JP2023503127A

JP2023503127A - 黒色腫の発症を予防する方法

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Publication number: JP2023503127A
Application number: JP2022529820A
Authority: JP
Inventors: ノバック，ピーター; テムニコフ，マキシム; バラキン，オレクサンドル
Original assignee: Vector Vitale IP LLC
Current assignee: Vector Vitale IP LLC
Priority date: 2019-11-22
Filing date: 2019-11-22
Publication date: 2023-01-26
Also published as: CA3159001A1; EP4061380A1; AU2019475409A1; WO2021101569A1

Abstract

黒色腫を処置するか、または黒色腫の発症を予防するための方法であって、治療有効量で６４Ｚｎｅ（Ａｓｐ）２を含む組成物の投与を含む、方法。このような投与は、腫瘍内および／または静脈内注射などの注射によるものであり得、１日１回または１日２回以上であり得る。治療有効量で６４Ｚｎｅ（Ａｓｐ）２を含む、黒色腫の処置または予防のための組成物。組成物は、注射に好適な液体であり得る。

Description

本開示は、腫瘍学、薬理学および獣医学に関連し、特に黒色腫などの悪性皮膚疾患の処置または予防に関連する。

黒色腫は、主に皮膚の表皮の基底層および眼の中層に位置するメラノサイト（メラニンを産生する色素含有細胞）から発症する悪性腫瘍である（Hurst E A et al., Archives of Dermatology Research, 2003, 139: 1067-1073）。このタイプの病状は、すべての悪性皮膚病変の１０パーセントを占める。その年間発生率は５％である。１９４０年代以降、黒色腫の発生率は毎年２倍になっている。黒色腫は、男性の間で６番目に多い癌であり、女性の間で７番目に多い癌である。皮膚黒色腫の平均発生率は、地中海諸国の年間１０万人あたり３～５症例から、北欧諸国の年間１０万人あたり１２～２０症例までさまざまであり、増加が続いている。死亡率は毎年１０万人あたり２～３症例であり、地理的場所によって若干の変化があり、過去１０年にわたって比較的安定したままとなっている。遺伝的に素因のある集団の紫外線への曝露の増加によって、少なくとも部分的に、過去数十年にわたって黒色腫の発生率の着実な増加がもたらされている［Oncology Clinical Practice Guidelines of the European Society for Medical Oncology (ESMO), 2010, p. 294-300］。悪性黒色腫は皮膚癌による死亡の６０～８０％の原因であり、その５年生存率は１４％である。米国では、人口の２％がこのタイプの皮膚癌と診断されており、これは毎年およそ１０，０００人の死亡の原因となっている。同時に、黒色腫は全身転移の可能性が非常に高い腫瘍である。

しかし、黒色腫を処置または予防する可能性は限られている。

一態様では、黒色腫の発症を予防する方法であって、治療有効用量で、亜鉛の各分子に対して２分子のアスパラギン酸を含有する^６４Ｚｎ_ｅ（Ａｓｐ）_２の対象への腫瘍内および／または静脈内投与を含む、方法が提供される。非^６４Ｚｎ濃縮型は、亜鉛ジアスパルテート（ｚｉｎｃｄｉ－ａｓｐａｒｔａｔｅ）として知られており、分子式はＺｎ（Ｃ_４Ｈ_６ＮＯ_４）_２である。ある特定の実施形態では、^６４Ｚｎ_ｅ（Ａｓｐ）_２のアスパルテートは、Ｌ－エナンチオマーが濃縮されている。さらなる実施形態では、それは、少なくとも９０％がＬ－エナンチオマー、少なくとも９５％がＬ－エナンチオマー、または少なくとも９８％がＬ－エナンチオマーである。

別の態様では、黒色腫転移を予防する方法であって、治療有効用量で、亜鉛の各分子に対して２分子のアスパラギン酸を含有する^６４Ｚｎ_ｅ（Ａｓｐ）_２の対象への腫瘍内および／または静脈内投与を含む、方法が提供される。

さらに別の態様では、治療有効量の^６４Ｚｎ_ｅ（Ａｓｐ）_２および少なくとも１つの担体または賦形剤を含む、黒色腫の発症を予防する際、および／または黒色腫転移を予防する際に使用するための組成物が提供される。

上記の各態様において、ある特定の実施形態では、^６４Ｚｎ_ｅ（Ａｓｐ）_２の^６４Ｚｎ濃縮亜鉛は、少なくとも８０％の^６４Ｚｎ、少なくとも８５％の^６４Ｚｎ、少なくとも９０％の^６４Ｚｎ、少なくとも９５％の^６４Ｚｎ、または少なくとも９９％の^６４Ｚｎである。^６４Ｚｎ濃縮の好適なレベルの例には、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、および９９．８％の^６４Ｚｎなど、記載された範囲内の任意の特定の値が含まれる。本明細書で使用される場合、別段の指定がない限り、Ｘ％^６４Ｚｎは、１００個の亜鉛原子のうち、Ｘ個が^６４Ｚｎであることを意味する。例えば、９５％^６４Ｚｎである亜鉛では、原子のうちの９５％が^６４Ｚｎである。別段の指定がない限り、「^６４Ｚｎ_ｅ」という用語は、本明細書では「^６４Ｚｎ濃縮亜鉛」の省略形として使用される。

図１は、Ｂ１６黒色腫細胞のマウスへの移植後５日目に、２分子のアスパラギン酸／亜鉛原子（別段の指定がない限り、本明細書では「^６４Ｚｎ_ｅ（Ａｓｐ）_２」と略記されている）を含む^６４Ｚｎ_ｅ（Ａｓｐ）_２の腫瘍内（「ｉ／ｔ」）注射を与えられた実験動物の生存データ（％対対照）を示す。^６４Ｚｎ_ｅ（Ａｓｐ）_２により処置を受けた（腫瘍移植後５日目の^６４Ｚｎ_ｅ（Ａｓｐ）_２の腫瘍内投与）群の生存率に関するデータを、対照群のデータと比較する。図２は、対照群と比較した、Ｂ１６黒色腫細胞の移植後５日目に^６４Ｚｎ_ｅ（Ａｓｐ）_２の腫瘍内注射を与えられたマウスにおける^６４Ｚｎ_ｅ（Ａｓｐ）_２の抗腫瘍活性に関するデータ（ｍｍ^３単位での平均腫瘍容量）を示す。図３は、対照群と比較した、Ｂ１６黒色腫細胞の移植後５日目に^６４Ｚｎ_ｅ（Ａｓｐ）_２の腫瘍内注射を与えられたマウスにおけるＢ１６黒色腫増殖の動態に関するデータ（ｍｍ^３単位での平均腫瘍体積）を示す。図４Ａ～４Ｃは、腫瘍細胞の移植の４５分および２４時間後における^６４Ｚｎ_ｅ（Ａｓｐ）_２の静脈内投与後の、Ｂ１６黒色腫の移植を受けたＣ５７Ｂ１マウスにおける肺の転移プロセスの阻害に関するデータを示す。図４Ａ－対照、図４Ｂ－腫瘍細胞の移植から２４時間後の^６４Ｚｎ_ｅ（Ａｓｐ）_２の静脈内注射、図４Ｃ－腫瘍細胞の移植から４５分後の^６４Ｚｎ_ｅ（Ａｓｐ）_２の静脈内投与。図５Ａ～５Ｂは、腫瘍細胞の移植の４５分および２４時間後における^６４Ｚｎ_ｅ（Ａｓｐ）_２の静脈内投与後の、黒色腫細胞の転移活性の定量的評価に関するデータを示し、転移の平均数（図５Ａ）および転移活性の阻害のパーセンテージ（図５Ｂ）として表される。

