JP2023513263A - Ｈｌａ－ｇポリペプチドを含む操作された赤血球系細胞およびその使用方法 - Google Patents

Ｈｌａ－ｇポリペプチドを含む操作された赤血球系細胞およびその使用方法 Download PDF

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Abstract

本開示は、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチド、外因性免疫原性ポリペプチド、および外因性共阻害性ポリペプチドのうちの１つ以上を含む、操作された赤血球系細胞および除核細胞に関し、細胞は、対象に投与されたときに、外因性免疫原性ポリペプチドに対する免疫寛容を誘導する、および／または免疫応答を低減することができる。本開示は、外因性ヒト白血球抗原－Ｇ（ＨＬＡ－Ｇ）ポリペプチドおよび外因性免疫原性ポリペプチドを含むように操作される、操作された赤血球系細胞（例えば、操作された除核赤血球系細胞）または除核細胞（例えば、改変された除核細胞）に関し、外因性ＨＬＡ－Ｇおよび外因性免疫原性ポリペプチドの両方が、細胞表面上にある。【選択図】図１Ａ

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０２０年２月１０に出願された米国仮特許出願第６２／９７２，６３２号に対する優先権を主張するものであり、その全内容は参照により本明細書に組み込まれる。
配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩ形式で電子的に提出された配列表を含み、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。２０２０年６月１日に作成された当該ＡＳＣＩＩコピーは、４７４７２－００５３ＷＯ１＿ＳＬ．ｔｘｔと名付けられ、サイズは３６４，９５０バイトである。
本開示は、概して、免疫学の分野に関する。より具体的には、本開示は、免疫原性ポリペプチドの使用に関する。
免疫原性ポリペプチド、例えば、酵素の投与は、それを必要とする患者に救命療法を提供することができる。様々なヒト疾患を治療するために使用されるポリペプチドは、多くの場合、それが外来抗原であるかのようにそれに応答する免疫細胞によって破壊、中和、またはそうでなければ無効にされる。適応免疫系および／または先天性免疫系によるこの強力な同種応答は、多くの場合、免疫抑制薬の投与によって制御される。しかしながら、免疫抑制薬による治療は、免疫系を広く抑制するため、有意な罹患率に関連している。さらに、免疫抑制薬の毒性は、他の問題を引き起こす。したがって、免疫原性ポリペプチド投与の成功は、多くの場合、最新の免疫抑制薬の拒絶と副作用との間のバランスに依存する。
免疫寛容の誘導は、免疫原性ポリペプチドの急性拒絶および慢性拒絶のリスク、ならびに最終的にはその治療有効性を減少させ得る。治療目的で免疫原性ポリペプチドを対象に投与するための改善された組成物および方法の必要性が依然としてある。
本開示は、外因性ヒト白血球抗原－Ｇ（ＨＬＡ－Ｇ）ポリペプチドおよび外因性免疫原性ポリペプチドを含むように操作される、操作された赤血球系細胞（例えば、操作された除核赤血球系細胞）または除核細胞（例えば、改変された除核細胞）に関し、外因性ＨＬＡ－Ｇおよび外因性免疫原性ポリペプチドの両方が、細胞表面上にある。
また、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドおよび外因性免疫原性ポリペプチドを含む、操作された赤血球系細胞（例えば、操作された除核赤血球系細胞）または除核細胞（例えば、改変された除核細胞）が提供され、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、細胞表面上に存在し、外因性免疫原性ポリペプチドは、細胞内にある。いくつかの実施形態では、外因性免疫原性ポリペプチドは、細胞のサイトゾル中にある。いくつかの実施形態では、外因性免疫原性ポリペプチドは、原形質膜の細胞内側にある。いくつかの実施形態では、外因性免疫原性ポリペプチドは、細胞によって分泌または放出される。
また、外因性自己抗原性ポリペプチド（例えば、本明細書に記載される外因性自己抗原性ポリペプチドのいずれか）および少なくとも１つの外因性共阻害性ポリペプチド（例えば、本明細書に記載される外因性共阻害性ポリペプチドのいずれか）を含む、操作された赤血球系細胞（例えば、操作された除核赤血球系細胞）または除核細胞（例えば、改変された除核細胞）も本明細書に提供される。いくつかの実施形態では、外因性自己抗原性ポリペプチドは、細胞のサイトゾル中にある。いくつかの実施形態では、外因性自己抗原性ポリペプチドは、原形質膜の細胞内側にある。いくつかの実施形態では、外因性自己抗原性ポリペプチドは、細胞によって分泌または放出される。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの外因性共阻害性ポリペプチドは、原形質膜の細胞内側にある。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの外因性共阻害性ポリペプチドは、細胞によって分泌または放出される。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの外因性共阻害性ポリペプチドは、ＩＬ－１０、ＩＬ－２７、ＩＬ－３７、ＴＧＦβ、ＣＤ３９、ＣＤ７３、アルギナーゼ１（ＡＲＧ１）、アネキシン１、フィブリノゲン様タンパク質２（ＦＧＬ２）、またはＰＤ－Ｌ１である。
いくつかの実施形態では、操作された赤血球系細胞（例えば、操作された除核赤血球系細胞）または除核細胞（例えば、改変された除核細胞）は、細胞表面上に外因性抗原性ポリペプチドをさらに含み、任意選択的に、外因性抗原性ポリペプチドは、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドに結合している。
本明細書に記載される操作された赤血球系細胞のいずれかのいくつかの実施形態では、操作された赤血球系細胞（例えば、操作された除核赤血球系細胞）または除核細胞（例えば、改変された除核細胞）は、細胞内に外因性抗原性ポリペプチドをさらに含む。いくつかの実施形態では、外因性抗原性ポリペプチドは、細胞のサイトゾル中にある。いくつかの実施形態では、外因性抗原性ポリペプチドは、原形質膜の細胞内側にある。
いくつかの実施形態では、操作された赤血球系細胞（例えば、操作された除核赤血球系細胞）または除核細胞（例えば、改変された除核細胞）は、外因性抗原性ポリペプチドをさらに分泌または放出し、任意選択的に、外因性抗原性ポリペプチドは、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドに結合している。
いくつかの実施形態では、操作された赤血球系細胞（例えば、操作された除核赤血球系細胞）または除核細胞（例えば、改変された除核細胞）は、細胞表面上に外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドおよび外因性免疫原性ポリペプチドを含み、外因性免疫原性ポリペプチドは、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドに結合していない。いくつかの実施形態では、操作された赤血球系細胞（例えば、操作された除核赤血球系細胞）または除核細胞（例えば、改変された除核細胞）は、細胞表面上に外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチド、および細胞内に外因性免疫原性ポリペプチドを含み、外因性免疫原性ポリペプチドは、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドに結合していない。
いくつかの実施形態では、操作された赤血球系細胞は、操作された除核赤血球系細胞、例えば、網状赤血球または赤血球である。いくつかの実施形態では、除核細胞（例えば、改変された除核細胞）は、網状赤血球、赤血球、または血小板である。いくつかの実施形態では、操作された赤血球系細胞は、有核の操作された赤血球系細胞である。
一態様では、本開示は、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドおよび外因性免疫原性ポリペプチドを含む操作された除核赤血球系細胞を提供し、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドおよび外因性免疫原性ポリペプチドの両方が、細胞の表面上にある。いくつかの実施形態では、外因性免疫原性ポリペプチドは、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドによって結合されていない。
別の態様では、本開示は、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドおよび外因性免疫原性ポリペプチドを含む操作された除核赤血球系細胞を提供し、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、細胞表面上にあり、外因性免疫原性ポリペプチドは、細胞内（ｗｉｔｈｉｎ ｔｈｅ ｃｅｌｌ）（すなわち、細胞内（ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ））にあり、任意選択的に、外因性免疫原性ポリペプチドは、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドによって結合されていない。いくつかの実施形態では、外因性免疫原性ポリペプチドは、細胞のサイトゾル中にあり、任意選択的に、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドによって結合されていない。いくつかの実施形態では、外因性免疫原性ポリペプチドは、原形質膜の細胞内側にあり、任意選択的に、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドによって結合されていない。いくつかの実施形態では、外因性免疫原性ポリペプチドは、原形質膜の細胞内側に外因性免疫原性ポリペプチドを位置付ける膜貫通ドメインを含み、任意選択的に、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドによって結合されていない。いくつかの実施形態では、外因性免疫原性ポリペプチドは、細胞によって分泌または放出され、任意選択的に、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドによって結合されていない。
いくつかの実施形態では、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、ＨＬＡ－Ｇ１アイソフォームポリペプチド、ＨＬＡ－Ｇ２アイソフォームポリペプチド、ＨＬＡ－Ｇ３アイソフォームポリペプチド、ＨＬＡ－Ｇ４アイソフォームポリペプチド、ＨＬＡ－Ｇ５アイソフォームポリペプチド、ＨＬＡ－Ｇ６アイソフォームポリペプチド、およびＨＬＡ－Ｇ７アイソフォームポリペプチドのうちのいずれか１つを含む。いくつかの実施形態では、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、ＨＬＡ－Ｇ１アイソフォームポリペプチド、ＨＬＡ－Ｇ２アイソフォームポリペプチド、ＨＬＡ－Ｇ５アイソフォームポリペプチド、およびＨＬＡ－Ｇ６アイソフォームポリペプチドのうちのいずれか１つを含む。
いくつかの実施形態では、外因性免疫原性ポリペプチドは、ヒトポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、外因性免疫原性ポリペプチドは、非ヒトポリペプチド（例えば、細菌、植物、酵母、真菌、ウイルス、プリオン、または原生動物に由来するポリペプチド）を含む。いくつかの実施形態では、外因性免疫原性ポリペプチドは、表１または表２に列挙されるポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、外因性免疫原性ポリペプチドは、アミノ酸分解ポリペプチド、尿酸分解ポリペプチド、またはシュウ酸オキシダーゼ（ＯｘＯｘ）を含む。
いくつかの実施形態では、外因性免疫原性ポリペプチドは、アミノ酸分解ポリペプチドを含み、アミノ酸分解ポリペプチドは、アスパラギナーゼ、フェニルアラニンアンモニウムリアーゼ（ＰＡＬ）、またはフェニルアラニンヒドロキシラーゼ（ＰＡＨ）である。いくつかの実施形態では、外因性免疫原性ポリペプチドは、ｄ－アミノレブリン酸デヒドロゲナーゼ（ＡＬＡ－Ｄ）を含む。
いくつかの実施形態では、外因性免疫原性ポリペプチドは、アミノ酸分解ポリペプチドを含み、アミノ酸分解ポリペプチドが、ホモシステイン低減ポリペプチドまたはホモシステイン分解ポリペプチドである。いくつかの実施形態では、アミノ酸分解ポリペプチドは、ホモシステイン低減ポリペプチドであり、ホモシステイン低減ポリペプチドは、メチオニンアデノシルトランスフェラーゼ、アラニントランスアミナーゼ、Ｌ－アラニン－Ｌ－アンチカプシンリガーゼ、Ｌ－システインデスルフィダーゼ、メチレンテトラヒドロ葉酸レダクターゼ、５－メチルテトラヒドロ葉酸－ホモシステインメチルトランスフェラーゼレダクターゼ、メチルマロン酸尿もしくはホモシスチン尿、ｃｂｌＤ型、またはそれらのバリアントである。いくつかの実施形態では、アミノ酸分解ポリペプチドは、ホモシステイン分解ポリペプチドであり、ホモシステイン分解ポリペプチドは、シスタチオニン－β－シンターゼ（ＣＢＳ）、メチオニンガンマ－リアーゼ、スルフィド：キノンレダクターゼ、メチオニンシンターゼ、５－メチルテトラヒドロプテロイルトリグルタミン酸－ホモシステイン－Ｓ－メチルトランスフェラーゼ、アデノシルホモシステイナーゼ、シスタチオニンガンマ－リアーゼ、メチオニンガンマ－リアーゼ、Ｌ－アミノ酸オキシダーゼ、テチン－ホモシステインＳ－メチルトランスフェラーゼ、ベタイン－ホモシステインＳ－メチルトランスフェラーゼ、ホモシステインＳ－メチルトランスフェラーゼ、５－メチルテトラヒドロプテロイルトリグルタミン酸－ホモシステイン－Ｓ－メチルトランスフェラーゼ、セレノシステインＳｅ－メチルトランスフェラーゼ、シスタチオニンガンマ－シンターゼ、Ｏ－アセチルホモセリンアミノカルボキシプロピルトランスフェラーゼ、アスパラギン－オキソ酸トランスアミナーゼ、グルタミン－フェニルピルビン酸トランスアミナーゼ、３－メルカプトピルビン酸硫黄トランスフェラーゼ、ホモシステインデスルフヒドラーゼ、シスタチオニンベータ－リアーゼ、アミノ酸ラセマーゼ、メチオニン－ｔＲＮＡリガーゼ、グルタミン酸－システインリガーゼ、Ｎ－（５－アミノ－５－カルボキシペンタノイル）－Ｌ－システイニル－Ｄ－バリンシンターゼ、Ｌ－イソロイシン４－ヒドロキシラーゼ、Ｌ－リシンＮ６－モノオキシゲナーゼ（ＮＡＤＰＨ）、メチオニンデカルボキシラーゼ、２，２－ジアルキルグリシンデカルボキシラーゼ（ピルビン酸塩）、およびシステインシンターゼ（ＣｙｓＯ）、またはそれらのバリアントである。
いくつかの実施形態では、外因性免疫原性ポリペプチドは、尿酸分解ポリペプチドを含み、尿酸分解ポリペプチドは、ウリカーゼ、ＨＩＵヒドロラーゼ、ＯＨＣＵデカルボキシラーゼ、アラントイナーゼ、アラントイカーゼ、ミエロペルオキシダーゼ、ＦＡＤ依存性尿酸ヒドロキシラーゼ、キサンチンデヒドロゲナーゼ、ヌクレオシドデオキシリボシルトランスフェラーゼ、ジオキソテトラヒドロピリミジンホスホリボシルトランスフェラーゼ、ジヒドロピリミジナーゼ、もしくはグアニンデアミナーゼ、またはそれらのバリアントである。
いくつかの実施形態では、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、対象への細胞の投与時に、外因性免疫原性ポリペプチドに対する免疫寛容（例えば、短期免疫寛容または長期免疫寛容）を誘導することができる。
いくつかの実施形態では、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、短期免疫寛容を誘導することができ、短期免疫寛容は、操作された除核赤血球系細胞が接触する免疫細胞のアポトーシスを誘導すること、または活性化、分化、および／もしくは増殖を阻害することを含み、任意選択的に、免疫細胞は、Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、またはＢ細胞である。いくつかの実施形態では、短期免疫寛容は、操作された除核赤血球系細胞が接触するＴ細胞またはＮＫ細胞の細胞傷害を阻害することを含む。いくつかの実施形態では、短期免疫寛容は、操作された除核赤血球系細胞が接触するＢ細胞による抗体分泌を阻害することを含む。
いくつかの実施形態では、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、長期免疫寛容を誘導することができ、長期免疫寛容は、操作された除核赤血球系細胞が接触する樹状細胞（ＤＣ）の成熟を阻害することを含む。いくつかの実施形態では、長期免疫寛容は、操作された除核赤血球系細胞が接触するＤＣのアネルギーを誘導することを含む。いくつかの実施形態では、長期免疫寛容は、操作された除核赤血球系細胞が接触するＣＤ４＋ Ｔ細胞の制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）への分化を誘導すること、および／または操作された除核赤血球系細胞が接触するＣＤ８＋ Ｔ細胞のＴｒｅｇへの分化を誘導することを含む。
いくつかの実施形態では、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、外因性抗原性ポリペプチド（例えば、外因性抗原性ポリペプチドは、モチーフＸＩ／ＬＰＸＸＸＸＸＬ（配列番号１）を含む）に結合している（例えば、共有結合または非共有結合している）。いくつかの実施形態では、外因性抗原性ポリペプチドは、ＲＩＩＰＲＨＬＱＬ（配列番号８４２）、ＫＬＰＡＱＦＹＩＬ（配列番号８４３）、またはＫＧＰＰＡＡＬＴＬ（配列番号８４４）から選択されるアミノ酸配列を含むか、またはそれらからなる。いくつかの実施形態では、外因性抗原性ポリペプチドは、約８アミノ酸長～約２４アミノ酸長である。
いくつかの実施形態では、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、ＨＬＡ－Ｇアルファ鎖の１つ以上のアルファドメインまたはその断片およびβ２Ｍポリペプチドまたはその断片を含む。いくつかの実施形態では、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、膜アンカーに連結されている。いくつかの実施形態では、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、リンカー（例えば、切断可能なリンカー）を介して外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドに連結された外因性抗原性ポリペプチドを含む一本鎖融合タンパク質であり、任意選択的に、膜アンカーを含む。いくつかの実施形態では、膜アンカーは、グリコフォリンＡ（ＧＰＡ）タンパク質もしくはその膜貫通ドメイン、小内在性膜タンパク質１（ＳＭＩＭ１）もしくはその膜貫通ドメイン、またはトランスフェリン受容体もしくはその膜貫通ドメインを含む。
いくつかの実施形態では、外因性免疫原性ポリペプチドは、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドに結合していない。
本明細書に記載される操作された除核赤血球系細胞のいずれかのいくつかの実施形態では、操作された除核赤血球系細胞は、外因性自己抗原性ポリペプチドをさらに含む。いくつかの実施形態では、外因性自己抗原性ポリペプチドは、細胞表面上にある。いくつかの実施形態では、外因性自己抗原性ポリペプチドは、膜アンカーをさらに含むか、または脂質部分への付着を介して細胞の原形質膜に係留されている。いくつかの実施形態では、外因性抗原性ポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端への方向に式Ｉ：Ｘ１－Ｘ２－Ｘ３（式Ｉ）を含み、式中、Ｘ１は、ＩＩ型膜タンパク質またはその膜貫通ドメインを含み、Ｘ２は、Ｉｉキーペプチドを含み、Ｘ３は、自己抗原を含む。いくつかの実施形態では、外因性自己抗原性ポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端への方向に式ＩＩ：Ｘ１－Ｘ２－Ｘ３－Ｘ４（式ＩＩ）を含み、式中、Ｘ１は、ＩＩ型膜タンパク質またはその膜貫通ドメインを含み、Ｘ２は、リンカーを含み、Ｘ３は、Ｉｉキーペプチドを含み、Ｘ４は、自己抗原を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、ポリＧＳリンカーである。いくつかの実施形態では、リンカーは、ＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳ（配列番号８４０）またはＧＰＧＰＧ（配列番号８４１）を含む。いくつかの実施形態では、Ｉｉキーペプチドは、ＬＲＭＫＬＰＫＰＰＫＰＶＳＫＭＲ（配列番号７６５）、ＹＲＭＫＬＰＫＰＰＫＰＶＳＫＭＲ（配列番号７６６）、ＬＲＭＫ（配列番号７６７）、ＹＲＭＫ（配列番号７６８）、ＬＲＭＫＬＰＫ（配列番号７６９）、ＹＲＭＫＬＰＫ（配列番号７７０）、ＹＲＭＫＬＰＫＰ（配列番号７７１）、ＬＲＭＫＬＰＫＰ（配列番号７７２）、ＬＲＭＫＬＰＫＳ（配列番号７７３）、ＹＲＭＫＬＰＫＳ（配列番号７７４）、ＬＲＭＫＬＰＫＳＡＫＰ（配列番号７７５）、およびＬＲＭＫＬＰＫＳＡＫＰＶＳＫ（配列番号７７６）の群から選択される配列を含む。いくつかの実施形態では、外因性自己抗原性ポリペプチドは、そのＣ末端に、１つ以上の追加の自己抗原をさらに含む。いくつかの実施形態では、任意の２つの自己抗原は、リンカーによって分離されている。いくつかの実施形態では、リンカーは、ポリＧＳリンカーである。いくつかの実施形態では、リンカーは、ＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳ（配列番号８４０）またはＧＰＧＰＧ（配列番号８４１）を含む。
いくつかの実施形態では、外因性自己抗原性ポリペプチドは、細胞内にある。いくつかの実施形態では、外因性自己抗原性ポリペプチドは、原形質膜の細胞内側にある。いくつかの実施形態では、外因性自己抗原性ポリペプチドは、膜アンカーをさらに含むか、または脂質部分への付着を介して細胞の原形質膜に係留されている。いくつかの実施形態では、外因性自己抗原性ポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端への方向に式ＩＩＩ：Ｘ１－Ｘ２－Ｘ３（式ＩＩＩ）を含み、式中、Ｘ１は、Ｉ型膜タンパク質またはその膜貫通ドメインを含み、Ｘ２は、Ｉｉキーペプチドを含み、Ｘ３は、自己抗原を含む。いくつかの実施形態では、外因性自己抗原性ポリペプチドは、式ＩＶ：Ｘ１－Ｘ２－Ｘ３－Ｘ４（式ＩＶ）を含み、式中、Ｘ１は、Ｉ型膜タンパク質またはその膜貫通ドメインを含み、Ｘ２は、リンカーを含み、Ｘ３は、Ｉｉキーペプチドを含み、Ｘ４は、自己抗原を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、ポリＧＳリンカーである。いくつかの実施形態では、ポリＧＳリンカーは、ＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳ（配列番号８４０）またはＧＰＧＰＧ（配列番号８４１）を含む。いくつかの実施形態では、外因性自己抗原性ポリペプチドは、そのＮ末端に、シグナルペプチドをさらに含む。いくつかの実施形態では、シグナルペプチドは、ＧＰＡシグナルペプチドである。いくつかの実施形態では、Ｉｉキーペプチドは、ＬＲＭＫＬＰＫＰＰＫＰＶＳＫＭＲ（配列番号７６５）、ＹＲＭＫＬＰＫＰＰＫＰＶＳＫＭＲ（配列番号７６６）、ＬＲＭＫ（配列番号７６７）、ＹＲＭＫ（配列番号７６８）、ＬＲＭＫＬＰＫ（配列番号７６９）、ＹＲＭＫＬＰＫ（配列番号７７０）、ＹＲＭＫＬＰＫＰ（配列番号７７１）、ＬＲＭＫＬＰＫＰ（配列番号７７２）、ＬＲＭＫＬＰＫＳ（配列番号７７３）、ＹＲＭＫＬＰＫＳ（配列番号７７４）、ＬＲＭＫＬＰＫＳＡＫＰ（配列番号７７５）、およびＬＲＭＫＬＰＫＳＡＫＰＶＳＫ（配列番号７７６）の群から選択される。いくつかの実施形態では、外因性自己抗原性ポリペプチドは、そのＣ末端に、１つ以上の追加の自己抗原をさらに含む。いくつかの実施形態では、任意の２つの自己抗原は、リンカーによって分離されている。いくつかの実施形態では、リンカーは、ポリＧＳリンカーである。いくつかの実施形態では、リンカーは、ＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳ（配列番号８４０）またはＧＰＧＰＧ（配列番号８４１）を含む。
いくつかの実施形態では、外因性自己抗原性ポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端への方向に式ＶＩＩ：Ｘ１－Ｘ２－Ｘ３－Ｘ４（式ＶＩＩ）を含み、
式中、Ｘ１は、Ｉ型膜タンパク質またはその膜貫通ドメインを含み、Ｘ２は、リンカーを含み、Ｘ３は、ＣＤ７４の細胞質部分またはその断片を含み、Ｘ４は、自己抗原を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、ＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳ（配列番号８４０）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ７４の細胞質部分は、ＱＱＱＧＲＬＤＫＬＴＶＴＳＱＮＬＱＬＥＮＬＲＭＫＬＰＫＰＰＫＰＶＳＫＭＲＭＡＴＰＬＬＭＱＡＬＰＭＧＡＬＰＱＧＰＭＱＮＡＴＫＹＧＮＭＴＥＤＨＶＭＨＬＬＱＮＡＤＰＬＫＶＹＰＰＬＫＧＳＦＰＥＮＬＲＨＬＫＮＴＭＥＴＩＤＷＫＶＦＥＳＷＭＨＨＷＬＬＦＥＭＳＲＨＳＬＥＱＫＰＴＤＡＰＰＫＥＳＬＥＬＥＤＰＳＳＧＬＧＶＴＫＱＤＬＧＰＶＰＭ（配列番号８４５）を含む。いくつかの実施形態では、外因性自己抗原性ポリペプチドのＮ末端は、シグナルペプチドをさらに含む。
いくつかの実施形態では、外因性自己抗原性ポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端への方向に式ＶＩＩＩ：Ｘ１－Ｘ２－Ｘ３－Ｘ４－Ｘ５（式ＶＩＩＩ）を含み、
式中、Ｘ１は、Ｉ型膜タンパク質またはその膜貫通ドメインを含み、Ｘ２は、リンカーを含み、Ｘ３は、ＣＤ７４のＮ末端細胞質部分またはその断片を含み、Ｘ４は、自己抗原を含み、Ｘ５は、ＣＤ７４のＣ末端細胞質部分を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、ＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳ（配列番号８４０）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ７４のＮ末端細胞質部分は、ＱＱＱＧＲＬＤＫＬＴＶＴＳＱＮＬＱＬＥＮＬＲＭＫ（配列番号８４７）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ７４のＣ末端細胞質部分は、ＧＡＬＰＱＧＰＭＱＮＡＴＫＹＧＮＭＴＥＤＨＶＭＨＬＬＱＮＡＤＰＬＫＶＹＰＰＬＫＧＳＦＰＥＮＬＲＨＬＫＮＴＭＥＴＩＤＷＫＶＦＥＳＷＭＨＨＷＬＬＦＥＭＳＲＨＳＬＥＱＫＰＴＤＡＰＰＫＥＳＬＥＬＥＤＰＳＳＧＬＧＶＴＫＱＤＬＧＰＶＰＭ（配列番号８４９）を含む。いくつかの実施形態では、外因性自己抗原性ポリペプチドのＮ末端は、シグナルペプチドをさらに含む。
いくつかの実施形態では、外因性自己抗原性ポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端への方向に式ＸＩ：Ｘ１－Ｘ２－Ｘ３－Ｘ４（式ＸＩ）を含み、式中、Ｘ１は、サイトゾルタンパク質またはその断片を含み、Ｘ２は、リンカーを含み、Ｘ３は、ＣＤ７４の細胞質部分またはその断片を含み、Ｘ４は、自己抗原を含む。いくつかの実施形態では、サイトゾルタンパク質は、ＭＡＧＷＮＡＹＩＤＮＬＭＡＤＧＴＣＱＤＡＡＩＶＧＹＫＤＳＰＳＶＷＡＡＶＰＧＫＴＦＶＮＩＴＰＡＥＶＧＶＬＶＧＫＤＲＳＳＦＹＶＮＧＬＴＬＧＧＱＫＣＳＶＩＲＤＳＬＬＱＤＧＥＦＳＭＤＬＲＴＫＳＴＧＧＡＰＴＦＮＶＴＶＴＫＴＤＫＴＬＶＬＬＭＧＫＥＧＶＨＧＧＬＩＮＫＫＣＹＥＭＡＳＨＬＲＲＳＱＹ（配列番号８４６）を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、ＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳ（配列番号８４０）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ７４の細胞質部分は、ＱＱＱＧＲＬＤＫＬＴＶＴＳＱＮＬＱＬＥＮＬＲＭＫＬＰＫＰＰＫＰＶＳＫＭＲＭＡＴＰＬＬＭＱＡＬＰＭＧＡＬＰＱＧＰＭＱＮＡＴＫＹＧＮＭＴＥＤＨＶＭＨＬＬＱＮＡＤＰＬＫＶＹＰＰＬＫＧＳＦＰＥＮＬＲＨＬＫＮＴＭＥＴＩＤＷＫＶＦＥＳＷＭＨＨＷＬＬＦＥＭＳＲＨＳＬＥＱＫＰＴＤＡＰＰＫＥＳＬＥＬＥＤＰＳＳＧＬＧＶＴＫＱＤＬＧＰＶＰＭ（配列番号８４５）を含む。いくつかの実施形態では、外因性自己抗原性ポリペプチドのＮ末端は、シグナルペプチドをさらに含む。
いくつかの実施形態では、外因性自己抗原性ポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端への方向に式ＸＩＩ：Ｘ１－Ｘ２－Ｘ３－Ｘ４－Ｘ５（式ＸＩＩ）を含み、
式中、Ｘ１は、細胞質タンパク質またはその断片を含み、Ｘ２は、リンカーを含み、Ｘ３は、ＣＤ７４のＮ末端細胞質部分またはその断片を含み、Ｘ４は、自己抗原を含み、Ｘ５は、ＣＤ７４のＣ末端細胞質部分を含む。いくつかの実施形態では、細胞質タンパク質は、ＭＡＧＷＮＡＹＩＤＮＬＭＡＤＧＴＣＱＤＡＡＩＶＧＹＫＤＳＰＳＶＷＡＡＶＰＧＫＴＦＶＮＩＴＰＡＥＶＧＶＬＶＧＫＤＲＳＳＦＹＶＮＧＬＴＬＧＧＱＫＣＳＶＩＲＤＳＬＬＱＤＧＥＦＳＭＤＬＲＴＫＳＴＧＧＡＰＴＦＮＶＴＶＴＫＴＤＫＴＬＶＬＬＭＧＫＥＧＶＨＧＧＬＩＮＫＫＣＹＥＭＡＳＨＬＲＲＳＱＹ（配列番号８４６）を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、ＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳ（配列番号８４０）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ７４のＮ末端細胞質部分は、ＱＱＱＧＲＬＤＫＬＴＶＴＳＱＮＬＱＬＥＮＬＲＭＫ（配列番号８４７）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ７４のＣ末端細胞質部分は、ＧＡＬＰＱＧＰＭＱＮＡＴＫＹＧＮＭＴＥＤＨＶＭＨＬＬＱＮＡＤＰＬＫＶＹＰＰＬＫＧＳＦＰＥＮＬＲＨＬＫＮＴＭＥＴＩＤＷＫＶＦＥＳＷＭＨＨＷＬＬＦＥＭＳＲＨＳＬＥＱＫＰＴＤＡＰＰＫＥＳＬＥＬＥＤＰＳＳＧＬＧＶＴＫＱＤＬＧＰＶＰＭ（配列番号８４９）を含む。いくつかの実施形態では、外因性自己抗原性ポリペプチドのＮ末端は、シグナルペプチドをさらに含む。
いくつかの実施形態では、外因性自己抗原性ポリペプチドは、細胞表面上に存在する。いくつかの実施形態では、外因性自己抗原性ポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端への方向に式ＩＸ：Ｘ１－Ｘ２－Ｘ３（式ＩＸ）を含み、
式中、Ｘ１は、ＩＩ型膜タンパク質またはその膜貫通ドメインを含み、Ｘ２は、ＣＤ７４の細胞質部分またはその断片を含み、Ｘ３は、自己抗原を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ７４の細胞質部分は、ＱＱＱＧＲＬＤＫＬＴＶＴＳＱＮＬＱＬＥＮＬＲＭＫＬＰＫＰＰＫＰＶＳＫＭＲＭＡＴＰＬＬＭＱＡＬＰＭＧＡＬＰＱＧＰＭＱＮＡＴＫＹＧＮＭＴＥＤＨＶＭＨＬＬＱＮＡＤＰＬＫＶＹＰＰＬＫＧＳＦＰＥＮＬＲＨＬＫＮＴＭＥＴＩＤＷＫＶＦＥＳＷＭＨＨＷＬＬＦＥＭＳＲＨＳＬＥＱＫＰＴＤＡＰＰＫＥＳＬＥＬＥＤＰＳＳＧＬＧＶＴＫＱＤＬＧＰＶＰＭ（配列番号８４５）を含む。いくつかの実施形態では、外因性自己抗原性ポリペプチドのＮ末端は、シグナルペプチドをさらに含む。
いくつかの実施形態では、外因性自己抗原性ポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端への方向に式Ｘ：Ｘ１－Ｘ２－Ｘ３－Ｘ４－Ｘ５（式Ｘ）を含み、
式中、Ｘ１は、ＩＩ型膜タンパク質またはその膜貫通ドメインを含み、Ｘ２は、リンカーを含み、Ｘ３は、ＣＤ７４のＮ末端細胞質部分またはその断片を含み、Ｘ４は、自己抗原を含み、Ｘ５は、ＣＤ７４のＣ末端細胞質部分を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号８５０）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ７４のＮ末端細胞質部分は、ＱＱＱＧＲＬＤＫＬＴＶＴＳＱＮＬＱＬＥＮＬＲＭＫ（配列番号８４７）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ７４のＣ末端細胞質部分は、ＡＬＰＱＧＰＭＱＮＡＴＫＹＧＮＭＴＥＤＨＶＭＨＬＬＱＮＡＤＰＬＫＶＹＰＰＬＫＧＳＦＰＥＮＬＲＨＬＫＮＴＭＥＴＩＤＷＫＶＦＥＳＷＭＨＨＷＬＬＦＥＭＳＲＨＳＬＥＱＫＰＴＤＡＰＰＫＥＳＬＥＬＥＤＰＳＳＧＬＧＶＴＫＱＤＬＧＰＶＰＭ（配列番号８４８）を含む。いくつかの実施形態では、外因性自己抗原性ポリペプチドのＮ末端は、シグナルペプチドをさらに含む。
いくつかの実施形態では、外因性自己抗原性ポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端への方向に式ＸＩＩＩ：Ｘ１－Ｘ２－Ｘ３－Ｘ４（式ＸＩＩＩ）を含み、式中、Ｘ１は、Ｉｉキーペプチドを含み、Ｘ２は、自己抗原を含み、Ｘ３は、リンカーを含み、Ｘ４は、Ｉ型膜タンパク質またはその膜貫通ドメインを含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、ＧＰＧＰＧ（配列番号８４１）を含む。いくつかの実施形態では、Ｘ１は、２つ以上（例えば、３、４、５、または６つ）のＩｉキーペプチドを含む。いくつかの実施形態では、外因性自己抗原性ポリペプチドのＮ末端は、シグナルペプチドをさらに含む。
いくつかの実施形態では、外因性自己抗原性ポリペプチドは、細胞のサイトゾル中にある。いくつかの実施形態では、外因性自己抗原性ポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端への方向に式Ｖ：Ｘ１－Ｘ２－Ｘ３（式Ｖ）を含み、式中、Ｘ１は、サイトゾルポリペプチドまたはその断片を含み、Ｘ２は、Ｉｉキーペプチドを含み、Ｘ３は、自己抗原を含む。いくつかの実施形態では、外因性自己抗原性ポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端への方向に式ＶＩ：Ｘ１－Ｘ２－Ｘ３－Ｘ４（式ＶＩ）を含み、式中、Ｘ１は、サイトゾルポリペプチドまたはその断片を含み、Ｘ２は、リンカーを含み、Ｘ３は、Ｉｉキーペプチドを含み、Ｘ４は、自己抗原を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、ポリＧＳリンカーである。いくつかの実施形態では、リンカーは、ＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳ（配列番号８４０）またはＧＰＧＰＧ（配列番号８４１）を含む。いくつかの実施形態では、サイトゾルポリペプチドは、プロフィリンまたはその断片を含む。いくつかの実施形態では、サイトゾルポリペプチドは、フェリチンまたはその断片を含む。いくつかの実施形態では、Ｉｉキーペプチドは、ＬＲＭＫＬＰＫＰＰＫＰＶＳＫＭＲ（配列番号７６５）、ＹＲＭＫＬＰＫＰＰＫＰＶＳＫＭＲ（配列番号７６６）、ＬＲＭＫ（配列番号７６７）、ＹＲＭＫ（配列番号７６８）、ＬＲＭＫＬＰＫ（配列番号７６９）、ＹＲＭＫＬＰＫ（配列番号７７０）、ＹＲＭＫＬＰＫＰ（配列番号７７１）、ＬＲＭＫＬＰＫＰ（配列番号７７２）、ＬＲＭＫＬＰＫＳ（配列番号７７３）、ＹＲＭＫＬＰＫＳ（配列番号７７４）、ＬＲＭＫＬＰＫＳＡＫＰ（配列番号７７５）、およびＬＲＭＫＬＰＫＳＡＫＰＶＳＫ（配列番号７７６）の群から選択される。いくつかの実施形態では、外因性自己抗原性ポリペプチドは、そのＣ末端に、１つ以上の追加の自己抗原をさらに含む。いくつかの実施形態では、任意の２つの自己抗原は、リンカーによって分離されている。いくつかの実施形態では、リンカーは、ポリＧＳリンカーである。いくつかの実施形態では、リンカーは、ＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳ（配列番号８４０）またはＧＰＧＰＧ（配列番号８４１）を含む。
本明細書に記載される操作された除核赤血球系細胞のいずれかのいくつかの実施形態では、操作された除核赤血球系細胞は、少なくとも１つの外因性共阻害性ポリペプチドをさらに含む。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの外因性共阻害性ポリペプチドのうちの１つは、細胞表面上にある。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの外因性共阻害性ポリペプチドのうちの１つは、膜貫通ドメインをさらに含む。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、グリコフォリンＡ（ＧＰＡ）膜貫通ドメイン、小内在性膜タンパク質１（ＳＭＩＭ１）膜貫通ドメイン、またはトランスフェリン受容体膜貫通ドメインである。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの外因性共阻害性ポリペプチドのうちの１つは、細胞内にある。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの外因性共阻害性ポリペプチドのうちの１つは、細胞によって分泌／放出される。
いくつかの実施形態では、少なくとも１つの外因性共阻害性ポリペプチドは、ＩＬ－１０、ＩＬ－２７、ＩＬ－３７、ＴＧＦβ、ＣＤ３９、ＣＤ７３、アルギナーゼ１（ＡＲＧ１）、アネキシン１、フィブリノゲン様タンパク質２（ＦＧＬ２）、およびＰＤ－Ｌ１からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの外因性共阻害性ポリペプチドは、ＩＬ－１０であり、配列番号７６０、７６１、７６２、または７６３に対して少なくとも９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの外因性共阻害性ポリペプチドは、ＰＤ－Ｌ１であり、配列番号７６４に対して少なくとも９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載される操作された赤血球系細胞のいずれかのいくつかの実施形態では、操作された赤血球系細胞は、原形質膜の外葉上のホスファチジルセリンの存在が増加するように処理されている。いくつかの実施形態では、操作された赤血球系細胞は、カルシウムイオノフォアで処理されている。いくつかの実施形態では、操作された赤血球系細胞は、イオノマイシン、Ａ２３１８７、およびＢＳ３のうちの１つ以上で処理されている。
本明細書に記載される操作された除核赤血球系細胞のいずれかのいくつかの実施形態では、少なくとも１つの外因性共阻害性ポリペプチドのうちの１つは、配列番号７６０～７６４および８１６～８２３のうちのいずれか１つに対して少なくとも９０％同一である配列を含む。
また、外因性自己抗原性ポリペプチドおよび少なくとも１つの外因性共阻害性ポリペプチドを含む、操作された除核赤血球系細胞も本明細書に提供される。いくつかの実施形態では、外因性自己抗原性ポリペプチドは、細胞表面上にある。いくつかの実施形態では、外因性自己抗原性ポリペプチドは、膜アンカーをさらに含むか、または脂質部分への付着を介して細胞の原形質膜に係留されている。いくつかの実施形態では、外因性自己抗原性ポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端への方向に式Ｉ：Ｘ１－Ｘ２－Ｘ３（式Ｉ）を含み、式中、Ｘ１は、ＩＩ型膜タンパク質またはその膜貫通ドメインを含み、Ｘ２は、Ｉｉキーペプチドを含み、Ｘ３は、自己抗原を含む。いくつかの実施形態では、外因性自己抗原性ポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端への方向に式ＩＩ：Ｘ１－Ｘ２－Ｘ３－Ｘ４（式ＩＩ）を含み、式中、Ｘ１は、ＩＩ型膜タンパク質またはその膜貫通ドメインを含み、Ｘ２は、リンカーを含み、Ｘ３は、Ｉｉキーペプチドを含み、Ｘ４は、自己抗原を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、ポリＧＳリンカーである。いくつかの実施形態では、リンカーは、ＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳ（配列番号８４０）またはＧＰＧＰＧ（配列番号８４１）を含む。いくつかの実施形態では、Ｉｉキーペプチドは、ＬＲＭＫＬＰＫＰＰＫＰＶＳＫＭＲ（配列番号７６５）、ＹＲＭＫＬＰＫＰＰＫＰＶＳＫＭＲ（配列番号７６６）、ＬＲＭＫ（配列番号７６７）、ＹＲＭＫ（配列番号７６８）、ＬＲＭＫＬＰＫ（配列番号７６９）、ＹＲＭＫＬＰＫ（配列番号７７０）、ＹＲＭＫＬＰＫＰ（配列番号７７１）、ＬＲＭＫＬＰＫＰ（配列番号７７２）、ＬＲＭＫＬＰＫＳ（配列番号７７３）、ＹＲＭＫＬＰＫＳ（配列番号７７４）、ＬＲＭＫＬＰＫＳＡＫＰ（配列番号７７５）、およびＬＲＭＫＬＰＫＳＡＫＰＶＳＫ（配列番号７７６）の群から選択される配列を含む。いくつかの実施形態では、外因性自己抗原性ポリペプチドは、そのＣ末端に、１つ以上の追加の自己抗原をさらに含む。いくつかの実施形態では、任意の２つの自己抗原は、リンカーによって分離されている。いくつかの実施形態では、リンカーは、ポリＧＳリンカーである。いくつかの実施形態では、リンカーは、ＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳ（配列番号８４０）またはＧＰＧＰＧ（配列番号８４１）を含む。
いくつかの実施形態では、外因性自己抗原性ポリペプチドは、細胞内にある。いくつかの実施形態では、外因性自己抗原性ポリペプチドは、原形質膜の細胞内側にある。いくつかの実施形態では、外因性抗原性ポリペプチドは、膜アンカーをさらに含むか、または脂質部分への付着を介して細胞の原形質膜に係留されている。いくつかの実施形態では、外因性自己抗原性ポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端への方向に式ＩＩＩ：Ｘ１－Ｘ２－Ｘ３（式ＩＩＩ）を含み、式中、Ｘ１は、Ｉ型膜タンパク質またはその膜貫通ドメインを含み、Ｘ２は、Ｉｉキーペプチドを含み、Ｘ３は、自己抗原を含む。いくつかの実施形態では、外因性自己抗原性ポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端への方向に式ＩＶ：Ｘ１－Ｘ２－Ｘ３－Ｘ４（式ＩＶ）を含み、式中、Ｘ１は、Ｉ型膜タンパク質またはその膜貫通ドメインを含み、Ｘ２は、リンカーを含み、Ｘ３は、Ｉｉキーペプチドを含み、Ｘ４は、自己抗原を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、ポリＧＳリンカーである。いくつかの実施形態では、リンカーは、ＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳ（配列番号８４０）またはＧＰＧＰＧ（配列番号８４１）を含む。いくつかの実施形態では、外因性自己抗原性ポリペプチドは、そのＮ末端に、シグナルペプチドをさらに含む。いくつかの実施形態では、シグナルペプチドは、ＧＰＡシグナルペプチドである。いくつかの実施形態では、Ｉｉキーペプチドは、ＬＲＭＫＬＰＫＰＰＫＰＶＳＫＭＲ（配列番号７６５）、ＹＲＭＫＬＰＫＰＰＫＰＶＳＫＭＲ（配列番号７６６）、
ＬＲＭＫ（配列番号７６７）、ＹＲＭＫ（配列番号７６８）、ＬＲＭＫＬＰＫ（配列番号７６９）、ＹＲＭＫＬＰＫ（配列番号７７０）、ＹＲＭＫＬＰＫＰ（配列番号７７１）、ＬＲＭＫＬＰＫＰ（配列番号７７２）、ＬＲＭＫＬＰＫＳ（配列番号７７３）、ＹＲＭＫＬＰＫＳ（配列番号７７４）、ＬＲＭＫＬＰＫＳＡＫＰ（配列番号７７５）、およびＬＲＭＫＬＰＫＳＡＫＰＶＳＫ（配列番号７７６）の群から選択される。いくつかの実施形態では、外因性自己抗原性ポリペプチドは、そのＣ末端に、１つ以上の追加の自己抗原をさらに含む。いくつかの実施形態では、任意の２つの自己抗原は、リンカーによって分離されている。いくつかの実施形態では、リンカーは、ポリＧＳリンカーである。いくつかの実施形態では、リンカーは、ＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳ（配列番号８４０）またはＧＰＧＰＧ（配列番号８４１）を含む。
いくつかの実施形態では、外因性自己抗原性ポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端への方向に式ＶＩＩ：Ｘ１－Ｘ２－Ｘ３－Ｘ４（式ＶＩＩ）を含み、
式中、Ｘ１は、Ｉ型膜タンパク質またはその膜貫通ドメインを含み、Ｘ２は、リンカーを含み、Ｘ３は、ＣＤ７４の細胞質部分またはその断片を含み、Ｘ４は、自己抗原を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、ＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳ（配列番号８４０）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ７４の細胞質部分は、ＱＱＱＧＲＬＤＫＬＴＶＴＳＱＮＬＱＬＥＮＬＲＭＫＬＰＫＰＰＫＰＶＳＫＭＲＭＡＴＰＬＬＭＱＡＬＰＭＧＡＬＰＱＧＰＭＱＮＡＴＫＹＧＮＭＴＥＤＨＶＭＨＬＬＱＮＡＤＰＬＫＶＹＰＰＬＫＧＳＦＰＥＮＬＲＨＬＫＮＴＭＥＴＩＤＷＫＶＦＥＳＷＭＨＨＷＬＬＦＥＭＳＲＨＳＬＥＱＫＰＴＤＡＰＰＫＥＳＬＥＬＥＤＰＳＳＧＬＧＶＴＫＱＤＬＧＰＶＰＭ（配列番号８４５）を含む。いくつかの実施形態では、外因性自己抗原性ポリペプチドのＮ末端は、シグナルペプチドをさらに含む。
いくつかの実施形態では、外因性自己抗原性ポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端への方向に式ＶＩＩＩ：Ｘ１－Ｘ２－Ｘ３－Ｘ４－Ｘ５（式ＶＩＩＩ）を含み、
式中、Ｘ１は、Ｉ型膜タンパク質またはその膜貫通ドメインを含み、Ｘ２は、リンカーを含み、Ｘ３は、ＣＤ７４のＮ末端細胞質部分またはその断片を含み、Ｘ４は、自己抗原を含み、Ｘ５は、ＣＤ７４のＣ末端細胞質部分を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、ＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳ（配列番号８４０）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ７４のＮ末端細胞質部分は、ＱＱＱＧＲＬＤＫＬＴＶＴＳＱＮＬＱＬＥＮＬＲＭＫ（配列番号８４７）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ７４のＣ末端細胞質部分は、ＧＡＬＰＱＧＰＭＱＮＡＴＫＹＧＮＭＴＥＤＨＶＭＨＬＬＱＮＡＤＰＬＫＶＹＰＰＬＫＧＳＦＰＥＮＬＲＨＬＫＮＴＭＥＴＩＤＷＫＶＦＥＳＷＭＨＨＷＬＬＦＥＭＳＲＨＳＬＥＱＫＰＴＤＡＰＰＫＥＳＬＥＬＥＤＰＳＳＧＬＧＶＴＫＱＤＬＧＰＶＰＭ（配列番号８４９）を含む。いくつかの実施形態では、外因性自己抗原性ポリペプチドのＮ末端は、シグナルペプチドをさらに含む。
いくつかの実施形態では、外因性自己抗原性ポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端への方向に式ＸＩ：Ｘ１－Ｘ２－Ｘ３－Ｘ４（式ＸＩ）を含み、式中、Ｘ１は、サイトゾルタンパク質またはその断片を含み、Ｘ２は、リンカーを含み、Ｘ３は、ＣＤ７４の細胞質部分またはその断片を含み、Ｘ４は、自己抗原を含む。いくつかの実施形態では、サイトゾルタンパク質は、ＭＡＧＷＮＡＹＩＤＮＬＭＡＤＧＴＣＱＤＡＡＩＶＧＹＫＤＳＰＳＶＷＡＡＶＰＧＫＴＦＶＮＩＴＰＡＥＶＧＶＬＶＧＫＤＲＳＳＦＹＶＮＧＬＴＬＧＧＱＫＣＳＶＩＲＤＳＬＬＱＤＧＥＦＳＭＤＬＲＴＫＳＴＧＧＡＰＴＦＮＶＴＶＴＫＴＤＫＴＬＶＬＬＭＧＫＥＧＶＨＧＧＬＩＮＫＫＣＹＥＭＡＳＨＬＲＲＳＱＹ（配列番号８４６）を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、ＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳ（配列番号８４０）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ７４の細胞質部分は、ＱＱＱＧＲＬＤＫＬＴＶＴＳＱＮＬＱＬＥＮＬＲＭＫＬＰＫＰＰＫＰＶＳＫＭＲＭＡＴＰＬＬＭＱＡＬＰＭＧＡＬＰＱＧＰＭＱＮＡＴＫＹＧＮＭＴＥＤＨＶＭＨＬＬＱＮＡＤＰＬＫＶＹＰＰＬＫＧＳＦＰＥＮＬＲＨＬＫＮＴＭＥＴＩＤＷＫＶＦＥＳＷＭＨＨＷＬＬＦＥＭＳＲＨＳＬＥＱＫＰＴＤＡＰＰＫＥＳＬＥＬＥＤＰＳＳＧＬＧＶＴＫＱＤＬＧＰＶＰＭ（配列番号８４５）を含む。いくつかの実施形態では、外因性自己抗原性ポリペプチドのＮ末端は、シグナルペプチドをさらに含む。
いくつかの実施形態では、外因性自己抗原性ポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端への方向に式ＸＩＩ：Ｘ１－Ｘ２－Ｘ３－Ｘ４－Ｘ５（式ＸＩＩ）を含み、
式中、Ｘ１は、細胞質タンパク質またはその断片を含み、Ｘ２は、リンカーを含み、Ｘ３は、ＣＤ７４のＮ末端細胞質部分またはその断片を含み、Ｘ４は、自己抗原を含み、Ｘ５は、ＣＤ７４のＣ末端細胞質部分を含む。いくつかの実施形態では、細胞質タンパク質は、ＭＡＧＷＮＡＹＩＤＮＬＭＡＤＧＴＣＱＤＡＡＩＶＧＹＫＤＳＰＳＶＷＡＡＶＰＧＫＴＦＶＮＩＴＰＡＥＶＧＶＬＶＧＫＤＲＳＳＦＹＶＮＧＬＴＬＧＧＱＫＣＳＶＩＲＤＳＬＬＱＤＧＥＦＳＭＤＬＲＴＫＳＴＧＧＡＰＴＦＮＶＴＶＴＫＴＤＫＴＬＶＬＬＭＧＫＥＧＶＨＧＧＬＩＮＫＫＣＹＥＭＡＳＨＬＲＲＳＱＹ（配列番号８４６）を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、ＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳ（配列番号８４０）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ７４のＮ末端細胞質部分は、ＱＱＱＧＲＬＤＫＬＴＶＴＳＱＮＬＱＬＥＮＬＲＭＫ（配列番号８４７）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ７４のＣ末端細胞質部分は、ＧＡＬＰＱＧＰＭＱＮＡＴＫＹＧＮＭＴＥＤＨＶＭＨＬＬＱＮＡＤＰＬＫＶＹＰＰＬＫＧＳＦＰＥＮＬＲＨＬＫＮＴＭＥＴＩＤＷＫＶＦＥＳＷＭＨＨＷＬＬＦＥＭＳＲＨＳＬＥＱＫＰＴＤＡＰＰＫＥＳＬＥＬＥＤＰＳＳＧＬＧＶＴＫＱＤＬＧＰＶＰＭ（配列番号８４９）を含む。いくつかの実施形態では、外因性自己抗原性ポリペプチドのＮ末端は、シグナルペプチドをさらに含む。
いくつかの実施形態では、外因性自己抗原性ポリペプチドは、細胞表面上に存在する。いくつかの実施形態では、外因性自己抗原性ポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端への方向に式ＩＸ：Ｘ１－Ｘ２－Ｘ３（式ＩＸ）を含み、
式中、Ｘ１は、ＩＩ型膜タンパク質またはその膜貫通ドメインを含み、Ｘ２は、ＣＤ７４の細胞質部分またはその断片を含み、Ｘ３は、自己抗原を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ７４の細胞質部分は、ＱＱＱＧＲＬＤＫＬＴＶＴＳＱＮＬＱＬＥＮＬＲＭＫＬＰＫＰＰＫＰＶＳＫＭＲＭＡＴＰＬＬＭＱＡＬＰＭＧＡＬＰＱＧＰＭＱＮＡＴＫＹＧＮＭＴＥＤＨＶＭＨＬＬＱＮＡＤＰＬＫＶＹＰＰＬＫＧＳＦＰＥＮＬＲＨＬＫＮＴＭＥＴＩＤＷＫＶＦＥＳＷＭＨＨＷＬＬＦＥＭＳＲＨＳＬＥＱＫＰＴＤＡＰＰＫＥＳＬＥＬＥＤＰＳＳＧＬＧＶＴＫＱＤＬＧＰＶＰＭ（配列番号８４５）を含む。いくつかの実施形態では、外因性自己抗原性ポリペプチドのＮ末端は、シグナルペプチドをさらに含む。
いくつかの実施形態では、外因性自己抗原性ポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端への方向に式Ｘ：Ｘ１－Ｘ２－Ｘ３－Ｘ４－Ｘ５（式Ｘ）を含み、
式中、Ｘ１は、ＩＩ型膜タンパク質またはその膜貫通ドメインを含み、Ｘ２は、リンカーを含み、Ｘ３は、ＣＤ７４のＮ末端細胞質部分またはその断片を含み、Ｘ４は、自己抗原を含み、Ｘ５は、ＣＤ７４のＣ末端細胞質部分を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号８５０）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ７４のＮ末端細胞質部分は、ＱＱＱＧＲＬＤＫＬＴＶＴＳＱＮＬＱＬＥＮＬＲＭＫ（配列番号８４７）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ７４のＣ末端細胞質部分は、ＡＬＰＱＧＰＭＱＮＡＴＫＹＧＮＭＴＥＤＨＶＭＨＬＬＱＮＡＤＰＬＫＶＹＰＰＬＫＧＳＦＰＥＮＬＲＨＬＫＮＴＭＥＴＩＤＷＫＶＦＥＳＷＭＨＨＷＬＬＦＥＭＳＲＨＳＬＥＱＫＰＴＤＡＰＰＫＥＳＬＥＬＥＤＰＳＳＧＬＧＶＴＫＱＤＬＧＰＶＰＭ（配列番号８４８）を含む。いくつかの実施形態では、外因性自己抗原性ポリペプチドのＮ末端は、シグナルペプチドをさらに含む。
いくつかの実施形態では、外因性自己抗原性ポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端への方向に式ＸＩＩＩ：Ｘ１－Ｘ２－Ｘ３－Ｘ４（式ＸＩＩＩ）を含み、式中、Ｘ１は、Ｉｉキーペプチドを含み、Ｘ２は、自己抗原を含み、Ｘ３は、リンカーを含み、Ｘ４は、Ｉ型膜タンパク質またはその膜貫通ドメインを含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、ＧＰＧＰＧ（配列番号８４１）を含む。いくつかの実施形態では、Ｘ１は、２つ以上（例えば、３、４、５、または６つ）のＩｉキーペプチドを含む。いくつかの実施形態では、外因性自己抗原性ポリペプチドのＮ末端は、シグナルペプチドをさらに含む。
いくつかの実施形態では、外因性自己抗原性ポリペプチドは、細胞のサイトゾル中にある。いくつかの実施形態では、外因性自己抗原性ポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端への方向に式Ｖ：Ｘ１－Ｘ２－Ｘ３（式Ｖ）を含み、式中、Ｘ１は、サイトゾルポリペプチドまたはその断片を含み、Ｘ２は、Ｉｉキーペプチドを含み、Ｘ３は、自己抗原を含む。いくつかの実施形態では、外因性自己抗原性ポリペプチドは、式ＶＩ：Ｘ１－Ｘ２－Ｘ３－Ｘ４（式ＶＩ）を含み、式中、Ｘ１は、サイトゾルポリペプチドまたはその断片を含み、Ｘ２は、リンカーを含み、Ｘ３は、Ｉｉキーペプチドを含み、Ｘ４は、自己抗原を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、ポリＧＳリンカーである。いくつかの実施形態では、リンカーは、ＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳ（配列番号８４０）またはＧＰＧＰＧ（配列番号８４１）を含む。いくつかの実施形態では、サイトゾルポリペプチドは、プロフィリンまたはその断片を含む。いくつかの実施形態では、サイトゾルポリペプチドは、フェリチンまたはその断片を含む。いくつかの実施形態では、Ｉｉキーペプチドは、ＬＲＭＫＬＰＫＰＰＫＰＶＳＫＭＲ（配列番号７６５）、ＹＲＭＫＬＰＫＰＰＫＰＶＳＫＭＲ（配列番号７６６）、ＬＲＭＫ（配列番号７６７）、ＹＲＭＫ（配列番号７６８）、ＬＲＭＫＬＰＫ（配列番号７６９）、ＹＲＭＫＬＰＫ（配列番号７７０）、ＹＲＭＫＬＰＫＰ（配列番号７７１）、ＬＲＭＫＬＰＫＰ（配列番号７７２）、ＬＲＭＫＬＰＫＳ（配列番号７７３）、ＹＲＭＫＬＰＫＳ（配列番号７７４）、ＬＲＭＫＬＰＫＳＡＫＰ（配列番号７７５）、およびＬＲＭＫＬＰＫＳＡＫＰＶＳＫ（配列番号７７６）の群から選択される。いくつかの実施形態では、外因性自己抗原性ポリペプチドは、そのＣ末端に、１つ以上の追加の自己抗原をさらに含む。いくつかの実施形態では、任意の２つの自己抗原は、リンカーによって分離されている。いくつかの実施形態では、リンカーは、ポリＧＳリンカーである。いくつかの実施形態では、リンカーは、ＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳ（配列番号８４０）またはＧＰＧＰＧ（配列番号８４１）を含む。
本明細書に記載される操作された除核細胞のいずれかのいくつかの実施形態では、操作された除核赤血球系細胞は、少なくとも１つの外因性共阻害性ポリペプチドをさらに含む。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの外因性共阻害性ポリペプチドのうちの１つは、細胞表面上にある。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの外因性共阻害性ポリペプチドのうちの１つは、膜貫通ドメインをさらに含む。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、グリコフォリンＡ（ＧＰＡ）膜貫通ドメイン、小内在性膜タンパク質１（ＳＭＩＭ１）膜貫通ドメイン、またはトランスフェリン受容体膜貫通ドメインである。
いくつかの実施形態では、少なくとも１つの外因性共阻害性ポリペプチドのうちの１つは、細胞内にある。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの外因性共阻害性ポリペプチドのうちの１つは、細胞によって分泌／放出される。
いくつかの実施形態では、少なくとも１つの外因性共阻害性ポリペプチドは、ＩＬ－１０、ＩＬ－２７、ＩＬ－３７、ＴＧＦβ、ＣＤ３９、ＣＤ７３、アルギナーゼ１（ＡＲＧ１）、アネキシン１、フィブリノゲン様タンパク質２（ＦＧＬ２）、およびＰＤ－Ｌ１からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの外因性共阻害性ポリペプチドのうちの１つは、ＩＬ－１０であり、配列番号７６０、７６１、７６２、または７６３に対して少なくとも９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの外因性共阻害性ポリペプチドのうちの１つは、ＰＤ－Ｌ１であり、配列番号７６４に対して少なくとも９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載される操作された除核赤血球系細胞のいずれかのいくつかの実施形態では、操作された赤血球系細胞は、原形質膜の外葉上のホスファチジルセリンの存在が増加するように処理されている。いくつかの実施形態では、操作された赤血球系細胞は、カルシウムイオノフォアで処理されている。いくつかの実施形態では、操作された赤血球系細胞は、イオノマイシン、Ａ２３１８７、およびＢＳ３のうちの１つ以上で処理されている。
いくつかの実施形態では、少なくとも１つの外因性共阻害性ポリペプチドのうちの１つは、配列番号７６０～７６４および８１６～８３２のうちのいずれか１つに対して少なくとも９０％同一である配列を含む。
いくつかの実施形態では、操作された除核赤血球系細胞は、網状赤血球または赤血球である。
いくつかの実施形態では、操作された除核赤血球系細胞は、ヒト細胞である。
別の態様では、本開示は、本明細書に記載される複数の操作された除核赤血球系細胞と、薬学的に許容される担体と、を含む医薬組成物を提供する。
別の態様では、本開示は、外因性免疫原性ポリペプチドに対する対象における免疫寛容を誘導する方法を提供し、方法は、本明細書に記載される複数の操作された除核赤血球系細胞、または本明細書に記載される医薬組成物を対象に投与し、それによって外因性免疫原性ポリペプチドに対する免疫寛容を誘導することを含む。
