JP2023519395A - ３’－ｏ－アミノ－２’－デオキシリボヌクレオシド－５’－三リン酸を調製する方法 - Google Patents
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本発明は、アリールオキシアミンを用いる処理によって３’－（Ｎ－アセトン－オキシム）－２’－デオキシヌクレオシド三リン酸を３’－Ｏ－アミン－２’－デオキシヌクレオシド三リン酸に変換することによって、３’－ヒドロキシ－２’－デオキシリボヌクレオシド－５’－三リン酸夾雑物が低減された３’－Ｏ－アミノ－２’－デオキシリボヌクレオシド－５’－三リン酸を調製する方法に関する。【選択図】図１
Description
合成生物学、遺伝子組み換え、ハイスループットシーケンシング、および分子診断といった多くの分野における合成ポリヌクレオチドに対する需要の高まりのためだけでなく、例えば生成物の長さの上限、ならびに有機溶媒の使用および廃棄の必要性など、ポリヌクレオチドを合成するための化学的手法における制約のため、ポリヌクレオチドを合成するための酵素的手法に対する関心が近年高まっている（Ｊｅｎｓｅｎら、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、５７：１８２１～１８３２（２０１８））。酵素合成の魅力は、その特異性と効率の高さ、および危険な廃棄物を取り扱う必要がない穏やかな水性反応条件での使用である。
現在、多くの酵素的手法は、テンプレート不要のポリメラーゼを使用して、支持体に付着した一本鎖イニシエーターまたは延長された鎖に３’－Ｏ－ブロックヌクレオシド三リン酸を付加し、続いて脱ブロックすることを所望の配列のポリヌクレオチドが得られるまで繰り返す（例えば、先に挙げたＪｅｎｓｅｎら）。様々な３’－Ｏ－ブロック基が使用可能であるが、特に関心を集めるのは、その大きさが小さく、かつ切断条件が容易であるため、３’－アミノブロック基の使用である（例えば、ＵＳ特許７５４４７９４および８２１２０２０）。３’－Ｏ－アミノ－２’デオキシリボヌクレオシド－５’－三リン酸の合成は、対応する２’－デオキシリボヌクレオシドから出発する図１に示されるスキームのとおりである。５’ヒドロキシ基の保護の後、Ｏ－アミノ部分は、続く光延条件下での２回のヒドロキシ反転を通して３’位に挿入されるＮ－ヒドロキシフタルイミド部分として「マスクされた」（または保護された）形態で供給される（Ｓｗａｍｙら、Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．１０９：２５５１～２６５１（２００９））。次いで、ヌクレオシドの３’－Ｏ－アミノ基および５’－ヒドロキシ基は、何れも脱保護される。しかし、５’－ヒドロキシ基の三リン酸化は、３’－Ｏ－アミノ基が再度保護されることを必要とし、これは、３’－Ｏ－アミノ基をオキシムに変換することによって達成され、次いでオキシムは、三リン酸化反応後にアルコキシルアミンを用いる処理によって最終的に脱保護される。しかし、この従来の脱保護手法は、３’－Ｏ－アミンをさらに切断してしまう。ポリヌクレオチド合成における酵素カップリング反応で３’－ヒドロキシル－２’－デオキシヌクレオシド三リン酸が存在すると、成長する鎖への二重付加を起こし、ポリヌクレオチド生成物中に除去困難な「ｎ＋１」失敗配列（ｆａｉｌｕｒｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅ）が生成される。
