JP2023514224A - 自己免疫障害における抗ｂｃｍａ治療 - Google Patents

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Abstract

本発明は、自己反応性Ｂ細胞系譜細胞により引き起こされる自己免疫障害などの自己免疫障害、例えば抗好中球細胞質抗体(ＡＮＣＡ)関連脈管炎(ＡＡＶ)の処置または管理に関する。

Description

本出願は、２０２０年２月１２日出願の米国仮出願６２／９７５,６６３に基づく優先権を主張し、その全体を引用により本明細書に包含させる。
配列表
本出願は、ASCIIテキスト形式のコンピュータで読み込み可能な形式(ＣＲＦ)の配列表を、引用によりその全体として含む。配列表テキストファイルは「14247-482-228_SEQ_LISTING」なる名称であり、２０２１年２月１１日に作成し、１０６,９９５バイトサイズである。
発明の分野
本発明は、自己反応性Ｂ細胞系譜細胞により引き起こされる自己免疫障害などの自己免疫障害、例えば抗好中球細胞質抗体(ＡＮＣＡ)関連脈管炎(ＡＡＶ)の処置または管理に関する。
背景
自己免疫障害は、対象の免疫系が対象自身の体の健常組織または臓器を攻撃するときに生ずる。ある場合、これらの障害は、Ｂ細胞系譜細胞(「自己反応性Ｂ細胞系譜細胞」)、例えば記憶Ｂ細胞、形質芽球および／または形質細胞による対象自身の組織(「自己抗原」)の抗原の異常認識に起因し得る。ある場合、自己反応性形質芽球および形質細胞は、自己抗原を認識するおよび／または自己抗原を発現する健常組織または臓器を攻撃する自己反応性抗体(「自己抗体」)を産生し得る。全身性エリテマトーデス(ＳＬＥ)は典型的な自己免疫障害として記載されている(Fava, A. and Petri, M. (2019). Systemic lupus erythematosus: Diagnosis and clinical management. Journal of autoimmunity, 96, 1-13)。
抗好中球細胞質抗体(ＡＮＣＡ)関連脈管炎(ＡＡＶ)は、罹病率および死亡率が相当である自己反応性Ｂ細胞系譜細胞により引き起こされる重篤な自己免疫障害である。ＡＡＶ患者は、種々の長さの疾患活動期と寛解期の間を循環する。現在ＡＡＶの治癒はなく、患者の５０％が疾患活動期中に死亡するかまたは重篤な合併症に苦しむ。ＡＡＶは、ＡＮＣＡ自己抗体により介在される小サイズ～中サイズ血管の破壊的炎症により特徴づけられる。
自己免疫障害の既存の処置は、寛解の誘導または維持に必ずしも有効ではないおよび／または望ましくない副作用を有し得る。それ故に、自己免疫障害の処置または管理のためのさらなる治療の必要がある。
概要
本発明は、ＢＣＭＡおよびＴ細胞の活性化を促進する１以上の抗原(例えばＣＤ３)に結合する多特異的(例えば二重特異的)抗体を使用して、自己免疫障害を有する対象を処置または管理する方法に関する。
ある態様において、本発明は、自己免疫障害を処置または管理する方法であって、このような処置または管理を必要とする対象(例えばヒト)に多特異的(例えば二重特異的)抗体を投与することを含み、ここで、多特異的抗体がＢＣＭＡおよびＴ細胞の活性化を促進する１以上の抗原(例えばＣＤ３)に結合するものである、方法を提供する。
他の態様において、本発明は、対象(例えばヒト)における自己免疫障害の処置または管理に使用するための、ＢＣＭＡおよびＴ細胞の活性化を促進する１以上の抗原(例えばＣＤ３)に結合する多特異的(例えば二重特異的)抗体を提供する。
好ましい実施態様において、自己免疫障害はＢ細胞系譜細胞(例えば自己反応性Ｂ細胞系譜細胞)により引き起こされる。好ましい実施態様において、Ｂ細胞系譜細胞、例えば自己反応性Ｂ細胞系譜細胞は、記憶Ｂ細胞、形質芽球および／または形質細胞である。
ある実施態様において、自己免疫障害は、全身性エリテマトーデス、ＩｇＡ腎症、ＩｇＧ４関連疾患、膜性腎症、重症筋無力症、視神経脊髄炎、尋常性天疱瘡、抗ＰＡＤ４活性化関節リウマチ、固形臓器移植における感作／既存抗体、ギランバレー症候群(急性炎症性脱髄性多発性神経炎－ＡＩＤＰ)、慢性炎症性脱髄性多発性神経炎(ＣＩＤＰ)、免疫性血小板減少性紫斑病、関節リウマチおよびＡＮＣＡ関連脈管炎(ＡＡＶ)から選択される。好ましい実施態様において、自己免疫障害はＩｇＧ４関連疾患ではない。好ましくは、自己免疫障害はＡＮＣＡ関連脈管炎(ＡＡＶ)、全身性エリテマトーデス(ＳＬＥ)および／または関節リウマチである。好ましい実施態様において、自己免疫障害はＡＮＣＡ関連脈管炎(ＡＡＶ)および／または関節リウマチである。
ある実施態様において、自己免疫障害は新たに診断される(例えば新たに診断されたＡＡＶ、ＳＬＥまたは関節リウマチ)。ある実施態様において、自己免疫障害は再発性または難治性である(例えば再発性または難治性ＡＡＶ、ＳＬＥまたは関節リウマチ)。
ある実施態様において、ＡＡＶは、多発血管炎性肉芽腫症(ＧＰＡ)、好酸球性多発血管炎性肉芽腫症(ＥＧＰＡ)、顕微鏡的多発血管炎(ＭＰＡ)および腎限局型ＡＮＣＡ関連脈管炎からなる群から選択される疾患を含む。ある実施態様において、ＡＡＶは多発血管炎性肉芽腫症(ウェゲナー肉芽腫症)、好酸球性多発血管炎性肉芽腫症、顕微鏡的多発血管炎または腎限局型ＡＮＣＡ関連脈管炎である。
ある実施態様において、ＡＡＶは、神経系、眼、鼻、心臓、腎臓、胃、腸、肺、関節、筋肉および皮膚から選択される患者の体の１か所以上に影響する。ある実施態様において、ＡＡＶは命を脅かすまたは主要臓器を脅かす所見の存在により一般化され、所望によりここで患者は汎発性肺胞出血(ＤＡＨ)を有する。他の実施態様において、ＡＡＶは、臓器を脅かす所見なく局在化する。
ある実施態様において、患者は形質芽球減少を必要とする。ある実施態様において、患者は寛解の誘導を必要とする。ある実施態様において、患者は寛解の維持を必要とする。ある実施態様において、方法は、無処置または対照処置と比較して、患者の形質芽球の少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、少なくとも９５％または１００％の減少をもたらす。
ある実施態様において、患者は寛解の誘導を必要とする。ある実施態様において、方法は寛解の誘導に使用され、所望によりここで方法は、対照処置と比較して、患者における少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、少なくとも９５％または１００％早い寛解の誘導をもたらす。他の実施態様において、患者は寛解の維持を必要とする。ある実施態様において、方法は寛解の維持に使用され、所望によりここで方法は、対照処置と比較して、患者における少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、少なくとも９５％または１００％長い寛解の維持をもたらす。
ある実施態様において、患者はサイトカイン放出症候群を発症するリスクにある。ある実施態様において、方法は、対照処置と比較して、患者におけるサイトカイン放出症候群の発生率の少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、少なくとも９５％または１００％の低減をもたらす。
ある実施態様において、患者は感染を発症するリスクにある。ある実施態様において、方法は、対照処置と比較して、患者における感染の発生率の少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、少なくとも９５％または１００％の低減をもたらす。
ある実施態様において、対照処置はステロイド(例えばグルココルチコイド)、シクロホスファミド、抗ＣＤ２０モノクローナル抗体(例えばリツキシマブ)、メトトレキサート、アザチオプリン、ミコフェノール酸、ミコフェノール酸モフェチル、アバコパン、抗ＴＮＦ剤(例えばインフリキシマブ、アダリムマブ、ゴリムマブ、エタネルセプト)、抗ＩＬ６Ｒ抗体(例えばトシリズマブ、サリルマブ)、共刺激遮断(例えばアバタセプト)、ＪＡＫ阻害剤(例えばトファシチニブ、バリシチニブ)および／またはベリムマブでの処置であり、好ましくはここで対照処置はステロイド、シクロホスファミドまたはリツキシマブでの処置である。
ある実施態様において、多特異的(例えば二重特異的)抗体は、次の群から選択されるＣＤＲ１Ｈ、ＣＤＲ２Ｈ、ＣＤＲ３Ｈ、ＣＤＲ１Ｌ、ＣＤＲ２ＬおよびＣＤＲ３Ｌ領域組み合わせを含む、抗ＢＣＭＡ抗体またはその抗原結合フラグメントを含む：
ａ)配列番号２１のＣＤＲ１Ｈ領域、配列番号２２のＣＤＲ２Ｈ領域、配列番号１７のＣＤＲ３Ｈ領域、配列番号２３のＣＤＲ１Ｌ領域、配列番号２４のＣＤＲ２Ｌ領域および配列番号２０のＣＤＲ３Ｌ領域；
ｂ)配列番号２１のＣＤＲ１Ｈ領域、配列番号２２のＣＤＲ２Ｈ領域、配列番号１７のＣＤＲ３Ｈ領域、配列番号２５のＣＤＲ１Ｌ領域、配列番号２６のＣＤＲ２Ｌ領域および配列番号２０のＣＤＲ３Ｌ領域；
ｃ)配列番号２１のＣＤＲ１Ｈ領域、配列番号２２のＣＤＲ２Ｈ領域、配列番号１７のＣＤＲ３Ｈ領域、配列番号２７のＣＤＲ１Ｌ領域、配列番号２８のＣＤＲ２Ｌ領域および配列番号２０のＣＤＲ３Ｌ領域；
ｄ)配列番号２９のＣＤＲ１Ｈ領域、配列番号３０のＣＤＲ２Ｈ領域、配列番号１７のＣＤＲ３Ｈ領域、配列番号３１のＣＤＲ１Ｌ領域、配列番号３２のＣＤＲ２Ｌ領域および配列番号３３のＣＤＲ３Ｌ領域；
ｅ)配列番号３４のＣＤＲ１Ｈ領域、配列番号３５のＣＤＲ２Ｈ領域、配列番号１７のＣＤＲ３Ｈ領域、配列番号３１のＣＤＲ１Ｌ領域、配列番号３２のＣＤＲ２Ｌ領域および配列番号３３のＣＤＲ３Ｌ領域；
ｆ)配列番号３６のＣＤＲ１Ｈ領域、配列番号３７のＣＤＲ２Ｈ領域、配列番号１７のＣＤＲ３Ｈ領域、配列番号３１のＣＤＲ１Ｌ領域、配列番号３２のＣＤＲ２Ｌ領域および配列番号３３のＣＤＲ３Ｌ領域；および
ｇ)配列番号１５のＣＤＲ１Ｈ領域、配列番号１６のＣＤＲ２Ｈ領域、配列番号１７のＣＤＲ３Ｈ領域、配列番号１８のＣＤＲ１Ｌ領域、配列番号１９のＣＤＲ２Ｌ領域および配列番号２０のＣＤＲ３Ｌ領域。
特に好ましい実施態様において、抗ＢＣＭＡ抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号２１のＣＤＲ１Ｈ領域、配列番号２２のＣＤＲ２Ｈ領域、配列番号１７のＣＤＲ３Ｈ領域、配列番号２７のＣＤＲ１Ｌ領域、配列番号２８のＣＤＲ２Ｌ領域および配列番号２０のＣＤＲ３Ｌ領域を含む。
ある実施態様において、抗ＢＣＭＡ抗体またはその抗原結合フラグメントは、次のものからなる群から選択される、ＶＨおよびＶＬを含む：
ａ)配列番号１０のＶＨ領域および配列番号１２のＶＬ領域、
ｂ)配列番号１０のＶＨ領域および配列番号１３のＶＬ領域、
ｃ)配列番号１０のＶＨ領域および配列番号１４のＶＬ領域、
ｄ)配列番号３８のＶＨ領域および配列番号１２のＶＬ領域、
ｅ)配列番号３９のＶＨ領域および配列番号１２のＶＬ領域、
ｆ)配列番号４０のＶＨ領域および配列番号１２のＶＬ領域または
ｇ)配列番号９のＶＨ領域および配列番号１１のＶＬ領域。
ある実施態様において、抗ＢＣＭＡ抗体またはその抗原結合フラグメントは、
ａ)配列番号１０のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一、少なくとも９５％同一、少なくとも９９％同一または同一であるアミノ酸配列を含む可変領域ＶＨおよび配列番号１４のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一、少なくとも９５％同一、少なくとも９９％同一または同一であるアミノ酸配列を含む可変領域ＶＬ；
ｂ)配列番号１０のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一、少なくとも９５％同一、少なくとも９９％同一または同一であるアミノ酸配列を含む可変領域ＶＨおよび配列番号１３のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一、少なくとも９５％同一、少なくとも９９％同一または同一であるアミノ酸配列を含む可変領域ＶＬ；または
ｃ)配列番号９のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一、少なくとも９５％同一、少なくとも９９％同一または同一であるアミノ酸配列を含む可変領域ＶＨおよび配列番号１１のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一、少なくとも９５％同一、少なくとも９９％同一または同一であるアミノ酸配列を含む可変領域ＶＬ
を含む。
特に好ましい実施態様において、抗ＢＣＭＡ抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１０のＶＨ領域および配列番号１４のＶＬ領域を含む。
ある実施態様において、Ｔ細胞の活性化を促進する１以上の抗原は、ＣＤ３、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲζ、ＩＣＯＳ、ＣＤ２８、ＣＤ２７、ＨＶＥＭ、ＬＩＧＨＴ、ＣＤ４０、４－１ＢＢ、ＯＸ４０、ＤＲ３、ＧＩＴＲ、ＣＤ３０、ＴＩＭ１、ＳＬＡＭ、ＣＤ２またはＣＤ２２６からなる群から選択される。好ましい実施態様において、Ｔ細胞の活性化を促進する１以上の抗原はＣＤ３である。
好ましい実施態様において、多特異的(例えば二重特異的)抗体は、それぞれ重鎖ＣＤＲ１Ｈ、ＣＤＲ２ＨおよびＣＤＲ３Ｈとして配列番号１、２および３の重鎖ＣＤＲを含む可変ドメインＶＨおよびそれぞれ軽鎖ＣＤＲ１Ｌ、ＣＤＲ２ＬおよびＣＤＲ３Ｌとして配列番号４、５および６の軽鎖ＣＤＲを含む可変ドメインＶＬを含む、抗ＣＤ３抗体またはその抗原結合フラグメントを含む。ある実施態様において、抗ＣＤ３抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号７のＶＨ領域および配列番号８のＶＬ領域を含む。
ある実施態様において、多特異的(例えば二重特異的)抗体は、配列番号７のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一、少なくとも９５％同一、少なくとも９９％同一または同一であるアミノ酸配列を含む可変領域ＶＨおよび配列番号８のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一、少なくとも９５％同一、少なくとも９９％同一または同一であるアミノ酸配列を含む可変領域ＶＬを含む、抗ＣＤ３抗体またはその抗原結合フラグメントを含む。
特に好ましい実施態様において、多特異的(例えば二重特異的)抗体は、配列番号１０のＶＨ領域および配列番号１４のＶＬ領域を含む抗ＢＣＭＡ抗体またはその抗原結合フラグメントならびに配列番号７のＶＨ領域および配列番号８のＶＬ領域を含む抗ＣＤ３抗体またはその抗原結合フラグメントを含む。
ある実施態様において、多特異的抗体は二重特異的抗体である。好ましい実施態様において、多特異的抗体はＢＣＭＡおよびＣＤ３に結合する二重特異的抗体である。ある実施態様において、二重特異的抗体は二価(例えば１＋１形式)である。ある実施態様において、二価二重特異的抗体は、形式：ＣＤ３ Ｆａｂ－ＢＣＭＡ Ｆａｂ(すなわちＦｃが存在しないとき)を有する。あるいは、二価二重特異的抗体は、形式：Ｆｃ－ＣＤ３ Ｆａｂ－ＢＣＭＡ Ｆａｂ；Ｆｃ－ＢＣＭＡ Ｆａｂ－ＣＤ３ Ｆａｂ；またはＢＣＭＡ Ｆａｂ－Ｆｃ－ＣＤ３ Ｆａｂ(すなわちＦｃが存在するとき)を有し得る。好ましい実施態様において、二価二重特異的抗体は形式ＢＣＭＡ Ｆａｂ－Ｆｃ－ＣＤ３ Ｆａｂを有する。ある実施態様において、二重特異的抗体は三価(例えば２＋１形式)である。好ましい実施態様において、二重特異的抗体は三価であり、抗ＢＣＭＡ抗体の２個のＦａｂフラグメント、抗ＣＤ３抗体の１個のＦａｂフラグメントおよび１個のＦｃ部分を含む。ある実施態様において、三価二重特異的抗体は、形式：ＣＤ３ Ｆａｂ－ＢＣＭＡ Ｆａｂ－ＢＣＭＡ Ｆａｂ；またはＢＣＭＡ Ｆａｂ－ＣＤ３ Ｆａｂ－ＢＣＭＡ Ｆａｂ(すなわちＦｃが存在しないとき)を有する。あるいは、三価二重特異的抗体は、形式：ＢＣＭＡ Ｆａｂ－Ｆｃ－ＣＤ３ Ｆａｂ－ＢＣＭＡ Ｆａｂ；ＢＣＭＡ Ｆａｂ－Ｆｃ－ＢＣＭＡ Ｆａｂ－ＣＤ３ Ｆａｂ；またはＣＤ３ Ｆａｂ－Ｆｃ－ＢＣＭＡ Ｆａｂ－ＢＣＭＡ Ｆａｂ(すなわちＦｃが存在するとき)を有し得る。好ましい実施態様において、三価二重特異的抗体は形式ＢＣＭＡ Ｆａｂ－Ｆｃ－ＣＤ３ Ｆａｂ－ＢＣＭＡ Ｆａｂを有する。
ある実施態様において、抗ＣＤ３ Ｆａｂは軽鎖および重鎖を含み、ここで、軽鎖は可変ドメインＶＨおよび定常ドメインＣＬを含むクロスオーバー軽鎖であり、重鎖は可変ドメインＶＬおよび定常ドメインＣＨ１を含むクロスオーバー重鎖である。
ある実施態様において、抗ＢＣＭＡ ＦａｂフラグメントのＣＨ１ドメインは、アミノ酸修飾Ｋ１４７Ｅ／ＤおよびＫ２１３Ｅ／Ｄ(ＥＵナンバリングによる番号付け)およびアミノ酸修飾Ｅ１２３Ｋ／Ｒ／ＨおよびＱ１２４Ｋ／Ｒ／Ｈ(Kabatによる番号付け)を有するＣＬドメインを含む対応する免疫グロブリン軽鎖を含む。
別の実施態様において、抗ＢＣＭＡ ＦａｂフラグメントのＣＨ１ドメインは、アミノ酸修飾Ａ１４１Ｗ、Ｌ１４５Ｅ、Ｋ１４７ＴおよびＱ１７５Ｅ(ＥＵナンバリングによる番号付け)またはその保存的置換およびアミノ酸修飾Ｆ１１６Ａ、Ｑ１２４Ｒ、Ｌ１３５ＶおよびＴ１７８Ｒ(Kabatによる番号付け)またはその保存的置換を有するＣＬドメインを含む対応する免疫グロブリン軽鎖を含む。
ある実施態様において、多特異的(例えば二重特異的)抗体はさらにＦｃを含む。ある実施態様において、ＦｃはＩｇＧ１ Ｆｃである。ある実施態様において、(例えばＩｇＧ１)Ｆｃは第一定常ドメインＣＨ２およびＣＨ３を含む第一Ｆｃ鎖および第二定常ドメインＣＨ２およびＣＨ３を含む第二Ｆｃ鎖を含み、ここで：
ａ)第一ＣＨ３ドメインは修飾Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８ＡおよびＹ４０７Ｖまたはその保存的置換(ＥＵナンバリングによる番号付け)を含む；および
ｂ)第二ＣＨ３ドメインは修飾Ｔ３６６Ｗまたはその保存的置換(ＥＵナンバリングによる番号付け)を含む。
別の実施態様において、(例えばＩｇＧ１)Ｆｃは第一定常ドメインＣＨ２およびＣＨ３を含む第一Ｆｃ鎖および第二定常ドメインＣＨ２およびＣＨ３を含む第二Ｆｃ鎖を含み、ここで：
ａ)第一ＣＨ３ドメインは修飾Ｔ３５０Ｖ、Ｌ３５１Ｙ、Ｆ４０５ＡおよびＹ４０７Ｖまたはその保存的置換(ＥＵナンバリングによる番号付け)を含む；および
ｂ)第二ＣＨ３ドメインは修飾Ｔ３５０Ｖ、Ｔ３６６Ｌ、Ｋ３９２ＬおよびＴ３９４Ｗまたはその保存的置換(ＥＵナンバリングによる番号付け)を含む。
ある実施態様において、(例えばＩｇＧ１)Ｆｃは：
ａ)修飾Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５ＡおよびＰ３２９Ｇ(ＥＵナンバリングによる番号付け)；および／または
ｂ)修飾Ｄ３５６ＥおよびＬ３５８Ｍ(ＥＵナンバリングによる番号付け)
を含む。
さらなる実施態様において、本発明の多特異的(例えば二重特異的)抗体は、次の配列番号を含む。
ｉ. ８３Ａ１０－ＴＣＢｃｖ：４５、４６、４７(×２)、４８
ii. ２１－ＴＣＢｃｖ：４９、５０、５１(×２)、４８
iii. ２２－ＴＣＢｃｖ：５２、５３、５４(×２)、４８
iv. ４２－ＴＣＢｃｖ：５５、５６、５７(×２)、４８
ｖ. Ｍａｂ１０１：５８、５９、６０(×２)、４８
vi. Ｍａｂ１０２：６１、６２、６３(×２)、４８
vii. Ｍａｂ１０３：６４、６５、６６(×２)、４８
好ましい実施態様において、本発明の二重特異的抗体は４２－ＴＣＢｃｖ、Ｍａｂ１０１またはＭａｂ１０２である。特に好ましい実施態様において、本発明の二重特異的抗体は４２－ＴＣＢｃｖである。
本発明の態様および実施態様は、添付する特許請求の範囲に提示される。本発明のこれらおよび他の態様および実施態様もここに記載される。
本発明を、添付する図面を引用してここでさらに詳細に説明する。当該図面は次のとおりである。
Ｔ細胞抗原(ＣＤ３が例示される)およびＢＣＭＡに結合するＦａｂフラグメントを形式Ｆａｂ ＢＣＭＡ－Ｆｃ－Ｆａｂ ＣＤ３で含む、本発明において使用するための種々の形式の二重特異的二価抗体を記載する。ＣＤ３ Ｆａｂは、軽鎖誤対合および副産物を減らすためのＶＨ－ＶＬクロスオーバーを含み得る。アミノ酸置換(「ＲＫ／ＥＥ」が例示される)を製造中の軽鎖誤対合／副産物を減らすためにＣＬ－ＣＨ１に導入し得る。ＣＤ３ ＦａｂおよびＢＣＭＡ Ｆａｂを可動性リンカーで互いに連結してよい。
次の形式：Ｆａｂ ＢＣＭＡ－Ｆｃ－Ｆａｂ ＣＤ３－Ｆａｂ ＢＣＭＡ(Ａ、Ｂ)；Ｆａｂ ＢＣＭＡ－Ｆｃ－Ｆａｂ ＢＣＭＡ－Ｆａｂ ＣＤ３(Ｃ、Ｄ)でＴ細胞抗原(ＣＤ３が例示される)およびＢＣＭＡに結合するＦａｂフラグメントを含む、本発明において使用するための種々の形式の二重特異的三価抗体を記載する。ＣＤ３ Ｆａｂは、軽鎖誤対合および副産物を減らすためのＶＨ－ＶＬクロスオーバーを含み得る。アミノ酸置換(「ＲＫ／ＥＥ」が例示される)を製造中の軽鎖誤対合／副産物を減らすためにＣＬ－ＣＨ１に導入し得る。ＣＤ３ ＦａｂおよびＢＣＭＡ Ｆａｂを可動性リンカーで互いに連結してよい。
次の形式：Ｆｃ－Ｆａｂ ＣＤ３－Ｆａｂ ＢＣＭＡ(Ａ、Ｂ)；Ｆｃ－Ｆａｂ ＢＣＭＡ－Ｆａｂ ＣＤ３(Ｃ、Ｄ)でＴ細胞抗原(ＣＤ３が例示される)およびＢＣＭＡに結合するＦａｂフラグメントを含む、本発明において使用するための二重特異的二価抗体のさらなる形式を示す。ＣＤ３ Ｆａｂは、軽鎖誤対合および副産物を減らすためのＶＨ－ＶＬクロスオーバーを含み得る。アミノ酸置換(「ＲＫ／ＥＥ」が例示される)を製造中の軽鎖誤対合／副産物を減らすためにＣＬ－ＣＨ１に導入し得る。ＣＤ３ ＦａｂおよびＢＣＭＡ Ｆａｂを可動性リンカーで互いに連結してよい。
フローサイトメトリーで評価した、ＢＣＭＡ発現癌細胞株(ＪＥＫＯ、ＲＰＭＩ－８２２６およびＨ９２９)と比較した４名の正常健常ボランティア(ＮＨＶ)からの形質芽球(ＰＢ)のＢＭＣＡ発現を示す(Ａ)。可溶性ＢＣＭＡレベルを、ＥＬＩＳＡにより評して、ＮＨＶ(‘正常’)、多発性骨髄腫(‘ＭＭ’)またはＡＮＣＡ関連脈管炎(‘ＡＡＶ’)患者からの血清または血漿サンプルで示す(Ｂ)。
ＪＥＫＯ細胞をＣＤ３＋Ｔ細胞と１：２標的：エフェクター(Ｔ：Ｅ)で培養し、抗ＢＣＭＡ抗ＣＤ３二重特異的抗体、すなわちＢＣＭＡ Ｔ細胞エンゲイジャー(ＣＣ－９３２６９、Ｍａｂ１０１またはＭａｂ１０２)で処理したときのＴ細胞介在性細胞死(Ａ)およびＴ細胞活性化(Ｂ)の用量－応答曲線を示す。ＪＥＫＯ細胞のＴ細胞介在性細胞致死をアネキシンＶ発現により評価した；２０時間時点を示す。Ｔ細胞の細胞系譜および活性化マーカーを２４時間時点でフローサイトメトリーにより分析した；ＣＤ８＋Ｔ細胞の％ＣＤ６９発現を示す。
ＲＰＭＩ－８２２６細胞を、種々の標的：エフェクター(Ｔ：Ｅ)比および種々の濃度のＣＣ－９３２６９でＮＨＶ ＰＢＭＣと共培養したときのＴ細胞介在性細胞致死(Ａ)およびＴ細胞活性化(Ｂ)の用量－応答曲線を示す。
健常ボランティアからの末梢血単核細胞(ＰＢＭＣ)を、種々の濃度のＢＣＭＡ Ｔ細胞エンゲイジャー、すなわちＢＣＭＡ ＴＣＥ(Ｍａｂ１０１、ＣＣ－９３２６９またはＭａｂ１０２)または対照２＋１抗体で２４時間処理したときの形質芽球死(Ａ)、Ｔ細胞活性化(Ｃ)およびサイトカイン産生(Ｄ)の用量－応答曲線を示す。代表的ＦＡＣＳプロットは、ＣＤ３(－) ＣＤ１９(＋)細胞上でゲーティングしてＣＤ２０(－) ＣＤ２７(＋)として形質芽球識別を示す(Ｂ)。形質芽球死は総ＣＤ１９(＋)細胞のパーセントとして評価する(Ａ)。ＣＤ８＋Ｔ細胞の％ＣＤ６９発現を示す(Ｃ)。
健常ボランティアからのＰＢＭＣを種々の濃度のＣＣ－９３２６９で２４時間処理したときのサイトカイン産生(ＩＦＮγ、ＩＬ－６、ＩＬ－２、ＩＬ－１０、グランザイムＢおよびパーフォリン)の用量－応答曲線を示す。
健常ボランティアからのＰＢＭＣを種々の濃度のＣＣ－９３２６９で２４時間処理したときのＢ細胞の細胞系譜を示す。ＣＤ２０(＋)ＣＤ２７(－)ＩｇＤ(＋)発現を有するナイーブＢ細胞(Ａ)、ＣＤ２０(＋)ＣＤ２７(＋)ＩｇＤ(＋)発現を有するスイッチされていない記憶Ｂ細胞(Ｂ)およびＣＤ２０(＋)ＣＤ２７(＋)ＩｇＤ(－)発現を有するスイッチされた記憶Ｂ細胞(Ｃ)を総ＣＤ１９(＋)細胞のパーセントとして示す。
培地に懸濁されたＰＢＭＣまたは骨髄(ＢＭ)上清に懸濁されたＰＢＭＣと比較した、骨髄(ＢＭ)単核細胞をＣＣ－９３２６９で２４時間処理したときの形質芽球死(Ａ)およびＴ細胞活性化(Ｂ)の用量－応答曲線を示す。形質芽球死は総ＣＤ１９(＋)細胞のパーセントとして評価する(Ａ)。ＣＤ８＋Ｔ細胞の％ＣＤ６９発現を示す(Ｂ)。
ＡＡＶ患者からのＰＢＭＣを種々の濃度のＢＣＭＡ ＴＣＥ(Ｍａｂ１０１、ＣＣ－９３２６９またはＭａｂ１０２)または対照２＋１抗体で２４時間処理したときの形質芽球死滅(Ａ)、Ｔ細胞活性化(Ｃ)およびサイトカイン産生(Ｄ)の用量－応答曲線を示す。代表的ＦＡＣＳプロットは、ＣＤ３(－) ＣＤ１９(＋)細胞上でゲーティングしてＣＤ２０(－) ＣＤ２７(＋)として形質芽球識別を示す(Ｂ)。形質芽球死は総ＣＤ１９(＋)細胞のパーセントとして評価する(Ａ)。ＣＤ８＋Ｔ細胞の％ＣＤ６９発現を示す(Ｃ)。
ＡＡＶ患者、ＡＡＶ１からのＰＢＭＣにおける、Ｔ細胞の細胞系譜(ＣＤ４、ＣＤ８)および活性化マーカー(ＣＤ６９、ＣＤ２５)の染色により評価して、ＢＣＭＡ ＴＣＥ(Ｍａｂ１０１[Ａ]、ＣＣ－９３２６９[Ｂ]またはＭａｂ１０２[Ｃ])と２４時間インキュベートしたときの、Ｔ細胞活性化を示す。ＣＤ４＋細胞またはＣＤ８＋細胞における％ＣＤ６９または％ＣＤ２５発現レベルを示す。
５カ月前最後にリツキシマブを受けたＡＡＶ患者、ＡＡＶ－５からのＰＢＭＣにおける、種々の濃度のＣＣ－９３２６９(Ｂ、Ｃ)または対照２＋１抗体(Ａ)とインキュベーション後の選択的形質芽球(ＰＢ)枯渇を示す。
ＡＡＶ－２対象におけるベースラインのＣＤ１９(＋) ＣＤ２０(－) ＣＤ２７(＋)形質芽球標的(Ａ)およびＣＤ４(＋)／ＣＤ８(＋)Ｔ細胞を示す(Ａ)。ＡＡＶ－２からのＰＢＭＣを種々の濃度のＢＣＭＡ ＴＣＥとインキュベートし、２４時間インキュベーション後、Ｔ細胞活性化をフローサイトメトリーにより評価した(Ｃ)。
ＪＥＫＯ－１細胞を種々のＴ：Ｅ比でＣＣ－９３２６９または対照２＋１抗体とインキュベートしたときのＴ細胞活性化の用量－応答曲線を示す。ＪＥＫＯ－１細胞を、それぞれ多発性骨髄腫(ＭＭ)またはＡＡＶで観察されるＴ：Ｅ比を模倣する１：１０または１：５００のＴ：Ｅ比でＰＢＭＣと培養した。２４時間インキュベーション後、細胞を洗浄し、次いでＣＤ８(＋)Ｔ細胞のＣＤ６９(Ａ)およびＣＤ２５(Ｂ)発現を評価した。
健常ボランティアからのＰＢＭＣを、種々の濃度のＢＣＭＡ ＴＣＥと２４時間インキュベートし、その後ＯＤＮ２００６(ＣｐＧ、１０μg／mL)で刺激するかまたは増殖因子ＩＬ－２(２０Ｕ／ml)、ＢＡＦＦ(２００ng／ml)およびＩＬ－２１(１００ng／ml)と４～７日間培養したときの形質芽球レベル(Ａ)および総ＩｇＧ分泌(Ｂ)を示す。
関節リウマチ(ＲＡ)からのＰＢＭＣを種々の濃度のＣＣ－９３２６９または対照２＋１抗体で２４時間処理したときの形質芽球死(Ａ)、Ｔ細胞活性化(Ｂ)およびサイトカイン産生(Ｃ)の用量－応答曲線を示す。
ＲＡからのＰＢＭＣの種々の濃度のＣＣ－９３２６９と２４時間インキュベーション後のＢ細胞の細胞系譜を示す。ＣＤ２０(＋)ＣＤ２７(－)ＩｇＤ(＋)発現を有するナイーブＢ細胞(Ａ)、ＣＤ２０(＋)ＣＤ２７(＋)ＩｇＤ(＋)発現を有するスイッチされていない記憶Ｂ細胞(Ｂ)およびＣＤ２０(＋)ＣＤ２７(＋)ＩｇＤ(－)発現を有するスイッチされた記憶Ｂ細胞(Ｃ)を総ＣＤ１９(＋)細胞のパーセントとして示す。
カニクイザルからのＰＢＭＣにおける、種々の濃度のＣＣ－９３２６９または対照２＋１抗体とインキュベーション後の選択的ＩＲＦ４＋形質芽球(ＰＢ)枯渇(Ａ)と最小ＣＤ２０(＋)Ｂ細胞枯渇(Ｂ)および活性化ＣＤ６９(＋)ＣＤ８(＋)Ｔ細胞の頻度の最小上昇(Ｃ)を示す。
全身性エリテマトーデス(ＳＬＥ)患者からのＰＢＭＣ(ｎ＝５)を種々の濃度のＣＣ－９３２６９で２４時間処理したときの形質芽球死(Ａ)およびＴ細胞活性化(Ｂ)の用量－応答曲線を示す。
正常健常ボランティアからのＰＢＭＣをＣＣ－９３２６９で２４時間処理したときの形質芽球死(Ａ)およびＴ細胞活性化(Ｂ)における外因性可溶性ＢＣＭＡ(ｓＢＣＭＡ)の影響を示す。
正常健常ボランティア(ｎ＝４)またはＡＡＶ患者(ｎ＝２)からの全血サンプルを種々の濃度のＣＣ－９３２６９で２４時間処理したときのＴ細胞活性化(Ａ)およびサイトカイン産生(Ｂ)の用量－応答曲線を示す。
実施例１８.３.３に特定する条件で保存後の２２－ＴＣＢｃｖ分子の代表的ＳＥＣクロマトグラム重ね合わせを示す。
二重特異的抗体Ｍａｂ１０１、Ｍａｂ１０２、８３Ａ１０－ＴＣＢｃｖおよび２２－ＴＣＢｃｖの熱的変性を示す。全二重特異的抗体は類似の熱的変性開始温度を示した(約６０℃)。しかしながら、最大遷移についてのＴｍａｐｐ値は、共通ＣＤＲ領域を含むＭａｂ１０１および８３Ａ１０－ＴＣＢｃｖ分子で約５℃高かった。
二重特異的抗体Ｍａｂ１０１、Ｍａｂ１０２、８３Ａ１０－ＴＣＢｃｖおよび２２－ＴＣＢｃｖのコロイド安定性評価を示す。評価をＰＥＧ ６０００沈殿により実施し、ｐＨ６緩衝液で実施した。８３Ａ１０のＣＤＲ領域を含む分子(すなわちＭａｂ１０１および８３Ａ１０－ＴＣＢｃｖ)は、排除体積効果により天然状態沈殿を誘導するのに、およそ２倍多くのＰＥＧ ６０００を必要とした。実線は、方程式１に一致する。
二重特異的抗体８３Ａ１０－ＴＣＢｃｖの代表的単サイクル動態ＳＰＲセンサーグラムを示す。抗体をｐＨ６で緩衝化し、２週間、２～８℃に保存した(Ａ)またはｐＨ８に緩衝化し、２週間、４０℃で保存した(Ｂ)。破線は非ストレスサンプルの保存前の１０の独立した測定値の平均を表し、点線はこの平均の３標準偏差(ＳＤ)を示す。パーセント類似性スコアを、方程式２のＳＤウィンドウ内に入るストレスサンプルのデータ点数を使用して、計算した。
二重特異的抗体Ｍａｂ１０１、Ｍａｂ１０２、８３Ａ１０－ＴＣＢｃｖおよび２２－ＴＣＢｃｖの配列アラインメントを示す。ＣＤＲ領域は影を付け、パーセント配列同一性を上に示す。
詳細な記載
ここで使用する単数表現は、その対象が１または１を超えること(例えば少なくとも１)を意味し得る。
「約」は、一般に測定の性質または正確さを考慮した、測定される量の許容される誤差の程度を意味する。誤差の程度の例は、ある数値または数値範囲の２０パーセント(％)以内、典型的に、１０％以内、より一般には５％以内である。
１以上の特性を「含む」としてここに記載される実施態様は、このような特性「からなる」および／または「から本質的になる」対応する実施態様の開示するものとしても見なされ得る。
濃度、量、体積、パーセンテージおよび他の数値は、範囲の形式でここに示され得る。このような範囲の形式は、単に便宜のためにおよび簡潔にするために使用され、範囲の限度として明記されている数値を含むだけでなく、その範囲に含まれる個々の数値または含まれる範囲を、各数値および範囲が明示的に記載されているかのように含むことを、柔軟に解釈すべきことを理解すべきである。
治療方法
本発明は、少なくとも一部、自己免疫障害を有する対象の、Ｔ細胞の活性化を促進する１以上の抗原(例えばＣＤ３)およびＢＣＭＡに結合する多特異的(例えば二重特異的)抗体での処置または管理に基づくものである。
ある実施態様において、「対象」または「患者」はヒトである。ある実施態様において、「対象」または「患者」は１８歳未満である。ある実施態様において、「対象」または「患者」は１８歳以上である。ある実施態様において、対象は寛解の誘導を必要とする。ある実施態様において、対象は寛解の維持を必要とする。ある実施態様において、患者は形質芽球減少を必要とする。
ここで使用する用語「処置」または「処置する」などは、所望の薬理的および／または生理的効果を得ることをいう。好ましくは、効果は治療、すなわち、疾患および／または疾患に起因する不都合な症状を部分的にまたは完全に治癒する効果である。あるいは、薬理的および／または生理的効果は予防、すなわち、疾患またはその症状を部分的にまたは完全に予防する効果であり得る。
ここで使用する用語「管理」または「管理する」などは、疾患および／または疾患に起因する不都合な症状の進行および／または悪化の抑制および／または遅延をいう。
本発明は、Ｔ細胞の活性化を促進する１以上の抗原(例えばＣＤ３)およびＢＣＭＡに結合する多特異的(例えば二重特異的)抗体での自己免疫障害の処置または管理に関する。
ある実施態様において、本発明の多特異的(例えば二重特異的)抗体は、自己免疫障害を引き起こす細胞、例えば自己免疫障害を引き起こすＢＣＭＡ発現細胞に選択的に結合できる。
好ましい実施態様において、自己免疫障害はＢ細胞系譜細胞(例えばＢＣＭＡ発現Ｂ細胞系譜細胞)により引き起こされる。ある実施態様において、Ｂ細胞系譜細胞(例えばＢＣＭＡ発現Ｂ細胞系譜細胞)は自己反応性Ｂ細胞系譜細胞である。ある実施態様において、Ｂ細胞系譜細胞(例えばＢＣＭＡ発現Ｂ細胞系譜細胞)は、例えば抗原提示細胞として働くことによりまたは炎症促進性サイトカインの分泌により、自己免疫を駆動する。
