄生虫若しくは細菌の抗原タンパク質又はその免疫原性ポリペプチドをコードする。「タンパク質」又は「ポリペプチド」という用語は、特定の作用様式、サイズ、３次元構造又は起源を全く考慮せずにアミノ酸の鎖からなる分子を指す。タンパク質の「断片」又は「部分」は、したがって、「タンパク質」と依然として称され得る。本明細書で定義されるタンパク質及び本明細書で定義される任意の方法で使用されるタンパク質は、単離されたタンパク質であり得る。「単離されたタンパク質」は、もはやその天然の環境にはないタンパク質、例えばインビトロ又は組換え細菌又は動物宿主細胞中にあるタンパク質を指すために使用される。抗原タンパク質又は免疫原性ペプチドは、エピトープ（又は抗原決定基）を含む任意のタンパク質又はペプチドであり得る。本発明の好ましい実施形態では、ｒＡｄ２６中のポリヌクレオチドは、ウイルス抗原、寄生虫又は細菌抗原をコードする。そのような抗原は、異なるウイルス、寄生虫又は細菌の野生型株のゲノムを配列決定し、そのようなゲノムからの抗原決定基をコードする核酸をサブクローニングし、それらをアデノウイルスゲノム配列にクローニングすることによって得ることができる。対象に投与されると、本発明によるｒＡｄ２６中のポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドは、対象において発現し、それは、ポリペプチド中に存在する抗原性断片に対する免疫応答をもたらす。

「アミノ酸配列」：これは、タンパク質の又はタンパク質内のアミノ酸残基の順序を指す。換言すれば、タンパク質中のアミノ酸の順序は、アミノ酸配列と称することができる。

「ヌクレオチド配列」：これは、核酸の又は核酸内のヌクレオチドの順序を指す。換言すれば、核酸中のヌクレオチドの順序は、ヌクレオチド配列と称することができる。

異種コード配列をアデノウイルスゲノムに挿入するための方法は、当業者に周知である。例えば、ＤＮＡのクローニング、ＤＮＡ及びＲＮＡの単離、ウエスタンブロット分析、ＲＴ－ＰＣＲ及びＰＣＲ増幅法など、標準的な分子生物学的手法のための方法は、既知の教科書及びマニュアルで説明されている。好ましい実施形態では、本発明による細菌、寄生虫又はウイルス抗原をコードするポリペプチドは、哺乳動物細胞、好ましくはヒト細胞における発現のためにコドン最適化されている。コドン最適化は、当技術分野において広く適用されている技術である。典型的には、異種コード配列がアデノウイルスゲノムのＥ１及び／又はＥ３領域にクローニングされるが、代わりにアデノウイルスゲノムの異なる領域にそれをクローニングすることも可能である。

異種コード配列は、アデノウイルス由来のプロモータ（例えば、Ｍａｊｏｒ Ｌａｔｅ Ｐｒｏｍｏｔｅｒ）の制御下に置かれ得る（すなわち作動可能に連結され得る）か、又は異種プロモータの制御下に置かれ得る。好適な異種プロモータの非限定的な例としては、ＣＭＶの最初期プロモータ（ＣＭＶプロモータ）及びラウス肉腫ウイルス長い末端反復プロモータ（ＲＳＶプロモータ）が挙げられる。好ましくは、プロモータは、発現カセット内の目的の異種遺伝子の上流に位置する。抗原の発現を駆動するために、Ａｄ２６ベクター中で使用することができるＣＭＶプロモータ配列の非限定的な例は、国際公開第２０１７／１０２９２９号パンフレットの配列番号２４に提供されている。

好ましくは、ｒＡｄ２６中のポリヌクレオチドは、ＨＩＶ感染症、ＨＰＶ感染症、ＨＳＶ感染症、クラミジア、淋病、梅毒及びトリコモナス症からなる群から選択される性感染症を引き起こす病原体に由来する抗原タンパク質又は免疫原性ペプチドをコードする。

好ましい実施形態では、ポリヌクレオチドは、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）の抗原タンパク質又は免疫原性ペプチドをコードする。好ましくは、抗原タンパク質は、ＨＰＶ株のＨＰＶ１６型（ＨＰＶ１６）、ＨＰＶ１８型（ＨＰＶ１８）、ＨＰＶ３１型（ＨＰＶ３１）、ＨＰＶ３３型（ＨＰＶ３３）、ＨＰＶ３５型（ＨＰＶ３５）、ＨＰＶ３９型（ＨＰＶ３９）、ＨＰＶ４５型（ＨＰＶ４５）、ＨＰＶ５１型（ＨＰＶ５１）、ＨＰＶ５２型（ＨＰＶ５２）、ＨＰＶ５６型（ＨＰＶ５６）、ＨＰＶ５８型（ＨＰＶ５８）、ＨＰＶ５９型（ＨＰＶ５９）、ＨＰＶ６８型（ＨＰＶ６８）、ＨＰＶ７３型（ＨＰＶ７３）からのものである。より好ましくは、抗原タンパク質は、ＨＰＶ１６及び／又はＨＰＶ１８からのものである。

特定の実施形態では、ポリヌクレオチドは、ＨＰＶ Ｅ１タンパク質、例えばＨＰＶ１６ Ｅ１タンパク質（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ受け入れ番号：ＡＡＡ４６９３６．１の配列をコードするポリヌクレオチド）又はＨＰＶ１８ Ｅ１タンパク質（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ受け入れ番号：ＡＡＡ９９５１６．１の配列をコードするポリヌクレオチド）の少なくとも１つのエピトープをコードする。

