JP2023522852A - Ｉｄｓ遺伝子導入のためのアデノ随伴ウイルス組成物及びその使用方法 - Google Patents

Ｉｄｓ遺伝子導入のためのアデノ随伴ウイルス組成物及びその使用方法 Download PDF

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Abstract

細胞のＩＤＳ遺伝子機能を回復させることができるアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）組成物、及びそれらのＡＡＶ組成物を使用してＩＤＳ遺伝子機能の低下に関連する障害（例えば、ハンター症候群）を治療するための方法が提供される。ＡＡＶ組成物を作製するための組成物、系、及び方法も提供される。

Description

関連出願
本出願は、２０２０年４月６日に出願された米国仮特許出願第６３／００５，８３３号、２０２０年１０月２１日に出願された同第６３／０９４，８００号、及び２０２１年２月３日に出願された同第６３／１４５，２５８号に対する優先権を主張するものであり、これらの全開示は参照により本明細書に組み込まれる。
配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩ形式で電子的に提出されており、かつ参照により全体が本明細書に組み込まれる配列表を含む（２０２１年３月３０日に作成された当該ＡＳＣＩＩコピーは「４０４２１７－ＨＭＷ－０３７ＷＯ（１８２７１０）ＳＬ．ｔｘｔ」という名前であり、２１７，２８３バイトのサイズである）。
ハンター症候群、又はムコ多糖症ＩＩ（ＭＰＳ ＩＩ）は、平均寿命を１０～２０年も大幅に縮め、かつアンメットメディカルニーズの高い、致命的なリソソーム蓄積障害である。この疾患は、主に男性に発症し、かつ特定のムコ多糖、別名、グリコサミノグリカン（ＧＡＧ）を分解して再利用する身体の能力を妨げる、稀なＸ連鎖性遺伝性障害である。ハンター症候群は、ＧＡＧ、ヘパラン硫酸、及びデルマタン硫酸の段階的分解に必須のリソソーム酵素であるイズロン酸－２－スルファターゼ（ＩＤＳ）の遺伝子欠損によって引き起こされる。ＩＤＳ欠損により、ＧＡＧが全身の細胞に蓄積し、ある特定の細胞及び器官の適切な機能が妨げられる。ＧＡＧの蓄積が続くと、ハンター症候群の兆候及び症状がより明らかになる。これらには、はっきりとした顔特徴、大きな頭部、腹部腫脹、難聴、心機能の低下につながる心臓弁肥厚、閉塞性気道疾患、睡眠時無呼吸、運動範囲及び移動範囲の減少、並びに肝臓及び脾臓の腫大が含まれ得る。ハンター症候群を有する患者の３分の２が中枢神経系（ＣＮＳ）疾患を発症し、神経認知及び行動が変則的になる。２～４歳の小児は、粗野な顔特徴、骨格異常、臓器肥大（特に肝臓）、及び認知障害を伴う心臓血管合併症などの症状を呈する可能性がある。米国におけるハンター症候群の発生率は、１３０，０００人に１人である。
現在、ハンター症候群はいくつかの異なる治療で管理することができている。治療には、骨髄移植及び酵素補充療法（ＥＲＴ）が含まれる。ＥＲＴは、Ｅｌａｐｒａｓｅなどの定期的な投与を必要とし、１～８時間の注入により毎週投与されなければならない。承認されたＥＲＴ治療は、ハンター症候群患者の３分の２に関連する神経変性の治療には不十分である。血液脳関門を通過するように操作された抗体を有するＩＤＳの融合タンパク質であるＳＨＰ６３１などの他のＥＲＴ治療は、依然として臨床試験段階である。他の治療には、ＩＤＳ遺伝子による形質導入された末梢血リンパ球の増殖を伴うエクスビボ遺伝子療法が含まれ、これは認知疾患を有する患者には推奨されないアプローチである。いくつかの異なる治療選択肢が利用可能であるにもかかわらず、ハンター症候群の治療法は存在しない。
遺伝子治療は、ハンター症候群を治療する機会を提供する。レンチウイルスベクターを含むレトロウイルスベクターは、核酸を宿主細胞ゲノムに組み込むことができ、ゲノムへの非標的挿入による安全性の懸念を引き起こす。例えば、ベクターが腫瘍抑制遺伝子を破壊するか、又はがん遺伝子を活性化し、それにより、悪性腫瘍がもたらされるリスクがある。実際に、ガンマレトロウイルスベクターをＣＤ３４＋骨髄前駆体に形質導入することによってＸ連鎖性重症複合免疫不全（ＳＣＩＤ）を治療するための臨床試験では、１０名中４名の患者が白血病を発症した（Ｈａｃｅｉｎ－Ｂｅｙ－Ａｂｉｎａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ．（２００８）１１８（９）：３１３２－４２（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる））。その一方で、非組み込みベクターは、多くの場合、インビボで十分な発現レベル又は十分な発現持続期間を確保することができない。
したがって、ハンター症候群を有する患者におけるＩＤＳ遺伝子機能を効率的かつ安全に回復させることができる改善された遺伝子療法組成物及び方法が当該技術分野で必要とされている。
細胞のＩＤＳ遺伝子機能を回復させることができるアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）組成物、及びそれらを使用してＩＤＳ遺伝子機能の低下に関連する障害（例えば、ハンター症候群）を治療するための方法が本明細書に提供される。ＡＡＶ組成物を作製するための組成物、系、及び方法も提供される。
したがって、一態様では、本開示は、組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）であって、（ａ）ＡＡＶキャプシドタンパク質を含むＡＡＶキャプシドと、イントロンを含むイズロン酸－２－スルファターゼ（ＩＤＳ）イントロン挿入コード配列に作動可能に連結された転写調節エレメントを含むｒＡＡＶゲノムと、を含む、ｒＡＡＶを提供する。
ある特定の実施形態では、ＩＤＳイントロン挿入コード配列は、ヒトＩＤＳタンパク質をコードする。ある特定の実施形態では、ＩＤＳイントロン挿入コード配列は、配列番号２３に記載のアミノ酸配列をコードする。
ある特定の実施形態では、イントロンは、異種イントロンである。ある特定の実施形態では、イントロンは、配列番号３３に記載のヌクレオチド配列と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有する。
ある特定の実施形態では、イントロンは、配列番号２４に記載のＩＤＳコード配列の７０８位及び７０９位に対応するＩＤＳイントロン挿入コード配列のヌクレオチド間に配置されている。ある特定の実施形態では、ＩＤＳイントロン挿入コード配列は、配列番号２５、５９、又は６０に記載のヌクレオチド配列と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。
ある特定の実施形態では、イントロンは、配列番号２６に記載のＩＤＳコード配列の５８０位及び５８１位に対応するＩＤＳイントロン挿入コード配列のヌクレオチド間に配置されている。ある特定の実施形態では、ＩＤＳイントロン挿入コード配列は、配列番号２７に記載のヌクレオチド配列と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。
ある特定の実施形態では、ＩＤＳイントロン挿入コード配列は、配列番号２５、２７、５９、又は６０に記載のヌクレオチド配列を含む。
ある特定の実施形態では、転写調節エレメントは、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーエレメント、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター、ニワトリ－β－アクチン（ＣＢＡ）プロモーター、小型ニワトリ－β－アクチン（ＳｍＣＢＡ）プロモーター、グリセルアルデヒド３－リン酸デヒドロゲナーゼ（ＧＡＰＤＨ）プロモーター、ベータ－グルクロニダーゼ（ＧＵＳＢ）プロモーター、改変ヒトＥＦ－１αプロモーター、ＣＡＬＭ１プロモーター、合成プロモーター、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択されるエレメントのうちの１つ以上を含む。
ある特定の実施形態では、転写調節因子は、配列番号２９、３０、３６、３９、４０、４１、４２、４４、４６、４７、４８、又は５５に記載のヌクレオチド配列と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。ある特定の実施形態では、転写調節エレメントは、配列番号２９に記載のヌクレオチド配列を含む。
ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶゲノムは、ＩＤＳイントロン挿入コード配列の３’側にポリアデニル化配列を更に含む。ある特定の実施形態では、ポリアデニル化配列は、外因性ポリアデニル化配列である。ある特定の実施形態では、外因性ポリアデニル化配列は、ＳＶ４０ポリアデニル化配列である。ある特定の実施形態では、ＳＶ４０ポリアデニル化配列は、配列番号４５に記載のヌクレオチド配列を含む。
ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶゲノムは、配列番号３７、４３、５２、５４、６１、６３、６５、６９、７５、又は７７に記載のヌクレオチド配列を含む。
ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶゲノムは、５’逆方向末端反復（５’ＩＴＲ）ヌクレオチド配列及び３’逆方向末端反復（３’ＩＴＲ）ヌクレオチド配列を更に含む。ある特定の実施形態では、５’ＩＴＲヌクレオチド配列は、配列番号１８、２０、又は４９と少なくとも９５％の配列同一性を有し、３’ＩＴＲヌクレオチド配列は、配列番号１４、１９、２１、又は５１と少なくとも９５％の配列同一性を有する。
ある特定の実施形態では、５’ＩＴＲヌクレオチド配列は、配列番号１８と少なくとも８０％の配列同一性を有し、３’ＩＴＲヌクレオチド配列は、配列番号１４と少なくとも８０％の配列同一性を有する。ある特定の実施形態では、５’ＩＴＲヌクレオチド配列は、配列番号１８と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の配列同一性を有し、３’ＩＴＲヌクレオチド配列は、配列番号１９と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の配列同一性を有する。ある特定の実施形態では、５’ＩＴＲヌクレオチド配列は、配列番号１８と少なくとも８０％の配列同一性を有し、３’ＩＴＲヌクレオチド配列は、配列番号５１と少なくとも８０％の配列同一性を有する。ある特定の実施形態では、５’ＩＴＲヌクレオチド配列は、配列番号４９と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の配列同一性を有し、３’ＩＴＲヌクレオチド配列は、配列番号１４と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の配列同一性を有する。ある特定の実施形態では、５’ＩＴＲヌクレオチド配列は、配列番号４９と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の配列同一性を有し、３’ＩＴＲヌクレオチド配列は、配列番号１９と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の配列同一性を有する。ある特定の実施形態では、５’ＩＴＲヌクレオチド配列は、配列番号４９と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の配列同一性を有し、３’ＩＴＲヌクレオチド配列は、配列番号５１と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の配列同一性を有する。ある特定の実施形態では、５’ＩＴＲヌクレオチド配列は、配列番号２０と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の配列同一性を有し、３’ＩＴＲヌクレオチド配列は、配列番号２１と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の配列同一性を有する。ある特定の実施形態では、５’ＩＴＲヌクレオチド配列及び３’ＩＴＲヌクレオチドは、それぞれ、配列番号１８及び１４、１８及び１９、１８及び５１、４９及び１４、４９及び１９、４０及び５１、又は２０及び２１の配列を含む。
ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶゲノムは、配列番号２８、３８、５０、５３、５６、５７、５８、６２、６４、６６、７０、７１、７２、７３、又は７４に記載のヌクレオチド配列を含む。ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶゲノムは、配列番号７２及び７４、７２及び２８、７３及び７４、又は７３及び２８に記載のヌクレオチド配列を含む。
ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶゲノムは、配列番号３８、５０、６２、６４、６６、７０、７６、又は７８に記載のヌクレオチド配列を含む。
ある特定の実施形態では、ＡＡＶキャプシドタンパク質は、配列番号１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１５、１６、又は１７のアミノ酸２０３～７３６のアミノ酸配列と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、配列番号１６のアミノ酸２０６に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＣである、配列番号１６のアミノ酸２９６に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＨである、配列番号１６のアミノ酸３１２に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＱである、配列番号１６のアミノ酸３４６に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＡである、配列番号１６のアミノ酸４６４に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＮである、配列番号１６のアミノ酸４６８に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＳである、配列番号１６のアミノ酸５０１に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＩである、配列番号１６のアミノ酸５０５に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＲである、配列番号１６のアミノ酸５９０に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＲである、配列番号１６のアミノ酸６２６に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＧ又はＹである、配列番号１６のアミノ酸６８１に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＭである、配列番号１６のアミノ酸６８７に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＲである、配列番号１６のアミノ酸６９０に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＫである、配列番号１６のアミノ酸７０６に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＣである、又は配列番号１６のアミノ酸７１８に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＧである。
ある特定の実施形態では、（ａ）配列番号１６のアミノ酸６２６に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＧであり、配列番号１６のアミノ酸７１８に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＧである、（ｂ）配列番号１６のアミノ酸２９６に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＨであり、配列番号１６のアミノ酸４６４に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＮであり、配列番号１６のアミノ酸５０５に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＲであり、配列番号１６のアミノ酸６８１に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＭである、（ｃ）配列番号１６のアミノ酸５０５に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＲであり、配列番号１６のアミノ酸６８７に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＲである、（ｄ）配列番号１６のアミノ酸３４６に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＡであり、配列番号１６のアミノ酸５０５に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＲである、又は（ｅ）配列番号１６のアミノ酸５０１に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＩであり、配列番号１６のアミノ酸５０５に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＲであり、配列番号１６のアミノ酸７０６に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＣである。
ある特定の実施形態では、キャプシドタンパク質は、配列番号１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１５、１６、又は１７のアミノ酸２０３～７３６のアミノ酸配列を含む。
ある特定の実施形態では、ＡＡＶキャプシドタンパク質は、配列番号１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１５、１６、又は１７のアミノ酸１３８～７３６のアミノ酸配列と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、配列番号１６のアミノ酸１５１に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＲである、配列番号１６のアミノ酸１６０に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＤである、配列番号１６のアミノ酸２０６に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＣである、配列番号１６のアミノ酸２９６に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＨである、配列番号１６のアミノ酸３１２に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＱである、配列番号１６のアミノ酸３４６に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＡである、配列番号１６のアミノ酸４６４に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＮである、配列番号１６のアミノ酸４６８に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＳである、配列番号１６のアミノ酸５０１に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＩである、配列番号１６のアミノ酸５０５に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＲである、配列番号１６のアミノ酸５９０に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＲである、配列番号１６のアミノ酸６２６に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＧ又はＹである、配列番号１６のアミノ酸６８１に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＭである、配列番号１６のアミノ酸６８７に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＲである、配列番号１６のアミノ酸６９０に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＫである、配列番号１６のアミノ酸７０６に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＣである、又は配列番号１６のアミノ酸７１８に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＧである。
ある特定の実施形態では、（ａ）配列番号１６のアミノ酸６２６に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＧであり、配列番号１６のアミノ酸７１８に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＧである、（ｂ）配列番号１６のアミノ酸２９６に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＨであり、配列番号１６のアミノ酸４６４に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＮであり、配列番号１６のアミノ酸５０５に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＲであり、配列番号１６のアミノ酸６８１に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＭである、（ｃ）配列番号１６のアミノ酸５０５に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＲであり、配列番号１６のアミノ酸６８７に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＲである、（ｄ）配列番号１６のアミノ酸３４６に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＡであり、配列番号１６のアミノ酸５０５に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＲである、又は（ｅ）配列番号１６のアミノ酸５０１に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＩであり、配列番号１６のアミノ酸５０５に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＲであり、配列番号１６のアミノ酸７０６に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＣである。
ある特定の実施形態では、キャプシドタンパク質は、配列番号１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１５、１６、又は１７のアミノ酸１３８～７３６のアミノ酸配列を含む。
ある特定の実施形態では、ＡＡＶキャプシドタンパク質は、配列番号１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１５、１６、又は１７のアミノ酸１～７３６のアミノ酸配列と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、配列番号１６のアミノ酸２に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＴである、配列番号１６のアミノ酸６５に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＩである、配列番号１６のアミノ酸６８に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＶである、配列番号１６のアミノ酸７７に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＲである、配列番号１６のアミノ酸１１９に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＬである、配列番号１６のアミノ酸１５１に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＲである、配列番号１６のアミノ酸１６０に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＤである、配列番号１６のアミノ酸２０６に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＣである、配列番号１６のアミノ酸２９６に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＨである、配列番号１６のアミノ酸３１２に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＱである、配列番号１６のアミノ酸３４６に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＡである、配列番号１６のアミノ酸４６４に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＮである、配列番号１６のアミノ酸４６８に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＳである、配列番号１６のアミノ酸５０１に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＩである、配列番号１６のアミノ酸５０５に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＲである、配列番号１６のアミノ酸５９０に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＲである、配列番号１６のアミノ酸６２６に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＧ又はＹである、配列番号１６のアミノ酸６８１に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＭである、配列番号１６のアミノ酸６８７に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＲである、配列番号１６のアミノ酸６９０に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＫである、配列番号１６のアミノ酸７０６に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＣである、又は配列番号１６のアミノ酸７１８に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＧである。
ある特定の実施形態では、（ａ）配列番号１６のアミノ酸２に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＴであり、配列番号１６のアミノ酸３１２に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＱである、（ｂ）配列番号１６のアミノ酸６５に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＩであり、配列番号１６のアミノ酸６２６に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＹである、（ｃ）配列番号１６のアミノ酸７７に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＲであり、配列番号１６のアミノ酸６９０に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＫである、（ｄ）配列番号１６のアミノ酸１１９に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＬであり、配列番号１６のアミノ酸４６８に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＳである、（ｅ）配列番号１６のアミノ酸６２６に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＧであり、配列番号１６のアミノ酸７１８に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＧである、（ｆ）配列番号１６のアミノ酸２９６に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＨであり、配列番号１６のアミノ酸４６４に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＮであり、配列番号１６のアミノ酸５０５に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＲであり、配列番号１６のアミノ酸６８１に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＭである、（ｇ）配列番号１６のアミノ酸５０５に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＲであり、配列番号１６のアミノ酸６８７に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＲである、（ｈ）配列番号１６のアミノ酸３４６に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＡであり、配列番号１６のアミノ酸５０５に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＲである、又は（ｉ）配列番号１６のアミノ酸５０１に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＩであり、配列番号１６のアミノ酸５０５に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＲであり、配列番号１６のアミノ酸７０６に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＣである。
ある特定の実施形態では、キャプシドタンパク質は、配列番号１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１５、１６、又は１７のアミノ酸１～７３６のアミノ酸配列を含む。
別の態様では、本開示は、細胞内でイズロン酸－２－スルファターゼ（ＩＤＳ）ポリペプチドを発現させるための方法であって、細胞に、本明細書に記載の組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）を形質導入することを含む、方法を提供する。
ある特定の実施形態では、細胞は、中枢神経系細胞である。ある特定の実施形態では、細胞は、脊髄、運動野、感覚野、海馬、被殻、小脳、任意選択的に小脳核、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される中枢神経系領域の細胞である。ある特定の実施形態では、細胞は、ニューロン及び／又はグリア細胞であり、任意選択的に、細胞は、中枢神経系及び／又は末梢神経系のニューロン及び／又はグリア細胞である。ある特定の実施形態では、細胞は、運動ニューロン、星状細胞、オリゴデンドロサイト、中枢神経系の大脳皮質細胞、末梢神経系の感覚ニューロン、シュワン細胞、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される細胞である。
ある特定の実施形態では、細胞は、肝臓細胞である。ある特定の実施形態では、細胞は、心臓細胞である。ある特定の実施形態では、細胞は、肺細胞である。ある特定の実施形態では、細胞は、腎臓細胞である。ある特定の実施形態では、細胞は、脾臓細胞である。
ある特定の実施形態では、細胞は、哺乳類対象に存在し、ｒＡＡＶは、対象における細胞に形質導入するのに有効な量で対象に投与される。
別の態様では、本開示は、本明細書に記載のｒＡＡＶを含む医薬組成物を提供する。
別の態様では、本開示は、ハンター症候群（ＨＳ）を有する対象を治療するための方法であって、対象に、有効量の本明細書に記載のｒＡＡＶ又は本明細書に記載の医薬組成物を投与することを含む、方法を提供する。
ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶ又は医薬組成物は、静脈内投与される。
ある特定の実施形態では、ハンター症候群（ＨＳ）は、イズロン酸－２－スルファターゼ（ＩＤＳ）遺伝子変異に関連する。
ある特定の実施形態では、対象は、ヒト対象である。
別の態様では、本開示は、ｒＡＡＶの調製のためのパッケージング系であって、（ａ）１つ以上のＡＡＶ Ｒｅｐタンパク質をコードする第１のヌクレオチド配列と、（ｂ）本明細書に記載のｒＡＡＶのキャプシドタンパク質をコードする第２のヌクレオチド配列と、（ｃ）本明細書に記載のｒＡＡＶのｒＡＡＶゲノム配列を含む第３のヌクレオチド配列と、を含む、パッケージング系を提供する。
ある特定の実施形態では、パッケージング系は、第１のヌクレオチド配列及び第２のヌクレオチド配列を含む第１のベクターと、第３のヌクレオチド配列を含む第２のベクターとを含む。
ある特定の実施形態では、パッケージング系は、１つ以上のヘルパーウイルス遺伝子を含む第４のヌクレオチド配列を更に含む。ある特定の実施形態では、第４のヌクレオチド配列は、第３のベクター内に含まれている。ある特定の実施形態では、第４のヌクレオチド配列は、アデノウイルス、ヘルペスウイルス、ワクシニアウイルス、及びサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）からなる群から選択されるウイルス由来の１つ以上の遺伝子を含む。
ある特定の実施形態では、第１のベクター、第２のベクター、及び／又は第３のベクターは、プラスミドである。
別の態様では、本開示は、ｒＡＡＶの組換え調製のための方法であって、ｒＡＡＶが産生される条件下で本明細書に記載のパッケージング系を細胞に導入することを含む、方法を提供する。
別の態様では、本開示は、配列番号２５、２６、２７、３７、３８、４３、５０、５２、５３、５４、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７５、７６、７７、又は７８に記載のヌクレオチド配列と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドを提供する。ある特定の実施形態では、ポリヌクレオチドは、配列番号２５、２６、２７、３７、３８、４３、５０、５２、５３、５４、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７５、７６、７７、又は７８に記載の核酸配列を含む。ある特定の実施形態では、ポリヌクレオチドは、ベクター、任意選択的に、ウイルスベクター（例えば、ＡＡＶベクター、レトロウイルスベクター、若しくはアデノウイルスベクター）又はプラスミドベクター内に含まれている。別の態様では、本開示は、前述のポリヌクレオチドを含む組換え細胞を提供する。
別の態様では、本開示は、薬剤としての使用のための、本明細書に記載のｒＡＡＶ、本明細書に記載の医薬組成物、本明細書に記載のポリヌクレオチド、又は本明細書に記載の組換え細胞を提供する。
別の態様では、本開示は、ハンター症候群（ＨＳ）の治療における使用のための、本明細書に記載のｒＡＡＶ、本明細書に記載の医薬組成物、本明細書に記載のポリヌクレオチド、又は本明細書に記載の組換え細胞を提供する。
別の態様では、本開示は、ハンター症候群（ＨＳ）を有する対象を治療する方法であって、当該対象に、有効量のｒＡＡＶ、医薬組成物、ポリヌクレオチド、又は細胞を投与することを含む、方法における使用のための、本明細書に記載のｒＡＡＶ、本明細書に記載の医薬組成物、本明細書に記載のポリヌクレオチド、又は本明細書に記載の組換え細胞を提供する。
ｐＨＭ－０５２０５のベクターマップである。 ｐＨＭ－０５２１３のベクターマップである。 ｐＨＭ－０５２１４のベクターマップである。 ｐＨＭ－０５２１６のベクターマップである。 ｐＨＭ－０５２１７ベクターのベクターマップである。 図２Ａは、投与後４週時点での野生型マウス及びＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスの肝臓中の形質導入細胞のＤＮＡ １ｎｇ当たりのベクターゲノム数を示すグラフである。図２Ｂは、ｎｍｏｌ／ｈｒ／ｍｇタンパク質で表した、投与後４週時点での野生型マウス及びＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスの肝臓中のＩ２Ｓ活性を示すグラフである。図２Ａ及び図２Ｂ中、ＷＴとは、未処理の野生型マウスを指し、ＭＰＳ ＩＩとは、未処理のＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスを指し、ＡＡＶ９－ｈＩＤＳとは、２ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶ９キャプシドにパッケージングされたｐＨＭ－０５２０５を投与したＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスを指し、ＨＳＣ１５－ｈＩＤＳとは、２ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶＨＳＣ１５キャプシドにパッケージングされたｐＨＭ－０５２０５を投与したＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスを指す。図２Ｂ中、ヒト肝臓とは、正常ヒト肝臓中の代表的なＩ２Ｓ活性レベルを指す。＊は、ｐ＜０．０５での統計的有意性を示し、＊＊＊は、ｐ＜０．００１での統計的有意性を示し、＊＊＊＊は、ｐ＜０．０００１での統計的有意性を示し、全てＷＴと比較したものである。未処理のマウスとは、ビヒクルを投与したマウスを指す。 図２Ａは、投与後４週時点での野生型マウス及びＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスの肝臓中の形質導入細胞のＤＮＡ １ｎｇ当たりのベクターゲノム数を示すグラフである。図２Ｂは、ｎｍｏｌ／ｈｒ／ｍｇタンパク質で表した、投与後４週時点での野生型マウス及びＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスの肝臓中のＩ２Ｓ活性を示すグラフである。図２Ａ及び図２Ｂ中、ＷＴとは、未処理の野生型マウスを指し、ＭＰＳ ＩＩとは、未処理のＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスを指し、ＡＡＶ９－ｈＩＤＳとは、２ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶ９キャプシドにパッケージングされたｐＨＭ－０５２０５を投与したＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスを指し、ＨＳＣ１５－ｈＩＤＳとは、２ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶＨＳＣ１５キャプシドにパッケージングされたｐＨＭ－０５２０５を投与したＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスを指す。図２Ｂ中、ヒト肝臓とは、正常ヒト肝臓中の代表的なＩ２Ｓ活性レベルを指す。＊は、ｐ＜０．０５での統計的有意性を示し、＊＊＊は、ｐ＜０．００１での統計的有意性を示し、＊＊＊＊は、ｐ＜０．０００１での統計的有意性を示し、全てＷＴと比較したものである。未処理のマウスとは、ビヒクルを投与したマウスを指す。 図３Ａは、投与後４週時点での野生型マウス及びＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスの脳（すなわち、前脳、中脳、及び後脳）中の形質導入細胞のＤＮＡ １ｎｇ当たりのベクターゲノム数を示すグラフである。図３Ｂは、ｎｍｏｌ／ｈｒ／ｍｇタンパク質で表した、投与後４週時点での野生型マウス及びＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスの前脳中のＩ２Ｓ活性を示すグラフである。図３Ａ及び図３Ｂ中、ＷＴとは、未処理の野生型マウスを指し、ＭＰＳ ＩＩとは、未処理のＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスを指し、ＡＡＶ９－ｈＩＤＳとは、２ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶ９キャプシドにパッケージングされたｐＨＭ－０５２０５を投与したＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスを指し、ＨＳＣ１５－ｈＩＤＳとは、２ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶＨＳＣ１５キャプシドにパッケージングされたｐＨＭ－０５２０５を投与したＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスを指す。図３Ｂ中、ヒト脳とは、正常成人ヒト脳中の代表的なＩ２Ｓ活性レベルを指す。ｎ．ｓは、有意ではないことを示す。未処理のマウスとは、ビヒクルを投与したマウスを指す。 図３Ａは、投与後４週時点での野生型マウス及びＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスの脳（すなわち、前脳、中脳、及び後脳）中の形質導入細胞のＤＮＡ １ｎｇ当たりのベクターゲノム数を示すグラフである。図３Ｂは、ｎｍｏｌ／ｈｒ／ｍｇタンパク質で表した、投与後４週時点での野生型マウス及びＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスの前脳中のＩ２Ｓ活性を示すグラフである。図３Ａ及び図３Ｂ中、ＷＴとは、未処理の野生型マウスを指し、ＭＰＳ ＩＩとは、未処理のＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスを指し、ＡＡＶ９－ｈＩＤＳとは、２ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶ９キャプシドにパッケージングされたｐＨＭ－０５２０５を投与したＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスを指し、ＨＳＣ１５－ｈＩＤＳとは、２ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶＨＳＣ１５キャプシドにパッケージングされたｐＨＭ－０５２０５を投与したＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスを指す。図３Ｂ中、ヒト脳とは、正常成人ヒト脳中の代表的なＩ２Ｓ活性レベルを指す。ｎ．ｓは、有意ではないことを示す。未処理のマウスとは、ビヒクルを投与したマウスを指す。 図４Ａは、マウス肝臓中の代表的な野生型Ｉ２Ｓ活性レベルのパーセンテージで表した、２ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶ９キャプシド（ＡＡＶ９－ｈＩＤＳ）にパッケージングされたｐＨＭ－０５２０５を投与したか、又は２ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶＨＳＣ１５キャプシド（ＨＳＣ１５－ｈＩＤＳ）にパッケージングされたｐＨＭ－０５２０５を投与したＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスの肝臓で検出された投与後４週時点でのＩ２Ｓ活性レベルを示すグラフである。図４Ｂは、肝臓中の代表的な正常ヒトＩ２Ｓ活性レベルのパーセンテージで表した、２ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶ９キャプシド（ＡＡＶ９－ｈＩＤＳ）にパッケージングされたｐＨＭ－０５２０５を投与したか、又は２ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶＨＳＣ１５キャプシド（ＨＳＣ１５－ｈＩＤＳ）にパッケージングされたｐＨＭ－０５２０５を投与したＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスの肝臓で検出された投与後４週時点でのＩ２Ｓ活性レベルを示すグラフである。図４Ａ及び図４Ｂ中、＊は、ｐ＜０．０５での統計的有意性を示す。 図４Ａは、マウス肝臓中の代表的な野生型Ｉ２Ｓ活性レベルのパーセンテージで表した、２ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶ９キャプシド（ＡＡＶ９－ｈＩＤＳ）にパッケージングされたｐＨＭ－０５２０５を投与したか、又は２ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶＨＳＣ１５キャプシド（ＨＳＣ１５－ｈＩＤＳ）にパッケージングされたｐＨＭ－０５２０５を投与したＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスの肝臓で検出された投与後４週時点でのＩ２Ｓ活性レベルを示すグラフである。図４Ｂは、肝臓中の代表的な正常ヒトＩ２Ｓ活性レベルのパーセンテージで表した、２ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶ９キャプシド（ＡＡＶ９－ｈＩＤＳ）にパッケージングされたｐＨＭ－０５２０５を投与したか、又は２ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶＨＳＣ１５キャプシド（ＨＳＣ１５－ｈＩＤＳ）にパッケージングされたｐＨＭ－０５２０５を投与したＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスの肝臓で検出された投与後４週時点でのＩ２Ｓ活性レベルを示すグラフである。図４Ａ及び図４Ｂ中、＊は、ｐ＜０．０５での統計的有意性を示す。 