上記を鑑み、３’－ヒドロキシル－２’－デオキシヌクレオシド三リン酸夾雑物を存在させることなく、３’－Ｏ－アミノ－２’－デオキシヌクレオシド三リン酸の合成に方法を使用することができれば、テンプレート不要のポリメラーゼを使用するポリヌクレオチドの酵素合成は進展するだろう。
本発明は、３’－ヒドロキシ－２’－デオキシリボヌクレオシド－５’－三リン酸夾雑物が低減された３’－Ｏ－アミノ－２’－デオキシリボヌクレオシド－５’－三リン酸を調製する方法に関する。本発明は、本発明の方法によって製造される組成物も含む。
一部の実施形態において、そのような本発明の方法は、以下の工程を含む：
（ａ）２’－デオキシリボヌクレオシドの５’－ヒドロキシ基を保護する工程；（ｂ）工程（ａ）で得られた化合物の（Ｓ）－３’－ヒドロキシ基を（Ｒ）－３’－ヒドロキシ基に変換する工程；（ｃ）工程（ｂ）の生成物をＮ－ヒドロキシフタルイミドと反応させて５’－Ｏ－保護－３’－Ｏ－フタルイミド－２’－デオキシヌクレオシドを生成する工程；（ｄ）工程（ｃ）の生成物の５’－ヒドロキシ基を脱保護する工程；（ｅ）工程（ｄ）の生成物を３’－Ｏ－（Ｎ－アセトン－オキシム）－２’－デオキシヌクレオシドに変換する工程；（ｆ）工程（ｅ）の生成物の５’－ヒドロキシ基を三リン酸化して３’－Ｏ－（Ｎ－アセトン－オキシム）－２’－デオキシヌクレオシド三リン酸を生じさせる工程；および（ｇ）工程（ｆ）の生成物をアリールオキシアミンで処理することによって工程（ｆ）の生成物を３’－Ｏ－アミン－２’－デオキシヌクレオシド三リン酸に変換する工程。
（ａ）２’－デオキシリボヌクレオシドの５’－ヒドロキシ基を保護する工程；（ｂ）工程（ａ）で得られた化合物の（Ｓ）－３’－ヒドロキシ基を（Ｒ）－３’－ヒドロキシ基に変換する工程；（ｃ）工程（ｂ）の生成物をＮ－ヒドロキシフタルイミドと反応させて５’－Ｏ－保護－３’－Ｏ－フタルイミド－２’－デオキシヌクレオシドを生成する工程；（ｄ）工程（ｃ）の生成物の５’－ヒドロキシ基を脱保護する工程；（ｅ）工程（ｄ）の生成物を３’－Ｏ－（Ｎ－アセトン－オキシム）－２’－デオキシヌクレオシドに変換する工程；（ｆ）工程（ｅ）の生成物の５’－ヒドロキシ基を三リン酸化して３’－Ｏ－（Ｎ－アセトン－オキシム）－２’－デオキシヌクレオシド三リン酸を生じさせる工程；および（ｇ）工程（ｆ）の生成物をアリールオキシアミンで処理することによって工程（ｆ）の生成物を３’－Ｏ－アミン－２’－デオキシヌクレオシド三リン酸に変換する工程。
一部の実施形態において、そのような組成物は、３’－Ｏ－アミノ－２’－デオキシリボヌクレオシド－５’－三リン酸およびアリールオキシアミンを２体積％未満の濃度で含有する水溶液を含む。
本発明の前述したこれらの特徴的な態様、および他の態様を、その一部が図で示され、かつ続く特許請求の範囲の節において特徴付けられる、説明される多数の実装形態および用途において例示する。しかし、上記の発明の概要は、本発明の説明される各実施形態または全ての実装形態を記載することを意図するものではない。