特定の実施形態では、ポリヌクレオチドは、ＨＰＶ Ｅ２タンパク質、例えばＨＰＶ１６ Ｅ２タンパク質又はＨＰＶ１８ Ｅ２タンパク質の少なくとも１つのエピトープをコードする。特定の実施形態では、Ｅ２タンパク質は、例えば、そのトランス活性化及び／又はＤＮＡ結合ドメイン、例えば欠失、突然変異又はタンパク質の他の部分の構造的再編成によって不活性化され得る。特定の実施形態では、Ｅ２は、トランス活性化ドメインに変異を有し、他の実施形態では、Ｅ２は、ＤＮＡ結合ドメインに変異を有し、更なる実施形態では、Ｅ２は、トランス活性化ドメイン及びＤＮＡ結合ドメインの両方に変異を有する。更に別の代替実施形態では、Ｅ２ポリペプチドは、並べ替えられた（シャッフルされた）断片に分割され、免疫原性のＥ２エピトープを維持しながらＥ２活性を抑制する。特定の実施形態では、Ｅ２タンパク質は、野生型Ｅ２タンパク質である。特定の他の実施形態では、Ｅ２タンパク質は、（野生型Ｅ２タンパク質と比べて）そのＤＮＡ結合ドメイン内に欠失又は１つ以上の突然変異を有する。

特定の実施形態では、ポリヌクレオチドは、ＨＰＶ Ｅ６タンパク質、例えばＨＰＶ１６ Ｅ６タンパク質又はＨＰＶ１８ Ｅ６タンパク質の少なくとも１つのエピトープをコードする。ＨＰＶ Ｅ６タンパク質は、当技術分野において以前に記載されたように、発癌能を欠失するために変異及び／又は再配列を含有し得る。

特定の実施形態では、ポリヌクレオチドは、ＨＰＶ Ｅ７タンパク質、例えばＨＰＶ１６ Ｅ７タンパク質又はＨＰＶ１８ Ｅ７タンパク質の少なくとも１つのエピトープをコードする。ＨＰＶ Ｅ７タンパク質は、当技術分野において以前に記載されたように、発癌能を欠失するために変異及び／又は再配列を含有し得る。

本発明の好ましい実施形態では、ポリヌクレオチドは、ＨＰＶのＥ６及びＥ７の両方のエピトープ、好ましくはＨＰＶ１６及び／又はＨＰＶ１８のＥ６及びＥ７のエピトープをコードする。特定の実施形態では、ポリヌクレオチドは、例えば、国際公開第２０１７／０２９３６０号パンフレットに詳細に記載されるように、ＨＰＶ１６ Ｅ６及びＥ７タンパク質の（本質的に）全てのＴ細胞エピトープが存在するように並べ換えられ、部分的に重複する断片の形態で実際上はＨＰＶ１６の完全なＥ６及びＥ７アミノ酸配列を含む融合タンパク質をコードする。特定の実施形態では、Ｅ６及びＥ７の両方のエピトープをコードするポリヌクレオチドは、例えば、国際公開第２０１７／０２９３６０号パンフレットに詳細に記載されるように、ＨＰＶのＥ２タンパク質の少なくとも１つのエピトープを更に含む。本発明で使用することができるＨＰＶ抗原のいくつかの非限定的な例は、ＨＰＶ１６－Ｅ６Ｅ７ＳＨ（国際公開第２０１７／０２９３６０号パンフレットの配列番号１）、ＨＰＶ１６－Ｅ２Ｅ６Ｅ７ＳＨ（国際公開第２０１７／０２９３６０号パンフレットの配列番号３）、ＨＰＶ１６－Ｅ６Ｅ７Ｅ２ＳＨ（国際公開第２０１７／０２９３６０号パンフレットの配列番号５）、ＨＰＶ１８－Ｅ６Ｅ７ＳＨ（国際公開第２０１７／０２９３６０号パンフレットの配列番号２０）又はＨＰＶ１８－Ｅ２Ｅ６Ｅ７ＳＨ（国際公開第２０１７／０２９３６０号パンフレットの配列番号２２）などの国際公開第２０１７／０２９３６０号パンフレットに記載されたものである。これらの抗原をコードする好適な核酸配列の例も国際公開第２０１７／０２９３６０号パンフレットに提供されており、例えばその中の配列番号２（ＨＰＶ１６－Ｅ６Ｅ７ＳＨをコードする）、その中の配列番号４（ＨＰＶ１６－Ｅ２Ｅ６Ｅ７ＳＨをコードする）、その中の配列番号６（ＨＰＶ１６－Ｅ６Ｅ７Ｅ２ＳＨをコードする）、その中の配列番号２１（ＨＰＶ１８－Ｅ６Ｅ７ＳＨをコードする）及びその中の配列番号２３（ＨＰＶ１８－Ｅ２Ｅ６Ｅ７ＳＨをコードする）などである。

ＨＰＶ抗原配列の他の例は、国立バイオテクノロジー情報センター（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ＮＣＢＩ））によって提供されるＧｅｎＢａｎｋ配列データベース（「ＧｅｎＢａｎｋ」）などの公的なデータベースから当業者に入手可能である。

好ましくは、ポリヌクレオチドは、ＨＰＶ Ｅ６タンパク質若しくはその抗原性部分及び／又はＨＰＶ Ｅ７タンパク質若しくはその抗原性部分をコードする。更により好ましくは、ポリヌクレオチドは、ＨＰＶ Ｅ６及びＥ７タンパク質の両方のエピトープをコードする。特定の実施形態では、ポリヌクレオチドは、配列番号１を含むか又はそれからなる。特定の実施形態では、ポリヌクレオチドは、配列番号２を含むか又はそれからなるタンパク質をコードする。

