JP2023518192A - 合成ナノキャリアに関連する方法および組成物 - Google Patents

合成ナノキャリアに関連する方法および組成物 Download PDF

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Abstract

本発明は、合成ナノキャリアに、ならびに関連する組成物および方法であって、ここで合成ナノキャリア組成物が凍結乾燥可能である、凍結乾燥形態である、またはその再構成組成物であることを含む、前記組成物および方法に関する。

Description

関連出願
本出願は、35 U.S.C. § 119の下で、２０２０年３月１１日に出願された米国仮出願第62/988,347号の優先権の利益を主張し、その全内容は参照により本明細書に組み込まれる。
発明の分野
本発明は、合成ナノキャリアに、ならびに関連する組成物および方法であって、ここで合成ナノキャリア組成物が凍結乾燥可能である、凍結乾燥形態である、またはその再構成組成物であることを含む前記組成物および方法に関する。いくつかの態様において、合成ナノキャリアは、疎水性ポリエステル担体材料などの疎水性担体材料、およびラパマイシン等のラパログなどの免疫抑制剤を含む。ラパマイシン等のラパログなどの免疫抑制剤は、安定した過飽和量であり得る。いくつかの態様において、合成ナノキャリアは、初期滅菌濾過可能である。いくつかの態様において、合成ナノキャリアは、親水性親油性バランス（ＨＬＢ）値が１０以下の非イオン性界面活性剤も含んでいる。
発明の概要
本明細書で提供されるのは、好ましくは凍結乾燥可能な、凍結乾燥形態である、またはその再構成組成物である合成ナノキャリアを含む、組成物である。いくつかの態様において、再構成時に、合成ナノキャリア組成物を使用して、抗原などに対する免疫応答を阻害または低減し、および／または他の有益なin vivo効果をもたらすことができる。
一側面において、本明細書で提供されるのは、凍結乾燥可能な、凍結乾燥形態である、または凍結乾燥形態の再構成組成物である合成ナノキャリア（これは、本明細書に記載の合成ナノキャリアのいずれか１つであり得る）である。異なる成分が、凍結乾燥の促進、凝集の低減（例えば、再構成後など）、および／または２～８℃での長期保管（例えば、凍結乾燥後など）に役立つことが見出された。本明細書で提供される合成ナノキャリア組成物または方法のいずれか１つのいくつかの態様において、長期保管期間は３６ヶ月以上である。したがって、本明細書で提供される合成ナノキャリア組成物または方法のいずれか１つのいくつかの態様において、合成ナノキャリア組成物は、かかる成分の１つ以上をさらに含むことができる。
本明細書で提供される組成物のいずれか１つの一態様において、かかる成分の１つ以上は、凍結乾燥保護剤を含む。かかる組成物のいずれか１つの一態様において、凍結乾燥保護剤は、スクロース、トレハロース、マンニトール、またはスクロース／マンニトール混合物を含む。かかる組成物のいずれか１つの一態様において、凍結乾燥保護剤はスクロースを含む。かかる組成物のいずれか１つの一態様において、スクロースは、４～９．６ｗｔ％の範囲の濃度である。
さらに見出されたのは、界面活性剤の使用が、ラパマイシンなどの免疫抑制剤の可溶化、および／または合成ナノキャリアの破壊につながり得ることである。したがって一側面において、かかる界面活性剤を含まない合成ナノキャリア組成物（本明細書に記載の合成ナノキャリアのいずれかであり得る）もまた提供される。かかる合成ナノキャリア組成物のいずれか１つの一態様において、合成ナノキャリア組成物は、リン酸緩衝液またはリン酸界面活性剤を含まない。かかる合成ナノキャリア組成物のいずれか１つの別の態様において、合成ナノキャリア組成物は、非リン酸緩衝液または非リン酸界面活性剤を含む。
さらに見出されたのは、いくつかの態様において、中性または中性に近いｐＨを維持するのに役立つ、緩衝成分の利点である。したがって、一側面において、緩衝液を含む、および／または中性または中性に近いｐＨである、合成ナノキャリア組成物（本明細書に記載の合成ナノキャリアのいずれか１つであり得る）も提供される。かかる合成ナノキャリア組成物のいずれか１つの一態様において、緩衝液は非リン酸緩衝液である。かかる合成ナノキャリア組成物のいずれか１つの一態様において、緩衝液はトリス緩衝液である。かかる合成ナノキャリア組成物のいずれか１つの一態様において、トリス緩衝液は、１０ｍＭの濃度である。かかる合成ナノキャリア組成物のいずれか１つの一態様において、トロメタミン（トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン）およびトリス塩酸塩（トリスＨＣｌ）は、トリス緩衝液の成分である。かかる合成ナノキャリア組成物のいずれか１つの一態様において、トリス緩衝液は、１．３ｍＭの濃度のトロメタミンおよび８．７ｍＭの濃度のトリスＨＣＬを含む。
本明細書で提供される合成ナノキャリア組成物のいずれか１つの一態様において、合成ナノキャリア組成物はさらに、スクロースなどの凍結乾燥保護剤（例えば、４～９．６ｗｔ％の濃度で）、および非リン酸緩衝液またはトリス緩衝液などの緩衝液（例えば、１０ｍＭで）を含む。かかる組成物のいずれか１つの一態様において、トリス緩衝液は、トロメタミン（トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン）（例えば、１．３ｍＭ）およびトリス塩酸塩（トリスＨＣｌ）（例えば、８．７ｍＭ）を含む。凍結乾燥保護剤および緩衝液は、それぞれ、本明細書で提供される凍結乾燥保護剤または緩衝液のいずれかであり得る。
本明細書で提供される合成ナノキャリア組成物または方法のいずれか１つの一態様において、組成物は、１０～２０ｗｔ％の合成ナノキャリア、疎水性担体材料、および免疫抑制剤；８０～９０ｗｔ％のスクロース、０．１～５ｗｔ％のトロメタミン；および０．１～５ｗｔ％のトリスＨＣＬを含む。
本明細書で提供される合成ナノキャリア組成物のいずれか１つの一態様において、組成物は、ｐＨ７．３（例えば、２５℃において）である。
本明細書で提供される合成ナノキャリア組成物のいずれか１つの一態様において、ラパマイシン等のラパログなどの免疫抑制剤は、２ｍｇ／ｍＬの免疫抑制剤の濃度である。
本明細書で提供される合成ナノキャリア組成物のいずれか１つの一態様において、組成物は、２０ｍＬのバイアル内にある。
本明細書で提供される組成物および方法のいずれか１つの一態様において、合成ナノキャリアの組成物は、凍結乾燥粉末形態などの凍結乾燥形態である。本明細書で提供される組成物および方法のいずれか１つの一態様において、合成ナノキャリアの組成物は、凍結乾燥粉末形態などに凍結乾燥される組成物である。本明細書で提供される組成物および方法のいずれか１つの一態様において、合成ナノキャリアの組成物は、凍結乾燥形態の再構成組成物である。本明細書で提供される組成物および方法のいずれか１つの一態様において、合成ナノキャリアの組成物は、ガラス製バイアルに保管される。本明細書で提供される組成物または方法のいずれか１つの一態様において、ガラス製バイアルは、２０ｍＬのガラス製バイアルである。本明細書で提供される組成物および方法のいずれか１つの一態様において、合成ナノキャリアの組成物は、２～８℃で保管される。
本明細書で提供される組成物および方法のいずれか１つの一態様において、疎水性ポリエステル担体材料などの疎水性担体材料は、ＰＬＡ、ＰＬＧ、ＰＬＧＡまたはポリカプロラクトンを含む。本明細書で提供される組成物および方法のいずれか１つの一態様において、疎水性ポリエステル担体材料などの疎水性担体材料はさらに、ＰＬＡ-ＰＥＧ、ＰＬＧＡ-ＰＥＧまたはＰＣＬ-ＰＥＧを含む。
本明細書で提供される組成物および方法のいずれか１つの一態様において、合成ナノキャリア中の疎水性ポリエステル担体材料などの疎水性担体材料の量は、５～９５重量％の疎水性担体材料／総固形分である。本明細書で提供される組成物および方法のいずれか１つの一態様において、合成ナノキャリア中の疎水性ポリエステル担体材料などの疎水性担体材料の量は、６０～９５重量％疎水性担体材料／総固形分である。
本明細書で提供される組成物または方法のいずれか１つの一態様において、ラパマイシン等のラパログは、疎水性ポリエステル担体材料などの疎水性担体材料の重量に対するラパマイシン等のラパログの重量に基づき、５０重量％未満の安定な過飽和量である。本明細書で提供される組成物および方法のいずれか１つの一態様において、ラパマイシン等のラパログは、４５重量％未満、４０重量％未満、３５重量％未満、３０重量％未満、２５重量％未満、２０重量％未満、１５重量％未満、または１０重量％未満の、安定した過飽和量で存在する。本明細書で提供される組成物および方法のいずれか１つの一態様において、ラパマイシン等のラパログは、７重量％を超える安定した過飽和量で存在する。
本明細書で提供される組成物または方法のいずれか１つの一態様において、ラパログの量は、６重量％以上かつ５０重量％以下のラパログ／疎水性担体材料である。本明細書で提供される組成物または方法のいずれか１つの一態様において、ラパログの量は、７重量％以上かつ３０重量％以下のラパログ／疎水性担体材料である。本明細書で提供される組成物または方法のいずれか１つの一態様において、ラパログの量は、８重量％以上かつ２４重量％以下のラパログ／疎水性担体材料である。
本明細書で提供される組成物または方法のいずれか１つの一態様において、ラパログは、合成ナノキャリアにカプセル化される。
本明細書で提供される組成物または方法のいずれか１つの一態様において、ラパログは、ラパマイシンである。
本明細書で提供される組成物および方法のいずれか１つの一態様において、組成物は、０．２２μｍフィルターを通して初期滅菌濾過可能である。
本明細書で提供される組成物および方法のいずれか１つの一態様において、合成ナノキャリアはさらに、ＨＬＢ値が１０以下の非イオン性界面活性剤を含む。本明細書で提供される組成物および方法のいずれか１つの一態様において、ＨＬＢ値が１０以下の非イオン性界面活性剤の量は、０．０１重量％以上かつ２０重量％以下の、ＨＬＢ値が１０以下の非イオン性界面活性剤／疎水性担体材料である。
本明細書で提供される組成物および方法のいずれか１つの一態様において、ＨＬＢ値が１０以下の非イオン性界面活性剤は、合成ナノキャリアにカプセル化されるか、合成ナノキャリアの表面に存在するか、またはその両方である。本明細書で提供される組成物および方法のいずれか１つの一態様において、ＨＬＢ値が１０以下の非イオン性界面活性剤の量は、０．１重量％以上かつ１５重量％以下の、ＨＬＢ値が１０以下の非イオン性界面活性剤／疎水性担体材料である。本明細書で提供される組成物および方法のいずれか１つの一態様において、ＨＬＢ値が１０以下の非イオン性界面活性剤の量は、１重量％以上かつ１３重量％以下の、ＨＬＢ値が１０以下の非イオン性界面活性剤／疎水性担体材料である。本明細書で提供される組成物および方法のいずれか１つの一態様において、ＨＬＢ値が１０以下の非イオン性界面活性剤の量は、１重量％以上かつ９重量％以下の、ＨＬＢ値が１０以下の非イオン性界面活性剤／疎水性担体材料である。
本明細書で提供される組成物および方法のいずれか１つの一態様において、ＨＬＢ値が１０以下の非イオン性界面活性剤は、ソルビタンエステル、脂肪アルコール、脂肪酸エステル、エトキシル化脂肪アルコール、ポロキサマー、脂肪酸、コレステロール、コレステロール誘導体、または胆汁酸もしくは塩を含む。本明細書で提供される組成物および方法のいずれか１つの一態様において、ＨＬＢ値が１０以下の非イオン性界面活性剤は、SPAN 40、SPAN 20、オレイルアルコール、ステアリルアルコール、イソプロピルパルミタート、グリセロールモノステアラート、BRIJ 52、BRIJ 93、Pluronic P-123、Pluronic L-31、パルミチン酸、ドデカン酸、グリセリルトリパルミタートまたはグリセリルトリリノレアートを含む。本明細書で提供される組成物および方法のいずれか１つの一態様において、ＨＬＢ値が１０以下の非イオン性界面活性剤は、SPAN 40である。
本明細書で提供される組成物または方法のいずれか１つの一態様において、重量は、合成ナノキャリアの製剤化の間に組み合わされる材料のレシピ重量である。本明細書で提供される組成物または方法のいずれか１つの一態様において、重量は、得られる合成ナノキャリア組成物中の材料の重量である。
本明細書で提供される組成物および方法のいずれか１つの一態様において、動的光散乱を使用して得られる合成ナノキャリアの粒度分布の平均は、１１０ｎｍを超える直径である。本明細書で提供される組成物および方法のいずれか１つの一態様において、直径は１２０ｎｍより大である。本明細書で提供される組成物および方法のいずれか１つの一態様において、直径は１５０ｎｍより大である。本明細書で提供される組成物および方法のいずれか１つの一態様において、直径は２００ｎｍより大である。本明細書で提供される組成物および方法のいずれか１つの一態様において、直径は２５０ｎｍより大である。本明細書で提供される組成物および方法のいずれか１つの一態様において、直径は３００ｎｍ未満である。本明細書で提供される組成物および方法のいずれか１つの一態様において、直径は２５０ｎｍ未満である。本明細書で提供される組成物および方法のいずれか１つの一態様において、直径は２００ｎｍ未満である。
別の側面において、本明細書で提供される組成物のいずれか１つを含むキットが提供される。提供されるキットのいずれか１つの一態様において、キットは、本明細書で提供される方法のいずれか１つで使用するためのものである。提供されるキットのいずれか１つの一態様において、キットはさらに、指示を含む。提供されるキットのいずれか１つの一態様において、指示には、本明細書で提供される方法のいずれか１つの説明が含まれる。
別の側面において、本明細書で提供される組成物のいずれか１つを対象に投与することを含む方法が提供される。本明細書で提供される方法のいずれか１つの一態様において、方法はさらに、対象に抗原を投与することを含む。本明細書で提供される方法のいずれか１つの一態様において、投与することは、皮内、筋肉内、静脈内、腹腔内または皮下投与による。
別の側面において、本明細書で提供される組成物またはキットのいずれか１つを製造する方法が提供される。これらの方法のいずれか１つの一態様において、製造方法は、本明細書で提供される方法のいずれか１つのステップを含む。
別の側面において、対象における免疫寛容を促進するための薬の製造のための、本明細書で提供される組成物またはキットのいずれか１つの使用が提供される。本明細書で提供される使用のいずれか１つの別の態様において、使用は、本明細書で提供される方法のいずれか１つを達成するためのものである。
別の側面において、本明細書で提供される組成物またはキットのいずれか１つは、本明細書で提供される方法のいずれか１つで使用するためのものであり得る。
別の側面において、免疫寛容を促進することを意図した薬の製造方法が提供される。一態様において、薬は、本明細書で提供される組成物のいずれか１つを含む。
図１は、凍結乾燥製剤の安定性に対する粒径試験の効果を示すグラフである。
発明の詳細な説明
本発明を詳細に説明する前に、本発明は特に例示された材料またはプロセスパラメータに限定されないことを理解されたい；なぜならば、これらは当然ながら変化し得るからである。本明細書で使用される用語は、本発明の特定の態様を説明することのみを目的としており、本発明を説明するための代替用語の使用の限定を意図しないことも理解されたい。
本明細書で引用されるすべての刊行物、特許、および特許出願は、上記または下記にかかわらず、すべての目的のために参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
本明細書および添付の特許請求の範囲で使用される場合、単数形「a」、「an」および「the」は、内容が明確に別を指図しない限り、複数の指示対象を含む。例えば、「ポリマー」への言及は、２つ以上のかかる分子の混合物または単一ポリマー種の異なる分子量の混合物を含み、「合成ナノキャリア」への言及は、２つ以上のかかる合成ナノキャリアの混合物または複数のかかる合成ナノキャリアを含む、などである。
本明細書で使用される用語「含む（comprise）」、またはその変形、例えば「含む（comprises）」もしくは「含むこと」などは、任意の列挙された整数（例えば、１つの特色、要素、特徴、特性、方法／プロセスステップまたは限定）または整数の群（複数の特色、要素、特徴、特性、方法／プロセスステップまたは限定）の包含を指すと読み取れるが、任意の他の整数または整数の群を除外するものではない。したがって、本明細書で使用される場合、用語「含むこと」は包括的であり、追加の列挙されていない整数または方法／プロセスステップを除外するものではない。
本明細書で提供される組成物および方法のいずれか１つの態様において、「含む」は、「から本質的になる」または「からなる」に置き換えてもよい。「から本質的になる」という語句は、本明細書では、特定の整数またはステップを、ならびに特許請求される発明の特徴または機能に実質的に影響を及ぼさないものを要求するために、使用される。本明細書で使用される場合、用語「からなる」とは、列挙された整数（例えば、１つの特色、要素、特徴、特性、方法／プロセスステップまたは限定）または整数のグループ（例えば、複数の特色、要素、特徴、特性、方法／プロセスのステップまたは限定）のみが存在することを示すために、使用される。
Ａ．緒言
驚くべきことに、本明細書に記載の合成ナノキャリア組成物のいずれか１つなどの合成ナノキャリアの組成物の、凍結乾燥を容易にし、保管安定性を維持し、凝集を低減するなどが可能な、特定の成分が見出された。したがって、本明細書で提供されるのは、かかる合成ナノキャリア組成物の凍結乾燥形態、ならびにその再構成組成物、および関連する方法である。
本発明を、以下により詳細に説明する。
Ｂ．定義
「投与すること」または「投与」または「投与する」とは、材料を薬理学的に有用な様式で対象に提供することを意味する。この用語は、いくつかの態様において、投与を引き起こすことを含むことを意図している。「投与を引き起こすこと」とは、別の当事者に対して直接的または間接的に、材料の投与を引き起こすこと、促すこと、奨励すること、支援すること、誘導すること、または管理することを意味する。
対象への投与のための組成物または用量の文脈における「有効量」とは、対象において１つ以上の所望の応答、例えば寛容原性免疫応答の生成をもたらす組成物または用量の量を指す。いくつかの態様において、有効量は、薬力学的に有効な量である。したがっていくつかの態様において、有効量は、本明細書で提供される所望の治療効果および／または免疫応答のうちの１つ以上をもたらす、本明細書で提供される組成物または用量の任意の量である。この量は、in vitroまたはin vivo目的のためであり得る。in vivoの目的では、この量は、臨床医が、抗原特異的免疫寛容を必要とする対象などの対象に、臨床的利益をもたらし得ると信じるであろう量であることができる。本明細書で提供される組成物のいずれもが、有効量であることができる。