本明細書で使用される場合、名詞の前の「ａ」または「複数」という単語は、特定の名詞の１つまたは複数を表す。

「例えば」および「など」という用語、ならびにそれらの文法上の同等物については、特に明記しない限り、「および限定なしに」という句が続くと理解される。本明細書で使用される場合、「約」という用語は、実験誤差による変動を説明することを意味する。本明細書で報告されるすべての測定値は、明示的に使用されているかどうかに関係なく、特に明記しない限り、「約」という用語によって改変されると理解される。本明細書で使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、文脈上別段の明確な指示がない限り、複数の指示対象を含む。

黒色腫などの医学的状態に関して本明細書で使用される「処置する」という用語は、状態の重症度および／または結果を軽減すること、状態の進行を遅らせること、状態を有する患者における状態の拡大を予防すること、状態の転移を少なくとも実質的に予防すること、および／または状態を治癒することを意味する。

黒色腫などの医学的状態に関して本明細書で使用される「予防する」という用語は、状態の発症を予防すること、少なくとも実質的に、状態の重症度および／または結果を軽減すること、状態の進行を遅らせること、状態を有する患者における状態の拡大を予防すること、および／または状態の転移を少なくとも実質的に予防することを意味する。

「有効量」、「予防有効量」、または「治療有効量」は、対象に有益な効果または好ましい結果を提供する薬剤または組成物の量、あるいは代替的に、所望のインビボ（ｉｎｖｉｖｏ）またはインビトロ（ｉｎｖｉｔｒｏ）活性を示す薬剤または組成物の量を指す。「有効量」、「予防有効量」、または「治療有効量」は、所望の生物学的、治療的、および／または予防的結果を提供する薬剤または組成物の量を指す。その結果は、患者／対象の疾患、障害、または状態の１つもしくは複数の兆候、症状、または原因の軽減、改善、緩和、低減、遅延、予防、および／または寛解、あるいは生物学的システムの他の望ましい変更であり得る。細胞増殖障害に関して、好ましい結果には、処置がない場合と比較して、疾患または障害に関連する症状の影響または重症度の軽減、および／または平均余命の延長が含まれる。有効量を、１回または複数回の投与で投与することができる。動物の用量レベルと人間の用量レベルとの間の関係（体表面積１平方メートルあたりのミリグラムに基づく）は、例えば、Freireich et al., (1966) Cancer Chemother Rep 50: 219に記載されている。

任意の組成物について、有効量は、細胞培養アッセイに従って、または動物モデル、典型的にはマウス、ラット、モルモット、ウサギ、イヌもしくはブタを使用して、最初に推定することができる。動物モデルを使用して、適切な濃度範囲および投与経路を決定することができる。次に、そのような情報を使用して、ヒトに適切な用量および投与経路を決定することができる。ヒトの等価用量を計算する場合、Guidance for Industry and the Reviewers document (2002, US Food and Drug Administration, Rockville, MD, USA)に記載されている換算表を使用することが推奨される。有効な１日用量は、一般に、０．０１ｍｇ／ｋｇ患者重量～２０００ｍｇ／ｋｇ患者重量の活性剤、好ましくは、０．０５ｍｇ／ｋｇ患者重量～５００ｍｇ／ｋｇ患者重量の活性剤である。正確な有効用量は、疾患の重症度、患者の一般的な健康状態、年齢、体重および性別、栄養、投与の時間および頻度、薬剤の組合せ、応答感受性、投与に対する耐性／応答、および当業者の知識に基づいて特定の患者の投与量および投与経路を決定する際に当業者によって考慮される他の要因によって異なる。このような用量は、慣例の実験を行うことにより、医師の裁量で決定することができる。有効用量は、他の薬剤の使用など、他の治療手順との併用の可能性によっても異なる。

本明細書で使用される場合、「患者」および「対象」は交換可能な用語であり、ヒトの患者／対象、イヌ、ネコ、非ヒト霊長類などを指す場合がある。

別段に定義されない限り、本明細書で使用されるすべての技術用語および科学用語は、本発明が属する技術分野における当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。本発明で使用するための方法および材料が本明細書に記載されており；当技術分野で知られている他の好適な方法および材料も使用することができる。材料、方法、および例は例示にすぎず、限定することを意図したものではない。本明細書で言及されるすべての刊行物、特許出願、特許、配列、データベースエントリ、および他の参考文献は、それらの全体が参照により組み込まれる。抵触する場合には、定義を含めて、本明細書が優先する。

黒色腫
黒色腫は、主に皮膚の表皮の基底層および眼の中層に位置するメラノサイト（メラニンを産生する色素含有細胞）から発症する悪性腫瘍である（Hurst E A et al., Archives of Dermatology Research, 2003, 139: 1067-1073）。このタイプの病状は、すべての悪性皮膚病変の１０パーセントを占める。その年間発生率は５％である。１９４０年代以降、黒色腫の発生率は毎年２倍になっている。黒色腫は、男性の間で６番目に多い癌であり、女性の間で７番目に多い癌である。皮膚黒色腫の平均発生率は、地中海諸国の年間１０万人あたり３～５症例から、北欧諸国の年間１０万人あたり１２～２０症例までさまざまであり、増加が続いている。死亡率は毎年１０万人あたり２～３症例であり、地理的場所によって若干の変化があり、過去１０年にわたって比較的安定したままとなっている。遺伝的に素因のある集団の紫外線への曝露の増加によって、少なくとも部分的に、過去数十年にわたって黒色腫の発生率の着実な増加がもたらされている［Oncology Clinical Practice Guidelines of the European Society for Medical Oncology (ESMO), 2010, p. 294-300］。悪性黒色腫は皮膚癌による死亡の６０～８０％の原因であり、その５年生存率は１４％である。米国では、人口の２％がこのタイプの皮膚癌と診断されており、これは毎年およそ１０，０００人の死亡の原因となっている。同時に、黒色腫は全身転移の可能性が非常に高い腫瘍である。