別の好ましい実施形態では、ポリヌクレオチドは、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、好ましくはＨＩＶ－１の抗原タンパク質又は免疫原性ペプチドをコードする。一実施形態では、抗原タンパク質は、ＨＩＶグループ抗原（Ｇａｇ）、ポリメラーゼ（Ｐｏｌ）及び／若しくはエンベロープ（Ｅｎｖ）タンパク質又はその抗原性部分であるか又はそれらに由来する。一実施形態では、抗原は、ＨＩＶ－１ Ｇａｇ、Ｐｏｌ及び／又はＥｎｖ抗原に由来する「モザイク」抗原である。そのようなモザイク抗原は、他によって記載されており、可能性のあるＴ細胞エピトープの最大範囲を提供しようとして開発されている（例えば、Ｂａｒｏｕｃｈ ｅｔ ａｌ，Ｎａｔ Ｍｅｄ ２０１０，１６：３１９－３２３）。モザイク抗原は、野生型の天然に存在するＨＩＶ－１抗原と長さ及びドメイン構造が類似している。例えば、記載され、ワクチンで使用されるモザイクＨＩＶ抗原としては、Ｂａｒｏｕｃｈら（上記）に記載されているもの及び例えば国際公開第２０１０／０５９７３２号パンフレット又は国際公開第２０１７／１０２９２９号パンフレットに記載されているものが挙げられる。本発明で使用することができる好適なモザイクＨＩＶ抗原の非限定的な例としては、（ｉ）国際公開第２０１７／１０２９２９号パンフレットの配列番号１（「ｍｏｓ１．Ｇａｇ」）又は配列番号２（「ｍｏｓ２．Ｇａｇ」）に記載されているアミノ酸配列を有するものなど、国際公開第２０１７／１０２９２９号パンフレットに記載されているモザイクＧａｇ抗原配列；（ｉｉ）国際公開第２０１７／１０２９２９号パンフレットの配列番号３（「ｍｏｓ１．Ｐｏｌ」）又は配列番号４（「ｍｏｓ２．Ｐｏｌ」）に記載されているアミノ酸配列を有するものなど、国際公開第２０１７／１０２９２９号パンフレットに記載されているモザイクＰｏｌ抗原配列；（ｉｉｉ）国際公開第２０１７／１０２９２９号パンフレットの配列番号５（「ｍｏｓ１．Ｅｎｖ」）又は配列番号１８（「ｍｏｓ２Ｓ．Ｅｎｖ」）に記載されているアミノ酸配列を有するものなど、国際公開第２０１７／１０２９２９号パンフレットに記載されているモザイクＥｎｖ抗原配列；若しくはその融合体、例えばｍｏｓ１．ＧａｇＰｏｌ（国際公開第２０１７／１０２９２９号パンフレットの配列番号２８）又はｍｏｓ２．ＧａｇＰｏｌ（国際公開第２０１７／１０２９２９号パンフレットの配列番号２９）の１つ以上を含む。これらの抗原をコードする好適な核酸配列の例も国際公開第２０１７／１０２９２９号パンフレットに提供されており、例えばその中の配列番号２０（ｍｏｓ１．ＧａｇＰｏｌをコードする）、配列番号２１（ｍｏｓ２．ＧａｇＰｏｌをコードする）、配列番号２２（ｍｏｓ１．Ｅｎｖをコードする）及び配列番号２３（ｍｏｓ２Ｓ．Ｅｎｖをコードする）などである。

本発明の好ましい一実施形態では、ポリヌクレオチドは、Ｇａｇ及びＰｏｌ融合タンパク質（例えば、「ｍｏｓ１．ＧａｇＰｏｌ」又は「ｍｏｓ２．ＧａｇＰｏｌ」）をコードする。特定の実施形態では、ポリヌクレオチドは、配列番号３を含むか又はそれからなる。特定の実施形態では、ポリヌクレオチドは、配列番号４を含むか又はそれからなるタンパク質をコードする。

本発明の別の好ましい実施形態では、ポリヌクレオチドは、Ｅｎｖヌクレオチド、例えばｍｏｓ１．Ｅｎｖ又はｍｏｓ２Ｓ．Ｅｎｖをコードする。特定の実施形態では、Ａｄ２６ベクターの組み合わせが使用され、ここでは、各Ａｄ２６ベクターは、前述のような抗原をコードするポリヌクレオチドを含み、Ａｄ２６ベクターの組み合わせは、前述のような抗原の組み合わせ、例えば（ｉ）ｍｏｓ１．ＧａｇＰｏｌ、（ｉｉ）ｍｏｓ２．ＧａｇＰｏｌ、（ｉｉｉ）ｍｏｓ１．Ｅｎｖ、及び（ｉｖ）ｍｏｓ２Ｓ．Ｅｎｖの組み合わせを一緒にコードする。そのようなベクターの組み合わせは、単一の組成物中で混合することができる（例えば、国際公開第２０１７／１０２９２９号パンフレットを参照されたい）。

ＨＩＶ Ｇａｇ、Ｐｏｌ、Ｅｎｖ抗原配列の他の例又はＮｅｆ、Ｔａｔ、Ｒｅｖ、Ｖｉｆ、Ｖｐｒ若しくはＶｐｕなどの他のＨＩＶ抗原配列は、ＧｅｎＢａｎｋなどの公的なデータベースから当業者に利用可能である。ＨＩＶ抗原の多くの異なるバリアントが記載されており、本明細書で使用することができる。別の非限定的な例は、国際公開第２０１３／１１０８１８号パンフレットに記載されるＨＩＶＴ細胞免疫原であろう。