いくつかの実施形態では、免疫寛容は、短期免疫寛容を含む。いくつかの実施形態では、短期免疫寛容は、操作された除核赤血球系細胞が接触する免疫細胞のアポトーシスを誘導すること、または活性化、分化、および／もしくは増殖を阻害することを含み、任意選択的に、免疫細胞は、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、またはＢ細胞である。いくつかの実施形態では、短期免疫寛容は、操作された除核赤血球系細胞が接触するＴ細胞またはＮＫ細胞の細胞傷害を阻害することを含む。いくつかの実施形態では、短期免疫寛容は、操作された除核赤血球系細胞が接触するＢ細胞による抗体分泌を阻害することを含む。
いくつかの実施形態では、免疫寛容は、長期免疫寛容を含む。いくつかの実施形態では、長期免疫寛容は、操作された除核赤血球系細胞が接触するＤＣの成熟を阻害することを含む。いくつかの実施形態では、長期免疫寛容は、操作された除核赤血球系細胞が接触するＤＣのアネルギーを誘導することを含む。いくつかの実施形態では、長期免疫寛容は、操作された除核赤血球系細胞が接触するＣＤ４＋ Ｔ細胞のＴｒｅｇへの分化を誘導すること、および／または操作された除核赤血球系細胞が接触するＣＤ８＋ Ｔ細胞のＴｒｅｇへの分化を誘導することを含む。
他の態様では、本開示は、疾患の治療を必要とする対象においてそれを行う方法を提供し、方法は、本明細書に記載される複数の操作された除核赤血球系細胞、または本明細書に記載される医薬組成物を対象に（例えば、静脈内）投与し、それによって対象において疾患を治療することを含む。
いくつかの実施形態では、外因性免疫原性ポリペプチドに対する対象における免疫応答は、外因性免疫原性ポリペプチドが対象に単独で投与される場合の、外因性免疫原性ポリペプチドに対する対象における免疫応答と比較して低減される、および／または外因性免疫原性ポリペプチドに対する対象における免疫応答は、外因性免疫原性ポリペプチドが外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドを欠く複数の操作された除核赤血球系細胞の表面上に存在するときに対象に投与される場合の、外因性免疫原性ポリペプチドに対する対象における免疫応答と比較して低減される。
いくつかの実施形態では、疾患は、がん（例えば、白血病）である。いくつかの実施形態では、疾患は、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、肛門がん、胆管がん、膀胱がん、骨がん、腸がん、脳がん、乳がん、肝臓がん、肺がん、原発不明がん、子宮頸がん、絨毛がん、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、結腸がん、結腸直腸がん、子宮内膜がん、眼がん、胆嚢がん、胃がん、妊娠性絨毛腫瘍（ＧＴＴ）、有毛細胞白血病、頭頸部がん、ホジキンリンパ腫、腎臓がん、喉頭がん、白血病、リンパ腫、皮膚がん、中皮腫、口腔および口腔咽頭がん、骨髄腫、鼻腔および副鼻腔がん、鼻咽腔がん、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、食道がん、卵巣がん、膵臓がん、陰茎がん、前立腺がん、直腸がん、唾液腺がん、軟部組織肉腫、腹部がん、精巣がん、甲状腺がん、子宮がん、膣がん、または外陰がんから選択されるがんである。
いくつかの実施形態では、疾患は、ホモシステイン関連疾患（例えば、ホモシスチン尿症）である。いくつかの実施形態では、疾患は、尿酸関連疾患（例えば、高尿酸血症、痛風、関節リウマチ、変形性関節炎、脳卒中、虚血性心疾患、不整脈、または慢性腎疾患）である。いくつかの実施形態では、疾患は、高シュウ酸尿症である。いくつかの実施形態では、疾患はフェニルケトン尿症である。
いくつかの実施形態では、疾患は、自己免疫疾患である。いくつかの実施形態では、自己免疫疾患は、１型糖尿病、多発性硬化症、結合組織障害、セリアック病、水疱性類天疱瘡、膜性糸球体腎炎、視神経脊髄炎、尋常性天疱瘡、自己免疫性脳炎、自己免疫性肝炎、慢性炎症性脱髄性多発神経炎（ＣＩＰＤ）、多発性筋炎および皮膚筋炎（ＰＭ／ＤＭ）、混合性結合組織疾患（ＭＣＴＤ）、重症筋無力症、関節リウマチ、自己免疫性肝疾患、ブドウ膜炎、自己免疫性心筋炎、白斑、円形脱毛症（ａｌｏｐｅｃｉｓ ａｒｅａｔａ）、または強皮症である。いくつかの実施形態では、自己免疫疾患は、１型糖尿病、多発性硬化症、結合組織障害、またはセリアック病である。いくつかの実施形態では、自己免疫疾患は、１型糖尿病である。いくつかの実施形態では、自己免疫疾患は、水疱性類天疱瘡、膜性糸球体腎炎、視神経脊髄炎、または尋常性天疱瘡である。いくつかの実施形態では、自己免疫疾患は、自己免疫性脳炎、自己免疫性肝炎、慢性炎症性脱髄性多発神経炎（ＣＩＰＤ）、多発性筋炎および皮膚筋炎（ＰＭ／ＤＭ）、混合性結合組織疾患（ＭＣＴＤ）、重症筋無力症、関節リウマチ、自己免疫性肝疾患、ブドウ膜炎、自己免疫性心筋炎、白斑、円形脱毛症（ａｌｏｐｅｃｉｓ ａｒｅａｔａ）、または強皮症である。
図面は、本開示の１つ以上の特徴、態様、または実施形態を例示することを意図しており、限定することを意図するものではない。
ＨＬＡ－Ｇポリペプチドを含む例示的な構築物を示す概略図である。ＨＬＡ－Ｇポリペプチドを含む例示的な一本鎖融合ポリペプチド、ならびに任意選択的に外因性抗原性ポリペプチドに連結された、膜アンカーに連結されたＨＬＡ－Ｇアルファ鎖の１つ以上のアルファドメイン（例えば、ＧＰＡポリペプチドまたはその膜貫通ドメイン）に連結された、外因性β２Ｍポリペプチドを含む２つの例示的な一本鎖融合ポリペプチドを含む、赤血球系細胞を示す。 ＨＬＡ－Ｇポリペプチドを含む例示的な構築物を示す概略図である。ＧＰＡ、ＳＭＩＭ１、またはトランスフェリン受容体などの膜アンカーに連結された、ＨＬＡ－Ｇアルファ鎖の１つ以上のアルファドメイン（例えば、アルファ１、アルファ２、およびアルファ３ドメイン）に連結された、β２Ｍポリペプチドに連結された外因性抗原性ペプチドを含むＨＬＡ－Ｇ構築物を示す。 ＨＬＡ－Ｇポリペプチドを含む例示的な構築物を示す概略図である。ＧＰＡ、ＳＭＩＭ１、またはトランスフェリン受容体などの膜アンカーに連結された、ＨＬＡ－Ｇアルファ鎖の１つ以上のアルファドメイン（例えば、アルファ１、アルファ２、およびアルファ３ドメインのうちの１つ以上）に連結された、β２Ｍポリペプチドを含む、開放構造（ＯＣ）構築物（例えば、外因性抗原性ポリペプチドに融合していない）を示し、ＨＬＡ－Ｇ開放構造は、外因性抗原性ポリペプチドに結合することができる。構築物は、β２Ｍリーダー配列をさらに含む。 ＨＬＡ－Ｇポリペプチドを含む例示的な構築物を示す概略図である。ＧＰＡ、ＳＭＩＭ１、またはトランスフェリン受容体などの膜アンカーに連結された、ＨＬＡ－Ｇ２アルファ１およびアルファ２ドメインを含むＨＬＡ－Ｇ２構築物を示す。構築物は、β２Ｍまたはアルファリーダー配列をさらに含む。
本開示は、操作された赤血球系細胞（例えば、操作された除核赤血球系細胞）または除核細胞（例えば、改変された除核細胞）を開示し、これらの細胞は、それらの表面上（例えば、細胞原形質膜の外葉上）に、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチド、および外因性免疫原性ポリペプチド（例えば、細胞表面上または細胞内に（例えば、細胞のサイトゾル中または原形質膜の細胞内側に））を含む。いくつかの実施形態では、外因性免疫原性ポリペプチドは、細胞によって分泌または放出される。いくつかの実施形態では、外因性免疫原性ポリペプチドは、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドに結合していない。
いくつかの実施形態では、操作された赤血球系細胞（例えば、操作された除核赤血球系細胞）または除核細胞（例えば、改変された除核細胞）は、外因性抗原性ポリペプチドをさらに含む。いくつかの実施形態では、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、外因性抗原性ポリペプチドに結合している。いくつかの実施形態では、外因性抗原性ポリペプチドは、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドに結合していない。いくつかの実施形態では、操作された赤血球系細胞または除核細胞は、細胞表面上に外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドおよび外因性免疫原性ポリペプチドを含み、外因性免疫原性ポリペプチドは、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドに結合していない（例えば、ＨＬＡ－Ｇポリペプチドの抗原結合裂に結合していない）。いくつかの実施形態では、操作された赤血球系細胞または除核細胞は、細胞表面内に外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドおよび外因性免疫原性ポリペプチドを含み、外因性免疫原性ポリペプチドは、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドに結合していない（例えば、ＨＬＡ－Ｇポリペプチドの抗原結合裂に結合していない）。
いくつかの実施形態では、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、ＨＬＡ－Ｇポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、アルファ１、アルファ２、およびアルファ３ドメイン）、ベータ－２ミクログロブリン（β２Ｍ）ポリペプチド、および膜アンカー（例えば、ＧＰＡ膜貫通ドメイン、ＳＭＩＭ１膜貫通ドメイン、またはトランスフェリン受容体膜貫通ドメインを含む）を含むか、またはそれらからなる一本鎖融合ポリペプチドであり、一本鎖融合ポリペプチドは、任意選択的に、外因性抗原性ポリペプチドに連結されている。他の実施形態では、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、例えば、モチーフＸＩ／ＬＰＸＸＸＸＸＬ（Ｘは、任意のアミノ酸残基（配列番号１）である）を含む外因性抗原性ポリペプチドに連結されたＨＬＡ－Ｇポリペプチドを含む、一本鎖融合ポリペプチドである。いくつかの実施形態では、外因性抗原性ポリペプチドは、ＲＩＩＰＲＨＬＱＬ（配列番号８４２）、ＫＬＰＡＱＦＹＩＬ（配列番号８４３）、およびＫＧＰＰＡＡＬＴＬ（配列番号８４４）から選択されるアミノ酸配列を含むか、またはそれらからなる。いくつかの実施形態では、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、ＨＬＡ－Ｇポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、ＨＬＡ－Ｇ１もしくはＨＬＡ－Ｇ５アイソフォームポリペプチドのアルファ１、アルファ２、およびアルファ３ドメイン；ＨＬＡ－Ｇ２もしくはＨＬＡ－Ｇ６アイソフォームポリペプチドのアルファ１およびアルファ３ドメイン；ＨＬＡ－Ｇ４アイソフォームポリペプチドのアルファ１およびアルファ２ドメイン；ＨＬＡ－Ｇ４アイソフォームポリペプチドのアルファ１およびアルファ２ドメイン；またはＨＬＡ－Ｇ３もしくはＨＬＡ－Ｇ７ポリペプチドのアルファ１ドメイン）、β２Ｍポリペプチド、ならびに膜アンカー（例えば、ＧＰＡ膜貫通ドメインを含む）を含むか、またはそれらからなる一本鎖融合ポリペプチドであり、一本鎖融合ポリペプチドは、任意選択的に、外因性抗原性ポリペプチドに連結されている。いくつかの実施形態では、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、ＨＬＡ－Ｇアルファ鎖の１つ以上のアルファドメイン（例えば、ＨＬＡ－Ｇ１もしくはＨＬＡ－Ｇ５アイソフォームポリペプチドのアルファ１、アルファ２、および／もしくはアルファ３ドメイン；ＨＬＡ－Ｇ２もしくはＨＬＡ－Ｇ６アイソフォームポリペプチドのアルファ１およびアルファ３ドメイン；ＨＬＡ－Ｇ４アイソフォームポリペプチドのアルファ１およびアルファ２ドメイン；ＨＬＡ－Ｇ４アイソフォームポリペプチドのアルファ１およびアルファ２ドメイン；またはＨＬＡ－Ｇ３もしくはＨＬＡ－Ｇ７ポリペプチドのアルファ１ドメイン）、β２Ｍポリペプチド、ならびに膜アンカー（例えば、ＧＰＡ膜貫通ドメイン）を含むか、またはそれらからなる一本鎖融合ポリペプチドであり、一本鎖融合ポリペプチドは、任意選択的に、外因性抗原性ポリペプチドに連結されている。いくつかの実施形態では、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、ＨＬＡ－Ｇアルファ鎖の１つ以上のアルファドメイン（例えば、ＨＬＡ－Ｇ１もしくはＨＬＡ－Ｇ５アイソフォームポリペプチドのアルファ１、アルファ２、および／もしくはアルファ３ドメイン；ＨＬＡ－Ｇ２もしくはＨＬＡ－Ｇ６アイソフォームポリペプチドのアルファ１およびアルファ３ドメイン；ＨＬＡ－Ｇ４アイソフォームポリペプチドのアルファ１およびアルファ２ドメイン；ＨＬＡ－Ｇ４アイソフォームポリペプチドのアルファ１およびアルファ２ドメイン；またはＨＬＡ－Ｇ３もしくはＨＬＡ－Ｇ７ポリペプチドのアルファ１ドメイン）、ならびに膜アンカー（例えば、ＧＰＡ膜貫通ドメイン）を含むか、またはそれらからなる一本鎖融合ポリペプチドであり、一本鎖融合ポリペプチドは、任意選択的に、外因性抗原性ポリペプチドに連結されている。
外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドおよび外因性免疫原性ポリペプチドを表面上に含む操作された赤血球系細胞（例えば、操作された除核赤血球系細胞）または除核細胞（例えば、改変された除核細胞）は、とりわけ、細胞表面上の外因性免疫原性ポリペプチドに対する対象における免疫寛容を誘導することができる。
いくつかの実施形態では、表面上に外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチド、および細胞内に外因性免疫原性ポリペプチドを含む操作された赤血球系細胞（例えば、操作された除核赤血球系細胞）または除核細胞（例えば、改変された除核細胞）は、とりわけ、外因性免疫原性ポリペプチドに対する対象における免疫寛容を誘導することができる。
例えば、本明細書に記載される操作された赤血球系細胞または除核細胞は、細胞が投与される対象において、潜在的な免疫応答から外因性免疫原性ポリペプチドをマスキングし得る。したがって、操作された赤血球系細胞および除核細胞は、細胞が投与される対象において、外因性免疫原性ポリペプチドに対する望ましくない免疫応答を誘導することなく外因性免疫原性ポリペプチドを投与することによって、または外因性免疫原性ポリペプチドに対する免疫応答の低減を誘導することによって、治療可能な疾患の治療に有利に使用され得る。
いくつかの実施形態では、外因性免疫原性ポリペプチドおよび外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドを含む操作された除核赤血球系細胞もしくは除核細胞、または細胞を含む医薬組成物は、疾患を治療するために対象に投与され得、外因性免疫原性ポリペプチドが単独で投与される場合の、外因性免疫原性ポリペプチドに対する対象における免疫応答と比較して、外因性免疫原性ポリペプチドに対する対象における免疫応答の低減をもたらす。他の実施形態では、外因性免疫原性ポリペプチドおよび外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドを含む操作された除核赤血球系細胞もしくは除核細胞、または細胞を含む医薬組成物は、疾患を治療するために対象に投与され得、外因性免疫原性ポリペプチドが外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドを欠く複数の操作された除核赤血球系細胞の表面上に存在するときに対象に投与される場合の、外因性免疫原性ポリペプチドに対する対象における免疫応答と比較して、外因性免疫原性ポリペプチドに対する対象における免疫応答の低減をもたらす。
いくつかの実施形態では、細胞表面上に外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドおよび外因性免疫原性ポリペプチド、ならびに任意選択的に本明細書に記載されるような外因性抗原性ポリペプチドを含む、操作された赤血球系細胞または除核細胞は、細胞が投与される対象において外因性免疫原性ポリペプチドに対する長期免疫寛容を誘導する。例えば、本明細書に記載される操作された赤血球系細胞または除核細胞は、樹状細胞（ＤＣ）の成熟を阻害すること、樹状細胞（ＤＣ）のアネルギーを誘導すること、本明細書に記載される操作された除核赤血球系細胞もしくは除核細胞が接触するＣＤ４＋ Ｔ細胞の制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）への分化を誘導すること、および／または本明細書に記載される操作された除核赤血球系細胞もしくは除核細胞が接触するＣＤ８＋ Ｔ細胞の制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）への分化を誘導することができる。
他の実施形態では、細胞表面上に外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドおよび外因性免疫原性ポリペプチド、ならびに任意選択的に本明細書に記載されるような外因性抗原性ポリペプチドを含む、操作された赤血球系細胞または除核細胞は、細胞が投与される対象において外因性免疫原性ポリペプチドに対する短期免疫寛容を誘導する。例えば、本明細書に記載される操作された赤血球系細胞または除核細胞は、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、もしくはＢ細胞）のアポトーシスを誘導すること、ならびに／または免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、もしくはＢ細胞）の活性化、分化、および／もしくは増殖を阻害すること、Ｔ細胞もしくはＮ細胞の細胞傷害を阻害すること、ならびに／または細胞分泌、またはＢ細胞による抗体分泌を阻害することができる。
いくつかの実施形態では、操作された赤血球系細胞または除核細胞は、細胞表面上に外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチド、および細胞中に外因性免疫原性ポリペプチド、ならびに任意選択的に本明細書に記載されるような１つ以上の外因性抗原性ポリペプチドおよび／または１つ以上の外因性共阻害性ポリペプチドを含み、細胞が投与される対象において外因性免疫原性ポリペプチドに対する長期免疫寛容を誘導する。例えば、本明細書に記載される操作された赤血球系細胞または除核細胞は、樹状細胞（ＤＣ）の成熟を阻害すること、樹状細胞（ＤＣ）のアネルギーを誘導すること、本明細書に記載される操作された除核赤血球系細胞もしくは除核細胞が接触するＣＤ４＋ Ｔ細胞の制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）への分化を誘導すること、および／または本明細書に記載される操作された除核赤血球系細胞もしくは除核細胞が接触するＣＤ８＋ Ｔ細胞の制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）への分化を誘導することができる。
他の実施形態では、操作された赤血球系細胞または除核細胞は、細胞表面上に外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチド、および細胞内に外因性免疫原性ポリペプチド、ならびに任意選択的に本明細書に記載されるような１つ以上の外因性抗原性ポリペプチドおよび／または１つ以上の外因性共阻害性ポリペプチドを含み、細胞が投与される対象において外因性免疫原性ポリペプチドに対する短期免疫寛容を誘導する。例えば、本明細書に記載される操作された赤血球系細胞または除核細胞は、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、もしくはＢ細胞）のアポトーシスを誘導すること、ならびに／または免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、もしくはＢ細胞）の活性化、分化、および／もしくは増殖を阻害すること、Ｔ細胞もしくはＮ細胞の細胞傷害を阻害すること、ならびに／または細胞分泌、またはＢ細胞による抗体分泌を阻害することができる。
また、少なくとも１つの外因性自己抗原性ポリペプチド（例えば、本明細書に記載されるか、または当該技術分野で既知の例示的な外因性自己抗原性ポリペプチドのいずれか）、および少なくとも１つの外因性共阻害性ポリペプチド（例えば、本明細書に記載されるか、または当該技術分野で既知の例示的な外因性共阻害性ポリペプチドのいずれか）を含む、操作された除核赤血球系細胞も本明細書に提供される。
操作された除核赤血球系細胞のいずれかに存在することができる外因性自己抗原性ポリペプチドおよび外因性共阻害性ポリペプチドの追加の非限定的な態様が、本明細書に記載される（かつ任意の組み合わせで使用され得る）。
本開示のいくつかの実施形態では、操作された赤血球系細胞は、操作された除核赤血球系細胞、例えば、網状赤血球または赤血球である。いくつかの実施形態では、除核細胞（例えば、改変された除核細胞）は、網状赤血球、赤血球、または血小板である。
本明細書に記載される操作された赤血球系細胞（例えば、操作された除核赤血球系細胞）または除核細胞（例えば、改変された除核細胞）および方法の多くの修正および他の実施形態は、本開示が前述の説明および関連する図面に提示される教示の利点を有する当業者によって容易に想到されるであろう。したがって、本明細書の開示が、開示される特定の実施形態に限定されるものではなく、修正および他の実施形態が、添付の特許請求の範囲内に含まれるよう意図されることが理解されるべきである。特定の用語が本明細書で用いられるが、これらは一般的かつ説明的な意味でのみ使用され、限定の目的には使用されない。
定義
本明細書および添付の特許請求の範囲で使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、内容が明確にそうでないと指示しない限り、複数の参照を含む。
選択肢（例えば、「または」）の使用は、選択肢の一方、両方、またはそれらの任意の組み合わせのいずれかを意味すると理解されるべきである。
本明細書で使用される場合、「約」という用語は、量、持続時間などの測定可能な値を指す場合、指定された値からの±２０％または±１０％、より好ましくは±５％、さらにより好ましくは±１％、およびさらにより好ましくは±０．１％の変動を包含することを意図し、これは、そのような変動が、開示された方法を実施するのに適切であるためである。
本明細書で使用される場合、別段の指示がない限り、任意の濃度範囲、パーセンテージ範囲、比率範囲、または整数範囲は、列挙された範囲内の任意の整数の値、および適切な場合、その分数（例えば、整数の１０分の１および１００分の１など）を含むと理解されるべきである。
本明細書で使用される場合、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、「含むこと（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、および「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」、ならびに「で構成される（ｃｏｍｐｒｉｓｅｄ ｏｆ）」は、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅ）」、「含むこと（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」、または「含有する（ｃｏｎｔａｉｎ）」、「含有すること（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」、「含有する（ｃｏｎｔａｉｎｓ）」と同義であることを意図し、後に続くもの、例えば、構成要素の存在を指定する包括的または非限定的な用語であり、当該技術分野で既知の、またはその中に開示された追加の、列挙されていない構成要素、特徴、要素、部材、工程の存在を排除または除外しない。
本明細書で使用される場合、「など」、「例えば」などの用語は、例示的な実施形態を指し、本開示の範囲を限定するものではないことが意図される。
別段の定義がない限り、本明細書で使用される全ての技術用語および科学用語は、本開示が関連する当業者によって一般に理解される意味と同じ意味を有する。本明細書に記載されるものと類似または同等の任意の方法および材料が、本開示の試験のための実践において使用され得るが、好ましい材料および方法が本明細書に記載される。
本明細書で使用される場合、「コドン最適化」という用語は、核酸分子によってコードされるポリペプチドを変化させることなく、宿主生物（例えば、ヒト赤血球系細胞）の典型的なコドン使用を反映するような、核酸分子の遺伝子またはコード領域におけるコドンの改変を指す。そのような最適化は、少なくとも１つ、または２つ以上、またはかなりの数のコドンを、宿主生物の遺伝子においてより頻繁に使用される１つ以上のコドンで置き換えることを含む。コドン最適化は、コード配列から転写された転写ＲＮＡ分子の発現宿主細胞または生物における翻訳を改善し得るか、またはコード配列の転写を改善し得る。
本明細書で使用される場合、「用量」および「投与量」は、所与の時間にわたって対象に投与するための薬理学的に活性な材料の特定の量を指すために、本明細書において互換的に使用される。別段の指定がない限り、列挙される用量は、本明細書に記載されるように、少なくとも１つの外因性ポリペプチドおよび少なくとも１つの外因性免疫原性ポリペプチドを含む、複数の操作された赤血球系細胞または除核細胞を指す。
本明細書で使用される場合、「クリックケミストリー」という用語は、連結された生成物の簡便な産生のために、第１の部分および第２の部分を共有結合的に連結するために使用される様々な反応を指す。これは、典型的には、以下の特徴のうちの１つ以上を有する：高速である、特異的である、高収率である、効率的である、自然発生的である、連結された実体の生体適合性を有意に変化させない、高い反応速度を有する、安定した生成物を産生する、単一の反応生成物の産生に有利である、高い原子経済を有する、化学選択的である、モジュール式である、立体選択的である、酸素に対して非感受性である、水に対して非感受性である、純度が高い、非クロマトグラフ法（例えば、結晶化もしくは蒸留）によって除去され得る害にならないもしくは比較的非毒性の副生成物のみを生成する、溶媒を必要としない、または生理学的条件下において安定して、無害もしくは生理学的に適合性のある溶媒、例えば、水中で実施され得る。例としては、アルキン／アジド反応、ジエン／ジエノフィル反応、またはチオール／アルケン反応が挙げられる。他の反応が使用され得る。いくつかの実施形態では、クリックケミストリーは、高速、特異的、および高収率である。
本明細書で使用される場合、「クリックケミストリーハンドル」という用語は、クリックシグネチャーを産生するために、クリック反応において第２のクリックケミストリーハンドルと反応することができる化学部分を指す。いくつかの実施形態では、クリックケミストリーハンドルは、カップリング試薬によって構成され、カップリング試薬は、基質反応性部分をさらに含み得る。
本明細書で使用される場合、「内因性」という用語は、化合物（例えば、小分子）またはプロセスの天然型を指すことを意図する。例えば、いくつかの実施形態では、「内因性」という用語は、生物もしくは細胞中、または生物もしくは細胞のゲノム中のその天然位置における核酸またはポリペプチドの天然型を指す。
本明細書で使用される場合、「操作された細胞」という用語は、遺伝子改変された細胞またはその子孫を指す。
本明細書で使用される場合、「除核細胞」という用語は、（例えば、赤血球生成などの分化プロセスにより）核を欠く細胞を指す。いくつかの実施形態では、除核細胞は、ポリペプチドを発現することができない。いくつかの実施形態では、除核細胞は、赤血球、網状赤血球、または血小板である。
本明細書で使用される場合、「操作された除核細胞」は、遺伝子改変された有核細胞またはその子孫に由来し、（例えば、分化により）核を欠く細胞を指す。いくつかの実施形態では、操作された除核細胞は、操作された除核細胞が由来した遺伝子改変された有核細胞またはその子孫（例えば、除核前）によって産生された外因性ポリペプチドを含む。
本明細書で使用される場合、「操作された赤血球系細胞」は、遺伝子改変された赤血球系細胞またはその子孫を指す。操作された赤血球系細胞は、操作された有核赤血球系細胞（例えば、遺伝子改変された赤血球系前駆細胞）および操作された除核赤血球系細胞（例えば、遺伝子改変された赤血球系前駆細胞に由来した網状赤血球および赤血球）を含む。
本明細書で使用される場合、「操作された除核赤血球系細胞」は、遺伝子改変された有核赤血球系細胞またはその子孫に由来し、（例えば、分化により）核を欠く赤血球系細胞を指す。いくつかの実施形態では、操作された除核赤血球系細胞は、遺伝子改変された有核赤血球系細胞またはその子孫に由来した赤血球または網状赤血球を含む。いくつかの実施形態では、操作された除核赤血球系細胞は、不死化有核赤血球系細胞またはその子孫に由来しなかった。
本明細書で使用される場合、「赤血球系前駆細胞」は、網状赤血球または赤血球に分化することができる細胞を指す。一般に、赤血球系前駆細胞は、有核である。赤血球系前駆細胞は、臍帯血幹細胞、ＣＤ３４＋細胞、造血幹細胞（ＨＳＣ）、脾臓コロニー形成（ＣＦＵ－Ｓ）細胞、一般的な骨髄前駆細胞（ＣＭＰ）、芽球コロニー形成細胞、バースト形成単位－赤血球系（ＢＦＵ－Ｅ）、巨核球－赤血球系前駆（ＭＥＰ）細胞、赤血球系コロニー形成単位（ＣＦＵ－Ｅ）、人工多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）、間葉幹細胞（ＭＳＣ）、多染性正赤芽球、および正染性正赤芽球を含む。いくつかの実施形態では、赤血球系前駆細胞は、不死または不死化細胞である。例えば、不死化赤芽球細胞は、ＣＤ３４＋造血前駆細胞のレトロウイルス形質導入によって生成されて、Ｏｃｔ４、Ｓｏｘ２、Ｋｌｆ４、ｃＭｙｃを発現し、ＴＰ５３を抑制することができる（例えば、Ｈｕａｎｇ ｅｔ ａｌ．（２０１４）Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．２２（２）：４５１－６３を参照されたく、その全内容は、参照により本明細書に組み込まれる）。
本明細書で使用される場合、「外因性核酸」という用語は、細胞に天然ではないが、細胞または細胞の前駆細胞に導入される核酸（例えば、遺伝子）を指す。外因性核酸は、細胞に天然の内因性核酸と相同であるか、または同一である領域またはオープンリーディングフレーム（例えば、遺伝子）を含み得る。いくつかの実施形態では、外因性核酸は、ＲＮＡを含む。いくつかの実施形態では、外因性核酸は、ＤＮＡを含む。いくつかの実施形態では、外因性核酸は、細胞のゲノムに組み込まれる。いくつかの実施形態では、外因性核酸は、細胞機構によって処理されて、外因性ポリペプチドを産生する。いくつかの実施形態では、外因性核酸は、外因性核酸が導入された細胞または細胞の前駆体である細胞によって保持されない。
本明細書で使用される場合、ポリペプチドに関する「外因性」という用語は、細胞中もしくは細胞上に導入されるか、または外因性ポリペプチドをコードする外因性核酸を細胞もしくは細胞の前駆体に導入することによって細胞によって発現されるポリペプチドを指す。いくつかの実施形態では、外因性ポリペプチドは、細胞または細胞の前駆体に導入された外因性核酸によってコードされたポリペプチドであり、この核酸は、任意選択的に細胞によって保持されない。いくつかの実施形態では、外因性ポリペプチドは、化学的または酵素的手段によって細胞の表面にコンジュゲートされたポリペプチドである。
本明細書で使用される場合、「発現する」または「発現」という用語は、転写および翻訳を含む、細胞がポリペプチドを産生するプロセスを指す。細胞中の特定のポリペプチドの発現は、ポリペプチドをコードする遺伝子のコピー数の増加、遺伝子の転写の増加、およびポリペプチドをコードするｍＲＮＡの翻訳の増加を含むがこれらに限定されない、いくつかの異なるアプローチを使用して増加し得る。
本明細書で使用される場合、外因性ポリペプチドまたは核酸に関する「第１の」、「第２の」、「第３の」などの用語は、２つ以上のタイプの外因性ポリペプチドまたは核酸がある場合の区別の便宜上使用される。これらの用語の使用は、明示的な記載がない限り、外因性ポリペプチドまたは核酸の特定の順序または配向を与えることを意図していない。
本明細書で使用される場合、「核酸分子」という用語は、デオキシリボヌクレオチド塩基および／またはリボヌクレオチド塩基の一本鎖または二本鎖ポリマーを指す。これには、染色体ＤＮＡ、プラスミド、ベクター、ｍＲＮＡ、ｔＲＮＡ、ｓｉＲＮＡなどが含まれるが、これらに限定されず、これらは、組換えであってもよく、核酸が細胞内に導入されたときに外因性ポリペプチドが発現され得る。
本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される担体」という用語は、用いられる投与量および／または濃度で、それに曝露される哺乳動物に対して毒性または有害ではない、標準的な薬学的賦形剤、担体、または安定剤のいずれかを含む。
本明細書で使用される場合、「ポリペプチド」、「ペプチド」、および「タンパク質」という用語は、アミノ酸残基のポリマーを指すために、本明細書において互換的に使用される。「ポリペプチド」、「ペプチド」、および「タンパク質」という用語はまた、グリコシル化、リン酸化、脂質付着、硫酸化、グルタミン酸残基のガンマ－カルボキシル化、ヒドロキシル化、およびＡＤＰ－リボシル化を含む改変を含むが、これらに限定されない。周知であり、上述のように、ポリペプチドは完全に直鎖状ではない場合があることが理解されるであろう。例えば、ポリペプチドは、ユビキチン化の結果として分岐状であり得、それらは、一般に、自然の処理事象および自然に発生しないヒトの操作によってもたらされる事象を含む、翻訳後処理の結果として、分岐を伴うかまたは伴わない環状であり得る。
本明細書で使用される場合、本明細書において「組換え」と称されるポリペプチドは、組換えＤＮＡ方法によって産生されたポリペプチドを指し、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）および／または制限酵素を使用したベクターへのクローニングなどの人工組換えの方法に依存する手順によって生成されるものを含む。
本明細書で使用される場合、「対象」、「個人」、および「患者」という用語は、本明細書において互換的に使用され、診断、治療、または療法が望まれる任意の哺乳動物対象、特にヒトを指す。本明細書に記載される方法は、ヒト療法および獣医学用途の両方に適用可能である。いくつかの実施形態では、対象は、哺乳動物（例えば、ヒト対象）である。いくつかの実施形態では、対象は、非ヒト哺乳動物（例えば、マウス、ラット、モルモット、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、ブタ、ウサギ、ヒツジ、またはサル、チンパンジー、もしくはヒヒなどの非ヒト霊長類）である。
本明細書で使用される場合、「治療有効量」および「有効量」という用語は、意図される利益（例えば、症状の防止、予防、症状の発症の遅延、または疾患の症状の改善）を提供するのに十分である活性薬剤（例えば、本明細書に記載される操作された赤血球系細胞または除核細胞）の量を指すために、互換的に使用される。予防的または防止的用途では、有効量は、疾患、障害、もしく状態にかかりやすいか、またはそうでなければ発症するリスクがある対象に投与されて、そのリスクを除去もしくは低減するか、重症度を軽減するか、またはその疾患、障害、もしくは状態の発症を遅らせることができ、これらは、疾患、障害、もしくは状態の生化学的、組織学的、および／もしくは行動的症状、その合併症、ならびに中間病理表現型を含む。
本明細書で使用される場合、「治療効果」という用語は、治療の結果を指し、その結果は、望ましく、有益であると判断される。治療効果は、直接的または間接的に、疾患兆候の停止、低減、または除去を含み得る。治療効果はまた、直接的または間接的に、疾患兆候の進行の停止、低減、または除去を含み得る。本明細書で使用される場合、「治療する」、「治療すること」、および／または「治療」という用語は、障害、疾患、もしくは状態の進行を実質的に阻害、実質的に阻害する、遅延させる、もしくは逆転させること、障害、疾患、もしくは状態の臨床症状を実質的に改善すること、または障害、疾患、もしくは状態の臨床症状の出現を実質的に予防することにより、有益なまたは所望の臨床結果を得ることを含む。治療とは、以下のうちの１つ以上を達成することをさらに指す：（ａ）障害、疾患、または状態の重症度を低減すること、（ｂ）治療される障害、疾患、または状態に特徴的な症状の発現を制限すること、（ｃ）治療される障害、疾患、または状態に特徴的な症状の悪化を制限すること、（ｄ）障害、疾患、または状態を以前に有していた対象において、障害、疾患、または状態の再発を制限すること、および（ｅ）障害、疾患、または状態について以前に無症状であった対象において、症状の再発を制限すること。薬理学的および／または生理学的効果などの有益なまたは所望の臨床結果には、疾患、障害、または状態にかかりやすいが、疾患の症状をまだ経験していないまたは呈していない対照における疾患、障害、または状態の発生の予防（予防的処置）、疾患、障害、または状態の症状の軽減、疾患、障害、または状態の程度の減少、疾患、障害、または状態の安定化（すなわち、悪化させないこと）、疾患、障害、または状態の拡大の予防、疾患、障害、または状態の進行の遅延または減速、疾患、障害、または状態の改善または緩和、およびそれらの組み合わせ、ならびに治療を受けていない場合に予想される生存と比較した生存の延長が含まれるが、これらに限定されない。
本明細書で使用される場合、ポリペプチドの「バリアント」という用語は、参照ポリペプチドと比較して、少なくとも１つのアミノ酸残基の差、例えば、１つ以上の置換、挿入、または欠失を有するポリペプチドを指す。いくつかの実施形態では、バリアントは、そのポリペプチドに対して少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する。バリアントは、断片（例えば、免疫原性ポリペプチドの酵素的に活性な断片（例えば、酵素））を含んでもよい。いくつかの実施形態では、断片は、完全長ポリペプチドと比較して、ポリペプチドのＮ末端、Ｃ末端、または両端上で（各々独立して）最大約１、２、３、４、５、１０、２０、３０、４０、５０、または１００個のアミノ酸残基を欠いてもよい。バリアントは、自然に発生し得るか、または非自然発生的であり得る。非自然発生的なバリアントは、当該技術分野で既知の変異誘発方法を使用して生成され得る。バリアントポリペプチドは、保存的または非保存的アミノ酸置換、欠失、または付加を含み得る。
本明細書で使用される場合、核酸およびアミノ酸配列に関する「配列同一性」または「同一性」という用語は、最大の配列同一性パーセントを達成するために配列をアラインメントし、必要に応じてギャップを導入した後の、配列同一性の一部としていかなる保存的置換も考慮しない、参照配列中のアミノ酸残基またはヌクレオチドと同一である候補配列中のアミノ酸残基またはヌクレオチドのパーセンテージを指す。比較のための配列の最適なアラインメントは、手動の他に、Ｓｍｉｔｈ ａｎｄ Ｗａｔｅｒｍａｎ，１９８１，Ａｄｓ Ａｐｐ．Ｍａｔｈ．２，４８２の局所相同性アルゴリズムによって、Ｎｅｄｄｌｅｍａｎ ａｎｄ Ｗｕｎｓｃｈ，１９７０，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８，４４３の局所相同性アルゴリズムによって、Ｐｅａｒｓｏｎ ａｎｄ Ｌｉｐｍａｎ，１９８８，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５，２４４４の類似検索法によって、または、これらのアルゴリズムを使用するコンピュータプログラム（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｐａｃｋａｇｅ，Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ，５７５ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｄｒｉｖｅ，Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓ．のＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡ、ＢＬＡＳＴ Ｐ、ＢＬＡＳＴ Ｎ、およびＴＦＡＳＴＡ）によってもたらされ得る。
本明細書で使用される場合、「外因性免疫原性ポリペプチド」という用語は、単独で、または担体（例えば、操作された赤血球系細胞（例えば、操作された除核赤血球系細胞）もしくは除核細胞（例えば、改変された除核細胞））の中もしくは上のいずれかで、対象に投与されたときに、細胞および／または液性免疫応答を誘発する外因性ポリペプチドを指す。外因性免疫原性ポリペプチドは、任意の供給源に由来し得る。いくつかの実施形態では、外因性免疫原性ポリペプチドは、ヒトポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、外因性免疫原性ポリペプチドは、同種反応性ポリペプチド（例えば、ヒト同種反応性ポリペプチド）を含む。他の実施形態では、外因性免疫原性ポリペプチドは、非ヒトポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、外因性免疫原性ポリペプチドは、細菌、植物、酵母、真菌、ウイルス、プリオン、または原生動物に由来する非ヒトポリペプチドを含む。
本明細書で使用される場合、「外因性自己抗原性ポリペプチド」という用語は、哺乳動物において自己抗原（例えば、自己免疫性障害に関連する自己抗原）に対する免疫寛容を誘発または誘導することができる外因性ポリペプチドを指す。
本明細書で使用される場合、「外因性自己抗原性ポリペプチド」という用語は、哺乳動物において自己抗原（例えば、自己免疫性障害に関連する自己抗原）に対する免疫寛容を誘発または誘導することができる外因性ポリペプチドを指す。
本明細書で使用される場合、「アミノ酸分解ポリペプチド」は、基質としてアミノ酸を利用し、アミノ酸の代謝産物または分解産物への変換を触媒するポリペプチド（例えば、酵素）を指す。いくつかの実施形態では、アミノ酸分解ポリペプチドは、アミノ酸残基中の結合を加水分解する。アミノ酸分解ポリペプチドは、野生型ポリペプチドまたは改変されたポリペプチドの両方を含み得る。いくつかの実施形態では、アミノ酸分解ポリペプチドは、アスパラギナーゼポリペプチド、フェニルアラニンアンモニウムリアーゼ（ＰＡＬ）ポリペプチド、フェニルアラニンヒドロキシラーゼ（ＰＡＨ）ポリペプチド、ホモシステイン低減ポリペプチド、またはホモシステイン分解ポリペプチドである。
本明細書で使用される場合、「アスパラギナーゼポリペプチド」という用語は、Ｌ－アスパラギンを、例えば、アスパラギン酸およびアンモニア）に分解する（本明細書においてアスパラギン分解活性とも称される）、任意のポリペプチドを指す。いくつかの実施形態では、アスパラギナーゼポリペプチドは、アスパラギン分解活性およびグルタミン分解活性（すなわち、グルタミナーゼ活性）の両方を有する。本明細書で使用される場合、「グルタミン分解活性」は、グルタミンのグルタミン酸塩およびアンモニアへの加水分解を触媒する酵素の能力を指す。したがって、いくつかの実施形態では、アスパラギナーゼポリペプチドは、アスパラギンおよびグルタミンのアスパラギン酸およびグルタミン酸のそれぞれ、ならびにアンモニアへの加水分解を触媒する。いくつかの実施形態では、アスパラギナーゼポリペプチドは、グルタミン分解活性を欠く。アスパラギナーゼポリペプチドのアスパラギン分解活性またはグルタミン分解活性を分析するための方法は、例えば、Ｇｅｒｖａｉｓ ａｎｄ Ｆｏｏｔｅ（２０１４）Ｍｏｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．４５（１０）：８６５－８７７に記載され、これは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。アスパラギナーゼポリペプチドは、野生型ポリペプチドまたは改変されたポリペプチドの両方を含み得る。
本明細書で使用される場合、「ホモシステイン低減ポリペプチド」は、（例えば、本明細書に記載されるような操作された赤血球系細胞（例えば、操作された除核赤血球系細胞）または除核細胞（例えば、改変された除核細胞）の上または中で）対象に投与されたときに、対象における、例えば、対象の血漿または血清中の、ホモシステインまたはその代謝産物のうちのいずれか１つ以上のレベルを低減する効果を有する、任意のポリペプチドを指す。本明細書で使用される場合、ホモシステイン低減ポリペプチドは、基質としてホモシステインを利用せず、すなわち、本明細書で使用されるようなホモシステイン分解ポリペプチドを含まない。いくつかの実施形態では、ホモシステイン代謝産物には、例えば、ジスルフィドホモシステイン（Ｈｃｙ－Ｓ－Ｓ－Ｈｃｙ）、ＨｃｙおよびＣｙｓの混合ジスルフィド（Ｈｃｙ－Ｓ－Ｓ－Ｃｙｓ）、Ｈｃｙおよび血漿タンパク質の混合ジスルフィド（Ｓ－Ｈｃｙ－タンパク質）、Ｈｃｙ－チオラクトン、Ｎ－Ｈｃｙ－タンパク質、Ｎε－Ｈｃｙ－Ｌｙｓ、ＡｄｏＨｃｙ、シスタチオニン、ホモシステインスルフィン酸、ホモシステイン酸、およびメチオニンが含まれる。ホモシステイン低減ポリペプチドは、野生型ポリペプチドまたは改変されたポリペプチドの両方を含み得る。ホモシステイン低減ポリペプチドを含む外因性ポリペプチドを含む赤血球系細胞および除核細胞は、対象においてホモシステイン関連疾患を治療するために、またはホモシステインレベルおよび／もしくはメチオニンレベルを低減するために使用され得る。
本明細書で使用される場合、「ホモシステイン分解ポリペプチド」は、基質としてホモシステインを利用し、ホモシステインをホモシステインの代謝産物または分解生成物に変換する、任意のポリペプチドを指す。ホモシステイン分解ポリペプチドは、野生型ポリペプチドまたは改変されたポリペプチドの両方を含み得る。ホモシステイン分解ポリペプチドを含む外因性ポリペプチドを含む赤血球系細胞および除核細胞は、対象においてホモシステイン関連疾患を治療するために、またはホモシステインレベルおよび／もしくはメチオニンレベルを低減するために使用され得る。
本明細書で使用される場合、「尿酸分解ポリペプチド」は、尿酸を異化または分解する任意のポリペプチドを指す。尿酸分解ポリペプチドの例には、尿酸オキシダーゼ（ウリカーゼとしても既知）、アラントイナーゼ、およびアラントイカーゼが含まれる。尿酸分解ポリペプチドの他の例は、本明細書に記載され、限定することを意図していない。いくつかの実施形態では、尿酸分解ポリペプチドは、尿酸の加水分解を触媒する。
本明細書で使用される場合、「がん」という用語は、白血病、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、肛門がん、胆管がん、膀胱がん、骨がん、腸がん、脳腫瘍、乳がん、カルチノイド、子宮頸がん、絨毛がん、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、結腸がん、結腸直腸がん、子宮内膜がん、眼がん、胆嚢がん、胃がん、妊娠性絨毛腫瘍（ＧＴＴ）、有毛細胞白血病、頭頸部がん、ホジキンリンパ腫、腎臓がん、喉頭がん、肝臓がん、肺がん、リンパ腫、黒色腫、皮膚がん、中皮腫、口腔または口腔咽頭がん、骨髄腫、鼻腔または副鼻腔がん、鼻咽腔がん、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、食道がん、卵巣がん、膵臓がん、陰茎がん、前立腺がん、直腸がん、唾液腺がん、非黒色腫皮膚がん、軟部組織肉腫、腹部がん、精巣がん、甲状腺がん、子宮がん、膣がん、および外陰がんを含む、任意のがんを含む。
本明細書で使用される場合、「尿酸関連疾患」という用語は、対象（例えば、ヒト対象）における過剰な尿酸に関連する疾患を指す。いくつかの実施形態では、尿酸関連疾患は、高尿酸血症、無症候性高尿酸血症、高尿酸尿症、痛風（例えば、慢性難治性痛風）、レッシュ・ナイハン症候群、尿酸腎結石症（ｕｒｉｃ ａｃｉｄ ｎｅｐｈｒｏｌｏｔｈｉａｓｉｓ）、血管状態、糖尿病、メタボリックシンドローム、炎症応答、認知障害、関節リウマチ、変形性関節炎、脳卒中、虚血性心疾患、不整脈、および慢性腎疾患から選択される。
本明細書で使用される場合、「ホモシステイン関連疾患」という用語は、対象（例えば、ヒト対象）における過剰なホモシステインに関連する疾患、および／またはグリオキシル酸塩などのすぐ上流のホモシステインまたは分子の異常な（例えば、増加した）レベルを伴う疾患を指す。いくつかの実施形態では、ホモシステイン関連疾患は、ホモシスチン尿症である。いくつかの実施形態では、ホモシスチン尿症は、症候性ホモシスチン尿症である。他の実施形態では、ホモシスチン尿症は、無症候性ホモシスチン尿症である。
本明細書で使用される場合、「外因性抗原性ポリペプチド」という用語は、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドの抗原結合裂に結合することができる外因性ポリペプチドを指す。本明細書で使用される場合、外因性抗原性ポリペプチドは、外因性免疫原性ポリペプチドとは異なる。
「ＨＬＡ－Ｇポリペプチド」および「ＨＬＡ－Ｇ」という用語は、ヒトＨＬＡクラスＩの組織適合性抗原、アルファ鎖Ｇポリペプチドのα重鎖の１つ以上のアルファドメイン（例えば、アルファ１、アルファ２、およびアルファ３ドメイン）を含むポリペプチドを指すために、本明細書において互換的に使用される。ＨＬＡ－Ｇの完全長α重鎖は、約４５ｋＤａであり、その遺伝子は、８つのエクソンを含有する。エクソン１は、リーダーペプチドをコードし、エクソン２および３は、アルファ１およびアルファ２ドメイン（両方ともペプチドに結合する）をコードし、エクソン４は、アルファ３ドメインをコードし、エクソン５は、膜貫通領域をコードし、エクソン６は、細胞質尾部をコードする。本明細書に記載されるように、いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、３つすべてより少ない内因性アルファドメインを含み得る（すなわち、ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、アルファドメインの１つ、２つ、または３つを含み得る）。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、自然発生的ＨＬＡ－Ｇポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、アルファ１、アルファ２、およびアルファ３ドメインのうちの１つ以上）を含み、自然発生的ＨＬＡ－Ｇポリペプチドの膜貫通ドメインおよび細胞質尾部を除外する。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、ＨＬＡ－Ｇ１またはＨＬＡ－Ｇ５アイソフォームポリペプチドのアルファ１、アルファ２、およびアルファ３ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、ＨＬＡ－Ｇ１アイソフォームポリペプチド（例えば、ＨＬＡ－Ｇ１＊０１：０１対立遺伝子またはＨＬＡ－Ｇ１＊０１：０４対立遺伝子）のアルファ１、アルファ２、およびアルファ３ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、ＨＬＡ－Ｇ２またはＨＬＡ－Ｇ６アイソフォームポリペプチドのアルファ１およびアルファ３ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、ＨＬＡ－Ｇ４アイソフォームポリペプチドのアルファ１およびアルファ２ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｇ２ポリペプチドは、ＨＬＡ－Ｇ４アイソフォームポリペプチドのアルファ１およびアルファ２ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、ＨＬＡ－Ｇ３またはＨＬＡ－Ｇ７ポリペプチドのアルファ１ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは自然発生的ＨＬＡ－Ｇポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、アルファ１、アルファ２、およびアルファ３ドメインのうちの１つ以上）を含み、膜アンカー（例えば、グリコフォリンＡ（ＧＰＡ）膜貫通ドメイン）に融合している。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、自然発生的ＨＬＡ－Ｇポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、アルファ１、アルファ２、およびアルファ３ドメインのうちの１つ以上）を含み、ＨＬＡ－Ｇ細胞質ドメインを含む膜アンカー（例えば、ＧＰＡ膜貫通ドメイン）に融合している。本明細書に記載されるように、いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｇポリペプチドはまた、（例えば、一本鎖融合ポリペプチドとして）ヘテロ二量体を形成するために、軽鎖（すなわち、ベータ－２ミクログロブリンまたはβ２Ｍポリペプチド）に結合または連結されたＨＬＡ－Ｇ重鎖を含む。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、軽鎖（すなわち、β２Ｍポリペプチド）に結合または連結されていない。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、外因性抗原性ポリペプチドに結合するか、もしくはそれに結合されている、および／または膜アンカーに連結されている。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、「ＨＬＡ－Ｇ一本鎖融合ポリペプチド」を含み、ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、β２Ｍポリペプチドに連結されたＨＬＡ－Ｇ重鎖の１つ以上のアルファドメイン（例えば、アルファ１、アルファ２、およびアルファ３ドメインのうちの１つ以上）を含み、任意選択的に、β２Ｍポリペプチドは、外因性抗原性ポリペプチドに連結されている。いくつかの実施形態では、一本鎖融合ポリペプチドは、膜アンカー、例えば、ＧＰＡポリペプチドもしくはその膜貫通ドメイン、ＳＭＩＭ１ポリペプチドもしくはその膜貫通ドメイン、またはトランスフェリン受容体もしくはその膜貫通ドメインを含む。
本明細書で使用される場合、「免疫寛容」という用語は、対象における免疫活性化の阻害、低減、もしくは防止、または免疫応答の抑制もしくは阻害をもたらす任意の機構を指す。免疫寛容には、中枢性寛容および末梢性寛容が含まれる。いくつかの実施形態では、中枢性寛容は、一次リンパ器官、例えば、胸腺および骨髄における発生中の自己反応性Ｔ細胞およびＢ細胞の抗原特異的欠失を指す。いくつかの実施形態では、末梢性寛容は、一次リンパ器官の外側の成熟ＴおよびＢリンパ球の欠失または不活性化を指す。いくつかの実施形態では、末梢性寛容は、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）による自己反応性リンパ球の抑制、または共刺激性危険シグナルの非存在下での継続的な低用量の抗原への曝露による抗原特異的エフェクターリンパ球のアネルギーもしくは非応答性の誘導を含む。Ｔｒｅｇ活性化およびリンパ球アネルギーの両方が、例えば、ＴＧＦ－ベータ、ＩＬ－１０、およびＩＬ－４などの阻害因子の分泌によって誘導され得る。寛容の阻害効果は、長期または短期にわたって誘導され得る（すなわち、長期免疫寛容または短期免疫寛容）。
本明細書で使用される場合、「長期免疫寛容」という用語は、例えば、寛容の発生に寄与する制御性またはサプレッサーＴ細胞の誘導に関連する（例えば、外因性免疫原性ポリペプチドに対する）免疫応答に対する長期阻害効果を指す。いくつかの実施形態では、外因性ＨＬＡ－ＧポリペプチドとＩＬＴ４受容体との相互作用は、Ｔｒｅｇの誘導に有利であり、これは、そのような長期効果を開始することができる（例えば、参照により本明細書に組み込まれるＲｅｂｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ ＩｍｍｕｎｏｌＲｅｓ．２０１４；２０１４：２９７０７３を参照されたい）。いくつかの実施形態では、長期免疫寛容は、本明細書に記載される操作された赤血球系細胞または除核細胞が接触するＤＣの成熟を阻害することを含む。他の実施形態では、長期免疫寛容は、操作された赤血球系細胞または除核細胞が接触するＤＣのアネルギーを誘導することを含む。他の実施形態では、長期免疫寛容は、本明細書に記載される操作された赤血球系細胞もしくは除核細胞が接触するＣＤ４＋ Ｔ細胞のＴｒｅｇへの分化を誘導すること、または本明細書に記載される操作された赤血球系細胞もしくは除核細胞が接触するＣＤ８＋ Ｔ細胞のＴｒｅｇへの分化を誘導することを含む。
本明細書で使用される場合、「短期免疫寛容」という用語は、例えば、ＴおよびＮＫ細胞の細胞傷害の阻害、Ｔ、ＮＫ、およびＢ細胞増殖の阻害、ならびに／または抗体産生の阻害に関連する（例えば、外因性免疫原性ポリペプチドに対する）免疫応答に対する短期阻害効果を指す。短期免疫寛容は、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチド（例えば、外因性抗原性ポリペプチドに結合した）と、Ｔ、ＮＫ、およびＢ細胞上のＩＬＴ２受容体との相互作用、ならびにＴおよびＮＫ細胞上の同族阻害性受容体ヘテロ二量体ＣＤ９４およびＮＫＧ２Ａとの相互作用によって誘導され得る（例えば、参照により本明細書に組み込まれるＲｅｂｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｒｅｓ．２０１４；２０１４：２９７０７３を参照されたい）。いくつかの実施形態では、短期免疫寛容は、本明細書に提供される操作された赤血球系細胞または除核細胞が接触する免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、もしくはＢ細胞、もしくはそれらの集団）のアポトーシスを誘導すること、または活性化、分化、および／もしくは増殖を阻害することを含む。いくつかの実施形態では、短期免疫寛容は、本明細書に提供される操作された赤血球系細胞または除核細胞が接触するＴ細胞またはＮＫ細胞の細胞傷害を阻害することを含む。いくつかの実施形態では、短期免疫寛容は、本明細書に提供される操作された赤血球系細胞または除核細胞が接触するＢ細胞による抗体分泌を阻害することを含む。
本明細書で使用される場合、免疫寛容に関する「誘導する」という用語は、対象において免疫寛容、例えば、長期免疫寛容または短期免疫寛容を、直接的または間接的のいずれかで増加させること、刺激すること、または強化することを指す。
本明細書で使用される場合、免疫細胞に関する「抑制すること」または「阻害すること」という用語は、増殖、分化、サイトカイン分泌、細胞傷害性エフェクター分子放出、細胞傷害活性、および活性化マーカーの発現から選択される免疫細胞の１つ以上の阻害もしくは抑制を引き起こすか、もしくはもたらす、または免疫細胞のアネルギー化もしくは免疫細胞のアポトーシスの誘導をもたらす、プロセス（例えば、シグナル伝達事象）を指す。免疫細胞の阻害または抑制を測定する好適なアッセイは、当該技術分野で既知であり、本明細書に記載される。
本明細書で使用される場合、免疫応答に関する「低減する」という用語は、例えば、ＥＬＩＳＰＯＴアッセイ（細胞免疫応答）、ＩＣＳ（細胞内サイトカイン染色アッセイ）、および抗原特異的Ｔ細胞を検出および定量化するための、抗原特異的ＣＤ４＋ Ｔ細胞の血液集団を定量化するための、もしくは抗原特異的ＣＤ８＋ Ｔ細胞の血液集団を定量化するための主要組織適合複合体（ＭＨＣ）四量体アッセイによって測定されるような、または低減が、好適な対照と比較して少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％である、免疫応答の形態または特徴を減少させること、阻害すること、または抑制することを指す。
本明細書で使用される場合、「共阻害性ポリペプチド」という用語は、免疫細胞活性の阻害、免疫細胞増殖の阻害、免疫細胞のアネルギー化、または免疫細胞のアポトーシスの誘導を含む、免疫細胞を抑制する任意のポリペプチドを指す。いくつかの実施形態では、外因性共阻害性ポリペプチドは、免疫細胞上の同族共阻害性ポリペプチドに特異的に結合することができる。
