JP2023508165A - Ｍｄｍ２アンタゴニストを用いた癌治療に関するバイオマーカー - Google Patents

Ｍｄｍ２アンタゴニストを用いた癌治療に関するバイオマーカー Download PDF

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Abstract

本発明は、ＭＤＭ２アンタゴニストを用いて癌の有効な治療を予測するためのバイオマーカーを提供する。癌患者におけるこれらのバイオマーカーの１以上の特定は、患者の癌がＭＤＭ２アンタゴニストを用いて上手く治療される可能性があるかどうか判定を行うことを可能とする。よって、本発明は一般に、ＭＤＭ２アンタゴニスト療法のコンパニオン診断に関する。バイオマーカーは、（ｉ）ＢＡＰ１；ならびに／または（ｉｉ）ＣＤＫＮ２Ａ；ならびに／または（ｉｉｉ）ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＲＳＡＤ２、ＭＸ１、ＢＡＴＦ２、ＩＦＩ４４Ｌ、ＩＦＩＴＭ１、ＩＳＧ１５、ＣＭＰＫ２、ＩＦＩ２７、ＣＤ７４、ＩＦＩＨ１、ＣＣＲＬ２、ＩＦＩ４４、ＨＥＲＣ６、ＩＳＧ２０、ＩＦＩＴ３、ＨＬＡ－Ｃ、ＯＡＳ１、ＩＦＩ３５、ＩＲＦ９、ＥＰＳＴＩ１、ＵＳＰ１８、ＢＳＴ２、ＣＳＦ１、Ｃ１Ｓ、ＤＨＸ５８、ＴＲＩＭ１４、ＯＡＳＬ、ＩＲＦ７、ＬＧＡＬＳ３ＢＰ、ＤＤＸ６０、ＬＡＰ３、ＬＡＭＰ３、ＰＡＲＰ１２、ＰＡＲＰ９、ＳＰ１１０、ＰＬＳＣＲ１、ＷＡＲＳ、ＳＴＡＴ１、ＩＲＦ３、ＩＲＦ５、ＭＳＣ、ＪＵＮ、ＳＰＩ１、ＩＲＦ１、ＣＯＭＭＤ３－ＢＭＩ１、ＳＴＡＴ２、ＲＵＮＸ３、ＳＲＥＢＦ１、ＦＬＩ１およびＢＲＣＡ１のうちの１つ、３つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０またはそれを超えるものである。

Description

本発明は、癌治療に関するバイオマーカーに関する。特に、本発明は、ＭＤＭ２アンタゴニストに対して感受性があり得るとして癌細胞を特定する生物学的マーカーを提供する。これらのバイオマーカーは、治療に対する応答を予測するための方法、システムおよびキットに、ならびに癌の個別化治療に組み込むことができる。
精密医療、または個別化医療は、各患者の遺伝子、環境、ライフスタイルの個人差を考慮に入れた、疾患の治療および予防のための新しいアプローチである。それはしばしば適切な時期に適切な薬物の適切な用量を投与する実践であると言われている。
精密医療の特定の焦点は、所与の患者が特定の薬物に応答するかどうかを予測する必要性である。特定の薬物が個々の患者を効果的に治療するかどうかを予測できる検査は、しばしばコンパニオン診断と呼ばれる。効果的なコンパニオン診断は、効果のない治療を提供する多大な経済的コストを節約しながら、患者の治療結果を改善することができるので、極めて望ましい。新しい治療薬の効果的なコンパニオン診断は、その療法が適正な集団で試行され、最終的に承認される機会を高めることもできる。
精密医療およびコンパニオン診断は、多くの場合、患者が特定の治療に応答する可能性があるかどうかを確実に予測できるバイオマーカーに頼る。あらゆる療法と疾患について信頼できるバイオマーカーを特定することは、非常に重要な課題である。
ＷＯ－Ａ－２０１６／０５６６７３には、臨床応用のための予測分子ツールを提供すると言われている複雑な遺伝子シグネチャーが記載されている。この開示はまた、癌または腫瘍の治療に影響を及ぼし得る抗癌薬、特にＭＤＭ２活性の阻害剤およびＭＤＭ２タンパク質とｐ５３タンパク質の相互作用のアンタゴニストに対する癌または腫瘍の感受性を予測する方法に関する。
ＵＳ－Ａ－２０１５／０２１１０７３にはまた、一般、ＭＤＭ２アンタゴニストに対する癌の応答を予測するためのバイオマーカーとしての少なくとも４つの遺伝子を含んでなる遺伝子パネルが記載されている。
Iorio et al (Cell. 2016 Jul 28;166(3):740-75) “A Landscape of Pharmacogenomic Interactions in Cancer”には、２９の組織由来の１１，２８９の腫瘍で特定された癌による変化（体細胞突然変異、コピー数変化、ＤＮＡのメチル化、および遺伝子発現が組み込まれている）が、どのようにして分子的に注釈が付けられた１，００１のヒト癌細胞株にマッピングでき、２６５の薬物に対する感受性と相関が見出されたかが報告されている。このような研究は、遺伝子型を細胞表現型と関連付け、選択された癌亜集団の治療選択肢を特定するためのリソースを提供するが、臨床的に関連する分子標的癌療法の開発は依然として手ごわい課題である。
精密医療に使用するための信頼性のあるバイオマーカーを特定する必要がなおある。
本発明は、ＭＤＭ２アンタゴニストを用いた癌の有効な治療を予測するために使用できるバイオマーカーの特定に基づく。癌患者におけるこれらのバイオマーカーの１以上の特定は、ＭＤＭ２アンタゴニストを用いて患者の癌が治療される可能性があるかどうか、または上手く治療される可能性があるかどうかの判断を行うことを可能とする。よって、特定の側面において、本発明は一般に、ＭＤＭ２アンタゴニスト療法のコンパニオン診断に関する。
本発明において特定されたバイオマーカーは、（ｉ）ＢＡＰ１；ならびに／または（ｉｉ）ＣＤＫＮ２Ａ；ならびに／または（ｉｉｉ）ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＲＳＡＤ２、ＭＸ１、ＢＡＴＦ２、ＩＦＩ４４Ｌ、ＩＦＩＴＭ１、ＩＳＧ１５、ＣＭＰＫ２、ＩＦＩ２７、ＣＤ７４、ＩＦＩＨ１、ＣＣＲＬ２、ＩＦＩ４４、ＨＥＲＣ６、ＩＳＧ２０、ＩＦＩＴ３、ＨＬＡ－Ｃ、ＯＡＳ１、ＩＦＩ３５、ＩＲＦ９、ＥＰＳＴＩ１、ＵＳＰ１８、ＢＳＴ２、ＣＳＦ１、Ｃ１Ｓ、ＤＨＸ５８、ＴＲＩＭ１４、ＯＡＳＬ、ＩＲＦ７、ＬＧＡＬＳ３ＢＰ、ＤＤＸ６０、ＬＡＰ３、ＬＡＭＰ３、ＰＡＲＰ１２、ＰＡＲＰ９、ＳＰ１１０、ＰＬＳＣＲ１、ＷＡＲＳ、ＳＴＡＴ１、ＩＲＦ３、ＩＲＦ５、ＭＳＣ、ＪＵＮ、ＳＰＩ１、ＩＲＦ１、ＣＯＭＭＤ３－ＢＭＩ１、ＳＴＡＴ２、ＲＵＮＸ３、ＳＲＥＢＦ１、ＦＬＩ１およびＢＲＣＡ１のうち１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０もしくはそれを超えるものである。これらのタンパク質およびそれらをコードする遺伝子は当技術分野で周知であり、Ｅｎｔｒｅｚ遺伝子ＩＤが以下に提供される。本明細書において使用する場合、これらのバイオマーカーは「本発明のバイオマーカー」と呼ばれる。
特に、１つの側面において、本発明は、癌を治療する方法において使用するためのＭＤＭ２アンタゴニストを提供し、この癌は、
ＢＡＰ１枯渇型であり；かつ／または
ＣＤＫＮ２Ａ枯渇型であり；かつ／または
ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＲＳＡＤ２、ＭＸ１、ＢＡＴＦ２、ＩＦＩ４４Ｌ、ＩＦＩＴＭ１、ＩＳＧ１５、ＣＭＰＫ２、ＩＦＩ２７、ＣＤ７４、ＩＦＩＨ１、ＣＣＲＬ２、ＩＦＩ４４、ＨＥＲＣ６、ＩＳＧ２０、ＩＦＩＴ３、ＨＬＡ－Ｃ、ＯＡＳ１、ＩＦＩ３５、ＩＲＦ９、ＥＰＳＴＩ１、ＵＳＰ１８、ＢＳＴ２、ＣＳＦ１、Ｃ１Ｓ、ＤＨＸ５８、ＴＲＩＭ１４、ＯＡＳＬ、ＩＲＦ７、ＬＧＡＬＳ３ＢＰ、ＤＤＸ６０、ＬＡＰ３、ＬＡＭＰ３、ＰＡＲＰ１２、ＰＡＲＰ９、ＳＰ１１０、ＰＬＳＣＲ１、ＷＡＲＳ、ＳＴＡＴ１、ＩＲＦ３、ＩＲＦ５、ＭＳＣ、ＪＵＮ、ＳＰＩ１、ＩＲＦ１、ＣＯＭＭＤ３－ＢＭＩ１、ＳＴＡＴ２、ＲＵＮＸ３、ＳＲＥＢＦ１、ＦＬＩ１およびＢＲＣＡ１のうち１つ、２つ、３つ、４つ、５つまたはそれを超えるものの発現の増大を示す。
ＭＤＭ２拮抗作用に対する感受性は、（ｉ）ＢＡＰ１発現の低下；ならびに／または（ｉｉ）ＣＤＫＮ２Ａ発現の低下；ならびに／または（ｉｉｉ）ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＲＳＡＤ２、ＭＸ１、ＢＡＴＦ２、ＩＦＩ４４Ｌ、ＩＦＩＴＭ１、ＩＳＧ１５、ＣＭＰＫ２、ＩＦＩ２７、ＣＤ７４、ＩＦＩＨ１、ＣＣＲＬ２、ＩＦＩ４４、ＨＥＲＣ６、ＩＳＧ２０、ＩＦＩＴ３、ＨＬＡ－Ｃ、ＯＡＳ１、ＩＦＩ３５、ＩＲＦ９、ＥＰＳＴＩ１、ＵＳＰ１８、ＢＳＴ２、ＣＳＦ１、Ｃ１Ｓ、ＤＨＸ５８、ＴＲＩＭ１４、ＯＡＳＬ、ＩＲＦ７、ＬＧＡＬＳ３ＢＰ、ＤＤＸ６０、ＬＡＰ３、ＬＡＭＰ３、ＰＡＲＰ１２、ＰＡＲＰ９、ＳＰ１１０、ＰＬＳＣＲ１、ＷＡＲＳ、ＳＴＡＴ１、ＩＲＦ３、ＩＲＦ５、ＭＳＣ、ＪＵＮ、ＳＰＩ１、ＩＲＦ１、ＣＯＭＭＤ３－ＢＭＩ１、ＳＴＡＴ２、ＲＵＮＸ３、ＳＲＥＢＦ１、ＦＬＩ１およびＢＲＣＡ１のうち１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０またはそれを超えるものの発現の増大によって特定することができる。
１つの実施形態において、ＭＤＭ２アンタゴニストは、ＢＡＰ１枯渇型である癌を治療する方法において使用するために提供される。この実施形態において、ＢＡＰ１枯渇癌は、ＣＤＫＮ２Ａ枯渇型でもあり得；かつ／または１つ、２つ、３つ、４つ、５つまたはそれを超えるインターフェロンシグネチャー遺伝子の発現の増大を示す。
ＣＤＫＮ２Ａでは、一般にタンパク質が評価される。これは例えば、免疫組織化学（ＩＨＣ）を用いて達成することができる。いくつかの実施形態において、ＣＤＫＮ２Ａの状態を検出するために突然変異分析（例えば、ＤＮＡシーケンシング）を使用することができる。
ＢＡＰ１では、一般にタンパク質が評価される。これは例えば、免疫組織化学（ＩＨＣ）を用いて達成することができる。いくつかの実施形態において、細胞の場所も評価することができる。いくつかの実施形態において、ＢＡＰ１の状態を検出するために突然変異分析（例えば、ＤＮＡシーケンシング）を使用することができる。
ＣＤＫＮ２ＡおよびＢＡＰ１は、本明細書においてタンパク質バイオマーカーと呼ばれる場合がある。ＣＤＫＮ２Ａ遺伝子は、ｐ１６（ＩＮＫ４Ａ）およびｐ１４（ＡＲＦ）タンパク質をコードし、遺伝子ＣＤＫＮ２Ａという場合には、ＣＤＫＮ２Ａによりコードされるタンパク質を含む。ＣＤＫＮ２Ａ欠損は、低いタンパク質発現産物レベル、すなわち、ｐ１６（ＩＮＫ４Ａ）および／またはｐ１４（ＡＲＦ）の対照発現レベルよりも低い発現レベルによって評価することができ、すなわち、ＣＤＫＮ２Ａ遺伝子欠損の結果は、ｐ１６および／またはＰ１４の欠損である。
遺伝子の有無、遺伝子の突然変異、遺伝子発現レベルおよびタンパク質発現レベルを含め、様々なバイオマーカーの評価が存在する。枯渇という用語は、遺伝子の欠損または完全な欠損、例えばＢＡＰ１もしくはＣＤＫＮ２Ａなどの遺伝子の突然変異および機能欠失を意味する場合があり、またはこの用語は遺伝子の欠損もしくは突然変異またはそれ以外から生じる低い遺伝子発現および低いタンパク質発現および機能を意味する場合がある。これらの枯渇は総て、「枯渇」という用語に含まれる。
本明細書で特定される残りのバイオマーカー（すなわち、上記で発現が増大していると特定されたもの）は、インターフェロンシグネチャー、またはＩＦＮシグネチャー、バイオマーカーと呼ばれる場合がある。それらはまた、１型インターフェロン経路遺伝子とも呼ばれる。一般に、これらのバイオマーカーは、ｍＲＮＡとして検出される。よって、１以上のＩＦＮシグネチャーバイオマーカーの評価技術には、当技術分野で公知のように、ｒｔＰＣＲまたはナノストリング分析などの定量的技術を含み得る。ＤＮＡもまた評価可能である。いくつかの実施形態において、バイオマーカー遺伝子の状態を検出するために、コピー数変動（ＣＮＶ）分析および／または突然変異分析（例えば、ＤＮＡシーケンシング）が使用できる。
本発明のバイオマーカーは、直接的または間接的に評価することができる。間接的評価は、一般にバイオマーカーの機能的上流または下流にある、そのレベルがバイオマーカーのレベルと相関する分子の検出を含む。例えば、バイオマーカーが働く基質を、バイオマーカーの間接的評価として使用することができる。１つの実施形態において、ＢＡＰ１レベルは、ヒストンＨ２Ａユビキチン化のレベルを検出することによって評価することができＨ２Ａユビキチン化の増大は一般に、ＢＡＰ１の低下を反映する。別の実施形態では、ＢＡＰ１の枯渇は、ＥＺＨ２の発現または活性の増大を判定することによって評価することができる。
以下の実施例におけるデータは、ＣＤＫＮ２Ａおよび／もしくはＢＡＰ１の枯渇、例えば、欠損（全面的もしくは完全な欠損としても知られる）、ならびに／またはＩＦＮシグネチャーバイオマーカーの１以上のレベルの上昇が、ＭＤＭ２アンタゴニストに対する癌細胞の感受性を予測することを示す。よって、低レベルのＣＤＫＮ２Ａおよび／もしくはＢＡＰ１；ならびに／または高レベルのＩＦＮシグネチャーバイオマーカーの１以上は、ＭＤＭ２アンタゴニストによる処置に適している癌を特定するために使用することができる。
いくつかの実施形態において、本発明のバイオマーカーまたはバイオマーカーの発現の低下または増大は、非癌細胞と比較して判定される。この癌：非癌の比較は、ＢＡＰ１欠損および／またはＣＤＫＮ２Ａ欠損を評価するために特に有用であり得る。非癌細胞は一般に、癌細胞と同種の細胞である。非癌細胞は、同じ患者のものであってもまたは異なる患者からのものであってもよく、またはこの種の非癌細胞に関して知られている値であってもよい。このようにして、発現は、健常者で決定された対照レベルまたは正常な非増殖性組織で決定された対照レベルと比較することができる。
いくつかの他の実施形態において、本発明のバイオマーカーまたはバイオマーカーの発現の低下または増大は、複数のＭＤＭ２阻害剤非応答対象からの複数の癌細胞サンプルと比較して、または１人のＭＤＭ２阻害剤非応答対象からの１つの癌細胞サンプルにおいて判定される。いくつかの実施形態において、１以上のＩＦＮシグネチャーバイオマーカーは、複数のＭＤＭ２阻害剤非応答対象からの複数の癌細胞サンプル、または１人のＭＤＭ２阻害剤非応答対象からの１つの癌細胞のサンプルにおいて決定されたＲＮＡに比べて増大または上昇している。非応答癌細胞は一般に、供試した癌細胞と同じ癌種の細胞である。非応答癌細胞は一般に、供試サンプルとは異なる１もしくは複数の患者からのものであり、またはその癌種の非応答癌細胞に関して知られている値であってもよい。
いくつかの実施形態において、患者は、ＢＡＰ１および／またはＣＤＫＮ２Ａの発現レベルが正常値上限（ＵＬＮ）よりも低く、かつ／またはＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＲＳＡＤ２、ＭＸ１、ＢＡＴＦ２、ＩＦＩ４４Ｌ、ＩＦＩＴＭ１、ＩＳＧ１５、ＣＭＰＫ２、ＩＦＩ２７、ＣＤ７４、ＩＦＩＨ１、ＣＣＲＬ２、ＩＦＩ４４、ＨＥＲＣ６、ＩＳＧ２０、ＩＦＩＴ３、ＨＬＡ－Ｃ、ＯＡＳ１、ＩＦＩ３５、ＩＲＦ９、ＥＰＳＴＩ１、ＵＳＰ１８、ＢＳＴ２、ＣＳＦ１、Ｃ１Ｓ、ＤＨＸ５８、ＴＲＩＭ１４、ＯＡＳＬ、ＩＲＦ７、ＬＧＡＬＳ３ＢＰ、ＤＤＸ６０、ＬＡＰ３、ＬＡＭＰ３、ＰＡＲＰ１２、ＰＡＲＰ９、ＳＰ１１０、ＰＬＳＣＲ１、ＷＡＲＳ、ＳＴＡＴ１、ＩＲＦ３、ＩＲＦ５、ＭＳＣ、ＪＵＮ、ＳＰＩ１、ＩＲＦ１、ＣＯＭＭＤ３－ＢＭＩ１、ＳＴＡＴ２、ＲＵＮＸ３、ＳＲＥＢＦ１、ＦＬＩ１およびＢＲＣＡ１のうち少なくとも１つの発現レベルが正常値上限（ＵＬＮ）よりも高い場合に、ＭＤＭ２アンタゴニストによる処置の候補として特定することができる。
場合により、この方法は、治療上有効な量のＭＤＭ２アンタゴニストを患者に投与する工程を含んでなり得る。
本明細書に記載の総ての側面および実施形態において、癌は一般にｐ５３野生型癌である。
１つの実施形態において、本発明は、癌、特に、ｐ５３野生型癌の治療において使用するためのＭＤＭ２アンタゴニストを提供し、前記癌は、患者から得られた生物学的サンプル内の本発明のバイオマーカーの１以上によって特徴付けられる。
本発明の別の実施形態によれば、患者において癌を治療する方法であって、本発明のバイオマーカーの１以上の発現プロファイルに基づいて患者を選択する工程；および
場合により、次に、前記患者に治療上有効な量のＭＤＭ２アンタゴニストを投与する工程を含んでなる方法を提供する。特定の実施形態において、患者は、
前記患者から得られた生物学的サンプルにおいてＢＡＰ１発現が低下していること；かつ／または前記患者から得られた生物学的サンプルにおいてＣＤＫＮ２Ａ発現が低下していること；かつ／または
前記患者から得られた生物学的サンプルにおいてＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＲＳＡＤ２、ＭＸ１、ＢＡＴＦ２、ＩＦＩ４４Ｌ、ＩＦＩＴＭ１、ＩＳＧ１５、ＣＭＰＫ２、ＩＦＩ２７、ＣＤ７４、ＩＦＩＨ１、ＣＣＲＬ２、ＩＦＩ４４、ＨＥＲＣ６、ＩＳＧ２０、ＩＦＩＴ３、ＨＬＡ－Ｃ、ＯＡＳ１、ＩＦＩ３５、ＩＲＦ９、ＥＰＳＴＩ１、ＵＳＰ１８、ＢＳＴ２、ＣＳＦ１、Ｃ１Ｓ、ＤＨＸ５８、ＴＲＩＭ１４、ＯＡＳＬ、ＩＲＦ７、ＬＧＡＬＳ３ＢＰ、ＤＤＸ６０、ＬＡＰ３、ＬＡＭＰ３、ＰＡＲＰ１２、ＰＡＲＰ９、ＳＰ１１０、ＰＬＳＣＲ１、ＷＡＲＳ、ＳＴＡＴ１、ＩＲＦ３、ＩＲＦ５、ＭＳＣ、ＪＵＮ、ＳＰＩ１、ＩＲＦ１、ＣＯＭＭＤ３－ＢＭＩ１、ＳＴＡＴ２、ＲＵＮＸ３、ＳＲＥＢＦ１、ＦＬＩ１およびＢＲＣＡ１のうち１つ、２つ、３つ、４つ、５つまたはそれを超えるものの発現が増大していること；および
場合により、次に、前記患者に治療上有効な量のＭＤＭ２アンタゴニストを投与する工程；
に基づいて選択される。
本発明のさらなる実施形態によれば、患者において癌の治療に使用するためのＭＤＭ２アンタゴニストが提供され、前記患者は、
前記患者から得られた生物学的サンプルにおいて低下したまたは低いＢＡＰ１発現；および／または
前記患者から得られた生物学的サンプルにおいて低下したまたは低いＣＤＫＮ２Ａ発現；および／または
前記患者から得られた生物学的サンプルにおいてＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＲＳＡＤ２、ＭＸ１、ＢＡＴＦ２、ＩＦＩ４４Ｌ、ＩＦＩＴＭ１、ＩＳＧ１５、ＣＭＰＫ２、ＩＦＩ２７、ＣＤ７４、ＩＦＩＨ１、ＣＣＲＬ２、ＩＦＩ４４、ＨＥＲＣ６、ＩＳＧ２０、ＩＦＩＴ３、ＨＬＡ－Ｃ、ＯＡＳ１、ＩＦＩ３５、ＩＲＦ９、ＥＰＳＴＩ１、ＵＳＰ１８、ＢＳＴ２、ＣＳＦ１、Ｃ１Ｓ、ＤＨＸ５８、ＴＲＩＭ１４、ＯＡＳＬ、ＩＲＦ７、ＬＧＡＬＳ３ＢＰ、ＤＤＸ６０、ＬＡＰ３、ＬＡＭＰ３、ＰＡＲＰ１２、ＰＡＲＰ９、ＳＰ１１０、ＰＬＳＣＲ１、ＷＡＲＳ、ＳＴＡＴ１、ＩＲＦ３、ＩＲＦ５、ＭＳＣ、ＪＵＮ、ＳＰＩ１、ＩＲＦ１、ＣＯＭＭＤ３－ＢＭＩ１、ＳＴＡＴ２、ＲＵＮＸ３、ＳＲＥＢＦ１、ＦＬＩ１およびＢＲＣＡ１のうち１つ、２つ、３つ、４つ、５つまたはそれを超えるものの増大したまたは高い発現
を有するとして選択されていることを特徴とする。
特定の実施形態において、患者組織のサンプルは、癌バイオマーカー発現プロファイルを決定するために治療前に検査される。サンプルは一般に、１以上の癌細胞、癌ＤＮＡ、または循環腫瘍ＤＮＡを含んでなり得る。サンプルは血液サンプルであり得る。サンプルは、腫瘍サンプル、例えば、腫瘍生検であり得る。この検査は、タンパク質、ｍＲＮＡ、ＤＮＡおよび／またはｃｔＤＮＡを検出するためのアッセイを含んでなり得る。
別の側面において、本発明は、ヒト患者の癌細胞サンプルにおける、癌がＭＤＭ２アンタゴニストによる処置に感受性を有するかどうかを評価するためのバイオマーカーとしての本発明の１以上のバイオマーカーの発現レベルの使用を提供する。
さらなる側面において、本発明は、ＭＤＭ２アンタゴニストによる処置に対するヒト癌患者の反応性を予測または評価するための方法であって、癌患者からのサンプルにおいて本発明の１以上のバイオマーカーの発現レベルを評価すること、および検査した発現レベルが、その癌がＭＤＭ２アンタゴニストで処置されるべきであることを示すかどうかを決定することを含んでなる方法を提供する。
いくつかの実施形態において、本発明の１以上のバイオマーカーは、癌が効果的にアポトーシスを受ける可能性があることを示す。よって、いくつかの実施形態において、本発明は、処置が特に有効である患者を特定することができる。
いくつかの実施形態において、評価工程は、バイオマーカーまたはバイオマーカーの発現レベル決定するためのｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイを含んでなる。
いくつかの実施形態において、評価工程は、発現レベルをＭＤＭ２アンタゴニストによる処置に対する反応性または非反応性に関連することが知られている発現レベルと比較することを含んでなる。いくつかの実施形態において、評価工程は、検査した発現レベルが、癌がＭＤＭ２アンタゴニストで治療可能であることを示すかどうか評価するために、観察された発現レベルを、同様にＭＤＭ２アンタゴニストによる処置に対する感受性に関連する発現レベルを反映する閾値と比較することを含んでなる。
いくつかの実施形態において、患者は、バイオマーカープロファイルに基づいて群に分類される。これはＭＤＭ２アンタゴニストによる処置に十分に（または強く）応答する可能性があるか否かとして患者を分類することを含み得る。
さらなる側面において、本発明は、ヒト癌患者がＭＤＭ２アンタゴニストによる処置に適しているかどうかを判定する方法であって、
患者からの癌細胞サンプルにおいて本発明の１以上のバイオマーカーの発現を検出すること；および
バイオマーカーの発現レベルに基づいて、前記患者の癌がサンプル中のＭＤＭ２アンタゴニストで治療される可能性があるかどうかを評価すること
を含んでなる方法を提供する。場合により、この側面の方法は、ＭＤＭ２アンタゴニストを用いて患者の癌を治療するさらなる工程を含んでなる。
さらなる実施形態において、本発明は、抗癌化合物と組み合わせて患者の癌の治療において使用するためのＭＤＭ２アンタゴニストを提供し、前記患者の前記癌は、１以上の本発明のバイオマーカーを有するとして選択されたｐ５３野生型癌であることを特徴とする。
さらなる実施形態において、本発明は、患者において癌を治療する方法であって、前記患者の前記癌は場合によりｐ５３野生型癌であり、患者は、ＭＤＭ２アンタゴニスト処置が有効であることを示すレベルで１以上の本発明のバイオマーカーを有するとして選択され、選択された患者に治療上有効な量のＭＤＭ２アンタゴニストおよび場合により別の抗癌薬を投与する方法を提供する。
さらなる実施形態において、本発明は、ＭＤＭ２アンタゴニストによる処置に適した癌患者を特定する方法を提供し、前記方法は、１以上の本発明のバイオマーカーの発現を検出および場合により定量することを含んでなる。
さらなる実施形態において、本発明は、患者（例えば、癌に罹患している）を選択する方法を提供し、前記方法は、１以上の本発明のバイオマーカーの発現を検出および場合により定量することによって患者を選択する工程を含んでなる。
さらなる実施形態において、本発明は、癌患者がＭＤＭ２アンタゴニストによる療法に応答する見込みを判定する方法を提供し、前記方法は、
患者からの癌細胞サンプルにおいて、対応する非癌細胞と比較して低下したＢＡＰ１発現の測定値を得ること；ならびに／または
患者からの癌細胞サンプルにおいて、対応する非癌細胞と比較して低下したＣＤＫＮ２Ａ発現の測定値を得ること；ならびに／または
ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＲＳＡＤ２、ＭＸ１、ＢＡＴＦ２、ＩＦＩ４４Ｌ、ＩＦＩＴＭ１、ＩＳＧ１５、ＣＭＰＫ２、ＩＦＩ２７、ＣＤ７４、ＩＦＩＨ１、ＣＣＲＬ２、ＩＦＩ４４、ＨＥＲＣ６、ＩＳＧ２０、ＩＦＩＴ３、ＨＬＡ－Ｃ、ＯＡＳ１、ＩＦＩ３５、ＩＲＦ９、ＥＰＳＴＩ１、ＵＳＰ１８、ＢＳＴ２、ＣＳＦ１、Ｃ１Ｓ、ＤＨＸ５８、ＴＲＩＭ１４、ＯＡＳＬ、ＩＲＦ７、ＬＧＡＬＳ３ＢＰ、ＤＤＸ６０、ＬＡＰ３、ＬＡＭＰ３、ＰＡＲＰ１２、ＰＡＲＰ９、ＳＰ１１０、ＰＬＳＣＲ１、ＷＡＲＳ、ＳＴＡＴ１、ＩＲＦ３、ＩＲＦ５、ＭＳＣ、ＪＵＮ、ＳＰＩ１、ＩＲＦ１、ＣＯＭＭＤ３－ＢＭＩ１、ＳＴＡＴ２、ＲＵＮＸ３、ＳＲＥＢＦ１、ＦＬＩ１およびＢＲＣＡ１のうち１つ、２つ、３つ、４つ、５つまたはそれを超えるものの発現の増大を示す測定値を得ること；ならびに
その測定値に基づいて患者がＭＤＭ２アンタゴニストによる療法に応答する可能性があることを判定すること
を含んでなる。
さらなる実施形態において、本発明は、
１以上の本発明のバイオマーカー決定すること、
１以上の本発明のバイオマーカーを有する患者に治療上有効な量のＭＤＭ２アンタゴニストを投与すること
を含んでなる薬物投与手順を提供する。
なおさらなる側面において、本発明は、癌に罹患しているヒト患者において１以上の本発明のバイオマーカーの発現を検出する方法を提供する。この方法は一般に、
（ａ）ヒト患者から癌細胞サンプルを得ること；および
（ｂ）サンプルを、バイオマーカーの発現を検出するための１以上の試薬と接触させることによって、サンプリングされた癌細胞において前記バイオマーカーが発現されているかどうかを検出すること
を含んでなる。
なおさらなる側面において、本発明は、ヒト患者からのサンプルにおいてＭＤＭ２拮抗作用に対する感受性に関する少なくとも１つのバイオマーカーの発現レベルを検出するためのキットまたは装置を提供し、前記キットまたは装置は、１以上の本発明のバイオマーカーを検出するための１または複数の検出試薬または検出試薬を含んでなる。
さらなる側面において、本発明は、ヒト癌患者がＭＤＭ２アンタゴニストによる処置に感受性があるかどうかを評価するためのシステムに属し、前記システムは、
ヒト患者からのサンプルにおいて１以上の本発明のバイオマーカーを検出することができ、そのように適合された検出手段、
決定されたバイオマーカーまたはバイオマーカーから、患者がＭＤＭ２アンタゴニストで治療される見込みの指標を決定することができ、そのように適合されたプロセッサ
を含んでなる。
システムは、場合により、情報を提示することができ、好ましくは対象の年齢などの情報、ならびに場合により性別および／または病歴情報などの他の患者情報を入力することもできるインターフェース、特にグラフィカルユーザーインターフェースへのデータ接続を含み、前記インターフェースは、システムの一部またはリモートインターフェースのいずれかである。場合により、前述のアイテムの１以上、特にプロセッサは、「クラウド内」、すなわち、固定された機器ではなく、インターネットベースのアプリケーションによって機能できる。
本発明はまた、患者を特定およびスクリーニングする方法、組合せ、およびキットを提供する。
さらなる実施形態において、本発明は、ＭＤＭ２アンタゴニストによる処置のために患者をスクリーニングまたは特定する方法であって、前記患者が、
前記患者から得られた生物学的サンプルにおけるＢＡＰ１発現の低下；ならびに／または
前記患者から得られた生物学的サンプルにおけるＣＤＫＮ２Ａ発現の低下；ならびに／または
前記患者から得られた生物学的サンプルにおけるＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＲＳＡＤ２、ＭＸ１、ＢＡＴＦ２、ＩＦＩ４４Ｌ、ＩＦＩＴＭ１、ＩＳＧ１５、ＣＭＰＫ２、ＩＦＩ２７、ＣＤ７４、ＩＦＩＨ１、ＣＣＲＬ２、ＩＦＩ４４、ＨＥＲＣ６、ＩＳＧ２０、ＩＦＩＴ３、ＨＬＡ－Ｃ、ＯＡＳ１、ＩＦＩ３５、ＩＲＦ９、ＥＰＳＴＩ１、ＵＳＰ１８、ＢＳＴ２、ＣＳＦ１、Ｃ１Ｓ、ＤＨＸ５８、ＴＲＩＭ１４、ＯＡＳＬ、ＩＲＦ７、ＬＧＡＬＳ３ＢＰ、ＤＤＸ６０、ＬＡＰ３、ＬＡＭＰ３、ＰＡＲＰ１２、ＰＡＲＰ９、ＳＰ１１０、ＰＬＳＣＲ１、ＷＡＲＳ、ＳＴＡＴ１、ＩＲＦ３、ＩＲＦ５、ＭＳＣ、ＪＵＮ、ＳＰＩ１、ＩＲＦ１、ＣＯＭＭＤ３－ＢＭＩ１、ＳＴＡＴ２、ＲＵＮＸ３、ＳＲＥＢＦ１、ＦＬＩ１およびＢＲＣＡ１のうち１つ、２つ、３つ、４つ、５つまたはそれを超えるものの発現の増大
を有するかどうかを判定することを含んでなる方法を提供する。
さらなる実施形態において、本発明は、
前記患者から得られた生物学的サンプルにおいてＢＡＰ１発現が低下しているか；かつ／または
前記患者から得られた生物学的サンプルにおいてＣＤＫＮ２Ａ発現が低下しているか；かつ／または
前記患者から得られた生物学的サンプルにおいて、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＲＳＡＤ２、ＭＸ１、ＢＡＴＦ２、ＩＦＩ４４Ｌ、ＩＦＩＴＭ１、ＩＳＧ１５、ＣＭＰＫ２、ＩＦＩ２７、ＣＤ７４、ＩＦＩＨ１、ＣＣＲＬ２、ＩＦＩ４４、ＨＥＲＣ６、ＩＳＧ２０、ＩＦＩＴ３、ＨＬＡ－Ｃ、ＯＡＳ１、ＩＦＩ３５、ＩＲＦ９、ＥＰＳＴＩ１、ＵＳＰ１８、ＢＳＴ２、ＣＳＦ１、Ｃ１Ｓ、ＤＨＸ５８、ＴＲＩＭ１４、ＯＡＳＬ、ＩＲＦ７、ＬＧＡＬＳ３ＢＰ、ＤＤＸ６０、ＬＡＰ３、ＬＡＭＰ３、ＰＡＲＰ１２、ＰＡＲＰ９、ＳＰ１１０、ＰＬＳＣＲ１、ＷＡＲＳ、ＳＴＡＴ１、ＩＲＦ３、ＩＲＦ５、ＭＳＣ、ＪＵＮ、ＳＰＩ１、ＩＲＦ１、ＣＯＭＭＤ３－ＢＭＩ１、ＳＴＡＴ２、ＲＵＮＸ３、ＳＲＥＢＦ１、ＦＬＩ１およびＢＲＣＡ１のうち１つ、２つ、３つ、４つ、５つまたはそれを超えるものの発現が増大しているか
に関して患者を検査することを含んでなる、患者の応答者を特定する方法を提供する。
さらなる実施形態において、本発明は、
（ａ）癌、場合により、中皮腫などのｐ５３野生型癌に関して治療を必要とする患者を特定すること；
（ｂ）前記患者が
前記患者から得られた生物学的サンプルにおけるＢＡＰ１発現の低下；ならびに／または
前記患者から得られた生物学的サンプルにおけるＣＤＫＮ２Ａ発現の低下；ならびに／または
前記患者から得られた生物学的サンプルにおけるＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＲＳＡＤ２、ＭＸ１、ＢＡＴＦ２、ＩＦＩ４４Ｌ、ＩＦＩＴＭ１、ＩＳＧ１５、ＣＭＰＫ２、ＩＦＩ２７、ＣＤ７４、ＩＦＩＨ１、ＣＣＲＬ２、ＩＦＩ４４、ＨＥＲＣ６、ＩＳＧ２０、ＩＦＩＴ３、ＨＬＡ－Ｃ、ＯＡＳ１、ＩＦＩ３５、ＩＲＦ９、ＥＰＳＴＩ１、ＵＳＰ１８、ＢＳＴ２、ＣＳＦ１、Ｃ１Ｓ、ＤＨＸ５８、ＴＲＩＭ１４、ＯＡＳＬ、ＩＲＦ７、ＬＧＡＬＳ３ＢＰ、ＤＤＸ６０、ＬＡＰ３、ＬＡＭＰ３、ＰＡＲＰ１２、ＰＡＲＰ９、ＳＰ１１０、ＰＬＳＣＲ１、ＷＡＲＳ、ＳＴＡＴ１、ＩＲＦ３、ＩＲＦ５、ＭＳＣ、ＪＵＮ、ＳＰＩ１、ＩＲＦ１、ＣＯＭＭＤ３－ＢＭＩ１、ＳＴＡＴ２、ＲＵＮＸ３、ＳＲＥＢＦ１、ＦＬＩ１およびＢＲＣＡ１のうち１つ、２つ、３つ、４つ、５つまたはそれを超えるものの増大を有することを判定すること；ならびに
（ｃ）前記患者を治療上有効な量のＭＤＭ２アンタゴニストで処置すること
を含んでなる治療方法を提供する。
さらなる実施形態において、本発明は、
（ａ）癌、場合により、中皮腫に関して治療を必要とする患者を特定すること；
（ｂ）患者において１以上の本発明のバイオマーカーを決定すること；
（ｃ）１以上の本発明のバイオマーカーを有する患者においてＭＤＭ２アンタゴニストが有効であるという認識に基づき、前記患者に対する治療としてＭＤＭ２アンタゴニストを選択すること；
（ｄ）前記患者を治療上有効な量のＭＤＭ２アンタゴニストで処置すること
を含んでなる治療方法を提供する。
さらなる実施形態において、本発明は、癌患者に対する治療を選択する方法であって、
（ａ）１以上の生物学的サンプルをアッセイし、それにより、患者において１以上の本発明のバイオマーカーを決定すること；
（ｂ）その決定に基づいて、治療上有効な量のＭＤＭ２アンタゴニストによる処置のために患者を選択すること
を含んでなる方法を提供する。
さらなる実施形態において、本発明は、ＭＤＭ２アンタゴニストによる処置のために患者（例えば、癌に罹患している）を選択するための手順を提供し、前記患者は、
前記患者から得られた生物学的サンプルにおいて低下したまたは低いＢＡＰ１発現；ならびに／または
前記患者から得られた生物学的サンプルにおいて低下したまたは低いＣＤＫＮ２Ａ発現；ならびに／または
前記患者から得られた生物学的サンプルにおいてＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＲＳＡＤ２、ＭＸ１、ＢＡＴＦ２、ＩＦＩ４４Ｌ、ＩＦＩＴＭ１、ＩＳＧ１５、ＣＭＰＫ２、ＩＦＩ２７、ＣＤ７４、ＩＦＩＨ１、ＣＣＲＬ２、ＩＦＩ４４、ＨＥＲＣ６、ＩＳＧ２０、ＩＦＩＴ３、ＨＬＡ－Ｃ、ＯＡＳ１、ＩＦＩ３５、ＩＲＦ９、ＥＰＳＴＩ１、ＵＳＰ１８、ＢＳＴ２、ＣＳＦ１、Ｃ１Ｓ、ＤＨＸ５８、ＴＲＩＭ１４、ＯＡＳＬ、ＩＲＦ７、ＬＧＡＬＳ３ＢＰ、ＤＤＸ６０、ＬＡＰ３、ＬＡＭＰ３、ＰＡＲＰ１２、ＰＡＲＰ９、ＳＰ１１０、ＰＬＳＣＲ１、ＷＡＲＳ、ＳＴＡＴ１、ＩＲＦ３、ＩＲＦ５、ＭＳＣ、ＪＵＮ、ＳＰＩ１、ＩＲＦ１、ＣＯＭＭＤ３－ＢＭＩ１、ＳＴＡＴ２、ＲＵＮＸ３、ＳＲＥＢＦ１、ＦＬＩ１およびＢＲＣＡ１のうち１つ、２つ、３つ、４つ、５つまたはそれを超えるものの増大したまたは高い発現
を有するとして選択されていることを特徴とする。
さらなる実施形態において、本発明は、患者の癌の治療において使用するためのＭＤＭ２アンタゴニストを提供し、前記患者は、
前記患者から得られた生物学的サンプルにおけるＢＡＰ１発現の低下；ならびに／または
前記患者から得られた生物学的サンプルにおけるＣＤＫＮ２Ａ発現の低下；ならびに／または
前記患者から得られた生物学的サンプルにおけるＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＲＳＡＤ２、ＭＸ１、ＢＡＴＦ２、ＩＦＩ４４Ｌ、ＩＦＩＴＭ１、ＩＳＧ１５、ＣＭＰＫ２、ＩＦＩ２７、ＣＤ７４、ＩＦＩＨ１、ＣＣＲＬ２、ＩＦＩ４４、ＨＥＲＣ６、ＩＳＧ２０、ＩＦＩＴ３、ＨＬＡ－Ｃ、ＯＡＳ１、ＩＦＩ３５、ＩＲＦ９、ＥＰＳＴＩ１、ＵＳＰ１８、ＢＳＴ２、ＣＳＦ１、Ｃ１Ｓ、ＤＨＸ５８、ＴＲＩＭ１４、ＯＡＳＬ、ＩＲＦ７、ＬＧＡＬＳ３ＢＰ、ＤＤＸ６０、ＬＡＰ３、ＬＡＭＰ３、ＰＡＲＰ１２、ＰＡＲＰ９、ＳＰ１１０、ＰＬＳＣＲ１、ＷＡＲＳ、ＳＴＡＴ１、ＩＲＦ３、ＩＲＦ５、ＭＳＣ、ＪＵＮ、ＳＰＩ１、ＩＲＦ１、ＣＯＭＭＤ３－ＢＭＩ１、ＳＴＡＴ２、ＲＵＮＸ３、ＳＲＥＢＦ１、ＦＬＩ１およびＢＲＣＡ１のうち１つ、２つ、３つ、４つ、５つまたはそれを超えるものの発現の増大
を有することが知られていることを特徴する。
さらなる実施形態において、本発明は、患者において癌を治療するためのキットを提供し、前記キットは、１以上の本発明のバイオマーカーの検出および／もしくは定量のためのバイオセンサー、ならびに／または１以上の本発明のバイオマーカーの検出のための試薬を、場合により、本明細書で定義されるような方法に従うキットの使用に関する説明書とともに含んでなる。
さらなる実施形態において、本発明は、癌を有する個人の、
前記患者から得られた生物学的サンプルにおけるＢＡＰ１発現の低下；ならびに／または
前記患者から得られた生物学的サンプルにおけるＣＤＫＮ２Ａ発現の低下；ならびに／または
前記患者から得られた生物学的サンプルにおけるＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＲＳＡＤ２、ＭＸ１、ＢＡＴＦ２、ＩＦＩ４４Ｌ、ＩＦＩＴＭ１、ＩＳＧ１５、ＣＭＰＫ２、ＩＦＩ２７、ＣＤ７４、ＩＦＩＨ１、ＣＣＲＬ２、ＩＦＩ４４、ＨＥＲＣ６、ＩＳＧ２０、ＩＦＩＴ３、ＨＬＡ－Ｃ、ＯＡＳ１、ＩＦＩ３５、ＩＲＦ９、ＥＰＳＴＩ１、ＵＳＰ１８、ＢＳＴ２、ＣＳＦ１、Ｃ１Ｓ、ＤＨＸ５８、ＴＲＩＭ１４、ＯＡＳＬ、ＩＲＦ７、ＬＧＡＬＳ３ＢＰ、ＤＤＸ６０、ＬＡＰ３、ＬＡＭＰ３、ＰＡＲＰ１２、ＰＡＲＰ９、ＳＰ１１０、ＰＬＳＣＲ１、ＷＡＲＳ、ＳＴＡＴ１、ＩＲＦ３、ＩＲＦ５、ＭＳＣ、ＪＵＮ、ＳＰＩ１、ＩＲＦ１、ＣＯＭＭＤ３－ＢＭＩ１、ＳＴＡＴ２、ＲＵＮＸ３、ＳＲＥＢＦ１、ＦＬＩ１およびＢＲＣＡ１のうち１つ、２つ、３つ、４つ、５つまたはそれを超えるものの発現の増大
を含んでなるＭＤＭ２アンタゴニストによる処置に対する反応性を決定する方法を提供する。
さらなる実施形態において、本発明は、癌を有する個人の、ＭＤＭ２アンタゴニストによる処置に対する反応性を決定する方法であって、
前記患者から得られた生物学的サンプルにおいてＢＡＰ１発現が低下し；かつ／または
前記患者から得られた生物学的サンプルにおいてＣＤＫＮ２Ａ発現が低下し；かつ／または
前記患者から得られた生物学的サンプルにおいてＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＲＳＡＤ２、ＭＸ１、ＢＡＴＦ２、ＩＦＩ４４Ｌ、ＩＦＩＴＭ１、ＩＳＧ１５、ＣＭＰＫ２、ＩＦＩ２７、ＣＤ７４、ＩＦＩＨ１、ＣＣＲＬ２、ＩＦＩ４４、ＨＥＲＣ６、ＩＳＧ２０、ＩＦＩＴ３、ＨＬＡ－Ｃ、ＯＡＳ１、ＩＦＩ３５、ＩＲＦ９、ＥＰＳＴＩ１、ＵＳＰ１８、ＢＳＴ２、ＣＳＦ１、Ｃ１Ｓ、ＤＨＸ５８、ＴＲＩＭ１４、ＯＡＳＬ、ＩＲＦ７、ＬＧＡＬＳ３ＢＰ、ＤＤＸ６０、ＬＡＰ３、ＬＡＭＰ３、ＰＡＲＰ１２、ＰＡＲＰ９、ＳＰ１１０、ＰＬＳＣＲ１、ＷＡＲＳ、ＳＴＡＴ１、ＩＲＦ３、ＩＲＦ５、ＭＳＣ、ＪＵＮ、ＳＰＩ１、ＩＲＦ１、ＣＯＭＭＤ３－ＢＭＩ１、ＳＴＡＴ２、ＲＵＮＸ３、ＳＲＥＢＦ１、ＦＬＩ１およびＢＲＣＡ１のうち１つ、２つ、３つ、４つ、５つまたはそれを超えるものの発現が増大している
患者を特定すること；ならびに次いで
治療上有効な量のＭＤＭ２アンタゴニストを前記患者に
投与すること
を含んでなる方法を提供する。
さらなる実施形態において、本発明は、患者において癌を治療する方法を提供し、前記方法は、
前記患者から得られた生物学的サンプルにおいてＢＡＰ１発現が低下し；かつ／または
前記患者から得られた生物学的サンプルにおいてＣＤＫＮ２Ａ発現が低下している
患者を選択する工程；
本明細書の工程において選択された前記患者に治療上有効な量のＭＤＭ２アンタゴニストを、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＲＳＡＤ２、ＭＸ１、ＢＡＴＦ２、ＩＦＩ４４Ｌ、ＩＦＩＴＭ１、ＩＳＧ１５、ＣＭＰＫ２、ＩＦＩ２７、ＣＤ７４、ＩＦＩＨ１、ＣＣＲＬ２、ＩＦＩ４４、ＨＥＲＣ６、ＩＳＧ２０、ＩＦＩＴ３、ＨＬＡ－Ｃ、ＯＡＳ１、ＩＦＩ３５、ＩＲＦ９、ＥＰＳＴＩ１、ＵＳＰ１８、ＢＳＴ２、ＣＳＦ１、Ｃ１Ｓ、ＤＨＸ５８、ＴＲＩＭ１４、ＯＡＳＬ、ＩＲＦ７、ＬＧＡＬＳ３ＢＰ、ＤＤＸ６０、ＬＡＰ３、ＬＡＭＰ３、ＰＡＲＰ１２、ＰＡＲＰ９、ＳＰ１１０、ＰＬＳＣＲ１、ＷＡＲＳ、ＳＴＡＴ１、ＩＲＦ３、ＩＲＦ５、ＭＳＣ、ＪＵＮ、ＳＰＩ１、ＩＲＦ１、ＣＯＭＭＤ３－ＢＭＩ１、ＳＴＡＴ２、ＲＵＮＸ３、ＳＲＥＢＦ１、ＦＬＩ１およびＢＲＣＡ１のうち１つ、２つ、３つ、４つ、５つまたはそれを超えるものの発現レベルを上昇させるためのインターフェロン（例えば、インターフェロンα）と組み合わせて投与する工程を含んでなる
さらなる実施形態において、本発明は、
（ｉ）ＢＡＰ１発現の決定を指示すること；ならびに／または
（ｉｉ）ＣＤＫＮ２Ａ発現の決定を指示すること；ならびに／または
（ｉｉｉ）ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＲＳＡＤ２、ＭＸ１、ＢＡＴＦ２、ＩＦＩ４４Ｌ、ＩＦＩＴＭ１、ＩＳＧ１５、ＣＭＰＫ２、ＩＦＩ２７、ＣＤ７４、ＩＦＩＨ１、ＣＣＲＬ２、ＩＦＩ４４、ＨＥＲＣ６、ＩＳＧ２０、ＩＦＩＴ３、ＨＬＡ－Ｃ、ＯＡＳ１、ＩＦＩ３５、ＩＲＦ９、ＥＰＳＴＩ１、ＵＳＰ１８、ＢＳＴ２、ＣＳＦ１、Ｃ１Ｓ、ＤＨＸ５８、ＴＲＩＭ１４、ＯＡＳＬ、ＩＲＦ７、ＬＧＡＬＳ３ＢＰ、ＤＤＸ６０、ＬＡＰ３、ＬＡＭＰ３、ＰＡＲＰ１２、ＰＡＲＰ９、ＳＰ１１０、ＰＬＳＣＲ１、ＷＡＲＳ、ＳＴＡＴ１、ＩＲＦ３、ＩＲＦ５、ＭＳＣ、ＪＵＮ、ＳＰＩ１、ＩＲＦ１、ＣＯＭＭＤ３－ＢＭＩ１、ＳＴＡＴ２、ＲＵＮＸ３、ＳＲＥＢＦ１、ＦＬＩ１およびＢＲＣＡ１のうち１つ、２つ、３つ、４つ、５つまたはそれを超えるものの発現レベルの決定を指示すること；ならびに
（ｉｖ）ＢＡＰ１および／またはＣＤＫＮ２Ａのレベルが低下している、かつ／またはＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＲＳＡＤ２、ＭＸ１、ＢＡＴＦ２、ＩＦＩ４４Ｌ、ＩＦＩＴＭ１、ＩＳＧ１５、ＣＭＰＫ２、ＩＦＩ２７、ＣＤ７４、ＩＦＩＨ１、ＣＣＲＬ２、ＩＦＩ４４、ＨＥＲＣ６、ＩＳＧ２０、ＩＦＩＴ３、ＨＬＡ－Ｃ、ＯＡＳ１、ＩＦＩ３５、ＩＲＦ９、ＥＰＳＴＩ１、ＵＳＰ１８、ＢＳＴ２、ＣＳＦ１、Ｃ１Ｓ、ＤＨＸ５８、ＴＲＩＭ１４、ＯＡＳＬ、ＩＲＦ７、ＬＧＡＬＳ３ＢＰ、ＤＤＸ６０、ＬＡＰ３、ＬＡＭＰ３、ＰＡＲＰ１２、ＰＡＲＰ９、ＳＰ１１０、ＰＬＳＣＲ１、ＷＡＲＳ、ＳＴＡＴ１、ＩＲＦ３、ＩＲＦ５、ＭＳＣ、ＪＵＮ、ＳＰＩ１、ＩＲＦ１、ＣＯＭＭＤ３－ＢＭＩ１、ＳＴＡＴ２、ＲＵＮＸ３、ＳＲＥＢＦ１、ＦＬＩ１およびＢＲＣＡ１のうち１つ、２つ、３つ、４つ、５つまたはそれを超えるもののレベルが増大している患者に治療上有効な量のＭＤＭ２アンタゴニストを投与すること
を含んでなる薬物投与手順を提供する。
さらなる実施形態において、本発明は、
（ｉ）ＭＤＭ２アンタゴニスト；
（ｉｉ）本明細書に記載のバイオマーカープロファイルを用いて特定された患者の治療におけるＭＤＭ２アンタゴニストの使用に関する説明を詳説した患者用添付文書
を含んでなる包装された医薬品を提供する。
さらなる実施形態において、本発明は、患者において癌を治療する方法を提供し、前記方法は、
（ｉ）患者からのサンプルをプライマー、抗体、基質またはプローブと接触させて、ＢＡＰ１ならびに／またはＣＤＫＮ２Ａならびに／またはＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＲＳＡＤ２、ＭＸ１、ＢＡＴＦ２、ＩＦＩ４４Ｌ、ＩＦＩＴＭ１、ＩＳＧ１５、ＣＭＰＫ２、ＩＦＩ２７、ＣＤ７４、ＩＦＩＨ１、ＣＣＲＬ２、ＩＦＩ４４、ＨＥＲＣ６、ＩＳＧ２０、ＩＦＩＴ３、ＨＬＡ－Ｃ、ＯＡＳ１、ＩＦＩ３５、ＩＲＦ９、ＥＰＳＴＩ１、ＵＳＰ１８、ＢＳＴ２、ＣＳＦ１、Ｃ１Ｓ、ＤＨＸ５８、ＴＲＩＭ１４、ＯＡＳＬ、ＩＲＦ７、ＬＧＡＬＳ３ＢＰ、ＤＤＸ６０、ＬＡＰ３、ＬＡＭＰ３、ＰＡＲＰ１２、ＰＡＲＰ９、ＳＰ１１０、ＰＬＳＣＲ１、ＷＡＲＳ、ＳＴＡＴ１、ＩＲＦ３、ＩＲＦ５、ＭＳＣ、ＪＵＮ、ＳＰＩ１、ＩＲＦ１、ＣＯＭＭＤ３－ＢＭＩ１、ＳＴＡＴ２、ＲＵＮＸ３、ＳＲＥＢＦ１、ＦＬＩ１およびＢＲＣＡ１のうち１つ、２つ、３つ、４つ、５つまたはそれを超えるものの発現レベルを決定すること；
（ｉｉ）前記患者から得られた生物学的サンプルにおいてＢＡＰ１および／またはＣＤＫＮ２Ａのレベルが低下している、かつ／またはＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＲＳＡＤ２、ＭＸ１、ＢＡＴＦ２、ＩＦＩ４４Ｌ、ＩＦＩＴＭ１、ＩＳＧ１５、ＣＭＰＫ２、ＩＦＩ２７、ＣＤ７４、ＩＦＩＨ１、ＣＣＲＬ２、ＩＦＩ４４、ＨＥＲＣ６、ＩＳＧ２０、ＩＦＩＴ３、ＨＬＡ－Ｃ、ＯＡＳ１、ＩＦＩ３５、ＩＲＦ９、ＥＰＳＴＩ１、ＵＳＰ１８、ＢＳＴ２、ＣＳＦ１、Ｃ１Ｓ、ＤＨＸ５８、ＴＲＩＭ１４、ＯＡＳＬ、ＩＲＦ７、ＬＧＡＬＳ３ＢＰ、ＤＤＸ６０、ＬＡＰ３、ＬＡＭＰ３、ＰＡＲＰ１２、ＰＡＲＰ９、ＳＰ１１０、ＰＬＳＣＲ１、ＷＡＲＳ、ＳＴＡＴ１、ＩＲＦ３、ＩＲＦ５、ＭＳＣ、ＪＵＮ、ＳＰＩ１、ＩＲＦ１、ＣＯＭＭＤ３－ＢＭＩ１、ＳＴＡＴ２、ＲＵＮＸ３、ＳＲＥＢＦ１、ＦＬＩ１およびＢＲＣＡ１のうち１つ、２つ、３つ、４つ、５つまたはそれを超えるもののレベルが増大している患者を選択すること；
（ｉｉｉ）次に、工程（ｉｉ）で選択された前記患者に治療上有効な量のＭＤＭ２アンタゴニストを投与すること
を含んでなる。
さらなる実施形態において、本発明は、ＭＤＭ２アンタゴニストによる処置のために患者を特定するための方法を提供し、前記方法は、
（ａ）患者からのサンプルを複数のオリゴヌクレオチドプライマーと接触させること、前記複数のプライマーは、以下：ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＲＳＡＤ２、ＭＸ１、ＢＡＴＦ２、ＩＦＩ４４Ｌ、ＩＦＩＴＭ１、ＩＳＧ１５、ＣＭＰＫ２、ＩＦＩ２７、ＣＤ７４、ＩＦＩＨ１、ＣＣＲＬ２、ＩＦＩ４４、ＨＥＲＣ６、ＩＳＧ２０、ＩＦＩＴ３、ＨＬＡ－Ｃ、ＯＡＳ１、ＩＦＩ３５、ＩＲＦ９、ＥＰＳＴＩ１、ＵＳＰ１８、ＢＳＴ２、ＣＳＦ１、Ｃ１Ｓ、ＤＨＸ５８、ＴＲＩＭ１４、ＯＡＳＬ、ＩＲＦ７、ＬＧＡＬＳ３ＢＰ、ＤＤＸ６０、ＬＡＰ３、ＬＡＭＰ３、ＰＡＲＰ１２、ＰＡＲＰ９、ＳＰ１１０、ＰＬＳＣＲ１、ＷＡＲＳ、ＳＴＡＴ１、ＩＲＦ３、ＩＲＦ５、ＭＳＣ、ＪＵＮ、ＳＰＩ１、ＩＲＦ１、ＣＯＭＭＤ３－ＢＭＩ１、ＳＴＡＴ２、ＲＵＮＸ３、ＳＲＥＢＦ１、ＦＬＩ１およびＢＲＣＡ１のうちいずれか１以上に関する少なくとも１対のオリゴヌクレオチドプライマーを含んでなる；
（ｂ）前記サンプルに対してＰＣＲを実施してサンプル中の遺伝子発現産物／転写産物を増幅させること；
（ｃ）前記遺伝子のうち少なくとも１つの発現産物のレベルを決定すること；ならびに
（ｄ）前記少なくとも１つの遺伝子の発現レベルが正常値上限（ＵＬＮ）よりも高い場合に、前記患者をＭＤＭ２アンタゴニストによる処置の候補として特定すること
を含んでなる。
患者は、場合により、ＢＡＰ１および／またはＣＤＫＮ２Ａの発現レベルが正常値上限（ＵＬＮ）よりも低く（例えば、下回る）、かつ／またはＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＲＳＡＤ２、ＭＸ１、ＢＡＴＦ２、ＩＦＩ４４Ｌ、ＩＦＩＴＭ１、ＩＳＧ１５、ＣＭＰＫ２、ＩＦＩ２７、ＣＤ７４、ＩＦＩＨ１、ＣＣＲＬ２、ＩＦＩ４４、ＨＥＲＣ６、ＩＳＧ２０、ＩＦＩＴ３、ＨＬＡ－Ｃ、ＯＡＳ１、ＩＦＩ３５、ＩＲＦ９、ＥＰＳＴＩ１、ＵＳＰ１８、ＢＳＴ２、ＣＳＦ１、Ｃ１Ｓ、ＤＨＸ５８、ＴＲＩＭ１４、ＯＡＳＬ、ＩＲＦ７、ＬＧＡＬＳ３ＢＰ、ＤＤＸ６０、ＬＡＰ３、ＬＡＭＰ３、ＰＡＲＰ１２、ＰＡＲＰ９、ＳＰ１１０、ＰＬＳＣＲ１、ＷＡＲＳ、ＳＴＡＴ１、ＩＲＦ３、ＩＲＦ５、ＭＳＣ、ＪＵＮ、ＳＰＩ１、ＩＲＦ１、ＣＯＭＭＤ３－ＢＭＩ１、ＳＴＡＴ２、ＲＵＮＸ３、ＳＲＥＢＦ１、ＦＬＩ１およびＢＲＣＡ１のうち少なくとも１つの発現レベルが正常値上限（ＵＬＮ）よりも高い（例えば、上回る）場合に、ＭＤＭ２アンタゴニストによる処置の候補として特定され得る。
さらなる実施形態において、本発明は、ＭＤＭ２アンタゴニストによる処置のために患者を特定するための方法を提供し、前記方法は、
（ａ）患者からのサンプルを１以上の本発明のバイオマーカーに対する抗体と接触させること；
（ｂ）前記サンプルに対してアッセイを実施すること；
（ｃ）１以上の本発明のバイオマーカーのレベルを決定すること；および
（ｄ）１以上の本発明のバイオマーカーのレベルが正常値上限（ＵＬＮ）よりも上昇または低下している場合に、前記患者をＭＤＭ２アンタゴニストによる処置の候補として特定すること
を含んでなる。
工程（ｂ）におけるアッセイは、免疫組織化学アッセイであるか、またはそれを含んでなり得る。いくつかの実施形態において、アッセイは、ＥＬＩＳＡであるか、またはそれを含んでなり得る。患者からのサンプルをＢＡＰ１および／またはＣＤＫＮ２Ａに対する抗体と接触させる場合、一般に前記サンプルに対して免疫組織化学アッセイが実施され、患者は、ＢＡＰ１またはＣＤＫＮ２Ａのレベルが正常値上限（ＵＬＮ）よりも低い（または不在の）場合に、ＭＤＭ２アンタゴニストによる処置の候補として特定される。
ひと度、処置のための患者が特定されれば、本明細書に記載の方法は、患者の癌をＭＤＭ２アンタゴニストで処置することをさらに含んでなり得る。
さらなる実施形態において、本発明は、癌に対するＭＤＭ２アンタゴニスト療法を受けるための癌患者を選択する方法であって、
（ａ）患者からの生物学的サンプルにおいてＢＡＰ１、ＣＤＫＮ２Ａ、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＲＳＡＤ２、ＭＸ１、ＢＡＴＦ２、ＩＦＩ４４Ｌ、ＩＦＩＴＭ１、ＩＳＧ１５、ＣＭＰＫ２、ＩＦＩ２７、ＣＤ７４、ＩＦＩＨ１、ＣＣＲＬ２、ＩＦＩ４４、ＨＥＲＣ６、ＩＳＧ２０、ＩＦＩＴ３、ＨＬＡ－Ｃ、ＯＡＳ１、ＩＦＩ３５、ＩＲＦ９、ＥＰＳＴＩ１、ＵＳＰ１８、ＢＳＴ２、ＣＳＦ１、Ｃ１Ｓ、ＤＨＸ５８、ＴＲＩＭ１４、ＯＡＳＬ、ＩＲＦ７、ＬＧＡＬＳ３ＢＰ、ＤＤＸ６０、ＬＡＰ３、ＬＡＭＰ３、ＰＡＲＰ１２、ＰＡＲＰ９、ＳＰ１１０、ＰＬＳＣＲ１、ＷＡＲＳ、ＳＴＡＴ１、ＩＲＦ３、ＩＲＦ５、ＭＳＣ、ＪＵＮ、ＳＰＩ１、ＩＲＦ１、ＣＯＭＭＤ３－ＢＭＩ１、ＳＴＡＴ２、ＲＵＮＸ３、ＳＲＥＢＦ１、ＦＬＩ１およびＢＲＣＡ１のうち１以上のレベルを決定すること；ならびに
（ｂ）患者からの生物学的サンプルにおいて、ＢＡＰ１および／またはＣＤＫＮ２Ａのレベルが所定の値よりも低く、かつ／または患者からの生物学的サンプルにおいて、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＲＳＡＤ２、ＭＸ１、ＢＡＴＦ２、ＩＦＩ４４Ｌ、ＩＦＩＴＭ１、ＩＳＧ１５、ＣＭＰＫ２、ＩＦＩ２７、ＣＤ７４、ＩＦＩＨ１、ＣＣＲＬ２、ＩＦＩ４４、ＨＥＲＣ６、ＩＳＧ２０、ＩＦＩＴ３、ＨＬＡ－Ｃ、ＯＡＳ１、ＩＦＩ３５、ＩＲＦ９、ＥＰＳＴＩ１、ＵＳＰ１８、ＢＳＴ２、ＣＳＦ１、Ｃ１Ｓ、ＤＨＸ５８、ＴＲＩＭ１４、ＯＡＳＬ、ＩＲＦ７、ＬＧＡＬＳ３ＢＰ、ＤＤＸ６０、ＬＡＰ３、ＬＡＭＰ３、ＰＡＲＰ１２、ＰＡＲＰ９、ＳＰ１１０、ＰＬＳＣＲ１、ＷＡＲＳ、ＳＴＡＴ１、ＩＲＦ３、ＩＲＦ５、ＭＳＣ、ＪＵＮ、ＳＰＩ１、ＩＲＦ１、ＣＯＭＭＤ３－ＢＭＩ１、ＳＴＡＴ２、ＲＵＮＸ３、ＳＲＥＢＦ１、ＦＬＩ１およびＢＲＣＡ１のうち１以上のレベルが所定の値以上である患者を選択すること
を含んでなる方法を提供する。
さらなる実施形態において、本発明は、患者の癌に対するＭＤＭ２アンタゴニストの有効性を予測するため、または癌に関するＭＤＭ２アンタゴニストに対する癌患者の応答を予測するための方法であって、患者からの生物学的サンプルにおいてＢＡＰ１、ＣＤＫＮ２Ａ、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＲＳＡＤ２、ＭＸ１、ＢＡＴＦ２、ＩＦＩ４４Ｌ、ＩＦＩＴＭ１、ＩＳＧ１５、ＣＭＰＫ２、ＩＦＩ２７、ＣＤ７４、ＩＦＩＨ１、ＣＣＲＬ２、ＩＦＩ４４、ＨＥＲＣ６、ＩＳＧ２０、ＩＦＩＴ３、ＨＬＡ－Ｃ、ＯＡＳ１、ＩＦＩ３５、ＩＲＦ９、ＥＰＳＴＩ１、ＵＳＰ１８、ＢＳＴ２、ＣＳＦ１、Ｃ１Ｓ、ＤＨＸ５８、ＴＲＩＭ１４、ＯＡＳＬ、ＩＲＦ７、ＬＧＡＬＳ３ＢＰ、ＤＤＸ６０、ＬＡＰ３、ＬＡＭＰ３、ＰＡＲＰ１２、ＰＡＲＰ９、ＳＰ１１０、ＰＬＳＣＲ１、ＷＡＲＳ、ＳＴＡＴ１、ＩＲＦ３、ＩＲＦ５、ＭＳＣ、ＪＵＮ、ＳＰＩ１、ＩＲＦ１、ＣＯＭＭＤ３－ＢＭＩ１、ＳＴＡＴ２、ＲＵＮＸ３、ＳＲＥＢＦ１、ＦＬＩ１および／またはＢＲＣＡ１のうち１以上のレベルを決定することを含んでなる方法を提供し、ＢＡＰ１および／またはＣＤＫＮ２Ａの生物学的サンプルレベルが所定の値と等しいか、または一般にはそれより小さく、かつ／またはＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＲＳＡＤ２、ＭＸ１、ＢＡＴＦ２、ＩＦＩ４４Ｌ、ＩＦＩＴＭ１、ＩＳＧ１５、ＣＭＰＫ２、ＩＦＩ２７、ＣＤ７４、ＩＦＩＨ１、ＣＣＲＬ２、ＩＦＩ４４、ＨＥＲＣ６、ＩＳＧ２０、ＩＦＩＴ３、ＨＬＡ－Ｃ、ＯＡＳ１、ＩＦＩ３５、ＩＲＦ９、ＥＰＳＴＩ１、ＵＳＰ１８、ＢＳＴ２、ＣＳＦ１、Ｃ１Ｓ、ＤＨＸ５８、ＴＲＩＭ１４、ＯＡＳＬ、ＩＲＦ７、ＬＧＡＬＳ３ＢＰ、ＤＤＸ６０、ＬＡＰ３、ＬＡＭＰ３、ＰＡＲＰ１２、ＰＡＲＰ９、ＳＰ１１０、ＰＬＳＣＲ１、ＷＡＲＳ、ＳＴＡＴ１、ＩＲＦ３、ＩＲＦ５、ＭＳＣ、ＪＵＮ、ＳＰＩ１、ＩＲＦ１、ＣＯＭＭＤ３－ＢＭＩ１、ＳＴＡＴ２、ＲＵＮＸ３、ＳＲＥＢＦ１、ＦＬＩ１およびＢＲＣＡ１のうち１以上のレベルが所定の値と等しいか、または一般にはそれより大きい場合に、患者における有効性が予測される。
さらなる実施形態において、本発明は、ＭＤＭ２アンタゴニストによる処置を必要とする、癌を有する患者を選択する方法であって、（ａ）患者から得られた腫瘍サンプルをＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＲＳＡＤ２、ＭＸ１、ＢＡＴＦ２、ＩＦＩ４４Ｌ、ＩＦＩＴＭ１、ＩＳＧ１５、ＣＭＰＫ２、ＩＦＩ２７、ＣＤ７４、ＩＦＩＨ１、ＣＣＲＬ２、ＩＦＩ４４、ＨＥＲＣ６、ＩＳＧ２０、ＩＦＩＴ３、ＨＬＡ－Ｃ、ＯＡＳ１、ＩＦＩ３５、ＩＲＦ９、ＥＰＳＴＩ１、ＵＳＰ１８、ＢＳＴ２、ＣＳＦ１、Ｃ１Ｓ、ＤＨＸ５８、ＴＲＩＭ１４、ＯＡＳＬ、ＩＲＦ７、ＬＧＡＬＳ３ＢＰ、ＤＤＸ６０、ＬＡＰ３、ＬＡＭＰ３、ＰＡＲＰ１２、ＰＡＲＰ９、ＳＰ１１０、ＰＬＳＣＲ１、ＷＡＲＳ、ＳＴＡＴ１、ＩＲＦ３、ＩＲＦ５、ＭＳＣ、ＪＵＮ、ＳＰＩ１、ＩＲＦ１、ＣＯＭＭＤ３－ＢＭＩ１、ＳＴＡＴ２、ＲＵＮＸ３、ＳＲＥＢＦ１、ＦＬＩ１および／またはＢＲＣＡ１が上昇しているかどうか、および／または（ｂ）患者から得られた腫瘍サンプルをＢＡＰ１および／またはＣＤＫＮ２Ａが低レベルかどうかを検査することを含んでなる方法を提供する。
さらなる実施形態において、本発明は、癌を治療する方法であって、（ｉ）癌に罹患しているまたは罹患する可能性がある患者から得られた腫瘍サンプルをＩＦＮシグネチャーバイオマーカーの上昇および／またはＢＡＰ１の欠損および／またはＣＤＫＮ２Ａの欠損に関して検査すること、ならびに（ｉｉ）ＭＤＭ２アンタゴニストをサンプルが採取された患者を投与することを含んでなる方法を提供する。
さらなる実施形態において、本発明は、ＭＤＭ２アンタゴニストによる処置から利益を受ける可能性が最も高い癌を有する患者を特定する方法であって、患者から得られた腫瘍サンプルにおいて１以上の本発明のバイオマーカーのレベルを測定すること、および前記患者が存在するレベルに従ってＭＤＭ２アンタゴニストによる処置から利益を受ける可能性があるかどうかを特定することを含んでなる方法を提供する。
本発明のいくつかの実施形態は、ＢＡＰ１欠損および／またはＣＤＫＮ２Ａ欠損を示すＢＡＰ１および／またはＣＤＫＮ２Ａの突然変異の存在を検出することを含んでなる。これらの突然変異は、正常非増殖性組織において決定された対照レベルまたは突然変異の不在と比較することができる。
本発明は様々に、癌患者がＭＤＭ２アンタゴニストによる処置に従うかどうかを決定する方法；ＭＤＭ２アンタゴニストによる阻害に対する腫瘍細胞増殖の感受性を予測する方法；ＭＤＭ２アンタゴニストを含む癌療法に対する、対象の癌の反応性を予測する方法；癌を有する対象のための治療プランを開発する方法；ＭＤＭ２アンタゴニストによる治療レジメンに応答するまたは感受性のある患者の特定のためのｉｎ ｖｉｔｒｏ法を提供する。これらの方法は一般に、サンプル、一般に、腫瘍サンプルにおいて１以上の本発明のバイオマーカーのレベルを参照レベルと比較すること、およびＭＤＭ２アンタゴニストを含む癌療法による処置に対する癌の反応性を予測することを含んでなる。１つの実施形態において、これらの方法は、本明細書に記載の１以上、例えば、２つ以上、または３つ以上、または４つ以上、または５つ以上、または６つ以上、または７つ以上、または８つ以上、または９つ以上、または１０以上、または１１以上のバイオマーカーを分析することを含んでなる。ある実施形態において、１以上のバイオマーカーは、ＢＡＰ１を含む。ある実施形態において、２つ以上のバイオマーカーは、ＢＡＰ１およびＣＤＫＮ２Ａを含み、１つの実施形態において、２つ以上のバイオマーカーは、ＢＡＰ１およびＣＤＫＮ２Ａ、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＩＲＦ７、ＩＦＩＴＭ１、ＩＲＦ９、ＭＸ１またはＩＦＩ３５から選択される１以上のバイオマーカーを含む。
さらなる実施形態において、本発明は、ＭＤＭ２アンタゴニストによる処置の候補である、腫瘍を有する患者が、化合物による処置に応答する見込みを予測するためのｉｎ ｖｉｔｒｏ方法であって、（ａ）患者から採取した１以上の組織サンプルにおいて、ＢＡＰ１、ＣＤＫＮ２Ａ、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＲＳＡＤ２、ＭＸ１、ＢＡＴＦ２、ＩＦＩ４４Ｌ、ＩＦＩＴＭ１、ＩＳＧ１５、ＣＭＰＫ２、ＩＦＩ２７、ＣＤ７４、ＩＦＩＨ１、ＣＣＲＬ２、ＩＦＩ４４、ＨＥＲＣ６、ＩＳＧ２０、ＩＦＩＴ３、ＨＬＡ－Ｃ、ＯＡＳ１、ＩＦＩ３５、ＩＲＦ９、ＥＰＳＴＩ１、ＵＳＰ１８、ＢＳＴ２、ＣＳＦ１、Ｃ１Ｓ、ＤＨＸ５８、ＴＲＩＭ１４、ＯＡＳＬ、ＩＲＦ７、ＬＧＡＬＳ３ＢＰ、ＤＤＸ６０、ＬＡＰ３、ＬＡＭＰ３、ＰＡＲＰ１２、ＰＡＲＰ９、ＳＰ１１０、ＰＬＳＣＲ１、ＷＡＲＳ、ＳＴＡＴ１、ＩＲＦ３、ＩＲＦ５、ＭＳＣ、ＪＵＮ、ＳＰＩ１、ＩＲＦ１、ＣＯＭＭＤ３－ＢＭＩ１、ＳＴＡＴ２、ＲＵＮＸ３、ＳＲＥＢＦ１、ＦＬＩ１およびＢＲＣＡ１のうち１以上のレベルを決定する工程を含んでなる方法を提供し、（ｉ）ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＲＳＡＤ２、ＭＸ１、ＢＡＴＦ２、ＩＦＩ４４Ｌ、ＩＦＩＴＭ１、ＩＳＧ１５、ＣＭＰＫ２、ＩＦＩ２７、ＣＤ７４、ＩＦＩＨ１、ＣＣＲＬ２、ＩＦＩ４４、ＨＥＲＣ６、ＩＳＧ２０、ＩＦＩＴ３、ＨＬＡ－Ｃ、ＯＡＳ１、ＩＦＩ３５、ＩＲＦ９、ＥＰＳＴＩ１、ＵＳＰ１８、ＢＳＴ２、ＣＳＦ１、Ｃ１Ｓ、ＤＨＸ５８、ＴＲＩＭ１４、ＯＡＳＬ、ＩＲＦ７、ＬＧＡＬＳ３ＢＰ、ＤＤＸ６０、ＬＡＰ３、ＬＡＭＰ３、ＰＡＲＰ１２、ＰＡＲＰ９、ＳＰ１１０、ＰＬＳＣＲ１、ＷＡＲＳ、ＳＴＡＴ１、ＩＲＦ３、ＩＲＦ５、ＭＳＣ、ＪＵＮ、ＳＰＩ１、ＩＲＦ１、ＣＯＭＭＤ３－ＢＭＩ１、ＳＴＡＴ２、ＲＵＮＸ３、ＳＲＥＢＦ１、ＦＬＩ１およびＢＲＣＡ１のレベルの上昇（例えば、少なくとも１名の健常参照者の参照値と比較）、および／またはＢＡＰ１欠損および／またはＣＤＫＮ２Ａ欠損（例えば、少なくとも１つの正常非増殖性組織の参照値と比較）は、患者がその処置に応答する可能性があることを示し、かつ／または（ｉｉ）より低レベルのＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＲＳＡＤ２、ＭＸ１、ＢＡＴＦ２、ＩＦＩ４４Ｌ、ＩＦＩＴＭ１、ＩＳＧ１５、ＣＭＰＫ２、ＩＦＩ２７、ＣＤ７４、ＩＦＩＨ１、ＣＣＲＬ２、ＩＦＩ４４、ＨＥＲＣ６、ＩＳＧ２０、ＩＦＩＴ３、ＨＬＡ－Ｃ、ＯＡＳ１、ＩＦＩ３５、ＩＲＦ９、ＥＰＳＴＩ１、ＵＳＰ１８、ＢＳＴ２、ＣＳＦ１、Ｃ１Ｓ、ＤＨＸ５８、ＴＲＩＭ１４、ＯＡＳＬ、ＩＲＦ７、ＬＧＡＬＳ３ＢＰ、ＤＤＸ６０、ＬＡＰ３、ＬＡＭＰ３、ＰＡＲＰ１２、ＰＡＲＰ９、ＳＰ１１０、ＰＬＳＣＲ１、ＷＡＲＳ、ＳＴＡＴ１、ＩＲＦ３、ＩＲＦ５、ＭＳＣ、ＪＵＮ、ＳＰＩ１、ＩＲＦ１、ＣＯＭＭＤ３－ＢＭＩ１、ＳＴＡＴ２、ＲＵＮＸ３、ＳＲＥＢＦ１、ＦＬＩ１およびＢＲＣＡ１、ならびに／または正常レベルまたは高レベルのＢＡＰ１および／またはＣＤＫＮ２Ａは、患者がその処置に応答する可能性が低いことを示す。
さらなる実施形態において、本発明は、（ａ）ＢＡＰ１、ＣＤＫＮ２Ａ、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＲＳＡＤ２、ＭＸ１、ＢＡＴＦ２、ＩＦＩ４４Ｌ、ＩＦＩＴＭ１、ＩＳＧ１５、ＣＭＰＫ２、ＩＦＩ２７、ＣＤ７４、ＩＦＩＨ１、ＣＣＲＬ２、ＩＦＩ４４、ＨＥＲＣ６、ＩＳＧ２０、ＩＦＩＴ３、ＨＬＡ－Ｃ、ＯＡＳ１、ＩＦＩ３５、ＩＲＦ９、ＥＰＳＴＩ１、ＵＳＰ１８、ＢＳＴ２、ＣＳＦ１、Ｃ１Ｓ、ＤＨＸ５８、ＴＲＩＭ１４、ＯＡＳＬ、ＩＲＦ７、ＬＧＡＬＳ３ＢＰ、ＤＤＸ６０、ＬＡＰ３、ＬＡＭＰ３、ＰＡＲＰ１２、ＰＡＲＰ９、ＳＰ１１０、ＰＬＳＣＲ１、ＷＡＲＳ、ＳＴＡＴ１、ＩＲＦ３、ＩＲＦ５、ＭＳＣ、ＪＵＮ、ＳＰＩ１、ＩＲＦ１、ＣＯＭＭＤ３－ＢＭＩ１、ＳＴＡＴ２、ＲＵＮＸ３、ＳＲＥＢＦ１、ＦＬＩ１およびＢＲＣＡ１のうち１以上のレベルを測定または定量すること；（ｂ）ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＲＳＡＤ２、ＭＸ１、ＢＡＴＦ２、ＩＦＩ４４Ｌ、ＩＦＩＴＭ１、ＩＳＧ１５、ＣＭＰＫ２、ＩＦＩ２７、ＣＤ７４、ＩＦＩＨ１、ＣＣＲＬ２、ＩＦＩ４４、ＨＥＲＣ６、ＩＳＧ２０、ＩＦＩＴ３、ＨＬＡ－Ｃ、ＯＡＳ１、ＩＦＩ３５、ＩＲＦ９、ＥＰＳＴＩ１、ＵＳＰ１８、ＢＳＴ２、ＣＳＦ１、Ｃ１Ｓ、ＤＨＸ５８、ＴＲＩＭ１４、ＯＡＳＬ、ＩＲＦ７、ＬＧＡＬＳ３ＢＰ、ＤＤＸ６０、ＬＡＰ３、ＬＡＭＰ３、ＰＡＲＰ１２、ＰＡＲＰ９、ＳＰ１１０、ＰＬＳＣＲ１、ＷＡＲＳ、ＳＴＡＴ１、ＩＲＦ３、ＩＲＦ５、ＭＳＣ、ＪＵＮ、ＳＰＩ１、ＩＲＦ１、ＣＯＭＭＤ３－ＢＭＩ１、ＳＴＡＴ２、ＲＵＮＸ３、ＳＲＥＢＦ１、ＦＬＩ１およびＢＲＣＡ１のレベル（例えば、健常者で決定された対照レベルと比較）、ならびに／またはＢＡＰ１ならびに／またはＣＤＫＮ２Ａのレベル（例えば、正常非増殖性組織で決定された対照レベルと比較）レベルと比較し、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＲＳＡＤ２、ＭＸ１、ＢＡＴＦ２、ＩＦＩ４４Ｌ、ＩＦＩＴＭ１、ＩＳＧ１５、ＣＭＰＫ２、ＩＦＩ２７、ＣＤ７４、ＩＦＩＨ１、ＣＣＲＬ２、ＩＦＩ４４、ＨＥＲＣ６、ＩＳＧ２０、ＩＦＩＴ３、ＨＬＡ－Ｃ、ＯＡＳ１、ＩＦＩ３５、ＩＲＦ９、ＥＰＳＴＩ１、ＵＳＰ１８、ＢＳＴ２、ＣＳＦ１、Ｃ１Ｓ、ＤＨＸ５８、ＴＲＩＭ１４、ＯＡＳＬ、ＩＲＦ７、ＬＧＡＬＳ３ＢＰ、ＤＤＸ６０、ＬＡＰ３、ＬＡＭＰ３、ＰＡＲＰ１２、ＰＡＲＰ９、ＳＰ１１０、ＰＬＳＣＲ１、ＷＡＲＳ、ＳＴＡＴ１、ＩＲＦ３、ＩＲＦ５、ＭＳＣ、ＪＵＮ、ＳＰＩ１、ＩＲＦ１、ＣＯＭＭＤ３－ＢＭＩ１、ＳＴＡＴ２、ＲＵＮＸ３、ＳＲＥＢＦ１、ＦＬＩ１およびＢＲＣＡ１のレベル（例えば、健常者で決定された対照レベルと比較）が上昇し、かつ／またはＢＡＰ１および／またはＣＤＫＮ２Ａの欠損（例えば、正常非増殖性組織で決定された対照レベルと比較）があれば、前記患者をＭＤＭ２アンタゴニストによる処置に適しているとして特定することを含んでなるアッセイを提供する。
さらなる実施形態において、本発明は、