ここで使用する用語「自己反応性Ｂ細胞系譜細胞」は、対象自身の組織上の抗原(「自己抗原」)を認識できるＢ細胞系譜細胞をいう。自己反応性Ｂ細胞系譜細胞は抗体分泌細胞であり得るおよび／または抗体を分泌できる。ある実施態様において、自己反応性Ｂ細胞系譜細胞は形質芽球、形質細胞、記憶Ｂ細胞またはこれらの何らかの組み合わせである。好ましい実施態様において、自己反応性Ｂ細胞系譜細胞は形質芽球、形質細胞および記憶Ｂ細胞である。特に好ましい実施態様において、自己反応性Ｂ細胞系譜細胞は形質芽球である。
ある実施態様において、本発明の多特異的(例えば二重特異的)抗体は、自己免疫障害を引き起こす自己反応性Ｂ
細胞系譜細胞に選択的に結合できる。好ましい実施態様において、自己反応性Ｂ細胞系譜細胞は、記憶Ｂ細胞、形質芽球および／または形質細胞などのＢＣＭＡ発現細胞である。
形質芽球は、形質細胞の前駆体である。それらは、ＣＤ１９(＋)、ＣＤ２０(－)、ＣＤ２７(＋)、ＣＤ３８(＋)、ＢＣＭＡ(＋)、ＩｇＤ(－)、ＣＤ２４(－)、ＳＬＡＭＦ７(＋)および／またはＣＤ１３８(－)からなる群から選択される１以上のマーカーの組み合わせにより同定され得る。ある実施態様において、形質芽球は、ＢＣＭＡ(＋)およびＳＬＡＭＦ７(＋)を示す細胞として同定され、所望によりここで細胞はマーカーＩｇＤ(－)、ＣＤ３８(＋)および／またはＣＤ１３８(－)の１以上も示す。ある実施態様において、形質芽球は、ＣＤ１９(＋) ＣＤ２０(－) ＣＤ２７(＋)ＢＣＭＡ(＋) ＳＬＡＭＦ７(＋) ＩｇＤ(－) ＣＤ３８(＋) ＣＤ１３８(－)を示す細胞として同定される。特に好ましい実施態様において、形質芽球は、マーカーＣＤ１９(＋) ＣＤ２０(－) ＣＤ２７(＋)を示す細胞として同定され、所望によりここで細胞はまたマーカーＢＣＭＡ(＋)および／またはＣＤ３８(＋)の１以上も示す。
形質細胞は抗体分泌細胞である。ここで使用する用語「形質細胞」は、短命および／または長命形質細胞であり得る。それらは、ＣＤ１９(＋)、ＣＤ２０(－)、ＣＤ２７(＋)、ＣＤ３８(＋)、ＢＣＭＡ(＋)、ＩｇＤ(－)、ＣＤ１３８(＋) ＣＤ２４(－)および／またはＳＬＡＭＦ７(＋)から選択される１以上のマーカーの組み合わせにより同定され得る。ある実施態様において、形質細胞は、マーカーＢＣＭＡ(＋) ＳＬＡＭＦ７(＋) ＣＤ１３８(＋)を示す細胞として同定され、所望によりここで細胞はまたマーカーＩｇＤ(－)および／またはＣＤ３８(＋)の１以上を示す。ある実施態様において、形質細胞は、ＣＤ１９(＋) ＣＤ２０(－) ＣＤ２７(＋)ＢＣＭＡ(＋) ＳＬＡＭＦ７(＋) ＩｇＤ(－) ＣＤ３８(＋) ＣＤ１３８(＋)を示す細胞として同定される。特に好ましい実施態様において、形質細胞は、マーカーＣＤ１９(＋) ＣＤ２０(－) ＣＤ２７(＋)を示す細胞として同定され、所望によりここで細胞はまたマーカーＢＣＭＡ(＋) ＣＤ３８(＋)および／またはＣＤ１３８(＋)の１以上も示す。
記憶Ｂ細胞は、濾胞外またはＧＣ反応において抗原およびＴ細胞ヘルパーにより活性化されるＢ細胞である。それらは、ＣＤ１９(＋)、ＣＤ２０(＋)、ＣＤ２７(＋)、ＣＤ３８(－)、ＢＣＭＡ(＋／－)、ＩｇＤ(－)および／またはＣＤ２４(＋)から選択される１以上のマーカーの組み合わせにより同定され得る。ある実施態様において、記憶Ｂ細胞は、マーカーＩｇＤ(－) ＣＤ３８(－)ＢＣＭＡ(＋／－)を示す細胞として同定される。ある実施態様において、記憶Ｂ細胞は、マーカーＣＤ１９(＋) ＣＤ２０(＋) ＣＤ２７(＋) ＩｇＤ(－) ＣＤ３８(－)ＢＣＭＡ(＋／－)を示す細胞として同定される。特に好ましい実施態様において、記憶Ｂ細胞は、マーカーＣＤ１９(＋) ＣＤ２０(＋) ＣＤ２７(＋)を示す細胞として同定され、所望によりここで細胞はまたＢＣＭＡ(＋)および／またはＣＤ３８(－)から選択されるマーカーの１以上も示す。
本発明者らは、本発明の多特異的(例えば二重特異的)抗体が自己免疫障害を有する患者の処置または管理に使用でき、ここで、患者からの血液サンプルの可溶性ＢＣＭＡは、多発性骨髄腫(ＭＭ)患者における可溶性ＢＣＭＡの量より少ないおよび／または可溶性ＢＣＭＡは正常健常患者における可溶性ＢＣＭＡの量と同等であることを特定している。患者からの血液サンプル(例えば単離血清または血漿)における可溶性ＢＣＭＡは、例えばAmpersand Biosciences(Lake Clear, NY)によるビーズベースの免疫アッセイを使用する、ＥＬＩＳＡにより測定され得る。
ある実施態様において、自己免疫障害を有する患者からの血液サンプルの可溶性ＢＣＭＡの量は、Ｂ細胞悪性腫瘍(例えばＢＣＭＡ発現癌)を有する患者における可溶性ＢＣＭＡの量より少ない。ある実施態様において、自己免疫障害を有する患者からの血液サンプルの可溶性ＢＣＭＡの量は、ＭＭ患者における可溶性ＢＣＭＡの量より少ない、好ましくはＭＭ患者における可溶性ＢＣＭＡの量より約１.５倍少ない、約２倍少ない、約２.５倍少ない、約３倍少ない、約３.５倍少ない、約４倍少ない、約４.５倍少ない、約５倍少ない、約５.５倍少ないまたは約６倍少ない。ある実施態様において、自己免疫障害を有する患者からの血液サンプルにおける可溶性ＢＣＭＡは、ＥＬＩＳＡにより測定して、約１５０ng／ml未満、約１００ng／ml未満、約７５ng／ml未満、約５０ng／ml未満、約４０ng／ml未満、約３５ng／ml未満または約３０ng／ml未満である。ある実施態様において、自己免疫障害を有する患者からの血液サンプルの可溶性ＢＣＭＡの量は、ＥＬＩＳＡにより測定して、正常健常者における可溶性ＢＣＭＡの量の約４０ng／ml以内、約３０ng／ml以内、約２０ng／ml以内、約１５ng／ml以内、約１０ng／ml以内または約５ng／ml以内である。ある実施態様において、自己免疫障害を有する患者からの血液サンプルの可溶性ＢＣＭＡの量は、ＥＬＩＳＡにより測定して少なくとも５ng／ml、少なくとも７.５ng／ml、少なくとも１０ng／ml、少なくとも１２.５ng／mlまたは少なくとも１５ng／mlである。ある実施態様において、自己免疫障害を有する患者からの血液サンプルの可溶性ＢＣＭＡの量は、ＥＬＩＳＡにより測定して、約５ng／ml～５０ng／ml、約５ng／ml～４０ng／ml、約５ng／ml～３０ng／ml、約１０ng／ml～５０ng／ml、約１０ng／ml～４０ng／mlまたは約１０ng／ml～３０ng／mlである。ＥＬＩＳＡにより測定した患者からの血液サンプル(例えば単離血清または血漿)における可溶性ＢＣＭＡは、Ampersand Biosciences(Lake Clear, NY)によるビーズベースの免疫アッセイを使用して測定し得る。本発明者らは、本発明の多特異的(例えば二重特異的)抗体が形質芽球および／または形質細胞により引き起こされる自己免疫障害を有する患者の処置または管理に使用でき、ここで、患者の形質芽球ＢＣＭＡ表面受容体密度が、正常健常ボランティアの形質芽球ＢＣＭＡ表面受容体密度と同等であることを特定している。
ある実施態様において、自己免疫障害の処置または管理を必要とする患者の形質芽球上のＢＣＭＡ表面受容体密度は、抗ＢＣＭＡ抗体被覆ビーズで作成した標準曲線に基づくフローサイトメトリー系を使用して測定して、約１０,０００分子未満、約５０００分子未満、約２５００分子未満または約２０００分子未満である。
ある実施態様において、自己免疫障害の処置または管理を必要とする患者の形質芽球上のＢＣＭＡ表面受容体密度は、抗ＢＣＭＡ抗体被覆ビーズで作成した標準曲線に基づくフローサイトメトリー系を使用して測定して、少なくとも約５００分子、少なくとも約７００分子、少なくとも約９００分子または少なくとも約１０００分子である。
ある実施態様において、自己免疫障害の処置または管理を必要とする患者の形質芽球上のＢＣＭＡ表面受容体密度は、抗ＢＣＭＡ抗体被覆ビーズで作成した標準曲線に基づくフローサイトメトリー系を使用して、約８００～約２２００分子、約９００～２１００分子または約１０００～２０００分子である。
ある実施態様において、本発明の処置または管理のための方法は、無処置または対照処置と比較して、患者における形質芽球の少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％または９５％または１００％減少をもたらす。好ましい実施態様において、本発明の処置または管理のための方法は、患者における形質芽球の少なくとも７５％の減少をもたらす。特に好ましい実施態様において、本発明の処置または管理のための方法は、患者における形質芽球の少なくとも９０％の減少をもたらす。
ある実施態様において、本発明の処置または管理のための方法は、無処置または対照処置と比較して、患者における形質細胞の少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％または９５％または１００％の減少をもたらす。好ましい実施態様において、本発明の処置または管理のための方法は、患者における形質細胞の少なくとも７５％の減少をもたらす。特に好ましい実施態様において、本発明の処置または管理のための方法は、患者における形質細胞の少なくとも９０％の減少をもたらす。
ある実施態様において、本発明の処置または管理のための方法は、無処置または対照処置と比較して、患者における形質細胞および形質芽球の少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％または９５％または１００％の減少をもたらす。好ましい実施態様において、本発明の処置または管理のための方法は、患者における形質細胞および形質芽球の少なくとも７５％の減少をもたらす。特に好ましい実施態様において、本発明の処置または管理のための方法は、患者における形質細胞および形質芽球の少なくとも９０％の減少をもたらす。
ＡＡＶ、ＳＬＥまたはＲＡなどの自己免疫障害に対する既存の処置は、シクロホスファミドおよび／または抗ＣＤ２０モノクローナル抗体(例えばリツキシマブ)と高用量のステロイド(例えばグルココルチコイド)の併用である。ここで使用する用語「対照処置」(例えばＡＡＶに対する)は、好ましくはシクロホスファミド、リツキシマブおよび／またはステロイドでの処置をいう。これとは別にまたはこれに加えて、「対照処置」(例えばＳＬＥまたはＲＡ)は、抗ＴＮＦ剤(例えばインフリキシマブ、アダリムマブ、ゴリムマブ、エタネルセプト)、抗ＩＬ６Ｒ抗体(例えばトシリズマブ、サリルマブ)、共刺激遮断(例えばアバタセプト)、ＪＡＫ阻害剤(例えばトファシチニブ、バリシチニブ)および／またはベリムマブでの処置をいう。さらなる処置は、シクロホスファミド、メトトレキサート、アザチオプリン、ミコフェノール酸、ミコフェノール酸モフェチルおよび／またはアバコパンを含む。しかしながら、このような既存の処置は必ずしも有効および／または持続性ではない。さらに、有害な副作用もあり得る。
理論に拘束されないが、本発明は、自己免疫障害を引き起こすＢ細胞系譜細胞、例えば自己反応性Ｂ系譜細胞、例えば形質芽球、形質細胞および記憶Ｂ細胞を選択的に枯渇させることが予測される。本発明の処置または管理のための方法は、それ故に、自己免疫障害を引き起こすＢ細胞系譜細胞を選択的に枯渇させない対照処置と比較して、早い寛解の誘導および／または少ないオフターゲット効果が予測される。
ある実施態様において、処置方法は寛解の誘導に使用される。ある実施態様において、本発明の処置または管理のための方法は、対照処置と比較して、患者における少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、少なくとも９５％または１００％早い寛解の誘導をもたらす。
本発明の処置または管理のための方法は、対照処置と比較して、良好な寛解の維持をもたらし得る。例えば、形質芽球および形質細胞の枯渇後、本発明の多特異的(例えば二重特異的)抗体は、ＢＣＭＡ陰性前駆体からの形質芽球および形質細胞の回復を(例えばＦＡＣＳおよび／またはＩｇＧ分泌により測定して)、再生のための増殖因子とのインキュベーション後でさえ、抑制および／または遅延させ得る。さらに、形質芽球および形質細胞の枯渇後、本発明の多特異的(例えば二重特異的)抗体は、ＣｐＧでの刺激後でさえ、抗体、例えば自己免疫障害を引き起こす自己抗体の産生を抑制および／または遅延させ得る。
ある実施態様において、本発明の多特異的(例えば二重特異的)抗体は、形質芽球／形質細胞分化誘導のためのＩＬ－２、ＢＡＦＦおよびＩＬ－２１またはＣｐＧ(ＯＤＮ２００６)での刺激に関わらず、ＩｇＧ抗体の産生を抑制および／または遅延させる。本発明の多特異的(例えば二重特異的)抗体を、２４時間、単離末梢血単核細胞(ＰＢＭＣ)と形質芽球溶解のＥＣ５０濃度でインキュベートした後ＣｐＧ(ＯＤＮ２００６ １０μg／mL)、ＩＬ－２(２０Ｕ／ml)、ＢＡＦＦ(２００ng／ml)およびＩＬ－２１(１００ng／ml)で７日間刺激し、その後ＩｇＧ濃度は、ＥＬＩＳＡにより測定して、約４０００pg／ml未満、約３５００pg／ml未満、約３０００pg／ml未満、約２５００pg／ml未満または約２０００pg／ml未満であり得る。本発明の多特異的(例えば二重特異的)抗体は、あるいは２４時間、単離末梢血単核細胞(ＰＢＭＣ)と形質芽球溶解のＥＣ９０濃度でインキュベートした後ＣｐＧ(ＯＤＮ２００６ １０μg／mL))、ＩＬ－２(２０Ｕ／ml)、ＢＡＦＦ(２００ng／ml)およびＩＬ－２１(１００ng／ml)で７日間刺激し、その後ＩｇＧ濃度は、ＥＬＩＳＡにより測定して、約２０００pg／ml未満、約１８００pg／ml未満、約１０００pg／ml未満または約５００pg／ml未満であり得る。
ある実施態様において、処置方法は、寛解の誘導および維持に使用される。ある実施態様において、方法は寛解の維持に使用される。ある実施態様において、本発明の処置または管理のための方法は、対照処置と比較して、患者における少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、少なくとも９５％または１００％長い寛解の維持をもたらす。
ある実施態様において、自己免疫障害は再発性または難治性である。ここで使用する用語「再発性」は、改善の期間の後、障害または障害の徴候および症状が戻ることを意味することを意図する。ここで使用する用語「難治性」は、特定の障害が、特定の治療剤での治療に抵抗性または非応答性であることを意味することを意図する。障害は、特定の治療剤に、該特定の治療剤での処置開始時から(すなわち、該治療剤への初期暴露に非応答性)または該治療剤での第一処置期間の過程でまたは該治療剤でのその後の処置期間の間の、該治療剤に対する耐性の獲得の結果として、治療に難治性であり得る。
ある実施態様において、自己免疫障害は再発性またはシクロホスファミド、抗ＣＤ２０モノクローナル抗体(例えばリツキシマブ)、グルココルチコイド(例えばメチルプレドニゾロン、デキサメサゾン)、抗葉酸剤(例えばメトトレキサート)、プリン合成阻害剤(例えばアザチオプリン、ミコフェノール酸および／またはミコフェノール酸モフェチル)、Ｃ５ａ阻害剤(例えばアバコパン)、抗ＣＤ１９抗体、ＢＡＦＦ／ＡＰＲＩＬアンタゴニスト、プロテアソーム阻害剤(例えばボルテゾミブ)、抗ＣＤ２２モノクローナル抗体、抗ＴＮＦ剤(例えばインフリキシマブ、アダリムマブ、ゴリムマブ、エタネルセプト)、抗ＩＬ６Ｒ抗体(例えばトシリズマブ、サリルマブ)、共刺激遮断(例えばアバタセプト)、ＪＡＫ阻害剤(例えばトファシチニブ、バリシチニブ)、ベリムマブおよび／またはブルトン型チロシンキナーゼ(ＢＴＫ)阻害剤に難治性である。
別の実施態様において、自己免疫障害は新たに診断されたものである。
本発明の多特異的(例えば二重特異的)抗体での処置に適する自己免疫障害は、アカラシア、アジソン病、急性炎症性脱髄性多発性神経炎－ＡＩＤＰ、成人スティル病、無ガンマグロブリン血症、円形脱毛症、アミロイド症、強直性脊椎炎、抗ＧＢＭ／抗ＴＢＭ腎炎、抗ＰＡＤ４活性化関節リウマチ、抗リン脂質抗体症候群、喘息、アトピー性皮膚炎、自己免疫性血管浮腫、自己免疫性自律神経障害、自己免疫性脳脊髄炎、自己免疫性肝炎、自己免疫性内耳疾患(ＡＩＥＤ)、自己免疫性心筋炎、自己免疫性卵巣炎、自己免疫性精巣炎、自己免疫性膵炎、自己免疫性網膜症、自己免疫性血小板減少症、自己免疫性蕁麻疹様、軸索およびニューロンニューロパチー(ＡＭＡＮ)、バロー病、ベーチェット病、良性粘膜ｌ 類天疱瘡、類天疱瘡、キャッスルマン病(ＣＤ)、セリアック病、シャーガス病、慢性炎症性脱髄性多発性神経炎(ＣＩＤＰ)、慢性再発性多発性骨髄炎(ＣＲＭＯ)、チャーグ・ストラウス症候群(ＣＳＳ)または好酸球性肉芽腫症(ＥＧＰＡ)、瘢痕性類天疱瘡、コーガン症候群、寒冷凝集素疾患、先天性心臓ブロック、コクサッキー心筋炎、クレスト症候群、クローン病、皮膚炎、疱疹状皮膚炎、皮膚筋炎、デビック病(視神経脊髄炎)、糖尿病、円板状ループス、ドレスラー症候群、子宮内膜症、好酸球性食道炎(ＥｏＥ)、好酸球性筋膜炎、結節性紅斑、本態性混合型クリオグロブリン血症、エバンス症候群、線維筋痛症、線維化肺胞炎、巨細胞性動脈炎(側頭動脈炎)、巨細胞心筋炎、グッドパスチャー症候群、多発血管炎性肉芽腫症、グレーブス病、ギランバレー症候群、橋本病、橋本甲状腺炎、自己免疫性溶血性貧血、ヘノッホ・シェーンライン紫斑病(ＨＳＰ)、妊娠疱疹または妊娠性類天疱瘡(ＰＧ)、化膿性汗腺炎(ＨＳ)(反対型ざ瘡)、低ガンマグロブリン血症、特発性膜性腎症、特発性血小板減少性紫斑病、ＩｇＡ腎症、ＩｇＧ４関連疾患、ＩｇＧ４関連硬化性疾患、ＩｇＧニューロパチー、ＩｇＭ多発性神経炎、免疫性血小板減少性紫斑病(ＩＴＰ)、封入体筋炎(ＩＢＭ)、炎症性腸疾患(ＩＢＤ)、間質性膀胱炎(ＩＣ)、若年性関節炎、若年性糖尿病(１型糖尿病)、若年性筋炎(ＪＭ)、川崎病、ランバート－イートン症候群、白血球破壊性脈管炎、扁平苔癬、硬化性苔癬、木質結膜炎、線状ＩｇＡ疾患(ＬＡＤ)、ループス、慢性ライム病、膜性腎症、メニエール病、顕微鏡的多発血管炎(ＭＰＡ)、混合型結合組織疾患(ＭＣＴＤ)、モーレン潰瘍、ムッハ・ハーバーマン病、多巣性運動神経障害(ＭＭＮ)またはＭＭＮＣＢ、多発性硬化症、重症筋無力症、筋炎、ナルコレプシー、新生児ループス、視神経脊髄炎、好中球減少症、眼瘢痕性類天疱瘡、視神経炎、回帰性リウマチ(ＰＲ)、ＰＡＮＤＡＳ、傍腫瘍性小脳変性症(ＰＣＤ)、発作性夜間血色素尿症(ＰＮＨ)、パリー・ロムバーグ症候群、毛様体扁平部炎(周辺部ぶどう膜炎)、パーソネージ・ターナー症候群、天疱瘡、尋常性天疱瘡、落葉状天疱瘡、末梢ニューロパチー、静脈周囲脳脊髄炎、悪性貧血(ＰＡ)、ＰＯＥＭＳ症候群、結節性多発性動脈炎、多腺性症候群Ｉ型、II型およびIII型、リウマチ性多発筋痛症、多発性筋炎、心筋梗塞後症候群、心膜切開後症候群、原発性胆汁性肝硬変、原発性硬化性胆管炎、プロゲステロン皮膚炎、乾癬、乾癬性関節炎、赤芽球癆(ＰＲＣＡ)、壊疽性膿皮症、レイノー症候群、反応性関節炎、反射性交感神経性ジストロフィー、再発性多発性軟骨炎、下肢静止不能症候群(ＲＬＳ)、腹膜後線維症、リウマチ熱、関節リウマチ、若年性関節リウマチ、サルコイドーシス、シュミット症候群、強膜炎、強皮症、固形臓器移植における感作／既存抗体、シェーグレン症候群、精子および精巣自己免疫、スティッフパーソン症候群(ＳＰＳ)、全身性エリテマトーデス(ＳＬＥ)、亜急性細菌心内膜炎(ＳＢＥ)、スザック症候群、交感性眼炎(ＳＯ)、高安動脈炎、側頭動脈炎／巨細胞性動脈炎、血小板減少性紫斑病、血栓性血小板減少性紫斑病(ＴＴＰ)、トロサ・ハント症候群(ＴＨＳ)、横断性脊髄炎、１型糖尿病、潰瘍性大腸炎(ＵＣ)、未分化結合組織疾患(ＵＣＴＤ)、ブドウ膜炎、脈管炎、白斑症、フォークト・小柳・原田病；およびウェゲナー病を含むが、これらに限定されない。好ましい実施態様において、自己免疫障害はＩｇＧ４関連疾患ではない。好ましい実施態様において、自己免疫障害はＡＡＶ(例えば再発性または難治性ＡＡＶ)、ＳＬＥ(例えば再発性または難治性ＳＬＥ)または関節リウマチ(例えば再発性または難治性関節リウマチ)である。特に好ましい実施態様において、自己免疫障害はＡＡＶ(例えば再発性または難治性ＡＡＶ)または関節リウマチ(例えば再発性または難治性関節リウマチ)である。
ある実施態様において、本発明の多特異的(例えば二重特異的)抗体はＡＡＶを処置または管理する。ある実施態様において、本発明の多特異的(例えば二重特異的)抗体は関節リウマチを処置または管理する。ある実施態様において、本発明の多特異的(例えば二重特異的)抗体はＳＬＥを処置または管理する。ある実施態様において、本発明の多特異的(例えば二重特異的)抗体はＡＡＶおよび関節リウマチを処置または管理する。ある実施態様において、本発明の多特異的(例えば二重特異的)抗体はＡＡＶ、ＳＬＥおよび関節リウマチを処置または管理する。
ある態様において、本発明は、ＡＡＶを処置または管理する方法であって、このような処置または管理を必要とする対象(例えばヒト)に多特異的(例えば二重特異的)抗体を投与することを含み、ここで、多特異的抗体がＢＣＭＡおよびＴ細胞の活性化を促進する１以上の抗原(例えばＣＤ３)に結合するものである、方法を提供する。
他の態様において、本発明は、対象(例えばヒト)におけるＡＡＶの処置または管理に使用するための、ＢＣＭＡおよびＴ細胞の活性化を促進する１以上の抗原(例えばＣＤ３)に結合する多特異的(例えば二重特異的)抗体を提供する。
ある態様において、本発明は、関節リウマチ(例えば再発性または難治性関節リウマチ)を処置または管理する方法であって、このような処置または管理を必要とする対象(例えばヒト)に多特異的(例えば二重特異的)抗体を投与することを含み、ここで、多特異的抗体がＢＣＭＡおよびＴ細胞の活性化を促進する１以上の抗原(例えばＣＤ３)に結合するものである、方法を提供する。
他の態様において、本発明は、対象(例えばヒト)における関節リウマチ(例えば再発性または難治性関節リウマチ)の処置または管理に使用するための、ＢＣＭＡおよびＴ細胞の活性化を促進する１以上の抗原(例えばＣＤ３)に結合する多特異的(例えば二重特異的)抗体を提供する。
ある態様において、本発明は、ＳＬＥ(例えば再発性または難治性ＳＬＥ)を処置または管理する方法であって、このような処置または管理を必要とする対象(例えばヒト)に多特異的(例えば二重特異的)抗体を投与することを含み、ここで、多特異的抗体がＢＣＭＡおよびＴ細胞の活性化を促進する１以上の抗原(例えばＣＤ３)に結合するものである、方法を提供する。
他の態様において、本発明は、対象(例えばヒト)におけるＳＬＥ(例えば再発性または難治性ＳＬＥ)の処置または管理に使用するための、ＢＣＭＡおよびＴ細胞の活性化を促進する１以上の抗原(例えばＣＤ３)に結合する多特異的(例えば二重特異的)抗体を提供する。
Ｔ細胞溶解、Ｔ細胞活性化およびサイトカイン産生
本発明の多特異的(例えば二重特異的)抗体は、Ｔ細胞の活性化を促進する１以上の抗原(例えばＣＤ３)に結合する。ここで使用する用語「Ｔ細胞抗原」は、Ｔ細胞の活性化を促進する１以上の抗原(例えばＣＤ３)をいう。
好ましい実施態様において、Ｔ細胞抗原(例えばＣＤ３)はヒトＴ細胞抗原(例えばヒトＣＤ３)である。好ましい実施態様において、Ｔ細胞抗原はＣＤ３である。
故に、本発明の多特異的(例えば二重特異的)抗体のＴ細胞抗原(例えばＣＤ３)への結合はＢＣＭＡ発現細胞(例えば形質芽球、形質細胞および／または記憶Ｂ細胞)の溶解をもたようなＴ細胞のＢＣＭＡ発現細胞への動員を可能とし得る。それ故に、本発明の多特異的(例えば二重特異的)抗体は、細胞毒性Ｔ細胞をＢＣＭＡ発現細胞(例えば形質芽球、形質細胞および／または記憶Ｂ細胞)に向け直すことにより、ＢＣＭＡ発現細胞の選択的枯渇を誘導できる。
本発明者らは、本発明の多特異的(例えば二重特異的)抗体を、低い標的ＢＣＭＡ発現細胞対エフェクターＴ細胞比(Ｔ：Ｅ比)により特徴づけられる障害、例えば自己免疫障害の処置に、高Ｔ：Ｅ比により特徴づけられる疾患、例えば多発性骨髄腫などのＢ細胞悪性腫瘍の処置に必要であるより低い用量で投与できることを特定している。
従って、ある実施態様において、本発明の多特異的(例えば二重特異的)抗体は自己免疫障害を有する対象に投与され、ここで、該個体のＢＣＭＡ発現細胞対エフェクターＴ細胞比は、約１：１５未満、約１：３０未満、約１：５０未満、約１：１００未満または１：５００未満であることを特定している。ＢＣＭＡ発現細胞対エフェクターＴ細胞比(Ｔ：Ｅ比)は、自己免疫障害を有する対象からの単離体液サンプル、例えば自己免疫障害を有する対象からの血液サンプル、骨髄吸引液または滑液で測定し得る。
本発明者らは、本発明の多特異的(例えば二重特異的)抗体が、ここに開示する自己免疫障害(例えばＢＣＭＡ発現Ｂ細胞系譜細胞により引き起こされる自己免疫障害)の処置に、Ｂ細胞悪性腫瘍(例えば多発性骨髄腫などのＢＣＭＡ発現癌)の処置に必要であるより低い用量で治療効果を達成できることを特定している。特に、本発明の多特異的(例えば二重特異的)抗体は、多発性骨髄腫の病原性細胞(例えばＢＣＭＡ発現悪性細胞)の溶解に必要な用量より低い用量(例えば１０倍～１００倍低い)で、自己免疫障害の病原性細胞(例えばＢＣＭＡ発現自己反応性Ｂ細胞系譜細胞)を溶解し得る。
故に、ある態様において、本発明は、Ｔ細胞の活性化を促進する１以上の抗原(例えばＣＤ３)およびＢＣＭＡに結合する多特異的(例えば二重特異的)抗体での自己免疫障害を処置または管理する方法であって、ここで、処置は、多特異的(例えば二重特異的)抗体の約０.０１mg～約１mgの用量での投与を含む、方法を提供する。多特異的(例えば二重特異的)抗体がここに開示するＣＣ－９３２６９抗体である実施態様において、用量は約０.０１mg～約１mgであり得る。
ここに開示する態様の何れかのある実施態様において、処置は、少なくとも１用量の多特異的(例えば二重特異的)抗体、例えば少なくとも２用量または少なくとも３用量の多特異的(例えば二重特異的)抗体を含む。別の実施態様において、３用量までの多特異的(例えば二重特異的)抗体、例えば２用量までまたは単回用量の多特異的(例えば二重特異的)抗体が投与される。好ましい実施態様において、単回用量の多特異的(例えば二重特異的)抗体が投与される。
特に好ましい実施態様において、処置は、約０.０１mg～約１mgの用量での単回用量の多特異的(例えば二重特異的)抗体を含む。
ある実施態様において、本発明の多特異的(例えば二重特異的)抗体は、単離ＰＢＭＣ(例えば自己免疫障害を有する患者からの単離ＰＢＭＣ)と２４時間インキュベートしたとき形質芽球溶解を達成し、ここで、本発明の多特異的(例えば二重特異的)抗体は、ＢＣＭＡ発現癌細胞(例えばＪＥＫＯ－１細胞株またはＭＭ細胞株)の細胞致死に必要であるより低い濃度である。ＰＢＭＣは、例えば、ＲＰＭＩ＋１０％ＨＩ ＦＢＳに再懸濁するフィコール勾配を使用して、全血サンプルから単離され得る。ある実施態様において、本発明の多特異的(例えば二重特異的)抗体は、血(例えば自己免疫障害を有する患者からの全血サンプル)と２４時間インキュベートしたとき、形質芽球溶解を達成し、ここで、本発明の多特異的(例えば二重特異的)抗体は、ＢＣＭＡ発現癌細胞(例えばＪＥＫＯ－１細胞株またはＭＭ細胞株)の細胞致死に必要であるより低い濃度である。形質芽球枯渇はＦＡＣＳにより測定され、それにより、形質芽球はＣＤ１９(＋) ＣＤ２０(－) ＣＤ２７(＋)細胞として同定される。ある実施態様において、本発明の多特異的(例えば二重特異的)抗体は、約１nM未満、約０.８nM未満、約０.６nM未満、約０.４nM未満、約０.３nM未満または約０.２５nM未満、約０.２nM未満、約０.１nM未満、約０.０５nM未満、約０.０２nM未満、約０.０１nM未満または約０.００５nM未満の５０％有効濃度(ＥＣ５０)で単離ＰＢＭＣ(例えば自己免疫障害を有する患者からの単離ＰＢＭＣ)と２４時間インキュベートしたとき、形質芽球の溶解を達成し得る。好ましい実施態様において、本発明の多特異的(例えば二重特異的)抗体は、約１nM以下、約０.８nM以下、約０.６nM以下、約０.４nM以下、約０.３nM以下、約０.２５nM以下、約０.０２nM以下、約０.０１nM以下、約０.００７nM以下または約０.００５nM以下の濃度で単離ＰＢＭＣ(例えば自己免疫障害を有する患者からの単離ＰＢＭＣ)と２４時間インキュベートしたとき、形質芽球の５０％の溶解を達成し得る。形質芽球枯渇はＦＡＣＳにより測定され、それにより形質芽球はＣＤ１９(＋) ＣＤ２０(－) ＣＤ２７(＋)細胞として同定される。ある実施態様において、本発明の多特異的(例えば二重特異的)抗体は、約１nM未満、約０.８nM未満、約０.６nM未満、約０.４nM未満、約０.３nM未満、約０.２nM未満、約０.１nM未満、約０.０８nM未満または約０.０６nM未満の９０％有効濃度(ＥＣ９０)で単離ＰＢＭＣ(例えば自己免疫障害を有する患者からの単離ＰＢＭＣ)と２４時間インキュベートしたとき、形質芽球の溶解を達成し得る。好ましい実施態様において、本発明の多特異的(例えば二重特異的)抗体は、約１nM未満、約０.８nM未満、約０.６nM未満、約０.４nM未満、約０.３nM未満、約０.２nM未満、約０.１nM未満、約０.０８nM未満または約０.０６nM未満の濃度で単離ＰＢＭＣ(例えば自己免疫障害を有する患者からの単離ＰＢＭＣ)と２４時間インキュベートしたとき、形質芽球の９０％の溶解を達成し得る。形質芽球枯渇はＦＡＣＳにより測定され、それにより形質芽球はＣＤ１９(＋) ＣＤ２０(－) ＣＤ２７(＋)細胞として同定される。
ある実施態様において、本発明の多特異的(例えば二重特異的)抗体は、約１nM未満、約０.９nM未満、約０.８nM未満、約０.７nM未満または約０.６nM未満の９９％有効濃度(ＥＣ９９)で単離ＰＢＭＣ(例えば自己免疫障害を有する患者からの単離ＰＢＭＣ)と２４時間インキュベートしたとき、形質芽球の溶解を達成し得る。ある実施態様において、本発明の多特異的(例えば二重特異的)抗体は、約１nM未満、約０.９nM未満、約０.８nM未満、約０.７nM未満または約０.６nM未満の濃度で単離ＰＢＭＣ(例えば自己免疫障害を有する患者からの単離ＰＢＭＣ)と２４時間インキュベートしたとき、形質芽球の９９％の溶解を達成する。形質芽球枯渇はＦＡＣＳにより測定され、それにより形質芽球はＣＤ１９(＋) ＣＤ２０(－) ＣＤ２７(＋)細胞として同定される。
サイトカイン放出症候群(ＣＲＳ)は、多発性骨髄腫などの癌の処置のためのＴ細胞誘導免疫療法の最も頻繁かつ重篤な有害作用の一つである(Shimabukuro-Vornhagen, A. et. al (2018) Cytokine release syndrome. J Immunother Cancer, 6(1) 56)。理論に拘束されないが、ＣＲＳは、例えば、免疫エフェクター細胞の活性化および／または増殖による、サイトカインの大量のおよび／または迅速な分泌をもたらし得る。ＩＦＮγ、ＩＬ－１β、ＩＬ－６、ＩＬ－２、ＩＬ－１０および／またはグランザイムＢなどのサイトカインレベル上昇は、Ｔ細胞誘導免疫療法での多発性骨髄腫の処置後観察される。
自己免疫障害が、処置の前でも高いサイトカインレベルと関連するため(Kunz, M. and Ibrahim, S. (2009) Cytokines and Cytokine Profiles in Human Autoimmune Diseases and Animal Models of Autoimmunity. Mediators of Inflammation, Article ID 979258; and Andreakos et. al (2002), Cytokines and anti-cytokine biologicals in autoimmunity: present and future. Cytokine & Growth Factor Reviews, Issues 4-5, Pages 299-313参照)、Ｔ細胞誘導免疫療法は、自己免疫障害の治療としては魅力的ではないと考えてよい。しかしながら、本発明者らは、驚くべきことに、本発明の多特異的(例えば二重特異的)抗体を、顕著なＴ細胞活性化なくまたはＴ細胞活性化がほとんどなくおよび顕著なサイトカイン産生なくまたはサイトカイン産生がほとんどなく、本発明の自己免疫障害に対する治療有効用量で投与し得ることを特定している。従って、本発明の多特異的(例えば二重特異的)抗体は、Ｔ細胞活性化および／またはサイトカイン産生例えばＣＲＳに付随する有害事象のリスクが最小で、本発明の自己免疫障害を処置または管理できる。
ある態様において、本発明は、Ｔ細胞の活性化を促進する１以上の抗原(例えばＣＤ３)およびＢＣＭＡに結合する多特異的(例えば二重特異的)抗体で自己免疫障害を処置または管理する方法であって、ここで、処置が顕著なＴ細胞活性化なくまたはＴ細胞活性化がほとんどなく治療有効用量で多特異的(例えば二重特異的)抗体を投与することを含む、方法を提供する。
ここで使用する「顕著なＴ細胞活性化がないまたはＴ細胞活性化が最小限」は、活性化マーカーＣＤ６９の表面発現により測定して、Ｔ細胞活性化が、単離ＰＢＭＣまたは全血(例えば自己免疫障害を有する患者の単離ＰＢＭＣまたは全血)のベースラインを超えるのが２０％未満、１５％未満、１０％未満または５％未満であることをいう。好ましくは、「顕著なＴ細胞活性化がないまたはＴ細胞活性化が最小限」は、活性化マーカーＣＤ６９の表面発現により測定して、Ｔ細胞活性化が、単離ＰＢＭＣまたは全血(例えば自己免疫障害を有する患者の単離ＰＢＭＣまたは全血)のベースラインを超えるのが、２０％未満であることをいう。好ましくは、Ｔ細胞活性化は、ＣＤ３＋Ｔ細胞(例えばＣＤ３＋ＣＤ４＋Ｔ細胞またはＣＤ３＋ＣＤ８＋Ｔ細胞または両者)について記載される。
