JP2023516992A - 中枢神経系疾患を治療するための抗－ｆａｍ１９ａ１拮抗剤の用途 - Google Patents

中枢神経系疾患を治療するための抗－ｆａｍ１９ａ１拮抗剤の用途 Download PDF

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Abstract

本開示内容は、ＣＮＳ機能異常と関連する疾患又は障害を治療する方法に関する。また、ＣＮＳ機能に異常がある対象を診断及び／又は確認するための方法が提供される。また、本開示内容と共に使用できるＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤が提供される。

Description

発明の詳細な説明
〔技術分野〕
（関連出願に対する相互参照事項）
本ＰＣＴ出願は、２０２０年３月２日付けで出願された米国臨時出願第６２／９８４，１６６の優先権を主張し、その全文が本明細書に参考として含まれる。
（電子提出された配列リストに対する参照事項）
本出願と共に、ＡＳＣＩＩテキストファイル（名称：３７６３．０１７ＰＣ０１＿ＳｅｑＬｉｓｔｉｎｇ＿ＳＴ２５．ｔｘｔ、大きさ：３２，２３４バイト；生成日：２０２１年３月１日）で電子提出された配列リストの内容は、その全体が本明細書に参考として含まれる。
（政府支援の陳述）
本研究は、２０１７年大韓民国中小ベンチャー企業部の財源で産学研協力技術開発事業の支援を受けて行われた。
本開示内容は、配列類似性１９を有するファミリー、メンバーＡ１（ＦＡＭ１９Ａ１）に特異的に結合する拮抗剤（例えば、抗体）、このような拮抗剤を含む組成物及び中枢神経系疾患及び／又は異常を予防及び／又は治療するために、このような拮抗剤を使用する方法を提供する。
〔背景技術〕
中枢神経系（ＣＮＳ）の疾患及び障害は、一般に、原因及び病因が知られていない異質的な障害群を含む。現在、アルツハイマー病（ＡＤ）、パーキンソン病（ＰＤ）、ハンチントン病（ＨＤ）、外傷性脳損傷（ＴＢＩ）、神経障害性疼痛及び緑内障などの中枢神経系疾患に対する治療法は存在していない。実際に、ほとんどの場合、ＣＮＳに対して利用可能な治療は相対的に少ない症状好転を提供しているが、事実上、一時緩和に過ぎない。また、全世界的に期待寿命が増加し、人口が成長することによって、ＣＮＳ疾患及び障害で苦しむ個人の数がさらに増加すると予想される（Ｆｅｉｇｉｎ，Ｖ．Ｌ．，ｅｔ ａｌ．，Ｌａｎｃｅｔ Ｎｅｕｒｏｌ １６（１１）：８７７－８９７（２０１７））。
〔発明の概要〕
〔発明が解決しようとする課題〕
このように、ＣＮＳ関連疾患及び障害に対するより効果的な治療オプションが依然として要求されている。
〔課題を解決するための手段〕
本明細書は、配列類似性１９を有するファミリー、メンバーＡ１（ＦＡＭ１９Ａ１）（「ＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤」）に特異的に結合する治療用拮抗剤を提供する。一部の様態において、前記ＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤は、必要とする対象での疾患又は障害を治療することができる。
一部の様態において、前記疾患又は障害は、中枢神経系（ＣＮＳ）関連疾患又は障害を含む。一部の様態において、前記ＣＮＳ関連疾患又は障害は、非正常的な神経回路と関連している。一部の様態において、前記ＣＮＳ関連疾患又は障害は、気分障害、精神障害又はこれらの全てを含む。特定の様態において、前記ＣＮＳ関連疾患又は障害は、不安、うつ病、外傷後ストレス障害（ＰＴＳＤ）、双極性障害、注意欠陥／多動性障害（ＡＤＨＤ）、自閉症、精神分裂病、神経障害性疼痛、緑内障、中毒症、くも膜嚢胞、強硬症、脳炎、てんかん／発作、固定症侯群、髄膜炎、片頭痛、多発性硬化症、骨髓病症、アルツハイマー病、ハンチントン病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、バッテン病、トゥレット症候群、外傷性脳損傷、脳脊髓損傷、脳卒中、振戦（本態性又はパーキンソン病性）、筋緊張異常、知的障害、脳腫瘍又はこれらの組み合わせを含む。
一部の様態において、前記ＣＮＳ関連疾患又は障害は、不安、うつ病、ＰＴＳＤ又はこれらの組み合わせである。一部の様態において、前記ＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤は、不安及び／又はうつ病と関連する一つ以上の症状を改善することができる（例えば、対象の運動性活動を増加させ／又は外部ストレスに反応する対象の能力を増加させることができる）。
一部の様態において、本開示内容で治療できる前記ＣＮＳ関連疾患又は障害は緑内障である。特定の様態において、前記ＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤は、緑内障と関連する炎症を減少、緩和又は阻害することができる。一部の様態において、前記ＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤は、網膜で網膜電位を改善することができる。一部の様態において、前記緑内障は、開放隅角緑内障、閉塞隅角緑内障、正常眼圧緑内障（「ＮＴＧ」）、先天性緑内障、続発性緑内障、色素性緑内障、偽落屑緑内障、外傷性緑内障、血管新生緑内障、虹彩角膜内皮症侯群、ぶどう膜炎緑内障及びこれらの組み合わせからなる群から選ばれる。一部の様態において、前記緑内障は、視神経損傷、網膜神経節細胞（「ＲＧＣ」）損失、高い眼圧（「ＩＯＰ」）、損傷した血液－網膜障壁及び／又は対象の網膜及び／又は視神経内のミクログリア活性水準の増加と関連している。一部の様態において、前記緑内障は、視神経乳頭部の機械的損傷及び／又は対象の網膜及び／又は視神経内の炎症水準の増加によって誘発される。
一部の様態において、前記ＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤は、対象内で網膜神経細胞変性の開始を遅延させることができる。一部の様態において、前記ＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤は、網膜神経節細胞の損失を減少させ／又は対象の網膜内の網膜神経節細胞の数を回復させることができる。特定の様態において、前記網膜神経節細胞の損失は、基準（例えば、ＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤の投与を受けていない対象の該当の値又はＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤を投与する前の対象の該当の値）に比べて少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％又は少なくとも約９０％減少する。一部の様態において、前記網膜神経節細胞の数は、基準（例えば、ＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤の投与を受けていない対象の該当の値又はＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤を投与する前の対象の該当の値）に比べて少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％又は少なくとも約９０％回復される。一部の様態において、前記ＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤は、対象の網膜の内網状層の神経連結を保護することができる。
一部の様態において、本明細書に開示されたＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤で治療できるＣＮＳ関連疾患又は障害は、神経障害性疼痛である。
一部の様態において、前記ＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤は、必要とする対象で外部刺激に対する閾値又は引延時間（ｌａｔｅｎｃｙ）を増加させることができる。特定の様態において、前記外部刺激は機械的刺激である。一部の様態において、前記外部刺激は熱刺激である。一部の様態において、前記外部刺激に対する閾値又は遅延時間は、基準（例えば、ＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤の投与を受けていない対象の該当の値又はＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤を投与する前の対象の該当の値）に比べて少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％又は少なくとも約９０％以上増加する。
一部の様態において、前記ＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤は、必要とする対象で感覚神経伝導速度を増加又は調節することができる。特定の様態において、前記感覚神経伝導速度は、基準（例えば、ＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤の投与を受けていない対象の該当の値又はＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤を投与する前の対象の該当の値）に比べて少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％又は少なくとも約９０％以上増加する。
一部の様態において、前記神経障害性疼痛は、中枢性神経障害性疼痛又は末梢性神経障害性疼痛である。一部の様態において、前記神経障害性疼痛は、身体傷害、感染、糖尿病、癌治療、アルコール中毒、切断、背中、足、尻又は顔面の筋弱化、三叉神経痛、多発性硬化症、帯状疱疹、脊椎手術又はこれらの任意の組み合わせと関連している。一部の様態において、前記神経障害性疼痛は、手根管症候群、中枢性疼痛症候群、退行性ディスク疾患、糖尿病性神経障害、幻肢痛、帯状疱疹後神経痛（帯状疱疹）、陰部神経痛、坐骨神経痛、腰痛、三叉神経痛又はこれらの任意の組み合わせを含む。特定の様態において、前記神経障害性疼痛は、神経の圧迫によって誘発される。一部の様態において、前記糖尿病性神経障害は、糖尿病性末梢神経障害である。一部の様態において、神経障害性疼痛は坐骨神経痛である。
一部の様態において、前記ＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤は、必要とする対象で中枢神経系機能を調節又は改善することができる。一部の様態において、前記中枢神経系機能は、辺縁系関連機能、嗅覚系関連機能、感覚系関連機能、視覚系関連機能又はこれらの組み合わせを含む。
一部の様態において、前記ＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤は、脳領域でＦＡＭ１９Ａ１タンパク質の発現水準及び／又はＦＡＭ１９Ａ１ ｍＲＮＡの発現水準を減少させることができる。特定の様態において、前記脳領域は、大脳皮質、海馬、視床下部、中脳、前頭前皮質、扁桃体（例えば、外側扁桃核及び基底内側扁桃核）、梨状皮質（ｐｉｒｉｆｏｒｍ ｃｏｒｔｅｘ）、前嗅核、外側嗅内皮質、手網（ｈａｂｅｎｕｌａ）又はこれらの組み合わせを含む。
一部の様態において、前記ＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤は、網膜領域でＦＡＭ１９Ａ１タンパク質の発現水準及び／又はＦＡＭ１９Ａ１ ｍＲＮＡの発現水準を減少させることができる。特定の様態において、前記網膜領域は、神経節細胞層（ＧＣＬ）又は内部網状層（ＩＮＬ）を含む。
一部の様態において、前記ＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤は、脊髓領域でＦＡＭ１９Ａ１タンパク質の発現水準及び／又はＦＡＭ１９Ａ１ ｍＲＮＡの発現水準を減少させることができる。特定の様態において、前記脊髓領域は後角（ｄｏｒｓａｌ ｈｏｒｎ）を含む。
一部の様態において、前記ＦＡＭ１９Ａ１タンパク質の発現水準及び／又はＦＡＭ１９Ａ１ ｍＲＮＡの発現水準は、基準（例えば、ＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤の投与を受けていない対象の該当の値又はＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤を投与する前の対象の該当の値）に比べて少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％又は少なくとも約９０％以上減少する。
一部の様態において、前記ＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤は、必要とする対象で神経幹細胞の分化を調節、誘導又は増加させることができる。
一部の様態において、前記ＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤は、基準（例えば、ＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤の投与を受けていない対象の該当の値又はＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤を投与する前の対象の該当の値）に比べて、分化された神経幹細胞で神経突起成長を増加させることができる。一部の様態において、前記神経突起成長は、前記基準に比べて少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％又は少なくとも約９０％以上増加する。
また、本明細書は、必要とする対象で中枢神経系（ＣＮＳ）機能の異常を診断する方法として、ＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤を前記対象のサンプルと接触させ、前記サンプル内のＦＡＭ１９Ａ１タンパク質水準又はＦＡＭ１９Ａ１ ｍＲＮＡ水準を測定することを含む方法を開示する。また、本願は、中枢神経系（ＣＮＳ）機能に異常がある対象を確認する方法として、ＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤を前記対象のサンプルと接触させ、前記サンプル内のＦＡＭ１９Ａ１タンパク質水準又はＦＡＭ１９Ａ１ ｍＲＮＡ水準を測定することを含む方法を提供する。
一部の様態において、前記接触及び測定は試験管内で行われる。
一部の様態において、前記ＣＮＳ機能は、辺縁系関連機能、嗅覚系関連機能、感覚系関連機能、視覚系関連機能又はこれらの組み合わせを含む。特定の様態において、前記ＣＮＳ機能の異常は、非正常的な神経回路と関連している。
一部の様態において、前記ＣＮＳ機能の異常は、ＣＮＳ関連疾患又は障害と関連している。一部の様態において、前記ＣＮＳ関連疾患又は障害は、気分障害、精神障害又はこれらの全てを含む。特定の様態において、前記ＣＮＳ関連疾患又は障害は、不安、うつ病、外傷後ストレス障害（ＰＴＳＤ）、双極性障害、注意欠陥／多動性障害（ＡＤＨＤ）、自閉症、精神分裂病、神経障害性疼痛、緑内障、中毒症、くも膜嚢胞、強硬症、脳炎、てんかん／発作、固定症侯群、髄膜炎、片頭痛、多発性硬化症、骨髓病症、アルツハイマー病、ハンチントン病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、バッテン病、トゥレット症候群、外傷性脳損傷、脳脊髓損傷、脳卒中、振戦（本態性又はパーキンソン病性）、筋緊張異常、知的障害、脳腫瘍又はこれらの組み合わせを含む。一部の様態において、前記ＣＮＳ関連疾患又は障害は、不安、うつ病、ＰＴＳＤ又はこれらの組み合わせである。一部の様態において、前記ＣＮＳ関連疾患又は障害は、緑内障、神経障害性疼痛又はこれらの全てである。
一部の様態において、前記中枢神経系機能の異常は、基準（例えば、中枢神経系機能の異常がない対象、例えば、健康な対象の該当の値）に比べて、サンプルでのＦＡＭ１９Ａ１タンパク質水準及び／又はＦＡＭ１９Ａ１ ｍＲＮＡ水準の増加と関連している。一部の様態において、前記ＦＡＭ１９Ａ１タンパク質水準及び／又はＦＡＭ１９Ａ１ ｍＲＮＡ水準は、前記基準に比べて少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％又は少なくとも約９０％以上増加する。
一部の様態において、前記中枢神経系機能の異常は、基準（例えば、中枢神経系機能の異常がない対象、例えば、健康な対象の該当の値）に比べて、サンプルでのＦＡＭ１９Ａ１タンパク質水準及び／又はＦＡＭ１９Ａ１ ｍＲＮＡ水準の減少と関連している。一部の様態において、前記ＦＡＭ１９Ａ１タンパク質水準及び／又はＦＡＭ１９Ａ１ ｍＲＮＡ水準は、前記基準に比べて少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％又は少なくとも約９０％以上減少する。
一部の様態において、前記ＦＡＭ１９Ａ１タンパク質水準は、免疫組織化学、ウエスタンブロット、放射免疫分析、酵素結合免疫吸着分析（ＥＬＩＳＡ）、放射免疫拡散、免疫沈降分析、オクタロニー（Ｏｕｃｈｔｅｒｌｏｎｙ）免疫拡散法、ロケット免疫電気泳動、組織免疫染色法、補体固定分析、ＦＡＣＳ、タンパク質チップ又はこれらの組み合わせによって測定される。一部の様態において、前記ＦＡＭ１９Ａ１ ｍＲＮＡ水準は、逆転写ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ－ＰＣＲ）、リアルタイムポリメラーゼ連鎖反応、ノーザンブロット又はこれらの組み合わせによって測定される。
一部の様態において、前記サンプルは、組織、細胞、血液、血清、血漿、唾液、小便、脳脊髄液（ＣＳＦ）又はこれらの組み合わせを含む。
一部の様態において、本明細書に開示された診断又は確認方法は、前記ＦＡＭ１９Ａ１タンパク質水準及び／又はＦＡＭ１９Ａ１ ｍＲＮＡ水準が基準に比べて増加するとき、ＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤を対象に投与することをさらに含む。一部の様態において、本明細書に開示された診断又は確認方法は、前記ＦＡＭ１９Ａ１タンパク質水準及び／又はＦＡＭ１９Ａ１ ｍＲＮＡ水準が基準に比べて減少するとき、ＦＡＭ１９Ａ１に対する作用剤（「ＦＡＭ１９Ａ１作用剤」）を投与することをさらに含む。
一部の様態において、前記ＦＡＭ１９Ａ１作用剤は、ＦＡＭ１９Ａ１タンパク質である。一部の様態において、前記ＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤は、ＦＡＭ１９Ａ１を特異的に標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｄｓＲＮＡ、アプタマー、ＰＮＡ、又はこれを含むベクターである。一部の様態において、前記ＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤は、抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体、前記抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体をコーディングするポリヌクレオチド、そのポリヌクレオチドを含むベクター、そのポリヌクレオチドを含む細胞又はこれらの任意の組み合わせである。一部の様態において、前記ＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤は抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体である。
一部の様態において、対象は男性対象である。
本明細書は、（ａ）ＥＬＩＳＡによって測定したとき、ＫＤが１０ｎＭ以下である可溶性ヒトＦＡＭ１９Ａ１に結合する特性、（ｂ）ＥＬＩＳＡによって測定したとき、ＫＤが１０ｎＭである膜結合ヒトＦＡＭ１９Ａ１に結合する特性、又は（ｃ）（ａ）及び（ｂ）の全てから選ばれる特性を示す抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体又はその抗原結合断片（「抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体」）を提供する。
一部の様態において、前記抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体は、ヒトＦＡＭ１９Ａ１エピトープに結合するために、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３、及び軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含む基準抗体と交差競争し、
（ｉ）前記重鎖ＣＤＲ１は、配列番号１０に示したアミノ酸配列を含み、前記重鎖ＣＤＲ２は、配列番号１１に示したアミノ酸配列を含み、前記重鎖ＣＤＲ３は、配列番号１２に示したアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ１は、配列番号１３に示したアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ２は、配列番号１４に示したアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ３は、配列番号１５に示したアミノ酸配列を含んだり；
（ｉｉ）前記重鎖ＣＤＲ１は、配列番号４に示したアミノ酸配列を含み、前記重鎖ＣＤＲ２は、配列番号５に示したアミノ酸配列を含み、前記重鎖ＣＤＲ３は、配列番号６に示したアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ１は、配列番号７に示したアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ２は、配列番号８に示したアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ３は、配列番号９に示したアミノ酸配列を含んだり；
（ｉｉｉ）前記重鎖ＣＤＲ１は、配列番号１６に示したアミノ酸配列を含み、前記重鎖ＣＤＲ２は、配列番号１７に示したアミノ酸配列を含み、前記重鎖ＣＤＲ３は、配列番号１８に示したアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ１は、配列番号１９に示したアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ２は、配列番号２０に示したアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ３は、配列番号２１に示したアミノ酸配列を含んだり；又は
（ｉｖ）前記重鎖ＣＤＲ１は、配列番号２２に示したアミノ酸配列を含み、前記重鎖ＣＤＲ２は、配列番号２３に示したアミノ酸配列を含み、前記重鎖ＣＤＲ３は、配列番号２４に示したアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ１は、配列番号２５に示したアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ２は、配列番号２６に示したアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ３は、配列番号２７に示したアミノ酸配列を含む。
一部の様態において、前記抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体は、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３、及び軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含む基準抗体と同一のＦＡＭ１９Ａ１エピトープに結合し、
（ｉ）前記重鎖ＣＤＲ１は、配列番号１０に示したアミノ酸配列を含み、前記重鎖ＣＤＲ２は、配列番号１１に示したアミノ酸配列を含み、前記重鎖ＣＤＲ３は、配列番号１２に示したアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ１は、配列番号１３に示したアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ２は、配列番号１４に示したアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ３は、配列番号１５に示したアミノ酸配列を含んだり；
（ｉｉ）前記重鎖ＣＤＲ１は、配列番号４に示したアミノ酸配列を含み、前記重鎖ＣＤＲ２は、配列番号５に示したアミノ酸配列を含み、前記重鎖ＣＤＲ３は、配列番号６に示したアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ１は、配列番号７に示したアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ２は、配列番号８に示したアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ３は、配列番号９に示したアミノ酸配列を含んだり；
（ｉｉｉ）前記重鎖ＣＤＲ１は、配列番号１６に示したアミノ酸配列を含み、前記重鎖ＣＤＲ２は、配列番号１７に示したアミノ酸配列を含み、前記重鎖ＣＤＲ３は、配列番号１８に示したアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ１は、配列番号１９に示したアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ２は、配列番号２０に示したアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ３は、配列番号２１に示したアミノ酸配列を含んだり；又は
（ｉｖ）前記重鎖ＣＤＲ１は、配列番号２２に示したアミノ酸配列を含み、前記重鎖ＣＤＲ２は、配列番号２３に示したアミノ酸配列を含み、前記重鎖ＣＤＲ３は、配列番号２４に示したアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ１は、配列番号２５に示したアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ２は、配列番号２６に示したアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ３は、配列番号２７に示したアミノ酸配列を含む。
一部の様態において、前記抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体は、Ｄ１１２、Ｍ１１７、Ａ１１９、Ｔ１２０、Ｎ１２２及びこれらの組み合わせからなる群から選ばれる少なくとも一つのエピトープに結合する。
一部の様態において、前記抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体は、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３、及び軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含み、前記重鎖ＣＤＲ３は、配列番号１２、６、１８又は２４に示したアミノ酸配列を含む。特定の様態において、前記重鎖ＣＤＲ１は、配列番号１０、４、１６又は２２に示したアミノ酸配列を含む。他の側面において、前記重鎖ＣＤＲ２は、配列番号１１、５、１７又は２３に示したアミノ酸配列を含む。一部の様態において、前記軽鎖ＣＤＲ１は、配列番号１３、７、１９又は２５に示したアミノ酸配列を含む。一部の様態において、前記軽鎖ＣＤＲ２は、配列番号１４、８、２０又は２６に示したアミノ酸配列を含む。特定の様態において、前記軽鎖ＣＤＲ３は、配列番号１５、９、２１又は２７に示したアミノ酸配列を含む。
一部の様態において、前記抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体は、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３、及び軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含み、
（ｉ）前記重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３は、それぞれ配列番号１０－１２に示したアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３は、それぞれ配列番号１３－１５に示したアミノ酸配列を含んだり；
（ｉｉ）前記重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３は、それぞれ配列番号４－６に示したアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３は、それぞれ配列番号７－９に示したアミノ酸配列を含んだり；
（ｉｉｉ）前記重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３は、それぞれ配列番号１６－１８に示したアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３は、それぞれ配列番号１９－２１に示したアミノ酸配列を含んだり；又は
（ｉｖ）前記重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３は、それぞれ配列番号２２－２４に示したアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３は、それぞれ配列番号２５－２７に示したアミノ酸配列を含む。
一部の様態において、前記抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体は、配列番号３０、２８、３２又は３４に示したアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン及び／又は配列番号３１、２９、３３又は３５に示したアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。
一部の様態において、前記抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体は、配列番号３０に示したアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、及び配列番号３１に示したアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。特定の様態において、前記抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体は、配列番号２８に示したアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、及び配列番号２９に示したアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。一部の様態において、前記抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体は、配列番号３２に示したアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、及び配列番号３３に示したアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。一部の様態において、前記抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体は、配列番号３４に示したアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、及び配列番号３５に示したアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。
一部の様態において、前記抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体は、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、前記ＶＨは、配列番号３０、２８、３２又は３４に示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％又は約１００％同一であるアミノ酸配列を含み／又は前記ＶＬは、配列番号３１、２９、３３又は３５に示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％又は約１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
一部の様態において、前記抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体は、キメラ抗体、ヒト抗体又はヒト化抗体である。一部の様態において、前記抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ又は単一鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）を含む。一部の様態において、前記抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、その変異体及びこれらの任意の組み合わせからなる群から選ばれる。一部の様態において、前記抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体はＩｇＧ１抗体である。一部の様態において、前記抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体は、Ｆｃ機能のない定常領域を含む。
一部の様態において、前記抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体は、製剤（ａｇｅｎｔ）に連結されて免疫接合体（ｉｍｍｕｎｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ）を形成する。特定の様態において、前記抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体は、薬剤学的に許容される担体と共に剤形化される。
一部の様態において、本明細書に開示された方法に有用なＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤は、本明細書に提供された抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体である。
一部の様態において、前記ＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤は、静脈内、経口、非経口、髄腔内、脳室内、肺、筋肉内、皮下、硝子体内又は脳室内に投与される。一部の様態において、対象はヒトである。
また、本明細書は、本開示内容の抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体をコーディングするヌクレオチド配列を含む核酸を提供する。また、本開示内容は、本明細書に開示された核酸、及び前記核酸に作動可能に連結された一つ以上のプロモーターを含むベクターを提供する。また、本開示内容は、本明細書に記載された核酸又はベクターを含む細胞を提供する。本明細書は、本開示内容の抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体及び担体を含む組成物を開示する。本開示内容は、本開示内容の抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体及び使用説明書を含むキットを提供する。
本明細書は、抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体を生産する方法として、本明細書に開示された細胞を適切な条件で培養し、前記抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体を分離することを含む方法を提供する。
〔図面の簡単な説明〕
図１は、陽性ポリｓｃＦｖ－ファージ抗体プール（ｐｏｏｌ）の結合に対して、実施例２に記載されているバイオパニングの各ラウンドからのＥＬＩＳＡ結果を示している。図示した陽性ポリｓｃＦｖ－ファージ抗体プールは、（ｉ）バイオパニングのラウンド１（「１’Ｆｃ」）、（ｉｉ）バイオパニングのラウンド２（「２’ｍＦｃ」）及び（ｉｉｉ）バイオパニングのラウンド３（「３’Ｆｃ」）からの抗体プールを含む。Ｍ１３ファージ＃３８及び全体のライブラリを対照群として使用した。図示したそれぞれのｓｃＦｖ－ファージ抗体プールに対して、ＦＡＭ１９Ａ１－Ｆｃ、ＦＡＭ１９Ａ１－ｍＦｃ及び非－ＦＡＭ１９Ａ１タンパク質（ＩＴＧＡ６－Ｆｃ）に対する結合が左側から右側に表示されている。
図２は、バイオパニングのラウンド３から分離された個別モノｓｃＦｖ－ファージクローンのＦＡＭ１９Ａ１タンパク質に対する結合のＥＬＩＳＡ結果を示している。図示した各クローンは、（左側から右側に）１Ａ１、１Ａ２、１Ａ３、１Ａ４、１Ａ５、１Ａ６、１Ａ７、１Ａ８、１Ａ９、１Ａ１０、１Ａ１１、１Ａ１２、１Ｂ１、１Ｂ２、１Ｂ３、１Ｂ４、１Ｂ５、１Ｂ６、１Ｂ７、１Ｂ８、１Ｂ９、１Ｂ１０、１Ｂ１１、１Ｂ１２、１Ｃ１、１Ｃ２、１Ｃ３、１Ｃ４、１Ｃ５、１Ｃ６、１Ｃ７、１Ｃ８、１Ｃ９、１Ｃ１０、１Ｃ１１、１Ｃ１２、１Ｄ１、１Ｄ２、１Ｄ３、１Ｄ４、１Ｄ５、１Ｄ６、１Ｄ７、１Ｄ８、１Ｄ９、１Ｄ１０、１Ｄ１１及び１Ｄ１２を含んでいる。それぞれの抗体クローンに対して、左側の棒は、ＦＡＭ１９Ａ１－Ｆｃに対する結合を示す。それぞれの抗体クローンに対して、右側の棒は、陰性対照群（非－ＦＡＭ１９Ａ１－Ｆｃ）に対する結合を示す。
図３は、バイオパニングのラウンド３から分離された互いに異なるモノｓｃＦｖ－ファージクローンのＢｓｔＮＩフィンガープリンティング分析を示している。図示したクローンは、（左側から右側に）１Ａ１１、１Ｃ１、Ｍ、２Ａ１０、２Ｃ９、２Ｄ１２、２Ｅ１、２Ｇ７、２Ｇ８、２Ｈ４、２Ｈ９、２Ｈ１１、２Ｈ１２、３Ａ４、３Ａ５、３Ａ８、３Ａ１１、３Ｂ６、３Ｂ８、３Ｂ１０、３Ｃ５、３Ｄ１、３Ｄ１１、３Ｄ１２、３Ｅ２、３Ｅ７、３Ｅ１２、３Ｆ１２、３Ｇ３、３Ｇ４、３Ｇ１０、３Ｇ１２、３Ｈ２、３Ｈ３、３Ｈ９、４Ａ２、４Ｄ１、４Ｅ１０、４Ｇ８、４Ｈ１１、５Ａ３、５Ｃ１、５Ｃ３、５Ｃ６、５Ｅ１１、５Ｇ１、６Ｅ１２及び７Ｇ８を含む。次のような各クローンは、高い親和性でＦＡＭ１９Ａ１に特異的に結合することができた（すなわち、非－ＦＡＭ１９Ａ１対照群タンパク質には結合しなかった）：１Ａ１１、１Ｃ１、２Ｇ７及び３Ａ８。抗体クローン２Ｃ９、５Ａ３及び２Ｅ１は、それぞれＦＡＭ１９Ａ１に特異的に結合していないか、モノファージ（ｍｏｎｏｐｈａｇｅ）でなかったり、低い親和性でＦＡＭ１９Ａ１に結合した。
図４は、ＦＡＭ１９Ａ１及び非－ＦＡＭ１９Ａ１タンパク質の全てに互いに異なるモノｓｃＦｖ－ファージクローンの結合に対するＥＬＩＳＡ結果を示している。前記クローンのそれぞれに対して、次のようなタンパク質に対する結合が示されている（左側から右側に）：（ｉ）ＦＡＭ１９Ａ１－ＭＹＣ／ＤＫＫ（Ｏｒｉｇｅｎｅ）、（ｉｉ）ＦＡＭ１９Ａ１－Ｎ－Ｆｃ、（ｉｉｉ）ＦＡＭ１９Ａ１－Ｎ－ｍＦｃ、（ｉｖ）ＩＴＧＡ６－Ｆｃ、（ｖ）ＣＤ５８－Ｆｃ、（ｖｉ）ｈＲＡＧＥ－Ｆｃ、（ｖｉｉ）ＡＩＴＲ－Ｆｃ、（ｖｉｉｉ）ｃ－Ｆｃ及び（ｉｘ）ｍＦｃ。前記３個のＦＡＭ１９Ａ１タンパク質は、結合検出のために使用したタグでのみ互いに異なる。
図５Ａ、図５Ｂ、図５Ｃ及び図５Ｄは、実施例３に記載されているように、生産された抗－ＦＡＭ１９Ａ１ ＩｇＧ１抗体の互いに異なる特性を示している。図５Ａは、抗－ＦＡＭ１９Ａ１ ＩｇＧ１抗体を生産するために使用した発現ベクターの概略的な構成を提供している。図５Ｂは、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析によって確認された抗体の純度及び移動度を提供している。図５Ｃは、生産収率データを提供している。図５Ｄは、ＥＬＩＳＡによって測定したＦＡＭ１９Ａ１タンパク質に対する抗体の結合分析を提供している。グラフの下側の表は、Ｋｄ値を提供している。図５Ｂ、図５Ｃ及び図５Ｄにおいて、図示した抗－ＦＡＭ１９Ａ１ ＩｇＧ１抗体は、クローン１Ａ１１、１Ｃ１、２Ｇ７及び３Ａ８を含む。
図６は、互いに異なる抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体クローンのＦＡＭ１９Ａ１突然変異体Ｍ１－Ｍ７結合に対するＥＬＩＳＡ結果を示している。野生型ＦＡＭ１９Ａ１及びＰＢＳを対照群として使用した。ＦＡＭ１９Ａ１タンパク質のそれぞれに対して、表示された５個の棒は、抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体クローン（ｉ）１Ａ１１（「Ａ１－１Ａ１１－Ｙｂｉｏ」）、（ｉｉ）１Ｃ１（「ＦＡＭ１９Ａ１－１Ｃ１」）、（ｉｉｉ）Ｆ４１Ｈ５、（ｉｖ）Ｄ６（「Ｄ６－ａ－Ｆａｍ１９Ａ１」）及びＥ１（「Ｅ１－ａ－Ｆａｍ１９Ａ１」）（左側から右側に）に該当する。
図７は、マウスの互いに異なる組織でのＦＡＭ１９Ａ１ ｍＲＮＡ発現を示している。図示した組織は、互いに異なる脳領域（すなわち、大脳皮質、小脳、中脳、脊髓、海馬、嗅球、視床下部及び脳下垂体）の組織、及び末梢組織（すなわち、心臓、肝、脾臓、胃、小腸、睾丸、腎臓及び肺）を含む。前記脳領域組織はボックスで表示されている。
図８Ａ、図８Ｂ、図８Ｃ、図８Ｄ、図８Ｅ、図８Ｆ、図８Ｇ及び図８Ｈは、実施例に記載されているように、生成したＦＡＭ１９Ａ１ ＬａｃＺノックイン（ｋｎｏｃｋ－ｉｎ、ＫＩ）マウスでのＦＡＭ１９Ａ１発現を示している。図８Ａは、ＦＡＭ１９Ａ１ ＬａｃＺ ＫＩマウス遺伝子構成の概略図である。ＬａｃＺ遺伝子配列をＦＡＭ１９Ａ１遺伝子のエクソン２内の開始コドンの真後ろに挿入した。この遺伝子構造体は、天然ＦＡＭ１９Ａ１プロモーターを使用して発現され、その結果として得られた産物は、ＬａｃＺ配列後方のポリＡ尾によってＦＡＭ１９Ａ１タンパク質のいずれの部分もないβ－ガラクトシダーゼである。したがって、同型接合ＦＡＭ１９Ａ１ ＬａｃＺ ＫＩマウスをＦＡＭ１９Ａ１の完全なノックアウトと見なした。Ｅ１、エクソン１；Ｅ２、エクソン２；Ｅ３、エクソン３；Ｅ４、エクソン４；Ｅ５、エクソン５；ｌａｃＺ、ｌａｃＺ遺伝子；ｎｅｏ、アミノ３’－グリコシルホスホトランスフェラーゼ遺伝子；ｐＡ、ｐｏｌｙ－Ａ尾。図８Ｂは、野生型ＦＡＭ１９Ａ１ ＬａｃＺ ＫＩ（＋／－）及びＦＡＭ１９Ａ１ ＬａｃＺ ＫＩ（－／－）動物でβ－ガラクトシダーゼ（３４３ ｂｐ）とＦＡＭ１９Ａ１（２４３ ｂｐ）とを比較するゲノムＤＮＡ ＰＣＲ結果を提供している。図８Ｃは、互いに異なる動物の皮質（ＣＴＸ）及び海馬（ＨＩＰ）の全てでのＦＡＭ１９Ａ１発現を比較するＲＴ－ＰＣＲ結果を提供している。図８Ｄは、ＦＡＭ１９Ａ１特異的抗体を使用して互いに異なる動物の皮質（ＣＴＸ）及び海馬（ＨＩＰ）での内因性ＦＡＭ１９Ａ１タンパク質発現を比較して提供している。ＥＣＬソリューションで生成する間の露出時間は、ＦＡＭ１９Ａ１の場合は３０分で、β－アクチンの場合は１分であった。図８Ｅ（皮質）及び図８Ｆ（海馬）は、図８Ｄに示した結果の定量分析を提供している。図８Ｇは、野生型動物の脳の多様な領域でのＦＡＭ１９Ａ１ ｍＲＮＡ及びタンパク質発現の全てを示している。ＥＣＬソリューションで生成する間の露出時間は、ＦＡＭ１９Ａ１の場合は３０分で、β－アクチンの場合は１分であった。図示した領域は、（ｉ）皮質（ＣＴＸ）、（ｉｉ）海馬（ＨＩＰ）、（ｉｉｉ）嗅球（ＯＢ）、（ｉｖ）小脳（ＣＢ）、（ｖ）視床＋視床下部（ＴＨ＋ＨＹＰ）、（ｖｉ）中脳（ＭＢ）、及び（ｖｉｉ）脳橋（ｐｏｎｓ、ＰＯ）を含む。図８Ｈは、図８Ｇに示した結果の定量分析を提供している。図８Ｅ、図８Ｆ及び図８Ｈにおいて、「ａ．ｕ．」は、任意の単位を意味する。データは、平均±平均の標準誤差（ＳＥＭ）として示した。一元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ）とボンフェローニ（Ｂｏｎｆｅｒｒｏｎｉ）事後試験により、ＷＴに対して＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１。
図９Ａ、図９Ｂ及び図９Ｃは、互いに異なる発達段階の間の、ＦＡＭ１９Ａ１ ＬａｃＺ ＫＩ（－／－）マウスでの全脳Ｘ－ｇａｌ染色を示している。図９Ａは、胚発達の１２．５日（Ｅ１２．５）に、ＷＴ及びＦＡＭ１９Ａ１ ＬａｃＺ ＫＩマウスでのβ－ガラクトシダーゼ発現を比較して提供している。図９Ｂは、胚発達の１４．５日、１６．５日及び１８．５日に、ＦＡＭ１９Ａ１ ＬａｃＺ ＫＩマウスでのβ－ガラクトシダーゼ発現を示している。図９Ｃは、出生後の０．５日、２．５日、７．５日、１４．５日及び５６．６日に、ＦＡＭ１９Ａ１ ＬａｃＺ ＫＩマウスでのβ－ガラクトシダーゼ発現を示している。図９Ａ、図９Ｂ及び図９Ｃにおいて、スケールバーは２ｍｍである。
図１０Ａ及び図１０Ｂは、胚及び出生後のＦＡＭ１９Ａ１ ＬａｃＺノックイン（ＫＩ）（＋／－）マウスの脳のＸ－ｇａｌ染色を提供している。図１０Ａは、胚発達の１４．５日（Ｅ１４．５）及び１８．５日（Ｅ１８．５）に、冠状脳切片でのＸ－ｇａｌ信号検出を示している。図１０Ｂは、出生後の０．５（Ｐ０．５）日、７．５（Ｐ７．５）日及び１４．５（Ｐ１４．５）日に、多様な領域でのＸ－ｇａｌ信号検出を示している。ＡＣｏ、前皮質扁桃核；Ａｍｙ、扁桃体；ＡＯ、前嗅核；Ａｕ、聴覚皮質；ＢＭＡ；基底内側扁桃核、前方部；ＣＥｎ、嗅内皮質；ＣＰｆ、梨状皮質；ＦＲ、反屈束（ｆａｓｃｉｃｕｌｕｓ ｒｅｔｒｏｆｌｅｘｕｓ）；Ｈｉｐ、海馬；ＬＳ、外側中隔核；Ｍ、運動皮質；ＭＧＶ、内側膝状核、腹側部分；Ｏｐ、上丘（ｓｕｐｅｒｉｏｒ ｃｏｌｌｉｃｕｌｕｓ）の視神経層；ＰＦ、橋屈（ｐｏｎｔｉｎｅ ｆｌｅｘｕｒｅ）；ＰＭＣｏ、後内側皮質扁桃核；Ｐｎ、橋核；ＰｒＬ、前辺縁皮質；ＲＭＣ、赤核、巨大細胞部；Ｓ、体性感覚皮質；Ｖ、視覚皮質。
図１１Ａ、図１１Ｂ及び図１１Ｃは、互いに異なる成体マウスの脳でのＦＡＭ１９Ａ１発現パターンを示している。図１１Ａでは、Ｘ－ｇａｌ沈殿物（赤色）がＦＡＭ１９Ａ１ ＬａｃＺ ＫＩマウスの皮質Ｌ２－３ ＣＵＸ１陽性神経細胞（緑色）の一部で検出された。図１１Ｂでは、β－ガラクトシダーゼ（緑色）がＦＡＭ１９Ａ１ ＬａｃＺ ＫＩマウスの皮質Ｌ５ ＣＴＩＰ２陽性神経細胞（マゼンタ色）の一部で確認された。矢印の頭部は、Ｘ－ｇａｌ又はβ－ガラクトシダーゼを発現する皮質マーカー細胞を示す。図１１Ｃは、免疫組織化学によって測定された成体マウスの冠状脳切片でのＸ－ｇａｌ染色を示している。互いに異なるパネルは、関連動物の互いに異なる脳領域を示す。ＡＯ、前嗅核；Ａｐｉｒ、扁桃体－梨状葉移行野；ＢＬＡ、基底内側扁桃核；ＢＬＰ、基底外側扁桃核、後方部；ＣＥｎ、嗅内皮質；ＣＰｆ、梨状皮質；Ｄ３Ｖ、背中側の第３脳室；ＦｒＡ、前頭連合皮質；Ｌ２－３、皮質層２－３；Ｌ５、皮質層５；ＣＡ１、２及び３、海馬のＣＡ１、ＣＡ２及びＣＡ３領域のフィールド；ＬａＤＬ、外側扁桃核；ＬＨｂ、外側手綱核；ＬＯ、外側眼窩皮質；ＬＳ、外側中隔核；ＬＶ、外側脳室；ＭＧＮ、内側膝状核；ＭＯ、内側眼窩皮質；Ｏｐ、上丘の視神経層；ＰＭＣｏ、後内側皮質扁桃核；ＰｒＬ、前辺縁皮質；Ｐｙ、海馬のピラミッド細胞層；ＲＧ、膨大顆粒皮質；ＶＯ、腹側眼窩皮質。
図１２は、成体マウスの脳、脊髓及び背中側の神経節でのＦＡＭ１９Ａ１発現（Ｘ－ｇａｌ染色によって表れる）を提供している。パネルＡ－Ｇは、異型接合ＦＡＭ１９Ａ１ ＬａｃＺノックイン（ＫＩ）マウスの互いに異なる脳領域のＸ－ｇａｌ染色された冠状切片を示している。パネルＨ及びＩは、同型接合ＦＡＭ１９Ａ１ ＬａｃＺ ＫＩマウスの互いに異なる脳のＸ－ｇａｌ染色された冠状切片を示している。パネルJ－Ｍは、異型接合ＦＡＭ１９Ａ１ ＬａｃＺ ＫＩマウスのＸ－ｇａｌ染色された冠状脊髓切片を示している。パネルＮは、異型接合ＦＡＭ１９Ａ１ ＬａｃＺ ＫＩマウスのＸ－ｇａｌ染色された背中側の神経節を示している。３Ｖ、第３脳室；７Ｎ、顔面神経核；ｃｐ、脳脚；ＤＣ、背側の蝸牛核；Ｅｃｕ、外部楔状束核；ｉｃ、内包；ＩＰＤＬ、脚間核、背外側亜核（ｄｏｒｓｏｌａｔｅｒａｌ ｓｕｂｎｕｃｌｅｕｓ）；ｌｆｐ、脳橋の縦束（ｌｏｎｇｉｔｕｄｉｎａｌ ｆａｓｃｉｃｕｌｕｓ）；ＬＰＯ、外側視索前野；ＬＲｔ、外側網状核；ｍｌ、内側毛帯；ＭＰＯＭ、内側視索前核、内側部；ＭＶｅＭＣ、内側前庭神経核、巨大細胞部；ＭＶｅＰＣ、内側前庭神経核、小細胞部；Ｐｎ、橋核；Ｐｏ、視床後核群；Ｐｒ、前位核；ｐｙ、錐体路；ＲｔＴｇ、橋網様被蓋核；Ｓｐ５Ｉ、脊椎三叉神経核、極間部；Ｓｐ５O、脊椎三叉神経核、口腔部；ＳｐＶｅ、脊椎前庭神経核；ＳｕＶｅ、前庭神経上核；ＶＭＨ、視床下部腹内側核；Ｘ、核Ｘ。
図１３は、ＦＡＭ１９Ａ１ ｍＲＮＡプローブを使用するｉｎ ｓｉｔｕ混成化による成長及び成熟野生型（ＷＴ）ラットの脳でのＦＡＭ１９Ａ１ ｍＲＮＡ発現を示している。図示したそれぞれの脳切片に対するラットの年齢は、各パネルの右側下端コーナーに提供されている：（ｉ）胚発達の１４．５日（Ｅ１４．５）、（ｉｉ）胚発達の１６．５日（Ｅ１６．５）、（ｉｉｉ）胚発達の１８．５日（Ｅ１８．５）、（ｉｖ）出生後の０．５日（Ｐ０．５）、（ｖ）出生後の７．５日（Ｐ７．５）、（ｖｉ）出生後の１４．５日（Ｐ１４．５）、（ｖｉｉ）出生後の２１．５日（Ｐ２１．５）及び（ｖｉｉｉ）成体脳の互いに異なる視覚（矢状、水平及び冠状）。Ａｍｙ、扁桃体；ＡＯ、前嗅核；Ｃｅｒ、小脳；ＣＴＸ、皮質；Ｈｂ、手網；Ｈｉｐ、海馬；Ｍｅｓ、中脳；ＳＣ、脊髓；Ｔｅｌ、終脳；Ｔｈ、視床。
図１４は、異型接合ＦＡＭ１９Ａ１ ＬａｃＺ ＫＩ親（ｐａｒｅｎｔｓ）から生成された子孫の数及び比率（％）を示す表を提供している。
図１５Ａ、図１５Ｂ、図１５Ｃ、図１５Ｄ、図１５Ｅ、図１５Ｆ、図１５Ｇ、図１５Ｈ、図１５Ｉ及び図１５Ｊは、野生型とＦＡＭ１９Ａ１ ＬａｃＺノックイン（ＫＩ）マウスのとの間の形態学的差を比較して提供している。図１５Ａ及び図１５Ｂは、それぞれ雄性及び雌性マウスでの年齢による体重変化を示している。図１５Ｃは、ＷＴ及びＦＡＭ１９Ａ１（－／－）成体マウスの脳の全体組織標本固定写真（ｗｈｏｌｅ－ｍｏｕｎｔ ｖｉｅｗ）を提供している。図１５Ｄは、ＷＴ異型接合ＦＡＭ１９Ａ１ ＬａｃＺ ＫＩ（ＦＡＭ１９Ａ１ ＋／－）及び同型接合ＦＡＭ１９Ａ１ ＬａｃＺ ＫＩ（ＦＡＭ１９Ａ１ －／－）マウスのニッスル染色された脳組織内の運動皮質層を示している。図１５Ｅ、図１５Ｆ及び図１５Ｇは、それぞれＷＴ（ｎ＝９）、ＦＡＭ１９Ａ１ ＋／－（ｎ＝８）及びＦＡＭ１９Ａ１ －／－（ｎ＝８）成体マウスの脳の総長さ、大脳皮質の長さ及び脳幅を提供している。図１５Ｈ、図１５Ｉ及び図１５Ｊは、それぞれＷＴ（ｎ＝５）ＦＡＭ１９Ａ１ ＋／－（ｎ＝５）及びＦＡＭ１９Ａ１ －／－（ｎ＝４）成体マウスの運動、体性感覚及び視覚皮質における皮質の厚さを提供している。データは、平均±平均の標準誤差（ＳＥＭ）として示した。一元配置分散分析又は二元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ）とボンフェローニ（Ｂｏｎｆｅｒｒｏｎｉ）事後試験により、ＷＴ又はＦＡＭ１９Ａ１ ＋／－に対して＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１。
図１６Ａ及び図１６Ｂは、成体マウスの脳の野生型（ＷＴ）、ＦＡＭ１９Ａ１ ＋／－及びＦＡＭ１９Ａ１ －／－の大脳皮質での推定皮質の体積（図１６Ａ）及び神経細胞の総数（図１６Ｂ）を比較して提供している。データは、平均±平均の標準誤差（ＳＥＭ）として示した。
図１７Ａ、図１７Ｂ、図１７Ｃ、図１７Ｄ、図１７Ｅ及び図１７Ｆは、野生型、ＦＡＭ１９Ａ１ ＋／－及びＦＡＭ１９Ａ１ －／－成体マウスの皮質層の厚さを比較して提供している。図１７Ａ、図１７Ｂ及び図１７Ｃは、それぞれ運動、体性感覚及び視覚皮質の皮質層の厚さを示している。図１７Ｄ、図１７Ｅ及び図１７Ｆは、それぞれ運動、体性感覚及び視覚皮質における皮質の総厚さに対する各皮質層の厚さの比を示している。前記互いに異なる皮質層はｘ軸に提供されている。前記皮質層（ｘ軸）のそれぞれに対して、棒は、（左側から右側に）それぞれ野生型（ＷＴ）、ＦＡＭ１９Ａ１ ＋／－及びＦＡＭ１９Ａ１ －／－成体マウスを示している。データは、平均±平均の標準誤差（ＳＥＭ）として示した。一元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ）により、ＷＴマウスに対して＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．００１、＊＊＊ｐ＜０．００１。
図１８Ａ、図１８Ｂ、図１８Ｃ及び図１８Ｄは、野生型、ＦＡＭ１９Ａ１ ＋／－及びＦＡＭ１９Ａ １－／－成体マウスの運動皮質層における神経細胞の密度を比較して提供している。図１８Ａにおいて、ＮｅｕＮを神経細胞に対するマーカーとして使用した。前記互いに異なる皮質層は、Ｌ１、Ｌ２－３、Ｌ４、Ｌ５及びＬ６として区別されている。図１８Ｂ、図１８Ｃ及び図１８Ｄは、それぞれ図１８Ａに示した皮質層のそれぞれにおける神経細胞の密度、体積及び総ＮｅｕＮ陽性細胞を定量的に比較して提供している。図１８Ａ、図１８Ｂ、図１８Ｃ及び図１８Ｄにおいて、前記皮質層（ｘ軸）のそれぞれに対して、棒は、（左側から右側に）それぞれ野生型（ＷＴ）、ＦＡＭ１９Ａ１ ＋／－及びＦＡＭ１９Ａ１ －／－成体マウスを示している。データは、平均±平均の標準誤差（ＳＥＭ）として示した。
図１９Ａ、図１９Ｂ、図１９Ｃ、図１９Ｄ及び図１９Ｅは、野生型、ＦＡＭ１９Ａ１ ＋／－及びＦＡＭ１９Ａ１ －／－成体マウスの運動皮質における皮質層グリア細胞の数を比較して提供している。図１９Ａにおいて、ＧＦＡＰ（緑色）陽性星状細胞及びＩｂａ１（赤色）陽性ミクログリアが運動皮質で検出された。図１９Ｂにおいて、Ｏｌｉｇ２陽性乏突起膠細胞（白色の矢印で例示された陽性細胞）が運動皮質で確認された。図１９Ｃ、図１９Ｄ及び図１９Ｅは、それぞれ運動皮質層でのＧＦＡＰ陽性細胞、Ｉｂａ１陽性細胞及びＯｌｉｇ２陽性細胞の数を示している。図１９Ｃ、図１９Ｄ及び図１９Ｅにおいて、前記皮質層（x軸）のそれぞれに対して、棒は、（左側から右側に）それぞれ野生型（ＷＴ）、ＦＡＭ１９Ａ１ ＋／－及びＦＡＭ１９Ａ１ －／－成体マウスを示している。データは、平均±平均の標準誤差（ＳＥＭ）として示した。
図２０Ａ、図２０Ｂ、図２０Ｃ、図２０Ｄ、図２０Ｅ、図２０Ｆ、図２０Ｇ及び図２０Ｈは、野生型、ＦＡＭ１９Ａ１ ＋／－及びＦＡＭ１９Ａ１ －／－成体マウスの過剰行動を比較して提供している。図２０Ａ及び図２０Ｂは、それぞれ高架式十字迷路（ＥＰＭ）試験で測定した開放アーム（ａｒｍ）での総時間及び総移動距離を示している。図２０Ｃ及び図２０Ｄは、それぞれオープンフィールド試験（ｏｐｅｎ ｆｉｅｌｄ ｔｅｓｔ、ＯＦＴ）で測定した中央での総時間及び総移動距離を示している。図２０Ｅは、ＯＦＴアリーナ―（ａｒｅｎａ）での動物移動の簡単な動線追跡を提供している。図２０Ｆは、テールサスペンション試験（ｔａｉｌ ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ ｔｅｓｔ、ＴＳＴ）で測定した不動時間の比率（％）を示している。図２０Ｇ及び図２０Ｈは、それぞれＹ－迷路試験で測定した自発的変化及び総移動距離を示している。データは、平均±平均の標準誤差（ＳＥＭ）として示した。一元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ）及びボンフェローニ（Ｂｏｎｆｅｒｒｏｎｉ）事後試験により、ＷＴ又はＦＡＭ１９Ａ１ ＋／－に対して＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１。
図２１Ａ、図２１Ｂ、図２１Ｃ、図２１Ｄ、図２１Ｅ及び図２１Ｆは、野生型、ＦＡＭ１９Ａ１ ＋／－及びＦＡＭ１９Ａ１ －／－成体マウスの短期及び長期記憶形成を比較して提供している。図２１Ａ、図２１Ｂ及び図２１Ｃは、それぞれ短期記憶新奇物体認識（ＮＯＲ）試験で測定した探索に要された総時間、物体選好度及び識別指数を示している。図２１Ｄ、図２１Ｅ及び図２１Ｆは、それぞれ長期記憶ＮＯＲ試験で測定した探索に要された総時間、物体選好度及び識別指数を示している。図２１Ａ、図２１Ｂ、図２１Ｄ、及び図２１Ｅにおいて、それぞれの動物群に対して、左側の棒は、慣れた物体に対する結果を示し、右側の棒は、新たな物体に対する結果を示している。データは、平均±平均の標準誤差（ＳＥＭ）として示した。一元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ）及びボンフェローニ（Ｂｏｎｆｅｒｒｏｎｉ）事後試験により、ＷＴ又はＦＡＭ１９Ａ１ ＋／－に対して＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１。