（ｉ）患者から得られた生物学的サンプルを抗体（例えば、ＢＡＰ１、ＣＤＫＮ２Ａ、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＲＳＡＤ２、ＭＸ１、ＢＡＴＦ２、ＩＦＩ４４Ｌ、ＩＦＩＴＭ１、ＩＳＧ１５、ＣＭＰＫ２、ＩＦＩ２７、ＣＤ７４、ＩＦＩＨ１、ＣＣＲＬ２、ＩＦＩ４４、ＨＥＲＣ６、ＩＳＧ２０、ＩＦＩＴ３、ＨＬＡ－Ｃ、ＯＡＳ１、ＩＦＩ３５、ＩＲＦ９、ＥＰＳＴＩ１、ＵＳＰ１８、ＢＳＴ２、ＣＳＦ１、Ｃ１Ｓ、ＤＨＸ５８、ＴＲＩＭ１４、ＯＡＳＬ、ＩＲＦ７、ＬＧＡＬＳ３ＢＰ、ＤＤＸ６０、ＬＡＰ３、ＬＡＭＰ３、ＰＡＲＰ１２、ＰＡＲＰ９、ＳＰ１１０、ＰＬＳＣＲ１、ＷＡＲＳ、ＳＴＡＴ１、ＩＲＦ３、ＩＲＦ５、ＭＳＣ、ＪＵＮ、ＳＰＩ１、ＩＲＦ１、ＣＯＭＭＤ３－ＢＭＩ１、ＳＴＡＴ２、ＲＵＮＸ３、ＳＲＥＢＦ１、ＦＬＩ１およびＢＲＣＡ１のうち１以上に対して特異的な抗体）と接触させること；
（ｉｉ）前記サンプルを洗浄して、結合していない抗体を除去すること；
（ｉｉｉ）結合した抗体からのシグナルの強度を測定すること；
（ｉｖ）測定されたシグナル強度を参照値と比較すること、および測定された強度が参照値よりも増大していれば、
（ｖ）患者から得られた生物学的サンプルを、
ａ．プライマー（例えば、以下の遺伝子：ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＲＳＡＤ２、ＭＸ１、ＢＡＴＦ２、ＩＦＩ４４Ｌ、ＩＦＩＴＭ１、ＩＳＧ１５、ＣＭＰＫ２、ＩＦＩ２７、ＣＤ７４、ＩＦＩＨ１、ＣＣＲＬ２、ＩＦＩ４４、ＨＥＲＣ６、ＩＳＧ２０、ＩＦＩＴ３、ＨＬＡ－Ｃ、ＯＡＳ１、ＩＦＩ３５、ＩＲＦ９、ＥＰＳＴＩ１、ＵＳＰ１８、ＢＳＴ２、ＣＳＦ１、Ｃ１Ｓ、ＤＨＸ５８、ＴＲＩＭ１４、ＯＡＳＬ、ＩＲＦ７、ＬＧＡＬＳ３ＢＰ、ＤＤＸ６０、ＬＡＰ３、ＬＡＭＰ３、ＰＡＲＰ１２、ＰＡＲＰ９、ＳＰ１１０、ＰＬＳＣＲ１、ＷＡＲＳ、ＳＴＡＴ１、ＩＲＦ３、ＩＲＦ５、ＭＳＣ、ＪＵＮ、ＳＰＩ１、ＩＲＦ１、ＣＯＭＭＤ３－ＢＭＩ１、ＳＴＡＴ２、ＲＵＮＸ３、ＳＲＥＢＦ１、ＦＬＩ１およびＢＲＣＡ１のうちいずれか１以上の少なくとも１つのオリゴヌクレオチドプライマー対）；
ｂ．抗体（例えば、ＢＡＰ１、ＣＤＫＮ２Ａ、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＲＳＡＤ２、ＭＸ１、ＢＡＴＦ２、ＩＦＩ４４Ｌ、ＩＦＩＴＭ１、ＩＳＧ１５、ＣＭＰＫ２、ＩＦＩ２７、ＣＤ７４、ＩＦＩＨ１、ＣＣＲＬ２、ＩＦＩ４４、ＨＥＲＣ６、ＩＳＧ２０、ＩＦＩＴ３、ＨＬＡ－Ｃ、ＯＡＳ１、ＩＦＩ３５、ＩＲＦ９、ＥＰＳＴＩ１、ＵＳＰ１８、ＢＳＴ２、ＣＳＦ１、Ｃ１Ｓ、ＤＨＸ５８、ＴＲＩＭ１４、ＯＡＳＬ、ＩＲＦ７、ＬＧＡＬＳ３ＢＰ、ＤＤＸ６０、ＬＡＰ３、ＬＡＭＰ３、ＰＡＲＰ１２、ＰＡＲＰ９、ＳＰ１１０、ＰＬＳＣＲ１、ＷＡＲＳ、ＳＴＡＴ１、ＩＲＦ３、ＩＲＦ５、ＭＳＣ、ＪＵＮ、ＳＰＩ１、ＩＲＦ１、ＣＯＭＭＤ３－ＢＭＩ１、ＳＴＡＴ２、ＲＵＮＸ３、ＳＲＥＢＦ１、ＦＬＩ１およびＢＲＣＡ１のうち１以上に特異的な抗体）、ならびに／または
ｃ．ＢＡＰ１の欠損もしくはＣＤＫＮ２Ａの欠損を示す遺伝子または突然変異体のプライマー
と接触させること；
（ｖｉ）前記サンプルに対してＰＣＲ、ＲＴ－ＰＣＲまたは次世代シーケンシングを実施して、サンプル中の遺伝子発現産物／転写産物を増幅させること；
（ｖｉｉ）前記遺伝子の少なくとも１つの発現産物のレベルを決定すること；および
（ｖｉｉｉ）対象をＭＤＭ２アンタゴニストによる処置に適している高い確率を有すると特定すること
を含んでなるアッセイを提供する。
さらなる実施形態において、本発明は、シーケンシングまたはイムノアッセイで決定した場合に腫瘍サンプルにおいて以下の遺伝子：ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＲＳＡＤ２、ＭＸ１、ＢＡＴＦ２、ＩＦＩ４４Ｌ、ＩＦＩＴＭ１、ＩＳＧ１５、ＣＭＰＫ２、ＩＦＩ２７、ＣＤ７４、ＩＦＩＨ１、ＣＣＲＬ２、ＩＦＩ４４、ＨＥＲＣ６、ＩＳＧ２０、ＩＦＩＴ３、ＨＬＡ－Ｃ、ＯＡＳ１、ＩＦＩ３５、ＩＲＦ９、ＥＰＳＴＩ１、ＵＳＰ１８、ＢＳＴ２、ＣＳＦ１、Ｃ１Ｓ、ＤＨＸ５８、ＴＲＩＭ１４、ＯＡＳＬ、ＩＲＦ７、ＬＧＡＬＳ３ＢＰ、ＤＤＸ６０、ＬＡＰ３、ＬＡＭＰ３、ＰＡＲＰ１２、ＰＡＲＰ９、ＳＰ１１０、ＰＬＳＣＲ１、ＷＡＲＳ、ＳＴＡＴ１、ＩＲＦ３、ＩＲＦ５、ＭＳＣ、ＪＵＮ、ＳＰＩ１、ＩＲＦ１、ＣＯＭＭＤ３－ＢＭＩ１、ＳＴＡＴ２、ＲＵＮＸ３、ＳＲＥＢＦ１、ＦＬＩ１およびＢＲＣＡのうち１以上の発現の上昇、ならびに／またはＢＡＰ１および／もしくはＣＤＫＮ２Ａの欠損を有する対象にＭＤＭ２アンタゴニストを投与することを含んでなる、癌を治療する方法を提供する。
さらなる実施形態において、本発明は、ＭＤＭ２アンタゴニストを、それを必要とする患者に投与する方法であって、
（１）ＢＡＰ１、ＣＤＫＮ２Ａ、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＲＳＡＤ２、ＭＸ１、ＢＡＴＦ２、ＩＦＩ４４Ｌ、ＩＦＩＴＭ１、ＩＳＧ１５、ＣＭＰＫ２、ＩＦＩ２７、ＣＤ７４、ＩＦＩＨ１、ＣＣＲＬ２、ＩＦＩ４４、ＨＥＲＣ６、ＩＳＧ２０、ＩＦＩＴ３、ＨＬＡ－Ｃ、ＯＡＳ１、ＩＦＩ３５、ＩＲＦ９、ＥＰＳＴＩ１、ＵＳＰ１８、ＢＳＴ２、ＣＳＦ１、Ｃ１Ｓ、ＤＨＸ５８、ＴＲＩＭ１４、ＯＡＳＬ、ＩＲＦ７、ＬＧＡＬＳ３ＢＰ、ＤＤＸ６０、ＬＡＰ３、ＬＡＭＰ３、ＰＡＲＰ１２、ＰＡＲＰ９、ＳＰ１１０、ＰＬＳＣＲ１、ＷＡＲＳ、ＳＴＡＴ１、ＩＲＦ３、ＩＲＦ５、ＭＳＣ、ＪＵＮ、ＳＰＩ１、ＩＲＦ１、ＣＯＭＭＤ３－ＢＭＩ１、ＳＴＡＴ２、ＲＵＮＸ３、ＳＲＥＢＦ１、ＦＬＩ１および／またはＢＲＣＡ１の患者レベル決定すること；
（２）上記に挙げた遺伝子のレベルおよび（１）で決定したような腫瘍の遺伝子型に基づいて前記患者に表現型を割り当てること、この表現型は低感受性（Ｐ）、中間型（Ｉ）、および感受性（Ｓ）から選択され、前記表現型は、腫瘍における遺伝子のレベルに基づいて割り当てられる；ならびに
（３）表現型Ｓの患者にＭＤＭ２アンタゴニストを投与すること
を含んでなる方法を提供する。
さらなる実施形態において、本発明は、患者において癌の治療に使用するための薬剤の製造におけるＭＤＭ２アンタゴニストの使用を提供し、前記癌腫瘍は、ＢＡＰ１欠損および／もしくはＣＤＫＮ２Ａ欠損を有し、かつ／または前記患者は、以下の遺伝子：ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＲＳＡＤ２、ＭＸ１、ＢＡＴＦ２、ＩＦＩ４４Ｌ、ＩＦＩＴＭ１、ＩＳＧ１５、ＣＭＰＫ２、ＩＦＩ２７、ＣＤ７４、ＩＦＩＨ１、ＣＣＲＬ２、ＩＦＩ４４、ＨＥＲＣ６、ＩＳＧ２０、ＩＦＩＴ３、ＨＬＡ－Ｃ、ＯＡＳ１、ＩＦＩ３５、ＩＲＦ９、ＥＰＳＴＩ１、ＵＳＰ１８、ＢＳＴ２、ＣＳＦ１、Ｃ１Ｓ、ＤＨＸ５８、ＴＲＩＭ１４、ＯＡＳＬ、ＩＲＦ７、ＬＧＡＬＳ３ＢＰ、ＤＤＸ６０、ＬＡＰ３、ＬＡＭＰ３、ＰＡＲＰ１２、ＰＡＲＰ９、ＳＰ１１０、ＰＬＳＣＲ１、ＷＡＲＳ、ＳＴＡＴ１、ＩＲＦ３、ＩＲＦ５、ＭＳＣ、ＪＵＮ、ＳＰＩ１、ＩＲＦ１、ＣＯＭＭＤ３－ＢＭＩ１、ＳＴＡＴ２、ＲＵＮＸ３、ＳＲＥＢＦ１、ＦＬＩ１およびＢＲＣＡ１のうち１以上の発現が上昇している。
さらなる実施形態において、本発明は、本明細書に記載の方法に従ってＭＤＭ２アンタゴニストによる処置に応答する可能性があると特定された患者において癌の処置に使用するための薬剤の製造におけるＭＤＭ２アンタゴニストの使用を提供する。
さらなる実施形態において、本発明は、一緒に包装された薬学上許容可能な担体中のＭＤＭ２アンタゴニスト薬、および癌（例えば、中皮腫、腎臓腫、または膠芽腫）薬剤が、レベルを測定するために使用されたアッセイ方法によって決定されるような本明細書で特定された１または複数のバイオマーカーのレベルに基づいて癌患者を治療するためのものであることを示す添付文書を含んでなる製品を提供する。
さらなる実施形態において、本発明は、ターゲットオーディエンスに、以下の遺伝子：ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＲＳＡＤ２、ＭＸ１、ＢＡＴＦ２、ＩＦＩ４４Ｌ、ＩＦＩＴＭ１、ＩＳＧ１５、ＣＭＰＫ２、ＩＦＩ２７、ＣＤ７４、ＩＦＩＨ１、ＣＣＲＬ２、ＩＦＩ４４、ＨＥＲＣ６、ＩＳＧ２０、ＩＦＩＴ３、ＨＬＡ－Ｃ、ＯＡＳ１、ＩＦＩ３５、ＩＲＦ９、ＥＰＳＴＩ１、ＵＳＰ１８、ＢＳＴ２、ＣＳＦ１、Ｃ１Ｓ、ＤＨＸ５８、ＴＲＩＭ１４、ＯＡＳＬ、ＩＲＦ７、ＬＧＡＬＳ３ＢＰ、ＤＤＸ６０、ＬＡＰ３、ＬＡＭＰ３、ＰＡＲＰ１２、ＰＡＲＰ９、ＳＰ１１０、ＰＬＳＣＲ１、ＷＡＲＳ、ＳＴＡＴ１、ＩＲＦ３、ＩＲＦ５、ＭＳＣ、ＪＵＮ、ＳＰＩ１、ＩＲＦ１、ＣＯＭＭＤ３－ＢＭＩ１、ＳＴＡＴ２、ＲＵＮＸ３、ＳＲＥＢＦ１、ＦＬＩ１およびＢＲＣＡ１および／またはＢＡＰ１欠損および／またはＣＤＫＮ２Ａ欠損のうち１以上のレベルが上昇している癌患者を治療するためのＭＤＭ２アンタゴニスト薬の使用を奨励することを含んでなる、ＭＤＭ２アンタゴニスト薬を知らせるための方法を提供する。
さらなる実施形態において、本発明は、癌患者の腫瘍（例えば、中皮腫）を、ＭＤＭ２を標的とする治療薬もしくは治療薬の組合せによる処置から利益を受ける可能性があるまたは治療薬もしくは治療薬の組合せによる処置から利益を受ける可能性がないと特定するように構成された装置を提供する。この装置は、患者を、ＭＤＭ２を標的とする治療薬または治療薬の組合せから利益を受ける可能性があるまたは可能性がないと特定するために、腫瘍または血液に基づくサンプルからの、以下の遺伝子：ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＲＳＡＤ２、ＭＸ１、ＢＡＴＦ２、ＩＦＩ４４Ｌ、ＩＦＩＴＭ１、ＩＳＧ１５、ＣＭＰＫ２、ＩＦＩ２７、ＣＤ７４、ＩＦＩＨ１、ＣＣＲＬ２、ＩＦＩ４４、ＨＥＲＣ６、ＩＳＧ２０、ＩＦＩＴ３、ＨＬＡ－Ｃ、ＯＡＳ１、ＩＦＩ３５、ＩＲＦ９、ＥＰＳＴＩ１、ＵＳＰ１８、ＢＳＴ２、ＣＳＦ１、Ｃ１Ｓ、ＤＨＸ５８、ＴＲＩＭ１４、ＯＡＳＬ、ＩＲＦ７、ＬＧＡＬＳ３ＢＰ、ＤＤＸ６０、ＬＡＰ３、ＬＡＭＰ３、ＰＡＲＰ１２、ＰＡＲＰ９、ＳＰ１１０、ＰＬＳＣＲ１、ＷＡＲＳ、ＳＴＡＴ１、ＩＲＦ３、ＩＲＦ５、ＭＳＣ、ＪＵＮ、ＳＰＩ１、ＩＲＦ１、ＣＯＭＭＤ３－ＢＭＩ１、ＳＴＡＴ２、ＲＵＮＸ３、ＳＲＥＢＦ１、ＦＬＩ１およびＢＲＣＡ１のうち１以上のレベル、ならびに／またはＢＡＰ１欠損および／もしくはＣＤＫＮ２Ａ欠損に関するシーケンシングデータまたはイムノアッセイデータを格納する記憶装置を含んでなり得る。
本明細書に記載の方法の１つの実施形態において、ＢＡＰ１および／もしくはＣＤＫＮ２Ａレベルが低いもしくは存在しない（例えば、ＢＡＰ１欠損もしくはＣＤＫＮ２Ａ欠損）ならびに／またはＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＲＳＡＤ２、ＭＸ１、ＢＡＴＦ２、ＩＦＩ４４Ｌ、ＩＦＩＴＭ１、ＩＳＧ１５、ＣＭＰＫ２、ＩＦＩ２７、ＣＤ７４、ＩＦＩＨ１、ＣＣＲＬ２、ＩＦＩ４４、ＨＥＲＣ６、ＩＳＧ２０、ＩＦＩＴ３、ＨＬＡ－Ｃ、ＯＡＳ１、ＩＦＩ３５、ＩＲＦ９、ＥＰＳＴＩ１、ＵＳＰ１８、ＢＳＴ２、ＣＳＦ１、Ｃ１Ｓ、ＤＨＸ５８、ＴＲＩＭ１４、ＯＡＳＬ、ＩＲＦ７、ＬＧＡＬＳ３ＢＰ、ＤＤＸ６０、ＬＡＰ３、ＬＡＭＰ３、ＰＡＲＰ１２、ＰＡＲＰ９、ＳＰ１１０、ＰＬＳＣＲ１、ＷＡＲＳ、ＳＴＡＴ１、ＩＲＦ３、ＩＲＦ５、ＭＳＣ、ＪＵＮ、ＳＰＩ１、ＩＲＦ１、ＣＯＭＭＤ３－ＢＭＩ１、ＳＴＡＴ２、ＲＵＮＸ３、ＳＲＥＢＦ１、ＦＬＩ１およびＢＲＣＡ１のうち１以上のレベルが正常でない（例えば、増大しているもしくは高い）場合に患者にＭＤＭ２アンタゴニストが投与される。
本明細書に記載の方法の別の実施形態では、ＢＡＰ１および／もしくはＣＤＫＮ２Ａレベルが高い（もしくは存在する）ならびに／またはＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＲＳＡＤ２、ＭＸ１、ＢＡＴＦ２、ＩＦＩ４４Ｌ、ＩＦＩＴＭ１、ＩＳＧ１５、ＣＭＰＫ２、ＩＦＩ２７、ＣＤ７４、ＩＦＩＨ１、ＣＣＲＬ２、ＩＦＩ４４、ＨＥＲＣ６、ＩＳＧ２０、ＩＦＩＴ３、ＨＬＡ－Ｃ、ＯＡＳ１、ＩＦＩ３５、ＩＲＦ９、ＥＰＳＴＩ１、ＵＳＰ１８、ＢＳＴ２、ＣＳＦ１、Ｃ１Ｓ、ＤＨＸ５８、ＴＲＩＭ１４、ＯＡＳＬ、ＩＲＦ７、ＬＧＡＬＳ３ＢＰ、ＤＤＸ６０、ＬＡＰ３、ＬＡＭＰ３、ＰＡＲＰ１２、ＰＡＲＰ９、ＳＰ１１０、ＰＬＳＣＲ１、ＷＡＲＳ、ＳＴＡＴ１、ＩＲＦ３、ＩＲＦ５、ＭＳＣ、ＪＵＮ、ＳＰＩ１、ＩＲＦ１、ＣＯＭＭＤ３－ＢＭＩ１、ＳＴＡＴ２、ＲＵＮＸ３、ＳＲＥＢＦ１、ＦＬＩ１およびＢＲＣＡ１のうち１以上のレベルが正常である、もしくは低い場合には、患者にＭＤＭ２アンタゴニストが投与されない。
特定の実施形態において、ＭＤＭ２アンタゴニストは、ＭＤＭ２アンタゴニストではない付加的癌治療と組み合わせて患者に投与され得る。１つの実施形態において、少なくとも１つの本発明のバイオマーカーは、以下の（ｉ）～（ｘｌｉｘ）に記載の薬剤と組み合わせてＭＤＭ２アンタゴニストで処置するための患者を選択するために使用することができる。
図１：ＣＤＫＮ２Ａ欠損を有する癌細胞株は、供試した総ての腫瘍腫で（Ａ）および非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）などの特定の適応（Ｂ）で、野生型ＣＤＫＮ２Ａを有するものよりも化合物１に対して感受性の増大を示した。 図２：ヒト患者由来中皮腫細胞株におけるＤＭＳＯおよび１μＭ化合物１での７２時間処置後の活性化カスパーゼ－３陽性細胞のパーセンテージ。 図３：アポトーシスおよび非アポトーシス中皮腫細胞株の比較において有意に差次的に発現した遺伝子のヒートマップ。列は細胞株であり、行は遺伝子である。左上のキーは遺伝子の対数変化倍率を示す。 図４：インターフェロンαシグナル伝達経路のＧＳＥＡエンリッチメントプロット。ｘ軸は、遺伝子（黒い垂線）およびｙ軸は、エンリッチメントスコア（ＥＳ）を表し、これはランク付けされた遺伝子リストの上位のインターフェロンαシグナル伝達経路のエンリッチメントに相当する。プロットの開始部分に明瞭なピークを有する遺伝子は、アポトーシス表現型と高い正の相関を持つ。 図５：Ｉｎｇｅｎｕｉｔｙ経路分析（ＩＰＡ）により生成されたインターフェロンシグナル伝達経路。上方調節された遺伝子および下方調節された遺伝子の両方を分析に使用した。アポトーシス細胞株において有意に上方調節された遺伝子は、グレーの背景で強調されている。 図６：腎臓腫瘍でも上方調節されたインターフェロンシグネチャー遺伝子。各遺伝子について、バーは、左から右へ、ＧＴＥｘ（正常組織）、ＴＣＧＡ－ＧＢＭ（膠芽腫）、ＴＣＧＡ－ＫＩＲＣ（腎明細胞癌）およびＴＣＧＡ－ＭＥＳＯ（中皮腫）を表す。 図７：１２名の患者に由来する中皮腫細胞株の全溶解液中のＢＡＰ１およびβ－アクチンのタンパク質レベルを示すウエスタンブロット。細胞株は、図２に示されるようにアポトーシスと非アポトーシス（＊非特異的結合）として分類される（Ａ）。テューキー箱ひげ図は、図７Ａから得られたβ－アクチンに対して正規化したＢＡＰ１タンパク質発現の定量を示す。＊＊Ｐ＜０．００５、マン・ホイットニー検定（Ｂ）。 図８：腎臓癌細胞株のＢＡＰ１ノックダウンは、アポトーシスを増大させる。３つの異なるｓｈＲＮＡで達成されたＫＤの程度との相関。 図９：腎臓癌細胞株のＢＡＰ１ノックダウンは、アポトーシスを増大させる。３つの異なるｓｈＲＮＡで達成されたＫＤの程度との相関。 図１０：患者由来中皮腫細胞株のＢＡＰ１ノックダウンもまた、化合物１添加の後にアポトーシスを増大させる。 図１１：腎臓癌細胞株におけるアポトーシスと相関するＢＡＰ１タンパク質発現の状態。 図１２：（２Ｓ，３Ｓ）－３－（４－クロロフェニル）－３－［（１Ｒ）－１－（４－クロロフェニル）－７－フルオロ－５－［（１Ｓ）－１－ヒドロキシ－１－（オキサン－４－イル）プロピル］－１－メトキシ－３－オキソ－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－イソインドール－２－イル］－２－メチルプロパン酸のＸ線粉末ディフラクトグラム。 図１３：サイトメトリーにより切断カスパーゼ－３を測定することによる７２時間処理後のＯＣＩ－ＡＭＬ３細胞株のアポトーシス誘導の測定。
発明の具体的説明
定義
「ＭＤＭ２阻害剤」および「ＭＤＭ２アンタゴニスト」という用語は同義語として使用され、上記のように、本明細書に記載されるようなＭＤＭ２化合物またはそれらの塩、溶媒和物、異性体、互変異性体、Ｎ－オキシド、エステル、プロドラッグ、同位体および保護形態（好ましくは、それらの塩もしくは互変異性体もしくは異性体もしくはＮ－オキシドもしくは溶媒和物、より好ましくは、それらの塩もしくは互変異性体もしくはＮ－オキシドもしくは溶媒和物）を含む、ＭＤＭ２化合物の類似体を定義する。
「ＭＤＭ２アンタゴニスト」は、１以上のＭＤＭ２ファミリーメンバー、特に、ＭＤＭ２およびＭＤＭ４（ＭＤＭｘとも呼ばれる）のアンタゴニストを意味する。「アンタゴニスト」という用語は、アゴニストにより媒介される生物学的応答を遮断するまたは低下させる一種の受容体リガンドまたは薬物を指す。アンタゴニストは、それらの同族受容体に対して親和性を有するがアゴニスト抗力はなく、結合は相互作用を妨げ、受容体におけるいずれのリガンド（例えば、内因性リガンドまたは基質、アゴニストまたは逆アゴニスト）の機能も阻害する。拮抗作用は直接的に生じてもまたは間接的に生じてもよく、いずれの機序によって、いずれの生理学的レベルで媒介されてもよい。結果として、リガンドの拮抗作用は、異なる状況下で機能的に異なる方法で現れる可能性がある。アンタゴニストは、受容体の活性部位もしくはアロステリック部位に結合することによってそれらの効果を媒介するか、または受容体の活性の生物学的調節に通常は関与しない独特の結合部位で相互作用する可能性がある。アンタゴニスト活性は、アンタゴニスト－受容体複合体の寿命に応じて可逆的または不可逆的であり得、これは次に、アンタゴニスト受容体結合の性質に依存する。
「効力」は、所与の強度の効果を生み出すのに必要な量に関して表される薬物活性の尺度である。極めて強力な薬物は、低濃度でより大きな応答を生じる。効力は親和性と有効性に比例する。親和性は、受容体に結合する薬物の能力である。有効性は、受容体の占有率と、分子、細胞、組織またはシステムレベルで応答を開始する能力との関係である。
本明細書において使用する場合、「媒介される」という用語は、例えば、本明細書に記載されるようなＭＤＭ２／ｐ５３と組み合わせて使用される（および例えば、様々な生理学的プロセス、疾患、病態、条件、療法、治療または介入に適用される）場合、この用語が適用される様々なプロセス、疾患、状態、病態、治療および介入は、タンパク質が生物学的役割を果たすものであるように限定的に機能することが意図される。この用語が疾患、状態、または病態に適用される場合、タンパク質が果たす生物学的役割は直接的であってもまたは間接的であってもよく、疾患、状態、または病態の症状の発現（またはその病因または進行）に必要および／または十分であり得る。従って、タンパク質機能（および特に機能の異常なレベル、例えば過剰発現または過少発現）は、必ずしも疾患、状態または病態の近位の原因である必要はなく、むしろ、媒介される疾患、状態または病態が、対象タンパク質が部分的にしか関与していない多因子の病因および複雑な進行を有するものを含むことが企図される。この用語が治療、予防または介入に適用される場合、タンパク質が果たす役割は直接的であってもまたは間接的であってもよく、治療、予防または介入の結果に必要および／または十分であり得る。従って、タンパク質が媒介する病状または病態には、いずれの特定の癌薬剤または治療に対する抵抗性の発達も含まれる。
「治療」という用語は、本明細書において病態、すなわち、状態、障害または疾患を治療することに関して使用される場合、一般に、ヒトまたは動物（例えば、獣医学的用途）のいずれに対する治療および療法にも関係し、ここでは、いくつかの所望の治療効果、例えば、病態の進行の阻害が達成され、進行速度の低下、進行速度の停止、病態の改善、治療される病態に関連するまたはそれにより引き起こされる少なくとも１つの症状の軽減または緩和および病態の治癒を含む。例えば、治療は、障害の１もしくは複数の症状の軽減、または障害の完全な根絶であり得る。
「予防」（すなわち、予防手段としての化合物の使用）という用語は、本明細書において病態、すなわち、状態、障害または疾患を治療することに関して使用される場合、一般に、ヒトまたは動物（例えば、獣医学的用途）のいずれに対する予防または防止にも関係し、ここで、例えば、疾患の発生を防ぐことまたは疾患から保護することにおいて、いくつかの所望の予防効果が達成される。予防には、障害の総ての症状を無期限に完全かつ全面的にブロックすること、疾患の１もしくは複数の症状の発症を単に遅らせること、または疾患が発生する可能性を低くすることが含まれる。
癌などの病状または病態の予防または治療という場合には、それらの範囲内に、例えば癌の罹患率の軽減または低減することを含む。
本発明の組合せは、別々に投与された場合の個々の化合物／薬剤の治療効果と比較して、治療的に有効な効果を生み出し得る。
「有効」という用語には、相加性、相乗作用、副作用の軽減、毒性の軽減、疾患の進行までの時間の延長、生存時間の延長、ある薬剤の別の薬剤に対する感作もしくは再感作、または応答率の改善などの有利な効果が含まれる。有利なことに、有効な効果は、各またはいずれかの成分のより低い用量を患者に投与することを可能にし、それにより、同じ治療効果を生み出し、かつ／または維持しながら、化学療法の毒性を軽減し得る。本文脈における「相乗」効果は、個別に提示された場合の組み合わせの薬剤の治療効果の合計よりも大きい、組合せによって生成される治療効果を指す。本文脈における「相加」効果は、個別に提示された場合に、組合せの薬剤のいずれの治療効果よりも大きい、組合せによって生成される治療効果を指す。「応答率」という用語は、本明細書において使用される場合、固形腫瘍の場合、所与の時点、例えば１２週間での腫瘍のサイズの縮小の程度を指す。従って、例えば、５０％の応答率は、腫瘍サイズの５０％の縮小を意味する。本明細書において「臨床応答」という場合には、５０％以上の反応率を指す。「部分的応答」は、本明細書では、５０％未満の応答率であると定義される。
本明細書において使用する場合、「組合せ」という用語は、２つ以上の化合物および／または薬剤に用いられる場合、２つ以上の薬剤が会合されている材料を定義することが意図される。本文脈における「組合せ」および「組み合わせる」という用語も、それに応じて解釈されるべきである。
組合せにおける２つ以上の化合物／薬剤の会合は、物理的なものであっても非物理的なものであってもよい。物理的に会合された組合せ化合物／薬剤の例としては、以下のものが挙げられる：
・混合物（例えば、同じ単位用量内）中に２つ以上の化合物／薬剤を含んでなる組成物（例えば、単一製剤）；
・２つ以上の化合物／薬剤が化学的／物理化学的連結された（例えば、架橋、分子凝集または共通のビヒクル部分への結合による）材料含んでなる組成物；
・２つ以上の化合物／薬剤が化学的／物理化学的に同時にパッケージングされた（例えば、脂質小胞、粒子（例えば、マイクロ粒子もしくはナノ粒子）またはエマルション液滴上または内部に配置された）材料を含んでなる組成物；
・２つ以上の化合物／薬剤が同時にパッケージングされたまたは同時に提供される（例えば、一連の単位用量の一部として）、医薬キット、医薬パックまたは患者パック。
非物理的に会合された組合せ化合物／薬剤の例としては、以下のものが挙げられる：
・２つ以上の化合物／薬剤のうち少なくとも１つを、２つ以上の化合物／薬剤の物理的会合を形成するためのその少なくとも１つの化合物の即時調合会合
に関する説明書とともに含んでなる材料（例えば、非単一製剤）；
・２つ以上の化合物／薬剤のうち少なくとも１つを、それらの２つ以上の化合物／薬剤との併用療法に関する説明書とともに含んでなる材料（例えば、非単一製剤）；
・２つ以上の化合物／薬剤のうち少なくとも１つを、それらの２つ以上の化合物／薬剤の他方が投与された（または投与される）患者集団への投与に関する説明書とともに含んでなる材料；
・２つ以上の化合物／薬剤のうち少なくとも１つを、それらの２つ以上の化合物／薬剤の他方と組み合わせて使用するために当業者に適合された量または形態で含んでなる材料。
本明細書において使用する場合、「併用療法」という用語は、２つ以上の化合物／薬剤の組合せ（上記に定義される通り）の使用を含んでなる療法を定義することが意図される。よって、本願において「併用療法」、「組合せ」およびの「組み合わせた」化合物／薬剤の使用は、同じ全体的な治療レジメンの一部として投与される化合物／薬剤を指し得る。従って、２つ以上の化合物／薬剤のそれぞれの用法・用量は異なる場合があり、それぞれが同時にまたは異なる時間に投与される場合がある。従って、組合せの化合物／薬剤は、同じ医薬製剤（すなわち、一緒に）または異なる医薬製剤（すなわち、別々に）のいずれかで、順次（例えば、前もしくは後に）または同時に投与され得ることが理解されるであろ。同じ製剤で同時にというのは単一製剤と同じであるが、異なる製剤で同時というのは非単一製剤である。併用療法における２つ以上の化合物／薬剤のそれぞれの用法・用量もまた、投与経路に関して異なる場合がある。
本明細書において使用する場合、「医薬キット」という用語は、投薬手段（例えば、測定装置）および／または送達手段（例えば、吸入器または注射器）とともに、場合により総てが共通の外装内に含まれる、医薬組成物の１以上の一連の単位用量を定義する。２つ以上の化合物／薬剤の組合せを含んでなる医薬キットにおいて、個々の化合物／薬剤は、単一製剤または非単一製剤であり得る。単位用量は、ブリスターパックに含まれていてもよい。医薬キットは、場合により、使用説明書をさらに含んでなってもよい。
本明細書において使用する場合、「医薬パック」という用語は、場合により共通の外装内に含まれる、医薬組成物の１以上の一連の単位用量を定義する。２つ以上の化合物／薬剤の組合せを含んでなる医薬パックにおいて、個々の化合物／薬剤は、単一製剤または非単一製剤であり得る。単位用量は、ブリスターパックに含まれていてもよい。医薬パックは、場合により、使用説明書をさらに含んでなってもよい。
「場合により置換されていてもよい」という用語は、本明細書において使用する場合、非置換であるか、または本明細書で定義されるような置換基によって置換されていてもよい基を指す。
発明の詳細な説明
本発明は、ＭＤＭ２アンタゴニスト療法に対する癌患者の可能性のある応答の決定を可能にするバイオマーカーの特定に基づいている。これはＭＤＭ２アンタゴニストを使用した癌の精密治療を提供する。
特定の実施形態において、本発明は、ＭＤＭ２アンタゴニストを用いた癌の治療のためのコンパニオン診断を提供する。本明細書において使用する場合、コンパニオン診断という用語は、患者が薬物に応答するかどうかを判定するために必要な検査（すなわち、必要なコンパニオン診断）と、患者が好都合にまたは最適に応答するかどうかを特定することを意図した検査の両方を指して使用される（これは、補完的な診断と呼ばれることもある）。特定の実施形態において、バイオマーカーは、応答する患者を識別し、従って、応答者を非応答者から区別する。別の実施形態では、バイオマーカーは、最適に応答する患者を特定し、それにより、医師は、その後、その患者に最適な治療を選択することができる。
いくつかの実施形態において、本発明は、本明細書で特定されるバイオマーカーのうち１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０、２０、２５またはそれを超えるものの発現レベルを決定するためのアッセイを提供する。このアッセイは、予後転帰を推定する工程を含んでも含まなくてもよい。アッセイは一般に、癌生検または血液サンプル（癌が血液癌であってもなくても）などの患者からのサンプルに対して実施されるｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイである。
有効な癌治療のためのバイオマーカー
本開示は、ＭＤＭ２アンタゴニストによる処置に対する癌細胞の感受性の増大を示すバイオマーカーを提供する。よって、特定されたバイオマーカーのうち１以上の特定は、癌患者をＭＤＭ２アンタゴニスト処置のために選択することを可能とする。
これらのバイオマーカーの１つは、ＣＤＫＮ２Ａの発現レベルである。実施例２において、ＣＤＫＮ２Ａ枯渇（例えば、欠失、欠損、サイレンシング、異型接合性の欠如、および／または不活性化）は、化合物１に対する感受性の増強を予測する統計的に有意な（補正ｐ値＜０．０２０）バイオマーカーとして示される（図１）。
いくつかの実施形態において、ＣＤＫＮ２Ａ枯渇は、ＣＤＫＮ２Ａ遺伝子における１以上の核酸置換および／または欠失から生じ得る。いくつかの実施形態において、Yarbrough et al., Journal of the National Cancer Institute, 91(18): 1569-1574, 1999; Liggett and Sidransky, Biology of Neoplasia, Journals of Oncology, 16(3): 1197-1206, 1998;および／またはCairns et al., Nature Genetics, 11:210-212, 1995に記載されているように、ＣＤＫＮ２Ａ遺伝子における１以上の核酸置換および／または欠失は不活性化型である。これらの不活性化突然変異の例としては、ヒトＣＤＫＮ２Ａ遺伝子のコドン２３２をアルギニンコドンから終止コドンへ変換するＣからＴへの変化；ｐ１６のリーディングフレームシフトおよび大きな末端切断を生じるヌクレオチド２２３における１９塩基対の生殖細胞系欠失；ＣＤＫＮ２Ａ遺伝子のヌクレオチド３６３～３６８における６塩基対の欠失；およびヒトＣＤＫＮ２Ａ遺伝子のヌクレオチド３４におけるＧからＴへの変化が挙げられる。
ＣＤＫＮ２Ａ遺伝子は、選択的にスプライシングされる第１エキソンの使用から２つのタンパク質ｐ１６（ｉｎｋ４）およびｐ１４（ａｒｆ）をコードする。これらのタンパク質のいずれかまたは両方の発現レベルは、ＣＤＫＮ２Ａ発現を測定するために使用可能である。ヒトｐ１６は、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ４２７７１を有する。ヒトｐ１４ＡＲＦは、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｑ８Ｎ７２６を有する。
本明細書で特定されるもう１つのバイオマーカーは、ＢＡＰ１の発現レベルである。実施例６（例えば、図７）は、ＢＡＰ１枯渇が、化合物１により誘導されるアポトーシスに対する感受性を予測するマーカーであることを示す。
いくつかの実施形態において、ＢＡＰ１枯渇は、ヒト染色体３ｐ２１．１に位置するＢＡＰ１遺伝子に対する１以上の変化から生じ得る。この突然変異は、１以上のヌクレオチド置換、付加、欠失、逆位もしくはその他のＤＮＡ再配列またはそれらの任意の組合せを含んでなり得る。ＢＡＰ１枯渇をもたらす１以上の遺伝子変化は、エキソン－イントロンスプライス部位またはその近傍における変化を含む、イントロン、エキソン、またはその両方に生じ得る。１以上の変化は、生殖細胞系または体細胞の核酸配列における突然変異であり得る。
ＢＡＰ１枯渇をもたらす変化の限定されない例は、ＷＯ－Ａ－２０１２／１１２８４６に記載されている。ＢＡＰ１枯渇は、Harbour et al.(2010) Science 330:1410-3に記載されているように、ＢＡＰ１ ｃＤＮＡの１３１８～１３１９番の間のアデノシンの挿入から生じ得る。もう１つの変化としては、一般にヒト染色体３の５２４３６６２４番の、エキソン１６におけるＣからＴへの置換が含まれる。イントロン６の３’末端の２ヌクレオチド上流である５２４４１３３４番におけるＡからＧへの置換は、ＢＡＰ１枯渇を生じ得る。このＡからＧへの置換は、エキソン７を欠く異常なスプライス部位産物を生じ得る。エキソン３の３’末端における５つのヌクレオチドの欠失と１つのヌクレオチドの置換は、ＢＡＰ１枯渇を生じ得る。５つのヌクレオチドの欠失は、ヒト染色体３の５２４４３５７０～５２４４３５７５番の間に存在し得る。
ＢＡＰ１に対する変化は、エキソン１３における、例えば、ヒト染色体３の５２４３７４４４番におけるシトシンの欠失を含んでなり得る。この変化は、エキソン１４からの４つのヌクレオチドの欠失を含んでなり得る。これらの４つのヌクレオチドはＴＣＡＣを含んでなってよく、ヒト染色体３の５２４３７１５９～５２４３７１６２番に存在し得る。エキソン４における２５ヌクレオチドの欠失は、ＢＡＰ１枯渇をもたらし得る。欠失したヌクレオチドは、ヒト染色体３の５２４４２５０７～５２４４２５３１番に存在し得る。
１つの実施形態において、ＢＡＰ１タンパク質は、１以上の突然変異を有する全長タンパク質であり得る。変異型ＢＡＰ１は、野生型ＢＡＰ１タンパク質の部分的または完全欠失であり得る。ＢＡＰ１の部分的欠失または突然変異は、核局在シグナル、野生型ＢＡＰ１の活性部位、ＡＳＸＬの結合部位、またはＢＡＰ１の機能欠失をもたらすと考えられる遺伝子のいずれかの場所に存在し得る。別の実施形態では、ＢＡＰ１枯渇は、非機能的ＢＡＰ１タンパク質から生じ得る。「非機能的ＢＡＰ１タンパク質」という用語は、限定されるものではないが、デユビキチナーゼ活性を示さないＢＡＰ１タンパク質を指し得る。ＷＯ－Ａ－２０１８／０５１１１０は、機能的ＢＡＰ１の枯渇をもたらす変異型ＢＡＰ１タンパク質配列の限定されない例を提供している。
別の実施形態では、バイオマーカー枯渇は、エピジェネティックサイレンシングの結果であり得る。エピジェネティックサイレンシングとしては、限定されるものではないが、ＷＯ－Ａ－２０１７／１３９４０４に記載されているようなヒストンのメチル化が挙げられる。野生型からのエピジェネティック変化は、バイオマーカーの活性を阻害し得るか、低下させ得るか、または消失させ得る。１つの実施形態において、野生型からのエピジェネティック変化は、ＢＡＰ１タンパク質の活性を阻害するか、低下させるか、または消失させる。１つの実施形態において、ＢＡＰ１枯渇は、ＷＯ－Ａ－２０１５／１９６０６４に記載されているようにヒストンＨ３Ｋ２７ｍｅ３の上方調節の結果であり得る。ヒストンのメチル化およびその他のエピジェネティック変化を測定するための方法は、当技術分野で公知である。
よって、低レベルのＣＤＫＮ２Ａおよび／またはＢＡＰ１は、ＭＤＭ２アンタゴニスト処置に対する感受性の増強を予測する。
これらの実施例はまた、癌細胞における以下のタンパク質：ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＲＳＡＤ２、ＭＸ１、ＢＡＴＦ２、ＩＦＩ４４Ｌ、ＩＦＩＴＭ１、ＩＳＧ１５、ＣＭＰＫ２、ＩＦＩ２７、ＣＤ７４、ＩＦＩＨ１、ＣＣＲＬ２、ＩＦＩ４４、ＨＥＲＣ６、ＩＳＧ２０、ＩＦＩＴ３、ＨＬＡ－Ｃ、ＯＡＳ１、ＩＦＩ３５、ＩＲＦ９、ＥＰＳＴＩ１、ＵＳＰ１８、ＢＳＴ２、ＣＳＦ１、Ｃ１Ｓ、ＤＨＸ５８、ＴＲＩＭ１４、ＯＡＳＬ、ＩＲＦ７、ＬＧＡＬＳ３ＢＰ、ＤＤＸ６０、ＬＡＰ３、ＬＡＭＰ３、ＰＡＲＰ１２、ＰＡＲＰ９、ＳＰ１１０、ＰＬＳＣＲ１、ＷＡＲＳ、ＳＴＡＴ１、ＩＲＦ３、ＩＲＦ５、ＭＳＣ、ＪＵＮ、ＳＰＩ１、ＩＲＦ１、ＣＯＭＭＤ３－ＢＭＩ１、ＳＴＡＴ２、ＲＵＮＸ３、ＳＲＥＢＦ１、ＦＬＩ１およびＢＲＣＡ１のうち少なくとも１つの発現の増大または上方調節がＭＤＭ２阻害に対する感受性の増大に関連することを示す。これらのバイオマーカーは、本明細書では「インターフェロンシグネチャー」と総称される。上記のように、これらのタンパク質の発現は一般に、ｍＲＮＡ転写産物を測定することによって決定される。特定の実施形態において、癌細胞は、これらのタンパク質のうち２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０、１１、１２、１３、１４、１５またはそれを超えるもの、例えば、２０以上、２５以上、または総てが細胞において発現される場合にＭＤＭ２アンタゴニスト感受性と特定される。典型的な実施形態において、これらのバイオマーカーの発現レベルは増大している。よって、高レベルのこれらのタンパク質のうち１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、１０、１５、２０、２５以上またはそれを超えるものは、ＭＤＭ２アンタゴニスト処置に対する感受性の増強を予測する。
特定の実施形態において、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＲＳＡＤ２、ＭＸ１およびＢＡＴＦ２のうち１つ、２つ、３つ、４つ、または総ての発現は、ＭＤＭ２アンタゴニストに対する感受性を予測する。
特定の実施形態において、ＩＦＩ４４Ｌ、ＩＦＩＴＭ１、ＩＳＧ１５、ＣＭＰＫ２およびＩＦＩ２７のうち１つ、２つ、３つ、４つ、または総ての発現は、ＭＤＭ２アンタゴニストに対する感受性を予測する。
特定の実施形態において、ＩＲＦ７、ＳＴＡＴ１、ＩＲＦ３、ＩＲＦ５、ＭＳＣ、ＪＵＮ、ＳＰＩ１、ＩＲＦ１、ＣＯＭＭＤ３－ＢＭＩ１、ＳＴＡＴ２、ＲＵＮＸ３、ＳＲＥＢＦ１、ＩＲＦ９、ＦＬＩ１およびＢＲＣＡ１のうち１つ、２つ、３つ、４つ、５つまたはそれを超えるものの発現。
特定の実施形態において、（ａ）ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＲＳＡＤ２、ＭＸ１およびＢＡＴＦ２のうち１つ、２つ、３つ、４つ、または総て；ならびに（ｂ）ＩＦＩ４４Ｌ、ＩＦＩＴＭ１、ＩＳＧ１５、ＣＭＰＫ２およびＩＦＩ２７のうち１つ、２つ、３つ、４つ、または総て；ならびに（ｃ）ＩＲＦ７、ＳＴＡＴ１、ＩＲＦ３、ＩＲＦ５、ＭＳＣ、ＪＵＮ、ＳＰＩ１、ＩＲＦ１、ＣＯＭＭＤ３－ＢＭＩ１、ＳＴＡＴ２、ＲＵＮＸ３、ＳＲＥＢＦ１、ＩＲＦ９、ＦＬＩ１およびＢＲＣＡ１のうち１つ、２つ、３つ、４つ、５つまたは総ての発現レベルは、ＭＤＭ２アンタゴニストに対する感受性を予測する。
参照しやすいように、本開示のバイオマーカーは、それらが特定された様式に従って４つの群に特徴付けることができる：
ａ．ＣＤＫＮ２Ａバイオマーカーの欠損は、一定の範囲の癌細胞株のアッセイに基づいてＭＤＭ２アンタゴニストに対する感受性の増強を予測するとして特定された。
ｂ．以下のバイオマーカーは、実施例において、ＭＤＭ２アンタゴニストによる処置時に強いアポトーシスを受ける細胞とＭＤＭ２アンタゴニストにより誘導されるアポトーシスの程度が弱い細胞との間で差次的に発現されるとして特定された（例示的閾値として細胞の４０％における誘導を使用）：ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＲＳＡＤ２、ＭＸ１、ＢＡＴＦ２、ＩＦＩ４４Ｌ、ＩＦＩＴＭ１、ＩＳＧ１５、ＣＭＰＫ２、ＩＦＩ２７、ＣＤ７４、ＩＦＩＨ１、ＣＣＲＬ２、ＩＦＩ４４、ＨＥＲＣ６、ＩＳＧ２０、ＩＦＩＴ３、ＨＬＡ－Ｃ、ＯＡＳ１、ＩＦＩ３５、ＩＲＦ９、ＥＰＳＴＩ１、ＵＳＰ１８、ＢＳＴ２、ＣＳＦ１、Ｃ１Ｓ、ＤＨＸ５８、ＴＲＩＭ１４、ＯＡＳＬ、ＩＲＦ７、ＬＧＡＬＳ３ＢＰ、ＤＤＸ６０、ＬＡＰ３、ＬＡＭＰ３、ＰＡＲＰ１２、ＰＡＲＰ９、ＳＰ１１０、ＰＬＳＣＲ１、ＷＡＲＳ。
ｃ．以下のバイオマーカーは、「ｂ」に記載の遺伝子の経路に関与すると特定された：ＩＲＦ７、ＳＴＡＴ１、ＩＲＦ３、ＩＲＦ５、ＭＳＣ、ＪＵＮ、ＳＰＩ１、ＩＲＦ１、ＣＯＭＭＤ３－ＢＭＩ１、ＳＴＡＴ２、ＲＵＮＸ３、ＳＲＥＢＦ１、ＩＲＦ９、ＦＬＩ１およびＢＲＣＡ１。
ｄ．バイオマーカーとしてのＢＡＰ１の欠損は、ＭＤＭ２により誘導されるアポトーシスに対して感受性のある癌細胞で特定された。
いくつかの実施形態において、１つのバイオマーカーが決定される。これは群ａ）、ｂ）、ｃ）またはｄ）のいずれのものであってもよい。
いくつかの実施形態において、複数のバイオマーカー、例えば、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０またはそれを超えるバイオマーカーが決定される。これらは、単一の群（すなわち、群ｂ）もしくは群ｃ）からの複数のバイオマーカーを含んでなってもよく、もしくはからなってもよく、または例えば、
・ＣＤＫＮ２Ａ（群ａ）；および群ｂ）からの０、１つ、２つもしくはそれを超えるもの；および群ｃ）からの０、１つ、２つもしくはそれを超えるもの；およびＢＡＰ１（群ｄ）を含むもしくは含まない；または
・群ｂ）からの０、１つ、２つもしくはそれを超えるもの；および群ｃ）からの０、１つ、２つもしくはそれを超えるもの、およびＢＡＰ１（群ｄ）を含むもしくは含まない；または；
群ｂ）からの２もしくはそれを超えるもの；群ｃ）からの２もしくはそれを超えるもの；ＢＡＰ１（群ｄ）を含むもしくは含まない
などの異なる遺伝子からの１以上のバイオマーカーを含んでなってもよく、もしくはからなってもよい。
複数のバイオマーカーが決定された場合、バイオマーカーの組合せは、バイオマーカーパネルと呼ばれる場合がある。バイオマーカーパネルは、特定されたバイオマーカーを含んでなり得るか、またはからなり得る。
本発明のバイオマーカーに加えて、他のバイオマーカーおよびまたは人口統計データ（例えば、年齢、性別）などのデータを、ＭＤＭ２阻害の適合性の決定に適用されるデータセットに含めることができる。場合により他のバイオマーカーが含まれる場合、バイオマーカーの合計数（すなわち、本発明のバイオマーカーパネルと他のバイオマーカー）は、３、４、５、６またはそれを超えるものであり得る。いくつかの実施形態において、成分の少ない予測バイオマーカーパネルは、必要な検査を簡単にすることができる。
「欠損」および「低下」という用語は、本明細書において使用する場合、それらの通常の意味を与えられるべきである。本明細書において使用される「増加」および「増強」という用語は、それらの通常の意味を与えられるべきである。
バイオマーカーは、当業者に明かである適当な技術によって決定することができる。バイオマーカーは、直接または間接的技術によって決定することができる。遺伝子発現は、ｍＲＮＡ転写産物を検出することによって検出することができる。タンパク質バイオマーカーは、免疫組織化学によって検出することができる。
いくつかの実施形態において、本発明のバイオマーカーの１以上の枯渇は、１以上のバイオマーカーの機能を評価することによって決定され得る。バイオマーカー発現レベルは、機能のレベルに正比例し得る。１以上のバイオマーカーの機能は、直接的または間接的に決定され得る。例えば、ＷＯ－Ａ－２０１５／１９６０６４に記載されているように、ＳＵＺ１２発現の調節は、ＢＡＰ１機能を評価するために決定することができる。ＢＡＰ１枯渇は、ＥＺＨ２発現および活性をもたらすことが示されているので、１つの実施形態において、ＢＡＰ１枯渇は、ＥＺＨ２発現の増大を決定することによって評価される。さらなる例示的実施形態において、ＡＳＸＬタンパク質との結合は、ＷＯ－Ａ－２０１８／０５１１１０に記載されているようにＢＡＰ１の発現を決定するために使用され得る。ＡＳＸＬタンパク質に対するＢＡＰ１の結合の低下は、ＢＡＰ１枯渇を特定するために使用され得る。
いくつかの実施形態において、発現レベルは、検査値が患者におけるＭＤＭ２阻害処置に対する感受性を示すかどうかを評価するために、処置に対する感受性に関連することが知られる発現レベルを同様に反映する閾値と比較することができる。
本開示に従って評価される患者は、癌を有することが既知であるか、またはその疑いがある。検査されるサンプルは、癌細胞を含んでいることが既知であるか、またはその疑いがあり得る。典型的な実施形態において、検査されるサンプルは、癌組織の生検である。生検は、液体生検または固体組織（例えば、固体腫瘍）生検であり得る。
バイオマーカーのレベル
本発明は、１以上のバイオマーカーを増大または低下したレベルで提供する。一般に、この比較は、正常な健常者、より一般には、癌細胞と同種の非癌細胞に対して行われる。
いくつかの実施形態において、バイオマーカーレベルの増大または低下は、同じ個人からの非癌細胞、一般には、同じ個人からの同種の非癌細胞と比較して決定される。
さらなる実施形態において、バイオマーカーレベルの増大または低下は、検査用標準物質および既知の正常集団値に基づく値に比べて決定される。一般に、既知のレベルは、非癌細胞から取得される。
他の実施形態において、バイオマーカーレベルの増大または低下は、正常（非癌）個体からの既知の値と比較される。例えば、ＧＴＥｘは、本明細書の他所に述べられるように、４４の異なる組織からの、正常な健常者の遺伝子発現のデータ源である。ＢｌｏｏｄＳｐｏｔ(www.bloodspot.eu)は、正常血液細胞および悪性血液細胞の遺伝子発現のデータ源であり、ＡＭＬ遺伝子発現データを含む。
いくつかの他の実施形態において、バイオマーカーレベルの増大または低下は、複数のＭＤＭ２阻害剤非応答対象からの複数の癌サンプルにおいて、または１人のＭＤＭ２阻害剤非応答対象からの１つの癌サンプルにおいて決定されたレベルと比較して評価される。これは１以上のＩＦＮシグネチャーバイオマーカーにとって特に有用であり得る。
１つの実施形態において、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＲＳＡＤ２、ＭＸ１、ＢＡＴＦ２、ＩＦＩ４４Ｌ、ＩＦＩＴＭ１、ＩＳＧ１５、ＣＭＰＫ２、ＩＦＩ２７、ＣＤ７４、ＩＦＩＨ１、ＣＣＲＬ２、ＩＦＩ４４、ＨＥＲＣ６、ＩＳＧ２０、ＩＦＩＴ３、ＨＬＡ－Ｃ、ＯＡＳ１、ＩＦＩ３５、ＩＲＦ９、ＥＰＳＴＩ１、ＵＳＰ１８、ＢＳＴ２、ＣＳＦ１、Ｃ１Ｓ、ＤＨＸ５８、ＴＲＩＭ１４、ＯＡＳＬ、ＩＲＦ７、ＬＧＡＬＳ３ＢＰ、ＤＤＸ６０、ＬＡＰ３、ＬＡＭＰ３、ＰＡＲＰ１２、ＰＡＲＰ９、ＳＰ１１０、ＰＬＳＣＲ１、ＷＡＲＳ、ＳＴＡＴ１、ＩＲＦ３、ＩＲＦ５、ＭＳＣ、ＪＵＮ、ＳＰＩ１、ＩＲＦ１、ＣＯＭＭＤ３－ＢＭＩ１、ＳＴＡＴ２、ＲＵＮＸ３、ＳＲＥＢＦ１、ＦＬＩ１および／またはＢＲＣＡ１のうち１以上のＲＮＡレベルが、癌に罹患していない正常対象から得られた対照サンプル中の前記ＲＮＡの量と比較して評価される。
別の実施形態において、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＲＳＡＤ２、ＭＸ１、ＢＡＴＦ２、ＩＦＩ４４Ｌ、ＩＦＩＴＭ１、ＩＳＧ１５、ＣＭＰＫ２、ＩＦＩ２７、ＣＤ７４、ＩＦＩＨ１、ＣＣＲＬ２、ＩＦＩ４４、ＨＥＲＣ６、ＩＳＧ２０、ＩＦＩＴ３、ＨＬＡ－Ｃ、ＯＡＳ１、ＩＦＩ３５、ＩＲＦ９、ＥＰＳＴＩ１、ＵＳＰ１８、ＢＳＴ２、ＣＳＦ１、Ｃ１Ｓ、ＤＨＸ５８、ＴＲＩＭ１４、ＯＡＳＬ、ＩＲＦ７、ＬＧＡＬＳ３ＢＰ、ＤＤＸ６０、ＬＡＰ３、ＬＡＭＰ３、ＰＡＲＰ１２、ＰＡＲＰ９、ＳＰ１１０、ＰＬＳＣＲ１、ＷＡＲＳ、ＳＴＡＴ１、ＩＲＦ３、ＩＲＦ５、ＭＳＣ、ＪＵＮ、ＳＰＩ１、ＩＲＦ１、ＣＯＭＭＤ３－ＢＭＩ１、ＳＴＡＴ２、ＲＵＮＸ３、ＳＲＥＢＦ１、ＦＬＩ１および／またはＢＲＣＡ１のＲＮＡレベルが、同じ患者からその患者が癌を有していなかった際に得られた初期のサンプル中の前記ＲＮＡの量と比較して評価される。
１つの実施形態において、それは正常レベル（例えば、「正常値上限」またはＵＬＮ）と比較して上昇または増大している。
１つの実施形態において、バイオマーカーの少なくとも１つのレベルは、対照サンプルに対する癌サンプルの曲線下面積（ＡＵＣ）が、（ａ）癌を有さない組織または者からのサンプル中のバイオマーカーのうち少なくとも１つのレベル、または（ｂ）対象からのサンプル中の１以上の対照タンパク質のレベルに対して、０．５よりも大きい（増大したバイオマーカーの場合）または０．５よりも小さい（枯渇バイオマーカーの場合）。場合により、ＡＵＣは、０．６、０．７、０．８、０．９、０．９５、０．９７５または０．９９よりも大きい、または小さい。
いくつかの実施形態において、これらのバイオマーカーの少なくとも１つのレベルは、（ａ）癌を有する組織もしくは者からのサンプル中の１以上のバイオマーカーのレベル、または（ｂ）癌対象からのサンプル中の１以上の対照タンパク質のレベルに対して対照から少なくとも１標準偏差である。
いくつかの実施形態において、比較のための対照は、健常患者から得られたサンプルまたは癌と診断された患者から得られた非癌組織サンプル、例えば、腫瘍が存在する同じ器官からの非癌組織サンプルである（例えば、非癌結腸組織は結腸癌の対照として役立ち得る）。いくつかの実施形態において、対照は、組織学的対照または標準値（すなわち、従前に検査した対象サンプルまたはベースライン値もしくは正常値に相当するサンプルの群）である。
差次的発現の判定のためにサンプルと比較するための対照または標準としては、正常であると考えられるサンプル（所望の特徴に関して変更されていないという点で、例えば、結腸癌を有さない対象からのサンプル）ならびにおそらく任意に設定されていたとしても検査値が含まれる。検査標準および値は、既知のまたは決定された集団値に基づいて設定してよく、測定され、実験的に決定された値の比較を可能とするグラフまたは表の形式で提供することができる。
このような実施形態において、１または複数のバイオマーカーの参照スコアは、正常な健常者に基づく。
癌
特定のバイオマーカーのうち１以上を呈する癌は、ＭＤＭ２アンタゴニストによる処置の奏効の見込みが高い。処置される癌は、それがバイオマーカーのうち１以上を呈する限り、特に限定されない。
癌は、一般にｐ５３野生型である。当技術分野で認識されるように、ｐ５３野生型癌細胞は、野生型レベルで、野生型機能を有する腫瘍抑制因子ｐ５３を発現する。野生型ｐ５３細胞は、ｐ５３腫瘍抑制因子機能の低下をもたらすｐ５３遺伝子の突然変異を含まない。
実施例に示されているデータは、結腸、血液、乳房、肺、皮膚、卵巣および膵臓を含む一定範囲の癌組織から生成されたものである。１つの実施形態において、癌は、結腸癌である。別の実施形態では、癌は、血液癌である。さらなる実施形態において、癌は、乳癌である。別の実施形態では、癌は、肺癌である。さらに別の実施形態では、癌は、皮膚癌、例えば、黒色腫または癌腫である。別の実施形態では、癌は、卵巣癌である。異なる実施形態において、癌は、膵臓癌である。
本発明による処置に関して評価することができる特定の癌としては、限定されるものではないが、中皮腫、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、膠芽腫（例えば、ＧＢＭ）および腎臓癌（例えば、ＫＩＲＣ）が挙げられる。
特定の実施形態において、癌細胞の増殖は、ナノモル範囲のＩＣ５０値を有するＭＤＭ２アンタゴニストによって阻害される。特定の実施形態において、ＩＣ５０値は、５００ｎＭ未満、４００ｎＭ未満、３００ｎＭ未満、または２００ｎＭ未満である。いくつかの実施形態において、ＩＣ５０値は、１００ｎＭ未満である。ＩＣ５０値は、例えば、本明細書で例示されるようなＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウェアまたは当技術分野で公知の方法を使用して計算することができる。
特定の実施形態において、ＭＤＭ２アンタゴニストは、癌細胞のアポトーシスを誘導する。アポトーシスは一般に、活性化カスパーゼ－３によって媒介され得る。アポトーシスの誘導は、１μＭのＭＤＭ２アンタゴニストで７２時間処理した後に活性化カスパーゼ－３に関して陽性の細胞を検出することによって判定することができる。当業者に自明であるように、例えば、１μＭのＭＤＭ２アンタゴニストで４８時間または５μＭで４８時間などの他のアッセイ濃度および／または処理期間も使用可能である。特定の実施形態において、細胞の少なくとも１０％、少なくとも２０％または少なくとも３０％が活性化カスパーゼ－３に関して陽性染色されることが、アポトーシス誘導の指標となる。特定の実施形態において、４０％が強いアポトーシス誘導を識別するための信頼度水準であり、集団の細胞の＞４０％が活性化カスパーゼ－３に関して陽性染色されればアポトーシスと見なすことができる。当業者に自明であるように、例えば、１０％、２０％、３０％、５０％、６０％、７０％、７５％またはそれを超える割合などの他の水準も、細胞およびアッセイの必要に応じて使用可能である。活性カスパーゼ－３染色キットは市販されており、例えば、カタログ番号ａｂ６５６１７としてＡｂｃａｍ（ケンブリッジ、ＵＫ）から入手可能な「Ｃｌｅａｖｅｄ Ｃａｓｐａｓｅ－３ Ｓｔａｉｎｉｎｇ Ｋｉｔ（Ｒｅｄ）」がある。Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ｃｅｌｌ Ｅｖｅｎｔ色素（Ｃ１０４２３）も使用可能である。
アネキシンＶ色素もアポトーシスを検出するために使用可能である。これは図９で使用し、アポトーシスを検出するために有用な色素として当技術分野で周知である。
ＭＤＭ２アンタゴニスト
形質転換関連タンパク質５３(transformation-related protein 53)（ＴＰ５３）遺伝子は、５３ＫＤａタンパク質－ｐ５３をコードする。腫瘍抑制タンパク質ｐ５３は、リン酸化、アセチル化およびメチル化を含むいくつかの翻訳後修飾を介して低酸素、ＤＮＡ損傷および発癌活性化などの細胞ストレスに反応し、活性化された多様な経路でシグナル伝達ノードとして働く。ｐ５３は、自己貪食、細胞接着、細胞代謝、稔性、ならびに幹細胞の加齢および発生を含む、他の生理学的手順において付加的役割を有する。ＡＴＭ、ＣＨＫ１および２、ならびにＤＮＡ－ＰＫを含むキナーゼの活性化から生じるｐ５３のリン酸化は、タンパク質の安定型と転写的に活性な形態を生じ、従って、ある範囲の遺伝子産物を生成する。ｐ５３の活性化に対する応答は、アポトーシス、生存、細胞周期の停止、ＤＮＡ修復、血管新生、浸潤および自己調節を含む。これらの特定の組合せは、細胞の遺伝的背景と一致して、観察される細胞効果、すなわち、アポトーシス、細胞周期の停止または老化を生じる。腫瘍細胞では、発癌ストレスと相まって、腫瘍抑制タンパク質および関連の細胞周期チェックポイント制御の欠損により、アポトーシス経路が有利になる場合がある。
低酸素およびＤＮＡ損傷などのストレス条件下で、タンパク質ｐ５３の細胞レベルは増大することが知られている。ｐ５３は、細胞周期の進行、ＤＮＡ修復の開始、プログラム細胞死を支配する多くの遺伝子の転写を開始することが知られている。これは、遺伝子研究を通じて証明されたｐ５３の腫瘍抑制因子の役割の機序を提供する。
ｐ５３の活性は、ＭＤＭ２タンパク質との結合相互作用によって負の、厳格な調節を受け、その転写はそれ自体、ｐ５３によって直接調節される。ｐ５３は、そのトランス活性化ドメインにＭＤＭ２タンパク質が結合すると不活性化される。不活性化されると、ｐ５３の機能は抑制され、ｐ５３－ＭＤＭ２複合体はユビキチン化の標的となる。
正常細胞では、活性型のｐ５３と不活性型のＭＤＭ２結合ｐ５３の間のバランスが自己調節ネガティブフィードバックループで維持されている。すなわち、ｐ５３は、ＭＤＭ２の発現を活性化することができ、それは次にｐ５３の抑制をもたらす。
突然変異によるｐ５３の不活性化は、総ての一般的な成人散発性癌の半数前後で一般的であることが判明している。さらに、腫瘍の約１０％前後で、ＭＤＭ２の遺伝子増幅と過剰発現により、機能欠失型のｐ５３が生じ、それにより、悪性形質転換と制御を欠く腫瘍増殖が可能となる。
ある範囲の機序によるp53の不活性化は、癌の発生および進行における高頻度の原因事象である。これらには、突然変異による不活化、発癌性ウイルスによる標的化、およびかなりの割合の症例で、ＭＤＭ２遺伝子の増幅および／または転写速度の上昇が含まれ、ＭＤＭ２タンパク質の過剰発現または活性化の増大をもたらす。一般的な散発性癌から採取された腫瘍サンプルで、ＭＤＭ２タンパク質の過剰発現を生じるＭＤＭ２の遺伝子増幅が観察されている。全体として、腫瘍の１０％前後がＭＤＭ２増幅を示し、肝細胞癌（４４％）、肺（１５％）、肉腫および骨肉腫（２８％）、ならびにホジキン病（６７％）で最も高い発生率が見られた(Danovi et al., Mol. Cell. Biol. 2004, 24, 5835-5843, Toledo et al., Nat Rev Cancer 2006, 6, 909-923, Gembarska et al., Nat Med 2012, 18, 1239-1247)。通常、活性化されたｐ５３によるＭＤＭ２の転写活性化は、ＭＤＭ２タンパク質レベルの増加をもたらし、負のフィードバックループを形成する。ＭＤＭ２およびＭＤＭＸによるｐ５３調節の本質的性質は、遺伝子ノックアウトマウスモデルによって実証されている。ＭＤＭ２－／－ノックアウトマウスは着床時前後では胎児に致命的である。致死性はＭＤＭ２とＴＰ５３のダブルノックアウトでが救済される。ＭＤＭ２は、ｐ５３トランス活性化ドメインに結合して閉塞させ、Ｅ３－ユビキチンリガーゼ活性を介して複合体のプロテアソーム破壊を促進することにより、ｐ５３の活性を直接阻害する。さらに、ＭＤＭ２はｐ５３の転写標的であるため、２つのタンパク質は自動調節フィードバックループでリンクされ、ｐ５３の活性化が一過性であることを保証する。
ｐ１６ＩＮＫ４ａ遺伝子座（ＣＤＫＮ２Ａ）の択一的リーディングフレーム（ＡＲＦ）産物であるｐ１４ＡＲＦタンパク質の誘導も、ｐ５３－ＭＤＭ２相互作用に負の調節に行う機序である。ｐ１４ＡＲＦはＭＤＭ２と直接相互作用し、ｐ５３転写応答のアップレギュレーションをもたらす。ＣＤＫＮ２Ａ（ＩＮＫ４Ａ）遺伝子のホモ接合突然変異によるｐ１４ＡＲＦの欠損は、ＭＤＭ２のレベルの上昇、従って、ｐ５３機能と細胞周期制御の欠損につながる。Tagawa et al (Molecular Therapy, Volume 24, Supplement 1, May 2016: Abstract 211)は、Ｐ５３の強制形質導入と、ＭＤＭ２－ｐ５３相互作用をブロックする薬剤の組合せが、ＩＮＫ４Ａ／ＡＲＦ領域に欠陥のある中皮腫に相乗的な細胞毒性をもたらしたと記載している。同様に、Tagawa et al (Human Gene Therapy, Volume 26 (10) October 2015: Abstract P014)は、ｐ５３とＭｄｍ２の間の相互作用を阻害すると、ＩＮＫ４Ａ／ＡＲＦ欠損中皮腫に対するｐ５３を介した細胞毒性活性が高まると記載している。
ＭＤＭＸはＭＤＭ２に対して強いアミノ酸配列と構造的相同性を示すが、どちらのタンパク質も他方の欠損の代わりとはなり得ず、ＭＤＭＸヌルマウスは子宮内で死に至り、ＭＤＭ２ノックアウトは初期胚発生時に致死的であるが、どちらもｐ５３ノックアウトによって救済でき、致死性のｐ５３依存性を示す。ＭＤＭＸはｐ５３にも結合し、ｐ５３依存性の転写を阻害するが、ＭＤＭ２とは異なり、ｐ５３によって転写的に活性化されないため、同じ自己調節ループを形成しない。さらに、ＭＤＭＸにはＥ３ユビキチンリガーゼ活性も核局在化シグナルもないが、ＭＤＭ２とヘテロダイマーを形成し、ＭＤＭ２の安定化に寄与することにより、ｐ５３の分解に寄与すると考えられている。
ＭＤＭ２－ｐ５３阻害の治療上の理論的根拠は、タンパク質間相互作用の強力なアンタゴニストがｐ５３をＭＤＭ２の抑制的制御から解放し、腫瘍におけるｐ５３を介した細胞死を活性化することである。腫瘍では、選択性は、正常または過剰発現レベルでのＭＤＭ２の作用によって以前にブロックされていた既存のＤＮＡ損傷または発癌性活性化シグナルを感知するｐ５３に起因すると想定される。正常細胞では、ｐ５３の活性化により、非アポトーシス経路が活性化され、どちらかといえば保護的増殖阻害応答が生じると予想される。さらに、ＭＤＭ２－ｐ５３アンタゴニストの非遺伝子毒性作用機序により、特に小児集団における癌の治療に適している。ＭＤＭ４はまたｐ５３の重要な負の調節因子でもある。
癌の約５０％は、ｐ５３をコードする遺伝子であるＴＰ５３が変異してその結果、タンパク質の腫瘍抑制機能の欠損、場合によっては、さらには新しい発癌機能を獲得するｐ５３タンパク質バージョンを生じる細胞を保持する。
高レベルのＭＤＭ２増幅が存在する癌には、脂肪肉腫（８８％）、軟部肉腫（２０％）、骨肉腫（１６％）、食道癌（１３％）、およびＢ細胞悪性腫瘍を含む特定の小児悪性腫瘍が含まれる。
ＭＤＭ２アンタゴニストの例
ＲｏｃｈｅのＭＤＭ２の小分子アンタゴニストであるイダサヌトリン（ＲＧ－７３８８）は、固形および血液腫瘍、ＡＭＬ、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、本態性血小板血症、真性赤血球増加症および濾胞性リンパ腫の第Ｉ～ＩＩＩ相臨床試験中であると報告されている。イダサヌトリン（ＲＧ－７３８８）は、以下の構造を有する。
Figure 2023508165000001
イダサヌトリン（ＲＧ－７３８８）は、市販されているか、または例えばＰＣＴ特許出願ＷＯ２０１４／１２８０９４に記載されているようにもしくはそれと類似の手順によって製造することができる。
ＨＤＭ－２０１（ＮＶＰ－ＨＤＭ２０１）は、進行性／転移性固形腫瘍、ＡＬＬ、ＡＭＬ、ＭＳを含む血液腫瘍、転移性ブドウ膜黒色腫、脱分化型脂肪肉腫、および高分化型脂肪肉腫を特徴とする野生型ＴＰ５３の第Ｉ／ＩＩ相臨床試験でＮｏｖａｒｔｉｓが開発中である。アンタゴニストＨＤＭ－２０１（ＮＶＰ－ＨＤＭ２０１）は、以下の化学構造を有する。
Figure 2023508165000002
ＨＤＭ－２０１（ＮＶＰ－ＨＤＭ２０１）は、市販されているか、または例えばＰＣＴ特許出願ＷＯ２０１３／１１１１０５に記載されているようにもしくはそれと類似の手順によって製造することができる。
ＭＤＭ２の小分子アンタゴニストであるＫＲＴ－２３２（ＡＭＧ－２３２）は、ＮＣＩ／Ａｍｇｅｎ／ＧＳＫにより第Ｉ～Ｉ／ＩＩ相臨床試験で、固形腫瘍、脂肪肉腫などの軟部肉腫、再発性または新規診断膠芽腫、転移性乳癌、難治性ＭＭ、転移性皮膚黒色腫および再発性／難治性ＡＭＬのために開発中である。ＫＲＴ－２３２（ＡＭＧ－２３２）は、以下の化学構造を有する。
Figure 2023508165000003
ＫＲＴ－２３２（ＡＭＧ－２３２）は、市販されているか、または例えばＰＣＴ特許出願ＷＯ０１１／１５３５０９に記載されているようにもしくはそれと類似の手順によって製造することができる。