有効量は、望ましくない免疫応答のレベルを低下させることを含み得るが、ただしいくつかの態様においては、望ましくない免疫応答を完全に防止することを含む。有効量は、望ましくない免疫応答の発生を遅らせることも含み得る。有効量はまた、所望の治療エンドポイントまたは所望の治療結果をもたらす量であり得る。他の態様において、有効量は、治療のエンドポイントまたは結果などの所望の応答のレベルを高めることを含み得る。有効量は、いくつかの態様において、対象において抗原に対する寛容原性免疫応答をもたらす。前述のいずれかの達成は、通常の方法で監視することができる。
有効量は当然ながら、処置される特定の対象に依存する；状態、疾患または障害の重症度；年齢、体調、サイズおよび体重などの個々の患者パラメータ；処置期間；同時治療の性質（もしあれば）；医療従事者の知識および専門的意見の範囲内の特定の投与経路および同様の要因。これらの要因は当業者には周知であり、通常の実験のみで対処することができる。一般に、最大用量、すなわち健全な医学的判断による最高安全用量を使用することが好ましい。しかしながら当業者は、患者が、医学的理由、心理的理由、または事実上その他の任意の理由で、より低い用量または耐容用量を主張する可能性があることを理解するであろう。
一般に、本発明の組成物中の成分の用量は、成分の量を指す。代替的に、用量は、所望の量を提供する合成ナノキャリアの数に基づいて投与することができる。
「抗原特異的」とは、抗原またはその一部の存在に起因する任意の免疫応答、または抗原を特異的に認識もしくは結合する分子を生成する任意の免疫応答を指す。例えば、免疫応答が抗原特異的抗体産生である場合、抗原に特異的に結合する抗体が産生される。別の例として、免疫応答が抗原特異的Ｂ細胞またはＣＤ４＋Ｔ細胞の増殖および／または活性である場合、増殖および／または活性は、抗原またはその一部を単独で認識すること、またはＭＨＣ分子、Ｂ細胞などと複合して認識することに起因する。
本明細書で使用される「平均」とは、特に明記しない限り算術平均を指す。
「カプセル化」とは、物質の少なくとも一部を合成ナノキャリア内に封入することを意味する。いくつかの態様において、物質は合成ナノキャリア内に完全に封入される。他の態様において、カプセル化された物質のほとんどまたはすべては、合成ナノキャリアの外部の局所環境に曝露されない。他の態様において、５０％、４０％、３０％、２０％、１０％、または５％（重量／重量）未満が、局所環境に曝露される。カプセル化は吸収とは異なり、吸収は、物質の大部分またはすべてを合成ナノキャリアの表面に配置し、物質を合成ナノキャリアの外部の局所環境に曝露したままにする。
「疎水性担体材料」とは、１つ以上のポリマーまたはそれらの単位(複数)を含みかつ疎水性の特徴を有する、１つ以上の分子を送達することができる、任意の薬学的に許容し得る担体を指す。いくつかの好ましい態様において、疎水性担体材料は「疎水性ポリエステル担体材料」であり、これは、１つ以上のポリエステルポリマーまたはその単位を含みかつ疎水性の特徴を有する、１つ以上の分子を送達することができる、任意の薬学的に許容し得る担体を指す。ポリエステルポリマーには、ＰＬＡ、ＰＬＧＡ、ＰＬＧおよびポリカプロラクトンが含まれるが、これらに限定されない。疎水性担体材料には、合成ナノキャリアまたはその一部を形成することができ、１つ以上の分子（例えば、ラパログなどの免疫抑制剤、ＨＬＢ値が１０以下の非イオン性界面活性剤）を含めるかまたは負荷することができる材料が、含まれる。一般に、担体材料は、１つ以上の分子の標的部位または標的細胞への送達、１つ以上の分子の制御放出、および他の所望の活動を可能にすることができる。「疎水性」とは、水への水素結合に実質的に関与しない材料を指す。かかる材料は、一般に無極性、主に無極性、または電荷が中性である。本明細書に記載の組成物に適した担体材料は、あるレベルで疎水性を示すことに基づいて選択することができる。したがって、疎水性ポリエステル担体材料は、全体的に疎水性であるものであり、疎水性ポリエステルまたはその単位から完全に構成され得る。しかしながらいくつかの態様において、疎水性ポリエステル担体材料は、全体的に疎水性であり、疎水性ポリエステルまたはその単位を含むが、ただし他のポリマーまたはその単位とも組み合わされている。これらの他のポリマーまたはその単位は、疎水性であってもよいが、必ずしもそうである必要はない。疎水性担体材料は１つ以上の他のポリマーまたはその単位を含んでもよいが、ただしポリマーまたはその単位のマトリックスが疎水性であると考えられるという条件においてである。
「初期滅菌濾過可能」とは、以前には濾過されていないが、０．２２μｍフィルターなどのフィルターを通して、少なくとも５０グラムのナノキャリア／１ｍ２のフィルター膜表面積のスループットで濾過することができる、合成ナノキャリアの組成物を指す。本明細書で提供される組成物または方法のいずれか１つのいくつかの態様において、スループットは、９ｍＬ容量の合成ナノキャリア懸濁液を取り、本明細書で提供されるフィルターのいずれか１つを有する１０ｍＬシリンジに入れることによって決定される。次いで、合成ナノキャリア懸濁液を、懸濁液材料がフィルターを通過しなくなるまでフィルターに押し入れる。スループットは、フィルターを通過した材料とシリンジ内に残っている懸濁液材料に基づいて計算することができる。本明細書で提供される組成物または方法のいずれか１つのいくつかの態様において、初期滅菌濾過可能な組成物は、非滅菌であり、および／またはin vivo投与に適していない（すなわち、実質的に純粋ではなく、in vivoでの投与にあまり望ましくない可溶性成分を含む）。本明細書で提供される組成物または方法のいずれか１つの他の態様において、初期滅菌濾過可能な組成物は、生成はされたが、臨床グレードの材料を生成するためにさらに処理されてはいない合成ナノキャリアを含む。本明細書で提供される組成物または方法のいずれか１つのいくつかの態様において、初期滅菌濾過可能な組成物は、事前に濾過されていないが、例えば０．２２μｍフィルターなどのフィルターを通して、少なくとも６０、７０、８０、９０、１００、１２０、１３０、１４０、１６０、２００、２５０、３００、３５０、５００、７５０、１０００、または１５００グラムのナノキャリア／フィルター膜表面積１ｍ２あたりのスループットで、濾過することができる。０．２２μｍフィルターは、０．２２μｍの孔寸法の任意のフィルターである。かかるフィルターは、さまざまな材料で、例えばポリエチレンスルホン、ポリフッ化ビニリデン、混合セルロースエステル、無溶媒酢酸セルロース、再生セルロース、ナイロンなどで、作製可能である。フィルターの具体例としては、Millipore SLGPM33R、Millipore SLGVM33RS、Millipore SLGSM33SS、Sartorius 16534、Sartorius 17764、Sartorius 17845などが挙げられる。
本明細書で使用される「凍結乾燥された」とは、製剤を凍結し、次いで当技術分野で知られている任意の凍結乾燥法を使用して（例えば、市販の凍結乾燥装置を使用して）凍結した内容物から氷を昇華させることにより乾燥させた、合成ナノキャリア組成物を指す。いくつかの態様において、得られる凍結乾燥物は、０．１％（ｗ／ｗ）～５％（ｗ／ｗ）の残留水分レベルを有し、安定な粉末として存在する。凍結乾燥物は、再構成媒体で再構成することができる。「再構成合成ナノキャリア」とは、合成ナノキャリアを含む凍結乾燥組成物を希釈剤または再構成媒体に溶解して、合成ナノキャリアが希釈剤全体に分散するようにすることにより調製されたものである。いくつかの態様において、希釈剤または再構成媒体は、注射用滅菌水を含む。いくつかの態様において、再構成された合成ナノキャリアは、対象への投与に適している。凍結乾燥された、またはこれから凍結乾燥される、または再構成された組成物は、いくつかの態様において、本明細書で提供される緩衝液および／または凍結乾燥保護剤を含む。いくつかの態様において、緩衝液は非リン酸緩衝液である。いくつかの態様において、緩衝液は、リン酸ナトリウム、リン酸カリウム、クエン酸塩、ヒスチジン、トロメタミン（トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン）、トリス塩酸塩（トリスＨＣｌ）、またはそれらの組み合わせである。いくつかの態様において、凍結乾燥保護剤は、スクロース、トレハロース、マルトース、ラクトース、ソルビトール、デキストラン、またはそれらの組み合わせを含む。一態様において、凍結乾燥保護剤は、二糖類（例えば、スクロース）である。一態様において、組成物は、緩衝液および二糖類（例えば、スクロース）を含む。一態様において、組成物は、トリス緩衝液およびスクロースを含む。一態様において、組成物は、トロメタミン、トリスＨＣｌ、およびスクロースを含む。これらの成分のいずれか１つまたはすべての量は、それぞれ、本明細書で提供される濃度のいずれか１つであり得る。
いくつかの態様において、トロメタミンは、本明細書で提供される組成物のいずれか１つに、濃度として０．５ｍＭ～３ｍＭ、０．５ｍＭ～２．５ｍＭ、０．５ｍＭ～２．０ｍＭ、０．５ｍＭ～１．５ｍＭ、０．５ｍＭ～１ｍＭ、１ｍＭ～３ｍＭ、１ｍＭ～２．５ｍＭ、１ｍＭ～２ｍＭ、１ｍＭ～１．９ｍＭ、１ｍＭ～１．８ｍＭ、１ｍＭ～１．７ｍＭ、１ｍＭ～１．６ｍＭ、１ｍＭ～１．５ｍＭ、１ｍＭ～１．４ｍＭ、１ｍＭ～１．３ｍＭ、１ｍＭ～１．２ｍＭ、１ｍＭ～１．１ｍＭ、１．２ｍＭ～３ｍＭ、１．２ｍＭ～２．５ｍＭ、１．２ｍＭ～２ｍＭ、１．２ｍＭ～１．９ｍＭ、１．２ｍＭ～１．８ｍＭ、１．２ｍＭ～１．７ｍＭ、１．２ｍＭ～１．６ｍＭ、１．２ｍＭ～１．５ｍＭ、１．２ｍＭ～１．４ｍＭ、１．２ｍＭ～１．３ｍＭ、１．４ｍＭ～３ｍＭ、１．４ｍＭ～２．５ｍＭ、１，４ｍＭ～２ｍＭ、１．４ｍＭ～１．９ｍＭ、１．４ｍＭ～１．８ｍＭ、１．４ｍＭ～１．７ｍＭ、１．４ｍＭ～１．６ｍＭ、１．４ｍＭ～１．５ｍＭ、１．５ｍＭ～３ｍＭ、１．５ｍＭ～２．５ｍＭ、１．５ｍＭ～２ｍＭ、２ｍＭ～３ｍＭ、または２ｍＭ～２．５ｍＭで存在する。いくつかの態様において、トロメタミンは、本明細書で提供される組成物のいずれか１つに、０．５ｍＭ、０．６ｍＭ、０．７ｍＭ、０．８ｍＭ、０．９ｍＭ、１ｍＭ、１．１ｍＭ、１．２ｍＭ、１．３ｍＭ、１．４ｍＭ、１．５ｍＭ、１．６ｍＭ、１．７ｍＭ、１．８ｍＭ、１．９ｍＭ、２ｍＭ、またはそれ以上の濃度で存在する。
いくつかの態様において、トリスＨＣｌは、本明細書で提供される組成物のいずれか１つに、濃度として７．５ｍＭ～１０ｍＭ、７．５ｍＭ～９．５ｍＭ、７．５ｍＭ～９ｍＭ、７．５ｍＭ～８．５ｍＭ、７．５ｍＭ～８ｍＭ、８ｍＭ～１０ｍＭ、８ｍＭ～９．５ｍＭ、８ｍＭ～９ｍＭ、８ｍＭ～８．９ｍＭ、８ｍＭ～８．８ｍＭ、８ｍＭ～８．７ｍＭ、８ｍＭ～８．６ｍＭ、８ｍＭ～８．５ｍＭ、８ｍＭ～８．４ｍＭ、８ｍＭ～８．３ｍＭ、８ｍＭ～８．２ｍＭ、８ｍＭ～８．１ｍＭ、８．２ｍＭ～１０ｍＭ、８．２ｍＭ～９．５ｍＭ、８．２ｍＭ～９ｍＭ、８．２ｍＭ～８．９ｍＭ、８．２ｍＭ～８．８ｍＭ、８．２ｍＭ～８．７ｍＭ、８．２ｍＭ～８．６ｍＭ、８．２ｍＭ～８．５ｍＭ、８．２ｍＭ～８．４ｍＭ、８．２ｍＭ～８．３ｍＭ、８．４ｍＭ～１０ｍＭ、８．４ｍＭ～９．５ｍＭ、８．４ｍＭ～９ｍＭ、８．４ｍＭ～８．９ｍＭ、８．４ｍＭ～８．８ｍＭ、８．４ｍＭ～８．７ｍＭ、８．４ｍＭ～８．６ｍＭ、８．４ｍＭ～８．５ｍＭ、８．６ｍＭ～１０ｍＭ、８．６ｍＭ～９．５ｍＭ、８．６ｍＭ～９ｍＭ、８．６ｍＭ～８．９ｍＭ、８．６ｍＭ～８．８ｍＭ、８．６ｍＭ～８．７ｍＭ、８．８ｍＭ～１０ｍＭ、８．８ｍＭ～９．５ｍＭ、８．８ｍＭ～９ｍＭ、８．８ｍＭ～８．９ｍＭ、８．８ｍＭ～１０ｍＭ、８．８ｍＭ～９．５ｍＭ、８．８ｍＭ～９ｍＭ、または８．８ｍＭ～８．９ｍＭで存在する。いくつかの態様において、トリスＨＣｌは、本明細書で提供される組成物のいずれか１つに、７．５ｍＭ、７．６ｍＭ、７．７ｍＭ、７．８ｍＭ、７．９ｍＭ、８ｍＭ、８．１ｍＭ、８．２ｍＭ、８．３ｍＭ、８．４ｍＭ、８．５ｍＭ、８．６ｍＭ、８．７ｍＭ、８．８ｍＭ、８．９ｍＭ、９ｍＭ、９．１ｍＭ、９．２ｍＭ、９．３ｍＭ、９．４ｍＭ、９．５ｍＭ、９．６ｍＭ、９．７ｍＭ、９．８ｍＭ、９．９ｍＭ、１０ｍＭ、またはそれ以上の濃度で存在する。
いくつかの態様において、スクロースは、本明細書で提供される組成物のいずれか１つに、８．５ｗｔ％～１０．５ｗｔ％、８．５ｗｔ％～１０ｗｔ％、８．５ｗｔ％～９．５ｗｔ％、８．５ｗｔ％～９ｗｔ％、９ｗｔ％～１０．５ｗｔ％、９～１０ｗｔ％、９ｗｔ％～９．９ｗｔ％、９ｗｔ％～９．８ｗｔ％、９ｗｔ％～９．７ｗｔ％、９ｗｔ％～９．６ｗｔ％、９ｗｔ％～９．５ｗｔ％、９ｗｔ％～９．４ｗｔ％、９ｗｔ％～９．３ｗｔ％、９ｗｔ％～９．２ｗｔ％、９ｗｔ％～９．１ｗｔ％、９．２ｗｔ％～１０．５ｗｔ％、９．２％～１０ｗｔ％、９．２ｗｔ％～９．９ｗｔ％、９．２ｗｔ％～９．８ｗｔ％、９．２ｗｔ％～９．７ｗｔ％、９．２ｗｔ％～９．６ｗｔ％、９．２ｗｔ％～９．５ｗｔ％、９．２ｗｔ％～９．４ｗｔ％、９．２ｗｔ％～９．３ｗｔ％、９．４ｗｔ％～１０．５ｗｔ％、９．４～１０ｗｔ％、９．４ｗｔ％～９．９ｗｔ％、９．４ｗｔ％～９．８ｗｔ％、９．４ｗｔ％～９．７ｗｔ％、９．４ｗｔ％～９．６ｗｔ％、９．４ｗｔ％～９．５ｗｔ％、９．６ｗｔ％～１０．５ｗｔ％、９．６％～１０ｗｔ％、９．６ｗｔ％～９．９ｗｔ％、９．６ｗｔ％～９．８ｗｔ％、９．６ｗｔ％～９．７ｗｔ％、９．８ｗｔ％～１０．５ｗｔ％、９．８～１０ｗｔ％、９．８ｗｔ％～９．９ｗｔ％、または１０ｗｔ％～１０．５ｗｔ％で存在する。いくつかの態様において、スクロースは、本明細書で提供される組成物のいずれか１つに、８．５ｗｔ％、８．６ｗｔ％、８．７ｗｔ％、８．８ｗｔ％、８．９ｗｔ％、９ｗｔ％、９．１ｗｔ％、９．２ｗｔ％、９．３ｗｔ％、９．４ｗｔ％、９．５ｗｔ％、９．６ｗｔ％、９．７ｗｔ％、９．８ｗｔ％、９．９ｗｔ％、１０ｗｔ％、１０．１ｗｔ％、１０．２ｗｔ％、１０．３ｗｔ％、１０．４ｗｔ％、１０．５ｗｔ％またはそれ以上で存在する。
いくつかの態様において、本明細書に記載の組成物は、１０～２０ｗｔ％の合成ナノキャリア、疎水性担体材料、および免疫抑制剤；８０～９０ｗｔ％のスクロース、０．１～５ｗｔ％のトロメタミン；および０．１～５ｗｔ％のトリスＨＣＬを含む。いくつかの態様において、合成ナノキャリア、疎水性担体材料、および免疫抑制剤は、本明細書で提供される組成物のいずれか１つに、５～１０ｗｔ％、５～１５ｗｔ％、５～２０ｗｔ％、５～２５ｗｔ％、１０～１５ｗｔ％、１０～２０ｗｔ％、１０～２５ｗｔ％、１５～２０ｗｔ％、１５～２５ｗｔ％、または２０～２５ｗｔ％で存在する。いくつかの態様において、組成物は、５ｗｔ％、６ｗｔ％、７ｗｔ％、８ｗｔ％、９ｗｔ％、１０ｗｔ％、１１ｗｔ％、１２ｗｔ％、１３ｗｔ％、１４ｗｔ％、１５ｗｔ％、１６ｗｔ％、１７ｗｔ％、１８ｗｔ％、１９ｗｔ％、２０ｗｔ％、２１ｗｔ％、２２ｗｔ％、２３ｗｔ％、２４ｗｔ％、または２５ｗｔ％の合成ナノキャリア、疎水性担体材料、および免疫抑制剤を含んでよい。いくつかの態様において、スクロースは、本明細書で提供される組成物のいずれか１つに、７５～９５ｗｔ％、例えば、７５～８０ｗｔ％、７５～８５ｗｔ％、７５～９０ｗｔ％、８０～８５ｗｔ％、８０～９０ｗｔ％、８０～９５ｗｔ％、８５～９０ｗｔ％、８５～９５ｗｔ％、または９０～９５ｗｔ％で存在する。いくつかの態様において、組成物は、７５ｗｔ％、７６ｗｔ％、７７ｗｔ％、７８ｗｔ％、７９ｗｔ％、８０ｗｔ％、８１ｗｔ％、８２ｗｔ％、８３ｗｔ％、８４ｗｔ％、８５ｗｔ％、８６ｗｔ％、８７ｗｔ％、８８ｗｔ％、８９ｗｔ％、９０ｗｔ％、９１ｗｔ％、９２ｗｔ％、９３ｗｔ％、９４ｗｔ％、または９５ｗｔ％のスクロースを含んでもよい。いくつかの態様において、トロメタミンは、本明細書で提供される組成物のいずれか１つに、０．１～５ｗｔ％、例えば、０．１～０．２ｗｔ％、０．１～０．３ｗｔ％、０．１～０．４ｗｔ％、０．１～０．５ｗｔ％、０．１～０．６ｗｔ％、０．１～０．７ｗｔ％、０．１～０．８ｗｔ％、０．１～０．９ｗｔ％、０．１～１ｗｔ％、０．１～１．５ｗｔ％、０．１～２ｗｔ％、０．１～２．５ｗｔ％、０．１～３ｗｔ％、０．１～３．５ｗｔ％、０．１～４ｗｔ％、０．１～４．５ｗｔ％、０．２～０．３ｗｔ％、０．２～０．４ｗｔ％、０．２～０．５ｗｔ％、０．２～０．６ｗｔ％、０．２～０．７ｗｔ％、０．２～０．８ｗｔ％、０．２～０．９ｗｔ％、０．３～０．４ｗｔ％、０．３～０．５ｗｔ％、０．３～０．６ｗｔ％、０．３～０．７ｗｔ％、０．３～０．８ｗｔ％、０．３～０．９ｗｔ％、０．４～０．５ｗｔ％、０．４～０．６ｗｔ％、０．４～０．７ｗｔ％、０．４～０．８ｗｔ％、０．４～０．９ｗｔ％、０．５～０．６ｗｔ％、０．５～０．７ｗｔ％、０．５～０．８ｗｔ％、０．５～０．９ｗｔ％、０．６～０．７ｗｔ％、０．６～０．８ｗｔ％、０．６～０．９ｗｔ％、０．７～０．８ｗｔ％、０．７～０．９ｗｔ％、０．８～０．９ｗｔ％、０．５～１．５ｗｔ％、０．５～２ｗｔ％、０．５～２．５ｗｔ％、０．５～３ｗｔ％、０．５～４ｗｔ％、０．５～５ｗｔ％、１～２ｗｔ％、１～３ｗｔ％、１～４ｗｔ％、または１～５ｗｔ％で存在する。いくつかの態様において、組成物は、０．１ｗｔ％、０．２ｗｔ％、０．３ｗｔ％、０．４ｗｔ％、０．５ｗｔ％、０．６ｗｔ％、０．７ｗｔ％、０．８ｗｔ％、０．９ｗｔ％、１ｗｔ％、１．２ｗｔ％、１．４ｗｔ％、１．５ｗｔ％、１．６ｗｔ％、１．８ｗｔ％、２ｗｔ％、２．５ｗｔ％、３ｗｔ％、３．５ｗｔ％、４ｗｔ％、４．５ｗｔ％、または５ｗｔ％のトロメタミンを含んでもよい。いくつかの態様において、トリスＨＣＬは、本明細書で提供される組成物のいずれか１つに、０．１～５ｗｔ％、例えば、０．１～０．２ｗｔ％、０．１～０．３ｗｔ％、０．１～０．４ｗｔ％、０．１～０．５ｗｔ％、０．１～０．６ｗｔ％、０．１～０．７ｗｔ％、０．１～０．８ｗｔ％、０．１～０．９ｗｔ％、０．１～１ｗｔ％、０．１～１．５ｗｔ％、０．１～２ｗｔ％、０．１～２．５ｗｔ％、０．１～３ｗｔ％、０．１～３．５ｗｔ％、０．１～４ｗｔ％、０．１～４．５ｗｔ％、０．２～０．３ｗｔ％、０．２～０．４ｗｔ％、０．２～０．５ｗｔ％、０．２～０．６ｗｔ％、０．２～０．７ｗｔ％、０．２～０．８ｗｔ％、０．２～０．９ｗｔ％、０．３～０．４ｗｔ％、０．３～０．５ｗｔ％、０．３～０．６ｗｔ％、０．３～０．７ｗｔ％、０．３～０．８ｗｔ％、０．３～０．９ｗｔ％、０．４～０．５ｗｔ％、０．４～０．６ｗｔ％、０．４～０．７ｗｔ％、０．４～０．８ｗｔ％、０．４～０．９ｗｔ％、０．５～０．６ｗｔ％、０．５～０．７ｗｔ％、０．５～０．８ｗｔ％、０．５～０．９ｗｔ％、０．６～０．７ｗｔ％、０．６～０．８ｗｔ％、０．６～０．９ｗｔ％、０．７～０．８ｗｔ％、０．７～０．９ｗｔ％、０．８～０．９ｗｔ％、０．５～１．５ｗｔ％、０．５～２ｗｔ％％、０．５～２．５ｗｔ％、０．５～３ｗｔ％、０．５～４ｗｔ％、０．５～５ｗｔ％、１～２ｗｔ％、１～３ｗｔ％、１～４ｗｔ％、または１～５ｗｔ％で存在する。いくつかの態様において、組成物は、０．１ｗｔ％、０．２ｗｔ％、０．３ｗｔ％、０．４ｗｔ％、０．５ｗｔ％、０．６ｗｔ％、０．７ｗｔ％、０．８ｗｔ％、０．９ｗｔ％、１ｗｔ％、１．２ｗｔ％、１．４ｗｔ％、１．５ｗｔ％、１．６ｗｔ％、１．８ｗｔ％、２ｗｔ％、２．５ｗｔ％、３ｗｔ％、３．５ｗｔ％、４ｗｔ％、４．５ｗｔ％、または５ｗｔ％のトリスＨＣＬを含んでもよい。