図５Ａは、マウス脳中の代表的な野生型Ｉ２Ｓ活性レベルのパーセンテージで表した、２ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶ９キャプシド（ＡＡＶ９－ｈＩＤＳ）にパッケージングされたｐＨＭ－０５２０５を投与したか、又は２ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶＨＳＣ１５キャプシド（ＨＳＣ１５－ｈＩＤＳ）にパッケージングされたｐＨＭ－０５２０５を投与したＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスの脳で検出された投与後４週時点でのＩ２Ｓ活性レベルを示すグラフである。図５Ｂは、脳中の代表的な正常ヒトＩ２Ｓ活性レベルのパーセンテージで表した、２ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶ９キャプシド（ＡＡＶ９－ｈＩＤＳ）にパッケージングされたｐＨＭ－０５２０５を投与したか、又は２ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶＨＳＣ１５キャプシド（ＨＳＣ１５－ｈＩＤＳ）にパッケージングされたｐＨＭ－０５２０５を投与したＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスの脳で検出された投与後４週時点でのＩ２Ｓ活性レベルを示すグラフである。 図５Ａは、マウス脳中の代表的な野生型Ｉ２Ｓ活性レベルのパーセンテージで表した、２ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶ９キャプシド（ＡＡＶ９－ｈＩＤＳ）にパッケージングされたｐＨＭ－０５２０５を投与したか、又は２ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶＨＳＣ１５キャプシド（ＨＳＣ１５－ｈＩＤＳ）にパッケージングされたｐＨＭ－０５２０５を投与したＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスの脳で検出された投与後４週時点でのＩ２Ｓ活性レベルを示すグラフである。図５Ｂは、脳中の代表的な正常ヒトＩ２Ｓ活性レベルのパーセンテージで表した、２ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶ９キャプシド（ＡＡＶ９－ｈＩＤＳ）にパッケージングされたｐＨＭ－０５２０５を投与したか、又は２ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶＨＳＣ１５キャプシド（ＨＳＣ１５－ｈＩＤＳ）にパッケージングされたｐＨＭ－０５２０５を投与したＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスの脳で検出された投与後４週時点でのＩ２Ｓ活性レベルを示すグラフである。 図６Ａは、投与後４週時点での野生型マウス及びＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスの肝臓で検出されたＧＡＧレベルを示すグラフである。図６Ｂは、投与後４週時点での野生型マウス及びＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスの脳で検出されたＧＡＧレベルを示すグラフである。図６Ｃは、投与後４週時点での野生型マウス及びＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスの尿で検出されたＧＡＧレベルを示すグラフである。図６Ａ、図６Ｂ、及び図６Ｃ中、ＷＴは、未処理の野生型マウスを指し、ＭＰＳ ＩＩとは、未処理のＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスを指し、ＡＡＶ９－ｈＩＤＳとは、２ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶ９キャプシドにパッケージングされたｐＨＭ－０５２０５を投与したＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスを指し、ＨＳＣ１５－ｈＩＤＳとは、２ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶＨＳＣ１５キャプシドにパッケージングされたｐＨＭ－０５２０５を投与したＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスを指す。図６Ａ中、ヒト肝臓とは、ヒト肝臓中の代表的なＧＡＧレベルを指す。図６Ｂ中、ヒト脳とは、ヒト脳中の代表的なＧＡＧレベルを指す。図６Ａ～図６Ｃ中、＊は、ｐ＜０．０５での統計的有意性を示し、＊＊は、ｐ＜０．０１での統計的有意性を示す。未処理のマウスとは、ビヒクルを投与したマウスを指す。 図６Ａは、投与後４週時点での野生型マウス及びＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスの肝臓で検出されたＧＡＧレベルを示すグラフである。図６Ｂは、投与後４週時点での野生型マウス及びＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスの脳で検出されたＧＡＧレベルを示すグラフである。図６Ｃは、投与後４週時点での野生型マウス及びＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスの尿で検出されたＧＡＧレベルを示すグラフである。図６Ａ、図６Ｂ、及び図６Ｃ中、ＷＴは、未処理の野生型マウスを指し、ＭＰＳ ＩＩとは、未処理のＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスを指し、ＡＡＶ９－ｈＩＤＳとは、２ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶ９キャプシドにパッケージングされたｐＨＭ－０５２０５を投与したＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスを指し、ＨＳＣ１５－ｈＩＤＳとは、２ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶＨＳＣ１５キャプシドにパッケージングされたｐＨＭ－０５２０５を投与したＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスを指す。図６Ａ中、ヒト肝臓とは、ヒト肝臓中の代表的なＧＡＧレベルを指す。図６Ｂ中、ヒト脳とは、ヒト脳中の代表的なＧＡＧレベルを指す。図６Ａ～図６Ｃ中、＊は、ｐ＜０．０５での統計的有意性を示し、＊＊は、ｐ＜０．０１での統計的有意性を示す。未処理のマウスとは、ビヒクルを投与したマウスを指す。 図６Ａは、投与後４週時点での野生型マウス及びＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスの肝臓で検出されたＧＡＧレベルを示すグラフである。図６Ｂは、投与後４週時点での野生型マウス及びＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスの脳で検出されたＧＡＧレベルを示すグラフである。図６Ｃは、投与後４週時点での野生型マウス及びＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスの尿で検出されたＧＡＧレベルを示すグラフである。図６Ａ、図６Ｂ、及び図６Ｃ中、ＷＴは、未処理の野生型マウスを指し、ＭＰＳ ＩＩとは、未処理のＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスを指し、ＡＡＶ９－ｈＩＤＳとは、２ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶ９キャプシドにパッケージングされたｐＨＭ－０５２０５を投与したＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスを指し、ＨＳＣ１５－ｈＩＤＳとは、２ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶＨＳＣ１５キャプシドにパッケージングされたｐＨＭ－０５２０５を投与したＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスを指す。図６Ａ中、ヒト肝臓とは、ヒト肝臓中の代表的なＧＡＧレベルを指す。図６Ｂ中、ヒト脳とは、ヒト脳中の代表的なＧＡＧレベルを指す。図６Ａ～図６Ｃ中、＊は、ｐ＜０．０５での統計的有意性を示し、＊＊は、ｐ＜０．０１での統計的有意性を示す。未処理のマウスとは、ビヒクルを投与したマウスを指す。 図７Ａは、投与後４週時点でのマウスＧＡＰＤＨの発現レベルに対して正規化した野生型マウス及びＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスの肝臓内でのｈＩＤＳの発現を示すグラフである。図７Ｂは、投与後４週時点でのマウスＧＡＰＤＨの発現レベルに対して正規化した野生型マウス及びＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスの脳内でのｈＩＤＳの発現を示すグラフである。図７Ａ及び図７Ｂ中、ＷＴとは、未処理の野生型マウスを指し、ＭＰＳ ＩＩとは、未処理のＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスを指し、ＡＡＶ９－ｈＩＤＳとは、２ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶ９キャプシドにパッケージングされたｐＨＭ－０５２０５を投与したＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスを指し、ＨＳＣ１５－ｈＩＤＳとは、２ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶＨＳＣ１５キャプシドにパッケージングされたｐＨＭ－０５２０５を投与したＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスを指す。図７Ｂ中、ヒト脳とは、正常成人ヒト脳内での代表的なＩＤＳ発現レベルを指す。未処理のマウスとは、ビヒクルを投与したマウスを指す。 図７Ａは、投与後４週時点でのマウスＧＡＰＤＨの発現レベルに対して正規化した野生型マウス及びＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスの肝臓内でのｈＩＤＳの発現を示すグラフである。図７Ｂは、投与後４週時点でのマウスＧＡＰＤＨの発現レベルに対して正規化した野生型マウス及びＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスの脳内でのｈＩＤＳの発現を示すグラフである。図７Ａ及び図７Ｂ中、ＷＴとは、未処理の野生型マウスを指し、ＭＰＳ ＩＩとは、未処理のＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスを指し、ＡＡＶ９－ｈＩＤＳとは、２ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶ９キャプシドにパッケージングされたｐＨＭ－０５２０５を投与したＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスを指し、ＨＳＣ１５－ｈＩＤＳとは、２ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶＨＳＣ１５キャプシドにパッケージングされたｐＨＭ－０５２０５を投与したＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスを指す。図７Ｂ中、ヒト脳とは、正常成人ヒト脳内での代表的なＩＤＳ発現レベルを指す。未処理のマウスとは、ビヒクルを投与したマウスを指す。 図８Ａは、経時的な野生型マウス及びＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスの尿で検出された総ＧＡＧレベルを示すグラフである。図８Ｂは、投与後１２週時点での野生型マウス及びＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスの肝臓で検出されたＧＡＧレベルを示すグラフである。図８Ｃは、ｎｍｏｌ／ｈｒ／ｍｇタンパク質で表した、投与後１２週時点での野生型マウス及びＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスの肝臓中のＩ２Ｓ活性を示すグラフである。図８Ａ、図８Ｂ、及び図８Ｃ中、ＷＴは、未処理の野生型マウスを指し、ＭＰＳ ＩＩとは、未処理のＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスを指し、ＨＳＣ１５－ｈＩＤＳとは、２ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶＨＳＣ１５キャプシドにパッケージングされたｐＨＭ－０５２０５を投与したＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスを指す。図８Ａ～図８Ｃ中、＊＊＊は、ｐ＜０．００１での統計的有意性を示し、＊＊＊＊は、ｐ＜０．０００１での統計的有意性を示す。未処理のマウスとは、ビヒクルを投与したマウスを指す。 図８Ａは、経時的な野生型マウス及びＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスの尿で検出された総ＧＡＧレベルを示すグラフである。図８Ｂは、投与後１２週時点での野生型マウス及びＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスの肝臓で検出されたＧＡＧレベルを示すグラフである。図８Ｃは、ｎｍｏｌ／ｈｒ／ｍｇタンパク質で表した、投与後１２週時点での野生型マウス及びＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスの肝臓中のＩ２Ｓ活性を示すグラフである。図８Ａ、図８Ｂ、及び図８Ｃ中、ＷＴは、未処理の野生型マウスを指し、ＭＰＳ ＩＩとは、未処理のＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスを指し、ＨＳＣ１５－ｈＩＤＳとは、２ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶＨＳＣ１５キャプシドにパッケージングされたｐＨＭ－０５２０５を投与したＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスを指す。図８Ａ～図８Ｃ中、＊＊＊は、ｐ＜０．００１での統計的有意性を示し、＊＊＊＊は、ｐ＜０．０００１での統計的有意性を示す。未処理のマウスとは、ビヒクルを投与したマウスを指す。 図８Ａは、経時的な野生型マウス及びＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスの尿で検出された総ＧＡＧレベルを示すグラフである。図８Ｂは、投与後１２週時点での野生型マウス及びＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスの肝臓で検出されたＧＡＧレベルを示すグラフである。図８Ｃは、ｎｍｏｌ／ｈｒ／ｍｇタンパク質で表した、投与後１２週時点での野生型マウス及びＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスの肝臓中のＩ２Ｓ活性を示すグラフである。図８Ａ、図８Ｂ、及び図８Ｃ中、ＷＴは、未処理の野生型マウスを指し、ＭＰＳ ＩＩとは、未処理のＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスを指し、ＨＳＣ１５－ｈＩＤＳとは、２ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶＨＳＣ１５キャプシドにパッケージングされたｐＨＭ－０５２０５を投与したＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスを指す。図８Ａ～図８Ｃ中、＊＊＊は、ｐ＜０．００１での統計的有意性を示し、＊＊＊＊は、ｐ＜０．０００１での統計的有意性を示す。未処理のマウスとは、ビヒクルを投与したマウスを指す。 図９Ａは、投与後１２週時点での野生型マウス及びＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスの脳で検出されたＧＡＧレベルを示すグラフである。図９Ｂは、ｎｍｏｌ／ｈｒ／ｍｇタンパク質で表した、投与後１２週時点での野生型マウス及びＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスの脳中のＩ２Ｓ活性を示すグラフである。図９Ａ及び図９Ｂ中、＊は、ｐ＜０．０５での統計的有意性を示し、＊＊は、ｐ＜０．０１での統計的有意性を示す。図９Ｃは、代表的な野生型マウスＩ２Ｓ活性のパーセンテージで表した、投与後１２週時点での野生型マウス及びＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスの脳中のＩ２Ｓ活性を示すグラフである。図９Ａ、図９Ｂ、及び図９Ｃ中、ＷＴは、未処理の野生型マウスを指し、ＭＰＳ ＩＩとは、未処理のＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスを指し、ＨＳＣ１５－ｈＩＤＳとは、２ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶＨＳＣ１５キャプシドにパッケージングされたｐＨＭ－０５２０５を投与したＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスを指す。未処理のマウスとは、ビヒクルを投与したマウスを指す。 図９Ａは、投与後１２週時点での野生型マウス及びＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスの脳で検出されたＧＡＧレベルを示すグラフである。図９Ｂは、ｎｍｏｌ／ｈｒ／ｍｇタンパク質で表した、投与後１２週時点での野生型マウス及びＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスの脳中のＩ２Ｓ活性を示すグラフである。図９Ａ及び図９Ｂ中、＊は、ｐ＜０．０５での統計的有意性を示し、＊＊は、ｐ＜０．０１での統計的有意性を示す。図９Ｃは、代表的な野生型マウスＩ２Ｓ活性のパーセンテージで表した、投与後１２週時点での野生型マウス及びＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスの脳中のＩ２Ｓ活性を示すグラフである。図９Ａ、図９Ｂ、及び図９Ｃ中、ＷＴは、未処理の野生型マウスを指し、ＭＰＳ ＩＩとは、未処理のＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスを指し、ＨＳＣ１５－ｈＩＤＳとは、２ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶＨＳＣ１５キャプシドにパッケージングされたｐＨＭ－０５２０５を投与したＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスを指す。未処理のマウスとは、ビヒクルを投与したマウスを指す。 図９Ａは、投与後１２週時点での野生型マウス及びＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスの脳で検出されたＧＡＧレベルを示すグラフである。図９Ｂは、ｎｍｏｌ／ｈｒ／ｍｇタンパク質で表した、投与後１２週時点での野生型マウス及びＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスの脳中のＩ２Ｓ活性を示すグラフである。図９Ａ及び図９Ｂ中、＊は、ｐ＜０．０５での統計的有意性を示し、＊＊は、ｐ＜０．０１での統計的有意性を示す。図９Ｃは、代表的な野生型マウスＩ２Ｓ活性のパーセンテージで表した、投与後１２週時点での野生型マウス及びＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスの脳中のＩ２Ｓ活性を示すグラフである。図９Ａ、図９Ｂ、及び図９Ｃ中、ＷＴは、未処理の野生型マウスを指し、ＭＰＳ ＩＩとは、未処理のＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスを指し、ＨＳＣ１５－ｈＩＤＳとは、２ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶＨＳＣ１５キャプシドにパッケージングされたｐＨＭ－０５２０５を投与したＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスを指す。未処理のマウスとは、ビヒクルを投与したマウスを指す。 Ｔ－００４のベクターマップである。 Ｔ－００５のベクターマップである。 Ｔ－００６ベクターのベクターマップである。 図１１Ａは、投与後４週時点での野生型マウス及びＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスの尿で検出された総ＧＡＧレベルを示すグラフである。図１１Ｂは、ｎｍｏｌ／ｈｒ／ｍｌで表した、投与後４週時点での野生型マウス及びＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスで検出された血清中Ｉ２Ｓ活性を示すグラフである。図１１Ａ及び図１１Ｂ中、ＷＴとは、未処理の野生型マウスを指し、ＭＰＳ ＩＩとは、未処理のＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスを指し、ＡＡＶ９－ｈＩＤＳとは、２ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶ９キャプシドにパッケージングされたｐＨＭ－０５２０５を投与したＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスを指し、ＨＳＣ１５－ｈＩＤＳとは、２ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶＨＳＣ１５キャプシドにパッケージングされたｐＨＭ－０５２０５を投与したＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスを指し、ＨＳＣ１５－Ｔ－００４とは、２ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶＨＳＣ１５キャプシドにパッケージングされたＴ－００４を投与したＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスを指し、ＨＳＣ１５－Ｔ－００５とは、２ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶＨＳＣ１５キャプシドにパッケージングされたＴ－００５を投与したＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスを指し、ＨＳＣ１５－Ｔ－００６とは、２ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶＨＳＣ１５キャプシドにパッケージングされたＴ－００６を投与したＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスを指す。図１１Ａ及び図１１Ｂ中、＊は、ｐ＜０．０５での統計的有意性を示し、＊＊は、ｐ＜０．０１での統計的有意性を示し、＊＊＊は、ｐ＜０．００１での統計的有意性を示し、＊＊＊＊は、ｐ＜０．０００１での統計的有意性を示す。未処理のマウスとは、ビヒクルを投与したマウスを指す。 図１１Ａは、投与後４週時点での野生型マウス及びＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスの尿で検出された総ＧＡＧレベルを示すグラフである。図１１Ｂは、ｎｍｏｌ／ｈｒ／ｍｌで表した、投与後４週時点での野生型マウス及びＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスで検出された血清中Ｉ２Ｓ活性を示すグラフである。図１１Ａ及び図１１Ｂ中、ＷＴとは、未処理の野生型マウスを指し、ＭＰＳ ＩＩとは、未処理のＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスを指し、ＡＡＶ９－ｈＩＤＳとは、２ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶ９キャプシドにパッケージングされたｐＨＭ－０５２０５を投与したＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスを指し、ＨＳＣ１５－ｈＩＤＳとは、２ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶＨＳＣ１５キャプシドにパッケージングされたｐＨＭ－０５２０５を投与したＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスを指し、ＨＳＣ１５－Ｔ－００４とは、２ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶＨＳＣ１５キャプシドにパッケージングされたＴ－００４を投与したＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスを指し、ＨＳＣ１５－Ｔ－００５とは、２ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶＨＳＣ１５キャプシドにパッケージングされたＴ－００５を投与したＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスを指し、ＨＳＣ１５－Ｔ－００６とは、２ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶＨＳＣ１５キャプシドにパッケージングされたＴ－００６を投与したＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスを指す。図１１Ａ及び図１１Ｂ中、＊は、ｐ＜０．０５での統計的有意性を示し、＊＊は、ｐ＜０．０１での統計的有意性を示し、＊＊＊は、ｐ＜０．００１での統計的有意性を示し、＊＊＊＊は、ｐ＜０．０００１での統計的有意性を示す。未処理のマウスとは、ビヒクルを投与したマウスを指す。 図１２Ａは、投与後４週時点での野生型マウス及びＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスの脳で検出されたＧＡＧレベルを示すグラフである。図１２Ｂは、投与後４週時点での野生型マウス及びＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスの肝臓で検出されたＧＡＧレベルを示すグラフである。図１２Ｃは、投与後４週時点での野生型マウス及びＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスの脳で検出されたＩ２Ｓ活性を示すグラフである。図１２Ｄは、投与後４週時点での野生型マウス及びＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスの肝臓で検出されたＩ２Ｓ活性を示すグラフである。図１２Ａ、図１２Ｂ、図１２Ｃ、及び図１２Ｄ中、ＷＴは、未処理の野生型マウスを指し、ＭＰＳ ＩＩとは、未処理のＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスを指し、ＡＡＶ９－ｈＩＤＳとは、２ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶ９キャプシドにパッケージングされたｐＨＭ－０５２０５を投与したＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスを指し、ＨＳＣ１５－ｈＩＤＳとは、２ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶＨＳＣ１５キャプシドにパッケージングされたｐＨＭ－０５２０５を投与したＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスを指し、ＨＳＣ１５－Ｔ－００４とは、２ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶＨＳＣ１５キャプシドにパッケージングされたＴ－００４を投与したＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスを指し、ＨＳＣ１５－Ｔ－００５とは、２ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶＨＳＣ１５キャプシドにパッケージングされたＴ－００５を投与したＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスを指し、ＨＳＣ１５－Ｔ－００６とは、２ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶＨＳＣ１５キャプシドにパッケージングされたＴ－００６を投与したＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスを指す。図１２Ａ、図１２Ｂ、及び図１２Ｄ中、＊は、ｐ＜０．０５での統計的有意性を示し、＊＊は、ｐ＜０．０１での統計的有意性を示し、＊＊＊は、ｐ＜０．００１での統計的有意性を示し、＊＊＊＊は、ｐ＜０．０００１での統計的有意性を示す。未処理のマウスとは、ビヒクルを投与したマウスを指す。 図１２Ａは、投与後４週時点での野生型マウス及びＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスの脳で検出されたＧＡＧレベルを示すグラフである。図１２Ｂは、投与後４週時点での野生型マウス及びＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスの肝臓で検出されたＧＡＧレベルを示すグラフである。図１２Ｃは、投与後４週時点での野生型マウス及びＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスの脳で検出されたＩ２Ｓ活性を示すグラフである。図１２Ｄは、投与後４週時点での野生型マウス及びＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスの肝臓で検出されたＩ２Ｓ活性を示すグラフである。図１２Ａ、図１２Ｂ、図１２Ｃ、及び図１２Ｄ中、ＷＴは、未処理の野生型マウスを指し、ＭＰＳ ＩＩとは、未処理のＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスを指し、ＡＡＶ９－ｈＩＤＳとは、２ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶ９キャプシドにパッケージングされたｐＨＭ－０５２０５を投与したＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスを指し、ＨＳＣ１５－ｈＩＤＳとは、２ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶＨＳＣ１５キャプシドにパッケージングされたｐＨＭ－０５２０５を投与したＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスを指し、ＨＳＣ１５－Ｔ－００４とは、２ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶＨＳＣ１５キャプシドにパッケージングされたＴ－００４を投与したＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスを指し、ＨＳＣ１５－Ｔ－００５とは、２ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶＨＳＣ１５キャプシドにパッケージングされたＴ－００５を投与したＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスを指し、ＨＳＣ１５－Ｔ－００６とは、２ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶＨＳＣ１５キャプシドにパッケージングされたＴ－００６を投与したＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスを指す。図１２Ａ、図１２Ｂ、及び図１２Ｄ中、＊は、ｐ＜０．０５での統計的有意性を示し、＊＊は、ｐ＜０．０１での統計的有意性を示し、＊＊＊は、ｐ＜０．００１での統計的有意性を示し、＊＊＊＊は、ｐ＜０．０００１での統計的有意性を示す。未処理のマウスとは、ビヒクルを投与したマウスを指す。 図１２Ａは、投与後４週時点での野生型マウス及びＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスの脳で検出されたＧＡＧレベルを示すグラフである。図１２Ｂは、投与後４週時点での野生型マウス及びＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスの肝臓で検出されたＧＡＧレベルを示すグラフである。図１２Ｃは、投与後４週時点での野生型マウス及びＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスの脳で検出されたＩ２Ｓ活性を示すグラフである。図１２Ｄは、投与後４週時点での野生型マウス及びＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスの肝臓で検出されたＩ２Ｓ活性を示すグラフである。図１２Ａ、図１２Ｂ、図１２Ｃ、及び図１２Ｄ中、ＷＴは、未処理の野生型マウスを指し、ＭＰＳ ＩＩとは、未処理のＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスを指し、ＡＡＶ９－ｈＩＤＳとは、２ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶ９キャプシドにパッケージングされたｐＨＭ－０５２０５を投与したＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスを指し、ＨＳＣ１５－ｈＩＤＳとは、２ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶＨＳＣ１５キャプシドにパッケージングされたｐＨＭ－０５２０５を投与したＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスを指し、ＨＳＣ１５－Ｔ－００４とは、２ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶＨＳＣ１５キャプシドにパッケージングされたＴ－００４を投与したＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスを指し、ＨＳＣ１５－Ｔ－００５とは、２ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶＨＳＣ１５キャプシドにパッケージングされたＴ－００５を投与したＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスを指し、ＨＳＣ１５－Ｔ－００６とは、２ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶＨＳＣ１５キャプシドにパッケージングされたＴ－００６を投与したＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスを指す。図１２Ａ、図１２Ｂ、及び図１２Ｄ中、＊は、ｐ＜０．０５での統計的有意性を示し、＊＊は、ｐ＜０．０１での統計的有意性を示し、＊＊＊は、ｐ＜０．００１での統計的有意性を示し、＊＊＊＊は、ｐ＜０．０００１での統計的有意性を示す。未処理のマウスとは、ビヒクルを投与したマウスを指す。 図１２Ａは、投与後４週時点での野生型マウス及びＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスの脳で検出されたＧＡＧレベルを示すグラフである。図１２Ｂは、投与後４週時点での野生型マウス及びＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスの肝臓で検出されたＧＡＧレベルを示すグラフである。図１２Ｃは、投与後４週時点での野生型マウス及びＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスの脳で検出されたＩ２Ｓ活性を示すグラフである。図１２Ｄは、投与後４週時点での野生型マウス及びＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスの肝臓で検出されたＩ２Ｓ活性を示すグラフである。図１２Ａ、図１２Ｂ、図１２Ｃ、及び図１２Ｄ中、ＷＴは、未処理の野生型マウスを指し、ＭＰＳ ＩＩとは、未処理のＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスを指し、ＡＡＶ９－ｈＩＤＳとは、２ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶ９キャプシドにパッケージングされたｐＨＭ－０５２０５を投与したＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスを指し、ＨＳＣ１５－ｈＩＤＳとは、２ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶＨＳＣ１５キャプシドにパッケージングされたｐＨＭ－０５２０５を投与したＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスを指し、ＨＳＣ１５－Ｔ－００４とは、２ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶＨＳＣ１５キャプシドにパッケージングされたＴ－００４を投与したＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスを指し、ＨＳＣ１５－Ｔ－００５とは、２ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶＨＳＣ１５キャプシドにパッケージングされたＴ－００５を投与したＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスを指し、ＨＳＣ１５－Ｔ－００６とは、２ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶＨＳＣ１５キャプシドにパッケージングされたＴ－００６を投与したＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスを指す。図１２Ａ、図１２Ｂ、及び図１２Ｄ中、＊は、ｐ＜０．０５での統計的有意性を示し、＊＊は、ｐ＜０．０１での統計的有意性を示し、＊＊＊は、ｐ＜０．００１での統計的有意性を示し、＊＊＊＊は、ｐ＜０．０００１での統計的有意性を示す。未処理のマウスとは、ビヒクルを投与したマウスを指す。 投与後４週時点までの野生型マウス及びＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスの体重を示すグラフである。図１３Ａ及び図１３Ｂ中、群１は、未処理のＩｄｓ ＫＯヘミ接合性対照であり、群２は、２．２ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶＨＳＣ１５キャプシドにパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を投与したＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスであり、群３は、６．５ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶＨＳＣ１５キャプシドにパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を投与したＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスであり、群４は、１．１ｅ１４ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶＨＳＣ１５キャプシドにパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を投与したＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスであり、群５は、野生型マウス対照であり、群６は、２．２ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶＨＳＣ１５キャプシドにパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を投与した野生型マウスであり、群７は、１．１ｅ１４ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶＨＳＣ１５キャプシドにパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を投与した野生型マウスである。未処理のマウスとは、ビヒクルを投与したマウスを指す。 投与後４週時点までの野生型マウス及びＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスの体重を示すグラフである。図１３Ａ及び図１３Ｂ中、群１は、未処理のＩｄｓ ＫＯヘミ接合性対照であり、群２は、２．２ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶＨＳＣ１５キャプシドにパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を投与したＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスであり、群３は、６．５ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶＨＳＣ１５キャプシドにパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を投与したＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスであり、群４は、１．１ｅ１４ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶＨＳＣ１５キャプシドにパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を投与したＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスであり、群５は、野生型マウス対照であり、群６は、２．２ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶＨＳＣ１５キャプシドにパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を投与した野生型マウスであり、群７は、１．１ｅ１４ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶＨＳＣ１５キャプシドにパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を投与した野生型マウスである。未処理のマウスとは、ビヒクルを投与したマウスを指す。 ＡＡＶＨＳＣ１５にパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を投与した野生型マウスにおける用量依存的Ｉ２Ｓ活性を示すグラフである。図１４Ａは、ｎｍｏｌ／ｈｒ／ｍｌ単位での、投与後２週時点での野生型マウス及びＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスで検出された血清中Ｉ２Ｓ活性を示すグラフである。図１４Ｂは、ｎｍｏｌ／ｈｒ／ｍｌ単位での、投与後４週時点での野生型マウス及びＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスで検出された血清中Ｉ２Ｓ活性を示すグラフである。図１４Ｃは、ｎｍｏｌ／ｈｒ／ｍｇ単位での、投与後４週時点での野生型マウス及びＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスの肝臓中のＩ２Ｓ活性を示すグラフである。図１４Ａ、図１４Ｂ、及び図１４Ｃ中、ＷＴは、未処理の野生型マウスを指し、ＭＰＳ ＩＩとは、未処理のＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスを指し、ＷＴ－２．２Ｅ＋１３とは、２．２ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶＨＳＣ１５にパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を投与した野生型マウスを指し、ＷＴ－１．１Ｅ＋１４とは、１．１ｅ１４ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶＨＳＣ１５にパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を投与した野生型マウスを指す。未処理のマウスとは、ビヒクルを投与したマウスを指す。 ＡＡＶＨＳＣ１５にパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を投与した野生型マウスにおける用量依存的Ｉ２Ｓ活性を示すグラフである。図１４Ａは、ｎｍｏｌ／ｈｒ／ｍｌ単位での、投与後２週時点での野生型マウス及びＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスで検出された血清中Ｉ２Ｓ活性を示すグラフである。図１４Ｂは、ｎｍｏｌ／ｈｒ／ｍｌ単位での、投与後４週時点での野生型マウス及びＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスで検出された血清中Ｉ２Ｓ活性を示すグラフである。図１４Ｃは、ｎｍｏｌ／ｈｒ／ｍｇ単位での、投与後４週時点での野生型マウス及びＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスの肝臓中のＩ２Ｓ活性を示すグラフである。図１４Ａ、図１４Ｂ、及び図１４Ｃ中、ＷＴは、未処理の野生型マウスを指し、ＭＰＳ ＩＩとは、未処理のＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスを指し、ＷＴ－２．２Ｅ＋１３とは、２．２ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶＨＳＣ１５にパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を投与した野生型マウスを指し、ＷＴ－１．