「ポリＧＳリンカー」という用語は、グリシンおよびセリン（ＧＳ）のジペプチドの連続したコピーを１つ以上（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０）含むペプチド配列を意味する。ポリＧＳリンカーの非限定的な例は、本明細書に記載される。
「Ｉｉキーペプチド」という用語は、外因性自己抗原性ポリペプチドに対してＮ末端に位置付けられたとき、ＭＨＣクラスＩＩ分子の抗原結合裂への外因性自己抗原性ポリペプチドの結合を促進するペプチドである。Ｉｉキーペプチドの非限定的な例は、本明細書に記載される。Ｉｉキーペプチドの追加の例は、当該技術分野で既知である。
本明細書で使用される場合、「特異的に結合する」という用語は、目的のポリペプチドへのリガンドの結合を指す（他の非特異的なポリペプチドへのリガンドの非特異的な結合とは対照的に）。いくつかの実施形態において、結合は、共有結合である。他の実施形態において、結合は、非共有結合である。例えば、外因性抗原性ポリペプチドは、本明細書に記載されるように、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドに共有結合的または非共有結合的のいずれかで特異的に結合していてもよい。
Ｉ．操作された赤血球系細胞および除核細胞
本開示は、細胞の表面上に外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドおよび外因性免疫原性ポリペプチドを含むように操作され、細胞が対象に投与されたときに、外因性免疫原性ポリペプチドに対する免疫寛容（例えば、短期免疫寛容または長期免疫寛容）が誘導される、および／または外因性免疫原性ポリペプチドに対する免疫応答の低減が誘導される、操作された赤血球系細胞（例えば、操作された除核赤血球系細胞）または除核細胞（例えば、改変された除核細胞）である。
いくつかの実施形態では、本開示は、細胞表面上に、１つ以上の外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチド、および１つ以上の外因性免疫原性ポリペプチド、例えば、アミノ酸分解ポリペプチド（例えば、アスパラギナーゼポリペプチド、フェニルアラニンアンモニウムリアーゼ（ＰＡＬ）ポリペプチド、フェニルアラニンヒドロキシラーゼ（ＰＡＨ）ポリペプチド、ホモシステイン低減ポリペプチド、もしくはホモシステイン分解ポリペプチド）、尿酸分解ポリペプチド、シュウ酸オキシダーゼ、ｄ－アミノレブリン酸デヒドロゲナーゼ（ＡＬＡ－Ｄ）、または本明細書の表１もしくは表２に記載されるポリペプチドのうちの任意の１つ以上を含む、操作された赤血球系細胞または除核細胞を提供する。
いくつかの実施形態では、本開示は、表面上に１つ以上の外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチド、および細胞内に１つ以上の外因性免疫原性ポリペプチド、例えば、本明細書の表１または表２に記載されるポリペプチドのうちの任意の１つ以上を含む、操作された赤血球系細胞（例えば、操作された除核赤血球系細胞）または除核細胞（例えば、改変された除核細胞）を提供する。
操作された赤血球系細胞（例えば、操作された除核赤血球系細胞）または除核細胞（例えば、改変された除核細胞）のいずれかのいくつかの実施形態は、１つ以上の外因性抗原性ポリペプチド（例えば、本明細書に記載されるか、もしくは当該技術分野で既知の例示的な外因性抗原性ポリペプチドのいずれか）、および／または１つ以上の外因性共阻害性ポリペプチド（例えば、本明細書に記載されるか、もしくは当該技術分野で既知の例示的な共阻害性ポリペプチドのいずれか）をさらに含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の外因性抗原性ポリペプチドは、細胞表面上、細胞の細胞質中、原形質膜の細胞内表面上に存在し得るか、または細胞によって分泌もしくは放出され得る。いくつかの実施形態では、１つ以上の外因性阻害性ポリペプチドは、細胞表面上、細胞の細胞質中、原形質膜の細胞内表面上に存在し得るか、または細胞によって分泌／放出され得る。いくつかの実施形態では、１つ以上の外因性抗原性ポリペプチドは、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドによって結合されていない。いくつかの実施形態では、１つ以上の外因性抗原性ポリペプチドは、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドによって結合されている。いくつかの実施形態では、１つ以上の外因性共阻害性ポリペプチドは、外因性ＨＬＡ－Ｇによって結合されていない。
いくつかの実施形態では、本開示は、免疫原性ポリペプチド、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチド、および外因性抗原性ポリペプチドを含み、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドが、外因性抗原性ポリペプチドに結合（例えば、特異的に結合）している、操作された赤血球系細胞（例えば、操作された除核赤血球系細胞）または除核細胞（例えば、改変された除核細胞）を提供する。いくつかの実施形態では、本開示はまた、少なくとも１つの免疫原性ポリペプチド、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチド、および外因性抗原性ポリペプチドを含み、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドが、一本鎖融合ポリペプチドの一部として外因性抗原性ポリペプチドに連結されている、操作された赤血球系細胞または除核細胞も提供する（例えば、図１Ａを参照されたい）。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの免疫原性ポリペプチド、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチド、および外因性抗原性ポリペプチドを含み、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドが、外因性抗原性ポリペプチドに連結されていない（例えば、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドおよび外因性抗原性ポリペプチドが、２つの別個のポリペプチドである）、操作された赤血球系細胞または除核細胞も提供される。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される操作された赤血球系細胞および除核細胞のいずれかはまた、以下に記載されるように、外因性共阻害性ポリペプチドを含むがこれに限定されない、１つ以上の追加の外因性ポリペプチドを含んでもよい。
また、少なくとも１つの外因性自己抗原性ポリペプチド（例えば、本明細書に記載される、もしくは当該技術分野で既知の例示的な自己抗原性ポリペプチドのいずれかの１つ以上）、および少なくとも１つの外因性共阻害性ポリペプチド（例えば、本明細書に記載される例示的な共阻害性ポリペプチドのいずれかの１つ以上）を含む、操作された赤血球系細胞（例えば、操作された除核赤血球系細胞）または除核細胞（例えば、改変された除核細胞）も本明細書に提供される。これらの操作された赤血球系細胞または除核細胞のいくつかの実施形態では、細胞は、ＨＬＡ－Ｇポリペプチドまたはその機能的断片を含まない。これらの操作された赤血球系細胞または除核細胞のいくつかの実施形態では、細胞は、ＭＨＣポリペプチドまたはその機能的断片を含まない。
外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチド
本開示は、１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、またはそれ以上）の外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドを含む、操作された赤血球系細胞（例えば、操作された除核赤血球系細胞）または除核細胞（例えば、改変された除核細胞）を含む。いくつかの実施形態では、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、外因性抗原提示ＨＬＡ－Ｇポリペプチドである。いくつかの実施形態では、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドの抗原結合裂上に充填された（結合した）外因性抗原性ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、外因性抗原性ポリペプチドは、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドに共有結合的または非共有結合的のいずれかで結合していてもよい。いくつかの実施形態では、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドの抗原結合裂上に充填された（結合した）内因性抗原性ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、内因性または外因性抗原性ポリペプチドは、モチーフＸＩ／ＬＰＸＸＸＸＸＬを有するアミノ酸配列を含み、Ｘは、任意のアミノ酸（配列番号１）である。いくつかの実施形態では、外因性または内因性抗原性ポリペプチドは、ＲＩＩＰＲＨＬＱＬ（配列番号８４２）、ＫＬＰＡＱＦＹＩＬ（配列番号８４３）、またはＫＧＰＰＡＡＬＴＬ（配列番号８４４）から選択されるアミノ酸配列を含むか、またはそれらからなる。
いくつかの実施形態では、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、機能的ＨＬＡ－Ｇポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、ＨＬＡ－Ｇアルファ鎖のアルファドメイン（アルファ１、アルファ２、およびアルファ３ドメイン）のうちの１つ以上、またはその断片もしくはバリアントを含む。いくつかの実施形態では、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、ベータ－２ミクログロブリン（β２Ｍ）ポリペプチド、またはその断片もしくはバリアントを含む。いくつかの実施形態では、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、β２Ｍポリペプチド（またはその断片もしくはバリアント）に結合、例えば、共有結合または非共有結合したＨＬＡ－Ｇ鎖の１つ以上のアルファドメインを含む。いくつかの実施形態では、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、β２Ｍポリペプチド（またはその断片もしくはバリアント）を含まない。
いくつかの実施形態では、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、ＨＬＡ－Ｇ１アイソフォームポリペプチド、ＨＬＡ－Ｇ２アイソフォームポリペプチド、ＨＬＡ－Ｇ３アイソフォームポリペプチド、ＨＬＡ－Ｇ４アイソフォームポリペプチド、ＨＬＡ－Ｇ５アイソフォームポリペプチド、ＨＬＡ－Ｇ６アイソフォームポリペプチド、もしくはＨＬＡ－Ｇ７アイソフォームポリペプチド、またはそれらの断片（例えば、それらの１つ以上のアルファドメイン）を含むか、またはそれらからなる。いくつかの実施形態では、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、オリゴマー化する（例えば、二量体を形成する）ことができる。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、ＨＬＡ－Ｇ１＊０１：０１対立遺伝子のものである。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、ＨＬＡ－Ｇ１＊０１：０４対立遺伝子のものである。
いくつかの実施形態では、外因性抗原性ポリペプチドは、融合ポリペプチド、例えば、一本鎖融合ポリペプチドの一部として、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドに連結されている。いくつかの実施形態では、外因性抗原性ポリペプチドは、モチーフＸＩ／ＬＰＸＸＸＸＸＬを有するアミノ酸配列を含み、Ｘは、任意のアミノ酸（配列番号１）である。いくつかの実施形態では、外因性抗原性ポリペプチドは、ＲＩＩＰＲＨＬＱＬ（配列番号８４２）、ＫＬＰＡＱＦＹＩＬ（配列番号８４３）、およびＫＧＰＰＡＡＬＴＬ（配列番号８４４）から選択されるアミノ酸配列を含むか、またはそれらからなる。例えば、いくつかの実施形態では、外因性抗原性ポリペプチドに連結された外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、図１Ｂに記載される構造を有する。他の実施形態では、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、図１Ｃに記載される構造を有する。他の実施形態では、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、図１Ｄに記載される構造を有する。
いくつかの実施形態では、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、ＨＬＡ－Ｇポリペプチドの１つ以上のアルファドメイン１～３（例えば、アルファ１、アルファ２、およびアルファ３ドメイン）を含み、β２Ｍポリペプチドを含まない。いくつかの実施形態では、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、ＨＬＡ－Ｇポリペプチドの１つ以上のアルファドメイン１～３（例えば、アルファ１、アルファ２、およびアルファ３ドメイン）、ならびにβ２Ｍポリペプチドまたはその断片もしくはバリアントを含む。いくつかの実施形態では、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、ＨＬＡ－Ｇポリペプチドの１つ以上のアルファドメイン１～３（例えば、アルファ１、アルファ２、およびアルファ３ドメイン）、ならびに膜アンカー（例えば、ＧＰＡまたはその膜貫通ドメイン）を含む。いくつかの実施形態では、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、ＨＬＡ－Ｇポリペプチドの１つ以上のアルファドメイン１～３（例えば、アルファ１、アルファ２、およびアルファ３ドメイン）、β２Ｍポリペプチド（またはその断片もしくはバリアント）、ならびに膜アンカーを含む。いくつかの実施形態では、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、ＨＬＡ－Ｇポリペプチドの１つ以上のアルファドメイン１～３（例えば、アルファ１、アルファ２、およびアルファ３ドメイン）、膜アンカー、ならびに１つ以上のリンカー（例えば、可動性リンカー）を含む。いくつかの実施形態では、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、ＨＬＡ－Ｇポリペプチドの１つ以上のアルファドメイン１～３（例えば、アルファ１、アルファ２、およびアルファ３ドメイン）、β２Ｍポリペプチド（またはその断片もしくはバリアント）、膜アンカー、ならびに１つ以上のリンカー（例えば、可動性リンカー）を含む。いくつかの実施形態では、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、ＨＬＡ－Ｇポリペプチドの１つ以上のアルファドメイン１～３（例えば、アルファ１、アルファ２、およびアルファ３ドメイン）、膜アンカー、ならびに１つ以上のリンカー（例えば、可動性リンカー）を含み、外因性抗原性ポリペプチドに連結されている（例えば、リンカーを介して）。いくつかの実施形態では、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、ＨＬＡ－Ｇポリペプチドの１つ以上のアルファドメイン１～３（例えば、アルファ１、アルファ２、およびアルファ３ドメイン）、β２Ｍポリペプチド（またはその断片もしくはバリアント）、膜アンカー、ならびに１つ以上のリンカー（例えば、可動性リンカー）を含み、外因性抗原性ポリペプチドに連結されている（（例えば、リンカーを介して）。
いくつかの実施形態では、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、ＨＬＡ－Ｇ１アイソフォームポリペプチド（例えば、ＨＬＡ－Ｇ１＊０１：０１対立遺伝子またはＨＬＡ－Ｇ１＊０１：０４対立遺伝子）のアルファ１、アルファ２、およびアルファ３ドメインを含み、β２Ｍポリペプチドを含まない。いくつかの実施形態では、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、ＨＬＡ－Ｇ１アイソフォームポリペプチド（例えば、ＨＬＡ－Ｇ１＊０１：０１対立遺伝子またはＨＬＡ－Ｇ１＊０１：０４対立遺伝子）のアルファ１、アルファ２、およびアルファ３ドメイン、ならびにβ２Ｍポリペプチドまたはその断片もしくはバリアントを含む。いくつかの実施形態では、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、ＨＬＡ－Ｇ１アイソフォームポリペプチド（例えば、ＨＬＡ－Ｇ１＊０１：０１対立遺伝子またはＨＬＡ－Ｇ１＊０１：０４対立遺伝子）のアルファ１、アルファ２、およびアルファ３ドメイン、ならびに膜アンカーを含む。いくつかの実施形態では、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、ＨＬＡ－Ｇ１アイソフォームポリペプチドのアルファ１、アルファ２、およびアルファ３ドメイン、β２Ｍポリペプチド（またはその断片もしくはバリアント）、ならびに膜アンカーを含む。いくつかの実施形態では、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、ＨＬＡ－Ｇ１アイソフォームポリペプチド（例えば、ＨＬＡ－Ｇ１＊０１：０１対立遺伝子またはＨＬＡ－Ｇ１＊０１：０４対立遺伝子）のアルファ１、アルファ２、およびアルファ３ドメイン、膜アンカー、ならびに１つ以上のリンカー（例えば、可動性リンカー）を含む。いくつかの実施形態では、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、ＨＬＡ－Ｇ１アイソフォームポリペプチド（例えば、ＨＬＡ－Ｇ１＊０１：０１対立遺伝子またはＨＬＡ－Ｇ１＊０１：０４対立遺伝子）のアルファ１、アルファ２、およびアルファ３ドメイン、β２Ｍポリペプチド（またはその断片もしくはバリアント）、膜アンカー、ならびに１つ以上のリンカーを含む。いくつかの実施形態では、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、ＨＬＡ－Ｇ１アイソフォームポリペプチド（例えば、ＨＬＡ－Ｇ１＊０１：０１対立遺伝子またはＨＬＡ－Ｇ１＊０１：０４対立遺伝子）のアルファ１、アルファ２、およびアルファ３ドメイン、膜アンカー、ならびに１つ以上のリンカーを含み、外因性抗原性ポリペプチドに連結されている（例えば、リンカーを介して）。いくつかの実施形態では、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、ＨＬＡ－Ｇ１アイソフォームポリペプチド（例えば、ＨＬＡ－Ｇ１＊０１：０１対立遺伝子またはＨＬＡ－Ｇ１＊０１：０４対立遺伝子）のアルファ１、アルファ２、およびアルファ３ドメイン、β２Ｍポリペプチド（またはその断片もしくはバリアント）、膜アンカー、ならびに１つ以上のリンカーを含み、外因性抗原性ポリペプチドに連結されている（例えば、リンカーを介して）。
いくつかの実施形態では、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、ＨＬＡ－Ｇ２アイソフォームポリペプチドのアルファ１およびアルファ３ドメインを含み、β２Ｍポリペプチドを含まない。いくつかの実施形態では、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、ＨＬＡ－Ｇ２アイソフォームポリペプチドのアルファ１およびアルファ３ドメイン、ならびにβ２Ｍポリペプチドまたはその断片もしくはバリアントを含む。いくつかの実施形態では、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、ＨＬＡ－Ｇ２アイソフォームポリペプチドのアルファ１およびアルファ３ドメイン、ならびに膜アンカーを含む。いくつかの実施形態では、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、ＨＬＡ－Ｇ２アイソフォームポリペプチドのアルファ１およびアルファ３ドメイン、β２Ｍポリペプチド（またはその断片もしくはバリアント）、ならびに膜アンカーを含む。いくつかの実施形態では、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、ＨＬＡ－Ｇ２アイソフォームポリペプチドのアルファ１およびアルファ３ドメイン、膜アンカー、ならびに１つ以上のリンカーを含む。いくつかの実施形態では、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、ＨＬＡ－Ｇ２アイソフォームポリペプチドのアルファ１およびアルファ３ドメイン、β２Ｍポリペプチド（またはその断片もしくはバリアント）、膜アンカー、ならびに１つ以上のリンカーを含む。いくつかの実施形態では、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、ＨＬＡ－Ｇ２アイソフォームポリペプチドのアルファ１およびアルファ３ドメイン、膜アンカー、ならびに１つ以上のリンカーを含み、外因性抗原性ポリペプチドに連結されている（例えば、リンカーを介して）。いくつかの実施形態では、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、ＨＬＡ－Ｇ２アイソフォームポリペプチドのアルファ１およびアルファ３ドメイン、β２Ｍポリペプチド（またはその断片もしくはバリアント）、膜アンカー、ならびに１つ以上のリンカーを含み、外因性抗原性ポリペプチドに連結されている（例えば、リンカーを介して）。いくつかの実施形態では、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、アミノ酸配列：
ＭＶＶＭＡＰＲＴＬＦＬＬＬＳＧＡＬＴＬＴＥＴＷＡＧＳＨＳＭＲＹＦＳＡＡＶＳＲＰＧＲＧＥＰＲＦＩＡＭＧＹＶＤＤＴＱＦＶＲＦＤＳＤＳＡＣＰＲＭＥＰＲＡＰＷＶＥＱＥＧＰＥＹＷＥＥＥＴＲＮＴＫＡＨＡＱＴＤＲＭＮＬＱＴＬＲＧＹＹＮＱＳＥＡＳＳＨＴＬＱＷＭＩＧＣＤＬＧＳＤＧＲＬＬＲＧＹＥＱＹＡＹＤＧＫＤＹＬＡＬＮＥＤＬＲＳＷＴＡＡＤＴＡＡＱＩＳＫＲＫＣＥＡＡＮＶＡＥＱＲＲＡＹＬＥＧＴＣＶＥＷＬＨＲＹＬＥＮＧＫＥＭＬＱＲＡＤＰＰＫＴＨＶＴＨＨＰＶＦＤＹＥＡＴＬＲＣＷＡＬＧＦＹＰＡＥＩＩＬＴＷＱＲＤＧＥＤＱＴＱＤＶＥＬＶＥＴＲＰＡＧＤＧＴＦＱＫＷＡＡＶＶＶＰＳＧＥＥＱＲＹＴＣＨＶＱＨＥＧＬＰＥＰＬＭＬＲＷＫＱＳＳＬＰＴＩＰＩＭＧＩＶＡＧＬＶＶＬＡＡＶＶＴＧＡＡＶＡＡＶＬＷＲＫＫＳＳＤ（配列番号３４）（シグナルペプチドには下線付き）を含むか、またはそれからなる。
いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、アミノ酸配列：ＧＳＨＳＭＲＹＦＳＡＡＶＳＲＰＧＲＧＥＰＲＦＩＡＭＧＹＶＤＤＴＱＦＶＲＦＤＳＤＳＡＣＰＲＭＥＰＲＡＰＷＶＥＱＥＧＰＥＹＷＥＥＥＴＲＮＴＫＡＨＡＱＴＤＲＭＮＬＱＴＬＲＧＹＹＮＱＳＥＡＳＳＨＴＬＱＷＭＩＧＣＤＬＧＳＤＧＲＬＬＲＧＹＥＱＹＡＹＤＧＫＤＹＬＡＬＮＥＤＬＲＳＷＴＡＡＤＴＡＡＱＩＳＫＲＫＣＥＡＡＮＶＡＥＱＲＲＡＹＬＥＧＴＣＶＥＷＬＨＲＹＬＥＮＧＫＥＭＬＱＲＡＤＰＰＫＴＨＶＴＨＨＰＶＦＤＹＥＡＴＬＲＣＷＡＬＧＦＹＰＡＥＩＩＬＴＷＱＲＤＧＥＤＱＴＱＤＶＥＬＶＥＴＲＰＡＧＤＧＴＦＱＫＷＡＡＶＶＶＰＳＧＥＥＱＲＹＴＣＨＶＱＨＥＧＬＰＥＰＬＭＬＲＷＫＱＳＳＬＰＴＩＰＩＭＧＩＶＡＧＬＶＶＬＡＡＶＶＴＧＡＡＶＡＡＶＬＷＲＫＫＳＳＤ（配列番号３５）を含むか、またはそれからなる。
いくつかの実施形態では、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、配列番号３５のアミノ酸配列からなり、配列番号３５の残基４２に不対システインを含む。
いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、対応する野生型ＨＬＡ－Ｇポリペプチドのアミノ酸配列、例えば、配列番号３４または配列番号３５に対して少なくとも６０％、少なくとも６１％、少なくとも６２％、少なくとも６３％、少なくとも６４％、少なくとも６５％、少なくとも６６％、少なくとも６７％、少なくとも６８％、少なくとも６９％、少なくとも７０％、少なくとも７１％、少なくとも７２％、少なくとも７３％、少なくとも７４％、少なくとも７５％、少なくとも７６％、少なくとも７７％、少なくとも７８％、少なくとも７９％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、配列番号３４または３５のアミノ酸配列を含むＨＬＡ－Ｇ２アイソフォームポリペプチドのアルファ１およびアルファ３ドメインを含み、β２Ｍポリペプチドを含まない。いくつかの実施形態では、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、配列番号３４または３５のアミノ酸配列を含むＨＬＡ－Ｇ２アイソフォームポリペプチドのアルファ１およびアルファ３ドメイン、ならびにβ２Ｍポリペプチドまたはその断片もしくはバリアントを含む。いくつかの実施形態では、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、配列番号３４または３５のアミノ酸配列を含むＨＬＡ－Ｇ２アイソフォームポリペプチドのアルファ１およびアルファ３ドメイン、ならびに膜アンカーを含む。いくつかの実施形態では、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、配列番号３４または３５のアミノ酸配列を含むＨＬＡ－Ｇ２アイソフォームポリペプチドのアルファ１およびアルファ３ドメイン、β２Ｍポリペプチド（またはその断片もしくはバリアント）、ならびに膜アンカーを含む。いくつかの実施形態では、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、配列番号３４または３５のアミノ酸配列を含むＨＬＡ－Ｇ２アイソフォームポリペプチドのアルファ１およびアルファ３ドメイン、膜アンカー、ならびに１つ以上のリンカーを含む。いくつかの実施形態では、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、配列番号３４または３５のアミノ酸配列を含むＨＬＡ－Ｇ２アイソフォームポリペプチドのアルファ１およびアルファ３ドメイン、β２Ｍポリペプチド（またはその断片もしくはバリアント）、膜アンカー、ならびに１つ以上のリンカーを含む。いくつかの実施形態では、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、配列番号３４または３５のアミノ酸配列を含むＨＬＡ－Ｇ２アイソフォームポリペプチドのアルファ１およびアルファ３ドメイン、膜アンカー、ならびに１つ以上のリンカーを含み、外因性抗原性ポリペプチドに連結されている（例えば、リンカーを介して）。いくつかの実施形態では、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、配列番号３４または３５のアミノ酸配列を含むＨＬＡ－Ｇ２アイソフォームポリペプチドのアルファ１およびアルファ３ドメイン、β２Ｍポリペプチド（またはその断片もしくはバリアント）、膜アンカー、ならびに１つ以上のリンカー（例えば、可動性リンカー）を含み、外因性抗原性ポリペプチドに連結されている（例えば、リンカーを介して）。
いくつかの実施形態では、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、ＨＬＡ－Ｇ３アイソフォームポリペプチドのアルファ１ドメインを含み、β２Ｍポリペプチドを含まない。いくつかの実施形態では、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、ＨＬＡ－Ｇ３アイソフォームポリペプチドのアルファ１ドメイン、およびβ２Ｍポリペプチドまたはその断片もしくはバリアントを含む。いくつかの実施形態では、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、ＨＬＡ－Ｇ３アイソフォームポリペプチドのアルファ１ドメイン、および膜アンカーを含む。いくつかの実施形態では、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、ＨＬＡ－Ｇ３アイソフォームポリペプチドのアルファ１ドメイン、β２Ｍポリペプチド（またはその断片もしくはバリアント）、および膜アンカーを含む。いくつかの実施形態では、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、ＨＬＡ－Ｇ３アイソフォームポリペプチドのアルファ１ドメイン、膜アンカー、および１つ以上のリンカー（例えば、可動性リンカー）を含む。いくつかの実施形態では、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、ＨＬＡ－Ｇ３アイソフォームポリペプチドのアルファ１ドメイン、β２Ｍポリペプチド（またはその断片もしくはバリアント）、膜アンカー、および１つ以上のリンカーを含む。いくつかの実施形態では、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、ＨＬＡ－Ｇ３アイソフォームポリペプチドのアルファ１ドメイン、膜アンカー、および１つ以上のリンカーを含み、外因性抗原性ポリペプチドに連結されている（例えば、リンカーを介して）。いくつかの実施形態では、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、ＨＬＡ－Ｇ３アイソフォームポリペプチドのアルファ１ドメイン、β２Ｍポリペプチド（またはその断片もしくはバリアント）、膜アンカー、および１つ以上のリンカーを含み、外因性抗原性ポリペプチドに連結されている（例えば、リンカーを介して）。
いくつかの実施形態では、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、ＨＬＡ－Ｇ４アイソフォームポリペプチドのアルファ１およびアルファ２ドメインを含み、β２Ｍポリペプチドを含まない。いくつかの実施形態では、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、ＨＬＡ－Ｇ４アイソフォームポリペプチドのアルファ１およびアルファ２ドメイン、ならびにβ２Ｍポリペプチドまたはその断片もしくはバリアントを含む。いくつかの実施形態では、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、ＨＬＡ－Ｇ４アイソフォームポリペプチドのアルファ１およびアルファ２ドメイン、ならびに膜アンカーを含む。いくつかの実施形態では、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、ＨＬＡ－Ｇ４アイソフォームポリペプチドのアルファ１およびアルファ２ドメイン、β２Ｍポリペプチド（またはその断片もしくはバリアント）、ならびに膜アンカーを含む。いくつかの実施形態では、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、ＨＬＡ－Ｇ４アイソフォームポリペプチドのアルファ１およびアルファ２ドメイン、膜アンカー、ならびに１つ以上のリンカーを含む。いくつかの実施形態では、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、ＨＬＡ－Ｇ４アイソフォームポリペプチドのアルファ１およびアルファ２ドメイン、β２Ｍポリペプチド（またはその断片もしくはバリアント）、膜アンカー、ならびに１つ以上のリンカーを含む。いくつかの実施形態では、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、ＨＬＡ－Ｇ４アイソフォームポリペプチドのアルファ１およびアルファ２ドメイン、膜アンカー、ならびに１つ以上のリンカーを含み、外因性抗原性ポリペプチドに連結されている（例えば、リンカーを介して）。いくつかの実施形態では、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、ＨＬＡ－Ｇ４アイソフォームポリペプチドのアルファ１およびアルファ２ドメイン、β２Ｍポリペプチド（またはその断片もしくはバリアント）、膜アンカー、ならびに１つ以上のリンカーを含み、外因性抗原性ポリペプチドに連結されている（例えば、リンカーを介して）。
いくつかの実施形態では、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、ＨＬＡ－Ｇ５アイソフォームポリペプチドのアルファ１、アルファ２、およびアルファ３ドメインを含み、β２Ｍポリペプチドを含まない。いくつかの実施形態では、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、ＨＬＡ－Ｇ５アイソフォームポリペプチドのアルファ１、アルファ２、およびアルファ３ドメイン、ならびにβ２Ｍポリペプチドまたはその断片もしくはバリアントを含む。いくつかの実施形態では、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、ＨＬＡ－Ｇ５アイソフォームポリペプチドのアルファ１、アルファ２、およびアルファ３ドメイン、ならびに膜アンカーを含む。いくつかの実施形態では、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、ＨＬＡ－Ｇ５アイソフォームポリペプチドのアルファ１、アルファ２、およびアルファ３ドメイン、β２Ｍポリペプチド（またはその断片もしくはバリアント）、ならびに膜アンカーを含む。いくつかの実施形態では、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、ＨＬＡ－Ｇ５アイソフォームポリペプチドのアルファ１、アルファ２、およびアルファ３ドメイン、膜アンカー、ならびに１つ以上のリンカーを含む。いくつかの実施形態では、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、ＨＬＡ－Ｇ５アイソフォームポリペプチドのアルファ１、アルファ２、およびアルファ３ドメイン、β２Ｍポリペプチド（またはその断片もしくはバリアント）、膜アンカー、ならびに１つ以上のリンカーを含む。いくつかの実施形態では、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、ＨＬＡ－Ｇ５アイソフォームポリペプチドのアルファ１、アルファ２、およびアルファ３ドメイン、膜アンカー、ならびに１つ以上のリンカーを含み、外因性抗原性ポリペプチドに連結されている（例えば、リンカーを介して）。いくつかの実施形態では、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、ＨＬＡ－Ｇ５アイソフォームポリペプチドのアルファ１、アルファ２、およびアルファ３ドメイン、β２Ｍポリペプチド（またはその断片もしくはバリアント）、膜アンカー、ならびに１つ以上のリンカーを含み、外因性抗原性ポリペプチドに連結されている（例えば、リンカーを介して）。
いくつかの実施形態では、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、ＨＬＡ－Ｇ６アイソフォームポリペプチドのアルファ１およびアルファ３ドメインを含み、β２Ｍポリペプチドを含まない。いくつかの実施形態では、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、ＨＬＡ－Ｇ６アイソフォームポリペプチドのアルファ１およびアルファ３ドメイン、ならびにβ２Ｍポリペプチドまたはその断片もしくはバリアントを含む。いくつかの実施形態では、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、ＨＬＡ－Ｇ６アイソフォームポリペプチドのアルファ１およびアルファ３ドメイン、ならびに膜アンカーを含む。いくつかの実施形態では、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、ＨＬＡ－Ｇ６アイソフォームポリペプチドのアルファ１およびアルファ３ドメイン、β２Ｍポリペプチド（またはその断片もしくはバリアント）、ならびに膜アンカーを含む。いくつかの実施形態では、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、ＨＬＡ－Ｇ６アイソフォームポリペプチドのアルファ１およびアルファ３ドメイン、膜アンカー、ならびに１つ以上のリンカーを含む。いくつかの実施形態では、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、ＨＬＡ－Ｇ６アイソフォームポリペプチドのアルファ１およびアルファ３ドメイン、β２Ｍポリペプチド（またはその断片もしくはバリアント）、膜アンカー、ならびに１つ以上のリンカー（例えば、可動性リンカー）を含む。いくつかの実施形態では、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、ＨＬＡ－Ｇ６アイソフォームポリペプチドのアルファ１およびアルファ３ドメイン、膜アンカー、ならびに１つ以上のリンカーを含み、外因性抗原性ポリペプチドに連結されている（例えば、リンカーを介して）。いくつかの実施形態では、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、ＨＬＡ－Ｇ６アイソフォームポリペプチドのアルファ１およびアルファ３ドメイン、β２Ｍポリペプチド（またはその断片もしくはバリアント）、膜アンカー、ならびに１つ以上のリンカーを含み、外因性抗原性ポリペプチドに連結されている（例えば、リンカーを介して）。
いくつかの実施形態では、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、ＨＬＡ－Ｇ７アイソフォームポリペプチドのアルファ１ドメインを含み、β２Ｍポリペプチドを含まない。いくつかの実施形態では、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、ＨＬＡ－Ｇ７アイソフォームポリペプチドのアルファ１ドメイン、およびβ２Ｍポリペプチド（またはその断片もしくはバリアント）を含む。いくつかの実施形態では、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、ＨＬＡ－Ｇ７アイソフォームポリペプチドのアルファ１ドメイン、および膜アンカーを含む。いくつかの実施形態では、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、ＨＬＡ－Ｇ７アイソフォームポリペプチドのアルファ１ドメイン、β２Ｍポリペプチド（またはその断片もしくはバリアント）、および膜アンカーを含む。いくつかの実施形態では、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、ＨＬＡ－Ｇ７アイソフォームポリペプチドのアルファ１ドメイン、膜アンカー、および１つ以上のリンカーを含む。いくつかの実施形態では、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、ＨＬＡ－Ｇ７アイソフォームポリペプチドのアルファ１ドメイン、β２Ｍポリペプチド（またはその断片もしくはバリアント）、膜アンカー、および１つ以上のリンカーを含む。いくつかの実施形態では、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、ＨＬＡ－Ｇ７アイソフォームポリペプチドのアルファ１ドメイン、膜アンカー、および１つ以上のリンカーを含み、外因性抗原性ポリペプチドに連結されている（例えば、リンカーを介して）。いくつかの実施形態では、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、ＨＬＡ－Ｇ７アイソフォームポリペプチドのアルファ１ドメイン、β２Ｍポリペプチド（またはその断片もしくはバリアント）、膜アンカー、および１つ以上のリンカーを含み、外因性抗原性ポリペプチドに連結されている（例えば、リンカーを介して）。
いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｇアイソフォームポリペプチド（例えば、本明細書に記載されるＨＬＡ－Ｇアイソフォームポリペプチドのいずれか）のアルファ１ドメインは、配列番号３４の２５位～１１４位のアミノ酸残基、または配列番号３５の１位～９０位のアミノ酸残基に対応する。いくつかの実施形態では、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、配列番号３５の１位～９０位のアミノ酸配列をコードする核酸配列に対して少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一である核酸配列を含むか、またはそれらからなる核酸によってコードされる。
いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｇアイソフォームポリペプチド（例えば、本明細書に記載されるＨＬＡ－Ｇアイソフォームポリペプチドのいずれか）のアルファ２ドメインは、配列番号３４の１１５位～２０６位のアミノ酸残基、または配列番号３５の９１位～１８２位のアミノ酸残基に対応する。いくつかの実施形態では、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、配列番号３５の９１位～１８２位のアミノ酸配列をコードする核酸配列に対して少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一である核酸配列を含むか、またはそれらからなる核酸によってコードされる。
いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｇアイソフォームポリペプチド（例えば、本明細書に記載されるＨＬＡ－Ｇアイソフォームポリペプチドのいずれか）のアルファ３ドメインは、配列番号３４の２０７位～２９８位のアミノ酸残基、または配列番号３５の１８３位～２７４位のアミノ酸残基に対応する。例えば、Ｇｅｒａｇｈｔｙ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ ８４（２４）：９１４５－９１４９，１９８７を参照されたい。いくつかの実施形態では、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、配列番号３５の１８３位～２７４位のアミノ酸配列をコードする核酸配列に対して少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一である核酸配列を含むか、またはそれらからなる核酸によってコードされる。
本明細書に記載される外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドをコードする核酸配列を含むか、またはそれからなる核酸も提供される。いくつかの実施形態では、核酸は、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームまたは遺伝子に動作可能に連結された少なくとも１つのプロモーター（例えば、構成的または誘導性プロモーター）を含む。いくつかの実施形態では、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、野生型ＨＬＡ－Ｇポリペプチドをコードする核酸配列に対して少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一である核酸配列を含むか、またはそれらからなる核酸によってコードされる。いくつかの実施形態では、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、野生型ＨＬＡ－Ｇポリペプチドをコードする核酸配列に対して少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一である核酸配列を含むか、またはそれらからなる核酸によってコードされ、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、シグナル配列を含まない。いくつかの実施形態では、核酸は、コドン最適化されている（例えば、ヒト細胞中の発現に対して）。いくつかの実施形態では、核酸は、コドン最適化されていない。
外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、完全長ＨＬＡ－Ｇポリペプチドおよびその機能的断片、ならびに野生型の自然発生的ＨＬＡ－Ｇポリペプチドのホモログ、アイソフォーム、およびバリアントを含み得る。例えば、いくつかの実施形態では、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドのアミノ酸配列は、１つ以上のアミノ酸残基で、それが由来した野生型外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドのアミノ酸配列とは異なり得る。例えば、いくつかの実施形態では、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、例えば、１つ以上のアミノ酸の欠失、挿入、および／または置換を含むように、野生型アミノ酸配列から改変され得る。いくつかの実施形態では、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドのアミノ酸配列は、野生型ＨＬＡ－Ｇポリペプチドのアミノ酸配列と比較して改変されて、保存的（例えば、構造的に類似した）アミノ酸置換を含む。例えば、構造的に類似したアミノ酸には、（イソロイシン（Ｉ）、ロイシン（Ｌ）、およびバリン（Ｖ））；（フェニルアラニン（Ｆ）およびチロシン（Ｙ））；（リシン（Ｋ）およびアルギニン（Ｒ））；（グルタミン（Ｑ）およびアスパラギン（Ｎ））；（アスパラギン酸（Ｄ）およびグルタミン酸（Ｅ））；ならびに（グリシン（Ｇ）およびアラニン（Ａ））が含まれる。いくつかの実施形態では、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドのアミノ酸配列は、野生型外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドのアミノ酸配列と比較して改変されて、非保存的アミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、野生型ＨＬＡ－Ｇポリペプチドのアミノ酸配列とは（例えば、切断、欠失、置換、または付加によって）、１、２、３、４、５、８、１０、２０、または５０個以下の残基だけ異なり、それが由来した野生型ＨＬＡ－Ｇポリペプチドの機能を保持するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、野生型アミノ酸配列、例えば、制御性ペプチド配列、リンカー、エピトープタグ（例えば、Ｈｉｓタグ、ＦＬＡＧタグ、もしくはｍｙｃタグ）、膜アンカー、例えば、グリコフォリンＡ（ＧＰＡ）タンパク質、ＧＰＡの膜貫通ドメイン、小内在性膜タンパク質１（ＳＭＩＭ１）の膜貫通ドメイン、またはトランスフェリン受容体の膜貫通ドメイン、および他のペプチド配列を含み得る。追加のアミノ酸配列は、外因性ＨＬＡ－ＧポリペプチドのＮ末端もしくはＣ末端に存在し得るか、またはポリペプチドのアミノ酸配列内に配置され得る。いくつかの実施形態では、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、翻訳後改変（例えば、グリコシル化）を含む。いくつかの実施形態では、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、本明細書に記載される細胞内またはその表面上でオリゴマー化する。いくつかの実施形態では、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、リーダー配列（例えば、自然発生的リーダー配列または異なるポリペプチドのリーダー配列）を含む。いくつかの実施形態では、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、リーダー配列を欠く（例えば、自然発生的リーダー配列を除去するように遺伝子改変されている）。いくつかの実施形態では、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、Ｎ末端メチオニン残基を有する。いくつかの実施形態では、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、Ｎ末端メチオニン残基を欠く。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される操作された赤血球系細胞または除核細胞は、細胞表面上に非膜貫通ポリペプチド、例えば、外因性抗原性ポリペプチド、外因性免疫原性ポリペプチド、または外因性β２ミクログロブリンポリペプチドを含む。非膜貫通ポリペプチドは、細胞表面への輸送の前に、細胞内に別の薬剤と集合する、細胞によって分泌され、次いで細胞表面上の膜係留ポリペプチド（例えば、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチド）によって細胞表面上に捕捉される、または細胞と接触しており（例えば、精製形態で）、次いで細胞表面上の膜係留ポリペプチドによって細胞表面上に捕捉される、のいずれかであり得る。
いくつかの実施形態では、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、脂質部分への付着（例えば、Ｎ－ミリストイル化、Ｓ－パルミトイル化、ファルネシル化、ゲラニルゲラニル化、またはグリコシルホスファチジルイノシトール（ＧＰＩ）アンカー）を介して、細胞の原形質膜に係留され得る。
いくつかの実施形態では、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、ＨＬＡ－Ｇポリペプチドの１つ以上のアルファドメイン１～３（例えば、アルファ１、アルファ２、およびアルファ３ドメイン）、膜アンカー、ならびにβ２Ｍポリペプチド（またはその断片もしくはバリアント）を含む。いくつかの実施形態では、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、リンカー（例えば、本明細書に提供されるリンカー（例えば、切断可能なリンカーまたは可動性リンカー））を介して連結された抗原性ポリペプチドをさらに含む。いくつかの実施形態では、膜アンカーは、グリコフォリンアンカー、特にグリコフォリンＡ（ＧＰＡ）であるか、または膜アンカーは、小内在性膜タンパク質１（ＳＭＩＭ１）である。いくつかの実施形態では、膜アンカーは、完全長ＧＰＡを含む。いくつかの実施形態では、膜アンカーは、完全長ＳＭＩＭ１を含む。いくつかの実施形態では、膜アンカーは、ＳＭＩＭ１の膜貫通ドメインまたはＧＰＡの膜貫通ドメインを含む。いくつかの実施形態では、膜アンカーは、完全長トランスフェリン受容体またはその断片（例えば、トランスフェリン受容体膜貫通ドメインを含む断片）を含む。いくつかの実施形態では、膜アンカーは、表Ａに記載されるアミノ酸配列を含むか、またはそれらからなる。
Figure 2023513263000002
いくつかの実施形態では、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドまたは融合タンパク質は、図１Ａ、１Ｂ、１Ｃ、または１Ｄに記載される構造を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される操作された赤血球系細胞または除核細胞上に存在する外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、ＩＬＴ４、ＩＬＴ２、および／またはＫＩＲ２ＤＬ４（例えば、ＮＫ細胞、ＣＤ８＋ Ｔ細胞、ＣＤ４＋ Ｔ細胞、Ｂ細胞、単球、および／または樹状細胞の表面上に存在する）などの１つ以上のＨＬＡ－Ｇ受容体に結合することができる。
外因性免疫原性ポリペプチド
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される操作された赤血球系細胞（例えば、操作された除核赤血球系細胞）または除核細胞（例えば、改変された除核細胞）は、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドおよび外因性免疫原性ポリペプチドを含み、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドおよび外因性免疫原性ポリペプチドは両方とも、細胞表面上にある。いくつかの実施形態では、外因性免疫原性ポリペプチドは、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドに結合していない。
他の実施形態では、本明細書に記載される操作された赤血球系細胞（例えば、操作された除核赤血球系細胞）または除核細胞（例えば、改変された除核細胞）は、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドおよび外因性免疫原性ポリペプチドを含み、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、細胞表面上にあり、外因性免疫原性ポリペプチドは、細胞内（ｗｉｔｈｉｎ ｔｈｅ ｃｅｌｌ）（すなわち、細胞内（ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ））にある（例えば、外因性免疫原性酵素、例えば、ＩＤＯまたはＣＤ３９）。いくつかの実施形態では、外因性免疫原性ポリペプチドは、細胞の細胞質中にある。いくつかの実施形態では、外因性免疫原性ポリペプチドは、原形質膜の細胞内側にある（例えば、本明細書に記載される例示的な膜アンカーのいずれかを使用して、原形質膜の細胞内側に位置付けられている）。いくつかの実施形態では、外因性免疫原性ポリペプチドは、細胞によって分泌または放出される。いくつかの実施形態では、細胞内外因性免疫原性ポリペプチドは、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドに結合していない。
また、外因性免疫原性ポリペプチド（例えば、本明細書に記載される外因性免疫原性ポリペプチドのいずれか）および少なくとも１つの外因性共阻害性ポリペプチド（例えば、本明細書に記載される外因性共阻害性ポリペプチドのいずれか）を含む、操作された赤血球系細胞（例えば、操作された除核赤血球系細胞）または除核細胞（例えば、改変された除核細胞）も本明細書に提供される。いくつかの実施形態では、外因性免疫原性ポリペプチドは、細胞のサイトゾル中にある。いくつかの実施形態では、外因性免疫原性ポリペプチドは、原形質膜の細胞内側にある。いくつかの実施形態では、外因性免疫原性ポリペプチドは、細胞によって分泌または放出される。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの外因性共阻害性ポリペプチドは、原形質膜の細胞内側にある。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの外因性共阻害性ポリペプチドは、細胞によって分泌または放出される。
いくつかの実施形態では、外因性免疫原性ポリペプチドは、脂質部分への付着（例えば、Ｎ－ミリストイル化、Ｓ－パルミトイル化、ファルネシル化、ゲラニルゲラニル化、およびグリコシルホスファチジルイノシトール（ＧＰＩ）アンカー）を介して、細胞の原形質膜に係留され得る。
いくつかの実施形態では、外因性免疫原性ポリペプチドは、膜アンカーを含み得る。いくつかの実施形態では、膜アンカーは、外因性免疫原性ポリペプチドのＮ末端上にある。他の実施形態では、膜アンカーは、外因性免疫原性ポリペプチドのＣ末端上にある。
本明細書に記載される使用のための外因性免疫原性ポリペプチドは、任意の供給源に由来し得る。いくつかの実施形態では、外因性免疫原性ポリペプチドは、ヒトポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、外因性免疫原性ポリペプチドは、同種反応性ポリペプチド（例えば、ヒト同種反応性ポリペプチド）を含む。いくつかの実施形態では、外因性免疫原性ポリペプチドは、非ヒトポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、外因性免疫原性ポリペプチドは、細菌、植物、酵母、真菌、ウイルス、プリオン、または原生動物に由来する非ヒトポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、外因性免疫原性ポリペプチドは、本明細書の表１または表２に記載されるポリペプチドのうちのいずれか１つを含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される使用のための外因性免疫原性ポリペプチドは、アミノ酸分解ポリペプチド（例えば、アスパラギナーゼポリペプチド、フェニルアラニンアンモニウムリアーゼ（ＰＡＬ）ポリペプチド、フェニルアラニンヒドロキシラーゼ（ＰＡＨ）ポリペプチド、ホモシステイン低減ポリペプチドもしくはホモシステイン分解ポリペプチド）、尿酸分解ポリペプチド、またはシュウ酸オキシダーゼを含む。いくつかの実施形態では、外因性免疫原性ポリペプチドは、ポルフォビリノーゲンシンターゼまたはデルタ－アミノレブリン酸デヒドラターゼとしても知られる、ｄ－アミノレブリン酸デヒドロゲナーゼ（ＡＬＡ－Ｄ）を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される操作された赤血球系細胞（例えば、操作された除核赤血球系細胞）または除核細胞（例えば、改変された除核細胞）は、２つ以上（例えば、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、またはそれ以上）の外因性免疫原性ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される操作された赤血球系細胞または除核細胞の集団は、２つ以上（例えば、少なくとも２つ、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、またはそれ以上）の外因性免疫原性ポリペプチドを含み、集団中の異なる操作された赤血球系細胞もしくは除核細胞は、異なるタイプの外因性免疫原性ポリペプチドを含むか、または集団中の異なる赤血球系細胞は、異なる複数のタイプの外因性免疫原性ポリペプチドを含む。
いくつかの実施形態では、外因性免疫原性ポリペプチドは、対応する野生型免疫原性ポリペプチドのアミノ酸配列に対して少なくとも６０％、少なくとも６１％、少なくとも６２％、少なくとも６３％、少なくとも６４％、少なくとも６５％、少なくとも６６％、少なくとも６７％、少なくとも６８％、少なくとも６９％、少なくとも７０％、少なくとも７１％、少なくとも７２％、少なくとも７３％、少なくとも７４％、少なくとも７５％、少なくとも７６％、少なくとも７７％、少なくとも７８％、少なくとも７９％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載される外因性免疫原性ポリペプチドをコードする核酸配列を含むか、またはそれからなる核酸も提供される。いくつかの実施形態では、核酸は、外因性免疫原性ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームまたは遺伝子に動作可能に連結された少なくとも１つのプロモーター（例えば、構成的または誘導性プロモーター）を含む。いくつかの実施形態では、外因性免疫原性ポリペプチド（例えば、外因性核酸）は、野生型免疫原性ポリペプチドをコードする核酸配列に対して少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一である核酸配列を含むか、またはそれらからなる核酸によってコードされる。いくつかの実施形態では、外因性免疫原性ポリペプチドは、野生型外因性免疫原性ポリペプチドをコードする核酸配列に対して少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一である核酸配列を含むか、またはそれらからなる核酸によってコードされ、外因性免疫原性ポリペプチドは、シグナル配列を含まない。いくつかの実施形態では、核酸は、コドン最適化されている（例えば、ヒト細胞中の発現に対して）。いくつかの実施形態では、核酸は、コドン最適化されていない。