特定の実施形態では、例えばｇｐ１４０タンパク質などの単離されたＨＩＶ Ｅｎｖタンパク質抗原を更に投与することによる、そのベクターが本発明に従って投与される更なる成分を対象に投与することができる（例えば、国際公開第２０１７／１０２９２９号パンフレットを参照されたく、例えば国際公開第２０１７／１０２９２９号パンフレットの配列番号７のアミノ酸３０～７０８及び／又は配列番号３６のアミノ酸３０～７２４を有する１つ又は両方のタンパク質）。

特定の実施形態では、ポリヌクレオチドは、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）、好ましくはＨＳＶ－２の抗原タンパク質又は免疫原性ペプチドをコードする。一実施形態では、この抗原タンパク質は、ｇＨ、ｇＬ、ｇＭ、ｇＢ、ｇＣ、ｇＫ、ｇＥ、ｇＤＩＣＰ２７、ＩＣＰ４７、ＩＣＰ４、ＩＣＰ３６，ＶＰ２２、ＲＲ２、ＵＬ１９、ＵＬ４７、ＶＰ１１／１２又はＶＰ１３／１４から選択されるＨＳＶタンパク質であるか又はそれに由来する。

特定の実施形態では、抗原をコードするポリヌクレオチドは、クラミジア・トラコマチス（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ）の抗原タンパク質又は免疫原性ペプチドをコードする。一実施形態では、抗原タンパク質は、ＰｅｐＡ、Ｌｃｒ、ＡｒｔＪ、ＤｎａＫ、ＣＴ３９８ＯｍｐＨ様、Ｌ７／Ｌ１２、ＯｍｃＡ、ＡｔｏＳ、Ｅｎｏ、ＨｔｒＡ、ＭｕｒＧ、ＭＯＭＰ、ＰｍｐＤ、ＭＩＰ及びＰｇｐ３から選択されるクラミジア・トラコマチス（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ）タンパク質であるか又はそれに由来する。

特定の実施形態では、ポリヌクレオチドは、淋菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ）の抗原タンパク質又は免疫原性ペプチドをコードする。一実施形態では、抗原タンパク質は、ＮＧＯ０４１６、ＮＧＯ０６９０、ＮＧＯ０９４８、ＮＧＯ１０４３、ＮＧＯ１２１５、ＮＧＯ１７０１、ＢａｍＡ、ＬｐｔＤ、ＴａｍＡ、ＮＧＯ２０５４、ＮＧＯ２１３９、Ｌｅｃｔｉｎ、Ａｇ４７３、Ｏｍｐ８５及びＦｒｐＢから選択される淋菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ）タンパク質であるか又はそれに由来する。

特定の実施形態では、ポリヌクレオチドは、梅毒トレポネーマ（Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ ｐａｌｌｉｄｕｍ）の抗原タンパク質又は免疫原性ペプチドをコードする。一実施形態では、抗原タンパク質は、Ｔｐ９２、Ｇｐｄ、ＴｐｒＫ及びＴｐ０４３５、Ｔｐ０７５１（Ｐａｌｌｉｌｙｓｉｎ）、フラジェリン及び４７キロダルトン膜内在性リポタンパク質から選択される梅毒トレポネーマ（Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ ｐａｌｌｉｄｕｍ）タンパク質であるか又はそれに由来する。

特定の実施形態では、ポリヌクレオチドは、膣トリコモナス（Ｔｒｉｃｈｏｍｏｎａｓ ｖａｇｉｎａｌｉｓ）の抗原タンパク質又は免疫原性ペプチドをコードする。一実施形態では、抗原タンパク質は、α－アクチニン又はＮ末端エノラーゼ（Ｇｅｎ ｅＩＤｓ ＴＶＡＧ＿３２９４６０、ＴＶＡＧ＿０４３５００、ＴＶＡＧ＿４６４１７０、ＴＶＡＧ＿３５８１１０、ＴＶＡＧ＿２６３７４０、ＴＶＡＧ＿４８７６００、ＴＶＡＧ＿１７０３７０、ＴＶＡＧ＿２８２０）から選択される膣トリコモナス（Ｔｒｉｃｈｏｍｏｎａｓ ｖａｇｉｎａｌｉｓ）タンパク質であるか又はそれに由来する。

一般に、前述したもの及び他のタンパク質などのタンパク質の配列、例えばＨＳＶ、クラミジア・トラコマチス（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ）、淋菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ）、梅毒トレポネーマ（Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ ｐａｌｌｉｄｕｍ）及び膣トリコモナス（Ｔｒｉｃｈｏｍｏｎａｓ ｖａｇｉｎａｌｉｓ）の配列は、国立テクノロジー情報センター（ＮＣＢＩ）によって提供されるＧｅｎＢａｎｋ配列データベースなどの公的なデータベースにおいて当業者に利用可能である。

一実施形態では、本発明による方法は、性感染症（ＳＴＤ）に対して免疫応答を誘導するためのものである。性感染症は、性感染症（ＳＴＩ）又は性病（ＶＤ）と称されることもあり、これらは、性的接触によって伝染し、生殖器領域の皮膚若しくは粘膜上で生存する微生物によって引き起こされるか、又は性交中の精液、膣分泌液若しくは血液を介して伝染する疾患である。一部のＳＴＤは、代わりに、滅菌されていない薬剤針の使用を通して、出産又は授乳中の母体から乳児に且つ輸血中に伝播し得る。一般的に知られるＳＴＤとしては、ＡＩＤＳ／ＨＩＶ感染症、クラミジア、性器ヘルペス、淋病、ＨＰＶ感染症誘発性疣贅又は癌、トリコモナス症及び梅毒が挙げられる。

