JP2023507828A - プリオンタンパク質特異的な抗体を含む医薬組成物 - Google Patents

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Abstract

本発明は、プリオンタンパク質特異的な抗体を含むことを特徴とする癌治療用の医薬組成物に関する。【選択図】図１

Description

本発明は、プリオンタンパク質特異的な抗体を含む医薬組成物に関する。
大腸癌は、世界中で最も頻繁に診断される癌であり、最近では、三番目に多い死亡原因である。大腸癌は、散発的、遺伝的及び環境的な要因により発病されることが知られており、環境的な要因の中では、食餌要素及び生活習慣が最も重要な役割を果たすことが知られている。但し、大腸癌は、初期の非転移性段階において診断されたときに治療可能であることが知られており、５年生存率もまた９０％以上と高い。
しかしながら、リンパ節に転移される場合、他の臓器への転移が可能になるため、５年生存率は１０％以下に減少する。最近のいくつかの研究は、分子標的治療と早期診断が大腸癌治療の潜在的なアプローチ法であることを示唆している。よって、大腸癌の機構及びそれに対応する新たな標的を抑えることは、抗癌の治療効果を効果的に高め、患者の生活の質を改善する上で非常に重要であると言える。
正常なプリオンタンパク質（ＰｒＰＣ）は、神経細胞においてよく発現される糖タンパク質であって、細胞の分化、細胞の移動及び神経物質の交換を調節する。近年の研究では、プリオンタンパク質が、制御されていない癌細胞の増殖、腫瘍の成長及び転移を促すことが報告されている。なお、結腸癌、直腸癌、腺腫、乳癌及び神経芽細胞腫などの癌患者の有害な予後を確認するための有効なバイオマーカーとして、プリオンタンパク質が提示されている。ここで、バイオマーカーとは、タンパク質やＤＮＡ、ＲＮＡ、細胞代謝物質などを用いて体内の変化を推察できる指標のことをいう。
特に、プリオンタンパク質は、耐性癌細胞、癌幹細胞などにおいて過剰に発現されているという研究報告がある。これらの研究では、プリオンタンパク質は、大腸癌をはじめとする色々な癌の好ましい治療標的であることが報告されている。そのことから、プリオンタンパク質などの糖タンパク質は薬物治療の効果的な標的ではないものの、プリオンタンパク質の活性を有効に制御し、かつ、抗癌剤への感受性を向上させるための方法が必要である。
また、最近、腫瘍から分泌されるエクソソームは、いまだに確認されていない種々のタンパク質もしくはマイクロＲＮＡを含んでいる。腫瘍由来のエクソソームは、腫瘍に直接的に関与したり、体内の血液を介して主な身体器官の組織に影響を及ぼしたりすることが知られており、それらによる影響としては、腫瘍の再発、腫瘍の転移、腫瘍の抗癌剤への耐性の誘発、血管組織の結合能を低下させることによる腫瘍細胞の浸透環境の形成などの種々の機能を有することが報告されている。
本発明は、前記課題を解決するために案出されたものであって、プリオンタンパク質の体内活性を抑えて抗癌剤への感受性を向上させる癌治療用の医薬組成物を提供することを目的とする。
本発明は、前記課題を解決するために案出されたものであって、本発明は、プリオンタンパク質特異的な抗体を含む癌治療用の医薬組成物を提供する。
本発明の癌治療用の医薬組成物は、抗癌剤、化学療法剤、トキシン、放射性同位元素（ｒａｄｉｏｉｓｏｔｏｐｅ）及び細胞毒性酵素よりなる群から選ばれる少なくとも１種をさらに含んでいてもよく、前記抗癌剤は、５－フルオロウラシル（５ＦＵ）抗癌剤及びオキサリプラチン（Ｏｘａｌａｐｌａｔｉｎ）抗癌剤よりなる群から選ばれる少なくとも１種であってもよい。
一つの例において、本発明は、プリオンタンパク質抗原決定基に結合する標的体及び抗癌剤、化学療法剤、トキシン、放射性同位元素、及び細胞毒性酵素よりなる群から選ばれる少なくとも１種が結合された複合体を含む癌治療用の医薬組成物を提供してもよい。
本発明のプリオンタンパク質特異的な抗体を含む癌治療用の医薬組成物の場合、抗癌剤への感受性を向上させて抗癌治療効果を向上させることができる。
実施例１による結果を示すグラフである。 実施例１による結果を示す写真である。 実施例２による結果を示す写真及びグラフである。 実施例２による結果を示す写真である。 実施例３による結果を示す写真である。 実施例３による結果を示す写真である。 実施例４による結果を示す写真である。 実施例４による結果を示す写真及びグラフである。 実施例５による結果を示す画像である。 実施例５による結果を示す画像である。 実施例６による結果を示す写真及びグラフである。 実施例６による結果を示す写真である。 実施例６による結果を示す写真である。 実施例７による実験モデル及び結果を示すグラフ及び写真である。 実施例７による実験モデル及び結果を示す写真である。 実施例８による結果を示すグラフである。 実施例８による結果を示すグラフである。 実施例９による実験モデル及び結果を示すグラフ及び写真である。
一実現例によれば、本発明は、プリオンタンパク質特異的な抗体を含む癌治療用の医薬組成物を提供する。
本発明の癌治療用の医薬組成物は、抗癌剤、化学療法剤、トキシン、放射性同位元素、及び細胞毒性酵素よりなる群から選ばれる少なくとも１種をさらに含んでいてもよく、前記抗癌剤は、５－フルオロウラシル（５－ｆｌｕｏｒｏｕｒａｃｉｌ；５ＦＵ）抗癌剤及びオキサリプラチン抗癌剤よりなる群から選ばれる少なくとも１種であってもよい。