１Ｅ＋１４とは、１．１ｅ１４ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶＨＳＣ１５にパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を投与した野生型マウスを指す。未処理のマウスとは、ビヒクルを投与したマウスを指す。 ＡＡＶＨＳＣ１５にパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を投与した野生型マウスにおける用量依存的Ｉ２Ｓ活性を示すグラフである。図１４Ａは、ｎｍｏｌ／ｈｒ／ｍｌ単位での、投与後２週時点での野生型マウス及びＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスで検出された血清中Ｉ２Ｓ活性を示すグラフである。図１４Ｂは、ｎｍｏｌ／ｈｒ／ｍｌ単位での、投与後４週時点での野生型マウス及びＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスで検出された血清中Ｉ２Ｓ活性を示すグラフである。図１４Ｃは、ｎｍｏｌ／ｈｒ／ｍｇ単位での、投与後４週時点での野生型マウス及びＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスの肝臓中のＩ２Ｓ活性を示すグラフである。図１４Ａ、図１４Ｂ、及び図１４Ｃ中、ＷＴは、未処理の野生型マウスを指し、ＭＰＳ ＩＩとは、未処理のＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスを指し、ＷＴ－２．２Ｅ＋１３とは、２．２ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶＨＳＣ１５にパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を投与した野生型マウスを指し、ＷＴ－１．１Ｅ＋１４とは、１．１ｅ１４ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶＨＳＣ１５にパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を投与した野生型マウスを指す。未処理のマウスとは、ビヒクルを投与したマウスを指す。 図１５Ａは、投与後４週時点での野生型マウス及びヘミ接合性マウスの脳中の総ＧＡＧレベルを示すグラフである。図１５Ｂは、投与後４週時点での野生型マウス及びヘミ接合性マウスの肝臓中の総ＧＡＧレベルを示すグラフである。図１５Ａ及び図１５Ｂ中、ＷＴとは、未処理の野生型マウスを指し、ＭＰＳ ＩＩとは、未処理のＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスを指し、ＷＴ－２．２Ｅ＋１３とは、２．２ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶＨＳＣ１５にパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を投与した野生型マウスを指し、ＷＴ－１．１Ｅ＋１４とは、１．１ｅ１４ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶＨＳＣ１５にパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を投与した野生型マウスを指す。図１５Ａ及び図１５Ｂ中、＊＊＊は、ｐ＜０．００１での統計的有意性を示し、＊＊＊＊は、ｐ＜０．０００１での統計的有意性を示す。未処理のマウスとは、ビヒクルを投与したマウスを指す。 図１５Ａは、投与後４週時点での野生型マウス及びヘミ接合性マウスの脳中の総ＧＡＧレベルを示すグラフである。図１５Ｂは、投与後４週時点での野生型マウス及びヘミ接合性マウスの肝臓中の総ＧＡＧレベルを示すグラフである。図１５Ａ及び図１５Ｂ中、ＷＴとは、未処理の野生型マウスを指し、ＭＰＳ ＩＩとは、未処理のＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスを指し、ＷＴ－２．２Ｅ＋１３とは、２．２ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶＨＳＣ１５にパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を投与した野生型マウスを指し、ＷＴ－１．１Ｅ＋１４とは、１．１ｅ１４ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶＨＳＣ１５にパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を投与した野生型マウスを指す。図１５Ａ及び図１５Ｂ中、＊＊＊は、ｐ＜０．００１での統計的有意性を示し、＊＊＊＊は、ｐ＜０．０００１での統計的有意性を示す。未処理のマウスとは、ビヒクルを投与したマウスを指す。 図１６Ａは、投与後４週時点の野生型マウス及びＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスの脳内でのＩＤＳの発現レベルを示すグラフである。図１６Ｂは、投与後４週時点の野生型マウス及びＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスの肝臓内でのＩＤＳの発現レベルを示すグラフである。図１６Ａ及び図１６Ｂ中、ＷＴとは、未処理の野生型マウスを指し、ＭＰＳ ＩＩとは、未処理のＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスを指し、ＭＰＳ ＩＩ－２．２Ｅ＋１３とは、２．２ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶＨＳＣ１５にパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を投与したＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスを指し、ＭＰＳ ＩＩ－６．５Ｅ＋１３とは、６．５ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶＨＳＣ１５にパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を投与したＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスを指し、ＭＰＳ ＩＩ－１．１Ｅ＋１４とは、１．１ｅ１４ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶＨＳＣ１５にパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を投与したＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスを指す。図１６Ａ及び図１６Ｂ中、＊は、ｐ＜０．０５での統計的有意性を示し、＊＊＊は、ｐ＜０．００１での統計的有意性を示す。未処理のマウスとは、ビヒクルを投与したマウスを指す。 図１６Ａは、投与後４週時点の野生型マウス及びＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスの脳内でのＩＤＳの発現レベルを示すグラフである。図１６Ｂは、投与後４週時点の野生型マウス及びＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスの肝臓内でのＩＤＳの発現レベルを示すグラフである。図１６Ａ及び図１６Ｂ中、ＷＴとは、未処理の野生型マウスを指し、ＭＰＳ ＩＩとは、未処理のＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスを指し、ＭＰＳ ＩＩ－２．２Ｅ＋１３とは、２．２ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶＨＳＣ１５にパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を投与したＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスを指し、ＭＰＳ ＩＩ－６．５Ｅ＋１３とは、６．５ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶＨＳＣ１５にパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を投与したＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスを指し、ＭＰＳ ＩＩ－１．１Ｅ＋１４とは、１．１ｅ１４ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶＨＳＣ１５にパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を投与したＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスを指す。図１６Ａ及び図１６Ｂ中、＊は、ｐ＜０．０５での統計的有意性を示し、＊＊＊は、ｐ＜０．００１での統計的有意性を示す。未処理のマウスとは、ビヒクルを投与したマウスを指す。 図１７Ａは、投与後２週時点での野生型マウス及びＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスで検出された血清中Ｉ２Ｓ活性を示すグラフである。図１７Ｂは、投与後４週時点での野生型Ｉｄｓ ＩＤＳ ＫＯヘミ接合性マウスで検出された血清中Ｉ２Ｓ活性を示すグラフである。図１７Ａ及び図１７Ｂ中、ＷＴとは、未処理の野生型マウスを指し、ＭＰＳ ＩＩとは、未処理のＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスを指し、ＭＰＳ ＩＩ－２．２Ｅ＋１３とは、２．２ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶＨＳＣ１５にパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を投与したＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスを指し、ＭＰＳ ＩＩ－６．５Ｅ＋１３とは、６．５ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶＨＳＣ１５にパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を投与したＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスを指し、ＭＰＳ ＩＩ－１．１Ｅ＋１４とは、１．１ｅ１４ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶＨＳＣ１５にパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を投与したＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスを指す。図１７Ａ及び図１７Ｂ中、＊＊は、ｐ＜０．０１での統計的有意性を示し、＊＊＊＊は、ｐ＜０．０００１での統計的有意性を示し、ｎｓは、有意ではないことを示す。未処理のマウスとは、ビヒクルを投与したマウスを指す。 図１７Ａは、投与後２週時点での野生型マウス及びＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスで検出された血清中Ｉ２Ｓ活性を示すグラフである。図１７Ｂは、投与後４週時点での野生型Ｉｄｓ ＩＤＳ ＫＯヘミ接合性マウスで検出された血清中Ｉ２Ｓ活性を示すグラフである。図１７Ａ及び図１７Ｂ中、ＷＴとは、未処理の野生型マウスを指し、ＭＰＳ ＩＩとは、未処理のＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスを指し、ＭＰＳ ＩＩ－２．２Ｅ＋１３とは、２．２ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶＨＳＣ１５にパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を投与したＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスを指し、ＭＰＳ ＩＩ－６．５Ｅ＋１３とは、６．５ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶＨＳＣ１５にパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を投与したＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスを指し、ＭＰＳ ＩＩ－１．１Ｅ＋１４とは、１．１ｅ１４ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶＨＳＣ１５にパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を投与したＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスを指す。図１７Ａ及び図１７Ｂ中、＊＊は、ｐ＜０．０１での統計的有意性を示し、＊＊＊＊は、ｐ＜０．０００１での統計的有意性を示し、ｎｓは、有意ではないことを示す。未処理のマウスとは、ビヒクルを投与したマウスを指す。 投与後４週時点での野生型マウス及びＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスの肝臓で検出されたＩ２Ｓ活性を示すグラフである。ＷＴとは、未処理の野生型マウスを指し、ＭＰＳ ＩＩとは、未処理のＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスを指し、ＭＰＳ ＩＩ－２．２Ｅ＋１３とは、２．２ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶＨＳＣ１５にパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を投与したＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスを指し、ＭＰＳ ＩＩ－６．５Ｅ＋１３とは、６．５ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶＨＳＣ１５にパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を投与したＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスを指し、ＭＰＳ ＩＩ－１．１Ｅ＋１４とは、１．１ｅ１４ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶＨＳＣ１５にパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を投与したＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスを指す。図１８中、＊＊は、ｐ＜０．０１での統計的有意性を示し、＊＊＊＊は、ｐ＜０．０００１での統計的有意性を示す。未処理のマウスとは、ビヒクルを投与したマウスを指す。 投与後２週時点（図１９Ａ）及び４週時点（図１９Ｂ）での尿中クレアチニンレベルに対して正規化した野生型マウス及びＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスの尿で検出された総ＧＡＧレベルを示すグラフである。 投与後２週時点（図１９Ａ）及び４週時点（図１９Ｂ）での尿中クレアチニンレベルに対して正規化した野生型マウス及びＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスの尿で検出された総ＧＡＧレベルを示すグラフである。 投与後４週時点での野生型マウス及びＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスにおけるＧＡＧヘパラン硫酸（ＧＡＧ－ＨＳ、「ＨＳ」）（図１９Ｃ））及びＧＡＧデルマタン硫酸（ＧＡＧ－ＤＳ、「ＤＳ」）（図１９Ｄ）のレベルを示すグラフである。ＷＴとは、未処理の野生型マウスを指し、ＭＰＳ ＩＩとは、未処理のＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスを指し、ＭＰＳ ＩＩ－２．２Ｅ＋１３とは、２．２ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶＨＳＣ１５にパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を投与したＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスを指し、ＭＰＳ ＩＩ－６．５Ｅ＋１３とは、６．５ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶＨＳＣ１５にパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を投与したＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスを指し、ＭＰＳ ＩＩ－１．１Ｅ＋１４とは、１．１ｅ１４ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶＨＳＣ１５にパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を投与したＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスを指す。図１９Ａ～図１９Ｄ中、ｎｓは、統計的に有意ではないことを示し、＊＊は、ｐ＜０．０１での統計的有意性を示し、＊＊＊は、ｐ＜０．００１での統計的有意性を示し、＊＊＊＊は、ｐ＜０．０００１での統計的有意性を示す。未処理のマウスとは、ビヒクルを投与したマウスを指す。 投与後４週時点での野生型マウス及びＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスにおけるＧＡＧヘパラン硫酸（ＧＡＧ－ＨＳ、「ＨＳ」）（図１９Ｃ））及びＧＡＧデルマタン硫酸（ＧＡＧ－ＤＳ、「ＤＳ」）（図１９Ｄ）のレベルを示すグラフである。ＷＴとは、未処理の野生型マウスを指し、ＭＰＳ ＩＩとは、未処理のＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスを指し、ＭＰＳ ＩＩ－２．２Ｅ＋１３とは、２．２ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶＨＳＣ１５にパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を投与したＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスを指し、ＭＰＳ ＩＩ－６．５Ｅ＋１３とは、６．５ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶＨＳＣ１５にパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を投与したＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスを指し、ＭＰＳ ＩＩ－１．１Ｅ＋１４とは、１．１ｅ１４ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶＨＳＣ１５にパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を投与したＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスを指す。図１９Ａ～図１９Ｄ中、ｎｓは、統計的に有意ではないことを示し、＊＊は、ｐ＜０．０１での統計的有意性を示し、＊＊＊は、ｐ＜０．００１での統計的有意性を示し、＊＊＊＊は、ｐ＜０．０００１での統計的有意性を示す。未処理のマウスとは、ビヒクルを投与したマウスを指す。 投与後４週時点での野生型マウス及びＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスの肝臓（図２０Ａ）、心臓（図２０Ｂ）、肺（図２０Ｃ）、脳（図２０Ｄ）、腎臓（図２０Ｅ）、及び脾臓（図２０Ｆ）で検出された総ＧＡＧレベルを示すグラフである。図２０Ａ、図２０Ｂ、図２０Ｃ、図２０Ｄ、図２０Ｅ、及び図２０Ｆ中、ＷＴは、未処理の野生型マウスを指し、ＭＰＳ ＩＩとは、未処理のＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスを指し、ＭＰＳ ＩＩ－２．２Ｅ＋１３とは、２．２ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶＨＳＣ１５にパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を投与したＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスを指し、ＭＰＳ ＩＩ－６．５Ｅ＋１３とは、６．５ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶＨＳＣ１５にパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を投与したＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスを指し、ＭＰＳ ＩＩ－１．１Ｅ＋１４とは、１．１ｅ１４ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶＨＳＣ１５にパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を投与したＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスを指す。図２０Ａ～図２０Ｆ中、＊は、ｐ＜０．０５での統計的有意性を示し、＊＊は、ｐ＜０．０１での統計的有意性を示し、＊＊＊は、ｐ＜０．００１での統計的有意性を示し、＊＊＊＊は、ｐ＜０．０００１での統計的有意性を示す。未処理のマウスとは、ビヒクルを投与したマウスを指す。 投与後４週時点での野生型マウス及びＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスの肝臓（図２０Ａ）、心臓（図２０Ｂ）、肺（図２０Ｃ）、脳（図２０Ｄ）、腎臓（図２０Ｅ）、及び脾臓（図２０Ｆ）で検出された総ＧＡＧレベルを示すグラフである。図２０Ａ、図２０Ｂ、図２０Ｃ、図２０Ｄ、図２０Ｅ、及び図２０Ｆ中、ＷＴは、未処理の野生型マウスを指し、ＭＰＳ ＩＩとは、未処理のＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスを指し、ＭＰＳ ＩＩ－２．２Ｅ＋１３とは、２．２ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶＨＳＣ１５にパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を投与したＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスを指し、ＭＰＳ ＩＩ－６．５Ｅ＋１３とは、６．５ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶＨＳＣ１５にパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を投与したＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスを指し、ＭＰＳ ＩＩ－１．１Ｅ＋１４とは、１．１ｅ１４ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶＨＳＣ１５にパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を投与したＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスを指す。図２０Ａ～図２０Ｆ中、＊は、ｐ＜０．０５での統計的有意性を示し、＊＊は、ｐ＜０．０１での統計的有意性を示し、＊＊＊は、ｐ＜０．００１での統計的有意性を示し、＊＊＊＊は、ｐ＜０．０００１での統計的有意性を示す。未処理のマウスとは、ビヒクルを投与したマウスを指す。 投与後４週時点での野生型マウス及びＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスの肝臓（図２０Ａ）、心臓（図２０Ｂ）、肺（図２０Ｃ）、脳（図２０Ｄ）、腎臓（図２０Ｅ）、及び脾臓（図２０Ｆ）で検出された総ＧＡＧレベルを示すグラフである。図２０Ａ、図２０Ｂ、図２０Ｃ、図２０Ｄ、図２０Ｅ、及び図２０Ｆ中、ＷＴは、未処理の野生型マウスを指し、ＭＰＳ ＩＩとは、未処理のＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスを指し、ＭＰＳ ＩＩ－２．２Ｅ＋１３とは、２．２ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶＨＳＣ１５にパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を投与したＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスを指し、ＭＰＳ ＩＩ－６．５Ｅ＋１３とは、６．５ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶＨＳＣ１５にパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を投与したＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスを指し、ＭＰＳ ＩＩ－１．１Ｅ＋１４とは、１．１ｅ１４ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶＨＳＣ１５にパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を投与したＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスを指す。図２０Ａ～図２０Ｆ中、＊は、ｐ＜０．０５での統計的有意性を示し、＊＊は、ｐ＜０．０１での統計的有意性を示し、＊＊＊は、ｐ＜０．００１での統計的有意性を示し、＊＊＊＊は、ｐ＜０．０００１での統計的有意性を示す。未処理のマウスとは、ビヒクルを投与したマウスを指す。 投与後４週時点での野生型マウス及びＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスの肝臓（図２０Ａ）、心臓（図２０Ｂ）、肺（図２０Ｃ）、脳（図２０Ｄ）、腎臓（図２０Ｅ）、及び脾臓（図２０Ｆ）で検出された総ＧＡＧレベルを示すグラフである。図２０Ａ、図２０Ｂ、図２０Ｃ、図２０Ｄ、図２０Ｅ、及び図２０Ｆ中、ＷＴは、未処理の野生型マウスを指し、ＭＰＳ ＩＩとは、未処理のＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスを指し、ＭＰＳ ＩＩ－２．２Ｅ＋１３とは、２．２ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶＨＳＣ１５にパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を投与したＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスを指し、ＭＰＳ ＩＩ－６．５Ｅ＋１３とは、６．５ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶＨＳＣ１５にパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を投与したＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスを指し、ＭＰＳ ＩＩ－１．１Ｅ＋１４とは、１．１ｅ１４ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶＨＳＣ１５にパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を投与したＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスを指す。図２０Ａ～図２０Ｆ中、＊は、ｐ＜０．０５での統計的有意性を示し、＊＊は、ｐ＜０．０１での統計的有意性を示し、＊＊＊は、ｐ＜０．００１での統計的有意性を示し、＊＊＊＊は、ｐ＜０．０００１での統計的有意性を示す。未処理のマウスとは、ビヒクルを投与したマウスを指す。 投与後４週時点での野生型マウス及びＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスの肝臓（図２０Ａ）、心臓（図２０Ｂ）、肺（図２０Ｃ）、脳（図２０Ｄ）、腎臓（図２０Ｅ）、及び脾臓（図２０Ｆ）で検出された総ＧＡＧレベルを示すグラフである。図２０Ａ、図２０Ｂ、図２０Ｃ、図２０Ｄ、図２０Ｅ、及び図２０Ｆ中、ＷＴは、未処理の野生型マウスを指し、ＭＰＳ ＩＩとは、未処理のＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスを指し、ＭＰＳ ＩＩ－２．２Ｅ＋１３とは、２．２ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶＨＳＣ１５にパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を投与したＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスを指し、ＭＰＳ ＩＩ－６．５Ｅ＋１３とは、６．５ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶＨＳＣ１５にパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を投与したＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスを指し、ＭＰＳ ＩＩ－１．１Ｅ＋１４とは、１．１ｅ１４ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶＨＳＣ１５にパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を投与したＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスを指す。図２０Ａ～図２０Ｆ中、＊は、ｐ＜０．０５での統計的有意性を示し、＊＊は、ｐ＜０．０１での統計的有意性を示し、＊＊＊は、ｐ＜０．００１での統計的有意性を示し、＊＊＊＊は、ｐ＜０．０００１での統計的有意性を示す。未処理のマウスとは、ビヒクルを投与したマウスを指す。 投与後４週時点での野生型マウス及びＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスの肝臓（図２０Ａ）、心臓（図２０Ｂ）、肺（図２０Ｃ）、脳（図２０Ｄ）、腎臓（図２０Ｅ）、及び脾臓（図２０Ｆ）で検出された総ＧＡＧレベルを示すグラフである。図２０Ａ、図２０Ｂ、図２０Ｃ、図２０Ｄ、図２０Ｅ、及び図２０Ｆ中、ＷＴは、未処理の野生型マウスを指し、ＭＰＳ ＩＩとは、未処理のＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスを指し、ＭＰＳ ＩＩ－２．２Ｅ＋１３とは、２．２ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶＨＳＣ１５にパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を投与したＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスを指し、ＭＰＳ ＩＩ－６．５Ｅ＋１３とは、６．５ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶＨＳＣ１５にパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を投与したＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスを指し、ＭＰＳ ＩＩ－１．１Ｅ＋１４とは、１．１ｅ１４ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶＨＳＣ１５にパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を投与したＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスを指す。図２０Ａ～図２０Ｆ中、＊は、ｐ＜０．０５での統計的有意性を示し、＊＊は、ｐ＜０．０１での統計的有意性を示し、＊＊＊は、ｐ＜０．００１での統計的有意性を示し、＊＊＊＊は、ｐ＜０．０００１での統計的有意性を示す。未処理のマウスとは、ビヒクルを投与したマウスを指す。 図２１Ａは、投与後４週時点での示された様々な用量でＡＡＶＨＳＣ１５にパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を投与したＭＰＳ ＩＩマウスの脳、心臓、腎臓、肝臓、肺、及び脾臓組織における形質導入細胞のＤＮＡ １μｇ当たりのベクターゲノム数を示すグラフである。図２１Ｂは、投与後４週時点での示された様々な用量でＡＡＶＨＳＣ１５にパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を投与したＭＰＳ ＩＩマウスの脳、心臓、腎臓、肝臓、肺、及び脾臓組織で検出された正規化したサイレント改変ｈＩＤＳ転写物を示すグラフである。図２１Ｃは、投与後４週時点での示された様々な用量でＡＡＶＨＳＣ１５にパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を投与したＭＰＳ ＩＩマウスの脳、腎臓、心臓、肝臓、肺、及び脾臓組織で検出されたヘパラン硫酸レベルを示すグラフである。図２１Ｄは、投与後４週時点での示された様々な用量でＡＡＶＨＳＣ１５にパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を投与したＭＰＳ ＩＩマウスの腎臓、心臓、肝臓、及び肺組織で検出されたデルマタン硫酸レベルを示すグラフである。図２１Ｃ及び図２１Ｄ中、ビヒクルを投与した野生型マウス及びＭＰＳ ＩＩマウスを対照として使用した。図２１Ｃ及び図２１Ｄ中、＊は、ｐ＜０．０５での統計的有意性を示し、＊＊は、＜０．０１での統計的有意性を示し、＊＊＊＊は、ｐ＜０．０００での統計的有意性を示し、ｎｓは、有意ではないことを示す。 図２１Ａは、投与後４週時点での示された様々な用量でＡＡＶＨＳＣ１５にパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を投与したＭＰＳ ＩＩマウスの脳、心臓、腎臓、肝臓、肺、及び脾臓組織における形質導入細胞のＤＮＡ １μｇ当たりのベクターゲノム数を示すグラフである。図２１Ｂは、投与後４週時点での示された様々な用量でＡＡＶＨＳＣ１５にパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を投与したＭＰＳ ＩＩマウスの脳、心臓、腎臓、肝臓、肺、及び脾臓組織で検出された正規化したサイレント改変ｈＩＤＳ転写物を示すグラフである。図２１Ｃは、投与後４週時点での示された様々な用量でＡＡＶＨＳＣ１５にパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を投与したＭＰＳ ＩＩマウスの脳、腎臓、心臓、肝臓、肺、及び脾臓組織で検出されたヘパラン硫酸レベルを示すグラフである。図２１Ｄは、投与後４週時点での示された様々な用量でＡＡＶＨＳＣ１５にパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を投与したＭＰＳ ＩＩマウスの腎臓、心臓、肝臓、及び肺組織で検出されたデルマタン硫酸レベルを示すグラフである。図２１Ｃ及び図２１Ｄ中、ビヒクルを投与した野生型マウス及びＭＰＳ ＩＩマウスを対照として使用した。図２１Ｃ及び図２１Ｄ中、＊は、ｐ＜０．０５での統計的有意性を示し、＊＊は、＜０．０１での統計的有意性を示し、＊＊＊＊は、ｐ＜０．０００での統計的有意性を示し、ｎｓは、有意ではないことを示す。 図２１Ａは、投与後４週時点での示された様々な用量でＡＡＶＨＳＣ１５にパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を投与したＭＰＳ ＩＩマウスの脳、心臓、腎臓、肝臓、肺、及び脾臓組織における形質導入細胞のＤＮＡ １μｇ当たりのベクターゲノム数を示すグラフである。図２１Ｂは、投与後４週時点での示された様々な用量でＡＡＶＨＳＣ１５にパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を投与したＭＰＳ ＩＩマウスの脳、心臓、腎臓、肝臓、肺、及び脾臓組織で検出された正規化したサイレント改変ｈＩＤＳ転写物を示すグラフである。図２１Ｃは、投与後４週時点での示された様々な用量でＡＡＶＨＳＣ１５にパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を投与したＭＰＳ ＩＩマウスの脳、腎臓、心臓、肝臓、肺、及び脾臓組織で検出されたヘパラン硫酸レベルを示すグラフである。図２１Ｄは、投与後４週時点での示された様々な用量でＡＡＶＨＳＣ１５にパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を投与したＭＰＳ ＩＩマウスの腎臓、心臓、肝臓、及び肺組織で検出されたデルマタン硫酸レベルを示すグラフである。図２１Ｃ及び図２１Ｄ中、ビヒクルを投与した野生型マウス及びＭＰＳ ＩＩマウスを対照として使用した。図２１Ｃ及び図２１Ｄ中、＊は、ｐ＜０．０５での統計的有意性を示し、＊＊は、＜０．０１での統計的有意性を示し、＊＊＊＊は、ｐ＜０．０００での統計的有意性を示し、ｎｓは、有意ではないことを示す。 図２１Ａは、投与後４週時点での示された様々な用量でＡＡＶＨＳＣ１５にパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を投与したＭＰＳ ＩＩマウスの脳、心臓、腎臓、肝臓、肺、及び脾臓組織における形質導入細胞のＤＮＡ １μｇ当たりのベクターゲノム数を示すグラフである。図２１Ｂは、投与後４週時点での示された様々な用量でＡＡＶＨＳＣ１５にパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を投与したＭＰＳ ＩＩマウスの脳、心臓、腎臓、肝臓、肺、及び脾臓組織で検出された正規化したサイレント改変ｈＩＤＳ転写物を示すグラフである。図２１Ｃは、投与後４週時点での示された様々な用量でＡＡＶＨＳＣ１５にパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を投与したＭＰＳ ＩＩマウスの脳、腎臓、心臓、肝臓、肺、及び脾臓組織で検出されたヘパラン硫酸レベルを示すグラフである。図２１Ｄは、投与後４週時点での示された様々な用量でＡＡＶＨＳＣ１５にパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を投与したＭＰＳ ＩＩマウスの腎臓、心臓、肝臓、及び肺組織で検出されたデルマタン硫酸レベルを示すグラフである。図２１Ｃ及び図２１Ｄ中、ビヒクルを投与した野生型マウス及びＭＰＳ ＩＩマウスを対照として使用した。図２１Ｃ及び図２１Ｄ中、＊は、ｐ＜０．０５での統計的有意性を示し、＊＊は、＜０．０１での統計的有意性を示し、＊＊＊＊は、ｐ＜０．０００での統計的有意性を示し、ｎｓは、有意ではないことを示す。 投与後４週時点での示された様々な用量でＡＡＶＨＳＣ１５にパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を投与したＭＰＳ ＩＩマウスの脳組織特異的ベクターゲノムレベル（図２２Ａ）、脳組織中の正規化したサイレント改変ｈＩＤＳ転写物（図２２Ｂ）、脳組織中のｈＩ２Ｓ活性（図２２Ｃ）、及び脳組織特異的ヘパラン硫酸レベル（図２２Ｄ）を示すグラフである。ビヒクルを投与した野生型マウス及びＭＰＳ ＩＩマウスを対照として使用した。図２２Ｃ及び図２２Ｄ中、＊は、ｐ＜０．０５での統計的有意性を示し、＊＊は、ｐ＜０．０１での統計的有意性を示し、＊＊＊は、ｐ＜０．００１での統計的有意性を示し、ｎｓは、有意ではないことを示す。 投与後４週時点での示された様々な用量でＡＡＶＨＳＣ１５にパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を投与したＭＰＳ ＩＩマウスの脳組織特異的ベクターゲノムレベル（図２２Ａ）、脳組織中の正規化したサイレント改変ｈＩＤＳ転写物（図２２Ｂ）、脳組織中のｈＩ２Ｓ活性（図２２Ｃ）、及び脳組織特異的ヘパラン硫酸レベル（図２２Ｄ）を示すグラフである。ビヒクルを投与した野生型マウス及びＭＰＳ ＩＩマウスを対照として使用した。図２２Ｃ及び図２２Ｄ中、＊は、ｐ＜０．０５での統計的有意性を示し、＊＊は、ｐ＜０．０１での統計的有意性を示し、＊＊＊は、ｐ＜０．００１での統計的有意性を示し、ｎｓは、有意ではないことを示す。 投与後４週時点での示された様々な用量でＡＡＶＨＳＣ１５にパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を投与したＭＰＳ ＩＩマウスの脳組織特異的ベクターゲノムレベル（図２２Ａ）、脳組織中の正規化したサイレント改変ｈＩＤＳ転写物（図２２Ｂ）、脳組織中のｈＩ２Ｓ活性（図２２Ｃ）、及び脳組織特異的ヘパラン硫酸レベル（図２２Ｄ）を示すグラフである。ビヒクルを投与した野生型マウス及びＭＰＳ ＩＩマウスを対照として使用した。図２２Ｃ及び図２２Ｄ中、＊は、ｐ＜０．０５での統計的有意性を示し、＊＊は、ｐ＜０．０１での統計的有意性を示し、＊＊＊は、ｐ＜０．００１での統計的有意性を示し、ｎｓは、有意ではないことを示す。 投与後４週時点での示された様々な用量でＡＡＶＨＳＣ１５にパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を投与したＭＰＳ ＩＩマウスの脳組織特異的ベクターゲノムレベル（図２２Ａ）、脳組織中の正規化したサイレント改変ｈＩＤＳ転写物（図２２Ｂ）、脳組織中のｈＩ２Ｓ活性（図２２Ｃ）、及び脳組織特異的ヘパラン硫酸レベル（図２２Ｄ）を示すグラフである。ビヒクルを投与した野生型マウス及びＭＰＳ ＩＩマウスを対照として使用した。図２２Ｃ及び図２２Ｄ中、＊は、ｐ＜０．０５での統計的有意性を示し、＊＊は、ｐ＜０．０１での統計的有意性を示し、＊＊＊は、ｐ＜０．００１での統計的有意性を示し、ｎｓは、有意ではないことを示す。 投与後４週時点での示された様々な用量でＡＡＶＨＳＣ１５にパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を投与したＭＰＳ ＩＩマウスの小脳（図２３Ａ）、脊髄（図２３Ｂ）、及び海馬（図２３Ｃ）におけるＩＨＣによって検出されたＬＡＭＰ１タンパク質のピクセル強度を示すグラフである。ビヒクルを投与した野生型マウス及びＭＰＳ ＩＩマウスを対照として使用した。図２３Ａ～図２３Ｃ中、＊は、ｐ＜０．０５での統計的有意性を示し、＊＊は、ｐ＜０．０１での統計的有意性を示し、＊＊＊は、ｐ＜０．００１での統計的有意性を示し、＊＊＊＊は、ｐ＜０．０００１での統計的有意性を示し、ｎｓは、有意ではないことを示す。 投与後４週時点での示された様々な用量でＡＡＶＨＳＣ１５にパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を投与したＭＰＳ ＩＩマウスの小脳（図２３Ａ）、脊髄（図２３Ｂ）、及び海馬（図２３Ｃ）におけるＩＨＣによって検出されたＬＡＭＰ１タンパク質のピクセル強度を示すグラフである。ビヒクルを投与した野生型マウス及びＭＰＳ ＩＩマウスを対照として使用した。図２３Ａ～図２３Ｃ中、＊は、ｐ＜０．０５での統計的有意性を示し、＊＊は、ｐ＜０．０１での統計的有意性を示し、＊＊＊は、ｐ＜０．００１での統計的有意性を示し、＊＊＊＊は、ｐ＜０．０００１での統計的有意性を示し、ｎｓは、有意ではないことを示す。 投与後４週時点での示された様々な用量でＡＡＶＨＳＣ１５にパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を投与したＭＰＳ ＩＩマウスの小脳（図２３Ａ）、脊髄（図２３Ｂ）、及び海馬（図２３Ｃ）におけるＩＨＣによって検出されたＬＡＭＰ１タンパク質のピクセル強度を示すグラフである。ビヒクルを投与した野生型マウス及びＭＰＳ ＩＩマウスを対照として使用した。図２３Ａ～図２３Ｃ中、＊は、ｐ＜０．０５での統計的有意性を示し、＊＊は、ｐ＜０．０１での統計的有意性を示し、＊＊＊は、ｐ＜０．００１での統計的有意性を示し、＊＊＊＊は、ｐ＜０．０００１での統計的有意性を示し、ｎｓは、有意ではないことを示す。 投与後４週時点での示された様々な用量でＡＡＶＨＳＣ１５にパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を投与したＭＰＳ ＩＩマウスで測定された血清中Ｉ２Ｓ活性を示すグラフである。ビヒクルを投与した野生型マウス及びＭＰＳ ＩＩマウスを対照として使用した。図２４中、＊＊は、ｐ＜０．０１での統計的有意性を示し、＊＊＊＊は、ｐ＜０．０００１での統計的有意性を示し、ｎｓは、有意ではないことを示す。 投与後４週時点での示された様々な用量でＡＡＶＨＳＣ１５にパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を投与したＭＰＳ ＩＩマウスで測定された肝臓組織におけるＩ２Ｓ活性を示すグラフである。ビヒクルを投与した野生型マウス及びＭＰＳ ＩＩマウスを対照として使用した。図２５中、＊＊は、ｐ＜０．０１での統計的有意性を示し、＊＊＊＊は、ｐ＜０．０００１での統計的有意性を示す。 ｐＨＭ－０５２０５ベクターのベクターマップである。 投与後４週時点での６ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶＨＳＣ１５にパッケージングされたｐＨＭ－０５２０５（野生型ｈＩＤＳコード配列を含む）又はｐＨＭ－０５２０８（サイレント改変ｈＩＤＳコード配列を含む）のいずれかを投与したＭＰＳ ＩＩマウスの血清中Ｉ２Ｓ活性（図２６Ｂ）、肝臓組織中Ｉ２Ｓ活性（図２６Ｃ）、及び脳中の正規化したｈＩＤＳ転写物（図２６Ｄ）を示すグラフである。ビヒクルを投与した野生型マウス及びＭＰＳ ＩＩ（「ヘミ」とも称する）を対照として使用した。図２６Ｂ～図２６Ｄ中、＊＊＊＊は、ｐ＜０．