外因性免疫原性ポリペプチドは、完全長ポリペプチドおよびその機能的断片（例えば、その酵素的に活性な断片）、ならびに活性、例えば、酵素活性を保持し得る野生型自然発生的外因性免疫原性ポリペプチドのホモログ、アイソフォーム、およびバリアントを含む。例えば、いくつかの実施形態では、外因性免疫原性ポリペプチドのアミノ酸配列は、１つ以上のアミノ酸残基で、それが由来した野生型外因性免疫原性ポリペプチドのアミノ酸配列とは異なり得る。例えば、いくつかの実施形態では、外因性免疫原性ポリペプチドは、例えば、１つ以上のアミノ酸の欠失、挿入、および／または置換を含むように、野生型アミノ酸配列から改変され得る。いくつかの実施形態では、外因性免疫原性ポリペプチドのアミノ酸配列は、野生型外因性免疫原性ポリペプチドのアミノ酸配列と比較して改変されて、保存的（例えば、構造的に類似した）アミノ酸置換または非保存的アミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、外因性免疫原性ポリペプチドのアミノ酸配列は、野生型免疫原性ポリペプチドのアミノ酸配列とは（例えば、切断、欠失、置換、または付加によって）、１、２、３、４、５、８、１０、２０、または５０個以下の残基だけ異なり、それが由来した野生型が陰性免疫原性ポリペプチドの機能を保持する。
いくつかの実施形態では、外因性免疫原性ポリペプチドの断片またはバリアントは、断片またはバリアントが由来した野生型外因性免疫原性ポリペプチドの外因性免疫原性ポリペプチド活性の少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも５１％、少なくとも５２％、少なくとも５３％、少なくとも５４％、少なくとも５５％、少なくとも５６％、少なくとも５７％、少なくとも５８％、少なくとも５９％、少なくとも６０％、少なくとも６１％、少なくとも６２％、少なくとも６３％、少なくとも６４％、少なくとも６５％、少なくとも６６％、少なくとも６７％、少なくとも６８％、少なくとも６９％、少なくとも７０％、少なくとも７１％、少なくとも７２％、少なくとも７３％、少なくとも７４％、少なくとも７５％、少なくとも７６％、少なくとも７７％、少なくとも７８％、少なくとも７９％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または少なくとも１００％を含む。
いくつかの実施形態では、外因性免疫原性ポリペプチドは、野生型アミノ酸配列、例えば、制御性ペプチド配列、リンカー、エピトープタグ（例えば、Ｈｉｓタグ、ＦＬＡＧタグ、もしくはｍｙｃタグ）、膜アンカー、例えば、膜貫通タンパク質（例えば、ＧＰＡ、ＳＭＩＭ１もしくはＫｅｌｌ、またはトランスフェリン受容体）、あるいはそれらの膜貫通ドメインを含み得る。追加のアミノ酸配列は、外因性免疫原性ポリペプチドのＮ末端もしくはＣ末端に存在し得るか、またはポリペプチドのアミノ酸配列内に配置され得る。いくつかの実施形態では、外因性免疫原性ポリペプチドは、外因性免疫原性ポリペプチドの一部分またはすべて（膜アンカーを除く）が細胞のサイトゾルに対して（例えば、原形質膜の内葉に近接して）位置するように配置された、膜アンカー（例えば、Ｉ型もしくはＩＩ型膜ポリペプチドまたはその膜貫通ドメイン）を含む。いくつかの実施形態では、外因性免疫原性ポリペプチドは、外因性免疫原性ポリペプチドの一部分またはすべて（膜アンカーを除く）が細胞の外表面に（例えば、細胞の細胞外環境に面して）位置するように配置された、膜ドメイン（例えば、膜貫通ドメインまたは膜貫通ポリペプチド）を含む。いくつかの実施形態では、外因性免疫原性ポリペプチドは、膜アンカー（例えば、膜貫通ドメインまたは膜貫通ポリペプチド）を含まない。
いくつかの実施形態では、外因性免疫原性ポリペプチドは、翻訳後改変（例えば、グリコシル化）を含む。いくつかの実施形態では、外因性免疫原性ポリペプチドは、本明細書に記載される細胞内または細胞表面上でオリゴマー化される。いくつかの実施形態では、外因性免疫原性ポリペプチドは、リーダー配列（例えば、自然発生的リーダー配列または異なるポリペプチドのリーダー配列）を含む。いくつかの実施形態では、外因性免疫原性ポリペプチドは、リーダー配列を欠く（例えば、自然発生的リーダー配列を除去するように遺伝子改変されている）。いくつかの実施形態では、外因性免疫原性ポリペプチドは、Ｎ末端メチオニン残基を有する。いくつかの実施形態では、外因性免疫原性ポリペプチドは、Ｎ末端メチオニン残基を欠く。
いくつかの実施形態では、外因性免疫原性ポリペプチドは、リンカー（例えば、外因性免疫原性ポリペプチドの膜アンカーと残りのアミノ酸配列との間に配置されている）を含み得る。本明細書に提供される任意のリンカーは、外因性免疫原性ポリペプチドに含まれ得る。いくつかの実施形態では、リンカーは、ポリ－グリシンポリ－セリンリンカーである。例えば、いくつかの実施形態では、リンカーは、アミノ酸配列（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）ｎを含むか、またはそれからなり、式中、（ｎ＝１～２０）である（配列番号８３９）。いくつかの実施形態では、ポリ－グリシンポリ－セリンリンカーは、グリシンおよび／またはセリンアミノ酸残基のみを含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、１つ以上のアミノ酸置換、欠失、および／または付加を有し、アミノ酸配列ＧＳＧを欠く、ポリ－グリシンポリ－セリンリンカーを含むか、またはそれらからなる。いくつかの実施形態では、リンカーは、アミノ酸配列（ＧＧＧＸＸ）ｎＧＧＧＧＳ（配列番号２０）またはＧＧＧＧＳ（ＸＧＧＧＳ）ｎ（配列番号２１）を含むか、またはそれらからなり、式中、ｎは、１以上である。いくつかの実施形態では、ｎは、１～２０（境界値を含む）であり（例えば、ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０であり得る）。追加のリンカーには、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号２２）、ＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳ（配列番号２３）、ＰＳＴＳＴＳＴ（配列番号２４）、およびＥＩＤＫＰＳＱ（配列番号２５）、ならびにそれらの多量体が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、リンカーは、ＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳ（配列番号８４０）またはＧＰＧＰＧ（配列番号８４１）である。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される操作された赤血球系細胞または除核細胞は、本明細書に記載される外因性免疫原性ポリペプチドをコードする核酸（例えば、ＤＮＡまたはＲＮＡ）と接触する、それを含む、またはそれを発現する。
いくつかの実施形態では、外因性免疫原性ポリペプチドは、以下の表１に記載されるポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、外因性免疫原性ポリペプチドは、米国特許第９，６４４，１８０号に開示されるポリペプチドを含み、その内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
Figure 2023513263000003
Figure 2023513263000004
Figure 2023513263000005
ａ．アミノ酸分解ポリペプチド
いくつかの実施形態では、本明細書に提供される外因性免疫原性ポリペプチドは、アミノ酸分解ポリペプチドを含むか、またはそれからなる。米国特許公開第２０１９／０１６０１０２号（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）は、本明細書に記載される操作された赤血球系細胞（例えば、操作された除核赤血球系細胞）または除核細胞（例えば、改変された除核細胞）の細胞表面上の外因性免疫原性ポリペプチドに含まれ得るアミノ酸分解ポリペプチドについて記載する。例示的なアミノ酸分解ポリペプチドには、例えば、アスパラギナーゼ、フェニルアラニンアンモニウムリアーゼ（ＰＡＬ）、フェニルアラニンヒドロキシラーゼ（ＰＡＨ）、ホモシステイン低減ポリペプチド、およびホモシステイン分解ポリペプチドが含まれる。
いくつかの実施形態では、アミノ酸分解ポリペプチドは、アスパラギナーゼ、セリンデヒドラターゼ、セリンヒドロキシメチルトランスフェラーゼポリペプチド、ＮＡＤ依存性Ｌ－セリンデヒドロゲナーゼ、アルギナーゼ、アルギニンデイミナーゼ、メチオニンガンマ－リアーゼ、Ｌ－アミノ酸オキシダーゼ、Ｓ－アデノシルメチオニンシンターゼ、シスタチオニンガンマ－リアーゼ、インドールアミン２，３－ジオキシゲナーゼ、またはフェニルアラインアンモニアリアーゼを含む。いくつかの実施形態では、アミノ酸分解ポリペプチドは、グルタミナーゼ、グルタミン－ピルビン酸トランスアミナーゼ、分岐鎖－アミノ酸トランスアミナーゼ、アミダーゼ、アルギニンデカルボキシラーゼ、芳香族Ｌ－アミノ酸デカルボキシラーゼ、システインリアーゼ、またはアルギニノコハク酸リアーゼを含む。いくつかの実施形態では、アミノ酸分解ポリペプチドは、酵素的に活性なポリペプチドを含む。
１．アスパラギナーゼ
いくつかの実施形態では、本明細書に提供される外因性免疫原性ポリペプチドは、アスパラギナーゼまたはその断片もしくはバリアントを含むアミノ酸分解ポリペプチドを含むか、またはそれらからなる。いくつかの実施形態では、アスパラギナーゼは、Ｃｏｖｉｎｉ ｅｔ ａｌ．（２０１２）Ｒｅｃｅｎｔ Ｐａｔ．Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖ．７（１）：４－１３（その中の表１を含むその全体が参照により本明細書に組み込まれる）に記載されるアスパラギナーゼ、またはそれに対して少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有するアスパラギナーゼである。いくつかの実施形態では、アスパラギナーゼは、Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ｔｈａｌｉａｎａ、Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ、Ｅｒｗｉｎｉａ ｃｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｉ、もしくはＨｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ、またはその断片もしくはバリアントのいずれか由来のアスパラギナーゼである。いくつかの実施形態では、アスパラギナーゼを含む外因性免疫原性ポリペプチドは、それが由来した野生型アスパラギナーゼの少なくとも９０％、８０％、７０％、６０％、もしくは５０％のＫｃａｔ、または野生型アスパラギナーゼのＫｍの１５０％、１２５％、１００％、７５％、もしくは５０％未満のＫｍ、またはそれらの組み合わせでアスパラギンを代謝し得る。追加のアスパラギナーゼは、例えば、Ｇｅｒｖａｉｓ ａｎｄ Ｆｏｏｔｅ，（上記参照）、Ｎｇｕｙｅｎ ｅｔ ａｌ．（２０１６）Ｊ．Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．２９１（３４）：１７６６４－７６、およびＭｏｏｌａ ｅｔ ａｌ．（１９９４）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．３０２（３）：９２１－７に記載され、それらの各々は、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。
多数のアスパラギナーゼが、細菌、植物、酵母、藻類、真菌、および哺乳動物において特定されており、本明細書に記載されるように使用され得る。例えば、いくつかの実施形態では、外因性免疫原性ポリペプチドは、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ（例えば、ＵｎｉｔＰｒｏｔアクセッション番号Ｐ００８０５を参照されたい）、Ｅｒｗｉｎｉａ ｃａｒｏｔｏｖｏｒａ（Ｐｅｃｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｔｒｏｓｅｐｔｉｃｕｍとしても既知、例えば、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＡＡＳ６７０２７を参照されたい）、Ｅｒｗｉｎｉａ ｃｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｉ（Ｄｉｃｋｅｙａ ｃｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｉとしても既知、例えば、ＵｎｉＰｒｏｔアクセッション番号Ｐ０６６０８およびＡＡＳ６７０２８、ならびにＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＣＡＡ３１２３９を参照されたい）、Ｅｒｗｉｎｉａ ｃａｒｏｔｏｖｏｒａ（Ｐｅｃｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｔｒｏｓｅｐｔｉｃｕｍとしても既知、例えば、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＡＡＳ６７０２７、ＡＡＰ９２６６６、およびＱ６Ｑ４Ｆ４を参照されたい）、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｔｕｔｚｅｒｉ（例えば、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＡＶＸ１１４３５を参照されたい）、Ｄｅｌｆｔｉａ ａｃｉｄｏｖｏｒａｓ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｃｉｄｏｖｏｒａｎｓとしても既知、例えば、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＡＢＸ３６２００を参照されたい）、Ｐｅｃｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｃａｒｏｔｏｖｏｒｕｍ（Ｅｒｗｉｎｉａ ａｒｏｉｄｅａｅとしても既知、例えば、ＮＣＢＩ参照番号ＷＰ＿０１５８４２０１３を参照されたい）、Ｔｈｅｒｍｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ（例えば、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＢＡＤ６９８９０およびＢＡＷ０１５４９を参照されたい）、Ｔｈｅｒｍｕｓ ａｑｕａｔｉｃｕｓ（例えば、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＫＯＸ８９２９２およびＥＥＤ０９８２１を参照されたい）、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ（例えば、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＫＩＩ２０８９０、ＡＲＩ７３７３２、およびＰＪＪ９５５６０を参照されたい）、Ｗｏｌｉｎｅｌｌａ ｓｕｃｃｉｎｏｇｅｎｅｓ（Ｖｉｂｒｉｏ ｓｕｃｃｉｎｏｇｅｎｅｓとしても既知、例えば、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＣＡＡ６１５０３を参照されたい）、Ｃｉｔｒｏｂａｃｔｅｒ ｆｒｅｕｎｄｉ（例えば、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＥＸＦ３０４２４を参照されたい）、Ｐｒｏｔｅｕｓ ｖｕｌｇａｒｉｓ（例えば、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＫＧＡ６００７３を参照されたい）、Ｚｙｍｏｍｏｎａｓ ｍｏｂｉｌｉｓ（例えば、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＡＨＢ１０７６０、ＡＲＴ９３８８６、ＡＡＶ９０３０７、ＡＥＨ６３２７７、およびＡＣＶ７６０７４を参照されたい）、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔアクセッション番号Ｏ３４４８を参照されたい）、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ（例えば、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＡＲＷ５６２７３、ＡＲＷ５４５３７、ＡＲＷ４４９１５、およびＡＯＰ１７３７２を参照されたい）、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｉｒｃｕｌａｎｓ（例えば、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＫＬＶ２５７５０、ＰＡＥ１３０９４、ＰＡＤ８９９８０、ＰＡＤ８１３４９、ＰＡＤ９０００８、およびＰＡＥ１３１２１を参照されたい）、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ ａｅｒｏｇｅｎｅｓ（例えば、ＮＣＢＩ参照番号ＹＰ＿００４５９４５２１およびＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＳＦＸ８６５３８を参照されたい）、Ｓｅｒｒａｔｉａ ｍａｒｃｅｓｃｅｎｓ（例えば、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＡＬＤ４６５８８、ＡＬＥ９５２４８、ＯＳＸ８１９５２、およびＰＨＩ５３１９２を参照されたい）、Ｗｏｌｉｎｅｌｌａ ｓｕｃｃｉｎｏｇｅｎｅｓ（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔアクセッション番号Ｐ５０２８６を参照されたい）、Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔアクセッション番号Ｏ２５４２４を参照されたい）、ならびにＣａｖｉａ ｐｏｒｃｅｌｌｕｓ（モルモット）（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔアクセッション番号Ｈ０Ｗ０Ｔ５を参照されたい）、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｏｍｉｕｓ（例えば、ＮＣＢＩ参照番号ＸＰ＿０１５４０７８１９を参照されたい）、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｔｅｒｒｅｕｓ（例えば、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＥＡＵ３６９０５およびＫＴ７２８８５２を参照されたい）、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｆｉｓｃｈｅｒｉ（ＮＣＢＩ参照番号ＸＰ＿００１２６５３７２）、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｆｕｍｉｇａｔｕｓ（ＮＣＢＩ参照番号ＸＰ＿７５００２８）、Ｇｌａｒｅａ ｌｏｚｏｙｅｎｓｉｓ（例えば、ＮＣＢＩ参照番号ＸＰ＿００８０８６７３６を参照されたい）、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓａｅ（例えば、ＮＣＢＩ参照番号ＮＰ＿０１０６０７を参照されたい）、Ｃｙｂｅｒｌｉｎｄｎｅｒａ ｊａｄｉｎｉｉ（Ｃａｎｄｉｄａ ｕｔｉｌｉｓとしても既知、例えば、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＣＥＰ２４０３３を参照されたい）、Ｍｅｙｅｒｏｚｙｍａ ｇｕｉｌｌｉｅｒｍｏｎｄｉｉ（Ｃａｎｄｉｄａ ｇｕｉｌｌｉｅｒｍｏｎｄｉｉとしても既知、例えば、ＮＣＢＩ参照番号ＸＰ＿００１４８５０６７、およびＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＥＤＫ３６９１３を参照されたい）、ならびにＲｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ ｔｏｒｕｌｏｉｄｅｓ（例えば、ＮＣＢＩ参照番号ＸＰ＿０１６２７４１４９．１およびＸＰ＿０１６２７２５０８）、または前述のいずれかの断片もしくはバリアント由来のアスパラギナーゼを含む。
いくつかの実施形態では、アスパラギンを含む外因性免疫原性ポリペプチド（および外因性免疫原性ポリペプチドを含む細胞）は、アスパラギナーゼ活性を有する。アスパラギナーゼ活性は、例えば、Ｇｅｒｖａｉｓ ａｎｄ Ｆｏｏｔｅ （２０１４）Ｍｏｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．４５（１０）：８６５－７７（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）のアッセイを使用して測定され得る。
アスパラギナーゼを含む外因性免疫原性ポリペプチドを含む操作された赤血球系細胞および除核細胞は、例えば、白血病（例えば、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、リンパ芽球性リンパ腫）、リンパ腫（例えば、ＮＫ／Ｔ細胞リンパ腫または非ホジキンリンパ腫）、膵がん、卵巣がん、卵管がん、および腹膜がんを含む、本明細書に記載されるがんの治療で使用され得る。
２．フェニルアラニンアンモニアリアーゼ（ＰＡＬ）
いくつかの実施形態では、外因性免疫原性ポリペプチドは、フェニルアラニンアンモニアリアーゼ（ＰＡＬ）またはその断片もしくはバリアントを含むアミノ酸分解ポリペプチドを含むか、またはそれらからなる。ＰＡＬまたはその断片もしくはバリアントを含む外因性免疫原性ポリペプチドを含む操作された赤血球系細胞または除核細胞は、フェニルケトン尿症（ＰＫＵ）を有する対象を治療するために使用され得る。いくつかの実施形態では、外因性免疫原性ポリペプチドは、Ａｎａｂａｅｎａ ｖａｒｉａｂｉｌｉｓ、Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ｔｈａｌｉａｎａ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｐｕｔｉｄａ由来のＰＡＬ、またはその断片もしくはバリアントを含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＰＡＬを含む外因性免疫原性ポリペプチド（および外因性免疫原性ポリペプチドを含む細胞）は、フェニルアラニンを分解して、ｔｒａｎｓ－ケイ皮酸およびアンモニアを産生することができる。ＰＡＬ活性は、Ｍｏｆｆｉｔｔ ｅｔ ａｌ．（２００７）Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ４６：１００４－１２（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）によって記載されるアッセイを使用して測定され得る。
３．グルタミナーゼ
いくつかの実施形態では、外因性免疫原性ポリペプチドは、グルタミナーゼまたはその断片もしくはバリアントを含むアミノ酸分解ポリペプチドを含むか、またはそれらからなる。いくつかの実施形態では、グルタミナーゼまたはその断片もしくはバリアントを含む外因性免疫原性ポリペプチドは、グルタミン分解活性およびアスパラギナーゼ活性の両方を有する。
多数のグルタミナーゼが特定されており、本明細書に記載されるように使用され得る。例えば、いくつかの実施形態では、外因性免疫原性ポリペプチドは、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ、Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｇｌｕｔａｍｉｎａｓｉｆｉｃａｎｓ、もしくはＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｐｕｔｉｄａ由来のグルタミナーゼ、またはその断片もしくはバリアントを含む。
グルタミナーゼを含む外因性免疫原性ポリペプチドを含む操作された赤血球系細胞は、例えば、白血病（例えば、ＡＭＬ、ＡＬＬ、リンパ芽球性リンパ腫）、リンパ腫（例えば、ＮＫ／Ｔ細胞リンパ腫または非ホジキンリンパ腫）、膵がん、卵巣がん、卵管がん、および腹膜がんを含む、本明細書に記載されるがんの治療で使用され得る。
本明細書に記載される操作された赤血球系細胞または除核細胞の外因性免疫原性ポリエプチドに含まれ得るアスパラギナーゼ、フェニルアラニンアンモニアリアーゼ、およびグルタミナーゼの例示的なアミノ酸配列が、表２に記載される。いくつかの実施形態では、外因性免疫原性ポリペプチドは、配列番号５、６、および７のうちのいずれか１つのアミノ酸配列またはその断片もしくはバリアントを含むＰＡＬを含むか、またはそれらからなる。いくつかの実施形態では、外因性免疫原性ポリペプチドは、配列番号８、９、１０、１１、１２、１３、および１４のうちのいずれか１つのアミノ酸配列またはその断片もしくはバリアントを含むアスパラギナーゼを含むか、またはそれらからなる。いくつかの実施形態では、外因性免疫原性ポリペプチドは、配列番号１５、１６、１７、および１８のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含むグルタミナーゼ、またはその断片もしくはバリアントを含むか、またはそれらからなる。いくつかの実施形態では、外因性免疫原性ポリペプチドは、配列番号８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、および１８のうちのいずれか１つのアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、またはその断片（例えば、その酵素的に活性な断片）を含むか、またはそれらからなる。
Figure 2023513263000006
Figure 2023513263000007
Figure 2023513263000008
４．フェニルアラニンヒドロキシラーゼ（ＰＡＨ）
いくつかの実施形態では、外因性免疫原性ポリペプチドは、フェニルアラニンヒドロキシラーゼ（ＰＡＨ）またはその断片もしくはバリアントを含むアミノ酸分解ポリペプチドを含むか、またはそれらからなる。ＰＡＨまたはその断片もしくはバリアントを含む外因性免疫原性ポリペプチドを含む操作された赤血球系細胞または赤血球系細胞は、ＰＫＵを有する対象を治療するために使用され得る。フェニルアラニンヒドロキシラーゼは、任意の供給源、例えば、哺乳動物、真菌、植物、または細菌源に由来し得る。例えば、いくつかの実施形態では、ＰＡＨは、Ｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｖｉｏｌａｃｅｕｍに由来する（例えば、参照により本明細書に組み込まれるＹｅｗ ｅｔ ａｌ．（２０１３）Ｍｏｌ．Ｇｅｎ．Ｍｅｔａｂ．１０９：３３９－４４を参照されたい）。
５．ホモシステイン低減ポリペプチドおよびホモシステイン分解ポリペプチド
いくつかの実施形態では、外因性免疫原性ポリペプチドは、ホモシステイン低減ポリペプチドもしくはホモシステイン分解ポリペプチド、またはその断片もしくはバリアントを含むアミノ酸分解ポリペプチドを含むか、またはそれらからなる。米国特許公開第２０１９／０３０９２７１号（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）は、本明細書に記載される操作された赤血球系細胞（例えば、操作された除核赤血球系細胞）または除核細胞（例えば、改変された除核細胞）の細胞表面上の外因性免疫原性ポリペプチドに含まれ得る複数のホモシステイン低減ポリペプチドおよびホモシステイン分解ポリペプチドについて記載する。ホモシステイン低減ポリペプチド（またはその断片もしくはバリアント）あるいはホモシステイン分解ポリペプチド（またはその断片もしくはバリアント）を含む外因性免疫原性ポリペプチドを含む操作された赤血球系細胞は、ホモシステインレベルの低減を必要とする対象においてそれを行うために、および／またはホモシステイン関連疾患を有する対象を治療するために使用され得る。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供される操作された赤血球系細胞または除核細胞は、シスタチオニンベータ－シンターゼもしくはメチオニンガンマ－リアーゼなどのホモシステイン分解ポリペプチド、またはその断片もしくはバリアントを含むか、またはそれらからなる第１の外因性免疫原性ポリペプチド、およびホモシステイン低減ポリペプチドまたはそのバリアントを含むか、またはそれらからなる第２の外因性免疫原性ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される操作された赤血球系細胞または除核細胞は、ホモシステイン分解ポリペプチドまたはその断片もしくはバリアントを含むか、またはそれらからなる第１の外因性免疫原性ポリペプチド、およびホモシステイン分解ポリペプチドまたはその断片もしくはバリアントを含むか、またはそれらからなる第２の外因性免疫原性ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される操作された赤血球系細胞または除核細胞は、ホモシステイン低減ポリペプチドまたはその断片もしくはバリアントを含むか、またはそれらからなる第１の外因性免疫原性ポリペプチド、およびホモシステイン低減ポリペプチドまたはその断片もしくはバリアントを含むか、またはそれらからなる第２の外因性免疫原性ポリペプチドを含む。
ホモシステイン低減ポリペプチドおよびホモシステイン分解ポリペプチド、ならびにその断片およびバリアントは、任意の供給源または種、例えば、哺乳動物、真菌（酵母を含む）、植物、または細菌源に由来し得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される使用のためのホモシステイン低減ポリペプチドは、キメラホモシステイン低減ポリペプチドまたはキメラホモシステイン分解ポリペプチド（例えば、２つの異なるポリペプチド、例えば、２つの異なる生物種に由来）である。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供される外因性免疫原性ポリペプチドは、ホモシステイン低減ポリペプチドを含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、外因性免疫原性ポリペプチドは、メチオニンアデノシルトランスフェラーゼ（例えば、酵素番号（Ｅ．Ｃ．）２．５．１．６）、アラニントランスアミナーゼ（例えば、Ｅ．Ｃ．２．６．１．２）、Ｌ－アラニン－Ｌ－アンチカプシンリガーゼ（例えば、Ｅ．Ｃ．６．３．２．４９）、Ｌ－システインデスルフィダーゼ（例えば、Ｅ．Ｃ．４．４．１．２８）、メチレンテトラヒドロ葉酸レダクターゼ（ＭＴＨＦＲ）（例えば、Ｅ．Ｃ．１．５．１．２０）、５－メチルテトラヒドロ葉酸－ホモシステインメチルトランスフェラーゼレダクターゼ（ＭＴＲＲ）（例えば、Ｅ．Ｃ．１．１６．１．８）、またはメチルマロン酸尿およびホモシスチン尿、ｃｂｌＤ型（ＭＭＡＤＨＣ）、または前述のいずれかの断片もしくはバリアントを含む、ホモシステイン低減ポリペプチドを含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供される外因性免疫原性ポリペプチドは、ホモシステイン分解ポリペプチドを含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、外因性免疫原性ポリペプチドは、シスタチオニンベータ－シンターゼ、メチオニンガンマ－リアーゼ（例えば、Ｅ．Ｃ．４．４．１．１１）、スルフィド：キノンレダクターゼ（例えば、Ｅ．Ｃ．１．８．５．４）、メチオニンシンターゼ（例えば、Ｅ．Ｃ．２．１．１．１３）、５－メチルテトラヒドロプテロイルトリグルタミン酸－ホモシステインＳ－メチルトランスフェラーゼ（例えば、Ｅ．Ｃ．２．１．１．１４）、アデノシルホモシステイナーゼ（例えば、Ｅ．Ｃ．３．３．１．１）、シスタチオニンガンマ－リアーゼ（例えば、Ｅ．Ｃ．４．４．１．１）、Ｌ－アミノ酸オキシダーゼ（例えば、Ｅ．Ｃ．１．４．３．２）、テチン－ホモシステインＳ－メチルトランスフェラーゼポリペプチド（例えば、Ｅ．Ｃ．２．１．１．３）、ベタイン－ホモシステインＳ－メチルトランスフェラーゼ（例えば、Ｅ．Ｃ．２．１．１．５）、ホモシステインＳ－メチルトランスフェラーゼ（例えば、Ｅ．Ｃ．２．１．１．１０）、セレノシステインＳｅ－メチルトランスフェラーゼ（例えば、Ｅ．Ｃ．２．１．１．２８０）、シスタチオニンガンマ－シンターゼ（例えば、Ｅ．Ｃ．２．５．１．４８）、Ｏ－アセチルホモセリンアミノカルボキシプロピルトランスフェラーゼ（例えば、Ｅ．Ｃ．２．５．１．４９）、アスパラギン－オキソ酸トランスアミナーゼ（例えば、Ｅ．Ｃ．２．６．１．１４）、グルタミン－フェニルピルビン酸トランスアミナーゼ（例えば、Ｅ．Ｃ．２．６．１．６４）、３－メルカプトピルビン酸硫黄トランスフェラーゼ（例えば、Ｅ．Ｃ．２．８．１．２）、ホモシステインデスルフヒドラーゼ（例えば、Ｅ．Ｃ．４．４．１．２）、シスタチオニンベータ－リアーゼ（例えば、Ｅ．Ｃ．４．４．１．８）、アミノ酸ラセマーゼ（例えば、Ｅ．Ｃ．５．１．１．１０）、メチオニン－ｔＲＮＡリガーゼ（例えば、Ｅ．Ｃ．６．１．１．１０）、グルタミン酸－システインリガーゼ（例えば、Ｅ．Ｃ．６．３．２．２）、Ｎ－（５－アミノ－５－カルボキシペンタノイル）－Ｌ－システイニル－Ｄ－バリンシンターゼ（例えば、Ｅ．Ｃ．６．３．２．２６）、Ｌ－イソロイシン４－ヒドロキシラーゼ（例えば、Ｅ．Ｃ．１．１４．１１．４５）、Ｌ－リシンＮ６－モノオキシゲナーゼ（ＮＡＤＰＨ）（例えば、Ｅ．Ｃ．１．１４．１３．５９）、メチオニンデカルボキシラーゼ（例えば、Ｅ．Ｃ．４．１．１．５７）、２，２－ジアルキルグリシンデカルボキシラーゼ（ピルビン酸塩）（例えば、Ｅ．Ｃ．４．１．１．６４）、もしくはシステインシンターゼ（ＣｙｓＯ）（例えば、Ｅ．Ｃ．２．５．１．４７、例えば、Ａｅｒｏｐｙｒｕｍ ｐｅｒｎｉｘ ＣｙｓＯポリペプチド）、または前述のいずれかの断片もしくはバリアントを含むホモシステイン分解ポリペプチドを含むか、またはそれらからなる。
尿酸分解ポリペプチド
いくつかの実施形態では、外因性免疫原性ポリペプチドは、尿酸分解ポリペプチドまたはその断片もしくはバリアントを含むか、またはそれらからなる。米国特許公開第２０１９／０３０９２６９号（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）は、本明細書に記載される操作された赤血球系細胞（例えば、操作された除核赤血球系細胞）または除核細胞（例えば、改変された除核細胞）の細胞表面上の外因性免疫原性ポリペプチドに含まれ得る複数の尿酸分解ポリペプチドについて記載する。尿酸分解ポリペプチド（またはその断片もしくはバリアント）を含む外因性免疫原性ポリペプチドを含む操作された赤血球系細胞は、尿酸関連疾患（例えば、痛風）を有する対象を治療するために使用され得る。
尿酸分解ポリペプチドならびにその断片およびバリアントは、任意の供給源または種、例えば、哺乳動物、真菌（酵母を含む）、植物、もしくは細菌源に由来し得るか、または組換え技術によって操作され得る。いくつかの実施形態では、外因性免疫原性ポリペプチドは、キメラ尿酸分解ポリペプチド（例えば、２つの異なるポリペプチド、例えば、２つの異なる生物種に由来）を含むか、またはそれらからなる。
いくつかの実施形態では、外因性免疫原性ポリペプチドは、ウリカーゼ、ＨＩＵヒドロラーゼ、ＯＨＣＵデカルボキシラーゼ、アラントイナーゼ、アラントイカーゼ、ミエロペルオキシダーゼ、ＦＡＤ依存性尿酸ヒドロキシラーゼ、キサンチンデヒドロゲナーゼ、ヌクレオシドデオキシリボシルトランスフェラーゼ、ジオキソテトラヒドロピリミジンホスホリボシルトランスフェラーゼ、ジヒドロピリミジナーゼ、もしくはグアニンデアミナーゼ、またはそれらのバリアントを含む尿酸分解ポリペプチドを含むか、またはそれらからなる。
シュウ酸オキシダーゼ
いくつかの実施形態では、外因性免疫原性ポリペプチドは、シュウ酸オキシダーゼ（ＯｘＯｘ）またはその断片もしくはバリアントを含むか、またはそれらからなる。ＯｘＯｘまたはその断片もしくはバリアントを含む外因性免疫原性ポリペプチドを含む操作された赤血球系細胞および除核細胞は、高シュウ酸尿症、例えば、原発性高シュウ酸尿症を有する対象を治療するために使用され得る。
シュウ酸オキシダーゼならびにその断片およびバリアントは、任意の供給源または種、例えば、哺乳動物、真菌（酵母を含む）、植物、もしくは細菌源に由来し得るか、または組換え技術によって操作され得る。いくつかの実施形態では、外因性免疫原性ポリペプチドは、キメラシュウ酸オキシダーゼ（例えば、２つの異なるポリペプチド、例えば、２つの異なる生物種に由来）を含むか、またはそれらからなる。
外因性抗原性ポリペプチド
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される操作された赤血球系細胞（例えば、操作された除核赤血球系細胞）または除核細胞（例えば、改変された除核細胞）は、少なくとも１つ（例えば、１、２、３、またはそれ以上）の外因性免疫原性ポリペプチド、少なくとも１つ（例えば、１、２、３、またはそれ以上）の外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチド、および少なくとも１つ（例えば、１、２、３、またはそれ以上）の外因性抗原性ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される操作された赤血球系細胞または除核細胞は、外因性免疫原性ポリペプチド、および外因性抗原性ポリペプチドに結合（例えば、特異的に結合）した外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、外因性抗原性ポリペプチドは、例えば、共有結合的または非共有結合的のいずれかで外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドに結合しており、両方のポリペプチドは、互いに融合していない（例えば、単一融合ポリペプチドとして）。他の実施形態では、外因性抗原性ポリペプチドは、融合ポリペプチドとして、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドの一部分に連結されている。いくつかの実施形態では、外因性抗原性ポリペプチドは、免疫寛容原性ポリペプチドである。いくつかの実施形態では、外因性抗原性ポリペプチドは、モチーフＸＩ／ＬＰＸＸＸＸＸＬを含むか、またはそれからなり、Ｘは、任意のアミノ酸残基（配列番号１）である。いくつかの実施形態では、外因性抗原性ポリペプチドは、ＲＩＩＰＲＨＬＱＬ（配列番号８４２）、ＫＬＰＡＱＦＹＩＬ（配列番号８４３）、およびＫＧＰＰＡＡＬＴＬ（配列番号８４４）から選択されるアミノ酸配列を含むか、またはそれらからなる。
いくつかの実施形態では、外因性抗原性ポリペプチドの一部分は、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドの抗原結合裂に結合（例えば、特異的に結合）することができる。当業者であれば、本明細書に提供される外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドに結合（例えば、特異的に結合）することができ、本明細書に記載される操作された赤血球系細胞または除核細胞に含まれ得る、外因性抗原性ポリペプチド（またはその断片）を容易に特定することができる。例えば、Ｋｅｓｓｌｅｒ ａｎｄ Ｍｅｌｉｅｆ（２００７）Ｌｅｕｋｅｍｉａ ２１：１８５９－７４（その全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。例えば、表１を参照されたい）に記載されるＴ細胞エピトープ予測ツールおよびアルゴリズムを含むがこれに限定されない、当該技術分野で既知の検索ツールおよびアルゴリズムが使用され得る。追加の検索ツールには、ＢＩＭＡＳ（ワールドワイドウェブ上でｂｉｍａｓ．ｄｃｒｔ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｍｏｌｂｉｏ／ｈｌａ＿ｂｉｎｄにおいて利用可能）、ＳＹＦＰＥＩＴＨＩ（ワールドワイドウェブ上でｓｙｆｐｅｉｔｈｉ．ｄｅにおいて利用可能）、ＮｅｔＭＨＣ（ワールドワイドウェブ上でｃｂｓ．ｄｔｕ．ｄｋ／ｓｅｒｖｉｃｅｓ／ＮｅｔＭＨＣにおいて利用可能）、ＰＲＥＤＥＰ（ワールドワイドウェブ上でｍａｒｇａｌｉｔ．ｈｕｊｉ．ａｃ．ｉｌにおいて利用可能）、ＰｒｏＰｒｅｄ－ｌ（ワールドワイドウェブ上でｉｍｔｅｃｈ．ｒｅｓ．ｉｎ／ｒａｇｈａｖａ／ｐｒｏｐｒｅｄ１／ｉｎｄｅｘ．ｈｔｍｌにおいて利用可能）、ｎＨＬＡＰｒｅｄ（ワールドワイドウェブ上でｉｍｔｅｃｈ．ｒｅｓ．ｉｎ／ｒａｇｈａｖａ／ｎｈｌａｐｒｅｄ／において利用可能）、およびＩＥＤＢ（ワールドワイドウェブ上でｔｏｏｌｓ．ｉｍｍｕｎｅｅｐｉｔｏｐｅ．ｏｒｇ／ａｎａｌｙｚｅ／ｈｔｍｌ／ｍｈｃ＿ｂｉｎｄｉｎｇ．ｈｔｍｌにおいて利用可能）が含まれる。国際特許公開第２０１８／００５５５９号（その内容は、参照により本明細書に組み込まれる）も、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドに結合することができる外因性抗原性ポリペプチドまたはその断片を特定する方法を記載する。結合親和性を評価するため、および／または外因性抗原性ポリペプチドまたはその断片が外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドに特異的に結合するかどうかを判定するための複数のアッセイが、当該技術分野で既知である。例えば、表面プラズモン共鳴（Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標））を使用して、２つのポリペプチド間の複合体の結合定数を決定することができる。他の好適なアッセイには、例えば、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）および放射免疫測定（ＲＩＡ）などの免疫測定、または蛍光、ＵＶ吸収、円二色性、核磁気共鳴（ＮＭＲ）、ウェスタンブロット、分析用超遠心、および分光法を使用したタンパク質の分光学的もしくは光学的特性の変化を監視することによる結合の決定が含まれる（例えば、Ｓｃａｔｃｈａｒｄ ｅｔ ａｌ．（１９４９）Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．５１：６６０－７２、Ｗｉｌｓｏｎ（２００２）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２９５：２１０３－５、米国特許第５，２８３，１７３号および同第５，４６８，６１４号、ならびに国際特許公開第２０１８／００５５５９号を参照されたい）。あるいは、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドへの外因性抗原性ポリペプチドまたはその断片の結合は、予測アルゴリズムを使用して決定され得る（例えば、Ｋｅｓｓｌｅｒ ａｎｄ Ｍｅｌｉｅｆ（２００７）（上記参照）を参照されたい）。
いくつかの実施形態では、外因性抗原性ポリペプチドは、ヒトポリペプチドに由来する。いくつかの実施形態では、外因性抗原性ポリペプチドは、感染性疾患剤（例えば、ウイルス、寄生体（例えば、細胞内寄生体）、プリオン、細菌（例えば、細胞内病原菌））に由来する。例えば、いくつかの実施形態では、外因性抗原性ポリペプチドは、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドの抗原結合裂に結合することができる感染性疾患剤ポリペプチドの断片を含む。いくつかの実施形態では、外因性抗原性ポリペプチドは、ウイルス（例えば、エプスタインバーウイルスまたはＨＩＶ）に由来する。いくつかの実施形態では、外因性抗原性ポリペプチドは、細菌（例えば、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）に由来する。
いくつかの実施形態では、外因性抗原性ポリペプチドは、約８～約２４アミノ酸残基長である。いくつかの実施形態では、外因性抗原性ポリペプチドは、約８アミノ酸残基長～２４アミノ酸残基長、例えば、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、または２４アミノ酸残基長である。いくつかの実施形態では、外因性抗原性ポリペプチドは、約１０～１５０アミノ酸残基（例えば、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、または１５０アミノ酸残基長）である。
いくつかの実施形態では、外因性抗原性ポリペプチドは、切断可能な部位を含む。いくつかの実施形態では、切断可能な部位は、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドの抗原結合裂に結合する外因性抗原性ポリペプチドのアミノ酸配列に隣接している。いくつかの実施形態では、切断可能な部位は、外因性抗原性ポリペプチドのリンカー内に存在する。いくつかの実施形態では、切断可能な部位は、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドの抗原結合裂に結合する外因性抗原性ポリペプチドのアミノ酸配列内に存在する。
いくつかの実施形態では、外因性抗原性ポリペプチドは、Ｎ末端またはＣ末端融合のいずれかとして、膜アンカー（例えば、膜貫通ドメイン、例えば、Ｉ型膜タンパク質膜貫通ドメイン（例えば、グリコフォリンＡ（ＧＰＡ）膜貫通ドメイン）、またはＩＩ型膜タンパク質膜貫通ドメイン（例えば、Ｋｅｌｌ膜貫通ドメインもしくは小内在性膜タンパク質１（ＳＭＩＭ１）膜貫通ドメイン））を含み、それにより、本明細書に記載される外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドに結合することができる外因性抗原性ポリペプチドの部分は、操作された赤血球系細胞または除核細胞の表面の外側上に存在する。いくつかの実施形態では、外因性抗原性ポリペプチドは、膜アンカー（例えば、膜貫通ドメイン）、リンカー、および外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドの抗原結合裂に結合することができるアミノ酸配列（例えば、抗原）を含む。本明細書に提供されるリンカーのいずれかは、膜アンカーと、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドの抗原結合裂に結合することができるアミノ酸配列との間に配置され得る。例えば、いくつかの実施形態では、リンカーは、可動性リンカー（例えば、ＧｌｙＳｅｒリンカー）である。いくつかの実施形態では、リンカーは、約３０～約１００アミノ酸残基長である。他の実施形態では、リンカーは、約４０アミノ酸残基長～７０アミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは、切断可能なリンカー（例えば、切断可能な部位を含む）である。
いくつかの実施形態では、外因性抗原性ポリペプチドは、脂質部分への付着（例えば、Ｎ－ミリストイル化、Ｓ－パルミトイル化、ファルネシル化、ゲラニルゲラニル化、およびグリコシルホスファチジルイノシトール（ＧＰＩ）アンカー）を介して、原形質膜に係留され得る。
本明細書に記載される外因性抗原性ポリペプチドをコードする核酸配列を含む、またはそれからなる核酸（例えば、外因性核酸）も提供される。いくつかの実施形態では、核酸は、外因性抗原性ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームまたは遺伝子に動作可能に連結された少なくとも１つのプロモーター（例えば、構成的または誘導性プロモーター）を含む。いくつかの実施形態では、核酸は、コドン最適化されている（例えば、ヒト細胞中の発現に対して）。いくつかの実施形態では、核酸は、コドン最適化されていない。
外因性抗原性ポリペプチドの非限定的な例が、表３に列挙される。
外因性自己抗原ポリペプチド
外因性自己抗原性ポリペプチドの非限定的な例には、プロインスリン、プロインスリン、およびインスリンペプチド（例えば、任意選択的に、本明細書に記載される膜アンカーのいずれかに融合しているか、または脂質部分への付着（例えば、Ｎ－ミリストイル化、Ｓ－パルミトイル化、ファルネシル化、ゲラニルゲラニル化、およびグリコシルホスファチジルイノシトール（ＧＰＩ）アンカー）を介して、原形質膜に付着している）が含まれる。外因性自己抗原性ポリペプチドの追加の例には、ＲＡＳグアニル放出タンパク質２（ＲａｓＧＲＰ２）、ＣＤＰ Ｌ－フコースシンターゼ、またはそれらの断片が含まれる。外因性抗原性ポリペプチド、外因性自己抗原性ポリペプチド、および自己抗原の追加の非限定的な例が、表３に示される。
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いくつかの実施形態では、少なくとも１つの外因性自己抗原性ポリペプチドは、ＨＬＡ－Ｇタンパク質配列もしくはその機能的断片、またはＭＨＣタンパク質配列もしくはその機能的断片を含まない。
いくつかの実施形態では、少なくとも１つの外因性自己抗原性ポリペプチドのうちの１つ以上は、少なくとも１つのＩｉキーペプチド（例えば、膜アンカーと自己抗原との間に配置されている）を含み得る。例えば、いくつかの実施形態では、Ｉｉキーペプチドは、アミノ酸配列ＬＲＭＫＬＰＫＰＰＫＰＶＳＫＭＲ（配列番号７６５）、ＹＲＭＫＬＰＫＰＰＫＰＶＳＫＭＲ（配列番号７６６）、ＬＲＭＫ（配列番号７６７）、ＹＲＭＫ（配列番号７６８）、ＬＲＭＫＬＰＫ（配列番号７６９）、ＹＲＭＫＬＰＫ（配列番号７７０）、ＹＲＭＫＬＰＫＰ（配列番号７７１）、ＬＲＭＫＬＰＫＰ（配列番号７７２）、ＬＲＭＫＬＰＫＳ（配列番号７７３）、ＹＲＭＫＬＰＫＳ（配列番号７７４）、ＬＲＭＫＬＰＫＳＡＫＰ（配列番号７７５）、またはＬＲＭＫＬＰＫＳＡＫＰＶＳＫ（配列番号７７６）を含むか、またはそれらからなる。いくつかの実施形態では、少なくとも１つのＩｉキーペプチドは、配列番号７６５～７７６のうちのいずれか１つに対して少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、少なくとも１つの外因性自己抗原性ポリペプチドのうちの１つ以上は、細胞表面上にある。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの外因性自己抗原性ポリペプチドのうちの１つ以上は、膜アンカーをさらに含むか、または脂質部分への付着を介して細胞の原形質膜に係留されている。
いくつかの実施形態では、外因性自己抗原性ポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端への方向に式Ｉ：Ｘ１－Ｘ２－Ｘ３（式Ｉ）を含み、式中、Ｘ１は、ＩＩ型膜タンパク質またはその膜貫通ドメイン（例えば、本明細書に記載される例示的なＩＩ型膜タンパク質またはその膜貫通ドメインのいずれか、例えば、ＳＭＩＭ１膜貫通ドメイン、またはトランスフェリン受容体（（ＴｆＲ１）ＣＤ７１としても既知の）膜貫通ドメイン）を含み、Ｘ２は、Ｉｉキーペプチド（例えば、本明細書に記載されるか、または当該技術分野で既知の例示的なＩｉキーペプチドのいずれか）を含み、Ｘ３は、自己抗原（例えば、本明細書に記載されるか、または当該技術分野で既知の例示的な自己抗原のいずれか）を含む。いくつかの実施形態では、外因性自己抗原性ポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端への方向に式ＩＩ：Ｘ１－Ｘ２－Ｘ３－Ｘ４（式ＩＩ）を含み、式中、Ｘ１は、ＩＩ型膜タンパク質またはその膜貫通ドメイン（例えば、本明細書に記載されるか、または当該技術分野で既知の例示的なＩＩ型受容体膜貫通ドメインのいずれか、例えば、ＳＭＩＭ１膜貫通ドメイン、またはＴｆＲ１膜貫通ドメイン）を含み、Ｘ２は、リンカー（例えば、本明細書に記載されるか、または当該技術分野で既知の例示的なリンカーのいずれか）を含み、Ｘ３は、Ｉｉキーペプチド（例えば、本明細書に記載されるか、または当該技術分野で既知の例示的なＩｉキーペプチドのいずれか）を含み、Ｘ４は、自己抗原（例えば、本明細書に記載されるか、または当該技術分野で既知の例示的な自己抗原のいずれか）を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、ポリＧＳリンカーである。いくつかの実施形態では、ポリＧＳリンカーは、（ＧＳ）ｎを含み、ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０である。いくつかの実施形態では、リンカーは、ＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳ（配列番号８４０）またはＧＰＧＰＧ（配列番号８４１）を含むか、またはそれらからなる。いくつかの実施形態では、Ｉｉキーペプチドは、ＬＲＭＫＬＰＫＰＰＫＰＶＳＫＭＲ（配列番号７６５）、ＹＲＭＫＬＰＫＰＰＫＰＶＳＫＭＲ（配列番号７６６）、ＬＲＭＫ（配列番号７６７）、ＹＲＭＫ（配列番号７６８）、ＬＲＭＫＬＰＫ（配列番号７６９）、ＹＲＭＫＬＰＫ（配列番号７７０）、ＹＲＭＫＬＰＫＰ（配列番号７７１）、ＬＲＭＫＬＰＫＰ（配列番号７７２）、ＬＲＭＫＬＰＫＳ（配列番号７７３）、ＹＲＭＫＬＰＫＳ（配列番号７７４）、ＬＲＭＫＬＰＫＳＡＫＰ（配列番号７７５）、およびＬＲＭＫＬＰＫＳＡＫＰＶＳＫ（配列番号７７６）の群から選択される配列を含む。いくつかの実施形態では、外因性自己抗原性ポリペプチドは、そのＣ末端に、１つ以上（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０）の追加の自己抗原（例えば、同一または異なる自己抗原）をさらに含む。いくつかの実施形態では、任意の２つの自己抗原は、リンカーによって分離されている。いくつかの実施形態では、リンカーは、ポリＧＳリンカーである。いくつかの実施形態では、リンカーは、ＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳ（配列番号８４０）またはＧＰＧＰＧ（配列番号８４１）を含むか、またはそれらからなる。
いくつかの実施形態では、外因性自己抗原性ポリペプチドは、細胞内にある。いくつかの実施形態では、外因性自己抗原性ポリペプチドは、原形質膜の細胞内側にある。いくつかの実施形態では、外因性自己抗原性ポリペプチドは、膜アンカーをさらに含むか、または脂質部分への付着を介して細胞の原形質膜に係留されている。いくつかの実施形態では、外因性自己抗原性ポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端への方向に式ＩＩＩ：Ｘ１－Ｘ２－Ｘ３（式ＩＩＩ）を含み、式中、Ｘ１は、Ｉ型膜タンパク質膜貫通ドメイン（例えば、本明細書に記載されるか、または当該技術分野で既知の例示的なＩ型膜タンパク質またはその膜貫通ドメインのいずれか、例えば、ＧＰＡ膜貫通ドメイン）を含み、Ｘ２は、Ｉｉキーペプチド（例えば、本明細書に記載されるか、または当該技術分野で既知のＩｉキーペプチドのいずれか）を含み、Ｘ３は、自己抗原（例えば、本明細書に記載されるか、または当該技術分野で既知の自己抗原のいずれか）を含む。いくつかの実施形態では、外因性自己抗原性ポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端への方向に式ＩＶ：Ｘ１－Ｘ２－Ｘ３－Ｘ４（式ＩＶ）を含み、式中、Ｘ１は、ＩＩ型膜タンパク質またはその膜貫通ドメイン（例えば、本明細書に記載されるか、または当該技術分野で既知のＩ型膜タンパク質またはその膜貫通ドメインのいずれか、例えば、ＧＰＡ膜貫通ドメイン）を含み、Ｘ２は、リンカー（例えば、本明細書に記載されるか、または当該技術分野で既知の例示的なリンカーのいずれか）を含み、Ｘ３は、Ｉｉキーペプチド（例えば、本明細書に記載されるか、または当該技術分野で既知の例示的なリンカーのいずれか）を含み、Ｘ４は、自己抗原（例えば、本明細書に記載されるか、または当該技術分野で既知の自己抗原のいずれか）を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、ポリＧＳリンカー（例えば、本明細書に記載される例示的なポリＧＳリンカーのいずれか）である。いくつかの実施形態では、リンカーは、ＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳ（配列番号８４０）またはＧＰＧＰＧ（配列番号８４１）を含むか、またはそれらからなる。いくつかの実施形態では、外因性自己抗原性ポリペプチドは、そのＮ末端に、シグナルペプチドをさらに含む。いくつかの実施形態では、シグナルペプチドは、ＧＰＡシグナルペプチドである。いくつかの実施形態では、Ｉｉキーペプチドは、ＬＲＭＫＬＰＫＰＰＫＰＶＳＫＭＲ（配列番号７６５）、ＹＲＭＫＬＰＫＰＰＫＰＶＳＫＭＲ（配列番号７６６）、ＬＲＭＫ（配列番号７６７）、ＹＲＭＫ（配列番号７６８）、ＬＲＭＫＬＰＫ（配列番号７６９）、ＹＲＭＫＬＰＫ（配列番号７７０）、ＹＲＭＫＬＰＫＰ（配列番号７７１）、ＬＲＭＫＬＰＫＰ（配列番号７７２）、ＬＲＭＫＬＰＫＳ（配列番号７７３）、ＹＲＭＫＬＰＫＳ（配列番号７７４）、ＬＲＭＫＬＰＫＳＡＫＰ（配列番号７７５）、およびＲＭＫＬＰＫＳＡＫＰＶＳＫ（配列番号７７６）の群から選択される。いくつかの実施形態では、外因性自己抗原性ポリペプチドは、そのＣ末端に、１つ以上（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０）の追加の自己抗原（例えば、同一または異なる自己抗原）をさらに含む。いくつかの実施形態では、任意の２つの自己抗原は、リンカー（例えば、本明細書に記載される例示的なリンカーのいずれか）によって分離されている。いくつかの実施形態では、リンカーは、ポリＧＳリンカーである。いくつかの実施形態では、リンカーは、ＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳ（配列番号８４０）またはＧＰＧＰＧ（配列番号８４１）を含む。
いくつかの実施形態では、外因性自己抗原性ポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端への方向に式ＶＩＩ：Ｘ１－Ｘ２－Ｘ３－Ｘ４（式ＶＩＩ）を含み、
式中、Ｘ１は、Ｉ型膜タンパク質またはその膜貫通ドメインを含み、Ｘ２は、リンカーを含み、Ｘ３は、ＣＤ７４の細胞質部分またはその断片を含み、Ｘ４は、自己抗原を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、ＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳ（配列番号８４０）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ７４の細胞質部分は、ＱＱＱＧＲＬＤＫＬＴＶＴＳＱＮＬＱＬＥＮＬＲＭＫＬＰＫＰＰＫＰＶＳＫＭＲＭＡＴＰＬＬＭＱＡＬＰＭＧＡＬＰＱＧＰＭＱＮＡＴＫＹＧＮＭＴＥＤＨＶＭＨＬＬＱＮＡＤＰＬＫＶＹＰＰＬＫＧＳＦＰＥＮＬＲＨＬＫＮＴＭＥＴＩＤＷＫＶＦＥＳＷＭＨＨＷＬＬＦＥＭＳＲＨＳＬＥＱＫＰＴＤＡＰＰＫＥＳＬＥＬＥＤＰＳＳＧＬＧＶＴＫＱＤＬＧＰＶＰＭ（配列番号８４５）を含む。いくつかの実施形態では、外因性自己抗原性ポリペプチドのＮ末端は、シグナルペプチドをさらに含む。
