JP2023513189A - 筋萎縮性側索硬化症（ａｌｓ）を治療するためのｍｉｒｎａ－４８５阻害剤の使用 - Google Patents

筋萎縮性側索硬化症（ａｌｓ）を治療するためのｍｉｒｎａ－４８５阻害剤の使用 Download PDF

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Abstract

本開示は、ＳＩＲＴ１タンパク質またはＳＩＲＴ１遺伝子の発現、ＰＧＣ－１αタンパク質及び／またはＰＧＣ－１α遺伝子の発現、ＣＤ３６タンパク質及び／またはＣＤ３６遺伝子の発現、ＮＲＧ１タンパク質及び／またはＮＲＧ１遺伝子の発現、ＳＴＭＮ２タンパク質及び／またはＳＴＭＮ２遺伝子の発現、及び／またはＮＲＸＮ１タンパク質及び／またはＮＲＸＮ１遺伝子の発現のレベルの減少に関連した筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）を治療するためのｍｉＲＮＡ阻害剤の使用を含む。

Description

関連出願の相互参照
本ＰＣＴ出願は、２０２０年２月７日に出願された米国特許仮出願第６２／９７１，７７１号、２０２０年３月１３日に出願された同第６２／９８９，４８７号、及び２０２０年７月１日に出願された同第６３／０４７，１４７号の優先権の利益を主張するものであり、各出願の全体を本明細書に参照によって援用するものである。
ＥＦＳ－ＷＥＢを介して電子的に提出された配列表の参照
本出願とともにＡＳＣＩＩテキストファイル（ファイル名：４３６６＿０２１ＰＣ０３＿Ｓｅｑｌｉｓｔｉｎｇ＿ＳＴ２５．ｔｘｔ、サイズ：２６４，０１５バイト、作成日：２０２１年２月５日）の形で提出される、電子的に提出される配列表の全体を、参照によって本明細書に援用する。
本開示は、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）を治療するためのｍｉＲ－４８５阻害剤（例えば、少なくとも１つのｍｉＲ－４８５結合部位を含むヌクレオチド分子をコードするポリヌクレオチド）の使用を提供するものである。
サーチュイン１（ＮＡＤ依存性脱アセチル化酵素サーチュイン１としても知られる）は、ヒトではＳＩＲＴ１遺伝子によってコードされている酵素である。サーチュイン１は、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤ）依存性ヒストン脱アセチル化酵素のファミリーに属し、様々な基質を脱アセチル化することができる（Ｒａｈｍａｎ，Ｓ．， ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ９：１１（２０１１））。したがって、サーチュイン１は、遺伝子発現、代謝、及び加齢をはじめとする広範な生理学的機能に役割を担っているものとして述べられてきた。さらに、異常なサーチュイン活性は、特定のヒトの病、例えばタンパク疾患と関連付けられている（例えば、ＡＬＳなどの神経変性疾患）。
筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）は、運動ニューロン疾患（ＭＮＤ）またはルー・ゲーリック病としても知られ、脳及び脊髄の神経細胞（特に随意筋運動を制御するもの）を冒す進行性の神経変性疾患である。症状としては、筋肉の硬直、筋肉の攣縮、筋肉量の減少による徐々に進む衰弱、ならびに歩行、手の使用、会話、嚥下、及び呼吸能力の最終的な喪失を挙げることができる。近年の集団ベースの研究によって、全世界で１０万人当たり４．１～８．４人がＡＬＳに罹患していることが示されている。さらに、診断後のＡＬＳ患者の平均余命は約３～５年である。ＡＬＳの正確な原因は不明であり、現在のところ、治療法は存在していない。現在利用可能な治療法（例えば、人工呼吸器、栄養管、物理的及び言語療法）はあくまで対症的なものに過ぎない。したがって、ＡＬＳの治療に対する新規でより効果的なアプローチが極めて望ましい。
本明細書では、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）の治療を必要とする対象のＡＬＳを治療する方法であって、ｍｉＲ－４８５を阻害する化合物（ｍｉＲＮＡ阻害剤）を対象に投与することを含む方法を提供する。
いくつかの態様では、ｍｉＲＮＡ阻害剤は、対象におけるＳＩＲＴ１タンパク質及び／またはＳＩＲＴ１遺伝子のレベルを増加させる。いくつかの態様では、対象は、ＳＩＲＴ１タンパク質及び／またはＳＩＲＴ１遺伝子のレベルの減少に関連したＡＬＳを有する。
いくつかの態様では、ｍｉＲＮＡ阻害剤は、オートファジーを誘導し、及び／または炎症を治療もしくは予防する。
いくつかの態様では、ｍｉＲＮＡ阻害剤は、対象におけるＣＤ３６タンパク質及び／またはＣＤ３６遺伝子のレベルを増加させる。いくつかの態様では、対象は、ＣＤ３６タンパク質及び／またはＣＤ３６遺伝子のレベルの減少に関連したＡＬＳを有する。
いくつかの態様では、ｍｉＲＮＡ阻害剤は、対象におけるＰＧＣ－１αタンパク質及び／またはＰＧＣ－１α遺伝子のレベルを増加させる。いくつかの態様では、対象は、ＰＧＣ－１αタンパク質及び／またはＰＧＣ－１α遺伝子のレベルの減少に関連したＡＬＳを有する。
いくつかの態様では、上記の方法で使用することができるｍｉＲ－４８５阻害剤は、神経発生を誘導する。特定の態様では、神経発生を誘導することは、神経幹細胞及び／または前駆細胞の増殖、分化、遊走、及び／または生存率の増加を含む。いくつかの態様では、神経発生を誘導することは、神経幹細胞及び／または前駆細胞の数の増加を含む。いくつかの態様では、神経発生を誘導することは、軸索、樹状突起、及び／またはシナプス発生の増加を含む。特定の態様では、ｍｉＲ－４８５阻害剤は、食作用を誘導する。
本明細書では、ＳＩＲＴ１タンパク質及び／またはＳＩＲＴ１遺伝子の異常なレベルに関連した疾患または状態の治療を必要とする対象において上記の疾患または状態を治療する方法であって、ｍｉＲ－４８５を阻害する化合物（ｍｉＲＮＡ阻害剤）を対象に投与することを含み、ｍｉＲＮＡ阻害剤がＳＩＲＴ１タンパク質及び／またはＳＩＲＴ１遺伝子のレベルを増加させる、方法も提供される。本明細書では、ＣＤ３６タンパク質及び／またはＣＤ３６遺伝子の異常なレベルに関連した疾患または状態の治療を必要とする対象において上記の疾患または状態を治療する方法であって、ｍｉＲ－４８５を阻害する化合物（ｍｉＲＮＡ阻害剤）を対象に投与することを含み、ｍｉＲＮＡ阻害剤がＣＤ３６タンパク質及び／またはＣＤ３６遺伝子のレベルを増加させる、方法も提供される。本明細書では、ＰＧＣ－１αタンパク質及び／またはＰＧＣ－１α遺伝子の異常なレベルに関連した疾患または状態の治療を必要とする対象において上記の疾患または状態を治療する方法であって、ｍｉＲ－４８５を阻害する化合物（ｍｉＲＮＡ阻害剤）を対象に投与することを含み、ｍｉＲＮＡ阻害剤がＰＧＣ－１αタンパク質及び／またはＰＧＣ－１α遺伝子のレベルを増加させる、方法も提供される。
いくつかの態様では、ｍｉＲＮＡ阻害剤は、ｍｉＲ４８５－３ｐを阻害する。いくつかの態様では、ｍｉＲ４８５－３ｐは、５’－ＧＵＣＡＵＡＣＡＣＧＧＣＵＣＵＣＣＵＣＵＣＵ－３’（配列番号１）を含む。いくつかの態様では、ｍｉＲＮＡ阻害剤は、５’－ＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号２）を含むヌクレオチド配列を含み、ｍｉＲＮＡ阻害剤は約６～約３０ヌクレオチドの長さである。
いくつかの態様では、ｍｉＲＮＡ阻害剤は、ＳＩＲＴ１遺伝子の転写及び／またはＳＩＲＴ１タンパク質の発現を増加させる。
いくつかの態様では、ｍｉＲＮＡ阻害剤は、ヌクレオチド配列の５’末端に少なくとも１個のヌクレオチド、少なくとも２個のヌクレオチド、少なくとも３個のヌクレオチド、少なくとも４個のヌクレオチド、少なくとも５個のヌクレオチド、少なくとも６個のヌクレオチド、少なくとも７個のヌクレオチド、少なくとも８個のヌクレオチド、少なくとも９個のヌクレオチド、少なくとも１０個のヌクレオチド、少なくとも１１個のヌクレオチド、少なくとも１２個のヌクレオチド、少なくとも１３個のヌクレオチド、少なくとも１４個のヌクレオチド、少なくとも１５個のヌクレオチド、少なくとも１６個のヌクレオチド、少なくとも１７個のヌクレオチド、少なくとも１８個のヌクレオチド、少なくとも１９個のヌクレオチド、または少なくとも２０個のヌクレオチドを含む。いくつかの態様では、ｍｉＲＮＡ阻害剤は、ヌクレオチド配列の３’末端に少なくとも１個のヌクレオチド、少なくとも２個のヌクレオチド、少なくとも３個のヌクレオチド、少なくとも４個のヌクレオチド、少なくとも５個のヌクレオチド、少なくとも６個のヌクレオチド、少なくとも７個のヌクレオチド、少なくとも８個のヌクレオチド、少なくとも９個のヌクレオチド、少なくとも１０個のヌクレオチド、少なくとも１１個のヌクレオチド、少なくとも１２個のヌクレオチド、少なくとも１３個のヌクレオチド、少なくとも１４個のヌクレオチド、少なくとも１５個のヌクレオチド、少なくとも１６個のヌクレオチド、少なくとも１７個のヌクレオチド、少なくとも１８個のヌクレオチド、少なくとも１９個のヌクレオチド、または少なくとも２０個のヌクレオチドを含む。
いくつかの態様では、ｍｉＲＮＡ阻害剤は、５’－ＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号２）、５’－ＧＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号３）、５’－ＣＧＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号４）、５’－ＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号５）、５’－ＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号６）、５’－ＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号７）、５’－ＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号８）、５’－ＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号９）、５’－ＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号１０）、５’－ＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号１１）、５’－ＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号１２）、５’－ＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号１３）、５’－ＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号１４）、及び５’－ＧＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号１５）、５’－ＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号１６）、５’－ＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号１７）、５’－ＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号１８）、５’－ＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号１９）、５’－ＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号２０）、５’－ＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号２１）、５’－ＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号２２）、５’－ＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号２３）、５’－ＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号２４）、５’－ＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号２５）、５’－ＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号２６）、５’－ＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号２７）、５’－ＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号２８）、５’－ＧＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号２９）、及び５’－ＡＧＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号３０）からなる群から選択される配列を有する。
いくつかの態様では、ｍｉＲＮＡ阻害剤は、５’－ＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号６２）、５’－ＧＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号６３）、５’－ＣＧＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号６４）、５’－ＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号６５）、５’－ＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号６６）、５’－ＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号６７）、５’－ＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号６８）、５’－ＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号６９）、５’－ＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号７０）、５’－ＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号７１）、５’－ＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号７２）、５’－ＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号７３）、５’－ＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号７４）、５’－ＧＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号７５）、５’－ＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号７６）、５’－ＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号７７）、５’－ＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号７８）、５’－ＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号７９）、５’－ＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号８０）、５’－ＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号８１）、５’－ＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号８２）、５’－ＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号８３）、５’－ＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号８４）、５’－ＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号８５）、５’－ＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号８６）、５’－ＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号８７）、５’－ＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号８８）、５’－ＧＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号８９）、及び５’－ＡＧＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号９０）からなる群から選択される配列を有する。
いくつかの態様では、ｍｉＲＮＡ阻害剤の配列は、５’－ＡＧＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号３０）または５’－ＡＧＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号９０）と、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、または少なくとも約９５％の配列同一性を有する。特定の態様では、ｍｉＲＮＡ阻害剤は、５’－ＡＧＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号３０）または５’－ＡＧＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号９０）と少なくとも９０％の類似性を有する。いくつかの態様では、ｍｉＲＮＡ阻害剤は、１個の置換または２個の置換を有するヌクレオチド配列５’－ＡＧＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号３０）または５’－ＡＧＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号９０）を含む。いくつかの態様では、ｍｉＲＮＡ阻害剤は、ヌクレオチド配列５’－ＡＧＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号３０）または５’－ＡＧＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号９０）を含む。いくつかの態様では、ｍｉＲＮＡ阻害剤は、ヌクレオチド配列５’－ＡＧＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号３０）を含む。
いくつかの態様では、ｍｉＲＮＡ阻害剤は、少なくとも１つの修飾ヌクレオチドを含む。いくつかの態様では、少なくとも１つの修飾ヌクレオチドは、ロックド核酸（ＬＮＡ）、アンロックド核酸（ＵＮＡ）、アラビノ核酸（ＡＢＡ）、架橋核酸（ＢＮＡ）、及び／またはペプチド核酸（ＰＮＡ）である。
いくつかの態様では、ｍｉＲＮＡ阻害剤は、骨格修飾を含む。特定の態様では、骨格修飾は、ホスホロジアミダイトモルホリノオリゴマー（ＰＭＯ）及び／またはホスホロチオエート（ＰＳ）修飾である。
いくつかの態様では、ｍｉＲＮＡ阻害剤は、送達剤中で送達される。特定の態様では、送達剤は、ミセル、エクソソーム、脂質ナノ粒子、細胞外小胞、または合成小胞である。
いくつかの態様では、ｍｉＲＮＡ阻害剤はウイルスベクターによって送達される。特定の態様では、ウイルスベクターは、ＡＡＶ、アデノウイルス、レトロウイルス、またはレンチウイルスである。いくつかの態様では、ウイルスベクターは、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、またはこれらの任意の組み合わせの血清型を有するＡＡＶである。
いくつかの態様では、ｍｉＲＮＡ阻害剤は送達剤によって送達される。特定の態様では、送達剤は、リピドイド、リポソーム、リポプレックス、脂質ナノ粒子、ポリマー化合物、ペプチド、タンパク質、細胞、ナノ粒子模倣体、ナノチューブ、またはコンジュゲートを含む。
いくつかの態様では、送達剤は、下式：
［ＷＰ］－Ｌ１－［ＣＣ］－Ｌ２－［ＡＭ］（式Ｉ）
または
［ＷＰ］－Ｌ１－［ＡＭ］－Ｌ２－［ＣＣ］（式ＩＩ）
（式中、
ＷＰは、水溶性バイオポリマー部分であり、
ＣＣは、正に帯電したキャリア部分であり、
ＡＭは、アジュバント部分であり、
Ｌ１及びＬ２は、独立して、任意選択のリンカーである）を有するカチオン性キャリアユニットを含み、
カチオン性キャリアユニットは、約１：１のイオン比で核酸と混合される場合にミセルを形成する。
いくつかの態様では、ｍｉＲＮＡ阻害剤は、イオン結合を介してカチオン性キャリアユニットと相互作用する。いくつかの態様では、水溶性ポリマーは、ポリ（アルキレングリコール）、ポリ（オキシエチル化ポリオール）、ポリ（オレフィンアルコール）、ポリ（ビニルピロリドン）、ポリ（ヒドロキシアルキルメタクリルアミド）、ポリ（ヒドロキシアルキルメタクリレート）、ポリ（サッカライド）、ポリ（α－ヒドロキシ酸）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリグリセロール、ポリホスファゼン、ポリオキサゾリン（「ＰＯＺ」）、ポリ（Ｎ－アクリロイルモルホリン）、またはそれらの任意の組み合わせを含む。他の態様では、水溶性ポリマーは、ポリエチレングリコール（「ＰＥＧ」）、ポリグリセロール、またはポリ（プロピレングリコール）（「ＰＰＧ」）を含む。
いくつかの態様では、水溶性ポリマーは、下式：
Figure 2023513189000002
を有する。
いくつかの態様では、ｎは、１～１０００である。特定の態様では、ｎは、少なくとも約１１０、少なくとも約１１１、少なくとも約１１２、少なくとも約１１３、少なくとも約１１４、少なくとも約１１５、少なくとも約１１６、少なくとも約１１７、少なくとも約１１８、少なくとも約１１９、少なくとも約１２０、少なくとも約１２１、少なくとも約１２２、少なくとも約１２３、少なくとも約１２４、少なくとも約１２５、少なくとも約１２６、少なくとも約１２７、少なくとも約１２８、少なくとも約１２９、少なくとも約１３０、少なくとも約１３１、少なくとも約１３２、少なくとも約１３３、少なくとも約１３４、少なくとも約１３５、少なくとも約１３６、少なくとも約１３７、少なくとも約１３８、少なくとも約１３９、少なくとも約１４０、または少なくとも約１４１である。さらなる態様では、ｎは、約８０～約９０、約９０～約１００、約１００～約１１０、約１１０～約１２０、約１２０～約１３０、約１４０～約１５０、または約１５０～約１６０である。
いくつかの態様では、水溶性ポリマーは、直鎖状、分枝鎖状、または樹枝状である。
いくつかの態様では、カチオン性キャリア部分は、１つ以上の塩基性アミノ酸を含む。特定の態様では、カチオン性キャリア部分は、少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個、少なくとも６個、少なくとも７個、少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個、少なくとも２０個、少なくとも２１個、少なくとも２２個、少なくとも２３個、少なくとも２４個、少なくとも２５個、少なくとも２６個、少なくとも２７個、少なくとも２８個、少なくとも２９個、少なくとも３０個、少なくとも３１個、少なくとも３２個、少なくとも３３個、少なくとも３４個、少なくとも３５個、少なくとも３６個、少なくとも３７個、少なくとも３８個、少なくとも３９個、少なくとも４０個、少なくとも４１個、少なくとも４２個、少なくとも４３個、少なくとも４４個、少なくとも４５個、少なくとも４６個、少なくとも４７個、少なくとも４８個、少なくとも４９個、または少なくとも５０個の塩基性アミノ酸を含む。特定の態様では、カチオン性キャリア部分は、約３０個～約５０個の塩基性アミノ酸を含む。
いくつかの態様では、塩基性アミノ酸は、アルギニン、リシン、ヒスチジン、またはそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの態様では、カチオン性キャリア部分は、約４０個のリシンモノマーを含む。
いくつかの態様では、アジュバント部分は、免疫反応、炎症反応、及び／または組織微小環境を調節することができる。特定の態様では、アジュバント部分は、イミダゾール誘導体、アミノ酸、ビタミン、またはそれらの任意の組み合わせを含む。
いくつかの態様では、アジュバント部分は、下式：
Figure 2023513189000003
（式中、Ｇ１及びＧ２のそれぞれは、Ｈ、芳香環、もしくは１～１０アルキルであるか、またはＧ１とＧ２はともに芳香環を形成し、ｎは１～１０である）を有する。
いくつかの態様では、アジュバント部分は、ニトロイミダゾールを含む。特定の態様では、アジュバント部分は、メトロニダゾール、チニダゾール、ニモラゾール、ジメトリダゾール、プレトマニド、オルニダゾール、メガゾール、アザニダゾール、ベンズニダゾール、またはそれらの任意の組み合わせを含む。
いくつかの態様では、アジュバント部分は、アミノ酸を含む。
いくつかの態様では、アジュバント部分は、下式：
Figure 2023513189000004
（式中、Ａｒは、
Figure 2023513189000005
であり、
Ｚ１及びＺ２のそれぞれは、ＨまたはＯＨである）を有する。
いくつかの態様では、アジュバント部分は、ビタミンを含む。特定の態様では、ビタミンは、環式環または環式ヘテロ原子環及びカルボキシル基またはヒドロキシル基を含む。
いくつかの態様では、ビタミンは、下式：
Figure 2023513189000006
（式中、Ｙ１及びＹ２のそれぞれは、Ｃ、Ｎ、Ｏ、またはＳであり、ｎは１または２である）を有する。
いくつかの態様では、ビタミンは、ビタミンＡ、ビタミンＢ１、ビタミンＢ２、ビタミンＢ３、ビタミンＢ６、ビタミンＢ７、ビタミンＢ９、ビタミンＢ１２、ビタミンＣ、ビタミンＤ２、ビタミンＤ３、ビタミンＥ、ビタミンＭ、ビタミンＨ、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。例えば、ビタミンは、ビタミンＢ３であってよい。
いくつかの態様では、アジュバント部分は、少なくとも約２個、少なくとも約３個、少なくとも約４個、少なくとも約５個、少なくとも約６個、少なくとも約７個、少なくとも約８個、少なくとも約９個、少なくとも約１０個、少なくとも約１１個、少なくとも約１２個、少なくとも約１３個、少なくとも約１４個、少なくとも約１５個、少なくとも約１６個、少なくとも約１７個、少なくとも約１８個、少なくとも約１９個、または少なくとも約２０個のビタミンＢ３を含む。特定の態様では、アジュバント部分は、約１０個のビタミンＢ３を含む。
いくつかの態様では、送達剤は、約１２０個～約１３０個のＰＥＧユニットを有する水溶性バイオポリマー部分と、約３０個～約４０個のリシンを有するポリリシンを含むカチオン性キャリア部分と、約５個～約１０個のビタミンＢ３を有するアジュバント部分と、を含む。
いくつかの態様では、送達剤は、ｍｉＲＮＡ阻害剤と結合されることでミセルを形成する。例えば、結合は、共有結合、非共有結合、またはイオン結合であってよい。
いくつかの態様では、ミセル中のカチオン性キャリアユニットとｍｉＲＮＡ阻害剤とは、カチオン性キャリアユニットの正電荷とｍｉＲＮＡ阻害剤の負電荷とのイオン比が約１：１となるように溶液中で混合される。いくつかの態様では、カチオン性キャリアユニットは、酵素分解からｍｉＲＮＡ阻害剤を保護することができる。
いくつかの態様では、本開示によって治療することが可能なＡＬＳは、孤発性ＡＬＳ、家族性ＡＬＳ、またはその両方を含む。いくつかの態様では、ｍｉＲＮＡ阻害剤は、ＡＬＳの発症を遅延する。いくつかの態様では、ｍｉＲＮＡ阻害剤は、対象の筋力を改善する。
いくつかの態様では、送達剤はミセルである。いくつかの態様では、ミセルは、（ｉ）約１００個～約２００個のＰＥＧユニット、（ｉｉ）それぞれがアミン基を有する約３０個～約４０個のリシン、（ｉｉｉ）それぞれがチオール基を有する約１５個～約２０個のリシン、及び（ｉｖ）それぞれがビタミンＢ３に結合された約３０個～約４０個のリシンを含む。いくつかの態様では、ミセルは、（ｉ）約１２０個～約１３０個のＰＥＧユニット、（ｉｉ）それぞれがアミン基を有する約３２個のリシン、（ｉｉｉ）それぞれがチオール基を有する約１６個のリシン、及び（ｉｖ）それぞれがビタミンＢ３に結合された約３２個のリシンを含む。
いくつかの態様では、ＰＥＧユニットに標的化部分がさらに結合されている。いくつかの態様では、標的化部分が、ＬＡＴ１標的化リガンドである。いくつかの態様では、標的化部分が、フェニルアラニンである。
本開示のキャリアユニットの例示的な構造を示す。提示される例は、アニオン性ペイロード、例えば、遺伝子を標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチドなどの核酸、例えば、ｍｉＲＮＡ（ａｎｔｉｍｉｒ）と静電的に相互作用することができるカチオン性キャリア部分を含む。いくつかの態様では、ＡＭは、ＷＰとＣＣとの間に配置することができる。ＣＣ及びＡＭコンポーネントは、簡単に直線的配置で描かれている。しかしながら、本明細書に記載されるように、いくつかの態様では、ＣＣ及びＡＭは、スキャフォールドの形で配置することができる。
野生型（ＷＴ）及びＡＬＳ（ＳＯＤ１－Ｇ９３Ａ）マウスのＰＧＣ－１αタンパク質及び／またはＩＬ－１βタンパク質の発現の比較を示す。Ａは、脊髄組織（腰部）におけるＰＧＣ－１α及び／またはＩＬ－１βの発現を示す。Ｂは、骨格筋におけるＰＧＣ－１αタンパク質の発現を示す。
ｍｉＲ－４８５阻害剤「（１）」またはＰＢＳ「（２）」で処理したＡＬＳマウスにおける疾患発症及び生存率の比較を示す。ｍｉＲ－４８５阻害剤で処理した後に疾患発症を示さないマウスの割合（％）を示す。 ｍｉＲ－４８５阻害剤「（１）」またはＰＢＳ「（２）」で処理したＡＬＳマウスにおける疾患発症及び生存率の比較を示す。ｍｉＲ－４８５阻害剤で処理したマウスで疾患発症が生じた平均日数を示す。 ｍｉＲ－４８５阻害剤「（１）」またはＰＢＳ「（２）」で処理したＡＬＳマウスにおける疾患発症及び生存率の比較を示す。生存曲線の比較を示す。
ハングワイヤ試験で測定したｍｉＲ－４８５阻害剤「（１）」またはＰＢＳ「（２）」で処理したＡＬＳマウスの筋力の比較を示す。筋力は、動物が落下するまで、ハングワイヤ上に留まることができた時間の長さ（落下までの潜時）で示される。
（Ａ）及び（Ｂ）はそれぞれ、ｍｉＲ－４８５阻害剤の投与が雄及び雌のラットの体重に目立った影響を及ぼさないことを示す。図に示されるように、雄及び雌のラットに、ｍｉＲ－４８５阻害剤の以下の用量、すなわち、（ｉ）０ｍｇ／ｋｇ（Ｇ１）、（ｉｉ）３．７５ｍｇ／ｋｇ（Ｇ２）、（ｉｉｉ）７．５ｍｇ／ｋｇ（Ｇ３）、及び（ｉｖ）１５ｍｇ／ｋｇ（Ｇ４）のうちの１つを投与した。ｍｉＲ－４８５阻害剤の投与の０、３、７、及び１４日後に体重を測定した。
（Ａ）及び（Ｂ）はそれぞれ、ｍｉＲ－４８５阻害剤の投与が雄及び雌のラットの死亡率に影響を及ぼさないことを示す。図に示されるように、雄及び雌のラットに、ｍｉＲ－４８５阻害剤の以下の用量、すなわち、（ｉ）０ｍｇ／ｋｇ（Ｇ１）、（ｉｉ）３．７５ｍｇ／ｋｇ（Ｇ２）、（ｉｉｉ）７．５ｍｇ／ｋｇ（Ｇ３）、及び（ｉｖ）１５ｍｇ／ｋｇ（Ｇ４）のうちの１つを投与した。ｍｉＲ－４８５阻害剤の投与後、０～１４日目まで動物の死亡率を毎日測定した。
雄ラットに投与した場合に、ｍｉＲ－４８５阻害剤の投与が持続する臨床的副作用を有さないことを示す。図に示されるように、雄ラットに、ｍｉＲ－４８５阻害剤の以下の用量、すなわち、（ｉ）０ｍｇ／ｋｇ（Ｇ１）、（ｉｉ）３．７５ｍｇ／ｋｇ（Ｇ２）、（ｉｉｉ）７．５ｍｇ／ｋｇ（Ｇ３）、及び（ｉｖ）１５ｍｇ／ｋｇ（Ｇ４）のうちの１つを投与した。測定した副作用には以下が含まれた。（ｉ）ＮＯＡ（目立った異常なし）、（ｉｉ）鬱血（尾）、（ｉｉｉ）浮腫（顔）、（ｉｖ）浮腫（前肢）、及び（ｖ）浮腫（後肢）。ｍｉＲ－４８５阻害剤の投与の０時間、０．５時間、１時間、２時間、４時間、６時間、１日、３日、５日、８日、１１日、及び１４日後に副作用を測定した。 雌ラットに投与した場合に、ｍｉＲ－４８５阻害剤の投与が持続する臨床的副作用を有さないことを示す。図に示されるように、雌ラットに、ｍｉＲ－４８５阻害剤の以下の用量、すなわち、（ｉ）０ｍｇ／ｋｇ（Ｇ１）、（ｉｉ）３．７５ｍｇ／ｋｇ（Ｇ２）、（ｉｉｉ）７．５ｍｇ／ｋｇ（Ｇ３）、及び（ｉｖ）１５ｍｇ／ｋｇ（Ｇ４）のうちの１つを投与した。測定した副作用には以下が含まれた。（ｉ）ＮＯＡ（目立った異常なし）、（ｉｉ）鬱血（尾）、（ｉｉｉ）浮腫（顔）、（ｉｖ）浮腫（前肢）、及び（ｖ）浮腫（後肢）。ｍｉＲ－４８５阻害剤の投与の０時間、０．５時間、１時間、２時間、４時間、６時間、１日、３日、５日、８日、１１日、及び１４日後に副作用を測定した。
（Ａ）及び（Ｂ）はそれぞれ、ｍｉＲ－４８５阻害剤の投与が雄及び雌のラットにおいて目立った病理学的異常を有さないことを示す。図に示されるように、雄及び雌のラットに、ｍｉＲ－４８５阻害剤の以下の用量、すなわち、（ｉ）０ｍｇ／ｋｇ（Ｇ１）、（ｉｉ）３．７５ｍｇ／ｋｇ（Ｇ２）、（ｉｉｉ）７．５ｍｇ／ｋｇ（Ｇ３）、及び（ｉｖ）１５ｍｇ／ｋｇ（Ｇ４）のうちの１つを投与した。
ＡＬＳマウスモデルにおける静脈内投与後のｍｉＲ－４８５阻害剤の治療効果を示す。実験計画の概略図を示す。 ＡＬＳマウスモデルにおける静脈内投与後のｍｉＲ－４８５阻害剤の治療効果を示す。コントロール動物と比較した、ｍｉＲ－４８５阻害剤で処理したマウスにおける疾患発症の比較を示す。 ＡＬＳマウスモデルにおける静脈内投与後のｍｉＲ－４８５阻害剤の治療効果を示す。異なる時点（生後１０７、１１４、１１９、１２１、及び１２３日）でＰＢＳ（「１」）またはｍｉＲ－４８５阻害剤（「２」）で処理したＡＬＳマウスのロータロッド潜時（動物がロータロッドトレッドミルから落下するまでに要した時間）の比較を示す。 ＡＬＳマウスモデルにおける静脈内投与後のｍｉＲ－４８５阻害剤の治療効果を示す。異なる時点（生後１０７、１１４、１１９、１２１、及び１２３日）でＰＢＳ（「１」）またはｍｉＲ－４８５阻害剤（「２」）で処理したＡＬＳマウスにおいて、ワイヤケージから動物が落下するまでの潜時の比較を示す。 ＡＬＳマウスモデルにおける静脈内投与後のｍｉＲ－４８５阻害剤の治療効果を示す。ＰＢＳ（「１」）またはｍｉＲ－４８５阻害剤（「２」）で処理したＡＬＳマウスにおいて、足を滑らせた回数の比較を示す。足滑りのデータは生後１１０日目に測定した。 ＡＬＳマウスモデルにおける静脈内投与後のｍｉＲ－４８５阻害剤の治療効果を示す。ＰＢＳ（「１」）またはｍｉＲ－４８５阻害剤（「２」）で処理したＡＬＳマウスにおいて、ビームの全長を横断するのに要した時間の比較を示す。ビーム横断時間は、５つの異なる時点（生後１０７、１１４、１１９、１２１、及び１２３日）で測定した。 ＡＬＳマウスモデルにおける静脈内投与後のｍｉＲ－４８５阻害剤の治療効果を示す。ｍｉＲ－４８５阻害剤（四角）またはＰＢＳ（丸）で処理したＡＬＳマウスの平均体重を時間の関数として示す。 ＡＬＳマウスモデルにおける静脈内投与後のｍｉＲ－４８５阻害剤の治療効果を示す。異なる処理群における動物の体重損失をピーク体重の割合（％）として比較したものを示す。 ＡＬＳマウスモデルにおける静脈内投与後のｍｉＲ－４８５阻害剤の治療効果を示す。ｍｉＲ－４８５阻害剤（四角）またはＰＢＳ（丸）で処理したＡＬＳ動物の生存曲線を示す。
