JP2023521491A - グルカゴン、ｇｌｐ－１及びｇｉｐ受容体の全てに対して活性を有する三重活性体又はその結合体を含む高脂血症の予防又は治療用薬学的組成物及び予防又は治療方法 - Google Patents

Abstract

本発明は、グルカゴン、ＧＬＰ－１及びＧＩＰ受容体の全てに対して活性を有する三重活性体及び／又はその持続型結合体の高脂血症に対する予防又は治療的用途に関する。

Description

本発明はグルカゴン、ＧＬＰ－１及びＧＩＰ受容体の全てに対して活性を有する三重活性体又はその結合体の高脂血症に対する治療的用途に関する。

脂肪質には、代表的にコレステロールと中性脂肪があり、このうちコレステロールは低密度リポタンパク（ＬＤＬ）コレステロールと高密度リポタンパク（ＨＤＬ）コレステロールに分けられる。これに関連し、血液内にコレステロールと中性脂肪の数値が正常範囲から外れている（増加及び減少の両方を含む）状態である脂質異常症と血液内に総コレステロールが高い状態である高コレステロール血症とは異なり、高脂血症（ｈｙｐｅｒｌｉｐｉｄｅｍｉａ）は、血液内に低密度リポタンパクコレステロールや中性脂肪のうち、いずれかが高いか、両方とも高い場合を総称する疾患であり、脂質異常症及び高コレステロール血症と区分される疾患である。これにより、これらの疾患において発病メカニズム及び患者の状態が互いに異なり、互いに異なる治療及び食事調節方法が要求される。例えば、体内脂質水準の調節異常により発病する疾患であって、脂質異常症の場合、非正常に低いコレステロール数値が問題になることがあるが、高脂血症とは異なり、健康補助食品摂取のような食事療法を通じて生体活動に必須なコレステロールの数値を増加させることが重要である。

血液内に低密度リポタンパクコレステロール及び／又は中性脂肪が非正常に高い場合、血管壁にたまって炎症を起こし、その結果、心血管疾患（ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ ｄｉｓｅａｓｅ）、脳血管疾患（Ｃｅｒｅｂｒｏｖａｓｃｕｌａｒ ｄｉｓｅａｓｅｓ）、末梢動脈疾患（ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌａｒｔｅｒｉａｌ ｄｉｓｅａｓｅ）を引き起こす原因となる。このうち、心血管疾患及び脳血管疾患は、癌と共に韓国の３大死亡原因である。高脂血症は西欧式食習慣による肥満人口が増加するにつれて増加している傾向であり、韓国内でも高脂血症患者が毎年約１０％ずつ増加する傾向である。このような高脂血症の病因としては、肥満、飲酒などに起因することが知られている。その中で最大の病因として肥満を挙げる。

このような高脂血症を予防及び／又は治療するために血中脂質の改善に多くの努力をしている。例えば、ＨＭＧＣＲ（ＨＭＧ－ＣｏＡ ｒｅｄｕｃｔａｓｅ）抑制剤として作用し、コレステロールの合成を阻害する効果を有するｓｔａｔｉｎと小腸でＮＰＣ１Ｌ１（Ｎｉｅｍａｎｎ－Ｐｉｃｋ Ｃ１－Ｌｉｋｅ １）を抑制してコレステロールの再吸収を抑制する効果を有するｅｚｅｔｉｍｉｂｅ、そしてＬＤＬ吸収を妨害するＰＣＳＫ９（Ｐｒｏｐｒｏｔｅｉｎ ｃｏｎｖｅｒｔａｓｅ ｓｕｂｔｉｌｉｓｉｎ／ｋｅｘｉｎ ｔｙｐｅ ９）を抑制するｅｖｏｌｏｃｕｍａｂの開発が完了して治療剤として使われている。（ＵＳ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ、２０１１；７（１）：２３－９、Ａｍ Ｊ Ｐｈａｒｍ Ｂｅｎｅｆｉｔｓ． ２０１０；２（４）：２６７－２７４、Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ ２０１４； ３７０：１８０９－１８１９）

しかし、ｓｔａｔｉｎ系列の薬物を利用した治療の場合、十分にコレステロールを調節できない時が多いだけでなく、高用量又は長期間使用する場合、肝毒性及び筋肉病症を誘発する恐れがあるという短所がある。Ｅｚｅｔｉｍｉｂｅは、臨床で血中脂質改善に対する効力が既存の薬物に比べて顕著に低いという短所を有している。Ｅｖｏｌｏｃｕｍａｂの場合、ＬＤＬＲ（ＬＤＬ ｒｅｃｅｐｔｏｒ）遺伝的変異のある患者には効力が足りないという報告がある。上述したように、現在商用化された薬物の場合、単一標的にのみ作用するため、遺伝的変異を有する患者や、超危険群高脂血症患者における血中脂質除去には効果的ではない。したがって、幅広い高脂血症患者に効能を示すことができる、多重標的を有する薬物の開発が依然として要求されている。

一方、ＧＬＰ－１（Ｇｌｕｃａｇｏｎ－ｌｉｋｅ ｐｅｐｔｉｄｅ－１）及びＧＩＰ（Ｇｌｕｃｏｓｅ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｉｎｓｕｌｉｏｎｔｒｏｐｉｃ ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ）は代表的な胃腸ホルモンであり、神経ホルモンとして食物摂取による血中糖濃度の調節に関与する物質である。グルカゴン（Ｇｌｕｃａｇｏｎ）は、膵臓から分泌されるペプチドホルモンであり、前述した両物質とともに血中糖濃度調節作用及び脂質代謝に関与する。

詳しくは、ＧＬＰ－１は、食べ物の摂取に刺激を受けて小腸から分泌されるホルモンであり、血糖濃度依存的に膵臓におけるインスリン分泌を促進し、血糖濃度を下げる作用を助ける。また、満腹因子として作用して胃腸の消化作用を遅らせ、食べ物の消化物の胃腸通過時間を遅延させて食べ物の摂取を減らす役割を有する。さらに、ラットに投与すると、食べ物の摂取抑制と体重減少効果があることが報告され、このような効果は、正常と肥満状態の両方で同様に現れることが確認され、肥満治療剤としての可能性を示した。

ＧＬＰ－１と共に食べ物の摂取に刺激を受けて分泌される胃腸ホルモンの一つであるＧＩＰは、小腸のＫ細胞から分泌される４２個のアミノ酸で構成されたホルモンであり、小腸で吸収された脂質を小腸細胞（ｅｎｔｅｒｏｃｙｔｅ）でＡｐｏＢ４８（Ａｐｏｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ Ｂ ４８）を抑制することにより、毛細血管への脂質放出を下げるのに役立つ機能を遂行し、ＧＬＰ－１の活性増加効果、抗炎症効果などが報告された。

グルカゴンは、薬物治療又は疾病、ホルモンや酵素欠乏などの原因により血糖値が下がり始めれば膵臓で生産される。グルカゴンは肝臓に信号してグリコーゲンを分解してグルコースを放出するよう誘導し、血糖水準を正常水準まで高める役割をする。また、グルカゴンは血糖上昇効果以外に動物とヒトにおいて食欲抑制、脂肪細胞の褐色化及びエネルギー代謝（ｅｎｅｒｇｙ ｅｘｐｅｎｄｉｔｕｒｅ）が促進できることが報告された。

国際特許公開第ＷＯ９７／３４６３１号 国際特許公開第９６／３２４７８号

ＵＳ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ、２０１１；７（１）：２３－９ Ａｍ Ｊ Ｐｈａｒｍ Ｂｅｎｅｆｉｔｓ． ２０１０；２（４）：２６７－２７４ Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ ２０１４； ３７０：１８０９－１８１９ Ｈ．Ｎｅｕｒａｔｈ， Ｒ．Ｌ．Ｈｉｌｌ， Ｔｈｅ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ， Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， １９７９

本発明の一つの目的は、グルカゴン受容体、ＧＬＰ－１（Ｇｌｕｃａｇｏｎ－ｌｉｋｅ ｐｅｐｔｉｄｅ－１）受容体、及びＧＩＰ（Ｇｌｕｃｏｓｅ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｉｎｓｕｌｉｏｎｔｒｏｐｉｃ ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ）受容体に対して活性を有するペプチド又は結合体を含む高脂血症の予防又は治療用薬学的組成物を提供することにある。

本発明の他の目的は、前記ペプチド、結合体又はこれを含む組成物を、これを必要とする個体に投与する段階を含む、高脂血症の予防又は治療方法を提供することにある。
本発明の他の目的は、高脂血症の予防又は治療のための薬剤の製造において、前記ペプチド、結合体又はこれを含む組成物の用途を提供することにある。

本発明を具現する一つの様態は、グルカゴン受容体、ＧＬＰ－１（Ｇｌｕｃａｇｏｎ－ｌｉｋｅ ｐｅｐｔｉｄｅ－１）受容体、及びＧＩＰ（Ｇｌｕｃｏｓｅ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｉｎｓｕｌｉｏｎｔｒｏｐｉｃ ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ）受容体に対して活性を有するペプチドを含む高脂血症の予防又は治療用薬学的組成物である。

一つの具体例として、前記ペプチドで追加されるアミノ酸配列は、天然ＧＬＰ－１、天然ＧＩＰ、又は天然エキセンジン－４アミノ酸配列に由来することを特徴とする。
他の具体例として、前記ペプチドは、下記一般式１で表されるアミノ酸配列を含むペプチドであることを特徴とする：

Ｘａａ１－Ｘａａ２－Ｘａａ３－Ｇｌｙ－Ｔｈｒ－Ｐｈｅ－Ｘａａ７－Ｓｅｒ－Ａｓｐ－Ｘａａ１０－Ｓｅｒ－Ｘａａ１２－Ｘａａ１３－Ｘａａ１４－Ｘａａ１５－Ｘａａ１６－Ｘａａ１７－Ｘａａ１８－Ｘａａ１９－Ｘａａ２０－Ｘａａ２１－Ｐｈｅ－Ｘａａ２３－Ｘａａ２４－Ｔｒｐ－Ｌｅｕ－Ｘａａ２７－Ｘａａ２８－Ｘａａ２９－Ｘａａ３０－Ｒ１（一般式１、配列番号１０３）

上記一般式１において、Ｘａａ１はヒスチジン（Ｈｉｓ、Ｈ）、４－イミダゾアセチル（ＣＡ）、又はチロシン（Ｔｙｒ、Ｙ）であり、Ｘａａ２はグリシン（Ｇｌｙ、Ｇ）、α－メチルグルタミン酸、又はＡｉｂ（ａｍｉｎｏｉｓｏｂｕｔｙｒｉｃ ａｃｉｄ）であり、Ｘａａ３はグルタミン酸（Ｇｌｕ、Ｅ）又はグルタミン（Ｇｌｎ、Ｑ）であり、Ｘａａ７はトレオニン（Ｔｈｒ、Ｔ）又はイソロイシン（Ｉｌｅ、Ｉ）であり、Ｘａａ１０はロイシン（Ｌｅｕ、Ｌ）、チロシン（Ｔｙｒ、Ｙ）、リシン（Ｌｙｓ、Ｋ）、システイン（Ｃｙｓ、Ｃ）、又はバリン（Ｖａｌ、Ｖ）であり、Ｘａａ１２はリシン（Ｌｙｓ、Ｋ）、セリン（Ｓｅｒ、Ｓ）、又はイソロイシン（Ｉｌｅ、Ｉ）であり、Ｘａａ１３はグルタミン（Ｇｌｎ、Ｑ）、チロシン（Ｔｙｒ、Ｙ）、アラニン（Ａｌａ、Ａ）、又はシステイン（Ｃｙｓ、Ｃ）であり、Ｘａａ１４はロイシン（Ｌｅｕ、Ｌ）、メチオニン（Ｍｅｔ、Ｍ）、又はチロシン（Ｔｙｒ、Ｙ）であり、Ｘａａ１５はシステイン（Ｃｙｓ、Ｃ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ、Ｄ）、グルタミン酸（Ｇｌｕ、Ｅ）、又はロイシン（Ｌｅｕ、Ｌ）であり、Ｘａａ１６はグリシン（Ｇｌｙ、Ｇ）、グルタミン酸（Ｇｌｕ、Ｅ）、又はセリン（Ｓｅｒ、Ｓ）であり、Ｘａａ１７はグルタミン（Ｇｌｎ、Ｑ）、アルギニン（Ａｒｇ、Ｒ）、イソロイシン（Ｉｌｅ、Ｉ）、グルタミン酸（Ｇｌｕ、Ｅ）、システイン（Ｃｙｓ、Ｃ）、又はリシン（Ｌｙｓ、Ｋ）であり、Ｘａａ１８はアラニン（Ａｌａ、Ａ）、グルタミン（Ｇｌｎ、Ｑ）、アルギニン（Ａｒｇ、Ｒ）、又はヒスチジン（Ｈｉｓ、Ｈ）であり、Ｘａａ１９はアラニン（Ａｌａ、Ａ）、グルタミン（Ｇｌｎ、Ｑ）、システイン（Ｃｙｓ、Ｃ）、又はバリン（Ｖａｌ、Ｖ）であり、Ｘａａ２０はリシン（Ｌｙｓ、Ｋ）、グルタミン（Ｇｌｎ、Ｑ）、又はアルギニン（Ａｒｇ、Ｒ）であり、Ｘａａ２１はグルタミン酸（Ｇｌｕ、Ｅ）、グルタミン（Ｇｌｎ、Ｑ）、ロイシン（Ｌｅｕ、Ｌ）、システイン（Ｃｙｓ、Ｃ）、又はアスパラギン酸（Ａｓｐ、Ｄ）であり、Ｘａａ２３はイソロイシン（Ｉｌｅ、Ｉ）又はバリン（Ｖａｌ、Ｖ）であり、Ｘａａ２４はアラニン（Ａｌａ、Ａ）、グルタミン（Ｇｌｎ、Ｑ）、システイン（Ｃｙｓ、Ｃ）、アスパラギン（Ａｓｎ、Ｎ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ、Ｄ）、又はグルタミン酸（Ｇｌｕ、Ｅ）であり、Ｘａａ２７はバリン（Ｖａｌ、Ｖ）、ロイシン（Ｌｅｕ、Ｌ）、リシン（Ｌｙｓ、Ｋ）、又はメチオニン（Ｍｅｔ、Ｍ）であり、Ｘａａ２８はシステイン（Ｃｙｓ、Ｃ）、リシン（Ｌｙｓ、Ｋ）、アラニン（Ａｌａ、Ａ）、アスパラギン（Ａｓｎ、Ｎ）、又はアスパラギン酸（Ａｓｐ、Ｄ）であり、Ｘａａ２９はシステイン（Ｃｙｓ、Ｃ）、グリシン（Ｇｌｙ、Ｇ）、グルタミン（Ｇｌｎ、Ｑ）、トレオニン（Ｔｈｒ、Ｔ）、グルタミン酸（Ｇｌｕ、Ｅ）、又はヒスチジン（Ｈｉｓ、Ｈ）であり、Ｘａａ３０はシステイン（Ｃｙｓ、Ｃ）、グリシン（Ｇｌｙ、Ｇ）、リシン（Ｌｙｓ、Ｋ）、又はヒスチジン（Ｈｉｓ、Ｈ）であるか、又は存在せず、
Ｒ１はシステイン（Ｃｙｓ、Ｃ）、ＧＫＫＮＤＷＫＨＮＩＴ（配列番号１０６）、ｍ－ＳＳＧＡＰＰＰＳ－ｎ（配列番号１０７）、又はｍ－ＳＳＧＱＰＰＰＳ－ｎ（配列番号１０８）であるか、又は存在せず、ここで、ｍは－Ｃｙｓ－、－Ｐｒｏ－、又は－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－であり、ｎは－Ｃｙｓ－、－Ｇｌｙ－、－Ｓｅｒ－、又は－Ｈｉｓ－Ｇｌｙ－であるか、又は存在しないことを特徴とする。

前述した具体例のいずれか一つによる組成物において、前記ペプチドは、上記一般式１において、Ｘａａ１４はロイシン又はメチオニンであり、Ｘａａ１５はシステイン、アスパラギン酸又はロイシンであることを特徴とする。

前述した具体例のいずれか一つによる組成物において、前記ペプチドは、上記一般式１において、Ｘａａ２はグリシン、α－メチルグルタミン酸、又はＡｉｂであり、Ｘａａ７はトレオニンであり、Ｘａａ１０はチロシン、システイン、又はバリンであり、Ｘａａ１２はリシン又はイソロイシンであり、Ｘａａ１３はチロシン、アラニン、グルタミン、又はシステインであり、Ｘａａ１４はロイシン、システイン、又はメチオニンであり、Ｘａａ１５はシステイン、ロイシン、グルタミン酸、又はアスパラギン酸であり、Ｘａａ１７はグルタミン、アルギニン、イソロイシン、システイン、グルタミン酸、又はリシンであり、Ｘａａ１８はアラニン、グルタミン、アルギニン、又はヒスチジンであり、Ｘａａ１９はアラニン、グルタミン、バリン、又はシステインであり、Ｘａａ２０はリシン、アルギニン、又はグルタミンであり、Ｘａａ２１はグルタミン酸、グルタミン、ロイシン、システイン、又はアスパラギン酸であり、Ｘａａ２３はイソロイシン又はバリンであり、Ｘａａ２４はシステイン、アラニン、グルタミン、アスパラギン、グルタミン酸、又はアスパラギン酸であり、Ｘａａ２７はロイシン又はリシンであることを特徴とする。

前述した具体例のいずれか一つによる組成物において、前記ペプチドは、下記一般式２で表されるアミノ酸配列を含むペプチドであることを特徴とする。

Ｘａａ１－Ｘａａ２－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｔｈｒ－Ｐｈｅ－Ｔｈｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｐ－Ｘａａ１０－Ｓｅｒ－Ｌｙｓ－Ｘａａ１３－Ｘａａ１４－Ｘａａ１５－Ｘａａ１６－Ｘａａ１７－Ｘａａ１８－Ｘａａ１９－Ｘａａ２０－Ｘａａ２１－Ｐｈｅ－Ｘａａ２３－Ｘａａ２４－Ｔｒｐ－Ｌｅｕ－Ｌｅｕ－Ｘａａ２８－Ｘａａ２９－Ｘａａ３０－Ｘａａ３１－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ｇｌｎ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｓｅｒ－Ｘａａ４０（一般式２、配列番号１０４）

上記一般式２において、Ｘａａ１は４－イミダゾアセチル、ヒスチジン、又はチロシンであり、Ｘａａ２はグリシン、α－メチルグルタミン酸、又はＡｉｂであり、Ｘａａ１０はチロシン、又はシステインであり、Ｘａａ１３はアラニン、グルタミン、チロシン、又はシステインであり、Ｘａａ１４はロイシン、メチオニン、又はチロシンであり、Ｘａａ１５はアスパラギン酸、グルタミン酸、又はロイシンであり、Ｘａａ１６はグリシン、グルタミン酸、又はセリンであり、Ｘａａ１７はグルタミン、アルギニン、イソロイシン、グルタミン酸、システイン、又はリシンであり、Ｘａａ１８はアラニン、グルタミン、アルギニン、又はヒスチジンであり、Ｘａａ１９はアラニン、グルタミン、システイン、又はバリンであり、Ｘａａ２０はリシン、グルタミン、又はアルギニンであり、Ｘａａ２１はシステイン、グルタミン酸、グルタミン、ロイシン、又はアスパラギン酸であり、Ｘａａ２３はイソロイシン又はバリンであり、Ｘａａ２４はシステイン、アラニン、グルタミン、アスパラギン、又はグルタミン酸であり、Ｘａａ２８はリシン、システイン、アスパラギン、又はアスパラギン酸であり、Ｘａａ２９はグリシン、グルタミン、システイン、又はヒスチジンであり、Ｘａａ３０はシステイン、グリシン、リシン、又はヒスチジンであり、Ｘａａ３１はプロリン又はシステインであり、Ｘａａ４０はシステインであるか、又は存在しないことを特徴とする。