したがって、特定の実施形態では、本発明による方法において、免疫応答は、ＨＩＶ感染症、ＨＳＶ感染症（例えば、性器ヘルペス）、ＨＰＶ感染症誘発性疾患、クラミジア、淋病、トリコモナス症及び梅毒からなる群から選択されるＳＴＤに対して誘導される。

一実施形態では、本発明は、ＨＩＶに対して免疫応答を誘導する方法を含む。ヒト免疫不全ウイルス感染症及び後天性免疫不全症候群（ＨＩＶ／ＡＩＤＳ）は、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）による感染によって引き起こされる病状の領域である。ＨＩＶは、主に、無防備なセックス（アナル及びオーラルセックスを含む）、汚染された輸血、皮下注射針により及び妊娠、出産又は授乳中に母体から幼児に伝播する。

一実施形態では、本発明は、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）に対して免疫応答を誘導する方法を含む。ＨＰＶ感染症は、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）によって引き起こされる感染症である。種々のＨＰＶ型が存在し（１２０を超える型が同定されており、番号により参照される）、一般にワクチンにより対処される必要がある各型について、型特異的抗原がワクチン中に組み込まれる必要があり得るが、特定の抗原について幾つかの交差反応性が存在し得る。１６、１８、３１、３３、３５、３９、４５、５１、５２、５６、５８、５９、６８、７３及び８２型は、発癌性の「高リスクの」性感染性ＨＰＶであり、これらの型による感染は、とりわけ、子宮頸部異形成（ＣＩＮ）、外陰上皮内腫瘍（ＶＩＮ）、膣上皮内腫瘍（ＶａＩＮ）、陰茎上皮内腫瘍（ＰＩＮ）及び／又は肛門上皮内腫瘍（ＡＩＮ）並びに頸部、外陰部、膣、陰茎、肛門、口又は喉の癌の発症をもたらし得る。

一実施形態では、本発明は、ＨＳＶに対して免疫応答を誘導する方法を含む。ＨＳＶは、２つの型、ＨＳＶ－１及びＨＳＶ－２に分類される。ＨＳＶによる感染症は、例えば、ＳＴＤ性器ヘルペス、生殖器の単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）による感染症を引き起こし得る。

一実施形態では、本発明は、クラミジア・トラコマチス（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ）に対する免疫応答を誘導する方法を含む。クラミジア・トラコマチス（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ）による感染症は、ＳＴＤクラミジアを引き起こす場合があり、この疾患は、トラコーマ、性病性リンパ肉芽腫、非淋菌性尿道炎、子宮頚炎、卵管炎、骨盤内炎症性疾患を含む様々な形態で現れ得る。

一実施形態では、本発明は、淋菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ）に対する免疫応答を誘導する方法を含む。細菌の淋菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ）による感染症は、ＳＴＤ淋病を引き起こし得る。感染症は、生殖器、口及び／又は直腸の感染症を伴い得る。

一実施形態では、本発明は、梅毒トレポネーマ（Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ ｐａｌｌｉｄｕｍ）に対する免疫応答を誘導する方法を含む。細菌の梅毒トレポネーマの亜種（Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ ｐａｌｌｉｄｕｍ ｓｕｂｓｐｅｃｉｅｓ ｐａｌｌｉｄｕｍ）によって引き起こされる性感染症は、梅毒として知られている。

一実施形態では、本発明は、膣トリコモナス（Ｔｒｉｃｈｏｍｏｎａｓ ｖａｇｉｎａｌｉｓ）に対する免疫応答を誘導する方法を含む。寄生虫膣トリコモナス（Ｔｒｉｃｈｏｍｏｎａｓ ｖａｇｉｎａｌｉｓ）によって引き起こされる性感染症は、トリコモナス症として知られている。

更なる態様では、本発明は、対象における免疫応答の誘導で使用するための、抗原をコードするポリヌクレオチドを含む組換えＡｄ２６型アデノウイルス（ｒＡｄ２６）を提供し、このｒＡｄ２６は、筋肉内投与、その後の膣内投与のためのものである。特定の実施形態では、ｒＡｄ２６は、本明細書に記載されるような細菌、寄生虫若しくはウイルス抗原又はその抗原性断片に対する免疫応答の誘導において使用するためのものである。特定の実施形態では、ｒＡｄ２６は、本明細書に記載されるようなＳＴＤに対する免疫応答の誘導において使用するためのものである。

好ましい実施形態では、ｒＡｄ２６は、ＨＰＶ又はＨＰＶ感染症に対する免疫応答の誘導において使用するためのものであり、本明細書に記載されるポリヌクレオチドは、ＨＰＶ Ｅ６タンパク質若しくはその抗原性部分及び／又はＨＰＶ Ｅ７タンパク質若しくはその抗原性部分をコードする。好ましくは、ポリヌクレオチドは、ＨＰＶ Ｅ６及びＥ７タンパク質の両方のエピトープをコードする。

別の好ましい実施形態では、ｒＡｄ２６は、ＨＩＶに対する免疫応答の誘導で使用するためのものであり、本明細書に記載されるポリヌクレオチドは、ＨＩＶ Ｅｎｖ、Ｇａｇ若しくはＰｏｌタンパク質又はその抗原性部分をコードする。