図２２Ａ、図２２Ｂ、図２２Ｃ及び図２２Ｄは、野生型、ＦＡＭ１９Ａ１ ＋／－及びＦＡＭ１９Ａ１ －／－成体マウスの恐怖反応を比較して提供している。図２２Ａは、パブロフの恐怖条件付け試験の獲得段階中における恐怖条件付けを示している。矢印は、関連群を示している。図２２Ｂ及び図２２Ｃは、それぞれ獲得段階後、２４時間に行った状況及び聴覚記憶試験の結果を示している。図２２Ｄは、合成したキツネの便臭である２，５－ジヒドロ－２，４，５－トリメチルチアゾリン（ＴＭＴ）を使用した先天的恐怖試験の結果を示している。矢印は関連群を示している。データは、平均±平均の標準誤差（ＳＥＭ）として示した。二元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ）及びボンフェローニ（Ｂｏｎｆｅｒｒｏｎｉ）事後試験又はＳｔｕｄｅｎｔ’ｓ ｔ試験により、ＷＴに対して＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１。
図２３Ａ及び図２３Ｂは、ＦＡＭ１９Ａ１ ＬａｃＺ ＫＩ及びＦＡＭ１９Ａ５ ＬａｃＺ ＫＩマウスを使用し、脳でのＦＡＭ１９Ａ１及びＦＡＭ１９Ａ５発現（β－ガラクトシダーゼ発現によって立証）を比較して提供している。図２３Ａは、ＦＡＭ１９Ａ５ ＬａｃＺ ＫＩマウス遺伝子の概略的な構成を示している。ＬａｃＺ遺伝子配列は、相同組換えによって挿入される。得られた産物は、β－ガラクトシダーゼとＦＡＭ１９Ａ５の融合形態である。図２３Ｂは、脳でのＦＡＭ１９Ａ１（左側）及びＦＡＭ１９Ａ５（右側）発現を示している。図示した領域は、Ｌ２－３（皮質層２及び３）；Ｌ５ｂ（皮質層５ｂ）；ＣＡ１（海馬のＣＡ１の領域）；ＣＡ２（海馬のＣＡ２の領域）；ＣＡ３（海馬のＣＡ３の領域）；ＤＧ（歯状回）；ＣＣ（脳梁）；ＣＴＸ（皮質）；ＴＨ（視床）；ｆｉ（海馬采）を含んでいる。スケールバー＝５００μｍ。
図２４は、（ｉ）対照群ＩｇＧ抗体（左側パネル）、（ｉｉ）抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体（中間パネル）又は（ｉｉｉ）ＦＡＭ１９Ａ１タンパク質（右側パネル）で処理したマウス成体における神経幹細胞内の分化された神経細胞の神経突起成長を比較して提供している。
図２５は、ヒトＩｇＧ１（「ｈＩｇＧ」；空の四角形）又は抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体（「ＦＡＭ１９Ａ１ Ａｂ」；充填された四角形）で処理した緑内障誘導動物の眼圧比較を示している。健康な正常動物（すなわち、緑内障を誘導していない動物）（「未投与（ｎａｉｖｅ）」）を対照群として使用した。眼圧は、緑内障誘導後の０日、１４日及び２８日に測定した。データは、平均±Ｓ．Ｄとして示した。「＊＊＊」は、未投与対照群に比べて統計的に有意な差（ｐ＜０．００１）を示す。
図２６は、ヒトＩｇＧ１（「ｈＩｇＧ」）又は抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体（「ＦＡＭ１９Ａ１Ａｂ」）で処理した緑内障誘導動物での律動様小波等級を比較して示している。健康な正常動物（すなわち、緑内障を誘導していない動物）（「未投与」）を対照群として使用した。データは平均±Ｓ．Ｄとして示した。「＊＊＊」は、未投与対照群に比べて統計的に有意な差（ｐ＜０．００１）を示す。「＃＃＃」は、ｈＩｇＧ群に比べて統計的に有意な差（ｐ＜０．００１）を示す。
図２７Ａ及び図２７Ｂは、ヒトＩｇＧ１（「ｈＩｇＧ」）又は抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体（「ＦＡＭ１９Ａ１ Ａｂ」）で処理した緑内障誘導動物の網膜神経節細胞層で観察した網膜神経節細胞（「ＲＧＣ」）の数を比較して示している。健康な正常動物（すなわち、緑内障を誘導していない動物）（「未投与」）を対照群として使用した。図２７Ａは、ＲＧＣ細胞の数を絶対値として示している。データは、平均±Ｓ．Ｄとして示した。「＊＊＊」は、未投与対照群に比べて統計的に有意な差（ｐ＜０．００１）を示す。「＃＃」は、ｈＩｇＧ群に比べて統計的に有意な差（ｐ＜０．０１）を示す。図２７Ｂは、前記群のそれぞれにおける代表的な動物の網膜神経節細胞層の蛍光映像（倍率１００×）を示している。
図２８は、食塩水（空の四角形）又は抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体（充填された四角形）で処理した慢性狭窄損傷（ＣＣＩ）誘導ラットでの足引っ込め閾値の比較を示している。正常な健康な動物（すなわち、ＣＣＩを誘導していない動物）（「未投与」）を対照群として使用した。足引っ込め閾値は、ＣＣＩ誘導後の７日、１４日及び２１日に測定した。データは平均±Ｓ．Ｄとして示した。「＃」は、食塩水群に比べて統計的に有意な差（ｐ＜０．０５）を示す。
図２９は、食塩水（空の四角形）又は抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体（充填された四角形）で処理した慢性狭窄損傷（ＣＣＩ）誘導ラットでのロータロッド（ｒｏｔａｒｏｄ）遅延時間（実施例に記載されているように、動物がロータロッド－トレッドミルから落ちるのにかかる時間）を比較して示している。正常な健康な動物（すなわち、ＣＣＩを誘導していない動物）（「未投与」）を対照群として使用した。遅延時間は、ＣＣＩ誘導後の７日、１４日及び２１日に測定した。データは、平均±Ｓ．Ｄとして示した。「＃」は、食塩水群に比べて統計的に有意な差（ｐ＜０．０５）を示す。
図３０Ａ、図３０Ｂ、図３０Ｃ、図３０Ｄ、図３０Ｅ及び図３０Ｆは、一次マウス海馬神経細胞での神経突起成長及び樹状分枝に対する抗－ＦＡＭ１９Ａ１の処理効果を示している。図３０Ａ及び図３０Ｂは、それぞれビヒクル（ｖｅｈｉｃｌｅ）－対照群又は抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体で処理したマウス海馬神経細胞での免疫組織化学を通じた神経突起成長を示している。図３０Ｃは、神経突起の平均総長さ（μｍ）を示している。図３０Ｄは、一次神経突起の数を示している。図３０Ｅは、分岐地点の数を示す。図３０Ｆは、二次神経突起の数を提供している。図３０Ｃ～図３０Ｆにおいて、データは、平均±Ｓ．Ｄとして示した。「＊」は、統計的に有意な差を示す（ｐ＜０．０５）。図３０Ａ及び図３０Ｂにおいて、スケールバーは２０μｍである。
図３１は、ＣＣＩ誘導機械的異痛症における抗－ＦＡＭ１９Ａ１単クローン性抗体（Ａ１－１Ｃ１）の鎮痛効果を示している。前記鎮痛効果は、それぞれの後足に１０秒間隔で１０回フィラメント適用から足引っ込め反応の数として示す（「引っ込め反応頻度（％）」）。ヒトＩｇＧ対照群抗体（充填された円）で処理したＣＣＩ誘導動物及び正常な健康な動物（すなわち、ＣＣＩを誘導していない動物）（未投与、空の円）を対照群として使用した。足引っ込め反応は、ＣＣＩ誘導後の６日、１０日、１３日、１７日及び２０日に測定した。データは、平均±Ｓ．Ｄとして示した。「＊」は、統計的に有意な差を示す（ｐ＜０．０１）。矢印は、抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体の投与時点（すなわち、ＣＣＩ誘導後の７日及び１４日）を示す。
図３２は、ＣＣＩ誘導熱痛覚過敏での抗－ＦＡＭ１９Ａ１単クローン性抗体（Ａ１－１Ｃ１）の鎮痛効果を示している。前記鎮痛効果は、引っ込め遅延時間（動物が熱刺激に反応し、足を引っ込めるのにかかった時間）として示す。ヒトＩｇＧ対照群抗体（充填された円）で処理したＣＣＩ誘導動物及び正常な健康な動物（すなわち、ＣＣＩを誘導していない動物）（未投与、空の円）を対照群として使用した。足引っ込め反応は、ＣＣＩ誘導後の６日、１０日、１３日、１７日及び２０日に測定した。データは、平均±Ｓ．Ｄとして示した。矢印は、抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体の投与時点（すなわち、ＣＣＩ誘導後の７日及び１４日）を示す。
〔発明を実施するための形態〕
本明細書は、配列類似性１９を有するファミリー、メンバーＡ１（ＦＡＭ１９Ａ１）に特異的に結合し、本明細書に開示された特性のうち一つ以上を示す拮抗剤（例えば、単クローン性抗体）を開示する。
本明細書に提供された開示内容の理解を容易にするために、多数の用語及び文句を定義する。追加の各定義は、詳細な説明全般にわたって記載されている。
Ｉ．定義
本開示内容全般にわたって、用語「一」又は「ある」の実体は、その実体の一つ以上を意味するものであって；例えば、「一抗体」は、一つ以上の抗体を示すものと理解される。このように、用語「一」（又は「ある」）、「一つ以上の」及び「少なくとも一つの」は、本明細書で混用され得る。
また、本明細書で使用する「及び／又は」は、２個の特定の特徴又は構成要素のそれぞれを、残りの他の特徴又は構成要素と共に又は単独で具体的な開示として見なすべきである。したがって、本明細書において、「Ａ及び／又はＢ」などの文句で使用される用語「及び／又は」は、「Ａ及びＢ」、「Ａ又はＢ」、「Ａ」（単独）及び「Ｂ」（単独）を含むように意図される。同様に、「Ａ、Ｂ及び／又はＣ」などの文句で使用される用語「及び／又は」は、次のような様態のそれぞれを含むように意図される：Ａ、Ｂ及びＣ；Ａ、Ｂ又はＣ；Ａ又はＣ；Ａ又はＢ；Ｂ又はＣ；Ａ及びＣ；Ａ及びＢ；Ｂ及びＣ；Ａ（単独）；Ｂ（単独）；及びＣ（単独）。
本明細書において、各様態を用語「含む」と記載すると、「からなる」及び／又は「本質的にからなる」の観点で記載された他の類似する様態も提供されるものと理解される。
異なる形で定義しない限り、本明細書で使用する全ての技術及び科学用語は、本開示内容と関連する技術分野の通常の技術者によって通常的に理解されるものと同一の意味を有する。例えば、Ｃｏｎｃｉｓｅ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｂｉｏｍｅｄｉｃｉｎｅ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｕｏ，Ｐｅｉ－Ｓｈｏｗ，２ｎｄ ｅｄ．，２００２，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ；Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，３ｒｄ ｅｄ．，１９９９，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ；及びＯｘｆｏｒｄ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ Ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｒｅｖｉｓｅｄ，２０００，Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓは、当業者に本開示内容で使用されている用語のうち多数を提供する。
単位、接頭辞及び記号は、これらのＳＩ（Ｓｙｓｔｅｍｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ｄｅ Ｕｎｉｔｅｓ）で認めた形態で表示される。数値範囲は、その範囲を限定する数字を含む。異なる形で表示されない限り、アミノ酸配列は、アミノでカルボキシ方向に左側から右側に書かれる。本明細書で提供された表題は、開示内容の多様な様態の制限ではなく、これらは、全体的に明細書を参照したものであり得る。したがって、真下に定義された各用語は、明細書を全体的に参照してより完全に定義される。
本明細書において、用語「約」は、ほとんど、概して、ほど又はその領域内を意味するものとして使用される。用語「約」が数値範囲と共に使用される場合、記載されている数値の上と下に境界を拡張し、該当の範囲を変更する。一般に、用語「約」は、明示された値の上と下の数値を、例えば、上又は下（さらに高いか、さらに低い）１０％の変化量だけ変更することができる。
用語「配列類似性１９を有するファミリー、メンバーＡ１」又は「ＦＡＭ１９Ａ１」は、５個の相同性が高いタンパク質のＴＡＦＡファミリー（ＦＡＭ１９ファミリーとしても知られている）に属したタンパク質を称する。これらのタンパク質は、所定位置に保存されたシステイン残基を含有し、ＣＣ－ケモカインファミリーに属する一種であるＭＩＰ－１ａｌｐｈａと遠くても関連している。ＦＡＭ１９Ａ１は、主に中枢神経系（脳及び脊髓）内で発現される。実施例を参照すればよい。例えば、ＦＡＭ１９Ａ１は、ＴＡＦＡ１又はケモカイン－類似タンパク質ＴＡＦＡ－１としても知られている。
ヒトにおいて、ＦＡＭ１９Ａ１をコーディングする遺伝子は、染色体３に位置している。ヒトＦＡＭ１９Ａ１（ＵｎｉＰｒｏｔ：Ｑ７Ｚ５Ａ９）の２個の可能性のあるイソ型（ｉｓｏｆｏｒｍ）がある：１３３個のアミノ酸からなるイソ型１（ＵｎｉＰｒｏｔ：Ｑ７Ｚ５Ａ９－１）及び５２個のアミノ酸からなっており、ＥＳＴデータを基盤にして予測されるイソ型２（ＵｎｉＰｒｏｔ：Ａ０Ａ０８７Ｘ２Ｊ７）。前記２個の公知となっているヒトＦＡＭ１９Ａ１イソ型のアミノ酸配列は、下記の表１に提供されている。
Figure 2023516992000002
用語「ＦＡＭ１９Ａ１」は、細胞によって自然に発現されるＦＡＭ１９Ａ１の任意の変異体又はイソ型を含む。したがって、本明細書に記載された拮抗剤（例えば、抗体）は、同一種内の互いに異なるイソ型（例えば、ヒトＦＡＭ１９Ａ１の互いに異なるイソ型）と交差反応したり、ヒト以外の種ＦＡＭ１９Ａ１（例えば、マウスＦＡＭ１９Ａ１）と交差反応することができる。これと異なり、前記抗体は、ヒトＦＡＭ１９Ａ１に特異的であってもよく、他の種とは何ら交差反応も示さなくてもよい。ＦＡＭ１９Ａ１又はその任意の変異体及びイソ型は、これらを自然に発現する細胞又は組織からの分離されたり、組換えによって生産され得る。ヒトＦＡＭ１９Ａ１をコーディングするポリヌクレオチドは、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＭ＿２１３６０９．３及び次のような配列を有する：
Figure 2023516992000003
用語「ＦＡＭ１９Ａ１タンパク質に対する拮抗剤」は、ＦＡＭ１９Ａ１タンパク質の発現を抑制する全ての拮抗剤を称する。このような拮抗剤は、ペプチド、核酸又は化合物であり得る。一部の様態において、ＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤は、ＦＡＭ１９Ａ１を標的とするアンチセンス－オリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｄｓＲＮＡ、アプタマー、ＰＮＡ（ペプチド核酸）又はこれを含むベクターであり得る。一部の様態において、ＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤は、ＦＡＭ１９Ａ１タンパク質に特異的に結合する抗体又はその抗原結合断片を含む。
用語「ＦＡＭ１９Ａ１タンパク質に対する作用剤」又は「ＦＡＭ１９Ａ１作用剤」は、ＦＡＭ１９Ａ１タンパク質の発現を促進し／又はＦＡＭ１９Ａ１タンパク質と同一の生物学的機能を共有し、ＦＡＭ１９Ａ１活性を増加させる全ての作用剤を称する。一部の様態において、ＦＡＭ１９Ａ１作用剤はＦＡＭ１９Ａ１タンパク質である。
用語「抗体」及び「各抗体」は、当業界の用語であり、本明細書で互換的に使用可能であり、抗原に特異的に結合する抗原結合部位を有する分子を称する。本明細書で使用する前記用語は、全体の抗体及びこれらの任意の抗原結合断片（すなわち、「抗原結合断片」）又はその単一鎖を含む。一部の様態において、「抗体」は、二硫化結合によって互いに連結された少なくとも２個の重（Ｈ）鎖及び２個の軽（Ｌ）鎖を含む糖タンパク質又はその抗原結合断片を称する。一部の様態において、「抗体」は、単一可変ドメイン、例えば、ＶＨＨドメインを含む単一鎖抗体を称する。それぞれの重鎖は、重鎖可変領域（本明細書では、ＶＨと略称する）及び重鎖定常領域で構成されている。特定の自然発生抗体において、前記重鎖定常領域は、３個のドメインＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３で構成されている。特定の自然発生抗体において、それぞれの軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書では、ＶＬと略称する）及び軽鎖定常領域で構成されている。前記軽鎖定常領域は、一つのドメインＣＬで構成されている。
前記ＶＨ及びＶＬ領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と称するより保存された各領域が散在された相補性決定領域（ＣＤＲ）と称する超可変性領域にさらに細分化され得る。ＶＨ及びＶＬのそれぞれは、アミノ末端からカルボキシ末端まで次のような順に配置されている３個のＣＤＲ及び４個のＦＲからなっている：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３及びＦＲ４。前記重鎖及び軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含有する。前記抗体の定常領域は、免疫系の多様な細胞（例えば、エフェクター細胞）及び古典的補体系の第１成分（Ｃｌｑ）を始めとした宿主組織又は因子に免疫グロブリンが結合することを媒介し得る。
用語「Ｋａｂａｔ番号表記（Ｋａｂａｔ ｎｕｍｂｅｒｉｎｇ）」及び類似する各用語は、当業界で認められており、抗体又はその抗原結合断片の重鎖及び軽鎖可変領域でアミノ酸残基の番号を表記する体系を言う。特定の様態において、抗体のＣＤＲは、Ｋａｂａｔ番号表記体系によって決定され得る（例えば、Ｋａｂａｔ ＥＡ ＆ Ｗｕ ＴＴ（１９７１）Ａｎｎ ＮＹ Ａｃａｄ Ｓｃｉ １９０：３８２－３９１ ａｎｄ Ｋａｂａｔ ＥＡ ｅｔ ａｌ．，（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ Ｎｏ．９１－３２４２参照）。Ｋａｂａｔ番号表記体系を用いると、抗体重鎖分子内の各ＣＤＲは、典型的にアミノ酸位置３１番乃至３５番（ＣＤＲ１）（場合によって３５番以降に、一つ又は２個の追加アミノ酸を含むことができる（Ｋａｂａｔ番号表記方式では、３５Ａ及び３５Ｂと称される。））、アミノ酸位置５０番乃至６５番（ＣＤＲ２）及びアミノ酸位置９５番乃至１０２番（ＣＤＲ３）に存在する。Ｋａｂａｔ番号表記体系を用いると、抗体軽鎖分子内の各ＣＤＲは、典型的にアミノ酸位置２４番乃至３４番（ＣＤＲ１）、アミノ酸位置５０番乃至５６番（ＣＤＲ２）及びアミノ酸位置８９番乃至９７番（ＣＤＲ３）に存在する。一部の様態において、本明細書に記載された抗体の各ＣＤＲをＫａｂａｔ番号表記方式によって決定した。
文句「Ｋａｂａｔのようなアミノ酸位置番号表記」、「Ｋａｂａｔ位置」及びこれらの文法的変形は、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１）で抗体コンピレーションの重鎖可変ドメイン又は軽鎖可変ドメインに対して使用される番号表記体系を称する。この番号表記体系を用いると、実際の線形アミノ酸配列は、可変ドメインのＦＷ又はＣＤＲの短縮又はこれに挿入するものに該当するさらに少ないか追加のアミノ酸を含有することができる。例えば、重鎖可変ドメインは、Ｈ２の残基５２番以降の単一アミノ酸挿入（Ｋａｂａｔによると、残基５２ａ番）、及び重鎖ＦＷ残基８２番以降に挿入された残基（例えば、Ｋａｂａｔによると、残基８２ａ番、８２ｂ番及び８２ｃ番など）を含むことができる。表３を参照すればよい。
Figure 2023516992000004
所定の抗体に対する残基のＫａｂａｔ番号表記は、「標準」Ｋａｂａｔ番号が表記された配列と前記抗体の配列の相同性の領域で整列によって決定され得る。その代わりに、Ｃｈｏｔｈｉａは、構造ループの位置を称する（Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７（１９８７））。Ｋａｂａｔ番号表記慣例を用いて番号を表記したとき、Ｃｈｏｔｈｉａ ＣＤＲ－Ｈ１ループの末端は、ループの長さによってＨ３２とＨ３４との間で変わる（これは、Ｋａｂａｔ番号表記方式がＨ３５ＡとＨ３５Ｂで挿入（ｉｎｓｅｒｔｉｏｎｓ）を置くためである；３５Ａや３５Ｂがない場合、ループは３２で終了する；３５Ａのみがある場合、ループは３３で終了する；３５Ａ及び３５Ｂが全てある場合、ループは３４で終了する）。ＡｂＭ超可変領域は、Ｋａｂａｔ ＣＤＲとＣｈｏｔｈｉａ構造ループとの間の折衷を代弁するものであって、Ｏｘｆｏｒｄ ＭｏｌｅｃｕｌａｒのＡｂＭ抗体モデリングソフトウェアによって使用される。
ＩＭＧＴ（ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ）も、ＣＤＲを含む免疫グロブリン可変領域に対する番号表記体系を提供する。例えば、本明細書に参考として含まれるＬｅｆｒａｎｃ，Ｍ．Ｐ．ｅｔ ａｌ．，Ｄｅｖ．Ｃｏｍｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２７：５５－７７（２００３）を参照すればよい。ＩＭＧＴ番号表記体系は、５，０００個を超える配列の整列、構造データ及び超可変ループの特性分析に基盤したものであって、全ての種に対して可変及びＣＤＲ領域の比較を容易にする。ＩＭＧＴ番号表記体系によると、ＶＨ－ＣＤＲ１は２６番乃至３５番の位置にあり、ＶＨ－ＣＤＲ２は５１番乃至５７番の位置にあり、ＶＨ－ＣＤＲ３は９３番乃至１０２番の位置にあり、ＶＬ－ＣＤＲ１は２７番乃至３２番の位置にあり、ＶＬ－ＣＤＲ２は５０番乃至５２番の位置にあり、ＶＬ－ＣＤＲ３は８９番乃至９７番の位置にある。
本開示内容で論議される全ての重鎖定常領域アミノ酸位置に対して、番号表記は、配列化された最初のヒトＩｇＧ１である骨髄腫タンパク質ＥＵのアミノ酸配列を記載したＥｄｅｌｍａｎ ｅｔ ａｌ．，１９６９，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ６３（１）：７８－８５）に最初に記載されたＥＵインデックスに従う。また、Ｅｄｅｌｍａｎ等のＥＵインデックスは、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，１９９１，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．，Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａに提示されている。これによって、文句「Ｋａｂａｔに提示されたＥＵインデックス」又は「ＫａｂａｔのＥＵインデックス」及び「Ｋａｂａｔに提示されたＥＵインデックスによる位置…」及びこれらの文法的変形は、Ｋａｂａｔ １９９１に提示されたＥｄｅｌｍａｎ等のヒトＩｇＧ１ ＥＵ抗体を基盤とする残基番号表記体系を称する。
可変ドメイン（重鎖及び軽鎖の全て）及び軽鎖定常領域アミノ酸配列に使用された番号表記体系は、Ｋａｂａｔ １９９１に提示されたものである。
抗体は、免疫グロブリン分子の任意の類型（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ又はＩｇＹ）、任意の類型（例えば、ＩｇＤ、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１又はＩｇＡ２）、又は任意の亜型（例えば、ヒトでのＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４；及びマウスでのＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ、ＩｇＧ２ｂ及びＩｇＧ３）を有することができる。兔疫グロブリン、例えば、ＩｇＧ１は、多くても、いくつかのアミノ酸で互いに異なる多くの同種異因子型（ａｌｌｏｔｙｐｅ）で存在する。本明細書に開示された抗体は、通常的に知られているイソ型、類型、亜型及び同種異因子型のうち任意のものからなり得る。特定の様態において、本明細書に開示された抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４亜型、又はこれらの任意の混成型である。特定の様態において、前記抗体は、ヒトＩｇＧ１亜型、ヒトＩｇＧ２又はヒトＩｇＧ４亜型を有する。
「抗体」は、例として、自然発生及び非－自然発生抗体；単クローン性及び多クローン性抗体；キメラ及びヒト化抗体；ヒト及び非－ヒト抗体、全合成抗体；単一鎖抗体；単一特異的抗体；多重特異的抗体（２重特異的抗体を含む）；２個の重鎖及び２個の軽鎖分子を含むテトラマー抗体；抗体軽鎖モノマー；抗体重鎖モノマー；抗体軽鎖ダイマー；抗体重鎖ダイマー；抗体軽鎖－抗体重鎖ペア；細胞内抗体（ｉｎｔｒａｂｏｄｙ）；ヘテロコンジュゲート（ｈｅｔｅｒｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ）抗体；１価抗体；ラクダ化（ｃａｍｅｌｉｚｅｄ）抗体；アフィボディー（ａｆｆｙｂｏｄｙ）；抗－イディオタイプ（抗－Ｉｄ）抗体（例えば、抗－抗－Ｉｄ抗体を含む）、及び完全に抗原結合できる単一モノマー可変抗体ドメイン（例えば、ＶＨドメイン又はＶＬドメイン）からなる結合分子を含む単一－ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）を含む（Ｈａｒｍｅｎ Ｍ．Ｍ．ａｎｄ Ｈａｒｄ Ｈ．Ｊ．Ａｐｐｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．７７（１）：１３－２２（２００７））。
抗体の「抗原結合部分」及び「抗原結合断片」という用語は、抗原（例えば、ヒトＦＡＭ１９Ａ１）に特異的に結合する能力を保有した抗体の一つ以上の断片を称する。このような「断片」は、例えば、約８個乃至約１５００個のアミノ酸長さであり、適切には約８個乃至約７４５個のアミノ酸長さ、適切には約８個乃至約３００個、例えば、約８個乃至約２００個のアミノ酸、又は約１０個乃至約５０個又は１００個のアミノ酸長さである。抗体の抗原－結合機能は、全長抗体の断片によって行われ得ることが明らかになった。抗体、例えば、本明細書に記載された抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体の「抗原結合部分」という用語に含まれる結合断片の各例は、（ｉ）ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ及びＣＨ１ドメインからなる１価断片であるＦａｂ断片；（ｉｉ）ヒンジ領域で二硫化連結部によって連結された２個のＦａｂ断片を含む２価断片であるＦ（ａｂ’）２断片；（ｉｉｉ）ＶＨ及びＣＨ１ドメインからなるＦｄ断片；（ｉｖ）抗体の単一アームのＶＬ及びＶＨドメイン及び二硫化連結されたＦｖｓ（ｓｄＦｖ）からなるＦｖ断片；（ｖ）ＶＨドメインからなるｄＡｂ断片（Ｗａｒｄ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３４１：５４４－５４６（１９８９））；及び（ｖｉ）分離された相補性決定領域（ＣＤＲ）、又は（ｖｉｉ）場合によって合成リンカーによって接合され得る２個以上の分離されたＣＤＲの組み合わせを含む。また、Ｆｖ断片の２個のドメインであるＶＬとＶＨは、別個の遺伝子によってコーディングされるが、これらは、組換え方法を用いてＶＬとＶＨ領域が対をなして１価分子を形成する単一タンパク質鎖（単一鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として知られている。）として作ることができる合成リンカーによって接合され得る；例えば、Ｂｉｒｄ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２：４２３－４２６（１９８８）；及びＨｕｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５：５８７９－５８８３（１９８８）を参照すればよい。また、このような単一鎖抗体は、抗体の「抗原結合部分」という用語内に含まれる。これらの抗体断片は、当業者に公知となっている従来技術を用いて得られ、前記各断片は、無傷抗体と同一の方式で有用性に対してスクリーニングされる。抗原結合部分は、組換えＤＮＡ技術によって又は無傷免疫グロブリンの酵素的又は化学的切断によって生成され得る。
本明細書で使用する用語「可変領域」と「可変ドメイン」は、互換して使用され、当業界では普遍的である。前記可変領域は、典型的に抗体の一部、一般に軽鎖又は重鎖の一部を称するものであって、典型的に、前記成熟した重鎖内にはアミノ－末端約１１０個乃至１２０個のアミノ酸があり、前記成熟した軽鎖内には約９０個乃至１１５個のアミノ酸があり、これらは、各抗体の間で配列が広範囲に異なり、特定抗体の特定抗原に対する結合と特異性で使用される。前記配列可変性は、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる領域に集中される一方で、前記可変ドメインでさらに高度に保存された領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる。
特定のメカニズム又は理論に限定されることを望むのではないが、前記軽鎖及び重鎖のＣＤＲは、抗原と抗体の相互作用及び特異性を主に担当するものと確信される。特定の様態において、前記可変領域はヒト可変領域である。特定の様態において、前記可変領域は、齧歯類又はネズミ科のＣＤＲ、及びヒトフレームワーク領域（ＦＲ）を含む。特定の様態において、前記可変領域は、霊長類（例えば、非－ヒト霊長類）可変領域である。特定の様態において、前記可変領域は、齧歯類又はネズミ科のＣＤＲ、及び霊長類（例えば、非－ヒト霊長類）フレームワーク領域（ＦＲ）を含む。
本明細書で使用する用語「重鎖（ＨＣ）」は、抗体と関連して使用したとき、定常ドメインのアミノ酸配列に基づいてＩｇＧの亜型、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４を含み、それぞれの抗体のＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ及びＩｇＭ類型を発生させる任意の別個のタイプ、例えば、アルファ（α）、デルタ（δ）、イプシロン（ε）、ガンマ（γ）及びミュー（μ）を称することができる。
本明細書で使用する用語「軽鎖（ＬＣ）」は、抗体と関連して使用したとき、定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて任意の別個のタイプ、例えば、カッパ（κ）又はラムダ（λ）を称することができる。軽鎖アミノ酸配列は当業界によく公知となっている。特定の様態において、前記軽鎖はヒト軽鎖である。
用語「ＶＬ」及び「ＶＬドメイン」は、抗体の軽鎖可変領域を称するために互換的に使用される。
用語「ＶＨ」及び「ＶＨドメイン」は、抗体の重鎖可変領域を称するために互換的に使用される。
本明細書で使用する用語「定常領域」又は「定常ドメイン」は互換的であり、当業界で通常の意味を有する。前記定常ドメインは、抗体部分、例えば、抗原に対する抗体の結合に直接関与しないが、Ｆｃ受容体との相互作用などの多様なエフェクター機能を示すことができる軽鎖及び／又は重鎖のカルボキシ末端部分である。免疫グロブリン分子の定常領域は、一般に、免疫グロブリン可変ドメインに比べてさらに保存されたアミノ酸配列を有している。
「Ｆｃ領域」（断片結晶化可能な領域）、「Ｆｃドメイン」又は「Ｆｃ」は、免疫系の多様な細胞（例えば、エフェクター細胞）上に位置したＦｃ受容体又は古典的補体系の第１成分（Ｃ１ｑ）に対する結合を含み、宿主組織又は因子に免疫グロブリンが結合することを媒介する抗体の重鎖のＣ－末端領域を称する。これによって、Ｆｃ領域は、第１定常領域免疫グロブリンドメイン（例えば、ＣＨ１又はＣＬ）を除いた抗体の定常領域を含む。ＩｇＧ、ＩｇＡ及びＩｇＤ抗体イソ型において、Ｆｃ領域は、抗体の２個の重鎖の第２（ＣＨ２）及び第３（ＣＨ３）定常ドメインから由来した２個の同一のタンパク質断片を含み；ＩｇＭ及びＩｇＥ Ｆｃ領域は、それぞれのポリペプチド鎖にある３個の重鎖定常ドメイン（ＣＨドメイン２－４）を含む。ＩｇＧの場合、Ｆｃ領域は、免疫グロブリンドメインＣγ２及びＣγ３、及びＣγ１とＣγ２との間のヒンジを含む。免疫グロブリン重鎖のＦｃ領域の境界は変わり得るが、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、一般にＣ２２６番又はＰ２３０番の位置にあるアミノ酸残基（又は、これらの２個のアミノ酸の間のアミノ酸）から重鎖のカルボキシ末端まで伸長されるものに限定されるが、番号表記は、ＫａｂａｔのようにＥＵインデックスに従う。ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインは、アミノ酸約２３１番からアミノ酸約３４０番に延長されており、ＣＨ３ドメインは、Ｆｃ領域でＣｍドメインのＣ－末端側に位置しているので、すなわち、ＩｇＧのアミノ酸約３４１番からアミノ酸約４４７番に延長されている。本明細書で使用するＦｃ領域は、任意の同種異因子型変異体を含む天然配列Ｆｃ、又は変異体Ｆｃ（例えば、非－自然発生Ｆｃ）であり得る。また、Ｆｃは、この領域が分離状態にあったり、又は「Ｆｃ融合タンパク質」（例えば、抗体又は免疫癒着（ｉｍｍｕｎｏａｄｈｅｓｉｏｎ））とも言う「Ｆｃ領域を含む結合タンパク質」などのＦｃ－含有タンパク質ポリペプチドと関連して意味するものであり得る。
「天然配列Ｆｃ領域」又は「天然配列Ｆｃ」は、自然で発見されたＦｃ領域のアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列を含む。天然配列ヒトＦｃ領域は、天然配列ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域；天然配列ヒトＩｇＧ２ Ｆｃ領域；天然配列ヒトＩｇＧ３ Ｆｃ領域；及び天然配列ヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域のみならず、これらの自然発生変異体を含む。天然配列Ｆｃは、各Ｆｃの多様な同種異因子型を含む（例えば、Ｊｅｆｆｅｒｉｓ ｅｔ ａｌ．，ｍＡｂｓ １：１（２００９）；Ｖｉｄａｒｓｓｏｎ Ｇ．ｅｔ ａｌ．Ｆｒｏｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ．５：５２０（２０１４）参照）。
「Ｆｃ受容体」又は「ＦｃＲ」は、免疫グロブリンのＦｃ領域に結合する受容体である。ＩｇＧ抗体に結合するＦｃＲは、Ｆｃγファミリーの受容体を含み、前記Ｆｃγファミリーには、これらの受容体の対立遺伝子変異体及び他の方式でスプライシングされた形態が含まれる。前記Ｆｃγファミリーは、３個の活性化受容体（マウスのＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩＩ及びＦｃγＲＩＶ；ヒトのＦｃγＲＩＡ、ＦｃγＲＩＩＡ及びＦｃγＲＩＩＩＡ）及び一つの阻害受容体（ＦｃγＲＩＩＢ）からなっている。ヒトＩｇＧ１は、ほとんどのヒトＦｃ受容体と結合し、最も強いＦｃエフェクター機能を引き出す。ヒトＩｇＧ１は、それが結合する活性化Ｆｃ受容体の類型と関連し、ラットのＩｇＧ２ａと同等なものと見なすことができる。その逆に、ヒトＩｇＧ４は、最小のＦｃエフェクター機能を引き出す（Ｖｉｄａｒｓｓｏｎ Ｇ．ｅｔ ａｌ．Ｆｒｏｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ．５：５２０（２０１４年１０月２０日オンライン公開）。
前記定常領域は、一つ以上のエフェクター機能を除去するために、例えば、組換え技術によって操作され得る。「エフェクター機能」は、抗体Ｆｃ領域とＦｃ受容体又はリガンドとの相互作用又はそれから生じる生化学的反応を称する。例示的な「エフェクター機能」は、Ｃ１ｑ結合、補体依存性細胞障害（ＣＤＣ）、Ｆｃ受容体結合、ＡＤＣＣ及び抗体依存性細胞－媒介食作用（ＡＤＣＰ）などのＦｃγＲ－媒介エフェクター機能、及び細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体；ＢＣＲ）の下向き調節を含む。このようなエフェクター機能は、一般にＦｃ領域が結合ドメイン（例えば、抗体可変ドメイン）と組み合わされることを必要とする。したがって、用語「Ｆｃ機能のない定常領域」は、Ｆｃ領域によって媒介された一つ以上のエフェクター機能が減少したり又は存在しない定常領域を含む。
抗体のエフェクター機能は、互いに異なる接近法によって減少又は回避され得る。抗体のエフェクター機能は、Ｆｃ領域に欠けた抗体断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、単一鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、又はモノマーＶＨ又はＶＬドメインからなるｓｄＡｂなど）を使用することによって減少又は回避され得る。これと異なり、Ｆｃ領域の他の価値のある特性（例えば、長い半減期及びヘテロダイマー化）は保有しながら、Ｆｃ領域で特定の残基に連結されている糖を除去し、抗体のエフェクター機能を減少させることによって、いわゆる無糖化（ａｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｅｄ）抗体が生成され得る。無糖化抗体は、例えば、糖が付着している残基を欠失又は変更することによって、糖を酵素的に除去することによって、グリコシル化阻害剤の存在下で培養された細胞で抗体を生産することによって、又はタンパク質をグリコシル化できない細胞（例えば、バクテリア宿主細胞）で抗体を発現することによって生成され得る。例えば、米国特許公開番号２０１２０１００１４０を参照すればよい。他の接近法は、エフェクター機能が減少したＩｇＧ亜型のＦｃ領域を用いるものであって、例えば、ＩｇＧ２及びＩｇＧ４抗体は、ＩｇＧ１及びＩｇＧ３よりさらに低い水準のＦｃエフェクター機能を有することを特徴とする。Ｆｃ部分のＣＨ２ドメインでヒンジ領域に最も近い残基が抗体のエフェクター機能を担当するが、これは、先天免疫系のエフェクター細胞上でＣ１ｑ（補体）及びＩｇＧ－Ｆｃ受容体（ＦｃγＲ）に対して大きく重畳した結合部位を含有しているためである（Ｖｉｄａｒｓｓｏｎ Ｇ．ｅｔ ａｌ．Ｆｒｏｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ．５：５２０（２０１４））。したがって、Ｆｃエフェクター機能が減少したり又は存在しない抗体は、例えば、ＩｇＧ４イソ型のＩｇＧ抗体のＣＨ２ドメイン、及びＩｇＧ１イソ型のＩｇＧ抗体のＣＨ３ドメインを含むキメラＦｃ領域、又はＩｇＧ２のヒンジ領域及びＩｇＧ４のＣＨ２領域を含むキメラＦｃ領域（例えば、Ｌａｕ Ｃ．ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９１：４７６９－４７７７（２０１３）参照）又はＦｃエフェクター機能を変更、例えば、Ｆｃ機能を減少させたり又はなくす突然変異を有するＦｃ領域を生成させることによって製造され得る。突然変異があるこのようなＦｃ領域は、当業界に公知となっている。例えば、米国特許公開番号２０１２０１００１４０及びその内容に引用された米国出願、各ＰＣＴ出願及びＡｎ ｅｔ ａｌ．，ｍＡｂｓ １：６、５７２－５７９（２００９）を参照すればよい。
「ヒンジ」、「ヒンジドメイン」、「ヒンジ領域」又は「抗体ヒンジ領域」は、ＣＨ１ドメインをＣＨ２ドメインと接合させ、ヒンジの上、中及び下部を含む重鎖定常領域のドメインを称する（Ｒｏｕｘ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６１：４０８３（１９９８））。前記ヒンジは、抗体の結合とエフェクター領域との間の可撓性の水準変化を提供し、また、２個の重鎖定常領域の間の分子間二硫化結合のための部位を提供する。本明細書で使用するヒンジは、全てのＩｇＧイソ型に対して、Ｇｌｕ２１６から始めてＧｌｙ２３７で終了する（Ｒｏｕｘ ｅｔ ａｌ.，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １６１：４０８３（１９９８））。野生型ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４ヒンジの配列は当業界に知られている。例えば、Ｋａｂａｔ ＥＡ ｅｔ ａｌ．，（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ Ｎｏ．９１－３２４２；Ｖｉｄａｒｓｓｏｎ Ｇ．ｅｔ ａｌ．，Ｆｒｏｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ．５：５２０（２０１４年１０月２０日オンライン公開）を参照すればよい。
用語「ＣＨ１ドメイン」は、重鎖定常ドメインでヒンジに可変ドメインを連結する重鎖定常領域を称する。本明細書で使用するＣＨ１ドメインは、Ａ１１８から始めてＶ２１５で終了する。用語「ＣＨ１ドメイン」は、野生型ＣＨ１ドメインのみならず、その自然に存在する変異体（例えば、同種異因子型）を含む。ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４（野生型及び同種異因子型を含む）のＣＨ１ドメイン配列は当業界に公知となっている（例えば、上記のＫａｂａｔ ＥＡ ｅｔ ａｌ．，（１９９１）及びＶｉｄａｒｓｓｏｎ Ｇ．ｅｔ ａｌ．，Ｆｒｏｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ．５：５２０（２０１４年１０月２０日オンライン公開参照）。例示的なＣＨ１ドメインは、例えば、米国特許公開２０１２０１００１４０及びその内容に引用された米国特許、公開公報及びＰＣＴ公報に記載されている抗体の生物学的活性、例えば、半減期を変更する突然変異を有するＣＨ１ドメインを含む。
用語「ＣＨ２ドメイン」は、重鎖定常ドメインでＣＨ３ドメインにヒンジを連結する重鎖定常領域を称する。本明細書で使用するＣＨ２ドメインは、Ｐ２３８から始めてＫ３４０で終了する。用語「ＣＨ２ドメイン」は、野生型ＣＨ２ドメインのみならず、その自然に存在する変異体（例えば、同種異因子型）を含む。ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４（野生型及び同種異因子型を含む）のＣＨ２ドメイン配列は当業界に公知となっている（例えば、上記のＫａｂａｔ ＥＡ ｅｔ ａｌ．，（１９９１）及びＶｉｄａｒｓｓｏｎ Ｇ．ｅｔ ａｌ．，Ｆｒｏｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ．５：５２０（２０１４年１０月２０日オンライン公開参照）。例示的なＣＨ２ドメインは、例えば、米国特許公開２０１２０１００１４０及びその内容に引用された米国特許、公開公報及びＰＣＴ公報に記載されている抗体の生物学的活性、例えば、半減期及び／又は減少したＦｃエフェクター機能を変更する突然変異を有するＣＨ２ドメインを含む。
用語「ＣＨ３ドメイン」は、重鎖定常ドメインでＣＨ２ドメインに対してＣ－末端である重鎖定常領域を言う。本明細書で使用するＣＨ３ドメインは、Ｇ３４１から始めてＫ４４７で終了する。用語「ＣＨ３ドメイン」は、野生型ＣＨ３ドメインのみならず、その自然に存在する変異体（例えば、同種異因子型）を含む。ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４（野生型及び同種異因子型を含む）のＣＨ３ドメイン配列は当業界に公知となっている（例えば、上記のＫａｂａｔ ＥＡ ｅｔ ａｌ．，（１９９１）及びＶｉｄａｒｓｓｏｎ Ｇ．ｅｔ ａｌ．，Ｆｒｏｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ．５：５２０（２０１４年１０月２０日オンライン公開参照）。例示的なＣＨ３ドメインは、例えば、米国特許公開２０１２０１００１４０及びその内容に引用された米国特許、公開公報及びＰＣＴ公報に記載されている抗体の生物学的活性、例えば、半減期を変更する突然変異を有するＣＨ３ドメインを含む。
本明細書で使用する「イソ型」は、重鎖定常領域遺伝子によってコーディングされる抗体の類型（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤ、及びＩｇＥ抗体）を称する。
「同種異因子型」は、いくつかのアミノ酸で相違する特定のイソ型グループ内の自然発生変異体を称する（例えば、Ｊｅｆｆｅｒｉｓ ｅｔ ａｌ．，（２００９）ｍＡｂｓ １：１参照）。本明細書に記載されている抗体は、任意の同種異因子型を有することができる。ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４の同種異因子型は当業界に公知となっている。例えば、上記のＫａｂａｔ ＥＡ ｅｔ ａｌ．，（１９９１）；Ｖｉｄａｒｓｓｏｎ Ｇ．ｅｔ ａｌ．，Ｆｒｏｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ．５：５２０（２０１４年１０月２０日オンライン公開）；及びＬｅｆｒａｎｃ ＭＰ，ｍＡｂｓ １：４，１－７（２００９）を参照すればよい。
文句「抗原を認識する抗体」及び「抗原に特異的な抗体」は、用語「抗原に特異的に結合する抗体」と本明細書で互換的に使用される。
本明細書で使用する「分離された抗体」は、互いに異なる抗原特異性を有する他の抗体が実質的にない抗体を意味する（例えば、ＦＡＭ１９Ａ１に特異的に結合する分離された抗体は、ＦＡＭ１９Ａ１以外の抗原に特異的に結合する抗体が実質的にないものである）。しかし、ＦＡＭ１９Ａ１のエピトープに特異的に結合する分離された抗体は、互いに異なる種の他のＦＡＭ１９Ａ１タンパク質に交差反応性を有することができる。
「結合親和性」は、一般に、分子（例えば、抗体）の単一結合部位とその結合パートナー（例えば、抗原）との間の相互作用の総和の強度を意味する。異なる形で提示しない限り、本明細書で使用する「結合親和性」は、結合ペアのメンバー（例えば、抗体及び抗原）の間の１：１相互作用を反映した固有結合親和性を意味する。パートナーＹに対する分子Ｘの親和性は、一般に解離定数（ＫＤ）によって表現され得る。親和性は、平衡解離定数（ＫＤ）及び平衡結合定数（ＫＡ）を含むが、これに限定されない当業界に公知となっている多数の方法で測定及び／又は表示され得る。前記ＫＤは、ｋｏｆｆ／ｋｏｎの分け前から計算され、モル濃度（Ｍ）として表示され、ＫＡは、ｋｏｎ／ｋｏｆｆの分け前から計算される。ｋｏｎは、例えば、抗原に対する抗体の結合速度定数を意味し、ｋｏｆｆは、例えば、抗原に対する抗体の解離を意味する。ｋｏｎ及びｋｏｆｆは、免疫分析（例えば、酵素結合免疫吸着分析（ＥＬＩＳＡ））、ＢＩＡＣＯＲＥＴＭ又は結合平衡除外法（ＫＩＮＥＸＡ（登録商標））のように当業者に公知となっている技術によって決定され得る。
本明細書で使用する用語「特異的に結合」、「特異的に認識」、「特異的結合」、「選択的結合」及び「選択的に結合」は、抗体と関連して類似する用語であって、抗原（例えば、エピトープ又は免疫複合体）に結合する分子（例えば、抗体）を称するものであり、このような結合は当業者によって理解されるものである。例えば、抗原に特異的に結合する分子は、例えば、免疫分析、ＢＩＡＣＯＲＥＴＭ、ＫＩＮＥＸＡ（登録商標）３０００機器（Ｓａｐｉｄｙｎｅ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｂｏｉｓｅ，ＩＤ）又は当業界に公知となっている他の分析法によって決定したとき、一般に、さらに低い親和度を有する他のペプチド又はポリペプチドに結合することができる。一部の様態において、抗原に特異的に結合する分子は、この分子が他の抗原に結合するとき、ＫＡより少なくとも２ｌｏｇｓ、２．５ｌｏｇｓ、３ｌｏｇｓ、４ｌｏｇｓ以上さらに大きいＫＡで前記抗原に結合する。
抗体は、典型的に１０－５Ｍ乃至１０－１１Ｍ以下の解離定数（ＫＤ）によって反映される高い親和度でこれらの同族抗原（ｃｏｇｎａｔｅ ａｎｔｉｇｅｎ）に特異的に結合する。約１０－４Ｍを超える任意のＫＤは、一般に非特異的結合を意味するものとして見なされる。本明細書で使用する抗原に「特異的に結合する」抗体は、高い親和度で抗原及び実質的に同一の抗原に結合する抗体を称するものであり、これは、例えば、前記所定の抗原を使用するＢＩＡＣＯＲＥＴＭ２０００機器で免疫分析（例えば、ＥＬＩＳＡ）又は表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）技術によって決定したとき、１０－７Ｍ以下、好ましくは１０－８Ｍ以下、遥かに好ましくは１０－９Ｍ以下、最も好ましくは１０－８Ｍ乃至１０－１０Ｍ以下のＫＤを有することを意味するが、この抗体は、関連のない抗原には高い親和度で結合しない。
本明細書で使用する「抗原」は、タンパク質、ペプチド又はハプテン（ｈａｐｔｅｎ）などの任意の天然又は合成免疫原性物質を称する。抗原は、ＦＡＭ１９Ａ１又はその断片であり得る。
本明細書で使用する「エピトープ」は、当業界の用語であり、抗体が特異的に結合できる抗原の局所領域を称する。エピトープは、例えば、ポリペプチドの隣接アミノ酸（線形又は隣接エピトープ）であってもよく、又は、エピトープは、例えば、ポリペプチド又は各ポリペプチドの２個以上の隣接していない各領域が合されたもの（立体形態、非線形、不連続又は非－隣接エピトープ）であってもよい。隣接アミノ酸から形成されたエピトープは、常にそうではないが、典型的に変性（ｄｅｎａｔｕｒｉｎｇ）溶媒に露出したときに維持される一方で、３次フォールディングによって形成されたエピトープは、典型的に変性溶媒で処理したときに喪失する。エピトープは、典型的に、特有の空間的立体形態内の少なくとも１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個又は２０個のアミノ酸を含む。所定の抗体によってどのエピトープが結合されるのかを決定するための方法（すなわち、エピトープマッピング）は、当業界によく公知となっており、例えば、（例えば、ＦＡＭ１９Ａ５の）重畳又は隣接ペプチドを所定の抗体（例えば、抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体）との反応性に対して試験する免疫ブロッティング及び免疫沈澱分析を含む。エピトープの空間的立体形態を決定する方法は、当業界の技術及び本明細書に記載された技術、例えば、ｘ線結晶学、２次元核磁気共鳴及びＨＤＸ－ＭＳを含む（例えば、Ｅｐｉｔｏｐｅ Ｍａｐｐｉｎｇ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．６６，Ｇ．Ｅ．Ｍｏｒｒｉｓ，Ｅｄ．（１９９６）参照）。
特定の様態において、前記抗体が結合するエピトープは、例えば、ＮＭＲ分光法、Ｘ－線回折結晶学研究、ＥＬＩＳＡ分析、質量分光分析と結合した水素／重水素交換（例えば、液体クロマトグラフィー電子噴霧質量分光分析）、アレイ基盤のオリゴ－ペプチドスキャニング分析及び／又は突然変異誘発マッピング（例えば、部位特異的突然変異誘発マッピング）によって決定され得る。Ｘ－線結晶学の場合、結晶化は、当業界に公知となっている方法のうち任意の方法を用いて達成され得る（例えば、Ｇｉｅｇｅ Ｒ ｅｔ ａｌ．，Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ Ｄ Ｂｉｏｌ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ ５０（Ｐｔ ４）：３３９－３５０；ＭｃＰｈｅｒｓｏｎ Ａ Ｅｕｒ Ｊ Ｂｉｏｃｈｅｍ １８９：１－２３（１９９０）；Ｃｈａｙｅｎ ＮＥ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ５：１２６９－１２７４（１９９７）；ＭｃＰｈｅｒｓｏｎ Ａ Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２５１：６３００－６３０３（１９７６）参照）。抗体：抗原結晶は、よく公知となっているＸ－線回折技術を用いて研究可能であり、Ｘ－ＰＬＯＲ（Ｙａｌｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，１９９２，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｓｉｍｕｌａｔｉｏｎｓ，Ｉｎｃ．によって配布；例えば、Ｍｅｔｈ Ｅｎｚｙｍｏｌ（１９８５）ｖｏｌｕｍｅｓ １１４ ＆ １１５，ｅｄｓ Ｗｙｃｋｏｆｆ Ｈ．Ｗ．ｅｔ ａｌ．，；Ｕ．Ｓ．２００４／００１４１９４参考）及びＢＵＳＴＥＲ（Ｂｒｉｃｏｇｎｅ Ｇ．Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ Ｄ Ｂｉｏｌ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ ４９（Ｐｔ１）：３７－６０（１９９３）；Ｂｒｉｃｏｇｎｅ Ｇ．Ｍｅｔｈ Ｅｎｚｙｍｏｌ ２７６Ａ：３６１－４２３（１９９７），ｅｄ Ｃａｒｔｅｒ ＣＷ；Ｒｏｖｅｒｓｉ Ｐ．ｅｔ ａｌ．，Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ Ｄ Ｂｉｏｌ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ ５６（Ｐｔ １０）：１３１６－１３２３（２０００））などのコンピューターソフトウェアを用いて構造分析（ｒｅｆｉｎｅ）され得る。突然変異誘発マッピング研究は、当業者に公知となっている任意の方法を用いて行われ得る。アラニンスキャニング突然変異誘発技術を含む突然変異誘発技術の記載に対しては、例えば、Ｃｈａｍｐｅ Ｍ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２７０（１９９５）：１３８８－１３９４及びＣｕｎｎｉｎｇｈａｍ Ｂ．Ｃ． ＆ Ｗｅｌｌｓ ＪＡ Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４４：１０８１－１０８５（１９８９）を参考にすればよい。
用語「エピトープマッピング」は、抗体－抗原認識に対する分子決定要因の同定過程を称する。
２個以上の抗体と関連して、用語「同一のエピトープに結合」は、所定の方法によって決定するとき、各抗体がアミノ酸残基の同一のセグメントに結合することを意味する。各抗体が、本明細書に記載された抗体と「ＦＡＭ１９Ａ１上の同一のエピトープ」に結合するかどうかを決定するための技術は、エピトープマッピング方法、例えば、エピトープの原子分解能を提供する抗原：抗体複合体の結晶のｘ－線分析及び水素／重水素交換質量分光分析（ＨＤＸ－ＭＳ）を含む。他の方法は、抗原断片又は抗原の突然変異された変異体に対する抗体の結合をモニタリングすることであって、ここで、前記抗原配列内のアミノ酸残基の変形による結合損失は、概してエピトープ成分の表示として見なされる。また、エピトープマッピングのための電算組み合わせ法も用いることができる。これらの方法は、組み合わせファージディスプレイペプチドライブラリから特定の短いペプチドを親和性分離する関心抗体の能力に依存する。同一のＶＨ及びＶＬ又は同一のＣＤＲ１、２及び３配列を有する抗体は、同一のエピトープに結合するものと予想される。
「標的との結合に対して他の抗体と競争」する抗体は、前記他の抗体の標的結合を（部分的に又は完全に）阻害する抗体を称する。２個の抗体が標的との結合に対して互いに競争するかどうか、すなわち、一つの抗体が他の一つの抗体の標的結合を阻害するかどうか及び阻害する程度は、公知となっている競争実験を用いて決定され得る。特定の様態において、いずれか一つの抗体は、他の抗体の標的結合で競争し、この結合を少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％又は１００％まで阻害する。阻害又は競争水準は、抗体が「遮断抗体」（すなわち、標的と先に培養される低温抗体）であるかどうかによって異なり得る。競争分析は、例えば、Ｅ．ｄ．Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｄａｖｉｄ Ｌａｎｅ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂ Ｐｒｏｔｏｃ；２００６；ｄｏｉ：１０．１１０１／ｐｄｂ．ｐｒｏｔ４２７７又はＥ．ｄ．Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｄａｖｉｄ Ｌａｎｅ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ，ＵＳＡ １９９９による「Ｕｓｉｎｇ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ」の第１１章に記載された通りに実施することができる。競争抗体は、同一のエピトープ、重畳エピトープ又は隣接エピトープ（例えば、立体障害に立証される）に結合する。
他の競争結合分析としては、固相直接又は間接放射性免疫分析（ＲＩＡ）、固相直接又は間接酵素免疫分析（ＥＩＡ）、サンドイッチ競争分析（Ｓｔａｈｌｉ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ ９：２４２（１９８３）参照）；固相直接ビオチン－アビジンＥＩＡ（Ｋｉｒｋｌａｎｄ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３７：３６１４（１９８６）参照）；固相直接標識化分析、固相直接標識化サンドイッチ分析（Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ（１９８８）参照）；１－１２５標識を使用する固相直接標識ＲＩＡ（Ｍｏｒｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２５（１）：７（１９８８）参照）；固相直接ビオチン－アビジンＥＩＡ（Ｃｈｅｕｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ １７６：５４６（１９９０）参照）；及び直接標識化ＲＩＡ（Ｍｏｌｄｅｎｈａｕｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃａｎｄ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３２：７７（１９９０）参照）を含む。