原発性黒色腫は化学療法および放射線療法に耐性がある。原発性黒色腫患者の主な処置方法は、腫瘍およびその周囲の若干の正常な組織を外科的に切除することである。外科的切除で除去される組織の量は、腫瘍の厚さ（ブレスローの厚さ）および腫瘍の浸潤の深さによって異なる。しかし、黒色腫の外科的処置には、長期にわたる創傷治癒および手術から２年以内の移植転移の発生に関連する複数の重大な欠点がある。この処置方法は、疾患の初期ステージ（ステージ１～２）でのみ使用される。進行ステージでは、放射線療法、化学療法、および免疫療法が追加で使用される。

抗腫瘍活性は、アルキル化化合物、代謝拮抗剤、抗生物質、植物または動物由来の物質、ホルモン製剤、および酵素など、その作用機序および化学構造が異なる種々の化合物によって示される。しかし、これらの化学療法薬は、正常な組織や器官に深刻な悪影響を及ぼし、そのためそれらの有用性は限定される。

黒色腫を処置する可能性は限定されている。最近、多くの研究により、組織および器官の同位体組成物が診断マーカーとして機能する場合があることが実証されている。特に、血液中のＣｕおよびＺｎの同位体比の研究は、同位体値と年齢、性別、および病状との間に有望な相関関係があることを示した。例えば、血清中の銅同位体比の測定は、肝硬変の発症の診断および予後のための新しいアプローチである（M. Costas-Rodriguez et al., Isotopic analysis of Cu in blood serum by multi-collector ICP-mass spectrometry: a new approach for the diagnosis and prognosis of liver cirrhosis, Metallomics 2015, 7: 491-498）。乳房組織中の亜鉛同位体組成物は、乳癌の診断に役立つ可能性がある（F. Larner et al., Zinc isotopic compositions of breast cancer tissue, Metallomics 2015, 7: 112-117）。さらに、ある特定の特許および特許出願は、治療的使用のための同位体濃縮組成物の使用について論じている。例えば、米国特許第９，８６１，６５９号；同１０，１８３，０４１号、および同１０，２２６，４８４を参照のこと。

ＷＯ２００７／１４０２８０は、黒色腫処置に使用される薬学的に許容される塩として、セシウムイオン源および／またはルビジウムイオン源を含む局所投与用の抗癌組成物を使用することを示唆している。この療法の使用の実現可能性は、癌細胞の酸性ｐＨをわずかにアルカリ性に変えることを含むアプローチに基づいており、それによって癌細胞の生存が損なわれ、通常癌細胞で形成される酸性および毒性物質の形成が中和され、排除される（Sartori HE. Nutrients and cancer: an introduction to cesium therapy, Pharmacol. Biochem. Behav. 1984; 21, Suppl. 1: 7-10）。したがって、質量分析および同位体研究は、カリウム、ルビジウムおよびセシウムが、癌細胞によって最も効果的に吸収されることを示した。グルコースはまだ細胞に入ることができるが、酸素は入ることができず；したがって、細胞は嫌気性になる。酸素がない場合、グルコースから乳酸への発酵が起こり、細胞のｐＨは７に低下し、最終的に６．５に低下する。高いｐＨ値を生成するセシウム、ルビジウム、およびカリウムは、そのような状態で細胞に入り、そのｐＨ値を上げることができる。この設定では、セシウムおよびルビジウムイオンは、カリウムの膜貫通移動の阻害を含む、癌細胞のイオン生理学を変化させる可能性がある。セシウムおよびルビジウムは、カリウムおよび結合水素イオン（Ｈ^＋）フラックスを効率的に制御し、すべての酸依存性癌に影響を及ぼし、腫瘍微小環境のｐＨを選択的に上昇させるための部位親和性を提供すると想定されている。著者の意見では、これは選択的腫瘍調節を提供するが、出願資料には、この組成物を使用して癌を処置することの有効性を確認する情報はなんら含まれていない。さらに、この出願に記載されている組成物は局所投与用であり、患者の処置において高い有効性を提供することはできない。したがって、記載されたアプローチの使用は、癌細胞を標的としているが、それでも腫瘍細胞の有効な根絶を提供することはできず、むしろ他の処置方法に加えて栄養補助食品としてのみ使用することができる。

方法
一態様では、黒色腫の発症を予防するための方法が提供される。この方法は、外科的介入や周囲の正常組織に対する損傷なしに悪性腫瘍の発症を効果的に抑制し、さらに高い抗転移効果を示す。特許請求された方法を使用することによって、化学療法薬の特徴であるように、身体に悪影響を与えることなく、黒色腫の発症の有効な阻害を達成することが可能になる。この方法は、それを必要とする対象に、アスパラギン酸塩の形態の亜鉛の軽同位体を投与することを含む。黒色腫の発症を予防するための開示された方法において使用される医薬組成物が提供され、これは、治療有効量で^６４Ｚｎ_ｅ（Ａｓｐ）_２を含む。開示された方法は、低い毒性効果とともに、腫瘍細胞の増殖を阻害するのに高い有効性を有する。

黒色腫を処置する方法または黒色腫の発症を予防する方法が開示されている。この方法は、治療有効量で^６４Ｚｎ_ｅ（Ａｓｐ）_２を含有する組成物の腫瘍内および／または静脈内投与を含む。組成物の投与は、単一または複数であり得る。ある特定の実施形態では、処置レジメンは、^６４Ｚｎ_ｅ（Ａｓｐ）_２の５～１０回の注射を含む。ある特定の実施形態では、^６４Ｚｎ_ｅ（Ａｓｐ）_２に存在するアスパルテートは、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％がＬ－エナンチオマー、またはすべてがＬ－異性体である。いくつかの実施形態では、アスパルテートはＤ－エナンチオマーであってもよく、他の実施形態では、アスパルテートは２つのエナンチオマーの混合物であってもよい。

黒色腫を処置するか、または黒色腫の発症を予防する方法であって、それを必要とする患者への治療有効量の^６４Ｚｎ_ｅ（Ａｓｐ）_２を含む組成物の投与を含む、方法が提供される。いくつかの実施形態では、組成物は水溶液である。いくつかの実施形態では、組成物は、腫瘍内または静脈内に投与される。いくつかの実施形態では、^６４Ｚｎ_ｅ（Ａｓｐ）_２は、２分子のアスパラギン酸を含む。いくつかの実施形態では、０．２μｇ／ｋｇ患者体重／日～２０００ｍｇ／ｋｇ患者体重／日の^６４Ｚｎ_ｅ（Ａｓｐ）_２を、患者に投与する。いくつかの実施形態では、０．０１ｍｇ／ｋｇ／日～５ｍｇ／ｋｇ／日の^６４Ｚｎ_ｅ（Ａｓｐ）_２を、患者に投与する。いくつかの実施形態では、０．１ｍｇ／ｋｇ／日～１ｍｇ／ｋｇ／日の^６４Ｚｎ_ｅ（Ａｓｐ）_２を、患者に投与する。いくつかの実施形態では、組成物は、１日１回投与される。他の実施形態では、組成物は、１日２回以上で投与される。いくつかの実施形態では、組成物は、溶媒として重水素減少水（ｄｅｕｔｅｒｉｕｍ－ｄｅｐｌｅｔｅｄｗａｔｅｒ）をさらに含む。いくつかの実施形態では、黒色腫を処置／予防する方法は、黒色腫転移を予防、遅延、または改善する方法である。