更なる態様では、本発明は、対象においてウイルス感染症を治療及び／又は予防するための方法であって、対象に、その感染症が治療及び／又は予防されるウイルスの抗原をコードするポリヌクレオチドを含む組換えＡｄ２６型アデノウイルス（ｒＡｄ２６）を投与することを含む方法を提供し、対象への投与は、ｒＡｄ２６の筋肉内投与、それに続くｒＡｄ２６の膣内投与を含む。

特定の実施形態では、本発明の方法による対象へのｒＡｄ２６の投与は、有効量の、ｒＡｄ２６を含む１つ以上の組成物の投与を含む。本明細書で使用する場合、「有効量」又は「免疫学的有効量」は、所望の免疫作用又は免疫応答を、それを必要とする対象において誘導するのに十分な組成物の量を意味する。一実施形態では、有効量は、免疫応答を、それを必要とする対象において誘導するのに十分な量を意味する。別の実施形態では、有効量は、免疫を、それを必要とする対象において発生させるのに十分な量を意味し、例えばウイルス感染などの疾患に対する保護作用をもたらすのに十分な量を意味する。有効量は、対象の身体的状態、年齢、体重、健康状態など；免疫応答を誘導するか又は防御免疫を提供するかのいずれかの特定の用途；投与される特異的組換えベクター；投与される組換えベクターによってコードされる免疫原又は抗原ポリペプチド；投与される特定の抗原ポリペプチド；並びに特定の疾患、例えばその免疫が望まれるウイルス感染症などの様々な因子に依存して変化し得る。当業者は、有効量を、本開示を考慮して容易に決定することができる。１回の投与中に対象に提供されるワクチン活性成分の全用量は、当業者に公知であるように変動し得、ｒＡｄ２６などのアデノウイルスについては、一般に１×１０^７ウイルス粒子（ｖｐ）～１×１０^１２ｖｐ、好ましくは１×１０^９ｖｐ～１×１０^１１ｖｐ、例えば５×１０^９ｖｐ～５×１０^１０ｖｐである。

更に他の態様では、本発明は、本明細書に記載される組換えＡｄ２６型アデノウイルスを含む第１の組成物と、本明細書に記載されるＡｄ２６型の第２の組成物とを含むパーツキットを提供する。特定の実施形態では、パーツキットは、抗原をコードするポリヌクレオチドを含む組換えＡｄ２６型アデノウイルス（ｒＡｄ２６）を含む第１の組成物と、ｒＡｄ２６を含む第２の組成物とを含み、第１の組成物は、筋肉内投与で使用するためのものであり、及び第２の組成物は、膣内投与で使用するためのものである。

パーツキットは、免疫応答の誘導で使用するためのものであり、好ましくは本明細書で定義されるような疾患、感染症又は抗原に対する免疫応答の誘導で使用するためのものである。

任意選択で、パーツキットは、添付文書を更に含む。添付文書は、使用説明書を含み得る。加えて又は代替的に、添付文書は、患者向け医薬品情報及び製品概要（ＳｍＰＣ）の少なくとも１つであり得る。

したがって、第１の態様では、本発明は、対象において免疫応答を誘導するための方法であって、対象に、抗原をコードするポリヌクレオチドを含む組換えＡｄ２６型アデノウイルス（ｒＡｄ２６）を筋肉内投与することと、その後、ｒＡｄ２６を対象に膣内投与することとを含む方法を提供する。

第２の態様では、本発明は、対象における免疫応答の誘導で使用するための、抗原（ｒＡｄ２６）をコードするポリヌクレオチドを含む組換えＡｄ２６型アデノウイルスを提供し、ｒＡｄ２６は、対象に対する筋肉内投与及びその後の膣内投与のためのものである。

第３の態様では、本発明は、抗原をコードするポリヌクレオチドを含む組換えＡｄ２６型アデノウイルス（ｒＡｄ２６）の、免疫応答を誘導するための医薬品の製造のための使用を提供し、ｒＡｄ２６は、対象に対する筋肉内投与及びその後の膣内投与のためのものである。

第４の態様では、本発明は、抗原をコードするポリヌクレオチドを含む組換えＡｄ２６型アデノウイルス（ｒＡｄ２６）を含む第１の組成物と、ｒＡｄ２６を含む第２の組成物とを含むパーツキットを提供し、第１の組成物は、筋肉内投与で使用するためのものであり、及び第２の組成物は、膣内投与で使用するためのものである。

第５の態様では、本発明は、対象においてウイルス感染症を治療及び／又は予防するための方法であって、対象に、ウイルス感染症を引き起こしたか、又はその予防が望ましいウイルスの抗原をコードするポリヌクレオチドを含む組換えＡｄ２６型アデノウイルス（ｒＡｄ２６）を投与することを含み、投与は、ｒＡｄ２６の筋肉内投与、その後のｒＡｄ２６の膣内投与を含む、方法を提供する。

当業者には、例えば、抗原及び／又はポリヌクレオチド、ｒＡｄ２６の起源並びにアイデンティティ、投与経路、医薬組成物、投与時期、対象、治療若しくは予防される疾患など、第１の態様に関する要素の上記で提供された説明が第２、第３、第４及び第５の態様におけるこれらの要素に等しく適用可能であることが明確であろう。

様々な刊行物、論文及び特許が背景技術及び本明細書の全体を通して引用又は記載されている。本明細書に含まれる文献、行為、材料、デバイス、物品などの説明は、本発明に関する状況を提供することを目的とするものである。そのような説明は、これらの内容のいずれか又は全てが、開示又は特許請求されるあらゆる発明に関する先行技術の一部を形成することを認めるものではない。