一つの例において、本発明は、プリオンタンパク質抗原決定基に結合する標的体及び抗癌剤、化学療法剤、トキシン、放射性同位元素、及び細胞毒性酵素よりなる群から選ばれる少なくとも１種が結合された複合体を含む癌治療用の医薬組成物を提供してもよい。
以下、実施例を挙げて本発明を詳細に説明する。しかしながら、これらの実施例及び実験例は、本発明の理解を助けるためのものにすぎず、本発明がこれらの実施例及び実験例に限定されるものではない。
＜準備例１＞
大腸癌患者の血漿サンプルの準備
大韓民国人体資源銀行から匿名の大腸癌患者の血漿サンプルの供与を受け、供与されたサンプルには、患者の制限的な情報（年齢、説明、病理学の腫瘍の状態、抗癌剤治療履歴）が含まれている。本実験及び臨床試料の情報の取得は、大韓民国人体資源銀行の倫理委員会の承認を得て実施された。
＜準備例２＞
抗癌剤耐性を有する大腸癌細胞株の培養法
ヒト一般大腸癌細胞株であるＳＮＵ－Ｃ５／ＷＴと５ＦＵ抗癌剤耐性を有するヒト大腸癌細胞株ＳＮＵ－Ｃ５／５ＦＵＲ、オキサリプラチン抗癌剤耐性を有するヒト大腸癌細胞株ＳＮＵ－Ｃ５／ＯＸＲの提供を受け、ヒト大腸癌幹細胞［Ｓ７０７；ｃａｎｃｅｒ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ（ＣＳＣ）］は、米国コーネル医科大学（Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ，ＵＳＡ）、医学科のＳｔｅｖｅｎ Ｍ Ｌｉｐｋｉｎ教授から提供された。ＳＮＵ－Ｃ５関連細胞株は、１０％のウシ胎児血清（Ｆｅｔａｌ ｂｏｖｉｎｅ ｓｅｒｕｍ）が含まれているＲＰＭＩ培養培地を用いて、３７℃のインキュベーターにおいて５％ ＣＯ２の存在下で培養した。大腸癌幹細胞は、非必須アミノ酸（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）、ピルビン酸ナトリウム（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）、ペニシリン－ストレプトマイシン（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）、Ｂ２７サプリメント（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）、Ｎ２サプリメント（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）、４０μｇ／ｍＬのヘパリン（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）、２０ｎｇ／ｍＬの繊維芽細胞増殖因子（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）及び４０ｎｇ／ｍＬの表皮生長因子（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を含む添加物とともに、ＤＭＥＭ／Ｆ１２培地を用いて、３７℃のインキュベーターにおいて５％ ＣＯ２の存在下で培養した。
＜準備例３＞
抗癌剤耐性を有する大腸癌細胞株のスフェロイド形成培養法
一般大腸癌細胞株（ＳＮＵ－Ｃ５／ＷＴ）と抗癌剤耐性を有する大腸癌細胞株（ＳＮＵ－Ｃ５／５ＦＵＲ，ＳＮＵ－Ｃ５／ＯＸＲ）及び大腸癌幹細胞株は、スフェロイドの形成培養のために６ウェルウルトラロークラスタープレートを用いて細胞懸濁培養を行った。培養に際しては、増殖培養液（準備例２を参照）を用いて培養し、次に、３７℃、５％ ＣＯ２の条件下で培養した。
大腸癌細胞株のスフェロイドは、培養してから７日目に形成された。各細胞株のスフェロイドは、光学顕微鏡を用いて確認しかつ測定した。
＜準備例４＞
抗癌剤耐性細胞の低酸素培養手法
５ＦＵ抗癌剤耐性細胞株（ＳＮＵ－Ｃ５／５ＦＵＲ）を増殖培養液（準備例２を参照）において培養し、低酸素培養チャンバーの中で、２％ Ｏ２，５％ ＣＯ２，Ｎ２バランスの低酸素環境に晒し、３７℃において２４時間にかけて培養した。低酸素培養の有無は、図中、正常酸素環境（Ｎで表す）と低酸素環境（Ｈで表す）に分けて示した。
＜準備例５＞
エクソソームの抽出手法
５ＦＵ抗癌剤耐性細胞株（ＳＮＵ－Ｃ５／５ＦＵＲ）を低酸素環境において４８時間培養し、次に、培養培地を集めて４００ｇ、１０分間遠心分離して細胞とその他の破片（ｄｅｂｒｉｓ）を取り除き、０．４５μｍのシリンジフィルターを用いて培養培地を準備した。培養培地からのエクソソームの抽出を容易にするために、培養培地を１００ｋＤａ ＭＷＣＯ限外ろ過装置（ｕｌｔｒａｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ ｄｅｖｉｃｅｓ）を用いて、２０００ｇ、２０分間遠心分離して培養培地を濃縮させた。濃縮された培養培地は、ＥｘｏＬｕｔＥ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｅｄ ｍｅｄｉｕｍ Ｅｘｏｓｏｍｅ ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ｋｉｔを用いて、エクソソームを抽出した。