いくつかの態様において、凍結乾燥組成物は、少なくとも１日、２日、３日、４日、５日、６日、１週間、１．５週間、２週間、２．５週間、３週間、３．５週間、１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、７ヶ月、８ヶ月、９ヶ月、１０ヶ月、１１ヶ月、１２ヶ月、１３ヶ月、１４ヶ月、１５ヶ月、１６ヶ月、１７ヶ月、１８ヶ月、１９ヶ月、２０ヶ月、２１ヶ月、２２ヶ月、２３ヶ月、２４ヶ月、２５ヶ月、２６ヶ月、２７ヶ月、２８ヶ月、２９ヶ月、３０ヶ月、３１ヶ月、３２ヶ月、３３ヶ月、３４ヶ月、３５ヶ月、３６ヶ月、またはそれ以上、安定である（例えば、免疫抑制剤含有量、純度、in vitro放出、粒径、外観、およびｐＨを維持している）。いくつかの態様において、凍結乾燥組成物は、少なくとも１～２週間、２～４週間、１～２ヶ月、２～４ヶ月、３～６ヶ月、３～９ヶ月、３～１２ヶ月、６～１２ヶ月、６～１８ヶ月、６～２４ヶ月、６～３０ヶ月、６～３６ヶ月、１～２年、１～３年、または２～３年、安定である。
いくつかの態様において、凍結乾燥組成物は、－２０℃±５℃（例えば、－２５℃、－２４℃、－２３℃、－２２℃、－２１℃、－２０℃、－１９℃、－１８℃、－１７℃、－１６℃、または－１５℃）で保管される。いくつかの態様において、凍結乾燥組成物は、５℃±３℃（例：２℃、３℃、４℃、５℃、６℃、７℃、または８℃）、または２５℃±５℃（例：２０℃、２１℃、２２℃、２３℃、２４℃、２５℃、２６℃、２７℃、２８℃、２９℃、または３０℃）で保管される。
「合成ナノキャリアの最大寸法」とは、合成ナノキャリアの任意の軸に沿って測定したナノキャリアの最大寸法を意味する。「合成ナノキャリアの最小寸法」とは、合成ナノキャリアの任意の軸に沿って測定した合成ナノキャリアの最小寸法を意味する。例えば、球状の合成ナノキャリアの場合、合成ナノキャリアの最大および最小寸法は実質的に同一であり、その直径のサイズである。同様に、立方体の合成ナノキャリアの場合、合成ナノキャリアの最小寸法はその高さ、幅、または長さの最小値であり、一方合成ナノキャリアの最大寸法は、その高さ、幅、または長さの最大値である。一態様において、試料中の合成ナノキャリアの総数に基づき、試料中の合成ナノキャリアの少なくとも７５％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも９０％の最小寸法は、１００ｎｍ以上である。一態様において、試料中の合成ナノキャリアの総数に基づき、試料中の合成ナノキャリアの少なくとも７５％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも９０％の最大寸法は、５μｍ未満である。好ましくは、試料中の合成ナノキャリアの総数に基づき、試料中の合成ナノキャリアの少なくとも７５％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも９０％の最小寸法は、１１０ｎｍより大きく、より好ましくは１２０ｎｍより大きく、より好ましくは１３０ｎｍより大きく、さらにより好ましくは１５０ｎｍより大きい。合成ナノキャリアの最大寸法と最小寸法のアスペクト比は、態様によって異なり得る。例えば、合成ナノキャリアの最大寸法と最小寸法のアスペクト比は、１：１～１，０００，０００：１まで、好ましくは１：１～１００，０００：１、より好ましくは１：１～１０，０００：１、より好ましくは１：１～１０００：１、さらに好ましくは１：１～１００：１、さらにより好ましくは１：１～１０：１である。
好ましくは、試料中の合成ナノキャリアの総数に基づき、試料中の合成ナノキャリアの少なくとも７５％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも９０％の最大寸法は３μｍ以下であり、より好ましくは２μｍ以下、より好ましくは１μｍ以下、より好ましくは８００ｎｍ以下、より好ましくは６００ｎｍ以下、およびさらに好ましくは５００ｎｍ以下である。好ましい態様において、試料中の合成ナノキャリアの総数に基づき、試料中の合成ナノキャリアの少なくとも７５％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも９０％の最小寸法は１００ｎｍ以上、より好ましくは１２０ｎｍ以上、より好ましくは１３０ｎｍ以上、より好ましくは１４０ｎｍ以上、およびさらにより好ましくは１５０ｎｍ以上である。合成ナノキャリアの寸法（例えば、有効直径）の測定は、いくつかの態様において、合成ナノキャリアを液体（通常は水性）媒体に懸濁し、動的光散乱（ＤＬＳ）を使用することによって（例えば、Brookhaven ZetaPALS装置を使用して）得ることができる。例えば、合成ナノキャリアの懸濁液を水性緩衝液から精製水に希釈して、約０．０１～０．５ｍｇ／ｍＬの最終合成ナノキャリア懸濁液濃度を達成することができる。希釈した懸濁液は、ＤＬＳ分析に適したキュベット内で直接調製するか、これに移すことができる。次にキュベットをＤＬＳに入れ、制御された温度に平衡させ、媒体の粘度と試料の屈折率の適切な入力に基づき安定した再現可能な分布を取得するのに十分な時間、スキャンする。次に、有効直径、または分布の平均が報告される。高アスペクト比または非球状の合成ナノキャリアの有効サイズを決定するには、より正確な測定値を得るために、電子顕微鏡などの拡張（augumentative）技術が必要となる場合がある。合成ナノキャリアの「寸法」または「サイズ」または「直径」とは、例えば、動的光散乱を使用して得られる粒度分布の平均を意味する。
「ＨＬＢ値が１０以下の非イオン性界面活性剤」または「低ＨＬＢ界面活性剤」とは、本明細書で使用される場合、少なくとも１つの疎水性尾部および１つの親水性頭部を含む構造を有するか、または疎水基もしくは領域と親水基もしくは領域を有する、非イオン性両親媒性分子を指す。界面活性剤の尾部は、一般に炭化水素鎖からなる。界面活性剤は、親水性頭部または親水基もしくは領域の電荷特性に基づいて、分類することができる。本明細書で使用される場合、「ＨＬＢ」は、界面活性剤の親水性－親油性（hydrophilic-lipophilic）バランスまたは親水性－親油性（hydrophile-lipophile）バランスを指し、界面活性剤の親水性または親油性の性質の尺度である。
本明細書で提供される界面活性剤のいずれか１つのＨＬＢは、グリフィン法またはデイビス法を使用して計算され得る。例えば、グリフィン法を使用すると、界面活性剤のＨＬＢは、界面活性剤の親水性部分の分子量を２０倍し、界面活性剤全体の分子量で割った値である。ＨＬＢ値は０～２０のスケールで表され、０は完全に疎水性（親油性）分子に対応し、２０は完全に親水性（疎油性）分子に対応する。いくつかの態様において、本明細書で提供される組成物または方法のいずれか１つの界面活性剤のＨＬＢは、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０である（例えば、グリフィン法またはデイビス法により決定した場合）。本明細書で提供される組成物および方法のいずれか１つで使用するためのかかる界面活性剤の例には、限定はされないが以下が含まれる；ソルビタンエステル、例えばSPAN 40、SPAN 20；脂肪アルコール、例えばオレイルアルコール、ステアリルアルコール；脂肪酸エステル、例えばイソプロピルパルミタート、グリセロールモノステアラート；エトキシル化脂肪アルコール、例えばBRIJ 52、BRIJ 93；ポロキサマー、例えばPluronic P-123、Pluronic L-31；脂肪酸、例えばパルミチン酸、ドデカン酸；トリグリセリド、例えばグリセリルトリパルミタート、グリセリルトリリノレアート；コレステロール；コレステロール誘導体、例えばコレステリル硫酸ナトリウム、ドデカン酸コレステリル；および胆汁塩または酸、例えばリトコール酸、リトコール酸ナトリウム。かかる界面活性剤のさらなる例としては、ソルビタンモノステアラート（SPAN 60）、ソルビタントリステアラート（SPAN 65）、ソルビタンモノオレアート（SPAN 80）、ソルビタンセスキオレアート（SPAN 83）、ソルビタントリオレアート（SPAN 85）、ソルビタンセスキオレアート（Arlacel 83）、ソルビタンジパルミタート、脂肪酸のモノおよびジグリセリド、ポリオキシエチレンソルビタントリオレアート（Tween 85）、ポリオキシエチレンソルビタンヘキサオレアート（G 1086）、ソルビタンモノイソステアラート（Montane 70）、ポリオキシエチレンアルコール、ポリオキシエチレングリコールアルキルエーテル、ポリオキシエチレン（２）オレイルエーテル（BRIJ 93）、ポリオキシエチレンセチルエーテル（BRIJ 52）、ポリエチレングリコールドデシルエーテル（BRIJ L4）；１－モノテトラデカノイル－ｒａｃ－グリセロール；グリセリルモノステアラート；グリセロールモノパルミタート；エチレンジアミンテトラキステトロール（Tetronic 90R4、Tetronic 701）、ポリオキシエチレン（５）ノニルフェニルエーテル（IGEPAL CA-520）、MERPOL A界面活性剤、MERPOL SE界面活性剤、およびポリ（エチレングリコール）ソルビトールヘキサオレアートが挙げられる。さらなる例もまた、当業者には明らかであろう。
「薬学的に許容し得る賦形剤」または「薬学的に許容し得る担体」とは、組成物を製剤化するために薬理学的に活性な物質と共に使用する、薬理学的に不活性な物質を意味する。薬学的に許容し得る賦形剤は、糖類（グルコース、ラクトースなど）、抗菌剤などの保存剤、再構成補助剤、着色剤、生理食塩水（リン酸緩衝生理食塩水など）、および緩衝液を含むがこれらに限定されない、当技術分野で知られている様々な材料を含む。
「提供する」とは、本発明の実施のために必要なアイテムまたはアイテムのセットまたは方法を供給する、個人が実行するアクションまたはアクションのセットを意味する。アクションまたはアクションのセットは、直接または間接的に実行し得る。
「ラパログ」とは、ラパマイシンおよび、ラパマイシン（シロリムス）（の類似体）に構造的に関連する分子を指し、好ましくは疎水性である。ラパログの例としては、限定することなく、テムシロリムス（CCI-779）、デフォロリムス、エベロリムス（RAD001）、リダフォロリムス（AP-23573）、ゾタロリムス（ABT-578）が挙げられる。ラパログの追加の例は、例えば、ＷＯ公開WO1998/002441および米国特許第8,455,510号に見出すことができ、かかるラパログの開示は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
「対象」とは動物を意味し、これには以下が含まれる：人間および霊長類などの温血哺乳類；鳥類；家庭用動物または家畜、例えばネコ、イヌ、ヒツジ、ヤギ、ウシ、ウマ、およびブタなど；実験動物、例えばマウス、ラット、およびモルモットなど；魚；爬虫類；動物園の動物および野生動物；など。
「過飽和」とは、平衡条件下でその中に溶解可能なよりも多くの溶質（免疫抑制剤など）を含有する組成物（合成ナノキャリア組成物など）を指す。換言すれば、過飽和濃度を有する組成物は、飽和濃度を超える濃度を有する。いくつかの態様において、免疫抑制剤は、疎水性ポリエステル担体材料などの疎水性担体材料の飽和限界を超えることができる（例えば、単独で、または製剤化プロセスの水相中の溶媒との組み合わせで）。組成物中の免疫抑制剤の量は、当技術分野で知られている任意の方法によって過飽和であると決定され得、これは例えば、組成物中の分子の濃度を決定し、その濃度を予測飽和濃度と比較することによる。
免疫抑制剤が過飽和量であるかどうかを判断する他の方法には、フィルムキャスティング、Ｘ線散乱、および電子顕微鏡法が含まれる。電子顕微鏡法の形態には、走査型電子顕微鏡法（ＳＥＭ）、透過型電子顕微鏡法（ＴＥＭ）、および極低温透過型電子顕微鏡法（ｃｒｙｏ－ＴＥＭ）が含まれるが、これらに限定されない。過飽和量の免疫抑制剤は、好ましくは「安定」である。いくつかの態様において、過飽和量の免疫抑制剤は、合成ナノキャリアが懸濁液中にかかる量を保持する場合、合成ナノキャリア中で安定である。好ましくは、安定した過飽和量の免疫抑制剤を有する合成ナノキャリアは、初期滅菌濾過可能であり、初期滅菌濾過性は、合成ナノキャリア中の過飽和量の免疫抑制剤の安定性の試験として役立ち得る。
「界面活性剤」とは、２つの液体の間または液体と固体の間の表面張力を低下可能な化合物を指す。界面活性剤は、洗浄剤、湿潤剤、乳化剤、発泡剤、および分散剤として作用することができ、本明細書で提供される合成ナノキャリアの形成に使用することができる。いくつかの態様において、界面活性剤は、ＨＬＢ値が１０以下の非イオン性界面活性剤である。
「合成ナノキャリア」とは、自然界には見られず、サイズが５ミクロン以下の少なくとも１つの寸法を有する、個別の物体を意味する。本明細書で提供される合成ナノキャリアは、疎水性ポリエステル担体材料などの疎水性担体材料を含む。合成ナノキャリアは、疎水性ポリエステルナノ粒子を含む合成ナノキャリアであり得るが、これに限定されない。合成ナノキャリアは様々な異なる形状であり得、これには限定なく、回転楕円体、立方体、錐体、楕円形、円筒形、トロイダルなどが含まれる。本発明による合成ナノキャリアは、１つ以上の表面を含む。態様において、合成ナノキャリアは、アスペクト比として１：１、１：１．２、１：１．５、１：２、１：３、１：５、１：７以上、または１：１０を超える値を有し得る。
約１００ｎｍ以下、好ましくは１００ｎｍ以下の最小寸法を有する本発明による合成ナノキャリアは、補体を活性化するヒドロキシル基を有する表面を含まないか、または代替的に、補体を活性化するヒドロキシル基ではない部分から本質的になる表面を含む。好ましい態様において、約１００ｎｍ以下、好ましくは１００ｎｍ以下の最小寸法を有する本発明による合成ナノキャリアは、補体を実質的に活性化する表面を含まないか、または代替的に、補体を実質的に活性化しない部分から本質的になる表面を含む。より好ましい態様において、約１００ｎｍ以下、好ましくは１００ｎｍ以下の最小寸法を有する本発明による合成ナノキャリアは、補体を活性化する表面を含まないか、または代替的に、補体を活性化しない部分から本質的になる表面を含む。
「総固形分」とは、合成ナノキャリアの組成物または懸濁液に含有されるすべての成分の総重量を指す。本明細書で提供される組成物または方法のいずれか１つのいくつかの態様において、総固形分の量は、懸濁液１ｍＬ当たりの全乾燥ナノキャリア質量として決定される。これは、重量法によって決定可能である。
「重量％」は、１つの重量の別の重量に対する比率に１００を掛けたものを指す。例えば重量％は、１つの成分の別のものに対する重量の比率に１００を掛けたもの、または１つの成分の重量の、２つ以上の成分の総重量に対する比率であり得る。一般に重量％は、合成ナノキャリアの集団全体の平均、または組成物もしくは懸濁液中の合成ナノキャリア全体の平均として測定される。
Ｃ．組成物および関連する方法
本明細書で提供されるのは、凍結乾燥、保管などの特性が改善された合成ナノキャリアの組成物である。本明細書で提供されるは、合成ナノキャリア組成物の凍結乾燥形態、その再構成組成物、および凍結乾燥される合成ナノキャリア組成物である。本明細書で提供される組成物のいずれか１つの一態様において、合成ナノキャリアの組成物は、中性または中性に近いｐＨ（例えば、２５℃などでｐＨ７．３）を有する。本明細書で提供される組成物のいずれか１つの一態様において、合成ナノキャリアの組成物は、凍結乾燥粉末形態などの凍結乾燥形態である。本明細書で提供される組成物のいずれか１つの一態様において、合成ナノキャリアの組成物は、凍結乾燥粉末形態などへと、凍結乾燥されるものである。本明細書で提供される組成物のいずれか１つの一態様において、合成ナノキャリアの組成物は、凍結乾燥形態の再構成組成物である。本明細書で提供される組成物のいずれか１つの一態様において、合成ナノキャリアの組成物は、ガラス製バイアルに保管される。本明細書で提供される組成物のいずれか１つの一態様において、ガラス製バイアルは２０ｍＬのガラス製バイアルであり、任意に２０ｍｍストッパーを含む。本明細書で提供される組成物のいずれか１つの一態様において、合成ナノキャリアの組成物は、２～８℃で保管される。
本明細書で提供される組成物は、例えば寛容原性免疫応答を促進するために、それを必要とする対象に投与することができる。
好ましくは、本明細書で提供される組成物のいずれか１つのいくつかの態様において、合成ナノキャリア組成物中の疎水性ポリエステル担体材料などの疎水性担体材料の量は、５～９５重量％疎水性担体材料／総固形分である。本明細書で提供される組成物のいずれか１つの他の態様において、合成ナノキャリア中の疎水性ポリエステル担体材料などの疎水性担体材料の量は、１０～９５、１５～９０、２０～９０、２５～９０、３０～８０、３０～７０、３０～６０、３０～５０などの重量％の疎水性担体材料／総固形分である。本明細書で提供される組成物のいずれか１つのさらに他の態様において、合成ナノキャリア中の疎水性ポリエステル担体材料などの疎水性担体材料の量は、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０または９５重量％の疎水性担体材料／総固形分である。