前述した具体例のいずれか一つによる組成物において、前記ペプチドは、上記一般式１において、Ｘａａ２はグリシン、α－メチルグルタミン酸、又はＡｉｂであり、Ｘａａ７はトレオニンであり、Ｘａａ１０はチロシン、システイン、又はバリンであり、Ｘａａ１２はリシン又はイソロイシンであり、Ｘａａ１３はチロシン、アラニン、又はシステインであり、Ｘａａ１４はロイシン又はメチオニンであり、Ｘａａ１５はシステイン又はアスパラギン酸であり、Ｘａａ１７はグルタミン、アルギニン、イソロイシン、システイン、又はリシンであり、Ｘａａ１８はアラニン、アルギニン、又はヒスチジンであり、Ｘａａ１９はアラニン、グルタミン、又はシステインであり、Ｘａａ２０はリシン又はグルタミンであり、Ｘａａ２１はグルタミン酸、システイン、又はアスパラギン酸であり、Ｘａａ２３はバリンであり、Ｘａａ２４はアラニン、グルタミン、システイン、アスパラギン、又はアスパラギン酸であり、Ｘａａ２７はロイシン又はリシンであることを特徴とする。

前述した具体例のいずれか一つによる組成物において、前記ペプチドは、上記一般式２において、Ｘａａ１３はアラニン、チロシン、又はシステインであり、Ｘａａ１５はアスパラギン酸又はグルタミン酸であり、Ｘａａ１７はグルタミン、アルギニン、システイン、又はリシンであり、Ｘａａ１８はアラニン、アルギニン、又はヒスチジンであり、Ｘａａ２１はシステイン、グルタミン酸、グルタミン、又はアスパラギン酸であり、Ｘａａ２３はイソロイシン又はバリンであり、Ｘａａ２４はシステイン、グルタミン、又はアスパラギンであり、Ｘａａ２８はシステイン、アスパラギン、又はアスパラギン酸であり、Ｘａａ２９はグルタミン、システイン、又はヒスチジンであり、Ｘａａ３０はシステイン、リシン、又はヒスチジンであることを特徴とする。

前述した具体例のいずれか一つによる組成物において、前記ペプチドは、上記一般式１において、Ｘａａ２はα－メチルグルタミン酸又はＡｉｂであり、Ｘａａ７はトレオニンであり、Ｘａａ１０はチロシン又はシステインであり、Ｘａａ１２はリシン又はイソロイシンであり、Ｘａａ１３はチロシン、アラニン、又はシステインであり、Ｘａａ１４はロイシン又はメチオニンであり、Ｘａａ１５はシステイン又はアスパラギン酸であり、Ｘａａ１６はグルタミン酸であり、Ｘａａ１７はアルギニン、イソロイシン、システイン、又はリシンであり、Ｘａａ１８はアラニン、アルギニン、又はヒスチジンであり、Ｘａａ１９はアラニン、グルタミン、又はシステインであり、Ｘａａ２０はリシン又はグルタミンであり、Ｘａａ２１はグルタミン酸又はアスパラギン酸であり、Ｘａａ２３はバリンであり、Ｘａａ２４はグルタミン、アスパラギン、又はアスパラギン酸であり、Ｘａａ２７はロイシンであり、Ｘａａ２８はシステイン、アラニン、アスパラギン、又はアスパラギン酸であることを特徴とする。

前述した具体例のいずれか一つによる組成物において、前記ペプチドは、上記一般式１において、Ｘａａ１はヒスチジン又は４－イミダゾアセチルであり、Ｘａａ２はα－メチルグルタミン酸又はＡｉｂであり、Ｘａａ３はグルタミンであり、Ｘａａ７はトレオニンであり、Ｘａａ１０はチロシンであり、Ｘａａ１２はイソロイシンであり、Ｘａａ１３はアラニン又はシステインであり、Ｘａａ１４はメチオニンであり、Ｘａａ１５はアスパラギン酸であり、Ｘａａ１６はグルタミン酸であり、Ｘａａ１７はイソロイシン又はリシンであり、Ｘａａ１８はアラニン又はヒスチジンであり、Ｘａａ１９はグルタミン又はシステインであり、Ｘａａ２０はリシンであり、Ｘａａ２１はアスパラギン酸であり、Ｘａａ２３はバリンであり、Ｘａａ２４はアスパラギンであり、Ｘａａ２７はロイシンであり、Ｘａａ２８はアラニン又はアスパラギンであり、Ｘａａ２９はグルタミン又はトレオニンであり、Ｘａａ３０はシステイン又はリシンであるか、又は存在しないことを特徴とする。

前述した具体例のいずれか一つによる組成物において、前記ペプチドは、下記一般式３のアミノ酸配列を含むペプチドであることを特徴とする。

Ｘａａ１－Ｘａａ２－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｔｈｒ－Ｐｈｅ－Ｔｈｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｐ－Ｔｙｒ－Ｓｅｒ－Ｌｙｓ－Ｘａａ１３－Ｌｅｕ－Ａｓｐ－Ｇｌｕ－Ｘａａ１７－Ｘａａ１８－Ｘａａ１９－Ｌｙｓ－Ｘａａ２１－Ｐｈｅ－Ｖａｌ－Ｘａａ２４－Ｔｒｐ－Ｌｅｕ－Ｌｅｕ－Ｘａａ２８－Ｘａａ２９－Ｘａａ３０－Ｘａａ３１－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ｇｌｎ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｓｅｒ－Ｘａａ４０（一般式３、配列番号１０５）

前記一般式３において、Ｘａａ１はヒスチジン又はチロシンであり、Ｘａａ２はα－メチルグルタミン酸又はＡｉｂであり、Ｘａａ１３はアラニン、チロシン又はシステインであり、Ｘａａ１７はアルギニン、システイン、又はリシンであり、Ｘａａ１８はアラニン又はアルギニンであり、Ｘａａ１９はアラニン又はシステインであり、Ｘａａ２１はグルタミン酸又はアスパラギン酸であり、Ｘａａ２４はグルタミン又はアスパラギンであり、Ｘａａ２８はシステイン又はアスパラギン酸であり、Ｘａａ２９はシステイン、ヒスチジン、又はグルタミンであり、Ｘａａ３０はシステイン又はヒスチジンであり、Ｘａａ３１はプロリン又はシステインであり、Ｘａａ４０はシステイン又は存在しないことを特徴とする。

前述した具体例のいずれか一つによる組成物において、前記ペプチドは、前記Ｒ１はシステイン、ＧＫＫＮＤＷＫＨＮＩＴ（配列番号１０６）、ＣＳＳＧＱＰＰＰＳ（配列番号１０９）、ＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ（配列番号１１０）、ＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳＣ（配列番号１１１）、ＰＳＳＧＡＰＰＰＳ（配列番号１１２）、ＰＳＳＧＡＰＰＰＳＧ（配列番号１１３）、ＰＳＳＧＡＰＰＰＳＨＧ（配列番号１１４）、ＰＳＳＧＡＰＰＰＳＳ（配列番号１１５）、ＰＳＳＧＱＰＰＰＳ（配列番号１１６）、又はＰＳＳＧＱＰＰＰＳＣ（配列番号１１７）であるか、存在しないことを特徴とする。

前述した具体例のいずれか一つによる組成物において、前記ペプチドは配列番号：１～１０２からなる群から選択されたアミノ酸配列を含むことを特徴とする。

前述した具体例のいずれか一つによる組成物において、前記一般式においてＮ－末端から１６番アミノ酸と２０番アミノ酸は互いに環を形成することを特徴とする。

前述した具体例のいずれか一つによる組成物において、前記ペプチドはそのＣ－末端がアミド化されたことを特徴とする。

前述した具体例のいずれか一つによる組成物において、前記薬学的組成物はＬＤＬ吸収増加、３－Ｈｙｄｒｏｘｙ－３－ｍｅｔｈｙｌｇｌｕｔａｒｙｌ－ＣｏＡ ｒｅｄｕｃｔａｓｅ（ＨＭＧＣＲ）活性抑制、及び脂肪酸分解促進効果のいずれか一つ以上の効果を有することを特徴とする。

前述した具体例のいずれか一つによる組成物において、前記薬学的組成物投与後２４時間～４８時間後の３－Ｈｙｄｒｏｘｙ－３－ｍｅｔｈｙｌｇｌｕｔａｒｙｌ－ＣｏＡ ｒｅｄｕｃｔａｓｅ（ＨＭＧＣＲ）の活性が５０％未満であることを特徴とする。

前述した具体例のいずれか一つによる組成物において、前記薬学的組成物は血中ＬＤＬ濃度及び中性脂肪濃度を減少させることを特徴とする。

本発明を具現するもう一つの様態は、前記ペプチドを含む結合体を含む高脂血症の予防又は治療のための薬学的組成物である。

一つの具体例として、前記結合体は、下記化学式（１）で示されることを特徴とすることができる：

Ｘ － Ｌａ － Ｆ・・・（１）

ここで、
Ｘは、前記グルカゴン受容体、ＧＬＰ－１受容体、及びＧＩＰ受容体に対して活性を有する、ペプチドであり、
Ｌは、ポリエチレングリコールであり、
ａは、０又は自然数であり、ただし、ａが２以上であるとき、それぞれのＬは互いに独立しており、
Ｆは、免疫グロブリンＦｃ領域である。

他の具体例として、前記ペプチドは、下記一般式１で表されるアミノ酸配列を含むペプチドであることを特徴とする：

Ｘａａ１－Ｘａａ２－Ｘａａ３－Ｇｌｙ－Ｔｈｒ－Ｐｈｅ－Ｘａａ７－Ｓｅｒ－Ａｓｐ－Ｘａａ１０－Ｓｅｒ－Ｘａａ１２－Ｘａａ１３－Ｘａａ１４－Ｘａａ１５－Ｘａａ１６－Ｘａａ１７－Ｘａａ１８－Ｘａａ１９－Ｘａａ２０－Ｘａａ２１－Ｐｈｅ－Ｘａａ２３－Ｘａａ２４－Ｔｒｐ－Ｌｅｕ－Ｘａａ２７－Ｘａａ２８－Ｘａａ２９－Ｘａａ３０－Ｒ１（一般式１、配列番号１０３）

上記一般式１において、
Ｘａａ１はヒスチジン（Ｈｉｓ、Ｈ）、４－イミダゾアセチル（ＣＡ）、又はチロシン（Ｔｙｒ、Ｙ）であり、
Ｘａａ２はグリシン（Ｇｌｙ、Ｇ）、α－メチルグルタミン酸、又はＡｉｂ（ａｍｉｎｏｉｓｏｂｕｔｙｒｉｃ ａｃｉｄ）であり、
Ｘａａ３はグルタミン酸（Ｇｌｕ、Ｅ）又はグルタミン（Ｇｌｎ、Ｑ）であり、
Ｘａａ７はトレオニン（Ｔｈｒ、Ｔ）又はイソロイシン（Ｉｌｅ、Ｉ）であり、
Ｘａａ１０はロイシン（Ｌｅｕ、Ｌ）、チロシン（Ｔｙｒ、Ｙ）、リシン（Ｌｙｓ、Ｋ）、システイン（Ｃｙｓ、Ｃ）、又はバリン（Ｖａｌ、Ｖ）であり、
Ｘａａ１２はリシン（Ｌｙｓ、Ｋ）、セリン（Ｓｅｒ、Ｓ）、又はイソロイシン（Ｉｌｅ、Ｉ）であり、
Ｘａａ１３はグルタミン（Ｇｌｎ、Ｑ）、チロシン（Ｔｙｒ、Ｙ）、アラニン（Ａｌａ、Ａ）、又はシステイン（Ｃｙｓ、Ｃ）であり、
Ｘａａ１４はロイシン（Ｌｅｕ、Ｌ）、メチオニン（Ｍｅｔ、Ｍ）、又はチロシン（Ｔｙｒ、Ｙ）であり、
Ｘａａ１５はシステイン（Ｃｙｓ、Ｃ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ、Ｄ）、グルタミン酸（Ｇｌｕ、Ｅ）、又はロイシン（Ｌｅｕ、Ｌ）であり、
Ｘａａ１６はグリシン（Ｇｌｙ、Ｇ）、グルタミン酸（Ｇｌｕ、Ｅ）、又はセリン（Ｓｅｒ、Ｓ）であり、
Ｘａａ１７はグルタミン（Ｇｌｎ、Ｑ）、アルギニン（Ａｒｇ、Ｒ）、イソロイシン（Ｉｌｅ、Ｉ）、グルタミン酸（Ｇｌｕ、Ｅ）、システイン（Ｃｙｓ、Ｃ）、又はリシン（Ｌｙｓ、Ｋ）であり、
Ｘａａ１８はアラニン（Ａｌａ、Ａ）、グルタミン（Ｇｌｎ、Ｑ）、アルギニン（Ａｒｇ、Ｒ）、又はヒスチジン（Ｈｉｓ、Ｈ）であり、
Ｘａａ１９はアラニン（Ａｌａ、Ａ）、グルタミン（Ｇｌｎ、Ｑ）、システイン（Ｃｙｓ、Ｃ）、又はバリン（Ｖａｌ、Ｖ）であり、
Ｘａａ２０はリシン（Ｌｙｓ、Ｋ）、グルタミン（Ｇｌｎ、Ｑ）、又はアルギニン（Ａｒｇ、Ｒ）であり、
Ｘａａ２１はグルタミン酸（Ｇｌｕ、Ｅ）、グルタミン（Ｇｌｎ、Ｑ）、ロイシン（Ｌｅｕ、Ｌ）、システイン（Ｃｙｓ、Ｃ）、又はアスパラギン酸（Ａｓｐ、Ｄ）であり、
Ｘａａ２３はイソロイシン（Ｉｌｅ、Ｉ）又はバリン（Ｖａｌ、Ｖ）であり、
Ｘａａ２４はアラニン（Ａｌａ、Ａ）、グルタミン（Ｇｌｎ、Ｑ）、システイン（Ｃｙｓ、Ｃ）、アスパラギン（Ａｓｎ、Ｎ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ、Ｄ）、又はグルタミン酸（Ｇｌｕ、Ｅ）であり、
Ｘａａ２７はバリン（Ｖａｌ、Ｖ）、ロイシン（Ｌｅｕ、Ｌ）、リシン（Ｌｙｓ、Ｋ）、又はメチオニン（Ｍｅｔ、Ｍ）であり、
Ｘａａ２８はシステイン（Ｃｙｓ、Ｃ）、リシン（Ｌｙｓ、Ｋ）、アラニン（Ａｌａ、Ａ）、アスパラギン（Ａｓｎ、Ｎ）、又はアスパラギン酸（Ａｓｐ、Ｄ）であり、
Ｘａａ２９はシステイン（Ｃｙｓ、Ｃ）、グリシン（Ｇｌｙ、Ｇ）、グルタミン（Ｇｌｎ、Ｑ）、トレオニン（Ｔｈｒ、Ｔ）、グルタミン酸（Ｇｌｕ、Ｅ）、又はヒスチジン（Ｈｉｓ、Ｈ）であり、
Ｘａａ３０はシステイン（Ｃｙｓ、Ｃ）、グリシン（Ｇｌｙ、Ｇ）、リシン（Ｌｙｓ、Ｋ）、又はヒスチジン（Ｈｉｓ、Ｈ）であるか、又は存在せず、
Ｒ１はシステイン（Ｃｙｓ、Ｃ）、ＧＫＫＮＤＷＫＨＮＩＴ（配列番号１０６）、ｍ－ＳＳＧＡＰＰＰＳ－ｎ（配列番号１０７）、又はｍ－ＳＳＧＱＰＰＰＳ－ｎ（配列番号１０８）であるか、又は存在せず、
ここで、
ｍは－Ｃｙｓ－、－Ｐｒｏ－、又は－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－であり、
ｎは－Ｃｙｓ－、－Ｇｌｙ－、－Ｓｅｒ－、又は－Ｈｉｓ－Ｇｌｙ－であるか、又は存在しない。

前述した具体例のいずれか一つによる組成物において、前記薬学的組成物は、前記一般式１で表されるペプチドがポリエチレングリコールを通じて免疫グロブリンＦｃ領域と結合した結合体を含むことを特徴とする。

前述した具体例のいずれか一つによる組成物において、前記薬学的組成物は、ＬＤＬ吸収増加、３－Ｈｙｄｒｏｘｙ－３－ｍｅｔｈｙｌｇｌｕｔａｒｙｌ－ＣｏＡ ｒｅｄｕｃｔａｓｅ（ＨＭＧＣＲ）活性抑制、及び脂肪酸分解促進効果のいずれか一つ以上の効果を有することを特徴とする。

前述した具体例のいずれか一つによる組成物において、前記薬学的組成物投与後２４時間～４８時間後の３－Ｈｙｄｒｏｘｙ－３－ｍｅｔｈｙｌｇｌｕｔａｒｙｌ－ＣｏＡ ｒｅｄｕｃｔａｓｅ（ＨＭＧＣＲ）の活性が５０％未満であることを特徴とする。

前述した具体例のいずれか一つによる組成物において、前記薬学的組成物は、血中ＬＤＬ濃度及び中性脂肪濃度を減少させることを特徴とする。

本発明を具現するもう一つの様態は、前記ペプチド、結合体又はこれを含む組成物を、これを必要とする個体に投与する段階を含む、高脂血症の予防又は治療方法である。

本発明を具現するもう一つの態様は、高脂血症の予防又は治療のための薬剤の製造において、前記ペプチド、結合体又はこれを含む組成物の用途である。

本発明による三重活性体持続型結合体は、グルカゴン受容体、ＧＬＰ－１（Ｇｌｕｃａｇｏｎ－ｌｉｋｅ ｐｅｐｔｉｄｅ－１）受容体、及びＧＩＰ（Ｇｌｕｃｏｓｅ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｉｎｓｕｌｉｏｎｔｒｏｐｉｃ ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ）受容体に対して活性を有し、高脂血症の治療に適用できる。

本発明の三重活性体持続型結合体の高脂血症治療効果をｉｎ ｖｉｖｏで確認した図である。 本発明の三重活性体持続型結合体によりＬＤＬ吸収が増加したことを確認した図である。 本発明の三重活性体持続型結合体により３－Ｈｙｄｒｏｘｙ－３－ｍｅｔｈｙｌｇｌｕｔａｒｙｌ－ＣｏＡ ｒｅｄｕｃｔａｓｅ（ＨＭＧＣＲ）活性が抑制されたことを確認した図である。 本発明の三重活性体持続型結合体の脂肪酸分解促進効果を確認した図である。

以下、本発明をより詳細に説明する。

なお、本願で開示される各説明及び実施形態はそれぞれ他の説明及び実施形態にも適用される。すなわち、本願で開示される様々な要素のあらゆる組み合わせが本発明に含まれる。また、以下の具体的な記述に本発明が限定されるものではない。