８ｍＬの培養培地にソリューションＡ、ＢとＣを加え、１０分間攪拌して反応させた。その後、３０００ｇ、１５分間遠心分離し、ペレットをソリューションＲに溶かし、次に、カラムＬにおいて７００ｇ、５分間遠心分離を行うことで、チューブにｃｒｕｄｅ ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｖｅｓｉｃｌｅｓを収穫した。次いで、ｃｒｕｄｅ ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｖｅｓｉｃｌｅｓにソリューションＢとＣを加え、次に１５分間攪拌して反応させた。３０００ｇ、５分間遠心分離を行うことでペレットを得、ソリューションＲに溶かし、次に、カラムＲにおいて３００ｇ、５分間遠心分離を行うことで、精製済みのエクソソームを取得した。
＜準備例６＞
ウェスタンブロット（Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ）解析
５ＦＵ抗癌剤耐性細胞株（ＳＮＵ－Ｃ５／５ＦＵＲ）由来のエクソソームからタンパク質を抽出し、細胞タンパク質（２０μｇタンパク質）をＳｏｄｉｕｍ ｄｏｄｅｃｙｌ ｓｕｌｆａｔｅ ｐｏｌｙａｃｒｙｌａｍｉｄｅ ｇｅｌ ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓで電気泳動し、ニトロセルロース膜（ｎｉｔｒｏｃｅｌｌｕｌｏｓｅ ｍｅｍｂｒａｎｅ）にブロッティング（ｂｌｏｔｔｉｎｇ）した。その後、前記膜をＴＢＳ－Ｔ［１０ｍＭ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ（ｐＨ７．６），１５０ｍＭ ＮａＣｌ及び０．０５％ Ｔｗｅｅｎ－２０］にて洗浄し、次に、５％脱脂乳にて１時間にかけてブロッキングしてから、１次抗体（ＰｒＰＣ，ＣＤ８１，ＣＤ６３）にて培養した。その後、膜を過酸化酵素と結合された２次抗体とともに培養した。バンドには、増強化学発光（ｅｎｈａｎｃｅｄ ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ）検出試薬を処理し、Ｘ線フィルム（Ｘ－ｒａｙ ｆｉｌｍ）に感光させて現像して確認した。
＜準備例７＞
蛍光活性化セルソーティング（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ－ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｃｅｌｌ ｓｏｒｔｉｎｇ；ＦＡＣＳ）器を用いたエクソソームの解析
正常もしくは低酸素環境に晒された５ＦＵ抗癌剤耐性細胞株（ＳＮＵ－Ｃ５／５ＦＵＲ）由来のエクソソームとともにそれぞれＣＤ８１もしくはＣＤ６３抗体（蛍光物質ＰＥ付きＦＡＣＳ用の抗体）を常温において３０分間培養し、次に、蛍光活性化セルソーティング器を用いて測定した。
＜準備例８＞
浸潤アッセイ（Ｉｎｖａｓｉｏｎ ａｓｓａｙ）手法
正常もしくは低酸素環境に晒された抗癌剤耐性細胞株（ＳＮＵ－Ｃ５／５ＦＵＲ，ＳＮＵ－Ｃ５／ＯＸＲ）由来のエクソソームを抗癌剤耐性細胞株（ＳＮＵ－Ｃ５／５ＦＵＲ，ＳＮＵ－Ｃ５／ＯＸＲ）または血管内皮前駆細胞（ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ ｃｅｌｌ；ＥＰＣ）に処理し、次に、マトリゲル（５０μｌ）がコーティングされた８μｍのｐｏｒｅ ｉｎｓｅｒｔ ｃｕｌｔｕｒｅ ｐｌａｔｅに塗抹する。
次いで、ｌｏｗ ｃｈａｍｂｅｒ ｐｌａｔｅには成長培地を、ｉｎｓｅｒｔ ｃｕｌｔｕｒｅ ｐｌａｔｅには血清が除去された培地を入れて２４時間にかけて３７℃のインキュベーターにおいて５％ ＣＯ２の存在下で培養した。
次いで、培地をすべて取り除いてから、インサート培養皿に存在する細胞を４％パラホルムアルデヒド（ｐａｒａｆｏｒｍａｌｄｅｈｙｄｅ）溶液において１時間にかけて固定し、次に、クリスタルバイオレット染色溶液にて５分間細胞染色を行った後、光学顕微鏡にて撮影を行った。
＜準備例９＞
創傷治癒アッセイ（Ｗｏｕｎｄ ｈｅａｌｉｎｇ ａｓｓａｙ）手法
約１ｍｍほどの厚さを有するセルスクレーパー（ｃｅｌｌ ｓｃｒａｐｅｒ）を用いて細胞培養皿（ｃｅｌｌ ｃｕｌｔｕｒｅ ｐｌａｔｅ）に付着した血管内皮前駆細胞を取り除く。そして、ＰＢＳを用いて３回洗浄し、正常もしくは低酸素環境に晒された５ＦＵ抗癌剤耐性細胞株（ＳＮＵ－Ｃ５／５ＦＵＲ）由来のエクソソームもしくはプリオンタンパク質標的低分子干渉ＲＮＡ（ＰＲＮＰ ｓｉＲＮＡ）もしくは非標的ｓｉＲＮＡ（スクランブルｓｉＲＮＡ；ｓｉ－Ｃｏｎ）が処理されたＳＮＵ－Ｃ５／５ＦＵＲ由来のエクソソームを血管内皮前駆細胞に処理し、次に、２４時間にかけて３７℃のインキュベーターにおいて５％ ＣＯ２の存在下で培養した。なお、光学顕微鏡を用いて、１ｍｍの距離から２４時間後に狭められる距離を測定した。
＜準備例１０＞
Ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ ａｎｔｉｂｏｄｙ ａｒｒａｙ－Ｍｅｍｂｒａｎｅテスト