本明細書で提供される組成物のいずれか１つのいくつかの態様において、ラパマイシン等のラパログを安定した過飽和量で含む合成ナノキャリアは、ラパマイシン等のラパログを６重量％以上かつ５０重量％以下／疎水性ポリエステル担体材料等の疎水性担体材料で含む。本明細書で提供される組成物のいずれか１つのいくつかの態様において、合成ナノキャリアは、６以上かつ４５以下、６以上かつ４０以下、６以上かつ３５以下、６以上かつ３０以下、６以上かつ２５以下、６以上かつ２０以下、６以上かつ１５以下の重量％のラパマイシン等のラパログ／疎水性ポリエステル担体材料等の疎水性担体材料を含む。本明細書で提供される組成物のいずれか１つの他の態様において、合成ナノキャリアは、７以上かつ４５以下、７以上かつ４０以下、７以上かつ３５以下、７以上かつ３０以下、７以上かつ２５以下、７以上かつ２０以下、７以上かつ１５以下の重量％のラパマイシン等のラパログ／疎水性ポリエステル担体材料等の疎水性担体材料を含む。本明細書で提供される組成物のいずれか１つのさらに他の態様において、合成ナノキャリアは、８重量％以上かつ２４重量％以下のラパマイシン等のラパログ／疎水性ポリエステル担体材料等の疎水性担体材料を含む。本明細書で提供される組成物のいずれか１つのいくつかの態様において、合成ナノキャリアは、６、７、８、９、１０、１２、１５、１７、２０、２２、２５、２７、３０、３５、４５またはそれ以上の重量％のラパマイシン等のラパログ／疎水性ポリエステル担体材料等の疎水性担体材料を含む。
本明細書で提供される組成物または方法のいずれか１つのいくつかの態様において、合成ナノキャリア中のＨＬＢ値が１０以下の非イオン性界面活性剤の量は、０．０１以上かつ２０重量％以下のＨＬＢ値１０以下の非イオン性界面活性剤／疎水性ポリエステル担体材料等の疎水性担体材料である。本明細書で提供される組成物または方法のいずれか１つのいくつかの態様において、合成ナノキャリア中のＨＬＢ値が１０以下の非イオン性界面活性剤の量は、０．１以上かつ１５以下、０．５以上かつ１３以下、１以上かつ９以下、または１０重量％の、ＨＬＢ値１０以下の非イオン性界面活性剤／疎水性ポリエステル担体材料等の疎水性担体材料である。本明細書で提供される組成物または方法のいずれか１つの他の態様において、合成ナノキャリア中のＨＬＢ値が１０以下の非イオン性界面活性剤の量は、０．０１以上かつ１７以下、０．０１以上かつ１５以下、０．０１で以上かつ１３以下、０．０１以上かつ１２以下、０．０１以上かつ１１以下、０．０１以上かつ１０以上、０．０１以上かつ９以下、０．０１以上かつ８以下、０．０１以上かつ７以下、０．０１以上かつ６以下、０．０１以上かつ５以下などの重量％の、ＨＬＢ値１０以下の非イオン性界面活性剤／疎水性ポリエステル担体材料等の疎水性担体材料である。本明細書で提供される組成物または方法のいずれか１つのさらに他の態様において、合成ナノキャリア中のＨＬＢ値が１０以下の非イオン性界面活性剤の量は、０．１以上かつ１５以下、０．１以上かつ１４以下、０．１以上かつ１３以下、０．１以上かつ１２以下、０．１以上かつ１１以下、０．１以上かつ１０以下、０．１以上かつ９以下、０．１以上かつ８以下、０．１以上かつ７以下、０．１以上かつ６以下、０．１以上かつ５以下などの重量％の、ＨＬＢ値１０以下の非イオン性界面活性剤／疎水性ポリエステル担体材料等の疎水性担体材料である。本明細書で提供される組成物または方法のいずれか１つのさらに他の態様において、合成ナノキャリア中のＨＬＢ値が１０以下の非イオン性界面活性剤の量は、０．５以上かつ１５以下、０．５以上かつ１４以下、０．５以上かつ１３以下、０．５以上かつ１２以下、０．５以上かつ１１以下、０．５以上かつ１０以下、０．５以上かつ９以下、０．５以上かつ８以下、０．５以上かつ７以下、０．５以上かつ６以下、０．５以上かつ５以下などの重量％の、ＨＬＢ値１０以下の非イオン性界面活性剤／疎水性ポリエステル担体材料等の疎水性担体材料である。本明細書で提供される組成物または方法のいずれか１つのさらに他の態様において、合成ナノキャリア中のＨＬＢ値が１０以下の非イオン性界面活性剤の量は、１以上かつ９以下、１以上かつ８以下、１以上かつ７以下、１以上かつ６以下、１以上かつ５以下などの重量％の、ＨＬＢ値１０以下の非イオン性界面活性剤／疎水性ポリエステル担体材料等の疎水性担体材料である。本明細書で提供される組成物または方法のいずれか１つのさらに他の態様において、合成ナノキャリア中のＨＬＢ値が１０以下の非イオン性界面活性剤の量は、５以上かつ１５以下、５以上かつ１４以下、５以上かつ１３以下、５以上かつ１２以下、５以上かつ１１以下、５以上かつ１０以下、５以上かつ９以下、５以上かつ８以下、５以上かつ７以下、５以上かつ６以下などの重量％の、ＨＬＢ値１０以下の非イオン性界面活性剤／疎水性ポリエステル担体材料等の疎水性担体材料である。本明細書で提供される組成物または方法のいずれか１つのいくつかの態様において、合成ナノキャリア中のＨＬＢ値が１０以下の非イオン性界面活性剤の量は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０重量％の、ＨＬＢ値１０以下の非イオン性界面活性剤／疎水性ポリエステル担体材料等の疎水性担体材料である。本明細書で提供されるＨＬＢ値のいずれも、グリフィン法またはデイビス法を使用して決定することができる。
本明細書で提供される組成物のいずれか１つについて本明細書で列挙される成分または材料の量は、当業者に知られている方法または本明細書で提供される方法を使用して決定することができる。例えば、ＨＬＢ値が１０以下の非イオン性界面活性剤の量は、抽出とそれに続くＨＰＬＣ法による定量によって測定することができる。疎水性ポリエステル担体材料などの疎水性担体材料の量は、ＨＰＬＣを使用して決定することができる。かかる量の決定は、いくつかの態様において、プロトンＮＭＲ、またはＭＡＬＤＩ－ＭＳなどの他の直交法を使用して、疎水性担体材料の同一性を決定することができる。同様の方法を使用して、本明細書で提供される組成物のいずれか１つにおける免疫抑制剤（例えば、ラパマイシン等のラパログ）の量を決定することができる。いくつかの態様において、免疫抑制剤（例えば、ラパマイシン等のラパログ）の量は、ＨＰＬＣを使用して決定される。本明細書で提供される組成物または方法のいずれか１つについて、成分または材料の量は、ナノキャリア製剤のレシピ重量に基づいて決定することもできる。したがって、本明細書で提供される組成物または方法のいずれか１つのいくつかの態様において、本明細書で提供される成分のいずれか１つの量は、合成ナノキャリアの製剤化の間の水相中の成分の量である。本明細書で提供される組成物または方法のいずれか１つのいくつかの態様において、成分のいずれか１つの量は、生成され製剤化プロセスの結果である合成ナノキャリア組成物中の、成分の量である。
本明細書で提供される合成ナノキャリアは、疎水性ポリマーまたは脂質などの疎水性担体材料を含む。したがって、いくつかの態様において、本明細書で提供される合成ナノキャリアは、１つ以上の脂質を含む。いくつかの態様において、合成ナノキャリアは脂質二重層を含み得る。いくつかの態様において、合成ナノキャリアは脂質単層を含み得る。いくつかの態様において、合成ナノキャリアは、脂質層（例えば、脂質二重層、脂質単層など）によって囲まれたポリマーマトリックスを含むコアを含み得る。さらなる疎水性担体材料には、脂質（合成および天然）、脂質－ポリマー複合体、脂質－タンパク質複合体、および架橋可能な油、ワックス、脂肪などが含まれる。本明細書で提供される疎水性担体材料として使用するための脂質材料のさらなる例は、例えば、ＰＣＴ公開番号WO2000/006120およびWO2013/056132に見出すことができ、かかる資料の開示は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
したがって、いくつかの態様において、本明細書で提供される合成ナノキャリアはリポソームであり得る。リポソームは、以下に報告されたものなどの標準的な方法によって生成することができる：Kim et al. (1983, Biochim. Biophys. Acta 728, 339-348)；Liu et al. (1992, Biochim. Biophys. Acta 1104, 95-101)；Lee et al. (1992, Biochim. Biophys. Acta. 1103, 185-197)、Brey et al. (米国特許出願公開20020041861)；Hass et al. (米国特許出願公開20050232984)、Kisak et al. (米国特許出願公開20050260260)およびSmyth-Templeton et al. (米国特許出願公開20060204566)；かかるリポソームおよびそれらの生成方法の開示は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
本明細書で提供される疎水性担体材料は、１つ以上の疎水性ポリマーまたはその単位を含む。しかし、いくつかの態様において、疎水性担体材料は全体的に疎水性ではあるが、疎水性担体材料はまた、疎水性ではないポリマーまたはその単位も含んでよい。
本明細書で提供される疎水性担体材料は、乳酸およびグリコール酸単位を含むコポリマーを含むことができる、ポリエステルを含んでよく、その例としては以下である：ポリ（乳酸－ｃｏ－グリコール酸）およびポリ（ラクチド－ｃｏ－グリコリド）、本明細書ではまとめて「ＰＬＧＡ」と呼ぶ；およびグリコール酸単位を含むホモポリマー、本明細書では「ＰＧＡ」と呼ぶ；および乳酸単位、例えばポリ－Ｌ－乳酸、ポリ－Ｄ－乳酸、ポリ－Ｄ，Ｌ－乳酸、ポリ－Ｌ－ラクチド、ポリ－Ｄ－ラクチド、およびポリ－Ｄ，Ｌ－ラクチドなど、本明細書ではまとめて「ＰＬＡ」と呼ぶ。いくつかの態様において、例示的なポリエステルとしては、例えば、ポリヒドロキシ酸；ＰＥＧコポリマー、およびラクチドとグリコリドとのコポリマー（例：ＰＬＡ-ＰＥＧコポリマー、ＰＧＡ-ＰＥＧコポリマー、ＰＬＧＡ-ＰＥＧコポリマー）、およびそれらの誘導体が含まれる。いくつかの態様において、ポリエステルには、例えば、ポリ（カプロラクトン）、ポリ（カプロラクトン）－ＰＥＧコポリマー、ポリ（Ｌ－ラクチド－ｃｏ－Ｌ－リジン）、ポリ（セリンエステル）、ポリ（４－ヒドロキシ－Ｌ－プロリンエステル）、ポリ［α－（４－アミノブチル）－Ｌ－グリコール酸］、およびその誘導体が含まれる。
いくつかの態様において、ポリエステルはＰＬＧＡであってもよい。ＰＬＧＡは、乳酸とグリコール酸の生体適合性および生分解性のコポリマーであり、ＰＬＧＡのさまざまな形態は乳酸：グリコール酸の比率によって特徴付けられる。乳酸は、Ｌ－乳酸、Ｄ－乳酸、またはＤ，Ｌ－乳酸であり得る。ＰＬＧＡの分解速度は、乳酸：グリコール酸の比率を変えることで調整可能である。いくつかの態様において、本発明に従って使用されるＰＬＧＡは、乳酸：グリコール酸の比率として約８５：１５、約７５：２５、約６０：４０、約５０：５０、約４０：６０、約２５：７５、または約１５：８５によって特徴付けられる。
本明細書で提供される疎水性ポリエステル担体材料は、疎水性ポリエステル担体材料全体が疎水性でありかつ１つ以上のポリエステルまたはその単位を含有するとの条件下で、１つ以上の非ポリエステル疎水性ポリマーもしくはその単位および／または疎水性ではないポリマーもしくはその単位を、含んでもよい。
本明細書で提供される疎水性担体材料は、非メトキシ末端、プルロニックポリマー、またはその単位である、１つ以上のポリマーを含み得る。「非メトキシ末端ポリマー」とは、メトキシ以外の部分で終わる少なくとも１つの末端を有するポリマーを意味する。いくつかの態様において、ポリマーは、メトキシ以外の部分で終わる少なくとも２つの末端を有する。他の態様において、ポリマーは、メトキシで終わる末端を有さない。「非メトキシ末端プルロニックポリマー」とは、両末端にメトキシを有する線状プルロニックポリマー以外のポリマーを意味する。
疎水性担体材料は、いくつかの態様において、ポリヒドロキシアルカノアート、ポリアミド、ポリエーテル、ポリオレフィン、ポリアクリラート、ポリカーボネート、ポリスチレン、シリコーン、フルオロポリマー、またはそれらの単位を含み得る。本明細書で提供される疎水性担体材料に含まれ得るポリマーのさらなる例には、ポリカーボネート、ポリアミド、またはポリエーテル、またはそれらの単位が含まれる。他の態様において、疎水性担体材料のポリマーは、ポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）、ポリプロピレングリコール、またはそれらの単位を含み得る。
いくつかの態様において、疎水性担体材料が生分解性のポリマーを含むことが好ましい。したがってかかる態様において、疎水性担体材料のポリマーは、ポリ（エチレングリコール）またはポリプロピレングリコールまたはその単位などのポリエーテルを含み得る。さらにポリマーは、ポリマーが生分解性であるように、ポリエーテルと生分解性ポリマーとのブロックコポリマーを含んでもよい。他の態様において、ポリマーは、ポリエーテルまたはその単位のみを、例えばポリ（エチレングリコール）またはポリプロピレングリコールまたはその単位などのみを、含むわけではない。
本発明での使用に適したポリマーの他の例には、限定はされないが、以下が含まれる：ポリエチレン、ポリカーボネート（例：ポリ（１，３－ジオキサン－２オン））、ポリ無水物（例：ポリ（セバシン酸無水物））、フマル酸ポリプロピル、ポリアミド（例：ポリカプロラクタム）、ポリアセタール、ポリエーテル、ポリエステル（例：ポリラクチド、ポリグリコリド、ポリラクチド－ｃｏ－グリコリド、ポリカプロラクトン、ポリヒドロキシ酸（例：ポリ（β－ヒドロキシアルカノアート）））、ポリ（オルトエステル）、ポリシアノアクリラート、ポリビニルアルコール、ポリウレタン、ポリホスファゼン、ポリアクリラート、ポリメタクリラート、ポリウレア、ポリスチレン、およびポリアミン、ポリリジン、ポリリジン－ＰＥＧコポリマー、およびポリ（エチレンイミン）、ポリ（エチレンイミン）－ＰＥＧコポリマー。
疎水性担体材料に含まれ得るポリマーのさらに他の例としては、アクリルポリマー、例えば、アクリル酸およびメタクリル酸コポリマー、メタクリル酸メチルコポリマー、メタクリル酸エトキシエチル、シアノエチルメタクリラート、アミノアルキルメタクリラートコポリマー、ポリ（アクリル酸）、ポリ（メタクリル酸）、メタクリル酸アルキルアミドコポリマー、ポリ（メチルメタクリラート）、ポリ（メタクリル酸無水物）、メタクリル酸メチル、ポリメタクリラート、ポリ（メタクリル酸メチル）コポリマー、ポリアクリルアミド、アミノアルキルメタクリラートコポリマー、グリシジルメタクリラートコポリマー、ポリシアノアクリラート、およびの前述のポリマーの１以上を含む組み合わせが挙げられる。
いくつかの態様において、疎水性担体材料のポリマーは、会合してポリマーマトリックスを形成することができる。多種多様なポリマーおよびそれらからポリマーマトリックスを形成する方法が、従来から知られている。いくつかの態様において、疎水性ポリマーマトリックスを含む合成ナノキャリアは、合成ナノキャリア内に疎水性環境を生成する。
いくつかの態様において、ポリマーは、１つ以上の部分および／または官能基で修飾され得る。本発明に従って様々な部分または官能基を使用することができる。いくつかの態様において、ポリマーは、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、炭水化物、および／または多糖由来の非環式ポリアセタールで修飾され得る（Papisov, 2001, ACS Symposium Series, 786:301）。ある態様の実施は、Grefらへの米国特許第5543158号、またはVon AndrianらによるＷＯ公開WO2009/051837の一般的な教示を使用して行うことができる。
いくつかの態様において、ポリマーは、脂質または脂肪酸基で修飾され得る。いくつかの態様において、脂肪酸基は、酪酸、カプロン酸、カプリル酸、カプリン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、アラキジン酸、ベヘン酸、またはリグノセリン酸のうちの１つ以上であり得る。いくつかの態様において、脂肪酸基は、パルミトレイン酸、オレイン酸、バクセン酸、リノール酸、α－リノール酸、γ－リノール酸、アラキドン酸、ガドール酸、アラキドン酸、エイコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸、またはエルカ酸のうちの１つ以上であり得る。
いくつかの態様において、ポリマーが生分解性であることが好ましい。いくつかの態様において、本発明によるポリマーは、ヒトにおける使用について米国食品医薬品局（ＦＤＡ）により21 C.F.R. § 177.2600の下で承認されている。
ポリマーは、天然または非天然（合成）ポリマーであり得る。ポリマーは、ホモポリマーであっても、２つ以上のモノマーを含むコポリマーであってもよい。配列に関して、コポリマーは、ランダムであるか、ブロックであるか、またはランダム配列とブロック配列の組み合わせを含むことができる。典型的には、本発明によるポリマーは有機ポリマーである。
いくつかの態様において、ポリマーは直鎖または分岐ポリマーであることができる。いくつかの態様において、ポリマーはデンドリマーであり得る。いくつかの態様において、ポリマーは互いに実質的に架橋することができる。いくつかの態様において、ポリマーは実質的に架橋を含まなくてもよい。いくつかの態様において、ポリマーは、架橋工程を経ることなく、本発明に従って使用することができる。さらに、合成ナノキャリアは、ブロックコポリマー、グラフトコポリマー、ブレンド、混合物、および／または前述のポリマーおよび他のポリマーの付加物を含み得ることが理解されるべきである。当業者は、本明細書に挙げたポリマーが、所望の基準を満たす限り、本発明に従って使用できるポリマーの例示的であるが包括的ではないリストを表すことを認識するであろう。
これらおよび他のポリマーの特性およびそれらを調製する方法は、当技術分野で周知である。（例えば以下を参照：米国特許6,123,727；5,804,178；5,770,417；5,736,372；5,716,404；6,095,148；5,837,752；5,902,599；5,696,175；5,514,378；5,512,600；5,399,665；5,019,379；5,010,167；4,806,621；4,638,045；および4,946,929；Wang et al., 2001, J. Am. Chem. Soc., 123:9480；Lim et al., 2001, J. Am. Chem. Soc., 123:2460；Langer, 2000, Acc. Chem. Res., 33:94；Langer, 1999, J. Control. Release, 62:7；およびUhrich et al., 1999, Chem. Rev., 99:3181）。より一般的には、特定の適切なポリマーを合成するためのさまざまな方法が、以下に記載されている：Concise Encyclopedia of Polymer Science and Polymeric Amines and Ammonium Salts, Ed. by Goethals, Pergamon Press, 1980；Principles of Polymerization by Odian, John Wiley & Sons, Fourth Edition, 2004；Contemporary Polymer Chemistry by Allcock et al., Prentice-Hall, 1981；Deming et al., 1997, Nature, 390:386；および米国特許6,506,577、6,632,922、6,686,446、および6,818,732。