野生型ＳＯＤ１コンストラクトまたはＧ９３Ａ変異を有するＳＯＤ１（ＳＯＤ１Ｇ９３Ａ）コンストラクトのいずれかをトランスフェクトしたＮＣＳ－３４細胞に対するｍｉＲ－４８５阻害剤の効果を示す。ＳＯＤ１の凝集に対するｍｉＲ－４８５阻害剤の効果を示すウエスタンブロット分析を示す。 野生型ＳＯＤ１コンストラクトまたはＧ９３Ａ変異を有するＳＯＤ１（ＳＯＤ１Ｇ９３Ａ）コンストラクトのいずれかをトランスフェクトしたＮＣＳ－３４細胞に対するｍｉＲ－４８５阻害剤の効果を示す。最初の３列（左から右に）は、野生型ＳＯＤ１をトランスフェクトし、（ｉ）ＰＢＳコントロール（上の行）、（ｉｉ）５０ｎＭのｍｉＲ－４８５阻害剤（中央の行）、または（ｉｉｉ）１００ｎＭのｍｉＲ－４８５阻害剤（下の行）で処理したＮＣＳ－３４細胞の結果を示す。最後の３列（左から右に）はＳＯＤ１Ｇ９３Ａコンストラクトをトランスフェクトし、（ｉ）ＰＢＳコントロール（上の行）、（ｉｉ）５０ｎＭのｍｉＲ－４８５阻害剤（中央の行）、または（ｉｉｉ）１００ｎＭのｍｉＲ－４８５阻害剤（下の行）で処理したＮＣＳ－３４細胞の結果を示す。第１行と第４行はＧＦＰ単独の発現を示す。第２行と第４行はＧＦＰのＬＣ３Ｂ単独の発現を示す。第３行と第６行はＧＦＰのＧＦＰとＬＣ３Ｂの発現の重なりを示す。白い矢印は、ＳＯＤ１Ｇ９３Ａをトランスフェクトし、ｍｉＲ－４８５阻害剤で処理したＮＣＳ－３４細胞におけるＳＯＤ１Ｇ９３Ａの凝集を示す。 野生型ＳＯＤ１コンストラクトまたはＧ９３Ａ変異を有するＳＯＤ１（ＳＯＤ１Ｇ９３Ａ）コンストラクトのいずれかをトランスフェクトしたＮＣＳ－３４細胞に対するｍｉＲ－４８５阻害剤の効果を示す。ＳＩＲＴ１及びＰＧＣ－１αタンパク質の発現に対するｍｉＲ－４８５阻害剤の効果のウエスタンブロット分析を示す。 野生型ＳＯＤ１コンストラクトまたはＧ９３Ａ変異を有するＳＯＤ１（ＳＯＤ１Ｇ９３Ａ）コンストラクトのいずれかをトランスフェクトしたＮＣＳ－３４細胞に対するｍｉＲ－４８５阻害剤の効果を示す。切断型カスパーゼ－３タンパク質の発現に対する効果のウエスタンブロット分析を示す。
本開示は、少なくとも１つのｍｉＲ－４８５結合部位を含み、タンパク質をコードしていないヌクレオチド分子をコードするヌクレオチド配列を含む、ｍｉＲ－４８５阻害剤の使用に関する。いくつかの態様では、ｍｉＲＮＡ結合部位（複数可）は、内因性ＳＩＲＴ１タンパク質及び／またはＳＩＲＴ１遺伝子を阻害するか、及び／またはその発現レベルを減少させる内因性のｍｉＲ－４８５に結合することができる。いくつかの態様では、内因性ｍｉＲ－４８５のｍｉＲＮＡ結合部位（複数可）に対する結合は、内因性のＣＤ３６タンパク質及び／またはＣＤ３６遺伝子を阻害するか、及び／またはその発現レベルを減少させることができる。同様に、いくつかの態様では、内因性ｍｉＲ－４８５のｍｉＲＮＡ結合部位（複数可）に対する結合は、内因性ＰＧＣ－１αを阻害するか、及び／またはその発現レベルを減少させることができる。いくつかの態様では、内因性ｍｉＲ－４８５のｍｉＲＮＡ結合部位（複数可）に対する結合は、内因性のＮＲＧ１タンパク質及び／またはＮＲＧ１遺伝子を阻害するか、及び／またはその発現レベルを減少させることができる。いくつかの態様では、内因性ｍｉＲ－４８５のｍｉＲＮＡ結合部位（複数可）に対する結合は、内因性のＳＴＭＮ２タンパク質及び／またはＳＴＭＮ２遺伝子を阻害するか、及び／またはその発現レベルを減少させることができる。いくつかの態様では、内因性ｍｉＲ－４８５のｍｉＲＮＡ結合部位（複数可）に対する結合は、内因性のＮＲＸＮ１タンパク質及び／またはＮＲＸＮ１遺伝子を阻害するか、及び／またはその発現レベルを減少させることができる。したがって、いくつかの態様では、本開示は、ＳＩＲＴ１タンパク質及び／またはＳＩＲＴ１遺伝子のレベルを増加させる必要のある対象においてＳＩＲＴ１タンパク質及び／またはＳＩＲＴ１遺伝子のレベルを増加させる方法であって、ｍｉＲ－４８５阻害剤を対象に投与することを含む方法に関する。さらなる態様では、対象におけるＳＩＲＴ１タンパク質及び／またはＳＩＲＴ１遺伝子のレベルを増加させることは、ＳＩＲＴ１タンパク質及び／またはＳＩＲＴ１遺伝子のレベルの減少に関連した疾患または状態の治療に有用となり得る。いくつかの態様では、本開示は、ＣＤ３６タンパク質及び／またはＣＤ３６遺伝子のレベルを増加させる必要のある対象においてＣＤ３６タンパク質及び／またはＣＤ３６遺伝子のレベルを増加させる方法であって、ｍｉＲ－４８５阻害剤を対象に投与することを含む方法に関する。さらなる態様では、対象におけるＣＤ３６タンパク質及び／またはＣＤ３６遺伝子のレベルを増加させることは、ＣＤ３６タンパク質及び／またはＣＤ３６遺伝子のレベルの減少に関連した疾患または状態の治療に有用となり得る。いくつかの態様では、本開示は、ＰＧＣ－１αタンパク質及び／またはＰＧＣ－１α遺伝子のレベルを増加させる必要のある対象においてＰＧＣ－１αタンパク質及び／またはＰＧＣ－１α遺伝子のレベルを増加させる方法であって、ｍｉＲ－４８５阻害剤を対象に投与することを含む方法に関する。さらなる態様では、対象におけるＰＧＣ－１αタンパク質及び／またはＰＧＣ－１α遺伝子のレベルを増加させることは、ＰＧＣ－１αタンパク質及び／またはＰＧＣ－１α遺伝子のレベルの減少に関連した疾患または状態の治療に有用となり得る。いくつかの態様では、本開示は、ＮＲＧ１タンパク質及び／またはＮＲＧ１遺伝子のレベルを増加させる必要のある対象においてＮＲＧ１タンパク質及び／またはＮＲＧ１遺伝子のレベルを増加させる方法であって、ｍｉＲ－４８５阻害剤を対象に投与することを含む方法に関する。さらなる態様では、対象におけるＮＲＧ１タンパク質及び／またはＮＲＧ１遺伝子のレベルを増加させることは、ＮＲＧ１タンパク質及び／またはＮＲＧ１遺伝子のレベルの減少に関連した疾患または状態の治療に有用となり得る。いくつかの態様では、本開示は、ＳＴＭＮ２タンパク質及び／またはＳＴＭＮ２遺伝子のレベルを増加させる必要のある対象においてＳＴＭＮ２タンパク質及び／またはＳＴＭＮ２遺伝子のレベルを増加させる方法であって、ｍｉＲ－４８５阻害剤を対象に投与することを含む方法に関する。さらなる態様では、対象におけるＳＴＭＮ２タンパク質及び／またはＳＴＭＮ２遺伝子のレベルを増加させることは、ＳＴＭＮ２タンパク質及び／またはＳＴＭＮ２遺伝子のレベルの減少に関連した疾患または状態の治療に有用となり得る。いくつかの態様では、本開示は、ＮＲＸＮ１タンパク質及び／またはＮＲＸＮ１遺伝子のレベルを増加させる必要のある対象においてＮＲＸＮ１タンパク質及び／またはＮＲＸＮ１遺伝子のレベルを増加させる方法であって、ｍｉＲ－４８５阻害剤を対象に投与することを含む方法に関する。さらなる態様では、対象におけるＮＲＸＮ１タンパク質及び／またはＮＲＸＮ１遺伝子のレベルを増加させることは、ＮＲＸＮ１タンパク質及び／またはＮＲＸＮ１遺伝子のレベルの減少に関連した疾患または状態の治療に有用となり得る。本明細書に開示されるように、本開示によって治療することが可能な疾患または状態として、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）がある。
記載される特定の組成物またはプロセスステップは無論のこと異なり得ることから、本開示をより詳細に記載するのに先立って、本開示は特定の組成物またはプロセスステップに限定されない点を理解されたい。本開示を読むことで当業者にとって明らかとなるように、本明細書に記載及び例示される個々の態様の各々は、本開示の範囲または趣旨から逸脱することなく、他のいくつかの態様のいずれかの特徴から容易に分離するかまたはそれらの特徴と組み合わせることができる個別の構成要素及び特徴を有する。記載されるいずれの方法も、記載される事象の順序で、または論理的に可能な他の任意の順序で実施することが可能である。
本明細書に示される見出しは本開示の様々な態様を限定するものではなく、本開示の態様は、本明細書の全体を参照することによって定義され得るものである。本開示の範囲は添付の特許請求の範囲によってのみ限定されるものであるので、本明細書で使用される用語は、あくまで特定の態様を説明することを目的としたものであって、限定することを目的としたものではない点も理解されるべきである。
Ｉ．用語
本開示をより容易に理解できるように、特定の用語を最初に定義する。本出願で使用する場合、本明細書に別段明記されない限り、以下の用語のそれぞれは、下記に記載する意味を有するものとする。追加の定義は、本出願の全体を通じて記載される。
「ａ」または「ａｎ」なる用語で示される実体は、その実体の１つ以上を指し、例えば、「ａ ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅ（ヌクレオチド配列）」は、１つ以上のヌクレオチド配列を表すものとして理解される点に留意されたい。したがって、「ａ」（または「ａｎ」）、ならびに「ｏｎｅ ｏｒ ｍｏｒｅ（１つ以上の）」、及び「ａｔ ｌｅａｓｔ ｏｎｅ（少なくとも１つの）」は、本明細書では互換的に用いられる場合がある。各請求項は、あらゆる任意選択的な要素を除外するように起草される場合もある点にも留意されたい。したがって、この記載は、請求項の要素の記載との関連において「～だけの」、「～のみ」などといった除外的な語の使用に対する、または否定による限定の使用に対する先行詞としての役割を有するものとする。
さらに、「及び／または」は、本明細書において使用される場合、２つの指定された特徴または構成要素の各々の、他方を伴うか、または伴わない具体的な開示とみなされるものである。したがって、本明細書で「Ａ及び／またはＢ」などの語句で使用される「及び／または」という用語は、「Ａ及びＢ」、「ＡまたはＢ」、「Ａ」（単独）、及び「Ｂ」（単独）を含むことが意図される。同様に、「Ａ、Ｂ、及び／またはＣ」などの語句で使用される「及び／または」という用語は、以下の態様、すなわち、Ａ、Ｂ、及びＣ；Ａ、Ｂ、またはＣ；ＡまたはＣ；ＡまたはＢ；ＢまたはＣ；Ａ及びＣ；Ａ及びＢ；Ｂ及びＣ；Ａ（単独）；Ｂ（単独）；ならびにＣ（単独）の各々を包含することが意図される。
本明細書において「ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ（含む）」なる文言で態様が説明されている場合は常に、「ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ（からなる）」及び／または「ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ（から本質的になる）」なる用語で記載される他の類似の態様も提供される点を理解されたい。
別段の定義がなされないかぎり、本明細書で使用されるすべての技術用語および科学用語は、本開示が関連する技術分野の当業者によって一般的に理解されるものと同じ意味を有するものとする。例えば、Ｔｈｅ Ｃｏｎｃｉｓｅ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｂｉｏｍｅｄｉｃｉｎｅ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｕｏ，Ｐｅｉ－Ｓｈｏｗ，２ｎｄ ｅｄ．，２００２，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ、Ｔｈｅ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，３ｒｄ ｅｄ．，１９９９，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、及びＴｈｅ Ｏｘｆｏｒｄ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ Ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｒｅｖｉｓｅｄ，２０００，Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓは、本開示で使用される用語の多くについての一般的な辞書を当業者に与えるものである。
単位、接頭辞、及び記号は、それらの国際単位系（ＳＩ）で承認された形式で示される。数値範囲は、その範囲を規定する数値を含むものとする。数値の範囲が記載されている場合、その範囲の記載された上限と下限との間にあるそれぞれの介在する整数値、及びそのそれぞれの分数もまた、そのような値の間のそれぞれの部分範囲とともに具体的に開示される点は理解されるべきである。任意の範囲の上限値及び下限値は独立してその範囲に含まれる場合も、その範囲から除外される場合もあるが、どちらかの限界値が含まれるか、どちらの限界値も含まれないか、または両方の限界値が含まれるそれぞれの範囲もまた、本開示に包含される。したがって、本明細書に記載される範囲は、記載される端点を含む、その範囲内のすべての値の簡略的な表記であるものとして理解される。例えば、１～１０の範囲は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、及び１０からなる群からの任意の数、数の組み合わせ、または部分範囲を含むものとして理解される。
値が明示的に記載されている場合、記載されている値とほぼ同じ数または量である値もまた、本開示の範囲内に含まれる点を理解されたい。ある組み合わせが開示される場合、その組み合わせの要素の部分的な組み合わせのそれぞれも具体的に開示され、本開示の範囲内に含まれる。逆に、異なる要素または要素群が個別に開示される場合、それらの組み合わせも開示される。ある開示の任意の要素が複数の選択肢を有するものとして開示される場合、各選択肢が単独で、または他の選択肢との任意の組み合わせとして除外されるその開示の例もまた、本明細書に開示される。つまり、ある開示の複数の要素がそのような除外を有することができ、そのような除外を有する要素のすべての組み合わせが本明細書に開示される。
ヌクレオチドは、それらの広く認められている１文字の略号で呼称する。特に断らない限り、ヌクレオチド配列は５’から３’の方向に左から右に記載する。本明細書においてヌクレオチドは、ＩＵＰＡＣ－ＩＵＢ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ Ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎにより推奨される一般的に公知のヌクレオチドの１文字記号により表記される。したがって、「ａ」はアデニンを表し、「ｃ」はシトシンを表し、「ｇ」はグアニンを表し、「ｔ」はチミンを表し、「ｕ」はウラシルを表す。
アミノ酸配列はアミノ末端からカルボキシ末端の方向に左から右に記載する。本明細書においてアミノ酸は、ＩＵＰＡＣ－ＩＵＢ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ Ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎにより推奨される、一般的に公知のアミノ酸の３文字記号または１文字記号により表記される。
「約」という用語は、本明細書では、およそ、大体、おおよそ、またはその範囲内の意味で使用される。「約」なる用語が数値範囲とともに使用される場合、記載される数値よりも上及び下の境界値を広げることによって、その範囲を修飾する。一般に、「約」という用語は、例えば、上または下に１０パーセント（より高いまたはより低い）の変動で、明示される値の上及び下に数値を修正することができる。
本明細書で使用する場合、「アデノ随伴ウイルス」（ＡＡＶ）なる用語には、これらに限定されるものではないが、ＡＡＶタイプ１、ＡＡＶタイプ２、ＡＡＶタイプ３（タイプ３Ａ及び３Ｂを含む）、ＡＡＶタイプ４、ＡＡＶタイプ５、ＡＡＶタイプ６、ＡＡＶタイプ７、ＡＡＶタイプ８、ＡＡＶタイプ９、ＡＡＶタイプ１０、ＡＡＶタイプ１１、ＡＡＶタイプ１２、ＡＡＶタイプ１３、ＡＡＶｒｈ．７４、ヘビＡＡＶ、トリＡＡＶ、ウシＡＡＶ、イヌＡＡＶ、ウマＡＡＶ、ヒツジＡＡＶ、ヤギＡＡＶ、エビＡＡＶ、Ｇａｏ ｅｔ ａｌ．（Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７８：６３８１（２００４））及びＭｏｒｉｓ ｅｔ ａｌ．（Ｖｉｒｏｌ．３３：３７５（２００４））に開示されるＡＡＶ血清型及び系統群、ならびに現在知られているかもしくは今後発見される他の任意のＡＡＶが含まれる（例えば、ＦＩＥＬＤＳ ｅｔ ａｌ．ＶＩＲＯＬＯＧＹ，ｖｏｌｕｍｅ ２，ｃｈａｐｔｅｒ ６９（４ｔｈ ｅｄ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ－Ｒａｖｅｎ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ）を参照）。いくつかの態様では、「ＡＡＶ」には、既知のＡＡＶの誘導体が含まれる。いくつかの態様では、「ＡＡＶ」には、改変された、または人工ＡＡＶが含まれる。
「投与」、「投与すること」なる用語、及びその文法的変化形は、本開示のｍｉＲＮＡ阻害剤などの組成物を、薬学的に許容される経路により対象に導入することを指す。本開示のｍｉＲＮＡ阻害剤を含むミセルなどの組成物の対象への導入は、腫瘍内、経口、肺、鼻腔内、非経口（静脈内、動脈内、筋肉内、腹腔内、もしくは皮下）、直腸、リンパ内、髄腔内、眼周または局所を含む任意の好適な経路によるものである。投与は、自己投与及び他者による投与を含む。適当な投与経路によって、組成物または薬剤はその目的とする機能を実行することができる。例えば、適当な経路が静脈内である場合、組成物は、組成物または薬剤を対象の静脈内に導入することによって投与される。
本明細書で使用する場合、「～に関連した」という用語は、２つ以上の実体または性質間の密接な関係性のことを指す。例えば、本開示によって治療することが可能な疾患または状態を記述するために用いられる場合（例えば、ＳＩＲＴ１タンパク質及び／またはＳＩＲＴ１遺伝子の異常なレベルに関連した疾患または状態）、「～に関連した」という用語は、対象がタンパク質及び／または遺伝子の異常な発現を示す場合に対象がその疾患または状態を罹患している可能性が高いことを指す。いくつかの態様では、タンパク質及び／または遺伝子の異常な発現は、疾患または状態を引き起こす。いくつかの態様では、異常な発現は疾患または状態を必ずしも引き起こさないが相関している。対象が、疾患または状態に関連したタンパク質及び／または遺伝子の異常な発現を示すかどうかを判定するために使用することができる適当な方法の非限定的な例を、本開示の他の箇所に示す。
本明細書で使用する場合、関心対象の１つ以上の値に適用される「ほぼ」という用語は、明示される参照値と同程度である値を指す。ある特定の態様では、「ほぼ」という用語は、特に明記しない限り、または他のことが文脈から明らかでない限り、明示される参照値の両方向に（数を超えるか、またはそれ未満の）１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、またはそれ以下の範囲内の値の範囲を指す（かかる数がとり得る値の１００％を超える場合を除く）。
本明細書で使用する場合、「保存された」という用語は、比較されている２つ以上の配列の同じ位置において不変に見出されるものである、それぞれポリヌクレオチド配列またはポリペプチド配列のヌクレオチドまたはアミノ酸残基を指す。相対的に保存されているヌクレオチドまたはアミノ酸は、配列の他の部分で出現するヌクレオチドまたはアミノ酸と比べてより関連する配列の間で保存されているものである。
いくつかの態様では、２つ以上の配列は、それらが互いに１００％同一である場合、「完全に保存されている」または「同一である」と言われる。いくつかの態様では、２つ以上の配列は、それらが互いに少なくとも７０％同一であるか、少なくとも８０％同一であるか、少なくとも９０％同一であるか、または少なくとも９５％同一である場合、「高度に保存されている」と言われる。いくつかの態様において、２つ以上の配列は、互いに約７０％同一である、約８０％同一である、約９０％同一である、約９５％、約９８％、または約９９％同一である場合、「高度に保存された」と言われる。いくつかの態様では、２つ以上の配列は、それらが互いに少なくとも３０％同一であるか、少なくとも４０％同一であるか、少なくとも５０％同一であるか、少なくとも６０％同一であるか、少なくとも７０％同一であるか、少なくとも８０％同一であるか、少なくとも９０％同一であるか、または少なくとも９５％同一である場合、「保存されている」と言われる。いくつかの態様では、２つ以上の配列は、それらが互いに約３０％同一であるか、約４０％同一であるか、約５０％同一であるか、約６０％同一であるか、約７０％同一であるか、約８０％同一であるか、約９０％同一であるか、約９５％同一であるか、約９８％同一であるか、または約９９％同一である場合、「保存されている」と言われる。配列の保存は、ポリヌクレオチドまたはポリペプチドの全長に適用することができ、または部分、領域、もしくはそれらの特徴に適用することができる。
本明細書で使用する場合、「由来する」という用語は、特定の分子もしくは生物または情報（例えば、アミノ酸または核酸の配列）を使用して、特定の分子もしくは生物から単離されるか、製造される構成要素を指す。例えば、第２の核酸配列に由来する核酸配列は、第２の核酸配列のヌクレオチド配列と同一であるか、または実質的に類似するヌクレオチド配列を含み得る。ヌクレオチドまたはポリペプチドの場合、派生した種は、例えば、自然に生じる変異誘発、人為的定方向突然変異誘発、または人為的ランダム変異誘発により得られ得る。ヌクレオチドまたはポリペプチドを派生させるために使用される変異誘発は、意図的に定方向、もしくは意図的にランダムであるか、または各々の組み合わせである。最初のものに由来する異なるヌクレオチドまたはポリペプチドを作製するためのヌクレオチドまたはポリペプチドの変異誘発は、ランダム事象（例えば、ポリメラーゼの不忠実さにより引き起こされる）であり得、派生したヌクレオチドまたはポリペプチドの同定は、例えば、本明細書において述べられる適切なスクリーニング法によりなされ得る。一部の態様では、第２のヌクレオチドまたはアミノ酸配列に由来するヌクレオチドまたはアミノ酸配列は、それぞれ第２のヌクレオチドまたはアミノ酸配列に対する少なくとも約５０％、少なくとも約５１％、少なくとも約５２％、少なくとも約５３％、少なくとも約５４％、少なくとも約５５％、少なくとも約５６％、少なくとも約５７％、少なくとも約５８％、少なくとも約５９％、少なくとも約６０％、少なくとも約６１％、少なくとも約６２％、少なくとも約６３％、少なくとも約６４％、少なくとも約６５％、少なくとも約６６％、少なくとも約６７％、少なくとも約６８％、少なくとも約６９％、少なくとも約７０％、少なくとも約７１％、少なくとも約７２％、少なくとも約７３％、少なくとも約７４％、少なくとも約７５％、少なくとも約７６％、少なくとも約７７％、少なくとも約７８％、少なくとも約７９％、少なくとも約８０％、少なくとも約８１％、少なくとも約８２％、少なくとも約８３％、少なくとも約８４％、少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％の配列同一性を有し、ここで、第１のヌクレオチドまたはアミノ酸配列は、第２のヌクレオチドまたはアミノ酸配列の生物活性を保持する。
本明細書で使用する場合、「コーディング領域」または「コーディング配列」とは、アミノ酸に翻訳可能なコドンからなるポリヌクレオチドの部分である。「終止コドン」（ＴＡＧ、ＴＧＡ、またはＴＡＡ）は通常はアミノ酸に翻訳されないがコーディング領域の一部とみなすことができる。ただし、すべてのフランキング配列、例えば、プロモーター、リボソーム結合部位、転写ターミネーター、イントロンなどはコーディング領域の一部ではない。コーディング領域の境界は、得られるポリペプチドのアミノ末端をコードする５’末端の開始コドンと、得られるポリペプチドのカルボキシ末端をコードする３’末端の翻訳終止コドンとによって一般的に決定される。
「相補的」及び「相補性」という用語は、ワトソン・クリック型塩基対形成則により互いに関連する２つ以上のオリゴマー（すなわち、それぞれが核酸塩基配列を含む）、またはオリゴマーと標的遺伝子との間を指す。例えば、核酸塩基配列「Ｔ－Ｇ－Ａ（５’→３’）」は、核酸塩基配列「Ａ－Ｃ－Ｔ（３’→５’）」に相補的である。相補性は「部分的」であってよく、その場合、所与の核酸塩基配列の核酸塩基のすべてより少ないものが塩基対形成則に従って他の核酸塩基配列と一致している。例えば、いくつかの態様では、所与の核酸塩基配列と他の核酸塩基配列との間の相補性は、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、または約９５％であり得る。したがって、特定の態様では、「相補性」という用語は、標的核酸配列（例えば、ｍｉＲ－４８５の核酸配列）との少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の一致または相補性を指す。または例のような、「完璧な」または「完全な」（１００％）相補性が、所与の核酸塩基配列と他の核酸塩基配列との間に存在し得る。いくつかの態様では、核酸塩基配列間の相補性の程度は、配列間のハイブリダイゼーションの効率及び強度に顕著な影響を与える。
「下流」という用語は、参照ヌクレオチド配列の３’側に存在するヌクレオチド配列を指す。ある特定の態様では、下流ヌクレオチド配列は、転写開始点に続く配列に関する。例えば、遺伝子の翻訳開始コドンは、転写開始部位の下流に存在する。
「賦形剤」及び「キャリア」という用語は、互換的に使用され、化合物、例えば本開示のｍｉＲＮＡ阻害剤の投与をさらに容易にするために医薬組成物に添加される不活性物質を指す。
本明細書で使用する場合、「発現」という用語は、ポリヌクレオチドが遺伝子産物、例えばＲＮＡまたはポリペプチドを生成するプロセスを指す。発現には、マイクロＲＮＡ結合部位、小分子ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、小分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、または他の任意のＲＮＡ産物へのポリヌクレオチドの転写が限定されることなく含まれる。発現には、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）へのポリヌクレオチドの転写、及びｍＲＮＡのポリペプチドへの翻訳が限定されることなく含まれる。発現によって、「遺伝子産物」が生成される。本明細書で使用する場合、遺伝子産物は、例えば遺伝子の転写によって生成されるＲＮＡなどの核酸であってよい。本明細書で使用する場合、遺伝子産物は、核酸、遺伝子の転写によって生成されるＲＮＡもしくはｍｉＲＮＡ、または転写産物から翻訳されたポリペプチドであってよい。本明細書に記載される遺伝子産物には、例えばポリアデニル化またはスプライシングなどの転写後修飾を有する核酸、または、例えばリン酸化、メチル化、グリコシル化、脂質の付加、他のタンパク質サブユニットとの会合、またはタンパク質分解開裂などの翻訳後修飾を有するポリペプチドがさらに含まれる。
本明細書で使用する場合、「相同性」という用語は、ポリマー分子間の、例えば核酸分子間の全体的関連性を指す。一般に、「相同性」という用語は、２つの分子の進化的関係を意味する。したがって、相同な２つの分子は、共通の進化的祖先を有する。本開示との関連で、相同性という用語は、同一性及び類似性の両方を包含する。
いくつかの態様では、ポリマー分子は、分子における少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または少なくとも約９９％のモノマーが同一（厳密に同じモノマー）であるか、または類似する（保存的置換）場合、互いに「相同である」とみなされる。「相同である」という用語は、必然的に少なくとも２つの配列（ポリヌクレオチド配列）間の比較を指す。
本開示との関連で、置換（それらがアミノ酸置換と称される場合でも）は、核酸レベルで行われ、すなわち、アミノ酸残基を代替アミノ酸残基で置換することは、第１のアミノ酸をコードするコドンを第２のアミノ酸をコードするコドンで置換することによって行われる。
本明細書で使用する場合、「同一性」という用語は、ポリマー分子間の、例えば、ポリヌクレオチド分子間の全体的なモノマー保存性を指す。いかなる追加の修飾語もない「同一である」という用語、例えば、「ポリヌクレオチドＡはポリヌクレオチドＢと同一である」は、ポリヌクレオチド配列同士が１００％同一（１００％の配列同一性）であることを意味する。例えば、「７０％同一である」と２つの配列を表現することは、例えば、「７０％配列同一性」を有するとそれらを表現することに等しい。
２つのポリペプチドまたはポリヌクレオチド配列の同一率（％）の計算は、例えば、最適な比較のために２つの配列をアラインメントすることにより実行され得る（例えば、最適なアラインメントのために第１及び第２のポリペプチドまたはポリヌクレオチド配列の一方または両方にギャップが導入され得、同一でない配列が比較のために無視され得る）。ある特定の態様において、比較目的のためにアライメントされた配列の長さは、参照配列の長さの少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または１００％である。次いで、対応するアミノ酸位のアミノ酸、またはポリヌクレオチドの場合は塩基が比較される。
第１の配列におけるある位置が第２の配列における対応する位置と同じアミノ酸またはヌクレオチドにより占められる場合、分子はその位置で同一である。２つの配列間の同一率（％）は、２つの配列の最適なアラインメントのために導入される必要があるギャップの数及び各ギャップの長さを考慮した、配列により共有される同一の位置の数の関数である。配列の比較及び２つの配列間の同一率（％）の決定は、数学アルゴリズムを使用して達成され得る。
異なる配列同士（例えば、ポリヌクレオチド配列）をアラインするために使用することができる適当なソフトウェアプログラムは様々なソースから入手可能である。配列同一率（％）を決定するための適当なプログラムの１つに、米国政府のＮａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ ＢＬＡＳＴウェブサイト（ｂｌａｓｔ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ）から入手可能なＢＬＡＳＴパッケージプログラムの一部であるｂｌ２ｓｅｑがある。Ｂｌ２ｓｅｑは、ＢＬＡＳＴＮまたはＢＬＡＳＴＰアルゴリズムのいずれかを使用して、２個の配列間の比較を行う。ＢＬＡＳＴＮが核酸配列を比較するために使用されるのに対して、ＢＬＡＳＴＰはアミノ酸配列を比較するために使用される。他の適当なプログラムとしては、例えば、バイオインフォマティクスプログラムパッケージＥＭＢＯＳＳの一部であり、Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（ＥＢＩ）よりｗｏｒｌｄｗｉｄｅｗｅｂ．ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／Ｔｏｏｌｓ／ｐｓａにおいてやはり入手可能なＮｅｅｄｌｅ、Ｓｔｒｅｔｃｈｅｒ、Ｗａｔｅｒ、またはＭａｔｃｈｅｒがある。
配列アライメントは、当該技術分野において公知の方法、例えば、ＭＡＦＦＴ、Ｃｌｕｓｔａｌ（ＣｌｕｓｔａｌＷ、Ｃｌｕｓｔａｌ Ｘ、またはＣｌｕｓｔａｌ Ｏｍｅｇａ）、ＭＵＳＣＬＥなどを使用して実施され得る。
ポリヌクレオチドまたはポリペプチド参照配列と整列する単一のポリヌクレオチドまたはポリペプチド標的配列内の異なる領域は、それぞれ、それら自体の配列同一率（％）を有することができる。配列同一率（％）は、１０分の１の位に四捨五入される点に留意されたい。たとえば、８０．１１、８０．１２、８０．１３、及び８０．１４は、８０．１に切り捨てられ、８０．１５、８０．１６、８０．１７、８０．１８、及び８０．１９は８０．２に切り上げられる。また、長さの値は常に整数である点に留意されたい。
ある特定の態様では、同一性パーセンテージ（％ＩＤ）または第１のアミノ酸配列（または核酸配列）の第２のアミノ酸配列（または核酸配列）に対する同一性パーセンテージ（％ＩＤ）は、％ＩＤ＝１００×（Ｙ／Ｚ）として計算され、式中、Ｙは、第１及び第２の配列のアラインメント（目視検査または特定の配列アライメントプログラムによりアラインメントされる）において完全な一致と評価されたアミノ酸残基（または核酸塩基）の数であり、Ｚは、第２の配列における残基の総数である。第１の配列の長さが第２の配列を超える場合、第１の配列の第２の配列に対する同一率（％）は、第２の配列の第１の配列に対する同一率（％）より高くなるであろう。
当業者であれば、配列同一率（％）を計算するための配列アラインメントの生成が、一次配列データによってのみ行われるバイナリー配列間比較に限定されない点は理解されよう。配列アライメントは、配列データを異種の供給源由来のデータ、例えば、構造データ（例えば、タンパク質結晶構造）、機能データ（例えば、変異の位置）、または系統学的データと統合することにより生成され得ることも理解されよう。異種データを統合してマルチプル配列アラインメントを生成する適当なプログラムとしてｗｏｒｌｄｗｉｄｅｗｅｂ．ｔｃｏｆｆｅｅ．ｏｒｇで入手できるか、あるいは例えばＥＢＩからも入手できるＴ－Ｃｏｆｆｅｅがある。配列同一率（％）を計算するために使用される最終的なアラインメントは、自動または手動のいずれかで管理され得ることも理解されよう。
本明細書で使用する場合、「単離された」、「精製された」、「抽出された」という用語、及びそれらの文法的変化形は、互換的に使用され、１つ以上の精製プロセスを受けた本開示の所望の組成物、例えば、本開示のｍｉＲＮＡ阻害剤の調製状態を指す。いくつかの態様では、本明細書で使用する場合、単離または精製は、夾雑物を含有する試料から本開示の組成物、例えば本開示のｍｉＲＮＡ阻害剤を取り出す、（例えば、画分を）部分的に取り出すプロセスである。
いくつかの態様では、単離された組成物は、検出可能な望ましくない活性を有さないか、または代替的に、望ましくない活性のレベルもしくは量が許容可能なレベルまたは量以下である。他の態様では、単離された組成物は、許容可能な量及び／または濃度及び／または活性以上の量及び／または濃度の本開示の所望の組成物を有する。他の態様では、単離された組成物は、組成物が取得される出発物質と比較して濃縮される。この濃縮は、出発物質と比較して少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、少なくとも約９９．９％、少なくとも約９９．９９％、少なくとも約９９．９９９％、少なくとも約９９．９９９９％、または９９．９９９９％超であり得る。
いくつかの態様では、単離された調製物は、残留する生物学的産物を実質的に含まない。いくつかの態様では、単離された調製物は、任意の混入している生物学的物質を１００％、少なくとも約９９％、少なくとも約９８％、少なくとも約９７％、少なくとも約９６％、少なくとも約９５％、少なくとも約９４％、少なくとも約９３％、少なくとも約９２％、少なくとも約９１％、または少なくとも約９０％含まない。残留する生物学的産物は、非生物物質（化学物質を含む）または不要な核酸、タンパク質、脂質、もしくは代謝産物を含み得る。