「２重特異的」又は「２重機能性抗体」は、２個の互いに異なる重鎖／軽鎖ペア、及び２個の互いに異なる結合部位を有する人工混成抗体である。２重特異的抗体は、ハイブリドーマの融合又はＦａｂ’断片の連結を含む多様な方法によって生産され得る。例えば、Ｓｏｎｇｓｉｖｉｌａｉ ＆ Ｌａｃｈｍａｎｎ，Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．７９：３１５－３２１（１９９０）；Ｋｏｓｔｅｌｎｙ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８，１５４７－１５５３（１９９２）を参照すればよい。
本明細書で使用する「単クローン性抗体」は、特定のエピトープに対して単一結合特異性及び親和性を示す抗体であったり、又は、全ての抗体が特定のエピトープに対して単一結合特異性及び親和性を示す抗体組成を称する。したがって、用語「ヒト単クローン性抗体」は、単一結合特異性を示し、ヒト生殖細胞系（ｇｅｒｍｌｉｎｅ）免疫グロブリン配列から由来した可変及び選択的定常領域を有する抗体又は抗体組成を称する。一部の様態において、ヒト単クローン性抗体は、例えば、不死化細胞に融合されたヒト重鎖導入遺伝子及び軽鎖導入遺伝子を含むゲノムを有する遺伝子導入（ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ）非－ヒト動物、例えば、遺伝子導入マウスから得たＢ細胞を含むハイブリドーマによって生産される。
本明細書で使用する用語「組換えヒト抗体」は、（ａ）ヒト免疫グロブリン遺伝子に対して遺伝子導入又は染色体導入（ｔｒａｎｓｃｈｒｏｍｏｓｏｍａｌ）動物（例えば、マウス）から分離された抗体又はそれから製造されたハイブリドーマ、（ｂ）抗体を発現するために形質転換された宿主細胞から、例えば、トランスフェクトーマ（ｔｒａｎｓｆｅｃｔｏｍａ）から分離された抗体、（ｃ）組換え、組み合わせヒト抗体ライブラリから分離された抗体、及び（ｄ）他のＤＮＡ配列にヒト免疫グロブリン遺伝子配列をスプライシングすることを伴う任意の他の手段によって製造、発現、生成又は分離された抗体などの組換え手段によって製造、発現、生成又は分離された全てのヒト抗体を含む。このような組換えヒト抗体は、生殖細胞系遺伝子によってコーディングされる特定のヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列を用いるが、例えば、抗体の成熟化中に起こる後続再配列及び突然変異を含む可変及び定常領域を含む。当業界に公知となっているように（例えば、Ｌｏｎｂｅｒｇ Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ．２３（９）：１１１７－１１２５（２００５）参照）、前記可変領域は、外来抗原に対して特異的な抗体を形成するように再配列される多様な遺伝子によってコーディングされる抗原結合ドメインを含有する。再配列以外にも、前記可変領域は、外来抗原に対する抗体の親和性を増加させるために多数の単一アミノ酸変化（体細胞突然変異又は超突然変異と言う）によってさらに変形し得る。前記定常領域は、抗原に対する追加反応で変わり得る（すなわち、イソ型変化）。したがって、抗原に反応して軽鎖及び重鎖免疫グロブリンポリペプチドをコーディングする、再配列されて体細胞突然変異された核酸分子は、本来の核酸分子と配列同一性を有することができない代わりに、実質的に同一又は類似であり得る（すなわち、少なくとも８０％同一性を有する）。
「ヒト」抗体（ＨｕＭＡｂ）は、フレームワークとＣＤＲ領域の全てがヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列から由来した可変領域を有する抗体を称する。また、前記抗体が定常領域を含有すると、前記定常領域も、ヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列から由来する。本明細書に記載された抗体は、ヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列によってコーディングされないアミノ酸残基（例えば、試験管内の無作為又は部位特異的突然変異誘発によって、又は生体内の体細胞突然変異によって導入された突然変異）を含むことができる。しかし、本明細書で使用する用語「ヒト抗体」は、マウスなどの他の哺乳類種の生殖細胞系から由来したＣＤＲ配列がヒトフレームワーク配列に移植された抗体を含まない。用語「ヒト」抗体と「完全なヒト」抗体は同義語として使用される。
「ヒト化」抗体は、非－ヒト抗体のＣＤＲドメインの外部のアミノ酸の一部、ほとんど又は全部がヒト免疫グロブリンから由来した相応するアミノ酸に置換された抗体を称する。一部の様態において、ＣＤＲドメインの外部のアミノ酸の一部、ほとんど又は全部がヒト免疫グロブリンのアミノ酸に置換され、一つ以上のＣＤＲ領域内部のアミノ酸の一部、ほとんど又は全部は変わらずに残っている。アミノ酸の小さい添加、欠失、挿入、置換又は変形は、これらが特定の抗原に結合する抗体の能力をなくさない限り許容可能である。「ヒト化」抗体は、原抗体の抗原特異性と類似する抗原特異性を維持する。
「キメラ抗体」は、マウス抗体から可変領域が由来し、ヒト抗体から定常領域が由来した抗体のように、一つの種から可変領域が由来し、他の種から定常領域が由来した抗体を称する。
本明細書で使用する用語「交差反応」は、異なる種のＦＡＭ１９Ａ１に結合する本明細書に記載された抗体の能力を称する。例えば、ヒトＦＡＭ１９Ａ１５に結合する本明細書に記載された抗体は、他の種のＦＡＭ１９Ａ１（例えば、マウスＦＡＭ１９Ａ１）にも結合することができる。本明細書で使用する交差反応性は、結合分析（例えば、ＳＰＲ、ＥＬＩＳＡ）で精製された抗原との特異的反応性を検出することによって、又は、ＦＡＭ１９Ａ１を生理学的に発現する細胞に結合したり、又は、そうでない場合、前記細胞と機能的に相互作用することによって測定され得る。交差反応性を決定するための方法は、本明細書に記載されている標準結合分析、例えば、ＢＩＡＣＯＲＥＴＭ ２０００ ＳＰＲ機器（Ｂｉａｃｏｒｅ ＡＢ，Ｕｐｐｓａｌａ，スウェーデン）を使用したＢＩＡＣＯＲＥＴＭ表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）分析又はフローサイトメトリー技術を含む。
用語「自然発生」を本明細書で対象に適用したとき、対象が自然で発見され得るという事実を意味する。例えば、自然のソースから分離可能であり、実験室で人によって意図的に変形しない有機体（ウイルスを含む）内に存在するポリペプチド又はポリヌクレオチド配列は自然発生である。
「ポリペプチド」は、少なくとも２個の連続的に連結されたアミノ酸残基を含む鎖を称するものであって、前記鎖の長さに上限はない。タンパク質内の一つ以上のアミノ酸残基は、グリコシル化、リン酸化又は二硫化結合形成などの変形を含有し得るが、これに限定されるのではない。「タンパク質」は、一つ以上のポリペプチドを含むことができる。
本明細書で使用する用語「核酸分子」は、ＤＮＡ分子及びＲＮＡ分子を含む。核酸分子は、単一鎖又は二重鎖であってもよく、ｃＤＮＡであってもよい。
本明細書で使用する用語「ベクター」は、連結された他の核酸を輸送できる核酸分子を意味するものである。ベクターの一類型は、追加ＤＮＡセグメントが結紮され得る円形の二重鎖ＤＮＡループを称する「プラスミド」である。ベクターの他の類型は、追加のＤＮＡセグメントがウイルスゲノムに連結され得るウイルスベクターである。特定のベクターは、これらが導入される宿主細胞で自己複製することができる（例えば、バクテリア性複製起源を有するバクテリアベクター及びエピソーマル（ｅｐｉｓｏｍａｌ）哺乳類動物）。他のベクター（例えば、非－エピソーマル哺乳類ベクター）は、宿主細胞に導入したとき、宿主細胞のゲノムに統合可能であり、これによって、宿主ゲノムによって複製される。さらに、特定のベクターは、これらが作動的に連結された遺伝子の発現を指示することができる。このようなベクターを、本明細書では「組換え発現ベクター」（又は、単純に「発現ベクター」）と言う。一般に、組換えＤＮＡ技術で活用性のある発現ベクターは、度々プラスミドの形態である。本明細書において、「プラスミド」と「ベクター」は、プラスミドがベクターの最も普遍的に使用される形態であるので、互換的に使用され得る。しかし、等価の機能を行う他の形態の発現ベクター、例えば、ウイルスベクター（例えば、複製欠損レトロウイルス、アデノウイルス及びアデノ随伴ウイルス）も含まれる。
本明細書で使用する用語「組換え宿主細胞」（又は、簡単に「宿主細胞」）は、細胞内に自然に存在しない核酸を含む細胞を称するものであって、組換え発現ベクターが導入された細胞であり得る。これらの用語は、特定の対象細胞のみならず、このような細胞の子孫も称するものと理解しなければならない。突然変異や環境的な影響によって次の世代に特定の変形が起こり得るので、このような子孫は、実際に親細胞と同一になり得ないが、依然として本明細書で使用する用語「宿主細胞」の範囲内に含まれる。
本明細書で使用する用語「連結された」は、２個以上の分子の会合を称する。前記連結は、共有連結又は非共有連結であり得る。また、前記連結は、遺伝子連結（すなわち、組換えによる融合）であり得る。このような連結は、化学的接合（ｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ）及び組換えタンパク質生産などの当業界で認める多様な技術を用いて達成され得る。
本明細書で使用する用語「治療有効量」は、対象のＣＮＳ関連疾患又は障害を「治療」したり、ＣＮＳ関連疾患又は障害の危険、潜在性、可能性又は発生を減少させるのに効果的な薬物単独又は他の治療剤と組み合わせた薬物の量を称する。「治療有効量」は、ＣＮＳ関連疾患又は障害を有したり、ＣＮＳ関連疾患又は障害を有する危険がある対象に一部の改善又は実益を提供する薬物又は治療剤の量を含む。これによって、「治療有効量」は、ＣＮＳ関連疾患又は障害の危険、潜在性、可能性又は発生を減少させたり、又は緩和及び軽減を提供し／又は少なくとも一つの指標を減少させ／又はＣＮＳ関連疾患又は障害の少なくとも一つの臨床症状を減少させる量である。ＣＮＳ関連疾患又は障害の非制限的な例は、本開示内容以外の他の部分に提供されている。
本明細書で使用する用語「治療する」及び「治療」は、疾患関連症侯群、合併症、症状又は生化学的徴候の進行、発達、重症度又は再発を反転、緩和、改善、阻害、遅延又は予防しようとする目的で対象に対して行われた任意の類型の介入又は過程、又は対象に活性剤を投与することを言う。治療は、疾患のある対象又は疾患のない対象（例えば、予防用）に対して行われ得る。
本明細書で使用する「中枢神経系」（ＣＮＳ）は、脳及び脊髄を含む神経系の一部を称する。中枢神経系は、網膜と視神経（脳神経ＩＩ）、嗅神経（脳神経Ｉ）及び嗅上皮をさらに含むことができる。脳は、ＣＮＳの一次制御モジュールであり、大きく４個の葉（ｌｏｂｅ）に分けることができる：（１）側頭葉（感覚入力を処理し、これを感情的意味に割り当て；長期記憶を確立し、一部の言語認識において重要である）；（２）後頭葉（視覚皮質を収容する脳の視覚処理領域）；（３）頭頂葉（触覚、空間認識及び方向探し（ｎａｖｉｇａｔｉｏｎ）を含む感覚情報統合；言語認識）；及び（４）前頭葉（ドーパミンに敏感な神経細胞のほとんどを含むので、集中力、補償（ｒｅｗａｒｄ）、短期記憶、動機付与及び構想に関与）。
脳は、他の領域にさらに分けることができる：（１）基底核（自発的動き、手続き学習及びどの運動活動を行うのかに対する決定の統制に関与；この領域に影響を及ぼす疾病は、パーキンソン病及びハンチントン病を含む）；（２）小脳（正確な運動制御、言語及び集中力に関与する。この領域が損傷すると、運動失調として知られている運動調節障害をもたらす）；（３）ブローカ（Ｂｒｏｃａ）領域（言語処理に関与；この領域が損傷すると、言語障害をもたらし得る）；（４）脳梁（左側及び右側半球を連結する広範囲な神経線維バンド；難読症児童は、脳梁がさらに小さいと知られている）；（５）延髄（嘔吐、呼吸、くしゃみ及び正確な血圧維持などの非自発的機能に関与する）；（６）視床下部（多様な神経ホルモンを分泌し、体温調節、喉の渇き及び虚飢に影響を及ぼす）；（７）視床（感覚及び運動入力を受け、残りの大脳皮質に情報伝達）；及び（８）扁桃体（側頭葉内に位置し、意思決定、記憶及び感情的反応に関与）。
本明細書で使用する用語「脊髓」は、脳幹の延髄から脊椎の腰部まで延長された神経組織で構成された長く且つ薄い管状構造を称する。脊髓機能の非制限的な例は、（１）末梢神経系のほとんどを脳に連結し、脳と末梢組織との間の信号伝達を担当；（２）引っ込め反射作用などのいくつかの単純な反射作用を担当する小さい調整中枢役割を含む。
本明細書で使用する用語「神経細胞」は、神経細胞及びその一部又は各一部（例えば、神経細胞体、軸索又は樹状突起）を含む。用語「神経細胞」は、中枢細胞体又は体細胞及び２つの類型の延長部又は突出部：一般にほとんどの神経細胞信号を細胞体に伝達する樹状突起、及び一般にほとんどの神経細胞信号を細胞体から標的神経細胞又は筋肉などのエフェクター細胞に伝達する軸索を含む神経系細胞を意味する。
本明細書で使用する用語「神経突起」は、神経細胞（例えば、軸索又は樹状突起）の細胞体からの任意の突出部を称する。
本明細書で使用する「投与」は、当業者に公知となっている多様な方法及び伝達系のうち任意のものを使用し、対象に治療剤又は治療剤を含む組成物を物理的に導入することを言う。本明細書に記載された抗体に対する好ましい投与経路は、静脈内、腹腔内、筋肉内、皮下、脊椎、硝子体内、又は、例えば、注射又は注入による他の非経口投与経路を含む。本明細書で使用する文句「非経口投与」は、一般に注射による腸内及び局所投与以外の投与方式を意味し、これに制限されないが、静脈内、腹腔内、筋肉内、動脈内、髄腔内、リンパ内、病変内、被膜内、眼窩内、心臓内、皮内、経気管、気管内、肺、皮下、表皮下、関節内、被膜下、クモ膜下、脊髓内、硝子体内、硬膜外、及び胸骨内注射及び注入のみならず、生体内電気穿孔を含む。これと異なり、本明細書に記載された抗体は、非経口経路、例えば、局所、表皮又は粘膜投与経路、例えば、鼻腔内、経口、膣内、直腸、舌下又は局所に投与され得る。また、投与は、例えば、１回、複数回及び／又は１回以上の延長された期間にわたって行われ得る。
本明細書で使用する用語「診断」は、患者が所定の疾患又は症状を病んでいるかどうかを決定又は予測し、治療に適した対象を確認するために使用できる方法を意味する。当業者であれば、一つ以上の診断マーカー（例えば、ＦＡＭ１９Ａ１）を基盤にして診断できるが、このとき、診断マーカーの存在、不在、量又は量の変化は、症状の存在、重症度又は不在を示す。一部の様態において、対象の生物学的サンプルでのＦＡＭ１９Ａ１発現の増加は、ＣＮＳ関連疾患又は障害を示す。用語「診断」は、１００％の正確度で特定の疾患又は障害の存在又は不在を決定する能力を意味するものではなく、さらに、所定の過程や結果が発生しない可能性よりは発生する可能性がさらに高いことを意味するものでもない。その代わりに、当業者であれば、用語「診断」は、特定の疾患又は障害が対象に存在する高い可能性を意味すると理解できる。一部の様態において、用語「診断」は、ＣＮＳ関連疾患又は障害がある対象を確認する一つ以上の診断方法を含む。ＣＮＳ関連疾患又は障害の非制限的な例は、本開示内容以外の他の部分に提供されている。
ＣＮＳ機能異常を診断するための組成物は、必要とする対象（例えば、ＣＮＳ機能に異常があると疑われる対象）のサンプルにおいて、ＦＡＭ１９Ａ１のタンパク質水準又はＦＡＭ１９Ａ１をコーディングする核酸（例えば、ｍＲＮＡ）水準を測定するための製剤を含む。このような製剤は、ＦＡＭ１９Ａ１ ｍＲＮＡに相補的な配列を有するオリゴヌクレオチド、プライマー又はＦＡＭ１９Ａ１ ｍＲＮＡに特異的に結合する核酸プローブ及びＦＡＭ１９Ａ１タンパク質に特異的に結合する抗体又はその抗原結合断片を含む。
本明細書で使用する用語「対象」は、任意のヒト又は非－ヒト動物を含む。用語「非－ヒト動物」は、全ての脊椎動物、例えば、哺乳類及び非－ヒト霊長類、ヒツジ、イヌ、ウシ、ニワトリ、両生類、爬虫類などの非－哺乳類を含む。本明細書（例えば、実施例）に記載されたように、本開示内容のＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤の有益な効果は性別に依存しない。したがって、一部の様態において、本明細書に開示されたＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤から実益（例えば、ＣＮＳ機能の改善又はＣＮＳ関連疾患又は障害の治療）を得ることができる対象は男性対象である。一部の様態において、用語「男性」は、Ｘ及びＹ染色体を有する個体を称する。一部の様態において、本明細書に開示されたＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤から実益（例えば、ＣＮＳ機能の改善又はＣＮＳ関連疾患又は障害の治療）を得ることができる対象は女性対象である。一部の様態において、用語「女性」は、２個のＸ染色体を有する個体を称する。一部の様態において、本明細書に開示されたＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤から実益（例えば、ＣＮＳ機能の改善又はＣＮＳ関連疾患又は障害の治療）を得ることができる対象は、男性及び女性対象を全て含む。
本明細書で使用する用語「神経細胞」は、電気及び化学的信号を通じて情報を処理して伝達する電気興奮性細胞を含む。神経細胞は、ＣＮＳの脳と脊髓、末梢神経系（ＰＮＳ）の神経節の主要な構成要素であり、互いに連結されて神経網を形成することができる。典型的な神経細胞は、体細胞（細胞体）、樹状突起及び軸索で構成されている。神経細胞の体細胞（細胞体）は核を含む。神経細胞の樹状突起は、神経細胞の入力がほとんど起こる枝が多い細胞延長部である。軸索は、体細胞から延長されている相対的に微細なケーブル状の突出部であって、神経信号を体細胞から遠く伝達し、特定類型の情報を体細胞に再度伝達する。用語「神経細胞の再成長促進」は、好ましくは、傷害又は損傷後に神経細胞の成長を刺激、促進、増加又は活性化させることを含む。
用語「緑内障」は、網膜神経節細胞死滅の漸進的損失及び視神経萎縮を特徴とする一群の眼球関連疾患及び／又は障害を称する。緑内障は、対象の網膜及び／又は視神経内での視神経損傷、網膜神経節細胞（「ＲＧＣ」）損失、高い眼圧（「ＩＯＰ」）、損傷した血液－網膜障壁及び／又はミクログリア活性水準の増加と関連し得る。緑内障は、無症状であったり、目と関連する次の症状のうちいずれか一つを有することができる：灼熱感又は刺すような感じ、裂傷、乾燥、疲労感、視野混濁／薄明視（ｄｉｍ ｖｉｓｉｏｎ）、トンネル視、昼盲症、夜盲症、照明周辺の後光及び／又は失明。Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ．，Ａｒｃｈ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ １１６：８６１－８６６（１９９８）。用語「緑内障」は、緑内障の原因及びいずれかの症状又は全ての症状と関係なく、いずれの類型であっても全ての類型の緑内障を含む。
用語「緑内障」は、次のような類型の緑内障を含むが、これに限定されるのではない：開放隅角緑内障、閉塞隅角緑内障、正常眼圧緑内障（「ＮＴＧ」）、先天性緑内障、続発性緑内障、色素性緑内障、偽落屑緑内障、外傷性緑内障、血管新生緑内障、虹彩角膜内皮症侯群、ぶどう膜炎緑内障。前記危険因子のうち一部は、眼圧上昇、遺伝的素因（例えば、緑内障の家族歴、特定の人種）、年齢、糖尿病、高血圧及び／又は目の物理的損傷を含む。
用語「炎症」は、傷害及び／又は損傷部位で免疫細胞（例えば、ミクログリア）及び血漿タンパク質の蓄積及び活性化を伴う血管化された組織での先天免疫系の複合反応を称する。健康な個体において、血液－網膜障壁は、血液から網膜に、また、その反対に物質が自由に流れることを防止する堅固な障壁を提供する。しかし、緑内障患者では、この障壁が損傷している。このような血管調節障害は、網膜の視神経乳頭部に行く血流を制限し、視神経乳頭部に自由に移動する多様な炎症媒介体（例えば、ＴＮＦ－α、ＩＬ－６、ＩＬ－９、ＩＬ－１０及び酸化窒素）の生成を可能にする。
本明細書で使用する用語「視神経」は、網膜から脳に視覚情報を伝達する対をなす神経（ｐａｉｒｅｄ ｎｅｒｖｅ）を称する。ヒトにおいて、視神経は、発生してから７週次中に眼茎（ｏｐｔｉｃ ｓｔａｌｋ）から由来し、網膜神経節細胞軸索及びグリア細胞で構成されている。視神経は、視神経乳頭（ｏｐｔｉｃ ｄｉｓｋ）から視神経交叉部（ｏｐｔｉｃ ｃｈｉａｓｍａ）まで延長されており、視覚路（ｏｐｔｉｃｔ ｒａｃｔ）として、外側膝状核、被蓋前核（ｐｒｅｔｅｃｔａｌ ｎｕｃｌｅｕｓ）及び上丘までつながっている。Ｓｅｌｈｏｒｓｔ，Ｊ．Ｂ．，ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｍｉｎ Ｎｅｕｒｏｌ ２９（１）：２９－３５（２００９）。
用語「視神経損傷」は、視神経の正常な構造又は機能の変化を称する。視神経の正常な構造又は機能変化は、緑内障を含む全ての疾患、障害又は傷害の結果であり得る。視神経の正常な機能変化は、網膜から脳に視覚情報を伝達するように、適切に機能する視神経の能力の全ての変化を含む。機能変化は、例えば、視野喪失、中心視力損傷、非正常的な色視などで表すことができる。構造変化の例には、網膜の神経線維損失、視神経の非正常的な陥凹（ｃｕｐｐｉｎｇ）及び／又は網膜の網膜神経節細胞層からの細胞損失が含まれる。本明細書で使用する「視神経損傷」は、対象の視神経のうち一つ又は２つの全てに対する視神経損傷を含むことができる。
「網膜神経節細胞」（ＲＧＣ）は、網膜の最も内側層（すなわち、神経節細胞層）の近くに位置した特定類型の神経細胞を称する。これらの細胞は、光受容器から収集された視覚情報を脳に伝達するのに重要な役割をする。Ｓａｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎｕ Ｒｅｖ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ ３８：２２１－４６（２０１５）。ＲＧＣは、大きさ、連結及び視覚的刺激に対する反応側面で大きく異なり得るが、これらは、いずれも共通的に脳まで延長されている長い軸索を有しているという決定的な特性を有する。
用語「眼圧」（ＩＯＰ）は、目の内部で維持される圧力を称する。目の前房（ａｎｔｅｒｉｏｒ ｃｈａｍｂｅｒ）は、角膜、虹彩、瞳孔及び水晶体で取り囲まれており、角膜と水晶体に酸素と栄養分を供給する役割をする房水である水様液で充填されている。水様液は、目の形状維持を助けるために必要な圧力を提供する。水様液の正常な分泌が中断されると、眼圧に影響を及ぼす。
用語「ミクログリア又はミクログリア細胞（ｍｉｃｒｏｇｌｉａ ｏｒ ｍｉｃｒｏｇｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ）」は、網膜内の存在するグリア細胞の一類型を称する。これらの細胞は、大食細胞のように挙動し、外部抗原及び／又は損傷に対して周辺の微細環境を継続して探査する。このような認識時、ミクログリアは活性化され、有害可能性がある任意の破片（ｄｅｂｒｉｓ）を貪食することによって損傷を制限し、炎症媒介体を分泌し、他の免疫細胞と相互作用しながら効果的な免疫反応を発生させることによって外来抗原及び／又は損傷に迅速に反応する。Ｋｅｔｔｅｎｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｈｙｓｉｏｌ Ｒｅｖ ９１（２）：４６１－５５３（２０１１）。活性化されたミクログリアは、Ｉｂａ－１の増加した表面発現によって休止状態のミクログリアと区別される。また、ミクログリア細胞は、発達中の網膜でプログラム細胞死（ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ ｃｅｌｌ ｄｅａｔｈ）に関与し、ミクログリアによって放出された神経成長因子（ＮＧＦ）は網膜神経細胞死を誘導し得る。Ａｓｈｗｅｌｌ ｅｔ ａｌ．，Ｖｉｓｕａｌ Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ ２（５）：４３７－４４８（１９８９）。
用語「神経障害性疼痛」は、中枢神経系（ＣＮＳ）及び／又は末梢神経系の任意の部位に影響を及ぼす傷害、損傷及び／又は不適切な機能による疼痛を称する。用語「神経障害性疼痛」は、神経障害性疼痛の原因及びいずれかの症状又は全ての症状と関係なく、いずれの類型であっても、全ての類型の神経障害性疼痛を含む。
神経障害性疼痛は、中枢性神経障害性疼痛及び末梢性神経障害性疼痛を含む。本明細書で使用している用語「中枢性神経障害性疼痛」は、障害、先天的欠陥又は中枢神経系（すなわち、脳又は脊髓）損傷に起因した疼痛を称する。本明細書で使用する用語「末梢性神経障害性疼痛」は、末梢感覚神経の損傷又は感染に起因した疼痛を称する。
神経障害性疼痛の症状は、持続性／慢性疼痛、自発性疼痛のみならず、異痛（例えば、平常時には疼痛がない刺激に対する疼痛反応）、痛覚過敏（例えば、一般にピンで刺すような軽症の不便さのみを引き起こす疼痛刺激に対する著しい反応）、感覚過敏（例えば、刺激、特に皮膚の刺激に対する過度な身体的過敏性）又は痛覚過敏（例えば、短い不便さが長期間重症の疼痛になる場合）を含むことができる。一部の様態において、症状は、長く持続され得、１次原因が存在した場合、これを解決した後で持続され得る。Ｍｅｒｃｋ Ｍａｎｕａｌ，Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｉｃ Ｐａｉｎ，ｍｅｒｃｋｍａｎｕａｌｓ．ｃｏｍ／ｐｒｏｆｅｓｓｉｏｎａｌ／ｎｅｕｒｏｌｏｇｉｃ－ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ／ｐａｉｎ／ｎｅｕｒｏｐａｔｈｉｃ－ｐａｉｎで利用可能である；Ｃａｍｐｂｅｌｌ Ｊ．Ｎ．ａｎｄ Ｍｅｙｅｒ Ｒ．Ａ．Ｎｅｕｒｏｎ ５２（１）：７７－９２（２００６）。
本明細書で使用する「単神経障害」は、単一末梢神経又は神経群の損傷又は破壊によってもたらされた領域に対する運動又は感覚の喪失を伴う末梢神経障害である。単神経障害は、局所部位の損傷又は外傷によって最も頻繁に発生し、これは、例えば、単神経に長期間の圧力／圧迫をもたらす。しかし、特定の全身性障害（例えば、多発性単神経炎）も単神経障害を起こし得る。一部の様態において、前記局所部位に対する損傷又は外傷は、神経の髄鞘（外被）又は神経細胞（軸索）の一部の破壊を引き起こし、神経を通じた刺激の伝導を遅延又は防止することができる。一部の様態において、前記単神経障害は、身体のいずれの部分にも影響を及ぼし得る。単神経障害性疼痛の例は、坐骨神経機能障害、一般的な鼻骨神経機能障害、腰骨神経機能障害、尺骨神経機能障害、頭蓋骨単神経障害ＶＩ、頭蓋骨単神経障害ＶＩＩ、頭蓋骨単神経障害ＩＩＩ（圧迫型）、頭蓋骨単神経障害ＩＩＩ（糖尿病型）、腋窩神経機能障害、手根管症候群、大腿神経機能障害、硬骨神経機能障害、顔面神経麻痺（Ｂｅｌｌ’ｓ ｐａｌｓｙ）、胸郭出口症候群、手根管症候群及び６番（外転）神経麻痺を含むが、これに限定されるのではない。Ｆｉｎｎｅｒｕｐ Ｎ Ｂ ｅｔ ａｌ．，Ｐａｉｎ １５７（８）：１５９９－１６０６（２０１６）；ｎｉｎｄｓ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ／ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌｎｅｕｒｏｐａｔｈｙ／ｄｅｔａｉｌ＿ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌｎｅｕｒｏｐａｔｈｙ．ｈｔｍで利用可能なＮａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｎｅｕｒｏｌｏｇｉｃａｌ Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ ａｎｄ Ｓｔｒｏｋｅ，Ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｙ Ｆａｃｔ Ｓｈｅｅｔを参照すればよい。
本明細書で使用する「多発性神経障害」は、多数の末梢神経の損傷又は破壊によってもたらされた領域に対する運動又は感覚の喪失を伴う末梢神経障害である。多発性神経障害性疼痛は、ポリオ後症候群、乳房切除後症侯群、糖尿病性神経障害、アルコール性神経障害、アミロイド、毒素、ＡＩＤＳ、甲状腺機能低下症、尿毒症、ビタミン欠乏症、化学療法誘発疼痛、２’，３’－ジデオキシシチジン（ｄｄＣ）治療、ギラン・バレー症候群又はファブリー病を含むが、これに限定されるのではない。Ｆｉｎｎｅｒｕｐ Ｎ．Ｂ．ｅｔ ａｌ．，Ｐａｉｎ １５７（８）：１５９９－１６０６（２０１６）；ｎｉｎｄｓ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ／ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌｎｅｕｒｏｐａｔｈｙ／ｄｅｔａｉｌ＿ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌｎｅｕｒｏｐａｔｈｙ．ｈｔｍで利用可能なＮａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｎｅｕｒｏｌｏｇｉｃａｌ Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ ａｎｄ Ｓｔｒｏｋｅ，Ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｙ Ｆａｃｔ Ｓｈｅｅｔを参照すればよい。
疾患又は障害「関連神経障害性疼痛」という用語は、疾患又は障害（例えば、本明細書に開示されたもの）を伴うか、疾患又は障害（例えば、本明細書に開示されたもの）によってもたらされたり、これに起因した神経障害性疼痛を称する。
［ＩＩ．本開示内容の方法］
疾患又は障害を治療する方法
本明細書は、治療（例えば、疾患又は障害治療）に使用できるＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤（例えば、抗体）を開示する。本明細書に記載されているように、ＦＡＭ１９Ａ１は、ＣＮＳの多くの領域（例えば、神経回路）で発現され、非正常的なＦＡＭ１９Ａ１発現は、正常なＣＮＳ機能損傷をもたらし得ると考えられる。本願の全般（例えば、実施例）にわたって立証されたように、本出願人は、本明細書に開示されたＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤が一つ以上のＣＮＳ機能を改善するために使用できることを発見した。また、本出願人は、本明細書に開示されたＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤の有益な効果が対象の性別と関係ないことを確認した。したがって、一部の様態において、本明細書に開示されたＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤は、男性対象（例えば、ＣＮＳ機能が損傷した男性対象）を治療するために使用することができる。一部の様態において、前記対象は女性対象ではない。一部の様態において、本明細書に開示されたＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤は、女性対象（例えば、ＣＮＳ機能が損傷した女性対象）を治療するために使用することができる。一部の様態において、本明細書に開示されたＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤は、男性及び女性対象（例えば、ＣＮＳ機能が損傷した男性及び女性対象）の全てを治療するために使用することができる。
一部の様態において、本明細書に開示されたＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤は、ＣＮＳ関連疾患又は障害を治療するために使用することができる。一部の様態において、本開示内容で治療できるＣＮＳ関連疾患又は障害は、非正常的な神経回路と関連している。本明細書で使用する用語「神経回路」は、活性化時にシナプスによって相互連結され、特定の機能を行う神経細胞集団を称する。神経回路は、互いに連結されて大規模の脳ネットワークを形成することができる。神経回路は、脳から神経細胞に情報を適切に伝達するのに必須的である。また、互いに異なる各神経回路は、一般に互いに異なる機能と関連している。一つ以上の神経回路での異常は、多様な類型のＣＮＳ関連疾患又は障害で観察されるようにＣＮＳ機能の損傷につながり得る。
一部の様態において、本明細書に開示されたＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤で治療できるＣＮＳ関連疾患又は障害は、気分障害、精神障害又はこれらの全てを含む。一部の様態において、本開示内容で治療できるＣＮＳ関連疾患又は障害は、不安、うつ病、外傷後ストレス障害（ＰＴＳＤ）、双極性障害、注意欠陥／多動性障害（ＡＤＨＤ）、自閉症、精神分裂病、神経障害性疼痛、緑内障、中毒症、くも膜嚢胞、強硬症、脳炎、てんかん／発作、固定症侯群、髄膜炎、片頭痛、多発性硬化症、骨髓病症、アルツハイマー病、ハンチントン病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、バッテン病、トゥレット症候群、外傷性脳損傷、脳脊髓損傷、脳卒中、振戦（本態性又はパーキンソン病性）、筋緊張異常、知的障害、脳腫瘍又はこれらの組み合わせを含む。
一部の様態において、本明細書に開示されたＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤で治療できるＣＮＳ関連疾患又は障害は、気分障害である。本明細書で使用する用語「気分障害」は、個人の感情状態に影響を及ぼす全ての類型の精神疾患を称する。本明細書で使用する用語「気分」は、人の内的感情状態を称する。一部の様態において、本開示内容で治療できる気分障害は、行動、生理学的、認知、神経化学的及び精神運動的機能障害と関連している気分及び感情が蔓延し、長期間無力感が拡大されることを特徴とし得る。気分障害は、持続的な気分上昇（躁病）、持続的な憂うつな気分又は躁病とうつ病との間を繰り返す気分と関連し得る。気分障害は、実際に遺伝的なものであり得／又は２次因子（例えば、疾病、薬物、投薬）によって誘発され得る。気分障害の例としては、大うつ病性障害（ＭＤＤ）、双極性障害（ＢＤ）、小うつ病性障害、持続性抑うつ障害（気分低下）、季節性情動障害（ＳＡＤ）、精神病性うつ病、産後うつ病、反復性短期うつ病性障害、月経前不快気分障害（ＰＭＤＤ）、状況性うつ病、非定型うつ病、不安障害及び気分循環性障害を含むが、これに限定されるのではない。
本明細書で使用する用語「大うつ病性障害」又は「ＭＤＤ」は、２個以上の大うつ病性症状の発生を特徴とする気分障害を称する。ＭＤＤの症状は、疲れ、無価値感、罪悪感、集中力低下、優柔不断、不眠症又は過眠症、ほぼ全ての活動に対する関心又は楽しみの著しい減少、焦燥感、死又は自殺に対する頻繁な思考、著しい体重減少又は増加（変化率５％）を含むことができる。ＭＤＤに対する診断基準は、他の気分障害と共に、例えば、Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ ａｎｄ Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｍｅｎｔａｌ Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ，ｆｏｕｒｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，ＤＳＭ－ＶＩ（登録商標）－ＴＲ，Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｉｃ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ（ＤＳＭ ＩＶ）で探すことができ、対象評価に有用である。
用語「双極性障害」は、極端的な気分が交互に変わる期間を特徴とする気分障害を称する。双極性障害がある人は、通常、過度に喜んだり怒る状態（躁病）で悲しみと絶望状態（うつ病）に変わった後、再び戻ってくる気分の循環を経験するが、その間の期間には正常な気分状態にある。双極性障害の診断は、例えば、ＤＳＭ ＩＶに記載されている。双極性障害の範疇には、双極性障害Ｉ（大うつ病があるか、大うつ病がない躁病）及び双極性障害ＩＩ（大うつ病がある軽躁病）が含まれるが、これに限定されない。本明細書で使用する用語「躁病」又は「躁病の」は、過度の興奮の不調な精神状態を称する。用語「軽躁病」は、深刻性が低く、それほど極端的でない躁病の症状の発現を称する。
本開示内容から明らかなように、本明細書に開示されたＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤は、全ての類型の気分障害を治療するために使用することができる。
一部の様態において、本明細書に開示されたＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤で治療できる損傷は、視覚系と関連している。したがって、一部の様態において、本明細書は、必要とする対象で緑内障を治療する方法として、ＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤を前記対象に投与することを含む方法を提供する。一部の様態において、本開示内容に有用なＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤は、ＦＡＭ１９Ａ１を特異的に標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｄｓＲＮＡ、アプタマー、ＰＮＡ又はこれを含むベクターである。一部の様態において、ＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤は、抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体、前記抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体をコーディングするポリヌクレオチド又はそのポリヌクレオチドを含むベクターである。一部の様態において、ＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤は、ＦＡＭ１９Ａ１タンパク質に結合し、ＦＡＭ１９Ａ１活性を減少させる。他の様態において、減少したＦＡＭ１９Ａ１活性は、緑内障と関連する炎症を減少、軽減又は阻害する。
一部の様態において、ＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤（例えば、抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体）は、網膜神経節細胞（ＲＧＣ）の損失を減少させ／又は対象（例えば、緑内障患者）の網膜内の網膜神経節細胞の数を回復させる。特定の様態において、網膜神経節細胞の損失は、基準（例えば、ＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤の投与を受けていない対象の該当の値又はＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤を投与する前の対象の該当の値）に比べて少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％又は少なくとも約９０％以上減少する。一部の様態において、網膜神経節細胞の数は、基準（例えば、ＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤の投与を受けていない対象の該当の値又はＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤を投与する前の対象の該当の値）に比べて少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％又は少なくとも約９０％以上回復される。
一部の様態において、本明細書に開示されたＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤（例えば、抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体）は、対象（例えば、緑内障患者）の網膜神経細胞変性の開始を遅延させる。一部の様態において、ＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤は、対象（例えば、緑内障患者）の網膜の内部網状層の神経連結を保護する。一部の様態において、ＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤は、ミクログリア細胞の活性化を調節することによって網膜の視神経乳頭部周辺での炎症を抑制する。一部の様態において、本明細書に開示されたＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤（例えば、抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体）は、例えば、緑内障対象で観察される高い眼圧を減少させる即刻の効果を有している。しかし、一部の様態において、ＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤は、対象（例えば、緑内障患者）で網膜電位を増加及び／又は改善させる。
一部の様態において、緑内障は、開放隅角緑内障、閉塞隅角緑内障、正常眼圧緑内障（「ＮＴＧ」）、先天性緑内障、続発性緑内障、色素性緑内障、偽落屑緑内障、外傷性緑内障、血管新生緑内障、虹彩角膜内皮症侯群、ぶどう膜炎緑内障又はこれらの組み合わせを含む。特定の様態において、緑内障は、視神経損傷、網膜神経節細胞（「ＲＧＣ」）損失、高い眼圧（「ＩＯＰ」）、損傷した血液－網膜障壁及び／又は対象の網膜及び／又は視神経内のミクログリア活性水準の増加と関連している。
一部の様態において、緑内障を治療する方法は、緑内障治療のための一つ以上の追加製剤を投与することをさらに含む。特定の様態において、前記追加製剤は、ＸＡＬＡＴＡＮ（登録商標）、ＬＵＭＩＧＡＮ（登録商標）、ＴＲＡＶＡＴＡＮ Ｚ（登録商標）などのプロスタグランジン類似体である。一部の様態において、前記追加製剤は、ＡＬＰＨＡＧＡＮ（登録商標） Ｐ及びＩＯＰＩＤＩＮＥ（登録商標）などのアルファ作用剤である。他の様態において、前記追加製剤は、ＴＲＵＳＯＰＴ（登録商標）及びＡＺＯＰＴ（登録商標）などの炭酸脱水酵素阻害剤である。このような追加製剤は、ＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤の投与前、投与と同時に又は投与後に投与され得る。
一部の様態において、ＣＮＳ機能損傷は、特に触覚に関する感覚系と関連している。したがって、一部の様態において、本開示内容は、必要とする対象で神経障害性疼痛を治療、予防又は軽減する方法として、ＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤を前記対象に投与することを含む方法を提供する。
一部の様態において、神経障害性疼痛は、中枢性神経障害性疼痛、すなわち、中枢体性感覚神経系を含むＣＮＳの任意の部位に影響を及ぼす傷害又は損傷（例えば、脳損傷及び脊髓損傷）による疼痛又は脳卒中、多発性硬化症又は延髄外側梗塞などの疾患又は障害と関連していたり、前記疾患又は障害の結果としての疼痛である。一部の様態において、中枢性神経障害性疼痛は、自発性であったり、刺激によって誘発され得る。一部の様態において、中枢神経障害性疼痛は、動的機械的異痛症及び冷感異痛を含むことができる。中枢性神経障害性疼痛の症状は、例えば、灼熱感、刺すような感じ、撃たれる感じ、絞り出す感じ、苦しい寒さ、感覚異常及び感覚障害などの感覚を含み、例えば、ひりひりする感じ、ピンと針で刺すような感じ、寒さ及び圧迫感が一般的である。中枢性神経障害性疼痛の分布は、例えば、眼窩周辺領域で小さい領域から広い領域に至る領域、脳卒中時の身体の半分又は脊髓損傷時の下体を含む領域、又は顔面の一側及び胴体又は四肢の反対側を含む領域を含む。脊髓損傷による中枢性神経障害性疼痛は、損傷部位で分節パターンとして認識される疼痛である「損傷部位（ａｔ－ｌｅｖｅｌ）」疼痛と、損傷部位の下側で感じられる疼痛である「損傷下部（ｂｅｌｏｗ－ｌｅｖｅｌ）」疼痛とを含む。一部の様態において、前記方法は、中枢性神経障害性疼痛、疼痛関連症状、疼痛の根本的な原因又はこれらの組み合わせを減少、反転、緩和、軽減、阻害、遅延又は予防する。
一部の様態において、神経障害性疼痛は、末梢性神経障害性疼痛、末梢神経系の任意の部位に影響を及ぼす傷害又は損傷（例えば、運動神経、感覚神経、自律神経又はこれらの組み合わせの損傷）による疼痛、又は、疾患又は障害に起因したり、これと関連した疼痛である。運動神経の傷害又は損傷は、筋弱化（例えば、背中、足、尻又は顔面筋肉の弱化）、苦しい痙攣及び線維多発性攣縮（ｆａｓｃｉｃｕｌａｔｉｏｎ、皮下で見られる統制されていない筋肉収縮）、筋肉萎縮（筋肉大きさの激しい収縮）及び反射作用の減少などの症状と関連している。感覚神経の傷害又は損傷は、皮膚の疼痛及び疼痛受容体の過敏化を含む多様な症状を誘発し、異痛（例えば、一般に無痛である刺激から激しい疼痛）が表れる。
一部の様態において、前記方法は、ＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤（例えば、抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体）を必要とする対象に投与することを含み、一つ以上の類型の神経障害性疼痛を治療する。一部の様態において、本明細書に開示された方法で治療できる神経障害性疼痛は、三叉神経痛（ＴＮ）（例えば、顔面又は口腔内三叉神経領域内の疼痛）、非定型三叉神経痛（ＡＴＮ）、後頭神経痛、帯状疱疹後神経痛（例えば、一つ以上の脊椎分節（ｓｐｉｎａｌ ｄｅｒｍａｔｏｍｅ）又は三叉神経眼分枝（ｏｐｈｔｈａｌｍｉｃ ｄｉｖｉｓｉｏｎ）内に一方的に分布された疼痛）、末梢神経損傷疼痛（例えば、一般に、外傷、手術又は圧迫の遠位部である病変神経の神経分布領域内の疼痛）、舌咽神経痛（例えば、咽喉、舌及び耳の後側に激しい疼痛を誘発する９番目の脳神経の刺激）、坐骨神経痛、腰痛及び非定型顔面痛を含むが、これに限定されない神経痛である。一部の様態において、前記神経痛は、化学的刺激、炎症、外傷（手術を含む）、例えば、隣接組織（例えば、腫瘍）による神経圧迫、又は感染に起因したり、これと関連している。一部の様態において、前記神経障害性疼痛は、脳又は脊髓損傷、脳卒中後疼痛、幻肢痛、下肢麻痺、上腕神経叢引き抜き損傷、腰髄神経根障害を含むが、これに限定されない求心路遮断性疼痛症候群である。一部の様態において、神経障害性疼痛は、ＣＲＰＳ１及びＣＲＰＳ２を含むが、これに限定されない複合性局所疼痛症候群（ＣＲＰＳ）である。一部の様態において、ＣＲＰＳ関連症状は、激しい疼痛、爪、骨及び皮膚の変化；患肢での接触過敏症の増加を含むことができる。一部の様態において、神経障害性疼痛は、神経障害（例えば、中枢又は末梢）である。神経障害性疼痛の非制限的な例は、例えば、単神経障害性疼痛（単神経障害）及び多発性神経障害性疼痛（多発性神経障害）を含む。
一部の様態において、神経障害性疼痛は、例えば、（１）神経圧迫（例えば、神経圧挫、神経伸長、神経絞扼又は不完全な神経切開）を含む外傷性傷害又は損傷；（２）脊髓損傷（例えば、脊髓の片側切断）；（３）末梢神経（例えば、運動神経、感覚神経、自律神経又はこれらの組み合わせ）の傷害又は損傷；（４）四肢切断；打撲傷；炎症（例えば、脊髓炎症）；又は外科的処置；及び（５）例えば、長期間特定群の関節の動きを必要とする反復的で、不便で／又は強制的な活動を含む反復的ストレス（例えば、尺骨神経障害及び手根管症候群）を含む物理的損傷に起因したり、これと関連している。一部の様態において、前記方法は、特に有毒物質に対する露出に起因したり、これと関連している神経障害性疼痛を治療する。
一部の様態において、神経障害性疼痛は、例えば、（１）虚血事例（例えば、脳卒中又は心臓麻痺）、（２）多発性硬化症、（３）代謝及び／又は内分泌疾患又は障害（例えば、糖尿病、代謝疾患及び成長ホルモンの過多生産によって誘発され、神経絞扼及び疼痛を起こす関節を含む骨格の一部が非正常的に大きくなることを特徴とする症状である末端肥大症）、（４）神経組織損傷（例えば、血管炎、すなわち、血管炎症）につながる末梢神経への酸素供給の減少を起こす小血管疾患、（５）自己免疫疾患（例えば、シェーグレン症候群、ループス、関節リウマチ及びギラン・バレー症候群としても知られている急性炎症性脱髄性（ｄｅｍｙｅｌｉｎａｔｉｎｇ）神経障害、（６）腎臓障害、（７）癌又は腫瘍（例えば、新生物腫瘍、神経腫、腫瘍随伴症候群（ｐａｒａｎｅｏｐｌａｓｔｉｃ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）及び癌治療時の化学治療剤と放射線の毒性）、（８）感染（例えば、水痘・帯状ヘルペス（帯状疱疹）、エプスタイン－バーウイルス、ウエストナイルウイルス、巨大細胞ウイルス及び単純ヘルペスウイルス、ＡＩＤＳなどのウイルス、ライム病、ジフテリア及びハンセン病などのバクテリアによる感染）、（９）炎症性障害、（１０）末梢神経障害（例えば、神経腫）、（１１）先天的であったり、新たに（ｄｅ ｎｏｖｏ）発生する遺伝的障害（例えば、シャルコー・マリー・トゥース（Ｃｈａｒｃｏｔ－Ｍａｒｉｅ－Ｔｏｏｔｈ）障害）、（１２）単神経障害、（１３）多発性神経障害又はこれらの組み合わせを含む一つ以上の疾患又は障害に起因したり、又はこれと関連している。一部の様態において、前記神経障害性疼痛は、真性糖尿病（Ｉ型又はＩＩ型）に起因したり、これと関連している。一部の様態において、前記神経障害性疼痛は糖尿病性末梢神経障害である。
一部の様態において、神経障害性疼痛は、例えば、ダニ媒介感染、水痘・帯状ヘルペス、エプスタイン－バーウイルス、ウエストナイルウイルス、巨大細胞ウイルス、単純ヘルペスウイルス、ＡＩＤＳ又は毒性物質（例えば、薬物、アルコール、重金属（例えば、鉛、ヒ素、水銀）、又は産業用物質（例えば、溶媒、接着剤から出る煙及び亜酸化窒素）を含む有毒物質に対する露出に起因したり、これと関連している。
一部の様態において、神経障害性疼痛は、身体傷害、感染、糖尿病、癌治療、アルコール中毒、切断、多発性硬化症、帯状疱疹、脊椎手術、坐骨神経痛（坐骨神経による疼痛）、腰痛、三叉神経痛などの神経痛（例えば、顔面又は口腔内の三叉神経領域内の疼痛）、疼痛性多発性神経障害などの神経障害性疼痛（例えば、足の疼痛は、脚、太もも及び手を含んで拡大され得る）又はこれらの組み合わせに起因したり、これと関連している。一部の様態において、神経障害性疼痛は三叉神経痛である。一部の様態において、神経障害性疼痛は、背中、脚、尻又は顔面筋肉の弱化と関連している。一部の様態において、神経障害性疼痛は、神経、例えば、脚、足、尻又は顔面筋肉にある神経の圧迫によって誘発される。一部の様態において、神経障害性疼痛は坐骨神経損傷を含む。一部の様態において、前記神経障害性疼痛は坐骨神経痛である。
一部の様態において、本開示内容の方法は、神経障害性疼痛と関連する一つ以上の症状を反転、緩和、軽減、阻害、遅延又は予防することができる。したがって、一様態において、本開示内容は、必要とする対象で痛覚過敏を改善するための方法として、ＦＡＭ１９Ａ１に対する拮抗剤を前記対象に投与することを含む方法を提供する。本明細書で使用する用語「痛覚過敏」は、疼痛刺激（例えば、ピンで刺すこと又はホットプレート）に対する増加又は著しい反応を称する。一部の様態において、前記痛覚過敏は、ピンで刺すこと（機械的痛覚過敏）などの機械的刺激に関する。他の様態において、前記痛覚過敏は、ホットプレート（熱痛覚過敏）などの熱刺激に関する。一部の様態において、前記必要とする対象は慢性狭窄損傷（例えば、坐骨神経痛）を有している。一部の様態において、前記必要とする対象は糖尿病性末梢神経障害を有している。
一部の様態において、ＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤を必要とする対象に投与すると、対象は、参考対照群（例えば、ＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤の投与を受けていない神経障害性疼痛対象）に比べて、機械的刺激に対してさらに高い閾値を有するようになる。本明細書で使用する用語「機械的刺激に対する閾値」は、対象が（例えば、身を引き離すことによって）刺激に反応する前（機械的刺激の）圧力の量を称する。したがって、さらに高い閾値を有する対象は、さらに低い閾値を有する対象に比べて遥かに多量の機械的刺激を耐えることができる。一部の様態において、本明細書に開示された方法は、機械的刺激に対する対象の閾値を参考対照群（例えば、ＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤を投与する前の対象の閾値）に比べて少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約１００％、少なくとも約１５０％又は少なくとも約２００％増加させることができる。
一部の様態において、ＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤を必要とする対象に投与すると、参考対照群（例えば、ＦＡＭ１９Ａ１５拮抗剤の投与を受けていない神経障害性疼痛対象）に比べて、熱刺激（例えば、ホットプレート）に対する対象の遅延時間（すなわち、刺激と反応との間の時間間隔）を増加させる。一部の様態において、本明細書に開示された方法は、熱刺激に対する対象の遅延時間を参考対照群（例えば、ＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤を投与する前の対象の閾値）に比べて少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約１００％、少なくとも約１５０％又は少なくとも約２００％増加させることができる。
他の様態において、本開示内容は、必要とする対象で感覚神経伝導速度を改善するための方法を提供する。用語「感覚神経伝導速度（ＳＮＣＶ）」は、電気信号が末梢神経を通じて移動する速度を称する。健康な神経は、損傷した神経よりさらに速く且つさらに強く電気信号を送る。Ｃｈｏｕｈａｎ Ｓ．，Ｊ Ｃｌｉｎ Ｄｉａｇｎ Ｒｅｓ １０（１）：ＣＣ０１－３（２０１６）を参照すればよい。したがって、ＳＮＣＶ測定を助ける試験（例えば、感覚神経伝導速度試験）は、対象で起こり得る神経損傷及び／又は機能障害を確認するのに有用であり得る。一部の様態において、本明細書に開示された方法は、神経障害性疼痛対象のＳＮＣＶを参考対照群（例えば、ＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤を投与する前の対象の閾値）に比べて少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約１００％、少なくとも約１５０％又は少なくとも約２００％増加させることができる。
一部の様態において、神経障害性疼痛を治療する方法は、神経障害性疼痛を治療するための追加製剤を投与することをさらに含むことができる。神経障害性疼痛を治療するための製剤の非制限的な例は、ベンラファキシン（ＥＦＦＥＸＯＲ（登録商標））、カルバマゼピン（ＣＡＲＢＡＴＲＯＬ（登録商標）、三叉神経痛の疼痛緩和用としてＦＤＡ承認を受けたＴＥＧＲＥＴＯＬ（登録商標））、ガバペンチン（ＮＥＵＲＯＮＴＩＮ（登録商標）、帯状疱疹を治癒してから１～３ヶ月間持続される疼痛である帯状疱疹後神経痛（ＰＨＮ）管理用としてＦＤＡ承認を受けたＧＲＡＬＩＳＥ（登録商標））、プレガバリン（ＰＨＮ、疼痛性糖尿病性神経障害性疼痛及び線維筋痛症に対して承認されたＬＹＲＩＣＡ（登録商標））などの抗てんかん薬、リドカインなどのナトリウムチャネル遮断薬、クロニジン、フェントラミン、フェノキシベンザミン、レセルピン、デクスメデトミジンなどのアドレナリン性薬物、モルヒネなどのオピオイド及びアミトリプチリン、イミプラミン及びデュロキセチンなどの抗うつ薬を含む。
前記一つ以上の追加治療薬物の用量及び投与は、例えば、薬物のそれぞれの製品ラベルによって指示されたように当業界に公知となっている。
一部の様態において、前記治療する対象は、ラット又はマウスなどの非ヒト動物である。一部の様態において、前記治療する対象はヒトである。
［中枢神経系（ＣＮＳ）機能を調節又は改善させる方法］