血管新生関連因子抗体（総４３個のターゲット）が付着したｍｅｍｂｒａｎｅを購入（ａｂｃａｍ；ａｂ１９３６５５）して、ドットブロット解析（ｄｏｔ ｂｌｏｔ ａｎａｌｙｓｉｓ）を行った。用いられたタンパク質サンプルは、正常もしくは低酸素環境に晒された５ＦＵ抗癌剤耐性細胞株（ＳＮＵ－Ｃ５／５ＦＵＲ）由来のエクソソームもしくはプリオンタンパク質特異的なｓｉＲＮＡ（ｓｉ－ＰＲＮＰ）もしくは非標的ｓｉＲＮＡ（ｓｉ－Ｃｏｎ）が処理されたＳＮＵ－Ｃ５／５ＦＵＲ由来のエクソソームが処理された血管内皮前駆細胞であり、エクソソーム処理を行ってから２４時間にかけて３７℃のインキュベーターにおいて５％ ＣＯ２の存在下で培養し、次に、細胞からタンパク質サンプル全体を取得した。
＜準備例１１＞
ローダミンデキストラン（Ｒｈｏｄａｍｉｎｅ－ｄｅｘｔｒａｎ）染め（ｓｔａｉｎ）
正常もしくは低酸素環境に晒された５ＦＵ抗癌剤耐性細胞株（ＳＮＵ－Ｃ５／５ＦＵＲ）由来のエクソソーム（２μｇ；週２回、総２週間）をマウスの尻尾に静脈注射し、生検３時間前にローダミンデキストラン（１００ｍｇ／ｋｇ）をマウスの尻尾に静脈注射した。次いで、マウスの肝、肺組織を生検して摘出した。摘出された組織には凍結組織切片を行って組織スライドを作製し、次に、ＤＡＰＩ染色を行った後に共焦点蛍光顕微鏡を用いて画像を撮影した。
＜準備例１２＞
腫瘍形成動物モデル
正常もしくは低酸素環境に晒された５ＦＵ抗癌剤耐性細胞株（ＳＮＵ－Ｃ５／５ＦＵＲ）由来のエクソソームを処理した一般大腸癌細胞株であるＳＮＵ－Ｃ５／ＷＴ（５×１０６細胞）をマウスの皮下層に移植し、１週間後に形成された腫瘍の大きさが８～１０ｍｍ３の体積から５ＦＵ（３０ｍｇ／ｋｇ）とプリオンタンパク質抗体をマウスの尻尾静脈を介して投薬した。薬物の投薬期間は、週２回にて総４週間であった。
＜準備例１３＞
腫瘍転移動物モデル
正常もしくは低酸素環境に晒された５ＦＵ抗癌剤耐性細胞株（ＳＮＵ－Ｃ５／５ＦＵＲ）由来のエクソソームを処理した一般大腸癌細胞株であるＳＮＵ－Ｃ５／ＷＴ（１×１０７細胞）をマウスの脾臓に移植し、次に、１週間後から５ＦＵ（３０ｍｇ／ｋｇ）とプリオンタンパク質抗体をマウスの尻尾静脈を介して投薬した。投薬期間は、週２回にて総７週間であった。次いで、生検してマウスの肝に転移された腫瘍を確認した。
＜準備例１４＞
免疫組織蛍光染色
腫瘍形成動物モデル及び腫瘍転移動物モデルにおいて生検された組織（腫瘍組織、肝転移腫瘍組織）を４％パラホルムアルデヒドに固定し、パラフィンにて包埋し、次に、組織切片した。切片された組織を用いて、細胞の増殖と関わる印紙Ｋｉ６７、細胞死滅関連因子ｃｌｅａｖｅｄ ｃａｓｐａｓｅ－３、血管内皮細胞の細胞間結合に関連するタンパク質ＺＯ－１、毛細血管マーカーであるＣＤ３１を用いて蛍光染色し、ＤＡＰＩを用いて組織の核を蛍光染色した。次いで、共焦点蛍光顕微鏡を用いて画像を撮影した。
＜実施例１＞
大腸癌患者の血漿内プリオンタンパク質の発現の確認及び抗癌剤耐性を有する大腸癌細胞株の３次元球体形成能
図１のＡは、大腸癌患者を大腸癌の進行度に応じて分類し、各大腸癌の進行度（ステージＩ、ＩＩ、ＩＩＩ）に応じてプリオンタンパク質の発現をプリオンタンパク質特異的な酵素結合免疫吸着法（ｅｎｚｙｍｅ－ｌｉｎｋｅｄ ｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔ ａｓｓａｙ；ＥＬＩＳＡ）を用いて測定した。その結果、癌の進行度を示すステージが高くなるにつれて、患者の血漿内におけるプリオンタンパク質の発現が増加した。
図１のＢは、大腸癌の進行度がＩＩＩ期（ステージＩＩＩ）である患者を薬物治療の有無をもって分類し、それらの血漿内のプリオンタンパク質の発現をＥＬＩＳＡを用いて測定した。その結果、薬物治療を受けた履歴がある患者の血漿内におけるプリオンタンパク質の発現が増加した。
図１のＣは、大腸癌患者を大腸癌組織内のプリオンタンパク質の発現有無をもって分類し、それらの患者の５年生存率を測定した。その結果、大腸癌組織におけるプリオンタンパク質の発現が増加した患者の場合、５年以内の生存率が減少した。
図２は、抗癌剤耐性を有する大腸癌細胞株（ＳＮＵ－Ｃ５／５ＦＵＲ，ＳＮＵＣ－Ｃ５／ＯＸＲ）及び大腸癌幹細胞株（ＣＳＣ）からプリオンタンパク質の発現有無に応じて細胞を分離し、プリオンタンパク質の発現有無による３次元球体の形成の実験法を用いて癌細胞の腫瘍形成能を確認した図である。その結果、プリオンタンパク質の発現が高い大腸癌細胞は、球体の形成が促されたことが確認された。
よって、図１と図２の結果は、大腸癌細胞において、プリオンタンパク質の発現有無が腫瘍形成能を増加させることを意味する。
＜実施例２＞
５ＦＵ抗癌剤耐性細胞株から抽出したエクソソームとエクソソーム内に含まれているプリオンタンパク質の確認及び大腸癌細胞に及ぼす影響
図３のＡは、５ＦＵ抗癌剤耐性細胞株からエクソソームを抽出し、抽出したエクソソームが２００μｍ以下であるか否かを凍結電子顕微鏡を用いて確認した画像である。
図３のＢは、抽出したエクソソームに対し、蛍光活性化セルソーティング器を用いてエクソソームマーカーであるＣＤ８１とＣＤ６３を測定した図である。
図３のＣは、抽出したエクソソームのプリオンタンパク質の発現と、エクソソームマーカーであるＣＤ８１とＣＤ６３をウェスタンブロット解析を用いて確認した図である。