本明細書で使用する場合、「連結された」という用語は、共有結合または非共有結合によりそれぞれ第２のアミノ酸配列またはポリヌクレオチド配列に結合された、第１のアミノ酸配列またはポリヌクレオチド配列を指す。第１のアミノ酸またはポリヌクレオチド配列は、第２のアミノ酸またはポリヌクレオチド配列に直接的に結合もしくは並列され得るか、または代替的に介在配列が第１の配列から第２の配列までに共有結合により加わり得る。「連結された」という用語は、第１のポリヌクレオチド配列の第２のポリヌクレオチド配列への５’末端または３’末端での融合を意味するだけでなく、第２のポリヌクレオチド配列（または第１のポリヌクレオチド配列）における任意の２つのヌクレオチドへの第１のポリヌクレオチド配列（またはそれぞれ第２のポリヌクレオチド配列）全体の挿入も含む。第１のポリヌクレオチド配列は、ホスホジエステル結合またはリンカーにより第２のポリヌクレオチド配列に連結され得る。リンカーは、例えば、ポリヌクレオチドであり得る。
本明細書で使用する場合、「ｍｉＲＮＡ阻害剤」とは、ｍｉＲＮＡの発現、機能、及び／または活性を減少させるか、変化させるか、及び／または調節することができる化合物を指す。ｍｉＲＮＡ阻害剤は、標的ｍｉＲＮＡ核酸配列と少なくとも部分的に相補的であるポリヌクレオチド配列であってよく、それにより、ｍｉＲＮＡ阻害剤は標的ｍｉＲＮＡ配列とハイブリダイズする。例えば、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤は、標的ｍｉＲ－４８５核酸配列と少なくとも部分的に相補的であるヌクレオチド分子をコードしたヌクレオチド配列を含み、それにより、ｍｉＲ－４８５阻害剤はｍｉＲ－４８５配列とハイブリダイズする。さらなる態様では、ｍｉＲ－４８５配列に対するｍｉＲ－４８５のハイブリダイゼーションは、ｍｉＲ－４８５の発現、機能、及び／または活性を減少させるか、変化させるか、及び／または調節する（例えば、ハイブリダイゼーションによって、ＳＩＲＴ１タンパク質及び／またはＳＩＲＴ１遺伝子の発現の増大がもたらされる）。
「ｍｉＲＮＡ」、「ｍｉＲ」、及び「マイクロＲＮＡ」という用語は、互換的に使用され、ＲＮＡによる遺伝子調節に関与する真核生物において見出されるマイクロＲＮＡ分子を指す。この用語は、前駆体からプロセシングされた一本鎖ＲＮＡ分子を指すために使用される。いくつかの態様では、「アンチセンスオリゴマー」という用語は、本開示のマイクロＲＮＡ分子を記述するために使用することもできる。本開示に関連するｍｉＲＮＡの名称及びそれらの配列は、本明細書において提供される。マイクロＲＮＡは、不完全な塩基対形成により標的ｍＲＮＡを認識及びそれに結合し、標的ｍＲＮＡの不安定化または翻訳阻害をもたらし、これにより、標的遺伝子発現を下方調節する。逆に、ｍｉＲＮＡ結合部位を含む分子（一般にｍｉＲＮＡのシード領域に相補的な配列を含む分子）によるｍｉＲＮＡの標的化は、ｍｉＲＮＡにより誘発される翻訳阻害を低減または阻害し得、標的遺伝子の上方調節をもたらす。
「ミスマッチ」または「複数のミスマッチ」という用語は、オリゴマー核酸塩基配列（例えば、ｍｉＲ－４８５阻害剤）における塩基対形成則に従って標的核酸配列（例えば、ｍｉＲ－４８５阻害剤）と一致しない１つ以上の核酸塩基（連続しているまたは離れているにかかわらず）を指す。多くの場合、完全な相補性が所望されるが、いくつかの態様では、標的核酸配列に対する１つ以上（好ましくは６つ、５つ、４つ、３つ、２つ、または１つ）のミスマッチが生じ得る。オリゴマー内の任意の位置でのバリエーションが含まれる。ある特定の態様では、本開示のアンチセンスオリゴマー（例えば、ｍｉＲ－４８５阻害剤）は、末端近くでの核酸塩基配列のバリエーション、内部でのバリエーションを含み、存在する場合、通常、５’及び／または３’末端の約６、５、４、３、２、または１サブユニット以内に存在する。いくつかの態様では、１つ、２つ、または３つの核酸塩基が除去されてもよく、依然としてオンターゲットの結合を与えることができる。
本明細書で使用する場合、「調節する」、「修飾する」という用語、及びそれらの文法的変化形は、一般に、特定の濃度、レベル、発現、機能、または行動に適用される場合、例えば、アンタゴニストまたはアゴニストとして作用するために、特定の濃度、レベル、発現、機能、または行動を増加または減少させること、例えば、直接または間接的に、促進すること／刺激すること／上方調節することまたはそれらに干渉すること／それらを阻害すること／それらを下方調節することにより変化させる能力を指す。場合によっては、修飾因子は、ある特定の濃度、レベル、活性、または機能を、コントロールと比較して、または一般に予想される活性の平均レベルと比較して、もしくは活性のコントロールレベルと比較して増加及び／または減少させ得る。いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲＮＡ阻害剤、例えばｍｉＲ－４８５阻害剤は、ｍｉＲ－４８５の発現、機能及び／または活性を調節する（例えば減少させる、変化させる、または失わせる）ことができ、それにより、ＳＩＲＴ１タンパク質もしくは遺伝子の発現及び／または活性を調節することができる。
「核酸」、「核酸分子」、「ヌクレオチド配列」、「ポリヌクレオチド」、及びそれらの文法的変化形は、互換的に使用され、一本鎖形態または二重螺旋のいずれかでのリン酸エステルポリマー形態のリボヌクレオシド（アデノシン、グアノシン、ウリジン、またはシチジン；「ＲＮＡ分子」）もしくはデオキシリボヌクレオシド（デオキシアデノシン、デオキシグアノシン、デオキシチミジン、またはデオキシシチジン；「ＤＮＡ分子」）、またはそれらの任意のホスホエステルアナログ、例えば、ホスホロチオネート及びチオエステルを指す。一本鎖核酸配列は、一本鎖ＤＮＡ（ｓｓＤＮＡ）または一本鎖ＲＮＡ（ｓｓＲＮＡ）を指す。二本鎖ＤＮＡ－ＤＮＡ、ＤＮＡ－ＲＮＡ、及びＲＮＡ－ＲＮＡ螺旋が可能である。核酸分子及び特にＤＮＡまたはＲＮＡ分子という用語は、分子の一次及び二次構造のみを指し、任意の特定の三次形態に限定されない。したがって、この用語は、とりわけ線形または環状ＤＮＡ分子（例えば、制限フラグメント）、プラスミド、スーパーコイルＤＮＡ、及び染色体に見出される二本鎖ＤＮＡを含む。特定の二本鎖ＤＮＡ分子の構造について述べる際、配列は、ＤＮＡの非転写鎖（すなわち、ｍＲＮＡに相同な配列を有する鎖）に沿った５’～３’方向での配列のみを提供する通常の慣例に従って本明細書に記載され得る。「組換えＤＮＡ分子」は、分子生物学的操作を受けたＤＮＡ分子である。ＤＮＡとしては、限定されるものではないが、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ、プラスミドＤＮＡ、合成ＤＮＡ、及び半合成ＤＮＡが挙げられる。本開示の「核酸組成物」は、本明細書に記載されるような１つ以上の核酸を含む。
「薬学的に許容されるキャリア」、「薬学的に許容される賦形剤」という用語、及びそれらの文法的変化形は、ヒトを含む動物に使用するための米国連邦政府の規制機関により承認されたか、または米国薬局方に列挙される薬剤のいずれか、ならびに対象への組成物の投与を禁止する程度まで望ましくない生理作用の発生を引き起こさず、投与される化合物の生物活性及び特性を抑制しない任意のキャリアまたは希釈剤を包含する。医薬組成物を調製するのに有用であり、一般に安全で、非毒性であり、望ましい賦形剤及び担体が含まれる。
本明細書で使用する場合、「医薬組成物」という用語は、１種以上の他の化学成分、例えば、薬学的に許容されるキャリア及び賦形剤と混合もしくは混ぜ合わされたか、またはそれらの中に懸濁された、例えば、本開示のｍｉＲＮＡ阻害剤などの本明細書に記載される化合物のうちの１種以上を指す。医薬組成物の１つの目的は、本開示のｍｉＲＮＡ阻害剤を含む製剤の対象への投与を促進することである。
本明細書で使用する場合、「ポリヌクレオチド」という用語は、リボヌクレオチド、デオキシリボヌクレオチド、それらのアナログ、またはそれらの混合物が挙げられるヌクレオチドの任意の長さのポリマーを指す。
いくつかの態様では、この用語は分子の一次構造を指す。したがって、この用語は、三本鎖、二本鎖、及び一本鎖デオキシリボ核酸（「ＤＮＡ」）、ならびに三本鎖、二本鎖、及び一本鎖リボ核酸（「ＲＮＡ」）を含む。この用語は、例えば、アルキル化及び／またはキャッピングにより修飾されたポリヌクレオチド及び未修飾形態のポリヌクレオチドも含む。
いくつかの態様では、「ポリヌクレオチド」という用語は、ポリデオキシリボヌクレオチド（２－デオキシ－Ｄ－リボースを含有する）、スプライシングされたまたはスプライシングされていないにかかわらず、ｔＲＮＡ、ｒＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ及びｍＲＮＡを含む、ポリリボヌクレオチド（Ｄ－リボースを含有する）、プリンまたはピリミジン塩基のＮ－またはＣ－配糖体である任意の他の種類のポリヌクレオチド、ならびに非ヌクレオチド骨格を含有する他のポリマー、例えば、ポリアミド（例えば、ペプチド核酸「ＰＮＡ」）及びポリモルホリノポリマー、ならびにＤＮＡ及びＲＮＡにおいて見出されるような塩基対形成及び塩基スタッキングを可能にする配置で核酸塩基を含有することを条件とする他の配列特異的合成核酸ポリマーを含む。
本開示のいくつかの態様では、ポリヌクレオチドは、例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチドなどのオリゴヌクレオチドであってよい。いくつかの態様では、オリゴヌクレオチドは、ＲＮＡである。いくつかの態様では、ＲＮＡは、合成ＲＮＡである。いくつかの態様では、合成ＲＮＡは、少なくとも１つの非天然核酸塩基を含む。いくつかの態様では、ある特定の種類のすべての核酸塩基が、非天然核酸塩基と置き換えられている（例えば、本明細書において開示されるポリヌクレオチドにおけるすべてのウリジンが、非天然核酸塩基、例えば、５－メトキシウリジンと置き換えられ得る）。
「ポリペプチド」、「ペプチド」、及び「タンパク質」という用語は、例えばＳＩＲＴ１遺伝子によりコードされた、任意の長さのアミノ酸のポリマーを指して本明細書において互換的に使用される。ポリマーは、修飾アミノ酸を含み得る。これらの用語は、自然に修飾された、または、例えば、ジスルフィド結合形成、グリコシル化、脂質化、アセチル化、リン酸化、または標識成分との結合など、他の任意の操作もしくは改変などの介入により修飾されたアミノ酸ポリマーも包含される。例えば、１つ以上のアミノ酸アナログ（例えば、ホモシステイン、オルニチン、ｐ－アセチルフェニルアラニン、Ｄ－アミノ酸、及びクレアチンなどの非天然アミノ酸が挙げられる）、及び当該技術分野において公知の他の修飾を含有するポリペプチドも定義の範囲内に含まれる。本明細書で使用する場合、「ポリペプチド」という用語は、任意のサイズ、構造、または機能のタンパク質、ポリペプチド、及びペプチドを指す。
ポリペプチドとしては、遺伝子産物、天然に存在するポリペプチド、合成ポリペプチド、上述のもののホモログ、オーソログ、パラログ、フラグメント及び他の等価物、バリアント、ならびにアナログが挙げられる。
ポリペプチドは、単一のポリペプチドであり得るか、またはダイマー、トリマー、もしくはテトラマーなどの多分子複合体であり得る。それらは、一本鎖または多連鎖ポリペプチドも含み得る。最も一般的に、ジスルフィド結合は、多鎖ポリペプチドに見られる。ポリペプチドという用語は、１つ以上のアミノ酸残基が、対応する天然に存在するアミノ酸の人工的な化学的アナログであるようなアミノ酸ポリマーにも適用され得る。いくつかの態様では、「ペプチド」は、アミノ酸約５０個以下の長さ、例えば、アミノ酸約５個、約１０個、約１５個、約２０個、約２５個、約３０個、約３５個、約４０個、約４５個、または約５０個の長さであり得る。
本明細書で使用する場合、「予防する」、「予防すること」という用語、及びそれらの変化形は、疾患、障害、及び／または状態の発症を部分的または完全に遅延させること；特定の疾患、障害、及び／または状態の１つ以上の症状、特徴、または臨床徴候の発症を部分的または完全に遅延させること；特定の疾患、障害、及び／または状態の１つ以上の症状、特徴、または徴候の発症を部分的または完全に遅延させること；特定の疾患、障害、及び／または状態の進行を部分的または完全に遅延させること；及び／または疾患、障害、及び／または状態に関連する病理を生じるリスクを減少させることを指す。いくつかの態様では、転帰の予防は、予防的治療によって実現される。
本明細書で使用する場合、「プロモーター」及び「プロモーター配列」という用語は互換可能であり、コーディング配列または機能性ＲＮＡの発現を制御することができるＤＮＡ配列を指す。一般的に、コーディング配列は、プロモーター配列の３’側に位置する。プロモーターは、天然遺伝子にその全体が由来してもよく、または自然界にみられる異なるプロモーターに由来する異なるエレメントで構成されてもよく、またはさらには、合成ＤＮＡセグメントを含んでもよい。異なるプロモーターは、異なる組織または細胞タイプにおいて、または発生の異なる段階において、または異なる環境的もしくは生理学的条件に応じて、遺伝子の発現を誘導することができる点は、当業者には理解されよう。ほとんどの細胞タイプでほとんどの時間に遺伝子を発現させるプロモーターは一般的に「構成的プロモーター」と呼ばれる。特定の細胞タイプにおいて遺伝子を発現させるプロモーターは、一般的に「細胞特異的プロモーター」または「組織特異的プロモーター」と呼ばれる。発生または細胞分化の特定の段階で遺伝子を発現させるプロモーターは、一般的に「発生特異的プロモーター」または「細胞分化特異的プロモーター」と呼ばれる。プロモーターを誘導する薬剤、生物学的分子、化学物質、リガンド、光などによる細胞の曝露または処理後に誘導されて遺伝子を発現させるプロモーターは、一般的に「誘導性プロモーター」または「調節可能なプロモーター」と呼ばれる。多くの場合で調節配列の正確な境界は完全には定義されていないことから、異なる長さのＤＮＡフラグメントが同じプロモーター活性を有し得る点もさらに認識されよう。
プロモーター配列の境界はその３’末端では転写開始部位であり、バックグラウンドよりも高い検出可能なレベルで転写を開始するのに必要な最小の数の塩基またはエレメントを含むように上流（５’方向）に延びている。プロモーター配列内には、転写開始部位（例えばヌクレアーゼＳ１によるマッピングによって簡便に定義される）ばかりでなく、ＲＮＡポリメラーゼの結合に関与するタンパク質結合ドメイン（コンセンサス配列）も見出される。いくつかの態様では、本開示とともに使用することができるプロモーターには、組織特異的プロモーターが含まれる。
本明細書で使用する場合、「予防」とは、疾患もしくは状態の発症を予防するために、または疾患もしくは状態に関連する症状を予防または遅延させるために使用される治療的行動または行動方針を指す。
本明細書で使用する場合、「予防法」は、健康を維持し、疾患または状態の発症を予防するために、または疾患もしくは状態に関連する症状を予防もしくは遅延させるために取られる手段を指す。
本明細書で使用する場合、「遺伝子調節領域」または「調節領域」という用語は、コーディング領域の上流（５’側のノンコーディング配列）、その内部、またはその下流（３’側のノンコーディング配列）に位置して、転写、ＲＮＡプロセシング、または関連するコーディング領域の翻訳に影響を及ぼすヌクレオチド配列を指す。調節領域には、プロモーター、翻訳リーダー配列、イントロン、ポリアデニル化認識配列、ＲＮＡプロセシング部位、エフェクター結合部位、またはステムループ構造が含まれ得る。コーディング領域が真核細胞内での発現のためのものである場合、ポリアデニル化シグナル及び転写終結配列がコーディング配列の３’側に通常は配置される。
いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤（例えば、１つ以上のｍｉＲ－４８５結合部位を含むＲＮＡをコードしたポリヌクレオチド）は、１つ以上のコーディング領域と機能的に関連付けられたプロモーター及び／または他の発現（例えば、転写）制御エレメントを含むことができる。機能的関連付けにおいて、遺伝子産物のコーディング領域は、１つ以上の調節領域と、その遺伝子産物の発現が調節領域（複数可）の影響または制御下に置かれるようにして関連付けられる。例えば、コーディング領域とプロモーターとは、プロモーター機能の誘導が、そのコーディング領域によってコードされたｍＲＮＡの転写をもたらし、かつプロモーターとコーディング領域との連結の性質が、プロモーターが遺伝子産物の発現を誘導する能力を妨げず、またはＤＮＡ鋳型が転写される能力も妨げない場合に、「機能的に関連付けられている」。プロモーター以外の他の発現制御エレメント、例えば、エンハンサー、オペレーター、リプレッサー、及び転写終結シグナルを、遺伝子産物の発現を誘導するようにコーディング領域と機能的に関連付けることもできる。
本明細書で使用する場合、「類似性」という用語は、ポリマー分子間の、例えば、ポリヌクレオチド分子（例えばｍｉＲＮＡ分子）間の全体的関連性を指す。ポリマー分子同士の互いに対する類似率（％）の計算は、類似率（％）の計算が当該技術分野で理解されるところの保存的置換を考慮している点を除いて、同一率（％）の計算と同様にして行うことができる。類似率（％）は、用いられる比較尺度、すなわち、核酸同士が、例えばそれらの進化的な近さ、電荷、体積、柔軟性、極性、疎水性、芳香族性、等電点、抗原性、またはそれらの組み合わせのどれにしたがって比較されるかによって左右されることが理解される。
「対象」、「患者」、「個体」、及び「宿主」なる用語、及びそれらの変化形は、本明細書において互換的に使用され、限定されるものではないが、ヒト、家庭用動物（例えば、イヌ、ネコなど）、家畜（例えば、ウシ、ヒツジ、ブタ、ウマなど）、及び実験動物（例えば、サル、ラット、マウス、ウサギ、モルモットなど）が挙げられる、診断、処置、または治療が所望される任意の哺乳動物対象、特にヒトを指す。本明細書に記載される方法は、ヒトの治療及び獣医学的用途の両方に適用可能である。
本明細書で使用する場合、「その必要がある対象」という表現は、例えば、ＳＩＲＴ１タンパク質及び／またはＳＩＲＴ１遺伝子の発現レベルを増加させるためなど、本開示のｍｉＲＮＡ阻害剤（例えば、ｍｉＲ－４８５阻害剤）の投与から恩恵を受ける哺乳動物対象などの対象を含む。
本明細書で使用する場合、「治療有効量」という用語は、所望の治療効果、薬理学的、及び／または生理学的効果をもたらす必要がある対象において所望の治療効果、薬理学的、及び／または生理学的効果をもたらすのに十分な、本開示のｍｉＲＮＡ阻害剤を含む試薬または医薬化合物の量である。治療上有効量は、予防が治療とみなされ得る場合、「予防上有効量」であり得る。
本明細書で使用する場合、「処置する」、「処置」、または「処置すること」という用語は、例えば、疾患または状態の重症度の低減、疾患経過の期間の低減、疾患または状態（例えば、糖尿病）に関連する１つ以上の症状の改善または除去、疾患または状態を必ずしも治療しない、疾患または状態を有する対象に対する有益な効果の提供を指す。この用語には、疾患もしくは状態またはその症状の予防または防止も含まれる。
「上流」という用語は、参照ヌクレオチド配列の５’側に位置するヌクレオチド配列を指す。
「ベクター」とは、宿主細胞内に核酸をクローニング及び／または導入するための任意の担体を指す。ベクターは、結合されたセグメントの複製をもたらすように別の核酸セグメントを結合させることができるレプリコンとすることができる。「レプリコン」とは、インビボで自律的な複製ユニットとして機能する（すなわち、それ自身の制御下で複製することができる）任意の遺伝子エレメント（例えば、プラスミド、ファージ、コスミド、染色体、ウイルス）のことを指す。「ベクター」という用語には、細胞に核酸をインビトロ、エクスビボ、またはインビボで導入するためのウイルス性及び非ウイルス性の担体が含まれる。例えば、プラスミド、改変真核生物ウイルス、または改変細菌ウイルスを含む数多くのベクターが当該技術分野で知られており、使用されている。適当なベクターへのポリヌクレオチドの挿入は、適当なポリヌクレオチドフラグメントを、相補的な粘着末端を有する選択されたベクターにライゲートすることによって行うことができる。
ベクターは、ベクターを取り込んだ細胞の選択または特定を可能とする選択マーカーまたはレポーターをコードするように操作することができる。選択マーカーまたはレポーターの発現によって、ベクターに含まれる他のコーディング領域を取り込んで発現する宿主細胞を特定し、及び／または選択することが可能となる。当該技術分野において知られ、使用されている選択マーカーの例としては、アンピシリン、ストレプトマイシン、ゲンタマイシン、カナマイシン、ヒグロマイシン、ビアラホス除草剤、スルホンアミドなどに対する耐性を与える遺伝子、ならびに表現型マーカーとして用いられる遺伝子、すなわち、アントシアン調節遺伝子、イソペンテニル基転移酵素遺伝子などが挙げられる。当該技術分野において知られ、使用されているレポーターの例としては、ルシフェラーゼ（Ｌｕｃ）、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）、クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ（ＣＡＴ）、β－ガラクトシダーゼ（ＬａｃＺ）、β－グルクロニダーゼ（Ｇｕｓ）などが挙げられる。選択マーカーはレポーターとみなすこともできる。
ＩＩ．使用方法
いくつかの態様では、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤は、１つ以上の遺伝子の発現及び／または活性を調節することにより、治療効果（例えば、ＡＬＳなどの神経変性疾患に罹患した対象における）を発揮することができる。本明細書に記載されるように、いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤は、ＳＩＲＴ１、ＣＤ３６、ＰＧＣ１、ＮＲＸＮ１、ＳＴＭＮ２、ＮＲＧ１、またはこれらの組み合わせから選択される遺伝子の発現及び／または活性を調節することができる。いずれか１つの理論によって束縛されるものではないが、このような調節によって、ｍｉＲ－４８５阻害剤は、これらに限定されるものではないが、タンパク質の恒常性（例えば、ＳＩＲＴ１）、ミトコンドリアに関連するもの（例えば、ＰＧＣ１α）、神経炎症（例えば、ＣＤ３６及びＳＩＲＴ１）、神経発生／シナプス形成（例えば、ＳＩＲＴ１、ＰＧＣ１α、ＳＴＭＮ２、ＮＲＧ１、及びＮＲＸＮ１）を含む多くの生物学的プロセスに影響を及ぼし得る。
ＳＩＲＴ１の調節
いくつかの態様では、本開示は、ＳＩＲＴ１タンパク質及び／またはＳＩＲＴ１遺伝子の発現を増加させる必要のある対象においてＳＩＲＴ１タンパク質及び／またはＳＩＲＴ１遺伝子の発現を増加させる方法であって、ｍｉＲ－４８５活性を阻害する化合物（すなわち、ｍｉＲ－４８５阻害剤）を対象に投与することを含む方法を提供する。特定の態様では、ｍｉＲ－４８５活性を阻害することは、対象におけるＳＩＲＴ１タンパク質及び／またはＳＩＲＴ１遺伝子の発現を増加させる。
サーチュイン１（ＳＩＲＴ１）は、ＮＡＤ依存性脱アセチル化酵素サーチュイン１としても知られ、ヒトではＳＩＲＴ１遺伝子によってコードされているタンパク質である。ＳＩＲＴ１遺伝子はヒトの第１０番染色体上に位置している（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＮＣ＿００００１０．１１のヌクレオチド６７，８８４，６５６～６７，９１８，３９０（＋鎖の方向））。ＳＩＲＴ１遺伝子及びそのコードされたタンパク質の同義語が知られており、「調節タンパク質ＳＩＲ２ホモログ１」、「サイレント接合型情報調節因子２ホモログ１（ｓｉｌｅｎｔ ｍａｔｉｎｇ－ｔｙｐｅ ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ２ ｈｏｍｏｌｏｇ１）」、「ＳＩＲ２」、「ＳＩＲ２様タンパク質１」、「ＳＩＲ２Ｌ１」、「ＳＩＲ２α」、「１型サーチュイン」、「ｈＳＩＲＴ１」、または「ｈＳＩＲ２」が挙げられる。
ヒトＳＩＲＴ１タンパク質には、選択的スプライシングから生じる少なくとも２種類の既知のアイソフォームがある。ＳＩＲＴ１アイソフォーム１（ＵｎｉＰｒｏｔ識別番号：Ｑ９６ＥＢ６－１）は７４７個のアミノ酸からなり、カノニカル配列として選択されている（配列番号３１）。ＳＩＲＴ１アイソフォーム２（「Δエクソン８」としても知られる（ＵｎｉＰｒｏｔ識別番号：Ｑ９６ＥＢ６－２）は、５６１個のアミノ酸からなり、以下の点でカノニカル配列と異なる：４５４～６３９：欠失（配列番号３２）。下記表１に、２つのＳＩＲＴ１アイソフォームの配列を示す。


Figure 2023513189000007
本明細書で使用する場合、「ＳＩＲＴ１」なる用語は、細胞によって天然に発現されるＳＩＲＴ１のあらゆるバリアントまたはアイソフォームを含む。したがって、いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤はＳＩＲＴ１アイソフォーム１の発現を増加させることができる。いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤はＳＩＲＴ１アイソフォーム２の発現を増加させることができる。さらなる態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤はＳＩＲＴ１アイソフォーム１及びアイソフォーム２の発現を増加させることができる。特に断らない限り、本明細書では、アイソフォーム１及びアイソフォーム２の両方を併せて「ＳＩＲＴ１」と呼ぶ。
いくつかの態様において、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤は、参照（例えば、ｍｉＲ－４８５阻害剤を投与しなかった対応する対象におけるＳＩＲＴ１タンパク質及び／またはＳＩＲＴ１遺伝子の発現）と比較してＳＩＲＴ１タンパク質及び／またはＳＩＲＴ１遺伝子の発現を少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約１００％、少なくとも約１５０％、少なくとも約２００％、または少なくとも約３００％増加させる。
いずれか１つの理論に束縛されるものではないが、いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤は、ｍｉＲ－４８５、例えばｍｉＲ－４８５－３ｐの発現及び／または活性を低下させることにより、ＳＩＲＴ１タンパク質及び／またはＳＩＲＴ１遺伝子の発現を増加させる。いくつかの態様では、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤は、ｍｉＲ－４８５－３ｐの発現及び／または活性を低下させることができる。
いくつかの態様において、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤は、参照（例えば、ｍｉＲ－４８５阻害剤を投与しなかった対応する対象におけるｍｉＲ－４８５－３ｐの発現）と比較してｍｉＲ－４８５－３ｐの発現及び／または活性を少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、または少なくとも約１００％減少させる。特定の態様において、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤は、参照（例えば、ｍｉＲ－４８５阻害剤を投与しなかった対応する対象におけるｍｉＲ－４８５－５ｐの発現）と比較してｍｉＲ－４８５－５ｐの発現及び／または活性を少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、または少なくとも約１００％減少させる。さらなる態様において、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤は、参照（例えば、ｍｉＲ－４８５阻害剤を投与しなかった対応する対象におけるｍｉＲ－４８５－３ｐ及びｍｉＲ－４８５－５ｐの発現）と比較してｍｉＲ－４８５－３ｐ及びｍｉＲ－４８５－５ｐの両方の発現及び／または活性を少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、または少なくとも約１００％減少させる。いくつかの態様では、ｍｉＲ－４８５－３ｐ及び／またはｍｉＲ－４８５－５ｐの発現は、ｍｉＲ－４８５阻害剤の投与後に完全に阻害される。
本明細書に記載されるように、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤は、対象に投与された場合にＳＩＲＴ１タンパク質及び／またはＳＩＲＴ１遺伝子の発現を増加させることができる。したがって、いくつかの態様では、本開示は、ＳＩＲＴ１タンパク質及び／またはＳＩＲＴ１遺伝子の異常な（例えば、低下した）レベルに関連した疾患または状態の治療を必要とする対象において、ＳＩＲＴ１タンパク質及び／またはＳＩＲＴ１遺伝子の異常なレベルに関連した疾患または状態を治療する方法を提供する。いくつかの態様では、ＳＩＲＴ１タンパク質及び／またはＳＩＲＴ１遺伝子の異常な（例えば、低下した）レベルに関連した疾患または状態は、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）である。特定の態様において、方法は、ｍｉＲ－４８５の活性を阻害する化合物（例えば、ｍｉＲ－４８５阻害剤）を対象に投与することを含み、ｍｉＲ－４８５阻害剤はＳＩＲＴ１タンパク質及び／またはＳＩＲＴ１遺伝子のレベルを増加させる。
ＣＤ３６の調節
本明細書に記載されるように、本出願人は、ヒトＣＤ３６の３’ＵＴＲがｍｉＲ－４８５－３ｐの標的部位を含み、ｍｉＲ－４８５－３ｐの結合がＣＤ３６の発現を減少させ得ることを特定した（例えば、実施例７及び８を参照）。したがって、いくつかの態様では、本開示は、ＣＤ３６タンパク質及び／またはＣＤ３６遺伝子の発現を増加させる必要のある対象においてＣＤ３６タンパク質及び／またはＣＤ３６遺伝子の発現を増加させる方法であって、ｍｉＲ－４８５活性を阻害する化合物（すなわち、ｍｉＲ－４８５阻害剤）を対象に投与することを含む方法を提供する。特定の態様では、ｍｉＲ－４８５活性を阻害することは、対象におけるＣＤ３６タンパク質及び／またはＣＤ３６遺伝子の発現を増加させる。
クラスター決定因子３６（ＣＤ３６）は、血小板糖タンパク質４としても知られ、ヒトではＣＤ３６遺伝子によってコードされているタンパク質である。ＣＤ３６遺伝子は第７番染色体上に位置している（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＮＣ＿０００００７．１４のヌクレオチド８０，６０２，６５６～８０，６７９，２７７（＋鎖の方向））。ＣＤ３６遺伝子及びそのコードされたタンパク質の同義語が知られており、「血小板糖タンパク質ＩＶ」、「脂肪酸転移酵素」、「スカベンジャー受容体クラスＢメンバー３」、「糖タンパク質８８」、「糖タンパク質ＩＩＩｂ」、「糖タンパク質ＩＶ」、「トロンボスポンジン受容体」、「ＧＰＩＩＩＢ」、「ＰＡＳ ＩＶ」、「ＧＰ３Ｂ」、「ＧＰＩＶ」、「ＦＡＴ」、「ＧＰ４」、「ＢＤＰＬＴ１０」、「ＳＣＡＲＢ３」、「ＣＨＤＳ７」、「ＰＡＳＩＶ」、または「ＰＡＳ－４」が挙げられる。
ヒトＣＤ３６タンパク質には、選択的スプライシングから生じる少なくとも４種類の既知のアイソフォームがある。ＣＤ３６アイソフォーム１（ＵｎｉＰｒｏｔ識別番号：Ｐ１６６７１－１）は４７２個のアミノ酸からなり、カノニカル配列として選択されている（配列番号３６）。ＣＤ３６アイソフォーム２（「ｅｘ８－ｄｅｌ」としても知られる（ＵｎｉＰｒｏｔ識別番号：Ｐ１６６７１－２）は、２８８個のアミノ酸からなり、以下の点でカノニカル配列と異なる：２７４～２８８：ＳＩＹＡＶＦＥＳＤＶＮＬＫＧＩ→ＥＴＣＶＨＦＴＳＳＦＳＶＣＫＳ、及び２８９～４７２：欠失（配列番号３７）。ＣＤ３６アイソフォーム３（「ｅｘ６－７－ｄｅｌ」としても知られる（ＵｎｉＰｒｏｔ識別番号：Ｐ１６６７１－３）は、４３３個のアミノ酸からなり、以下の点でカノニカル配列と異なる：２３４～２７２：欠失（配列番号３８）。ＣＤ３６アイソフォーム４（「ｅｘ４－ｄｅｌ」としても知られる（ＵｎｉＰｒｏｔ識別番号：Ｐ１６６７１－４）は、４１２個のアミノ酸からなり、以下の点でカノニカル配列と異なる：１４４～２０３：欠失（配列番号３９）。下記表２に、４つのＣＤ３６アイソフォームの配列を示す。

Figure 2023513189000008
本明細書で使用する場合、「ＣＤ３６」なる用語は、細胞によって天然に発現されるＣＤ３６のあらゆるバリアントまたはアイソフォームを含む。したがって、いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤はＣＤ３６アイソフォーム１の発現を増加させることができる。いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤はＣＤ３６アイソフォーム２の発現を増加させることができる。いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤はＣＤ３６アイソフォーム３の発現を増加させることができる。いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤はＣＤ３６アイソフォーム４の発現を増加させることができる。さらなる態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤はＣＤ３６のアイソフォーム１とアイソフォーム２、及び／またはアイソフォーム３とアイソフォーム４、及び／またはアイソフォーム１とアイソフォーム４、及び／またはアイソフォーム２とアイソフォーム３の両方の発現を増加させることができる。いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤はすべてのＣＤ３６アイソフォームの発現を増加させることができる。特に断らない限り、アイソフォーム１、アイソフォーム２、アイソフォーム３、及びアイソフォーム４を本明細書ではまとめて「ＣＤ３６」と呼ぶ。
いくつかの態様において、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤は、参照（例えば、ｍｉＲ－４８５阻害剤を投与しなかった対応する対象におけるＣＤ３６タンパク質及び／またはＣＤ３６遺伝子の発現）と比較してＣＤ３６タンパク質及び／またはＣＤ３６遺伝子の発現を少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約１００％、少なくとも約１５０％、少なくとも約２００％、または少なくとも約３００％増加させる。
いずれか１つの理論に束縛されるものではないが、いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤は、ｍｉＲ－４８５の発現及び／または活性を低下させることにより、ＣＤ３６タンパク質及び／またはＣＤ３６遺伝子の発現を増加させる。ｍｉＲ－４８５－３ｐ及びｍｉＲ－４８５－５ｐの２つの成熟型が知られている。本明細書で開示されるように、いくつかの態様では、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤は、ｍｉＲ－４８５－３ｐの発現及び／または活性を低下させることができる。いくつかの態様では、ｍｉＲ－４８５阻害剤は、ｍｉＲ－４８５－５ｐの発現及び／または活性を低下させることができる。さらなる態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤は、ｍｉＲ－４８５－３ｐ及びｍｉＲ－４８５－５ｐの両方の発現及び／または活性を低下させることができる。