配列の説明

本発明の下記の実施例により、本発明の性質を更に説明する。下記の実施例は、本発明を限定せず、本発明の範囲は、添付の特許請求の範囲により決定されるものであることを理解すべきである。

実施例１：マウスにおけるＨＰＶ１６のＥ６及びＥ７の融合タンパク質を発現するアデノウイルスベクターＡｄ２６ベクターを含む第１及び第２の組成物の投与によって誘導される粘膜細胞免疫応答
材料及び方法
免疫化の５日前に、動物にデポ・プロベラ（３ｍｇ／マウス）を皮下注射（ＳＣ）し、マウスの月経周期を同調させた。テストしたＡｄ２６ベクターは、ＨＰＶ１６のＥ６及びＥ７抗原の融合タンパク質を発現した（Ａｄ２６．ＨＰＶ１６の抗原配列は、配列番号２として提供され、ヌクレオチド配列は、配列番号１として提供される）。ベクターを１０^１０ウイルス粒子（ｖｐ）の用量において筋肉内投与でテストした（ＩＭ、２群及び３群）一方、対照マウス（１群）は、導入遺伝子を発現しない１０^１０のＡｄ２６ベクターを受けた（Ａｄ２６．空）。７日目、１４日目及び２１日目に１群及び２群の動物は、ＰＢＳを膣内で受けた（ＩＶＡＧ）。初回投与から２週間後、３群のマウスは、４％のカルボキシメチルセルロース（ワクチンが膣管内の局所にとどまることを促進するゲル）中に再懸濁されたＡｄ２６．ＨＰＶ１６ベクター（１０^１０ｖｐ）のＩＶＡＧを受けるか、又はマウスは、ＰＢＳ ＩＶＡＧを受け、動物を２週間後に安楽死処分した（実験セットアップの概略図については、図１Ａを参照されたい）。

ＨＰＶ１６－Ｅ７抗原に対する免疫応答を、テトラマー分析と組み合わせたフローサイトメトリーなどの確立された免疫学的アッセイを使用して測定した。

結果
Ａｄ２６．ＨＰＶ１６による単一ＩＭ免疫化は、膣粘膜においていくらかのＨＰＶ１６－Ｅ７特異的組織常在性メモリＴ細胞応答を誘導した（図１Ｂ）。対照的に、ＩＭ／ＩＶＡＧ同種２回投与Ａｄ２６．ＨＰＶ１６免疫化レジメンは、膣粘膜内で検出される抗原特異的組織常在性メモリＣＤ８Ｔ細胞を増強させ、Ａｄ２６．ＨＰＶ１６の単一ＩＭ免疫化によって誘導されるものの５倍を超える増加をもたらした（平均群応答：ＩＭ Ａｄ２６．ＨＰＶ１６：１１．６７％；ＩＭ／ＩＶＡＧ Ａｄ２６．ＨＰＶ１６：５８．５７％）。約２．５倍の増強は、膣管におけるＨＰＶ１６－Ｅ７特異的ＣＤ８Ｔ細胞の％でも見られた（図１Ｃ）。ＣＤ１０３＋Ｔ細胞の誘導は、これらが感染部位において感染細胞を殺傷するために必要な細胞であるため、望ましい効果である。例えば、ＣＤ１０３は、ＨＩＶ感染中の女性生殖管における子宮頸部Ｔ細胞応答を予測するためのサロゲートマーカーとして使用されており（Ｋｉｒａｖｕ ｅｔ ａｌ，２０１１，Ｃｌｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４１：１４３－１５１）、ＣＤ１０３は、子宮頸部癌の腫瘍反応性Ｔ細胞浸潤の迅速評価のための有望なマーカーであり、ＨＰＶ Ｅ６／Ｅ７標的化免疫療法のための有望な応答バイオマーカーであることが報告された（Ｋｏｍｄｅｕｒ ｅｔ ａｌ，２０１７，Ｏｎｃｏｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，２０１７，ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１０８０／２１６２４０２Ｘ．２０１７．１３３８２３０）。したがって、本発明のレジメンの目的の抗原をコードするＡｄ２６ベクター（ｒＡｄ２６）の筋肉内投与、その後の同じｒＡｄ２６の膣内投与は、望ましいタイプの免疫応答の強力な増強をもたらす。これまで、そのような応答は、同種ベクターの異なる時点での投与でのみ示されていたが、驚くべきことに、ここでは同じＡｄ２６ベクターを使用することによってもこれが可能であると思われる。

実施例２：ＩＭの第１投与とＩＶＡＧの第２投与との間の時間間隔は、マウスにおいて誘導された粘膜細胞免疫の量及び品質に影響を及ぼさない。
材料及び方法
マウスは、Ａｄ２６．ＨＰＶ１６又は導入遺伝子を含まないＡｄ２６ベクター（Ａｄ２６．空）の１０^１０ＶＰでの投与を受けた。第２の免疫化の１週間前に、動物にデポ・プロベラ（３ｍｇ／マウス）をＳＣ注射し、マウスの月経周期を同調させた。その後、動物に、最初の免疫化から２週間後又は８週間後のいずれかでＡｄ２６．ＨＰＶ１６をＩＭ又はＩＶＡＧ経路を介して投与した。第２の投与から２週間後、動物を安楽死処理した（実験セットアップの概略図については、図２Ａを参照されたい）。