本発明により、多種多様な合成ナノキャリアを使用することができる。いくつかの態様において、合成ナノキャリアは球体またはスフェロイドである。いくつかの態様において、合成ナノキャリアは、平らまたは板状である。いくつかの態様において、合成ナノキャリアは立方体または立方状（cubic）である。いくつかの態様において、合成ナノキャリアは卵形（oval）または楕円形である。いくつかの態様において、合成ナノキャリアは、円柱、円錐、または錐体である。
いくつかの態様において、サイズまたは形状に関して比較的均一な合成ナノキャリアの集団を使用して、各合成ナノキャリアが同様の特性を有するようにすることが望ましい。例えば、合成ナノキャリアの総数に基づき合成ナノキャリアの少なくとも８０％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％が、合成ナノキャリアの平均直径または平均寸法の５％、１０％、または２０％以内の最小寸法または最大寸法を有することができる。
本発明による組成物は、要素を、保存剤、緩衝液、生理食塩水、またはリン酸緩衝生理食塩水などの薬学的に許容し得る賦形剤と組み合わせて含むことができる。組成物は、有用な剤形に到達するために、従来の医薬品製造および調合技術を使用して作製することができる。一態様において、合成ナノキャリアを含む組成物などの組成物は、注射用の滅菌生理食塩水に保存剤と共に懸濁される。
いくつかの態様において、本明細書で提供される合成ナノキャリアの任意の成分を、単離することができる。隔離するとは、要素がその本来の環境から分離され、その識別または使用を可能にするのに十分な量で存在することを指す。これは例えば、要素がクロマトグラフィーまたは電気泳動などによって精製され得ることを意味する。単離された要素は実質的に純粋であってよいが、必ずしもそうである必要はない。単離された要素は、薬学的調製物において薬学的に許容し得る賦形剤と混合され得るので、要素は、調製物のわずかな重量パーセンテージのみを構成し得る。それにもかかわらず、この要素は、生体系で関連している可能性のある物質から分離されている、すなわち、他の脂質またはタンパク質から単離されているという点で、単離されている。本明細書で提供される要素のいずれも、単離されて組成物に含められるか、または単離された形態で方法において使用され得る。
Ｄ．組成物を製造および使用する方法ならびに関連する方法
合成ナノキャリアは、当技術分野で知られている多種多様な方法を使用して調製することができる。例えば合成ナノキャリアは、以下の方法により形成することができる：ナノ沈殿、流体チャネルを使用したフローフォーカシング、噴霧乾燥、単一および二重エマルジョン溶媒蒸発、溶媒抽出、相分離、ミリング（凍結粉砕（cryomilling）を含む）、超臨界流体（超臨界二酸化炭素など）処理、マイクロエマルジョン手順、マイクロファブリケーション、ナノファブリケーション、犠牲層、単純および複雑なコアセルベーション、および当業者に周知の他の方法。代替的または追加的に、単分散半導体、導電性、磁性、有機、および他のナノ材料の、水性および有機溶媒合成が記載されている（Pellegrino et al., 2005, Small, 1:48；Murray et al., 2000, Ann. Rev. Mat. Sci., 30:545；およびTrindade et al., 2001, Chem. Mat., 13:3843）。追加の方法が文献に記載されている（例えば以下を参照：Doubrow, Ed., “Microcapsules and Nanoparticles in Medicine and Pharmacy,” CRC Press, Boca Raton, 1992；Mathiowitz et al., 1987, J. Control. Release, 5:13；Mathiowitz et al., 1987, Reactive Polymers, 6:275；およびMathiowitz et al., 1988, J. Appl. Polymer Sci., 35:755；米国特許5578325および6007845；P. Paolicelli et al., “Surface-modified PLGA-based Nanoparticles that can Efficiently Associate and Deliver Virus-like Particles” Nanomedicine. 5(6):843-853 (2010)）。
様々な材料を、限定はされないが以下を含む様々な方法を用いて、所望のように合成ナノキャリアにカプセル化することができる：C. Astete et al., “Synthesis and characterization of PLGA nanoparticles” J. Biomater. Sci. Polymer Edn, Vol. 17, No. 3, pp. 247-289 (2006)；K. Avgoustakis “Pegylated Poly(Lactide) and Poly(Lactide-Co-Glycolide) Nanoparticles: Preparation, Properties and Possible Applications in Drug Delivery” Current Drug Delivery 1:321-333 (2004)；C. Reis et al., “Nanoencapsulation I. Methods for preparation of drug-loaded polymeric nanoparticles” Nanomedicine 2:8- 21 (2006)；P. Paolicelli et al., “Surface-modified PLGA-based Nanoparticles that can Efficiently Associate and Deliver Virus-like Particles” Nanomedicine. 5(6):843-853 (2010)。材料を合成ナノキャリアにカプセル化するのに適した他の方法を使用することができ、これは、限定することなく、２００３年１０月１４日に発行されたUngerへの米国特許第6,632,671号に開示されている方法を含む。
ある態様において、合成ナノキャリアは、ナノ沈殿プロセスまたは噴霧乾燥によって調製される。合成ナノキャリアの調製に使用する条件は、所望のサイズまたは特性（例えば、疎水性、親水性、外部形態、「粘着性」、形状など）の粒子を生成するために変更することができる。合成ナノキャリアを調製する方法および使用する条件（例えば、溶媒、温度、濃度、空気流量など）は、合成ナノキャリアに含まれる材料および／または担体マトリックスの組成に依存し得る。
上記の方法のいずれかによって調製された合成ナノキャリアが、所望の範囲外のサイズ範囲を有する場合、かかる合成ナノキャリアは、例えばふるいを使用してサイズ調整することができる。
態様において、合成ナノキャリアは、同じビヒクルまたは送達システム中で混合することにより、抗原または他の組成物と組み合わせることができる。
本明細書で提供される組成物は、以下を含み得る：無機または有機緩衝液（例：リン酸、炭酸、酢酸、またはクエン酸のナトリウム塩またはカリウム塩）およびｐＨ調整剤（例：塩酸、水酸化ナトリウムまたは水酸化カリウム、クエン酸または酢酸の塩、アミノ酸およびそれらの塩）、酸化防止剤（例：アスコルビン酸、α－トコフェロール）、界面活性剤（例：ポリソルベート２０、ポリソルベート８０、ポリオキシエチレン９－１０ノニルフェノール、デオキシコール酸ナトリウム）、溶液および／または低温／凍結安定剤（例：スクロース、ラクトース、マンニトール、トレハロース）、浸透圧調整剤（例：塩類または糖類）、抗菌剤（例：安息香酸、フェノール、ゲンタマイシン）、消泡剤（例：ポリジメチルシロゾン）、保存剤（例：チメロサール、２－フェノキシエタノール、ＥＤＴＡ）、高分子安定剤および粘度調整剤（例：ポリビニルピロリドン、ポロキサマー４８８、カルボキシメチルセルロース）および共溶媒（例：グリセロール、ポリエチレングリコール、エタノール）。
本発明による組成物は、薬学的に許容し得る賦形剤を含み得る。組成物は、有用な剤形に到達するために、従来の医薬品製造および調合技術を使用して作製することができる。本発明の実施への使用に適した技術は、Handbook of Industrial Mixing: Science and Practice, Edited by Edward L. Paul, Victor A. Atiemo-Obeng, and Suzanne M. Kresta, 2004 John Wiley & Sons, Inc.；およびPharmaceutics: The Science of Dosage Form Design, 2nd Ed. Edited by M. E. Auten, 2001, Churchill Livingstoneに記載されている。一態様において、組成物は、注射用の滅菌生理食塩水中に保存剤と共に懸濁される。
本発明の組成物は、任意の適切な様式で製造することができ、本発明が、本明細書に記載の方法を使用して生成可能な組成物には限定されないことが理解されるべきである。適切な製造方法を選択するには、関連する特定の要素の特性に注意する必要がある。
いくつかの態様において、組成物は滅菌条件下で製造されるか、または初期もしくは最後に滅菌化される。これにより、得られる組成物が滅菌で非感染性であることを保証でき、したがって非滅菌組成物と比較して安全性が向上する。これは、特に組成物を受け取る対象が免疫不全を有する場合、感染症に罹患している場合、および／または感染しやすい場合に、価値ある安全対策を提供する。いくつかの態様において、組成物を凍結乾燥し、製剤化戦略に応じて懸濁液中にまたは凍結乾燥粉末として、活性を失うことなく長期間保管することができる。
本発明による投与は、皮内、筋肉内、皮下、静脈内、および腹腔内経路を含むがこれらに限定されない、様々な経路によるものであり得る。本明細書で言及される組成物は、従来の方法を用いて投与のために製造および調製され得る。
本発明の組成物は、本明細書の他の箇所に記載の有効量等の有効量で、投与することができる。剤形の用量は、本発明に従って要素を様々な量で含有することができる。本発明の剤形に存在する要素の量は、それらの性質、達成されるべき治療的利益、および他のかかるパラメータに従って変化し得る。態様において、用量範囲研究を実施して、剤形に存在する最適な治療量を確立することができる。態様において、要素は、対象への投与時に所望の効果および／または免疫応答の低下を生じさせるのに有効な量で、剤形中に存在する。対象において従来の用量範囲研究および技術を使用して、所望の結果を達成するための量を決定することが可能であり得る。本発明の剤形は、様々な頻度で投与することができる。一態様において、本明細書で提供される組成物の少なくとも１回の投与が、薬理学的に関連する応答を生成するのに十分である。
本開示の別の側面は、キットに関する。提供されるキットのいずれか１つのいくつかの態様において、キットは、本明細書で提供される合成ナノキャリア組成物のいずれか１つを含む。提供されるキットのいずれか１つのいくつかの態様において、キットはさらに抗原を含む。提供されるキットのいずれか１つのいくつかの態様において、本明細書で提供される合成ナノキャリア組成物のいずれか１つを含む容器は、バイアルまたはアンプルである。提供されるキットのいずれか１つのいくつかの態様において、組成物は凍結乾燥形態であり、後で再構成することができる。提供されるキットのいずれか１つのいくつかの態様において、キットはさらに、再構成、混合、投与などのための説明書を含む。提供されるキットのいずれか１つのいくつかの態様において、説明書は、本明細書に記載の方法の説明を含む。説明書は、例えば印刷された挿入物またはラベルなどの、任意の適切な形式であり得る。本明細書で提供されるキットのいずれか１つのいくつかの態様において、キットはさらに、合成ナノキャリアをin vivoで対象に送達できる、１つ以上のシリンジまたは他の装置を含む。
例
例１－凍結乾燥合成ナノキャリア
凍結乾燥組成物の異なる成分が、凍結乾燥の促進、凝集の低減（例えば、再構成後）、および／または２～８℃での長期保管（例えば、凍結乾燥後）を可能にするのに役立つことが見出された。また、界面活性剤の使用が、ラパマイシンなどの免疫抑制剤の可溶化、および／または合成ナノキャリアの破壊につながる可能性があることも見出された。また、いくつかの態様において、中性ｐＨの維持を助ける緩衝成分の利点も見出されている。
一例として、トリス緩衝液は、凍結時にリン酸緩衝液で発生し得るｐＨの低下を回避するのに役立つことが見出された。トリス緩衝液を作るために、トロメタミン（トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン）およびトリス塩酸塩（トリスＨＣｌ）を混合し、好ましくはいくつかの態様において、中性付近のｐＨを維持した。トリス緩衝液はいくつかの態様において、１０ｍＭの濃度および／またはｐＨ７．３（２５℃で）であった。トリス緩衝液はいくつかの態様において、濃度１．３ｍＭのトロメタミンおよび濃度８．７ｍＭのトリスＨＣＬを含んでいた。
実験製剤も、凍結乾燥後および保管中のナノ粒子の凝集を防ぐそれらの能力に基づいて評価した。スクロース、トレハロース、マンニトール、およびスクロース／マンニトール混合物を含む様々な製剤を試験した。スクロースを含有するものなどの製剤は、一貫して適切な生成物を生成し、再構成が迅速で、再構成時に目に見える凝集物がなく、凍結乾燥後の粒子サイズの増加がほとんどまたはまったくなかった。スクロースを含む製剤も、これらの特性を１２ヶ月の安定性試験を通じて示し続けた。４～９．６ｗｔ％の範囲等の多くのスクロース濃度が、凝集に対して同様の保護を示すことが見出された（図１）。
これらの研究に基づいて、凍結乾燥のために選択された例示的な製剤は、本明細書で提供される合成ナノキャリアを、２ｍｇ／ｍＬのラパマイシン濃度、９．６ｗｔ％のスクロース濃度、および１０ｍＭのｐＨ７．３トリス緩衝液を含むものであることが見出された。バイアルのサイズは、凍結乾燥中の乾燥速度を助けるために２０ｍＬであった。
例２－過飽和量のラパマイシンを有する合成ナノキャリア
ポリマーＰＬＧＡ（３：１のラクチド：グリコリド、固有粘度０．３９ｄＬ／ｇ）およびＰＬＡ－ＰＥＧ（５ｋＤａのＰＥＧブロック、固有粘度０．３６ｄＬ／ｇ）、ならびに薬剤ラパマイシン（ＲＡＰＡ）を含有するナノキャリア組成物は、水中油型エマルジョン蒸発法を用いて合成した。有機相は、ポリマーおよびＲＡＰＡをジクロロメタンに溶解することにより形成した。エマルジョンは、有機相を、界面活性剤ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）を含有する水相中で均質化することにより形成した。次いで、エマルジョンを多量の水性緩衝液と組み合わせ、混合して溶媒を蒸発させた。異なる組成物中のＲＡＰＡ含有量は、ＲＡＰＡ含有量が増加するにつれて組成物が系のＲＡＰＡ飽和限界を超えるように変化させた。組成物の飽和限界でのＲＡＰＡ含有量は、水相および分散ナノキャリア相におけるＲＡＰＡの溶解度を用いて計算した。ＰＶＡを水相中の一次溶質として含有する組成物の場合、水相中のＲＡＰＡの溶解度はＰＶＡ濃度に比例し、ＲＡＰＡは溶解したＰＶＡに対して１：１２５の質量比で溶解することが見出された。記載のＰＬＧＡおよびＰＬＡ－ＰＥＧをナノキャリアポリマーとして含有する組成物について、分散ナノキャリア相中のＲＡＰＡ溶解度は７．２％ｗｔ／ｗｔであることが見出された。次の式を使用して、組成物の飽和限界でのＲＡＰＡ含有量を算出することができる：
ＲＡＰＡ含有量＝Ｖ（０．００８ｃＰＶＡ＋０．０７２ｃｐｏｌ）
ここで、ｃＰＶＡはＰＶＡの質量濃度、ｃｐｏｌはポリマーの複合質量濃度（combined mass concentration）、Ｖは蒸発終了時のナノキャリア懸濁液の体積である。
Figure 2023518192000002
 １、２、および３については、一貫して６０％のＲＡＰＡが回収されず、水相と有機相の間の準飽和平衡レジームが示される。より多量のＲＡＰＡを含有する残りのナノキャリアの場合、一貫して６．８ｍｇのＲＡＰＡは回収されない。この一貫した絶対質量損失は、系が過飽和状態にあることを示す（すなわち、１以上の相において過飽和状態である）。
例３－過飽和量のラパマイシンを有する合成ナノキャリア
ポリマーＰＬＡ（固有粘度０．４１ｄＬ／ｇ）およびＰＬＡ－ＰＥＧ（５ｋＤａのＰＥＧブロック、固有粘度０．５０ｄＬ／ｇ）、ならびに薬剤ＲＡＰＡを含有するナノキャリア組成物を、例２に記載の水中油型エマルジョン蒸発法を使用して合成した。異なる組成物中のＲＡＰＡ含有量は、ＲＡＰＡ含有量が増加するにつれて、組成物が系のＲＡＰＡ飽和限界を超えるように変化させた。組成物の飽和限界でのＲＡＰＡ含有量は、例２に記載の方法を用いて算出した。記載のＰＬＡおよびＰＬＡ－ＰＥＧをナノキャリアポリマーとして含有する組成物について、分散ナノキャリア相中のＲＡＰＡ溶解度は８．４％ｗ／ｗであることが見出された。次の式を使用して、組成物の飽和限界でのＲＡＰＡ含有量を算出することができる：
ＲＡＰＡ含有量＝Ｖ（０．００８ｃＰＶＡ＋０．０８４ｃｐｏｌ）
ここで、ｃＰＶＡはＰＶＡの質量濃度、ｃｐｏｌはポリマーの複合質量濃度、およびＶは蒸発終了時のナノキャリア懸濁液の体積である。すべてのナノキャリアロットを、形成の最後に０．２２μｍフィルターで濾過した。
Figure 2023518192000003
 増加量のＲＡＰＡをナノキャリア１２～１５に加えたにも関わらず、ナノキャリア中の最終ＲＡＰＡ含有量は増加せず、一方フィルターのスループットは低下した。これは、組成物においてＲＡＰＡが過飽和であり、過剰のＲＡＰＡが洗浄および／または濾過中に除去されたことを示す。
例４－より迅速な溶媒蒸発と低ＨＬＢ界面活性剤により、初期滅菌濾過可能な過飽和量のラパマイシンを有する合成ナノキャリアがもたらされる
材料および方法