^６４Ｚｎ_ｅ（Ａｓｐ）_２中のアスパルテートのエナンチオマー純度は、例えば、キラルクロマトグラフィーなどの当技術分野で知られている方法によって決定することができる。

^６４Ｚｎ_ｅ（Ａｓｐ）_２化合物または他の亜鉛含有化合物中の亜鉛の存在は、例えば、誘導結合プラズマを用いた原子発光分光法（ａｔｏｍｉｃｅｍｉｓｓｉｏｎｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ）などの当技術分野で知られている方法によって確認することができる。誘導結合プラズマを用いた原子発光分光法に試料を供する前に、試料を、マイクロ波放射の作用下にてテフロンオートクレーブ内で鉱酸の混合物により処理することができる。

^６４Ｚｎ_ｅ（Ａｓｐ）_２化合物または他の亜鉛含有化合物中の元素状不純物または硫酸イオンの不純物は、例えば、誘導結合プラズマを用いた原子発光分光法などの当技術分野で知られている方法によって測定することができる。誘導結合プラズマを用いた原子発光分光法に試料を供する前に、試料を、マイクロ波放射の作用下にてテフロンオートクレーブ内で鉱酸の混合物により処理することができる。

軽同位体は、購入することができる。必要な濃縮度のＺｎ－６４酸化物は、例えば、ＯａｋＲｉｄｇｅＮａｔｉｏｎａｌｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、ＯａｋＲｉｄｇｅ、ＴＮ、ＵＳＡから購入することができる。

ある特定の実施形態では、それを必要とする対象に投与される^６４Ｚｎ_ｅの有効量は、０．２μｇ／ｋｇ患者体重／日～２０００ｍｇ／ｋｇ患者体重／日であり得る。０．２μｇ／ｋｇ／日～２０００ｍｇ／ｋｇ／日のこの範囲は、アスパルテートの一部として組成物中に存在する亜鉛の量に対応する。さらなる実施形態では、投与される^６４Ｚｎ_ｅの範囲は、０．０１ｍｇ／ｋｇ／日～５ｍｇ／ｋｇ／日、より好ましくは、０．１ｍｇ／ｋｇ／日～１ｍｇ／ｋｇ／日である。開示された方法で使用するための組成物は、対応する量を含有する。例えば、開示された方法を使用するための組成物は、組成物の単回投与が^６４Ｚｎ_ｅ（Ａｓｐ）_２の形態で１～１００ｍｇの^６４Ｚｎ_ｅ、例として１、５、１０、２０、３０、４０、５０、または１００ｍｇの^６４Ｚｎ_ｅを含有するような量の^６４Ｚｎ_ｅを含有する。例示的な組成物は、溶液１ｍｌあたり１ｍｇの^６４Ｚｎ_ｅを含有する^６４Ｚｎ_ｅ（Ａｓｐ）_２の溶液である。いくつかの実施形態では、溶媒は重水素減少水である。この溶液は、経口または非経口投与用、例として、腫瘍内または静脈内投与などの注射による投与用に処方されている。注射用組成物は、塩分およびｐＨが注射経路に最適化された溶液などの水溶液であり得る。この溶液には、ＤＭＳＯなどの賦形剤を含めてもよい。ＤＭＳＯは、１％の濃度で存在し得る。開示された方法で使用するための別の例示的な組成物は、３０ｍｇの^６４Ｚｎ_ｅを含有する経口投与用の錠剤または他の固体組成物である。組成物はまた、水性組成物、例えば、シロップなどの経口投与用の液体であり得る。

開示された方法の処置レジメンは、開示された方法で使用するための組成物の腫瘍内投与または静脈内投与のいずれか、あるいは両方の投与経路を含み得る。両方の経路が患者に使用される場合、同じ組成物を両方の経路を介して投与してもよく、または異なる組成物を投与してもよい。いくつかの実施形態では、腫瘍内および静脈内投与経路の組合せが使用される。

実施例では、黒色腫モデルシステムを使用して、^６４Ｚｎ_ｅ（Ａｓｐ）_２を含む組成物の有効性を研究し、腫瘍細胞が遠隔部位および／または限局ニッチ（ｌｏｃａｌｎｉｃｈｅ）に拡大する可能性がある場合における、手術／外科的介入を含む、温血動物における腫瘍播種の複数のプロセスをインビボでシミュレートする。組成物の術後投与および／または黒色腫転移プロセス（したがって腫瘍の進行）の可能性を予防するための組成物の投与により、転移プロセスが抑制され、これは重要な利点を有する。

科学理論に関連させる意図はないが、^６４Ｚｎ_ｅ（Ａｓｐ）_２の有効性について以下のように説明する。癌組織には、主に重同位体（Ｚｎ^７０など）が濃縮しており、基本元素の軽同位体（^６４Ｚｎ_ｅなど）が枯渇している。^６４Ｚｎ_ｅを^７０Ｚｎ_ｅ（^７０Ｚｎ濃縮亜鉛）で置換すると、タンパク質構造内の１つまたは複数のアミノ酸のキラル性に同位体誘発変化が生じ得、その結果、受容体、リガンド、およびシグナル分子の立体構造（ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ）に影響を与える場合がある。構造の精度の喪失、タンパク質の枯渇および分解は、細胞内および細胞間ホメオスタシスの破壊につながる場合があり、その結果、種々の病状がもたらされる場合がある。生細胞における自己触媒反応によるアミノ酸の病理学的キラル増幅の特徴に応じて、疾患の発症速度および症状発現は緩徐であるかまたは急速であり得る。一般に、非対称自己触媒作用の反応は、収量と時間との間の関係に非線形の性質を有する。最も劇的な結果は、上記の変化が「ゲノムの守護神」として知られ、その３分の２がジンクフィンガーで構成されているｐ５３タンパク質で起こる場合に発生する。亜鉛には５つの安定な同位体が存在する。実際、ｐ５３の「不適切な」立体構造は、細胞周期の停止の失敗、分化の機能不全、アポトーシス、代謝、ゲノム安定性、血管新生、ＤＮＡ修復、老化、およびその他のプロセスを引き起こす。知られていないことは、病理学的変化のまさに開始は、同位体置換によって誘発されたキラル性によるものであり、これによりタンパク質の立体構造の変化がもたらされるということである。これらの変化は明らかに可逆的であるため、軽同位体を使用することで正常状態への回復を達成することができる。ｐ５３に関しては、これは^６４Ｚｎ同位体であり得る。