一つの特定理論に拘束されなく、一部の様態において、本明細書に開示されたＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤は、ＦＡＭ１９Ａ１活性を減少及び／又は阻害することによって疾患又は障害を治療することができる。一部の様態において、前記減少及び／又は阻害されたＦＡＭ１９Ａ１活性は、中枢神経系の一つ以上の機能を改善させることができる。したがって、一部の様態において、本明細書は、必要とする対象で中枢神経系の一つ以上の機能を調節又は改善させる方法として、ＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤を前記対象に投与することを含む方法を開示する。一部の様態において、本開示内容に有用なＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤は、ＦＡＭ１９Ａ１を特異的に標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｄｓＲＮＡ、アプタマー、ＰＮＡ又はこれを含むベクターである。特定の様態において、ＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤は、抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体、抗－ＦＡＭ１９Ａ１５抗体をコーディングするポリヌクレオチド又はそのポリヌクレオチドを含むベクターを含む。
上述したように、一部重複する機能があるが、ＣＮＳ内のほとんどの組織は、互いに異なる群に分類され得る特定の機能に関与する。したがって、一部の様態において、中枢神経系機能は、辺縁系関連機能、嗅覚系関連機能、感覚系関連機能、視覚系関連機能又はこれらの組み合わせを含む。
本明細書で使用する用語「辺縁系関連機能」は、辺縁系と関連する活動を称する。用語「辺縁系」は、３個の主要機能である感情、記憶及び覚醒（又は刺激）を処理する脳の一部を称する。一部の様態において、前記辺縁系は、次のような脳領域を含む：嗅球、海馬、視床下部、扁桃体、視床前核、脳弓、脳弓柱、乳頭体、透明中隔、手綱交連（ｈａｂｅｎｕｌａｒ ｃｏｍｍｉｓｓｕｒｅ）、帯状回、海馬傍回、嗅内皮質、手網及び辺縁中脳領域。
本明細書で使用する用語「嗅覚系関連機能」は、臭い感知（嗅覚）のために使用される感覚系の一部を称する嗅覚系と関連する活動を称する。
本明細書で使用する用語「感覚系関連機能」は、感覚系と関連する活動を称する。感覚系は、感覚神経細胞（感覚受容体細胞を含む）、神経経路及び感覚知覚に関与する脳の一部を含む。一部の様態において、感覚系関連機能は、聴覚、触覚、味覚、均衡感覚又はこれらの組み合わせを含む。
本明細書で使用する用語「視覚系関連機能」は、視覚と関連する活動を称する。用語「視覚系」は、視覚的細部事項の処理（例えば、可視光線から情報を感知及び解釈）に関与するだけでなく、様々な非－イメージ光応答機能（例えば、瞳孔光反射（ＰＬＲ）及び１周期リズム光流入（ｃｉｒｃａｄｉａｎ ｐｈｏｔｏｅｎｔｒａｉｎｍｅｎｔ））の形成を可能にするＣＮＳの一部を称する。視覚系は、受光及び単眼表現（ｍｏｎｏｃｕｌａｒ ｒｅｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ）の形成；一対の２次元投影から核双眼知覚の蓄積；視覚的個体の識別及び分類；物体までの距離及び物体間の距離評価；及び見える物体に対応する身体の動き案内を含む多数の複雑な作業を行う。
本開示内容と関連して、ＦＡＭ１９Ａ１は、本明細書に開示されたＣＮＳ機能と関連する特定の脳領域で発現されることが示された。例えば、実施例８を参照すればよい。特定のメカニズム又は理論に拘束されることなく、ＦＡＭ１９Ａ１の非正常的な発現は、ＣＮＳ機能の欠陥の原因であり得る。
一部の様態において、本明細書に開示されたＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤（例えば、抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体）は、脳領域（例えば、本明細書に開示されたＣＮＳ機能と関連する領域）でＦＡＭ１９Ａ１タンパク質発現及び／又はＦＡＭ１９Ａ１ ｍＲＮＡ発現を減少させることによって中枢神経系機能を調節又は改善することができる。特定の様態において、脳領域は、大脳皮質、海馬、視床下部、中脳、前頭前皮質、扁桃体（例えば、外側扁桃核及び基底内側扁桃核）、梨状皮質、前嗅核、外側嗅内皮質、手網又はこれらの組み合わせを含む。
一部の様態において、ＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤（例えば、抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体）は、網膜領域でＦＡＭ１９Ａ１タンパク質発現及び／又はＦＡＭ１９Ａ１ ｍＲＮＡ発現を減少させる。特定の様態において、網膜領域は、神経節細胞層（ＧＣＬ）又は内網状層（ＩＮＬ）を含む。
一部の様態において、ＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤（例えば、抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体）は、脊髓領域でのＦＡＭ１９Ａ１タンパク質発現及び／又はＦＡＭ１９Ａ１ ｍＲＮＡ発現を減少させる。特定の様態において、脊椎領域は後角を含む。
一部の様態において、本明細書に開示されたＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤（例えば、抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体）を投与した後、ＦＡＭ１９Ａ１タンパク質発現及び／又はＦＡＭ１９Ａ１ ｍＲＮＡ発現は、基準（例えば、ＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤の投与を受けていない対象の該当の値又はＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤を投与する前の対象の該当の値）に比べて少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％又は少なくとも約９０％以上減少する。一部の様態において、減少したＦＡＭ１９Ａ１タンパク質発現及び／又はＦＡＭ１９Ａ１ ｍＲＮＡ発現は、ＣＮＳ機能の改善と関連している。
神経細胞の分化を調節、誘導又は増加させる方法
神経幹細胞（ＮＳＣ）は、連続的に分裂する能力（すなわち、自己再生能力）を有し、中枢神経系の神経細胞、星状細胞及び乏突起膠細胞に分化する能力を有している。神経細胞への分化過程は、主に胚性期に発生するが、グリア細胞への分化過程は出生後に発生する。Ｂａｙｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｃｏｍｐ Ｎｅｕｒｏｌ ３０７：４９９－５１６（１９９１）；Ｍｉｌｌｅｒ ａｎｄ Ｇａｕｔｈｉｅｒ，Ｎｅｕｒｏｎ ５４：３５７－３６９（２００７）を参照すればよい。
正常なＣＮＳ機能を維持するためには、神経細胞とグリア細胞（例えば、星状細胞）の数値的均衡が必須である。星状細胞は、特定の有益な機能（例えば、神経細胞を構造的に支持し、神経成長因子を分泌し、血液－脳障壁の維持に役に立つ機能）を有しているが、過度に多い星状細胞形成は、神経細胞の再生を妨害し、ＣＮＳ組織に炎症媒介損傷を起こし得る。Ｍｙｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｂｒａｉｎ １２９：２７６１－２７７２（２００６）；Ｃｈｅｎ ａｎｄ Ｓｗａｎｓｏｎ，Ｊ Ｃｅｒｅｂ Ｂｌｏｏｄ Ｆｌｏｗ Ｍｅｔａｂ ２３：１３７－１４９（２００３）；Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ ｅｔ ａｌ．，Ｂｒａｉｎ １２８：１９３１－１９４２（２００５）；Ｆａｄｅｎ，Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｎｅｕｒｏｌ １５：７０７－７１２（２００２）を参照すればよい；また、その全文が本明細書に参考として含まれる米国公開番号２０１５／０１１８２３０を参照すればよい。
神経膠症は、中枢神経系の多様な病理学的過程で頻繁に起こる現象であり、神経細胞損傷による星状細胞の過多増殖及び活性化によって誘発される。中枢神経系に損傷が加えられると、正常星状細胞は、グリア細胞繊維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）と呼ばれる中間フィラメントタンパク質の生成を増加させる肥大性の反応性星状細胞になる。反応性星状細胞を含む多様なグリア細胞は、損傷後に過多増殖するようになり、治癒過程の産物である神経膠瘢痕という固体細胞層が形成される。このような神経膠症は、ハンチントン病、パーキンソン病、アルツハイマー病を始めとした退行性脳疾患、脳脊髓損傷、及び脳卒中及び脳腫瘍などの中枢神経系の多様な病理現象で観察される。Ｆａｉｄｅａｕ ｅｔ ａｌ．，Ｈｕｍ Ｍｏｌ Ｇｅｎｅｔ １９（１５）：３０５３－６７（２０１０）；Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒ Ｄｒｕｇ Ｔａｒｇｅｔｓ ５：１４９－１５７（２００５）；Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ Ｄｅａｔｈ Ｄｉｆｆｅｒ １６：３７８－３８５（２００９）；Ｒｏｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ ３１（３５）：１２４７１－１２４８２（２０１１）；Ｔａｌｂｏｔｔ ｅｔ ａｌ．，Ｅｘｐ Ｎｅｕｒｏｌ １９２：１１－２４（２００５）；Ｓｈｉｍａｄａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ ３２（３３）：７９２６－４０（２０１２）；Ｓｏｆｒｏｎｉｅｗ ａｎｄ Ｖｉｎｔｅｒｓ，Ａｃｔａ Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ １１９：７－３５（２０１０）を参照すればよい。
したがって、任意の特定メカニズム又は理論に拘束されることなく、例えば、神経幹細胞からの神経細胞の分化を促進及び／又は調節することによってＣＮＳ機能を改善することができる。これによって、本開示内容は、必要とする対象で神経細胞の分化及び／又は成熟を調節、誘導又は増加させる方法として、ＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤（例えば、抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体）を前記対象に投与することを含む方法を提供する。一部の様態において、ＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤は、基準（例えば、ＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤の投与を受けていない対象の該当の値又はＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤を投与する前の対象の該当の値）に比べて、分化された神経幹細胞（すなわち、神経細胞）で神経突起成長を増加させる。特定の様態において、神経突起成長は、前記基準に比べて少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％又は少なくとも約９０％以上増加する。
中枢神経系（ＣＮＳ）機能異常を診断する方法
本明細書は、必要とする対象でＣＮＳ機能異常を診断する方法として、ＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤（例えば、抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体）を前記対象のサンプルと接触させ、前記サンプルでのＦＡＭ１９Ａ１タンパク質水準又はＦＡＭ１９Ａ１ ｍＲＮＡ水準を測定することを含む方法を開示する。また、本明細書は、中枢神経系機能異常がある対象を確認する方法として、ＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤を前記対象のサンプルと接触させ、前記サンプルでのＦＡＭ１９Ａ１タンパク質水準又はＦＡＭ１９Ａ１ ｍＲＮＡ水準を測定することを含む方法を開示する。
用語「中枢神経系機能異常」は、ＣＮＳと関連する一つ以上の機能を行えない能力（又は減少した能力）を称する。一部の様態において、中枢神経系機能は、辺縁系関連機能、嗅覚系関連機能、感覚系関連機能、視覚系関連機能又はこれらの組み合わせを含む。
本開示内容以外に、他の部分に説明されているように、ＣＮＳに影響を及ぼす多くの疾患又は障害は、損傷したＣＮＳ機能とある程度は関連している（例えば、緑内障と関連する一次症状は視力損傷である）。したがって、一部の様態において、本明細書に開示された方法は、ＣＮＳと関連する疾患又は障害を有する対象を診断及び／又は確認するために使用することができる。このような疾患又は障害の非制限的な例は、緑内障、神経障害性疼痛、中毒症、くも膜嚢胞、注意欠陥／多動性障害（ＡＤＨＤ）、自閉症、双極性障害、強硬症、うつ病、脳炎、てんかん／発作、固定症侯群、髄膜炎、片頭痛、多発性硬化症、骨髓病症、アルツハイマー病、ハンチントン病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、バッテン病、トゥレット症候群、外傷性脳損傷、外傷後ストレス障害（ＰＴＳＤ）、脳脊髓損傷、脳卒中、振戦（本態性又はパーキンソン病性）、筋緊張異常、精神分裂病、知的障害及び脳腫瘍を含む。一部の様態において、中枢神経系機能異常は、緑内障又は神経障害性疼痛と関連している。
一部の様態において、中枢神経系機能に異常がある対象を診断及び／又は確認する方法は、測定前にＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤を前記対象に投与し、生体内で前記ＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤とＦＡＭ１９Ａ１との間に接触を起こさせることを含む。一部の様態において、前記接触及び測定は試験管内で行われる。
一部の様態において、ＣＮＳ機能の異常は、基準（例えば、中枢神経系機能に異常がない対象、例えば、健康な対象のサンプルでの該当の値）に比べて、サンプルでのＦＡＭ１９Ａ１タンパク質水準及び／又はＦＡＭ１９Ａ１ ｍＲＮＡ水準の増加と関連している。特定の様態において、前記ＦＡＭ１９Ａ１タンパク質水準及び／又はＦＡＭ１９Ａ１ ｍＲＮＡ水準は、前記基準に比べて少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％又は少なくとも約９０％以上増加する。
一部の様態において、中枢神経系機能に異常がある対象のサンプルは、基準（例えば、中枢神経系機能に異常がない対象、例えば、健康な対象のサンプルでの該当の値）に比べて、ＦＡＭ１９Ａ１タンパク質水準及び／又はＦＡＭ１９Ａ１ ｍＲＮＡ水準において少なくとも１．１倍、少なくとも１．２倍、少なくとも１．３倍、少なくとも１．４倍、少なくとも１．５倍、少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも４倍、少なくとも５倍、少なくとも６倍、少なくとも７倍、少なくとも８倍、少なくとも９倍、少なくとも１０倍、少なくとも１１倍、少なくとも１２倍、少なくとも１３倍、少なくとも１５倍、少なくとも２０倍、少なくとも２５倍又は少なくとも３０倍の増加を有する。
一部の様態において、ＣＮＳ機能の異常は、基準（例えば、中枢神経系機能に異常がない対象、例えば、健康な対象のサンプルでの該当の値）に比べて、サンプルでのＦＡＭ１９Ａ１タンパク質水準及び／又はＦＡＭ１９Ａ１ ｍＲＮＡ水準の減少と関連している。特定の様態において、前記ＦＡＭ１９Ａ１タンパク質水準及び／又はＦＡＭ１９Ａ１ ｍＲＮＡ水準は、前記基準に比べて少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％又は少なくとも約９０％以上減少する。
一部の様態において、中枢神経系機能に異常がある対象のサンプルは、基準（例えば、中枢神経系機能に異常がない対象、例えば、健康な対象のサンプルでの該当の値）に比べて、ＦＡＭ１９Ａ１タンパク質水準及び／又はＦＡＭ１９Ａ１ ｍＲＮＡ水準において少なくとも１．１倍、少なくとも１．２倍、少なくとも１．３倍、少なくとも１．４倍、少なくとも１．５倍、少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも４倍、少なくとも５倍、少なくとも６倍、少なくとも７倍、少なくとも８倍、少なくとも９倍、少なくとも１０倍、少なくとも１１倍、少なくとも１２倍、少なくとも１３倍、少なくとも１５倍、少なくとも２０倍、少なくとも２５倍又は少なくとも３０倍の減少を有する。
一部の様態において、ＦＡＭ１９Ａ１タンパク質水準は、免疫組織化学、ウエスタンブロット、放射免疫分析、酵素結合免疫吸着分析（ＥＬＩＳＡ）、放射免疫拡散、免疫沈降分析、オクタロニー免疫拡散法、ロケット免疫電気泳動、組織免疫染色法、補体固定分析、ＦＡＣＳ、タンパク質チップ又はこれらの組み合わせによって測定される。一部の様態において、ＦＡＭ１９Ａ１ ｍＲＮＡ水準は、逆転写ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ－ＰＣＲ）、リアルタイムポリメラーゼ連鎖反応、ノーザンブロット又はこれらの組み合わせによって測定される。一部の様態において、ＦＡＭ１９Ａ１タンパク質水準は、本明細書に開示されたＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤（例えば、抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体）を使用する分析法によって測定される。
一部の様態において、サンプル（例えば、ＦＡＭ１９Ａ１タンパク質水準及び／又はＦＡＭ１９Ａ１ ｍＲＮＡ水準を測定するサンプル）は、組織、細胞、血液、血清、血漿、唾液、小便、脳脊髄液（ＣＳＦ）又はこれらの組み合わせを含む。
一部の様態において、中枢神経系機能に異常がある対象を診断及び／又は確認する方法は、ＦＡＭ１９Ａ１タンパク質水準及び／又はＦＡＭ１９Ａ１ ｍＲＮＡ水準が基準（例えば、中枢神経系機能に異常がない対象、例えば、健康な対象のサンプルでの該当の値）に比べて増加すると、ＦＡＭ１９Ａ１作用剤を前記対象に投与することをさらに含む。
一部の様態において、中枢神経系機能に異常がある対象を診断及び／又は確認する方法は、ＦＡＭ１９Ａ１タンパク質水準及び／又はＦＡＭ１９Ａ１ ｍＲＮＡ水準が基準（例えば、中枢神経系機能に異常がない対象、例えば、健康な対象のサンプルでの該当の値）に比べて減少すると、ＦＡＭ１９Ａ１作用剤を前記対象に投与することをさらに含む。
一部の様態において、ＦＡＭ１９Ａ１作用剤はＦＡＭ１９Ａ１タンパク質を含む。一部の様態において、ＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤は、抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体、前記抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体をコーディングするポリヌクレオチド、そのポリヌクレオチドを含むベクター、そのポリヌクレオチドを含む細胞又はこれらの任意の組み合わせを含む。一部の様態において、ＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤は、ＦＡＭ１９Ａ１を特異的に標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｄｓＲＮＡ、アプタマー、ＰＮＡ又はこれを含むベクターを含む。特定の様態において、ＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤は抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体である。
[ＩＩＩ．ＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤］
本方法と共に、一つ以上のＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤を使用することができる。一部の様態において、ＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤は、ＦＡＭ１９Ａ１を特異的に標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｄｓＲＮＡ、アプタマー、ＰＮＡ（ペプチド核酸）又はこれを含むベクターである。一部の様態において、ＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤は、抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体、前記抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体をコーディングするポリヌクレオチド又はそのポリヌクレオチドを含むベクターである。
本明細書に開示された方法に有用な抗体は、特定の機能的特徴又は特性を特徴とする単クローン性抗体を含む。例えば、前記抗体は、可溶性ＦＡＭ１９Ａ１及び膜結合ＦＡＭ１９Ａ１を含むヒトＦＡＭ１９Ａ１に特異的に結合する。可溶性及び／又は膜結合ヒトＦＡＭ１９Ａ１への特異的結合以外にも、本明細書に記載された抗体は、（ａ）ＫＤが１０ｎＭ以下である可溶性ヒトＦＡＭ１９Ａ１に結合したり；（ｂ）ＫＤが１０ｎＭ以下である膜結合ヒトＦＡＭ１９Ａ１に結合したり；又は（ａ）及び（ｂ）の全てである。
一部の様態において、本明細書に開示された抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体は、可溶性ヒトＦＡＭ１９Ａ１又は高い親和度、例えば、ＫＤが１０－７Ｍ以下、１０－８Ｍ（１０ｎＭ）以下、１０－９Ｍ（１ｎＭ）以下、１０－１０Ｍ（０．１ｎＭ）以下、１０－１１Ｍ以下又は１０－１２Ｍ以下、例えば、１０－１２Ｍ乃至１０－７Ｍ、１０－１１Ｍ乃至１０－７Ｍ、１０－１０Ｍ乃至１０－７Ｍ又は１０－９Ｍ乃至１０－７Ｍ、例えば、１０－１２Ｍ、５×１０－１２Ｍ、１０－１１Ｍ、５×１０－１１Ｍ、１０－１０Ｍ、５×１０－１０Ｍ、１０－９Ｍ、５×１０－９Ｍ、１０－８Ｍ、５×１０－８Ｍ、１０－７Ｍ又は５×１０－７Ｍである可溶性ヒトＦＡＭ１９Ａ１又は膜結合ヒトＦＡＭ１９Ａ１に特異的に結合する。多様な種のヒトＦＡＭ１９Ａ１に対する抗体の結合能を評価するための標準分析法は、例えば、ＥＬＩＳＡ、ウエスタンブロット及びＲＩＡを含み、当業界に公知となっている。適切な分析法は、実施例部分に詳細に記載されている。また、前記抗体の結合キネティクス（例えば、結合親和度）は、ＥＬＩＳＡ、ＢＩＡＣＯＲＥＴＭ分析又はＫＩＮＥＸＡ（登録商標）などの当業界に知られている標準分析法によっても評価され得る。
一部の様態において、本明細書に開示された抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体は、例えば、ＥＬＩＳＡによって決定したとき、ＫＤが１０－７Ｍ以下、１０－８Ｍ（１０ｎＭ）以下、１０－９Ｍ（１ｎＭ）以下、１０－１０Ｍ以下、１０－１２Ｍ乃至１０－７Ｍ、１０－１１Ｍ乃至１０－７Ｍ、１０－１０Ｍ乃至１０－７Ｍ、１０－９Ｍ乃至１０－７Ｍ、又は１０－８Ｍ乃至１０－７Ｍである可溶性ヒトＦＡＭ１９Ａ１に結合する。一部の様態において、抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体は、ＫＤが１０ｎＭ以下、例えば、０．１ｎＭ乃至１０ｎＭ、０．１ｎＭ乃至５ｎＭ、０．１ｎＭ乃至１ｎＭ、０．５ｎＭ乃至１０ｎＭ、０．５ｎＭ乃至５ｎＭ、０．５ｎＭ乃至１ｎＭ、１ｎＭ乃至１０ｎＭ、１ｎＭ乃至５ｎＭ又は５ｎＭ乃至１０ｎＭである可溶性ＦＡＭ１９Ａ１に結合する。特定の様態において、抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体は、ＥＬＩＳＡによって決定したとき、ＫＤが約１ｐＭ、２ｐＭ、３ｐＭ、４ｐＭ、５ｐＭ、６ｐＭ、７ｐＭ、８ｐＭ、９ｐＭ、１０ｐＭ、２０ｐＭ、３０ｐＭ、４０ｐＭ、５０ｐＭ、６０ｐＭ、７０ｐＭ、８０ｐＭ、９０ｐＭ、１００ｐＭ、２００ｐＭ、３００ｐＭ、４００ｐＭ、５００ｐＭ、６００ｐＭ、７００ｐＭ、８００ｐＭ又は９００ｐＭ、又は、約１ｎＭ、２ｎＭ、３ｎＭ、４ｎＭ、５ｎＭ、６ｎＭ、７ｎＭ、８ｎＭ又は９ｎＭ、又は、約１０ｎＭ、２０ｎＭ、３０ｎＭ、４０ｎＭ、５０ｎＭ、６０ｎＭ、７０ｎＭ、８０ｎＭ又は９０ｎＭである可溶性ヒトＦＡＭ１９Ａ１に特異的に結合する。
一部の様態において、抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体は、ＫＤが、例えば、ＥＬＩＳＡによって決定したとき、１０－７Ｍ以下、１０－８Ｍ（１０ｎＭ）以下、１０－９Ｍ（１ｎＭ）以下、１０－１０Ｍ以下、１０－１２Ｍ乃至１０－７Ｍ、１０－１１Ｍ乃至１０－７Ｍ、１０－１０Ｍ乃至１０－７Ｍ、１０－９Ｍ乃至１０－７Ｍ又は１０－８Ｍ乃至１０－７Ｍである膜結合ヒトＦＡＭ１９Ａ１に結合する。特定の様態において、抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体は、ＥＬＩＳＡによって決定したとき、ＫＤが１０ｎＭ以下、例えば、０．１ｎＭ乃至１０ｎＭ、０．１ｎＭ乃至５ｎＭ、０．１ｎＭ乃至１ｎＭ、０．５ｎＭ乃至１０ｎＭ、０．５ｎＭ乃至５ｎＭ、０．５ｎＭ乃至１ｎＭ、１ｎＭ乃至１０ｎＭ、１ｎＭ乃至５ｎＭ又は５ｎＭ乃至１０ｎＭである膜結合ヒトＦＡＭ１９Ａ１に特異的に結合する。一部の様態において、前記抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体又はその抗原結合部分は、ＥＬＩＳＡによって決定したとき、ＫＤが約１ｐＭ、２ｐＭ、３ｐＭ、４ｐＭ、５ｐＭ、６ｐＭ、７ｐＭ、８ｐＭ、９ｐＭ、１０ｐＭ、２０ｐＭ、３０ｐＭ、４０ｐＭ、５０ｐＭ、６０ｐＭ、７０ｐＭ、８０ｐＭ、９０ｐＭ、１００ｐＭ、２００ｐＭ、３００ｐＭ、４００ｐＭ、５００ｐＭ、６００ｐＭ、７００ｐＭ、８００ｐＭ又は９００ｐＭ、又は、約１ｎＭ、２ｎＭ、３ｎＭ、４ｎＭ、５ｎＭ、６ｎＭ、７ｎＭ、８ｎＭ又は９ｎＭ、又は、約１０ｎＭ、２０ｎＭ、３０ｎＭ、４０ｎＭ、５０ｎＭ、６０ｎＭ、７０ｎＭ、８０ｎＭ又は９０ｎＭである膜結合ヒトＦＡＭ１９Ａ１に結合する。
前記以外にも、ＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤（例えば、抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体）は、次の機能的特性のうち一つ以上を示す：
（１）神経細胞の分化促進；
（２）分化された神経細胞での神経突起成長増加；
（３）緑内障と関連する一つ以上の症状の減少、反転及び／又は予防；
（４）網膜電位向上（例えば、増加した律動様小波によって立証される）；
（５）網膜神経節細胞の損失減少及び／又は回復（例えば、緑内障対象で観察される）；
（６）神経障害性疼痛と関連する一つ以上の症状の減少、反転及び／又は予防；
（７）外部刺激に対する遅延時間及び／又は閾値増加；及び
（８）感覚神経伝導速度の増加及び／又は調節。
本明細書に開示された抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体の他の機能的特性は、本願の全般にわたって提供されている。
一部の様態において、本明細書に開示された抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体は、ヒトＦＡＭ１９Ａ１エピトープに結合するために、本明細書に開示されたＣＤＲ又は可変領域（例えば、１Ｃ１、１Ａ１１、２Ｇ７及び３Ａ８）を含む抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体と交差競争する。
一部の様態において、本開示内容の抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体は、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３、及び軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含む基準抗体の結合を阻害し、（ｉ）前記基準抗体の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３は、それぞれ配列番号１０－１２に示したアミノ酸配列を含み、前記基準抗体の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３は、それぞれ配列番号１３－１５に示したアミノ酸配列を含んだり；（ｉｉ）前記基準抗体の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３は、それぞれ配列番号４－６に示したアミノ酸配列を含み、前記基準抗体の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３は、それぞれ配列番号７－９に示したアミノ酸配列を含んだり；（ｉｉｉ）前記基準抗体の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３は、それぞれ配列番号１６－１８に示したアミノ酸配列を含み、前記基準抗体の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３は、それぞれ配列番号１９－２１に示したアミノ酸配列を含んだり；又は（ｉｖ）前記基準抗体の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３は、それぞれ配列番号２２－２４に示したアミノ酸配列を含み、前記基準抗体の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３は、それぞれ配列番号２５－２７に示したアミノ酸配列を含む。
一部の様態において、前記基準抗体は、（ａ）それぞれ配列番号３０及び３１に示したアミノ酸配列を含む重鎖及び軽鎖可変領域；（ｂ）それぞれ配列番号２８及び２９に示したアミノ酸配列を含む重鎖及び軽鎖可変領域；（ｃ）それぞれ配列番号３２及び３３に示したアミノ酸配列を含む重鎖及び軽鎖可変領域；又は（ｄ）それぞれ配列番号３４及び３５に示したアミノ酸配列を含む重鎖及び軽鎖可変領域；を含む。
一部の様態において、本明細書に開示された抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体は、ヒトＦＡＭ１９Ａ１に対するこのような基準抗体の結合を少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％又は１００％阻害する。競争抗体は、同一のエピトープ、重畳エピトープ又は隣接したエピトープに結合する（例えば、立体障害によって立証される）。２個の抗体が標的に対する結合のために互いに競争するかどうかは、ＲＩＡ及びＥＩＡなどの当業界に公知となっている競争実験を用いて決定することができる。
一部の様態において、抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体は、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３、及び軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含む本明細書に開示された基準抗体と同一のＦＡＭ１９Ａ１エピトープに結合し、（ｉ）前記重鎖ＣＤＲ１は、配列番号１０に示したアミノ酸配列を含み、前記重鎖ＣＤＲ２は、配列番号１１に示したアミノ酸配列を含み、前記重鎖ＣＤＲ３は、配列番号１２に示したアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ１は、配列番号１３に示したアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ２は、配列番号１４に示したアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ３は、配列番号１５に示したアミノ酸配列を含んだり；（ｉｉ）前記重鎖ＣＤＲ１は、配列番号４に示したアミノ酸配列を含み、前記重鎖ＣＤＲ２は、配列番号５に示したアミノ酸配列を含み、前記重鎖ＣＤＲ３は、配列番号６に示したアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ１は、配列番号７に示したアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ２は、配列番号８に示したアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ３は、配列番号９に示したアミノ酸配列を含んだり；（ｉｉｉ）前記重鎖ＣＤＲ１は、配列番号１６に示したアミノ酸配列を含み、前記重鎖ＣＤＲ２は、配列番号１７に示したアミノ酸配列を含み、前記重鎖ＣＤＲ３は、配列番号１８に示したアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ１は、配列番号１９に示したアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ２は、配列番号２０に示したアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ３は、配列番号２１に示したアミノ酸配列を含んだり；又は（ｉｖ）前記重鎖ＣＤＲ１は、配列番号２２に示したアミノ酸配列を含み、前記重鎖ＣＤＲ２は、配列番号２３に示したアミノ酸配列を含み、前記重鎖ＣＤＲ３は、配列番号２４に示したアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ１は、配列番号２５に示したアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ２は、配列番号２６に示したアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ３は、配列番号２７に示したアミノ酸配列を含む。特定の様態において、前記基準抗体は、（ｉ）配列番号３０、２８、３２又は３４に示したアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン及び（ｉｉ）配列番号３１、２９、３３又は３５に示したアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。
一部の様態において、前記基準抗体は、（ａ）それぞれ配列番号３０及び３１に示したアミノ酸配列を含む重鎖及び軽鎖可変領域；（ｂ）それぞれ配列番号２８及び２９に示したアミノ酸配列を含む重鎖及び軽鎖可変領域；（ｃ）それぞれ配列番号３２及び３３に示したアミノ酸配列を含む重鎖及び軽鎖可変領域；又は（ｄ）それぞれ配列番号３４及び３５に示したアミノ酸配列を含む重鎖及び軽鎖可変領域；を含む。
２個の抗体が同一のエピトープに結合するかどうかを決定するための技術は、例えば、エピトープの原子分解能を提供する抗原：抗体複合体の結晶のｘ－線分析及び水素／重水素交換質量分光分析（ＨＤＸ－ＭＳ）などのエピトープマッピング方法、抗原配列内のアミノ酸残基の変形による結合損失を、概してエピトープ成分の表示として見なす抗原断片又は抗原の突然変異された変異体に対する抗体の結合をモニタリングする方法、エピトープマッピングのための電算組み合わせ方法を含む。
本開示内容の抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体は、例えば、ヒトＦＡＭ１９Ａ１の断片に対する抗体の結合によって決定されたように、成熟したヒトＦＡＭ１９Ａ１の少なくとも一つのエピトープに結合することができる。一部の様態において、抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体は、Ｄ１１２、Ｍ１１７、Ａ１１９、Ｔ１２０、Ｎ１２２及びこれらの組み合わせからなる群から選ばれる少なくとも一つのエピトープに結合する。
一部の様態において、本明細書は、例えば、免疫分析（例えば、ＥＬＩＳＡ）、表面プラズモン共鳴又は結合平衡除外法によって測定したとき、ＦＡＭ１９Ａファミリー内の他のタンパク質に比べて２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％又はさらに高い親和度でＦＡＭ１９Ａ１に結合する抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体を提供する。特定の様態において、本明細書に開示された抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体は、例えば、免疫分析（例えば、ＥＬＩＳＡ）、表面プラズモン共鳴又は結合平衡除外法によって測定したとき、ＦＡＭ１９Ａファミリー内の他のタンパク質との交差反応性を有さない。
一部の様態において、抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体は、天然抗体でないか、自然発生抗体ではない。例えば、特定の様態において、本開示内容の抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体は、さらに多いか、さらに少ないか又は相違する類型の翻訳後の変形を有することによって自然発生抗体と異なる翻訳後の変形を有する。
［ＩＶ．例示的な抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体］
本明細書に開示された方法で使用できる特定の抗体は、本明細書に開示されたＣＤＲ及び／又は可変領域の配列を有する抗体、例えば、単クローン性抗体のみならず、これらの可変領域又はＣＤＲ配列に少なくとも８０％の同一性（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％又は少なくとも９９％の同一性）を有する抗体である。本開示内容の互いに異なる抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体のＶＨ及びＶＬアミノ酸配列は、それぞれ表６及び表７に提供されている。
Figure 2023516992000005
Figure 2023516992000006
Figure 2023516992000007
Figure 2023516992000008
一部の様態において、本開示内容の抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体は、重鎖及び軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域は、配列番号３０、２８、３２又は３４に示したアミノ酸配列を含む。一部の様態において、本明細書に開示された抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体は、配列番号３０、２８、３２及び３４からなる群から選ばれる重鎖可変領域のＣＤＲを含む。
一部の様態において、本明細書に開示された抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体は、重鎖及び軽鎖可変領域を含み、前記軽鎖可変領域は、配列番号３１、２９、３３又は３５に示したアミノ酸配列を含む。一部の様態において、本明細書に開示された抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体は、配列番号３１、２９、３３及び３５からなる群から選ばれる軽鎖可変領域のＣＤＲを含む。
一部の様態において、抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体は、配列番号３０、２８、３２及び３４からなる群から選ばれる重鎖可変領域のＣＤＲ、及び配列番号３１、２９、３３及び３５からなる群から選ばれる軽鎖可変領域のＣＤＲを含む。
一部の様態において、抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体は、重鎖及び軽鎖可変領域を含み、（ｉ）前記重鎖可変領域は、配列番号３０に示したアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域は、配列番号３１に示したアミノ酸配列を含み；（ｉｉ）前記重鎖可変領域は、配列番号２８に示したアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域は、配列番号２９に示したアミノ酸配列を含み；（ｉｉｉ）前記重鎖可変領域は、配列番号３２に示したアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域は、配列番号３３に示したアミノ酸配列を含み；（ｉｖ）前記重鎖可変領域は、配列番号３４に示したアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域は、配列番号３５に示したアミノ酸配列を含む。
一部の様態において、抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体は、重鎖及び軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域は、配列番号３０、２８、３２又は３４に示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％又は約１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
一部の様態において、抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体は、重鎖及び軽鎖可変領域を含み、前記軽鎖可変領域は、配列番号３１、２９、３３又は３５に示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％又は約１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
一部の様態において、抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体は、重鎖及び軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域は、配列番号３０、２８、３２又は３４に示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％又は約１００％同一であるアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域は、配列番号３１、２９、３３又は３５に示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％又は約１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
一部の様態において、抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体は：
（ａ）それぞれ配列番号３０及び３１に示したアミノ酸配列を含む重鎖及び軽鎖可変領域；
（ｂ）それぞれ配列番号２８及び２９に示したアミノ酸配列を含む重鎖及び軽鎖可変領域；
（ｃ）それぞれ配列番号３２及び３３に示したアミノ酸配列を含む重鎖及び軽鎖可変領域；又は
（ｄ）それぞれ配列番号３４及び３５に示したアミノ酸配列を含む重鎖及び軽鎖可変領域；を含む。
一部の様態において、本開示内容の抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体は、（ｉ）１Ｃ１の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３又はこれらの組み合わせ及び／又は１Ｃ１の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３又はこれらの任意の組み合わせ；（ｉｉ）１Ａ１１の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３又はこれらの組み合わせ及び／又は１Ａ１１の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３又はこれらの任意の組み合わせ；（ｉｉｉ）２Ｇ７の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３又はこれらの組み合わせ及び／又は２Ｇ７の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３又はこれらの任意の組み合わせ；又は（ｉｖ）３Ａ８の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３又はこれらの組み合わせ及び／又は３Ａ８の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３又はこれらの任意の組み合わせを含む。本明細書に開示された互いに異なる抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体に対するＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３のアミノ酸配列が表４に提供されている。本明細書に開示された互いに異なる抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体に対するＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３のアミノ酸配列は、表５に提供されている。
一部の様態において、ヒトＦＡＭ１９Ａ１に特異的に結合する抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体は：
（ａ）配列番号１０に示したアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号１１に示したアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ２；及び／又は
（ｃ）配列１２に示したアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ３；を含む。
一部の様態において、抗体は、前記ＶＨ ＣＤＲのうち１個、２個又は３個の全てを含む。
一部の様態において、ヒトＦＡＭ１９Ａ１に特異的に結合する抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体は：
（ａ）配列番号１３に示したアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号１４に示したアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ２；及び／又は
（ｃ）配列番号１５に示したアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ３；を含む。
一部の様態において、抗体は、前記ＶＬ ＣＤＲのうち１個、２個又は３個の全てを含む。
一部の様態において、ヒトＦＡＭ１９Ａ１に特異的に結合する抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体は：
（ａ）配列番号１０に示したアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号１１に示したアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号１２に示したアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号１３に示したアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号１４に示したアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ２；及び／又は
（ｆ）配列番号１５に示したアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ３；を含む。
一部の様態において、ヒトＦＡＭ１９Ａ１に特異的に結合する抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体は：
（ａ）配列番号４に示したアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号５に示したアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ２；及び／又は
（ｃ）配列番号６に示したアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ３；を含む。
一部の様態において、抗体は、前記ＶＨ ＣＤＲのうち１個、２個又は３個の全てを含む。
一部の様態において、ヒトＦＡＭ１９Ａ１に特異的に結合する抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体は：
（ａ）配列番号７に示したアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号８に示したアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ２；及び／又は
（ｃ）配列番号９に示したアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ３；を含む。
一部の様態において、抗体は、前記ＶＬ ＣＤＲのうち１個、２個又は３個の全てを含む。
一部の様態において、ヒトＦＡＭ１９Ａ１に特異的に結合する抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体は：
（ａ）配列番号４に示したアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号５に示したアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号６に示したアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号７に示したアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号８に示したアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ２；及び／又は
（ｆ）配列番号９に示したアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ３；を含む。
一部の様態において、ヒトＦＡＭ１９Ａ１に特異的に結合する抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体は：
（ａ）配列番号１６に示したアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号１７に示したアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ２；及び／又は
（ｃ）配列番号１８に示したアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ３；を含む。
一部の様態において、抗体は、前記ＶＨ ＣＤＲのうち１個、２個又は３個の全てを含む。
一部の様態において、ヒトＦＡＭ１９Ａ１に特異的に結合する抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体は：
（ａ）配列番号１９に示したアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号２０に示したアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ２；及び／又は
（ｃ）配列番号２１に示したアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ３；を含む。
一部の様態において、抗体は、前記ＶＬ ＣＤＲのうち１個、２個又は３個の全てを含む。
一部の様態において、ヒトＦＡＭ１９Ａ１に特異的に結合する抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体は：
（ａ）配列番号１６に示したアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号１７に示したアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号１８に示したアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号１９に示したアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号２０に示したアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ２；及び／又は
（ｆ）配列番号２１に示したアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ３；を含む。
一部の様態において、ヒトＦＡＭ１９Ａ１に特異的に結合する抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体は：
（ａ）配列番号２２に示したアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号２３に示したアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ２；及び／又は
（ｃ）配列番号２４に示したアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ３；を含む。
一部の様態において、抗体は、前記ＶＨ ＣＤＲのうち１個、２個又は３個の全てを含む。
一部の様態において、ヒトＦＡＭ１９Ａ１に特異的に結合する抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体は：
（ａ）配列番号２５に示したアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号２６に示したアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ２；及び／又は
（ｃ）配列２７に示したアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ３；を含む。
一部の様態において、抗体は、前記ＶＬ ＣＤＲのうち１個、２個又は３個の全てを含む。
一部の様態において、ヒトＦＡＭ１９Ａ１に特異的に結合する抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体は：
（ａ）配列番号２２に示したアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号２３に示したアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号２４に示したアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号２５に示したアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号２６に示したアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ２；及び／又は
（ｆ）配列番号２７に示したアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ３；を含む。
本明細書に記載されたＶＨドメイン又はその一つ以上のＣＤＲは、重鎖、例えば、全長（ｆｕｌｌ ｌｅｎｇｔｈ）重鎖を形成するための定常ドメインに連結され得る。同様に、本明細書に記載されたＶＬドメイン又はその一つ以上のＣＤＲは、軽鎖、例えば、全長軽鎖を形成するための定常ドメインに連結され得る。全長重鎖及び全長軽鎖は、組み合わせて全長抗体を生成する。