本発明の一般的原理は、特に、図面に示され、かつ詳細に説明されるような例として本明細書により詳細に開示される。しかし、記載される特定の実施形態に本発明を限定することを意図するものではないことが理解されるべきである。本発明は、いくつかの実施形態についてその詳細が示される、様々な変形例および代替形態を受け入れる。本発明の原理および範囲に含まれる全ての変形例、均等物、および代替例を包含するよう意図される。
本発明は、共通の工程：
（ａ）２’－デオキシリボヌクレオシドの５’－ヒドロキシ基を保護する工程；
（ｂ）工程（ａ）で得られた化合物の（Ｓ）－３’－ヒドロキシ基を（Ｒ）－３’－ヒドロキシ基に変換する工程；
（ｃ）工程（ｂ）の生成物をＮ－ヒドロキシフタルイミドと反応させて５’－Ｏ－保護－３’－Ｏ－フタルイミド－２’－デオキシヌクレオシドを生成する工程；
（ｄ）工程（ｃ）の生成物の５’－ヒドロキシ基を脱保護する工程；
（ｅ）工程（ｄ）の生成物を３’－Ｏ－（Ｎ－アセトン－オキシム）－２’－デオキシヌクレオシドに変換する工程；
（ｆ）工程（ｅ）の生成物の５’－ヒドロキシ基を三リン酸化して３’－Ｏ－（Ｎ－アセトン－オキシム）－２’－デオキシヌクレオシド三リン酸を生じさせる工程；および
（ｇ）工程（ｆ）の生成物を３’－Ｏ－アミン－２’－デオキシヌクレオシド三リン酸に変換する工程
を用いて３’－Ｏ－アミノ－２’－デオキシリボヌクレオシド－５’－三リン酸を調製する方法に関する。
（ａ）２’－デオキシリボヌクレオシドの５’－ヒドロキシ基を保護する工程；
（ｂ）工程（ａ）で得られた化合物の（Ｓ）－３’－ヒドロキシ基を（Ｒ）－３’－ヒドロキシ基に変換する工程；
（ｃ）工程（ｂ）の生成物をＮ－ヒドロキシフタルイミドと反応させて５’－Ｏ－保護－３’－Ｏ－フタルイミド－２’－デオキシヌクレオシドを生成する工程；
（ｄ）工程（ｃ）の生成物の５’－ヒドロキシ基を脱保護する工程；
（ｅ）工程（ｄ）の生成物を３’－Ｏ－（Ｎ－アセトン－オキシム）－２’－デオキシヌクレオシドに変換する工程；
（ｆ）工程（ｅ）の生成物の５’－ヒドロキシ基を三リン酸化して３’－Ｏ－（Ｎ－アセトン－オキシム）－２’－デオキシヌクレオシド三リン酸を生じさせる工程；および
（ｇ）工程（ｆ）の生成物を３’－Ｏ－アミン－２’－デオキシヌクレオシド三リン酸に変換する工程
を用いて３’－Ｏ－アミノ－２’－デオキシリボヌクレオシド－５’－三リン酸を調製する方法に関する。
「（Ｒ）－３’－ヒドロキシ基」といったように、基または部分に先行する「（Ｓ）」または「（Ｒ）」という用語は、当該基に置換される炭素の絶対配置を意味する。炭素の位置は、「（Ｓ）」または「（Ｒ）」という用語に続く場合もある。「（Ｒ）－３’－ヒドロキシ基」において、ヒドロキシ基で置換される３’位の炭素の絶対配置はＲ配置である。
アデニン、グアニン、シトシン、チミン、およびウラシルの２’－デオキシヌクレオシドは、それぞれ、２’－デオキシアデノシン、２’－デオキシグアノシン、２’－デオキシシチジン、２’－デオキシチミジン、および２’－デオキシウリジンである。