ここで使用するＴ細胞活性化の「ベースライン」(例えばＣＤ６９を発現するＣＤ８(＋)Ｔ細胞の「ベースライン」)は、単離ＰＢＭＣまたは全血(例えば自己免疫障害を有する患者の単離ＰＢＭＣまたは全血)の対照サンプルにおける、関連する活性化マーカー(例えばＣＤ６９)を発現する関連するＴ細胞(例えばＣＤ８(＋)Ｔ細胞)のパーセンテージとして定義される。好ましくは、対照サンプルは、対照抗ＣＤ３抗体、例えば対照２＋１抗ＨＥＬ抗ＣＤ３抗体で処理される。好ましくは、Ｔ細胞活性化は、ＣＤ３＋Ｔ細胞(例えばＣＤ３＋ＣＤ４＋Ｔ細胞またはＣＤ３＋ＣＤ８＋Ｔ細胞または両者)について記載される。ある実施態様において、本発明の多特異的(例えば二重特異的)抗体を、形質芽球溶解の５０％有効濃度(ＥＣ５０)で単離ＰＢＭＣまたは全血(例えば自己免疫障害を有する患者の単離ＰＢＭＣまたは全血)と２４時間インキュベートしたとき、顕著なＴ細胞活性化がないまたはＴ細胞活性化がほとんどなくある。Ｔ細胞活性化は、Ｔ細胞の細胞系譜(ＣＤ３、ＣＤ４およびＣＤ８)および活性化マーカー(ＣＤ６９、ＣＤ２５およびＣＤ１５４)の染色により測定され得る。好ましくは、Ｔ細胞活性化は、ＣＤ３＋Ｔ細胞(ＣＤ３＋ＣＤ４＋Ｔ細胞またはＣＤ３＋ＣＤ８＋Ｔ細胞または両者)について記載される。
好ましい実施態様において、本発明の多特異的(例えば二重特異的)抗体を、形質芽球溶解の５０％有効濃度(ＥＣ５０)で単離ＰＢＭＣまたは全血(例えば自己免疫障害を有する患者の単離ＰＢＭＣまたは全血)と２４時間インキュベートしたとき、ＣＤ６９を発現するＣＤ８(＋)Ｔ細胞の顕著な増加はないまたはＣＤ６９を発現するＣＤ８(＋)Ｔ細胞の増加は最小限である。好ましい実施態様において、本発明の多特異的(例えば二重特異的)抗体を、形質芽球溶解の５０％有効濃度(ＥＣ５０)で単離ＰＢＭＣまたは全血(例えば自己免疫障害を有する患者の単離ＰＢＭＣまたは全血)と２４時間インキュベートしたとき、存在するＣＤ６９を発現するＣＤ８(＋)Ｔ細胞がベースラインを超えるのは１０％未満、５％未満、４％未満、約３％未満、２％未満または１％未満である。ある実施態様において、本発明の多特異的(例えば二重特異的)抗体を、形質芽球溶解の５０％有効濃度(ＥＣ５０)で単離ＰＢＭＣまたは全血(例えば自己免疫障害を有する患者の単離ＰＢＭＣまたは全血)と２４時間インキュベートしたとき、ＣＤ６９を発現するＣＤ８(＋)Ｔ細胞の頻度のベースラインを超える増加はない。
ある実施態様において、本発明の多特異的(例えば二重特異的)抗体を、形質芽球溶解の５０％有効濃度(ＥＣ５０)で単離ＰＢＭＣまたは全血(例えば自己免疫障害を有する患者の単離ＰＢＭＣまたは全血)と２４時間インキュベートしたとき、存在するＣＤ６９を発現するＣＤ４(＋)Ｔ細胞およびＣＤ６９を発現するＣＤ８(＋)Ｔ細胞がベースラインを超えるのは１０％未満、５％未満、４％未満、約３％未満、２％未満または１％未満である。ある実施態様において、本発明の多特異的(例えば二重特異的)抗体を、形質芽球溶解の５０％有効濃度(ＥＣ５０)で単離ＰＢＭＣまたは全血(例えば自己免疫障害を有する患者の単離ＰＢＭＣまたは全血)と２４時間インキュベートしたとき、ＣＤ６９を発現するＣＤ４(＋)Ｔ細胞およびＣＤ６９を発現するＣＤ８(＋)Ｔ細胞のベースラインを超える増加はない。
ある実施態様において、本発明の多特異的(例えば二重特異的)抗体を形質芽球溶解の９０％有効濃度(ＥＣ９０)で単離ＰＢＭＣまたは全血(例えば自己免疫障害を有する患者の単離ＰＢＭＣまたは全血)と２４時間インキュベートしたとき、顕著なＴ細胞活性化はないまたはＴ細胞活性化は最小限である。Ｔ細胞活性化は、Ｔ細胞の細胞系譜(ＣＤ３、ＣＤ４およびＣＤ８)および活性化マーカー(ＣＤ６９、ＣＤ２５およびＣＤ１５４)の染色により測定され得る。好ましくは、Ｔ細胞活性化はＣＤ３＋Ｔ細胞(ＣＤ３＋ＣＤ４＋Ｔ細胞またはＣＤ３＋ＣＤ８＋Ｔ細胞または両者)について記載される。好ましい実施態様において、本発明の多特異的(例えば二重特異的)抗体を形質芽球溶解の９０％有効濃度(ＥＣ９０)で単離ＰＢＭＣまたは全血(例えば自己免疫障害を有する患者の単離ＰＢＭＣまたは全血)と２４時間インキュベートしたとき、ＣＤ６９を発現するＣＤ８(＋)Ｔ細胞の顕著な増加はないまたはＣＤ６９を発現するＣＤ８(＋)Ｔ細胞の増加は最小限である。好ましい実施態様において、本発明の多特異的(例えば二重特異的)抗体を形質芽球溶解の９０％有効濃度(ＥＣ９０)で単離ＰＢＭＣまたは全血(例えば自己免疫障害を有する患者の単離ＰＢＭＣまたは全血)と２４時間インキュベートしたとき、存在するＣＤ６９を発現するＣＤ８(＋)Ｔ細胞がベースラインを超えるのは２０％未満、１５％未満、１０％未満、５％未満、４％未満、約３％未満、２％未満または１％未満である。
ある実施態様において、本発明の多特異的(例えば二重特異的)抗体を形質芽球溶解の９０％有効濃度(ＥＣ９０)で単離ＰＢＭＣまたは全血(例えば自己免疫障害を有する患者の単離ＰＢＭＣまたは全血)と２４時間インキュベートしたとき、存在するＣＤ６９を発現するＣＤ４(＋)Ｔ細胞およびＣＤ６９を発現するＣＤ８(＋)Ｔ細胞がベースラインを超えるのは２０％未満、１５％未満、１０％未満、５％未満、４％未満、約３％未満、２％未満または１％未満である。ある実施態様において、本発明の多特異的(例えば二重特異的)抗体を形質芽球溶解の９０％有効濃度(ＥＣ９０)で単離ＰＢＭＣまたは全血(例えば自己免疫障害を有する患者の単離ＰＢＭＣまたは全血)と２４時間インキュベートしたとき、ＣＤ６９を発現するＣＤ４(＋)Ｔ細胞およびＣＤ６９を発現するＣＤ８(＋)Ｔ細胞のベースラインを超える増加はない。
ある実施態様において、本発明の多特異的(例えば二重特異的)抗体を、形質芽球溶解の９９％有効濃度(ＥＣ９９)で単離ＰＢＭＣまたは全血(例えば自己免疫障害を有する患者の単離ＰＢＭＣまたは全血ＰＢＭＣ)と２４時間インキュベートしたとき、存在するＣＤ６９を発現するＣＤ８(＋)Ｔ細胞がベースラインを超えるのは４０％未満、３０％未満、２０％未満、１５％未満、１０％未満または５％未満である。好ましくは、Ｔ細胞活性化はＣＤ３＋Ｔ細胞(ＣＤ３＋ＣＤ４＋Ｔ細胞またはＣＤ３＋ＣＤ８＋Ｔ細胞または両者)について記載される。
ある実施態様において、本発明の多特異的(例えば二重特異的)抗体は、ＣＤ６９を発現するＣＤ８(＋)Ｔ細胞数がベースラインを超えて増加するのが約２０％未満、約１５％未満、約１０％未満、約５％未満、約４％未満、約３％未満、約２％未満または約１％未満である濃度で、単離ＰＢＭＣまたは全血(例えば自己免疫障害を有する患者の単離ＰＢＭＣまたは全血)と２４時間インキュベートしたとき、４０％を超える、４５％を超える、５０％を超える、５５％を超える、６０％を超える、６５％を超える、７０％を超える、７５％を超える、８０％を超える、８５％を超える、９０％を超える、９５％を超えるまたは約１００％の形質芽球の溶解を達成し得る。
ある実施態様において、本発明の多特異的(例えば二重特異的)抗体は、ＣＤ６９を発現するＣＤ８(＋)Ｔ細胞数がベースラインを超えるのが約４０％未満、約３０％未満、約２０％未満、約１５％未満、約１０％未満、約５％未満、約４％未満、約３％未満、約２％未満または約１％未満である濃度で、単離ＰＢＭＣまたは全血(例えば自己免疫障害を有する患者の単離ＰＢＭＣまたは全血)と２４時間インキュベートしたとき、約５０％、約９０％または約９９％の形質芽球の溶解を達成し得る。ある態様において、本発明は、Ｔ細胞の活性化を促進する１以上の抗原(例えばＣＤ３)およびＢＣＭＡに結合する多特異的(例えば二重特異的)抗体で自己免疫障害を処置または管理する方法であって、ここで、処置は、多特異的(例えば二重特異的)抗体を、顕著なサイトカイン産生なくまたはサイトカイン産生がほとんどなく、治療有効用量で投与することを含むものである、方法を提供する。
ここで使用する「顕著なサイトカイン産生がないまたはサイトカイン産生が最小限」は、サイトカインレベルが単離ＰＢＭＣまたは全血(例えば自己免疫障害を有する患者の単離ＰＢＭＣまたは全血)のベースラインを超えるのが２０pg／mL未満、１０pg／mL未満または５pg／mL未満であることをいう。好ましくは、「顕著なサイトカインが産生ないまたはサイトカイン産生が最小限」は、ドナーサンプルにおけるベースラインサイトカインレベルを超えるのが５pg／mL未満であるサイトカインレベルをいう。サイトカインレベルは、MSD Pro-inflammatory Iアッセイを使用して測定し得る。
ここで使用する「ベースライン」サイトカインレベル(例えばＩＦＮγの「ベースライン」レベル)は、単離ＰＢＭＣまたは全血(例えば自己免疫障害を有する患者の単離ＰＢＭＣまたは全血)の対照サンプルにおける関連するサイトカイン(例えばＩＦＮγ)のレベルとして定義される。好ましくは、対照サンプルは、対照抗ＣＤ３抗体、例えば対照２＋１抗ＨＥＬ抗ＣＤ３抗体で処理される。サイトカインレベルは、MSD Pro-inflammatory Iアッセイを使用して測定し得る。
ある実施態様において、本発明の多特異的(例えば二重特異的)抗体を、形質芽球溶解の５０％有効濃度(ＥＣ５０)で単離ＰＢＭＣまたは全血(例えば自己免疫障害を有する患者の単離ＰＢＭＣまたは全血)と２４時間インキュベートしたとき、顕著なサイトカイン産生がないまたはサイトカイン産生は最小限である。サイトカインＩＦＮγ、ＩＬ－６、ＩＬ－２、ＩＬ－１０、ＩＬ－１β、グランザイムＢおよび／またはパーフォリンの産生は、MSD Pro-inflammatory Iアッセイを使用して測定される。ある実施態様において、本発明の多特異的(例えば二重特異的)抗体を、形質芽球溶解の５０％有効濃度(ＥＣ５０)で単離ＰＢＭＣまたは全血(例えば自己免疫障害を有する患者の単離ＰＢＭＣまたは全血)と２４時間インキュベートしたとき、ベースラインを超える炎症促進性サイトカイン(例えばＩＦＮγ、ＩＬ－６、ＩＬ－２、ＩＬ－１０、ＩＬ－１β、グランザイムＢおよび／またはパーフォリン)のレベルは、５０pg／mL未満、２０pg／mL未満、１０pg／mL未満または５pg／mL未満である。
好ましい実施態様において、本発明の多特異的(例えば二重特異的)抗体を、形質芽球溶解の５０％有効濃度(ＥＣ５０)で単離ＰＢＭＣまたは全血(例えば自己免疫障害を有する患者の単離ＰＢＭＣまたは全血)と２４時間インキュベートし得るとき、ＩＦＮγの顕著な増加はないまたはＩＦＮγの増加は最小限である。ある実施態様において、本発明の多特異的(例えば二重特異的)抗体を、形質芽球溶解の５０％有効濃度(ＥＣ５０)で単離ＰＢＭＣまたは全血(例えば自己免疫障害を有する患者の単離ＰＢＭＣまたは全血)と２４時間インキュベートしたとき、ベースラインを超えるＩＦＮγのレベルは５０pg／mL未満、２０pg／mL未満、１０pg／mL未満または５pg／mL未満である。ある実施態様において、本発明の多特異的(例えば二重特異的)抗体は、ＩＦＮγがベースラインを超えて増加するのが約５０pg／ml未満、約１０pg／ml未満または約５pg／ml未満である濃度で、単離ＰＢＭＣまたは全血(例えば自己免疫障害を有する患者の単離ＰＢＭＣまたは全血)と２４時間インキュベートしたとき、４０％を超える、４５％を超える、５０％を超える、５５％を超える、６０％を超える、６５％を超える、７０％を超える、７５％を超える、８０％を超える、８５％を超える、９０％を超える、９５％を超えるまたは約１００％の形質芽球の溶解を達成し得る。
抗ＩＬ－６受容体治療が、ＣＲＳの駆動におけるＩＬ－６の中心的役割を考慮して、ＣＲＳの処置に使用される(Shimabukuro-Vornhagen, A. et. al (2018) Cytokine release syndrome. J Immunother Cancer, 6(1) 56)。ある実施態様において、ＩＬ－６のレベルは、本発明の多特異的(例えば二重特異的)抗体を、形質芽球溶解の５０％有効濃度(ＥＣ５０)で２４時間単離ＰＢＭＣまたは全血(例えば自己免疫障害を有する患者の単離ＰＢＭＣまたは全血)とインキュベートしたとき、ベースラインを超えるのは１０pg／mL未満または５pg／mL未満である。
ある態様において、本発明は、Ｔ細胞の活性化を促進する１以上の抗原(例えばＣＤ３)およびＢＣＭＡに結合する多特異的(例えば二重特異的)抗体で自己免疫障害を処置または管理する方法であって、ここで、処置が、多特異的(例えば二重特異的)抗体を、ＣＲＳが最小限である治療有効用量で投与することを含むものである、方法を提供する。
ここで使用する「ＣＲＳが最小限」は、対照処置と比較して、患者におけるCTCAE v. 5.0グレード１サイトカイン放出症候群(ＣＲＳ)の少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、少なくとも９５％または１００％低い発生率をいう。好ましくは、「ＣＲＳが最小限」は、CTCAE v. 5.0グレード１ ＣＲＳをいう。CTCAE v. 5.0グレード１ ＣＲＳは、ＮＩＨ、アメリカ国立がん研究所、がん治療及び診断部門(ＤＣＴＤ)、がん治療評価プログラム(ＣＴＥＰ)により定義される。
ある実施態様において、本発明の処置または管理のための方法は、対照処置と比較して、患者におけるサイトカイン放出症候群の発生率の少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、少なくとも９５％または１００％の低減をもたらす。
ある実施態様において、本発明の処置または管理のための方法は、対照処置と比較して、患者における感染の発生率の少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、少なくとも９５％または１００％の低減をもたらす。
多特異的抗体
本発明の多特異的(例えば二重特異的)抗体は、ＢＣＭＡおよびＴ細胞の活性化を促進する１以上の抗原(例えばＣＤ３)に特異的に結合する。用語「ＢＣＭＡおよびＴ細胞の活性化を促進する１以上の抗原(例えばＣＤ３)に対する抗体」または「ＢＣＭＡおよびＴ細胞の活性化を促進する１以上の抗原(例えばＣＤ３)に結合する抗体」は、抗体が治療剤として有用であるように十分な親和性でＢＣＭＡおよびＴ細胞の活性化を促進する１以上の抗原(例えばＣＤ３)と結合できる、多特異的(例えば二重特異的)抗体をいう。これは、ＢＣＭＡに結合する第一抗体または抗原結合フラグメントおよびＴ細胞の活性化を促進する１以上の抗原(例えばＣＤ３)に結合する第二抗体または抗原結合フラグメントを含む分子の製造により達成される。このような多特異的抗体は、三重特異的抗体または二重特異的抗体であり得る。好ましい実施態様において、多特異的抗体は二重特異的抗体である。
ここで使用する用語「ＢＣＭＡ」は、分化型形質細胞で優先的に発現される腫瘍壊死受容体スーパーファミリーのメンバーである、ＢＣＭＡ；TR17_HUMAN, TNFRSF17(UniProt Q02223)としても知られるヒトＢ細胞成熟抗原をいう。ＢＣＭＡの細胞外ドメインは、UniProtによると、アミノ酸１～５４(または５～５１)からなる。ここで使用する用語「ＢＣＭＡに対する抗体」、「抗ＢＣＭＡ抗体」または「ＢＣＭＡに結合する抗体」は、ＢＣＭＡの細胞外ドメインに特異的に結合する抗体に関する。
用語「ＢＣＭＡに特異的に結合」は、抗体がＢＣＭＡのターゲティングにおいて治療剤として有用であるように十分な親和性で規定した標的に結合できる抗体をいう。ある実施態様において、ＢＣＭＡに特異的に結合する抗体は、他の抗原に結合しないまたは生理学的効果を生ずるのに十分な親和性で他の抗原と結合しない。
ある実施態様において、抗ＢＣＭＡ抗体が無関係の、非ＢＣＭＡタンパク質に結合する程度は、例えば、表面プラズモン共鳴(ＳＰＲ)、例えばBiacore(登録商標)、酵素結合免疫吸着(ＥＬＩＳＡ)またはフローサイトメトリー(ＦＡＣＳ)により測定して、抗体のＢＣＭＡへの結合より約１０倍、好ましくは＞１００倍少ない。ある実施態様において、ＢＣＭＡに結合する抗体は、１０－８Ｍ以下、好ましくは１０－８Ｍ～１０－１３Ｍ、好ましくは１０－９Ｍ～１０－１３Ｍの解離定数(Ｋｄ)を有する。
ある実施態様において、抗ＢＣＭＡ抗体は、種々の種からのＢＣＭＡ、好ましくはヒトおよびカニクイザルおよびさらに好ましくはまたマウスおよびラットＢＣＭＡで保存されている、ＢＣＭＡのエピトープに結合する。
好ましくは、抗ＢＣＭＡ抗体は、ヒトＢＣＭＡおよび非ヒト哺乳動物起源のＢＣＭＡ、好ましくはカニクイザル、マウスおよび／またはラットからのＢＣＭＡからなる、一群のＢＣＭＡに特異的に結合する。抗ＢＣＭＡ抗体は、プレートに結合したＢＣＭＡを使用して、ヒトＢＣＭＡに対する結合についてＥＬＩＳＡにより分析する。このアッセイについて、好ましくは１.５μg／mLのプレートに結合したＢＣＭＡおよび０.１pM～２００nMの濃度範囲の抗ＢＣＭＡ抗体の量が使用される。
本発明の多特異的(例えば二重特異的)抗体は、Ｔ細胞の活性化を促進する１以上の抗原、例えばＴ細胞抗原に結合する。好ましい実施態様において、Ｔ細胞抗原はヒトＴ細胞抗原である。Ｔ細胞の活性化を促進する１以上の抗原は、ＣＤ３、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲζ、ＩＣＯＳ、ＣＤ２８、ＣＤ２７、ＨＶＥＭ、ＬＩＧＨＴ、ＣＤ４０、４－１ＢＢ、ＯＸ４０、ＤＲ３、ＧＩＴＲ、ＣＤ３０、ＴＩＭ１、ＳＬＡＭ、ＣＤ２またはＣＤ２２６からなる群から選択され得る。好ましい実施態様において、Ｔ細胞の活性化を促進する１以上の抗原はＣＤ３、例えばヒトＣＤ３である。従って、好ましい実施態様において、本発明の多特異的(例えば二重特異的)抗体はＣＤ３、例えばヒトＣＤ３に結合する。
用語「ＣＤ３」は、ヒトＣＤ３タンパク質多サブユニット複合体をいう。ＣＤ３タンパク質多サブユニット複合体は、６個の別個のポリペプチド鎖からなる。故に、本用語は、ＣＤ３γ鎖(SwissProt P09693)、ＣＤ３δ鎖(SwissProt P04234)、２個のＣＤ３ε鎖(SwissProt P07766)および１個のＣＤ３ζ鎖ホモダイマー(SwissProt 20963)からなり、Ｔ細胞受容体αおよびβ鎖と結合している。本用語は、「完全長」、非プロセス型ＣＤ３ならびに細胞(Ｔ細胞を含む)により天然に発現されまたはこれらポリペプチドをコードする遺伝子またはｃＤＮＡでトランスフェクトした細胞で発現され得るあらゆるＣＤ３バリアント、アイソフォームおよび種ホモログを含む。
用語「ＣＤ３に特異的に結合」は、抗体がＣＤ３のターゲティングにおいて治療剤として有用であるように十分な親和性で規定した標的に結合できる抗体をいう。ある実施態様において、ＣＤ３に特異的に結合する抗体は、他の抗原に結合しないまたは生理学的効果を生ずるのに十分な親和性で他の抗原と結合しない。
本発明の多特異的(例えば二重特異的)抗体は、ＣＤ３への結合について、ＳＰＲ、例えばBiacore(登録商標)により分析され得る。ある実施態様において、二重特異的抗体は、表面プラズモン共鳴アッセイにより決定して、好ましくは２５℃でBiacore 8Kを使用して測定して、約１０－７Ｍ以下の解離定数(ＫＤ)、約１０－８Ｍ以下のＫＤ、約１０－９Ｍ以下のＫＤ、約１０－１０Ｍ以下のＫＤ、約１０－１１Ｍ以下のＫＤまたは約１０－１２Ｍ以下のＫＤで、ヒトＣＤ３に結合する。好ましい実施態様において、多特異的(例えば二重特異的)抗体は、約１０－８Ｍ以下の解離定数(ＫＤ)でヒトＣＤ３に結合する。
ここでの用語「抗体」は、所望の抗原結合活性を示す限り、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多特異的(例えば二重特異的)抗体および抗体フラグメントを含むが、これらに限定されない種々の抗体構造を含む。
「重鎖」は、重鎖可変領域(ここでは「ＶＨ」と省略)および重鎖定常領域(ここでは「ＣＨ」と省略)を含む。重鎖定常領域は、重鎖定常ドメインＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３(抗体クラスＩｇＡ、ＩｇＤおよびＩｇＧ)および所望により重鎖定常ドメインＣＨ４(抗体クラスＩｇＥおよびＩｇＭ)を含む。
「軽鎖」は軽鎖可変ドメイン(ここでは「ＶＬ」と省略)および軽鎖定常ドメイン(ここでは「ＣＬ」と省略)を含む。可変領域ＶＨおよびＶＬは、フレームワーク領域(ＦＲ)と称されるより保存された領域が介在する、相補性決定領域(ＣＤＲ)と称される超可変性領域にさらに細分され得る。各ＶＨおよびＶＬは、アミノ末端からカルボキシ末端方向で次の順番：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４に配置された３個のＣＤＲおよび４個のＦＲからなる。重鎖および軽鎖の「定常ドメイン」は、抗体の標的への結合に直接関与しないが、種々のエフェクター機能を発揮する。
抗体とその標的抗原またはエピトープの間の結合は、相補性決定領域(ＣＤＲ)により介在される。ＣＤＲは、抗原結合部位を形成する抗体の重鎖と軽鎖の可変領域内に位置する、高配列可変性の領域である。ＣＤＲは、抗原特異性の主決定基である。典型的に、抗体重鎖および軽鎖は、各々非連続的に配置された３個のＣＤＲを含む。抗体重鎖および軽鎖ＣＤＲ３領域は、本発明の抗体の結合特異性／親和性に特に重要な役割を有し、それ故に、本発明の態様を提供する。
ここで使用する用語「抗原結合フラグメント」は、１個、２個または３個の軽鎖ＣＤＲおよび／または１個、２個または３個の重鎖ＣＤＲを含む抗原結合ポリペプチドのあらゆる天然に存在するまたは人工的に構築された配置を含み、ここで、ポリペプチドは抗原に結合できる。故に、本用語は、インタクト抗体が結合する抗原に結合する、インタクト抗体の一部を含む、インタクト抗体以外の分子をいう。抗体フラグメントの例は、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆ(ａｂ’)２；二重特異的抗体；線形抗体；一本鎖抗体分子(例えばｓｃＦｖ)；および複数抗体フラグメントから形成された多特異的(例えば二重特異的)抗体を含むが、これらに限定されない。
用語「Ｆａｂフラグメント」および「Ｆａｂ」はここでは相互交換可能に使用され、単一軽鎖(すなわち定常ドメインＣＬおよびＶＬ)および単一重鎖(すなわち定常ドメインＣＨ１およびＶＨ)を含む。Ｆａｂフラグメントの重鎖は、他の重鎖とジスルフィド結合を形成できない。
「Ｆａｂ’フラグメント」は単一軽鎖および単一重鎖を含むが、ＣＨ１およびＶＨに加えて、「Ｆａｂ’フラグメント」は、ＣＨ１とＣＨ２ドメインの間に、鎖間ジスルフィド結合の形成に必要な重鎖の領域を含む。故に、２個の「Ｆａｂ’フラグメント」は、ジスルフィド結合の形成を介して結合し、Ｆ(ａｂ’)２分子を形成できる。
「Ｆ(ａｂ’)２フラグメント」は、２個の軽鎖および２個の重鎖を含む。各鎖は、２個の重鎖の間の鎖間ジスルフィド結合の形成に必要な定常領域の部分を含む。
「Ｆｖフラグメント」は、重鎖および軽鎖の可変領域のみを含む。これは定常領域を含まない。
「単一ドメイン抗体」は、単一抗体ドメイン単位(例えば、ＶＨまたはＶＬ)を含む抗体フラグメントである。
「一本鎖Ｆｖ」(「ｓｃＦｖ」)は、単一鎖を形成するよう一緒に連結された、抗体のＶＨドメインおよびＶＬドメインを含む抗体フラグメントである。ポリペプチドリンカーは、ｓｃＦｖのＶＨドメインおよびＶＬドメインの接続に一般に使用される。
「タンデムｓｃＦｖ」は、ＴａｎｄＡｂ(登録商標)としても知られ、可動性ペプチドリンカーで２個のｓｃＦｖをタンデム配向で共有結合することにより形成される、一本鎖Ｆｖ分子である。
「二特異的Ｔ細胞エンゲイジャー」(ＢｉＴＥ(登録商標))は、単一ペプチド鎖上の２個の一本鎖可変フラグメント(ｓｃＦｖ)からなる融合タンパク質である。ｓｃＦｖの一方はＣＤ３受容体を介してＴ細胞に、他方は腫瘍細胞抗原に結合する。
「二重特異的抗体」は、同じ鎖の２個のドメイン間で対形成させるには短すぎるペプチドリンカーにより接続された、同じポリペプチド鎖上の軽鎖可変ドメイン(ＶＬ)に接続された重(ＶＨ)鎖可変ドメイン(ＶＨ－ＶＬ)を含む、小二価および二重特異的抗体フラグメントである(Kipriyanov, Int. J. Cancer 77 (1998), 763-772)。これは、他の鎖の相補性ドメインと対形成させ、２個の機能的抗原結合部位を有する二量体分子の結合を促進する。
「DARPin」は、二重特異的アンキリン反復分子である。DARPinは、ヒトゲノムに見ることができ、最も豊富な結合タンパク質タイポ得の一つである、天然アンキリンタンパク質に由来する。DARPinライブラリーモジュールは、初期デザインについて２２９アンキリン反復およびその後の精密化のために他の２２００を使用する、天然アンキリン反復タンパク質配列により規定される。モジュールは、DARPinライブラリーの構成要素として役立つ。ライブラリーモジュールは、ヒトゲノム配列を模倣する。DARPinは、４～６モジュールからなる。各モジュールが約３.５kDaであるため、平均DARPinサイズは１６～２１kDaである。結合剤の選択は、完全に無細胞であり、He M. and Taussig MJ., Biochem Soc Trans. 2007, Nov;35(Pt 5):962-5に記載されるリボソームディスプレイにより実施される。
ＣＤＲの配列は、当分野で知られる何れかの番号システム、例えば、Kabatシステム(Kabat, E. A., et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th ed., Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991)；Chothiaシステム(Chothia &, Lesk, “Canonical Structures for the Hypervariable Regions of Immunoglobulins,” J. Mol. Biol. 196, 901-917 (1987))；またはＩＭＧＴシステム(Lefranc et al., “IMGT Unique Numbering for Immunoglobulin and Cell Receptor Variable Domains and Ig superfamily V-like domains,” Dev. Comp. Immunol. 27, 55-77 (2003))を引用して、同定され得る。
Figure 2023514224000002
本発明で記載する重鎖定常領域アミノ酸位置について、ナンバリングは、Edelman, G.M., et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 63 (1969) 78-85に最初に記載されたＥＵインデックスによる。EdelmanのＥＵナンバリングは、Kabat et al. (1991)(supra.)にも示される。故に、重鎖の文脈における用語「Kabatに示されるＥＵインデックス」、「ＥＵインデックス」、「KabatのＥＵインデックス」または「ＥＵナンバリング」は、Kabat et al. (1991)に示されるEdelman et al. のヒトｌｇＧ１ ＥＵ抗体に基づく残基ナンバリングシステムをいう。軽鎖定常領域アミノ酸配列で使用されるナンバリングシステムは、Kabat et al. (supra.)に示されるものに類似する。故に、ここで使用する「Kabatによる番号付け」は、Kabat et al. (supra.)に示すKabatをいう。
本発明の抗体およびその抗原結合フラグメントは、組み換え手段によりあらゆる種に由来し得る。例えば、抗体または抗原結合フラグメントは、そのマウス、ラット、ヤギ、ウマ、ブタ、ウシ、ニワトリ、ウサギ、ラクダ類、ロバ、ヒトまたはキメラバージョンであり得る。ヒトへの投与に使用するために、非ヒト由来抗体または抗原結合フラグメントを、遺伝的または構造的に変えて、ヒト患者への投与の際低抗原性となるようにし得る。
特に好ましいのは、特に、組み換えヒトまたはヒト化抗体としてのヒトまたはヒト化抗体である。
用語「ヒト化抗体」は、フレームワークまたは「相補性決定領域」(ＣＤＲ)が親免疫グロブリンと比較して異なる特異性の免疫グロブリンのＣＤＲを含むよう修飾されている、抗体である。例えば、マウスＣＤＲをヒト抗体のフレームワーク領域に移植して、「ヒト化抗体」を調製し得る。例えば、Riechmann, L., et al., Nature 332 (1988) 323-327; and Neuberger, M.S., et al., Nature 314 (1985) 268-270参照。ある実施態様において、「ヒト化抗体」は、特に、Ｃｌｑ結合および／またはＦｃ受容体(ＦｃＲ)結合に関して、本発明の抗体の性質を産生するために、定常領域が元の抗体からさらに修飾または変更されているものである。
用語「ヒト抗体」は、ヒトもしくはヒト細胞から産生されたまたはヒト抗体レパートリーまたは他のヒト抗体コード化配列を利用する非ヒト源に由来する抗体のものに対応するアミノ酸配列を有するものである。ヒト抗体のこの定義は、非ヒト抗原結合残基を含むヒト化抗体を特に除外する。ヒト抗体は、ファージディスプレイライブラリーを含む、当分野で知られる種々の技術を使用して、産生され得る。
用語「キメラ抗体」は、通常、組み換えＤＮＡ技術により調製される、ある起源または種からの可変領域、すなわち、結合領域および異なる起源または種由来の定常領域の少なくとも一部を含む、抗体をいう。マウス可変領域およびヒト定常領域を含むキメラ抗体は好ましい。本発明に含まれる「キメラ抗体」の他の好ましい形態は、定常領域が、特に、Ｃｌｑ結合および／またはＦｃ受容体(ＦｃＲ)結合に関して、本発明の抗体の性質を産生するように元の抗体から修飾または変更されているものを含む。このようなキメラ抗体は、「クラススイッチ抗体」とも称される。キメラ抗体は、免疫グロブリン可変領域をコードするＤＮＡセグメントおよび免疫グロブリン定常領域をコードするＤＮＡセグメントを含む免疫グロブリン遺伝子の発現産物である。慣用の組み換えＤＮＡおよび遺伝子トランスフェクション技術を含むキメラ抗体を産生する方法は、当分野で周知である。例えば、Morrison, S.L., et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81 (1984) 6851-6855；米国特許５,２０２,２３８および５,２０４,２４４参照。
用語「Ｆｃ領域」および「Ｆｃ」はここでは相互交換可能に使用され、２個のＦｃ鎖により形成される天然免疫グロブリンの部分をいう。各「Ｆｃ鎖」は、定常ドメインＣＨ２および定常ドメインＣＨ３を含む。各Ｆｃ鎖は、ヒンジ領域も含み得る。天然Ｆｃ領域はホモ二量体である。ある実施態様において、Ｆｃ領域は、Ｆｃヘテロ二量体化をさせる修飾を含み得る。
用語「Ｆｃ部分」は、Ｆｃ領域に対応する本発明の抗体の部分またはその抗原結合フラグメントをいう。
ＩｇＡ、ＩｇＧ、ＩｇＤ、ＩｇＥおよびＩｇＭとして分類される重鎖定常領域の５つの主要なクラスがあり、各々アイソタイプにより指定される特徴的エフェクター機能を有する。例えば、ＩｇＧは、ＩｇＧｌ、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４として知られる４サブクラスに分けら得る。Ｉｇ分子は、複数のクラスの細胞受容体と相互作用する。例えば、ＩｇＧ分子は、ＩｇＧクラスの抗体に特異的な３クラスのＦｃγ受容体(ＦｃγＲ)、すなわちＦｃγＲＩ、ＦｃγＲIIおよびＦｃγＲIIIと相互作用する。ＩｇＧのＦｃγＲ受容体への結合のための重要な配列は、ＣＨ２およびＣＨ３ドメインに位置することが記載されている。
本発明の抗体またはその抗原結合フラグメントは、あらゆるアイソタイプ、すなわちＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧおよびＩｇＭおよび４鎖免疫グロブリン(Ｉｇ)構造の合成多量体であってもよい。好ましい実施態様において、抗体またはその抗原結合フラグメントはＩｇＧアイソタイプである。抗体または抗原結合フラグメントは、あらゆるＩｇＧサブクラス、例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４アイソタイプであり得る。好ましい実施態様において、抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＩｇＧ１アイソタイプである。
ある実施態様において、抗体は、ＩｇＧアイソタイプである重鎖定常領域を含む。ある実施態様において、抗体は、ＩｇＧアイソタイプである重鎖定常領域の一部を含む。ある実施態様において、ＩｇＧ定常領域またはその一部は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４定常領域である。好ましくは、ＩｇＧ定常領域またはその一部は、ＩｇＧ１定常領域である。
本発明の抗体またはその抗原結合フラグメントは、ラムダ軽鎖またはカッパ軽鎖を含み得る。