したがって、一部の様態において、前記抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体は、抗体軽鎖及び重鎖、例えば、別個の軽鎖及び重鎖を含む。前記軽鎖と関連して、特定の様態において、本明細書に記載された抗体の軽鎖は、カッパー（ｋａｐｐａ）軽鎖である。一部の様態において、本明細書に記載された抗体の軽鎖は、ラムダ（ｌａｍｂｄａ）軽鎖である。一部の様態において、本明細書に記載された抗体の軽鎖は、ヒトカッパー軽鎖又はヒトラムダ軽鎖である。特定の様態において、ＦＡＭ１９Ａ１ポリペプチド（例えば、ヒトＦＡＭ１９Ａ１）に特異的に結合する本明細書に記載された抗体は、本明細書に記載された任意のＶＬ又はＶＬ ＣＤＲアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、前記軽鎖の定常領域は、ヒトカッパー軽鎖定常領域のアミノ酸配列を含む。一部の様態において、ＦＡＭ１９Ａ１ポリペプチド（例えば、ヒトＦＡＭ１９Ａ１）に特異的に結合する本明細書に記載された抗体は、本明細書に記載されたＶＬ又はＶＬ ＣＤＲアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、前記軽鎖の定常領域は、ヒトラムダ軽鎖定常領域のアミノ酸配列を含む。ヒト定常領域の配列の非制限的な例は当業界に記載されている。例えば、米国特許番号５，６９３，７８０及び上記のＫａｂａｔ ＥＡ ｅｔ ａｌ．，（１９９１）を参照すればよい。
前記重鎖と関連して、一部の様態において、本明細書に記載された抗体の重鎖は、アルファ（α）、デルタ（δ）、イプシロン（ε）、ガンマ（γ）又はミュー（μ）重鎖であり得る。一部の様態において、記載された抗体の重鎖は、ヒトアルファ（α）、デルタ（δ）、イプシロン（ε）、ガンマ（γ）又はミュー（μ）重鎖を含むことができる。一部の様態において、ＦＡＭ１９Ａ１（例えば、ヒトＦＡＭ１９Ａ１）に特異的に結合する本明細書に記載された抗体は、本明細書に記載されたＶＨ又はＶＨ ＣＤＲアミノ酸配列を含む重鎖を含み、前記重鎖の定常領域は、ヒトガンマ（γ）重鎖定常領域のアミノ酸配列を含む。一部の様態において、ＦＡＭ１９Ａ１（例えば、ヒトＦＡＭ１９Ａ１）に特異的に結合する本明細書に記載された抗体は、本明細書に開示されたＶＨ又はＶＨ ＣＤＲアミノ酸配列を含む重鎖を含み、前記重鎖の定常領域は、本明細書に記載されていたり、当業界に公知となっているヒト重鎖のアミノ酸を含む。ヒト定常領域の配列の非制限的な例は当業界に記載されている。例えば、米国特許番号５，６９３，７８０及び上記のＫａｂａｔ ＥＡ ｅｔ ａｌ．，（１９９１）を参照すればよい。
一部の様態において、本明細書に記載された抗体は、本明細書に記載されたＶＨ又はＶＨ ＣＤＲ、及びＶＬとＶＬ ＣＤＲを含むＶＬドメイン及びＶＨドメインを含み、前記定常領域は、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ又はＩｇＹ免疫グロブリン分子又はヒトＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ又はＩｇＹ免疫グロブリン分子の定常領域のアミノ酸配列を含む。特定の様態において、ＦＡＭ１９Ａ１（例えば、ヒトＦＡＭ１９Ａ１）に特異的に結合する本明細書に記載された抗体は、本明細書に記載された任意のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン及びＶＨドメインを含み、前記定常領域は、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ又はＩｇＹ免疫グロブリン分子及び任意の亜型の免疫グロブリン分子（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１及びＩｇＡ２）の定常領域のアミノ酸配列を含む。一部の様態において、前記定常領域は、亜型（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４）及び同種異因子型（例えば、Ｇ１ｍ、Ｇ２ｍ、Ｇ３ｍ及びｎＧ４ｍ）及びこれらの変種を含む天然ヒトＩｇＧの定常領域のアミノ酸配列を含む。例えば、Ｖｉｄａｒｓｓｏｎ Ｇ．ｅｔ ａｌ．Ｆｒｏｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ．５：５２０（２０１４年１０月２０日オンライン公開）及びＪｅｆｆｅｒｉｓ Ｒ．ａｎｄ Ｌｅｆｒａｎｃ ＭＰ，ｍＡｂｓ １：４、１－７（２００９）を参照すればよい。一部の様態において、前記定常領域は、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４又はこれらの変種の定常領域のアミノ酸配列を含む。
一部の様態において、本明細書に開示された抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体は、Ｆｃエフェクター機能、例えば、補体依存性細胞障害（ＣＤＣ）及び／又は抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）を有さない。エフェクター機能は、Ｆｃ領域によって媒介し、前記Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインでヒンジ領域に最も近接した残基は、先天性免疫系のエフェクター細胞上でＣｌｑ（補体）及びＩｇＧ－Ｆｃ受容体（ＦｃγＲ）に対して大きく重畳する結合部位を含むので、抗体のエフェクター機能を担当する。また、ＩｇＧ２及びＩｇＧ４抗体は、ＩｇＧ１及びＩｇＧ３抗体より低い水準のＦｃエフェクター機能を有している。抗体のエフェクター機能は、（１）Ｆｃ領域に欠けた抗体断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、単一鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）又はモノマーＶＨ又はＶＬドメインからなるｓｄＡｂなど）を使用し；（２）例えば、糖が付着している残基を欠失又は変更することによって、糖を酵素的に除去することによって、グリコシル化阻害剤の存在下で培養された細胞で抗体を生成することによって、又はタンパク質をグリコシル化できない細胞（例えば、バクテリア宿主細胞、例えば、米国特許公開第２０１２０１００１４０号参照）で抗体を発現することによって無糖化抗体を生成し；（３）エフェクター機能が減少したＩｇＧ亜型のＦｃ領域を使用し（例えば、ＩｇＧ２及びＩｇＧ４抗体のＦｃ領域、又はＩｇＧ２及びＩｇＧ４抗体のＣＨ２ドメインを含むキメラＦｃ領域、例えば、米国特許公開第２０１２０１００１４０号及びＬａｕ Ｃ．ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９１：４７６９－４７７７（２０１３）参照）；及び（４）Ｆｃ機能を減少させたり、Ｆｃ機能をなくす突然変異を有するＦｃ領域を生成させることを含む当業界に公知となっている互いに異なる接近法によって減少又は回避され得る。例えば、米国特許公開第２０１２０１００１４０号及びその内容に引用された米国及びＰＣＴ出願、及びＡｎ ｅｔ ａｌ．，ｍＡｂｓ １：６，５７２－５７９（２００９）を参照すればよい。
これによって、一部の様態において、本明細書に開示された抗原結合断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、単一鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）又はモノマーＶＨ又はＶＬドメインからなるｓｄＡｂである。このような抗体断片は、当業界によく知られており、上記に記載されている。
一部の様態において、本明細書に開示された抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体は、Ｆｃエフェクター機能が減少したり、Ｆｃエフェクター機能がないＦｃ領域を含む。一部の様態において、前記定常領域は、ヒトＩｇＧ２又はＩｇＧ４のＦｃ領域のアミノ酸配列を含み、一部の様態において、前記抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体は、ＩｇＧ２／ＩｇＧ４イソ型を有する。一部の様態において、前記抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体は、ＩｇＧ４イソ型のＩｇＧ抗体のＣＨ２ドメイン、及びＩｇＧ１イソ型のＩｇＧ抗体のＣＨ３ドメインを含むキメラＦｃ領域、又はＩｇＧ２のヒンジ領域、及びＩｇＧ４のＣＨ２領域を含むキメラＦｃ領域、又は、Ｆｃエフェクター機能が減少したり、Ｆｃエフェクター機能がない突然変異を有するＦｃ領域を含む。Ｆｃエフェクター機能が減少したり、Ｆｃエフェクター機能がないＦｃ領域は、当業界に公知となっているものを含む。例えば、Ｌａｕ Ｃ．ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９１：４７６９－４７７７（２０１３）；Ａｎ ｅｔ ａｌ，ｍＡｂｓ １：６、５７２－５７９（２００９）；及び米国特許公開番号２０１２０１００１４０及びその内容に引用された米国特許、公開公報及びＰＣＴ公開公報を参照すればよい。また、Ｆｃエフェクター機能が減少したり、Ｆｃエフェクター機能がないＦｃ領域は、当業者であれば容易に作ることができる。
本明細書に記載された抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体は、サンプル試験及び生体内の映像化を含む診断目的で使用することができ、この目的のために、前記抗体を適切な検出可能な製剤に接合させ、免疫接合体を形成することができる。診断目的のために適切な製剤は、全身映像化のための放射性同位元素及びサンプル試験のための放射性同位元素、酵素、蛍光標識及びその他の適切な抗体タグを含む検出可能な標識である。
前記検出可能な標識は、コロイダル金などの金属ゾルを含む微粒子標識、例えば、Ｎ２Ｓ２、Ｎ３Ｓ又はＮ４類型のペプチドキレート化剤が提供されたＩ１２５又はＴｃ９９などの同位元素、蛍光マーカー、発光マーカー、燐光マーカーなどを含む発色団のみならず、所定の基質を検出可能なマーカーに転換させる酵素標識、及び、例えば、重合酵素連鎖反応による増幅後に確認されるポリヌクレオチドタグを含み、試験管内の診断分野で使用されている多様な類型のうち任意のものであり得る。適切な酵素標識には、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリ性ホスファターゼなどが含まれる。例えば、前記標識は、アダマンチルメトキシホスホリルオキシフェニルジオキセタン（ＡＭＰＰＤ）、二ナトリウム３－（４－（メトキシスピロ１，２－ジオキセタン－３，２’－（５’－クロロ）トリシクロ３．３．１．１ ３，７デカン－４－イル）フェニルホスフェート（ＣＳＰＤ）のみならず、ＣＤＰ及びＣＤＰ－ｓｔａｒ（登録商標）などの１，２ジオキセタン基質又は当業者によく知られている他の発光基質、例えば、テルビウム（ＩＩＩ）及びユーロピウム（ＩＩＩ）などの適切なランタノイドのキレートの転換後、化学発光の存在又は形成を測定して検出される酵素アルカリ性ホスファターゼであり得る。検出手段は、選択された標識によって決定される。前記標識又はその反応生成物の外観は、前記標識が微粒子でありながら適切な水準で蓄積される場合、肉眼を用いたり、分光光度計、照度計、蛍光光度計などの機器を用いて、いずれも標準施行によって得ることができる。
免疫接合体は、当業界に公知となっている方法によって製造することができる。好ましくは、接合方法の結果として、実質的に（又はほとんど）非－免疫原性である結合、例えば、ペプチド－（すなわち、アミド－）、スルフィド－、（立体障害）、ジスルフィド－、ヒドラゾーン－及びエーテル結合が表れる。これらの結合は、ほとんど非－免疫原性であり、血清内で相当な安定性を示す（例えば、Ｓｅｎｔｅｒ，Ｐ．Ｄ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．１３（２００９）２３５－２４４；ＷＯ２００９／０５９２７８；ＷＯ９５／１７８８６参照）。
前記モイエティ及び抗体の生化学的属性により、互いに異なる接合戦略を用いることができる。前記モイエティが自然発生型であったり、５０個乃至５００個のアミノ酸の組換え型である場合、タンパク質接合体の合成のための化学的方法を説明する標準的な手続きがテキストブックに記載されており、当業者であれば容易に従うことができる（例えば、Ｈａｃｋｅｎｂｅｒｇｅｒ，Ｃ．Ｐ．Ｒ．，ａｎｄ Ｓｃｈｗａｒｚｅｒ，Ｄ．，Ａｎ ｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．４７（２００８）１００３０－１００７４）。一部の様態において、前記抗体又はモイエティ内のシステイン残基とマレイニミドモイエティの反応を用いる。これは、例えば、抗体のＦａｂ又はＦａｂ’－断片を使用する場合に、特に適切なカップリング化学的方法である。これと異なり、一部の様態において、前記抗体又はモイエティのＣ－末端にカップリングを行う。タンパク質、例えば、Ｆａｂ－断片のＣ－末端変形は、例えば、Ｓｕｎｂｕｌ，Ｍ．ａｎｄ Ｙｉｎ，Ｊ．，Ｏｒｇ．Ｂｉｏｍｏｌ．Ｃｈｅｍ．７（２００９）３３６１－３３７１に記載された通りに行うことができる。
一般に、部位特異的反応及び共有結合は、天然アミノ酸を、存在する他の官能基の反応性と直交（ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ）する反応性を有するアミノ酸に変換することを基盤とする。例えば、稀な配列コンテキスト（ｃｏｎｔｅｘｔ）内の特定システインは、アルデヒドに酵素的に変換され得る（Ｆｒｅｓｅ，Ｍ．Ａ．ａｎｄ Ｄｉｅｒｋｓ，Ｔ．，ＣｈｅｍＢｉｏＣｈｅｍ．１０（２００９）４２５－４２７参照）。所定の配列コンテキスト内の天然アミノ酸と特定酵素の特異的酵素反応性を用いて、所望のアミノ酸変形を得ることもできる（例えば、Ｔａｋｉ，Ｍ．ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔ．Ｅｎｇ．Ｄｅｓ．Ｓｅｌ．１７（２００４）１１９－１２６；Ｇａｕｔｉｅｒ，Ａ．ｅｔ ａｌ．，Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．１５（２００８）１２８－１３６；ａｎｄ Ｐｒｏｔｅａｓｅ－ｃａｔａｌｙｚｅｄ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｏｆ Ｃ－Ｎ ｂｏｎｄｓ ｉｓ ｕｓｅｄ ｂｙ Ｂｏｒｄｕｓａ，Ｆ．，Ｈｉｇｈｌｉｇｈｔｓ ｉｎ Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（２００４）３８９－４０３参照）。
また、部位特異的反応及び共有結合は、適切な変形試薬と末端アミノ酸の選択的反応によって達成され得る。ベンゾニトリルとＮ－末端システインの反応性（Ｒｅｎ，Ｈ．ｅｔ ａｌ.，Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．４８（２００９）９６５８－９６６２参照）を用いて部位特異的共有結合を得ることができる。また、天然化学結紮は、Ｃ－末端システイン残基に依存することができる（Ｔａｙｌｏｒ，Ｅ．Ｖｏｇｅｌ；Ｉｍｐｅｒｉａｌｉ，Ｂ，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（２００９），２２（Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ），６５－９６）。
ＥＰ １ ０７４ ５６３は、一連の正に帯電したアミノ酸内に位置したシステインと一連の負に帯電したアミノ酸内のシステインのさらに速い反応を基盤とする接合方法を記載している。
前記モイエティは、合成ペプチド又はペプチド模倣体であってもよい。ポリペプチドが化学的に合成される場合、このような合成中に直交する化学反応性を有するアミノ酸が導入され得る（例えば、ｄｅ Ｇｒａａｆ，Ａ．Ｊ．ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ．Ｃｈｅｍ．２０（２００９）１２８１－１２９５参照）。非常に多様な直交する官能基は、不安定でありながら合成ペプチドに導入され得るので、このようなペプチドをリンカーに接合することは標準化学的方法である。
単一標識されたポリペプチドを得るために、１：１化学量論比を有する接合体を他の接合副産物からクロマトグラフィーによって分離することができる。この過程は、染料標識された結合ペアメンバー及び帯電したリンカーを使用することによって容易になり得る。このような種類の標識及び大きく負に帯電した結合ペアメンバーを使用することによって、分離のために電荷と分子量の差を利用できるので、非－標識ポリペプチド及び１個より多いリンカーを保有したポリペプチドから単一接合されたポリペプチドが容易に分離される。前記蛍光染料は、標識された１価結合剤のように、未結合成分から複合体を精製するのに有用であり得る。
［Ｖ．核酸分子］
本明細書に記載された他の様態は、本明細書に記載された抗体及びその抗原結合断片のうちいずれか一つをコーディングする一つ以上の核酸分子に関する。前記核酸は、全細胞（ｗｈｏｌｅ ｃｅｌｌ）、細胞溶解物、又は、一部精製されたり、実質的に純粋な形態に存在し得る。核酸は、他の細胞成分又は他の汚染物質、例えば、他の細胞核酸（例えば、他の染色体ＤＮＡ、例えば、自然で分離されたＤＮＡに連結された染色体ＤＮＡ）又はタンパク質からアルカリ／ＳＤＳ処理、ＣｓＣｌバンディング（ｂａｎｄｉｎｇ）、カラムクロマトグラフィー、制限酵素、アガロースゲル電気泳動及び当業界によく知られているそれ以外の技術を含む標準技術によって精製されるとき、「分離」されたり、「実質的に純粋になる」。Ｆ．Ａｕｓｕｂｅｌ，ｅｌ ａｌ．，ｅｄ．（１９８７）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ ａｎｄ Ｗｉｌｅｙ Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋを参照すればよい。本明細書に記載された核酸は、例えば、ＤＮＡ又はＲＮＡであってもよく、イントロン配列を含有したり、イントロン配列を含有することができない。特定の様態において、前記核酸はｃＤＮＡ分子である。
本明細書に記載された核酸は、標準分子生物学技術を用いて得ることができる。ハイブリドーマによって発現された抗体（例えば、下記に追加的に説明されているように、ヒト免疫グロブリン遺伝子を保有した遺伝子導入マウスから製造されたハイブリドーマ）の場合、ハイブリドーマによって作られた抗体の軽鎖及び重鎖をコーディングするｃＤＮＡは、標準ＰＣＲ増幅又はｃＤＮＡクローニング技術によって得ることができる。免疫グロブリン遺伝子ライブラリから（例えば、ファージディスプレイ技術を用いて）得た抗体の場合、前記抗体をコーディングする核酸をライブラリから回収することができる。
特定の核酸分子は、本開示内容の多様な抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体のＶＨ及びＶＬ配列をコーディングするものである。このような抗体のＶＨ配列をコーディングする例示的な各ＤＮＡ配列は、配列番号３８、３６、４０及び４２に示されている。表８を参照すればよい。このような抗体のＶＬ配列をコーディングする例示的な各ＤＮＡ配列は、配列番号３９、３７、４１及び４３に示されている。表９を参照すればよい。
Figure 2023516992000009
Figure 2023516992000010
例えば、本明細書に開示された抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体を製造するための方法は、前記抗体の関連重鎖及び軽鎖を、信号ペプチドと共に、前記重鎖及び軽鎖をコーディングするヌクレオチド配列を含む細胞株で発現させることを含むことができる。これらのヌクレオチド配列を含む宿主細胞は、本明細書に含まれる。
ＶＨ及びＶＬセグメントをコーディングするＤＮＡ断片が収得されると、これらのＤＮＡ断片は、標準組換えＤＮＡ技術によって追加的に操作し、例えば、可変領域遺伝子を全長抗体鎖遺伝子、Ｆａｂ断片遺伝子又はｓｃＦｖ遺伝子に変換することができる。これらの操作において、ＶＬ又はＶＨ－コーディングＤＮＡ断片は、抗体定常領域又は可撓性リンカーなどの他のタンパク質をコーディングする他のＤＮＡ断片に作動的に連結される。これと関連して使用された用語「作動的に連結」は、２個のＤＮＡ断片が接合され、前記２個のＤＮＡ断片によってコーディングされたアミノ酸配列がフレーム内に残っていることを意味するように意図される。
ＶＨ領域をコーディングする分離されたＤＮＡは、ＶＨコーディングＤＮＡを、重鎖定常領域（ヒンジ、ＣＨ１、ＣＨ２及び／又はＣＨ３）をコーディングする他のＤＮＡ分子に作動的に連結することによって全長重鎖遺伝子に転換され得る。ヒト重鎖定常領域遺伝子の配列は当業界に公知となっており（例えば、Ｋａｂａｔ、ＥＡ、ｅｌ ａｌ．，（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，ＵＳ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ Ｎｏ．９１－３２４２参考）、これらの領域を含むＤＮＡ断片は、標準ＰＣＲ増幅によって得ることができる。前記重鎖定常領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＭ又はＩｇＤ定常領域、例えば、ＩｇＧ２及び／又はＩｇＧ４定常領域であり得る。Ｆａｂ断片重鎖遺伝子の場合、ＶＨコーディングＤＮＡは、重鎖ＣＨ１定常領域のみをコーディングする他のＤＮＡ分子に作動的に連結され得る。
前記ＶＬ領域をコーディングする分離されたＤＮＡは、ＶＬコーディングＤＮＡを、軽鎖定常領域（ＣＬ）をコーディングする他のＤＮＡ分子に作動的に連結することによって全長軽鎖遺伝子（のみならず、Ｆａｂ軽鎖遺伝子）に転換され得る。ヒト軽鎖定常領域遺伝子の配列は当業界に公知となっており（例えば、Ｋａｂａｔ，ＥＡ，ｅｔ ａｌ．，（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ Ｎｏ．９１－３２４２）、これらの領域を含むＤＮＡ断片は、標準ＰＣＲ増幅によって得ることができる。前記軽鎖定常領域は、カッパー又はラムダ定常領域であり得る。
ｓｃＦｖ抗体を生成するために、前記ＶＨ及びＶＬコーディングＤＮＡ断片は、可撓性リンカー、例えば、アミノ酸配列（Ｇｌｙ４－Ｓｅｒ）３をコーディングする他の断片に作動的に連結され、前記ＶＨ及びＶＬ配列は、ＶＬ及びＶＨ領域が可撓性リンカーによって接合された隣接単一鎖タンパク質として発現され得る（例えば、Ｂｉｒｄ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２：４２３－４２６（１９８８）；Ｈｕｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５：５８７９－５８８３（１９８８）；ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ ｅｔ ａｌ.，Ｎａｔｕｒｅ ３４８：５５２－５５４（１９９０）参照）。
一部の様態において、本明細書に開示されたベクターは、抗体又はその抗原結合断片をコーディングするヌクレオチド配列を含む分離された核酸分子を含む。
本開示内容に適切なベクターは、発現ベクター、ウイルスベクター及びプラスミドベクターを含む。一部の様態において、前記ベクターはウイルスベクターである。
本明細書で使用する「発現ベクター」は、挿入されたコーディング配列の転写及び翻訳に必要な要素を含有する任意の核酸構造体を称したり、ＲＮＡウイルスベクターの場合は、適切な宿主細胞への導入時に複製と翻訳に必要な要素を称する。発現ベクターは、プラスミド、ファージミド、ウイルス及びこれらの誘導体を含むことができる。
［ＶＩ．抗体の生産］
本明細書に開示された抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体は、抗体合成のために当業界に公知となっている任意の方法、例えば、化学的合成又は組換え発現技術によって生産され得る。本明細書に記載された方法は、異なる意味を有さない限り、分子生物学、微生物学、遺伝分析、組換えＤＮＡ、有機化学、生化学、ＰＣＲ、オリゴヌクレオチド合成及び変形、核酸混成化及び当業界の関連技術分野の従来技術を用いる。これらの技術は、例えば、本明細書に引用された参照文献に記載されており、文献で完全に説明されている。例えば、Ｍａｎｉａｔｉｓ Ｔ ｅｔ ａｌ．，（１９８２）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ；Ｓａｍｂｒｏｏｋ Ｊ ｅｔ ａｌ．，（１９８９），Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｓｅｃｏｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ；Ｓａｍｂｒｏｏｋ Ｊ ｅｔ ａｌ.，（２００１）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ；Ａｕｓｕｂｅｌ ＦＭ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ（１９８７ ａｎｄ ａｎｎｕａｌ ｕｐｄａｔｅｓ）；Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ（１９８７ ａｎｄ ａｎｎｕａｌ ｕｐｄａｔｅｓ）Ｇａｉｔ（ｅｄ．）（１９８４）Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ，ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ；Ｅｃｋｓｔｅｉｎ（ｅｄ．）（１９９１）Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ａｎｄ Ａｎａｌｏｇｕｅｓ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ，ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ；Ｂｉｒｒｅｎ Ｂ ｅｔ ａｌ．，（ｅｄｓ．）（１９９９）Ｇｅｎｏｍｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓを参考にすればよい。
一部の様態において、本明細書に記載された抗体は、例えば、合成、ＤＮＡ配列の遺伝工学を通じた生成を伴う任意の手段によって製造、発現、生成又は分離された抗体（例えば、組換え抗体）である。特定の様態において、このような抗体は、生体内の動物又は哺乳類（例えば、ヒト）の抗体生殖細胞系レパートリー内に自然的に存在しない配列（例えば、ＤＮＡ配列又はアミノ酸配列）を含む。
特定の様態において、本明細書は、本明細書に記載された細胞又は宿主細胞を培養することを含むＦＡＭ１９Ａ１（例えば、ヒトＦＡＭ１９Ａ１）に免疫特異的に結合する抗体又はその抗原結合断片を製造する方法を提供する。特定の様態において、本明細書は、ＦＡＭ１９Ａ１（例えば、ヒトＦＡＭ１９Ａ１）に免疫特異的に結合する抗体又はその抗原結合断片を製造する方法として、前記抗体又はその抗原結合断片を本明細書に記載された細胞又は宿主細胞（例えば、本明細書に記載された抗体をコーディングするポリヌクレオチドを含む細胞又は宿主細胞）を使用して発現（例えば、組換えによって発現）させる段階を含む方法を提供する。一部の様態において、前記細胞は、分離された細胞である。一部の様態において、前記細胞に外因性ポリヌクレオチドを導入した。特定の様態において、前記方法は、細胞又は宿主細胞から得た抗体又はその抗原結合断片を精製する段階をさらに含む。
多クローン性抗体を生産するための方法は、当業界に公知となっている（例えば、Ｃｈａｐｔｅｒ １１ ｉｎ：Ｓｈｏｒｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，（２００２）５ｔｈ Ｅｄ．，Ａｕｓｕｂｅｌ Ｆ Ｍ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ参照）。
単クローン性抗体は、ハイブリドーマ、組換え及びファージディスプレイ技術又はこれらの組み合わせを使用することを含み、当業界に公知となっている多様な技術を用いて製造することができる。例えば、単クローン性抗体は、当業界に公知となっており、例えば、Ｈａｒｌｏｗ Ｅ ＆ Ｌａｎｅ Ｄ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，２ｎｄ ｅｄ．１９８８）；Ｈａｍｍｅｒｌｉｎｇ ＧＪ ｅｔ ａｌ．，ｉｎ：Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｔ－Ｃｅｌｌ Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ ５６３ ６８１（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，Ｎ．Ｙ．，１９８１）に教示されている技術を含むハイブリドーマ技術を用いて生産することができる。本明細書で使用する用語「単クローン性抗体」は、ハイブリドーマ技術を通じて生産された抗体に制限されない。例えば、単クローン性抗体は、本明細書に記載された抗体又はその断片、例えば、このような抗体の軽鎖及び／又は重鎖を外因的に発現する宿主細胞から組換えによって生産することができる。
一部の様態において、本明細書で使用する「単クローン性抗体」は、単一細胞（例えば、組換え抗体を生産するハイブリドーマ又は宿主細胞）によって生産される抗体であって、前記抗体は、例えば、ＥＬＩＳＡ、又は、当業界に公知となっていたり、本明細書に提供されている実施例欄に記載されている他の抗原結合又は競争的結合分析法によって決定されたように、ＦＡＭ１９Ａ１（例えば、ヒトＦＡＭ１９Ａ１）に免疫特異的に結合する。特定の様態において、単クローン性抗体は、キメラ抗体又はヒト化抗体であり得る。特定の様態において、単クローン性抗体は、１価抗体又は多価（例えば、２価）抗体である。特定の様態において、単クローン性抗体は、単一特異的又は多重特異的抗体（例えば、２重特異的抗体）である。本明細書に記載された単クローン性抗体は、例えば、Ｋｏｈｌｅｒ Ｇ ＆ Ｍｉｌｓｔｅｉｎ Ｃ（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ ２５６：４９５に記載した通りにハイブリドーマ方法によって作ることができたり、例えば、本明細書に記載された技術を用いてファージライブラリから分離され得る。クローン細胞株及びこれによって発現される単クローン性抗体を製造するための他の方法は、当業界によく知られている（例えば、上記のＣｈａｐｔｅｒ １１ ｉｎ：Ｓｈｏｒｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，（２００２）５ｔｈ Ｅｄ．，Ａｕｓｕｂｅｌ ＦＭ ｅｔ ａｌ．を参照）。
ハイブリドーマ技術を用いて特定の抗体を生産及びスクリーニングするための方法は、通常的なものであって、当業界によく知られている。例えば、ハイブリドーマ方法では、マウス、又は、ヒツジ、ヤギ、ウサギ、ネズミ、ハムスター又はマカクサルなどの他の適切な宿主動物を免疫化し、免疫化のために使用したタンパク質（例えば、ヒトＦＡＭ１９Ａ１）に特異的に結合する抗体を生産したり、生産できるリンパ球を導き出す。これと異なり、リンパ球は、試験管内で免疫化され得る。次に、リンパ球は、ポリエチレングリコールなどの適切な融合剤を使用して骨髄腫細胞と融合され、ハイブリドーマ細胞を形成する（Ｇｏｄｉｎｇ ＪＷ（Ｅｄ），Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ，ｐｐ．５９－１０３（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，１９８６））。さらに、ＲＩＭＭＳ（反復免疫多重部位）技術を用いて動物を免疫化することができる（Ｋｉｌｐａｔｒｉｃｋ ＫＥ ｅｔ ａｌ．，（１９９７）Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ １６：３８１－９、その全文が参考として含まれる）。
一部の様態において、マウス（又は、その他のニワトリ、ネズミ、サル、ロバ、ブタ、ヒツジ、ハムスター又はイヌなどの動物）は、抗原（例えば、ヒトＦＡＭ１９Ａ１などのＦＡＭ１９Ａ１）で免疫化され得、免疫反応が検出されると、例えば、抗原に特異的な抗体がマウス血清で検出されると、マウスの脾臓を回収し、脾臓細胞を分離する。その次に、前記脾臓細胞を任意の適切な骨髄腫細胞、例えば、ＡＴＣＣ（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）（Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）から入手できる細胞株ＳＰ２０の細胞によく知られている技術によって融合することによってハイブリドーマを形成する。ハイブリドーマは、希釈を制限して選別及びクローニングする。特定の様態において、免疫化されたマウスのリンパ節は、回収してＮＳＯ骨髄腫細胞と融合させる。
このように製造したハイブリドーマ細胞を、好ましくは融合されていない親骨髄腫細胞の成長又は生存を阻害する一つ以上の物質を含有する適切な培養培地で接種及び成長させる。例えば、親骨髄腫細胞に酵素ヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＧＰＲＴ又はＨＰＲＴ）が欠如している場合、ハイブリドーマ用培養培地は、典型的にＨＧＰＲＴ－欠乏細胞の成長を妨害する物質であるヒポキサンチン、アミノプテリン及びチミジン（ＨＡＴ培地）を含むことができる。
特定の様態は、効率的に融合され、選別された抗体生産細胞によって抗体の安定した高水準の生産をサポートし、ＨＡＴ培地などの培地に感受性のある骨髄腫細胞を使用する。これらの骨髄腫細胞株としては、ＮＳＯ細胞株又はＳａｌｋ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ Ｃｅｌｌ Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ Ｃｅｎｔｅｒ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ，ＵＳＡから入手可能なＭＯＰＣ－２１及びＭＰＣ－１１マウス腫瘍及びＡｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ，ＵＳＡから入手可能なＳＰ－２又はＸ６３－Ａｇ８．６５３細胞から由来したものなどのマウス骨髄腫細胞株がある。ヒト骨髄腫及びマウス－ヒト異種骨髄腫細胞株も、ヒト単クローン性抗体生産に対して記述された（Ｋｏｚｂｏｒ Ｄ（１９８４）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １３３：３００１－５；Ｂｒｏｄｅｕｒ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，ｐｐ．５１－６３（Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８７））。
ハイブリドーマ細胞が成長する培養培地を、ＦＡＭ１９Ａ１（例えば、ヒトＦＡＭ１９Ａ１）に対して指向された単クローン性抗体の生産に対して分析する。ハイブリドーマ細胞によって生産された単クローン性抗体の結合特異性は、当業界に公知となっている方法、例えば、免疫沈澱又は試験管内結合分析法、例えば、放射性免疫分析（ＲＩＡ）又は酵素結合免疫吸着分析（ＥＬＩＳＡ）によって決定される。
所望の特異性、親和性及び／又は活性の抗体を生産するハイブリドーマ細胞を同定した後、クローンは、希釈手続きを制限してサブクローニング（ｓｕｂｃｌｏｎｉｎｇ）することができ、標準方法（上記のＧｏｄｉｎｇ ＪＷ（Ｅｄ），Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ参照）によって成長させることができる。このような目的に適切な培養培地は、例えば、Ｄ－ＭＥＭ又はＲＰＭＩ １６４０培地を含む。また、ハイブリドーマ細胞は、動物で腹水腫瘍として生体内で成長し得る。
サブクローンによって分泌された単クローン性抗体を、例えば、タンパク質Ａ－セファロース、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析又は親和性クロマトグラフィーなどの従来の免疫グロブリン精製手続きによって培養培地、腹水液又は血清から適切に分離する。
本明細書に記載された抗体は、特定のＦＡＭ１９Ａ１（例えば、ヒトＦＡＭ１９Ａ１）を認識し、当業者に公知となっている任意の技術によって生成され得る抗体断片を含む。例えば、本明細書に記載されたＦａｂ及びＦ（ａｂ’）２断片は、パパイン（Ｆａｂ断片を生成するための）又はペプシン（Ｆ（ａｂ’）２断片を生成するための）などの酵素を使用して免疫グロブリン分子のタンパク質分解切断によって生成され得る。Ｆａｂ断片は、抗体分子の２個の同一のアーム（ａｒｍ）のうち一つに該当し、重鎖のＶＨ及びＣＨ１ドメインと対をなす完全な軽鎖を含む。Ｆ（ａｂ’）２断片は、ヒンジ領域で二硫化結合によって連結された抗体分子の２個の抗原結合アームを含む。
また、本明細書に記載された抗体又はその抗原結合断片は、当業界に公知となっている多様なファージディスプレイ方法を用いて生成することもできる。ファージディスプレイ方法で、機能性抗体ドメインは、これをコーディングするポリヌクレオチド配列を保有したファージ粒子の表面に表示される。特に、ＶＨ及びＶＬドメインをコーディングするＤＮＡ配列は、動物ｃＤＮＡライブラリ（例えば、ヒトｃＤＮＡライブラリ又は感染した組織のマウス又はニワトリｃＤＮＡライブラリなどの非－ヒトｃＤＮＡライブラリ）から増幅される。前記ＶＨ及びＶＬドメインをコーディングするＤＮＡは、ＰＣＲによってｓｃＦｖリンカーと共に組み換えられ、ファージミドベクターにクローニングされる。前記ベクターは、Ｅ．ｃｏｌｉで電気穿孔され、前記Ｅ．ｃｏｌｉは、ヘルパーファージによって感染される。これらの方法に使用されるファージは、典型的にｆｄ及びＭ１３を含む糸状ファージ（ｆｉｌａｍｅｎｔｏｕｓ ｐｈａｇｅ）であって、前記ＶＨ及びＶＬドメインは、一般にファージ遺伝子ＩＩＩや遺伝子VＩＩＩに組換えによって融合される。特定の抗原に結合する抗原結合ドメインを発現するファージは、抗原、例えば、標識された抗原、固体表面又はビードに結合又は捕獲された抗原を使用して選別又は同定され得る。本明細書に記載された抗体の製造に使用できるファージディスプレイ方法の例は、Ｂｒｉｎｋｍａｎ Ｕ ｅｔ ａｌ．，（１９９５）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ １８２：４１－５０；Ａｍｅｓ ＲＳ ｅｔ ａｌ．，（１９９５）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ １８４：１７７－１８６；Ｋｅｔｔｌｅｂｏｒｏｕｇｈ ＣＡ ｅｔ ａｌ．，（１９９４）Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２４：９５２－９５８；Ｐｅｒｓｉｃ Ｌ ｅｔ ａｌ．，（１９９７）Ｇｅｎｅ １８７：９－１８；Ｂｕｒｔｏｎ ＤＲ ＆ Ｂａｒｂａｓ ＣＦ（１９９４）Ａｄｖａｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ ５７：１９１－２８０；ＰＣＴ出願番号ＰＣＴ／ＧＢ９１／００１１３４；国際公開番号ＷＯ９０／０２８０９、ＷＯ９１／１０７３７、ＷＯ９２／０１０４７、ＷＯ９２／１８６１９、ＷＯ９３／１１２３６、ＷＯ９５／１５９８２、ＷＯ９５／２０４０１及びＷＯ９７／１３８４４；米国特許番号５，６９８，４２６、５，２２３，４０９、５，４０３，４８４、５，５８０，７１７、５，４２７，９０８、５，７５０，７５３、５，８２１，０４７、５，５７１，６９８、５，４２７，９０８、５，５１６，６３７、５，７８０，２２５、５，６５８，７２７、５，７３３，７４３及び５，９６９，１０８に開示されているものを含む。
前記参考文献に記載されているように、ファージ選択後、前記ファージの抗体コーディング領域は分離及び使用され、ヒト抗体を含み、全抗体又は任意の他の所望の抗原結合断片を生成することができ、例えば、下記に記載されているように、哺乳類細胞、昆虫細胞、植物細胞、酵母及びバクテリアを含む任意の所望の宿主で発現され得る。ＰＣＴ公開番号ＷＯ９２／２２３２４；Ｍｕｌｌｉｎａｘ ＲＬ ｅｔ ａｌ.，（１９９２）ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ １２（６）：８６４－９；Ｓａｗａｉ Ｈ ｅｔ ａｌ.，（１９９５）Ａｍ Ｊ Ｒｅｐｒｏｄ Ｉｍｍｕｎｏｌ ３４：２６－３４；及びＢｅｔｔｅｒ Ｍ ｅｔ ａｌ.，（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４０：１０４１－１０４３に開示されているように、当業界に公知となっている方法を用いてＦａｂ、Ｆａｂ’及びＦ（ａｂ’）２断片などの抗体断片を組換えによって生産するための技術を採用することもできる。
一様態において、全抗体を生成するために、ＶＨ又はＶＬヌクレオチド配列、制限部位及び前記制限部位を保護するための側面配列を含むＰＣＲプライマーを使用して鋳型、例えば、ｓｃＦｖクローンから前記ＶＨ又はＶＬ配列を増幅させることができる。当業者に公知となっているクローニング技術を用いて前記ＰＣＲ増幅されたＶＨドメインを、ＶＨ定常領域を発現するベクターにクローニングすることができ、前記ＰＣＲ増幅されたＶＬドメインを、ＶＬ定常領域を発現するベクター、例えば、ヒトカッパー又はラムダ定常領域にクローニングすることができる。前記ＶＨ及びＶＬドメインは、必要な定常領域を発現する一つのベクターにクローニングすることもできる。次に、前記重鎖変換ベクター及び軽鎖変換ベクターを、当業者に公知となっている技術を用いて細胞株に同時形質移入させ、全長抗体、例えば、ＩｇＧを発現する安定した又は一時的な細胞株を生成する。
キメラ抗体は、前記抗体の互いに異なる各部分が互いに異なる免疫グロブリン分子から由来した分子である。例えば、キメラ抗体は、ヒト抗体の定常領域に融合された非－ヒト動物（例えば、マウス、ラット又はニワトリ）単クローン性抗体の可変領域を含むことができる。キメラ抗体を生産するための各方法は当業界に知られている。例えば、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ ＳＬ（１９８５）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２９：１２０２－７；Ｏｉ ＶＴ ＆ Ｍｏｒｒｉｓｏｎ ＳＬ（１９８６）ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ４：２１４－２２１；Ｇｉｌｌｉｅｓ ＳＤ ｅｔ ａｌ.，（１９８９）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ １２５：１９１－２０２；及び米国特許番号５，８０７，７１５、４，８１６，５６７、４，８１６，３９７及び６，３３１，４１５を参照すればよい。
ヒト化抗体は、所定の抗原に結合することができ、ヒト免疫グロブリンのアミノ酸配列を実質的に有するフレームワーク領域、及び非－ヒト免疫グロブリン（例えば、マウス又はニワトリ免疫グロブリン）のアミノ酸配列を実質的に有するＣＤＲを含む。特定の様態において、ヒト化抗体は、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）、典型的にヒト免疫グロブリンの少なくとも一部を含む。また、前記抗体は、重鎖のＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２、ＣＨ３及びＣＨ４領域を含むことができる。ヒト化抗体は、ＩｇＭ、ＩｇＧ、ＩｇＤ、ＩｇＡ及びＩｇＥを含む全ての類型の免疫グロブリン及びＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４を含む任意のイソ型から選択され得る。ヒト化抗体は、次を含む当業界に公知となっている多様な技術を用いて生産できるが、これらの技術に限定されるのではない：ＣＤＲ－グラフティング（ヨーロッパ特許番号ＥＰ２３９４００；国際公開番号ＷＯ９１／０９９６７；及び米国特許番号５，２２５，５３９、５，５３０，１０１及び５，５８５，０８９）、ベニアリング（ｖｅｎｅｅｒｉｎｇ）又はリサーフェシング（ｒｅｓｕｒｆａｃｉｎｇ）（ヨーロッパ特許番号ＥＰ５９２１０６及びＥＰ５１９５９６；Ｐａｄｌａｎ ＥＡ（１９９１）Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２８（４／５）：４８９－４９８；Ｓｔｕｄｎｉｃｋａ ＧＭ ｅｔ ａｌ．，（１９９４）Ｐｒｏｔ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ７（６）：８０５－８１４；及びＲｏｇｕｓｋａ ＭＡ ｅｔ ａｌ．，（１９９４）ＰＮＡＳ ９１：９６９－９７３）、チェーンシャッフリング（米国特許番号５，５６５，３３２）、及び、例えば、米国特許番号６，４０７，２１３、米国特許番号５，７６６，８８６、国際公開番号ＷＯ９３／１７１０５；Ｔａｎ Ｐ ｅｔ ａｌ．，（２００２）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １６９：１１１９－２５；Ｃａｌｄａｓ Ｃ ｅｔ ａｌ．，（２０００）Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ.１３（５）：３５３－６０；Ｍｏｒｅａ Ｖ ｅｔ ａｌ．，（２０００）Ｍｅｔｈｏｄｓ ２０（３）：２６７－７９；Ｂａｃａ Ｍ ｅｔ ａｌ．，（１９９７）Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２７２（１６）：１０６７８－８４；Ｒｏｇｕｓｋａ ＭＡ ｅｔ ａｌ.，（１９９６）Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ ９（１０）：８９５－９０４；Ｃｏｕｔｏ ＪＲ ｅｔ ａｌ.，（１９９５）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５５（２３ Ｓｕｐｐ）：５９７３ｓ－５９７７ｓ；Ｃｏｕｔｏ ＪＲ ｅｔ ａｌ．，（１９９５）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ５５（８）：１７１７－２２；Ｓａｎｄｈｕ ＪＳ（１９９４）Ｇｅｎｅ １５０（２）：４０９－１０及びＰｅｄｅｒｓｅｎ ＪＴ ｅｔ ａｌ.，（１９９４）Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２３５（３）：９５９－７３に開示された技術。また、その全文が本明細書に参考として含まれた米国出願公開番号ＵＳ２００５／００４２６６４ Ａ１（２００５年２月２４日）を参照すればよい。
多重特異的（例えば、２重特異的抗体）を製造するための方法が記載されている（例えば、米国特許番号７，９５１，９１７；７，１８３，０７６；８，２２７，５７７；５，８３７，２４２；５，９８９，８３０；５，８６９，６２０；６，１３２，９９２及び８，５８６，７１３参照）。
単一ドメイン抗体、例えば、軽鎖に欠けた抗体は、当業界によく知られている方法によって生産することができる。Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ Ｌ ＆ Ｍｕｙｌｄｅｒｍａｎｓ Ｓ（１９９９）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２３１：２５－３８；Ｎｕｔｔａｌｌ ＳＤ ｅｔ ａｌ．，（２０００）Ｃｕｒｒ Ｐｈａｒｍ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ １（３）：２５３－２６３；Ｍｕｙｌｄｅｒｍａｎｓ Ｓ，（２００１）Ｊ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ ７４（４）：２７７－３０２；米国特許番号６，００５，０７９；及び国際公開番号ＷＯ９４／０４６７８、ＷＯ９４／２５５９１及びＷＯ０１／４４３０１を参照すればよい。
また、ＦＡＭ１９Ａ１抗原に免疫特異的に結合する抗体も、当業者によく知られている技術を用いて抗原を「模倣」する抗－遺伝子型抗体を生成するのに使用することができる（例えば、Ｇｒｅｅｎｓｐａｎ ＮＳ ＆ Ｂｏｎａ ＣＡ（１９８９）ＦＡＳＥＢ Ｊ ７（５）：４３７－４４４；及びＮｉｓｓｉｎｏｆｆ Ａ（１９９１）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １４７（８）：２４２９－２４３８参照）。
特定の様態において、本明細書に記載された抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体と同一のＦＡＭ１９Ａ１（例えば、ヒトＦＡＭ１９Ａ１）のエピトープに結合する本明細書に記載された抗体は、ヒト抗体又はその抗原結合断片である。特定の様態において、本明細書に記載された抗体がＦＡＭ１９Ａ１（例えば、ヒトＦＡＭ１９Ａ１）に結合することを競争的に遮断（例えば、投与量依存的方式で）する本明細書に記載された抗体は、ヒト抗体又はその抗原結合断片である。
ヒト抗体は、当業界に公知となっている任意の方法を用いて生産することができる。例えば、機能的内因性免疫グロブリンは発現できないが、ヒト免疫グロブリン遺伝子は発現できる遺伝子導入マウスを使用することができる。特に、前記ヒト重鎖及び軽鎖免疫グロブリン遺伝子複合体は、無作為に又は相同性組換えによってマウス胚性幹細胞に導入され得る。これと異なり、前記ヒト重鎖及び軽鎖遺伝子以外にも、ヒト可変領域、定常領域及び多様性領域をマウス胚性幹細胞に導入することができる。前記マウス重鎖及び軽鎖免疫グロブリン遺伝子は、相同性組換えによってヒト免疫グロブリン遺伝子座（ｌｏｃｉ）の導入とは別途に又は同時に非－機能的になり得る。特に、ＪＨ領域の同型接合（ｈｏｍｏｚｙｇｏｕｓ）欠失は、内因性抗体生産を不可能にする。前記変形した胚性幹細胞を拡張し、胚盤胞（ｂｌａｓｔｏｃｙｓｔ）に微細注射することによってキメラマウスを生成する。前記キメラマウスを飼育し、ヒト抗体を発現する同型接合子孫を生成する。前記遺伝子導入マウスは、選択された抗原、例えば、抗原（例えば、ＦＡＭ１９Ａ１）の全部又は一部によって正常な方式で免疫化する。抗原に対して指向された単クローン性抗体は、従来のハイブリドーマ技術を用いて免疫化された遺伝子導入マウスから得ることができる。前記遺伝子導入マウスが保有したヒト免疫グロブリン導入遺伝子は、Ｂ細胞の分化中に再配列され、続いて、類型変換（ｃｌａｓｓ ｓｗｉｔｃｈｉｎｇ）及び体細胞突然変異を経る。これによって、このような技術を用いると、治療的に有用なＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ及びＩｇＥ抗体を生産することができる。ヒト抗体生産のためのこのような技術に対する概要に対しては、Ｌｏｎｂｅｒｇ Ｎ ＆ Ｈｕｓｚａｒ Ｄ（１９９５）Ｉｎｔ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ １３：６５－９３を参照すればよい。ヒト抗体及びヒト単クローン性抗体を生産するためのこのような技術及びこのような抗体を生産するためのプロトコルに対する詳細な論議に対しては、例えば、国際公開番号ＷＯ９８／２４８９３、ＷＯ９６／３４０９６及びＷＯ９６／３３７３５；及び米国特許番号５，４１３，９２３、５，６２５，１２６、５，６３３，４２５、５，５６９，８２５、５，６６１，０１６、５，５４５，８０６、５，８１４，３１８及び５，９３９，５９８を参照すればよい。ヒト抗体を生産できるマウスの例としては、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥＴＭ（Ａｂｇｅｎｉｘ，Ｉｎｃ．；米国特許番号６，０７５，１８１及び６，１５０，１８４）、ＨＵＡＢ－ＭＯＵＳＥＴＭ（Ｍｅｄｅｒｅｘ，Ｉｎｃ．／Ｇｅｎ Ｐｈａｒｍ；米国特許番号５，５４５，８０６及び５，５６９，８２５）、ＴＲＡＮＳ ＣＨＲＯＭＯ ＭＯＵＳＥＴＭ（Ｋｉｒｉｎ）及びＫＭ ＭＯＵＳＥＴＭ（Ｍｅｄａｒｅｘ／Ｋｉｒｉｎ）を参照すればよい。
ＦＡＭ１９Ａ（例えば、ヒトＦＡＭ１９Ａ１）に特異的に結合するヒト抗体は、ヒト免疫グロブリン配列から由来した抗体ライブラリを使用し、上述したファージディスプレイ方法を含む当業界に公知となっている多様な方法によって作ることができる。また、米国特許番号４，４４４，８８７、４，７１６，１１１及び５，８８５，７９３；及び国際公開番号ＷＯ９８／４６６４５、ＷＯ９８／５０４３３、ＷＯ９８／２４８９３、ＷＯ９８／１６６５４、ＷＯ９６／３４０９６、ＷＯ９６／３３７３５及びＷＯ９１／１０７４１を参照すればよい。
一部の様態において、ヒト抗体は、マウス－ヒトハイブリドーマを使用して生産され得る。例えば、エプスタイン－バーウイルス（ＥＢＶ）で形質転換されたヒト末梢血リンパ球は、マウス骨髄腫細胞と融合され、ヒト単クローン性抗体を分泌するマウス－ヒトハイブリドーマを生産することができ、これらのマウス－ヒトハイブリドーマをスクリーニングし、標的抗原（例えば、ヒトＦＡＭ１９Ａ１などのＦＡＭ１９Ａ１）に免疫特異的に結合するヒト単クローン性抗体を分泌することを決定することができる。これらの方法は、公知となっており、当業界に記載されている（例えば、Ｓｈｉｎｍｏｔｏ Ｈ ｅｔ ａｌ．，（２００４）Ｃｙｔｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ４６：１９－２３；Ｎａｇａｎａｗａ Ｙ ｅｔ ａｌ．，（２００５）Ｈｕｍａｎ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ １４：２７－３１参照）。
［ＶＩＩ．抗体を操作する方法］
上記で論議したように、本明細書に開示されたＶＨ及びＶＬ配列を有する抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体又はその抗原結合部分は、ＶＨ及び／又はＶＬ配列又はこれに付着した定常領域を変形させることによって、新たな抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体又はその抗原結合部分を生成するために使用することができる。これによって、本明細書に記載された他の様態では、本明細書に記載された抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体の構造的特徴は、ヒトＦＡＭ１９Ａ１に対する結合のように、本明細書に記載された抗体の少なくとも一つの機能的特性を保有する構造的に関連する抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体を生成するために使用される。例えば、前記操作方法のための出発物質は、本明細書に提供されたＶＨ及び／又はＶＬ配列又はその一つ以上のＣＤＲ領域である。前記操作された抗体を生成するために、本明細書に提供されたＶＨ及び／又はＶＬ配列のうち一つ以上又はその一つ以上のＣＤＲ領域を有する抗体を実際に製造（すなわち、タンパク質として発現）する必要がない。その代わりに、前記配列に含まれた情報を出発物質として使用し、元の配列から派生された「２世代」配列を生成した後、「２世代」配列を製造し、これをタンパク質として発現する。
したがって、本明細書は：
（ａ）（ｉ）表４に示したＣＤＲ１、ＣＤＲ２及び／又はＣＤＲ３配列又は表６に示した重鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２及び／又はＣＤＲ３を含む重鎖可変領域の配列；及び（ｉｉ）表５に示したＣＤＲ１、ＣＤＲ２及び／又はＣＤＲ３配列又は表７に示した軽鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２及び／又はＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域の配列を提供し；
（ｂ）前記重鎖可変領域の配列及び／又は軽鎖可変領域の配列内の少なくとも一つのアミノ酸残基を変形し、少なくとも一つの変形された抗体又は抗原結合部分の配列を生成し；
（ｃ）前記変形した抗体又は抗原結合部分の配列をタンパク質として発現することを含む抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体又はその抗原結合部分を製造するための方法を提供する。
標準分子生物学技術を用いて変形した抗体又は抗原結合部分の配列を製造及び発現させることができる。
一部の様態において、前記変形した抗体又は抗原結合部分の配列によってコーディングされた抗体又はその抗原結合部分は、本明細書に記載された抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体の機能的特性のうち一つ、一部又は全部を保有したものである。このような特性の非制限的な例は：
（１）例えば、ＢＩＡＣＯＲＥＴＭ又はＥＬＩＳＡによって測定したとき、ＫＤが１０ｎＭ以下である可溶性ヒトＦＡＭ１９Ａ１に結合する特性；
（２）例えば、ＢＩＡＣＯＲＥＴＭ又はＥＬＩＳＡによって測定したとき、ＫＤが１０ｎＭ以下である膜結合ヒトＦＡＭ１９Ａ１に結合する特性；
（３）神経細胞の分化を促進させる特性；
（４）分化された神経細胞で神経突起成長を増加させる特性；
（５）緑内障と関連する一つ以上の症状を減少、反転及び／又は予防する特性；
（６）網膜電位を向上させる特性（例えば、増加した律動様小波によって立証される）；
（７）網膜神経節細胞の損失を減少及び／又は回復させる特性（例えば、緑内障対象で観察される）；