本明細書に記載されるように、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤は、対象に投与された場合にＣＤ３６タンパク質及び／またはＣＤ３６遺伝子の発現を増加させることができる。したがって、いくつかの態様では、本開示は、ＣＤ３６タンパク質及び／またはＣＤ３６遺伝子の異常な（例えば、低下した）レベルに関連した疾患または状態の治療を必要とする対象において、そのような疾患または状態を治療する方法を提供する。いくつかの態様では、ＣＤ３６タンパク質及び／またはＣＤ３６遺伝子の異常な（例えば、低下した）レベルに関連した疾患または状態は、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）である。特定の態様において、方法は、ｍｉＲ－４８５の活性を阻害する化合物（例えば、ｍｉＲ－４８５阻害剤）を対象に投与することを含み、ｍｉＲ－４８５阻害剤はＣＤ３６タンパク質及び／またはＣＤ３６遺伝子のレベルを増加させる。
ＰＧＣ１の調節
本明細書に提供される開示は、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤が、例えば、本明細書に開示される疾患または障害を罹患した対象におけるＰＧＣ－１αの発現をさらに調節することができることを実証する（例えば、実施例３を参照）。したがって、いくつかの態様では、本開示は、ＰＧＣ－１αタンパク質及び／またはＰＧＣ－１α遺伝子の発現を増加させる必要のある対象においてＰＧＣ－１αタンパク質及び／またはＰＧＣ－１α遺伝子の発現を増加させる方法であって、ｍｉＲ－４８５活性を阻害する化合物（すなわち、ｍｉＲ－４８５阻害剤）を対象に投与することを含む方法を提供する。特定の態様では、ｍｉＲ－４８５活性を阻害することは、対象におけるＰＧＣ－１αタンパク質及び／またはＰＧＣ－１α遺伝子の発現を増加させる。
ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体ガンマコアクチベーター１－アルファ（ＰＧＣ１－α）は、ＰＰＡＲＧコアクチベーター１アルファまたはリガンド作用モジュレーター６としても知られ、ヒトではＰＰＡＲＧＣ１Ａ遺伝子によってコードされているタンパク質である。ＰＧＣ－１α遺伝子はヒトの第４番染色体上に位置している（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＮＣ＿０００００４．１２のヌクレオチド２３，７９２，０２１～２４，４７２，９０５（＋鎖の方向））。ＰＧＣ－１α遺伝子及びそのコードされたタンパク質の同義語が知られており、「ＰＰＡＲＧＣ１Ａ」、「ＬＥＭ６」、「ＰＧＣ１」、「ＰＧＣ１Ａ」、「ＰＧＣ－１ｖ」、「ＰＰＡＲＧＣ１」、「ＰＧＣ１α」、または「ＰＧＣ－１（α）」が挙げられる。
ヒトＰＧＣ－１αタンパク質には、選択的スプライシングから生じる少なくとも９種類の既知のアイソフォームがある。ＰＧＣ－１αアイソフォーム１（ＵｎｉＰｒｏｔ識別番号：Ｑ９ＵＢＫ２－１）は７９８個のアミノ酸からなり、カノニカル配列として選択されている（配列番号４０）。ＰＧＣ－１αアイソフォーム２（「アイソフォームＮＴ－７ａ」としても知られる（ＵｎｉＰｒｏｔ識別番号：Ｑ９ＵＢＫ２－２）は、２７１個のアミノ酸からなり、以下の点でカノニカル配列と異なる：２６９～２７１：ＤＰＫ→ＬＦＬ；２７２～７９８：欠失（配列番号４１）。ＰＧＣ－１αアイソフォーム３（「アイソフォームＢ５」としても知られる（ＵｎｉＰｒｏｔ識別番号：Ｑ９ＵＢＫ２－３）は、８０３個のアミノ酸からなり、以下の点でカノニカル配列と異なる：１～１８：ＭＡＷＤＭＣＮＱＤＳＥＳＶＷＳＤＩＥ→ＭＤＥＴＳＰＲＬＥＥＤＷＫＫＶＬＱＲＥＡＧＷＱ（配列番号４２）。ＰＧＣ－１αアイソフォーム４（「アイソフォームＢ４」としても知られる（ＵｎｉＰｒｏｔ識別番号：Ｑ９ＵＢＫ２－４）は、７８６個のアミノ酸からなり、以下の点でカノニカル配列と異なる：１～１８：ＭＡＷＤＭＣＮＱＤＳＥＳＶＷＳＤＩＥ→ＭＤＥＧＹＦ（配列番号４３）。ＰＧＣ－１αアイソフォーム５（「アイソフォームＢ４－８ａ」としても知られる（ＵｎｉＰｒｏｔ識別番号：Ｑ９ＵＢＫ２－５）は、２８９個のアミノ酸からなり、以下の点でカノニカル配列と異なる：１～１８：ＭＡＷＤＭＣＮＱＤＳＥＳＶＷＳＤＩＥ→ＭＤＥＧＹＦ、２９４～３０１：ＬＴＰＰＴＴＰＰ→ＶＫＴＮＬＩＳＫ、３０２～７９８：欠失（配列番号４４）。ＰＧＣ－１αアイソフォーム６（「アイソフォームＢ５－ＮＴ」としても知られる（ＵｎｉＰｒｏｔ識別番号：Ｑ９ＵＢＫ２－６）は、２７６個のアミノ酸からなり、以下の点でカノニカル配列と異なる：１～１８：ＭＡＷＤＭＣＮＱＤＳＥＳＶＷＳＤＩＥ→ＭＤＥＴＳＰＲＬＥＥＤＷＫＫＶＬＱＲＥＡＧＷＱ、２６９－２７１：ＤＰＫ→ＬＦＬ、２７２－７９８：欠失（配列番号４５）。ＰＧＣ－１αアイソフォーム７（「Ｂ４－３ｅｘｔ」としても知られる（ＵｎｉＰｒｏｔ識別番号：Ｑ９ＵＢＫ２－７）は、１３８個のアミノ酸からなり、以下の点でカノニカル配列と異なる：１～１８：ＭＡＷＤＭＣＮＱＤＳＥＳＶＷＳＤＩＥ→ＭＤＥＧＹＦ、１４４～１５０：ＬＫＫＬＬＬＡ→ＶＲＴＬＰＴＶ、１５１～７９８：欠失（配列番号４６）。ＰＧＣ－１αアイソフォーム８（「アイソフォーム８ａ」としても知られる（ＵｎｉＰｒｏｔ識別番号：Ｑ９ＵＢＫ２－８）は、３０１個のアミノ酸からなり、以下の点でカノニカル配列と異なる：２９４～３０１：ＬＴＰＰＴＴＰＰ→ＶＫＴＮＬＩＳＫ、３０２～７９８：欠失（配列番号４７）。ＰＧＣ－１αアイソフォーム９（「アイソフォーム９」としても知られる（ＵｎｉＰｒｏｔ識別番号：Ｑ９ＵＢＫ２－９）は、６７１個のアミノ酸からなり、以下の点でカノニカル配列と異なる：１～１２７：欠失（配列番号４８）。下記表３に、９つのＰＧＣ－１αアイソフォームの配列を示す。
Figure 2023513189000009
Figure 2023513189000010
Figure 2023513189000011
本明細書で使用する場合、「ＰＧＣ－１α」なる用語は、細胞によって天然に発現されるＰＧＣ－１αのあらゆるバリアントまたはアイソフォームを含む。したがって、いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤は、ＰＧＣ－１αアイソフォーム１の発現を増加させることができる。いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤は、ＰＧＣ－１αアイソフォーム２の発現を増加させることができる。したがって、いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤は、ＰＧＣ－１αアイソフォーム１の発現を増加させることができる。いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤は、ＰＧＣ－１αアイソフォーム２の発現を増加させることができる。したがって、いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤は、ＰＧＣ－１αアイソフォーム３の発現を増加させることができる。いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤は、ＰＧＣ－１αアイソフォーム４の発現を増加させることができる。したがって、いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤は、ＰＧＣ－１αアイソフォーム５の発現を増加させることができる。いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤は、ＰＧＣ－１αアイソフォーム６の発現を増加させることができる。したがって、いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤は、ＰＧＣ－１αアイソフォーム７の発現を増加させることができる。いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤は、ＰＧＣ－１αアイソフォーム８の発現を増加させることができる。したがって、いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤は、ＰＧＣ－１αアイソフォーム９の発現を増加させることができる。さらなる態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤は、ＰＧＣ－１αアイソフォーム１、アイソフォーム２、アイソフォーム３、アイソフォーム４、アイソフォーム５、アイソフォーム６、アイソフォーム７、アイソフォーム８、及びアイソフォーム９の発現を増加させることができる。特に断らない限り、本明細書では、アイソフォーム１及びアイソフォーム２の両方を併せて「ＰＧＣ－１α」と呼ぶ。
いくつかの態様において、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤は、参照（例えば、ｍｉＲ－４８５阻害剤を投与しなかった対応する対象におけるＰＧＣ－１αタンパク質及び／またはＰＧＣ－１α遺伝子の発現）と比較してＰＧＣ－１αタンパク質及び／またはＰＧＣ－１α遺伝子の発現を少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約１００％、少なくとも約１５０％、少なくとも約２００％、または少なくとも約３００％増加させる。
いずれか１つの理論に束縛されるものではないが、いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤は、ｍｉＲ－４８５の発現及び／または活性を低下させることにより、ＰＧＣ－１αタンパク質及び／またはＰＧＣ－１α遺伝子の発現を増加させる。ｍｉＲ－４８５－３ｐ及びｍｉＲ－４８５－５ｐの２つの成熟型のｍｉＲ－４８５が知られている。いくつかの態様では、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤は、ｍｉＲ－４８５－３ｐの発現及び／または活性を低下させることができる。いくつかの態様では、ｍｉＲ－４８５阻害剤は、ｍｉＲ－４８５－５ｐの発現及び／または活性を低下させることができる。さらなる態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤は、ｍｉＲ－４８５－３ｐ及びｍｉＲ－４８５－５ｐの両方の発現及び／または活性を低下させることができる。
本明細書に記載されるように、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤は、対象に投与された場合にＰＧＣ－１αタンパク質及び／またはＰＧＣ－１α遺伝子の発現を増加させることができる。したがって、いくつかの態様では、本開示は、ＰＧＣ－１αタンパク質及び／またはＰＧＣ－１α遺伝子の異常な（例えば、低下した）レベルに関連した疾患または状態の治療を必要とする対象において、そのような疾患または状態を治療する方法を提供する。いくつかの態様では、ＰＧＣ－１αタンパク質及び／またはＰＧＣ－１α遺伝子の異常な（例えば、低下した）レベルに関連した疾患または状態は、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）である。特定の態様において、方法は、ｍｉＲ－４８５の活性を阻害する化合物（例えば、ｍｉＲ－４８５阻害剤）を対象に投与することを含み、ｍｉＲ－４８５阻害剤はＰＧＣ－１αタンパク質及び／またはＰＧＣ－１α遺伝子のレベルを増加させる。
ＮＲＧ１の調節
本明細書に提供される開示は、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤が、例えば、本明細書に開示される疾患または障害（例えば、ＡＬＳ）を罹患した対象におけるＮＲＧ１の発現をさらに調節することができることを実証する。したがって、いくつかの態様では、本開示は、ＮＲＧ１タンパク質及び／またはＮＲＧ１遺伝子の発現を増加させる必要のある対象においてＮＲＧ１タンパク質及び／またはＮＲＧ１遺伝子の発現を増加させる方法であって、ｍｉＲ－４８５活性を阻害する化合物（すなわち、ｍｉＲ－４８５阻害剤）を対象に投与することを含む方法を提供する。特定の態様では、ｍｉＲ－４８５活性を阻害することは、対象におけるＮＲＧ１タンパク質及び／またはＮＲＧ１遺伝子の発現を増加させる。
ニューレグリン１は、ヒトではＮＲＧ１遺伝子によってコードされる細胞接着分子である。ＮＲＧ１は、受容体のＥＧＦＲファミリーに作用するニューレグリンファミリーの４つのタンパク質のうちの１つである。ＮＲＧ１遺伝子はヒトの第８番染色体上に位置している（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＮＣ＿０００００８．１１のヌクレオチド３１，６３９，２４５～３２，７７４，０４６）。ＮＲＧ１遺伝子及びそのコードされたタンパク質の同義語が知られており、「ＧＧＦ」、「ＨＧＬ」、「ＨＲＧ」、「ＮＤＦ」、「ＡＲＩＡ」、「ＧＧＦ２」、「ＨＲＧ１」、「ＨＲＧＡ」、「ＳＭＤＦ」、「ＭＳＴ１３１」、「ＭＳＴＰ１３１」、及び「ＮＲＧ１－ＩＴ２」が挙げられる。
ヒトＮＲＧ１タンパク質には、選択的スプライシングから生じる少なくとも１１種類の既知のアイソフォームがある。ＮＲＧ１アイソフォーム１（「α」としても知られる）（ＵｎｉＰｒｏｔ識別番号：Ｑ０２２９７－１）はアミノ酸６４０個の長さであり、カノニカル配列として選択されている（配列番号９１）。ＮＲＧ１アイソフォーム２（「α１Ａ」としても知られる）（ＵｎｉＰｒｏｔ識別番号：Ｑ０２２９７－２）は、アミノ酸６４８個の長さであり、以下の点でカノニカル配列と異なる：２３４～２３４：Ｋ→ＫＨＬＧＩＥＦＩＥ（配列番号９２）。ＮＲＧ１アイソフォーム３（「α２Ｂ」としても知られる）（ＵｎｉＰｒｏｔ識別番号：Ｑ０２２９７－３）は、アミノ酸４６２個の長さであり、以下の点でカノニカル配列と異なる：（ｉ）４２４－４６２：ＹＶＳＡＭＴＴＰＡＲ．．．ＳＰＰＶＳＳＭＴＶＳ→ＨＮＬＩＡＥＬＲＲＮ．．．ＳＳＩＰＨＬＧＦＩＬ、及び（ｉｉ）４６３－６４０：欠失（配列番号９３）。ＮＲＧ１アイソフォーム４（「α３」としても知られる）（ＵｎｉＰｒｏｔ識別番号：Ｑ０２２９７－４）は、２４７個のアミノ酸からなり、以下の点でカノニカル配列と異なる：（ｉ）２３４～２４７：ＫＡＥＥＬＹＱＫＲＶＬＴＩＴ→ＳＡＱＭＳＬＬＶＩＡＡＫＴＴ、及び（ｉｉ）２４８～２６０：欠失（配列番号９４）。ＮＲＧ１アイソフォーム６（「β１」及び「β１Ａ」としても知られる）（ＵｎｉＰｒｏｔ識別番号：Ｑ０２２９７－６）は、アミノ酸６４５個の長さであり、以下の点でカノニカル配列と異なる：２１３～２３４：ＱＰＧＦＴＧＡＲＣＴＥＮＶＰＭＫＶＱＮＱＥＫ→ＰＮＥＦＴＧＤＲＣＱＮＹＶＭＡＳＦＹＫＨＬＧＩＥＦＭＥ（配列番号９５）。ＮＲＧ１アイソフォーム７（「β２」としても知られる（ＵｎｉＰｒｏｔ識別番号：Ｑ０２２９７－７）は、６４７個のアミノ酸からなり、以下の点でカノニカル配列と異なる：２１３～２３３：ＱＰＧＦＴＧＡＲＣＴＥＮＶＰＭＫＶＱＮＱＥ→ＰＮＥＦＴＧＤＲＣＱＮＹＶＭＡＳＦＹ（配列番号９６）。ＮＲＧ１アイソフォーム８（「β３」及び「ＧＧＦＨＦＢ１」としても知られる）（ＵｎｉＰｒｏｔ識別番号：Ｑ０２２９７－８）は、２４１個のアミノ酸からなり、以下の点でカノニカル配列と異なる：２１３～２４１：ＱＰＧＦＴＧＡＲＣＴＥＮＶＰＭＫＶＱＮＱＥＫＡＥＥＬＹＱＫ→ＰＮＥＦＴＧＤＲＣＱＮＹＶＭＡＳＦＹＳＴＳＴＰＦＬＳＬＰＥ、及び（ｉｉ）２４２～６４０：欠失（配列番号９７）。ＮＲＧ１アイソフォーム９（「ＧＧＦ２」及び「ＧＧＦＨＰＰ２」としても知られる）（ＵｎｉＰｒｏｔ識別番号：Ｑ０２２９７－９）は、４２２個のアミノ酸からなり、以下の点でカノニカル配列と異なる：（ｉ）１～３３：ＭＳＥＲＫＥＧＲＧＫＧＫＧＫＫＫＥＲＧＳＧＫＫＰＥＳＡＡＧＳＱＳＰ→ＭＲＷＲＲＡＰＲＲＳ．．．ＥＶＳＲＶＬＣＫＲＣ、（２）１３４～１６８：ＥＩＩＴＧＭＰＡＳＴＥＧＡＹＶＳＳＥＳＰＩＲＩＳＶＳＴＥＧＡＮＴＳＳＳ→Ａ、（３）２１３～２４１：ＱＰＧＦＴＧＡＲＣＴＥＮＶＰＭＫＶＱＮＱＥＫＡＥＥＬＹＱＫ→ＰＮＥＦＴＧＤＲＣＱＮＹＶＭＡＳＦＹＳＴＳＴＰＦＬＳＬＰＥ、及び（ｉｖ）２４２～６４０：欠失（配列番号９８Ｘ）。ＮＲＧ１アイソフォーム１０（「ＳＭＤＦ」としても知られる）（ＵｎｉＰｒｏｔ識別番号：Ｑ０２２９７－１０）は、２９６個のアミノ酸からなり、以下の点でカノニカル配列と異なる：（ｉ）１～１６６：欠失、（ｉｉ）１６７～１６７：Ｓ→ＭＥＩＹＳＰＤＭＳＥ．．．ＥＴＮＬＱＴＡＰＫＬ、（ｉｉｉ）２１３～２４１：ＱＰＧＦＴＧＡＲＣＴＥＮＶＰＭＫＶＱＮＱＥＫＡＥＥＬＹＱＫ→ＰＮＥＦＴＧＤＲＣＱＮＹＶＭＡＳＦＹＳＴＳＴＰＦＬＳＬＰＥ、及び（ｉｖ）２４２－６４０：欠失（配列番号９９）。ＮＲＧ１アイソフォーム１１（「タイプＩＶ－β１ａ」としても知られる）（ＵｎｉＰｒｏｔ識別番号：Ｑ０２２９７－１１）は、アミノ酸５９０個の長さであり、以下の点でカノニカル配列と異なる：（ｉ）１～２１：欠失、（ｉｉ）２２～３３：ＫＫＰＥＳＡＡＧＳＱＳＰ→ＭＧＫＧＲＡＧＲＶＧＴＴ、（ｉｉｉ）１３４～１６８：ＥＩＩＴＧＭＰＡＳＴＥＧＡＹＶＳＳＥＳＰＩＲＩＳＶＳＴＥＧＡＮＴＳＳＳ→Ａ、及び（ｉｖ）２１３～２３４：ＱＰＧＦＴＧＡＲＣＴＥＮＶＰＭＫＶＱＮＱＥＫ→ＰＮＥＦＴＧＤＲＣＱＮＹＶＭＡＳＦＹＫＨＬＧＩＥＦＭＥ（配列番号１００）。ＮＲＧ１アイソフォーム１２（ＵｎｉＰｒｏｔ識別番号：Ｑ０２２９７－１２）は、４２０個のアミノ酸からなり、以下の点でカノニカル配列と異なる：（ｉ）２１３～２３３：ＱＰＧＦＴＧＡＲＣＴＥＮＶＰＭＫＶＱＮＱＥ→ＰＮＥＦＴＧＤＲＣＱＮＹＶＭＡＳＦＹ、及び（ｉｉ）４２４～６４０：欠失（配列番号１０１）。
下記表４に、既知のアイソフォームを含むＮＲＧ１タンパク質のアミノ酸配列を示す。
Figure 2023513189000012
Figure 2023513189000013
Figure 2023513189000014
本明細書で使用する場合、「ＮＲＧ１」なる用語は、細胞によって天然に発現されるＮＲＧ１のあらゆるバリアントまたはアイソフォームを含む。したがって、いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤はＮＲＧ１アイソフォーム１（すなわち、カノニカル配列）の発現を増加させることができる。いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤はＮＲＧ１アイソフォーム２の発現を増加させることができる。いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤はＮＲＧ１アイソフォーム３の発現を増加させることができる。いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤はＮＲＧ１アイソフォーム４の発現を増加させることができる。いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤はＮＲＧ１アイソフォーム６の発現を増加させることができる。いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤はＮＲＧ１アイソフォーム７の発現を増加させることができる。いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤はＮＲＧ１アイソフォーム８の発現を増加させることができる。いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤はＮＲＧ１アイソフォーム９の発現を増加させることができる。いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤はＮＲＧ１アイソフォーム１０の発現を増加させることができる。いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤はＮＲＧ１アイソフォーム１１の発現を増加させることができる。いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤はＮＲＧ１アイソフォーム１２の発現を増加させることができる。さらなる態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤は、ＮＲＧ１アイソフォーム１、ＮＲＧ１アイソフォーム２、ＮＲＧ１アイソフォーム３、ＮＲＧ１アイソフォーム４、ＮＲＧ１アイソフォーム６、ＮＲＧ１アイソフォーム７、ＮＲＧ１アイソフォーム８、ＮＲＧ１アイソフォーム９、ＮＲＧ１アイソフォーム１０、ＮＲＧ１アイソフォーム１１、及びＮＲＧ１アイソフォーム１２の発現を増加させることができる。特に断らない限り、本明細書では、上記に述べたＮＲＧ１のアイソフォームをまとめて「ＮＲＧ１」と呼ぶ。
いくつかの態様において、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤は、参照（例えば、ｍｉＲ－４８５阻害剤を投与しなかった対応する対象におけるＮＲＧ１タンパク質及び／またはＮＲＧ１遺伝子の発現）と比較してＮＲＧ１タンパク質及び／またはＮＲＧ１遺伝子の発現を少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約１００％、少なくとも約１５０％、少なくとも約２００％、または少なくとも約３００％増加させる。
いずれか１つの理論に束縛されるものではないが、いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤は、ｍｉＲ－４８５、例えばｍｉＲ－４８５－３ｐの発現及び／または活性を低下させることにより、ＮＲＧ１タンパク質及び／またはＮＲＧ１遺伝子の発現を増加させる。
本明細書に記載されるように、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤は、対象に投与された場合にＮＲＧ１タンパク質及び／またはＮＲＧ１遺伝子の発現を増加させることができる。したがって、いくつかの態様では、本開示は、ＮＲＧ１タンパク質及び／またはＮＲＧ１遺伝子の異常な（例えば、低下した）レベルに関連した疾患または状態の治療を必要とする対象において、そのような疾患または状態を治療する方法を提供する。いくつかの態様では、ＮＲＧ１タンパク質及び／またはＮＲＧ１遺伝子の異常な（例えば、低下した）レベルに関連した疾患または状態は、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）である。特定の態様において、方法は、ｍｉＲ－４８５の活性を阻害する化合物（例えば、ｍｉＲ－４８５阻害剤）を対象に投与することを含み、ｍｉＲ－４８５阻害剤はＮＲＧ１タンパク質及び／またはＮＲＧ１遺伝子のレベルを増加させる。
ＳＴＭＮ２の調節
本明細書に提供される開示は、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤が、例えば、本明細書に開示される疾患または障害（例えば、ＡＬＳ）を罹患した対象におけるＳＴＭＮ２の発現をさらに調節することができることを実証する。したがって、いくつかの態様では、本開示は、ＳＴＭＮ２タンパク質及び／またはＳＴＭＮ２遺伝子の発現を増加させる必要のある対象においてＳＴＭＮ２タンパク質及び／またはＳＴＭＮ２遺伝子の発現を増加させる方法であって、ｍｉＲ－４８５活性を阻害する化合物（すなわち、ｍｉＲ－４８５阻害剤）を対象に投与することを含む方法を提供する。特定の態様では、ｍｉＲ－４８５活性を阻害することは、対象におけるＳＴＭＮ２タンパク質及び／またはＳＴＭＮ２遺伝子の発現を増加させる。
スタスミン－２は、リンタンパク質のスタスミンファミリーのメンバーであり、ヒトではＳＴＭＮ２遺伝子によってコードされている。スタスミンタンパク質は、微小管ダイナミクス及びシグナル伝達において機能している。コードされたタンパク質は、神経細胞の成長における調節的な役割を担っており、骨形成にも関与していると考えられている。ＳＴＭＮ２遺伝子はヒトの第８番染色体上に位置している（ＮＣ＿０００００８．１１のヌクレオチド７９，６１１，１１７～７９，６６６，１６２）。ＳＴＭＮ２遺伝子及びそのコードされたタンパク質の同義語が知られており、「ＳＣＧ１０」及び「ＳＣＧＮ１０」が挙げられる。
ヒトＳＴＭＮ２タンパク質には、選択的スプライシングから生じる少なくとも２種類の既知のアイソフォームがある。ＳＴＭＮ２アイソフォーム１（ＵｎｉＰｒｏｔ識別番号：Ｑ９３０４５－１）はアミノ酸１７９個の長さであり、カノニカル配列として選択されている（配列番号１０２）。ＳＴＭＮ２アイソフォーム２（ＵｎｉＰｒｏｔ識別番号：Ｑ９３０４５－２）は、アミノ酸１８７個の長さであり、以下の点でカノニカル配列と異なる：１６１～１７９：ＥＲＨＡＡＥＶＲＲＮＫＥＬＱＶＥＬＳＧ→ＬＶＫＦＩＳＳＥＬＫＥＳＩＥＳＱＦＬＥＬＱＲＥＧＥＫＱ（配列番号１０３）。
下記表５に、ＳＴＭＮ２タンパク質のアミノ酸配列を示す。
Figure 2023513189000015
本明細書で使用する場合、「ＳＴＭＮ２」なる用語は、細胞によって天然に発現されるＳＴＭＮ２のあらゆるバリアントまたはアイソフォームを含む。したがって、いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤はＳＴＭＮ２アイソフォーム１（すなわち、カノニカル配列）の発現を増加させることができる。いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤はＳＴＭＮ２アイソフォーム２の発現を増加させることができる。いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤はＳＴＭＮ２アイソフォーム１及びＳＴＭＮ２アイソフォーム２の発現を増加させることができる。特に断らない限り、本明細書では、上記に述べたＳＴＭＮ２のアイソフォームをまとめて「ＳＴＭＮ２」と呼ぶ。
いくつかの態様において、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤は、参照（例えば、ｍｉＲ－４８５阻害剤を投与しなかった対応する対象におけるＳＴＭＮ２タンパク質及び／またはＳＴＭＮ２遺伝子の発現）と比較してＳＴＭＮ２タンパク質及び／またはＳＴＭＮ２遺伝子の発現を少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約１００％、少なくとも約１５０％、少なくとも約２００％、または少なくとも約３００％増加させる。
いずれか１つの理論に束縛されるものではないが、いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤は、ｍｉＲ－４８５、例えばｍｉＲ－４８５－３ｐの発現及び／または活性を低下させることにより、ＳＴＭＮ２タンパク質及び／またはＳＴＭＮ２遺伝子の発現を増加させる。
本明細書に記載されるように、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤は、対象に投与された場合にＳＴＭＮ２タンパク質及び／またはＳＴＭＮ２遺伝子の発現を増加させることができる。したがって、いくつかの態様では、本開示は、ＳＴＭＮ２タンパク質及び／またはＳＴＭＮ２遺伝子の異常な（例えば、低下した）レベルに関連した疾患または状態の治療を必要とする対象において、そのような疾患または状態を治療する方法を提供する。いくつかの態様では、ＳＴＭＮ２タンパク質及び／またはＳＴＭＮ２遺伝子の異常な（例えば、低下した）レベルに関連した疾患または状態は、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）である。特定の態様において、方法は、ｍｉＲ－４８５の活性を阻害する化合物（例えば、ｍｉＲ－４８５阻害剤）を対象に投与することを含み、ｍｉＲ－４８５阻害剤はＳＴＭＮ２タンパク質及び／またはＳＴＭＮ２遺伝子のレベルを増加させる。
ＮＲＸＮ１の調節
本明細書に提供される開示は、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤が、例えば、本明細書に開示される疾患または障害（例えば、ＡＬＳを参照）を罹患した対象におけるＮＲＸＮ１の発現をさらに調節することができることを実証する。したがって、いくつかの態様では、本開示は、ＮＲＸＮ１タンパク質及び／またはＮＲＸＮ１遺伝子の発現を増加させる必要のある対象においてＮＲＸＮ１タンパク質及び／またはＮＲＸＮ１遺伝子の発現を増加させる方法であって、ｍｉＲ－４８５活性を阻害する化合物（すなわち、ｍｉＲ－４８５阻害剤）を対象に投与することを含む方法を提供する。特定の態様では、ｍｉＲ－４８５活性を阻害することは、対象におけるＮＲＸＮ１タンパク質及び／またはＮＲＸＮ１遺伝子の発現を増加させる。
ニューレキシン１は、タンパク質のニューレキシンファミリーのメンバーであり、ヒトではＮＲＸＮ１遺伝子によってコードされている。ニューレキシンは、脊椎動物の神経系で細胞接着分子及び受容体として機能するタンパク質のファミリーである。ニューレキシンは、神経伝達物質が適切に放出されるように、カルシウムチャネルと小胞のエクソサイトーシスとのカップリング機構を介した伝達に関与している。ＮＲＸＮ１遺伝子はヒトの第２番染色体上に位置している（ＮＣ＿０００００２．１２のヌクレオチド４９，９１８，５０３～５１，０３２，５３６）。ＮＲＸＮ１遺伝子及びそのコードされたタンパク質の同義語が知られており、「ニューレキシン１α」、「ニューレキシン１β」、「ＰＴＨＳＬ２」、「ＳＣＺＤ１７」、及び「Ｈｓ．２２９９８」が挙げられる。
ヒトＮＲＸＮ１タンパク質には、ＮＲＸＮ１－α及びＮＲＸＮ１－βという、選択的プロモーターの使用から生じる２つの主要なアイソフォームがある。
ＮＲＸＮ１－αタンパク質では、選択的スプライシングから生じる少なくとも４つの既知のアイソフォームが存在する。ＮＲＸＮ１アイソフォーム１ａ（ＵｎｉＰｒｏｔ識別番号：Ｑ９ＵＬＢ１－１）は、アミノ酸１４７７個の長さであり、カノニカル配列として選択されている（配列番号１０４）。ＮＲＸＮ１アイソフォーム２ａ（ＵｎｉＰｒｏｔ識別番号：Ｑ９ＵＬＢ１－２）は、１４９６個のアミノ酸からなり、以下の点でカノニカル配列と異なる：（ｉ）３７９～３８６：欠失、（ｉｉ）１２３９～１２３９：Ａ→ＡＧＮＮＤＮＥＲＬＡＩＡＲＱＲＩＰＹＲＬＧＲＶＶＤＥＷＬＬＤＫ、及び（ｉｉｉ）１３７３～１３７５：欠失（配列番号１０５）。ＮＲＸＮ１アイソフォーム３ａ（ＵｎｉＰｒｏｔ識別番号：Ｑ９ＵＬＢ１－３）は、アミノ酸１，５４７個の長さであり、以下の点でカノニカル配列と異なる：（ｉ）２５８～２５８：→ＥＩＫＦＧＬＱＣＶＬＰＶＬＬＨＤＮＤＱＧＫＹＣＣＩＮＴＡＫＰＬＴＥＫ、（ｉｉ）３８６～３８６：Ｍ→ＭＶＮＫＬＨＣＳ、及び（ｉｉｉ）１２３９～１２３９：Ａ→ＡＧＮＮＤＮＥＲＬＡＩＡＲＱＲＩＰＹＲＬＧＲＶＶＤＥＷＬＬＤＫ（配列番号１０６）。ＮＲＸＮ１アイソフォーム４（ＵｎｉＰｒｏｔ識別番号：Ｑ９ＵＬＢ１－４）は、アミノ酸１３９個の長さであり、以下の点でカノニカル配列と異なる：（ｉ）１～１３３５：欠失、（ｉｉ）１３３６～１３４４：ＧＫＰＰＴＫＥＰＩ→ＭＤＭＲＷＨＣＥＮ、及び（ｉｉｉ）１３７３～１３７５：欠失（配列番号１０７）。
ＮＲＸＮ１－βタンパク質では、選択的スプライシングから生じる少なくとも２つの既知のアイソフォームが存在する。ＮＲＸＮ１アイソフォーム１ｂ（ＵｎｉＰｒｏｔ識別番号：Ｐ５８４００－２）は、アミノ酸４７２個の長さであり、カノニカル配列として選択されている（配列番号１０８）。ＮＲＸＮ１アイソフォーム３ｂ（ＵｎｉＰｒｏｔ識別番号：Ｐ５８４００－１）は、４４２個のアミノ酸からなり、以下の点でカノニカル配列と異なる：２０５～２３４：欠失（配列番号１０９）。
下記表６及び７に、ＮＲＸＮ１タンパク質のアミノ酸配列を示す。


Figure 2023513189000016
Figure 2023513189000017
Figure 2023513189000018
Figure 2023513189000019
Figure 2023513189000020
本明細書で使用する場合、「ＮＲＸＮ１」なる用語は、細胞によって天然に発現されるＮＲＸＮ１のあらゆるバリアントまたはアイソフォームを含む。したがって、いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤は、ＮＲＸＮ１アイソフォーム１ａの発現を増加させることができる。いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤は、ＮＲＸＮ１アイソフォーム２ａの発現を増加させることができる。いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤は、ＮＲＸＮ１アイソフォーム３ａの発現を増加させることができる。いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤は、ＮＲＸＮ１アイソフォーム４ａの発現を増加させることができる。いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤は、ＮＲＸＮ１アイソフォーム１ｂの発現を増加させることができる。いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤は、ＮＲＸＮ１アイソフォーム３ｂの発現を増加させることができる。いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤は、ＮＲＸＮ１アイソフォーム１ａ、ＮＲＸＮ１アイソフォーム２ａ、ＮＲＸＮ１アイソフォーム３ａ、ＮＲＸＮ１アイソフォーム４ａ、ＮＲＸＮ１アイソフォーム１ｂ、ＮＲＸＮ１アイソフォーム３ｂの発現を増加させることができる。特に断らない限り、本明細書では、上記に述べたＮＲＸＮ１のアイソフォームをまとめて「ＮＲＸＮ１」と呼ぶ。
いくつかの態様において、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤は、参照（例えば、ｍｉＲ－４８５阻害剤を投与しなかった対応する対象におけるＮＲＸＮ１タンパク質及び／またはＮＲＸＮ１遺伝子の発現）と比較してＮＲＸＮ１タンパク質及び／またはＮＲＸＮ１遺伝子の発現を少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約１００％、少なくとも約１５０％、少なくとも約２００％、または少なくとも約３００％増加させる。
いずれか１つの理論に束縛されるものではないが、いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤は、ｍｉＲ－４８５、例えばｍｉＲ－４８５－３ｐの発現及び／または活性を低下させることにより、ＮＲＸＮ１タンパク質及び／またはＮＲＸＮ１遺伝子の発現を増加させる。
本明細書に記載されるように、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤は、対象に投与された場合にＮＲＸＮ１タンパク質及び／またはＮＲＸＮ１遺伝子の発現を増加させることができる。したがって、いくつかの態様では、本開示は、ＮＲＸＮ１タンパク質及び／またはＮＲＸＮ１遺伝子の異常な（例えば、低下した）レベルに関連した疾患または状態の治療を必要とする対象において、そのような疾患または状態を治療する方法を提供する。いくつかの態様では、ＮＲＸＮ１タンパク質及び／またはＮＲＸＮ１遺伝子の異常な（例えば、低下した）レベルに関連した疾患または状態は、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）である。特定の態様において、方法は、ｍｉＲ－４８５の活性を阻害する化合物（例えば、ｍｉＲ－４８５阻害剤）を対象に投与することを含み、ｍｉＲ－４８５阻害剤はＮＲＸＮ１タンパク質及び／またはＮＲＸＮ１遺伝子のレベルを増加させる。