好ましい実施態様において、抗体またはその抗原結合フラグメントは、カッパ軽鎖である軽鎖を含む。ある実施態様において、抗体または抗原結合フラグメントは、カッパ定常領域である軽鎖定常領域(ＣＬ)を含む軽鎖を含む。
ある実施態様において、抗体は、カッパ可変領域である軽鎖可変領域(ＶＬ)を含む軽鎖を含む。好ましくは、カッパ軽鎖は、カッパＶＬであるＶＬおよびカッパＣＬであるＣＬを含む。
あるいは、抗体またはその抗原結合フラグメントは、ラムダ軽鎖である軽鎖を含み得る。ある実施態様において、抗体または抗原結合フラグメントは、ラムダ定常領域である軽鎖定常領域(ＣＬ)を含む軽鎖を含む。ある実施態様において、抗体は、ラムダ可変領域である軽鎖可変領域(ＶＬ)を含む軽鎖を含む。
操作された抗体およびその抗原結合フラグメントは、ＶＨおよび／またはＶＬ内のフレームワーク残基が修飾されているものを含む。このような修飾は、抗体の性質を改善、例えば抗体の免疫原性を低減および／または抗体産生および精製を改善し得る。
ここに開示する抗体およびその抗原結合フラグメントは、さらに、当分野で知られる慣用の技術を使用して、例えば、アミノ酸欠失、挿入、置換、付加および／または組み換えおよび／または当分野で知られる何れかの他の修飾を、単独でまたは組み合わせで使用して、さらに修飾し得る。免疫グロブリン鎖のアミノ酸配列の基本的ＤＮＡ配列にこのような修飾を導入する方法は、当業者に周知である。
本発明の抗体およびその抗原結合フラグメントは、共有結合が抗体のそのエピトープへの結合を阻止しないかまたは抗体の生物学的活性を他の点で障害しないように、修飾(例えば、あらゆるタイプの分子の抗体への共有結合により)されている誘導体を含む。適当な誘導体の例は、フコシル化抗体、グリコシル化抗体、アセチル化抗体、ペグ化抗体、リン酸化抗体およびアミド化抗体を含むが、これらに限定されない。
本発明の抗体のアミノ酸配列の微細な変異は、アミノ酸配列における該変異が、本明細書の他の箇所に定義する本発明の抗体またはその抗原結合フラグメントと少なくとも７５％、より好ましくは少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％および最も好ましくは少なくとも９９％配列同一性を維持する限り、本発明の範囲内である考えられる。
本発明の抗体は、ある種からのアミノ酸残基が、保存的または非保存的位置の何れかで、他の種の対応する残基に置換されている、バリアントを含み得る。ある実施態様において、非保存的位置のアミノ酸残基は、保存的または非保存的残基で置換される。特に、保存的アミノ酸置換が考慮される。
「保存的アミノ酸置換」は、アミノ酸残基が類似の側鎖を有するアミノ酸残基で置き換えられるものである。類似の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは当分野で定義されており、塩基性側鎖(例えば、リシン、アルギニンまたはヒスチジン)、酸性側鎖(例えば、アスパラギン酸またはグルタミン酸)、非荷電極性側鎖(例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、チロシンまたはシステイン)、非極性側鎖(例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニンまたはトリプトファン)、ベータ分岐側鎖(例えば、スレオニン、バリン、イソロイシン)および芳香族側鎖(例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファンまたはヒスチジン)を含む。故に、ポリペプチドにおけるアミノ酸が同じ側鎖ファミリーの他のアミノ酸で置き換えられるならば、アミノ酸置換は保存的と考えられる。本発明の抗体に保存的に修飾されたバリアントを含めることは、他の形態のバリアント、例えば多型バリアント、種間ホモログおよびアレルを含むが、これらに限定されない。
「非保存的アミノ酸置換」は、(ｉ)正に荷電した側鎖を有する残基(例えば、Ａｒｇ、ＨｉｓまたはＬｙｓ)が負に荷電した残基(例えば、ＧｌｕまたはＡｓｐ)を置換するまたはそれにより置換される、(ii)親水性残基(例えば、ＳｅｒまたはＴｈｒ)が疎水性残基(例えば、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、ＰｈｅまたはＶａｌ)を置換するまたはそれにより置換される、(iii)システインまたはプロリンが何らかの他の残基を置換するまたはそれにより置換されるまたは(iv)嵩高い疎水性または芳香族側鎖を有する残基(例えば、Ｖａｌ、Ｈｉｓ、ＩｌｅまたはＴｒｐ)が小さい側鎖を有する残基(例えば、ＡｌａまたはＳｅｒ)または側鎖がない残基(例えば、Ｇｌｙ)を置換するまたはそれにより置換されるものを含む。
抗体形式
多特異的(例えば二重特異的)抗体の形式は、最先端技術で知られている。例えば、二重特異的抗体形式はKontermann RE, mAbs 4:2 1-16 (2012); Holliger P., Hudson PJ, Nature Biotech.23 (2005) 1126- 1136, Chan AC, Carter PJ Nature Reviews Immunology 10, 301-316 (2010) and Cuesta AM et al., Trends Biotech 28 (2011) 355-362に記載される。
本発明の多特異的(例えば二重特異的)抗体はどんな形式でもよい。多特異的(例えば二重特異的)抗体形式は、例えば、多価単一鎖抗体、二重特異的抗体およびトリアボディおよびさらなる抗原結合ドメイン(例えば、単一鎖Ｆｖ、タンデムｓｃＦｖ、ＶＨドメインおよび／またはＶＬドメイン、Ｆａｂまたは(Ｆａｂ)２)が１以上のペプチド－リンカーを介して連結している完全長抗体の定常ドメイン構造を有する抗体ならびにDARPinなどの抗体模倣体を含む。ある実施態様において、本発明の多特異的(例えば二重特異的)抗体は、二重特異的Ｔ細胞エンゲイジャー(ＢＩＴＥ(登録商標))などのｓｃＦｖの形式を有する。ある実施態様において、本発明の抗体は、ＢＣＭＡに結合する第一ドメイン、Ｔ細胞抗原(例えばＣＤ３)に結合する第二ドメインならびに各々ヒンジ、ＣＨ２ドメインおよびＣＨ３ドメインを含む２個のポリペプチドモノマーを含む第三ドメインであって、当該２個のポリペプチドモノマーが互いにペプチドリンカーを介して融合している(例えば(ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３－リンカー－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３)第三ドメインを含む、単一鎖抗体である。
抗体の「結合価」は、結合ドメインの数を意味する。すなわち、用語「二価」、「三価」および「多価」は、それぞれ２個の結合ドメイン、３個の結合ドメインおよび多数の結合ドメインの存在を意味する。本発明の多特異的(例えば二重特異的)抗体は、各標的抗原に結合できる１個を超える結合ドメインを有し得る(すなわち、抗体は三価または多価である)。好ましい実施態様において、本発明の多特異的(例えば二重特異的)抗体は、各標的抗原の同じエピトープに結合できる１個を超える結合ドメインを有する。ある実施態様において、本発明の多特異的(例えば二重特異的)抗体は、各標的抗原の異なるエピトープに結合できる１個を超える結合ドメインを有する。
本発明の多特異的(例えば二重特異的)抗体は二価、三価または四価であり得る。好ましい実施態様において、多特異的(例えば二重特異的)抗体は三価であり、好ましくはここで三価抗体はＢＣＭＡに対して二価である。故に、二重特異的抗体は三価であってよく、ここで、三価抗体はＢＣＭＡに対して二価である。
特異的(例えば二重特異的)抗体は、単一種からの完全長であってよくまたはキメラ化もしくはヒト化されていてよい。２個を超える抗原結合ドメインを有する抗体について、いくつかの結合ドメインは、タンパク質が２個の異なる抗原の結合ドメインを有する限り、同一でよい。
本発明の多特異的(例えば二重特異的)抗体は、二重特異的ヘテロ二量体形式を有し得る。ある実施態様において、二重特異的抗体は２個の異なる重鎖および２個の異なる軽鎖を含む。他の実施態様において、多特異的(例えば二重特異的)抗体は２個の同一軽鎖および２個の異なる重鎖を含む。ある実施態様において、本発明の多特異的(例えば二重特異的)抗体において、重鎖および軽鎖(ＨＣ／ＬＣ)の２個の対の一方はＣＤ３に特異的に結合し、他方はＢＣＭＡに特異的に結合する。
本発明の二重特異的抗体が二価である実施態様において、それらは１個の抗ＢＣＭＡ抗体および１個の抗ＣＤ３抗体を含んでよい(ここでは「１＋１」形式と称する)。
ＢＣＭＡおよびＣＤ３抗体がＦａｂである実施態様において、１＋１形式の二価二重特異的抗体は、形式：ＣＤ３ Ｆａｂ－ＢＣＭＡ Ｆａｂ(すなわちＦｃが存在しないとき)を有し得る。あるいは、二重特異的抗体は、形式：Ｆｃ－ＣＤ３ Ｆａｂ－ＢＣＭＡ Ｆａｂ；Ｆｃ－ＢＣＭＡ Ｆａｂ－ＣＤ３ Ｆａｂ；またはＢＣＭＡ Ｆａｂ－Ｆｃ－ＣＤ３ Ｆａｂ(すなわちＦｃが存在するとき)を有し得る。好ましい実施態様において、二価二重特異的抗体は形式ＢＣＭＡ Ｆａｂ－Ｆｃ－ＣＤ３ Ｆａｂを有する。
「ＣＤ３ Ｆａｂ－ＢＣＭＡ Ｆａｂ」は、ＣＤ３ ＦａｂがそのＮ末端を介してＢＣＭＡ ＦａｂのＣ末端に結合することを意味する。
「Ｆｃ－ＢＣＭＡ Ｆａｂ－ＣＤ３ Ｆａｂ」は、ＢＣＭＡ ＦａｂがそのＣ末端を介してＦｃのＮ末端に結合し、ＣＤ３ ＦａｂがそのＣ末端を介してＢＣＭＡ ＦａｂのＮ末端に結合することを意味する。
「Ｆｃ－ＣＤ３ Ｆａｂ－ＢＣＭＡ Ｆａｂ」は、ＣＤ３ ＦａｂがそのＣ末端を介してＦｃのＮ末端に結合し、ＢＣＭＡ ＦａｂがそのＣ末端を介してＣＤ３ ＦａｂのＮ末端に結合することを意味する。
「ＢＣＭＡ Ｆａｂ－Ｆｃ－ＣＤ３ Ｆａｂ」は、ＢＣＭＡおよびＣＤ３ ＦａｂフラグメントがそれらのＣ末端を介してＦｃのＮ末端に結合することを意味する。
本発明の二重特異的抗体が三価である実施態様において、それらは、２個の抗ＢＣＭＡ抗体および１個の抗ＣＤ３抗体を含み得る(ここでは「２＋１」形式と称する)。
ＢＣＭＡおよびＣＤ３抗体がＦａｂである実施態様において、２＋１形式の三価二重特異的抗体は、形式：ＣＤ３ Ｆａｂ－ＢＣＭＡ Ｆａｂ－ＢＣＭＡ Ｆａｂ；またはＢＣＭＡ Ｆａｂ－ＣＤ３ Ｆａｂ－ＢＣＭＡ Ｆａｂ(すなわちＦｃが存在しないとき)を有し得る。あるいは、二重特異的抗体は、形式：ＢＣＭＡ Ｆａｂ－Ｆｃ－ＣＤ３ Ｆａｂ－ＢＣＭＡ Ｆａｂ；ＢＣＭＡ Ｆａｂ－Ｆｃ－ＢＣＭＡ Ｆａｂ－ＣＤ３ Ｆａｂ；またはＣＤ３ Ｆａｂ－Ｆｃ－ＢＣＭＡ Ｆａｂ－ＢＣＭＡ Ｆａｂ(すなわちＦｃが存在するとき)を有し得る。好ましい実施態様において、三価二重特異的抗体は形式ＢＣＭＡ Ｆａｂ－Ｆｃ－ＣＤ３ Ｆａｂ－ＢＣＭＡ Ｆａｂを有する。
「ＣＤ３ Ｆａｂ－ＢＣＭＡ Ｆａｂ－ＢＣＭＡ Ｆａｂ」は、ＣＤ３ ＦａｂがそのＣ末端を介して第一ＢＣＭＡ ＦａｂのＮ末端に結合し、第一ＢＣＭＡ ＦａｂがそのＣ末端を介して第二ＢＣＭＡ ＦａｂのＮ末端に結合することを意味する。
「ＢＣＭＡ Ｆａｂ－ＣＤ３ Ｆａｂ－ＢＣＭＡ Ｆａｂ」は、第一ＢＣＭＡ ＦａｂがそのＣ末端を介してＣＤ３ ＦａｂのＮ末端に結合し、ＣＤ３ ＦａｂがそのＣ末端を介して第二ＢＣＭＡ ＦａｂのＮ末端に結合することを意味する。
「ＢＣＭＡ Ｆａｂ－Ｆｃ－ＣＤ３ Ｆａｂ－ＢＣＭＡ Ｆａｂは、第一ＢＣＭＡ ＦａｂおよびＣＤ３ ＦａｂがそれらのＣ末端を介してＦｃのＮ末端に結合し、第二ＢＣＭＡ ＦａｂがそのＣ末端を介してＣＤ３ ＦａｂのＮ末端に結合することを意味する。
「ＢＣＭＡ Ｆａｂ－Ｆｃ－ＢＣＭＡ Ｆａｂ－ＣＤ３ Ｆａｂ」は、第一ＢＣＭＡ Ｆａｂおよび第二ＢＣＭＡ ＦａｂがそれらのＣ末端を介してＦｃのＮ末端に結合し、ＣＤ３ ＦａｂがそのＣ末端を介して第二ＢＣＭＡ ＦａｂのＮ末端に結合することを意味する。
「ＣＤ３ Ｆａｂ－Ｆｃ－ＢＣＭＡ Ｆａｂ－ＢＣＭＡ Ｆａｂ」は、ＣＤ３ Ｆａｂおよび第一ＢＣＭＡ ＦａｂがそれらのＣ末端を介してＦｃのＮ末端に結合し、第二ＢＣＭＡ ＦａｂがそのＣ末端を介して第一ＢＣＭＡ ＦａｂのＮ末端に結合することを意味する。
ある実施態様において、本発明の二重特異的抗体は１個以下のＢＣＭＡに特異的に結合するＢＣＭＡ Ｆａｂおよび１個以下のＣＤ３に特異的に結合するＣＤ３ Ｆａｂおよび１個以下のＦｃ部分を含む。
ある実施態様において、二重特異的抗体は１個以下のＣＤ３に特異的に結合するＣＤ３ Ｆａｂ、２個以下のＢＣＭＡに特異的に結合するＢＣＭＡ Ｆａｂおよび１個以下のＦｃ部分を含む。ある実施態様において、１個以下のＣＤ３ Ｆａｂおよび１個以下のＢＣＭＡ ＦａｂはＦｃ部分に連結され、連結は、ＦａｂのＦｃ部分のヒンジ領域へのＣ末端結合を介して実施される。ある実施態様において、第二ＢＣＭＡ Ｆａｂは、そのＣ末端を介してＣＤ３ ＦａｂのＮ末端またはＦｃ部分のヒンジ領域に結合し、故に、二重特異的抗体のＦｃ部分とＣＤ３ Ｆａｂの間である。
２個のＢＣＭＡ Ｆａｂを含む実施態様において、ＢＣＭＡ Ｆａｂは好ましくは同じ抗体に由来し、好ましくはＣＤＲ配列、可変ドメイン配列ＶＨおよびＶＬおよび／または定常ドメイン配列ＣＨ１およびＣＬが同一である。好ましくは、２個のＢＣＭＡ Ｆａｂのアミノ酸配列は同一である。
本発明の二重特異的抗体はまたＦａｂの代わりにｓｃＦｖも含み得る。故に、ある実施態様において、二重特異的抗体は、各Ｆａｂが対応するｓｃＦｖに置き換わった、上記形式の何れかを有する。
本発明の二重特異的抗体の要素、例えばＦａｂフラグメントを、最先端技術による適切なリンカーの使用により、化学的に一緒に連結し得る。好ましい実施態様において、(Ｇｌｙ４－Ｓｅｒ１)３リンカーが使用される(Desplancq DK et al., Protein Eng. 1994 Aug;7(8):1027-33 and Mack M. et al., PNAS July 18, 1995 vol. 92 no. 15 7021-7025)。ここで使用する「化学的に連結」(または「連結」)は、要素が共有結合により連結されることを意味する。リンカーがペプチド性リンカーであるため、このような共有結合は、通常生化学的組み換え手段により実施される。例えば、結合は、各ＦａｂフラグメントのＶＬおよび／またはＶＨドメイン、リンカーおよび抗体がＦｃを含むならばＦｃ部分鎖をコードする核酸を使用して、実施し得る。
リンカーが使用される場合において、このリンカーは、第一ドメインおよび第二ドメインの各々が互いに独立してそれらの異なる結合特異性を維持できることを十分に確実にする長さおよび配列であり得る。
抗体配列
ある実施態様において、多特異的(例えば二重特異的)抗体は、次の群から選択されるＣＤＲ１Ｈ、ＣＤＲ２Ｈ、ＣＤＲ３Ｈ、ＣＤＲ１Ｌ、ＣＤＲ２ＬおよびＣＤＲ３Ｌ領域組み合わせを含む抗ＢＣＭＡ抗体またはその抗原結合フラグメントを含む：
ａ)配列番号２１のＣＤＲ１Ｈ領域、配列番号２２のＣＤＲ２Ｈ領域、配列番号１７のＣＤＲ３Ｈ領域、配列番号２３のＣＤＲ１Ｌ領域、配列番号２４のＣＤＲ２Ｌ領域および配列番号２０のＣＤＲ３Ｌ領域；
ｂ)配列番号２１のＣＤＲ１Ｈ領域、配列番号２２のＣＤＲ２Ｈ領域、配列番号１７のＣＤＲ３Ｈ領域、配列番号２５のＣＤＲ１Ｌ領域、配列番号２６のＣＤＲ２Ｌ領域および配列番号２０のＣＤＲ３Ｌ領域；
ｃ)配列番号２１のＣＤＲ１Ｈ領域、配列番号２２のＣＤＲ２Ｈ領域、配列番号１７のＣＤＲ３Ｈ領域、配列番号２７のＣＤＲ１Ｌ領域、配列番号２８のＣＤＲ２Ｌ領域および配列番号２０のＣＤＲ３Ｌ領域；
ｄ)配列番号２９のＣＤＲ１Ｈ領域、配列番号３０のＣＤＲ２Ｈ領域、配列番号１７のＣＤＲ３Ｈ領域、配列番号３１のＣＤＲ１Ｌ領域、配列番号３２のＣＤＲ２Ｌ領域および配列番号３３のＣＤＲ３Ｌ領域；
ｅ)配列番号３４のＣＤＲ１Ｈ領域、配列番号３５のＣＤＲ２Ｈ領域、配列番号１７のＣＤＲ３Ｈ領域、配列番号３１のＣＤＲ１Ｌ領域、配列番号３２のＣＤＲ２Ｌ領域および配列番号３３のＣＤＲ３Ｌ領域；
ｆ)配列番号３６のＣＤＲ１Ｈ領域、配列番号３７のＣＤＲ２Ｈ領域、配列番号１７のＣＤＲ３Ｈ領域、配列番号３１のＣＤＲ１Ｌ領域、配列番号３２のＣＤＲ２Ｌ領域および配列番号３３のＣＤＲ３Ｌ領域；および
ｇ)配列番号１５のＣＤＲ１Ｈ領域、配列番号１６のＣＤＲ２Ｈ領域、配列番号１７のＣＤＲ３Ｈ領域、配列番号１８のＣＤＲ１Ｌ領域、配列番号１９のＣＤＲ２Ｌ領域および配列番号２０のＣＤＲ３Ｌ領域。
ここに開示する何れの実施態様においても、配列番号１８のＣＤＲ１Ｌ領域を配列番号６７のＣＤＲ１Ｌ領域で置き換え得るおよび配列番号１９のＣＤＲ２Ｌ領域を配列番号６８のＣＤＲ２Ｌ領域で置き換え得る。従って、ある実施態様において、多特異的(例えば二重特異的)抗体は、配列番号１５のＣＤＲ１Ｈ領域、配列番号１６のＣＤＲ２Ｈ領域、配列番号１７のＣＤＲ３Ｈ領域、配列番号６７のＣＤＲ１Ｌ領域、配列番号６８のＣＤＲ２Ｌ領域および配列番号２０のＣＤＲ３Ｌ領域を含む抗ＢＣＭＡ抗体またはその抗原結合フラグメントを含み得る。
ここに開示する何れの実施態様においても、配列番号２７のＣＤＲ１Ｌ領域を配列番号７１のＣＤＲ１Ｌ領域で置き換え得る；および配列番号２８のＣＤＲ２Ｌ領域を配列番号７２のＣＤＲ２Ｌ領域で置き換え得る。従って、ある実施態様において、多特異的(例えば二重特異的)抗体は、配列番号２１のＣＤＲ１Ｈ領域、配列番号２２のＣＤＲ２Ｈ領域、配列番号１７のＣＤＲ３Ｈ領域、配列番号７１のＣＤＲ１Ｌ領域、配列番号７２のＣＤＲ２Ｌ領域および配列番号２０のＣＤＲ３Ｌ領域を含む抗ＢＣＭＡ抗体またはその抗原結合フラグメントを含み得る。
ここに開示する何れの実施態様においても、配列番号２５のＣＤＲ１Ｌ領域を配列番号６９のＣＤＲ１Ｌ領域で置き換え得る；および配列番号２６のＣＤＲ２Ｌ領域を配列番号７０のＣＤＲ２Ｌ領域で置き換え得る。従って、ある実施態様において、多特異的(例えば二重特異的)抗体は、配列番号２１のＣＤＲ１Ｈ領域、配列番号２２のＣＤＲ２Ｈ領域、配列番号１７のＣＤＲ３Ｈ領域、配列番号６９のＣＤＲ１Ｌ領域、配列番号７０のＣＤＲ２Ｌ領域および配列番号２０のＣＤＲ３Ｌ領域を含む抗ＢＣＭＡ抗体またはその抗原結合フラグメントを含み得る。
好ましい実施態様において、多特異的(例えば二重特異的)抗体は、次のものから選択されるＣＤＲ１Ｈ、ＣＤＲ２Ｈ、ＣＤＲ３Ｈ ＣＤＲ１Ｌ、ＣＤＲ２ＬおよびＣＤＲ３Ｌ領域組み合わせを含む、抗ＢＣＭＡ抗体またはその抗原結合フラグメントを含む：
ａ)配列番号２１のＣＤＲ１Ｈ領域、配列番号２２のＣＤＲ２Ｈ領域、配列番号１７のＣＤＲ３Ｈ領域、配列番号２７のＣＤＲ１Ｌ領域、配列番号２８のＣＤＲ２Ｌ領域および配列番号２０のＣＤＲ３Ｌ領域；
ｂ)配列番号２１のＣＤＲ１Ｈ領域、配列番号２２のＣＤＲ２Ｈ領域、配列番号１７のＣＤＲ３Ｈ領域、配列番号２５のＣＤＲ１Ｌ領域、配列番号２６のＣＤＲ２Ｌ領域および配列番号２０のＣＤＲ３Ｌ領域；または
ｃ)配列番号１５のＣＤＲ１Ｈ領域、配列番号１６のＣＤＲ２Ｈ領域、配列番号１７のＣＤＲ３Ｈ領域、配列番号１８のＣＤＲ１Ｌ領域、配列番号１９のＣＤＲ２Ｌ領域および配列番号２０のＣＤＲ３Ｌ領域。
特に好ましい実施態様において、多特異的(例えば二重特異的)抗体は、配列番号２１のＣＤＲ１Ｈ領域、配列番号２２のＣＤＲ２Ｈ領域および配列番号１７のＣＤＲ３Ｈ領域を含むＶＨ領域および配列番号２７のＣＤＲ１Ｌ領域、配列番号２８のＣＤＲ２Ｌ領域および配列番号２０のＣＤＲ３Ｌ領域を含むＶＬ領域を含む抗ＢＣＭＡ抗体またはその抗原結合フラグメントを含む。ある実施態様において、多特異的(例えば二重特異的)抗体は、次の群から選択されるＶＨおよびＶＬを含む、抗ＢＣＭＡ抗体またはその抗原結合フラグメントを含む：
ａ)配列番号１０のＶＨ領域および配列番号１２のＶＬ領域、
ｂ)配列番号１０のＶＨ領域および配列番号１３のＶＬ領域、
ｃ)配列番号１０のＶＨ領域および配列番号１４のＶＬ領域、
ｄ)配列番号３８のＶＨ領域および配列番号１２のＶＬ領域、
ｅ)配列番号３９のＶＨ領域および配列番号１２のＶＬ領域、
ｆ)配列番号４０のＶＨ領域および配列番号１２のＶＬ領域または
ｇ)配列番号９のＶＨ領域および配列番号１１のＶＬ領域。
ある実施態様において、多特異的(例えば二重特異的)抗体は、次の群から選択されるＶＨおよびＶＬを含む、抗ＢＣＭＡ抗体またはその抗原結合フラグメントを含む：
ａ)配列番号１０のアミノ酸と少なくとも７５％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９５％同一または同一であるアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号１４のアミノ酸と少なくとも９０％同一、少なくとも９５％同一または同一であるアミノ酸配列を含むＶＬ；
ｂ)配列番号１０のアミノ酸と少なくとも７５％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９５％同一または同一であるアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号１３のアミノ酸と少なくとも７５％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９５％同一または同一であるアミノ酸配列を含むＶＬ；または
ｃ)配列番号９のアミノ酸と少なくとも７５％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９５％同一または同一であるアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号１１のアミノ酸と少なくとも７５％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９５％同一または同一であるアミノ酸配列を含むＶＬ。
ある実施態様において、多特異的(例えば二重特異的)抗体は、次の群から選択されるＶＨおよびＶＬを含む、抗ＢＣＭＡ抗体またはその抗原結合フラグメントを含む：
ａ)配列番号１０のＶＨ領域および配列番号１３のＶＬ領域、
ｂ)配列番号１０のＶＨ領域および配列番号１４のＶＬ領域または
ｃ)配列番号９のＶＨ領域および配列番号１１のＶＬ領域。
特に好ましい実施態様において、抗ＢＣＭＡ抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１０のＶＨ領域および配列番号１４のＶＬ領域を含む。
ある実施態様において、多特異的(例えば二重特異的)抗体は抗ＣＤ３抗体またはその抗原結合フラグメントを含む。
抗ＣＤ３抗体の例は、ＯＫＴ３、ＴＲ６６、ＡＰＡ １／１、ＳＰ３４、ＣＨ２５２７、ＷＴ３１、７Ｄ６、ＵＣＨＴ－１、Ｌｅｕ－４、ＢＣ－３、Ｈ２Ｃ、ＨｕＭ２９１(ビジリズマブ)、Ｈｕ２９１(ＰＤＬ)、ＣｈＡｇｌｙＣＤ３(オテリキシズマブ)、ｈＯＫＴ３γ１(Ａｌａ－Ａｌａ)(テプリズマブ)およびＮＩ－０４０１(フォラルマブ)を含む。
初めて産生された抗ＣＤ３抗体は、ＣＤ３εドメインに結合するマウス抗体であるＯＫＴ３(ムロモナブ－ＣＤ３であった。その後の抗ＣＤ３抗体は、ヒト化またはヒト抗体および操作された抗体、例えば修飾Ｆｃ領域を含む抗体を含む。
抗ＣＤ３抗体は、単一ポリペプチド鎖上のエピトープ、例えばＡＰＡ １／１またはＳＰ３(Yang SJ, The Journal of Immunology (1986) 137; 1097-1100)またはＣＤ３の２以上のサブユニットに位置する構造的エピトープ、例えばＷＴ３１、７Ｄ６、ＵＣＨＴ－１(ＷＯ２００００４１４７４参照)およびＬｅｕ－４４を認識できる。ＢＣ－３(Anasetti et al., Transplantation 54: 844 (1992))およびＨ２Ｃ(ＷＯ２００８１１９５６７Ａ２)を含むいくつかの抗ＣＤ３抗体を使用した臨床治験が実施されている。臨床開発中の抗ＣＤ３抗体は、ＨｕＭ２９１(ビジリズマブ)(Norman et al., Transplantation. 2000 Dec 27;70(12):1707-12.)、Ｈｕ２９１(ＰＤＬ)、ＣｈＡｇｌｙＣＤ３(オテリキシズマブ)(H Waldmann)、ｈＯＫＴ３γ１(Ａｌａ－Ａｌａ)(テプリズマブ)(J BluestoneおよびJohnson and Johnson)および(ＮＩ－０４０１)フォラルマブを含む。
あらゆる抗ＣＤ３抗体またはその抗原結合フラグメントが、本発明の多特異的(例えば二重特異的)抗体における使用に適し得る。例えば、多特異的(例えば二重特異的)抗体は、ＯＫＴ３、ＴＲ６６、ＡＰＡ １／１、ＳＰ３４、ＣＨ２５２７、ＷＴ３１、７Ｄ６、ＵＣＨＴ－１、Ｌｅｕ－４、ＢＣ－３、Ｈ２Ｃ、ＨｕＭ２９１(ビジリズマブ)、Ｈｕ２９１(ＰＤＬ)、ＣｈＡｇｌｙＣＤ３(オテリキシズマブ)、ｈＯＫＴ３γ１(Ａｌａ－Ａｌａ)(テプリズマブ)およびＮＩ－０４０１(フォラルマブ)から選択される抗ＣＤ３抗体を含み得る。ある実施態様において、本発明の多特異的(例えば二重特異的)抗体はヒト化ＳＰ３４抗体またはその抗原結合フラグメントを含む。
ある好ましい実施態様において、抗ＣＤ３抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＳＰ３４に由来し得て、抗体ＳＰ３４と類似の配列およびエピトープ結合に関して同じ性質を有し得る。
ある実施態様において、多特異的(例えば二重特異的)抗体は、それぞれ重鎖ＣＤＲ１Ｈ、ＣＤＲ２ＨおよびＣＤＲ３Ｈとして配列番号１、２および３の重鎖ＣＤＲを含む可変ドメインＶＨおよびそれぞれ軽鎖ＣＤＲ１Ｌ、ＣＤＲ２ＬおよびＣＤＲ３Ｌとして配列番号４、５および６の軽鎖ＣＤＲを含む可変ドメインＶＬを含む、抗ＣＤ３抗体またはその抗原結合フラグメントを含む。
ある実施態様において、多特異的(例えば二重特異的)抗体は、配列番号７(ＶＨ)および配列番号８(ＶＬ)の可変ドメインを含む抗ＣＤ３抗体またはその抗原結合フラグメントを含む。ある実施態様において、多特異的(例えば二重特異的)抗体は、配列番号７のアミノ酸と少なくとも７５％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９５％同一または同一であるアミノ酸配列を含む可変領域ＶＨおよび配列番号８のアミノ酸と少なくとも７５％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９５％同一または同一であるアミノ酸配列を含む可変領域ＶＬを含む、抗ＣＤ３抗体またはその抗原結合フラグメントを含む。
ある実施態様において、多特異的(例えば二重特異的)抗体は、次の群から選択されるＣＤＲ１Ｈ、ＣＤＲ２Ｈ、ＣＤＲ３Ｈ、ＣＤＲ１Ｌ、ＣＤＲ２ＬおよびＣＤＲ３Ｌ領域組み合わせを含む抗ＢＣＭＡ抗体またはその抗原結合フラグメント：
ａ)配列番号２１のＣＤＲ１Ｈ領域、配列番号２２のＣＤＲ２Ｈ領域、配列番号１７のＣＤＲ３Ｈ領域、配列番号２３のＣＤＲ１Ｌ領域、配列番号２４のＣＤＲ２Ｌ領域および配列番号２０のＣＤＲ３Ｌ領域；
ｂ)配列番号２１のＣＤＲ１Ｈ領域。配列番号２２のＣＤＲ２Ｈ領域、配列番号１７のＣＤＲ３Ｈ領域、配列番号２５のＣＤＲ１Ｌ領域、配列番号２６のＣＤＲ２Ｌ領域および配列番号２０のＣＤＲ３Ｌ領域；
ｃ)配列番号２１のＣＤＲ１Ｈ領域、配列番号２２のＣＤＲ２Ｈ領域、配列番号１７のＣＤＲ３Ｈ領域、配列番号２７のＣＤＲ１Ｌ領域、配列番号２８のＣＤＲ２Ｌ領域および配列番号２０のＣＤＲ３Ｌ領域；
ｄ)配列番号２９のＣＤＲ１Ｈ領域、配列番号３０のＣＤＲ２Ｈ領域、配列番号１７のＣＤＲ３Ｈ領域、配列番号３１のＣＤＲ１Ｌ領域、配列番号３２のＣＤＲ２Ｌ領域および配列番号３３のＣＤＲ３Ｌ領域；
ｅ)配列番号３４のＣＤＲ１Ｈ領域、配列番号３５のＣＤＲ２Ｈ領域、配列番号１７のＣＤＲ３Ｈ領域、配列番号３１のＣＤＲ１Ｌ領域、配列番号３２のＣＤＲ２Ｌ領域および配列番号３３のＣＤＲ３Ｌ領域；
ｆ)配列番号３６のＣＤＲ１Ｈ領域、配列番号３７のＣＤＲ２Ｈ領域、配列番号１７のＣＤＲ３Ｈ領域、配列番号３１のＣＤＲ１Ｌ領域、配列番号３２のＣＤＲ２Ｌ領域および配列番号３３のＣＤＲ３Ｌ領域；または
ｇ)配列番号１５のＣＤＲ１Ｈ領域、配列番号１６のＣＤＲ２Ｈ領域、配列番号１７のＣＤＲ３Ｈ領域、配列番号１８のＣＤＲ１Ｌ領域、配列番号１９のＣＤＲ２Ｌ領域および配列番号２０のＣＤＲ３Ｌ領域、
および配列番号１のＣＤＲ１Ｈ領域、配列番号２のＣＤＲ２Ｈ領域、配列番号３のＣＤＲ３Ｈ領域、配列番号４のＣＤＲ１Ｌ領域、配列番号５のＣＤＲ２Ｌ領域および配列番号６のＣＤＲ３Ｌ領域を含む抗ＣＤ３抗体またはその抗原結合フラグメント
を含む。
特に好ましい実施態様において、多特異的(例えば二重特異的)抗体は
配列番号２１のＣＤＲ１Ｈ領域、配列番号２２のＣＤＲ２Ｈ領域および配列番号１７のＣＤＲ３Ｈ領域を含むＶＨ領域および配列番号２７のＣＤＲ１Ｌ領域、配列番号２８のＣＤＲ２Ｌ領域および配列番号２０のＣＤＲ３Ｌ領域を含むＶＬ領域を含む抗ＢＣＭＡ抗体またはその抗原結合フラグメント；および
配列番号１のＣＤＲ１Ｈ領域、配列番号２のＣＤＲ２Ｈ領域、配列番号３のＣＤＲ３Ｈ領域、配列番号４のＣＤＲ１Ｌ領域、配列番号５のＣＤＲ２Ｌ領域および配列番号６のＣＤＲ３Ｌ領域を含む抗ＣＤ３抗体またはその抗原結合フラグメント
を含む。
ある実施態様において、多特異的(例えば二重特異的)抗体は、次の群から選択されるＶＨおよびＶＬを含む、抗ＢＣＭＡ抗体またはその抗原結合フラグメント：
ａ)配列番号１０のＶＨ領域および配列番号１２のＶＬ領域；
ｂ)配列番号１０のＶＨ領域および配列番号１３のＶＬ領域；
ｃ)配列番号１０のＶＨ領域および配列番号１４のＶＬ領域；
ｄ)配列番号３８のＶＨ領域および配列番号１２のＶＬ領域；
ｅ)配列番号３９のＶＨ領域および配列番号１２のＶＬ領域；
ｆ)配列番号４０のＶＨ領域および配列番号１２のＶＬ領域；または
ｇ)配列番号９のＶＨ領域および配列番号１１のＶＬ領域および
配列番号７のＶＨ領域および配列番号８のＶＬ領域を含む抗ＣＤ３抗体またはその抗原結合フラグメント
を含む。
特に好ましい実施態様において、多特異的(例えば二重特異的)抗体は、配列番号１０のＶＨ領域および配列番号１４のＶＬ領域を含む抗ＢＣＭＡ抗体またはその抗原結合フラグメントならびに配列番号７のＶＨ領域および配列番号８のＶＬ領域を含む抗ＣＤ３抗体またはその抗原結合フラグメントを含む。
ある実施態様において、多特異的(例えば二重特異的)抗体は、ＧＳＫ２８５７９１６、ＡＭＧ－４２０、ＡＭＧ－７０１、ＪＮＪ－９５７、ＪＮＪ－６４００７９５７、ＰＦ－０６８６３１３５、ＲＥＧＮ－５４５８またはＴＮＢ－３８３Ｂの一つのＣＤＲ３Ｈ、ＣＤＲ３Ｌ、ＣＤＲ１Ｈ、ＣＤＲ２Ｈ、ＣＤＲ１ＬおよびＣＤＲ２Ｌを含む抗ＢＣＭＡ抗体またはその抗原結合フラグメントを含む。ある実施態様において、多特異的(例えば二重特異的)抗体は、ＧＳＫ２８５７９１６、ＡＭＧ－４２０、ＡＭＧ－７０１、ＪＮＪ－９５７、ＪＮＪ－６４００７９５７、ＰＦ－０６８６３１３５、ＲＥＧＮ－５４５８またはＴＮＢ－３８３Ｂの一つのＶＨおよびＶＬを含む抗ＢＣＭＡ抗体またはその抗原結合フラグメントを含む。
Ｆｃ
本発明の多特異的(例えば二重特異的)抗体はＦｃを含んでよいまたはＦｃを含まなくてよい。好ましい実施態様において、本発明の多特異的(例えば二重特異的)抗体はＦｃ、好ましくはヒトＦｃを含む。
ある実施態様において、Ｆｃは、バリアントＦｃ、例えば、望ましい構造特性および／または生物学的活性を特性するよう親Ｆｃ配列(例えばその後にバリアントを産生するために修飾される非修飾Ｆｃポリペプチド)と比較して修飾(例えばアミノ酸置換、欠失および／または挿入による)されている、Ｆｃ配列である。
従って、本発明の多特異的(例えば二重特異的)抗体は、典型的に、血清半減期、補体結合、Ｆｃ受容体結合および／または抗原依存性細胞毒性などの抗体の１以上の機能的性質を変えるために１以上の修飾を含むＦｃを含み得る。Ｆｃは、本発明の抗体において、抗ＢＣＭＡおよび／または抗ＣＤ３ Ｆａｂフラグメントと連結され得る。
Ｆｃの存在は、抗体の排出半減期を伸ばす利点がある。本発明の多特異的(例えば二重特異的)抗体は、マウスまたはカニクイザルサル、好ましくはカニクイザルサルで、１２時間より長い、好ましくは３日以上の排出半減期を有し得る。ある実施態様において、本発明の多特異的(例えば二重特異的)抗体は、少なくとも週１回または２回投与を可能とする約１～１２日の排出半減期を有する。
エフェクター機能低減
好ましくは、本発明の多特異的(例えば二重特異的)抗体は、ＦｃＲおよびＣ１ｑ結合を回避し、ＡＤＣＣ／ＣＤＣを最小化するための修飾を含む、Ｆｃ領域(例えばＩｇＧ１サブクラスの)を含む。これは、二重特異的抗体が、その腫瘍細胞致死有効性を、純粋にエフェクター細胞の強力な機構、例えばＴ細胞、再指示／活性化に介在する利点を提供する。それ故に、補体系およびＦｃＲを発現するエフェクター細胞に対する効果などのさらなる作用機構は回避され、注入に伴う反応などの副作用が減少する。
好ましい実施態様において、本発明の多特異的(例えば二重特異的)抗体は、修飾Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５ＡおよびＰ３２９Ｇ(ＥＵナンバリングによる番号付け)を含む、ＩｇＧ、特にＩｇＧ１のＦｃ領域を含む。
ヘテロ二量体化
本発明の多特異的(例えば二重特異的)抗体はヘテロ多量体抗体であり得る。このようなヘテロ多量体抗体は、抗体の正しい集合を促進するための抗体鎖間の相互作用に関与する領域に修飾を含み得る。