０００１での統計的有意性を示し、ｎｓは、有意ではないことを示す。 投与後４週時点での６ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶＨＳＣ１５にパッケージングされたｐＨＭ－０５２０５（野生型ｈＩＤＳコード配列を含む）又はｐＨＭ－０５２０８（サイレント改変ｈＩＤＳコード配列を含む）のいずれかを投与したＭＰＳ ＩＩマウスの血清中Ｉ２Ｓ活性（図２６Ｂ）、肝臓組織中Ｉ２Ｓ活性（図２６Ｃ）、及び脳中の正規化したｈＩＤＳ転写物（図２６Ｄ）を示すグラフである。ビヒクルを投与した野生型マウス及びＭＰＳ ＩＩ（「ヘミ」とも称する）を対照として使用した。図２６Ｂ～図２６Ｄ中、＊＊＊＊は、ｐ＜０．０００１での統計的有意性を示し、ｎｓは、有意ではないことを示す。 投与後４週時点での６ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶＨＳＣ１５にパッケージングされたｐＨＭ－０５２０５（野生型ｈＩＤＳコード配列を含む）又はｐＨＭ－０５２０８（サイレント改変ｈＩＤＳコード配列を含む）のいずれかを投与したＭＰＳ ＩＩマウスの血清中Ｉ２Ｓ活性（図２６Ｂ）、肝臓組織中Ｉ２Ｓ活性（図２６Ｃ）、及び脳中の正規化したｈＩＤＳ転写物（図２６Ｄ）を示すグラフである。ビヒクルを投与した野生型マウス及びＭＰＳ ＩＩ（「ヘミ」とも称する）を対照として使用した。図２６Ｂ～図２６Ｄ中、＊＊＊＊は、ｐ＜０．０００１での統計的有意性を示し、ｎｓは、有意ではないことを示す。 ｐＨＭ－０５２１１ベクターのベクターマップである。 図２７Ｂは、各々２ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶＨＳＣ１５キャプシドにパッケージングされたｐＨＭ－０５２０５又はｐＨＭ－０５２１１を投与したＭＰＳ ＩＩマウスで検出された血清中Ｉ２Ｓ活性レベルを示すグラフである。示されるように、血清中Ｉ２Ｓ活性を投与後６週時点又は８週時点で測定した。ビヒクルを投与したＭＰＳ ＩＩマウスを対照として使用した。図２７Ｃは、各々２ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶＨＳＣ１５キャプシドにパッケージングされたｐＨＭ－０５２０５又はｐＨＭ－０５２１１を投与したＭＰＳ ＩＩマウスの脳中の正規化したｈＩＤＳ転写物レベルを示すグラフである。マウスを屠殺し、示されるように、脳ｈＩＤＳ転写物を投与後２週時点又は８週時点で測定した。図２７Ｂ及び図２７Ｃ中、ｎｓは、有意ではないことを示す。 図２７Ｂは、各々２ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶＨＳＣ１５キャプシドにパッケージングされたｐＨＭ－０５２０５又はｐＨＭ－０５２１１を投与したＭＰＳ ＩＩマウスで検出された血清中Ｉ２Ｓ活性レベルを示すグラフである。示されるように、血清中Ｉ２Ｓ活性を投与後６週時点又は８週時点で測定した。ビヒクルを投与したＭＰＳ ＩＩマウスを対照として使用した。図２７Ｃは、各々２ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶＨＳＣ１５キャプシドにパッケージングされたｐＨＭ－０５２０５又はｐＨＭ－０５２１１を投与したＭＰＳ ＩＩマウスの脳中の正規化したｈＩＤＳ転写物レベルを示すグラフである。マウスを屠殺し、示されるように、脳ｈＩＤＳ転写物を投与後２週時点又は８週時点で測定した。図２７Ｂ及び図２７Ｃ中、ｎｓは、有意ではないことを示す。 １．８ｅ１４ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶＨＳＣ１５にパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を投与したＭＰＳ ＩＩマウスに関する様々なデータを示すグラフである。図２８Ａは、投与後５２週時点までの処理したＭＰＳ ＩＩマウスにおける酵素蛍光アッセイを使用して検出された血清中Ｉ２Ｓ活性レベルを示すグラフである。個々のマウス（ｎ＝３～５マウス／群）間の最小値、最大値、及び中央値をボックス内に表示し、エラーバーは標準偏差を示す。 図２８Ｂは、投与後１２週、２４週、３９週、及び５２週時点での処理したＭＰＳ ＩＩマウスの脳、心臓、肝臓、脾臓、腎臓、及び肺組織における形質導入細胞のＤＮＡ １μｇ当たりのベクターゲノム数を示すグラフである。 図２８Ｃは、投与後１２週、２４週、３９週、及び５２週時点での処理したＭＰＳ ＩＩマウスの脳、心臓、肝臓、脾臓、腎臓、及び肺組織で検出されたｈＩＤＳ転写物数を示すグラフである。 図２８Ｄは、投与後５２週時点での処理したＭＰＳ ＩＩマウスの脳、心臓、肝臓、脾臓、腎臓、及び肺組織で検出されたヘパラン硫酸レベルを示すグラフである。 図２８Ｅ及び図２８Ｆは、投与後５２週時点での処理したＭＰＳ ＩＩマウスの脊髄（図２８Ｅ）及び海馬（図２８Ｆ）におけるＩＨＣによって検出されたＬＡＭＰ１タンパク質のピクセル強度を示すグラフである。 図２８Ｅ及び図２８Ｆは、投与後５２週時点での処理したＭＰＳ ＩＩマウスの脊髄（図２８Ｅ）及び海馬（図２８Ｆ）におけるＩＨＣによって検出されたＬＡＭＰ１タンパク質のピクセル強度を示すグラフである。 図２８Ｇは、投与後３９週時点での処理したＭＰＳ ＩＩの三叉神経節における形質導入細胞のＤＮＡ １μｇ当たりのベクターゲノム数を示すグラフである。 図２８Ｈは、投与後１２週、２４週、３９週、及び５２週時点での処理したＭＰＳ ＩＩマウスの肝臓組織で検出されたＩ２Ｓ活性レベルを示すグラフである。 図２８Ｉ～図２８Ｌは、投与後１２週（図２８Ｉ）、２４週（図２８Ｊ）、３９週（図２８Ｋ）、及び５２週（図２８Ｌ）時点での処理したＭＰＳ ＩＩマウスの脳組織で検出されたＩ２Ｓ活性レベルを示すグラフである。 図２８Ｉ～図２８Ｌは、投与後１２週（図２８Ｉ）、２４週（図２８Ｊ）、３９週（図２８Ｋ）、及び５２週（図２８Ｌ）時点での処理したＭＰＳ ＩＩマウスの脳組織で検出されたＩ２Ｓ活性レベルを示すグラフである。 図２８Ｉ～図２８Ｌは、投与後１２週（図２８Ｉ）、２４週（図２８Ｊ）、３９週（図２８Ｋ）、及び５２週（図２８Ｌ）時点での処理したＭＰＳ ＩＩマウスの脳組織で検出されたＩ２Ｓ活性レベルを示すグラフである。 図２８Ｉ～図２８Ｌは、投与後１２週（図２８Ｉ）、２４週（図２８Ｊ）、３９週（図２８Ｋ）、及び５２週（図２８Ｌ）時点での処理したＭＰＳ ＩＩマウスの脳組織で検出されたＩ２Ｓ活性レベルを示すグラフである。 図２８Ｍは、投与後５２週時点までのＡＡＶＨＳＣ１５にパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を１．８ｅ１４ｖｇ／ｋｇで投与したＭＰＳ ＩＩマウスの尿で検出されたＧＡＧ－ＨＳレベルを示すグラフである。 図２８Ｎは、投与後５２週時点でのＡＡＶＨＳＣ１５にパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を１．８ｅ１４ｖｇ／ｋｇで投与したＭＰＳ ＩＩマウスにおけるプルキンエ細胞層細胞密度の定量を示すグラフである。 図２８Ｏは、投与後５２週時点での処理したＭＰＳ ＩＩマウスの頬骨弓の厚さを示すグラフである。図２８Ｂ～図２８Ｄ及び図２８Ｅ～図２８Ｍの各々中、未処理のＭＰＳ ＩＩ及び野生型マウスを対照として使用した。図２８Ｊ～図２８Ｌ中、正常成人ヒト脳組織を追加の対照として使用した。いずれの事例でも、＊は、ｐ＜０．０５での統計的有意性を示し、＊＊は、ｐ＜０．０１での統計的有意性を示し、＊＊＊は、ｐ＜０．００１での統計的有意性を示し、ｎｓは、有意ではないことを示す。未処理のマウスとは、ビヒクルを投与したマウスを指す。 図２９Ａは、足首及び足の深さ及び幅測定値の位置を示す概略図である。図２９Ｂ～図２９Ｅは、投与後１４、２０、２８、３４、３７、４０、４６、及び５２週時点での１．８ｅ１４ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶＨＳＣ１５にパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を投与したＭＰＳ ＩＩマウスにおける足の幅（図２９Ｂ）、足の深さ（図２９Ｃ）、足首の幅（図２９Ｄ）、及び足首の深さ（図２９Ｅ）測定値を示すグラフである。いずれの事例でも、ビヒクルを投与した野生型マウス及びＭＰＳ ＩＩマウスを対照として使用した。 図２９Ａは、足首及び足の深さ及び幅測定値の位置を示す概略図である。図２９Ｂ～図２９Ｅは、投与後１４、２０、２８、３４、３７、４０、４６、及び５２週時点での１．８ｅ１４ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶＨＳＣ１５にパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を投与したＭＰＳ ＩＩマウスにおける足の幅（図２９Ｂ）、足の深さ（図２９Ｃ）、足首の幅（図２９Ｄ）、及び足首の深さ（図２９Ｅ）測定値を示すグラフである。いずれの事例でも、ビヒクルを投与した野生型マウス及びＭＰＳ ＩＩマウスを対照として使用した。 図２９Ａは、足首及び足の深さ及び幅測定値の位置を示す概略図である。図２９Ｂ～図２９Ｅは、投与後１４、２０、２８、３４、３７、４０、４６、及び５２週時点での１．８ｅ１４ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶＨＳＣ１５にパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を投与したＭＰＳ ＩＩマウスにおける足の幅（図２９Ｂ）、足の深さ（図２９Ｃ）、足首の幅（図２９Ｄ）、及び足首の深さ（図２９Ｅ）測定値を示すグラフである。いずれの事例でも、ビヒクルを投与した野生型マウス及びＭＰＳ ＩＩマウスを対照として使用した。 図２９Ａは、足首及び足の深さ及び幅測定値の位置を示す概略図である。図２９Ｂ～図２９Ｅは、投与後１４、２０、２８、３４、３７、４０、４６、及び５２週時点での１．８ｅ１４ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶＨＳＣ１５にパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を投与したＭＰＳ ＩＩマウスにおける足の幅（図２９Ｂ）、足の深さ（図２９Ｃ）、足首の幅（図２９Ｄ）、及び足首の深さ（図２９Ｅ）測定値を示すグラフである。いずれの事例でも、ビヒクルを投与した野生型マウス及びＭＰＳ ＩＩマウスを対照として使用した。 図２９Ａは、足首及び足の深さ及び幅測定値の位置を示す概略図である。図２９Ｂ～図２９Ｅは、投与後１４、２０、２８、３４、３７、４０、４６、及び５２週時点での１．８ｅ１４ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶＨＳＣ１５にパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を投与したＭＰＳ ＩＩマウスにおける足の幅（図２９Ｂ）、足の深さ（図２９Ｃ）、足首の幅（図２９Ｄ）、及び足首の深さ（図２９Ｅ）測定値を示すグラフである。いずれの事例でも、ビヒクルを投与した野生型マウス及びＭＰＳ ＩＩマウスを対照として使用した。 図３０Ａ、図３０Ｄ、及び図３０Ｅは、投与後８週時点までのＡＡＶＨＳＣ１５にパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を１．８ｅ１４ｖｇ／ｋｇで投与したＭＰＳ ＩＩマウスの血清（図３０Ａ）、肝臓組織（図３０Ｄ）、及び脳組織（図３０Ｆ）で検出されたＩ２Ｓ活性レベルを示すグラフである。ビヒクルを投与したＭＰＳ ＩＩマウスを対照として使用した。図３０Ａ中、＊は、ｐ＜０．０５での統計的有意性を示し、＊＊は、ｐ＜０．０１での統計的有意性を示し、＊＊＊は、ｐ＜０．００１での統計的有意性を示し、ｎｓは、有意ではないことを示す。図３０Ｂ及び図３０Ｃは、示されるように、投与後８日、２週、及び８週時点でのＡＡＶＨＳＣ１５にパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を１．８ｅ１４ｖｇ／ｋｇで投与したＭＰＳ ＩＩマウスの脳、心臓、肝臓、及び脾臓組織で検出されたベクターゲノムレベル（図３０Ｂ）及びサイレント改変ｈＩＤＳ転写物レベル（図３０Ｃ）を示すグラフである。 図３０Ａ、図３０Ｄ、及び図３０Ｅは、投与後８週時点までのＡＡＶＨＳＣ１５にパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を１．８ｅ１４ｖｇ／ｋｇで投与したＭＰＳ ＩＩマウスの血清（図３０Ａ）、肝臓組織（図３０Ｄ）、及び脳組織（図３０Ｆ）で検出されたＩ２Ｓ活性レベルを示すグラフである。ビヒクルを投与したＭＰＳ ＩＩマウスを対照として使用した。図３０Ａ中、＊は、ｐ＜０．０５での統計的有意性を示し、＊＊は、ｐ＜０．０１での統計的有意性を示し、＊＊＊は、ｐ＜０．００１での統計的有意性を示し、ｎｓは、有意ではないことを示す。図３０Ｂ及び図３０Ｃは、示されるように、投与後８日、２週、及び８週時点でのＡＡＶＨＳＣ１５にパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を１．８ｅ１４ｖｇ／ｋｇで投与したＭＰＳ ＩＩマウスの脳、心臓、肝臓、及び脾臓組織で検出されたベクターゲノムレベル（図３０Ｂ）及びサイレント改変ｈＩＤＳ転写物レベル（図３０Ｃ）を示すグラフである。 図３０Ａ、図３０Ｄ、及び図３０Ｅは、投与後８週時点までのＡＡＶＨＳＣ１５にパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を１．８ｅ１４ｖｇ／ｋｇで投与したＭＰＳ ＩＩマウスの血清（図３０Ａ）、肝臓組織（図３０Ｄ）、及び脳組織（図３０Ｆ）で検出されたＩ２Ｓ活性レベルを示すグラフである。ビヒクルを投与したＭＰＳ ＩＩマウスを対照として使用した。図３０Ａ中、＊は、ｐ＜０．０５での統計的有意性を示し、＊＊は、ｐ＜０．０１での統計的有意性を示し、＊＊＊は、ｐ＜０．００１での統計的有意性を示し、ｎｓは、有意ではないことを示す。図３０Ｂ及び図３０Ｃは、示されるように、投与後８日、２週、及び８週時点でのＡＡＶＨＳＣ１５にパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を１．８ｅ１４ｖｇ／ｋｇで投与したＭＰＳ ＩＩマウスの脳、心臓、肝臓、及び脾臓組織で検出されたベクターゲノムレベル（図３０Ｂ）及びサイレント改変ｈＩＤＳ転写物レベル（図３０Ｃ）を示すグラフである。 図３０Ａ、図３０Ｄ、及び図３０Ｅは、投与後８週時点までのＡＡＶＨＳＣ１５にパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を１．８ｅ１４ｖｇ／ｋｇで投与したＭＰＳ ＩＩマウスの血清（図３０Ａ）、肝臓組織（図３０Ｄ）、及び脳組織（図３０Ｆ）で検出されたＩ２Ｓ活性レベルを示すグラフである。ビヒクルを投与したＭＰＳ ＩＩマウスを対照として使用した。図３０Ａ中、＊は、ｐ＜０．０５での統計的有意性を示し、＊＊は、ｐ＜０．０１での統計的有意性を示し、＊＊＊は、ｐ＜０．００１での統計的有意性を示し、ｎｓは、有意ではないことを示す。図３０Ｂ及び図３０Ｃは、示されるように、投与後８日、２週、及び８週時点でのＡＡＶＨＳＣ１５にパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を１．８ｅ１４ｖｇ／ｋｇで投与したＭＰＳ ＩＩマウスの脳、心臓、肝臓、及び脾臓組織で検出されたベクターゲノムレベル（図３０Ｂ）及びサイレント改変ｈＩＤＳ転写物レベル（図３０Ｃ）を示すグラフである。 図３０Ａ、図３０Ｄ、及び図３０Ｅは、投与後８週時点までのＡＡＶＨＳＣ１５にパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を１．８ｅ１４ｖｇ／ｋｇで投与したＭＰＳ ＩＩマウスの血清（図３０Ａ）、肝臓組織（図３０Ｄ）、及び脳組織（図３０Ｆ）で検出されたＩ２Ｓ活性レベルを示すグラフである。ビヒクルを投与したＭＰＳ ＩＩマウスを対照として使用した。図３０Ａ中、＊は、ｐ＜０．０５での統計的有意性を示し、＊＊は、ｐ＜０．０１での統計的有意性を示し、＊＊＊は、ｐ＜０．００１での統計的有意性を示し、ｎｓは、有意ではないことを示す。図３０Ｂ及び図３０Ｃは、示されるように、投与後８日、２週、及び８週時点でのＡＡＶＨＳＣ１５にパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を１．８ｅ１４ｖｇ／ｋｇで投与したＭＰＳ ＩＩマウスの脳、心臓、肝臓、及び脾臓組織で検出されたベクターゲノムレベル（図３０Ｂ）及びサイレント改変ｈＩＤＳ転写物レベル（図３０Ｃ）を示すグラフである。 示されるように、投与後８日（図３１Ａ）、２週（図３１Ｂ）、及び８週（図３１Ｃ）時点でＡＡＶＨＳＣ１５にパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を１．８ｅ１４ｖｇ／ｋｇで投与したＭＰＳ ＩＩマウスの脳、心臓、肝臓、及び脾臓組織で検出されたＧＡＧ－ＨＳレベルを示すグラフである。 示されるように、投与後８日（図３１Ａ）、２週（図３１Ｂ）、及び８週（図３１Ｃ）時点でＡＡＶＨＳＣ１５にパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を１．８ｅ１４ｖｇ／ｋｇで投与したＭＰＳ ＩＩマウスの脳、心臓、肝臓、及び脾臓組織で検出されたＧＡＧ－ＨＳレベルを示すグラフである。 示されるように、投与後８日（図３１Ａ）、２週（図３１Ｂ）、及び８週（図３１Ｃ）時点でＡＡＶＨＳＣ１５にパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を１．８ｅ１４ｖｇ／ｋｇで投与したＭＰＳ ＩＩマウスの脳、心臓、肝臓、及び脾臓組織で検出されたＧＡＧ－ＨＳレベルを示すグラフである。 示された様々な時点でのＡＡＶＨＳＣ１５にパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を１．８ｅ１４ｖｇ／ｋｇで投与したＭＰＳ ＩＩマウスの尿で検出されたＧＡＧ－ＨＳレベルを示すグラフである。いずれの事例でも、ビヒクルを投与した野生型及びＭＰＳ ＩＩマウスを対照として使用した。 ビヒクルで処理した野生型（ＷＴ）マウス、ビヒクルで処理したＭＰＳ ＩＩマウス、及び示されるように、６ｅ１３ｖｇ／ｋｇ（ＭＰＳ ＩＩ ６Ｅ＋１３）、１ｅ１４ｖｇ／ｋｇ（ＭＰＳ ＩＩ １Ｅ＋１４）、又は２ｅ１４ｖｇ／ｋｇ（ＭＰＳ ＩＩ ２Ｅ＋１４）の用量で静脈内投与した、ＡＡＶＨＳＣ１５キャプシドにパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７で処理したＭＰＳ ＩＩマウスの脳脊髄液（ＣＳＦ）（図３２Ａ）又は脳組織（図３２Ｂ）におけるＨＰＬＣ－ＭＳ／ＭＳによって検出されたＧＡＧ－ＨＳレベルを示すグラフである。 ビヒクルで処理した野生型（ＷＴ）マウス、ビヒクルで処理したＭＰＳ ＩＩマウス、及び示されるように、６ｅ１３ｖｇ／ｋｇ（ＭＰＳ ＩＩ ６Ｅ＋１３）、１ｅ１４ｖｇ／ｋｇ（ＭＰＳ ＩＩ １Ｅ＋１４）、又は２ｅ１４ｖｇ／ｋｇ（ＭＰＳ ＩＩ ２Ｅ＋１４）の用量で静脈内投与した、ＡＡＶＨＳＣ１５キャプシドにパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７で処理したＭＰＳ ＩＩマウスの脳脊髄液（ＣＳＦ）（図３２Ａ）又は脳組織（図３２Ｂ）におけるＨＰＬＣ－ＭＳ／ＭＳによって検出されたＧＡＧ－ＨＳレベルを示すグラフである。 ビヒクルで処理した野生型（ＷＴ）マウス、ビヒクルで処理したＭＰＳ ＩＩマウス、及び示されるように、６ｅ１３ｖｇ／ｋｇ（ＭＰＳ ＩＩ ６Ｅ＋１３）、１ｅ１４ｖｇ／ｋｇ（ＭＰＳ ＩＩ １Ｅ＋１４）、又は２ｅ１４ｖｇ／ｋｇ（ＭＰＳ ＩＩ ２Ｅ＋１４）の用量で静脈内投与した、ＡＡＶＨＳＣ１５キャプシドでパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７で処理したＭＰＳ ＩＩマウスの脳組織で検出されたＩ２Ｓ活性レベルを示すグラフである。正常成人ヒト脳組織を追加の対照（「ヒトＷＴ」）として使用した。図３２Ａ～図３２Ｃ中、＊は、ｐ＜０．０５での統計的有意性を示し、＊＊は、ｐ＜０．０１での統計的有意性を示し、＊＊＊は、ｐ＜０．００１での統計的有意性を示し、＊＊＊＊は、ｐ＜０．０００１での統計的有意性を示す。 マンノース６－リン酸（Ｍ６Ｐ）の存在下又は不在下でのＡＡＶＨＳＣ１５にパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を１．８ｅ１４ｖｇ／ｋｇで投与した８日後にＭＰＳ ＩＩマウスから得られた血清とインキュベートしたＩＤＳ ＫＯ ＨｅＬａ細胞の細胞溶解物で検出されたＩ２Ｓ活性レベルを示すグラフである。図３３中、＊は、ｐ＜０．０５での統計的有意性を示し、＊＊＊は、ｐ＜０．００１での統計的有意性を示す。
本開示は、細胞のＩＤＳ遺伝子機能を回復させることができるＡＡＶ組成物、及びそれらを使用してＩＤＳ遺伝子機能の低下に関連する障害（例えば、ハンター症候群）を治療するための方法を提供する。ＡＡＶ組成物を作製するための組成物、系、及び方法も提供される。
Ｉ．定義
本明細書で使用される場合、「組換えアデノ随伴ウイルス」又は「ｒＡＡＶ」という用語は、機能性Ｒｅｐ遺伝子及びＣａｐ遺伝子を欠くゲノムを含むＡＡＶを指す。
本明細書で使用される場合、「ＩＤＳ遺伝子」という用語は、イズロン酸－２－スルファターゼ遺伝子を指す。ヒトＩＤＳ遺伝子は、アメリカ国立生物工学情報センター（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ＮＣＢＩ））によって遺伝子ＩＤ３４２３で特定されている。ＩＤＳ遺伝子の相補的コード配列の例示的なヌクレオチド配列は、配列番号２４として提供される。ＩＤＳポリペプチドの例示的なアミノ酸配列は、配列番号２３として提供される。
本明細書で使用される場合、「ｒＡＡＶゲノム」という用語は、ｒＡＡＶのゲノム配列を含む核酸分子（例えば、ＤＮＡ及び／又はＲＮＡ）を指す。当業者であれば、ｒＡＡＶゲノムが導入遺伝子（例えば、転写調節エレメントに作動可能に連結されたＩＤＳコード配列）を含む場合、ｒＡＡＶゲノムが導入遺伝子の転写方向に対してセンス又はアンチセンス配向であり得ることを理解するであろう。
本明細書で使用される場合、「ＡＡＶキャプシドタンパク質」という用語は、ＡＡＶ ＶＰ１、ＶＰ２、又はＶＰ３キャプシドタンパク質を指す。本明細書で使用される場合、「クレードＦキャプシドタンパク質」という用語は、それぞれ、本明細書の配列番号１のアミノ酸１～７３６、１３８～７３６、及び２０３～７３６に記載のＶＰ１、ＶＰ２、又はＶＰ３アミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するＡＡＶ ＶＰ１、ＶＰ２、又はＶＰ３キャプシドタンパク質を指す。
本明細書で使用される場合、２つのヌクレオチド配列間又は２つのアミノ酸配列間の「同一性パーセンテージ」は、整列した配列の対間の一致数に１００を乗じ、かつ内部ギャップを含む整列した領域の長さで除することによって計算される。同一性スコアリングは、完全一致のみをカウントし、アミノ酸の相互の類似度を考慮しない。配列末端のギャップではなく、内部ギャップのみが長さに含まれることに留意されたい。
本明細書で使用される場合、「ＩＤＳ遺伝子変異に関連する疾患又は障害」という用語は、ＩＤＳ遺伝子の変異によって引き起こされる、ＩＤＳ遺伝子の変異によって悪化する、又はＩＤＳ遺伝子の変異に遺伝子的に関連する任意の疾患又は障害を指す。ある特定の実施形態では、ＩＤＳ遺伝子変異に関連する疾患又は障害は、ハンター症候群又はムコ多糖症ＩＩ（ＭＰＳ ＩＩ）である。
本明細書で使用される場合、「コード配列」という用語は、開始コドンで始まり、終止コドンで終わる、ポリペプチドをコードする相補的ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）の部分を指す。遺伝子は、選択的スプライシング、選択的翻訳開始、及び集団内変動に起因して、１つ以上のコード配列を有し得る。コード配列は、野生型、サイレント改変、又はイントロン挿入のいずれかであり得る。例示的な野生型ＩＤＳコード配列は、配列番号２４に記載される。
本明細書で使用される場合、「サイレント改変」という用語は、コード配列又はスタッファー挿入コード配列によってコードされるポリペプチドのアミノ酸配列を変化させない、（例えば、ヌクレオチド置換による）遺伝子のコード配列又はイントロン挿入コード配列の改変を指す。かかるサイレント改変は、コード配列の翻訳効率を高める、及び／又はコード配列が細胞に形質導入されたときに内因性遺伝子の対応する配列との組換えを防止し得るという点で有利である。本明細書に記載の例示的なサイレント改変ＩＤＳコード配列は、配列番号２６、６７、又は６８に記載される。
本明細書で使用される場合、遺伝子の「イントロン挿入コード配列」という用語は、遺伝子のコード配列に挿入された１つ以上のイントロンを含むヌクレオチド配列を指す。遺伝子のイントロン挿入コード配列は、イントロンを含むイントロン挿入コード配列とも称される。ある特定の実施形態では、イントロンのうちの少なくとも１つは、非天然イントロン又は異種イントロンであり、すなわち、遺伝子の天然イントロンとは異なる配列を有する。ある特定の実施形態では、イントロン挿入コード配列中のイントロンは全て、非天然イントロンである。非天然イントロンは、異なる種由来のイントロンの配列、又は同じ種若しくは異なる種由来の異なる遺伝子中のイントロンの配列を有することができる。あるいは、又は加えて、非天然イントロン配列の少なくとも一部分は合成であり得る。当業者であれば、当該技術分野で既知のいずれかのコンセンサススプライシングモチーフを導入することによってＲＮＡスプライシングを媒介するように非天然イントロン配列を設計することができることを理解するであろう。コンセンサススプライシングモチーフの例は、Ｓｉｂｌｅｙ ｅｔ ａｌ．，（２０１６）Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，１７，４０７－２１（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に提供されている。かかる配列が最適なサイズ（例えば、４．５～４．８ｋｂ）に到達するようにベクターの調整を可能にし得るため、非天然イントロンの挿入によりベクターパッケージングの効率及び頑健性が促進され得る。ある特定の実施形態では、イントロンのうちの少なくとも１つが遺伝子の天然イントロンである。ある特定の実施形態では、イントロン挿入コード配列中のイントロンの全てが遺伝子の天然イントロンである。非天然イントロン又は天然イントロンは、コード配列中の任意のヌクレオチド間結合に挿入され得る。ある特定の実施形態では、１つ以上の非天然イントロン又は天然イントロンは、効率的なスプライシングを促進すると予測されるヌクレオチド間結合に挿入される（例えば、Ｚｈａｎｇ（１９９８）Ｈｕｍａｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，７（５）：９１９－３２（この開示は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）を参照のこと）。ある特定の実施形態では、１つ以上の非天然イントロン又は天然イントロンは、２つの内因性エクソンを連結するヌクレオチド間結合に挿入される。したがって、ある特定の実施形態では、遺伝子のイントロン挿入コード配列は、効率的なスプライシングのために設計された１つ以上のイントロンを含む。ある特定の実施形態では、１つ以上のイントロンが遺伝子のコード配列に挿入されて、遺伝子の発現を増強することができる（例えば、イントロン媒介性増強（ＩＭＥ）を介して）。
本明細書で使用される場合、「異種イントロン」及び「非天然イントロン」という用語は、所与の遺伝子に天然ではないイントロンを指す。
本開示では、ＩＤＳ遺伝子におけるヌクレオチド位置は、開始コドンの第１のヌクレオチドに対して特定される。開始コドンの第１のヌクレオチドは１位にあり、開始コドンの第１のヌクレオチドの５’側のヌクレオチドは負の数を有し、開始コドンの第１のヌクレオチドの３’側のヌクレオチドは正の数を有する。ヒトＩＤＳ遺伝子の例示的なヌクレオチド１は、ＮＣＢＩ参照配列：ＮＧ＿０１１９００．３のヌクレオチド１７０であり（受入領域：ＮＧ＿０１１９００、領域５０２９．．３３３４７、分類群９６０６、染色体Ｘ、マップＸｑ２８）、ヒトＩＤＳ遺伝子の例示的なヌクレオチド３は、ＮＣＢＩ参照配列：ＮＧ＿０１１９００．３のヌクレオチド１７２である。開始コドンの５’側に隣接するヌクレオチドは、ヌクレオチド－１である。
本明細書で使用される場合、「転写調節エレメント」又は「ＴＲＥ」という用語は、ＲＮＡポリメラーゼによる作動可能に連結されたヌクレオチド配列の転写を調節して（例えば、制御して、増加させて、又は減少させて）ＲＮＡ分子を形成するシス作用性ヌクレオチド配列、例えば、ＤＮＡ配列を指す。ＴＲＥは、転写を調節するために、転写因子などの１つ以上のトランス作用性分子に依存する。したがって、１つのＴＲＥは、異なるトランス作用性分子と接触しているとき、例えば、異なるタイプの細胞に存在しているときに、異なる方法で転写を調節することができる。ＴＲＥは、１つ以上のプロモーターエレメント及び／又はエンハンサーエレメントを含んでもよい。当業者であれば、遺伝子におけるプロモーターエレメントとエンハンサーエレメントの位置が近い可能性があり、「プロモーター」という用語がプロモーターエレメント及びエンハンサーエレメントを含む配列を指し得ることを理解するであろう。したがって、「プロモーター」という用語は、配列中のエンハンサーエレメントを除外しない。プロモーターエレメント及びエンハンサーエレメントは、同じ遺伝子又は種に由来する必要はなく、各プロモーターエレメント又はエンハンサーエレメントの配列は、ゲノム中の対応する内因性配列と同一であるか、又は実質的に同一であるかのいずれかであり得る。
本明細書で使用される場合、「作動可能に連結された」という用語は、ＴＲＥと転写されるコード配列との間の結合を説明するために使用される。典型的には、遺伝子発現は、１つ以上のプロモーターエレメン及び／又はエンハンサーエレメントを含むＴＲＥの制御下に置かれる。コード配列の転写がＴＲＥによって制御又は影響される場合、コード配列はＴＲＥに「作動可能に連結」されている。ＴＲＥのプロモーターエレメント及びエンハンサーエレメントは、所望の転写活性が得られる限り、コード配列から任意の配向及び／又は距離にあり得る。ある特定の実施形態では、ＴＲＥは、コード配列の上流にある。
本明細書で使用される場合、「ポリアデニル化配列」という用語は、ＲＮＡに転写されるとポリアデニル化シグナル配列を構成するＤＮＡ配列を指す。ポリアデニル化配列は、天然（例えば、ＩＤＳ遺伝子由来）である可能性も外因性である可能性もある。外因性ポリアデニル化配列は、哺乳類又はウイルスポリアデニル化配列（例えば、ＳＶ４０ポリアデニル化配列）であり得る。
本明細書で使用される場合、「外因性ポリアデニル化配列」とは、ＩＤＳ遺伝子（例えば、ヒトＩＤＳ遺伝子）の内因性ポリアデニル化配列と同一でも実質的に同一でもないポリアデニル化配列を指す。ある特定の実施形態では、外因性ポリアデニル化配列は、同じ種（例えば、ヒト）の非ＩＤＳ遺伝子のポリアデニル化配列である。ある特定の実施形態では、外因性ポリアデニル化配列は、異なる種（例えば、ウイルス）のポリアデニル化配列である。
本明細書で使用される場合、対象へのＡＡＶの投与との関連での「有効量」という用語は、所望の予防効果又は治療効果をもたらすＡＡＶの量を指す。
本明細書で使用される場合、ＩＤＳタンパク質の発現レベルなどの測定可能な値を指す場合の「約」又は「およそ」という用語は、本明細書に開示される方法を行うのに適切なように、所与の値又は範囲の±２０％又は±１０％、±５％、±１％、又は±０．１％の変動を包含する。
ＩＩ．アデノ随伴ウイルス組成物
一態様では、低下した又は別様に欠陥のあるＩＤＳ遺伝子機能を有する細胞においてＩＤＳポリペプチドを発現させるのに有用な新規のｒＡＡＶ組成物が本明細書に提供される。ある特定の実施形態では、本明細書に開示されるＡＡＶは、キャプシドタンパク質（例えば、ＡＡＶクレードＦキャプシドタンパク質）を含むＡＡＶキャプシドと、イントロン挿入ＩＤＳコード配列（例えば、サイレント改変イントロン挿入ＩＤＳコード配列）に作動可能に連結された転写調節エレメントを含むｒＡＡＶゲノムと、を含み、ＡＡＶを形質導入した細胞におけるＩＤＳの染色体外発現が可能になる。
ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、又はＡＡＶ９血清型由来のキャプシドタンパク質を含むが、これらに限定されない、当該技術分野で既知のいずれかのキャプシド由来のキャプシドタンパク質を本明細書に開示されるｒＡＡＶ組成物に使用することができる。例えば、ある特定の実施形態では、キャプシドタンパク質は、配列番号１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１５、１６、又は１７のアミノ酸２０３～７３６のアミノ酸配列と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、キャプシドタンパク質は、配列番号１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１５、１６、又は１７のアミノ酸２０３～７３６のアミノ酸配列と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ここで、配列番号１６のアミノ酸２０６に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＣである、配列番号１６のアミノ酸２９６に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＨである、配列番号１６のアミノ酸３１２に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＱである、配列番号１６のアミノ酸３４６に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＡである、配列番号１６のアミノ酸４６４に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＮである、配列番号１６のアミノ酸４６８に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＳである、配列番号１６のアミノ酸５０１に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＩである、配列番号１６のアミノ酸５０５に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＲである、配列番号１６のアミノ酸５９０に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＲである、配列番号１６のアミノ酸６２６に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＧ又はＹである、配列番号１６のアミノ酸６８１に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＭである、配列番号１６のアミノ酸６８７に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＲである、配列番号１６のアミノ酸６９０に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＫである、配列番号１６のアミノ酸７０６に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＣである、又は配列番号１６のアミノ酸７１８に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＧである。ある特定の実施形態では、配列番号１６のアミノ酸６２６に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＧであり、配列番号１６のアミノ酸７１８に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＧである。ある特定の実施形態では、配列番号１６のアミノ酸２９６に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＨであり、配列番号１６のアミノ酸４６４に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＮであり、配列番号１６のアミノ酸５０５に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＲであり、配列番号１６のアミノ酸６８１に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＭである。ある特定の実施形態では、配列番号１６のアミノ酸５０５に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＲであり、配列番号１６のアミノ酸６８７に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＲである。ある特定の実施形態では、配列番号１６のアミノ酸３４６に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＡであり、配列番号１６のアミノ酸５０５に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＲである。ある特定の実施形態では、配列番号１６のアミノ酸５０１に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＩであり、配列番号１６のアミノ酸５０５に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＲであり、配列番号１６のアミノ酸７０６に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＣである。ある特定の実施形態では、キャプシドタンパク質は、配列番号１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１５、１６、又は１７のアミノ酸２０３～７３６のアミノ酸配列を含む。
例えば、ある特定の実施形態では、キャプシドタンパク質は、配列番号１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１５、１６、又は１７のアミノ酸１３８～７３６のアミノ酸配列と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、キャプシドタンパク質は、配列番号１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１５、１６、又は１７のアミノ酸１３８～７３６のアミノ酸配列と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ここで、配列番号１６のアミノ酸１５１に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＲである、配列番号１６のアミノ酸１６０に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＤである、配列番号１６のアミノ酸２０６に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＣである、配列番号１６のアミノ酸２９６に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＨである、配列番号１６のアミノ酸３１２に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＱである、配列番号１６のアミノ酸３４６に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＡである、配列番号１６のアミノ酸４６４に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＮである、配列番号１６のアミノ酸４６８に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＳである、配列番号１６のアミノ酸５０１に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＩである、配列番号１６のアミノ酸５０５に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＲである、配列番号１６のアミノ酸５９０に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＲである、配列番号１６のアミノ酸６２６に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＧ又はＹである、配列番号１６のアミノ酸６８１に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＭである、配列番号１６のアミノ酸６８７に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＲである、配列番号１６のアミノ酸６９０に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＫである、配列番号１６のアミノ酸７０６に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＣである、又は配列番号１６のアミノ酸７１８に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＧである。ある特定の実施形態では、配列番号１６のアミノ酸６２６に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＧであり、配列番号１６のアミノ酸７１８に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＧである。ある特定の実施形態では、配列番号１６のアミノ酸２９６に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＨであり、配列番号１６のアミノ酸４６４に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＮであり、配列番号１６のアミノ酸５０５に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＲであり、配列番号１６のアミノ酸６８１に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＭである。ある特定の実施形態では、配列番号１６のアミノ酸５０５に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＲであり、配列番号１６のアミノ酸６８７に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＲである。ある特定の実施形態では、配列番号１６のアミノ酸３４６に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＡであり、配列番号１６のアミノ酸５０５に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＲである。ある特定の実施形態では、配列番号１６のアミノ酸５０１に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＩであり、配列番号１６のアミノ酸５０５に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＲであり、配列番号１６のアミノ酸７０６に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＣである。ある特定の実施形態では、キャプシドタンパク質は、配列番号１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１５、１６、又は１７のアミノ酸１３８～７３６のアミノ酸配列を含む。