上記の共通の工程は、数多くの具体的な実施形態と共に以下の文献に開示される：ＤｅＣｌｅｒｃｑら、欧州特許出願ＥＰ０３８１３３５；近藤ら、Ｓｙｍｐ．Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｃｈｅｍ．、１６：９３～９６（１９８５）；Ｂｕｒｇｅｓｓら、Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍ．８：９１５～９１６（１９９４）；Ｈｕｔｔｅｒら、Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ、Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ＆Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ、２９（１１）：８７９～８９５（２０１０）；Ｓａｒａｃら、国際特許公開ＷＯ２０２０／０４３８４６；米国特許７５４４７９４；８０３４９２３；８２１２０２０；および１０４７２３８３。
本発明によると、図２に説明されるように、工程（ｆ）の３’－Ｏ－（Ｎ－アセトン－オキシム）－２’－デオキシヌクレオシド三リン酸は、アリールオキシアミンで処理することによって３’－Ｏ－アミン－２’－デオキシヌクレオシド三リン酸に変換される。一部の実施形態において、アリールオキシアミンは、無置換もしくは置換Ｏ－ベンジルヒドロキシルアミン、または置換もしくは無置換フェニルヒドロキシルアミンである。例示的置換基として、メトキシ、ニトロ、ハロが挙げられ、ハロは、特にフルオロ、クロロ、またはブロモである。例示的置換Ｏ－ベンジルヒドロキシルアミンとして、Ｏ－（２，３，４，５，６－ペンタフルオロベンジル）ヒドロキシルアミンおよびＯ－（４－ニトロベンジル）ヒドロキシルアミンが挙げられるが、これらに限定されない。一実施形態において、本発明の方法で使用されるアリールオキシアミンは、Ｏ－ベンジルヒドロキシルアミンである。別の実施形態において、本発明の方法で使用されるアリールオキシアミンは、置換または無置換フェニルヒドロキシルアミンである。上記のように、例示的置換基として、メトキシ、ニトロ、ハロが挙げられ、ハロは、特にフルオロ、クロロ、またはブロモである。変換工程（ｇ）は、アリールオキシアミンの水溶液を使用して行われてよい。一部の実施形態において、ピリミジン３’－Ｏ－（Ｎ－アセトン－オキシム）－２’－デオキシヌクレオシド三リン酸は、６．８から７．０の間のｐＨで変換または脱保護されて３’－Ｏ－アミン－２’－デオキシヌクレオシド三リン酸を形成する。一部の実施形態において、プリン３’－Ｏ－（Ｎ－アセトン－オキシム）－２’－デオキシヌクレオシド三リン酸は、６．０から６．８の間のｐＨで変換または脱保護されて３’－Ｏ－アミン－２’－デオキシヌクレオシド三リン酸を形成する。一部の実施形態において、そのような変換に使用されるアリールオキシアミンの濃度は、変換を引き起こすのに十分高いが、ポリヌクレオチド合成に使用する前に３’－Ｏ－アミン－２’－デオキシヌクレオシド三リン酸を精製する必要がないほど十分低い濃度である。一部の実施形態において、そのようなアリールオキシアミンの濃度は、１から１００パーセント（ｖ／ｖ）までの範囲内である。一部の実施形態において、そのようなアリールオキシアミンの濃度は、１から２パーセント（ｖ／ｖ）までの範囲内である。他の実施形態において、そのようなアリールオキシアミンの濃度は、２パーセント（ｖ／ｖ）未満である。他の実施形態において、そのようなアリールオキシアミンの濃度は、１パーセント（ｖ／ｖ）未満である。