開示された方法は、同位体選択的タンパク質調節をもたらし、これにより、送信および受信受容体ならびにシグナル分子を回復することによって細胞通信システムにおける損傷した負のフィードバックを回復することが可能になるだけでなく、さらに重要なことに、ｐ５３タンパク質の正常機能および関連する経路を再活性化することによって生体分子の突然変異を排除する可能性を開く。実施例に示されている質量分析研究によって確認が行われる。

以下の実施例を参照することにより、本発明をより完全に以下に説明し、これらの実施例は、例示としてのみ提示されており、本発明の範囲を限定するものと解釈されるべきではない。

［実施例１］

マウスモデルで実施された、特許請求された方法の有効性を支持するインビボ研究（^６４Ｚｎ_ｅ（Ａｓｐ）_２の腫瘍内投与）
以下の特徴を有するＢ１６黒色腫細胞を実験に使用した。
由来：ハツカネズミ（Ｍｕｓｍｕｓｃｕｌｕｓ）皮膚（Ｃ５７ＢＬ／６マウス）
腫瘍増殖の特徴：短期インキュベーション、急速な増殖、自発的転移の欠如。
腫瘍接種性は１００％である。この黒色腫の腫瘍増殖を引き起こす細胞の最小用量は、マウスの皮下注射あたりわずか１００～１０００である。
動物の平均余命は２１～３１日である。
腫瘍細胞集団は不均質であり、高度に色素沈着した領域およびメラニンの含有量が少ない断片の両方を含む。
核型：染色体数は３０から８０まで変化し、２ｎ＝４０、モダル数は７２染色体（１４％）であり、倍数性は３％である。すべての細胞には、ロバートソン型転座による２～８個の染色体間会合（ｉｎｔｅｒｃｈｒｏｍｏｓｏｍａｌａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎｓ）が含まれている。

Ｂ１６黒色腫細胞の特徴は、ｃ－ｍｙｃ、ｃ－ｊｕｎ、およびｃ－ｆｏｓ腫瘍遺伝子のｍＲＮＡ発現レベルが非常に低いこと、およびｃ－ｒａｓ、ｃ－ａｂｌ、ｃ－ｅｒｂ－Ｂ２、Ｂ－ｌｙｍ、ｃ－ｓｉｓ、およびｃ－ｍｙｂ腫瘍遺伝子の発現がないことである。この黒色腫の細胞に固有の別の特性は、それらがプロコアグラント（ｐｒｏｃｏａｇｕｌａｎｔ）活性を示す大量の因子をインビトロで産生することである。

免疫細胞化学的分析を使用した黒色腫細胞の表現型特徴の研究は、細胞がＶＥ－カドヘリン、Ｎ－およびＥ－カドヘリン、ＴｗｉｓｔおよびＳｌｕｇ転写因子、Ｐ－糖タンパク質、ＥＲＣＣ、ＤＡＢ２、ＴＡＰ１を発現し、ＣＤ４４を弱く発現することを示した。

マウスの使用を伴うすべての研究を、実験的およびその他の科学的目的で使用される脊椎動物の保護（ＰｒｏｔｅｃｔｉｏｎｏｆＶｅｒｔｅｂｒａｔｅＡｎｉｍａｌｓｕｓｅｄｆｏｒＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌａｎｄＯｔｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃＰｕｒｐｏｓｅｓ）に関する欧州条約の規則に従って実施した［ＥＣ委員会（ＣｏｍｍｉｓｓｉｏｎｏｆｔｈｅＥｕｒｏｐｅａｎＣｏｍｍｕｎｉｔｉｅｓ）：優良試験所規範の原則の適用および化学物質の試験に対するそれらの適用の検証（ｔｈｅＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆＰｒｉｎｃｉｐｌｅｓｏｆＧｏｏｄＬａｂｏｒａｔｏｒｙＰｒａｃｔｉｃｅａｎｄｔｈｅＶｅｒｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆＴｈｅｉｒＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓｆｏｒＴｅｓｔｓｏｎＣｈｅｍｉｃａｌＳｕｂｓｔａｎｃｅｓ）を規制する法律に関する１９８６年１２月１８日理事会指令（８７／１８／ＥＥＣ）。The Rules Governing Medicinal Products in the European Community. - 1991. - V. 1. - P. 145-146］。

動物を、実験の目的に従って、抗腫瘍活性を示す生物学的薬物を含む、試験製品の前臨床研究のために一般に認められている要件に従って選択した。

動物を、The Guide for Care and Use of Laboratory Animals (ILAR publication, 1996, National Academy Press, 1996)に記載された基準に従って維持した。実験中、動物はプラスチック製のケージで飼育され、昼と夜の自然なサイクルがあり、標準的な食餌が与えられ、食料および水を自由に摂取できた。

臨床観察
ケージ内のすべての動物を、死亡率またはそれらの健康状態の異常性のなんらかの兆候を判定するために毎日検査した。なんらかの異常が検出されるたびに徹底的な検査を行った。すべての異常性を記録した。

結果の統計処理は、スチューデントのｔ検定を使用した医学的および生物学的統計の分析用に設計されたＳＴＡＴＩＳＴＩＳＡ６．０ソフトウェアパッケージを使用して実施した；９５％以上の確率での差異は有意であると見なされた（ｐ＜０．０５）。

実験では、１０～１２週齢、体重１８～２２ｇの雌型С_５７Ｂｌ／Ｊ６マウス１５匹（群あたり５匹のマウス）を使用した。

Ｂ１６黒色腫細胞を、標準的な条件下でインビトロにて培養した。移植用に、指数期の腫瘍細胞を０．０２％ベルセン溶液で基質から除去し、血球計算器でトリパンブルーの存在下にて懸濁液の細胞充実性および生存率を評価し、懸濁液を、食塩水で希釈することにより、１０^７細胞／ｍｌの濃度に調整した。黒色腫細胞を、０．０５ｍｌの懸濁液（０．５×１０^６細胞／マウス）で動物の背部領域に皮内（ｉ．ｃ．）注射した。腫瘍細胞の注射の２４時間前に、各マウスの背部の被毛（ｗｏｏｌｃｏｖｅｒ）を脱毛クリームで除去した。