固有粘度が０．４１ｄＬ／ｇのＰＬＡは、Evonik Industries AG（Rellinghauser Strase 1-11, Essen Germany）から製品コード100 DL 4Aを購入した。約５，０００Ｄａのメチルエーテル末端ＰＥＧブロックおよび０．５０ＤＬ／ｇの全体の固有粘度を有するＰＬＡ－ＰＥＧ－ＯＭｅブロックコポリマーは、Evonik Industries AG（Rellinghauser Strase 1-11, Essen Germany）から製品コード100 DL mPEG 5000 5CEを購入した。ラパマイシンは、Concord Biotech Limited, 1482-1486 Trasad Road, Dholka 382225, Ahmedabad Indiaから購入した。製品コードはSIROLIMUS。EMPROVE（登録商標）Pollyvinyl Alcohol 4-88（ＰＶＡ）、USP（８５～８９％加水分解、粘度３．４～４．６ｍＰａ・ｓ）は、EMD Chemicals Inc. (480 South Democrat Road Gibbstown, NJ 08027)から製品コード1.41350を購入した。Cellgro PBS 1X（ＰＢＳ）は、Corning Incorporated (One Riverfront Plaza Corning, NY 14831 USA)から部品番号21-040-CVを購入した。ダルベッコのリン酸緩衝生理食塩水1X（ＤＰＢＳ）は、Lonza（Muenchensteinerstrasse 38, CH-4002 Basel, Switzerland）から製品コード17-512Qを購入した。ソルビタンモノパルミタートは、Croda International（300-A Columbus Circle, Edison, NJ 08837）から製品コードSPAN 40を購入した。
試料１について、溶液は次のように調製した：
溶液１：ポリマーとラパマイシンの混合物を、ＰＬＡを１８．７５ｍｇ／ｍＬで、ＰＬＡ－ＰＥＧ－Ｏｍｅを６．２５ｍｇ／ｍＬで、およびラパマイシンを４．７ｍｇ／ｍＬでジクロロメタン中に溶解することにより、調製した。溶液２：ＰＶＡを、５０ｍｇ／ｍＬで、１００ｍＭのｐＨ８リン酸緩衝液中に調製した。
Ｏ／Ｗエマルジョンは、溶液１（１．０ｍＬ）と溶液２（３．０ｍＬ）を小さなガラス製圧力管で組み合わせることにより調製し、１０秒間ボルテックス混合した後、圧力管をBranson Digital Sonifier 250を使用して氷水浴に浸しながら、３０％の振幅で１分間超音波処理して乳化させた。次にエマルジョンを、ＤＰＢＳ（３０ｍＬ）を含有する５００ｍＬの開放ビーカーに加えた。第２のＯ／Ｗエマルジョンを、上記と同じ材料および方法を用いて調製し、次いで、第１のエマルジョンとＤＰＢＳを含有する同じ容器に加えた。これを次に室温で２時間撹拌して、ジクロロメタンを蒸発させ、ナノキャリアを形成させた。ナノキャリアの一部を、ナノキャリア懸濁液を遠心管に移し７５，６００×ｇ、４℃で５０分間遠心分離することにより洗浄し、上清を除去し、ペレットを０．２５％ｗ／ｖのＰＶＡを含有するＤＰＢＳに再懸濁した。洗浄手順を繰り返した後、ペレットを０．２５％ｗ／ｖのＰＶＡを含有するＤＰＢＳに再懸濁して、ポリマーベースで公称濃度１０ｍｇ／ｍＬのナノキャリア懸濁液を達成した。同一の製剤を別の５００ｍＬビーカーに調製し、同様に処理し、滅菌濾過の直前に最初の製剤と共にプールした。次にナノキャリア懸濁液を、直径３３ｍｍの０．２２μｍＰＥＳメンブレンシリンジフィルター（Millipore部品番号SLGP033RB）を使用して濾過した。濾過したナノキャリア懸濁液は、次に－２０℃で保管した。
試料２について、溶液を次のように調製した：
溶液１：ポリマーとラパマイシンの混合物を、ＰＬＡを７５ｍｇ／ｍＬで、ＰＬＡ－ＰＥＧ－Ｏｍｅを２５ｍｇ／ｍＬで、およびラパマイシンを１６ｍｇ／ｍＬでジクロロメタン中に溶解して調製した。溶液２：ソルビタンモノパルミタート混合物を、SPAN 40を２０ｍｇ／ｍＬでジクロロメタン中に溶解して調製した。溶液３：ポリビニルアルコールを、５０ｍｇ／ｍＬで１００ｍＭのｐＨ８リン酸緩衝液中に調製した。溶液４：ジクロロメタンを、０．２０μｍのＰＴＦＥメンブレンシリンジフィルター（VWR部品番号28145-491）を用いて濾過した。
Ｏ／Ｗエマルジョンは、溶液１（０．５ｍＬ）、溶液２（０．１２５ｍＬ）、および溶液４（０．３７５ｍＬ）、および溶液３（３．０ｍＬ）を小さなガラス製圧力管内で組み合わせて調製し、１０秒間ボルテックス混合した後、Branson Digital Sonifier 250を使用して圧力管を氷水浴に浸しながら、３０％の振幅で１分間超音波処理することにより乳化した。次にエマルジョンを、ＤＰＢＳ（３０ｍＬ）を含有する５０ｍＬビーカーに加えた。第２のＯ／Ｗエマルジョンを、上記と同じ材料および方法を用いて調製し、次いで第１のエマルジョンとＤＰＢＳを含有する同じビーカーに添加した。ナノキャリア懸濁液を次に、試料１と同じ方法で処理した。
試料３について、溶液は次のように調製した；
溶液１：ポリマーとラパマイシンの混合物は、ＰＬＡを３７．５ｍｇ／ｍＬで、ＰＬＡ－ＰＥＧ－Ｏｍｅを１２．５ｍｇ／ｍＬで、およびラパマイシンを８ｍｇ／ｍＬでジクロロメタン中に溶解して調製した。溶液２：ポリビニルアルコールは、７５ｍｇ／ｍＬで１００ｍＭのｐＨ８リン酸緩衝液中に調製した。
Ｏ／Ｗエマルジョンは、溶液１（１ｍＬ）と溶液２（３．０ｍＬ）を小さなガラス製圧力管で組み合わせて調製し、１０秒ボルテックス混合した後、Branson Digital Sonifier 250を使用して圧力管を氷水浴に浸しながら、３０％の振幅で１分間超音波処理することにより乳化した。Ｏ／Ｗエマルジョンは、試料１についての上記と同じ方法で形成した。超音波処理による乳化の後、エマルジョンをＤＰＢＳ（３０ｍＬ）を含有する５０ｍＬビーカーに加えた。第２のＯ／Ｗエマルジョンを、上記と同じ材料および方法を使用して調製し、次いで同じ溶媒蒸発容器に添加した。エマルジョンを２時間撹拌して、有機溶媒を蒸発させ、ナノキャリアを形成させた。次いでナノキャリアの一部を、ナノキャリア懸濁液を遠心管に移し７５，６００×ｇで５０分間遠心分離することにより洗浄し、上清を除去し、ペレットをＰＢＳに再懸濁した。洗浄手順を繰り返し、次いでペレットをＰＢＳに再懸濁して、ポリマーベースで公称濃度１０ｍｇ／ｍＬを有するナノキャリア懸濁液を達成した。次にナノキャリア懸濁液を、直径３３ｍｍの０．２２μｍＰＥＳメンブレンシリンジフィルター（Millipore部品番号SLGP033RB）を使用して濾過した。濾過したナノキャリア懸濁液は、次に－２０℃で保管した。
ナノキャリアのサイズは、動的光散乱法により決定した。ナノキャリア中のラパマイシンの量は、ＨＰＬＣ分析により決定した。懸濁液１ｍＬあたりの乾燥ナノキャリアの総質量は、重量法により決定した。
Figure 2023518192000004
Figure 2023518192000005
例５－過飽和の決定方法
材料および方法
固有粘度が０．４１ｄＬ／ｇのＰＬＡは、Evonik Industries AG (Rellinghauser Strase 1-11, Essen Germany)から製品コード100 DL 4Aを購入した。ラパマイシンは、Concord Biotech Limited, 1482-1486 Trasad Road, Dholka 382225, Ahmedabad Indiaから購入した。製品コードはSIROLIMUS。
溶液は次のように調製した：
溶液１：ポリマー溶液は、ＰＬＡを１００ｍｇ／ｍＬでジクロロメタンに溶解することにより調製した。溶液２：ラパマイシン溶液は、ラパマイシンを１００ｍｇ／ｍＬでジクロロメタンに溶解することにより調製した。
ガラス製の顕微鏡スライドを７０％イソプロパノールで洗浄し、化学ドラフトチャンバー内の清浄で平らな面上で乾燥させた。混合物１は、１００μＬの溶液１と１００μＬのジクロロメタンを、耐溶剤性のスクリューキャップ付きガラス製バイアル内で混合して調製し、ボルテックス混合により混合した。混合物２は、混合物１と同じ方法により、１００μＬの溶液１、３３．３μＬの溶液２、および６６．７μＬのジクロロメタンを用いて調製した。混合物３は、混合物１と同じ方法により、１００μＬの溶液１および６６．７μＬの溶液２、および３３．３μＬのジクロロメタンを用いて調製した。次に、５０μＬの各混合物を清浄なガラス製スライド上の別々の場所に塗布し、ドラフトチャンバー内で室温で一晩乾燥させた。各乾燥フィルムのデジタル画像を撮影し、画像解析ソフトウェアを使用して解析した。正規化された平均強度の増加は、フィルムが飽和点を超えると不透明になることを示し得る。
Figure 2023518192000006
例６－低ＨＬＢ界面活性剤ＳＭは、ＲＡＰＡ負荷および合成ナノキャリアの濾過性を向上する
ポリマーＰＬＡ（固有粘度０．４１ｄＬ／ｇ）およびＰＬＡ－ＰＥＧ（５ｋＤａのＰＥＧブロック、固有粘度０．５０ｄＬ／ｇ）、ならびに疎水性薬剤ラパマイシン（ＲＡＰＡ）を含有するナノキャリア組成物を、低ＨＬＢ界面活性剤ソルビタンモノパルミタート（ＳＭ）有りまたは無しで、水中油型エマルジョン蒸発法を使用して合成した。有機相は、ポリマーおよびＲＡＰＡをジクロロメタンに溶解することにより形成した。エマルジョンは、プローブチップソニケーターを使用し、界面活性剤ＰＶＡを含有する水相中の有機相を均質化することにより、形成した。次いでエマルジョンを多量の水性緩衝液と組み合わせ、これを混合して溶媒の溶解および蒸発を可能にした。得られたナノキャリアを洗浄し、０．２２μｍフィルターで濾過した。すべての組成物は、１００ｍｇのポリマーを含有していた。異なる組成物中のＲＡＰＡ含有量は変化させた。
Figure 2023518192000007
界面活性剤ＳＭを含有しない組成物（試料１、２、および３）では、ＲＡＰＡの添加量が増加するにつれて、ナノキャリア組成物にＲＡＰＡを完全に組み込む能力が制限されるという、いくつかの兆候が観察された。ＳＭの非存在下でより高いＲＡＰＡ製剤レベルでの、濾過前と濾過後のナノキャリアサイズの差の増加は、洗浄および／または濾過プロセス中に除去されるより大きな粒子（個々の粒子または凝集体）の存在を示していた。これは、目詰まり前のフィルターのスループットの減少によっても示された。最後に、ＳＭを含まないナノキャリア組成物へのＲＡＰＡの追加量を増やしても、ＲＡＰＡ負荷は増加せず（例えば、試料３と比較した試料１）、これは、追加のＲＡＰＡがナノキャリアの大部分から分離可能であり、洗浄および／または濾過工程中に除去されたことを示す。
対照的に、界面活性剤ＳＭを含有する組成物は、増大する量のＲＡＰＡを容易に組み込んだ。ナノキャリアのサイズは濾過の影響を受けず、組成物に加えるＲＡＰＡの量を増やすと、ナノキャリアのＲＡＰＡ負荷が増加した。最高の負荷レベル（試料６）ではフィルタースループットのいくらかの低下が見られたが、これは、ナノキャリアのサイズが本質的に大きいためである可能性がある。まとめると、ＳＭの組み込みは、合成ナノキャリア組成物のＲＡＰＡ負荷と濾過性を高めるのに役立った。
例７－ＳＭおよびコレステロールはＲＡＰＡ負荷と濾過性を高めた
ナノキャリア組成物を、実施例６に記載の材料および方法を使用して生成した。ポリマーおよびＲＡＰＡを含有するナノキャリアは、ＲＡＰＡ負荷レベルを変えて生成した。さらに、ＲＡＰＡを高度に負荷したナノキャリアも、賦形剤、界面活性剤ＳＭまたはコレステロールを、賦形剤：ＲＡＰＡの質量比３．２：１で使用して生成した。
Figure 2023518192000008
 賦形剤の非存在下で生成したナノキャリアの試料（試料７および８）は、明らかなナノキャリア飽和点を超えたＲＡＰＡ負荷の増加が、フィルタースループットの低下につながる傾向があることを実証した。ＳＭまたはコレステロールのいずれかを添加すると、安定性を維持しつつＲＡＰＡ負荷が増加した（試料９および１０）。
例８－低ＨＬＢ界面活性剤のＲＡＰＡ負荷および濾過性に対する効果
材料および方法
固有粘度が０．４１ｄＬ／ｇのＰＬＡは、Lakeshore Biomaterials（756 Tom Martin Drive, Birmingham, AL 35211）から製品コード100 DL 4Aを購入した。約５，０００Ｄａのメチルエーテル末端ＰＥＧブロックおよび０．５０ＤＬ／ｇの全体固有粘度を有するＰＬＡ－ＰＥＧ－ＯＭｅブロックコポリマーは、Lakeshore Biomaterials（756 Tom Martin Drive, Birmingham, AL 35211）から製品コード100 DL mPEG 5000 5CEを購入した。ラパマイシンは、Concord Biotech Limited（1482-1486 Trasad Road, Dholka 382225, Ahmedabad India）から製品コードSIROLIMUSを購入した。EMPROVE（登録商標）Pollyvinyl Alcohol 4-88, USP（８５～８９％加水分解、粘度３．４～４．６ｍＰａ・ｓ）は、EMD Chemicals Inc.（480 South Democrat Road Gibbstown, NJ 08027）から製品コード1.41350を購入した。ダルベッコのリン酸緩衝生理食塩水1X（ＤＰＢＳ）は、Lonza（Muenchensteinerstrasse 38, CH-4002 Basel, Switzerland）から製品コード17-512Qを購入した。ソルビタンモノパルミタートは、Croda International（300-A Columbus Circle, Edison, NJ 08837）から製品コードSPAN 40を購入した。ポリソルベート８０は、NOF America Corporation（One North Broadway, Suite 912 White Plains, NY 10601）から製品コードPolysorbate80（HX2）を購入した。ソルビタンモノラウラート（SPAN 20）は、Alfa Aesar（26 Parkridge Rd Ward Hill, MA 01835）から製品コードL12099を購入した。ソルビタンステアラート（SPAN 60）は、Sigma-Aldrich（3050 Spruce St. St. Louis, MO 63103）から製品コードS7010を購入した。ソルビタンモノオレアート（SPAN 80）は、Tokyo Chemial Industry Co., Ltd.（9211 North Harborgate Street Portland, OR 97203）から製品コードS0060を購入した。オクチルβ－Ｄ－グルコピラノシドは、Sigma-Aldrich（3050 Spruce St. St. Louis, MO 63103）から製品コードO8001を購入した。オレイルアルコールは、Alfa Aesar（26 Parkridge Rd Ward Hill, MA 01835）から製品コードA18018を購入した。イソプロピルパルミタートは、Sigma-Aldrich（3050 Spruce St. Louis, MO 63103）から製品コードW515604を購入した。ポリエチレングリコールヘキサデシルエーテル（BRIJ 52）はSigma-Aldrich（3050 Spruce St. St. Louis, MO 63103）から製品コード388831を購入した。ポリエチレングリコールオレイルエーテル（BRIJ 93）は、Sigma-Aldrich（3050 Spruce St. St. Louis, MO 63103）から製品コード388866を購入した。ポリ（エチレングリコール）－ブロック－ポリ（プロピレングリコール）－ブロック－ポリ（エチレングリコール）（Pluronic L-31）は、Sigma-Aldrich（3050 Spruce St. St. Louis, MO 63103）から製品コード435406を購入した。ポリ（エチレングリコール）－ブロック－ポリ（プロピレングリコール）－ブロック－ポリ（エチレングリコール）（Pluronic P-123）は、Sigma-Aldrich（3050 Spruce St. St. Louis, MO 63103）から製品コード435465を購入した。パルミチン酸は、Sigma-Aldrich（3050 Spruce St. St. Louis, MO 63103）から製品コードP0500を購入した。ＤＬ－α－パルミチンは、Sigma-Aldrich(3050 Spruce St. St. Louis, MO 63103）から製品コードM1640を購入した。グリセリルトリパルミタートは、Sigma-Aldrich（３050 Spruce St. St. Louis, MO 63103）から製品コードT5888を購入した。
試料１１について、溶液は次のように調製した：
溶液１：ポリマーとラパマイシンの混合物は、ＰＬＡを７５ｍｇ／ｍＬで、ＰＬＡ－ＰＥＧ－Ｏｍｅを２５ｍｇ／ｍＬで、ラパマイシンを１６ｍｇ／ｍＬでジクロロメタン中に溶解して調製した。溶液２：ポリソルベート８０混合物は、ポリソルベート８０を８０ｍｇ／ｍＬでジクロロメタン中に溶解して調製した。溶液３：ポリビニルアルコールは、５０ｍｇ／ｍＬで、１００ｍＭのｐＨ８リン酸緩衝液中に調製した。
Ｏ／Ｗエマルジョンは、溶液１（０．５ｍＬ）、溶液２（０．１ｍＬ）、ジクロロメタン（０．４ｍＬ）、および溶液３（３．０ｍＬ）を小さなガラス製圧力管内で組み合わせ、１０秒間ボルテックス混合して調製した後、Branson Digital Sonifier 250を使用して圧力管を氷水浴に浸しながら、３０％の振幅で１分間超音波処理した。次にエマルジョンを、ＤＰＢＳ（３０ｍＬ）を含有する５０ｍＬビーカーに加えた。第２のＯ／Ｗエマルジョンを、上記と同じ材料および方法を用いて調製し、次いで、第１のエマルジョンとＤＰＢＳを含有する同じ容器に加えた。次いでこれを室温で２時間撹拌して、ジクロロメタンを蒸発させ、ナノキャリアを形成させた。ナノキャリアの一部を、ナノキャリア懸濁液を遠心管に移し７５，６００×ｇ、４℃で５０分間遠心分離することにより洗浄し、上清を除去し、ペレットを０．２５％ｗ／ｖのＰＶＡを含有するＤＰＢＳに再懸濁した。洗浄手順を繰り返した後、ペレットを０．２５％ｗ／ｖのＰＶＡを含有するＤＰＢＳに再懸濁して、ポリマーベースで公称濃度１０ｍｇ／ｍＬのナノキャリア懸濁液を達成した。次にナノキャリア懸濁液を、０．２２μｍのＰＥＳメンブレンシリンジフィルター（Millipore部品番号SLGP033RB）を使用して濾過した。濾過したナノキャリア懸濁液は、次に－２０℃で保管した。
試料１２～２５については、溶液を次のように調製した：