一部の実施形態において、本発明の方法で使用されるアリールオキシアミンとして、置換または無置換Ｏ－ベンジルヒドロキシルアミン、置換または無置換Ｏ－フェニルヒドロキシルアミン、置換または無置換Ｏ－フェニルエチルジドロキシルアミン、置換または無置換Ｏ－ベンジルオキシエチルヒドロキシルアミン、および置換または無置換Ｏ－フェノキシエチルヒドロキシルアミンが挙げられ、置換基は、ハロ、メトキシ、ニトロから選択される。一部の実施形態において、ハロは、フルオロ、クロロ、またはブロモである。一部の実施形態において、本発明の方法で使用されるアリールオキシアミンとして、Ｏ－ベンジルヒドロキシルアミン、Ｏ－フェニルヒドロキシルアミン、Ｏ－［（２－メトキシフェニル）メチル］ヒドロキシルアミン、Ｏ－［（３，５－ジクロロフェニル）メチル］ヒドロキシルアミン、Ｏ－（３－クロロベンジル）ヒドロキシルアミン、Ｏ－（４－ニトロベンジル）ヒドロキシルアミン、Ｏ－（４－メトキシベンジル）ヒドロキシルアミン、Ｏ－［（３，４－ジクロロフェニル）メチル］ヒドロキシルアミン、Ｏ－（２－クロロベンジル）ヒドロキシルアミン、Ｏ－［４－（トリフルオロメチル）ベンジル］ヒドロキシルアミン、Ｏ－［（２，５－ジクロロフェニル）メチル］ヒドロキシルアミン、Ｏ－（２－メチルベンジル）ヒドロキシルアミン、Ｏ－（２，３，４，５，６－ペンタフルオロベンジル）ヒドロキシルアミン、Ｏ－（４－ニトロベンジル）ヒドロキシルアミン、Ｏ－（２－（ベンジルオキシ）エチル）ヒドロキシルアミン、Ｏ－（４－ブロモフェニル）ヒドロキシルアミン、Ｏ－［２－（トリフルオロメチル）フェニル］ヒドロキシルアミン、またはＯ－（２－フェノキシエチル）ヒドロキシルアミンが挙げられるがこれらに限定されない。
３’－Ｏ－アミノ－２’－デオキシリボヌクレオシド－５’－三リン酸およびアリールオキシアミンを２体積％未満の濃度で含有する水溶液を含む組成物を提供することも本発明の目的である。特定の実施形態において、前記アリールオキシアミンは、Ｏ－ベンジルヒドロキシルアミンまたはＯ－フェニルヒドロキシルアミンである。特に、前記３’－Ｏ－アミノ－２’－デオキシリボヌクレオシド－５’－三リン酸は、アデニン、チミン、グアニン、シトシン、ウラシル、イノシン、キサンチン、またはヒポキサンチンからなる群から選択される塩基を有してよい。ある実施形態において、３’－Ｏ－アミノ－２’－デオキシリボヌクレオシド－５’－三リン酸は、図４に示される塩基からなる群から選択される塩基を有する。有利には、結合基は、アルキルリンカー、アルケニルリンカー、チオエーテルリンカー、アミノアルキル、アミノアリル、アジドアルキル、アジドアリルプロパルギルアミン、ビスプロパルギル、またはビスプロパルギル－ＰＥＧである。
実施例１：プリン核酸塩基（Ａ、Ｇ）３’－Ｏ－アミノ－２’－デオキシグアノシン－５’－三リン酸の脱保護
３’－Ｏ－（Ｎ－アセトン－オキシム）－２’－デオキシグアノシン－５’－三リン酸の溶液（５．０ｍＬ、５．０ｍｍｏｌ、１００ｍＭ原液）に、水５．０ｍＬおよびＯ－ベンジルヒドロキシルアミン（６．２ｍＬ、５０ｍｍｏｌ）を加え、１０％ｗ／ｗの含水酢酸を添加することによってｐＨを６．５に調整した。反応を６時間攪拌した。ジエチルエーテル（３×５０ｍＬ）で水性相を抽出した。水相を凍らせ、１時間凍結乾燥した。図３Ａは、２時間後の上記クルード反応混合物のクロマトグラムである。有機溶媒を用いて過剰なＯ－ベンジルヒドロキシルアミンを液液抽出で除去する。３’－ＯＮＨ２－ヌクレオシド三リン酸の水性組成物は、少量のＯ－ベンジルヒドロキシルアミン、酢酸ナトリウム、および塩化ナトリウムを含有してよい。図３Ｂは、３’－Ｏ－アミノ－２’－デオキシグアノシン－５’－三リン酸生成物のＨＰＬＣクロマトグラムである。実施例における液液抽出溶媒は、ジエチルエーテルであるが、メチルｔｅｒｔ－ブチルエーテル、ジクロロメタン、トルエン、ペンタンなど、およびそれらの混合物といった任意の有機溶媒でありうる。