（８）神経障害性疼痛と関連する一つ以上の症状を減少、反転及び／又は予防する特性；
（９）外部刺激に対する遅延時間及び／又は閾値を増加させる特性；及び
（１０）感覚神経伝導速度を増加及び／又は調節する特性；を含む。
本明細書に記載された抗体を操作する方法の特定の様態において、突然変異が抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体コーディング配列の全部又は一部に沿って無作為に又は選択的に導入され得、その結果として得た変形した抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体を、本明細書に記載された結合活性及び／又は他の機能的特性に対してスクリーニングすることができる。突然変異方法は、当業界に記載されている。例えば、ＳｈｏｒｔのＰＣＴ公開ＷＯ０２／０９２７８０は、飽和突然変異誘発、合成結紮アセンブリー又はこれらの組み合わせを用いて抗体突然変異を生成及びスクリーニングする方法を記載している。これと異なり、Ｌａｚａｒ等のＰＣＴ公開ＷＯ０３／０７４６７９は、抗体の物理化学的特性を最適化するためにコンピュータースクリーニング方法を用いる方法を記載している。
［ＶＩＩＩ．細胞及びベクター］
特定の様態において、本明細書は、ＦＡＭ１９Ａ１（例えば、ヒトＦＡＭ１９Ａ１）、関連ポリヌクレオチド及び発現ベクターに特異的に結合する本明細書に記載された抗体を発現する（例えば、組換えによって）細胞（例えば、宿主細胞）を提供する。本明細書は、宿主細胞、例えば、哺乳類細胞で組換え発現のための抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体又は断片をコーディングするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドを含むベクター（例えば、発現ベクター）を提供する。また、本明細書は、抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体（例えば、ヒト又はヒト化抗体）を組換えによって発現するためのこのようなベクターを含む宿主細胞を提供する。特定の様態において、本明細書は、宿主細胞からこのような抗体を発現することを含む、本明細書に記載された抗体を生産するための方法を提供する。
ＦＡＭ１９Ａ１（例えば、ヒトＦＡＭ１９Ａ１）に特異的に結合する本明細書に記載された抗体（例えば、本明細書に記載された全長抗体、抗体の重鎖及び／又は軽鎖又は単一鎖抗体）の組換え発現は、前記抗体をコーディングするポリヌクレオチドを含む発現ベクターの製作を伴う。本明細書に記載された抗体分子、抗体の重鎖及び／又は軽鎖又はその断片（例えば、重鎖及び／又は軽鎖可変ドメイン）をコーディングするポリヌクレオチドが得られると、前記抗体分子の生産のためのベクターを当業界によく知られている技術を用いた組換えＤＮＡ技術によって製造することができる。これによって、抗体又は抗体断片（例えば、軽鎖又は重鎖）をコーディングするヌクレオチド配列を含有するポリヌクレオチドを発現することによってタンパク質を製造するための方法が本明細書に記載されている。当業者によく知られている方法を用いて抗体又は抗体断片（例えば、軽鎖又は重鎖）コーディング配列及び適切な転写及び翻訳制御信号を含有する発現ベクターを製作することができる。これらの方法は、例えば、試験管内の組換えＤＮＡ技術、合成技術及び生体内の遺伝子組換えを含む。また、本明細書に記載された抗体分子、抗体の重鎖又は軽鎖、抗体の重鎖又は軽鎖可変ドメイン又はその断片、又はプロモーターに作動可能に連結された重鎖又は軽鎖ＣＤＲをコーディングするヌクレオチド配列を含む複製可能なベクターを提供する。このようなベクターは、例えば、前記抗体分子の定常領域をコーディングするヌクレオチド配列を含むことができ（例えば、その全文が本明細書に参考として含まれた国際公開番号ＷＯ８６／０５８０７及びＷＯ８９／０１０３６；及び米国特許番号５，１２２，４６４参照）、前記抗体の可変ドメインを、全体重鎖、全体軽鎖、又は全体重鎖及び軽鎖の全ての発現のためにこのようなベクターにクローニングすることができる。
発現ベクターは、従来技術によって細胞（例えば、宿主細胞）に伝達され得、その後、その結果として得た細胞を従来の技術によって培養し、本明細書に記載された抗体（例えば、本開示内容の抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体のＶＨ及び／又はＶＬ又はＶＨ及び／又はＶＬ ＣＤＲのうち一つ以上を含む抗体）又はその断片を生産することができる。これによって、本明細書は、ポリヌクレオチドを含有する宿主細胞を提供するものであって、前記ポリヌクレオチドは、前記宿主細胞でこのような配列の発現のためのプロモーターに作動可能に連結された本明細書に記載された抗体又はその断片、その重鎖又は軽鎖又はその断片、又は本明細書に記載された単一鎖抗体をコーディングする。特定の様態において、二重鎖抗体の発現のために、個別的に重鎖及び軽鎖の全てをコーディングするベクターは、詳細に後述しているように、全体の免疫グロブリン分子の発現のために宿主細胞で共発現することができる。特定の様態において、宿主細胞は、本明細書に記載された抗体の重鎖及び軽鎖の全て又はその断片をコーディングするポリヌクレオチドを含むベクターを含有する。特定の様態において、宿主細胞は、２個の互いに異なるベクター、すなわち、本明細書に記載された抗体の重鎖又は重鎖可変領域又はその断片をコーディングするポリヌクレオチドを含む第１ベクター、及び本明細書に記載された抗体の軽鎖又は軽鎖可変領域又はその断片をコーディングするポリヌクレオチドを含む第２ベクターを含有する。一部の様態において、第１宿主細胞は、本明細書に記載された抗体の重鎖又は重鎖可変領域又はその断片をコーディングするポリヌクレオチドを含む第１ベクターを含み、第２宿主細胞は、本明細書に記載された抗体の軽鎖又は軽鎖可変領域をコーディングするポリヌクレオチドを含む第２ベクターを含む。特定の様態において、第１細胞によって発現される重鎖／重鎖可変領域は、第２細胞の軽鎖／軽鎖可変領域と会合し、本明細書に記載された抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体又はその抗原結合断片を形成する。特定の様態において、本明細書は、このような第１宿主細胞及びこのような第２宿主細胞を含む宿主細胞の集団を提供する。
一部の様態において、本明細書は、本明細書に記載された抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体の軽鎖／軽鎖可変領域をコーディングするポリヌクレオチドを含む第１ベクター、及び本明細書に記載された抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体の重鎖／重鎖可変領域をコーディングするポリヌクレオチドを含む第２ベクターを含むベクターの集団を提供する。
本明細書に記載された抗体分子を発現するために、多様な宿主－発現ベクターシステムを使用することができる。このような宿主－発現システムは、関心のあるコーディング配列を生成し、続いて、精製できる伝達体（ｖｅｈｉｃｌｅ）に該当するが、また、適切なヌクレオチドコーディング配列による形質転換又は形質移入時、本明細書に記載された抗体分子をインシチュ（ｉｎ ｓｉｔｕ）発現できる細胞に該当する。これらは、抗体コーディング配列を含む組換えバックテリオファージＤＮＡ、プラスミドＤＮＡ又はコスミドＤＮＡ発現ベクターによって形質転換されたバクテリア（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ及びＢ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）などの微生物；抗体コーディング配列を含有する組換え酵母発現ベクターによって形質転換された酵母（例えば、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ Ｐｉｃｈｉａ）；抗体コーディング配列を含有する組換えウイルス発現ベクター（例えば、ｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓ）によって感染した昆虫細胞システム；組換えウイルス発現ベクター（例えば、カリフラワーモザイクウイルス、ＣａＭＶ；タバコモザイクウイルス、ＴＭＶ）によって感染したり、抗体コーディング配列を含有する組換えプラスミド発現ベクター（例えば、Ｔｉプラスミド）によって形質転換された植物細胞システム（例えば、Ｃｈｌａｍｙｄｏｍｏｎａｓ ｒｅｉｎｈａｒｄｔｉｉなどの緑藻類）；又は哺乳類細胞のゲノムから由来したプロモーター（例えば、メタロチオネインプロモーター）又は哺乳類ウイルスから由来したプロモーター（例えば、アデノウイルス後期プロモーター；ワクシニアウイルス７．５Ｋプロモーター）を含有する組換え発現構造体を保有した哺乳類細胞システム（例えば、ＣＯＳ（例えば、ＣＯＳ１又はＣＯＳ）、ＣＨＯ、ＢＨＫ、ＭＤＣＫ、ＨＥＫ ２９３、ＮＳＯ、ＰＥＲ．Ｃ６、ＶＥＲＯ、ＣＲＬ７０３０、ＨｓＳ７８Ｂｓｔ、ＨｅＬａ、ＮＩＨ３Ｔ３、ＨＥＫ－２９３Ｔ、ＨｅｐＧ２、ＳＰ２１０、Ｒ１．１、Ｂ－Ｗ、Ｌ－Ｍ、ＢＳＣｌ、ＢＳＣ４０、ＹＢ／２０及びＢＭＴ１０細胞）を含むが、これに限定されるのではない。特定の様態において、本明細書に記載された抗体又はその抗原結合断片を発現させるための細胞は、ＣＨＯ細胞、例えば、ＣＨＯ ＧＳ ＳＹＳＴＥＭＴＭ（Ｌｏｎｚａ）のＣＨＯ細胞である。一部の様態において、本明細書に記載された抗体を発現させるための細胞は、ヒト細胞、例えば、ヒト細胞株である。一部の様態において、哺乳類発現ベクターは、ＰＯＰＴＩＶＥＣＴＭ又はｐｃＤＮＡ３．３である。一部の様態において、特に、全体の組換え抗体分子の発現のための大腸菌などのバクテリア細胞又は真核細胞（例えば、哺乳類細胞）が組換え抗体分子の発現のために使用される。例えば、中国ハムスターの卵巣（ＣＨＯ）細胞などの哺乳類細胞は、ヒトサイトメガロウイルスの主要中間体初期遺伝子プロモーター要素などのベクターと共に、抗体に対して有効な発現システムである（Ｆｏｅｃｋｉｎｇ ＭＫ ＆ Ｈｏｆｓｔｅｔｔｅｒ Ｈ（１９８６）Ｇｅｎｅ ４５：１０１－５；及びＣｏｃｋｅｔｔ ＭＩ ｅｔ ａｌ．，（１９９０）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ８（７）：６６２－７）。特定の様態において、本明細書に記載された抗体は、ＣＨＯ細胞又はＮＳＯ細胞によって生産される。一部の様態において、ＦＡＭ１９Ａ１（例えば、ヒトＦＡＭ１９Ａ１）に免疫特異的に結合する本明細書に記載された抗体をコーディングするヌクレオチド配列の発現は、構成的プロモーター、誘導性プロモーター又は組織特異的プロモーターによって調節される。
バクテリアシステムにおいて、多数の発現ベクターは、発現される抗体分子に対して意図された用途によって有利に選択され得る。例えば、このような抗体を、抗体分子の薬剤学的組成物を作るために大量生産しようとするとき、容易に精製される高水準の融合タンパク質生成物の発現を指示するベクターが好ましい。このようなベクターには、抗体コーディング配列がｌａｃ Ｚコーディング領域を有する構成でベクターに個別的に結紮され、融合タンパク質が生成されるＥ．ｃｏｌｉ発現ベクターｐＵＲ２７８（Ｒｕｅｔｈｅｒ Ｕ ＆ Ｍｕｅｌｌｅｒ－Ｈｉｌｌ Ｂ（１９８３）ＥＭＢＯ Ｊ ２：１７９１－１７９４）；ｐＩＮベクター（Ｉｎｏｕｙｅ Ｓ ＆ Ｉｎｏｕｙｅ Ｍ（１９８５）Ｎｕｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ １３：３１０１－３１０９；Ｖａｎ Ｈｅｅｋｅ Ｇ ＆ Ｓｃｈｕｓｔｅｒ ＳＭ（１９８９）Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２４：５５０３－５５０９）；などが含まれるが、これに制限されるのではない。例えば、グルタチオン５－トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）によって融合タンパク質として外来ポリペプチドを発現させるためにｐＧＥＸベクターを使用することもできる。一般に、このような融合タンパク質は可溶性であり、マトリックスグルタチオンアガロースビーズに吸着及び結合した後、遊離グルタチオンが存在する状態で溶出することによって、溶解された細胞から容易に精製され得る。前記ｐＧＥＸベクターは、トロンビン又は因子Ｘａプロテアーゼ切断部位を含むように構成され、クローニングされた標的遺伝子産物がＧＳＴモイエティから放出され得る。
昆虫システムにおいて、例えば、ＡｃＮＰＶ（Ａｕｔｏｇｒａｐｈａ ｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａ核多面体ウイルス）は、外来遺伝子を発現するベクターとして使用され得る。前記ウイルスは、ヨトウガ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）細胞で成長する。前記抗体コーディング配列は、ウイルスの非－必須領域（例えば、ポリヘドリン遺伝子）に個別的にクローニングされ、ＡｃＮＰＶプロモーター（例えば、ポリヘドリンプロモーター）の制御状態にあり得る。
哺乳類宿主細胞では、多数のウイルス系発現システムが使用され得る。アデノウイルスを発現ベクターとして使用する場合、関心のある抗体コーディング配列をアデノウイルス転写／翻訳制御複合体、例えば、後期プロモーター及び３部（ｔｒｉｐａｒｔｉｔｅ）リーダー配列に結紮させることができる。次に、このキメラ遺伝子を試験管内又は生体内の組換えによってアデノウイルスゲノムに挿入することができる。前記ウイルスゲノムの非－必須領域（例えば、領域Ｅ１又はＥ３）に挿入すると、生存可能であり、感染した宿主で抗体分子を発現できる組換えウイルスが生成され得る（例えば、Ｌｏｇａｎ Ｊ ＆ Ｓｈｅｎｋ Ｔ（１９８４）ＰＮＡＳ ８１（１２）：３６５５－９参照）。挿入された抗体コーディング配列の効率的な翻訳のために、特定の開始信号も必要であり得る。これらの信号は、ＡＴＧ開始コドン及び隣接配列を含む。また、前記開始コドンは、全体の挿入物の翻訳が可能になるように所望のコーディング配列のリーディングフレームと互いに合っていなければならない。これらの外因性翻訳制御信号及び開始コドンは、天然及び合成の全ての多様な起源を有することができる。発現効率は、適切な転写エンハンサー要素、転写終結因子などを含むことによって増大し得る（例えば、Ｂｉｔｔｅｒ Ｇ ｅｔ ａｌ．，（１９８７）Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．１５３：５１６－５４４参照）。
また、前記挿入された配列の発現を調節したり、所望の特定方式で遺伝子産物を変形及び処理する宿主細胞菌株を選別することができる。タンパク質生成物のこのような変形（例えば、グリコシル化）及び処理（例えば、切断）は、タンパク質の機能に重要であり得る。互いに異なる宿主細胞は、タンパク質及び遺伝子産物の翻訳後、処理及び変形に対する特徴的でありながら特異的なメカニズムを有している。発現された外来タンパク質の正しい変形及び処理が可能になるように適切な細胞株又は宿主システムを選択することができる。このために、１次転写体の適切な処理、遺伝子産物のグリコシル化及びリン酸化に対する細胞機構を保有した真核宿主細胞を使用することができる。このような哺乳類宿主細胞は、ＣＨＯ、ＶＥＲＯ、ＢＨＫ、Ｈｅｌａ、ＭＤＣＫ、ＨＥＫ ２９３、ＮＩＨ ３Ｔ３、Ｗ１３８、ＢＴ４８３、Ｈｓ５７８Ｔ、ＨＴＢ２、ＢＴ２０、Ｔ４７Ｄ、ＮＳＯ（いずれの免疫グロブリン鎖も体内に生成していないマウス骨髄腫細胞株）、ＣＲＬ７０３０、ＣＯＳ（例えば、ＣＯＳ １又はＣＯＳ）、ＰＥＲ．Ｃ６、ＶＥＲＯ、ＨｓＳ７８Ｂｓｔ、ＨＥＫ－２９３Ｔ、ＨｅｐＧ２、ＳＰ２１０、Ｒ１．１、Ｂ－Ｗ、Ｌ－Ｍ、ＢＳＣ １、ＢＳＣ４０、ＹＢ／２０、ＢＭＴ１０及びＨｓＳ７８Ｂｓｔ細胞を含むが、これに制限されるのではない。特定の様態において、本明細書に記載された抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体は、ＣＨＯ細胞などの哺乳類細胞で生産される。
一部の様態において、本明細書に記載された抗体又はその抗原結合部分は、減少したフコース含量を有したり、フコース含量を全く有していない。このような抗体は、当業者に公知となっている技術を用いて生産することができる。例えば、前記抗体は、フコシル化能力が不足又は欠如した細胞で発現され得る。特定の例において、１，６－フコシルトランスフェラーゼの２個の対立遺伝子がノックアウトされた細胞株を、フコース含量が減少した抗体又はその抗原結合部分を生産するために使用することができる。ＰＯＴＥＬＬＩＧＥＮＴ（登録商標）システム（Ｌｏｎｚａ）は、フコース含量が減少した抗体又はその抗原結合部分を生産するために使用できるこのようなシステムの一例である。
長期間高収率で組換えタンパク質を生産するために、安定した発現細胞を作ることができる。例えば、本明細書に記載された抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体又はその抗原結合部分を安定的に発現する細胞株を操作することができる。特定の様態において、本明細書に提供された細胞は会合し、本明細書に記載された抗体又はその抗原結合部分を形成する軽鎖／軽鎖可変ドメイン及び重鎖／重鎖可変ドメインを安定的に発現する。
特定の様態において、宿主細胞は、ウイルス複製起源を含有する発現ベクターを使用する代わりに、適切な発現制御要素（例えば、プロモーター、エンハンサー、配列、転写終結因子、ポリアデニル化部位など）によって制御されたＤＮＡ及び選択マーカーを用いて形質転換することができる。外来ＤＮＡ／ポリヌクレオチドの導入後、操作された細胞を濃縮培地で１日～２日間成長させることができ、その後、選択的培地に変える。組換えプラスミドでの選択マーカーは、選択に対する耐性を付与し、細胞がこれらの染色体にプラスミドを安定的に統合・成長させ、細胞株にクローニング及び膨張され得る焦点（ｆｏｃｉ）を形成する。この方法は、本明細書に記載された抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体又はその抗体結合部分を発現する細胞株を操作するために有利に利用可能である。このように操作された細胞株は、抗体分子と直・間接的に相互作用する組成物のスクリーニング及び評価に特に有用であり得る。
それぞれｔｋ－、ｈｇｐｒｔ－又はａｐｒｔ－細胞で使用できるヘルペス単純ウイルスチミジンキナーゼ（Ｗｉｇｌｅｒ Ｍ ｅｔ ａｌ．，（１９７７）Ｃｅｌｌ １１（１）：２２３－３２）、ヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（Ｓｚｙｂａｌｓｋａ ＥＨ ＆ Ｓｚｙｂａｌｓｋｉ Ｗ（１９６２）ＰＮＡＳ ４８（１２）：２０２６－２０３４）及びアデニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（Ｌｏｗｙ Ｉ ｅｔ ａｌ．，（１９８０）Ｃｅｌｌ ２２（３）：８１７－２３）遺伝子を含む多数の選択システムを使用できるが、これらに限定されるのではない。また、抗代謝産物耐性は、次のような遺伝子に対する選択のベースとして使用することができる：メトトレキサート耐性を付与するｄｈｆｒ（Ｗｉｇｌｅｒ Ｍ ｅｔ ａｌ．，（１９８０）ＰＮＡＳ ７７（６）：３５６７－７０；Ｏ’Ｈａｒｅ Ｋ ｅｔ ａｌ.，（１９８１）ＰＮＡＳ ７８：１５２７－３１）；ミコフェノール酸耐性を付与するｇｐｔ（Ｍｕｌｌｉｇａｎ ＲＣ ＆ Ｂｅｒｇ Ｐ（１９８１）ＰＮＡＳ ７８（４）：２０７２－６）；アミノグリコシドＧ－４１８耐性を付与するｎｅｏ（Ｗｕ ＧＹ ＆ Ｗｕ ＣＨ（１９９１）Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｙ ３：８７－９５；Ｔｏｌｓｔｏｓｈｅｖ Ｐ（１９９３）Ａｎｎ Ｒｅｖ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｔｏｘｉｃｏｌ ３２：５７３－５９６；Ｍｕｌｌｉｇａｎ ＲＣ（１９９３）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６０：９２６－９３２；及びＭｏｒｇａｎ ＲＡ ＆ Ａｎｄｅｒｓｏｎ ＷＦ（１９９３）Ａｎｎ Ｒｅｖ Ｂｉｏｃｈｅｍ ６２：１９１－２１７；Ｎａｂｅｌ ＧＪ ＆ Ｆｅｉｇｎｅｒ ＰＬ（１９９３）Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ １１（５）：２１１－５）；及びハイグロマイシン耐性を付与するｈｙｇｒｏ（Ｓａｎｔｅｒｒｅ ＲＦ ｅｔ ａｌ．，（１９８４）Ｇｅｎｅ ３０（１－３）：１４７－５６）。組換えＤＮＡ技術分野で一般に知られている方法は、所望の組換えクローンを選別するために通常的に適用可能であり、このような方法は、例えば、その全文が本明細書に参考として含まれるＡｕｓｕｂｅｌ ＦＭ ｅｔ ａｌ．，（ｅｄｓ．），Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，ＮＹ（１９９３）；Ｋｒｉｅｇｌｅｒ Ｍ，Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ ａｎｄ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｓｔｏｃｋｔｏｎ Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ（１９９０）；及びＣｈａｐｔｅｒｓ １２ ａｎｄ １３，Ｄｒａｃｏｐｏｌｉ ＮＣ ｅｔ ａｌ．，（ｅｄｓ．），Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，ＮＹ（１９９４）；Ｃｏｌｂｅｒｅ－Ｇａｒａｐｉｎ Ｆ ｅｔ ａｌ．，（１９８１）Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ １５０：１－１４に記載されている。
抗体分子の発現水準は、ベクター増幅によって増加し得る（検討のために、Ｂｅｂｂｉｎｇｔｏｎ ＣＲ ＆ Ｈｅｎｔｓｃｈｅｌ ＣＣＧ，Ｔｈｅ ｕｓｅ ｏｆ ｖｅｃｔｏｒｓ ｂａｓｅｄ ｏｎ ｇｅｎｅ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｆｏｒ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｃｌｏｎｅｄ ｇｅｎｅｓ ｉｎ ｍａｍｍａｌｉａｎ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ＤＮＡ ｃｌｏｎｉｎｇ，Ｖｏｌ ３（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８７を参照すればよい））。抗体を発現するベクターシステム内のマーカーが増幅可能であるとき、宿主細胞培養物に存在する阻害剤の水準増加は、マーカー遺伝子の複製数を増加させ得る。増幅された領域は抗体遺伝子と関連しているので、抗体の生産も増加し得る（Ｃｒｏｕｓｅ ＧＦ ｅｔ ａｌ．，（１９８３）Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ ３：２５７－６６）。
前記宿主細胞は、本明細書に記載された２個以上の発現ベクターである重鎖由来ポリペプチドをコーディングする第１ベクター及び軽鎖由来ポリペプチドをコーディングする第２ベクターによって同時形質移入され得る。前記２個のベクターは、重鎖及び軽鎖ポリペプチドの同一の発現を可能にする同一の選択マーカーを含有することができる。前記宿主細胞は、前記２個以上の発現ベクターの互いに異なる量によって同時形質移入され得る。例えば、宿主細胞は、第１発現ベクター及び第２発現ベクターの次のような比のうちいずれか一つによって形質移入され得る：１：１、１：２、１：３、１：４、１：５、１：６、１：７、１：８、１：９、１：１０、１：１２、１：１５、１：２０、１：２５、１：３０、１：３５、１：４０、１：４５又は１：５０。
これと異なり、重鎖及び軽鎖ポリペプチドの全てをコーディング・発現できる単一ベクターを使用することができる。このような状況で、前記軽鎖は、過量の毒性遊離重鎖を防止するために重鎖の前方に位置しなければならない（Ｐｒｏｕｄｆｏｏｔ ＮＪ（１９８６）Ｎａｔｕｒｅ ３２２：５６２－５６５；及びＫｏｈｌｅｒ Ｇ（１９８０）ＰＮＡＳ ７７：２１９７－２１９９）。前記重鎖及び軽鎖をコーディングする配列は、ｃＤＮＡ又はゲノムＤＮＡを含むことができる。前記発現ベクターは、モノシストロン性又はマルチシストロン性であり得る。マルチシストロン性核酸構造体は、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個以上、又は、２～５個、５～１０個又は１０～２０個範囲の遺伝子／ヌクレオチド配列をコーディングすることができる。例えば、バイシストロン性核酸構造体は、プロモーター、第１遺伝子（例えば、本明細書に記載された抗体の重鎖）及び第２遺伝子（例えば、本明細書に記載された抗体の軽鎖）の順に含むことができる。このようなベクターにおいて、前記２個の遺伝子の転写は前記プロモーターによって駆動し得る一方で、第１遺伝子からのｍＲＮＡの翻訳は、キャップ－依存的（ｃａｐ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ）スキャニングメカニズムによって駆動してもよく、第２遺伝子からのｍＲＮＡの翻訳は、キャップ－独立的メカニズム、例えば、ＩＲＥＳによって駆動してもよい。
組換え発現によって本明細書に記載された抗体分子が生成されると、免疫グロブリン分子の精製のための当業界に公知となっている任意の方法、例えば、クロマトグラフィー（例えば、イオン交換、親和性、特に、タンパク質Ａ以降、特異的抗原に対する親和性、及びサイジング（ｓｉｚｉｎｇ）カラムクロマトグラフィー）、遠心分離、差等溶解度又はタンパク質精製のためのその他の標準技術によって精製され得る。また、本明細書に記載された抗体を、本明細書に記載されたり又はその他に当業界に公知となっている異種ポリペプチド配列に融合させることによって精製を容易にすることができる。
特定の様態において、本明細書に記載された抗体又はその抗原結合部分は、分離又は精製される。一般に、分離された抗体は、抗原特異性が前記分離された抗体と異なる他の抗体が実質的にない抗体である。例えば、一部の様態において、本明細書に記載された抗体の製剤には、細胞物質及び／又は化学的前駆体が実質的にない。用語「細胞物質が実質的にない」は、細胞から分離されたり又は組換えによって生産され、細胞の細胞成分から分離された抗体の製剤を含む。これによって、細胞物質が実質的にない抗体は、異種タンパク質（本明細書で「汚染タンパク質」ともいう）及び／又は抗体の変異体、例えば、抗体の互いに異なる翻訳後の変形した形態又は抗体（又は抗体結合部分）の他の異なる変形した形態を約３０％、２０％、１０％、５％、２％、１％、０．５％又は０．１％（乾燥重量基準）未満で有する抗体の製剤を含む。前記抗体を組換えによって生産するとき、前記抗体には、一般に培養培地が実質的になく、すなわち、培養培地がタンパク質製剤体積の約２０％＞、１０％＞、２％、１％、０．５％又は０．１％未満に相当する。前記抗体を化学的合成によって生産するとき、前記抗体は、一般に化学的前駆体又は他の化学物質が実質的になく、すなわち、タンパク質合成に関与する化学的前駆体又は他の化学物質から分離される。したがって、このような抗体製剤は、化学前駆体又は関心のある抗体以外の化合物を約３０％、２０％、１０％又は５％（乾燥重量基準）未満で有する。一部の様態において、本明細書に記載された抗体は分離又は精製される。
［ＩＸ．診断］
上述したように、本明細書に記載されたＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤（例えば、抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体）は、サンプル試験及び生体内映像化を含む診断の目的で使用することができ、この目的のために、前記抗体（又はその結合部分）を適切な検出可能な製剤に接合させることによって免疫接合体を形成することができる。診断の目的のために、適切な製剤は、全身映像化のための放射性同位元素及びサンプル試験のための放射性同位元素、酵素、蛍光標識及びその他の適切な抗体タグを含む検出可能な標識である。
検出可能な標識は、コルロイダル金などの金属ゾルを含む微粒子標識、例えば、Ｎ２Ｓ２、Ｎ３Ｓ又はＮ４類型のペプチドキレート化剤が提供されたＩ１２５又はＴｃ９９などの同位元素、蛍光マーカー、発光マーカー、燐光マーカーなどを含む発色団のみならず、所定の基質を検出可能なマーカーに転換させる酵素標識、及び、例えば、重合酵素連鎖反応による増幅後に確認されるポリヌクレオチドタグを含み、試験管内診断分野で現在使用されている多様な類型のうち任意のものであり得る。適切な酵素標識には、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリ性ホスファターゼなどが含まれる。例えば、前記標識は、アダマンチルメトキシホスホリルオキシフェニルジオキセタン（ＡＭＰＰＤ）、二ナトリウム３－（４－（メトキシスピロ１，２－ジオキセタン－３，２’－（５’－クロロ）トリシクロ３．３．１．１ ３，７デカン－４－イル）フェニルホスフェート（ＣＳＰＤ）のみならず、ＣＤＰ及びＣＤＰ－ＳＴＡＲ（登録商標）などの１，２ジオキセタン基質又は当業者によく知られている他の発光基質、例えば、テルビウム（ＩＩＩ）及びユーロピウム（ＩＩＩ）などの適切なランタノイドのキレートの転換後、化学発光の存在又は形成を測定して検出される酵素アルカリ性ホスファターゼであり得る。検出手段は、選択された標識によって決定される。前記標識又はその反応生成物の外観は、前記標識が微粒子でありながら適切な水準で蓄積される場合、肉眼を用いたり、分光光度計、照度計、蛍光光度計などの機器を使用し、いずれも標準施行によって得ることができる。
また、本明細書に記載されたＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤（例えば、抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体）は、抗体－薬物接合体（ＡＤＣ）などの免疫接合体を形成するために治療剤に接合され得る。適切な治療剤は、ＣＮＳ機能の異常又はこのような異常と関連している疾患及び障害（例えば、緑内障又は神経障害性疼痛）を治療できる製剤を含む。このような治療剤の非制限的な例は、本開示内容全体にわたって提供されている。
免疫接合体は、当業界に公知となっている方法によって製造することができる。一部の様態において、接合方法の結果として、実質的に（又はほとんど）非－免疫原性である結合、例えば、ペプチド－（すなわち、アミド－）、スルフィド－、（立体障害）、ジスルフィド－、ヒドラゾーン－及びエーテル結合が表れる。これらの結合は、ほとんど非－免疫原性であり、血清内で相当な安定性を示す（例えば、Ｓｅｎｔｅｒ，Ｐ．Ｄ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．１３（２００９）２３５－２４４；ＷＯ２００９／０５９２７８；ＷＯ９５／１７８８６参照）。
前記モイエティ及び抗体の生化学的属性によって、互いに異なる接合戦略を用いることができる。前記モイエティが自然発生型であったり、５０個乃至５００個のアミノ酸の組換えせ型である場合、タンパク質接合体の合成のための化学的方法を説明する標準手続きがテキストブックにあり、当業者であれば容易に従うことができる（例えば、Ｈａｃｋｅｎｂｅｒｇｅｒ，Ｃ．Ｐ．Ｒ．，ａｎｄ Ｓｃｈｗａｒｚｅｒ，Ｄ．，Ａｎ ｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．４７（２００８）１００３０－１００７４）。一部の様態において、前記抗体又はモイエティ内のシステイン残基とマレイニミドモイエティの反応を用いる。これは、例えば、抗体のＦａｂ又はＦａｂ’－断片を使用する場合に特に適切なカップリング化学的方法である。これと異なり、一部の様態において、前記抗体又はモイエティのＣ－末端にカップリングを行う。タンパク質、例えば、Ｆａｂ－断片のＣ－末端変形は、例えば、Ｓｕｎｂｕｌ，Ｍ．ａｎｄ Ｙｉｎ，Ｊ．，Ｏｒｇ．Ｂｉｏｍｏｌ．Ｃｈｅｍ．７（２００９）３３６１－３３７１に記載された通りに行うことができる。
一般に、部位特異的反応及び共有結合は、天然アミノ酸を、存在する他の官能基の反応性と直交する反応性を有するアミノ酸に変換することを基盤とする。例えば、稀な配列コンテキスト内の特定システインは、アルデヒドに酵素的に変換され得る（Ｆｒｅｓｅ，Ｍ．Ａ．ａｎｄ Ｄｉｅｒｋｓ，Ｔ．，ＣｈｅｍＢｉｏＣｈｅｍ．１０（２００９）４２５－４２７参照）。所定の配列コンテキスト内の天然アミノ酸と特定酵素の特異的酵素反応性を用いて所望のアミノ酸変形を得ることもできる（例えば、Ｔａｋｉ，Ｍ．ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔ．Ｅｎｇ．Ｄｅｓ．Ｓｅｌ．１７（２００４）１１９－１２６；Ｇａｕｔｉｅｒ，Ａ．ｅｔ ａｌ．，Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．１５（２００８）１２８－１３６；ａｎｄ Ｐｒｏｔｅａｓｅ－ｃａｔａｌｙｚｅｄ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｏｆ Ｃ－Ｎ ｂｏｎｄｓ ｉｓ ｕｓｅｄ ｂｙ Ｂｏｒｄｕｓａ，Ｆ．，Ｈｉｇｈｌｉｇｈｔｓ ｉｎ Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（２００４）３８９－４０３参照）。
また、部位特異的反応及び共有結合は、適切な変形試薬と末端アミノ酸の選択的反応によって達成され得る。ベンゾニトリルとＮ－末端システインの反応性（Ｒｅｎ，Ｈ．ｅｔ ａｌ．，Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．４８（２００９）９６５８－９６６２参照）を用いて部位特異的共有結合を得ることができる。また、天然化学結紮は、Ｃ－末端システイン残基に依存し得る（Ｔａｙｌｏｒ，Ｅ．Ｖｏｇｅｌ；Ｉｍｐｅｒｉａｌｉ，Ｂ，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（２００９），２２（Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ），６５－９６）。
ＥＰ １ ０７４ ５６３は、一連の正に帯電したアミノ酸内に位置したシステインと一連の負に帯電したアミノ酸内のシステインのさらに速い反応を基盤とする接合方法を記載している。
前記モイエティは、合成ペプチド又はペプチド模倣体であってもよい。ポリペプチドが化学的に合成される場合、このような合成中に直交する化学反応性を有するアミノ酸が導入され得る（例えば、ｄｅ Ｇｒａａｆ，Ａ．Ｊ．ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ．Ｃｈｅｍ．２０（２００９）１２８１－１２９５参照）。非常に多様な直交する官能基は、不安定でありながら合成ペプチドに導入され得るので、このようなペプチドをリンカーに接合することは標準化学的方法である。
単一標識されたポリペプチドを得るために、１：１化学量論比を有する接合体を他の接合副産物からクロマトグラフィーによって分離することができる。この過程は、染料標識された結合ペアメンバー及び帯電したリンカーを使用することによって容易になり得る。このような種類の標識及び大きく負に帯電した結合ペアメンバーを使用することによって、分離のために電荷と分子量の差を利用できるので、非－標識ポリペプチド及び１個より多いリンカーを保有したポリペプチドから単一接合されたポリペプチドが容易に分離される。前記蛍光染料は、標識された１価結合剤などの未結合成分から複合体を精製するのに有用であり得る。
［Ｘ．薬剤学的組成物］
本明細書は、生理学的に許容される担体、賦形剤又は安定化剤（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（１９９０）Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ）で所望の程度の純度を有する本明細書に記載されたＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤（例えば、抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体）を含む組成物を提供する。許容される担体、賦形剤又は安定化剤は、使用された投与量及び濃度で受容者に非毒性であり、ホスフェート、シトレート及びその他の有機酸などの緩衝剤；アスコルビン酸及びメチオニンを含む抗酸化剤；保存剤（オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド；ヘキサメトニウムクロリド；ベンザルコニウムクロリド；フェノール、ブチル又はベンジルアルコール；メチル又はプロピルパラベンなどのアルキルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３－ペンタノール；及びｍ－クレゾールなどの）；低分子量（約１０個未満の残基）ポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン又は免疫グロブリンなどのタンパク質；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン又はリシンなどのアミノ酸；単糖類、二糖類、及びグルコース、マンノース又はデキストリンを含む他の炭水化物；ＥＤＴＡなどのキレート化剤；スクロース、マンニトール、トレハロース又はソルビトールなどの糖；ナトリウムなどの塩形成対イオン；金属複合体（例えば、Ｚｎ－タンパク質複合体）；及び／又はＴＷＥＥＮ（登録商標）、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（登録商標）又はポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの非イオン性界面活性剤；を含む。
一部の様態において、薬剤学的組成物は、薬剤学的に許容される担体内に、本明細書に記載された抗体又はその抗原結合断片、２重特異的分子又は免疫複合体、及び場合によって一つ以上の追加的な予防又は治療剤を含む。特定の様態において、薬剤学的組成物は、薬剤学的に許容される担体に、本明細書に記載された抗体又はその抗原断片の有効量、及び場合によって一つ以上の追加的な予防又は治療剤を含む。一部の様態において、前記抗体は、前記薬剤学的組成物に含まれた唯一の活性成分である。本明細書に記載された薬剤学的組成物は、ＦＡＭ１９Ａ１活性を減少させることによって、例えば、ＣＮＳ機能異常と関連している疾患又は障害の治療に有用であり得る。
非経口製剤で使用される薬剤学的に許容される担体は、水性ビヒクル、非水性ビヒクル、抗微生物剤、等張剤、緩衝剤、抗酸化剤、局所麻酔剤、懸濁及び分散剤、乳化剤、金属イオン封鎖剤、キレート化剤及びその他の薬剤学的に許容される物質を含む。水性ビヒクルの各例は、塩化ナトリウム注射液、リンゲル注射液、等張デキストロース注射液、滅菌水注射液、デキストロース及び乳酸リンゲル注射液を含む。非水性非経口ビヒクルは、植物起源の固定油、綿実油、コーン油、ごま油及びピーナッツ油を含む。静菌又は静真菌濃度の抗微生物剤は、フェノール又はクレゾール、水銀含有物質、ベンジルアルコール、クロロブタノール、メチル及びプロピルｐ－ヒドロキシ安息香酸エステル、チメロサール、ベンザルコニウムクロリド及びベンゼトニウムクロリドを含む複数回投与用容器にパッケージされた非経口製剤に添加され得る。等張剤は、塩化ナトリウム及びデキストロースを含む。緩衝剤は、ホスフェート及びシトレートを含む。抗酸化剤は、硫酸水素ナトリウムを含む。局所麻酔剤は、プロカイン塩酸塩を含む。懸濁及び分散剤は、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース及びポリビニルピロリドンを含む。乳化剤は、Ｐｏｌｙｓｏｒｂａｔｅ ８０（ＴＷＥＥＮ（登録商標） ８０）を含む。金属イオンの封鎖剤又はキレート化剤はＥＤＴＡを含む。また、薬剤学的担体は、水混和性ビヒクル用エチルアルコール、ポリエチレングリコール及びプロピレングリコール；及びｐＨ調整のための水酸化ナトリウム、塩酸、クエン酸又は乳酸を含む。
薬剤学的組成物は、任意の投与経路のために剤形化され得る。具体的な例は、鼻内、経口、非経口、髄腔内、脳室内、肺、皮下又は脳室内を含む。本明細書では、皮下、筋肉内又は静脈内注射を特徴とする非経口投与も考慮される。注射剤は、従来の形態で、液体溶液や懸濁液、注射前に液体のうち溶液又は懸濁液に適切な固体形態で製造されたり、又は乳化液として製造され得る。また、注射剤、溶液及び乳化液は、一つ以上の賦形剤を含有する。適切な賦形剤は、例えば、水、食塩水、デキストロース、グリセロール又はエタノールである。また、必要な場合、投与する薬剤学的組成物は、少量の湿潤又は乳化剤、ｐＨ緩衝剤、安定化剤、溶解度増進剤などの非毒性補助物質、及び、例えば、酢酸ナトリウム、ソルビタンモノラウレート、トリエタノールアミンオレート及びシクロデキストリンなどの製剤を含有することができる。
抗体の非経口投与用製剤は、注射用即時滅菌液、皮下注射用錠剤を含み、使用直前に溶媒と即時に組み合わせることができる凍結乾燥粉末などの滅菌乾燥可溶性製品、注射用即時滅菌懸濁液、使用直前にビヒクルと即時に組み合わせることができる滅菌乾燥不溶性製品及び滅菌乳化液を含む。前記溶液は、水性又は非水性であり得る。
静脈内投与の場合に適切な担体は、生理食塩水又はリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）、及びグルコース、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール及びこれらの混合物などの増粘剤及び可溶化剤を含有する溶液を含む。
抗体を含む局所用混合物は、局所及び全身投与に対して記載された通りに製造される。その結果として得た混合物は、溶液、懸濁液、乳化液などであってもよく、クリーム、ゲル、軟膏、乳化液、溶液、エリキシル、ローション、懸濁液、チンキ、ペースト、フォーム、エアロゾル、潅注液（ｉｒｒｉｇａｔｉｏｎ）、スプレー、坐薬、包帯、皮膚パッチ又は局所投与に適切な任意の他の剤形として剤形化され得る。
本明細書に記載された抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体は、例えば、吸入による局所用エアロゾルとして剤形化され得る（例えば、炎症性疾患、特に喘息治療に有用なステロイド伝達用エアロゾルを記載している米国特許番号４，０４４，１２６、４，４１４，２０９及び４，３６４，９２３参照）。これらの気道投与用剤形は、噴霧器用エアロゾル又は溶液形態であったり、吸入剤用微細粉末として単独又はラクトースなどの非活性担体と組み合わせることができる。この場合、前記剤形の粒子は、一部の様態において、５０マイクロン未満の直径、特定の様態においては１０マイクロン未満の直径を有する。
本明細書に記載された抗体又はその抗原結合断片は、目などの皮膚と粘膜への局所塗布のように、局所用又は局部用としてゲル、クリーム及びローションの形態で目に適用したり、又は、水槽内（ｉｎｔｒａｃｉｓｔｅｒｎａｌ）又は脊髓内に適用するために製剤化され得る。局所投与は、経皮伝達用として、そして、目や粘膜投与用又は吸入療法用としても考慮される。前記抗体の点鼻液（ｎａｓａｌ ｓｏｌｕｔｉｏｎ）は、単独で他の薬剤学的に許容される賦形剤と組み合わせて投与され得る。
イオン泳動及び電気泳動デバイスを含む経皮パッチは、当業者によく知られており、抗体を投与するために使用され得る。例えば、このようなパッチは、米国特許番号６，２６７，９８３、６，２６１，５９５、６，２５６，５３３、６，１６７，３０１、６，０２４，９７５、６，０１０，７１５、５，９８５，３１７、５，９８３，１３４、５，９４８，４３３及び５，８６０，９５７に開示されている。
特定の様態において、本明細書に記載された抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体を含む薬剤学的組成物は、溶液、乳化液及びその他の混合物であり、投与用として再構成できる凍結乾燥粉末である。また、前記凍結乾燥粉末は、固体又はゲルとして再構成及び剤形化され得る。前記凍結乾燥粉末は、抗体（例えば、抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体）又はその薬剤学的に許容される誘導体を適切な溶媒に溶解させて製造される。一部の様態において、前記凍結乾燥粉末は滅菌性である。前記溶媒は、前記粉末又は前記粉末から製造された再構成溶液の安定性又はその他の薬理学的成分を改善する賦形剤を含有することができる。使用可能な賦形剤は、デキストロース、ソルビトール、フルクトース、コーンシロップ、キシリトール、グリセリン、グルコース、スクロース又はその他の適切な製剤を含むが、これに限定されるのではない。また、前記溶媒は、シトレート、リン酸ナトリウム又はリン酸カリウムなどの緩衝剤、又は、当業者に公知となっている、一部の様態において、約中性ｐＨの他のこのような緩衝剤を含有することができる。続いて、前記溶液を滅菌・ろ過した後、当業者に公知となっている標準条件で凍結乾燥し、所望の剤形を提供する。一部の様態において、前記得られた溶液は、凍結乾燥用バイアルに配分され得る。それぞれのバイアルは、前記化合物の単一投与量又は多数の投与量を含有することができる。前記凍結乾燥された粉末は、約４℃乃至室温などの適切な条件で保管され得る。
このような凍結乾燥された粉末を注射用水によって再構成し、非経口投与用として使用するための剤形を提供する。再構成のために、前記凍結乾燥された粉末を滅菌水又は他の適切な担体に添加する。その正確な量は、選択した化合物によって異なる。このような量は、経験的に決定することができる。
また、本明細書に記載された抗体又はその抗原結合断片、２重特異的分子、免疫複合体、及び本明細書に提供された他の組成物は、治療する対象の特定組織、受容体又は他の身体領域を標的とするように剤形化されてもよい。このような標的化方法が多数の当業者によく知られている。本明細書において、このような標的化方法は、いずれも本組成物に使用することが考慮される。標的化方法の非制限的な例に対しては、例えば、その全文が本明細書に参考として含まれる米国特許番号６，３１６，６５２、６，２７４，５５２、６，２７１，３５９、６，２５３，８７２、６，１３９，８６５、６，１３１，５７０、６，１２０，７５１、６，０７１，４９５、６，０６０，０８２、６，０４８，７３６、６，０３９，９７５、６，００４，５３４、５，９８５，３０７、５，９７２，３６６、５，９００，２５２、５，８４０，６７４、５，７５９，５４２及び５，７０９，８７４を参照すればよい。
生体内への投与のために使用される組成物は、滅菌性であり得る。これは、例えば、滅菌用ろ過膜を通じたろ過によって容易に行われる。
［ＸＩ．キット］
本明細書は、本明細書に記載された一つ以上の抗体又はその抗原結合断片を含む診断又は治療用キットを提供する。特定の様態において、本明細書は、本明細書に提供された一つ以上の抗体又はその抗原結合断片などの本明細書に記載された薬剤学的組成物の各成分のうち一つ以上が充填された一つ以上の容器、及び、場合によって使用説明書を含むパック又はキットを提供する。一部の様態において、前記キットは、本明細書に記載された組成物及び本明細書に記載された任意の予防又は治療剤を含有する。
〔実施例〕
（実施例１：抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体スクリーニング）
Ｙ－Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ（大田、大韓民国）のファージ－ｓｃＦｖ抗体ライブラリは、１－３×１０１０多様性を有する１０個の互いに異なるライブラリセットからなり、合計１×１０１１多様性を形成する。関連抗体をスクリーニングするためにバイオパニングを行った。簡単には、ＦＡＭ１９Ａ１－Ｆｃ及びＦＡＭ１９Ａ１－ｍＦｃタンパク質（Ｙ－Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ、大田、大韓民国）を使用して免疫吸着チューブをコーティングした後でブロッキングした。ファージ感染後、３０℃で１６時間にわたってヒトｓｃＦｖライブラリ細胞（１０１０多様性）を培養し、ＰＥＧで濃縮した後、ＰＢＳ緩衝液に懸濁することによってライブラリファージを製造した。次に、前記ライブラリファージを免疫吸着チューブに添加し、これを室温で２時間にわたって培養した。培養後、前記チューブを１×ＰＢＳ／Ｔ及び１×ＰＢＳで洗浄し、抗原（ＦＡＭ１９Ａ１タンパク質）に結合されたｓｃＦｖファージのみを溶出させた。陽性ファージのプールを使用し、追加的な増幅及びバイオパニングのために大腸菌を感染させた。上記の過程を繰り返し、合計３回までバイオパニングを行った。それぞれの増幅により、ＦＡＭ１９Ａ１タンパク質に対する高い親和性に対してファージをスクリーニング及び選択した。
（実施例２：抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体クローンの選択）
バイオパニングのそれぞれのラウンドから陽性ポリｓｃＦｖ－ファージ抗体プールの特異性を調査するために、ポリ－ファージＥＬＩＳＡを行った。ＥＬＩＳＡ免疫プレートをＩＴＧＡ６－Ｆｃタンパク質又はＦＡＭ１９Ａ１－４－Ｆｃタンパク質でコーティングした。次に、前記プレートに実施例１のファージ抗体プールを添加し、ＥＬＩＳＡを直接行った。Ｍ１３ファージ＃３８（非－標識抗体指向）を陰性対照群として使用した。
図１に示したように、バイオパニングのラウンド３のｓｃＦｖ－ファージ抗体プールには、抗－ＦＡＭ１９Ａ１ファージ抗体が成功的に濃縮された。
次に、ポリ－ファージＥＬＩＳＡ結果に基づいて、高い結合能を示した３次バイオパニングから約１０００個の単一クローンを選択した。これらの単一クローンを９６ウェルプレートで培養し、ヘルパーファージによって感染させた。次に、モノｓｃＦｖ－ファージをＦＡＭ１９Ａ１－Ｆｃタンパク質でコーティングされた免疫プレートに移し、ＥＬＩＳＡを直接行った。結合がＦＡＭ１９Ａ１に特異的であったことを明らかにするために、ＩＴＧＡ６－Ｆｃタンパク質（非特異的抗原対照群）でコーティングした免疫プレートも使用した。
図２に示したように、モノｓｃＦｖ－ファージクローンは、ＦＡＭ１９Ａ１－Ｆｃにのみ結合することが明らかになり、ｓｃＦｖ－ファージクローンの特異性を確認した。
次に、選択された陽性ｓｃＦｖ－ファージクローンをグループ化するために、ｓｃＦｖを増幅できるプライマーセットを使用してコロニーＰＣＲを行った。増幅されたＰＣＲサンプルをＢｓｔＮＩで処理した後、８％ＤＮＡポリアクリルアミドゲルでサンプルを展開（ｒｕｎ）させ、抗体の多様性を評価した。
図３に示したように、ＰＣＲ断片化結果に基づいて陽性ｓｃＦｖ－ファージクローンを７個の群に分けることができた。これらは、いずれも以前にはＦＡＭ１９Ａ１－Ｆｃに強く結合するが、ＩＴＧＡ６－Ｆｃには結合しないことが示された。
次に、７個の群のそれぞれのｓｃ－Ｆｖファージが他の抗原に結合していないことを確認するために、追加的な抗原（Ｃ－Ｆｃ、ｈＲＡＧＥ－Ｆｃ、ＣＤ５８－Ｆｃ、ＩＴＧＡ６－Ｆｃ及びＡＩＲＴＲ）を使用して追加的なＥＬＩＳＡ結合分析（上記で説明する）を行った。
図４に示したように、試験した７個のクローンのうちクローン１Ａ１１、１Ｃ１、２Ｇ７及び３Ａ８は、非－ＦＡＭ１９Ａ１抗原に対して最も少ない結合を示した。配列分析の結果、これらの４個のクローンは、いずれも固有のアミノ酸配列を有していることが分かった。
（実施例３：抗－ＦＡＭ１９Ａ１ ＩｇＧ１抗体の生産）
選択された４個の単クローン性ファージ抗体をｓｃＦｖからヒトＩｇＧに転換させるために、ファージ抗体のそれぞれの重鎖及び軽鎖の可変領域を、重鎖及び軽鎖の定常領域を含む発現ベクターにサブクローニングした。図５Ａを参照すればよい。次に、前記重鎖及び軽鎖を含むプラスミドをＨＥＫ ２９３Ｆ細胞に６日間同時形質移入させた。次に、６日間生産された抗体をタンパク質Ａ親和性クロマトグラフィーを用いて精製した。精製後、グリシン緩衝液を通じて抗体を分離し、最終再懸濁緩衝液をＰＢＳに変えた。精製された抗体をＢＣＡ及びナノドロップ（ｎａｎｏ ｄｒｏｐ）で定量化した。精製されたタンパク質の純度及び移動度は、還元及び非還元条件で４個の抗体の５μｇをそれぞれローディングした後、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析によって確認した。図５Ｂに示したように、４個の抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体クローンは、非還元条件で約１５０ｋＤａ以上の大きさを有する。抗体の生産収率は、約１１ｍｇ／Ｌ（２Ｇ７クローン）乃至９０．５ｍｇ／Ｌ（１Ｃ１クローン）の範囲にあった（図５Ｃ）。
４個の抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体クローンの親和度も、ＥＬＩＳＡを用いて評価した。図５Ｄに示したように、１Ｃ１クローンは、試験した全ての濃度でＦＡＭ１９Ａ１に対して最も大きい親和度を有する。
（実施例４：エピトープマッピング分析）
抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体クローンの特性を追加的に分析するために、エピトープマッピング分析を行った。簡単には、互いに異なるＦＡＭ１９ファミリーメンバー（すなわち、ＦＡＭ１９Ａ１－５）に対するアミノ酸配列を整列させ、ＦＡＭ１９Ａ１タンパク質のアミノ酸配列がＦＡＭ１９Ａファミリーの他のメンバー（すなわち、ＦＡＭ１９Ａ２－５）と最も大きく異なる７個の領域を同定した。これらの領域のアミノ酸配列をＦＡＭ１９Ａ２－５タンパク質に対する該当の領域のコンセンサス（ｃｏｎｓｅｎｓｕｓ）配列に取り替え、Ｍ１－Ｍ７突然変異を生産した。表１０を参照すればよい。
Figure 2023516992000011
結合を評価するために、ＥＬＩＳＡプレートを突然変異Ｍ１－Ｍ７又は野生型ＦＡＭ１９Ａ１タンパク質５００ｎｇで４℃で一晩中コーティングした後、続いて、１×ＰＢＳで２回洗浄した。次に、前記プレートを室温で１時間にわたってブロッキングバッファー（１００μＬ／ウェル）でブロッキングした。次に、互いに異なる抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体クローン（１Ａ１１、１Ｃ１、Ｄ６、Ｅ１及びＦ４１Ｈ５；１μｇ）をＥＬＩＳＡプレートの適切なウェルに添加し、プレートを室温で１時間にわたって培養した。プレートを洗浄した後、抗－ｈＫａｐｐａ－ＨＲＰ抗体（１：２０００）をウェルに添加し、プレートを室温で３０分間培養した。ＴＭＢ基質の添加によって変色反応を誘導した。この反応を５０μＬの硫酸（２Ｎ Ｈ２ＳＯ４）を使用して中止させ、９６ウェルマイクロプレートリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅ）を使用して６２０ｎｍの基準波長で４５０ｎｍで吸収を通じて色変化度を検出した。
図６に示したように、最も大きいＦＡＭ１９Ａ１結合親和度を有するものと以前に明らかになった抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体クローン１Ｃ１は、ＦＡＭ１９Ａ１突然変異体Ｍ６に結合できなかった。上記の表８に示したように、Ｍ６突然変異体は、アミノ酸残基Ｄ１１２Ｎ、Ｍ１１７Ｓ、Ａ１１９Ｓ、Ｔ１２０Ｓ及びＮ１２２Ｈで置換を有している。この結果は、これらの残基が抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体クローン１Ｃ１に対する重要な結合エピトープであることを意味する。
（実施例５：ＦＡＭ１９Ａ１発現分析）
ＦＡＭ１９Ａ１の発現パターンの特性をさらによく分析するために、ＲＴ－ＰＣＲを用いてマウスの他の組織でＦＡＭ１９Ａ１ ｍＲＮＡ水準を測定した。簡単には、全てのＲＮＡを互いに異なる脳領域（すなわち、大脳皮質、小脳、中脳、脊髓、海馬、嗅球、視床下部及び脳下垂体）及び末梢組織（すなわち、心臓、肝、脾臓、胃、小腸、睾丸、腎臓及び肺）から分離した。以前に記述したように、単一段階酸性グアニジニウムチオシアネート－フェノール－クロロホルム方法を用いてＲＮＡを分離した。Ｃｈｏｍｃｚｙｎｓｋｉ，Ｐ．，ｅｔ ａｌ．，Ａｎａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍ １６２（１）：１５６－９（１９８７）を参照すればよい。次に、各ＲＮＡサンプルの１μｍをＭａｌｏｎｅｙ Ｍｕｒｉｎｅ Ｌｅｕｋｅｍｉａ Ｖｉｒｕｓ（Ｍ－ＭＬＶ）Ｒｅｖｅｒｓｅ Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔａｓｅ（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）で逆転写した。次に、ｃＤＮＡの分画を次のようなプライマーを使用して増幅させた：（ｉ）ｍＦＡＭ１９Ａ１＿Ｆ：５’－ＡＴＧ ＧＣＡ ＡＴＧ ＧＴＣ ＴＣＴ ＧＣＡ－３’；及び（ｉｉ）ｍＦＡＭ１９Ａ１＿Ｒ：５’－ＴＴＡ ＧＧＴ ＴＣＴ ＴＧＧ ＧＴＧ ＡＡＴ－３’。