本明細書全体を通して、天然に存在するアミノ酸に対する通常の１文字及び３文字コードが用いられるだけでなく、Ａｉｂ（α－アミノイソブチル酸）、Ｓａｒ（Ｎ－ｍｅｔｈｙｌｇｌｙｃｉｎｅ）、α－メチルグルタミン酸（α－ｍｅｔｈｙｌ－ｇｌｕｔａｍｉｃ ａｃｉｄ）などの他のアミノ酸に対して一般に許容される３文字コードが用いられる。また、本明細書において略語で言及したアミノ酸は、ＩＵＰＡＣ－ＩＵＢ命名法に従って記載したものである。
アラニン Ａｌａ，Ａ アルギニン Ａｒｇ，Ｒ
アスパラギン Ａｓｎ，Ｎ アスパラギン酸 Ａｓｐ，Ｄ
システイン Ｃｙｓ，Ｃ グルタミン酸 Ｇｌｕ，Ｅ
グルタミン Ｇｌｎ，Ｑ グリシン Ｇｌｙ，Ｇ
ヒスチジン Ｈｉｓ，Ｈ イソロイシン Ｉｌｅ，Ｉ
ロイシン Ｌｅｕ，Ｌ リシン Ｌｙｓ，Ｋ
メチオニン Ｍｅｔ，Ｍ フェニルアラニン Ｐｈｅ，Ｆ
プロリン Ｐｒｏ，Ｐ セリン Ｓｅｒ，Ｓ
トレオニン Ｔｈｒ，Ｔ トリプトファン Ｔｒｐ，Ｗ
チロシン Ｔｙｒ，Ｙ バリン Ｖａｌ，Ｖ

本発明の一実施態様は、グルカゴン受容体、ＧＬＰ－１（Ｇｌｕｃａｇｏｎ－ｌｉｋｅ ｐｅｐｔｉｄｅ－１）受容体及びＧＩＰ（Ｇｌｕｃｏｓｅ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｉｎｓｕｌｉｏｎｔｒｏｐｉｃ ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ）受容体に対して活性を有するペプチドを含む、高脂血症の予防又は治療用薬学的組成物である。

本発明の三重活性体は、高脂血症に対する治療又は予防効果があることを特徴とする。本発明において、血液内にコレステロール（低密度リポタンパクコレステロール及び高密度リポタンパクコレステロール）と中性脂肪（コレステロールではない脂質の一種）数値が正常範囲から外れている（増加及び減少の両方を含む）状態である脂質異常症と血液内に総コレステロールが高い状態である高コレステロール血症とは異なり、高脂血症は血液内に低密度リポタンパクコレステロールや中性脂肪のいずれかが高いか、両方とも高い場合を総称する疾患であり、脂質異常症及び高コレステロール血症と区分される疾患である。例えば、低密度リポタンパクコレステロールが１３０ｍｇ／ｄＬを超過及び／又は中性脂肪が２００ｍｇ／ｄＬを超過する場合、高脂血症に該当する。

ヒトの場合、低密度リポタンパクコレステロールの正常範囲は１３０ｍｇ／ｄＬ以下、高密度リポタンパクコレステロールの正常範囲は６０ｍｇ／ｄＬ以上、具体的には、男性で４０ｍｇ／ｄＬ以上、女性で５０ｍｇ／ｄＬ以上、中性脂肪の正常範囲は２００ｍｇ／ｄＬ以下であり、これを外れる場合、前記の表１に記載されたような疾病を有すると理解できる。

前記の表１に示すように、効果的な高脂血症の治療のためには、正常範囲を外れた低密度リポタンパクコレステロールと中性脂肪に対する減少効果が顕著に優れることが要求される点で、高コレステロール血症及び脂質異常症の治療のために要求される条件と区別される。

このような側面で、本発明の三重活性体は、血液内の低密度リポタンパクコレステロール及び／又は中性脂肪を減少させることに特徴がある。

前記「グルカゴン受容体、ＧＬＰ－１受容体及びＧＩＰ受容体に対して活性を有するペプチド」は、本発明において三重活性体と混用され得る。

このようなペプチドには、グルカゴン、ＧＬＰ－１及びＧＩＰ受容体に対して有意なレベルの活性を有する様々な物質、例えば様々なペプチドが含まれる。

特にこれに制限されるものではないが、前記グルカゴン、ＧＬＰ－１及びＧＩＰ受容体に対して有意なレベルの活性を有する三重活性体は、グルカゴン、ＧＬＰ－１及びＧＩＰ受容体のうち１つ又はそれ以上の受容体、具体的には２つ又はそれ以上の受容体、より具体的には３つの受容体の全てに対するｉｎ ｖｉｔｒｏ活性が、当該受容体の天然リガンド（天然グルカゴン、天然ＧＬＰ－１及び天然ＧＩＰ）に比べて、０．１％以上、１％以上、２％以上、３％以上、４％以上、５％以上、６％以上、７％以上、８％以上、９％以上、１０％以上、２０％以上、３０％以上、４０％以上、５０％以上、６０％以上、７０％以上、８０％以上、９０％以上、又は１００％以上を示すことができる。

このような三重活性体のｉｎ ｖｉｔｒｏ活性を測定する方法を本願明細書の実験例１に示すが、特にこれに限定されるものではない。

一方、前記ペプチドは、次のｉ）～ｉｉｉ）の１つ以上、２つ以上、特に３つの活性を有すること、具体的には有意な活性を有することを特徴とする。
ｉ）ＧＬＰ－１受容体の活性化；ｉｉ）グルカゴン受容体の活性化；ｉｉｉ）ＧＩＰ受容体の活性化。

ここで、受容体を活性化するとは、天然のものに比べて、受容体に対するｉｎ ｖｉｔｒｏ活性が０．１％以上、１％以上、２％以上、３％以上、４％以上、５％以上、６％以上、７％以上、８％以上、９％以上、１０％以上、２０％以上、３０％以上、４０％以上、５０％以上、６０％以上、７０％以上、８０％以上、９０％以上、又は１００％以上にすることを意味する。しかし、これらに限定されるものではない。

本発明による組成物は、グルカゴン受容体、ＧＬＰ－１（Ｇｌｕｃａｇｏｎ－ｌｉｋｅ ｐｅｐｔｉｄｅ－１）受容体、及びＧＩＰ（Ｇｌｕｃｏｓｅ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｉｎｓｕｌｉｏｎｔｒｏｐｉｃ ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ）受容体に対して活性を有する分離されたペプチドを含むことにより、ＬＤＬ吸収増加、コレステロール合成抑制、及び脂肪酸分解促進効果のいずれか一つ以上の効果を示すことができ、それにより高脂血症に対して優れた治療効果を示すことができる。例えば、前記組成物投与後２４時間～４８時間後の３－Ｈｙｄｒｏｘｙ－３－ｍｅｔｈｙｌｇｌｕｔａｒｙｌ－ＣｏＡ ｒｅｄｕｃｔａｓｅ（ＨＭＧＣＲ）の活性は５０％未満であってもよい。

具体的には、前記組成物が投与された個体において２４時間以上の時間（例えば、２４時間～４８時間）が経過した後、３－Ｈｙｄｒｏｘｙ－３－ｍｅｔｈｙｌｇｌｕｔａｒｙｌ－ＣｏＡ ｒｅｄｕｃｔａｓｅ（ＨＭＧＣＲ）の活性は５０％、４０％、又は３０％未満を示すことができ、これは個体において体内コレステロール合成が本発明による組成物により抑制され、それにより高脂血症に対する効果を有することを示唆する。

また、本発明による組成物は、血中ＬＤＬ濃度及び中性脂肪濃度を減少させ、高脂血症に対して特に優れた治療効果を提供することができる。

また、前記ペプチドは、天然ＧＬＰ－１、天然グルカゴン及び天然ＧＩＰのいずれかに比べて、体内半減期が延長されたものであるが、特にこれらに限定されるものではない。

このような前記ペプチドは、非自然発生の（ｎｏｎ－ｎａｔｕｒａｌｌｙ ｏｃｃｕｒｒｉｎｇ）ものであってもよいが、特にこれに限定されるものではない。

具体的には、前記分離されたペプチドは、天然グルカゴンのアナログであってもよいが、特にこれに限定されるものではない。

本発明による前記天然グルカゴンのアナログには、天然グルカゴンと比較してアミノ酸配列に少なくとも１つの差異のあるペプチド、天然グルカゴン配列を修飾（ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ）することにより改変されたペプチド、天然グルカゴンの模倣体が含まれる。

一方、天然グルカゴンは、次のアミノ酸配列を有するが、特にこれに限定されるものではない。

Ｈｉｓ－Ｓｅｒ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｔｈｒ－Ｐｈｅ－Ｔｈｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｐ－Ｔｙｒ－Ｓｅｒ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－Ｌｅｕ－Ａｓｐ－Ｓｅｒ－Ａｒｇ－Ａｒｇ－Ａｌａ－Ｇｌｎ－Ａｓｐ－Ｐｈｅ－Ｖａｌ－Ｇｌｎ－Ｔｒｐ－Ｌｅｕ－Ｍｅｔ－Ａｓｎ－Ｔｈｒ（配列番号：１１８）

具体的には、前記ペプチドは、天然グルカゴン配列において少なくとも１つのアミノ酸の置換（ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｉｏｎ）、付加（ａｄｄｉｔｉｏｎ）、欠失（ｄｅｌｅｔｉｏｎ）、修飾（ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ）及びそれらの組み合わせからなる群から選択される改変が行われた天然グルカゴンのアナログであってもよいが、特にこれらに限定されるものではない。

また、前記アミノ酸の置換には、アミノ酸への置換や、非天然化合物への置換が全て含まれる。

さらに、付加は、ペプチドのＮ末端及び／又はＣ末端において行われてもよい。なお、付加されるアミノ酸は、１以上、２以上、３以上、４以上、５以上、６以上、７以上、８以上、９以上、１０以上、１１以上のアミノ酸であってもよいが、特にこれらに限定されるものではなく、広義にはポリペプチドの付加が含まれるが、特にこれに限定されるものではない。

より具体的には、前記グルカゴンアナログは、天然グルカゴンのアミノ酸配列において、１番、２番、３番、７番、１０番、１２番、１３番、１４番、１５番、１６番、１７番、１８番、１９番、２０番、２１番、２３番、２４番、２７番、２８番及び２９番からなる群から選択される、１個以上、２個以上、３個以上、４個以上、５個以上、６個以上、７個以上、８個以上、９個以上、１０個以上、１１個以上、１２個以上、１３個以上、１４個以上、１５個以上、１６個以上、１７個以上、１８個以上、１９以上又は２０個のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたものであってもよく、また、独立して又は追加でそのＣ末端に１個以上、２個以上、３個以上、４個以上、５個以上、６個以上、７個以上、８個以上、９個以上、１０個以上又は１１個以上のアミノ酸が付加されたものであってもよいが、特にこれらに限定されるものではない。

より具体的には、前記グルカゴンアナログは、天然グルカゴンのアミノ酸配列において、１番、２番、３番、１０番、１２番、１３番、１４番、１５番、１６番、１７番、１８番、１９番、２０番、２１番、２３番、２４番、２７番、２８番及び２９番からなる群から選択される、１個以上、２個以上、３個以上、４個以上、５個以上、６個以上、７個以上、８個以上、９個以上、１０個以上、１１個以上、１２個以上、１３個以上、１４個以上、１５個以上、１６個以上、１７個以上、１８個以上又は１９個のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたものであってもよく、また、独立して又は追加でそのＣ末端に１個以上、２個以上、３個以上、４個以上、５個以上、６個以上、７個以上、８個以上、９個以上、１０個以上又は１１個以上のアミノ酸が付加されたものであってもよいが、特にこれらに限定されるものではない。

より具体的には、前記グルカゴンアナログは、天然グルカゴンのアミノ酸配列において、１番、２番、３番、１０番、１３番、１４番、１５番、１６番、１７番、１８番、１９番、２０番、２１番、２３番、２４番、２８番及び２９番からなる群から選択される、１個以上、２個以上、３個以上、４個以上、５個以上、６個以上、７個以上、８個以上、９個以上、１０個以上、１１個以上、１２個以上、１３個以上、１４個以上、１５個以上、１６個以上又は１７個のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたものであってもよく、また、独立して又は追加でそのＣ末端に１個以上、２個以上、３個以上、４個以上、５個以上、６個以上、７個以上、８個以上、９個以上、１０個以上又は１１個以上のアミノ酸が付加されたものであってもよいが、特にこれらに限定されるものではない。

より具体的には、前記グルカゴンアナログは、天然グルカゴンのアミノ酸配列において、１番、２番、１３番、１６番、１７番、１８番、１９番、２０番、２１番、２３番、２４番、２７番、２８番及び２９番からなる群から選択される、１個以上、２個以上、３個以上、４個以上、５個以上、６個以上、７個以上、８個以上、９個以上、１０個以上、１１個以上、１２個以上、１３個以上又は１４個のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたものであってもよく、また、独立して又は追加でそのＣ末端に１個以上、２個以上、３個以上、４個以上、５個以上、６個以上、７個以上、８個以上、９個以上、１０個以上又は１１個以上のアミノ酸が付加されたものであってもよいが、特にこれらに限定されるものではない。

前記天然グルカゴンから導入されるアミノ酸は、チロシン、α－メチルグルタミン酸、Ａｉｂ、メチオニン、グルタミン酸、ヒスチジン、リシン、ロイシン、イソロイシン、グルタミン、バリン、グリシン、アラニン、システイン、セリン、アラニン、アスパラギン酸及びアルギニンからなる群から選択されてもよいが、特にこれらに限定されるものではない。

例えば、前述したように付加されるアミノ酸配列は、天然ＧＬＰ－１、天然ＧＩＰ又は天然エキセンジン－４のアミノ酸配列に由来する１つ以上のアミノ酸配列であってもよい。

このようなグルカゴンアナログ又は三重活性体は、分子内架橋（ｉｎｔｒａｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｂｒｉｄｇｅ）を含んでもよく（例えば、共有結合的架橋又は非共有結合的架橋）、具体的には環を含む形態であってもよい。例えば、グルカゴンアナログ又は三重活性体の１６番目のアミノ酸と２０番目のアミノ酸間に環が形成された形態であってもよいが、特にこれに限定されるものではない。

前記環の非制限的な例として、ラクタム架橋（又はラクタム環）が挙げられるが、特にこれに限定されるものではない。

また、前記グルカゴンアナログ又は三重活性体は、目的とする位置に環を形成するアミノ酸を含むことにより環を含むように改変されたものが全て含まれる。

例えば、グルカゴンアナログ又は三重活性体の１６番目と２０番目のアミノ酸対がそれぞれ環を形成するグルタミン酸又はリシンに置換されたものであってもよいが、これに限定されるものではない。

このような環は、前記グルカゴンアナログ又は三重活性体内のアミノ酸側鎖間に形成され、例えばリシンの側鎖とグルタミン酸の側鎖間にラクタム環が形成される形態であってもよいが、特にこれらに限定されるものではない。

前記方法の組み合わせにより作製されるグルカゴンのアナログの例として、天然グルカゴンとアミノ酸配列が少なくとも１つ異なり、Ｎ末端のアミノ酸残基のα炭素が除去された、グルカゴン受容体、ＧＬＰ－１受容体及びＧＩＰ受容体に対して活性を有するペプチドなどが挙げられるが、これらに限定されるものではなく、アナログ作製のための様々な方法の組み合わせにより、本発明に用いられる天然グルカゴンのアナログを作製することができる。

また、本発明のペプチドは、活性体分解酵素の認識作用を回避して体内半減期を延長させるために、一部のアミノ酸を他のアミノ酸又は非天然化合物に置換するが、特にこれらに限定されるものではない。

具体的には、前記三重活性体のアミノ酸配列のうち２番目のアミノ酸配列の置換により、分解酵素の認識作用を回避して体内半減期を延長させたペプチドであってもよいが、体内の分解酵素の認識作用を回避するためのアミノ酸の置換又は変更であればいかなるものでもよい。

また、天然グルカゴンのアナログの作製のためのこのような改変には、Ｌ型もしくはＤ型アミノ酸及び／又は非天然アミノ酸を用いた改変、並びに／又は天然配列の修飾、例えば側鎖官能基の改変、分子内の共有結合、一例として側鎖間の環形成、メチル化、アシル化、ユビキチン化、リン酸化、アミノヘキサン化、ビオチン化などの修飾による改変が全て含まれる。

さらに、天然グルカゴンのアミノ及び／又はカルボキシ末端に少なくとも１つのアミノ酸が付加されたものが全て含まれる。

前記置換されるか、付加されるアミノ酸としては、ヒトタンパク質において通常観察される２０種のアミノ酸だけでなく、異常又は非自然発生アミノ酸を用いることができる。異常アミノ酸の市販元には、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、ＣｈｅｍＰｅｐ、Ｇｅｎｚｙｍｅ ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓが含まれる。これらのアミノ酸が含まれるペプチドと定型的なペプチド配列は、民間のペプチド合成会社、例えば米国のＡｍｅｒｉｃａｎ ｐｅｐｔｉｄｅ ｃｏｍｐａｎｙやＢａｃｈｅｍ、又は韓国のＡｎｙｇｅｎにおいて合成及び購入することができる。

アミノ酸誘導体も同じ方式で入手することができ、一例として４－イミダゾ酢酸（４－ｉｍｉｄａｚｏａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄ）などが挙げられる。

また、本発明によるペプチドは、生体内のタンパク質切断酵素から保護して安定性を向上させるために、そのＮ末端及び／又はＣ末端などが化学的に修飾された形態、有機基により保護された形態、又はペプチド末端などにアミノ酸が付加されて改変された形態であってもよい。

特に、化学的に合成したペプチドの場合、Ｎ及びＣ末端が電荷を帯びているので、その電荷を除去するために、Ｎ末端のアセチル化（ａｃｅｔｙｌａｔｉｏｎ）及び／又はＣ末端のアミド化（ａｍｉｄａｔｉｏｎ）を行ってもよいが、特にこれらに限定されるものではない。

また、本発明によるペプチドには、ペプチド自体、その塩（例えば、前記ペプチドの薬学的に許容される塩）又はその溶媒和物の形態が全て含まれる。さらに、ペプチドは、薬学的に許容されるものであれば、いかなる形態であってもよい。

前記塩の種類は、特に限定されるものではない。もっとも、個体、例えば哺乳類に安全かつ効果的な形態であることが好ましいが、特にこれらに限定されるものではない。

前記「薬学的に許容される」とは、医薬学的判断の範囲内で、過度な毒性、刺激、アレルギー反応などを誘発することなく所望の用途に効果的に使用できる物質を意味する。

本発明における「薬学的に許容される塩」には、薬学的に許容される無機酸、有機酸又は塩基から誘導された塩が含まれる。好適な酸の例としては、塩酸、臭素酸、硫酸、硝酸、過塩素酸、フマル酸、マレイン酸、リン酸、グリコール酸、乳酸、サリチル酸、コハク酸、トルエン－ｐ－スルホン酸、酒石酸、酢酸、クエン酸、メタンスルホン酸、ギ酸、安息香酸、マロン酸、ナフタレン－２－スルホン酸、ベンゼンスルホン酸などが挙げられる。好適な塩基から誘導された塩には、ナトリウム、カリウムなどのアルカリ金属、マグネシウムなどのアルカリ土類金属、アンモニウムなどが含まれる。