群分け。動物を、以下のように群に分けた：
群番号１：対照群、Ｂ１６黒色腫細胞をｉ．ｃ．注射されたマウス；
群番号２：Ｂ１６黒色腫細胞をｉ．ｃ．注射され、腫瘍細胞を接種された後５日目に^６４Ｚｎ_ｅ（Ａｓｐ）_２の腫瘍内注射をされたマウス；
群番号３：Ｂ１６黒色腫細胞をｉ．ｃ．注射され、腫瘍細胞を接種された後１１日目に^６４Ｚｎ_ｅ（Ａｓｐ）_２の腫瘍内注射をされたマウス

投与する組成物は、その投与直前に調製した。^６４Ｚｎ_ｅ（Ａｓｐ）_２を、１％ＤＭＳＯを加えた重水素減少水に溶解した。群番号２の動物には、腫瘍が直径０．５ｃｍに達した後、腫瘍内および腫瘍増殖領域の周囲に、２０μｌ／マウスの容量で２００μｇ／マウスの用量にて^６４Ｚｎ_ｅ（Ａｓｐ）_２を含む組成物を注射した（腫瘍細胞のｉ．ｃ．投与後５日目）。実験動物が新たな腫瘍増殖を有する場合に、以下の^６４Ｚｎ_ｅ（Ａｓｐ）_２の注射を、上記のスキームに従って与えた。

群番号３の動物には、腫瘍細胞のｉ．ｃ．投与後１１日目に、腫瘍内および腫瘍増殖領域の周囲に、３０μｌ／マウスの容量で３００μｇ／マウスの用量にて^６４Ｚｎ_ｅ（Ａｓｐ）_２を含む組成物を注射した。実験動物が新たな腫瘍増殖を有する場合に、２０μｌ／マウスの容量で２００μｇ／マウスの用量にて、^６４Ｚｎ_ｅ（Ａｓｐ）_２のフォローアップ注射を与えた。最初の注射の２４時間後に、その後、１日おきに、一連の注射を与えた。^６４Ｚｎ_ｅ（Ａｓｐ）_２を、１日おきに１０日間、合計５回腫瘍内投与した。

第３群について：群３のマウスは、腫瘍細胞注射後１１日目に、^４Ｚｎ_ｅアスパルテートの形態で、３００ｍｃｇ／マウスの^６４Ｚｎ_ｅを、１３、１５、１７、１９日目に２００ｍｃｇ／マウスの^４Ｚｎ_ｅアスパルテートを受けた。

第２群について：群２のマウスは、腫瘍細胞注射後５日目に２００ｍｃｇ／マウスの^４Ｚｎ_ｅアスパルテートを受け、次に、実験動物が新たな腫瘍増殖を有する場合に、２００ｍｃｇ／ｍｌで、^４Ｚｎ_ｅアスパルテートを与えられた。

^６４Ｚｎ_ｅ（Ａｓｐ）_２の抗腫瘍効果を、一般に受け入れられている規則に従って腫瘍容量の変化に基づいて推定された黒色腫腫瘍の増殖動態に基づいて評価した。

実験腫瘍が直径０．３～０．５ｃｍに達したときから、その後２～３日ごとに、実験動物の各腫瘍結節のサイズを３つの直交する平面（幅×長さ×高さ（Ｗ×Ｌ×Ｈ））で測定し、腫瘍容量は、楕円形の体積についての以下の式を使用して計算した：Ｖ＝４／３×πａｂｃ；式中、Ｖは腫瘍容量（ｍｍ^３）であり；ａ、ｂ、ｃは腫瘍（ｒｕｍｏｒ）半径（ｍｍ）であり：ａはｘ軸に沿った半径であり、ｂはｙ軸に沿った半径であり、ｃはｚ軸に沿った半径である。

統計的データ処理：スチューデントのｔ検定を使用して、群の平均値の間に統計的に有意差があるかどうかを確認した。計算は、ＳＴＡＴＩＳＴＩＣＡ６．０ソフトウェアパッケージを使用して行った。

^６４Ｚｎ_ｅ（Ａｓｐ）_２の投与を含む方法の抗腫瘍活性の研究中に、^６４Ｚｎ_ｅ（Ａｓｐ）_２を含む組成物の腫瘍内投与がマウスの黒色腫の発症を抑制することを示す結果が得られた（表１を参照のこと）。図１～４は、マウスにおける特許請求された方法の有効性の結果を示している。^６４Ｚｎ_ｅ（Ａｓｐ）_２を含む組成物の腫瘍内注射を受けた実験動物の生存率も実験中に決定された（表２を参照のこと）。

群番号２（腫瘍細胞の接種後５日目の治療用組成物の投与）では、^６４Ｚｎ_ｅ（Ａｓｐ）_２の単一の腫瘍内注射後、５匹中２匹の実験動物において、黒色腫の増殖が１００％抑制されたことにも留意されたい。

提示されたデータから分かるように、腫瘍細胞の接種後５日目の^６４Ｚｎ_ｅ（Ａｓｐ）_２の腫瘍内投与により、腫瘍容量の有意な縮小がもたらされた（^６４Ｚｎ_ｅ（Ａｓｐ）_２で処理された実験動物の腫瘍容量は、対照群の対応する数値の４％であった）。腫瘍細胞の接種後１１日目に薬物を最初に投与した群における^６４Ｚｎ_ｅ（Ａｓｐ）_２の抗腫瘍効果は、それほど顕著ではなかった。腫瘍増殖の統計的に有意な抑制は、実験の２１日目と２４日目にのみ観察された。黒色腫のサイズは、対照と比較して８５％（２１日目）および７５．６％（２４日目）縮小した。黒色腫に対する抗腫瘍活性は、３１日目の生存動物のパーセンテージにも現れた。特に、腫瘍細胞の接種後５日目に^６４Ｚｎ_ｅ（Ａｓｐ）_２を注射したマウスの生存率は８０％であったが、対照群では２０％の動物しか生存していなかった。

表３は、群２および薬物投与の個々のレジメンにおける^６４Ｚｎ_ｅ（Ａｓｐ）_２療法中のＢ１６黒色腫の増殖動態を示す。
［実施例２］

マウスモデルで実施された、特許請求された方法の有効性を支持するインビボ研究（^６４Ｚｎ_ｅ（Ａｓｐ）_２の静脈内／静脈内＋腫瘍内投与）
血行性転移の実験モデルは、Ｂ１６黒色腫細胞の接種が可能である実験で使用された。これらの細胞の特徴を実施例１に示す。細胞を、標準的な条件下でインビトロにて培養した。移植用に、腫瘍細胞を０．０２％ベルセン溶液で基質から除去し、血球計算器でトリパンブルーの存在下にて懸濁液の細胞充実性および生存率を評価し、懸濁液を、１×１０^６細胞／ｍｌの濃度に調整した。黒色腫細胞を、０．０５ｍｌの懸濁液（０．５×１０^６細胞／マウス）で動物の背部領域に皮内（ＩＣ）注射した。腫瘍細胞接種の２４時間前に、マウスの背部の毛皮の一部を脱毛クリームで除去した。実験では、Ｂ１６マウス黒色腫から単離した細胞を使用した。細胞を、標準的な条件下でインビトロにて培養した。接種のために、腫瘍細胞を０．０２％ベルセン溶液で基質から除去した。得られた細胞懸濁液の細胞充実性および生存率を、トリパンブルーの存在下で血球計算器を用いて評価した。細胞濃度を、生理食塩水で１×１０^６細胞／ｍｌに調整した。黒色腫細胞を、０．２ｍｌの懸濁液（０．２×１０^６細胞／マウス）で外側尾静脈にＩＶ注射した。