例えば、本発明の多特異的(例えば二重特異的)抗体は、Ｆｃヘテロ二量体化させるためにＣＨ２およびＣＨ３ドメインに１以上の修飾を有するＦｃを含み得る。これとは別にまたはこれに加えて、本発明の多特異的(例えば二重特異的)抗体は、Ｆａｂフラグメントの重鎖と軽鎖の優先的対形成を促進するためにＣＨ１およびＣＬ領域に修飾を含み得る。
ヘテロ二量体化を促進するためのいくつかの戦略が存在する。これらの戦略は、２個の抗体鎖の各々への、両鎖が互いに適合性であり、故に、ヘテロ二量体を形成できるが、各鎖はそれ自体二量体化できないような、非相称相補性修飾の導入を含む。このような修飾は、挿入、欠失、保存的および非保存的置換および再配列を含み得る。
ヘテロ二量体化は、第一抗体鎖と第二抗体鎖の間に好都合な静電気的相互作用を作るための荷電残基の導入により促進され得る。例えば、１以上の正に荷電したアミノ酸を第一抗体鎖に導入でき、かつ１以上の負に荷電したアミノ酸を第二抗体鎖の対応する位置に導入できる。
これとは別にまたはこれに加えて、ヘテロ二量体化は、接触残基間の立体障害の導入により促進され得る。例えば、嵩高い側鎖を有する１以上の残基を第一抗体鎖に導入してよく、かつ該嵩高い側鎖を収容できる１以上の残基を第二抗体鎖に導入できる。
これとは別にまたはこれに加えて、ヘテロ二量体化は、ホモダイマー形成よりヘテロ二量体形成をエントロピー的におよびエンタルピー的に好都合とするための鎖間の界面での親水性および疎水性残基への１以上の修飾の導入により促進され得る。
ヘテロ二量体化を促進するためのさらなる戦略は、抗体鎖の一部の、各鎖が対応する再配列を含む鎖とのみ適合性であるような再配列である。例えば、CrossMAbテクノロジーは、正確な鎖対合を可能とするための抗体ドメインのクロスオーバーに基づく。(ｉ)ＶＨおよびＶＬが交換され、かつＣＨ１およびＣＬが交換されるCrossMAbＦａｂ；(ii)ＶＨおよびＶＬが交換されるCrossMAbＶＨ－ＶＬ；および(iii)ＣＨ１およびＣＬが交換されるCrossMAbＣＨ１－ＣＬの３つの主なCrossMAb形式がある(Klein et al., 2016. MABS, 8(6):1010-1020)。
ある実施態様において、本発明の多特異的(例えば二重特異的)抗体はＶＨおよびＶＬの交換を含み得る。ある実施態様において、本発明の多特異的(例えば二重特異的)抗体はＣＨ１およびＣＬの交換を含み得る。ある実施態様において、本発明の多特異的(例えば二重特異的)抗体はＶＨおよびＶＬの交換およびＣＨ１およびＣＬの交換を含み得る。
好ましい実施態様において、本発明の多特異的(例えば二重特異的)抗体はＶＨおよびＶＬの交換を含む。
ヘテロ二量体化を促進する他のアプローチは、鎖交換遺伝子操作ドメイン(ＳＥＥＤ)の使用を含む(Davis et al., 2010. Protein Eng Des Sel, 23 (4); 195-202)。
上記戦略の組み合わせを、抗体安定性への影響を最小化しながら、結合の効率を最大にするために使用し得る。
Ｆｃヘテロ二量体化
ある実施態様において、本発明の多特異的(例えば二重特異的)抗体はヘテロ二量体Ｆｃを有し得て、例えば抗ＢＣＭＡ抗体由来の１個の重鎖および抗ＣＤ３抗体由来の１個の重鎖を含み得る。
本発明の多特異的(例えば二重特異的)抗体は、第一ＣＨ２および／またはＣＨ３ドメインと第二ＣＨ２および／またはＣＨ３ドメインの対合を促進する１以上の修飾を含むヘテロ二量体Ｆｃを含み得る。好ましい実施態様において、１以上の修飾は、例えば、ＣＨ３ドメインへの非相称修飾をもたらすことにより、第一ＣＨ３ドメインと第二ＣＨ３ドメインの対合を促進する。１以上の修飾は、アミノ酸挿入、欠失、保存的および非保存的置換および再配列およびそれらの組み合わせから選択される修飾を含み得る。
典型的に、第一ＣＨ３ドメインおよび第二ＣＨ３ドメインは、各ＣＨ３ドメイン(またはそれを含む重鎖)がもはや自身とホモ二量体化できず、むしろ相補的に操作された他方のＣＨ３ドメインとのヘテロ二量体化を強いられるような相補的様式でいずれも操作される(故に、第一および第二ＣＨ３ドメインがヘテロ二量体化し、２個の第一または２個の第二ＣＨ３ドメイン間のホモダイマーは形成されない)。
本発明の多特異的(例えば二重特異的)抗体は、例えばＷＯ９６／０２７０１１、Ridgway, J.B., et al., Protein Eng. 9 (1996) 617-621、Merchant, A.M. et al., Nat. Biotechnol. 16 (1998) 677-68およびＷＯ９８／０５０４３１にいくつかの例と共に詳述される、１以上の「ノブ・イントゥ・ホール」修飾を有するＦｃを含み得る。
この方法において、２個のＣＨ３ドメインの相互作用表面は、これら２個のＣＨ３ドメインを含む両Ｆｃ鎖のヘテロ二量体化が増加するよう変えられる。２個のＣＨ３ドメイン(２個のＦｃ鎖の)の一方は「ノブ」であり、他方は「ホール」であり得る。
従って、本発明の多特異的(例えば二重特異的)抗体は２個のＣＨ３ドメインを含んでよく、ここで、第一Ｆｃ鎖の第一ＣＨ３ドメインおよび第二Ｆｃ鎖の第二ＣＨ３ドメインの各々は、抗体ＣＨ３ドメイン間の元々の界面を含む界面で会い、ここで、該界面は、抗体の形成を促進するよう改変されている。
ある実施態様において：
(ｉ)他方のＦｃ鎖のＣＨ３ドメインの元の界面と会う一方のＦｃ鎖のＣＨ３ドメインの元の界面内で、アミノ酸残基が大きな側鎖体積を有するアミノ酸残基に置き換えられ、それにより一方のＦｃ鎖のＣＨ３ドメインの界面に、他方のＦｃ鎖のＣＨ３ドメインの界面内の空洞に置くことができる突起が産生されるように、一方のＦｃ鎖のＣＨ３ドメインが改変される；および
ii)一方のＦｃ鎖のＣＨ３ドメインの元の界面に会う他方のＦｃ鎖のＣＨ３ドメインの元の界面内で、アミノ酸残基が小さな側鎖体積を有するアミノ酸残基に置き換えられ、それにより他方のＦｃ鎖のＣＨ３ドメインの界面に空洞が産生され、その中に一方のＦｃ鎖のＣＨ３ドメインの界面内の突起を置くことができるように、他方のＦｃ鎖のＣＨ３ドメインが改変される。
好ましくは、該大きな側鎖体積を有するアミノ酸残基は、アルギニン(Ｒ)、フェニルアラニン(Ｆ)、チロシン(Ｙ)、トリプトファン(Ｗ)からなる群から選択される。
ある実施態様において、本発明の多特異的(例えば二重特異的)抗体は、位置Ｔ３６６、Ｌ３６８およびＹ４０７、例えばＴ３６６Ｓ、Ｌ３６８ＡおよびＹ４０７Ｖに修飾を含む第一ＣＨ３ドメインを含む(ＥＵナンバリングによる番号付け)。
ある実施態様において、本発明の多特異的(例えば二重特異的)抗体は、位置Ｔ３６６に修飾(「ノブ修飾」)、例えばＴ３６６Ｗを含む第二ＣＨ３ドメインを含む(ＥＵナンバリングによる番号付け)。
特に好ましい実施態様において、本発明の多特異的(例えば二重特異的)抗体は、修飾Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８ＡおよびＹ４０７Ｖまたはその保存的置換を含む第一ＣＨ３ドメインおよび修飾Ｔ３６６Ｗまたはその保存的置換を含む第二ＣＨ３ドメイン(ＥＵナンバリングによる番号付け)を含む。
ある実施態様において、本発明の多特異的(例えば二重特異的)抗体は、表２に示す修飾を含む第一ＣＨ３ドメインおよび表２に示す修飾を含む第二ＣＨ３ドメインを含む。
Figure 2023514224000003
本発明の多特異的(例えば二重特異的)抗体は、ＵＳ９,５６２,１０９およびＵＳ９,５７４,０１０(引用により本明細書に包含させる)に示す修飾の１以上を含み得る。
ある実施態様において、本発明の多特異的(例えば二重特異的)抗体は、位置Ｔ３５０、Ｌ３５１、Ｆ４０５および／またはＹ４０７(ＥＵナンバリングによる番号付け)に１以上の修飾、例えばＴ３５０Ｖ、Ｌ３５１Ｙ、Ｆ４０５Ａおよび／またはＹ４０７Ｖを含む、第一ＣＨ３ドメインを含む。ある実施態様において、本発明の多特異的(例えば二重特異的)抗体は、位置Ｔ３５０、Ｌ３５１、Ｆ４０５およびＹ４０７(ＥＵナンバリングによる番号付け)に修飾、例えばＴ３５０Ｖ、Ｌ３５１Ｙ、Ｆ４０５ＡおよびＹ４０７Ｖを含む第一ＣＨ３ドメインを含む。
ある実施態様において、本発明の多特異的(例えば二重特異的)抗体は、位置Ｔ３５０、Ｔ３６６、Ｋ３９２および／またはＴ３９４(ＥＵナンバリングによる番号付け)に１以上の修飾、例えばＴ３５０Ｖ、Ｔ３６６Ｌ、Ｋ３９２Ｌおよび／またはＴ３９４Ｗを含む第二ＣＨ３ドメインを含む。ある実施態様において、本発明の多特異的(例えば二重特異的)抗体は、位置Ｔ３５０、Ｔ３６６、Ｋ３９２およびＴ３９４(ＥＵナンバリングによる番号付け)に修飾、例えばＴ３５０Ｖ、Ｔ３６６Ｌ、Ｋ３９２ＬおよびＴ３９４Ｗを含む第二ＣＨ３ドメインを含む。
好ましい実施態様において、本発明の多特異的(例えば二重特異的)抗体は、位置Ｔ３５０、Ｌ３５１、Ｆ４０５および／またはＹ４０７に１以上の修飾(例えばＴ３５０Ｖ、Ｌ３５１Ｙ、Ｆ４０５Ａおよび／またはＹ４０７Ｖ)を含む第一ＣＨ３ドメインおよび位置Ｔ３５０、Ｔ３６６、Ｋ３９２および／またはＴ３９４に１以上の修飾(例えばＴ３５０Ｖ、Ｔ３６６Ｌ、Ｋ３９２Ｌおよび／またはＴ３９４Ｗ)を含む第二ＣＨ３ドメイン(ＥＵナンバリングによる番号付け)を含む。
特に好ましい実施態様において、本発明の多特異的(例えば二重特異的)抗体は、位置Ｔ３５０、Ｌ３５１、Ｆ４０５およびＹ４０７に修飾(例えばＴ３５０Ｖ、Ｌ３５１Ｙ、Ｆ４０５ＡおよびＹ４０７Ｖ)を含む第一ＣＨ３ドメインおよび位置Ｔ３５０、Ｔ３６６、Ｋ３９２およびＴ３９４に修飾(例えばＴ３５０Ｖ、Ｔ３６６Ｌ、Ｋ３９２ＬおよびＴ３９４Ｗ)を含む第二ＣＨ３ドメイン(ＥＵナンバリングによる番号付け)を含む。
１以上の修飾は、帯電、疎水性／親水性相互作用および／または側鎖間の立体障害を修飾し得る。
特に好ましい実施態様において、本発明の多特異的(例えば二重特異的)抗体は、修飾Ｔ３５０Ｖ、Ｌ３５１Ｙ、Ｆ４０５ＡおよびＹ４０７Ｖまたはその保存的置換を含む第一ＣＨ３ドメインおよび修飾Ｔ３５０Ｖ、Ｔ３６６Ｌ、Ｋ３９２ＬおよびＴ３９４Ｗまたはその保存的置換を含む第二ＣＨ３ドメインを含む(ＥＵナンバリングによる番号付け)。
ある実施態様において、本発明の多特異的(例えば二重特異的)抗体は、表３に示す修飾を含む第一ＣＨ３ドメインおよび表３に示す修飾を含む第二ＣＨ３ドメインを含む。
Figure 2023514224000004
ヘテロ二量体化させるためのＣＨ３修飾についての他の技術が本発明の代替として考慮され、例えばＷＯ９６／２７０１１、ＷＯ９８／０５０４３１、ＥＰ１８７０４５９、ＷＯ２００７／１１０２０５、ＷＯ２００７／１４７９０１、ＷＯ２００９／０８９００４、ＷＯ２０１０／１２９３０４、ＷＯ２０１１／９０７５４、ＷＯ２０１１／１４３５４５、ＷＯ２０１２／０５８７６８、ＷＯ２０１３／１５７９５４、ＷＯ２０１３／１５７９５３およびＷＯ２０１３／０９６２９１に記載のものを含む。
ある実施態様において、本発明の二重特異的抗体はＩｇＧ２アイソタイプであり、ＷＯ２０１０／１２９３０４に記載のヘテロ二量体化アプローチが使用され得る。
他のＦｃ修飾
ある実施態様において、二重特異的本発明の抗体は、両ＣＨ３ドメインが、両ＣＨ３ドメイン間のジスルフィド架橋が形成され得るように、対応する位置におけるアミノ酸としてシステイン(Ｃ)の導入により改変されている、Ｆｃを含み得る。システインは、ＣＨ３ドメインの一方の３４９位およびＣＨ３ドメインの他方の３５４位に導入され得る(ＥＵナンバリングによる番号付け)。
好ましくは、３５４位に導入されたシステインは第一ＣＨ３ドメインにあり、３４９位に導入されたシステインは第二ＣＨ３ドメインにある(ＥＵナンバリングによる番号付け)。
Ｆｃは、Ｄ３５６Ｅ、Ｌ３５８Ｍ、Ｎ３８４Ｓ、Ｋ３９２Ｎ、Ｖ３９７ＭおよびＶ４２２Ｉなどの修飾を含み得る(ＥＵナンバリングによる番号付け)。好ましくは、両ＣＨ３ドメインはＤ３５６ＥおよびＬ３５８Ｍを含む(ＥＵナンバリングによる番号付け)。
軽鎖および重鎖ヘテロ二量体化
本発明の多特異的(例えば二重特異的)抗体において、免疫グロブリン重鎖および軽鎖の１以上は、１以上の修飾、例えば重鎖および軽鎖が共発現または共産生されたとき、特異的重鎖と特異的軽鎖の優先的対形成を促進することができるアミノ酸修飾を含み得る。このような修飾は、ＢＣＭＡへの結合などの生物学的性質を変えることなく、産生／精製を大幅に改善させ得る。特に、アミノ酸交換などの修飾の１以上の導入により、生産における軽鎖誤対合および副産物形成が有意に減少され得て、それ故に収率が増加し、精製が促進される。
１以上の修飾は、立体障害の導入、荷電アミノ酸の逆の電荷での置換および／または疎水性または親水性相互作用により優先的ヘテロ二量体対形成を促進し得る。好ましい実施態様において、１以上の修飾は、立体障害の導入および荷電アミノ酸の逆の電荷での置換により、優先的ヘテロ二量体対形成を促進する。
アミノ酸交換は、軽鎖誤対合、例えばベンス・ジョーンズ型副産物を低減する、荷電アミノ酸の逆の電荷での置換(例えばＣＨ１／ＣＬ界面におけるであり得る。
好ましい実施態様において、軽鎖および重鎖ヘテロ二量体化を助ける１以上の修飾は、ＣＤＲ外の軽鎖および重鎖におけるアミノ酸修飾である。
１以上の修飾は、抗ＢＣＭＡ抗体またはその抗原結合フラグメントに存在し得る。あるいは、１以上の修飾は、抗ＣＤ３抗体またはその抗原結合フラグメントに存在し得る。好ましい実施態様において、１以上の修飾は抗ＢＣＭＡ抗体またはその抗原結合フラグメントに存在する。
ある実施態様において、本発明の多特異的(例えば二重特異的)抗体は、アミノ酸修飾Ｋ１４７Ｅ／ＤおよびＫ２１３Ｅ／Ｄ(ＥＵナンバリングによる番号付け)を有するＣＨ１ドメインを含む免疫グロブリン重鎖およびアミノ酸修飾Ｅ１２３Ｋ／Ｒ／ＨおよびＱ１２４Ｋ／Ｒ／Ｈ(Kabatによる番号付け)を有するＣＬドメインを含む対応する免疫グロブリン軽鎖を含む。好ましくは、ＣＨ１ドメインはアミノ酸修飾Ｋ１４７ＥおよびＫ２１３Ｅ(ＥＵナンバリングによる番号付け)またはその保存的置換を含み、対応するＣＬドメインはアミノ酸修飾Ｅ１２３ＲおよびＱ１２４Ｋまたはその保存的置換(Kabatによる番号付け)を含む。このような多特異的(例えば二重特異的)抗体は高収率で産生され得て、容易に精製され得る。
ある実施態様において、表４に記載のアミノ酸修飾はＢＣＭＡ抗体またはＣＤ３抗体にあり得る。
ある実施態様において、二重特異的本発明の抗体は二価であり、１個の抗ＢＣＭＡ抗体またはその抗原結合フラグメントおよび１個の抗ＣＤ３抗体またはその抗原結合フラグメントを含み(「１＋１」形式)、ここで、
(ａ)ＢＣＭＡ抗体またはその抗原結合フラグメント(例えばＢＣＭＡ Ｆａｂ)は表４に示すアミノ酸修飾を有するＣＨ１ドメインおよび表４のアミノ酸修飾を有する対応するＣＬドメインを含む；または
(ｂ)ＣＤ３抗体またはその抗原結合フラグメント(例えばＣＤ３ Ｆａｂ)は表４に示すアミノ酸修飾を有するＣＨ１ドメインおよび表４のアミノ酸修飾を有する対応するＣＬドメインを含む。
ある実施態様において、二重特異的本発明の抗体は三価であり、２個の抗ＢＣＭＡ抗体またはその抗原結合フラグメントおよび１個の抗ＣＤ３抗体またはその抗原結合フラグメントを含み(「２＋１」形式)、ここで、
(ａ)ＢＣＭＡ抗体またはその抗原結合フラグメント(例えばＢＣＭＡ Ｆａｂ)の一方または両方は表４に示すアミノ酸修飾を有するＣＨ１ドメインおよび表４のアミノ酸修飾を有する対応するＣＬドメインを含む；または
(ｂ)ＣＤ３抗体(例えばＣＤ３ Ｆａｂ)は表４に示すアミノ酸修飾を有するＣＨ１ドメインおよび表４のアミノ酸修飾を有する対応するＣＬドメインを含む。
特に、各ＢＣＭＡ抗体(例えばＢＣＭＡ Ｆａｂ)は表４に示すアミノ酸修飾を有するＣＨ１ドメインおよび対応するアミノ酸修飾を有するＣＬドメインを含み得る。
Figure 2023514224000005
好ましい実施態様において、本発明の多特異的(例えば二重特異的)抗体は、表４に示す修飾を表２に示す修飾と組み合わせて含む。故に、ある実施態様において、二重特異的本発明の抗体は二価であり、
(ａ)(ｉ)ＢＣＭＡ抗体またはその抗原結合フラグメント(例えばＢＣＭＡ Ｆａｂ)がアミノ酸修飾Ｋ１４７ＥおよびＫ２１３Ｅを含むＣＨ１ドメインおよびアミノ酸修飾Ｅ１２３ＲおよびＱ１２４Ｋを含む対応するＣＬドメインを含む(すなわち表４に示す修飾)または(ii)ＣＤ３抗体またはその抗原結合フラグメント(例えばＣＤ３ Ｆａｂ)がアミノ酸修飾Ｋ１４７ＥおよびＫ２１３Ｅを含むＣＨ１ドメインおよびアミノ酸修飾Ｅ１２３ＲおよびＱ１２４Ｋを含む対応するＣＬドメインを含む(すなわち表４に示す修飾)、１個の抗ＢＣＭＡ抗体またはその抗原結合フラグメントおよび１個の抗ＣＤ３抗体またはその抗原結合フラグメント(「１＋１」形式)；および
(ｂ)修飾Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８ＡおよびＹ４０７Ｖを含む第一ＣＨ３ドメインおよび修飾Ｔ３６６Ｗを含む第二ＣＨ３ドメイン(すなわち表２に示す修飾)
を含む。
ある実施態様において、二重特異的本発明の抗体は三価であり、
(ａ)(ｉ)ＢＣＭＡ抗体またはその抗原結合フラグメント(例えばＢＣＭＡ Ｆａｂ)の一方または両方がアミノ酸修飾Ｋ１４７ＥおよびＫ２１３Ｅを含むＣＨ１ドメインおよびアミノ酸修飾Ｅ１２３ＲおよびＱ１２４Ｋを含む対応するＣＬドメイン(すなわち表４に示す修飾)を含むまたは(ii)ＣＤ３抗体またはその抗原結合フラグメント(例えばＣＤ３ Ｆａｂ)がアミノ酸修飾Ｋ１４７ＥおよびＫ２１３Ｅを含むＣＨ１ドメインおよびアミノ酸修飾Ｅ１２３ＲおよびＱ１２４Ｋを含む対応するＣＬドメイン(すなわち表４に示す修飾)を含む、２個の抗ＢＣＭＡ抗体またはその抗原結合フラグメントおよび１個の抗ＣＤ３抗体またはその抗原結合フラグメント(「２＋１」形式)；および
(ｂ)修飾Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８ＡおよびＹ４０７Ｖを含む第一ＣＨ３ドメインおよび修飾Ｔ３６６Ｗを含む第二ＣＨ３ドメイン(すなわち表２に示す修飾)
を含む。
特に、各ＢＣＭＡ抗体(例えばＢＣＭＡ Ｆａｂ)は、表４に示すアミノ酸修飾を有するＣＨ１ドメインおよび表４のアミノ酸修飾を有する対応するＣＬドメインを含み得る。好ましい実施態様において、第一Ｆｃ鎖はＦｃのＮ末端で第一抗ＢＣＭＡ抗体のＣ末端に結合し、第二Ｆｃ鎖はＦｃのＮ末端で抗ＣＤ３抗体のＣ末端に結合する。
ある実施態様において、多特異的(例えば二重特異的)、本発明の抗体は、Ａ１４１、Ｌ１４５、Ｋ１４７、Ｑ１７５の一か所以上(ＥＵナンバリングによる番号付け)にアミノ酸修飾を有するＣＨ１ドメインを含む免疫グロブリン重鎖およびＦ１１６、Ｑ１２４、Ｌ１３５、Ｔ１７８の一か所以上(Kabatによる番号付け)にアミノ酸修飾を有するＣＬドメインを含む対応する免疫グロブリン軽鎖を含む。好ましくは、ＣＨ１ドメインはアミノ酸修飾Ａ１４１Ｗ、Ｌ１４５Ｅ、Ｋ１４７Ｔ、Ｑ１７５Ｅまたはその保存的置換(ＥＵナンバリングによる番号付け)を含み、対応するＣＬドメインはアミノ酸修飾Ｆ１１６Ａ、Ｑ１２４Ｒ、Ｌ１３５Ｖ、Ｔ１７８Ｒまたはその保存的置換(Kabatによる番号付け)を含む。
ある実施態様において、本発明の多特異的(例えば二重特異的)抗体は、表５に示すアミノ酸修飾を有するＣＨ１ドメインおよび表５に示すアミノ酸修飾を有するＣＬドメインを含む対応する免疫グロブリン軽鎖を含む。本発明の多特異的(例えば二重特異的)抗体が本発明の抗ＢＣＭＡ抗体またはその抗原結合フラグメントおよび本発明の抗ＣＤ３抗体またはその抗原結合フラグメントを含む実施態様において、表５に記載するアミノ酸修飾はＢＣＭＡ抗体またはＣＤ３抗体にあり得る。
ある実施態様において、二重特異的本発明の抗体は二価であり、１個の抗ＢＣＭＡ抗体および１個の抗ＣＤ３抗体を含み(「１＋１」形式)、ここで、
(ａ)ＢＣＭＡ抗体(例えばＢＣＭＡ Ｆａｂ)は表５に示すアミノ酸修飾を有するＣＨ１ドメインおよび表５のアミノ酸修飾を有する対応するＣＬドメインを含む；または
(ｂ)ＣＤ３抗体(例えばＣＤ３ Ｆａｂ)は表５に示すアミノ酸修飾を有するＣＨ１ドメインおよび表５のアミノ酸修飾を有する対応するＣＬドメインを含む。
ある実施態様において、二重特異的本発明の抗体は三価であり、２個の抗ＢＣＭＡ抗体および１個の抗ＣＤ３抗体を含み(「２＋１」形式)、ここで、
(ａ)ＢＣＭＡ抗体(例えばＢＣＭＡ Ｆａｂ)の一方または両方は表５に示すアミノ酸修飾を有するＣＨ１ドメインおよび表５のアミノ酸修飾を有する対応するＣＬドメインを含む；または
(ｂ)ＣＤ３抗体(例えばＣＤ３ Ｆａｂ)は表５に示すアミノ酸修飾を有するＣＨ１ドメインおよび表５のアミノ酸修飾を有する対応するＣＬドメインを含む。
特に好ましい実施態様、各ＢＣＭＡ抗体(例えばＢＣＭＡ Ｆａｂ)は表５に示すアミノ酸修飾を有するＣＨ１ドメインおよび表５のアミノ酸修飾を有する対応するＣＬドメインを含み得る。
Figure 2023514224000006
好ましい実施態様において、本発明の多特異的(例えば二重特異的)抗体は表５に示すアミノ酸修飾を表３に示すアミノ酸修飾と組み合わせて含む。故に、ある実施態様において、二重特異的本発明の抗体は二価であり、
(ａ)(ｉ)ＢＣＭＡ抗体(例えばＢＣＭＡ Ｆａｂ)がアミノ酸修飾Ａ１４１Ｗ、Ｌ１４５Ｅ、Ｋ１４７ＴおよびＱ１７５Ｅを含むＣＨ１ドメインおよびアミノ酸修飾Ｆ１１６Ａ、Ｑ１２４Ｒ、Ｌ１３５ＶおよびＴ１７８Ｒを含む対応するＣＬドメインを含む(すなわち表５に示す修飾)または(ii)ＣＤ３抗体(例えばＣＤ３ Ｆａｂ)がアミノ酸修飾Ａ１４１Ｗ、Ｌ１４５Ｅ、Ｋ１４７ＴおよびＱ１７５Ｅを含むＣＨ１ドメインおよびアミノ酸修飾Ｆ１１６Ａ、Ｑ１２４Ｒ、Ｌ１３５ＶおよびＴ１７８Ｒを含む対応するＣＬドメインを含む(すなわち表５に示す修飾)、１個の抗ＢＣＭＡ抗体および１個の抗ＣＤ３抗体(「１＋１」形式)；および
(ｂ)修飾Ｔ３５０Ｖ、Ｌ３５１Ｙ、Ｆ４０５ＡおよびＹ４０７Ｖを含む第一ＣＨ３ドメインおよび修飾Ｔ３５０Ｖ、Ｔ３６６Ｌ、Ｋ３９２ＬおよびＴ３９４Ｗを含む第二ＣＨ３ドメイン(すなわち表３に示す修飾)
を含む。
好ましい実施態様において、第一Ｆｃ鎖はＦｃのＮ末端で抗ＢＣＭＡ抗体のＣ末端に結合し、第二Ｆｃ鎖はＦｃのＮ末端で抗ＣＤ３抗体のＣ末端に結合する。
ある実施態様において、二重特異的本発明の抗体は三価であり、
(ａ)(ｉ)ＢＣＭＡ抗体(例えばＢＣＭＡ Ｆａｂ)の一方または両方がアミノ酸修飾Ａ１４１Ｗ、Ｌ１４５Ｅ、Ｋ１４７ＴおよびＱ１７５Ｅを含むＣＨ１ドメインおよびアミノ酸修飾Ｆ１１６Ａ、Ｑ１２４Ｒ、Ｌ１３５ＶおよびＴ１７８Ｒを含む対応するＣＬドメインを含む(すなわち表５に示す修飾)または(ii)ＣＤ３抗体(例えばＣＤ３ Ｆａｂ)がアミノ酸修飾Ａ１４１Ｗ、Ｌ１４５Ｅ、Ｋ１４７ＴおよびＱ１７５Ｅを含むＣＨ１ドメインおよびアミノ酸修飾Ｆ１１６Ａ、Ｑ１２４Ｒ、Ｌ１３５ＶおよびＴ１７８Ｒを含む対応するＣＬドメインを含む(すなわち表５に示す修飾)、２個の抗ＢＣＭＡ抗体および１個の抗ＣＤ３抗体(「２＋１」形式)；および
(ｂ)修飾Ｔ３５０Ｖ、Ｌ３５１Ｙ、Ｆ４０５ＡおよびＹ４０７Ｖを含む第一ＣＨ３ドメインおよび修飾Ｔ３５０Ｖ、Ｔ３６６Ｌ、Ｋ３９２ＬおよびＴ３９４Ｗを含む第二ＣＨ３ドメイン(すなわち表３に示す修飾)
を含む。
特に、各ＢＣＭＡ抗体(例えばＢＣＭＡ Ｆａｂ)は表５に示すアミノ酸修飾を有するＣＨ１ドメインおよび表５のアミノ酸修飾を有する対応するＣＬドメインを含む。好ましい実施態様において、第一Ｆｃ鎖はＦｃのＮ末端で第一抗ＢＣＭＡ抗体のＣ末端に結合し、第二Ｆｃ鎖はＦｃのＮ末端で抗ＣＤ３抗体のＣ末端に結合する。
あるいは、ＣＨ１ドメインは位置Ｑ１７５(ＥＵナンバリングによる番号付け)にアミノ酸修飾を含んでよく、対応するＣＬドメインはＦ１１６、Ｑ１２４、Ｌ１３５、Ｔ１７８の一か所以上(Kabatによる番号付け)にアミノ酸修飾を含んでよい。ＣＨ１ドメインはアミノ酸修飾Ｑ１７５Ｋ(ＥＵナンバリングによる番号付け)またはその保存的置換を含んでよく、対応するＣＬドメインはアミノ酸修飾Ｆ１１６Ａ、Ｑ１２４Ｒ、Ｌ１３５Ｖ、Ｔ１７８Ｒ(Kabatによる番号付け)またはその保存的置換を含んでよい。
別の実施態様において、ＣＨ１ドメインは位置Ｑ１７５(ＥＵナンバリングによる番号付け)にアミノ酸修飾を含んでよく、対応するＣＬドメインはＱ１２４、Ｌ１３５、Ｑ１６０、Ｔ１８０(Kabatによる番号付け)の１か所以上にアミノ酸修飾を含んでよい。ＣＨ１ドメインはアミノ酸修飾Ｑ１７５Ｋ(ＥＵナンバリングによる番号付け)またはその保存的置換を含んでよく、対応するＣＬドメインはアミノ酸修飾Ｑ１２４Ｅ、Ｌ１３５Ｗ、Ｑ１６０ＥおよびＴ１８０Ｅまたはその保存的置換(Kabatによる番号付け)を含み得る。
本発明の多特異的(例えば二重特異的)抗体は、さらにアミノ酸チロシン(Ｙ)、グルタミン酸(Ｅ)、セリン(Ｓ)およびヒスチジン(Ｈ)からなる群から選択されるＶＬ領域の４９位のアミノ酸置換および／またはスレオニン(Ｔ)またはアラニン(Ａ)であるＶＬ領域の７４位であるアミノ酸置換を含み得る。
CrossMAb
本発明の多特異的(例えば二重特異的)抗体は、CrossMAbテクノロジーを含み得る。CrossMAbテクノロジーは、正確な鎖対合を可能にするための、抗体ドメインのクロスオーバーに基づく。多特異的(例えば二重特異的)抗体形成を促進するために使用される。(ｉ)ＶＨおよびＶＬが交換され、かつＣＨ１およびＣＬが交換されるCrossMAbＦａｂ；(ii)ＶＨおよびＶＬが交換されるCrossMAbＶＨ－ＶＬ；および(iii)ＣＨ１およびＣＬが交換されるCrossMAbＣＨ１－ＣＬの３つの主なCrossMAb形式がある(Klein et al., 2016. MABS, 8(6):1010-1020)。
CrossMAbテクノロジーは、最先端技術で知られる。可変ドメインＶＬおよびＶＨまたは定常ドメインＣＬおよびＣＨ１が交換されている二重特異的抗体は、ＷＯ２００９０８０２５１およびＷＯ２００９０８０２５２に記載される。
本発明の多特異的(例えば二重特異的)抗体内の抗体または抗原結合フラグメントの１以上において、可変ドメインＶＬおよびＶＨまたは定常ドメインＣＬおよびＣＨ１は交換され得る。ある実施態様において、本発明の多特異的(例えば二重特異的)抗体はＶＨおよびＶＬの交換およびＣＨ１およびＣＬの交換を含み得る。故に、本発明の多特異的(例えば二重特異的)抗体はクロスオーバー軽鎖およびクロスオーバー重鎖を含み得る。ここで使用する「クロスオーバー軽鎖」は、ＶＨ－ＣＬ、ＶＬ－ＣＨ１またはＶＨ－ＣＨ１を含み得る軽鎖である。ここで使用する「クロスオーバー重鎖」は、ＶＬ－ＣＨ１、ＶＨ－ＣＬまたはＶＬ－ＣＬを含み得る重鎖である。
ある実施態様において、本発明の多特異的(例えば二重特異的)抗体は
(ａ)ＣＤ３に特異的に結合する抗体の軽鎖および重鎖；および
(ｂ)ＢＣＭＡに特異的に結合する抗体の軽鎖および重鎖
を含み、ここで、可変ドメインＶＬおよびＶＨおよび／または定常ドメインＣＬおよびＣＨ１は、(ｉ)抗ＢＣＭＡ抗体；および／または(ii)抗ＣＤ３抗体で交換されている。
ある実施態様において、抗ＣＤ３抗体の可変ドメインＶＬおよびＶＨまたは定常ドメインＣＬおよびＣＨ１またはその抗原結合フラグメントは交換されている。より好ましくは、抗ＣＤ３抗体またはその抗原結合フラグメントの可変ドメインＶＬおよびＶＨは交換されている。
１＋１形式の二重特異的抗体が形式：ＣＤ３ Ｆａｂ－ＢＣＭＡ Ｆａｂ(すなわちＦｃが存在しないとき)；Ｆｃ－ＣＤ３ Ｆａｂ－ＢＣＭＡ Ｆａｂ；Ｆｃ－ＢＣＭＡ Ｆａｂ－ＣＤ３ Ｆａｂ；またはＢＣＭＡ Ｆａｂ－Ｆｃ－ＣＤ３ Ｆａｂを有する実施態様において、二重特異的抗体は、CrossMAb形式、例えばCrossMAbＦａｂ、CrossMAbＶＨ－ＶＬまたはCrossMAbＣＨ１－ＣＬを有し得る。ＢＣＭＡ Ｆａｂは、CrossMAb形式、例えばCrossMAbＦａｂ、CrossMAbＶＨ－ＶＬまたはCrossMAbＣＨ１－ＣＬを有し得る。あるいは、ＣＤ３ Ｆａｂは、CrossMAb形式、例えばCrossMAbＦａｂ、CrossMAbＶＨ－ＶＬまたはCrossMAbＣＨ１－ＣＬを有し得る。好ましい実施態様において、二重特異的抗体のＣＤ３ Ｆａｂは、CrossMAbＶＨ－ＶＬ形式を含む。
２＋１形式を有する本発明の二重特異的抗体がCrossMAbテクノロジーを含むのは、特に好ましい。故に、２＋１形式の三価二重特異的抗体の２＋１形式の三価二重特異的抗体が形式：ＣＤ３ Ｆａｂ－ＢＣＭＡ Ｆａｂ－ＢＣＭＡ Ｆａｂ；ＢＣＭＡ Ｆａｂ－ＣＤ３ Ｆａｂ－ＢＣＭＡ Ｆａｂ(すなわちＦｃが存在しないとき)； ＢＣＭＡ Ｆａｂ－Ｆｃ－ＣＤ３ Ｆａｂ－ＢＣＭＡ Ｆａｂ；ＢＣＭＡ Ｆａｂ－Ｆｃ－ＢＣＭＡ Ｆａｂ－ＣＤ３ Ｆａｂ；またはＣＤ３ Ｆａｂ－Ｆｃ－ＢＣＭＡ Ｆａｂ－ＢＣＭＡ Ｆａｂを有する実施態様において、二重特異的抗体は、CrossMAb形式、例えばCrossMAbＦａｂ、CrossMAbＶＨ－ＶＬまたはCrossMAbＣＨ１－ＣＬを有し得る。ＢＣＭＡ Ｆａｂは、CrossMAb形式、例えばCrossMAbＦａｂ、CrossMAbＶＨ－ＶＬまたはCrossMAbＣＨ１－ＣＬを有し得る。あるいは、ＣＤ３ Ｆａｂは、CrossMAb形式、例えばCrossMAbＦａｂ、CrossMAbＶＨ－ＶＬまたはCrossMAbＣＨ１－ＣＬを有し得る。好ましい実施態様において、二重特異的抗体のＣＤ３ Ｆａｂは、CrossMAbＶＨ－ＶＬ形式を含む。
ある実施態様において、１＋１形式を有する二重特異的本発明の抗体はCrossMAbテクノロジーを含まない、すなわち抗ＢＣＭＡ抗体も抗ＣＤ３抗体も交換された可変ドメインＶＬおよびＶＨまたは定常ドメインＣＬおよびＣＨ１を有しない。
例示的実施態様
例示的実施態様は図１～３に示す。
ある実施態様において、本発明の二重特異的抗体は、形式ＢＣＭＡ Ｆａｂ－Ｆｃ－ＣＤ３ Ｆａｂに従い抗ＣＤ３抗体の１個のＦａｂフラグメント、抗ＢＣＭＡ抗体の１個のＦａｂフラグメントおよび１個のＦｃ部分を含む、二価二重特異的抗体である。抗ＢＣＭＡ Ｆａｂフラグメントは、表４または表５に示すアミノ酸修飾を含む。抗ＣＤ３ Ｆａｂフラグメントは軽鎖および重鎖を含み、ここで、軽鎖は可変ドメインＶＨおよび定常ドメインＣＬを含むクロスオーバー軽鎖であり、重鎖は可変ドメインＶＬおよび定常ドメインＣＨ１を含むクロスオーバー重鎖である。この実施態様は、表４に示すアミノ酸修飾と共に図１Ａに示される。
ある実施態様において、本発明の二重特異的抗体は、形式ＢＣＭＡ Ｆａｂ－Ｆｃ－ＣＤ３ Ｆａｂに従い抗ＣＤ３抗体の１個のＦａｂフラグメント、抗ＢＣＭＡ抗体の１個のＦａｂフラグメントおよび１個のＦｃ部分を含む、二価二重特異的抗体である。抗ＣＤ３ Ｆａｂフラグメントは、(ａ)軽鎖が可変ドメインＶＨおよび定常ドメインＣＬを含むクロスオーバー軽鎖であり、重鎖が可変ドメインＶＬおよび定常ドメインＣＨ１を含むクロスオーバー重鎖である軽鎖および重鎖；およびまた(ｂ)表４または表５に示すアミノ酸修飾を含む。この実施態様は、表４に示すアミノ酸修飾と共に図１Ｂに示される。
ある実施態様において、本発明の二重特異的抗体は、形式ＢＣＭＡ Ｆａｂ－Ｆｃ－ＣＤ３ Ｆａｂ－ＢＣＭＡ Ｆａｂに従い抗ＣＤ３抗体の１個のＦａｂフラグメント、抗ＢＣＭＡ抗体の２個のＦａｂフラグメントおよび１個のＦｃ部分を含む、三価二重特異的抗体である。各抗ＢＣＭＡ Ｆａｂフラグメントは、表４または表５に示すアミノ酸修飾を含む。抗ＣＤ３ Ｆａｂフラグメントは軽鎖および重鎖を含み、ここで、軽鎖は可変ドメインＶＨおよび定常ドメインＣＬを含むクロスオーバー軽鎖であり、重鎖は可変ドメインＶＬおよび定常ドメインＣＨ１を含むクロスオーバー重鎖である。この実施態様は、表４に示すアミノ酸修飾と共に図２Ａに示される。
ある実施態様において、本発明の二重特異的抗体は、形式ＢＣＭＡ Ｆａｂ－Ｆｃ－ＣＤ３ Ｆａｂ－ＢＣＭＡ Ｆａｂに従い抗ＣＤ３抗体の１個のＦａｂフラグメント、抗ＢＣＭＡ抗体の２個のＦａｂフラグメントおよび１個のＦｃ部分を含む、三価二重特異的抗体である。抗ＣＤ３ Ｆａｂフラグメントは、(ａ)軽鎖が可変ドメインＶＨおよび定常ドメインＣＬを含むクロスオーバー軽鎖であり、重鎖が可変ドメインＶＬおよび定常ドメインＣＨ１を含むクロスオーバー重鎖である軽鎖および重鎖；およびまた(ｂ)表４または表５に示すアミノ酸修飾を含む。この実施態様は、表４に示すアミノ酸修飾と共に図２Ｂに示される。
ある実施態様において、本発明の二重特異的抗体は、形式ＢＣＭＡ Ｆａｂ－Ｆｃ－ＢＣＭＡ Ｆａｂ－ＣＤ３ Ｆａｂに従い抗ＣＤ３抗体の１個のＦａｂフラグメント、抗ＢＣＭＡ抗体の２個のＦａｂフラグメントおよび１個のＦｃ部分を含む、三価二重特異的抗体である。各抗ＢＣＭＡ Ｆａｂフラグメントは、表４または表５に示すアミノ酸修飾を含む。抗ＣＤ３ Ｆａｂフラグメントは軽鎖および重鎖を含み、ここで、軽鎖は可変ドメインＶＨおよび定常ドメインＣＬを含むクロスオーバー軽鎖であり、重鎖は可変ドメインＶＬおよび定常ドメインＣＨ１を含むクロスオーバー重鎖である。この実施態様は、表４に示すアミノ酸修飾と共に図２Ｃに示される。
ある実施態様において、本発明の二重特異的抗体は、形式ＢＣＭＡ Ｆａｂ－Ｆｃ－ＢＣＭＡ Ｆａｂ－ＣＤ３ Ｆａｂに従い抗ＣＤ３抗体の１個のＦａｂフラグメント、抗ＢＣＭＡ抗体の２個のＦａｂフラグメントおよび１個のＦｃ部分を含む、三価二重特異的抗体である。抗ＣＤ３ Ｆａｂフラグメントは、(ａ)軽鎖が可変ドメインＶＨおよび定常ドメインＣＬを含むクロスオーバー軽鎖であり、重鎖が可変ドメインＶＬおよび定常ドメインＣＨ１を含むクロスオーバー重鎖である軽鎖および重鎖；およびまた(ｂ)表４または表５に示すアミノ酸修飾を含む。この実施態様は、表４に示すアミノ酸修飾と共に図２Ｄに示される。