図７に示したように、試験した全ての脳領域でＦＡＭ１９Ａ１ ｍＲＮＡが観察された。しかし、末梢組織では、脳領域に比べて発現が全く観察されないか、相対的に低い発現が観察された。この結果は、ＦＡＭ１９Ａ１が主に中枢神経系内で発現されることを示唆する。
（実施例６：ＦＡＭ１９Ａ１ ＬａｃＺ Ｋｎｏｃｋ－Ｉｎ（ＫＩ）マウス開発）
ＦＡＭ１９Ａ１発現及び機能特性を追加的に分析するために、ＦＡＭ１９Ａ１遺伝子にｌａｃＺリポーターが挿入された遺伝子導入マウスを確立した。簡単には、ＦＡＭ１９Ａ１に対する標的化ベクターを含むＬａｃＺ配列を製作し（図８Ａ）、これを電気穿孔によって胚性幹（ＥＳ）細胞に伝達した。遺伝子導入ＥＳ細胞の遺伝子型分析及び染色体係数によって標的ベクター統合（ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）を検証した。確認されたＥＳ細胞を胚盤胞に注入し、これを雌性受容マウスの子宮に移した。キメラの生成時、安定的な生殖腺発現のために生殖腺伝達試験を行った。生成されたＦＡＭ１９Ａ１ ＬａｃＺ ＫＩキメラマウスをＣ５７ＢＬ／６Ｊ遺伝的背景に逆交配させた。前記２個の菌株は、異型接合雄性マウスを野生型Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ雌性マウスと交尾させて維持した。同型接合ＦＡＭ１９Ａ１ ＬａｃＺ ＫＩマウスを得るために、異型接合雄性マウスを異型接合雌性マウスと交尾させた。
この動物モデルによると、ＦＡＭ１９Ａ１が存在すると推定されるｌａｃＺ遺伝子の挿入（ＦＡＭ１９Ａ１遺伝子のエクソン２で開始コドンの真後ろに挿入、図８Ａ参照）は、ＦＡＭ１９Ａ１の代わりに、β－ガラクトシダーゼ発現として表れると予想された。したがって、標的ベクターをＦＡＭ１９Ａ１遺伝子の２個の対立遺伝子の全てに挿入すると、ＦＡＭ１９Ａ１発現の完全な除去として表れると予測された。２個の対立遺伝子にｌａｃＺ遺伝子が挿入されたマウスを、同型接合ＦＡＭ１９Ａ１ ＬａｃＺ Ｋｎｏｃｋ－Ｉｎ（「ＦＡＭ１９Ａ１ ＬａｃＺ ＫＩ（－／－）」）として表記した。
ゲノム水準でＦＡＭ１９Ａ１遺伝子の欠失を確認するために、挿入されたＬａｃＺ遺伝子配列を特異的に標的とするプライマーを使用したＤＮＡ ＰＣＲを用いた。これらのマウスでＦＡＭ１９Ａ１遺伝子の完全な欠失をタンパク質水準で確認するために、多クローン性抗－ＦＡＭ１９Ａ１及び／又は抗－β－ガラクトシダーゼ抗体を使用してウエスタンブロット（「ＷＢ」）及び免疫組織化学（「ＩＨＣ」）を行った。
ＷＢ分析のために、成体マウスの皮質及び海馬領域を分離し、５０ｍＭ Ｔｒｉｓ－ＨＣＬ（ｐＨ７．５）、０．１％ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）及びタンパク質阻害剤カクテル錠剤（Ｒｏｃｈｅ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ）を含有した緩衝液で溶解させた。前記溶解物内のタンパク質含量をＢｉｏＲａｄ Ｂｒａｄｆｏｒｄタンパク質分析試薬（ＢｉｏＲａｄ）を使用して定量化し、これをＳＤＳポリアクリルアミドゲルから分離した。分離されたタンパク質をＢｉｏ－Ｒａｄ Ｔｒａｎｓ－Ｂｌｏｔ電気泳動装置（Ｒｉｃｈｍｏｎｄ，ＣＡ）でニトロセルローズブロッティング膜に移し、ＲＴで３０分間０．３％Ｔｗｅｅｎ ２０及び５％脱脂乳を含有するＴｒｉｓ緩衝食塩水でブロットをブロッキングした。ブロットを１次抗体と共に３時間にわたって培養した後、西洋ワサビペルオキシダーゼ接合２次抗体と共に、室温で１時間にわたって培養した。ＧＥヘルスケア（ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）ＥＣＬ試薬を適用した後、これをＸ線フィルムに露出させ、免疫反応バンドを可視化した。抗体及びこれらの希釈倍数（ｄｉｌｕｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ）は次の通りであった：ウサギ多クローン性抗－ＦＡＭ１９Ａ１（実験室生成）を１：５００、β－アクチン（ａｂ８２２７，Ａｂｃａｍ）を１：２０００、ＨＲＰ接合抗－ウサギ（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｗｅｓｔ Ｇｒｏｖｅ，ＰＡ）を１：５０００。
ＩＨＣ分析のために、動物にリン酸塩緩衝食塩水（ＰＢＳ）中の４％パラホルムアルデヒドを貫流させた。脳を分離した後、これを同一の固定液に一晩中後固定させた。次に、脳をＰＢＳ中の３０％スクロースで凍結保護し、Ｃｒｙｏｓｔａｔ（Ｌｅｉｃａ）を使用して４０μｍで連続的に切片化した。前記切片は、室温（ＲＴ）で３０分間ＰＢＳ中の３％ＢＳＡ及び０．１％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００でブロッキングした。１次抗体を４℃で一晩中適用した後、適切な蛍光接合２次抗体をＨｏｅｃｈｓｔ ３３３４２（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）と共にＲＴで３０分間適用した。抗体及びこれらの希釈倍数は、次の通りであった：ウサギ多クローン性抗－ＦＡＭ１９Ａ１（実験室生成）を１：５００、β－ガラクトシダーゼ（ａｂ９３９１、Ａｂｃａｍ）を１：５００、蛍光接合抗－ウサギ及び抗－ニワトリ（Ｌｉｆｅ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を１：５００。共焦点顕微鏡（ＴＣＳ ＳＰ８，Ｌｅｉｃａ）を使用してイメージを得た。
図８Ｂに示したように、ゲノムＤＮＡ ＰＣＲを通じてＦＡＭ１９Ａ１ ＬａｃＺ ＫＩ（－／－）動物でＬａｃＺ遺伝子の成功的な挿入を確認した。挿入されたＬａｃＺ遺伝子配列に自体終結コドンのみならず、ｐｏｌｙ－Ａ尾があるという点を勘案すると、この遺伝子構成の最終産物は、ＦＡＭ１９Ａ１のいずれの部分もない無傷（ｉｎｔａｃｔ）β－ガラクトシダーゼである。ＦＡＭ１９Ａ１ ＬａｃＺ ＫＩマウスにおいて、ＦＡＭ１９Ａ１遺伝子の破壊はＲＴ－ＰＣＲによって確認した（図８Ｃ）。また、図８Ｄ～図８Ｆに示したように、皮質（ＣＴＸ）及び海馬（ＨＩＰ）の全てにおいて、ＦＡＭ１９Ａ１タンパク質発現は、野生型動物に比べて異型接合マウス（ＦＡＭ１９Ａ１ ＬａｃＺ ＫＩ（＋／－））で実質的に減少した。同型接合マウス（ＦＡＭ１９Ａ１ ＬａｃＺ ＫＩ（－／－））では、ＦＡＭ１９Ａ１タンパク質が検出されなかった。図８Ｇ及び図８Ｈを通じて、ＦＡＭ１９Ａ１タンパク質発現の破壊がｍＲＮＡ水準と直接関連することを確認した。これらの結果は、ＦＡＭ１９Ａ１ ＬａｃＺ ＫＩ（－／－）マウスにおいて、ＦＡＭ１９Ａ１遺伝子の完全な欠失を確認するものである。
（実施例７：胚及び出生後のマウスの脳でのＦＡＭ１９Ａ１発現）
ＦＡＭ１９Ａ１の機能をさらによく理解するために、β－ガラクトシダーゼ活性に基づく酵素分析法であるＸ－ｇａｌ染色を用いてＦＡＭ１９Ａ１発現のパターン及びタイミング（ｔｉｍｉｎｇ）を評価した。発達段階で開始されるＦＡＭ１９Ａ１遺伝子の完全なノックアウトは、脳構造の変形を誘発し、結果を変えられるので、ＦＡＭ１９Ａ１ ＬａｃＺ ＫＩ（＋／－）（異種接合体）動物を使用した。
胚、出生後の脳及び成体の目に対するＸ－ｇａｌ染色：胚性Ｘ－ｇａｌ染色のために、姙娠したマウスを子宮頸部脱臼によって犠牲させ、胚を分離した。全体の胚Ｅ１２．５を４℃でＰＢＳ中の４％パラホルムアルデヒド及び０．２％グルタルアルデヒドに１５分間固定させた。Ｅ１４．５より古い胚の場合は截頭し、皮膚を除去した。胚の頭を４℃で１～２時間にわたって同一の固定液に固定させた。出生後の脳と成体の目の場合は、脳と目を頭蓋骨から分離し、４℃で１～２時間にわたって同一の固定液に固定させた。次に、固定された組織をＰＢＳで５分間２回洗浄し、これを一晩中培養した後、暗い場所でｐＨ７．３の０．１Ｍリン酸塩緩衝液中のＸ－ｇａｌ染色液、１ｍｇ／ｍｌのＸ－Ｇａｌ、２ｍＭのＭｇＣｌ２、５ｍＭのＥＧＴＡ、５ｍＭのフェロシアン化カリウム、５ｍＭのフェリシアン化カリウム、０．０１％のデオキシコール酸ナトリウム及び０．０２％のＮｏｎｉｄｅｔ－Ｐ４０で２４～４８時間にわたって３７℃で染色した。染色された組織をＰＢＳ中の４％パラホルムアルデヒドで４℃で一晩中固定し、洗浄後に全体の脳イメージを得た。
ｘ－ｇａｌ染色された切片の場合、染色された全体の脳又は目をＰＢＳ中の３０％スクロースで凍結保護し、Ｃｒｙｏｓｔａｔ（Ｌｅｉｃａ）を使用して４０μｍで切片化した。場合によって、Ｎｕｃｌｅａｒ Ｆａｓｔ Ｒｅｄ（Ｈ－３４０３、ＶＥＣＴＯＲ）をカウンター染色として使用した。スライドスキャナー（Ａｘｉｏｓｃａｎ Ｚ1，Ｚｅｉｓｓ）を使用して切片のイメージを撮影した。
成体の脳に対するＸ－ｇａｌ染色：リン酸塩緩衝液（ＰＢ）中の４％パラホルムアルデヒド及び０．２％グルタルアルデヒドを動物に貫流した。脳を分離し、これを４℃で２４時間にわたってＰＢ中の０．２％グルタルアルデヒドに後固定させた。次に、脳をＰＢＳ中の３０％スクロースで凍結保護し、Ｃｒｙｏｓｔａｔ（Ｌｅｉｃａ）を使用して４０μｍで連続的に切片化した。前記切片化された組織を暗い場所でｐＨ７．３の０．１Ｍリン酸塩緩衝液中のＸ－ｇａｌ染色溶液、１ｍｇ／ｍｌのＸ－Ｇａｌ、２ｍＭのＭｇＣｌ２、５ｍＭのＥＧＴＡ、５ｍＭのフェロシアン化カリウム、５ｍＭのフェリシアン化カリウム、０．０１％デオキシコール酸ナトリウム及び０．０２％Ｎｏｎｉｄｅｔ－Ｐ４０で２４～４８時間にわたって３７℃で培養した。スライドスキャナー（Ａｘｉｏ ｓｃａｎ Ｚ1，Ｚｅｉｓｓ）を使用して切片のイメージを撮影した。
図９Ａ及び図９Ｂに示したように、まず、ＦＡＭ１９Ａ１を初期胚発達中に制限された皮質領域で発現させた（陽性β－ガラクトシダーゼ染色によって立証される）。胚の１２．５日（Ｅ１２．５）までＦＡＭ１９Ａ１発現の兆しはなかった。しかし、胚の１４．５日（Ｅ１４．５）からβ－ガラクトシダーゼ活性（すなわち、ＦＡＭ１９Ａ１発現）が腹側皮質領域で観察されており、吻側部分で特に強い発現があった。これらの染色された領域は、初期の梨状皮質（Ｃｐｆ）と嗅内皮質（Ｃｅｎ）であると考えられた。図１０Ａを参照すればよい。
出生後、ＦＡＭ１９Ａ１の新皮質発現がさらに明らかになった。図９Ｃを参照すればよい。出生後の初期に、まず、ＦＡＭ１９Ａ１が体性感覚、視覚及び聴覚皮質領域で観察され、梨状皮質と嗅内皮質で継続して発現された。時間の経過と共に、ＦＡＭ１９Ａ１発現は他の新皮質領域に拡大された。出生後の１４．５日（Ｐ１４．５）まで、新皮質β－ガラクトシダーゼ（すなわち、ＦＡＭ１９Ａ１）発現が皮質層に特異的に発見された。図１０Ｂを参照すればよい。また、Ｘ－ｇａｌ染色信号は、後内側皮質扁桃核（ＰＭＣｏ）、海馬及び扁桃体を含む辺縁領域で検出された。図１０Ｂを参照すればよい。これらの結果は、ＦＡＭ１９Ａ１発現パターンが大脳皮質層及び辺縁系の領域に特異的に限定されたので、ＦＡＭ１９Ａ１が神経発達中に分化された神経細胞で発現される可能性があることを示唆する。また、ＦＡＭ１９Ａ１は、脳室帯や脳室下帯のように幹細胞が豊富な領域では検出されておらず、これは、ＦＡＭ１９Ａ１がＮＳＣの増殖に関与しないこともあることを示唆する。
（実施例８：成体マウスの脳でのＦＡＭ１９Ａ１発現）
ＦＡＭ１９Ａ１が神経活性で役割をするかどうかを評価するために、成体ＦＡＭ１９Ａ１ ＬａｃＺ ＫＩ異型接合マウスでＦＡＭ１９Ａ１の発現パターンをマッピングした。
成体マウスの脳において、Ｘ－ｇａｌ染色を通じてＦＡＭ１９Ａ１が全ての皮質領域で発現されたことが分かる（図９Ｃ）。Ｘ－ｇａｌ染色を用いた免疫組織化学は、Ｘ－ｇａｌ沈殿物とβ－ガラクトシダーゼがそれぞれ皮質層２－３（Ｌ２－３）に対するピラミッド神経細胞マーカーであるＣＵＸ１及び皮質層５ｂ（Ｌ５ｂ）に対するピラミッド神経細胞マーカーであるＣＴＩＰ２と共同ローカライズされたことを示した。これを通じて、ＦＡＭ１９Ａ１が層特異的に主にピラミッド神経細胞で発現されることが分かる（図１１Ａ、図１１Ｂ及び図１１Ｃ（パネルｉｖ））。また、Ｘ－ｇａｌは、内包（ｉｃ）、大脳脚（ｃｐ）及び錐体路（ｐｙ）を含む皮質脊髓路で信号を示し、これは、１次運動皮質Ｌ５ｂのピラミッド神経細胞でのＦＡＭ１９Ａ１の存在を示唆する（図１２、パネルＧ及びＩ）。
また、特定の感覚回路でのＦＡＭ１９Ａ１の存在を調査した。嗅神経回路において、β－ガラクトシダーゼ及びＦＡＭ１９Ａ１ ｍＲＮＡ発現は、嗅球（ＯＢ）でほとんど観察されなかったが（図８Ｆ）、ＦＡＭ１９Ａ１タンパク質がウエスタンブロッティングによって検出された（図８Ｆ及び図８Ｇ）。検出されたＦＡＭ１９Ａ１タンパク質は、陽性Ｘ－ｇａｌ信号を示す前嗅核（ＡＯ）、ＣＰｆ及び皮質扁桃体を含む他の嗅覚関連脳領域の神経細胞から放出され得る（図８Ｄ、図８Ｅ及び図８Ｈ）。視覚神経回路の場合、視覚神経回路の視神経交叉部又は外側膝状核（ＬＧＮ）でβ－ガラクトシダーゼ発現がなかったが、上丘（Ｏｐ）の視神経層及び視覚皮質ではいずれもβ－ガラクトシダーゼ発現を示したので（図１１Ｃ、パネルｖｉｉ；図９Ｃ）、これは、ＦＡＭ１９Ａ１が優れた上丘依存的視覚情報処理及び眼球運動制御に関与し得ることを意味する。また、β－ガラクトシダーゼ発現は、内側膝状核（ＭＧＮ）、背中側の蝸牛核（ＤＣ）及び聴覚皮質を含む聴覚神経回路と関連する一部の領域で観察された（図１１Ｃ、パネルｉｘ；図１２、パネルＥ）。
海馬及び扁桃体を含む辺縁領域ではＦＡＭ１９Ａ１の明らかな発現があった。海馬において、β－ガラクトシダーゼはＣＡ領域で発現されたが、歯状回（ＤＧ）では発現されなかった（図１１Ｃ、パネルｉｖ）。ＣＥｎにおいて、β－ガラクトシダーゼ発現によって海馬ＦＡＭ１９Ａ１発現が海馬三シナプス（ｔｒｉｓｙｎａｐｔｉｃ）回路でＦＡＭ１９Ａ１の役割を暗示することが可能であった（図１１Ｃ、パネルｉｖ及びｖｉｉｉ）。扁桃核のうち外側扁桃核（ＬａＤＬ）及び基底内側扁桃核（ＢＬＡ）を含む基底外側核でのみβ－ガラクトシダーゼが発現された（図１１Ｃ、パネルｖ）。また、ＦＡＭ１９Ａ１発現は、ＢＬＡ、Ｃｅｎ及びＣＰｆと直接連結されていると考えられるＰＭＣｏ及び扁桃体－梨状葉移行野（Ａｐｉｒ）で検出された（図１１Ｃ、パネルｖｉ）。
β－ガラクトシダーゼは、内側視索前核（ＭＰＯＭ）、外側視索前野（ＬＰＯ）及び視床下部腹内側核（ＶＭＨ）を含む一部の視床下部核でも発現された（図１２、パネルＢ及びＣ）。辺縁系の一部として、視床下部は、ＣＮＳと内分泌系との間の媒介体としての役割をするものと知られている。したがって、ここで提供されたデータは、ＦＡＭ１９Ａ１が内分泌恒常性に寄与し得ることを示唆する。辺縁領域に広範囲に連結された他の脳領域である外側中隔核（ＬＳ）もβ－ガラクトシダーゼ発現を示した（図１１Ｃ、パネルｉｉｉ）。
成体野生型ラットの脳を使用したインシチュ混成化は、ＦＡＭ１９Ａ１ ｍＲＮＡが上部及び下部皮質層、海馬のＣＡ領域及び扁桃体の基底外側核で検出されたことを示した（図１３）。このようなＦＡＭ１９Ａ１ ｍＲＮＡ発現パターンは、ＦＡＭ１９Ａ１ ＬａｃＺ ＫＩマウス脳でβ－ガラクトシダーゼの発現パターンと一致したが、これを通じて、ＦＡＭ１９Ａ１ ＬａｃＺ ＫＩマウスを使用して観察されたＦＡＭ１９Ａ１発現マッピングを確認した（図１１Ｃ、パネルｉｉ、ｉｖ及びｖ）。また、観察されたＦＡＭ１９Ａ１発現パターンは、野生型マウスの脳に対する開放型ソース単一細胞基盤のＲＮＡ－配列分析データベースと一致した。まとめると、これらのデータは、ＦＡＭ１９Ａ１が主に神経細胞、特にピラミッド神経細胞で発現され、運動挙動、感覚情報処理及び／又は辺縁系関連脳機能に関与する可能性があることを意味する。
（実施例９：野生型及びＦＡＭ１９Ａ１－／－動物の間の形態学的差比較）
ＦＡＭ１９Ａ１の初期欠乏は脳の発達異常を誘発し得るので、同型接合ＦＡＭ１９Ａ１ ＬａｃＺ ＫＩ（ＦＡＭ１９Ａ１－／－）、異型接合ＦＡＭ１９Ａ１ ＬａｃＺ ＫＩ（ＦＡＭ１９Ａ１＋／－）及びＷＴマウスの形態学的差を調査した。
一般的な特徴の場合、異型接合親から約２４～２５％のメンデル頻度及び類似する性比でＦＡＭ１９Ａ１－／－マウスを出生させた（図１４）。出生直後、新生児遺伝子型の間では肉眼的所見（ｇｒｏｓｓ ａｐｐｅａｒａｎｃｅ）に明らかな差がなかったが；ＦＡＭ１９Ａ１－／－マウス（雄性及び雌性の全て）は、野生型対照群動物に比べて遥かに重かった（図１５Ａ及び図１５Ｂ）。
成体脳の総長さと幅は、ＷＴとＦＡＭ１９Ａ１－／－マウスとの間で類似していたが（図１５Ｃ、図１５Ｅ及び図１５Ｇ）、大脳皮質の長さは、ＷＴマウスに比べてＦＡＭ１９Ａ１－／－マウスでさらに長かった（図１５Ｆ）。皮質層で特異的に発現された遺伝子の除去は、不適切な皮質層の会合につながり得る。しかし、本明細書に開示されたＦＡＭ１９Ａ１－／－マウスにおいて、大脳皮質の体積は影響を受けなかった（図１６Ａ及び図１６Ｂ）。また、ＦＡＭ１９Ａ１－／－マウスのＸ－ｇａｌ染色された脳切片に対する総体的観察によって検出された脳構造において、注目するほどの構造的異常はなかった（データは未提示）。全ての新皮質領域の厚さは、ＦＡＭ１９Ａ１－／－マウスで大きく減少しなかった（図１５Ｈ、図１５Ｉ及び図１５Ｊ）。しかし、皮質層の比率の観点で、視覚皮質のＬ４及び運動皮質のＬ６は、ＷＴマウスに比べてＦＡＭ１９Ａ１－／－で減少した（図１７Ａ～図１７Ｆ）。
これらの皮質層の厚さの変化は、非正常的な細胞構造の結果であり得るが、ＦＡＭ１９Ａ１－／－とＷＴマウスとの間には、皮質層の神経細胞及びグリア細胞集団で有意な差が観察されなかった（図１８Ａ～図１８Ｄ及び図１９Ａ～図１９Ｅ）。また、神経細胞及びグリア細胞の形態に注目するほどの異常がなかった（データは未提示）。まとめると、これらの発見は、全体のＦＡＭ１９Ａ１アブレーションが体重増加を減少させ、新皮質構造を少し変更させたが、皮質の細胞類型の構成に大きな影響を及ぼさなかったことを意味する。
（実施例１０：過剰行動に対するＦＡＭ１９Ａ１の役割分析）
既に説明したように、ＦＡＭ１９Ａ１は、感情処理に関与するものとして知られている前辺縁皮質及び扁桃体（図１１Ｃ、パネルｉ及びｖ）を含む辺縁系の多くの領域で発現された。したがって、ＦＡＭ１９Ａ１枯渇が不安及びうつ病に及ぼす影響を評価するために、以前の実施例で詳述したＦＡＭ１９Ａ１－／－マウスを使用して高架式十字迷路（ＥＰＭ）試験、オープンフィールド試験（ＯＦＴ）及びテールサスペンション試験（ＴＳＴ）を行った。特に雄性マウスを使用した。
ＥＰＭ試験は、次のように行った。高架式十字迷路（ＥＰＭ）は、４個の垂直アーム、高さが２０ｃｍである２個の開放型（５×３０ｃｍ）及び２個の閉鎖型（５×３０ｃｍ）壁を有する。前記迷路は、地面からの高さが５０ｃｍであった。試験動物は、開放型アームのうち一つに対面する迷路の中央に個別的に配置し、１５分間自由に探索できるようにした。録画ビデオをＡＮＹ－迷路ビデオ追跡プログラム（Ｓｔｏｅｌｔｉｎｇ、イリノイ州、米国）で分析した。開放型アームに進入した回数、開放型アームで過ごした時間、中央交差回数及び総移動距離を記録した。進入は、四足の全てがアーム内に位置した場合として定義した。
ＯＦＴは、次のように行った。幅（ｗ）４０×高さ（ｈ）４０×長さ（ｄ）４０ｃｍのＯＦＴ装置を不透明プラスチックで作った。試験アレナーは、中央区域と周辺境界区域の３０％として定義した。実験動物を個別的にアレナーの中央に配置し、１０分間行動を記録した。所要時間の比率及び中央区域への進入を点数化し、総移動距離は、ＡＮＹ－迷路ビデオ追跡プログラム（Ｓｔｏｅｌｔｉｎｇ）を使用して決定した。
ＴＳＴは、次のように行った。ボックス（３６．５×３０．５×３０．５ｃｍ）で６分間マウス尾を個別的にぶら下げた。録画ビデオをＡＮＹ－迷路ビデオ追跡プログラム（Ｓｔｏｅｌｔｉｎｇ）で分析した。不動性は、マウスの不安終了及び脱出試みとして定義した。
ＥＰＭ試験時、ＷＴマウスに比べて、ＦＡＭ１９Ａ１－／－マウスにおいて開放型アームで過ごした時間（図２０Ａ）及び総移動距離（図２０Ｂ）が増加した。ＯＦＴ時、ＯＦＴアレナーの中央で過ごした時間は、ＦＡＭ１９Ａ１－／－マウスとＷＴマウスとの間で類似していたが、総移動距離は、ＦＡＭ１９Ａ１－／－マウスでさらに高かった（図２０Ｃ、図２０Ｄ及び図２０Ｅ）。ＴＳＴ時、ＦＡＭ１９Ａ１－／－マウスは、ＷＴマウスより低い不動性を示した（図２０Ｆ）。
前記結果は、ＦＡＭ１９Ａ１活性を阻害すると活性が増加し得、これは、不安又はうつ病関連障害の治療に役立つことができることを示唆する。
（実施例１１：記憶に対するＦＡＭ１９Ａ１の役割分析）
短期記憶（ＳＴＭ）、特に空間運用記憶は、海馬のＣＡ１とＣＡ３及びＣＥｎとの間の相互作用を伴うものとして知られている。図１１Ｃに示したように（パネルｉｖ及びｖｉｉｉ）、ＦＡＭ１９Ａ１は、これらの領域で高く発現され、これは、記憶形成においてＦＡＭ１９Ａ１の役割が可能であることを示唆する。ＦＡＭ１９Ａ１が記憶（短期及び長期の全て）に対して有し得る可能性のある役割を評価するために、Ｙ－迷路試験を次のように行った。Ｙ－迷路アレナーは、長さ３０ｃｍ、幅５ｃｍ、壁の高さ２０ｃｍの３個の同一のアームを有する。試験動物を個別的に中央に配置し、５分にわたってアーム進入順序及び総移動距離を記録し、ＡＮＹ－迷路ビデオ追跡プログラム（Ｓｔｏｅｌｔｉｎｇ）によって分析した。自発的な変化比率は、３個のアームの全てに進入した回数（ＡＢＣ、ＡＣＢ、ＢＡＣ、ＢＣＡ、ＣＡＢ、ＣＢＡ）を含む試み回数を最大可能な変化の数（進入したアームの総数から２を引いた値に該当）で割った後、１００を掛けて計算した。
図２０Ｇに示したように、ＦＡＭ１９Ａ１－／－とＷＴマウスとの間には、自発的な変化において有意な差が観察されなかった。しかし、総移動距離は、ＷＴ対照群動物に比べて、ＦＡＭ１９Ａ１－／－マウスで有意に増加した（図２０Ｈ）。この結果は、ＥＰＭ及びＯＦＴ試験（実施例１０参照）からの発見を確認したものであって、これは、ＦＡＭ１９Ａ１の阻害が活性の増加につながり得ることを意味する。
さらに、新たな物体認識（ＮＯＲ）試験を行い、物体認識記憶で存在し得る各欠陥を調査した。簡単には、試験アレナーは、幅（ｗ）４０×高さ（ｈ）４０×長さ（ｄ）４０ｃｍであった。砂及び積み上げたプラスチック煙瓦（ｗ７×１３×ｈ１５ｃｍ）で充填したＴ－７５フラスコを物体として使用した。マウスを個別的に１０分間物体のない試験アレナーで適応させた。翌日、獲得中に２個の同一の物体をアレナーに配置し、個々のマウスが１０分間自由に探索できるようにした。獲得段階において、同一の２個の物体に対する最小探索時間基準は２０秒であった。試験段階は、獲得してから６時間（短期記憶試験の場合）又は２４時間（長期記憶試験の場合）と計画した。試験段階中、以前に導入された物体と新たな物体の全てをアレナーに配置した。次に、マウスは、１０分間アレナーを自由に探索できるようにした。分析のために、獲得及び試験段階を記録した。それぞれの物体を探索するのに要された時間を測定した。探索行動は、臭いを嗅ぎながら物体に対する関心を示す場合として定義した。
ＮＯＲ試験の短期記憶バージョンにおいて、ＦＡＭ１９Ａ１－／－とＷＴマウスとの間には新たな物体に対する選好度で有意な差がなかった（図２１Ｂ及び図２１Ｃ）。しかし、ＮＯＲ試験の長期記憶（ＬＴＭ）バージョンでは、ＦＡＭ１９Ａ１－／－の場合、ＷＴマウスに比べて新たな物体に対する選好度が低く、慣れた物体に対する選好度が高かった（図２１Ｅ及び図２１Ｆ）。これらの発見は、ＦＡＭ１９Ａ１－／－マウスの場合、獲得してから２４時間後に慣れた物体と新たな物体とを区別する能力が低く、これは、ＦＡＭ１９Ａ１－／－マウスでＬＴＭに欠陥があり得ることを示す。また、ＦＡＭ１９Ａ１－／－マウスの場合、ＷＴマウスに比べて、物体が新たなものであるのか、それとも慣れたものであるのかと関係なく、物体の探索にさらに多くの時間を消費する傾向があった（図２１Ａ及び図２１Ｄ）。
前記結果は、ＦＡＭ１９Ａ１が短期記憶でない長期記憶の形成に重要であり得ることを立証する。
（実施例１２：恐怖獲得に対するＦＡＭ１９Ａ１の役割分析）
図１１Ｃに示したように（パネルｉｖ及びｖ）、ＦＡＭ１９Ａ１は、扁桃体及び海馬などの脳の恐怖処理関連領域で発現された。したがって、ＦＡＭ１９Ａ１が恐怖処理に及ぼす潜在的役割を評価するために、上記で説明したＦＡＭ１９Ａ１－／－マウスを使用してパブロフの恐怖条件付け試験を行った。このときにも、雄性ＦＡＭ１９Ａ１－／－マウスを使用した。試験を次のように行った。獲得段階前日、条件付けチャンバー（１８×１８×３０ｃｍ）で１０分間マウスを適応させた。獲得中にマウスを条件付けチャンバーに配置し、それぞれフットショック（０．７ｍＡ、２秒）と共に終了するトーン音（３０秒、５ｋＨｚ、７５ｄＢ）からなる５回の条件付け試験を６０秒の試験間隔で繰り返した。２４時間後、条件付け恐怖反応を試験した。状況別試験のために、条件付けされたマウスをフットショックとトーン音なしで同一のチャンバーに配置し、５分間凍結時間（ｆｒｅｅｚｉｎｇ ｔｉｍｅ）を測定した。聴覚試験のためにマウスを別個の状況に配置し、５分の探索期間後、フットショックなしで９０秒間隔で３個のトーン音に再び露出させた。凍結挙動を不動性（ｉｍｍｏｂｉｌｉｔｙ）として定義し、トーン音の提供中に点数化した。試験期間の全ての凍結時間は、それぞれのトーン音の提供に対する平均凍結期間の百分率として示した。
図２２Ａに示したように、恐怖獲得段階の間、ＦＡＭ１９Ａ１－／－マウスは、ＷＴマウスに比べてさらに少ない凍結挙動を示し（図２２Ａ）、これは、恐怖条件付けがこれらの動物で適切に誘導されなかったことを意味する。したがって、ＦＡＭ１９Ａ１－／－マウスは、後続状況及び聴覚記憶試験の間にさらに少ない凍結挙動を示した（図２２Ｂ及び図２２Ｃ）。
いずれか一つの理論に拘束されることなく、ＦＡＭ１９Ａ１－／－動物で観察された恐怖獲得の不足は、先天的恐怖反応と関連し得る。一般に、マウスは、捕食者の臭いを嗅ぐとき、先天的に恐怖を経験する。この先天的恐怖反応を試験するために、ＦＡＭ１９Ａ１－／－及びＷＴマウスを３０μｌの合成した捕食者キツネの便臭（ＴＭＴ、２，５－ジヒドロ－２，４，５－トリメチルチアゾリン、ＳＲＱ Ｂｉｏ、フロリダ、米国）が入っているチャンバー（１８×１８×３０ｃｍ）に配置した。ＴＭＴ露出後、ＴＭＴ誘発凍結挙動を１５分間記録し、ＡＮＹ－迷路ビデオ追跡プログラム（Ｓｔｏｅｌｔｉｎｇ）を使用して３分間隔で平均凍結時間の比率として分析した。
図２２Ｄに示したように、ＦＡＭ１９Ａ１－／－動物は、全体のＴＭＴ露出にわたってＷＴマウスと同一の大きさの恐怖反応を示し、これは、先天的恐怖反応がＦＡＭ１９Ａ１－／－マウスでそのまま維持されたことを意味する。この発見は、ＦＡＭ１９Ａ１－／－マウスが条件付けされた恐怖反応を獲得できないことが先天的恐怖反応と関連していない代わりに、ＦＡＭ１９Ａ１－／－マウスが条件と無条件刺激との間の連関性を形成できないようにする感覚機能障害などの他のメカニズムと関連していることを示唆する。
前記データは、ＦＡＭ１９Ａ１が多様なＣＮＳ機能で役割をすることを総合的に立証する。従前には、この役割が性別によって変わると提示された。例えば、Ｌｅｉ等は、雌性ＦＡＭ１９Ａ１－／－マウスのみが対照群動物に比べて変化した行動を表すことを示すデータを提供した。Ｌｅｉ ｅｔ ａｌ．，ＦＡＳＥＢ Ｊ ３３（１２）：１４７３４－１４７４７（２０１９）を参照すればよい。しかし、本開示内容に提供されたデータは、前記実施例で使用された全てのＦＡＭ１９Ａ１－／－マウスが雄性であったため、ＦＡＭ１９Ａ１が男性対象で正常なＣＮＳ機能にも重要であることを立証する。したがって、前記実施例は、ＦＡＭ１９Ａ１を標的とする製剤（例えば、本明細書に開示されたＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤）が男性及び女性対象の全てにおいて治療効果を有し得ることを示唆する。
（実施例１３：成体マウスの脳でのＦＡＭ１９Ａ１及びＦＡＭ１９Ａ５発現パターンの比較）
また、ＦＡＭ１９Ａファミリーの他のメンバーであるＦＡＭ１９Ａ５は、多様な脳領域で高く発現されるものとして知られている。その全文が本明細書に参考として含まれる米国特許番号９，５７９，３９８ Ｂ２を参照すればよい。ＦＡＭ１９Ａ１及びＦＡＭ１９Ａ５の発現差を調査するために、ＬａｃＺリポーター遺伝子システムを使用してＦＡＭ１９Ａ５ ＬａｃＺ ＫＩマウスを発生させた。具体的には、ＦＡＭ１９Ａ５とβ－ガラクトシダーゼの融合形態を生産するようにマウスをデザインした（図２３Ａ）。
図２３Ｂに示したように、ＦＡＭ１９Ａ１及びＦＡＭ１９Ａ５発現パターンに主要な相違点があった。一つ目、ＦＡＭ１９Ａ１は、ピラミッド形状の皮質層で特異的に発現され、これは、主要ＦＡＭ１９Ａ１発現細胞がピラミッド型神経細胞であることを意味する。これに比べて、ＦＡＭ１９Ａ５は、Ｌ２でさらに多少強い強度で全ての皮質層で発現された。脳梁（ＣＣ）は、ＦＡＭ１９Ａ５に対して陽性であったが、ＦＡＭ１９Ａ１に対しては陽性でなかった。また、ＦＡＭ１９Ａ５は、全ての海馬部位、視床部、手網で発現されたが、ＦＡＭ１９Ａ１の場合、海馬と外側手綱核のＣＡ領域でのみ発現された。図２３Ｂを参照すればよい。
これらの発現パターン差は、ＦＡＭ１９Ａ１及びＦＡＭ１９Ａ５が非重畳機能を有する可能性があることを意味する。
（実施例１４：神経幹細胞分化に対するＦＡＭ１９Ａ１の影響分析）
ＣＮＳ関連機能に対するＦＡＭ１９Ａ１の機能を追加的に特性分析するために、成体神経幹細胞分化に対するＦＡＭ１９Ａ１の役割を評価した。
神経幹細胞分化：簡単には、７～９週齢マウスの脳室下帯（ＳＶＺ）を収去し、ＨＢＳＳ中の０．８％パパイン（Ｗｏｒｔｈｉｎｇｔｏｎ，Ｌａｋｅｗｏｏｄ，ＮＪ，ＵＳＡ）及び０．０８％ディスパーゼＩＩ（Ｒｏｃｈｅ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ，ＵＳＡ）を使用する単一細胞懸濁液で３７℃で４５分間解離させ、成体神経幹細胞（ＮＳＣ）を生成した。増殖培地（上皮細胞成長因子（ＥＧＦ，２０ｎｇ／ｍｌ，Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、塩基性線維芽細胞成長因子（ｂＦＧＦ，２０ｎｇ／ｍｌ，Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ，ＵＳＡ）及びＬ－アスコルビン酸（２０ｎｇ／ｍｌ，Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ，ＵＳＡ）含有）が存在する状態で細胞の浮遊コロニーを単一細胞から生成した。神経球分化分析のために、解離された単一細胞は、１ウェル当たり５０，０００個の細胞密度で２４－ウェルプレートに塗抹し、成長因子を含有した増殖培地で培養した。１日目に、培地は、成長因子（例えば、上皮細胞成長因子（ＥＧＦ，２０ｎｇ／ｍｌ，Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、塩基性線維芽細胞成長因子（ｂＦＧＦ，２０ｎｇ／ｍｌ，Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ，ＵＳＡ）及びＬ－アスコルビン酸（２０ｎｇ／ｍｌ，Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ，ＵＳＡ）を含有しない分化培地に変えた。次に、細胞を抗－ＦＡＭ１９Ａ１ Ａｂ又はＦＡＭ１９Ａ１タンパク質（毎日５００ｎｇ／ｍＬ）が存在する分化培地で６日間さらに培養した。次に、前記細胞に対して３つの主要神経系統マーカー（すなわち、Ｔｕｊ１、ＧＦＡＰ及びＯ４）を使用する免疫細胞化学を行った。
免疫組織化学：免疫細胞化学分析のために、分化された成体神経幹細胞を適切な日に４％ＰＦＡで固定させた。ＲＴで３０分間ＰＢＳ中の３％ＢＳＡ及び０．１％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００で細胞をブロッキングした。この研究に使用した１次抗体は、ウサギ抗－Ｔｕｊ１（Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）、マウス抗－Ｏ４（Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）、ラット抗－ＧＦＡＰ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ，ＵＳＡ）であった。ＰＢＳで数回洗浄した後、適切な２次抗体を３０分間適用した。続いて、カバースリップを洗浄して載せ、蛍光又は共焦点顕微鏡（ＬＳＭ７００；Ｚｅｉｓｓ，Ｇｏｅｔｔｉｎｇｅｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）で観察した。
組換えＨｉs－ＦＡＭ１９Ａ１タンパク質生成：Ｎ－末端ヘキサヒスチジン－タグされたＦＡＭ１９Ａ１を生成するために、ｔａｃプロモーターの制御下で遺伝子を発現ベクターｐＬＰＳ－ｈＴのＢａｍＨＩ及びＸｈｏＩＩ部位にクローニングした。得られたプラスミドｐＬＰＳ－ＦＡＭ１９Ａ１－６－ＨｉｓＮをＥ．ｃｏｌｉ ＤＨ５αの形質転換のために使用した。複製された遺伝子の１次構造は、配列分析によって確認した。組換えＦＡＭ１９Ａ１は、イソプロピルβ－Ｄ－１－チオガラクトピラノシド（ＩＰＴＧ）を使用してバクテリアで発現させ、Ｎｉ－ＮＴＡ（Ｑｉａｇｅｎ，Ｖａｌｅｎｃｉａ，ＵＳＡ）を使用する親和性クロマトグラフィーで精製した。
多クローン性抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体の生成：抗－ＦＡＭ１９Ａ１多クローン性抗体を生成するために、合成ＦＡＭ１９Ａ１ペプチド（ＣＨＧＳＬＱＨＴＦＱＱＨＨＬＨＲＰＥＧ，配列番号５２；Ａｂｃｌｏｎ）で免疫化したウサギから抗血清を得た。Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ方法（ＩＰＡ－３００，Ｒｅｐｌｉｇｅｎ）を用いてウサギ血清からＩｇＧ分画物を得た。
図２４に示したように、抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体で処理したＮＳＣは、対照群ＩｇＧ抗体又はＦＡＭ１９Ａ１タンパク質で処理した細胞に比べて分化された神経細胞の神経突起成長を増加させた。
（実施例１５：抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体の生体内投与後の眼圧評価）
生体内ＦＡＭ１９Ａ１活性の中和が度々緑内障と関連する眼圧上昇を緩和できるかどうかを評価するために、緑内障ウサギモデルを使用した。簡単には、ニュージーランドの白いウサギ（雄性、体重２～２．５ｋｇ）（大韓民国、京畿道、翰林実験動物研究所）をＺｏｌｅｔｉｌ ５０（ＶＩＲＢＡＣ，フランス）とキシラジン（ＲＯＭＰＵＮ（登録商標），Ｂａｙｅｒ ＡＧ，ドイツ）で深く麻酔させた。次に、ウサギの目を眼孔（ｏｒｂｉｔ）から持ち上げながら眼窩を露出させた。それぞれの目に対して露出した目の上と下に位置した強膜上静脈を強膜及び他の隣接血管に影響を与えることなく、強膜上静脈を閉塞するに十分な深さで電気焼灼器を使用して焼灼させた。
緑内障を誘導してから（すなわち、０日）約２週後、ウサギの目に硝子体内注射を通じてヒトＩｇＧ兔疫グロブリン（対照群）又は抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体を投与した（５０μＬの体積のうち１００μｇ／目）。前記抗体を１週に１回ずつ合計４週間動物に投与した。未投与（すなわち、緑内障及び抗体注射なし）ウサギを追加的な対照群として使用した。緑内障を誘導してから０日、１４日及び２８日にＴＯＮＯＶＥＴ（登録商標）を使用して眼圧を測定した。図２５に示したように、測定された全ての時点の場合、抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体は緑内障誘発ウサギの眼圧に影響を及ぼさなかった。ＩｇＧ対照群抗体又は抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体の投与を受けたウサギは、未投与動物に比べて類似する形で眼圧が上昇した。
（実施例１６：抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体の生体内投与後の網膜電位差評価）
網膜電位図（ＥＲＧ）は、光受容器（杆状体及び錐状体）、内部網膜細胞（双極性及び無軸索細胞）及び神経節細胞を含む網膜内の多様な細胞によって発生する電気的活性を測定する診断試験である。一般に、明るい光の刺激時、健康な目のＥＲＧは、初期陰性波（「Ａ－波」）と、以降のさらに急勾配の上昇と、さらに速いピークとを有するＢ－波とからなり、「律動様小波」（ＯＰ）として知られている高周波振動が重畳した複雑な波形を示すことができる。Ａ－波は、杆状体の集団的反応によって左右され、暗順応（ｓｃｏｔｏｐｉｃ）Ｂ－波は、杆状体双極性神経細胞の反応によって左右される。ＯＰは、双極性、無軸索細胞及び神経節細胞が相互作用する内部網状層内で発生する。Ｗｉｌｓｅｙ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ ２７（２）：１１８－１２４（２０１６）を参照すればよい。これらの値を評価することによって、網膜内で発見される互いに異なる細胞の健康を評価することができる。
実施例１５で詳述したように、ニュージーランドの白いウサギで緑内障を誘導し、これらの動物の目にヒトＩｇＧ対照群抗体又は抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体を注射した。抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体を最初に投与してから４週後、動物の目内の電気的活性（すなわち、「網膜電位差」）を評価するために律動様小波を測定した。
図２６に示したように、抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体の投与は、緑内障誘発ウサギで測定された律動様小波を大きく向上させた。ヒトＩｇＧ対照群抗体の投与を受けた動物では、検出可能な律動様小波が測定されなかった。これに比べて、ＦＡＭ１９Ａ１特異的抗体の投与を受けた動物の律動様小波は、未投与動物と類似していた。まとめると、これらの結果は、実施例１５の結果と共に、緑内障誘発ウサギに抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体を投与すると、緑内障と関連する網膜損傷を改善できることを示唆する。
（実施例１７：抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体の生体内投与後の網膜神経節細胞数評価）
前記ＥＲＧ分析の結果を確認するために、ニュージーランドの白いウサギで緑内障を誘導し、実施例１５で記載したように、ヒトＩｇＧ対照群抗体又は抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体をこれらの動物のそれぞれの目に注射した。次に、抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体を最初に投与してから４週後に動物を犠牲させた。各動物の両眼を摘出し、これを約２４時間にわたって１０％中性緩衝ホルマリン溶液に固定させた。その後、ＰＢＳで目を洗浄した後、角膜、水晶体、硝子体膜を分離した。次に、目をカップ状にし、５０％メタノールに３０分間固定させた。次に、目を滅菌蒸留水で洗浄し、それぞれの目を１２ウェルプレートのウェルに入れた。約０．５ｍＬの０．１％エチジウムブロミドをそれぞれのウェルに添加し、目をこの溶液で３０分間培養した。培養後、目を滅菌蒸留水で洗浄し、６０ｍｍの皿に載せた。網膜神経節細胞層の細胞数を蛍光顕微鏡を使用して測定した。
図２７Ａ及び図２７Ｂに示したように、ｈＩｇＧ対照群抗体の投与を受けた緑内障誘発ウサギの網膜神経節細胞の数が未投与対照群ウサギより著しく低かった。しかし、抗ＦＡＭ１９Ａ１抗体の投与を受けた動物では、網膜神経節細胞層で観察された網膜神経節細胞の数が大きく増加した。このような結果は、抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体の投与が、緑内障によって観察された網膜神経節細胞の損失を減少及び／又は回復させることができ、内網状層と網膜神経細胞の神経連結を保護できることを示唆する。
（実施例１８：慢性狭窄損傷のラットモデルでの抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体の生体内投与後の機械的異痛症評価）
生体内のＦＡＭ１９Ａ１活性の中和が神経障害性疼痛を緩和できるかどうかを研究するために、以前にＢｅｎｎｅｔｔ ａｎｄ Ｘｉｅ，Ｐａｉｎ ３３（１）：８７－１０７（１９８８），Ａｕｓｔｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｖｉｓ Ｅｘｐ ６１：３３９３（２０１２）によって記述された通りに慢性狭窄損傷（ＣＣＩ）のラットモデルを使用した。坐骨神経の実験的なＣＣＩは、神経障害性疼痛研究に最も広く使用されるモデルの一つであり、同側の後足で炎症反応を誘導するものと報告された。したがって、例えば、Ｖｏｎ Ｆｒｅｙ試験によって測定された後足引っ込め閾値は、神経障害性疼痛の良い指標として提供される。
慢性狭窄損傷による神経障害性疼痛誘導：簡単には、６週齢の雄性Ｓｐｒａｇｕｅ－ＤａｗｌｅｙラットをＺｏｌｅｔｉｌ ５０（ＶＩＲＢＡＣ，フランス）及びキシラジン（ＲＯＭＰＵＮ（登録商標），Ｂａｙｅｒ ＡＧ，ドイツ）で深く麻酔させた。次に、ラットの腰と太ももを除毛し、皮膚をポビドンヨードで殺菌した。次に、太もも側面の皮膚を切開し、大腿二頭筋を通じた鈍的切開（ｂｌｕｎｔ ｄｉｓｓｅｃｔｉｏｎ）によって大腿部の中央で総坐骨神経を露出させた。坐骨神経の近位部には、約７ｍｍの神経に付着組織がなく、その周囲に４個の結紮糸（４．０黒色のシルク）を約１ｍｍの間隔で緩く縛った。このように影響を受けた神経の長さは４～５ｍｍであった。神経結紮後、筋肉層と皮膚層を直ぐ糸で重ねて縫合し、局所抗生剤を塗布した。
抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体投与：Ｚｏｌｅｔｉｌ ５０（ＶＩＲＢＡＣ，フランス）及びキシラジン（ＲＯＭＰＵＮ（登録商標），Ｂａｙｅｒ ＡＧ，ドイツ）を使用して雄性Ｓｐｒａｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙラットを麻酔させ、表１１（下）に示したように３個の群に分けた。慢性狭窄損傷がある一群のラット（「ＣＣＩ誘導ラット」）（ｎ＝５）には、髄腔内注射を通じて抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体を投与した（０．１ｍＬの体積のうち１０μｇ／ラット）。抗体は、１週に１回、合計２週間投与した。他の群のＣＣＩ－誘導ラット（ｎ＝５）を「陰性対照群」として使用し、０．９％食塩水のみを投与した。残りのラット群（ｎ＝５）は、「虚偽対照群」として使用した（すなわち、ＣＣＩ誘導及び投与なし）。
Figure 2023516992000012
Ｖｏｎ Ｆｒｅｙ試験：坐骨神経の慢性狭窄後、６日、１４日及び２１日目に、Ｖｏｎ Ｆｒｅｙ試験を用いて足引っ込め閾値を評価した。ラットは、鉄網底がある装置に位置させ、約２０分間環境に安定するように置いた。次に、メッシュ底を通じて後足の足底面に１０秒間隔で３回Ｖｏｎ ｆｒｅｙフィラメント（直径０．５ｍｍ）を適用し、足引っ込め閾値を測定した。
図２８に示したように、ＣＣＩ誘導結果、６日（基準）に未投与動物に比べて足引っ込め閾値が大きく減少した。ＣＣＩ誘導後、週１回（７日及び１４日）抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体を髄腔内注射した結果、ＣＣＩ誘導後の０．９％食塩水処理ラットに比べて足引っ込め閾値が著しく増加した。この増加は、ＣＣＩ誘導後の１４日に最も著しかった。これらの結果は、抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体の生体内投与によるＦＡＭ１９Ａ１活性中和が神経障害性疼痛を緩和できることを意味する。
（実施例１９：慢性狭窄損傷のラットモデルでの抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体の生体内投与後の運動機能評価）
抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体処理が運動機能を変化できるかどうかを研究するために、ＣＣＩ－誘導ラットの運動活性をロータロッド試験を用いて評価した。この試験は、ＣＣＩ誘導による下肢の疼痛や筋弱化を示す良い指標として提供される（Ｃｈｅｎ Ｌ ｅｔ ａｌ ２０１４，Ｖａｄａｋｋａｎ ＫＩ ｅｔ ａｌ ２００５）。ＣＣＩ誘導及び抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体投与は、実施例１８に記載された通りに行った。
ロータロッド試験：各Ｓｐｒａｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙラット（虚偽対照群及びＣＣＩ－誘導）をロータロッド－トレッドミル（Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ａｐｐａｒａｔｕｓ ７７５０，ＵＧＯ ＢＡＳＩＬＥ Ｉｎｃ．，イタリア）に注意深く載せ、ロータロッドの回転速度を４ｒｐｍから２０ｒｐｍまで一定の間隔で増加させた。落ちる遅延時間を６日に記録した（基準）。運動性能は、各ラットに対する３回の試験の平均時間から決定したロータロッド装置から落ちる遅延時間として見なした。
図２９に示したように、ＣＣＩ誘導は、６日目（基準）に未投与動物に比べて遅延時間を著しく減少させた（すなわち、ラットが遥かに速くロータロッドから飛び降りた）。ＣＣＩ誘導後、抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体を週１回（７日及び１４日）髄腔内注射した結果、ＣＣＩ誘導後の０．９％食塩水処理群に比べて遅延時間が改善された（すなわち、ラットがロータロッド装置にさらに長く残っていた）。これらの結果は、ＣＣＩ誘導後、抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体の生体内投与が神経障害性疼痛を減少させるだけでなく、運動機能も向上できることを意味する。
（実施例２０：一次マウス海馬神経細胞の分化に対するＦＡＭ１９Ａ１の影響分析）
ＣＮＳ関連機能に対するＦＡＭ１９Ａ１の役割をさらによく理解するために、単クローン性抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体を生成した（Ａ１－１Ｃ１）。次に、前記抗体を使用して、以前に観察した神経細胞の分化に対するＦＡＭ１９Ａ１の影響を確認した（実施例１４参照）。出生後の１日（Ｐ１）に、Ｃ５７ＢＬ／６マウスから由来した海馬細胞を以前に記載した通りに準備した。Ｃｈａｎｇ，Ｓ．ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ ４（８）：７８７－９３（２００１）を参照すればよい。簡単には、海馬を切開し、３７℃で１０分間０．２５％トリプシンＥＤＴＡ（ＴＥ）で解離し、粉砕液（ｔｒｉｔｕｒａｔｉｏｎ ｓｏｌｕｔｉｏｎ，ＨＢＳＳ中の１ｍＭのＬ－グルタミン，１０％ウシ胎児血清，１０％ＢＳＡ及び０．５％ＤＮＡｓｅ）で研磨されたハーフ－ボア（ｈａｌｆ－ｂｏｒｅ）パスツールピペットで研磨した。細胞（２．５×１０５）を０．５％グルコース、１ｍＭのピルビン酸、１．２ｍＭのＬ－グルタミン及び１２ｍＭのウシ胎児血清が添加された最小Ｅａｇｌｅ’ｓ培地（ＭＥＭ）内の６０ｍｍのペトリ皿にあるポリ－Ｄ－リシンコーティングガラスカバースリップに塗抹した。塗抹してから４時間後、前記培地は、２％Ｂ－２７及び０．５ｍＭのＬ－グルタミンが添加されたＮｅｕｒｏｂａｓａｌ培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）に取り替えた。１μｇ／ｍｌの抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体（ヒトＦＡＭ１９Ａ１ １Ｃ１単クローン性抗体）の存在又は不在下で細胞を５％ＣＯ２－加湿インキュベータで３７℃で維持した。
免疫細胞化学の場合、試験管内の３日に（ＤＩＶ ３）、細胞を４％ホルムアルデヒド、４％スクロース、ＰＢＳで１５分間固定させた。この研究に使用された１次抗体は、ウサギβ－チューブリン３（Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）であった。２次抗体を西洋ワサビペルオキシダーゼ（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｗｅｓｔ Ｇｒｏｖｅ，ＰＡ）に連結した。皮質及び海馬神経細胞の形態学的分析は、従前に記載した通りに決定した。Ｂａｊ，Ｇ．，ｅｔ ａｌ．，Ｆｒｏｎｔ Ｃｅｌｌ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ ８：１８（２０１４）を参照すればよい。神経細胞をβ－チューブリン３で染色した後、神経突起の総長さ、１次及び高次神経突起の数、分岐地点の数をＩｍａｇｅ Ｊプログラム（Ｆｉｊｉ，ＮＩＨ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ）を使用する単純神経突起追跡プラグインによって測定した。
図３０Ａ～図３０Ｆに示したように、抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体で海馬細胞を処理した結果、ビヒクル処理対照群細胞に比べて総神経突起成長（図３０Ａ参照）を有意に増大させた（図３０Ｂ参照）。１次神経突起の総数は影響を受けなかったが（図３０Ｄ参照）、抗－ＦＡＭ１９Ａ１で処理すると、２次神経突起が１次神経突起から延長された分岐地点の数が大きく増加した（図３０Ｅ及び図３０Ｆ参照）。
総合的に、本結果は、実施例１４の結果と共に、神経細胞の分化を調節するにおいてＦＡＭ１９Ａ１の重要性を強調する。
（実施例２１：マウス慢性狭窄損傷モデルでの単クローン性抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体の鎮痛効果評価）
次に、単クローン性抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体（Ａ１－１Ｃ１）を使用し、ＣＣＩ誘導動物で以前に観察された神経障害性疼痛（実施例１８及び１９参照）に対するＦＡＭ１９Ａ１活性中和の治療効果を確認した。
慢性狭窄損傷による神経障害性疼痛の誘導：簡単には、８週齢の雄性Ｃ５７ＢＬ／７マウスをＺｏｌｅｔｉｌ ５０（ＶＩＲＢＡＣ，フランス）及びキシラジン（ＲＯＭＰＵＮ（登録商標），Ｂａｙｅｒ ＡＧ，ドイツ）で深く麻酔させた。次に、腰と太ももを除毛し、皮膚をポビドンヨードで殺菌した。次に、太もも側面の皮膚を切開し、大腿二頭筋を通じた鈍的切開によって大腿部の中央で総坐骨神経を露出させた。３個の結紮糸（６．０黒色シルク）を約１ｍｍ間隔で緩く縛った。神経結紮後、筋肉層と皮膚層を直ぐ糸で重ねて縫合し、局所抗生剤を塗布した。
単クローン性抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体投与：Ｃ５７ＢＬ／６マウスは、表１２に示したように３個の群に分けた。慢性狭窄損傷がある一群のマウス（「ＣＣＩ誘導マウス」）（ｎ＝７）には、髄腔内注射を通じて抗－ＦＡＭ１９Ａ１を投与した（５μｌ体積のうち５μｇ／マウス）。抗体は、１週に１回、合計２週間投与した。他の群のＣＣＩ－誘導マウス（ｎ＝６）は、「陰性対照群」として使用し、正常なヒトＩｇＧの投与を受けた。残りのマウス群（ｎ＝２）は、「未投与対照群」として使用した（すなわち、ＣＣＩ誘導及び投与なし）。
Figure 2023516992000013
Ｖｏｎ Ｆｒｅｙ試験：坐骨神経の慢性狭窄後、６日、１０日、１３日、１７日及び２０日目に、Ｖｏｎ Ｆｒｅｙ試験（０．１６ｇ）を用いて足引っ込め頻度を評価した。マウスは、鉄網底がある装置に位置させ、約２０分間環境に安定するように置いた。それぞれの後足に１０秒間隔で１０回フィラメントを適用した。次に、足引っ込め反応の回数を数え、同側の後足の機械的行動試験結果は、最大１０回のうち足引っ込みの比率に該当する引っ込め反応頻度（ＰＷＦ、％）として示した。
ハーグリーブス試験：坐骨神経の慢性狭窄後、６日、１０日、１３日、１７日及び２０日目に、足底試験装置（Ｓｅｒｉｅｓ ８，Ｍｏｄｅｌ ３９０Ｇ，ＩＩＴＣ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｉｎｃ．，Ｗｏｏｄｌａｎｄ Ｈｉｌｌｓ，ＣＡ，ＵＳＡ）を使用して有害な熱刺激に対する足引っ込め反応遅延時間（ＰＷＬ、秒）で熱過敏性を測定した。試験を行う前に、マウスは、３０分間高架式ガラス板上のプラスチックチャンバーである試験環境に適応させた。足底試験装置は、後足の下のガラス底の下側に位置している輻射熱源を発生させる。デジタル時計に連結された光電池は、輻射熱に対する足引っ込め遅延時間を測定した。光源の強度は、未投与動物で１０～１５秒の足引っ込め反応遅延時間を生成するように調整した。過度な組織損傷から動物を保護するために、２０秒のカットオフ時間を使用した。試験は、各時点で各後足に対して２回繰り返した後、平均引っ込め遅延時間を計算及び記録した。
図３１に示したように、ＣＣＩ誘導は、未投与動物に比べて足引っ込め頻度を著しく増加させた（すなわち、ＣＣＩ誘導動物は、フィラメントに対する反応で足をさらに頻繁に引っ込めた）。週１回に（ＣＣＩ誘導後、７日及び１４日に）、単クローン性抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体の髄腔内投与は、対照群ＩｇＧ抗体で処理したＣＣＩ誘導動物に比べて足引っ込め頻度を大きく減少させた。熱刺激に対する反応でも類似する結果が観察された。単クローン性抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体で処理したＣＣＩ誘導動物は、対照群抗体で処理したＣＣＩ誘導動物に比べて引っ込め遅延時間が増加した。図３２を参照すればよい。
これらの結果は、単クローン性抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体の治療効果を立証し、ＦＡＭ１９Ａ１活性を中和させることが、神経障害性疼痛を緩和できることを確認させる。総合的には、前記実施例で示した結果は、本明細書に開示されたＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤が、男性及び女性対象の全てにおいて多様なＣＮＳ関連疾病及び障害を治療するのに有用であり得ることを立証する。
概要及び要約セクションを含む詳細な説明セクションは、特許請求の範囲を解釈するために使用されるものと理解しなければならない。概要及び要約セクションは、発明者によって考慮される本開示内容の例示的な様態の一つ以上を示すが、全ての例示的な様態を示すものではないので、本開示内容と添付の特許請求の範囲を何らかの方式で制限しようとするものではない。
本開示内容は、特定の機能及びこれらの関係の具現を説明する機能的構成要素を通じて上記で説明した。これらの機能的構成要素の境界は、説明の便宜のために、本明細書では任意に定義した。前記特定の機能とこれらの関係が適切に行われる限り、代替境界を定義することができる。
特定様態の上述した説明は、他人が当業界技術内の知識を応用することによって、本開示内容の一般的な概念を逸脱しない範囲で過度な実験なしで多様な応用のためにこのような特定様態を容易に変形及び／又は調整できるように、本開示内容の一般的な属性を完全に示すことができる。したがって、このような調整及び変形は、本明細書に提示された教示及び指針に立脚して開示された各様態の均等物の意味及び範囲内にあるように意図される。本明細書の文句又は用語は、本明細書の用語又は文句が教示及び指針に照らして当業者によって解釈できるように、制限ではなく、説明を目的とするものであることを理解しなければならない。
本開示内容の幅及び範囲は、上述した例示的な様態のうちいずれによっても制限されてはならなく、後述する特許請求の範囲及びその等価物によってのみ定義されなければならない。
本明細書に引用された全ての刊行物、特許、特許出願、インターネットサイト及び受託番号／データベース配列（ポリヌクレオチド及びポリペプチド配列の全てを含む）は、それぞれの個別的な刊行物、特許、特許出願、インターネットサイト又は受託番号／データベース配列が具体的に及び個別的に参考として含まれるものと表示されたのと同じ程度で、全ての目的のためにその全文が本明細書に参考として含まれる。