また、本発明における「溶媒和物」とは、本発明によるペプチド又はその塩が溶媒分子と複合体を形成したものを意味する。

もう一つの具体的な様態として、前記ペプチドは、下記一般式１で表されるアミノ酸配列を含むことができる。

Ｘａａ１－Ｘａａ２－Ｘａａ３－Ｇｌｙ－Ｔｈｒ－Ｐｈｅ－Ｘａａ７－Ｓｅｒ－Ａｓｐ－Ｘａａ１０－Ｓｅｒ－Ｘａａ１２－Ｘａａ１３－Ｘａａ１４－Ｘａａ１５－Ｘａａ１６－Ｘａａ１７－Ｘａａ１８－Ｘａａ１９－Ｘａａ２０－Ｘａａ２１－Ｐｈｅ－Ｘａａ２３－Ｘａａ２４－Ｔｒｐ－Ｌｅｕ－Ｘａａ２７－Ｘａａ２８－Ｘａａ２９－Ｘａａ３０－Ｒ１（一般式１、配列番号１０３）

一般式１において、Ｘａａ１はヒスチジン、４－イミダゾアセチル又はチロシンであり、Ｘａａ２はグリシン、α－メチルグルタミン酸又はＡｉｂであり、Ｘａａ３はグルタミン酸又はグルタミンであり、Ｘａａ７はトレオニン又はイソロイシンであり、Ｘａａ１０はロイシン、チロシン、リシン、システイン又はバリンであり、Ｘａａ１２はリシン、セリン又はイソロイシンであり、Ｘａａ１３はグルタミン、チロシン、アラニン又はシステインであり、Ｘａａ１４はロイシン、メチオニン又はチロシンであり、Ｘａａ１５はシステイン、アスパラギン酸、グルタミン酸又はロイシンであり、Ｘａａ１６はグリシン、グルタミン酸又はセリンであり、Ｘａａ１７はグルタミン、アルギニン、イソロイシン、グルタミン酸、システイン又はリシンであり、Ｘａａ１８はアラニン、グルタミン、アルギニン又はヒスチジンであり、Ｘａａ１９はアラニン、グルタミン、システイン又はバリンであり、Ｘａａ２０はリシン、グルタミン又はアルギニンであり、Ｘａａ２１はグルタミン酸、グルタミン、ロイシン、システイン又はアスパラギン酸であり、Ｘａａ２３はイソロイシン又はバリンであり、Ｘａａ２４はアラニン、グルタミン、システイン、アスパラギン、アスパラギン酸又はグルタミン酸であり、Ｘａａ２７はバリン、ロイシン、リシン、又はメチオニンであり、Ｘａａ２８はシステイン、リシン、アラニン、アスパラギン又はアスパラギン酸であり、Ｘａａ２９はシステイン、グリシン、グルタミン、トレオニン、グルタミン酸又はヒスチジンであり、Ｘａａ３０はシステイン、グリシン、リシンもしくはヒスチジンであるか、又は存在せず、
Ｒ１はシステイン、ＧＫＫＮＤＷＫＨＮＩＴ（配列番号１０６）、ｍ－ＳＳＧＡＰＰＰＳ－ｎ（配列番号１０７）もしくはｍ－ＳＳＧＱＰＰＰＳ－ｎ（配列番号１０８）であるか、又は存在せず、
ここで、ｍは－Ｃｙｓ－、－Ｐｒｏ－、又は－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－であり、ｎは－Ｃｙｓ－、－Ｇｌｙ－、－Ｓｅｒ－、もしくは－Ｈｉｓ－Ｇｌｙ－であるか、又は存在しなくてもよい。

前記三重活性体の例として、配列番号：１～１０２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むもの、配列番号１～１０２からなる群から選択されるアミノ酸配列（必須）からなるものが挙げられるが、これらに限定されるものではない。

また、本発明に「特定配列番号で表されるペプチド」と記載されていても、当該配列番号のアミノ酸配列からなるペプチドと同一又は相当する活性を有するものであれば、当該配列番号のアミノ酸配列の前後の無意味な配列付加、自然発生する突然変異、又はその非表現突然変異（ｓｉｌｅｎｔ ｍｕｔａｔｉｏｎ）を除外するものではなく、このような配列付加又は突然変異を有するものも本願に含まれることは言うまでもない。

以上の内容は、本発明の他の具体例又は他の態様にも適用されるが、これらに限定されるものではない。

具体的には、一般式１において、Ｘａａ１４はロイシン又はメチオニンであり、Ｘａａ１５はシステイン、アスパラギン酸又はロイシンである。

このようなペプチドの例として、配列番号１～１２、１４～１７及び２１～１０２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むペプチド、当該アミノ酸配列（必須）からなるペプチドが挙げられるが、特にこれらに限定されるものではない。

このようなペプチドは、グルカゴン受容体、ＧＬＰ－１受容体及びＧＩＰ受容体の少なくとも１つを有意に活性化させることができるが、特にこれらに限定されるものではない。具体的には、ＧＬＰ－１を有意に活性化させるものであるか、さらにグルカゴン受容体及び／又はＧＩＰ受容体を有意に活性化させるものであるが、特にこれらに限定されるものではない。

より具体的には、一般式１において、Ｘａａ２はグリシン、α－メチルグルタミン酸又はＡｉｂであり、Ｘａａ７はトレオニンであり、Ｘａａ１０はチロシン、システイン又はバリンであり、Ｘａａ１２はリシン又はイソロイシンであり、Ｘａａ１３はチロシン、アラニン、グルタミン又はシステインであり、Ｘａａ１４はロイシン、システイン又はメチオニンであり、Ｘａａ１５はシステイン、ロイシン、グルタミン酸又はアスパラギン酸であり、Ｘａａ１７はグルタミン、アルギニン、イソロイシン、システイン、グルタミン酸又はリシンであり、Ｘａａ１８はアラニン、グルタミン、アルギニン又はヒスチジンであり、Ｘａａ１９はアラニン、グルタミン、バリン又はシステインであり、Ｘａａ２０はリシン、アルギニン又はグルタミンであり、Ｘａａ２１はグルタミン酸、グルタミン、ロイシン、システイン又はアスパラギン酸であり、Ｘａａ２３はイソロイシン又はバリンであり、Ｘａａ２４はシステイン、アラニン、グルタミン、アスパラギン、グルタミン酸又はアスパラギン酸であり、Ｘａａ２７はロイシン又はリシンであるペプチドであってもよいが、特にこれらに限定されるものではない。

より具体的には、一般式１において、Ｘａａ２はグリシン、α－メチルグルタミン酸又はＡｉｂであり、Ｘａａ７はトレオニンであり、Ｘａａ１０はチロシン、システイン又はバリンであり、Ｘａａ１２はリシン又はイソロイシンであり、Ｘａａ１３はチロシン、アラニン又はシステインであり、Ｘａａ１４はロイシン又はメチオニンであり、Ｘａａ１５はシステイン又はアスパラギン酸であり、Ｘａａ１７はグルタミン、アルギニン、イソロイシン、システイン又はリシンであり、Ｘａａ１８はアラニン、アルギニン又はヒスチジンであり、Ｘａａ１９はアラニン、グルタミン又はシステインであり、Ｘａａ２０はリシン又はグルタミンであり、Ｘａａ２１はグルタミン酸、システイン又はアスパラギン酸であり、Ｘａａ２３はバリンであり、Ｘａａ２４はアラニン、グルタミン、システイン、アスパラギン又はアスパラギン酸であり、Ｘａａ２７はロイシン又はリシンであってもよいが、特にこれらに限定されるものではない。

より具体的には、一般式１において、Ｘａａ２はα－メチルグルタミン酸又はＡｉｂであり、Ｘａａ７はトレオニンであり、Ｘａａ１０はチロシン又はシステインであり、Ｘａａ１２はリシン又はイソロイシンであり、Ｘａａ１３はチロシン、アラニン又はシステインであり、Ｘａａ１４はロイシン又はメチオニンであり、Ｘａａ１５はシステイン又はアスパラギン酸であり、Ｘａａ１６はグルタミン酸であり、Ｘａａ１７はアルギニン、イソロイシン、システイン又はリシンであり、Ｘａａ１８はアラニン、アルギニン又はヒスチジンであり、Ｘａａ１９はアラニン、グルタミン又はシステインであり、Ｘａａ２０はリシン又はグルタミンであり、Ｘａａ２１はグルタミン酸又はアスパラギン酸であり、Ｘａａ２３はバリンであり、Ｘａａ２４はグルタミン、アスパラギン又はアスパラギン酸であり、Ｘａａ２７はロイシンであり、Ｘａａ２８はシステイン、アラニン、アスパラギン又はアスパラギン酸であってもよい。

具体的には、一般式１において、Ｘａａ１はヒスチジン又は４－イミダゾアセチルであり、Ｘａａ２はα－メチルグルタミン酸又はＡｉｂであり、Ｘａａ３はグルタミンであり、Ｘａａ７はトレオニンであり、Ｘａａ１０はチロシンであり、Ｘａａ１２はイソロイシンであり、Ｘａａ１３はアラニン又はシステインであり、Ｘａａ１４はメチオニンであり、Ｘａａ１５はアスパラギン酸であり、Ｘａａ１６はグルタミン酸であり、Ｘａａ１７はイソロイシン又はリシンであり、Ｘａａ１８はアラニン又はヒスチジンであり、Ｘａａ１９はグルタミン又はシステインであり、Ｘａａ２０はリシンであり、Ｘａａ２１はアスパラギン酸であり、Ｘａａ２３はバリンであり、Ｘａａ２４はアスパラギンであり、Ｘａａ２７はロイシンであり、Ｘａａ２８はアラニン又はアスパラギンであり、Ｘａａ２９はグルタミン又はトレオニンであり、Ｘａａ３０はシステインもしくはリシンであるか、又は存在しなくてもよい。

より具体的には、一般式１において、Ｘａａ２はグリシン、α－メチルグルタミン酸又はＡｉｂであり、Ｘａａ３はグルタミンであり、Ｘａａ７はトレオニンであり、Ｘａａ１０はチロシン、システイン又はバリンであり、Ｘａａ１２はリシンであり、Ｘａａ１３はチロシンであり、Ｘａａ１４はロイシンであり、Ｘａａ１５はアスパラギン酸であり、Ｘａａ１６はグリシン、グルタミン酸又はセリンであり、Ｘａａ１７はグルタミン、アルギニン、システイン又はリシンであり、Ｘａａ１８はアラニン、アルギニン又はヒスチジンであり、Ｘａａ１９はアラニン又はグルタミンであり、Ｘａａ２０はリシン又はグルタミンであり、Ｘａａ２１はグルタミン酸、システイン又はアスパラギン酸であり、Ｘａａ２３はバリンであり、Ｘａａ２４はアラニン、グルタミン又はシステインであり、Ｘａａ２７はロイシン又はリシンであり、Ｘａａ２９はグリシン、グルタミン、トレオニン又はヒスチジンであってもよいが、特にこれらに限定されるものではない。

このようなペプチドは、ＧＬＰ－１受容体及びグルカゴン受容体の活性化の程度が有意に高く、ＧＩＰ受容体の活性化の程度に比べて高いか、ＧＬＰ－１受容体、グルカゴン受容体及びＧＩＰ受容体の活性化の程度が全て有意に高いか、ＧＬＰ－１受容体及びＧＩＰ受容体の活性化の程度が有意に高く、グルカゴン受容体の活性化の程度に比べて高いものであってもよいが、特にこれらに限定されるものではない。

このようなペプチドの例として、配列番号８、９、２１～３７、３９、４２、４３、４９～６１、６４～８３、８５、８６、８８、８９、９１～９３、９５～１０２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むペプチド、当該アミノ酸配列（必須）からなるペプチドが挙げられるが、特にこれらに限定されるものではない。

具体的な態様として、前記ペプチドは、一般式２で表されるアミノ酸配列を含むものであってもよい。

Ｘａａ１－Ｘａａ２－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｔｈｒ－Ｐｈｅ－Ｔｈｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｐ－Ｘａａ１０－Ｓｅｒ－Ｌｙｓ－Ｘａａ１３－Ｘａａ１４－Ｘａａ１５－Ｘａａ１６－Ｘａａ１７－Ｘａａ１８－Ｘａａ１９－Ｘａａ２０－Ｘａａ２１－Ｐｈｅ－Ｘａａ２３－Ｘａａ２４－Ｔｒｐ－Ｌｅｕ－Ｌｅｕ－Ｘａａ２８－Ｘａａ２９－Ｘａａ３０－Ｘａａ３１－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ｇｌｎ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｓｅｒ－Ｘａａ４０（一般式２、配列番号１０４）

前記式において、Ｘａａ１は４－イミダゾアセチル、ヒスチジン又はチロシンであり、Ｘａａ２はグリシン、α－メチルグルタミン酸又はＡｉｂであり、Ｘａａ１０はチロシン又はシステインであり、Ｘａａ１３はアラニン、グルタミン、チロシン又はシステインであり、Ｘａａ１４はロイシン、メチオニン又はチロシンであり、Ｘａａ１５はアスパラギン酸、グルタミン酸又はロイシンであり、Ｘａａ１６はグリシン、グルタミン酸又はセリンであり、Ｘａａ１７はグルタミン、アルギニン、イソロイシン、グルタミン酸、システイン又はリシンであり、Ｘａａ１８はアラニン、グルタミン、アルギニン又はヒスチジンであり、Ｘａａ１９はアラニン、グルタミン、システイン又はバリンであり、Ｘａａ２０はリシン、グルタミン又はアルギニンであり、Ｘａａ２１はシステイン、グルタミン酸、グルタミン、ロイシン又はアスパラギン酸であり、Ｘａａ２３はイソロイシン又はバリンであり、Ｘａａ２４はシステイン、アラニン、グルタミン、アスパラギン又はグルタミン酸であり、Ｘａａ２８はリシン、システイン、アスパラギン又はアスパラギン酸であり、Ｘａａ２９はグリシン、グルタミン、システイン又はヒスチジンであり、Ｘａａ３０はシステイン、グリシン、リシン又はヒスチジンであり、Ｘａａ３１はプロリン又はシステインであり、Ｘａａ４０はシステインであるか、又は存在しなくてもよい。

より具体的には、一般式２において、Ｘａａ１３はアラニン、チロシン又はシステインであり、Ｘａａ１５はアスパラギン酸又はグルタミン酸であり、Ｘａａ１７はグルタミン、アルギニン、システイン又はリシンであり、Ｘａａ１８はアラニン、アルギニン又はヒスチジンであり、Ｘａａ２１はシステイン、グルタミン酸、グルタミン又はアスパラギン酸であり、Ｘａａ２３はイソロイシン又はバリンであり、Ｘａａ２４はシステイン、グルタミン又はアスパラギンであり、Ｘａａ２８はシステイン、アスパラギン又はアスパラギン酸であり、Ｘａａ２９はグルタミン、システイン又はヒスチジンであり、Ｘａａ３０はシステイン、リシン又はヒスチジンであってもよい。

このようなペプチドの例として、配列番号２１、２２、４２、４３、５０、６４～７７及び９５～１０２からなる群から選択されるアミノ酸配列、より具体的には配列番号２１、２２、４２、４３、５０、６４～７７及び９６～１０２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むペプチド、当該アミノ酸配列（必須）からなるペプチドが挙げられるが、特にこれらに限定されるものではない。

具体的な態様として、前記ペプチドは、一般式３のアミノ酸配列を含むものであってもよい。

Ｘａａ１－Ｘａａ２－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｔｈｒ－Ｐｈｅ－Ｔｈｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｐ－Ｔｙｒ－Ｓｅｒ－Ｌｙｓ－Ｘａａ１３－Ｌｅｕ－Ａｓｐ－Ｇｌｕ－Ｘａａ１７－Ｘａａ１８－Ｘａａ１９－Ｌｙｓ－Ｘａａ２１－Ｐｈｅ－Ｖａｌ－Ｘａａ２４－Ｔｒｐ－Ｌｅｕ－Ｌｅｕ－Ｘａａ２８－Ｘａａ２９－Ｘａａ３０－Ｘａａ３１－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ｇｌｎ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｓｅｒ－Ｘａａ４０（一般式３、配列番号１０５）

一般式３において、Ｘａａ１はヒスチジン又はチロシンであり、Ｘａａ２はα－メチルグルタミン酸又はＡｉｂであり、Ｘａａ１３はアラニン、チロシン又はシステインであり、Ｘａａ１７はアルギニン、システイン又はリシンであり、Ｘａａ１８はアラニン又はアルギニンであり、Ｘａａ１９はアラニン又はシステインであり、Ｘａａ２１はグルタミン酸又はアスパラギン酸であり、Ｘａａ２４はグルタミン又はアスパラギンであり、Ｘａａ２８はシステイン又はアスパラギン酸であり、Ｘａａ２９はシステイン、ヒスチジン又はグルタミンであり、Ｘａａ３０はシステイン又はヒスチジンであり、Ｘａａ３１はプロリン又はシステインであり、Ｘａａ４０はシステインであるか、又は存在しなくてもよい。

このようなペプチドの例として、配列番号２１、２２、４２、４３、５０、６４～７１、７５～７７及び９６～１０２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むペプチド、当該アミノ酸配列（必須）からなるペプチドが挙げられるが、特にこれらに限定されるものではない。

また、一般式１において、Ｒ１はシステイン、ＧＫＫＮＤＷＫＨＮＩＴ（配列番号１０６）、ＣＳＳＧＱＰＰＰＳ（配列番号１０９）、ＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ（配列番号１１０）、ＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳＣ（配列番号１１１）、ＰＳＳＧＡＰＰＰＳ（配列番号１１２）、ＰＳＳＧＡＰＰＰＳＧ（配列番号１１３）、ＰＳＳＧＡＰＰＰＳＨＧ（配列番号１１４）、ＰＳＳＧＡＰＰＰＳＳ（配列番号１１５）、ＰＳＳＧＱＰＰＰＳ（配列番号１１６）又はＰＳＳＧＱＰＰＰＳＣ（配列番号１１７）であるか、又は存在しないが、特にこれらに限定されるものではない。

また、本発明のペプチドは、その長さに応じてこの分野で周知の方法、例えば自動ペプチド合成機により合成することができ、遺伝子操作技術により産生することができる。

具体的には、本発明のペプチドは、標準合成方法、組換え発現システム又は任意の他の当該分野の方法により作製することができる。よって、本発明によるペプチドは、例えば、下記を含む多くの方法で合成することができる：

（ａ）ペプチドを固相もしくは液相法で段階的に又はフラグメント組立により合成し、最終ペプチド生成物を分離及び精製する方法；又は
（ｂ）ペプチドをコードする核酸作製物を宿主細胞内で発現させ、発現生成物を宿主細胞培養物から回収する方法；又は
（ｃ）ペプチドをコードする核酸作製物を無細胞試験管内で発現させ、発現生成物を回収する方法；又は
（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）の任意の組み合わせによりペプチドのフラグメントを得て、次にフラグメントを連結してペプチドを得ることにより当該ペプチドを回収する方法。