いくつかの実施形態では、外因性自己抗原性ポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端への方向に式ＶＩＩＩ：Ｘ１－Ｘ２－Ｘ３－Ｘ４－Ｘ５（式ＶＩＩＩ）を含み、
式中、Ｘ１は、Ｉ型膜タンパク質またはその膜貫通ドメインを含み、Ｘ２は、リンカーを含み、Ｘ３は、ＣＤ７４のＮ末端細胞質部分またはその断片を含み、Ｘ４は、自己抗原を含み、Ｘ５は、ＣＤ７４のＣ末端細胞質部分を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、ＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳ（配列番号８４０）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ７４のＮ末端細胞質部分は、ＱＱＱＧＲＬＤＫＬＴＶＴＳＱＮＬＱＬＥＮＬＲＭＫ（配列番号８４７）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ７４のＣ末端細胞質部分は、ＧＡＬＰＱＧＰＭＱＮＡＴＫＹＧＮＭＴＥＤＨＶＭＨＬＬＱＮＡＤＰＬＫＶＹＰＰＬＫＧＳＦＰＥＮＬＲＨＬＫＮＴＭＥＴＩＤＷＫＶＦＥＳＷＭＨＨＷＬＬＦＥＭＳＲＨＳＬＥＱＫＰＴＤＡＰＰＫＥＳＬＥＬＥＤＰＳＳＧＬＧＶＴＫＱＤＬＧＰＶＰＭ（配列番号８４９）を含む。いくつかの実施形態では、外因性自己抗原性ポリペプチドのＮ末端は、シグナルペプチドをさらに含む。
いくつかの実施形態では、外因性自己抗原性ポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端への方向に式ＸＩ：Ｘ１－Ｘ２－Ｘ３－Ｘ４（式ＸＩ）を含み、式中、Ｘ１は、サイトゾルタンパク質またはその断片を含み、Ｘ２は、リンカーを含み、Ｘ３は、ＣＤ７４の細胞質部分またはその断片を含み、Ｘ４は、自己抗原を含む。いくつかの実施形態では、サイトゾルタンパク質は、ＭＡＧＷＮＡＹＩＤＮＬＭＡＤＧＴＣＱＤＡＡＩＶＧＹＫＤＳＰＳＶＷＡＡＶＰＧＫＴＦＶＮＩＴＰＡＥＶＧＶＬＶＧＫＤＲＳＳＦＹＶＮＧＬＴＬＧＧＱＫＣＳＶＩＲＤＳＬＬＱＤＧＥＦＳＭＤＬＲＴＫＳＴＧＧＡＰＴＦＮＶＴＶＴＫＴＤＫＴＬＶＬＬＭＧＫＥＧＶＨＧＧＬＩＮＫＫＣＹＥＭＡＳＨＬＲＲＳＱＹ（配列番号８４６）を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、ＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳ（配列番号８４０）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ７４の細胞質部分は、ＱＱＱＧＲＬＤＫＬＴＶＴＳＱＮＬＱＬＥＮＬＲＭＫＬＰＫＰＰＫＰＶＳＫＭＲＭＡＴＰＬＬＭＱＡＬＰＭＧＡＬＰＱＧＰＭＱＮＡＴＫＹＧＮＭＴＥＤＨＶＭＨＬＬＱＮＡＤＰＬＫＶＹＰＰＬＫＧＳＦＰＥＮＬＲＨＬＫＮＴＭＥＴＩＤＷＫＶＦＥＳＷＭＨＨＷＬＬＦＥＭＳＲＨＳＬＥＱＫＰＴＤＡＰＰＫＥＳＬＥＬＥＤＰＳＳＧＬＧＶＴＫＱＤＬＧＰＶＰＭ（配列番号８４５）を含む。いくつかの実施形態では、外因性自己抗原性ポリペプチドのＮ末端は、シグナルペプチドをさらに含む。
いくつかの実施形態では、外因性自己抗原性ポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端への方向に式ＸＩＩ：Ｘ１－Ｘ２－Ｘ３－Ｘ４－Ｘ５（式ＸＩＩ）を含み、
式中、Ｘ１は、細胞質タンパク質またはその断片を含み、Ｘ２は、リンカーを含み、Ｘ３は、ＣＤ７４のＮ末端細胞質部分またはその断片を含み、Ｘ４は、自己抗原を含み、Ｘ５は、ＣＤ７４のＣ末端細胞質部分を含む。いくつかの実施形態では、細胞質タンパク質は、ＭＡＧＷＮＡＹＩＤＮＬＭＡＤＧＴＣＱＤＡＡＩＶＧＹＫＤＳＰＳＶＷＡＡＶＰＧＫＴＦＶＮＩＴＰＡＥＶＧＶＬＶＧＫＤＲＳＳＦＹＶＮＧＬＴＬＧＧＱＫＣＳＶＩＲＤＳＬＬＱＤＧＥＦＳＭＤＬＲＴＫＳＴＧＧＡＰＴＦＮＶＴＶＴＫＴＤＫＴＬＶＬＬＭＧＫＥＧＶＨＧＧＬＩＮＫＫＣＹＥＭＡＳＨＬＲＲＳＱＹ（配列番号８４６）を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、ＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳ（配列番号８４０）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ７４のＮ末端細胞質部分は、ＱＱＱＧＲＬＤＫＬＴＶＴＳＱＮＬＱＬＥＮＬＲＭＫ（配列番号８４７）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ７４のＣ末端細胞質部分は、ＧＡＬＰＱＧＰＭＱＮＡＴＫＹＧＮＭＴＥＤＨＶＭＨＬＬＱＮＡＤＰＬＫＶＹＰＰＬＫＧＳＦＰＥＮＬＲＨＬＫＮＴＭＥＴＩＤＷＫＶＦＥＳＷＭＨＨＷＬＬＦＥＭＳＲＨＳＬＥＱＫＰＴＤＡＰＰＫＥＳＬＥＬＥＤＰＳＳＧＬＧＶＴＫＱＤＬＧＰＶＰＭ（配列番号８４９）を含む。いくつかの実施形態では、外因性自己抗原性ポリペプチドのＮ末端は、シグナルペプチドをさらに含む。
いくつかの実施形態では、外因性自己抗原性ポリペプチドは、細胞表面上に存在する。いくつかの実施形態では、外因性自己抗原性ポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端への方向に式ＩＸ：Ｘ１－Ｘ２－Ｘ３（式ＩＸ）を含み、
式中、Ｘ１は、ＩＩ型膜タンパク質またはその膜貫通ドメインを含み、Ｘ２は、ＣＤ７４の細胞質部分またはその断片を含み、Ｘ３は、自己抗原を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ７４の細胞質部分は、ＱＱＱＧＲＬＤＫＬＴＶＴＳＱＮＬＱＬＥＮＬＲＭＫＬＰＫＰＰＫＰＶＳＫＭＲＭＡＴＰＬＬＭＱＡＬＰＭＧＡＬＰＱＧＰＭＱＮＡＴＫＹＧＮＭＴＥＤＨＶＭＨＬＬＱＮＡＤＰＬＫＶＹＰＰＬＫＧＳＦＰＥＮＬＲＨＬＫＮＴＭＥＴＩＤＷＫＶＦＥＳＷＭＨＨＷＬＬＦＥＭＳＲＨＳＬＥＱＫＰＴＤＡＰＰＫＥＳＬＥＬＥＤＰＳＳＧＬＧＶＴＫＱＤＬＧＰＶＰＭ（配列番号８４５）を含む。いくつかの実施形態では、外因性自己抗原性ポリペプチドのＮ末端は、シグナルペプチドをさらに含む。
いくつかの実施形態では、外因性自己抗原性ポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端への方向に式Ｘ：Ｘ１－Ｘ２－Ｘ３－Ｘ４－Ｘ５（式Ｘ）を含み、
式中、Ｘ１は、ＩＩ型膜タンパク質またはその膜貫通ドメインを含み、Ｘ２は、リンカーを含み、Ｘ３は、ＣＤ７４のＮ末端細胞質部分またはその断片を含み、Ｘ４は、自己抗原を含み、Ｘ５は、ＣＤ７４のＣ末端細胞質部分を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号８５０）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ７４のＮ末端細胞質部分は、ＱＱＱＧＲＬＤＫＬＴＶＴＳＱＮＬＱＬＥＮＬＲＭＫ（配列番号８４７）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ７４のＣ末端細胞質部分は、ＡＬＰＱＧＰＭＱＮＡＴＫＹＧＮＭＴＥＤＨＶＭＨＬＬＱＮＡＤＰＬＫＶＹＰＰＬＫＧＳＦＰＥＮＬＲＨＬＫＮＴＭＥＴＩＤＷＫＶＦＥＳＷＭＨＨＷＬＬＦＥＭＳＲＨＳＬＥＱＫＰＴＤＡＰＰＫＥＳＬＥＬＥＤＰＳＳＧＬＧＶＴＫＱＤＬＧＰＶＰＭ（配列番号８４８）を含む。いくつかの実施形態では、外因性自己抗原性ポリペプチドのＮ末端は、シグナルペプチドをさらに含む。
いくつかの実施形態では、外因性自己抗原性ポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端への方向に式ＸＩＩＩ：Ｘ１－Ｘ２－Ｘ３－Ｘ４（式ＸＩＩＩ）を含み、式中、Ｘ１は、Ｉｉキーペプチドを含み、Ｘ２は、自己抗原を含み、Ｘ３は、リンカーを含み、Ｘ４は、Ｉ型膜タンパク質またはその膜貫通ドメインを含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、ＧＰＧＰＧ（配列番号８４１）を含む。いくつかの実施形態では、Ｘ１は、２つ以上（例えば、３、４、５、または６つ）のＩｉキーペプチドを含む。いくつかの実施形態では、外因性自己抗原性ポリペプチドのＮ末端は、シグナルペプチドをさらに含む。
いくつかの実施形態では、外因性抗原性ポリペプチドは、細胞のサイトゾル中にある。いくつかの実施形態では、外因性抗原性ポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端への方向に式Ｖ：Ｘ１－Ｘ２－Ｘ３（式Ｖ）を含み、式中、Ｘ１は、サイトゾルポリペプチド（例えば、本明細書に記載される例示的なサイトゾルポリペプチドのいずれか、例えば、プロフィリン（配列番号８３３）またはその断片）を含み、Ｘ２は、Ｉｉキーペプチド（例えば、本明細書に記載されるか、または当該技術分野で既知の例示的なＩｉキーペプチドのいずれか）を含み、Ｘ３は、外因性抗原性ポリペプチド（例えば、本明細書に記載されるか、または当該技術分野で既知の例示的な抗原性ポリペプチドのいずれか）を含む。
いくつかの実施形態では、外因性自己抗原性ポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端への方向に式ＶＩ：Ｘ１－Ｘ２－Ｘ３－Ｘ４を含み、式中、Ｘ１は、サイトゾルポリペプチドまたはその断片（例えば、本明細書に記載される例示的なサイトゾルポリペプチドのいずれか、例えば、プロフィリン、フェリチン、またはその断片）を含み、Ｘ２は、リンカー（例えば、本明細書に記載されるか、または当該技術分野で既知の例示的なリンカーのいずれか）を含み、Ｘ３は、Ｉｉキーペプチド（例えば、本明細書に記載されるか、または当該技術分野で既知の例示的なＩｉキーペプチドのいずれか）を含み、Ｘ４は、自己抗原（例えば、本明細書に記載されるか、または当該技術分野で既知の例示的な自己抗原のいずれか）を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、ポリＧＳリンカーである。いくつかの実施形態では、リンカーは、ＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳ（配列番号８４０）またはＧＰＧＰＧ（配列番号８４１）を含む。いくつかの実施形態では、Ｉｉキーペプチドは、ＬＲＭＫＬＰＫＰＰＫＰＶＳＫＭＲ（配列番号７６５）、ＹＲＭＫＬＰＫＰＰＫＰＶＳＫＭＲ（配列番号７６６）、ＬＲＭＫ（配列番号７６７）、ＹＲＭＫ（配列番号７６８）、ＬＲＭＫＬＰＫ（配列番号７６９）、ＹＲＭＫＬＰＫ（配列番号７７０）、ＹＲＭＫＬＰＫＰ（配列番号７７１）、ＬＲＭＫＬＰＫＰ（配列番号７７２）、ＬＲＭＫＬＰＫＳ（配列番号７７３）、ＹＲＭＫＬＰＫＳ（配列番号７７４）、ＬＲＭＫＬＰＫＳＡＫＰ（配列番号７７５）、およびＬＲＭＫＬＰＫＳＡＫＰＶＳＫ（配列番号７７６）の群から選択される。いくつかの実施形態では、外因性自己抗原性ポリペプチドは、そのＣ末端に、１つ以上（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０）の追加の自己抗原（例えば、同一または異なる外因性抗原性ポリペプチド）をさらに含む。いくつかの実施形態では、任意の２つの自己抗原は、リンカー（例えば、ＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳ（配列番号８４０）またはＧＰＧＰＧ（配列番号８４１）を含むリンカー）によって分離されている。
いくつかの実施形態では、外因性自己抗原性ポリペプチドは、ＣＤ７４またはその一部分（例えば、配列番号８３５または８３６）を含み得る。
本明細書に記載される外因性自己抗原性ポリペプチドのいずれかで使用され得るリンカーの非限定的な例には、配列番号５３２、８１２、または８１５が含まれる。本明細書に記載される外因性自己抗原性ポリペプチドのいずれかで使用され得るシグナルペプチドの非限定的な例は、ＧＰＡシグナルペプチド（例えば、配列番号８１１）である。本明細書に記載される外因性自己抗原性ポリペプチドのいずれかに含まれ得る膜貫通ドメインの非限定的な例は、配列番号８１３および８１４である。
いくつかの実施形態では、少なくとも１つの外因性自己抗原性ポリペプチドのうちの１つは、配列番号７７７～８１０および８２４～８３２のうちのいずれか１つに対して少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８５％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９２％同一、少なくとも９４％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９８％同一、少なくとも９９％同一、または１００％同一）である配列を含む。
外因性共阻害性ポリペプチド
特定の実施形態では、本明細書に記載される操作された赤血球系細胞（例えば、操作された除核赤血球系細胞）または除核細胞（例えば、改変された除核細胞）は、少なくとも１つ（例えば、１、２、３、またはそれ以上）の外因性免疫原性ポリペプチド、少なくとも１つ（例えば、１、２、３、またはそれ以上）の外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチド、および少なくとも１つ（例えば、１、２、３、またはそれ以上）の外因性共阻害性ポリペプチド、ならびに任意選択的に、少なくとも１つ（例えば、１、２、３、またはそれ以上）の外因性抗原性ポリペプチドをさらに含む。
他の態様では、本明細書に記載される操作された赤血球系細胞（例えば、操作された除核赤血球系細胞）または除核細胞（例えば、改変された除核細胞）は、少なくとも１つの外因性自己抗原性ポリペプチド（例えば、本明細書に記載される例示的な自己抗原性ポリペプチドのいずれかの１つ以上）、および少なくとも１つの共阻害性ポリペプチド（例えば、本明細書に記載されるか、または当該技術分野で既知の例示的な共阻害性ポリペプチドのいずれかの１つ以上）を含む。
いくつかの実施形態では、少なくとも１つの外因性共阻害性ポリペプチドのうちの１つ以上は、操作された赤血球系細胞または除核細胞の細胞表面上に存在する。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの外因性共阻害性ポリペプチドのうちの１つ以上は、膜貫通ドメイン（例えば、グリコフォリンＡ（ＧＰＡ）膜貫通ドメイン、小内在性膜タンパク質１（ＳＭＩＭ１）膜貫通ドメイン、もしくはトランスフェリン受容体（ＴｆＲ１）膜貫通ドメイン、または本明細書に記載されるか、もしくは当該技術分野で既知の他の例示的な膜貫通ドメインのいずれか）をさらに含む。
いくつかの実施形態では、少なくとも１つの外因性共阻害性ポリペプチドのうちの１つ以上は、細胞内に存在する。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの外因性共阻害性ポリペプチドのうちの１つ以上は、細胞のサイトゾル中に存在する。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの外因性共阻害性ポリペプチドのうちの１つ以上は、原形質膜の細胞内側に付着している。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの外因性共阻害性ポリペプチドのうちの１つ以上は、細胞によって分泌または放出され得る。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの外因性共阻害性ポリペプチドのうちの１つ以上は、脂質部分への付着（例えば、Ｎ－ミリストイル化、Ｓ－パルミトイル化、ファルネシル化、ゲラニルゲラニル化、またはグリコシルホスファチジルイノシトール（ＧＰＩ）アンカー）を介して、細胞の原形質膜に係留され得る。
いくつかの実施形態では、少なくとも１つの外因性共阻害性ポリペプチドは、ＩＬ－１０、ＩＬ－２７、ＩＬ－３７、ＴＧＦβ、ＣＤ３９、ＣＤ７３、アルギナーゼ１（ＡＲＧ１）、アネキシン１、フィブリノゲン様タンパク質２（ＦＧＬ２）、またはＰＤ－Ｌ１である。例えば、いくつかの実施形態では、外因性共阻害性ポリペプチドは、ＩＬ－１０である。いくつかの実施形態では、外因性共阻害性ポリペプチドは、変異体ＩＬ－１０、例えば、８７位のイソロイシンがロイシン以外のアミノ酸（例えば、アラニンまたはグリシン、例えば、Ｄｉｎｇ ｅｔ ａｌ．（２０００）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９１（２）：２１３－２２３を参照されたい）で置き換えられているアミノ酸置換を含む、ＩＬ－１０タンパク質である。いくつかの実施形態では、外因性共阻害性ポリペプチドは、ヒトＩＬ－１０の単量体形態を含む（例えば、Ｊｏｓｅｐｈｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，（２０００）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７５：１３５５２－１３５５７を参照されたい）。いくつかの実施形態では、単量体ヒトＩＬ－１０は、８７位のイソロイシンがロイシン以外のアミノ酸（例えば、アラニンまたはグリシン）で置き換えられているアミノ酸置換を含む。
いくつかの実施形態では、外因性共阻害性ポリペプチドは、配列番号７６０～７６４のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含むか、またはそれらからなる。いくつかの実施形態では、外因性共阻害性ポリペプチドは、配列番号７６０、７６１、７６２、７６３、または７６４に対して少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、外胚性共阻害性ポリペプチドは、シグナルペプチドを含む。他の実施形態では、外因性共阻害性ポリペプチドは、シグナルペプチドを含まない。いくつかの実施形態では、外因性共阻害性ポリペプチドは、膜アンカー（例えば、膜貫通タンパク質またはその膜貫通断片）に融合されている。いくつかの実施形態では、外因性共阻害性ポリペプチドは、ヒトグリコフォリンＡ（ＧＰＡ）タンパク質またはその断片（ＧＰＡ膜貫通ドメイン、例えば、配列番号８１３を含む断片）に融合されている。いくつかの実施形態では、外因性共阻害性ポリペプチドは、切断可能である。いくつかの実施形態では、外因性共阻害性ポリペプチドは、小内在性膜タンパク質１（ＳＭＩＭ１）またはその断片（ＳＭＩＭ１膜貫通ドメイン、例えば、配列番号８１４を含む断片）に融合されている。いくつかの実施形態では、外因性共阻害性ポリペプチドは、トランスフェリン受容体またはその断片（例えば、トランスフェリン受容体膜貫通ドメインを含む断片）に融合されている。いくつかの実施形態では、外因性共阻害性ポリペプチドは、ＩＬ－１０（例えば、配列番号７６０～７６３のうちのいずれか１つに対して少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９４％、少なくとも９６％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一な配列）を含む。いくつかの実施形態では、外因性共阻害性ポリペプチドは、シグナルペプチド（例えば、ＧＰＡシグナルペプチド（例えば、配列番号８１１））および／または膜貫通ドメイン（例えば、ＧＰＡ膜貫通ドメイン（配列番号８１３））をさらに含み得る。
いくつかの実施形態では、外因性共阻害性ポリペプチドは、ＰＤ－Ｌ１を含む。いくつかの実施形態では、外因性共阻害性ポリペプチドは、配列番号７６４に対して少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９４％、少なくとも９６％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、外因性共阻害性ポリペプチドは、シグナルペプチド（例えば、ＧＰＡシグナルペプチド（例えば、配列番号８１１））および／または膜貫通ドメイン（例えば、ＧＰＡ膜貫通ドメイン（配列番号８１３）、またはＳＭＩＭ１膜貫通ドメイン（配列番号８１４）、またはトランスリン受容体膜貫通ドメイン）をさらに含む。
いくつかの実施形態では、少なくとも１つの外因性阻害性ポリペプチドのうちの１つは、配列番号８１６～８２３のいずれかに対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９４％、少なくとも９６％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一である配列を含む。
いくつかの実施形態では、外因性共阻害性ポリペプチドは、可溶性サイトカイン（例えば、ＩＬ－１０、ＩＬ－２７、ＩＬ－３７、およびＴＧＦβ）を含むか、またはそれらからなる。いくつかの実施形態では、外因性共阻害性ポリペプチドは、酵素（例えば、ＣＤ３９、ＣＤ７３、およびＡＲＧ１）を含むか、またはそれらからなる。いくつかの実施形態では、外因性共阻害性ポリペプチドは、細胞受容体（例えば、ＰＤ－Ｌ１）を含む。
いくつかの実施形態では、外因性共阻害性ポリペプチドは、表４に列挙されるポリペプチドを含むか、またはそれらからなる。いくつかの実施形態では、外因性共阻害性ポリペプチドは、Ｂ７－１、Ｂ７－２、Ｂ７ＤＣ、Ｂ７Ｈ１、ＨＶＥＭ、コラーゲン、ガレクチン－９、ＣＤ４８、ＴＩＭ４、ＣＤ１５５、ＣＤ１１２、ＣＤ１１３、ＰＤＬ１、ＩＬ－３５、ＩＬ－１０、ＩＬ－２７、ＶＳＩＧ－３、ＩＬ－１Ｒａ、ＩＬ－４、ＩＬ－１１、ＩＬ－１３、ＴＧＦβ、ＩＬ－３３、ＩＬ－３７、ＣＤ３９、ＣＤ７３、ＡＲＧ１、アネキシン１、ＦＧＬ２、または前述のいずれかの機能的断片を含むか、またはそれらからなる。
いくつかの実施形態では、外因性共阻害性ポリペプチドは、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、マクロファージ、ＤＣ、またはＮＫ細胞）上の共阻害性受容体に特異的に結合するアゴニストポリペプチド（例えば、抗体またはその機能的断片）を含む。例えば、いくつかの実施形態では、外因性共阻害性ポリペプチドは、ＰＤ１、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、ＴＧＦβ、ＣＥＡＣＡＭ（例えば、ＣＥＡＣＡＭ－１、ＣＥＡＣＡＭ－３、および／またはＣＥＡＣＡＭ－５）、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、ならびに２Ｂ４からなる群から選択される受容体に結合する抗体を含む。いくつかの実施形態では、外因性共阻害性ポリペプチドは、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、マクロファージ、ＤＣ、またはＮＫ細胞）上の標的受容体（例えば、表４に列挙されるような）に結合する抗体を含むか、またはそれらからなる。
いくつかの実施形態では、外因性共阻害性ポリペプチドは、チェックポイント分子（例えば、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、およびＯＸ４０Ｌ）を含むか、またはそれらからなる。いくつかの実施形態では、外因性共阻害性ポリペプチドは、ＰＤ－１、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、またはＬＡＧ３のアゴニスト（例えば、アゴニスト抗体またはその機能的断片）を含むか、またはそれらからなる。
Figure 2023513263000032
いくつかの実施形態では、外因性共阻害性ポリペプチドは、共刺激性ポリペプチドのその同族共刺激性受容体への結合を遮断する抗体を含む。いくつかの実施形態では、外因性共阻害性ポリペプチドは、４－１ＢＢＬ、ＬＩＧＨＴ、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ７０、ＯＸ４０Ｌ、ＧＩＴＲＬ、ＴＩＭ４、ＳＬＡＭ、ＣＤ４８、ＣＤ５８、ＣＤ８３、ＣＤ１５５、ＣＤ１１２、ＩＬ－１５に融合したＩＬ－１５Ｒα、ＩＬ－２、ＩＬ－２１、ＩＣＡＭ、ＬＦＡ－１のリガンド、抗ＣＤ３抗体、または抗ＣＤ２８抗体のその受容体への結合を遮断する抗体（またはその機能的断片）を含む。いくつかの実施形態では、外因性共阻害性ポリペプチドは、抗ＩＣＯＳＬ抗体（例えば、ＩＣＯＳへのＩＣＯＳＬの結合を遮断することができる抗ＩＣＯＳＬ抗体）を含むか、またはそれからなる。
本明細書に記載される外因性共阻害性ポリペプチドのいずれかのいくつかの実施形態では、外因性共阻害性ポリペプチドは、配列番号７６０～７６４のうちのいずれか１つに対して少なくとも８０％同一、少なくとも８５％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９２％同一、少なくとも９４％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９８％同一、少なくとも９９％同一、または１００％同一である配列を含む。
いくつかの実施形態では、外因性共阻害性ポリペプチドは、膜アンカー（例えば、膜貫通ドメイン、例えば、Ｎ末端融合またはＣ末端融合のいずれかとしての、Ｉ型膜タンパク質膜貫通ドメイン（例えば、ＧＰＡ膜貫通ドメイン）、またはＩＩ型膜タンパク質膜貫通ドメイン（例えば、Ｋｅｌｌ膜貫通ドメインもしくはＳＭＩＭ１膜貫通ドメイン）などの膜貫通ドメイン）を含む。いくつかの実施形態では、外因性共阻害性ポリペプチドは、トランスフェリン受容体膜貫通ドメインを含む。
いくつかの実施形態では、外因性共阻害性ポリペプチドは、リンカーを含む。外因性共阻害性ポリペプチドは、本明細書に提供されるリンカーのうちのいずれかを含み得る。リンカーは、２０アミノ酸長よりも大きくてもよい。いくつかの実施形態では、リンカーペプチド配列は、概して、約３～約３０アミノ酸長、例えば、約５～約２０アミノ酸長、約５～約１５アミノ酸長、約１～約１０アミノ酸長である。しかしながら、より長いもしくはより短いリンカーが使用され得るか、またはリンカーは、完全に省かれ得る。いくつかの実施形態では、外因性共阻害性ポリペプチドは、可動性リンカー（例えば、（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）３）（配列番号２９）を含む。当該技術分野で既知である追加のリンカーが使用され得る（例えば、Ｈｕｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ．（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５：５８７９－８３、米国特許 第５，０９１，５１３号、同第５，１３２，４０５号、同第４，９５６，７７８号、同第５，２５８，４９８号、および同第５，４８２，８５８号を参照されたい。
本明細書に記載される外因性ポリペプチド（例えば、外因性免疫原性ポリペプチド、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチド、外因性抗原性ポリペプチド、および外因性共阻害性ポリペプチド）のいずれかは、Ｎ末端の、Ｃ末端の、または外因性ポリペプチド内に配置された１つ以上（例えば、２、３、４、またはそれ以上）のエピトープタグを含み得る。エピトープタグは、外因性ポリペプチドの検出、定量化、および／または単離（例えば、フローサイトメトリー、ウェスタンブロット、または免疫沈降を使用した）に使用され得る。例示的なエピトープタグには、ＨＡタグ（例えば、ＹＰＹＤＶＰＤＹＡ（配列番号２６））、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）、ｍｙｃ－タグ（例えば、ＥＱＫＬＩＳＥＥＤＬ（配列番号２７））、キチン結合タンパク質、マルトース結合タンパク質、グルタチオン－Ｓ－トランスフェラーゼ、ポリ（Ｈｉｓ）タグ、チオレドキシン、ポリ（ＮＡＮＰ）、ＦＬＡＧ－タグ（例えば、ＤＹＫＤＤＤＤＫ（配列番号２８））、Ｖ５－タグ、ＡｖｉＴａｇ（商標）、カルモジュリン－タグ、ポリグルタミン酸－タグ、Ｅ－タグ、Ｓ－タグ、ＳＢＰ－タグ、Ｓｏｆｔａｇ－１、Ｓｏｆｔａｇ－３、Ｓｔｒｅｐ－ｔａｇ（登録商標）、ＴＣ－タグ、ＶＳＶタグ、Ｘｐｒｅｓｓ－タグ、イソペプタグ、ＳｐｙＴａｇ、ビオチンカルボキシル担体タンパク質、Ｎｕｓ－タグ、Ｆｃ－タグ、またはＴｙ－タグが含まれる。
循環時間
いくつかの実施形態では、本開示の操作された赤血球系細胞または除核細胞（または細胞の集団）は、対象への投与後、少なくとも約１日～約２４０日間（例えば、少なくとも約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１０５、１１０、１１５、１２０、１２５、１３０、１３５、１４０、１４５、１５０、１５５、１６０、１６５、１７０、１７５、１８０、１８５、１９０、１９５、２００、２０５、２１０、２１５、２２０、２２５、２３０、２３５、または２４０日間）、循環中に存在する。
いくつかの実施形態では、少なくとも１つの外因性免疫原性ポリペプチドおよび少なくとも１つの外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドを含む（ならびに任意選択的に、少なくとも１つの外因性抗原性ポリペプチドおよび／または少なくとも１つの外因性共阻害性ポリペプチドを含む）、操作された除核赤血球系細胞または除核細胞は、同じ外因性免疫原性ポリペプチドを含む（ならびに任意選択的に、同じ外因性抗原性ポリペプチドおよび／または同じ外因性共阻害性ポリペプチドを含むが、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドを欠く）操作された除核赤血球系細胞または除核細胞の循環時間と比較して、投与後の対象において循環時間の増加を示す（例えば、少なくとも１０％、２５％、５０％、７５％、１００％、１５０％、２００％、２５０％、３００％、またはそれ以上）。
改変
本明細書に記載される操作された除核赤血球系細胞または除核細胞中に存在する外因性ポリペプチドのうちの１つ以上は、真核細胞、例えば、哺乳動物細胞、例えば、ヒト細胞に特徴的な翻訳後改変を含み得る。いくつかの実施形態では、外因性ポリペプチドのうちの１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、またはそれ以上）は、グリコシル化（例えば、Ｏ－結合型グリコシル化もしくはＮ－結合型グリコシル化）されている、リン酸化されている、またはその両方である。いくつかの実施形態では、外因性ポリペプチドのうちの１つ以上は、疎水性基（例えば、ミリストイル化、パルミトイル化、イソプレニル化、プレニル化、またはグリピエーション）、補因子へのコンジュゲーション（例えば、リポイル化、フラビン部分（例えば、ＦＭＮもしくはＦＡＤ）、ヘムＣ付着、ホスホパンテテイニル化、またはレチニリデンシッフ塩基形成）、ジフトアミド形成、エタノールアミンホスホグリセロール付着、ヒプシン形成、アシル化（例えば、Ｏ－アシル化、Ｎ－アシル化、またはＳ－アシル化）、ホルミル化、アセチル化、アルキル化（例えば、メチル化またはエチル化）、アミド化、ブチル化、ガンマ－カルボキシル化、マロニル化、ヒドロキシル化、ヨード化、ヌクレオチド付加（例えば、ＡＤＰ－リボシル化）、酸化、リン酸エステル（Ｏ－結合型）またはホスホロアミダート（Ｎ－結合型）形成、（例えば、リン酸化またはアデニル化）、プロピオン化、ピログルタミン酸形成、Ｓ－グルタチオン化、Ｓ－ニトロシル化、スクシニル化、硫酸化、ＩＳＧ化、ＳＵＭＯ化、ユビキチン化、ＮＥＤＤ化、またはアミノ酸の化学的改変（例えば、シトルリン化、脱アミド化、エリミニル化、またはカルバミル化）、ジスルフィド架橋の形成、ラセミ化（例えば、プロリン、セリン、アラニン、またはメチオニンの）から選択される１つ以上の翻訳後改変を含む。
コピー数
いくつかの実施形態では、操作された赤血球系細胞（例えば、操作された除核赤血球系細胞）または除核細胞（例えば、改変された除核細胞）は、本明細書に記載される外因性ポリペプチドのうちの１つ以上の少なくとも約１０、１００、１，０００、５，０００、１０，０００、２５，０００、５０，０００、６０，０００、７０，０００、８０，０００、９０，０００、１００，０００、１５０，０００、２００，０００、２５０，０００、３００，０００、３５０，０００、４００，０００、４５０，０００、５００，０００、５５０，０００、６００，０００、またはそれ以上のコピーを含む。
操作された赤血球系細胞の物理的特徴
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される操作された赤血球系細胞または除核細胞は、本明細書に記載される１つ以上（例えば、２、３、４、またはそれ以上）の物理的特徴、例えば、浸透圧脆弱性、細胞サイズ、ヘモグロビン濃度、またはホスファチジルセリン含有量を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される外因性ポリペプチドのうちの１つ以上を含む操作された赤血球系細胞または除核細胞は、野生型の未処理の赤血球系細胞または除核細胞の物理的特徴を有する。
いくつかの実施形態では、操作された赤血球系細胞または除核細胞は、本明細書に記載される外因性ポリペプチドを含まない単離された未培養赤血球系細胞と実質的に同じ浸透圧膜脆弱性を示す。いくつかの実施形態では、操作された赤血球系細胞または除核細胞は、０．３％、０．３５％、０．４％、０．４５％、または０．５％のＮａＣｌで５０％未満の細胞溶解の浸透圧脆弱性を有する。浸透圧脆弱性は、国際出願公開第２０１５／０７３５８７（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）の実施例５９の方法を使用して分析され得る。
いくつかの実施形態では、操作された赤血球系細胞または除核細胞は、野生型の未処理の除核赤血球系細胞とほぼ同じ直径または容積を有する。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される操作された赤血球系細胞または除核細胞の集団は、約４、５、６、７、または８ミクロンの平均直径を有し、任意選択的に、集団の標準偏差は、１、２、または３ミクロン未満である。いくつかの実施形態では、集団中の１つ以上の操作された赤血球系細胞または除核細胞は、約４～８、５～７、または約６ミクロンの直径を有する。いくつかの実施形態では、集団中の操作された赤血球系細胞または除核細胞の直径は、約１ミクロン未満、約２０ミクロン超、約１ミクロン～約２０ミクロン、約２ミクロン～約２０ミクロン、約３ミクロン～約２０ミクロン、約４ミクロン～約２０ミクロン、約５ミクロン～約２０ミクロン、約６ミクロン～約２０ミクロン、約５ミクロン～約１５ミクロン、または約１０ミクロン～約３０ミクロンである。細胞直径は、いくつかの実施形態では、Ａｄｖｉａ １２０血液学システム、Ｖｉ－ｃｅｌｌ（商標）Ｃｅｌｌ Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ Ａｎａｌｙｚｅｒ（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ）、またはＭｏｘｉ Ｚ細胞計数器（Ｏｒｆｌｏ）を使用して測定される。
いくつかの実施形態では、操作された赤血球系細胞または除核細胞の平均赤血球容積の容積は、１０ｆＬよりも大きい、２０ｆＬ、３０ｆＬ、４０ｆＬ、５０ｆＬ、６０ｆＬ、７０ｆＬ、８０ｆＬ、９０ｆＬ、１００ｆＬ、１１０ｆＬ、１２０ｆＬ、１３０ｆＬ、１４０ｆＬ、１５０ｆＬ、または１５０よりも大きい。いくつかの実施形態では、操作された赤血球系細胞または除核細胞の平均赤血球容積は、３０ｆＬ未満、４０ｆＬ、５０ｆＬ、６０ｆＬ、７０ｆＬ、８０ｆＬ、９０ｆＬ、１００ｆＬ、１１０ｆＬ、１２０ｆＬ、１３０ｆＬ、１４０ｆＬ、１５０ｆＬ、１６０ｆＬ、１７０ｆＬ、１８０ｆＬ、１９０ｆＬ、２００ｆＬ、または２００ｆＬ未満である。いくつかの実施形態では、操作された赤血球系細胞または除核細胞の平均赤血球容積は、８０～１００、１００～２００、２００～３００、３００～４００、または４００～５００フェムトリットル（ｆＬ）である。いくつかの実施形態では、操作された赤血球系細胞（例えば、操作された除核赤血球系細胞）または除核細胞（例えば、改変された除核細胞）の集団は、本段落に記載される平均赤血球容積を有し、集団の標準偏差は、５０、４０、３０、２０、１０、５、または２ｆＬ未満である。平均赤血球容積は、いくつかの実施形態では、血液学的分析機器、例えば、Ｃｏｕｌｔｅｒ計数器、Ｍｏｘｉ Ｚ細胞計数器（Ｏｒｆｌｏ）、またはＳｙｓｍｅｘ血液分析器を使用して測定される。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される操作された赤血球系細胞（例えば、操作された除核赤血球系細胞）または除核細胞（例えば、改変された除核細胞）は、野生型の未処理の赤血球系細胞または除核細胞と類似したヘモグロビン含有量を有する。いくつかの実施形態では、操作された赤血球系細胞または除核細胞は、少なくとも約２０、２２、２４、２６、２８、または３０ｐｇ、および任意選択的に、最大約３０ｐｇの総ヘモグロビンを含む。ヘモグロビンレベルは、いくつかの実施形態では、国際出願公開第２０１５／０７３５８７号（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）の実施例３３のＤｒａｂｋｉｎ試薬方法を使用して決定される。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される操作された赤血球系細胞（例えば、操作された除核赤血球系細胞）または除核細胞（例えば、改変された除核細胞）は、野生型の未処理の赤血球系細胞または除核細胞とほぼ同じ、その細胞膜の外葉上のホスファチジルセリン含有量を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される操作された赤血球系細胞（例えば、操作された除核赤血球系細胞）または除核細胞（例えば、改変された除核細胞）の集団は、アネキシンＶ染色に対して陽性である約３０、２５、２０、１５、１０、９、８、６、５、４、３、２、または１％未満の細胞を含む。ホスファチジルセリン曝露は、いくつかの実施形態では、ＰＳに優先的に結合するアネキシン－Ｖ－ＦＩＴＣの染色、およびフローサイトメトリーによるＦＩＴＣ蛍光の測定、例えば、国際出願公開第２０１５／０７３５８７号（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）の実施例５４の方法の使用によって評価される。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される操作された赤血球系細胞もしくは除核細胞、または操作された赤血球系細胞もしくは除核細胞の集団は、内因性ＧＰＡ（Ｃ２３５ａ）、トランスフェリン受容体（ＣＤ７１）、バンド３（ＣＤ２３３）、またはインテグリンアルファ４（Ｃ４９ｄ）のうちの１つ以上（例えば、すべて）を含む。これらのタンパク質は、例えば、国際出願公開第２０１８／００９８３８号（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）の実施例１０に記載されるように測定され得る。ＧＰＡ陽性細胞およびバンド３陽性細胞のパーセンテージは、典型的には、赤血球系細胞の成熟中に増加し、インテグリンアルファ４陽性のパーセンテージは、典型的には、成熟全体を通して高いままである。
いくつかの実施形態では、操作された除核赤血球系細胞または除核細胞の集団は、少なくとも約５０％、６０％、６１％、６２％、６３％、６４％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％のＧＰＡ＋（すなわち、ＣＤ２３５ａ＋）細胞を含む。いくつかの実施形態では、操作された除核赤血球系細胞または除核細胞の集団は、約５０％～約１００％（例えば、約６０％～約１００％、約６５％～約１００％、約７０％～約１００％、約７５％～約１００％、約８０％～約１００％、約８５％～約１００％、約９０％～約１００％、約９５％～約１００％、約７５％～約９９％、約８０％～約９９％、約８５％～約９９％、約９０％～約９９％、約９５％～約９９％、約７５％～約９５％、約８０％～約９５％、約８５％～約９５％、約９０％～約９５％、約９５％～約９８％）のＧＰＡ＋細胞を含む。ＧＰＡの存在は、いくつかの実施形態では、ＦＡＣＳを使用して検出される。
いくつかの実施形態では、操作された除核赤血球系細胞または除核細胞の集団は、少なくとも約５０％、６０％、６１％、６２％、６３％、６４％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％のＣＤ７１＋細胞を含む。いくつかの実施形態では、操作された除核赤血球系細胞または除核細胞の集団は、約７０％～約１００％（例えば、約７５％～約１００％、約８０％～約１００％、約８５％～約１００％、約９０％～約１００％、約９５％～約１００％、約７５％～約９９％、約８０％～約９９％、約８５％～約９９％、約９０％～約９９％、約９５％～約９９％、約７５％～約９５％、約８０％～約９５％、約８５％～約９５％、約９０％～約９５％、約９５％～約９８％）のＣＤ７１＋細胞を含む。ＣＤ７１（トランスフェリン受容体）の存在は、いくつかの実施形態では、ＦＡＣＳを使用して検出される。
いくつかの実施形態では、操作された除核赤血球系細胞または除核細胞の集団は、少なくとも約５０％、６０％、６１％、６２％、６３％、６４％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％のＣＤ２３３＋細胞を含む。いくつかの実施形態では、操作された除核赤血球系細胞または除核細胞の集団は、約７０％～約１００％（例えば、約７５％～約１００％、約８０％～約１００％、約８５％～約１００％、約９０％～約１００％、約９５％～約１００％、約７５％～約９９％、約８０％～約９９％、約８５％～約９９％、約９０％～約９９％、約９５％～約９９％、約７５％～約９５％、約８０％～約９５％、約８５％～約９５％、約９０％～約９５％、約９５％～約９８％）のＣＤ２３３＋細胞を含む。ＣＤ２３３（バンド３）の存在は、いくつかの実施形態では、ＦＡＣＳを使用して検出される。
いくつかの実施形態では、操作された除核赤血球系細胞または除核細胞の集団は、少なくとも約５０％、６０％、６１％、６２％、６３％、６４％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％のＣＤ４７＋細胞を含む。いくつかの実施形態では、操作された除核赤血球系細胞または除核細胞の集団は、約７０％～約１００％（例えば、約７５％～約１００％、約８０％～約１００％、約８５％～約１００％、約９０％～約１００％、約９５％～約１００％、約７５％～約９９％、約８０％～約９９％、約８５％～約９９％、約９０％～約９９％、約９５％～約９９％、約７５％～約９５％、約８０％～約９５％、約８５％～約９５％、約９０％～約９５％、約９５％～約９８％）のＣＤ４７＋細胞を含む。ＣＤ４７（インテグリン関連タンパク質）の存在は、いくつかの実施形態では、ＦＡＣＳを使用して検出される。
いくつかの実施形態では、操作された除核赤血球系細胞または除核細胞の集団は、少なくとも約５０％、６０％、６１％、６２％、６３％、６４％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％のＣＤ３６－（ＣＤ３６陰性）細胞を含む。いくつかの実施形態では、操作された除核赤血球系細胞または除核細胞の集団は、約７０％～約１００％（例えば、約７５％～約１００％、約８０％～約１００％、約８５％～約１００％、約９０％～約１００％、約９５％～約１００％、約７５％～約９９％、約８０％～約９９％、約８５％～約９９％、約９０％～約９９％、約９５％～約９９％、約７５％～約９５％、約８０％～約９５％、約８５％～約９５％、約９０％～約９５％、約９５％～約９８％）のＣＤ３６－（ＣＤ３６陰性）細胞を含む。ＣＤ３６の存在は、いくつかの実施形態では、ＦＡＣＳを使用して検出される。
いくつかの実施形態では、操作された除核赤血球系細胞または除核細胞の集団は、少なくとも約５０％、６０％、６１％、６２％、６３％、６４％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％のＣＤ３４－（ＣＤ３４陰性）細胞を含む。いくつかの実施形態では、操作された除核赤血球系細胞または除核細胞の集団は、約７０％～約１００％（例えば、約７５％～約１００％、約８０％～約１００％、約８５％～約１００％、約９０％～約１００％、約９５％～約１００％、約７５％～約９９％、約８０％～約９９％、約８５％～約９９％、約９０％～約９９％、約９５％～約９９％、約７５％～約９５％、約８０％～約９５％、約８５％～約９５％、約９０％～約９５％、約９５％～約９８％）のＣＤ３４－（ＣＤ３４陰性）細胞を含む。ＣＤＣＤ３４の存在は、いくつかの実施形態では、ＦＡＣＳを使用して検出される。
いくつかの実施形態では、操作された除核赤血球系細胞または除核細胞の集団は、少なくとも約５０％、６０％、６１％、６２％、６３％、６４％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％のＣＤ２３５ａ＋／ＣＤ４７＋／ＣＤ２３３＋細胞を含む。いくつかの実施形態では、操作された除核赤血球系細胞または除核細胞の集団は、約７０％～約１００％（例えば、約７５％～約１００％、約８０％～約１００％、約８５％～約１００％、約９０％～約１００％、約９５％～約１００％、約７５％～約９９％、約８０％～約９９％、約８５％～約９９％、約９０％～約９９％、約９５％～約９９％、約７５％～約９５％、約８０％～約９５％、約８５％～約９５％、約９０％～約９５％、約９５％～約９８％）のＣＤ２３５ａ＋／ＣＤ４７＋／ＣＤ２３３＋細胞を含む。
いくつかの実施形態では、操作された除核赤血球系細胞または除核細胞の集団は、少なくとも約５０％、６０％、６１％、６２％、６３％、６４％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％のＣＤ２３５ａ＋／ＣＤ４７＋／ＣＤ２３３＋／ＣＤ３４－／ＣＤ３６－細胞を含む。いくつかの実施形態では、操作された除核赤血球系細胞または除核細胞の集団は、約７０％～約１００％（例えば、約７５％～約１００％、約８０％～約１００％、約８５％～約１００％、約９０％～約１００％、約９５％～約１００％、約７５％～約９９％、約８０％～約９９％、約８５％～約９９％、約９０％～約９９％、約９５％～約９９％、約７５％～約９５％、約８０％～約９５％、約８５％～約９５％、約９０％～約９５％、約９５％～約９８％）のＣＤ２３５ａ＋／ＣＤ４７＋／ＣＤ２３３＋／ＣＤ３４－／ＣＤ３６－細胞を含む。
いくつかの実施形態では、赤血球系細胞を含む操作された除核赤血球系細胞または除核細胞の集団は、約１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、または１％未満のウニ状赤血球を含む。いくつかの実施形態では、操作された除核赤血球系細胞または除核細胞の集団は、約１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、または１％未満のピレノサイトを含む。
操作された赤血球系細胞の集団
一態様では、本開示は、本明細書に記載される操作された赤血球系細胞または除核細胞の集団、例えば、複数または集団の操作された除核赤血球系細胞を特徴とする。「複数」および「集団」という用語は、本明細書において互換的に使用される。いくつかの実施形態では、操作された除核赤血球系細胞または除核細胞の集団は、主に除核細胞（例えば、７０％超）、主に有核細胞（例えば、７０％超）、または除核細胞および有核細胞の任意の混合物を含み得る。いくつかの実施形態では、操作された赤血球系細胞または除核細胞の集団は、網状赤血球、赤血球、または網状赤血球および赤血球の混合物を含み得る。いくつかの実施形態では、操作された赤血球系細胞または除核細胞の集団は、主に網状赤血球を含み得る。いくつかの実施形態では、操作された赤血球系細胞または除核細胞の集団は、主に赤血球（例えば、未成熟または成熟赤血球）を含み得る。
いくつかの実施形態では、操作された赤血球系細胞の集団は、除核細胞から本質的になる。いくつかの実施形態では、操作された赤血球系細胞の集団は、主にまたは実質的に除核細胞を含む。例えば、いくつかの実施形態では、操作された赤血球系細胞の集団は、少なくとも約７０％以上の除核細胞を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される集団は、少なくとも約７０％、約７１％、約７２％、約７３％、約７４％、約７５％、約７６％、約７７％、約７８％、約７９％、約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、または約１００％の除核細胞を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される集団は、約７０％よりも大きい除核細胞を含む。いくつかの実施形態では、操作された赤血球系細胞の集団は、約７０％、約７１％、約７２％、約７３％、約７４％、約７５％、約７６％、約７７％、約７８％、約７９％、約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％よりも大きい除核細胞を含む。いくつかの実施形態では、操作された赤血球系細胞の集団は、約８０％～約１００％の除核細胞、例えば、約８０％～約９５％、約８０％～約９０％、約８０％および約８５％、約８５％～約１００％、約８５％～約９５％、約８５％～約９０％、約９０％～約１００％、約９０％～約９５％、または約９５％～約１００％の除核細胞を含む。
いくつかの実施形態では、操作された赤血球系細胞の集団は、約３０％未満の有核細胞を含む。例えば、実施形態では、操作された赤血球系細胞の集団は、約１％未満、約２％、約３％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％、約２０％、約２１％、約２２％、約２３％、約２４％、約２５％、約２６％、約２７％、約２８％、約２９％、または約３０％未満の有核細胞を含む。いくつかの実施形態では、操作された赤血球系細胞の集団は、約１％未満、約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％、約２１％、約２２％、約２３％、約２４％、約２５％、約２６％、約２７％、約２８％、約２９％、または約３０％未満の有核細胞を含む。いくつかの実施形態では、操作された赤血球系細胞の集団は、０％～３０％の有核細胞を含む。いくつかの実施形態では、操作された赤血球系細胞の集団は、約０％～２０％の有核細胞、例えば、約０％～１９％、約０％～１５％、約０％～１０％、約０％～５％、約０％～４％、約０％～３％、約０％～２％の有核細胞、または約５％～２０％、約１０％～２０％、または約１５％～２０％の有核細胞を含む。
いくつかの実施形態では、本開示は、本明細書に記載される操作された赤血球系細胞の集団を特徴とし、操作された赤血球系細胞の集団は、３０％未満の有核細胞および少なくとも７０％の除核細胞を含むか、または２０％未満の有核細胞および少なくとも８０％の除核細胞を含むか、または１５％未満の有核細胞および少なくとも８５％の除核細胞を含むか、または１０％未満の有核細胞および少なくとも９０％の除核細胞を含むか、または５％未満の有核細胞と少なくとも９５％の除核細胞を含む。いくつかの実施形態では、本開示は、本明細書に記載される操作された赤血球系細胞の集団を特徴とし、操作された赤血球系細胞は、約０％の有核細胞および約１００％の除核細胞、約１％の有核細胞および約９９％の除核細胞、約２％の有核細胞および約９８％の除核細胞、約３％の有核細胞および約９７％の除核細胞、約４％の有核細胞および約９６％の除核細胞、約５％の有核細胞および約９５％の除核細胞、約６％の有核細胞および約９４％の除核細胞、約７％の有核細胞および約９３％の除核細胞、約８％の有核細胞および約９２％の除核細胞、約９％の有核細胞および約９１％の除核細胞、約１０％の有核細胞および約９０％の除核細胞、約１１％の有核細胞および約８９％の除核細胞、約１２％の有核細胞および約８８％の除核細胞、約１３％の有核細胞および約８７％の除核細胞、約１４％の有核細胞および約８６％の除核細胞、約８５％の有核細胞および約８５％の除核細胞、約１６％の有核細胞および約８４％の除核細胞、約１７％の有核細胞および約８３％の除核細胞、約１８％の有核細胞および約８２％の除核細胞、約１９％の有核細胞および約８１％の除核細胞、または約２０％の有核細胞および約８０％の除核細胞を含む。
他の実施形態では、操作された赤血球系細胞集団は、主にまたは実質的に有核細胞を含む。いくつかの実施形態では、操作された赤血球系細胞集団は、有核細胞から本質的になる。様々な実施形態では、操作された赤血球系細胞集団中の有核細胞は、赤血球系前駆細胞である。いくつかの実施形態では、赤血球系前駆細胞は、多能性造血幹細胞（ＨＳＣ）、多能性骨髄前駆細胞、ＣＦＵ－Ｓ細胞、ＢＦＵ－Ｅ細胞、ＣＦＵ－Ｅ細胞、前正赤芽球、好塩基性正赤芽球、多染性正赤芽球、および正染性正赤芽球からなる群から選択される。
特定の実施形態では、操作された赤血球系細胞の集団は、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％の有核細胞を含む。
いくつかの実施形態では、赤血球系細胞または除核細胞の集団は、約１×１０９～２×１０９、２×１０９～５×１０９、５×１０９～１×１０１０、１×１０１０～２×１０１０、２×１０１０～５×１０１０、５×１０１０～１×１０１１、１×１０１１～２×１０１１、２×１０１１～５×１０１１、５×１０１１～１×１０１２、１×１０１２～２×１０１２、２×１０１２～５×１０１２、または５×１０１２～１×１０１３細胞を含む。
本明細書に記載される操作された赤血球系細胞または除核細胞の調製中、細胞の一部の画分は、外因性ポリペプチドを含まない場合があることが理解されるであろう（例えば、外因性核酸による発現または形質導入またはコンジュゲーションの欠如に起因して）。したがって、いくつかの実施形態では、本明細書に提供される操作された赤血球系細胞または除核細胞の集団は、操作された赤血球系細胞および改変されていない赤血球系細胞の混合物、または改変された除核細胞および改変されていない除核細胞の混合物を含み、すなわち、集団中の細胞の一部の画分は、外因性ポリペプチドを含まない（例えば、発現しない）。例えば、操作された赤血球系細胞または除核細胞の集団は、様々な実施形態では、少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の、外因性ポリペプチドを含む赤血球系細胞または除核細胞を含み得、集団中の残りの赤血球系細胞または除核細胞は、外因性ポリペプチドを含まない。いくつかの実施形態では、操作された赤血球系細胞（例えば、操作された除核赤血球系細胞）または除核細胞の単回単位用量は、少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の、外因性ポリペプチドを含む赤血球系細胞または除核細胞を含みこの用量中の残りの赤血球系細胞または除核細胞は、外因性ポリペプチドを含まない。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される操作された赤血球系細胞または除核細胞は、細胞が投与される対象に対して自己および／または同種異系である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される操作された赤血球系細胞または除核細胞は、１つ以上の血液型抗原、例えば、Ｌｅ（ａ－ｂ－）（Ｌｅｗｉｓ抗原式）、Ｆｙ（ａ－ｂ－）（Ｄｕｆｆｙ式）、Ｊｋ（ａ－ｂ－）（Ｋｉｄｄ式）、Ｍ－Ｎ－（ＭＮＳ式）、Ｋ－ｋ－（Ｋｅｌｌ式）、Ｌｕ（ａ－ｂ－）（Ｌｕｔｈｅｒａｎ式）、およびＨ抗原陰性（Ｂｏｍｂａｙ表現型）、またはそれらの任意の組み合わせをを含まない。いくつかの実施形態では、操作された赤血球系細胞または除核細胞は、Ｏ型および／またはＲｈ－でもある。微量の血液型は、例えば、Ａｇａｒｗａｌ ｅｔ ａｌ．（２０１３）Ｂｌｏｏｄ Ｒｅｓ．４８（１）：５１－４、およびＭｉｔｒａ ｅｔ ａｌ．（２０１４）Ｉｎｄｉａｎ Ｊ Ａｎａｅｓｔｈ．５８（５）：５２４－８に記載され、それらの各々は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
ＩＩ．操作された赤血球系細胞を作製する方法
いくつかの態様では、本開示は、少なくとも１つの外因性免疫原性ポリペプチドおよび少なくとも１つの外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチド（ならびに任意選択的に、少なくとも１つの外因性抗原性ポリペプチドおよび／または少なくとも１つの外因性共阻害性ポリペプチド）を含む、操作された赤血球系細胞（例えば、操作された除核赤血球系細胞）または除核細胞（例えば、改変された除核細胞）を作製する方法を提供する。他の態様では、本開示は、少なくとも１つの外因性自己抗原性および少なくとも１つの外因性共阻害性ポリペプチドを含む、操作された赤血球系細胞（例えば、操作された除核赤血球系細胞）または除核細胞（例えば、改変された除核細胞）を作製する方法を提供する。
外因性ポリペプチドを含む操作された赤血球系細胞および除核細胞を製造する方法は、例えば、国際出願公開第２０１５／０７３５８７号および同第２０１５／１５３１０２号に記載され、それら各々は、参照によりその全体が組み込まれる。
いくつかの態様では、本明細書は、少なくとも１つの外因性免疫原性ポリペプチドおよび少なくとも１つの外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドを含む、操作された赤血球系細胞（例えば、操作された除核赤血球系細胞）または除核細胞（例えば、改変された除核細胞）を産生する方法を提供し、方法は、外因性免疫原性ポリペプチドをコードする外因性核酸を、有核赤血球系前駆細胞に導入することと、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドをコードする外因性核酸を、有核赤血球系前駆細胞に導入することと、外因性免疫原性ポリペプチドおよび外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドの両方の除核および産生に好適な条件下で有核赤血球系前駆細胞を培養し、それによって操作された赤血球系細胞または除核細胞を作製することと、を含む。いくつかの実施形態では、方法は、外因性抗原性ポリペプチドおよび／または外因性共阻害性ポリペプチドをコードする外因性核酸を、有核赤血球系前駆細胞に導入することをさらに含む。いくつかの実施形態では、外因性免疫原性ポリペプチド、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチド、外因性抗原性ポリペプチド、および外因性共阻害性ポリペプチドのうちの１つ以上は、同じ外因性核酸によってコードされる。いくつかの実施形態では、外因性免疫原性ポリペプチド、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチド、外因性抗原性ポリペプチド、および外因性共阻害性ポリペプチドのうちの１つ以上は、異なる外因性核酸によってコードされる。
いくつかの実施形態では、本明細書は、少なくとも１つの外因性免疫原性ポリペプチドおよび少なくとも１つの外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドを含む、操作された赤血球系細胞（例えば、操作された除核赤血球系細胞）または除核細胞（例えば、改変された除核細胞）を産生する方法を提供し、方法は、外因性免疫原性ポリペプチドをコードする外因性核酸を、有核赤血球系前駆細胞に導入することと、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドをコードする外因性核酸を、有核赤血球系前駆細胞に導入することと、外因性免疫原性ポリペプチドおよび外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドの両方の除核および産生に好適な条件下で有核赤血球系前駆細胞を培養し、それによって操作された除核赤血球系細胞を作製することと、操作された除核赤血球系細胞または除核細胞を少なくとも１つの外因性抗原性ポリペプチドと接触させることであって、少なくとも１つの外因性抗原性ポリペプチドが、操作された除核赤血球系細胞または除核細胞の表面上の外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドに結合する、接触させることと、を含む。いくつかの実施形態では、方法は、外因性抗原性ポリペプチドおよび／または外因性共阻害性ポリペプチドをコードする外因性核酸を、有核赤血球系前駆細胞に導入することをさらに含む。いくつかの実施形態では、外因性免疫原性ポリペプチド、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチド、外因性抗原性ポリペプチド、および外因性共阻害性ポリペプチドのうちの１つ以上は、同じ外因性核酸によってコードされる。いくつかの実施形態では、外因性免疫原性ポリペプチド、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチド、外因性抗原性ポリペプチド、および外因性共阻害性ポリペプチドのうちの１つ以上は、異なる外因性核酸によってコードされる。