^６４Ｚｎ_ｅ（Ａｓｐ）_２を、重水素減少水に溶解した。組成物を、マイクロインジェクションシリンジを使用して、６０μｇの^６４Ｚｎ_ｅ／マウスの用量で静脈内注射した：４時間、それぞれ０．３ｍｌ（合計０．６ｍｌ）の容量で、３０μｇ／マウスの用量にて２回の注射。注射を、１日おきに１０日間与えた（合計５回の注射）。本発明の組成物の最初の注射は、腫瘍細胞の接種の４５分または２４時間後に与えられた。腫瘍細胞のＩＶ注射後２６日目に、各群のすべての動物から肺を切除し、次いで転移の数および容量を測定した。実験では、１２～１４週齢、体重２５～２７ｇのС_５７Ｂｌマウス（群あたり８匹のマウス）を使用した。動物が維持された条件は、上記の実施例１に記載されている。

実験前は、すべての動物は健康であり、正常な挙動能力を有していた。実験中、動物はプラスチック製のケージ内で、自然光の照明の下で、標準的な食餌が与えられ、食料および水を自由に摂取して維持された。

Ｍｉｃｒｏ－ＦｉｎｅＰｌｕｓマイクロインジェクションシリンジ（ＢｅｃｔｏｎＤｉｃｋｉｎｓｏｎ）を使用して、^６４Ｚｎ_ｅ（Ａｓｐ）_２組成物を、動物の外側尾静脈に静脈内注射した。注射部位を、９６％エタノールで洗浄した。

ケージ内のすべての動物を、死亡率またはそれらの健康状態の異常性のなんらかの兆候を判定するために毎日検査した。なんらかの異常が検出されるたびに徹底的な検査を行った。すべての異常性を記録した。

結果の統計処理は、スチューデントのｔ検定を使用した医学的および生物学的統計の分析用に設計されたＳＴＡＴＩＳＴＩＣＡ６．０ソフトウェアパッケージを使用して実施した。

動物を、以下のように実験群に分けた：
群番号１：対照群、Ｂ１６黒色腫細胞をＩＶ注射され、溶媒（重水素減少水）をＩＶ注射されたマウス；
群番号２：Ｂ１６黒色腫細胞をＩＶ注射され、腫瘍細胞を接種されてから２４時間後に^６４Ｚｎ_ｅ（Ａｓｐ）_２をＩＶ注射されたマウス；
群番号３：Ｂ１６黒色腫細胞をＩＶ注射され、腫瘍細胞を接種されてから４５分後に^６４Ｚｎ_ｅ（Ａｓｐ）_２をＩＶ注射されたマウス。

転移の増殖を、以下のように評価した。

腫瘍細胞のＩＶ注射後２６日目に、各群のすべての動物から肺を切除し、次に転移の数および容量を測定した。

転移の容量を、球の体積についての以下の式を使用して計算した：
Ｖ＝４／３×πｒ^３、式中、Ｖは転移容量（ｍｍ^３）であり；ｒは転移半径（ｍｍ）である。

血行性Ｂ１６黒色腫転移の実験モデルにおける^６４Ｚｎ_ｅ（Ａｓｐ）_２のインビボ抗転移活性を評価するために、マウスの肺における転移の数および容量に関するデータを使用した。実験の結果を、表４および図１、２、３、４Ａ、４Ｂ、４Ｃ、５Ａおよび５Ｂに示す。

上記の結果では、黒色腫の転移プロセスの発症を抑制することにおける^６４Ｚｎ_ｅ（Ａｓｐ）_２の有効性が確認されている。選択された投与経路の使用後の転移の数および容量の統計的に有意な下落が、実証された。効果は、腫瘍細胞を接種した後、より短い時間（４５分）以内に注射を与えた場合に、肺組織の転移性病変の容量と数の両方でより顕著であり、このことは、良好な見通しと、腫瘍増殖の開始、悪性細胞の拡大、および^６４Ｚｎ_ｅ（Ａｓｐ）_２による療法の開始の間の時間を短縮する必要があることを示している。

^６４Ｚｎ_ｅ（Ａｓｐ）_２を含む組成物の腫瘍内および静脈内同時投与の可能性を追加の実験で評価した（データは示していない）。これらの実験により、体内の転移プロセスを抑制する^６４Ｚｎ_ｅ（Ａｓｐ）_２の有効性が確認され、これは、腫瘍サイズの下落、生存動物の数の増加、および転移の数の減少に示された。
［実施例３］

皮膚黒色腫の試料における化学元素の軽同位体および重同位体の分布の研究
実験動物からの皮膚黒色腫の試料および健康な動物から採取した対応する試料中の種々の化学元素の同位体の分布を分析し、実験で比較した。微量元素の測定には、グロー放電質量分析法を使用した。分析用の試料を以下のように調製した。

１．最大１ｇの重さの調製組織の試料を液体窒素に浸した。１秒あたり約１００°の速度で超高速冷却すると、ほとんどの水が非晶質氷に変わり、その構造は水の構造とほとんど変わらず、体積膨張しない。この事実により、凍結後の組織の構造は細胞レベルでは変化しない。

２．非晶質氷を、昇華プロセスを加速するために乾燥チャンバーに乾燥窒素を自動的に供給しながら、低温で減圧下にて昇華させることによって除去した。乾燥チャンバーに供給されるガスの容量は０．１ｌ／分を超えなかった。これらの条件下での試料の乾燥時間は約１０時間であった。

３．二次乾燥は減圧下にて実施した。この目的のために、ほぼ完全な（最大９９％）脱水のステージで、試料を減圧下にて３５～４０℃の温度に加熱し、これらの条件下で約１時間等温で保持した。

２つの同一の質量値が得られるまでの試料の一定の質量が、乾燥プロセスの完了の基準であった。乾燥プロセスの最後の３時間の間、生体物質試料を１時間ごとに真空チャンバーから取り出し、分析天秤で秤量した。２つの同一の質量値が得られたらすぐに、乾燥プロセスを停止した。