本開示から明らかとなるように、ＳＩＲＴ１タンパク質及び／またはＳＩＲＴ１遺伝子の異常な（例えば、例えば低下した）レベルに関連したあらゆる疾患または状態を本開示によって治療することができる。いくつかの態様では、本開示は、ＣＤ３６タンパク質及び／またはＣＤ３６遺伝子の異常な（例えば、低下した）レベルに関連した疾患または状態の治療に有用となりうる。いくつかの態様では、本開示は、ＰＧＣ－１αタンパク質及び／またはＰＧＣ－１α遺伝子の異常な（例えば、低下した）レベルに関連した疾患または障害を治療するために使用することもできる。いくつかの態様では、本開示は、ＮＲＧ１タンパク質及び／またはＮＲＧ１遺伝子の異常な（例えば、低下した）レベルに関連した疾患または障害を治療するために使用することもできる。いくつかの態様では、本開示は、ＳＴＭＮ２タンパク質及び／またはＳＴＭＮ２遺伝子の異常な（例えば、低下した）レベルに関連した疾患または障害を治療するために使用することもできる。いくつかの態様では、本開示は、ＮＲＸＮ１タンパク質及び／またはＮＲＸＮ１遺伝子の異常な（例えば、低下した）レベルに関連した疾患または障害を治療するために使用することもできる。
いくつかの態様では、そのようなタンパク質及び／または遺伝子の異常な（例えば、低下した）レベルに関連した疾患または状態は、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）である。いくつかの態様では、そのようなタンパク質及び／または遺伝子の異常な（例えば、低下した）レベルに関連した疾患または状態は、以下、すなわち、アルツハイマー病、パーキンソン病、自閉症スペクトラム障害、精神遅滞、てんかん発作、脳卒中、脊髄損傷、またはこれらの任意の組み合わせから選択される疾患または状態ではない。
いくつかの態様では、本開示によって治療することが可能なＡＬＳは、孤発性ＡＬＳ、家族性ＡＬＳ、またはその両方を含む。本明細書で使用する場合、「孤発性」ＡＬＳという用語は、ＡＬＳ発症の家族歴と関連のないＡＬＳを指す。ＡＬＳ診断のおよそ約９０％以上が孤発性ＡＬＳである。本明細書で使用する場合、「家族性」ＡＬＳという用語は、家族内で複数の発症があり、疾患の遺伝的要素を示唆するＡＬＳを指す。いくつかの態様では、本開示によって治療することが可能なＡＬＳは、原発性側索硬化症（ＰＬＳ）である。ＰＬＳは、腕及び脚の上位運動ニューロンを冒し得る。しかしながら、顕性のＰＬＳを有する人の７５％超が、症状の発症の４年以内に下位運動ニューロン徴候を示し、これはその時点までＰＬＥの確定診断を下すことができないことを意味する。ＰＬＳは、進行が遅く、機能低下が比較的少なく、呼吸能力に影響せず、体重減少がそれほど深刻ではないことから、古典型ＡＬＳよりも良好な予後を有する。いくつかの態様では、ＡＬＳは、進行性筋萎縮症（ＰＭＡ）を含む。ＰＭＡは、腕及び脚の下位運動ニューロンを冒し得る。ＰＭＡは、古典型ＡＬＳよりも平均して長い生存期間に関連しているものの、時間とともに他の脊髄領域へと進行し、最終的には呼吸不全及び死亡につながる。ＰＭＡの後期に上位運動ニューロン徴候が発現する場合があるが、その場合、診断は古典的ＡＬＳに変更される場合がある。
いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤を投与することは、ＳＩＲＴ１タンパク質及び／またはＳＩＲＴ１遺伝子の異常な（例えば、低下した）レベルに関連する疾患または状態の１つ以上の症状を改善することができる。いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤を投与することは、ＣＤ３６タンパク質及び／またはＣＤ３６遺伝子の異常な（例えば、低下した）レベルに関連する疾患または状態の１つ以上の症状を改善することができる。いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤を投与することは、ＰＧＣ－１αタンパク質及び／またはＰＧＣ－１α遺伝子の異常な（例えば、低下した）レベルに関連する疾患または状態の１つ以上の症状を改善することができる。いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤を投与することは、ＮＲＧ１タンパク質及び／またはＮＲＧ１遺伝子の異常な（例えば、低下した）レベルに関連する疾患または状態の１つ以上の症状を改善することができる。いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤を投与することは、ＳＴＭＮ２タンパク質及び／またはＳＴＭＮ２遺伝子の異常な（例えば、低下した）レベルに関連する疾患または状態の１つ以上の症状を改善することができる。いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤を投与することは、ＮＲＸＮ１タンパク質及び／またはＮＲＸＮ１遺伝子の異常な（例えば、低下した）レベルに関連する疾患または状態の１つ以上の症状を改善することができる。そのような症状の非限定的な例を以下に記載する。
本明細書に記載されるように、ＳＩＲＴ１、ＣＤ３６、ＰＧＣ１－α、ＮＲＧ１、ＳＴＭＮ２、及び／またはＮＲＸＮ１の異常な発現に関連した疾患または障害として、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）がある。したがって、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤は、ＡＬＳに関連した１つ以上の症状を改善することができる。症状の非限定的な例としては、歩行または通常の日常活動を行うことの困難；つまずき及び転倒；四肢の虚弱；不明瞭な発語；嚥下障害；筋痙攣及び攣縮；不相応な号泣、笑い、または欠伸；認知症；認知能力及び行動変化；ならびにこれらの組み合わせが挙げられる。
いくつかの態様では、対象にｍｉＲ－４８５阻害剤を投与することは、対象（例えば、ＡＬＳに罹患した）の１つ以上の四肢の物理的強さを増加させることができる。例えば、いくつかの態様では、対象が長時間にわたって物体（例えば、ハングワイヤまたはポール）につかまる能力が、参照（例えば、投与前の対象の対応する値）と比較して増加する。いくつかの態様では、対象が物体（例えば、ハングワイヤまたはポール）につかまることができる時間の長さは、参照（例えば、ｍｉＲ－４８５阻害剤を投与しなかった対象）と比較して、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約１００％、少なくとも約１５０％、少なくとも約２００％、少なくとも約２５０％、または少なくとも約３００％以上、増加する。
いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤を対象に投与することは、参照（例えば、ｍｉＲ－４８５阻害剤を投与しなかった対応する個人における疾患発症）と比較して疾患の発症を遅延させることができる。いくつかの態様では、ＡＬＳの疾患の発症は、参照（例えば、ｍｉＲ－４８５阻害剤を投与しなかった対象）と比較して、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約１００％、少なくとも約１５０％、少なくとも約２００％、少なくとも約２５０％、または少なくとも約３００％以上、遅延される。いくつかの態様では、ＡＬＳの疾患の発症は、参照（例えば、ｍｉＲ－４８５阻害剤を投与しなかった対象）と比較して、少なくとも約１０日、少なくとも約２０日、少なくとも約３０日、少なくとも約４０日、少なくとも約５０日、少なくとも約６０日、少なくとも約７０日、少なくとも約８０日、少なくとも約９０日、少なくとも約１００日、少なくとも約１５０日、少なくとも約２００日、少なくとも約２５０日、少なくとも約１年、少なくとも約２年、少なくとも約３年、少なくとも約４年、または少なくとも約５年以上、遅延される。
いくつかの態様では、対象にｍｉＲ－４８５阻害剤を投与することは、対象（例えば、ＡＬＳに罹患している）における１つ以上の認知機能症状を、参照（例えば、投与前の対象における認知機能症状）と比較して改善する。
いくつかの態様では、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤を投与することは、対象（例えば、つまずき、手で物を持つのが難しい、不明瞭な発話、嚥下障害、筋痙攣、姿勢悪化、頭をもちあげているのが難しい、筋硬直、またはこれらの任意の組み合わせ）におけるＡＬＳの１つ以上の症状の発症、または発症のリスクを、参照（例えば、ｍｉＲ－４８５阻害剤を投与しなかった対象）と比較して、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または約１００％低下させる。
いくつかの態様では、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤を投与することは、対象（例えば、ＡＬＳに罹患している）におけるスカベンジャー細胞（例えば、グリア細胞）の食作用活性を（例えば、ＣＤ３６タンパク質及び／またはＣＤ３６遺伝子の発現を増加させることにより）、参照（例えば、投与前の対象における食作用活性）と比較して増加させる。いくつかの態様では、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤を投与することは、対象（例えば、ＡＬＳに罹患している）における神経細胞の樹状突起スパイン密度を、参照（例えば、ｍｉＲ－４８５阻害剤を投与しなかった対象）と比較して、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約１００％、少なくとも約１５０％、少なくとも約２００％、少なくとも約２５０％、または約３００％以上、増加させる。
いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤を投与することは、対象（例えば、ＡＬＳに罹患している）における神経発生を（例えば、ＣＤ３６タンパク質及び／またはＣＤ３６遺伝子の発現を増加させることにより）、参照（例えば、投与前の対象における神経発生）と比較して増加させる。本明細書で使用する場合、「神経発生」という用語は、神経細胞が形成されるプロセスを指す。神経発生は、神経幹細胞及び前駆細胞の増殖、これらの細胞の新たな神経細胞タイプへの分化、ならびに新しい細胞の遊走及び生存を包含する。この用語は、主として出生前及び周産期の発生の正常な発生中に生じる神経発生、ならびに疾患、傷害、または治療介入後に生じる細胞再生を含むものとする。成人の神経発生は、「神経」または「神経系」発生とも呼ばれる。いくつかの態様では、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤を投与することは、対象（例えば、ＡＬＳに罹患している）における神経発生を、参照（例えば、ｍｉＲ－４８５阻害剤を投与しなかった対象）と比較して、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約１００％、少なくとも約１５０％、少なくとも約２００％、少なくとも約２５０％、または約３００％以上、増加させる。
いくつかの態様では、神経発生を増加及び／または誘導することは、神経幹細胞及び／または前駆細胞の増殖、分化、遊走、及び／または生存率の増加をともなう。したがって、いくつかの態様では、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤を投与することは、対象の神経幹細胞及び／または前駆細胞の増殖を増加させることができる。特定の態様では、神経幹細胞及び／または前駆細胞の増殖は、参照（例えば、ｍｉＲ－４８５阻害剤を投与しなかった対象）と比較して、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約１００％、少なくとも約１５０％、少なくとも約２００％、少なくとも約２５０％、または少なくとも約３００％以上、増加する。いくつかの態様では、神経幹細胞及び／または前駆細胞の生存率は、参照（例えば、ｍｉＲ－４８５阻害剤を投与しなかった対象）と比較して、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約１００％、少なくとも約１５０％、少なくとも約２００％、少なくとも約２５０％、または少なくとも約３００％以上、増加する。
いくつかの態様では、神経発生を増加及び／または誘導することは、神経幹細胞及び／または前駆細胞の数の増加をともなう。いくつかの態様では、神経幹細胞及び／または前駆細胞の数は、参照（例えば、ｍｉＲ－４８５阻害剤を投与しなかった対象）と比較して、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約１００％、少なくとも約１５０％、少なくとも約２００％、少なくとも約２５０％、または少なくとも約３００％以上、増加する。
いくつかの態様では、神経発生を増加及び/または誘導することは、軸索、樹状突起、及び/またはシナプス発生の増加をともなう。特定の態様では、軸索、樹状突起、及び／またはシナプス発生は、参照（例えば、ｍｉＲ－４８５阻害剤を投与しなかった対象）と比較して、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約１００％、少なくとも約１５０％、少なくとも約２００％、少なくとも約２５０％、または少なくとも約３００％以上、増加する。
いくつかの態様では、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤を投与することは、対象（例えば、ＡＬＳに罹患している）における神経炎症を（例えば、ＳＩＲＴ１タンパク質及び／またはＳＩＲＴ１遺伝子の発現を増加させることにより）、参照（例えば、投与前の対象における神経炎症）と比較して減少させる。特定の態様では、ｍｉＲ－４８５阻害剤を投与することは、対象（例えば、ＡＬＳに罹患している）における神経炎症を、参照（例えば、ｍｉＲ－４８５阻害剤を投与しなかった対象）と比較して、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または約１００％減少させる。いくつかの態様では、神経炎症の減少は、グリア細胞が産生する炎症性メディエーターの量が減少することを含む。したがって、特定の態様では、ｍｉＲ－４８５阻害剤を対象（例えば、ＡＬＳに罹患している）に投与することは、グリア細胞が産生する炎症性メディエーターの量を、参照（例えば、ｍｉＲ－４８５阻害剤を投与しなかった対象）と比較して、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または約１００％減少させる。いくつかの態様では、グリア細胞が産生する炎症性メディエーターは、ＴＮＦ－αを含む。いくつかの態様では、炎症性メディエーターは、ＩＬ－１βを含む。いくつかの態様では、グリア細胞が産生する炎症性メディエーターは、ＴＮＦ－α及びＩＬ－１βの両方を含む。
いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤を投与することは、対象（例えば、ＡＬＳに罹患している）におけるオートファジーを（例えば、ＳＩＲＴ１タンパク質及び／またはＳＩＲＴ１遺伝子の発現を増加させることにより）増加させる。本明細書で使用する場合、「オートファジー」という用語は、細胞ストレス応答ならびに細胞恒常性を維持するために長寿命タンパク質、タンパク質凝集体、及び損傷したオルガネラの分解を担う生存経路のことを指す。いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤を対象（例えば、ＡＬＳに罹患している）に投与することは、参照（例えば、ｍｉＲ－４８５阻害剤を投与しなかった対象）と比較してオートファジーを、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約１００％、少なくとも約１５０％、少なくとも約２００％、または少なくとも約３００％以上、増加させる。
当該技術分野では周知であり、本明細書に記載されているように、ＡＬＳ患者は特定の運動及び／または非運動症状を呈する。例えば、ＡＬＳに関連した運動症状の非限定的な例としては、筋力低下（例えば、脚の虚弱、ペンまたはカップを持つことが難しい、頭より高く腕を上げることが難しい、手または指で細かい運動動作を行う際のぎこちなさ、呼吸困難）、筋萎縮、筋攣縮（すなわち、筋肉の短時間の自然な制御不能な痙攣）、痙縮（すなわち、緊張及び強ばりにつながる、筋肉の長時間の制御不能な収縮）、構音障害(すなわち、口及び顔の筋肉を動かせないことによる遅い、不明瞭な発語）、嚥下障害（すなわち、飲み込むことができない）、及びこれらの組み合わせが挙げられる。ＡＬＳに関連する非運動症状の例としては、認知機能障害、情動調節障害（ＰＢＡ）（すなわち、社会的場面で不相応にみえる笑いまたは号泣の不随意かつ制御不能なエピソード）が挙げられる。
いくつかの態様では、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤を投与することは、対象（例えば、ＡＬＳに罹患している）における１つ以上の運動症状を、参照（例えば、投与前の対象における対応する運動症状）と比較して改善する。いくつかの態様では、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤を投与することは、対象（例えば、ＡＬＳに罹患している）における１つ以上の運動症状を、参照（例えば、ｍｉＲ－４８５阻害剤を投与しなかった対象）と比較して、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約１００％、少なくとも約１５０％、少なくとも約２００％、少なくとも約２５０％、または少なくとも約３００％以上、改善する。
いくつかの態様では、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤を投与することは、対象（例えば、ＡＬＳに罹患している）における１つ以上の非運動症状を、参照（例えば、投与前の対象における対応する非運動症状）と比較して改善する。特定の態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤を投与することは、対象（例えば、ＡＬＳに罹患している）における１つ以上の非運動症状を、参照（例えば、ｍｉＲ－４８５阻害剤を投与しなかった対象）と比較して、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約１００％、少なくとも約１５０％、少なくとも約２００％、少なくとも約２５０％、または少なくとも約３００％以上、改善する。
いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤は、当該技術分野では周知の任意の適当な経路で投与することができる。特定の態様では、ｍｉＲ－４８５阻害剤は、補足的投与、筋肉内投与、皮下投与、点眼、静脈内投与、腹腔内投与、皮内投与、眼窩内投与、脳内投与、頭蓋内投与、脳室内投与、脊髄内投与、心室内投与、髄腔内投与、大槽内投与、嚢内投与、腫瘍内投与、またはそれらの任意の組み合わせで投与される。特定の態様では、ｍｉＲ－４８５阻害剤は、脳室内（ＩＣＶ）投与される。特定の態様では、ｍｉＲ－４８５阻害剤は、静脈内投与される。
いくつかの態様では、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤は、１つ以上のさらなる治療薬と併用することができる。いくつかの態様では、さらなる治療薬とｍｉＲ－４８５阻害剤とは同時に投与される。特定の態様において、さらなる治療薬とｍｉＲ－４８５阻害剤とは順次投与される。
いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤は副作用を生じない。特定の態様では、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤は、対象に投与される際に体重に悪影響を及ぼさない。いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤は、対象に投与される際に死亡率の増加をもたらさず、病理学的異常も引き起こさない。
ＩＩＩ．本開示で有用なｍｉＲ－４８５阻害剤
本開示では、ｍｉＲ－４８５活性を阻害することができる化合物を開示する（ｍｉＲ－４８５阻害剤）。いくつかの態様では、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤は、少なくとも１つのｍｉＲ－４８５結合部位を含むヌクレオチド分子をコードするヌクレオチド配列を含んでおり、ヌクレオチド分子はタンパク質をコードしていない。本明細書に記載されるように、いくつかの態様では、ｍｉＲ－４８５結合部位は、標的ｍｉＲＮＡ核酸配列（すなわち、ｍｉＲ－４８５）と少なくとも部分的に相補的であるため、ｍｉＲ－４８５阻害剤はｍｉＲ－４８５の核酸配列とハイブリダイズする。
いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ阻害剤のｍｉＲ－４８５結合部位は、ｍｉＲ－４８５の核酸配列と、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％の配列同一性を有する。特定の態様では、ｍｉＲ－４８５結合部位は、ｍｉＲ－４８５の核酸配列と完全に相補的である。
ｍｉＲ－４８５のヘアピン前駆体はｍｉＲ－４８５－５ｐ及びｍｉＲ－４８５－３ｐの両方を生成することができる。本開示との関連で、「ｍｉＲ－４８５」は、特に断らない限り、ｍｉＲ－４８５－５ｐ及びｍｉＲ－４８５－３ｐの両方を包含する。ヒト成熟ｍｉＲ－４８５－３ｐは、配列５’－ＧＵＣＡＵＡＣＡＣＧＧＣＵＣＵＣＣＵＣＵＣＵ－３’（配列番号１；ｍｉＲＢａｓｅアクセッション番号ＭＩＭＡＴ０００２１７６）を有する。ｍｉＲ－４８５－３ｐの５’－ＵＣＡＵＡＣＡ－３’（配列番号４９）の５’末端配列はシード配列である。ヒト成熟ｍｉＲ－４８５－５ｐは、配列５’－ＡＧＡＧＧＣＵＧＧＣＣＧＵＧＡＵＧＡＡＵＵＣ－３’（配列番号３３；ｍｉＲＢａｓｅアクセッション番号ＭＩＭＡＴ０００２１７５）を有する。ｍｉＲ－４８５－５ｐの５’－ＧＡＧＧＣＵＧ－３’（配列番号５０）の５’末端配列はシード配列である。
当業者には明らかであるが、ヒト成熟ｍｉＲ－４８５－３ｐは、他の種のものと相当の配列類似性を有している。例えば、マウス成熟ｍｉＲ－４８５－３ｐは、ヒト成熟ｍｉＲ－４８５－３ｐと、５’末端及び３’末端のそれぞれで１個のアミノ酸が異なっている（すなわち、５’末端に余分な「Ａ」があり、３’末端の「Ｃ」がない）。マウス成熟ｍｉＲ－４８５－３ｐは以下の配列を有する：
Figure 2023513189000021
（配列番号３４；ｍｉＲＢａｓｅアクセッション番号ＭＩＭＡＴ０００３１２９；下線部はヒト成熟ｍｉＲ－４８５－３ｐとの重複部分に相当する）。マウス成熟ｍｉＲ－４８５－５ｐの配列はヒトの配列と同一である：５’－ａｇａｇｇｃｕｇｇｃｃｇｕｇａｕｇａａｕｕｃ－３’（配列番号３３；ｍｉＲＢａｓｅアクセッション番号ＭＩＭＡＴ０００３１２８）。このような配列の類似性のため、いくつかの態様では、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤は、１つ以上の種のｍｉＲ－４８５－３ｐ及び／またはｍｉＲ－４８５－５ｐに結合することができる。特定の態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤は、ヒト及びマウスのｍｉＲ－４８５－３ｐ及び／またはｍｉＲ－４８５－５ｐに結合することができる。
いくつかの態様では、ｍｉＲ－４８５結合部位は、ｍｉＲ－４８５－３ｐの配列（またはその部分配列）と相補的（例えば、完全に相補的）な一本鎖のポリヌクレオチド配列である。いくつかの態様では、ｍｉＲ－４８５－３ｐの部分配列は、シード配列を含む。したがって、特定の態様では、ｍｉＲ－４８５結合部位は、配列番号４９に記載される核酸配列と、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％の配列相補性を有する。特定の態様では、ｍｉＲ－４８５結合部位は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個のミスマッチを除いてｍｉＲ－４８５－３ｐと相補的である。さらなる態様では、ｍｉＲ－４８５結合部位は、配列番号１に記載される核酸配列と完全に相補的である。
いくつかの態様では、ｍｉＲ－４８５結合部位は、ｍｉＲ－４８５－５ｐの配列（またはその部分配列）と相補的（例えば、完全に相補的）な一本鎖のポリヌクレオチド配列である。いくつかの態様では、ｍｉＲ－４８５－５ｐの部分配列は、シード配列を含む。特定の態様では、ｍｉＲ－４８５結合部位は、配列番号５０に記載される核酸配列と、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％の配列相補性を有する。特定の態様では、ｍｉＲ－４８５結合部位は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個のミスマッチを除いてｍｉＲ－４８５－５ｐと相補的である。さらなる態様では、ｍｉＲ－４８５結合部位は、配列番号３５に記載される核酸配列と完全に相補的である。
ｍｉＲＮＡのシード領域は、標的ｍＲＮＡと緊密な二重鎖を形成する。多くのｍｉＲＮＡは、標的ｍＲＮＡの３’非翻訳領域（ＵＴＲ）と不完全に塩基対合し、ｍｉＲＮＡの５’近位の「シード」領域が対合特異性の大部分を与える。いずれの理論にも束縛されるものではないが、最初の９個のｍｉＲＮＡヌクレオチド（シード配列を含む）がより高い特異性を与えるのに対して、この領域の３’側のｍｉＲＮＡヌクレオチドはより低い配列特異性を与え、それにより、より高度のミスマッチした塩基対合を許容し、２～７位が最も重要であると考えられる。したがって、本開示の特定の態様では、ｍｉＲ－４８５結合部位は、ｍｉＲ－４８５のシード配列の全長にわたって完全に相補的（すなわち、１００％の相補性）な配列を含む。
本開示との関連で使用することができるｍｉＲＮＡ配列及びｍｉＲＮＡ結合配列としては、これらに限定されるものではないが、本明細書に示される配列表の配列の全部または一部、ならびにｍｉＲＮＡ前駆体配列、またはこれらのｍｉＲＮＡのうちの１つ以上のものの相補体が挙げられる。その配列が、示されるｍｉＲＮＡの成熟配列またはその相補的配列と少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７１％、少なくとも約７２％、少なくとも約７３％、少なくとも約７４％、少なくとも約７５％、少なくとも約７６％、少なくとも約７７％、少なくとも約７８％、少なくとも約７９％、少なくとも約８０％、少なくとも約８１％、少なくとも約８２％、少なくとも約８３％、少なくとも約８４％、少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるようなｍｉＲＮＡまたはその相補的配列を含めるために名前による特定のｍｉＲＮＡまたはｍｉＲＮＡ結合部位を含む本開示のあらゆる態様も想到される。
特定の態様では、本開示のｍｉＲＮＡ結合配列は、改変された配列がｍｉＲ－４８５に依然として特異的に結合できる限り、本明細書で提供される配列表に示される配列の５’末端、３’末端、または５’末端及び３’末端の両方にさらなるヌクレオチドを含んでもよい。いくつかの態様では、本開示のｍｉＲＮＡ結合配列は、改変された配列がｍｉＲ－４８５に依然として特異的に結合できる限り、提供される配列表に示される配列に対して、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個、またはそれ以上のヌクレオチドにおいて異なり得る。
ｍｉＲＮＡ結合分子またはｍｉＲＮＡに関して本明細書に記載されるあらゆる方法及び組成物は、合成ｍｉＲＮＡ結合分子に関して実施することができる点も具体的に想到される。本開示のＲＮＡ配列に関連した開示は、対応するＤＮＡ配列に等しく適用できる点も理解されよう。
いくつかの態様では、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤は、ヌクレオチド配列の５’末端に少なくとも１個のヌクレオチド、少なくとも２個のヌクレオチド、少なくとも３個のヌクレオチド、少なくとも４個のヌクレオチド、少なくとも５個のヌクレオチド、少なくとも６個のヌクレオチド、少なくとも７個のヌクレオチド、少なくとも８個のヌクレオチド、少なくとも９個のヌクレオチド、少なくとも１０個のヌクレオチド、少なくとも１１個のヌクレオチド、少なくとも１２個のヌクレオチド、少なくとも１３個のヌクレオチド、少なくとも１４個のヌクレオチド、少なくとも１５個のヌクレオチド、少なくとも１６個のヌクレオチド、少なくとも１７個のヌクレオチド、少なくとも１８個のヌクレオチド、少なくとも１９個のヌクレオチド、または少なくとも２０個のヌクレオチドを含む。いくつかの態様では、ｍｉＲ－４８５阻害剤は、ヌクレオチド配列の３’末端に少なくとも１個のヌクレオチド、少なくとも２個のヌクレオチド、少なくとも３個のヌクレオチド、少なくとも４個のヌクレオチド、少なくとも５個のヌクレオチド、少なくとも６個のヌクレオチド、少なくとも７個のヌクレオチド、少なくとも８個のヌクレオチド、少なくとも９個のヌクレオチド、少なくとも１０個のヌクレオチド、少なくとも１１個のヌクレオチド、少なくとも１２個のヌクレオチド、少なくとも１３個のヌクレオチド、少なくとも１４個のヌクレオチド、少なくとも１５個のヌクレオチド、少なくとも１６個のヌクレオチド、少なくとも１７個のヌクレオチド、少なくとも１８個のヌクレオチド、少なくとも１９個のヌクレオチド、または少なくとも２０個のヌクレオチドを含む。
いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤は、約６～約３０ヌクレオチドの長さである。特定の態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤は、７ヌクレオチドの長さである。さらなる態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤は、８ヌクレオチドの長さである。いくつかの態様では、ｍｉＲ－４８５阻害剤は、９ヌクレオチドの長さである。いくつかの態様では、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤は、１０ヌクレオチドの長さである。特定の態様では、ｍｉＲ－４８５阻害剤は、１１ヌクレオチドの長さである。さらなる態様では、ｍｉＲ－４８５阻害剤は、１２ヌクレオチドの長さである。いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤は、１３ヌクレオチドの長さである。特定の態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤は、１４ヌクレオチドの長さである。いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤は、１５ヌクレオチドの長さである。さらなる態様では、ｍｉＲ－４８５阻害剤は、１６ヌクレオチドの長さである。特定の態様では、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤は、１７ヌクレオチドの長さである。いくつかの態様では、ｍｉＲ－４８５阻害剤は、１８ヌクレオチドの長さである。いくつかの態様では、ｍｉＲ－４８５阻害剤は、１９ヌクレオチドの長さである。特定の態様では、ｍｉＲ－４８５阻害剤は、２０ヌクレオチドの長さである。さらなる態様では、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤は、２１ヌクレオチドの長さである。いくつかの態様では、ｍｉＲ－４８５阻害剤は、２２ヌクレオチドの長さである。
いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤は、配列番号２～３０から選択される配列と、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるヌクレオチド配列を含む。特定の態様では、ｍｉＲ－４８５阻害剤は、配列番号２～３０からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含み、ヌクレオチド配列は１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個のミスマッチを場合により含んでもよい。
いくつかの態様では、ｍｉＲＮＡ阻害剤は、５’－ＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号２）、５’－ＧＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号３）、５’－ＣＧＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号４）、５’－ＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号５）、５’－ＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号６）、５’－ＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号７）、５’－ＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号８）、５’－ＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号９）、５’－ＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号１０）、５’－ＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号１１）、５’－ＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号１２）、５’－ＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号１３）、５’－ＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号１４）、または５’－ＧＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号１５）を含む。