また、前記グルカゴン受容体、ＧＬＰ－１受容体、及びＧＩＰ受容体に対して活性を有するペプチドは、グルカゴン受容体、ＧＬＰ－１受容体及びＧＩＰ受容体に対して活性を有するペプチドに、その生体内半減期を延長させるための生体適合性物質が結合された結合体の形態であってもよい。本発明における前記生体適合性物質は、キャリアと混用される。

本発明における前記ペプチドの結合体は、キャリアが結合されていない前記ペプチドより効力の持続性が向上したものであり、本発明においては、このような結合体を「持続型結合体」という。

なお、このような結合体は、非自然発生の（ｎｏｎ－ｎａｔｕｒａｌｌｙ ｏｃｃｕｒｒｉｎｇ）ものであってもよい。

本発明を具現するためのもう一つの様態は、グルカゴン受容体、ＧＬＰ－１（Ｇｌｕｃａｇｏｎ－ｌｉｋｅ ｐｅｐｔｉｄｅ－１）受容体、及びＧＩＰ（Ｇｌｕｃｏｓｅ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｉｎｓｕｌｉｏｎｔｒｏｐｉｃ ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ）受容体に対して活性を有するペプチドを含む結合体を含む、高脂血症の予防又は治療用薬学的組成物である。

本発明の一つの具体例において、前記結合体は下記化学式（１）で表される、結合体である：

Ｘ － Ｌａ － Ｆ・・・（１）

ここで、Ｘは、前記グルカゴン受容体、ＧＬＰ－１受容体、及びＧＩＰ受容体に対して活性を有する、ペプチドであり；Ｌは、ポリエチレングリコールであり；ａは、０又は自然数であり、ただし、ａが２以上であるとき、それぞれのＬは互いに独立しており；Ｆは、免疫グロブリンＦｃ領域である。

前記結合体においてＸ、すなわちグルカゴン受容体、ＧＬＰ－１受容体、及びＧＩＰ受容体に対して活性を有するペプチドについては、前述のとおりである。

前記結合体において、ＦはＸ、すなわちグルカゴン受容体、ＧＬＰ－１受容体及びＧＩＰ受容体に対して活性を有するペプチドの半減期を延長させることのできる物質であり、本発明の前記結合体の一部をなす一構成である。

前記Ｆは、Ｘに共有化学結合又は非共有化学結合により互いに結合されたものであってもよく、共有化学結合、非共有化学結合、又はそれらの組み合わせとしてＬを介して、ＦとＸが互いに結合されたものであってもよい。

前記免疫グロブリンＦｃ領域は、具体的にＩｇＧＦｃ領域であってもよいが、特にこれに制限されない。

本発明の一具体例として、前記Ｆ（免疫グロブリンＦｃ領域）は、二つのポリペプチド鎖からなる二合体であり、Ｌの一方の末端が前記二つのポリペプチド鎖中の一つのポリペプチド鎖にのみ連結されている構造を有してもよいが、これに制限されない。

本発明のペプチド内の一つ以上のアミノ酸の側鎖は、生体内で可溶性及び／又は半減期を増加させ／又は生体利用率を増加させるために、このような生体適合性物質に接合されてもよい。このような変形はまた、治療学的タンパク質及びペプチドの消去（ｃｌｅａｒａｎｃｅ）を減少させることができる。

上述した生体適合性物質は、水溶性（両親媒性又は親水性）及び／又は無毒性及び／又は薬学的に許容可能なものであってもよい。

前記Ｆは、Ｘと直接的に連結されるか（すなわち、前記化学式（１）においてａが０であるか）、又はリンカー（Ｌ）を通じて連結されたものであってもよい。

具体的には、前記Ｌは非ペプチド性リンカーであるポリエチレングリコリンカーであってもよい。本発明において、「ポリエチレングリコールリンカー」は、エチレングリコール繰り返し単位が２個以上結合した生体適合性重合体を含む。前記繰り返し単位は、ペプチド結合ではなく任意の共有結合を通じて互いに連結される。前記ポリエチレングリコールリンカーは、本発明の結合体の一部をなす一構成であってもよく、前記化学式（１）においてＬに該当する。

前記Ｌａにおいてａは１以上であってもよく、ａが２以上である場合、それぞれのＬは独立していてもよい。

また、一つの具体的な実施形態において、前記結合体は、両方の末端にＦ、具体的には、免疫グロブリンＦｃ領域及びＸ、具体的には、ペプチド薬物と結合できる反応基を含む非ペプチド性リンカーを通じてＦとＸが互いに共有結合的に連結されたものであってもよい。

具体的には、前記Ｌ（ポリエチレングリコールリンカー）は、エチレングリコール繰り返し単位を含有するリンカー、例えば、ポリエチレングリコールであってもよいが、これに制限されない。本明細書において、前記ポリエチレングリコールはエチレングリコール同種重合体、ＰＥＧ共重合体、又はモノメチル置換されたＰＥＧ重合体（ｍＰＥＧ）の形態をすべて包括する用語であるが、特にこれに制限されるものではない。また、当該分野において既に知られているその誘導体及び当該分野の技術レベルで容易に製造できる誘導体も本発明の範囲に含まれる。

前記ポリエチレングリコールリンカーは、エチレングリコール繰り返し単位を含みながら、結合体の製造に用いられる作用基を末端に含んでもよい。本発明による持続型結合体は前記作用基を通じてＸとＦが連結された形態であってもよいが、これに制限されない。本発明において、前記非ペプチド性リンカーは２個、又は３個以上の作用基を含んでもよく、各作用基は同一又は互いに異なってもよいが、これに制限されない。

具体的には、前記リンカーは下記化学式（２）で表されるポリエチレングリコール（ＰＥＧ）であってもよいが、これに制限されるものではない：

・・・（２）

ここで、ｎ＝１０～２４００、ｎ＝１０～４８０、又はｎ＝５０～２５０であるが、これに制限されない。

前記持続型結合体でＰＥＧの一部は、－（ＣＨ₂ＣＨ₂Ｏ）_n－構造だけでなく、連結要素と、この－（ＣＨ₂ＣＨ₂Ｏ）_n－の間に介在する酸素原子も含み得るが、これに制限されるものではない。

また、一つの具体的な実施形態において前記持続型結合体は、本発明のペプチド（Ｘ）と免疫グロブリンＦｃ領域（Ｆ）がエチレングリコール繰り返し単位を含むリンカー（Ｌ）により、共有結合で連結された構造であってもよいが、これに制限されるものではない。

本発明で用いられるエチレングリコール繰り返し単位の分子量は０超２００ｋＤａの範囲、具体的に約１～１００ｋＤａの範囲、約１～５０ｋＤａの範囲、約１～３０ｋＤａの範囲、約２～３０ｋＤａの範囲、約１～２０ｋＤａの範囲、より具体的に約３．４ｋＤａ～１０ｋＤａの範囲、より具体的に約３．４ｋＤａであってもよいが、これに制限されない。

本発明において用語、「約」は±０．５、±０．４、±０．３、±０．２、±０．１などを全て含む範囲であり、約という用語の後に来る数値と同等または類似の範囲の数値を全て含むが、これに制限されない。

前記ポリエチレングリコールだけでなく、当該分野に既に知られているこれらの誘導体及び当該分野の技術水準で簡単に製造できる誘導体も本発明の範囲に含まれる。

また、前記Ｆに該当するポリペプチドと結合する本発明の非ペプチド性リンカーは、一種の重合体だけでなく相違する種類の重合体の組合わせが用いられることもできる。

一つの具体的な実施形態において前記非ペプチド性リンカーの両末端は、それぞれＦ、例えば、免疫グロブリンＦｃ領域のアミン基又はチオール基及びＸのアミン基又はチオール基に結合できる。

具体的には、前記非ペプチド性重合体は、両末端にそれぞれＦ（例えば、免疫グロブリンＦｃ領域）及びＸと結合され得る反応基、具体的には、Ｘ，あるいはＦ（例えば、免疫グロブリンＦｃ領域）のＮ末端又はリシンに位置したアミン基、又はシステインのチオール基と結合される反応基を含んでもよいが、これに制限されない。

また、Ｆ，例えば、免疫グロブリンＦｃ領域及びＸと結合される、前記非ペプチド性重合体の反応基はアルデヒド基、マレイミド基及びスクシンイミド誘導体で構成された群から選択されが、これに制限されない。

前記において、アルデヒド基としてプロピオンアルデヒド基又はブチルアルデヒド基を例として挙げることができるが、これに制限されない。

前記において、スクシンイミド誘導体としては、スクシンイミジルバレレート、スクシンイミジルメチルブタノエート、スクシンイミジルメチルプロピオネート、スクシンイミジルブタノエート、スクシンイミジルプロピオネート、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド、ヒドロキシスクシンイミジル、スクシンイミジルカルボキシメチル又はスクシンイミジルカーボネートが用いられてもよいが、これに制限されない。

非ペプチド性リンカーは、このような反応基を通じてＸとＦに連結され得るが、特にこれに制限されるものではない。

また、アルデヒド結合による還元性アミン化で生成された最終産物は、アミド結合で連結されたものより遥かに安定している。アルデヒド反応基は、低いｐＨでＮ末端に選択的に反応し、高いｐＨ、例えば、ｐＨ９．０の条件ではリシン残基と共有結合を形成できる。

また、前記非ペプチド性リンカーの両末端の反応基は互いに同一又は互いに異なってもよく、例えば、一方の末端にはマレイミド基を、他方の末端にはアルデヒド基、プロピオンアルデヒド基、又はブチルアルデヒド基を有することができる。しかし、非ペプチド性リンカーの各末端にＦ、具体的には、免疫グロブリンＦｃ領域とＸが結合され得れば、特にこれに制限されない。

例えば、前記非ペプチド性リンカーの一方の末端には反応基としてマレイミド基を含み、他方の末端にはアルデヒド基、プロピオンアルデヒド基又はブチルアルデヒド基などを含んでもよい。

両末端にヒドロキシ反応基を有するポリエチレングリコールを非ペプチド性重合体として用いる場合には、公知の化学反応により前記ヒドロキシ基を前記多様な反応基で活性化したり、商業的に入手可能な変形された反応基を有するポリエチレングリコールを用いて本発明の持続型タンパク質結合体を製造できる。

一つの具体的な実施形態において前記非ペプチド性重合体はＸのシステイン残基、より具体的にはシステインの-ＳＨ基に連結されるものであってもよいが、これに制限されない。

例えば、前記Ｘに該当するペプチドにおいて１０番のシステイン残基、１３番のシステイン残基、１５番のシステイン残基、１７番のシステイン残基、１９番のシステイン残基、２１番のシステイン残基、２４番のシステイン残基、２８番のシステイン残基、２９番のシステイン残基、３０番のシステイン残基、３１番のシステイン残基、４０番のシステイン残基、又は４１番のシステイン残基に前記非ペプチド性重合体が連結されたものであってもよいが、特にこれに制限されない。

具体的には、前記システイン残基の－ＳＨ基に非ペプチド性重合体の反応基が連結されてもよく、反応基に対しては前述した内容がいずれも適用される。もし、マレイミド－ＰＥＧ－アルデヒドを用いる場合、マレイミド基はＸの－ＳＨ基とチオエーテル（ｔｈｉｏｅｔｈｅｒ）結合で連結し、アルデヒド基はＦ、具体的には免疫グロブリンＦｃの－ＮＨ₂基と還元的アミン化反応を通じて連結できるが、これに制限されず、これは一例に該当する。

また、前記結合体において、非ペプチド性重合体の反応基が免疫グロブリンＦｃ領域のＮ末端に位置した－ＮＨ₂と連結されたものであってもよいが、これは一例に該当する。

本発明における「免疫グロブリンＦｃ領域」とは、免疫グロブリンの重鎖と軽鎖の可変領域を除いたものであり、重鎖定常領域２（ＣＨ２）及び／又は重鎖定常領域３（ＣＨ３）部分を含む部位を意味する。前記免疫グロブリンＦｃ領域は、本発明の結合体の一部をなす一構成であってもよい。

本発明において、Ｆｃ領域と言えば、そこには、全長免疫グロブリンをパパインで消化して得られるＦｃ切片の天然配列だけでなく、Ｆｃ切片天然配列の誘導体、例えば、天然配列の少なくとも１つのアミノ酸残基が欠失（例えば、ヒンジ部位の一部残基が欠失）、挿入、非保存的もしくは保存的置換、又はそれらの組み合わせにより置換されて天然のものとは異なる配列も含まれる。本明細書において「生体適合性物質」又は「キャリア」は前記Ｆｃ領域を意味する。

前記Ｆ（免疫グロブリンＦｃ領域）は、２つのポリペプチド鎖がジスルフィド結合で連結されている構造であり、前記２つの鎖のうち１つの鎖の窒素原子を介してのみ連結されている構造であるが、これに限定されるものではない。前記窒素原子を介する連結は、リシンのεアミノ原子やＮ末端のアミノ基に還元的アミノ化により連結されるものであってもよい。

還元的アミノ化反応とは、反応物のアミン基又はアミノ基が他の反応物のアルデヒド（すなわち、還元的アミノ化が可能な官能基）と反応してアミンを生成し、次いで還元反応によりアミン結合を形成する反応を意味し、当該技術分野で周知の有機合成反応である。

本発明の持続型結合体の一つの具体例として、前記持続型結合体は前記免疫グロブリンＦｃ領域がそのＮ末端窒素原子を通じてリンカーに連結されたものであってもよい。

このような免疫グロブリンＦｃ領域は、重鎖定常領域にヒンジ（ｈｉｎｇｅ）部分を含んでもよいが、これに限定されるものではない。

本発明における免疫グロブリンＦｃ領域は、Ｎ末端に特定のヒンジ配列を含んでもよい。

本発明における「ヒンジ配列」とは、重鎖に位置してジスルフィド結合（ｉｎｔｅｒ ｄｉｓｕｌｆｉｄｅ ｂｏｎｄ）により免疫グロブリンＦｃ領域の二量体を形成する部位を意味する。

本発明における前記ヒンジ配列は、次のアミノ酸配列を有するヒンジ配列中の一部が欠失して１つのシステイン残基のみ有するように変異したものであってもよいが、これに限定されるものではない。：

Ｇｌｕ－Ｓｅｒ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｃｙｓ－Ｐｒｏ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ－Ｐｒｏ（配列番号１１９）。

前記ヒンジ配列は、配列番号１１９のヒンジ配列中の８番目又は１１番目のシステイン残基が欠失して１つのシステイン残基のみ含むものであってもよい。本発明のヒンジ配列は、１つのシステイン残基のみ含む、３～１２個のアミノ酸からなるものであるが、これに限定されるものではない。より具体的には、本発明のヒンジ配列は、次の配列を有するものであってもよい。

Ｇｌｕ－Ｓｅｒ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ－Ｐｒｏ（配列番号１２０）
Ｇｌｕ－Ｓｅｒ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｃｙｓ－Ｐｒｏ－Ｓｅｒ－Ｐｒｏ（配列番号１２１）
Ｇｌｕ－Ｓｅｒ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｃｙｓ－Ｐｒｏ－Ｓｅｒ（配列番号１２２）
Ｇｌｕ－Ｓｅｒ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｃｙｓ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ（配列番号１２３）
Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｃｙｓ－Ｐｒｏ－Ｓｅｒ（配列番号１２４）
Ｇｌｕ－Ｓｅｒ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｃｙｓ（配列番号１２５）
Ｇｌｕ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｃｙｓ（配列番号１２６）
Ｇｌｕ－Ｓｅｒ－Ｐｒｏ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ－Ｐｒｏ（配列番号１２７）
Ｇｌｕ－Ｐｒｏ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ－Ｐｒｏ（配列番号１２８）
Ｐｒｏ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ－Ｐｒｏ（配列番号１２９）
Ｇｌｕ－Ｓｅｒ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ－Ｐｒｏ（配列番号１３０）
Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ－Ｐｒｏ（配列番号１３１）
Ｇｌｕ－Ｓｅｒ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ－Ｐｒｏ（配列番号１３２）
Ｇｌｕ－Ｓｅｒ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｃｙｓ（配列番号１３３）
Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｃｙｓ－Ｐｒｏ（配列番号１３４）
Ｇｌｕ－Ｓｅｒ－Ｌｙｓ－Ｐｒｏ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ－Ｐｒｏ（配列番号１３５）
Ｇｌｕ－Ｓｅｒ－Ｐｒｏ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ－Ｐｒｏ（配列番号１３６）
Ｇｌｕ－Ｐｒｏ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ（配列番号１３７）
Ｓｅｒ－Ｃｙｓ－Ｐｒｏ（配列番号１３８）

より具体的には、前記ヒンジ配列は、配列番号１２９（Ｐｒｏ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ－Ｐｒｏ）又は配列番号１３８（Ｓｅｒ－Ｃｙｓ－Ｐｒｏ）のアミノ酸配列を含むものであってもよいが、これらに限定されるものではない。

本発明の持続型結合体のより具体的な形態において、前記結合体内の免疫グロブリンＦｃ領域のＮ末端はプロリンであり、この結合体は、前記プロリンの窒素原子を通じてＦｃ領域がリンカーに連結されたものである。

本発明の持続型結合体の一つの実施形態において、前記免疫グロブリンＦｃ領域はヒンジ配列が存在することにより、免疫グロブリンＦｃ領域の鎖二つがホモ二量体（ｈｏｍｏｄｉｍｅｒ）やヘテロ二量体（ｈｅｔｅｒｏｄｉｍｅｒ）を形成した二量体の形態であってもよい。本発明の化学式（１）の結合体は、リンカーの一末端が二量体の免疫グロブリンＦｃ領域の１つの鎖に連結された形態であるが、これらに限定されるものではない。

本発明における「Ｎ末端」とは、タンパク質又はポリペプチドのアミノ末端を意味し、アミノ末端の最末端、又は最末端から１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個もしくは１０個以上のアミノ酸まで含むものであってもよい。本発明の免疫グロブリンＦｃ領域は、ヒンジ配列をＮ末端に含んでもよいが、これに限定されるものではない。

また、本発明の免疫グロブリンＦｃ領域は、天然のものと実質的に同等又は向上した効果を有するものであれば、免疫グロブリンの重鎖と軽鎖の可変領域を除き、一部又は全部の重鎖定常領域１（ＣＨ１）及び／又は軽鎖定常領域１（ＣＬ１）を含む拡張されたＦｃ領域であってもよい。さらに、ＣＨ２及び／又はＣＨ３に相当する非常に長い一部のアミノ酸配列が欠失した領域であってもよい。

例えば、本発明の免疫グロブリンＦｃ領域は、１）ＣＨ１ドメイン、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメイン及びＣＨ４ドメイン、２）ＣＨ１ドメイン及びＣＨ２ドメイン、３）ＣＨ１ドメイン及びＣＨ３ドメイン、４）ＣＨ２ドメイン及びＣＨ３ドメイン、５）ＣＨ１ドメイン、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメイン及びＣＨ４ドメインの少なくとも１つのドメインと免疫グロブリンヒンジ領域（又はヒンジ領域の一部）との組み合わせ、６）重鎖定常領域の各ドメインと軽鎖定常領域の二量体である。しかし、これらに限定されるものではない。