いくつかの態様では、本明細書は、少なくとも１つの外因性自己抗原性ポリペプチドおよび少なくとも１つの外因性共阻害性ポリペプチドを含む、操作された赤血球系細胞（例えば、操作された除核赤血球系細胞）または除核細胞（例えば、改変された除核細胞）を産生する方法を提供し、方法は、外因性自己抗原性ポリペプチドをコードする外因性核酸を、有核赤血球系前駆細胞に導入することと、外因性共阻害性ポリペプチドをコードする外因性核酸を、有核赤血球系前駆細胞に導入することと、少なくとも１つの外因性自己抗原性ポリペプチドおよび少なくとも１つの外因性共阻害性ポリペプチドの両方の除核および産生に好適な条件下で有核赤血球系前駆細胞を培養し、それによって操作された赤血球系細胞または除核細胞を作製することと、を含む。
いくつかの実施形態では、赤血球系前駆細胞は、不死化され、例えば、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ、例えば、ＨＰＶ１６型）Ｅ６および／またはＥ７遺伝子を含む。いくつかの実施形態では、不死化赤血球系前駆細胞は、ＢＥＬ－Ａ細胞株の細胞である（Ｔｒａｋａｒｎａｓａｎｇａ ｅｔ ａｌ．（２０１７）Ｎａｔ．Ｃｏｍｍｕｎ．８：１４７５０を参照されたい）。追加の不死化赤血球系前駆細胞は、米国特許第９，９５１，３５０号および同第８，９７５，０７２号に記載される。
いくつかの実施形態では、赤血球系前駆細胞、例えば、ＣＤ３４＋造血前駆細胞（例えば、ヒト（例えば、成人ヒト）またはマウス細胞）は、本明細書に記載される１つ以上の外因性ポリペプチドをコードする外因性核酸と接触し、細胞は、培養物中で増殖および分化することができる。したがって、本明細書に記載される外因性核酸および／または外因性ポリペプチドを含む操作された赤血球系前駆細胞も本明細書に提供される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、赤血球系前駆細胞および赤血球系細胞）は、少なくとも１，０００倍、２，０００倍、５，０００倍、１０，０００倍、２０，０００倍、５０，０００倍、もしくは１００，０００倍、またはそれ以上（および任意選択的に、最大１００，０００倍、２００，０００倍、または５００，０００倍）増殖する。細胞数は、いくつかの実施形態では、自動細胞計数器を使用して測定される。
本明細書に提供される改変された赤血球系前駆細胞は、当該技術分野で既知の方法を使用して、操作された除核赤血球系細胞（例えば、網状赤血球または赤血球）にインビトロで分化し得る（例えば、（例えば、Ｇｉａｒｒａｔａｎａ ｅｔ ａｌ．（２０１１）Ｂｌｏｏｄ １１８：５０７１－９、Ｈｕａｎｇ ｅｔ ａｌ．（２０１４）、Ｋｕｒｉｔａ ｅｔ ａｌ．，ＰＬＯＳ Ｏｎｅ ２０１３，８：ｅ５９８９０、および国際出願公開第２０１４／１８３０７１号を参照されたい）。例えば、赤血球系細胞は、ＣＤ３４＋造血前駆細胞（Ｇｉａｒｒａｔａｎａ ｅｔ ａｌ．（２０１１））、人工多能性幹細胞（Ｋｕｒｉｔａ ｅｔ ａｌ．（２０１３）ＰＬＯＳ Ｏｎｅ ８：ｅ５９８９０）、および胚性幹細胞（Ｈｉｒｏｓｅ ｅｔ ａｌ．（２０１３）Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｒｅｐｏｒｔｓ １：４９９～５０８）を含む、赤血球系前駆細胞から培養され得る。
前駆細胞を赤血球系細胞または血小板に増殖および分化させるのに好適である成長および分化因子のカクテルは、当該技術分野で既知である。好適な増殖および分化因子には、幹細胞因子（ＳＣＦ）、インターロイキン（ＩＬ）、例えば、ＩＬ－１、ＩＬ－２、ＩＬ－３、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－８、ＩＬ－９、ＩＬ－１１、ＩＬ－１２、ＣＳＦ、Ｇ－ＣＳＦ、トロンボポエチン（ＴＰＯ）、顆粒球－マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）、エリスロポエチン（ＥＰＯ）、Ｆｌｔ３、Ｆｌｔ２、ＰＩＸＹ ３２１、および白血病阻害因子（ＬＩＦ）が含まれるが、これらに限定されない。
赤血球系細胞は、多段階培養プロセスを使用して培養され得る。例えば、いくつかの実施形態では、赤血球系前駆細胞（例えば、ＣＤ３４＋ ＨＳＣ）は、以下に概説されるように、３段階培養プロセスに供され得る。
第１の工程は、培養中の細胞を１～１０００ｎｇ／ｍＬのＳＣＦ、１～１００Ｕ／ｍＬのＥＰＯ、および０．１～１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－３と接触させることを含み得る。任意選択的に、第１の工程は、培養中の細胞を、核ホルモン受容体（例えば、グルココルチコイド受容体、エストロゲン受容体、プロゲステロン受容体、アンドロゲン受容体、またはプレグナンｘ受容体）に結合し、それを活性化するリガンドと接触させることを含む。これらの受容体のリガンドは、コルチコステロイド（例えば、デキサメタゾンもしくはヒドロコルチゾン（例えば、各々１０ｎＭ～１００μＭ））、エストロゲン（例えば、１０ｎＭ～１００μＭのベータ－エストラジオール）、プロゲストゲン（例えば、プロゲステロン、ヒドロキシプロゲステロン、５ａ－ジヒドロプロゲステロン、もしくは１１－デオキシコルチコステロン（例えば、各々１０ｎＭ～１００μＭ））、または合成プロゲスチン（例えば、１０ｎＭ～１００μＭの酢酸クロルマジノン）、アンドロゲン（例えば、テストステロン、ジヒドロテストステロン、もしくはアンドロステンジオン（例えば、各々１０ｎＭ～１００μＭ）、またはプレグナンｘ受容体リガンド（例えば、リファンピシン、ヒペルホリン、ヒペリシン（例えば、各々１０ｎＭ～１００μＭ）、またはビタミンＥ様分子（例えば、１０ｎＭ～１００μＭ）を含む。第１の工程はまた、任意選択的に、培養中の細胞を、例えば、１～５０μ．ｇ／ｍＬのインスリン、１～５０μｇ／ｍＬのインスリン様成長因子１（ＩＧＦ－１）、１～５０μｇ／ｍＬのインスリン様成長因子２（ＩＧＦ－２）、または１～５０μｇ／ｍＬのメカノ成長因子などのインスリン様分子と接触させることを含み得る。第１の工程は、任意選択的に、培養中の細胞をトランスフェリン（例えば０．１ｍｇ／ｍＬ～５ｍｇ／ｍＬの、例えば、ホロトランスフェリン、アポトランスフェリン、またはそれらの組み合わせ）と接触させることを含み得る。第１の工程は、任意選択的に、培養中の細胞を１つ以上のインターロイキンまたは成長因子（例えば、ＩＬ－１、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－８、ＩＬ－９、ＩＬ－１１、ＩＬ－１２、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ）、マクロファージコロニー刺激因子（Ｍ－ＣＳＦ）、ＧＭ－ＣＳＦ、ＴＰＯ、線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）、血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）、形質転換成長因子ベータ（ＴＧＦ－Ｂ）、腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦ－α）、巨核球増殖発達因子（ＭＧＤＦ）、白血病阻害因子（ＬＩＦ）、およびＦｌｔ３リガンドと接触させることを含み得る。各インターロイキンまたは成長因子は、０．１～１００ｎｇ／ｍＬの濃度で供給され得る。第１の工程はまた、任意選択的に、培養中の細胞を血清タンパク質または非タンパク質分子（例えば、ウシ胎児血清（ＦＢＳ）（１～２０％）、ヒト血漿（１～２０％）、プラスマネート（１～２０％）、ヒト血清（１～２０％）、アルブミン（０．１～１００ｍｇ／ｍＬ）、またはヘパリン（０．１～１０Ｕ／ｍＬ）と接触させることを含み得る。
第２の工程は、培養中の細胞を１～１０００ｎｇ／ｍＬのＳＣＦおよび１～１００Ｕ／ｍＬのＥＰＯと接触させることを含み得る。第２のステップはまた、任意選択的に、培養中の細胞をインスリン様分子（例えば、インスリン、ＩＧＦ－１、ＩＧＦ－２、またはメカノ成長因子（例えば、各々１～５０μｇ／ｍＬ））と接触させることを含み得る。第２のステップは、任意選択的に、培養中の細胞をトランスフェリン（例えば０．１ｍｇ／ｍＬ～５ｍｇ／ｍＬの、例えば、ホロトランスフェリン、アポトランスフェリン、またはそれらの組み合わせ）と接触させることをさらに含み得る。第２の方法はまた、任意選択的に、培養中の細胞を血清タンパク質または非タンパク質分子（例えば、ＦＢＳ（１～２０％）、ヒト血漿（１～２０％）、プラスマネート（１～２０％）、ヒト血清（１～２０％）、アルブミン（０．１～１００ｍｇ／ｍＬ）、またはヘパリン（０．１～１０Ｕ／ｍＬ）と接触させることを含み得る。
第３の工程は、培養中の細胞を１～１００Ｕ／ｍＬのＥＰＯと接触させることを含み得る。第３の工程は、培養中の細胞を１～１０００ｎｇ／ｍＬのＳＣＦと接触させることを含み得る。第３の工程は、任意選択的に、培養中の細胞をインスリン様分子（例えば、インスリン、ＩＧＦ－１、ＩＧＦ－２、またはメカノ成長因子（例えば、各々１～５０μｇ／ｍＬ））と接触させることをさらに含み得る。第３の工程はまた、任意選択的に、培養中の細胞をトランスフェリン（例えば０．１ｍｇ／ｍＬ～５ｍｇ／ｍＬの、例えば、ホロトランスフェリン、アポトランスフェリン、またはそれらの組み合わせ）と接触させることを含み得る。第３の工程はまた、任意選択的に、培養中の細胞を血清タンパク質または非タンパク質分子（例えば、ＦＢＳ（１～２０％）、ヒト血漿（１～２０％）、プラスマネート（１～２０％）、ヒト血清（１～２０％）、アルブミン（０．１～１００ｍｇ／ｍＬ）、またはヘパリン（０．１～１０Ｕ／ｍＬ）と接触させることを含み得る。
培養プロセスは、任意選択的に、当該技術分野で既知の方法による細胞を、１つ以上の遺伝子（例えば、転写因子、成長因子、または成長因子受容体（例えば、ＧＡＴＡ１、ＧＡＴＡ２、ｃＭｙｃ、ｈＴＥＲＴ、ｐ５３、ＥＰＯ、ＳＣＦ、インスリン、ＥＰＯ－Ｒ、ＳＣＦ－Ｒ、トランスフェリン－Ｒ、インスリン－Ｒ）を活性化またはノックダウンする分子（例えば、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ｍＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、マイクロＲＮＡ、ｌｎｃＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ホルモン、または小分子）と接触させることを含み得る。
いくつかの実施形態では、改変された赤血球系前駆細胞または改変された赤血球系細胞は、少なくとも１００倍、１０００倍、２０００倍、５０００倍、１０，０００倍、２０，０００倍、５０，０００倍、または１００，０００倍（および任意選択的に、最大１００，０００倍、２００，０００倍、または５００，０００倍）増殖する。細胞数は、いくつかの実施形態では、自動細胞計数器を使用して測定される。
いくつかの実施形態では、培養中に、改変された赤血球系前駆細胞、例えば、改変されたＨＳＣをインビトロで部分的にのみ分化させ、さらなる分化、例えば、網状赤血球または赤血球へのさらなる分化が、インビボで対象への細胞投与後に発生することを可能にすることが望ましくあり得る（例えば、Ｎｅｉｌｄｅｚ－Ｎｇｕｙｅｎ ｅｔ ａｌ．（２００２）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２０：４６７－７２を参照されたい）。したがって、いくつかの実施形態では、本明細書に記載される細胞のインビトロでの分化および／または成熟は、任意の所望の段階で停止され得る。いくつかの実施形態では、改変された赤血球系前駆細胞または改変された赤血球系細胞は、除核を含まない除核前の任意の段階に部分的に分化し、したがって有核細胞、例えば、赤血球系細胞のままである。いくつかの実施形態では、結果として得られた細胞は、有核であり、赤血球系系統が制限されている。いくつかの実施形態では、結果として得られた細胞は、多能性骨髄前駆細胞、ＣＦＵ－Ｓ細胞、ＢＦＵ－Ｅ細胞、ＣＦＵ－Ｅ細胞、前正赤芽球（前赤芽球）、好塩基性正赤芽球、多染性正赤芽球、および正染性正赤芽球から選択される。
いくつかの実施形態では、改変された赤血球系前駆細胞または改変された赤血球系細胞は、除核段階を通してインビトロで分化し、それらは、網状赤血球になる。そのような実施形態では、網状赤血球は、対象に（例えば、医薬組成物中で）投与され、対象への投与後に最終的に成熟してインビボで赤血球になることができる。いくつかの実施形態では、改変された赤血球系前駆細胞または改変された赤血球系細胞は、赤血球になるまでインビトロで分化する。
いくつかの実施形態では、改変された赤血球系前駆細胞、例えば、ＨＳＣは、インビトロで増殖および分化して、異なる系統、例えば、血小板の造血細胞になり得る。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される除核細胞は、血小板である。様々な系統の造血細胞を培養し、分化させる方法は、当該技術分野で既知である。例えば、インビトロで血小板を生成する方法は、当該技術分野で既知である（例えば、Ｗａｎｇ ａｎｄ Ｚｈｅｎｇ（２０１６）Ｓｐｒｉｎｇｅｒｐｌｕｓ ５（１）：７８７、および米国特許第９，５７４，１７８号を参照されたい）。外因性ポリペプチドを含む血小板を産生する方法は、例えば、国際特許出願公開第２０１５／０７３５８７号および同第２０１５／１５３１０２号に記載され、それら各々は、参照によりその全体が組み込まれる。
いくつかの実施形態では、操作された血小板は、ＣＤ３４＋ ＨＳＣ、人工多能性幹細胞、または胚性幹細胞などの造血前駆細胞から生成される。いくつかの実施形態では、血小板は、造血前駆細胞を、多段階培養プロセスにおいて定義された因子と接触させることによって生成される。いくつかの実施形態では、多段階培養プロセスには、巨核球前駆細胞の集団を産生するのに好適な条件下で造血前駆細胞の集団を培養することと、血小板を産生するのに好適な条件下で巨核球前駆細胞の集団を培養することと、を含む。造血前駆細胞を増殖および分化させ、血小板を産生するのに好適である成長因子および分化因子のカクテルは、当該技術分野で既知である。好適な増殖および分化因子には、ＳＣＦ、Ｆｌｔ－３／Ｆｌｋ－２リガンド（ＦＬ）、ＴＰＯ、ＩＬ－１１、ＩＬ－３、ＩＬ－６、およびＩＬ－９が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、２～４×１０４細胞／ｍＬの無血清培地にＣＤ３４＋ ＨＳＣを播種し、等容量の培地を添加することによって培養４日目に培地をリフレッシュすることによって、血小板が産生され得る。培養６日目に、細胞が計数および分析される：１．５×１０５細胞が洗浄され、ＴＰＯ（３０ｎｇ／ｍＬ）、ＳＣＦ（１ｎｇ／ｍＬ）、ＩＬ－６（７．５ｎｇ／ｍＬ）、およびＩＬ－９（１３．５ｎｇ／ｍＬ）を含むサイトカインカクテルを補充した同じ培地１ｍＬ中に配置されて、巨核球分化を誘導する。培養１０日目に、懸濁培養の約１／４～約半分が、新鮮な培地で置き換えられる。細胞は、最初の６培養日は３９℃および最後の８培養日は３７℃で、加湿雰囲気（１０％ ＣＯ２）中で培養される。生存有核細胞は、トリパンブルー染色後に血球計で計数される。培養中の血小板の分化状態は、参照により本明細書に組み込まれる国際特許出願公開第２０１５／０７３５８７号の実施例４４および４５に記載されるように、フローサイトメトリーまたは定量ＰＣＲによって評価され得る。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される操作された赤血球系細胞は、本開示の外因性ポリペプチド（例えば、外因性免疫原性ポリペプチド、外因性抗原性ポリペプチド、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチド、および／または外因性共阻害性ポリペプチド）をコードする外因性核酸を、好適な単離細胞、例えば、有核赤血球系細胞、赤血球系前駆細胞、または有核血小板前駆細胞に導入することによって生成され得る。いくつかの実施形態では、外因性核酸は、ＤＮＡまたはＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）である。核酸を細胞に導入するための例示的な方法には、リポソーム媒介導入、形質転換、遺伝子銃、トランスフェクション、および形質導入（例えば、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、レンチウイルスベクター、ヘルペスウイルスベクター、およびレトロウイルスベースのベクターを含むウイルスベクターを使用して実施される）が含まれるが、これらに限定されない。核酸を細胞に導入するための追加の例示的な方法には、例えば、ネイキッドＤＮＡ、ＣａＰＯ４沈殿、ＤＥＡＥデキストラン、エレクトロポレーション、プロトプラスト融合、リポフェクション、および細胞マイクロインジェクションの使用が含まれる。
いくつかの実施形態では、赤血球系細胞または前駆細胞に、本明細書に記載される外因性ポリペプチドをコードするｍＲＮＡをトランスフェクトして、操作された赤血球系細胞または除核細胞を生成することができる。ｍＲＮＡは、１つ以上の外因性ポリペプチドをコードする配列を含有するｃＤＮＡプラスミド構築物のインビトロ転写から得られ得る。例えば、外因性ポリペプチドをコードするｃＤＮＡ配列は、特定のＲＮＡポリメラーゼと適合性のあるプロモーター配列を含有するクローニングベクターに挿入され得る。例えば、クローニングベクターＺＡＰ Ｅｘｐｒｅｓｓ（登録商標）ｐＢＫ－ＣＭＶ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ、Ｌａ Ｊｏｌｌａ，Ｃａｌｉｆ．，ＵＳＡ）は、それぞれ、Ｔ３ ＲＮＡポリメラーゼおよびＴ７ ＲＮＡポリメラーゼと適合性のあるＴ３プロモーター配列およびＴ７プロモーター配列を含有する。センスｍＲＮＡのインビトロ転写の場合、プラスミドは、外因性ポリペプチドをコードする配列の末端に対応する終止コドンの下流の制限部位で線状化される。ｍＲＮＡは、例えば、ＲＮＡＭａｘｘ（登録商標）Ｈｉｇｈ Ｙｉｅｌｄ Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ Ｋｉｔ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ、Ｌａ Ｊｏｌｌａ，Ｃａｌｉｆ．，ＵＳＡ）などの市販のキットを使用して、線状ＤＮＡ鋳型から転写される。いくつかの事例では、５’－ｍ７ＧｐｐｐＧキャップｍＲＮＡを生成することが望ましい場合がある。したがって、線状化ｃＤＮＡ鋳型の転写は、例えば、Ａｍｂｉｏｎ（Ａｕｓｔｉｎ，Ｔｅｘ．，ＵＳＡ）製のｍＭＥＳＳＡＧＥ ｍＭＡＣＨＩＮＥ Ｈｉｇｈ Ｙｉｅｌｄ Ｃａｐｐｅｄ ＲＮＡ Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ Ｋｉｔを使用して行われ得る。転写は、３７℃で３０分～４時間にわたって２０～１００μＬの反応容積中で行われ得る。転写されたｍＲＮＡは、ＤＮａｓｅ Ｉで短時間処理して線状化ＤＮＡ鋳型を除去することにより反応混合物から精製され、その後、塩化リチウム、酢酸ナトリウム、または酢酸アンモニウムの存在下で７０％エタノール中に沈殿する。転写されたｍＲＮＡの完全性は、アガロース－ホルムアルデヒドゲルまたは市販のＮｏｖｅｘプレキャストＴＢＥゲル（Ｎｏｖｅｘ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ，Ｃａｌｉｆ．，ＵＳＡ）を用いた電気泳動を使用して評価され得る。
外因性ポリペプチドをコードするメッセンジャーＲＮＡは、例えば、リポフェクションおよびエレクトロポレーション（ｖａｎ Ｔａｎｄｅｌｏｏ ｅｔ ａｌ．（２００１）Ｂｌｏｏｄ ９８：４９－５６）を含む様々なアプローチを使用して、赤血球系細胞または赤血球系前駆細胞（例えば、ＣＤ３４＋ ＨＳＣ）に導入され得る。リポフェクションの場合、例えば、Ｏｐｔｉ－ＭＥＭ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ，Ｃａｌｉｆ．，ＵＳＡ）中５μｇのインビトロ転写ｍＲＮＡが、カチオン性脂質ＤＭＲＩＥ－Ｃ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）と１：４の比率で５～１５分間インキュベートされる。あるいは、ｍＲＮＡを細胞にトランスフェクトするために、例えば、ＤＯＴＡＰ、様々な形態のポリエチレンイミン、およびポリＬ－リシン（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｓａｉｎｔ Ｌｏｕｉｓ Ｍｏ．，ＵＳＡ）、ならびにＳｕｐｅｒｆｅｃｔ（Ｑｉａｇｅｎ，Ｉｎｃ．、Ｖａｌｅｎｃｉａ，Ｃａｌｉｆ．，ＵＳＡ、例えば、Ｂｅｔｔｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２９：３８８２－３８９１（２００１）を参照されたい）を含む様々な他のカチオン性脂質またはカチオン性ポリマーが使用され得る。結果として得られたｍＲＮＡ／脂質複合体は、細胞（１～２×１０６細胞／ｍＬ）と３７℃で２時間インキュベートされ、洗浄され、培養に戻される。エレクトロポレーションの場合、例えば、５００μＬのＯｐｔｉ－ＭＥＭ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ，Ｃａｌｉｆ．，ＵＳＡ）中約５～２０×１０６細胞が約２０μｇのインビトロ転写ｍＲＮＡと混合され、例えば、Ｅａｓｙｊｅｃｔ Ｐｌｕｓデバイス（ＥｑｕｉＢｉｏ、Ｋｅｎｔ，Ｕｎｉｔｅｄ Ｋｉｎｇｄｏｍ）を使用して、０．４ｃｍキュベット中でエレクトロポレーションされる。いくつかの事例では、特定のｍＲＮＡを細胞にトランスフェクトするのに有用な条件を決定するために、様々な電圧、静電容量、およびエレクトロポレーション容積を試験する必要があり得る。
あるいは、ｍＲＮＡは、ペプチド媒介ＲＮＡ送達戦略（例えば、Ｂｅｔｔｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，（２００１）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２９：３８８２－９１を参照されたい）を使用して、赤血球系前駆細胞（例えば、ＣＤ３４＋細胞）または赤血球系細胞にトランスフェクトされ得る。例えば、カチオン性脂質ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）２ｋＤａ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｓａｉｎｔ Ｌｏｕｉｓ，Ｍｏ．，ＵＳＡ）が、メリチンペプチド（Ａｌｔａ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ，ＵＫ）と組み合わされて、特に有糸分裂後初代細胞におけるｍＲＮＡトランスフェクションの効率を高め得る。メリチンペプチドは、例えば、ヘテロ二官能性クロスリンカーであるスクシンイミジル３－（２－ピリジルジチオ）プロピオネートなどのジスルフィドクロスリンカーを使用してＰＥＩにコンジュゲートされ得る。インビトロ転写ｍＲＮＡは、メリチン－ＰＥＩと５～１５分間プレインキュベートされて、ＲＮＡ／ペプチド／脂質複合体を形成する。次いで、この複合体が５％ ＣＯ２加湿環境下で無血清培養培地中の細胞に３７℃で２～４時間にわたって添加され、次いで、除去され、トランスフェクト細胞がさらに培養される。
いくつかの実施形態では、操作された赤血球系細胞または除核細胞は、１つ以上の外因性ポリペプチドをコードする核酸（例えば、本明細書に記載される例示的な核酸のいずれか）を、有核前駆細胞（例えば、有核赤血球系前駆細胞）に導入することによって生成される。いくつかの実施形態では、外因性ポリエクチドは、ＤＮＡによってコードされ、ＤＮＡは、有核前駆細胞に導入される。いくつかの実施形態では、外因性ポリペプチドは、ＲＮＡによってコードされ、ＲＮＡは、有核前駆細胞（例えば、有核赤血球系前駆細胞もしくは有核血小板前駆細胞）、または血小板に導入される。
１つ以上の外因性ポリペプチドをコードする核酸は、例えば、一過性または安定的トランスフェクションおよび遺伝子療法アプローチ（例えば、ヌクレアーゼ（例えば、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系）を使用）を含む様々な技術を使用して、それぞれ、除核赤血球系細胞および血小板への最終分化前に、赤血球系前駆細胞および血小板前駆細胞に導入され得る。
ウイルス遺伝子導入を使用して、本明細書に提供される１つ以上の外因性ポリペプチドをコードする核酸を細胞にトランスフェクトすることができる。例えば、モロニーマウス白血病ウイルス（ＭＭＬＶ）、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）、レンチウイルス（例えば、ヒト免疫不全ウイルス１（ＨＩＶ１））、およびスプマウイルス（例えば、泡沫状ウイルス、例えば、Ｏｓｔｅｎ ｅｔ ａｌ．（２００７）ＨＥＰ １７８：１７７－２０２を参照されたい）を含む、多数のウイルスが遺伝子導入ビヒクルとして使用され得る。
１つ以上の外因性ポリペプチドをコードする核酸は、赤血球系前駆細胞および血小板前駆細胞にトランスフェクトされ得る。好適なベクターは、モロニーマウス白血病ウイルス（ＭＭＬＶ）ベクターである（例えば、Ｍａｌｉｋ ｅｔ ａｌ．（１９９８）Ｂｌｏｏｄ ９１：２６６４－７１を参照されたい）。例えば、外因性ポリペプチドをコードするｃＤＮＡを含有するＤＮＡ構築物は、標準的な分子生物学技術を使用してＭＭＬＶベクター骨格に組み込まれ得る。構築物は、パッケージング細胞株（例えば、ＰＡ３１７細胞）にトランスフェクトされ、産生細胞（例えば、ＰＧ１３細胞）にトランスフェクトするために、培養上清から得られたウイルス粒子が使用される。ＰＧ１３ウイルス上清（またはそれから精製されたウイルス粒子）は、赤血球系前駆細胞または血小板前駆細胞とインキュベートされる。外因性ポリペプチド発現は、蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）分析を使用して、例えば、外因性ポリペプチドに対して蛍光標識された抗体を用いて監視され得る。
非ウイルスベクターを使用して、１つ以上の外因性ポリペプチドをコードする核酸を、赤血球系前駆細胞または血小板前駆細胞に導入し得る。化学的方法および物理的方法を含む多数の送達方法を使用して、非ウイルスベクターを赤血球系前駆細胞または血小板前駆細胞に導入し得る。例えば、１つ以上の外因性ポリペプチドをコードする非ウイルス性ベクター（例えば、プラスミドＤＮＡ）は、カチオン性脂質およびポリマーなどの合成巨大分子を使用して、赤血球系前駆細胞または血小板前駆細胞に導入され得る（例えば、Ｐａｐａｐｅｔｒｏｕ ｅｔ ａｌ．（２００５）Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ １２：Ｓ１１８－３０を参照されたい）。あるいは、市販のリポソームトランスフェクション試薬が使用され得る。任意選択的に、赤血球系前駆細胞または血小板前駆細胞（例えば、造血および臍帯血由来ＣＤ３４＋細胞、例えば、Ｓｈｉｎ ｅｔ ａｌ．（２００５）Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ １７２５：３７７－８４を参照されたい）に効率的にトランスフェクトするために、カチオン性ポリマー、例えば、ＰＥＩが使用され得る。１つ以上の外因性ポリペプチドをコードするプラスミドベクターを導入するために使用され得る他の方法には、粒子媒介トランスフェクション、遺伝子銃、バイオリスティック法、または粒子衝撃技術（例えば、Ｐａｐａｐｅｔｒｏｕ ｅｔ ａｌ．（２００５）を参照されたい）、およびエレクトロポレーション（例えば、ヌクレオフェクション）が含まれる。任意選択的に、赤血球系前駆細胞および血小板前駆細胞は、宿主ゲノムに組み込まれない限り哺乳動物細胞において自己複製することができない従来の発現ベクターで非ウイルス的にトランスフェクトされ得る。あるいは、赤血球系前駆細胞および血小板前駆細胞に、宿主細胞の染色体に組み込まれることなく、自己複製遺伝子単位として、宿主細胞核中で持続し得るエピソームベクターをトランスフェクトし得る（例えば、Ｐａｐａｐｅｔｒｏｕ ｅｔ ａｌ．（２００５）を参照されたい）。哺乳動物人工染色体もまた、外因性核酸の非ウイルス導入に使用され得る（Ｖａｎｄｅｒｂｙｌ ｅｔ ａｌ．（２００５）Ｅｘｐ．Ｈｅｍａｔｏｌ．３３：１４７０－６）。１つ以上の外因性ポリペプチドをコードする外因性核酸は、標準的な分子生物学法、例えば、制限消化、重複伸長ＰＣＲ、およびＧｉｂｓｏｎ集合を使用して、非ウイルスベクターに集合し得る。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される外因性ポリペプチドをコードする外因性核酸は、構成的プロモーターに動作可能に連結されている。いくつかの実施形態では、外因性核酸は、誘導性または抑制性プロモーターに動作可能に連結されている。
本明細書に記載される赤血球系細胞および除核細胞は、本明細書に記載される外因性ポリペプチドを細胞（例えば、細胞上または細胞中に存在する天然タンパク質）上に化学的または酵素的にコンジュゲートすることによって産生され得る。さらに、本明細書に記載される赤血球系細胞および除核細胞はまた、外因性ポリペプチドを細胞上または細胞中に存在する異なる外因性ポリエプチド上に化学的または酵素的にコンジュゲートすることによって産生され得る。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される赤血球系細胞および除核細胞は、本明細書に記載される１つ以上の外因性ポリペプチドを細胞（例えば、細胞表面）にクリックコンジュゲートするクリックケミストリーを使用して、または細胞上もしくは細胞中に存在する１つの外因性ポリペプチドを別の外因性ポリペプチドにクリックコンジュゲートすることによって（例えば、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドを外因性抗原性ポリペプチドにクリックコンジュゲートすることによって産生される。複数（例えば、２、３、４、またはそれ以上）の外因性ポリペプチドが、クリックケミストリーを使用して細胞にコンジュゲートされ得る。外因性ポリペプチドをコンジュゲートするためにクリックケミストリーを使用する方法は、当該技術分野で既知である（例えば、米国特許公開第２０１８／０３４４７７０号を参照されたく、その全内容は、参照により本明細書に組み込まれる）。例えば、本明細書に記載される赤血球系細胞または除核細胞は、ａ）第１のクリックケミストリーハンドルを赤血球系細胞に結合させること、およびｂ）例えば、第１のクリックケミストリーハンドルが第２のクリックケミストリーハンドルと反応するのに好適な条件下で、細胞を、第２のクリックケミストリーハンドルに結合した外因性ポリペプチドと接触させることによって作製され得る。あるいは、本明細書に記載される赤血球系細胞または除核細胞は、ａ）第１のクリックケミストリーハンドルを、赤血球系細胞または除核細胞の上または中の第１の外因性ポリペプチド（例えば、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチド）と結合させること、およびｂ）例えば、第１のカップリング試薬が第２のクリックケミストリーハンドルと反応するのに句的な条件下で、細胞を、第２のクリックケミストリーハンドルに結合した第２の外因性ポリペプチド（例えば、外因性抗原性ポリペプチド）と接触させることによって作製され得る。外因性ポリペプチドを細胞にクリックコンジュゲートするために、または本明細書に提供される細胞上の１つの外因性ポリペプチドを別の外因性ポリペプチドにクリックコンジュゲートするために、当該技術分野で既知の任意のクリックケミストリーハンドルが使用され得る。例示的なクリックケミストリーハンドルには、３－アジドプロピオン酸スルホ－ＮＨＳエステル、アジド酢酸ＮＨＳエステル、アジド－ＰＥＧ－ＮＨＳエステル、アジドプロピルアミン、アジド－ＰＥＧ－アミン、アジド－ＰＥＧ－マレイミド、ビス－スルホン－ＰＥＧ－アジド、またはそれらの誘導体を含むアジドカップリング試薬が含まれる。いくつかの実施形態では、アジドカップリング試薬は、アジドアルキル部分、アジドアリール部分、またはアジドヘテロアリール部分を含む。追加のクリックケミストリーハンドルは、ＭｃＫａｙ ａｎｄ Ｆｉｎｎ（２０１４）Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．２１（９）：１０７５－１０１、およびＬａｈａｎｎ，Ｊ．（ｅｄ．）Ｃｌｉｃｋ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｍａｔｅｒｉａｌｓ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｗｅｓｔ Ｓｕｓｓｅｘ，２００９に記載され、それらの各々は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
本明細書に記載される赤血球系細胞および除核細胞はまた、細胞上または細胞上に存在する外因性ポリペプチド上の求核試薬と反応して、相互結合関係を形成する求電子基（例えば、混合無水物）を含有するカップリング化合物を使用して、本明細書に記載される１つ以上の外因性ポリペプチドを細胞にコンジュゲートすることによって、または細胞上もしくは細胞中に存在する１つの外因性ポリペプチドを別の外因性ポリペプチドにコンジュゲートすること（例えば、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドを外因性抗原性ポリペプチドにコンジュゲートすること）によって産生され得る。代表的な求電子基には、αβ不飽和カルボニル、ハロゲン化アルキル、および置換マレイミドなどのチオールが含まれる。カップリング化合物は、ポリペプチド中の１つ以上の官能基（例えば、アミノ基、カルボキシル基、またはトリオシン（ｔｒｙｏｓｉｎｅ）基）を介して、外因性ポリペプチドに付着し得る。コンジュゲーションのための外因性ポリペプチドは、アクチベーター（例えば、クロロギ酸イソブチル、５，５’－（ジチオビス（２－ニトロ安息香酸）（ＤＴＮＢ）、ｐ－クロロ第二水銀安息香酸（ＣＭＢ）、およびｍ－マレイミド安息香酸（ＭＢＡ））の存在下で、外因性ポリペプチドと反応する混合無水物を形成するためのカップリング剤上のカルボキシル基を使用して調製され得る。
外因性ポリペプチドはまた、架橋試薬を使用して、本明細書に記載される赤血球系細胞もしくは除核細胞、または細胞上の別の外因性ポリペプチドにコンジュゲートされ得る。外因性ポリペプチド上の官能基（例えば、カルボキシル基）は、カルボジイミドまたは他の既知のアクチベーターを使用して活性化され得る。架橋試薬（例えば、アミノ基）は、活性化官能基と反応して、反応性誘導体を形成することができる。赤血球系細胞または除核細胞上の適切な求核基と反応することができる第２の反応基を有するカップリング剤を使用して、架橋を形成し得る。そのような反応基は、ヨード酢酸などのアルキル化剤、αβ不飽和カルボニル化合物（例えば、アクリル酸）、チオール試薬（例えば、水銀および置換マレイミド）を含む。
あるいは、外因性ポリペプチドは、架橋試薬を使用することなく、本明細書に記載される赤血球系細胞もしくは除核細胞、または細胞上の別の外因性ポリペプチドに付着し得る。外因性ポリペプチド（例えば、外因性抗原性ポリペプチド）上の官能基は、アクチベーター（例えば、Ｗｏｏｄｗａｒｄ試薬Ｋ）を使用して、本明細書に記載される赤血球系細胞もしくは除核細胞上の、または他の外因性ポリペプチド上の求核剤と直接反応するように活性化されて、細胞または他の外因性ポリペプチド上の求核基と後に反応することができる外因性ポリペプチド上のエノールエステル誘導体を形成し得る。
外因性ポリペプチドはまた、酵素媒介コンジュゲーションを使用して、本明細書に記載される赤血球系細胞もしくは除核細胞、または細胞上の別の外因性ポリペプチドにコンジュゲートされ得る。例えば、外因性ポリペプチドは、ソルターゼを使用して、細胞（例えば、細胞の膜上に存在するタンパク質）にコンジュゲートされ得る。ソルターゼを使用して外因性ポリペプチドを細胞にコンジュゲートする方法は、例えば、米国特許第１０，２６０，０３８号および同第１０，４７１，０９９号に記載され、それらの両方は、参照により組み込まれる。
本明細書に提供される操作された赤血球系細胞および除核細胞は、本明細書に記載されるか、またはそうでなければ当該技術分野で既知の方法を使用して、１つ以上の外因性抗原性ポリペプチドに酵素的にまたは化学的にコンジュゲートされた外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドを含み得る。化学的コンジュゲーションは、上述の方法を使用して、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドと１つ以上の外因性抗原性ポリペプチドとの間の共有結合を作ることによって実施され得る。外因性抗原性ポリペプチドはまた、二官能性架橋剤（例えば、ＮＨＳエステル－マレイミドヘテロ二官能性架橋剤）およびクリックケミストリーを使用した化学的コンジュゲーション、ならびにトランスペプチダーゼ、イソペプチダーゼ、トランスグルタミナーゼ（例えば、Ｓｔｅｆｆｅｎ ｅｔ ａｌ．（２０１７）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２９２（３８）：１５６２２－３５を参照されたい）、ソルターゼ（例えば、ソルターゼＡもしくはソルターゼＢ）、またはブテラーゼ（例えば、ブテラーゼ１）を使用した酵素的コンジュゲーションを含むがこれらに限定されない、任意の化学的および酵素的手段によって、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドにコンジュゲートされ得る。
任意選択的に、本明細書に提供される操作された赤血球系細胞または除核細胞の外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、ビオチン－ストレプトアビジン架橋を介して１つ以上の外因性抗原性ポリペプチドにコンジュゲートされ得る。例えば、ビオチン化外因性抗原性ポリペプチドは、ストレプトアビジン架橋を介して外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドの非特異的ビオチン化表面に連結され得る。ビオチンコンジュゲーションは、任意の既知の化学的手段（例えば、Ｈｉｒｓｃｈ ｅｔ ａｌ．（２００４）Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９５：１３５－５４を参照されたい）によって実施され得る。外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、アミン反応性ビオチン化試薬、例えば、ＥＺ－Ｌｉｎｋ Ｓｕｌｆｏ－ＮＨＳ－ＳＳ－Ｂｉｏｔｉｎ（スルホスクシンイミジル２－（ビオチンアミド）－エチル－１，３－ジチオプロピオン酸；Ｐｉｅｒｃｅ－Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，Ｉｌｌ．，ＵＳＡ、例えば、Ｊａｉｓｗａｌ ｅｔ ａｌ．，（２００３）Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ．２１：４７－５１を参照されたい）を使用してビオチン化され得る。
外因性抗原性ポリペプチドはまた、ソルターゼ（例えば、ソルターゼＡ）を使用して、本明細書に提供される操作された赤血球系細胞または除核細胞の外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドにコンジュゲートされ得る。例えば、第１の外因性ポリペプチド（例えば、細胞上の外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドまたは外因性抗原性ポリペプチド）は、アクセプター配列（例えば、ＬＰＸＴＧ（配列番号３２）またはＬＰＸＴＡ（配列番号３３））のいずれかを含むか、または含むように操作されており、第２の外因性ポリペプチド（例えば、細胞上の外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドまたは外因性抗原性ポリペプチド）は、Ｎ末端ドナー配列（例えば、Ｇ、ＧＧ、ＧＧＧ、Ａ、ＡＡ、およびＡＡＡ）をを含むか、または含むように操作されている。好適なソルターゼ（例えば、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓソルターゼＡまたはＳ．ｐｙｏｇｅｎｅｓソルターゼＡ）と接触した場合、ペプチド転移反応が発生し、それにより、両方の外因性ポリペプチドがコンジュゲートされる（例えば、参照により本明細書に組み込まれるＳｗｅｅ ｅｔ ａｌ．（２０１３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １１０（４）：１４２８－３３を参照されたい）。いくつかの実施形態では、外因性ＨＬＡ－ＧポリペプチドのＮ末端は、Ｎ末端ドナー配列Ｇ、ＧＧ、ＧＧＧ、Ａ、ＡＡ、またはＡＡＡを含む。いくつかの実施形態では、外因性ＨＬＡ－ＧポリペプチドのＮ末端ドナー配列（例えば、ＧＧ、ＧＧＧ）は、ソルターゼ媒介反応（例えば、ソルターゼＡ媒介反応）を介して、アクセプター配列ＬＰＸＴＧ（配列番号３２）またはＬＰＸＴＡ（配列番号３３）を含有する外因性抗原性ポリペプチドにコンジュゲートされている。ソルターゼ媒介コンジュゲーション反応およびソルタギングを利用する方法に使用され得る追加のアクセプター配列およびドナー配列は、Ａｎｔｏｓ ｅｔ ａｌ．（２０１６）Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｓｔｒｕｃｔ Ｂｉｏｌ．３８：１１１－８に記載され、その内容は、参照により本明細書に組み込まれる）。
外因性抗原性ポリペプチドは、ブテラーゼ１、例えば、Ｃｌｉｔｏｒｉａ ｔｅｒｎａｔｅａブテラーゼ１（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢアクセッション番号Ａ０Ａ０６０Ｄ９Ｚ７）を使用して、操作された赤血球系細胞または除核細胞上の外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドにコンジュゲートされ得る。例えば、第１の外因性ポリペプチド（例えば、細胞上の外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチド、または外因性抗原性ポリペプチド）は、Ｃ末端ブテラーゼ－１トリペプチド認識配列Ａｓｘ－Ｈｉｓ－Ｖａｌ（Ａｓｘは、ＡｓｐまたはＡｓｎである）を含むか、または含むように操作されている。第２の外因性ポリペプチド（例えば、細胞上の外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチド、または外因性抗原性ポリペプチド）は、Ｎ末端Ｘ１Ｘ２を含むように操作されており、Ｘ１は、任意のアミノ酸であり、Ｘ２は、Ｉ、Ｌ、Ｖ、またはＣである。ブテラーゼ１と接触した場合、両方の外因性ポリペプチドが、酵素によってコンジュゲートされる（例えば、Ｎｇｕｙｅｎ ｅｔ ａｌ．（２０１６）Ｎａｔｕｒｅ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ １１：１９７７－８８を参照されたい）。
あるいは、外因性ポリペプチドは、本明細書に記載される赤血球系細胞および除核細胞上にコンジュゲートされ得、外因性ポリペプチドは、触媒結合形成ポリペプチド（例えば、ＳｐｙＴａｇ／ＳｐｙＣａｔｃｈｅｒ系）を使用して、互いにコンジュゲートされ得る。例えば、本明細書に提供される赤血球系細胞または除核細胞は、ＳｐｙＴａｇまたはＳｐｙＣａｔｃｈｅｒポリペプチドのいずれかを（例えば、外因性ポリペプチドの細胞外部分上に）含む外因性ポリペプチドを含むように操作され得る。あるいは、本明細書に記載される外因性ポリペプチド（例えば、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドまたは外因性抗原性ポリペプチド）は、ＳｐｙＴａｇまたはＳｐｙＣａｔｃｈｅｒポリペプチドのいずれかを含むように操作され得る。例えば、いくつかの実施形態では、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、Ｎ末端ＳｐｙＣａｔｃｈｅｒポリエペプチドを含み、外因性抗原性ポリペプチドは、ＳｐｙＴａｇポリペプチドを含む。ＳｐｙＴａｇおよびＳｐｙＣａｔｃｈｅｒポリペプチドの接触により、共有結合が形成され得る（例えば、Ｚａｋｅｒｉ ｅｔ ａｌ．（２０１２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．１０９：Ｅ６９０－７を参照されたい）。
外因性ポリペプチドは、本明細書に記載される赤血球系細胞および除核細胞上にコンジュゲートされ得、外因性ポリペプチドは、組み合わせ方法（例えば、酵素的組み合わせおよびクリックケミストリー）を使用して、互いにコンジュゲートされ得る。例えば、ソルターゼ媒介コンジュゲーションを使用して、クリックケミストリーハンドル（例えば、アジドまたはアルキン）を細胞または外因性ポリペプチド上に付着させ得る。続いて、クリックケミストリー（例えば、シクロ付加反応）を使用して、追加の外因性ポリペプチドを細胞上、または外因性ポリペプチド上にコンジュゲートし得る（例えば、外因性抗原性ポリペプチドを外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドに、例えば、Ｎｅｖｅｓ ｅｔ ａｌ．（２０１３）Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２４（６）：９３４－４１を参照されたい）。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供される赤血球系細胞および除核細胞は、ソルターゼ媒介コンジュゲーション、低張負荷、低張性透析工程、および／または制御された細胞変形のうちの１つ以上を含まない方法を使用して産生される。
本明細書に提供される赤血球系細胞および除核細胞は、遠心分離（例えば、密度勾配遠心分離）、蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）、および磁気活性化細胞選別（ＭＡＣＳ）などであるがこれらに限定されない、当該技術分野で既知の方法を使用して単離され得る。単離された赤血球系細胞および除核細胞は、製剤化され得る（例えば、操作された赤血球系細胞または除核細胞の単離された集団を、１つ以上の薬学的に許容される担体（例えば、リン酸緩衝生理食塩水）と混合することによって）。
本明細書の多くの実施形態では、本明細書に記載される１つ以上（例えば、２つ以上）の外因性ポリペプチドが、赤血球系細胞（例えば、操作された除核赤血球系細胞）または除核細胞（例えば、改変された除核細胞）の上またはその中に位置するが、本明細書に記載される任意の外因性ポリペプチドは、別のビヒクル上またはビヒクル中にも位置し得る。ビヒクルは、例えば、細胞、小体、ナノ粒子、ミセル、リポソーム、またはエクソソームを含み得る。例えば、いくつかの態様では、本開示は、例えば、１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、またはそれ以上）の本明細書に記載される外因性ポリペプチドを表面上に含む、ビヒクル（例えば、細胞、小体、ナノ粒子、ミセル、リポソーム、またはエクソソーム）を提供する。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される操作された赤血球系細胞（例えば、操作された除核赤血球系細胞）、除核細胞（例えば、改変された除核細胞）、または他のビヒクルは、膜、例えば、半透過性膜に封入され得る。いくつかの実施形態では、膜は、多糖類、例えば、アニオン性多糖アルギン酸を含む。いくつかの実施形態では、半透過性膜は、細胞が通過することを可能にしないが、小分子または巨大分子、例えば、代謝産物、タンパク質、またはＤＮＡの通過を可能にする。複数の好適な膜が当該技術分野で既知であり、これらの目的に使用され得る（例えば、Ｌｉｅｎｅｒｔ ｅｔ ａｌ．（２０１４）Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．１５：９５－１０７（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）を参照されたい）。
ＩＩＩ．操作された赤血球系細胞を使用する方法
本明細書に記載されるＨＬＡ－Ｇポリペプチドおよび外因性免疫原性ポリペプチド（例えば、細胞表面上の、細胞内の（例えば、細胞質中もしくは原形質膜の細胞内側の）、または細胞によって分泌もしくは放出される）を含む、操作された赤血球系細胞（例えば、操作された除核赤血球系細胞）または除核細胞（例えば、改変された除核細胞）は、様々な治療方法で使用され得る。少なくとも１つの外因性自己抗原性ポリペプチドおよび少なくとも１つの外因性共阻害性ポリペプチドを含む、操作された赤血球系細胞（例えば、操作された除核赤血球系細胞）または除核細胞（例えば、改変された除核細胞）も、様々な治療方法で使用され得る。特に、これらの細胞は、外因性免疫原性ポリペプチドおよび／または外因性自己抗原性ポリペプチドに対する免疫寛容または低減された免疫応答を提供することが望ましい、様々な疾患および障害を治療するために使用され得る。
いくつかの実施形態では、本開示は、疾患の治療を必要とする対象において、本明細書に提供される複数の操作された赤血球系細胞もしくは除核細胞のいずれか、または細胞を含む医薬組成物を対象に投与し、それによって対象を治療することによって、それを行う方法を特徴とする。
いくつかの実施形態では、操作された赤血球系細胞または除核細胞は、少なくとも１つ（例えば、１、２、３、またはそれ以上）の外因性免疫原性ポリペプチド、少なくとも１つ（例えば、１、２、３、またはそれ以上）の外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチド、および任意選択的に、少なくとも１つ（例えば、１、２、３、またはそれ以上）の外因性共阻害性ポリペプチド（例えば、細胞表面上、細胞質中、原形質膜の細胞内側に存在するか、または細胞によって分泌もしくは放出される）、ならびに／あるいは少なくとも１つ（例えば、１、２、３、またはそれ以上）の外因性自己抗原性ポリペプチド（例えば、細胞表面上、細胞質中、原形質膜の細胞内側に存在するか、または細胞によって分泌もしくは放出される）を含む。
いくつかの実施形態では、疾患は、外因性免疫原性ポリペプチドによって調節される疾患、例えば、がん、ホモシステイン関連疾患、尿酸関連疾患、高シュウ酸尿症、例えば、原発性高シュウ酸尿症、またはフェニルケトン尿症（ＰＫＵ）である。
いくつかの実施形態では、操作された赤血球系細胞または除核細胞上に含まれる外因性免疫原性ポリペプチドに対する対象における免疫応答は、（ａ）外因性免疫原性ポリペプチドが単独で対象に投与される場合の、外因性免疫原性ポリペプチドに対する対象における免疫応答、または（ｂ）外因性免疫原性ポリペプチドが外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドを欠く同等の操作された赤血球系細胞もしくは除核細胞の表面上に存在するときに対象に投与される場合の、外因性免疫原性ポリペプチドに対する対象における免疫応答のいずれかと比較して低減される。
いくつかの実施形態では、操作された赤血球系細胞または除核細胞上に含まれる外因性自己抗原性ポリペプチドに対する対象における免疫応答は、（ａ）外因性自己抗原性ポリペプチドが単独で対象に投与される場合の、外因性自己抗原性ポリペプチドに対する対象における免疫応答、または（ｂ）外因性自己抗原性ポリペプチドが外因性共阻害性ポリペプチドを欠く同等の操作された赤血球系細胞もしくは除核細胞の表面上に存在するときに対象に投与される場合の、外因性自己抗原性ポリペプチドに対する対象における免疫応答のいずれかと比較して低減される。
いくつかの実施形態では、本開示は、外因性免疫原性ポリペプチドに対する対象における免疫応答を低減する方法を提供し、方法は、本明細書に記載される複数の操作された赤血球系細胞（例えば、操作された除核赤血球系細胞）もしくは除核細胞（例えば、改変された除核細胞）、または本明細書に記載される細胞を含む医薬組成物を対象に投与することを含み、外因性免疫原性ポリペプチドに対する免疫応答は、（ａ）外因性免疫原性ポリペプチドが単独で対象に投与される場合の、外因性免疫原性ポリペプチドに対する対象における免疫応答、または（ｂ）外因性免疫原性ポリペプチドが外因性免疫原性ポリペプチドを欠く同等の操作された赤血球系細胞もしくは除核細胞の表面上に存在するときに対象に投与される場合の、外因性免疫原性ポリペプチドに対する対象における免疫応答のいずれかと比較して、対象において少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、またはそれ以上低減される。
いくつかの実施形態では、本開示は、外因性自己抗原性ポリペプチドに対する対象における免疫応答を低減する方法を提供し、方法は、本明細書に記載される複数の操作された赤血球系細胞（例えば、操作された除核赤血球系細胞）もしくは除核細胞（例えば、改変された除核細胞）、または本明細書に記載される細胞を含む医薬組成物を対象に投与することを含み、外因性自己抗原性ポリペプチドに対する免疫応答は、（ａ）外因性自己抗原性ポリペプチドが単独で対象に投与される場合の、外因性自己抗原性ポリペプチドに対する対象における免疫応答、または（ｂ）外因性自己抗原性ポリペプチドが外因性共阻害性ポリペプチドを欠く同等の操作された赤血球系細胞もしくは除核細胞の表面上に存在するときに対象に投与される場合の、外因性自己抗原性ポリペプチドに対する対象における免疫応答のいずれかと比較して、対象において少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、またはそれ以上低減される。
いくつかの実施形態では、本開示は、外因性免疫原性ポリペプチドに対する対象における免疫寛容、例えば、長期免疫寛容または短期免疫寛容を誘導する方法を提供し、方法は、本明細書に記載される複数の操作された赤血球系細胞（例えば、操作された除核赤血球系細胞）もしくは除核細胞（例えば、改変された除核細胞）、または細胞を含む医薬組成物を対象に投与することを含む。いくつかの実施形態では、本開示は、外因性免疫原性ポリペプチドに対する対象における免疫寛容、例えば、長期免疫寛容または短期免疫寛容を誘導する方法を提供し、方法は、対象の細胞を、本明細書に記載される操作された赤血球系細胞（例えば、操作された除核赤血球系細胞）または除核細胞（例えば、改変された除核細胞）と接触させることを含む。いくつかの実施形態では、操作された赤血球系細胞または除核細胞は、少なくとも１つ（例えば、１、２、３、またはそれ以上）の外因性免疫原性ポリペプチド、少なくとも１つ（例えば、１、２、３、またはそれ以上）の外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチド、ならびに任意選択的に、少なくとも１つ（例えば、１、２、３、またはそれ以上）の外因性共阻害性ポリペプチド、および／または少なくとも１つ（例えば、１、２、３、またはそれ以上）の外因性抗原性ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドは、外因性抗原性ポリペプチドに結合している。いくつかの実施形態では、接触させることは、インビトロ、エクスビボ、またはインビボで実施される。いくつかの実施形態では、接触させることは、インビトロで実施される。いくつかの実施形態では、接触させることは、エクスビボで実施される。いくつかの実施形態では、接触させることは、インビボで実施される。
いくつかの実施形態では、本開示は、外因性自己抗原性ポリペプチドに対する対象における免疫寛容、例えば、長期免疫寛容または短期免疫寛容を誘導する方法を提供し、方法は、対象の細胞を、本明細書に記載される操作された赤血球系細胞（例えば、操作された除核赤血球系細胞）または除核細胞（例えば、改変された除核細胞）と接触させることを含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供される方法によって誘導される免疫寛容は、短期免疫寛容である。いくつかの実施形態では、短期免疫寛容は、本明細書に提供される操作された赤血球系細胞または除核細胞が接触する免疫細胞の活性化、分化、および／または増殖を阻害することを含み、免疫細胞は、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、またはＢ細胞からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、短期免疫寛容は、本明細書に提供される操作された赤血球系細胞または除核細胞が接触するＴ細胞またはＮＫ細胞の細胞傷害を阻害することを含む。いくつかの実施形態では、短期免疫寛容は、本明細書に提供される操作された赤血球系細胞または除核細胞が接触するＢ細胞による抗体分泌を阻害することを含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供される方法によって誘導される免疫寛容は、長期免疫寛容である。いくつかの実施形態では、長期免疫寛容は、操作された除核赤血球系細胞が接触する樹状細胞（ＤＣ）の成熟を阻害することを含む。いくつかの実施形態では、長期免疫寛容は、操作された除核赤血球系細胞が接触する樹状細胞（ＤＣ）のアネルギーを誘導することを含む。いくつかの実施形態では、長期免疫寛容は、操作された除核赤血球系細胞が接触するＣＤ４＋ Ｔ細胞の制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）への分化を誘導すること、または操作された除核赤血球系細胞が接触するＣＤ８＋ Ｔ細胞の制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）への分化を誘導することを含む。
別の態様では、本開示は、免疫応答の低減を必要とする対象を治療する方法を提供し、方法は、対象の免疫細胞を、本明細書に記載される操作された赤血球系細胞（例えば、操作された除核赤血球系細胞）または除核細胞（例えば、改変された除核細胞）と接触させ、それによって、免疫応答の低減を必要とする対象を治療することを含む。いくつかの実施形態では、免疫応答の低減を必要とする対象は、操作された赤血球系細胞または除核細胞の表面上の外因性免疫原性ポリペプチドによって調節される疾患（例えば、がん、ホモシステイン関連疾患、尿酸関連疾患、高シュウ酸尿症、例えば、原発性高シュウ酸尿症、またはフェニルケトン尿症（ＰＫＵ））に罹患している対象である。
外因性薬剤ポリペプチドを含む操作された赤血球系細胞および除核細胞を投与する方法は、例えば、国際特許公開第２０１５／０７３５８７号および同第２０１５／１５３１０２号に記載され、それら各々は、参照によりその全体が組み込まれる。操作された赤血球系細胞および除核細胞、または細胞を含む医薬組成物は、注射、摂取、輸血、埋め込み、または移植を含む任意の便利な方法を使用して、対象に投与され得る。例えば、操作された赤血球系細胞および除核細胞、または細胞を含む医薬組成物は、皮下、皮内、筋肉内、静脈内（ｉ．ｖ．）注射、腹腔内、または腫瘍もしくはリンパ節への直接の注射によって、対象に投与され得る。いくつかの実施形態では、操作された赤血球系細胞または除核細胞は、対象の循環（例えば、静脈内）または脾臓に直接投与される。