いくつかの態様では、ｍｉＲＮＡ阻害剤は、５’－ＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号１６）、５’－ＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号１７）、５’－ＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号１８）、５’－ＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号１９）、５’－ＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号２０）、５’－ＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号２１）、５’－ＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号２２）、５’－ＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号２３）、５’－ＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号２４）、５’－ＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号２５）、５’－ＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号２６）、５’－ＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号２７）、５’－ＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号２８）、５’－ＧＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号２９）、または５’－ＡＧＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号３０）を有する。
いくつかの態様では、ｍｉＲＮＡ阻害剤は、５’－ＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号６２）、５’－ＧＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号６３）、５’－ＣＧＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号６４）、５’－ＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号６５）、５’－ＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号６６）、５’－ＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号６７）、５’－ＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号６８）、５’－ＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号６９）、５’－ＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号７０）、５’－ＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号７１）、５’－ＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号７２）、５’－ＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号７３）、５’－ＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号７４）、５’－ＧＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号７５）、５’－ＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号７６）、５’－ＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号７７）、５’－ＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号７８）、５’－ＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号７９）、５’－ＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号８０）、５’－ＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号８１）、５’－ＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号８２）、５’－ＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号８３）、５’－ＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号８４）、５’－ＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号８５）、５’－ＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号８６）、５’－ＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号８７）、５’－ＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号８８）、５’－ＧＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号８９）、及び５’－ＡＧＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号９０）からなる群から選択される配列を有する。
いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲＮＡ阻害剤（すなわち、ｍｉＲ－４８５阻害剤）は、５’－ＡＧＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号３０）または５’－ＡＧＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号９０）と少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、または少なくとも約９５％同一であるヌクレオチド配列を含む。いくつかの態様では、ｍｉＲＮＡ阻害剤は、５’－ＡＧＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号３０）または５’－ＡＧＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ －３’（配列番号９０）と少なくとも９０％の類似性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの態様では、ｍｉＲＮＡ阻害剤は、１個の置換または２個の置換を有するヌクレオチド配列５’－ＡＧＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号３０）または５’－ＡＧＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号９０）を含む。特定の態様では、ｍｉＲＮＡ阻害剤は、ヌクレオチド配列５’－ＡＧＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号３０）または５’－ＡＧＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号９０）を含む。特定の態様では、ｍｉＲＮＡ阻害剤は、ヌクレオチド配列５’－ＡＧＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号３０）を含む。
いくつかの態様では、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤は、本明細書に開示される配列、例えば、配列番号２～３０のいずれか１つと、Ｎ末端に少なくとも１個、少なくとも２個、少なくとも３個、少なくとも４個、または少なくとも５個のさらなる核酸、Ｃ末端に少なくとも１個、少なくとも２個、少なくとも３個、少なくとも４個、または少なくとも５個のさらなる核酸、またはその両方と、を含む。いくつかの態様では、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤は、本明細書に開示される配列、例えば、配列番号２～３０のいずれか１つと、Ｎ末端に１個のさらなる核酸及び／またはＣ末端に１個のさらなる核酸と、を含む。いくつかの態様では、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤は、本明細書に開示される配列、例えば、配列番号２～３０のいずれか１つと、Ｎ末端に１個または２個のさらなる核酸及び／またはＣ末端に１個または２個のさらなる核酸と、を含む。いくつかの態様では、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤は、本明細書に開示される配列、例えば、配列番号２～３０のいずれか１つと、Ｎ末端に１～３個のさらなる核酸及び／またはＣ末端に１～３個のさらなる核酸と、を含む。いくつかの態様では、ｍｉＲ－４８５阻害剤は、５’－ＧＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号２９）を含む。
いくつかの態様では、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤は、１個のｍｉＲ－４８５結合部位を含む。さらなる態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤は、少なくとも２個のｍｉＲ－４８５結合部位を含む。特定の態様では、ｍｉＲ－４８５阻害剤は、３個のｍｉＲ－４８５結合部位を含む。いくつかの態様では、ｍｉＲ－４８５阻害剤は、４個のｍｉＲ－４８５結合部位を含む。いくつかの態様では、ｍｉＲ－４８５阻害剤は、５個のｍｉＲ－４８５結合部位を含む。特定の態様では、ｍｉＲ－４８５阻害剤は、６個以上のｍｉＲ－４８５結合部位を含む。いくつかの態様では、すべてのｍｉＲ－４８５結合部位は同じである。いくつかの態様では、すべてのｍｉＲ－４８５結合部位は異なる。いくつかの態様では、少なくとも１つのｍｉＲ－４８５結合部位が異なる。いくつかの態様では、すべてのｍｉＲ－４８５結合部位は、ｍｉＲ－４８５－３ｐ結合部位である。他の態様では、すべてのｍｉＲ－４８５結合部位は、ｍｉＲ－４８５－５ｐ結合部位である。さらなる態様では、ｍｉＲ－４８５阻害剤は、少なくとも１つのｍｉＲ－４８５－３ｐ結合部位と、少なくとも１つのｍｉＲ－４８５－５ｐ結合部位とを含む。
ＩＩＩ．ａ．化学修飾されたポリヌクレオチド
いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤は、少なくとも１つの化学修飾されたヌクレオシド及び／またはヌクレオチドを含むポリヌクレオチドを含む。本開示のポリヌクレオチドが化学修飾されている場合、ポリヌクレオチドは、「修飾ポリヌクレオチド」と呼ぶことができる。
「ヌクレオシド」は、糖分子（例えば、ペントースまたはリボース）またはその誘導体を、有機塩基（例えば、プリンまたはピリミジン）またはその誘導体（本明細書において「核酸塩基」とも称される）とともに含有する化合物を指す。「ヌクレオチド」は、リン酸基を含むヌクレオシドを指す。修飾されたヌクレオチドは、１つ以上の修飾された非天然ヌクレオシドを含むように、任意の有用な方法により、例えば、化学的に、酵素的に、または組換えにより合成され得る。
ポリヌクレオチドは、連結されたヌクレオシドの領域または複数の領域を含み得る。かかる領域は、可変的な骨格結合を有し得る。連結は、標準的なホスホジエステル結合であり得、その場合、ポリヌクレオチドはヌクレオチドの領域を含む。
本明細書において開示される修飾されたポリヌクレオチドは、様々な異なる修飾を含み得る。いくつかの態様では、修飾されたポリヌクレオチドは、１種、２種、またはそれ以上（任意選択的に異なる）のヌクレオシドまたはヌクレオチド修飾を含有する。いくつかの態様では、修飾されたポリヌクレオチドは、１つ以上の所望の特性、例えば、未修飾ポリヌクレオチドと比較して改善された熱または化学安定性、低減された免疫原性、低減された分解、標的マイクロＲＮＡに対する結合の増加、他のマイクロＲＮＡまたは他の分子に対する低減された非特異的結合を示し得る。
いくつかの態様では、本開示のポリヌクレオチド（例えば、ｍｉＲ－４８５阻害剤）は、化学修飾されている。本明細書で使用する場合、ポリヌクレオチドに関して、「化学修飾」または必要に応じて「化学修飾された」という用語は、アデノシン（Ａ）、グアノシン（Ｇ）、ウリジン（Ｕ）、チミジン（Ｔ）、またはシチジン（Ｃ）リボヌクレオシドまたはデオキシリボヌクレオシドに対する、限定されるものではないが、それらの核酸塩基、糖、骨格、またはそれらの任意の組み合わせが挙げられるそれらの位置、パターン、パーセント、または集団のうちの１つ以上における修飾を指す。
いくつかの態様では、本開示のポリヌクレオチド（例えば、ｍｉＲ－４８５阻害剤）は、同じヌクレオシド種類のすべてもしくはいずれかの均一な化学修飾、または同じヌクレオシド種類のすべてもしくはいずれかにおける同じ出発修飾の漸減滴定（ｄｏｗｎｗａｒｄ ｔｉｔｒａｔｉｏｎ）によって生成される修飾の群、またはランダムな組み込みを伴うことを除いて同じヌクレオシド種類のすべてもしくはいずれかの測定されたパーセントの化学修飾を有し得る。さらなる態様では、本開示のポリヌクレオチド（例えば、ｍｉＲ－４８５阻害剤）は、ポリヌクレオチド全体にわたって同じヌクレオシド種類のうちの２つ、３つ、または４つの均一な化学修飾を有し得る（例えば、すべてのウリジン及びすべてのシトシンなどが、同じように修飾される）。
修飾されたヌクレオチドの塩基対形成は、標準的なアデニン－チミン、アデニン－ウラシル、またはグアニン－シトシン塩基対だけでなく、ヌクレオチド及び／または非標準的もしくは修飾塩基を含む修飾ヌクレオチドの間で形成される塩基対も包含し、ここで、水素結合ドナー及び水素結合アクセプターの配置が、非標準的塩基と標準的塩基との間、または２つの相補的な非標準的塩基構造間の水素結合を可能にする。かかる非標準的塩基対形成の１つの例は、修飾された核酸塩基イノシンとアデニン、シトシン、またはウラシルとの間の塩基対形成である。塩基／糖またはリンカーの任意の組み合わせが、本開示のポリヌクレオチドに組み込まれ得る。
当業者は、特に注記される場合を除き、本出願に記載されるポリヌクレオチド配列は、代表的なＤＮＡ配列において「Ｔ」を列挙するが、配列がＲＮＡを表す場合、「Ｔ」は「Ｕ」と置換されることを理解するであろう。例えば、本開示のＴＤは、ＲＮＡとして、ＤＮＡとして、またはＲＮＡ及びＤＮＡユニットの両方を含むハイブリッド分子として投与され得る。
いくつかの態様では、ポリヌクレオチド（例えば、ｍｉＲ－４８５阻害剤）は、少なくとも２つ（例えば、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、８つ、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１８、２０以上）の修飾された核酸塩基の組み合わせを含む。
いくつかの態様では、ポリヌクレオチドにおける核酸塩基、糖、骨格結合、またはそれらの任意の組み合わせは、少なくとも約５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％修飾される。
（ｉ）塩基修飾
特定の態様では、化学修飾は、本開示（例えば、ｍｉＲ－４８５阻害剤）のポリヌクレオチド内の核酸塩基に存在する。いくつかの態様では、少なくとも１つの化学修飾ヌクレオシドは、修飾されたウリジン（例えば、シュードウリジン（ψ）、２－チオウリジン（ｓ２Ｕ）、１－メチル－シュードウリジン（ｍ１ψ）、１－エチル－シュードウリジン（ｅ１ψ）、または５－メトキシ－ウリジン（ｍｏ５Ｕ））、修飾されたシトシン（例えば、５－メチル－シチジン（ｍ５Ｃ））、修飾されたアデノシン（例えば、１－メチル－アデノシン（ｍ１Ａ）、Ｎ６－メチル－アデノシン（ｍ６Ａ）、または２－メチルアデニン（ｍ２Ａ））、修飾されたグアノシン（例えば、７－メチル－グアノシン（ｍ７Ｇ）または１－メチル－グアノシン（ｍ１Ｇ））、またはそれらの組み合わせである。
いくつかの態様では、本開示のポリヌクレオチド（例えば、ｍｉＲ－４８５阻害剤）は、特定の修飾について均一に修飾される（例えば、完全に修飾される、配列全体にわたって修飾される）。例えば、ポリヌクレオチドは、同じ種類の塩基修飾、例えば、５－メチル－シチジン（ｍ５Ｃ）により均一に修飾され得、これは、ポリヌクレオチド配列におけるすべてのシトシン残基が、５－メチル－シチジン（ｍ５Ｃ）と置き換えられることを意味する。同様に、ポリヌクレオチドは、配列に存在する任意の種類のヌクレオシド残基について、修飾されたヌクレオシド、例えば、上記に記載されるもののいずれかとの置換により均一に修飾され得る。
いくつかの態様では、本開示のポリヌクレオチド（例えば、ｍｉＲ－４８５阻害剤）は、少なくとも２つ（例えば、２つ、３つ、４つ、またはそれ以上）の修飾された核酸塩基の組み合わせを含む。いくつかの態様では、本開示のポリヌクレオチド（例えば、ｍｉＲ－４８５阻害剤）における１種類の核酸塩基の少なくとも約５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％が、修飾された核酸塩基である。
（ｉｉ）骨格修飾
いくつかの態様では、本開示のポリヌクレオチド（すなわちｍｉＲ－４８５阻害剤）は、ヌクレオシド間に任意の有用な結合を含むことができる。本開示の組成物において有用な、骨格修飾を含むそのような結合としては、これらに限定されるものではないが、以下のものが挙げられる：３’－アルキレンホスホネート、３’－アミノホスホロアミダート、アルケン含有骨格、アミノアルキルホスホロアミダート、アミノアルキルホスホトリエステル、ボラノホスフェート、－ＣＨ２－Ｏ－Ｎ（ＣＨ３）－ＣＨ２－、－ＣＨ２－Ｎ（ＣＨ３）－Ｎ（ＣＨ３）－ＣＨ２－、－ＣＨ２－ＮＨ－ＣＨ２－、キラルホスホネート、キラルホスホロチオネート、ホルムアセチル及びチオホルムアセチル骨格、メチレン（メチルイミノ）、メチレンホルムアセチル及びチオホルムアセチル骨格、メチレンイミノ及びメチレンヒドラジノ骨格、モルホリノ結合、－Ｎ（ＣＨ３）－ＣＨ２－ＣＨ２－、ヘテロ原子ヌクレオシド間結合を有するオリゴヌクレオシド、ホスフィナート、ホスホロアミダート、ホスホロジチオエート、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合、ホスホロチオネート、ホスホトリエステル、ＰＮＡ、シロキサン骨格、スルファメート骨格、スルフィド、スルホキシド、及びスルホン骨格、スルホネート及びスルホンアミド骨格、チオノアルキルホスホネート、チオノアルキルホスホトリエステル、ならびにチオノホスホロアミダート。


Figure 2023513189000022
いくつかの態様では、上記に開示される骨格結合の存在は、本開示のポリヌクレオチド（例えば、ｍｉＲ－４８５阻害剤）の安定性及び分解に対する耐性を増加させる。
いくつかの態様では、本開示のポリヌクレオチド（例えば、ｍｉＲ－４８５阻害剤）における少なくとも約５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％の骨格結合が修飾される（例えば、それらのすべてがホスホロチオエートである）。
いくつかの態様では、本開示のポリヌクレオチド（すなわち、ｍｉＲ－４８５阻害剤）に含めることができる骨格修飾は、ホスホロジアミダイトモルホリノオリゴマー（ＰＭＯ）及び／またはホスホロチオエート（ＰＳ）修飾を含む。
（ｉｉｉ）糖修飾
本開示のポリヌクレオチド（例えば、ｍｉＲ－４８５阻害剤）に組み込まれ得る修飾されたヌクレオシド及びヌクレオチドは、核酸の糖に対して修飾され得る。いくつかの態様では、糖修飾は、ｍｉＲ－４８５核酸配列に対するｍｉＲ－４８５阻害剤の結合の親和性を増加させる。ＬＮＡまたは２’－置換糖などの親和性改善ヌクレオチド類似体をｍｉＲ－４８５阻害剤に組み込むことによって、ｍｉＲ－４８５阻害剤の長さ及び／またはサイズを小さくすることができる。
いくつかの態様では、本開示のポリヌクレオチド（すなわち、ｍｉＲ－４８５阻害剤）における少なくとも約５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％のヌクレオチドが糖修飾（例えば、ＬＮＡ）を含有する。
いくつかの態様では、本開示のポリヌクレオチドにおける１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、または２２ヌクレオチドユニットが糖修飾される（例えば、ＬＮＡ）。
一般に、ＲＮＡは、酸素を有する五員環である糖基リボースを含む。非限定的な例示的修飾ヌクレオチドとしては、リボースにおける酸素の（例えば、Ｓ、Ｓｅ、またはアルキレン、例えば、メチレンまたはエチレンとの）置換；二重結合の付加（例えば、リボースのシクロペンテニルまたはシクロヘキセニルとの置換）；リボースの環縮小（例えば、シクロブタンまたはオキセタンの四員環の形成）；リボースの環拡大（例えば、追加の炭素またはヘテロ原子を有し、６または七員環の形成、例えば、アンヒドロヘキシトール、アルトリトール、マンニトール、シクロヘキサニル、シクロヘキセニル、及びホスホロアミダート骨格も有するモルホリノ）；多環式形態（例えば、トリシクロ）；及び「アンロックド」形態、例えば、グリコール核酸（ＧＮＡ）（例えば、Ｒ－ＧＮＡまたはＳ－ＧＮＡ、ここで、リボースは、ホスホジエステル結合に結合されたグリコールユニットと置き換えられる）、トレオース核酸（ＴＮＡ、ここで、リボースは、α－Ｌ－トレオフラノシル－（３’→２’）と置き換えられる）、及びペプチド核酸（ＰＮＡ、ここで、２－アミノ－エチル－グリシン結合が、リボース及びホスホジエステル骨格と置き換わる）が挙げられる。糖基は、リボースにおける対応する炭素と反対の立体化学配置を有する１つ以上の炭素も含有し得る。したがって、ポリヌクレオチド分子は、糖として、例えば、アラビノースを含有するヌクレオチドを含み得る。
リボースの２’ヒドロキシ基（ＯＨ）は、いくつかの異なる置換基で修飾または置換され得る。２’－位での例示的な置換としては、限定されるものではないが、Ｈ、ハロ、任意選択的に置換されたＣ１～６アルキル；任意選択的に置換されたＣ１～６アルコキシ；任意選択的に置換されたＣ６～１０アリールオキシ；任意選択的に置換されたＣ３～８シクロアルキル；任意選択的に置換されたＣ３～８シクロアルコキシ；任意選択的に置換されたＣ６～１０アリールオキシ；任意選択的に置換されたＣ６～１０アリール－Ｃ１～６アルコキシ、任意選択的に置換されたＣ１～１２（ヘテロシクリル）オキシ；糖（例えば、リボース、ペントース、または本明細書に記載されるいずれか）；ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、－Ｏ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎＣＨ２ＣＨ２ＯＲ（ここで、Ｒは、Ｈまたは任意選択的に置換されたアルキルであり、ｎは、０～２０（例えば、０～４、０～８、０～１０、０～１６、１～４、１～８、１～１０、１～１６、１～２０、２～４、２～８、２～１０、２～１６、２～２０、４～８、４～１０、４～１６、及び４～２０）の整数である）；「ロックド」核酸（ＬＮＡ）（２’－ヒドロキシが、Ｃ１～６アルキレンまたはＣ１～６ヘテロアルキレン架橋により、同じリボース糖の４’－炭素に連結されており、ここで、例示的な架橋としては、メチレン、プロピレン、エーテル、アミノ架橋、アミノアルキル、アミノアルコキシ、アミノ、及びアミノ酸が挙げられる）が挙げられる。
いくつかの態様では、本開示のポリヌクレオチド（すなわち、ｍｉＲ－４８５阻害剤）に存在するヌクレオチド類似体は、例えば、２’－Ｏ－アルキル－ＲＮＡユニット、２’－ＯＭｅ－ＲＮＡユニット、２’－Ｏ－アルキル－ＳＮＡ、２’－アミノ－ＤＮＡユニット、２’－フルオロ－ＤＮＡユニット、ＬＮＡユニット、アラビノ核酸（ＡＮＡ）ユニット、２’－フルオロ－ＡＮＡユニット、ＨＮＡユニット、ＩＮＡ（インターカレーティング核酸）ユニット、２’ＭＯＥユニット、またはそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの態様では、ＬＮＡは、例えば、オキシＬＮＡ（例えば、β－Ｄ－オキシ－ＬＮＡまたはα－Ｌ－オキシ－ＬＮＡ）、アミノＬＮＡ（例えば、β－Ｄ－アミノ－ＬＮＡまたはα－Ｌ－アミノ－ＬＮＡ）、チオＬＮＡ（例えば、β－Ｄ－チオ－ＬＮＡまたはα－Ｌ－チオ－ＬＮＡ）、ＥＮＡ（例えば、β－Ｄ－ＥＮＡまたはα－Ｌ－ＥＮＡ）、またはそれらの任意の組み合わせである。さらなる態様では、本開示のポリヌクレオチド（すなわちｍｉＲ－４８５阻害剤）に含めることができるヌクレオチド類似体は、ロックド核酸（ＬＮＡ）、アンロックド核酸（ＵＮＡ）、アラビノ核酸（ＡＢＡ）、架橋核酸（ＢＮＡ）、及び／またはペプチド核酸（ＰＮＡ）を含む。
いくつかの態様では、本開示のポリヌクレオチド（すなわち、ｍｉＲ－４８５阻害剤）は、修飾されたＲＮＡヌクレオチド類似体（例えば、ＬＮＡ）及びＤＮＡユニットの両方を含み得る。いくつかの態様では、ｍｉＲＮＡ阻害剤はギャップマーである。例えば、米国特許第８，４０４，６４９号、同第８，５８０，７５６号、同第８，１６３，７０８号、同第９，０３４，８３７号（これらのすべてが参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる）を参照のこと。いくつかの態様では、ｍｉＲＮＡ阻害剤はマイクロマーである。米国特許公開第ＵＳ２０１８０２０１９２８号（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）を参照のこと。
いくつかの態様では、本開示のポリヌクレオチド（少なくとも、ｍｉＲ－４８５阻害剤）は、エンドヌクレアーゼ及びエキソヌクレアーゼによる速やかな分解を防止するための修飾を含むことができる。修飾としては、これらに限定されるものではないが、例えば、（ａ）末端修飾、例えば、５’末端修飾（リン酸化、脱リン酸化、共役化、反転結合など）、３’末端修飾（共役化、ＤＮＡヌクレオチド、反転結合など）、（ｂ）塩基修飾、例えば、修飾塩基、安定化塩基、不安定化塩基、または広範なパートナーのレパートリーと塩基対合する塩基、または共役化塩基による置換、（ｃ）糖修飾（例えば、２’位または４’位における）または糖の置換、ならびに（ｄ）ホスホジエステル結合の修飾または置換を含む、ヌクレオシド間結合の修飾が挙げられる。
ＩＶ．ベクター及び送達システム
いくつかの態様では、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤は、例えば、ＳＩＲＴ１タンパク質及び／またはＳＩＲＴ１遺伝子の異常な（例えば、低下した）レベルに関連した疾患または条件に罹患した対象に、当該技術分野では周知のあらゆる関連する送達システムを用いて投与することができる。特定の態様では、送達システムはベクターである。したがって、いくつかの態様では、本開示は、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤を含むベクターを提供する。
いくつかの態様では、ベクターは、ウイルスベクターである。いくつかの態様では、ウイルスベクターは、アデノウイルスベクターまたはアデノ随伴ウイルスベクターである。いくつかの態様では、ウイルスベクターは、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、またはこれらの任意の組み合わせの血清型を有するＡＡＶである。いくつかの態様では、アデノウイルスベクターは、第３世代アデノウイルスベクターである。ＡＤＥＡＳＹ（商標）は、アデノウイルスベクターコンストラクトを作製するうえで圧倒的に最も一般的な方法である。このシステムは、シャトル（または導入）ベクター及びアデノウイルスベクターの２つのタイプのプラスミドで構成される。目的の導入遺伝子をシャトルベクターにクローニングし、検証し、制限酵素ＰｍｅＩで直鎖化する。次いで、このコンストラクトを、ＰＡＤＥＡＳＹ（商標）を含むＢＪ５１８３Ｅ．ｃｏｌｉ細胞であるＡＤＥＡＳＩＥＲ－１細胞に形質転換する。ＰＡＤＥＡＳＹ（商標）は、ウイルス産生に必要なアデノウイルス遺伝子を含んだ約３３Ｋｂのアデノウイルスプラスミドである。シャトルベクターとアデノウイルスプラスミドとは、アデノウイルスプラスミド内への導入遺伝子の相同組み換えを促進する一致した左右のホモロジーアームを有している。標準的なＢＪ５１８３に、スーパーコイルを形成したＰＡＤＥＡＳＹ（商標）とシャトルベクターを同時形質転換することもできるが、この方法は非組換えアデノウイルスプラスミドの高いバックグラウンドを生じる。次いで、組換えアデノウイルスプラスミドをサイズ及び適当な制限消化パターンについて検証し、導入遺伝子がアデノウイルスプラスミドに挿入され、他のパターンの組み換えが生じていないことを確認する。検証が済んだなら、組換えプラスミドをＰａｃＩで直鎖化してＩＴＲで挟まれた直鎖状ｄｓＤＮＡコンストラクトを作製する。２９３または９１１細胞に直鎖化したコンストラクトをトランスフェクトすると、ウイルスをおよそ７～１０日後に回収することができる。この方法以外にも、本明細書に開示される方法を実施するために、本願が出願された時点で当該技術分野において周知のアデノウイルスベクターコンストラクトを作製するための方法を用いることができる。
いくつかの態様では、ウイルスベクターは、レトロウイルスベクター、例えばレンチウイルスベクター（例えば第３または第４世代のレンチウイルスベクター）である。レンチウイルスベクターは、１つの細胞株に３つの別々のプラスミド発現システムをトランスフェクトする一過性トランスフェクションシステムで通常は作製される。これらには、導入ベクタープラスミド（ＨＩＶプロウイルスの部分）、パッケージングプラスミドまたはコンストラクト、及び異なるウイルスの異種エンベロープ遺伝子（ｅｎｖ）を含むプラスミドが含まれる。ベクターの３つのプラスミドコンポーネントをパッケージング細胞に入れた後、これをＨＩＶシェル内に挿入する。ベクターのウイルス部分は挿入配列を含んでいるため、ウイルスは細胞系内で複製することはできない。現在の第３世代レンチウイルスベクターは、９つのＨＩＶ－１タンパク質のうちの３つのみ（Ｇａｇ、Ｐｏｌ、Ｒｅｖ）をコードしており、これらは組換えによる複製能を有するウイルスの生成を防止するために別々のプラスミドから発現させられる。第４世代レンチウイルスベクターでは、レトロウイルスゲノムはさらに減らされている（例えば、ＴＡＫＡＲＡ（登録商標）ＬＥＮＴＩ－Ｘ（商標）第４世代パッケージングシステムを参照）。
当該技術分野では周知の任意のＡＡＶベクターを本明細書に開示される方法で使用することができる。ＡＡＶベクターは既知のベクターを含んでよく、それらのバリアント、フラグメント、または融合体を含んでよい。いくつかの態様では、ＡＡＶベクターは、ＡＡＶタイプ１（ＡＡＶ１）、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３Ａ、ＡＶＶ３Ｂ、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＶＶ９、ＡＶＶ１０、ＡＶＶ１１、ＡＶＶ１２、ＡＶＶ１３、ＡＡＶｒｈ．７４、トリＡＡＶ、ウシＡＡＶ、イヌＡＡＶ、ウマＡＡＶ、ヤギＡＶＶ、霊長類ＡＡＶ、非霊長類ＡＡＶ、ウシＡＡＶ、エビＡＶＶ、ヘビＡＶＶ、及びこれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。
いくつかの態様では、ＡＡＶベクターは、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３Ａ、ＡＶＶ３Ｂ、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＶＶ９、ＡＶＶ１０、ＡＶＶ１１、ＡＶＶ１２、ＡＶＶ１３、ＡＡＶｒｈ．７４、トリＡＡＶ、ウシＡＡＶ、イヌＡＡＶ、ウマＡＡＶ、ヤギＡＶＶ、霊長類ＡＡＶ、非霊長類ＡＡＶ、ヒツジＡＡＶ、エビＡＶＶ、ヘビＡＶＶ、及びこれらの任意の組み合わせからなる群から選択されたＡＡＶベクターから誘導される。
いくつかの態様では、ＡＡＶベクターは、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３Ａ、ＡＶＶ３Ｂ、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＶＶ９、ＡＶＶ１０、ＡＶＶ１１、ＡＶＶ１２、ＡＶＶ１３、ＡＡＶｒｈ．７４、トリＡＡＶ、ウシＡＡＶ、イヌＡＡＶ、ウマＡＡＶ、ヤギＡＶＶ、霊長類ＡＡＶ、非霊長類ＡＡＶ、ヒツジＡＡＶ、エビＡＶＶ、ヘビＡＶＶ、及びこれらの任意の組み合わせからなる群から選択される少なくとも２つのＡＡＶベクターから誘導されるキメラベクターである。
特定の態様では、ＡＡＶベクターは、当該技術分野では周知の少なくとも２つの異なるＡＡＶベクターの領域を含む。
いくつかの態様では、ＡＡＶベクターは、第１のＡＡＶ（例えば、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３Ａ、ＡＶＶ３Ｂ、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＶＶ９、ＡＶＶ１０、ＡＶＶ１１、ＡＶＶ１２、ＡＶＶ１３、ＡＡＶｒｈ．７４、トリＡＡＶ、ウシＡＡＶ、イヌＡＡＶ、ウマＡＡＶ、ヤギＡＶＶ、霊長類ＡＡＶ、非霊長類ＡＡＶ、ヒツジＡＡＶ、エビＡＶＶ、ヘビＡＶＶ、またはこれらの任意の組み合わせ）に由来する末端逆位配列と、第２のＡＡＶ（例えば、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３Ａ、ＡＶＶ３Ｂ、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＶＶ９、ＡＶＶ１０、ＡＶＶ１１、ＡＶＶ１２、ＡＶＶ１３、ＡＡＶｒｈ．７４、トリＡＡＶ、ウシＡＡＶ、イヌＡＡＶ、ウマＡＡＶ、ヤギＡＶＶ、霊長類ＡＡＶ、非霊長類ＡＡＶ、ヒツジＡＡＶ、エビＡＶＶ、ヘビＡＶＶ、またはこれらの任意の組み合わせ）に由来する第２の末端逆位配列と、を含む。
いくつかの態様では、ＡＡＶベクターは、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３Ａ、ＡＶＶ３Ｂ、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＶＶ９、ＡＶＶ１０、ＡＶＶ１１、ＡＶＶ１２、ＡＶＶ１３、ＡＡＶｒｈ．７４、トリＡＡＶ、ウシＡＡＶ、イヌＡＡＶ、ウマＡＡＶ、ヤギＡＶＶ、霊長類ＡＡＶ、非霊長類ＡＡＶ、ヒツジＡＡＶ、エビＡＶＶ、ヘビＡＶＶ、及びこれらの任意の組み合わせからなる群から選択されたＡＡＶベクターの部分を含む。いくつかの態様では、ＡＡＶベクターは、ＡＡＶ２を含む。