溶液１：ポリマーとラパマイシンの混合物は、ＰＬＡを７５ｍｇ／ｍＬで、ＰＬＡ－ＰＥＧ－Ｏｍｅを２５ｍｇ／ｍＬで、ラパマイシンを１６ｍｇ／ｍＬでジクロロメタン中に溶解して調製した。溶液２：ＨＬＢ混合物は、ＨＬＢ界面活性剤を５．０ｍｇ／ｍＬでジクロロメタン中に溶解することにより調製した。ＨＬＢ界面活性剤には、SPAN 20、SPAN 40、SPAN 60、SPAN 80、オクチルβ－Ｄ－グルコピラノシド、オレイル酸、イソプロピルパルミタート、BRIJ 52、BRIJ 93、Pluronic L-31、Pluronic P-123、パルミチン酸、ＤＬ－α－パルミチン、およびグリセリルトリパルミタートが含まれる。溶液３：ポリビニルアルコールは、６２．５ｍｇ／ｍＬで、１００ｍＭのｐＨ８リン酸緩衝液中に調製した。
Ｏ／Ｗエマルジョンは、溶液１（０．５ｍＬ）、溶液２（０．５ｍＬ）、および溶液３（３．０ｍＬ）を小さなガラス製圧力管内で組み合わせて調製し、１０秒間ボルテックス混合した後、Branson Digital Sonifier 250を使用して圧力管を氷水浴に浸しながら、３０％の増幅で１分間超音波処理した。次に、エマルジョンをＤＰＢＳ（３０ｍＬ）を含有する５０ｍＬビーカーに加えた。第２のＯ／Ｗエマルジョンを、上記と同じ材料および方法を用いて調製し、次いで、第１のエマルジョンとＤＰＢＳを含有する同じビーカーに添加した。これを次に室温で２時間撹拌して、ジクロロメタンを蒸発させ、ナノキャリアを形成させた。ナノキャリアの一部を、ナノキャリア懸濁液を遠心管に移し７５，６００×ｇ、４℃で５０分間遠心分離することにより洗浄し、上清を除去し、ペレットを０．２５％ｗ／ｖのＰＶＡを含有するＤＰＢＳに再懸濁した。洗浄手順を繰り返した後、ペレットを０．２５％ｗ／ｖのＰＶＡを含有するＤＰＢＳに再懸濁して、ポリマーベースで公称濃度１０ｍｇ／ｍＬのナノキャリア懸濁液を達成した。次にナノキャリア懸濁液を、０．２２μｍＰＥＳメンブレンシリンジフィルター（Millipore部品番号SLGP033RB）を使用して濾過した。濾過したナノキャリア懸濁液は、次に－２０℃で保管した。
Figure 2023518192000009
ほとんどの低ＨＬＢ界面活性剤のＨＬＢは、公開されている情報を使用して決定した。ＤＬ－α－パルミチンについて、ＨＬＢは次の式を用いて算出した：Ｍｗ＝３３０．５ｇ／ｍｏｌ、親水性部分＝１１９．０ｇ／ｍｏｌ；ＨＬＢ＝１１９．０／３３０．５＊１００／５＝７．２。グリセリルパルミタートについては、ＨＬＢは次の式を用いて算出した：Ｍｗ＝８０７．３ｇ／ｍｏｌ、親水性部分＝１７３．０ｇ／ｍｏｌ；ＨＬＢ＝１７３．０／８０７．３＊１００／５＝４．３。イソプロピルパルミタートについて、ＨＬＢは次の式を用いて算出した：Ｍｗ＝２９８．５ｇ／ｍｏｌ、親水性部分＝４４．０ｇ／ｍｏｌ；ＨＬＢ＝４４．０／２９８．５＊１００／５＝２．９。オレイルアルコールについては、ＨＬＢは次の式を用いて算出した：Ｍｗ＝２６８．５ｇ／ｍｏｌ、親水性部分＝１７．０ｇ／ｍｏｌ：ＨＬＢ＝１７．０／２６８．５＊１００／５＝１．３。さらに、低ＨＬＢ界面活性剤の負荷は、抽出とそれに続くＨＰＬＣ法による定量により測定した。
例９－低ＨＬＢ界面活性剤の合成ナノキャリアの濾過性に対する効果
材料および方法
約５，０００Ｄａのメチルエーテル末端ＰＥＧブロックおよび０．５０ＤＬ／ｇの全体固有粘度を有するＰＬＡ－ＰＥＧ－ＯＭｅブロックコポリマーは、Evonik Industries (Rellinghauser Strase 1-11 45128 Essen, Germany)から製品コード100 DL mPEG 5000 5CEを購入した。固有粘度が０．４１ｄＬ／ｇのＰＬＡは、Evonik Industries（Rellinghauser Strase 1-11 45128 Essen Germany）から製品コード100 DL 4Aを購入した。ラパマイシンは、Concord Biotech Limited, 1482-1486 Trasad Road, Dholka 382225, Ahmedabad Indiaから購入した。製品コードはSIROLIMUS。ソルビタンモノパルミタートは、Croda（315 Cherry Lane New Castle Delaware 19720）から製品コードSPAN 40を購入した。ジクロロメタンは、Spectrum（14422 S San Pedro Gardena CA, 90248-2027）から購入した。部品番号はM1266。EMPROVE（登録商標）Pollyvinyl Alcohol 4-88, USP（８５～８９％加水分解、粘度３．４～４．６ｍＰａ・ｓ）は、EMD Chemicals Inc.（480 South Democrat Road Gibbstown, NJ 08027）から製品コード1.41350を購入した。ダルベッコのリン酸緩衝生理食塩水、1X, 0.0095 M (PO4)、カルシウムおよびマグネシウム非含有は、BioWhittaker（8316 West Route 24 Mapleton, IL 61547）から部品番号#12001、製品コードLonza DPBSを購入した。乳化は、Branson Digital Sonifier 250および１／８インチのテーパーチップチタンプローブを用いて実施した。
溶液は次のように調製した：
溶液１：ポリマー混合物は、ＰＬＡ－ＰＥＧ－ＯＭｅ（100 DL mPEG 5000 5CE）を５０ｍｇ／１ｍＬで、およびＰＬＡ（100 DL 4A）を１５０ｍｇ／１ｍＬでジクロロメタン中に溶解することにより調製した。溶液２：ラパマイシンは、１６０ｍｇ／１ｍＬででジクロロメタンに溶解した。溶液５：ソルビタンモノパルミタート（SPAN 40）は、５０ｍｇ／１ｍＬでジクロロメタンに溶解した。溶液６：ジクロロメタンは、０．２μｍＰＴＦＥメンブレンシリンジフィルター（VWR部品番号28145-491）を使用して滅菌濾過した。溶液７：ポリビニルアルコール溶液は、ポリビニルアルコール（EMPROVE（登録商標）Pollyvinyl Alcohol 4-88）を７５ｍｇ／１ｍＬで、１００ｍＭのｐＨ８リン酸緩衝液に溶解することにより調製した。溶液８：ポリビニルアルコールとダルベッコのリン酸緩衝生理食塩水、1X、0.0095 M（PO4）の混合物は、ポリビニルアルコール（EMPROVE（登録商標）Pollyvinyl Alcohol 4-88）を２．５ｍｇ／１ｍＬで、ダルベッコのリン酸緩衝生理食塩水、1X、0.0095 M（PO4）（Lonza DPBS）に溶解することにより調製した。
試料２６については、Ｏ／Ｗエマルジョンを、溶液１（０．５ｍＬ）、溶液２（０．１ｍＬ）、溶液５（０．１ｍＬ）、および溶液６（０．３０ｍＬ）を小さなガラス製圧力管内で組み合わせることにより、調製した。溶液を、ピペッティングを繰り返して混合した。次に、溶液７（３．０ｍＬ）を添加し、製剤を１０秒間ボルテックス混合した。次いで製剤を、圧力管を氷浴に浸しながら、振幅３０％で１分間超音波処理した。次いでエマルジョンを、Lonza DPBS（３０ｍＬ）を含有する５０ｍＬの開放ビーカーに加えた。次いで、これを室温で２時間撹拌して、ジクロロメタンを蒸発させ、ナノキャリアを形成させた。ナノキャリアの一部を、ナノキャリア懸濁液を遠心管に移し７５，６００ｘｇ、４℃で５０分間遠心分離することにより洗浄し、上清を除去し、ペレットを溶液８に再懸濁した。洗浄手順を繰り返し、次いで、ペレットを溶液８に再懸濁して、ポリマーベースで１０ｍｇ／ｍＬの公称濃度を有するナノキャリア懸濁液を達成した。ナノキャリア製剤は、０．２２μｍＰＥＳメンブレンシリンジフィルター（Millex部品番号SLGP033RS）を使用して濾過した。ナノキャリア溶液フィルタースループットの質量を測定した。次いで、濾過したナノキャリア溶液を－２０℃で保管した。
試料２７については、Ｏ／Ｗエマルジョンを、溶液１（０．５ｍＬ）、溶液２（０．１ｍＬ）、および溶液６（０．４０ｍＬ）を小さなガラス製圧力管内で組み合わせることにより調製した。溶液を、ピペッティングを繰り返して混合した。次に溶液７（３．０ｍＬ）を添加し、製剤を１０秒間ボルテックス混合した。次いで製剤を、圧力管を氷浴に浸しながら、振幅３０％で１分間超音波処理した。次にエマルジョンを、Lonza DPBS（３０ｍＬ）を含有する５０ｍＬの開放ビーカーに加えた。次いで、これを室温で２時間撹拌して、ジクロロメタンを蒸発させ、ナノキャリアを形成させた。ナノキャリアの一部を、ナノキャリア懸濁液を遠心管に移し７５，６００ｘｇ、４℃で５０分間遠心分離することにより洗浄し、上清を除去し、ペレットを溶液８に再懸濁した。洗浄手順を繰り返し、次いでペレットを溶液８に再懸濁して、ポリマーベースで１０ｍｇ／ｍＬの公称濃度を有するナノキャリア懸濁液を達成した。ナノキャリア製剤は、０．２２μｍＰＥＳメンブレンシリンジフィルター（Millex部品番号SLGP033RS）を使用して濾過した。ナノキャリア溶液フィルタースループットの質量を測定した。次いで、濾過したナノキャリア溶液を－２０℃で保管した。
ナノキャリアのサイズを、動的光散乱により決定した。ナノキャリア中のラパマイシンの量は、ＨＰＬＣ分析により決定した。懸濁液１ｍＬあたりの乾燥ナノキャリアの総質量は、重量法により決定した。濾過性は、第１フィルターを通過した濾液の量で評価した。
データは、ラパマイシンの場合、合成ナノキャリアへのSPAN 40の組み込みが、合成ナノキャリア組成物の濾過性の増加をもたらしたことを示す。
Figure 2023518192000010
例１０－SPAN 40はポリエステルポリマーを含む合成ナノキャリアの濾過性を大幅に高める
材料および方法
固有粘度が０．４１ｄＬ／ｇのＰＬＡ（100 DL 4A）は、Evonik Industries AG（Rellinghauser Strase 1-11, Essen Germany）から製品コード100 DL 4Aを購入した。約５，０００Ｄａのメチルエーテル末端ＰＥＧブロックおよび０．５０ＤＬ／ｇの全体固有粘度を有するＰＬＡ－ＰＥＧ－ＯＭｅブロックコポリマーは、Evonik Industries AG（Rellinghauser Strase 1-11, Essen Germany）から製品コード100 DL mPEG 5000 5CEを購入した。ラパマイシンは、Concord Biotech Limited（1482-1486 Trasad Road, Dholka 382225, Ahmedabad India）から製品コードSIROLIMUSを購入した。EMPROVE（登録商標）Pollyvinyl Alcohol 4-88 (ＰＶＡ), USP（８５～８９％加水分解、粘度３．４～４．６ｍＰａ・ｓ）は、EMD Chemicals Inc.（480 South Democrat Road Gibbstown, NJ 08027）から製品コード1.41350を購入した。ダルベッコのリン酸緩衝生理食塩水1X（ＤＰＢＳ）は、Lonza（Muenchensteinerstrasse 38, CH-4002 Basel, Switzerland）から製品コード17-512Qを購入した。ソルビタンモノパルミタート（SPAN 40）は、Croda International（300-A Columbus Circle, Edison, NJ 08837）から製品コードSpan 40を購入した。約５４重量％のラクチドおよび４６重量％のグリコリド、および固有粘度０．２４ｄＬ／ｇを有するＰＬＧＡ（5050 DLG 2.5A）は、Evonik Industries AG（Rellinghauser Strase 1-11, Essen Germany）から製品コード5050 DLG 2.5Aを購入した。約７３重量％のラクチドおよび２７重量％のグリコリド、および０．３９ｄＬ／ｇの固有粘度を有するＰＬＧＡ（7525 DLG 4A）は、Evonik Industries AG（Rellinghauser Strase 1-11, Essen Germany）から製品コード7525 DLG 4Aを購入した。平均Ｍｗが１４，０００Ｄａ、Ｍｎが１０，０００Ｄａのポリカプロラクトン（ＰＣＬ）は、Sigma-Aldrich（3050 Spruce St. St. Louis, MO 63103）から製品コード440752を購入した。
試料１、３、５および７については、次のように溶液を調製した：
溶液１：ＰＬＡ－ＰＥＧ－Ｏｍｅを５０ｍｇ／ｍＬ、Span 40を１０ｍｇ／ｍＬ、およびラパマイシンを３２ｍｇ／ｍＬでジクロロメタンに溶解した。溶液２：100 DL 4Aを１５０ｍｇ／ｍＬでジクロロメタンに溶解した。溶液３：5050 DLG 2.5Aを１５０ｍｇ／ｍＬでジクロロメタンに溶解した。溶液４：7525 DLG 4Aを１５０ｍｇ／ｍＬでジクロロメタンに溶解した。溶液５：ＰＣＬを１５０ｍｇ／ｍＬでジクロロメタンに溶解した。溶液６：ＰＶＡを７５ｍｇ／ｍＬで、１００ｍＭのｐＨ８リン酸緩衝液中に調製した。
Ｏ／Ｗエマルジョンを、溶液１（０．５ｍＬ）を肉厚ガラス製圧力管に移すことにより調製した。これに、ロット１では溶液２（０．５ｍＬ）を、ロット３では溶液３（０．５ｍＬ）を、ロット５では溶液４（０．５ｍＬ）を、ロット７では溶液５（０．５ｍＬ）を加えた。次いで２つの溶液を、ピペッティングを繰り返すことにより混合した。次に溶液６（３．０ｍＬ）を加え、管を１０秒間ボルテックス混合した後、Branson Digital Sonifier 250を使用して圧力管を氷水浴に浸しながら、振幅３０％で１分間超音波処理して乳化した。次いでエマルジョンをＤＰＢＳ（３０ｍＬ）を含有する５０ｍＬビーカーに添加した。次いで、これを室温で２時間撹拌して、ジクロロメタンを蒸発させ、ナノキャリアを形成させた。ナノキャリアの一部を、ナノキャリア懸濁液を遠心管に移し７５，６００×ｇで５０分間遠心分離することにより洗浄し、上清を除去し、ペレットをＤＰＢＳに再懸濁した。洗浄手順を繰り返し、次いでペレットをＤＰＢＳに再懸濁して、ポリマーベースで１０ｍｇ／ｍＬの公称濃度を有するナノキャリア懸濁液を達成した。次に、ナノキャリア懸濁液の濾過を、０．２２μｍＰＥＳメンブレンシリンジフィルター（Millipore部品番号SLGP033RB）を使用し、および必要に応じて０．４５μｍのＰＥＳメンブレンシリンジフィルター（PALL部品番号4614）、および／または１．２μｍのＰＥＳメンブレンシリンジフィルター（PALL部品番号4656）使用して実施した。次いで、濾過されたナノキャリア懸濁液を－２０℃で保管した。
ナノキャリアのサイズは、動的光散乱により決定した。ナノキャリア中のラパマイシンの量は、ＨＰＬＣ分析により決定した。濾過性は、最初の滅菌０．２２μｍフィルターのフロースルーの重量を収率と比較して、フィルターをブロックする前に通過したナノキャリアの実際の質量、または最初で唯一のフィルターを通過した合計量を決定することにより、決定した。懸濁液１ｍＬあたりの乾燥ナノキャリアの総質量は、重量法により決定した。
試料２、４、６、および８について、溶液は次のように調製した：
溶液１：ポリマーとラパマイシンの混合物は、ＰＬＡ－ＰＥＧ－Ｏｍｅを５０ｍｇ／ｍＬで、ラパマイシンを３２ｍｇ／ｍＬでジクロロメタンに溶解することにより調製した。溶液２：100 DL 4Aを１５０ｍｇ／ｍＬでジクロロメタンに溶解した。溶液３：5050 DLG 2.5Aを１５０ｍｇ／ｍＬでジクロロメタンに溶解した。溶液４：7525 DLG 4Aを１５０ｍｇ／ｍＬでジクロロメタンに溶解した。溶液５：ＰＣＬを１５０ｍｇ／ｍＬでジクロロメタンに溶解した。溶液６：ポリビニルアルコールを７５ｍｇ／ｍＬで、１００ｍＭのｐＨ８リン酸緩衝液中に調製した。
Ｏ／Ｗエマルジョンは、溶液１（０．５ｍＬ）を肉厚ガラス製圧力管に移すことにより調製した。これに、ロット２では溶液２（０．５ｍＬ）を、ロット４では溶液３（０．５ｍＬ）を、ロット６では溶液４（０．５ｍＬ）を、ロット８では溶液５（０．５ｍＬ）を加えた。次いで２つの溶液を、ピペッティングを繰り返すことにより混合した。ＰＶＡ溶液の添加、洗浄、濾過、および保管は、上記の通りである。
ナノキャリアのサイズは、上記と同じように評価した。
結果は、ポリエステルポリマーを含む合成ナノキャリアの濾過性が、合成ナノキャリアにSPAN 40を含めることにより、有意に増加することを示す。
Figure 2023518192000011
例１１－SPAN 40はラパマイシンの濾過性を高める
材料および方法
固有粘度が０．４１ｄＬ／ｇのＰＬＡは、Evonik Industries AG（Rellinghauser Strase 1-11, Essen Germany）から製品コード100 DL 4Aを購入した。約５，０００Ｄａのメチルエーテル末端ＰＥＧブロックおよび０．５０ＤＬ／ｇの全体固有粘度を有するＰＬＡ－ＰＥＧ－ＯＭｅブロックコポリマーは、Evonik Industries AG（Rellinghauser Strase 1-11, Essen Germany）から製品コード100 DL mPEG 5000 5CEを購入した。ラパマイシンは、Concord Biotech Limited（1482-1486 Trasad Road, Dholka 382225, Ahmedabad India）から製品コードSIROLIMUSを購入した。EMPROVE（登録商標）Pollyvinyl Alcohol 4-88, USP（８５～８９％加水分解、粘度３．４～４．６ｍＰａ・ｓ）は、EMD Chemicals Inc.（480 South Democrat Road Gibbstown, NJ 08027）から製品コード1.41350を購入した。ダルベッコのリン酸緩衝生理食塩水1X（ＤＰＢＳ）は、Lonza（Muenchensteinerstrasse 38, CH-4002 Basel, Switzerland）から製品コード17-512Qを購入した。ソルビタンモノパルミタートは、Croda International（300-A Columbus Circle, Edison, NJ 08837）から製品コードSPAN 40を購入した。
溶液は次のように調製した。溶液１：ポリマーとラパマイシンの混合物は、ＰＬＡを１５０ｍｇ／ｍＬで、ＰＬＡ－ＰＥＧ－Ｏｍｅを５０ｍｇ／ｍＬで溶解することにより調製した。溶液２：ラパマイシン溶液は、１００ｍｇ／ｍＬでジクロロメタン中に調製した。溶液６：ソルビタンモノパルミタート溶液は、SPAN 40を５０ｍｇ／ｍＬでジクロロメタン中に溶解することにより調製した。溶液７：ポリビニルアルコールは、７５ｍｇ／ｍＬで、１００ｍＭのｐＨ８リン酸緩衝液中に調製した。