例えば、ある特定の実施形態では、キャプシドタンパク質は、配列番号１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１５、１６、又は１７のアミノ酸１～７３６のアミノ酸配列と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、キャプシドタンパク質は、配列番号１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１５、１６、又は１７のアミノ酸１～７３６のアミノ酸配列と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ここで、配列番号１６のアミノ酸２に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＴである、配列番号１６のアミノ酸６５に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＩである、配列番号１６のアミノ酸６８に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＶである、配列番号１６のアミノ酸７７に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＲである、配列番号１６のアミノ酸１１９に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＬである、配列番号１６のアミノ酸１５１に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＲである、配列番号１６のアミノ酸１６０に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＤである、配列番号１６のアミノ酸２０６に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＣである、配列番号１６のアミノ酸２９６に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＨである、配列番号１６のアミノ酸３１２に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＱである、配列番号１６のアミノ酸３４６に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＡである、配列番号１６のアミノ酸４６４に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＮである、配列番号１６のアミノ酸４６８に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＳである、配列番号１６のアミノ酸５０１に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＩである、配列番号１６のアミノ酸５０５に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＲである、配列番号１６のアミノ酸５９０に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＲである、配列番号１６のアミノ酸６２６に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＧ又はＹである、配列番号１６のアミノ酸６８１に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＭである、配列番号１６のアミノ酸６８７に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＲである、配列番号１６のアミノ酸６９０に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＫである、配列番号１６のアミノ酸７０６に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＣである、又は配列番号１６のアミノ酸７１８に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＧである。ある特定の実施形態では、配列番号１６のアミノ酸２に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＴであり、配列番号１６のアミノ酸３１２に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＱである。ある特定の実施形態では、配列番号１６のアミノ酸６５に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＩであり、配列番号１６のアミノ酸６２６に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＹである。ある特定の実施形態では、配列番号１６のアミノ酸７７に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＲであり、配列番号１６のアミノ酸６９０に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＫである。ある特定の実施形態では、配列番号１６のアミノ酸１１９に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＬであり、配列番号１６のアミノ酸４６８に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＳである。ある特定の実施形態では、配列番号１６のアミノ酸６２６に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＧであり、配列番号１６のアミノ酸７１８に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＧである。ある特定の実施形態では、配列番号１６のアミノ酸２９６に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＨであり、配列番号１６のアミノ酸４６４に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＮであり、配列番号１６のアミノ酸５０５に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＲであり、配列番号１６のアミノ酸６８１に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＭである。ある特定の実施形態では、配列番号１６のアミノ酸５０５に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＲであり、配列番号１６のアミノ酸６８７に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＲである。ある特定の実施形態では、配列番号１６のアミノ酸３４６に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＡであり、配列番号１６のアミノ酸５０５に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＲである。ある特定の実施形態では、配列番号１６のアミノ酸５０１に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＩであり、配列番号１６のアミノ酸５０５に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＲであり、配列番号１６のアミノ酸７０６に対応するキャプシドタンパク質中のアミノ酸がＣである。ある特定の実施形態では、キャプシドタンパク質は、配列番号１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１５、１６、又は１７のアミノ酸１～７３６のアミノ酸配列を含む。
ある特定の実施形態では、ＡＡＶキャプシドは、（ａ）配列番号１、２、３、４、６、７、１０、１１、１２、１３、１５、１６、又は１７のアミノ酸２０３～７３６のアミノ酸配列を含むキャプシドタンパク質、（ｂ）配列番号１、２、３、４、５、６、７、９、１０、１１、１２、１３、１５、１６、又は１７のアミノ酸１３８～７３６のアミノ酸配列を含むキャプシドタンパク質、及び（ｃ）配列番号１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１５、１６、又は１７のアミノ酸１～７３６のアミノ酸配列を含むキャプシドタンパク質のうちの２つ以上を含む。ある特定の実施形態では、ＡＡＶキャプシドは、（ａ）配列番号１、２、３、４、６、７、１０、１１、１２、１３、１５、１６、又は１７のアミノ酸２０３～７３６からなるアミノ酸配列を有するキャプシドタンパク質、（ｂ）配列番号１、２、３、４、５、６、７、９、１０、１１、１２、１３、１５、１６、又は１７のアミノ酸１３８～７３６からなるアミノ酸配列を有するキャプシドタンパク質、及び（ｃ）配列番号１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１５、１６、又は１７のアミノ酸１～７３６からなるアミノ酸配列を有するキャプシドタンパク質を含む。
ある特定の実施形態では、ＡＡＶキャプシドは、（ａ）配列番号８のアミノ酸２０３～７３６の配列と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むキャプシドタンパク質、（ｂ）配列番号８のアミノ酸１３８～７３６の配列と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むキャプシドタンパク質、及び（ｃ）配列番号８のアミノ酸１～７３６の配列と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むキャプシドタンパク質のうちの１つ以上を含む。ある特定の実施形態では、ＡＡＶキャプシドは、（ａ）配列番号８のアミノ酸２０３～７３６のアミノ酸配列を含むキャプシドタンパク質、（ｂ）配列番号８のアミノ酸１３８～７３６のアミノ酸配列を含むキャプシドタンパク質、及び（ｃ）配列番号８のアミノ酸１～７３６のアミノ酸配列を含むキャプシドタンパク質のうちの１つ以上を含む。ある特定の実施形態では、ＡＡＶキャプシドは、（ａ）配列番号８のアミノ酸２０３～７３６のアミノ酸配列を含むキャプシドタンパク質、（ｂ）配列番号８のアミノ酸１３８～７３６のアミノ酸配列を含むキャプシドタンパク質、及び（ｃ）配列番号８のアミノ酸１～７３６のアミノ酸配列を含むキャプシドタンパク質のうちの２つ以上を含む。ある特定の実施形態では、ＡＡＶキャプシドは、（ａ）配列番号８のアミノ酸２０３～７３６からなるアミノ酸配列を有するキャプシドタンパク質、（ｂ）配列番号８のアミノ酸１３８～７３６からなるアミノ酸配列を有するキャプシドタンパク質、及び（ｃ）配列番号８のアミノ酸１～７３６からなるアミノ酸配列を有するキャプシドタンパク質を含む。
ある特定の実施形態では、ＡＡＶキャプシドは、（ａ）配列番号１１のアミノ酸２０３～７３６の配列と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むキャプシドタンパク質、（ｂ）配列番号１１のアミノ酸１３８～７３６の配列と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むキャプシドタンパク質、及び（ｃ）配列番号１１のアミノ酸１～７３６の配列と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むキャプシドタンパク質のうちの１つ以上を含む。ある特定の実施形態では、ＡＡＶキャプシドは、（ａ）配列番号１１のアミノ酸２０３～７３６のアミノ酸配列を含むキャプシドタンパク質、（ｂ）配列番号１１のアミノ酸１３８～７３６のアミノ酸配列を含むキャプシドタンパク質、及び（ｃ）配列番号１１のアミノ酸１～７３６のアミノ酸配列を含むキャプシドタンパク質のうちの１つ以上を含む。ある特定の実施形態では、ＡＡＶキャプシドは、（ａ）配列番号１１のアミノ酸２０３～７３６のアミノ酸配列を含むキャプシドタンパク質、（ｂ）配列番号１１のアミノ酸１３８～７３６のアミノ酸配列を含むキャプシドタンパク質、及び（ｃ）配列番号１１のアミノ酸１～７３６のアミノ酸配列を含むキャプシドタンパク質のうちの２つ以上を含む。ある特定の実施形態では、ＡＡＶキャプシドは、（ａ）配列番号１１のアミノ酸２０３～７３６からなるアミノ酸配列を有するキャプシドタンパク質、（ｂ）配列番号１１のアミノ酸１３８～７３６からなるアミノ酸配列を有するキャプシドタンパク質、及び（ｃ）配列番号１１のアミノ酸１～７３６からなるアミノ酸配列を有するキャプシドタンパク質を含む。
ある特定の実施形態では、ＡＡＶキャプシドは、（ａ）配列番号１３のアミノ酸２０３～７３６の配列と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むキャプシドタンパク質、（ｂ）配列番号１３のアミノ酸１３８～７３６の配列と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むキャプシドタンパク質、及び（ｃ）配列番号１３のアミノ酸１～７３６の配列と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むキャプシドタンパク質のうちの１つ以上を含む。ある特定の実施形態では、ＡＡＶキャプシドは、（ａ）配列番号１３のアミノ酸２０３～７３６のアミノ酸配列を含むキャプシドタンパク質、（ｂ）配列番号１３のアミノ酸１３８～７３６のアミノ酸配列を含むキャプシドタンパク質、及び（ｃ）配列番号１３のアミノ酸１～７３６のアミノ酸配列を含むキャプシドタンパク質のうちの１つ以上を含む。ある特定の実施形態では、ＡＡＶキャプシドは、（ａ）配列番号１３のアミノ酸２０３～７３６のアミノ酸配列を含むキャプシドタンパク質、（ｂ）配列番号１３のアミノ酸１３８～７３６のアミノ酸配列を含むキャプシドタンパク質、及び（ｃ）配列番号１３のアミノ酸１～７３６のアミノ酸配列を含むキャプシドタンパク質のうちの２つ以上を含む。ある特定の実施形態では、ＡＡＶキャプシドは、（ａ）配列番号１３のアミノ酸２０３～７３６からなるアミノ酸配列を有するキャプシドタンパク質、（ｂ）配列番号１３のアミノ酸１３８～７３６からなるアミノ酸配列を有するキャプシドタンパク質、及び（ｃ）配列番号１３のアミノ酸１～７３６からなるアミノ酸配列を有するキャプシドタンパク質を含む。
ある特定の実施形態では、ＡＡＶキャプシドは、（ａ）配列番号１６のアミノ酸２０３～７３６の配列と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むキャプシドタンパク質、（ｂ）配列番号１６のアミノ酸１３８～７３６の配列と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むキャプシドタンパク質、及び（ｃ）配列番号１６のアミノ酸１～７３６の配列と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むキャプシドタンパク質のうちの１つ以上を含む。ある特定の実施形態では、ＡＡＶキャプシドは、（ａ）配列番号１６のアミノ酸２０３～７３６のアミノ酸配列を含むキャプシドタンパク質、（ｂ）配列番号１６のアミノ酸１３８～７３６のアミノ酸配列を含むキャプシドタンパク質、及び（ｃ）配列番号１６のアミノ酸１～７３６のアミノ酸配列を含むキャプシドタンパク質のうちの１つ以上を含む。ある特定の実施形態では、ＡＡＶキャプシドは、（ａ）配列番号１６のアミノ酸２０３～７３６のアミノ酸配列を含むキャプシドタンパク質、（ｂ）配列番号１６のアミノ酸１３８～７３６のアミノ酸配列を含むキャプシドタンパク質、及び（ｃ）配列番号１６のアミノ酸１～７３６のアミノ酸配列を含むキャプシドタンパク質のうちの２つ以上を含む。ある特定の実施形態では、ＡＡＶキャプシドは、（ａ）配列番号１６のアミノ酸２０３～７３６からなるアミノ酸配列を有するキャプシドタンパク質、（ｂ）配列番号１６のアミノ酸１３８～７３６からなるアミノ酸配列を有するキャプシドタンパク質、及び（ｃ）配列番号１６のアミノ酸１～７３６からなるアミノ酸配列を有するキャプシドタンパク質を含む。
本明細書に開示されるＡＡＶ組成物に有用なｒＡＡＶゲノムは、概して、イントロン挿入ＩＤＳコード配列に作動可能に連結された転写調節エレメント（ＴＲＥ）を含む。ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶゲノムは、ＴＲＥ及びイントロン挿入ＩＤＳコード配列の５’側に５’逆方向末端反復（５’ＩＴＲ）ヌクレオチド配列を含み、ＴＲＥ及びイントロン挿入ＩＤＳコード配列の３’側に３’逆方向末端反復（３’ＩＴＲ）ヌクレオチド配列を含む。
ある特定の実施形態では、イントロン挿入ＩＤＳコード配列は、ＩＤＳ遺伝子のコード配列の全て又は実質的に全てを含む。ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶゲノムは、配列番号２３をコードするヌクレオチド配列を含み、任意選択的に、イントロン挿入ＩＤＳコード配列の３’側に外因性ポリアデニル化配列を更に含むことができる。ある特定の実施形態では、配列番号２３をコードするイントロン挿入ＩＤＳコード配列のヌクレオチド配列は、野生型である（例えば、配列番号２５に記載の配列を有する）。ある特定の実施形態では、配列番号２３をコードするイントロン挿入ＩＤＳコード配列のヌクレオチド配列は、サイレント改変されている（例えば、配列番号２７、５９、又は６０に記載の配列を有する）。
ある特定の実施形態では、イントロン挿入ＩＤＳコード配列は、ＩＤＳタンパク質のアミノ酸配列の全て又は実質的に全てを含むポリペプチドをコードする。ある特定の実施形態では、イントロン挿入ＩＤＳコード配列は、野生型ＩＤＳタンパク質（例えば、ヒトＩＤＳタンパク質）のアミノ酸配列をコードする。ある特定の実施形態では、イントロン挿入ＩＤＳコード配列は、変異ＩＤＳタンパク質（例えば、ヒトＩＤＳタンパク質）のアミノ酸配列をコードし、ここで、変異ＩＤＳポリペプチドは野生型ＩＤＳポリペプチドと機能的に同等である、すなわち、野生型ＩＤＳポリペプチドとして機能することができる。ある特定の実施形態では、機能的に同等なＩＤＳポリペプチドは、野生型ＩＤＳポリペプチドには見られない少なくとも１つの特徴、例えば、タンパク質分解に抵抗する能力を更に含む。
ある特定の実施形態では、本明細書に開示されるＡＡＶ組成物に有用なｒＡＡＶゲノムは、概して、ＩＤＳをコードするイントロン挿入コード配列に作動可能に連結された転写調節エレメント（ＴＲＥ）を含む。
ｒＡＡＶゲノムは、任意の哺乳類細胞（例えば、ヒト細胞）においてＩＤＳを発現させるために使用され得る。したがって、ＴＲＥは、任意の哺乳類細胞（例えば、ヒト細胞）で活性であり得る。ある特定の実施形態では、ＴＲＥは、広範なヒト細胞で活性である。かかるＴＲＥは、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター／エンハンサー（例えば、配列番号２９、４０、又は４６と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のヌクレオチド配列を含む）、ＳＶ４０プロモーター、ニワトリＡＣＴＢプロモーター（例えば、配列番号４７と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のヌクレオチド配列を含む）、ＪｅＴプロモーター（例えば、配列番号３０と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のヌクレオチド配列を含む）、ｓｍＣＢＡプロモーター（例えば、配列番号５５と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のヌクレオチド配列を含む）、ヒト伸長因子１アルファ（ＥＦ１α）プロモーター（例えば、配列番号３９と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のヌクレオチド配列を含む）、転写因子結合部位を含むマウス微小ウイルス（ＭＶＭ）イントロン（例えば、配列番号３３と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のヌクレオチド配列を含む）、ヒトホスホグリセリン酸キナーゼ（ＰＧＫ１）プロモーター、ヒトユビキチンＣ（Ｕｂｃ）プロモーター、ヒトベータアクチンプロモーター、ヒトニューロン特異的エノラーゼ（ＥＮＯ２）プロモーター、ヒトベータグルクロニダーゼ（ＧＵＳＢ）プロモーター、ウサギベータグロビンエレメント（例えば、配列番号４１と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のヌクレオチド配列を含む）、ヒトカルモジュリン１（ＣＡＬＭ１）プロモーター（例えば、配列番号４４と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のヌクレオチド配列を含む）、及び／又はヒトメチル－ＣｐＧ結合タンパク質２（ＭｅＣＰ２）プロモーターを含む、構成的プロモーター及び／又はエンハンサーエレメントを含む。これらのＴＲＥのうちのいずれかを任意の順序で組み合わせて、効率的な転写を駆動することができる。例えば、ｒＡＡＶゲノムは、ＣＡＧプロモーターと総称される、ウサギベータグロビン遺伝子のエクソン３由来のＣＭＶエンハンサー、ＣＢＡプロモーター、及びスプライスアクセプター（例えば、配列番号４２と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のヌクレオチド配列を含む）を含み得る。例えば、ｒＡＡＶゲノムは、ＣＡＳＩプロモーター領域と総称される、ＣＭＶエンハンサーとＣＢＡプロモーターとのハイブリッド、続いて、スプライスドナー及びスプライスアクセプター（例えば、配列番号４８と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のヌクレオチド配列を含む）を含み得る。
あるいは、ＴＲＥは、組織特異的ＴＲＥであり得る、すなわち、特定の組織及び／又は器官で活性である。組織特異的ＴＲＥは、１つ以上の組織特異的プロモーター及び／又はエンハンサーエレメント、並びに任意選択的に１つ以上の構成的プロモーター及び／又はエンハンサーエレメントを含む。当業者であれば、当該技術分野で既知の方法によって、組織特異的プロモーター及び／又はエンハンサーエレメントを、組織で特異的に発現される遺伝子から単離することができることを理解するであろう。
ある特定の実施形態では、ＴＲＥは、脳特異的（例えば、ニューロン特異的、グリア細胞特異的、星状細胞特異的、オリゴデンドロサイト特異的、ミクログリア特異的、及び／又は中枢神経系特異的）である。例示的な脳特異的ＴＲＥは、ヒトグリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーター、ヒトシナプシン１（ＳＹＮ１）プロモーター、ヒトシナプシン２（ＳＹＮ２）プロモーター、ヒトメタロチオネイン３（ＭＴ３）プロモーター、及び／又はヒトプロテオリピドタンパク質１（ＰＬＰ１）プロモーター由来であるが、これらに限定されない１つ以上のエレメントを含み得る。更なる脳特異的プロモーターエレメントがＷＯ２０１６／１００５７５Ａ１（この開示は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に開示されている。
ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶゲノムは、任意選択的に上に開示されるＴＲＥのうちの少なくとも１つを含む２つ以上のＴＲＥを含む。当業者であれば、これらのＴＲＥのうちのいずれかを任意の順序で組み合わせることができ、構成的ＴＲＥと組織特異的ＴＲＥとの組み合わせが効率的で組織特異的な転写を駆動することができることを理解するであろう。
ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶベクターは更に、ＩＤＳコード配列の５’側にイントロンを含むか、又はＩＤＳコード配列に挿入されたイントロンを含む。かかるイントロンは、例えば、転写サイレンシングを減少させ、かつ核から細胞質へのｍＲＮＡの輸送を増強することによって、導入遺伝子発現を増加させることができる。ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶゲノムは、５’から３’の方向に、非コードエクソン、イントロン、及びＩＤＳコード配列を含む。ある特定の実施形態では、イントロン配列は、ＩＤＳコード配列に挿入され、ここで、任意選択的に、イントロンが２つの天然エクソンを連結するヌクレオチド間結合に挿入される。ある特定の実施形態では、イントロンは、天然エクソン１とエクソン２を連結するヌクレオチド間結合に挿入される。
イントロンは、ＩＤＳ遺伝子の天然イントロン配列、異なる種由来又は同じ種由来の異なる遺伝子由来のイントロン配列（すなわち、非天然イントロン又は異種イントロン）、及び／又は合成イントロン配列を含み得る。当業者であれば、合成イントロン配列が当該技術分野で既知のいずれかのコンセンサススプライシングモチーフを導入することによってＲＮＡスプライシングを媒介するように設計され得ることを理解するであろう（例えば、Ｓｉｂｌｅｙ ｅｔ ａｌ．，（２０１６）Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，１７，４０７－２１（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる））。例示的なイントロン配列は、Ｌｕ ｅｔ ａｌ．（２０１３）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ ２１（５）：９５４－６３、及びＬｕ ｅｔ ａｌ．（２０１７ Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．２８（１）：１２５－３４（参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる）に提供されている。ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶゲノムは、ＳＶ４０エレメント（例えば、配列番号３１と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一のヌクレオチド配列を含む）、又はマウス微小ウイルス（ＭＶＭ）イントロン（例えば、配列番号３３と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一のヌクレオチド配列を含む）を含む。ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶゲノムは、ＳＶ４０エレメント（例えば、配列番号３１に記載のヌクレオチド配列を含む）、又はマウス微小ウイルス（ＭＶＭ）イントロン（例えば、配列番号３３に記載のヌクレオチド配列を含む）を含む。ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶゲノムは、転写されていないニワトリＡＣＴＢ（ｃＡＣＴＢ）プロモーターを部分的に含み、ｃＡＣＴＢエクソン１の全てを含み、ｃＡＣＴＢイントロン１を部分的に含み、ウサギＨＢＢ２（ｒＨＢＢ２）イントロン２を部分的に含み、かつｒＨＢＢ２エクソン３を部分的に含む、ニワトリ配列とウサギ配列との組み合わせを含むキメライントロン配列（例えば、配列番号３２）を含む。ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶゲノムは、キメライントロン配列（例えば、配列番号３２と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一のヌクレオチド配列を含む）を含む。ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶゲノムは、キメライントロン配列（例えば、配列番号３２に記載のヌクレオチド配列を含む）を含む。
ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶゲノムは、ＣＭＶエンハンサー、ＣＢＡプロモーター、及びキメライントロン配列を含むＴＲＥ（例えば、配列番号３６と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一のヌクレオチド配列を含む）を含む。ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶゲノムは、配列番号３６を含むＴＲＥを含む。
ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶゲノムは、配列番号２９と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一のヌクレオチド配列を含むＴＲＥを含む。ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶゲノムは、配列番号２９を含むＴＲＥを含む。
ある特定の実施形態では、本明細書に開示されるｒＡＡＶゲノムは、転写ターミネーター（例えば、ポリアデニル化配列）を更に含む。ある特定の実施形態では、転写ターミネーターは、イントロン挿入ＩＤＳコード配列の３’側にある。転写ターミネーターは、転写を効果的に終了する任意の配列であり得、当業者であれば、かかる配列を、イントロン挿入ＩＤＳコード配列の転写が所望される細胞で発現されるいずれの遺伝子からも単離することができることを理解するであろう。ある特定の実施形態では、転写ターミネーターは、ポリアデニル化配列を含む。ある特定の実施形態では、ポリアデニル化配列は、ヒトＩＤＳ遺伝子の内因性ポリアデニル化配列と同一であるか、又は実質的に同一である。ある特定の実施形態では、ポリアデニル化配列は、外因性ポリアデニル化配列である。ある特定の実施形態では、ポリアデニル化配列は、ＳＶ４０ポリアデニル化配列（例えば、配列番号３４、３５、又は４５に記載のヌクレオチド配列、又はそれらに相補的なヌクレオチド配列を含む）である。ある特定の実施形態では、ポリアデニル化配列は、配列番号４５に記載の配列を含む。
ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶゲノムは、５’から３’の方向に、ＴＲＥ、イントロン挿入ＩＤＳコード配列、及びポリアデニル化配列を含む。ある特定の実施形態では、ＴＲＥは、配列番号２９、３０、３１、３２、３３、３５、３６、３９、４０、４１、４２、４４、４６、４７、４８、及び５５のうちのいずれか１つと少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の配列同一性を有する、イントロン挿入ＩＤＳコード配列は、配列番号２５、２７、５９、又は６０と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の配列同一性を有する、及び／又はポリアデニル化配列は、配列番号３４、３５、又は４５のうちのいずれか１つと少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の配列同一性を有する。
ある特定の実施形態では、ＴＲＥは、配列番号２９に記載のヌクレオチド配列を含む、イントロン挿入ＩＤＳコード配列は、配列番号２５に記載の配列を含む、及び／又はポリアデニル化配列は、配列番号４５に記載の配列を含む。
ある特定の実施形態では、ＴＲＥは、配列番号２９に記載のヌクレオチド配列を含む、イントロン挿入ＩＤＳコード配列は、配列番号２７に記載の配列を含む、及び／又はポリアデニル化配列は、配列番号４５に記載の配列を含む。
ある特定の実施形態では、ＴＲＥは、配列番号２９に記載のヌクレオチド配列を含む、イントロン挿入ＩＤＳコード配列は、配列番号５９に記載の配列を含む、及び／又はポリアデニル化配列は、配列番号４５に記載の配列を含む。
ある特定の実施形態では、ＴＲＥは、配列番号２９に記載のヌクレオチド配列を含む、イントロン挿入ＩＤＳコード配列は、配列番号６０に記載の配列を含む、及び／又はポリアデニル化配列は、配列番号４５に記載の配列を含む。
ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶゲノムは、配列番号３７、４３、５２、５４、６１、６３、６５、６９、７５、又は７７と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一の配列を含む。ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶゲノムは、配列番号３７、４３、５２、５４、６１、６３、６５、６９、７５、又は７７に記載のヌクレオチド配列を含む。ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶゲノムのヌクレオチド配列は、配列番号３７、４３、５２、５４、６１、６３、６５、６９、７５、又は７７に記載のヌクレオチド配列からなる。ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶゲノムは、配列番号３７に記載のヌクレオチド配列を含む。ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶゲノムのヌクレオチド配列は、配列番号３７に記載のヌクレオチド配列からなる。ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶゲノムは、配列番号４３に記載のヌクレオチド配列を含む。ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶゲノムのヌクレオチド配列は、配列番号４３に記載のヌクレオチド配列からなる。ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶゲノムは、配列番号５２に記載のヌクレオチド配列を含む。ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶゲノムのヌクレオチド配列は、配列番号５２に記載のヌクレオチド配列からなる。ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶゲノムは、配列番号５４に記載のヌクレオチド配列を含む。ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶゲノムのヌクレオチド配列は、配列番号５４に記載のヌクレオチド配列からなる。ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶゲノムは、配列番号６１に記載のヌクレオチド配列を含む。ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶゲノムのヌクレオチド配列は、配列番号６１に記載のヌクレオチド配列からなる。ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶゲノムは、配列番号６３に記載のヌクレオチド配列を含む。ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶゲノムのヌクレオチド配列は、配列番号６３に記載のヌクレオチド配列からなる。ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶゲノムは、配列番号６５に記載のヌクレオチド配列を含む。ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶゲノムのヌクレオチド配列は、配列番号６５に記載のヌクレオチド配列からなる。ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶゲノムは、配列番号６９に記載のヌクレオチド配列を含む。ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶゲノムのヌクレオチド配列は、配列番号６９に記載のヌクレオチド配列からなる。ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶゲノムは、配列番号７５に記載のヌクレオチド配列を含む。ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶゲノムのヌクレオチド配列は、配列番号７５に記載のヌクレオチド配列からなる。ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶゲノムは、配列番号７７に記載のヌクレオチド配列を含む。ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶゲノムのヌクレオチド配列は、配列番号７７に記載のヌクレオチド配列からなる。
ある特定の実施形態では、本明細書に開示されるｒＡＡＶゲノムは更に、ＴＲＥの５’側に５’逆方向末端反復（５’ＩＴＲ）ヌクレオチド配列を含み、イントロン挿入ＩＤＳコード配列の３’側に３’逆方向末端反復（３’ＩＴＲ）ヌクレオチド配列を含む。任意のＡＡＶ血清型のＩＴＲ配列又はそのバリアントを本明細書に開示されるｒＡＡＶゲノムに使用することができる。５’ＩＴＲ及び３’ＩＴＲは、同じ血清型のＡＡＶ由来である可能性も異なる血清型のＡＡＶ由来である可能性もある。本明細書に開示されるｒＡＡＶゲノムに使用するための例示的なＩＴＲは、本明細書で配列番号１４、１８～２１、２８、４９、５１、５７、及び７２～７４に記載される。
ある特定の実施形態では、５’ＩＴＲ又は３’ＩＴＲは、ＡＡＶ２由来である。ある特定の実施形態では、５’ＩＴＲ及び３’ＩＴＲはいずれも、ＡＡＶ２由来である。ある特定の実施形態では、５’ＩＴＲヌクレオチド配列は、配列番号１８と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の配列同一性を有するか、又は３’ＩＴＲヌクレオチド配列は、配列番号１４と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の配列同一性を有する。ある特定の実施形態では、５’ＩＴＲヌクレオチド配列は、配列番号１８と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の配列同一性を有し、３’ＩＴＲヌクレオチド配列は、配列番号１４と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の配列同一性を有する。ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶゲノムは、配列番号３７、４３、５２、又は５４のうちのいずれか１つに記載のヌクレオチド配列、配列番号１８の配列を有する５’ＩＴＲヌクレオチド配列、及び配列番号１４の配列を有する３’ＩＴＲヌクレオチド配列を含む。
ある特定の実施形態では、５’ＩＴＲ又は３’ＩＴＲは、ＡＡＶ２由来である。ある特定の実施形態では、５’ＩＴＲ及び３’ＩＴＲはいずれも、ＡＡＶ２由来である。ある特定の実施形態では、５’ＩＴＲヌクレオチド配列は、配列番号１８と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の配列同一性を有するか、又は３’ＩＴＲヌクレオチド配列は、配列番号１９と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の配列同一性を有する。ある特定の実施形態では、５’ＩＴＲヌクレオチド配列は、配列番号１８と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の配列同一性を有し、３’ＩＴＲヌクレオチド配列は、配列番号１９と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の配列同一性を有する。ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶゲノムは、配列番号３７、４３、５２、又は５４のうちのいずれか１つに記載のヌクレオチド配列、配列番号１８の配列を有する５’ＩＴＲヌクレオチド配列、及び配列番号１９の配列を有する３’ＩＴＲヌクレオチド配列を含む。
ある特定の実施形態では、５’ＩＴＲ又は３’ＩＴＲは、ＡＡＶ５由来である。ある特定の実施形態では、５’ＩＴＲ及び３’ＩＴＲはいずれも、ＡＡＶ５由来である。ある特定の実施形態では、５’ＩＴＲヌクレオチド配列は、配列番号２０と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の配列同一性を有するか、又は３’ＩＴＲヌクレオチド配列は、配列番号２１と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の配列同一性を有する。ある特定の実施形態では、５’ＩＴＲヌクレオチド配列は、配列番号２０と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の配列同一性を有し、３’ＩＴＲヌクレオチド配列は、配列番号２１と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の配列同一性を有する。ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶゲノムは、配列番号３７、４３、５２、又は５４のうちのいずれか１つに記載のヌクレオチド配列、配列番号２０の配列を有する５’ＩＴＲヌクレオチド配列、及び配列番号２１の配列を有する３’ＩＴＲヌクレオチド配列を含む。
ある特定の実施形態では、５’ＩＴＲヌクレオチド配列及び３’ＩＴＲヌクレオチド配列は、互いに実質的に相補的である（例えば、５’ＩＴＲ又は３’ＩＴＲにおける１、２、３、４、又は５つのヌクレオチド位置でのミスマッチを除いて互いに相補的である）。
ある特定の実施形態では、５’ＩＴＲ又は３’ＩＴＲは、Ｒｅｐタンパク質による分解を減少させる又は排除するように修飾されている（「非分解性ＩＴＲ」）。ある特定の実施形態では、非分解性ＩＴＲは、末端分解部位のヌクレオチド配列の挿入、欠失、又は置換を含む。ｒＡＡＶゲノムが感染細胞で複製された後、かかる修飾によりＡＡＶの自己相補的二本鎖ＤＮＡゲノムの形成が可能になる。例示的な非分解性ＩＴＲ配列は、当該技術分野で既知である（例えば、米国特許第７，７９０，１５４号及び同第９，７８３，８２４号（参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる）に提供されるものを参照のこと）。ある特定の実施形態では、５’ＩＴＲは、配列番号４９と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一のヌクレオチド配列を含む。ある特定の実施形態では、５’ＩＴＲは、配列番号４９と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一のヌクレオチド配列からなる。ある特定の実施形態では、５’ＩＴＲは、配列番号４９に記載のヌクレオチド配列からなる。ある特定の実施形態では、３’ＩＴＲは、配列番号５１と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一のヌクレオチド配列を含む。ある特定の実施形態では、５’ＩＴＲは、配列番号５１と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一のヌクレオチド配列からなる。ある特定の実施形態では、３’ＩＴＲは、配列番号５１に記載のヌクレオチド配列からなる。ある特定の実施形態では、５’ＩＴＲは、配列番号４９に記載のヌクレオチド配列からなり、３’ＩＴＲは、配列番号５１に記載のヌクレオチド配列からなる。ある特定の実施形態では、５’ＩＴＲは、配列番号４９に記載のヌクレオチド配列からなり、３’ＩＴＲは、配列番号１４に記載のヌクレオチド配列からなる。
ある特定の実施形態では、５’ＩＴＲは、野生型ＡＡＶ２ゲノム配列に由来する追加のヌクレオチド配列に隣接している。ある特定の実施形態では、５’ＩＴＲは、野生型ＡＡＶ２ ＩＴＲに隣接する野生型ＡＡＶ２配列に由来する追加の４６ｂｐ配列に隣接している。ある特定の実施形態では、追加の４６ｂｐ配列は、５’ＩＴＲの内側にある。ある特定の実施形態では、４６ｂｐ配列は、配列番号７１に記載の配列からなる。ある特定の実施形態では、５’ＩＴＲは、配列番号７１と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一のヌクレオチド配列を含む。ある特定の実施形態では、５’ＩＴＲは、配列番号７２又は７３に記載のヌクレオチド配列を含む。ある特定の実施形態では、５’ＩＴＲのヌクレオチド配列は、配列番号７２又は７３と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一のヌクレオチド配列からなる。ある特定の実施形態では、５’ＩＴＲのヌクレオチド配列は、配列番号７２又は７３に記載のヌクレオチド配列からなる。
ある特定の実施形態では、３’ＩＴＲは、野生型ＡＡＶ２ゲノム配列に由来する追加のヌクレオチド配列に隣接している。ある特定の実施形態では、３’ＩＴＲは、野生型ＡＡＶ２ ＩＴＲに隣接する野生型ＡＡＶ２配列に由来する追加の３７ｂｐ配列に隣接している。例えば、Ｓａｖｙ ｅｔ ａｌ．，Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ Ｍｅｔｈｏｄｓ（２０１７）２８（５）：２７７－２８９（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）を参照されたい。ある特定の実施形態では、追加の３７ｂｐ配列は、３’ＩＴＲの内側にある。ある特定の実施形態では、３７ｂｐ配列は、配列番号５６に記載の配列からなる。ある特定の実施形態では、３’ＩＴＲは、配列番号２８、５７、又は７４と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一のヌクレオチド配列を含む。ある特定の実施形態では、３’ＩＴＲは、配列番号２８、５７、又は７４に記載のヌクレオチド配列を含む。ある特定の実施形態では、３’ＩＴＲのヌクレオチド配列は、配列番号２８、５７、又は７４と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一のヌクレオチド配列からなる。ある特定の実施形態では、３’ＩＴＲのヌクレオチド配列は、配列番号２８、５７、又は７４に記載のヌクレオチド配列からなる。
ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶゲノムは、５’から３’の方向に、５’ＩＴＲと、５’から３’の方向に、本明細書に開示される、ＴＲＥ、任意選択的に非コードエクソン及びイントロン、イントロン挿入ＩＤＳコード配列、並びにポリアデニル化配列を含む内部エレメントと、非分解性ＩＴＲと、内部エレメントに相補的なヌクレオチド配列と、３’ＩＴＲとを含む。かかるｒＡＡＶゲノムは、感染後及び複製前に、ＡＡＶの自己相補的二本鎖ＤＮＡゲノムを形成することができる。
ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶゲノムは、５’から３’の方向に、５’ＩＴＲ、ＴＲＥ、ＩＤＳコード配列、ポリアデニル化配列、及び３’ＩＴＲを含む。ある特定の実施形態では、５’ＩＴＲは、配列番号１８、２０、４９、又は７３と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の配列同一性を有する、ＴＲＥは、配列番号２９、３０、３１、３２、３３、３５、３６、３９、４０、４１、４２、４４、４６、４７、４８、及び５５のうちのいずれか１つと少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の配列同一性を有する、イントロン挿入ＩＤＳコード配列は、配列番号２５、２７、５９、又は６０と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の配列同一性を有する、ポリアデニル化配列は、配列番号３４、３５、又は４５のうちのいずれか１つと少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の配列同一性を有する、及び／又は３’ＩＴＲは、配列番号１４、１９、２１、２８、５１、５７、又は７４と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の配列同一性を有する。ある特定の実施形態では、５’ＩＴＲは、配列番号１８、２０、４９、又は７３からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含むか、又はそれからなる、ＴＲＥは、配列番号２９、３０、３１、３２、３３、３５、３６、３９、４０、４１、４２、４４、４６、４７、４８、及び／又は５５からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む、イントロン挿入ＩＤＳコード配列は、配列番号２５、２７、５９、又は６０に記載の配列を含む、ポリアデニル化配列は、配列番号３４、３５、又は４５からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む、及び／又は３’ＩＴＲは、配列番号１４、１９、２１、２８、５１、５７、又は７４からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含むか、又はそれからなる。
ある特定の実施形態では、５’ＩＴＲは、配列番号１８又は４９に記載のヌクレオチド配列を含むか、又はそれからなる、ＴＲＥは、配列番号２９に記載のヌクレオチド配列を含む、イントロン挿入ＩＤＳコード配列は、配列番号２５、２７、５９、又は６０に記載の配列を含む、ポリアデニル化配列は、配列番号４５に記載の配列を含む、及び／又は３’ＩＴＲは、配列番号１４又は５１に記載の配列を含むか、又はそれからなる。
ある特定の実施形態では、５’ＩＴＲは、配列番号４９に記載のヌクレオチド配列を含むか、又はそれからなる、ＴＲＥは、配列番号２９に記載のヌクレオチド配列を含む、イントロン挿入ＩＤＳコード配列は、配列番号２５に記載の配列を含む、ポリアデニル化配列は、配列番号４５に記載の配列を含む、及び／又は３’ＩＴＲは、配列番号５１に記載の配列を含むか、又はそれからなる。
ある特定の実施形態では、５’ＩＴＲは、配列番号４９に記載のヌクレオチド配列を含むか、又はそれからなる、ＴＲＥは、配列番号２９に記載のヌクレオチド配列を含む、イントロン挿入ＩＤＳコード配列は、配列番号２５に記載の配列を含む、ポリアデニル化配列は、配列番号４５に記載の配列を含む、及び／又は３’ＩＴＲは、配列番号１４に記載の配列を含むか、又はそれからなる。