その結果、５ＦＵ抗癌剤耐性細胞株を低酸素培養したとき、エクソソーム内におけるプリオンタンパク質の発現が増加した。しかしながら、５ＦＵ抗癌剤耐性細胞株におけるプリオンタンパク質の発現をＰＲＮＰ ｓｉＲＮＡを用いて抑えた結果、たとえ５ＦＵ抗癌剤耐性細胞株を低酸素培養しても、エクソソーム内のプリオンタンパク質の発現を増加させることができなかった。
図４は、正常もしくは低酸素培養された抗癌剤耐性大腸癌細胞株（ＳＮＵ－Ｃ５／５ＦＵＲ，ＳＮＵ－Ｃ５／ＯＸＲ）と大腸癌幹細胞株（ＣＳＣ）からそれぞれ抽出したエクソソームを一般の正常酸素環境に晒された抗癌剤耐性大腸癌細胞株（ＳＮＵ－Ｃ５／５ＦＵＲ，ＳＮＵ－Ｃ５／ＯＸＲ）と大腸癌幹細胞株（ＣＳＣ）に対応して処理したとき、大腸癌細胞株の３次元球体形成能を確認したものである。図４のＡは、正常もしくは低酸素環境に晒されたＳＮＵ－Ｃ５／５ＦＵＲから抽出したエクソソームを一般の正常酸素環境に晒されたＳＮＵ－Ｃ５／５ＦＵＲに処理したものであり、図４のＢは、正常もしくは低酸素環境に晒されたＳＮＵ－Ｃ５／ＯＸＲから抽出したエクソソームを一般の正常酸素環境に晒されたＳＮＵ－Ｃ５／ＯＸＲに処理したものであり、図４のＣは、正常もしくは低酸素環境に晒されたＣＳＣから抽出したエクソソームを一般の正常酸素環境に晒されたＣＳＣに処理したものである。
プリオンタンパク質の発現が高いエクソソーム（Ｈ－５ＦＵＲ－Ｅｘｏ，Ｈ－ＯＸＲ－Ｅｘｏ及びＨ－ＣＳＣ－Ｅｘｏ）が処理されたグループは、いずれもプリオンタンパク質の発現が低いエクソソーム（Ｎ－５ＦＵＲ－Ｅｘｏ，Ｎ－ＯＸＲ－Ｅｘｏ及びＮ－ＣＳＣ－Ｅｘｏ）が処理されたグループに比べて、腫瘍形成能である３次元球体の形成能が増加した。しかしながら、プリオンタンパク質標的ｓｉＲＮＡ（ｓｉ－ＰＲＮＰ）を処理し、低酸素培養された抗癌剤耐性大腸癌細胞株（ＳＮＵ－Ｃ５／５ＦＵＲ，ＳＮＵ－Ｃ５／ＯＸＲ）と大腸癌幹細胞株から抽出されたプリオンタンパク質がないエクソソーム（ｓｉ－ＰＲＮＰ＋Ｈ－５ＦＵＲ－Ｅｘｏ，ｓｉ－ＰＲＮＰ＋Ｈ－ＯＸＲ－Ｅｘｏ及びｓｉ－ＰＲＮＰ＋Ｈ－ＣＳＣ－Ｅｘｏ）が処理されたグループの場合には、大腸癌細胞株の３次元球体の形成能を向上させることができなかった。但し、ｓｉ－ＰＲＮＰの対照群であって、いかなるタンパク質をも抑えられない非標的ｓｉＲＮＡ（ｓｉ－Ｃｏｎ）を処理した低酸素培養された抗癌剤耐性大腸癌細胞株（ＳＮＵ－Ｃ５／５ＦＵＲ，ＳＮＵ－Ｃ５／ＯＸＲ）と大腸癌幹細胞株から抽出したエクソソーム（ｓｉ－ＣＯＮ＋Ｈ－５ＦＵＲ－Ｅｘｏ，ｓｉ－ＣＯＮ＋Ｈ－ＯＸＲ－Ｅｘｏ及びｓｉ－ＣＯＮ＋Ｈ－ＣＳＣ－Ｅｘｏ）が処理されたグループは、依然として腫瘍形成能である３次元球体の形成能が増加した。
＜実施例３＞
低酸素培養した抗癌剤耐性細胞株から抽出されたエクソソームが大腸癌細胞の浸潤能力に及ぼす影響
図５は、正常もしくは低酸素培養された抗癌剤耐性細胞株から抽出されたエクソソームが処理された大腸癌細胞株（ＳＮＵ－Ｃ５／５ＦＵＲ，ＳＮＵ－Ｃ５／ＯＸＲ）の浸潤能力を向上させることを浸潤アッセイを用いて確認した図である。
その結果、低酸素培養された抗癌剤耐性細胞株から抽出されたエクソソーム（Ｈ－５ＦＵＲ－Ｅｘｏ，Ｈ－ＯＸＲ－Ｅｘｏ）が処理されたグループにおいて、大腸癌細胞株の浸潤能力が増加した。しかしながら、プリオンタンパク質が抑えられたエクソソーム（ｓｉ－ＰＲＮＰ＋Ｈ－５ＦＵＲ－Ｅｘｏ，ｓｉ－ＰＲＮＰ＋Ｈ－ＯＸＲ－Ｅｘｏ）が処理されたグループの場合には、大腸癌細胞株の浸潤能力を向上させることができなかった。
図６は、正常もしくは低酸素培養された抗癌剤耐性細胞株から抽出したエクソソームが処理された大腸癌細胞株の形態学的な変化を光学顕微鏡にて撮影した様子であり、低酸素培養された抗癌剤耐性細胞株から抽出したエクソソーム（Ｈ－５ＦＵＲ－Ｅｘｏ，Ｈ－ＯＸＲ－Ｅｘｏ）が処理された大腸癌細胞株は、細胞の移動のために形態が星状もしくは放射状の形状に変化した。しかしながら、プリオンタンパク質が抑えられたエクソソーム（ｓｉ－ＰＲＮＰ＋Ｈ－５ＦＵＲ－Ｅｘｏ，ｓｉ－ＰＲＮＰ＋Ｈ－ＯＸＲ－Ｅｘｏ）が処理されたグループの場合には、細胞の運動性の向上のための細胞の形状の変化が起こらなかった。
＜実施例４＞
低酸素培養した抗癌剤耐性細胞株から抽出したエクソソームが血管内皮前駆細胞に及ぼす影響
図７のＡは、正常もしくは低酸素培養された５ＦＵ抗癌剤耐性細胞株から抽出されたエクソソームを血管内皮前駆細胞に処理し、次に、細胞の移動能力を確認するために細胞遊走アッセイ（ｃｅｌｌ ｍｉｇｒａｔｉｏｎ ａｓｓａｙ）を行った結果である。
図７のＢは、正常もしくは低酸素培養された５ＦＵ抗癌剤耐性細胞株から抽出されたエクソソームを血管内皮前駆細胞に処理し、次に、細胞の移動能力を確認するために浸潤アッセイを行った結果である。
その結果、低酸素環境において培養された５ＦＵ抗癌剤耐性細胞株から抽出したエクソソーム（Ｈ－５ＦＵＲ－Ｅｘｏ）が処理されたグループの血管内皮前駆細胞の運動能力が向上した。しかしながら、プリオンタンパク質が抑えられたエクソソーム（ｓｉ－ＰＲＮＰ＋Ｈ－５ＦＵＲ－Ｅｘｏ）が処理されたグループの場合には、血管内皮前駆細胞の運動能力を向上させることができなかった。
図８のＡは、低酸素培養された５ＦＵ抗癌剤耐性細胞株から抽出したエクソソームを血管内皮前駆細胞に処理し、次に、血管内皮前駆細胞内の血管新生因子の発現の度合いをＡｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ ａｎｔｉｂｏｄｙ ａｒｒａｙ－Ｍｅｍｂｒａｎｅテストにて測定した結果である。