ＭＤＭ２およびＭＤＭ４のペプチド二重アンタゴニストであるＡＬＲＮ－６９２４（ＳＰ－３１５）は、Ａｉｌｅｒｏｎ ＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓおよびＲｏｃｈｅにより第ＩＩ相臨床試験で、固形腫瘍、小細胞肺癌、ならびにリンパ腫、急性骨髄性白血病、急性リンパ球性白血病、網膜芽細胞腫、肝芽細胞腫、脳腫瘍、脂肪肉腫および転移性乳癌を含む小児腫瘍の静脈内処置のために開発中である。ＡＬＲＮ－６９２４（ＳＰ－３１５）は、プロテアーゼに抵抗性のある特定の折り畳まれた形状（生物学的に活性な形状）にペプチドを固定するステープルペプチド技術に基づいて開発された合成ペプチドである。ＡＬＲＮ－６９２４（ＳＰ－３１５）は、以下の構造を有する。
Figure 2023508165000004
ＡＬＲＮ－６９２４（ＳＰ－３１５）は、市販されているか、または例えばＰＣＴ特許出願ＷＯ２０１７２０５７８６に記載されているように、もしくはそれと類似の手順によって製造することができる。
ＭＤＭ２の小分子アンタゴニストであるＣＧＭ－０９７（ＮＶＰ－ＣＧＭ－０９７）は、Ｎｏｖａｒｔｉｓにより第Ｉ相臨床試験で、進行性固形腫瘍および急性リンパ芽球性白血病（Ｂ－ＡＬＬ）のために開発されている。ＣＧＭ－０９７（ＮＶＰ－ＣＧＭ－０９７）はｍ以下の化学構造を有する。
Figure 2023508165000005
ＣＧＭ－０９７（ＮＶＰ－ＣＧＭ－０９７）は、市販されているか、または例えばＰＣＴ特許出願ＷＯ２０１１０７６７８６に記載されているように、もしくはそれと類似の手順によって製造することができる。
ＭＤＭ２の小分子アンタゴニストであるミラデメタントシル酸塩（ＤＳ－３０３２）は、Ｄａｉｉｃｈｉ Ｓａｎｋｙｏにより第Ｉ相臨床試験で、進行性固形腫瘍、リンパ腫、黒色腫、難治性または再発性ＡＭＬ、ＡＬＬ、多発性骨髄腫、急性転化期のＣＭＬ、または高リスクＭＤＳおよびびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫のために開発中である。ミラデメタントシル酸塩（ＤＳ－３０３２）は、以下の化学構造を有する。
Figure 2023508165000006
ミラデメタントシル酸塩（ＤＳ－３０３２）は、市販されているか、または例えばＰＣＴ特許出願ＷＯ２０１５／０３３９７４に記載されているように、もしくはそれと類似の手順によって製造することができる。
ＭＤＭ２の小分子アンタゴニストである、ＡＰＧ－１１５（ＡＡＡ－１１５；ＮＣＴ－０２９３５９０７）は、Ａｓｃｅｎｔａｇｅ Ｐｈａｒｍａにより第Ｉ相臨床試験で、腫瘍およびリンパ腫、ＡＭＬ、腺様嚢胞癌（ＡＣＣ）の治療のために開発中である。ＡＰＧ－１１５（ＡＡＡ－１１５；ＮＣＴ－０２９３５９０７）は、以下の化学構造を有する。
Figure 2023508165000007
ＡＰＧ－１１５（ＡＡＡ－１１５；ＮＣＴ－０２９３５９０７）は、市販されているか、または例えばＰＣＴ特許出願ＷＯ２０１５／１６１０３２に記載されているように、もしくはそれと類似の手順によって製造することができる。
ＭＤＭ２のアンタゴニストであるＢＩ－９０７８２８は、ＢＩにより第Ｉ相臨床試験で、ＧＢＭ、転移性脳腫瘍、ＮＳＣＬＣ、軟部肉腫および移行上皮癌（尿路上皮細胞癌）の治療のために開発中である。
ＢＩ－９０７８２８は、市販されているか、または例えばＰＣＴ特許出願２０１５／１６１０３２に記載されているように、もしくはそれと類似の手順によって製造することができる。
ミシガン大学は、ＭＩ－１０６１のＰＲＯＴＡＣとサリドマイドのコンジュゲートであるＬＥ－００４を開発中であり、それはＭＤＭ２の分解を誘導することによってマウスのヒト白血病モデルの増殖を効果的に阻害したことが示された。構造は以下の通りであり、例えばＰＣＴ特許出願ＷＯ２０１７／１７６９５７またはＷＯ２０１７／１７６９５８に記載されているように、またはそれと類似の手順によって製造することができる。ＬＥ－００４は、以下の化学構造を有する。
Figure 2023508165000008
ＭＩ－７７３（ＳＡＲ４０５８３８）は、極めて強力で選択的なＭＤＭ２阻害剤であり、他のタンパク質よりも高い特異性でＭＤＭ２に結合し、癌細胞株において細胞増殖を強力に阻害する。ＳＡＲ４０５８３８は、アポトーシスを効果的に誘導し、細胞増殖を強力に阻害し、用量依存的アポトーシスを誘導し、臨床試験で検討中である。構造は以下の通りである。
Figure 2023508165000009
 ＳＡＲ４０５８３８は、例えばＷＯ－Ａ－２０１１／０６００４９に記載されているように製造することができる。
ＤＳ－５２７２は、ＭＤＭ２のアンタゴニストであり、Ｄａｉｉｃｈｉ Ｓａｎｋｙｏにより経口投与のために開発中である。構造は以下の通りである。
Figure 2023508165000010
ＤＳ－５２７２は、例えばＰＣＴ特許出願ＷＯ２０１５／０３３９７４に記載されているように、またはそれと類似の手順によって製造することができる。
ＳＪ－０２１１は、ＭＤＭ２のアンタゴニストであり、テネシー大学、ケンタッキー大学およびセントジュードの小児研究病院により、網膜療法の処置のために開発中である。
ＢＩ－０２５２は、ＢＩにより経口投与のために開発中のＭＤＭ２のアンタゴニストである。ＢＩ－０２５２は、ＭＤＭ２とｐ５３の相互作用を阻害する。構造は以下の通りである。
Figure 2023508165000011
ＡＭ－７２０９は、ＭＤＭ２のアンタゴニストであり、ＡｍｇｅｎによりＡＭＧ－２３２のバックアップとして開発中である。構造は以下の通りである。
Figure 2023508165000012
ＡＭ－７２０９は、例えばＰＣＴ特許出願ＷＯ２０１４／２００９３７に記載されているように、またはそれと類似の手順によって製造することができる。
ＳＰ－１４１（ＪａｐＡ）は、ＭＤＭ２の直接的アンタゴニストであり、テキサス工科大学により開発中である。構造は以下の通りである。
Figure 2023508165000013
ＳＣＨ－１４５０２０６は、ＭＤＭ２のアンタゴニストであり、Ｓｃｈｅｒｉｎｇ－Ｐｌｏｕｇｈ ＆ Ｍｅｒｃｋにより経口投与のために開発中である。一例の構造は以下の通りである。
Figure 2023508165000014
ＭＫ－８２４２およびＳＣＨ－９００２４２としても知られるシタラビンは、修飾された糖部分（リボースの代わりにアラビノース）を有するシチジンの代謝拮抗物質類似体である。経口投与時に、潜在的な抗腫瘍活性を有する二重微小染色体２ヒトホモログ(human homolog of double minute 2)（ＨＤＭ２）の経口で生物学的に利用可能な阻害剤であるＨＤＭ２阻害剤ＭＫ－８２４２は、腫瘍抑制タンパク質ｐ５３の転写活性化ドメインへのＨＤＭ２タンパク質の結合を阻害する。このＨＤＭ２－ｐ５３相互作用を防ぐことにより、ｐ５３の分解が阻害され、ｐ５３シグナル伝達の回復が生じる可能性がある。これは、ｐ５３を介した腫瘍細胞のアポトーシスを誘導する。
Ｎｕｔｌｉｎ－３ａは、ＭＤＭ２のアンタゴニストまたは阻害剤（マウス二重微小染色体２ヒトホモログ）であり、ｐ５３とのその相互作用を妨げ、ｐ５３の安定化と活性化をもたらす。構造は以下の通りである。
Figure 2023508165000015
ＮＸＮ－６（ＮＸＮ－７；ＮＸＮ－５５２；ＮＸＮ－５６１；ＮＸＮ－１１）は、Ｎｅｘｕｓ、ＰｒｉａｘｏｎおよびＢＩにより経口投与のために開発中のＭＤＭ２のアンタゴニストである。例としての構造は以下の通りである。
Figure 2023508165000016
ＡＤＯ－２１は、Ａｄａｍｅｄ Ｇｒｏｕｐにより開発中のＭＤＭ２のアンタゴニストである。
ＣＴＸ－５０－ＣＴＸ－１は、ＭｉＲｘ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，ＣＲＣにより開発中の小分子ＭＤＭ２アンタゴニストである。
ＩＳＡ－２７は、ナポリ大学およびサレルノ大学により開発中の小分子ＭＤＭ２アンタゴニストである。構造は以下の通りである。
Figure 2023508165000017
ＲＧ－７１１２（ＲＯ５０４５３３７）は、強力で選択性のある、初期臨床的、経口的に活性なおよび血液脳関門を通過するＭＤＭ２－ｐ５３阻害剤である。構造は以下の通りである。
Figure 2023508165000018
ＲＯ－８９９４は、Ｒｏｃｈｅにより開発中の小分子ＭＤＭ２アンタゴニストである。ＲＯ－８９９４は、瘍増殖を阻害してｐ５３のミトコンドリア効果を誘導することが示されている。構造は以下の通りである。
Figure 2023508165000019
ＲＯ－８９９４は、市販されているか、または例えばＰＣＴ特許出願ＷＯ２０１１／０６７１８５に記載されているように、もしくはそれと類似の手順によって製造することができる。
ＲＯ－６８３９９２１（ＲＧ－７７７５）は、ＲｏｃｈｅによりＩＶ投与のために開発中の小分子ＭＤＭ２アンタゴニストである。構造は以下の通りである。
Figure 2023508165000020
ＲＯ－６８３９９２１（ＲＧ－７７７５）は、例えばＰＣＴ特許出願ＷＯ２０１４／２０６８６６に記載されているように、またはそれと類似の手順によって製造することができる。
ＪＮＪ ２６８５４１６５（セルデメタン）は、ｉｎ ｖｉｔｒｏおよびｅｘ ｖｉｖｏで多発性骨髄腫（ＭＭ）細胞に対して強力な活性を示した経口ＨＤＭ２阻害剤（またはアンタゴニスト）と同様に以下の構造を有し、ｐ５３機能を回復させ、他のＨＤＭ２依存性経路に潜在的に影響を与えるための潜在的薬剤である。
Figure 2023508165000021
ＭＤＭ２およびＭＤＭ４のステープル合成ペプチドデュアルアンタゴニストであるＡＴＳＰ－７０４１（ＳＰ－１５４）は、Ａｉｌｅｒｏｎ ＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓおよびＲｏｃｈｅにより開発されており、前臨床開発中である。ＡＴＳＰ－７０４１（ＳＰ－１５４）は、以下の構造を有する。
Figure 2023508165000022
ＳＡＨ－ｐ５３－８は、ＭＤＭ４、Ｈｄｍ２およびカスパーゼ３のステープル合成ペプチドアンタゴニストは、ハーバード大学およびＤａｎａ－Ｆａｂｅｒにより開発中であり、前臨床開発中である。ＳＡＨ－ｐ５３－８は、以下の構造を有する。
Figure 2023508165000023
ＰＭ－２（ｓＭＴｉｄｅ－０２）は、ＭＤＭ４、Ｈｄｍ２およびカスパーゼ３のステープル合成ペプチドアンタゴニストは、Ｈａｒｖａｒｄ ＣｏｌｌｅｇｅおよびＤａｎａ－Ｆａｂｅｒにより開発中であり、前臨床開発中である。ＰＭ－２（ｓＭＴｉｄｅ－０２）は、以下の構造を有する。
Figure 2023508165000024
Ｋ－１７８は、関西医科大学により開発中のＭＤＭ４の小分子アンタゴニストであり、前臨床開発中である。Ｋ－１７８は、以下の化学構造を有する。
Figure 2023508165000025
ＭＭＲｉ－６４は、Ｒｏｓｗｅｌｌ Ｐａｒｋ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅにより開発中のＭＤＭ２およびＭＤＭ４の小分子アンタゴニストであり、発見段階である。ＭＭＲｉ－６４は、以下の化学構造を有する。
Figure 2023508165000026
ＭＤＭ２およびＭＤＭ４の小分子アンタゴニストもまた、ヤギェウォ大学および第二医科大学により開発中である。一例は、以下の化学構造を有する。
Figure 2023508165000027
ＭＤＭ２およびＭＤＭ４の小分子アンタゴニストは、Ｅｍｏｒｙおよびジョージア州立大学により開発中であり、急性リンパ芽球性白血病の治療のための前臨床開発中である。
ＭＤＭ２およびＭＤＭ４の小分子アンタゴニストは、Ａｄａｍｅｄにより開発中であり、発見段階である。
本発明の１つの実施形態において、ＭＤＭ２アンタゴニストは、イダサヌトリン、ＨＤＭ－２０１、ＫＲＴ－２３２、ＡＬＲＮ－６９２４、ＡＬＲＮ－６９２４、ＣＧＭ－０９７、ミラデメタントシル酸塩、ＡＰＧ－１１５、ＢＩ－９０７８２８、ＬＥ－００４、ＤＳ－５２７２、ＳＪ－０２１１、ＢＩ－０２５２、ＡＭ－７２０９、ＳＰ－１４１、ＳＣＨ－１４５０２０６、ＮＸＮ－６、ＡＤＯ－２１、ＣＴＸ－５０－ＣＴＸ－１、ＩＳＡ－２７、ＲＯ－８９９４、ＲＯ－６８３９９２１、ＡＴＳＰ－７０４１、ＳＡＨ－ｐ５３－８、ＰＭ－２、Ｋ－１７８、ＭＭＲｉ－６４および
Figure 2023508165000028
 、またはその互変異性体もしくは溶媒和物もしくは薬学上許容可能な塩からなる群から選択される。
本発明の１つの実施形態において、ＭＤＭ２アンタゴニストは、イダサヌトリン、ＨＤＭ－２０１、ＫＲＴ－２３２（ＡＭＧ－２３２）、ＡＬＲＮ－６９２４、ＣＧＭ－０９７、ミラデメタントシル酸塩（ＤＳ－３０３２ｂ）、ＡＰＧ－１１５、ＢＩ－９０７８２８、ＬＥ－００４、ＤＳ－５２７２、ＳＪ－０２１１、ＡＰＧ－１５５、ＲＧ－７１１２、ＲＧ７３８８、ＳＡＲ４０５９３９、シタラビン（ＭＫ－８２４２およびＳＣＨ－９００２４２としても知られる）、ＢＩ－０２５２、ＡＭ－７２０９、ＳＰ－１４１、ＳＣＨ－１４５０２０６、ＮＸＮ－６、ＡＤＯ－２１、ＣＴＸ－５０－ＣＴＸ－１、ＩＳＡ－２７、ＲＯ－８９９４、ＲＯ－６８３９９２１、ＲＯ－６８３９９２１、ＡＴＳＰ－７０４１、ＳＡＨ－ｐ５３－８、ＰＭ－２、Ｋ－１７８、ＭＭＲｉ－６４および
Figure 2023508165000029
 、またはその互変異性体もしくは溶媒和物もしくは薬学上許容可能な塩からなる群から選択される。
本発明の１つの実施形態において、ＭＤＭ２アンタゴニストは、イダサヌトリン、ＨＤＭ－２０１、ＫＲＴ－２３２（ＡＭＧ－２３２）、ＡＬＲＮ－６９２４、ＣＧＭ－０９７、ミラデメタントシル酸塩（ＤＳ－３０３２ｂ）、ＡＰＧ－１１５、ＢＩ－９０７８２８、ＬＥ－００４、ＤＳ－５２７２、ＳＪ－０２１１、ＢＩ－０２５２、ＡＭ－７２０９、ＳＰ－１４１、ＳＣＨ－１４５０２０６、ＮＸＮ－６、ＡＤＯ－２１、ＣＴＸ－５０－ＣＴＸ－１、ＩＳＡ－２７、ＲＯ－８９９４、ＲＯ－６８３９９２１、ＲＯ－６８３９９２１、ＡＴＳＰ－７０４１、ＳＡＨ－ｐ５３－８、ＰＭ－２、Ｋ－１７８、ＭＭＲｉ－６４および
Figure 2023508165000030
 、またはその互変異性体もしくは溶媒和物もしくは薬学上許容可能な塩からなる群から選択される。
本発明の１つの実施形態において、ＭＤＭ２アンタゴニストは、イダサヌトリン（ＲＧ－７３８８）、ＨＤＭ－２０１、ＫＲＴ－２３２（ＡＭＧ－２３２）、ＡＬＲＮ－６９２４、ＭＩ－７７３（ＳＡＲ４０５８３８）、ミラデメタン（ＤＳ－３０３２ｂ）、ＡＰＧ－１１５、ＢＩ－９０７８２８、またはその互変異性体もしくは溶媒和物もしくは薬学上許容可能な塩からなる群から選択される。
本発明の１つの実施形態において、ＭＤＭ２アンタゴニストは、イダサヌトリン（ＲＧ－７３８８）、ＨＤＭ－２０１、ＫＲＴ－２３２（ＡＭＧ－２３２）、ＡＬＲＮ－６９２４、ＭＩ－７７３（ＳＡＲ４０５８３８）、ミラデメタン（ＤＳ－３０３２ｂ）、ＡＰＧ－１１５、ＢＩ－９０７８２８、または式Ｉｏの化合物、またはその互変異性体もしくは溶媒和物もしくは薬学上許容可能な塩からなる群から選択される。
式Ｉ ｏ の化合物
特定のＭＤＭ２アンタゴニストは、２０１５年９月２９日に出願された英国特許出願第１５１７２１６．６号および同第１５１７２１７．４号の優先権を主張する、２０１６年９月２９日に出願された本発明者らの初期の国際特許出願ＰＣＴ／ＧＢ２０１６／０５３０４２およびＰＣＴ／ＧＢ２０１６／０５３０４１に開示されているイソインドリン化合物であり、それらの総ての内容は参照によりその全内容が本明細書の一部とされる。特に、化合物（２Ｓ，３Ｓ）－３－（４－クロロフェニル）－３－［（１Ｒ）－１－（４－クロロフェニル）－７－フルオロ－５－［（１Ｓ）－１－ヒドロキシ－１－（オキサン－４－イル）プロピル］－１－メトキシ－３－オキソ－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－イソインドール－２－イル］－２－メチルプロパン酸（「化合物１」）は、本発明者らの初期の国際特許出願ＰＣＴ／ＧＢ２０１６／０５３０４２に開示されている。
１つの実施形態において、ＭＤＭ２アンタゴニストは、式Ｉｏの化合物：
Figure 2023508165000031
 またはその互変異性体もしくは溶媒和物もしくは薬学上許容可能な塩であり、
式中、ｃｙｃは、フェニルまたは複素環基Ｈｅｔであり、これはピリジニル、ピリミジニル、ピラジニルもしくはピリダジニル、またはそのＮ－オキシドであり；
Ｒ１は、ヒドロキシ、ハロゲン、ニトロ、ニトリル、Ｃ１－４アルキル、ハロＣ１－４アルキル、ヒドロキシＣ１－４アルキル、Ｃ２－６アルケニル、Ｃ１－４アルコキシ、ハロＣ１－４アルコキシ、Ｃ２－４アルキニル、－Ｏ０，１－（ＣＲｘＲｙ）ｖ－ＣＯ２Ｈ、－（ＣＲｘＲｙ）ｖ－ＣＯ２Ｃ１－４アルキル、－（ＣＲｘＲｙ）ｖ－ＣＯＮ（Ｃ１－４アルキル）２、－Ｐ（＝Ｏ）（Ｒｘ）２、－Ｓ（Ｏ）ｄ－Ｒｘ、３～６環員を有する－Ｓ（Ｏ）ｄ－複素環基および－Ｓ（Ｏ）ｄ－Ｎ（Ｒ８）２から独立に選択され、ここで、ｃｙｃがＨｅｔである場合、Ｒ１は炭素原子と結合し；
Ｒ２は、水素、Ｃ１－４アルキル、Ｃ２－６アルケニル、ヒドロキシＣ１－４アルキル、－（ＣＲｘＲｙ）ｕ－ＣＯ２Ｈ、－（ＣＲｘＲｙ）ｕ－ＣＯ２Ｃ１－４アルキル、および－（ＣＲｘＲｙ）ｕ－ＣＯＮＲｘＲｙから選択され；
ｓは、０および１から選択され；
Ｒ３は、水素または－（Ａ）ｔ－（ＣＲｘＲｙ）ｑ－Ｘであり；
ｔは、０および１から選択され；
ｑは、０、１および２から選択され；
ここで、Ｒ３が－（Ａ）ｔ－（ＣＲｘＲｙ）ｑ－Ｘである場合、（ｉ）ｓ、ｔおよびｑのうち少なくとも１つは０以外であり、（ｉｉ）ｔが０である場合、ｓは１であり、かつ、ｑは０以外であり；
Ａは、Ｃ３－６シクロアルキル基または３～６環員を有する複素環基であり、ここで、前記複素環基は、Ｎ、Ｏ、Ｓおよびその酸化型から選択される１以上（例えば、１、２、または３個）のヘテロ原子を含んでなり；
Ｘは、水素、ハロゲン、－ＣＮ、－ＯＲ９、－（ＣＨ２）ｖ－ＣＯ２Ｈ、－（ＣＨ２）ｖ－ＣＯ２Ｃ１－４アルキル、－Ｓ（Ｏ）ｄ－Ｒｘ、－Ｃ（＝Ｏ）－Ｃ１－４アルキル、－Ｓ（Ｏ）ｄ－Ｎ（Ｈ）ｅ（Ｃ１－４アルキル）２－ｅ、－ＮＲｘＲｙ、－ＮＨＳＯ２Ｒｘ、－ＮＲｘＣＯＲｙ、および－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲｘＲｙから選択され；
Ｒ４およびＲ５は、ハロゲン、ニトリル、Ｃ１－４アルキル、ハロＣ１－４アルキル、Ｃ１－４アルコキシおよびハロＣ１－４アルコキシから独立に選択され；
Ｒ６およびＲ７は、水素、Ｃ１－６アルキル、ハロＣ１－６アルキル、Ｃ２－６アルケニル、Ｃ２－６アルキニル、ヒドロキシ、ヒドロキシＣ１－６アルキル、－ＣＯＯＣ１－６アルキル、－（ＣＨ２）ｊ－Ｏ－Ｃ１－６アルキル、－（ＣＨ２）ｊ－Ｏ－（ヒドロキシＣ１－６アルキル）、－Ｃ１－６アルキル－ＮＲｘＲｙ、－（ＣＲｘＲｙ）ｐ－ＣＯＮＲｘＲｙ、－（ＣＲｘＲｙ）ｐ－ＮＲｘＣＯＲｙ、－（ＣＲｘＲｙ）ｐ－Ｏ－ＣＨ２－ＣＯＮＲｘＲｙ、３～７環員を有する複素環基、３～７環員を有する－ＣＨ２－複素環基、３～７環員を有する－ＣＨ２－Ｏ－複素環基、３～７環員を有する－ＣＨ２－ＮＨ－複素環基、３～７環員を有する－ＣＨ２－Ｎ（Ｃ１－６アルキル）－複素環基、３～７環員を有する－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ－複素環基、Ｃ３－８シクロアルキル、－ＣＨ２－Ｃ３－８シクロアルキル、－ＣＨ２－Ｏ－Ｃ３－８シクロアルキル、およびＣ３－８シクロアルケニルから独立に選択され、ここで、前記シクロアルキル、シクロアルケニルまたは複素環基は、１以上のＲｚ基で場合により置換されていてもよく、かつ、各場合において、複素環基は、Ｎ、Ｏ、Ｓおよびその酸化型から選択される１以上（例えば、１、２、または３個）のヘテロ原子を含んでなり；
またはＲ６およびＲ７基は、それらが結合されている炭素原子と一緒になって、Ｃ３－６シクロアルキルまたは３～６環員を有するヘテロシクリル基を形成し、ここで、前記複素環基は、Ｎ、Ｏ、Ｓおよびその酸化型から選択される１以上（例えば、１、２、または３個）のヘテロ原子を含んでなり、かつ、前記Ｃ３－６シクロアルキルおよびヘテロシクリル基は、１以上のＲｚ基で場合により置換されていてもよく；
Ｒ８およびＲ９は、水素、Ｃ１－６アルキル、ハロＣ１－６アルキル、ヒドロキシＣ１－６アルキル、－（ＣＨ２）ｋ－Ｏ－Ｃ１－６アルキル、－（ＣＨ２）ｋ－Ｏ－（ヒドロキシＣ１－６アルキル）、ヒドロキシＣ１－６アルコキシ、－（ＣＨ２）ｋ－ＣＯ２Ｃ１－６アルキル、－（ＣＨ２）ｋ－ＣＯ２Ｈ、－Ｃ１－６アルキル－Ｎ（Ｈ）ｅ（Ｃ１－４アルキル）２－ｅ、－（ＣＨ２）ｊ－Ｃ３－８シクロアルキルおよび－（ＣＨ２）ｊ－Ｃ３－８シクロアルケニルから独立に選択され；
ＲｘおよびＲｙは、水素、ハロゲン、ニトロ、ニトリル、Ｃ１－６アルキル、ハロＣ１－６アルキル、Ｃ２－６アルケニル、Ｃ２－６アルキニル、ヒドロキシ、ヒドロキシＣ１－６アルキル、Ｃ１－６アルコキシ、－（ＣＨ２）ｋ－Ｏ－Ｃ１－６アルキル、ヒドロキシＣ１－６アルコキシ、－ＣＯＯＣ１－６アルキル、－Ｎ（Ｈ）ｅ（Ｃ１－４アルキル）２－ｅ、－Ｃ１－６アルキル－Ｎ（Ｈ）ｅ（Ｃ１－４アルキル）２－ｅ、－（ＣＨ２）ｋ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｈ）ｅ（Ｃ１－４アルキル）２－ｅ、Ｃ３－８シクロアルキルおよびＣ３－８シクロアルケニルから独立に選択され；
またはＲｘおよびＲｙ基は、それらが結合されている炭素原子または窒素原子と一緒に連結してＣ３－６シクロアルキルまたは３～６環員を有する飽和ヘテロシクリル基を形成することができ、これらは３～５環員の芳香族ヘテロシクリル基と場合により縮合されていてもよく；
または炭素原子上にある場合、ＲｘおよびＲｙ基は一緒に連結して＝ＣＨ２基を形成することができ；
Ｒｚは、ハロゲン、ニトロ、ニトリル、Ｃ１－６アルキル、ハロＣ１－６アルキル、Ｃ２－６アルケニル、Ｃ２－６アルキニル、＝Ｏ、ヒドロキシ、ヒドロキシＣ１－６アルキル、Ｃ１－６アルコキシ、－（ＣＨ２）ｋ－Ｏ－Ｃ１－６アルキル、ヒドロキシＣ１－６アルコキシ、－Ｃ（＝Ｏ）Ｃ１－６アルキル、－Ｃ（＝Ｏ）Ｃ１－６アルキル－ＯＨ、－Ｃ（＝Ｏ）Ｃ１－６アルキル－Ｎ（Ｈ）ｅ（Ｃ１－４アルキル）２－ｅ、－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｈ）ｅ（Ｃ１－４アルキル）２－ｅ、－（ＣＨ２）ｒ－ＣＯ２Ｃ１－６アルキル、－（ＣＨ２）ｒ－ＣＯ２Ｈ、－Ｎ（Ｈ）ｅ（Ｃ１－４アルキル）２－ｅ、－Ｃ１－６アルキル－Ｎ（Ｈ）ｅ（Ｃ１－４アルキル）２－ｅ、３～６環員を有するヘテロシクリル基、－Ｃ（＝Ｏ）Ｃ１－４アルキルにより置換された、３～６環員を有するヘテロシクリル基、－Ｃ（＝Ｏ）ＯＣ１－４アルキルにより置換された、３～６環員を有するヘテロシクリル基、－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｈ）ｅ（Ｃ１－４アルキル）２－ｅにより置換された、３～６環員を有するヘテロシクリル、３～６環員を有する－Ｃ（＝Ｏ）ヘテロシクリル基、Ｃ３－８シクロアルキルおよびＣ３－８シクロアルケニルから独立に選択され、ここで、Ｒ７がピリジンである場合、Ｒｚは－ＮＨ２以外であり；
ａ、ｊ、ｄ、ｅ、ｎ、ｒおよびｐは、０、１および２から独立に選択され；
ｋおよびｍは、１および２から独立に選択され；
ｕは、０、１、２および３から選択され；かつ
ｖは、０および１から選択される。
式（Ｉｏ）の化合物は、以下に「＊」でマークしたキラル中心を有する。
Figure 2023508165000032
式（Ｉｏ）の化合物は、示された位置（本明細書では（３）と呼ばれる）に立体中心を含み、キラル非ラセミ体である。式（Ｉｏ）の化合物は、破線の結合と実線のくさびによって示される立体化学を有し、この立体異性体が優勢である。
一般に、式（Ｉｏ）の化合物の少なくとも５５％（例えば、少なくとも６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％または９５％）が示された立体異性体として存在する。ある一般的な実施形態において、式（Ｉｏ）の化合物の総量の９７％（例えば、９９％）以上（例えば、実質的に総て）が単一の立体異性体として存在し得る。
これらの化合物はまた、１以上のさらなるキラル中心も含み得る（例えば、－ＣＲ６Ｒ７ＯＨ基および／またはＲ３基および／または－ＣＨＲ２基に）。
一般に、式（Ｉｏ）の化合物の鏡像体過剰率は、少なくとも１０％（例えば、少なくとも２０％、４０％、６０％、８０％、８５％、９０％または９５％）である。ある一般的な実施形態において、式（Ｉｏ）の化合物の鏡像体過剰率は、９７％（例えば、９９％）以上である。
この節の目的では、イソインドリン－１－オン環は以下のように符番される。
Figure 2023508165000033
化合物は、化学命名ソフトウェアパッケージによって利用されているプロトコールによって命名する。
ｃｙｃがフェニルである式（Ｉ ｏ ）の化合物
ｃｙｃがフェニルである式（Ｉｏ）の化合物は、２０１７年４月６日にＷＯ２０１７／０５５８６０として公開された本発明者らの初期の国際特許出願ＰＣＴ／ＧＢ２０１６／０５３０４２に開示されている。ＷＯ２０１７／０５５８６０に開示されている化合物、部分式、および置換基（例えば、式（Ｉ）、Ｉ（ｅ）、Ｉ（ｆ）、Ｉ（ｇ）、Ｉ（ｇ’）、Ｉ（ｈ）、Ｉ（ｉ）、Ｉ（ｊ）、Ｉ（ｋ）、Ｉ（Ｌ）、Ｉ（ｍ）、Ｉ（ｍ’）、Ｉ（ｎ）、Ｉ（ｏ）、Ｉ（ｏ’）、Ｉ（ｏ’’）、Ｉ（ｐ）、Ｉ（ｐ’）、Ｉ（ｑ）、Ｉ（ｑ’）、Ｉ（ｑ’’）、Ｉ（ｑ’’’）、Ｉ（ｑ’’’’）、Ｉ（ｒ）、Ｉ（ｓ）、Ｉ（ｔ）、Ｉ（ｕ）、Ｉ（ｖ）、Ｉ（ｖ’）、Ｉ（ｗ）、Ｉ（ｘ）、Ｉ（ｘ’）、Ｉ（ｙ）、（ＩＩ）、（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）、（ＩＩＩａ）、（ＩＩＩｂ）、（ＩＶａ）、（ＩＶｂ）、（Ｖ）、（ＶＩ）、（Ｖｉａ）、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩａ）、（ＶＩＩｂ）、（ＶＩＩｃ）、（ＶＩＩｄ）、（ＶＩＩｄ’）、（ＶＩＩｅ）、（ＶＩＩｅ’）、（ａ）、（ｂ）、（ｂａ）、（ｂｂ）、（ｂｃ）または（ｃ））が相互参照される。よって、この相互参照のために、ＷＯ２０１７／０５５８６０の化合物、部分式、および置換基は、本願により直接的かつ明確に開示される。
ｃｙｃがフェニルである式（Ｉｏ）の特定の部分式、実施形態および化合物には以下のものが含まれる。
１つの実施形態において、Ｒ１は、クロロまたはニトリル、特に、クロロである。
Ｒ２が水素以外である場合、式（Ｉｏ）の化合物は、少なくとも２つのジアステレオ異性体として存在し得る。
Figure 2023508165000034
疑念を避けるため、一般式（Ｉｏ）および総ての部分式は、－ＣＨＲ２－基のエピマーとして関連する個々のジアステレオ異性体およびジアステレオ異性体の混合物の両方を含む。１つの実施形態において、式（Ｉｏ）の化合物は、ジアステレオ異性体１Ａまたはその互変異性体もしくは溶媒和物もしくは薬学上許容可能な塩である。１つの実施形態において、式（Ｉｏ）の化合物は、ジアステレオ異性体１Ｂまたはその互変異性体もしくは溶媒和物もしくは薬学上許容可能な塩である。
１つの実施形態において、Ｒ２は、水素および－（ＣＲｘＲｙ）ｕ－ＣＯ２Ｈ（例えば、－ＣＯＯＨ、－ＣＨ２ＣＯＯＨ、－ＣＨ２ＣＨ２－ＣＯ２Ｈ、－（ＣＨ（ＣＨ３））－ＣＯ２Ｈおよび－（Ｃ（ＣＨ３）２）－ＣＯ２Ｈ）から選択される。
１つの実施形態において、ａは１であり、かつ、置換基Ｒ４はイソインドリン－１－オンの４位にあり、式（Ｉｏ）の化合物は、式（Ｉｒ）の化合物またはその互変異性体もしくは溶媒和物または薬学上許容可能な塩である。
Figure 2023508165000035
Ｒ４は、ハロゲン、ニトリル、Ｃ１－４アルキル、ハロＣ１－４アルキル、Ｃ１－４アルコキシおよびハロＣ１－４アルコキシから独立に選択される。
１つの実施形態において、Ｒ４はハロゲンである。１つの実施形態において、Ｒ４はフルオロまたはクロロである。別の実施形態では、Ｒ４はフルオロである。
１つの実施形態において、ａは１であり、置換基Ｒ４はイソインドリン－１－オンの４位にあり、かつ、Ｒ４はＦであり、式（Ｉｏ）の化合物は、式（Ｉｓ）の化合物またはその互変異性体もしくは溶媒和物もしくは薬学上許容可能な塩である。
Figure 2023508165000036
Ｒ６およびＲ７は異なり、式（Ｉｏ）の化合物は、少なくとも２つのジアステレオ異性体として存在し得る。
Figure 2023508165000037
疑念を避けるため、一般式（Ｉｏ）および総ての部分式は、－ＣＲ６Ｒ７ＯＨ基のエピマーとして関連する個々のジアステレオ異性体およびジアステレオ異性体の混合物の両方を含む。
１つの実施形態において、Ｒ６はＣ１－６アルキル（例えば、メチルまたはエチル、例えば、メチル）であり、かつ、Ｒ７はオキサニルであり、式（Ｉｏ）の化合物は式（Ｉｗ）の化合物である。
Figure 2023508165000038
式（Ｉｗ）の１つの実施形態において、Ｒｚは、水素またはフッ素である。
部分式
１つの実施形態において、Ｒ６は、メチルまたはエチルであり、式（Ｉｏ）の化合物は、式（ＩＩＩｂ）の化合物またはその互変異性体もしくは溶媒和物もしくは薬学上許容可能な塩であり、
Figure 2023508165000039
 式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ７、ａ、ｍおよびｓは、本明細書で定義される通りである。
１つの実施形態において、ｓは０であり、式（Ｉｏ）の化合物は、式（ＩＶｂ）の化合物またはその互変異性体もしくは溶媒和物もしくは薬学上許容可能な塩である。
Figure 2023508165000040
 式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ７、ａ、ｍおよびｓは、本明細書で定義される通りである。
１つの実施形態において、ｍは１であり、置換基Ｒ４は、フェニル基ａの４位にあり、式（Ｉｏ）の化合物は、式（ＶＩ）の化合物またはその互変異性体もしくは溶媒和物もしくは薬学上許容可能な塩である。
Figure 2023508165000041
１つの実施形態において、Ｒ５はクロロであり、式（ＶＩ）の化合物は、式（ＶＩａ）の化合物またはその互変異性体もしくは溶媒和物もしくは薬学上許容可能な塩である。
Figure 2023508165000042
１つの実施形態において、Ｒ３はメチルであり、式（ＶＩ）の化合物は、式（ＶＩＩｆ）の化合物またはその互変異性体もしくは溶媒和物もしくは薬学上許容可能な塩である。
Figure 2023508165000043
式（ＶＩＩｆ）の１つの実施形態において、Ｒ６はエチルである。
式（ＶＩＩｆ）の化合物の１つの実施形態において、Ｒ７は、メチル、オキサニル、ピラゾリル、イミダゾリル、ピペリジニル、およびシクロヘキシルから選択され、前記シクロアルキルおよび複素環基は、１以上のＲｚ基（例えば、メチル、フッ素、またはヒドロキシ）で場合により置換されていてもよい。
式（ＶＩＩｆ）の化合物の１つの実施形態において、Ｒ７は、オキサニルおよびメチルから選択される。
式（ＶＩＩｆ）の化合物の１つの実施形態において、Ｒ７は、１以上のＲｚ基（例えば、メチル、フッ素、またはヒドロキシ）で場合により置換されていてもよいピペリジニルから選択される。
以上に記載の部分式 の別の実施形態では、Ｒ２は、－（ＣＨ（ＣＨ３））－ＣＯ２Ｈおよび－（Ｃ（ＣＨ３）２－ＣＯ２Ｈ）から選択される。
１つの実施形態において、ＭＤＭ２アンタゴニストは、式（Ｉｏ）の化合物またはその互変異性体もしくは溶媒和物もしくは薬学上許容可能な塩であり、式中、
Ｒ１は、ハロゲン（例えば、Ｃｌ）、ニトリル、Ｏ０，１（ＣＲｘＲｙ）ｖＣＯＯＨ（例えば、－ＣＯＯＨ、－ＣＨ２ＣＯＯＨ、－ＯＣＨ２ＣＯＯＨまたは－Ｃ（ＣＨ３）２ＣＯＯＨであり；
ｎは、１または２であり；
Ｒ２は、水素ならびに－（ＣＲｘＲｙ）ｕ－ＣＯ２Ｈ（例えば、－ＣＯＯＨ、－ＣＨ２ＣＯＯＨ、－ＣＨ２ＣＨ２－ＣＯ２Ｈ、－（ＣＨ（ＣＨ３））－ＣＯ２Ｈおよび－（Ｃ（ＣＨ３）２）－ＣＯ２Ｈ）から選択される。
Ｒ３は水素であり、かつ、ｓは１であり；
Ｒ４はハロゲン（例えば、Ｆ）であり；
Ｒ５はハロゲン（例えば、Ｃｌ）であり；
ｍは１であり；
Ｒ６は、水素またはＣ１－６アルキル（例えば、－ＣＨ３または－ＣＨ２ＣＨ３）であり；
Ｒ７は、Ｃ１－４アルキル（例えば、メチル）、ヒドロキシルＣ１－４アルキル（例えば、ヒドロキシルメチル）、メトキシＣ１－４アルキル（例えば、メトキシメチル）、５または６環員を有する複素環基（例えば、ピペリジニル、オキサニル、イミダゾリルまたはピラゾリル））であり；
前記５または６環員を有する複素環基は、Ｃ１－４アルキル（例えば、メチル）から独立に選択される１または２個のＲｚ基で場合により置換されていてもよい。
１つの実施形態において、ＭＤＭ２アンタゴニストは、実施例１～１３７の１つであるか、あるいは本明細書に定義される例の第１のセットに記載される実施例１～１３７またはその互変異性体、Ｎ－オキシド、薬学上許容可能な塩もしくは溶媒和物、すなわち、ＷＯ２０１７／０５５８６０にも記載されているようなｃｙｃがフェニルである化合物から選択される式（Ｉｏ）の化合物である。
１つの実施形態において、ＭＤＭ２アンタゴニストは、実施例１～９７（ｃｙｃがフェニルである例）の１つであるか、あるいは本明細書に定義される例の第１のセットに記載される実施例１～９７（ｃｙｃがフェニルである例）またはその互変異性体、Ｎ－オキシド、薬学上許容可能な塩もしくは溶媒和物、すなわち、ＷＯ２０１７／０５５８６０にも記載されているようなｃｙｃがフェニルである化合物から選択される式（Ｉｏ）の化合物である。
１つの実施形態において、ＭＤＭ２アンタゴニストは、以下の化合物、またはその互変異性体、Ｎ－オキシド、薬学上許容可能な塩もしくは溶媒和物：
４－｛［（１Ｒ）－１－（４－クロロフェニル）－７－フルオロ－５－［１－ヒドロキシ－１－（１－メチル－１Ｈ－イミダゾール－４－イル）プロピル］－１－｛［１－（ヒドロキシメチル）シクロプロピル］メトキシ｝－３－オキソ－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－イソインドール－２－イル］メチル｝ベンゾニトリル、例えば、
Figure 2023508165000044
 ；および
（３Ｓ）－３－（４－クロロフェニル）－３－［（１Ｒ）－１－（４－クロロフェニル）－７－フルオロ－５－［１－ヒドロキシ－１－（オキサン－４－イル）エチル］－１－メトキシ－３－オキソ－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－イソインドール－２－イル］プロパン酸
例えば、
Figure 2023508165000045
 から選択される式（Ｉｏ）の化合物である。
１つの実施形態において、ＭＤＭ２アンタゴニストは、以下の化合物、またはその互変異性体、Ｎ－オキシド、薬学上許容可能な塩もしくは溶媒和物：
４－｛［（１Ｒ）－１－（４－クロロフェニル）－７－フルオロ－５－［１－ヒドロキシ－１－（１－メチル－１Ｈ－イミダゾール－４－イル）プロピル］－１－｛［１－（ヒドロキシメチル）シクロプロピル］メトキシ｝－３－オキソ－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－イソインドール－２－イル］メチル｝ベンゾニトリル；および
（３Ｓ）－３－（４－クロロフェニル）－３－［（１Ｒ）－１－（４－クロロフェニル）－７－フルオロ－５－［１－ヒドロキシ－１－（オキサン－４－イル）エチル］－１－メトキシ－３－オキソ－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－イソインドール－２－イル］プロパン酸
から選択される式（Ｉｏ）の化合物である。
１つの実施形態において、ＭＤＭ２アンタゴニストは、ジアステレオ異性体２Ｂである式（Ｉｏ）の化合物であり、以下の化合物、またはその互変異性体、Ｎ－オキシド、薬学上許容可能な塩もしくは溶媒和物：
４－｛［（１Ｒ）－１－（４－クロロフェニル）－７－フルオロ－５－［１－ヒドロキシ－１－（１－メチル－１Ｈ－イミダゾール－４－イル）プロピル］－１－｛［１－（ヒドロキシメチル）シクロプロピル］メトキシ｝－３－オキソ－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－イソインドール－２－イル］メチル｝ベンゾニトリル；および
（３Ｓ）－３－（４－クロロフェニル）－３－［（１Ｒ）－１－（４－クロロフェニル）－７－フルオロ－５－［１－ヒドロキシ－１－（オキサン－４－イル）エチル］－１－メトキシ－３－オキソ－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－イソインドール－２－イル］プロパン酸
から選択される。
１つの実施形態において、式（Ｉｏ）の化合物は、２－（５－クロロ－２－｛［（１Ｒ）－１－（４－クロロフェニル）－７－フルオロ－５－［（１Ｓ）－１－ヒドロキシ－１－（オキサン－４－イル）プロピル］－１－メトキシ－３－オキソ－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－イソインドール－２－イル］メチル｝フェニル）－２－メチルプロパン酸、またはその互変異性体、Ｎ－オキシド、薬学上許容可能な塩もしくは溶媒和物、例えば、
Figure 2023508165000046
 である。
１つの実施形態において、ＭＤＭ２アンタゴニストは、（２Ｓ，３Ｓ）－３－（４－クロロフェニル）－３－［（１Ｒ）－１－（４－クロロフェニル）－７－フルオロ－５－［（１Ｓ）－１－ヒドロキシ－１－（オキサン－４－イル）プロピル］－１－メトキシ－３－オキソ－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－イソインドール－２－イル］－２－メチルプロパン酸（「化合物１」）またはその互変異性体、Ｎ－オキシド、薬学上許容可能な塩もしくは溶媒和物、例えば、
Figure 2023508165000047
 である式（Ｉｏ）の化合物である。
疑念を避けるため、各一般的および具体的実施形態およびある置換基の例は、各一般的および具体的実施形態および本明細書で定義されるような１以上、特に、総ての他の置換基の例と組み合わせてもよく、このような実施形態は総て本願に含まれると理解されるべきである。
ｃｙｃが複素環基である式（Ｉ ｏ ）の化合物
ｃｙｃが複素環基である式（Ｉｏ）の化合物は、２０１７年４月６日にＷＯ２０１７／０５５８５９として公開された本発明者らの初期の国際特許出願ＰＣＴ／ＧＢ２０１６／０５３０４１に開示されている。ＷＯ２０１７／０５５８５９に開示されている化合物、部分式、および置換基（例えば、式ｅ（Ｉ）、Ｉ（ａ）、Ｉ（ａ’）、Ｉ（ｂ）、Ｉ（ｃ）、Ｉ（ｄ）、Ｉ（ｅ）、Ｉ（ｆ）、Ｉ（ｇ）、Ｉ（ｇ’）、Ｉ（ｈ）、Ｉ（ｉ）、Ｉ（ｊ）、Ｉ（ｋ）、Ｉ（Ｌ）、Ｉ（ｍ）、Ｉ（ｍ’）、Ｉ（ｎ）、Ｉ（ｏ）、Ｉ（ｏ’）、Ｉ（ｏ’’）、Ｉ（ｐ）、Ｉ（ｐ’）、Ｉ（ｑ）、Ｉ（ｑ’）、Ｉ（ｑ’’）、Ｉ（ｑ’’’）、Ｉ（ｑ’’’’）、Ｉ（ｒ）、Ｉ（ｓ）、Ｉ（ｔ）、Ｉ（ｕ）、Ｉ（ｖ）、Ｉ（ｖ’）、Ｉ（ｗ）、Ｉ（ｘ）、Ｉ（ｘ’）、Ｉ（ｙ）、（ＩＩ）、（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）、（ＩＩＩａ）、（ＩＩＩＩｂ）、（Ｉｖａ）、（ＩＶｂ）、（Ｖ）、（ＶＩ）、（ＶＩａ）、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩａ）、（ＶＩＩｂ）、（ＶＩＩｃ）、（ＶＩＩｄ）、（ＶＩＩｄ’）、（ＶＩＩｅ）、（ＶＩＩｅ’）、（ａ）、（ｂ）、（ｂａ）、（ｂｂ）、（ｂｃ）、または（ｃ））および本明細書で定義されるようなそれらの例が相互参照される。よって、この相互参照のために、ＷＯ２０１７／０５５８５９の化合物、部分式、および置換基は、本願により直接的かつ明確に開示される。
ｃｙｃが複素環基である式（Ｉｏ）の特定の部分式、実施形態および化合物には以下のものが含まれる。
別の実施形態において、Ｒ２は水素であり、式（Ｉｏ）の化合物は、式（Ｉｅ）の化合物またはその互変異性体もしくは溶媒和物もしくは薬学上許容可能な塩である。
Figure 2023508165000048
Ｒ２が水素以外である場合、式（Ｉｏ）の化合物は、少なくとも２つのジアステレオ異性体として存在し得る。
Figure 2023508165000049
疑念を避けるため、一般式（Ｉｏ）および総ての部分式は、－ＣＨＲ２－基のエピマーとして関連する個々のジアステレオ異性体およびジアステレオ異性体の混合物の両方を含む。１つの実施形態において、式（Ｉｏ）の化合物は、ジアステレオ異性体１Ａまたはその互変異性体もしくは溶媒和物もしくは薬学上許容可能な塩である。１つの実施形態において、式（Ｉｏ）の化合物は、ジアステレオ異性体１Ｂまたはその互変異性体もしくは溶媒和物もしくは薬学上許容可能な塩である。
１つの実施形態において、Ａは、Ｃ３－６シクロアルキル基であり（すなわち、ｇは１、２または３である）、かつ、ｔは１であり、ｓは０または１であり、式（Ｉｏ）の化合物は、式（Ｉｆ）の化合物またはその互変異性体もしくは溶媒和物もしくは薬学上許容可能な塩である。
Figure 2023508165000050
１つの実施形態において、Ａは、Ｃ３－６シクロアルキル基であり（すなわち、ｇは１、２または３である）、かつ、ｔは１であり、ｓは１であり、式（Ｉｏ）の化合物は、式（Ｉｇ）の化合物またはその互変異性体もしくは溶媒和物もしくは薬学上許容可能な塩である。
Figure 2023508165000051
１つの実施形態において、Ａは、Ｃ３－６シクロアルキル基であり（すなわち、ｇは１、２または３である）、かつ、ｔは１であり、ｓは１であり、シクロアルキル基は、ジェミナルに二置換され（すなわち、基－（ＣＲｘＲｙ）ｑ－Ｘと－ＣＨ２－Ｏ－イソインドリノン基が両方ともシクロアルキル基の同じ原子に結合している）、式（Ｉｏ）の化合物は、式（Ｉｈ）の化合物またはその互変異性体もしくは溶媒和物もしくは薬学上許容可能な塩である。
Figure 2023508165000052
１つの実施形態において、Ａは、シクロプロピル基であり（すなわち、ｇは１である）、ｔは１であり、かつ、ｓは１である。従って、シクロアルキル基はシクロプロピル基であり、式（Ｉｏ）の化合物は、式（Ｉｉ）の化合物またはその互変異性体もしくは溶媒和物もしくは薬学上許容可能な塩である。
Figure 2023508165000053
１つの実施形態において、Ａは、Ｃ３－６シクロアルキル基であり（すなわち、ｇは１、２または３であり）、ｔは１であり、ｓは１であり、かつ、Ｘは－ＣＮであり、式（Ｉｏ）の化合物は、式（Ｉｋ’）の化合物またはその互変異性体もしくは溶媒和物もしくは薬学上許容可能な塩である。
Figure 2023508165000054
別の実施形態では、Ａは、Ｃ３－６シクロアルキル基であり（すなわち、ｇは１、２または３である）、ｔは１であり、ｓは１であり、かつ、ＲｘおよびＲｙは、水素（１Ｈおよび２Ｈを含む）であり、式（Ｉｏ）の化合物は、式（ＩＬ）の化合物またはその互変異性体もしくは溶媒和物もしくは薬学上許容可能な塩である。
Figure 2023508165000055
１つの実施形態において、Ａは、Ｃ３－シクロアルキル基であり（すなわち、ｇは１である）、ｔは１であり、ｓは１であり、かつ、Ｘは－ＣＮであり、式（Ｉｏ）の化合物は、式（Ｉｎ’）の化合物またはその互変異性体もしくは溶媒和物もしくは薬学上許容可能な塩であり、
Figure 2023508165000056
 式中、ｑは０または１である。化合物（Ｉｎ）の１つの実施形態において、ｑは０である。
１つの実施形態において、Ｒ３は－（ＣＲｘＲｙ）ｑ－Ｘであり、かつ、ｓは１であり、ｔは０であり、ｑは１または２であり、式（Ｉｏ）の化合物は、式（Ｉｐ）の化合物である。
Figure 2023508165000057
１つの実施形態において、Ａは、Ｃ３－６シクロアルキル基または３～６環員を有する飽和複素環基であり、ここで、ｔは１であり、ｓは１であり、Ｙは－ＣＨ２－、Ｏ、またはＳＯ２から独立に選択され、ｉは０または１であり、ｇは１、２、３または４であり、かつ、ｉ＋ｇは１、２、３または４であり、式（Ｉｏ）の化合物は、式（Ｉｑ）の化合物またはその互変異性体もしくは溶媒和物もしくは薬学上許容可能な塩である。
Figure 2023508165000058
１つの実施形態において、ｉは１であり、かつ、ＹはＯまたはＳＯ２、特に、Ｏである。１つの実施形態において、式（Ｉｑ）の化合物は、式（Ｉｑ’’’’）の化合物またはその互変異性体もしくは溶媒和物もしくは薬学上許容可能な塩である。
Figure 2023508165000059
１つの実施形態において、ｓは０であり、ｔは１であり、Ａはテトラヒドロフラニルであり、ｑは０であり、かつ、Ｘは水素である。１つの実施形態において、Ｒ３はテトラヒドロフラニルであり、かつ、ｓは０である。
１つの実施形態において、ａは１であり、かつ、置換基Ｒ４はイソインドリン－１－オンの４位にあり、式（Ｉｏ）の化合物は、式（Ｉｒ）の化合物またはその互変異性体もしくは溶媒和物もしくは薬学上許容可能な塩である。
Figure 2023508165000060
 Ｒ４は、ハロゲン、ニトリル、Ｃ１－４アルキル、ハロＣ１－４アルキル、Ｃ１－４アルコキシおよびハロＣ１－４アルコキシから独立に選択される。
１つの実施形態において、Ｒ４はハロゲンである。１つの実施形態において、Ｒ４はフルオロまたはクロロである。別の実施形態では、Ｒ４はフルオロである。
１つの実施形態において、ａは１であり、置換基Ｒ４はイソインドリン－１－オンの４位にあり、かつ、Ｒ４はＦであり、式（Ｉｏ）の化合物は、式（Ｉｓ）の化合物またはその互変異性体もしくは溶媒和物もしくは薬学上許容可能な塩である。
Figure 2023508165000061
Ｒ６およびＲ７が異なる場合、式（Ｉｏ）の化合物は、少なくとも２つのジアステレオ異性体として存在し得る。
Figure 2023508165000062
疑念を避けるため、一般式（Ｉｏ）および総ての部分式は、－ＣＲ６Ｒ７ＯＨ基のエピマーとして関連する個々のジアステレオ異性体およびジアステレオ異性体の混合物の両方を含む。
１つの実施形態において、Ｒ７は、４－フルオロ－１－メチルピペリジン－４－イルであり、式（Ｉｏ）の化合物は、式（Ｉｘ’’）の化合物またはその互変異性体もしくは溶媒和物もしくは薬学上許容可能な塩である。
Figure 2023508165000063
部分式
１つの実施形態において、式（Ｉｏ）の化合物は、式（ＩＩ）の化合物またはその互変異性体もしくは溶媒和物もしくは薬学上許容可能な塩であり、
Figure 2023508165000064
 式中、Ｌは、ＣＲ１、ＣＨまたはＮであり、かつ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、ａ、ｍおよびｓは、本明細書で定義される通りである。１つの実施形態において、ＬはＣＨである。１つの実施形態において、ＬはＮである。１つの実施形態において、Ｌは、ＣＲ１、例えば、Ｃ－ＯＨまたはＣ－ヒドロキシＣ１－４アルキル（例えば、Ｃ－ＯＨまたはＣ－ＣＨ２ＯＨ）である。
別の実施形態において、Ｒ１は、クロロまたはニトリルであり、式（ＩＩ）の化合物は、式（ＩＩａ）の化合物またはその互変異性体もしくは溶媒和物もしくは薬学上許容可能な塩であり、
Figure 2023508165000065
 式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ７、ｍおよびｓは、本明細書で定義される通りである。
１つの実施形態において、Ｒ６はエチルであり、式（ＩＩ）の化合物は、式（ＩＩＩｂ）の化合物またはその互変異性体もしくは溶媒和物もしくは薬学上許容可能な塩であり、
Figure 2023508165000066
 式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ７、ａ、ｍおよびｓは、本明細書で定義される通りである。
１つの実施形態において、ｓは０であり、式（ＩＩ）の化合物は、式（ＩＶｂ）の化合物またはその互変異性体もしくは溶媒和物もしくは薬学上許容可能な塩であり、
Figure 2023508165000067
 式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ７、ｍおよびｓは、本明細書で定義される通りである。
１つの実施形態において、Ｒ４はＦであり、式（Ｉｏ）の化合物は、式（Ｖ）の化合物またはその互変異性体もしくは溶媒和物もしくは薬学上許容可能な塩であり、
Figure 2023508165000068
 式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ５、Ｒ７、ｍおよびｓは、本明細書で定義される通りである。
１つの実施形態において、ｍは１であり、かつ、置換基Ｒ４はフェニル基の４位にあり、式（ＩＩ）の化合物は、式（ＶＩ）の化合物またはその互変異性体もしくは溶媒和物もしくは薬学上許容可能な塩である。
Figure 2023508165000069
１つの実施形態において、Ｒ５はクロロであり、式（ＶＩ）の化合物は、式（ＶＩａ）の化合物またはその互変異性体もしくは溶媒和物もしくは薬学上許容可能な塩である。
Figure 2023508165000070
１つの実施形態において、Ａは、Ｃ３－６シクロアルキル基であり（ｇは１、２または３である）、かつ、ｔは１であり、式（ＶＩ）の化合物は、式（ＶＩＩ）の化合物またはその互変異性体もしくは溶媒和物もしくは薬学上許容可能な塩である。
Figure 2023508165000071
１つの実施形態において、Ａは、Ｃ３－６シクロアルキル基であり（ｇは１、２または３である）、ｔは１であり、かつ、シクロアルキル基はジェミナルに二置換され（すなわち、基－（ＣＲｘＲｙ）－ＸおよびＣＨ２基（ｓが１である場合）または酸素原子（ｓが０である場合）は両方ともシクロアルキル基の同じ原子に結合しており、式（ＶＩＩ）の化合物は、式（ＶＩＩａ）の化合物またはその互変異性体もしくは溶媒和物もしくは薬学上許容可能な塩である。
Figure 2023508165000072
１つの実施形態において、ｇは１であり、従って、シクロアルキル基はシクロプロピル基であり、式（ＶＩＩａ）の化合物は、式（ＶＩＩｂ）の化合物またはその互変異性体もしくは溶媒和物もしくは薬学上許容可能な塩である。
Figure 2023508165000073
１つの実施形態において、ｓは１であり、式（ＶＩＩｂ）の化合物は、式（ＶＩＩｃ）の化合物またはその互変異性体もしくは溶媒和物もしくは薬学上許容可能な塩である。
Figure 2023508165000074
１つの実施形態において、Ｘは－ＣＮであり、式（ＶｌＩｄ）の化合物は、式（ＶＩｌｅ’’）の化合物またはその互変異性体もしくは溶媒和物もしくは薬学上許容可能な塩であり、
Figure 2023508165000075
 式中、ｑは０または１であり、特に、ｑは０である。
１つの実施形態において、Ｒ３はメチルであり、式（ＶＩ）の化合物は、式（ＶＩＩｆ）の化合物またはその互変異性体もしくは溶媒和物もしくは薬学上許容可能な塩である。
Figure 2023508165000076
式（ａ）の化合物の１つの実施形態において、Ｒ７は、Ｃ１－６アルキル（例えば、メチル）および／またはハロ（例えば、フルオロ）で場合により置換されていてもよいピペリジニルまたはピペラジニルである。
式（ａ’）の化合物の１つの実施形態において、Ｒ７は、Ｃ１－６アルキル（例えば、メチル）および／またはハロ（例えば、フルオロ）で場合により置換されていてもよいピペリジニルである。
１つの実施形態において、Ａは、３～６環員を有するヘテロシクリル基であり、前記複素環基は、Ｎ、Ｏ、Ｓおよびその酸化型から選択される１以上（例えば、１、２、または３個）のヘテロ原子を含んでなり（ｔは１であり；ｇは１、２、３または４であり；ＺはＮ、Ｏ、Ｓおよびその酸化型を表し；ｉは１、２、または３であり；かつ、ｉ＋ｇ＝２、３、４または５）、式（ＶＩ）の化合物は、式（ｂ）の化合物またはその互変異性体もしくは溶媒和物もしくは薬学上許容可能な塩である。
Figure 2023508165000077
１つの実施形態において、ｓは０であり、ｇは２であり、ｑは０であり、かつ、Ｘは水素であり、式（ｂ）の化合物は、式（ｂｂ）の化合物またはその互変異性体もしくは溶媒和物もしくは薬学上許容可能な塩である。
Figure 2023508165000078
別の実施形態では、式（Ｉｏ）の化合物は、式（ｃ）の化合物またはその互変異性体もしくは溶媒和物もしくは薬学上許容可能な塩であり、
Figure 2023508165000079
 式中、Ｒ１は、クロロまたはニトリルであり、ｓは１であり、かつ、Ｘはヒドロキシルであるか、またはｓは０であり、かつ、Ｘは－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２である。
別の実施形態では、式（Ｉｏ）の化合物は、式（ｃ’）の化合物またはその互変異性体もしくは溶媒和物もしくは薬学上許容可能な塩であり、
Figure 2023508165000080
 式中、Ｒ１は、クロロまたはニトリルであり、ｓは１であり、かつ、Ｘはヒドロキシルであるか、またはｓは０であり、かつ、Ｘは－ＣＮである。
１つの実施形態において、ＭＤＭ２アンタゴニストは、式（Ｉｏ）の化合物またはその互変異性体もしくは溶媒和物もしくは薬学上許容可能な塩であり、式中、
Ｈｅｔは、ピリジニルまたはピリミジニルであり、
Ｒ１は、炭素原子と結合しており、ヒドロキシ、ハロゲン、ニトロ、ニトリルおよびＣ１－４アルキルから独立に選択され；
Ｒ２は、水素、Ｃ１－４アルキル、Ｃ２－６アルケニル、ヒドロキシＣ１－４アルキルおよび－ＣＨ２ＣＯ２Ｈから選択され；
Ｒ３は、水素または－（Ａ）ｔ－（ＣＲｘＲｙ）ｑ－Ｘであり；
ｓおよびｔは、０および１から独立に選択され；
ｑは、０、１および２から選択され；
ここで、Ｒ３が－（Ａ）ｔ－（ＣＲｘＲｙ）ｑ－Ｘである場合、（ｉ）ｓ、ｔおよびｑの少なくとも１つは０以外であり、（ｉｉ）ｔが０である場合、ｓは１であり、かつ、ｑは０以外であり；
Ａは、３～６環員を有する複素環基であり、前記複素環基は、Ｎ、Ｏ、Ｓおよびその酸化型から選択される１以上（例えば、１、２、または３個）のヘテロ原子を含んでなり；
Ｘは、水素、ハロゲン、－ＣＮおよび－ＯＲ９から選択され；
Ｒ４およびＲ５は、ハロゲン、ニトリルおよびＣ１－４アルキルから独立に選択され；
Ｒ６は、水素およびＣ１－６アルキルから選択され；
Ｒ７は、３～７環員を有する複素環基、３～７環員を有する－ＣＨ２－複素環基、Ｃ３－８シクロアルキル、および－ＣＨ２－Ｃ３－８シクロアルキルから選択され、前記シクロアルキルまたは複素環基は、１以上のＲｚ基で場合により置換されていてもよく、各場合において、前記複素環基は、Ｎ、Ｏ、Ｓおよびその酸化型から選択される１以上（例えば、１、２、または３個）のヘテロ原子を含んでなり；
Ｒ９は、水素およびＣ１－６アルキルから選択され；
ＲｘおよびＲｙは、水素およびＣ１－６アルキルから独立に選択され；
Ｒｚは、ハロゲン、ニトロ、ニトリル、Ｃ１－６アルキル、ハロＣ１－６アルキル、Ｃ２－６アルケニル、ヒドロキシ、ヒドロキシＣ１－６アルキル、Ｃ１－６アルコキシ、－Ｃ（＝Ｏ）Ｃ１－６アルキル、および－Ｎ（Ｈ）ｅ（Ｃ１－４アルキル）２－ｅから独立に選択され；
ｎおよびｅは、０、１および２から独立に選択され；
ｍは、１および２から選択され；かつ
ａは、０および１から選択される。
１つの実施形態において、ＭＤＭ２アンタゴニストは、式（Ｉｏ）の化合物またはその互変異性体もしくは溶媒和物もしくは薬学上許容可能な塩であり、式中、
Ｈｅｔは、ピリジニルまたはピリミジニルであり、
Ｒ１は、炭素原子に結合しており、ハロゲン、ヒドロキシおよびニトリルから独立に選択され；
Ｒ２は、水素、Ｃ１－４アルキルおよび－ＣＨ２ＣＯ２Ｈから選択され；
Ｒ３は、水素または－（Ａ）ｔ－（ＣＲｘＲｙ）ｑ－Ｘであり；
Ａは、３～６環員を有する複素環基であり、前記複素環基は、Ｎ、Ｏ、Ｓおよびその酸化型から選択される１以上（例えば、１、２、または３個）のヘテロ原子を含んでなり；
かつ、ｔは、０および１から独立に選択され；
ｑは、０、１および２から選択され；
ここで、Ｒ３が－（Ａ）ｔ－（ＣＲｘＲｙ）ｑ－Ｘである場合、（ｉ）ｓ、ｔおよびｑの少なくとも１つは０以外であり、（ｉｉ）ｔが０である場合、ｓは１であり、かつ、ｑは０以外であり；
Ｘは、水素、ハロゲンまたは－ＯＲ９から選択され；
Ｒ４およびＲ５は、ハロゲンから独立に選択され；
Ｒ６は、水素およびＣ１－６アルキルから選択され；
Ｒ７は、３～７環員を有する複素環基、３～７環員を有する－ＣＨ２－複素環基、Ｃ３－８シクロアルキル、および－ＣＨ２－Ｃ３－８シクロアルキルから選択され、前記シクロアルキル、シクロアルケニルまたは複素環基は、１以上のＲｚ基で場合により置換されていてもよい、各場合において、前記複素環基は、Ｎ、Ｏ、Ｓおよびその酸化型から選択される１以上（例えば、１、２、または３個）のヘテロ原子を含んでなり；
Ｒ９は、水素およびＣ１－６アルキルから選択され；
ＲｘおよびＲｙは、水素およびＣ１－６アルキルから独立に選択され；
Ｒｚは、ハロゲン、ニトロ、ニトリル、およびＣ１－６アルキルから独立に選択され；
ｎは１であり、かつ、ｍは１であり；かつ
ａは、０および１から選択される。
１つの実施形態において、ＭＤＭ２アンタゴニストは、式（Ｉｏ）の化合物またはその互変異性体もしくは溶媒和物もしくは薬学上許容可能な塩であり、式中、
Ｈｅｔは、ピリジニルまたはピリミジニルであり、
Ｒ１は、炭素原子と結合しており、ハロゲン、ヒドロキシおよびニトリルから独立に選択され；
Ｒ２は、水素、Ｃ１－４アルキルおよび－ＣＨ２ＣＯ２Ｈから選択され；
Ｒ３は、－（Ａ）ｔ－（ＣＲｘＲｙ）ｑ－Ｘであり；
Ａは、３～６環員を有する複素環基であり、前記複素環基は、Ｎ、Ｏ、Ｓおよびその酸化型から選択される１以上（例えば、１、２、または３個）のヘテロ原子を含んでなり；
ｓおよびｔは、０および１から独立に選択され；
ｑは、０、１および２から選択され；
ここで、（ｉ）ｓ、ｔおよびｑの少なくとも１つは０以外であり、（ｉｉ）ｔが０の場合、ｓは１であり、かつ、ｑは０以外であり；
Ｘは、水素、ハロゲンおよび－ＯＲ９から選択され；
Ｒ４およびＲ５は、ハロゲンから独立に選択され；
Ｒ６は、水素およびＣ１－６アルキルから選択され；
Ｒ７は、１以上のＲｚ基で場合により置換されていてもよい、３～７環員を有する複素環基であり；
Ｒ９は、水素およびＣ１－６アルキルから選択され；
ＲｘおよびＲｙは、水素およびＣ１－６アルキルから独立に選択され；
Ｒｚは、ハロゲンおよびＣ１－６アルキルから独立に選択され；
ｎは１であり、かつ、ｍは１であり、かつ、
ａは１である。
１つの実施形態において、ＭＤＭ２アンタゴニストは、実施例１～５８０（ｃｙｃが複素環基である例）の１つであるか、あるいは実施例１～５８０またはその互変異性体、Ｎ－オキシド、薬学上許容可能な塩もしくは溶媒和物（本明細書に定義される例の第２のセットに記載される式Ｉｏの化合物、すなわち、ＷＯ２０１７／０５５８５９にも記載されているようなｃｙｃがＨｅｔである）から選択される式（Ｉｏ）の化合物である。
１つの実施形態において、ＭＤＭ２アンタゴニストは、実施例１～４６０の１つであるか、あるいは実施例１～４６０またはその互変異性体、Ｎ－オキシド、薬学上許容可能な塩もしくは溶媒和物（本明細書に定義される第２のセットに記載される式Ｉｏの化合物、すなわち、ＷＯ２０１７／０５５８５９にも記載されているようなｃｙｃがＨｅｔである化合物）から選択される式（Ｉｏ）の化合物である。
１つの実施形態において、ＭＤＭ２アンタゴニストは、実施例１～４５９の１つであるか、あるいはまたは実施例１～４５９またはその互変異性体、Ｎ－オキシド、薬学上許容可能な塩もしくは溶媒和物（本明細書に定義される第２のセットに記載される式Ｉｏの化合物、すなわち、ＷＯ２０１７／０５５８５９にも記載されているようなｃｙｃがＨｅｔである化合物）から選択される式（Ｉｏ）の化合物である。
１つの実施形態において、ＭＤＭ２アンタゴニストは、以下の化合物、またはその互変異性体、Ｎ－オキシド、薬学上許容可能な塩もしくは溶媒和物：
（３Ｒ）－３－（４－クロロフェニル）－２－［（５－クロロピリミジン－２－イル）メチル］－４－フルオロ－６－｛１－ヒドロキシ－１－［トランス－４－ヒドロキシシクロヘキシル］エチル｝－３－｛［１－（ヒドロキシメチル）シクロプロピル］メトキシ｝－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－イソインドール－１－オン；
例えば、
Figure 2023508165000081
 ２－｛［（１Ｒ）－１－（４－クロロフェニル）－７－フルオロ－５－［１－ヒドロキシ－１－（１－メチル－１Ｈ－イミダゾール－４－イル）プロピル］－３－オキソ－１－［（３Ｓ）－オキソラン－３－イルオキシ］－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－イソインドール－２－イル］メチル｝ピリミジン－５－カルボニトリル；
例えば、
Figure 2023508165000082
 （３Ｒ）－２－［（５－クロロ－３－ヒドロキシピリジン－２－イル）メチル］－３－（４－クロロフェニル）－４－フルオロ－６－［１－ヒドロキシ－１－（１－メチル－１Ｈ－イミダゾール－４－イル）プロピル］－３－（２－ヒドロキシエトキシ）－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－イソインドール－１－オン；
例えば、
Figure 2023508165000083
 ６－｛［（１Ｒ）－１－（４－クロロフェニル）－７－フルオロ－５－［１－（４－フルオロオキサン－４－イル）－１－ヒドロキシプロピル］－３－オキソ－１－［（３Ｓ）－オキソラン－３－イルオキシ］－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－イソインドール－２－イル］メチル｝ピリジン－３－カルボニトリル；