３’－Ｏ－（Ｎ－アセトン－オキシム）－２’－デオキシグアノシン－５’－三リン酸の溶液（５．０ｍＬ、５．０ｍｍｏｌ、１００ｍＭ原液）に、水５．０ｍＬおよびＯ－ベンジルヒドロキシルアミン（６．２ｍＬ、５０ｍｍｏｌ）を加え、１０％ｗ／ｗの含水酢酸を添加することによってｐＨを６．５に調整した。反応を６時間攪拌した。ジエチルエーテル（３×５０ｍＬ）で水性相を抽出した。水相を凍らせ、１時間凍結乾燥した。図３Ａは、２時間後の上記クルード反応混合物のクロマトグラムである。有機溶媒を用いて過剰なＯ－ベンジルヒドロキシルアミンを液液抽出で除去する。３’－ＯＮＨ２－ヌクレオシド三リン酸の水性組成物は、少量のＯ－ベンジルヒドロキシルアミン、酢酸ナトリウム、および塩化ナトリウムを含有してよい。図３Ｂは、３’－Ｏ－アミノ－２’－デオキシグアノシン－５’－三リン酸生成物のＨＰＬＣクロマトグラムである。実施例における液液抽出溶媒は、ジエチルエーテルであるが、メチルｔｅｒｔ－ブチルエーテル、ジクロロメタン、トルエン、ペンタンなど、およびそれらの混合物といった任意の有機溶媒でありうる。
実施例２：ピリミジン核酸塩基（Ｔ、Ｃ）３’－Ｏ－アミノ－２’－デオキシシチジン－５’－三リン酸の脱保護
３’－Ｏ－（Ｎ－アセトン－オキシム）－２’－デオキシシチジン－５’－三リン酸の溶液（５．０ｍＬ、５．０ｍｍｏｌ、１００ｍＭ原液）に、水５．０ｍＬおよびＯ－ベンジルヒドロキシルアミン（６．２ｍＬ、５０ｍｍｏｌ）を加え、１０％ｗ／ｗの含水酢酸を添加することによってｐＨを６．８に調整した。反応を６時間攪拌した。ジエチルエーテル（３×５０ｍＬ）で水性相を抽出した。水相を凍らせ、１時間凍結乾燥した。
３’－Ｏ－（Ｎ－アセトン－オキシム）－２’－デオキシシチジン－５’－三リン酸の溶液（５．０ｍＬ、５．０ｍｍｏｌ、１００ｍＭ原液）に、水５．０ｍＬおよびＯ－ベンジルヒドロキシルアミン（６．２ｍＬ、５０ｍｍｏｌ）を加え、１０％ｗ／ｗの含水酢酸を添加することによってｐＨを６．８に調整した。反応を６時間攪拌した。ジエチルエーテル（３×５０ｍＬ）で水性相を抽出した。水相を凍らせ、１時間凍結乾燥した。
Claims (9)
- （ａ）２’－デオキシリボヌクレオシドの５’－ヒドロキシ基を保護する工程；
（ｂ）工程（ａ）で得られた化合物の（Ｓ）－３’－ヒドロキシ基を（Ｒ）－３’－ヒドロキシ基に変換する工程；
（ｃ）工程（ｂ）の生成物をＮ－ヒドロキシフタルイミドと反応させて５’－Ｏ－保護－３’－Ｏ－フタルイミド－２’－デオキシヌクレオシドを生成する工程；
（ｄ）工程（ｃ）の生成物の５’－ヒドロキシ基を脱保護する工程；
（ｅ）工程（ｄ）の生成物を３’－Ｏ－（Ｎ－アセトン－オキシム）－２’－デオキシヌクレオシドに変換する工程；
（ｆ）工程（ｅ）の生成物の５’－ヒドロキシ基を三リン酸化して３’－Ｏ－（Ｎ－アセトン－オキシム）－２’－デオキシヌクレオシド三リン酸を生じさせる工程；および
（ｇ）工程（ｆ）の生成物をアリールオキシアミンで処理することによって工程（ｆ）の生成物を３’－Ｏ－アミン－２’－デオキシヌクレオシド三リン酸に変換する工程