ある実施態様において、本発明の二重特異的抗体は、形式Ｆｃ－ＣＤ３ Ｆａｂ－ＢＣＭＡ Ｆａｂに従い抗ＣＤ３抗体の１個のＦａｂフラグメント、抗ＢＣＭＡ抗体の１個のＦａｂフラグメントおよび１個のＦｃ部分を含む、二価二重特異的抗体である。抗ＢＣＭＡ Ｆａｂフラグメントは、表４または表５に示すアミノ酸修飾を含む。抗ＣＤ３ Ｆａｂフラグメントは軽鎖および重鎖を含み、ここで、軽鎖は可変ドメインＶＨおよび定常ドメインＣＬを含むクロスオーバー軽鎖であり、重鎖は可変ドメインＶＬおよび定常ドメインＣＨ１を含むクロスオーバー重鎖である。この実施態様は、表４に示すアミノ酸修飾と共に図３Ａに示される。
ある実施態様において、本発明の二重特異的抗体は、形式Ｆｃ－ＣＤ３ Ｆａｂ－ＢＣＭＡ Ｆａｂに従い抗ＣＤ３抗体の１個のＦａｂフラグメント、抗ＢＣＭＡ抗体の１個のＦａｂフラグメントおよび１個のＦｃ部分を含む、二価二重特異的抗体である。抗ＣＤ３ Ｆａｂフラグメントは、(ａ)軽鎖が可変ドメインＶＨおよび定常ドメインＣＬを含むクロスオーバー軽鎖であり、重鎖が可変ドメインＶＬおよび定常ドメインＣＨ１を含むクロスオーバー重鎖である軽鎖および重鎖；およびまた(ｂ)表４または表５に示すアミノ酸修飾を含む。この実施態様は、表４に示すアミノ酸修飾と共に図３Ｂに示される。
ある実施態様において、本発明の二重特異的抗体は、形式Ｆｃ－ＢＣＭＡ Ｆａｂ－ＣＤ３ Ｆａｂに従い抗ＣＤ３抗体の１個のＦａｂフラグメント、抗ＢＣＭＡ抗体の１個のＦａｂフラグメントおよび１個のＦｃ部分を含む、二価二重特異的抗体である。抗ＢＣＭＡ Ｆａｂフラグメントは、表４または表５に示すアミノ酸修飾を含む。抗ＣＤ３ Ｆａｂフラグメントは軽鎖および重鎖を含み、ここで、軽鎖は可変ドメインＶＨおよび定常ドメインＣＬを含むクロスオーバー軽鎖であり、重鎖は可変ドメインＶＬおよび定常ドメインＣＨ１を含むクロスオーバー重鎖である。この実施態様は、表４に示すアミノ酸修飾と共に図３Ｃに示される。
ある実施態様において、本発明の二重特異的抗体は、形式Ｆｃ－ＢＣＭＡ Ｆａｂ－ＣＤ３ Ｆａｂに従い抗ＣＤ３抗体の１個のＦａｂフラグメント、抗ＢＣＭＡ抗体の１個のＦａｂフラグメントおよび１個のＦｃ部分を含む、二価二重特異的抗体である。抗ＣＤ３ Ｆａｂフラグメントは、(ａ)軽鎖が可変ドメインＶＨおよび定常ドメインＣＬを含むクロスオーバー軽鎖であり、重鎖が可変ドメインＶＬおよび定常ドメインＣＨ１を含むクロスオーバー重鎖である軽鎖および重鎖；およびまた(ｂ)表４または表５に示すアミノ酸修飾を含む。この実施態様は、表４に示すアミノ酸修飾と共に図３Ｄに示される。
ある実施態様において、図２に示す抗体は、さらに表２または表３に示す修飾を含む。例えば、図２に示す抗体は、表４に示す修飾を表２に示す修飾と組み合わせて含み得る。あるいは、図２に示す抗体は、表５に示す修飾を表３に示す修飾と組み合わせて含み得る。
ある実施態様において、本発明の二重特異的抗体は、形式ＢＣＭＡ Ｆａｂ－Ｆｃ－ＣＤ３ Ｆａｂ－ＢＣＭＡ Ｆａｂに従い抗ＣＤ３抗体の１個のＦａｂフラグメント、抗ＢＣＭＡ抗体の２個のＦａｂフラグメントおよび１個のＦｃ部分を含む、三価二重特異的抗体である。抗ＣＤ３ Ｆａｂフラグメントは軽鎖および重鎖を含み、ここで、軽鎖は可変ドメインＶＨおよび定常ドメインＣＬを含むクロスオーバー軽鎖であり、重鎖は可変ドメインＶＬおよび定常ドメインＣＨ１を含むクロスオーバー重鎖である。各抗ＢＣＭＡ Ｆａｂフラグメントは軽鎖および重鎖を含み、ここで、重鎖はアミノ酸修飾Ｋ１４７ＥおよびＫ２１３Ｅ(ＥＵナンバリングによる番号付け)を含むＣＨ１ドメインを含み、軽鎖はアミノ酸修飾Ｅ１２３ＲおよびＱ１２４Ｋ(Kabatによる番号付け)を含む対応するＣＬドメインを含む(すなわち表４に示す修飾)。Ｆｃ部分は第一Ｆｃ鎖および第二Ｆｃ鎖を含み、ここで、第一Ｆｃ鎖は第一定常ドメインＣＨ２および第一定常ドメインＣＨ３を含み、第二Ｆｃ鎖は第二定常ドメインＣＨ２および第二定常ドメインＣＨ３を含む。第一Ｆｃ鎖はＦｃのＮ末端で第一抗ＢＣＭＡ ＦａｂのＣ末端に結合し、第二Ｆｃ鎖はＦｃのＮ末端で抗ＣＤ３ ＦａｂのＣ末端に結合する。第一ＣＨ３ドメインは修飾Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８ＡおよびＹ４０７Ｖ(「ホール修飾」)を含み、第二ＣＨ３ドメインは修飾Ｔ３６６Ｗ(「ノブ修飾」)(ＥＵナンバリングによる番号付け)を含む(すなわち表２に示す修飾)。さらに、両Ｆｃ鎖はさらに修飾Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５ＡおよびＰ３２９Ｇおよび所望によりＤ３５６ＥおよびＬ３５８Ｍを含む(ＥＵナンバリングによる番号付け)。所望により、両ＣＨ３ドメイン間にジスルフィド架橋が形成されるように、第一ＣＨ３ドメインはさらにアミノ酸修飾Ｓ３５４Ｃを含み、第二ＣＨ３ドメインはさらにアミノ酸修飾Ｙ３４９Ｃを含む(ＥＵナンバリングによる番号付け)。
他の実施態様において、本発明の二重特異的抗体は、形式ＢＣＭＡ Ｆａｂ－Ｆｃ－ＣＤ３ Ｆａｂ－ＢＣＭＡ Ｆａｂによる抗ＣＤ３抗体の１個のＦａｂフラグメント、抗ＢＣＭＡ抗体の２個のＦａｂフラグメントおよび１個のＦｃ部分を含む、三価二重特異的抗体である。抗ＣＤ３ Ｆａｂフラグメントは軽鎖および重鎖を含み、ここで、軽鎖は可変ドメインＶＨおよび定常ドメインＣＬを含むクロスオーバー軽鎖であり、重鎖は可変ドメインＶＬおよび定常ドメインＣＨ１を含むクロスオーバー重鎖である。各抗ＢＣＭＡ Ｆａｂフラグメントは軽鎖および重鎖を含み、ここで、重鎖はアミノ酸修飾Ａ１４１Ｗ、Ｌ１４５Ｅ、Ｋ１４７ＴおよびＱ１７５Ｅ(ＥＵナンバリングによる番号付け)を含むＣＨ１ドメインを含み、軽鎖はアミノ酸修飾Ｆ１１６Ａ、Ｑ１２４Ｒ、Ｌ１３５ＶおよびＴ１７８Ｒ(Kabatによる番号付けナンバリング)を含む対応するＣＬドメインを含む(すなわち表５に示す修飾)。Ｆｃ部分は第一Ｆｃ鎖および第二Ｆｃ鎖を含み、ここで、第一Ｆｃ鎖は第一定常ドメインＣＨ２および第一定常ドメインＣＨ３を含み、第二Ｆｃ鎖は第二定常ドメインＣＨ２および第二定常ドメインＣＨ３を含む。第一ＣＨ３ドメインは修飾Ｔ３５０Ｖ、Ｌ３５１Ｙ、Ｆ４０５ＡおよびＹ４０７Ｖを含み、第二ＣＨ３ドメインは修飾Ｔ３５０Ｖ、Ｔ３６６Ｌ、Ｋ３９２ＬおよびＴ３９４Ｗを含む(ＥＵナンバリングによる番号付け)(すなわち表３に示す修飾)。さらに、両Ｆｃ鎖はさらに修飾Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５ＡおよびＰ３２９Ｇおよび所望によりＤ３５６ＥおよびＬ３５８Ｍを含む(ＥＵナンバリングによる番号付け)。
ある実施態様において、抗ＢＣＭＡ Ｆａｂフラグメントは、次の群から選択されるＣＤＲ１Ｈ、ＣＤＲ２Ｈ、ＣＤＲ３Ｈ、ＣＤＲ１Ｌ、ＣＤＲ２ＬおよびＣＤＲ３Ｌ領域組み合わせ：
ａ)配列番号２１のＣＤＲ１Ｈ領域、配列番号２２のＣＤＲ２Ｈ領域、配列番号１７のＣＤＲ３Ｈ領域、配列番号２３のＣＤＲ１Ｌ領域、配列番号２４のＣＤＲ２Ｌ領域および配列番号２０のＣＤＲ３Ｌ領域、
ｂ)配列番号２１のＣＤＲ１Ｈ領域、配列番号２２のＣＤＲ２Ｈ領域、配列番号１７のＣＤＲ３Ｈ領域、配列番号２５のＣＤＲ１Ｌ領域、配列番号２６のＣＤＲ２Ｌ領域および配列番号２０のＣＤＲ３Ｌ領域、
ｃ)配列番号２１のＣＤＲ１Ｈ領域、配列番号２２のＣＤＲ２Ｈ領域、配列番号１７のＣＤＲ３Ｈ領域、配列番号２７のＣＤＲ１Ｌ領域、配列番号２８のＣＤＲ２Ｌ領域および配列番号２０のＣＤＲ３Ｌ領域、
ｄ)配列番号２９のＣＤＲ１Ｈ領域、配列番号３０のＣＤＲ２Ｈ領域、配列番号１７のＣＤＲ３Ｈ領域、配列番号３１のＣＤＲ１Ｌ領域、配列番号３２のＣＤＲ２Ｌ領域および配列番号３３のＣＤＲ３Ｌ領域、
ｅ)配列番号３４のＣＤＲ１Ｈ領域、配列番号３５のＣＤＲ２Ｈ領域、配列番号１７のＣＤＲ３Ｈ領域、配列番号３１のＣＤＲ１Ｌ領域、配列番号３２のＣＤＲ２Ｌ領域および配列番号３３のＣＤＲ３Ｌ領域、
ｆ)配列番号３６のＣＤＲ１Ｈ領域、配列番号３７のＣＤＲ２Ｈ領域、配列番号１７のＣＤＲ３Ｈ領域、配列番号３１のＣＤＲ１Ｌ領域、配列番号３２のＣＤＲ２Ｌ領域および配列番号３３のＣＤＲ３Ｌ領域、
ｇ)配列番号１５のＣＤＲ１Ｈ領域、配列番号１６のＣＤＲ２Ｈ領域、配列番号１７のＣＤＲ３Ｈ領域、配列番号１８のＣＤＲ１Ｌ領域、配列番号１９のＣＤＲ２Ｌ領域および配列番号２０のＣＤＲ３Ｌ領域
を含み、そして
抗ＣＤ３ Ｆａｂフラグメントは配列番号１のＣＤＲ１Ｈ領域、配列番号２のＣＤＲ２Ｈ領域、配列番号３のＣＤＲ３Ｈ領域、配列番号４のＣＤＲ１Ｌ領域、配列番号５のＣＤＲ２Ｌ領域および配列番号６のＣＤＲ３Ｌ領域を含む。
ある実施態様において、抗ＢＣＭＡ Ｆａｂフラグメントは次の群から選択されるＶＨおよびＶＬ：
ａ)配列番号１０のＶＨ領域および配列番号１２のＶＬ領域、
ｂ)配列番号１０のＶＨ領域および配列番号１３のＶＬ領域、
ｃ)配列番号１０のＶＨ領域および配列番号１４のＶＬ領域、
ｄ)配列番号３８のＶＨ領域および配列番号１２のＶＬ領域、
ｅ)配列番号３９のＶＨ領域および配列番号１２のＶＬ領域、
ｆ)配列番号４０のＶＨ領域および配列番号１２のＶＬ領域または
ｇ)配列番号９のＶＨ領域および配列番号１１のＶＬ領域
を含み；そして
抗ＣＤ３ Ｆａｂフラグメントは、配列番号７のＶＨ領域および配列番号８のＶＬ領域を含む。
さらなる実施態様において、本発明の多特異的(例えば二重特異的抗体)は、次の配列番号(下表６Ａ、７Ｂおよび７Ｃに記載のとおり)を含む：
８３Ａ１０－ＴＣＢｃｖ：４５、４６、４７(×２)、４８(図２Ａ)
２１－ＴＣＢｃｖ：４９、５０、５１(×２)、４８(図２Ａ)
２２－ＴＣＢｃｖ：５２、５３、５４(×２)、４８(図２Ａ)
４２－ＴＣＢｃｖ：５５、５６、５７(×２)、４８(図２Ａ)
Ｍａｂ１０１：５８、５９、６０(×２)、４８(記載される「ＲＫ／ＥＥ」置換ではなく、軽鎖誤対合／副産物を低減するためのＣＬ－ＣＨ１における別のアミノ酸置換Ａ１４１Ｗ、Ｌ１４５Ｅ、Ｋ１４７Ｔ、Ｑ１７５Ｅ(「ＷＥＴＥ」)およびＦ１１６Ａ、Ｑ１２４Ｒ、Ｌ１３５Ｖ、Ｔ１７８Ｒ(「ＡＲＶＲ」)がある以外、図２Ａ)
Ｍａｂ１０２：６１、６２、６３(×２)、４８(記載される「ＲＫ／ＥＥ」置換ではなく、軽鎖誤対合／副産物を低減するためのＣＬ－ＣＨ１における別のアミノ酸置換Ａ１４１Ｗ、Ｌ１４５Ｅ、Ｋ１４７Ｔ、Ｑ１７５Ｅ(「ＷＥＴＥ」)およびＦ１１６Ａ、Ｑ１２４Ｒ、Ｌ１３５Ｖ、Ｔ１７８Ｒ(「ＡＲＶＲ」)がある以外、図２Ａ)
Ｍａｂ１０３：６４、６５、６６(×２)、４８(記載される「ＲＫ／ＥＥ」置換ではなく、軽鎖誤対合／副産物を低減するためのＣＬ－ＣＨ１における別のアミノ酸置換Ａ１４１Ｗ、Ｌ１４５Ｅ、Ｋ１４７Ｔ、Ｑ１７５Ｅ(「ＷＥＴＥ」)およびＦ１１６Ａ、Ｑ１２４Ｒ、Ｌ１３５Ｖ、Ｔ１７８Ｒ(「ＡＲＶＲ」)がある以外、図２Ａ)。
ここで使用する用語「８３Ａ１０－ＴＣＢｃｖ」は、配列番号４５、配列番号４６、配列番号４７(２×)および配列番号４８の重鎖および軽鎖組み合わせにより特定され、図２Ａに示され、そしてＥＰ１４１７９７０５に記載される、ＢＣＭＡおよびＣＤ３に特異的に結合する二重特異的抗体をいう。
ここで使用する用語「２１－ＴＣＢｃｖ、２２－ＴＣＢｃｖ、４２－ＴＣＢｃｖ」は、図２Ａに示され、そしてＷＯ２０１７／０２１４５０に記載される配列番号４８、配列番号４９、配列番号５０および配列番号５１(２×)の重鎖および軽鎖組み合わせにより特定されるＭａｂ２１、配列番号４８、配列番号５２、配列番号５３および配列番号５４(２×)の重鎖および軽鎖組み合わせにより特定されるＭａｂ２２および配列番号４８、配列番号５５、配列番号５６および配列番号５７(２×)の重鎖および軽鎖組み合わせにより特定されるＭａｂ４２の各二重特異的抗体をいう。
ここで使用する用語「Ｍａｂ１０１」は、配列番号４８、配列番号５８、配列番号６０(２×)および配列番号５９の重鎖および軽鎖組み合わせにより特定され、図２Ａに示される(しかし記載される「ＲＫ／ＥＥ」置換ではなく、軽鎖誤対合／副産物を低減するためのＣＬ－ＣＨ１における別のアミノ酸置換Ａ１４１Ｗ、Ｌ１４５Ｅ、Ｋ１４７Ｔ、Ｑ１７５Ｅ(「ＷＥＴＥ」)およびＦ１１６Ａ、Ｑ１２４Ｒ、Ｌ１３５Ｖ、Ｔ１７８Ｒ(「ＡＲＶＲ」)がある)、ＢＣＭＡおよびＣＤ３に特異的に結合する二重特異的抗体をいう。ここで使用する用語「Ｍａｂ１０２」は、配列番号４８、配列番号６１、配列番号６３(２×)および配列番号６２の重鎖および軽鎖組み合わせにより特定され、図２Ａに示される(しかし記載される「ＲＫ／ＥＥ」置換ではなく、軽鎖誤対合／副産物を低減するためのＣＬ－ＣＨ１における別のアミノ酸置換Ａ１４１Ｗ、Ｌ１４５Ｅ、Ｋ１４７Ｔ、Ｑ１７５Ｅ(「ＷＥＴＥ」)およびＦ１１６Ａ、Ｑ１２４Ｒ、Ｌ１３５Ｖ、Ｔ１７８Ｒ(「ＡＲＶＲ」)がある)、ＢＣＭＡおよびＣＤ３に特異的に結合する二重特異的抗体をいう。ここで使用する用語「Ｍａｂ１０３」は、配列番号４８、配列番号６４、配列番号６６(２×)および配列番号６５の重鎖および軽鎖組み合わせにより特定され、図２Ａに示される(しかし記載される「ＲＫ／ＥＥ」置換ではなく、軽鎖誤対合／副産物を低減するためのＣＬ－ＣＨ１における別のアミノ酸置換Ａ１４１Ｗ、Ｌ１４５Ｅ、Ｋ１４７Ｔ、Ｑ１７５Ｅ(「ＷＥＴＥ」)およびＦ１１６Ａ、Ｑ１２４Ｒ、Ｌ１３５Ｖ、Ｔ１７８Ｒ(「ＡＲＶＲ」)がある)、ＢＣＭＡおよびＣＤ３に特異的に結合する二重特異的抗体をいう。
好ましい実施態様において、本発明の二重特異的抗体は４２－ＴＣＢｃｖである。ここで使用する用語「ＣＣ－９３２６９」は、二重特異的抗体４２－ＴＣＢｃｖをいう。
安定性が改善された抗体
ここに提供されるのは、修飾がない抗体と比較して、安定性の改善(例えば生理化学的性質の改善)を提供する１以上のアミノ酸修飾を有する、ＢＣＭＡおよびＴ細胞抗原(例えばＣＤ３)に対する多特異的(例えば二重特異的)抗体である。また提供されるのは、核酸分子、ベクター、宿主細胞およびそれを含む医薬組成物、その製造方法および処置方法を含むその使用である。
本発明のある態様において、多特異的ＢＣＭＡに結合する抗体およびＴ細胞抗原が提供され、ここで、多特異的抗体は、(ｉ)抗ＢＣＭＡ抗体またはその抗原結合フラグメント；(ii)抗Ｔ細胞抗原抗体またはその抗原結合フラグメント；および(iii)Ｆｃを含み、ここで、抗ＢＣＭＡ抗体またはその抗原結合フラグメントは：
ａ)配列番号２１のＣＤＲ１Ｈ領域、配列番号２２のＣＤＲ２Ｈ領域、配列番号１７のＣＤＲ３Ｈ領域を含むＶＨドメインおよび配列番号２７のＣＤＲ１Ｌ領域、配列番号２８のＣＤＲ２Ｌ領域および配列番号２０のＣＤＲ３Ｌ領域を含むＶＬドメイン；
ｂ)配列番号２１のＣＤＲ１Ｈ領域、配列番号２２のＣＤＲ２Ｈ領域、配列番号１７のＣＤＲ３Ｈ領域を含むＶＨドメインおよび配列番号２５のＣＤＲ１Ｌ領域、配列番号２６のＣＤＲ２Ｌ領域および配列番号２０のＣＤＲ３Ｌ領域を含むＶＬドメイン；または
ｃ)配列番号１５のＣＤＲ１Ｈ領域、配列番号１６のＣＤＲ２Ｈ領域、配列番号１７のＣＤＲ３Ｈ領域を含むＶＨドメインおよび配列番号１８のＣＤＲ１Ｌ領域、配列番号１９のＣＤＲ２Ｌ領域および配列番号２０のＣＤＲ３Ｌ領域を含むＶＬドメイン
を含み、ここで、多特異的抗体はＣＨ１ドメインおよびＣＬドメインを含み、ここで、ＣＨ１ドメインは位置Ａ１４１、Ｌ１４５、Ｋ１４７およびＱ１７５(ＥＵナンバリングによる番号付け)にアミノ酸修飾を含み、ＣＬドメインは位置Ｆ１１６、Ｑ１２４、Ｌ１３５およびＴ１７８(Kabatによる番号付け)にアミノ酸修飾を含み、
そして、ここで、Ｆｃは第一定常ドメインＣＨ２およびＣＨ３を含む第一Ｆｃ鎖および第二定常ドメインＣＨ２およびＣＨ３を含む第二Ｆｃ鎖を含み、ここで、第一ＣＨ３ドメインはアミノ酸位置Ｔ３５０、Ｌ３５１、Ｆ４０５およびＹ４０７(ＥＵナンバリングによる番号付け)に修飾を含み、第二ＣＨ３ドメインはアミノ酸位置Ｔ３５０、Ｔ３６６、Ｋ３９２およびＴ３９４(ＥＵナンバリングによる番号付け)に修飾を含み、所望によりここでＴ細胞抗原はＣＤ３である。
ある実施態様において、ＣＨ１ドメインは、修飾Ａ１４１Ｗ、Ｌ１４５Ｅ、Ｋ１４７ＴおよびＱ１７５Ｅまたはその保存的置換(ＥＵナンバリングによる番号付け)の２以上(例えば全て)を含み、ここで、ＣＬドメインは、修飾Ｆ１１６Ａ、Ｑ１２４Ｒ、Ｌ１３５ＶおよびＴ１７８Ｒまたはその保存的置換(Kabatによる番号付け)の２以上(例えば全て)を含む。
アミノ酸修飾を含むＣＨ１ドメインおよびＣＬドメインは、抗ＢＣＭＡ抗体またはその抗原結合フラグメントまたは抗Ｔ細胞抗原抗体またはその抗原結合フラグメントに由来し得る。好ましい実施態様において、抗ＢＣＭＡ抗体またはその抗原結合フラグメントは、アミノ酸修飾を含むＣＨ１ドメインおよびＣＬドメインを含む。
ある実施態様において、第一ＣＨ３ドメインは修飾Ｔ３５０Ｖ、Ｌ３５１Ｙ、Ｆ４０５ＡおよびＹ４０７Ｖまたはその保存的置換(ＥＵナンバリングによる番号付け)の１以上を含む；および第二ＣＨ３ドメインは修飾Ｔ３５０Ｖ、Ｔ３６６Ｌ、Ｋ３９２ＬおよびＴ３９４Ｗまたはその保存的置換(ＥＵナンバリングによる番号付け)の１以上を含む。好ましい実施態様において、第一ＣＨ３ドメインは修飾Ｔ３５０Ｖ、Ｌ３５１Ｙ、Ｆ４０５ＡおよびＹ４０７Ｖまたはその保存的置換(ＥＵナンバリングによる番号付け)を含む；および第二ＣＨ３ドメインは修飾Ｔ３５０Ｖ、Ｔ３６６Ｌ、Ｋ３９２ＬおよびＴ３９４Ｗまたはその保存的置換(ＥＵナンバリングによる番号付け)を含む。
ある実施態様において、本発明の多特異的(例えば二重特異的)抗体は抗ＣＤ３抗体またはその抗原結合フラグメントを含み、ここで、抗ＣＤ３抗体のＶＨドメインは配列番号１、２および３のＣＤＲをそれぞれＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２およびＣＤＲＨ３として含み、抗ＣＤ３抗体のＶＬドメインは配列番号４、５および６のＣＤＲをそれぞれ軽鎖ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２およびＣＤＲＬ３として含む。
好ましい実施態様において、本発明の多特異的(例えば二重特異的)抗体は、配列番号７のＶＨおよび配列番号８のＶＬを含む抗ＣＤ３抗体またはその抗原結合フラグメントを含む。
ある実施態様において、本発明の多特異的(例えば二重特異的)抗体はＩｇＧ１ Ｆｃを含み、所望によりここでＦｃは
ａ)修飾Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５ＡおよびＰ３２９Ｇ(ＥＵナンバリングによる番号付け)；および／または
ｂ)修飾Ｄ３５６ＥおよびＬ３５８Ｍ(ＥＵナンバリングによる番号付け)
を含む。
ある実施態様において、多特異的本発明の抗体は抗ＢＣＭＡ抗体の２個のＦａｂフラグメントおよび抗ＣＤ３抗体の１個のＦａｂフラグメントを含む二重特異的三価抗体であり、所望によりここで抗体は形式ＢＣＭＡ Ｆａｂ－Ｆｃ－ＣＤ３ Ｆａｂ－ＢＣＭＡ Ｆａｂである。
本発明のある態様において、ＢＣＭＡおよびＣＤ３に結合する多特異的抗体が提供され、ここで、多特異的抗体は三価二重特異的抗体の形式であり、ここで、多特異的抗体は形式ＢＣＭＡ Ｆａｂ－Ｆｃ－ＣＤ３ Ｆａｂ－ＢＣＭＡ Ｆａｂによる抗ＣＤ３抗体の１個のＦａｂフラグメント、抗ＢＣＭＡ抗体の２個のＦａｂフラグメントおよび１個のＦｃを含み、ここで：
ａ)抗ＣＤ３ Ｆａｂフラグメントは軽鎖および重鎖を含み、ここで、軽鎖は可変ドメインＶＨおよび定常ドメインＣＬを含むクロスオーバー軽鎖であり、重鎖は可変ドメインＶＬおよび定常ドメインＣＨ１を含むクロスオーバー重鎖である、
ｂ)各抗ＢＣＭＡ Ｆａｂフラグメントは軽鎖および重鎖を含み、ここで、軽鎖は可変ドメインＶＬおよび定常ドメインＣＬを含み、重鎖は可変ドメインＶＨおよび定常ドメインＣＨ１を含み、ここで：
(ｉ)可変ドメインＶＨはそれぞれ配列番号２１、２２および１７の重鎖ＣＤＲ１～３を含み、可変ドメインＶＬはそれぞれ配列番号２７、２８および２０の軽鎖ＣＤＲ１～３を含む；
(ii)可変ドメインＶＨはそれぞれ配列番号２１、２２および１７の重鎖ＣＤＲ１～３を含み、可変ドメインＶＬはそれぞれ配列番号２５、２６および２０の軽鎖ＣＤＲ１～３を含む；または
(iii)可変ドメインＶＨはそれぞれ配列番号１５、１６および１７の重鎖ＣＤＲ１～３を含み、可変ドメインＶＬはそれぞれ配列番号１８、１９および２０の軽鎖ＣＤＲ１～３を含む；
ｃ)各抗ＢＣＭＡ ＦａｂフラグメントのＣＨ１ドメインは修飾Ａ１４１Ｗ、Ｌ１４５Ｅ、Ｋ１４７ＴおよびＱ１７５Ｅまたはその保存的置換(ＥＵナンバリングによる番号付け)を含み、各抗ＢＣＭＡ Ｆａｂフラグメントの対応するＣＬドメインは修飾Ｆ１１６Ａ、Ｑ１２４Ｒ、Ｌ１３５Ｖ、Ｔ１７８Ｒまたはその保存的置換(Kabatによる番号付けナンバリング)を含む、
ｄ)Ｆｃは第一Ｆｃ鎖および第二Ｆｃ鎖、第一定常ドメインＣＨ２およびＣＨ３を含む第一Ｆｃ鎖ならびに第二定常ドメインＣＨ２およびＣＨ３を含む第二Ｆｃ鎖を含み、ここで、第一Ｆｃ鎖はＦｃのＮ末端で１個の抗ＢＣＭＡ ＦａｂフラグメントのＣ末端に結合し、第二Ｆｃ鎖はＦｃのＮ末端で抗ＣＤ３ ＦａｂフラグメントのＣ末端に結合し、ここで：
(ｉ)第一ＣＨ３ドメインは修飾Ｔ３５０Ｖ、Ｌ３５１Ｙ、Ｆ４０５ＡおよびＹ４０７Ｖを含み、第二ＣＨ３ドメインは修飾Ｔ３５０Ｖ、Ｔ３６６Ｌ、Ｋ３９２ＬおよびＴ３９４Ｗを含む(ＥＵナンバリングによる番号付け)および
(ii)両Ｆｃ鎖は修飾Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５ＡおよびＰ３２９Ｇおよび所望により修飾Ｄ３５６ＥおよびＬ３５８Ｍを含む(ＥＵナンバリングによる番号付け)。
本発明のさらなる態様において、ＢＣＭＡおよびＣＤ３に結合する三価二重特異的抗体が提供され、ここで、三価二重特異的抗体は、次の配列番号
ｉ. Ｍａｂ１０１：５８、５９、４８および２×６０
ii. Ｍａｂ１０２：６１、６２、４８および２×６３
iii. Ｍａｂ１０３：６４、６５、４８および２×６６
を含む。
各分子Ｍａｂ１０１、Ｍａｂ１０２およびＭａｂ１０３は、記載される「ＲＫ／ＥＥ」置換ではなく、軽鎖誤対合／副産物を低減するためのＣＬ－ＣＨ１における別のアミノ酸置換Ａ１４１Ｗ、Ｌ１４５Ｅ、Ｋ１４７Ｔ、Ｑ１７５Ｅ(「ＷＥＴＥ」)およびＦ１１６Ａ、Ｑ１２４Ｒ、Ｌ１３５Ｖ、Ｔ１７８Ｒ(「ＡＲＶＲ」)がある以外、図２Ａに示される、２＋１二重特異的形式である。
さらなる態様において、本発明の多特異的(例えば二重特異的)抗体および薬学的に許容される添加物を含む、医薬組成物が提供される。関連態様において、本発明の三価二重特異的抗体および薬学的に許容される添加物を含む、医薬組成物が提供される。
さらなる態様において、本発明の多特異的(例えば二重特異的)抗体、本発明の三価二重特異的抗体または本発明の医薬組成物は、医薬として使用するためである。
関連態様において、対象を処置する方法であって、そのような処置を必要とする対象(例えばヒト)に本発明の多特異的(例えば二重特異的)抗体、本発明の三価二重特異的抗体または本発明の医薬組成物を投与することを含む、方法が提供される。
好ましい実施態様において、本発明の多特異的(例えば二重特異的)抗体、本発明の三価二重特異的抗体または本発明の医薬組成物は、形質細胞障害の処置用医薬として使用するためである。ある実施態様において、形質細胞障害は癌である。好ましい実施態様において、癌は多発性骨髄腫または形質細胞白血病である。
医薬組成物
本発明の多特異的(例えば二重特異的)抗体は、対象に医薬組成物として投与され得る。従って、本発明はまた本発明の多特異的(例えば二重特異的)抗体および薬学的に許容される添加物を含む、医薬組成物も提供する。
ここで使用する用語「薬学的に許容される」は、連邦政府または州政府の規制当局による承認または米国薬局方、欧州薬局方もしくは動物およびより具体的にはヒトにおける使用のための他の一般に認識されている局方同等物への掲載を意味する。
ここに開示する医薬組成物は、障害の診断、検出またはモニタリング、障害またはその症状の１以上の予防、処置、管理または改善および／または研究に使用するためであるが、それに限定されない。ここに開示する医薬組成物は、動物への使用またはヒトにおける医薬使用に適し得る。
適当な添加物の例は、水、食塩水、リン酸緩衝化食塩水、デキストロース、グリセロール、エタノールなどの１以上のおよびこれらの何らかの組み合わせを含む。多くの場合、組成物に糖、ポリアルコールまたは塩化ナトリウムなどの等張剤を含めるのが好ましい。特に、適当な添加物の関連する例は、(１)約１mg／mL～２５mg／mLヒト血清アルブミンを含むまたは含まないダルベッコリン酸緩衝化食塩水、ｐＨ約７.４、(２)０.９％食塩水(０.９％ｗ／ｖ塩化ナトリウム(ＮａＣｌ))および(３)５％(ｗ／ｖ)デキストロースを含み、またトリプタミンなどの抗酸化剤およびＴｗｅｅｎ ２０(登録商標)などの安定化剤も含み得る。
当業者は、本発明の多特異的(例えば二重特異的)抗体と使用する１以上の添加物の適切な選択は、医薬組成物の所望の性質に依存することを理解する。
本発明の医薬組成物または多特異的(例えば二重特異的)抗体は、対象に、あらゆる適切な全身または局所投与経路により投与され得る。例えば、投与は経口、頬側、舌下、眼、鼻腔内、気管内、肺、局所、経皮、泌尿生殖器、直腸、皮下、静脈内、動脈内、腹腔内、筋肉内、頭蓋内、髄腔内、硬膜外、脳室内または腫瘍内であり得る。ある実施態様において、医薬組成物または多特異的(例えば二重特異的)抗体は静脈内または皮下投与される。好ましい実施態様において、医薬組成物または多特異的(例えば二重特異的)抗体は静脈内投与される。
本発明の医薬組成物は、あらゆる適切な手段、例えば上皮または経皮パッチ、軟膏、ローション、クリームまたはゲル；ネブライザー、気化器または吸入器；注射または点滴；またはカプセル、錠剤、水もしくは非水性媒体中の溶液もしくは懸濁液、液滴、坐薬、浣腸、スプレーまたは粉末の形態によるによる投与のために製剤化できる。どの場合でも最も適当な投与経路は、患者の身体的および精神的状態、疾患の性質および重症度および製剤の所望の性質に依存する。
単剤療法および組み合わせ治療
ある実施態様において、処置は、対象に単剤療法として本発明の多特異的(例えば二重特異的)抗体を投与することを含む。
ある実施態様において、処置は、対象に組み合わせ治療として本発明の多特異的(例えば二重特異的)抗体を投与することを含み、ここで、組み合わせ治療は、本発明の多特異的(例えば二重特異的)抗体および１以上のさらなる治療剤の投与を含む。用語「組み合わせ治療」は、単一患者への選択した複数治療剤の投与を含み、これら薬剤が同じもしくは異なる投与経路でまたは同じもしくは異なる時点で投与される処置を含むことを意図する。
ある実施態様において、１以上のさらなる治療剤は、抗葉酸剤(例えばメトトレキサート)、プリン合成阻害剤(例えばアザチオプリン、ミコフェノール酸および／またはミコフェノール酸モフェチル)、Ｃ５ａ阻害剤(例えばアバコパン)、抗ＣＤ１９抗体、抗ＣＤ２０抗体(例えばリツキシマブ)、ステロイド、ブルトン型チロシンキナーゼ(ＢＴＫ)阻害剤および／またはＢＡＦＦ／ＡＰＲＩＬアンタゴニスト(例えば抗ＢＡＦＦ抗体)からなる群から選択される。
本発明者らは、寛解誘導および／または寛解の維持においてステロイドの必要性は最小限であることを特定している。故に、ある実施態様において、１以上のさらなる治療剤はステロイド、例えばグルココルチコイドではない。
ある実施態様において、１以上のさらなる治療剤は、サリドマイドおよびその免疫療法誘導体、抗ＣＤ３８抗体、抗ＰＤ－１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、ガンマセクレターゼ阻害剤(ＧＳＩ)、抗ＢＣＭＡ抗体薬物コンジュゲートおよび抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞治療からなる群から選択される。
ここで使用する用語「抗ＣＤ３８抗体」は、ヒトＣＤ３８に特異的に結合する抗体に関する。本発明のある実施態様において、抗ＣＤ３８抗体はダラツムマブ(ＵＳ２０１５０２４６１２３)である。本発明のある実施態様において、抗ＣＤ３８抗体はイサツキシマブ(ＳＡＲ６５０９８４、ＵＳ８８７７８９９)である。本発明のある実施態様において、抗ＣＤ３８抗体はＭＯＲ２０２(ＷＯ２０１２０４１８００)である。本発明のある実施態様において、抗ＣＤ３８抗体はＡｂ７９(ＵＳ８３６２２１１)である。本発明のある実施態様において、抗ＣＤ３８抗体はＡｂ１９(ＵＳ８３６２２１１)である。このような抗ＣＤ３８抗体の投与は最先端技術に従って実施され、各処方情報に記載される。例えばダラツムマブ投与量は、通常１６mg／kg(www.ema.europa.eu)である。
ここで使用する用語「サリドマイド化合物」または「サリドマイドおよび免疫治療誘導体」は、２－(２,６－ジオキソピペリジン－３－イル)－２,３－ジヒドロ－１Ｈ－イソインドール－１,３－ジオンおよびその免疫療法誘導体に関する。本発明のある実施態様において、サリドマイド化合物は、サリドマイド(CAS Registry Number 50-35-1)、レナリドマイド(CAS Registry Number 191732-72-6)、ポマリドマイド(CAS Registry Number 19171-19-8)、ＣＣ１２２(CAS Registry Number 1398053-45-6)およびＣＣ－２２０(CAS Registry Number 1323403-33-3)および各塩(好ましくはＨＣｌ塩１：１)を含む群から選択されるが、これらに限定されない。ＣＣ－１２２の化学的式は２,６－ピペリジンジオン,３－(５－アミノ－２－メチル－４－オキソ－３(４Ｈ－キナゾリニル)、塩酸塩(１：１)であり、ＣＣ－２２０の化学的式は、２,６－ピペリジンジオン、３－[１,３－ジヒドロ－４－[[４－(４－モルホリニルメチル)フェニル]メトキシ]－１－オキソ－２Ｈ－イソインドール－２－イル]－、(３Ｓ)－、塩酸塩(１：１)である。ＣＣ－２２０を製造する方法は、例えば、引用により全体として本明細書に包含させるＵＳ２０１１０１９６１５０に開示される。
サリドマイド化合物の投与は最先端技術に従って実施され、各処方情報に記載される。例えばレブラミド(登録商標)(レナリドマイド)投与量は通常反復２８日サイクルで１～２１日目２５mg１日１回経口(www.revlimid.com)であり、多発性骨髄腫処置のためのポマリスト(登録商標)(ポマリドマイド)投与量は、通常反復２８日サイクルで１～２１日目１日あたり４mg経口摂取(www.celgene.com)である。ある実施態様において、３－(５－アミノ－２－メチル－４－オキソ－４Ｈ－キナゾリン－３－イル)－ピペリジン－２,６－ジオンは、１日あたり約５～約５０mgの量で投与される。
ある実施態様において、ＣＣ－１２２およびＣＣ－２２０は、１日あたり約５～約２５mgの量で投与される。他の実施態様において、ＣＣ－１２２およびＣＣ－２２０は、１日あたり約５mg、１０mg、１５mg、２５mg、３０mgまたは５０mgの量で投与される。他の実施態様において、１０mgまたは２５mgのＣＣ－１２２およびＣＣ－２２０が１日あたり投与される。ある実施態様において、ＣＣ－１２２およびＣＣ－２２０が１日２回投与される。
ここで使用する用語「抗ＰＤ－１抗体」は、ヒトＰＤ－１に特異的に結合する抗体をいう。このような抗体は、例えばＷＯ２０１５０２６６３４(ＭＫ－３４７５、ペムブロリズマブ)、ＵＳ７５２１０５１、ＵＳ８００８４４９およびＵＳ８３５４５０９に記載される。ペムブロリズマブ(キイトルーダ(登録商標)、ＭＫ－３４７５)は、ＷＯ２００９／１１４３３５、Poole, R.M. Drugs (2014) 74: 1973; Seiwert, T., et al., J. Clin. Oncol. 32,5s (suppl;abstr 6011)にも記載される。本発明のある実施態様において、ＰＤ－１抗体はＭＫ－３４７５(WHO Drug Information, Vol. 27, No. 2, pages 161-162 (2013))であり、ＷＯ２０１５０２６６３４の図６に示す重鎖および軽鎖アミノ酸配列を含む。ペムブロリズマブのアミノ酸配列はＷＯ２００８１５６７１２(軽鎖ＣＤＲ配列番号１５、１６および１７および重鎖ＣＤＲ配列番号１８、１９および２０)に記載される。本発明のある実施態様において、ＰＤ－１抗体はニボルマブ(ＢＭＳ－９３６５５８、ＭＤＸ １１０６；WHO Drug Information, Vol. 27, No. 1, pages 68-69 (2013)、ＷＯ２００６／１２１１６８、ＷＯ２０１５０２６６３４に示されるアミノ酸配列)である。本発明のある実施態様において、ＰＤ－１抗体はピディリズマブ(ＣＴ－０１１、ｈＢＡＴまたはｈＢＡＴ－１としても知られる；アミノ酸配列ＷＯ２００３／０９９１９６参照；ＷＯ２００９／１０１６１１、Fried I. et al.; Neuro Oncol (2014) 16 (suppl 5): v111-v112.)である。本発明のある実施態様において、ＰＤ－１抗体はＭＥＤＩ－０６８０(ＡＭＰ－５１４、ＷＯ２０１０／０２７４２３、ＷＯ２０１０／０２７８２７、ＷＯ２０１０／０２７８２８、Hamid O. et al.; J Clin Oncol 33, 2015 (suppl; abstr TPS3087))である。本発明のある実施態様において、ＰＤ－１抗体はＰＤＲ００１(Naing A. et al.; J Clin Oncol 34, 2016 (suppl; abstr 3060)である。本発明のある実施態様において、ＰＤ－１抗体はＲＥＧＮ２８１０(Papadopoulos KPet al.; J Clin Oncol 34, 2016 (suppl; abstr 3024)。本発明のある実施態様において、ＰＤ－１抗体はランブロリズマブ(ＷＯ２００８／１５６７１２))である。本発明のある実施態様において、ＰＤ－１抗体は、ＷＯ２００８／１５６７１２に記載されるｈ４０９Ａｌｌ、ｈ４０９Ａ１６またはｈ４０９Ａ１７である。このような抗ＰＤ－１抗体の投与は最先端技術に従って実施され、各処方情報に記載される。例えばキイトルーダ(登録商標)は、通常３週毎に２mg／kg体重の濃度で投与される(http://ec.europa.eu/health/documents)。