例えば、
Figure 2023508165000084
 ６－｛［（１Ｒ）－１－（４－クロロフェニル）－７－フルオロ－１－［（３－フルオロオキセタン－３－イル）メトキシ］－５－［１－ヒドロキシ－１－（１－メチル－１Ｈ－イミダゾール－４－イル）プロピル］－３－オキソ－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－イソインドール－２－イル］メチル｝ピリジン－３－カルボニトリル；
例えば、
Figure 2023508165000085
 ６－｛［（１Ｒ）－１－（４－クロロフェニル）－７－フルオロ－１－（｛１－［ヒドロキシ（２Ｈ２）メチル］シクロプロピル｝（２Ｈ２）メトキシ）－５－［１－ヒドロキシ－１－（１－メチル－１Ｈ－イミダゾール－４－イル）プロピル］－３－オキソ－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－イソインドール－２－イル］メチル｝ピリジン－３－カルボニトリル；
例えば、
Figure 2023508165000086
 および
（３Ｒ）－３－（４－クロロフェニル）－２－［（５－クロロピリミジン－２－イル）メチル］－４－フルオロ－６－［１－ヒドロキシ－１－（１－メチルピペリジン－４－イル）プロピル］－３－［（３Ｓ）－オキソラン－３－イルオキシ］－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－イソインドール－１－オン
例えば、
Figure 2023508165000087
 から選択される式（Ｉｏ）の化合物である。
１つの実施形態において、ＭＤＭ２アンタゴニストは、ジアステレオ異性体２Ａである式（Ｉｏ）の化合物であり、以下の化合物、またはその互変異性体、Ｎ－オキシド、薬学上許容可能な塩もしくは溶媒和物：
（３Ｒ）－３－（４－クロロフェニル）－２－［（５－クロロピリミジン－２－イル）メチル］－４－フルオロ－６－｛１－ヒドロキシ－１－［トランス－４－ヒドロキシシクロヘキシル］エチル｝－３－｛［１－（ヒドロキシメチル）シクロプロピル］メトキシ｝－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－イソインドール－１－オン；
２－｛［（１Ｒ）－１－（４－クロロフェニル）－７－フルオロ－５－［１－ヒドロキシ－１－（１－メチル－１Ｈ－イミダゾール－４－イル）プロピル］－３－オキソ－１－［（３Ｓ）－オキソラン－３－イルオキシ］－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－イソインドール－２－イル］メチル｝ピリミジン－５－カルボニトリル；
（３Ｒ）－２－［（５－クロロ－３－ヒドロキシピリジン－２－イル）メチル］－３－（４－クロロフェニル）－４－フルオロ－６－［１－ヒドロキシ－１－（１－メチル－１Ｈ－イミダゾール－４－イル）プロピル］－３－（２－ヒドロキシエトキシ）－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－イソインドール－１－オン；
６－｛［（１Ｒ）－１－（４－クロロフェニル）－７－フルオロ－５－［１－（４－フルオロオキサン－４－イル）－１－ヒドロキシプロピル］－３－オキソ－１－［（３Ｓ）－オキソラン－３－イルオキシ］－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－イソインドール－２－イル］メチル｝ピリジン－３－カルボニトリル；
６－｛［（１Ｒ）－１－（４－クロロフェニル）－７－フルオロ－１－［（３－フルオロオキセタン－３－イル）メトキシ］－５－［１－ヒドロキシ－１－（１－メチル－１Ｈ－イミダゾール－４－イル）プロピル］－３－オキソ－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－イソインドール－２－イル］メチル｝ピリジン－３－カルボニトリル；
６－｛［（１Ｒ）－１－（４－クロロフェニル）－７－フルオロ－１－（｛１－［ヒドロキシ（２Ｈ２）メチル］シクロプロピル｝（２Ｈ２）メトキシ）－５－［１－ヒドロキシ－１－（１－メチル－１Ｈ－イミダゾール－４－イル）プロピル］－３－オキソ－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－イソインドール－２－イル］メチル｝ピリジン－３－カルボニトリル；および
（３Ｒ）－３－（４－クロロフェニル）－２－［（５－クロロピリミジン－２－イル）メチル］－４－フルオロ－６－［１－ヒドロキシ－１－（１－メチルピペリジン－４－イル）プロピル］－３－［（３Ｓ）－オキソラン－３－イルオキシ］－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－イソインドール－１－オン
から選択される。
１つの実施形態において、ＭＤＭ２アンタゴニストは、ジアステレオ異性体２Ｂである式（Ｉｏ）の化合物であり、以下の化合物、またはその互変異性体、Ｎ－オキシド、薬学上許容可能な塩もしくは溶媒和物：
（３Ｒ）－３－（４－クロロフェニル）－２－［（５－クロロピリミジン－２－イル）メチル］－４－フルオロ－６－｛１－ヒドロキシ－１－［トランス－４－ヒドロキシシクロヘキシル］エチル｝－３－｛［１－（ヒドロキシメチル）シクロプロピル］メトキシ｝－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－イソインドール－１－オン；
２－｛［（１Ｒ）－１－（４－クロロフェニル）－７－フルオロ－５－［１－ヒドロキシ－１－（１－メチル－１Ｈ－イミダゾール－４－イル）プロピル］－３－オキソ－１－［（３Ｓ）－オキソラン－３－イルオキシ］－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－イソインドール－２－イル］メチル｝ピリミジン－５－カルボニトリル；
（３Ｒ）－２－［（５－クロロ－３－ヒドロキシピリジン－２－イル）メチル］－３－（４－クロロフェニル）－４－フルオロ－６－［１－ヒドロキシ－１－（１－メチル－１Ｈ－イミダゾール－４－イル）プロピル］－３－（２－ヒドロキシエトキシ）－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－イソインドール－１－オン；
６－｛［（１Ｒ）－１－（４－クロロフェニル）－７－フルオロ－５－［１－（４－フルオロオキサン－４－イル）－１－ヒドロキシプロピル］－３－オキソ－１－［（３Ｓ）－オキソラン－３－イルオキシ］－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－イソインドール－２－イル］メチル｝ピリジン－３－カルボニトリル；
６－｛［（１Ｒ）－１－（４－クロロフェニル）－７－フルオロ－１－［（３－フルオロオキセタン－３－イル）メトキシ］－５－［１－ヒドロキシ－１－（１－メチル－１Ｈ－イミダゾール－４－イル）プロピル］－３－オキソ－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－イソインドール－２－イル］メチル｝ピリジン－３－カルボニトリル；
６－｛［（１Ｒ）－１－（４－クロロフェニル）－７－フルオロ－１－（｛１－［ヒドロキシ（２Ｈ２）メチル］シクロプロピル｝（２Ｈ２）メトキシ）－５－［１－ヒドロキシ－１－（１－メチル－１Ｈ－イミダゾール－４－イル）プロピル］－３－オキソ－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－イソインドール－２－イル］メチル｝ピリジン－３－カルボニトリル；および
（３Ｒ）－３－（４－クロロフェニル）－２－［（５－クロロピリミジン－２－イル）メチル］－４－フルオロ－６－［１－ヒドロキシ－１－（１－メチルピペリジン－４－イル）プロピル］－３－［（３Ｓ）－オキソラン－３－イルオキシ］－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－イソインドール－１－オン
から選択される。
１つの実施形態において、ＭＤＭ２アンタゴニストは、以下の化合物、またはその互変異性体、Ｎ－オキシド、薬学上許容可能な塩もしくは溶媒和物：
（３Ｒ）－３－（４－クロロフェニル）－２－［（５－クロロピリミジン－２－イル）メチル］－４－フルオロ－６－［２－ヒドロキシ－１－（４－メチルピペラジン－１－イル）ブタン－２－イル］－３－［（３Ｓ）－オキソラン－３－イルオキシ］－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－イソインドール－１－オン；
例えば、
Figure 2023508165000088
 （３Ｒ）－３－（４－クロロフェニル）－２－［（５－クロロピリミジン－２－イル）メチル］－４－フルオロ－６－［１－（４－フルオロ－１－メチルピペリジン－４－イル）－１－ヒドロキシプロピル］－３－メトキシ－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－イソインドール－１－オン；
例えば、
Figure 2023508165000089
 １－（｛［（１Ｒ）－１－（４－クロロフェニル）－２－［（５－クロロピリミジン－２－イル）メチル］－７－フルオロ－５－［１－（４－フルオロ－１－メチルピペリジン－４－イル）－１－ヒドロキシプロピル］－３－オキソ－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－イソインドール－１－イル］オキシ｝メチル）シクロプロパン－１－カルボニトリル；
例えば、
Figure 2023508165000090
 （３Ｒ）－３－（４－クロロフェニル）－２－［（５－クロロピリミジン－２－イル）メチル］－４－フルオロ－６－［１－（４－フルオロ－１－メチルピペリジン－４－イル）－１－ヒドロキシプロピル］－３－［シス－３－ヒドロキシシクロブトキシ］－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－イソインドール－１－オン；
例えば、
Figure 2023508165000091
 および
（３Ｒ）－３－（４－クロロフェニル）－２－［（５－クロロピリミジン－２－イル）メチル］－４－フルオロ－６－［１－（４－フルオロ－１－メチルピペリジン－４－イル）－１－ヒドロキシプロピル］－３－［（２Ｒ）－２－ヒドロキシプロポキシ］－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－イソインドール－１－オン
例えば、
Figure 2023508165000092
 から選択される式（Ｉｏ）の化合物である。
１つの実施形態において、ＭＤＭ２アンタゴニストは、１－（｛［（１Ｒ）－１－（４－クロロフェニル）－２－［（５－クロロピリミジン－２－イル）メチル］－７－フルオロ－５－［１－（４－フルオロ－１－メチルピペリジン－４－イル）－１－ヒドロキシプロピル］－３－オキソ－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－イソインドール－１－イル］オキシ｝メチル）シクロプロパン－１－カルボニトリルである式（Ｉｏ）の化合物、またはその互変異性体、Ｎ－オキシド、薬学上許容可能な塩もしくは溶媒和物である。
１つの実施形態において、ＭＤＭ２アンタゴニストは、（３Ｒ）－３－（４－クロロフェニル）－２－［（５－クロロピリミジン－２－イル）メチル］－４－フルオロ－６－［１－（４－フルオロ－１－メチルピペリジン－４－イル）－１－ヒドロキシプロピル］－３－メトキシ－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－イソインドール－１－オンである式（Ｉｏ）の化合物、またはその互変異性体、Ｎ－オキシド、薬学上許容可能な塩もしくは溶媒和物である。
１つの実施形態において、ＭＤＭ２アンタゴニストは、ジアステレオ異性体２Ａである式（Ｉｏ）の化合物であり、１－（｛［（１Ｒ）－１－（４－クロロフェニル）－２－［（５－クロロピリミジン－２－イル）メチル］－７－フルオロ－５－［１－（４－フルオロ－１－メチルピペリジン－４－イル）－１－ヒドロキシプロピル］－３－オキソ－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－イソインドール－１－イル］オキシ｝メチル）シクロプロパン－１－カルボニトリル、またはその互変異性体、Ｎ－オキシド、薬学上許容可能な塩もしくは溶媒和物である。
１つの実施形態において、ＭＤＭ２アンタゴニストは、ジアステレオ異性体２Ａである式（Ｉｏ）の化合物であり、（３Ｒ）－３－（４－クロロフェニル）－２－［（５－クロロピリミジン－２－イル）メチル］－４－フルオロ－６－［１－（４－フルオロ－１－メチルピペリジン－４－イル）－１－ヒドロキシプロピル］－３－メトキシ－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－イソインドール－１－オン、またはその互変異性体、Ｎ－オキシド、薬学上許容可能な塩もしくは溶媒和物である。
１つの実施形態において、ＭＤＭ２アンタゴニストは、ジアステレオ異性体２Ｂである式（Ｉｏ）の化合物であり、１－（｛［（１Ｒ）－１－（４－クロロフェニル）－２－［（５－クロロピリミジン－２－イル）メチル］－７－フルオロ－５－［１－（４－フルオロ－１－メチルピペリジン－４－イル）－１－ヒドロキシプロピル］－３－オキソ－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－イソインドール－１－イル］オキシ｝メチル）シクロプロパン－１－カルボニトリル、またはその互変異性体、Ｎ－オキシド、薬学上許容可能な塩もしくは溶媒和物である。
１つの実施形態において、ＭＤＭ２アンタゴニストは、ジアステレオ異性体２Ｂである式（Ｉｏ）の化合物であり、（３Ｒ）－３－（４－クロロフェニル）－２－［（５－クロロピリミジン－２－イル）メチル］－４－フルオロ－６－［１－（４－フルオロ－１－メチルピペリジン－４－イル）－１－ヒドロキシプロピル］－３－メトキシ－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－イソインドール－１－オン、またはその互変異性体、Ｎ－オキシド、薬学上許容可能な塩もしくは溶媒和物である。
１つの実施形態において、ＭＤＭ２アンタゴニストは、（３Ｒ）－３－（４－クロロフェニル）－２－［（５－クロロピリミジン－２－イル）メチル］－４－フルオロ－６－［（１Ｓ）－１－（４－フルオロ－１－メチルピペリジン－４－イル）－１－ヒドロキシプロピル］－３－メトキシ－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－イソインドール－１－オン、またはその互変異性体、Ｎ－オキシド、薬学上許容可能な塩もしくは溶媒和物である。
１つの実施形態において、ＭＤＭ２アンタゴニストは、（３Ｒ）－３－（４－クロロフェニル）－２－［（５－クロロピリミジン－２－イル）メチル］－４－フルオロ－６－［（１Ｒ）－１－（４－フルオロ－１－メチルピペリジン－４－イル）－１－ヒドロキシプロピル］－３－メトキシ－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－イソインドール－１－オン、またはその互変異性体、Ｎ－オキシド、薬学上許容可能な塩もしくは溶媒和物である。
１つの実施形態において、ＭＤＭ２アンタゴニストは、１－（｛［（１Ｒ）－１－（４－クロロフェニル）－２－［（５－クロロピリミジン－２－イル）メチル］－７－フルオロ－５－［（１Ｓ）－１－（４－フルオロ－１－メチルピペリジン－４－イル）－１－ヒドロキシプロピル］－３－オキソ－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－イソインドール－１－イル］オキシ｝メチル）シクロプロパン－１－カルボニトリル、またはその互変異性体、Ｎ－オキシド、薬学上許容可能な塩もしくは溶媒和物である。
１つの実施形態において、ＭＤＭ２アンタゴニストは、１－（｛［（１Ｒ）－１－（４－クロロフェニル）－２－［（５－クロロピリミジン－２－イル）メチル］－７－フルオロ－５－［（１Ｒ）－１－（４－フルオロ－１－メチルピペリジン－４－イル）－１－ヒドロキシプロピル］－３－オキソ－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－イソインドール－１－イル］オキシ｝メチル）シクロプロパン－１－カルボニトリル、またはその互変異性体、Ｎ－オキシド、薬学上許容可能な塩もしくは溶媒和物である。
疑念を避けるため、各一般的および具体的実施形態およびある置換基の例は、各一般的および具体的実施形態および本明細書で定義されるような１以上、特に、総ての他の置換基の例と組み合わせてもよく、このような実施形態は総て本願に含まれると理解されるべきである。
特定の化合物
本発明の使用および方法は、本明細書に記載される式Ｉｏの総ての化合物に当てはまり、すなわち、ＭＤＭ２アンタゴニストは、式Ｉｏの化合物、その任意の部分式、または本明細書に記載の任意の具体的化合物、またはその互変異性体、Ｎ－オキシド、薬学上許容可能な塩もしくは溶媒和物であり得る。
１つの実施形態において、ＭＤＭ２アンタゴニストは、本明細書に定義される例の第１のセットに記載されるような実施例１～１３４から選択される式Ｉｏの化合物（すなわち、ＷＯ２０１７／０５５８６０にも記載されているようなｃｙｃがフェニルである化合物）である。
１つの実施形態において、ＭＤＭ２アンタゴニストは、本明細書に定義される例の第２のセットに記載されるような実施例１～５８０から選択される式Ｉｏの化合物（すなわち、ＷＯ２０１７／０５５８５９にも記載されているようなｃｙｃがＨｅｔである化合物）である。
本発明のある特定の実施形態において、ＭＤＭ２アンタゴニストは、本明細書で定義されるような式（Ｉｏ）の化合物またはその互変異性体、Ｎ－オキシド、薬学上許容可能な塩もしくは溶媒和物、すなわち、（２Ｓ，３Ｓ）－３－（４－クロロフェニル）－３－［（１Ｒ）－１－（４－クロロフェニル）－７－フルオロ－５－［（１Ｓ）－１－ヒドロキシ－１－（オキサン－４－イル）プロピル］－１－メトキシ－３－オキソ－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－イソインドール－２－イル］－２－メチルプロパン酸である。
（２Ｓ，３Ｓ）－３－（４－クロロフェニル）－３－［（１Ｒ）－１－（４－クロロフェニル）－７－フルオロ－５－［（１Ｓ）－１－ヒドロキシ－１－（オキサン－４－イル）プロピル］－１－メトキシ－３－オキソ－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－イソインドール－２－イル］－２－メチルプロパン酸は、本明細書では「化合物１」と呼ばれる。例えば、
Figure 2023508165000093
（２Ｓ，３Ｓ）－３－（４－クロロフェニル）－３－［（１Ｒ）－１－（４－クロロフェニル）－７－フルオロ－５－［（１Ｓ）－１－ヒドロキシ－１－（オキサン－４－イル）プロピル］－１－メトキシ－３－オキソ－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－イソインドール－２－イル］－２－メチルプロパン酸は、２０１７年４月６日にＷＯ２０１７／０５５８６０として公開された国際特許出願第ＰＣＴ／ＧＢ２０１６／０５３０４２号において実施例１２４として開示されている。
化合物１の製造のための方法は、２０１８年１０月４日にＷＯ２０１８／１７８６９１として公開された国際特許出願第ＰＣＴ／ＧＢ２０１８／０５０８４５号に見出すことができる。
１つの実施形態において、ＭＤＭ２アンタゴニストは、遊離酸の形態の化合物１である。別の実施形態では、ＭＤＭ２アンタゴニストは、化合物１の薬学上許容可能な塩である。
概要
他のＭＤＭ２アンタゴニストは、従来の方法で、例えば、記載されているものと類似の手順によって製造することができる。
ＭＤＭ２アンタゴニストの薬量学は当業者に知られている。各ＭＤＭ２アンタゴニストの好ましい投与方法ならびに用量および投与レジメンは、治療される特定の腫瘍および治療される特定の宿主によって異なることが認識されるであろう。最適な方法、投与スケジュール、用量および投与レジメンは、従来の方法を使用して、本明細書に示される情報を考慮して、当業者により容易に決定することができる。
塩、溶媒和物、互変異性体、異性体、Ｎ－オキシド、エステル、プロドラッグおよび同位体
本明細書でいずれの化合物に対する言及も、例えば以下に述べられるようなそのイオン形態、塩、溶媒和物、異性体（指定がない限り、幾何異性体および立体化学異性体を含む）、互変異性体、Ｎ－オキシド、エステル、プロドラッグ、同位体および保護形態、特に、その塩または互変異性体または異性体またはＮ－オキシドまたは溶媒和物；より詳しくは、その塩または互変異性体またはＮ－オキシドまたは溶媒和物を含む。１つの実施形態において、化合物という場合には、その塩または互変異性体または溶媒和物も含む。
塩
化合物は、塩、例えば、酸付加塩、または特定の場合には、カルボン酸塩、スルホン酸塩およびリン酸塩などの有機塩基および無機塩基の塩の形態で存在し得る。このような塩は総て本発明の範囲内にあり、式（Ｉｏ）の化合物という場合には、化合物の塩形態を含む。
Ｎ－オキシド
アミン官能基を含む化合物は、Ｎ－オキシドも形成し得る。本明細書においてアミン官能基を含む化合物という場合には、Ｎ－オキシドも含む。
幾何異性体および互変異性体
これらの化合物はいくつかの異なる幾何異性形態、および互変異性形態で存在する場合があり、式（Ｉｏ）の化合物という場合には、このような総ての形態を含む。疑念を避けるため、化合物がいくつかの幾何異性形態または互変異性形態の１つで存在する可能性があり、１つのみが具体的に記載される、または示される場合、他の総てのものもやはり本発明に含まれる。
例えば、ある特定のヘテロアリール環は、以下に示されるＡおよびＢなどの２つの互変異性形態で存在し得る。簡単にするために、式は一形態を示すことがあるが、この式は両方の互変異性形態と理解されるべきである。
立体異性体
特に言及または示されない限り、化合物の化学表示は、可能性のある総ての立体化学的異性形態の混合物を表す。
式（Ｉ ｏ ）の化合物
立体中心は、通常の様式で、「破線」または「実線」のくさびを用いて示される。例えば、
Figure 2023508165000094
化合物が２つのジアステレオ異性体／エピマーの混合物として記載される場合、立体中心の構成は明示されず、直線で示される。
化合物が１以上のキラル中心を含み、２つ以上の光学異性体の形態で存在し得る場合、化合物という場合には、文脈がそうでないことを必要としない限り、その総ての光学異性形態（例えば、鏡像異性体、エピマーおよびジアステレオ異性体）を、個々の光学異性体、もしく混合物（例えば、ラセミまたはスカレミック混合物）または２つ以上の光学異性体のいずれかとして含む。
立体化学的に純粋な化合物が特に注目される。化合物が例えばＲと明示される場合、これはその化合物がＳ異性体を実質的に含まないことを意味する。化合物が例えばＥと明示されれば、これはその化合物がＺ異性体を実質的に含まないことを意味する。シス、トランス、Ｒ、Ｓ、ＥおよびＺという用語は当業者に周知である。
同位体変形形態
本発明は、総ての薬学上許容可能な同位体標識化合物、すなわち、１以上の原子が、同じ原子番号であるが、自然界に通常見られる原子質量または質量数とは異なる原子質量または質量数を有する原子で置換されている化合物を含む。
溶媒和物および結晶形
また、化合物の任意の多型体、および溶媒和物、例えば、水和物、アルコラートなども化合物に含まれる。
１つの実施形態において、ＭＤＭ２アンタゴニストは、（２Ｓ，３Ｓ）－３－（４－クロロフェニル）－３－［（１Ｒ）－１－（４－クロロフェニル）－７－フルオロ－５－［（１Ｓ）－１－ヒドロキシ－１－（オキサン－４－イル）プロピル］－１－メトキシ－３－オキソ－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－イソインドール－２－イル］－２－メチルプロパン酸の遊離酸の結晶形である。
１つの実施形態において、ＭＤＭ２アンタゴニストは、
（ａ）回折角１５．１、１５．５、１５．８および２２．３°２θ（±０．２°２θ）におけるピークを特徴とするＸ線粉末回折パターン；または
（ｂ）面間隔３．９９、５．６２、５．７１および５．８７Å
を有する、（２Ｓ，３Ｓ）－３－（４－クロロフェニル）－３－［（１Ｒ）－１－（４－クロロフェニル）－７－フルオロ－５－［（１Ｓ）－１－ヒドロキシ－１－（オキサン－４－イル）プロピル］－１－メトキシ－３－オキソ－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－イソインドール－２－イル］－２－メチルプロパン酸の結晶形である。
特に、（２Ｓ，３Ｓ）－３－（４－クロロフェニル）－３－［（１Ｒ）－１－（４－クロロフェニル）－７－フルオロ－５－［（１Ｓ）－１－ヒドロキシ－１－（オキサン－４－イル）プロピル］－１－メトキシ－３－オキソ－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－イソインドール－２－イル］－２－メチルプロパン酸の結晶形は、
（ａ）回折角１１．３、１５．１、１５．５、１５．８、１７．２、２０．８、２２．３および２８．６°２θ（±０．２°２θ）におけるピークを特徴とするＸ線粉末回折パターン；または
（ｂ）面間隔３．１２、３．９９、４．２７、５．１７、５．６２、５．７１、５．８７および７．８５Å
を有する。
特に、（２Ｓ，３Ｓ）－３－（４－クロロフェニル）－３－［（１Ｒ）－１－（４－クロロフェニル）－７－フルオロ－５－［（１Ｓ）－１－ヒドロキシ－１－（オキサン－４－イル）プロピル］－１－メトキシ－３－オキソ－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－イソインドール－２－イル］－２－メチルプロパン酸の結晶形は、本明細書の表６に示される回折角（２θ）における主要ピークの存在、面間隔（ｄ）および強度を特徴とするＸ線粉末回折パターンを有する。
特に、（２Ｓ，３Ｓ）－３－（４－クロロフェニル）－３－［（１Ｒ）－１－（４－クロロフェニル）－７－フルオロ－５－［（１Ｓ）－１－ヒドロキシ－１－（オキサン－４－イル）プロピル］－１－メトキシ－３－オキソ－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－イソインドール－２－イル］－２－メチルプロパン酸の結晶形は、図１２に示されるＸ線粉末回折パターンと同じ回折角にピークを示す、好ましくは、それらのピークが図１２のピークと同じ相対強度を有するＸ線粉末回折パターンを有する。
特に、（２Ｓ，３Ｓ）－３－（４－クロロフェニル）－３－［（１Ｒ）－１－（４－クロロフェニル）－７－フルオロ－５－［（１Ｓ）－１－ヒドロキシ－１－（オキサン－４－イル）プロピル］－１－メトキシ－３－オキソ－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－イソインドール－２－イル］－２－メチルプロパン酸の結晶形は、実質的に図１２に示されるようなＸ線粉末回折パターンを有する。
１つの実施形態において、（２Ｓ，３Ｓ）－３－（４－クロロフェニル）－３－［（１Ｒ）－１－（４－クロロフェニル）－７－フルオロ－５－［（１Ｓ）－１－ヒドロキシ－１－（オキサン－４－イル）プロピル］－１－メトキシ－３－オキソ－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－イソインドール－２－イル］－２－メチルプロパン酸の結晶形は、ＤＳＣを実施した際に２６６～２６７℃（例えば、２６６．６１℃）に発熱ピークを示す。
結晶形は、実質的に結晶性であってよく、これはある単結晶形が優勢であって、他の結晶形が微量、好ましくは無視できる量で存在し得ることを意味する。
例えば、結晶形は、他のいずれの結晶形も５重量％以下含み得る。
複合体
これらの化合物はまた、それらの範囲に、化合物の複合体（例えば、シクロデキストリンなどの化合物との包接複合体もしくは包接体、または金属との錯体）も含む。複合体包接複合体、包接体および金属錯体は、当業者に周知の方法によって形成することができる。
プロドラッグ
化合物のいずれのプロドラッグもまた化合物に含まれる。「プロドラッグ」とは、例えば、ｉｎ ｖｉｖｏで生物学的に活性な化合物に変換されるいずれの化合物も意味する。
本発明において使用される化合物の製造のための方法
式（Ｉ ｏ ）の化合物
本節では、文脈がそうではないことを示さない限り、本願の他の総ての節と同様に、式Ｉｏという場合には本明細書で定義されるような他の総ての部分式およびその例も含む。
式（Ｉｏ）の化合物は、当業者に周知の合成方法に従って製造することができる。
必要な中間体は市販されているか、文献で既知であるか、文献と同様の方法によって製造されるか、以下の例示的実験手順に記載されているものと同様の方法によって調整される。他の化合物は、当技術分野で周知の方法を用い、基の官能基相互変換によって製造することができる。
ｃｙｃがフェニルである化合物を製造、単離および精製するための一般手順は、２０１７年４月６日にＷＯ２０１７／０５５８６０として公開された国際特許出願第ＰＣＴ／ＧＢ２０１６／０５３０４２号に見出すことができる。
ｃｙｃがＨｅｔである化合物を製造、単離および精製するための一般手順は、２０１７年４月６日にＷＯ２０１７／０５５８５９として公開された国際特許出願第ＰＣＴ／ＧＢ２０１６／０５３０４１号に見出すことができる。
バイオマーカーの検出
いくつかの実施形態において、患者組織のサンプルが検査される。組織は１以上の癌細胞を含んでなる可能性があり、または血液から得ることのできる循環腫瘍ＤＮＡ（ｃｔＤＮＡ）などの癌細胞由来の核酸、一般にＤＮＡを含んでなる可能性がある。
いくつかの実施形態において、サンプルは、対象とする１または複数のバイオマーカーの相対発現を測定するｉｎ ｖｉｔｒｏ診断装置に装填される。
患者は一般に、治療が有効であり得るかどうかを確認するために本発明が実施される際に癌を有すことが既知であるか、またはその疑いがあり得る。従って、特定の実施形態において、この方法は、癌を有することが既知であるか、またはその疑いがあるヒト患者がＭＤＭ２アンタゴニストを用いて治療可能であるかどうかを評価するためのものである。
本発明の方法は一般に、１以上の検出試薬および／または検出技術を使用することにより、特定されたバイオマーカーの１以上、および場合によりさらなるバイオマーカーを検出することを含んでなる。検出は一般に、患者からのサンプルに対してｅｘ ｖｉｖｏ、例えば、ｉｎ ｖｉｔｒｏで行われる。１つの実施形態において、バイオマーカーは、直接測定される。別の実施形態では、バイオマーカーレベルを間接的に測定するためにバイオマーカー基質が測定され得る。
「検出する」とは、バイオマーカーの発現レベルを測定、定量、スコア化、またはアッセイすることを意味する。バイオマーカータンパク質、遺伝子またはｍＲＮＡ転写産物を含む生物学的化合物を評価する方法は、当技術分野で公知である。バイオマーカーを検出する方法は直接的測定および間接的測定を含むと認識される。当業者は、特定のバイオマーカーをアッセイする適当な方法を選択することができる。
「検出試薬」は、対象とするバイオマーカーに結合する、特異的に（または選択的に）相互作用する、または検出する薬剤または化合物である。このような検出試薬は、限定されるものではないが、タンパク質バイオマーカーと優先的に結合する抗体、ポリクローナル抗体、もしくはモノクローナル抗体、またはｍＲＮＡもしくはＤＮＡバイオマーカーに相補的であり、一般にストリンジェントハイブリダイゼーション条件下で選択的に結合するオリゴヌクレオチドを含み得る。
「特異的に（もしくは選択的に）結合する」または「特異的に（もしくは選択的に）免疫反応する」という句は、検出試薬に関して言及する場合、生体分子のヘテロな集団においてバイオマーカーの存在を示す結合反応を指す。例えば、指定されたイムノアッセイ条件下で、明示された検出試薬（例えば、抗体）は、バックグラウンドの少なくとも２倍の特定のタンパク質に結合し、サンプル中に存在する他のタンパク質に実質的に有意な量では結合しない。このような条件下での特異的結合には、特定のタンパク質に対するその特異性のために選択された抗体が必要となり得る。特定のタンパク質と特異的に免疫反応性のある抗体を選択するために、様々なイムノアッセイ形式を使用することができる。例えば、固相ＥＬＩＳＡイムノアッセイ（酵素結合免疫吸着アッセイ）は、タンパク質と特異的に免疫反応する抗体を選択するために常用される（特定の免疫反応性を決定するために使用できるイムノアッセイ形式および条件の説明については、例えば、Harlow & Lane, Antibodies, A Laboratory Manual (1988)を参照のこと）。一般に、特異的または選択的反応は、バックグラウンドシグナルまたはノイズの少なくとも２倍、より一般的にはバックグラウンドの１０～１００倍を超える。
ｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーション（ＩＳＨ）、定量的リアルタイムポリメラーゼ連鎖反応（ｑＲＴ ＰＣＲ）および免疫組織化学（ＩＨＣ）などの技術は、従来から疾患バイオマーカーを診断または検出するために使用されてきた。しかしながら、次世代シーケンシング、単一分子リアルタイムシーケンシング、デジタル病理学および定量的組織病理学などのハイスループットの高感度アプローチの出現により、コンパニオン診断またはＣＤｘを実現するテクノロジープラットフォームに変化が生じている。定量的組織病理学とデジタル病理学はどちらも医学画像に基づく診断アプローチであり、それらは、組織サンプル中のタンパク質バイオマーカーの局在化および測定を提供する。組織マーカーは、自動化された蛍光に基づくイメージングプラットフォームを使用して識別および定量される。
検出されるバイオマーカーがタンパク質である場合、検出方法には、抗体に基づくアッセイ、タンパク質アレイアッセイ、質量分析（ＭＳ）に基づくアッセイ、および（近）赤外線分光法に基づくアッセイが含まれる。例えば、イムノアッセイには、限定するものではないが、ウエスタンブロット、ラジオイムノアッセイ、ＥＬＩＳＡ、「サンドイッチ」イムノアッセイ、免疫沈降アッセイ、沈降素反応、ゲル拡散沈降素反応、免疫拡散アッセイ、蛍光イムノアッセイなどの技術を使用する競合および非競合アッセイシステムが挙げられる。このようなアッセイは慣例あり、当技術分野ではよく知られている。
「分析する」ことは、サンプル中のマーカー（例えば、マーカーまたは構成要素の発現レベルの有無など）の測定によってサンプルに関連する値のセットを決定すること、および測定値を同じ対象または他の対照とする対象からのサンプルまたはサンプルセットと比較することを含む。本教示のマーカーは、当技術分野で公知の様々な従来の方法のいずれによって分析することもできる。「分析する」ことは、例えば、対象が療法（例えば、本明細書に記載されるようなＭＤＭ２アンタゴニスト処置）に対する応答者であるか非応答者であるかを決定するための統計分析を実行することを含み得る。
本教示の文脈における「サンプル」は、対象から単離された任意の生物学的サンプル、例えば、血液サンプルまたは生検を指す。サンプルには、限定するものではないが、単一細胞または複数細胞、細胞の断片、体液のアリコート、全血、血小板、血清、血漿、赤血球、白血球、内皮細胞、組織生検、滑膜液、リンパ液、腹水、および間質液または細胞外液を含み得る。「サンプル」という用語は、歯肉溝滲出液、骨髄、脳脊髄液（ＣＳＦ）、唾液、粘膜、痰、精液、汗、尿、またはその他の体液を含む、細胞間隙の液体も包む。「血液サンプル」は、全血または血液細胞、赤血球、白血球、血小板、血清および血漿を含むその任意の画分を指し得る。サンプルは、限定するものではないが、静脈穿刺、排泄、射精、マッサージ、生検、針吸引、洗浄、掻き取り、外科的切開、または当技術分野で知られている介入もしくは他の手段を含む手段によって対象から得ることができる。
分析技術
ＭＤＭ２アンタゴニストの投与の前に、患者は、患者が罹患している、または罹患している可能性のある疾患または病態が、ＭＤＭ２２／ｐ５３を阻害する化合物による処置に感受性があるものかどうかを決定するためにスクリーニングされ得る。「患者」という用語は、霊長類などのヒトおよび獣医学的対象、特にヒト患者を含む。
例えば、患者から採取された生物学的サンプルを分析して、患者が罹患している、または置換している可能性のある癌などの病態または疾患が、ＭＤＭ２のレベルの上方調節またはＭＤＭ２／ｐ５３の下流の生化学的経路の上方調節をもたらす遺伝的異常または異常なタンパク質発現を特徴とするものであるかどうかを決定することができる。さらに、患者から採取された生物学的サンプルを分析して、患者が罹患している、または置換している可能性のある癌などの病態または疾患が、本発明のバイオマーカーによって特徴付けられるものであるかどうかを決定することができる。
ＭＤＭ２の活性化または増感、ＭＤＭ２発現に影響を与える調節経路の欠損または阻害、受容体もしくはそれらのリガンドの上方調節、細胞遺伝学的異常、または受容体もしくはリガンドの突然変異体の存在をもたらすそのような異常の例。ＭＤＭ２／ｐ５３の上方調節、特にＭＤＭ２の過剰発現、または野生型ｐ５３を示す腫瘍は、ＭＤＭ２／ｐ５３の阻害剤に特に感受性がある可能性がある。例えば、ＭＤＭ２の増幅および／またはｐ１４ＡＲＦなどのその負の調節因子の欠失は、本明細書で論じられるように、ある範囲の癌において同定されている。さらに、ＢＡＰ１および／またはＣＤＫＮ２Ａの欠損および／または本明細書に概説される遺伝子の発現の増加が見られ得る。
「上昇」および「増大」という用語は、遺伝子増幅（すなわち、複数の遺伝子コピー）、細胞遺伝学的異常、および転写効果または翻訳後効果による発現の増大を含む、上方調節された発現または過剰発現を含む。従って、患者に、本発明のバイオマーカーの上方調節に特徴的な適切なタンパク質またはマーカーを検出するための診断検査を行うことができる。診断という用語には、スクリーニングが含まれる。
「マーカー」または「バイオマーカー」という用語は、例えば、ｐ５３または増幅ＭＤＭ２の突然変異の存在もしくはｐ１４ＡＲＦの欠失（欠損）を同定するためのＤＮＡ組成の測定を含む遺伝子マーカー、または一般には本明細書で広範に論じられる本発明のバイオマーカーを含む。マーカーという用語はまた、前述のタンパク質のタンパク質レベル、タンパク質状態、およびｍＲＮＡレベルを含む、ＭＤＭ２／ｐ５３の上方調節または本明細書に概説されるバイオマーカーの上方調節もしくは下方調節に特徴的なマーカーを含む。遺伝子増幅には、７コピーを超えるもの、ならびに２～７コピーの増加が含まれる。
「減少した」、「枯渇した」または「低下した」という用語は、下方調節（すなわち、遺伝子コピーの減少）、細胞遺伝学的異常、および転写効果による発現の減少を含む、発現の低下または発現の減少を含む。従って、患者に、本発明のより低いレベルのバイオマーカーを検出するための診断検査を行うことができる。
診断試験およびスクリーニングは、一般に、腫瘍生検サンプル、血液サンプル（脱落した腫瘍細胞の単離および濃縮、または循環腫瘍ＤＮＡの単離）、脳脊髄液、血漿、血清、唾液、便生検、唾液、染色体分析、胸膜液、腹水、頬側スミア(buccal spears)、皮膚生検または尿から選択される生物学的サンプル（すなわち、体組織または体液）で行われる。
さらに、血液に基づく（系統的）循環腫瘍ＤＮＡ（ｃｔＤＮＡ）検査またはＮＧＳに基づく液体生検検査などの液体生検も、特に癌の検出または突然変異の特定に使用可能である。次世代シーケンシング（ＮＧＳ）を含む液体に基づく生検は、例えば、循環腫瘍細胞（ＣＴＣ）に対する全ゲノムシーケンシングまたは循環腫瘍ＤＮＡ（ｃｔＤＮＡ）の大規模並列シーケンシングにより、ＰＣＲおよび腫瘍生検の従来の検出方法を補完する。
１つの実施形態において、得られるサンプルは、血液サンプル、例えば、血漿または血清サンプル、特に、血清サンプルである。１つの実施形態において、得られるサンプルは、腫瘍生検サンプルである。
１つの実施形態において、通常、血清分離管に採取される血液は、医療検査室または臨床現場で分析される。第２の実施形態では、腫瘍は生検によって分析され、医療研究所で分析される。
スクリーニング方法には、限定するものではないが、逆転写酵素ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ－ＰＣＲ）、タンパク質分析、または蛍光ｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）などのｉｎ－ｓｉｔｕハイブリダイゼーションなどの標準的な方法が含まれる。
細胞遺伝学的異常、遺伝子増幅、欠失、タンパク質の下方調節、突然変異および上方調節の同定および分析方法は、当業者に既知である。スクリーニング方法は、限定するものではないが、従来のサンガーまたは次世代シーケンシング法によるＤＮＡ配列分析、逆転写酵素ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ－ＰＣＲ）、ＲＮＡシーケンシング（ＲＮアーゼｑ）、ナノストリングハイブリダイゼーション近接ＲＮＡ ｎＣｏｕｎｔｅｒアッセイ、または例えば蛍光ｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）などのｉｎ－ｓｉｔｕハイブリダイゼーション、または対立遺伝子特異的ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）などの標準的な方法を含み得る。さらに、タンパク質レベルを評価するための方法には、免疫組織化学または他のイムノアッセイが含まれる。従って、１つの実施形態において、患者サンプルにおいてタンパク質発現が分析される。別の実施形態では、患者サンプルにおいて、ＦＩＳＨなどの技術を用いて遺伝子発現、例えば、遺伝子異常が分析される。遺伝子コピーの変化を評価するための方法には、異常なコピー数を検出するマルチプレックスＰＣＲ法であるＭＬＰＡ（マルチプレックスライゲーション依存性プローブ増幅法(Multiplex Ligation-dependent Probe Amplification)）、遺伝子の増幅、獲得および欠失を検出することができる他のＰＣＲ技術など、細胞遺伝学研究室で慣用される技術が含まれる。
ＲＴ－ＰＣＲによるスクリーニングでは、腫瘍のｍＲＮＡレベルは、ｍＲＮＡのｃＤＮＡコピーを作り出した後にＰＣＲによりｃＤＮＡの増幅を行うことによって評価される。ＰＣＲ増幅の方法、プライマーの選択、および増幅の条件は、当業者に既知である。核酸操作およびＰＣＲは、例えば、Ausubel, F.M. et al.編, (2004) Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons Inc.、またはInnis, M.A. et al.編, (1990) PCR Protocols: a guide to methods and applications, Academic Press, San Diegoに記載されているように、標準的な方法によって行われる。拡散技術を含む反応および操作はまた、Sambrook et al., (2001), 第3版, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Pressに記載されている。あるいは、ＲＴ－ＰＣＲ（例えば、Ｒｏｃｈｅ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ）用の市販キットは、または米国特許第号４，６６６，８２８号；同第４，６８３，２０２号；同第４，８０１，５３１号；同第５，１９２，６５９号、同第５，２７２，０５７号、同第５，８８２，８６４号、および同第６，２１８，５２９号に示されているような方法が使用可能であり、これらは引用することにより本明細書の一部とされる。突然変異、例えば、本明細書で概説する遺伝子は、ＰＣＲによって決定することができる。１つの実施形態において、特定のプライマー対は市販されているか、または文献に記載されている通りである。
ｍＲＮＡ発現を評価するためのｉｎ－ｓｉｔｕハイブリダイゼーション技術の例は、蛍光ｉｎ－ｓｉｔｕハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）である（Angerer (1987) Meth. Enzymol., 152: 649参照）。
次世代シーケンシング（ＮＧＳ）、ＤＮＡシーケンシングまたはナノストリングが実施可能である。
一般に、ｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーションは、以下の主要工程を含んでなる：（１）分析する組織の固定；（２）標的核酸の接近性を高め、非特異的結合を低減するためのサンプルのプレハイブリダイゼーション処理；（３）生物学的構造または組織における核酸に対する核酸混合物のハイブリダイゼーション；（４）ハイブリダイゼーションで結合しなかった核酸断片を除去するためのハイブリダイゼーション後洗浄、および（５）ハイブリダイズした核酸断片の検出。このような適用で使用するプローブは一般に、例えば、放射性同位元素または蛍光リポーターで標識される。特定のプローブは、ストリンジェント条件下で標的核酸との特異的ハイブリダイゼーションを可能とするに十分な長さ、例えば、約５０、１００、または２００ヌクレオチド～約１０００またはそれを超えるヌクレオチドである。ＦＩＳＨを実施するための標準的方法は、Ausubel, F.M. et al.,編 (2004) Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons Inc and Fluorescence In Situ Hybridization: Technical Overview by John M. S. Bartlett in Molecular Diagnosis of Cancer, Methods and Protocols, 第2版; ISBN: 1-59259-760-2; March 2004, pps. 077-088; Series: Methods in Molecular Medicineに記載されている。
遺伝子発現プロファイリングの方法は、(DePrimo et al. (2003), BMC Cancer, 3:3)により記載されている。簡単に述べれば、プロトコールは、次の通りである：第１鎖ｃＤＮＡ合成をプライムするための（ｄＴ）２４オリゴマーを用いて全ＲＮＡから二本鎖ｃＤＮＡを合成し、その後、ランダムヘキサマープライマーを用いて第２鎖のｃＤＮＡ合成を行う。二本鎖ｃＤＮＡは、ビオチン化リボヌクレオチドを用いてｃＲＮＡのｉｎ ｖｉｔｒｏ転写のための鋳型として使用される。ｃＲＮＡは、Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ（サンタクララ、ＣＡ、ＵＳＡ）により記載されているプロトコールに従って化学的に断片化し、次いでヒトゲノムアレイ上で一晩ハイブリダイズさせた。あるいは、ＤＮＡマイクロアレイの一種である一塩基多型（ＳＮＰ）アレイを、集団内の多型を検出するために使用することができる。
さらに、検査キットは、ナノストリング技術またはｄｄＰＣＲを使用してもよい。
あるいは、ｍＲＮＡから発現されるタンパク質産物は、腫瘍サンプルの免疫組織化学（または他のイムノアッセイ）、マイクロタイタープレート用いた固相イムノアッセイ、ウエスタンブロット法、２次元ＳＤＳポリアクリルアミドゲル電気泳動、ＥＬＩＳＡ、フローサイトメトリーおよび例えば、キャピラリー電気泳動による特定のタンパク質の検出に関して当技術分野で公知の他の方法によってアッセイすることができる。検出方法は、部位特異的抗体の使用を含むと考えられる。当業者は、ＭＤＭ２およびｐ５３の上方調節の検出、ＭＤＭ２もしくはｐ５３変異体もしくは突然変異体、またはＭＤＭ２の負のレギュレーター（例えば、ｐ１４ＡＲＦ）もしくは本明細書に記載の遺伝子の欠損の検出のためのこのような周知の技術は総て、本例に適用可能であることを認識するであろう。特に、本明細書に記載の遺伝子のレベルは、免疫組織化学を使用して測定することができる。細胞質における発現は、腫瘍細胞の染色のよって評価することができる。いくつかの実施形態において、本発明のタンパク質バイオマーカーの一方または両方は、これらの技術を用いてアッセイされる。いくつかの実施形態において、１以上のバイオマーカー基質は、これらの技術を用いてアッセイされる。
タンパク質のレベル、特に、タンパク質の増大、現象、または異常なレベルは、標準的なタンパク質アッセイを用いて評価することができる。また、発現のレベルの上昇もしくは低下、または発現不足もしくは過剰発現は、組織サンプル、例えば、腫瘍組織で、Ｃｈｅｍｉｃｏｎ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌから得られるものなどのアッセイを用いてタンパク質レベルを測定することにより検出することもできる。対象とするタンパク質は、サンプル溶解液から免疫沈降させ、そのレベルを測定する。
遺伝子がＣＤＫＮ２ＡまたはＢＡＰ１である実施形態では、ＥＬＩＳＡ、免疫比濁法、急速免疫拡散、および視覚的凝集など、様々な分析方法が判定に利用可能であることが認識されるであろう。
例えばＩＦＮシグネチャーバイオマーカーに関して遺伝子発現を調べる実施形態では、判定に利用可能な様々な分析方法が存在することが認識されるであろう。
ＢＡＰ１欠損またはＣＤＫＮ２Ａ欠損の検出を含んでなる１つの実施形態において、このような検出は一般に、生検に対して検証済みのアッセイを用い、ＤＮＡレベル（すなわち、ＤＮＡシーケンシング）、ＲＮＡ（すなわち、ｑＰＣＲ、遺伝子アレイ、エキソームシーケンシングなど）またはタンパク質（すなわち、免疫組織化学）レベルで行うことができる。別の実施形態において、ＢＡＰ１欠損またはＣＤＫＮ２Ａ欠損の検出は、逆相タンパク質アレイ、ウエスタンブロット法、半定量的または定量的ＩＨＣの１以上を含んでなる。
免疫組織化学（ＩＨＣ）は、バイオマーカー検出のための重要な技術である。第１にそれは、検査した癌組織の組織学的に関連する領域におけるバイオマーカーの発現の直接的可視化を可能とする。第二に、ＩＨＣは標準的な方法で処理されたＦＦＰＥ組織切片で実行され、臨床的に利用可能な標本でバイオマーカーアッセイを実行できるようにする。第三に、検証済みのＩＨＣアッセイは、臨床診療に容易に実装することができる。例えば、ＰＤ－Ｌ１、ＨＥＲ２およびＡＬＫを検出するためのアッセイなど、臨床的に使用される複数の検証済みＩＨＣアッセイがある(https://www.fda.gov/medical-devices/vitro-diagnostics/list-cleared-or-approved-companion-diagnostic-devices-vitro-and-imaging-tools)。従来、病理学者はＩＨＣデータを視覚的にスコア化していた。例えば、ＨＳＣＯＲＥの計算では、各強度レベルで染色された面積のパーセンテージに染色の加重強度（例えば、１、２、または３；０は染色なし、１は弱い染色、２は中程度の染色および３は強い染色）を乗じたものの合計が生成される[McCarty et al: Cancer Res 1986, 46:4244s-4248s]。アッセイ検証の目的で、これらの分析は、染色されたＴＭＡ切片に配列された標本に対して行われる場合が多く、統計的に厳密な試験のために十分に多数の標本を提示することができる。組織標本は非常に少数のスライド上の組織コアによって適切に提示され、ＩＨＣコストおよび組織の使用を最小限に抑え、観察者内、観察者間、および研究所間の研究を促進する。対象とする画像領域（例えば、組織標本の癌領域）を分類し、それらの領域内のＩＨＣ染色強度を定量化するためのコンピューター支援方法も、データを作成するために利用可能である。
このような技術は、本明細書に記載の他の遺伝子の検出にも等しく適用可能であることが分かるであろう。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の遺伝子の増大したレベルの検出は、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）アッセイ、または遺伝子に特異的な核酸プローブとの直接核酸シーケンシングまたはハイブリダイゼーションを含んでなる。
従って、これらの技術は総て、本発明のＭＤＭ２アンタゴニストによる処置に特に適した腫瘍を特定するために使用することもできる。
ＭＤＭ２／ｐ５３阻害剤による刺激に対する応答を評価するために、適当であれば、例えば癌患者における循環白血病細胞の測定などのｅｘ ｖｉｖｏ機能アッセイを利用することもできる。
従って、本発明のさらなる側面において、スクリーニングされ、罹患している、または罹患しているリスクがあると判定された患者の病状または病態の治療または予防のための医薬品を製造するためのＭＤＭ２アンタゴニストの使用が含まれる。ＭＤＭ２／ｐ５３阻害剤による処置に感受性があると思われる疾患または病態に罹患している、または罹患しているリスクがある。
本発明の別の側面として、以下の遺伝子ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＲＳＡＤ２、ＭＸ１、ＢＡＴＦ２、ＩＦＩ４４Ｌ、ＩＦＩＴＭ１、ＩＳＧ１５、ＣＭＰＫ２、ＩＦＩ２７、ＣＤ７４、ＩＦＩＨ１、ＣＣＲＬ２、ＩＦＩ４４、ＨＥＲＣ６、ＩＳＧ２０、ＩＦＩＴ３、ＨＬＡ－Ｃ、ＯＡＳ１、ＩＦＩ３５、ＩＲＦ９、ＥＰＳＴＩ１、ＵＳＰ１８、ＢＳＴ２、ＣＳＦ１、Ｃ１Ｓ、ＤＨＸ５８、ＴＲＩＭ１４、ＯＡＳＬ、ＩＲＦ７、ＬＧＡＬＳ３ＢＰ、ＤＤＸ６０、ＬＡＰ３、ＬＡＭＰ３、ＰＡＲＰ１２、ＰＡＲＰ９、ＳＰ１１０、ＰＬＳＣＲ１、ＷＡＲＳ、ＳＴＡＴ１、ＩＲＦ３、ＩＲＦ５、ＭＳＣ、ＪＵＮ、ＳＰＩ１、ＩＲＦ１、ＣＯＭＭＤ３－ＢＭＩ１、ＳＴＡＴ２、ＲＵＮＸ３、ＳＲＥＢＦ１、ＦＬＩ１および／またはＢＲＣＡ１のうち１以上のレベルの上昇、および／またはＢＡＰ１欠損および／またはＣＤＫＮ２Ａ欠損を有する部分集団から選択される患者における癌の予防または治療に使用するためのＭＤＭ２アンタゴニストが含まれる。
本発明の別の側面には、ｐ５３野生型、ならびに以下のＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＲＳＡＤ２、ＭＸ１、ＢＡＴＦ２、ＩＦＩ４４Ｌ、ＩＦＩＴＭ１、ＩＳＧ１５、ＣＭＰＫ２、ＩＦＩ２７、ＣＤ７４、ＩＦＩＨ１、ＣＣＲＬ２、ＩＦＩ４４、ＨＥＲＣ６、ＩＳＧ２０、ＩＦＩＴ３、ＨＬＡ－Ｃ、ＯＡＳ１、ＩＦＩ３５、ＩＲＦ９、ＥＰＳＴＩ１、ＵＳＰ１８、ＢＳＴ２、ＣＳＦ１、Ｃ１Ｓ、ＤＨＸ５８、ＴＲＩＭ１４、ＯＡＳＬ、ＩＲＦ７、ＬＧＡＬＳ３ＢＰ、ＤＤＸ６０、ＬＡＰ３、ＬＡＭＰ３、ＰＡＲＰ１２、ＰＡＲＰ９、ＳＰ１１０、ＰＬＳＣＲ１、ＷＡＲＳ、ＳＴＡＴ１、ＩＲＦ３、ＩＲＦ５、ＭＳＣ、ＪＵＮ、ＳＰＩ１、ＩＲＦ１、ＣＯＭＭＤ３－ＢＭＩ１、ＳＴＡＴ２、ＲＵＮＸ３、ＳＲＥＢＦ１、ＦＬＩ１および／またはＢＲＣＡ１のうち１以上のレベルの上昇、ならびに／またはＢＡＰ１欠損ならびに／またはＣＤＫＮ２Ａ欠損を有する部分集団から選択される患者における癌の予防または治療において使用するためのＭＤＭ２アンタゴニストが含まれる。
本発明の別の側面としては、ｐ１４ＡＲＦなどの負のＭＤＭ２レギュレーターの欠損、以下のＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＲＳＡＤ２、ＭＸ１、ＢＡＴＦ２、ＩＦＩ４４Ｌ、ＩＦＩＴＭ１、ＩＳＧ１５、ＣＭＰＫ２、ＩＦＩ２７、ＣＤ７４、ＩＦＩＨ１、ＣＣＲＬ２、ＩＦＩ４４、ＨＥＲＣ６、ＩＳＧ２０、ＩＦＩＴ３、ＨＬＡ－Ｃ、ＯＡＳ１、ＩＦＩ３５、ＩＲＦ９、ＥＰＳＴＩ１、ＵＳＰ１８、ＢＳＴ２、ＣＳＦ１、Ｃ１Ｓ、ＤＨＸ５８、ＴＲＩＭ１４、ＯＡＳＬ、ＩＲＦ７、ＬＧＡＬＳ３ＢＰ、ＤＤＸ６０、ＬＡＰ３、ＬＡＭＰ３、ＰＡＲＰ１２、ＰＡＲＰ９、ＳＰ１１０、ＰＬＳＣＲ１、ＷＡＲＳ、ＳＴＡＴ１、ＩＲＦ３、ＩＲＦ５、ＭＳＣ、ＪＵＮ、ＳＰＩ１、ＩＲＦ１、ＣＯＭＭＤ３－ＢＭＩ１、ＳＴＡＴ２、ＲＵＮＸ３、ＳＲＥＢＦ１、ＦＬＩ１および／またはＢＲＣＡ１のうち１以上のレベルの上昇、および／またはＢＡＰ１欠損および／またはＣＤＫＮ２Ａ欠損を有する患者における癌の予防または治療のためのＭＤＭ２アンタゴニストが含まれる。
循環バイオマーカーと組み合わせた血管正常化のＭＲＩ判定（例えば、ＭＲＩグラジエントエコー、スピンエコー、およびコントラスト増強を使用して、血液量、相対血管サイズ、および血管透過性を測定する）を使用して、本発明において使用する化合物による処置に適した患者を特定することもできる。
従って、本発明のさらなる側面は、ＭＤＭ２／ｐ５３によって媒介される病状または病態の診断および治療のための方法であり、この方法は、（ｉ）患者が罹患している、または罹患している可能性のある疾患または病態がＭＤＭ２／ｐ５３阻害剤による処置に感受性があると思われるものかどうかを判定するために患者をスクリーニングすること、および（ｉｉ）患者の疾患または病態にそのような感受性があることが示された場合、その後、本明細書で定義されるＭＤＭ２アンタゴニストおよびそのサブグループまたは例を患者に投与することを含んでなる。
１つの実施形態において、本発明の方法は、ＭＤＭファミリーメンバー（例えば、ＭＤＭ２および／またはＭＤＭｘ）のうち１以上の過剰発現を有する患者をスクリーニングする工程をさらに含んでなる。
１つの実施形態において、本発明の方法は、ＭＤＭ２の過剰発現をもたらす細胞遺伝学的異常を有する患者、例えば、負のレギュレーターｐ１４ＡＲＦの欠損を有するとして選択された患者をスクリーニングする工程をさらに含んでなる。
１つの実施形態において、患者から得られるサンプルは、本明細書に記載の遺伝子のレベルを決定するためにプライマー、抗体、基質またはプローブと接触させる。
１つの実施形態において、この方法は、（ｉ）患者サンプルをプライマー、抗体、基質またはプローブと接触させること、および（ｉｉ）本明細書に記載の遺伝子のレベルを決定することを含んでなる。
基礎レベルは、抗体、例えば蛍光プローブに結合した抗体で、未処理細胞の細胞内染色を行うことによって分析することができる。本明細書に記載のバイオマーカーに対する抗体は、ある範囲の供給者から市販されている。特に、使用される抗体は、ＦＤＡ承認のｉｎ ｖｉｔｒｏ診断キット（ＩＶＤ）の一部であってもよい。
１つの実施形態において、この方法は、（ｉ）患者サンプルを抗体に接触させること、および（ｉｉ）本明細書に記載の１以上のバイオマーカーのレベルを決定することを含んでなる。
１つの実施形態において、この方法は、（ｉ）患者サンプルを抗体と接触させること、および（ｉｉ）本明細書に記載の１以上のバイオマーカーのレベルを評価するために核局在のレベルを決定することを含んでなる。
適当であれば、核局在のレベルは、抗体を用い、免疫組織化学または免疫蛍光を使用して決定することができる。
ＢＡＰ１またはＣＤＫＮ２Ａの欠損をもたらす突然変異は、逆相タンパク質アレイ、ウエスタンブロット法、半定量的もしくは定量的ＩＨＣ、またはＤＮＡシーケンシングを用いて検出することができる。１つの実施形態において、この方法は、（ｉ）患者サンプルを抗突然変異体抗体と接触させること、ならびに（ｉｉ）患者腫瘍がそのＢＡＰ１欠損および／またはＣＤＫＮ２Ａ欠損であると判定することを含んでなる。１つの実施形態において、この方法は、（ｉ）患者サンプルを抗突然変異体抗体と接触させること、および（ｉｉ）ＢＡＰ１またはＣＤＫＮ２Ａ（またはその欠損）のレベルを決定することを含んでなる。
ＢＡＰ１またはＣＤＫＮ２Ａの欠損および突然変異の検出は、患者サンプル、例えば、腫瘍生検からのＤＮＡの抽出、適当なプライマーを用いたＰＣＲおよびＤＮＡシーケンシングの増幅によって行うことができる。ＰＣＲプライマーは、設計可能であるか、または市販されている。突然変異アレイキットも市販されている。
１つの実施形態において、この方法は、（ｉ）患者サンプルを１以上のＢＡＰ１および／またはＣＤＫＮ２Ａ ＰＣＲプライマーと接触させること、ならびに（ｉｉ）ＢＡＰ１および／またはＣＤＫＮ２Ａの突然変異または欠失の有無を判定することを含んでなる。別の実施形態において、この方法の工程（ｉ）は、患者サンプルを１以上のバイオマーカー基質の１以上のＰＣＲプライマーと接触させることを含んでなる。
１つの実施形態において、この方法は、（ｉ）患者サンプルをＢＡＰ１抗体および／またはＣＤＫＮ２Ａ抗体と接触させること、ならびに（ｉｉ）ＢＡＰ１および／またはＣＤＫＮ２Ａの突然変異または欠失の有無を決定することを含んでなる。別の実施形態において、この方法の工程（ｉ）は、患者サンプルをバイオマーカー基質抗体と接触させることを含んでなる。
タンパク質レベルは、ＥＬＩＳＡキットを使用して決定することができる。患者サンプルで使用するためのＥＬＩＳＡキットは、臨床現場で血液化学を評価するために使用することができる。これらは、タンパク質に特異的な抗体、例えば、抗ＢＡＰ１もしくは抗ＣＤＫＮ２Ａなどの抗バイオマーカー抗体、またはコンジュゲート抗体を利用する。特に、使用される抗体は、ＦＤＡ承認ｉｎ ｖｉｔｒｏ診断キットの一部である。１つの実施形態において、レベルは、Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｆｏｒ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（ＡＣＢ）によって定義される基準に従う検査に従って決定される。