別の態様では、本開示は、免疫応答の低減を必要とする対象を治療する方法を特徴とし、方法は、ａ）対象のＨＬＡ状態を決定することと、ｂ）対象と免疫学的に適合性のある操作された赤血球系細胞（例えば、操作された除核赤血球系細胞）または除核細胞（例えば、改変された除核細胞）を選択することであって、細胞が、操作された赤血球系細胞または除核細胞であり、外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドおよび外因性免疫原性ポリペプチド、ならびに任意選択的に、外因性共阻害性ポリペプチドおよび／または外因性抗原性ポリペプチドを含む、選択することと、ｃ）操作された赤血球系細胞または除核細胞を対象に投与し、それによって、免疫応答の低減を必要とする対象を治療することと、を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供される操作された赤血球系細胞または除核細胞の用量は、約１×１０９～２×１０９、２×１０９～５×１０９、５×１０９～１×１０１０、１×１０１０～２×１０１０、２×１０１０～５×１０１０、５×１０１０～１×１０１１、１×１０１１～２×１０１１、２×１０１１～５×１０１１、５×１０１１～１×１０１２、１×１０１２～２×１０１２、２×１０１２～５×１０１２、または５×１０１２～１×１０１３細胞を含む。
いくつかの態様では、本開示は、疾患の治療を必要とする対象においてそれを行う方法を提供し、方法は、本明細書に記載される操作された赤血球系細胞もしくは除核細胞、または操作された赤血球系細胞もしくは除核細胞の集団を含む医薬組成物の投与を必要とする対象に、それを行うことを含む。いくつかの実施形態では、疾患は、がん、ホモシステイン関連疾患、尿酸関連疾患、高シュウ酸尿症、例えば、原発性高シュウ酸尿症、またはフェニルケトン尿症（ＰＫＵ）である。
いくつかの態様では、本開示は、本明細書に提供される疾患、例えば、がん、ホモシステイン関連疾患、尿酸関連疾患、高シュウ酸尿症、例えば、原発性高シュウ酸尿症、またはフェニルケトン尿症（ＰＫＵ）を治療するための、本明細書に記載される操作された赤血球系細胞もしくは除核細胞、または細胞を含む医薬組成物の使用を提供する。
いくつかの実施形態では、複数の本明細書に記載される操作された除核赤血球系細胞のいずれか、または本明細書に記載される医薬組成物のいずれかは、貪食誘導剤または原形質膜の外葉上のホスファチジルセリンの存在を増加させる薬剤（例えば、カルシウムイオノフォア、例えば、イオノマイシン、Ａ２３１８７、およびスベリン酸ビススルホスクシンイミジル（ＢＳ３））と接触し得る。例えば、ＷＯ ２０１５／１５３１０２Ａ１を参照されたい。
他の態様では、本開示は、本明細書に記載される疾患、例えば、がん、ホモシステイン関連疾患、尿酸関連疾患、高シュウ酸尿症、例えば、原発性高シュウ酸尿症、またはフェニルケトン尿症（ＰＫＵ）を治療するための薬剤の製造のための、本明細書に記載される操作された赤血球系細胞もしくは除核細胞、または細胞を含む医薬組成物の使用を提供する。
がん
いくつかの態様では、本開示は、がんの治療を必要とする対象においてそれを行う方法を提供し、方法は、操作された赤血球系細胞もしくは除核細胞、細胞の集団、または集団を含む医薬組成物を対象に投与することを含み、操作された赤血球系細胞または除核細胞は、少なくとも１つの外因性免疫原性ポリペプチド、少なくとも１つの外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチド、ならびに任意選択的に、少なくとも１つの外因性共阻害性ポリペプチドおよび／または少なくとも１つの外因性抗原性ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、外因性免疫原性ポリペプチドは、アミノ酸分解ポリペプチド（例えば、アスパラギナーゼまたはグルタミナーゼ）を含む。
いくつかの態様では、本開示は、がんの治療を必要とする対象においてそれを行う方法を提供し、方法は、操作された赤血球系細胞もしくは除核細胞、細胞の集団、または集団を含む医薬組成物を対象に投与することを含み、操作された赤血球系細胞または除核細胞は、少なくとも１つの外因性自己抗原性ポリペプチドおよび少なくとも１つの外因性共阻害性ポリペプチドを含む。
いくつかの実施形態では、がんは、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、肛門がん、胆管がん、膀胱がん、骨がん、腸がん、脳腫瘍、乳がん、カルチノイド、子宮頸がん、絨毛がん、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、結腸がん、結腸直腸がん、子宮内膜がん、眼がん、胆嚢がん、胃がん、妊娠性絨毛腫瘍（ＧＴＴ）、有毛細胞白血病、頭頸部がん、ホジキンリンパ腫、腎臓がん、喉頭がん、肝臓がん、肺がん、リンパ腫、黒色腫、皮膚がん、中皮腫、口腔または口腔咽頭がん、骨髄腫、鼻腔または副鼻腔がん、鼻咽腔がん、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、食道がん、卵巣がん、膵臓がん、陰茎がん、前立腺がん、直腸がん、唾液腺がん、非黒色腫皮膚がん、軟部組織肉腫、腹部がん、精巣がん、甲状腺がん、子宮がん、膣がん、および外陰がんから選択される。
いくつかの実施形態では、対象のがん細胞は、栄養要求性であり、例えば、対象のがん細胞の少なくとも亜集団は、栄養要求性である。いくつかの実施形態では、対象における１つ以上のがん細胞は、アミノ酸、例えば、アスパラギンおよび／またはグルタミンの合成に障害がある。いくつかの実施形態では、がんは、アミノ酸合成遺伝子の変異を有し、例えば、変異は、遺伝子産物の活性を低減または除去する。いくつかの実施形態では、アミノ酸合成遺伝子は、アミノ酸の生合成に寄与するタンパク質をコードし、例えば、前駆体分子からのアミノ酸の形成を触媒する。
いくつかの実施形態では、操作された赤血球系細胞または除核細胞は、アスパラギナーゼポリペプチドを含む外因性免疫原性ポリペプチド、ならびに抗ＣＤ３３標的化部分（例えば、抗ＣＤ３３抗体またはＣＤ３３に対する特異的結合パートナー、例えば、ＣＤ３３結合断片、またはＣＤ３３リガンド、例えば、自然発生的ＣＤ３３リガンド）を含む外因性ポリペプチドを含む。これらの細胞および細胞を含む医薬組成物は、がん（例えば、白血病、例えば、ＡＬＬまたはＣＬＬ）の治療に使用され得る。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供される操作された赤血球系細胞または除核細胞は、第２の療法と共に投与される。第２の療法は、例えば、化学療法、放射線療法、手術、または抗体療法を含み得る。
有効性は、例えば、インビトロで、本明細書に記載される操作された赤血球系細胞または除核細胞を、がん細胞（例えば、ＭＶ４－１１、ＭＯＬＭ－１３、ＴＨＰ１、ＨＬ６０、Ｂ１６－Ｆ１０、ＲＰＭＩ ８２２６のうちの１つ以上）と接触させ、次のうちの１つ以上：がん細胞の数、がん細胞の分裂速度、およびがん細胞ＤＮＡの複製のを分析することによって（例えば、インキュベーション後、例えば、６８または８７時間）、分析され得る。 抗がん有効性はまた、当該技術分野で既知の動物モデルを使用して分析され得、例えば、ＡＭＬの場合、播種性ＭＶ４－１１ ＡＭＬマウスモデルが使用され得る。
ホモシステイン関連疾患
いくつかの態様では、本開示は、ホモシステイン関連疾患（例えば、ホモシスチン尿症）の治療を必要とする対象においてそれを行う方法を提供し、方法は、操作された赤血球系細胞もしくは除核細胞、細胞の集団、または集団を含む医薬組成物を対象に投与することを含み、操作された赤血球系細胞または除核細胞は、少なくとも１つの外因性免疫原性ポリペプチド、少なくとも１つの外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチド、ならびに任意選択的に、少なくとも１つの外因性共阻害性ポリペプチドおよび／または少なくとも１つの外因性抗原性ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、外因性免疫原性ポリペプチドは、ホモシステイン低減ポリペプチドまたはホモシステイン分解ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、外因性免疫原性ポリペプチドは、メチオニンアデノシルトランスフェラーゼ、アラニントランスアミナーゼ、Ｌ－アラニン－Ｌ－アンチカプシンリガーゼ、Ｌ－システインデスルフィダーゼ、メチレンテトラヒドロ葉酸レダクターゼ、５－メチルテトラヒドロ葉酸－ホモシステインメチルトランスフェラーゼレダクターゼ、およびメチルマロン酸尿もしくはホモシスチン尿、ｃｂｌＤ型、またはそれらのバリアントから選択されるホモシステイン低減ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、外因性免疫原性ポリペプチドは、ＣＢＳ、メチオニンガンマ－リアーゼ、スルフィド：キノンレダクターゼ、メチオニンシンターゼ、５－メチルテトラヒドロプテロイルトリグルタミン酸－ホモシステイン－Ｓ－メチルトランスフェラーゼ、アデノシルホモシステイナーゼ、シスタチオニンガンマ－リアーゼ、メチオニンガンマ－リアーゼ、Ｌ－アミノ酸オキシダーゼ、テチン－ホモシステインＳ－メチルトランスフェラーゼ、ベタイン－ホモシステインＳ－メチルトランスフェラーゼ、ホモシステインＳ－メチルトランスフェラーゼ、５－メチルテトラヒドロプテロイルトリグルタミン酸－ホモシステイン－Ｓ－メチルトランスフェラーゼ、セレノシステインＳｅ－メチルトランスフェラーゼ、シスタチオニンガンマ－シンターゼ、Ｏ－アセチルホモセリンアミノカルボキシプロピルトランスフェラーゼ、アスパラギン－オキソ酸トランスアミナーゼ、グルタミン－フェニルピルビン酸トランスアミナーゼ、３－メルカプトピルビン酸硫黄トランスフェラーゼ、ホモシステインデスルフヒドラーゼ、シスタチオニンベータ－リアーゼ、アミノ酸ラセマーゼ、メチオニン－ｔＲＮＡリガーゼ、グルタミン酸－システインリガーゼ、Ｎ－（５－アミノ－５－カルボキシペンタノイル）－Ｌ－システイニル－Ｄ－バリンシンターゼ、Ｌ－イソロイシン４－ヒドロキシラーゼ、Ｌ－リシンＮ６－モノオキシゲナーゼ（ＮＡＤＰＨ）、メチオニンデカルボキシラーゼ、２，２－ジアルキルグリシンデカルボキシラーゼ（ピルビン酸塩）、およびＣｙｓＯ、またはそれらのバリアントから選択されるホモシステイン分解ポリペプチドを含む。
いくつかの態様では、本開示は、ホモシステイン関連疾患（例えば、ホモシスチン尿症）の治療を必要とする対象においてそれを行う方法を提供し、方法は、操作された赤血球系細胞もしくは除核細胞、細胞の集団、または集団を含む医薬組成物を対象に投与することを含み、操作された赤血球系細胞または除核細胞は、少なくとも１つの外因性自己抗原性ポリペプチドおよび少なくとも１つの外因性共阻害性ポリペプチドを含む。
いくつかの実施形態では、ホモシステイン関連疾患は、ホモシスチン尿症（例えば、ＣＢＳ欠損ホモシスチン尿症、症候性ホモシスチン尿症、または無症候性ホモシスチン尿症）である。いくつかの実施形態では、操作された赤血球系細胞、除核細胞、または細胞を含む医薬組成物を対象に投与することは、対象における血漿総ホモシステイン（ｔＨｃｙ）のレベルを、正常レベル（例えば、約５～約１５μＭ、約５～約５０μＭ、約１０～約５０μＭ、または約１５～約５０μＭ）に低減する。
いくつかの実施形態では、操作された赤血球系細胞、除核細胞、または細胞を含む医薬組成物を対象に投与することは、細胞または医薬組成物を投与する前の対象における総血漿ホモシステインのレベルと比較して約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、１５０％、２００％、またはそれ以上、総血漿ホモシステインレベルを減少させる。
フェニルケトン尿症
いくつかの態様では、本開示は、フェニルケトン尿症（ＰＫＵ）の治療を必要とする対象においてそれを行う方法を提供し、方法は、操作された赤血球系細胞もしくは除核細胞、細胞の集団、または集団を含む医薬組成物を対象に投与することを含み、操作された赤血球系細胞または除核細胞は、少なくとも１つの外因性免疫原性ポリペプチド、少なくとも１つの外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチド、ならびに任意選択的に、少なくとも１つの外因性共阻害性ポリペプチドおよび／または少なくとも１つの外因性抗原性ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、外因性免疫原性ポリペプチドは、ＰＡＬまたはＰＡＨを含む。
いくつかの態様では、本開示は、フェニルケトン尿症（ＰＫＵ）の治療を必要とする対象においてそれを行う方法を提供し、方法は、操作された赤血球系細胞もしくは除核細胞、細胞の集団、または集団を含む医薬組成物を対象に投与することを含み、操作された赤血球系細胞または除核細胞は、少なくとも１つの自己抗原性免疫原性ポリペプチド、ならびに少なくとも１つの外因性共阻害性ポリペプチドおよび／または少なくとも１つの外因性抗原性ポリペプチドを含む。
尿酸関連疾患
いくつかの態様では、本開示は、尿酸関連疾患（例えば、痛風）の治療を必要とする対象においてそれを行う方法を提供し、方法は、操作された赤血球系細胞もしくは除核細胞、細胞の集団、または集団を含む医薬組成物を対象に投与することを含み、操作された赤血球系細胞または除核細胞は、少なくとも１つの外因性免疫原性ポリペプチド、少なくとも１つの外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチド、ならびに任意選択的に、少なくとも１つの外因性共阻害性ポリペプチドおよび／または少なくとも１つの外因性抗原性ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、外因性免疫原性ポリペプチドは、尿酸分解ポリペプチド（例えば、尿酸オキシダーゼ、アラントイナーゼ、またはアラントイカーゼ）を含む。
いくつかの態様では、本開示は、尿酸関連疾患（例えば、痛風）の治療を必要とする対象においてそれを行う方法を提供し、方法は、操作された赤血球系細胞もしくは除核細胞、細胞の集団、または集団を含む医薬組成物を対象に投与することを含み、操作された赤血球系細胞または除核細胞は、少なくとも１つの外因性自己抗原性ポリペプチドおよび少なくとも１つの外因性共阻害性ポリペプチドを含む。
いくつかの実施形態では、尿酸関連疾患は、高尿酸血症、無症候性高尿酸血症、高尿酸尿症、痛風（例えば、慢性難治性痛風）、レッシュ・ナイハン症候群、尿酸腎結石症（ｕｒｉｃ ａｃｉｄ ｎｅｐｈｒｏｌｏｔｈｉａｓｉｓ）、血管状態、糖尿病、メタボリックシンドローム、炎症応答、認知障害、関節リウマチ、変形性関節炎、脳卒中、虚血性心疾患、不整脈、および慢性腎疾患から選択される。
いくつかの実施形態では、操作された赤血球系細胞、除核細胞、または細胞を含む医薬組成物を対象に投与することは、細胞または医薬組成物を投与する前の対象の血液中の尿酸レベルと比較して約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、１５０％、２００％、またはそれ以上、対象の血液中の尿酸レベルを減少させる。
高シュウ酸尿症
いくつかの態様では、本開示は、高シュウ酸尿症（例えば、原発性高シュウ酸尿症）の治療を必要とする対象においてそれを行う方法を提供し、方法は、操作された赤血球系細胞もしくは除核細胞、細胞の集団、または集団を含む医薬組成物を対象に投与することを含み、操作された赤血球系細胞または除核細胞は、少なくとも１つの外因性免疫原性ポリペプチド、少なくとも１つの外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチド、ならびに任意選択的に、少なくとも１つの外因性共阻害性ポリペプチドおよび／または少なくとも１つの外因性抗原性ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、外因性免疫原性ポリペプチドは、シュウ酸オキシダーゼ（ｏｘｏｌａｔｅ ｏｘｉｄａｓｅ）を含む。
いくつかの態様では、本開示は、高シュウ酸尿症（例えば、原発性高シュウ酸尿症）の治療を必要とする対象においてそれを行う方法を提供し、方法は、操作された赤血球系細胞もしくは除核細胞、細胞の集団、または集団を含む医薬組成物を対象に投与することを含み、操作された赤血球系細胞または除核細胞は、少なくとも１つの外因性自己抗原性ポリペプチドおよび少なくとも１つの外因性共阻害性ポリペプチドを含む。
いくつかの実施形態では、操作された赤血球系細胞、除核細胞、または細胞を含む医薬組成物を対象に投与することは、細胞または医薬組成物を投与する前の対象の血液中のシュウ酸（ｏｘｏｌａｔｅ）レベルと比較して約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、１５０％、２００％、またはそれ以上、対象の血液中のシュウ酸（ｏｘｏｌａｔｅ）レベルを減少させる。いくつかの実施形態では、操作された赤血球系細胞、除核細胞、または細胞を含む医薬組成物を対象に投与することは、細胞または医薬組成物を投与する前の対象の尿中のシュウ酸（ｏｘｏｌａｔｅ）レベルと比較して約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、１５０％、２００％、またはそれ以上、対象の尿中のシュウ酸（ｏｘｏｌａｔｅ）レベルを減少させる。
自己免疫疾患
いくつかの態様では、本開示は、自己免疫疾患（例えば、細胞性免疫誘導疾患、液性免疫誘導性疾患、他の自己免疫疾患）の治療を必要とする対象においてそれを行う方法を提供し、方法は、操作された赤血球系細胞もしくは除核細胞（例えば、本明細書に記載される例示的な細胞のいずれか）、細胞の集団（例えば、本明細書に記載される細胞の例示的な集団のいずれか）、または集団を含む医薬組成物（例えば、本明細書に記載される例示的な医薬組成物のいずれか）を、対象に投与することを含み、操作された赤血球系細胞または除核細胞は、少なくとも１つの外因性免疫原性ポリペプチド（例えば、本明細書に記載されるか、もしくは当該技術分野で既知の例示的な外因性免疫原性ポリペプチドのいずれか）、少なくとも１つの外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチド（例えば、本明細書に記載されるか、もしくは当該技術分野で既知の例示的な外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドのいずれか）、ならびに任意選択的に、少なくとも１つの外因性共阻害性ポリペプチド（例えば、本明細書に記載されるか、もしくは当該技術分野で既知の例示的な外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドのいずれか）、および／または少なくとも１つの外因性抗原性ポリペプチド（例えば、本明細書に記載されるか、もしくは当該技術分野で既知の外因性抗原性ポリペプチドのいずれか）を含む。
いくつかの態様では、本開示は、自己免疫疾患（例えば、細胞性免疫誘導疾患、液性免疫誘導性疾患、他の自己免疫疾患）の治療を必要とする対象においてそれを行う方法を提供し、方法は、操作された赤血球系細胞もしくは除核細胞（例えば、本明細書に記載される例示的な細胞のいずれか）、細胞の集団（例えば、本明細書に記載される細胞の例示的な集団のいずれか）、または集団を含む医薬組成物（例えば、本明細書に記載される例示的な医薬組成物のいずれか）を、対象に投与することを含み、操作された赤血球系細胞または除核細胞は、少なくとも１つの自己抗原性ポリペプチド（例えば、本明細書に記載されるか、もしくは当該技術分野で既知の例示的な外因性自己抗原性ポリペプチドのいずれか）および少なくとも１つの外因性共阻害性ポリペプチド（例えば、本明細書に記載されるか、もしくは当該技術分野で既知の例示的な外因共阻害性ポリペプチドのいずれか）を含む。
自己免疫疾患の非限定的な例には、アカラシア、アジソン病、成人スチル病、無ガンマグロブリン血症、円形脱毛症、アミロイドーシス、強直性脊椎炎、抗ＧＢＭ／抗ＴＢＭ腎炎、抗リン脂質症候群、自己免疫性血管性浮腫、自己免疫性自律神経節障害、自己免疫性脳脊髄炎、自己免疫性肝炎、自己免疫性内耳疾患（ＡＩＥＤ）、自己免疫性心筋炎、自己免疫性卵巣炎、自己免疫性精巣炎、自己免疫性膵炎、自己免疫性網膜症、自己免疫性蕁麻疹、軸索および神経ニューロパチー神経（ＡＭＡＮ）、バロー病、ベーチェット病、良性粘膜類天疱瘡、類天疱瘡、キャッスルマン病（ＣＤ）、セリアック病、シャーガス病、慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー（ＣＩＤＰ）、慢性再発性多巣性骨髄炎（ＣＲＭＯ）、チャーグ・ストラウス症候群（ＣＳＳ）または好酸球性肉芽腫症（ＥＧＰＡ）、瘢痕性類天疱瘡、コーガン症候群、寒冷凝集素症、先天性心ブロック、コクサッキー心筋炎、クレスト症候群、クローン病、疱疹状皮膚炎、皮膚筋炎、デビック病（視神経脊髄炎）、円板状ループス、ドレスラー症候群、子宮内膜症、好酸球性食道炎（ＥｏＥ）、好酸球性筋膜炎、結節性紅斑、本態性混合型クリオグロブリン血症、エバンス症候群、線維筋痛症、繊維化肺胞炎、巨細胞性動脈炎（側頭動脈炎）、巨細胞性心筋炎、糸球体腎炎、グッドパスチャー症候群、多発血管炎性肉芽腫症、グレーブス病、ギラン・バレー症候群、橋本甲状腺炎、溶血性貧血、ヘノッホ・シェーンライン紫斑病（ＨＳＰ）、妊娠性疱疹または妊娠性類天疱瘡（ＰＧ）、化膿性汗腺炎（ＨＳ）（反対型ざ瘡）、低ガンマグロブリン血症、ＩｇＡ腎症、ＩｇＧ４関連硬化症、免疫性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、封入体筋炎（ＩＢＭ）、間質性膀胱炎（ＩＣ）、若年性関節炎、若年性糖尿病（１型糖尿病）、若年性筋炎（ＪＭ）、川崎病、ランバート・イートン症候群、白血球破砕性血管炎、扁平苔癬、硬化性苔癬、木質結膜炎、線状ＩｇＡ病（ＬＡＤ）、ループス、慢性ライム病、メニエール病、顕微鏡的多発血管炎（ＭＰＡ）、混合性結合組織疾患（ＭＣＴＤ）、モーレン潰瘍、ムッハ・ハーベルマン病、多巣性運動ニューロパチー（ＭＭＮ）またはＭＭＮＣＢ、
多発性硬化症、重症筋無力症、筋炎、ナルコレプシー、新生児ループス、視神経脊髄炎、好中球減少症、眼部瘢痕性類天疱瘡、視神経炎、回帰性リウマチ（ＰＲ）、ＰＡＮＤＡＳ、傍腫瘍性小脳変性症（ＰＣＤ）、発作性夜間ヘモグロビン尿症（ＰＮＨ）、パリー・ロンベルグ症候群、扁平部炎（周辺性ブドウ膜炎）、パーソネージ・ターナー症候群、天疱瘡、末梢神経障害、静脈周囲性脳脊髄炎、悪性貧血（ＰＡ）、ＰＯＥＭＳ症候群、結節性多発動脈炎、多腺性症候群Ｉ型、ＩＩ型、ＩＩＩ型、リウマチ性多発筋痛症、多発性筋炎、心筋梗塞後症候群、心膜切開後症候群、原発性胆汁性肝硬変、原発性硬化性胆管炎、プロゲステロン皮膚炎、乾癬、乾癬性関節炎、赤芽球癆（ＰＲＣＡ）、壊疽性膿皮症、レイノー現象、反応性関節炎、反射性交感性ジストロフィー、再発性多発軟骨炎、レストレスレッグス症候群（ＲＬＳ）、後腹膜線維症、リウマチ熱、関節リウマチ、サルコイドーシス、シュミット症候群、強膜炎、強皮症、シェーグレン症候群、精子および精巣自己免疫、スティッフパーソン症候群（ＳＰＳ）、亜急性細菌性心内膜炎（ＳＢＥ）、スザック症候群、交感性眼炎（ＳＯ）、高安動脈炎、側頭動脈炎／巨細胞性動脈炎、血小板減少性紫斑病（ＴＴＰ）、トロサ・ハント症候群（ＴＨＳ）、横断性脊髄炎、１型糖尿病、潰瘍性大腸炎（ＵＣ）、未分化結合組織疾患（ＵＣＴＤ）、ブドウ膜炎、血管炎、白斑、ならびにフォークト・小柳・原田病が含まれる。
細胞性免疫誘導疾患の非限定的な例には、１型糖尿病、多発性硬化症、結合組織障害、およびセリアック病が含まれる。
いくつかの実施形態では、自己免疫疾患が１型糖尿病である場合、外因性免疫原性ポリペプチドおよび／または外因性自己抗原性ポリペプチドおよび／または自己抗原は、インスリン、プロインスリン、プレプロインスリン、膵島抗原２（ＩＡ－２）、グルタミン酸デカルボキシラーゼ（例えば、ＧＡＤ１、ＧＡＤ２、ＧＡＤ６５、またはＧＡＤ６７）、亜鉛トランスポーター８（ＺｎＴ８）、膵島特異的グルコース－６－ホスファターゼ触媒サブユニット関連タンパク質（ＩＧＲＰ）、ペリフェリン、ａＧｌｉａ、アルファ／ベータ－グリアジン、ＰＤＣ－Ｅ２、ジヒドロリポアミドＳ－アセチルトランスフェラーゼ、ＤＧ１ ＥＣ２、デスモソーム糖タンパク質１、ＤＧ３（デスモグレイン３）、ＡＱＰ４（アクアポリン４）、およびクロモグラニンＡのうちの１つ以上から選択される。
いくつかの実施形態では、自己免疫疾患が多発性硬化症である場合、外因性免疫原性ポリペプチドおよび／または外因性自己抗原性ポリペプチドおよび／または自己抗原は、ミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質（ＭＯＧ）、ミエリン塩基性タンパク質（ＭＢＰ）、プロテオ脂質タンパク質（ＰＬＰ）、ミエリン関連糖タンパク質（ＭＡＧ）、ミエリン関連オリゴデンドロサイト塩基性タンパク質（ＭＯＢＰ）、２’，３’－環式ヌクレオチド３’－ホスホジエステラーゼ（ＣＮＰａｓｅ）、Ｓ１００カルシウム結合タンパク質Ｂ（Ｓ１００ベータ）、およびトランスアルドラーゼのうちの１つ以上から選択される。
いくつかの実施形態では、自己免疫疾患が混合性結合組織障害である場合、外因性免疫原性ポリペプチドおよび／または外因性自己抗原性ポリペプチドおよび／または自己抗原は、Ｕ１小核リボ核タンパク質（Ｕ１ｓｎＲＮＰ）、７３ｋＤａ熱ショックタンパク質、およびカゼインキナーゼのうちの１つ以上から選択される。
いくつかの実施形態では、自己免疫疾患がセリアック病である場合、外因性免疫原性ポリペプチドおよび／または外因性自己抗原性ポリペプチドは、グルテンを含む。
液性免疫誘導疾患の非限定的な例には、水疱性類天疱瘡、膜性糸球体腎炎、視神経脊髄炎、および尋常性天疱瘡が含まれる。
いくつかの実施形態では、自己免疫疾患が水疱性類天疱瘡である場合、外因性免疫原性ポリペプチドおよび／または外因性自己抗原性ポリペプチドおよび／または自己抗原は、コラーゲンＸＶＩＩ型アルファ１（ＢＰ１８０）、水疱性類天疱瘡抗原２３０（ＢＰ２３０）、ラミニン３３２、α６－β４インテグリン、およびＶＩＩ型コラーゲンのうちの１つ以上から選択される。
いくつかの実施形態では、自己免疫疾患が膜性糸球体腎炎である場合、外因性免疫原性ポリペプチドおよび／または外因性自己抗原性ポリペプチドおよび／または自己抗原は、ホスホリパーゼＡ２受容体（ＰＬＡ２Ｒ）、中性エンドペプチダーゼ（ＮＥＰ）、および７Ａを含有するトロンボスポンジン１型ドメイン（ＴＨＳＤ７Ａ）のうちの１つ以上から選択される。
いくつかの実施形態では、自己免疫疾患が視神経脊髄炎である場合、外因性免疫原性ポリペプチドおよび／または外因性自己抗原性ポリペプチドおよび／または自己抗原は、アクアポリン４（ＡＱＰ－４）およびＭＯＧのうちの一方または両方から選択される。
いくつかの実施形態では、自己免疫疾患が尋常性天疱瘡である場合、外因性免疫原性ポリペプチドおよび／または外因性自己抗原性ポリペプチドおよび／または自己抗原は、デスモグレイン１（ＤＳＧ１）およびデスモグレイン３（ＤＳＧ３）のうちの一方または両方から選択される。
自己免疫疾患のさらなる非限定的な例には、自己免疫性脳炎、自己免疫性肝炎、慢性炎症性脱髄性多発神経炎（ＣＩＰＤ）、多発性筋炎および皮膚筋炎（ＰＭ／ＤＭ）、混合性結合組織疾患（ＭＣＴＤ）、重症筋無力症、関節リウマチ、自己免疫性肝疾患、ブドウ膜炎、自己免疫性心筋炎、白斑、円形脱毛症（ａｌｏｐｅｃｉｓ ａｒｅａｔａ）、および強皮症が含まれる。
いくつかの実施形態では、自己免疫疾患が自己免疫性脳炎である場合、外因性免疫原性ポリペプチドおよび／または外因性自己抗原性ポリペプチドは、Ｎ－メチル－Ｄ－アスパラギン酸受容体（ＮＭＤＡＲ）、ヒストン様ＤＮＡ結合タンパク質（Ｈｕ）、Ｍａ／Ｔａ、ＣＶ２、グルタミン酸デカルボキシラーゼ（ＧＡＤ）、電位開口型カリウムチャネル複合体（ＶＧＫＣ）、電位開口型カルシウムチャネル（ＶＧＣＣ）、ロイシンリッチグリオーマ不活化１（ＬＧＩ１）、α－アミノ－３－ヒドロキシ－５－メチル－４－イソオキサゾールプロピオン酸受容体（ＡＭＰＡＲ）、ガンマ－アミノブチル酸Ａ（ＧＡＢＡ－Ａ）受容体、ＧＡＢＡ－Ｂ受容体、コンタクチン関連タンパク質２（Ｃａｓｐｒ２）、ＩｇＬＯＮ５、ジペプチジル－ペプチダーゼ様タンパク質６（ＤＰＰＸ）、グリシン受容体（ＧｌｙＲ）、代謝グルタミン酸受容体５（ｍＧｌｕＲ５）、グルタミン酸代謝型受容体１（ｍＧｌｕＲ１）、ニューレキシン３－アルファ、またはドーパミン－２受容体のうちの１つ以上から選択される。
いくつかの実施形態では、自己免疫疾患が自己免疫性肝炎である場合、外因性免疫原性ポリペプチドおよび／または外因性自己抗原性ポリペプチドおよび／または自己抗原は、肝腎ミクロソーム１型（ＬＫＭ１）、（ＳＭＡ）、（ＡＮＡ）、肝腎ミクロソーム２型（ＬＫＭ２）、Ｓｒｃ様アダプター（ＳＬＡ）、ダイニン軽鎖１（ＬＣ１）、アシアロ糖タンパク質受容体１（ＡＳＧＰＲ）、および核周辺型抗好中球細胞質抗体（ｐＡＮＣＡ）のうちの１つ以上から選択される。
いくつかの実施形態では、自己免疫疾患が慢性炎症性脱髄性多発神経炎（ＣＩＰＤ）である場合、外因性免疫原性ポリペプチドおよび／または外因性自己抗原性ポリペプチドおよび／または自己抗原は、コンタクチン１（ＣＮＴＮ）、ニューロファスチン－１５５（ＮＦ１５５）、または静注用免疫グロブリン（ＩＶＩＧ）のうちの１つ以上から選択される。
いくつかの実施形態では、自己免疫疾患が多発性筋炎および皮膚筋炎（ＰＭ／ＤＭ）である場合、外因性免疫原性ポリペプチドおよび／または外因性自己抗原性ポリペプチドおよび／または自己抗原は、ヒスチジルｔＲＮＡシンテターゼ（Ｊｏ－１）、黒色腫分化関連遺伝子５（ＭＤＡ５／ＣＡＤＭ１４０）、またはＴＦ１８１アルファのうちの１つ以上から選択される。
いくつかの実施形態では、自己免疫疾患が混合性結合組織疾患（ＭＣＴＤ）である場合、外因性免疫原性ポリペプチドおよび／または外因性自己抗原性ポリペプチドおよび／または自己抗原は、Ｕ１小核１（Ｕ１－ＲＮＡ）を含む。
いくつかの実施形態では、自己免疫疾患が重症筋無力症である場合、外因性免疫原性ポリペプチドは、ニコチンアセチルコリン受容体（ｎＡｃｈＲ）である。
いくつかの実施形態では、自己免疫疾患が関節リウマチである場合、外因性免疫原性ポリペプチドおよび／または外因性自己抗原性ポリペプチドは、コラーゲン、熱ショックタンパク質、およびヒトＴ細胞抗原ｇｐ３９のうちの１つ以上から選択される。
いくつかの実施形態では、自己免疫疾患が自己免疫性肝疾患である場合、外因性免疫原性ポリペプチドまたは外因性自己抗原性ポリペプチドまたは自己抗原は、ピルビン酸デヒドロゲナーゼ複合体－Ｅ２（ＰＤＣ－Ｅ２）である。
いくつかの実施形態では、自己免疫疾患がブドウ膜炎である、外因性免疫原性ポリペプチドおよび／または外因性自己抗原性ポリペプチドおよび／または自己抗原は、レチノール結合タンパク質３（ＩＲＢＰ）およびＳ－アレスチンのうちの一方または両方である。
いくつかの実施形態では、自己免疫疾患が自己免疫性心筋炎である場合、外因性免疫原性ポリペプチドおよび／または外因性自己抗原性ポリペプチドおよび／または自己抗原は、心筋ミオシン（例えば、αＭｙＨＣ）、ミオシン結合タンパク質－Ｃ（ＭＹＢＣ）、高速型ＲＮＡ結合タンパク質２０（ＲＢＭ２０）、およびジストロフィンのうちの１つ以上から選択される。
いくつかの実施形態では、自己免疫疾患が白斑である、外因性免疫原性ポリペプチドおよび／または外因性自己抗原性ポリペプチドは、メラン－Ａ（ＭＡＲＴ１）、ｇｐ１００、チロシナーゼ、またはチロシナーゼ関連タンパク質１（ＴＲＰ－１）、およびチロシナーゼ関連タンパク質２（ＴＲＰ－２）のうちの１つ以上から選択される。
いくつかの実施形態では、自己免疫疾患が円形脱毛症（ａｌｏｐｅｃｉｓ ａｒｅａｔａ）である場合、外因性免疫原性ポリペプチドおよび／または外因性自己抗原性ポリペプチドおよび／または自己抗原は、トリコヒアリン、ＴＲＰ－２、ｇｐ１００、またはＭＡＲＴ１のうちの１つ以上から選択される。
いくつかの実施形態では、自己免疫疾患が強皮症である場合、外因性免疫原性ポリペプチドおよび／または外因性自己抗原性ポリペプチドおよび／または自己抗原は、トポイソメラーゼ、３を含有するＲＮＡ結合領域（ＲＮＰＣ３）、およびＲＮＡポリメラーゼＩＩＩ（ＰＯＬＲ３）のうちの１つ以上から選択される。
いくつかの実施形態では、操作された赤血球系細胞または除核細胞は、少なくとも１つの外因性免疫原性ポリペプチド（例えば、本明細書に記載されるか、もしくは当該技術分野で既知の例示的な外因性免疫原性ポリペプチドのいずれか）、少なくとも１つの外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチド（例えば、本明細書に記載されるか、もしくは当該技術分野で既知の例示的な外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドのいずれか）、ならびに任意選択的に、（ｉ）少なくとも１つの外因性共阻害性ポリペプチド（例えば、本明細書に記載されるか、もしくは当該技術分野で既知の例示的な外因性共阻害性ポリペプチドのいずれか）（例えば、ＩＬ－１０、ＩＬ－２７、ＩＬ－３７、ＣＤ３９、ＣＤ７３、アルギナーゼ１（ＡＲＧ１）、アネキシン１、フィブリノゲン様タンパク質２（ＦＧＬ２）、ＰＤ－Ｌ１、およびＴＧＦβのうちの１つ以上）、および／または（ｉｉ）少なくとも１つの外因性抗原性ポリペプチド（例えば、本明細書に記載されるか、もしくは当該技術分野で既知の例示的な外因性抗原性ポリペプチドのいずれか）を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供される操作された赤血球系細胞または除核細胞（例えば、本明細書に記載される例示的な操作された赤血球系細胞または除核細胞のいずれか）は、第２の療法または治療剤と共に投与される。第２の療法は、例えば、手術、生物学的製剤（例えば、組換え抗体）、細胞ベースの療法（例えば、ＣＡＲ－Ｔ細胞またはＣＡＲ ＮＫ細胞）、および免疫抑制薬または免疫抑制剤を含み得る。免疫抑制薬または免疫抑制剤の非限定的な例には、コルチコステロイド（例えば、プレドニゾン、ブデソニド、およびプレドニゾロン）、ヤヌスキナーゼ阻害剤（例えば、トファシチニブ）、カルシニューリン阻害剤（例えば、シクロスポリンまたはタクロリムス）、ｍＴＯＲ阻害剤（例えば、シロリムスおよびエベロリムス）、ＩＭＤＨ阻害剤（例えば、アザチオプリン、レフルノミド、およびミコフェノール酸）、ならびに生物学的製剤（例えば、アバタセプト、アダリムマブ、アナキンラ、セルトリズマブ、エタネルセプト、ゴリムマブ、インフリキシマブ、イキセキズマブ、ナタリズマブ、リツキシマブ、セクキヌマブ、トシリズマブ、ウステキヌマブ、ベドリズマブ、バシリクスマブ（ｂａｓｉｌｉｘｕｍａｂ）、およびダクリズマブ）が含まれる。
本明細書で引用されるすべての刊行物および特許出願は、各個々の刊行物または特許出願が、すべての目的で参照により組み込まれることが具体的かつ個別に示されたかのように、すべての目的で参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。本明細書で考察される刊行物は、本出願の出願日以前のそれらの開示についてのみ提供される。本明細書におけるいかなるものも、本明細書に記載される発明者らが、以前の開示により、または任意の他の理由により、そのような開示に先行する権利がないことを認めるものと解釈されるべきではない。
実施例１．ペプチド－ＨＬＡ－Ｇ－ＧＰＡおよび非ヒト免疫原性ポリペプチドを含む、操作された除核赤血球系細胞の生成。
赤血球系細胞を、外因性抗原性ポリペプチドＨＬＡ－Ｇポリペプチド、およびグリコフォリンＡ（ＧＰＡ）膜貫通ドメインを含む、一本鎖融合タンパク質である外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチド（ペプチド－ＨＬＡ－Ｇ－ＧＰＡ融合タンパク質）を含むように形質導入する。任意選択的に、ペプチド－ＨＬＡ－Ｇ－ＧＰＡ融合タンパク質または非ヒト免疫原性ポリペプチドは、タンパク質を検出するために使用され得る検出可能なタグ（例えば、ＦＬＡＧ－タグまたはｍｙｃ－タグ）を含む。赤血球系細胞は、非ヒト免疫原性ポリペプチド（例えば、アスパラギナーゼなどの非ヒトアミノ酸分解ポリペプチド）をさらに含むように同時形質導入される。細胞培養および形質導入を、以下の「方法」のセクションに記載されるように実施して、細胞表面上のペプチド－ＨＬＡ－Ｇ－ＧＰＡ融合タンパク質および非ヒト免疫原性ポリペプチドの両方を含む、操作された除核赤血球系細胞を得る。
操作された除核赤血球系細胞の表面上のペプチド－ＨＬＡ－Ｇ－ＧＰＡ融合タンパク質および非ヒト免疫原性ポリペプチドの存在は、アロフィコシアニン（ＡＰＣ）標識またはフィコエリスリン（ＰＥ）標識された抗ＨＬＡ－Ｇおよび抗免疫原性ポリペプチド抗体を結合および検出することによって決定される。
方法
レンチウイルスベクターの産生
ペプチド－ＨＬＡ－Ｇ－ＧＰＡ融合タンパク質および非ヒト免疫原性ポリペプチドをコードする核酸を生成し、レンチウイルスベクターｐＣＤＨの複数のクローニング部位（各々、ＭＳＣＶプロモーター（ＳＹＳＴＥＭ ＢＩＯＳＣＩＥＮＣＥＳ）の制御下）にクローニングされ、それにより、１つのレンチウイルスベクターが、両方のタンパク質をコードする遺伝子を含む。レンチウイルスは、ＴｒａｎｓＩＴ－ＬＴＩトランスフェクション試薬（ＭＩＲＵＳ）を使用して、ｐＰＡＣＫＨ１（ＳＹＳＴＥＭ ＢＩＯＳＣＩＥＮＣＥＳ）、ならびにペプチド－ＨＬＡ－Ｇ－ＧＰＡおよび非ヒト免疫原性ポリペプチドをコードする遺伝子を含有するｐＣＤＨレンチウイルスベクターを細胞にトランスフェクトすることによって、２９３Ｔ細胞中で産生される。１２～１４時間のインキュベーション後、細胞を新鮮な培養培地中に配置する。ウイルス粒子を含む上清を、約６００×ｇで５分間遠心分離することによって、培地交換の４８時間後に収集する。ウイルス粒子を、超遠心分離または超遠心分離を伴う接線流濾過（ＴＦＦ）によって濃縮する。上清を収集し、０．４５μｍフィルターを通して濾過し、－８０℃においてアリコートで凍結させる。
赤血球系細胞の増殖および分化
正常なヒトドナーからの動員された末梢血細胞に由来するヒトＣＤ３４＋細胞は、ＡｌｌＣｅｌｌｓ Ｉｎｃ．から凍結状態で購入される。増殖／分化手順は、３つの段階を含む。第１の段階において、解凍したＣＤ３４＋赤血球系前駆細胞を、組換えヒトインスリン、ヒトトランスフェリン、組換えヒト組換えヒトＳＣＦ、および組換えヒトＩＬ－３を含むイスコフＭＤＭ培地中で培養する。第２の段階において、赤血球系細胞を、ヒト血清アルブミン、組換えヒトインスリン、ヒトトランスフェリン、ヒト組換えＳＣＦ、ヒト組換えＥＰＯ、およびＬ－グルタミンを補充したイスコフＭＤＭ培地中で培養する。第３の段階において、赤血球系細胞を、ヒトトランスフェリン、組換えヒトインスリン、ヒト組換えＥＰＯ、およびヘパリンを補充したイスコフＭＤＭ培地中で培養する。培養物を、５％ ＣＯ２インキュベーター中３７℃で維持する。
赤血球系前駆細胞の形質導入
赤血球系前駆細胞を、上述の培養プロセスの段階１の最中に形質導入する。培養培地中の赤血球系細胞を、レンチウイルス上清およびポラキサマー（ｐｏｌａｘａｍｅｒ）３３８と組み合わせる。プレートを２０００ｒｐｍで室温において９０分間回転させるスピノキュレーションによって、感染を達成する。スピノキュレーション後、細胞を３７□Ｃで一晩インキュベートする。
ペプチド－ＨＬＡ－Ｇ－ＧＰＡおよび非ヒト免疫原性ポリペプチドの検出
操作された除核赤血球系細胞上のペプチド－ＨＬＡ－Ｇ－ＧＰＡ融合タンパク質および非ヒト免疫原性ポリペプチドの存在を、アロフィコシアニン（ＡＰＣ）標識またはフィコエリスリン（ＰＥ）標識された抗ＨＬＡ－Ｇおよび抗免疫原性ポリペプチド抗体を使用して検出する。
抗体の結合を、ＡＰＣ蛍光またはＰＥ蛍光に対するフローサイトメトリーによって検出し、ゲートセットは、染色された非形質導入細胞に基づいている。あるいは、ペプチド－ＨＬＡ－Ｇ－ＧＰＡ融合タンパク質および非ヒト免疫原性ポリペプチドは、抗ＨＬＡ－Ｇおよび抗免疫原性ポリペプチド抗体を使用したＳＤＳ－ＰＡＧＥ分離後のウェスタンブロッティングによって検出され得る。
実施例２．ペプチド－ＨＬＡ－Ｇ－ＧＰＡおよび非ヒト免疫原性ポリペプチドを含む操作された除核赤血球系細胞によるインビトロでの免疫寛容の活性化。
赤血球系細胞を、例えば実施例１に記載されるように、ペプチド－ＨＬＡ－Ｇ－ＧＰＡ融合タンパク質および非ヒト免疫原性ポリペプチドを含むように形質導入する。
機能アッセイ
Ｔ細胞抑制に対する、ペプチド－ＨＬＡ－Ｇ－ＧＰＡおよび非ヒト免疫原性ポリペプチドを含む操作された除核赤血球系細胞の効果を、（１）Ｔ細胞活性の阻害、（２）Ｔ細胞増殖の阻害、および（３）Ｔ細胞のアポトーシスの誘導のうちの１つ以上を決定することによって評価する。
例えば、操作された除核赤血球系細胞を活性化Ｔ細胞（例えば、ＣＤ４＋ Ｔ細胞）と接触させ、市販のＥＬＩＳＡキット（Ｒ＆Ｄ ＳＹＳＴＥＭＳ）を用いて上清のサイトカイン分析を実施する（例えば、ヒトＩＬ－２、ＩＦＮ－γ、およびＩＬ－１０レベルを検出するために）ことによって、Ｔ細胞活性の阻害を決定する。例えば、操作された除核赤血球系細胞を用いた処理後、ＩＬ－２分泌阻害の検出は、抗増殖効果を示す。
例えば、蛍光色素５，６－カルボキシフルオレセインジアセテートスクシンイミジルエステル（ＣＦＳＥ）でＴ細胞を標識し、Ｔ細胞を操作された除核赤血球系細胞と接触させることによって、Ｔ細胞増殖の阻害を分析する。操作された除核赤血球系細胞に応答して増殖するＴ細胞は、フローサイトメトリーによって測定されるＣＦＳＥ蛍光強度の低減を示す。あるいは、放射性チミジンの組み込みを使用して、操作された除核赤血球系細胞に応答したＴ細胞の成長速度を評価することができる。あるいは、Ｔ細胞増殖の阻害を、Ｋｉ６７などの特定の細胞増殖マーカーを検出することによって分析する（例えば、ヒト抗Ｋｉ６７抗体、クローンＡｂＤ０２５３１（ＢＩＯＲＡＤを使用して））。
操作された除核赤血球系細胞によるＴ細胞アポトーシスの誘導を、例えば、蛍光色素コンジュゲートアネキシンＶ染色を使用して分析する。
ペプチド－ＨＬＡ－Ｇ－ＧＰＡ融合タンパク質および非ヒト免疫原性ポリペプチドを含む操作された赤血球系細胞へのヒト免疫細胞の曝露後の免疫細胞活性化を検出および測定するために、ヒト末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を用いたエクスビボ免疫測定を、Ｓａｌｖａｔ ｅｔ ａｌ．（２０１７）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．１１４（２６）：Ｅ５０８５－９３）（その全内容は、参照により本明細書に組み込まれる）に記載されるように使用され得る。
Ｂ細胞の増殖、分化、および抗体（Ｉｇ）分泌の阻害、ならびにＮＫ細胞の増殖および細胞傷害の阻害に対する、ペプチド－ＨＬＡ－Ｇ－ＧＰＡ融合タンパク質および非ヒト免疫原性ポリペプチドを含む操作された除核赤血球系細胞の効果を、Ｒｅｂｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．（２０１４）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｒｅｓ．２０１４：２９７０７３（その全内容は、参照により本明細書に組み込まれる）に記載されるように決定する。

Claims (234)

  1. 外因性ヒト白血球抗原－Ｇ（ＨＬＡ－Ｇ）ポリペプチドおよび外因性免疫原性ポリペプチドを含む操作された除核赤血球系細胞であって、前記外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドおよび前記外因性免疫原性ポリペプチドの両方が、前記細胞の表面上にある、操作された除核赤血球系細胞。
  2. 外因性ヒト白血球抗原－Ｇ（ＨＬＡ－Ｇ）ポリペプチドおよび外因性免疫原性ポリペプチドを含む操作された除核赤血球系細胞であって、前記外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドが、前記細胞の表面上にあり、前記外因性免疫原性ポリペプチドが、前記細胞内にある、操作された除核赤血球系細胞。
  3. 前記外因性免疫原性ポリペプチドが、前記細胞のサイトゾル中にある、請求項２に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  4. 前記外因性免疫原性ポリペプチドが、膜アンカーを含むか、または脂質部分への付着を介して前記細胞の原形質膜に係留されている、請求項２に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  5. 前記外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドが、ＨＬＡ－Ｇ１アイソフォームポリペプチド、ＨＬＡ－Ｇ２アイソフォームポリペプチド、ＨＬＡ－Ｇ３アイソフォームポリペプチド、ＨＬＡ－Ｇ４アイソフォームポリペプチド、ＨＬＡ－Ｇ５アイソフォームポリペプチド、ＨＬＡ－Ｇ６アイソフォームポリペプチド、およびＨＬＡ－Ｇ７アイソフォームポリペプチドのうちのいずれか１つを含む、請求項１～４のいずれか一項に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  6. 前記外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドが、ＨＬＡ－Ｇ１アイソフォームポリペプチド、ＨＬＡ－Ｇ２アイソフォームポリペプチド、ＨＬＡ－Ｇ５アイソフォームポリペプチド、およびＨＬＡ－Ｇ６アイソフォームポリペプチドのうちのいずれか１つを含む、請求項１～４のいずれか一項に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  7. 前記外因性免疫原性ポリペプチドが、ヒトポリペプチドを含む、請求項１～６のいずれか一項に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  8. 前記外因性免疫原性ポリペプチドが、非ヒトポリペプチドを含む、請求項１～６のいずれか一項に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  9. 前記非ヒトポリペプチドが、細菌、植物、酵母、真菌、ウイルス、プリオン、または原生動物に由来するポリペプチドを含む、請求項８に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  10. 前記外因性免疫原性ポリペプチドが、表１または表２に列挙されるポリペプチドを含む、請求項１～９のいずれか一項に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  11. 前記外因性免疫原性ポリペプチドが、アミノ酸分解ポリペプチド、尿酸分解ポリペプチド、またはシュウ酸オキシダーゼ（ＯｘＯｘ）を含む、請求項１～９のいずれか一項に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  12. 前記外因性免疫原性ポリペプチドが、前記アミノ酸分解ポリペプチドを含み、前記アミノ酸分解ポリペプチドが、アスパラギナーゼ、フェニルアラニンアンモニウムリアーゼ（ＰＡＬ）、またはフェニルアラニンヒドロキシラーゼ（ＰＡＨ）である、請求項１１に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  13. 前記外因性免疫原性ポリペプチドが、ｄ－アミノレブリン酸デヒドロゲナーゼ（ＡＬＡ－Ｄ）を含む、請求項１～９のいずれか一項に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  14. 前記外因性免疫原性ポリペプチドが、前記アミノ酸分解ポリペプチドを含み、前記アミノ酸分解ポリペプチドが、ホモシステイン低減ポリペプチドまたはホモシステイン分解ポリペプチドである、請求項１１に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  15. 前記アミノ酸分解ポリペプチドが、前記ホモシステイン低減ポリペプチドであり、前記ホモシステイン低減ポリペプチドが、メチオニンアデノシルトランスフェラーゼ、アラニントランスアミナーゼ、Ｌ－アラニン－Ｌ－アンチカプシンリガーゼ、Ｌ－システインデスルフィダーゼ、メチレンテトラヒドロ葉酸レダクターゼ、５－メチルテトラヒドロ葉酸－ホモシステインメチルトランスフェラーゼレダクターゼ、メチルマロン酸尿もしくはホモシスチン尿、ｃｂｌＤ型、またはそれらのバリアントである、請求項１４に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  16. 前記アミノ酸分解ポリペプチドが、前記ホモシステイン分解ポリペプチドであり、ホモシステイン分解ポリペプチドが、シスタチオニン－β－シンターゼ（ＣＢＳ）、メチオニンガンマ－リアーゼ、スルフィド：キノンレダクターゼ、メチオニンシンターゼ、５－メチルテトラヒドロプテロイルトリグルタミン酸－ホモシステイン－Ｓ－メチルトランスフェラーゼ、アデノシルホモシステイナーゼ、シスタチオニンガンマ－リアーゼ、メチオニンガンマ－リアーゼ、Ｌ－アミノ酸オキシダーゼ、テチン－ホモシステインＳ－メチルトランスフェラーゼ、ベタイン－ホモシステインＳ－メチルトランスフェラーゼ、ホモシステインＳ－メチルトランスフェラーゼ、５－メチルテトラヒドロプテロイルトリグルタミン酸－ホモシステイン－Ｓ－メチルトランスフェラーゼ、セレノシステインＳｅ－メチルトランスフェラーゼ、シスタチオニンガンマ－シンターゼ、Ｏ－アセチルホモセリンアミノカルボキシプロピルトランスフェラーゼ、アスパラギン－オキソ酸トランスアミナーゼ、グルタミン－フェニルピルビン酸トランスアミナーゼ、３－メルカプトピルビン酸硫黄トランスフェラーゼ、ホモシステインデスルフヒドラーゼ、シスタチオニンベータ－リアーゼ、アミノ酸ラセマーゼ、メチオニン－ｔＲＮＡリガーゼ、グルタミン酸－システインリガーゼ、Ｎ－（５－アミノ－５－カルボキシペンタノイル）－Ｌ－システイニル－Ｄ－バリンシンターゼ、Ｌ－イソロイシン４－ヒドロキシラーゼ、Ｌ－リシンＮ６－モノオキシゲナーゼ（ＮＡＤＰＨ）、メチオニンデカルボキシラーゼ、２，２－ジアルキルグリシンデカルボキシラーゼ（ピルビン酸塩）、およびシステインシンターゼ（ＣｙｓＯ）、またはそれらのバリアントである、請求項１４に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  17. 前記外因性免疫原性ポリペプチドが、前記尿酸分解ポリペプチドを含み、前記尿酸分解ポリペプチドが、ウリカーゼ、ＨＩＵヒドロラーゼ、ＯＨＣＵデカルボキシラーゼ、アラントイナーゼ、アラントイカーゼ、ミエロペルオキシダーゼ、ＦＡＤ依存性尿酸ヒドロキシラーゼ、キサンチンデヒドロゲナーゼ、ヌクレオシドデオキシリボシルトランスフェラーゼ、ジオキソテトラヒドロピリミジンホスホリボシルトランスフェラーゼ、ジヒドロピリミジナーゼ、もしくはグアニンデアミナーゼ、またはそれらのバリアントを含む、請求項１１に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  18. 前記外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドが、対象への前記細胞の投与時に、前記外因性免疫原性ポリペプチドに対する免疫寛容を誘導することができる、請求項１～１７のいずれか一項に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  19. 前記免疫寛容が、短期免疫寛容を含む、請求項１８に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  20. 前記短期免疫寛容が、前記操作された除核赤血球系細胞が接触する免疫細胞のアポトーシスを誘導すること、または活性化、分化、および／もしくは増殖を阻害することを含み、任意選択的に、前記免疫細胞が、Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、またはＢ細胞である、請求項１９に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  21. 前記短期免疫寛容が、前記操作された除核赤血球系細胞が接触するＴ細胞またはＮＫ細胞の細胞傷害を阻害することを含む、請求項１９または２０に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  22. 前記短期免疫寛容が、前記操作された除核赤血球系細胞が接触するＢ細胞による抗体分泌を阻害することを含む、請求項１９～２１のいずれか一項に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  23. 前記免疫寛容が、長期免疫寛容を含む、請求項１８～２２のいずれか一項に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  24. 前記長期免疫寛容が、前記操作された除核赤血球系細胞が接触する樹状細胞（ＤＣ）の成熟を阻害することを含む、請求項２３に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  25. 前記長期免疫寛容が、前記操作された除核赤血球系細胞が接触するＤＣのアネルギーを誘導することを含む、請求項２３または２４に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  26. 前記長期免疫寛容が、
    ａ．前記操作された除核赤血球系細胞が接触するＣＤ４＋ Ｔ細胞の制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）への分化を誘導すること、および／または
    ｂ．前記操作された除核赤血球系細胞が接触するＣＤ８＋ Ｔ細胞のＴｒｅｇへの分化を誘導すること、を含む、請求項２３～２５のいずれか一項に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  27. 前記外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドが、外因性抗原性ポリペプチドに結合している、請求項１～２６のいずれか一項に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  28. 前記外因性抗原性ポリペプチドが、モチーフＸＩ／ＬＰＸＸＸＸＸＬ（配列番号１）を含む、請求項２７に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  29. 前記外因性抗原性ポリペプチドが、約８アミノ酸長～約２４アミノ酸長である、請求項２７または２８に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  30. 前記外因性抗原性ポリペプチドが、前記外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドに共有結合している、請求項２７～２９のいずれか一項に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  31. 前記外因性抗原性ポリペプチドが、前記外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドに非共有結合している、請求項２７～２９のいずれか一項に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  32. 前記外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドが、ＨＬＡ－Ｇアルファ鎖の１つ以上のアルファドメインまたはその断片およびβ２Ｍポリペプチドまたはその断片を含む、請求項１～３１のいずれか一項に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  33. 前記外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドが、膜アンカーに連結されている、請求項３２に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  34. 前記外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドが、リンカーを介して前記外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドに連結された外因性抗原性ポリペプチドを含む一本鎖融合タンパク質である、請求項３２に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  35. 前記一本鎖融合タンパク質が、膜アンカーをさらに含む、請求項３４に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  36. 前記リンカーが、切断可能なリンカーである、請求項３４または３５に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  37. 前記外因性免疫原性ポリペプチドが、前記外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドに結合していない、請求項１～３６のいずれか一項に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  38. 前記膜アンカーが、グリコフォリンＡ（ＧＰＡ）タンパク質もしくはその膜貫通ドメイン、小内在性膜タンパク質１（ＳＭＩＭ１）もしくはその膜貫通ドメイン、またはトランスフェリン受容体もしくはその膜貫通ドメインを含む、請求項３３または３５に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  39. 前記操作された除核赤血球系細胞が、外因性自己抗原性ポリペプチドをさらに含む、請求項１～２６のいずれか一項に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  40. 前記外因性自己抗原性ポリペプチドが、前記細胞の表面上にある、請求項３９に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  41. 前記外因性自己抗原性ポリペプチドが、膜アンカーをさらに含むか、または脂質部分への付着を介して前記細胞の原形質膜に係留されている、請求項４０に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  42. 前記外因性自己抗原性ポリペプチドが、Ｎ末端からＣ末端への方向に式Ｉを含み、
    Ｘ１－Ｘ２－Ｘ３（式Ｉ）
    式中、
    Ｘ１は、ＩＩ型膜タンパク質またはその膜貫通ドメインを含み、
    Ｘ２は、Ｉｉキーペプチドを含み、
    Ｘ３は、自己抗原を含む、請求項４０に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  43. 前記外因性自己抗原性ポリペプチドが、Ｎ末端からＣ末端への方向に式ＩＩを含み、
    Ｘ１－Ｘ２－Ｘ３－Ｘ４（式ＩＩ）
    式中、
    Ｘ１は、ＩＩ型膜タンパク質またはその膜貫通ドメインを含み、
    Ｘ２は、リンカーを含み、
    Ｘ３は、Ｉｉキーペプチドを含み、
    Ｘ４は、自己抗原を含む、請求項４０に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  44. 前記リンカーが、ポリＧＳリンカーである、請求項４３に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  45. 前記リンカーが、ＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳ（配列番号８４０）またはＧＰＧＰＧ（配列番号８４１）を含む、請求項４３に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  46. 前記Ｉｉキーペプチドが、
    ＬＲＭＫＬＰＫＰＰＫＰＶＳＫＭＲ（配列番号７６５）、
    ＹＲＭＫＬＰＫＰＰＫＰＶＳＫＭＲ（配列番号７６６）、
    ＬＲＭＫ（配列番号７６７）、
    ＹＲＭＫ（配列番号７６８）、
    ＬＲＭＫＬＰＫ（配列番号７６９）、
    ＹＲＭＫＬＰＫ（配列番号７７０）、
    ＹＲＭＫＬＰＫＰ（配列番号７７１）、
    ＬＲＭＫＬＰＫＰ（配列番号７７２）、
    ＬＲＭＫＬＰＫＳ（配列番号７７３）、
    ＹＲＭＫＬＰＫＳ（配列番号７７４）、
    ＬＲＭＫＬＰＫＳＡＫＰ（配列番号７７５）、および