また、本発明の持続型結合体の一つの実施形態として、前記免疫グロブリンＦｃ領域Ｆは２つのポリペプチド鎖からなる二量体ｄｉｍｅｒであり、この時、前記Ｆｃ領域二量体ＦとＸはエチレングリコール繰り返し単位を含有する一つの同一のリンカーＬを通じて共有結合的に連結されている。この実施形態の一具体例において、ＸはこのようなＦｃ領域二量体Ｆの両ポリペプチド鎖中の一つのポリペプチド鎖にのみリンカーＬを通じて共有結合で連結されている。この実施形態のさらに具体的な例示において、このようなＦｃ領域二量体Ｆの両ポリペプチド鎖中、Ｘが連結された一つのポリペプチド鎖には一分子のＸのみがＬを通じて共有結合的に連結されている。この実施形態の最も具体的な例示において前記Ｆはホモ二量体である。

本発明の持続型結合体の他の実施形態では、二量体形態の一つのＦｃ領域にＸ２分子が対称に結合されたものであってもよい。ここで、前記免疫グロブリンＦｃ領域とＸはＬにより互いに連結されてもよい。しかし、前記記述の例に限定されるものではない。

また、本発明の免疫グロブリンＦｃ領域には、天然アミノ酸配列だけでなく、その配列誘導体も含まれる。アミノ酸配列誘導体とは、天然アミノ酸配列の少なくとも１つのアミノ酸残基が欠失、挿入、非保存的もしくは保存的置換、又はそれらの組み合わせにより異なる配列を有するものを意味する。

例えば、ＩｇＧ Ｆｃの場合、結合に重要であることが知られている２１４～２３８、２９７～２９９、３１８～３２２又は３２７～３３１番目のアミノ酸残基が修飾に適した部位として用いられてもよい。

また、ジスルフィド結合を形成する部位が除去された誘導体、天然ＦｃからＮ末端のいくつかのアミノ酸が欠失された誘導体、天然ＦｃのＮ末端にメチオニン残基が付加された誘導体など、様々な誘導体が用いられる。さらに、エフェクター機能をなくすために、補体結合部位、例えばＣ１ｑ結合部位が除去されてもよく、ＡＤＣＣ（ａｎｔｉｂｏｄｙ ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｃｅｌｌ ｍｅｄｉａｔｅｄ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ）部位が除去されてもよい。このような免疫グロブリンＦｃ領域の配列誘導体を作製する技術は、国際特許公開第ＷＯ９７／３４６３１号、国際特許公開第９６／３２４７８号などに開示されている。

分子の活性を全体的に変化させないタンパク質及びペプチドにおけるアミノ酸交換は、当該分野で公知である（Ｈ．Ｎｅｕｒａｔｈ， Ｒ．Ｌ．Ｈｉｌｌ， Ｔｈｅ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ， Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， １９７９）。最も一般的な交換は、アミノ酸残基Ａｌａ／Ｓｅｒ、Ｖａｌ／Ｉｌｅ、Ａｓｐ／Ｇｌｕ、Ｔｈｒ／Ｓｅｒ、Ａｌａ／Ｇｌｙ、Ａｌａ／Ｔｈｒ、Ｓｅｒ／Ａｓｎ、Ａｌａ／Ｖａｌ、Ｓｅｒ／Ｇｌｙ、Ｔｈｙ／Ｐｈｅ、Ａｌａ／Ｐｒｏ、Ｌｙｓ／Ａｒｇ、Ａｓｐ／Ａｓｎ、Ｌｅｕ／Ｉｌｅ、Ｌｅｕ／Ｖａｌ、Ａｌａ／Ｇｌｕ、Ａｓｐ／Ｇｌｙ間の交換である。場合によっては、リン酸化（ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ）、硫酸化（ｓｕｌｆａｔｉｏｎ）、アクリル化（ａｃｒｙｌａｔｉｏｎ）、グリコシル化（ｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ）、メチル化（ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ）、ファルネシル化（ｆａｒｎｅｓｙｌａｔｉｏｎ）、アセチル化（ａｃｅｔｙｌａｔｉｏｎ）、アミド化（ａｍｉｄａｔｉｏｎ）などにより修飾（ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ）されてもよい。

前述したＦｃ誘導体は、本発明のＦｃ領域と同等の生物学的活性を示し、Ｆｃ領域の熱、ｐＨなどに対する構造的安定性を向上させたものであってもよい。

また、このようなＦｃ領域は、ヒトや、ウシ、ヤギ、ブタ、マウス、ウサギ、ハムスター、ラット、モルモットなどの動物の生体内から分離した天然のものから得てもよく、形質転換された動物細胞もしくは微生物から得られた組換えたもの又はその誘導体であってもよい。ここで、天然のものから得る方法は、全免疫グロブリンをヒト又は動物の生体から分離し、その後タンパク質分解酵素で処理することにより得る方法であってもよい。パパインで処理するとＦａｂ及びＦｃに切断され、ペプシンで処理するとｐＦ’ｃ及びＦ（ａｂ）₂に切断される。これらは、サイズ排除クロマトグラフィー（ｓｉｚｅ－ｅｘｃｌｕｓｉｏｎ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）などを用いてＦｃ又はｐＦ’ｃを分離することができる。より具体的な実施形態においては、ヒト由来のＦｃ領域を、微生物から得られた組換え免疫グロブリンＦｃ領域である。

また、免疫グロブリンＦｃ領域は、天然糖鎖、天然のものに比べて増加した糖鎖、天然のものに比べて減少した糖鎖、又は糖鎖が除去された形態であってもよい。このような免疫グロブリンＦｃ糖鎖の増減又は除去には、化学的方法、酵素学的方法、微生物を用いた遺伝工学的手法などの通常の方法が用いられてもよい。ここで、Ｆｃから糖鎖が除去された免疫グロブリンＦｃ領域は、補体（ｃ１ｑ）との結合力が著しく低下し、抗体依存性細胞傷害又は補体依存性細胞傷害が低減又は除去されるので、生体内で不要な免疫反応を誘発しない。このようなことから、糖鎖が除去されるか、非グリコシル化された免疫グロブリンＦｃフラグメントは、薬物のキャリアとしての本来の目的に適する。

本発明における「糖鎖の除去（Ｄｅｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ）」とは、酵素で糖を除去したＦｃ領域を意味し、非グリコシル化（Ａｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ）とは、原核生物、より具体的な実施形態においては大腸菌で産生されてグリコシル化されていないＦｃ領域を意味する。

一方、免疫グロブリンＦｃ領域は、ヒト起源、又はウシ、ヤギ、ブタ、マウス、ウサギ、ハムスター、ラット、モルモットなどの動物起源であってもよく、より具体的な実施形態においてはヒト起源である。

また、免疫グロブリンＦｃ領域は、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＭ由来のものであってもよく、それらの組み合わせ（ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ）又はそれらのハイブリッド（ｈｙｂｒｉｄ）によるＦｃ領域であってもよい。より具体的な実施形態においては、ヒト血液に最も豊富なＩｇＧ又はＩｇＭ由来のものであり、さらに具体的な実施形態においては、リガンド結合タンパク質の半減期を延長させることが知られているＩｇＧ由来のものである。一層具体的な実施形態において、前記免疫グロブリンＦｃ領域はＩｇＧ４ Ｆｃ領域であり、最も具体的な実施形態において、前記免疫グロブリンＦｃ領域はヒトＩｇＧ４由来の非グリコシル化されたＦｃ領域であるが、これらに限定されるものではない。

また、一つの具体例として、免疫グロブリンＦｃ領域はヒトＩｇＧ４ Ｆｃフラグメントであり、各単量体の３番目のアミノ酸であるシステイン間のジスルフィド結合（ｉｎｔｅｒ－ｃｈａｉｎ形態）により２個の単量体が連結されたホモ二量体の形態であってもよく、このとき、ホモ二量体は各単量体で３５番及び９５番のシステイン間及び１４１番及び１９９番のシステイン間のジスルフィド結合、すなわち２つのジスルフィド結合（ｉｎｔｒａ－ｃｈａｉｎ形態）を有するものである／有するものであってもよい。

各単量体のアミノ酸は、２２１個のアミノ酸からなり、ホモ二量体を形成するアミノ酸は、全体で４４２個のアミノ酸からなるが、これらに限定されるものではない。具体的には、免疫グロブリンＦｃ切片は、配列番号１３９のアミノ酸配列（２２１個のアミノ酸からなる）を有する２個の単量体が各単量体の３番目のアミノ酸であるシステイン間のジスルフィド結合によりホモ二量体を形成し、前記ホモ二量体の単量体は、それぞれ独立して３５番目と９５番目のシステイン間の内部のジスルフィド結合、及び１４１番目と１９９番目のシステイン間の内部のジスルフィド結合を形成するものであるが、これに限定されるものではない。

一方、本発明における「組み合わせ（ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ）」とは、二量体又は多量体を形成する際に、同一起源の単鎖免疫グロブリンＦｃ領域をコードするポリペプチドが異なる起源の単鎖ポリペプチドに結合することを意味する。すなわち、ＩｇＧ Ｆｃ、ＩｇＡ Ｆｃ、ＩｇＭ Ｆｃ、ＩｇＤ Ｆｃ及びＩｇＥ Ｆｃフラグメントからなる群から選択される少なくとも２つのフラグメントから二量体又は多量体を作製することができる。

また、上述した結合体は、効力の持続性が天然ＧＬＰ－１、ＧＩＰ、もしくはグルカゴンに比べて、又はＦが修飾されていないＸに比べて増加したものであってもよく、このような結合体は上述した形態だけでなく、生分解性ナノパーティクルに封入された形態などを全て含む。

前記ペプチド（例えば、前記ペプチド自体又はこれに生体適合性物質が結合した形態）を含む組成物は高脂血症の予防又は治療用であってもよい。

本発明において用語「予防」とは、前記ペプチド又はこれを含む組成物の投与により高脂血症の発病を抑制又は遅延させる全ての行為を意味し、「治療」とは、前記ペプチド又はこれを含む組成物の投与により高脂血症の症状が好転したり有益になる全ての行為を意味する。

本発明において用語「投与」とは、任意の適切な方法で患者に所定の物質を導入することを意味し、前記組成物の投与経路は特にこれに制限されないが、前記組成物が生体内標的に到達できる任意の一般的な経路を通じて投与され、例えば、腹腔内投与、静脈内投与、筋肉内投与、皮下投与、皮内投与、経口投与、局所投与、鼻内投与、肺内投与、又は直腸内投与などが挙げられる。

本発明の薬学的組成物は薬学的に許容可能な担体、賦形剤又は希釈剤をさらに含んでもよい。このような薬学的に許容可能な担体、賦形剤、又は希釈剤は非自然的に発生したものであり得る。

本発明における「薬学的に許容される」とは、治療効果を発揮する程度の十分な量と副作用を起こさないことを意味し、疾患の種類、患者の年齢、体重、健康状態、性別、薬物に対する感受性、投与経路、投与方法、投与回数、治療期間、配合、同時用いられる薬物などの医学分野における公知の要素により当業者が容易に決定することができる。

本発明のペプチド、又は結合体を含む薬学的組成物は、薬学的に許容される担体をさらに含んでもよい。前記担体は特にこれに限定されないが、経口投与の場合は、結合剤、滑沢剤、崩壊剤、賦形剤、可溶化剤、分散剤、安定化剤、懸濁化剤、色素、香料などを用いることができ、注射剤の場合は、緩衝剤、保存剤、無痛化剤、可溶化剤、等張化剤、安定化剤などを混合して用いることができ、局所投与用の場合は、基剤、賦形剤、滑沢剤、保存剤などを用いることができるが、特にこれらに限定されるものではない。

本発明の組成物の剤形は、前述したような薬学的に許容される担体と混合して様々な形態に製造することができる。例えば、経口投与の場合は、錠剤、トローチ剤、カプセル剤、エリキシル剤、懸濁剤、シロップ剤、ウエハー剤などの形態に製造することができ、注射剤の場合は、使い捨てアンプル又は複数回投薬形態に製造することができる。その他、溶液、懸濁液、錠剤、丸薬、カプセル剤、徐放性製剤などに剤形化することができる。

なお、製剤化に適した担体、賦形剤及び希釈剤の例としては、ラクトース、グルコース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、キシリトール、エリトリトール、マルチトール、デンプン、アカシア、アルギン酸塩、ゼラチン、リン酸カルシウム、ケイ酸カルシウム、セルロース、メチルセルロース、微晶質セルロース、ポリビニルピロリドン、水、ヒドロキシ安息香酸メチル、ヒドロキシ安息香酸プロピル、タルク、ステアリン酸マグネシウム又は鉱油などが挙げられる。また、充填剤、抗凝集剤、滑沢剤、湿潤剤、香料、防腐剤などをさらに含んでもよい。

さらに、本発明の薬学的組成物は、錠剤、丸剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤、懸濁剤、内用液剤、乳剤、シロップ剤、滅菌水溶液剤、非水性溶剤、凍結乾燥剤及び坐剤からなる群から選択されるいずれかの剤形を有してもよい。

さらに、前記組成物は、薬学的分野における通常の方法による患者の体内投与に適した単回投与型の製剤、具体的にはタンパク質医薬品の投与に有用な製剤形態に剤形化し、当該技術分野で通常用いる投与方法を用いて経口、又は皮膚、静脈内、筋肉内、動脈内、骨髄内、髄膜腔内、心室内、肺、経皮、皮下、腹腔内、鼻腔内、消化管内、局所、舌下、膣内もしくは直腸経路が含まれる非経口投与経路で投与することができるが、これらに限定されるものではない。

さらに、前記ペプチド又は結合体は、生理食塩水や有機溶媒のように薬剤に許容される様々な担体（ｃａｒｒｉｅｒ）と混合して用いることができ、安定性や吸収性を向上させるために、グルコース、スクロース、デキストランなどの炭水化物、アスコルビン酸（ａｓｃｏｒｂｉｃ ａｃｉｄ）、グルタチオンなどの抗酸化剤（ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔｓ）、キレート剤、低分子タンパク質、他の安定化剤（ｓｔａｂｉｌｉｚｅｒｓ）などを薬剤として用いることができる。

本発明の薬学的組成物の投与量と回数は、治療する疾患、投与経路、患者の年齢、性別及び体重、疾患の重症度などの様々な関連因子と共に、活性成分である薬物の種類により決定される。

本発明の組成物の総有効量は、単回投与量（ｓｉｎｇｌｅ ｄｏｓｅ）で患者に投与してもよく、複数回投与量（ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｄｏｓｅ）で長期間投与する分割治療方法（ｆｒａｃｔｉｏｎａｔｅｄ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｐｒｏｔｏｃｏｌ）により投与してもよい。本発明の薬学的組成物は、疾患の程度に応じて有効成分の含有量を変えてもよい。具体的には、結合体の総用量は、１日体重１ｋｇ当たり約０．０００１ｍｇ～５００ｍｇであることが好ましい。しかし、前記結合体の用量は、薬学的組成物の投与経路及び治療回数だけでなく、患者の年齢、体重、健康状態、性別、疾患の重症度、食餌、排泄率などの様々な要因を考慮して患者に対する有効投与量が決定されるので、これらを考慮すると、当該分野における通常の知識を有する者であれば、前記本発明の組成物の特定の用途に応じた適切な有効投与量を決定することができるであろう。本発明による薬学的組成物は、本発明の効果を奏するものであれば、その剤形、投与経路及び投与方法が特に限定されるものではない。

本発明の薬学的組成物は、生体内持続性及び力価に優れるので、本発明の薬学的製剤の投与回数及び頻度を大幅に減少させることができる。

本発明の他の実施態様は、前記ペプチド、結合体又は結合体又はそれを含む組成物を必要とする個体に投与するステップを含む、高脂血症の予防又は治療方法を提供する。

前記ペプチド、結合体又はそれを含む組成物、高脂血症、予防及び治療については前述した通りである。

本発明における前記個体とは、高脂血症の疑いのある個体であり、前記高脂血症の疑いのある個体とは、該当する疾患が発症したか、発症するリスクのある、ヒトをはじめとしてマウス、家畜などが含まれる哺乳動物を意味するが、本発明の結合体又はそれを含む前記組成物で治療可能な個体であればいかなるものでもよい。

本発明の方法は、前記ペプチド又は結合体を含む薬学的組成物を薬学的有効量で投与するステップを含んでもよい。好適な総１日使用量は正しい医学的判断の範囲内で担当医により決定され、１回又は数回に分けて投与することができる。しかし、本発明の目的上、特定の患者に対する具体的な治療的有効量は、達成しようとする反応の種類と程度、場合によっては他の製剤が用いられるか否か、具体的な組成物、患者の年齢、体重、一般的な健康状態、性別、食餌、投与時間、投与経路、組成物の分泌率、治療期間、具体的な組成物と共に又は同時に投与される薬物をはじめとする様々な因子や、医薬分野で周知の類似の因子に応じて異なる量であることが好ましい。

本発明のさらに他の実施態様は、高脂血症の予防又は治療のための薬剤の製造における、前記ペプチド、結合体又はこれを含む組成物の用途である。

前記ペプチド、結合体又はそれを含む組成物、高脂血症、予防及び治療については前述した通りである。

以下、実施例を挙げて本発明をより詳細に説明する。しかし、これらの実施例は本発明を例示するものにすぎず、本発明がこれらに限定されるものではない。

実施例１： 三重活性体の製造
ＧＬＰ－１、ＧＩＰ及びグルカゴン受容体の全てに対して活性を有する三重活性体を製造し、下記表２にその配列を示す。

前記表２に示す配列において、Ｘで表記したアミノ酸は非天然アミノ酸であるＡｉｂ（ａｍｉｎｏｉｓｏｂｕｔｙｒｉｃ ａｃｉｄ）であり、下線を引いたアミノ酸は下線を引いたアミノ酸が互いに環を形成することを意味する。また、表２において、ＣＡは４－イミダゾアセチル（４－ｉｍｉｄａｚｏａｃｅｔｙｌ）を意味し、Ｙはチロシンを意味する。

実施例２：三重活性体持続型結合体の製造
両末端にそれぞれマレイミド基及びアルデヒド基を有する１０ｋＤａのＰＥＧ、すなわちマレイミド－ＰＥＧ－アルデヒド（１０ｋＤａ、ＮＯＦ、日本）を実施例１の三重活性体（配列番号２１、２２、４２、４３、５０、７７及び９６）のシステイン残基にペグ化するために、三重活性体とマレイミド－ＰＥＧ－アルデヒドのモル比を１：１～３とし、タンパク質の濃度を１～５ｍｇ／ｍｌとし、低温で０．５～３時間反応させた。ここで、反応は、５０ｍＭ Ｔｒｉｓ緩衝液（ｐＨ７．５）に２０～６０％イソプロパノールを添加した環境下で行った。反応終了後に、前記反応液をＳＰセファロースＨＰ（ＧＥ ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、米国）に適用し、システインにモノペグ化された三重活性体を精製した。

次に、前記精製したモノペグ化した三重活性体と免疫グロブリンＦｃをモル比 １：１～５、とし、タンパク質の濃度を１０～５０ｍｇ／ｍｌとし、４～８℃で１２～１８時間反応させた。反応は、１００ｍＭリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ６．０）に還元剤である１０～５０ｍＭシアノ水素化ホウ素ナトリウムと１０～３０％イソプロパノールを添加した環境下で行った。反応終了後に、前記反応液をブチルセファロースＦＦ精製カラム（ＧＥ ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、米国）とＳｏｕｒｃｅ ＩＳＯ精製カラム（ＧＥ ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、米国）に適用し、三重活性体と免疫グロブリンＦｃとを含む結合体を精製した。精製されたその持続型結合体は分子内で三重活性体ペプチド、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）リンカーとＦｃ二量体が１：１：１のモル比で共有結合連結された構造であり、ＰＥＧリンカーはＦｃ二量体の両ポリペプチド鎖中の一本鎖だけに連結されている。