ある特定の実施形態では、５’ＩＴＲは、配列番号４９に記載のヌクレオチド配列を含むか、又はそれからなる、ＴＲＥは、配列番号２９に記載のヌクレオチド配列を含む、イントロン挿入ＩＤＳコード配列は、配列番号２７に記載の配列を含む、ポリアデニル化配列は、配列番号４５に記載の配列を含む、及び／又は３’ＩＴＲは、配列番号１４に記載の配列を含むか、又はそれからなる。
ある特定の実施形態では、５’ＩＴＲは、配列番号１８に記載のヌクレオチド配列を含むか、又はそれからなる、ＴＲＥは、配列番号２９に記載のヌクレオチド配列を含む、イントロン挿入ＩＤＳコード配列は、配列番号２５に記載の配列を含む、ポリアデニル化配列は、配列番号４５に記載の配列を含む、及び／又は３’ＩＴＲは、配列番号１４に記載の配列を含むか、又はそれからなる。
ある特定の実施形態では、５’ＩＴＲは、配列番号１８に記載のヌクレオチド配列を含むか、又はそれからなる、ＴＲＥは、配列番号２９に記載のヌクレオチド配列を含む、イントロン挿入ＩＤＳコード配列は、配列番号２７に記載の配列を含む、ポリアデニル化配列は、配列番号４５に記載の配列を含む、及び／又は３’ＩＴＲは、配列番号１４に記載の配列を含むか、又はそれからなる。
ある特定の実施形態では、５’ＩＴＲは、配列番号１８に記載のヌクレオチド配列を含むか、又はそれからなる、ＴＲＥは、配列番号２９に記載のヌクレオチド配列を含む、イントロン挿入ＩＤＳコード配列は、配列番号２７に記載の配列を含む、ポリアデニル化配列は、配列番号４５に記載の配列を含む、及び／又は３’ＩＴＲは、配列番号１９に記載の配列を含むか、又はそれからなる。
ある特定の実施形態では、５’ＩＴＲは、配列番号４９に記載のヌクレオチド配列を含むか、又はそれからなる、ＴＲＥは、配列番号２９に記載のヌクレオチド配列を含む、イントロン挿入ＩＤＳコード配列は、配列番号５９に記載の配列を含む、ポリアデニル化配列は、配列番号４５に記載の配列を含む、及び／又は３’ＩＴＲは、配列番号１４に記載の配列を含むか、又はそれからなる。
ある特定の実施形態では、５’ＩＴＲは、配列番号４９に記載のヌクレオチド配列を含むか、又はそれからなる、ＴＲＥは、配列番号２９に記載のヌクレオチド配列を含む、イントロン挿入ＩＤＳコード配列は、配列番号６０に記載の配列を含む、ポリアデニル化配列は、配列番号４５に記載の配列を含む、及び／又は３’ＩＴＲは、配列番号１４に記載の配列を含むか、又はそれからなる。
ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶゲノムは、配列番号３８、５０、５３、５８、６２、６４、６６、７０、７６、又は７８と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％）同一の配列を含む。ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶゲノムは、配列番号３８、５０、５３、５８、６２、６４、６６、７０、７６、又は７８に記載のヌクレオチド配列を含む。ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶゲノムのヌクレオチド配列は、配列番号３８、５０、５３、５８、６２、６４、６６、７０、７６、又は７８に記載のヌクレオチド配列からなる。ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶゲノムは、配列番号３８に記載のヌクレオチド配列を含む。ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶゲノムのヌクレオチド配列は、配列番号３８に記載のヌクレオチド配列からなる。ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶゲノムは、配列番号５０に記載のヌクレオチド配列を含む。ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶゲノムのヌクレオチド配列は、配列番号５０に記載のヌクレオチド配列からなる。ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶゲノムは、配列番号５３に記載のヌクレオチド配列を含む。ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶゲノムのヌクレオチド配列は、配列番号５３に記載のヌクレオチド配列からなる。ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶゲノムは、配列番号５８に記載のヌクレオチド配列を含む。ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶゲノムのヌクレオチド配列は、配列番号５８に記載のヌクレオチド配列からなる。ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶゲノムは、配列番号６２に記載のヌクレオチド配列を含む。ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶゲノムのヌクレオチド配列は、配列番号６２に記載のヌクレオチド配列からなる。ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶゲノムは、配列番号６４に記載のヌクレオチド配列を含む。ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶゲノムのヌクレオチド配列は、配列番号６４に記載のヌクレオチド配列からなる。ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶゲノムは、配列番号６６に記載のヌクレオチド配列を含む。ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶゲノムのヌクレオチド配列は、配列番号６６に記載のヌクレオチド配列からなる。ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶゲノムは、配列番号７０に記載のヌクレオチド配列を含む。ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶゲノムのヌクレオチド配列は、配列番号７０に記載のヌクレオチド配列からなる。ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶゲノムは、配列番号７６に記載のヌクレオチド配列を含む。ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶゲノムのヌクレオチド配列は、配列番号７６に記載のヌクレオチド配列からなる。ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶゲノムは、配列番号７８に記載のヌクレオチド配列を含む。ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶゲノムのヌクレオチド配列は、配列番号７８に記載のヌクレオチド配列からなる。
ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶは、（ａ）配列番号１６のアミノ酸２０３～７３６のアミノ酸配列を含むＡＡＶキャプシドタンパク質と、５’から３’の方向に、以下の遺伝エレメント：５’ＩＴＲエレメント（例えば、配列番号４９の５’ＩＴＲ）、転写調節エレメント（例えば、配列番号２９の配列を含むＴＲＥ）、野生型ヒトイントロン挿入ＩＤＳコード配列（例えば、配列番号２５のイントロン挿入ｈＩＤＳコード配列）、ＳＶ４０ポリアデニル化配列（例えば、配列番号４５のＳＶ４０ポリアデニル化配列）、及び３’ＩＴＲエレメント（例えば、配列番号５１の３’ＩＴＲ）を含むｒＡＡＶゲノムとを含む、（ｂ）配列番号１６のアミノ酸１３８～７３６のアミノ酸配列を含むＡＡＶキャプシドタンパク質と、５’から３’の方向に、以下の遺伝エレメント：５’ＩＴＲエレメント（例えば、配列番号４９の５’ＩＴＲ）、転写調節エレメント（例えば、配列番号２９の配列を含むＴＲＥ）、野生型ヒトイントロン挿入ＩＤＳコード配列（例えば、配列番号２５のイントロン挿入ｈＩＤＳコード配列）、ＳＶ４０ポリアデニル化配列（例えば、配列番号４５のＳＶ４０ポリアデニル化配列）、及び３’ＩＴＲエレメント（例えば、配列番号５１の３’ＩＴＲ）を含むｒＡＡＶゲノムとを含む、並びに／又は（ｃ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＡＡＶキャプシドタンパク質と、５’から３’の方向に、以下の遺伝エレメント：５’ＩＴＲエレメント（例えば、配列番号４９の５’ＩＴＲ）、転写調節エレメント（例えば、配列番号２９の配列を含むＴＲＥ）、野生型ヒトイントロン挿入ＩＤＳコード配列（例えば、配列番号２５のイントロン挿入ｈＩＤＳコード配列）、ＳＶ４０ポリアデニル化配列（例えば、配列番号４５のＳＶ４０ポリアデニル化配列）、及び３’ＩＴＲエレメント（例えば、配列番号５１の３’ＩＴＲ）を含むｒＡＡＶゲノムとを含む。
ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶは、（ａ）配列番号１６のアミノ酸２０３～７３６のアミノ酸配列を含むＡＡＶキャプシドタンパク質と、５’から３’の方向に、以下の遺伝エレメント：５’ＩＴＲエレメント（例えば、配列番号４９の５’ＩＴＲ）、転写調節エレメント（例えば、配列番号２９の配列を含むＴＲＥ）、野生型ヒトイントロン挿入ＩＤＳコード配列（例えば、配列番号２５のイントロン挿入ｈＩＤＳコード配列）、ＳＶ４０ポリアデニル化配列（例えば、配列番号４５のＳＶ４０ポリアデニル化配列）、及び３’ＩＴＲエレメント（例えば、配列番号１４の３’ＩＴＲ）を含むｒＡＡＶゲノムとを含む、（ｂ）配列番号１６のアミノ酸１３８～７３６のアミノ酸配列を含むＡＡＶキャプシドタンパク質と、５’から３’の方向に、以下の遺伝エレメント：５’ＩＴＲエレメント（例えば、配列番号４９の５’ＩＴＲ）、転写調節エレメント（例えば、配列番号２９の配列を含むＴＲＥ）、野生型ヒトイントロン挿入ＩＤＳコード配列（例えば、配列番号２５のイントロン挿入ｈＩＤＳコード配列）、ＳＶ４０ポリアデニル化配列（例えば、配列番号４５のＳＶ４０ポリアデニル化配列）、及び３’ＩＴＲエレメント（例えば、配列番号１４の３’ＩＴＲ）を含むｒＡＡＶゲノムとを含む、並びに／又は（ｃ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＡＡＶキャプシドタンパク質と、５’から３’の方向に、以下の遺伝エレメント：５’ＩＴＲエレメント（例えば、配列番号４９の５’ＩＴＲ）、転写調節エレメント（例えば、配列番号２９の配列を含むＴＲＥ）、野生型ヒトイントロン挿入ＩＤＳコード配列（例えば、配列番号２５のイントロン挿入ｈＩＤＳコード配列）、ＳＶ４０ポリアデニル化配列（例えば、配列番号４５のＳＶ４０ポリアデニル化配列）、及び３’ＩＴＲエレメント（例えば、配列番号１４の３’ＩＴＲ）を含むｒＡＡＶゲノムとを含む。
ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶは、（ａ）配列番号１６のアミノ酸２０３～７３６のアミノ酸配列を含むＡＡＶキャプシドタンパク質と、５’から３’の方向に、以下の遺伝エレメント：５’ＩＴＲエレメント（例えば、配列番号４９の５’ＩＴＲ）、転写調節エレメント（例えば、配列番号２９の配列を含むＴＲＥ）、サイレント改変ヒトイントロン挿入ＩＤＳコード配列（例えば、配列番号２７のイントロン挿入ｈＩＤＳコード配列）、ＳＶ４０ポリアデニル化配列（例えば、配列番号４５のＳＶ４０ポリアデニル化配列）、及び３’ＩＴＲエレメント（例えば、配列番号１４の３’ＩＴＲ）を含むｒＡＡＶゲノムとを含む、（ｂ）配列番号１６のアミノ酸１３８～７３６のアミノ酸配列を含むＡＡＶキャプシドタンパク質と、５’から３’の方向に、以下の遺伝エレメント：５’ＩＴＲエレメント（例えば、配列番号４９の５’ＩＴＲ）、転写調節エレメント（例えば、配列番号２９の配列を含むＴＲＥ）、サイレント改変ヒトイントロン挿入ＩＤＳコード配列（例えば、配列番号２７のイントロン挿入ｈＩＤＳコード配列）、ＳＶ４０ポリアデニル化配列（例えば、配列番号４５のＳＶ４０ポリアデニル化配列）、及び３’ＩＴＲエレメント（例えば、配列番号１４の３’ＩＴＲ）を含むｒＡＡＶゲノムとを含む、並びに／又は（ｃ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＡＡＶキャプシドタンパク質と、５’から３’の方向に、以下の遺伝エレメント：５’ＩＴＲエレメント（例えば、配列番号４９の５’ＩＴＲ）、転写調節エレメント（例えば、配列番号２９の配列を含むＴＲＥ）、サイレント改変ヒトイントロン挿入ＩＤＳコード配列（例えば、配列番号２７のイントロン挿入ｈＩＤＳコード配列）、ＳＶ４０ポリアデニル化配列（例えば、配列番号４５のＳＶ４０ポリアデニル化配列）、及び３’ＩＴＲエレメント（例えば、配列番号１４の３’ＩＴＲ）を含むｒＡＡＶゲノムとを含む。
ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶは、（ａ）配列番号１６のアミノ酸２０３～７３６のアミノ酸配列を含むＡＡＶキャプシドタンパク質と、５’から３’の方向に、以下の遺伝エレメント：５’ＩＴＲエレメント（例えば、配列番号１８の５’ＩＴＲ）、転写調節エレメント（例えば、配列番号２９の配列を含むＴＲＥ）、野生型ヒトイントロン挿入ＩＤＳコード配列（例えば、配列番号２５のイントロン挿入ｈＩＤＳコード配列）、ＳＶ４０ポリアデニル化配列（例えば、配列番号４５のＳＶ４０ポリアデニル化配列）、及び３’ＩＴＲエレメント（例えば、配列番号１４の３’ＩＴＲ）を含むｒＡＡＶゲノムとを含む、（ｂ）配列番号１６のアミノ酸１３８～７３６のアミノ酸配列を含むＡＡＶキャプシドタンパク質と、５’から３’の方向に、以下の遺伝エレメント：５’ＩＴＲエレメント（例えば、配列番号１８の５’ＩＴＲ）、転写調節エレメント（例えば、配列番号２９の配列を含むＴＲＥ）、野生型ヒトイントロン挿入ＩＤＳコード配列（例えば、配列番号２５のイントロン挿入ｈＩＤＳコード配列）、ＳＶ４０ポリアデニル化配列（例えば、配列番号４５のＳＶ４０ポリアデニル化配列）、及び３’ＩＴＲエレメント（例えば、配列番号１４の３’ＩＴＲ）を含むｒＡＡＶゲノムとを含む、並びに／又は（ｃ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＡＡＶキャプシドタンパク質と、５’から３’の方向に、以下の遺伝エレメント：５’ＩＴＲエレメント（例えば、配列番号１８の５’ＩＴＲ）、転写調節エレメント（例えば、配列番号２９の配列を含むＴＲＥ）、野生型ヒトイントロン挿入ＩＤＳコード配列（例えば、配列番号２５のイントロン挿入ｈＩＤＳコード配列）、ＳＶ４０ポリアデニル化配列（例えば、配列番号４５のＳＶ４０ポリアデニル化配列）、及び３’ＩＴＲエレメント（例えば、配列番号１４の３’ＩＴＲ）を含むｒＡＡＶゲノムとを含む。
ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶは、（ａ）配列番号１６のアミノ酸２０３～７３６のアミノ酸配列を含むＡＡＶキャプシドタンパク質と、５’から３’の方向に、以下の遺伝エレメント：５’ＩＴＲエレメント（例えば、配列番号１８の５’ＩＴＲ）、転写調節エレメント（例えば、配列番号２９の配列を含むＴＲＥ）、サイレント改変ヒトイントロン挿入ＩＤＳコード配列（例えば、配列番号２７のイントロン挿入ｈＩＤＳコード配列）、ＳＶ４０ポリアデニル化配列（例えば、配列番号４５のＳＶ４０ポリアデニル化配列）、及び３’ＩＴＲエレメント（例えば、配列番号１４の３’ＩＴＲ）を含むｒＡＡＶゲノムとを含む、（ｂ）配列番号１６のアミノ酸１３８～７３６のアミノ酸配列を含むＡＡＶキャプシドタンパク質と、５’から３’の方向に、以下の遺伝エレメント：５’ＩＴＲエレメント（例えば、配列番号１８の５’ＩＴＲ）、転写調節エレメント（例えば、配列番号２９の配列を含むＴＲＥ）、サイレント改変ヒトイントロン挿入ＩＤＳコード配列（例えば、配列番号２７のイントロン挿入ｈＩＤＳコード配列）、ＳＶ４０ポリアデニル化配列（例えば、配列番号４５のＳＶ４０ポリアデニル化配列）、及び３’ＩＴＲエレメント（例えば、配列番号１４の３’ＩＴＲ）を含むｒＡＡＶゲノムとを含む、並びに／又は（ｃ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＡＡＶキャプシドタンパク質と、５’から３’の方向に、以下の遺伝エレメント：５’ＩＴＲエレメント（例えば、配列番号１８の５’ＩＴＲ）、転写調節エレメント（例えば、配列番号２９の配列を含むＴＲＥ）、サイレント改変ヒトイントロン挿入ＩＤＳコード配列（例えば、配列番号２７のイントロン挿入ｈＩＤＳコード配列）、ＳＶ４０ポリアデニル化配列（例えば、配列番号４５のＳＶ４０ポリアデニル化配列）、及び３’ＩＴＲエレメント（例えば、配列番号１４の３’ＩＴＲ）を含むｒＡＡＶゲノムとを含む。
ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶは、（ａ）配列番号１６のアミノ酸２０３～７３６のアミノ酸配列を含むＡＡＶキャプシドタンパク質と、５’から３’の方向に、以下の遺伝エレメント：５’ＩＴＲエレメント（例えば、配列番号１８の５’ＩＴＲ）、転写調節エレメント（例えば、配列番号２９の配列を含むＴＲＥ）、サイレント改変ヒトイントロン挿入ＩＤＳコード配列（例えば、配列番号２７のイントロン挿入ｈＩＤＳコード配列）、ＳＶ４０ポリアデニル化配列（例えば、配列番号４５のＳＶ４０ポリアデニル化配列）、及び３’ＩＴＲエレメント（例えば、配列番号１９の３’ＩＴＲ）を含むｒＡＡＶゲノムとを含む、（ｂ）配列番号１６のアミノ酸１３８～７３６のアミノ酸配列を含むＡＡＶキャプシドタンパク質と、５’から３’の方向に、以下の遺伝エレメント：５’ＩＴＲエレメント（例えば、配列番号１８の５’ＩＴＲ）、転写調節エレメント（例えば、配列番号２９の配列を含むＴＲＥ）、サイレント改変ヒトイントロン挿入ＩＤＳコード配列（例えば、配列番号２７のイントロン挿入ｈＩＤＳコード配列）、ＳＶ４０ポリアデニル化配列（例えば、配列番号４５のＳＶ４０ポリアデニル化配列）、及び３’ＩＴＲエレメント（例えば、配列番号１９の３’ＩＴＲ）を含むｒＡＡＶゲノムとを含む、並びに／又は（ｃ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＡＡＶキャプシドタンパク質と、５’から３’の方向に、以下の遺伝エレメント：５’ＩＴＲエレメント（例えば、配列番号１８の５’ＩＴＲ）、転写調節エレメント（例えば、配列番号２９の配列を含むＴＲＥ）、サイレント改変ヒトイントロン挿入ＩＤＳコード配列（例えば、配列番号２７のイントロン挿入ｈＩＤＳコード配列）、ＳＶ４０ポリアデニル化配列（例えば、配列番号４５のＳＶ４０ポリアデニル化配列）、及び３’ＩＴＲエレメント（例えば、配列番号１９の３’ＩＴＲ）を含むｒＡＡＶゲノムとを含む。
ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶは、（ａ）配列番号１６のアミノ酸２０３～７３６のアミノ酸配列を含むＡＡＶキャプシドタンパク質と、５’から３’の方向に、以下の遺伝エレメント：５’ＩＴＲエレメント（例えば、配列番号４９の５’ＩＴＲ）、転写調節エレメント（例えば、配列番号２９の配列を含むＴＲＥ）、サイレント改変ヒトイントロン挿入ＩＤＳコード配列（例えば、配列番号５９のイントロン挿入ｈＩＤＳコード配列）、ＳＶ４０ポリアデニル化配列（例えば、配列番号４５のＳＶ４０ポリアデニル化配列）、及び３’ＩＴＲエレメント（例えば、配列番号１４の３’ＩＴＲ）を含むｒＡＡＶゲノムとを含む、（ｂ）配列番号１６のアミノ酸１３８～７３６のアミノ酸配列を含むＡＡＶキャプシドタンパク質と、５’から３’の方向に、以下の遺伝エレメント：５’ＩＴＲエレメント（例えば、配列番号４９の５’ＩＴＲ）、転写調節エレメント（例えば、配列番号２９の配列を含むＴＲＥ）、サイレント改変ヒトイントロン挿入ＩＤＳコード配列（例えば、配列番号５９のイントロン挿入ｈＩＤＳコード配列）、ＳＶ４０ポリアデニル化配列（例えば、配列番号４５のＳＶ４０ポリアデニル化配列）、及び３’ＩＴＲエレメント（例えば、配列番号１４の３’ＩＴＲ）を含むｒＡＡＶゲノムとを含む、並びに／又は（ｃ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＡＡＶキャプシドタンパク質と、５’から３’の方向に、以下の遺伝エレメント：５’ＩＴＲエレメント（例えば、配列番号４９の５’ＩＴＲ）、転写調節エレメント（例えば、配列番号２９の配列を含むＴＲＥ）、サイレント改変ヒトイントロン挿入ＩＤＳコード配列（例えば、配列番号５９のイントロン挿入ｈＩＤＳコード配列）、ＳＶ４０ポリアデニル化配列（例えば、配列番号４５のＳＶ４０ポリアデニル化配列）、及び３’ＩＴＲエレメント（例えば、配列番号１４の３’ＩＴＲ）を含むｒＡＡＶゲノムとを含む。
ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶは、（ａ）配列番号１６のアミノ酸２０３～７３６のアミノ酸配列を含むＡＡＶキャプシドタンパク質と、５’から３’の方向に、以下の遺伝エレメント：５’ＩＴＲエレメント（例えば、配列番号４９の５’ＩＴＲ）、転写調節エレメント（例えば、配列番号２９の配列を含むＴＲＥ）、サイレント改変ヒトイントロン挿入ＩＤＳコード配列（例えば、配列番号６０のイントロン挿入ｈＩＤＳコード配列）、ＳＶ４０ポリアデニル化配列（例えば、配列番号４５のＳＶ４０ポリアデニル化配列）、及び３’ＩＴＲエレメント（例えば、配列番号１４の３’ＩＴＲ）を含むｒＡＡＶゲノムとを含む、（ｂ）配列番号１６のアミノ酸１３８～７３６のアミノ酸配列を含むＡＡＶキャプシドタンパク質と、５’から３’の方向に、以下の遺伝エレメント：５’ＩＴＲエレメント（例えば、配列番号４９の５’ＩＴＲ）、転写調節エレメント（例えば、配列番号２９の配列を含むＴＲＥ）、サイレント改変ヒトイントロン挿入ＩＤＳコード配列（例えば、配列番号６０のイントロン挿入ｈＩＤＳコード配列）、ＳＶ４０ポリアデニル化配列（例えば、配列番号４５のＳＶ４０ポリアデニル化配列）、及び３’ＩＴＲエレメント（例えば、配列番号１４の３’ＩＴＲ）を含むｒＡＡＶゲノムとを含む、並びに／又は（ｃ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＡＡＶキャプシドタンパク質と、５’から３’の方向に、以下の遺伝エレメント：５’ＩＴＲエレメント（例えば、配列番号４９の５’ＩＴＲ）、転写調節エレメント（例えば、配列番号２９の配列を含むＴＲＥ）、サイレント改変ヒトイントロン挿入ＩＤＳコード配列（例えば、配列番号６０のイントロン挿入ｈＩＤＳコード配列）、ＳＶ４０ポリアデニル化配列（例えば、配列番号４５のＳＶ４０ポリアデニル化配列）、及び３’ＩＴＲエレメント（例えば、配列番号１４の３’ＩＴＲ）を含むｒＡＡＶゲノムとを含む。
ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶは、（ａ）配列番号１６のアミノ酸２０３～７３６のアミノ酸配列を含むＡＡＶキャプシドタンパク質と、配列番号２５、２７、２９、３７、３８、４３、５０、５２、５３、５４、５８、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６９、７０、７５、７６、７７、又は７８のうちのいずれか１つに記載のヌクレオチド配列を含むｒＡＡＶゲノムとを含む、（ｂ）配列番号１６のアミノ酸１３８～７３６のアミノ酸配列を含むＡＡＶキャプシドタンパク質と、配列番号２５、２７、２９、３７、３８、４３、５０、５２、５３、５４、５８、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６９、７０、７５、７６、７７、又は７８のうちのいずれか１つに記載のヌクレオチド配列を含むｒＡＡＶゲノムとを含む、及び／又は（ｃ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＡＡＶキャプシドタンパク質と、配列番号２５、２７、２９、３７、３８、４３、５０、５２、５３、５４、５８、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６９、７０、７５、７６、７７、又は７８のうちのいずれか１つに記載のヌクレオチド配列を含むｒＡＡＶゲノムとを含む。
別の態様では、配列番号２５、２６、２７、３７、３８、４３、５０、５２、５３、５４、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７５、７６、７７、又は７８に記載の核酸配列と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一の核酸配列を含むポリヌクレオチドが本明細書に提供される。ある特定の実施形態では、ポリヌクレオチドは、配列番号２５、２６、２７、３７、３８、４３、５０、５２、５３、５４、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７５、７６、７７、又は７８に記載の核酸配列を含む。ある特定の実施形態では、ポリヌクレオチドの核酸配列は、配列番号２５、２６、２７、３７、３８、４３、５０、５２、５３、５４、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７５、７６、７７、又は７８に記載の核酸配列からなる。ある特定の実施形態では、ポリヌクレオチドは、配列番号２５、２６、２７、３７、３８、４３、５０、５２、５３、５４、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７５、７６、７７、又は７８に記載の核酸配列を含む。ある特定の実施形態では、ポリヌクレオチドの核酸配列は、配列番号２５、２６、２７、３７、３８、４３、５０、５２、５３、５４、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７５、７６、７７、又は７８に記載の核酸配列からなる。
配列番号２５、２７、５９、又は６０に記載の核酸配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％）同一の核酸配列を含むポリヌクレオチドも本明細書に提供される。ある特定の実施形態では、ポリヌクレオチドは、配列番号２５、２７、５９、又は６０に記載の核酸配列を含む。ある特定の実施形態では、ポリヌクレオチドの核酸配列は、配列番号２５、２７、５９、又は６０に記載の核酸配列からなる。ある特定の実施形態では、ポリヌクレオチドは、配列番号２５に記載の核酸配列を含む。ある特定の実施形態では、ポリヌクレオチドの核酸配列は、配列番号２５に記載の核酸配列からなる。ある特定の実施形態では、ポリヌクレオチドは、配列番号２７に記載の核酸配列を含む。ある特定の実施形態では、ポリヌクレオチドの核酸配列は、配列番号２７に記載の核酸配列からなる。ある特定の実施形態では、ポリヌクレオチドは、配列番号５９に記載の核酸配列を含む。ある特定の実施形態では、ポリヌクレオチドの核酸配列は、配列番号５９に記載の核酸配列からなる。ある特定の実施形態では、ポリヌクレオチドは、配列番号６０に記載の核酸配列を含む。ある特定の実施形態では、ポリヌクレオチドの核酸配列は、配列番号６０に記載の核酸配列からなる。
ポリヌクレオチドは、ＤＮＡ、ＲＮＡ、修飾ＤＮＡ、修飾ＲＮＡ、又はそれらの組み合わせを含み得る。ある特定の実施形態では、ポリヌクレオチドは、ベクター、例えば、ウイルスベクター又はプラスミド内に含まれている。ポリヌクレオチド又はベクターを含む組換え細胞も本明細書に提供される。
別の態様では、本開示は、本明細書に開示されるＡＡＶを、薬学的に許容される賦形剤、アジュバント、希釈剤、ビヒクル若しくは担体、又はそれらの組み合わせと一緒に含む医薬組成物を提供する。「薬学的に許容される担体」には、組成物の活性成分と組み合わせられた場合、その成分が、意図せぬ免疫反応などの破壊的な生理学的反応を引き起こすことなく生物学的活性を保持することを可能にする任意の材料が含まれる。薬学的に許容される担体には、水、リン酸緩衝生理食塩水、油／水エマルションなどのエマルション、及び湿潤剤が含まれる。かかる担体を含む組成物は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，ｃｕｒｒｅｎｔ Ｅｄ．，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ Ｐａ． １８０４２，ＵＳＡ、Ａ．Ｇｅｎｎａｒｏ（２０００）“Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ”，２０ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ，＆Ｗｉｌｋｉｎｓ、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ（１９９９）Ｈ．Ｃ．Ａｎｓｅｌ ｅｔ ａｌ，７ｔｈ ｅｄ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ，＆Ｗｉｌｋｉｎｓ、及びＨａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ（２０００）Ａ．Ｈ．Ｋｉｂｂｅ ｅｔ ａｌ，３ｒｄ ｅｄ．Ａｍｅｒ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ａｓｓｏｃ．に記載の方法などの周知の従来の方法によって製剤化される。
ＩＩＩ．使用方法
別の態様では、本開示は、細胞内でＩＤＳポリペプチドを発現させるための方法を提供する。本方法は、概して、細胞に、本明細書に開示されるｒＡＡＶを形質導入することを含む。かかる方法は、ＩＤＳ発現を回復させる際に非常に効率的である。したがって、ある特定の実施形態では、本明細書に開示される方法は、細胞に、本明細書に開示されるｒＡＡＶを形質導入することを含む。
本明細書に開示される方法は、ＩＤＳ遺伝子に変異を有するいずれの細胞にも適用することができる。当業者であれば、活性内因性ＩＤＳ（例えば、内因性Ｉ２Ｓ活性）を必要とする細胞が特に注目すべきものであることを理解するであろう。したがって、ある特定の実施形態では、本方法は、内因性Ｉ２Ｓ活性を失ったいずれの細胞にも適用される。
ある特定の実施形態では、本方法は、ニューロン及び／又はグリア細胞に適用される。ある特定の実施形態では、活性内因性ＩＤＳ（例えば、内因性Ｉ２Ｓ活性）を必要とするニューロン及び／又はグリア細胞が特に注目すべきものである。ある特定の実施形態では、本方法は、中枢神経系（ＣＮＳ）細胞及び／又は末梢神経系（ＰＮＳ）細胞に適用される。ある特定の実施形態では、活性内因性ＩＤＳ（例えば、内因性Ｉ２Ｓ活性）を必要とする中枢神経系細胞及び／又は末梢神経系細胞が特に注目すべきものである。ある特定の実施形態では、前脳、中脳、後脳、脊髄、及びそれらの任意の組み合わせの細胞が特に注目すべきものである。ある特定の実施形態では、脊髄、運動野、感覚野、視床、海馬、被殻、小脳（例えば、小脳核）、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される中枢神経系領域の細胞が特に注目すべきものである。ある特定の実施形態では、脳橋及び脳髄質、上行性脊髄束、及びそれらの任意の組み合わせの細胞が特に注目すべきものである。ある特定の実施形態では、活性内因性ＩＤＳ（例えば、内因性Ｉ２Ｓ活性）を必要とする脊髄、運動野、感覚野、視床、海馬、被殻、小脳（例えば、小脳核）、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される中枢神経系（ＣＮＳ）領域の細胞が特に注目すべきものである。ある特定の実施形態では、中枢神経系（ＣＮＳ）における運動ニューロン及び星状細胞プロファイル、ＣＮＳにおけるオリゴデンドロサイト（上行性線維）、ＣＮＳにおける大脳皮質細胞集団、並びに末梢神経系（ＰＮＳ）の感覚ニューロンが特に注目すべきものである。ある特定の実施形態では、脊髄の背側束に存在するオリゴデンドロサイトなどのオリゴデンドロサイトが特に注目すべきものである。ある特定の実施形態では、星状細胞、オリゴデンドロサイト、シュワン細胞、及びそれらの任意の組み合わせを含むが、これらに限定されない、中枢神経系におけるグリアプロファイルが特に注目すべきものである。ある特定の実施形態では、運動ニューロン、星状細胞、オリゴデンドロサイト、中枢神経系の大脳皮質細胞、末梢神経系の感覚ニューロン、末梢神経系のグリア細胞（例えば、シュワン細胞）、及びそれらの任意の組み合わせが特に注目すべきものである。
ある特定の実施形態では、本方法は、肝臓細胞（例えば、肝細胞）に適用される。ある特定の実施形態では、活性内因性ＩＤＳ（例えば、内因性Ｉ２Ｓ活性）を必要とする肝臓細胞が特に注目すべきものである。ある特定の実施形態では、本方法は、心臓細胞（例えば、心筋細胞）に適用される。ある特定の実施形態では、活性内因性ＩＤＳ（例えば、内因性Ｉ２Ｓ活性）を必要とする心臓細胞が特に注目すべきものである。ある特定の実施形態では、本方法は、肺細胞（例えば、気道上皮細胞）に適用される。ある特定の実施形態では、活性内因性ＩＤＳ（例えば、内因性Ｉ２Ｓ活性）を必要とする肺細胞が特に注目すべきものである。ある特定の実施形態では、本方法は、腎臓細胞（例えば、腎上皮細胞）に適用される。ある特定の実施形態では、活性内因性ＩＤＳ（例えば、内因性Ｉ２Ｓ活性）を必要とする腎臓細胞が特に注目すべきものである。ある特定の実施形態では、本方法は、脾臓細胞（例えば、脾細胞）に適用される。ある特定の実施形態では、活性内因性ＩＤＳ（例えば、内因性Ｉ２Ｓ活性）を必要とする脾臓細胞が特に注目すべきものである。
本明細書に開示される方法は、研究目的のためにインビトロで行われ得るか、又は治療目的のためにエクスビボ若しくはインビボで行われ得る。
ある特定の実施形態では、形質導入される細胞は、哺乳類対象に存在し、ＡＡＶは、対象における細胞に形質導入するのに有効な量で対象に投与される。したがって、ある特定の実施形態では、本開示は、ＩＤＳ遺伝子変異に関連する疾患又は障害を有する対象を治療するための方法であって、概して、対象に、有効量の本明細書に開示されるｒＡＡＶを投与することを含む、方法を提供する。対象は、ＩＤＳ変異を有する、ヒト対象、非ヒト霊長類対象（例えば、カニクイザル）、又は齧歯類対象（例えば、マウス）であり得る。ＩＤＳ遺伝子変異に関連するいずれの疾患又は障害も、本明細書に開示される方法を使用して治療することができる。好適な疾患又は障害には、ハンター症候群が挙げられるが、これに限定されない。
ある特定の実施形態では、前述の方法は、（ａ）配列番号１６のアミノ酸２０３～７３６のアミノ酸配列を含むＡＡＶキャプシドタンパク質と、５’から３’の方向に、以下の遺伝エレメント：５’ＩＴＲエレメント（例えば、配列番号４９の５’ＩＴＲ）、転写調節エレメント（例えば、配列番号２９の配列を含むＴＲＥ）、野生型ヒトイントロン挿入ＩＤＳコード配列（例えば、配列番号２５のイントロン挿入ｈＩＤＳコード配列）、ＳＶ４０ポリアデニル化配列（例えば、配列番号４５のＳＶ４０ポリアデニル化配列）、及び３’ＩＴＲエレメント（例えば、配列番号５１の３’ＩＴＲ）を含むｒＡＡＶゲノムとを含むｒＡＡＶ、（ｂ）配列番号１６のアミノ酸１３８～７３６のアミノ酸配列を含むＡＡＶキャプシドタンパク質と、５’から３’の方向に、以下の遺伝エレメント：５’ＩＴＲエレメント（例えば、配列番号４９の５’ＩＴＲ）、転写調節エレメント（例えば、配列番号２９の配列を含むＴＲＥ）、野生型ヒトイントロン挿入ＩＤＳコード配列（例えば、配列番号２５のイントロン挿入ｈＩＤＳコード配列）、ＳＶ４０ポリアデニル化配列（例えば、配列番号４５のＳＶ４０ポリアデニル化配列）、及び３’ＩＴＲエレメント（例えば、配列番号５１の３’ＩＴＲ）を含むｒＡＡＶゲノムとを含むｒＡＡＶ、並びに／又は（ｃ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＡＡＶキャプシドタンパク質と、５’から３’の方向に、以下の遺伝エレメント：５’ＩＴＲエレメント（例えば、配列番号４９の５’ＩＴＲ）、転写調節エレメント（例えば、配列番号２９の配列を含むＴＲＥ）、野生型ヒトイントロン挿入ＩＤＳコード配列（例えば、配列番号２５のイントロン挿入ｈＩＤＳコード配列）、ＳＶ４０ポリアデニル化配列（例えば、配列番号４５のＳＶ４０ポリアデニル化配列）、及び３’ＩＴＲエレメント（例えば、配列番号５１の３’ＩＴＲ）を含むｒＡＡＶゲノムとを含むｒＡＡＶを用いる。
ある特定の実施形態では、前述の方法は、（ａ）配列番号１６のアミノ酸２０３～７３６のアミノ酸配列を含むＡＡＶキャプシドタンパク質と、５’から３’の方向に、以下の遺伝エレメント：５’ＩＴＲエレメント（例えば、配列番号４９の５’ＩＴＲ）、転写調節エレメント（例えば、配列番号２９の配列を含むＴＲＥ）、野生型ヒトイントロン挿入ＩＤＳコード配列（例えば、配列番号２５のイントロン挿入ｈＩＤＳコード配列）、ＳＶ４０ポリアデニル化配列（例えば、配列番号４５のＳＶ４０ポリアデニル化配列）、及び３’ＩＴＲエレメント（例えば、配列番号１４の３’ＩＴＲ）を含むｒＡＡＶゲノムとを含むｒＡＡＶ、（ｂ）配列番号１６のアミノ酸１３８～７３６のアミノ酸配列を含むＡＡＶキャプシドタンパク質と、５’から３’の方向に、以下の遺伝エレメント：５’ＩＴＲエレメント（例えば、配列番号４９の５’ＩＴＲ）、転写調節エレメント（例えば、配列番号２９の配列を含むＴＲＥ）、野生型ヒトイントロン挿入ＩＤＳコード配列（例えば、配列番号２５のイントロン挿入ｈＩＤＳコード配列）、ＳＶ４０ポリアデニル化配列（例えば、配列番号４５のＳＶ４０ポリアデニル化配列）、及び３’ＩＴＲエレメント（例えば、配列番号１４の３’ＩＴＲ）を含むｒＡＡＶゲノムとを含むｒＡＡＶ、並びに／又は（ｃ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＡＡＶキャプシドタンパク質と、５’から３’の方向に、以下の遺伝エレメント：５’ＩＴＲエレメント（例えば、配列番号４９の５’ＩＴＲ）、転写調節エレメント（例えば、配列番号２９の配列を含むＴＲＥ）、野生型ヒトイントロン挿入ＩＤＳコード配列（例えば、配列番号２５のイントロン挿入ｈＩＤＳコード配列）、ＳＶ４０ポリアデニル化配列（例えば、配列番号４５のＳＶ４０ポリアデニル化配列）、及び３’ＩＴＲエレメント（例えば、配列番号１４の３’ＩＴＲ）を含むｒＡＡＶゲノムとを含むｒＡＡＶを用いる。
ある特定の実施形態では、前述の方法は、（ａ）配列番号１６のアミノ酸２０３～７３６のアミノ酸配列を含むＡＡＶキャプシドタンパク質と、５’から３’の方向に、以下の遺伝エレメント：５’ＩＴＲエレメント（例えば、配列番号４９の５’ＩＴＲ）、転写調節エレメント（例えば、配列番号２９の配列を含むＴＲＥ）、サイレント改変ヒトイントロン挿入ＩＤＳコード配列（例えば、配列番号２７のイントロン挿入ｈＩＤＳコード配列）、ＳＶ４０ポリアデニル化配列（例えば、配列番号４５のＳＶ４０ポリアデニル化配列）、及び３’ＩＴＲエレメント（例えば、配列番号１４の３’ＩＴＲ）を含むｒＡＡＶゲノムとを含むｒＡＡＶ、（ｂ）配列番号１６のアミノ酸１３８～７３６のアミノ酸配列を含むＡＡＶキャプシドタンパク質と、５’から３’の方向に、以下の遺伝エレメント：５’ＩＴＲエレメント（例えば、配列番号４９の５’ＩＴＲ）、転写調節エレメント（例えば、配列番号２９の配列を含むＴＲＥ）、サイレント改変ヒトイントロン挿入ＩＤＳコード配列（例えば、配列番号２７のイントロン挿入ｈＩＤＳコード配列）、ＳＶ４０ポリアデニル化配列（例えば、配列番号４５のＳＶ４０ポリアデニル化配列）、及び３’ＩＴＲエレメント（例えば、配列番号１４の３’ＩＴＲ）を含むｒＡＡＶゲノムとを含むｒＡＡＶ、並びに／又は（ｃ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＡＡＶキャプシドタンパク質と、５’から３’の方向に、以下の遺伝エレメント：５’ＩＴＲエレメント（例えば、配列番号４９の５’ＩＴＲ）、転写調節エレメント（例えば、配列番号２９の配列を含むＴＲＥ）、サイレント改変ヒトイントロン挿入ＩＤＳコード配列（例えば、配列番号２７のイントロン挿入ｈＩＤＳコード配列）、ＳＶ４０ポリアデニル化配列（例えば、配列番号４５のＳＶ４０ポリアデニル化配列）、及び３’ＩＴＲエレメント（例えば、配列番号１４の３’ＩＴＲ）を含むｒＡＡＶゲノムとを含むｒＡＡＶを用いる。
ある特定の実施形態では、前述の方法は、（ａ）配列番号１６のアミノ酸２０３～７３６のアミノ酸配列を含むＡＡＶキャプシドタンパク質と、５’から３’の方向に、以下の遺伝エレメント：５’ＩＴＲエレメント（例えば、配列番号１８の５’ＩＴＲ）、転写調節エレメント（例えば、配列番号２９の配列を含むＴＲＥ）、野生型ヒトイントロン挿入ＩＤＳコード配列（例えば、配列番号２５のイントロン挿入ｈＩＤＳコード配列）、ＳＶ４０ポリアデニル化配列（例えば、配列番号４５のＳＶ４０ポリアデニル化配列）、及び３’ＩＴＲエレメント（例えば、配列番号１４の３’ＩＴＲ）を含むｒＡＡＶゲノムとを含むｒＡＡＶ、（ｂ）配列番号１６のアミノ酸１３８～７３６のアミノ酸配列を含むＡＡＶキャプシドタンパク質と、５’から３’の方向に、以下の遺伝エレメント：５’ＩＴＲエレメント（例えば、配列番号１８の５’ＩＴＲ）、転写調節エレメント（例えば、配列番号２９の配列を含むＴＲＥ）、野生型ヒトイントロン挿入ＩＤＳコード配列（例えば、配列番号２５のイントロン挿入ｈＩＤＳコード配列）、ＳＶ４０ポリアデニル化配列（例えば、配列番号４５のＳＶ４０ポリアデニル化配列）、及び３’ＩＴＲエレメント（例えば、配列番号１４の３’ＩＴＲ）を含むｒＡＡＶゲノムとを含むｒＡＡＶ、並びに／又は（ｃ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＡＡＶキャプシドタンパク質と、５’から３’の方向に、以下の遺伝エレメント：５’ＩＴＲエレメント（例えば、配列番号１８の５’ＩＴＲ）、転写調節エレメント（例えば、配列番号２９の配列を含むＴＲＥ）、野生型ヒトイントロン挿入ＩＤＳコード配列（例えば、配列番号２５のイントロン挿入ｈＩＤＳコード配列）、ＳＶ４０ポリアデニル化配列（例えば、配列番号４５のＳＶ４０ポリアデニル化配列）、及び３’ＩＴＲエレメント（例えば、配列番号１４の３’ＩＴＲ）を含むｒＡＡＶゲノムとを含むｒＡＡＶを用いる。
ある特定の実施形態では、前述の方法は、（ａ）配列番号１６のアミノ酸２０３～７３６のアミノ酸配列を含むＡＡＶキャプシドタンパク質と、５’から３’の方向に、以下の遺伝エレメント：５’ＩＴＲエレメント（例えば、配列番号１８の５’ＩＴＲ）、転写調節エレメント（例えば、配列番号２９の配列を含むＴＲＥ）、サイレント改変ヒトイントロン挿入ＩＤＳコード配列（例えば、配列番号２７のイントロン挿入ｈＩＤＳコード配列）、ＳＶ４０ポリアデニル化配列（例えば、配列番号４５のＳＶ４０ポリアデニル化配列）、及び３’ＩＴＲエレメント（例えば、配列番号１４の３’ＩＴＲ）を含むｒＡＡＶゲノムとを含むｒＡＡＶ、（ｂ）配列番号１６のアミノ酸１３８～７３６のアミノ酸配列を含むＡＡＶキャプシドタンパク質と、５’から３’の方向に、以下の遺伝エレメント：５’ＩＴＲエレメント（例えば、配列番号１８の５’ＩＴＲ）、転写調節エレメント（例えば、配列番号２９の配列を含むＴＲＥ）、サイレント改変ヒトイントロン挿入ＩＤＳコード配列（例えば、配列番号２７のイントロン挿入ｈＩＤＳコード配列）、ＳＶ４０ポリアデニル化配列（例えば、配列番号４５のＳＶ４０ポリアデニル化配列）、及び３’ＩＴＲエレメント（例えば、配列番号１４の３’ＩＴＲ）を含むｒＡＡＶゲノムとを含むｒＡＡＶ、並びに／又は（ｃ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＡＡＶキャプシドタンパク質と、５’から３’の方向に、以下の遺伝エレメント：５’ＩＴＲエレメント（例えば、配列番号１８の５’ＩＴＲ）、転写調節エレメント（例えば、配列番号２９の配列を含むＴＲＥ）、サイレント改変ヒトイントロン挿入ＩＤＳコード配列（例えば、配列番号２７のイントロン挿入ｈＩＤＳコード配列）、ＳＶ４０ポリアデニル化配列（例えば、配列番号４５のＳＶ４０ポリアデニル化配列）、及び３’ＩＴＲエレメント（例えば、配列番号１４の３’ＩＴＲ）を含むｒＡＡＶゲノムとを含むｒＡＡＶを用いる。
ある特定の実施形態では、前述の方法は、（ａ）配列番号１６のアミノ酸２０３～７３６のアミノ酸配列を含むＡＡＶキャプシドタンパク質と、５’から３’の方向に、以下の遺伝エレメント：５’ＩＴＲエレメント（例えば、配列番号１８の５’ＩＴＲ）、転写調節エレメント（例えば、配列番号２９の配列を含むＴＲＥ）、サイレント改変ヒトイントロン挿入ＩＤＳコード配列（例えば、配列番号２７のイントロン挿入ｈＩＤＳコード配列）、ＳＶ４０ポリアデニル化配列（例えば、配列番号４５のＳＶ４０ポリアデニル化配列）、及び３’ＩＴＲエレメント（例えば、配列番号１９の３’ＩＴＲ）を含むｒＡＡＶゲノムとを含むｒＡＡＶ、（ｂ）配列番号１６のアミノ酸１３８～７３６のアミノ酸配列を含むＡＡＶキャプシドタンパク質と、５’から３’の方向に、以下の遺伝エレメント：５’ＩＴＲエレメント（例えば、配列番号１８の５’ＩＴＲ）、転写調節エレメント（例えば、配列番号２９の配列を含むＴＲＥ）、サイレント改変ヒトイントロン挿入ＩＤＳコード配列（例えば、配列番号２７のイントロン挿入ｈＩＤＳコード配列）、ＳＶ４０ポリアデニル化配列（例えば、配列番号４５のＳＶ４０ポリアデニル化配列）、及び３’ＩＴＲエレメント（例えば、配列番号１９の３’ＩＴＲ）を含むｒＡＡＶゲノムとを含むｒＡＡＶ、並びに／又は（ｃ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＡＡＶキャプシドタンパク質と、５’から３’の方向に、以下の遺伝エレメント：５’ＩＴＲエレメント（例えば、配列番号１８の５’ＩＴＲ）、転写調節エレメント（例えば、配列番号２９の配列を含むＴＲＥ）、サイレント改変ヒトイントロン挿入ＩＤＳコード配列（例えば、配列番号２７のイントロン挿入ｈＩＤＳコード配列）、ＳＶ４０ポリアデニル化配列（例えば、配列番号４５のＳＶ４０ポリアデニル化配列）、及び３’ＩＴＲエレメント（例えば、配列番号１９の３’ＩＴＲ）を含むｒＡＡＶゲノムとを含むｒＡＡＶを用いる。
ある特定の実施形態では、前述の方法は、（ａ）配列番号１６のアミノ酸２０３～７３６のアミノ酸配列を含むＡＡＶキャプシドタンパク質と、５’から３’の方向に、以下の遺伝エレメント：５’ＩＴＲエレメント（例えば、配列番号４９の５’ＩＴＲ）、転写調節エレメント（例えば、配列番号２９の配列を含むＴＲＥ）、サイレント改変ヒトイントロン挿入ＩＤＳコード配列（例えば、配列番号５９のイントロン挿入ｈＩＤＳコード配列）、ＳＶ４０ポリアデニル化配列（例えば、配列番号４５のＳＶ４０ポリアデニル化配列）、及び３’ＩＴＲエレメント（例えば、配列番号１４の３’ＩＴＲ）を含むｒＡＡＶゲノムとを含むｒＡＡＶ、（ｂ）配列番号１６のアミノ酸１３８～７３６のアミノ酸配列を含むＡＡＶキャプシドタンパク質と、５’から３’の方向に、以下の遺伝エレメント：５’ＩＴＲエレメント（例えば、配列番号４９の５’ＩＴＲ）、転写調節エレメント（例えば、配列番号２９の配列を含むＴＲＥ）、サイレント改変ヒトイントロン挿入ＩＤＳコード配列（例えば、配列番号５９のイントロン挿入ｈＩＤＳコード配列）、ＳＶ４０ポリアデニル化配列（例えば、配列番号４５のＳＶ４０ポリアデニル化配列）、及び３’ＩＴＲエレメント（例えば、配列番号１４の３’ＩＴＲ）を含むｒＡＡＶゲノムとを含むｒＡＡＶ、並びに／又は（ｃ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＡＡＶキャプシドタンパク質と、５’から３’の方向に、以下の遺伝エレメント：５’ＩＴＲエレメント（例えば、配列番号４９の５’ＩＴＲ）、転写調節エレメント（例えば、配列番号２９の配列を含むＴＲＥ）、サイレント改変ヒトイントロン挿入ＩＤＳコード配列（例えば、配列番号５９のイントロン挿入ｈＩＤＳコード配列）、ＳＶ４０ポリアデニル化配列（例えば、配列番号４５のＳＶ４０ポリアデニル化配列）、及び３’ＩＴＲエレメント（例えば、配列番号１４の３’ＩＴＲ）を含むｒＡＡＶゲノムとを含むｒＡＡＶを用いる。