図８のＢは、低酸素培養された５ＦＵ抗癌剤耐性細胞株から抽出したエクソソームを血管内皮前駆細胞に処理し、次に、血管内皮前駆細胞内の血管新生因子の発現の度合いをＡｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ ａｎｔｉｂｏｄｙ ａｒｒａｙ－Ｍｅｍｂｒａｎｅテストにて測定した結果を統計数値に変更したグラフである。
その結果、低酸素培養された５ＦＵ抗癌剤耐性細胞株から抽出したエクソソーム（Ｈ－５ＦＵＲ－Ｅｘｏ）を処理した血管内皮前駆細胞において、血管新生因子（Ａｎｇｉｏｇｅｎｉｎ，ＥＧＦ，ＥＮＡ－７８，ｂＦＧＦ，ＭＣＰ－１）の発現を増加させた。しかしながら、プリオンタンパク質が抑えられたエクソソーム（ｓｉ－ＰＲＮＰ＋Ｈ－５ＦＵＲ－Ｅｘｏ）が処理された場合には、血管内皮前駆細胞の血管新生因子の発現を増加させることができなかった。
これらの結果は、大腸癌から分泌されるプリオンタンパク質陽性エクソソームが血管を形成する血管内皮細胞の運動性を増加させ、血管新生を促すことを意味する。
＜実施例５＞
低酸素培養された抗癌剤耐性細胞株から抽出したエクソソームが小動物実験に及ぼす影響
図９は、正常もしくは低酸素培養された５ＦＵ抗癌剤耐性細胞株から抽出したエクソソームを実験用のマウスに投与したとき、エクソソームが身体器官の組織の結合力に及ぼす影響を確認した結果である。エクソソームを週２回、総４週間投与し、次に、生検３時間前にローダミンデキストランをマウスの尻尾静脈を介して投与した。ローダミンデキストランは、身体器官の組織の結合力が弱くなった部分に浸透するという特徴がある。図９は、蛍光顕微鏡撮影を用いて確認した結果である。図９のＡは、マウスの肝組織を、図９のＢは、マウスの肺組織を撮影した画像である。
その結果、低酸素培養された抗癌剤耐性細胞株から抽出したエクソソーム（Ｈ－５ＦＵＲ－Ｅｘｏ）を投与された実験用のマウスの肝と肺組織の結合力が弱くなってローダミンデキストランが組織に浸透したことを確認した。これらの結果は、低酸素培養された抗癌剤耐性細胞株から抽出したエクソソームが身体器官の組織の結合力を弱めることを意味する。しかしながら、プリオンタンパク質が抑えられたエクソソーム（ｓｉ－ＰＲＮＰ＋Ｈ－５ＦＵＲ－Ｅｘｏ）の場合には、身体器官の組織の結合力にいかなる影響を及ぼすことができなかったため、ローダミンデキストランが身体器官の組織に浸透することができなかった。
図１０は、正常もしくは低酸素培養された５ＦＵ抗癌剤耐性細胞株から抽出したエクソソームを実験用のマウスに投与したとき、エクソソームが血管組織に存在する細胞間結合に関連するタンパク質ＺＯ－１に及ぼす影響を蛍光顕微鏡撮影を用いて確認した図である。図１０において、血管は、ＣＤ３１により蛍光染色された。図１０のＡは、マウスの肝組織を、図１０のＢは、マウスの肺組織を撮影した画像である。
その結果、低酸素培養された抗癌剤耐性細胞株から抽出されたエクソソーム（Ｈ－５ＦＵＲ－Ｅｘｏ）が血管細胞組織に存在するＺＯ－１タンパク質の発現を減少させることを確認した。ＺＯ－１タンパク質の発現の減少は、組織の細胞間の結合力を減少させることを意味し、よって、当該結果は、大腸癌由来のエクソソームが肝と肺に存在する血管組織の細胞間の結合力を弱めることを意味する。
＜実施例６＞
プリオンタンパク質標的抗体と抗癌剤との組合剤を用いた大腸癌腫瘍の形成の抑制の確認
抗癌剤耐性がない一般大腸癌細胞株群（ＰＢＳ）、抗癌剤耐性がない一般大腸癌細胞株に５ＦＵ抗癌剤（３０ｍｇ／ｋｇ）を３次蒸留水に希釈して週２回にて総７週間腹腔内投与した群（Ｏｎｌｙ ５－ＦＵ）、抗癌剤耐性がない一般大腸癌細胞株に低酸素培養された５ＦＵ抗癌剤耐性細胞株から抽出したエクソソームを処理した群（Ｈ－５ＦＵＲ－Ｅｘｏ）、抗癌剤耐性がない一般大腸癌細胞株に低酸素培養された５ＦＵ抗癌剤耐性細胞株から抽出したエクソソームを処理し、次に、５ＦＵ抗癌剤（３０ｍｇ／ｋｇ）を３次蒸留水に希釈して週２回にて総７週間腹腔内投与した群（Ｈ－５ＦＵＲ－Ｅｘｏ＋５－ＦＵ）、抗癌剤耐性がない一般大腸癌細胞株に低酸素培養された５ＦＵ抗癌剤耐性細胞株から抽出したエクソソームを処理し、次に、プリオンタンパク質標的抗体（５ｍｇ／ｋｇ）と５ＦＵ抗癌剤（３０ｍｇ／ｋｇ）を３次蒸留水に希釈して週２回にて総７周間腹腔内投与した群（Ｈ－５ＦＵＲ－Ｅｘｏ＋５－ＦＵ＋Ａｎｔｉ－ＰｒＰ）及び抗癌剤耐性がない一般大腸癌細胞株に低酸素培養された５ＦＵ抗癌剤耐性細胞株から抽出したエクソソームを処理し、次に、プリオンタンパク質標的抗体（５ｍｇ／ｋｇ）を３次蒸留水に希釈して週２回にて総７週間腹腔内投与した群（Ｈ－５ＦＵＲ－Ｅｘｏ＋Ａｎｔｉ－ＰｒＰ）をそれぞれ準備した。
実施例６において用いられたプリオンタンパク質標的抗体は、米国Ｍｅｒｃｋ社製の製品番号ＭＡＢ１５６２であった。
その結果、図１１のＡは、形成された腫瘍の状態を示す画像である。図１１のＢは、形成された腫瘍の体積の分布を示すグラフである。この結果によれば、低酸素培養された５ＦＵ抗癌剤耐性細胞株から抽出したエクソソームが処理された一般大腸癌細胞株グループ（Ｈ－５ＦＵＲ－Ｅｘｏ）は、一般大腸癌細胞株（ＰＢＳ）単独グループよりも高い腫瘍形成能を示している。