１つの実施形態において、この方法は、（ｉ）患者サンプルを抗体と接触させること、および（ｉｉ）本明細書に記載の遺伝子からタンパク質のレベルを決定することを含んでなる。
特に、サンプルは、レベルを定量する条件下で接触させる。
例えば、上記の接触工程で、サンプルは一般にバッファーの存在下、プライマー、プローブ、基質または抗体と接触させる。基質は例えば、蛍光プローブであり得る。
患者の選択
本発明によるＭＤＭ２アンタゴニストによる処置のために選択された患者は、前節に記載される方法に従って、ＢＡＰ１、ＣＤＫＮ２Ａ、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＲＳＡＤ２、ＭＸ１、ＢＡＴＦ２、ＩＦＩ４４Ｌ、ＩＦＩＴＭ１、ＩＳＧ１５、ＣＭＰＫ２、ＩＦＩ２７、ＣＤ７４、ＩＦＩＨ１、ＣＣＲＬ２、ＩＦＩ４４、ＨＥＲＣ６、ＩＳＧ２０、ＩＦＩＴ３、ＨＬＡ－Ｃ、ＯＡＳ１、ＩＦＩ３５、ＩＲＦ９、ＥＰＳＴＩ１、ＵＳＰ１８、ＢＳＴ２、ＣＳＦ１、Ｃ１Ｓ、ＤＨＸ５８、ＴＲＩＭ１４、ＯＡＳＬ、ＩＲＦ７、ＬＧＡＬＳ３ＢＰ、ＤＤＸ６０、ＬＡＰ３、ＬＡＭＰ３、ＰＡＲＰ１２、ＰＡＲＰ９、ＳＰ１１０、ＰＬＳＣＲ１、ＷＡＲＳ、ＳＴＡＴ１、ＩＲＦ３、ＩＲＦ５、ＭＳＣ、ＪＵＮ、ＳＰＩ１、ＩＲＦ１、ＣＯＭＭＤ３－ＢＭＩ１、ＳＴＡＴ２、ＲＵＮＸ３、ＳＲＥＢＦ１、ＦＬＩ１および／またはＢＲＣＡ１に関して検査または評価されることが認識されるであろう。
例えば、このような選択された患者は、
ＢＡＰ１発現の減少もしくは低下；および／または
ＣＤＫＮ２Ａ発現の減少もしくは低下；および／または
ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＲＳＡＤ２、ＭＸ１、ＢＡＴＦ２、ＩＦＩ４４Ｌ、ＩＦＩＴＭ１、ＩＳＧ１５、ＣＭＰＫ２、ＩＦＩ２７、ＣＤ７４、ＩＦＩＨ１、ＣＣＲＬ２、ＩＦＩ４４、ＨＥＲＣ６、ＩＳＧ２０、ＩＦＩＴ３、ＨＬＡ－Ｃ、ＯＡＳ１、ＩＦＩ３５、ＩＲＦ９、ＥＰＳＴＩ１、ＵＳＰ１８、ＢＳＴ２、ＣＳＦ１、Ｃ１Ｓ、ＤＨＸ５８、ＴＲＩＭ１４、ＯＡＳＬ、ＩＲＦ７、ＬＧＡＬＳ３ＢＰ、ＤＤＸ６０、ＬＡＰ３、ＬＡＭＰ３、ＰＡＲＰ１２、ＰＡＲＰ９、ＳＰ１１０、ＰＬＳＣＲ１、ＷＡＲＳ、ＳＴＡＴ１、ＩＲＦ３、ＩＲＦ５、ＭＳＣ、ＪＵＮ、ＳＰＩ１、ＩＲＦ１、ＣＯＭＭＤ３－ＢＭＩ１、ＳＴＡＴ２、ＲＵＮＸ３、ＳＲＥＢＦ１、ＦＬＩ１およびＢＲＣＡ１の１つ、２つ、３つ、４つ、５つもしくはそれを超えるものの発現の増大もしくは高い発現
を示す。
１つの実施形態において、選択された患者は、癌、特に、ＴＰ５３野生型腫瘍の少なくとも１つの症状を示す、または呈する。
１つの実施形態において選択された癌患者は、事前にＭＤＭ２アンタゴニスト処置を受けていない。１つの実施形態において、選択された患者は、ＭＤＭ２アンタゴニストによる療法に従前には応答していない。
いくつかの実施形態において、核酸発現プロファイル（例えば、ＩＦＮ遺伝子シグネチャー）は、ＮａｎｏＳｔｒｉｎｇ ｎＣｏｕｎｔｅｒなどのＰＣＲ、ＨＴＧ ＥｄｇｅＳｅｑまたは定量的遺伝子発現アッセイによって決定される。いくつかの実施形態において、タンパク質発現プロファイル（例えば、ＢＡＰ１および／またはＣＤＫＮ２Ａ）は、イムノアッセイによって決定される。
遺伝子シグネチャー（ＩＦＮ）
１つの実施形態において、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＲＳＡＤ２、ＭＸ１、ＢＡＴＦ２、ＩＦＩ４４Ｌ、ＩＦＩＴＭ１、ＩＳＧ１５、ＣＭＰＫ２、ＩＦＩ２７、ＣＤ７４、ＩＦＩＨ１、ＣＣＲＬ２、ＩＦＩ４４、ＨＥＲＣ６、ＩＳＧ２０、ＩＦＩＴ３、ＨＬＡ－Ｃ、ＯＡＳ１、ＩＦＩ３５、ＩＲＦ９、ＥＰＳＴＩ１、ＵＳＰ１８、ＢＳＴ２、ＣＳＦ１、Ｃ１Ｓ、ＤＨＸ５８、ＴＲＩＭ１４、ＯＡＳＬ、ＩＲＦ７、ＬＧＡＬＳ３ＢＰ、ＤＤＸ６０、ＬＡＰ３、ＬＡＭＰ３、ＰＡＲＰ１２、ＰＡＲＰ９、ＳＰ１１０、ＰＬＳＣＲ１、ＷＡＲＳ、ＳＴＡＴ１、ＩＲＦ３、ＩＲＦ５、ＭＳＣ、ＪＵＮ、ＳＰＩ１、ＩＲＦ１、ＣＯＭＭＤ３－ＢＭＩ１、ＳＴＡＴ２、ＲＵＮＸ３、ＳＲＥＢＦ１、ＦＬＩ１および／またはＢＲＣＡ１のうち１以上のＲＮＡレベルは、癌に罹患していない正常から得られた対照サンプルにおいて前記ＲＮＡの量に比べて上昇している。
別の実施形態において、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＲＳＡＤ２、ＭＸ１、ＢＡＴＦ２、ＩＦＩ４４Ｌ、ＩＦＩＴＭ１、ＩＳＧ１５、ＣＭＰＫ２、ＩＦＩ２７、ＣＤ７４、ＩＦＩＨ１、ＣＣＲＬ２、ＩＦＩ４４、ＨＥＲＣ６、ＩＳＧ２０、ＩＦＩＴ３、ＨＬＡ－Ｃ、ＯＡＳ１、ＩＦＩ３５、ＩＲＦ９、ＥＰＳＴＩ１、ＵＳＰ１８、ＢＳＴ２、ＣＳＦ１、Ｃ１Ｓ、ＤＨＸ５８、ＴＲＩＭ１４、ＯＡＳＬ、ＩＲＦ７、ＬＧＡＬＳ３ＢＰ、ＤＤＸ６０、ＬＡＰ３、ＬＡＭＰ３、ＰＡＲＰ１２、ＰＡＲＰ９、ＳＰ１１０、ＰＬＳＣＲ１、ＷＡＲＳ、ＳＴＡＴ１、ＩＲＦ３、ＩＲＦ５、ＭＳＣ、ＪＵＮ、ＳＰＩ１、ＩＲＦ１、ＣＯＭＭＤ３－ＢＭＩ１、ＳＴＡＴ２、ＲＵＮＸ３、ＳＲＥＢＦ１、ＦＬＩ１および／またはＢＲＣＡ１のＲＮＡレベルは、腫瘍において、同じ患者から得られた非腫瘍サンプルの前記ＲＮＡの量に比べて上昇している。
１つの実施形態において、癌は、ＣＸＣＬ１０またはＣＸＣＬ１１の発現の増大を示す。
別の実施形態では、癌は、ＩＲＦ７、ＩＦＩＴＭ１、ＩＲＦ９、ＭＸ１、またはＩＦＩ３５の発現の増大を示す。
別の実施形態では、癌は、ＩＲＦ７、ＩＦＩＴＭ１、ＩＲＦ９、ＭＸ１、ＩＦＩ３５、ＣＸＣＬ１０またはＣＸＣＬ１１のうち１以上の、例えば、２つ以上の発現の増大を示す。
いくつかの実施形態において、レベルの上昇は、ＭＤＭ２阻害剤非応答対象からのサンプルにおいて決定されるＲＮＡの量と比較したものである。
１つの実施形態において、正常レベルと比較した上昇または増大である。
正常値上限（ＵＬＮ）は、全範囲の９５％のレベルを指す。それは正常集団の９５パーセントが入る（すなわち、９５％予測区間）値のセットである。
１つの実施形態において、レベルの上昇は、対照サンプル、正常値上限（ＵＬＮ）または前記患者から採取したサンプルと＞１倍の差、例えば、１．５、２．０、２．５、３．０、３．５、４．０、４．５、５．０、５．５、６．０、６．５、７．０、７．５、８．０、８．５、９．０、９．５、１０、１０．５、１１、１１．５、１２、１２．５、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００倍またはその間の任意の範囲の差である。１つの実施形態において、レベルの上昇は、対照サンプルまたはＵＬＮの１～５０倍の差である。１つの実施形態において、レベルの上昇は、極めて高く、対照サンプル、ＵＬＮまたは前記患者から採取したサンプルと例えば＞１０倍の差、例えば、１０、１０．５、１１、１１．５、１２、１２．５、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１０００またはその間の任意の範囲の倍率差である。１つの実施形態において、レベルの上昇は、対照サンプルまたはＵＬＮと１０～１０００倍の差である。１つの実施形態において、レベルの上昇は、対照サンプルの２～１０倍（例えば、５倍）の差である。
その倍数の違いは、疾患個体と正常個体（参照値または対照試料）の間で決定することができる。この参照値は、正常個体から計算するか、または供試するサンプルタイプを除くサンプルのプールに基づいて計算することができる （例えば、ＴＰ５３野生およびＣＤＫＮ２ＡまたはＢＡＰ１の欠損）。１つの実施形態において、正常組織（供給源ＧＴＥｘ；Nat Biotechnol. 2017 Apr 11;35(4):314-316）と患者中皮腫サンプル（供給源：ＴＣＧＡ）のインターフェロン遺伝子発現の差は、５倍を超え０．０５倍（ｌｏｇ２スケール）であり、特に、遺伝子セットには平均１．５倍（ｌｏｇ２スケール）の増大がある。
１つの実施形態において、ＲＮＡの濃度は、ｒｔＰＣＲおよび／またはマイクロアレイおよび／またはナノストリングによって決定される。各アッセイには、特定のアッセイ方法に関連する「正常値上限」（ＵＬＮ）値があるのが一般的である。次に、そのようなＵＬＮは、一般に、ＲＮＡ濃度を測定するための特定のアッセイ法を使用して、十分なサンプルサイズの正常健康対象から決定される。ＵＬＮは通常、なお正常範囲内（例えば、平均値の２標準偏差以内）と考えられる最高のＲＮＡ濃度として決定される。このようなＵＬＮ値は、濃度を測定するために使用される特定のアッセイ方法によって異なるので、それぞれの特定のアッセイには、そのアッセイ方法に関連付けられた固有の ＵＬＮ値がある。
本明細書に示されるように、癌患者がＭＤＭ２アンタゴニスト治療から恩恵を受ける可能性があるかどうかを予測するために濃度を使用することができる。
ＢＡＰ１およびＣＤＫＮ２Ａアッセイ
１つの実施形態において、ＢＡＰ１および／ＣＤＫＮ２Ａの１以上のタンパク質レベルは、癌に罹患していない正常対象から得られた対照サンプルにおける前記タンパク質の量に比べて減少している。
別の実施形態において、ＢＡＰ１および／ＣＤＫＮ２Ａのタンパク質レベルは、同じ患者から得られた初期のサンプル中の前記タンパク質の量に比べて減少している。
１つの実施形態において、それは正常レベルに比べて低下または減少している。
正常上限値（ＵＬＮ）は、全範囲の９５％のレベルを指す。それは正常集団の９５パーセントが入る（すなわち、９５％予測区間）値のセットである。
１つの実施形態において、レベルの低下は、対照サンプル、正常値上限（ＵＬＮ）または前記患者から採取したサンプルと＞１倍の差、例えば、０．７５、０．５、０．４、０．３、０．２、０．１５、０．１、０．０９、０．０８、０．０７、０．０６、０．０５、０．０４、０．０３、０．０２もしくは０．０１またはその間の任意の範囲の差である。１つの実施形態において、レベルの低下は、対照サンプルまたはＵＬＮと１～０．０１倍の差である。１つの実施形態において、レベルの低下は極めて低く、対照サンプル、ＵＬＮまたは前記患者から採取したサンプルと例えば＞０．０１倍の差、例えば、０．００１またはその間の任意の範囲の倍率差である。１つの実施形態において、レベルの低下は０であり、すなわち、全く存在しない。
別の実施形態では、ＢＡＰ１またはＣＤＫＮ２Ａレベルは、免疫組織化学によって決定される。
タンパク質、タンパク質複合体またはプロテオミクスマーカーは、当技術分野で公知の様々な方法によって特異的に同定および／または定量することができ、単独でまたは組み合わせて使用することができる。免疫学的または抗体に基づく技術としては、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、ウエスタンブロット法、免疫蛍光、マイクロアレイ、いくつかのクロマトグラフィー技術（すなわち、免疫アフィニティークロマトグラフィー）、フローサイトメトリー、免疫沈降などが含まれる。このような方法は、対象とするタンパク質またはタンパク質複合体に関連する特定のエピトープまたはエピトープの組合せに対する１または複数の抗体の特異性に基づく。非免疫学的方法としては、タンパク質またはタンパク質複合体それ自体の物理的特徴に基づくものが含まれる。このような方法の例としては、電気泳動、いくつかのクロマトグラフィー技術（例えば、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、高速タンパク質液体クロマトグラフィー（ＦＰＬＣ）、アフィニティークロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、サイズ排除クロマトグラフィーなど）、質量分析、シーケンシング、プロテアーゼ消化などが含まれる。このような方法は、質量、電荷、疎水性または親水性に基づき、これはタンパク質またはタンパク質複合体のアミノ酸相補物、およびアミノ酸の特定の配列から導かれる。
１つの実施形態において、ＢＡＰ１またはＣＤＫＮ２Ａの発現はない。低レベルのＢＡＰ１またはＣＤＫＮ２Ａを有するサンプルは、ＢＡＰ１陰性またはＣＤＫＮ２Ａ陰性、例えば、ＢＡＰ１欠損またはＣＤＫＮ２Ａ欠損として特定することができる。
１つの実施形態において、ＢＡＰ１またはＣＤＫＮ２Ａの欠損は、突然変異分析、例えば、ＤＮＡシーケンシングによって評価される。
ＢＡＰ１またはＣＤＫＮ２Ａの細胞質発現ならびに核発現のレベルもまた決定することができる。ＢＡＰ１タンパク質またはＣＤＫＮ２Ａタンパク質の核局在は、細胞内のマーカーである。核発現のレベルは、組織学を用い、抗体（例えば、バイオマーカーに対するモノクローナル抗ヒト抗体）で処理した後に得られた陽性細胞のパーセンテージを表すスコア（範囲０～１００）によってスコア化することができる。免疫染色発現スコアを作成することができる。
細胞質のＢＡＰ１および／またはＣＤＫＮ２Ａのレベルはまた、免疫組織化学または免疫蛍光を用いて測定することもできる。
１つの実施形態において、ＢＡＰ１および／またはＣＤＫＮ２Ａのうち１以上のレベルは、癌に罹患していない正常対象から得られた対照サンプル中の前記タンパク質の量に比べて低下している。
１つの実施形態において、ＢＡＰ１および／またはＣＤＫＮ２Ａのうち１以上のレベルは、同じ患者から得られた非腫瘍サンプル中の前記タンパク質の量に比べて腫瘍では低下している。
１つの実施形態において、ＢＡＰ１および／またはＣＤＫＮ２Ａのうち１以上の発現レベルは、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．９％または１００％低下している。発現の１００％の低下は、完全な低下、すなわち、全面的な欠損である。いくつかの実施形態では、少なくとも５０％の低下が提供される。いくつかの実施形態では、少なくとも７５％の低下が提供される。
いくつかの実施形態では、少なくとも８０％の低下が提供される。
いくつかの実施形態では、少なくとも９５％、例えば、少なくとも９９％の低下が提供される。
定量方法
本発明は、ＭＤＭ２アンタゴニストによる処置のために患者を特定することに関する。いくつかの実施形態において、この方法は、少なくとも
（ａ）患者からのサンプルをＢＡＰ１および／またはＣＤＫＮ２Ａに対する抗体（または１以上のＢＡＰ１および／またはＣＤＫＮ２Ａ基質）と接触させる工程；
（ｂ）前記サンプルに対してＥＬＩＳＡまたは免疫組織化学アッセイを実施する工程；
（ｃ）ＢＡＰ１および／またはＣＤＫＮ２Ａのレベルを決定する工程；ならびに
（ｄ）（ｉ）ＢＡＰ１および／もしくはＣＤＫＮ２Ａのレベルが正常値上限（ＵＬＮ）比べて低下している；または（ｉｉ）ＢＡＰ１および／もしくはＣＤＫＮ２Ａが存在しない；または（ｉｉｉ）ＢＡＰ１および／もしくはＣＤＫＮ２Ａのレベルが正常値上限（ＵＬＮ）に比べて低い場合に、前記患者をＭＤＭ２アンタゴニストによる処置の候補として特定する工程
を含んでなる。
他の実施形態において、ＭＤＭ２アンタゴニストによる処置のために患者を特定するための方法は、
（ａ）患者からのサンプルをＢＡＰ１に対する抗体（および／もしくは１以上のＢＡＰ１基質）と接触させて、タンパク質発現のレベルを決定すること；ならびに／または
（ｂ）患者からのサンプルをＣＤＫＮ２Ａに対する抗体（および／もしくは１以上のＢＡＰ１基質）と接触させて、タンパク質発現のレベルを決定すること；
（ｃ）ＢＡＰ１および／もしくはＣＤＫＮ２Ａのレベルが正常値上限（ＵＬＮ）に比べて低下している場合に、前記患者をＭＤＭ２アンタゴニストで処置すること
を含んでなる。
その他の方法において、患者において癌を治療するための方法は、
（ａ）患者からのサンプルを複数のオリゴヌクレオチドプライマーと接触させること、前記複数のプライマーは、以下の遺伝子：ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＲＳＡＤ２、ＭＸ１、ＢＡＴＦ２、ＩＦＩ４４Ｌ、ＩＦＩＴＭ１、ＩＳＧ１５、ＣＭＰＫ２、ＩＦＩ２７、ＣＤ７４、ＩＦＩＨ１、ＣＣＲＬ２、ＩＦＩ４４、ＨＥＲＣ６、ＩＳＧ２０、ＩＦＩＴ３、ＨＬＡ－Ｃ、ＯＡＳ１、ＩＦＩ３５、ＩＲＦ９、ＥＰＳＴＩ１、ＵＳＰ１８、ＢＳＴ２、ＣＳＦ１、Ｃ１Ｓ、ＤＨＸ５８、ＴＲＩＭ１４、ＯＡＳＬ、ＩＲＦ７、ＬＧＡＬＳ３ＢＰ、ＤＤＸ６０、ＬＡＰ３、ＬＡＭＰ３、ＰＡＲＰ１２、ＰＡＲＰ９、ＳＰ１１０、ＰＬＳＣＲ１、ＷＡＲＳ、ＳＴＡＴ１、ＩＲＦ３、ＩＲＦ５、ＭＳＣ、ＪＵＮ、ＳＰＩ１、ＩＲＦ１、ＣＯＭＭＤ３－ＢＭＩ１、ＳＴＡＴ２、ＲＵＮＸ３、ＳＲＥＢＦ１、ＦＬＩ１およびＢＲＣＡ１のうちいずれか１以上に対する少なくとも１対のオリゴヌクレオチドプライマーを含んでなる；ならびに
（ｂ）前記少なくとも１つの遺伝子の発現レベルが正常値上限（ＵＬＮ）に比べて高い場合に、前記患者をＭＤＭ２アンタゴニストで処置すること
を含んでなる。
また、ＭＤＭ２アンタゴニストによる処置のために患者を特定または選択するための方法も提供され、その方法は、
（ａ）患者からのサンプルをＢＡＰ１に対する抗体および／もしくはＣＤＫＮ２Ａに対する抗体と接触させて、タンパク質発現のレベルを決定すること；ならびに／または
（ｂ）患者からのサンプルをＢＡＰ１および／もしくはＣＤＫＮ２Ａに対する抗体と接触させて、タンパク質発現のレベルを決定すること；ならびに／または
（ｃ）患者からのサンプルを複数のオリゴヌクレオチドプライマーと接触させること、前記複数のプライマーは、以下の遺伝子：ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＲＳＡＤ２、ＭＸ１、ＢＡＴＦ２、ＩＦＩ４４Ｌ、ＩＦＩＴＭ１、ＩＳＧ１５、ＣＭＰＫ２、ＩＦＩ２７、ＣＤ７４、ＩＦＩＨ１、ＣＣＲＬ２、ＩＦＩ４４、ＨＥＲＣ６、ＩＳＧ２０、ＩＦＩＴ３、ＨＬＡ－Ｃ、ＯＡＳ１、ＩＦＩ３５、ＩＲＦ９、ＥＰＳＴＩ１、ＵＳＰ１８、ＢＳＴ２、ＣＳＦ１、Ｃ１Ｓ、ＤＨＸ５８、ＴＲＩＭ１４、ＯＡＳＬ、ＩＲＦ７、ＬＧＡＬＳ３ＢＰ、ＤＤＸ６０、ＬＡＰ３、ＬＡＭＰ３、ＰＡＲＰ１２、ＰＡＲＰ９、ＳＰ１１０、ＰＬＳＣＲ１、ＷＡＲＳ、ＳＴＡＴ１、ＩＲＦ３、ＩＲＦ５、ＭＳＣ、ＪＵＮ、ＳＰＩ１、ＩＲＦ１、ＣＯＭＭＤ３－ＢＭＩ１、ＳＴＡＴ２、ＲＵＮＸ３、ＳＲＥＢＦ１、ＦＬＩ１およびＢＲＣＡ１のうちいずれか１以上に対する少なくとも１対のオリゴヌクレオチドプライマーを含んでなる；
（ｄ）ＢＡＰ１および／またはＣＤＫＮ２Ａのレベルが正常値上限（ＵＬＮ）に比べて低下し、および／または以下の遺伝子：ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＲＳＡＤ２、ＭＸ１、ＢＡＴＦ２、ＩＦＩ４４Ｌ、ＩＦＩＴＭ１、ＩＳＧ１５、ＣＭＰＫ２、ＩＦＩ２７、ＣＤ７４、ＩＦＩＨ１、ＣＣＲＬ２、ＩＦＩ４４、ＨＥＲＣ６、ＩＳＧ２０、ＩＦＩＴ３、ＨＬＡ－Ｃ、ＯＡＳ１、ＩＦＩ３５、ＩＲＦ９、ＥＰＳＴＩ１、ＵＳＰ１８、ＢＳＴ２、ＣＳＦ１、Ｃ１Ｓ、ＤＨＸ５８、ＴＲＩＭ１４、ＯＡＳＬ、ＩＲＦ７、ＬＧＡＬＳ３ＢＰ、ＤＤＸ６０、ＬＡＰ３、ＬＡＭＰ３、ＰＡＲＰ１２、ＰＡＲＰ９、ＳＰ１１０、ＰＬＳＣＲ１、ＷＡＲＳ、ＳＴＡＴ１、ＩＲＦ３、ＩＲＦ５、ＭＳＣ、ＪＵＮ、ＳＰＩ１、ＩＲＦ１、ＣＯＭＭＤ３－ＢＭＩ１、ＳＴＡＴ２、ＲＵＮＸ３、ＳＲＥＢＦ１、ＦＬＩ１およびＢＲＣＡ１のうち１以上のレベルが正常値上限（ＵＬＮ）に比べて高い場合に、前記患者をＭＤＭ２アンタゴニストで処置する
を含んでなる。
選択される患者は一般に癌患者である。患者は一般に、その患者が患者からの生物学的サンプル中のＢＡＰ１および／もしくはＣＤＫＮ２Ａのレベルが所定の値より低い（もしくは存在しない）、かつ／または患者からの生物学的サンプル中のＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＲＳＡＤ２、ＭＸ１、ＢＡＴＦ２、ＩＦＩ４４Ｌ、ＩＦＩＴＭ１、ＩＳＧ１５、ＣＭＰＫ２、ＩＦＩ２７、ＣＤ７４、ＩＦＩＨ１、ＣＣＲＬ２、ＩＦＩ４４、ＨＥＲＣ６、ＩＳＧ２０、ＩＦＩＴ３、ＨＬＡ－Ｃ、ＯＡＳ１、ＩＦＩ３５、ＩＲＦ９、ＥＰＳＴＩ１、ＵＳＰ１８、ＢＳＴ２、ＣＳＦ１、Ｃ１Ｓ、ＤＨＸ５８、ＴＲＩＭ１４、ＯＡＳＬ、ＩＲＦ７、ＬＧＡＬＳ３ＢＰ、ＤＤＸ６０、ＬＡＰ３、ＬＡＭＰ３、ＰＡＲＰ１２、ＰＡＲＰ９、ＳＰ１１０、ＰＬＳＣＲ１、ＷＡＲＳ、ＳＴＡＴ１、ＩＲＦ３、ＩＲＦ５、ＭＳＣ、ＪＵＮ、ＳＰＩ１、ＩＲＦ１、ＣＯＭＭＤ３－ＢＭＩ１、ＳＴＡＴ２、ＲＵＮＸ３、ＳＲＥＢＦ１、ＦＬＩ１およびＢＲＣＡ１のうち１以上のレベルが所定の値以上である場合に選択される。
患者の癌に対するＭＤＭ２アンタゴニストの有効性を予測するための方法は、患者からの生物学的サンプル中のＢＡＰ１、ＣＤＫＮ２Ａ、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＲＳＡＤ２、ＭＸ１、ＢＡＴＦ２、ＩＦＩ４４Ｌ、ＩＦＩＴＭ１、ＩＳＧ１５、ＣＭＰＫ２、ＩＦＩ２７、ＣＤ７４、ＩＦＩＨ１、ＣＣＲＬ２、ＩＦＩ４４、ＨＥＲＣ６、ＩＳＧ２０、ＩＦＩＴ３、ＨＬＡ－Ｃ、ＯＡＳ１、ＩＦＩ３５、ＩＲＦ９、ＥＰＳＴＩ１、ＵＳＰ１８、ＢＳＴ２、ＣＳＦ１、Ｃ１Ｓ、ＤＨＸ５８、ＴＲＩＭ１４、ＯＡＳＬ、ＩＲＦ７、ＬＧＡＬＳ３ＢＰ、ＤＤＸ６０、ＬＡＰ３、ＬＡＭＰ３、ＰＡＲＰ１２、ＰＡＲＰ９、ＳＰ１１０、ＰＬＳＣＲ１、ＷＡＲＳ、ＳＴＡＴ１、ＩＲＦ３、ＩＲＦ５、ＭＳＣ、ＪＵＮ、ＳＰＩ１、ＩＲＦ１、ＣＯＭＭＤ３－ＢＭＩ１、ＳＴＡＴ２、ＲＵＮＸ３、ＳＲＥＢＦ１、ＦＬＩ１およびＢＲＣＡ１のレベルを決定することを含んでなり、ＢＡＰ１および／またはＣＤＫＮ２Ａの生物学的サンプルレベルが所定の値未満であること、および／またはＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＲＳＡＤ２、ＭＸ１、ＢＡＴＦ２、ＩＦＩ４４Ｌ、ＩＦＩＴＭ１、ＩＳＧ１５、ＣＭＰＫ２、ＩＦＩ２７、ＣＤ７４、ＩＦＩＨ１、ＣＣＲＬ２、ＩＦＩ４４、ＨＥＲＣ６、ＩＳＧ２０、ＩＦＩＴ３、ＨＬＡ－Ｃ、ＯＡＳ１、ＩＦＩ３５、ＩＲＦ９、ＥＰＳＴＩ１、ＵＳＰ１８、ＢＳＴ２、ＣＳＦ１、Ｃ１Ｓ、ＤＨＸ５８、ＴＲＩＭ１４、ＯＡＳＬ、ＩＲＦ７、ＬＧＡＬＳ３ＢＰ、ＤＤＸ６０、ＬＡＰ３、ＬＡＭＰ３、ＰＡＲＰ１２、ＰＡＲＰ９、ＳＰ１１０、ＰＬＳＣＲ１、ＷＡＲＳ、ＳＴＡＴ１、ＩＲＦ３、ＩＲＦ５、ＭＳＣ、ＪＵＮ、ＳＰＩ１、ＩＲＦ１、ＣＯＭＭＤ３－ＢＭＩ１、ＳＴＡＴ２、ＲＵＮＸ３、ＳＲＥＢＦ１、ＦＬＩ１およびＢＲＣＡ１のうち１以上のレベルが所定の値以上であることが患者における有効性を予測する。
これらの方法を実施するためのシステム
本明細書に記載の方法は、患者の評価または予後を補助するためのシステムを利用することができる。システムは、様々な装置部品（ユニット）が統合された単一の装置であり得る。システムはまた、その様々な部品、またはこれらの部品のいくつかを別個の装置として備えることができる。部品は、測定装置、グラフィカルユーザーインターフェース、およびコンピューター処理ユニットを含んでなり得る。
システムは一般に、インターフェースへのデータ接続を備えており、それにより、インターフェース自体がシステムの一部になることも、リモートインターフェースになることもある。後者は、実際のインターフェースを提供するために、異なる装置、好ましくはスマートフォンまたはタブレットコンピューターなどのハンドヘルド装置を使用する可能性を指す。そのような場合のデータ接続は、好ましくは、Ｗｉ－ＦｉもしくはＢｌｕｅｔｏｏｔｈ、または他の技術もしくは規格によるものなどの無線データ転送を含む。
特定の実施形態において、測定装置は、例えば装置に挿入できるカートリッジに１以上の癌細胞または一滴の血液を置くことによって、組織サンプルを受容するように構成される。デバイスは、同じサンプルから１または複数のバイオマーカーまたは複数のバイオマーカーのレベルを決定することができる既存のデバイスであり得る。処理ユニットは、測定装置からタンパク質濃度の数値を受容することができる。処理ユニットには通常、入力データに基づいてスコアを計算できるソフトウェア（一般に組み込みソフトウェア）が提供される。
別の実施形態では、ヒト癌患者がＭＤＭ２アンタゴニストによる処置に適しているかどうかを評価するためのシステムは、以下を含んでなる：
（ａ）ヒト患者からのサンプルにおいて本発明の１または複数のバイオマーカーを検出することができ、そのように適合された検出手段。このような手段は既知であり、当業者には容易に入手可能である。一般に、対象のサンプルを受容するための容器が提供され、この容器に検出手段が設けられる。
（ｂ）前記タンパク質の決定された濃度から、患者がＭＤＭ２アンタゴニストで治療される可能性の指標を決定することができ、そのように適合されたプロセッサ。
場合により、このシステムは、情報を提示できるユーザーインターフェース（またはリモートインターフェースへのデータ接続）、特に、グラフィカルユーザーインターフェース（ＧＵＩ）を含んでなり；ＧＵＩは、テキストに基づくユーザーインターフェース、入力されたコマンドラベル、またはテキストナビゲーションの代わりに、グラフィックアイコンおよび視覚的インジケータ－、例えば、二次表記を介してユーザーが電子デバイスと対話できるようにするユーザーインターフェースの一種であり（本発明においてこのようなインターフェイスタイプに排除されるものない）；ＧＵＩは一般に知られ、通常、ＭＰ３プレーヤー、ポータブルメディアプレーヤー、ゲームデバイス、スマートフォン、およびより小型の家庭用、オフィス用および産業用コントロールなどのハンドヘルドモバイル デバイスで使用され；前述のように、インターフェースは、場合により、患者に関する情報などの情報を入力できるように選択することもできる。
１つの実施形態において、ＭＤＭ２アンタゴニストによる処置に対するヒト癌患者の適合性を決定するためのシステムは、対象からのサンプル中のバイオマーカー発現レベルを示すバイオマーカーのパネルに関連するデータを含んでなる、患者からのサンプルに関連するデータを格納するための記憶装置；本発明の１以上のバイオマーカーを含んでなるバイオマーカーのパネル；および患者を分類するために記憶装置に通信可能に接続されたプロセッサを含んでなる。
キット
本発明はまた、癌治療のためのＭＤＭ２阻害に応答する患者の可能性を評価するために、本発明のバイオマーカーの１以上を検出するためのキットを、別個にまたは前述のシステムの一部として提供する。キットは一般に、本発明のバイオマーカーの１以上を検出するための１以上の検出試薬を含んでなる。これらの試薬は、バイオマーカーの直接検出または間接検出、例えば相関基質の検出のためのものであり得る。
一般に、キットは、それぞれが本発明の異なるバイオマーカーに向けられた、２つ以上、または３つ以上の検出試薬を含んでなる。
本発明の方法を参照して上述したように、キットは、他のタンパク質に対するものなどのより多くの検出試薬を含んでなり得る。好ましい実施形態では、キットで利用できる検出試薬は、上述のように、本発明のバイオマーカーパネルを構成する２つ、３つ、または４つのタンパク質の検出のための検出試薬からなる。
キットは、前記検出試薬を含んでなるチップ、マイクロタイタープレートまたはビーズもしくは樹脂などの固相支持体を含んでなり得る。いくつかの実施形態において、キットは、質量分析プローブを含んでなる。
キットはまた、洗浄溶液および／または非結合検出試薬または前記バイオマーカーのいずれかに特異的な検出試薬も提供し得る（サンドイッチ型アッセイ）。
このようなキットは、本発明のバイオマーカーの１以上の検出および／または定量のためのバイオセンサーを場合により本明細書に記載されるような方法に従ってキットを使用するための説明書とともに、適宜含んでなる。
本発明のバイオマーカーの１以上の状態を特徴付ける十分に確立された遺伝的および生化学的手段がある。また、血液、例えば、血清サンプル中のタンパク質の量を特徴付ける十分に確立された生化学的手段もある。
１つの実施形態において、本発明は、包装された癌治療薬を含む。包装された治療薬は、本発明を使用して選択された患者における意図された使用のために有効量の本発明の組成物を使用することに関する説明書とともに包装された組成物を含む。他の実施形態では、本発明は、対象の癌を治療するための医薬品を製造するための本発明の組成物のいずれかの使用を提供する。
１つの実施形態において、本発明は、単一の患者サンプルから本発明のバイオマーカーの１以上のレベルを決定するためのキットまたはパネルまたはアレイを提供する。
生物学的効果
本明細書に記載の化合物、そのサブグループおよび例は、ｐ５３とＭＤＭ２の相互作用を阻害することが示されている。そのような阻害は、細胞増殖の停止および細胞死（一般にアポトーシス）をもたらし、これは、本明細書に記載の病状または病態、例えば、以下で論じる疾患および病態、ならびにｐ５３およびＭＤＭ２が役割を果たす上記の疾患および病態を予防または治療するのに有用であり得る。従って、例えば、本発明において使用するための化合物は、癌の発生を緩和または減少させるのに有用であり得ると考えられる。
本明細書に記載の化合物は、成人集団の治療のために有用であり得る。本発明の化合物は、小児集団の治療のために有用であり得る。
本明細書に記載の化合物は、ＭＤＭ２－ｐ５３複合体の形成の良好なアンタゴニストであることが示されている。本明細書に記載の化合物は、ＭＤＭ２に結合してＭＤＭ２に対して効力を示し得る。本発明の化合物の効力は、本明細書に記載のアッセイプロトコールおよび当技術分野で公知の他の方法を用いて、ＭＤＭ２／ｐ５３に対して決定されている。より詳しくは、式（Ｉｏ）の化合物およびそのサブグループは、ＭＤＭ２／ｐ５３に対して親和性を有する。
本発明において使用するための特定の化合物は、ＩＣ５０値が０．１μＭ未満、特に、０．０１または０．００１μＭ未満のものである。
ＭＤＭ２／ｐ５３機能は、例えば血管リモデリング・血管新生阻害プロセスおよび代謝経路の調節、ならびに発癌などの様々なプロセスにおける役割により、多くの疾患に関連付けられている。ＭＤＭ２に対するそれらの親和性の結果として、化合物は、自己免疫病態；真性糖尿病；慢性炎症性疾患、例えば、ループス腎炎、全身性紅斑性狼瘡（ＳＬＥ）、自己免疫性糸球体腎炎、関節リウマチ、乾癬、炎症性腸疾患、自己免疫性糖尿病、湿疹過敏反応、喘息、ＣＯＰＤ、鼻炎、および上気道疾患；常染色体劣性先天性魚鱗癬（ＡＲＣＩ）などの角質増殖性疾患；糸球体障害、慢性腎臓病（ＣＫＤ）腎炎症、有足細胞喪失、糸球体硬化症、タンパク尿、および進行性腎疾患を含む腎疾患；心血管疾患、例えば、心肥大、再狭窄、不整脈、アテローム性動脈硬化；虚血性損傷関連の心筋梗塞、血管損傷、脳卒中および再灌流損傷；血管増殖性疾患；加齢性黄斑変性症、特に、滲出型の加齢性黄斑変性症などの眼疾患；未熟児網膜症（ＲＯＰ）および糖尿病性網膜症などの虚血性増殖性網膜症、および血管腫を含むある範囲の疾患または病態を治療または予防するのに有用であることが判明し得ることが予想される。
ＭＤＭ２に対するそれらの親和性の結果として、化合物が癌などの増殖性障害の治療または予防に有用であることが判明し得ることが予想される。
治療（または阻害）され得る癌（およびそれらの良性対応物）の例としては、限定するものではないが、上皮起源の腫瘍（腺癌、扁平上皮癌、移行上皮癌および他の癌を含む様々な種類の腺腫および癌腫）例えば、膀胱および尿路、乳房、消化管（食道、胃、小腸、結腸、腸、結腸直腸、直腸および肛門を含む）、肝臓（肝細胞癌）、胆嚢および胆道系、外分泌膵臓、腎臓（例えば、腎細胞癌）、肺（例えば、腺癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、気管支肺胞癌および中皮腫）、頭頸部（例えば、舌、頬腔、喉頭、咽頭、鼻咽頭、扁桃腺、唾液腺、鼻腔および副鼻腔の癌）、卵巣、卵管、腹膜、膣、陰門、陰茎、精巣、子宮頚、子宮筋、子宮内膜、甲状腺（例えば、甲状腺濾胞癌）、脳、副腎、前立腺、皮膚および付属器（例えば、黒色腫、基底細胞癌、扁平上皮癌、角化棘細胞腫、異形成母斑）；リンパ系統の血液悪性腫瘍および関連病態（例えば、急性リンパ球性白血病［ＡＬＬ］、慢性リンパ球性白血病［ＣＬＬ］、Ｂ細胞リンパ腫、例えば、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫［ＤＬＢＣＬ］、濾胞性リンパ腫、バーキットリンパ腫、マントル細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫および白血病、ナチュラルキラー［ＮＫ］細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫、有毛細胞白血病、意義不明の単クローン性免疫グロブリン血症、形質細胞腫、多発性骨髄腫、および移植後リンパ増殖性障害）ならびに骨髄系統の血液悪性腫瘍および関連病態（例えば、急性骨髄性白血病［ＡＭＬ］、慢性骨髄性白血病［ＣＭＬ］、慢性骨髄単球性白血病［ＣＭＭＬ］、好酸球増加症候群、骨髄増殖性障害、例えば、真性多血症、本態性血小板血症および原発性骨髄線維症、骨髄増殖性症候群、骨髄異形成症候群、および前骨髄球性白血病）を含む血液悪性腫瘍（すなわち、白血病、リンパ腫）、前癌性血液障害および境界悪性腫瘍障害傷害；間葉起源の腫瘍、例えば、軟部組織、骨または軟骨の肉腫、例えば、骨肉腫、線維肉腫、軟骨肉腫、横紋筋肉腫、平滑筋肉腫、脂肪肉腫、血管肉腫、カポジ肉腫、ユーイング肉腫、滑膜肉腫、類上皮肉腫、消化管間質腫瘍、良性および悪性組織球腫、および隆起性皮膚線維肉腫；中枢神経系または末梢神経系の腫瘍（例えば、星状細胞腫（例えば、神経膠腫）、神経腫および膠芽腫、髄膜腫、脳室上衣細胞腫、松果体腫瘍および神経鞘腫）；内分泌腫瘍（例えば、下垂体腫瘍、副腎腫瘍、膵島細胞腫瘍、副甲状腺腫瘍、カルチノイド腫瘍および甲状腺の髄様癌）；眼および付属器の腫瘍（例えば、網膜芽細胞腫）;生殖細胞および栄養膜腫瘍（例えば、奇形腫、精上皮腫、未分化胚細胞腫、胞状奇胎および絨毛癌）;ならびに小児および胎児性腫瘍（例えば、髄芽腫、神経芽腫、ウィルムス腫瘍、および原始神経外胚葉性腫瘍）;または患者を悪性腫瘍に罹患しやすくする先天性もしくはその他の症候群(例えば、色素性乾皮症)が挙げられる。
細胞の成長は、厳密に制御された機能である。異常な細胞増殖の病態である癌は、細胞が制御を欠いた方法で複製する (数が増加する) か、制御不能に増殖する (大きくなる) か、かつ／またはアポトーシス (プログラム細胞死)、壊死、またはアノイキスによる細胞死の減少を受ける場合に生じる。１つの実施形態において、異常な細胞増殖は、制御さを欠いた細胞増殖、過剰な細胞増殖またはプログラム細胞死の減少から選択される。特に、異常な細胞増殖の病態または疾患は癌である。
従って、異常な細胞増殖（すなわち、制御を欠き、かつ／または急速な細胞増殖）を含んでなる疾患または病態を治療するための本発明の医薬組成物、使用または方法において、１つの実施形態では、異常な細胞増殖を含んでなる疾患または病態は癌である。
多くの疾患は、持続的で制御を欠いた血管新生を特徴とする。慢性増殖性疾患は、多くの場合、炎症および／もしくは増殖状態に寄与するもしくはそれを維持する可能性がある、または血管の侵襲的増殖による組織破壊につながる著しい血管新生を伴う。腫瘍の成長と転移は、血管新生に依存することが分かっている。従って、本発明において使用する化合物は、腫瘍血管新生の開始を防止および破壊するのに有用であり得る。
血管新生は一般に、新規もしくは置換血管の発生、または新生血管形成を表して使用される。これは、血管系が胚に確立されるのに必要かつ生理学的な正常のプロセスである。一般に、排卵、月経および創傷治癒の部位を除くほとんどの正常な成体組織では血管新生は起こらない。しかし、多くの疾患は、持続的で制御を欠く血管新生を特徴としている。例えば、関節炎では、新しい毛細血管が関節に侵入し、軟骨を破壊する。糖尿病 (および多くの異なる眼疾患) では、新しい血管が黄斑または網膜またはその他の眼の構造に侵入し、失明を引き起こす場合がある。アテローム性動脈硬化のプロセスは、血管新生に関連付けられている。腫瘍の成長と転移は、血管新生に依存することが分かっている。これらの化合物は、癌および転移、眼疾患、関節炎および血管腫などの疾患の治療に有益であり得る。
従って、本発明で使用するための化合物は、転移および転移性癌の治療に有用であり得る。転移または転移性疾患は、ある器官または部分から隣接していない別の器官または部分への疾患の拡散である。本発明において使用するための化合物によって治療することができる癌には、原発性腫瘍（すなわち、発生部位の癌細胞）、局所浸潤（局所領域の周囲の正常組織に浸透および浸潤する癌細胞）、および転移（または二次）腫瘍、すなわち、血流（血行性拡散）を介して、またはリンパ管を介して、または体腔を横切って（経体腔）、体内の他の部位や組織に循環していた悪性細胞から形成された腫瘍が含まれる。特に、本発明において使用するための化合物は、転移および転移癌の治療に有用であり得る。
１つの実施形態において、血液悪性腫瘍は白血病である。別の実施形態では、血液悪性腫瘍はリンパ腫である。１つの実施形態では、癌はＡＭＬである。別の実施形態では、癌はＣＬＬである。
１つの実施形態において、本発明において使用される化合物は、急性または慢性白血病、特に、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性リンパ球性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、または慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）などの白血病の予防または治療において使用するためのものである。１つの実施形態において、本発明において使用される化合物は、急性または慢性リンパ腫、特に、バーキットリンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫またはびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫などのリンパ腫の予防または治療において使用するためのものである。
１つの実施形態において、本発明において使用される化合物は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）または急性リンパ球性白血病（ＡＬＬ）の予防または治療において使用するためのものである。
１つの実施形態において、本発明において使用される化合物は、リンパ系統の血液悪性腫瘍および関連病態（例えば、急性リンパ球性白血病［ＡＬＬ］、慢性リンパ球性白血病［ＣＬＬ］、Ｂ細胞リンパ腫、例えば、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫［ＤＬＢＣＬ］、濾胞性リンパ腫、バーキットリンパ腫、マントル細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫および白血病、ナチュラルキラー［ＮＫ］細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫、有毛細胞白血病、意義不明の単クローン性免疫グロブリン血症、形質細胞腫、多発性骨髄腫、および移植後リンパ増殖性障害）ならびに骨髄系統の血液悪性腫瘍および関連病態（例えば、急性骨髄性白血病［ＡＭＬ］、慢性骨髄性白血病［ＣＭＬ］、慢性骨髄単球性白血病［ＣＭＭＬ］、好酸球増加症候群、骨髄増殖性障害、例えば、真性多血症、本態性血小板血症および原発性骨髄線維症、骨髄増殖性症候群、骨髄異形成症候群、および前骨髄球性白血病）を含む血液悪性腫瘍（すなわち、白血病、リンパ腫）および前悪性血液障害および境界型悪性腫瘍の障害の予防または治療において使用するためのものである。
１つの実施形態は、ｐ５３野生型であるかまたはＭＤＭ２増幅を有する癌を有する亜集団から選択される患者における癌の予防または治療において使用するために本発明において使用される化合物を含む。
これらの癌は、ＭＤＭ２アンタゴニストによる処置に感受性のある癌であり得る。これらの癌は、ＭＤＭ２を過剰発現する癌であり得る。癌は、ｐ５３野生型である癌であり得る。
特定の癌としては、ＭＤＭ２増幅および／またはＭＤＭ２過剰発現を有するもの、例えば、肝細胞癌、肺、肉腫、骨肉腫、およびホジキン病が含まれる。
特定の癌としては、野生型ｐ５３を有するものが含まれる。特定の癌としては、野生型ｐ５３を有し、必ずというわけではないが特にＭＤＭ２の発現が高い場合の癌細胞が含まれる。
１つの実施形態において、癌は、ｐ５３機能性腫瘍である。１つの実施形態において、治療されるこの疾患は、ｐ５３機能性の固形および血液悪性腫瘍である。別の実施形態では、治療される患者はｐ５３変異型腫瘍を有し、例えば、ｐ５３変異型腫瘍を有するＡＭＬ患者である。
１つの実施形態において、癌は、脳の腫瘍、例えば、神経膠腫、または神経芽腫である。
１つの実施形態において、癌は、皮膚の癌、例えば、黒色腫である。
１つの実施形態において、癌は、肺の癌、例えば、ＮＳＣＬＣまたは中皮腫である。１つの実施形態において、癌は、肺の癌、例えば、中皮腫である。１つの実施形態において、中皮腫は、悪性腹膜中皮腫または悪性胸腔中皮腫である。
１つの実施形態において、癌は、消化管、例えば、ＧＩＳＴ、胃、結腸直腸または腸の癌である。
１つの実施形態において、癌は、骨肉腫である。
１つの実施形態において、癌は、脂肪肉腫である。
１つの実施形態において、癌は、ユーイング肉腫である。
１つの実施形態において、癌は、脂肪肉腫、軟部組織肉腫、骨肉腫、食道癌、およびＢ細胞悪性腫瘍を含む特定の小児悪性腫瘍である。
１つの実施形態において、癌は、結腸直腸癌、乳癌、肺癌および脳癌である。
１つの実施形態において、癌は、小児癌である。
１つの実施形態において、癌は、ｐ５３野生型である。
１つの実施形態において、癌は、肺の癌、例えば、ＮＳＣＬＣまたは中皮腫、腎臓の癌、例えば、ＫＩＲＣまたは脳の癌、例えば、膠芽腫である。
１つの実施形態において、癌は、ＢＡＰ１欠損を示すことがしばしば知られている癌である。１つの実施形態において、癌は、脳の癌、腎臓の癌、例えば、明細胞腎細胞癌（ｃｃＲＣＣ）もしくはＫＩＲＣ、食道癌、または黒色腫である。１つの実施形態において、癌は、ＢＡＰ１欠損を示すことがしばしば知られている癌であり、固形腫瘍または癌腫である。
１つの実施形態において、癌は、上皮起源の腫瘍；間葉起源の腫瘍；中枢神経系または末梢神経系の腫瘍；内分泌腫瘍；眼および付属器の腫瘍；生殖細胞および栄養膜腫瘍；小児および胎児性腫瘍；または患者を悪性腫瘍に罹患しやすくする症候群、先天性またはその他である。１つの実施形態において、癌は、上皮起源の腫瘍；間葉起源の腫瘍；中枢神経系または末梢神経系の腫瘍；内分泌腫瘍；眼および付属器の腫瘍；生殖細胞および栄養膜腫瘍である。
特定の癌がＭＤＭ２アンタゴニストに感受性があるものであるかどうかは、「診断の方法」という見出しの節に示されるような方法によって決定され得る。
さらなる側面は、本明細書に記載の疾患または病態、特に、癌の治療のための薬剤の製造のための化合物の使用を提供する。
特定の癌は、特定の薬物による治療に抵抗性がある。これは、腫瘍の種類（最も一般的な上皮性悪性腫瘍は本質的に化学療法抵抗性があり、前立腺は現在利用可能な化学療法または放射線療法のレジメンに対して比較的抵抗性がある）に起因する場合もあれば、疾患の進行または治療の結果として自然に抵抗性が生じる場合もある。この点に関して、前立腺という場合には、抗アンドロゲン療法、特に、アビラテロンもしくはエンザルタミドに対する抵抗性を有する前立腺、または去勢抵抗性前立腺が含まれる。同様に、多発性骨髄腫という場合には、ボルテゾミブ非感受性多発性骨髄腫または難治性多発性骨髄腫が含まれ、慢性骨髄性白血病という場合には、イミタニブ非感受性慢性骨髄性白血病および難治性慢性骨髄性白血病が含まれる。この点に関して、中皮腫という場合には、トポイソメラーゼ毒、アルキル化剤、抗チューブリン剤、葉酸拮抗剤、白金化合物および放射線療法に対する抵抗性を有する中皮腫、特に、シスプラチン抵抗性中皮腫が含まれる。
化合物はまた、細胞を化学療法に対して増感させることにより、腫瘍増殖、病因、化学療法および放射線療法に対する抵抗性の治療において、および抗転移剤として有用であり得る。
総てのタイプの治療的抗癌介入は、必然的に標的腫瘍細胞にかかるストレスを増大させる。ＭＤＭ２／ｐ５３のアンタゴニストは、（ｉ）悪性細胞を抗癌薬および／または処置に増感させる；（ｉｉ）抗癌薬および／または治療に対す抵抗性の発生率を軽減または低減する；（ｉｉｉ）抗癌薬および／または治療に対する抵抗性を逆転させる；（ｉｖ）抗癌薬および／または治療の活性を増強する；（ｖ）抗癌薬および／または治療に対する抵抗性の発生を遅延または予防する可能性のある化学療法種を表す。
１つの実施形態において、本発明は、ＭＤＭ２により媒介される疾患または病態の治療において使用するための化合物を提供する。さらなる実施形態において、ＭＤＭ２により媒介される疾患または病態は、ＭＤＭ２の過剰発現および／もしくは活性の増大または高いコピー数のＭＤＭ２および／または野生型ｐ５３を特徴とする癌である。
さらなる側面は、本明細書に記載の疾患または病態、特に、癌の治療のための薬剤の製造のための化合物の使用を提供する。
１つの実施形態において、ＭＤＭ２／ｐ５３により媒介される疾患または病態の予防または治療において使用するための化合物が提供される。１つの実施形態において、ＭＤＭ２タンパク質とｐ５３の間の相互作用を阻害するための化合物が提供される。
１つの実施形態において、有効量の定義されるような少なくとも１つの化合物を含んでなる医薬組成物が提供される。
１つの実施形態において、哺乳動物に定義されるような少なくとも１つの化合物を含んでなる薬剤を投与する工程を含んでなる、癌の予防または治療のための方法が提供される。
医薬製剤
活性化合物は単独で投与することが可能であるが、一般に医薬組成物（例えば、製剤）として提供される。
よって、本発明はさらに、上記で定義されるような医薬組成物、ならびに式（Ｉｏ）の１つの化合物（および本明細書で定義されるようなそのサブグループ）を含む少なくとも１つのＭＤＭ２アンタゴニストを、１種類以上の薬学上許容可能な賦形剤、および場合により、本明細書に記載されるようなその他の治療薬または予防薬とともに含んでなる（例えば、混合した）医薬組成物を作製する方法を提供する。
薬学上許容可能な賦形剤は、例えば、担体（例えば、固体、液体または半固体担体）、アジュバント、希釈剤、充填剤または増量剤、造粒剤、コーティング剤、放出制御剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、保存剤、抗酸化剤、緩衝剤、沈殿防止剤、増粘剤、香味剤、甘味剤、矯味剤、安定剤または医薬組成物に従来使用されている任意の他の賦形剤から選択され得る。様々なタイプの医薬組成物のための賦形剤の例を以下により詳細に示す。
「薬学上許容可能な」という用語は、本明細書において使用する場合、健全な医学的判断の範囲内で、対象（例えば、ヒト対象）の組織と接触して使用するのに適し、過度の毒性、刺激、アレルギー反応、またはその他の問題または合併症がなく、妥当なベネフィット／リスク比に見合った化合物、材料、組成物、および／または投与形に関する。各賦形剤はまた、製剤の他の成分と適合するという意味で「許容可能」でなければならない。
式（Ｉｏ）の化合物を含むＭＤＭ２アンタゴニストを含有する医薬組成物は既知の技術に従って調剤することができる。例えば、Remington’s Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easton, PA, USAを参照のこと。
医薬組成物は、経口投与、非経口投与、局所投与、鼻腔内投与、気管支内投与、舌下投与、眼内投与、耳内投与、直腸投与、膣内投与、または経皮投与に適したいずれの形態であってもよい。組成物が非経口投与を目的とする場合、それらは、静脈内、筋肉内、腹腔内、皮下投与、または注射、注入もしくは他の送達手段による標的臓器または組織への直接送達のために調剤することができる。送達は、ボーラス注射、短期注入または長期注入によってもよく、受動的送達を介して、または適切な注入ポンプもしくはシリンジドライバーの利用を介して行うことができる。
非経口投与に適した医薬製剤には、抗酸化剤、緩衝剤、静菌剤、補助溶媒、界面活性剤、有機溶媒混合物、シクロデキストリン錯化剤、乳化剤（エマルション製剤の形成および安定化のため）、リポソームを形成するためのリポソーム成分、ポリマーゲルを形成するためのゲル化可能なポリマー、凍結乾燥保護剤およびとりわけ有効成分を可溶形態で安定化し、製剤を意図されたレシピエントの血液と等張にするための薬剤の組合せを含み得る水性および非水性の滅菌注射液が含まれる。非経口投与用の医薬製剤は、沈殿防止剤および増粘剤を含み得る水性および非水性の無菌懸濁液の形態をとることもできる(R. G. Strickly, Solubilizing Excipients in oral and injectable formulations, Pharmaceutical Research, Vol 21(2) 2004, p 201-230) 。
製剤は、例えば、密封されたアンプル、バイアルおよびプレフィルドシリンジなどの単位用量または複数用量の容器で提供してもよく、使用直前に無菌液体担体、例えば注射用水を添加するだけのフリーズドライ（凍結乾燥）状態で保存してもよい。１つの実施形態では、製剤は、適切な希釈剤を使用してその後再構成するためのボトル内の有効医薬品成分として提供される。
医薬製剤は、式（Ｉｏ）の化合物、またはそのサブグループを含むＭＤＭ２アンタゴニストを凍結乾燥させることによって調製することができる。凍結乾燥は、組成物をフリーズドライする手順を指す。従って、フリーズドライおよび凍結乾燥は、本明細書では同義語として使用される。
即時調合注射溶液および懸濁液は、無菌粉末、顆粒および錠剤から調製され得る。
非経口注射のための本発明の医薬組成物はまた、薬学上許容可能な無菌水溶液または非水溶液、分散液、懸濁液またはエマルション、ならびに使用直前に無菌注射溶液または分散液に再構成するための無菌粉末を含んでなり得る。適切な水性および非水性担体、希釈剤、溶媒または賦形剤の例としては、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールなど）、カルボキシメチルセルロースおよびその適切な混合物、植物油（例えば、ヒマワリ油、ベニバナ油、コーン油またはオリーブ油)、およびオレイン酸エチルなどの注射可能な有機エステルが挙げられる。適切な流動性は、例えば、レシチンなどの増粘剤の使用、分散液の場合には必要な粒径の維持、および界面活性剤の使用によって維持することができる。
本発明の組成物はまた、保存剤、湿潤剤、乳化剤、および分散剤などのアジュバントも含有し得る。微生物の作用の防止は、様々な抗菌剤および抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸などを含めることによって確保することができる。糖、塩化ナトリウムなどの張性を調節するための薬剤を含めることも望ましい場合がある。モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンなどの吸収を遅延させる薬剤を含めることによって、注射可能な医薬形態の持続的な吸収をもたらすことができる。
本発明の１つの典型的な実施形態では、医薬組成物は、ｉ．ｖ．投与、例えば、注射または注入による投与に適した形態である。静脈内投与の場合、溶液をそのまま投与するか、または投与前に輸液バッグ（０．９％生理食塩水または５％デキストロースなどの薬学上許容可能な賦形剤を含む）に注入することができる。
別の典型的な実施形態では、医薬組成物は、皮下（ｓ．ｃ．）投与に適した形態である。
経口投与に適した医薬投与形には、錠剤（コーティングまたは非コーティング）、カプセル（ハードまたはソフトシェル）、カプレット、ピル、ロゼンジ、シロップ、溶液、散剤、顆粒、エリキシルおよび懸濁液、舌下錠剤、ウエハースまたは口内パッチなどのパッチ剤が含まれる。
よって、錠剤組成物は、単位用量の有効化合物を、糖または糖アルコール、例えば、ラクトース、スクロース、ソルビトールもしくはマンニトールなどの不活性希釈剤もしくは担体；ならびに／または炭酸ナトリウム、リン酸カルシウム、炭酸カルシウム、もしくはセルロースもしくはその誘導体、例えば、微晶質セルロース（ＭＣＣ）、メチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、およびデンプン、例えば、コーンスターチなどの非糖由来希釈剤とともに含有し得る。錠剤はまた、ポリビニルピロリドンなどの結合および造粒剤、崩壊剤（例えば、架橋カルボキシメチルセルロースなどの膨潤可能な架橋ポリマー）、滑沢剤（例えば、ステアリン酸塩）、保存剤（例えば、パラベン）、抗酸化剤（例えば、ＢＨＴ）、緩衝剤（例えば、リン酸またはクエン酸バッファー）、ならびにクエン酸／重炭酸混合物などの発泡剤などの標準的成分も含有し得る。このような賦形剤は周知であり、ここで詳細に述べる必要はない。
錠剤は、胃液との接触時に薬物を放出する (即時放出錠剤) か、長期間にわたって、もしくは消化管の特定の領域で制御された様式で放出する (制御放出錠剤) ように設計することができる。
カプセル製剤は、ハードゼラチン種またはソフトゼラチン種であってよく、有効成分を固体、半固体、または液体の形態で含有することができる。ゼラチンカプセルは、動物ゼラチンまたはその合成もしくは植物由来の同等物から形成することができる。
固体剤形（例えば、錠剤、カプセルなど）は、コーティングされていてもコーティングされていなくてもよい。コーティングは、保護フィルム（例えば、ポリマー、ワックスもしくはワニス）として、または薬物放出を制御するためのメカニズムとして、または美的もしくは識別目的で機能し得る。コーティング（例えば、Ｅｕｄｒａｇｉｔ（商標）型のポリマー）は、胃腸管内の所望の位置で有効成分を放出するように設計することができる。従って、コーティングは、胃腸管内の特定のｐＨ条件下で分解するように選択することができ、それにより胃または回腸、十二指腸、空腸もしくは結腸において化合物を選択的に放出する。
コーティングの代わりに、またはコーティングに加えて、薬物は、放出制御剤、例えば、胃腸管で制御された様式で化合物を放出するように適合させ得る放出遅延剤を含んでなる固体マトリックス中に存在し得る。あるいは、薬物は、胃腸管内の酸性度またはアルカリ度が変化する条件下で化合物を選択的に放出するように適合させ得るポリマーコーティング、例えば、ポリメタクリレートポリマーコーティングコーティング中に存在してもよい。あるいは、マトリックス材料または放出遅延コーティングは、剤形が胃腸管を通過するにつれ実質的に連続的に侵食される侵食性ポリマー（例えば、無水マレイン酸ポリマー）の形態をとることができる。別の選択肢としては、コーティングは、腸内の微生物作用下で崩壊するように設計することができる。さらなる選択肢として、活性化合物は、化合物の放出の浸透圧制御を提供する送達系で調剤することができる。浸透放出および他の遅延放出または持続放出製剤（例えば、イオン交換樹脂に基づく製剤）は、当業者に周知の方法に従って調製され得る。
式（Ｉｏ）の化合物を含むＭＤＭ２アンタゴニストは、担体とともに調剤し、ナノ粒子の形態で投与することができ、ナノ粒子の表面積の増大がそれらの吸収を助ける。さらに、ナノ粒子は、細胞への直接浸透の可能性を与える。ナノ粒子薬物送達系は、２００６年３月１３日刊行の“Nanoparticle Technology for Drug Delivery”, Ram B Gupta and Uday B. Kompella編, Informa Healthcare, ISBN 9781574448573に記載されている。薬物送達のためのナノ粒子はまた、J. Control. Release, 2003, 91 (1-2), 167-172、およびSinha et al., Mol. Cancer Ther. August 1, (2006) 5, 1909にも記載されている。
医薬組成物は一般に、およそ１％（ｗ／ｗ）～およそ９５％の有効成分および９９％（ｗ／ｗ）～５％（ｗ／ｗ）の薬学上許容可能な賦形剤または賦形剤の組合せを含んでなる。一般に、組成物は、およそ２０％（ｗ／ｗ）～およそ９０％（ｗ／ｗ）の有効成分および８０％（ｗ／ｗ）～１０％の薬学上許容可能な賦形剤または賦形剤の組合せを含んでなる。医薬組成物は、およそ１％～およそ９５％、一般におよそ２０％～およそ９０％の有効成分を含んでなる。本発明による医薬組成物は、例えば、単位用量形態で、アンプル、バイアル、坐剤、プレフィルドシリンジ、糖衣錠、錠剤またはカプセル剤の形態などであり得る。
薬学上許容可能な賦形剤は、製剤の所望の物理的形態に従って選択することができ、例えば、希釈剤（例えば、充填剤または増量剤などの固体希釈剤；ならびに溶媒および補助溶媒などの液体希釈剤）、崩壊剤、緩衝剤、滑沢剤、流動助剤、放出制御（例えば、放出リターディングまたは遅延ポリマーまたはワックス）剤、結合剤、造粒剤、色素、可塑剤、抗酸化剤、保存剤、香味剤、矯味剤、張力調整剤およびコーティング剤から選択することができる。
当業者は、製剤に使用するための適当な量の成分を選択する専門知識を有する。例えば、錠剤およびカプセル剤は一般に、０～２０％の崩壊剤、０～５％の滑沢剤、０～５％の流動助剤および／または０～９９％（ｗ／ｗ）の充填剤／または増量剤（薬物用量による）を含有する。それらはまた、０～１０％（ｗ／ｗ）のポリマー結合剤、０～５％（ｗ／ｗ）の抗酸化剤、０～５％（ｗ／ｗ）の色素も含有する。徐放性錠剤は、さらに０～９９％（ｗ／ｗ）のポリマー（用量による）を含有する。錠剤またはカプセル剤のフィルムコートは一般に、０～１０％（ｗ／ｗ）の放出制御（例えば、遅延）ポリマー、０～３％（ｗ／ｗ）の色素、および／または０～２％（ｗ／ｗ）の可塑剤を含有する。
非経口製剤は一般に、０～２０％（ｗ／ｗ）のバッファー、０～５０％（ｗ／ｗ）の補助溶媒、および／または０～９９％（ｗ／ｗ）の注射水（ＷＦＩ）（用量により、フリーズドライの場合）を含有する。筋肉内デポ用の製剤は、０～９９％（ｗ／ｗ）の油も含有し得る。
経口投与用の医薬組成物は、有効成分を固体担体と合わせ、所望により得られた混合物を造粒し、所望によりまたは必要であれば、適当な賦形剤を添加した後、混合物を錠剤、糖衣錠コアまたはカプセルに加工することによって得ることができる。また、有効成分を測定量で拡散または放出させるポリマーまたはワックスマトリックスにそれらを組み込むことも可能である。
本発明において使用される化合物はまた、固体分散体として調剤することもできる。固体分散体は、２つ以上の固体の均一で非常に微細な分散相である。固体分散体の一種である固溶体（分子分散系）は、製薬技術での使用が周知であり(Chiou and Riegelman, J. Pharm. Sci., 60, 1281-1300 (1971) 参照)、難水溶性薬物の溶解速度の増大およびバイオアベイラビリティの向上に有用である。
本発明はまた、本明細書に記載の固体溶液を含んでなる固体投与形を提供する。固体投与形としては、錠剤、カプセル剤、チュアブル錠、および分散性または発泡性錠剤が含まれる。既知の賦形剤を固溶体と混合して、所望の剤形を得ることができる。例えば、カプセルは、（ａ）崩壊剤および滑沢剤、または（ｂ）崩壊剤、滑沢剤および界面活性剤と混合された固溶体を含有し得る。さらに、カプセルは、ラクトースまたは微結晶性セルロースなどの増量剤を含有し得る。錠剤は、少なくとも１つの崩壊剤、滑沢剤、界面活性剤、増量剤および流動促進剤と混合された固溶体を含み得る。チュアブル錠は、増量剤、滑沢剤、および所望により付加的甘味剤（例えば、人工甘味料）、および適切な香料と混合された固溶体を含有し得る。固溶体はまた、糖ビーズなどの不活性担体の表面に薬物と適切なポリマーの溶液を噴霧することによって形成することもできる（「ノンパレイユ」）。その後、これらのビーズをカプセルに充填するか、打錠することができる。
医薬製剤は、単一のパッケージ、通常はブリスターパックに全治療コースを含む「患者パック」で患者に提示することができる。患者が患者パックに含まれる添付文書をいつでも見ることができるが、患者の処方箋には通常これはないという点で、患者パックには薬剤師が患者の医薬品の供給をバルク供給から分割する従来の処方箋に優る利点がある。添付文書を含めることで、医師の指示に対する患者のコンプライアンスが向上することが示されている。
局所使用および経鼻送達のための組成物には、軟膏、クリーム、スプレー、パッチ、ゲル、液滴および挿入物（例えば、眼内挿入物）が含まれる。このような組成物は、既知の方法に従って調剤することができる。
直腸または膣内投与のための製剤の例としては、例えば、有効化合物を含有する成型可能なまたはワックス状の材料から形成され得るペッサリーおよび坐剤が含まれる。有効化合物の溶液は直腸投与にも使用可能である。
吸入による投与のための組成物は、吸入可能な粉末組成物または液体もしくは粉末スプレーの形態を取ってよく、粉末吸入装置またはエアロゾル分配装置を使用して標準的な形態で投与され得る。そのような装置は周知である。吸入による投与の場合、粉末製剤は、一般に有効化合物をラクトースなどの不活性固体粉末希釈剤とともに含んでなる。
式（Ｉｏ）の化合物を含むＭＤＭ２アンタゴニストは一般に単位投与形で提供され、従って一般に所望のレベルの生物活性を提供するために十分な化合物を含有する。例えば、製剤は、１ナノグラム～２グラムの有効成分、例えば１ナノグラム～２ミリグラムの有効成分を含有し得る。これらの範囲内で、化合物の特定の部分範囲は、０．１ミリグラム～２グラムの有効成分（より通常には１０ミリグラム～１グラム、例えば、５０ミリグラム～５００ミリグラム）、または１マイクログラム～２０ミリグラム（例えば、１マイクログラム～１０ミリグラム、例えば、０．１ミリグラム～２ミリグラムの有効成分）を含有し得る。
経口組成物の場合、単位投与形は、１マイクログラム～２グラム、より一般には１０ミリグラム～１グラム、例えば、５０ミリグラム～１グラム、例えば、１００ミリグラム～１グラムの有効化合物を含有し得る。