ある特定の実施形態では、前述の方法は、（ａ）配列番号１６のアミノ酸２０３～７３６のアミノ酸配列を含むＡＡＶキャプシドタンパク質と、５’から３’の方向に、以下の遺伝エレメント：５’ＩＴＲエレメント（例えば、配列番号４９の５’ＩＴＲ）、転写調節エレメント（例えば、配列番号２９の配列を含むＴＲＥ）、サイレント改変ヒトイントロン挿入ＩＤＳコード配列（例えば、配列番号６０のイントロン挿入ｈＩＤＳコード配列）、ＳＶ４０ポリアデニル化配列（例えば、配列番号４５のＳＶ４０ポリアデニル化配列）、及び３’ＩＴＲエレメント（例えば、配列番号１４の３’ＩＴＲ）を含むｒＡＡＶゲノムとを含むｒＡＡＶ、（ｂ）配列番号１６のアミノ酸１３８～７３６のアミノ酸配列を含むＡＡＶキャプシドタンパク質と、５’から３’の方向に、以下の遺伝エレメント：５’ＩＴＲエレメント（例えば、配列番号４９の５’ＩＴＲ）、転写調節エレメント（例えば、配列番号２９の配列を含むＴＲＥ）、サイレント改変ヒトイントロン挿入ＩＤＳコード配列（例えば、配列番号６０のイントロン挿入ｈＩＤＳコード配列）、ＳＶ４０ポリアデニル化配列（例えば、配列番号４５のＳＶ４０ポリアデニル化配列）、及び３’ＩＴＲエレメント（例えば、配列番号１４の３’ＩＴＲ）を含むｒＡＡＶゲノムとを含むｒＡＡＶ、並びに／又は（ｃ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＡＡＶキャプシドタンパク質と、５’から３’の方向に、以下の遺伝エレメント：５’ＩＴＲエレメント（例えば、配列番号４９の５’ＩＴＲ）、転写調節エレメント（例えば、配列番号２９の配列を含むＴＲＥ）、サイレント改変ヒトイントロン挿入ＩＤＳコード配列（例えば、配列番号６０のイントロン挿入ｈＩＤＳコード配列）、ＳＶ４０ポリアデニル化配列（例えば、配列番号４５のＳＶ４０ポリアデニル化配列）、及び３’ＩＴＲエレメント（例えば、配列番号１４の３’ＩＴＲ）を含むｒＡＡＶゲノムとを含むｒＡＡＶを用いる。
ある特定の実施形態では、前述の方法は、（ａ）配列番号１６のアミノ酸２０３～７３６のアミノ酸配列を含むＡＡＶキャプシドタンパク質と、配列番号２５、２７、３７、３８、４３、５０、５２、５３、５４、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６９、又は７０のうちのいずれか１つに記載のヌクレオチド配列を含むｒＡＡＶゲノムとを含むｒＡＡＶ、（ｂ）配列番号１６のアミノ酸１３８～７３６のアミノ酸配列を含むＡＡＶキャプシドタンパク質と、配列番号２５、２７、３７、３８、４３、５０、５２、５３、５４、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６９、又は７０のうちのいずれか１つに記載のヌクレオチド配列を含むｒＡＡＶゲノムとを含むｒＡＡＶ、及び／又は（ｃ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＡＡＶキャプシドタンパク質と、配列番号２５、２７、３７、３８、４３、５０、５２、５３、５４、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６９、又は７０のうちのいずれか１つに記載のヌクレオチド配列を含むｒＡＡＶゲノムとを含むｒＡＡＶを用いる。
本明細書に開示される方法は、それらがインビボ及びインビトロの両方で、高効率でＩＤＳタンパク質を細胞内で発現させることができるという点で特に有利である。ある特定の実施形態では、ＩＤＳタンパク質の発現レベルは、ＩＤＳ遺伝子に変異を有しない同じ型の細胞における内因性ＩＤＳタンパク質の発現レベルの少なくとも約０．１％、少なくとも約０．２％、少なくとも約０．３％、少なくとも約０．４％、少なくとも約０．５％、少なくとも約０．６％、少なくとも約０．７％、少なくとも約０．８％、少なくとも約０．９％、少なくとも約１％、少なくとも約２％、少なくとも約３％、少なくとも約４％、少なくとも約５％、少なくとも約６％、少なくとも約７％、少なくとも約８％、少なくとも約９％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９９％、少なくとも約１００％、又はそれらの任意の介在パーセンテージである。ある特定の実施形態では、ＩＤＳタンパク質の発現レベルは、ＩＤＳ遺伝子に変異を有しない同じ型の細胞における内因性ＩＤＳタンパク質の発現レベルよりも少なくとも１．１倍、１．２倍、１．３倍、１．４倍、１．５倍、１．６倍、１．７倍、１．８倍、１．９倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、又は１０倍高い。ＥＬＩＳＡ、ウェスタンブロッティング、免疫染色、及び質量分析を含むが、これらに限定されない、ＩＤＳタンパク質の発現レベルを決定するいずれかの方法を用いることができる。
ある特定の実施形態では、本明細書に開示されるＡＡＶ組成物の細胞への形質導入は、本明細書に提供されるように、又は当業者に既知の任意の形質導入方法によって行われ得る。ある特定の実施形態では、細胞は、５０，０００、１００，０００、１５０，０００、２００，０００、２５０，０００、３００，０００、３５０，０００、４００，０００、４５０，０００、若しくは５００，０００の感染多重度（ＭＯＩ）で、又は最適な細胞への形質導入を提供するいずれかのＭＯＩでＡＡＶと接触し得る。
本明細書に開示されるＡＡＶ組成物は、静脈内、くも膜下腔内、腹腔内、皮下、筋肉内、鼻腔内、局所、又は皮内経路を含むが、これらに限定されない任意の適切な経路によって対象に投与することができる。ある特定の実施形態では、本組成物は、静脈内注射又は皮下注射による投与用に製剤化されている。
ＩＶ．ＡＡＶパッケージング系
別の態様では、本開示は、本明細書に開示される組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）の組換え調製のためのパッケージング系を提供する。かかるパッケージング系は、概して、１つ以上のＡＡＶ Ｒｅｐタンパク質をコードする第１のヌクレオチドと、本明細書に開示されるＡＡＶのうちのいずれかのキャプシドタンパク質をコードする第２のヌクレオチドと、本明細書に開示されるｒＡＡＶゲノムのうちのいずれかを含む第３のヌクレオチド配列と、を含み、ここで、パッケージング系が、ｒＡＡＶゲノムをキャプシド内に封入してＡＡＶを形成するように細胞内で作動可能である。
ある特定の実施形態では、パッケージング系は、１つ以上のＡＡＶ Ｒｅｐタンパク質をコードする第１のヌクレオチド配列及びＡＡＶキャプシドタンパク質をコードする第２のヌクレオチド配列を含む第１のベクターと、ｒＡＡＶゲノムを含む第３のヌクレオチド配列を含む第２のベクターとを含む。本明細書に記載のパッケージング系に関連して使用される場合、「ベクター」とは、核酸を細胞に導入するためのビヒクルである核酸分子（例えば、プラスミド、ウイルス、コスミド、人工染色体など）を指す。
いずれのＡＡＶ Ｒｅｐタンパク質も本明細書に開示されるパッケージング系に用いることができる。パッケージング系のある特定の実施形態では、Ｒｅｐヌクレオチド配列は、ＡＡＶ２ Ｒｅｐタンパク質をコードする。好適なＡＡＶ２ Ｒｅｐタンパク質には、Ｒｅｐ ７８／６８又はＲｅｐ ６８／５２が挙げられるが、これらに限定されない。パッケージング系のある特定の実施形態では、ＡＡＶ２ Ｒｅｐタンパク質をコードするヌクレオチド配列は、配列番号２２のＡＡＶ２ Ｒｅｐアミノ酸配列と最小配列同一性パーセントを有するタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含み、ここで、最小配列同一性パーセントは、ＡＡＶ２ Ｒｅｐタンパク質のアミノ酸配列の長さにわたって、少なくとも７０％（例えば、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％）である。パッケージング系のある特定の実施形態では、ＡＡＶ２ Ｒｅｐタンパク質は、配列番号２２に記載のアミノ酸配列を有する。
パッケージング系のある特定の実施形態では、パッケージング系は、１つ以上のヘルパーウイルス遺伝子を含む第４のヌクレオチド配列を更に含む。パッケージング系のある特定の実施形態では、パッケージング系は、１つ以上のヘルパーウイルス遺伝子を含む第４のヌクレオチド配列を含む、第３のベクター、例えば、ヘルパーウイルスベクターを更に含む。第３のベクターは、独立した第３のベクターであっても、第１のベクターと一体型であっても、第２のベクターと一体型であってもよい。
パッケージング系のある特定の実施形態では、ヘルパーウイルスは、アデノウイルス、ヘルペスウイルス（単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）を含む）、ポックスウイルス（ワクシニアウイルスなど）、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、及びバキュロウイルスからなる群から選択される。パッケージング系のある特定の実施形態では、ヘルパーウイルスがアデノウイルスである場合、アデノウイルスゲノムは、Ｅｌ、Ｅ２、Ｅ４、及びＶＡからなる群から選択される１つ以上のアデノウイルスＲＮＡ遺伝子を含む。パッケージング系のある特定の実施形態では、ヘルパーウイルスがＨＳＶである場合、ＨＳＶゲノムは、ＵＬ５／８／５２、ＩＣＰＯ、ＩＣＰ４、ＩＣＰ２２、及びＵＬ３０／ＵＬ４２からなる群から選択されるＨＳＶ遺伝子のうちの１つ以上を含む。
パッケージング系のある特定の実施形態では、第１のベクター、第２のベクター、及び／又は第３のベクターは、１つ以上のプラスミド内に含まれている。ある特定の実施形態では、第１のベクター及び第３のベクターが第１のプラスミド内に含まれている。ある特定の実施形態では、第２のベクター及び第３のベクターが第２のプラスミド内に含まれている。
パッケージング系のある特定の実施形態では、第１のベクター、第２のベクター、及び／又は第３のベクターは、１つ以上の組換えヘルパーウイルス内に含まれている。ある特定の実施形態では、第１のベクター及び第３のベクターが組換えヘルパーウイルス内に含まれている。ある特定の実施形態では、第２のベクター及び第３のベクターが組換えヘルパーウイルス内に含まれている。
更なる態様では、本開示は、本明細書に記載のＡＡＶの組換え調製のための方法であって、ｒＡＡＶゲノムをキャプシドに封入して本明細書に記載のｒＡＡＶを形成するように作動可能な条件下で、本明細書に記載のパッケージング系を細胞にトランスフェクト又は形質導入することを含む、方法を提供する。ｒＡＡＶの組換え調製のための例示的な方法は、一過性トランスフェクション（例えば、本明細書に記載の第１のベクターと、第２のベクターと、任意選択的に第３のベクターとを含む１つ以上のトランスフェクションプラスミドでの）、ウイルス感染（例えば、１つ以上の組換えヘルパーウイルス、例えば、アデノウイルス、ポックスウイルス（ワクシニアウイルスなど）、ヘルペスウイルス（本明細書に記載の第１のベクターと、第２のベクターと、任意選択的に第３のベクターとを含む、ＨＳＶ、サイトメガロウイルス、又はバキュロウイルスを含む）での）、及び安定した産生細胞株トランスフェクション又は感染（例えば、本明細書に記載の１つ以上のＡＡＶ Ｒｅｐタンパク質をコードするＲｅｐヌクレオチド配列及び／又は１つ以上のＡＡＶキャプシドタンパク質をコードするＣａｐヌクレオチド配列を含む安定した産生細胞、例えば、哺乳類又は昆虫細胞での、かつプラスミド又は組換えヘルパーウイルスの形態で送達される本明細書に記載のｒＡＡＶゲノムでの）を含む。
したがって、本開示は、組換えＡＡＶ（ｒＡＡＶ）の調製のためのパッケージング系であって、１つ以上のＡＡＶ Ｒｅｐタンパク質をコードする第１のヌクレオチド配列と、本明細書に記載のＡＡＶのうちのいずれか１つのキャプシドタンパク質をコードする第２のヌクレオチド配列と、本明細書に記載のＡＡＶのうちのいずれか１つのｒＡＡＶゲノム配列を含む第３のヌクレオチド配列と、任意選択的に、１つ以上のヘルパーウイルス遺伝子を含む第４のヌクレオチド配列と、を含む、パッケージング系を提供する。
Ｖ．実施例
本明細書に開示される組換えＡＡＶベクターは、インビトロ及びインビボで非常に効率的な遺伝子移入を媒介する。以下の実施例は、本明細書に開示されるＡＡＶベースのベクターを使用した、ＩＤＳ遺伝子（ハンター症候群などのある特定のヒト疾患で変異する）の発現の効率的な回復を実証する。これらの実施例は、例証として提供されており、限定するものではない。
以下の実施例５、６、及び１１では、２．２ｅ１３ｖｇ／ｋｇ、６．５ｅ１３ｖｇ／ｋｇ、及び１．１ｅ１４ｖｇ／ｋｇの用量のＡＡＶを、ベクターゲノム中のヒトＩＤＳ遺伝子に対して力価測定する。ベクターゲノム中のＳＶ４０ポリＡ配列を使用して力価測定する場合、ＡＡＶの等価用量は、２ｅ１３ｖｇ／ｋｇ、６ｅ１３ｖｇ／ｋｇ、及び１ｅ１４ｖｇ／ｋｇである。以下の実施例９、１０、及び１２では、１．８ｅ１４ｖｇ／ｋｇの用量のＡＡＶを、ベクターゲノム中のヒトＩＤＳ遺伝子に対して力価測定する。ベクターゲノム中のＳＶ４０ポリＡ配列に対して力価測定する場合、ＡＡＶの等価用量は、１ｅ１４ｖｇ／ｋｇである。
実施例１：ヒトＩＤＳトランスファーベクター
本実施例は、ベクターを形質導入する細胞（例えば、ヒト細胞又はマウス細胞）内でヒトＩＤＳ（ｈＩＤＳ）を発現させるためのヒトＩＤＳトランスファーベクターｐＨＭ－０５２０５、ｐＨＭ－０５２１３、ｐＨＭ－０５２１４、ｐＨＭ－０５２１６、及びｐＨＭ－０５２１７を提供する。
ａ）ｐＨＭ－０５２０５
図１Ａに示すＩＤＳトランスファーベクターｐＨＭ－０５２０５は、５’から３’の方向に、以下の遺伝エレメント：５’ＩＴＲエレメント、ＣＭＶプロモーターを含む転写調節エレメント、野生型ヒトＩＤＳイントロン挿入コード配列、ＳＶ４０ポリアデニル化配列、及び３’ＩＴＲエレメントを含む。これらのエレメントの配列を表１に記載する。このベクターは、ベクターを形質導入する細胞（例えば、ヒト細胞又はマウス細胞）内でヒトＩＤＳタンパク質を発現させることができる。
ｂ）ｐＨＭ－０５２１３
図１Ｂに示すＩＤＳトランスファーベクターｐＨＭ－０５２１３は、５’から３’の方向に、以下の遺伝エレメント：５’ＩＴＲエレメント、ＣＭＶプロモーターを含む転写調節エレメント、野生型ヒトＩＤＳイントロン挿入コード配列、ＳＶ４０ポリアデニル化配列、及び３’ＩＴＲエレメントを含む。これらのエレメントの配列を表１に記載する。このベクターは、ベクターを形質導入する細胞（例えば、ヒト細胞又はマウス細胞）内でヒトＩＤＳタンパク質を発現させることができる。
ｃ）ｐＨＭ－０５２１４
図１Ｃに示すＩＤＳトランスファーベクターｐＨＭ－０５２１４は、５’から３’の方向に、以下の遺伝エレメント：５’ＩＴＲエレメント、ＣＭＶプロモーターを含む転写調節エレメント、サイレント改変ヒトＩＤＳイントロン挿入コード配列、ＳＶ４０ポリアデニル化配列、及び３’ＩＴＲエレメントを含む。これらのエレメントの配列を表１に記載する。このベクターは、ベクターを形質導入する細胞（例えば、ヒト細胞又はマウス細胞）内でヒトＩＤＳタンパク質を発現させることができる。
ｄ）ｐＨＭ－０５２１６
図１Ｄに示すＩＤＳトランスファーベクターｐＨＭ－０５２１６は、５’から３’の方向に、以下の遺伝エレメント：５’ＩＴＲエレメント、ＣＭＶプロモーターを含む転写調節エレメント、野生型ヒトＩＤＳイントロン挿入コード配列、ＳＶ４０ポリアデニル化配列、及び３’ＩＴＲエレメントを含む。これらのエレメントの配列を表１に記載する。このベクターは、ベクターを形質導入する細胞（例えば、ヒト細胞又はマウス細胞）内でヒトＩＤＳタンパク質を発現させることができる。
ｅ）ｐＨＭ－０５２１７
図１Ｅに示すＩＤＳトランスファーベクターｐＨＭ－０５２１７は、５’から３’の方向に、以下の遺伝エレメント：５’ＩＴＲエレメント、ＣＭＶプロモーターを含む転写調節エレメント、サイレント改変ヒトＩＤＳイントロン挿入コード配列、ＳＶ４０ポリアデニル化配列、及び３’ＩＴＲエレメントを含む。これらのエレメントの配列を表１に記載する。このベクターは、ベクターを形質導入する細胞（例えば、ヒト細胞又はマウス細胞）内でヒトＩＤＳタンパク質を発現させることができる。
Figure 2023522852000001
本明細書に開示されるベクターを、ＡＡＶＨＳＣ５、ＡＡＶＨＳＣ７、ＡＡＶＨＳＣ１５、又はＡＡＶＨＳＣ１７キャプシドなどであるが、これらに限定されない、ＡＡＶキャプシド、例えば、ＡＡＶクレードＦキャプシドにパッケージングすることができる。パッケージングされたウイルス粒子を野生型動物又はＩＤＳ欠損動物に投与することができる。
実施例２：ムコ多糖症（ＭＰＳ）ＩＩ型（ハンター症候群）マウスモデルにおけるＩＤＳ遺伝子導入
ハンター症候群は、稀なＸ連鎖性遺伝性障害であり、主に男性に発症する疾患である。この疾患は、リソソーム酵素イズロネート－２－スルファターゼ（ＩＤＳ）の遺伝子欠損によって引き起こされる。ＩＤＳは、グリコサミノグリカン（ＧＡＧ）、ヘパラン硫酸（ＨＳ）、及びデルマタン硫酸（ＤＳ）の段階的分解に不可欠である。ＩＤＳは、中枢神経系で主に発現される。
インビボでのＩＤＳ遺伝子導入の効果を研究するために、ＭＰＳ ＩＩマウスモデルを使用した。ＭＰＳ ＩＩマウスモデルＢ６Ｊ．Ｃｇ－Ｉｄｓｔｍ１Ｍｕｅｎ／ＨＭＩは、遺伝子発現を消失させるマウスＩｄｓ遺伝子のエクソン４及びエクソン５の一部の欠失を含むＩｄｓノックアウト（Ｉｄｓ ＫＯ）マウスである。Ｇａｒｃｉａ ｅｔ ａｌ．（２００７）Ｊ．Ｉｎｈｅｒｉｔ． Ｍｅｔａｂ． Ｄｉｓ． ３０（６）：９２４－９３４を参照されたい。Ｉｄｓ ＫＯマウスは、Ｉ２Ｓ活性を欠き、組織及び器官中ＧＡＧレベルの増加を呈し、尿中ＧＡＧ排泄も呈する。ＬＡＭＰ１発現は、Ｉｄｓ ＫＯマウスの組織で上昇する。Ｉｄｓ ＫＯマウスは、指の肥厚、踵関節の腫脹などの進行性の骨格異常を呈する。
この実施例では、７～９週齢の野生型雄マウス及びＩｄｓ ＫＯヘミ接合性（Ｉｄｓ ＫＯヘミ）雄マウスを使用した。ＡＡＶＨＳＣ１５キャプシドにパッケージングされたｐＨＭ－０５２０５又はＡＡＶ９キャプシドにパッケージングされたｐＨＭ－０５２０５を２ｅ１３ベクターゲノム／キログラム体重（ｖｇ／ｋｇ）の用量でマウスの静脈内に単回投与した。投与後４週時点でマウスを屠殺した。
ベクターゲノム及びｈＩ２Ｓ活性がＩｄｓ ＫＯヘミマウスの脳組織及び肝臓組織で検出されたことが見出された。図２は、野生型Ｉｄｓ ＫＯヘミ雄マウス又は示されるようにｒＡＡＶを投与したＩｄｓ ＫＯヘミ雄マウスの肝臓で検出されたベクターゲノム（図２Ａ）及びＩ２Ｓ活性（図２Ｂ）を示す。＊は、ｐ＜０．０５での統計的有意性を示し、＊＊＊は、ｐ＜０．００１での統計的有意性を示し、＊＊＊＊は、ｐ＜０．０００１での統計的有意性を示し、全てＷＴと比較したものである。図３は、野生型Ｉｄｓ ＫＯヘミ雄マウス又は示されるようにｒＡＡＶを投与したＩｄｓ ＫＯヘミ雄マウスの脳で検出されたベクターゲノム（図３Ａ）及びｈＩ２Ｓ活性（図３Ｂ）を示す。ベクターゲノムの量もｈＩ２Ｓ活性も脳と比較して肝臓でより高かったことが見出された。脳では、ベクターゲノムレベルが吻側尾側軸にわたって類似しており、ＡＡＶ９キャプシドにパッケージングされたｐＨＭ－０５２０５を投与したＩｄｓ ＫＯヘミマウスと比較して、ＡＡＶＨＳＣ１５キャプシドにパッケージングされたｐＨＭ－０５２０５を投与したＩｄｓ ＫＯヘミマウスでより高かったことが見出された。
図４は、ＡＡＶ９キャプシドにパッケージングされたｐＨＭ－０５２０５を投与したＩｄｓ ＫＯヘミマウスと比較した、ＡＡＶＨＳＣ１５キャプシドにパッケージングされたｐＨＭ－０５２０５を投与したＩｄｓ ＫＯヘミマウスの肝臓中及び脳中のｈＩ２Ｓ活性を示す。肝臓で検出されたｈＩ２Ｓ活性レベルが、ＡＡＶ９キャプシドにパッケージングされたｐＨＭ－０５２０５を投与したＩｄｓ ＫＯヘミマウスと比較して、ＡＡＶＨＳＣ１５キャプシドにパッケージングされたｐＨＭ－０５２０５を投与した両Ｉｄｓ ＫＯヘミマウスに対して超生理学的であったことが見出された（図４Ａは、肝臓中の野生型Ｉ２Ｓ活性レベルのパーセンテージとしてＩ２Ｓ活性を示し、図４Ｂは、肝臓中の正常ヒトＩ２Ｓ活性のパーセンテージとしてＩ２Ｓ活性を示す）。ＡＡＶＨＳＣ１５キャプシドにパッケージングされたｐＨＭ－０５２０５を投与したＩｄｓ ＫＯヘミマウスが、ＡＡＶ９キャプシドにパッケージングされたｐＨＭ－０５２０５を投与したＩｄｓ ＫＯヘミマウスと比較して、有意に高いｈＩ２Ｓ活性を呈したことも見出された。脳では、ＡＡＶＨＳＣ１５キャプシドにパッケージングされたｐＨＭ－０５２０５を投与したＩｄｓ ＫＯヘミマウスと比較して、ＡＡＶ９にパッケージングされたｐＨＭ－０５２０５を投与したＩｄｓ ＫＯヘミマウスのｈＩ２Ｓ活性レベルが、それぞれ、野生型マウスでは約４０％及び約４５％、成人ヒトでは約７５％及び約８２％のレベルであったことが見出された（図５Ａは、脳中のマウスＩ２Ｓ活性レベルのパーセンテージとしてＩ２Ｓ活性を示し、図５Ｂは、脳中の正常ヒトＩ２Ｓ活性のパーセンテージとしてＩ２Ｓ活性を示す）。＊は、ｐ＜０．０５での統計的有意性を示す。
ＡＡＶＨＳＣ１５キャプシドにパッケージングされたｐＨＭ－０５２０５を投与したＩｄｓ ＫＯヘミマウス及びＡＡＶ９キャプシドにパッケージングされたｐＨＭ－０５２０５を投与したＩｄｓ ＫＯヘミマウスが、未処理のＩｄｓ ＫＯヘミマウス（ビヒクルで処理したＩｄｓ ＫＯヘミマウス）と比較して、脳、肝臓、及び尿中のＧＡＧレベルを減少させたことが見出された。図６は、野生型（ＷＴ）、Ｉｄｓ ＫＯヘミマウス（ＭＰＳ ＩＩ）、ＡＡＶ９キャプシドにパッケージングされたｐＨＭ－０５２０５を投与したＩｄｓ ＫＯヘミマウス（ＡＡＶ９－ｈＩＤＳ）、ＡＡＶＨＳＣ１５キャプシドにパッケージングされたｐＨＭ－０５２０５を投与したＩｄｓ ＫＯヘミマウス（ＨＳＣ１５－ｈＩＤＳ）、及び／又は代表的なヒトの肝臓中（図６Ａ）、脳中（図６Ｂ）、及び尿中（図６Ｃ）のＧＡＧレベルを示す。ＡＡＶＨＳＣ１５キャプシドにパッケージングされたｐＨＭ－０５２０５を投与したＩｄｓ ＫＯヘミマウス及びＡＡＶ９キャプシドにパッケージングされたｐＨＭ－０５２０５を投与したＩｄｓ ＫＯマウスの肝臓及び脳中のＧＡＧレベルが野生型のレベルまで減少したことが見出された。尿中では、ＡＡＶＨＳＣ１５キャプシドにパッケージングされたｐＨＭ－０５２０５を投与したＩｄｓ ＫＯヘミマウスのＧＡＧレベルが野生型マウスよりも有意に低かったことが見出された。＊は、ｐ＜０．０５での統計的有意性を示し、＊＊は、ｐ＜０．０１での統計的有意性を示す。
図７は、ｈＩＤＳのｍＲＮＡ発現が、野生型（ＷＴ）、Ｉｄｓ ＫＯヘミマウス（ＭＰＳ ＩＩ）、ＡＡＶ９キャプシドにパッケージングされたｐＨＭ－０５２０５を投与したＩｄｓ ＫＯヘミマウス（ＡＡＶ９－ｈＩＤＳ）、ＡＡＶＨＳＣ１５キャプシドにパッケージングされたｐＨＭ－０５２０５を投与したＩｄｓ ＫＯヘミマウス（ＨＳＣ１５－ｈＩＤＳ）、及び／又は代表的なヒトの肝臓（図７Ａ）及び脳（図７Ｂ）で検出されたことを示す。
投与後１２週時点での肝臓組織及び尿中で、ＡＡＶＨＳＣ１５キャプシドにパッケージングされたｐＨＭ－０５２０５を投与したＩｄｓ ＫＯヘミマウスは、耐久性及び表現型のレスキューを示した。図８Ａは、示される時点での尿試料中のＧＡＧレベルが野生型レベルまでレスキューされたことを示し、ＷＴが野生型マウスであり、ＭＰＳ ＩＩがＩｄｓ ＫＯヘミマウスであり、ＨＳＣ１５－ｈＩＤＳがＡＡＶＨＳＣ１５キャプシドにパッケージングされたｐＨＭ－０５２０５を投与したＩｄｓ ＫＯヘミマウスである。＊＊＊は、ｐ＜０．００１での統計的有意性を示す。図８Ｂは、肝臓中のＧＡＧレベルが野生型レベルまでレスキューされたことを示し、ＷＴが野生型マウスであり、ＭＰＳ ＩＩがＩｄｓ ＫＯヘミマウスであり、ＨＳＣ１５－ｈＩＤＳがＡＡＶＨＳＣ１５キャプシドにパッケージングされたｐＨＭ－０５２０５を投与したＩｄｓ ＫＯヘミマウスである。＊＊＊＊は、ｐ＜０．０００１での統計的有意性を示す。図８Ｃは、肝臓中のＩ２Ｓ活性が増加したことを示し、ＷＴが野生型マウスであり、ＨＳＣ１５－ｈＩＤＳがＡＡＶＨＳＣ１５キャプシドにパッケージングされたｐＨＭ－０５２０５を投与したＩｄｓ ＫＯヘミマウスである。＊＊＊＊は、ｐ＜０．０００１での統計的有意性を示す。加えて、ＡＡＶＨＳＣ１５にパッケージングされたｐＨＭ－０５２０５を投与したＩｄｓ ＫＯヘミマウスが、抗ＬＡＭＰ１抗体を使用して免疫組織化学によって検出されたように、肝臓組織中のＬＡＭＰ１を減少させたことが見出された。
投与後１２週時点での脳では、ＡＡＶＨＳＣ１５キャプシドにパッケージングされたｐＨＭ－０５２０５を投与したＩｄｓ ＫＯヘミマウスは、耐久性及び表現型のレスキューを示した。図９Ａは、脳中のＧＡＧレベルが野生型レベルまでレスキューされたことを示し、ＷＴが野生型マウスであり、ＭＰＳ ＩＩがＩｄｓ ＫＯヘミマウスであり、ＨＳＣ１５－ｈＩＤＳがＡＡＶＨＳＣ１５キャプシドにパッケージングされたｐＨＭ－０５２０５を投与したＩｄｓ ＫＯヘミマウスである。＊は、ｐ＜０．０５での統計的有意性を示し、＊＊は、ｐ＜０．０１での統計的有意性を示す。ｈＩ２Ｓ活性が野生型マウス（ＷＴ）及びＡＡＶＨＳＣ１５キャプシドにパッケージングされたｐＨＭ－０５２０５を投与したＩｄｓ ＫＯヘミマウスの脳で検出された（図９Ｂ及び図９Ｃ）。＊は、ｐ＜０．０５での統計的有意性を示す。
実施例３：ヒトＩＤＳトランスファーベクター
本実施例は、ベクターを形質導入する細胞（例えば、ヒト細胞又はマウス細胞）内でヒトＩＤＳ（ｈＩＤＳ）を発現させるためのヒトＩＤＳトランスファーベクターＴ－００４、Ｔ－００５、及びＴ－００６を提供する。
ａ）Ｔ－００４
図１０Ａに示すＩＤＳトランスファーベクターＴ－００４は、５’から３’の方向に、以下の遺伝エレメント：５’ＩＴＲエレメント、ＣＭＶプロモーターを含む転写調節エレメント、サイレント改変ヒトＩＤＳイントロン挿入コード配列、ＳＶ４０ポリアデニル化配列、及び３’ＩＴＲエレメントを含む。これらのエレメントの配列を表２に記載する。このベクターは、ベクターを形質導入する細胞（例えば、ヒト細胞又はマウス細胞）内でヒトＩＤＳタンパク質を発現させることができる。
ｂ）Ｔ－００５
図１０Ｂに示すＩＤＳトランスファーベクターＴ－００５は、５’から３’の方向に、以下の遺伝エレメント：５’ＩＴＲエレメント、ＣＭＶプロモーターを含む転写調節エレメント、サイレント改変ヒトＩＤＳイントロン挿入コード配列、ＳＶ４０ポリアデニル化配列、及び３’ＩＴＲエレメントを含む。これらのエレメントの配列を表２に記載する。このベクターは、ベクターを形質導入する細胞（例えば、ヒト細胞又はマウス細胞）内でヒトＩＤＳタンパク質を発現させることができる。
ｃ）Ｔ－００６
図１０Ｃに示すＩＤＳトランスファーベクターＴ－００６は、５’から３’の方向に、以下の遺伝エレメント：５’ＩＴＲエレメント、ＣＭＶプロモーターを含む転写調節エレメント、サイレント改変ヒトＩＤＳイントロン挿入コード配列、ＳＶ４０ポリアデニル化配列、及び３’ＩＴＲエレメントを含む。これらのエレメントの配列を表２に記載する。このベクターは、ベクターを形質導入する細胞（例えば、ヒト細胞又はマウス細胞）内でヒトＩＤＳタンパク質を発現させることができる。
Figure 2023522852000002
本明細書に開示されるベクターを、ＡＡＶＨＳＣ５、ＡＡＶＨＳＣ７、ＡＡＶＨＳＣ１５、又はＡＡＶＨＳＣ１７キャプシドなどであるが、これらに限定されない、ＡＡＶキャプシド、例えば、ＡＡＶクレードＦキャプシドにパッケージングすることができる。パッケージングされたウイルス粒子を野生型動物又はＩＤＳ欠損動物に投与することができる。
実施例４：ムコ多糖症（ＭＰＳ）ＩＩ（ハンター症候群）マウスモデルにおけるＩＤＳ遺伝子導入
この実施例では、６～９週齢の野生型雄マウス及びＩｄｓ ＫＯヘミ接合性（Ｉｄｓ ＫＯヘミ、ＭＰＳ ＩＩとも称する）雄マウスを使用した。ＡＡＶＨＳＣ１５キャプシド又はＡＡＶ９キャプシドのいずれかにパッケージングされたｐＨＭ－０５２０５、Ｔ－００４、Ｔ－００５、又はＴ－００６を２ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量でマウスの静脈内に単回投与した。投与後４週時点でマウスを屠殺した。
図１１は、４匹の野生型マウス（ＷＴ）、４匹のＩｄｓ ＫＯヘミマウス（ＭＰＳ ＩＩ）、ＡＡＶ９キャプシドにパッケージングされたｐＨＭ－０５２０５を投与した４匹のＩｄｓ ＫＯヘミマウス（ＡＡＶ９－ｈＩＤＳ）、ＡＡＶＨＳＣ１５キャプシドにパッケージングされたｐＨＭ－０５２０５を投与した４匹のＩｄｓ ＫＯヘミマウス（ＨＳＣ１５－ｈＩＤＳ）、ＡＡＶＨＳＣ１５キャプシドにパッケージングされたＴ－００４を投与した８匹のＩｄｓ ＫＯヘミマウス（ＨＳＣ１５－Ｔ－００４）、ＡＡＶＨＳＣ１５キャプシドにパッケージングされたＴ－００５を投与した４匹のＩＤＳ ＫＯヘミマウス（ＨＳＣ１５－Ｔ－００５）、及び ＡＡＶＨＳＣ１５キャプシドにパッケージングされたＴ－００６を投与した４匹のＩＤＳ ＫＯヘミマウス（ｈＩＤＳ－Ｔ－００６）の尿で検出されたＧＡＧレベル（図１１Ａ）及び血清中Ｉ２Ｓ活性（図１１Ｂ）を示す。図１１Ａに示すように、処理したＩｄｓ ＫＯヘミマウスの尿中のＧＡＧレベルは、未処理のＩｄｓ ＫＯヘミマウス（ビヒクルで処理したＩｄｓ ＫＯヘミマウス）と比較して減少した。図１１Ｂに示すように、血清中Ｉ２Ｓ活性が、ＡＡＶＨＳＣ１５キャプシドにパッケージングされたＴ－００４、Ｔ－００５、又はＴ－００６を投与したＩｄｓ ＫＯヘミマウスで検出可能であった。＊は、ｐ＜０．０５での統計的有意性を示し、＊＊は、ｐ＜０．０１での統計的有意性を示し、＊＊＊は、ｐ＜０．００１での統計的有意性を示し、＊＊＊＊は、ｐ＜０．０００１での統計的有意性を示す。
図１２は、野生型マウス（ＷＴ）、Ｉｄｓ ＫＯヘミマウス（ＭＰＳ ＩＩ）、ＡＡＶ９キャプシドにパッケージングされたｐＨＭ－０５２０５を投与したＩｄｓ ＫＯヘミマウス（ＡＡＶ９－ｈＩＤＳ）、ＡＡＶＨＳＣ１５キャプシドにパッケージングされたｐＨＭ－０５２０５を投与したＩｄｓ ＫＯヘミマウス（ＨＳＣ１５－ｈＩＤＳ）、ＡＡＶＨＳＣ１５キャプシドにパッケージングされたＴ－００４を投与したＩｄｓ ＫＯヘミマウス（ＨＳＣ１５－Ｔ－００４）、ＡＡＶＨＳＣ１５キャプシドにパッケージングされたＴ－００５を投与したＩｄｓ ＫＯヘミマウス（ＨＳＣ１５－Ｔ－００５）、及び／又は ＡＡＶＨＳＣ１５キャプシドにパッケージングされたＴ－００６を投与したＩｄｓ ＫＯヘミマウス（ｈＩＤＳ－Ｔ－００６）の脳及び肝臓で検出されたＧＡＧレベル（図１２Ａ及び図１２Ｂ）並びに脳及び肝臓中のＩ２Ｓ活性（図１２Ｃ及び図１２Ｄ）を示す。示すように、処理したＩｄｓ ＫＯヘミマウスの脳（図１２Ａ）及び肝臓（図１２Ｂ）中のＧＡＧレベルは、未処理のＩｄｓ ＫＯヘミマウス（ビヒクルで処理したＩｄｓ ＫＯヘミマウス）と比較して減少した。示すように、脳（図１２Ｃ）及び肝臓（図１２Ｄ）中のＩ２Ｓ活性が、ＡＡＶＨＳＣ１５キャプシドにパッケージングされたＴ－００４、Ｔ－００５、又はＴ－００６を投与したＩｄｓ ＫＯヘミマウスで検出可能であった。＊は、ｐ＜０．０５での統計的有意性を示し、＊＊は、ｐ＜０．０１での統計的有意性を示し、＊＊＊は、ｐ＜０．００１での統計的有意性を示し、＊＊＊＊は、ｐ＜０．０００１での統計的有意性を示す。
実施例５：ムコ多糖症（ＭＰＳ）ＩＩ（ハンター症候群）マウスモデルにおけるＩＤＳ遺伝子導入
この実施例では、７～１０週齢の野生型雄マウス及びＩｄｓ ＫＯヘミ接合性（Ｉｄｓ ＫＯヘミ、ＭＰＳ ＩＩとも称する）雄を使用した。２．２ｅ１３ｖｇ／ｋｇ、６．５ｅ１３ｖｇ／ｋｇ、及び１．１ｅ１４ｖｇ／ｋｇを含む用量範囲のＡＡＶＨＳＣ１５キャプシドにパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７をマウスに静脈内投与した（５マウス／群）。投与後４週時点でマウスを屠殺した。この実施例では、未処理のマウスとは、ビヒクルを投与したマウスを指す。
ＡＡＶＨＳＣ１５キャプシドにパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７の安全性を調査するために、野生型マウスへのウイルスの投与の効果を試験した。体重減少の兆候がいずれの投薬量でも経時的に観察されなかったときに、ＡＡＶＨＳＣ１５キャプシドにパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７の忍容性が実証された（図１３Ａ及び図１３Ｂ）。図１３Ａ及び図１３Ｂに示すように、野生型マウス及びＡＡＶＨＳＣ１５にパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７で処理したＩｄｓ ＫＯヘミマウスはいずれも経時的な体重の減少の兆候を示さなかった。図１３Ａ中、群１は、Ｉｄｓ ＫＯヘミマウス対照であり、群２は、２．２ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶＨＳＣ１５キャプシドにパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を投与したＩｄｓ ＫＯヘミマウスであり、群３は、６．５ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶＨＳＣ１５キャプシドにパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を投与したＩｄｓ ＫＯヘミマウスであり、群４は、１．１ｅ１４ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶＨＳＣ１５キャプシドにパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を投与したＩｄｓ ＫＯヘミマウスであり、群５は、野生型マウスである。図１３Ｂ中、群５は、野生型マウスであり、群６は、２．２ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶＨＳＣ１５キャプシドにパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を投与した野生型マウスであり、群７は、１．１ｅ１４ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶＨＳＣ１５キャプシドにパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を投与した野生型マウスである。
野生型マウスにおけるＩ２Ｓ活性が、ＡＡＶＨＳＣ１５キャプシドにパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７の投与に対して用量依存的であったことが見出された。血清では、投与後２週時点（図１４Ａ）及び４週時点（図１４Ｂ）で、示される用量でＡＡＶＨＳＣ１５キャプシドにパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を投与した野生型マウスは、Ｉ２Ｓ活性の用量依存的な増加を呈した。未処理の野生型（ＷＴ）マウス及びＩｄｓ ＫＯヘミ接合性（ＭＰＳ ＩＩ）マウスを対照として使用した。肝臓では、投与後４週時点（図１４Ｃ）で、示される用量でＡＡＶＨＳＣ１５キャプシドにパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を投与した野生型マウスは、Ｉ２Ｓ活性の用量依存的な増加を呈した。これにより、ヒトＩ２Ｓ活性が野生型マウスで検出可能であり、正常レベルを超える野生型マウスにおけるＩ２Ｓ活性の増加が体重に影響を及ぼさないことが実証された。
ＡＡＶＨＳＣ１５キャプシドにパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を投与した野生型マウスのＧＡＧレベルは未処理の野生型マウスのＧＡＧレベルと類似しており、野生型レベルを下回って更に減少したことは見出されなかった。脳（図１５Ａ）及び肝臓（図１５Ｂ）では、処理したＩｄｓ ＫＯヘミマウスのＧＡＧレベルが未処理の野生型マウス（対照）と同等であったことが見出された。＊＊＊は、ｐ＜０．００１での統計的有意性を示し、＊＊＊＊は、ｐ＜０．０００１での統計的有意性を示す。
脳内及び肝臓内での発現が、ＡＡＶＨＳＣ１５にパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７の投与に対して用量依存的であったことが見出された。図１６Ａは、示される用量でＡＡＶＨＳＣ１５にパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を投与したＩｄｓ ＫＯヘミマウスの脳内発現を示し、用量の増加とともに発現が増加することを実証する。図１６Ｂは、示される用量でＡＡＶＨＳＣ１５にパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を投与したＩｄｓ ＫＯヘミマウスの肝臓内発現を示し、用量の増加とともに発現が増加することを実証する。概して、肝臓が脳よりも多くのサイレント改変ＩＤＳ発現量を有したことが見出された。＊は、ｐ＜０．０５での統計的有意性を示し、＊＊＊は、ｐ＜０．００１での統計的有意性を示す。
ＡＡＶＨＳＣ１５キャプシドにパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７の有効性を調査するために、Ｉｄｓ ＫＯヘミマウスへのウイルス投与の効果を試験した。ＡＡＶＨＳＣ１５キャプシドにパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を投与したＩｄｓ ＫＯヘミマウスにおける血清中Ｉ２Ｓ活性が投与後２週時点で検出され（図１７Ａ）、投与後４週時点でも一貫したままであった（図１７Ｂ）。４週時点で、血清中Ｉ２Ｓ活性が最大６．５ｅ１３ｖｇ／ｋｇまで用量依存的であったことが見出された。＊＊は、ｐ＜０．０１での統計的有意性を示し、＊＊＊＊は、ｐ＜０．０００１での統計的有意性を示す。
ＡＡＶＨＳＣ１５キャプシドにパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７は、肝臓でも用量依存的なＩ２Ｓ活性を示した。図１８は、ＡＡＶＨＳＣ１５キャプシドにパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を投与したＩｄｓ ＫＯヘミマウスの肝臓中Ｉ２Ｓ活性を示す。＊＊は、ｐ＜０．０１での統計的有意性を示し、＊＊＊＊は、ｐ＜０．０００１での統計的有意性を示す。
ＡＡＶＨＳＣ１５にパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を投与したＩｄｓ ＫＯヘミマウスの尿中のＧＡＧレベルは、投与後２週時点（図１９Ａ）及び４週時点（図１９Ｂ）で全ての用量により野生型レベルまで減少したことが見出された。ＡＡＶＨＳＣ１５にパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を投与したＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウスの尿中のＧＡＧ硫酸ヘパリン（ＧＡＧ－ＨＳ）レベル（図１９Ｃ）及びＧＡＧデルマタン硫酸（ＧＡＧ－ＤＳ）レベル（図１９Ｄ）が、投与後４週時点で野生型レベルまで減少したことが見出された。ＧＡＧレベルを質量分析により決定し、各尿試料中のクレアチニンレベルに対して正規化した。二元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ）を使用して統計分析を行った。ｎｓは、統計的に有意ではないことを示し、＊＊は、ｐ＜０．０１での統計的有意性を示し、＊＊＊は、ｐ＜０．００１での統計的有意性を示し、＊＊＊＊は、ｐ＜０．０００１での統計的有意性を示す。
ＡＡＶＨＳＣ１５にパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を投与したＩｄｓ ＫＯヘミマウスの肝臓（図２０Ａ）、心臓（図２０Ｂ）、肺（図２０Ｃ）、脳（図２０Ｄ）、腎臓（図２０Ｅ）、及び脾臓（図２０Ｆ）中のＧＡＧレベルが、投与後４週時点で全ての用量により野生型レベルまで減少したことが見出された。＊は、ｐ＜０．０５での統計的有意性を示し、＊＊は、ｐ＜０．０１での統計的有意性を示し、＊＊＊は、ｐ＜０．００１での統計的有意性を示し、＊＊＊＊は、ｐ＜０．０００１での統計的有意性を示す。
実施例６：ムコ多糖症（ＭＰＳ）ＩＩ（ハンター症候群）マウスモデルにおけるＩＤＳ遺伝子導入
別の実施例では、成体野生型マウス及びＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウス（Ｉｄｓ ＫＯヘミ、ＭＰＳ ＩＩとも称する）における４週間単回静脈内投与範囲測定試験を行った。２．２ｅ１３ｖｇ／ｋｇ、６．５ｅ１３ｖｇ／ｋｇ、及び１．１ｅ１４ｖｇ／ｋｇのＡＡＶＨＳＣ１５キャプシドにパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７をマウスに静脈内投与した（４～５マウス／群）。投与後４週時点でマウスを屠殺した。これらの実験では、ＡＡＶＨＳＣ１５にパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７が血液脳関門を通過して脳細胞に形質導入し、Ｉ２Ｓの発現、並びに脳中のヘパラン硫酸の有意な減少及びＬＡＭＰ１の用量依存的減少がもたらされたことが見出された。血清中及び肝臓中Ｉ２Ｓ活性も用量依存的であったことが見出された。全ての用量で、ヘパラン硫酸レベルが試験した全ての末梢組織で減少したことが見出された。ＭＰＳ ＩＩ又はＷＴ処理動物における体重減少の欠如に基づいて、最大１．１ｅ１４ｖｇ／ｋｇの用量のＡＡＶＨＳＣ１５にパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７が忍容性を示したことが見出された。
ＡＡＶＨＳＣ１５キャプシドにパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７の単回静脈内投与により、主要なマウス末梢器官及び中心器官におけるベクターゲノムレベル（図２１Ａ）及びｈＩＤＳ転写物レベル（図２１Ｂ）の用量依存的な増加がもたらされたことが見出された。図２１Ｂは、野生型ｈＩＤＳ転写物に対して正規化したサイレント改変ｈＩＤＳ転写物のパーセンテージを示す。ヘパラン硫酸（図２１Ｃ）、デルマタン硫酸塩（図２１Ｄ）、及び／又は総ＧＡＧレベルが、全ての用量で全ての器官で減少したことが見出された。図２１Ｃ及び図２１Ｄ中、＊は、ｐ＜０．０５での統計的有意性を示し、＊＊は、＜０．０１での統計的有意性を示し、＊＊＊＊は、ｐ＜０．０００１での統計的有意性を示し、ｎｓは、有意ではないことを示す。
投与後４週時点で、ＡＡＶＨＳＣ１５キャプシドにパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を投与したＭＰＳ ＩＩマウスは、脳中のベクターゲノムレベル（図２２Ａ）、ヒト野生型ｈＩＤＳ転写物に対して正規化したサイレント改変ｈＩＤＳ転写物のパーセンテージ（図２２Ｂ）、及びＩ２Ｓ活性（図２２Ｃ）の用量依存的増加を呈した。ＡＡＶＨＳＣ１５にパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を投与したＭＰＳ ＩＩマウスの脳中のヘパラン硫酸レベルが、投与後４週時点で全ての用量により減少したことが見出された（図２２Ｄ）。図２２Ａ～図２２Ｄに示すように、ＡＡＶＨＳＣ１５キャプシドにパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７は、血液脳関門を通過し、脳組織に形質導入し、サイレント改変ｈＩＤＳを発現させ、検出可能な脳中Ｉ２Ｓ活性をもたらし、脳組織特異的ＧＡＧを減少させた。図２２Ａ～図２２Ｄ中、＊は、ｐ＜０．０５での統計的有意性を示し、＊＊は、ｐ＜０．０１での統計的有意性を示し、＊＊＊は、ｐ＜０．００１での統計的有意性を示し、ｎｓは、有意ではないことを示す。
脳病理学に対するＡＡＶＨＳＣ１５キャプシドにパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７の投与の効果を更に評価するために、小脳（図２３Ａ）、脊髄（図２３Ｂ）、及び海馬（図２３Ｃ）を、免疫組織化学（ＩＨＣ）によってリソソーム関連膜タンパク質１（ＬＡＭＰ１）についてアッセイした。ＬＡＭＰ１の存在は、リソソーム負荷の証拠である。免疫組織化学（ＩＨＣ）によるＬＡＭＰ１の検出を、ウサギポリクローナル抗ＬＡＭＰ１抗体（Ａｂｃａｍ、ａｂ２４１７０）を使用して行った。簡潔には、ホルマリン固定パラフィン包埋（ＦＦＰＥ）試料を４μｍ又は６μｍに切片化し、帯電スライド上にマウントした。スライドを、自動染色装置を使用して処理及びプロセシングし、抗ＬＡＭＰ１一次抗体で３０分間染色し（０．２５μｇ／ｍｌ）、抗ウサギ標識ポリマー－ＨＲＰで３０分間染色した。染色切片の画像を取得し、ピクセル平均グレー値を分析し、各切片におけるＬＡＭＰ１の発現の半定量的報告を可能にした。図２３Ａ～図２３Ｃに示すように、ＡＡＶＨＳＣ１５にパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７は、血液脳関門を通過し、処理したＭＰＳ ＩＩマウスのＣＮＳ中のＬＡＭＰ１減少の用量依存的傾向をもたらした。図２３Ａ～図２３Ｃ中、＊は、ｐ＜０．０５での統計的有意性を示し、＊＊は、ｐ＜０．０１での統計的有意性を示し、＊＊＊は、ｐ＜０．００１での統計的有意性を示し、＊＊＊＊は、ｐ＜０．０００１での統計的有意性を示し、ｎｓは、有意ではないことを示す。
肝臓、脾臓、心臓、腎臓、及び肺を含む主要な器官内でのＬＡＭＰ１発現も、ＩＨＣによって分析した。１．１ｅ１４ｖｇ／ｋｇの用量でＡＡＶＨＳＣ１５キャプシドにパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を投与したＭＰＳ ＩＩマウスの定性分析は、処理したＭＰＳ ＩＩマウスの肝臓、脾臓、心臓、腎臓、及び肺内でのＬＡＭＰ１発現が、未処理のＭＰＳ ＩＩマウス（ビヒクルを投与したＭＰＳ ＩＩマウス）と比較して減少したことを示した。
投与後４週時点で、ＡＡＶＨＳＣ１５キャプシドにパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を投与したＭＰＳ ＩＩマウスは、血清中（図２４）及び肝臓中（図２５）Ｉ２Ｓ活性の用量依存的増加を示した。図２４及び図２５中、＊＊は、ｐ＜０．０１での統計的有意性を示し、＊＊＊＊は、ｐ＜０．０００１での統計的有意性を示し、ｎｓは、有意ではないことを示す。
実施例７：野生型ｈＩＤＳトランスファーベクターとサイレント改変ｈＩＤＳトランスファーベクターとの比較
本実施例は、ベクターを形質導入する細胞（例えば、ヒト細胞又はマウス細胞）内でヒトＩＤＳ（ｈＩＤＳ）を発現させるためのヒトＩＤＳトランスファーベクターｐＨＭ－０５２０５を提供する。本実施例は、ｈＩＤＳトランスファーベクターＴ－００６とｐＨＭ－０５２０５との間の有効性の比較を提供する。Ｔ－００６を実施例３に記載し、ｐＨＭ－０５２０５を以下に記載する。
ｐＨＭ－０５２０５
図２６Ａに示すＩＤＳトランスファーベクターｐＨＭ－０５２０５は、５’から３’の方向に、以下の遺伝エレメント：５’ＩＴＲエレメント、ＣＭＶプロモーターを含む転写調節エレメント、野生型ヒトＩＤＳイントロン挿入コード配列、ＳＶ４０ポリアデニル化配列、及び３’ＩＴＲエレメントを含む。これらのエレメントの配列を表３に記載する。このベクターは、ベクターを形質導入する細胞（例えば、ヒト細胞又はマウス細胞）内でヒトＩＤＳタンパク質を発現させることができる。
Figure 2023522852000003