ここで使用する用語「抗ＰＤ－Ｌ１抗体」は、ヒトＰＤ－Ｌ１に特異的に結合する抗体をいう。このような抗体は、例えばＷＯ２０１５０２６６３４、ＷＯ２０１３／０１９９０６、Ｗ０２０１０／０７７６３４およびＵＳ８３８３７９６に記載される。本発明のある実施態様において、ＰＤ－Ｌ１抗体はＭＰＤＬ３２８０Ａ(アテゾリズマブ、ＹＷ２４３.５５.Ｓ７０、ＷＯ２０１０／０７７６３４、McDermott DF. Et al., JCO March 10, 2016 vol. 34 no. 8 833-842である)。本発明のある実施態様において、ＰＤ－Ｌ１抗体はＭＤＸ－１１０５(ＢＭＳ－９３６５５９、ＷＯ２００７／００５８７４、Patrick A. Ott PA et al., DOI: 10.1158/1078-0432, Clinical Cancer Research-13-0143)である。本発明のある実施態様において、ＰＤ－Ｌ１抗体はＭＥＤＩ４７３６(デュルバルマブ、ＷＯ２０１６／０４０２３８、Gilbert J. et al., Journal for ImmunoTherapy of Cancer 20153(Suppl 2):P152)である。本発明のある実施態様において、ＰＤ－Ｌ１抗体はＭＳＢ００１０７１８Ｃ(アベルマブ、Disis ML. et al., Journal of Clinical Oncology, Vol 33, No 15_suppl (May 20 Supplement), 2015: 5509)である。本発明のある実施態様において、ＰＤ－Ｌ１抗体は、ＷＯ２０１６００７２３５に記載の配列番号１６のＶＨ配列および配列番号１７のＶＬ配列を含む、抗ＰＤ－Ｌ１抗体である。このような抗ＰＤ－Ｌ１抗体の投与は最先端技術に従って実施され、各処方情報に記載される。例えばアテゾリズマブは、通常３週毎に６０分にわたる静脈内点滴として１２００mgの濃度で投与される(www.accessdata.fda.gov)。
ここで使用される用語「ガンマセクレターゼ」は、ガンマセクレターゼ切断部位でガンマセクレターゼ切断配列を有する基質に結合し、ガンマセクレターゼ切断配列の切断を触媒するガンマセクレターゼ活性を示し、基質切断産物を産生するあらゆるタンパク質またはタンパク質複合体をいう。ある実施態様において、ガンマセクレターゼは、次のサブユニット：プレセニリン、ニカストリン、ガンマ－セクレターゼサブユニットＡＰＨ－１およびガンマ－セクレターゼサブユニットＰＥＮ－２の１以上を含む、タンパク質複合体である。
ここで使用する用語「ガンマセクレターゼ阻害剤」または「ＧＳＩ」は、ガンマセクレターゼの発現および／または機能を阻害または低減できるあらゆる分子をいう。ある実施態様において、ＧＳＩは、ガンマセクレターゼのサブユニット(例えば、プレセニリン、ニカストリン、ＡＰＨ－１またはＰＥＮ－２)の発現および／または機能を低減する。塩、共結晶、結晶形態、プロドラッグなどのあらゆる形態の「ガンマセクレターゼ阻害剤」がこの用語の範囲内に含まれる。ある実施態様において、ＧＳＩは抗体または抗原結合フラグメント、小分子、タンパク質またはペプチドおよび核酸から選択される。
有害事象
ある実施態様において、患者は、多特異的(例えば二重特異的)抗体の投与と関連する有害事象を発症するまたは発症するリスクにある。有害事象は、サイトカイン駆動型毒性(例えばサイトカイン放出症候群(ＣＲＳ))、注入に伴う反応(ＩＲＲ)、感染、マクロファージ活性化症候群(ＭＡＳ)、神経毒性、重度腫瘍溶解症候群(ＴＬＳ)、好中球減少症、血小板減少症、肝酵素上昇および／または中枢神経系(ＣＮＳ)毒性であり得る。具体的実施態様において、有害事象はＣＲＳである。
患者が多特異的(例えば二重特異的)抗体の投与と関連する有害事象を発症するまたは発症するリスクにある場合には、処置は、さらに有害事象の発症または有害事象の発症のリスクを処置、予防、遅延、低減または減弱できる薬剤の投与を含み得る。薬剤を、患者に多特異的(例えば二重特異的)抗体での処置開始前(例えば有害事象発症を予防するまたはリスクを低減するための予防として)または多特異的(例えば二重特異的)抗体での処置中(例えば有害事象の進展に応答して)投与し得る。
ある実施態様において、薬剤は、コルチコステロイドなどのステロイドを含む。ここで使用する「コルチコステロイド」は、コレステロールに由来され得て、水素化シクロペンタノペルヒドロフェナントレン環系により特徴づけられる、あらゆる天然に存在するまたは合成ステロイドホルモンを意味する。天然に存在するコルチコステロイドは、一般に副腎皮質により産生される。合成コルチコステロイドはハロゲン化され得る。活性に必要な官能基は、Δ４、Ｃ３ケトンおよびＣ２０ケトンの二重結合を含む。コルチコステロイドは、グルココルチコイドおよび／または鉱質コルチコイド活性を有し得る。例示的コルチコステロイドの例は、プレドニゾロン、メチルプレドニゾロン、プレドニゾン、トリアムシノロン、ベタメタゾン、ブデソニドおよびデキサメサゾンを含む。
ある実施態様において、薬剤は、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－１０、ＩＬ－１０Ｒ、ＩＬ－６、ＩＬ－６受容体(ＩＬ－６Ｒ)、ＩＦＮｙ、ＩＦＮＧＲ、ＩＬ－２、ＩＬ－２Ｒ／ＣＤ２５、ＭＣＰ－１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ４、ΜΙΡΙβ、ＣＣＲ５、ＴＮＦアルファ、ＴＮＦＲ１、ＩＬ－１およびＩＬ－１Ｒアルファ／ＩＬ－１ベータから選択されるサイトカイン受容体またはサイトカインのアンタゴニストを含み、ここで、アンタゴニストは抗体または抗原結合フラグメント、小分子、タンパク質またはペプチドおよび核酸から選択される。アンタゴニストは抗ＩＬ－６抗体および／または抗ＩＬ６Ｒ抗体であり得る。例えば、アンタゴニストはトシリズマブ、シルツキシマブ、クラザキズマブ、サリルマブ、オロキズマブ、エルシリモマブ、ＡＬＤ５１８／ＢＭＳ－９４５４２９、シルクマブ(ＣＮＴＯ １３６)、ＣＰＳＩ－２６３４、ＡＲＧＸ－１０９、レンジルマブ、ＦＥ３０１およびＦＭ１０１から選択され得る。ある実施態様において、アンタゴニストはトシリズマブおよび／またはシルツキシマブである。
ある実施態様において、薬剤は、制御Ｔ細胞(Ｔｒｅｇ)集団を低減させる分子を含む。Ｔｒｅｇ細胞の数を低減させる(例えば、枯渇させる)薬剤は当分野で知られ、例えば、ＣＤ２５枯渇、シクロホスファミド投与、抗ＣＴＬＡ４抗体およびグルココルチコイド誘導ＴＮＬＲファミリー関連遺伝子(ＧＩＴＲ)機能の調節を含む。ＧＩＴＲは、免疫系を増強するＴ細胞活性化により上方制御される、ＴＮＬＲスーパーファミリーのメンバーである。ある実施態様において、処置はシクロホスファミドの投与を含む。
上記のとおり、本発明者らは、本発明の二重特異的抗体での処置後に顕著なサイトカイン放出がないまたは最小限であることを観察している。従って、有害事象がサイトカイン駆動型毒性(例えばＣＲＳ)である、ある実施態様において、処置は、サイトカイン受容体またはサイトカインのアンタゴニストなどの有害事象の発症または有害事象の発症のリスクを処置、予防、遅延、低減または減弱できる薬剤の投与をさらに含まない。
免責
上記実施態様は、説明的例として理解されるべきである。さらなる実施態様が想定される。ある一つの実施態様に関連して記載されている何らかの特性を単独でまたは記載されている他の特性と組み合わせて使用できることおよび何らかの他の実施態様の１以上の特性もしくは何らかの他の実施態様の何らかの組み合わせと組み合わせて使用し得ることも理解されるべきである。さらに、上に記載されていない均等物および修飾も、添付する特許請求の範囲により定義される本発明の範囲から逸脱することなく用いられ得る。
本発明の状況において、ここに記載する抗体および方法の他の例および変異は、当業者には明らかである。他の例および変異は、添付する特許請求の範囲に示す本発明の範囲内である。
ここに引用する全文献は、各々、該引用文献に存在する全データ、表、図および文章を含み、全体として引用により本明細書に包含させる。
Figure 2023514224000007
Figure 2023514224000008
Figure 2023514224000009
Figure 2023514224000010
Figure 2023514224000011
Figure 2023514224000012
Figure 2023514224000013
Figure 2023514224000014
 注：配列番号２０および配列番号３３は同一である
Figure 2023514224000015
Figure 2023514224000016
Figure 2023514224000017
Figure 2023514224000018
実施例１：正常健常ボランティア(ＮＨＶ)およびＡＡＶ患者からのサンプルにおける形質芽球および形質細胞上のＢＣＭＡ表面発現ならびに可溶性ＢＣＭＡレベル
末梢血単核細胞(ＰＢＭＣ)を、４名の正常健常ボランティア(ＮＨＶ)から集めた全血からフィコール勾配を使用して単離した。ＢＭＣＡ発現を、フローサイトメトリーにより形質芽球(ＰＢ)で評価した。形質芽球をＣＤ１９(＋) ＣＤ２０(－) ＣＤ２７(＋) ＣＤ３８(＋)として同定した。抗ＢＣＭＡ抗体被覆蛍光ビーズを使用して、平均蛍光強度対ＢＣＭＡ表面受容体密度を比較するための標準曲線を作成した。ＢＣＭＡ発現癌細胞株(ＪＥＫＯ、ＲＰＭＩ－８２２６およびＨ９２９)を比較のためにプロファイリングした(図４Ａ)。ＢＣＭＡ表面発現は、試験した全ＮＨＶについて、多発性骨髄腫細胞株ＲＰＭＩ－８２２６およびＨ９２９より、ＮＨＶからの形質芽球由来で遥かに低い。
可溶性ＢＣＭＡレベルを、ＮＨＶ(‘正常’)、多発性骨髄腫(‘ＭＭ’)またはＡＮＣＡ関連脈管炎(‘ＡＡＶ’)患者からの血清または血漿サンプルでＥＬＩＳＡにより評価した(図４Ｂ)。可溶性ＢＣＭＡレベルはＭＭサンプルよりＮＨＶサンプルで遥かに低く、ＭＭ患者と比較したＮＨＶにおける形質芽球上のＢＣＭＡ細胞表面発現が低レベルであることを示す。ＡＡＶからの血清および血漿(ＰＲ３＋)サンプルの両者における可溶性ＢＣＭＡレベルはＮＨＶサンプルと同等であり、ＭＭサンプルより遥かに低い。この相関の観点から、ＡＡＶにおける形質芽球および形質細胞上のＢＣＭＡ表面発現は、ＮＨＶと同等であることが推測される。
実施例２：Ｔ細胞二重特異的抗体の産生
形式第一ＢＣＭＡ Ｆａｂ－Ｆｃ－ＣＤ３ Ｆａｂ－第二ＢＣＭＡ Ｆａｂを有する抗ＢＣＭＡ抗ＣＤ３二重特異的抗体を産生した(ここでは「２＋１」形式と称する)。抗ＢＣＭＡ抗ＣＤ３二重特異的抗体を製造する方法は、引用により本明細書に包含させるＷＯ２０１７／０２１４５０に見ることができる。
ＨＤ１は：
－ ＦｃのＣＨ３ドメインはアミノ酸置換Ｔ３６６Ｗを有する一個の鎖およびアミノ酸置換Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８ＡおよびＹ４０７Ｖを有する一個の鎖を含む(表２に示すとおり)；および
－ ＢＣＭＡ Ｆａｂの両者はＣＨ１ドメインにアミノ酸置換Ｋ１４７ＥおよびＫ２１３ＥおよびＣＬドメインにアミノ酸置換Ｅ１２３ＲおよびＱ１２４Ｋを含む(表４に示すとおり)
ことを示し；
ＨＤ２は：
－ ＣＨ２－ＦｃのＣＨ３ドメインはアミノ酸置換Ｔ３５０Ｖ、Ｌ３５１Ｙ、Ｆ４０５Ａ、Ｙ４０７Ｖを有する一個の鎖およびアミノ酸置換Ｔ３５０Ｖ、Ｔ３６６Ｌ、Ｋ３９２Ｌ、Ｔ３９４Ｗを有する一個の鎖を含む(表３に示すとおり)；
－ ＢＣＭＡ Ｆａｂの両者はＣＨ１ドメインにアミノ酸置換Ａ１４１Ｗ、Ｌ１４５Ｅ、Ｋ１４７Ｔ、Ｑ１７５ＥおよびＣＬドメインにアミノ酸置換Ｆ１１６Ａ、Ｑ１２４Ｒ、Ｌ１３５Ｖ、Ｔ１７８Ｒを含む(表５に示すとおり)
ことを示す
(重鎖定常領域アミノ酸位置ＥＵナンバリングによる番号付け；軽鎖定常領域アミノ酸位置Kabatによる番号付け)。
ＨＤ１およびＨＤ２下に記載した上記修飾に加えて、本実施例における二重特異的抗体のＦｃは、アミノ酸置換Ｐ３２９Ｇ、Ｌ２３４ＡおよびＬ２３５Ａを含む(位置ＥＵナンバリングによる番号付け)。
本実施例の二重特異的抗体はまたＣＤ３ ＦａｂのＶＨおよびＶＬが交換された「CrossMAb」テクノロジーも含む。
本実施例において産生した抗体の概要を表８に提供する。
Figure 2023514224000019
実施例３：ＢＣＭＡ Ｔ細胞エンゲイジャーによる用量依存的ＢＣＭＡ発現細胞致死がＴ細胞活性化と共に生ずる
ＪＥＫＯ細胞
ＪＥＫＯ細胞を、ＣＤ３＋Ｔ細胞(一夜休息)と、１：２標的：エフェクター(Ｔ：Ｅ)比および種々の濃度の抗ＢＣＭＡ抗ＣＤ３二重特異的抗体(ＢＣＭＡ Ｔ細胞エンゲイジャー)と培養した。ＪＥＫＯ細胞のＴ細胞介在性致死を、２４時間にわたり測定したアネキシンＶ発現により評価し、画像を２時間毎に記録した。アネキシンＶ＋細胞カウントを、Incucyte ZOOMソフトウェアを使用して決定した。データおよび２０時間時点で計算したＥＣ５０値を図５Ａおよび表９に示す。
Figure 2023514224000020

このデータは、ＢＣＭＡ Ｔ細胞エンゲイジャー(ＢＣＭＡ ＴＣＥ)が、正常健常ボランティアからの形質芽球と同等なレベルでＢＣＭＡ発現細胞を致死させ得ることを示す。
Ｔ細胞活性化を、２４時間時点でフローサイトメトリーにより分析した。細胞を洗浄し、次いでＴ細胞の細胞系譜マーカー(ＣＤ３、ＣＤ４およびＣＤ８)および活性化マーカー(ＣＤ６９、ＣＤ２５およびＣＤ１５４)について染色した。フローサイトメトリーサンプルをBD LSRFortessaで獲得し、Treestar FlowJo Xソフトウェアを使用して分析した。細胞画像化を、Incucyte Live Cell Analysis Imaging Systemで実施した。データをプロットし、ＥＣ５０値をGraphpad Prism 7ソフトウェアを使用して計算した。
図５Ｂは、ＣＤ８＋Ｔ細胞上のＣＤ６９発現により表されるＴ細胞活性化を示す。
これらのデータは、ＪＥＫＯ細胞の致死についてＢＣＭＡ Ｔ細胞エンゲイジャーの５０％有効濃度(ＥＣ５０)での活性化Ｔ細胞の頻度の上昇を示す。
ＭＭ細胞
多発性骨髄腫細胞株ＲＰＭＩ－８２２６を、
種々の標的：エフェクター(Ｔ：Ｅ)比および種々の濃度のＣＣ－９３２６９でＮＨＶ ＰＢＭＣと共培養した。ＲＰＭＩ－８２２６細胞のＴ細胞介在性致死を、９６時間にわたり測定したアネキシンＶ発現により評価し、毎時画像を記録した。アネキシンＶ＋細胞カウントを、Incucyte ZOOMソフトウェアを使用して決定した；２５時間および７２時間時点を図６Ａに示す。
Ｔ細胞活性化を、２５時間および７２時間時点でフローサイトメトリーにより分析した。２５時間後、細胞を洗浄し、次いでＣＤ８ Ｔ細胞の細胞系譜およびＴ細胞活性化のマーカーとしてＣＤ６９発現について染色した(図６Ｂ)。
これらのデータは、ＭＭ細胞致死の用量以下のＣＣ－９３２６９の用量で、顕著なＴ細胞活性化が生ずることを示す。
実施例４：健常ボランティアからの形質芽球のＢＣＭＡ Ｔ細胞エンゲイジャーによる用量依存的ＢＣＭＡ発現細胞致死がＴ細胞活性化がほとんどなく生ずる
末梢血単核細胞(ＰＢＭＣ)を、ＲＰＭＩ＋１０％ＨＩ ＦＢＳに再懸濁したフィコール勾配を使用して、健常ボランティアから集めた全血から単離した。ＰＢＭＣを種々の濃度のＢＣＭＡ ＴＣＥまたは対照２＋１抗ＨＥＬ抗ＣＤ３抗体で処理した。２４時間インキュベーション後、形質芽球死滅、Ｔ細胞活性化およびサイトカイン産生を評価した。
形質芽球死滅はＦＡＣＳにより評価され、それにより形質芽球はＣＤ１９(＋) ＣＤ２０(－) ＣＤ２７(＋)細胞として同定され、かつ未処理対照に対して正規化した総ＣＤ１９(＋)細胞のパーセントとして示す。ＣＤ１９(＋) ＣＤ２０(－) ＣＤ２７(＋)細胞を、形質芽球のさらなる既知マーカーＢＣＭＡ(＋) ＳＬＡＭＦ７(＋) ＩｇＤ(－) ＣＤ３８(＋) ＣＤ１３８(－)を得るために確認した。図７Ａは代表的用量－応答曲線であり、図７Ｂは、ＣＤ３(－) ＣＤ１９(＋)細胞上でゲーティングした代表的ＦＡＣＳプロットである。健常ボランティア(ｎ＝１２)における形質芽球致死についてのＣＣ－９３２６９の５０％有効濃度(ＥＣ５０)は０.００５nMである。形質芽球死滅は、ＢＣＭＡ発現癌細胞株(例えばＪＥＫＯ細胞)の致死に必要であるより低いＢＣＭＡ ＴＣＥ濃度で生ずる。
Ｔ細胞活性化のために、細胞を洗浄し、次いでＴ細胞の細胞系譜(ＣＤ３、ＣＤ４およびＣＤ８)および活性化マーカー(ＣＤ６９、ＣＤ２５およびＣＤ１５４)について染色した。図７Ｃに示すデータは、ＣＤ８(＋)Ｔ細胞上のＣＤ６９発現である。培養上清を、MSD Pro-inflammatory Iアッセイを使用してサイトカイン産生(ＩＦＮγ、ＩＬ－６、ＩＬ－２、ＩＬ－１０、グランザイムＢおよびパーフォリン)について分析した(図７Ｄ、図８)。図８のデータはＣＣ－９３２６９についてである。
まとめると、これらのデータは、健常ボランティアのＰＢＭＣの形質芽球の死滅についてのＢＣＭＡ ＴＣＥの５０％有効濃度(ＥＣ５０)で活性化Ｔ細胞の頻度はほとんど上昇せず(すなわちベースラインを超えるのが２０％未満)、かつサイトカインがほとんど産生されない(すなわちベースラインを超えるのが２０pg／mL未満)ことを示す。
表１０はＣＣ－９３２６９のデータを要約し、形質芽球の枯渇の９０％有効濃度(ＥＣ９０)で活性化Ｔ細胞の頻度がほとんど上昇しないことを説明する。ＣＣ－９３２６９は、インビトロで、顕著なＴ細胞活性化の非存在下で、健常ボランティアからのＰＢＭＣの形質芽球の深い枯渇(＞９０％)を示す。
Figure 2023514224000021
実施例５：健常ボランティアからのＰＢＭＣにおけるＣＣ－９３２６９との培養後の他のＢ細胞集団に対する効果
実施例４からのＣＣ－９３２６９処理ＰＢＭＣサンプルをＢ細胞の細胞系譜マーカー(ＣＤ２０、ＣＤ２７およびＩｇＤ)について染色した。記憶Ｂ細胞をマーカーＣＤ１９(＋) ＣＤ２０(＋) ＣＤ２７(＋)を示す細胞として同定し、次いで、さらにマーカーＩｇＤ(－) ＣＤ３８(－)ＢＣＭＡ(＋／－)で確認した。データを、総ＣＤ１９(＋) ＣＤ２０(＋)細胞のパーセントとして示す図９Ａ～Ｃに示す。このデータは、ＣＣ－９３２６９がインビトロで形質芽球死滅について９０％有効濃度(ＥＣ９０)で、健常ボランティアからのＰＢＭＣにおけるナイーブ細胞、スイッチされていない記憶Ｂ細胞またはスイッチされた記憶Ｂ細胞集団を顕著に枯渇させないことを示す。
実施例６：操作された骨髄における形質芽球の用量依存的ＢＣＭＡ ＴＣＥ介在性致死と最小限のＴ細胞活性化
骨髄(ＢＭ)単核細胞をフィコール勾配を使用して健常ボランティアの骨髄から単離し、次いで種々の濃度のＢＣＭＡ ＴＣＥまたは対照２＋１抗ＨＥＬ抗ＣＤ３抗体で処理した。２４時間インキュベーション後、形質芽球致死(図１０Ａ、表１１)およびＴ細胞活性化(図１０Ｂ)を、実施例４におけるとおり、フローサイトメトリーにより評価した。健常ボランティアから単離したＰＢＭＣを、培地または骨髄(ＢＭ)上清に懸濁し、次いで、比較のために２４時間ＢＣＭＡ ＴＣＥまたは対照２＋１抗ＨＥＬ抗ＣＤ３抗体で処理した。
Figure 2023514224000022

これらのデータは、ＢＣＭＡ ＴＣＥが培地に懸濁されたＰＢＭＣからの形質芽球と類似の濃度で骨髄からの形質芽球の致死を誘導し、Ｔ細胞活性化が最小限であることを示す。このデータは、長命形質芽球および形質細胞が骨髄で優先的に見られるため、重要である。
実施例７：ＡＡＶからの形質芽球用量依存的ＢＣＭＡ ＴＣＥ介在性致死と最小限のＴ細胞活性化
末梢血単核細胞(ＰＢＭＣ)を、再発性またはリツキシマブ、メトトレキサートおよび葉酸に難治性であるＡＡＶを含むＡＡＶ患者から集めた全血から、フィコール勾配を使用して単離し、次いで種々の濃度のＢＣＭＡ ＴＣＥ(ＣＣ－９３２６９、Ｍａｂ１０１またはＭａｂ１０２)または対照２＋１抗ＨＥＬ抗ＣＤ３抗体で処理した。２４時間インキュベーション後、形質芽球致死(図１１Ａ～１１Ｂ)、Ｔ細胞活性化(図１１Ｃ、１２Ａ－１２Ｃ)およびサイトカイン産生(図１１Ｄ)を評価した。
形質芽球致死はＦＡＣＳにより評価され、それにより形質芽球はＣＤ１９(＋) ＣＤ２０(－) ＣＤ２７(＋)細胞として同定され、かつ未処理対照に対して正規化した総ＣＤ１９(＋)細胞のパーセントとして示す(図１１Ａ)。ＣＤ１９(＋) ＣＤ２０(－) ＣＤ２７(＋)細胞を、形質芽球のさらなる既知マーカーＢＣＭＡ(＋) ＳＬＡＭＦ７(＋) ＩｇＤ(－) ＣＤ３８(＋) ＣＤ１３８(－)を得るために確認した。図１１Ｂは、ＣＤ３(－) ＣＤ１９(＋)細胞上でゲーティングした代表的ＦＡＣＳプロットである。ＡＡＶにおける形質芽球致死についてのＣＣ－９３２６９の５０％有効濃度(ＥＣ５０)は０.００７nMである。ＡＡＶ形質芽球致死は、ＢＣＭＡ発現レベルが類似であるにも関わらず、ＪＥＫＯ癌細胞株を致死させるのに必要であるより低いＢＣＭＡ ＴＣＥ濃度で生ずる。
Ｔ細胞活性化について、細胞を洗浄し、次いでＴ細胞の細胞系譜(ＣＤ３、ＣＤ４およびＣＤ８)および活性化マーカー(ＣＤ６９、ＣＤ２５およびＣＤ１５４)について染色した。図１１Ｃに示すデータは、ＣＤ８(＋)Ｔ細胞上のＣＤ６９発現である。図１２Ａ～Ｃに示すデータは、ＣＤ４(＋)Ｔ細胞またはＣＤ８(＋)Ｔ細胞上のＣＤ６９またはＣＤ２５発現レベルである。
培養上清を、MSD Pro-inflammatory Iアッセイを使用してサイトカイン産生(ＩＦＮγ、ＩＬ－６、ＴＮＦα、ＩＬ－１β、グランザイムＡ、グランザイムＢおよびパーフォリン)について分析した。ＩＦＮγのデータを図１１Ｄに示す。
まとめると、これらのデータは、ＢＣＭＡ ＴＣＥのＡＡＶ形質芽球致死コンピテント用量で、活性化Ｔ細胞の頻度の顕著な上昇がなく(すなわちベースラインを超えるのが２０％未満)、サイトカイン産生もない(すなわちベースラインを超えるのが２０pg／mL未満)ことを示す。
表１２は、Ｔ細胞活性化がない形質芽球(ＰＢ)致死についてのＢＣＭＡ ＴＣＥ濃度のウィンドウを強調して、実施例４および７からのデータを要約する。このウィンドウで、Ｔ細胞活性化またはサイトカイン放出症候群(ＣＲＳ)などの過度のサイトカイン産生と関連する有害事象は生ずる可能性が低い。
Figure 2023514224000023
実施例８：リツキシマブで処置したＡＡＶ患者からの形質芽球の用量依存的ＣＣ－９３２６９介在性致死
末梢血単核細胞(ＰＢＭＣ)を、リツキシマブを５カ月前に最後に受けたＡＡＶ患者、ＡＡＶ－５からの全血をフィコール勾配により単離し、ＲＰＭＩ＋１０％ＨＩ ＦＢＳに再懸濁した。ＰＢＭＣを、２４時間ＣＣ－９３２６９の濃度を増やしながら(図１３Ｂ～１３Ｃ)または対照２＋１抗ＨＥＬ抗ＣＤ３抗体(図１３Ａ)で処理し、次いでフローサイトメトリーにより評価した。細胞を、生存細胞ＦＡＣＳプロットに到達するための生存能および単一化についてゲーティングした(図１３)。形質芽球をＣＤ１９＋ＣＤ２７＋ＣＤ２０－として定義する。形質芽球は、ＣＤ３８＋、ＢＣＭＡ＋およびＣＤ１３８－であることも確認された(データは示していない)。ＣＤ１９＋ＣＤ２０＋ゲートから、ナイーブＢ細胞はＣＤ２７－ＩｇＤ＋として、スイッチされていない記憶Ｂ細胞はＣＤ２７＋ＩｇＤ＋として、そしてスイッチされた記憶Ｂ細胞はＣＤ２７＋およびＩｇＤ－として定義される。正常健常ボランティアからの代表的ドットプロットを示す。ＣＤ２０(＋)Ｂ細胞を欠くが、高いＣＤ２０(－) ＣＤ２７(＋)形質芽球数が対照で観察され(図１３Ａ)、リツキシマブが形質芽球を枯渇させず、Ｂ細胞を枯渇させたことが示された。ＣＣ－９３２６９はナノモル未満の濃度で形質芽球の選択的枯渇を誘導し、Ｂ細胞枯渇は最小限であった(図１３Ｂ)。ＣＣ－９３２６９は、ＡＡＶ患者のＰＢＭＣからの形質芽球を、患者が免疫抑制剤、例えばリツキシマブで処置されていても、迅速に枯渇させる。
実施例９：ＡＡＶ患者ＰＢＭＣにおける標的非存在下のＢＣＭＡ－ＴＣＥは、活性化Ｔ細胞の頻度を上昇させない
ＰＢＭＣを、先にリツキシマブ、ミコフェノール酸、デキサメサゾンおよびメチルプレドニゾロンで処置されているＡＡＶ患者、ＡＡＶ－２から単離した。図１４Ａは、ＡＡＶ－１対象と比較して、ＡＡＶ－２対象においてベースライン時にＣＤ１９(＋) ＣＤ２０(－) ＣＤ２７(＋)形質芽球および形質細胞標的を欠くことを示すＦＡＣＳプロットを示す。プロットはＣＤ３(－) ＣＤ１９(＋)細胞でゲーティングしたものである。図１４Ｂは、ＡＡＶ－２対象におけるＣＤ４(＋)およびＣＤ８(＋)Ｔ細胞の適切な存在を示すＦＡＣＳプロットを示す。プロットはＣＤ３(＋)細胞でゲーティングしたものである。
ＡＡＶ－２からのＰＢＭＣを種々の濃度のＢＣＭＡ ＴＣＥで処理し、２４時間インキュベーション後、Ｔ細胞活性化を実施例７におけるとおりフローサイトメトリーにより評価した。図１４Ｃは、ＣＤ４(＋)またはＣＤ８(＋)Ｔ細胞上のＣＤ６９(＋)またはＣＤ２５(＋)の頻度を示す。これらのデータは、ＢＣＭＡ－ＴＣＥは、標的形質芽球／形質細胞がないとき、Ｔ細胞活性化を導かないことを示す。
実施例１０：ＢＣＭＡ発現癌細胞がＡＡＶに類似するエフェクター：標的比で致死させるとき、Ｔ細胞活性化は低い
ＪＥＫＯ－１細胞(２５００細胞／ウェル)を、それぞれ多発性骨髄腫(ＭＭ)またはＡＡＶで観察される標的：エフェクター(Ｔ：Ｅ)比(ＢＣＭＡ＋細胞：Ｔ細胞)を模倣するため、１：１０または１：５００のＴ：Ｅ比でＰＢＭＣと培養した。ＣＣ－９３２６９または対照２＋１抗ＨＥＬ抗ＣＤ３抗体と２４時間インキュベーション後、細胞を洗浄し、次いでＣＤ８(＋)Ｔ細胞上のＣＤ６９(図１５Ａ)およびＣＤ２５(図１５Ｂ)発現を評価した。
これらのデータは、Ｔ：Ｅ比(ＢＣＭＡ＋細胞：Ｔ細胞)が大きいほど、大きなＴ細胞活性化がもたらされることを示す。顕著なことに、活性化Ｔ細胞の頻度は、Ｔ：Ｅ比が健常ボランティアおよびＡＡＶ患者で見られるＢＣＭＡ発現形質芽球とＴ細胞の比と同等であるとき、Ｔ：Ｅ比がＭＭ患者を模倣するときより低い。
実施例１１：ＢＣＭＡ－ＴＣＥは、適切な形質芽球／形質細胞増殖因子刺激に関わらず、ＩｇＧ産生形質芽球および形質細胞が再生する能力を失くす
末梢血単核細胞(ＰＢＭＣ)を、フィコール勾配を使用して、健常ボランティアから集めた全血から単離し、種々の濃度のＢＣＭＡ ＴＣＥ(ＣＣ－９３２６９、Ｍａｂ１０１またはＭａｂ１０２)または対照２＋１抗ＨＥＬ抗ＣＤ３抗体で処理した。患者Ｄ２１４は、形質芽球枯渇についての９０％有効濃度(ＥＣ９０)でＢＣＭＡ ＴＣＥで処置された。
２４時間インキュベーション後、ＰＢＭＣを増殖因子ＩＬ－２(２０Ｕ／ml)、ＢＡＦＦ(２００ng／ml)およびＩＬ－２１(１００ng／ml)と４～７日間培養して、ＢＣＭＡ陰性前駆体からの形質芽球／形質細胞分化を誘導した。一部培養はまたこの期間ＣｐＧ(ＯＤＮ２００６１０μg／mL)でも刺激した。
培養後、形質芽球および形質細胞(ＣＤ１９(＋) ＣＤ２０(－) ＣＤ２７(＋))またはＣＤ２０＋Ｂ細胞をフローサイトメトリーにより測定した(図１６Ａ)。ＢＣＭＡ－ＴＣＥは、特に形質芽球致死についての９０％有効濃度(ＥＣ９０)で、再生のための適切な増殖因子にも拘わらず、枯渇後の形質芽球および形質細胞の回復を抑制する。
培養上清を集めて、ＥＬＩＳＡにより総ＩｇＧ分泌を測定した(図１６Ｂ)。ＢＣＭＡ－ＴＣＥは、特に形質芽球死滅についてのＥＣ９０濃度で、ＣｐＧでの刺激に拘らず、ＩｇＧ抗体の産生を抑制する。これは、インビボで形質芽球の９０％の枯渇により、ＩｇＧ自己抗体産生が抑制され得ることを示唆する。
実施例１２：関節リウマチからの形質芽球の用量依存的ＢＣＭＡ ＴＣＥ介在性致死と最小限のＴ細胞活性化
ＰＢＭＣを関節リウマチ(ＲＡ)患者から単離し、種々の濃度のＣＣ－９３２６９で処理した。２４時間インキュベーション後、形質芽球死滅(図１７Ａ)、Ｔ細胞活性化(図１７Ｂ)およびサイトカイン分泌(図１７Ｃ)を実施例４におけるとおりフローサイトメトリーにより評価した。
ＲＡにおける形質芽球致死についてのＣＣ－９３２６９の５０％有効濃度(ＥＣ５０)は０.００１nMである。それ故に、ＲＡ形質芽球致死は、Ｔ細胞活性化またはサイトカイン分泌に必要であるより低いＢＣＭＡ ＴＣＥ濃度で生ずる。
実施例１３：ＣＣ－９３２６９と培養後のＲＡ患者からのＰＢＭＣにおける他のＢ細胞集団に対する効果
実施例１２からのＣＣ－９３２６９処理ＰＢＭＣサンプルを、Ｂ細胞の細胞系譜マーカー(ＣＤ２０、ＣＤ２７およびＩｇＤ)について染色した。図１８Ａ～Ｃに示すデータは、総ＣＤ１９(＋)ＣＤ２０(＋)細胞のパーセントとして示す。データは、インビトロで、ＣＣ－９３２６９は、形質芽球致死についてのＥＣ９０濃度で、ＲＡ患者からのＰＢＭＣにおけるナイーブ細胞、スイッチされていない記憶Ｂ細胞またはスイッチされた記憶Ｂ細胞集団を顕著に枯渇させないことを示す。
実施例１４：全身性エリテマトーデス患者からの形質芽球の用量依存的ＢＣＭＡ ＴＣＥ介在性致死が最小限のＴ細胞活性化で生ずる
ＰＢＭＣを全身性エリテマトーデス(ＳＬＥ)患者から単離し、種々の濃度のＣＣ－９３２６９または対照２＋１抗体で処理した。２４時間インキュベーション後、形質芽球致死(図２０Ａ)およびＴ細胞活性化(図２０Ｂ)を実施例４におけるとおり評価した。
ＳＬＥにおける形質芽球致死についてＣＣ－９３２６９の５０％有効濃度(ＥＣ５０)は０.０１nM(ｎ＝５)である。それ故に、ＳＬＥ形質芽球致死は、Ｔ細胞活性化に必要であるより低いＢＣＭＡ ＴＣＥ濃度で生ずる。
実施例１５：カニクイザルにおけるＣＣ－９３２６９による形質芽球の選択的枯渇
ＰＢＭＣを、カニクイザルの全血から単離した。形質芽球およびＣＤ２０(＋)Ｂ細胞を種々の濃度のＣＣ－９３２６９または対照２＋１抗ＨＥＬ抗ＣＤ３抗体で２４時間処理した。
形質芽球致死はＦＡＣＳにより評価され、それにより形質芽球はＣＤ１９(＋)ＩＲＦ４(＋)として同定され、総ＣＤ１９(＋)細胞のパーセントとして示される(図１９Ａ)。ＣＤ２０(＋)Ｂ細胞致死もＦＡＣＳにより評価され、それによりＣＤ１９(＋)ＣＤ２０(＋)細胞は総ＣＤ１９(＋)細胞のパーセントとして示される(図１９Ｂ)。ＩＲＦ４＋形質芽球致死は、ＣＤ２０(＋)Ｂ細胞の致死、広範なＣＤ２０(＋)Ｂ細胞枯渇なく、ＩＲＦ４＋形質芽を選択的に枯渇できる。
Ｔ細胞活性化はＦＡＣＳにより評価され、それによりＣＤ６９(＋)ＣＤ８(＋)Ｔ細胞は総ＣＤ８(＋)Ｔ細胞のパーセントとして示される(図１９Ｃ)。
まとめると、これらのデータは、許容される薬物動態－薬力学的(ＰＫ／ＰＤ)モデルにおいてＣＤ２０(＋)Ｂ細胞枯渇なくＩＲＦ４＋形質芽球枯渇するためのＣＣ－９３２６９の濃度で、ＣＣ－９３２６９による形質芽球の選択的致死および活性化Ｔ細胞の頻度の最小限の上昇を示す。これらは、インビボでＢＣＭＡ－ＴＣＥの薬理学的および毒性学的効果を予測するために使用され得る。
実施例１６：健常ボランティアからの形質芽球のＣＣ－９３２６９介在性致死に対する外因性可溶性ＢＣＭＡの効果
ＰＢＭＣを正常健常ボランティアから単離し、種々の濃度の外因性可溶性ＢＣＭＡ(ｓＢＣＭＡ)を加えた。６７.６ng／mLの最高濃度のｓＢＣＭＡを、自己免疫性患者におけるｓＢＣＭＡレベルの上限の２倍を表すとして選択した(データは示していない)。自己免疫障害を有するドナー患者からの血清または血漿における可溶性ＢＣＭＡレベルを、Ampersand Biosciences(Lake Clear, NY)によるビーズベースの免疫アッセイにより評価した。次いでサンプルをＣＣ－９３２６９の濃度を増やしながら(０～５０nM)または対照２＋１抗体で２４時間処理し、形質芽球致死(図２１Ａ)およびＴ細胞活性化(図２１Ｂ)を評価した。
形質芽球致死はＦＡＣＳにより評価され、それにより形質芽球はＣＤ１９(＋) ＣＤ２０(－) ＣＤ２７(＋)細胞として同定され、かつ未処理対照に対して正規化した総ＣＤ１９(＋)細のパーセントとして示す(図２１Ａ)。ｓＢＣＭＡ存在下の形質芽球致死は、自己免疫性患者における以上の濃度でｓＢＣＭＡが存在していても、ＢＣＭＡ発現癌細胞株(例えばＪＥＫＯ細胞)を致死させるより低い濃度のＣＣ－９３２６９で生ずる。
Ｔ細胞活性化について、細胞を洗浄し、次いでＴ細胞の細胞系譜(ＣＤ４およびＣＤ８)および活性化マーカー(ＣＤ６９、ＣＤ２５)について染色した。図２１Ｂに示すデータは、ＣＤ４(＋)Ｔ細胞またはＣＤ８(＋)Ｔ細胞上のＣＤ６９(＋)の頻度を示す。