Ｏ／Ｗエマルジョンは、溶液１（０．５ｍＬ）を肉厚圧力管に加えることにより調製した。ロット１では、これに溶液６（０．１ｍＬ）およびジクロロメタン（０．２８ｍＬ）を組み合わせた。次いで、ロット１を溶液２（０．１２ｍＬ）と組み合わせた。同様にロット２をジクロロメタン（０．３８ｍＬ）と組み合わせ、次にロット２を溶液２（０．１２ｍＬ）と組み合わせた。したがって、各ロットの有機相の総量は１ｍＬであった。合わせた有機相溶液を、ピペッティングを繰り返すことにより混合した。次に、溶液７（３．０ｍＬ）を加え、圧力管を１０秒間ボルテックス混合し、Branson Digital Sonifier 250を使用して圧力管を氷水浴に浸しながら、３０％の振幅で１分間超音波処理した。次いでエマルジョンを、ＤＰＢＳ（３０ｍＬ）を含有する５０ｍＬビーカーに添加した。次いで、これを室温で２時間攪拌して、ジクロロメタンを急速に蒸発させてナノキャリアを形成させた。ナノキャリアの一部を、ナノキャリア懸濁液を遠心管に移し７５，６００×ｇ、４℃で５０分間遠心分離することにより洗浄し、上清を除去し、ペレットを０．２５％ｗ／ｖのＰＶＡを含有するＤＰＢＳに再懸濁した。洗浄手順を繰り返した後、ペレットを０．２５％ｗ／ｖのＰＶＡを含有するＤＰＢＳに再懸濁して、ポリマーベースで公称濃度１０ｍｇ／ｍＬのナノキャリア懸濁液を達成した。次にナノキャリア懸濁液を、０．２２μｍＰＥＳメンブレンシリンジフィルター（Millipore部品番号SLGP033RB）を使用して濾過した。次いで、濾過したナノキャリア懸濁液を－２０℃で保管した。
この結果は、合成ナノキャリアにSPAN 40を組み込むと、ラパマイシンの濾過性が向上したことを示す。
Figure 2023518192000012
例１２－ラパマイシン負荷および合成ナノキャリアの濾過性に対する成分の量の効果を示す
材料および方法
約５，０００Ｄａのメチルエーテル末端ＰＥＧブロックおよび０．５０ＤＬ／ｇの全体固有粘度を有するＰＬＡ－ＰＥＧ－ＯＭｅブロックコポリマーは、Evonik Industries（Rellinghauser Strase 1-11 45128 Essen, Germany）から製品コード100 DL mPEG 5000 5CEを購入した。固有粘度が０．４１ｄＬ／ｇのＰＬＡは、Evonik Industries（Rellinghauser Strase 1-11 45128 Essen Germany）から製品コード100 DL 4Aを購入した。ラパマイシンは、Concord Biotech Limited, 1482-1486 Trasad Road, Dholka 382225, Ahmedabad Indiaから購入した。製品コードはSIROLIMUS。ソルビタンモノパルミタートは、Croda（315 Cherry Lane New Castle Delaware 19720）から製品コードSPAN 40を購入した。ジクロロメタンは、Spectrum（14422 S San Pedro Gardena CA, 90248-2027）から購入した。部品番号はM1266。EMPROVE（登録商標）Pollyvinyl Alcohol 4-88, (ＰＶＡ), USP（８５～８９％加水分解、粘度３．４～４．６ｍＰａ・ｓ）は、EMD Chemicals Inc.(480 South Democrat Road Gibbstown, NJ 08027）から製品コード1.41350を購入した。カルシウムとマグネシウムを含まないダルベッコのリン酸緩衝生理食塩水（ＤＰＢＳ）1X、0.0095 M（PO4）は、BioWhittaker（8316 West Route 24 Mapleton, IL 61547）から部品番号#12001、製品コードLonza DPBSを購入した。乳化は、Branson Digital Sonifier 250および１／８インチのテーパーチップチタンプローブを使用して実施した。
溶液は次のように調製した：
ポリマー溶液：ポリマー混合物は、ＰＬＡ－ＰＥＧ－ＯＭｅ（100DL mPEG 5000 5CE）およびＰＬＡ（100DL 4A）を、ＰＬＡ－ＰＥＧ対ＰＬＡの比率１：３で、ジクロロメタン中に示されたｍｇ／ｍＬで溶解することにより調製した。ラパマイシン溶液：ラパマイシンは、示されたｍｇ／ｍＬでジクロロメタンに溶解した。SPAN 40溶液：ソルビタンモノパルミタート（SPAN 40）を、示されたｍｇ／ｍＬでジクロロメタンに溶解した。ＣＨ２Ｃｌ２溶液：ジクロロメタン（ＣＨ２Ｃｌ２）は、０．２μｍＰＴＦＥメンブレンシリンジフィルター（VWR部品番号28145-491）を使用して滅菌濾過した。ＰＶＡ溶液：ポリビニルアルコール溶液は、ポリビニルアルコール（EMPROVE（登録商標）Pollyvinyl Alcohol 4-88）を、示されたｍｇ／ｍＬで１００ｍＭのｐＨ８リン酸塩緩衝液中に溶解することにより調製した。ＤＰＢＳ ＰＶＡ溶液：ポリビニルアルコールとダルベッコのリン酸緩衝生理食塩水、1X、0.0095 M（PO4）の混合物は、ポリビニルアルコール（EMPROVE（登録商標）Pollyvinyl Alcohol 4-88）を、２．５ｍｇ／ｍＬでダルベッコのリン酸緩衝生理食塩水1X、0.0095 M（PO4）（Lonza DPBS）に溶解することにより調製した。
Ｏ／Ｗエマルジョンを、ポリマー溶液、ラパマイシン溶液、SPAN 40溶液および／またはＣＨ２Ｃｌ２溶液（総量１～２ｍＬ）を肉厚ガラス製圧力管内で組み合わせることにより調製した。溶液は、ピペッティングを繰り返して混合した。次に、ＰＶＡ溶液（３～６ｍＬ）を添加した（１ｍＬの有機相と３ｍＬの水性ＰＶＡ溶液との単一エマルジョンとして、または次々に調製された２つの単一エマルジョンとしてのいずれか）。調合物を１０秒間ボルテックス混合し、次いで圧力管を氷浴に浸しながら、３０％の振幅で１分間超音波処理した。次いでエマルジョンを、Lonza DPBS（３０ｍＬ）を含有する５０ｍＬの開放ビーカーに加えた。次いで、これを室温で２時間撹拌して、ジクロロメタンを蒸発させ、ナノキャリアを形成させた。ナノキャリアの一部を、ナノキャリア懸濁液を遠心管に移し７５，６００×ｇ、４℃で５０分間遠心分離することにより洗浄し、上清を除去し、ペレットをＤＰＢＳ ＰＶＡ溶液に再懸濁した。洗浄手順を繰り返し、次いでペレットをＤＰＢＳ ＰＶＡ溶液に再懸濁して、ポリマーベースで１０ｍｇ／ｍＬの公称濃度を有するナノキャリア懸濁液を達成した。ナノキャリア製剤は、０．２２μｍＰＥＳメンブレンシリンジフィルター（Millex部品番号SLGP033RS）を使用して濾過した。ナノキャリア溶液フィルタースループットの質量を測定した。次いで、濾過したナノキャリア溶液を－２０℃で保管した。
濾過性は、Milliporeの部品番号SLGP033RBの３３ｍｍＰＥＳメンブレン０．２２μｍシリンジフィルター１つを通過する測定ナノキャリアのｇ／フィルターメンブレン表面積ｍ２、として与えられる。
結果は、in vivoで有効であると予想されるラパマイシン量を有する初期滅菌濾過可能な合成ナノキャリアをもたらすことができる、多数の合成ナノキャリア中の様々な成分の量を示す。
Figure 2023518192000013

Claims (85)

  1. 以下：疎水性担体材料および免疫抑制剤
    を含む合成ナノキャリアを含む、組成物であって；
    ここで、組成物は、凍結乾燥可能であり、凍結乾燥粉末形態などの凍結乾燥形態であるか、またはその再構成バージョンである、前記組成物。
  2. 合成ナノキャリアが、本明細書に記載の合成ナノキャリアのいずれか１つである、請求項１に記載の組成物。
  3. 組成物が、再構成時に、肉眼で見えるような目に見える凝集体を有さず；再構成時に、少なくとも１２ヶ月間は１０％以内などの安定した平均粒子径を有し；凍結乾燥後、少なくとも１２～３６ヶ月間は２～８℃で保管可能であり；凍結乾燥後、少なくとも１２ヶ月間は２０～３０℃で保管可能であり；および／または、中性または中性に近いｐＨ（例えば、２５℃でｐＨ７．３）を溶液中で有する、請求項１または２に記載の組成物。
  4. 組成物が、リン酸緩衝液またはリン酸界面活性剤を含まない、請求項１～３のいずれか一項に記載の組成物。
  5. 組成物が、非リン酸緩衝液などの緩衝液を含む、請求項１～４のいずれか一項に記載の組成物。
  6. 組成物が、凍結乾燥保護剤を含む、請求項１～５のいずれか一項に記載の組成物。
  7. 組成物が、非リン酸緩衝液などの緩衝液、および凍結乾燥保護剤を含む、請求項１～６のいずれか一項に記載の組成物。
  8. 緩衝液が、トリス緩衝液である、請求項５～７のいずれか一項に記載の組成物。
  9. トリス緩衝液が、１０ｍＭの濃度である、請求項８に記載の組成物。
  10. トリス緩衝液が、トリスＨＣｌおよびトロメタミンを含む、請求項８または９に記載の組成物。
  11. 凍結乾燥保護剤が、スクロースまたはスクロース／マンニトール混合物を含む、請求項１～１０のいずれか一項に記載の組成物。
  12. 凍結乾燥保護剤が、スクロースを含む、請求項１１に記載の組成物。
  13. 組成物が、トロメタミン、トリスＨＣｌ、およびスクロースのうちの少なくとも１つを含む、請求項１～１２のいずれか一項に記載の組成物。
  14. 組成物が、トロメタミン、トリスＨＣｌ、およびスクロースを含む、請求項１～１３のいずれか一項に記載の組成物。
  15. トロメタミンが、１．３ｍＭの濃度である、請求項１～１４のいずれか一項に記載の組成物。
  16. トリスＨＣＬが、８．７ｍＭの濃度である、請求項１～１５のいずれか一項に記載の組成物。
  17. スクロースが、４～９．６ｗｔ％である、請求項１～１６のいずれか一項に記載の組成物。
  18. スクロースが、９．６ｗｔ％である、請求項１７に記載の組成物。
  19. 組成物が、２５℃でｐＨ７．３の溶液中にある、請求項１～１８のいずれか一項に記載の組成物。
  20. 組成物が、ガラス製バイアル（例えば、任意に２０ｍｍストッパーをさらに含む、２０ｍＬのガラス製バイアル）内に保管される、請求項１～１９のいずれか一項に記載の組成物。
  21. 組成物が、２～８℃で（例えば、凍結乾燥形態で）保管される、請求項１～２０のいずれか一項に記載の組成物。
  22. 組成物が、凍結乾燥されようとしている、請求項１～２１のいずれか一項に記載の組成物。
  23. 組成物が、再構成されている、請求項１～２２のいずれか一項に記載の組成物。
  24. 組成物が、凍結乾燥されている、請求項１～２３のいずれか一項に記載の組成物。
  25. 組成物が、凍結乾燥粉末として凍結乾燥される、請求項２４に記載の組成物。
  26. 免疫抑制剤が、ラパログである、請求項１～２５のいずれか一項に記載の組成物。
  27. ラパログが、ラパマイシンである、請求項２６に記載の組成物。
  28. ラパログまたはラパマイシンが、２ｍｇ／ｍＬの濃度である、請求項２６または２７に記載の組成物。
  29. 免疫抑制剤が、合成ナノキャリアにカプセル化されている、請求項１～２８のいずれか一項に記載の組成物。
  30. 免疫抑制剤が合成ナノキャリア中に、５０重量％未満のラパマイシン／疎水性担体材料という安定な過飽和量で存在する、請求項１～２９のいずれか一項に記載の組成物。
  31. 免疫抑制剤が、７重量％を超える安定な過飽和量で存在する、請求項１～３０のいずれか一項に記載の組成物。
  32. 疎水性担体材料が、１つ以上の疎水性ポリマーまたは脂質を含む、請求項１～３１のいずれか一項に記載の組成物。
  33. 疎水性担体材料が、１つ以上の疎水性ポリマーを含み、ここで１つ以上の疎水性ポリマーがポリエステルを含む、請求項３２に記載の組成物。
  34. ポリエステルが、ＰＬＡ、ＰＬＧ、ＰＬＧＡまたはポリカプロラクトンを含む、請求項３３に記載の組成物。
  35. 疎水性担体材料が、ＰＬＡ－ＰＥＧ、ＰＬＧＡ－ＰＥＧまたはＰＣＬ－ＰＥＧを含むか、またはこれをさらに含む、請求項３３または３４に記載の組成物。
  36. 合成ナノキャリア中の疎水性担体材料の量が、５～９５重量％の疎水性担体材料／総固形分である、請求項１～３５のいずれか一項に記載の組成物。
  37. 合成ナノキャリア中の疎水性担体材料の量が、６０～９５重量％の疎水性担体材料／総固形分である、請求項３６に記載の組成物。
  38. 免疫抑制剤の量が、疎水性担体材料の重量あたり、６重量％以上かつ５０重量％以下の免疫抑制剤である、請求項１～３７のいずれか一項に記載の組成物。
  39. 免疫抑制剤の量が、疎水性担体材料の重量あたり、７重量％以上かつ３０重量％以下の免疫抑制剤である、請求項３８に記載の組成物。
  40. 免疫抑制剤の量が、疎水性担体材料の重量あたり、８重量％以上かつ２４重量％以下の免疫抑制剤である、請求項３９に記載の組成物。
  41. 合成ナノキャリアがさらに、ＨＬＢ値が１０以下の非イオン性界面活性剤を含む、請求項１～４０のいずれか一項に記載の組成物。
  42. ＨＬＢ値が１０以下の非イオン性界面活性剤が、ソルビタンエステル、脂肪アルコール、脂肪酸エステル、エトキシル化脂肪アルコール、ポロキサマーまたは脂肪酸を含む、請求項４１に記載の組成物。
  43. ＨＬＢ値が１０以下の非イオン性界面活性剤が、SPAN 40、SPAN 20、オレイルアルコール、ステアリルアルコール、イソプロピルパルミタート、グリセロールモノステアラート、BRIJ 52、BRIJ 93、Pluronic P-123、Pluronic L-31、パルミチン酸、ドデカン酸、グリセリルトリパルミタートまたはグリセリルトリリノレアートを含む、請求項４１または４２に記載の組成物。
  44. ＨＬＢ値が１０以下の非イオン性界面活性剤が、SPAN 40である、請求項４３に記載の組成物。
  45. ＨＬＢ値が１０以下の非イオン性界面活性剤が、合成ナノキャリアに封入されるか、合成ナノキャリアの表面に存在するか、またはその両方である、請求項４１～４４のいずれか一項に記載の組成物。
  46. ＨＬＢ値が１０以下の非イオン性界面活性剤の量が、疎水性担体材料の重量あたり、０．０１重量％以上かつ２０重量％以下の、ＨＬＢ値１０以下の非イオン性界面活性剤である、請求項４１～４５のいずれか一項に記載の組成物。
  47. ＨＬＢ値が１０以下の非イオン性界面活性剤の量が、疎水性担体材料の重量あたり、０．１重量％以上かつ１５重量％以下の、ＨＬＢ値１０以下の非イオン性界面活性剤である、請求項４６に記載の組成物。
  48. 組成物が、例えば凍結乾燥前など溶液中にある場合、０．２２μｍフィルターを通して初期滅菌濾過可能である、請求項１～４７のいずれか一項に記載の組成物。
  49. 動的光散乱を用いて得られた、合成ナノキャリアの粒度分布の平均が、１１０ｎｍを超える直径である、請求項１～４８のいずれか一項に記載の組成物。
  50. 直径が、１２０ｎｍより大きい、請求項４９に記載の組成物。
  51. 直径が、１５０ｎｍより大きい、請求項５０に記載の組成物。
  52. 直径が、２００ｎｍより大きい、請求項５１に記載の組成物。
  53. 直径が、２５０ｎｍより大きい、請求項５２に記載の組成物。
  54. 直径が、３００ｎｍ未満である、請求項４９～５３のいずれか一項に記載の組成物。
  55. 直径が、２５０ｎｍ未満である、請求項５４に記載の組成物。
  56. 直径が、２００ｎｍ未満である、請求項５５に記載の組成物。
  57. 組成物が、１０～２０％の合成ナノキャリア、疎水性担体材料、および免疫抑制剤；８０～９０％のスクロース、０．１～５％のトロメタミン；および０．１～５％のトリスＨＣＬを含む、請求項１～５６のいずれか一項に記載の組成物。
  58. 組成物がさらに、抗原を含む、請求項１～５７のいずれか一項に記載の組成物。
  59. 以下：請求項１～５８のいずれか一項に記載の組成物
    を含む、キット。
  60. キットが、本明細書で提供される方法のいずれか１つで使用するためのものである、請求項５９に記載のキット。
  61. 指示をさらに含む、請求項６０に記載のキット。
  62. 指示が、本明細書で提供される方法のいずれか１つの説明を含む、請求項６１に記載のキット。
  63. キットがさらに、抗原を含む、請求項５９～６２のいずれか一項に記載のキット。
  64. 請求項１～５８に記載の組成物のいずれか１つの組成物を、それを必要とする対象に投与することを含む、方法。
  65. 抗原を対象に投与することをさらに含む、請求項６４に記載の方法。
  66. 合成ナノキャリアを含む組成物を生成する方法であって、以下：
    請求項１～５８のいずれか一項に記載の合成ナノキャリアを溶液中で生成または取得すること、および
    緩衝液および凍結乾燥保護剤の少なくとも１つを、該溶液に添加すること
    を含む、前記方法。
  67. 緩衝液が、非リン酸緩衝液である、請求項６６に記載の方法。
  68. 緩衝液が、トリス緩衝液（例えば、１０ｍＭの濃度までの）である、請求項６７に記載の方法。
  69. トリス緩衝液が、トリスＨＣｌおよびトロメタミンを含む、請求項６８に記載の方法。
  70. 凍結乾燥保護剤が、スクロースまたはマンニトール／スクロース混合物を含む、請求項６６～６９のいずれか一項に記載の方法。
  71. 凍結乾燥保護剤が、スクロースを含む、請求項７０に記載の方法。
  72. 緩衝液および凍結乾燥保護剤が添加される、請求項６６～７１のいずれか一項に記載の方法。
  73. トロメタミン、トリスＨＣｌ、およびスクロースの少なくとも１つが、溶液に添加される、請求項６６～７２のいずれか一項に記載の方法。
  74. トロメタミン、トリスＨＣｌ、およびスクロースが添加される、請求項７３に記載の方法。
  75. トロメタミンが、１．３ｍＭの濃度で溶液に添加される、請求項６６～７４のいずれか一項に記載の方法。
  76. トリスＨＣＬが、８．７ｍＭの濃度で溶液に添加される、請求項６６～７５のいずれか一項に記載の方法。
  77. スクロースが、４～９．６ｗｔ％で添加される、請求項６６～７６のいずれか一項に記載の方法。
  78. 溶液が、２５℃でｐＨ７．３であるか、またはかかるｐＨに調整されている、請求項６６～７７のいずれか一項に記載の方法。
  79. 合成ナノキャリアを溶液中で凍結乾燥することをさらに含む、請求項６６～７８のいずれか一項に記載の方法。
  80. 凍結乾燥することが、粉末形態にすることである、請求項７９に記載の方法。
  81. 凍結乾燥された合成ナノキャリアを再構成することをさらに含む、請求項６６～８０のいずれか一項に記載の方法。
  82. 合成ナノキャリアが、ガラス製バイアル（例えば、２０ｍＬのガラス製バイアル）に保管される、請求項６６～８１のいずれか一項に記載の方法。
  83. 合成ナノキャリアが、２～８℃で保管される、請求項６６～８２のいずれか一項に記載の方法。
  84. 請求項６６～８３のいずれか一項に記載の方法によって生成される、組成物。
  85. 請求項８４に記載の組成物を、それを必要とする対象に投与することを含む、方法。
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