有効化合物は、所望の治療効果を達成するために十分な量でそれを必要とする患者（例えば、ヒトまたは動物患者）に投与される。
他の抗癌剤との組合せ
本明細書で定義されるようなＭＤＭ２アンタゴニストは、ＭＤＭ２／ｐ５３により媒介されるある範囲の疾患または病態の予防または治療において有用であり得る。このような病状および病態の例は上記に示されている。
これらの化合物は一般に、このような投与を必要とする対象、例えば、ヒトまたは動物患者、一般に、ヒトに投与される。
このような化合物は一般に、治療上または予防上有用であり、かつ、一般に非毒性の量で投与される。しかしながら、特定の状況（例えば、生命を脅かす疾患の場合）では、式（Ｉｏ）で使用される化合物を投与する利益が、毒性作用または副作用の欠点を上回る可能性があり、その場合、ある程度の毒性が伴うで化合物を投与することは望ましいと考えられ得る。
化合物は、有益な治療効果を維持するために長期間にわたって投与してもよいし、短期間だけ投与してもよい。あるいは、それらは、連続的に、または断続的な投薬を提供する様式（例えば、パルス様式）で投与され得る。
ＭＤＭ２アンタゴニストの典型的な一日用量は、１００ピコグラム～１００ミリグラム／キログラム体重、より一般には５ナノグラム～２５ミリグラム／キログラム体重、より通常には１０ナノグラム～１５ミリグラム／キログラム（例えば、１０ナノグラム～１０ミリグラム、より一般には１マイクログラム／キログラム～２０ミリグラム／キログラム、例えば、１マイクログラム～１０ミリグラム／キログラム）／キログラム体重の範囲であり得るが、必要であれば、より高いまたは低い用量も投与可能である。式（Ｉｏ）の化合物は、毎日、または例えば、２日、もしくは３日、もしくは４日、もしくは５日、もしくは６日、もしくは７日、もしくは１０日もしくは１４日、もしくは２１日、もしくは２８日毎に反復して投与することができる。
用量はまた、患者の体表面積に対して投与される薬物の量（ｍｇ／ｍ２）として表すこともできる。ＭＤＭ２アンタゴニストの典型的な一日用量は、３７００ｐｇ／ｍ２～３７００ｍｇ／ｍ２、より一般には１８５ｎｇ／ｍ２～９２５ｍｇ／ｍ２、より通常には３７０ｎｇ／ｍ２～５５５ｍｇ／ｍ２（例えば、３７０ｎｇ／ｍ２～３７０ｍｇ／ｍ２、より一般には３７ｍｇ／ｍ２～７４０ｍｇ／ｍ２、例えば、３７ｍｇ／ｍ２～３７０ｍｇ／ｍ２）の範囲であり得るが、必要であれば、より高いまたは低い用量も投与可能である。式（Ｉｏ）の化合物は、毎日、または例えば、２日、もしくは３日、もしくは４日、もしくは５日、もしくは６日、もしくは７日、もしくは１０日もしくは１４日、もしくは２１日、もしくは２８日毎に反復して投与することができる。
本発明において使用される化合物は、ある範囲の用量、例えば、０．１～５０００ｍｇ、または１～１５００ｍｇ、２～８００ｍｇ、または５～５００ｍｇ、例えば、２～２００ｍｇまたは１０～１０００ｍｇ、１０、２０、５０および８０ｍｇを含む特定の用量例で経口投与することができる。化合物は、毎日１回または複数回投与することができる。化合物は、継続的に投与する（すなわち、治療レジメンの期間、休薬なしで毎日服用する）ことができる。あるいは、化合物は、断続的に投与することができる（すなわち、治療レジメンの期間、１週間などの所定の期間継続的に服用し、その後１週間などの期間中断し、その後１週間などのさらなる期間継続的に服用するなど）。断続的な投与を含む治療レジメンの例には、投与が１週間有り、１週間無し；または２週間有り、１週間無し；または３週間有り、１週間無し；または２週間有り、２週間無し；または４週間有り、２週間無し；または１週間有り、３週間無しのサイクルで、１サイクル以上、例えば、２、３、４、５、６、７、８、９または１０サイクルのレジメンが含まれる。この断続的な治療は、１週間ではなく日数に基づくこともある。例えば、治療は、１～６日間の毎日の投薬、１～６日間の休薬を含んでなり得、このパターンが治療プロトコール中に反復される。本発明において使用される化合物が投与されない日数（または週数）は、本発明において使用される化合物が投与される日数（または週数）と必ずしも等しい必要はない。
１つの実施形態において、本発明において使用される化合物は、毎日３ｍｇ／ｍ２～１２５ｍｇ／ｍ２の量で投与することができる。処置は継続的な毎日の投与によるか、またはより通常には、処置休止を挟んだ複数の治療サイクルからなる。単回の処置サイクルの一例は、５回の連続的一日用量の後に３週間の処置無しが続く。
１つの特定の投与レジメンは、１日１回（例えば、経口）１週間（例えば、５日の処置）の後、１、２、または３週間処置の休止が続く。別の投与レジメンは、１週間に１回（例えば、経口）、１、２、３または４週間である。
１つの特定の投与スケジュールでは、患者は式（Ｉｏ）の化合物の注入を１日１時間、最大１０日間、特に１週間に最大５日与えられ、この処置を、所望の間隔、例えば２～４週間、特に３週間毎に反復する。
より詳しくは、患者は、式（Ｉｏ）の化合物を毎日１時間、５日間注入し、この処置を３週間毎に反復する。
別の特定の投与スケジュールでは、患者は、３０分～１時間にわたって注入され、続いて可変の持続時間、例えば、１～５時間、例えば３時間、維持注入が行われる。
本発明において使用される化合物はまた、ボーラスまたは持続注入によって投与することもできる。本発明において使用される化合物は、治療サイクル中、毎日～毎週１回、または２週間に１回、または３週間に１回、または４週間に１回投与することができる。治療サイクル中に毎日投与する場合、この毎日の投与は、治療サイクルの週数にわたって不連続であり得、例えば、１週間（または数日）投与し、１週間（または数日間）投与せず、治療サイクル中にこのパターンを反復する。
さらに特定の投与スケジュールでは、患者は、１２時間～５日間の持続注入、特に２４時間～７２時間の持続注入を与えられる。
しかしながら、最終的には、投与される化合物の量および使用される組成物の種類は、治療される疾患または生理学的状態の性質に相応し、医師の裁量下にある。
本発明において使用される化合物を単一の薬剤として使用すること、または本発明において使用される化合物を、細胞増殖を調節するために違う機序を介して作用する別の薬剤と組み合わせて、癌発生の特徴的な特徴のうちの２つを治療することが有益であり得る。組み合わせ実験は、例えば、Chou TC, Talalay P. Quantitative analysis of dose-effect relationships: the combined effects of multiple drugs or enzyme inhibitors. Adv Enzyme Regulat 1984;22: 27-55に記載されているように行うことができる。
本明細書で定義されるような化合物は、単独の治療薬として投与することもできるし、または特定の病状、例えば以上に定義された癌などの腫瘍性疾患の治療のために、１以上の他の化合物（または療法）との併用療法で投与することもできる。上記の病態の治療のために、本発明において使用される化合物は、癌治療において、１以上の他の薬剤、より具体的には、他の抗癌剤またはアジュバント（治療における補助剤）と組み合わせて有利に使用され得る。ＭＤＭ２アンタゴニストと一緒に（同時にまたは異なる時間間隔で）投与され得る他の治療薬または処置の例としては、限定するものではないが、以下が挙げられる。
・トポイソメラーゼＩ阻害剤
・代謝拮抗物質
・チューブリン標的化薬剤
・ＤＮＡ結合剤およびトポイソメラーゼＩＩ阻害剤
・アルキル化剤
・モノクローナル抗体
・抗ホルモン剤
・シグナル伝達阻害剤
・プロテアソーム阻害剤
・ＤＮＡメチルトランスフェラーゼ阻害剤
・サイトカインおよびレチノイド
・クロマチン標的療法
・放射線療法、および
・その他の治療薬または予防薬
抗癌剤またはアジュバント（またはその塩）の特定の例としては、限定するものではないが、以下の群（ｉ）～（ｘｌｖｉｉｉ）、場合により、群（ｘｌｉｘ）から選択される薬剤のいずれかもが挙げられる。
（ｉ）白金化合物、例えば、シスプラチン（場合により、アミフォスチンと組み合わせて）、カルボプラチンまたはオキサリプラチン；
（ｉｉ）タキサン化合物、例えば、パクリタキセル、パクリタキセルタンパク質結合粒子（アブラキサン（商標））、ドセタキセル、カバジタキセルまたはラロタキセル；
（ｉｉｉ）トポイソメラーゼＩ阻害剤、例えば、カンプトテシン化合物、例えば、カンプトテシン、イリノテカン（ＣＰＴ１１）、ＳＮ－３８、またはトポテカン；
（ｉｖ）トポイソメラーゼＩＩ阻害剤、例えば、抗腫瘍エピポドフィロトキシンまたはポドフィロトキシン誘導体、例えば、エトポシド、またはテニポシド；
（ｖ）ビンカアルカロイド、例えば、ビンブラスチン、ビンクリスチン、リポソームビンクリスチン（Ｏｎｃｏ－ＴＣＳ）、ビノレルビン、ビンデシン、ビンフルニンまたはビンベシル；
（ｖｉ）ヌクレオシド誘導体、例えば、５－フルオロウラシル（５－ＦＵ、場合により、ロイコボリンと組み合わせて）、ゲムシタビン、カペシタビン、テガフール、ＵＦＴ、Ｓ１、クラドリビン、シタラビン（Ａｒａ－Ｃ、シトシンアラビノシド）、フルダラビン、クロファラビン、またはネララビン；
（ｖｉｉ）代謝拮抗物質、例えば、クロファラビン、アミノプテリン、またはメトトレキサート、アザシチジン、シタラビン、フロクスウリジン、ペントスタチン、チオグアニン、チオプリン、６－メルカプトプリン、またはヒドロキシ尿素（ヒドロキシカルバミド）；
（ｖｉｉｉ）アルキル化剤、例えば、ナイトロジェンマスタードまたはニトロソ尿素、例えば、シクロホスファミド、クロラムブシル、カルムスチン（ＢＣＮＵ）、ベンダムスチン、チオテパ、メルファラン、トレオスルファン、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、アルトレタミン、ブスルファン、ダカルバジン、エストラムスチン、フォテムスチン、イフォスファミド（場合により、メスナと組み合わせて）、ピポブロマン、プロカルバジン、ストレプトゾシン、テモゾロミド、ウラシル、メクロレタミン、メチルシクロヘキシルクロロエチルニトロ尿素、またはニムスチン（ＡＣＮＵ）；
（ｉｘ）アントラサイクリン、アントラセンジオンおよび関連薬物、例えば、ダウノルビシン、ドキソルビシン（場合により、デクスラゾキサンと組み合わせて）、ドキソルビシンリポソーム製剤（例えば、カエリクス（商標）、ミオセット（商標）、ドキシル（商標））、イダルビシン、ミトキサントロン、エピルビシン、アムサクリン、またはバルルビシン；
（ｘ）エポチロン、例えば、イキサベピロン、パツピロン、ＢＭＳ－３１０７０５、ＫＯＳ－８６２およびＺＫ－ＥＰＯ、エポチロンＡ、エポチロンＢ、デスオキシエポチロン Ｂ（エポチロンＤまたはＫＯＳ－８６２としても知られる）、アザエポチロンＢ（ＢＭＳ－２４７５５０としても知られる）、ラウリマリド(aulimalide)、イソラウリマリド、またはルエテロビン；
（ｘｉ）ＤＮＡメチルトランスフェラーゼ阻害剤、例えば、テモゾロミド、アザシチジン、またはデシタビン；
（ｘｉｉ）葉酸拮抗薬、例えば、メトトレキサート、ペメトレキセド二ナトリウム、またはラルチトレキセド；
（ｘｉｉｉ）細胞傷害性抗生物質、例えば、アクチノマイシンＤ(antinomycin D)、ブレオマイシン、マイトマイシンＣ、ダクチノマイシン、カルミノマイシン、ダウノマイシン、レバミゾール、プリカマイシン、またはミトラマイシン；
（ｘｉｖ）チューブリン結合剤、例えば、コンブレスタチン、コルヒチンまたはノコダゾール；
（ｘｖ）シグナル伝達阻害剤、例えば、キナーゼ阻害剤、例えば、受容体チロシンキナーゼ阻害剤（例えば、ＥＧＦＲ（上皮成長因子受容体）阻害剤、ＶＥＧＦＲ（血管内皮成長因子受容体）阻害剤、ＰＤＧＦＲ（血小板由来成長因子受容体）阻害剤、Ａｘｌ阻害剤、ＭＴＫＩ（複数標的キナーゼ阻害剤）、Ｒａｆ阻害剤、ＲＯＣＫ阻害剤、ｍＴＯＲ阻害剤、ＭＥＫ阻害剤またはＰＩ３Ｋ阻害剤）、例えば、メシル酸イマチニブ、エルロチニブ、ゲフィチニブ、ダサチニブ、ラパチニブ、ドボチニブ、アキシチニブ、ニロチニブ、バンデタニブ、バタリニブ、パゾパニブ、ソラフェニブ、スニチニブ、テムシロリムス、エベロリムス（ＲＡＤ ００１）、ベムラフェニブ（ＰＬＸ４０３２またはＲＧ７２０４）、ダブラフェニブ、エンコラフェニブ、セルメチニブ（ＡＺＤ６２４４）、トラメチニブ（ＧＳＫ１２１１２０２１２）、ダクトリシブ（ＢＥＺ２３５）、ブパルリシブ（ＢＫＭ－１２０；ＮＶＰ－ＢＫＭ－１２０）、ＢＹＬ７１９、コパンリシブ（ＢＡＹ－８０－６９４６）、ＺＳＴＫ－４７４、ＣＵＤＣ－９０７、アピトリシブ（ＧＤＣ－０９８０；ＲＧ－７４２２）、ピクチリシブ（ピクトレリシブ、ＧＤＣ－０９４１、ＲＧ－７３２１）、ＧＤＣ－００３２、ＧＤＣ－００６８、ＧＳＫ－２６３６７７１、イデラリシブ（旧称ＣＡＬ－１０１、ＧＳ １１０１、ＧＳ－１１０１）、ＭＬＮ１１１７（ＩＮＫ１１１７）、ＭＬＮ０１２８（ＩＮＫ１２８）、ＩＰＩ－１４５（ＩＮＫ１１９７）、ＬＹ－３０２３４１４、イパタセルチブ、アフレセルチブ、ＭＫ－２２０６、ＭＫ－８１５６、ＬＹ－３０２３４１４、ＬＹ２９４００２、ＳＦ１１２６またはＰＩ－１０３、ソノリシブ（ＰＸ－８６６）、またはＡＴ１３１４８、
（ｘｖｉ）オーロラキナーゼ阻害剤、例えば、ＡＴ９２８３、バラセルチブ（ＡＺＤ１１５２）、ＴＡＫ－９０１、ＭＫ０４５７（ＶＸ６８０）、セニセルチブ（Ｒ－７６３）、ダヌセルチブ（ＰＨＡ－７３９３５８）、アリセルチブ（ＭＬＮ－８２３７）、またはＭＰ－４７０；
（ｘｖｉｉ）ＣＤＫ阻害剤、例えば、ＡＴ７５１９、ロスコビチン、セリシクリブ、アルボシジブ（フラボピリドール）、ダイナシクリブ（ＳＣＨ－７２７９６５）、７－ヒドロキシ－スタウロスポリン（ＵＣＮ－０１）、ＪＮＪ－７７０６６２１、ＢＭＳ－３８７０３２（別称ＳＮＳ－０３２）、ＰＨＡ５３３５３３、ＺＫ－３０４７０９、またはＡＺＤ－５４３８、また、パルボシクリブ（ＰＤ３３２９９１）およびリボシクリブ（ＬＥＥ－０１１）などのＣＤＫ４阻害剤を含む；
（ｘｖｉｉｉ）ＰＫＡ／Ｂ阻害剤およびＰＫＢ（ａｋｔ）経路阻害剤、例えば、ＡＴ１３１４８、ＡＺ－５３６３、Ｓｅｍａｐｈｏｒｅ、ＳＦ１１２６およびＭＴＯＲ阻害剤、例えば、ラパマイシン類似体、ＡＰ２３８４１およびＡＰ２３５７３、カルモジュリン阻害剤（フォークヘッドトランスロケーション阻害剤）、ＡＰＩ－２／ＴＣＮ（トリシリビン）、ＲＸ－０２０１、エンザスタウリンＨＣｌ（ＬＹ３１７６１５）、ＮＬ－７１－１０１、ＳＲ－１３６６８、ＰＸ－３１６、またはＫＲＸ－０４０１（ペリフォシン／ＮＳＣ ６３９９６６）；
（ｘｉｘ）Ｈｓｐ９０阻害剤、例えば、オナレスピブ（ＡＴ１３３８７）、ヘルビマイシン、ゲルダナマイシン（ＧＡ）、１７－アリルアミノ－１７－デスメトキシゲルダナマイシン（１７－ＡＡＧ）、例えば、ＮＳＣ－３３０５０７、Ｋｏｓ－９５３およびＣＮＦ－１０１０、１７－ジメチルアミノエチルアミノ－１７－デメトキシゲルダナマイシン塩酸塩（１７－ＤＭＡＧ）、例えば、ＮＳＣ－７０７５４５およびＫｏｓ－１０２２、ＮＶＰ－ＡＵＹ９２２（ＶＥＲ－５２２９６）、ＮＶＰ－ＢＥＰ８００、ＣＮＦ－２０２４（経口プリンとしてのＢＩＩＢ－０２１）、ガネテスピブ（ＳＴＡ－９０９０）、ＳＮＸ－５４２２（ＳＣ－１０２１１２）またはＩＰＩ－５０４；
（ｘｘ）モノクローナル抗体（非結合型または放射性同位元素、毒素またはその他の薬剤に結合）、抗体誘導体および関連薬剤、例えば、抗ＣＤ抗体、抗ＶＥＧＦＲ抗体、抗ＨＥＲ２抗体または抗ＥＧＦＲ抗体、例えば、リツキシマブ（ＣＤ２０）、オファツムマブ（ＣＤ２０）、イブリツモマブ・チウキセタン（ＣＤ２０）、ＧＡ１０１（ＣＤ２０）、トシツモマブ（ＣＤ２０）、エピラツズマブ（ＣＤ２２）、リンツズマブ（ＣＤ３３）、ゲムツズマブ・オゾガマイシン（ＣＤ３３）、アレムツズマブ（ＣＤ５２）、ガリキシマブ（ＣＤ８０）、トラスツズマブ（ＨＥＲ２抗体）、ペルツズマブ（ＨＥＲ２）、トラスツズマブ－ＤＭ１（ＨＥＲ２）、エルツマキソマブ（ＨＥＲ２およびＣＤ３）、セツキシマブ（ＥＧＦＲ）、パニツムマブ（ＥＧＦＲ）、ネシツムマブ（ＥＧＦＲ）、ニモツズマブ（ＥＧＦＲ）、ベバシズマブ（ＶＥＧＦ）、カツマキソマブ（ＥｐＣＡＭおよびＣＤ３）、アバゴボマブ（ＣＡ１２５）、ファーレツズマブ（葉酸受容体）、エロツズマブ（ＣＳ１）、デノスマブ（ＲＡＮＫリガンド）、フィギツムマブ（ＩＧＦ１Ｒ）、ＣＰ７５１，８７１（ＩＧＦ１Ｒ）、マパツムマブ（ＴＲＡＩＬ受容体）、ｍｅｔＭＡＢ（ｍｅｔ）、ミツモマブ（ＧＤ３ガングリオシド）、ナプツモマブエスタフェナトクス（５Ｔ４）、またはシルツキシマブ（ＩＬ６）または免疫調節剤、例えば、ＣＴＬＡ－４遮断抗体および／またはＰＤ－１およびＰＤ－Ｌ１および／またはＰＤ－Ｌ２に対する抗体、例えば、イピリムマブ（ＣＴＬＡ４）、ＭＫ－３４７５（ペンブロリズマブ、旧称ラムブロリズマブ、抗ＰＤ－１）、ニボルマブ（抗ＰＤ－１）、ＢＭＳ－９３６５５９（抗ＰＤ－Ｌ１）、ＭＰＤＬ３２０Ａ、ＡＭＰ－５１４またはＭＥＤＩ４７３６（抗ＰＤ－Ｌ１）、またはトレメリムマブ（旧称チシリムマブ、ＣＰ－６７５，２０６、抗ＣＴＬＡ－４）；
（ｘｘｉ）エストロゲン受容体アンタゴニストまたは選択的エストロゲン受容体調節薬（ＳＥＲＭ）またはエストロゲン合成阻害剤、例えば、タモキシフェン、フルベストラント、トレミフェン、ドロロキシフェン、ファスロデックス、またはラロキシフェン；
（ｘｘｉｉ）アロマターゼ阻害剤および関連薬物、例えば、エキセメスタン、アナストロゾール、レトラゾール、テストラクトンアミノグルテチミド、ミトタンまたはボロゾール；
（ｘｘｉｉｉ）抗アンドロゲン作用薬（すなわち、アンドロゲン受容体アンタゴニスト）および関連薬剤、例えば、ビカルタミド、ニルタミド、フルタミド、シプロテロン、またはケトコナゾール；
（ｘｘｉｖ）ホルモンおよびそれらの類似体、例えば、メドロキシプロゲステロン、ジエチルスチルベストロール（別称ジエチルスチルボエストロール）またはオクトレオチド；
（ｘｘｖ）ステロイド、例えば、プロピオン酸ドロモスタノロン、酢酸メゲストロール、ナンドロロン（デカン酸塩、フェンプロピオン酸塩）、フルオキシメステロン(fluoxymestrone)またはゴシポール、
（ｘｘｖｉ）ステロイドシトクロムＰ４５０ １７α－ヒドロキシラーゼ－１７，２０－リアーゼ阻害剤（ＣＹＰ１７）、例えば、アビラテロン；
（ｘｘｖｉｉ）ゴナドトロピン放出ホルモンアゴニストまたはアンタゴニスト（ＧｎＲＡｓ）、例えば、アバレリクス、酢酸ゴセレリン、酢酸ヒストレリン、酢酸ロイプロリド、トリプトレリン、ブセレリン、またはデスロレリン；
（ｘｘｖｉｉｉ）グルココルチコイド、例えば、プレドニゾン、プレドニゾロン、デキサメタゾン；
（ｘｘｉｘ）レチノイド、レキシノイド、ビタミンＤまたはレチノイン酸およびレチノイン酸代謝遮断薬（ＲＡＭＢＡ）、例えば、アキュテイン、アリトレチノイン、ベキサロテン、またはトレチノインなどの分化誘導薬；
（ｘｘｘ）ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤、例えば、チピファルニブ；
（ｘｘｘｉ）クロマチン標的治療薬、例えば、ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）阻害剤、例えば、酪酸ナトリウム、サブエロイルアニリドヒドロキサム酸（ＳＡＨＡ）、デプシペプチド（ＦＲ ９０１２２８）、ダシノスタット（ＮＶＰ－ＬＡＱ８２４）、Ｒ３０６４６５／ＪＮＪ－１６２４１１９９、ＪＮＪ－２６４８１５８５、トリコスタチンＡ、ボリノスタット、クラミドシン、Ａ－１７３、ＪＮＪ－ＭＧＣＤ－０１０３、ＰＸＤ－１０１、またはアピシジン；
（ｘｘｘｉｉ）プロテアソーム阻害剤、例えば、ボルテゾミブ、カルフィルゾミブ、ＣＥＰ－１８７７０、ＭＬＮ－９７０８、またはＯＮＸ－０９１２；ＮＥＤＤ８阻害剤；ＨＤＭ２アンタゴニストおよびデユビキチナーゼ（ＤＵＢ）を含むユビキチン－プロテアソーム経路を標的とする薬物；
（ｘｘｘｉｉｉ）光力学性薬剤、例えば、ポルフィマーナトリウムまたはテモポルフィン；
（ｘｘｘｉｖ）海洋生物由来抗癌剤、例えば、トラベクテジン(trabectidin)；
（ｘｘｘｖ）例えば、β粒子放射同位体（例えば、ヨウ素－１３１、イットリウム－９０）またはα粒子放射同位体（例えば、ビスマス－２１３またはアクチニウム－２２５）を伴う放射免疫治療のための放射性標識薬、例えば、イブリツモマブまたはヨウ素トシツモマブまたはαラジウム２２３；
（ｘｘｘｖｉ）テロメラーゼ阻害剤、例えば、テロメスタチン；
（ｘｘｘｖｉｉ）マトリックスメタロプロテイナーゼ阻害剤、例えば、バチマスタット、マリマスタット、プリノスタットまたはメタスタット；
（ｘｘｘｖｉｉｉ）組換えインターフェロン（例えば、インターフェロン－γおよびインターフェロンα）およびインターロイキン（例えば、インターロイキン２）、例えば、アルデスロイキン、デニロイキンジフチトクス、インターフェロンα２ａ、インターフェロンα２ｂ、またはペグインターフェロンα２ｂ；
（ｘｘｘｉｘ）選択的免疫応答調節剤、例えば、サリドマイド、またはレナリドマイド；
（ｘｌ）治療用ワクチン、例えば、シプロイセル－Ｔ（プロベンジ）またはＯｎｃｏＶｅｘ；
（ｘｌｉ）サイトカイン活性化剤には、ピシバニール、ロムルチド、シゾフィラン、ビルリジン、またはチモシンが含まれる；
（ｘｌｉｉ）三酸化ヒ素；
（ｘｌｉｉｉ）Ｇタンパク質共役受容体（ＧＰＣＲ）阻害剤、例えば、アトラセンタン；
（ｘｌｉｖ）酵素、例えば、Ｌ－アスパラギナーゼ、ペグアスパラガーゼ、ラスブリカーゼ、またはペガデマーゼ；
（ｘｌｖ）ＤＮＡ修復阻害剤、例えば、ＰＡＲＰ阻害剤、例えば、オラパリブ、ベリパリブ、イニパリブ、ＩＮＯ－１００１、ＡＧ－０１４６９９、またはＯＮＯ－２２３１；
（ｘｌｖｉ）デス受容体（例えば、ＴＮＦ関連アポトーシス誘導リガンド（ＴＲＡＩＬ）受容体）のアゴニスト、例えば、マパツムマブ（旧称ＨＧＳ－ＥＴＲ１）、コナツムマブ（旧称ＡＭＧ６５５）、ＰＲＯ９５７８０、レクサツムマブ、ドゥラネルミン、ＣＳ－１００８、多標的または組換えＴＲＡＩＬリガンド、例えば、組換えヒトＴＲＡＩＬ／Ａｐｏ２リガンド；
（ｘｌｖｉｉ）免疫治療薬、例えば、免疫チェックポイント阻害剤；癌ワクチンおよびＣＡＲ－Ｔ細胞療法；
（ｘｌｖｉｉｉ）細胞死（アポトーシス）誘導Ｂｃｌ－２（Ｂ細胞リンパ腫２）アンタゴニストのレギュレーター、例えば、ベネトクラックス（ＡＢＴ－１９９またはＧＤＣ－０１９９）、ＡＢＴ－７３７、ＡＢＴ－２６３、ＴＷ－３７、サブトクラックス、オバトクラックス、ならびにＬＣＬ－１６１（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、Ｄｅｂｉｏ－１１４３（Ｄｅｂｉｏｐｈａｒｍａ／Ａｓｃｅｎｔａ）、ＡＺＤ５５８２、ビリナパント／ＴＬ－３２７１１（ＴｅｔｒａＬｏｇｉｃ）、ＣＵＤＣ－４２７／ＧＤＣ－０９１７／ＲＧ－７４５９（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、ＪＰ１２０１（Ｊｏｙａｎｔ）、Ｔ－３２５６３３６（Ｔａｋｅｄａ）、ＧＤＣ－０１５２（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）またはＨＧＳ－１０２９／ＡＥＧ－４０８２６（ＨＧＳ／Ａｅｇｅｒａ）を含むＭＩＭ１およびＩＡＰアンタゴニスト；
（ｘｌｉｘ）予防薬（補助剤）；すなわち、化学療法薬に関連する副作用のいくつかを軽減または緩和する薬剤、例えば、
制吐薬、
化学療法関連好中球減少症を予防するまたはその期間を短縮する、および血小板、赤血球または白血球のレベルの低下から生じる合併症を予防する薬剤、例えば、インターロイキン－１１（例えば、オプレルベキン）、エリスロポエチン（ＥＰＯ）およびその類似体（例えば、ダルベポエチンアルファ）、顆粒球マクロファージ－コロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）などのコロニー刺激因子類似体（例えば、サルグラモスチム）、および顆粒球－コロニー刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ）およびその類似体（例えば、フィルグラスチム、ペグフィルグラスチム）、
骨吸収を阻害する薬剤、例えば、デノスマブまたはビスホスホネート、例えば、ゾレドロネート、ゾレンドロン酸、パミドロネートおよびイバンドロネート、
炎症性応答を抑制する薬剤、例えば、デキサメタゾン、プレドニゾン、およびプレドニゾロン、
先端巨大症または他の希なホルモン産生腫瘍を有する患者において成長ホルモンおよびＩＧＦ－Ｉ（およびその他のホルモン）の血液レベルを軽減するために使用される薬剤、例えば、ホルモンソマトスタチンの合成形態、例えば、酢酸オクトレオチド、
葉酸のレベルを低減する薬物に対する解毒薬、例えば、ロイコボリン、またはフォリン酸、
疼痛のための薬剤、例えば、オピエート、例えば、モルヒネ、ジアモルヒネおよびフェンタニル、
非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、例えば、ＣＯＸ－２阻害剤、例えば、セレコキシブ、エトリコキシブおよびルミラコキシブ、
粘膜炎のための薬剤、例えば、パリフェルミン、
食欲不振症、悪液質、浮腫または血栓塞栓症発作を含む副作用の処置のための薬剤、例えば、酢酸メゲストロール。
１つの実施形態において、本発明のバイオマーカー、特に、ＢＡＰ１および／またはＣＤＫＮ２Ａおよび／または本明細書に挙げられている遺伝子は、上記の（ｉ）～（ｘｌｉｘ）に挙げられている薬剤のうち１以上と組み合わせたＭＤＭ２アンタゴニストで処置するための患者を選択するために使用することができる。１つの実施形態において、本発明のバイオマーカー、特に、ＢＡＰ１および／またはＣＤＫＮ２Ａおよび／または本明細書に挙げられているインターフェロン遺伝子は、組換えインターフェロン、ＤＮＡ修復阻害剤、例えば、ＰＡＲＰ阻害剤；ＩＡＰアンタゴニスト；白金化合物；アルキル化剤、および／または放射線療法と組み合わせたＭＤＭ２アンタゴニストで処置するための患者を選択するために使用することができる。
１つの実施形態において、患者の腫瘍は、正常レベルまたは高レベルのＢＡＰ１および／またはＣＤＫＮ２Ａ、および／または低レベルのインターフェロンシグネチャー遺伝子の存在のために単一薬剤としてのＭＤＭ２阻害剤による処置に適していないと判定され、従って、その患者は、ＭＤＭ２アンタゴニストに対する腫瘍感受性を生じさせるために使用可能な付加的薬剤と組み合わせたＭＤＭ２阻害剤で処置することができる。１つの実施形態において、患者の腫瘍は、ＢＡＰ１が正常もしくは高いおよび／またはＣＤＫＮ２Ａが正常もしくは高い、および／またはインターフェロンシグネチャー遺伝子が低いと判定され、付加的抗癌剤と組み合わせたＭＤＭ２アンタゴニストで処置される。１つの実施形態において、患者の腫瘍は、ＢＡＰ１および／またはＣＤＫＮ２Ａの存在および／または正常レベルもしくは高いレベルのＢＡＰ１および／またはＣＤＫＮ２Ａ遺伝子発現、および／または低い発現レベルのインターフェロンシグネチャー遺伝子を示すと判定され、上記の（ｉ）～（ｘｌｉｘ）に挙げられている薬剤のうち１以上と組み合わせたＭＤＭ２アンタゴニストで処置される。
１つの実施形態において、本発明のバイオマーカー、特に、ＢＡＰ１および／またはＣＤＫＮ２Ａおよび／または本明細書に挙げられている遺伝子、例えば、インターフェロンシグネチャー遺伝子は、上記の（ｉ）～（ｘｌｉｘ）に挙げられている薬剤のうち１以上と組み合わせたＭＤＭ２アンタゴニストで患者を処置するために使用することができる。
１つの実施形態において、本発明のバイオマーカーは、特に、ＢＡＰ１および／またはＣＤＫＮ２Ａは、組換えインターフェロン（例えば、インターフェロン－γおよびインターフェロンα）およびインターロイキン（例えば、インターロイキン２）、例えば、アルデスロイキン、デニロイキンジフチトクス、インターフェロンα２ａ、インターフェロンα２ｂ、またはペグインターフェロンα２ｂと組み合わせたＭＤＭ２アンタゴニストで処置するための患者を選択するために使用することができる。１つの実施形態において、患者の腫瘍は、ＢＡＰ１および／またはＣＤＫＮ２Ａが正常もしくは高いおよび／またはインターフェロンシグネチャーが低いと判定され、１以上の組換えインターフェロンと組み合わせたＭＤＭ２アンタゴニストで処置される。
１つの実施形態において、本発明のバイオマーカー、特に、ＢＡＰ１および／またはＣＤＫＮ２Ａおよび／または本明細書に挙げられている遺伝子は、ＤＮＡ修復阻害剤、例えば、ＰＡＲＰ阻害剤、例えば、オラパリブ、ベリパリブ、イニパリブ、ＩＮＯ－１００１、ＡＧ－０１４６９９、またはＯＮＯ－２２３１と組み合わせたＭＤＭ２アンタゴニストで処理するための患者を選択するために使用することができる。１つの実施形態において、患者の腫瘍は、ＢＡＰ１および／またはＣＤＫＮ２Ａが正常もしくは高い、および／またはインターフェロンシグネチャー遺伝子が低いと判定され、ＰＡＲＰ阻害剤と組み合わせたＭＤＭ２アンタゴニストで処置される。１つの実施形態において、ＰＡＲＰ阻害剤は、例えば、オラパリブ、ルカパリブ、ベリパリブ、イニパリブ、ＩＮＯ－１００１、ＡＧ－０１４６９９、ＯＮＯ－２２３１；およびタラゾパリブから選択される。
１つの実施形態において、本発明のバイオマーカー、特に、ＢＡＰ１および／またはＣＤＫＮ２Ａおよび／または本明細書に挙げられてる遺伝子は、ＬＣＬ－１６１（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、Ｄｅｂｉｏ－１１４３（Ｄｅｂｉｏｐｈａｒｍａ／Ａｓｃｅｎｔａ）、ＡＺＤ５５８２、Ｂｉｒｉｎａｐａｎｔ／ＴＬ－３２７１１（ＴｅｔｒａＬｏｇｉｃ）、ＣＵＤＣ－４２７／ＧＤＣ－０９１７／ＲＧ－７４５９（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、ＪＰ１２０１（Ｊｏｙａｎｔ）、Ｔ－３２５６３３６（Ｔａｋｅｄａ）、ＧＤＣ－０１５２（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）またはＨＧＳ－１０２９／ＡＥＧ－４０８２６（ＨＧＳ／Ａｅｇｅｒａ）を含むＩＡＰアンタゴニストと組み合わせたＭＤＭ２アンタゴニストで処置するための患者を選択するために使用することができる。１つの実施形態において、患者の腫瘍は、ＢＡＰ１および／またはＣＤＫＮ２Ａが正常もしくは高い、および／またはインターフェロンシグネチャー遺伝子が低いと判定され、ＩＡＰアンタゴニストと組み合わせたＭＤＭ２アンタゴニストで処置される。１つの実施形態において、ＩＡＰアンタゴニストは、例えば、ＬＣＬ－１６１（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、Ｄｅｂｉｏ－１１４３（Ｄｅｂｉｏｐｈａｒｍａ／Ａｓｃｅｎｔａ）、ＡＺＤ５５８２、Ｂｉｒｉｎａｐａｎｔ／ＴＬ－３２７１１（ＴｅｔｒａＬｏｇｉｃ）、ＣＵＤＣ－４２７／ＧＤＣ－０９１７／ＲＧ－７４５９（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、ＪＰ１２０１（Ｊｏｙａｎｔ）、Ｔ－３２５６３３６（Ｔａｋｅｄａ）、ＧＤＣ－０１５２（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、ＡＳＴＸ６６０およびＨＧＳ－１０２９／ＡＥＧ－４０８２６（ＨＧＳ／Ａｅｇｅｒａ）から選択される。
１つの実施形態において、本発明のバイオマーカー、特に、ＢＡＰ１および／またはＣＤＫＮ２Ａおよび／または本明細書に挙げられてるインターフェロン遺伝子は、白金化合物、例えば、シスプラチン（場合により、アミフォスチンと組み合わせて）、カルボプラチンまたはオキサリプラチン；アルキル化剤、例えば、ナイトロジェンマスタードまたはニトロソ尿素、例えば、シクロホスファミド、クロラムブシル、カルムスチン（ＢＣＮＵ）、ベンダムスチン、チオテパ、メルファラン、トレオスルファン、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、アルトレタミン、ブスルファン、ダカルバジン、エストラムスチン、フォテムスチン、イフォスファミド（場合により、メスナと組み合わせて）、ピポブロマン、プロカルバジン、ストレプトゾシン、テモゾロミド、ウラシル、メクロレタミン、メチルシクロヘキシルクロロエチルニトロソ尿素、またはニムスチン（ＡＣＮＵ）、および／または放射線療法と組み合わせたＭＤＭ２アンタゴニストで処置するための患者を選択するために使用することができる。１つの実施形態において、患者の腫瘍は、ＢＡＰ１および／またはＣＤＫＮ２Ａが正常もしくは高いおよび／またはインターフェロンシグネチャー遺伝子が低いと判定され、白金化合物、例えば、シスプラチン（場合により、アミフォスチンと組み合わせて）、カルボプラチンまたはオキサリプラチン；アルキル化剤、例えば、ナイトロジェンマスタードまたはニトロソ尿素、例えば、シクロホスファミド、クロラムブシル、カルムスチン（ＢＣＮＵ）、ベンダムスチン、チオテパ、メルファラン、トレオスルファン、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、アルトレタミン、ブスルファン、ダカルバジン、エストラムスチン、フォテムスチン、イフォスファミド（場合により、メスナと組み合わせて）、ピポブロマン、プロカルバジン、ストレプトゾシン、テモゾロミド、ウラシル、メクロレタミン、メチルシクロヘキシルクロロエチルニトロソ尿素、またはニムスチン（ＡＣＮＵ）、および／または放射線療法と組み合わせたＭＤＭ２アンタゴニストで処置される。１つの実施形態において、白金化合物は、例えば、シスプラチン（場合により、アミフォスチンと組み合わせて）、カルボプラチン、オキサリプラチン、ジシクロプラチン、ヘプタプラチン、ロバプラチン、ネダプラチン、サトラプラチンまたは四硝酸トリプラチン、特に、シスプラチン、カルボプラチン、およびオキサリプラチンから選択される。１つの実施形態において、ナイトロジェンマスタードまたはニトロソ尿素などのアルキル化剤は、例えば、シクロホスファミド、クロラムブシル、カルムスチン（ＢＣＮＵ）、アンバムスチン、ベンダムスチン、チオテパ、メルファラン、トレオスルファン、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、ブスルファン，ダカルバジン、エストラムスチン、フォテムスチン、イフォスファミド（場合により、メスナと組み合わせて）、ピポブロマン、プロカルバジン、ストレプトゾシン、テモゾロミド、ウラシル、メクロレタミン、メクロレタミンオキシド塩酸塩、メチルシクロヘキシルクロロエチルニトロ尿素、ニムスチン（ＡＣＮＵ）、プレドニムスチン、メクロレタミン、エトグルシド；ストレプトゾトシン、イロフルベン、ミトラクトール、グルホスファミド、エボホスファミド、エチレンイミンまたはメチルメラミン（アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリメチロロメラミン、トリエチレンホスホルアミド、トリエチレンチオホスホルアミド、またはトリメチロロメラミン(trimemylolomelamine)から選択される。１つの実施形態において、本発明のバイオマーカー、特に、ＢＡＰ１および／またはＣＤＫＮ２Ａおよび／または本明細書に挙げられてる遺伝子は、放射線療法と組み合わせたＭＤＭ２アンタゴニストで処置するための患者を選択するために使用することができる。１つの実施形態において、患者の腫瘍は、ＢＡＰ１および／またはＣＤＫＮ２Ａが正常もしくは高いおよび／またはインターフェロンシグネチャー遺伝子が低いと判定され、放射線療法と組み合わせたＭＤＭ２アンタゴニストで処置される。
別の実施形態では、患者において癌を治療する方法が提供され、前記方法は、
（ａ）前記患者から得られた生物学的サンプルに正常レベルまたは高レベルのＢＡＰ１および／またはＣＤＫＮ２Ａ（または低レベルのインターフェロンシグネチャー）を有する患者を選択する工程；ならびに
（ｂ）工程（ａ）で選択された前記患者に、治療上有効な量のＭＤＭ２アンタゴニストおよび例えば、ＢＡＰ１および／またはＣＤＫＮ２Ａのレベルを低下させる（またはインターフェロンシグネチャーのレベルを増大させる）ことによってＭＤＭ２アンタゴニストに対する感受性を誘導する薬剤を投与する工程
を含んでなる。
１つの実施形態において、ＢＡＰ１および／またはＣＤＫＮ２Ａのレベルを低下させる（またはインターフェロンシグネチャーのレベルを増大させる）ための薬剤または処置は、抗癌剤または抗癌治療である。１つの実施形態において、ＢＡＰ１および／またはＣＤＫＮ２Ａのレベルを低下させる（またはインターフェロンシグネチャーのレベルを増大させる）ための薬剤または処置は、組換えインターフェロン（例えば、インターフェロン－γおよびインターフェロンα）およびインターロイキン（例えば、インターロイキン２）、例えば、アルデスロイキン、デニロイキンジフチトクス、インターフェロンα２ａ、インターフェロンα２ｂ、またはペグインターフェロンα２ｂ、またはＤＮＡ修復阻害剤、例えば、ＰＡＲＰ阻害剤、またはＩＡＰアンタゴニストまたは白金化合物、例えば、シスプラチン（場合により、アミフォスチンと組み合わせて）、カルボプラチンまたはオキサリプラチン；アルキル化剤、例えば、ナイトロジェンマスタードまたはニトロソ尿素、例えば、シクロホスファミド、クロラムブシル、カルムスチン（ＢＣＮＵ）、ベンダムスチン、チオテパ、メルファラン、トレオスルファン、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、アルトレタミン、ブスルファン、ダカルバジン、エストラムスチン、フォテムスチン、イフォスファミド（場合により、メスナと組み合わせて）、ピポブロマン、プロカルバジン、ストレプトゾシン、テモゾロミド、ウラシル、メクロレタミン、メチルシクロヘキシルクロロエチルニトロソ尿素、またはニムスチン（ＡＣＮＵ）、および／または放射線療法である。
１つの実施形態において、感受性を誘導する、例えば、ＢＡＰ１および／またはＣＤＫＮ２Ａのレベルを低下させる（またはインターフェロンシグネチャーのレベルを増大させる）ための薬剤または処置は、組換えインターフェロンおよびインターロイキン、ＤＮＡ 修復阻害剤、ＩＡＰアンタゴニストまたは白金化合物である。１つの実施形態において、感受性を誘導する、例えば、ＢＡＰ１および／またはＣＤＫＮ２Ａのレベルを低下させる（またはインターフェロンシグネチャーのレベルを増大させる）ための薬剤または処置は、ＩＡＰアンタゴニストである。
１つの実施形態において、アポトーシスを誘発するための薬剤または処置は、ＩＡＰアンタゴニストである。１つの実施形態において、ＩＡＰアンタゴニストは、ＬＣＬ－１６１（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、Ｄｅｂｉｏ－１１４３（Ｄｅｂｉｏｐｈａｒｍａ／Ａｓｃｅｎｔａ）、ＡＺＤ５５８２、Ｂｉｒｉｎａｐａｎｔ／ＴＬ－３２７１１（ＴｅｔｒａＬｏｇｉｃ）、ＣＵＤＣ－４２７／ＧＤＣ－０９１７／ＲＧ－７４５９（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、ＪＰ１２０１（Ｊｏｙａｎｔ）、Ｔ－３２５６３３６（Ｔａｋｅｄａ）、ＧＤＣ－０１５２（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）またはＨＧＳ－１０２９／ＡＥＧ－４０８２６（ＨＧＳ／Ａｅｇｅｒａ）である。
１つの実施形態において、ＩＡＰアンタゴニストは、ＡＳＴＸ６６０、ＬＣＬ－１６１（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、Ｄｅｂｉｏ－１１４３（Ｄｅｂｉｏｐｈａｒｍａ／Ａｓｃｅｎｔａ）、ＡＺＤ５５８２、Ｂｉｒｉｎａｐａｎｔ／ＴＬ－３２７１１（ＴｅｔｒａＬｏｇｉｃ）、ＣＵＤＣ－４２７／ＧＤＣ－０９１７／ＲＧ－７４５９（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、ＪＰ１２０１（Ｊｏｙａｎｔ）、Ｔ－３２５６３３６（Ｔａｋｅｄａ）、ＧＤＣ－０１５２（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）またはＨＧＳ－１０２９／ＡＥＧ－４０８２６（ＨＧＳ／Ａｅｇｅｒａ）である。１つの実施形態において、ＩＡＰアンタゴニストは、ＡＳＴＸ６６０である。１つの実施形態において、本発明は、ＭＤＭ２抗アゴニスト、例えば、（２Ｓ，３Ｓ）－３－（４－クロロフェニル）－３－［（１Ｒ）－１－（４－クロロフェニル）－７－フルオロ－５－［（１Ｓ）－１－ヒドロキシ－１－（オキサン－４－イル）プロピル］－１－メトキシ－３－オキソ－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－イソインドール－２－イル］－２－メチルプロパン酸とＡＳＴＸ６６０の組合せに関する。
１つの側面において、本発明は、
（ｉ）（２Ｓ，３Ｓ）－３－（４－クロロフェニル）－３－［（１Ｒ）－１－（４－クロロフェニル）－７－フルオロ－５－［（１Ｓ）－１－ヒドロキシ－１－（オキサン－４－イル）プロピル］－１－メトキシ－３－オキソ－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－イソインドール－２－イル］－２－メチルプロパン酸（「イソインドリン－１－オン化合物」）またはその互変異性体もしくは溶媒和物もしくは薬学上許容可能な塩；および
（ｉｉ）１－｛６－［（４－フルオロフェニル）メチル］－５－（ヒドロキシメチル）－３，３－ジメチル－１Ｈ，２Ｈ，３Ｈ－ピロロ［３，２－ｂ］ピリジン－１－イル｝－２－［（２Ｒ，５Ｒ）－５－メチル－２－｛［（３Ｒ）－３－メチルモルホリン－４－イル］メチル｝ピペラジン－１－イル］エタン－１－オン（「ＡＳＴＸ６６０」）またはその互変異性体もしくは溶媒和物もしくは薬学上許容可能な塩
の組合せを提供する。
特に、本発明のこの側面は以下のものを提供する。
本明細書に開示されるような組合せ（例えば、イソインドリン－１－オン化合物またはその互変異性体もしくは溶媒和物もしくは薬学上許容可能な塩とＡＳＴＸ６６０またはその互変異性体もしくは溶媒和物もしくは薬学上許容可能な塩の組合せ）および場合により、１以上（例えば、１つまたは２つ）の他の治療薬（例えば、抗癌剤）を含んでなる組合せ。
イソインドリン－１－オン化合物またはその互変異性体もしくは溶媒和物もしくは薬学上許容可能な塩と付加的治療薬、例えば、ＡＳＴＸ６６０またはその互変異性体もしくは溶媒和物もしくは薬学上許容可能な塩を含んでなる本明細書に開示されるような組合せ（このイソインドリン－１－オン化合物またはその互変異性体もしくは溶媒和物もしくは薬学上許容可能な塩と付加的治療薬、例えば、ＡＳＴＸ６６０またはその互変異性体もしくは溶媒和物もしくは薬学上許容可能な塩は、物理的に会合している）。
イソインドリン－１－オン化合物またはその互変異性体もしくは溶媒和物もしくは薬学上許容可能な塩および本明細書に開示されるような付加的治療薬、例えば、ＡＳＴＸ６６０またはその互変異性体もしくは溶媒和物もしくは薬学上許容可能な塩を含んでなる組合せ（このイソインドリン－１－オン化合物またはその互変異性体もしくは溶媒和物もしくは薬学上許容可能な塩と付加的治療薬、例えば、ＡＳＴＸ６６０またはその互変異性体もしくは溶媒和物もしくは薬学上許容可能な塩は、（ａ）混合物であるか；（ｂ）化学的／物理化学的に連結されているか；（ｃ）化学的／物理化学的に共包装されているか；または（ｄ）混合されていないが、共包装または共存している）。
イソインドリン－１－オン化合物またはその互変異性体もしくは溶媒和物もしくは薬学上許容可能な塩と本明細書に開示されるような付加的治療薬、例えば、ＡＳＴＸ６６０またはその互変異性体もしくは溶媒和物もしくは薬学上許容可能な塩を含んでなる組合せ（このイソインドリン－１－オン化合物またはその互変異性体もしくは溶媒和物もしくは薬学上許容可能な塩と治療薬、例えば、ＡＳＴＸ６６０またはその互変異性体もしくは溶媒和物もしくは薬学上許容可能な塩は、非物理的に会合している）。
イソインドリン－１－オン化合物またはその互変異性体もしくは溶媒和物もしくは薬学上許容可能な塩と本明細書に開示されるような付加的治療薬、例えば、ＡＳＴＸ６６０またはその互変異性体もしくは溶媒和物もしくは薬学上許容可能な塩を含んでなる組合せ（この組合せは、（ａ）２つ以上の化合物のうち少なくとも１つを、２つ以上の化合物の物理的会合を形成するための少なくとも１つの化合物の即時調合会合に関する説明書とともに；または（ｂ）２つ以上の化合物のうち少なくとも１つを、２つ以上の化合物を用いた併用療法に関する説明書とともに；または（ｃ）２つ以上の化合物のうち少なくとも１つを、２つ以上の化合物の他方が投与された（または投与される）患者集団への投与に関する説明書とともに；または（ｄ）２つ以上の化合物の他方と組み合わせて使用するために特に適した量または形態の、２つ以上の化合物のうち少なくとも１つを含んでなる）。
イソインドリン－１－オン化合物またはその互変異性体もしくは溶媒和物もしくは薬学上許容可能な塩と本明細書に開示されるような付加的治療薬、例えば、ＡＳＴＸ６６０またはその互変異性体もしくは溶媒和物もしくは薬学上許容可能な塩を、医薬キットまたは患者パックの形態で含んでなる組合せ。
イソインドリン－１－オン化合物またはその互変異性体もしくは溶媒和物もしくは薬学上許容可能な塩と本明細書に開示されるような付加的治療薬、例えば、ＡＳＴＸ６６０またはその互変異性体もしくは溶媒和物もしくは薬学上許容可能な塩を含んでなる組合せを含んでなる医薬組成物。
イソインドリン－１－オン化合物またはその互変異性体もしくは溶媒和物もしくは薬学上許容可能な塩と付加的治療薬、例えば、ＡＳＴＸ６６０またはその互変異性体もしくは溶媒和物もしくは薬学上許容可能な塩を含んでなる組合せ、あるいは療法において使用するための、本明細書に開示されるような組合せを含んでなる医薬組成物。
イソインドリン－１－オン化合物またはその互変異性体もしくは溶媒和物もしくは薬学上許容可能な塩と付加的治療薬、例えば、ＡＳＴＸ６６０またはその互変異性体もしくは溶媒和物もしくは薬学上許容可能な塩を含んでなる組合せ、あるいは本明細書に記載されるような病状または病態の予防または治療において使用するための、本明細書に開示されるような組合せを含んでなる医薬組成物。
本明細書に記載されるような病状または病態の予防または治療において使用するための薬剤の製造のための、イソインドリン－１－オン化合物またはその互変異性体もしくは溶媒和物もしくは薬学上許容可能な塩および付加的治療薬、例えば、ＡＳＴＸ６６０またはその互変異性体もしくは溶媒和物もしくは薬学上許容可能な塩を含んでなる組合せ、あるいは本明細書に開示されるような組合せを含んでなる医薬組成物の使用。
イソインドリン－１－オン化合物またはその互変異性体もしくは溶媒和物もしくは薬学上許容可能な塩と付加的治療薬、例えば、ＡＳＴＸ６６０またはその互変異性体もしくは溶媒和物もしくは薬学上許容可能な塩を含んでなる組合せあるいは本明細書に開示されるような組合せを含んでなる医薬組成物を投与することを含んでなる、本明細書に記載されるような疾患または病態の予防または治療のための方法。
必要とする患者に（ｉ）付加的治療薬、例えば、ＡＳＴＸ６６０、またはその互変異性体、Ｎ－オキシド、薬学上許容可能な塩もしくは溶媒和物と（ｉｉ）本明細書で定義されるようなイソインドリン－１－オン化合物、またはその互変異性体、Ｎ－オキシド、薬学上許容可能な塩もしくは溶媒和物を投与することを含んでなる、本明細書に記載されるような疾患または病態の予防または治療のための方法。
特に、本明細書に開示されるような予防または治療のための方法で使用するための、イソインドリン－１－オン化合物またはその互変異性体もしくは溶媒和物もしくは薬学上許容可能な塩と付加的治療薬、例えば、ＡＳＴＸ６６０またはその互変異性体もしくは溶媒和物もしくは薬学上許容可能な塩を含んでなる組合せ、あるいは本明細書に開示されるような組合せを含んでなる医薬組成物（この病状または病態は、ＭＤＭ２－ｐ５３により媒介される）。
イソインドリン－１－オン化合物またはその互変異性体もしくは溶媒和物もしくは薬学上許容可能な塩と付加的治療薬、例えば、ＡＳＴＸ６６０またはその互変異性体もしくは溶媒和物もしくは薬学上許容可能な塩を含んでなる組合せ、あるいは本明細書に開示されるような組合せを含んでなる医薬組成物、あるいは本明細書に開示されるような組合せを用いた予防または治療のための方法（患者は、本明細書に記載のバイオマーカー、特に、ＢＡＰ１枯渇および／またはＣＤＫＮ２Ａ枯渇および／または１以上のインターフェロンシグネチャー遺伝子の発現の増大に従って選択される）。
イソインドリン－１－オン化合物またはその互変異性体もしくは溶媒和物もしくは薬学上許容可能な塩と付加的治療薬、例えば、ＡＳＴＸ６６０またはその互変異性体もしくは溶媒和物もしくは薬学上許容可能な塩を含んでなる組合せ、あるいは本明細書に開示されるような組合せを含んでなる医薬組成物、または本明細書に開示されるような組合せを用いた予防または治療のための方法（患者は、ＢＡＰ１および／またはＣＤＫＮ２Ａが正常または高い、および／またはインターフェロンシグネチャー遺伝子が低い腫瘍を有するとして選択される）。
イソインドリン－１－オン化合物またはその互変異性体もしくは溶媒和物もしくは薬学上許容可能な塩と付加的治療薬、例えば、ＡＳＴＸ６６０またはその互変異性体もしくは溶媒和物もしくは薬学上許容可能な塩を含んでなる組合せ、あるいは本明細書に開示されるような組合せを含んでなる医薬組成物、または本明細書に開示されるような組合せを用いた予防または治療のための方法（この病状または病態は癌である）。
イソインドリン－１－オン化合物またはその互変異性体もしくは溶媒和物もしくは薬学上許容可能な塩と付加的治療薬、例えば、ＡＳＴＸ６６０またはその互変異性体もしくは溶媒和物もしくは薬学上許容可能な塩を含んでなる組合せ、あるいは本明細書に開示されるような組合せを含んでなる医薬組成物、あるいは本明細書に開示されるような組合せを用いた予防または治療のための方法（この病状または病態は、癌であり、急性骨髄性白血病である）。
急性骨髄性白血病の予防または治療のための本明細書に開示されるような使用のための、イソインドリン－１－オン化合物またはその互変異性体もしくは溶媒和物もしくは薬学上許容可能な塩と本明細書に開示されるような付加的治療薬、例えば、ＡＳＴＸ６６０またはその互変異性体もしくは溶媒和物もしくは薬学上許容可能な塩を含んでなる組合せ。
本明細書に記載されるような病状または病態の予防または治療において使用するための、イソインドリン－１－オン化合物、またはその互変異性体、Ｎ－オキシド、薬学上許容可能な塩もしくは溶媒和物（このイソインドリン－１－オン化合物は、付加的治療薬、例えば、ＡＳＴＸ６６０、またはその互変異性体、Ｎ－オキシド、薬学上許容可能な塩もしくは溶媒和物と組み合わせて使用される）。
本明細書に記載されるような癌の予防または治療において使用するための、イソインドリン－１－オン化合物またはその互変異性体、Ｎ－オキシド、薬学上許容可能な塩もしくは溶媒和物（このイソインドリン－１－オン化合物は、付加的治療薬、例えば、ＡＳＴＸ６６０、またはその互変異性体、Ｎ－オキシド、薬学上許容可能な塩もしくは溶媒和物と組み合わせて使用される）。
本明細書に記載されるような病状または病態の予防または治療において使用するための、ＡＳＴＸ６６０、またはその互変異性体、Ｎ－オキシド、薬学上許容可能な塩もしくは溶媒和物（この治療薬は、イソインドリン－１－オン化合物、またはその互変異性体、Ｎ－オキシド、薬学上許容可能な塩もしくは溶媒和物と組み合わせて使用される）。
付加的治療薬、例えば、ＡＳＴＸ６６０またはその互変異性体もしくは溶媒和物もしくは薬学上許容可能な塩、および場合により、１以上の他の治療薬との併用療法で、必要とする患者における癌の予防、治療または管理において使用するための、イソインドリン－１－オン化合物、またはその互変異性体、Ｎ－オキシド、薬学上許容可能な塩もしくは溶媒和物。
患者が別の治療薬、例えば、ＡＳＴＸ６６０、またはその互変異性体、Ｎ－オキシド、薬学上許容可能な塩もしくは溶媒和物で処置される場合の癌の治療用薬剤の製造のためのイソインドリン－１－オン化合物、またはその互変異性体、Ｎ－オキシド、薬学上許容可能な塩もしくは溶媒和物の使用。
患者が本明細書に開示されるようなイソインドリン－１－オン化合物、またはその互変異性体、Ｎ－オキシド、薬学上許容可能な塩もしくは溶媒和物で処置される場合の癌の治療用薬剤の製造のための治療薬、例えば、ＡＳＴＸ６６０、またはその互変異性体、Ｎ－オキシド、薬学上許容可能な塩もしくは溶媒和物の使用。
患者が別の治療薬、例えば、ＡＳＴＸ６６０、またはその互変異性体、Ｎ－オキシド、薬学上許容可能な塩もしくは溶媒和物で処置される場合に、癌に罹患している患者の応答率の向上または増強において使用するための薬剤の製造のための、イソインドリン－１－オン化合物、またはその互変異性体、Ｎ－オキシド、薬学上許容可能な塩もしくは溶媒和物の使用。
哺乳動物における異常な細胞増殖を含んでなるまたは常な細胞増殖から生じる疾患または病態の治療において使用するためのイソインドリン－１－オン化合物、またはその互変異性体、Ｎ－オキシド、薬学上許容可能な塩もしくは溶媒和物（この哺乳動物は、別の治療薬、例えば、ＡＳＴＸ６６０またはその互変異性体、Ｎ－オキシド、薬学上許容可能な塩もしくは溶媒和物による処置を受けている）。
哺乳動物における異常な細胞増殖を含んでなるまたは常な細胞増殖から生じる疾患または病態の罹患率の緩和または軽減において使用するための、イソインドリン－１－オン化合物、またはその互変異性体、Ｎ－オキシド、薬学上許容可能な塩もしくは溶媒和物（この哺乳動物は、別の治療薬、例えば、ＡＳＴＸ６６０、またはその互変異性体、Ｎ－オキシド、薬学上許容可能な塩もしくは溶媒和物による処置を受けている）。
腫瘍細胞の増殖を阻害するための医薬組成物の製造における、本明細書に開示されるような組合せ（例えば、イソインドリン－１－オン化合物またはその互変異性体もしくは溶媒和物もしくは薬学上許容可能な塩と付加的治療薬、例えば、ＡＳＴＸ６６０またはその互変異性体もしくは溶媒和物もしくは薬学上許容可能な塩を含んでなる組合せ）の使用。
癌の治療における同時、個別または逐次使用のための組合せ製剤としての、第１の有効成分としてのイソインドリン－１－オン化合物、またはその互変異性体、Ｎ－オキシド、薬学上許容可能な塩もしくは溶媒和物、およびさらなる有効成分としての付加的治療薬、例えば、ＡＳＴＸ６６０、またはその互変異性体、Ｎ－オキシド、薬学上許容可能な塩もしくは溶媒和物を含有する製品。
１つの実施形態において、組み合わせて使用される付加的治療薬は、ＢＡＰ１および／またはＣＤＫＮ２Ａのレベルを低下させる（またはインターフェロンシグネチャーのレベルを増大ための薬剤または処置である。１つの実施形態において、ＢＡＰ１および／またはＣＤＫＮ２Ａのレベルを低下させる（またはインターフェロンシグネチャーのレベルを増大させる）ための薬剤または処置は、組換えインターフェロン（例えば、インターフェロン－γおよびインターフェロンα）およびインターロイキン（例えば、インターロイキン２）、例えば、アルデスロイキン、デニロイキンジフチトクス、インターフェロンα２ａ、インターフェロンα２ｂ、またはペグインターフェロンα２ｂ、またはＤＮＡ修復阻害剤、例えば、ＰＡＲＰ阻害剤、またはＩＡＰアンタゴニストまたは白金化合物、例えば、シスプラチン（場合により、アミフォスチンと組み合わせて）、カルボプラチンまたはオキサリプラチン；アルキル化剤、例えば、ナイトロジェンマスタードまたはニトロソ尿素、例えば、シクロホスファミド、クロラムブシル、カルムスチン（ＢＣＮＵ）、ベンダムスチン、チオテパ、メルファラン、トレオスルファン、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、アルトレタミン、ブスルファン、ダカルバジン、エストラムスチン、フォテムスチン、イフォスファミド（場合により、メスナと組み合わせて）、ピポブロマン、プロカルバジン、ストレプトゾシン、テモゾロミド、ウラシル、メクロレタミン、メチルシクロヘキシルクロロエチルニトロ尿素、またはニムスチン（ＡＣＮＵ）、および／または放射線療法である。
１－｛６－［（４－フルオロフェニル）メチル］－５－（ヒドロキシメチル）－３，３－ジメチル－１Ｈ，２Ｈ，３Ｈ－ピロロ［３，２－ｂ］ピリジン－１－イル｝－２－［（２Ｒ，５Ｒ）－５－メチル－２－｛［（３Ｒ）－３－メチルモルホリン－４－イル］メチル｝ピペラジン－１－イル］エタン－１－オン（ＡＳＴＸ６６０）および乳酸塩を含むその薬学上許容可能な塩を製造、単離および精製するための具体的手順は、２０１５年６月２５日にＷＯ２０１５／０９２４２０として公開された国際特許出願第ＰＣＴ／ＧＢ２０１４／０５３７７８号の実施例２に見出すことができる。１つの実施形態において、それは１－｛６－［（４－フルオロフェニル）メチル］－５－（ヒドロキシメチル）－３，３－ジメチル－１Ｈ，２Ｈ，３Ｈ－ピロロ［３，２－ｂ］ピリジン－１－イル｝－２－［（２Ｒ，５Ｒ）－５－メチル－２－｛［（３Ｒ）－３－メチルモルホリン－４－イル］メチル｝ピペラジン－１－イル］エタン－１－オンの乳酸塩である。
本発明の組合せ中に存在する化合物はそれぞれ、個々に異なる投与スケジュールで、異なる経路を介して投与され得る。従って、これら２つ以上の薬剤のそれぞれの薬量学は異なる場合があり、それぞれ同時にまたは異なる時点で投与され得る。当業者には、自身の共通の一般知識を通して、使用する投与レジメンおよび併用療法が分かるであろう。例えば、本発明において使用される化合物は、それらの既存の併用レジメンに従って投与される１以上の他の薬剤と組み合わせて使用してもよい。
タキサン化合物は、有利には、５０～４００ｍｇ／体表面積平方メートル（ｍｇ／ｍ２）、例えば、７５～２５０ｍｇ／ｍ２の用量、特にパクリタキセルでは、約１７５～２５０ｍｇ／ｍ２の用量、ドセタキセルでは、約７５～１５０ｍｇ／ｍ２／治療コースで投与される。
カンプトテシン化合物は、有利には、０．１～４００ｍｇ／体表面積平方メートル（ｍｇ／ｍ２）、例えば、１～３００ｍｇ／ｍ２の用量、特にイリノテカンでは、約１００～３５０ｍｇ／ｍ２の用量、トポテカンでは、約１～２ｍｇ／ｍ２／治療コースで投与される。
抗腫瘍ポドフィロトキシン誘導体は、有利には、３０～３００ｍｇ／体表面積平方メートル（ｍｇ／ｍ２）、例えば、５０～２５０ｍｇ／ｍ２の用量、特にエトポシドでは、約３５～１００ｍｇ／ｍ２の用量、テニポシドでは、約５０～２５０ｍｇ／ｍ２／治療コースで投与される。
抗腫瘍ビンカアルカロイドは、有利には、２～３０ｍｇ／体表面積平方メートル（ｍｇ／ｍ２）の用量、特にビンブラスチンでは、約３～１２ｍｇ／ｍ２の用量、ビンクリスチンでは、約１～２ｍｇ／ｍ２の用量、ビノレルビンでは、約１０～３０ｍｇ／ｍ２／治療コースの用量で投与される。
抗腫瘍ヌクレオシド誘導体は、有利には、２００～２５００ｍｇ／体表面積平方メートル（ｍｇ／ｍ２）、例えば、７００～１５００ｍｇ／ｍ２の用量、特に５－ＦＵでは、２００～５００ｍｇ／ｍ２の用量、ゲムシタビンでは、約８００～１２００ｍｇ／の用量、カペシタビンでは、約１０００～２５００ｍｇ／ｍ２／治療コースで投与される。
ナイトロジェンマスタードまたはニトロソ尿素などのアルキル化剤は、有利には、１００～５００ｍｇ／体表面積平方メートル（ｍｇ／ｍ２）、例えば、１２０～２００ｍｇ／ｍ２の用量、特にシクロホスファミドでは、約１００～５００ｍｇ／ｍ２の用量、クロラムブシルでは、約０．１～０．２ｍｇ／ｋｇの用量、カルムスチンでは、約１５０～２００ｍｇ／ｍ２の用量、ロムスチンでは、約１００～１５０ｍｇ／ｍ２／治療コースの用量で投与される。
抗腫瘍アントラサイクリン誘導体は、有利には、１０～７５ｍｇ／体表面積平方メートル（ｍｇ／ｍ２）、例えば、１５～６０ｍｇ／ｍ２の用量、特にドキソルビシンでは約４０～７５ｍｇ／ｍ２の用量、ダウノルビシンでは、約２５～４５ｍｇ／ｍ２の用量、イダルビシンでは、約１０～１５ｍｇ／ｍ２／治療コースの用量で投与される。
抗エストロゲン作用薬は、有利には、特定の薬剤および治療される病態に応じて１日約１～１００ｍｇの用量で投与される。タモキシフェンは、有利には、５～５０ｍｇ、一般に１０～２０ｍｇの用量で１日２回経口投与され、この療法を、治療効果を達成および維持するために十分な時間継続する。トレミフェンは、有利には、約６０ｍｇの用量で１日１回経口投与され、この療法を、治療効果を達成および維持するために十分な時間継続する。アナストロゾールは、有利には、約１ｍｇの用量で１日１回経口投与される。ドロロキシフェンは、有利には、約２０～１００ｍｇの用量で１日１回経口投与される。ラロキシフェンは、有利には、約６０ｍｇの用量で１日１回経口投与される。エキセメスタンは、有利には、約２５ｍｇの用量で１日１回経口投与される。
抗体は有利には、約１～５ｍｇ／体表面積平方メートル（ｍｇ／ｍ２）の用量で、または異なる場合には、当技術分野で公知のように投与される。トラスツズマブは、有利には、１～５ｍｇ／体表面積平方メートル（ｍｇ／ｍ２）、特に２～４ｍｇ／ｍ２／治療コースの用量で投与される。
式（Ｉｏ）の化合物が１つ、２つ、３つ、４つまたはそれを超える他の治療薬（一般に、１つまたは２つ、より一般には１つ）との併用療法で投与される場合、これらの化合物は、同時にまたは逐次に投与することができる。後者の場合、これら２つ以上の化合物は、有利な作用または相乗作用が達成されることを保証するために十分な期間および量および様式で投与される。逐次投与される場合、それらは近接した間隔（例えば、５～１０分の期間）に投与することもできるし、またはより長い間隔で（例えば、１、２、３、４時間以上あけて、または必要に応じてより長い期間あけて）投与することもでき、厳密な投与レジメンは治療薬の特性に応じる。これらの用量は例えば、１回、２回またはそれを超える回数／治療コースで投与することができ、これを例えば、７、１４、２１または２８日毎に反復することができる。