表１３は、ＣＣ－９３２６９からのデータを要約し、健常ボランティアからのＰＢＭＣにおける形質芽球のインビトロ枯渇についてＢＣＭＡ ＴＣＥの９０％有効濃度(ＥＣ９０)で、増加させたｓＢＣＭＡレベルで活性化Ｔ細胞の頻度の上昇が最小限である(すなわちベースラインを超えるのが２０％未満)ことを示す。
Figure 2023514224000024
実施例１７：健常ボランティアおよびＡＡＶ患者からの全血サンプルにおける最小限のＣＣ－９３２６９介在Ｔ細胞活性化およびサイトカイン分泌
正常健常ボランティア(ｎ＝４)およびＡＡＶ患者(ｎ＝２)からの全血サンプルを種々の濃度のＣＣ－９３２６９または対照２＋１抗体で処理した。２４時間インキュベーション後、Ｔ細胞活性化を実施例４におけるとおり評価した。図２２Ａに示すデータは、全血正常健常ボランティア(ＮＨＶ)およびＡＡＶ患者からのサンプルにおけるＣＤ８(＋)Ｔ細胞上のＣＤ６９発現を示す。
培養上清を、MSD Pro-inflammatory Iアッセイを使用してサイトカイン産生(ＩＦＮγ、ＩＬ－１β、ＩＬ－６、ＩＬ－２、ＩＬ－１０およびグランザイムＢ)について分析した(図２２Ｂ)。
まとめると、これらのデータは、正常健常ボランティアからの全血サンプルをＣＣ－９３２６９で処理したとき、活性化Ｔ細胞の頻度の上昇が最小限である(すなわちベースラインを超えるのが２０％未満)およびサイトカイン産生が最小限である(すなわちベースラインを超えるのが２０pg／mL未満)ことを示す。
実施例１８：安定性が改善された抗体
４個のＢＣＭＡｘＣＤ３分子：Ｍａｂ１０１、Ｍａｂ１０２、８３Ａ１０－ＴＣＢｃｖおよび２２－ＴＣＢｃｖの物理化学的性質を評価した。Ｍａｂ１０１および８３Ａ１０－ＴＣＢｃｖは、抗体８３Ａ１０のＣＤＲを含むＢＣＭＡ結合ドメインを含み、Ｍａｂ１０２および２２－ＴＣＢｃｖは、抗体Ｍａｂ２２のＣＤＲを含むＢＣＭＡ結合ドメインを含む。４個のバリアント全て同じＣＤ３結合ドメインを有する。４個のＢＣＭＡｘＣＤ３分子の配列アラインメントを図２７に示す。各分子は、記載される「ＲＫ／ＥＥ」置換ではなく、軽鎖誤対合／副産物を低減するためのＣＬ－ＣＨ１における別のアミノ酸置換Ａ１４１Ｗ、Ｌ１４５Ｅ、Ｋ１４７Ｔ、Ｑ１７５Ｅ(「ＷＥＴＥ」)およびＦ１１６Ａ、Ｑ１２４Ｒ、Ｌ１３５Ｖ、Ｔ１７８Ｒ(「ＡＲＶＲ」)がある以外、図２Ａに示されるとおり、２＋１二重特異的形式である。
用語「ＨＤ１」および「ＨＤ１プラットフォーム」は、これら実施例で、「ノブ・イントゥ・ホール」変異を含む二重特異的抗体をいうために使用する。特に、ここで使用する用語「ＨＤ１形式」および「ＨＤ１プラットフォーム」は、形式ＢＣＭＡ Ｆａｂ－Ｆｃ－ＣＤ３ Ｆａｂ－ＢＣＭＡ Ｆａｂの二重特異的抗体をいい、ここで、
(ｉ)抗ＣＤ３ Ｆａｂフラグメントは軽鎖および重鎖を含み、ここで、軽鎖は可変ドメインＶＨおよび定常ドメインＣＬを含むクロスオーバー軽鎖であり、重鎖は可変ドメインＶＬおよび定常ドメインＣＨ１を含むクロスオーバー重鎖である；
(ii)抗ＢＣＭＡ ＦａｂはＣＬドメインにアミノ酸置換１２３Ｒおよび１２４Ｋならびに対応するＣＨ１ドメインにアミノ酸置換１４７Ｅおよび２１３Ｅを含む；
(iii)第一ＦｃのＣＨ３ドメインは修飾Ｔ３６６Ｗを含み、第二ＦｃのＣＨ３ドメインは修飾Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８ＡおよびＹ４０７Ｖを含む。
用語「ＨＤ２形式」および「ＨＤ２プラットフォーム」は、これら実施例で、本発明のヘテロ二量体化変異を含む二重特異的抗体をいうために使用する。特に、ここで使用する用語「ＨＤ２形式」および「ＨＤ２プラットフォーム」は、形式ＢＣＭＡ Ｆａｂ－Ｆｃ－ＣＤ３ Ｆａｂ－ＢＣＭＡ Ｆａｂの二重特異的抗体を言い、ここで、
(ｉ)抗ＣＤ３ Ｆａｂフラグメントは軽鎖および重鎖を含み、ここで、軽鎖は可変ドメインＶＨおよび定常ドメインＣＬを含むクロスオーバー軽鎖であり、重鎖は可変ドメインＶＬおよび定常ドメインＣＨ１を含むクロスオーバー重鎖である；
(ii)抗ＢＣＭＡ ＦａｂはＣＨ１ドメインにアミノ酸置換Ａ１４１Ｗ、Ｌ１４５Ｅ、Ｋ１４７Ｔ、Ｑ１７５Ｅならびに対応するＣＬドメインにアミノ酸置換Ｆ１１６Ａ、Ｑ１２４Ｒ、Ｌ１３５Ｖ、Ｔ１７８Ｒを含む；
(iii)第一ＦｃのＣＨ３ドメインは修飾Ｔ３５０Ｖ、Ｌ３５１Ｙ、Ｆ４０５ＡおよびＹ４０７Ｖを含み、第二ＦｃのＣＨ３ドメインは修飾Ｔ３５０Ｖ、Ｔ３６６Ｌ、Ｋ３９２ＬおよびＴ３９４Ｗを含む(ＥＵナンバリングによる番号付け)。
表１４に示すとおり、二重特異的抗体Ｍａｂ１０１およびＭａｂ１０２は本発明のＨＤ２変異を含み、一方、二重特異的抗体８３Ａ１０－ＴＣＢｃｖおよび２２－ＴＣＢｃｖは「ノブ・イントゥ・ホール」(ＨＤ１)変異を含む。「ノブ・イントゥ・ホール」修飾は、例えばＷＯ９６／０２７０１１、Ridgway, J.B., et al., Protein Eng. 9 (1996) 617-621, Merchant, A.M. et al., Nat. Biotechnol. 16 (1998) 677-68およびＷＯ９８／０５０４３１にいくつかの例と共に詳述されている。これらの修飾は、修飾Ｔ３６６Ｗ(「ノブ修飾」)を含む第一ＣＨ３ドメインおよび修飾Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８ＡおよびＹ４０７Ｖ(「ホール修飾」)を含む第二ＣＨ３ドメインからなる(KabatのＥＵナンバリングによる番号付け)。
Figure 2023514224000025
本発明者らは、本発明の形式の二重特異的抗体(すなわちＭａｂ１０１およびＭａｂ１０２)の結合能が、表面プラズモン共鳴により決定して、ＨＤ１形式の対応するＢＣＭＡ結合ドメインを含む二重特異的抗体(すなわち８３Ａ１０－ＴＣＢｃｖおよび２２－ＴＣＢｃｖ)の結合能より、化学的ストレス(すなわち低ｐＨ暴露、高ｐＨ暴露およびｔｅｒｔ－ブチルペルオキサイド暴露)による影響を受けないことを示しており、それによりＨＤ２形式が安定性の全体的増加に貢献することを証明する。
本発明者らは、ＨＤ２形式の使用が、Ｍａｂ２２のＣＤＲに起因する物理的安定性の減少を補うことを示している。特に、サイズ排除クロマトグラフィー(ＳＥＣ)によるタンパク質濃度の測定は、撹拌および低ｐＨ暴露両者の後のＨＤ１二重特異的２２－ＴＣＢｃｖのタンパク質濃度の明らかな減少を示し、これは、ＨＤ２プラットフォーム等価物、Ｍａｂ１０２では観察されなかった。等価物Ｍａｂ１０２分子におけるＨＤ２プラットフォームの使用は、それ故に抗体安定性に対するＭａｂ２２ ＣＤＲの負の影響を低減する。
さらに、各分子の全体的安定性スコアを、複数の物理的および化学的安定性アッセイにより作成されたデータの複合分析に基づき計算した(表１８参照)。この分析において、両ＨＤ２プラットフォーム分子、Ｍａｂ１０１およびＭａｂ１０２は、各ＨＤ１プラットフォーム均等物、８３Ａ１０－ＴＣＢｃｖおよび２２－ＴＣＢｃｖより高いスコアであり、両二重特異的分子がＨＤ２形式でより安定であることが示唆される。
実施例１８.１：化学的安定性
化学的安定性評価は、アスパラギン酸異性化およびフラグメント化反応を加速するための低ｐＨ維持(ｐＨ４)ならびにアスパラギン脱アミド化、酸化反応およびチオエーテル形成を加速するための高ｐＨ維持(ｐＨ８)からなった。Ｔｅｒｔ－ブチルペルオキサイド(ＴＢＰ)もｐＨ６プラットフォーム緩衝液に加えて、溶媒暴露メチオニン残基の酸化を促進した。
化学的安定性を評価するために使用した一次的方法は、ここに記載するセンサーグラム比較法を使用する表面プラズモン共鳴(ＳＰＲ)および化学的修飾が物理的安定性に影響するかまたは低分子量(ＬＭＷ)クリッピングに至る可能性があるときはサイズ排除クロマトグラフィー(ＳＥＣ)であった。ペプチドマッピングも、ＳＰＲ結合結果に依存して、選択したサンプルで用いた。
実施例１８.１.１ 表面プラズモン共鳴によるＢＣＭＡおよびＣＤ３結合の変化の分析
ＳＰＲ実験を、分析およびサンプル区画温度をそれぞれ２５℃および７℃に設定したBiacore T200 system(GE Healthcare, Uppsala, Sweden)を使用して実施した。
抗ヒトＩｇＧ(抗ヒトIgG 捕捉Kitから)を、製造業者の指示に従いＣＭ５チップの表面にアミンカップリングさせた。ランニング緩衝液で１μg／mLに希釈した分子二重特異的抗体を、６０秒注入でチップ表面に捕捉させた。シングルサイクルカイネティクス法による、次に抗原を３０μL／分の流速で漸増濃度で５回注入した(３０秒／注入)。抗原濃度は、ＢＣＭＡについて０.０８～５０nMおよびＣＤ３について１２.７～１０００nMの範囲であった。３００秒解離時間を最後の抗原注入後加えた。各実験後、３Ｍ ＭｇＣｌ２の３０秒注入を使用して、全フローセルを再生した。
分析前、データを、まず対照フローセルからのデータを減算し、次いで抗原の代わりに緩衝液を注入したブランクサイクルを減算することにより二重対照とした。センサーグラム比較分析は、Biacore T200(software version 3.0)を使用して実施した。全データを、１００％が注入中に得られた最大結合を反映し、０％がベースラインを反映する応答に対して正規化した。平均および±３標準偏差(ＳＤ)センサーグラムを、各分子の非ストレス材料(標準)の１０以上の独立したセンサーグラムから計算した。対応する非ストレス標準に対するストレスサンプルの結合類似性の定量のために、サンプルセンサーグラムを、標準のセンサーグラムと同時評価した。類似性の程度を、どれだけ多くのサンプルデータ点が、方程式２に従う±３標準偏差限界内に入るかまたは外側であるかに基づき計算し、ここで、ＳＳＱは平方和である(Karlsson, R., Pol, E., and Frostell, Å. (2016); Analytical Biochemistry 502, 53-63)。ＳＰＲ分析の全材料を表１５に示す。
Figure 2023514224000026

２～８℃(ｐＨ６)および４０℃(ｐＨ８)で２週間保存したバリアント８３Ａ１０－ＴＣＢｃｖを比較する代表的ＳＰＲセンサーグラムを、それぞれ図２６Ａおよび図２６Ｂに示す。
Figure 2023514224000027
表１８に示すとおり、２２－ＴＣＢｃｖ(ＨＤ１プラットフォーム変異を含む)は、ｔｅｒｔ－ブチルペルオキサイド暴露以外全ストレス条件にわたりＣＤ３およびＢＣＭＡ結合の最大の全体的減少を示し、全体的化学的安定性スコアは最低であった。逆に、Ｍａｂ１０１(本発明のＨＤ２プラットフォーム変異を含む)は、全ストレス条件にわたり、結合の最小の変化を示した。
ＨＤ２変異を含む両二重特異的抗体(すなわち、Ｍａｂ１０１およびＭａｂ１０２)は、同じＣＤＲ領域を含む対応するＨＤ１分子より大きな全体的化学的安定性スコアを有しており、ＨＤ２プラットフォームが抗体の化学的安定性に貢献することが示唆される。
ＳＰＲ結合データは、それ故に、ＨＤ２変異を含む二重特異的抗体(すなわちＭａｂ１０１およびＭａｂ１０２)の結合能は、ＨＤ１変異を有する対応するＢＣＭＡ結合ドメインを含む二重特異的抗体(すなわち８３Ａ１０－ＴＣＢｃｖおよび２２－ＴＣＢｃｖ)の結合能より、化学的ストレス(すなわち低ｐＨ維持、高ｐＨ維持およびｔｅｒｔ－ブチルペルオキサイド暴露)による影響を受けないことを示唆する。従って、これらのデータは、本発明のＨＤ２変異が、８３Ａ１０またはＭａｂ２２のＣＤＲを含むＣＤ３ｘＢＣＭ二重特異的抗体と共に使用されるとき、二重特異的抗体の安定性をＨＤ１変異よりも改善することを示す。
実施例１８.１.２ 還元ペプチドマッピング
二重特異的抗体の化学的安定性をさらに差別化するために、還元ペプチドマッピングを全４個の二重特異的抗体で実施した。分子を、２週間、４０℃でＴＢＰの存在下、ｐＨ８およびｐＨ６に緩衝化して保存した。対照として、２週間、２～８℃で保存したｐＨ６サンプルも分析した。
全サンプルを、１０kDa ＭＷＣＯフィルターを使用して５０mM酢酸、ｐＨ５.０緩衝液に緩衝液交換した。次に、製造業者が提唱するAccuMAPプロトコール(Promego, Madison, WI)に従い、サンプルを消化した。簡潔には、サンプルをＧｄＨＣｌで変性し、ＴＣＥＰにより還元し、ヨードアセトアミドによりアルキル化した。１時間前消化をＬｙｓＣにより実施し、続いてＧｄＨＣｌを１Ｍ未満に希釈し、メチオニンを１５mMの濃度まで加えた。次いでトリプシン／ＬｙｓＣ混合物を、最終３時間、３７℃で消化した。全工程をｐＨ５で実施した。ＴＦＡを最終組成物の２％加えることにより、消化を停止した。
約３０μgの消化サンプルを、Orbitrap Velos Proマススペクトロメーター(Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA)と直列のWaters CSH C18カラム(２.１×１５０mm、１３０Å細孔半径、１.７μmビーズ直径)に注入した。ＬＣ溶媒Ａは０.１％ギ酸(ＦＡ)水溶液であり、溶媒Ｂは０.１％ＦＡのＡＣＮ溶液であった。分離勾配を１％Ｂから始め、１１０分かけて２７％Ｂまで直線的に増加させ、次いで３０％から４０％Ｂへの５分の直線勾配が続いた。カラム温度を７０℃に設定した。マススペクトルを、トップ１０データ依存型取得で取得した。ＭＳ１を、４００ｍ／ｚで解像力６０,０００に設定したオービトラップで実施した。ＣＩＤＭＳ／ＭＳを、ラピッドスキャン設定したイオントラップで分析した。ダイナミックエクスクルージョンを１５秒および１０ppm質量ウィンドウに設定した。生データを、Protein Metrics Byonic and Byologicソフトウェアパッケージで分析した。修飾比を、次の通り、ＸＩＣ強度を使用して計算した：修飾ｐｅｐ強度／(修飾ｐｅｐ強度＋非修飾ｐｅｐ強度)×１００％。
表１６および１７は、それぞれＢＣＭＡおよびＣＤ３ ＣＤＲ内または近辺の残基の修飾を示す。ＳＰＲデータに一致して、２２－ＴＣＢｃｖは、特にメチオニンおよびトリプトファン酸化について、ＢＣＭＡおよびＣＤ３ ＣＤＲ領域における化学的修飾に対する最大の傾向を示した。対照的に、Ｍａｂ１０１分子で大きなレベルで観察された唯一の修飾は、ＴＢＰ処理後のＢＣＭＡ ＨＣおよびＨＨＣにおけるＭ３４であった(表１６)。
Figure 2023514224000028
Figure 2023514224000029
実施例１８.２：物理的安定性
物理的安定性評価は、示差走査熱量測定(ＤＳＣ)による熱安定性およびプラットフォームｐＨ６緩衝液中のポリエチレングリコール(ＰＥＧ)沈殿によるコロイド安定性の測定からなった。物理的安定性はｐＨ６プラットフォーム緩衝液中の撹拌および凍結・解凍(Ｆ／Ｔ)ストレス後も評価した。最後に、室温での短い低ｐＨ維持を、ウイルス不活性化を模倣するために使用した。この処理過程は、あまり構造的に安定ではないタンパク質生物製剤の非天然凝集をしばしばもたらす。
実施例１８.２.１ 示差走査熱量測定による熱安定性の評価
示差走査熱量測定を、TA Instruments NanoDSC(New Castle, DE)でNanoAnalyzeソフトウェアを使用して実施した。ＢＣＭＡｘＣＤ３サンプルを１００mMヒスチジンｐＨ６.０緩衝液で１mg／mLに希釈した(表１９)。分析前、サンプルおよびタンパク質を含まないその対応する緩衝液を３０分間脱気した。サンプルおよび緩衝液を、１０℃から１００℃に、１℃分－１の速度で加熱した。取得後、対応する緩衝液をサンプルの各々から減算し、データを正規化して、kcal・mol－１・℃－１に変換した。結果を、最初の変性遷移の開始温度(℃)として記載する。
図２４に示すとおり、全４個の分子は、類似の熱的変性開始温度(約６０℃)を有したが、大部分の吸熱ドメインの変性遷移は、Ｍａｂ１０１および８３Ａ１０－ＴＣＢｃｖ分子(８３Ａ１０のＢＣＭＡ ＣＤＲを含む)が約５℃高いＴｍａｐｐ値を有する。
実施例１８.２.２ ＰＥＧ沈殿によるコロイド安定性評価
４個のＢＣＭＡｘＣＤ３分子のコロイド安定性評価を、ＰＥＧ ６０００沈殿により実施した。ＰＥＧ沈殿実験を、４０％(ｗ／ｖ)保存溶液からの漸増濃度のＰＥＧ－６０００中、１００mMヒスチジンによりｐＨ６.０に緩衝化した１.０ｇ／mL ＢＣＭＡｘＣＤ３分子からなる１６０μL溶液の調製により実施した(表１９)。溶液を４℃で一夜静置し、次いで６０分間、２５,０００RCFで撹拌した。次いで、上清に残ったタンパク質の量を、Agilent Cary UV-8454(Agilent, Palo Alto, CA)を使用する２８０nmの吸光度により測定した。データを、経験的４パラメータシグモイド方程式(方程式１)に適合させて、出発量のタンパク質(Ｃｍ)の半分を沈殿させるのに必要なＰＥＧ－６０００のパーセンテージ(ｗ／ｖ)を決定し、記載する。パラメータｂ、ｍおよびｒは、それぞれ曲線ベース、最高値および速度を表す。
Figure 2023514224000030
 図２５に示すとおり、Ｍａｂ１０２および２２－ＴＣＢｃｖ(Ｍａｂ２２のＢＣＭＡ ＣＤＲを含む)は、ＰＥＧ沈殿により評価して、プラットフォームｐＨ６ヒスチジン緩衝液におけるコロイド安定性が最低であった。Ｍａｂ１０１および８３Ａ１０－ＴＣＢｃｖ(８３Ａ１０のＢＣＭＡ ＣＤＲを含む)は、排除体積効果により、天然状態沈殿を誘導するのに、約２倍ものＰＥＧを必要とした。
実施例１８.２.３ 撹拌および凍結・解凍後の物理的安定性のサイズ排除クロマトグラフィー評価
物理的安定性を、ｐＨ６プラットフォーム緩衝液における撹拌および凍結・解凍(Ｆ／Ｔ)ストレス後のサイズ排除クロマトグラフィーによっても評価した。
凍結・解凍
１mg／mL ＢＣＭＡｘＣＤ３分子各４００μL(表１９)を、０.５mL自立型Fisherbrandスクリューキャップクライオチューブ(part #02-707-357)に分配し、チューブ仕切りを備えた一列サンプル箱に保管し、－８０℃で凍結した。各サイクル少なくとも１時間サンプル凍結とその後の室温での解凍および次のＦ／Ｔサイクル前の穏やかな混合からなる計５回の凍結・解凍(Ｆ／Ｔ)サイクルを実施した。サンプルを、５回目のＦ／Ｔサイクル後ＳＥＣにより分析した。
撹拌
１mg／mL ＢＣＭＡｘＣＤ３分子(表１９)の各４００μLを、１.５mL標準エッペンドルフチューブ(part # 022364111)に移し、温度制御付きＶＷＲマイクロプレートシェーカーに移した。シェーカーを、２４時間、２５℃で１５００rpmに設定した。撹拌後、サンプルをＳＥＣにより分析した。
サイズ排除クロマトグラフィー
サイズ排除クロマトグラフィー(ＳＥＣ)を、単一TSKgel G3000SWxl ７.８×３００mm、５μmカラムを備えたAgilent 1260 HPLC系(Agilent, Palo Alto, California)で実施した。移動相は、１００mM ＫＨ２ＰＯ４、２５０mM ＮａＣｌ ｐＨ６.８からなった。各サンプル２０マイクロリットルをカラムに２５℃で注入し、０.５mL／分の流速で３０分間定組成で溶出した。溶出を、２８０nmのＵＶ検出によりモニターし、タンパク質濃度を、各ＢＣＭＡｘＣＤ３分子の統合された曲線の総面積、流速、注入体積、フローセルパス長および透過係数を使用して計算した。
２個の値がＳＥＣ分析について記載される；％モノマーの減少および２～８℃に維持したｐＨ６ ２週間サンプルに対する濃度。この方法は、「ゼロ時」サンプルを排除することにより必要な時間および材料の要件を低減し、同時に全サンプルを同じクロマトグラフィー順序内で分析することにより、クロマトグラフィーの変動の可能性(例えばカラム性能)を最小化する。
希釈可変性(ならびに統合および注入可変性)の可能性を考慮して、同じ１０mg／mL標準ｍＡｂ溶液からの１０の独立した１：１０希釈物も調製し、それらをＢＣＭＡｘＣＤ３ 安定性サンプルと同じＳＥＣ順序で分析した。モノマーパーセンテージおよび濃度の減少を、それぞれこれらの希釈標準の平均パーセントモノマー(２σＭ)および濃度(２σＣ)の２倍標準偏差(２σ)に関連して記載する。
ＳＥＣ評価の結果を表１５に提供し、パーセント主ピークモノマーおよびｐＨ６ ２ｋ ２～８℃(対照)サンプルおよびストレスサンプルの各々の間の濃度の差異を表１８に示す。
ＳＰＲデータに一致して、ＳＥＣ結果は、ｐＨ３維持後の撹拌後のＨＤ１プラットフォーム分子２２－ＴＣＢｃｖのタンパク質濃度が明らかに減少することを示し、これは他の分子では観察されなかった。故に、等価物Ｍａｂ１０１分子におけるＨＤ２プラットフォームの使用は、安定性に対するＭａｂ２２ ＣＤＲの負の影響を最小化する。２２－ＴＣＢｃｖバリアントの代表的クロマトグラムを図２６に示す。
スコアリング
分子は、物理的および化学的安定性を示す各方法の応答に対する許容基準(表１８の薄い灰色の網掛け領域)に従って採点され、実験結果(濃い灰色の網掛け領域)がこれらの基準内にどのように収まるかに基づいて０、１または２のスコアが割り当てられた。ＳＥＣにより測定したパーセントモノマーおよび濃度の減少を、標準１０mg／mL ｍＡｂ溶液の１０個の独立した１：１０希釈物から決定した平均パーセントモノマー(２σＭ)および濃度(２σＣ)の２倍標準偏差に対して採点した；現在の試験について、２σＭおよび２σＣはそれぞれ０.３３および０.１４であった。物理的および化学的安定性スコアの合計を、各応答数(物理的について評価８および化学的評価について１６)で除し、物理的安定性および化学的安定性両者のスコアが０～２の範囲内となった。各バリアントについての総スコアはこうして物理的および化学的安定性スコアの合計であり、それ故に０～４の範囲内である(表１８)。表１８における応答は等しく荷重される。
表１８は、物理的安定性評価において、撹拌後およびｐＨ３維持後、２２－ＴＣＢｃｖ分子のタンパク質濃度が明らかに減少することを示し、これは、他の分子で観察されなかった。
２２－ＴＣＢｃｖはまた化学的安定性評価においても他の分子に及ばず、ＴＢＰによる酸化後のパーセントモノマーの大きな喪失および低および高ｐＨ維持後のＣＤ３およびＢＣＭＡ結合の大きな喪失を示した。評価の物理的安定性部分と同様、Ｍａｂ１０１は全化学的ストレス後、濃度、パーセントモノマーおよび結合の変化が最小であった。両ＨＤ２－プラットフォーム分子、すなわちＭａｂ１０１およびＭａｂ１０２は、各ＨＤ１プラットフォーム均等物より高いスコアであった(表１８)。
それ故に、これらのデータは、ＨＤ２－プラットフォーム形式が、８３Ａ１０およびＭａｂ２２二重特異的抗体両者について、ＨＤ１プラットフォーム形式より安定な分子をもたらしたことを明らかに示す。
Figure 2023514224000031
Figure 2023514224000032
Figure 2023514224000033
Figure 2023514224000034

Claims (36)

  1. 自己免疫障害を処置または管理する方法であって、そのような処置または管理を必要とする患者にＢ細胞成熟抗原(ＢＣＭＡ)およびＴ細胞の活性化を促進する１以上の抗原に結合する多特異的抗体を投与することを含む、方法。
  2. 自己免疫障害が抗好中球細胞質抗体(ＡＮＣＡ)関連脈管炎(ＡＡＶ)、関節リウマチ(ＲＡ)または全身性エリテマトーデス(ＳＬＥ)である、請求項１の方法。
  3. 抗好中球細胞質抗体(ＡＮＣＡ)関連脈管炎(ＡＡＶ)を処置または管理する方法であって、そのような処置または管理を必要とする対象にＢＣＭＡおよびＴ細胞の活性化を促進する１以上の抗原に結合する多特異的抗体を投与することを含む、方法。
  4. Ｔ細胞の活性化を促進する１以上の抗原がＣＤ３、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲζ、ＩＣＯＳ、ＣＤ２８、ＣＤ２７、ＨＶＥＭ、ＬＩＧＨＴ、ＣＤ４０、４－１ＢＢ、ＯＸ４０、ＤＲ３、ＧＩＴＲ、ＣＤ３０、ＴＩＭ１、ＳＬＡＭ、ＣＤ２またはＣＤ２２６からなる群から選択され、好ましくはここで、Ｔ細胞の活性化を促進する１以上の抗原がＣＤ３である、請求項１～３の何れかの方法。
  5. 多特異的抗体がＢＣＭＡおよびＣＤ３に結合する二重特異的抗体である、請求項１～４の何れかの方法。
  6. 多特異的抗体が二重特異的抗体であり、所望により二重特異的抗体が抗ＢＣＭＡ抗体の２個のＦａｂフラグメント、抗ＣＤ３抗体の１個のＦａｂフラグメントおよび１個のＦｃ部分を含む三価二重特異的抗体であり、ここで、二重特異的抗体が形式ＢＣＭＡ Ｆａｂ－Ｆｃ－ＣＤ３ Ｆａｂ－ＢＣＭＡ Ｆａｂである、請求項１～５の何れかの方法。
  7. 多特異的抗体が
    (ａ)配列番号２１のＣＤＲ１Ｈ領域、配列番号２２のＣＤＲ２Ｈ領域、配列番号１７のＣＤＲ３Ｈ領域、配列番号２７のＣＤＲ１Ｌ領域、配列番号２８のＣＤＲ２Ｌ領域および配列番号２０のＣＤＲ３Ｌ領域；
    (ｂ)配列番号２１のＣＤＲ１Ｈ領域、配列番号２２のＣＤＲ２Ｈ領域、配列番号１７のＣＤＲ３Ｈ領域、配列番号２５のＣＤＲ１Ｌ領域、配列番号２６のＣＤＲ２Ｌ領域および配列番号２０のＣＤＲ３Ｌ領域；または
    (ｃ)配列番号１５のＣＤＲ１Ｈ領域、配列番号１６のＣＤＲ２Ｈ領域、配列番号１７のＣＤＲ３Ｈ領域、配列番号１８のＣＤＲ１Ｌ領域、配列番号１９のＣＤＲ２Ｌ領域および配列番号２０のＣＤＲ３Ｌ領域
    から選択されるＣＤＲ１Ｈ、ＣＤＲ２Ｈ、ＣＤＲ３Ｈ ＣＤＲ１Ｌ、ＣＤＲ２ＬおよびＣＤＲ３Ｌ領域組み合わせを含む抗ＢＣＭＡ抗体またはその抗原結合フラグメントを含む、請求項１～６の何れかの方法。
  8. 多特異的抗体が
    (ａ)配列番号１０のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一、少なくとも９５％同一、少なくとも９９％同一または同一であるアミノ酸配列を含む可変領域ＶＨおよび配列番号１４のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一、少なくとも９５％同一、少なくとも９９％同一または同一であるアミノ酸配列を含む可変領域ＶＬを有する抗ＢＣＭＡ抗体またはその抗原結合フラグメント；
    (ｂ)配列番号１０のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一、少なくとも９５％同一、少なくとも９９％同一または同一であるアミノ酸配列を含む可変領域ＶＨおよび配列番号１３のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一、少なくとも９５％同一、少なくとも９９％同一または同一であるアミノ酸配列を含む可変領域ＶＬを有する抗ＢＣＭＡ抗体またはその抗原結合フラグメント；または
    (ｃ)配列番号９のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一、少なくとも９５％同一、少なくとも９９％同一または同一であるアミノ酸配列を含む可変領域ＶＨおよび配列番号１１のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一、少なくとも９５％同一、少なくとも９９％同一または同一であるアミノ酸配列を含む可変領域ＶＬを有する抗ＢＣＭＡ抗体またはその抗原結合フラグメント
    を含む、請求項１～７の何れかの方法。
  9. 多特異的抗体が配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号３のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号４のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２および配列番号６のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む抗ＣＤ３抗体またはその抗原結合フラグメントを含む、請求項１～８の何れかの方法。
  10. 抗ＣＤ３抗体またはその抗原結合フラグメントが配列番号７のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一、少なくとも９５％同一、少なくとも９９％同一または同一であるアミノ酸配列を含む可変領域ＶＨおよび配列番号８のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一、少なくとも９５％同一、少なくとも９９％同一または同一であるアミノ酸配列を含む可変領域ＶＬを含む、請求項９の方法。
  11. 多特異的抗体が
    (ａ)配列番号４８、配列番号５５、配列番号５６および２個のコピーの配列番号５７；
    (ｂ)配列番号４８、配列番号５８、配列番号５９および２個のコピーの配列番号６０；または
    (ｃ)配列番号４８、配列番号６１、配列番号６２および２個のコピーの配列番号６３
    のポリペプチドの重鎖および軽鎖セットを含む、請求項１～３の何れかの方法。
  12. 自己免疫性疾患が全身性エリテマトーデス、ＩｇＡ腎症、膜性腎症、重症筋無力症、視神経脊髄炎、尋常性天疱瘡、抗ＰＡＤ４活性化関節リウマチ、固形臓器移植における感作／既存抗体、ギランバレー症候群(急性炎症性脱髄性多発性神経炎－ＡＩＤＰ)、慢性炎症性脱髄性多発性神経炎(ＣＩＤＰ)、免疫性血小板減少性紫斑病、関節リウマチおよびＡＮＣＡ関連脈管炎(ＡＡＶ)からなる群から選択される、請求項１～１１の何れかの方法。
  13. ＡＡＶが多発血管炎性肉芽腫症(ＧＰＡ)、好酸球性多発血管炎性肉芽腫症(ＥＧＰＡ)、顕微鏡的多発血管炎(ＭＰＡ)および腎限局型ＡＮＣＡ関連脈管炎からなる群から選択される疾患を含む、請求項３～１２の何れかの方法。
  14. ＡＡＶが多発血管炎性肉芽腫症(ＧＰＡ)である、請求項１３の方法。
  15. ＡＡＶが好酸球性多発血管炎性肉芽腫症(ＥＧＰＡ)である、請求項１３の方法。
  16. ＡＡＶが顕微鏡的多発血管炎(ＭＰＡ)である、請求項１３の方法。
  17. ＡＡＶが腎限局型ＡＮＣＡ関連脈管炎である、請求項１３の方法。
  18. 自己免疫障害(例えばＡＡＶ)が難治性または再発性である、請求項１～１７の何れかの方法。
  19. 自己免疫障害(例えばＡＡＶ)が新たに診断されたものである、請求項１～１８の何れかの方法。
  20. ＡＡＶが神経系、眼、鼻、心臓、腎臓、胃、腸、肺、関節、筋肉および皮膚から選択される患者身体の１か所以上に影響する、請求項３～１６、１８または１９の何れかの方法。
  21. ＡＡＶが生命を脅かすまたは主要臓器を脅かす兆候の存在により一般化される、請求項３～２０の何れかの方法。
  22. 患者が汎発性肺胞出血(ＤＡＨ)を有する、請求項２１の方法。
  23. ＡＡＶが臓器を脅かす兆候なく局在化する、請求項３～２０の何れかの方法。
  24. 患者が形質芽球減少を必要とする、請求項１～２３の何れかの方法。
  25. 患者がサイトカイン放出症候群を発症するリスクにある、請求項１～２４の何れかの方法。
  26. 患者が感染を発症するリスクにある、請求項１～２５の何れかの方法。
  27. 患者が寛解の誘導を必要とする、請求項１～２６の何れかの方法。
  28. 患者が寛解の維持を必要とする、請求項１～２７の何れかの方法。
  29. 方法が、無処置または対照処置と比較して、患者の形質芽球の少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、少なくとも９５％または１００％の減少をもたらす、請求項１～２８の何れかの方法。
  30. 方法が、対照処置と比較して、患者におけるサイトカイン放出症候群の発生率の少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、少なくとも９５％または１００％の低減をもたらす、請求項１～２９の何れかの方法。
  31. 方法が、対照処置と比較して、患者における感染の発生率の少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、少なくとも９５％または１００％の低減をもたらす、請求項１～３０の何れかの方法。
  32. 方法が、対照処置と比較して、患者における少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、少なくとも９５％または１００％早い寛解の誘導をもたらす、請求項１～３１の何れかの方法。
  33. 方法が、対照処置と比較して、患者における少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、少なくとも９５％または１００％長い寛解の維持をもたらす、請求項１～３２の何れかの方法。
  34. 対照処置がステロイド(例えばグルココルチコイド)、シクロホスファミド、抗ＣＤ２０モノクローナル抗体(例えばリツキシマブ)、メトトレキサート、アザチオプリン、ミコフェノール酸、ミコフェノール酸モフェチル、アバコパン、抗ＴＮＦ剤(例えばインフリキシマブ、アダリムマブ、ゴリムマブ、エタネルセプト)、抗ＩＬ６Ｒ抗体(例えばトシリズマブ、サリルマブ)、共刺激遮断(例えばアバタセプト)、ＪＡＫ阻害剤(例えばトファシチニブ、バリシチニブ)および／またはベリムマブでの処置であり、好ましくはここで対照処置がステロイド、シクロホスファミドまたはリツキシマブでの処置である、請求項２９～３３の何れかの方法。
  35. 方法が寛解の誘導に使用される、請求項１～３４の何れかの方法。
  36. 方法が寛解の維持に使用される、請求項１～３４の何れかの方法。
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