一方、前記免疫グロブリンＦｃは配列番号１３９のアミノ酸配列（２２１個のアミノ酸で構成される）を有する単量体２つが各単量体の３番のアミノ酸であるシステイン間にジスルフィド結合を通じてホモ二量体を形成し、前記ホモ二量体の単量体は、それぞれ独立に３５番及び９５番のシステイン間の内部のジスルフィド結合及び１４１番及び１９９番のシステイン間の内部のジスルフィド結合が形成されたものである。

製造後に逆相クロマトグラフィー、サイズ排除クロマトグラフィー及びイオン交換クロマトグラフィーで分析した純度は９５％以上であった。

本実施例で製造された三重活性体及び免疫グロブリンＦｃがＰＥＧを通じて連結された結合体は、三重結合体及び免疫グロブリンＦｃを含む結合体又は持続型結合体と命名した。

例えば、配列番号４２の三重活性体及び免疫グロブリンＦｃがＰＥＧを介して連結された結合体を、「配列番号４２と免疫グロブリンＦｃとを含む結合体」又は「配列番号４２の持続型結合体」と命名し、これらは、本発明において混用される。

実験例１：三重活性体及びその持続型結合体のｉｎ ｖｉｔｒｏ活性の測定
実施例１及び２で製造した三重活性体とその持続型結合体の活性を測定するために、ＧＬＰ－１受容体、グルカゴン（ＧＣＧ）受容体及びＧＩＰ受容体がそれぞれ形質転換された細胞株を用いて、ｉｎ ｖｉｔｒｏで細胞活性を測定する方法を用いた。

前記各細胞株は、ＣＨＯ（ｃｈｉｎｅｓｅ ｈａｍｓｔｅｒ ｏｖａｒｙ）にヒトＧＬＰ－１受容体、ヒトＧＣＧ受容体及びヒトＧＩＰ受容体遺伝子をそれぞれ発現するように形質転換されたものであり、ＧＬＰ－１、ＧＣＧ及びＧＩＰの活性を測定するのに適している。よって、それぞれの形質転換細胞株を用いて各部分の活性を測定した。

実施例１と２で製造した三重活性体とその持続型結合体のＧＬＰ－１活性の測定のために、ヒトＧＬＰ－１を５０ｎＭから０．００００４８ｎＭまで４倍連続希釈し、実施例１及び１で製造した三重活性体とその持続型結合体を４００ｎＭから０．０００３８ｎＭまで４倍連続希釈した。前記培養したヒトＧＬＰ－１受容体を発現するＣＨＯ細胞から培養液を除去し、連続希釈した各物質を５μｌずつ前記細胞に添加し、次いでｃＡＭＰ抗体を含む緩衝液を５μｌずつ追加し、その後常温で１５分間培養した。次に、細胞溶解緩衝液（ｃｅｌｌ ｌｙｓｉｓ ｂｕｆｆｅｒ）を含むｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｍｉｘを１０μｌずつ加えて細胞を溶解させ、常温で９０分間反応させた。前記反応が終了した細胞溶解物をＬＡＮＣＥ ｃＡＭＰ ｋｉｔ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ、ＵＳＡ）に適用し、蓄積されたｃＡＭＰからＥＣ₅₀値を算出し、相互比較した。ヒトＧＬＰ－１に対する相対力価を下記表３と表４に示す。

前記実施例１と２で製造した三重活性体とその持続型結合体のＧＣＧ活性の測定のために、ヒトＧＣＧを５０ｎＭから０．００００４８ｎＭまで４倍連続希釈し、実施例１と２で製造した三重活性体とその持続型結合体を４００ｎＭから０．０００３８ｎＭまで４倍連続希釈した。前記培養したヒトＧＣＧ受容体を発現するＣＨＯ細胞から培養液を除去し、連続希釈した各物質を５μｌずつ前記細胞に添加し、次いでｃＡＭＰ抗体を含む緩衝液を５μｌずつ追加し、その後常温で１５分間培養した。次に、細胞溶解緩衝液（ｃｅｌｌ ｌｙｓｉｓ ｂｕｆｆｅｒ）を含むｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｍｉｘを１０μｌずつ加えて細胞を溶解させ、常温で９０分間反応させた。前記反応が終了した細胞溶解物をＬＡＮＣＥ ｃＡＭＰ ｋｉｔ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ、ＵＳＡ）に適用し、蓄積されたｃＡＭＰからＥＣ₅₀値を算出し、相互比較した。ヒトＧＣＧに対する相対力価を下記表３と表４に示す。

前記実施例１と２で製造した三重活性体とその持続型結合体のＧＩＰ活性の測定のために、ヒトＧＩＰを５０ｎＭから０．００００４８ｎＭまで４倍連続希釈し、実施例１と２で製造した三重活性体とその持続型結合体を４００ｎＭから０．０００３８ｎＭまで４倍連続希釈した。前記培養したヒトＧＩＰ受容体を発現するＣＨＯ細胞から培養液を除去し、連続希釈した各物質を５μｌずつ前記細胞に添加し、次いでｃＡＭＰ抗体を含む緩衝液を５μｌずつ追加し、その後常温で１５分間培養した。次に、細胞溶解緩衝液（ｃｅｌｌ ｌｙｓｉｓ ｂｕｆｆｅｒ）を含むｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｍｉｘを１０μｌずつ加えて細胞を溶解させ、常温で９０分間反応させた。前記反応が終了した細胞溶解物をＬＡＮＣＥ ｃＡＭＰ ｋｉｔ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ、ＵＳＡ）に適用し、蓄積されたｃＡＭＰからＥＣ₅₀値を算出し、相互比較した。ヒトＧＩＰに対する相対力価を下記表３と表４に示す。

前記表４は三重活性体持続型結合体の相対力価比を確認した表であり、前記で製造した新規な三重活性体持続型結合体は、ＧＬＰ－１受容体、ＧＩＰ受容体及びグルカゴン受容体を全て活性化することができる三重活性体として機能を有することを確認した。

実験例２：三重活性体持続型結合体の高脂血症治療効果の確認（Ｉｎ ｖｉｖｏ）
Ｇｏｌｄｅｎ ｓｙｒｉａｎ ｈａｍｓｔｅｒ（以下、高脂血症ハムスター）に２週間Ｆｒｕｃｔｏｓｅ食餌摂取を行い、高脂血症モデルを誘導した。実施例１で製造された三重結合体から配列番号４２を選定し、配列番号４２の持続型結合体（１．６、３．１ｎｍｏｌ／ｋｇ、Ｑ２Ｄ）を、高脂血症を誘導したハムスターに３週間皮下を通じて反復投与した。比較群としては、市販中の高脂血症治療剤であるｅｖｏｌｏｃｕｍａｂ（２１９．２ｎｍｏｌ／ｋｇ、ＱＷ）を使用し、高脂血症治療効果を確認した。

図１に示すように、配列番号４２の持続型結合体を３週間反復投与した場合、血中総コレステロール（５０～６０％減少）及びＬＤＬ（７０～８５％減少）が有意に減少したことを確認した反面、ｅｖｏｌｏｃｕｍａｂ投与群においては不足な効能を示した。

実験例３：三重活性体持続型結合体の高脂血症治療効果の確認（Ｉｎ ｖｉｔｒｏ）
ＨｅｐＧ２ ｃｅｌｌを利用してＬＤＬ吸収増加、３－Ｈｙｄｒｏｘｙ－３－ｍｅｔｈｙｌｇｌｕｔａｒｙｌ－ＣｏＡ ｒｅｄｕｃｔａｓｅ（ＨＭＧＣＲ）活性抑制、及び脂肪酸分解促進効果の確認実験により、実施例２の三重活性体持続型結合体の優れた高脂血症治療効能作用機序（Ｍｏｄｅ ｏｆ ａｃｔｉｏｎ）をｉｎ ｖｉｔｒｏで確認した。

（１）三重活性体持続型結合体によるＬＤＬ吸収増加
ＨｅｐＧ２ ｃｅｌｌに配列番号４２の持続型結合体を処理していない対照群（ｃｏｎｔｒｏｌ）と比較し、配列番号４２の持続型結合体（０．０１、０．１、１、１０μＭ）及びｅｖｏｌｏｃｕｍａｂ（１０μｇ／ｍＬ）を４８時間処理した後、ＢＯＤＩＰＹ標識されたＬＤＬの細胞内吸収量を確認し、その結果を図２に示した。

図２に示すように、ＬＤＬ吸収量が配列番号４２の持続型結合体により濃度依存的（ｃｏｎｔｒｏｌ対比１３２．７～３５４％）に増加することを確認した。

（２）三重活性体持続型結合体による３－Ｈｙｄｒｏｘｙ－３－ｍｅｔｈｙｌｇｌｕｔａｒｙｌ－ＣｏＡ ｒｅｄｕｃｔａｓｅ（ＨＭＧＣＲ）活性抑制
コレステロール合成律速酵素（ｒａｔｅ ｌｉｍｉｔｉｎｇ ｅｎｚｙｍｅ）である３－Ｈｙｄｒｏｘｙ－３－ｍｅｔｈｙｌｇｌｕｔａｒｙｌ－ＣｏＡ ｒｅｄｕｃｔａｓｅ（以下、ＨＭＧＣＲ）の活性を測定するために、ＨｅｐＧ２ ｃｅｌｌに配列番号４２の持続型結合体を処理していない対照群（ｃｏｎｔｒｏｌ）と比較して配列番号４２の持続型結合体（１０μＭ）、及びスタチン（１μＭ）を処理した後、ＨＭＧ－ＣｏＡを処理条件でＮＡＤＰＨの減少程度を測定し（ＨＭＧＣＲはＮＡＤＰＨを用いてＨＭＧ－ＣＯＡをコレステロール前駆体であるｍｉｌｏｌｏｎａｔｅに転換する）、その結果を図３に示した。

図３に示すように、配列番号４２の持続型結合体がＨＭＧＣＲの活性を持続的に抑制する（ｃｏｎｔｒｏｌ対比約８０％減少）ことを確認した。

（３）三重活性体持続型結合体による脂肪酸分解促進
脂肪酸分解の副産物であるケトン体（ｋｅｔｏｎｅ ｂｏｄｙ）を測定した。このため、脂肪酸（ｐａｌｍｉｔａｔｅ）を処理したＨｅｐＧ２ ｃｅｌｌに配列番号４２の持続型結合体を処理していない対照群（ｃｏｎｔｒｏｌ）と比較し、配列番号４２の持続型結合体（０．０１、０．１、１、１０μＭ）及びグルカゴン（２．５μＭ）を処理した後、購入可能なケトン体測定ｋｉｔ（Ｓｉｇｍａ ＃ＭＡＫ０４１）を用いて生成されたケトン体量を測定した。

測定の結果、図４に示すように、ケトン体生成が配列番号４２の持続型結合体濃度依存的に増加したことを確認した。

前記のような実験から本発明による三重活性体及びその持続型結合体は、ＬＤＬ吸収増加、ＨＭＧＣＲ活性抑制によるコレステロール合成阻害、及び脂肪酸分解促進を通じて血中中性脂肪及びＬＤＬを減少させることにより、高脂血症に対する治療効果を示すことを確認した。

以上の説明から、本発明の属する技術分野の当業者であれば、本発明がその技術的思想や必須の特徴を変更することなく、他の具体的な形態で実施できることを理解するであろう。なお、前記実施例はあくまで例示的なものであり、限定的なものでないことを理解すべきである。本発明には、明細書ではなく請求の範囲の意味及び範囲とその等価概念から導かれるあらゆる変更や変形された形態が含まれるものと解釈すべきである。

Claims (19)