また、低酸素培養された５ＦＵ抗癌剤耐性細胞株から抽出されたエクソソームが処理された一般大腸癌細胞株グループは、抗癌剤耐性が生成されて、５ＦＵ抗癌剤の単独処理（Ｈ－５ＦＵＲ－Ｅｘｏ＋５－ＦＵ）に際して、腫瘍の形成を有効に抑えることができないことを表にて示している。しかしながら、低酸素培養された５ＦＵ抗癌剤耐性細胞株から抽出されたエクソソームが処理された一般大腸癌グループにプリオンタンパク質標的抗体（５ｍｇ／ｋｇ）と５ＦＵ抗癌剤（３０ｍｇ／ｋｇ）を３次蒸留水に希釈した製造物を投薬したグループ（Ｈ－５ＦＵＲ－Ｅｘｏ＋５－ＦＵ＋Ａｎｔｉ－ＰｒＰ）の場合、腫瘍の形成を有効に抑えていた。これらの結果は、抗癌剤耐性がない一般大腸癌細胞株単独グループに５ＦＵ抗癌剤を処理したグループ（Ｏｎｌｙ ５－ＦＵ）と非常に類似した結果を示しており、本発明において製作されるプリオンタンパク質標的抗体（５ｍｇ／ｋｇ）と５ＦＵ抗癌剤（３０ｍｇ／ｋｇ）との組合物が抗癌剤耐性を有する大腸癌における治療効果を上昇させることを証明している。
図１２のＡは、腫瘍細胞の細胞増殖を確認するために、細胞増殖関連因子であるＫｉ６７の蛍光染色を用いて確認した図である。
その結果、低酸素培養された５ＦＵ抗癌剤耐性細胞株から抽出されたエクソソームが処理された一般大腸癌細胞株に５ＦＵ抗癌剤を投薬したグループ（Ｈ－５ＦＵＲ－Ｅｘｏ＋５－ＦＵ）は、５ＦＵ抗癌剤を投薬しても、腫瘍細胞の細胞増殖能を減少させることができなかった。しかしながら、低酸素培養された５ＦＵ抗癌剤耐性細胞株由来のエクソソームが処理された一般大腸癌細胞株グループにプリオンタンパク質標的抗体（５ｍｇ／ｋｇ）と５ＦＵ抗癌剤（３０ｍｇ／ｋｇ）を３次蒸留水に希釈した製造物を投薬したグループ（Ｈ－５ＦＵＲ－Ｅｘｏ＋５－ＦＵ＋Ａｎｔｉ－ＰｒＰ）の場合、腫瘍組織内の癌細胞の細胞増殖率が著しく減少していることを示している。
図１２のＢは、細胞の死滅を確認できるｃｌｅａｖｅｄ ｃａｓｐａｓｅ－３を組織蛍光染色して共焦点蛍光顕微鏡を用いて確認した図である。
その結果、低酸素培養された５ＦＵ抗癌剤耐性細胞株から抽出されたエクソソームが処理された一般大腸癌細胞株グループにプリオンタンパク質標的抗体（５ｍｇ／ｋｇ）と５ＦＵ抗癌剤（３０ｍｇ／ｋｇ）を３次蒸留水に希釈した製造物を投薬したグループ（Ｈ－５ＦＵＲ－Ｅｘｏ＋５－ＦＵ＋Ａｎｔｉ－ＰｒＰ）の場合、著しくｃｌｅａｖｅｄ ｃａｓｐａｓｅ－３の発現が増加した。
これらの結果は、抗癌剤耐性がない一般大腸癌細胞株単独グループに５ＦＵ抗癌剤を処理したグループ（Ｏｎｌｙ５－ＦＵ）と非常に類似した結果を示しており、本発明において製作されるプリオンタンパク質標的抗体（５ｍｇ／ｋｇ）と５ＦＵ抗癌剤（３０ｍｇ／ｋｇ）との組合物が抗癌剤耐性を有する大腸癌細胞の細胞死滅を促すことを意味する。
図１３は、低酸素培養された５ＦＵ抗癌剤耐性細胞株から抽出されたエクソソームが処理された一般大腸癌細胞株グループにプリオンタンパク質標的抗体（５ｍｇ／ｋｇ）と５ＦＵ抗癌剤（３０ｍｇ／ｋｇ）を３次蒸留水に希釈した製造物を投薬したグループ（Ｈ－５ＦＵＲ－Ｅｘｏ＋５－ＦＵ＋Ａｎｔｉ－ＰｒＰ）の場合、腫瘍組織内の血管における組織蛍光染色法により、腫瘍形成動物モデルの腫瘍組織において細胞間結合に関連する因子ＺＯ－１の発現を保持することを確認した図である。
＜実施例７＞
プリオンタンパク質標的抗体と抗癌剤との組合剤を用いた大腸癌腫瘍の転移に及ぼす影響
実施例７において用いられたプリオンタンパク質標的抗体は、米国Ｍｅｒｃｋ社製の製品番号ＭＡＢ１５６２であった。
図１４のＡは、抗癌剤耐性がない一般大腸癌細胞株（ＳＮＵ－Ｃ５／ＷＴ）に低酸素培養された５ＦＵ抗癌剤耐性細胞株から抽出されたエクソソームを処理し、次に、実験用ネズミの脾臓に移植して腫瘍転移動物モデルを構築し、次に、１週間後にプリオンタンパク質標的抗体（５ｍｇ／ｋｇ）と５ＦＵ抗癌剤（３０ｍｇ／ｋｇ）を３次蒸留水に希釈して週２回にて総７週間腹腔内投与する方法を図式化したものである。
図１４のＢは、マウスの脾臓に移植された癌細胞がマウスの肝に転移されたことを撮影した画像である。
その結果、低酸素培養された５ＦＵ抗癌剤耐性細胞株由来のエクソソームが処理された一般大腸癌細胞株（Ｈ－５ＦＵＲ－Ｅｘｏ）の場合、肝への転移が盛んになった。しかしながら、低酸素培養された５ＦＵ抗癌剤耐性細胞株由来のエクソソームが処理された一般大腸癌細胞株にプリオンタンパク質標的抗体（５ｍｇ／ｋｇ）と５ＦＵ抗癌剤（３０ｍｇ／ｋｇ）との組合物を投薬したグループ（Ｈ－５ＦＵＲ－Ｅｘｏ＋５－ＦＵ＋Ａｎｔｉ－ＰｒＰ）の場合、肝への転移能を減少させた。
図１５は、低酸素培養された５ＦＵ抗癌剤耐性細胞株由来のエクソソームが処理された一般大腸癌細胞株にプリオンタンパク質標的抗体（５ｍｇ／ｋｇ）と５ＦＵ抗癌剤（３０ｍｇ／ｋｇ）との組合物を投薬したグループ（Ｈ－５ＦＵＲ－Ｅｘｏ＋５－ＦＵ＋Ａｎｔｉ－ＰｒＰ）の場合、腫瘍転移小動物モデルの肝に転移された、低酸素培養された５ＦＵ抗癌剤耐性細胞株由来のエクソソームが処理された一般大腸癌細胞株の腫瘍組織において、組織蛍光染色法により、血管細胞の細胞間結合に関連する因子ＺＯ－１の発現を保持することを確認した図である。
よって、この実施例は、プリオンタンパク質が血管細胞の結合力を弱めることで大腸癌の転移が盛んに行われ、プリオンタンパク質を抑えたとき、大腸癌の転移を抑えることができることを意味する。