投与の典型的な方法および順序、ならびに組合せの各成分のそれぞれの用量およびレジメンは、投与される本発明で使用される特定の他の薬剤および化合物、それらの投与経路、治療される特定の腫瘍、および治療される特定の宿主によって異なる。最適な投与方法および投与順序、ならびに用量およびレジメンは、当業者により、常法を使用し、本明細書に示される情報を考慮して容易に決定することができる。
組合せとして投与される場合の本発明による化合物と１以上の他の抗癌剤との重量比は、当業者によって決定され得る。前記比率ならびに投与の正確な用量および頻度は、当業者に周知であるように、本発明による特定の化合物および使用される他の抗癌剤、治療される特定の病態、治療される病態の重症度、特定の患者の年齢、体重、性別、食事、投与時間および健康状態、投与様式、ならびに個人が服用している可能性のある他の薬物によって異なる。さらに、治療対象の応答に応じて、および／または本発明の化合物を処方する医師の評価に応じて、有効な１日量を増減できることは明らかである。本ＭＤＭ２アンタゴニストと別の抗癌剤の特定の重量比は、１／１０～１０／１、より具体的には１／５～５／１、さらにより具体的には１／３～３／１の範囲であり得る。
本発明において使用するための化合物はまた、放射線療法、光線力学療法、遺伝子療法などの非化学療法処置；手術および食事制限と組み合わせて投与することもできる。放射線療法は、根治的、緩和的、アジュバント、ネオアジュバント、または予防目的で使用され得る。
本発明の化合物はまた、放射線療法および化学療法のために腫瘍細胞を増感させる治療用途も有する。従って、本発明の化合物は、「放射線増感剤」および／または「化学増感剤」として使用することができ、または別の「放射線増感剤」および／または「化学増感剤」と組み合わせて投与することもできる。１つの実施形態において、本発明で使用される化合物は、化学増感剤として使用するためのものである。
「放射線増感剤」という用語は、電離放射線に対する細胞の感受性を高め、かつ／または電離放射線で治療可能な疾患の治療を促進するために、治療上有効な量で患者に投与される分子として定義される。
「化学療法増感剤」という用語は、化学療法に対する細胞の感受性を高め、かつ／または化学療法で治療可能な疾患の治療を促進するために、治療上有効な量で患者に投与される分子として定義される。
多くの癌治療プロトコールは現在、Ｘ線の照射と組み合わせて放射線増感剤を使用する。Ｘ線活性化放射線増感剤の例としては、限定するものではないが、以下：メトロニダゾール、ミソニダゾール、デスメチルミソニダゾール、ピモニダゾール、エタニダゾール、ニモラゾール、マイトマイシンＣ、ＲＳＵ １０６９、ＳＲ ４２３３、ＥＯ９、ＲＢ ６１４５、ニコチンアミド、５－ブロモデオキシウリジン（ＢＵｄＲ）、５－ヨードデオキシウリジン（ＩＵｄＲ）、ブロモデオキシシチジン、フルオロデオキシウリジン（ＦｕｄＲ）、ヒドロキシ尿素、シスプラチン、および治療上有効な類似体およびその誘導体が挙げられる。
癌の光線力学療法（ＰＤＴ）は、増感剤の放射線活性化剤として可視光を使用する。光力学的放射線増感剤の例としては、限定するものではないが、以下：ヘマトポルフィリン 誘導体、フォトフリン、ベンゾポルフィリン誘導体、スズエチオポルフィリン、フェオボルビド－ａ、バクテリオクロロフィル－ａ、ナフタロシアニン、フタロシアニン、亜鉛フタロシアニン、ならびにその治療上有効な類似体および誘導体が挙げられる。
放射線増感剤は、限定するものではないが、標的細胞への放射線増感剤の組み込みを促進する化合物：標的細胞への治療薬、栄養素、および／もしくは酸素の流れを制御する化合物；付加的放射線を伴ってまたは伴わずに腫瘍に作用する化学療法薬；または癌もしくは他の疾患を治療するための他の治療上有効な化合物を含む治療上有効な量の１以上の他の化合物と組み合わせて投与することができる。
化学療法増感剤は、限定するものではないが、標的細胞への化学療法増感剤の組み込みを促進する化合物：標的細胞への治療薬、栄養素、および／もしくは酸素の流れを制御する化合物；腫瘍に作用する化学療法薬；または癌もしくは他の疾患を治療するための他の治療上有効な化合物を含む治療上有効な量の１以上の他の化合物と組み合わせて投与することができる。カルシウム拮抗薬、例えば、ベラパミルは、抗腫瘍薬と組み合わせて、受け入れられている化学療法薬に耐性のある腫瘍細胞に化学療法感受性を確立するため、および薬物感受性悪性腫瘍におけるそのような化合物の有効性を増強するために有用であることが判明している。
別の化学療法薬との併用療法で使用するために、式（Ｉｏ）の化合物および１つ、２つ、３つ、４つまたはそれを超える他の治療薬を、例えば、２つ、３つ、４つまたはそれを超える治療薬を含有する剤形に、すなわち総ての成分を含有する単一の医薬組成物に一緒に調剤することができる。あるいは、個々の治療薬を別々に調剤し、場合によりそれらの使用説明書とともにキットの形で一緒に提供提示することもできる。
１つの実施形態において、医薬組成物は、式（Ｉｏ）の化合物を薬学上許容可能な担体および場合により１以上の治療薬とともに含んでなる。
別の実施形態において、本発明は、腫瘍細胞の増殖を阻害するための医薬組成物の製造における、本発明による組合せの使用に関する。
さらなる実施形態において、本発明は、癌に罹患している患者の治療において同時、個別または逐次使用するための組合せ製剤としての、式（Ｉｏ）の化合物と１以上の抗癌剤を含有する製品に関する。
本発明の特定の実施形態は、以下の符番された実施形態のリストに要約される。
１．癌が
ＢＡＰ１枯渇型であり；かつ／または
ＣＤＫＮ２Ａ枯渇型であり；かつ／または
ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＲＳＡＤ２、ＭＸ１、ＢＡＴＦ２、ＩＦＩ４４Ｌ、ＩＦＩＴＭ１、ＩＳＧ１５、ＣＭＰＫ２、ＩＦＩ２７、ＣＤ７４、ＩＦＩＨ１、ＣＣＲＬ２、ＩＦＩ４４、ＨＥＲＣ６、ＩＳＧ２０、ＩＦＩＴ３、ＨＬＡ－Ｃ、ＯＡＳ１、ＩＦＩ３５、ＩＲＦ９、ＥＰＳＴＩ１、ＵＳＰ１８、ＢＳＴ２、ＣＳＦ１、Ｃ１Ｓ、ＤＨＸ５８、ＴＲＩＭ１４、ＯＡＳＬ、ＩＲＦ７、ＬＧＡＬＳ３ＢＰ、ＤＤＸ６０、ＬＡＰ３、ＬＡＭＰ３、ＰＡＲＰ１２、ＰＡＲＰ９、ＳＰ１１０、ＰＬＳＣＲ１、ＷＡＲＳ、ＳＴＡＴ１、ＩＲＦ３、ＩＲＦ５、ＭＳＣ、ＪＵＮ、ＳＰＩ１、ＩＲＦ１、ＣＯＭＭＤ３－ＢＭＩ１、ＳＴＡＴ２、ＲＵＮＸ３、ＳＲＥＢＦ１、ＦＬＩ１およびＢＲＣＡ１のうち１つ、２つ、３つ、４つ、５つまたはそれを超えるものの発現の増大を示す場合に、癌を治療する方法において使用するためのＭＤＭ２アンタゴニスト。
２．患者組織のサンプルが処置前の癌発現プロファイルを決定するために検査される、実施形態１に記載の使用のためのＭＤＭ２アンタゴニスト。
３．前記サンプルが癌のＤＮＡ、ｃｔＤＮＡ、または癌細胞を含んでなる、実施形態２に記載の使用のためのＭＤＭ２アンタゴニスト。
４．前記検査がタンパク質、ｍＲＮＡおよび／またはｃｔＤＮＡを検出するためのアッセイを含んでなる、実施形態２または実施形態３に記載の使用のためのＭＤＭ２アンタゴニスト。
５．（ｉ）タンパク質がイムノアッセイ、タンパク質結合アッセイ、抗体に基づくアッセイ、抗原結合タンパク質に基づくアッセイ、タンパク質に基づくアレイ、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、フローサイトメトリー、タンパク質アレイ、ブロット、ウエスタンブロット、ネフェロメトリー、比濁法、クロマトグラフィー、質量分析、酵素活性、ラジオイムノアッセイ、免疫蛍光、免疫化学発光、免疫電気化学発光、免疫電気泳動、競合イムノアッセイ、もしくは免疫沈降を用いて検出され；かつ／または（ｉｉ）ｍＲＮＡがＲＴ－ＰＣＲもしくは定量的遺伝子発現アッセイを用いて検出される、実施形態４に記載の使用のためのＭＤＭ２アンタゴニスト。
６．前記患者が決定された発現プロファイルに基づいて処置の選択を受ける、実施形態２～５のいずれかに記載の使用のためのＭＤＭ２アンタゴニスト。
７．前記癌が非小細胞肺癌、中皮腫、膠芽腫または腎明細胞癌である、実施形態１～６のいずれかに記載の使用のためのＭＤＭ２アンタゴニスト。
８．前記癌がＰ５３野生型である、実施形態１～７のいずれかに記載の使用のためのＭＤＭ２アンタゴニスト。
９．前記癌細胞が処置工程後にアポトーシスを受ける実施形態１～８のいずれかに記載の使用のためのＭＤＭ２アンタゴニスト。
１０．ＭＤＭ２アンタゴニストにより少なくともある割合の癌細胞に活性化カスパーゼ－３が誘導される、実施形態１～９のいずれかに記載の使用のためのＭＤＭ２アンタゴニスト。
１１．ＭＤＭ２アンタゴニストにより少なくとも４０％の癌細胞または少なくとも６０％の癌細胞に活性化カスパーゼ－３が誘導される、実施形態１０に記載の使用のためのＭＤＭ２アンタゴニスト。
１２．前記癌が対照に比べて、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＲＳＡＤ２、ＭＸ１、ＢＡＴＦ２、ＩＦＩ４４Ｌ、ＩＦＩＴＭ１、ＩＳＧ１５、ＣＭＰＫ２、ＩＦＩ２７、ＣＤ７４、ＩＦＩＨ１、ＣＣＲＬ２、ＩＦＩ４４、ＨＥＲＣ６、ＩＳＧ２０、ＩＦＩＴ３、ＨＬＡ－Ｃ、ＯＡＳ１、ＩＦＩ３５、ＩＲＦ９、ＥＰＳＴＩ１、ＵＳＰ１８、ＢＳＴ２、ＣＳＦ１、Ｃ１Ｓ、ＤＨＸ５８、ＴＲＩＭ１４、ＯＡＳＬ、ＩＲＦ７、ＬＧＡＬＳ３ＢＰ、ＤＤＸ６０、ＬＡＰ３、ＬＡＭＰ３、ＰＡＲＰ１２、ＰＡＲＰ９、ＳＰ１１０、ＰＬＳＣＲ１およびＷＡＲＳのうち１つ、２つ、３つ、４つ、５つまたはそれを超えるものの発現の増大を示す、実施形態１～１１のいずれかに記載の使用のためのＭＤＭ２アンタゴニスト。
１３．前記癌がＣＸＣＬ１０またはＣＸＣＬ１１の発現の増大を示す、実施形態１２に記載の使用のためのＭＤＭ２アンタゴニスト。
１４．前記癌がＩＲＦ７、ＳＴＡＴ１、ＩＲＦ３、ＩＲＦ５、ＭＳＣ、ＪＵＮ、ＳＰＩ１、ＩＲＦ１、ＣＯＭＭＤ３－ＢＭＩ１、ＳＴＡＴ２、ＲＵＮＸ３、ＳＲＥＢＦ１、ＩＲＦ９、ＦＬＩ１およびＢＲＣＡ１のうち１つ、２つ、３つ、４つ、５つまたはそれを超えるものの発現の増大を示す、実施形態１～１３のいずれかに記載の使用のためのＭＤＭ２アンタゴニスト。
１５．前記ＭＤＭ２アンタゴニストが本明細書で定義されるような式（Ｉｏ）の化合物またはその互変異性体、Ｎ－オキシド、薬学上許容可能な塩もしくは溶媒和物、例えば、（２Ｓ，３Ｓ）－３－（４－クロロフェニル）－３－［（１Ｒ）－１－（４－クロロフェニル）－７－フルオロ－５－［（１Ｓ）－１－ヒドロキシ－１－（オキサン－４－イル）プロピル］－１－メトキシ－３－オキソ－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－イソインドール－２－イル］－２－メチルプロパン酸またはその互変異性体、Ｎ－オキシド、薬学上許容可能な塩もしくは溶媒和物である、実施形態１～１４に記載の使用のためのＭＤＭ２アンタゴニスト。
１６．イダサヌトリン、ＨＤＭ－２０１、ＫＲＴ－２３２、ＡＬＲＮ－６９２４、ＡＬＲＮ－６９２４、ＣＧＭ－０９７、ミラデメタントシル酸塩、ＡＰＧ－１１５、ＢＩ－９０７８２８、ＬＥ－００４、ＤＳ－５２７２、ＳＪ－０２１１、ＢＩ－０２５２、ＡＭ－７２０９、ＳＰ－１４１、ＳＣＨ－１４５０２０６、ＮＸＮ－６、ＡＤＯ－２１、ＣＴＸ－５０－ＣＴＸ－１、ＩＳＡ－２７、ＲＯ－８９９４、ＲＯ－６８３９９２１、ＲＯ－６８３９９２１、ＡＴＳＰ－７０４１、ＳＡＨ－ｐ５３－８、ＰＭ－２、Ｋ－１７８、ＭＭＲｉ－６４および
Figure 2023508165000095
 またはその互変異性体もしくは溶媒和物もしくは薬学上許容可能な塩からなる群から選択される、実施形態１～１５のいずれかに記載の使用のためのＭＤＭ２アンタゴニスト。
１７．ヒト患者の癌細胞サンプルにおける、癌がＭＤＭ２アンタゴニストによる処置に感受性を有するかどうかを評価するための１または複数のバイオマーカーとしての、
ＢＡＰ１、ＣＤＫＮ２Ａ、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＲＳＡＤ２、ＭＸ１、ＢＡＴＦ２、ＩＦＩ４４Ｌ、ＩＦＩＴＭ１、ＩＳＧ１５、ＣＭＰＫ２、ＩＦＩ２７、ＣＤ７４、ＩＦＩＨ１、ＣＣＲＬ２、ＩＦＩ４４、ＨＥＲＣ６、ＩＳＧ２０、ＩＦＩＴ３、ＨＬＡ－Ｃ、ＯＡＳ１、ＩＦＩ３５、ＩＲＦ９、ＥＰＳＴＩ１、ＵＳＰ１８、ＢＳＴ２、ＣＳＦ１、Ｃ１Ｓ、ＤＨＸ５８、ＴＲＩＭ１４、ＯＡＳＬ、ＩＲＦ７、ＬＧＡＬＳ３ＢＰ、ＤＤＸ６０、ＬＡＰ３、ＬＡＭＰ３、ＰＡＲＰ１２、ＰＡＲＰ９、ＳＰ１１０、ＰＬＳＣＲ１、ＷＡＲＳ、ＳＴＡＴ１、ＩＲＦ３、ＩＲＦ５、ＭＳＣ、ＪＵＮ、ＳＰＩ１、ＩＲＦ１、ＣＯＭＭＤ３－ＢＭＩ１、ＳＴＡＴ２、ＲＵＮＸ３、ＳＲＥＢＦ１、ＦＬＩ１およびＢＲＣＡ１
のうち１以上の発現レベルの使用、例えば、このＭＤＭ２アンタゴニストは、本明細書で定義されるような式（Ｉｏ）の化合物またはその互変異性体、Ｎ－オキシド、薬学上許容可能な塩もしくは溶媒和物、例えば、（２Ｓ，３Ｓ）－３－（４－クロロフェニル）－３－［（１Ｒ）－１－（４－クロロフェニル）－７－フルオロ－５－［（１Ｓ）－１－ヒドロキシ－１－（オキサン－４－イル）プロピル］－１－メトキシ－３－オキソ－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－イソインドール－２－イル］－２－メチルプロパン酸またはその互変異性体、Ｎ－オキシド、薬学上許容可能な塩もしくは溶媒和物である。
１８．ＭＤＭ２アンタゴニストによる処置に対するヒト癌患者の反応性を予測または評価するための方法であって、癌患者からのサンプルにおいて、
ＢＡＰ１、ＣＤＫＮ２Ａ、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＲＳＡＤ２、ＭＸ１、ＢＡＴＦ２、ＩＦＩ４４Ｌ、ＩＦＩＴＭ１、ＩＳＧ１５、ＣＭＰＫ２、ＩＦＩ２７、ＣＤ７４、ＩＦＩＨ１、ＣＣＲＬ２、ＩＦＩ４４、ＨＥＲＣ６、ＩＳＧ２０、ＩＦＩＴ３、ＨＬＡ－Ｃ、ＯＡＳ１、ＩＦＩ３５、ＩＲＦ９、ＥＰＳＴＩ１、ＵＳＰ１８、ＢＳＴ２、ＣＳＦ１、Ｃ１Ｓ、ＤＨＸ５８、ＴＲＩＭ１４、ＯＡＳＬ、ＩＲＦ７、ＬＧＡＬＳ３ＢＰ、ＤＤＸ６０、ＬＡＰ３、ＬＡＭＰ３、ＰＡＲＰ１２、ＰＡＲＰ９、ＳＰ１１０、ＰＬＳＣＲ１、ＷＡＲＳ、ＳＴＡＴ１、ＩＲＦ３、ＩＲＦ５、ＭＳＣ、ＪＵＮ、ＳＰＩ１、ＩＲＦ１、ＣＯＭＭＤ３－ＢＭＩ１、ＳＴＡＴ２、ＲＵＮＸ３、ＳＲＥＢＦ１、ＦＬＩ１およびＢＲＣＡ１
のうち１以上の発現レベルを評価すること；ならびに
検査した発現レベルが、その癌がＭＤＭ２アンタゴニストで治療されるべきであることを示すかどうか決定すること
を含んでなる、方法。
１９．前記評価工程が、前記発現レベルを（ｉ）ＭＤＭ２アンタゴニストによる処置に対する反応性もしくは非反応性に関連する発現レベルと、または（ｉｉ）同じタイプの健常な非癌細胞からの発現レベルと比較することを含んでなる、実施形態１８に記載の方法。
２０．前記患者がバイオマーカープロファイルに基づいて群に分類され、場合により、前記群は、
（ｉ）応答者および非応答者；または
（ｉｉ）強い応答者
を含んでなるまたはからなる、実施形態１８または実施形態１９に記載の方法。
２１．前記患者が、以下のマーカー：ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＲＳＡＤ２、ＭＸ１、ＢＡＴＦ２、ＩＦＩ４４Ｌ、ＩＦＩＴＭ１、ＩＳＧ１５、ＣＭＰＫ２、ＩＦＩ２７、ＣＤ７４、ＩＦＩＨ１、ＣＣＲＬ２、ＩＦＩ４４、ＨＥＲＣ６、ＩＳＧ２０、ＩＦＩＴ３、ＨＬＡ－Ｃ、ＯＡＳ１、ＩＦＩ３５、ＩＲＦ９、ＥＰＳＴＩ１、ＵＳＰ１８、ＢＳＴ２、ＣＳＦ１、Ｃ１Ｓ、ＤＨＸ５８、ＴＲＩＭ１４、ＯＡＳＬ、ＩＲＦ７、ＬＧＡＬＳ３ＢＰ、ＤＤＸ６０、ＬＡＰ３、ＬＡＭＰ３、ＰＡＲＰ１２、ＰＡＲＰ９、ＳＰ１１０、ＰＬＳＣＲ１、ＷＡＲＳ、ＳＴＡＴ１、ＩＲＦ３、ＩＲＦ５、ＭＳＣ、ＪＵＮ、ＳＰＩ１、ＩＲＦ１、ＣＯＭＭＤ３－ＢＭＩ１、ＳＴＡＴ２、ＲＵＮＸ３、ＳＲＥＢＦ１、ＦＬＩ１およびＢＲＣＡ１のうち１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０またはそれを超えるものが、処置に適さないと特定された患者よりも高いレベルで発現される場合に処置に特に適していると特定される、実施形態１８～２０のいずれかに記載の方法。
２２．前記患者が、（ｉ）ＭＤＭ２アンタゴニストによる処置に対する非反応性に関連する発現レベル、または（ｉｉ）同じタイプの健常な非癌細胞からの発現レベルに比べて、ＢＡＰ１発現の低下および／またはＣＤＫＮ２Ａ発現の低下が検出された場合に、ＭＤＭ２アンタゴニストによる処置のための特定される、実施形態１８～２１のいずれかに記載の方法。
２３．前記ヒト患者からの癌細胞サンプルにおいてバイオマーカーの発現レベルを検出する工程を含んでなる、実施形態１８～２２のいずれかに記載の方法。
２４．前記検出がｉｎ ｖｉｔｒｏ検出アッセイを用いて行われる、実施形態２３に記載の方法。
２５．ＭＤＭ２アンタゴニストによる処置に対するヒト癌患者の感受性を決定する方法であって、癌細胞患者からのサンプルにおいて
ＢＡＰ１、ＣＤＫＮ２Ａ、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＲＳＡＤ２、ＭＸ１、ＢＡＴＦ２、ＩＦＩ４４Ｌ、ＩＦＩＴＭ１、ＩＳＧ１５、ＣＭＰＫ２、ＩＦＩ２７、ＣＤ７４、ＩＦＩＨ１、ＣＣＲＬ２、ＩＦＩ４４、ＨＥＲＣ６、ＩＳＧ２０、ＩＦＩＴ３、ＨＬＡ－Ｃ、ＯＡＳ１、ＩＦＩ３５、ＩＲＦ９、ＥＰＳＴＩ１、ＵＳＰ１８、ＢＳＴ２、ＣＳＦ１、Ｃ１Ｓ、ＤＨＸ５８、ＴＲＩＭ１４、ＯＡＳＬ、ＩＲＦ７、ＬＧＡＬＳ３ＢＰ、ＤＤＸ６０、ＬＡＰ３、ＬＡＭＰ３、ＰＡＲＰ１２、ＰＡＲＰ９、ＳＰ１１０、ＰＬＳＣＲ１、ＷＡＲＳ、ＳＴＡＴ１、ＩＲＦ３、ＩＲＦ５、ＭＳＣ、ＪＵＮ、ＳＰＩ１、ＩＲＦ１、ＣＯＭＭＤ３－ＢＭＩ１、ＳＴＡＴ２、ＲＵＮＸ３、ＳＲＥＢＦ１、ＦＬＩ１およびＢＲＣＡ１
のうち１以上の発現を検出すること：ならびに
サンプル中のバイオマーカーの発現レベルに基づいて、患者の癌がＭＤＭ２アンタゴニストによる処置に応答する可能性があるかどうかを評価すること
を含んでなる、方法。
２６．癌に罹患しているヒト患者において、
ＢＡＰ１、ＣＤＫＮ２Ａ、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＲＳＡＤ２、ＭＸ１、ＢＡＴＦ２、ＩＦＩ４４Ｌ、ＩＦＩＴＭ１、ＩＳＧ１５、ＣＭＰＫ２、ＩＦＩ２７、ＣＤ７４、ＩＦＩＨ１、ＣＣＲＬ２、ＩＦＩ４４、ＨＥＲＣ６、ＩＳＧ２０、ＩＦＩＴ３、ＨＬＡ－Ｃ、ＯＡＳ１、ＩＦＩ３５、ＩＲＦ９、ＥＰＳＴＩ１、ＵＳＰ１８、ＢＳＴ２、ＣＳＦ１、Ｃ１Ｓ、ＤＨＸ５８、ＴＲＩＭ１４、ＯＡＳＬ、ＩＲＦ７、ＬＧＡＬＳ３ＢＰ、ＤＤＸ６０、ＬＡＰ３、ＬＡＭＰ３、ＰＡＲＰ１２、ＰＡＲＰ９、ＳＰ１１０、ＰＬＳＣＲ１、ＷＡＲＳ、ＳＴＡＴ１、ＩＲＦ３、ＩＲＦ５、ＭＳＣ、ＪＵＮ、ＳＰＩ１、ＩＲＦ１、ＣＯＭＭＤ３－ＢＭＩ１、ＳＴＡＴ２、ＲＵＮＸ３、ＳＲＥＢＦ１、ＦＬＩ１およびＢＲＣＡ１
のうち１以上の発現を検出する方法。
２７．（ａ）ヒト患者から癌細胞サンプルを得る工程；および
（ｂ）前記サンプルをバイオマーカーの発現を検出するための１以上の試薬と接触させることにより、前記バイオマーカーがサンプリングされた癌細胞において発現されているかどうかを検出する工程
を含んでなる、実施形態２６に記載の方法。
２８．前記ＭＤＭ２アンタゴニストが本明細書で定義されるような式（Ｉｏ）の化合物またはその互変異性体、Ｎ－オキシド、薬学上許容可能な塩もしくは溶媒和物、例えば、（２Ｓ，３Ｓ）－３－（４－クロロフェニル）－３－［（１Ｒ）－１－（４－クロロフェニル）－７－フルオロ－５－［（１Ｓ）－１－ヒドロキシ－１－（オキサン－４－イル）プロピル］－１－メトキシ－３－オキソ－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－イソインドール－２－イル］－２－メチルプロパン酸またはその互変異性体、Ｎ－オキシド、薬学上許容可能な塩もしくは溶媒和物である、実施形態１８～２７のいずれかに記載の方法。
２９．前記ＭＤＭ２アンタゴニストが、イダサヌトリン、ＨＤＭ－２０１、ＫＲＴ－２３２、ＡＬＲＮ－６９２４、ＡＬＲＮ－６９２４、ＣＧＭ－０９７、ミラデメタントシル酸塩、ＡＰＧ－１１５、ＢＩ－９０７８２８、ＬＥ－００４、ＤＳ－５２７２、ＳＪ－０２１１、ＢＩ－０２５２、ＡＭ－７２０９、ＳＰ－１４１、ＳＣＨ－１４５０２０６、ＮＸＮ－６、ＡＤＯ－２１、ＣＴＸ－５０－ＣＴＸ－１、ＩＳＡ－２７、ＲＯ－８９９４、ＲＯ－６８３９９２１、ＲＯ－６８３９９２１、ＡＴＳＰ－７０４１、ＳＡＨ－ｐ５３－８、ＰＭ－２、Ｋ－１７８、ＭＭＲｉ－６４および
Figure 2023508165000096
 またはその互変異性体もしくは溶媒和物もしくは薬学上許容可能な塩
からなる群から選択される、実施形態１８～２７のいずれかに記載の方法。
３０．ＭＤＭ２アンタゴニストを投与することにより患者の癌を治療する工程をさらに含んでなる、実施形態１８～２９のいずれかに記載の方法。
３１．前記ＭＤＭ２アンタゴニストが本明細書で定義されるような式（Ｉｏ）の化合物またはその互変異性体、Ｎ－オキシド、薬学上許容可能な塩もしくは溶媒和物、例えば、（２Ｓ，３Ｓ）－３－（４－クロロフェニル）－３－［（１Ｒ）－１－（４－クロロフェニル）－７－フルオロ－５－［（１Ｓ）－１－ヒドロキシ－１－（オキサン－４－イル）プロピル］－１－メトキシ－３－オキソ－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－イソインドール－２－イル］－２－メチルプロパン酸またはその互変異性体、Ｎ－オキシド、薬学上許容可能な塩もしくは溶媒和物である、実施形態３０に記載の方法。
３２．前記ＭＤＭ２アンタゴニストがイダサヌトリン、ＨＤＭ－２０１、ＫＲＴ－２３２、ＡＬＲＮ－６９２４、ＡＬＲＮ－６９２４、ＣＧＭ－０９７、ミラデメタントシル酸塩、ＡＰＧ－１１５、ＢＩ－９０７８２８、ＬＥ－００４、ＤＳ－５２７２、ＳＪ－０２１１、ＢＩ－０２５２、ＡＭ－７２０９、ＳＰ－１４１、ＳＣＨ－１４５０２０６、ＮＸＮ－６、ＡＤＯ－２１、ＣＴＸ－５０－ＣＴＸ－１、ＩＳＡ－２７、ＲＯ－８９９４、ＲＯ－６８３９９２１、ＲＯ－６８３９９２１、ＡＴＳＰ－７０４１、ＳＡＨ－ｐ５３－８、ＰＭ－２、Ｋ－１７８、ＭＭＲｉ－６４および
Figure 2023508165000097
 またはその互変異性体もしくは溶媒和物もしくは薬学上許容可能な塩
からなる群から選択される、実施形態３０に記載の方法。
３３．前記処置がその方法の結果に基づいて患者に提供される、実施形態３０～３２のいずれかに記載の方法。
３４．ヒト患者からのサンプルにおいてＭＤＭ２阻害に対する感受性に関する少なくとも１つのバイオマーカーの発現レベルを検出するためのキットまたは装置であって、
ＢＡＰ１、ＣＤＫＮ２Ａ、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＲＳＡＤ２、ＭＸ１、ＢＡＴＦ２、ＩＦＩ４４Ｌ、ＩＦＩＴＭ１、ＩＳＧ１５、ＣＭＰＫ２、ＩＦＩ２７、ＣＤ７４、ＩＦＩＨ１、ＣＣＲＬ２、ＩＦＩ４４、ＨＥＲＣ６、ＩＳＧ２０、ＩＦＩＴ３、ＨＬＡ－Ｃ、ＯＡＳ１、ＩＦＩ３５、ＩＲＦ９、ＥＰＳＴＩ１、ＵＳＰ１８、ＢＳＴ２、ＣＳＦ１、Ｃ１Ｓ、ＤＨＸ５８、ＴＲＩＭ１４、ＯＡＳＬ、ＩＲＦ７、ＬＧＡＬＳ３ＢＰ、ＤＤＸ６０、ＬＡＰ３、ＬＡＭＰ３、ＰＡＲＰ１２、ＰＡＲＰ９、ＳＰ１１０、ＰＬＳＣＲ１、ＷＡＲＳ、ＳＴＡＴ１、ＩＲＦ３、ＩＲＦ５、ＭＳＣ、ＪＵＮ、ＳＰＩ１、ＩＲＦ１、ＣＯＭＭＤ３－ＢＭＩ１、ＳＴＡＴ２、ＲＵＮＸ３、ＳＲＥＢＦ１、ＦＬＩ１およびＢＲＣＡ１
のうち１以上を検出するための検出試薬を含んでなる、キットまたは装置。
３５．ＭＤＭ２アンタゴニストによる処置に対するヒト癌患者の適合性を決定するためのシステムであって、対象からのサンプルにおけるバイオマーカー発現レベルを示すバイオマーカーパネルに関連するデータを含んでなる、患者からのサンプルに関連するデータを格納するための記憶装置；本発明の１以上のバイオマーカーを含んでなるバイオマーカーのパネル（このバイオマーカーパネルは、
ＢＡＰ１、ＣＤＫＮ２Ａ、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＲＳＡＤ２、ＭＸ１、ＢＡＴＦ２、ＩＦＩ４４Ｌ、ＩＦＩＴＭ１、ＩＳＧ１５、ＣＭＰＫ２、ＩＦＩ２７、ＣＤ７４、ＩＦＩＨ１、ＣＣＲＬ２、ＩＦＩ４４、ＨＥＲＣ６、ＩＳＧ２０、ＩＦＩＴ３、ＨＬＡ－Ｃ、ＯＡＳ１、ＩＦＩ３５、ＩＲＦ９、ＥＰＳＴＩ１、ＵＳＰ１８、ＢＳＴ２、ＣＳＦ１、Ｃ１Ｓ、ＤＨＸ５８、ＴＲＩＭ１４、ＯＡＳＬ、ＩＲＦ７、ＬＧＡＬＳ３ＢＰ、ＤＤＸ６０、ＬＡＰ３、ＬＡＭＰ３、ＰＡＲＰ１２、ＰＡＲＰ９、ＳＰ１１０、ＰＬＳＣＲ１、ＷＡＲＳ、ＳＴＡＴ１、ＩＲＦ３、ＩＲＦ５、ＭＳＣ、ＪＵＮ、ＳＰＩ１、ＩＲＦ１、ＣＯＭＭＤ３－ＢＭＩ１、ＳＴＡＴ２、ＲＵＮＸ３、ＳＲＥＢＦ１、ＦＬＩ１およびＢＲＣＡ１
のうち１以上を含んでなる）；および
患者を分類するために記憶装置に通信可能に接続されたプロセッサ
を含んでなる、システム。
３６．前記癌がＢＡＰ１欠損を示す、実施形態１～３５のいずれかに記載の使用のためのＭＤＭ２アンタゴニスト、使用、方法、キットまたはシステム。
３７．前記癌がＣＤＫＮ２Ａ欠損を示す、実施形態１～３６のいずれかに記載の使用のためのＭＤＭ２アンタゴニスト、使用、方法、キットまたはシステム。
以下、本発明を以下の限定されない例を参照してさらに説明する。
以下、本発明において使用するためのＭＤＭ２アンタゴニストを、限定するものではないが、以下の例に記載される特定の実施形態を参照することで説明する。化合物はＡｕｔｏＮｏｍ（ＭＤＬ）もしくはＣｈｅｍＡｘｏｎ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｔｏ Ｎａｍｅなどの自動命名パッケージを用いて命名するか、または化学物質供給者により命名された通りである。
ｃｙｃがフェニルであるＭＤＭ２アンタゴニストの例の以下の第１のセットは、２０１７年４月６日にＷＯ２０１７／０５５８６０として公開された国際特許出願第ＰＣＴ／ＧＢ２０１６／０５３０４２号に記載されているように製造することができる。
Figure 2023508165000098
Figure 2023508165000099
Figure 2023508165000100
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Figure 2023508165000104
Figure 2023508165000105
Figure 2023508165000106
ｃｙｃがＨｅｔであるＭＤＭ２アンタゴニスト例の以下の第２のセットは、２０１７年４月６日にＷＯ２０１７／０５５８５９として公開された国際特許出願第ＰＣＴ／ＧＢ２０１６／０５３０４１号に記載されているように製造することができる。
Figure 2023508165000107
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Figure 2023508165000143
Figure 2023508165000144
（２Ｓ，３Ｓ）－３－（４－クロロフェニル）－３－［（１Ｒ）－１－（４－クロロフェニル）－７－フルオロ－５－［（１Ｓ）－１－ヒドロキシ－１－（オキサン－４－イル）プロピル］－１－メトキシ－３－オキソ－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－イソインドール－２－イル］－２－メチルプロパン酸（「化合物１」）の製造１
Figure 2023508165000145
工程１：（２Ｓ，３Ｓ）－３－（４－クロロフェニル）－３－［１－（４－クロロフェニル）－７－フルオロ－１－ヒドロキシ－５－［（１Ｓ）－１－ヒドロキシ－１－（オキサン－４－イル）プロピル］－３－オキソ－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－イソインドール－２－イル］－２－メチルプロパン酸プロパ－２－エン－１－イル
ＤＭＦ（１５ｍＬ）中、（Ｓ）－２－（４－クロロベンゾイル）－３－フルオロ－５－（１－ヒドロキシ－１－（テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－４－イル）プロピル）安息香酸（製造５２）（０．６８６ｇ、１．６ｍｍｏｌ）、（２Ｓ，３Ｓ）－３－アミノ－３－（４－クロロフェニル）－２－メチルプロパン酸プロパ－２－エン－１－イル（製造６２）（０．５４ｇ、２．１２ｍｍｏｌ）およびジイソプロピルエチルアミン（０．８３ｍＬ、４．８ｍｍｏｌ）の溶液に、ＨＡＴＵ（０．９１ｇ、２．４ｍｍｏｌ）を加え、この反応混合物を２時間撹拌した。水を加え、酢酸エチルで抽出した。有機相を飽和ＮａＨＣＯ３、ブラインで洗浄し、乾燥させ、溶媒を蒸発させた。粗生成物をクロマトグラフィーにより精製して標題化合物（０．７５ｇ、７２％）を得た。MS: [M-H]- =654。
工程２：（２Ｓ，３Ｓ）－３－（４－クロロフェニル）－３－［（１Ｒ）－１－（４－クロロフェニル）－７－フルオロ－５－［（１Ｓ）－１－ヒドロキシ－１－（オキサン－４－イル）プロピル］－１－メトキシ－３－オキソ－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－イソインドール－２－イル］－２－メチルプロパン酸プロパ－２－エン－１－イル
標題化合物は、（２Ｓ，３Ｓ）－３－（４－クロロフェニル）－３－［１－（４－クロロフェニル）－７－フルオロ－１－ヒドロキシ－５－［（１Ｓ）－１－ヒドロキシ－１－（オキサン－４－イル）プロピル］－３－オキソ－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－イソインドール－２－イル］－２－メチルプロパン酸エチルおよびメタノールから、１，１－ビス（ヒドロキシメチル）シクロプロパンの代わりにＭｅＯＨを使用すること以外は製造１０に記載されているものと同様の方法で製造した。ジアステレオ異性体はキラルＳＦＣにより分離し、標題化合物は溶出の早い異性体であった。MS: [M + H]+ = 670。
工程３：（２Ｓ，３Ｓ）－３－（４－クロロフェニル）－３－［（１Ｒ）－１－（４－クロロフェニル）－７－フルオロ－５－［（１Ｓ）－１－ヒドロキシ－１－（オキサン－４－イル）プロピル］－１－メトキシ－３－オキソ－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－イソインドール－２－イル］－２－メチルプロパン酸
標題化合物は、（２Ｓ，３Ｓ）－３－（４－クロロフェニル）－３－［（１Ｒ）－１－（４－クロロフェニル）－７－フルオロ－５－［（１Ｓ）－１－ヒドロキシ－１－（オキサン－４－イル）プロピル］－１－メトキシ－３－オキソ－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－イソインドール－２－イル］－２－メチルプロパン酸プロパ－２－エン－１－イルから、実施例９０工程４に記載されているものと同様の方法で製造した。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): 12.56-12.00 (1H, m), 7.71 (1H, s), 7.42 (1H, d), 7.02 (4H, d), 6.88 (3H, d), 4.91 (1H, s), 4.23 (1H, d), 3.99-3.85 (2H, m), 3.75 (1H, dd), 3.25-3.10 (5H, m), 2.02-1.90 (1H, m), 1.90-1.78 (2H, m), 1.67 (1H, d), 1.43-1.17 (6H, m), 0.95 (1H, d), 0.58 (3H, t)。MS:[M + H]+ = 630。
（２Ｓ，３Ｓ）－３－（４－クロロフェニル）－３－［（１Ｒ）－１－（４－クロロフェニル）－７－フルオロ－５－［（１Ｓ）－１－ヒドロキシ－１－（オキサン－４－イル）プロピル］－１－メトキシ－３－オキソ－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－イソインドール－２－イル］－２－メチルプロパン酸（トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン塩）
上記の化合物をＥｔＯＨに溶解させ、１ｍｏｌ当量のトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンを加えた。溶媒を真空除去して無色の固体を得た。1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 7.69 (s, 1H), 7.39 (d, J = 10.7 Hz, 1H), 7.01 (ブロード s, 4H), 6.96 - 6.88 (m, 4H), 4.92 (ブロード s, 1H), 4.34 - 4.22 (m, 1H), 3.88 (dd, J = 10.9, 4.2 Hz, 1H), 3.74 (dd, J = 11.1, 4.2 Hz, 1H), 3.71 - 3.61 (m, 1H), 3.29 (s, 6H), 3.33 - 3.22 (m, 1H), 3.21 - 3.14 (m, 1H), 3.13 (s, 3H), 1.94 (tt, J = 12.2, 3.6 Hz, 1H), 1.89 - 1.78 (m, 2H), 1.66 (d, J = 12.8 Hz, 1H), 1.41 - 1.24 (m, 2H), 1.19 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 0.93 (d, J = 13.2 Hz, 1H), 0.57 (t, J = 7.3 Hz, 3H)。MS:[M + H]+ = 630。
（２Ｓ，３Ｓ）－３－（４－クロロフェニル）－３－［（１Ｒ）－１－（４－クロロフェニル）－７－フルオロ－５－［（１Ｓ）－１－ヒドロキシ－１－（オキサン－４－イル）プロピル］－１－メトキシ－３－オキソ－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－イソインドール－２－イル］－２－メチルプロパン酸（「化合物１」）の製造２
段階１：３－ブロモ－５－フルオロ安息香酸ｔｅｒｔ－ブチル
Figure 2023508165000146
３－ブロモ－５－フルオロ安息香酸（３２．０ｇ、１．０当量）を、ＤＣＭ（２８８ｍＬ、９容量）とＴＨＦ（３２ｍＬ、１容量）の混合物中で、大部分の固体が溶解するまで撹拌した。ＤＭＦ（０．５７ｍＬ、５ｍｏｌ％）を加え、そのフラスコを周囲温度の水浴に入れた。塩化オキサリル（１３．７ｍＬ、１．１０当量）を、シリンジポンプを介して１時間かけて加え、添加終了の３０分後に反応はＨＰＬＣにより完了した（分析前にサンプルをＭｅＯＨ中で急冷してメチルエステルを形成させる）。得られた希薄なスラリーを一晩熟成させ、１００ｍＬ容量まで濃縮し、ＴＨＦ（１６０ｍＬ、５容量）で希釈し、再び１００ｍＬまで濃縮した。得られた酸塩化物の希薄なスラリーをＴＨＦで総容量１６０ｍＬまで希釈した。ＴＨＦ中ＬｉＯｔＢｕの溶液（２０重量％、６７．３ｇ、７７ｍＬ、１．１５当量）をＴＨＦ（２４３ｍＬ）で希釈し、次いでこの溶液を氷／塩浴で内部温度－９℃まで冷却した。内部温度を－３℃未満に維持しつつ、これに酸塩化物を含有するスラリーを５５分かけて加えた。添加の終了から１５分後に反応は完了していた。この溶液を周囲温度に温めながら一晩熟成させ、ヘプタン（３２０ｍＬ、１０容量）で希釈し、水（１６０ｍＬ、５容量）で洗浄した。水層を界面に不溶性断片が見られるまで除去し、次いで、有機層をソルカフロッグパッドで濾過した。このパッドをヘプタン（１０ｍＬ）ですすぎ、次いで、合わせた有機層を水（２×８０ｍＬ、２．５容量）で２回洗浄した。得られた有機層を最終容量１００ｍＬまで減圧下で蒸留し、ヘプタン（１６０ｍＬ、５容量）で希釈し、再び総容量１００ｍＬまで濃縮した。３－ブロモ－５－フルオロ安息香酸ｔｅｒｔ－ブチルの溶液をそのまま次の工程で使用した。NMR 1H (400MHz; CDCl3): 7.89-7.88 (1H, m), 7.60-7.57 (1H, m), 7.40-7.37 (1H, m), 1.57 (9H, s)。
段階２：３－フルオロ－５－［１－ヒドロキシ－１－（オキサン－４－イル）プロピル］安息香酸
Figure 2023508165000147
２－ＭｅＴＨＦ（２００ｍＬ、１０容量）中、３－ブロモ－５－フルオロ安息香酸ｔｅｒｔ－ブチル（２０．０ｇ、１．０当量）および１－（オキサン－４－イル）プロパン－１－オン（１０．８５ｇ、１．０５当量）の溶液を、ＴＨＦ中０．５Ｍ ＬｉＣｌ溶液（７２．７ｍＬ、０．５当量）で処理し、－７０℃に冷却した。ヘキサン中ｎ－ブチルリチウムの溶液（２．２Ｍ、３９．０ｍＬ、１．１当量）を１時間かけて滴下し、添加の終了時に反応は完了していた。この混合物を－２０℃に温め、半飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液（２００ｍＬ）で急冷し、１０分間振盪した。この混合物を沈降させ、層を分離した。有機相を水（５０ｍＬ、２．５容量）で洗浄した。この溶液をＨＰＬＣによりアッセイしたところ、２０．６ｇの３－フルオロ－５－［１－ヒドロキシ－１－（オキサン－４－イル）プロピル］安息香酸ｔｅｒｔ－ブチル（アッセイ収率８４％）であった。LCMS (M-H)-; m/z = 337.2。この有機溶液を減圧蒸留により総容量およそ４０ｍＬ（～２容量）まで濃縮した。この３－フルオロ－５－［１－ヒドロキシ－１－（オキサン－４－イル）プロピル］安息香酸ｔｅｒｔ－ブチルの濃縮溶液を２０℃にてＴＦＡ（２８．０ｍＬ、６．０当量）で処理し、溶液を６０℃に温め、２時間熟成させ、この時、ＨＰＬＣ分析は反応が９８％完了していたことを示し、この混合物を２０℃に冷却し、その後、ＭＴＢＥ（４０ｍＬ、２容量）およびヘプタン（８０ｍＬ、４容量）で希釈した。この溶液を真正の３－フルオロ－５－［１－ヒドロキシ－１－（オキサン－４－イル）プロピル］安息香酸ｔｅｒｔ－ブチルを播種し、３０分間熟成させ、この間にシードベッドが成長した。このスラリーを、ヘプタン（１２０ｍＬ）を添加して１時間かけて希釈し、濾過し、ケーキをヘプタン（４０ｍＬ）で洗浄し、標題化合物を灰白色固体として得た（１４．８９ｇ、収率８７％）。NMR 1H (400MHz; DMSO): 13.23 (1H, s), 7.79 (1H, t), 7.50-7.47 (1H, m), 7.43-7.39 (1H, m), 4.79 (1H, s, ブロード), 3.79 (2H, ddd), 3.18 (2H, dt), 1.86-1.79 (3H, m), 1.64 (1H, d), 1.36-1.09 (2H, m), 0.93 (1H, d), 0.58 (3H, t); LCMS (M+H)+: m/z = 283.1
段階３：３－フルオロ－５－［１－（オキサン－４－イル）－１－［（トリメチルシリル）オキシ］プロピル］安息香酸
Figure 2023508165000148
０℃にて、ＤＣＭ（４０ｍＬ）中、３－フルオロ－５－［１－ヒドロキシ－１－（オキサン－４－イル）プロピル］安息香酸（７．０６ｇ、１．０当量）の懸濁液に、Ｅｔ３Ｎ（７．０８ｇ、２．６当量）を３０分かけて加えた（温度を５℃未満に維持）。得られた透明な溶液をＤＣＭ（４０ｍＬ）中、ＴＭＳＯＴｆ（１３．３４ｇ、２．４当量）の溶液で６０分かけて処理した（温度を５℃未満に維持）。この反応混合物を０℃でさらに１時間撹拌した。この冷反応混合物に水（８８ｍＬ）を１５分かけて加え、相を分離した。有機相を０．２Ｍ ＫＨＳＯ４溶液（５３ｍＬ）および水（２×８８ｍＬ）で洗浄した。この溶液をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空濃縮した。粗生成物（油状物）をＤＣＭ／ヘプタンから結晶化させ、標題化合物（８．２４ｇ、９３％）を灰白色固体として得た。NMR 1H (400MHz; DMSO): 7.79 (1H, t), 7.65-8.62 (1H, m), 7.35-7.31 (1H, m), 3.98 (2H, ddd), 3.33 (2H, dtd), 2.04-1.84 (3H, m), 1.75 (1H, d), 1.37 (1h, qd), 1.26-1.20 (2H, m), 0.72 (3H, t), 0.25 (9H, s); LCMS (M+H)+: m/z = 355.2
段階４：２－（４－クロロベンゾイル）－３－フルオロ－５－［１－ヒドロキシ－１－（オキサン－４－イル）プロピル］安息香酸
Figure 2023508165000149
内部温度－７０℃にて、ＴＨＦ（６０ｍＬ、１５容量）にｎ－ＢｕＬｉ（９．８ｍＬ、２．０当量、ヘキサン中２．３Ｍ溶液）を加えた。ＴＨＦ（２０．０ｍＬ、５容量）中、３－フルオロ－５－［１－（オキサン－４－イル）－１－［（トリメチルシリル）オキシ］プロピル］安息香酸（４．０ｇ、１．０当量）の溶液を、内部温度を－６５℃未満に維持しつつ、６０分かけて滴下した。添加が終了した後、得られた淡赤色溶液を３０分間撹拌し、内部温度を－６０℃未満に維持しつつ、ＴＨＦ（２容量、８．０ｍＬ）中、塩化４－クロロベンゾイル（１．６ｍＬ、１．１５当量）を１０分かけて加え、添加の終了時に反応は完了し、この溶液を０℃に温め、２－（４－クロロベンゾイル）－３－フルオロ－５－［１－（オキサン－４－イル）－１－［（トリメチルシリル）オキシ］プロピル］安息香酸をＴＨＦ中の溶液として得た。LCMS (M+H)+: m/z = 493.2
この溶液に濃Ｈ３ＰＯ４（３．８ｍＬ、５．０当量）を加え、この混合物を５０℃で１８時間撹拌した。この混合物をトルエン（４０ｍＬ、１０容量）および４％ＮａＣｌ水溶液（２０ｍＬ、５容量）で希釈した。相を分離し、上層の有機層を４％ＮａＣｌ水溶液（２０ｍＬ）および水（１０ｍＬ）で洗浄した。有機層を約１／３容量に濃縮し、次いで、トルエン（６０ｍＬ、１５容量）で希釈した。この溶液を総容量約３５ｍＬに濃縮し（約９容量、浴温５０℃、圧力８０ｍｂａｒ）、この間に白色固体が沈殿した。このスラリーを５０℃で１時間熟成させ、次いで、周囲温度まで冷却し、３時間熟成させた。このスラリー を濾過し、ケーキを２×８ｍＬ（２×２容量）のトルエンで洗浄した後、真空炉（炉温５０℃）で一定の重量になるまで乾燥させた。標題化合物は、補正収率８１％で白色固体として得られた（４．０４ｇ、９５重量％）。LCMS (M+H)+: m/z = 421.1
段階５：２－（４－クロロベンゾイル）－３－フルオロ－５－［（１Ｓ）－１－ヒドロキシ－１－（オキサン－４－イル）プロピル］安息香酸－ビス［（１Ｓ）－１－フェニルエチル］アミン塩
Figure 2023508165000150
２－（４－クロロベンゾイル）－３－フルオロ－５－［１－ヒドロキシ－１－（オキサン－４－イル）プロピル］安息香酸（ラセミ化合物、３００ｇ、８５重量％、２５５ｇ ６、１．０当量）をイソプロパノール（４０００ｍＬ）に、５５℃で１０分間撹拌することにより溶解させて均質な溶液を得、その後、２５℃に冷却した。この溶液に、ＩＰＡ（３００ｍｌ）中、ビス［（１Ｓ）－１－フェニルエチル］アミン（１３６．５２ｇ；１．０当量）を２分かけて加えた後、ＩＰＡ（２００ｍＬ）ですすいだ。この溶液を周囲温度（２２～２３℃）で１５分間撹拌し、次いで、標題化合物の真正なサンプル（０．５０ｇ）を播種し、固体はすぐに結晶化し、若干の吸熱（およそ－０．４℃）が見られた。この懸濁液を内部温度１９℃で２０時間撹拌し、濾過し、ケーキをＩＰＡ（４５０ｍＬ）で洗浄した。固体を真空吸引下で２時間、次いで、５０℃の真空炉で２０時間乾燥させ、ベージュ色の固体；１７５．５ｇ（ＩＰＡ溶媒和物としての収率４１％）を得、ＨＰＬＣによればこの混合物は９５：５ ｅ．ｒ．である。
キラルＨＰＬＣ条件：
カラム：ＣｈｉｒａｌＰａｋ ＩＣ－３ ３μカラム４．６×１５０ｍｍ
カラム温度：２７℃
溶離剤：ヘプタン／ＩＰＡ ８０：２０（０．１％ＴＦＡ含有）
流速：１．０ｍＬ／分 ＠２５４ｎｍ
保持時間 所望（Ｓ）鏡像異性体；ＲＴ＝４．６０分。不所望（Ｒ）鏡像異性体）、ＲＴ＝５．８３分
８０℃に温め、均質な溶液が形成するまでこの温度で１５分間撹拌することにより、材料（２５０ｇ、１．０当量、９５：５ ｅ．ｒ．）をＩＰＡ（４０００ｍＬ、１６容量）に溶解させた。この溶液を約１時間かけて５２℃まで冷却し、標題化合物の真正なサンプル（０．５０ｇ）を播種し、この懸濁液を４時間かけて２０℃まで冷却し、次いで、周囲温度で、この温度で一晩（合計２４時間）撹拌した。真空下での濾過により固体を単離し、濾過ケーキをＩＰＡ（２×４５０ｍＬ）で洗浄し、濾過ケーキを５分間吸引乾燥させた後、さらに５０℃の真空炉で乾燥させた。２－（４－クロロベンゾイル）－３－フルオロ－５－［（１Ｓ）－１－ヒドロキシ－１－（オキサン－４－イル）プロピル］安息香酸－ビス［（１Ｓ）－１－フェニルエチル］アミン塩をベージュ色の固体として得（２１９．２ｇ；回収率８８％）；ＨＰＬＣにより、ｅ．ｒ．は９９．６：０．４であった。NMR 1H (400MHz; DMSO): 7.84 (1H, d), 7.67 (1H, t), 7.65 (1H, t), 7.58 (1H, t), 7.56 (1H, t), 7.47 (1H, dd), 7.34-7.30 (4H, m), 7.28-7.20 (6H, m), 4.90 (1H, s), 3.90 (1H, dd), 3.80-3.72 (1H, m), 3.51-3.46 (1H, m), 3.30-3.15 (1H, m), 1.93-1.83 (3H, m), 1.68 (1H, d), 1.41-1.28 (1H, m), 1.26 (3H, s), 1.24 (3H, s), 1.04 (3H, s), 1.03 (3H, s), 0.65 (3H, t)
段階６：（２Ｓ，３Ｓ）－３－アミノ－３－（４－クロロフェニル）－２－メチルプロパン酸２－（トリメチルシリル）エチル塩酸塩
Figure 2023508165000151
－１０℃にて、ＤＣＭ（１１００ｍＬ、１０容量）中、（２Ｓ，３Ｓ）－３－｛［（ｔｅｒｔ－ブトキシ）カルボニル］アミノ｝－３－（４－クロロフェニル）－２－メチルプロパン酸（１０９．８２ｇ、１．０当量）、２－トリメチルシリルエタノール（４９．６６ｇ、１．２当量）およびＤＭＡＰ（４．２８ｇ、０．０５ｍｏｌ％）の懸濁液に、ＥＤＣ・ＨＣｌ（１００．６５ｇ、１．５当量）を５等分して７５分かけて加えた（０℃未満の温度に維持）。得られた透明溶液をゆっくり室温まで温め、１６時間撹拌した。この反応混合物に１Ｎ ＨＣｌ溶液（１０００ｍＬ）を１５分かけてゆっくり加え、相を分離した。有機相を５％ＮａＨＣＯ３溶液（５００ｍＬ）および水（２×５００ｍＬ）で洗浄した。有機相を真空濃縮して（２Ｓ，３Ｓ）－３－｛［（ｔｅｒｔ－ブトキシ）カルボニル］アミノ｝－３－（４－クロロフェニル）－２－メチルプロパン酸２－（トリメチルシリル）エチルを得、これをそのまま次の工程で使用した。LCMS (M+H)+: m/z = 414.2
粗材料（蝋状白色固体）をＤＣＭ（２００ｍＬ）／ヘプタン（１５００ｍＬ）に再溶解させ、このヘプタン溶液に２時間かけてジオキサン中４Ｎ ＨＣｌ溶液（３５０ｍＬ、４．０当量）を滴下した。この添加の際にＨＣｌ塩が沈澱し始め、反応が周囲温度で２４時間熟成されるにつれ懸濁液は徐々に濃厚となる。この懸濁液をＭＴＢＥ（８００ｍＬ）で希釈し、濾過し、濾過ケーキをＭＴＢＥ（２×２００ｍＬ）で洗浄し、５０℃の真空炉で一定の重量になるまで乾燥させた後、標題化合物を白色のフレーク状固体として得た（１０８．２２ｇ、８８％）。NMR 1H (400MHz; CDCl3): 8.93 (3H, bs), 7.39-7.29 (4H, m), 4.3 (1H, bd), 4.06-3.92 (2H, m), 3.17-3.08 (1H, m), 1.32 (3H, d), 0.80-0.71 (2H, m), -0.02 (9H, s); LCMS (M+H)+: m/z = 314.1
段階７：（２Ｓ，３Ｓ）－３－（４－クロロフェニル）－３－［（１Ｒ）－１－（４－クロロフェニル）－７－フルオロ－１－ヒドロキシ－５－［（１Ｓ）－１－ヒドロキシ－１－（オキサン－４－イル）プロピル］－３－オキソ－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－イソインドール－２－イル］－２－メチルプロパン酸 ２－（トリメチルシリル）エチル
Figure 2023508165000152
２－（４－クロロベンゾイル）－３－フルオロ－５－［（１Ｓ）－１－ヒドロキシ－１－（オキサン－４－イル）プロピル］安息香酸－ビス［（１Ｓ）－１－フェニルエチル］アミン塩（１５．０ｇ、１．０当量）、（２Ｓ，３Ｓ）－３－アミノ－３－（４－クロロフェニル）－２－メチルプロパン酸２－（トリメチルシリル）エチル塩酸塩（８．２ｇ、１．１当量）、ＥＤＣ塩酸塩（４．７ｇ、１．１５当量）、ＤＭＡＰ（２６０ｍｇ、０．１当量）、および２－ヒドロキシピリジン－Ｎ－オキシド（２３０ｍｇ、０．１当量）の混合物にジクロロメタン（１５０ｍＬ、１０容量）を加えた。この混合物を１８時間撹拌し、次いで、ＮａＨＣＯ３水溶液（６０ｍＬのＨ２Ｏ中、４．５ｇ、２．５当量）を加えることにより急冷した。層を分離し、ＤＣＭ相を３０ｍＬ（２容量）まで濃縮した。ＭＴＢＥ（１５０ｍＬ、１０容量）を加え、有機層を２×Ｈ３ＰＯ４水溶液（６０ｍＬの水中、３．５ｍＬ、２．５当量）、ＮａＨＣＯ３水溶液（６０ｍＬのＨ２Ｏ中、４．５ｇ、２．５当量）、および水（６０ｍＬ）で順次洗浄した。有機層を６０ｍＬ（２容量）まで濃縮し、ＭｅＯＨ（３００ｍＬ、２０容量）で希釈し、１５０ｍＬ（１０容量）まで濃縮した。ＭｅＯＨ溶液を水（１５ｍＬ）で希釈し、真正なサンプル（１５ｍｇ、０．１重量％）を播種し、周囲温度で３０分間熟成させ、その間にシードベッドが成長した。このスラリーを、２時間かけて水（４５ｍＬ）を加えて希釈し、１時間熟成させた後に濾過した。このケーキを２．５／１ ＭｅＯＨ：Ｈ２Ｏ（４５ｍＬ）および水（４５ｍＬ）で洗浄し、５０℃の真空炉で１８時間乾燥させ、標題化合物を白色固体として得た（１３．５ｇ、収率８９％、１９Ｆ ＮＭＲによりｄ．ｒ．＞９９：１）。NMR 1H (400MHz; CDCl3): 7.80 (1H, s), 7.15 (1H, d), 7.01-6.99 (4H, m), 6.97-6.92 (4H, m), 4.77 (1H, s), 4.36 (1H, d), 4.16-4.08 (1H, m), 3.94-3.90 (1H, m), 3.89-3.79 (2H, m), 3.47 (1H, d), 3.31 (1H, t), 3.08 (1H, t), 2.55 (1H, s), 1.91 (1H, sep), 1.86-1.77 (2H, m), 1.74-1.71 (1H, m), 1.41-1.22 (5H, m), 0.94 (1H, d), 0.68-0.54 (5H, m), 0.10 (9H, s), NMR 19F (376 MHz, CDCl3) δ: --119.1およびLCMS (M+H)+: m/z = 716.2
段階８：（２Ｓ，３Ｓ）－３－（４－クロロフェニル）－３－［（１Ｒ）－１－（４－クロロフェニル）－７－フルオロ－５－［（１Ｓ）－１－ヒドロキシ－１－（オキサン－４－イル）プロピル］－１－メトキシ－３－オキソ－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－イソインドール－２－イル］－２－メチルプロパン酸２－（トリメチルシリル）エチル
Figure 2023508165000153
１００ｍＬの３つ口フラスコにて室温で、固体（２Ｓ，３Ｓ）－３－（４－クロロフェニル）－３－［（１Ｒ）－１－（４－クロロフェニル）－７－フルオロ－１－ヒドロキシ－５－［（１Ｓ）－１－ヒドロキシ－１－（オキサン－４－イル）プロピル］－３－オキソ－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－イソインドール－２－イル］－２－メチルプロパン酸２－（トリメチルシリル）エチル（２．５ｇ、１．０当量）を無水ＴＨＦ（１２．５ｍＬ、５容量）に溶解させた。この溶液を内部温度－７０℃に冷却し、ＭｅＯＴｆ（トリフルオロメタンスルホン酸メチル）（０．４６ｍＬ、１．２当量）を加えた。得られた透明な溶液を内部温度－７０℃に維持した。ＬｉＯｔＢｕ（ＴＨＦ中２０重量％、１．９ｍＬ、１．２当量）をシリンジポンプによって１時間かけて滴下した。この混合物を１８時間－７０℃に維持した後、２時間かけて－１５℃に冷却し、この時点で変換率は＞９８％であった。この反応混合物をＩＰＡ（１２．５ｍＬ）、次いで水（１２．５ｍＬ）で希釈した。この溶液に生成物１０を播種し、周囲温度で３０分間撹拌し、その間にシードベッドが形成した。さらなる水（２５ｍＬ）を、シリンジポンプを介して１．５時間かけてゆっくり加え、このスラリーを周囲温度で１時間熟成させた後に濾過した。このケーキを１：１ ＩＰＡ／水（２０ｍＬ）で洗浄し、５０℃の真空炉で乾燥させ、標題化合物（２．４ｇ）（未補正収率９４％、１９Ｆ ＮＭＲにより１００：０．５ ｄ．ｒ）。NMR 1H (400MHz; CDCl3): 7.67 (1H, d), 7.28 (1H, dd), 6.93-6.88 (8H, m), 4.30-4.19 (m, 2H), 4.01 (dd, 1H), 3.92-3.77 (m, 3H), 3.40-3.26 (m, 2H), 3.22 (s, 3H), 1.97-1.84 (m, 4H), 1.72 (bs, 3H), 1.49-1.38 (m, 2H), 1.36 (d, 3H), 1.07 (bd, 1H), 0.69 (t, 3H), 0.61-0.52 (m, 2H), -0.08 (s, 9H); NMR 19F (376 MHz, CDCl3) δ: -118.8およびLCMS (M+H)+: m/z = 730.3
段階９：（２Ｓ，３Ｓ）－３－（４－クロロフェニル）－３－［（１Ｒ）－１－（４－クロロフェニル）－７－フルオロ－５－［（１Ｓ）－１－ヒドロキシ－１－（オキサン－４－イル）プロピル］－１－メトキシ－３－オキソ－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－イソインドール－２－イル］－２－メチルプロパン酸
Figure 2023508165000154
（２Ｓ，３Ｓ）－３－（４－クロロフェニル）－３－［（１Ｒ）－１－（４－クロロフェニル）－７－フルオロ－５－［（１Ｓ）－１－ヒドロキシ－１－（オキサン－４－イル）プロピル］－１－メトキシ－３－オキソ－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－イソインドール－２－イル］－２－メチルプロパン酸２－（トリメチルシリル）エチル（１７０．０ｇ、１．０当量）およびＣｓＦ（７０．７ｇ、２．０当量）を５Ｌの固定容器に充填し、周囲温度でＤＭＦ（５１０ｍＬ、３容量）を加えた。この混合物を６０℃に温め、この温度で７時間熟成させ、この時点で反応は完了していた。この混合物を２０℃に冷却し、一晩撹拌した。ＤＭＦをＥｔＯＡｃ（１７００ｍＬ、１０ｍＬ）および１Ｍ ＨＣｌ（５１０ｍＬ、３容量）で希釈した。層を分離し、有機層を５％ＬｉＣｌ水溶液（４×６８０ｍＬ、４容量）および水（２×６８０ｍＬ、４容量）で順次洗浄した後、濃縮した。得られた油状物をＥｔＯＡｃ（各２５０ｍＬ）から２回濃縮して標題化合物を淡黄色泡沫として得た（１４１ ｇ 補正後、９２重量％、収率９６％）。この固体をＥｔＯＡｃ（６８４ｍＬ、４容量）に懸濁させ、７０℃に加熱し、この温度で１時間維持し、次いで、２時間かけて２０℃に冷却した。ヘプタン（１３７０ｍＬ、８容量）を７０分かけて加え、スラリーを一晩熟成させた。この固体を濾過し、ＥｔＯＡｃ／ヘプタン １：２（２×３００ｍＬ）で洗浄し、５０℃の真空炉で一定の重量になるまで乾燥させ、１３３ｇ（収率８６％）を得た。
この生成物は安定な無水結晶形で単離された。これは遊離酸「形態Ｆ」と呼称されており、安定な結晶多型である。
ＸＲＰＤは、以下の共鳴にピークを有する（表６）：
Figure 2023508165000155
Figure 2023508165000156
工程１０ａ：（２Ｓ，３Ｓ）－３－（４－クロロフェニル）－３－［（１Ｒ）－１－（４－クロロフェニル）－７－フルオロ－５－［（１Ｓ）－１－ヒドロキシ－１－（オキサン－４－イル）プロピル］－１－メトキシ－３－オキソ－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－イソインドール－２－イル］－２－メチルプロパン酸トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン塩
Figure 2023508165000157
（２Ｓ，３Ｓ）－３－（４－クロロフェニル）－３－［（１Ｒ）－１－（４－クロロフェニル）－７－フルオロ－５－［（１Ｓ）－１－ヒドロキシ－１－（オキサン－４－イル）プロピル］－１－メトキシ－３－オキソ－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－イソインドール－２－イル］－２－メチルプロパン酸（１１３．０ｇ、１．０当量）およびトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（２１．９５ｇ、１．０１当量）を固体として２Ｌの容器に充填した。窒素下で撹拌しながらメタノール（１１３０ｍＬ）を加え、流動性の懸濁液を得た。これらの固体を３０分かけて３８～４０℃に温めることで溶解させて透明な溶液を得た。これを２０～２２℃に冷却し、次いで、Ｂｕｃｈｉ ｒｏｔａｖａｐｏｒにて減圧濃縮して白色泡沫を得た。この泡沫を結晶化皿に移し、終末にかけて（６０時間）６０℃で真空乾燥させ（およそ２０ｍｍＨｇ）、標題化合物を硬いが脆い白色泡沫として得た（１３４．１ｇ；９９．５）。
化合物１の製造のための他の方法は、２０１８年１０月４日にＷＯ２０１８／１７８６９１として公開された国際特許出願第ＰＣＴ／ＧＢ２０１８／０５０８４５号に見出すことができる。
生物学的アッセイ
実施例１－式（Ｉ ｏ ）の化合物
９６ウェルプレート結合アッセイ（ＥＬＩＳＡ）を用いたＭＤＭ２－ｐ５３の相互作用
ＥＬＩＳＡアッセイは、２００μｌ／ウェルの１μｇ ｍｌ－１ビオチン化ＩＰ３ペプチドとともにプレインキュベートしたストレプトアビジンコーティングプレートで行った。プレートは、プレートをＰＢＳで洗浄した後にＭＤＭ２結合に使用できる状態となった。
９６ウェルプレートに分注したＤＭＳＯ中の化合物溶液および対照溶液を、室温で（例えば、２０℃）にて２０分間、２．５～５％（ｖ／ｖ）の最終ＤＭＳＯ濃度で、ｉｎ ｖｉｔｒｏで翻訳されたＭＤＭ２の最適濃度の１９０μｌアリコートとともにプレインキュベートし、その後、ＭＤＭ２－化合物混合物をｂ－ＩＰ３ストレプトアビジンプレートに移し、４℃で９０分間インキュベートした。ＰＢＳで３回洗浄して結合してないＭＤＭ２を除去した後、各ウェルを、一次マウスモノクローナル抗ＭＤＭ２抗体（Ａｂ－５、Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ、使用する抗体保存溶液によって１／１００００または１／２００希釈で使用）のＴＢＳ－Ｔｗｅｅｎ（５０ｍＭ トリス ｐＨ７．５；１５０ｍＭ ＮａＣｌ；０．０５％ Ｔｗｅｅｎ ２０非イオン界面活性剤）緩衝溶液とともに２０℃で１時間インキュベートし、次いで、ＴＢＳ－Ｔｗｅｅｎで３回洗浄した後、ヤギ抗マウスセイヨウワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）結合二次抗体（抗体保存溶液によって１／２００００または１／２０００で使用）のＴＢＳ－Ｔｗｅｅｎ緩衝溶液とともに２０℃で４５分間インキュベートした。結合していない二次抗体をＴＢＳ－Ｔｗｅｅｎで３回洗浄することによって除去した。結合しているＨＲＰ活性は、定量可能な光シグナルを生成するためにジアシルヒドラジド基質ルミノールの酸化を用いる増強化学発光（ＥＣＬ（商標）、Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）によって測定した。所与の濃度でのＭＤＭ２阻害のパーセンテージは、［１－（化合物で処理されたサンプルにおいて検出されたＲＬＵ－ＲＬＵ陰性ＤＭＳＯ対照）÷（ＤＭＳＯ陽性および陰性対照のＲＬＵ］×１００または（化合物で処理されたサンプルにおいて検出されたＲＬＵ÷ＤＭＳＯ対照のＲＬＵ）×１００として計算される。ＩＣ５０は、濃度に対するＭＤＭ２阻害％のプロットを用いて計算し、２回または３回の独立した実験の平均である。
ウエスタンブロット解析