陽性ポリｓｃＦｖ－ファージ抗体プール（ｐｏｏｌ）の結合に対して、実施例２に記載されているバイオパニングの各ラウンドからのＥＬＩＳＡ結果を示している。 バイオパニングのラウンド３から分離された個別モノｓｃＦｖ－ファージクローンのＦＡＭ１９Ａ１タンパク質に対する結合のＥＬＩＳＡ結果を示している。 バイオパニングのラウンド３から分離された互いに異なるモノｓｃＦｖ－ファージクローンのＢｓｔＮＩフィンガープリンティング分析を示している。 ＦＡＭ１９Ａ１及び非－ＦＡＭ１９Ａ１タンパク質の全てに互いに異なるモノｓｃＦｖ－ファージクローンの結合に対するＥＬＩＳＡ結果を示している。 抗－ＦＡＭ１９Ａ１ ＩｇＧ１抗体を生産するために使用した発現ベクターの概略的な構成を提供している。 ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析によって確認された抗体の純度及び移動度を提供している。 生産収率データを提供している。 ＥＬＩＳＡによって測定したＦＡＭ１９Ａ１タンパク質に対する抗体の結合分析を提供している。 互いに異なる抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体クローンのＦＡＭ１９Ａ１突然変異体Ｍ１－Ｍ７結合に対するＥＬＩＳＡ結果を示している。 マウスの互いに異なる組織でのＦＡＭ１９Ａ１ ｍＲＮＡ発現を示している。 ＦＡＭ１９Ａ１ ＬａｃＺ ＫＩマウス遺伝子構成の概略図である。 野生型ＦＡＭ１９Ａ１ ＬａｃＺ ＫＩ（＋／－）及びＦＡＭ１９Ａ１ ＬａｃＺ ＫＩ（－／－）動物でβ－ガラクトシダーゼ（３４３ ｂｐ）とＦＡＭ１９Ａ１（２４３ ｂｐ）とを比較するゲノムＤＮＡ ＰＣＲ結果を提供している。 互いに異なる動物の皮質（ＣＴＸ）及び海馬（ＨＩＰ）の全てでのＦＡＭ１９Ａ１発現を比較するＲＴ－ＰＣＲ結果を提供している。 ＦＡＭ１９Ａ１特異的抗体を使用して互いに異なる動物の皮質（ＣＴＸ）及び海馬（ＨＩＰ）での内因性ＦＡＭ１９Ａ１タンパク質発現を比較して提供している。 図８Ｄに示した結果の定量分析を提供している。 図８Ｄに示した結果の定量分析を提供している。 野生型動物の脳の多様な領域でのＦＡＭ１９Ａ１ ｍＲＮＡ及びタンパク質発現の全てを示している。 図８Ｇに示した結果の定量分析を提供している。 胚発達の１２．５日（Ｅ１２．５）に、ＷＴ及びＦＡＭ１９Ａ１ ＬａｃＺ ＫＩマウスでのβ－ガラクトシダーゼ発現を比較して提供している。 胚発達の１４．５日、１６．５日及び１８．５日に、ＦＡＭ１９Ａ１ ＬａｃＺ ＫＩマウスでのβ－ガラクトシダーゼ発現を示している。 出生後の０．５日、２．５日、７．５日、１４．５日及び５６．６日に、ＦＡＭ１９Ａ１ ＬａｃＺ ＫＩマウスでのβ－ガラクトシダーゼ発現を示している。 胚及び出生後のＦＡＭ１９Ａ１ ＬａｃＺノックイン（ＫＩ）（＋／－）マウスの脳のＸ－ｇａｌ染色を提供している。胚発達の１４．５日（Ｅ１４．５）及び１８．５日（Ｅ１８．５）に、冠状脳切片でのＸ－ｇａｌ信号検出を示している。 胚及び出生後のＦＡＭ１９Ａ１ ＬａｃＺノックイン（ＫＩ）（＋／－）マウスの脳のＸ－ｇａｌ染色を提供している。図１０Ｂは、出生後の０．５（Ｐ０．５）日、７．５（Ｐ７．５）日及び１４．５（Ｐ１４．５）日に、多様な領域でのＸ－ｇａｌ信号検出を示している。 互いに異なる成体マウスの脳でのＦＡＭ１９Ａ１発現パターンを示している。Ｘ－ｇａｌ沈殿物（赤色）がＦＡＭ１９Ａ１ ＬａｃＺ ＫＩマウスの皮質Ｌ２－３ ＣＵＸ１陽性神経細胞（緑色）の一部で検出された。 互いに異なる成体マウスの脳でのＦＡＭ１９Ａ１発現パターンを示している。β－ガラクトシダーゼ（緑色）がＦＡＭ１９Ａ１ ＬａｃＺ ＫＩマウスの皮質Ｌ５ ＣＴＩＰ２陽性神経細胞（マゼンタ色）の一部で確認された。 互いに異なる成体マウスの脳でのＦＡＭ１９Ａ１発現パターンを示している。免疫組織化学によって測定された成体マウスの冠状脳切片でのＸ－ｇａｌ染色を示している。 成体マウスの脳、脊髓及び背中側の神経節でのＦＡＭ１９Ａ１発現（Ｘ－ｇａｌ染色によって表れる）を提供している。 ＦＡＭ１９Ａ１ ｍＲＮＡプローブを使用するｉｎ ｓｉｔｕ混成化による成長及び成熟野生型（ＷＴ）ラットの脳でのＦＡＭ１９Ａ１ ｍＲＮＡ発現を示している。 異型接合ＦＡＭ１９Ａ１ ＬａｃＺ ＫＩ親（ｐａｒｅｎｔｓ）から生成された子孫の数及び比率（％）を示す表を提供している。 雄性マウスでの年齢による体重変化を示している。 雌性マウスでの年齢による体重変化を示している。 ＷＴ及びＦＡＭ１９Ａ１（－／－）成体マウスの脳の全体組織標本固定写真（ｗｈｏｌｅ－ｍｏｕｎｔ ｖｉｅｗ）を提供している。 ＷＴ異型接合ＦＡＭ１９Ａ１ ＬａｃＺ ＫＩ（ＦＡＭ１９Ａ１ ＋／－）及び同型接合ＦＡＭ１９Ａ１ ＬａｃＺ ＫＩ（ＦＡＭ１９Ａ１ －／－）マウスのニッスル染色された脳組織内の運動皮質層を示している。 ＷＴ（ｎ＝９）、ＦＡＭ１９Ａ１ ＋／－（ｎ＝８）及びＦＡＭ１９Ａ１ －／－（ｎ＝８）成体マウスの脳の総長さを提供している。 ＷＴ（ｎ＝９）、ＦＡＭ１９Ａ１ ＋／－（ｎ＝８）及びＦＡＭ１９Ａ１ －／－（ｎ＝８）成体マウスの大脳皮質の長さを提供している。 ＷＴ（ｎ＝９）、ＦＡＭ１９Ａ１ ＋／－（ｎ＝８）及びＦＡＭ１９Ａ１ －／－（ｎ＝８）成体マウスの脳幅を提供している。 ＷＴ（ｎ＝５）ＦＡＭ１９Ａ１ ＋／－（ｎ＝５）及びＦＡＭ１９Ａ１ －／－（ｎ＝４）成体マウスの運動皮質における皮質の厚さを提供している。 ＷＴ（ｎ＝５）ＦＡＭ１９Ａ１ ＋／－（ｎ＝５）及びＦＡＭ１９Ａ１ －／－（ｎ＝４）成体マウスの体性感覚皮質における皮質の厚さを提供している。 ＷＴ（ｎ＝５）ＦＡＭ１９Ａ１ ＋／－（ｎ＝５）及びＦＡＭ１９Ａ１ －／－（ｎ＝４）成体マウスの視覚皮質における皮質の厚さを提供している。 成体マウスの脳の野生型（ＷＴ）、ＦＡＭ１９Ａ１ ＋／－及びＦＡＭ１９Ａ１ －／－の大脳皮質での推定皮質の体積を比較して提供している 成体マウスの脳の野生型（ＷＴ）、ＦＡＭ１９Ａ１ ＋／－及びＦＡＭ１９Ａ１ －／－の大脳皮質での神経細胞の総数を比較して提供している。 野生型、ＦＡＭ１９Ａ１ ＋／－及びＦＡＭ１９Ａ１ －／－成体マウスの運動皮質層の厚さを示している。 野生型、ＦＡＭ１９Ａ１ ＋／－及びＦＡＭ１９Ａ１ －／－成体マウスの体性感覚皮質層の厚さを示している。 野生型、ＦＡＭ１９Ａ１ ＋／－及びＦＡＭ１９Ａ１ －／－成体マウスの視覚皮質の厚さを示している。 野生型、ＦＡＭ１９Ａ１ ＋／－及びＦＡＭ１９Ａ１ －／－成体マウスの皮質の総厚さに対する運動皮質の層の厚さの比を示している。 野生型、ＦＡＭ１９Ａ１ ＋／－及びＦＡＭ１９Ａ１ －／－成体マウスの皮質の総厚さに対する体性感覚皮質層の厚さの比を示している。 野生型、ＦＡＭ１９Ａ１ ＋／－及びＦＡＭ１９Ａ１ －／－成体マウスの皮質の総厚さに対する視覚皮質層の厚さの比を示している。 野生型、ＦＡＭ１９Ａ１ ＋／－及びＦＡＭ１９Ａ １－／－成体マウスの運動皮質層における神経細胞の密度を比較して提供している。 図１８Ａに示した皮質層のそれぞれにおける神経細胞の密度を定量的に比較して提供している。 図１８Ａに示した皮質層のそれぞれにおける体積定量的に比較して提供している。 図１８Ａに示した皮質層のそれぞれにおける総ＮｅｕＮ陽性細胞を定量的に比較して提供している。 野生型、ＦＡＭ１９Ａ１ ＋／－及びＦＡＭ１９Ａ１ －／－成体マウスの運動皮質における皮質層グリア細胞の数を比較して提供している。 野生型、ＦＡＭ１９Ａ１ ＋／－及びＦＡＭ１９Ａ１ －／－成体マウスの運動皮質における皮質層グリア細胞の数を比較して提供している。 運動皮質層でのＧＦＡＰ陽性細胞の数を示している。 運動皮質層でのＩｂａ１陽性細胞の数を示している。 運動皮質層でのＯｌｉｇ２陽性細胞の数を示している。 野生型、ＦＡＭ１９Ａ１ ＋／－及びＦＡＭ１９Ａ１ －／－成体マウスの過剰行動について、高架式十字迷路（ＥＰＭ）試験で測定した開放アーム（ａｒｍ）での総時間を比較している。 野生型、ＦＡＭ１９Ａ１ ＋／－及びＦＡＭ１９Ａ１ －／－成体マウスの過剰行動について、高架式十字迷路（ＥＰＭ）試験で測定した開放アーム（ａｒｍ）での総移動距離を比較している。 野生型、ＦＡＭ１９Ａ１ ＋／－及びＦＡＭ１９Ａ１ －／－成体マウスの過剰行動について、オープンフィールド試験（ｏｐｅｎ ｆｉｅｌｄ ｔｅｓｔ、ＯＦＴ）で測定した中央での総時間を比較している。 野生型、ＦＡＭ１９Ａ１ ＋／－及びＦＡＭ１９Ａ１ －／－成体マウスの過剰行動について、オープンフィールド試験（ｏｐｅｎ ｆｉｅｌｄ ｔｅｓｔ、ＯＦＴ）で測定した中央での総移動距離を示している。 ＯＦＴアリーナ―（ａｒｅｎａ）での動物移動の簡単な動線追跡を提供している。 野生型、ＦＡＭ１９Ａ１ ＋／－及びＦＡＭ１９Ａ１ －／－成体マウスの過剰行動について、テールサスペンション試験（ｔａｉｌ ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ ｔｅｓｔ、ＴＳＴ）で測定した不動時間の比率（％）を示している。 野生型、ＦＡＭ１９Ａ１ ＋／－及びＦＡＭ１９Ａ１ －／－成体マウスの過剰行動について、Ｙ－迷路試験で測定した自発的変化を示している。 野生型、ＦＡＭ１９Ａ１ ＋／－及びＦＡＭ１９Ａ１ －／－成体マウスの過剰行動について、Ｙ－迷路試験で測定した総移動距離を示している。 野生型、ＦＡＭ１９Ａ１ ＋／－及びＦＡＭ１９Ａ１ －／－成体マウスについて、短期記憶新奇物体認識（ＮＯＲ）試験で測定した探索に要された総時間を示している。 野生型、ＦＡＭ１９Ａ１ ＋／－及びＦＡＭ１９Ａ１ －／－成体マウスについて、短期記憶新奇物体認識（ＮＯＲ）試験で測定した物体選好度を示している。 野生型、ＦＡＭ１９Ａ１ ＋／－及びＦＡＭ１９Ａ１ －／－成体マウスについて、短期記憶新奇物体認識（ＮＯＲ）試験で測定した識別指数を示している。 野生型、ＦＡＭ１９Ａ１ ＋／－及びＦＡＭ１９Ａ１ －／－成体マウスについて、長期記憶ＮＯＲ試験で測定した探索に要された総時間を示している。 野生型、ＦＡＭ１９Ａ１ ＋／－及びＦＡＭ１９Ａ１ －／－成体マウスについて、長期記憶ＮＯＲ試験で測定した探索に要された物体選好度を示している。 野生型、ＦＡＭ１９Ａ１ ＋／－及びＦＡＭ１９Ａ１ －／－成体マウスについて、長期記憶ＮＯＲ試験で測定した識別指数を示している。 野生型、ＦＡＭ１９Ａ１ ＋／－及びＦＡＭ１９Ａ１ －／－成体マウスについて、パブロフの恐怖条件付け試験の獲得段階中における恐怖条件付けを示している。 恐怖獲得段階後、２４時間に行った状況試験の結果を示している。 恐怖獲得段階後、２４時間に行った聴覚記憶試験の結果を示している。 合成したキツネの便臭である２，５－ジヒドロ－２，４，５－トリメチルチアゾリン（ＴＭＴ）を使用した先天的恐怖試験の結果を示している。 ＦＡＭ１９Ａ５ ＬａｃＺ ＫＩマウス遺伝子の概略的な構成を示している。 脳でのＦＡＭ１９Ａ１（左側）及びＦＡＭ１９Ａ５（右側）発現を示している。 （ｉ）対照群ＩｇＧ抗体（左側パネル）、（ｉｉ）抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体（中間パネル）又は（ｉｉｉ）ＦＡＭ１９Ａ１タンパク質（右側パネル）で処理したマウス成体における神経幹細胞内の分化された神経細胞の神経突起成長を比較して提供している。 ヒトＩｇＧ１（「ｈＩｇＧ」；空の四角形）又は抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体（「ＦＡＭ１９Ａ１ Ａｂ」；充填された四角形）で処理した緑内障誘導動物の眼圧比較を示している。 ヒトＩｇＧ１（「ｈＩｇＧ」）又は抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体（「ＦＡＭ１９Ａ１Ａｂ」）で処理した緑内障誘導動物での律動様小波等級を比較して示している。 ヒトＩｇＧ１（「ｈＩｇＧ」）又は抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体（「ＦＡＭ１９Ａ１ Ａｂ」）で処理した緑内障誘導動物の網膜神経節細胞層で観察した網膜神経節細胞（「ＲＧＣ」）の数を比較して示している。ＲＧＣ細胞の数を絶対値として示している。 ヒトＩｇＧ１（「ｈＩｇＧ」）又は抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体（「ＦＡＭ１９Ａ１ Ａｂ」）で処理した緑内障誘導動物の網膜神経節細胞層で観察した網膜神経節細胞（「ＲＧＣ」）の数を比較して示している。前記群のそれぞれにおける代表的な動物の網膜神経節細胞層の蛍光映像（倍率１００×）を示している。 食塩水（空の四角形）又は抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体（充填された四角形）で処理した慢性狭窄損傷（ＣＣＩ）誘導ラットでの足引っ込め閾値の比較を示している。 食塩水（空の四角形）又は抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体（充填された四角形）で処理した慢性狭窄損傷（ＣＣＩ）誘導ラットでのロータロッド（ｒｏｔａｒｏｄ）遅延時間（実施例に記載されているように、動物がロータロッド－トレッドミルから落ちるのにかかる時間）を比較して示している。 ビヒクル（ｖｅｈｉｃｌｅ）－対照群で処理したマウス海馬神経細胞での免疫組織化学を通じた神経突起成長を示している。 ビヒクル（ｖｅｈｉｃｌｅ）－抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体で処理したマウス海馬神経細胞での免疫組織化学を通じた神経突起成長を示している。 神経突起の平均総長さ（μｍ）を示している。 一次神経突起の数を示している。 分岐地点の数を示す。 二次神経突起の数を提供している。 ＣＣＩ誘導機械的異痛症における抗－ＦＡＭ１９Ａ１単クローン性抗体（Ａ１－１Ｃ１）の鎮痛効果を示している。 ＣＣＩ誘導熱痛覚過敏での抗－ＦＡＭ１９Ａ１単クローン性抗体（Ａ１－１Ｃ１）の鎮痛効果を示している。
本明細書で使用する用語「交差反応」は、異なる種のＦＡＭ１９Ａ１に結合する本明細書に記載された抗体の能力を称する。例えば、ヒトＦＡＭ１９Ａ１に結合する本明細書に記載された抗体は、他の種のＦＡＭ１９Ａ１（例えば、マウスＦＡＭ１９Ａ１）にも結合することができる。本明細書で使用する交差反応性は、結合分析（例えば、ＳＰＲ、ＥＬＩＳＡ）で精製された抗原との特異的反応性を検出することによって、又は、ＦＡＭ１９Ａ１を生理学的に発現する細胞に結合したり、又は、そうでない場合、前記細胞と機能的に相互作用することによって測定され得る。交差反応性を決定するための方法は、本明細書に記載されている標準結合分析、例えば、ＢＩＡＣＯＲＥＴＭ ２０００ ＳＰＲ機器（Ｂｉａｃｏｒｅ ＡＢ，Ｕｐｐｓａｌａ，スウェーデン）を使用したＢＩＡＣＯＲＥＴＭ表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）分析又はフローサイトメトリー技術を含む。
一部の様態において、ＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤を必要とする対象に投与すると、参考対照群（例えば、ＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤の投与を受けていない神経障害性疼痛対象）に比べて、熱刺激（例えば、ホットプレート）に対する対象の遅延時間（すなわち、刺激と反応との間の時間間隔）を増加させる。一部の様態において、本明細書に開示された方法は、熱刺激に対する対象の遅延時間を参考対照群（例えば、ＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤を投与する前の対象の閾値）に比べて少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約１００％、少なくとも約１５０％又は少なくとも約２００％増加させることができる。
［中枢神経系（ＣＮＳ）機能を調節又は改善させる方法］
一つの特定理論に拘束されなく、一部の様態において、本明細書に開示されたＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤は、ＦＡＭ１９Ａ１活性を減少及び／又は阻害することによって疾患又は障害を治療することができる。一部の様態において、前記減少及び／又は阻害されたＦＡＭ１９Ａ１活性は、中枢神経系の一つ以上の機能を改善させることができる。したがって、一部の様態において、本明細書は、必要とする対象で中枢神経系の一つ以上の機能を調節又は改善させる方法として、ＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤を前記対象に投与することを含む方法を開示する。一部の様態において、本開示内容に有用なＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤は、ＦＡＭ１９Ａ１を特異的に標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｄｓＲＮＡ、アプタマー、ＰＮＡ又はこれを含むベクターである。特定の様態において、ＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤は、抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体、抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体をコーディングするポリヌクレオチド又はそのポリヌクレオチドを含むベクターを含む。

Claims (101)

  1. 配列類似性１９を有するファミリー、メンバーＡ１（ＦＡＭ１９Ａ１）（「ＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤」）に特異的に結合する治療用拮抗剤。
  2. 前記拮抗剤は、必要とする対象で疾患又は障害を治療できる、請求項１に記載の用途のＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤。
  3. 前記疾患又は障害は、中枢神経系（ＣＮＳ）関連疾患又は障害を含む、請求項２に記載の用途のＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤。
  4. 前記ＣＮＳ関連疾患又は障害は、非正常的な神経回路と関連している、請求項３に記載の用途のＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤。
  5. 前記ＣＮＳ関連疾患又は障害は、気分障害、精神障害又はこれらの全てを含む、請求項３又は４に記載の用途のＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤。
  6. 前記ＣＮＳ関連疾患又は障害は、不安、うつ病、外傷後ストレス障害（ＰＴＳＤ）、双極性障害、注意欠陥／多動性障害（ＡＤＨＤ）、自閉症、精神分裂病、神経障害性疼痛、緑内障、中毒症、くも膜嚢胞、強硬症、脳炎、てんかん／発作、固定症侯群、髄膜炎、片頭痛、多発性硬化症、骨髓病症、アルツハイマー病、ハンチントン病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、バッテン病、トゥレット症候群、外傷性脳損傷、脳脊髓損傷、脳卒中、振戦（本態性又はパーキンソン病性）、筋緊張異常、知的障害、脳腫瘍又はこれらの組み合わせを含む、請求項３乃至５のいずれか１項に記載の用途のＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤。
  7. 前記ＣＮＳ関連疾患又は障害は、不安、うつ病、ＰＴＳＤ又はこれらの組み合わせである、請求項６に記載の用途のＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤。
  8. 前記ＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤は、不安及び／又はうつ病と関連する一つ以上の症状を改善（例えば、前記対象の運動性活動を増加させ／又は外部ストレスに反応する前記対象の能力を増加）させることができる、請求項７に記載の用途のＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤。
  9. 前記ＣＮＳ関連疾患又は障害が緑内障である、請求項６に記載の用途のＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤。
  10. 前記ＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤は、緑内障と関連する炎症を減少、緩和又は阻害できる、請求項９に記載の用途のＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤。
  11. 前記ＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤は、網膜で網膜電位を改善できる、請求項９又は１０に記載の用途のＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤。
  12. 前記緑内障は、開放隅角緑内障、閉塞隅角緑内障、正常眼圧緑内障（「ＮＴＧ」）、先天性緑内障、続発性緑内障、色素性緑内障、偽落屑緑内障、外傷性緑内障、血管新生緑内障、虹彩角膜内皮症侯群、ぶどう膜炎緑内障及びこれらの組み合わせからなる群から選ばれる、請求項９乃至１１のいずれか１項に記載の用途のＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤。
  13. 前記緑内障は、視神経損傷、網膜神経節細胞（「ＲＧＣ」）損失、高い眼圧（「ＩＯＰ」）、損傷した血液－網膜障壁及び／又は対象の網膜及び／又は視神内のミクログリア活性水準の増加と関連している、請求項９乃至１２のいずれか１項に記載の用途のＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤。
  14. 前記緑内障は、視神経乳頭部の機械的損傷及び／又は前記対象の網膜及び／又は視神経内の炎症水準の増加によって誘発される、請求項９乃至１３のいずれか１項に記載の用途のＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤。
  15. 前記拮抗剤は、前記対象内で網膜神経細胞変性の開始を遅延させることができる、請求項９乃至１４のいずれか１項に記載の用途のＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤。
  16. 前記拮抗剤は、網膜神経節細胞の損失を減少させ／又は対象の網膜内の網膜神経節細胞の数を回復させることができる、請求項９乃至１５のいずれか１項に記載の用途のＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤。
  17. 前記網膜神経節細胞の損失は、基準（例えば、ＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤の投与を受けていない対象の該当の値又はＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤を投与する前の対象の該当の値）に比べて少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％又は少なくとも約９０％減少する、請求項１６に記載の用途のＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤。
  18. 前記網膜神経節細胞の数は、基準（例えば、ＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤の投与を受けていない対象の該当の値又はＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤を投与する前の対象の該当の値）に比べて少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％又は少なくとも約９０％回復される、請求項１６に記載の用途のＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤。
  19. 前記拮抗剤は、前記対象の網膜の内網状層の神経連結を保護できる、請求項９乃至１８のいずれか１項に記載の用途のＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤。
  20. 前記ＣＮＳ関連疾患又は障害は神経障害性疼痛である、請求項６に記載の用途のＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤。
  21. 前記拮抗剤は、必要とする対象で外部刺激に対する閾値又は遅延時間を増加させることができる、請求項２０に記載の用途のＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤。
  22. 前記外部刺激は機械的刺激である、請求項２１に記載の用途のＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤。
  23. 前記外部刺激は熱刺激である、請求項２１に記載の用途のＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤。
  24. 前記外部刺激に対する閾値又は遅延時間は、基準（例えば、ＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤の投与を受けていない対象の該当の値又はＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤を投与する前の対象の該当の値）に比べて少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％又は少なくとも約９０％以上増加する、請求項２１乃至２３のいずれか１項に記載の用途のＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤。
  25. 前記拮抗剤は、必要とする対象で感覚神経伝導速度を増加又は調節することができる、請求項２０乃至２４のいずれか１項に記載の用途のＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤。
  26. 前記感覚神経伝導速度は、基準（例えば、ＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤の投与を受けていない対象の該当の値又はＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤を投与する前の対象の該当の値）に比べて少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％又は少なくとも約９０％以上増加する、請求項２５に記載の用途のＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤。
  27. 前記神経障害性疼痛は、中枢性神経障害性疼痛又は末梢性神経障害性疼痛である、請求項２０乃至２６のいずれか１項に記載の用途のＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤。
  28. 前記神経障害性疼痛は、身体傷害、感染、糖尿病、癌治療、アルコール中毒、切断、背中、足、尻又は顔面筋肉の弱化、三叉神経痛、多発性硬化症、帯状疱疹、脊椎手術又はこれらの任意の組み合わせと関連している、請求項２０乃至２７のいずれか１項に記載の用途のＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤。
  29. 前記神経障害性疼痛は、手根管症候群、中枢性疼痛症候群、退行性ディスク疾患、糖尿病性神経障害、幻肢痛、帯状疱疹後神経痛（帯状疱疹）、陰部神経痛、坐骨神経痛、腰痛、三叉神経痛又はこれらの任意の組み合わせを含む、請求項２０乃至２８のいずれか１項に記載の用途のＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤。
  30. 前記神経障害性疼痛は、神経の圧迫によって誘発される、請求項２０乃至２９のいずれか１項に記載の用途のＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤。
  31. 前記糖尿病性神経障害は糖尿病性末梢神経障害である、請求項２９に記載の用途のＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤。
  32. 前記神経障害性疼痛は坐骨神経痛である、請求項３０に記載の用途のＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤。
  33. 前記拮抗剤は、必要とする対象で中枢神経系機能を調節又は改善することができる、請求項１乃至３２のいずれか１項に記載の用途のＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤。
  34. 前記中枢神経系機能は、辺縁系関連機能、嗅覚系関連機能、感覚系関連機能、視覚系関連機能又はこれらの組み合わせを含む、請求項３３に記載の用途のＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤。
  35. 前記拮抗剤は、脳領域でＦＡＭ１９Ａ１タンパク質の発現水準及び／又はＦＡＭ１９Ａ１ ｍＲＮＡの発現水準を減少させることができる、請求項３３又は３４に記載の用途のＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤。
  36. 前記脳領域は、大脳皮質、海馬、視床下部、中脳、前頭前皮質、扁桃体（例えば、外側扁桃核及び基底内側扁桃核）、梨状皮質、前嗅核、外側嗅内皮質、手網又はこれらの組み合わせを含む、請求項３５に記載の用途のＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤。
  37. 前記拮抗剤は、網膜領域でＦＡＭ１９Ａ１タンパク質の発現水準及び／又はＦＡＭ１９Ａ１ ｍＲＮＡの発現水準を減少させることができる、請求項３３乃至３６のいずれか１項に記載の用途のＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤。
  38. 前記網膜領域は、神経節細胞層（ＧＣＬ）又は内部網状層（ＩＮＬ）を含む、請求項３７に記載の用途のＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤。
  39. 前記拮抗剤は、脊髓領域でＦＡＭ１９Ａ１タンパク質の発現水準及び／又はＦＡＭ１９Ａ１ ｍＲＮＡの発現水準を減少させることができる、請求項３３乃至３８のいずれか１項に記載の用途のＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤。
  40. 前記脊髓領域は後角を含む、請求項３９に記載の用途のＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤。
  41. 前記ＦＡＭ１９Ａ１タンパク質の発現水準及び／又はＦＡＭ１９Ａ１ ｍＲＮＡの発現水準は、基準（例えば、ＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤の投与を受けていない対象の該当の値又はＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤を投与する前の対象の該当の値）に比べて少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％又は少なくとも約９０％以上減少する、請求項３５乃至４０のいずれか１項に記載の用途のＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤。
  42. 前記拮抗剤は、必要とする対象で神経幹細胞の分化を調節、誘導又は増加させることができる、請求項１乃至４１のいずれか１項に記載の用途のＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤。
  43. 前記拮抗剤は、基準（例えば、ＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤の投与を受けていない対象の該当の値又はＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤を投与する前の対象の該当の値）に比べて、分化された神経幹細胞で神経突起成長を増加させることができる、請求項４２に記載の用途のＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤。
  44. 前記神経突起成長は、前記基準に比べて少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％又は少なくとも約９０％以上増加する、請求項４３に記載の用途のＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤。
  45. 必要とする対象で中枢神経系（ＣＮＳ）機能の異常を診断する方法として、ＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤を前記対象のサンプルと接触させ、前記サンプル内のＦＡＭ１９Ａ１タンパク質水準又はＦＡＭ１９Ａ１ ｍＲＮＡ水準を測定することを含む方法。
  46. 中枢神経系（ＣＮＳ）機能に異常がある対象を確認する方法として、ＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤を前記対象のサンプルと接触させ、前記サンプル内のＦＡＭ１９Ａ１タンパク質水準又はＦＡＭ１９Ａ１ ｍＲＮＡ水準を測定することを含む方法。
  47. 前記接触及び測定は試験管内で行われる、請求項４５又は４６に記載の方法。
  48. 前記ＣＮＳ機能は、辺縁系関連機能、嗅覚系関連機能、感覚系関連機能、視覚系関連機能又はこれらの組み合わせを含む、請求項４５乃至４７のいずれか１項に記載の方法。
  49. 前記ＣＮＳ機能の異常は、非正常的な神経回路と関連している、請求項４５乃至４８のいずれか１項に記載の方法。
  50. 前記ＣＮＳ機能の異常は、ＣＮＳ関連疾患又は障害と関連している、請求項４５乃至４９のいずれか１項に記載の方法。
  51. 前記ＣＮＳ関連疾患又は障害は、気分障害、精神障害又はこれらの全てを含む、請求項５０に記載の方法。
  52. 前記ＣＮＳ関連疾患又は障害は、不安、うつ病、外傷後ストレス障害（ＰＴＳＤ）、双極性障害、注意欠陥／多動性障害（ＡＤＨＤ）、自閉症、精神分裂病、神経障害性疼痛、緑内障、中毒症、くも膜嚢胞、強硬症、脳炎、てんかん／発作、固定症侯群、髄膜炎、片頭痛、多発性硬化症、骨髓病症、アルツハイマー病、ハンチントン病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、バッテン病、トゥレット症候群、外傷性脳損傷、脳脊髓損傷、脳卒中、振戦（本態性又はパーキンソン病性）、筋緊張異常、知的障害、脳腫瘍又はこれらの組み合わせを含む、請求項５０又は５１に記載の方法。
  53. 前記ＣＮＳ関連疾患又は障害は、不安、うつ病、ＰＴＳＤ又はこれらの組み合わせである、請求項５２に記載の方法。
  54. 前記ＣＮＳ関連疾患又は障害は、緑内障、神経障害性疼痛又はこれらの全てである、請求項５２に記載の方法。
  55. 前記中枢神経系機能の異常は、基準（例えば、中枢神経系機能の異常がない対象、例えば、健康な対象の該当の値）に比べて、前記サンプルでのＦＡＭ１９Ａ１タンパク質水準及び／又はＦＡＭ１９Ａ１ ｍＲＮＡ水準の増加と関連している、請求項４５乃至５４のいずれか１項に記載の方法。
  56. 前記ＦＡＭ１９Ａ１タンパク質水準及び／又はＦＡＭ１９Ａ１ ｍＲＮＡ水準は、前記基準に比べて少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％又は少なくとも約９０％以上増加する、請求項５５に記載の方法。
  57. 前記中枢神経系機能の異常は、基準（例えば、中枢神経系機能の異常がない対象、例えば、健康な対象の該当の値）に比べて、前記サンプルでのＦＡＭ１９Ａ１タンパク質水準及び／又はＦＡＭ１９Ａ１ ｍＲＮＡ水準の減少と関連している、請求項４５乃至５４のいずれか１項に記載の方法。
  58. 前記ＦＡＭ１９Ａ１タンパク質水準及び／又はＦＡＭ１９Ａ１ ｍＲＮＡ水準は、前記基準に比べて少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％又は少なくとも約９０％以上減少する、請求項５７に記載の方法。
  59. 前記ＦＡＭ１９Ａ１タンパク質水準は、免疫組織化学、ウエスタンブロット、放射免疫分析、酵素結合免疫吸着分析（ＥＬＩＳＡ）、放射免疫拡散、免疫沈降分析、オクタロニー免疫拡散法、ロケット免疫電気泳動、組織免疫染色法、補体固定分析、ＦＡＣＳ、タンパク質チップ又はこれらの組み合わせによって測定される、請求項４５乃至５８のいずれか１項に記載の方法。
  60. 前記ＦＡＭ１９Ａ１ ｍＲＮＡ水準は、逆転写ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ－ＰＣＲ）、リアルタイムポリメラーゼ連鎖反応、ノーザンブロット又はこれらの組み合わせによって測定される、請求項４５乃至５８のいずれか１項に記載の方法。
  61. 前記サンプルは、組織、細胞、血液、血清、血漿、唾液、小便、脳脊髄液（ＣＳＦ）又はこれらの組み合わせを含む、請求項４５乃至６０のいずれか１項に記載の方法。
  62. 前記ＦＡＭ１９Ａ１タンパク質水準及び／又はＦＡＭ１９Ａ１ ｍＲＮＡ水準は、基準に比べて増加するとき、ＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤を前記対象に投与することをさらに含む、請求項４５乃至５６及び請求項５９乃至６１のいずれか１項に記載の方法。
  63. 前記ＦＡＭ１９Ａ１タンパク質水準及び／又はＦＡＭ１９Ａ１ ｍＲＮＡ水準は、基準に比べて減少するとき、ＦＡＭ１９Ａ１に対する作用剤（「ＦＡＭ１９Ａ１作用剤」）を投与することをさらに含む、請求項４５乃至５４及び請求項５７乃至６１のいずれか１項に記載の方法。
  64. 前記ＦＡＭ１９Ａ１作用剤はＦＡＭ１９Ａ１タンパク質である、請求項６３に記載の方法。
  65. 前記ＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤は、ＦＡＭ１９Ａ１を特異的に標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｄｓＲＮＡ、アプタマー、ＰＮＡ、又はこれを含むベクターである、請求項１乃至６４のいずれか１項に記載の用途のＦＡＭ１９Ａ５拮抗剤。
  66. 前記ＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤は、抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体、前記抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体をコーディングするポリヌクレオチド、そのポリヌクレオチドを含むベクター、そのポリヌクレオチドを含む細胞又はこれらの任意の組み合わせである、請求項１乃至６４のいずれか１項に記載の用途のＦＡＭ１９Ａ５拮抗剤。
  67. 前記ＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤は抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体である、請求項６６に記載の用途のＦＡＭ１９Ａ５拮抗剤又は方法。
  68. 前記対象は男性である、請求項２乃至６７のいずれか１項に記載の用途のＦＡＭ１９Ａ５拮抗剤又は方法。
  69. （ａ）ＥＬＩＳＡによって測定したとき、ＫＤが１０ｎＭ以下である可溶性ヒトＦＡＭ１９Ａ１に結合する特性、
    （ｂ）ＥＬＩＳＡによって測定したとき、ＫＤが１０ｎＭである膜結合ヒトＦＡＭ１９Ａ１に結合する特性又は
    （ｃ）（ａ）及び（ｂ）の全てから選ばれる特性を示す抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体又はその抗原結合断片（「抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体」）。
  70. ヒトＦＡＭ１９Ａ１エピトープに結合するために重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３、及び軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含む基準抗体と交差競争し、
    （ｉ）前記重鎖ＣＤＲ１は、配列番号１０に示したアミノ酸配列を含み、前記重鎖ＣＤＲ２は、配列番号１１に示したアミノ酸配列を含み、前記重鎖ＣＤＲ３は、配列番号１２に示したアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ１は、配列番号１３に示したアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ２は、配列番号１４に示したアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ３は、配列番号１５に示したアミノ酸配列を含んだり；
    （ｉｉ）前記重鎖ＣＤＲ１は、配列番号４に示したアミノ酸配列を含み、前記重鎖ＣＤＲ２は、配列番号５に示したアミノ酸配列を含み、前記重鎖ＣＤＲ３は、配列番号６に示したアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ１は、配列番号７に示したアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ２は、配列番号８に示したアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ３は、配列番号９に示したアミノ酸配列を含んだり；
    （ｉｉｉ）前記重鎖ＣＤＲ１は、配列番号１６に示したアミノ酸配列を含み、前記重鎖ＣＤＲ２は、配列番号１７に示したアミノ酸配列を含み、前記重鎖ＣＤＲ３は、配列番号１８に示したアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ１は、配列番号１９に示したアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ２は、配列番号２０に示したアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ３は、配列番号２１に示したアミノ酸配列を含んだり；又は
    （ｉｖ）前記重鎖ＣＤＲ１は、配列番号２２に示したアミノ酸配列を含み、前記重鎖ＣＤＲ２は、配列番号２３に示したアミノ酸配列を含み、前記重鎖ＣＤＲ３は、配列番号２４に示したアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ１は、配列番号２５に示したアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ２は、配列番号２６に示したアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ３は、配列番号２７に示したアミノ酸配列を含む、請求項６９に記載の抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体。
  71. 重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３、及び軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含む基準抗体と同一のＦＡＭ１９Ａ１エピトープに結合し、
    （ｉ）前記重鎖ＣＤＲ１は、配列番号１０に示したアミノ酸配列を含み、前記重鎖ＣＤＲ２は、配列番号１１に示したアミノ酸配列を含み、前記重鎖ＣＤＲ３は、配列番号１２に示したアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ１は、配列番号１３に示したアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ２は、配列番号１４に示したアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ３は、配列番号１５に示したアミノ酸配列を含んだり；
    （ｉｉ）前記重鎖ＣＤＲ１は、配列番号４に示したアミノ酸配列を含み、前記重鎖ＣＤＲ２は、配列番号５に示したアミノ酸配列を含み、前記重鎖ＣＤＲ３は、配列番号６に示したアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ１は、配列番号７に示したアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ２は、配列番号８に示したアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ３は、配列番号９に示したアミノ酸配列を含んだり；
    （ｉｉｉ）前記重鎖ＣＤＲ１は、配列番号１６に示したアミノ酸配列を含み、前記重鎖ＣＤＲ２は、配列番号１７に示したアミノ酸配列を含み、前記重鎖ＣＤＲ３は、配列番号１８に示したアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ１は、配列番号１９に示したアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ２は、配列番号２０に示したアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ３は、配列番号２１に示したアミノ酸配列を含んだり；又は
    （ｉｖ）前記重鎖ＣＤＲ１は、配列番号２２に示したアミノ酸配列を含み、前記重鎖ＣＤＲ２は、配列番号２３に示したアミノ酸配列を含み、前記重鎖ＣＤＲ３は、配列番号２４に示したアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ１は、配列番号２５に示したアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ２は、配列番号２６に示したアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ３は、配列番号２７に示したアミノ酸配列を含む、請求項６９又は７０に記載の抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体。
  72. Ｄ１１２、Ｍ１１７、Ａ１１９、Ｔ１２０、Ｎ１２２及びこれらの組み合わせからなる群から選ばれる少なくとも一つのエピトープに結合する、請求項６９乃至７１のいずれか１項に記載の抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体。
  73. 重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３、及び軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含み、前記重鎖ＣＤＲ３は、配列番号１２、６、１８又は２４に示したアミノ酸配列を含む、請求項６９乃至７２のいずれか１項に記載の抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体。
  74. 前記重鎖ＣＤＲ１は、配列番号１０、４、１６又は２２に示したアミノ酸配列を含む、請求項７３に記載の抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体。
  75. 前記重鎖ＣＤＲ２は、配列番号１１、５、１７又は２３に示したアミノ酸配列を含む、請求項７３又は７４に記載の抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体。
  76. 前記軽鎖ＣＤＲ１は、配列番号１３、７、１９又は２５に示したアミノ酸配列を含む、請求項７３乃至７５のいずれか１項に記載の抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体。
  77. 前記軽鎖ＣＤＲ２は、配列番号１４、８、２０又は２６に示したアミノ酸配列を含む、請求項７３乃至７６のいずれか１項に記載の抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体。
  78. 前記軽鎖ＣＤＲ３は、配列番号１５、９、２１又は２７に示したアミノ酸配列を含む、請求項７３乃至７７のいずれか１項に記載の抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体。
  79. 重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３、及び軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含み、
    （ｉ）前記重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３は、それぞれ配列番号１０－１２に示したアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３は、それぞれ配列番号１３－１５に示したアミノ酸配列を含んだり；
    （ｉｉ）前記重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３は、それぞれ配列番号４－６に示したアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３は、それぞれ配列番号７－９に示したアミノ酸配列を含んだり；
    （ｉｉｉ）前記重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３は、それぞれ配列番号１６－１８に示したアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３は、それぞれ配列番号１９－２１に示したアミノ酸配列を含んだり；又は
    （ｉｖ）前記重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３は、それぞれ配列番号２２－２４に示したアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３は、それぞれ配列番号２５－２７に示したアミノ酸配列を含む、請求項６９乃至７２のいずれか１項に記載の抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体。
  80. 配列番号３０、２８、３２又は３４に示したアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン及び／又は配列番号３１、２９、３３又は３５に示したアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む、請求項６９乃至７９のいずれか１項に記載の抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体。
  81. 配列番号３０に示したアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、及び配列番号３１に示したアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む、請求項８０に記載の抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体。
  82. 配列番号２８に示したアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、及び配列番号２９に示したアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む、請求項８０に記載の抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体。
  83. 配列番号３２に示したアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、及び配列番号３３に示したアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む、請求項８０に記載の抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体。
  84. 配列番号３４に示したアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、及び配列番号３５に示したアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む、請求項８０に記載の抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体。
  85. 重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域は、配列番号３０、２８、３２又は３４に示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％又は約１００％同一であるアミノ酸配列を含み／又は前記軽鎖可変領域は、配列番号３１、２９、３３又は３５に示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％又は約１００％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項６９乃至７２のいずれか１項に記載の抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体。
  86. キメラ抗体、ヒト抗体又はヒト化抗体である、請求項６９乃至７３のいずれか１項に記載の抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体。
  87. Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ又は単一鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）を含む、請求項６９乃至８６のいずれか１項に記載の抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体。
  88. ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、その変異体及びこれらの任意の組み合わせからなる群から選ばれる、請求項６９乃至８７のいずれか１項に記載の抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体。
  89. ＩｇＧ１抗体である、請求項８８に記載の抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体。
  90. Ｆｃ機能がない定常領域をさらに含む、請求項８８に記載の抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体。
  91. 製剤に連結されて免疫接合体を形成する、請求項６９乃至９０のいずれか１項に記載の抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体。
  92. 薬剤学的に許容される担体と共に剤形化される、請求項６９乃至９１のいずれか１項に記載の抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体。
  93. 前記ＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤は、請求項６９乃至９２のいずれか１項による抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体である、請求項１乃至６８のいずれか１項に記載の用途のＦＡＭ１９Ａ５拮抗剤又は方法。
  94. 前記ＦＡＭ１９Ａ１拮抗剤は、静脈内、経口、非経口、髄腔内、脳室内、肺、筋肉内、皮下、硝子体内又は脳室内に投与され得る、請求項１乃至６８及び９３のいずれか１項に記載の用途のＦＡＭ１９Ａ５拮抗剤又は方法。
  95. 前記対象はヒトである、請求項１乃至６８、９３及び９４のいずれか１項に記載の用途のＦＡＭ１９Ａ５拮抗剤又は方法。
  96. 請求項６９乃至９２のいずれか１項による抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体をコーディングするヌクレオチド配列を含む核酸。
  97. 請求項９６による核酸、及び前記核酸に作動可能に連結された一つ以上のプロモーターを含むベクター。
  98. 請求項９６による核酸又は請求項９７によるベクターを含む細胞。
  99. 請求項６９乃至９２のいずれか１項による抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体及び担体を含む組成物。
  100. 請求項６９乃至９２のいずれか１項による抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体及び使用説明書を含むキット。
  101. 抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体を生産する方法として、請求項９８による細胞を適切な条件で培養し、前記抗－ＦＡＭ１９Ａ１抗体を分離することを含む方法。
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