1. グルカゴン受容体、ＧＬＰ－１（Ｇｌｕｃａｇｏｎ－ｌｉｋｅ ｐｅｐｔｉｄｅ－１）受容体及びＧＩＰ（Ｇｌｕｃｏｓｅ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｉｎｓｕｌｉｏｎｔｒｏｐｉｃ ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ）受容体に対して活性を有する分離されたペプチドを含み、
   前記ペプチドは、下記一般式１で表されるアミノ酸配列を含む、高脂血症の予防又は治療のための薬学的組成物：
   Ｘａａ１－Ｘａａ２－Ｘａａ３－Ｇｌｙ－Ｔｈｒ－Ｐｈｅ－Ｘａａ７－Ｓｅｒ－Ａｓｐ－Ｘａａ１０－Ｓｅｒ－Ｘａａ１２－Ｘａａ１３－Ｘａａ１４－Ｘａａ１５－Ｘａａ１６－Ｘａａ１７－Ｘａａ１８－Ｘａａ１９－Ｘａａ２０－Ｘａａ２１－Ｐｈｅ－Ｘａａ２３－Ｘａａ２４－Ｔｒｐ－Ｌｅｕ－Ｘａａ２７－Ｘａａ２８－Ｘａａ２９－Ｘａａ３０－Ｒ１（一般式１、配列番号１０３）
   上記一般式１において、Ｘａａ１はヒスチジン（Ｈｉｓ、Ｈ）、４－イミダゾアセチル（ＣＡ）、又はチロシン（Ｔｙｒ、Ｙ）であり、Ｘａａ２はグリシン（Ｇｌｙ、Ｇ）、α－メチルグルタミン酸、又はＡｉｂ（ａｍｉｎｏｉｓｏｂｕｔｙｒｉｃ ａｃｉｄ）であり、Ｘａａ３はグルタミン酸（Ｇｌｕ、Ｅ）又はグルタミン（Ｇｌｎ、Ｑ）であり、Ｘａａ７はトレオニン（Ｔｈｒ、Ｔ）又はイソロイシン（Ｉｌｅ、Ｉ）であり、Ｘａａ１０はロイシン（Ｌｅｕ、Ｌ）、チロシン（Ｔｙｒ、Ｙ）、リシン（Ｌｙｓ、Ｋ）、システイン（Ｃｙｓ、Ｃ）、又はバリン（Ｖａｌ、Ｖ）であり、Ｘａａ１２はリシン（Ｌｙｓ、Ｋ）、セリン（Ｓｅｒ、Ｓ）、又はイソロイシン（Ｉｌｅ、Ｉ）であり、Ｘａａ１３はグルタミン（Ｇｌｎ、Ｑ）、チロシン（Ｔｙｒ、Ｙ）、アラニン（Ａｌａ、Ａ）、又はシステイン（Ｃｙｓ、Ｃ）であり、Ｘａａ１４はロイシン（Ｌｅｕ、Ｌ）、メチオニン（Ｍｅｔ、Ｍ）、又はチロシン（Ｔｙｒ、Ｙ）であり、Ｘａａ１５はシステイン（Ｃｙｓ、Ｃ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ、Ｄ）、グルタミン酸（Ｇｌｕ、Ｅ）、又はロイシン（Ｌｅｕ、Ｌ）であり、Ｘａａ１６はグリシン（Ｇｌｙ、Ｇ）、グルタミン酸（Ｇｌｕ、Ｅ）、又はセリン（Ｓｅｒ、Ｓ）であり、Ｘａａ１７はグルタミン（Ｇｌｎ、Ｑ）、アルギニン（Ａｒｇ、Ｒ）、イソロイシン（Ｉｌｅ、Ｉ）、グルタミン酸（Ｇｌｕ、Ｅ）、システイン（Ｃｙｓ、Ｃ）、又はリシン（Ｌｙｓ、Ｋ）であり、Ｘａａ１８はアラニン（Ａｌａ、Ａ）、グルタミン（Ｇｌｎ、Ｑ）、アルギニン（Ａｒｇ、Ｒ）、又はヒスチジン（Ｈｉｓ、Ｈ）であり、Ｘａａ１９はアラニン（Ａｌａ、Ａ）、グルタミン（Ｇｌｎ、Ｑ）、システイン（Ｃｙｓ、Ｃ）、又はバリン（Ｖａｌ、Ｖ）であり、Ｘａａ２０はリシン（Ｌｙｓ、Ｋ）、グルタミン（Ｇｌｎ、Ｑ）、又はアルギニン（Ａｒｇ、Ｒ）であり、Ｘａａ２１はグルタミン酸（Ｇｌｕ、Ｅ）、グルタミン（Ｇｌｎ、Ｑ）、ロイシン（Ｌｅｕ、Ｌ）、システイン（Ｃｙｓ、Ｃ）、又はアスパラギン酸（Ａｓｐ、Ｄ）であり、Ｘａａ２３はイソロイシン（Ｉｌｅ、Ｉ）又はバリン（Ｖａｌ、Ｖ）であり、Ｘａａ２４はアラニン（Ａｌａ、Ａ）、グルタミン（Ｇｌｎ、Ｑ）、システイン（Ｃｙｓ、Ｃ）、アスパラギン（Ａｓｎ、Ｎ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ、Ｄ）、又はグルタミン酸（Ｇｌｕ、Ｅ）であり、Ｘａａ２７はバリン（Ｖａｌ、Ｖ）、ロイシン（Ｌｅｕ、Ｌ）、リシン（Ｌｙｓ、Ｋ）、又はメチオニン（Ｍｅｔ、Ｍ）であり、Ｘａａ２８はシステイン（Ｃｙｓ、Ｃ）、リシン（Ｌｙｓ、Ｋ）、アラニン（Ａｌａ、Ａ）、アスパラギン（Ａｓｎ、Ｎ）、又はアスパラギン酸（Ａｓｐ、Ｄ）であり、Ｘａａ２９はシステイン（Ｃｙｓ、Ｃ）、グリシン（Ｇｌｙ、Ｇ）、グルタミン（Ｇｌｎ、Ｑ）、トレオニン（Ｔｈｒ、Ｔ）、グルタミン酸（Ｇｌｕ、Ｅ）、又はヒスチジン（Ｈｉｓ、Ｈ）であり、Ｘａａ３０はシステイン（Ｃｙｓ、Ｃ）、グリシン（Ｇｌｙ、Ｇ）、リシン（Ｌｙｓ、Ｋ）、又はヒスチジン（Ｈｉｓ、Ｈ）であるか、又は存在せず、
   Ｒ１はシステイン（Ｃｙｓ、Ｃ）、ＧＫＫＮＤＷＫＨＮＩＴ（配列番号１０６）、ｍ－ＳＳＧＡＰＰＰＳ－ｎ（配列番号１０７）、又はｍ－ＳＳＧＱＰＰＰＳ－ｎ（配列番号１０８）であるか、又は存在せず、
   ここで、ｍは－Ｃｙｓ－、－Ｐｒｏ－、又は－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－であり、ｎは－Ｃｙｓ－、－Ｇｌｙ－、－Ｓｅｒ－、又は－Ｈｉｓ－Ｇｌｙ－であるか、又は存在しない。
2. 上記一般式１において、Ｘａａ１４はロイシン又はメチオニンであり、Ｘａａ１５はシステイン、アスパラギン酸又はロイシンである、請求項１に記載の薬学的組成物。
3. 上記一般式１において、Ｘａａ２はグリシン、α－メチルグルタミン酸、又はＡｉｂであり、Ｘａａ７はトレオニンであり、Ｘａａ１０はチロシン、システイン、又はバリンであり、Ｘａａ１２はリシン又はイソロイシンであり、Ｘａａ１３はチロシン、アラニン、グルタミン、又はシステインであり、Ｘａａ１４はロイシン、システイン、又はメチオニンであり、Ｘａａ１５はシステイン、ロイシン、グルタミン酸、又はアスパラギン酸であり、Ｘａａ１７はグルタミン、アルギニン、イソロイシン、システイン、グルタミン酸、又はリシンであり、Ｘａａ１８はアラニン、グルタミン、アルギニン、又はヒスチジンであり、Ｘａａ１９はアラニン、グルタミン、バリン、又はシステインであり、Ｘａａ２０はリシン、アルギニン、又はグルタミンであり、Ｘａａ２１はグルタミン酸、グルタミン、ロイシン、システイン、又はアスパラギン酸であり、Ｘａａ２３はイソロイシン又はバリンであり、Ｘａａ２４はシステイン、アラニン、グルタミン、アスパラギン、グルタミン酸、又はアスパラギン酸であり、Ｘａａ２７はロイシン又はリシンである、請求項１に記載の薬学的組成物。
4. 前記ペプチドは、下記一般式２で表されるアミノ酸配列を含むペプチドである、請求項１に記載の薬学的組成物：
   Ｘａａ１－Ｘａａ２－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｔｈｒ－Ｐｈｅ－Ｔｈｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｐ－Ｘａａ１０－Ｓｅｒ－Ｌｙｓ－Ｘａａ１３－Ｘａａ１４－Ｘａａ１５－Ｘａａ１６－Ｘａａ１７－Ｘａａ１８－Ｘａａ１９－Ｘａａ２０－Ｘａａ２１－Ｐｈｅ－Ｘａａ２３－Ｘａａ２４－Ｔｒｐ－Ｌｅｕ－Ｌｅｕ－Ｘａａ２８－Ｘａａ２９－Ｘａａ３０－Ｘａａ３１－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ｇｌｎ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｓｅｒ－Ｘａａ４０（一般式２、配列番号１０４）
   上記一般式２において、Ｘａａ１は４－イミダゾアセチル、ヒスチジン、又はチロシンであり、Ｘａａ２はグリシン、α－メチルグルタミン酸、又はＡｉｂであり、Ｘａａ１０はチロシン、又はシステインであり、Ｘａａ１３はアラニン、グルタミン、チロシン、又はシステインであり、Ｘａａ１４はロイシン、メチオニン、又はチロシンであり、Ｘａａ１５はアスパラギン酸、グルタミン酸、又はロイシンであり、Ｘａａ１６はグリシン、グルタミン酸、又はセリンであり、Ｘａａ１７はグルタミン、アルギニン、イソロイシン、グルタミン酸、システイン、又はリシンであり、Ｘａａ１８はアラニン、グルタミン、アルギニン、又はヒスチジンであり、Ｘａａ１９はアラニン、グルタミン、システイン、又はバリンであり、Ｘａａ２０はリシン、グルタミン、又はアルギニンであり、Ｘａａ２１はシステイン、グルタミン酸、グルタミン、ロイシン、又はアスパラギン酸であり、Ｘａａ２３はイソロイシン又はバリンであり、Ｘａａ２４はシステイン、アラニン、グルタミン、アスパラギン、又はグルタミン酸であり、Ｘａａ２８はリシン、システイン、アスパラギン、又はアスパラギン酸であり、Ｘａａ２９はグリシン、グルタミン、システイン、又はヒスチジンであり、Ｘａａ３０はシステイン、グリシン、リシン、又はヒスチジンであり、Ｘａａ３１はプロリン又はシステインであり、Ｘａａ４０はシステインであるか、又は存在しない。
5. 上記一般式１において、Ｘａａ２はグリシン、α－メチルグルタミン酸、又はＡｉｂであり、Ｘａａ７はトレオニンであり、Ｘａａ１０はチロシン、システイン、又はバリンであり、Ｘａａ１２はリシン又はイソロイシンであり、Ｘａａ１３はチロシン、アラニン、又はシステインであり、Ｘａａ１４はロイシン又はメチオニンであり、Ｘａａ１５はシステイン又はアスパラギン酸であり、Ｘａａ１７はグルタミン、アルギニン、イソロイシン、システイン、又はリシンであり、Ｘａａ１８はアラニン、アルギニン、又はヒスチジンであり、Ｘａａ１９はアラニン、グルタミン、又はシステインであり、Ｘａａ２０はリシン又はグルタミンであり、Ｘａａ２１はグルタミン酸、システイン、又はアスパラギン酸であり、Ｘａａ２３はバリンであり、Ｘａａ２４はアラニン、グルタミン、システイン、アスパラギン、又はアスパラギン酸であり、Ｘａａ２７はロイシン又はリシンである、請求項１に記載の薬学的組成物。
6. 上記一般式２において、Ｘａａ１３はアラニン、チロシン、又はシステインであり、Ｘａａ１５はアスパラギン酸又はグルタミン酸であり、Ｘａａ１７はグルタミン、アルギニン、システイン、又はリシンであり、Ｘａａ１８はアラニン、アルギニン、又はヒスチジンであり、Ｘａａ２１はシステイン、グルタミン酸、グルタミン、又はアスパラギン酸であり、Ｘａａ２３はイソロイシン又はバリンであり、Ｘａａ２４はシステイン、グルタミン、又はアスパラギンであり、Ｘａａ２８はシステイン、アスパラギン、又はアスパラギン酸であり、Ｘａａ２９はグルタミン、システイン、又はヒスチジンであり、Ｘａａ３０はシステイン、リシン、又はヒスチジンである、請求項２に記載の薬学的組成物。
7. 上記一般式１において、Ｘａａ２はα－メチルグルタミン酸又はＡｉｂであり、Ｘａａ７はトレオニンであり、Ｘａａ１０はチロシン又はシステインであり、Ｘａａ１２はリシン又はイソロイシンであり、Ｘａａ１３はチロシン、アラニン、又はシステインであり、Ｘａａ１４はロイシン又はメチオニンであり、Ｘａａ１５はシステイン又はアスパラギン酸であり、Ｘａａ１６はグルタミン酸であり、Ｘａａ１７はアルギニン、イソロイシン、システイン、又はリシンであり、Ｘａａ１８はアラニン、アルギニン、又はヒスチジンであり、Ｘａａ１９はアラニン、グルタミン、又はシステインであり、Ｘａａ２０はリシン又はグルタミンであり、Ｘａａ２１はグルタミン酸又はアスパラギン酸であり、Ｘａａ２３はバリンであり、Ｘａａ２４はグルタミン、アスパラギン、又はアスパラギン酸であり、Ｘａａ２７はロイシンであり、Ｘａａ２８はシステイン、アラニン、アスパラギン、又はアスパラギン酸である、請求項１に記載の薬学的組成物。
8. 上記一般式１において、Ｘａａ１はヒスチジン又は４－イミダゾアセチルであり、Ｘａａ２はα－メチルグルタミン酸又はＡｉｂであり、Ｘａａ３はグルタミンであり、Ｘａａ７はトレオニンであり、Ｘａａ１０はチロシンであり、Ｘａａ１２はイソロイシンであり、Ｘａａ１３はアラニン又はシステインであり、Ｘａａ１４はメチオニンであり、Ｘａａ１５はアスパラギン酸であり、Ｘａａ１６はグルタミン酸であり、Ｘａａ１７はイソロイシン又はリシンであり、Ｘａａ１８はアラニン又はヒスチジンであり、Ｘａａ１９はグルタミン又はシステインであり、Ｘａａ２０はリシンであり、Ｘａａ２１はアスパラギン酸であり、Ｘａａ２３はバリンであり、Ｘａａ２４はアスパラギンであり、Ｘａａ２７はロイシンであり、Ｘａａ２８はアラニン又はアスパラギンであり、Ｘａａ２９はグルタミン又はトレオニンであり、Ｘａａ３０はシステイン又はリシンであるか、存在しない、請求項１に記載の薬学的組成物。
9. 前記ペプチドは下記一般式３のアミノ酸配列を含むペプチドである、請求項１に記載の薬学的組成物：
   Ｘａａ１－Ｘａａ２－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｔｈｒ－Ｐｈｅ－Ｔｈｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｐ－Ｔｙｒ－Ｓｅｒ－Ｌｙｓ－Ｘａａ１３－Ｌｅｕ－Ａｓｐ－Ｇｌｕ－Ｘａａ１７－Ｘａａ１８－Ｘａａ１９－Ｌｙｓ－Ｘａａ２１－Ｐｈｅ－Ｖａｌ－Ｘａａ２４－Ｔｒｐ－Ｌｅｕ－Ｌｅｕ－Ｘａａ２８－Ｘａａ２９－Ｘａａ３０－Ｘａａ３１－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ｇｌｎ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｓｅｒ－Ｘａａ４０（一般式３、配列番号１０５）
   上記一般式３において、Ｘａａ１はヒスチジン又はチロシンであり、Ｘａａ２はα－メチルグルタミン酸又はＡｉｂであり、Ｘａａ１３はアラニン、チロシン又はシステインであり、Ｘａａ１７はアルギニン、システイン、又はリシンであり、Ｘａａ１８はアラニン又はアルギニンであり、Ｘａａ１９はアラニン又はシステインであり、Ｘａａ２１はグルタミン酸又はアスパラギン酸であり、Ｘａａ２４はグルタミン又はアスパラギンであり、Ｘａａ２８はシステイン又はアスパラギン酸であり、Ｘａａ２９はシステイン、ヒスチジン、又はグルタミンであり、Ｘａａ３０はシステイン又はヒスチジンであり、Ｘａａ３１はプロリン又はシステインであり、Ｘａａ４０はシステイン又は存在しない。
10. 前記Ｒ１はシステイン、ＧＫＫＮＤＷＫＨＮＩＴ（配列番号１０６）、ＣＳＳＧＱＰＰＰＳ（配列番号１０９）、ＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ（配列番号１１０）、ＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳＣ（配列番号１１１）、ＰＳＳＧＡＰＰＰＳ（配列番号１１２）、ＰＳＳＧＡＰＰＰＳＧ（配列番号１１３）、ＰＳＳＧＡＰＰＰＳＨＧ（配列番号１１４）、ＰＳＳＧＡＰＰＰＳＳ（配列番号１１５）、ＰＳＳＧＱＰＰＰＳ（配列番号１１６）、又はＰＳＳＧＱＰＰＰＳＣ（配列番号１１７）であるか、存在しない、請求項１に記載の薬学的組成物。
11. 前記ペプチドは、配列番号１～１０２からなる群から選択されたアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の薬学的組成物。
12. 前記一般式において、Ｎ末端から１６番アミノ酸と２０番アミノ酸は互いに環を形成する、請求項１～９のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
13. 前記ペプチドはそのＣ末端がアミド化された、請求項１～１１のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
14. 前記薬学的組成物はＬＤＬ吸収増加、３－Ｈｙｄｒｏｘｙ－３－ｍｅｔｈｙｌｇｌｕｔａｒｙｌ－ＣｏＡ ｒｅｄｕｃｔａｓｅ（ＨＭＧＣＲ）活性抑制、及び脂肪酸分解促進効果のいずれか一つ以上の効果を有するものである、請求項１～１１のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
15. 下記化学式（１）で表される結合体を含む高脂血症の予防又は治療のための薬学的組成物であって、
    Ｘ － Ｌａ － Ｆ・・・（１）
    ここで、
    Ｘは、前記グルカゴン受容体、ＧＬＰ－１受容体およびＧＩＰ受容体に対して活性を有する、ペプチドであり、
    Ｌは、ポリエチレングリコールであり、
    ａは、０又は自然数であり、ただし、ａが２以上であるとき、それぞれのＬは互いに独立しており、
    Ｆは、免疫グロブリンＦｃ領域であり；
    前記ペプチドは、下記一般式１で表されるアミノ酸配列を含むペプチドである：
    Ｘａａ１－Ｘａａ２－Ｘａａ３－Ｇｌｙ－Ｔｈｒ－Ｐｈｅ－Ｘａａ７－Ｓｅｒ－Ａｓｐ－Ｘａａ１０－Ｓｅｒ－Ｘａａ１２－Ｘａａ１３－Ｘａａ１４－Ｘａａ１５－Ｘａａ１６－Ｘａａ１７－Ｘａａ１８－Ｘａａ１９－Ｘａａ２０－Ｘａａ２１－Ｐｈｅ－Ｘａａ２３－Ｘａａ２４－Ｔｒｐ－Ｌｅｕ－Ｘａａ２７－Ｘａａ２８－Ｘａａ２９－Ｘａａ３０－Ｒ１（一般式１、配列番号１０３）
    前記一般式１において、
    Ｘａａ１はヒスチジン（Ｈｉｓ、Ｈ）、４－イミダゾアセチル（ＣＡ）、又はチロシン（Ｔｙｒ、Ｙ）であり、
    Ｘａａ２はグリシン（Ｇｌｙ、Ｇ）、α－メチルグルタミン酸、又はＡｉｂ（ａｍｉｎｏｉｓｏｂｕｔｙｒｉｃ ａｃｉｄ）であり、
    Ｘａａ３はグルタミン酸（Ｇｌｕ、Ｅ）又はグルタミン（Ｇｌｎ、Ｑ）であり、
    Ｘａａ７はトレオニン（Ｔｈｒ、Ｔ）又はイソロイシン（Ｉｌｅ、Ｉ）であり、
    Ｘａａ１０はロイシン（Ｌｅｕ、Ｌ）、チロシン（Ｔｙｒ、Ｙ）、リシン（Ｌｙｓ、Ｋ）、システイン（Ｃｙｓ、Ｃ）、又はバリン（Ｖａｌ、Ｖ）であり、
    Ｘａａ１２はリシン（Ｌｙｓ、Ｋ）、セリン（Ｓｅｒ、Ｓ）、又はイソロイシン（Ｉｌｅ、Ｉ）であり、
    Ｘａａ１３はグルタミン（Ｇｌｎ、Ｑ）、チロシン（Ｔｙｒ、Ｙ）、アラニン（Ａｌａ、Ａ）、又はシステイン（Ｃｙｓ、Ｃ）であり、
    Ｘａａ１４はロイシン（Ｌｅｕ、Ｌ）、メチオニン（Ｍｅｔ、Ｍ）、又はチロシン（Ｔｙｒ、Ｙ）であり、
    Ｘａａ１５はシステイン（Ｃｙｓ、Ｃ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ、Ｄ）、グルタミン酸（Ｇｌｕ、Ｅ）、又はロイシン（Ｌｅｕ、Ｌ）であり、
    Ｘａａ１６はグリシン（Ｇｌｙ、Ｇ）、グルタミン酸（Ｇｌｕ、Ｅ）、又はセリン（Ｓｅｒ、Ｓ）であり、
    Ｘａａ１７はグルタミン（Ｇｌｎ、Ｑ）、アルギニン（Ａｒｇ、Ｒ）、イソロイシン（Ｉｌｅ、Ｉ）、グルタミン酸（Ｇｌｕ、Ｅ）、システイン（Ｃｙｓ、Ｃ）、又はリシン（Ｌｙｓ、Ｋ）であり、
    Ｘａａ１８はアラニン（Ａｌａ、Ａ）、グルタミン（Ｇｌｎ、Ｑ）、アルギニン（Ａｒｇ、Ｒ）、又はヒスチジン（Ｈｉｓ、Ｈ）であり、
    Ｘａａ１９はアラニン（Ａｌａ、Ａ）、グルタミン（Ｇｌｎ、Ｑ）、システイン（Ｃｙｓ、Ｃ）、又はバリン（Ｖａｌ、Ｖ）であり、
    Ｘａａ２０はリシン（Ｌｙｓ、Ｋ）、グルタミン（Ｇｌｎ、Ｑ）、又はアルギニン（Ａｒｇ、Ｒ）であり、
    Ｘａａ２１はグルタミン酸（Ｇｌｕ、Ｅ）、グルタミン（Ｇｌｎ、Ｑ）、ロイシン（Ｌｅｕ、Ｌ）、システイン（Ｃｙｓ、Ｃ）、又はアスパラギン酸（Ａｓｐ、Ｄ）であり、
    Ｘａａ２３はイソロイシン（Ｉｌｅ、Ｉ）又はバリン（Ｖａｌ、Ｖ）であり、
    Ｘａａ２４はアラニン（Ａｌａ、Ａ）、グルタミン（Ｇｌｎ、Ｑ）、システイン（Ｃｙｓ、Ｃ）、アスパラギン（Ａｓｎ、Ｎ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ、Ｄ）、又はグルタミン酸（Ｇｌｕ、Ｅ）であり、
    Ｘａａ２７はバリン（Ｖａｌ、Ｖ）、ロイシン（Ｌｅｕ、Ｌ）、リシン（Ｌｙｓ、Ｋ）、又はメチオニン（Ｍｅｔ、Ｍ）であり、
    Ｘａａ２８はシステイン（Ｃｙｓ、Ｃ）、リシン（Ｌｙｓ、Ｋ）、アラニン（Ａｌａ、Ａ）、アスパラギン（Ａｓｎ、Ｎ）、又はアスパラギン酸（Ａｓｐ、Ｄ）であり、
    Ｘａａ２９はシステイン（Ｃｙｓ、Ｃ）、グリシン（Ｇｌｙ、Ｇ）、グルタミン（Ｇｌｎ、Ｑ）、トレオニン（Ｔｈｒ、Ｔ）、グルタミン酸（Ｇｌｕ、Ｅ）、又はヒスチジン（Ｈｉｓ、Ｈ）であり、
    Ｘａａ３０はシステイン（Ｃｙｓ、Ｃ）、グリシン（Ｇｌｙ、Ｇ）、リシン（Ｌｙｓ、Ｋ）、又はヒスチジン（Ｈｉｓ、Ｈ）であるか、又は存在せず、
    Ｒ１はシステイン（Ｃｙｓ、Ｃ）、ＧＫＫＮＤＷＫＨＮＩＴ（配列番号１０６）、ｍ－ＳＳＧＡＰＰＰＳ－ｎ（配列番号１０７）、又はｍ－ＳＳＧＱＰＰＰＳ－ｎ（配列番号１０８）であるか、又は存在せず、
    ここで、
    ｍは－Ｃｙｓ－、－Ｐｒｏ－、又は－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－であり、
    ｎは－Ｃｙｓ－、－Ｇｌｙ－、－Ｓｅｒ－、又は－Ｈｉｓ－Ｇｌｙ－であるか、又は存在しない。
16. 前記免疫グロブリンＦｃ領域はＩｇＧＦｃ領域である、請求項１５に記載の薬学的組成物。
17. 前記薬学的組成物はＬＤＬ吸収増加、３－Ｈｙｄｒｏｘｙ－３－ｍｅｔｈｙｌｇｌｕｔａｒｙｌ－ＣｏＡ ｒｅｄｕｃｔａｓｅ（ＨＭＧＣＲ）活性抑制、及び脂肪酸分解促進効果のいずれか一つ以上の効果を有するものである、請求項１５に記載の薬学的組成物。
18. 前記薬学的組成物投与後２４時間～４８時間後の３－Ｈｙｄｒｏｘｙ－３－ｍｅｔｈｙｌｇｌｕｔａｒｙｌ－ＣｏＡ ｒｅｄｕｃｔａｓｅ（ＨＭＧＣＲ）の活性が５０％未満のものである、請求項１に記載の薬学的組成物。
19. 前記薬学的組成物は血中ＬＤＬ濃度及び中性脂肪濃度を減少させるものである、請求項１に記載の薬学的組成物。

Images