ＳＪＳＡ細胞を、０．５％ＤＭＳＯ中、５、１０および２０μＭの化合物で処理した。細胞を０．５％ＤＭＳＯ単独の対照とともに、氷冷リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で洗浄し、高分子量のＤＮＡを破断し、サンプルの粘度を低下させるために音波処理を２×５秒（Ｓｏｎｉｐｒｅｐ １５０ＭＥ）行いつつ、ＳＤＳバッファー（６２．５ｍＭトリス ｐＨ６．８；２％ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）；１０％グリセロール）中に細胞を溶解させることによりタンパク質抽出物を調製した。サンプルのタンパク質濃度は、Ｐｉｅｒｃｅ ＢＣＡアッセイシステム（Ｐｉｅｒｃｅ、ロックフォード、ＩＬ）を用いて評価し、５０μｇアリコートのタンパク質を標準的なＳＤＳ－ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）およびウエスタン免疫ブロット法を用いて分析した。β－メルカプトエタノール（５％）およびブロモフェノールブルー（０．０５％）を加え、次に、サンプルを５分間煮沸した後、軽く遠心分離し、その後、プレキャスト４～２０％勾配トリス－グリシン緩衝ＳＤＳ－ポリアクリルアミドゲル（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）にロードした。分子量標準（ＳｅｅＢｌｕｅ（商標）、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）が総てのゲルに含まれ、電気泳動はＮｏｖｅｘ ＸＬタンク（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）にて１８０ボルトで９０分間行った。分離したタンパク質を、ＢｉｏＲａｄ電気泳動タンクおよび２５ｍＭトリス、１９０ｍＭグリシンおよび２０％メタノール転写バッファーを用い、ゲルからＨｙｂｏｎｄ Ｃニトロセルロース膜（Ａｍｅｒｓｈａｍ）へ、３０ボルトで一晩または７０ボルトで２時間電気泳動的に転写した。転写したタンパク質の免疫検出に使用した一次抗体は、マウスモノクローナルＮＣＬ－ｐ５３ＤＯ－７（Ｎｏｖｏｃａｓｔｒａ）１：１０００；ＭＤＭ２（Ａｂ－１、クローンＩＦ２）（癌遺伝子）１：５００；ＷＡＦ１（Ａｂ－１、クローン４Ｄ１０）（癌遺伝子）１：１００；アクチン（ＡＣ４０）（Ｓｉｇｍａ）１：１０００であった。使用した二次抗体は、ペルオキシダーゼ結合、親和性精製、ヤギ抗マウス（Ｄａｋｏ）１：１０００であった。タンパク質の検出および可視化は、青色感受性オートラジオグラフィーフィルム（Ｓｕｐｅｒ ＲＸ、Ｆｕｊｉ）への露光による光検出を用いる増強化学発光（ＥＣＬ（商標）、Ａｍｅｒｓｈａｍ）によって行った。
プロトコールＡ：ＳＪＳＡ－１アッセイおよびＳＮ４０Ｒ２アッセイ
供試したＭＤＭ２増幅細胞株は、同質遺伝子的に一致したｐ５３野生型と変異型骨肉腫（それぞれＳＪＳＡ－１およびＳＮ４０Ｒ２）の対であった。細胞培養は総て、１０％ウシ胎仔血清を添加したＲＰＭＩ １６４０培地（Ｇｉｂｃｏ、Ｐａｉｓｌｅｙ、ＵＫ）で増殖させ、常法通りに検査し、マイコプラズマ感染症が陰性であることを確認した。細胞の増殖およびその阻害は、従前に概略が示されたようにスルホローダミンＢ（ＳＲＢ）法を用いて測定した。それぞれ１００μｌの３×１０４／ｍｌおよび２×１０４／ｍｌのＳＪＳＡ－１細胞およびＳＮ４０Ｒ２細胞を９６ウェル組織培養プレートに播種し、３７℃、５％ＣＯ２の加湿インキュベーターにて２４時間インキュベートし、その後、培地を一定範囲のＭＤＭ２－ｐ５３アンタゴニスト濃度を含有する１００μｌの試験培地に置換し、さらに７２時間インキュベートして細胞を増殖させた後、２５μＬの５０％トリクロロ酢酸（ＴＣＡ）を加えて４℃で１時間、細胞を固定した。ＴＣＡを蒸留水で洗い流し、１００μＬのＳＲＢ色素（１％酢酸中０．４％ｗ／ｖ）（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｐｏｏｌｅ、Ｄｏｒｓｅｔ）をプレートの各ウェルに加えた。室温で３０分間ＳＲＢ色素とともにインキュベートした後、プレートを１％酢酸で洗浄し、乾燥させた。次に、ＳＲＢで染色されたタンパク質（これはウェル内の細胞数の指標となる）を１００μＬの１０ｍＭトリス－ＨＣｌ（ｐＨ１０．５）に再懸濁させ、ＦｌｕｏＳｔａｒ Ｏｍｅｇａプレートリーダーを用い、各ウェルでλ＝５７０ｎｍでの吸光度を測定した。ＧＩ５０は、Ｐｒｉｓｍ ｖ４．０統計ソフトウェアを用いたデータの非直線回帰分析により計算した。
プロトコールＢ：ＳＪＳＡ－１アッセイおよびＳＮ４０Ｒ２アッセイ
ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（登録商標）Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ Ｃｅｌｌ Ｖｉａｂｉｌｉｔｙアッセイは、代謝活性のある細胞の存在のシグナルとなるＡＴＰの存在の定量に基づき培養物中の生細胞の数を決定するための均質な方法である。ＳＪＳＡ－１およびＳＮ４０Ｒ２はいずれも、１０％ＦＢＳ（ＰＡＡ ＃Ａ１５－２０４）および１０Ｕ／ｍｌペニシリン／ストレプトマイシンを添加したＲＰＭＩ １６４０（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ ＃６１８７０）で増殖させた。７５μｌ中２０００細胞を９６ウェルプレートの各ウェルに播種し、３７℃、５％ＣＯ２の加湿インキュベーターにて２４時間置いた。次に、ＤＭＳＯ中、一定範囲のＭＤＭ２－ｐ５３アンタゴニスト濃縮物を細胞に加え、ＤＭＳＯ終濃度０．３％とし、さらに７２時間インキュベートして細胞を増殖させた。１００μｌのＣＴＧ試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ ＃Ｇ７５７３）を総てのウェルに加え、ｔｏｐｃｏｕｎｔで発光を測定した。ＥＣ５０値は、４パラメーターシグモイド曲線から、ＸＬｆｉｔをＡｃｔｉｖｉｔｙ Ｂａｓｅ（ＩＤＢＳ；ギルフォード、サリー州、ＵＫ）とともに使用して決定した。
抗増殖活性
細胞増殖の阻害は、アラマーブルーアッセイ(Nociari, M. M, Shalev, A., Benias, P., Russo, C. Journal of Immunological Methods 1998, 213, 157-167)を用いて測定される。この方法は、レサズリンをその蛍光産物レゾルフィンへ還元する生細胞の能力に基づく。各増殖アッセイのために、細胞を９６ウェルプレートに播種し、１６時間回復させた後、さらに７２時間阻害剤化合物（０．１％ＤＭＳＯ ｖ／ｖ中）を添加する。インキュベーション期間の終了時に、１０％（ｖ／ｖ）アラマーブルーを加え、さらに６時間インキュベートした後、５３５ｎＭ励起／５９０ｎＭ発光で蛍光産物の測定を行う。本発明において使用するための化合物の抗増殖活性は、例えば、ＤＳＭＺ、ＥＣＡＣＣまたはＡＴＣＣから入手可能な癌細胞株において化合物の増殖阻害能を測定することによって決定することができる。
結果：ｃｙｃがフェニルである実施例の第１のセット
Figure 2023508165000158
Figure 2023508165000159
Figure 2023508165000160
２つ以上のデータ点が得られている場合には、上記表はこれらのデータ点の平均（例えば、幾何平均または算術平均）を示す。
当然のことながら、本発明は、単に例として記載される上記実施形態の詳細に限定されるもではないと理解されるべきである。
結果：ｃｙｃがＨｅｔである実施例の第２のセット
結果
Figure 2023508165000161
Figure 2023508165000162
Figure 2023508165000163
Figure 2023508165000164
Figure 2023508165000165
Figure 2023508165000166
Figure 2023508165000167
Figure 2023508165000168
Figure 2023508165000169
Figure 2023508165000170
Figure 2023508165000171
Figure 2023508165000172
２つ以上のデータ点が得られている場合には、上記表はこれらのデータ点の平均（例えば、幾何平均または算術平均）を示す。
当然のことながら、本発明は、単に例として記載される上記実施形態の詳細に限定されるもではないと理解されるべきである。
実施例２－２１０のｐ５３野生型癌細胞株細胞株パネルスクリーンにおける化合物１の抗増殖効果に対する感受性の増大を予測するバイオマーカーの検討
化合物１を、結腸、血液、乳房、肺、皮膚、卵巣、および膵臓を含む一定範囲の腫瘍組織に由来する２１０のｐ５３野生型癌細胞株のパネルにおいてスクリーニングした。ＩＣ５０値および活性面積を未処理の用量反応曲線から計算した。体細胞突然変異、コピー数変化および高メチル化などのこれらの細胞株のゲノムの特徴は、Ｇａｒｎｅｔｔ ｅｔ ａｌ（２０１６）により報告されたようなＣａｎｃｅｒ Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ Ｅｖｅｎｔｓのリストから取得した。ゲノムの特徴と化合物１の薬物応答の有意な関連を特定するためにＡＮＯＶＡ法を使用した。本発明者らは、ＣＤＫＮ２Ａ欠損を、化合物１に対する感受性の増強を予測する統計的に有意な（補正ｐ値＜０．０２）バイオマーカーとして特定した（図１）。
方法：
癌細胞を適当な培地で培養した。細胞を採取し、Ｖｉ－ｃｅｌｌ ＸＲセルカウンターを用いて計数した。細胞を適当な密度に調整し、９６ウェル不透明壁・透明底プレートに容量１００μＬで播種し、３７℃、５％ＣＯ２の加湿雰囲気中で一晩インキュベートした。第１列には細胞は加えず、これをブランク対照として使用した。プレートのレイアウトを表１に示す。
化合物１の１０ｍＭ保存溶液をＤＭＳＯで調製した。この保存溶液をＤＭＳＯでさらに希釈した後、細胞を含有する９６ウェルプレートの２連のウェルに加えてＤＭＳＯ終濃度を０．１％とした。次に、プレートを３７℃、５％ＣＯ２の加湿雰囲気中で３日間インキュベートした。各細胞株は３反復で試験した。
１００μＬのＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ試薬をアッセイプレートの各ウェルに加えた。プレートをオービタルシェーカー上で１０分間混合した後、室温で１０分間インキュベーションを行った。次に、プレートをＥｎＳｐｉｒｅプレートリーダーで読み取った（発光）。
各ウェルは、培地単独対照（無細胞）を差し引き、平均ＤＭＳＯ対照から培地単独対照を差し引いたパーセンテージとして計算した。シグモイド用量反応（可変勾配）曲線およびＩＣ５０値は、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ、ラホヤ カリフォルニア州 ＵＳＡ）を使用して計算した。
実施例３－ヒト患者由来中皮腫細胞株に対する化合物１の抗増殖効果
中皮腫は、ＣＤＫＮ２Ａ（Ｅｎｔｒｅｚ遺伝子ＩＤ １０２９）の欠損が頻繁に見られる適応症の１つであり、化合物１の抗増殖活性を１２のｐ５３野生型、患者由来中皮腫細胞株のパネルでさらに検討した。化合物１は、これらの細胞株の増殖を、１２の細胞株のうち７株で平均ＩＣ５０値＜１００ｎＭ、１１細胞株で＜４００ｎＭで強力に阻害した（表１）。
Figure 2023508165000173
方法：
Figure 2023508165000174
アラマーブルー増殖アッセイ：
２×１０５細胞を播種し、３７℃、空気中５％ＣＯ２の加湿雰囲気中で一晩インキュベートした。化合物をまずＤＭＳＯ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、セントルイス、ＭＯ、ＵＳＡ）、次に無血清培地で希釈し、その後、細胞を播種した９６ウェルプレートの３連のウェルに加えてＤＭＳＯ終濃度を０．１％とした。次いで、各細胞株についてプレートを３７℃、空気中５％ＣＯ２の加湿雰囲気中で７２時間インキュベートした。総ての細胞株について、生細胞数を、生細胞のミトコンドリア活性に応答したレサズリン（アラマーブルー）のレゾルフィンへの変換を測定することにより決定した。アラマーブルー（商標）（ＡｂＤ Ｓｅｒｏｔｅｃ／Ｂｉｏ－Ｒａｄ、ハーキュリーズ、ＣＡ、ＵＳＡ）を処理期間の終了に向かってウェル容積の１０％（２０μｌ／ウェル）まで添加し、さらに８～２４時間インキュベートした。次に、プレートをＳｐｅｃｔｒａＭａｘ Ｇｅｍｉｎｉリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ、サニーベール、ＣＡ、ＵＳＡ）にて５３５ｎｍ（励起）および５９０ｎｍ（発光）で読み取った。各ウェルを、平均ＤＭＳＯ対照のパーセンテージとして計算した。シグモイド用量反応（可変勾配）曲線およびＩＣ５０値は、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ、ラホヤ、ＣＡ、ＵＳＡ）を使用して計算した。
実施例４－ヒト患者由来中皮腫細胞株における化合物１による活性化カスパーゼ－３の誘導
化合物１の全般的抗増殖効果の評価に加え、化合物１により誘導されるアポトーシスのレベルを、活性化カスパーゼ－３を有する細胞のパーセンテージとして測定した。化合物１依存性の活性化カスパーゼ－３の増大は総ての細胞株に見られた。特に、６つの細胞株（＃２、＃４０、＃１２、＃１９、＃５２、およびＭｅｓｏ－７Ｔ）は、１μＭの化合物１で７２時間処理した後に活性化カスパーゼ－３に関する陽性染色は細胞の＞４０％で、強いアポトーシス誘導を示した。追跡分析の目的で、これらの６つの細胞株は、化合物１による同じ処理後に＜４０％のアポトーシスを示した他の６つの「非アポトーシス」細胞株（＃２６、＃１８、Ｍｅｓｏ－２９Ｔ、Ｍｅｓｏ－５０Ｔ、＃２４、＃３５）に対して、「アポトーシス」と分類された（図２）。化合物１により誘導されるアポトーシスの程度は、アラマーブルー増殖アッセイから得られたＩＣ５０値（表１）からは予測されず、従って、その後の以下の節に記載されるバイオインフォマティクス分析のために、特にそれらのアポトーシス能に基づいて細胞株を分類する影響が強調される。
実施例５－化合物１により誘導されるアポトーシスに対する感受性を予測するバイオマーカーを特定するための患者由来の中皮腫細胞株のバイオインフォマティクス分析
アポトーシス対非アポトーシス患者由来中皮腫細胞株（上記）に対してバイオインフォマティクス分析を実施し、化合物１により誘導されるアポトーシスに感受性のある癌細胞を予測するバイオマーカーを特定した。
ａ．差次的遺伝子発現
患者由来中皮腫細胞株の遺伝子発現プロフィールは、ＨｉＳｅｑプラットフォームおよび各サンプルにつき生物学的３反復を用い、ペアエンド、標準的ＲＮＡ－シーケンシング（ＲＮＡ－ｓｅｑ）によって行った。配列決定はＧＡＴＣ Ｂｉｏｔｅｃｈ（現Ｅｕｒｏｆｉｎｓ Ｇｅｎｏｍｉｃｓ）により行われ、ＲＮＡ－ｓｅｑデータのバイオインフォマティクス分析は所内で行った。１サンプル当たり平均３７００万前後のリードを得た。ＲＮＡ－ｓｅｑリードは、ＳＴＡＲアライナー（ｖ２．５．４ｂ）を用い、ヒトゲノムｈｇ３８／ＧＲＣｈ３８に対してアラインした。平均９４％のリードがゲノムに一意にアラインされた。アラインされたＢＡＭファイルは、ＧＥＮＣＯＤＥ ｖ２７アノテーションに基づくＨＴＳｅｑソフトウェアスイート（バージョン０．１１．１）のｈｔｓｅｑ－ｃｏｕｎｔツールを用い、転写産物および遺伝子の定量のために使用した。ＤＥＳｅｑ２ Ｒパッケージ（ｖ１．２０．０）の分散安定化変換関数を用いて、未処理のカウントデータを正規化し、教師なし階層クラスタリングを行った。生物学的反復は高い相関を示した（Ｒ２＝０．９８）。
差次的遺伝子発現はＤＥＳｅｑ２ Ｒパッケージを用いて行った。発現が２倍を超える遺伝子および補正Ｐ値＜１ｅ－７は、アポトーシスサンプルと非アポトーシスサンプルの間で有意に差次的に発現されると見なされた。非アポトーシス細胞株に比べてアポトーシス細胞株では、合計１０５および１２３の遺伝子がそれぞれ有意に上方調節および下方調節されると予測された（図３）。
ｂ．経路エンリッチメント分析
分子シグネチャーデータベース（ＭＳｉｇＤＢ）から得られたホールマークおよびカノニカル経路遺伝子セットを用いて、上方調節および下方調節される遺伝子が濃縮された生物学的経路を特定するためにジーンセットエンリッチメント分析（ＧＳＥＡ）を使用した。「インターフェロンシグナル伝達」経路は、アポトーシス細胞株で有意に上方調節されていると予測された（正規化エンリッチメントスコア＝１．８７およびＦＤＲ ｑ値＜０．００２）（図４）。表３に、エンリッチメントシグナルに寄与する遺伝子のサブセットを列挙する。
Figure 2023508165000175
ｃ．Ｉｎｇｅｎｕｉｔｙ ｐａｔｈｗａｙおよび上流レギュレーター分析
さらに、アポトーシスサンプルと非アポトーシスサンプルの間で差次的に発現する遺伝子が濃縮された経路および上流レギュレーター（例えば、転写レギュレーター）を特定するために、ＱＩＡＧＥＮのＩｎｇｅｎｕｉｔｙ Ｐａｔｈｗａｙ分析（ＩＰＡ）を使用した。カノニカル経路のＩＰＡコア分析はまた、インターフェロンシグナル伝達を、有意に濃縮されていると特定した（ｚスコア＝３およびｐ値＝４．４５ｅ－０３）（図５）。上流レギュレーター分析は、１５の活性化された転写因子（活性化スコア＞２およびｐ値＜０．０５）を同定した。予測された上位の上流活性化レギュレーターは、ＩＲＦ７、ＩＲＦ１、ＩＲＦ３、ＩＲＦ９およびＩＲＦ５を含め、ほとんどがＩＲＦであった（表４）。
Figure 2023508165000176
ｄ．正常組織および中皮腫で上方調節されているインターフェロンシグネチャー遺伝子
正常組織（供給源：ＧＴＥｘ）および中皮腫サンプル（供給源：ＴＣＧＡ）におけるインターフェロン遺伝子の発現を、中皮腫癌に対して正常組織でこれらの遺伝子の予測される倍率差を理解するために調べた。総ての中皮腫サンプルを使用し、これらにはＰ５３およびＣＤＫＮ２Ａ／ＢＡＰ１の状態に基づく予備選択を行わなかった。
遺伝子発現データは、均一なリアラインメント、同じ参照ゲノム、遺伝子発現の定量およびバッチ効果の除去を含むこれら２つの異なる供給源からの統合遺伝子発現データを備えているＴｏｉｌ ＲＮＡ－ｓｅｑパイプライン (Nat Biotechnol. 2017 Apr 11;35(4):314-316, https://xenabrowser.net/datapages/?hub=https://toil.xenahubs.net:443)から取得したことから、これら２つのデータセットは同じ尺度で比較することができる。
ｆｐｋｍ値を２１の正常組織サンプルおよび８７中皮腫サンプルで比較した。図６は、選択されたインターフェロン遺伝子の箱ひげ図を示す。全体的に見れば、インターフェロン遺伝子は、正常組織よりも中皮腫で発現が高い。５３のインターフェロン遺伝子のセットで、倍率差は５倍を超え０．０５倍（ｌｏｇ２スケール）まで異なり、平均は１．５倍であった。
ｅ．膠芽腫および腎臓癌腫で上方調節されているインターフェロンシグネチャー遺伝子
膠芽腫（ＧＢＭ）および腎臓明細胞癌（ＫＩＲＣ）の遺伝子発現データ（ｆｐｋｍ値）は、Ｔｏｉｌ ＲＮＡ－ｓｅｑパイプライン(Nat Biotechnol. 2017 Apr 11;35(4):314-316, https://xenabrowser.net/datapages/?hub=https://toil.xenahubs.net:443)から取得した。ＧＢＭおよびＫＩＲＣサンプルのｐｆｋｍ値を正常組織と比較した（図６）。
腎明細胞癌（ＫＩＲＣ）におけるＩＦＮシグネチャーとＢＡＰ１突然変異の相関
図６（正常ＧＴＥｘ組織、中皮腫（ＭＥＳＯ）、腎臓明細胞癌（ＫＩＲＣ）、および膠芽腫（ＧＢＭ）におけるＩＦＮ遺伝子発現）は、正常ＧＴＥｘ組織と比べてＭＥＳＯ、ＫＩＲＣおよびＧＢＭにおいて、重要なインターフェロン遺伝子の高い発現を示す。
このインターフェロンシグネチャーの上方調節は、腎臓明細胞癌（ＫＩＲＣ）のＢＡＰ１突然変異と有意に相関している。
遺伝子発現データは、ＵＣＳＣ Ｘｅｎａリソースから入手し、ＫＩＲＣについては、https://xenabrowser.net/datapages/?dataset=TCGA KIRC.htseq_counts.tsv&host=https%3A%2F%2Fgdc.xenahubs.net&removeHub=https%3A%2F%2Fxena.treehouse.gi.ucsc.edu%3A443に見出せる。
このデータは、分散安定化変換を使用して正規化し(Anders, S., Huber, W. Differential expression analysis for sequence count data. Genome Biol 11, R106 (2010) doi:10.1186/gb-2010-11-10-r106)、共発現ネットワークは、ＷＧＣＮＡパッケージ(Langfelder, P., Horvath, S. WGCNA: an R package for weighted correlation network analysis. BMC Bioinformatics 9, 559 (2008) doi:10.1186/1471-2105-9-559)を使用し、デフォルト設定の自動ネットワーク構築に基づくＲで構築した。遺伝子発現モジュールと遺伝子型（例えば、ＢＡＰ１突然変異）の間の相関を計算した。ａｎＲｉｃｈｍｅｎｔ Ｒパッケージを使用し、ＢＡＰ１突然変異と有意に相関するモジュールの生物学的機能を分析するために遺伝子オントロジーエンリッチメント分析を行った。上位の生物学的プロセスは、免疫応答および炎症性応答であった。
実施例６－化合物１により誘導されるアポトーシスに感受性のある癌細胞におけるＢＡＰ１タンパク質発現の欠損
ＢＡＰ１（Ｅｎｔｒｅｚ遺伝子ＩＤ ８３１４）の欠損は、アポトーシス細胞株に見られるＩＲＦ１およびＩＲＦ９などのコアインターフェロン経路遺伝子の濃縮に関連する特徴の１つである（表３および４）(Hmeljak et al., 2018)。ＢＡＰ１に関する免疫ブロット法は、６つのアポトーシス細胞株（＃２、＃１２、＃１９、＃４０、＃５２、Ｍｅｓｏ－７Ｔ）が検出可能なＢＡＰ１タンパク質発現の欠損を示すことを実証した（図７）。これらのデータは、ＢＡＰ１発現の欠損が化合物１により誘導されるアポトーシスに対する感受性を予測するマーカーであることを示す。
さらなる実験的証拠が図８～１１に示される。
図８は、非アポトーシスヒト腎臓癌細胞株（ＭＳＫＣＣからライセンスを受けて取得したＣａｋｉ－１細胞株）におけるｓｈＲＮＡを介したＢＡＰ１ノックダウンを示す。ＢＡＰ１を標的とする３つの独立したｓｈＲＮＡを使用し、２つの独立したｓｈＲＮＡでＢＡＰ１ノックダウンレベルが達成された。これらの結果は、ＢＡＰ１欠損がＤＮＡ損傷の増大をもたらすことを示す。
図９は、ＣＡＫＩ１ ｓｈＢＡＰ１アポトーシスアッセイを示す。１μＭの化合物１で７２時間処理した細胞に対してアネキシンＶアッセイを行って、アポトーシスを受けている細胞の％を検出した。ＢＡＰ１の欠損は、化合物１処理の後にアポトーシスの増大に至ることが示される。
これは３つの異なるｓｈＲＮＡで達成されたＫＤの程度と相関している。
患者由来中皮腫細胞株におけるＢＡＰ１のノックダウンは、化合物１の添加の後にアポトーシスを増大させることが認められた（図１０参照）。原発中皮腫細胞株Ｍｅｓｏ ＃２４に対して安定なＢＡＰ１ノックダウンをえるためにＢＡＰ１ ｓｈＲＮＡを使用した。ＢＡＰ１の欠損は、化合物１処理の後にアポトーシスの増大に至ることが示される。
ＢＡＰ１の状態はまた、供試したｐ５３野生型腎臓癌細胞株におけるアポトーシスとも相関している（図１１参照）。
方法：
ウエスタンブロット法
細胞溶解液は、細胞ペレットを採取し、氷冷１×完全トリス溶解バッファー（１％トリトンＸ－１００、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、２０ｍＭトリス．ＨＣｌ ｐＨ７．５）およびプロテアーゼ阻害剤（ｃｏｍｐｌｅｔｅ ｍｉｎｉ、１錠／１０ｍｌ、Ｒｏｃｈｅ、ウェリン・ガーデン・シティ、ハートフォードシャー州、ＵＫ）、５０ｍＭ ＮａＦおよび１ｍＭ Ｎａ３Ｖ０４）を加えることによって調製した。サンプルをボルテックスで撹拌し、氷上に３０分間置いた。溶解液を、冷却微量遠心機にて１４，０００ｒｐｍで１５分間の遠心分離により明澄化し、タンパク質測定（ＢＣＡアッセイ－Ｐｉｅｒｃｅ、ペイズリー、ＵＫ）のために上清サンプルを取り出した。
次に、細胞溶解液をウエスタンブロット法によって分析した。等量のタンパク質溶解液をＳＤＳサンプルバッファー（Ｎｏｖｅｘ、ペイズリー、ＵＫ）およびＤＴＴと混合した後、１０分間煮沸した。サンプルをＳＤＳ ＰＡＧＥ（４～１２％Ｎｕ－ＰＡＧＥゲル－Ｎｏｖｅｘ、ペイズリー、スコットランド）によって分離し、ニトロセルロースフィルターにブロットし、Ｏｄｙｓｓｅｙブロッキングバッファー（ＬＩ－ＣＯＲ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、リンカーン、ＵＳＡ）でブロックし、特異的一次抗体とともに４℃で一晩インキュベートし、Ｏｄｙｓｓｅｙブロッキングバッファーで希釈した（表５）。洗浄後、ブロットをＯｄｙｓｓｅｙブロッキングバッファー（ＬｉＣｏｒ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、リンカーン、ＵＳＡ）中、１：１０，０００希釈の赤外線色素標識抗ウサギＩＲ８００または抗ヤギＩＲ８００二次抗体とともに１時間インキュベートした。次に、Ｏｄｙｓｓｅｙ赤外線イメージングシステム（ＬｉＣＯＲ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、リンカーン、ＵＳＡ）で赤外線蛍光を検出するためにブロットをスキャンした。
Figure 2023508165000177
実施例７－急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）細胞株におけるＭＤＭ２アンタゴニスト化合物１とＩＡＰアンタゴニストＡＳＴＸ６６０の組合せによるアポトーシスの誘導の特徴
野生型（ＷＴ）ＴＰ５３を有するＡＭＬ細胞株のパネルにおいて、ＭＤＭ２アンタゴニスト化合物１で２４時間、４８時間または７２時間処理した後に切断カスパーゼ－３サイトメトリーによってアポトーシスの誘導を分析した。０．１μＭの化合物１で処理した後に一定のレベルのアポトーシス誘導が見られ、ＴＮＦ－αを添加した場合の化合物１とＩＡＰアンタゴニストＡＳＴＸ６６０の潜在的組合せ効果の分析のために、ＯＣＩ－ＡＭＬ３を選択した（この７２時間後のアポトーシス誘導が低レベルであったため）。図１３に示されるように、０．１μＭの化合物１処理単独は、処理７２時間後であっても、ＯＣＩ－ＡＭＬ３細胞に高レベルのアポトーシスを誘導しなかった。しかしながら、０．１μＭの化合物１と１μＭのＡＳＴＸ６６０および１ｎｇ／ｍｌのＴＮＦ－αの組合せでは、７２時間後にＯＣＩ－ＡＭＬ３細胞においてアポトーシスレベルに相乗作用的増大が測定され、ＡＭＬ細胞株における細胞死の誘導に関して、ＭＤＭ２アンタゴニストをＩＡＰアンタゴニストと組み合わせることの潜在的利益が示唆される。
方法：
ＯＣＩ－ＡＭＬ３細胞を、１０％ＦＢＳを含有するＲＰＭＩ－１６４０培地中０．２５×１０６細胞／ｍｌで６ウェルプレートに播種し、加湿５％ＣＯ２／空気インキュベーターに３７℃で一晩置いた。翌日、細胞を０．１μＭの化合物１または１μＭのＡＳＴＸ６６０＋１ｎｇ／ｍｌ ＴＮＦ－αまたはこれらの処理の組合せで処理し、３７℃で７２時間インキュベートした（比較のために０．１％ｖ／ｖ ＤＭＳＯ対照を設けた）。７２時間後、細胞を遠心分離により採取し、０．５ｍｌ ＰＢＳ＋１％ＦＢＳに再懸濁させた。切断カスパーゼ－３レベルの分析は、２μＭのＣｅｌｌＥｖｅｎｔカスパーゼ－３／７緑色検出試薬（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ、ペイズリー、ＵＫ）を３７℃で３０分間添加することによって行い、その後、Ｇｕａｖａ ｅａｓｙＣｙｔｅ ＨＴサイトメーター（Ｍｅｒｃｋ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、ケニルワース、ＮＪ、ＵＳＡ）で蛍光染色細胞を評価した。切断カスパーゼ－３染色はＦＬ１（緑色）チャネルで記録し、染色細胞集団および非染色細胞集団のゲートを設定するために非染色およびＤＭＳＯ対照ウェルを使用し、これによりアポトーシスを受けている細胞のパーセンテージの計算が可能となる。
考察：化合物１とＡＳＴＸ６６０の組合せ
記載の実験は、化合物１に感受性のあるｐ５３ ｗｔ腫瘍もあれば、感受性の低いものもあることを示す。例えば、ＯＣＩ－ＡＭＬ３系統では、化合物１は、実質的なレベルのアポトーシスによる細胞死を誘導しない（図１３）。ＯＣＩ－ＡＭＬ３は、正常レベルのＢＡＰ１およびＣＤＫＮ２Ａを示す（すなわち、ＯＣＩ－ＡＭＬ３は、ＢＡＰ１欠損／ＣＤＫＮ２Ａ欠損細胞株ではない）。
アポトーシスを誘導し得る２つ以上の薬剤の組合せは、単一の薬剤に耐性のある腫瘍の感受性を高める可能性がある。ＯＣＩ－ＡＭＬ３は化合物１に非感受性の系統として特徴付けられるが、ＩＡＰアンタゴニストＡＳＴＸ６６０の添加は、化合物１によるアポトーシス誘導に対してＯＣＩ－ＡＭＬ３株を増感させる（図１３）。
本明細書に記載される例および実施形態は、例示を目的とするに過ぎず、それらに照らして様々な修正または変更が当業者に示唆され、本願の精神および範囲および添付の特許請求の範囲に含まれるものと理解される。本明細書で引用される総ての刊行物、配列受託番号、特許、および特許出願は、目的を問わず参照によりその全内容が本明細書に組み込まれる。
医薬製剤例
（ｉ）錠剤製剤
式（Ｉｏ）の化合物を含有する錠剤組成物は、適当な量の化合物（例えば、５０～２５０ｍｇ）と適当な希釈剤、崩壊剤、圧縮剤および／または流動促進剤を混合し（１つの可能性のある錠剤は、５０ｍｇの化合物と希釈剤としての１９７ｍｇのラクトース（ＢＰ）、および滑沢剤としての３ｍｇのステアリン酸マグネシウムを含んでなる）、既知の方法で圧縮して錠剤を形成することによって調製される。圧縮錠剤は場合によりフィルムコーティングしてもよい。
（ｉｉ）カプセル製剤
カプセル製剤は、１００～２５０ｍｇの式（Ｉｏ）の化合物と１当量のラクトースを混合し、得られた混合物を標準的なゼラチン硬カプセルに充填することによって調製される。必要であれば、適当な崩壊剤および／または流動促進剤を適当な量で含めることができる。
（ｉｉｉ）注射製剤Ｉ
注射による投与のための非経口組成物は、式（Ｉｏ）の化合物（例えば、塩形態）を、有効化合物の濃度が１．５重量％となるように１０％プロピレングリコールを含有する水に溶解させることによって調製することができる。次に、この溶液を等張化し、濾過または最終滅菌によって除菌し、アンプルまたはバイアルまたはプレフィルドシリンジに充填し、密封する。
（ｉｖ）注射製剤ＩＩ
注射用非経口組成物は、水に式（Ｉｏ）の化合物（例えば、塩形態）（２ｍｇ／ｍｌ）およびマンニトール（５０ｍｇ／ｍｌ）を溶解させ、この溶液を無菌充填するか、または最終滅菌し、密封可能な１ｍｌバイアルまたはアンプルまたはプレフィルドシリンジに充填することによって調製される。
（ｖ）注射製剤ＩＩＩ
注射または注入によるｉ．ｖ．送達のための製剤は、式（Ｉｏ）の化合物（例えば、塩形態）を水に２０ｍｇ／ｍｌで溶解させ、次いで、等張となるように調整することによって調製することができる。次に、バイアルを密封し、オートクレーブによって滅菌するか、またはアンプルもしくはバイアルもしくはプレフィルドシリンジに充填し、濾過除菌して密封する。
（ｖｉ）注射製剤ＩＶ
注射または注入によるｉ．ｖ．送達用製剤は、式（Ｉｏ）の化合物（例えば、塩形態）を、バッファー（例えば、０．２Ｍ酢酸塩 ｐＨ４．６）を含有する水に２０ｍｇ／ｍｌで溶解させることによって調製することができる。次に、バイアル、アンプルまたはプレフィルドシリンジを密封し、オートクレーブにより滅菌するか、濾過除菌して密封する。
（ｖｉｉ）皮下または筋肉内注射製剤
皮下または筋肉内投与用組成物は、式（Ｉｏ）の化合物を５～５０ｍｇ／ｍｌの濃度となるように製薬等級のコーン油と混合することによって調製される。組成物を滅菌し、適切な容器に充填する。
（ｖｉｉｉ）凍結乾燥製剤Ｉ
調剤済みの式（Ｉｏ）の化合物のアリコートを５０ｍｌバイアルに入れ、凍結乾燥させる。凍結乾燥の際、組成物は－４５℃で一段階凍結プロトコールを用いて凍結させる。アニーリングのために温度を－１０℃に上げ、次いで、凍結のために－４５℃に下げ、その後、＋２５℃でおよそ３４００分間、一次乾燥させ、その後、温度が５０℃になれば、工程を増やして二次乾燥させる。一次乾燥および二次乾燥中の圧力は８０ミリトルに設定する。
（ｉｘ）凍結乾燥製剤ＩＩ
本明細書で定義されるような調剤済みの式（Ｉｏ）の化合物またはその塩のアリコートを５０ｍｌバイアルに入れ、凍結乾燥させる。凍結乾燥の際、組成物は－４５℃で一段階凍結プロトコールを用いて凍結させる。アニーリングのために温度を－１０℃に上げ、次いで、凍結のために－４５℃に下げ、その後、＋２５℃でおよそ３４００分間、一次乾燥させ、その後、温度が５０℃になれば、工程を増やして二次乾燥させる。一次乾燥および二次乾燥中の圧力は８０ミリトルに設定する。
（ｘ）ｉ．ｖ．投与において使用するための凍結乾燥製剤ＩＩＩ
緩衝水溶液を、式（Ｉｏ）の化合物をバッファーに溶解させることにより調製する。この緩衝溶液を、粒状物質を除去するために濾過しつつ容器（例えば１型ガラスバイアル）に充填し、次にこれを部分的に密封する（例えば、Ｆｌｕｏｒｔｅｃ栓による）。化合物および製剤が十分に安定であれば、その製剤を１２１℃で適切な時間オートクレーブで処理することにより滅菌する。製剤がオートクレーブで処理するほど安定でなければ、適切なフィルターを用いて除菌し、無菌条件下で無菌バイアルに充填することができる。この溶液を、適切なサイクルを用いて凍結乾燥させる。凍結乾燥サイクルの完了時に、大気圧までバイアルに窒素を再充填し、栓をし、固定する（例えば、アルミニウム圧着）。静脈内投与の場合、凍結乾燥固体を０．９％生理食塩水または５％デキストロースなどの薬学上許容可能な希釈剤で再構成することができる。この溶液はそのまま投与することもできるし、または投与前に点滴バッグ（０．９％生理食塩水または５％デキストロースなどの薬学上許容可能な希釈剤を含有する）中にさらに希釈することもできる。
（ｘｉｉ）ボトル中の散剤
経口投与用組成物は、本明細書において使用される化合物をボトルまたはバイアルに充填することによって調製される。この組成物は、その後、適切な希釈剤、例えば、水、果汁、または市販のビヒクル、例えば、ＯｒａＳｗｅｅｔまたはＳｙｒｓｐｅｎｄで再構成される。再構成された溶液は、投与のために投与カップまたは経口用シリンジに分配することができる。

Claims (47)

  1. ＢＡＰ１枯渇型である癌を治療する方法において使用するための、ＭＤＭ２アンタゴニスト。
  2. 前記癌が、
    ＣＤＫＮ２Ａ枯渇型であり；かつ／または
    １つ、２つ、３つ、４つ、５つもしくはそれを超えるインターフェロンシグネチャー遺伝子の発現の増大を示す、
    請求項１に記載の使用のためのＭＤＭ２アンタゴニスト。
  3. 前記インターフェロンシグネチャー遺伝子が、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＲＳＡＤ２、ＭＸ１、ＢＡＴＦ２、ＩＦＩ４４Ｌ、ＩＦＩＴＭ１、ＩＳＧ１５、ＣＭＰＫ２、ＩＦＩ２７、ＣＤ７４、ＩＦＩＨ１、ＣＣＲＬ２、ＩＦＩ４４、ＨＥＲＣ６、ＩＳＧ２０、ＩＦＩＴ３、ＨＬＡ－Ｃ、ＯＡＳ１、ＩＦＩ３５、ＩＲＦ９、ＥＰＳＴＩ１、ＵＳＰ１８、ＢＳＴ２、ＣＳＦ１、Ｃ１Ｓ、ＤＨＸ５８、ＴＲＩＭ１４、ＯＡＳＬ、ＩＲＦ７、ＬＧＡＬＳ３ＢＰ、ＤＤＸ６０、ＬＡＰ３、ＬＡＭＰ３、ＰＡＲＰ１２、ＰＡＲＰ９、ＳＰ１１０、ＰＬＳＣＲ１、ＷＡＲＳ、ＳＴＡＴ１、ＩＲＦ３、ＩＲＦ５、ＭＳＣ、ＪＵＮ、ＳＰＩ１、ＩＲＦ１、ＣＯＭＭＤ３－ＢＭＩ１、ＳＴＡＴ２、ＲＵＮＸ３、ＳＲＥＢＦ１、ＦＬＩ１およびＢＲＣＡ１である、請求項２に記載の使用のためのＭＤＭ２アンタゴニスト。
  4. 患者組織のサンプルが、処置前の癌発現プロファイルを決定するために検査される、請求項１～３のいずれか一項に記載の使用のためのＭＤＭ２アンタゴニスト。
  5. 前記サンプルが、癌ＤＮＡ、ｃｔＤＮＡ、または癌細胞を含む、請求項４に記載の使用のためのＭＤＭ２アンタゴニスト。
  6. 前記検査が、タンパク質、ｍＲＮＡおよび／またはｃｔＤＮＡを検出するためのアッセイを含んでなる、請求項４または５に記載の使用のためのＭＤＭ２アンタゴニスト。
  7. （ｉ）タンパク質が、イムノアッセイ、タンパク質結合アッセイ、抗体に基づくアッセイ、抗原結合タンパク質に基づくアッセイ、タンパク質に基づくアレイ、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、フローサイトメトリー、タンパク質アレイ、ブロット、ウエスタンブロット、ネフェロメトリー、比濁法、クロマトグラフィー、質量分析、酵素活性、ラジオイムノアッセイ、免疫蛍光、免疫化学発光、免疫電気化学発光、免疫電気泳動、競合イムノアッセイ、または免疫沈降を用いて検出され；および／または（ｉｉ）ｍＲＮＡがＲＴ－ＰＣＲまたは定量的遺伝子発現アッセイを用いて検出される、請求項６に記載の使用のためのＭＤＭ２アンタゴニスト。
  8. 前記患者が、決定された発現プロファイルに基づいて処置の選択を受ける、請求項４～７のいずれか一項に記載の使用のためのＭＤＭ２アンタゴニスト。
  9. 前記癌が
    （ｉ）非小細胞肺癌、中皮腫、膠芽腫もしくは腎明細胞癌；または
    （ｉｉ）脳、明細胞腎細胞癌（ｃｃＲＣＣ）、食道癌または黒色腫
    である、請求項１～８のいずれか一項に記載の使用のためのＭＤＭ２アンタゴニスト。
  10. 前記癌がＰ５３野生型である、請求項１～９のいずれか一項に記載の使用のためのＭＤＭ２アンタゴニスト。
  11. 前記癌細胞が処置工程後にアポトーシスを受ける、請求項１～１０のいずれか一項に記載の使用のためのＭＤＭ２アンタゴニスト。
  12. ＭＤＭ２アンタゴニストにより少なくともある割合の癌細胞に活性化カスパーゼ－３が誘導される、請求項１～１１のいずれか一項に記載の使用のためのＭＤＭ２アンタゴニスト。
  13. ＭＤＭ２アンタゴニストンにより少なくとも４０％の癌細胞または少なくとも６０％の癌細胞に活性化カスパーゼ－３が誘導される、請求項１２に記載の使用のためのＭＤＭ２アンタゴニスト。
  14. 前記癌が、対照に比べて、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＲＳＡＤ２、ＭＸ１、ＢＡＴＦ２、ＩＦＩ４４Ｌ、ＩＦＩＴＭ１、ＩＳＧ１５、ＣＭＰＫ２、ＩＦＩ２７、ＣＤ７４、ＩＦＩＨ１、ＣＣＲＬ２、ＩＦＩ４４、ＨＥＲＣ６、ＩＳＧ２０、ＩＦＩＴ３、ＨＬＡ－Ｃ、ＯＡＳ１、ＩＦＩ３５、ＩＲＦ９、ＥＰＳＴＩ１、ＵＳＰ１８、ＢＳＴ２、ＣＳＦ１、Ｃ１Ｓ、ＤＨＸ５８、ＴＲＩＭ１４、ＯＡＳＬ、ＩＲＦ７、ＬＧＡＬＳ３ＢＰ、ＤＤＸ６０、ＬＡＰ３、ＬＡＭＰ３、ＰＡＲＰ１２、ＰＡＲＰ９、ＳＰ１１０、ＰＬＳＣＲ１およびＷＡＲＳのうちの１つ、２つ、３つ、４つ、５つまたはそれを超えるものの発現の増大を示す、請求項１～１３のいずれか一項に記載の使用のためのＭＤＭ２アンタゴニスト。
  15. 前記癌がＣＸＣＬ１０またはＣＸＣＬ１１の発現の増大を示す、請求項１４に記載の使用のためのＭＤＭ２アンタゴニスト。
  16. 前記癌が、ＩＲＦ７、ＳＴＡＴ１、ＩＲＦ３、ＩＲＦ５、ＭＳＣ、ＪＵＮ、ＳＰＩ１、ＩＲＦ１、ＣＯＭＭＤ３－ＢＭＩ１、ＳＴＡＴ２、ＲＵＮＸ３、ＳＲＥＢＦ１、ＩＲＦ９、ＦＬＩ１およびＢＲＣＡ１のうちの１つ、２つ、３つ、４つ、５つまたはそれを超えるものの発現の増大を示す、請求項１～１５のいずれか一項に記載の使用のためのＭＤＭ２アンタゴニスト。
  17. 前記ＭＤＭ２アンタゴニストが、本明細書で定義されるような式（Ｉｏ）の化合物またはその互変異性体、Ｎ－オキシド、薬学上許容可能な塩もしくは溶媒和物、例えば、（２Ｓ，３Ｓ）－３－（４－クロロフェニル）－３－［（１Ｒ）－１－（４－クロロフェニル）－７－フルオロ－５－［（１Ｓ）－１－ヒドロキシ－１－（オキサン－４－イル）プロピル］－１－メトキシ－３－オキソ－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－イソインドール－２－イル］－２－メチルプロパン酸またはその互変異性体、薬学上許容可能な塩もしくは溶媒和物である、請求項１～１６のいずれか一項に記載の使用のためのＭＤＭ２アンタゴニスト。
  18. 前記ＭＤＭ２アンタゴニストが、イダサヌトリン（ＲＧ－７３８８）、ＨＤＭ－２０１、ＫＲＴ－２３２（ＡＭＧ－２３２）、ＡＬＲＮ－６９２４、ＭＩ－７７３（ＳＡＲ４０５８３８）、ＣＧＭ－０９７、ミラデメタントシル酸塩、ＡＰＧ－１１５、ＢＩ－９０７８２８、ＬＥ－００４、ＤＳ－５２７２、ＳＪ－０２１１、ＢＩ－０２５２、ＡＭ－７２０９、ＳＰ－１４１、ＳＣＨ－１４５０２０６、ＮＸＮ－６、ＡＤＯ－２１、ＣＴＸ－５０－ＣＴＸ－１、ＩＳＡ－２７、ＲＯ－８９９４、ＲＯ－６８３９９２１、ＡＴＳＰ－７０４１、ＳＡＨ－ｐ５３－８、ＰＭ－２、Ｋ－１７８、ＭＭＲｉ－６４および
    Figure 2023508165000178
    またはそのまたは互変異性体もしくは溶媒和物もしくは薬学上許容可能な塩からなる群から選択される、請求項１～１７のいずれか一項に記載の使用のためのＭＤＭ２アンタゴニスト。
  19. ヒト患者の癌細胞サンプルにおける、癌がＭＤＭ２アンタゴニストによる処置に感受性を有するかどうかを評価するための１または複数のバイオマーカーとしての、ＢＡＰ１の発現レベル、ならびに場合により、
    ＣＤＫＮ２Ａ、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＲＳＡＤ２、ＭＸ１、ＢＡＴＦ２、ＩＦＩ４４Ｌ、ＩＦＩＴＭ１、ＩＳＧ１５、ＣＭＰＫ２、ＩＦＩ２７、ＣＤ７４、ＩＦＩＨ１、ＣＣＲＬ２、ＩＦＩ４４、ＨＥＲＣ６、ＩＳＧ２０、ＩＦＩＴ３、ＨＬＡ－Ｃ、ＯＡＳ１、ＩＦＩ３５、ＩＲＦ９、ＥＰＳＴＩ１、ＵＳＰ１８、ＢＳＴ２、ＣＳＦ１、Ｃ１Ｓ、ＤＨＸ５８、ＴＲＩＭ１４、ＯＡＳＬ、ＩＲＦ７、ＬＧＡＬＳ３ＢＰ、ＤＤＸ６０、ＬＡＰ３、ＬＡＭＰ３、ＰＡＲＰ１２、ＰＡＲＰ９、ＳＰ１１０、ＰＬＳＣＲ１、ＷＡＲＳ、ＳＴＡＴ１、ＩＲＦ３、ＩＲＦ５、ＭＳＣ、ＪＵＮ、ＳＰＩ１、ＩＲＦ１、ＣＯＭＭＤ３－ＢＭＩ１、ＳＴＡＴ２、ＲＵＮＸ３、ＳＲＥＢＦ１、ＦＬＩ１およびＢＲＣＡ１；
    のうちの１以上の発現レベルの使用であって、
    例えば、前記ＭＤＭ２アンタゴニストは、本明細書で定義されるような式（Ｉｏ）の化合物またはその互変異性体、Ｎ－オキシド、薬学上許容可能な塩もしくは溶媒和物、例えば、（２Ｓ，３Ｓ）－３－（４－クロロフェニル）－３－［（１Ｒ）－１－（４－クロロフェニル）－７－フルオロ－５－［（１Ｓ）－１－ヒドロキシ－１－（オキサン－４－イル）プロピル］－１－メトキシ－３－オキソ－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－イソインドール－２－イル］－２－メチルプロパン酸またはその互変異性体、Ｎ－オキシド、薬学上許容可能な塩もしくは溶媒和物である、使用。
  20. ＭＤＭ２アンタゴニストによる処置に対するヒト癌患者の反応性を予測または評価するための方法であって、癌患者からのサンプルにおいて、ＢＡＰ１、ならびに場合により、
    ＣＤＫＮ２Ａ、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＲＳＡＤ２、ＭＸ１、ＢＡＴＦ２、ＩＦＩ４４Ｌ、ＩＦＩＴＭ１、ＩＳＧ１５、ＣＭＰＫ２、ＩＦＩ２７、ＣＤ７４、ＩＦＩＨ１、ＣＣＲＬ２、ＩＦＩ４４、ＨＥＲＣ６、ＩＳＧ２０、ＩＦＩＴ３、ＨＬＡ－Ｃ、ＯＡＳ１、ＩＦＩ３５、ＩＲＦ９、ＥＰＳＴＩ１、ＵＳＰ１８、ＢＳＴ２、ＣＳＦ１、Ｃ１Ｓ、ＤＨＸ５８、ＴＲＩＭ１４、ＯＡＳＬ、ＩＲＦ７、ＬＧＡＬＳ３ＢＰ、ＤＤＸ６０、ＬＡＰ３、ＬＡＭＰ３、ＰＡＲＰ１２、ＰＡＲＰ９、ＳＰ１１０、ＰＬＳＣＲ１、ＷＡＲＳ、ＳＴＡＴ１、ＩＲＦ３、ＩＲＦ５、ＭＳＣ、ＪＵＮ、ＳＰＩ１、ＩＲＦ１、ＣＯＭＭＤ３－ＢＭＩ１、ＳＴＡＴ２、ＲＵＮＸ３、ＳＲＥＢＦ１、ＦＬＩ１およびＢＲＣＡ１のうちの１以上、の発現レベルを評価すること；
    ならびに前記癌がＭＤＭ２アンタゴニストで処置されるべきであることを示すかどうかを判定すること
    を含んでなる、方法。
  21. 前記評価工程が、発現レベルを、（ｉ）ＭＤＭ２アンタゴニストによる処置に対する反応性もしくは非反応性に関連する発現レベル、または（ｉｉ）同じタイプの健常な非癌細胞からの発現レベルと比較することを含んでなる、請求項２０に記載の方法。
  22. 前記患者がバイオマーカープロファイルに基づいて群に分類され、場合により、前記群は、
    （ｉｉｉ）応答者および非応答者；または
    （ｉｖ）強い応答者
    を含んでなるまたはからなる、請求項２０または２１に記載の方法。
  23. 以下のマーカー：ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＲＳＡＤ２、ＭＸ１、ＢＡＴＦ２、ＩＦＩ４４Ｌ、ＩＦＩＴＭ１、ＩＳＧ１５、ＣＭＰＫ２、ＩＦＩ２７、ＣＤ７４、ＩＦＩＨ１、ＣＣＲＬ２、ＩＦＩ４４、ＨＥＲＣ６、ＩＳＧ２０、ＩＦＩＴ３、ＨＬＡ－Ｃ、ＯＡＳ１、ＩＦＩ３５、ＩＲＦ９、ＥＰＳＴＩ１、ＵＳＰ１８、ＢＳＴ２、ＣＳＦ１、Ｃ１Ｓ、ＤＨＸ５８、ＴＲＩＭ１４、ＯＡＳＬ、ＩＲＦ７、ＬＧＡＬＳ３ＢＰ、ＤＤＸ６０、ＬＡＰ３、ＬＡＭＰ３、ＰＡＲＰ１２、ＰＡＲＰ９、ＳＰ１１０、ＰＬＳＣＲ１、ＷＡＲＳ、ＳＴＡＴ１、ＩＲＦ３、ＩＲＦ５、ＭＳＣ、ＪＵＮ、ＳＰＩ１、ＩＲＦ１、ＣＯＭＭＤ３－ＢＭＩ１、ＳＴＡＴ２、ＲＵＮＸ３、ＳＲＥＢＦ１、ＦＬＩ１およびＢＲＣＡ１のうちの１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０またはそれを超えるものが、処置に適さないと特定された患者よりも高レベルで発現される場合に、患者が処置に特に適していると特定される、請求項２０～２２のいずれか一項に記載の方法。
  24. （ｉ）ＭＤＭ２アンタゴニストによる処置に対する非反応性と関連する発現レベル、または（ｉｉ）同じタイプの健常な非癌細胞からの発現レベルに比べてＢＡＰ１発現の低下および／またはＣＤＫＮ２Ａ発現の低下が検出された場合に、患者がＭＤＭ２アンタゴニストによる処置のための患者として特定される、請求項２０～２３のいずれか一項に記載の方法。
  25. 前記ヒト患者からの癌細胞サンプルにおいて前記バイオマーカーの発現レベルを検出する工程を含んでなる、請求項２０～２４のいずれか一項に記載の方法。
  26. 前記検出がｉｎ ｖｉｔｒｏ検出アッセイを用いて行われる、請求項２５に記載の方法。
  27. ＭＤＭ２アンタゴニストによる処置に対するヒト癌患者の感受性を判定する方法であって、該患者からの癌細胞サンプルにおいて、ＢＡＰ１、ならびに場合により、
    ＣＤＫＮ２Ａ、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＲＳＡＤ２、ＭＸ１、ＢＡＴＦ２、ＩＦＩ４４Ｌ、ＩＦＩＴＭ１、ＩＳＧ１５、ＣＭＰＫ２、ＩＦＩ２７、ＣＤ７４、ＩＦＩＨ１、ＣＣＲＬ２、ＩＦＩ４４、ＨＥＲＣ６、ＩＳＧ２０、ＩＦＩＴ３、ＨＬＡ－Ｃ、ＯＡＳ１、ＩＦＩ３５、ＩＲＦ９、ＥＰＳＴＩ１、ＵＳＰ１８、ＢＳＴ２、ＣＳＦ１、Ｃ１Ｓ、ＤＨＸ５８、ＴＲＩＭ１４、ＯＡＳＬ、ＩＲＦ７、ＬＧＡＬＳ３ＢＰ、ＤＤＸ６０、ＬＡＰ３、ＬＡＭＰ３、ＰＡＲＰ１２、ＰＡＲＰ９、ＳＰ１１０、ＰＬＳＣＲ１、ＷＡＲＳ、ＳＴＡＴ１、ＩＲＦ３、ＩＲＦ５、ＭＳＣ、ＪＵＮ、ＳＰＩ１、ＩＲＦ１、ＣＯＭＭＤ３－ＢＭＩ１、ＳＴＡＴ２、ＲＵＮＸ３、ＳＲＥＢＦ１、ＦＬＩ１およびＢＲＣＡ１
    のうちの１以上の発現を検出すること；
    ならびにサンプル中のバイオマーカーの発現レベルに基づいて、前記患者の癌がＭＤＭ２アンタゴニストによる処置に応答する可能性があるかどうかを評価すること
    を含んでなる、方法。
  28. 癌に罹患しているヒト患者において、ＢＡＰ１、ならびに場合により、
    ＣＤＫＮ２Ａ、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＲＳＡＤ２、ＭＸ１、ＢＡＴＦ２、ＩＦＩ４４Ｌ、ＩＦＩＴＭ１、ＩＳＧ１５、ＣＭＰＫ２、ＩＦＩ２７、ＣＤ７４、ＩＦＩＨ１、ＣＣＲＬ２、ＩＦＩ４４、ＨＥＲＣ６、ＩＳＧ２０、ＩＦＩＴ３、ＨＬＡ－Ｃ、ＯＡＳ１、ＩＦＩ３５、ＩＲＦ９、ＥＰＳＴＩ１、ＵＳＰ１８、ＢＳＴ２、ＣＳＦ１、Ｃ１Ｓ、ＤＨＸ５８、ＴＲＩＭ１４、ＯＡＳＬ、ＩＲＦ７、ＬＧＡＬＳ３ＢＰ、ＤＤＸ６０、ＬＡＰ３、ＬＡＭＰ３、ＰＡＲＰ１２、ＰＡＲＰ９、ＳＰ１１０、ＰＬＳＣＲ１、ＷＡＲＳ、ＳＴＡＴ１、ＩＲＦ３、ＩＲＦ５、ＭＳＣ、ＪＵＮ、ＳＰＩ１、ＩＲＦ１、ＣＯＭＭＤ３－ＢＭＩ１、ＳＴＡＴ２、ＲＵＮＸ３、ＳＲＥＢＦ１、ＦＬＩ１およびＢＲＣＡ１
    のうちの１以上の発現を検出する方法。
  29. （ａ）ヒト患者から癌細胞サンプルを得る工程；および
    （ｂ）サンプリングされた癌細胞において前記バイオマーカーが発現されているかどうかを、前記サンプルを前記バイオマーカーの発現を検出するための１以上の試薬と接触させることによって検出する工程
    を含んでなる、請求項２８に記載の方法。
  30. 前記ＭＤＭ２アンタゴニストが、本明細書で定義されるような式（Ｉｏ）の化合物またはその互変異性体、Ｎ－オキシド、薬学上許容可能な塩もしくは溶媒和物、例えば、（２Ｓ，３Ｓ）－３－（４－クロロフェニル）－３－［（１Ｒ）－１－（４－クロロフェニル）－７－フルオロ－５－［（１Ｓ）－１－ヒドロキシ－１－（オキサン－４－イル）プロピル］－１－メトキシ－３－オキソ－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－イソインドール－２－イル］－２－メチルプロパン酸またはその互変異性体、Ｎ－オキシド、薬学上許容可能な塩もしくは溶媒和物である、請求項２０～２９のいずれか一項に記載の方法。
  31. 前記ＭＤＭ２アンタゴニストが、イダサヌトリン、ＨＤＭ－２０１、ＫＲＴ－２３２（ＡＭＧ－２３２）、ＡＬＲＮ－６９２４、ＭＩ－７７３（ＳＡＲ４０５８３８）、ＣＧＭ－０９７、ミラデメタントシル酸塩、ＡＰＧ－１１５、ＢＩ－９０７８２８、ＬＥ－００４、ＤＳ－５２７２、ＳＪ－０２１１、ＢＩ－０２５２、ＡＭ－７２０９、ＳＰ－１４１、ＳＣＨ－１４５０２０６、ＮＸＮ－６、ＡＤＯ－２１、ＣＴＸ－５０－ＣＴＸ－１、ＩＳＡ－２７、ＲＯ－８９９４、ＲＯ－６８３９９２１、ＡＴＳＰ－７０４１、ＳＡＨ－ｐ５３－８、ＰＭ－２、Ｋ－１７８、ＭＭＲｉ－６４および
    Figure 2023508165000179
    、またはその互変異性体もしくは溶媒和物もしくは薬学上許容可能な塩からなる群から選択される、請求項２０～２９のいずれか一項に記載の方法。
  32. ＭＤＭ２アンタゴニストを投与することにより前記患者の癌を処置する工程をさらに含んでなる、請求項２０～３１のいずれか一項に記載の方法。
  33. 前記ＭＤＭ２アンタゴニストが、本明細書で定義されるような式（Ｉｏ）の化合物またはその互変異性体、Ｎ－オキシド、薬学上許容可能な塩もしくは溶媒和物、例えば、（２Ｓ，３Ｓ）－３－（４－クロロフェニル）－３－［（１Ｒ）－１－（４－クロロフェニル）－７－フルオロ－５－［（１Ｓ）－１－ヒドロキシ－１－（オキサン－４－イル）プロピル］－１－メトキシ－３－オキソ－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－イソインドール－２－イル］－２－メチルプロパン酸またはその互変異性体、Ｎ－オキシド、薬学上許容可能な塩もしくは溶媒和物である、請求項３２に記載の方法。
  34. 前記ＭＤＭ２アンタゴニストが、イダサヌトリン、ＨＤＭ－２０１、ＫＲＴ－２３２（ＡＭＧ－２３２）、ＡＬＲＮ－６９２４、ＭＩ－７７３（ＳＡＲ４０５８３８）、ＣＧＭ－０９７、ミラデメタントシル酸塩、ＡＰＧ－１１５、ＢＩ－９０７８２８、ＬＥ－００４、ＤＳ－５２７２、ＳＪ－０２１１、ＢＩ－０２５２、ＡＭ－７２０９、ＳＰ－１４１、ＳＣＨ－１４５０２０６、ＮＸＮ－６、ＡＤＯ－２１、ＣＴＸ－５０－ＣＴＸ－１、ＩＳＡ－２７、ＲＯ－８９９４、ＲＯ－６８３９９２１、ＡＴＳＰ－７０４１、ＳＡＨ－ｐ５３－８、ＰＭ－２、Ｋ－１７８、ＭＭＲｉ－６４および
    Figure 2023508165000180
    またはその互変異性体もしくは溶媒和物もしくは薬学上許容可能な塩からなる群から選択される、請求項３２に記載の方法。
  35. 前記処置が前記方法の結果に基づいて前記患者に提供される、請求項３２～３４のいずれか一項に記載の方法。
  36. ヒト患者からのサンプルにおいてＭＤＭ２阻害に対する感受性に関する少なくとも１つのバイオマーカーの発現レベルを検出するためのキットまたは装置であって、
    ＢＡＰ１を検出するための検出試薬、および場合により、
    ＣＤＫＮ２Ａ、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＲＳＡＤ２、ＭＸ１、ＢＡＴＦ２、ＩＦＩ４４Ｌ、ＩＦＩＴＭ１、ＩＳＧ１５、ＣＭＰＫ２、ＩＦＩ２７、ＣＤ７４、ＩＦＩＨ１、ＣＣＲＬ２、ＩＦＩ４４、ＨＥＲＣ６、ＩＳＧ２０、ＩＦＩＴ３、ＨＬＡ－Ｃ、ＯＡＳ１、ＩＦＩ３５、ＩＲＦ９、ＥＰＳＴＩ１、ＵＳＰ１８、ＢＳＴ２、ＣＳＦ１、Ｃ１Ｓ、ＤＨＸ５８、ＴＲＩＭ１４、ＯＡＳＬ、ＩＲＦ７、ＬＧＡＬＳ３ＢＰ、ＤＤＸ６０、ＬＡＰ３、ＬＡＭＰ３、ＰＡＲＰ１２、ＰＡＲＰ９、ＳＰ１１０、ＰＬＳＣＲ１、ＷＡＲＳ、ＳＴＡＴ１、ＩＲＦ３、ＩＲＦ５、ＭＳＣ、ＪＵＮ、ＳＰＩ１、ＩＲＦ１、ＣＯＭＭＤ３－ＢＭＩ１、ＳＴＡＴ２、ＲＵＮＸ３、ＳＲＥＢＦ１、ＦＬＩ１およびＢＲＣＡ１のうちの１以上を検出するための検出試薬
    を含んでなる、キットまたは装置。
  37. ＭＤＭ２アンタゴニストによる処置に対するヒト癌患者の適合性を判定するためのシステムであって、対象からのサンプル中のバイオマーカー発現レベルを示すバイオマーカーパネル（このバイオマーカーパネルは、ＢＡＰ１、ならびに場合により、
    ＣＤＫＮ２Ａ、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＲＳＡＤ２、ＭＸ１、ＢＡＴＦ２、ＩＦＩ４４Ｌ、ＩＦＩＴＭ１、ＩＳＧ１５、ＣＭＰＫ２、ＩＦＩ２７、ＣＤ７４、ＩＦＩＨ１、ＣＣＲＬ２、ＩＦＩ４４、ＨＥＲＣ６、ＩＳＧ２０、ＩＦＩＴ３、ＨＬＡ－Ｃ、ＯＡＳ１、ＩＦＩ３５、ＩＲＦ９、ＥＰＳＴＩ１、ＵＳＰ１８、ＢＳＴ２、ＣＳＦ１、Ｃ１Ｓ、ＤＨＸ５８、ＴＲＩＭ１４、ＯＡＳＬ、ＩＲＦ７、ＬＧＡＬＳ３ＢＰ、ＤＤＸ６０、ＬＡＰ３、ＬＡＭＰ３、ＰＡＲＰ１２、ＰＡＲＰ９、ＳＰ１１０、ＰＬＳＣＲ１、ＷＡＲＳ、ＳＴＡＴ１、ＩＲＦ３、ＩＲＦ５、ＭＳＣ、ＪＵＮ、ＳＰＩ１、ＩＲＦ１、ＣＯＭＭＤ３－ＢＭＩ１、ＳＴＡＴ２、ＲＵＮＸ３、ＳＲＥＢＦ１、ＦＬＩ１およびＢＲＣＡ１
    のうちの１以上を含んでなる）に関連するデータを含んでなる、患者からのサンプルに関連するデータを格納するための記憶装置；ならびに
    患者を分類するために前記記憶装置に通信可能に接続されたプロセッサ
    を含んでなる、システム。
  38. 癌が、
    ＢＡＰ１枯渇型であり；かつ／または
    ＣＤＫＮ２Ａ枯渇型であり；かつ／または
    ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＲＳＡＤ２、ＭＸ１、ＢＡＴＦ２、ＩＦＩ４４Ｌ、ＩＦＩＴＭ１、ＩＳＧ１５、ＣＭＰＫ２、ＩＦＩ２７、ＣＤ７４、ＩＦＩＨ１、ＣＣＲＬ２、ＩＦＩ４４、ＨＥＲＣ６、ＩＳＧ２０、ＩＦＩＴ３、ＨＬＡ－Ｃ、ＯＡＳ１、ＩＦＩ３５、ＩＲＦ９、ＥＰＳＴＩ１、ＵＳＰ１８、ＢＳＴ２、ＣＳＦ１、Ｃ１Ｓ、ＤＨＸ５８、ＴＲＩＭ１４、ＯＡＳＬ、ＩＲＦ７、ＬＧＡＬＳ３ＢＰ、ＤＤＸ６０、ＬＡＰ３、ＬＡＭＰ３、ＰＡＲＰ１２、ＰＡＲＰ９、ＳＰ１１０、ＰＬＳＣＲ１、ＷＡＲＳ、ＳＴＡＴ１、ＩＲＦ３、ＩＲＦ５、ＭＳＣ、ＪＵＮ、ＳＰＩ１、ＩＲＦ１、ＣＯＭＭＤ３－ＢＭＩ１、ＳＴＡＴ２、ＲＵＮＸ３、ＳＲＥＢＦ１、ＦＬＩ１およびＢＲＣＡ１
    のうちの１つ、２つ、３つ、４つ、５つまたはそれを超えるものの発現の増大を示す、
    癌を治療する方法において使用するためのＭＤＭ２アンタゴニスト。
  39. 癌が、以下：
    ＢＡＰ１枯渇型であること；ならびに／または
    ＣＤＫＮ２Ａ枯渇型であること；ならびに／または
    ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＲＳＡＤ２、ＭＸ１、ＢＡＴＦ２、ＩＦＩ４４Ｌ、ＩＦＩＴＭ１、ＩＳＧ１５、ＣＭＰＫ２、ＩＦＩ２７、ＣＤ７４、ＩＦＩＨ１、ＣＣＲＬ２、ＩＦＩ４４、ＨＥＲＣ６、ＩＳＧ２０、ＩＦＩＴ３、ＨＬＡ－Ｃ、ＯＡＳ１、ＩＦＩ３５、ＩＲＦ９、ＥＰＳＴＩ１、ＵＳＰ１８、ＢＳＴ２、ＣＳＦ１、Ｃ１Ｓ、ＤＨＸ５８、ＴＲＩＭ１４、ＯＡＳＬ、ＩＲＦ７、ＬＧＡＬＳ３ＢＰ、ＤＤＸ６０、ＬＡＰ３、ＬＡＭＰ３、ＰＡＲＰ１２、ＰＡＲＰ９、ＳＰ１１０、ＰＬＳＣＲ１、ＷＡＲＳ、ＳＴＡＴ１、ＩＲＦ３、ＩＲＦ５、ＭＳＣ、ＪＵＮ、ＳＰＩ１、ＩＲＦ１、ＣＯＭＭＤ３－ＢＭＩ１、ＳＴＡＴ２、ＲＵＮＸ３、ＳＲＥＢＦ１、ＦＬＩ１およびＢＲＣＡ１のうちの１つ、２つ、３つ、４つ、５つまたはそれを超えるものの発現の増大を示すこと
    のうちの１以上、または２以上を特徴とする、癌を治療する方法において使用するためのＭＤＭ２アンタゴニスト。
  40. 前記癌がＢＡＰ１欠損を示す、請求項１～３９のいずれか一項に記載の使用のためのＭＤＭ２アンタゴニスト、使用、方法、キットまたはシステム。
  41. 前記癌がＣＤＫＮ２Ａ欠損を示す、請求項１～４０のいずれか一項に記載の使用のためのＭＤＭ２アンタゴニスト、使用、方法、キットまたはシステム。
  42. 前記ＭＤＭ２アンタゴニストが第２の治療薬との併用療法の一部である、請求項１～３５または３８～４１のいずれか一項に記載の使用のためのＭＤＭ２アンタゴニスト、使用または方法。
  43. ＭＤＭ２アンタゴニストに対する感受性を誘導するため、例えば、ＢＡＰ１および／もしくはＣＤＫＮ２Ａのレベルを低下させる、またはインターフェロンシグネチャー遺伝子のレベルを増大させるための薬剤と組み合わせた、癌を治療する方法において使用するためのＭＤＭ２アンタゴニストであって、
    癌が、
    正常レベルまたは高レベルで存在するＢＡＰ１を有し；かつ／または
    正常レベルまたは高レベルで存在するＣＤＫＮ２Ａを有し；かつ／または
    インターフェロンシグネチャー遺伝子：ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＲＳＡＤ２、ＭＸ１、ＢＡＴＦ２、ＩＦＩ４４Ｌ、ＩＦＩＴＭ１、ＩＳＧ１５、ＣＭＰＫ２、ＩＦＩ２７、ＣＤ７４、ＩＦＩＨ１、ＣＣＲＬ２、ＩＦＩ４４、ＨＥＲＣ６、ＩＳＧ２０、ＩＦＩＴ３、ＨＬＡ－Ｃ、ＯＡＳ１、ＩＦＩ３５、ＩＲＦ９、ＥＰＳＴＩ１、ＵＳＰ１８、ＢＳＴ２、ＣＳＦ１、Ｃ１Ｓ、ＤＨＸ５８、ＴＲＩＭ１４、ＯＡＳＬ、ＩＲＦ７、ＬＧＡＬＳ３ＢＰ、ＤＤＸ６０、ＬＡＰ３、ＬＡＭＰ３、ＰＡＲＰ１２、ＰＡＲＰ９、ＳＰ１１０、ＰＬＳＣＲ１、ＷＡＲＳ、ＳＴＡＴ１、ＩＲＦ３、ＩＲＦ５、ＭＳＣ、ＪＵＮ、ＳＰＩ１、ＩＲＦ１、ＣＯＭＭＤ３－ＢＭＩ１、ＳＴＡＴ２、ＲＵＮＸ３、ＳＲＥＢＦ１、ＦＬＩ１およびＢＲＣＡ１のうちの１つ、２つ、３つ、４つ、５つまたはそれを超えるものの発現の低下を示す、ＭＤＭ２アンタゴニスト。
  44. 患者において癌を治療する方法であって、
    （ａ）前記患者から得られた生物学的サンプル内で正常レベルまたは高レベルのＢＡＰ１および／もしくはＣＤＫＮ２Ａ、ならびに／または低レベルのインターフェロンシグネチャー遺伝子を有する患者を選択する工程；ならびに
    （ｂ）工程（ａ）で選択された前記患者に、治療上有効な量のＭＤＭ２アンタゴニストと、例えばＢＡＰ１および／もしくはＣＤＫＮ２ａのレベルを低下させる、かつ／またはインターフェロンシグネチャー遺伝子のレベルを増大させることによってＭＤＭ２アンタゴニストに対する感受性を誘導するための薬剤とを投与する工程
    を含んでなる、方法。
  45. 前記ＭＤＭ２アンタゴニストに対する感受性を誘導するための薬剤がＡＳＴＸ６６０である、請求項４３または４４に記載の方法。
  46. 患者において請求項１～３のいずれか一項に定義される癌の治療に使用するための、ＭＤＭ２阻害剤を含んでなる医薬組成物であって、該ＭＤＭ２阻害剤が、式（Ｉｏ）の化合物またはその互変異性体、Ｎ－オキシド、薬学上許容可能な塩もしくは溶媒和物、例えば、（２Ｓ，３Ｓ）－３－（４－クロロフェニル）－３－［（１Ｒ）－１－（４－クロロフェニル）－７－フルオロ－５－［（１Ｓ）－１－ヒドロキシ－１－（オキサン－４－イル）プロピル］－１－メトキシ－３－オキソ－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－イソインドール－２－イル］－２－メチルプロパン酸またはその互変異性体、Ｎ－オキシド、薬学上許容可能な塩もしくは溶媒和物である、医薬組成物。
  47. （ｉ）患者からのサンプルが、
    ＢＡＰ１枯渇型であること；ならびに／または
    ＣＤＫＮ２Ａ枯渇であること；ならびに／または
    ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＲＳＡＤ２、ＭＸ１、ＢＡＴＦ２、ＩＦＩ４４Ｌ、ＩＦＩＴＭ１、ＩＳＧ１５、ＣＭＰＫ２、ＩＦＩ２７、ＣＤ７４、ＩＦＩＨ１、ＣＣＲＬ２、ＩＦＩ４４、ＨＥＲＣ６、ＩＳＧ２０、ＩＦＩＴ３、ＨＬＡ－Ｃ、ＯＡＳ１、ＩＦＩ３５、ＩＲＦ９、ＥＰＳＴＩ１、ＵＳＰ１８、ＢＳＴ２、ＣＳＦ１、Ｃ１Ｓ、ＤＨＸ５８、ＴＲＩＭ１４、ＯＡＳＬ、ＩＲＦ７、ＬＧＡＬＳ３ＢＰ、ＤＤＸ６０、ＬＡＰ３、ＬＡＭＰ３、ＰＡＲＰ１２、ＰＡＲＰ９、ＳＰ１１０、ＰＬＳＣＲ１、ＷＡＲＳ、ＩＲＦ７、ＳＴＡＴ１、ＩＲＦ３、ＩＲＦ５、ＭＳＣ、ＪＵＮ、ＳＰＩ１、ＩＲＦ１、ＣＯＭＭＤ３－ＢＭＩ１、ＳＴＡＴ２、ＲＵＮＸ３、ＳＲＥＢＦ１、ＦＬＩ１およびＢＲＣＡ１のうちの１つ、２つ、３つ、４つ、５つまたはそれを超えるもの発現の増大を示すこと
    を判定すること；ならびに
    （ｉｉ）前記患者に有効量のＭＤＭ２アンタゴニストを投与すること
    を含んでなる、癌患者を治療する方法において使用するための、ＭＤＭ２アンタゴニスト。
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