野生型ｈＩＤＳコード配列（ｐＨＭ－０５２０５）を含むｈＩＤＳトランスファーベクター及びサイレント改変ｈＩＤＳコード配列（Ｔ－００６）を含むｈＩＤＳコードベクターの有効性を試験するために、Ｔ－００６及びｐＨＭ－０５２０５を各々ＡＡＶＨＳＣ１５にパッケージングし、６ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量でＭＰＳ ＩＩマウスに投与した。マウスを投与後４週時点で屠殺し、血清中（図２６Ｂ）及び肝臓中（図２６Ｃ）Ｉ２Ｓ活性を測定し、マウスＧタンパク質経路サプレッサー１（ＧＰＳ１）の発現に対して正規化したｈＩＤＳ転写物の相対発現（図２６Ｄ）も測定した。図２６Ｂ及び図２６Ｃに示すように、サイレント改変ｈＩＤＳトランスファーベクター（Ｔ－００６、「ＳＣ ＳＡ」）の投与により、処理したＭＰＳ ＩＩマウスにおいて、野生型ｈＩＤＳトランスファーベクター（ｐＨＭ－０５２０５、「ＳＣ ＷＴ」）の投与と比較して、それぞれ、有意に高い血清中及び肝臓中Ｉ２Ｓ活性がもたらされた。図２６Ｄは、サイレント改変ｈＩＤＳトランスファーベクターの投与により、処理したＭＰＳ ＩＩマウスにおいて、野生型ｈＩＤＳトランスファーベクターの投与と比較して、脳組織内でｈＩＤＳ転写物の有意に高い相対発現がもたらされることを示す。ビヒクルで処理したＭＰＳ ＩＩマウスを対照として使用した。図２６Ｂ～図２６Ｄ中、＊＊＊＊は、ｐ＜０．０００１での統計的有意性を示し、ｎｓは、有意ではないことを示す。
実施例８：一本鎖ｈＩＤＳトランスファーベクターと自己相補的ｈＩＤＳトランスファーベクターとの比較
本実施例は、ベクターを形質導入する細胞（例えば、ヒト細胞又はマウス細胞）内でヒトＩＤＳ（ｈＩＤＳ）を発現させるためのヒトＩＤＳトランスファーベクターｐＨＭ－０５２１１を提供する。本実施例は、ｈＩＤＳトランスファーベクターｐＨＭ－０５２０５とｐＨＭ－０５２１１との比較を提供する。ｐＨＭ－０５２０５を実施例７に記載し、ｐＨＭ－０５２１１を以下に記載する。
ｐＨＭ－０５２１１
図２７Ａに示すＩＤＳトランスファーベクターｐＨＭ－０５２１１は、５’から３’の方向に、以下の遺伝エレメント：５’ＩＴＲエレメント、ＣＭＶプロモーターを含む転写調節エレメント、野生型ヒトＩＤＳイントロン挿入コード配列、ＳＶ４０ポリアデニル化配列、及び３’ＩＴＲエレメントを含む。これらのエレメントの配列を表４に記載する。このベクターは、ベクターを形質導入する細胞（例えば、ヒト細胞又はマウス細胞）内でヒトＩＤＳタンパク質を発現させることができる。
Figure 2023522852000004
一本鎖ｈＩＤＳトランスファーベクター（ｐＨＭ－０５２１１、「ＳＳ ＷＴ」）と自己相補的ｈＩＤＳトランスファーベクター（ｐＨＭ－０５２０５、「ＳＣ ＷＴ」）との比較を行った。図２７Ｂは、２ｅ１３ｖｇ／ｋｇの用量で各々ＡＡＶＨＳＣ１５キャプシドにパッケージングされたｐＨＭ－０５２１１又はｐＨＭ－０５２０５を投与したＭＰＳ ＩＩマウスで検出された血清中ｈＩ２Ｓ活性レベルを示し、示されるように、血清中ｈＩ２Ｓ活性を投与後６週時点又は８週時点で測定した。血清中ｈＩ２Ｓ活性を誘導する一本鎖ｈＩＤＳトランスファーベクターの能力と自己相補的ｈＩＤＳトランスファーベクターの能力との間に有意差は見られなかった。図２７Ｃは、一本鎖トランスファーベクター又は自己相補的トランスファーベクターで処理したＭＰＳ ＩＩマウスにおけるマウスＧタンパク質経路サプレッサー１（ＧＰＳ１）の発現に対して正規化したｈＩＤＳ転写物の相対発現を示す。示されるように、マウスを投与２週時点又は８週時点で屠殺し、各コホートにおいて、一本鎖トランスファーベクターで処理したマウスと自己相補的トランスファーベクターで処理したマウスとの間にｈＩＤＳ転写物の相対発現に差異は検出されなかった。ｎｓは、有意ではないことを示す。
分析用超遠心分離沈降速度（ＡＵＣ）とは、沈降係数に基づいて巨大分子を定量するために使用される分析方法である。ｒＡＡＶ試料を分析する場合、ＡＵＣを使用して、ＤＮＡ含有キャプシド（完全なキャプシド及び部分的に完全なキャプシド）と空のキャプシドの相対的割合を決定することができる。一本鎖トランスファーベクター及び自己相補的トランスファーベクターのＡＵＣプロファイルを決定した。一本鎖トランスファーベクターのＡＵＣプロファイルは、自己相補的トランスファーベクターのＡＵＣプロファイルと比較して、より高い割合の完全なキャプシドを有するプロファイルを示した。自己相補的トランスファーベクター（ｐＨＭ－０５２０５）は、３１．７％の完全にパッケージングされたキャプシドをもたらし、一本鎖トランスファーベクター（ｐＨＭ－０５２１１）は、８５．０％の完全にパッケージングされたキャプシドをもたらした。
実施例９：ムコ多糖症（ＭＰＳ）ＩＩ（ハンター症候群）マウスモデルにおけるｈＩＤＳ遺伝子導入
本実施例は、成体野生型マウス及びＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウス（Ｉｄｓ ＫＯヘミ、ＭＰＳ ＩＩマウスとも称する）における５２週間単回静脈内投与経時変化、耐久性、及び有効性試験を説明する。１．８ｅ１４ｖｇ／ｋｇの用量のＡＡＶＨＳＣ１５キャプシドにパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７をマウスに静脈内投与した（３～５マウス／群）。
ＭＰＳ ＩＩマウスに静脈内投与したＡＡＶＨＳＣ１５キャプシドにパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７の１．８ｅ１４ｖｇ／ｋｇでの単回投与により、ビヒクルで処理した対照ＭＰＳ ＩＩマウスと比較して、有意な血清中Ｉ２Ｓ活性がもたらされたことが見出された（図２８Ａ）。血清中Ｉ２Ｓ活性は投与後５２週時点まで検出可能であった。
投与後５２週時点で、ベクターゲノム及び発現が維持された。トランスファーベクターで処理したＭＰＳ ＩＩマウスの脳、心臓、肝臓、脾臓、腎臓、及び肺組織中のベクターゲノムレベル（図２８Ｂ）及びｈＩＤＳ転写物レベル（図２８Ｃ）は、投与後５２週時点まで検出された。ＡＡＶＨＳＣ１５にパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７の１．８ｅ１４ｖｇ／ｋｇでの投与後５２週時点で、脳、心臓、肝臓、脾臓、腎臓、及び肺組織中のグリコサミノグリカンヘパラン硫酸（ＧＡＧ－ＨＳ）レベルが、ビヒクルで処理したＭＰＳ ＩＩマウスと比較して減少したことが見出された（図２８Ｄ）。
脳では、ＬＡＭＰ－１染色の減少が、脊髄（図２８Ｅ）及び海馬（図２８Ｆ）におけるＩＨＣによってアッセイされたように、投与後５２週時点で観察された。海馬では、ＬＡＭＰ－１染色は、ビヒクルで処理したＭＰＳ ＩＩマウスと比較して、トランスファーベクターで処理したＭＰＳ ＩＩマウスで有意に減少した。図２８Ｅ及び２８Ｆ中、＊は、ｐ＜０．０５での統計的有意性を示し、ｎｓは、有意ではないことを示す。
血液神経関門（ＢＮＢ）の通過及び末梢神経系（ＰＮＳ）の形質導入を評価するために、三叉神経節を動物から採取した。ベクターゲノムが、投与されたビヒクルで処理したＭＰＳ ＩＩマウス及び野生型マウスと比較して、投与後３９週時点で、ＡＡＶＨＳＣ１５キャプシドにパッケージされたｐＨＭ－０５２１７を１．８ｅ１４ｖｇ／ｋｇの用量で投与したＭＰＳ ＩＩマウスで検出された（図２８Ｇ）。図２８Ｇに示すように、ＡＡＶＨＳＣ１５にパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７が、ＰＮＳのＢＮＢを通過して細胞に形質導入したことが見出された。
ＡＡＶＨＳＣ１５キャプシドにパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を１．８ｅ１４ｖｇ／ｋｇの用量で投与したＭＰＳ ＩＩマウスでは、肝臓特異的及び脳組織特異的Ｉ２Ｓ酵素活性が検出された。肝臓特異的Ｉ２Ｓ酵素活性は、投与後１２週時点、２４週時点、３９週時点、及び５２週時点で検出され（図２８Ｈ）、脳特異的Ｉ２Ｓ酵素活性は、１２週時点（図２８Ｉ）、２４週時点（図２８Ｊ）、３９週時点（図２８Ｋ）、及び５２週時点（図２８Ｌ）で検出された。図２８Ｊ～図２８Ｌ中、正常成人ヒト脳組織を追加の対照として使用した。
ＡＡＶＨＳＣ１５にパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を１．８ｅ１４ｖｇ／ｋｇで投与したＭＰＳ ＩＩマウスの尿で検出されたＧＡＧ－ＨＳレベルが、ビヒクルで処理したＭＰＳ ＩＩマウスと比較して、投与後少なくとも５２週時点まで減少したことが見出された（図２８Ｍ）。尿中ＧＡＧ－ＨＳレベルを質量分析によって決定し、各尿試料中のクレアチニンレベルに対して正規化した。図２８Ｍ中、データを、各用量コホート（ｎ＝３～５マウス／群）の平均レベルとして提示する。
ＭＰＳ ＩＩマウスは、小脳におけるプルキンエ細胞ニューロンの進行性変性を特徴とする。ＡＡＶＨＳＣ１５にパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を１．８ｅ１４ｖｇ／ｋｇで投与したＭＰＳ ＩＩマウスのプルキンエ細胞層（ＰＣＬ）細胞線密度を投与後５２週時点で定量した。プルキンエ細胞線密度の定量を、ヘマトキシリン及びエオシン（Ｈ＆Ｅ）で共染色した矢状脳切片で行った。小脳の画像を収集し、Ｐｕｒｋｉｎｊｅ細胞層（ＰＣＬ）の４００μｍの長さの領域に沿ったプルキンエ細胞体の総数を手動で計数した。３つのＰＣＬ領域を切片毎に無作為にサンプリングした（ｎ＝１切片／動物）。ＡＡＶＨＳＣ１５にパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を１．８ｅ１４ｖｇ／ｋｇで投与したＭＰＳ ＩＩマウスが、ビヒクルで処理したＭＰＳ ＩＩマウスと比較して、プルキンエ細胞変性を軽減したことが見出された（図２８Ｎ）。図２８Ｎ中、＊＊は、一元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ）検定によって計算される、ｐ＜０．０１での統計的有意性を示す。
ＭＰＳ ＩＩマウスは、野生型動物と比較して、頬骨弓の肥厚、指の肥厚、及び後足の腫大を含む骨格異常を特徴とする。動物の皮膚を切って取り出した頭蓋骨の頬骨弓基底部の形態学的測定値を、キャリパーを使用して評価した。ＡＡＶＨＳＣ１５キャプシドにパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を１．８ｅ１４ｖｇ／ｋｇで投与したＭＰＳ ＩＩマウスが、ビヒクルで処理したＭＰＳ ＩＩマウスと比較して、頬骨弓の厚さが減少したことが見出された（図２８Ｏ）。図２８Ｏ中、＊＊＊は、ｐ＜０．０１での統計的有意性を示し、ｎｓは、有意ではないことを示す。
投与後５２週時点で、１．８ｅ１４ｖｇ／ｋｇのＡＡＶＨＳＣ１５にパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７で処理したＭＰＳ ＩＩマウスは、未処理のＭＰＳ ＩＩマウス（ビヒクルを投与したＭＰＳ ＩＩマウス）と比較して、後足及び足首の腫大の減少を呈する。麻酔をかけたマウスの足首及び足の測定を、デジタルキャリバーを使用して、図２９Ａに提供する概略図に従って行った。図２９Ｂ及び図２９Ｃに示すように、トランスファーベクターで処理したＭＰＳ ＩＩマウスは、ビヒクルで処理した対照ＭＰＳ ＩＩマウスと比較して、足の幅（図２９Ｂ）及び深さ（図２９Ｃ）の両方によって経時的に測定されたように、足の肥厚の軽減を呈した。図２９Ｄ及び２９Ｅに示すように、トランスファーベクターで処理したＭＰＳ ＩＩマウスは、ビヒクルで処理した対照ＭＰＳ ＩＩマウスと比較して、足首の幅（図２９Ｄ）及び深さ（図２９Ｅ）の両方によって経時的に測定されたように、踵関節の腫脹の軽減を呈した。
実施例１０：ムコ多糖症（ＭＰＳ）ＩＩ（ハンター症候群）マウスモデルにおけるＩＤＳ遺伝子導入
本実施例は、成体野生型マウス及びＩｄｓ ＫＯヘミ接合性マウス（Ｉｄｓ ＫＯヘミ、ＭＰＳ ＩＩとも称する）における８週間単回静脈内投与生物学的動態試験を説明する。１．８ｅ１４ｖｇ／ｋｇの用量のＡＡＶＨＳＣ１５キャプシドにパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７をマウスに静脈内投与した（４～５マウス／群）。
ＭＰＳ ＩＩマウスに静脈内投与したＡＡＶＨＳＣ１５キャプシドにパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７の１．８ｅ１４ｖｇ／ｋｇでの単回投与により、ビヒクルで処理した対照ＭＰＳ ＩＩマウスと比較して、投与後早ければ１日時点で測定可能な、有意な血清中Ｉ２Ｓ活性がもたらされたことが見出された（図３０Ａ）。ＡＡＶＨＳＣ１５キャプシドにパッケージされたｐＨＭ－０５２１７を１．８ｅ１４ｖｇ／ｋｇで単回静脈内投与したＭＰＳ ＩＩマウスにおけるベクターゲノムレベル（図３０Ｂ）及び発現レベル（図３０Ｃ）が、全ての試験した時点で、脳、心臓、肝臓、及び脾臓組織で検出された。投与後８週時点で、肝組織（図３０Ｄ）及び脳組織（図３０Ｅ）特異的Ｉ２Ｓ活性が、ＡＡＶＨＳＣ１５キャプシドにパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を１．８ｅ１４ｖｇ／ｋｇで静脈内に単回投与したＭＰＳ ＩＩマウスで検出された。ＡＡＶＨＳＣ１５にパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７の１．８ｅ１４ｖｇ／ｋｇでの投与後８日時点（図３１Ａ）、２週時点（図３１Ｂ）、及び８週時点（図３１Ｃ）で、脳、心臓、肝臓、及び脾臓組織中のグリコサミノグリカンヘパラン硫酸（ＧＡＧ－ＨＳ）レベルが、ビヒクルで処理したＭＰＳ ＩＩマウスと比較して減少したことが見出された。ＡＡＶＨＳＣ１５にパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を１．８ｅ１４ｖｇ／ｋｇで投与したＭＰＳ ＩＩマウスの尿で検出されたＧＡＧ－ＨＳレベルが、ビヒクルで処理したＭＰＳ ＩＩマウスと比較して、投与後３日時点までに、かつ少なくとも８週時点までベースラインレベルから減少したことが見出された（図３１Ｄ）。図３０Ａ～図３１Ｄ中、＊は、ｐ＜０．０５での統計的有意性を示し、＊＊は、ｐ＜０．０１での統計的有意性を示し、＊＊＊は、ｐ＜０．００１での統計的有意性を示し、ｎは、統計的に有意ではないことを示す。
実施例１１：ムコ多糖症（ＭＰＳ）ＩＩ（ハンター症候群）マウスモデルにおけるＩＤＳ遺伝子導入
マウスの脳脊髄液（ＣＳＦ）中のグリコサミノグリカンヘパラン硫酸（ＧＡＧ－ＨＳ）レベルを、高速液体クロマトグラフィー質量分析を使用して、ヘパリナーゼ消化後のＣＳＦ試料中のヘパラン硫酸特異的二糖を測定することによって決定した。図３２Ａに示されるように、野生型（ＷＴ）マウス、ビヒクルで処理したＭＰＳ ＩＩマウス、及び６ｅ１３ｖｇ／ｋｇ（ＭＰＳ ＩＩ ６Ｅ＋１３）、１ｅ１４ｖｇ／ｋｇ（ＭＰＳ ＩＩ １Ｅ＋１４）、又は２ｅ１４ｖｇ／ｋｇ（ＭＰＳ ＩＩ ２Ｅ＋１４）の用量で静脈内投与したＡＡＶＨＳＣ１５キャプシドでパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７で処理したＭＰＳ ＩＩマウスのＣＳＦ中のＧＡＧ－ＨＳレベルを投与後１２週時点で測定した。ビヒクルで処理したＭＰＳ ＩＩマウスと比較して、試験した全ての用量でＣＳＦ中ＧＡＧ－ＨＳレベルの減少が観察された。図３２Ａでは、各群は、合計５匹のマウスからプールされた３つのＣＳＦ試料を有する。一元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ）を使用して統計分析を行った。＊は、ｐ＜０．０５での統計的有意性を示し、＊＊は、ｐ＜０．０１での統計的有意性を示す。図３２Ｂに示されるように、野生型（ＷＴ）マウス、ビヒクルで処理したＭＰＳ ＩＩマウス、及び６ｅ１３ｖｇ／ｋｇ（ＭＰＳ ＩＩ ６Ｅ＋１３）、１ｅ１４ｖｇ／ｋｇ（ＭＰＳ ＩＩ １Ｅ＋１４）、又は２ｅ１４ｖｇ／ｋｇ（ＭＰＳ ＩＩ ２Ｅ＋１４）の用量で静脈内投与したＡＡＶＨＳＣ１５キャプシドでパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７で処理したＭＰＳ ＩＩマウスの脳中のＧＡＧ－ＨＳレベルを投与後１２週時点で測定した。図３２Ｂに示すように、ビヒクルで処理した未処理のＭＰＳ ＩＩマウスと比較して、試験した全ての用量で脳中ＧＡＧ－ＨＳレベルの減少が観察された。一元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ）を使用して統計分析を行った。＊＊＊＊は、ｐ＜０．０００１での統計的有意性を示す。
図３２Ｃに示されるように、野生型（ＷＴ）マウス、ＭＰＳ ＩＩマウス、及び６ｅ１３ｖｇ／ｋｇ（ＭＰＳ ＩＩ ６Ｅ＋１３）、１ｅ１４ｖｇ／ｋｇ（ＭＰＳ ＩＩ １Ｅ＋１４）、又は２ｅ１４ｖｇ／ｋｇ（ＭＰＳ ＩＩ ２Ｅ＋１４）の用量で静脈内投与したＡＡＶＨＳＣ１５キャプシドでパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７で処理したＭＰＳ ＩＩマウスの脳中のＩ２Ｓ活性を投与後１２週時点で測定した。正常成人ヒト脳組織を追加の対照として使用した。一元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ）検定を使用して統計分析を行った。＊は、ｐ＜０．０５での統計的有意性を示し、＊＊＊は、ｐ＜０．００１での統計的有意性を示す。
実施例１２：ＩＤＳ遺伝子導入の相互補正
ＡＡＶ遺伝子導入ベクターから発現されたＩ２Ｓの相互補正能力を調べるために、ＡＡＶＨＳＣ１５にパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を１．８ｅ１４ｖｇ／ｋｇでＭＰＳ ＩＩマウスに静脈内投与し、血清をアッセイした。
イズロン酸－２－スルファターゼは、翻訳後修飾されている。初期の７３～７８ｋＤａのＩＤＳタンパク質を、マンノース６－リン酸（Ｍ６Ｐ）部分の添加により、９０ｋＤａのリン酸化前駆体に変換する。その後、９０ｋＤａの前駆体を、１８ｋＤａのポリペプチドを放出して、タンパク質分解的切断により様々な中間体を介して主要な５５ｋＤａの中間体に処理する。チオールプロテアーゼによる更なるタンパク質分解的切断により、ハイブリッド型及び複合型オリゴ糖鎖を含む４５ｋＤａの成熟形態がもたらされる。
簡潔には、ＩＤＳ ＫＯ ＨｅＬａ細胞を培養し、１．８ｅ１４ｖｇ／ｋｇのＡＡＶＨＳＣ１５にパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７で処理したＭＰＳ ＩＩマウスから得たマウス血清と投与後８日目にインキュベートした。細胞を、Ｍ６Ｐの存在下又は不在下で、処理したマウス血清と４８時間インキュベートした。ヤギ抗ｈＩＤＳ一次抗体でプローブし、かつロバ抗ヤギ二次抗体を使用して検出したウェスタンブロットにより、以下のことが確認された：（１）ＡＡＶＨＳＣ１５にパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７によって作製されたｈＩＤＳタンパク質が、９０ｋＤａの前駆体形態で、処理したＭＰＳ ＩＩマウスの血清中を循環する、（２）９０ｋＤａの形態が触媒的に活性である、及び （３）９０ｋＤａの形態が、Ｍ６Ｐ依存的経路を介してＩＤＳ ＫＯ ＨｅＬａ細胞によって取り込まれ、ＩＤＳ ＫＯ ＨｅＬａ細胞のリソソーム内で中間体５５ｋＤａタンパク質及び成熟４５ｋＤａタンパク質にプロセシングされる。
ＩＤＳ ＫＯ ＨｅＬａ細胞を処理したＭＰＳ ＩＩマウスから得たマウス血清とインキュベートした後、細胞を遠心分離し、上清を除去した。その後、ペレット状にした細胞を溶解し、ｈＩ２Ｓ活性についてアッセイした。図３３は、ＩＤＳ ＫＯ細胞（対照）、Ｍ６Ｐを含まない処理したＭＰＳ ＩＩマウス血清とインキュベートしたＩＤＳ ＫＯ細胞、及びＭ６Ｐを含む処理したＭＰＳ ＩＩマウス血清とインキュベートしたＩＤＳ ＫＯ細胞で検出されたＩ２Ｓ活性レベルを示す。図３３に示すように、Ｉ２Ｓ活性が、ＡＡＶＨＳＣ１５にパッケージングされたｐＨＭ－０５２１７を１．８ｅ１４ｖｇ／ｋｇで投与した８日後にＭＰＳ ＩＩマウスから得た血清で処理したＩＤＳ ＫＯ ＨｅＬａ細胞の溶解物で検出可能であった。Ｉ２Ｓ活性が、Ｍ６Ｐが存在する場合により低かったことが見出され、いかなる理論にも拘束されることなく、Ｍ６ＰがＭ６Ｐ受容体について競合し、それ故に、インビトロでのｈＩ２Ｓの取り込みがＭ６Ｐ受容体経路によって媒介されることを示唆する。＊は、ｐ＜０．０５での統計的有意性を示し、＊＊＊は、ｐ＜０．００１での統計的有意性を示す。
本発明の範囲は、本明細書に記載の特定の実施形態によって限定されるべきではない。実際に、記載されるものに加えて本発明の様々な修正が、前述の記述及び添付の図面から当業者に明らかになるであろう。かかる修正は、添付の特許請求の範囲内に入るよう意図されている。
本明細書で引用される全ての参考文献（例えば、刊行物又は特許又は特許出願）は、個々の参考文献（例えば、刊行物又は特許又は特許出願）が各々、全ての目的のために参照によりその全体が組み込まれることを具体的かつ個別に示された場合と同じ程度に、全ての目的のために参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。他の実施形態も以下の特許請求の範囲内である。

Claims (64)

  1. 組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）であって、
    （ａ）ＡＡＶキャプシドタンパク質を含むＡＡＶキャプシドと、
    （ｂ）イントロンを含むイズロン酸－２－スルファターゼ（ＩＤＳ）イントロン挿入コード配列に作動可能に連結された転写調節エレメントを含むｒＡＡＶゲノムと、を含む、ｒＡＡＶ。
  2. 前記ＩＤＳイントロン挿入コード配列がヒトＩＤＳタンパク質をコードする、請求項１に記載のｒＡＡＶ。
  3. 前記ＩＤＳイントロン挿入コード配列が、配列番号２３に記載のアミノ酸配列をコードする、請求項１又は２に記載のｒＡＡＶ。
  4. 前記イントロンが異種イントロンである、先行請求項のいずれか一項に記載のｒＡＡＶ。
  5. 前記イントロンが、配列番号３３に記載のヌクレオチド配列と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有する、先行請求項のいずれか一項に記載のｒＡＡＶ。
  6. 前記イントロンが、配列番号２４に記載のＩＤＳコード配列の７０８位及び７０９位に対応する前記ＩＤＳイントロン挿入コード配列のヌクレオチド間に配置されている、先行請求項のいずれか一項に記載のｒＡＡＶ。
  7. 前記ＩＤＳイントロン挿入コード配列が、配列番号２５、５９、又は６０に記載のヌクレオチド配列と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む、先行請求項のいずれか一項に記載のｒＡＡＶ。
  8. 前記イントロンが、配列番号２６に記載のＩＤＳコード配列の５８０位及び５８１位に対応する前記ＩＤＳイントロン挿入コード配列のヌクレオチド間に配置されている、請求項１～５のいずれか一項に記載のｒＡＡＶ。
  9. 前記ＩＤＳイントロン挿入コード配列が、配列番号２７に記載のヌクレオチド配列と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む、請求項８に記載のｒＡＡＶ。
  10. 前記ＩＤＳイントロン挿入コード配列が、配列番号２５、２７、５９、又は６０に記載のヌクレオチド配列を含む、請求項１～５のいずれか一項に記載のｒＡＡＶ。
  11. 前記転写調節エレメントが、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーエレメント、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター、ニワトリ－β－アクチン（ＣＢＡ）プロモーター、小型ニワトリ－β－アクチン（ＳｍＣＢＡ）プロモーター、グリセルアルデヒド３－リン酸デヒドロゲナーゼ（ＧＡＰＤＨ）プロモーター、ベータ－グルクロニダーゼ（ＧＵＳＢ）プロモーター、改変ヒトＥＦ－１αプロモーター、ＣＡＬＭ１プロモーター、合成プロモーター、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択されるエレメントのうちの１つ以上を含む、先行請求項のいずれか一項に記載のｒＡＡＶ。
  12. 前記転写調節エレメントが、配列番号２９、３０、３６、３９、４０、４１、４２、４４、４６、４７、４８、又は５５に記載のヌクレオチド配列と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む、先行請求項のいずれか一項に記載のｒＡＡＶ。
  13. 前記転写調節エレメントが、配列番号２９に記載のヌクレオチド配列を含む、先行請求項のいずれか一項に記載のｒＡＡＶ。
  14. 前記ｒＡＡＶゲノムが、前記ＩＤＳイントロン挿入コード配列の３’側にポリアデニル化配列を更に含む、先行請求項のいずれか一項に記載のｒＡＡＶ。
  15. 前記ポリアデニル化配列が外因性ポリアデニル化配列である、請求項１４に記載のｒＡＡＶ。
  16. 前記外因性ポリアデニル化配列がＳＶ４０ポリアデニル化配列である、請求項１５に記載のｒＡＡＶ。
  17. 前記ＳＶ４０ポリアデニル化配列が、配列番号３４、３５、又は４５に記載のヌクレオチド配列を含む、請求項１６に記載のｒＡＡＶ。
  18. 前記ｒＡＡＶゲノムが、配列番号３７、４３、５２、５４、６１、６３、６５、６９、７５、又は７７に記載のヌクレオチド配列を含む、先行請求項のいずれか一項に記載のｒＡＡＶ。
  19. 前記ｒＡＡＶゲノムが、５’逆方向末端反復（５’ＩＴＲ）ヌクレオチド配列及び３’逆方向末端反復（３’ＩＴＲ）ヌクレオチド配列を更に含む、先行請求項のいずれか一項に記載のｒＡＡＶ。
  20. 前記５’ＩＴＲヌクレオチド配列が、配列番号１８、２０、又は４９と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有する、及び／又は前記３’ＩＴＲヌクレオチド配列が、配列番号１４、１９、２１、又は５１と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有する、請求項１９に記載のｒＡＡＶ。
  21. （ａ）前記５’ＩＴＲヌクレオチド配列が、配列番号１８と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有し、前記３’ＩＴＲヌクレオチド配列が、配列番号１４と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有する、
    （ｂ）前記５’ＩＴＲヌクレオチド配列が、配列番号１８と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有し、前記３’ＩＴＲヌクレオチド配列が、配列番号１９と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有する、
    （ｃ）前記５’ＩＴＲヌクレオチド配列が、配列番号１８と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有し、前記３’ＩＴＲヌクレオチド配列が、配列番号５１と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有する、
    （ｄ）前記５’ＩＴＲヌクレオチド配列が、配列番号４９と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有し、前記３’ＩＴＲヌクレオチド配列が、配列番号１４と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有する、
    （ｅ）前記５’ＩＴＲヌクレオチド配列が、配列番号４９と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有し、前記３’ＩＴＲヌクレオチド配列が、配列番号１９と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有する、
    （ｆ）前記５’ＩＴＲヌクレオチド配列が、配列番号４９と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有し、前記３’ＩＴＲヌクレオチド配列が、配列番号５１と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有する、又は
    （ｇ）前記５’ＩＴＲヌクレオチド配列が、配列番号２０と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有し、前記３’ＩＴＲヌクレオチド配列が、配列番号２１と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有する、請求項１９に記載のｒＡＡＶ。
  22. 前記５’ＩＴＲヌクレオチド配列及び前記３’ＩＴＲヌクレオチドが、それぞれ、配列番号１８及び１４、１８及び１９、１８及び５１、４９及び１４、４９及び１９、４９及び５１、又は２０及び２１の配列を含む、請求項１９に記載のｒＡＡＶ。
  23. 前記ｒＡＡＶゲノムが、配列番号２８、３８、５０、５３、５６、５７、５８、６２、６４、６６、７０、７１、７２、７３、又は７４に記載のヌクレオチド配列を含む、先行請求項のいずれか一項に記載のｒＡＡＶ。
  24. 前記ｒＡＡＶゲノムが、配列番号７２及び７４、７２及び２８、７３及び７４、又は７３及び２８に記載のヌクレオチド配列を含む、請求項２３に記載のｒＡＡＶ。
  25. 前記ｒＡＡＶゲノムが自己相補的である、請求項１～１８のいずれか一項に記載のｒＡＡＶ。
  26. 前記ｒＡＡＶゲノムが、配列番号３８、５０、６２、６４、６６、７０、７６、又は７８に記載のヌクレオチド配列を含む、請求項２５に記載のｒＡＡＶ。
  27. 前記ｒＡＡＶゲノムが一本鎖である、請求項１～１８のいずれか一項に記載のｒＡＡＶ。
  28. 前記ｒＡＡＶゲノムが、配列番号５３又は５８に記載のヌクレオチド配列を含む、請求項２７に記載のｒＡＡＶ。
  29. 前記ＡＡＶキャプシドタンパク質が、配列番号１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１５、１６、又は１７のアミノ酸２０３～７３６のアミノ酸配列と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、先行請求項のいずれか一項に記載のｒＡＡＶ。
  30. 配列番号１６のアミノ酸２０６に対応する前記キャプシドタンパク質中のアミノ酸がＣである、配列番号１６のアミノ酸２９６に対応する前記キャプシドタンパク質中のアミノ酸がＨである、配列番号１６のアミノ酸３１２に対応する前記キャプシドタンパク質中のアミノ酸がＱである、配列番号１６のアミノ酸３４６に対応する前記キャプシドタンパク質中のアミノ酸がＡである、配列番号１６のアミノ酸４６４に対応する前記キャプシドタンパク質中のアミノ酸がＮである、配列番号１６のアミノ酸４６８に対応する前記キャプシドタンパク質中のアミノ酸がＳである、配列番号１６のアミノ酸５０１に対応する前記キャプシドタンパク質中のアミノ酸がＩである、配列番号１６のアミノ酸５０５に対応する前記キャプシドタンパク質中のアミノ酸がＲである、配列番号１６のアミノ酸５９０に対応する前記キャプシドタンパク質中のアミノ酸がＲである、配列番号１６のアミノ酸６２６に対応する前記キャプシドタンパク質中のアミノ酸がＧ又はＹである、配列番号１６のアミノ酸６８１に対応する前記キャプシドタンパク質中のアミノ酸がＭである、配列番号１６のアミノ酸６８７に対応する前記キャプシドタンパク質中のアミノ酸がＲである、配列番号１６のアミノ酸６９０に対応する前記キャプシドタンパク質中のアミノ酸がＫである、配列番号１６のアミノ酸７０６に対応する前記キャプシドタンパク質中のアミノ酸がＣである、又は配列番号１６のアミノ酸７１８に対応する前記キャプシドタンパク質中のアミノ酸がＧである、請求項２９に記載のｒＡＡＶ。
  31. （ａ）配列番号１６のアミノ酸６２６に対応する前記キャプシドタンパク質中のアミノ酸がＧであり、配列番号１６のアミノ酸７１８に対応する前記キャプシドタンパク質中のアミノ酸がＧである、
    （ｂ）配列番号１６のアミノ酸２９６に対応する前記キャプシドタンパク質中のアミノ酸がＨであり、配列番号１６のアミノ酸４６４に対応する前記キャプシドタンパク質中のアミノ酸がＮであり、配列番号１６のアミノ酸５０５に対応する前記キャプシドタンパク質中のアミノ酸がＲであり、配列番号１６のアミノ酸６８１に対応する前記キャプシドタンパク質中のアミノ酸がＭである、
    （ｃ）配列番号１６のアミノ酸５０５に対応する前記キャプシドタンパク質中のアミノ酸がＲであり、配列番号１６のアミノ酸６８７に対応する前記キャプシドタンパク質中のアミノ酸がＲである、
    （ｄ）配列番号１６のアミノ酸３４６に対応する前記キャプシドタンパク質中のアミノ酸がＡであり、配列番号１６のアミノ酸５０５に対応する前記キャプシドタンパク質中のアミノ酸がＲである、又は
    （ｅ）配列番号１６のアミノ酸５０１に対応する前記キャプシドタンパク質中のアミノ酸がＩであり、配列番号１６のアミノ酸５０５に対応する前記キャプシドタンパク質中のアミノ酸がＲであり、配列番号１６のアミノ酸７０６に対応する前記キャプシドタンパク質中のアミノ酸がＣである、請求項３０に記載のｒＡＡＶ。
  32. 前記キャプシドタンパク質が、配列番号１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１５、１６、又は１７のアミノ酸２０３～７３６のアミノ酸配列を含む、請求項２９に記載のｒＡＡＶ。
  33. 前記ＡＡＶキャプシドタンパク質が、配列番号１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１５、１６、又は１７のアミノ酸１３８～７３６のアミノ酸配列と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、先行請求項のいずれか一項に記載のｒＡＡＶ。
  34. 配列番号１６のアミノ酸１５１に対応する前記キャプシドタンパク質中のアミノ酸がＲである、配列番号１６のアミノ酸１６０に対応する前記キャプシドタンパク質中のアミノ酸がＤである、配列番号１６のアミノ酸２０６に対応する前記キャプシドタンパク質中のアミノ酸がＣである、配列番号１６のアミノ酸２９６に対応する前記キャプシドタンパク質中のアミノ酸がＨである、配列番号１６のアミノ酸３１２に対応する前記キャプシドタンパク質中のアミノ酸がＱである、配列番号１６のアミノ酸３４６に対応する前記キャプシドタンパク質中のアミノ酸がＡである、配列番号１６のアミノ酸４６４に対応する前記キャプシドタンパク質中のアミノ酸がＮである、配列番号１６のアミノ酸４６８に対応する前記キャプシドタンパク質中のアミノ酸がＳである、配列番号１６のアミノ酸５０１に対応する前記キャプシドタンパク質中のアミノ酸がＩである、配列番号１６のアミノ酸５０５に対応する前記キャプシドタンパク質中のアミノ酸がＲである、配列番号１６のアミノ酸５９０に対応する前記キャプシドタンパク質中のアミノ酸がＲである、配列番号１６のアミノ酸６２６に対応する前記キャプシドタンパク質中のアミノ酸がＧ又はＹである、配列番号１６のアミノ酸６８１に対応する前記キャプシドタンパク質中のアミノ酸がＭである、配列番号１６のアミノ酸６８７に対応する前記キャプシドタンパク質中のアミノ酸がＲである、配列番号１６のアミノ酸６９０に対応する前記キャプシドタンパク質中のアミノ酸がＫである、配列番号１６のアミノ酸７０６に対応する前記キャプシドタンパク質中のアミノ酸がＣである、又は配列番号１６のアミノ酸７１８に対応する前記キャプシドタンパク質中のアミノ酸がＧである、請求項３３に記載のｒＡＡＶ。
  35. （ａ）配列番号１６のアミノ酸６２６に対応する前記キャプシドタンパク質中のアミノ酸がＧであり、配列番号１６のアミノ酸７１８に対応する前記キャプシドタンパク質中のアミノ酸がＧである、
    （ｂ）配列番号１６のアミノ酸２９６に対応する前記キャプシドタンパク質中のアミノ酸がＨであり、配列番号１６のアミノ酸４６４に対応する前記キャプシドタンパク質中のアミノ酸がＮであり、配列番号１６のアミノ酸５０５に対応する前記キャプシドタンパク質中のアミノ酸がＲであり、配列番号１６のアミノ酸６８１に対応する前記キャプシドタンパク質中のアミノ酸がＭである、
    （ｃ）配列番号１６のアミノ酸５０５に対応する前記キャプシドタンパク質中のアミノ酸がＲであり、配列番号１６のアミノ酸６８７に対応する前記キャプシドタンパク質中のアミノ酸がＲである、
    （ｄ）配列番号１６のアミノ酸３４６に対応する前記キャプシドタンパク質中のアミノ酸がＡであり、配列番号１６のアミノ酸５０５に対応する前記キャプシドタンパク質中のアミノ酸がＲである、又は
    （ｅ）配列番号１６のアミノ酸５０１に対応する前記キャプシドタンパク質中のアミノ酸がＩであり、配列番号１６のアミノ酸５０５に対応する前記キャプシドタンパク質中のアミノ酸がＲであり、配列番号１６のアミノ酸７０６に対応する前記キャプシドタンパク質中のアミノ酸がＣである、請求項３４に記載のｒＡＡＶ。
  36. 前記キャプシドタンパク質が、配列番号１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１５、１６、又は１７のアミノ酸１３８～７３６のアミノ酸配列を含む、請求項３３に記載のｒＡＡＶ。
  37. 前記ＡＡＶキャプシドタンパク質が、配列番号１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１５、１６、又は１７のアミノ酸１～７３６のアミノ酸配列と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、先行請求項のいずれか一項に記載のｒＡＡＶ。
  38. 配列番号１６のアミノ酸２に対応する前記キャプシドタンパク質中のアミノ酸がＴである、配列番号１６のアミノ酸６５に対応する前記キャプシドタンパク質中のアミノ酸がＩである、配列番号１６のアミノ酸６８に対応する前記キャプシドタンパク質中のアミノ酸がＶである、配列番号１６のアミノ酸７７に対応する前記キャプシドタンパク質中のアミノ酸がＲである、配列番号１６のアミノ酸１１９に対応する前記キャプシドタンパク質中のアミノ酸がＬである、配列番号１６のアミノ酸１５１に対応する前記キャプシドタンパク質中のアミノ酸がＲである、配列番号１６のアミノ酸１６０に対応する前記キャプシドタンパク質中のアミノ酸がＤである、配列番号１６のアミノ酸２０６に対応する前記キャプシドタンパク質中のアミノ酸がＣである、配列番号１６のアミノ酸２９６に対応する前記キャプシドタンパク質中のアミノ酸がＨである、配列番号１６のアミノ酸３１２に対応する前記キャプシドタンパク質中のアミノ酸がＱである、配列番号１６のアミノ酸３４６に対応する前記キャプシドタンパク質中のアミノ酸がＡである、配列番号１６のアミノ酸４６４に対応する前記キャプシドタンパク質中のアミノ酸がＮである、配列番号１６のアミノ酸４６８に対応する前記キャプシドタンパク質中のアミノ酸がＳである、配列番号１６のアミノ酸５０１に対応する前記キャプシドタンパク質中のアミノ酸がＩである、配列番号１６のアミノ酸５０５に対応する前記キャプシドタンパク質中のアミノ酸がＲである、配列番号１６のアミノ酸５９０に対応する前記キャプシドタンパク質中のアミノ酸がＲである、配列番号１６のアミノ酸６２６に対応する前記キャプシドタンパク質中のアミノ酸がＧ又はＹである、配列番号１６のアミノ酸６８１に対応する前記キャプシドタンパク質中のアミノ酸がＭである、配列番号１６のアミノ酸６８７に対応する前記キャプシドタンパク質中のアミノ酸がＲである、配列番号１６のアミノ酸６９０に対応する前記キャプシドタンパク質中のアミノ酸がＫである、配列番号１６のアミノ酸７０６に対応する前記キャプシドタンパク質中のアミノ酸がＣである、又は配列番号１６のアミノ酸７１８に対応する前記キャプシドタンパク質中のアミノ酸がＧである、請求項３７に記載のｒＡＡＶ。
  39. （ａ）配列番号１６のアミノ酸２に対応する前記キャプシドタンパク質中のアミノ酸がＴであり、配列番号１６のアミノ酸３１２に対応する前記キャプシドタンパク質中のアミノ酸がＱである、
    （ｂ）配列番号１６のアミノ酸６５に対応する前記キャプシドタンパク質中のアミノ酸がＩであり、配列番号１６のアミノ酸６２６に対応する前記キャプシドタンパク質中のアミノ酸がＹである、
    （ｃ）配列番号１６のアミノ酸７７に対応する前記キャプシドタンパク質中のアミノ酸がＲであり、配列番号１６のアミノ酸６９０に対応する前記キャプシドタンパク質中のアミノ酸がＫである、
    （ｄ）配列番号１６のアミノ酸１１９に対応する前記キャプシドタンパク質中のアミノ酸がＬであり、配列番号１６のアミノ酸４６８に対応する前記キャプシドタンパク質中のアミノ酸がＳである、
    （ｅ）配列番号１６のアミノ酸６２６に対応する前記キャプシドタンパク質中のアミノ酸がＧであり、配列番号１６のアミノ酸７１８に対応する前記キャプシドタンパク質中のアミノ酸がＧである、
    （ｆ）配列番号１６のアミノ酸２９６に対応する前記キャプシドタンパク質中のアミノ酸がＨであり、配列番号１６のアミノ酸４６４に対応する前記キャプシドタンパク質中のアミノ酸がＮであり、配列番号１６のアミノ酸５０５に対応する前記キャプシドタンパク質中のアミノ酸がＲであり、配列番号１６のアミノ酸６８１に対応する前記キャプシドタンパク質中のアミノ酸がＭである、
    （ｇ）配列番号１６のアミノ酸５０５に対応する前記キャプシドタンパク質中のアミノ酸がＲであり、配列番号１６のアミノ酸６８７に対応する前記キャプシドタンパク質中のアミノ酸がＲである、
    （ｈ）配列番号１６のアミノ酸３４６に対応する前記キャプシドタンパク質中のアミノ酸がＡであり、配列番号１６のアミノ酸５０５に対応する前記キャプシドタンパク質中のアミノ酸がＲである、又は
    （ｉ）配列番号１６のアミノ酸５０１に対応する前記キャプシドタンパク質中のアミノ酸がＩであり、配列番号１６のアミノ酸５０５に対応する前記キャプシドタンパク質中のアミノ酸がＲであり、配列番号１６のアミノ酸７０６に対応する前記キャプシドタンパク質中のアミノ酸がＣである、請求項３８に記載のｒＡＡＶ。
  40. 前記キャプシドタンパク質が、配列番号１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１５、１６、又は１７のアミノ酸１～７３６のアミノ酸配列を含む、請求項３７に記載のｒＡＡＶ。
  41. 細胞内でイズロン酸－２－スルファターゼ（ＩＤＳ）ポリペプチドを発現させるための方法であって、前記細胞に、先行請求項のいずれか一項に記載の組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）を形質導入することを含む、方法。
  42. 前記細胞が中枢神経系細胞である、請求項４１に記載の方法。
  43. 前記細胞が、脊髄、運動野、感覚野、海馬、被殻、小脳、任意選択的に小脳核、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される中枢神経系領域の細胞である、請求項４１に記載の方法。
  44. 前記細胞がニューロン又はグリア細胞であり、任意選択的に、前記細胞が中枢神経系又は末梢神経系のニューロン又はグリア細胞である、請求項４１に記載の方法。
  45. 前記細胞が、運動ニューロン、星状細胞、オリゴデンドロサイト、中枢神経系の大脳皮質細胞、末梢神経系の感覚ニューロン、シュワン細胞、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される細胞である、請求項４１に記載の方法。
  46. 前記細胞が、肝臓細胞、心臓細胞、肺細胞、腎臓細胞、又は脾臓細胞である、請求項４１に記載の方法。
  47. 前記細胞が哺乳類対象に存在し、前記ｒＡＡＶが、前記対象における前記細胞に形質導入するのに有効な量で前記対象に投与される、請求項４１～４６のいずれか一項に記載の方法。
  48. 請求項１～４０のいずれか一項に記載のｒＡＡＶを含む、医薬組成物。
  49. ハンター症候群（ＨＳ）を有する対象を治療するための方法であって、前記対象に、有効量の請求項１～４０のいずれか一項に記載のｒＡＡＶ又は請求項４８に記載の医薬組成物を投与することを含む、方法。
  50. 前記ｒＡＡＶ又は前記医薬組成物が静脈内投与される、請求項４９に記載の方法。
  51. ハンター症候群（ＨＳ）が、イズロン酸－２－スルファターゼ（ＩＤＳ）遺伝子変異に関連する、請求項４９又は５０に記載の方法。
  52. 前記対象がヒト対象である、請求項４９～５１のいずれか一項に記載の方法。
  53. ｒＡＡＶの調製のためのパッケージング系であって、
    （ａ）１つ以上のＡＡＶ Ｒｅｐタンパク質をコードする第１のヌクレオチド配列と、
    （ｂ）請求項１～４０のいずれか一項に記載のｒＡＡＶのキャプシドタンパク質をコードする第２のヌクレオチド配列と、
    （ｃ）請求項１～４０のいずれか一項に記載のｒＡＡＶのｒＡＡＶゲノム配列を含む第３のヌクレオチド配列と、を含む、パッケージング系。
  54. 前記パッケージング系が、前記第１のヌクレオチド配列及び前記第２のヌクレオチド配列を含む第１のベクターと、前記第３のヌクレオチド配列を含む第２のベクターと、を含む、請求項５３に記載のパッケージング系。
  55. １つ以上のヘルパーウイルス遺伝子を含む第４のヌクレオチド配列を更に含む、請求項５３又は５４に記載のパッケージング系。
  56. 前記第４のヌクレオチド配列が第３のベクター内に含まれている、請求項５５に記載のパッケージング系。
  57. 前記第４のヌクレオチド配列が、アデノウイルス、ヘルペスウイルス、ワクシニアウイルス、及びサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）からなる群から選択されるウイルス由来の１つ以上の遺伝子を含む、請求項５５又は５６に記載のパッケージング系。
  58. 前記第１のベクター、前記第２のベクター、及び／又は前記第３のベクターがプラスミドである、請求項５３～５７のいずれか一項に記載のパッケージング系。
  59. ｒＡＡＶの組換え調製のための方法であって、前記ｒＡＡＶが産生される条件下で請求項５３～５８のいずれか一項に記載のパッケージング系を細胞に導入することを含む、方法。
  60. 配列番号２５、２６、２７、３７、３８、４３、５０、５２、５３、５４、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７５、７６、７７、又は７８に記載のヌクレオチド配列と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有する核酸配列を含むポリヌクレオチドであって、任意選択的に、ウイルスベクター又はプラスミドベクター内に含まれている、ポリヌクレオチド。
  61. 請求項６０に記載のポリヌクレオチドを含む、組換え細胞。
  62. 薬剤としての使用のための、請求項１～４０のいずれか一項に記載のｒＡＡＶ、請求項４８に記載の医薬組成物、請求項６０に記載のポリヌクレオチド、又は請求項６１に記載の組換え細胞。
  63. ハンター症候群（ＨＳ）の治療における使用のための、請求項１～４０のいずれか一項に記載のｒＡＡＶ、請求項４８に記載の医薬組成物、請求項６０に記載のポリヌクレオチド、又は請求項６１に記載の組換え細胞。
  64. ハンター症候群（ＨＳ）を有する対象を治療する方法であって、前記対象に、有効量の前記ｒＡＡＶ、前記医薬組成物、前記ポリヌクレオチド、又は前記細胞を投与することを含む、方法における使用のための、請求項１～４０のいずれか一項に記載のｒＡＡＶ、請求項４８に記載の医薬組成物、請求項６０に記載のポリヌクレオチド、又は請求項６１に記載の組換え細胞。
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