＜実施例８＞
プリオンタンパク質標的抗体と抗癌剤との組合剤が抗癌剤耐性大腸癌の細胞周期に及ぼす影響
実施例８において用いられたプリオンタンパク質標的抗体は、米国Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃ社製の製品番号Ｓｃ－３９３１６５であった。
図１６のＡは、抗癌剤耐性がない一般大腸癌細胞株（ＳＮＵ－Ｃ５／ＷＴ）にプリオンタンパク質標的抗体を１０ｎｇ／ｍＬ、５０ｎｇ／ｍＬ、１００ｎｇ／ｍＬ及び２００ｎｇ／ｍＬの濃度にて処理したとき、細胞の増殖能を評価した細胞周期解析である。
図１６のＢは、５ＦＵ抗癌剤耐性がある大腸癌細胞株（ＳＮＵ－Ｃ５／５ＦＵＲ）にプリオンタンパク質標的抗体を１０ｎｇ／ｍＬ、５０ｎｇ／ｍＬ、１００ｎｇ／ｍＬ及び２００ｎｇ／ｍＬの濃度にて処理したとき、細胞の増殖能を評価した細胞周期解析（ｃｅｌｌ ｃｙｃｌｅ ａｎａｌｙｓｉｓ）である。
その結果、プリオンタンパク質標的抗体は、濃度が増加するにつれて、大腸癌細胞株の細胞周期Ｓ期を減少させることが確認された。
図１７のＡは、抗癌剤耐性がない一般大腸癌細胞株（ＳＮＵ－Ｃ５／ＷＴ）に５ＦＵ抗癌剤（１０μＭ）処理、プリオンタンパク質標的抗体（２００ｎｇ／ｍＬ）の処理及び５ＦＵ抗癌剤とプリオンタンパク質標的抗体を併合処理したとき、細胞の増殖能を評価した細胞周期解析である。
図１７のＢは、５ＦＵ抗癌剤耐性がある大腸癌細胞株（ＳＮＵ－Ｃ５／５ＦＵＲ）に５ＦＵ抗癌剤（１０、５０、１００μＭ）処理、プリオンタンパク質標的抗体（２００ｎｇ／ｍＬ）処理及び５ＦＵ抗癌剤（１０、５０、１００μＭ）とプリオンタンパク質標的抗体（２００ｎｇ／ｍＬ）を投与量ごとにそれぞれ併合処理したとき、細胞の増殖能を評価した細胞周期解析である。図１７のＢは、抗癌剤耐性細胞であるため、様々な濃度の５ＦＵ抗癌剤を用いて、抗癌剤への感受性がどれほど高くなるかを確認した結果である。
その結果、プリオンタンパク質標的抗体が併合処理された実験群の方が５ＦＵ単独処理群よりもさらに細胞周期Ｓ期を抑えていた。特に、５ＦＵ抗癌剤耐性がある大腸癌細胞株（ＳＮＵ－Ｃ５／５ＦＵＲ）の場合には、５ＦＵ抗癌剤の抗癌剤耐性を有する濃度１０、５０、１００μＭにおいてプリオンタンパク質標的抗体と同時に処理されたとき、細胞周期Ｓ期が最大で１／３に減少することを示している。
これらの結果は、プリオンタンパク質標的抗体が５ＦＵに対する抗癌剤への感受性を上昇させて細胞の増殖を抑えることを示す。
＜実施例９＞
プリオンタンパク質標的抗体と抗癌剤との組合剤が大腸癌の形成に及ぼす影響
実施例９において用いられたプリオンタンパク質標的抗体は、米国Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃ社製の製品番号Ｓｃ－３９３１６５であった。
図１８のＡは、抗癌剤耐性がない一般大腸癌細胞株（ＳＮＵ－Ｃ５／ＷＴ）をマウスに移植して腫瘍形成動物モデルを製作し、抗癌剤５ＦＵとプリオンタンパク質標的抗体を投与する実験方法に関する説明図である。
図１８のＢは、抗癌剤耐性がない一般大腸癌細胞株（ＳＮＵ－Ｃ５／ＷＴ）をマウスに移植して腫瘍形成動物モデルに５ＦＵとプリオンタンパク質標的抗体を併合処理したときに形成された腫瘍を示す結果図である。
その結果、５ＦＵとプリオンタンパク質標的抗体を１０ｍｇ／ｋｇもしくは１００ｍｇ／ｋｇの量にて併合処理した腫瘍形成動物モデルグループの方において、５ＦＵが単独にて投薬されたグループに比べて、腫瘍の大きさが減少していた。よって、腫瘍形成モデルにおいてプリオンタンパク質標的抗体を用いたとき、抗癌剤への感受性が高くなって抗癌治療効果を高めることを示す結果である。
前述したように、図面を参照し、本発明の好適な実施例について説明したが、当該技術分野における通常の知識を有する者であれば、添付の特許請求の範囲に記載の本発明の思想及び領域から逸脱することなく、本発明を種々に修正及び変更することができることを理解するであろう。
本発明のプリオンタンパク質特異的な抗体を含む癌治療用の医薬組成物は、抗癌剤耐性が生じた癌細胞においても抗癌剤の効果が敏感に働くようにすることができる。

Claims (4)

  1. プリオンタンパク質特異的な抗体を含むことを特徴とする、癌治療用の医薬組成物。
  2. 抗癌剤、化学療法剤、トキシン、放射性同位元素（ｒａｄｉｏｉｓｏｔｏｐｅ）、及び細胞毒性酵素よりなる群から選ばれる少なくとも１種をさらに含むことを特徴とする、請求項１に記載の癌治療用の医薬組成物。
  3. 前記抗癌剤が、５ＦＵ抗癌剤及びオキサリプラチン（Ｏｘａｌａｐｌａｔｉｎ）抗癌剤よりなる群から選ばれる少なくとも１種であることを特徴とする、請求項２に記載の癌治療用の医薬組成物。
  4. プリオンタンパク質抗原決定基に結合する標的体と、
    抗癌剤、化学療法剤、トキシン、放射性同位元素、及び細胞毒性酵素よりなる群から選ばれる少なくとも１種と、が結合された複合体を含むことを特徴とする、癌治療用の医薬組成物。
JP2022538406A 2019-12-20 2020-07-08 プリオンタンパク質特異的な抗体を含む医薬組成物 Pending JP2023507828A (ja)

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