昇華プロセスの完了後、乾燥試料を真空チャンバーから取り出し、ケージに固定された銅グリッドの間に薄い層（各層５μｍ以下）で置いた。厚さ５０～１００ミクロンの半円形の５０個の銅グリッドを使用し、それらを保持する金属クランプで一緒にしっかりと押し付けた。質量分析のためにこのように準備された「サンドイッチ」は、５０個の銅グリッドで構成され、その間に試験材料が挟まれてしっかりと押し付けられていた。

クランプ表面上の分析領域は直径１０ｍｍの円であり、その中心には試料が挟まれて押し付けられた銅グリッドがあった。

実験では、以下の仕様のＦｉｎｎｉｇａｎＥＬＥＭＥＮＴＧＤグロー放電質量分析計を使用した：
・ダイナミックレンジ＞１０^１２線形、自動クロスキャリブレーション（マトリックス元素（１００％）から超微量（ｐｐｔ）まで）；
・感度（ピーク高さ、総イオン電流）：＞１×１０^１０ｃｐｓ、１．６^＊１０^－９Ａ；
・ダークノイズ＜０．２ｃｐｓ
・質量分解能＞１００００；
・質量安定性２５ｐｐｍ／８時間
研究の結果を表５に示す。

上記の表から分かるように、結果では、キラル性による病理学的変化が同位体置換によって誘発され得るという我々の仮説が確認される。したがって、本発明による^６４Ｚｎ_ｅ（Ａｓｐ）_２の投与により、予防し、転写因子または細胞周期を制御するタンパク質などの、タンパク質がうまく機能するのに必要な正常な同位体分布を回復し、それにより悪性腫瘍の形成を抑制することができる。
［実施例４］

実験では、^６４Ｚｎ_ｅ（Ａｓｐ）_２は^６４Ｚｎ_ｅ酸化物から合成され、合成後は粉末状であった。実験に必要な濃度の溶液を、動物に投与する直前に、必要な量の得られた^６４Ｚｎ_ｅ（Ａｓｐ）_２粉末を生理食塩水または重水素減少水に溶解することによって調製した。

誘導結合プラズマを用いた原子発光分光法の方法を、試料中の亜鉛カチオンの存在を確認するために持続した。測定の前に、試料を、マイクロ波放射の作用下にてテフロンオートクレーブ内で鉱酸の混合物により処理した。試料中の亜鉛の存在が主なカチオンとして確認された；およその含有量は１７．６％であった。他の元素の不純物も明らかになった。

Ｚｎ含有量の測定も、エンドポイント指示薬としてエリオクロムブラックＴを使用した錯滴定法で行った。試料中の亜鉛の含有量は１７．９８±０．１７％であることが見出された。

アスパラギン酸イオンの存在の確認およびその光学異性体形態の決定を、キラルクロマトグラフィーカラムＣｈｉｒａｌｃｅｌＯＤ－Ｒを使用して、２５４ｎｍの波長で検出する液体クロマトグラフィーによって実施した。従来は、シアン酸イソフェニルを使用して誘導体化を実施していた。また、ラセミ混合物Ｄ，Ｌ－アスパラギン酸および純粋なＬ－アスパラギン酸の誘導体化標準のクロマトグラムが得られた。試料には、Ｌ－異性体のみが含まれていることが示された。

亜鉛含有量は１７．９８±０．１７％であり、Ｌ－アスパラギン酸亜鉛の９０．８±０．９％に相当する。

試料中の^６４Ｚｎの相対含有量の測定は、試料ｐａｉ１を脱イオン水に溶解し、亜鉛に基づいて１．３３ｐｐｍの濃度に希釈した後に実行した。^６４Ｚｎ、^６６Ｚｎ、^６７Ｚｎ、^６８Ｚｎ、および^７０Ｚｎ同位体のシグナル強度の比率を、Ａｇｉｌｅｎｔ７５００ｃｅ誘導結合プラズマ質量分析計を使用して試料溶液について測定した。結果を表６に示す。試料には、^６４Ｚｎが濃縮されており、９９．３９％で測定された。

試料溶液中の硫酸イオン含有量を、塩化バリウムを使用する比濁法によって決定した。試料中のサルフェートの含有量は０．６６±０．０３２％であることが見出された。

試料中の元素状不純物および硫酸イオンの不純物を測定した。元素状不純物を、誘導結合プラズマを用いた原子発光分光法によって回収した。測定の前に、試料を、マイクロ波放射の作用下にてテフロンオートクレーブ内で鉱酸の混合物により処理した。表７に示すように、リン、カルシウム、ナトリウム、銀、アルミニウム、ビスマス、銅、鉄、カリウム、マグネシウム、および鉛の不純物が検出された。

本発明を、その詳細な説明と併せて説明してきたが、前述の説明は、添付の特許請求の範囲によって定義される本発明の範囲を説明することを意図し、限定するものではないことを理解すべきである。その他の態様、利点、および改変は、添付の特許請求の範囲内にある。したがって、本発明のある特定の特徴のみが説明され記載されてきたが、当業者には多くの改変および変更が思い浮かぶであろう。したがって、添付の特許請求の範囲は、本発明の真の趣旨に含まれるすべてのそのような改変および変更を包含するように意図されていることが理解されるべきである。

Claims

黒色腫を処置するか、または黒色腫の発症を予防する方法であって、それを必要とする患者への治療有効量の^６４Ｚｎ_ｅ（Ａｓｐ）_２を含む組成物の投与を含む、方法。
前記組成物が水溶液である、請求項１に記載の方法。
前記組成物が腫瘍内または静脈内に投与される、請求項１または請求項２に記載の方法。
^６４Ｚｎ_ｅ（Ａｓｐ）_２が２分子のアスパラギン酸を含む、請求項１から３のいずれか一項に記載の方法。
０．２μｇ／ｋｇ患者体重／日～２０００ｍｇ／ｋｇ患者体重／日の^６４Ｚｎ_ｅ（Ａｓｐ）_２を、前記患者に投与する、請求項１から４のいずれか一項に記載の方法。
０．０１ｍｇ／ｋｇ／日～５ｍｇ／ｋｇ／日の^６４Ｚｎ_ｅ（Ａｓｐ）_２を、前記患者に投与する、請求項５に記載の方法。
０．１ｍｇ／ｋｇ／日～１ｍｇ／ｋｇ／日の^６４Ｚｎ_ｅ（Ａｓｐ）_２を、前記患者に投与する、請求項５または請求項６に記載の方法。
前記組成物が、１日１回投与される、請求項１から７のいずれか一項に記載の方法。
前記組成物が、１日２回以上で投与される、請求項１から７のいずれか一項に記載の方法。
前記組成物が、溶媒として重水素減少水をさらに含む、請求項１から８のいずれか一項に記載の方法。
黒色腫を処置する前記方法が、黒色腫転移を予防、遅延、または改善する方法である、請求項１から９のいずれか一項に記載の方法。