いくつかの態様では、ＡＡＶベクターは、スプライスアクセプター部位を含む。いくつかの態様では、ＡＡＶベクターは、プロモーターを含む。当該技術分野では周知の任意のプロモーターを本開示のＡＡＶベクターで使用することができる。いくつかの実施態様では、プロモーターはＲＮＡ Ｐｏｌ ＩＩＩプロモーターである。いくつかの態様では、ＲＮＡ Ｐｏｌ ＩＩＩプロモーターは、Ｕ６プロモーター、Ｈ１プロモーター、７ＳＫプロモーター、５Ｓプロモーター、アデノウイルス２（Ａｄ２）ＶＡＩプロモーター、及びこれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。いくつかの態様では、プロモーターは、サイトメガロウイルス前初期遺伝子（ＣＭＶ）プロモーター、ＥＦ１ａプロモーター、Ｓｖ４０プロモーター、ＰＧＫ１プロモーター、Ｕｂｃプロモーター、ヒトβアクチンプロモーター、ＣＡＧプロモーター、ＴＲＥプロモーター、ＵＡＳプロモーター、Ａｃ５プロモーター、ポリヘドリンプロモーター、ＣａＭＫＩＩａプロモーター、ＧＡＬ１プロモーター、ＧＡＬ１０プロモーター、ＴＥＦプロモーター、ＧＤＳプロモーター、ＡＤＨ１プロモーター、ＣａＭＶ３５Ｓプロモーター、またはＵｂｉプロモーターである。特定の態様では、プロモーターは、Ｕ６プロモーターを含む。
いくつかの態様では、ＡＡＶベクターは、構成的に活性なプロモーター（構成的プロモーター）を含む。いくつかの態様では、構成的プロモーターは、ヒポキサンチンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＰＲＴ）、アデノシンデアミナーゼ、ピルビン酸キナーゼ、βアクチンプロモーター、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、サルウイルス（例えば、ＳＶ４０）、パピローマウイルス、アデノウイルス、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、ラウス肉腫ウイルス、レトロウイルス末端反復配列（ＬＴＲ）、マウス幹細胞ウイルス（ＭＳＣＶ）、及び単純ヘルペスウイルスのチミジンキナーゼプロモーターからなる群から選択される。
いくつかの態様では、プロモーターは、誘導性プロモーターである。いくつかの態様では、誘導性プロモーターは、組織特異的プロモーターである。特定の態様では、組織特異的プロモーターは、神経細胞、グリア細胞、または神経細胞及びグリア細胞の両方において、ＡＡＶベクターのコーディング領域の転写を誘導する。
いくつかの態様では、ＡＡＶベクターは、１つ以上のエンハンサーを含む。いくつかの態様では、１つ以上のエンハンサーはＡＡＶ内に単独で、または本明細書に開示されるプロモーターとともに存在する。いくつかの態様では、ＡＡＶベクターは、３’ＵＴＲのポリ（Ａ）テール配列を含む。いくつかの態様では、３’ＵＴＲのポリ（Ａ）テール配列は、ｂＧＨポリ（Ａ）、アクチンポリ（Ａ）、ヘモグロビンポリ（Ａ）、及びこれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。いくつかの態様では、３’ＵＴＲのポリ（Ａ）テール配列はｂＧＨポリ（Ａ）を含む。
いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤は、送達剤とともに投与される。使用することができる送達剤の非限定的な例としては、リピドイド、リポソーム、リポプレックス、脂質ナノ粒子、ポリマー化合物、ペプチド、タンパク質、細胞、ナノ粒子模倣体、ナノチューブ、ミセル、またはコンジュゲートが挙げられる。
したがって、いくつかの態様では、本開示は、本開示のｍｉＲＮＡ阻害剤（すなわちｍｉＲ－４８５阻害剤）と、送達剤と、を含む組成物も提供する。いくつかの態様では、送達剤は、下式：
［ＷＰ］－Ｌ１－［ＣＣ］－Ｌ２－［ＡＭ］（式Ｉ）
または
［ＷＰ］－Ｌ１－［ＡＭ］－Ｌ２－［ＣＣ］（式ＩＩ）
（式中、
ＷＰは、水溶性バイオポリマー部分であり、
ＣＣは、正に帯電したキャリア部分であり、
ＡＭは、アジュバント部分であり、
Ｌ１及びＬ２は、独立して、任意選択のリンカーである）を有するカチオン性キャリアユニットを含み、
カチオン性キャリアユニットは、約１：１のイオン比で核酸と混合される場合にミセルを形成する。
いくつかの態様では、本開示のｍｉＲＮＡ阻害剤（すなわち、ｍｉＲ－４８５阻害剤）を含む組成物は、イオン結合を介してカチオン性キャリアユニットと相互作用する。
いくつかの態様では、水溶性ポリマーは、ポリ（アルキレングリコール）、ポリ（オキシエチル化ポリオール）、ポリ（オレフィンアルコール）、ポリ（ビニルピロリドン）、ポリ（ヒドロキシアルキルメタクリルアミド）、ポリ（ヒドロキシアルキルメタクリレート）、ポリ（サッカライド）、ポリ（α－ヒドロキシ酸）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリグリセロール、ポリホスファゼン、ポリオキサゾリン（「ＰＯＺ」）、ポリ（Ｎ－アクリロイルモルホリン）、またはそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの態様では、水溶性ポリマーは、ポリエチレングリコール（「ＰＥＧ」）、ポリグリセロール、またはポリ（プロピレングリコール）（「ＰＰＧ」）を含む。いくつかの態様では、水溶性ポリマーは、下式：
Figure 2023513189000023
（式中、ｎは、１～１０００である）を有する。
いくつかの態様では、ｎは、少なくとも約１１０、少なくとも約１１１、少なくとも約１１２、少なくとも約１１３、少なくとも約１１４、少なくとも約１１５、少なくとも約１１６、少なくとも約１１７、少なくとも約１１８、少なくとも約１１９、少なくとも約１２０、少なくとも約１２１、少なくとも約１２２、少なくとも約１２３、少なくとも約１２４、少なくとも約１２５、少なくとも約１２６、少なくとも約１２７、少なくとも約１２８、少なくとも約１２９、少なくとも約１３０、少なくとも約１３１、少なくとも約１３２、少なくとも約１３３、少なくとも約１３４、少なくとも約１３５、少なくとも約１３６、少なくとも約１３７、少なくとも約１３８、少なくとも約１３９、少なくとも約１４０、または少なくとも約１４１である。いくつかの態様では、ｎは、約８０～約９０、約９０～約１００、約１００～約１１０、約１１０～約１２０、約１２０～約１３０、約１４０～約１５０、または約１５０～約１６０である。
いくつかの態様では、水溶性ポリマーは、直鎖状、分枝鎖状、または樹枝状である。いくつかの態様では、カチオン性キャリア部分は、１つ以上の塩基性アミノ酸を含む。いくつかの態様では、カチオン性キャリア部分は、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、少なくとも６つ、少なくとも７、少なくとも８つ、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、少なくとも２２、少なくとも２３、少なくとも２４、少なくとも２５、少なくとも２６、少なくとも２７、少なくとも２８、少なくとも２９、少なくとも３０、少なくとも３１、少なくとも３２、少なくとも３３、少なくとも３４、少なくとも３５、少なくとも３６、少なくとも３７、少なくとも３８、少なくとも３９、少なくとも４０、少なくとも４１、少なくとも４２、少なくとも４３、少なくとも４４、少なくとも４５、少なくとも４６、少なくとも４７、少なくとも４８、少なくとも４９、または少なくとも５０の塩基性アミノ酸を含む。いくつかの態様では、カチオン性キャリア部分は、約３０～約５０の塩基性アミノ酸を含む。いくつかの態様では、塩基性アミノ酸は、アルギニン、リシン、ヒスチジン、またはそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの態様では、カチオン性キャリア部分は、約４０個のリシンモノマーを含む。
いくつかの態様では、アジュバント部分は、免疫反応、炎症反応、及び／または組織微小環境を調節することができる。いくつかの態様では、アジュバント部分は、イミダゾール誘導体、アミノ酸、ビタミン、またはそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの態様では、アジュバント部分は、下式：
Figure 2023513189000024
（式中、Ｇ１及びＧ２のそれぞれは、Ｈ、芳香環、もしくは１～１０アルキルであるか、またはＧ１とＧ２はともに芳香環を形成し、ｎは１～１０である）を有する。
いくつかの態様では、アジュバント部分は、ニトロイミダゾールを含む。いくつかの態様では、アジュバント部分は、メトロニダゾール、チニダゾール、ニモラゾール、ジメトリダゾール、プレトマニド、オルニダゾール、メガゾール、アザニダゾール、ベンズニダゾール、またはそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの態様では、アジュバント部分は、アミノ酸を含む。
いくつかの態様では、アジュバント部分は、下式：
Figure 2023513189000025
（式中、Ａｒは、
Figure 2023513189000026
であり、
Ｚ１及びＺ２のそれぞれは、ＨまたはＯＨである）を有する。
いくつかの態様では、アジュバント部分は、ビタミンを含む。いくつかの態様では、ビタミンは、環式環または環式ヘテロ原子環及びカルボキシル基またはヒドロキシル基を含む。いくつかの態様では、ビタミンは、下式：
Figure 2023513189000027
（式中、Ｙ１及びＹ２のそれぞれは、Ｃ、Ｎ、Ｏ、またはＳであり、ｎは１または２である）を有する。
いくつかの態様では、ビタミンは、ビタミンＡ、ビタミンＢ１、ビタミンＢ２、ビタミンＢ３、ビタミンＢ６、ビタミンＢ７、ビタミンＢ９、ビタミンＢ１２、ビタミンＣ、ビタミンＤ２、ビタミンＤ３、ビタミンＥ、ビタミンＭ、ビタミンＨ、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。いくつかの態様では、ビタミンは、ビタミンＢ３である。
いくつかの態様では、アジュバント部分は、少なくとも約２個、少なくとも約３個、少なくとも約４個、少なくとも約５個、少なくとも約６個、少なくとも約７個、少なくとも約８個、少なくとも約９個、少なくとも約１０個、少なくとも約１１個、少なくとも約１２個、少なくとも約１３個、少なくとも約１４個、少なくとも約１５個、少なくとも約１６個、少なくとも約１７個、少なくとも約１８個、少なくとも約１９個、または少なくとも約２０個のビタミンＢ３を含む。いくつかの態様では、アジュバント部分は、約１０個のビタミンＢ３を含む。
いくつかの態様では、組成物は、約１２０個～約１３０個のＰＥＧユニットを有する水溶性バイオポリマー部分と、約３０個～約４０個のリシンを有するポリリシンを含むカチオン性キャリア部分と、約５個～約１０個のビタミンＢ３を有するアジュバント部分と、を含む。
いくつかの態様では、組成物は、（ｉ）約１００個～約２００個のＰＥＧユニットを有する水溶性バイオポリマー部分と、（ｉｉ）アミン基を有する約３０個～約４０個のリシン（例えば、約３２個のリシン）と、（ｉｉｉ）それぞれがチオール基を有する約１５個～２０個のリシン（例えば、それぞれがチオール基を有する約１６個のリシン）と、（ｉｖ）ビタミンＢ３に融合された約３０個～４０個のリシン（例えば、それぞれがビタミンＢ３に融合された約３２個のリシン）と、を含む。いくつかの態様では、組成物は、水溶性ポリマーに結合された標的化部分、例えばＬＡＴ１標的化リガンド、例えばフェニルアラニンをさらに含む。いくつかの態様では、組成物中のチオール基は、ジスルフィド結合を形成する。
いくつかの態様では、組成物は、（１）（ｉ）約１００個～約２００個のＰＥＧユニットと、（ｉｉ）アミン基を有する約３０個～約４０個のリシン（例えば、約３２個のリシン）と、（ｉｉｉ）それぞれがチオール基を有する約１５個～２０個のリシン（例えば、それぞれがチオール基を有する約１６個のリシン）と、（ｉｖ）ビタミンＢ３に融合された約３０個～４０個のリシン（例えば、それぞれがビタミンＢ３に融合された約３２個のリシン）と、を有するミセルと、（２）ｍｉＲ４８５阻害剤（例えば、配列番号３０）と、を含み、ｍｉＲ４８５阻害剤はミセル内に封入される。いくつかの態様では、組成物は、ＰＥＧユニットに結合された標的化部分、例えばＬＡＴ１標的化リガンド、例えばフェニルアラニンをさらに含む。いくつかの態様では、ミセル中のチオール基は、ジスルフィド結合を形成する。
本開示は、本開示のｍｉＲＮＡ阻害剤（すなわちｍｉＲ－４８５阻害剤、例えば配列番号３０）を含むミセルであって、ｍｉＲＮＡ阻害剤と送達剤とが互いに結合した、ミセルも提供する。
いくつかの態様では、結合は、共有結合、非共有結合、またはイオン結合である。いくつかの態様では、カチオン性キャリアユニットのカチオン性キャリア部分の正電荷は、溶液中で本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤と混合される際にミセルを形成するのに十分であり、溶液中のカチオン性キャリアユニットのカチオン性キャリア部分の正電荷とｍｉＲ－４８５阻害剤（または阻害剤を含むベクター）の負電荷の全体的イオン比は、約１：１である。
いくつかの態様では、カチオン性キャリアユニットは、酵素分解から本開示のｍｉＲＮＡ阻害剤（すなわち、ｍｉＲ－４８５阻害剤）を保護することができる（本明細書に参照によりその全体を援用する、２０２０年１２月３０日に公開されたＰＣＴ公開第ＷＯ２０２０／２６１２２７号を参照）。
Ｖ．医薬組成物
いくつかの態様では、本開示は、対象に投与するのに適した本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤（例えば、ｍｉＲ－４８５阻害剤を含むポリヌクレオチドまたはベクター）を含む医薬組成物も提供する。医薬組成物は、一般的に、本明細書に記載されるｍｉＲ－４８５阻害剤（例えば、ポリヌクレオチドまたはベクター）と、薬学的に許容される賦形剤またはキャリアとを、対象への投与に適した形態で含む。薬学的に許容される賦形剤またはキャリアは、投与される特定の組成物、及び組成物を投与するために使用される特定の方法により部分的に決定される。
したがって、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤を含む医薬組成物の多種多様な適当な製剤が存在する（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．１８ｔｈ ｅｄ．（１９９０）を参照）。医薬組成物は一般に、無菌状態で、米国食品医薬品局の適正製造基準（ＧＭＰ）規制のすべてに完全に準拠したものとして製剤化される。
ＶＩ．キット
本開示は、本開示のｍｉＲＮＡ阻害剤（例えば、本明細書に開示されるポリヌクレオチド、ベクター、または医薬組成物）と、必要に応じて使用説明書、例えば本明細書に開示される方法に従った使用説明書と、を含むキットまたは製品も提供する。いくつかの態様では、キットまたは製品は、ｍｉＲ－４８５阻害剤（例えば、本開示のベクター、例えばＡＡＶベクター、ポリヌクレオチド、または医薬組成物）を１つ以上の容器に含む。いくつかの態様では、キットまたは製品は、ｍｉＲ－４８５阻害剤（例えば、本開示のベクター、例えばＡＡＶベクター、ポリヌクレオチド、または医薬組成物）と、パンフレットと、を含む。本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤（例えば、本開示のベクター、ポリヌクレオチド、及び医薬組成物、またはこれらの組み合わせ）は、当該技術分野では周知の確立されたキット形式の１つに容易に組み込むことができる点は当業者には容易に認識されよう。
以下の実施例は、例示のために示すものであって、限定のために示すものではない。
実施例１：ｍｉＲ－４８５阻害剤の調製
（ａ）アルキン修飾チロシンの合成：本開示のミセルをＢＢＢのＬＡＴ１輸送体に誘導するためのカチオン性キャリアユニットの組織特異的標的化部分（ＴＭ、図１を参照）の合成のための中間体として、アルキン修飾されたチロシンを調製した。
アセトニトリル（４．０ｍｌ）中、Ｎ－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－Ｌ－チロシンメチルエステル（Ｂｏｃ－Ｔｙｒ－ＯＭｅ）（０．５ｇ，１．６９ｍｍｏｌ）及びＫ２ＣＯ３（１．５当量，２．５４ｍｍｏｌ）の混合物を、臭化プロパルギル（１．２当量，２．０３ｍｍｏｌ）に滴下した。反応混合物を６０℃で一晩加熱した。反応後、反応混合物を、水：酢酸エチル（ＥＡ）を使用して抽出した。次いで、有機層を、ブライン溶液を使用して洗浄した。粗製物を、フラッシュカラム（ヘキサン中、１０％ＥＡ）により精製した。次に、得られた生成物を、１，４－ジオキサン（１．０ｍｌ）及び６．０ＭのＨＣｌ（１．０ｍｌ）中に溶解した。反応混合物を１００℃で一晩加熱した。次に、ジオキサンを除去し、ＥＡにより抽出した。水性ＮａＯＨ（０．５Ｍ）溶液をｐＨ値が７になるまで混合物に加えた。反応物質をエバポレーターで濃縮し、１２，０００ｒｐｍで０℃で遠心分離した。沈殿物を脱イオン水で洗浄して凍結乾燥した。
（ｂ）ポリ（エチレングリコール）－ｂ－ポリ（Ｌ－リシン）（ＰＥＧ－ＰＬＬ）の合成：この合成ステップにより、本開示のカチオン性キャリアユニットの水溶性バイオポリマー（ＷＰ）及びカチオン性キャリア（ＣＣ）を調製した（図１を参照）。
ポリ（エチレングリコール）－ｂ－ポリ（Ｌ－リシン）を、モノメトキシＰＥＧ（ＭｅＯ－ＰＥＧ）を高分子開始剤として用いてＬｙｓ（ＴＦＡ）－ＮＣＡの開環重合により合成した。要約すると、ＭｅＯ－ＰＥＧ（６００ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）及びＬｙｓ（ＴＦＡ）－ＮＣＡ（２５７４ｍｇ、９．６ｍｍｏｌ）を、１Ｍのチオ尿素を含有するＤＭＦ及びＤＭＦ（またはＮＭＰ）中に別々に溶解した。Ｌｙｓ（ＴＦＡ）－ＮＣＡ溶液を、マイクロシリンジによりＭｅＯ－ＰＥＧ溶液に滴下し、反応混合物を３７℃で４日間撹拌した。反応ボトルをアルゴン及び真空によりパージした。すべての反応をアルゴン雰囲気下で行った。反応後、混合物を過剰量のジエチルエーテル中で沈殿させた。沈殿物をメタノールに再溶解し、冷ジエチルエーテル中で再び沈殿させた。次いで、沈殿物を濾過し、減圧下で乾燥後に白色粉末を得た。ＰＥＧ－ＰＬＬ（ＴＦＡ）のＴＦＡ基の脱保護を行うため、次のステップを行った。
ＭｅＯ－ＰＥＧ－ＰＬＬ（ＴＦＡ）（５００ｍｇ）をメタノール（６０ｍＬ）に溶解し、１ＮのＮａＯＨ（６ｍＬ）をポリマー溶液に撹拌下で滴下した。混合物を撹拌しながら３７℃で１日維持した。反応混合物を１０ｍＭのＨＥＰＥＳに対して４回及び蒸留水に対して透析した。凍結乾燥後にＰＥＧ－ＰＬＬの白色粉末を得た。
（ｂ）アジド－ポリ（エチレングリコール）－ｂ－ポリ（Ｌ－リシン）（Ｎ３－ＰＥＧ－ＰＬＬ）の合成：この合成ステップにより、本開示のカチオン性キャリアユニットの水溶性バイオポリマー（ＷＰ）及びカチオン性キャリア（ＣＣ）を調製した（図１を参照）。
アジド－ポリ（エチレングリコール）－ｂ－ポリ（Ｌ－リシン）を、アジド－ＰＥＧ（Ｎ３－ＰＥＧ）を用いてＬｙｓ（ＴＦＡ）－ＮＣＡの開環重合により合成した。要約すると、Ｎ３－ＰＥＧ（３００ｍｇ，０．０６ｍｍｏｌ）及びＬｙｓ（ＴＦＡ）－ＮＣＡ（１２８７ｍｇ，４．８ｍｍｏｌ）を、１Ｍのチオ尿素を含んだＤＭＦ及びＤＭＦ（またはＮＭＰ）に別々に溶解した。Ｌｙｓ（ＴＦＡ）－ＮＣＡ溶液を、マイクロシリンジによりＮ３－ＰＥＧ溶液に滴下し、反応混合物を３７℃で４日間撹拌した。反応ボトルをアルゴン及び真空によりパージした。すべての反応をアルゴン雰囲気下で行った。反応後、混合物を過剰量のジエチルエーテル中で沈殿させた。沈殿物をメタノールに再溶解し、冷ジエチルエーテル中で再び沈殿させた。次いで、沈殿物を濾過し、減圧下で乾燥後に白色粉末を得た。ＰＥＧ－ＰＬＬ（ＴＦＡ）のＴＦＡ基の脱保護を行うため、次のステップを行った。
Ｎ３－ＰＥＧ－ＰＬＬ（５００ｍｇ）をメタノール（６０ｍＬ）に溶解し、１ＮのＮａＯＨ（６ｍＬ）を撹拌しながらポリマー溶液に滴下した。混合物を撹拌しながら３７℃で１日維持した。反応混合物を１０ｍＭのＨＥＰＥＳに対して４回及び蒸留水に対して透析した。凍結乾燥後にＮ３－ＰＥＧ－ＰＬＬの白色粉末を得た。
（ｃ）（メトキシまたは）アジド－ポリ（エチレングリコール）－ｂ－ポリ（Ｌ－リシン／ニコチンアミド／メルカプトプロパンアミド）（Ｎ３－ＰＥＧ－ＰＬＬ（Ｎｉｃ／ＳＨ））の合成：このステップでは、組織特異的アジュバント部分（ＡＭ、図１を参照）を本開示のカチオン性キャリアユニットのＷＰ－ＣＣコンポーネントに結合させた。カチオン性キャリアユニットに使用した組織特異的アジュバント部分（ＡＭ）は、ニコチンアミド（ビタミンＢ３）とした。このステップにより、図１に示されるカチオン性キャリアユニットのＷＰ－ＣＣ－ＡＭコンポーネントが得られる。
アジド－ポリ（エチレングリコール）－ｂ－ポリ（Ｌ－リシン／ニコチンアミド／メルカプトプロパンアミド）（Ｎ３－ＰＥＧ－ＰＬＬ（Ｎｉｃ／ＳＨ））を、ＥＤＣ／ＮＨＳの存在下でＮ３－ＰＥＧ－ＰＬＬ及びニコチン酸の化学修飾により合成した。Ｎ３－ＰＥＧ－ＰＬＬ（３７２ｍｇ，２５．８μｍｏｌ）及びニコチン酸（５５６．７ｍｇ，ＰＥＧ－ＰＬＬのＮＨ２に対して１．０２当量）を、脱イオン水及びメタノール（１：１）の混合物に別々に溶解した。ＥＤＣ・ＨＣｌ（５５６．７ｍｇ，Ｎ３－ＰＥＧ－ＰＬＬのＮＨ２に対して１．５当量）をニコチン酸溶液に加え、ＮＨＳ（３３４．２ｍｇ，ＰＥＧ－ＰＬＬのＮＨ２に対して１．５当量）を混合物に段階的に加えた。
反応混合物をＮ３－ＰＥＧ－ＰＬＬ溶液に加えた。反応混合物を撹拌しながら３７℃で１６時間維持した。１６時間後、３，３’－ジチオジプロピオン酸（３６．８ｍｇ，０．１当量）をメタノールに溶解し、ＥＤＣ・ＨＣｌ（４０．３ｍｇ，０．１５当量）、及びＮＨＳ（２４．２ｍｇ，０．１５当量）を脱イオン水にそれぞれ溶解した。次いで、ＮＨＳ及びＥＤＣ・ＨＣｌを、３，３’－ジチオジプロピオン酸溶液に順次加えた。粗製のＮ３－ＰＥＧ－ＰＬＬ（Ｎｉｃ）溶液を加えた後、混合液を３７℃で４時間撹拌した。
精製を行うため、混合物をメタノールに対して２時間透析し、ＤＬ－ジチオトレイトール（ＤＴＴ，４０．６ｍｇ，０．１５当量）を加えた後、３０分間活性化した。
ＤＴＴを除去するため、混合物を、メタノール、脱イオン水中５０％のメタノール、脱イオン水に対して順次透析した。
ｄ）フェニルアラニン－ポリ（エチレングリコール）－ｂ－ポリ（Ｌ－リシン／ニコチンアミド／メルカプトプロパンアミド）（Ｐｈｅ－ＰＥＧ－ＰＬＬ（Ｎｉｃ／ＳＨ））の合成：このステップでは、組織特異的標的化部分（ＴＭ）を上記のステップで合成したＷＰ－ＣＣ－ＡＭコンポーネントに結合させた。ＴＭコンポーネント（フェニルアラニン）は、ステップ（ａ）で調製した中間体とステップ（ｃ）の生成物との反応によって調製した。
血管内の脳の内皮組織を標的化するため、ＬＡＴ１を標的とするアミノ酸としてフェニルアラニンを、銅触媒の存在下でのＮ３－ＰＥＧ－ＰＬＬ（Ｎｉｃ／ＳＨ）とアルキン修飾されたチロシンとの間のクリック反応により導入した。要約すると、Ｎ３－ＰＥＧ－ＰＬＬ（Ｎｉｃ／ＳＨ）（１３０ｍｇ，６．５μｍｏｌ）及びアルキン修飾されたフェニルアラニン（５．７ｍｇ，４．０当量）を脱イオン水（または５０ｍＭのリン酸ナトリウム緩衝液）に溶解した。次いで、ＣｕＳＯ４・Ｈ２Ｏ（０．４ｍｇ，２５ｍｏｌ％）及びＴｒｉｓ（３－ヒドロキシプロピルトリアゾリルメチル）アミン（ＴＨＰＴＡ，３．４ｍｇ，１．２当量）を脱イオン水に溶解し、Ｎ３－ＰＥＧ－ＰＬＬ（Ｎｉｃ／ＳＨ）溶液を加えた。次いで、アスコルビン酸ナトリウム（３．２ｍｇ，２．５当量）を混合液に加えた。反応混合物を、室温で１６時間撹拌しながら維持した。反応後、混合物を透析膜（ＭＷＣＯ＝７，０００）に移し、脱イオン水に対して１日間透析した。最終生成物を凍結乾燥後に得た。
（ｅ）ポリイオン複合体（ＰＩＣ）ミセル製剤－上記に記載したようにして本開示のカチオン性キャリアユニットを調製した後、ミセルを作製した。本実施例に記載されるミセルは、アンチセンスオリゴヌクレオチドペイロードと組み合わされたカチオン性キャリアユニットからなるものである。
ＭｅＯ－ＰＥＧ－ＰＬＬ（Ｎｉｃ）またはＰｈｅ－ＰＥＧ－ＰＬＬ（Ｎｉｃ）とｍｉＲＮＡを混合することによりナノサイズのＰＩＣミセルを調製した。ＰＥＧ－ＰＬＬ（Ｎｉｃ）を、０．５ｍｇ／ｍＬの濃度でＨＥＰＥＳ緩衝液（１０ｍＭ）に溶解した。次いで、ＲＮＡｓｅ非含有水中のｍｉＲＮＡ溶液（２２．５μＭ）を、ｍｉＲＮＡ阻害剤（配列番号２～３０）（例えば、ＡＧＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ；配列番号３０）とポリマーとの比が２：１（ｖ／ｖ）となるようにポリマー溶液と混合した。
ポリマーと抗ｍｉＲＮＡとの混合比は、ミセル形成条件、すなわち、ポリマー（本開示のキャリア）中のアミンと抗ｍｉＲＮＡ（ペイロード）中のリン酸との比を最適化することにより決定した。ポリマー（キャリア）と抗ｍｉＲＮＡ（ペイロード）との混合物を、マルチボルテックスにより３０００ｒｐｍで９０秒間はげしく混合し、室温で３０分間維持して、ミセルを安定化した。
使用に先立ち、ミセル（１０μＭの抗ｍｉＲＮＡ濃度）を４℃で保存した。ＭｅＯ－ミセルまたはＰｈｅ－ミセルを同じ方法を用いて調製し、ミセル調製時に両方のポリマーを混合することにより異なる量のＰｈｅ（２５％～７５％）を含有するミセルも調製した。
実施例２：ＡＬＳにおけるＩＬ－１β及びＰＧＣ－１αの発現の分析
本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤がＡＬＳを治療することができるかどうかの評価を開始するに当たり、確立されたＡＬＳ動物モデル（すなわち、ＳＯＤ１－ＡＬＳマウス）を用いた。ＡＬＳマウスを作製するため、雌ＳＯＤ１Ｇ９３Ａ変異体トランスジェニックマウス（バックグラウンドＢ６／ＳＪＬ）をＪａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙより購入し、ＷＴＢ６／ＳＪＬと交配した。ＳＯＤ１Ｇ９３Ａ変異体マウスの遺伝子型は、Ｔｈｅ Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙによって提供される標準的なＰＣＲ条件に従ってテールＤＮＡのＰＣＲ分析によって確認した。ケージ当たり４～５匹の遺伝子型の混ざり合ったマウスを、１２時間の明／１２時間の暗のサイクルで食餌と水を自由摂取させて飼育した。すべての動物の飼育手順は、実験動物の飼育及び使用についてのＫｏｎｙａｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙのガイドラインに従って行った。
簡単に述べると、ＡＬＳマウス及び野生型動物の脊髄（腰部）及び骨格筋からの組織試料を単離した。次いで、ウエスタンブロットを使用してＩＬ－１β及びＰＧＣ－１αの発現を測定した。図２Ａ及び２Ｂに示されるように、脊髄では、既知の炎症メディエーターであるＩＬ－１βの発現の顕著な増加が認められた。骨格筋では、ＡＬＳマウスが発現したＰＧＣ－１αの発現レベルは野生型動物と比較してより低かった。
これらの結果は、ＡＬＳが遺伝子発現の特定の差に関連しており、これを本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤を用いて標的化できる可能性を示している。
実施例３：疾患の発症に対するｍｉＲ－４８５阻害剤の分析
上記の仮説の評価を開始するに当たり、ＡＬＳマウスをＩＣＶ注射によるｍｉＲ－４８５阻害剤の２回の投与（合計用量＝３μｇ／マウス）で処理した。コントロールＡＬＳマウスにはＰＢＳ、ＡＬＳの進行を遅らせることが以前に確認されているアンチセンスオリゴヌクレオチドをＩＣＶ注射により２回投与した。その後、ＡＬＳの発症を評価した。マウスを約２週間の間に６回評価した。症状のないマウスを０点とした。後肢に震えがみられるマウスを１点とした。マウスの尾を持ってぶら下げた際に固く麻痺した後肢を示すマウスを２点とした。転倒または歩行困難を示すマウスを３点とした。後肢を引きずり、立つことができないマウスを４点とした。マウスを仰向けに置いたときに姿勢を直せないマウスを５点とした。マウスの評価スコアが４点未満だった場合にマウスを疾患発症を呈しているものとみなした。
図３Ａ及び３Ｂに示されるように、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤で処理した動物は、ＰＢＳで処理したコントロール動物と比較して有意に遅い疾患発症を示した。コントロール動物における平均疾患発症は約９０日であった。ｍｉＲ－４８５処理動物では、疾患発症はおよそ１ヶ月遅れた。（すなわち約１２０日）さらに、ｍｉＲ－４８５阻害剤で処理した動物は、コントロール動物と比較して高い生存率を示した（図３Ｃを参照）。
実施例４：筋力に対するｍｉＲ－４８５阻害剤の分析
ｍｉＲ－４８５阻害剤がＡＬＳに関連した他の症状も改善できるかどうかを調べるため、実施例３のマウスにハングワイヤ試験を行って筋力を測定した。図４に示されるように、ｍｉＲ－４８５阻害剤で処理した動物は、測定したすべての時間で、ＰＢＳで処理した動物と比較して落下までの潜時の大幅な増加を示した。
まとめると、上記の結果は、ｍｉＲ－４８５阻害剤が、疾患発症を遅らせるだけでなく、ＡＬＳに関連した１つ以上の症状（例えば、筋力低下）も改善し得ることによってＡＬＳ患者で治療効果を有し得ることを示している。さらに、上記のデータは、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤は、当該分野における他の薬剤と比較して大幅に低い用量で大幅に高い治療効果を奏することを示している。
実施例５：静脈内投与後のｍｉＲ－４８５阻害剤の治療効果の分析
ｍｉＲ－４８５阻害剤の治療効果をさらに評価するため、ＡＬＳマウス（実施例２を参照）に、生後約２ヶ月（すなわち６６日目）から開始してＰＢＳまたはｍｉＲ－４８５阻害剤（１用量当たり２．５ｍｇ／ｋｇ）を静脈内投与した（図９Ａを参照）。各マウスに１回／週の投与間隔で合計４回の投与を行った（生後６６、７３、８０、及び８７日目）。その後、生後約１００～１２５日に、体重、及びさらに下記に述べるようにロータロッド、ハングワイヤ、及びバランスビーム試験を用いて運動機能を評価した。一部の動物はさらに屠殺して、ウエスタンブロット及び／または免疫組織化学分析を用いて腰部脊髄における各種のタンパク質（例えば、ＣｈＡＴ１、Ｉｂａ１、ＰＧＣ１、ＳＩＲＴ１、ＧＦＡＰ、ＴＮＦ、及びＩＬ－１）の発現を評価した。
神経学的スコア試験を用いて疾患発症を評価した。神経学的スコア試験の評価は以下のように行った。正常（運動機能障害の徴候なし）が４匹、マウスの尾を持ってぶら下げたときに後肢に震えがみられたのが３匹、歩行異常が認められたものが２匹、少なくとも一方の後肢を引きずったものが１匹、動物を仰臥位に置いた場合に３０秒で起き上がれなかったものは０匹であった。神経学的スコアが３点以下の状態が２週間連続して生じた場合、疾患発症として評価した。
ロータロッド:マウスを、ロータロッド装置（ロッド径３ｃｍ）で、１０ｒｐｍの固定速度で６００秒間、１日１回、３日間連続で訓練した。ロッド上での成績を３００秒間で４～４０ｒｐｍの一定の加速割合で評価した。６０分間隔で２回の連続した試行を行った。
ハングワイヤ試験：運動協調性のワイヤハング試験で、マウスを厚さ２ｍｍ、長さ５５ｃｍのピンと張った金属製ワイヤ上で試験した。その中にマウスが落下するように、長さ６０ｃｍの黒いポリスチレン製ボックスからなる特製のハング装置を作製した。マウスがぶら下げられてからワイヤから落下するまでの潜時を、各マウスで３回の試行における最長のぶら下がり時間を測定して記録した。
バランスビーム試験：マウスを幅０．５ｃｍ、長さ１ｍのバランスビーム装置に乗せた。バランスビームは、走路の端に暗い休息箱を有する高さ５０ｃｍの透明なプレキシグラス製構造として構成されたものを用いた。マウスを午前中、３回、ビーム上で訓練し、試行間で少なくとも１５分間の休憩時間を与えた。マウスを暗い休息箱の中に少なくとも１０秒間置いた後、ホームケージに戻した。その後、午後にマウスを訓練セッションの少なくとも２時間後に再試験した。試験セッションにおいてマウスの成績を記録した。試験は３回の試行で構成し、試行間に少なくとも１０分間の休憩時間を置いた。足を滑らせた合計回数を３回の試験のうちの最後の試験についてマニュアルで計算した。
図９Ｂに示されるように、コントロール動物と比較して、ｍｉＲ－４８５阻害剤で処理したＡＬＳマウスでは、疾患発症の遅れが認められた（約２１日）。さらに、コントロール動物と比較して、ｍｉＲ－４８５阻害剤で処理したＡＬＳマウスは、体重低下の減少（図９Ｇ及び９Ｈを参照）及び生存率の増加（図９Ｉを参照）も示した。さらに、図９Ｃ～９Ｆに示されるように、ｍｉＲ－４８５阻害剤で処理したＡＬＳマウスは、運動機能の改善も示した。例えば、ｍｉＲ－４８５阻害剤の投与後、ＡＬＳマウスは、落下までの潜時の増加（ロータロッド及びハングワイヤ試験の両方で。図９Ｃ及び９Ｄを参照）、足を滑らせた回数の減少（ビームバランス試験。図９Ｅを参照）、及びビーム横断時間の減少（ビームバランス試験。図９Ｆを参照）を示した。
上記の結果は、例えば、運動機能の改善、体重低下の減少、疾患発症の遅延、及び生存率の増加をもたらす、ＡＬＳの治療における本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤の有効性をさらに示すものである。
実施例６：ｍｉＲ－４８５阻害剤の安全性プロファイルの分析
ｍｉＲ－４８５阻害剤のインビボ投与が何らかの有害作用をもたらし得るかどうかを評価するため、単一用量毒性試験を行った。要約すると、ｍｉＲ－４８５阻害剤を、以下の用量、すなわち、（ｉ）０ｍｇ／ｋｇ（Ｇ１）、（ｉｉ）３．７５ｍｇ／ｋｇ（Ｇ２）、（ｉｉｉ）７．５ｍｇ／ｋｇ（Ｇ３）、及び（ｉｖ）１５ｍｇ／ｋｇ（Ｇ４）のうちの１つで雄及び雌のラットに投与した。次いで、体重、死亡率、臨床的徴候、及び病理学の異常を移動後の異なる時点の動物で観察した。
図５Ａ及び図５Ｂに示されるように、ｍｉＲ－４８５阻害剤の投与（試験したすべての用量で）は雄及び雌のラットの両方で体重になんらの異常な影響も及ぼさないようであった。同様に、死亡率及び病理学的異常は処理動物のいずれでも観察されなかった（図６Ａ、６Ｂ、８Ａ、及び８Ｂを参照）。可能性のある臨床的に関連した副作用（例えば、ＮＯＡ、鬱血（尾）、及び浮腫（顔、前肢、または後肢））に関して、そのような影響はすべての処理動物で投与１日後までに消失した（図７Ａ及び図７Ｂを参照）。
上記の結果は、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤は、ＡＬＳの治療において治療効果を有するだけでなく、インビボで投与した場合にも安全であることを示している。
実施例７：ＳＯＤ１活性に対するｍｉＲ－４８５阻害剤の効果の分析
ＳＯＤ１（銅・亜鉛スーパーオキシドディスムターゼ酵素としても知られる）は、細胞（例えば、神経細胞）を酸化ストレスから守るうえで重要な役割を果たしている。ＳＯＤ１の変異（例えば、Ｇ９３Ａ）がＡＬＳに関与していることが示されている。したがって、本明細書に開示されるｍｉＲＮＡ阻害剤がＡＬＳを治療する潜在的な機構をより深く理解するため、ＮＣＳ－３４細胞（運動神経細胞を増加させたマウス胎児脊髄細胞とマウス神経芽腫との融合により作製されたハイブリッド細胞株）に、ＧＦＰでタグ付けした野生型ＳＯＤ１（ＳＯＤ１ＷＴ）及びＧ９３Ａ変異を有するＳＯＤ１（ＳＯＤ１Ｇ９３Ａ）コンストラクトをトランスフェクトした。次いで、トランスフェクトした細胞を異なる濃度（０、５０、１００、または３００ｎＭ）のｍｉＲ－４８５阻害剤で処理した。ウエスタンブロット及び免疫蛍光分析を用いてトランスフェクトした細胞のさまざまなＳＯＤ１関連活性（ＳＯＤ１の凝集、ＳＩＲＴ１及びＰＧＣ－１αの発現、及びアポトーシス）を評価した。ウエスタンブロットによる評価を行うため、トランスフェクションの４８時間後に全細胞抽出物をＴｒｉｓバッファー（ｐＨ７．５）中、２％ＳＤＳ中で調製した。次いで、ＳＯＤ１種の非変性界面活性剤中への不溶性を評価した。免疫蛍光分析による評価を行うため、トランスフェクションに先立って、ＮＣＳ－３４細胞をカバーグラス上に播いて一晩増殖させた。次いで、トランスフェクションの４８時間後に細胞をＰＢＳで洗浄し、メタノールで１０分間、室温で固定し、モイストチャンバー内で、室温で１０分間、ＰＢＳ中、０．１％ＴｒｉｔｏｎＸ－１００で透過処理した。使用した抗体及び濃度は、マウスＧＦＰ（Ｓａｎｔａｃｒｕｚ）、１：１００；ウサギ抗ＬＣ３Ｂ（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）である。共焦点顕微鏡（Ｌｅｉｃａ ５２４ ＤＭｉ８）を使用して画像を取得した。