結果
ＨＰＶ１６－Ｅ７特異的ＣＤ１０３＋組織常在性メモリＣＤ８Ｔ細胞の有意に高い誘導がＡｄ２６．ＨＰＶ１６でＩＭ／ＩＭを介して投与された動物と比べて、間隔に関係なく、ＩＭ／ＩＶＡＧを介して投与された動物の頸膣部粘膜において検出された（図２Ｂ）。第１の投与と第２の投与との間の間隔は、頸膣部組織におけるＨＰＶ１６に特異的な組織常在性メモリＴ細胞の誘導に決定的な影響を及ぼさなかった（図２Ｂ）。ＩＭ／ＩＶＡＧ適用は、適用のＩＭ／ＩＭ経路と比べて、Ａｄ２６中和抗体のわずかに低い血清レベルを誘導する傾向があった（図２Ｃ）。ＩＭ／ＩＶＡＧに対する全身応答及びＩＭ／ＩＭに対する全身応答も、脾臓におけるＨＰＶ１６－Ｅ７特異的ＣＤ８Ｔ細胞の％を測定することによって比較したところ（図２Ｄ）、全身応答に有意差は観察されなかった。

実施例３：Ａｄ２６単独又は膣内のＴＬＲアゴニストのイミキモドを組み合わせた筋肉内－膣内２回投与レジメン後の膣粘膜におけるＨＩＶ特異的ＣＤ８Ｔ細胞免疫応答の比較。
材料及び方法
マウスは、Ａｄ２６．Ｍｏｓ１．ＧａｇＰｏｌ（抗原配列は、配列番号３として提供され、ヌクレオチド配列は、配列番号４として提供されている）又は導入遺伝子を含まないＡｄ２６ベクター（Ａｄ２６．空）の１０^１０ＶＰでの初回のＩＭ投与を受けた。２回目の免疫化の１週間前に、動物にデポ・プロベラ（３ｍｇ／マウス）をＳＣ注射し、マウスの月経周期を同調させた。その後、動物に初回免疫化から２週間後、Ａｄ２６．Ｍｏｓ１．ＧａｇＰｏｌ単独で若しくはＩＶＡＧ経路を介してイミキモドゲルと組み合わせたＡｄ２６．Ｍｏｓ１．ＧａｇＰｏｌを投与するか、又は動物にＡｄ２６．Ｍｏｓ１．ＧａｇＰｏｌ若しくは導入遺伝子を含まないＡｄ２６ベクター（Ａｄ２６．空）を１０^１０ＶＰで筋肉内注射する。２回目の投与から２週間後、動物を安楽死処分する（実験セットアップの概略図については、図３を参照されたい）。Ｍｏｓ１．ＧａｇＰｏｌ挿入に特異的なＣＤ８Ｔ細胞の誘導を、限定されないが、膣組織及び脾臓におけるＨＩＶ Ｇａｇ特異的ＣＤ８Ｔ細胞に対して染色するための多量体と組み合わせたフローサイトメトリーなどの様々な免疫学的技法によって測定する。

Claims (10)

1. 対象において免疫応答を誘導するための方法であって、
   前記対象に、抗原をコードするポリヌクレオチドを含む組換えＡｄ２６型アデノウイルス（ｒＡｄ２６）を筋肉内投与することと、
   その後、前記ｒＡｄ２６を前記対象に膣内投与することと
   を含む方法。
2. 前記ポリヌクレオチドは、細菌、寄生虫若しくはウイルス抗原又はその抗原性断片をコードする、請求項１に記載の方法。
3. 性感染症（ＳＴＤ）を引き起こす病原体に対する免疫応答を誘導するためのものである、請求項１又は２に記載の方法。
4. 前記性感染症は、ＨＩＶ感染症、ＨＰＶ感染症、ＨＳＶ感染症、クラミジア、淋病、梅毒及びトリコモナス症からなる群から選択される、請求項３に記載の方法。
5. 前記ポリヌクレオチドは、ＨＰＶ Ｅ６タンパク質若しくはその抗原性部分及び／又はＨＰＶ Ｅ７タンパク質若しくはその抗原性部分をコードし、好ましくは、前記ポリヌクレオチドは、ＨＰＶ Ｅ６及びＥ７タンパク質の両方のエピトープをコードする、請求項１～４のいずれか一項に記載の方法。
6. 前記抗原は、ＨＩＶ Ｅｎｖ、Ｇａｇ若しくはＰｏｌタンパク質又はその抗原性部分の少なくとも１つを含む、請求項１～４のいずれか一項に記載の方法。
7. 前記ｒＡｄ２６は、前記筋肉内投与後、約１～１０週間、好ましくは約２～８週間膣内投与される、請求項１～６のいずれか一項に記載の方法。
8. 対象における免疫応答の誘導で使用するための、抗原をコードするポリヌクレオチドを含む組換えＡｄ２６型アデノウイルス（ｒＡｄ２６）であって、前記ｒＡｄ２６は、筋肉内投与、その後の膣内投与のためのものである、組換えＡｄ２６型アデノウイルス。
9. 対象においてウイルス感染症を治療及び／又は予防するための方法であって、前記対象に、前記ウイルス感染症を引き起こしたか、又はその予防が望ましいウイルスの抗原をコードするポリヌクレオチドを含む組換えＡｄ２６型アデノウイルス（ｒＡｄ２６）を投与することを含み、前記投与は、前記ｒＡｄ２６の筋肉内投与、その後の前記ｒＡｄ２６の膣内投与を含む、方法。
10. パーツキットであって、
    － 抗原をコードするポリヌクレオチドを含む組換えＡｄ２６型アデノウイルス（ｒＡｄ２６）を含む第１の組成物と、
    － 前記ｒＡｄ２６を含む第２の組成物と
    を含み、前記第１の組成物は、筋肉内投与で使用するためのものであり、及び前記第２の組成物は、膣内投与で使用するためのものである、パーツキット。

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