    ＬＲＭＫＬＰＫＳＡＫＰＶＳＫ（配列番号７７６）、からなる群から選択される配列を含む、請求項４２～４５のいずれか一項に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  47. 前記外因性自己抗原性ポリペプチドが、そのＣ末端に、１つ以上の追加の自己抗原をさらに含む、請求項４３～４６のいずれか一項に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  48. 任意の２つの自己抗原が、リンカーによって分離されている、請求項４７に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  49. 前記リンカーが、ポリＧＳリンカーである、請求項４８に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  50. 前記リンカーが、ＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳ（配列番号８４０）またはＧＰＧＰＧ（配列番号８４１）を含む、請求項４８に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  51. 前記外因性自己抗原性ポリペプチドが、前記細胞内にある、請求項３９に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  52. 前記外因性自己抗原性ポリペプチドが、原形質膜の細胞内側にある、請求項５１に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  53. 前記外因性自己抗原性ポリペプチドが、膜アンカーをさらに含むか、または脂質部分への付着を介して前記細胞の前記原形質膜に係留されている、請求項５２に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  54. 前記外因性抗原性ポリペプチドが、Ｎ末端からＣ末端への方向に式ＩＩＩを含み、
    Ｘ１－Ｘ２－Ｘ３（式ＩＩＩ）
    式中、
    Ｘ１は、Ｉ型膜タンパク質またはその膜貫通ドメインを含み、
    Ｘ２は、Ｉｉキーペプチドを含み、
    Ｘ３は、自己抗原を含む、請求項５２または５３に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  55. 前記外因性自己抗原性ポリペプチドが、Ｎ末端からＣ末端への方向に式ＩＶを含み、
    Ｘ１－Ｘ２－Ｘ３－Ｘ４（式ＩＶ）
    式中、
    Ｘ１は、Ｉ型膜タンパク質またはその膜貫通ドメインを含み、
    Ｘ２は、リンカーを含み、
    Ｘ３は、Ｉｉキーペプチドを含み、
    Ｘ４は、自己抗原を含む、請求項５２または５３に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  56. 前記リンカーが、ポリＧＳリンカーである、請求項５５に記載の操作された赤血球系細胞。
  57. 前記リンカーが、ＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳ（配列番号８４０）またはＧＰＧＰＧ（配列番号８４１）を含む、請求項５５に記載の操作された赤血球系細胞。
  58. 前記外因性自己抗原性ポリペプチドが、そのＮ末端に、シグナルペプチドをさらに含む、請求項５４～５７のいずれか一項に記載の操作された赤血球系細胞。
  59. 前記シグナルペプチドが、ＧＰＡシグナルペプチドである、請求項５８に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  60. 前記Ｉｉキーペプチドが、
    ＬＲＭＫＬＰＫＰＰＫＰＶＳＫＭＲ（配列番号７６５）、
    ＹＲＭＫＬＰＫＰＰＫＰＶＳＫＭＲ（配列番号７６６）、
    ＬＲＭＫ（配列番号７６７）、
    ＹＲＭＫ（配列番号７６８）、
    ＬＲＭＫＬＰＫ（配列番号７６９）、
    ＹＲＭＫＬＰＫ（配列番号７７０）、
    ＹＲＭＫＬＰＫＰ（配列番号７７１）、
    ＬＲＭＫＬＰＫＰ（配列番号７７２）、
    ＬＲＭＫＬＰＫＳ（配列番号７７３）、
    ＹＲＭＫＬＰＫＳ（配列番号７７４）、
    ＬＲＭＫＬＰＫＳＡＫＰ（配列番号７７５）、および
    ＬＲＭＫＬＰＫＳＡＫＰＶＳＫ（配列番号７７６）、からなる群から選択される配列を含む、請求項５４～５９のいずれか一項に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  61. 前記外因性自己抗原性ポリペプチドが、Ｎ末端からＣ末端への方向に式ＶＩＩを含み、
    Ｘ１－Ｘ２－Ｘ３－Ｘ４（式ＶＩＩ）、
    式中、
    Ｘ１は、Ｉ型膜タンパク質またはその膜貫通ドメインを含み、
    Ｘ２は、リンカーを含み、
    Ｘ３は、ＣＤ７４の細胞質部分またはその断片を含み、
    Ｘ４は、自己抗原を含む、請求項５２または５３に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  62. 前記リンカーが、ＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳ（配列番号８４０）を含む、請求項６１に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  63. ＣＤ７４の前記細胞質部分が、ＱＱＱＧＲＬＤＫＬＴＶＴＳＱＮＬＱＬＥＮＬＲＭＫＬＰＫＰＰＫＰＶＳＫＭＲＭＡＴＰＬＬＭＱＡＬＰＭＧＡＬＰＱＧＰＭＱＮＡＴＫＹＧＮＭＴＥＤＨＶＭＨＬＬＱＮＡＤＰＬＫＶＹＰＰＬＫＧＳＦＰＥＮＬＲＨＬＫＮＴＭＥＴＩＤＷＫＶＦＥＳＷＭＨＨＷＬＬＦＥＭＳＲＨＳＬＥＱＫＰＴＤＡＰＰＫＥＳＬＥＬＥＤＰＳＳＧＬＧＶＴＫＱＤＬＧＰＶＰＭ（配列番号８４５）を含む、請求項６１または６２に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  64. 前記外因性自己抗原性ポリペプチドの前記Ｎ末端が、シグナルペプチドをさらに含む、請求項６１～６３のいずれか一項に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  65. 前記外因性自己抗原性ポリペプチドが、Ｎ末端からＣ末端への方向に式ＶＩＩＩを含み、
    Ｘ１－Ｘ２－Ｘ３－Ｘ４－Ｘ５（式ＶＩＩＩ）
    式中、
    Ｘ１は、Ｉ型膜タンパク質またはその膜貫通ドメインを含み、
    Ｘ２は、リンカーを含み、
    Ｘ３は、ＣＤ７４のＮ末端細胞質部分またはその断片を含み、
    Ｘ４は、自己抗原を含み、
    Ｘ５は、ＣＤ７４のＣ末端細胞質部分を含む、請求項５２または５３に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  66. 前記リンカーが、ＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳ（配列番号８４０）を含む、請求項６５に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  67. ＣＤ７４の前記Ｎ末端細胞質部分が、ＱＱＱＧＲＬＤＫＬＴＶＴＳＱＮＬＱＬＥＮＬＲＭＫ（配列番号８４７）を含む、請求項６５または６６に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  68. ＣＤ７４の前記Ｃ末端細胞質部分が、ＧＡＬＰＱＧＰＭＱＮＡＴＫＹＧＮＭＴＥＤＨＶＭＨＬＬＱＮＡＤＰＬＫＶＹＰＰＬＫＧＳＦＰＥＮＬＲＨＬＫＮＴＭＥＴＩＤＷＫＶＦＥＳＷＭＨＨＷＬＬＦＥＭＳＲＨＳＬＥＱＫＰＴＤＡＰＰＫＥＳＬＥＬＥＤＰＳＳＧＬＧＶＴＫＱＤＬＧＰＶＰＭ（配列番号８４９）を含む、請求項６５～６７のいずれか一項に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  69. 前記外因性自己抗原性ポリペプチドの前記Ｎ末端が、シグナルペプチドをさらに含む、請求項６５～６８のいずれか一項に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  70. 前記外因性自己抗原性ポリペプチドが、Ｎ末端からＣ末端への方向に式ＸＩを含み、
    Ｘ１－Ｘ２－Ｘ３－Ｘ４（式ＸＩ）
    式中、
    Ｘ１は、サイトゾルタンパク質またはその断片を含み、
    Ｘ２は、リンカーを含み、
    Ｘ３は、ＣＤ７４の細胞質部分またはその断片を含み、
    Ｘ４は、自己抗原を含む、請求項５２または５３に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  71. 前記サイトゾルタンパク質が、ＭＡＧＷＮＡＹＩＤＮＬＭＡＤＧＴＣＱＤＡＡＩＶＧＹＫＤＳＰＳＶＷＡＡＶＰＧＫＴＦＶＮＩＴＰＡＥＶＧＶＬＶＧＫＤＲＳＳＦＹＶＮＧＬＴＬＧＧＱＫＣＳＶＩＲＤＳＬＬＱＤＧＥＦＳＭＤＬＲＴＫＳＴＧＧＡＰＴＦＮＶＴＶＴＫＴＤＫＴＬＶＬＬＭＧＫＥＧＶＨＧＧＬＩＮＫＫＣＹＥＭＡＳＨＬＲＲＳＱＹ（配列番号８４６）を含む、請求項７０に記載の操作された赤血球系細胞。
  72. 前記リンカーが、ＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳ（配列番号８４０）を含む、請求項７０または７１に記載の操作された赤血球系細胞。
  73. ＣＤ７４の前記細胞質部分が、ＱＱＱＧＲＬＤＫＬＴＶＴＳＱＮＬＱＬＥＮＬＲＭＫＬＰＫＰＰＫＰＶＳＫＭＲＭＡＴＰＬＬＭＱＡＬＰＭＧＡＬＰＱＧＰＭＱＮＡＴＫＹＧＮＭＴＥＤＨＶＭＨＬＬＱＮＡＤＰＬＫＶＹＰＰＬＫＧＳＦＰＥＮＬＲＨＬＫＮＴＭＥＴＩＤＷＫＶＦＥＳＷＭＨＨＷＬＬＦＥＭＳＲＨＳＬＥＱＫＰＴＤＡＰＰＫＥＳＬＥＬＥＤＰＳＳＧＬＧＶＴＫＱＤＬＧＰＶＰＭ（配列番号８４５）を含む、請求項７０～７２のいずれか一項に記載の操作された赤血球系細胞。
  74. 前記外因性自己抗原性ポリペプチドの前記Ｎ末端が、シグナルペプチドをさらに含む、請求項７０～７３のいずれか一項に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  75. 前記外因性自己抗原性ポリペプチドが、Ｎ末端からＣ末端への方向に式ＸＩＩを含み、
    Ｘ１－Ｘ２－Ｘ３－Ｘ４－Ｘ５（式ＸＩＩ）
    式中、
    Ｘ１は、細胞質タンパク質またはその断片を含み、
    Ｘ２は、リンカーを含み、
    Ｘ３は、ＣＤ７４のＮ末端細胞質部分またはその断片を含み、
    Ｘ４は、自己抗原を含み、
    Ｘ５は、ＣＤ７４のＣ末端細胞質部分を含む、請求項５２または５３に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  76. 前記細胞質タンパク質が、ＭＡＧＷＮＡＹＩＤＮＬＭＡＤＧＴＣＱＤＡＡＩＶＧＹＫＤＳＰＳＶＷＡＡＶＰＧＫＴＦＶＮＩＴＰＡＥＶＧＶＬＶＧＫＤＲＳＳＦＹＶＮＧＬＴＬＧＧＱＫＣＳＶＩＲＤＳＬＬＱＤＧＥＦＳＭＤＬＲＴＫＳＴＧＧＡＰＴＦＮＶＴＶＴＫＴＤＫＴＬＶＬＬＭＧＫＥＧＶＨＧＧＬＩＮＫＫＣＹＥＭＡＳＨＬＲＲＳＱＹ（配列番号８４６）を含む、請求項７５に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  77. 前記リンカーが、ＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳ（配列番号８４０）を含む、請求項７５または７６に記載の操作された赤血球系細胞。
  78. ＣＤ７４の前記Ｎ末端細胞質部分が、ＱＱＱＧＲＬＤＫＬＴＶＴＳＱＮＬＱＬＥＮＬＲＭＫ（配列番号８４７）を含む、請求項７５～７７のいずれか一項に記載の操作された赤血球系細胞。
  79. ＣＤ７４の前記Ｃ末端細胞質部分が、
    ＧＡＬＰＱＧＰＭＱＮＡＴＫＹＧＮＭＴＥＤＨＶＭＨＬＬＱＮＡＤＰＬＫＶＹＰＰＬＫＧＳＦＰＥＮＬＲＨＬＫＮＴＭＥＴＩＤＷＫＶＦＥＳＷＭＨＨＷＬＬＦＥＭＳＲＨＳＬＥＱＫＰＴＤＡＰＰＫＥＳＬＥＬＥＤＰＳＳＧＬＧＶＴＫＱＤＬＧＰＶＰＭ（配列番号８４９）を含む、請求項７５～７８のいずれか一項に記載の操作された赤血球系細胞。
  80. 前記外因性自己抗原性ポリペプチドの前記Ｎ末端が、シグナルペプチドをさらに含む、請求項７５～７９のいずれか一項に記載の操作された赤血球系細胞。
  81. 前記外因性自己抗原性ポリペプチドが、前記細胞の表面上に存在する、請求項３９に記載の操作された赤血球系細胞。
  82. 前記外因性自己抗原性ポリペプチドが、Ｎ末端からＣ末端への方向に式ＩＸを含み、
    Ｘ１－Ｘ２－Ｘ３（式ＩＸ）
    式中、
    Ｘ１は、ＩＩ型膜タンパク質またはその膜貫通ドメインを含み、
    Ｘ２は、ＣＤ７４の細胞質部分またはその断片を含み、
    Ｘ３は、自己抗原を含む、請求項８１に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  83. ＣＤ７４の前記細胞質部分が、ＱＱＱＧＲＬＤＫＬＴＶＴＳＱＮＬＱＬＥＮＬＲＭＫＬＰＫＰＰＫＰＶＳＫＭＲＭＡＴＰＬＬＭＱＡＬＰＭＧＡＬＰＱＧＰＭＱＮＡＴＫＹＧＮＭＴＥＤＨＶＭＨＬＬＱＮＡＤＰＬＫＶＹＰＰＬＫＧＳＦＰＥＮＬＲＨＬＫＮＴＭＥＴＩＤＷＫＶＦＥＳＷＭＨＨＷＬＬＦＥＭＳＲＨＳＬＥＱＫＰＴＤＡＰＰＫＥＳＬＥＬＥＤＰＳＳＧＬＧＶＴＫＱＤＬＧＰＶＰＭ（配列番号８４５）を含む、請求項８２に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  84. 前記外因性自己抗原性ポリペプチドの前記Ｎ末端が、シグナルペプチドをさらに含む、請求項８２または８３に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  85. 前記外因性自己抗原性ポリペプチドが、Ｎ末端からＣ末端への方向に式Ｘを含み、
    Ｘ１－Ｘ２－Ｘ３－Ｘ４－Ｘ５（式Ｘ）
    式中、
    Ｘ１は、ＩＩ型膜タンパク質またはその膜貫通ドメインを含み、
    Ｘ２は、リンカーを含み、
    Ｘ３は、ＣＤ７４のＮ末端細胞質部分またはその断片を含み、
    Ｘ４は、自己抗原を含み、
    Ｘ５は、ＣＤ７４のＣ末端細胞質部分を含む、請求項８１に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  86. 前記リンカーが、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号８５０）を含む、請求項８５に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  87. ＣＤ７４の前記Ｎ末端細胞質部分が、ＱＱＱＧＲＬＤＫＬＴＶＴＳＱＮＬＱＬＥＮＬＲＭＫ（配列番号８４７）を含む、請求項８５または８６に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  88. ＣＤ７４の前記Ｃ末端細胞質部分が、ＡＬＰＱＧＰＭＱＮＡＴＫＹＧＮＭＴＥＤＨＶＭＨＬＬＱＮＡＤＰＬＫＶＹＰＰＬＫＧＳＦＰＥＮＬＲＨＬＫＮＴＭＥＴＩＤＷＫＶＦＥＳＷＭＨＨＷＬＬＦＥＭＳＲＨＳＬＥＱＫＰＴＤＡＰＰＫＥＳＬＥＬＥＤＰＳＳＧＬＧＶＴＫＱＤＬＧＰＶＰＭ（配列番号８４８）を含む、請求項８５～８７のいずれか一項に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  89. 前記外因性自己抗原性ポリペプチドの前記Ｎ末端が、シグナルペプチドをさらに含む、請求項８５～８８のいずれか一項に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  90. 前記外因性自己抗原性ポリペプチドが、Ｎ末端からＣ末端への方向に式ＸＩＩＩを含み、
    Ｘ１－Ｘ２－Ｘ３－Ｘ４（式ＸＩＩＩ）
    式中、
    Ｘ１は、Ｉｉキーペプチドを含み、
    Ｘ２は、自己抗原を含み、
    Ｘ３は、リンカーを含み、
    Ｘ４は、Ｉ型膜タンパク質またはその膜貫通ドメインを含む、請求項８１に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  91. 前記リンカーが、ＧＰＧＰＧ（配列番号８４１）を含む、請求項９０に記載の操作された赤血球系細胞。
  92. Ｘ１が、２つ以上のＩｉキーペプチドを含む、請求項９０または９１に記載の操作された赤血球系細胞。
  93. 前記外因性自己抗原性ポリペプチドの前記Ｎ末端が、シグナルペプチドをさらに含む、請求項９０～９２のいずれか一項に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  94. 前記外因性自己抗原性ポリペプチドが、そのＣ末端に、１つ以上の追加の外因性抗原性ポリペプチドをさらに含む、請求項５４～９３のいずれか一項に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  95. 任意の２つの外因性自己抗原性ポリペプチドが、リンカーによって分離されている、請求項９４に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  96. 前記リンカーが、ポリＧＳリンカーである、請求項９５に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  97. 前記リンカーが、ＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳ（配列番号８４０）またはＧＰＧＰＧ（配列番号８４１）を含む、請求項９５に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  98. 前記外因性自己抗原性ポリペプチドが、前記細胞のサイトゾル中にある、請求項３９に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  99. 前記外因性自己抗原性ポリペプチドが、Ｎ末端からＣ末端への方向に式Ｖを含み、
    Ｘ１－Ｘ２－Ｘ３（式Ｖ）
    式中、
    Ｘ１は、サイトゾルポリペプチドまたはその断片を含み、
    Ｘ２は、Ｉｉキーペプチドを含み、
    Ｘ３は、自己抗原を含む、請求項９８に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  100. 前記外因性自己抗原性ポリペプチドが、Ｎ末端からＣ末端への方向に式ＶＩを含み、
    Ｘ１－Ｘ２－Ｘ３－Ｘ４（式ＶＩ）
    式中、
    Ｘ１は、サイトゾルポリペプチドまたはその断片を含み、
    Ｘ２は、リンカーを含み、
    Ｘ３は、Ｉｉキーペプチドを含み、
    Ｘ４は、自己抗原を含む、請求項９８に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  101. 前記リンカーが、ポリＧＳリンカーである、請求項１００に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  102. 前記リンカーが、ＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳ（配列番号８４０）またはＧＰＧＰＧ（配列番号８４１）を含む、請求項１００に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  103. 前記サイトゾルポリペプチドが、プロフィリン、フェリチン、またはその断片を含む、請求項９９～１０２のいずれか一項に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  104. 前記Ｉｉキーペプチドが、
    ＬＲＭＫＬＰＫＰＰＫＰＶＳＫＭＲ（配列番号７６５）、
    ＹＲＭＫＬＰＫＰＰＫＰＶＳＫＭＲ（配列番号７６６）、
    ＬＲＭＫ（配列番号７６７）、
    ＹＲＭＫ（配列番号７６８）、
    ＬＲＭＫＬＰＫ（配列番号７６９）、
    ＹＲＭＫＬＰＫ（配列番号７７０）、
    ＹＲＭＫＬＰＫＰ（配列番号７７１）、
    ＬＲＭＫＬＰＫＰ（配列番号７７２）、
    ＬＲＭＫＬＰＫＳ（配列番号７７３）、
    ＹＲＭＫＬＰＫＳ（配列番号７７４）、
    ＬＲＭＫＬＰＫＳＡＫＰ（配列番号７７５）、および
    ＬＲＭＫＬＰＫＳＡＫＰＶＳＫ（配列番号７７６）、からなる群から選択される配列を含む、請求項９９～１０３のいずれか一項に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  105. 前記外因性自己抗原性ポリペプチドが、そのＣ末端に、１つ以上の追加の自己抗原をさらに含む、請求項９９～１０４のいずれか一項に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  106. 任意の２つの自己抗原が、リンカーによって分離されている、請求項１０５に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  107. 前記リンカーが、ポリＧＳリンカーである、請求項１０４に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  108. 前記リンカーが、ＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳ（配列番号８４０）またはＧＰＧＰＧ（配列番号８４１）を含む、請求項１０６に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  109. 前記操作された除核赤血球系細胞が、少なくとも１つの外因性共阻害性ポリペプチドをさらに含む、請求項１～１０８のいずれか一項に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  110. 前記少なくとも１つの外因性共阻害性ポリペプチドのうちの１つが、前記細胞の表面上にある、請求項１０９に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  111. 前記少なくとも１つの外因性共阻害性ポリペプチドのうちの１つが、膜貫通ドメインをさらに含む、請求項１１０に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  112. 前記膜貫通ドメインが、グリコフォリンＡ（ＧＰＡ）膜貫通ドメイン、小内在性膜タンパク質１（ＳＭＩＭ１）膜貫通ドメイン、またはトランスフェリン受容体膜貫通ドメインである、請求項１１１に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  113. 前記少なくとも１つの外因性共阻害性ポリペプチドのうちの１つが、前記細胞内にある、請求項１０９に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  114. 前記少なくとも１つの外因性共阻害性ポリペプチドのうちの１つが、前記細胞によって分泌／放出される、請求項１０９に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  115. 前記少なくとも１つの外因性共阻害性ポリペプチドが、ＩＬ－１０、ＩＬ－２７、ＩＬ－３７、ＴＧＦβ、ＣＤ３９、ＣＤ７３、アルギナーゼ１（ＡＲＧ１）、アネキシン１、フィブリノゲン様タンパク質２（ＦＧＬ２）、およびＰＤ－Ｌ１からなる群から選択される、請求項１０９～１１４のいずれか一項に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  116. 前記少なくとも１つの外因性共阻害性ポリペプチドのうちの１つが、ＩＬ－１０であり、配列番号７６０、７６１、７６２、または７６３に対して少なくとも９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項１１５に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  117. 前記少なくとも１つの外因性共阻害性ポリペプチドのうちの１つが、ＰＤ－Ｌ１であり、配列番号７６４に対して少なくとも９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項１１５に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  118. 前記操作された赤血球系細胞が、前記原形質膜の外葉上のホスファチジルセリンの存在が増加するように処理されている、請求項１～１１７のいずれか一項に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  119. 前記操作された赤血球系細胞が、カルシウムイオノフォアで処理されている、請求項１１８に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  120. 前記操作された赤血球系細胞が、イオノマイシン、Ａ２３１８７、およびＢＳ３のうちの１つ以上で処理されている、請求項１１９に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  121. 前記少なくとも１つの前記外因性共阻害因子ポリペプチドのうちの１つが、配列番号８１６～８２３のうちのいずれか１つに対して少なくとも９０％同一である配列を含む、請求項１１５に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  122. 外因性自己抗原性ポリペプチドおよび少なくとも１つの外因性共阻害性ポリペプチドを含む、操作された除核赤血球系細胞。
  123. 前記外因性自己抗原性ポリペプチドが、前記細胞の表面上にある、請求項１２２に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  124. 前記外因性自己抗原性ポリペプチドが、膜アンカーをさらに含むか、または脂質部分への付着を介して前記細胞の原形質膜に係留されている、請求項１２２に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  125. 前記外因性自己抗原性ポリペプチドが、Ｎ末端からＣ末端への方向に式Ｉを含み、
    Ｘ１－Ｘ２－Ｘ３（式Ｉ）
    式中、
    Ｘ１は、ＩＩ型膜タンパク質またはその膜貫通ドメインを含み、
    Ｘ２は、Ｉｉキーペプチドを含み、
    Ｘ３は、自己抗原を含む、請求項１２３に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  126. 前記外因性自己抗原性ポリペプチドが、Ｎ末端からＣ末端への方向に式ＩＩを含み、
    Ｘ１－Ｘ２－Ｘ３－Ｘ４（式Ｉ）
    式中、
    Ｘ１は、ＩＩ型膜タンパク質またはその膜貫通ドメインを含み、
    Ｘ２は、リンカーを含み、
    Ｘ３は、Ｉｉキーペプチドを含み、
    Ｘ４は、自己抗原を含む、請求項１２３に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  127. 前記リンカーが、ポリＧＳリンカーである、請求項１２６に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  128. 前記リンカーが、ＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳ（配列番号８４０）またはＧＰＧＰＧ（配列番号８４１）を含む、請求項１２６に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  129. 前記Ｉｉキーペプチドが、
    ＬＲＭＫＬＰＫＰＰＫＰＶＳＫＭＲ（配列番号７６５）、
    ＹＲＭＫＬＰＫＰＰＫＰＶＳＫＭＲ（配列番号７６６）、
    ＬＲＭＫ（配列番号７６７）、
    ＹＲＭＫ（配列番号７６８）、
    ＬＲＭＫＬＰＫ（配列番号７６９）、
    ＹＲＭＫＬＰＫ（配列番号７７０）、
    ＹＲＭＫＬＰＫＰ（配列番号７７１）、
    ＬＲＭＫＬＰＫＰ（配列番号７７２）、
    ＬＲＭＫＬＰＫＳ（配列番号７７３）、
    ＹＲＭＫＬＰＫＳ（配列番号７７４）、
    ＬＲＭＫＬＰＫＳＡＫＰ（配列番号７７５）、および
    ＬＲＭＫＬＰＫＳＡＫＰＶＳＫ（配列番号７７６）、からなる群から選択される配列を含む、請求項１２５～１２７のいずれか一項に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  130. 前記外因性自己抗原性ポリペプチドが、そのＣ末端に、１つ以上の追加の自己抗原をさらに含む、請求項１２６～１２９のいずれか一項に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  131. 任意の２つの自己抗原が、リンカーによって分離されている、請求項１３０に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  132. 前記リンカーが、ポリＧＳリンカーである、請求項１３１に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  133. 前記リンカーが、ＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳ（配列番号８４０）またはＧＰＧＰＧ（配列番号８４１）を含む、請求項１３１に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  134. 前記外因性自己抗原性ポリペプチドが、前記細胞内にある、請求項１２２に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  135. 前記外因性自己抗原性ポリペプチドが、原形質膜の細胞内側にある、請求項１３４に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  136. 前記外因性自己抗原性ポリペプチドが、膜アンカーをさらに含むか、または脂質部分への付着を介して前記細胞の原形質膜に係留されている、請求項１３５に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  137. 前記外因性自己抗原性ポリペプチドが、Ｎ末端からＣ末端への方向に式ＩＩＩを含み、
    Ｘ１－Ｘ２－Ｘ３（式ＩＩＩ）
    式中、
    Ｘ１は、Ｉ型膜タンパク質またはその膜貫通ドメインを含み、
    Ｘ２は、Ｉｉキーペプチドを含み、
    Ｘ３は、自己抗原を含む、請求項１３５または１３６に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  138. 前記外因性自己抗原性ポリペプチドが、Ｎ末端からＣ末端への方向に式ＩＶを含み、
    Ｘ１－Ｘ２－Ｘ３－Ｘ４（式ＩＶ）
    式中、
    Ｘ１は、Ｉ型膜タンパク質またはその膜貫通ドメインを含み、
    Ｘ２は、リンカーを含み、
    Ｘ３は、Ｉｉキーペプチドを含み、
    Ｘ４は、自己抗原を含む、請求項１３５または１３６に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  139. 前記リンカーが、ポリＧＳリンカーである、請求項１３８に記載の操作された赤血球系細胞。
  140. 前記リンカーが、ＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳ（配列番号８４０）またはＧＰＧＰＧ（配列番号８４１）を含む、請求項１３８に記載の操作された赤血球系細胞。
  141. 前記外因性自己抗原性ポリペプチドが、そのＮ末端に、シグナルペプチドをさらに含む、請求項１３７～１４０のいずれか一項に記載の操作された赤血球系細胞。
  142. 前記シグナルペプチドが、ＧＰＡシグナルペプチドである、請求項１４１に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  143. 前記Ｉｉキーペプチドが、
    ＬＲＭＫＬＰＫＰＰＫＰＶＳＫＭＲ（配列番号７６５）、
    ＹＲＭＫＬＰＫＰＰＫＰＶＳＫＭＲ（配列番号７６６）、
    ＬＲＭＫ（配列番号７６７）、
    ＹＲＭＫ（配列番号７６８）、
    ＬＲＭＫＬＰＫ（配列番号７６９）、
    ＹＲＭＫＬＰＫ（配列番号７７０）、
    ＹＲＭＫＬＰＫＰ（配列番号７７１）、
    ＬＲＭＫＬＰＫＰ（配列番号７７２）、
    ＬＲＭＫＬＰＫＳ（配列番号７７３）、
    ＹＲＭＫＬＰＫＳ（配列番号７７４）、
    ＬＲＭＫＬＰＫＳＡＫＰ（配列番号７７５）、および
    ＬＲＭＫＬＰＫＳＡＫＰＶＳＫ（配列番号７７６）、からなる群から選択される配列を含む、請求項１３７～１４２のいずれか一項に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  144. 前記外因性自己抗原性ポリペプチドが、そのＣ末端に、１つ以上の追加の自己抗原をさらに含む、請求項１３７～１４３のいずれか一項に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  145. 任意の２つの自己抗原が、リンカーによって分離されている、請求項１４４に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  146. 前記リンカーが、ポリＧＳリンカーである、請求項１４５に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  147. 前記リンカーが、ＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳ（配列番号８４０）またはＧＰＧＰＧ（配列番号８４１）を含む、請求項１４５に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  148. 前記外因性自己抗原性ポリペプチドが、Ｎ末端からＣ末端への方向に式ＶＩＩを含み、
    Ｘ１－Ｘ２－Ｘ３－Ｘ４（式ＶＩＩ）
    式中、
    Ｘ１は、Ｉ型膜タンパク質またはその膜貫通ドメインを含み、
    Ｘ２は、リンカーを含み、
    Ｘ３は、ＣＤ７４の細胞質部分またはその断片を含み、
    Ｘ４は、自己抗原を含む、請求項１３５または１３６に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  149. 前記リンカーが、ＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳ（配列番号８４０）を含む、請求項１４８に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  150. ＣＤ７４の前記細胞質部分が、ＱＱＱＧＲＬＤＫＬＴＶＴＳＱＮＬＱＬＥＮＬＲＭＫＬＰＫＰＰＫＰＶＳＫＭＲＭＡＴＰＬＬＭＱＡＬＰＭＧＡＬＰＱＧＰＭＱＮＡＴＫＹＧＮＭＴＥＤＨＶＭＨＬＬＱＮＡＤＰＬＫＶＹＰＰＬＫＧＳＦＰＥＮＬＲＨＬＫＮＴＭＥＴＩＤＷＫＶＦＥＳＷＭＨＨＷＬＬＦＥＭＳＲＨＳＬＥＱＫＰＴＤＡＰＰＫＥＳＬＥＬＥＤＰＳＳＧＬＧＶＴＫＱＤＬＧＰＶＰＭ（配列番号８４５）を含む、請求項１４８または１４９に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  151. 前記外因性自己抗原性ポリペプチドの前記Ｎ末端が、シグナルペプチドをさらに含む、請求項１４８～１５０のいずれか一項に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  152. 前記外因性自己抗原性ポリペプチドが、Ｎ末端からＣ末端への方向に式ＶＩＩＩを含み、
    Ｘ１－Ｘ２－Ｘ３－Ｘ４－Ｘ５（式ＶＩＩＩ）
    式中、
    Ｘ１は、Ｉ型膜タンパク質またはその膜貫通ドメインを含み、
    Ｘ２は、リンカーを含み、
    Ｘ３は、ＣＤ７４のＮ末端細胞質部分またはその断片を含み、
    Ｘ４は、自己抗原を含み、
    Ｘ５は、ＣＤ７４のＣ末端細胞質部分を含む、請求項１３５または１３６に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  153. 前記リンカーが、ＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳ（配列番号８４０）を含む、請求項１５２に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  154. ＣＤ７４の前記Ｎ末端細胞質部分が、ＱＱＱＧＲＬＤＫＬＴＶＴＳＱＮＬＱＬＥＮＬＲＭＫ（配列番号８４７）を含む、請求項１５２または１５３に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  155. ＣＤ７４の前記Ｃ末端細胞質部分が、ＧＡＬＰＱＧＰＭＱＮＡＴＫＹＧＮＭＴＥＤＨＶＭＨＬＬＱＮＡＤＰＬＫＶＹＰＰＬＫＧＳＦＰＥＮＬＲＨＬＫＮＴＭＥＴＩＤＷＫＶＦＥＳＷＭＨＨＷＬＬＦＥＭＳＲＨＳＬＥＱＫＰＴＤＡＰＰＫＥＳＬＥＬＥＤＰＳＳＧＬＧＶＴＫＱＤＬＧＰＶＰＭ（配列番号４８９）を含む、請求項１５２～１５４のいずれか一項に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  156. 前記外因性自己抗原性ポリペプチドの前記Ｎ末端が、シグナルペプチドをさらに含む、請求項１５２～１５５のいずれか一項に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  157. 前記外因性自己抗原性ポリペプチドが、Ｎ末端からＣ末端への方向に式ＸＩを含み、
    Ｘ１－Ｘ２－Ｘ３－Ｘ４（式ＸＩ）
    式中、
    Ｘ１は、サイトゾルタンパク質またはその断片を含む、
    Ｘ２は、リンカーを含み、
    Ｘ３は、ＣＤ７４の細胞質部分またはその断片を含み、
    Ｘ４は、自己抗原を含む、請求項１３５または１３６に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  158. 前記サイトゾルタンパク質が、ＭＡＧＷＮＡＹＩＤＮＬＭＡＤＧＴＣＱＤＡＡＩＶＧＹＫＤＳＰＳＶＷＡＡＶＰＧＫＴＦＶＮＩＴＰＡＥＶＧＶＬＶＧＫＤＲＳＳＦＹＶＮＧＬＴＬＧＧＱＫＣＳＶＩＲＤＳＬＬＱＤＧＥＦＳＭＤＬＲＴＫＳＴＧＧＡＰＴＦＮＶＴＶＴＫＴＤＫＴＬＶＬＬＭＧＫＥＧＶＨＧＧＬＩＮＫＫＣＹＥＭＡＳＨＬＲＲＳＱＹ（配列番号８４６）を含む、請求項１５７に記載の操作された赤血球系細胞。
  159. 前記リンカーが、ＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳ（配列番号８４０）を含む、請求項１５７または１５８に記載の操作された赤血球系細胞。
  160. ＣＤ７４の前記細胞質部分が、ＱＱＱＧＲＬＤＫＬＴＶＴＳＱＮＬＱＬＥＮＬＲＭＫＬＰＫＰＰＫＰＶＳＫＭＲＭＡＴＰＬＬＭＱＡＬＰＭＧＡＬＰＱＧＰＭＱＮＡＴＫＹＧＮＭＴＥＤＨＶＭＨＬＬＱＮＡＤＰＬＫＶＹＰＰＬＫＧＳＦＰＥＮＬＲＨＬＫＮＴＭＥＴＩＤＷＫＶＦＥＳＷＭＨＨＷＬＬＦＥＭＳＲＨＳＬＥＱＫＰＴＤＡＰＰＫＥＳＬＥＬＥＤＰＳＳＧＬＧＶＴＫＱＤＬＧＰＶＰＭ（配列番号８４５）を含む、請求項１５７～１５９のいずれか一項に記載の操作された赤血球系細胞。
  161. 前記外因性自己抗原性ポリペプチドの前記Ｎ末端が、シグナルペプチドをさらに含む、請求項１５７～１６０のいずれか一項に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  162. 前記外因性自己抗原性ポリペプチドが、Ｎ末端からＣ末端への方向に式ＸＩＩを含み、
    Ｘ１－Ｘ２－Ｘ３－Ｘ４－Ｘ５（式ＸＩＩ）
    式中、
    Ｘ１は、細胞質タンパク質またはその断片を含み、
    Ｘ２は、リンカーを含み、
    Ｘ３は、ＣＤ７４のＮ末端細胞質部分またはその断片を含み、
    Ｘ４は、自己抗原を含み、
    Ｘ５は、ＣＤ７４のＣ末端細胞質部分を含む、請求項１３５または１３６に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  163. 前記細胞質タンパク質が、ＭＡＧＷＮＡＹＩＤＮＬＭＡＤＧＴＣＱＤＡＡＩＶＧＹＫＤＳＰＳＶＷＡＡＶＰＧＫＴＦＶＮＩＴＰＡＥＶＧＶＬＶＧＫＤＲＳＳＦＹＶＮＧＬＴＬＧＧＱＫＣＳＶＩＲＤＳＬＬＱＤＧＥＦＳＭＤＬＲＴＫＳＴＧＧＡＰＴＦＮＶＴＶＴＫＴＤＫＴＬＶＬＬＭＧＫＥＧＶＨＧＧＬＩＮＫＫＣＹＥＭＡＳＨＬＲＲＳＱＹ（配列番号８４６）を含む、請求項１６２に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  164. 前記リンカーが、ＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳ（配列番号８４０）を含む、請求項１６２または１６３に記載の操作された赤血球系細胞。
  165. ＣＤ７４の前記Ｎ末端細胞質部分が、ＱＱＱＧＲＬＤＫＬＴＶＴＳＱＮＬＱＬＥＮＬＲＭＫ（配列番号８４７）を含む、請求項１６２～１６４のいずれか一項に記載の操作された赤血球系細胞。
  166. ＣＤ７４の前記Ｃ末端細胞質部分が、
    ＧＡＬＰＱＧＰＭＱＮＡＴＫＹＧＮＭＴＥＤＨＶＭＨＬＬＱＮＡＤＰＬＫＶＹＰＰＬＫＧＳＦＰＥＮＬＲＨＬＫＮＴＭＥＴＩＤＷＫＶＦＥＳＷＭＨＨＷＬＬＦＥＭＳＲＨＳＬＥＱＫＰＴＤＡＰＰＫＥＳＬＥＬＥＤＰＳＳＧＬＧＶＴＫＱＤＬＧＰＶＰＭ（配列番号８４９）を含む、請求項１６２～１６５のいずれか一項に記載の操作された赤血球系細胞。
  167. 前記外因性自己抗原性ポリペプチドの前記Ｎ末端が、シグナルペプチドをさらに含む、請求項１６２～１６６のいずれか一項に記載の操作された赤血球系細胞。
  168. 前記外因性自己抗原性ポリペプチドが、前記細胞の表面上に存在する、請求項１６７に記載の操作された赤血球系細胞。
  169. 前記外因性自己抗原性ポリペプチドが、Ｎ末端からＣ末端への方向に式ＩＸを含み、
    Ｘ１－Ｘ２－Ｘ３（式ＩＸ）
    式中、
    Ｘ１は、ＩＩ型膜タンパク質またはその膜貫通ドメインを含み、
    Ｘ２は、ＣＤ７４の細胞質部分またはその断片を含み、
    Ｘ３は、自己抗原を含む、請求項１６８に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  170. ＣＤ７４の前記細胞質部分が、ＱＱＱＧＲＬＤＫＬＴＶＴＳＱＮＬＱＬＥＮＬＲＭＫＬＰＫＰＰＫＰＶＳＫＭＲＭＡＴＰＬＬＭＱＡＬＰＭＧＡＬＰＱＧＰＭＱＮＡＴＫＹＧＮＭＴＥＤＨＶＭＨＬＬＱＮＡＤＰＬＫＶＹＰＰＬＫＧＳＦＰＥＮＬＲＨＬＫＮＴＭＥＴＩＤＷＫＶＦＥＳＷＭＨＨＷＬＬＦＥＭＳＲＨＳＬＥＱＫＰＴＤＡＰＰＫＥＳＬＥＬＥＤＰＳＳＧＬＧＶＴＫＱＤＬＧＰＶＰＭ（配列番号８４５）を含む、請求項１６９に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  171. 前記外因性自己抗原性ポリペプチドの前記Ｎ末端が、シグナルペプチドをさらに含む、請求項１６９または１７０に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  172. 前記外因性自己抗原性ポリペプチドが、Ｎ末端からＣ末端への方向に式Ｘを含み、
    Ｘ１－Ｘ２－Ｘ３－Ｘ４－Ｘ５（式Ｘ）
    式中、
    Ｘ１は、ＩＩ型膜タンパク質またはその膜貫通ドメインを含み、
    Ｘ２は、リンカーを含み、
    Ｘ３は、ＣＤ７４のＮ末端細胞質部分またはその断片を含み、
    Ｘ４は、自己抗原を含み、
    Ｘ５は、ＣＤ７４のＣ末端細胞質部分を含む、請求項１６８に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  173. 前記リンカーが、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号５８０）を含む、請求項１７２に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  174. ＣＤ７４の前記Ｎ末端細胞質部分が、ＱＱＱＧＲＬＤＫＬＴＶＴＳＱＮＬＱＬＥＮＬＲＭＫ（配列番号８４７）を含む、請求項１７２または１７３に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  175. ＣＤ７４の前記Ｃ末端細胞質部分が、ＡＬＰＱＧＰＭＱＮＡＴＫＹＧＮＭＴＥＤＨＶＭＨＬＬＱＮＡＤＰＬＫＶＹＰＰＬＫＧＳＦＰＥＮＬＲＨＬＫＮＴＭＥＴＩＤＷＫＶＦＥＳＷＭＨＨＷＬＬＦＥＭＳＲＨＳＬＥＱＫＰＴＤＡＰＰＫＥＳＬＥＬＥＤＰＳＳＧＬＧＶＴＫＱＤＬＧＰＶＰＭ（配列番号８４８）を含む、請求項１７２～１７４のいずれか一項に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  176. 前記外因性自己抗原性ポリペプチドの前記Ｎ末端が、シグナルペプチドをさらに含む、請求項１７２～１７５のいずれか一項に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  177. 前記外因性自己抗原性ポリペプチドが、Ｎ末端からＣ末端への方向に式ＸＩＩＩを含み、
    Ｘ１－Ｘ２－Ｘ３－Ｘ４（式ＸＩＩＩ）
    式中、
    Ｘ１は、Ｉｉキーペプチドを含み、
    Ｘ２は、自己抗原を含み、
    Ｘ３は、リンカーを含み、
    Ｘ４は、Ｉ型膜タンパク質またはその膜貫通ドメインを含む、請求項１６８に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  178. 前記リンカーが、ＧＰＧＰＧ（配列番号８４１）を含む、請求項１７７に記載の操作された赤血球系細胞。
  179. Ｘ１が、２つ以上のＩｉキーペプチドを含む、請求項１７７または１７８に記載の操作された赤血球系細胞。
  180. 前記外因性自己抗原性ポリペプチドの前記Ｎ末端が、シグナルペプチドをさらに含む、請求項１７７～１７９のいずれか一項に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  181. 前記外因性自己抗原性ポリペプチドが、前記細胞のサイトゾル中にある、請求項１２２に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  182. 前記外因性自己抗原性ポリペプチドが、Ｎ末端からＣ末端への方向に式Ｖを含み、
    Ｘ１－Ｘ２－Ｘ３（式Ｖ）
    式中、
    Ｘ１は、サイトゾルポリペプチドまたはその断片を含み、
    Ｘ２は、Ｉｉキーペプチドを含み、
    Ｘ３は、自己抗原を含む、請求項１８１に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  183. 前記外因性自己抗原性ポリペプチドが、Ｎ末端からＣ末端への方向に式ＶＩを含み、
    Ｘ１－Ｘ２－Ｘ３－Ｘ４（式ＶＩ）
    式中、
    Ｘ１は、サイトゾルポリペプチドまたはその断片を含み、
    Ｘ２は、リンカーを含み、
    Ｘ３は、Ｉｉキーペプチドを含み、
    Ｘ４は、自己抗原を含む、請求項１８１に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  184. 前記リンカーが、ポリＧＳリンカーである、請求項１８３に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  185. 前記リンカーが、ＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳ（配列番号８４０）またはＧＰＧＰＧ（配列番号８４１）を含む、請求項１８３に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  186. 前記サイトゾルポリペプチドが、プロフィリン、フェリチン、またはその断片を含む、請求項１８２～１８５のいずれか一項に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  187. 前記Ｉｉキーペプチドが、
    ＬＲＭＫＬＰＫＰＰＫＰＶＳＫＭＲ（配列番号７６５）、
    ＹＲＭＫＬＰＫＰＰＫＰＶＳＫＭＲ（配列番号７６６）、
    ＬＲＭＫ（配列番号７６７）、
    ＹＲＭＫ（配列番号７６８）、
    ＬＲＭＫＬＰＫ（配列番号７６９）、
    ＹＲＭＫＬＰＫ（配列番号７７０）、
    ＹＲＭＫＬＰＫＰ（配列番号７７１）、
    ＬＲＭＫＬＰＫＰ（配列番号７７２）、
    ＬＲＭＫＬＰＫＳ（配列番号７７３）、
    ＹＲＭＫＬＰＫＳ（配列番号７７４）、
    ＬＲＭＫＬＰＫＳＡＫＰ（配列番号７７５）、および
    ＬＲＭＫＬＰＫＳＡＫＰＶＳＫ（配列番号７７６）、からなる群から選択される配列を含む、請求項１８２～１８６のいずれか一項に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  188. 前記外因性自己抗原性ポリペプチドが、そのＣ末端に、１つ以上の追加の自己抗原をさらに含む、請求項１８２～１８７のいずれか一項に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  189. 任意の２つの自己抗原が、リンカーによって分離されている、請求項１８８に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  190. 前記リンカーが、ポリＧＳリンカーである、請求項１８９に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  191. 前記リンカーが、ＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳ（配列番号８４０）またはＧＰＧＰＧ（配列番号８４１）を含む、請求項１８９に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  192. 前記少なくとも１つの外因性共阻害性ポリペプチドのうちの１つが、前記細胞の表面上にある、請求項１２２～１９１のいずれか一項に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  193. 前記少なくとも１つの外因性共阻害性ポリペプチドのうちの１つが、膜貫通ドメインをさらに含む、請求項１９２に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  194. 前記膜貫通ドメインが、グリコフォリンＡ（ＧＰＡ）膜貫通ドメイン、小内在性膜タンパク質１（ＳＭＩＭ１）膜貫通ドメイン、またはトランスフェリン受容体膜貫通ドメインである、請求項１９２に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  195. 前記少なくとも１つの外因性共阻害性ポリペプチドのうちの１つが、前記細胞内にある、請求項１２２～１９１のいずれか一項に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  196. 前記少なくとも１つの外因性共阻害性ポリペプチドのうちの１つが、前記細胞によって分泌／放出される、請求項１２２～請求項１９１のいずれか一項に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  197. 前記少なくとも１つの外因性共阻害性ポリペプチドが、ＩＬ－１０、ＩＬ－２７、ＩＬ－３７、ＴＧＦβ、ＣＤ３９、ＣＤ７３、アルギナーゼ１（ＡＲＧ１）、アネキシン１、フィブリノゲン様タンパク質２（ＦＧＬ２）、およびＰＤ－Ｌ１からなる群から選択される、請求項１９２～１９６のいずれか一項に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  198. 前記少なくとも１つの外因性共阻害性ポリペプチドのうちの１つが、ＩＬ－１０であり、配列番号７６０、７６１、７６２、または７６３に対して少なくとも９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項１９７に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  199. 前記少なくとも１つの外因性共阻害性ポリペプチドのうちの１つが、ＰＤ－Ｌ１であり、配列番号７６４に対して少なくとも９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項１９７に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  200. 前記操作された赤血球系細胞が、前記原形質膜の前記外葉上のホスファチジルセリンの存在が増加するように処理されている、請求項１～１９９のいずれか一項に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  201. 前記操作された赤血球系細胞が、カルシウムイオノフォアで処理されている、請求項２００に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  202. 前記操作された赤血球系細胞が、イオノマイシン、Ａ２３１８７、およびＢＳ３のうちの１つ以上で処理されている、請求項２０１に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  203. 前記少なくとも１つの外因性共阻害性ポリペプチドのうちの１つが、配列番号８１６～８２３のうちのいずれか１つに対して少なくとも９０％同一である配列を含む、請求項１２２～１９１のいずれか一項に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  204. 前記操作された除核赤血球系細胞が、網状赤血球である、請求項１～２０３のいずれか一項に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  205. 前記操作された除核赤血球系細胞が、赤血球である、請求項１～２０３のいずれか一項に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  206. 前記操作された除核赤血球系細胞が、ヒト細胞である、請求項１～２０５のいずれか一項に記載の操作された除核赤血球系細胞。
  207. 請求項１～２０６のいずれか一項に記載の複数の操作された除核赤血球系細胞と、薬学的に許容される担体と、を含む、医薬組成物。
  208. 外因性免疫原性ポリペプチドに対する対象における免疫寛容を誘導する方法であって、請求項１～２０６のいずれか一項に記載の複数の操作された除核赤血球系細胞、または請求項２０７に記載の医薬組成物を前記対象に投与し、それによって前記外因性免疫原性ポリペプチドに対する免疫寛容を誘導することを含む、方法。
  209. 前記免疫寛容が、短期免疫寛容を含む、請求項２０８に記載の方法。
  210. 前記短期免疫寛容が、前記操作された除核赤血球系細胞が接触する免疫細胞のアポトーシスを誘導すること、または活性化、分化、および／もしくは増殖を阻害することを含み、任意選択的に、前記免疫細胞が、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、またはＢ細胞である、請求項２０９に記載の方法。
  211. 前記短期免疫寛容が、前記操作された除核赤血球系細胞が接触するＴ細胞またはＮＫ細胞の細胞傷害を阻害することを含む、請求項２０９または２１０に記載の方法。
  212. 前記短期免疫寛容が、前記操作された除核赤血球系細胞が接触するＢ細胞による抗体分泌を阻害することを含む、請求項２０９～２１１のいずれか一項に記載の方法。
  213. 前記免疫寛容が、長期免疫寛容を含む、請求項２０９～２１３のいずれか一項に記載の方法。
  214. 前記長期免疫寛容が、前記操作された除核赤血球系細胞が接触するＤＣの成熟を阻害することを含む、請求項２１３に記載の方法。
  215. 前記長期免疫寛容が、前記操作された除核赤血球系細胞が接触するＤＣのアネルギーを誘導することを含む、請求項２１３または２１４に記載の方法。
  216. 前記長期免疫寛容が、
    ａ．前記操作された除核赤血球系細胞が接触するＣＤ４＋ Ｔ細胞のＴｒｅｇへの分化を誘導すること、および／または
    ｂ．前記操作された除核赤血球系細胞が接触するＣＤ８＋ Ｔ細胞のＴｒｅｇへの分化を誘導すること、を含む、請求項２１３～２１５のいずれか一項に記載の方法。
  217. 疾患の治療を必要とする対象においてそれを行う方法であって、請求項１～２０６のいずれか一項に記載の複数の操作された除核赤血球系細胞、または請求項２０７に記載の医薬組成物を前記対象に投与し、それによって前記対象において前記疾患を治療することを含む、方法。
  218. ａ．前記外因性免疫原性ポリペプチドに対する前記対象における免疫応答が、前記外因性免疫原性ポリペプチドが前記対象に単独で投与される場合の、前記外因性免疫原性ポリペプチドに対する前記対象における免疫応答と比較して低減される、および／または
    ｂ．前記外因性免疫原性ポリペプチドに対する前記対象における免疫応答が、前記外因性免疫原性ポリペプチドが前記外因性ＨＬＡ－Ｇポリペプチドを欠く複数の操作された除核赤血球系細胞の表面上に存在するときに対象に投与される場合の、前記外因性免疫原性ポリペプチドに対する前記対象における免疫応答と比較して低減される、請求項２１７に記載の方法。
  219. 前記疾患が、がんである、請求項２１７または２１８に記載の方法。
  220. 前記がんが、白血病である、請求項２１９に記載の方法。
  221. 前記がんが、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、肛門がん、胆管がん、膀胱がん、骨がん、腸がん、脳がん、乳がん、肝臓がん、肺がん、原発不明がん、子宮頸がん、絨毛がん、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、結腸がん、結腸直腸がん、子宮内膜がん、眼がん、胆嚢がん、胃がん、妊娠性絨毛腫瘍（ＧＴＴ）、有毛細胞白血病、頭頸部がん、ホジキンリンパ腫、腎臓がん、喉頭がん、白血病、リンパ腫、皮膚がん、中皮腫、口腔および口腔咽頭がん、骨髄腫、鼻腔および副鼻腔がん、鼻咽腔がん、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、食道がん、卵巣がん、膵臓がん、陰茎がん、前立腺がん、直腸がん、唾液腺がん、軟部組織肉腫、腹部がん、精巣がん、甲状腺がん、子宮がん、膣がん、または外陰がんである、請求項２１９に記載の方法。
  222. 前記疾患が、ホモシステイン関連疾患である、請求項２１７または２１８に記載の方法。
  223. 前記ホモシステイン関連疾患が、ホモシスチン尿症である、請求項２２２に記載の方法。
  224. 前記疾患が、尿酸関連疾患である、請求項２１７または２１８に記載の方法。
  225. 前記尿酸関連疾患が、高尿酸血症である、請求項２２４に記載の方法。
  226. 前記尿酸関連疾患が、痛風、関節リウマチ、変形性関節炎、脳卒中、虚血性心疾患、不整脈、または慢性腎疾患である、請求項２２４に記載の方法。
  227. 前記疾患が、高シュウ酸尿症である、請求項２１７または２１８に記載の方法。
  228. 前記疾患が、自己免疫疾患である、請求項２１７または２１８に記載の方法。
  229. 前記自己免疫疾患が、１型糖尿病、多発性硬化症、結合組織障害、セリアック病、水疱性類天疱瘡、膜性糸球体腎炎、視神経脊髄炎、尋常性天疱瘡、自己免疫性脳炎、自己免疫性肝炎、慢性炎症性脱髄性多発神経炎（ＣＩＰＤ）、多発性筋炎および皮膚筋炎（ＰＭ／ＤＭ）、混合性結合組織疾患（ＭＣＴＤ）、重症筋無力症、関節リウマチ、自己免疫性肝疾患、ブドウ膜炎、自己免疫性心筋炎、白斑、円形脱毛症（ａｌｏｐｅｃｉｓ ａｒｅａｔａ）、または強皮症である、請求項２２８に記載の方法。
  230. 前記自己免疫疾患が、１型糖尿病、多発性硬化症、結合組織障害、またはセリアック病である、請求項２２８に記載の方法。
  231. 前記自己免疫疾患が、１型糖尿病である、請求項２２８に記載の方法。
  232. 前記自己免疫疾患が、水疱性類天疱瘡、膜性糸球体腎炎、視神経脊髄炎、または尋常性天疱瘡である、請求項２２８に記載の方法。
  233. 前記自己免疫疾患が、自己免疫性脳炎、自己免疫性肝炎、慢性炎症性脱髄性多発神経炎（ＣＩＰＤ）、多発性筋炎および皮膚筋炎（ＰＭ／ＤＭ）、混合性結合組織疾患（ＭＣＴＤ）、重症筋無力症、関節リウマチ、自己免疫性肝疾患、ブドウ膜炎、自己免疫性心筋炎、白斑、円形脱毛症（ａｌｏｐｅｃｉｓ ａｒｅａｔａ）、または強皮症である、請求項２２８に記載の方法。
  234. 前記複数の操作された除核赤血球系細胞、または前記医薬組成物が、静脈内投与される、請求項２０８～２３３のいずれか一項に記載の方法。
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