図１０Ａに示されるように、トランスフェクトしたＮＣＳ－３４細胞のｍｉＲ－４８５阻害剤処理によって、ウエスタンブロットによって評価されるように変異体ＳＯＤ１の凝集の濃度依存的な減少がもたらされた。変異体ＳＯＤ１の凝集を減少させるｍｉＲ－４８５阻害剤のこのような効果は、免疫蛍光分析によっても確認された（図１０Ｂを参照）。図に示されるように、ＳＯＤ１Ｇ９３Ａの凝集によって形成される封入体の数の顕著な減少が認められた。さらに、ｍｉＲ－４８５阻害剤処理細胞では、ＳＯＤ１Ｇ９３Ａは、ＬＣ３Ｂの発現としばしば共局在化していた（図１０Ｂの白い矢印を参照）。ＬＣ３Ｂは、ＭＡＰ１Ａ及びＭＡＰ１Ｂ微小管結合タンパク質のサブユニットであり、オートファゴソームの膜構造に中心的な役割を果たしている。ＬＣ３ＢとＳＯＤ１Ｇ９３Ａとの共局在化は、細胞質のＳＯＤ１の一部がオートファジー・エンドリソソーム系によって分解され得ることを示している。さらに、ＳＩＲＴ１及びＰＧＣ－１αのタンパク質発現は、ｍｉＲ－４８５阻害剤で処理した、ＳＯＤ１Ｇ９３ＡをトランスフェクトしたＮＣＳ－３４細胞でいずれも増加していた（図１０Ｃを参照）。ｍｉＲ－４８５阻害剤による処理は、野生型ＳＯＤ１をトランスフェクトしたＮＣＳ－３４細胞におけるＳＩＲＴ１及びＰＧＣ－１αタンパク質の発現には顕著な影響はないようであった。最後に、ｍｉＲ－４８５阻害剤による処理は、ＳＯＤ１Ｇ９３Ａコンストラクトをトランスフェクトし、ｍｉＲ－４８５阻害剤で処理したＮＣＳ－３４細胞における切断型カスパーゼ－３の発現の減少によって示されるように、ＳＯＤ１Ｇ９３Ａにより誘導されるアポトーシスも減少させた。
いずれか１つの理論によって束縛されるものではないが、上記に示される結果をまとめると、本明細書で提供されるｍｉＲ－４８５阻害剤は、ＳＯＤ１Ｇ９３Ａにより誘発される神経細胞の損傷を抑制することによってＡＬＳを治療できることを示すものである。
特許請求の範囲を解釈するうえで、「発明の概要」及び「要約」のセクションではなく、「発明の詳細な説明」のセクションを用いることが意図されている点は認識されるべきである。発明の概要及び要約セクションは、本発明者（複数可）により意図される１つ以上であるが、すべてではない本開示の例示的態様を示し得、したがって、本開示及び添付の特許請求の範囲を如何様にも限定することを意図しない。
本開示は、特定の機能及びそれらの関係の実施を示す機能的構成単位を用いて上記された。これらの機能的要素の境界は、説明の便宜上、本明細書では任意に定義されている。特定の機能及びそれらの関係性が適切に実施されている限り、代替的な境界を定義することもできる。
具体的な態様の上記の具体的な説明は本開示の一般的な性質を余すところなく示しているため、他者は、当業者の技能の範囲内の知識を適用することで、不要な実験を行うことなく、本開示の一般的概念から逸脱せずに、かかる具体的な態様を容易に改変し、及び／またはさまざまな用途に適合させることができる。したがって、そのような適合及び改変は、本明細書に示される教示及び助言に基づき、開示される態様の均等物の意味及び範囲内に包含されるものとする。本明細書における語句または用語は、説明を目的としたものであって、限定を目的とするものではなく、本明細書における語句または用語は本明細書の教示及び助言を考慮することで当業者によって理解されるはずである。
本開示の幅及び範囲は、上記に記載した例示的な態様のいずれによっても限定されるべきでなく、下記の請求項及びそれらの均等物のみにしたがって定義されるべきものである。
本出願全体を通じて引用され得るすべての引用参考文献（参考文献、特許、特許出願、及びウェブサイトを含む）の内容の全体を、あらゆる目的で、参照によって本明細書に明示的に援用し、また、それらに引用される文献も同様に援用する。

Claims (90)

  1. 筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）の治療を必要とする対象において前記ＡＬＳを治療する方法であって、ｍｉＲ－４８５を阻害する化合物（ｍｉＲＮＡ阻害剤）を前記対象に投与することを含む、前記方法。
  2. 前記ｍｉＲＮＡ阻害剤が前記対象におけるＳＩＲＴ１タンパク質及び／またはＳＩＲＴ１遺伝子のレベルを増加させる、請求項１に記載の方法。
  3. 前記対象が、ＳＩＲＴ１タンパク質及び／またはＳＩＲＴ１遺伝子のレベルの減少に関連したＡＬＳを有する、請求項１または２に記載の方法。
  4. 前記ｍｉＲＮＡ阻害剤が、オートファジーを誘導し、及び／または炎症を治療または予防する、請求項１または２に記載の方法。
  5. 前記ｍｉＲＮＡ阻害剤が、前記対象におけるＣＤ３６タンパク質及び／またはＣＤ３６遺伝子のレベルを増加させる、請求項１～４のいずれか１項に記載の方法。
  6. 前記対象が、ＣＤ３６タンパク質及び／またはＣＤ３６遺伝子のレベルの減少に関連したＡＬＳを有する、請求項１～５のいずれか１項に記載の方法。
  7. 前記ｍｉＲＮＡ阻害剤が、前記対象のＰＧＣ－１αタンパク質及び／またはＰＧＣ－１α遺伝子のレベルを増加させる、請求項１～６のいずれか１項に記載の方法。
  8. 前記対象が、ＰＧＣ－１αタンパク質及び／またはＰＧＣ－１α遺伝子のレベルの減少に関連したＡＬＳを有する、請求項１～７のいずれか１項に記載の方法。
  9. 前記ｍｉＲＮＡ阻害剤が、前記対象のＮＲＧ１タンパク質及び／またはＮＲＧ１遺伝子のレベルを増加させる、請求項１～８のいずれか１項に記載の方法。
  10. 前記対象が、ＮＲＧ１タンパク質及び／またはＮＲＧ１遺伝子のレベルの減少に関連したＡＬＳを有する、請求項１～９のいずれか１項に記載の方法。
  11. 前記ｍｉＲＮＡ阻害剤が、前記対象のＳＴＭＮ２タンパク質及び／またはＳＴＭＮ２遺伝子のレベルを増加させる、請求項１～８のいずれか１項に記載の方法。
  12. 前記対象が、ＳＴＭＮ２タンパク質及び／またはＳＴＭＮ２遺伝子のレベルの減少に関連したＡＬＳを有する、請求項１～９のいずれか１項に記載の方法。
  13. 前記ｍｉＲＮＡ阻害剤が、前記対象のＮＲＸＮ１タンパク質及び／またはＮＲＸＮ１遺伝子のレベルを増加させる、請求項１～１０のいずれか１項に記載の方法。
  14. 前記対象が、ＮＲＸＮ１タンパク質及び／またはＮＲＸＮ１遺伝子のレベルの減少に関連したＡＬＳを有する、請求項１～９のいずれか１項に記載の方法。
  15. 前記ｍｉＲＮＡ阻害剤が神経発生を誘導する、請求項１～１４のいずれか１項に記載の方法。
  16. 神経発生を誘導することが、神経幹細胞及び／または前駆細胞の増殖、分化、遊走、及び／または生存率の増加を含む、請求項１５に記載の方法。
  17. 神経発生を誘導することが、神経幹細胞及び／または前駆細胞の数の増加を含む、請求項１５または１６に記載の方法。
  18. 神経発生を誘導することが、軸索、樹状突起、及び／またはシナプスの発生の増加を含む、請求項１５～１７のいずれか１項に記載の方法。
  19. 前記ｍｉＲＮＡ阻害剤が食作用を誘導する、請求項１～１８のいずれか１項に記載の方法。
  20. ＳＩＲＴ１タンパク質及び／またはＳＩＲＴ１遺伝子の異常なレベルに関連した筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）の治療を必要とする対象において前記ＡＬＳを治療する方法であって、ｍｉＲ－４８５を阻害する化合物（ｍｉＲＮＡ阻害剤）を前記対象に投与することを含み、前記ｍｉＲＮＡ阻害剤が前記ＳＩＲＴ１タンパク質及び／またはＳＩＲＴ１遺伝子のレベルを増加させる、前記方法。
  21. ＣＤ３６タンパク質及び／またはＣＤ３６遺伝子の異常なレベルに関連した筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）の治療を必要とする対象において前記ＡＬＳを治療する方法であって、ｍｉＲ－４８５を阻害する化合物（ｍｉＲＮＡ阻害剤）を前記対象に投与することを含み、前記ｍｉＲＮＡ阻害剤が前記ＣＤ３６タンパク質及び／またはＣＤ３６遺伝子のレベルを増加させる、前記方法。
  22. ＰＧＣ－１αタンパク質及び／またはＰＧＣ－１α遺伝子の異常なレベルに関連した筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）の治療を必要とする対象において前記ＡＬＳを治療する方法であって、ｍｉＲ－４８５を阻害する化合物（ｍｉＲＮＡ阻害剤）を前記対象に投与することを含み、前記ｍｉＲＮＡ阻害剤が前記ＰＧＣ－１αタンパク質及び／またはＰＧＣ－１α遺伝子のレベルを増加させる、前記方法。
  23. ＮＲＧ１タンパク質及び／またはＮＲＧ１遺伝子の異常なレベルに関連した筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）の治療を必要とする対象において前記ＡＬＳを治療する方法であって、ｍｉＲ－４８５を阻害する化合物（ｍｉＲＮＡ阻害剤）を前記対象に投与することを含み、前記ｍｉＲＮＡ阻害剤が前記ＮＲＧ１タンパク質及び／またはＮＲＧ１遺伝子のレベルを増加させる、前記方法。
  24. ＳＴＭＮ２タンパク質及び／またはＳＴＭＮ２遺伝子の異常なレベルに関連した筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）の治療を必要とする対象において前記ＡＬＳを治療する方法であって、ｍｉＲ－４８５を阻害する化合物（ｍｉＲＮＡ阻害剤）を前記対象に投与することを含み、前記ｍｉＲＮＡ阻害剤が前記ＳＴＭＮ２タンパク質及び／またはＳＴＭＮ２遺伝子のレベルを増加させる、前記方法。
  25. ＮＲＸＮ１タンパク質及び／またはＮＲＸＮ１遺伝子の異常なレベルに関連した筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）の治療を必要とする対象において前記ＡＬＳを治療する方法であって、ｍｉＲ－４８５を阻害する化合物（ｍｉＲＮＡ阻害剤）を前記対象に投与することを含み、前記ｍｉＲＮＡ阻害剤が前記ＮＲＸＮ１タンパク質及び／またはＮＲＸＮ１遺伝子のレベルを増加させる、前記方法。
  26. 前記ｍｉＲＮＡ阻害剤がｍｉＲ－４８５－３ｐを阻害する、請求項１～２５のいずれか１項に記載の方法。
  27. 前記ｍｉＲ－４８５－３ｐが、５’－ｇｕｃａｕａｃａｃｇｇｃｕｃｕｃｃｕｃｕｃｕ－３’（配列番号１）を含む、請求項２６に記載の方法。
  28. 前記ｍｉＲＮＡ阻害剤が、５’－ＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号２）を含むヌクレオチド配列を含み、前記ｍｉＲＮＡ阻害剤が約６～約３０ヌクレオチドの長さである、請求項１～２６のいずれか１項に記載の方法。
  29. 前記ｍｉＲＮＡ阻害剤が、ＳＩＲＴ１、ＰＧＣ１－α、ＣＤ３６、ＮＲＧ１、ＳＴＭＮ２、及び／またはＮＲＸＮ１遺伝子の転写、及び／またはＳＩＲＴ１、ＰＧＣ１－α、ＣＤ３６、ＮＲＧ１、ＳＴＭＮ２、及び／またはＮＲＸＮ１タンパク質の発現を増加させる、請求項１～２８のいずれか１項に記載の方法。
  30. 前記ｍｉＲＮＡ阻害剤が、前記ヌクレオチド配列の前記５’末端に少なくとも１個のヌクレオチド、少なくとも２個のヌクレオチド、少なくとも３個のヌクレオチド、少なくとも４個のヌクレオチド、少なくとも５個のヌクレオチド、少なくとも６個のヌクレオチド、少なくとも７個のヌクレオチド、少なくとも８個のヌクレオチド、少なくとも９個のヌクレオチド、少なくとも１０個のヌクレオチド、少なくとも１１個のヌクレオチド、少なくとも１２個のヌクレオチド、少なくとも１３個のヌクレオチド、少なくとも１４個のヌクレオチド、少なくとも１５個のヌクレオチド、少なくとも１６個のヌクレオチド、少なくとも１７個のヌクレオチド、少なくとも１８個のヌクレオチド、少なくとも１９個のヌクレオチド、または少なくとも２０個のヌクレオチドを含む、請求項１～２９のいずれか１項に記載の方法。
  31. 前記ｍｉＲＮＡ阻害剤が、前記ヌクレオチド配列の前記３’末端に少なくとも１個のヌクレオチド、少なくとも２個のヌクレオチド、少なくとも３個のヌクレオチド、少なくとも４個のヌクレオチド、少なくとも５個のヌクレオチド、少なくとも６個のヌクレオチド、少なくとも７個のヌクレオチド、少なくとも８個のヌクレオチド、少なくとも９個のヌクレオチド、少なくとも１０個のヌクレオチド、少なくとも１１個のヌクレオチド、少なくとも１２個のヌクレオチド、少なくとも１３個のヌクレオチド、少なくとも１４個のヌクレオチド、少なくとも１５個のヌクレオチド、少なくとも１６個のヌクレオチド、少なくとも１７個のヌクレオチド、少なくとも１８個のヌクレオチド、少なくとも１９個のヌクレオチド、または少なくとも２０個のヌクレオチドを含む、請求項１～３０のいずれか１項に記載の方法。
  32. 前記ｍｉＲＮＡ阻害剤が、５’－ＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号２）、５’－ＧＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号３）、５’－ＣＧＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号４）、５’－ＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号５）、５’－ＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号６）、５’－ＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号７）、５’－ＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号８）、５’－ＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号９）、５’－ＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号１０）、５’－ＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号１１）、５’－ＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号１２）、５’－ＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号１３）、５’－ＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号１４）、５’－ＧＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号１５）、５’－ＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号１６）、５’－ＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号１７）、５’－ＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号１８）、５’－ＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号１９）、５’－ＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号２０）、５’－ＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号２１）、５’－ＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号２２）、５’－ＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号２３）、５’－ＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号２４）、５’－ＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号２５）、５’－ＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号２６）、５’－ＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号２７）、５’－ＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号２８）、５’－ＧＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号２９）、及び５’－ＡＧＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号３０）からなる群から選択される配列を有する、請求項１～２６及び２９～３１のいずれか１項に記載の方法。
  33. 前記ｍｉＲＮＡ阻害剤が、５’－ＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号６２）、５’－ＧＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号６３）、５’－ＣＧＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号６４）、５’－ＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号６５）、５’－ＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号６６）、５’－ＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号６７）、５’－ＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号６８）、５’－ＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号６９）、５’－ＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号７０）、５’－ＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号７１）、５’－ＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号７２）、５’－ＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号７３）、５’－ＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号７４）、５’－ＧＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号７５）、５’－ＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号７６）、５’－ＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号７７）、５’－ＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号７８）、５’－ＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号７９）、５’－ＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号８０）、５’－ＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号８１）、５’－ＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号８２）、５’－ＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号８３）、５’－ＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号８４）、５’－ＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号８５）、５’－ＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号８６）、５’－ＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号８７）、５’－ＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号８８）、５’－ＧＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号８９）、及び５’－ＡＧＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号９０）からなる群から選択される配列を有する、請求項１～２６及び請求項２９～３１のいずれか１項に記載の方法。
  34. 前記ｍｉＲＮＡ阻害剤の配列が、５’－ＡＧＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号３０）または５’－ＡＧＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号９０）と、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、または少なくとも約９５％の配列同一性を有する、請求項１～３１のいずれか１項に記載の方法。
  35. 前記ｍｉＲＮＡ阻害剤が、５’－ＡＧＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号３０）または５’－ＡＧＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号９０）と少なくとも９０％の類似性を有する、請求項３４に記載の方法。
  36. 前記ｍｉＲＮＡ阻害剤が、１個の置換または２個の置換を有するヌクレオチド配列５’－ＡＧＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号３０）または５’－ＡＧＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号９０）を含む、請求項１～３４のいずれか１項に記載の方法。
  37. 前記ｍｉＲＮＡ阻害剤が、ヌクレオチド配列５’－ＡＧＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号３０）または５’－ＡＧＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号９０）を含む、請求項１～３４のいずれか１項に記載の方法。
  38. 前記ｍｉＲＮＡ阻害剤が、ヌクレオチド配列５’－ＡＧＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号３０）を含む、請求項３７に記載の方法。
  39. 前記ｍｉＲ阻害剤が、少なくとも１つの修飾ヌクレオチドを含む、請求項１～３８のいずれか１項に記載の方法。
  40. 前記少なくとも１つの修飾ヌクレオチドが、ロックド核酸（ＬＮＡ）、アンロックド核酸（ＵＮＡ）、アラビノ核酸（ＡＢＡ）、架橋核酸（ＢＮＡ）、及び／またはペプチド核酸（ＰＮＡ）である、請求項３９に記載の方法。
  41. 前記ｍｉＲＮＡ阻害剤が骨格修飾を含む、請求項１～４０のいずれか１項に記載の方法。
  42. 前記骨格修飾が、ホスホロジアミダイトモルホリノオリゴマー（ＰＭＯ）及び／またはホスホロチオエート（ＰＳ）修飾である、請求項４１に記載の方法。
  43. 前記ｍｉＲＮＡ阻害剤が、送達剤中で送達される、請求項１～４２のいずれか１項に記載の方法。
  44. 前記送達剤が、ミセル、エクソソーム、脂質ナノ粒子、細胞外小胞、または合成小胞である、請求項４３に記載の方法。
  45. 前記ｍｉＲＮＡ阻害剤がウイルスベクターによって送達される、請求項１～４４のいずれか１項に記載の方法。
  46. 前記ウイルスベクターが、ＡＡＶ、アデノウイルス、レトロウイルス、またはレンチウイルスである、請求項４５に記載の方法。
  47. 前記ウイルスベクターが、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、またはこれらの任意の組み合わせの血清型を有するＡＡＶである、請求項４６に記載の方法。
  48. 前記ｍｉＲＮＡ阻害剤が、送達剤によって送達される、請求項１～４７のいずれか１項に記載の方法。
  49. 前記送達剤が、リピドイド、リポソーム、リポプレックス、脂質ナノ粒子、ポリマー化合物、ペプチド、タンパク質、細胞、ナノ粒子模倣体、ナノチューブ、またはコンジュゲートを含む、請求項４８に記載の方法。
  50. 前記送達剤が、
    ［ＷＰ］－Ｌ１－［ＣＣ］－Ｌ２－［ＡＭ］（式Ｉ）
    または
    ［ＷＰ］－Ｌ１－［ＡＭ］－Ｌ２－［ＣＣ］（式ＩＩ）
    （式中、
    ＷＰは、水溶性バイオポリマー部分であり、
    ＣＣは、正に帯電したキャリア部分であり、
    ＡＭは、アジュバント部分であり、
    Ｌ１及びＬ２は、独立して、任意選択のリンカーである）を有するカチオン性キャリアユニットを含み、
    前記カチオン性キャリアユニットは、約１：１のイオン比で核酸と混合される場合にミセルを形成する、請求項４８または４９に記載の方法。
  51. 前記ｍｉＲＮＡ阻害剤が、イオン結合を介して前記カチオン性キャリアユニットと相互作用する、請求項５０に記載の方法。
  52. 前記水溶性ポリマーが、ポリ（アルキレングリコール）、ポリ（オキシエチル化ポリオール）、ポリ（オレフィンアルコール）、ポリ（ビニルピロリドン）、ポリ（ヒドロキシアルキルメタクリルアミド）、ポリ（ヒドロキシアルキルメタクリレート）、ポリ（サッカライド）、ポリ（α－ヒドロキシ酸）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリグリセロール、ポリホスファゼン、ポリオキサゾリン（「ＰＯＺ」）、ポリ（Ｎ－アクリロイルモルホリン）、またはそれらの任意の組み合わせを含む、請求項５０または５１に記載の方法。
  53. 前記水溶性ポリマーが、ポリエチレングリコール（「ＰＥＧ」）、ポリグリセロール、またはポリ（プロピレングリコール）（「ＰＰＧ」）を含む、請求項５０～５２に記載の方法。
  54. 前記水溶性ポリマーが、下式：
    Figure 2023513189000028
    （式中、ｎは、１～１０００である）を有する、請求項５０～５３のいずれか１項に記載の方法。
  55. 前記ｎが、少なくとも約１１０、少なくとも約１１１、少なくとも約１１２、少なくとも約１１３、少なくとも約１１４、少なくとも約１１５、少なくとも約１１６、少なくとも約１１７、少なくとも約１１８、少なくとも約１１９、少なくとも約１２０、少なくとも約１２１、少なくとも約１２２、少なくとも約１２３、少なくとも約１２４、少なくとも約１２５、少なくとも約１２６、少なくとも約１２７、少なくとも約１２８、少なくとも約１２９、少なくとも約１３０、少なくとも約１３１、少なくとも約１３２、少なくとも約１３３、少なくとも約１３４、少なくとも約１３５、少なくとも約１３６、少なくとも約１３７、少なくとも約１３８、少なくとも約１３９、少なくとも約１４０、または少なくとも約１４１である、請求項５４に記載の方法。
  56. 前記ｎが、約８０～約９０、約９０～約１００、約１００～約１１０、約１１０～約１２０、約１２０～約１３０、約１４０～約１５０、約１５０～約１６０である、請求項５４に記載の方法。
  57. 前記水溶性ポリマーが、直鎖状、分枝鎖状、または樹枝状である、請求項５０～５６のいずれか１項に記載の方法。
  58. 前記カチオン性キャリア部分が、１つ以上の塩基性アミノ酸を含む、請求項５０～５７のいずれか１項に記載の方法。
  59. 前記カチオン性キャリア部分が、少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個、少なくとも６個、少なくとも７個、少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個、少なくとも２０個、少なくとも２１個、少なくとも２２個、少なくとも２３個、少なくとも２４個、少なくとも２５個、少なくとも２６個、少なくとも２７個、少なくとも２８個、少なくとも２９個、少なくとも３０個、少なくとも３１個、少なくとも３２個、少なくとも３３個、少なくとも３４個、少なくとも３５個、少なくとも３６個、少なくとも３７個、少なくとも３８個、少なくとも３９個、少なくとも４０個、少なくとも４１個、少なくとも４２個、少なくとも４３個、少なくとも４４個、少なくとも４５個、少なくとも４６個、少なくとも４７個、少なくとも４８個、少なくとも４９個、または少なくとも５０個の塩基性アミノ酸を含む、請求項５８に記載の方法。
  60. 前記カチオン性キャリア部分が、約３０個～約５０個の塩基性アミノ酸を含む、請求項５９に記載の方法。
  61. 前記塩基性アミノ酸が、アルギニン、リシン、ヒスチジン、またはそれらの任意の組み合わせを含む、請求項５９または６０のいずれか１項に記載の方法。
  62. 前記カチオン性キャリア部分が、約４０個のリシンモノマーを含む、請求項５０～６１のいずれか１項に記載の方法。
  63. 前記アジュバント部分が、免疫反応、炎症反応、及び／または組織微小環境を調節することができる、請求項５０～６２のいずれか１項に記載の方法。
  64. 前記アジュバント部分が、イミダゾール誘導体、アミノ酸、ビタミン、またはそれらの任意の組み合わせを含む、請求項５０～６３のいずれか１項に記載の方法。
  65. 前記アジュバント部分が、下式：
    Figure 2023513189000029
    （式中、Ｇ１及びＧ２のそれぞれは、Ｈ、芳香環、もしくは１～１０アルキルであるか、またはＧ１とＧ２はともに芳香環を形成し、ｎは１～１０である）を有する、請求項６４に記載の方法。
  66. 前記アジュバント部分がニトロイミダゾールを含む、請求項６４に記載の方法。
  67. 前記アジュバント部分が、メトロニダゾール、チニダゾール、ニモラゾール、ジメトリダゾール、プレトマニド、オルニダゾール、メガゾール、アザニダゾール、ベンズニダゾール、またはそれらの任意の組み合わせを含む、請求項６４に記載の方法。
  68. 前記アジュバント部分が、アミノ酸を含む、請求項５０～６４のいずれか１項に記載の方法。
  69. 前記アジュバント部分が、下式：
    Figure 2023513189000030
    （式中、Ａｒは
    Figure 2023513189000031
    であり、Ｚ１及びＺ２のそれぞれは、ＨまたはＯＨである）を有する、請求項６８に記載の方法。
  70. 前記アジュバント部分が、ビタミンを含む、請求項５０～６３のいずれか１項に記載の方法。
  71. 前記ビタミンが、環式環または環式ヘテロ原子環及びカルボキシル基またはヒドロキシル基を含む、請求項７０に記載の方法。
  72. 前記ビタミンが、下式：
    Figure 2023513189000032
    （式中、Ｙ１及びＹ２のそれぞれは、Ｃ、Ｎ、Ｏ、またはＳであり、ｎは１または２である）を有する、請求項７０または７１に記載の方法。
  73. 前記ビタミンが、ビタミンＡ、ビタミンＢ１、ビタミンＢ２、ビタミンＢ３、ビタミンＢ６、ビタミンＢ７、ビタミンＢ９、ビタミンＢ１２、ビタミンＣ、ビタミンＤ２、ビタミンＤ３、ビタミンＥ、ビタミンＭ、ビタミンＨ、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、請求項７０～７２のいずれか１項に記載の方法。
  74. 前記ビタミンが、ビタミンＢ３である、請求項７０～７３のいずれか１項に記載の方法。
  75. 前記アジュバント部分が、少なくとも約２個、少なくとも約３個、少なくとも約４個、少なくとも約５個、少なくとも約６個、少なくとも約７個、少なくとも約８個、少なくとも約９個、少なくとも約１０個、少なくとも約１１個、少なくとも約１２個、少なくとも約１３個、少なくとも約１４個、少なくとも約１５個、少なくとも約１６個、少なくとも約１７個、少なくとも約１８個、少なくとも約１９個、または少なくとも約２０個のビタミンＢ３を含む、請求項７０～７４のいずれか１項に記載の方法。
  76. 前記アジュバント部分が、約１０個のビタミンＢ３を含む、請求項６３に記載の方法。
  77. 約１２０個～約１３０個のＰＥＧユニットを有する水溶性バイオポリマー部分と、約３０個～約４０個のリシンを有するポリリシンを含むカチオン性キャリア部分と、約５個～約１０個のビタミンＢ３を有するアジュバント部分と、を含む、請求項７０～７６のいずれか１項に記載の方法。
  78. 前記送達剤が、前記ｍｉＲＮＡ阻害剤と結合されることでミセルを形成する、請求項７０～７７のいずれか１項に記載の方法。
  79. 前記結合が、共有結合、非共有結合、またはイオン結合である、請求項７８に記載の方法。
  80. 前記ミセル中の前記カチオン性キャリアユニットと前記ｍｉＲＮＡ阻害剤とが、前記カチオン性キャリアユニットの正電荷と前記ｍｉＲＮＡ阻害剤の負電荷とのイオン比が約１：１となるように溶液中で混合される、請求項７８または７９に記載の方法。
  81. 前記カチオン性キャリアユニットが、酵素分解から前記ｍｉＲＮＡ阻害剤を保護することができる、請求項７８～８０のいずれか１項に記載の方法。
  82. 前記ＡＬＳが、孤発性ＡＬＳ、家族性ＡＬＳ、またはその両方を含む、請求項１～８１のいずれか１項に記載の方法。
  83. 前記ｍｉＲＮＡ阻害剤がＡＬＳの発症を遅延させる、請求項１～８２のいずれか１項に記載の方法。
  84. 前記ｍｉＲＮＡ阻害剤が、前記対象の筋力を改善する、請求項１～８３のいずれか１項に記載の方法。
  85. 前記送達剤が、ミセルである、請求項４８に記載の方法。
  86. 前記ミセルが、（ｉ）約１００個～約２００個のＰＥＧユニット、（ｉｉ）それぞれがアミン基を有する約３０個～約４０個のリシン、（ｉｉｉ）それぞれがチオール基を有する約１５個～約２０個のリシン、及び（ｉｖ）それぞれがビタミンＢ３に結合された約３０個～約４０個のリシンを含む、請求項８５に記載の方法。
  87. 前記ミセルが、（ｉ）約１２０個～約１３０個のＰＥＧユニット、（ｉｉ）それぞれがアミン基を有する約３２個のリシン、（ｉｉｉ）それぞれがチオール基を有する約１６個のリシン、及び（ｉｖ）それぞれがビタミンＢ３に結合された約３２個のリシンを含む、請求項８５に記載の方法。
  88. 前記ＰＥＧユニットに治療部分がさらに結合されている、請求項８６または８７に記載の方法。
  89. 前記標的化部分が、ＬＡＴ１標的化リガンドである、請求項８８に記載の方法。
  90. 前記標的化部分が、フェニルアラニンである、請求項８９に記載の方法。
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