を含む３’－Ｏ－アミノ－２’－デオキシリボヌクレオシド－５’－三リン酸を調製する方法。 - 前記アリールオキシアミンは、置換または無置換Ｏ－ベンジルヒドロキシルアミン、置換または無置換Ｏ－フェニルヒドロキシルアミン、置換または無置換Ｏ－フェニルエチルジドロキシルアミン、置換または無置換Ｏ－ベンジルオキシエチルヒドロキシルアミン、および置換または無置換Ｏ－フェノキシエチルヒドロキシルアミンであり、そのようなアリールオキシアミンは、ハロ、メトキシ、またはニトロで置換されている、請求項１に記載の方法。
- 前記アリールオキシアミンは、Ｏ－ベンジルヒドロキシルアミン、Ｏ－フェニルヒドロキシルアミン、Ｏ－［（２－メトキシフェニル）メチル］ヒドロキシルアミン、Ｏ－［（３，５－ジクロロフェニル）メチル］ヒドロキシルアミン、Ｏ－（３－クロロベンジル）ヒドロキシルアミン、Ｏ－（４－ニトロベンジル）ヒドロキシルアミン、Ｏ－（４－メトキシベンジル）ヒドロキシルアミン、Ｏ－［（３，４－ジクロロフェニル）メチル］ヒドロキシルアミン、Ｏ－（２－クロロベンジル）ヒドロキシルアミン、Ｏ－［４－（トリフルオロメチル）ベンジル］ヒドロキシルアミン、Ｏ－［（２，５－ジクロロフェニル）メチル］ヒドロキシルアミン、Ｏ－（２－メチルベンジル）ヒドロキシルアミン、Ｏ－（２，３，４，５，６－ペンタフルオロベンジル）ヒドロキシルアミン、Ｏ－（４－ニトロベンジル）ヒドロキシルアミン、Ｏ－（２－（ベンジルオキシ）エチル）ヒドロキシルアミン、Ｏ－（４－ブロモフェニル）ヒドロキシルアミン、Ｏ－［２－（トリフルオロメチル）フェニル］ヒドロキシルアミン、およびＯ－（２－フェノキシエチル）ヒドロキシルアミンからなる群から選択される、請求項２に記載の方法。
- 前記アリールオキシアミンは、Ｏ－ベンジルヒドロキシルアミンまたはＯ－フェニルヒドロキシルアミンである、請求項３に記載の方法。
- ３’－Ｏ－アミノ－２’－デオキシリボヌクレオシド－５’－三リン酸およびアリールオキシアミンを２体積％未満の濃度で含有する水溶液を含む組成物。
- 前記アリールオキシアミンは、Ｏ－ベンジルヒドロキシルアミンまたはＯ－フェニルヒドロキシルアミンである、請求項５に記載の組成物。
- 前記３’－Ｏ－アミノ－２’－デオキシリボヌクレオシド－５’－三リン酸は、アデニン、チミン、グアニン、シトシン、ウラシル、イノシン、キサンチン、またはヒポキサンチンからなる群から選択される塩基を有する、請求項５または６に記載の組成物。
- 前記３’－Ｏ－アミノ－２’－デオキシリボヌクレオシド－５’－三リン酸は、
からなる群から選択される塩基を有し、Ｚは、２’－デオキシリボース－５’－三リン酸の１’炭素、ＲはＨ、ＣＨ３、または結合基のいずれかであり、ＸはＮまたはＣ－Ｒのいずれかである、請求項５から７のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記結合基は、アルキルリンカー、アルケニルリンカー、チオエーテルリンカー、アミノアルキル、アミノアリル、アジドアルキル、アジドアリルプロパルギルアミン、ビスプロパルギル、またはビスプロパルギル－ＰＥＧである、請求項８に記載の組成物。
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